80. peruť byla reaktivována v březnu 1937 opět jako stíhací jednotka, vybavená nyní stroji Gloster Gauntlet. Ty již nicméně zastarávaly, a proto byly brzy nahrazeny stíhačkami Gloster Gladiator. V roce 1938 se s nimi peruť navrátila do Egypta jako jednotka protivzdušné obrany. Po vypuknutí druhé světové války a vstupu Itálie do ní byla peruť přesunuta na egyptsko-libyjskou hranici, ale poté, co Itálie napadla Řecko, byla jednou z jednotek vyslaných k jeho obraně. Od ledna 1941 začala být vybavována Hawkery Hurricane. Peruť během bojů v Řecku a na Krétě přišla o většinu svého vybavení a v květnu 1941 byla obnovena na základně RAF Aqir v Palestině. Odřad peruti poté operoval z Nikósie na Kypru, a její letka „A“ z Haify. V červenci 1941 se celá peruť přemístila na Kypr, předtím než byla následující měsíc přeložena do Sýrie a o dva měsíce později pak opět do bojů v severní Africe. Během bitvy u El Alameinu poskytovala ochranu zásobovacím liniím před útokem letectev Osy. Jednotka setrvala ve Středomoří až do začátku roku 1944, kdy se vrátila na Britské ostrovy, aby se zapojila do příprav na operaci Overlord, spojenecké vylodění v Normandii. Po vylodění byla přezbrojena stroji Hawker Tempest, s nimiž se zapojila do obrany proti útokům letounových střel V-1. Po odeznění této hrozby se peruť přesunula na evropský kontinent, kde působila jako stíhací až do konce války.