実験：
　銅以外の金属を含む金属置換体タンパク質は、N末端に6xHisタグを導入した亜硝酸還元酵素を遺伝子工学的に作成し大腸菌での発現系を用いて発現させ、Ni-NTAアフィニティーカラムクロマトグラフィーで精製したものを用いた。精製後の試料は50mMEDTAを含む中性緩衝液中に一週間以上漬けることで金属を含まないアポ型タンパク質として調製し、その試料に対し各種金属（M²⁺:Co,Ni,Zn）イオンを含む緩衝液で透析する（４℃で1週間）ことで各金属置換体を調製した。続いて、過剰なM²⁺イオンを除去後、各金属置換体タンパク質の結晶化とX線回折実験を行った。X線回折実験は大型放射光施設SPring-8蛋白研ビームラインBL44XUにて実施した。各々の回折データおよび構造精密化統計値を表１に示す。分子置換法により初期位相の決定およびRefmacによる構造精密化を行い、最終的にR因子値が〜20%程に到達したところで精密化を終了した。Znに置換した試料についてはタイプ-１銅部位およびタイプ-２銅部位がZnに置換された構造は確認できたが、分子表面の所々に不明瞭かつ解釈不能な電子密度が多く見られ、今回は精密化途中の段階で断念することとし、参考データ程度として扱うことのみにした。

カテゴリ: 化学
質問: 精製後の試料は、何を含む中性緩衝液中に何週間以上漬けることで、金属を含まないアポ型タンパク質として調製されましたか？
回答: 精製後の試料は、50mMEDTAを含む中性緩衝液中に一週間以上漬けることで、金属を含まないアポ型タンパク質として調製されました。

カテゴリ: 化学
質問: 分子置換法により、何および何が行われましたか？
回答: 分子置換法により、初期位相の決定およびRefmacによる構造精密化が行われました。