재위 기간 동안 그는 프랑스의 왕 프랑수아 1세와 그의 후계자 앙리 2세와의 사이에 벌어진 이탈리아 전쟁에 집중하였다. 이 전쟁에서 신성 로마 제국은 엄청나게 많은 전비를 소모했으나, 무적의 테르시오 부대와 황제의 재상 메르쿠리오 가티나라 및 프란치스코 데 로스 코보스 이 몰리나의 도움으로 군사적 성공을 거두었다. 카를 5세에게 밀라노와 프랑슈콩테를 빼았긴 프랑수아 1세는 오스만 제국과 동맹을 맺었다. 카를 5세의 라이벌 쉴레이만 대제는 1526년에 헝가리 왕국을 정복하고 1529년에 빈을 포위하였으나 끝내 점령하지 못하고 물러났다.(참조 : "모하치 전투, 빈 공방전")