Ton هاد بمثابة ملخص للمعمل وحاليا هنمشي على ال
slides ونشوف إذا في شغلات ما قولتها بالنسبة لل
objectives إيش الأهداف في المعمل ال preparing and
sterilizing media, reagent and supplies كيف نحضر
ال media كيف نعملها sterilization كيف نعقم كمان ال
reagent وال supplies وال equipment و أي إشي راح
أستخدمه في زراعة البكتيرياto familiarize the
student with media quality assurance procedures
أنه هيتعرفوا على طريقة تحضير الميديا بجودة عالية
مافيها أي contamination to familiarize the student
with safety concerns such as autoclave safety and
waning of powders برضه كمان هيتعرفوا على ال
autoclave إيش ال principle اللي له، لإيش بنستخدمه،
إيش الظروف اللي بوفرها وكمان كيف نوزن ال powder
قولنا إن ال media بتجيني على شكل powder طب ليش ما
تجيني على شكل media جاهزة ما عليها إلا غير أصبها
في الأطباق وأزرع للإجابة على السؤال إحنا بنعرف إنه
من طرق حفظ الطعام التشفيف لما يكون الطعام منزوع
منه المي فهذا الأشي حيزود من عمرهيعني هيطول لعند
ما يخرب فنفس الاشي ال powder لما تكون ال powder ال
media powder هذا الاشي راح يزود من ال shelf life
لإلها لو كانها rehydration يعني فيها ميه هذا راح
يأثر من ال shelf life هاي واحد الشغل التاني احنا
قولنا قبل شوية media ال SSA بدنا حضر 52 جرام بحط
عليها واحد liter يعني بالنهاية ألف milحضرنا من ويل
من 52 جرام فقط عشان بيه المثال ان ال media كانت 1
kilogram فبالتالي راح احضر أطباق كتير كبيرة
وبالتالي هذا الاشي راح يستهلك او راح ياخد عندي حيز
فمشان نقلل من الحيز فبتيجينا على شكل powder و انا
بروح استخدم و بحضر على قد ما بحتاجه لأن لو حضرت
الكمية كلهافبتحتاج بس في الأربع لخمس أسابيع و بعد
كده خلاص بتخرب، لكن لو كانت عندي على شكل powder
ممكن أتضالها عند الأسنينتمام نيجي على كيف نحضر ال
media preparation of culture media أول أشيه ال
media قولنا بتجينها شكل powder بدي أستخدم على قد
ما بدي باخد powder فبعمل rehydrate powder
according to manufacture structure بعمل
rehydration يعني بضيف distil water على الوزنة من
وين باخد الوزنة وقدرش بضيف distil water حسب ال
instructions أو التعليمات الموجودة على البوتل من
براقبل اللي أعمل sterilization بال Autoclave
ensure ingredients are completely dissolved بدي
أضمن أنه كل المكونات كل ال powder دابت كيف بدي
أعرف أنها دابت قولنا بعد ما أحطها على ال hot plate
بقى أشوف ال solution إذا clear وإذا كان ال wall أو
الجدران ل .. ل ال flask كان برضه كمان clean إذا
نضيفش فيه أي حبيبات معناته هيك ال media دابتavoid
wastage by preparing only sufficient for either
immediate use or use in the near future بقوللي
اتجنب انك تضيع ال media كاف انه بس بحضر ال media
على قد ما بحتاج
لكن بإمكاني أضيف allowing extra for mistakes يعني
لو تجربتي تحتاج لسبع أطباق بقولي حضري عشرة ليش
الزيادة هدول؟ لإن ممكن و أنا بزرع اللوب اللي
بستخدمه للزراع ممكن ييجي فيخبط بالأجار فيصير فيه
خدش فيه فبروح بستبدله بطبق تاني فيما لو صار
mistake بقدر أنه أستبدلهقال لو خمسة عشر لعشرين ملي
لتر أو سنتمتر مكعب من ال media بحطه في ال petri
dish قولنا تقريبا لربع الطبق بحط mediadispense in
volume appropriate for sterilization in the
autoclave or pressure cooker pressure cooker هي
معناها تنجرة تتضغط فاحنا قولنا ال autoclave بيشبه
تنجرة تتضغط من ناحية ال principle و من ناحية كمان
الشكل steam under a pressure فبقوللي انه ال
autoclave له أحجام مختلفة لصغير و لكبير فقداش
ساعته بتتحمل بقى حط فيه tubes و flask مشان ال
sterilization حسب ساعته بقىبقى حاط فيه ل glassware
agar slopes are prepared in test tube by allowing
sterile molten cooled medium to solidify in a
slope position احنا قلنا ممكن نصب الميديا في
بلايات ممكن اصبها في ال tubes عفرد انا بحكي على ال
tubes صبيتها سكرتها اما بال swab او بال screw cap
بعدين حضرتهم في ال rack و كل ال rack بال tubes
غطيتهم ب سولفان و دخلتهم بال autoclave لما يطلع
بال autoclave هيكون ال media عندى liquid بديهنها
تكون slope مائلة لإن طبعا في biochemical tests
هتعرفوا عليها في ال essential microbiology بتحتاج
ان تكون عندى ال mediaslop مائلة طب كيف تخليها
مائلة؟ بمجرد ما تطلع من autoclave و هي لسه سخنة
بحط الراك و بحط تحته شغلة زي مثلا كتاب أو قلم و
هيك بيصير الراك مائل بزاوية بقطركه على هذه الوضع
اللي عامة تتصل بال mediaهي الصورة بتميلني ال
bottles اللي بيكون فيها ال powder و كيف من برا في
عليها ال instructions اللي من خلالها بتدلني على
طريقة تحضير ال media و هاي بتقولي كيف احنا لما
نغطي Le Flasque بالسلفان و الصورة هاي بتبين انه
كيف لما يكون في حبيبات على جدار Le Flasque معناه
ان لسه ال media ما دابتحضرنا ال media طالع يانا
بدنا نصب ال media في أطباق boring قبلات طبعا هاي
ال procedure استحالة أجابلكم بالامتحان شو هي ال
procedure لصب ال media لكن انتوا هيتحاسبوا في
العمل على طريقة صبكم ل ال mediacollect one bottle
of sterile molten agar from the water bath المقض
بال bottle of sterile molten agar يعني هي لما تكون
ال media liquid لسه في ال flask تمام بروح أطلحها
من ال autoclave قولنا هتكون سخنة بس تانا عليها لما
تصير 45 بعد هيك hold the flask in the left hand
بإيد اليسار رح أكون ماسكة ال flaskو بإيدي اليميني
بآخر إصبع راح أشيل السلفان عن ال flask بإيدي
اليسار أمسك فيها ال flask و الإصبع الأخر بإيدي
اليميني راح أشيل السلفان عن ال flask بعدين بروح
أعقم فوهةالفلاسك تمام flame the neck of the bottle
بعقمل فوها lift the lid of the petri dish slightly
with the right hand قلنا الإيدي اليسار فيها
الفلاسك الإيدي اليمين هيكون في عندي صفة من الأطباق
فوق بعض راح أجي لآخر واحد من تحت ورح أرفع الغطاية
بإيدي اليمين شوية slightly مابفتحها على .. انا
بفتحها بزاوية 45بروح أفتحها شوية تمام بعدين pour
the sterile molten agar into the Petri dish and
replace the lid بروح أصب الميدا تقريبا من 15 ل20
مل وبعدين بسكر الغطاية لفلسك بروح أعقم الفوهة تاني
وبسكر بالسلفان flame the neck of the bottle and
replace the lid gently rotate the dish to ensure
that the medium covers the plate evenly
قلنا بعد ما صبينا في الطبق بروح أحرك و بعمله
agitation ال agitation هاد لحتى أضمن أن ال media
موزعة بالتساوي في كل الطبق allow doublet to
solidify خلاص طبعا بعد ما خلص أول طبق من تحت فبروح
للي فوقه ولي فوقه و هكذا لعند ما كلهم أصبهم بقى
أتركهم لعند ما يتصلبوا to solidify seal and
incubate doublet in aninverted position و اللي
ممكن انه احطها في ال incubator لو بدى استخدمها
حاليا ممكن احطها في التلاجة و بتظلها من 4 ل 5
أسابيع طبعا لو بدى احطها سواء بال incubator او
بالتلاجة هتكون مقلوبة inverted position ليش؟ انه
بتكون الغطاية لتحت لحتى مايصير condensation و
قطرات الماء انها تنزل تاني على ال media و تخربها
note the base of the plate must be covered لازم
يكون القاعللطبق مغطى لهك بعمل agitation و لازم
الكمية تكون من 15 ل20 مش أقل من هك أجار must not
touch the lid مش لازم أحط الأجار بكمية كتير كبيرة
بحيث أنه الأجار يخبط بالغطاة
the surface must be smooth with no bubbles وانا
بصب ال media لازم ما يتكون air bubbles لو اتكون
air bubbles قلنا الحل بمرر افلام على ال surface و
هيك نتخلص من ال air bubbles طبعا احنا قلنا المبدأ
عندنا و الطريقة لحتى اصب ال media في الأطباء انها
تكون عندى صفة أطباء في أبعاد تقريبا عشرة لكن في
ناس شو ممكن تعمل بتوزع الأطباء على ال bench و
بتصير تصب في كل طبقطيب الأفضل مين؟ الطريقة بتاعت
أنه انو وزّيحها و لا الطريقة ان يكون في صفتة،
الأفضل ان يكون في صفتة فوق بعض، ليش؟لأن طريقة
توزيع الأطباق على الـ bench هيبتعمل contamination
كيف contamination؟ لما يكون كل واحد لحال فبصير
عندي مدى أكتر ان انا افتح الغطاء أكتر بزاوية 45
فبالتالي هيصير فيه contamination لما يكون في صفة
فوق بعض بقدر ان انا اتحكم بالفتحة بحيث لو فتحت
أكتر هيوقع كل فوق فهيك هيقلل من ال .. من ال
contamination الشغل التاني لما كلهم أفردهم على ال
bench فهيك هتاخد حيز كبيرفالأفضل زى ما قولنا أن
يكون الصفة فوق بعض و أسير أبدأ من اللى تحت بعدين
اللى فوقه
Storage of media من ناحية تخزين ال media Store
stocks of repaired media ال stocks المقصود فيها ال
media القصل قبل ما أعملها ال rehydration يعني ما
المقصود فيها هي ال bottles فبدي أخزن ال bottles
اللي فيها ال powder بحطها على ال room temperature
ببعدها عن direct sunlight ببعدها عن أشعة الشمس ليس
لأن في ممكن بعض ال media مكوناتها بتتكسر مع الشمس
وين بحطها؟ a cupboard is ideal ممكن احطها في خزانة
او ممكن احطها في open shelf اللي هي في الرفوف
قولنا انه ال bottles اللي فيها البودر بخزنها بعيد
عن أشعة الشمس حتى كمان بتكون فيه bottles اللونها
غامقMedia in videos closed by cotton, wooly blocks
that are stored for future use will be subject to
evaporation لو الميديا أنا حطاها مثلا في .. في
flask على أساس ان بدي استخدمها فيما بعد أو مثلا
حطاها في .. في tubes وكنت مغطياها بالسواب أو .. أو
مثلا بالقطنبيقوللي هاي بعد فترة هصير عرض لل
evaporation ممكن ال media تتبخر فبالتالي هتقل ال
size لإلها فالأفضل أنه أستبدل القطن ب screw cap
بالغطاية اللى بنلفها لحتى نسكرها
تمام remelt stored agar media لو أنا نسيت ال media
في ال flask و لاقيتها متصلبة بسيحها تاني كيف ب ..
بحطها boiling water bath boiling يعني هتكون درجة
حرارة ال water bath مية او ممكن احطها بال pressure
cooker اللي هي ال autoclave ممكن احطها بال
microwave oven ممكن كمان احط .. احطها بال hot
plate و هذه كلها عندها القدرة انها تسيح ال media
sterile agari plates can be pre-bored and stored
in well sealed plastic bags قلنا بعد ما طلعنا ال
plates من ال .. من ال plastic bags اللي كانت فيها
بقصف فيها ال media و بتركها لعمل تتصلب و بعدين
برجحها بنفس الكيس اللي كانت فيه لكن هتكون مقلوبة
ليش مقلوبة؟ لحتى نمنع ال condensation و ما يتكون
قطرات الماء اللي تيجي على ال media و تخربهافي
عندنا مصطلحين هنتعرف عليهم ال sterilization و ال
disinfection ال sterilization هي القضاء على جميع
أنواع ال micro organism يعني بتعمل تدمير كامل لكل
ال micro organism بما فيها ال spores أو الأبواغ
complete destruction of all the microorganism
including spars طب ليش ال spars؟ بيقوللي هاي بتكون
كتير resistance ساعد نقضي عليها لكن بال
sterilization هنتمكن نلقضا على ال sparsطب شو ممكن
شغلات بنستخدمها بتعمل تعقيم sterilization من خلال
الحرارة ال heat زي مثلا بأستخدم ال oven أو ال
autoclave باستخدام ال filtration و باستخدام ال
radiation و برضه ممكن نستخدم ال chemicals إنه في
أنواع chemical بتعمل sterilization بتقدر على جميع
أنواع ال microorganism لكن في أنواع chemical تقدر
فقط على نوع معين مش على كل ال microorganismنيجي
للـ disinfection disinfection فقط هي بتقضي على
البكتيريا الممرضة destruction أو inhibition أو
removal للميكروبس that may cause disease يا بتعمل
disease يا بتعمل spoilage فساد لل food إيش الأمثلة
على الشغلات اللي بتعمل disinfection يعني التطهير
اللي هي مثلا زي الكيميكا زي ما أستخدم الديوتول
وأمسح فيه البنش فهذا مش راح يقضي على كل أنواع ال
micro organismمن الأمثلة على الـ sterilization،
الـ autoclave إيش ال principle للـ autoclave؟ اللي
هي steam under a pressure فهذه بتوفر درجة حارة 121
لمدة 15 minute وضغط 15 psi وبالتالي all
microorganisms including bacteria in the spores
will be destroyed
كيف ده نعمل الـ sterilization للـ equipment و ال
materials المعدات و المواد زي مثلا ال wire loop ال
wire loop هذا مستخدم لزراعة البكتيريا بيكون هو سلك
في نهايته زي دائرة فبأمسك من الدائرة هاي بحط فيها
كوليني و بروح أسرحها في طبق فاضيالـ wire loop كيف
بدي أعقمه بروح أعرضه لـ flame لما يصير لونه أحمر
معناته هيك أتعقّم heat redness in benzene burner
flame طيب بالنسبة للـ glassware للزجاجيات اللي
بتكون امتي فاضية بالنسبة كمان لل glass pipet مش
لبلاستيك لجلس وكمان بالنسبة لل petri dishes برضه
كمان لجلس بحطهم بال hot air ovenفي الفرن أو ممكن
انه انه اغطيهم ب مادة مقاومة للحرارة heat
resistant زي مثلا ال grease proof paper او
الالمونوم اللي هي السولفان بالنهاية فاروح اغطيهم و
بحطهم في الفرن هذا الفرن بوفر درجة حارة 160 لمدة
ساعتين و هيك بيعمل ال sterilization و بيقدر جميع
انواع ال micro organism بقوللي هذا بيسمح ل
allowing additional time for items to come to
temperature يعنيهنحط درج حرارة 160 هتبدأ انها تعلق
تعلق تعلق لما تصير 160 هيبدأ يحسب ساعتين خلاصوا
الساعتين هتبدأ درج حرارة cool down هتنزل