Puchar Świata w biathlonie 2000/2001 to 24. sezon w historii tej dyscypliny sportu. Pierwsze zawody miały odbyć się 30 listopada 2000 r. w austriackim Hochfilzen, jednak z powodu braku śniegu zostały przeniesione do włoskiej Anterselvy. Sezon zakończył się 18 marca 2001 w norweskim Holmenkollen. Najważniejszą imprezą sezonu były mistrzostwa świata w Pokljuce.