Los primeros Lysanders entraron en servicio en junio de 1938 en las filas del 16º Squadron de la RAF y fueron equipando a los escuadrones para la cooperación con el ejército e inicialmente utilizados para lanzamiento de mensajes y artillería de detección. Cuando empezó la guerra en Europa, el temprano Mk I había sido reemplazada en gran parte por Mk II; la mayoría de los Mk I fueron al Medio Oriente. Algunos de estos aviones, ahora designado tipo L.1, operaron con los Chindits del Ejército Indio Británico en la Campaña de Birmania de la Segunda Guerra Mundial. Tuvieron un importante papel en la Batalla de Madagascar: campaña aliada para capturar esta Isla africana, que estaba controlada por la Francia de Vichy.