В 1922 году Глисон дебютировал на большом экране, появившись в дальнейшем в более чем сотне фильмов, среди которых «Познакомьтесь с Джоном Доу» (1941), «А вот и мистер Джордан» (1941, номинация на премию «Оскар» за лучшую мужскую роль второго плана), «Сказки Манхэттена» (1942), «Мышьяк и старые кружева» (1944), «Ключи от царства небесного» (1944), «Дерево растет в Бруклине» (1945), «Жена епископа» (1947), «Сделай один ложный шаг» (1949) и «Ночь охотника» (1955).