10 czerwca 1940 roku, w momencie ataku Włoch na Francję, okręt wchodził w skład 34. eskadry okrętów podwodnych 3. Flotylli w Mesynie (wraz z siostrzanymi „Goffredo Mameli”, „Pier Capponi” i „Giovanni da Procida”). Dowództwo jednostki sprawował kmdr ppor. (wł. "capitano di corvetta") Mario Vannutelli. Na przełomie lipca i sierpnia okręt operował na wodach między Kretą a Aleksandrią, wraz z „Goffredo Mameli” i „Narvalo”. Od 15 do 21 października „Tito Speri” ponownie patrolował wody na południe od Krety, wraz z „Santorre Santarosa”, „Ascianghi”, „Anfitrite”, „Fratelli Bandiera” i „Enrico Toti”.