V druhom semifinálovom behu postúpil Tyson Gay, podobne ako aj ďalší favorit Asafa Powell, ktorý prekonal v semifinále rekord Mauricea Greenea v počte behov na 100 metrov zabehnutých pod 10 sekúnd o jeden beh. Po finále sa vyjadril, že sa počas tohto behu zranil po tom, čo si natiahol slabiny. Ďalšie miesta už neboli tak výrazne zastúpené v úvahách všeobecného predpokladu na postup do finále, ale najväčšie šance na postup sa prikladali Richardovi Thompsonovi a Dwainovi Chambersovi, ktorí nakoniec aj postúpili. Japonec Naoki Cukahara skončil posledný, pričom bol jediným reprezentantom ázijského kontinentu v semifinále a predposledný Gerald Phiri bol zas jediným africkým reprezentantom v semifinále. Michael Frater, finalista behu na 100 metrov z Letných olympijských hier 2008, vypadol podobne ako Američan Monzavous Edwards.