Tsjechië nam deel aan de Olympische Zomerspelen 2016 in Rio de Janeiro, Brazilië. Het land had een selectie bestaande uit meer dan honderd sporters, actief in twintig olympische sportdisciplines. Judoka Lukáš Krpálek droeg de Tsjechische vlag bij de openingsceremonie; hij won het enige goud van Tsjechië in 2016, door in de gewichtsklasse tot 100 kilogram de Azerbeidzjaan Gasimov te verslaan. Josef Dostál, drager van de nationale vlag bij de sluitingsceremonie, was winnaar van een van de overige tien olympische medailles van de Tsjechische ploeg: bij de K-1 1000 meter sprint won hij het zilver. Dostál was ook succesvol met de K-4 op de 1000 meter, waarbij Tsjechië het brons won.