Nach einer grundlegenden Umstrukturierung nahm am 26. Oktober 1995 die täglich verkehrende "NightLine" mit nunmehr 22 Linien ihren Betrieb auf. Im Jänner 1999 erfolgten Änderungen an den Linienführungen, außerdem wurden neue, günstigere Tarife und im Vorverkauf erhältliche Streifenkarten eingeführt. Seit Juni 2002 ist der NightLine-Tarif in den Einheitstarif des Verkehrsverbundes Ost-Region (VOR) eingebunden, wodurch für die Fahrt ein regulärer Fahrschein verwendet werden kann bzw. die Benützung der Nachtbusse für Inhaber von Zeitkarten kostenlos ist. Im März 2006 erfolgten erneut Anpassungen, die Anzahl der Linien wurde auf 28 erhöht, von denen allerdings einige nur am Wochenende bzw. täglich als Anrufsammeltaxi verkehren. Die letzten drei Kurse der Buslinie 360, betrieben von den Wiener Lokalbahnen, wurden in das Netz der NightLine aufgenommen. Diese verkehrt von Wien Oper über Vösendorf und die Shopping City Süd nach Baden. Bisher wurden vier Nachtlinien eingestellt: N52 im Frühjahr 2000 und N72 (mit der 2. Reform eingeführt) Ende Dezember 2007 sowie N50 und N58 im Zuge der Einführung der Nacht-U-Bahn. Während der EM 2008 fuhr entlang der Ringstraße – Zweierlinie und dem Franz-Josefs-Kai die temporäre Linie N1.