Το έτος 1789 έφερε τη Γαλλική Επανάσταση και μαζί της τη διαίρεση της Αλσατίας στους νομούς Άνω Ρήνος και Κάτω Ρήνος. Οι Αλσατοί έπαιξαν ενεργό ρόλο στη Γαλλική Επανάσταση. Στις 21 Ιουλίου 1789, μετά την είδηση για την άλωση της Βαστίλης στο Παρίσι, πλήθος ανθρώπων συγκεντρώθηκε στο δημαρχείο του Στρασβούργου, αναγκάζοντας τους διοικητές της πόλης να φύγουν και έθεσαν έτσι συμβολικά τέλος στο φεουδαρχικό σύστημα στην Αλσατία. Το 1792, ο Ρουζέ ντε Λιλ συνέθεσε στο Στρασβούργο το επαναστατικό τραγούδι η Μασσαλιώτιδα (ως "Τραγούδι για το στρατό του Ρήνου"), το οποίο αργότερα έγινε ο εθνικός ύμνος της Γαλλίας. Η Μασσαλιώτιδα ακούστηκε για πρώτη φορά τον Απρίλιο του ίδιου έτους στο σαλόνι του δημάρχου του Στρασβούργου Ντίτριχ. Μερικοί από τους πιο διάσημους στρατηγούς της Γαλλικής Επανάστασης προέρχονταν επίσης από την Αλσατία, όπως ο Κελλερμάν, ο νικητής του Βαλμί, ο Κλεμπέρ, ένας από τους στρατηγούς της Γαλλικής Δημοκρατίας στον πόλεμο της Βανδέας και ο Βεστερμάν, που επίσης πολέμησε στη Βανδέα.