Rei coroado na Alemanha, Carlos ficou do lado do e declarou Martinho Lutero um fora da lei na Dieta dos Worms(1521). No mesmo ano, Francisco I da França, cercado pelas posses dos Habsburgo, iniciou um conflito na Lombardia que durou até a Batalha de Pavia (1525), levando à sua prisão temporária. O caso protestante ressurgiu em 1527, quando Roma foi saqueada por um exército dos rebeldes soldados de Carlos, em grande parte da fé luterana. Depois que suas forças deixaram os Estados papais, Carlos V defendeu Viena do Império Otomano e obteve a coroação como rei na Itália pelo papa Clemente VII. Em 1535, ele anexou o ducado vago de Milão e capturou Tunes. No entanto, a expedição de Argel e a perda de Buda no início dos anos 1540 frustraram suas políticas anti-otomanas. Enquanto isso, Carlos V havia chegado a um acordo com o para a organização do Conselho de Trento (1545). A recusa da Liga de Esmalcalda luterana em reconhecer a validade do Conselho levou a uma guerra vencida por Carlos V com a prisão dos príncipes protestantes. No entanto, ofereceu novo apoio à causa luterana e fortaleceu uma estreita aliança com o sultão Solimão, o Magnífico, o governante do Império Otomano desde 1520.