Una compañía del regimiento participó de la Expedición al Paraguay al mando de Manuel Belgrano. El 23 de septiembre de 1810 se reunió con otras fuerzas de la expedición en el campamento de San Nicolás de los Arroyos y luego avanzó por la Mesopotamia argentina integrando la 1° División, bandera roja, al mando del mayor José Machaín. El 19 de diciembre participó del Combate de Campichuelo y luego fue reforzada con soldados de la disuelta "Compañía de Zapadores de la Banda Oriental". Formó parte de la vanguardia de la expedición, encontrándose en las batallas de Paraguarí (19 de enero de 1811) y Tacuarí (14 de febrero de 1811).