Eredetileg 43 ország erősítette meg részvételét a dalfesztiválra, beleértve Bosznia-Hercegovinát, Bulgáriát, Horvátországot és Ukrajnát is, melyek három, kettő, kettő, illetve egy kihagyott év után vettek részt újból. Portugália viszont 2013 után ismételten nem vesz részt, illetve Romániát 2016. április 22-én kizárták a versenyből a TVR köztelevízió EBU felé való tartozásai miatt. Így végül 42 ország vett részt a 2016-os Eurovíziós Dalfesztiválon.