Полк этот долгое время находился на Кавказе и принимал участие в походах против горцев. В кампании 1853—1856 годов полк находился в отряде войск, назначенных для обороны побережья Балтийского моря от возможной высадки англо-французского десанта. В 1863—1864 годах Донской казачий № 3-го полк находился в Польше и принимал участие в подавлении восстания поляков.