Ihren letzten Einsatz hatte die nassauische Armee im Deutschen Krieg von 1866, an dem Nassau mit etwa 6100 Soldaten teilnahm. Herzog Adolf führte persönlich den Oberbefehl. Nach dem Gefecht bei Zorn (12. Juli 1866) verließ Herzog Adolf sein Herzogtum. Die nassauische Armee wurde in den Odenwald verlegt und nahm noch an den Gefechten bei Tauberbischofsheim (24. Juli 1866) und Gerchsheim (25. Juli 1866) teil. Insgesamt hatte die Armee in diesem Krieg fünf Gefallene und sieben Vermisste zu verzeichnen.