Diego Simeone nahm an der Copa América der Jahre 1991 und 1993 teil, die er beide mit der Argentinischen Nationalmannschaft gewann. Simeone bestritt 1994 bei der Weltmeisterschaft in den USA seine erste Fußball-Weltmeisterschaft. Hier trat die "Albiceleste" als einer der Turnierfavoriten an und Simeone spielte neben Spielern wie Diego Maradona, Sergio Goycochea und Gabriel Batistuta. Allerdings schied man im Achtelfinale nach einer Niederlage gegen Rumänien aus. Es folgte die Teilnahme an der WM 1998 in Frankreich, wo Simeone seine Nationalmannschaft in vier von fünf Spielen als Kapitän auf den Platz führte. Berühmt geworden ist sein Zweikampf im Achtelfinale der WM 1998 mit David Beckham, wo der damalige Jungstar der englischen Nationalmannschaft wegen Nachtretens des Feldes verwiesen wurde. In diesem Turnier war im Viertelfinale gegen die Niederlande Schluss. Simeone war ebenfalls bei der WM 2002 in Japan und Südkorea dabei. Dieses Turnier wurde für die Argentinier zum Desaster. Der zweimalige Weltmeister scheiterte bereits in der Vorrunde. Simeone hatte in den ersten beiden Spielen mitgespielt. Insgesamt bestritt er zwischen Juli 1988 und Juni 2002 106 Länderspiele und war von Dezember 2000 bis Oktober 2006 alleiniger Rekordnationalspieler seines Landes. 1996 nahm Simeone an den Olympischen Spielen in Atlanta teil und gewann mit Argentinien die Silbermedaille.