Am Krieg gegen Dänemark von 1864 nahm das Regiment als Teil der 6. Infanterie-Division im kombinierten Armeekorps teil. Der erste Kampfeinsatz war das Gefecht von Missunde am 2. Februar 1864. Daran nahmen alle drei Bataillone des Regiments unter Führung des Regimentskommandeurs Oberstleutnant von Hartmann teil. Das Regiment erlitt an diesem Tag Verluste von 10 Toten und 3 Vermissten, dazu kamen 29 Verwundete. Bis auf fünf Verwundete stammten alle Verluste aus dem II. Bataillon, das am rechten Flügel von der Ornumer Mühle gegen die Bastion 60 vorging, und dort im freien Feld dem Kartätschen- und Gewehrfeuer ausgesetzt war.