s.Pz.B.41 активно использовались вплоть до окончания войны, последние случаи боевого применения относятся к Берлинской операции. Помимо боёв на восточном фронте, известно о применении этого орудия в боях в Северной Африке и на западном фронте в 1944—1945 годах. Баллистические возможности орудия позволяли ему бороться с лёгкими, а в благоприятных условиях также со средними и даже тяжёлыми танками противника (например, зарегистрирован случай пробития снарядом s.Pz.B.41 нижнего лобового листа тяжёлого танка ИС-2). В ноябре 1944 года в вермахте было 1336 s.Pz.B.41, в апреле 1945 года ещё оставалось 853 орудия (775 в войсках и 78 на складах). Часть орудий была установлена на бронетранспортёры Sd.Kfz.250 (получившаяся модификация имела наименование Sd.Kfz.250/11) и бронеавтомобили Sd.Kfz.221.