Setelah kematian Aleksander, Athena dikalahkan oleh Antipatros dalam Perang Lamian dan pelabuhannya di Piraeus menampung garnisun Makedonia. Untuk melawan kekuatan Makedonia di bawah Kassandros, Athena menjalin hubungan dengan para penguasa Helenistik lainnya, seperti Antigonos I Monophthalmus, dan pada tahun 307 Antigonus mengirim putranya Demetrius untuk merebut kota. Setelah Demetrius menguasai Makedonia, Athena menjadi sekutu dengan Mesir Ptolemaik dalam upaya mendapatkan kemerdekaannya dari Demetrius, dan dengan pasukan Ptolemaik mereka berhasil memberontak dan mengalahkan Makedonia pada tahun 287, meskipun Piraeus tetap diamankan. Perlawanan-perlawanan Athena gagal dalam menghadapi Makedonia meski dengan bantuan Ptolemaik seperti halnya Perang Kremonides. Kerajaan Ptolemaik pada saat itu menjadi sekutu utama kota, mendukung dengan pasukan, uang, dan material dalam berbagai konflik. Athena menghadiahi Kerajaan Ptolemaik pada 224/223 SM dengan memberi nama phyle ke-13 Ptolemais dan mendirikan kultus agama yang disebut Ptolemaia. Athena Helenistik juga menyaksikan munculnya Komedi Baru dan aliran filsafat Helenistik seperti Stoikisme dan Epikureanisme. Pada pergantian abad, Dinasti Attalidia di Pergamum menjadi pendukung dan pelindung Athena saat kekaisaran Ptolemaik melemah. Athena nantinya juga akan mendirikan kultus untuk raja Pergamus, Atalos I.