De eigenaar van Twickenham Stadium is de Engelse rugbybond RFU. Alle interlands van het Engelse nationale team worden hier gespeeld. Dus alle vriendschappelijke wedstrijden, alsmede de wedstrijden voor het Zeslandentoernooi voor herenteams en damesteams. Het stadion is ook gebruikt voor het wereldkampioenschap rugby in 1991, 1999 en 2015. Naast deze wedstrijden tussen landenteams wordt het stadion ook gebruikt voor een aantal rugbywedstrijden tussen clubs. Zo wordt de finale van de "Guinness Premiership", de Engelse nationale clubcompetitie, gespeeld in Twickenham en ook de "EDF Energy Cup", het Engels-Welsh bekertoernooi. De "Varsity Match" wordt sinds 1921 elk jaar op de tweede dinsdag van december in Twickenham gespeeld, dit is een wedstrijd tussen de universiteiten van Oxford en Cambridge. Het is de rugbyversie van de Boat Race die jaarlijks tussen deze twee universiteiten wordt gevaren op de Theems. Het stadion is ook de plaats voor de finale van de "Daily Mail Cup", de competitie tussen Engelse scholen. De finale van de "Heineken Cup", het Europese bekertoernooi voor clubteams, is ook een aantal keer gespeeld in Twickenham.