السلام عليكم ورحمة الله وبركاته نستكمل باقي معامل
الـ Food Microbiology ونبدأ اليوم بالمعمل الثالث
هو بعنوان Media Preparation, Sterilization and
Disinfectant زي ما بتعرفوا أنه فيه بكتيريا بتكون
موجودة داخل أجسام الكائن الحي معناته هيبتستهلك من
المواد الغذائية الموجودة داخل أجسام الكائنات الحية
طيب لو كنت بحاجة إنه أتعرف على هذه البكتيريا
وأعزلها وأعمل عليها الـ Biochemical Test معناته
لازم أنميها داخل المختبر داخل المختبر يعني خارج جسم
الكائن الحي يعني لازم أنا أوفر لها المواد الغذائية
اللي بتحتاجها للنمو فهذه المواد الغذائية بيسموها
الـ media فالـ media هي كلمة جمع مفردها medium
exactly زي كلمة bacteria مفردها bacterium الـ media
هي الأوساط الغذائية اللازمة لنمو البكتيريا اليوم
بدنا نشوف كيف بدنا نحضر هذه الـ media بداية
الشركات المصنعة بتجيب لنا الـ media على شكل powder
هذه الـ powder بتكون موجودة داخل bottles شو بدي
أعمل؟ أول ما أشوف ال bottles بدي أطلع على ال
instructions أو التعليمات الموجودة عليها من برا
هيكون مكتوب عليها طريقة تحضير الـ media على سبيل
المثال، عندي media اسمها الـ SSA مكتوب على الـ
instructions 52 جرام in one liter، شو المقصود
فيها؟ أعني أن 52 جرام من البودر، بحط عليها 1 لتر
distilled water كيف بدي أحضر أو كيف بدي أجهز الـ 52
جرام باودر؟ بقول لي، حيكون في عندك ميزان، راح أحط
عليه cup فاضي، وبهيك راح تطلع لي قراءة ال cup ما
بديها، لأن هي ما بتلزمني، فبصفر عليها باستخدام
spatula، بصير أحط من ال powder داخل ال cup، لحد ما
أصير عندي القراءة 52 جرام، معناته أنا كده وصلت
للوزن اللي بدي إياه بروح أخد هاي الوزنة و بحطها داخل
الـ flask هاد الـ flask لازم يكون مغسول بالماء
و بالصابون بالـ distilled water تمام، ضايل عليّ
أجهز الـ 1 لتر distilled water بروح على المختبر أو
على المكان اللي فيه تحضير للميديات
بدور على سيلندر يكون حجمه مناسب للحجم المكتوب على
الـ instructions فبدي 1 liter يعني ألف مل فبروح
أدور على السيلندر بحجم ألف مل بغسله بالماء والصابون
وبعدين بالـ distilled water بحط عليه الـ distilled
water لحد العلامة اللي هي الألف مل بعدين بصير
أضيف distilled water بالتدريج على ال flask كل ما أضيف
شوية من ال distilled water بحرك ال flask بأضيف و بحرك
لحد ما تخلص كل ال distilled water بالنهاية هلاحظ أن
مشكلة ال powder ما دابت بدي أدوبها بروح أحط الـ
flask على الـ hot plate
عفواً الـ hot plate هذا نفس الجهاز معكم في معمل
الأنزجة الـ hot plate له مفتاحين مفتاح خاص بالحرارة
مفتاح خاص بالحركة لما أحط الـ flask على الـ hot
plate بحط جواته قطعة اسمها Magnetic اللي هي مغناطيس
بعدين بأشغل مفتاح الحرارة الحرارة بتاعة الـ hot
plate عندها القدرة إنها تساعد على ذوبان ال
powder هاي واحد تاني شغلة لما أشغل مفتاح الحركة
هيصير المغناطيس اللي جوا بتحرك وبالتالي هيساعد على
ذوبان ال powder كمان طيب كيف بدي أعرف إنه ال
media كده خلاص دابت تمامًا؟ بتطلع أول شيء على ال
solution لو لقيت الـ solution turbid يعني عكارة
فيه معناته لسه ما دابت إيه؟ لو لقيت الـ solution
clear معناته كل الـ media دابت كل الـ powder داب
في الـ distilled water هي هي أول شيء الشغلة
التانية بتطلع على جدار الـ flask لو لقيت لسه فيه
حبيبات معناته ما دابت ال media لو لقيت إنه الجدار
نظيف زي كأنه مغسول معناته الكلام إن ال media دابت
طيب دابت ال media بعد هيك بروح أجيب سلفان و
بغطي فوهة ال flask بالتالي
بنروح لخطوة ال sterilization اللي هي التعقيم حسب
مش كل ال media بتحتاج إلى تعقيم إن أحطها بالـ
Autoclave هذا الشيء باعتمد على نوع الميديا وحسب
المكونات اللي فيها لأن في ميديات ما بتقدر تتحمل
درجة حرارة الـ Autoclave وبالتالي مكونات هذه
الميديا بتتكسر وبالتالي هذه الميديا مش هتكون فعالة
فحسب نوع الميديا هل بتحتاج إلى تعقيم أو لا حسب
المثال هذه الميديا كانت بتحتاج إلى تعقيم قلنا
بنغطيها لاصق بسلفان وبعدين بروح أحطها بالـ
Autoclave الـ Autoclave زي ما أنتم عارفين بيعمل
sterilization يعني تعقيم تعقيم هو القضاء على جميع
أنواع الـ micro organism بما فيها الـ Spores الظروف
اللي بتوفرها الـ Autoclave أول شيء من ناحية الـ
temperature 121 Celsius من ناحية الـ Pressure 15
PSI فمعكم واجب PSI هي اختصار لشو؟ من ناحية الـ
Time 15 Minutes قلنا إيه بدي يصير، هيكون في شاشة
على جهاز الـ Autoclave هتبدأ الـ Temperature
إنها ترتفع لما تصل 121، هيبدأ يحسب 15 Minutes
خلصوا الـ 15 Minutes وبهيك درجة الحرارة هتنزل
بالتدريج تمام، خلاص، بعد كده طلعت الـ Flask من
الـ Autoclave بقول لي ما هتصب وهي سخنة لحد ما
تصير درجة حرارة ال media 45 ببدأ أصب طب كيف بدي
أعرفها؟ من الميديا اللي كانت معقمة صعب أفتحها و
أحط فيها ترمومتر وهيك حيصير فيه Contamination
فبقول لي 45 هي بتحسّيها بإيدك إذا قادرة إنك تمسكي
الـ Flask معناته خلاص إن هيك وصلت لدرجة حرارة 45 ما
بنفع أطول عليها على الآخر لأن ال media ممكن بعد
كده إنها تتصلب فلما تصير 45 ببدأ إن أنا أصبها
طريقة صب ال media بتكون إما في أطباق plate أو
بتكون في tubes بالنسبة للأطباق بالأساس إحنا بنستخدم
الأطباق plastic هي يعني Disposable يعني بس استخدام
واحد وخلاص لكن في نوع ثاني من الأطباق بتكون من
الزجاج هاي بقدر أحطها بالـ autoclave وأعقمها
وأستخدمها ثاني وثالث ورابع فإحنا راح نعتمد عندنا في
ما عملنا هي الـ plastic إحنا بنستخدم بتكون كلها موجودة
في packet plastic مسكر معناته الكلام إن هاي الأطباق
معقمة بروح أفتحهم وبأطلّعهم بروح أحط صفّ من تحت بعض
تقريباً عشرة لازم شغلي بتتبع فيه الـ Aseptic
technique يعني بدي أشتغل عندي لهب بحيث إن ال
environment أو الـ working area اللي عندي هتكون
نظيفة بحيث إن ما يصير أي Contamination الأطباق
عندي وعندي كمان الـ flask بروح أشيل السلفان اللي
على ال Flask و بعقم فوهته عند اللهب بعد هيك بروح لآخر
طبق عندي من تحت برفع الغطاء شوية ما برفعها لآخر
مشان ما يصير Contamination برفعها شوية بس وبعدين
باليد الثانية بقصب ال media وبعد ما قصب بعمل
agitation للطبق Agitation يعني تحريك خلصت صبّيتها
بروح أعقم فوهة الفلوسك ثاني وبغطيها بالسلفان قد ايش
الكمية اللي لازم أضيفها من ال media داخل الطبق
بقول لي بضيف من 15 لحد 20 سم مكعب أو يعني ملليلتر
هي هي تقريباً هتكون لثلث الطبق أو لربع الطبق طب ليش بعمل
agitation مشان أحرك ال media على القاع بحيث إن
تكون موزعة بشكل متساوي الشرط عند الصب ما يكون الـ plate
عندي فاضي وشرط ثاني إن ال media ما تلامس الغطاء
يعني ما أضيف media بشكل كتير كبير بس على قد إن
ربع ال plate تمام صبيت آخر واحد من تحت بعدين بطلع
للي فوقه برفعها شوية طبعًا الصف فوقها عددك هتكون
برفعها شوية بروح أعقم الفوهة بقصبّها بسكر الغطاء وبعمل
agitation بعقم فوهة الـ flask ثاني وبغطيها تمام
بروح للثالث من تحت برفع الغطاء مع كل الأطباق اللي
فوقه بكون عم بعقم ال Flask بصبّ بسكر Agitation و
بعقم الفوهة ثاني وهكذا تمام هيك صبيت كل الصفّ اللي
عندي بنستنى إن اللي عندنا تتصلب لأن هاي Agar
يعني هيتحول إلى صلّبة اتصلّبت راح أعمل labeling
باستخدام الـ Marker طب الـ labeling بالكم هيكون على
السطح من فوق يعني عن الغطاء ولا هيكون على القاعدة؟
الـ labeling بعملها على قاعدة الطبق الـ labeling شو
بدي أكتب فيه بحكي لي أكتب في اسم ال media طب ليش؟
لأن في كثير ميديات بتتشابه أو لها نفس اللون زي ما
قلنا قبل إنه في ميديا ممكن إنها تنمّي لـ Gram
positive ممكن ميديا إنها تنمّي لـ Gram negative فبدي
أكتب اسم الميديا مشان أقدر أستخدمها استخدام صحيح و
أعزل من خلالها البكتيريا الصحيحة طيب، في مشاكل
ممكن تصير عند صبّ الميديا لو أنا بصبّ الميديا تكون
عندي air bubbles في فقاعات في الأجار، شو ممكن
أعمل؟ طبعًا لازم نستثني فكرة إن إحنا نكبّ الميديا،
هاد مش حل خالص الحل لو اتكونت air bubbles، بنمرر
الـ flame على الأجار لما أمرر اللهب عليها وهيك راح
تنبعط الـ air bubbles طيب، شو ممكن يصير لو صبيتي الـ
media و هي سخنة كثير؟ يعني كانت درجة حرارتها أكتر من
45 أكتر من 45 يعني هيكون فيه بخار الماء كثير بخار الماء
راح يتلامس مع الغطاية وبالتالي، حيث كثّف، هيعمل
Condensation وحتى تساقط قطرات الماء على الـ Media
طيب، لما يصير فيه ميّه على الـ Media فهيك لما بدي
أجي أزرع البكتيريا، هتكون البكتيريا عندي عايمة،
فما فيش عندي مستعمرات، فصعب أنه أعمل Isolation
للبكتيريا إيه الحل؟ قلنا ما بنكب الـ Media الحل
أنه بمسك الطبق و بحطه على الـ Incubator درجة حرارته
37، عندها القدرة إنها تجفّف الميّ اللي هياللي
على الـ plates طيب احنا قلنا لما نطلع الـ media من الـ
autoclave بدي أصفر عليها لإن ما تصير درجة حرارتها
45 و أنا قادرة إنه أمسكها بإيدي و أتحملها طيب مثلًا
أنا كنت عمالة بأستنى فيها فالتهيت عنها و نسيتها أو
مثلًا إن حطيتها لعند ما تبرد و روحت روحت على البيت
تذكرتها تاني يوم هنيجي على الـ flask هلاحظ إن الـ
media متصلبة جوا الـ flask شو الحل؟ قلنا ما بنكب
الـ media شو بدي أعمل؟ بدي أسيحها ثاني "remelted"
بدي أعملها يعني بدي أسيح الـ media ثاني بحطها إما
على الـ hot plate وهيك الـ media هتسيح طبعًا مش
بحاجة إن أنا أعقمها لأن أنا أساسًا يعني ما فتحتها
فضلاً عن إمعاقمة من أول مرة ممكن أحطها على الـ water
bath و بالتالي بتسيح ممكن أحطها في الـ autoclave
ثاني و هتسيح أو ممكن أحطها في الـ microwave هاي
كلها شغلات ممكنها إنها تسيح الـ media بعد ما تتصلب
قبل لأصبع يعني هي لسه في الـ flask الـ hot plate الـ
water bath و الـ autoclave و الـ microwave
قلنا كل مشكلة إلها حل كب الـ media مش حل الـ media
لو اتسلبت بسيحها ثاني الـ media لو فيها ميّه بجففها
لو فيها air bubbles بتخلص من الـ air bubbles
باستخدام الـ flame طيب قلنا الأطباق بعد ما تتصلب الـ
media فيهم بعملهم labelling على كل طبق عملت
labelling وخلاص تمام هلأ بحاجة إن أنا أحفظها يعني
ببدأ أحط الأطباق في التلاجة كيف بدي أحطهم؟ بحطهم في
نفس الظرف اللي كانوا جايين فيه في نفس الـ bucket
الـ plastic بحطهم الأطباق مقلوبة يعني الغطاية لتحت
بحطهم بالتلاجة ليش لتحت؟ مشان ما يصير Condensation
قطرات الماء تيجي على الـ media وتأثر على زراعة
البكتيريا هيك خلصنا من طريقة صب الـ media في الـ
plates نيجي على صب الـ media في الـ tubes نفس ما
قلنا أول شيء بأجيب الميزان بحط عليه الـ cup بصفر
على قراءة الـ cup بعدين بستخدم الـ spatula بأوزن 52
جرام بحطها في الـ flask مقصود بالمي و بالصابون و
بالـDistilled water بعدين بروح لـ سيرندر مقصود بالمي
و الصابون و الـDistilled water بحط فيه ألف مل
Distilled water و بصير أضيف على الـpowder و بحرك
بالتدريج تمام، بعد هيك بحطها على الـhot plate
بشغّل المفتاح حين بحط جواها الـmagnetic لعند ما
تذوب بالكامل و بعدين هذه الـmedia مش راح أحطها
بالـautoclave، ليش؟ لأن الـ tube هي من الـ glass
يعني بأستخدمها أكتر من مرة فهي الـ tube مش معقمة
أساسًا و الـ media عندي مش معقمة فليش لا أعقم أول
شيء الـ tube و بعدين أعقم الـ media لأ فبصب الـ media
في الـ tube و بعقمهم مرة واحدة و هيك بأفرغ حالي
الوقت فببدأ في الصب في الـ tube بقول ليه الـ tube
بتحتاج لخمسة مل أو خمسة سنتمتر مكعب من الـ media
باستخدام الـ syringe أو باستخدام الـ pipet بصير
أحط خمسة مل على كل الـ tube قلنا في الـ plates بنحتاج
من خمسة عشر لعندي عشرين مل أما في الـ tube خمسة مل
تمام حطيت في الـ tubes بحاجة إنه أنا أسكرهم بعد
هيك الـ tubes عندي نوعين، في نوع بيكون عنده فوهة من
فوقها زي خطوط أو محززة، معناته هاي بتحتاج إلى
غطاية باللفها لف مشان تتسكر أو ممكن يكون أن فوهة
الـ tube تكون ملساء فبسكرها بالقطن فبعد ما صبّينا الـ
media إما بسكرها بالقطن أو بالسواب أو ممكن أسكرها
بالـ screw cap اللي هي الغطاية اللي باللفّها بعد كده
بدخلهم في الـ autoclave وهيك بحقق الـ media أو بحقق
الـ tubes بس بقول لي في ملاحظة أنه لما تستخدم الـ
screw cap ما تحذقها على الآخر لما تدخليها في الـ
autoclave ليش؟ لأن ممكن الضغط تبع الـ autoclave
بيخلي الـ tubes إنها تنفجر فما بحذقها بدخلها بالـ
autoclave لما تطلع من الـ autoclave فبحذقها تمام طب
كيف بدي أحط الـ tubes في الـ autoclave؟ بقول لي
بالأساس الـ autoclave بيكون فيه سلة بحط فيها الـ
flask الـ beaker أي شيء بدي أعقمه طب لو حطيت الـ
tubes في السلة هاي هتوقع طب شو بدي أعمل؟ الـ tubes
بروح أحطها في راك و بصفطهم في الـ rack هاد و بعد كده
بغطي الـ rack بالـ tubes بالسلفان و بدخلهم بالـ autoclave