Chromatografie

Chromatografie (z řečtiny χρώμα – barva, γραφειν – psát) je souhrnné označení pro skupinu fyzikálně-chemických separačních metod. Molekuly analytu se u všech typů chromatografických separací rozdělují mezi stacionární a mobilní fázi. Dělení je založeno na rozdílné distribuci složek směsi mezi mobilní a stacionární fázi. Postup vynalezl počátkem 20. století ruský přírodovědec Michail Cvět.

Chromatografické pojmy 
Analyty – složky vzorku, které mají být chromatograficky rozděleny a identifikovány

Analytická chromatografie – chromatografie sloužící k zjištění existence analytu (kvalitativní stanovení) a k určení jeho koncentrace ve vzorku (kvantitativní stanovení).

Chromatograf – přístroj sloužící k chromatografické separaci složek vzorku

Chromatogram – záznam z chromatografu, znázorňující jednotlivé analyty nejčastěji ve formě chromatografických píků (zón) oddělených navzájem základní linií

Chromatografická separace – rozdělení vzorku na jednotlivé složky (analyty) na základě rozdílné distribuce mezi mobilní a stacionární fázi

Mobilní fáze (eluent) je fáze pohybující se chromatografickým systémem. Tato fáze přivádí vzorek do stacionární fáze, kde dochází k jeho separaci

Retenční čas – čas, který složka potřebuje k průchodu chromatografickým systémem

Preparativní chromatografie slouží k izolaci čistých (nebo alespoň čistějších) složek vzorku, které jsou dále použity (k chemické reakci, další separaci apod.)

Stacionární fáze – je fáze ukotvená na místě, přes kterou prochází mobilní fáze a také složky vzorku. Jde například o tenkou vrstvu silikagelu na inertním nosiči (při tenkovrstevné chromatografii) či kolonu naplněnou silikagélem. Zde dochází k separaci v důsledku distribuce vzorku mezi stacionární a mobilní fázi

Autosampler - automaticky dávkuje vzorky do přístroje

Rozdělení chromatografických metod podle uspořádání 
 sloupcová chromatografie (kolonová chromatografie, CC, column chromatography) - stacionární fáze je v koloně
 papírová chromatografie (PP, paper chrom.) - stacionární fází je obvykle voda, adsorbovaná na papír
 chromatografie na tenké vrstvě (TLC, thin layer chromatography) - stacionární fází  je tenká vrstva adsorbentu anebo inertního nosiče, který váže kapalnou stacionární fázi

Rozdělení chromatografických metod podle mobilní fáze 
 plynová chromatografie (GC, gas chromatography) - mobilní fází je plyn
 fluidní chromatografie - mobilní fáze je látka v nadkritickém stavu
 plazmová chromatografie - mobilní fáze je proud iontů
 kapalinová chromatografie (LC, HPLC, liquid chrom., vysokoúčinná kapalinová chrom.) - mobilní fází je kapalina.

Při kapalinové chromatografii je mobilní fází kapalina a stacionární fází je pevná látka (LSC) nebo kapalina, zakotvená na pevné látce (LLC). 

Při LLC dochází k dělení složek analytu v důsledku různých hodnot jejich rozdělovacích koeficientů.

Při LSC dochází k dělení složek analytu v důsledku jejich různých adsorbčních vlastností.

Rozdělení kapalinové chromatografie podle principu dělení 
 adsorpční chromatografie - stacionární fáze je adsorbent.
 iontová chromatografie - stacionární fáze je ionex.
 gelová chromatografie nebo gelová filtrační chromatografie - stacionární fáze je neionizovaný přírodní nebo syntetický gel.
 afinitní chromatografie - stacionární fáze obsahuje zakotvené ligandy, na které se rozdělovaná látka váže.
 rozdělovací chromatografie - o separaci rozhoduje různá rozpustnost složek vzorku v stacionární a mobilní fázi

Rozdělení chromatografie podle podmínek 
 izokratická chromatografie - konstantní podmínky
 gradientová chromatografie - mění se podmínky, např. teplota nebo složení mobilní fáze.

Galerie

Reference

Externí odkazy 
 

 
Separační metody
Klinická biochemie