V roce 1524 Karel vyhnal Francouze pod Bonnivetovým velením z Lombardie a bojoval v bitvě u Pavie. Císař předal Karlovi velení nad smíšenou španělsko-německou armádou (která zahrnovala řadu luteránů) vyslanou k potrestání papeže Klementa VII. Zanedbal však zásobování této armády penězi a jídlem a Karel dokázal vojáky udržet pohromadě pouze slibem bohaté kořisti. Ačkoli Klement sjednal s císařem příměří, armáda pokračovala v postupu a dosáhla v květnu 1527 Říma. Karlova smrt - umělec a zlatník Benvenuto Cellini tvrdil, že vystřelil ránu, která ho zabila - před hradbami odstranila poslední zábrany vojáků, což vyústilo ve vydrancování Říma.