En 1509, durant la Guerre de la Ligue de Cambrai, les forces vénitiennes en déroute après leur défaite à la bataille d'Agnadel, se barricadèrent sur le commandement de Niccolò di Pitigliano dans la forteresse de Mestre, qui devint l'ultime rempart sur la terre ferme et d'où partirent les expéditions de secours de Trévise assiégée, et à la reconquête de Padoue, occupée par les forces impériales. En 1513 Mestre dut de nouveau affronter l'assaut des Espagnols et des Allemands, qui prirent la forteresse, mirent à sac et incendièrent le centre-ville. En l'honneur de sa résistance héroïque, la cité reçut de la Sérénissime le titre de "Mestre Fidelissima" (Mestre la Très Fidèle), qui est demeurée sa devise jusqu'à aujourd'hui.