Am 28. März 1941 war die "Stuart" als Force C (10. Zerstörerflottille mit den Zerstörern "Greyhound", "Griffin", "Hotspur" und "Havock") an der Seeschlacht von Kap Matapan beteiligt. Im Taggefecht kamen die Kreuzer und die Flugzeuge des Trägers HMS "Formidable" zum Einsatz. Bei der Suche nach dem durch einen Lufttorpedo beschädigten Schlachtschiff "Vittorio Veneto" stieß die "Stuart" in der Dunkelheit auf italienische Kreuzer der Zara-Klasse, die von den britischen Schlachtschiffen HMS "Barham", HMS "Valiant" und HMS "Warspite" unter Feuer genommen wurden. Die "Fiume" sankt sofort, die von den britischen Schlachtschiffen schwer getroffene "Zara" und die zuerst von einem Lufttorpedo getroffene "Pola" wurden kampfunfähig später von britischen Zerstörern versenkt, die sogar versucht hatten, die "Pola" als Prise einzuschleppen. Die britischen Schlachtschiffe zogen sich wegen befürchteter Torpedoangriffe nach kurzem Artillerieeinsatz zurück. "Stuart" und die anderen Zerstörer (zusätzlich auch die 14. Zerstörerflottille mit "Jervis", "Janus", "Mohawk" und "Nubian") versenkten die durch Artillerietreffer der Schlachtschiffe angeschlagenen Zerstörer "Vittorio Alfieri" und "Giosué Carducci", die "Vincenzo Gioberti" und "Alfredo Oriani" konnten schwer beschädigt entkommen. Außer den vier Zerstörern der Oriani-Klasse, die die schweren Kreuzer begleiteten, griffen andere italienische Zerstörer nicht ein. 2303 italienische Seeleute kamen ums Leben, 1015 Seeleute wurden von den britischen Zerstörern gerettet, die den Italienern auch den letzten Standort ihrer Schiffe übermittelten.