بسم الله الرحمن الرحيم راح نأخذ مع بعض اليوم إن
شاء الله أول موضوع في معاملنا الفعلية في مادة الدم
السريري العملية راح تكون هي عبارة عن making a blood
smear and examination of blood smear يعني كيف بدي
أعمل blood smear أو كيف بدي أقرأها وإيش الأشياء
اللي بعرفها من خلال blood smear بدايةً ماهي ال
blood smear؟ الـ Blood Smear أنا بأخذ فيها ببساطة
drop من الـ blood وبجيب slide بفرض عليها ال drop
هذه بحيث أن ال blood يكون one layer يعني طبقة
واحدة من الخلايا هذا الشرط الأول، الشغل الثاني أن
تكون الخلايا هذه متجانسة من ناحية التوزيع بحيث أن
أي منطقة في هذه السمير تكون معبرة عن الكل، إذا الـ
Blood Smear لازم تكون Monolayer بحيث أنه أقدر أشوف
الخلايا، لو كانت الخلايا فوق بعض مش هقدر أميزها من
بعض، الشغل الثاني أن يكون الـ Distribution تبعها في
كل السمير متجانس طبيعي، طيب نيجي لأول طريقة اللي هي
الـ Cover Glass Smear هذه الطريقة وإن كانت طريقة
تعطي Distribution جيد وممتاز للخلايا لكن مشكلتها أن
الـ Cover Glass يا بنات كتير صغيرة، صعب أني أتعامل
معها، صعب أني أصبغها، صعب أني أخزنها، صعب أني أعمل
لها label لـ Cover نفسها، يعني هنا بفرض على الـ
Cover نفسها، بينما الطريقة اللي بتعتمد على ال slide
slide to slide method اللي أنتم تعلمتوها بيسميها
Wedge Smear، إيش يعني Wedge Smear؟ اللي هي إني
أستخدم Two Slides وأعمل الـ Smear من خلالهم هذا
الطريقة هي الأكثر شيوعًا وإن كان إلها بعض الـ
disadvantages حناخدها في وقتها لكن هي المستخدمة
تقريبًا على مستوى العالم، الطريقة الثالثة اللي هي
The Spun Smear/Small Smear هذه بتعتمد على وجود جهاز
بيقوم بفرد الخلايا طبقة واحدة وال distribution
تبعها كتير كويس وهي هذه أفضل طريقة في الطرق
المتبعة كلها، ياتها أنه أستخدم الجهاز اللي بيعمل فرد
للشريحة لوحدها وبيعطيني الخلايا موزعة بشكل جيد، طبعًا
الـ Blood Smear العادية هذه اللي أنا بعملها بتكون
من الـ Holy Blood بأخذ عينة متجانسة وبفرضها و
بشتغل عليها، أحيانًا بضطر أني أعمل Blood Smear بطرق
خاصة أو يكون محتواها شوية مختلف عشان دراسة أشياء
معينة زي مثلًا حاجة بسموها Buffy Coat smear عارفين
إيش هو الـ Buffy Coat؟ الـ Buffy Coat إنه لما بعمل
centrifuge لل blood تطلع طبقة فوق ال RBCs الطبقة هذه
مكونة من ال white BCs and platelets ال Buffy Coat
Smear هذه بتلزم أعمل .. يعني بأخذ ال drop منها و
بفرد بدل ما أخد من ال whole blood من الدم كله و
أفرد، بأخذ بس من ال Buffy Coat هذه تلزم لما يبقى عدد
الـ white blood cells كثير قليل، أقل من 1000 خلية
per µL ممكن أضطر أعمل الـ buffy coat smear على
أساس أني أزود فرصة أني أشوف white blood cells
وبالتالي أقدر أعمل differential، في عندي نوع ثاني
بيسموه thick blood film، طبعًا احنا الفيلم العادي
اللي بنعمله عبارة عن thin blood film، لأني أنا
لوحتلكم بالبداية لازم الخلايا تكون مكونة من one
layer يعني هو thin، الثاني أحيانًا بضطر إليه عشان
أعمل دراسة لبعض الـ Blood Parasites زي الملاريا،
يعني عندنا مثلًا الملاريا بتعيش في قلب الـ RBCs، في
داخل الـ RBCs، فبالتالي عشان أنا أشوف، نيجي إيه
للـ Wedge Smear أو الطريقة التقليدية للـ Blood Film
طبعًا أنا بأخذ Specimen عبارة عن EDTA Blood أو
ممكن نأخذ Micro Sample، عادي، بيمشي الحال، طبعًا هنا
بقولك الـ EDTA خلال ساعتين أو تلات ساعات من الـ
Collection يفضل ليش؟ لأنه بعد هيك ممكن يصير بعض
التغير في أشكال الخلايا نتيجة الـ EDTA نفسها
يعني بتعمل، ممكن تعمل shrinking للخلايا أو تعمل
damage لل shape تبعها، زي اللي هو هيوش هنلاحظ هنا
بقولك إنه مع الوقت ممكن بعض الخلايا تصير
crenated أو مقارقة، هي زي مكرمشة في بعض الحالات
إذا كانت كمية الـ Anticoagulant زيادة يعني احنا
متفقين يا بنات إنه لما بسحب blood بسحب لغاية
العلامة، طبعًا هو هذه العلامة هم ما بيكونوش حاطينها
عشوائي بيكونوا حاطينها بناء على إن كمية الـ EDTA
أو الـ Anticoagulant أيًّا كان تكون متناسبة مع
كمية الـ blood الموجودة أو اللي أنا بدي أضيفها على
العينة، الشغلة الثانية ممكن تعطيني crenated cells
خلايا مش طبيعية، all the blood أو long-standing لو
كان العينة قديمة أو طولت قبل ما أفردها ممكن تعطيكي
crenated cells، لو كان الجو حار ممكن يشجع هذه
التغيرات اللي هي وجود ال crenation الخلايا، طبعًا
الطريقة أنا هرِفق لكم فيديو بيوضح الطريقة هذه
الطريقة إنه أنا بأخذ drop من ال blood على ال slide
وبأجي ب angle 30 إلى 40 درجة عادي، هرجيكم الحركة
وبرجع ال slide شوية بعدين بسحب، طبعًا هنا الطريقة
يعني في الصور هي هنا أوضح، أول حاجة بأخذ drop من ال
blood، ال drop بأجي على ال slide الثانية اللي تحت
بسميها slide اللي بعمل عليها الفيلم، اللي فوق
بسميها spreader اللي بدي أفرد فيها، بأجي على ال
spreader بحطها قدام ال blood drop وبأجي برجع شوية
صغيرة لغاية ما تفرد، بس ما بديها توصل للأطراف على
الآخر لأ يعني تفرد توصل يظل شوية من الطرف هذا و
شوية من الطرف هذا، لأنه يا بنات لو وصلت للأطراف
احتكاك أطراف الـ slide هذه بالـ Spreader هيعمل
تكسير للخلايا، فبالتالي الخلايا اللي بتكون على
الأطراف لو وصلت للأطراف هتبقى مشوهة، عشان هيك بسيب
شوية ما بخليهاش لما تفرد تطلع معايا، خليهاش لما
تفرد توصل للنهاية وبعدين بسحب إيدي بالحركة هذه
ضروري تشوفوا الفيديو المرفق عشان تتذكروا كيف طريقة
سَرد الـ blood، بالنهاية بيطلع معايا سمير شكلها
bullet shape، هي شكلها شكل الرصاصة يعني هذا أفضل
شكل للـ blood، طيب إيش هي مميزات الـ good blood smear
أول واحد أول حاجة أكيد المكان اللي أنا حاطط عنده
ال drop هيبقى thick وبعد هيك هيبدأ الـ blood يصير
thinner لغاية ما أوصل للنهاية، بالنهاية بوصل ل
smooth rounded feather edge، يعني في النهاية هوصل
لطرف الـ blood film هيكون rounded وهيكون smooth
فهذه المنطقة اللي عند النهاية اللي بتكون smooth
اللي هي الثالثة على الفيلم هي أفضل منطقة لل count
لأن الخلايا بتكون فيها مكونة mono layer، شغلة ثانية
الـ Blood Film المفروض يشغل ثلثي الـ Slide Area
ثلثي المساحة الكلية بتاعة الشريحة، برضه شغلة مهمة
"Don't touch any edge of the slide" يفترض زي ما
قلتلكم ما يلمسش أطراف الـ Slide لأنه لو لمس ممكن
يصير تشوه أو تكسير للخلايا نتيجة احتكاك أطراف الـ
Slides، should be margin free except for the
point application يعني هلقيت لما بأجي بتطلع على
الفيلم المفروض ما يكونش فيه أي تعرجات أي تضاريس أي
حاجة بارزة أو طالعة أو نازلة لازم كله يبقى smooth
واحد صحيح، الـ thickness مختلف لكن هو بيبقى smooth إلا
في مكان ما أنا حطيت العينة، مكان ما حطيت العينة
لازم يكون فيه يعني معلم إنه هي مكانها مختلف وفيه
شوية تجعد لكن باقي الفيلم لازم يبقى smooth، شغلة
مهمة برضه، as soon as a drop of blood is placed on
the glass slide، مجرد ما أحط ال drop على ال slide يا
بنات لازم أفرد، ما أستناش عليها، لأنه لو أنا تركتها
شوية، إيش ممكن يصير؟ ممكن تبدأ أنتم عارفين أن
خلايا الدم لو أنا جبت عينة الدم وحطيتها بتيوب و
تركتها شوية هتبدأ تفصل الـ RBCs تحت والـ white BCs
فوقها، صح؟ تلك هيصير في ال drop بتاعة ال blood أنا
لو تركتها قبل ما أفردها هتبدأ الـ RPCs ترسف تحت
والـ WBCs تقعد فوق لأعلى، فلما أقوم بسحبها بالـ
Spreader، الـ Spreader هتروح ساحبة من الخلايا اللي
الأعلى وتاخدها عند التالي، فبالتالي هيكون التوزيع
في الفيلم مش طبيعي، تلاقي الـ Blood Film توزيعه مش
جيد، الخلايا الكبيرة اللي هي بتشمل الـ White Bases
هتلاقيها متجمعة عند الأطراف بتاعة الـ Field بتاعة
الفيلم أو في الوسط هتلاقي عدد أكبر من الـ RBCs
ويخلو تقريبًا أو يقل عدد الـ White Bases، إذن مجرد ما
... مجرد ما أحط ال drop لازم أفرد، قلقني يجي ل
thickness of the spreader يعني إيش الحاجات اللي
بتتحكم في سمك ال spreader؟ في حاجات من عينة الدم
نفسها اللي هو ال hematocrite إذا كان يا بنات ال
hematocrite كتير عالي يعني العين ال ... ال ... ال
hemoglobin فيها عالي وخلايا الدم الحمرة فيها كتيرة
هذه متوقع أنها تبقى thick لما أجي أفردها ممكن يطلع
معايا الفيلم thick، إيش بروح بعمل؟ بقلل الزاوية اللي
بين ال spreader وال slide، تمام؟ بقلل الزاوية اللي
أنا فردت فيها، لكن لو كان ال hematocrit قليل ال
angle هذه لازم أنا أزودها تمام عشان يطلع الفيلم
هذه الصورة عندي بتوضح لو كان ال hematocrit عالي
بقلل الزاوية هذه اللي هي بتصنعها الـ Spreader مع
الـ slide نفسها عشان أحصل على فيلم thin، لكن لو كان
الـ hematocrit قليل أنا بحاول أسمك الفيلم شوية
فبزود الزاوية وبالتالي بزيد الـ thickness بتاع
الفيلم، هلقيت إيش اللي بتحكم في الـ thickness بتاع
الفيلم؟ أول شيء الزاوية حكينا عنها، بعدين حجم ال
drop، كل ما كانت ال drop أكبر كل ما كان ال
thickness أكثر، شغلة ثالثة اللي هو سرعة الفرد، لما
بكون بفرض شوية شوية هيبقى الفيلم thick لكن لما
بفرض بسرعة هيبقى الفيلم thin، طيب إيش هي الأسباب
اللي ممكن تخلي ال blood smear سيئة؟ أول حاجة حجم ال
drop من ال blood إذا كانت كبيرة كتير أو صغيرة كتير
طبعًا مش هيطلع معايا الفيلم كويس، spreader slide
pushed across the slide in a jerky manner، هلقيت
لما بأجي بسحب ال spreader هيك في هذا الاتجاه
المفروض أسحب حركة واحدة بدون ما إيدي ترتعش أو
تتوقف، لو ارتعشت أو توقفت هتلاقي أنه طلع عندك خطوط
في الـ blood film وطلعت الفيلم اللي عملتيه طلع سيء
طيب الشغلة الثالثة ألاقي أحيانًا احنا المفروض بنيجي
بنسحب ال spreader على طول ال slide هذه أحيانًا ما
تقدريش تظلي موصلة للآخر أو إيدك بتحرف على جهة، هذه
برضه بتطلع معاك blood smear إما ما هو هتل أو إنه
مش straight مش عدل، الشغلة الثانية ال angle يعني أنت
ما قدرتيش تعملي ال angle المناسبة اللي هي 30 درجة
بال spreader أو عملتيها هذه تقريبًا اللي قلناها
failure to push the spreader slide completely 173 0
كويس هذا فيه ثقوب هذا طرف شايفين برتقال مش منتظم
هنا فيه منطقة فاضية في الوسط يعني هذه أشكال ممكن
احنا نشوفها عند الفرد تقريبا هذا أفضل واحد وإن كان
.. بيبان إن اللي كان يفرد كان يعني بيمشي ببطء إلى
حد ما لكن هو أفضل واحد طيب
أحيانا يا بنات أنا بأخد كل الاحتياطات وبشتغل كويس
لكن بيكون في حاجة في الـ blood نفسه أثرت على الفرد
يعني هذه الحاجة موجودة في عينة الدم نفسها يعني ما
.. ما بقدر أتحكم فيها هذه بيسميها biological causes
of poor smear أشياء في عينة الـ blood بتأثر على
جودة الفرد أول حاجة الـ cold agglutinin إيش يعني
الـ cold agglutinin؟ ألاحظت في بعض الأحيان إحنا
قلنا إنه أو بتعرفوا إن خلايا الدم يا بنات عادة
بيكون عليها أنتيجينات عارفين الـ Ant A عارفين الـ
Antigen A والـ Antigen B وفصائل الدم في أنتيجينات
ثانية بتكون على سطح خلايا الدم الحمراء فلاحظت
الانتيجينات هذه من البديهي عشان الإنسان يكون طبيعي
وما يصيرش عنده مضاعفات ما يكونش إلها أجسام مضادة في
الدم عنده نفسه يعني الـ Antigen والـ Antibody مش
لازم يجتمعوا في نفس الشخص صح؟ وإلا بيصير
Agglutination في نفس الشخص وممكن يصير عنده مضاعفات
خطيرة في بعض الأحيان قد يجتمعوا قد يجتمعوا بسبب
حالات مرضية إذا كان الشخص اجتمع فيه Antigen
و Antibody ممكن يصير عنده Agglutination طيب الـ
Agglutination هل هيصير في جسمه يؤذي؟ هذا برجع لنوع
الـ Antibody أيه Antibodies إذا وجدت بتشتغل على
درجة حرارة الجسم بيسموها Warm Antibodies هذه بتشكل
خطورة على الإنسان ليش؟ لأنه بتعمل تفاعل في داخل
الجسم لأن هي أصلا Warm وبتشتغل على 37% لكن في
Antibodies تانية بيسموها cold ممكن تجتمع الـ antigen
والـ antibody في داخل الجسم لكن ما بيشتغل نهائيا
على 37 تمام يعني ما بيشكل خطورة في داخل الجسم
بينما لو أنا سحبت العينة اخترتها شوية في الـ room
temperature هتبدأ تعمل agglutination عشان هيكسم
منها cold agglutination تشتغل على درجة حرارة
منخفضة طيب أنا سحبت عينة الدم وجيت فرتها وطلعت عليها
تحت الميكروسكوب لقيت الخلايا عاملة agglutination
بقول أه احتمال يبقى فينا cold agglutination طبعا
هذه بتكون واضحة هنتعلم شكلها بتكون واضحة جدا تحت
المايكروسكوب طيب كيف ممكن أحل مشكلة الـ cold
agglutination ولا إشي بدفع العين شوية بدفع العين
شوية ممكن يفك الـ agglutination وأروح أفردها دغري
طب لو ما أفكرممكن أسحب عينة جديدة في أدوات كلها
pre-warmed يعني أدفي السرنجة، أدفي الـ needle،
أدفي الـ tube، أدفي الـ slide، وأفرد دغري وما
أتيح لها فرصة إنها تعمل agglutination ما أتيح لها
فرصة إنها تبرد الـ antibodies عشان تشتغل ما أعطيهاش
فرصة إنها تعمل agglutination فححصل على blood film
جيد إذا السبب الأول وجود cold agglutination تمام؟
سمينا cold لأنه بشتغل على درجة حرارة الغرفة ما
بيشتغل على حرارة الجسم طيب السبب الثاني ليبيميا
ارتفاع الدهون في الدم طبعا هذه الدهون هتعمل عند
ثقوب في الـ blood film زي اللي حكينا عنها قبل شوية
هذه ما .. يعني مافي حاجة ممكن أعالجها من خلالها
خلاص يعني هيظل الـ blood film بمشكلته ثغرة ثالثة
اللي هو role of formation يمكن مر عليكم إيش يعني
role of formation إن خلايا الدم تتصفط فوق بعض زي
.. زي العملة المعدنية زي الـ coins تمام طبعاً هذا
برضه بيكون نتيجة مشكلة عند الشخص نفسه أدت لتجمع
الخلايا بهذا الشكل هذه الصحيح ما إلها حل يعالجها
ولا يحلها يعني هي هتظل عاملة role of formation و
هتبين في الـ blood film إنه فيها role of formation
طيب
هنا بقول لك إحنا حكينا عن الـ wet jasmine اللي
استخدمنا فيها two slides لكن بقول لك على الرغم من
إنها had the easiest and most popular method طريقة
الأسهل والأكثر شيوعا لكن ما بتعطينيش equality
smear لكن بالرغم من هيك إحنا بنستعملها طب ليش ما
بتعطينيش equality smear؟ إيش مساويها؟ لاحظنا فيها
أو بنلاحظ إن الـ white pieces إلى حد ما مش موزعة
بشكل جيد في الـ blood film كافي يعني يعني أنا الـ
white pieces عندي إلها أحجام يعني مثلا الـ Monocyte
أكبر واحدة هتلاقي أن الـ Monocyte راحت معاكي على
الطرف من سحبت مع الـ Spreader للآخر بينما الخلايا
الأصغر اللي زي الـ Lymphocyte هتلاقيها في نص الـ
Blood Film طبعا فبالتالي بقول لك إنه في يعني مش
بتعطينيش high quality smear لكن بالرغم من هيك إحنا
بنستخدمها طبعا كمان ممكن تعطيني بعض الـ بعض
التغيرات في أشكال الخلايا عند أطراف الفلم خاصة
طبعا الـ Wright's blood smear produced the most
uniform distribution of blood film أفضل واحدة
حكينا اللي هي blood smear اللي هي باستخدام الجهاز
طيب
نيجي للـ slide fixation and staining هلقيت يا بنات
إحنا حضرنا blood smear لـ blood smear وهي هيك أنا مش
هقدر أشطر عليها حاجة لازم أعمل لها تثبيت على
الشريحة وأعمل لها Staining المرحلة الأولى أنا بعرف
أنكم أخذتوها في المقدمة بس المرحلة دي أنا مش فاهمة
ما بعرفش يعني إذا أخذتوها ولا لأ لكن رغم ذلك أنا
هحكي يعني ما فيش هندي مشكلة نيجي للـ slide fixation
الصحيح الـ slide fixation أنه أنا بدي أثبت الخلايا
على الشريحة عشان بعد هيك أصبغها لأن لو ما أثبتها و
حطيت الصبغة هتنغسل الخلايا وتروح طيب قبل ما أعمل
تثبيت بمادة مثبتة إحنا بنستخدم مادة بنثبت فيها قبل
ما نعمل تثبيت في عندي خطوة مهمة جدا قبل التثبيت
وأنا بعتبرها رقم واحد في الـ Fixation اللي هي أني
أترك الشريحة يصير لها Good Drying لأن لو الشريحة
ما نشفتش بشكل جيد هتلاحظ أنه إيش ما تحط عليها
Fixative هينغسل وينزلوا مش هيصير لها Fixation خالص
فبالتالي أهم حاجة أن أعمل drying للشريحة بتركها
على بنش أفقي تنشف براحتها بعيد عن أي درجات حرارة
مرتفعة لما تنشف مظبوط بأخد الشريحة هذه أو السمير
وبعمل لها Fixation هنا بقول لك إن لو بدي أصبغ
بالليشمان ستين هي الخطوات اللي عندي نيجي لخطوة الـ
fixation زي ما قلت لكم عشان أحافظ على الـ Morphology
للخلايا لازم أعمل لها Fixation بـ Methanol إحنا
يعني عادة المستخدم الميثانول هو الأفضل يعني في الـ
Fixation الميثانول لكن لأنه يعني Carcinogenic
بنستبدله أحيانا كتير بالـ Ethanol طبعا عملية الـ
Fixation الهدف منها أني أحافظ على الـ Morphology
للخلايا يعني فرضا أنا يعني فرضت الفلم وما فيش معايا
وقت أصبح اليوم مثلا بدي أمشي أو أخلص شغل ما بنفعش
أسيبه لبكرة بدون Fixation ما بنفع أسيبه بدون صباغة بس
ما بنفعش أسيبه بدون Fixation فهو عملية الـ Fixation
كلها من دقيقتين إلى تلات دقائق بعمله Fixation
وبتركه طالما أنا عملت Fixation أضمنت أن الخلايا مش
هتخرب ولا شكلها هيتغير إذا ضروري أعمل Fixation as
soon as possible after they have dried بعد ما
الأفلام عنده أو بعد ما الشرايح عندي تنشف لازم
أعمل لها Fixation بسرعة كيف بتتم عملية الـ Fixation
في هذا الـ Staining Jar أكيد شفته في الانسجار بحط
فيه الـ Ethanol أو الميثانول المركز وبحط فيه
الشريحة من دقيقتين إلى تلات دقائق وبغطيه طبعا
ضروري جدا أغطيه باستمرار لأنه لو انتصرت رطوبة من
الجو أو ميه طبعا بخار الماء لرطوبة هيأثر على
تركيزه بالتالي هيطلع Absolute Alcohol وهذا هيأثر
على أشكال الخلايا هيخرب عند cell membrane تاع
الخلايا وحتى بقول لك يعني أنت إذا بتستخدمه المفروض
تغيريه من مرتين إلى تلات مرات يوميا لأنه بتخافي
تدخل هنا في عندنا ملاحظة مهمة الملاحظة هذه بتقول لك
إذا كان يعني ضروري خلال عملية الـ fixation أنه
ما يكونش فيه ميه نهائيا يعني لا قبل الـ fixation
يصير contact الفلم بميه لأن لو صار contact بميه
هيخرّب الـ blood film هيعمل abnormal morphology في
الخلايا لو كان فيه رطوبة أو ميه خلال الـ Fixation
هنا هتظهر على شكل قطرات الميه هذه هتظهر على شكل
بقع لامعة على الخلايا وهتغلبني في الـ diagnosis
يعني أول إشي هتخرب أشكال الخلايا وممكن تتدخل في
الـ diagnosis يعني ما أعرف أقرأ الـ blood film
بشكل جيد منها هنا بقول لك عشان تحافظي على الكحول لو
أنت عندك إعزاز كحول لازم تبقى مغطى كويس ما تتركش
منها أيه المفتوحة للهواء الجوي لأن الكحول دغري
هيمتص الميه أو بخار الماء ويرتبط فيه وبالتالي
هيقلّ
مشهورة باسم عاملها Romanowski Group of Staining
يعني هي مجموعة كبيرة بتشمل أكتر من صبغة من أنواعها
Wright stain, Giemsa stain, Leishman stain, Field stain,
Reit stain برضه فيه Reit Giemsa فيه يعني أنواع
كتير منها كلها هذه مسميات لصبغات بستخدمها لصباغة
blood film هلقيت الصبغات هذه اللي بستخدمها لصباغة
الـ Blood Film كلها بتشترك في نفس الـ Principle
لكن بيختلف المسميات أو الشركات المزودة بالصبغة إيش
هي الـ Principle بتاعة الصبغة؟ خلينا حبة حبة نفهم
إيش الفكرة بتاعة الصبغة عشان نعرف إن هي الـ
Principle العامل الـ Romanowsky Staining طبعا
الصبغة مكونة من شقين شق حامضي Anionic وشق قاعدي
Cationic الشق القاعدي قد يكون مثلين بلو أو أحد
مشتقاته زي الأزور مثلا الشق الحامضي ممكن يكون
ايوزين Eosin Y ايوزين B طبعا بيختلف إيش المشتق
لكن إحنا بنشترك إنه في شق حامضي وشق قاعدي إيش
التركيبة أو إيش الـ derivative هي الاختلاف بين صبغة
وتانية لكن الفكرة الأساسية في كل الصبغات واحدة طيب
نيجي نفهم إيش الـ Principle بتاعة الصبغة إحنا
قلنا إنه في عندنا شق قاعدي اللي هو الـ Cationic
زي مثلين بلو أو مشتقاته هذا راح يرتبط بالأجزاء
الحامضية بالخلية يرتبط بإيش؟ بالأجزاء الحامضية إيش
في عندي حاجة مهمة حامضية في الخلية؟ النواة النواة
مكونة من حمض نووي أحماض نووية DNA و RNA صح؟ فبالتالي
النواة عادة هتنصبغ بالجزء اللي هو الـ Basic بالـ
Cationic Dye الميسلين بلو وهتظهر باللون الـ
purple هو اللون تاع النواة تقريبا معظم الأنوية
بتشترك بنفس اللون مع درجات بسيطة من الاختلاف
تعطيك ألوان متعددة في نفس الخلية هنا بسميها
polychromatic stain متعددة الألوان هنا بقولك
neutrophilic granules كيف اللون اللي أختاره،
xenophilic granules، eosinophilic granules الـ
eosinophilic تقريبا لونها غامق من لون النواة هنا
شوية على أحمر، هنا بيكون لونها pink
هنا خطوات الصبغة هذه خطوات الصبغة أنا بقول لكم
الخطوات العامة للصبغة هي كثير بسيطة أنا أول شيء
عملت smear عملتلها drying بعدين عملتلها fixation
صح هي هذول الخطوات احنا خلصنا منهم بعد ما أعمل
fixation الصبغة عادة بستخدمها diluted يعني بخفف
الصبغة، وبعد ما بخفف الصبغة بجيب الشريحة بغمرها
بالصبغة طبعاً وقت معين، إيش الوقت هذا؟ يعني بعتمد على
التجربة، أنا بجرب الوقت المناسب لما بحضر صبغة جديدة
بجرب إيش الوقت المناسب لها وبعتمده، ممكن يتراوح من
10 إلى 15 دقيقة، وبعد هيك ببترك الشريحة تنشف وبتفرج
عليها تحت الـ microscope هذه الـ principle بتاعة
الصباغة بشكل عام، عفواً الـ procedure بتاعة الصباغة
بنجفف، بنعمل fixation، بنصبغ بصبغة مخففة، بس مش أكثر
يعني بنسيب الشريحة تنشف في الهواء، بعد هيك بحطها
تحت الميكروسكوب وبتفرج عليها، طيب هنا بقول لك stain
in characteristics characteristics of correctly
blood-stained normal film يعني لو أنا فردت فيلم
وصبغته وكانت الصبغة كويسة، إيش الألوان اللي أنا
لازم أشوفها؟ طبعا احنا نوّهنا توي للألوان، سنعود
ونعيد، الأنوية هيكون لونها purple لأنها تأخذ صبغة
الميثيلين بلو، الـ cytoplasm تختلف حسب مكونات الـ
cytoplasm يعني مثلاً الـ erythrocyte هيظهر لون pink لون
deep pink اللي هي الـ RBCs الهيموجلوبين هياخد
الصبغة الحامضية، الـ neutrophil هتظهر تقريباً pink
الـ lymphocyte الـ lymphocyte طبعاً هي خلية هنتعرف عليها
هيبقى الـ Cytoplasm تبعها Blue تقريباً deep blue الـ
monocyte الـ Cytoplasm بتاعها هيكون Gray Blue الـ
basophil هيبقى الـ Cytoplasm Blue to purple، بنيجي
للـ Granules للـ Granules، الـ Neutrophil طبعاً
الكلام هذا شوية هيكون جامد، لكن لما تشوفوه على
الصور وتتعودوا على أشكال الخلايا هيكون بسيط إن
شاء الله، الـ Neutrophil الشكل حبيباتها Fine and
Purple أو حتى مش Purple بتقدر تقول Pink، eosinophil
Red Orange، الـ basophil حبيباتها purple black
الـ monocyte غالباً ما فيش فيها Granules يعني، أو very
fine reddish granules، الـ platelet بيكون لونها purple
يعني أنا بقدر أقول لك الآن هذه الشريحة احنا هنفهمها
أكثر لقدام لما نشوف الصور تحت الخلايا إن شاء الله
هنا هذه الشريحة برضه بورجيكي أشكال وألوان الحبيبات
تحت الـ basophil ويه الـ eosinophil
طيب نيجي لبعض المشاكل اللي ممكن يعني، أو الأشياء
اللي بتعمل عندي مشاكل باستغلال، احنا قلنا إن الـ
Phosphate Buffer لازم نستخدمه عشان يضبط الـ pH
تاعت الصبغة، هنا بقول لك لو كانت الصبغة Too Acidic،
إيش ممكن يصير؟ يعني كمية الحامض فيها زيادة
فبالتالي الأشياء اللي هتأخذ الصبغة الحامضية هتبدو
لونها Pinker يعني لو جينا هذا فيلم عادي، هذه
الصغيرة اللي شايفينها هنا، هذه RBCs، قارن بين لون
الـ RBCs الطبيعي ولون الـ RBCs اللي في الصبغة
الحمضية بزيادة، طبعاً هتأخذ الصبغة الحمضية أكثر
ويبدو لونها أكثر حمرارة، لكن الأجزاء اللي بدها تأخذ
الصبغة القاعدية نظراً لأن الصبغة القاعدية أو الشق
القاعدي نسبته قليلة أو ضعيفة هتكون فاتحة زي أش زي
النواة يعني شوفوا النواة الطبيعية كيف غامقة بينما
النواة اللي بتبقى صبغتها Too Eosinophilic بتبقى كثير
فاتحة، عن العكس لو كانت الصبغة Too Basic هتلاقي
الفيلم بدأ لونه كله أزرق غامق، أزرق غامق يعني هاي
مثلاً هذا الـ blood film العادي اللي توا شفناه هذا
كله جاي ماخذ الصبغة الميثيلين بلو أعلى هتلاقي
اللون الأزرق فيه مكتسح، الأنوية غامقة جداً لكن
الأجزاء اللي بدها طبعاً الصبغة هنا قاعدية زيادة
يعني نسبة الحامضية فيها قليلة، فبالتالي الأجزاء اللي
بدأت تأخذ الصبغة الحمضية هتكون فاتحة يعني مش ماخدة
صبغة حمضية واضح جداً اللي هو الـ RBCs، الـ RBCs
المفروض يكون لونها pink أكثر من هيك على أحمر أكثر
من هيك، لكن لأنه ما فيش صبغة حمضية كفاية، وظهرت باللون
الأزرق تمام؟ إذن if the stain buffer mixture is too
alkaline الـ red blood cells ستظهر grayish blue
شايفين لونها بدل ما يظهر pink؟ ظهرت grayish blue
and the white cell nuclei will stain very deeply
purple هتلاقي الأنوية صارت غامقة جداً، فالبيئة اللي
بتاعة الصبغة لازم تكون متعادلة ومضبوطة بالفسفات
بفر، طيب هنا بقول لك أحيانا إيش الأسباب اللي بتؤدي لـ
Too Acidic Stain وكيف أعالجها، أو Too Basic Stain
وكيف أعالجها، Too Acidic Stain إذا ظهرت عندي
الألوان اللي شفتها إنه الفيلم كله جاي أحمر هيك الـ
RBCs فاتحة كثير والأنوية مش مصبوغة كويس ممكن يكون
وقت الصباغة مش كافي، أو أنا غسلت كثير يعني بعد ما
صبغت أنا، بعد ما بصبغ بعمل washing عملية الـ washing
هاد استغرقت وقت طويل أو الصبغة كانت قديمة، طبعاً بدي
أعالج المشاكل هذول، بطول الوقت بتاع الصبغة بضبط الـ
pH بتاعت الباستان وبقلل الـ buffering أو الوضع لو
كانت Too Alkaline ممكن يبقى الـ blood film thick أو
prolonged staining أو insufficient washing عملية
الـ washing ما كانتش كافية أو الـ pH components نفسها
الصبغة نفسها الـ pH بتاعتها مرتفعة، بنشيك على الـ
pH، بنقلل الـ Staining Time، بنطول الـ Washing
Time لحيث بنكون خلصنا جزئية الـ Staining، في عندنا
فيديوهات هنشوفها ملحقة بهذا الـ PowerPoint الصغير
أو بهذا الفيديو الصغير، في عندنا فيديو عن الـ Blood
Smear كيف بنحضره عشان الراجل مع بعض، يعطيكم
العافية