В 1519 году король Испании Карл I был выбран императором Священной Римской империи под именем Карл V. Под его властью оказались огромные владения: Испания и её обширные колонии в Америке, большая часть Германии, Нидерланды, Сицилия и Неаполь, а титул императора позволил выдвинуть претензии на Милан и Бургундию, являвшимися частью империи. Начавшаяся в Германии Реформация, борьбу с которой возглавил Карл V, обеспечила ему поддержку папства. В 1521 году испано-имперская армия захватила Ломбардию и Милан, одержав 27 апреля 1522 года решающую победу при Бикокке, а также оккупировала Геную. Папа вновь занял Парму и Пьяченцу. В 1523 году Венеция, воевавшая в союзе с Францией, заключила сепаратный мир. Французы, оставшись без союзника, к концу 1524 года были полностью вытеснены из Италии.