В 1508—1513 годах принимал участие в Войне Камбрейской лиги. В 1513 году назначен Франческо Марией делла Ровере посланником в Риме. Поддерживает дружеские отношения с художниками и писателями из круга папы Льва X: Пьетро Бембо, Якопо Садолето, Бернардо Довици да Биббиена, Томмазо Ингирами, Рафаэлем, Микеланджело, Антонио Тебальдео, Федерико Фрегозо. В 1515 году королём Франции становится Франциск I; Кастильоне предпринимает дипломатические усилия для налаживания отношений Льва X с новым монархом, но безрезультатно. В 1516 году отправляется в ссылку в Мантую вслед за отстранённым от власти Франческо Марией делла Ровере.