Zwölf Jahre nach dem vorläufig letzten Friedensschluss von 1852 wurde um Schleswig und Holstein wieder Krieg geführt. Dieser Deutsch-Dänische Krieg von 1864 versprach anfangs noch eine österreichisch-preußische Zusammenarbeit unter dem Dach des Deutschen Bundes. Preußens Ministerpräsident Otto von Bismarck nahm den Streit über die gemeinsame Herrschaft in Schleswig und Holstein 1866 zum Anlass, aus dem Bund auszutreten. Der folgende Deutsche Krieg beendete Österreichs Vorherrschaft in Deutschland und führte zur Auflösung des Deutschen Bundes.