Таким образом, император и король Карл стал самым могущественным человеком в . Концентрация в одних руках такой большой власти очень беспокоила короля Франции Франциска I, который оказался со всех сторон окружён территориями Габсбургов. В 1521 году Франциск вторгся в испанские владения в Италии и , начав второй этап франко-испанского конфликта. Война завершилась поражением Франции, которая потерпела поражения при Бикокке (1522), Павии (1525, где Франциск попал в плен) и Ландриано (1529), после чего Франциск вернул Милан Испании.