ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера Отдел Новых Технологий "МИКОПЛ АЗМА-50" инструкция по применению НАБОРА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ВИЗУАЛЬНОГО ВЫЯВЛЕНИЯ Mycoplasma hominis (Комплект № 1)	Регистрационное удостоверение № ФСР 2009/05983 от 16 августа 2011 г

##### 2. Приготовление проб для исследования.

Для выявления M. h. пригодны следующие биологические материалы: отделяемое влагалища, отделяемое шейки матки, отделяемое уретры, сперма, центрифугат мочи. Забор проб осуществлять с (щетки)1. помощью ложки Фолькмана или одноразового тампона Исследуемые пробы внести в пробирки, содержащие 0,5 мл транспортной среды для урогенитальных микоплазм. Пробирки с пробами закрыть, промаркировать и доставить в лабораторию. Время транспортировки не должно превышать 8-12 ч при температуре 6-10 °С. В лаборатории перенести 100 мкл раствора из пробирки с пробой в транспортной среде в пробирку, содержащую 0,9 мл жидкой питательной среды для выявления M. h.

##### В зависимости от целей исследования, дальнейшее определение может быть проведено в варианте качественного или полуколичественного анализа.

## 3. Качественный анализ.

Пробирки с исследуемыми пробами и одну пробирку без пробы (контроль питательной среды) поместить в термостат при температуре 37±1 °С. Учет результатов проводить через 24 ч. Окончательный учет результатов проводить через 72 ч. Положительным результатом «+» считается появление фиолетовой окраски среды в пробирке с исследуемой пробой при сохранении зеленой (исходной) окраски в контрольной пробирке. Отсутствие изменения окраски среды в исследуемой пробе по сравнению с окраской среды в контрольной пробирке оценивается как отрицательный результат «-».

## НАЗНАЧЕНИЕ

Набор реагентов МИКОПЛАЗМА-50 (Комплект № 1) предназначен для одноэтапного визуального выявления Mycoplasma hominis (M. h.) в отделяемом из цервикального канала и влагалища, в семенной жидкости, в секрете предстательной железы, в отделяемом уретры и в центрифугате мочи. Комплект № 1 рассчитан на проведение 50 анализов в пробирках для микропроб.

## ПРИНЦИП МЕТОДА

## 4. Полуколичественный анализ.

В основе метода лежит использование селективной питательной среды для выявления M. h., которая обеспечивает оптимальные условия для роста M. h. при подавлении роста других микоплазм, дрожжеподобных грибов и большинства представителей бактериальной флоры, потенциально содержащихся в исследуемом образце. Наличие в среде рН-индикатора позволяет проводить визуальную оценку результатов исследования по изменению цвета питательной среды в процессе культивирования.

Для полуколичественной оценки титра делают два последовательных разведения исследуемой пробы с шагом 10. Для этого исходную пробирку с пробой, обозначенную К(+++), встряхнуть и перенести из нее 100 мкл раствора в другую пробирку, обозначенную К(++) и содержащую 0,9 мл питательной среды для выявления M. h., что соответствует разведению в 10 раз. Затем перенести 100 мкл раствора из пробирки К(++) в пробирку, обозначенную К(+) и содержащую 0,9 мл питательной среды для выявления M. h., что соответствует разведению исследуемой пробы в 100 раз. Три пробирки с пробами К(+++), К(++) и К(+) и одну пробирку без пробы, обозначенную К(-) и содержащую 0,9 мл питательной среды для выявления M. h., поместить в термостат при температуре 37±1 °С. Результаты анализа учитывать через 24 ч. Окончательный учет результатов проводить через 72 ч. Появление фиолетовой окраски среды только в пробирке К(+++) при отсутствии изменений в окраске 102 среды в пробирках К(++), К(+) и К(-) указывает на то, что титр M. h. составляет не более колониеобразующих единиц в мл (КОЕ/мл). Появление фиолетовой окраски среды в двух пробирках К(+++) и К(++) при отсутствии изменений в окраске среды в пробирках К(+) и К(-) указывает на то, что 103 титр M. h. составляет не более КОЕ/мл. Появление фиолетовой окраски среды в трех пробирках К(+++), К(++) и К(+) при отсутствии изменения в окраске среды в пробирке К(-) свидетельствует о том, 104 что титр M. h. составляет не менее КОЕ/мл. Отсутствие изменения окраски среды в трех пробирках с пробой К(+++), К(++) и К(+) по сравнению с окраской среды в контрольной пробирке К(-) считается отрицательным результатом «-». Примечание: помутнение среды во время культивирования (при изменении или без изменения окраски в пробирках с исследуемыми пробами) свидетельствует о росте посторонней микрофлоры. Результаты исследования таких проб учету не подлежат и требуют повторного проведения анализа или дополнительного посева на плотную питательную среду для морфологической идентификации колоний M. h.

## СОСТАВ НАБОРА (Комплект № 1)

Питательная среда для выявления M. h., лиофилизированная . . . 1 фл. Пробирки для микропроб . . . . . . 50 шт. Этикетки для маркировки пробирок . . . . . 50 шт.

##### МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

Потенциальный риск применения набора – класс 2а. Набор МИКОПЛАЗМА-50 (Комплект № 1) предназначен только для in vitro диагностики. Входящие в компоненты набора вещества инактивированы и безопасны. Однако исследуемые клинические материалы, а также сточные растворы, оборудование и материалы, находящиеся с ними в контакте, представляют собой потенциально инфекционный материал, и обращаться с ними следует, соблюдая технику безопасности. Следует избегать любого контакта компонентов набора со слизистыми оболочками. При работе с набором следует соблюдать «Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР» (Москва, 1981 г.).

## ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ:

## УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА

- Термостат, поддерживающий температуру 37±1 ºС;

Набор МИКОПЛАЗМА-50 (Комплект № 1) следует хранить при температуре 2-8 °С в упаковке предприятия- изготовителя в течение всего срока годности. Допускается хранение набора при температуре до 25 °С не более 2 недель. Срок годности набора – 12 мес. Приготовленную питательную среду можно хранить при температуре 2-8 °С не более 1 недели или при температуре минус 7 °С и ниже не более 2 мес. Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по применению набора. По вопросам, касающимся качества набора МИКОПЛАЗМА-50 (Комплект № 1), следует обращаться в ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера по адресу: 197101, Санкт-Петербург, ул. Мира, 14, тел./факс: (812) 233-17-03, 346-83-87, телефон (812) 325-27-10, 346-83-86 http://www.dntpasteur.ru; e-mail: pasteurdnt@ya.ru

- - дозаторы пипеточные;
- - горелка газовая (спиртовка);
- - вода дистиллированная;
- - транспортная среда для урогенитальных микоплазм.

## ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА 1. Приготовление жидкой питательной среды.

Во флакон с лиофилизированной питательной средой для выявления M. h. внести 50 мл дистил- лированной воды. Содержимое флакона перемешать до полного растворения (в течение 1 мин). Полученный прозрачный раствор зеленого цвета разлить по 0,9 мл в пробирки для микропроб, закрыть и хранить до применения при температуре 2-8 ºС не более 7 сут или при температуре минус 7 ºС и ниже не более 2 мес. 0С) Перед проведением анализа пробирки со средой выдержать при комнатной температуре (18-25 в течение 1 ч. Раствор в пробирках должен быть прозрачным, зеленого цвета. В случае помутнения раствора или изменения его цвета пробирки со средой в работе не использовать!

© НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, 2011 г.