Ана де Мендоса-и-де ла Серда принадлежала к одной из знатнейших семей Испании, являясь потомком младшей линии  — графов де Мелито, обладавших крупными земельными владениями в Калабрии. Её прадедом по отцовской линии был знаменитый кардинал Мендоса, прославившийся как полководец во время войны за кастильское наследство (1475—1479), а затем служивший Католическим королям в качестве примаса Испании. Как священнослужитель, он не имел права иметь детей, однако Педро Гонсалес имел трёх сыновей от двух жён. Все они были легитимизированы папой и Фердинандом Арагонским в 1489 году.