El Principado de Piombino fue ocupado de 1548 a 1552 por el duque de Florencia, Cosme I de Médici, en el curso de la llamada Guerra de Siena, durante la cual se enfrentaron por una parte España y Florencia, y de otra Francia, la República de Siena y el Imperio otomano. En 1552 además moría la regente, Elena Salviati. Jacobo por el Tratado de Londres del 20 de mayo de 1557 recupera el principado a cambio de ceder al Ducado de Florencia la villa de Portoferraio y permitir el establecimiento de guarniciones españolas en sus dominios. Conformándose los presidios de la toscana septentrionales.