Antoine Kambanda nasceu em 10 de novembro de 1958 em Ruanda. Por causa da violência interétnica, sua família mudou-se brevemente para Burundi e depois para Uganda, onde ele cursou o ensino fundamental, e depois para o Quênia, onde cursou o ensino médio. Mais tarde, ele retornou à sua terra natal, onde frequentou o seminário menor em Rutongo em Kigali (1983-1984) e o Seminário Maior de São Carlos de Nyakibanda em Butare (1984-1990). Em 8 de setembro de 1990, ele foi ordenado sacerdote em Kabgayi pelo Papa João Paulo II, que estava em visita apostólica. Depois disso, foi Prefeito de Estudos de 1990 a 1993 no seminário menor de São Vicente de Ndera, Kigali. Em seguida, frequentou a Pontifícia Academia Afonsiana de Roma de 1993 a 1999, onde obteve o doutorado em teologia moral. Seus pais e cinco de seus seis irmãos, junto com muitos outros parentes e amigos, foram mortos em 1994 durante o genocídio contra os tútsis.