En 219, la prise et la destruction de Sagonte, récente alliée de Rome, par Hannibal Barca déclenchent la Deuxième Guerre punique. C'est dans ce contexte de rivalités guerrières entre les deux puissances méditerranéennes que Séville est prise par les Carthaginois qui s’emparent violemment de la ville en -216. Dix ans plus tard, la victoire à la bataille d'Ilipa permet aux troupes romaines menées par le général Scipion de s’emparer de l’antique Ispal en -206. Cette victoire ouvre la voie à la conquête de l'Hispanie, convoitée pour ses métaux et ses sols fertiles. La première étape de la conquête est marquée par la soumission de l’Hispanie ultérieure, qui deviendra une des régions les mieux intégrées à l'Empire. Les Romains rebaptisent Séville sous le nom d’Hispalis. La reconstruction de la ville commence, parallèlement à la fondation par Scipion du premier établissement romain du Sud de la péninsule Ibérique, Itálica, ville aujourd'hui en ruines (commune de Santiponce). La fondation de cette colonie répond à des exigences pratiques — accueillir les vétérans des légions romaines — mais aussi certainement stratégiques : l'installation d'une ville romaine en face d'Hispalis permet de surveiller cette dernière, tout en contrôlant le Bætis (nom donné par les Romains au Guadalquivir). Les deux cités se forgent alors des caractéristiques propres : à Itálica le rôle de lieu de résidence, à Hispalis les fonctions commerciales, artisanales et industrielles. L’antique Ispal reste durant des décennies à l’ombre de sa prestigieuse voisine, qui donnera naissance à deux empereurs romains : Hadrien et Trajan.