هنبدأ الجهة بالجزء العامل الـ Experiment اللي هي
التجربةأولا نحكي عن بعض المصطلحات ال illusion
تحكينا هو عبارة عن ال mobile phase تحكينا ال
mobile phase ممكن أسميه solvent ممكن أسميه liquid
ممكن أسميه illusion ال illusion هي motion of
mobile phase through the stationary phase هي حركة
ال mobile phase عبر ال stationary phase لما يمشي
السائل اللي هو ال mobile phase من الورقة اللي هي
ال stationary phase هذه الحركة بسميها illusionالـ
illusion time هو الوقت
اللذي يحتاجه الـ mobile phase للمعبور عبر
الستشريناري phase اللي بيكون له شهر illusion time
فهو بيمر أسرع عبر ال stationary phase اللي بيكون
وقته أقل أخد واجهة أجال إذا هو ماشي أسرع ال
illusion time هو الوقت اللي احتاجه ال mobile phase
عشان يمشي عبر ال stationary phase ال mobile phase
هو part of a chromatography system that is mobile
commonly a solvent mixture زي اللي في ال column
chromatography أو thin layer chromatography or gas
as gas in gas chromatographyال mobile phase هو جزء
من أجزاء ال chromatographic system هما جزءين ال
stationary و ال mobile ال mobile هو أحد أجزاءه
بيكون عبارة عن solvent عبارة أو ممكن يكون liquid
أو gas في تجربتنا لليوم إيش الأدوات اللي بدي
استخدمها بدي استخدم اللي you want أكيد بدي mobile
phase ال mobile phase اللي هو اللي you wantاللي
بنستخدمه اليوم هو عبارة عن unbutanol مع acetic
acid مع distilled water نسبة خمسة لواحد لخمسة بحط
خمسة من ال butanol على واحد من ال acetic acid على
خمسة من ال distilled water و أحركهم لمدة عشر دقايق
و بعدين بخليهم يفصلوا لطبقات باخد الطبقة اللي فاج
و بستخدمها ك اليوان ك mobile phaseبدي developing
solution developing solution هي دي عبارة عن مادة
كيميائية عشان توضح لون المادة المفصولة اليوم في
تجربتنا بدي اجيب .. بدي نجيب خليط من أحماض أمينية
خليط يحتوي على عدة أنواع من الأحماض الأمينية بدي
إياه يفصل لمكوناته لإن بعد ما التقنية تمشي ويفصل
إلى مكوناته بتكون عندي نقاط في كل .. كل مكون بيفصل
في مكان هذه النقاطبتكون colorless بتكون غير ملونة
على الورق اللى أنا استخدمتها للفصل ما بيظهر اللون
فهتكون مش هشوف النقاط وين فصلت فبدي محلول او مادة
تظهرلي اللون بتغير اللون اللى عندي يعني تحولها
تظهرليها بملون هتكون بألوان تانية فبدي استخدم مادة
بتحددلي اللون المادة المفصولةهذه المادة اللي اليوم
نستخدمها اسمها Developing Solution هي عبارة عن
تلاتة من عشرة جرام من النهيدرين على عشرة مل من
البيوتانول على تلاتة مل من الستيكاسين المغزاة إنه
أنا بدي أستخدم محلول يظهر لي لون المادة المفصولة
لأنها كانت عبارة عن colorless مالهاش لون فبعد
الفصل مش هعرف وين هي وفصلت وين هي وقفت إلا إذا
لونتهاأنا اليوم بضفص الأحماض أمينية، تمام؟ الأحماض
الأمينية، أيش الفحص اللي بيستخدم لكشف عن كل
الأحماض الأمينية؟ مع كل الأحماض الأمينية بيعطيني
positive من الفحصات اللي في أول معملة أخدناها كان
عبارة عن فحص الـ Nenhydrin الـ Nenhydrin بيعطيني
positive مع الـ Free Alpha Amino Group حكينا كلهم
عندهم هاي وبيتحول اللون لبربه، مع ذالب رولين عنده
amino group بس بيعطيني برضه لون يلون، يعني المغزة
هيطلع عندى لونيعني كلهم هيعطوني لهم فهيتلون و أشوف
وين هاي ال spot و اكفه إيش كمان بتستخدم؟ بتستخدم
solution of different amino acid بد الخليط اللي
بيحتوي على عدة مكونات من الأحماض الأمينيةو بدي ال
chromatography paper اللي هي ال stationary face و
بدي ال lotion chamber ال chamber اللي هو عبارة عن
زي بيكر بدي أحط فيه السائل اللي هو عبارة عن ال ال
mobile face السائل هدون بدي أحطه بشامبر بيكر glass
capillary force booting بدي tubeاللي هى الـ
Cabillary Tube القنابيب اللى رفيعة القنابيب
الشهرية اظن استخدمتها بالمقدمة هى القنابيب عشان
تحطلي ال spot اخد من العينة من الخليط نقطة صغيرة
تحطلي مقدار صغير ال drying oven بدي فرن لا تشفيف
على درجة حرارة 60 درجة سيليزيا هذا الفرن بس عشان
يجفف ويزيد التفاعل بين المواد و ال Nenhydrin بيزود
التفاعل المواد مع ال Nenhydrinكيف خطوات العمل؟ كيف
أنا بدي أشتغل التجربة؟ هلجيت أن أنا أخد أولا ال
stationary fast الورقة تمام هجيت أنا بحكي لإنه لما
تشتغلي بدك تكوني لابسة gloves و بدك تستخدمي قلم
رصاص في الرسم عليها رسم خط البداية و خط النهاية
بدك تستخدمي قلم رصاصليش؟ لأنه جلم الحبر لو
استخدمتيه هو عبارة عن أصباغ عبارة عن ألوان لما
تيجي تفصليه ممكن تفصل الألوان معاك اللي هو اللي
موجودة فيه الجلم الحمر و بدي بس ألبس gloves عشان
أتجنب ال contamination ده بعيد عن ال contamination
ليش؟ لأن جلدي الإنسان عبارة عن حماض أمنية في الجلب
موجودة فانت لو استخدمت الورقة بيدك من غير gloves
بصمات اسمك اللى بتحتوي على أحماض أمينية بتطبق على
الورقة ممكن تفصل ويصير عندك وانت مانعش ان يصير
عندك في أحماض أمينية جاية من الإيد من الجل مش انها
من الخليط تمام؟ الجيتكى بده يشتغل بده يجيب ال
stationary phase اللى عبارة عن ورقة علنا اليوم
stationary phaseالورقة هاي بتكون برس متقبة تمام
بدي أعمل فيها خط بداية اللي من عنده بدي أحط الخليط
بدي أحط نقطة من المادة اللي بدي أفصلهاكيف بده أحط
خط البداية بيحكيلي بنجيس من تحت من أسفل الورقة
لفوق بنجيس 8 من 10 سانتي 8 من 10 سانتي من عندها
بحط خط البداية إذا من تحت لفوق بدي أجيس 8 من 10
سانتي و أرسم خط البداية من فوق من ال end line من
خط النهاية لوين بده يوصل من فوق بدي أجيس من فوق 5
من 10 سانتيتمام؟ و بعدين إذا عندي أكتر من خليط بدي
أفصل و أقوى أكتر من المادة بدي أجيس من الطرف من
الخط البداية اللي جيسته من تحت اللي رسمته من الطرف
بدي أجيس واحد سانتي و أحط أول نقطة و بعدين واحد
سانتي و أحط النقطة التاني و واحد سانتي و أحط
النقطة التالتة فكل نقطة بينها و بين البداية و
بينها و بين الجانبها واحد سانتي بدي أجيس و أحط
النقطةأنا هكذا بكون جهزت الورقة أنه من تحت جسد 8
من 10 سانتي و من فوق 5 من 10 سانتي بعدين على خط
البداية اللي أنا رسمته تحت بدي أجيس من الحفة نص
سانتي و أحط أول واحد أول مكوّنبعدين بدي أجيس بينه
وبين التاني واحد سانتي و أحط المكون التاني و واحد
سانتي و أحط المكون التاني من على الجدار لأول مكون
بجيس بس نص سانتي بس بين المكون و التاني بجيس واحد
سانتي هلجيت الورقة صارت عندي جاهزة زيك و مرسوم
الخط البداية و الخط النهائية و أين بدي أحط كل مكون
بجيب هذا الخليط و بحطعلى كل مكان بكون كتب اسمها
مثلا ال اول مكتشر واحد مكتشر اتنين و لو بدي اعمل
بس glycine لحال و cysteine لحال و bruline لحال بحط
لكل واحدة في مكان من ال cup بتاعها خليت الأول باخد
بال capillary tube القنبوبة الشعرية و بحط نقطة على
مكانها الأول التانية بحط بال capillary tube و بحط
نقطةهلجيت خلصة الورقة ال stationary phase جاهزة
ومحطوط عليها الخليط بجيب ال beaker اللي يحتوي على
ال mobile phaseوبحطها بغمرها يعني الورقة بغمرها في
ال mobile phase ال stationary phase اللي هي الورقة
بغمرها في ال mobile phase وبسيبها لحد ما يرتفع
السائل في ال mobile phase اللي هو ال mobile phase
هذا السائل بدي يرتفع عبر ال stationary phaseبيرتفع
و بيوصل لما يجرب يوصل من خط النهاية بقى أشيل
الورقة من ال mobile face بشيلها من ال beacon و
بطلحها بسيبها جف في الفرن في ال oven بعد ما جف
بطلحها مش هنشوف النقاط مش هنشوف كيف فصل ليش لأنه
أصلا بتكون colorless المواد اللي فصلت أحمد عمانية
colorlessماذا أفعل؟ بجيب الـ developing بعدما جف
بجيب الـ developing solution اللي هو المحلول اللي
بيظهر اللون بقرشه عبارة عن بخاخ بقرش منه على
الورقة و بحطها في الفرن الجافبعد ما اتجف ويزود
التفاعل هذا الفرن بين الـ Nenhydrin و المركّب
الحمض الأميني أطلّحها من الفرن بشوف أنه فصل عندي
على شكل Spot على شكل نقاط ملونة كل نقطة في مكان
بحسب لكل نقطة ال retention factor بدي أجيز المسافة
اللي مشيتها النقطة من خط البداية لأين مشيت على
النقطة اللي مشي على المسافة اللي مشيها المحلول من
البداية للنهاية اللي مشيها ال mobile phase من
البداية للنهايةبصير عندي هيك معروف لكل نقطة ال
retention factor برجع للجدول، هي في عندنا جدول
بالاخر بيوضح أنه كل حمض أميني جديش إيه ال
retention factor أنا بكون حسبت ال retention factor
على فرض طلع معاهي 55% باجي على هذا الجدول 55% من
هو الحمض الأميني ال triptofan إذا هذا هو ال
triptofan مثلا طلعت معاهي 5 من 100 من هذا بيطلع ال
arginine وهكذاهذه التقنية ككل بيكر انها يحتوي على
ال mobile phase ال solvent تحت وهذا العمود هو
عبارة عن ال stationary phase بعد ما احط عليها
الخليط بغمرها في داخل ال mobile phase و بيبدأ يمر
الساقل عبرها لما يصل خط النهائي بطلحها
Determination of amino acid using thin layer
chromatography انا بدي استخدم a thin layer
chromatography في هذا المعمل عشان افصل الأحماض
الأمنية خليط من أحماض أمنية طيب حكينا الأحماض
الأمنية colorless كيف بديك تتعرفي عليها بيحكي اللي
بنتعرف عليها باستخدام حاجات عدة مكونات Developing
solution سميناها Developing solution هايأبارعاً
مادة بتلون الأشياء فبقدر أعرف بتلونها و بتخليها
ملونة و بعرف ما كانت اش ممكن استخدم اشهر اشي ممكن
استخدم مع ال amino acid هي ال Nihidrin Spray برش
من نهيدرين بختار بيستخدم ك visualizing agent عمل
مكشف بقدر اكتشف منه الأحمد الأمينية انه بلونها
حكينا اللي هو مبدأ عمل ال Nihidrin انه بيتكون عند
رومانس كمبليكس لونه بيربو ممكن استخدم iodine vapor
as indicator انه باروش من ال iodine و هو بيستخدم ك
indicator برضه بيتفاعل مع الحماد الأمنى و ممكن
استخدم fluorescence indicator بستخدم صفقة مشعة
بترتبط في داخل الأحمد الأمينية وبتعطيني إشعاع
باستخدم ultraviolet lamp باللامدة المشعة وين
المكان اللي بيشع فيه اللي بيظهر فيه إشعاع إذا هاد
عبارة عن حمد أميني فاصل في هذه المنطقة بحسبله
retention factor وين ما يعطيني إشعاع تاني مشعق
ظهرت إشعاع تحت ال ultraviolet lamp بيكون برضه نقطة
حمد أميني آخرهنا عندنا صورة عندنا مثال حط اعطيني
على اليمين عندك نقطة الزرقاء خط البداية من نقطة
الزرقاء اللي تحت تمام؟ هي لما انفصلت مشيت مسافة من
خط البداية من عند وين كانت لو وين وصلت هي اتنين
وواحد صاندرالموبايل فاس جدش مشي من البداية للنهاية
مشي بيحكي ل 2.8 صندوق كيف بده أحسب ال retention
factor؟ بجسم 2 و 1 على 2 و 8 بيطلع 75 من 100 هي ال
retention factor لهذه المادة برجع للجدول بشوف من
هذه ال 75% من هي المادة و بطلع اسمهاهنا نفس الشيء
كيف بدأ أحسب ال retention factor اللي هنا بمثلها
بي على ا برموز بي على ا اللي هي المسافة اللي
قطعتها المادة من البداية لون وصلت على المسافة اللي
قطعها ال solvent من البداية للنهاية هنا جدول فيه
بعض الأحمد الأمينية و retention factor لكل حمض
أميني وهذا هو كل المعمل لهذه التجربة أتمنى تكونوا
فهمتها