El 1324 la reina Elisabet Riquilda de Polònia va fundar l'actual basílica de l'Assumpció de la Mare de Déu, que actualment és el seu lloc de descans final. Al , Brno es va convertir en un dels centres de les assemblees regionals de Moràvia, reunions que es van alternar entre Brno i Olomouc. Aquestes assemblees van prendre decisions polítiques, legals i financeres. Brno i Olomouc van ser també les seus de la Cort del país i les Taules de Terres de Moràvia, per la qual cosa van ser les dues ciutats més importants de Moràvia. Des de mitjan fins a principis del , el castell de Špilberk havia servit com a seu permanent dels marcgravis de Moràvia (governants moravians); un d'ells va ser elegit rei dels Romans. Brno fou assetjada el 1428 i de nou el 1430 pels hussites durant les guerres hussites. Els dos intents de conquesta de la ciutat van fracassar.