Matylda Pešková silně sympatizovala s českou národní myšlenkou a čile se zapojovala do veřejného a spolkového života. Spoluorganizovala řadu přednášek, pořádaných Vojtou Náprstkem a ženským spolkem Americký klub dam, jehož byla členkou. 30. listopadu 1867 byla spolu se Sofií Podlipskou a dalšími českými vlastenkami odsouzena na 48 hodin vězení za účast na pochodu na Bílou horu připomínající bitvu na Bílé hoře.