Op 22 juni 2010 begon Isner op Wimbledon tegen Nicolas Mahut aan de langste wedstrijd in de geschiedenis van het tennis, de partij duurde ruim elf uur en werd pas op 24 juni beëindigd. Isner won de partij uiteindelijk met 6-4, 3-6, 6-7(7), 7-6(3) en 70-68. Tijdens die wedstrijd verbrak Isner het record van meeste aantal aces in één wedstrijd: hij maakte er 113. Mahut deed niet veel voor Isner onder met 103 aces.