Questo ramo più giovane chiamato "Gonzaga-Guastalla" entrerà in conflitto con il ramo dei "Gonzaga-Nevers" nel 1628 in occasione della Guerra di successione di Mantova e del Monferrato, i cui pretendenti per la successione su Mantova di Vincenzo II furono da una parte Ferrante II di Guastalla e dall'altra Carlo I di Gonzaga-Nevers.