Delle 22 squadre che la composero, le sette nuove squadre rispetto all'edizione precedente furono le retrocesse dalla Serie A 2008-2009 (, e , che hanno preso il posto delle promosse , e ), e le promosse dalla Lega Pro Prima Divisione 2008-2009 (, , e , rimpiazzano le retrocesse , , e il , delle quali solo il Rimini è riuscito a iscriversi in Lega Pro 2009-2010: i toscani e gli irpini sono iscritti in Serie D e i veneti sono iscritti in Eccellenza. Il Gallipoli è esordiente in Serie B.