1 травня 1940 року підводний човен був спущений на воду, а вже 10 числа, після вторгнення Німеччини, O 25 був затоплений у водосховищі Ньїве-Ватервег поблизу Роттердама, оскільки не було доступного буксира для буксирування човна до Великої Британії.