1526年弗朗索瓦一世与教宗克勉七世缔结科涅克同盟，聯手發動反查理的，當弗朗索瓦一世撕毀與查理五世的馬德里條約時，教宗以上帝的名義認可條約無效，給予弗朗索瓦一世神聖的加持。作为报复，查理五世1527年再度派軍侵入意大利，包圍羅馬。因為主帥夏爾三世·德·波旁意外死亡，西班牙军队在暴亂中焚掠罗马并掠走教宗，是為羅馬之劫。此後一百年內，教宗常常受到西班牙國王的壓力和巨大影響（西班牙正式在義大利稱霸），使其无法批准英格兰国王亨利八世离弃查理的姨母阿拉貢的凱瑟琳，逼使亨利八世在1533年發動宗教改革。