Der junge Generalstabsoffizier Robert Roth wurde 1840 zum "Gouverneur" und damit zum Aufseher über die Ausbildung des Prinzen ernannt. Diese Funktion hatte Roth bis zum Jahr 1849 inne. Prinz Nikolaus trat am 25. Februar 1845 als Unterleutnant in das 2. Infanterieregiment der Nassauischen Armee ein und wurde dort am 24. Juli 1849 Oberleutnant. Am 2. Februar 1850 schied er aus der Armee aus und ging als Oberstleutnant beim 18. Jägerbataillon in österreichische Dienste. Mitte Juni 1854 trat er dann als Hauptmann à la suite im dortigen Jägerbataillon in Nassauische Dienste zurück und wurde am 1. Juli Major à la suite des Jägerbataillons. Als solcher nahm er im österreichischen Hauptquartier am Krieg 1859 in Italien teil. Nach der Absetzung von Otto I. von Griechenland im Jahre 1862 versuchte der britische Premierminister Lord Palmerston ihn auf den griechischen Thron zu heben. In den Augen der britischen Regierung wäre ein König mit guten Verbindungen nach Russland dort nützlich gewesen. Dagegen aber sprach sich Kaiser Napoleon III. aus, der dort keinen Offizier sehen wollte, der noch vor kurzem gegen ihn gekämpft hatte. So wurde Wilhelm von Schleswig-Holstein-Sonderburg-Glücksburg 1863 als Georg I. König von Griechenland.