В 1509 году монастырь был обновлён митрополитом Виссарионом I. Почти 200 лет Тврдош был центром Требинской митрополии. В 1667 году монастырь сильно пострадал от землетрясения, но был восстановлен митрополитом Василием Острожским. В 1694 году во время Великой Турецкой войны венецианцы взорвали монастырь.