De hoofdrol, "Liz Lemon" wordt vertolkt door Tina Fey, die tevens bedenkster en uitvoerend producent is. Liz is hoofdschrijver van "TGS With Tracy Jordan" en tracht constant succes op professioneel en persoonlijk vlak te bereiken. Fey won voor haar rol in 2008 de Emmy Award voor Beste actrice in een komische serie Andere rollen worden vertolkt door Tracy Morgan, Jane Krakowski, Jack McBrayer, Scott Adsit, Judah Friedlander en Alec Baldwin. Ook kende de serie door de jaren heen diverse prominente gastacteurs, waaronder Oprah Winfrey, Al Gore, Jerry Seinfeld, Paul McCartney en Kim Kardashian.