С началом Восточной войны 1853—1856 годов Екатеринбургский полк вошёл в состав войск, занявших Молдавию и Валахию, и затем находился в отряде генерала Бельгарда. В октябре 1854 года полк вошёл в состав Севастопольского гарнизона, где наиболее отличился в Инкерманском сражении 24 октября, когда после лихой атаки на бригаду Кодрингтона, 2-й и 4-й батальоны Екатеринбургского полка ворвались в английский лагерь, налетели на батарею и заклепали на ней четыре орудия.