L'estinzione della famiglia Gonzaga, nel 1627, diede inizio alla seconda guerra di successione del Monferrato. Fu infatti Carlo I di Nevers, discendente di Federico II Gonzaga, a ereditare i due ducati. Questa volta, però, la Francia offrì supporto ai Gonzaga-Nevers; per questo motivo, Spagna e Sacro Romano Impero, sue avversarie nella guerra dei trent'anni, entrarono in guerra a fianco dei Savoia. Il conflitto si concluse nel 1631 con il trattato di Cherasco: Carlo I manteneva il possesso del Monferrato, ma cedeva Alba e Trino al duca di Savoia.