Le 5 mai 1866, l'ordre de mobilisation est émis et le régiment se déplace en train le 24 mai jusqu'à Potsdam. De là, il commence la marche vers Brieg et traversé la frontière de la Bohême le 26 juin avec la division de la Garde. Les premières escarmouches avec les Autrichiens ont lieu à Soor. Le lendemain, les et bataillon réussissent à capturer douze officiers et 394 hommes à Burkersdorf et Staudenz. Les fusiliers sont entrés en action dans la , mais n'ont aucun rôle direct dans l'issue victorieuse. Dans la bataille de Sadowa, le 3 juillet, les et bataillons capturent les hauteurs stratégiquement importantes près de et éliminent les batteries d'artillerie ennemies qui y sont positionnées. Au cours de la bataille, le régiment perd trente hommes et a blesse quatre officiers et 189 hommes.