Am 16. Mai 1866 wurde das I. und II. Bataillon der 6. Brigade/3. Division unterstellt, das III. Bataillon wurde bei Hof an der oberfränkischen Grenze zu Wachaufgaben abgestellt. Die Bataillone traten zu je zwei Schützen- und vier Füsilierkompanien à 144 Mann an. Im Juli 1866 wurde das IV. Bataillon zur Sicherung an der Grenze zu Böhmen aufgestellt, welches am 31. August 1866 wieder aufgelöst wurde. Das Reserve-Bataillon war bis 23. August 1866 Garnison der Festung Ingolstadt und wurde zum 1. September 1866 wieder aufgelöst. Im Gefechte bei Dermbach am 3. Juli 1866 musste die 1. Schützen-Kompanie acht Gefallene und dreißig Verwundete hinnehmen. Bei Zella (4. Juli) war das II. Bataillon beteiligt und verlor 21 Mann. Das I. Bataillon hielt zusammen mit einigen Kompanien des 6. Infanterie-Regiments am 10. Juli 1866 den Offenthaler Berg (bei Hammelburg) über vier Stunden gegen dreizehn preußische Bataillone. Am 24. Juli wurde das III. Bataillon zur Reserve-Brigade abgegeben, das I. und II. Bataillon fochten tags darauf bei Helmstadt. Dabei hatten die beiden Bataillone fünfzehn Tote und 39 Verwundete zu beklagen. Das III. Bataillon kam am 26. Juli 1866 zum Einsatz und büßte dabei einen Offizier, einen Unteroffizier sowie zwei Mann ein. Insgesamt hatte das Regiment während des gesamten Deutschen Krieges an Gefallenen nur zwei Offiziere und dreißig Mann hinzunehmen.