查理五世因此勃然大怒，加上查理漸漸厭倦克萊孟七世教宗干預他認為與宗教毫無關係的事務，波旁公爵夏尔三世率领军队攻打罗马，在1527年攻陷羅馬，使教宗蒙羞。結果，以後克萊孟七世與繼任的教宗在與世俗勢力交往時，都顯得加倍謹慎，不敢違背西班牙國王。1529年法國在蘭德里亞諾戰役被西班牙再次擊敗，正式放棄米蘭予西班牙；教宗更與查理簽署巴塞隆那和約，結束並建立更和諧關係。西班牙正式成為天主教的保護者，而查理被教宗加冕為意大利國王（倫巴第）。