El primer empleo en combate de la ametralladora Gatling tuvo lugar durante la Guerra de Secesión. Doce ametralladoras fueron compradas por comandantes del Ejército de la Unión y empleadas en las trincheras durante el sitio de Petersburg, Virginia (junio de 1864-abril de 1865). Otras ocho ametralladoras fueron montadas a bordo de cañoneros. La ametralladora no fue aceptada por el Ejército estadounidense hasta 1866, cuando un representante de la empresa productora hizo una demostración en combate.