1863년 프레데릭 7세가 후사 없이 죽자 슐레스비히와 홀슈타인을 놓고 충돌이 일어난다. 덴마크와 슐레스비히의 왕위(공작위)계승 계보에 따르면, 덴마크와 슐레스비히의 지배권은 모두 크리스티안 글뤽스부르크 공작(나중에 크리스티안 9세로 즉위한다)에게 상속되어야 했으며, 홀슈타인의 지배권은 누구에게 상속되어야 할지 논란이 있었다. 이 결정은 라이벌인 친독일 성향 덴마크 왕가인 아우구스텐보르그 가의 반발을 불렀다. 이들은 앞서 1848년 주장했던 바와 같이 다시 슐레스비히와 홀슈타인 모두의 공작위를 요구했다. 1863년 11월 덴마크와 슐레스비히 공동의 헌법이 통과되었는데, 비스마르크는 이를 프로이센과 오스트리아가 이 문제에 간섭하여 덴마크에 전쟁을 선포할 빌미로 삼았다. 이로써 제2차 슐레스비히 전쟁이 발발하였고 덴마크는 패배하였다. 영국은 1864년 런던 회의를 열어 중재하려 노력하였으나 실패로 끝나고, 덴마크는 슐레스비히 전체(현재는 북부 슐레스비히는 다시 덴마크령이다), 홀슈타인, 라우엔부르크를 프로이센과 오스트리아에 빼앗긴다.