21 години по-късно папските гвардейци спасяват папа Климент VII от войските на Свещената Римска империя, които водени от Карл V плячкосват Рим. В клането умират 8000 души, а много ценни документи и артефакти са изгорени от германската армия. Много сгради, дворци и резиденции са сериозно пострадали. На 6 май 1527 г. Папската армия влиза в кръвопролитен бой с войската на Карл V. Умират 147 войници, но Климент VII успява да избяга с 42 гвардейци и да се скрие в укреплението „Сант Анджело“. Обсадата продължава 5 седмици, но папата отново се спасява (вж. Разграбване на Рим (1527)). Оттогава насам 6 май е ден на Швейцарската гвардия. На този ден новите попълнения на армията, съставени от млади швейцарци, полагат клетвите си.