Профренската политика на папа Климент VII предизвиква разграбването на Рим от немците и довежда до изгонване на Медичите от Флоренция през 1527 г. Тогава папата сключва съюз с императора на Свещената римска империя Карл V и с негова помощ връща Флоренция на Алесандро, който се жени за незаконната дъщеря на Карл V Маргарите и получава титлата херцог на Флоренция. Разпуснатият живот на Алесандро ражда масово недоволство, намерило израз в организиран заговор. В резултат херцогът е убит от роднината си Лоренцино през 1537 г.