Károly császár nemzetközileg elszigetelődött. Franciaország új katonai szövetséget kovácsolt ellene. A Milánói Hercegség, Velence, Firenze és a Pápai állam a cognaci ligában tömörültek, a szövetséget 1526. május 22-én megkötötték, csatlakozott hozzá VIII. Henrik angol király is. Kitört a cognaci liga háborúja. Charles de Bourbon herceg, volt connétable, a császár szövetségese július 10-én elfoglalta Milánót. Közben a mohácsi csatavesztés nyomán VII. Kelemen pápa helyzete megrendült, fegyverszünetet kért Károlytól. 1527. május 6-án Károly zsoldosai felprédálták Rómát (Charles, Bourbon hercege elesett az ostrom során).