Nach der Schlacht bei Tannenberg erlebte die Stadt ab 1410 schnell eine Blütezeit, in der sie sich territorial erweiterte. Hrodna wurde von zwei Bürgermeistern regiert, einem katholischen und einem orthodoxen. Ihre goldene Zeit erlebte die Stadt während der Herrschaft der Jagiellonen- und Wasa-Dynastie. Während der Zeit von Stefan Batory wurde Hrodna de facto zur Hauptstadt des polnisch-litauischen Reiches. Das alte Schloss wurde damals ausgebaut, es entstand eine Jesuiten-Schule. Hrodna war Sitz des Krontribunal, des höchsten Gerichts für die Gebiete des Großfürstentums Litauen.