1537年6月，查理五世承认科西莫为佛罗伦萨的领导，条件是佛罗伦萨要在意大利战争中支持哈布斯堡皇帝对抗法国。从此后美第奇家族一直统治着佛罗伦萨，直到家族的最后一位大公吉安·加斯托内·德·美第奇（1671年-1737年）。