Rome accueille les matchs à domicile de l'équipe d'Italie de rugby à 15 dans le tournoi des Six Nations. De l'admission des "Azzurri" au tournoi, qui a eu lieu en 2000, jusqu'en 2011, tous les matchs ont été joués au stade Flaminio, sur le terrain ou l'Italie a joué pour la première fois en 1935 (dans le stade national préexistant de la PNF) une rencontre avec un XV de France. A partir des Six Nations 2012, l'Italie joue ses matchs à domicile au stade olympique . L'Olimpico accueille également régulièrement d'autres matchs importants de l'équipe nationale de rugby : la finale de la Coupe d'Europe de rugby en 1954 entre l'Italie et la France a été suivie de nombreux "tests matchs" contre les équipes nationales les plus populaires de l'hémisphère sud : Argentine, Nouvelle Zélande et Afrique du Sud.