Etter overleveringen ble skipet satt inn på ruten hun var bygd for, Rotterdam-ruten. 5. desember 1939 ble DS «Ariadne» satt inn i regulær hurtigrutetrafikk. Under angrepet på Norge 9. april 1940 var skipet i Nord-Norge, og ble rekvirert av de norske myndighetene. Hun ble benyttet til troppetransporter i forsvaret av Nord-Norge, og senere som hospitalskip. 8. juni seilte hun vestover med 54 mennesker ombord, for å prøve å ta seg over Norskehavet til allierte havner. Hun fikk følge av Det Nordenfjeldske Dampskibsselskabs (NFDS) DS «Prins Olav», et annet hurtigruteskip som hadde unnsluppet krigshandlingene. Klokken 22.30 9. juni 1940 omkring 80 nautiske mil vest av Røst, ble de to skipene oppdaget av seks tyske bombefly. Flyene gikk til angrep, og bestrøk skipene med maskingeværsalver og slapp bomber. DS «Ariadne» ble truffet først, selv om hun var merket som hospitalskip. DS «Prins Olav» gjorde unnvikende manøvrer, men ble til slutt truffet av to bomber i akterskipet. Begge skipene sank, og en person fra DS «Prins Olav» omkom, mens åtte mennesker fra DS «Ariadne» mistet livet. Alle de resterende ble plukket opp noen timer senere av den britiske jageren HMS «Arrow».