Родился в Нью-Йорке, в семье основателя ювелирной фирмы «Тиффани и Ко» — Чарльза Льюиса Тиффани. Выросший в роскоши и окружённый красивыми вещами, Луис Комфорт Тиффани решил посвятить себя искусству. Обучался живописи у Джорджа Иннесса и Сэмюэля Колмена в Нью-Йорке, и в Париже у Леона Байли. В 1876 году состоялась экспозиция работ Тиффани на Всемирной выставке в Филадельфии, а в 1877 году он стал одним из учредителей «Общества американских художников».