Isaac Darlington war ein Cousin der Kongressabgeordneten Edward Darlington (1795–1884) und William Darlington (1782–1863). Er besuchte die Friends School in Birmingham. Anschließend unterrichtete er selbst als Lehrer in den Bezirksschulen seiner Heimat. Nach einem Jurastudium und seiner 1801 erfolgten Zulassung als Rechtsanwalt begann er in West Chester in diesem Beruf zu arbeiten. Politisch wurde er Mitglied der Ende der 1790er Jahre von Alexander Hamilton gegründeten Föderalistischen Partei. Von 1807 bis 1809 saß er als Abgeordneter im Repräsentantenhaus von Pennsylvania; in den Jahren 1814 und 1815 war er während der Endphase des Britisch-Amerikanischen Kriegs Leutnant in einem Freiwilligenregiment aus Pennsylvania.