**DNSA**
**– Dirección de Epidemiología y Análisis de Riesgo**  **- Programa de Fiebre Aftosa**  1 

### Vigilancia epidemiológica de fiebre aftosa. Muestreo serol**ógico**

**Patagonia Norte A 2013**  **Introducción :**  La Dirección de Epidemiología y Análisis de Riesgo, dependiente de la Dirección Nacional de Sanidad Animal de SENASA, diseñó el presente estudio a los f ines de complementar la información necesaria para solicitar el reconocimiento de la Patagonia Norte A como zona libre de fiebre aftosa sin vacunación conforme a los artículos 8.5.42 a 8.5.47 y 8.5.49 del Código Terrestre de la Organización Mundial de Sanidad Animal (OIE). Por lo que este estudio tuvo como objetivo demostrar ausencia de infección del virus de la fiebre aftosa en la región Patagonia Norte A (parte de las provincias de Río Negro, Buenos Aires y Neuquén ) . En cuanto a la operatoria de toma y envío de muestras, las mismas estuvieron a cargo de los veterinarios locales del SENASA, mientras que el diagnóstico se realizó en el Laboratorio Animal de la Dirección de Laboratorios y Control Técnico (DILAB

SENASA). **Objetivos :**  El objetivo del presente estudio es demostrar la ausencia de infección por el virus de la Fiebre Aftosa (VFA) en la zona de Patagonia Norte A. Los indicadores de infección fueron evaluados por la presencia de anticuerpos contra proteínas no estructurales (PNE) en bovinos y contra proteínas estructurales (PE) en porcinos (virus tipo A24 y O1 Campos) . **Marco del muestreo :**  El marco de presente muestreo corresponde a la zona de Patagonia Norte A, en cual existen alrededor de 600.000 bovinos en 3.000 establecimientos, 430.000 ovinos en 1.500 establecimientos, 45.000 caprinos y 25000 cerdos. En esta zona se han realizado muestreos serológicos anuales desde el año 2001 . En estos estudios se utilizaron diseños probabilísticos sobre la totalidad de los predios bovinos, tendientes a demostrar ausencia de circulación del VFA a un nivel detectable de 1% de prevalencia predial y 10% de prevalencia intrapredio. Los resultados obtenidos en todos los muestreos anteriores fueron negativos. Hace unos años que Argentina comenzó el proceso tendiente a lograr el reconocimiento de la zona como libre sin vacunación; así la última campaña de vacunación sistemática se llevó a cabo a fines de 2012, con la decisión de suspender su aplicación definitiva el 4 de marzo de 2013 . Como parte de este proceso, se consideró conveniente modificar la estrategia de muestreo en la zona, pasando de un muestreo probabilístico a un muestreo basado en**DNSA**
**– Dirección de Epidemiología y Análisis de Riesgo**  **- Programa de Fiebre Aftosa**  2 riesgo tendiente a probar ausencia de infección del VFA. En años posteriores, esta nueva metodología empleada sentará las bases de un sistema dirigido a la detección temprana de un eventual ingreso de VFA. Por ello, se ha orientado hacia predios categorizados de “riesgo”, de acuerdo a ciertos factores (linderos al río, aquellos en los que ingresaron animales en los últimos años, cercanía a frigoríficos, basurales, entre otros.), y se ha orientado a la categoría de bovinos de menor edad (6 a 12 meses) para detectar si hubiera infección por el virus de la fiebre aftosa en la PNA. Simultáneamente al muestreo de fiebre aftosa en bovinos en esta esta zona, se realizaron también otras actividades de vigilancia en porcinos y animales silvestres a fin de demostrar ausencia de infección del virus de fiebre aftosa en estas especies. Con este fin fueron inspeccionados los establecimientos de cría familiar de cerdos linderos a, los basurales (vertederos) municipales; realizándose inspección clínica a los animales, a los cuales también se les realizó un muestreo serológico. Para ello, se tomaron muestras de suero para detección de anticuerpos específicos contra el virus de fiebre aftosa para los virus A 24 y O1 Campos, además estas muestras fueron sometidas a otras pruebas diagnósticas, tales como Peste porcina clásica, Aujeszky, Peste porcina africana y PRRS. Asimismo, en cada caso se debió completar una encuesta epidemiológica. También se trabajó en colaboración con los niveles provinciales y municipales, fomentando reuniones con intendentes y personal de estos estratos gubernamentales, con el objeto de difundir información del trabajo de vigilancia que se llevó a cabo y de esta forma lograr que preste colaboración para el control y eliminación de cerdos de los basurales, evitando de esta manera que estos animales sean alimentados con basura, deshechos y/o restos de la faena. Como parte de las actividades de vigilancia, se realizó un relevamiento y georreferenciación los basurales a cielo abierto y se identificaron los establecimientos más próximos con existencias de porcinos. Cuando fueran detectados animales en cercanía a los basurales, estos establecimientos debían inspeccionados y muestreados. Además se trabajó en conjunto a las autoridades de Fauna Silvestre Provinciales y a las facultades de Veterinaria, Ciencias Biológicas y Naturales de la zona, con el objetivo de ampliar las oportunidades de toma de muestras en animales silvestres susceptibles a la enfermedad. A partir de esta vigilancia en fauna silvestre se obtuvieron muestras de jabalíes. 

### I. **Muestreo en b ovinos:** 
**Tamaño de la muestra :**  Se realizó un muestreo probabilístico aleatorio en dos etapas; mediante la selección de establecimientos categorizados como de “riesgo” de acuerdo a ciertos factores y la selección de bovinos de la categoría de 6 a 12 meses. Los supuestos determinados fueron:**DNSA**
**– Dirección de Epidemiología y Análisis de Riesgo**  **- Programa de Fiebre Aftosa**  3 - Mínima prevalencia esperada de rodeos positivos: 1%.

- Mínima prevalencia esperada de animales positivos: 20%.

- Error tipo II: 5%.

- Nivel de Confianza: 95%.

- Sensibilidad y especificidad de la prueba diagnóstica: 0,9. Con estos supuestos anteriormente descriptos, la cantidad de establecimientos muestreados fue de 245, con una cantidad de 15 bovinos en cada uno de los establecimientos, totalizando 3 . 675 sueros. Los supuestos subyacentes son: 1. La región se encontró comprobadamente libre de infección con VFA, de acuerdo a los muestreos realizados anualmente en los últimos 12 años. 2. La probabilidad de introducción de VFA a la región desde el último muestreo se asocia con diversos factores, entre ellos ciertos establecimientos cuya localización o prácticas asociadas aumentaron su riesgo en relación al resto de los establecimientos de la región (establecimientos de riesgo). 3. Si la infección se encuentra ausente en la población de riesgo, entonces es posible aceptar que se encuentra ausente en el total poblacional. 4. Se identificaron establecimientos de riesgo que fueron definidos en base a ciertos criterios:  Aquellos establecimientos linderos al Río Colorado (n=118), ya que la cercanía geográfica puede suponer una mayor probabilidad de ingreso ilegal de animales o subproductos.  Establecimientos con ingresos de animales reproductores desde la zona norte al rio Colorado (zona con vacunación) en los dos últimos años (n=402), ya que el movimiento implica el riesgo de ingreso de VFA durante el periodo silente de una epidemia.  Establecimientos linderos a mataderos, basurales, o remates feria (n=59), debido a que pueden asociarse con exposición a productos contaminados ingresados ilegalmente; otros factores de riesgo local como predios con una cantidad de movimientos por encima de la media y otros factores para fiebre aftosa determinados por el veterinario local también fueron considerados
. Estas categorías de clasificación no son mutuamente excluyentes, ya que existen algunos predios con más de un factor de riesgo; conformándose una subpoblación de máximo riesgo con los predios que cuenten con más de un factor de riesgo que fueron muestreados en su totalidad (n= 23) .**DNSA**
**– Dirección de Epidemiología y Análisis de Riesgo**  **- Programa de Fiebre Aftosa**  4 Gráfico 1. Localización geográfica de los basurales, frigoríficos y remate feria de PNA.

5. Se mantiene el nivel de detección de prevalencia a nivel predial utilizada en muestreos anteriores (1% de predios). 6. En caso de producirse un ingreso, la prevalencia intrapredio esperada será mayor al 10% asumido para una población vacunada. En la epidemia de Argentina ocurrida en los años 2000

-2001, en poblaciones no vacunadas pero con recientemente historial de vacunación, la prevalencia intrapredio promedio fue del 10%. Por lo tanto, se considera conservador considerar una prevalencia esperada intrapredio del 20%. De esta manera, la fracción de muestreo representa el 100% de los predios de máximo riesgo (con más de un factor de riesgo, n=23) , el 45% de los predios de riesgo (n=245) , y el 8% de los predios totales en la región (n=2. 950) . En el gráfico 2 puede observarse la localización geográfica de los predios considerados de máximo riesgo (con más de un factor de riesgo).**DNSA**
**– Dirección de Epidemiología y Análisis de Riesgo**  **- Programa de Fiebre Aftosa**  5 Gráfico 2. Localización geográfica de los predios considerados de máximo riesgo en PNA.

**C ategoría de animales muestreadas**  **:** Los animales muestreados fueron bovinos de seis a doce meses de edad (categoría 1) . En el caso de aquellos establecimientos que no contaban con los 15 animales de esa categoría, se completó la cantidad de las muestras con bovinos de hasta 24 meses. **Pruebas diagnósticas :**  La totalidad de las muestras se procesaron en el laboratorio central de SENASA (Dirección de Laboratorios y Control Técnico, Martínez, provincia de Buenos Aires), Laboratorio Referencia en Fiebre Aftosa de la Organización Mundial de Sanidad Animal (OIE). Las pruebas diagnósticas realizadas buscan detectar la presencia de anticuerpos contra proteínas no estructurales del VFA (Sistema Elisa 3ABC/EITB) en bovinos como indicador de infección. En aquellos establecimientos en los que se hubiese detectado al menos un animal reactor a las pruebas confirmatorias en el muestreo inicial (EITB) se debía llevar a cabo un estudio Complementario en línea con las recomendaciones que efectúa la OIE, en el Articulo 8.5.49 del Código Terrestre; este estudio complementario tiene como objetivo ampliar las investigaciones, y confirmar o descartar el primer resultado como indicador de infección/circulación viral. **Resultados :**  En el gráfico 3 se muestra la distribución georreferenciada de los predios muestreados. Además se observa que estos establecimientos muestreados coindicen con la mayor**DNSA**
**– Dirección de Epidemiología y Análisis de Riesgo**  **- Programa de Fiebre Aftosa**  6 concentración de los movimientos entrantes de los bovinos desde establecimientos/remate feria de la zona con vacunación a PNA. Gráfico 3. Ubicación georreferenciada de los predios muestreados y las zonas de mayor

concentración de movimientos entrantes a PNA.

En la tabla 1 se muestra la cantidad de muestras tomadas por categoría de bovinos, por oficina local: Tabla 1. Cantidad de bovinos muestreados en la zona.

**Provincia Oficina**  **Local Cantidad**  **establecimientos muestreados**  **Cantidad bovinos**

**muestreados y analizados de**  **categoría 1 Cantidad bovinos** 

**muestreados y analizados de**  **categoría 2 Total** 

Buenos Aires C. Patagones 16 165 75 240

J. Pradere 13 76 134 210 Stroeder 20 206 94 300 Villalonga 19 244 41 285 **Subtotal 68**  **691 344**  **1 .** **035** Neuquén Neuquén 3 30 14 44

Río Negro Choele Choel 31 456 9 465

Gral. Conesa 27 384 15 399 Gral. Roca 15 207 14 221 Guardia Mitre 17 255 0 255 Río Colorado 57 799 36 835 San Antonio Oeste 4 60 0 60 Viedma 15 218 7 225 Villa Regina 10 128 7 135 **Subtotal 176**  **2 .** **507 88**  **2 .** **595 Total**  **247 3** **. 228**  **446 3** **. 674** **DNSA**
**– Dirección de Epidemiología y Análisis de Riesgo**  **- Programa de Fiebre Aftosa**  7 Los resultados de todas las muestras de sueros bovinos resultaron "No Reactivos" a ELISA 3 ABC

-EITB, por lo que no fue necesario realizar estudios complementarios **II.** 

### Muestreo en p**orcinos:** El estudio serológico en porcinos fue complementario al relevamiento de basurales realizado en los principales centros poblados. En este sentido se indicó la visita de un establecimiento de críanza familiar de cerdos para inspección, encuesta y toma de muestras de sangre. **Tamaño de la muestra :**  Para la realización de este muestreo, se estimó la cantidad de muestras a tomar en base a un diseño aleatorio simple para detección de un evento en cada predio visitado. Los supuestos utilizados para cada predio fueron:

- Prevalencia intrapredio del 20%. Esperando una prevalencia relativamente alta en estas poblaciones debido a que se trata de animales no vacunados y altamente expuestos a posibles fuentes de infección por la cercanía a un basural
.

- Nivel de confianza: 95%

- Error de tipo II: 0,05 **Cantidad de muestras y categoría de animales muestreadas :**  Con los supuestos mencionados anteriormente para la cantidad de muestras a tomar en cada establecimiento se concluyó de acuerdo a la población presente en el establecimiento, tal como se muestra en la siguiente tabla: Tabla 2: Cantidad de muestras a tomar de acuerdo a la población del establecimiento
.

**Población de porcinos del establecimiento**  **No de porcinos a mue** **strear** <50 Toda la población 50 21 100 24 250 27 500 27 >1000 28**DNSA**
**– Dirección de Epidemiología y Análisis de Riesgo**  **- Programa de Fiebre Aftosa**  8 **Pruebas diagnósticas :**  La totalidad de las muestras se procesaron en el laboratorio central de SENASA (Dirección de Laboratorios y Control Técnico, Martínez, provincia de Buenos Aires), La prueba utilizada fue el ELISA fl. para detección de anticuerpos específicos contra el virus de Fiebre Aftosa para los virus A 24 y O1 Campos
. **Resultados:** En la siguiente tabla se detalla la cantidad de muestras tomadas y analizadas de porcinos, por oficina local: Tabla 3. Cantidad de porcinos muestreados y analizados en la zona, por oficina local de SENASA.
**Provincia Of. Local**  **Cant idad de**  **es t** **ablecimient os**  **m uestreados**  **Cant idad de p** **orcinos**

**muestreados y a** **nalizados** Bs. As. Patagones 4 38 Neuquén Neuquén 14 68
Río Negro Choele Choel 16 95

Gral. Conesa 2 24 Gral. Roca 27 133 Guardia Mitre 4 37 Río Colorado 3 17 Viedma 6 50 **Subtotal** 5 8 356 **Total 7** **6 4** **62** Todas las muestras de suero de los porcinos analizadas resultaron negativas a las pruebas de ELISA fl para ambos virus
. Del análisis de la encuesta realizada en los establecimientos con porcinos que fueron muestreados por encontrarse linderos a basurales, se desprende la siguiente información:  Fueron visitados 76 establecimientos, de los cuales 58 pertenecían a Río Negro, 14 a Neuquén y los 4 restantes a Buenos Aires.  El 100% de los establecimientos pertenecieron a un tipo de explotación de producción familiar o subsistencia. El 78,7% de los mismos poseía alambrado, de los cuales 1 3 se encontraban en buen estado y 22 en regulares condiciones.  La cantidad total minima y maxima de porcinos por establecimiento fue de 1 a 98 animales.  La distancia de los establecimientos con porcinos de las áreas de riesgo están descriptos en el gráfico 4.**DNSA**
**– Dirección de Epidemiología y Análisis de Riesgo**  **- Programa de Fiebre Aftosa**  9 Grafico 4. Distancia de los establecimientos muestreados a las áreas de riesgo identificadas

**M uestreo**  **de animales silvestres :**  Como se explicó anteriormente se trabajó en conjunto a las autoridades de Fauna Silvestre Provinciales y a las facultades de Veterinaria, Ciencias Biológicas y Naturales de la zona, con el objetivo de ampliar las oportunidades de toma de muestras en animales silvestres susceptibles a la enfermedad. A partir de esta vigilancia en fauna silvestre, en el año 2013 se obtuvieron muestras de jabalíes distribuidas de la siguiente manera descripta en la tabla 4. Tabla 4. Detalle de la cantidad de establecimientos y muestras tomadas de jabalíes.
**Provincia Of** 

**icina Local**  **Cant idad de** 

**e stablecimientos**  **m uestreados**  **Cant idad de**  **j abalíes**  **mue streados**  Buenos Aires C. Patagones 1 3* Río Negro Choele

Choel 5 10 Guardia Mitre 3 7 Río Colorado 1 1 **Total 10**  **21** *Sólo de uno se pudo extraer suero para ser analizada. Estas muestras de suero fueron analizadas por ELISA fl para los virus de fiebre aftosa A24 y O1 campos, resultando todas negativas.