Για πρώτη φορά διεξήχθη ένα δημοψήφισμα στο Γιβραλτάρ που αφορούσε την Ευρωπαϊκή Ένωση στις 23 Ιουνίου 2016. Ήταν μέρος του βρετανικού δημοψηφίσματος. Το Γιβραλτάρ, μέλος της ΕΕ από το 1973, ψήφισε να παραμείνει στην ένωση με ποσοστό 95,9%. Το ποσοστό συμμετοχής ήταν 83,6%.