Sólo un año más tarde, cuando se reanudó la guerra de Italia en 1526, Frundsberg recibió una petición de ayuda procedente del Ejército Imperial en Lombardía. A pesar de tratarse de una cantidad insuficiente, recibió 36.000 táleros alemanes para organizar el nuevo ejército. En Mindelheim, Frundsberg recibió un préstamo, vendió los soportes de su mesa de plata y las joyas de su esposa para adquirir los fondos restantes necesarios para reclutar un ejército. En menos de tres semanas, organizó a más de 12.000 hombres y cruzó los Alpes en pleno noviembre, derrotó a Juan de Médicis el 25 en Governolo (Roncoferraro). Se unió al Condestable de Borbón en Fiorenzuola d'Arda y marchó en dirección a Roma. Dirigía un ejército de unos 18.000 hombres, que comprendían muchos luteranos (entre ellos él mismo), gentes para quienes el Papa era el mismísimo Anticristo. Sin embargo, antes de llegar a la Ciudad Eterna, las tropas se amotinaron por el atraso de las pagas, lo que hizo que Frundsberg incapaz de restaurar el orden y enfermo se marcha a Ferrara y luego a Lecco a recuperarse. Los amotinados se dirigieron entonces a Roma y la tomaron al asalto, sometiéndola durante semanas a un terrible saqueo (Saco de Roma). Este asunto sacudió al viejo comandante hasta tal punto que sufrió un duro golpe del que fue incapaz de restablecerse. Frundsberg se trasladó a Alemania después de una larga estancia en hospitales italianos.