Im Juni 1866 mit Beginn des Dritten Italienischen Unabhängigkeitskriegs übernahm Ricasoli erneut die Spitze der Regierung. Er scheiterte jedoch wie zuvor an der Frage einer Aussöhnung mit dem Vatikan, diesmal am Widerstand antiklerikaler Kräfte im Parlament. So sah er sich im April 1867 abermals zum Rücktritt genötigt.