Die Häuser der dunklen Gasse überstanden den großen Brand von 1842 weitgehend unbeschadet. Erst die Folgen der Choleraepidemie von 1892 führten zu umfangreichen Sanierungsmaßnahmen, die zwischen 1906 und 1909 die Straße zu einer modernen und vornehmen Geschäftsstraße mit Kontorhäusern wie dem Barkhof, dem Südseehaus und den Semperhäusern umwandelten. Büros von Handelshäusern belegten die Obergeschosse, während die Erdgeschosse häufig als Verkaufsräume vermietet wurden. Die zentrale Lage und die Nähe zum Hauptbahnhof ließen die Spitalerstraße zu einer der attraktivsten Einkaufsstraßen Hamburgs werden, wobei allerdings zunehmend der wachsende Autoverkehr störte. Letzteres führte dazu, dass die Straße zum 7. September 1968 in eine Fußgängerzone umgewandelt wurde.