بسم الله الرحمن الرحيم والصلاة والسلام على أشرف
المرسلين سيدنا محمد وعلى آله وصحبه أجمعين طلابنا
الأعزاء نرجو من الله الكريم أن تكونوا جميعا بخير
وبصحة جيدة تحدثنا في المحاضرة السابقة عن فحص يعتبر
من أهم الفحوصات التي تستخدم في تقييم قدرة الرجل
على الإنجاب وهو فحص تحليل السائل المنوي تحت مصطلح
Seminal Analysis قررنا خلال الحديث عن هذا الفحص عن
عدة معايير مهمة كالـ volume الـ pH الـ viscosity الـ
concentration الـ count الـ motility بأقسامها
متمثلة في الـ progressive motile الـ non
progressive motile الـ non motile spermatozoa
انتقلنا للحديث عن الـ morphology انتقلنا للحديث عن
بعض الفحوصات المتعلقة بنشاط الـ sperm زي الـ
fructose test هذه معظمها فحوصات لها علاقة بالـ
Seminal Fluid جميعها يتم إجراءها و يتم إنجازها في
المختبر وبعضها لا يتم تطرق إليها مثل فحص الفركتوز
على سبيل المثال اليوم سوف نتحدث عن موضوع جديد له
علاقة بالآلية المتبعة و الطرق المستخدمة لتحضير
عينة السائل للحقن المجهري أو للتلقيح الصناعي
التقليدي المسمى باسم IVF In Vitro Fertilization
ولكن قبل أن نتحدث عن هذه الآليات وهذه الطرق التي
يمكن أن تستخدم من أجل تحضير عينة السائل دعونا
نتكلم عن مصطلحات طبية مهمة جداً لها علاقة بالـ XY
ولها علاقة بالـ Seminal Fluid من أشهرها Aspermia
فالـ Aspermia معناها انعدام وجود seminal fluid هذا
الرجل لا يستطيع أن يعمل ejaculation فبالتالي في
عنده seminal fluid ال volume الخاص فيه zero مافي
عنده seminal أو semen volume مافي عنده semen
volume so the definition of Aspermia is no
seminal fluid وينطبق عليها مصطلحين hypospermia
وhyperspermia الـ Hyper-Spermia زيادة في الـ volume
في الحجم بتجاوز الـ 5.5 ملي لتر أما الـ Hypo
-Spermia نقصان في الـ volume لكي يكون أقل من 2 ملي
لتر لأننا اتفقنا أن الـ normal volume للـ seminal
fluid 2 ملي لتر فزيادته و نقصانه له مصطلح معين
يليه مصطلح مهم جدا و هو أكثر انتشارا هو عبارة عن
الـ Oligospermia الـ Ologospermia معناها نقصان في
عدد الحيوانات المنوية في كل واحد مليليتر لكي تصل
إلى أقل من 20 مليون حيوان في المليلتر الواحد يليه
مصطلح مهم ويعتبر من المصطلحات الأكثر انتشارا و
الأهم وهي مصطلح الـ Azospermia فالـ Azospermia
معناها عدم وجود سبيرماتوزوة في الـ seminal fluid
so the lack of sperm in the semen جدش بتتمثل هذه
العملية وهذا المصطلح مصطلح الازوسبيرميا يمثل 2% أو
يتواجد بمعدل 2% من ال total males population يعني
بمعنى أخر كل 100 male وكل 100 men فيهم اثنين
مصابين بالازوسبيرميا أيضا وجدوا أن الازوسبيرميا
تتواجد بمعدل 10-15% من الذكور المشخصين بأنهم
infertile هذا المصطلح مصطلح مهم وخاطر في نفس
اللحظة خدوا بالك في مصطلحين إنهم علاقة بال
azospermia azospermia as general term و azospermia
after centrifugation ال azospermia as general term
إنه تكنولوجيست عامل scanning للشريحة مالجاش فيها
sperm وضع إنه عدد ال sperm zero فبالتالي
azospermia في تكنولوجيست أخر و embryologist أخر
أكثر دراية بالعمل فأخد العينة ك total sample وضعها
في test tube وعملها centrifugation أخد جزء من ال
sediment وعملها scanning ما وجد sperm فبيسميه
azospermia after centrifugation وهو المصطلح الأدق
لأن ممكن أنا لما أعمل mixing و أخد 50 micro أو 10
micro و أعملها scanning ومالاجيش لو أنا عملت
mixing كويس أو عملت centrifugation للعينة يعني
جمعتها ورصبتها وعملت لها concentrationو أخدت من الـ
sediments ممكن ألاقي sperm أو اثنين أو ثلاثة لأن
هذا بيأثر على طبيعة علاج المريض فيما بعد فمهم جدا
بعد ما ألاقي مصطلح Azospermia في العينة و أعمل فحص
للعينة و ألاقيها Azospermia أعملها centrifugation
و أفحصها مرة ثانية عشان أقول Azospermia after
centrifugation أو لاقيت واحد sperm after
centrifugation فهذا المصطلح مهم جدا هنتكلم عنه لما
نصل إلى الـ testicular biopsy كيف المصطلح
الازوسبيرميا after centrifugation بلعب دور كبير
ومهم في تحديد هل هذا الذكر أو هذا الرجل يلجأ إلى
ال testicular biopsy أو لا وإن لجأ إلى ال
testicular biopsy ما طبيعة ال biopsy هنتكلم في
عندي أربعة أنواع أسبابها بشكل أساسي أسباب
الازوسبيرميا قد تكون ال blockage على طول ال
reproductive tract أو قد يكون عندي abnormality في
ال hormone level وأشهرهم in FSH and LH testosterone
قد يكون عندي مشكلة في ال ejaculatory duct قد يكون
عندي مشكلة أساسية وظيفية أو تركيبية في ال
testicular وال testicular أو ال testis هي المصنع
الأساسي لإنتاج الاسبيرميا وبناء على هذا تم تقسيم
الاسبيرميا إلى قسمين أساسيين obstructive aspermia
و non-obstructive aspermia فطالما تم تقسيم الـ
Azospermia إلى Obstructive وNon-obstructive
Azospermia ما هو الفرق؟ ما هو الفرق بين الـ
Obstructive وNon-obstructive Azospermia؟ الـ
Obstructive Azospermia وجدوا أن أكثر أسباب وجودها
هي عبارة عن Blockage في الـ Vas Deferens أو الـ
Epididymis أو الـ Ejaculatory Duct فقط Blockage؟ لأ
واجهته ممكن يكون سبب آخر إن الـ Congenital Absence
في الـ Vas Deferens إبداد Epididymis وإيجاكلوتريدارت
تبشوفوا الفرق بين ال blockage و الcongenital
absence ال blockage إن هذا علم الذكر أو هذا الرجل
تعرض إلى حادث معين عمل وجود blockage وانسداد في
هذه القنوات المذكورة الثلاثة أما الcongenital
absence .. absence .. absence وهو إن ال male خلق
وولد وجاء على قيد الحياة وماعندهوش هذه المركبات أو
واحد منهم ماعندهوش الـ Epididymis ماعندهوش ال vast
difference وماعندهوش ال ejaculatory duct وارد صحيح
وارد ماهي المشاكل والأسباب التي تؤدي إلى حدوث ال
blockage بشكل أساسي لأن ال blockage يُعتبر هو
الأكثر انتشارا من أشهر الأسباب في عندي trauma أو
injury في منطقة .. في منطقة خاصة بال reproductive
tract infection أو inflammation في عندي عملية
جراحية في منطقة ال pelvic area في عندي الـ
vasectomy وهو إن الـ vas deference تعرض للاستئصال
ذكر رجل مصاب بـ cystic fibrosis أو mutation في
الجين الخاص بالـ cystic fibrosis فهذا الـ mutation
أدى إلى حدوث مشكلة في الـ vas deferens مما أدى
إلى وجود مشكلة في تطور الـ vas deferens فأدى إلى
حدوث blockage في الـ vas deferens بشكل أساسي إذن،
بناء على هذا الكلام في أسباب معينة علاقة بالـ
Obstructive Azospermia وتطرقنا إليها بشكل و بآخر و
من أشهر اللي قلنا عنها هي الـ Blockage في الـ
Vasodifference اللي بتدمس و النوع الثاني الـ
Ejaculatory duct واحد منهم أو الثلاثة مع بعض نجي
للشق الآخر من أنواع الـ Azospermia اللي حكيناها
Non-obstructive Azospermia والمعصود بالـ Non
-obstructive Azospermia أن الثلاثة مركبات
الأساسية أو التركيبات الثلاثة الأساسية سواء كان
الـ Epididymis أو الـBase Difference أو
الـEjaculatory Duct بيكونوا سالمين 100% ما في
عندهم Blockage ولكن في أسباب أخرى عبارة عن أسباب
جانبية أدت إلى إنقاص معدل إنتاج الـ sperm فبالتالي
هذه الـ external factor أو الـ other factor هي
اللي أثرت على المصنع بشكل أساسي ولم تؤثر على عوامل
أخرى خلينا نشوف إيش ممكن الأسباب التي تؤدي إلى
الـ non-obstructive azospermia الـ non-obstructive
azospermia المقصود فيها أن الثلاثة تركيبات الأساسية
اللي اتكلمنا عليها Vas deferens Epididymis Ejaculatory
duct Normal there is no blockage in this tubule or
in this tract ولكن there is another external
factor أثرت على الـ testis بشكل أساسي منها الـ
genetic causes أسباب وراثية من أشهرها الـ Klinefelter
والـ Klinefelter هو عبارة عن male with two copies
of X chromosome فهذا يؤدي إلى وجود ضمور في الـ
testis مما يؤدي إلى إنقاص معدل إنتاج الـ spermia
أيضا من أسباب الوراثية التي تؤدي إلى non
-obstructive azospermia أو بشكل أساسي الـ
azospermia ولكن non-obstructive هي وجود micro
-deletion في الـ Y-Chromosome لأن الـ Y-Chromosome
يحتوي على جينات تلعب دورًا مهمة وأساسية وحساسة في
إنتاج الحيوانات المنوية، فلو صار microdeletion في
الـY كرمز وملاجينات أساسية معناه لـ production
rate will be declined، هرمون abnormality or
imbalance، ومن أشهر هذه الحالات وجود ما يُعرف باسمه
الـ Hypogonadotropic، Hypogonadotropic يعني نقصان
في مستوى الهرمونات التي تفرز من مناطق معينة، الجناد
ومن أشهر هذه الهرمونات التستوستيرون الذي يلعب دورًا
مهمة في إنتاج وتطور ونضوج الحيوانات المنوية أيضًا
Hypogonadism، من حيث الـGonadism أيضًا من أشهر
الأسباب أيضًا Hyperprolactinemia،
بمعنى آخر زيادة مستوى هرمون البرولاكتين، زي ما
البرولاكتين بيعمل infertility مؤقت عند الفيميل،
أيضًا البرولاكتين قد يؤدي ويعمل بشكل سلبي على
المادة، فبالتالي لازم للبرولاكتين يصير فيه عنده
عملية معالجة في حالة ارتفاعه، من أسباب الهرمونية
أيضًا الـ Androgen-resistant، أنه في عندي Androgen
-hormone وفي عندي Sex-hormone ولكن الـ Receptor مش
شغال عشان يستقبله، فبالتالي لا يؤدي الوظيفة المطلوبة،
فيه سبب ثاني من أسباب الـ Azoospermia، ولكن الـ Non
-obstructive Azoospermia، سيرتولي سيل Only Syndrome،
وهي عبارة عن مشكلة في السيرتولي سيل التي تلعب
دورًا مهمة في تطور ونضوج الحيوانات المنوية،
spermatogenic arrest، تستكل failure to produce full
mature sperm cell، أنه تستشغالة ولكن في عندها ضعف
في منطقة معينة أو في مرحلة معينة من مراحل التطور
ونضوج الحيوانات المنوية، فبالتالي بيعطيني sperm،
ولكن هذا ال sperm لا يكون ناضج بالشكل المطلوب أو
بالكيفية المطلوبة، سبب آخر من أسباب الـ azoospermia
ولكن الـ non-obstructive، ال trauma، ال radiation، ال
varicocele أيضًا، كيدنفيريا، ال diabetes .. ال
diabetic أو ال diabetes، ال cirrhosis، هذه كلها
تعتبر من الأسباب التي تؤدي وتساهم في حدود ال non
-obstructive azoospermia، ال non-obstructive
azoospermia في مصطلح ثاني من المصطلحات الطبية
المهمة asthenozoospermia، وهذا المصطلح مقصود فيه
أنه فيها عندي ك technologist عندي عينات، عينات هذه
فيها sperm motility أو sperm motile، ولكن في عندي
reduction في كمية ونسبة الحيوانات المنوية المتحركة،
حتى تصل إلى أقل من 40%، ورغم أنه ال normal range ل
ال total motile 42%، عفوا 40%، بس لـ Progressive 32%،
فبالتالي لو صار في عندي reduction in the
percentage of total sperm motile less than 40%، هذا
المصطلح بسميه asthenozoospermia، طب شو أسبابه؟ شو
العوامل الممكن تسبب وتأثر على ال sperm motility؟
في عندي عدة عوامل، من أول عوامل التي تؤثر سلبًا عن
ال sperm motility، ال Varicocele دوال الخصية، خدوا
بالك، ال Varicocele هو عبارة عن تضخم في بعض الأوردة أو
التي تحيط بالـ testes، تعتبر reversible بمعنى آخر
أنه ممكن يصير علاج إلها وترجع مرة ثانية، هذا يعتبر
مشكلة مؤقتة تزال بعملية جراحية، في عندي مشكلة أيضًا
seminal tract infection، في عندي antisperm antibody،
لأن الـ antibody هيعمل قتل للـ sperm ويفقد قدرته
على حركة، فيما بيعمل reduction، poor nutrition، عندي
مشكلة في التخزينة، ما عنده كمية كافية من ال fructose،
ما بتناول فواكه بكمية كافية، ما بتناول مصادر ال
fructose، فبالتالي هيفقد ال sperm قدرته على الحركة،
بسبب فقدانه العنصر الأساسي للحركة، ال smoking، ال
alcohol intake، ال caffeine، ال tobacco consumption،
هذا كلها تعتبر من أسباب التي تؤدي إلى نقصان مستوى
ونسبة حركة الحيوانات المنوية، هذه بشكل أساسي من
الأسباب الأخرى التي تساهم في نقصان معدل ونسبة تحرك
الحيوانات المنوية هو التعرض لبعض الـ toxic agents،
زي الناس الـ farmers، الناس اللي بتشتغل في البنزينة،
الناس اللي بتشتغل كمزارعين، الناس اللي بتشتغل في
مصنع البطاريات، الناس اللي بتشتغل في المناجم الفحم،
تتعرض لكمية كبيرة جدا من ال organic solvent أو
المواد التي تعتبر مواد سامة، المشكلة ليست في التعرض،
المشكلة في كمية التعرض ووقت التعرض وال
concentration اللي بتتعرض إليه الإنسان، يعني ممكن
أي إنسان، إحنا في حياتنا اليوم دي متعرضين، ولكن مش كلنا
متعرضين، أنت ممكن تتعرض ساعة، من إزاي اللي بيشتغل
في البنزينة بدوام 12 ساعة؟ ومش اللي بيشتغل في
الفحم وفي منجم الفحم بدوام ممكن يصل إلى 24 ساعة،
متواصل أو متقطع، فبالتالي في عنده duration لل
exposure، كمية، وقت عالي جدًا، فبيعمل مشاكل في ال
sperm motility، أيضًا الـ Age بيلعب دور عكسي في
وجهة الدراسات أن هناك علاقة سلبية ما بين الـ Age
و percentage of sperm motility، تحت مصطلح Negative
Correlation between the Male Age and the
Percentage of Sperm Motile، كل ما زاد ال Age قل
الموتيلتي، كل ما قل ال Age زاد الموتالي ال sperm،
أيضًا ال Cancer بيلعب دور سلبي، لأنه طول ما في عندي
Cancer في عند الـ Radiotherapy، في عند الـ
Chemotherapy، وكلهم يؤثر سلبًا على مصنع الحيوانات
المنوية وفيؤثر سلبًا على الحيوانات المنوية
الموجودة في الـ epididymis، ويؤثر سلبًا على
الحيوانات المنوية التي ما زالت تُخلق، فبالتالي، دي
بيعمل reduction عندي في عدد ال sperm المتحركة في
عنده مصطلح آخر اسمه Teratospermia، ما المقصود بهذا
المصطلح؟ Teratospermia معناه إن في أنا عندي sperm في
عندي spermatozoa وفي عندي mature sperm، ولكن معدل
ال .. أو نسبة .. نسبة ال sperm اللي يعتبر up
normal form عالي جدًا، up normal form يعني ميجارو
head، pin head، double tail، two mid piece، يعني
بمعنى آخر أنا عملت scanning للعينة، لقيت عدد ومستوى
ونسبة ومعدل تواجد ال up normal form spermatozoa
عالي جدًا، بالتالي بسميها Teratospermia، Teratospermia،
شو أسبابها؟ شو ال most common؟ شو الفكرة التي تؤدي
إلى حدوث Teratospermia؟ أول حاجة ال infection، ال
chronic infection، كل ما اتعرضت أو هنعرف إيش عن ال
chronic infection أو كيف ال chronic infection بسبب
تغييب في أشكال الحيوانات، خدوا بالكوا، اربطوها وهنتكلم
عنها بشكل مستفيض، تكلمنا عن المحاضرة الفاتتة،
chronic infection يعني ال immune system هيشتغل،
يعني في عندي white blood cells هتهاجر للمنطقة هذه، هتفرز
ال white blood cells كمية كبيرة جدا من ال free radical،
فتديني ROS، Reactive Oxygen Species، هذي بتعملي
degradation في ال DNA وفي ال morphology بتاعة ال
sperm، ببساطة جدًا، Smoking وال alcohol intake تؤدي
إلى Teratospermia، عدم وجود اتزان وتناول طعام صحي
تؤدي إلى Teratospermia، الـ Obesity تعتبر من أهم
العوامل التي تساعد في وجود Teratospermia، الـ Drug
الذي يتم تناوله بغير وصفة طبية أو بغير جرعة طبية،
بعض الأدوية تؤثر سلبًا أيضًا، وجود ال trauma في
منطقة ال testicular تؤثر على ال morphology الخاص
بالـ spermatozoa، كل هذه المصطلحات وكل هذه الأسباب
تؤدي إلى حدوث مشاكل في عملية إنتاج أو تطور أو نضوج
الـ spermatozoa، مصطلح آخر بنسميه polyzoospermia،
polyzoospermia وهو عبارة عن مصطلح المقصود فيه زيادة
عدد الحيوانات المنوية في السائل لتصل إلى أكثر من
200 مليون خلية أو 200 مليون sperm per milliliter،
increase in the total number of spermatozoa to
arrive 200 million per milliliter، طبعا هذا العدد
مهول يعتبر، ومش كل زيادة في العدد تعتبر زيادة
إيجابية، فبالتالي الزيادة قد تكون سلبية، ببساطة جدًا،
تصور أن أنت عندك كمية كبيرة جدًا قد كل المدرسة أو
كل الجامعة في حالة من حالات التصقيد، سوف تخرج من
بوابة صغيرة جدًا، سوف يحدث تدافع عند عملية الخروج
مما يؤدي إلى وجود إصابات وقد يؤدي إلى اختناقات على
صعيد بسيط جدًا، على الوضع الحالي، فمباناك لو كان عندك
200 مليون sperm هيخرجوه بشكل دفقات متتالية، هيصير
في عندي نوع من أنواع إعاقة في الحركة، إعاقة في
الحركة، يعني تدمير، يعني ال fertility chance تقل و
تحدجيه عند المال، طبعًا it is usually associated with
a decrease in the volume of ejaculatory matter، هذا
السبب اللي بيؤدي إلى زيادة الحجز، زيادة العدد، إن ال
حجم بدل ما يكون خمسة فيهم 200 مليون كان فيها
واحد مل فيهم 200 مليون فمن أهم أسباب زيادة ال
concentration of sperm أو دعنا نسميها زيادة ال
count of sperm هو عبارة عن حدوث reduction في ال
sperm volume في ال seminal volume it may be a
cause of infertility since such high concentration
can be difficult for their movement طبعا زيادة في
العدد يؤدي إلى تزاحم أثناء المسير في رحلة ال
fertilization فالتزاحم هذا هيكون تزاحم عكسي فهيمنع
من حركة ال sperm ما تزيد بشكل المطلوب و بشكل
المناسب لأن فيه تدافع طبعا it is important
condition in male fertility because white cell
are weak in the sperm and can't damage its genetic
material طبعا أيضا من أهم المصطلحات وجود بعض ال
white cells تؤثر سلبًا على هذه العملية طبعًا وجود
ال white cells لها علاقة بحاجة بتسميها
Pyospermia أو حاجة بتسميها presence of leukocyte
in seminal fluid طبعًا وجود ال leukocyte في ال
seminal fluid معناه أنه في عندي infection ال
infection هيهاجر كمية كبيرة جدًا من ال white
cells إلى المكان فبالتالي هيعملها destruction
ببساطة جدا وجود ال white cells هيعمل ROS
هيعمل destruction ل genetic material فيؤدي إلى فشل
ال sperm في قدرته على عملية الإخصاب while the
blood cells release powerful substances called
reactive oxygen species which destroy organisms
that cause infection unfortunately أو للأسف بشكل
كبير جدا وجدوا أن الـ ROS بتأثر سلبًا بشكل كبير جدًا
على الـ sperm DNA على الـ sperm motility وعلى الـ
sperm movement طبعا فادوا بالكواخر تلت نقاط اللي
لهم علاقة بمصطلح وجود حاجة بنتسميها leukospermia
و leukospermia بيسموها وجود ال leukocyte بكميات
كبيرة جدًا في ال seminal fluid هذه رقم ثلاثة
النقطة رقم ثلاثة ونقطة رقم أربعة ونقطة رقم خمسة
لها علاقة بمصطلح اسمه leukospermia أو Pyospermia
و هذا المصطلح Leukospermia أو Pyospermia هي عبارة
عن presence of leukocyte in seminal fluid with high
number طبعا هذه المفروض في هنا عنوان جديد خلصنا من
المصطلحات التطبيقية المهمة سننتقل إلى موضوع جديد
كيف يتم تحضير عينات السائل من أجل ال ART أو ال IVF
أحد تقنيات ال ART طبعا في البداية في عندي مصطلح ال
IVF In Vitro Fertilization فيها عندي مصطلح الـ ICSI
وفيها عندي مصطلح ال IUI إيش يعني ال IUI اختصارها
Intrauterine Insemination وهي ببساطة جدا هي إيصال
لـ spermatozoa الناضجة إلى الرحم
متى بنستخدمها إذا كان في مواجهة عنيفة من قبل ال
female barriers الموجودة في منطقة الـ cervix ومنطقة
ال vagina لل spermatozoa أو ال spermatozoa لا تقدر
تقطع هذه المسافة فبيجي الطبيب بياخد ال spermatozoa
بيعملها preparation بيحطها في أنبوبة اسمها
catheter tube very thin و بيحطّنها داخل ال vagina
الخاصة بال female أو ببعناء آخر داخل الرحم الخاص
بال female مرورًا بال vagina و ال cervical فبيقصر
المسافة اللي هتمشيها ال spermatozoa و بيقصروبيقلل
معدل الأخطار اللي بتوجهها ال spermatozoa هذا
المصطلح بنسميه IUI intrauterine insemination يعني
الحقن داخل الرحم طبعا هذه بنعملها إذا كان ال female
طبيعية 100% ولكن في عندي مشكلة في ال motility
الخاصة بال male spermatozoa شو السبب منها؟ شو
الهدف منها؟ تقليل المصاعب والمخاطر اللي يتواجهها
الـ spermatozoa خلال رحلة ال fertilization في
منطقة ال cervical أو منطقة ال vagina مرتبطة على ال
leukocyte و الـ antisperm antibody و خلافه طيب ال
sperm process for IVF كيف يتم تحضير العينة؟ أو
خلال عملية تحضير العينة، شو بيصير؟ طبعا خلال .. أو
فكرة تحضير العينة و الفكرة الأساسية لتحضير العينة
ومبدأ تحضير العينة يقوم على مبدأ أساسي هو عزل
الحيوانات المنوية الجيدة التي تعتبر normal form و
good motile فبالتالي طالما في عندي عزل للحيوانات
المنوية الجيدة إذا سوف يتم التخلص من ال seminal
fluid أو ال seminal plasma يتم التخلص من خلالها من
العوامل التي تعمل decapacitation والمقصود بال
decapacitation يعني فقدان الحيوانة المنوية القدرة
على الإخصاب إبعاد وعزل الـ dysfunctional و الـ ROS
producing sperm بمعنى آخر إبعاد الـ sperm ب
dysfunction اللي ممكن يفرز كمية كبيرة جدا من الـ ROS
اللي بتدمر الحيوانات المنوية الأخرى التخلص من ال
leukocyte لأن ال leukocyte جالب شوية حكينا ممكن
يفرز كمية كبيرة جدا من ال ROS التخلص من البكتيريا من
أن البكتيريا تلعب سلبًا ودورًا سلبيًا على
الحيوانات المنوية المتبقية وتحسين قدرة الـ sperm
من حيث الحركة والمحافظة على المادة الوراثية بالشكل
الكامل بالإضافة إلى المحافظة على الـ Acrosome
Reaction والمحافظة على الـ sperm في حالة Normal
Form إذن هذه الخمس نقاط، خمس نقاط أساسية تحدث خلال
عملية الـ Sperm Processing for IVF من أجلها
يتم المحافظة على الـ sperm يتم المحافظة على الـ
sperm و الـ acrosome ... sperm morphology و الـ
acrosome reaction و الـ motility الخاصة بالـ sperm
كيف يتم المحافظة على هذه الأمور؟ من خلال التخلص من
الحيوانات المنوية الميتة التخلص من البكتيريا
التخلص من الكرات الدم البيضاء و التخلص من ال
seminal plasma التي قد تحتوي على الـ anti sperm
antibody أو إذا كان طبعًا لل male يصنع antibody ضد
نفسه أو يحتوي على الـ Decapitation Factor هذه أهم
خمس نقاط أساسية أهم خمس نقاط أساسية ما هي الطرق
التي تستخدم في عملية ال isolation أول طريقة تستخدم
في عملية ال isolation و ال extraction و ال
processing هي طريقة بسيطة جدا تسمى simple dilution
and washing simple dilution and washing هنتكلم
عنها بالتفصيل النقطة الثانية أو الطريقة الثانية هي
ال sperm up و من اسمها سباحة للأعلى النقطة الثالثة
و الطريقة الثالثة هي density أو density gradient
centrifugation density gradient gradient
centrifugation بمعنى آخر الفصل بناء على الكثافة
المتدرجة في عندي simple dilution and washing في
عندي sperm swim up في عندي density gradient
centrifugation طبعا هذه الثلاث نقاط أو الثلاث عوامل
أو الثلاث طرق إن صح التعبير الأكثر استخداما والأكثر
شيوعا ولكن حاليا الأكثر استخداما الطريقة الثانية
أو الثالثة والأكثر على الإطلاق والأكثر استخداما في
مختبرات ال IVF هي الطريقة الثالثة اللي لها علاقة
بال density خلينا نأخذ الطريقة الأولى اللي اسمها
simple dilution and washing ببساطة جدًا خلال هذه
العملية يتم فصل ال spermatozoa عن ال seminal
fluid بما يحتويه فصل ال spermatozoa عن ال seminal
fluid بما يحتويه هذا الإجراء يحفظ قدرة الإجراء
للتواصل بشكل كبير بما يحتوي عليه الإجراء بما يحتوي
عليه الإجراء بما يحتوي عليه الإجراء بما يحتوي على
الإجراء بما يحتوي عليه الإجراء بما يحتوي على
الإجراء بما يحتوي عليه هذه الطريقة الأولى، يعني
أكثر ... أو أكثر الحالات التي يستخدم معها الطريقة
الأولى ال simple dilution and washing مثل ... إذا
كان في عندي immune disorder إذا كان في عندي male
factor أو حالات عدم إنجاب غير معروفة السبب طبعا
هذا ال ... هذا ال technique بيحتاج dilution و
centrifugation طبعا ال sperm بيصير له washing ب
solution يحتوي على ال antibiotic و بعض ال
supplemental protein ومن أشهرهم الـ albumin يُضاف
يعني كإن أنا بستخدم media هذه ال media فيها
antibiotic plus supplemental protein like albumin
بضيفها على عينة السمن بمعدل 1 إلى 1، 2 إلى 2
و خلافه ولكن الأكثر استخدام من ال ratio one to one
ال media sterile of the equal volume from the
seminal fluid يعني ال ratio ما بين ال media
المستخدمة التي تحتوي على الـ supplemental protein و
الـ antibiotic إلى كمية السمن fluid لازم تكون 1
لـ 1 مل بمعنى أنا أضفت أو بدي أعمل Washing لـ 1 مل من
العينة بدي أضيف 1 مل من الـ Sample فبالتالي بعمل
Mixing للعينة و بقيس كده عندي الـ volume تدريجيًا
عندي 5 مل إذا لازم أضيف عليهم خمسة مل من الـ media
بعملها good mixing بعدين بضيفها في test tube و
بعملها centrifugation باستخدام طبعًا الـ
centrifuge طبعًا الـ centrifugation لها زمن معين و
سرعة معينة فبعملها centrifugation على ثلاثمية دورة
300 G لمدة عشر دقائق فهتفصل لنا مركبين أو طبقتين الـ
semen في الأسفل و الـ supernatant كلها في الأعلى
removing with sterile pipet طبعًا هنا for 10 minutes
and then the supernatant is very careful remove
طبعًا الـ supernatant أنا ما بدي إياه لإنه فيه كل الـ
debris فيه كل الـ decomposition factor فيه كل
العوامل اللي ممكن تؤثر سلبًا على الـ sperm فبعمل
removing للـ supernatant بسحبه بالـ sterile pipet أو
الـ dropper و برميه لـ Palette أو لـ Sediment
الموجود بعملها Resuspension و بضيف عليها بعد كده
واحد مل من نفس الـ media و بعملها Mixing و
Centrifugation لمدة خمس دقائق على نفس السرعة 300 G
برفع الـ supernatant و برميه بتخلص منه و بعمله
discard بعد كده بعمل Resuspension للـ Pellet و
بضيف عليها واحد مل من نفس الـ media أنا كده بكون
غسلتها مرتين ممكن أغسلها كمان مرة ما فيش مشكلة بضيف
واحد مل مرة ثانية Mixing centrifugation على 300 G
لمدة خمس دقائق بتخلص من الـ super net and بضيف أو
بعمل resuspension للـ sediment الموجود أو للـ Pellet
الموجود طبعًا كده الـ sediment بتكون جاهزة لعملية الـ
IUI for example جاهزة لعملية الـ IVF for example
بناءً على طبيعة العينة أو طبيعة الـ process اللي أنا
بدي أستخدمه طبعًا استخدمت عشر دقائق و بعدين عشر
دقائق و بعدين عشر دقائق يعني ممكن تأخذ لـ minimum
ثلاثين دقيقة العملية ككل ما بين عملية الـ first
centrifugation حتى الـ last time أو الـ last step
centrifugation طبعًا مهم جدًا قبل ما أكون جهزت
العينة و بعدها لـ empirical lab أو لعملية الحقن
بشكل أساسي لازم أعمل evaluation للعينة أو للـ Pellet أو
للـ semen إن أشوف ما فيش فيه متايل sperm ما فيش
فيه count sperm بعد كده أعملها preparation
preparing for insemination insemination يعني الحقن
الـ Insemination أي ما المقصود فيه برجع بأكد أن هذه العملية بتأخذ
لها كمية قليلة جدًا من الوقت يعني ثلاثين الـ أربعين
دقيقة يعني مش الوقت الكبير المرحلة الثانية من
المرحلة التي تستخدم أو الطريقة الثانية طريقة الـ
Swim-up طبعًا طريقة this warm-up هي أكثر الطرق
التي يتم فيها استخدامها في الـ research على سبيل
المثال و الـ I.O.I. الـ research و الـ I.O.I. طبعًا
في هذه العملية أو عملية this warm-up الـ principle
الأساسي الخاص فيها أنه فقط الـ spermatozoa التي
تُعتبر progressive motility أو progressive motile .. progressive motile
spermatozoa هي التي تستطيع السباحة للأعلى يعني هنا
بفصل فقط الـ motile sperm عن باقي الـ spermatozoa عن
باقي الـ debris عن باقي الأمور التي لا نريد أن
تتواجد مع العينة ليه؟ لأن ببساطة جدًا الحيوانات
المنوية الأكثر صحة الأكثر قدرة على الحركة التي
تُعتبر حركتها طبيعية هي التي تستطيع أن تسبح للأعلى
طيب ليه تسبح للأعلى؟ هنعرف ليه سميت أصلاً Swim-up طبعًا
this procedure is very easy to perform and allowed
recovery for good number of progressive
spermatozoa في مجموعة Normal Spermatozoa أو مجموعة
Normal Sperm طبعًا في البداية هذه الطريقة لديها
عديد من المفاتيح منها على سبيل المثال إنه بيعمل
reduction في percentage of normal chromatin
condensation in spermatozoa بيعمل why pellets
spermatozoa are in close contact with other cell
debris leucocytes at the bottom of the tube
beginning exposure to the high level of ROS طبعًا
طالما فقط الـ spermatozoa التي تتميز بالـ progressive motility
التي تسبح في الأعلى إذا أنا هفقد كمية كبيرة جدًا من
الـ spermatozoa في الـ centrifugation و هتقل في
الـ Pellet وجودها في الـ Pellet يعني قريبة من الـ leukocyte
قريبة من الـ leukocyte يعني قريبة من الـ ROS قريبة
من الـ ROS يعني عندي الـ ROS هتأثر على الـ spermatozoa و
هيعمل لي destructure لها عشان كده بلاقي عدد
الحيوانات المنوية التي تسبح للأعلى قليل جدًا قد
تكون Normal Motile ولكن قد لا تكون Normal
Morphology أو Normal Sperm Condensation المادة
الوراثية مش هتكون .. ممكن ما تكونش Normal بنسبة
100% فبالتالي هذه تُعتبر من الطرق التي تُستخدم
طبعًا أكثر استخدام لهذه الطريقة في عملية الـ I.O.I
بسميها Intra-Uterine Insemination كيف أنا هتشتغل
هذه الطريقة و كيف بتتم ببساطة جدًا بجيب عينة الـ
seminal fluid بعمل Mixing بينها و بين الـ media
اسمها IOI media بنسبة 1 إلى 2 شو يعني 1 إلى 2؟
بمعنى آخر أنا عندي 1 مل Semen بضيف عليها 2 مل Washing
culture media أو IOI media أو بسموها Washing media
أو Swim-up media اللي هي مسميات كثيرة عندي 1 مل
بضيف عليها 2 مل من الـ media بعمل Mixing طبعًا هذا
في الـ sterilized tube و بعمله Centrifugation لمدة
10 دقائق على 2200 rpm بعد كده بتخلص من كل الـ
supernatant ما ليش علاقة بيه بعمله discard و بعدين
بعدين بضيف عليه نفس الـ media بكمية معينة 1 مل 1.5
مل بناءً على كمية الـ Pellet الموجودة ولكن عملية إضافة الـ
media هنا بتتم بشكل Slowly جدًا وعلى الجدار
الداخلي للأنبوبة يعني بأخذ بالـ sterile و أضربها 1
مل أو 2 مل بأنها ما فيش عندي حجم الـ Pellet عندي
حجم الـ Pellet أو الـ sediment 1 مل بأخذ 2 مل و
بميل الأنبوبة و بنزل السائل أو الـ solution أو الـ
media على الجدار الداخلي للأنبوبة عشان ما يصيرش drop
مرة واحدة مع الـ sediment بعد كده بأخذ الأنبوبة هذه
و بضيفها بشكل مائل بزاوية 45 درجة و بحطها في الـ
incubator لمدة 45 دقيقة على 37 درجة مئوية طبعًا
هذه الـ Inclination أو بزاوية 45 بالـdenis landship بتساعد
الـ spermatozoa أنها تسبح بسهولة نحو السطح فبالتالي
ما بيكون فيش قوة كبيرة جدًا بتواجد الـ spermatozoa
تقاوم عملية السباحة للأعلى بالفعل الـ gravity فأنا
عملت عملية Inclination لها عشان أُقلل المسافة اللي
هتقطعها الـ spermatozoa و ما أُجهد الـ sperm لأن أنا
محتاج حركته في عملية الـ fertilization بعد ما أخلص
الـ 40 أو الـ 45 دقيقة بأجي بطلع الأنبوبة برفعها
بأجي أشوف الـ supernatant بعد ما كانت clear صارت turbid معناه
فيه spermatozoa صعدت للأعلى بأخذ كل الـ supernatant
اللي فيه spermatozoon و بضيفه في الـ sterile test
tube و بعمل evaluation للعينة من حيث الـ count و من
حيث الـ motility قد ايش فيها Sperm و قد ايش فيها
متغير الـ Sperm طبعًا هذه صورة بتوضح الكلام فيها
عندي Test tube ضفت العينة واحد منه وضفت عليها
اثنين من الـ media عملتلها Mixing ثم تخلصت
بـ centrifugation وتخلصت من الـ supernatant ضفت media أخرى
تتناسب مع كمية الـ sediment الموجودة ضفتها وقمت
بوضعها في Rack بزاوية 45 درجة مئوية ودخلتها الـ
incubator على 37 درجة .. عفواً ضفتها في الـ Rack
بزاوية 45 درجة بعدين أدخلت الـ Rack بالأنبوبة داخل الـ
incubator على درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة من 20 لـ 40
دقيقة بعد كده هرفع الأنبوبة هلاقي الـ supernatant
turbid بعد ما كان clear دليل أنه في spermatozoon
بأخذ كل الـ supernatant اللي موجود بالأعلى دون
ما ألامس الـ sediment و بضيفها في أنبوبة جديدة بعدين
بأخذ منه عشرة micro بعمله assessment علشان أشوف كم
في عندي Sperm count و كم في عندي Motile و كم في
عندي عدد من حيث عدد الـ Sperm طبعًا هذه الطريقة
ما بتحتاج Skill معينة طريقة سهلة جدًا رخيصة جدًا
ما بتحتاج لـ Test tube و Media و أكثر استخدامها للـ IVF
التقليدي بالإضافة
الطريقة الثالثة التي تعتبر هي أكثر الطرق استخدامًا
طريقة الـ Density Gradient Centrifugation يعني
الـ فصل باستخدام الكثافة المختلفة أو طبقة الكثافة
المختلفة طبعًا هذه التقنية هي تقنية مهمة جدًا لاختيار
عدد كبير أو عدد كبير من Motile spermatozoa في حالة
عدد عدد عدد عدد عدد عدد عدد عدد عدد عدد عدد
عدد عدد عدد عدد عدد عدد عدد عدد عدد عدد عدد عدد
عدد عدد عدد عدد عدد عدد عدد عدد عدد
ع
العينات التي تُصنف على أنها Oligospermia أو
Teratospermia أو Asthenozoospermia طبعاً، in this
method, good quality sperm can be separated from
dead sperm أمر طبيعي، from leukocytes، from other
compounds of the seminal plasma by density
discontinuous gradient ما المقصود فيه؟
the density discontinuous gradient يعني كثافة متدرجة
غير متصلة من حيث الكثافة ما بقول كل أنبوبة 90%
كثافتها هنحكي عنها شيء عن كثافة متدرجة أو كثافة
غير متواصلة فكرتها أنه أنا بفصل الـ good sperm من
حيث الـ quality عن الـ other spermatozoa عن الـ bad
quality sperm عن الـ dead sperm عن الـ ecocide عن الـ
debris عن الـ other material فكيف أنا بدي أشتغلها
ببساطة جداً ببساطة جداً بجيب test tube بضيف فيها
عندي two types of media نفس الـ media ولكن with
different concentrations كدا بسميها two types of
media من حيث الـ density وليس من حيث النوع two
types of media according to density not according
to composition فنفرض إن الـ media الأولى تركيزها 40
و الـ media الأولى كثافتها 40 و الـ media الثانية
كثافتها 80 فبأخذ ببساطة جداً بجيب الـ test tube بضيف
عليها top layer 40% يعني بمعنى آخر بجيب الـ media
اللي كثافتها 80% وأضيف واحد منها بعدين كده بجيب الـ
media اللي كثافتها 40% وأضيف واحد منها آخر بشرط أن
الإضافة تكون بشكل مائل عشان ما يصير strong mix
between two types of media فهتكون الـ layer السفلى
لها علاقة بالـ media اللي كثافتها 80% بينما الـ
layer العلوية لها علاقة بالـ media اللي كثافتها 40%
بعدين بجيب 2 مل .. طبعاً خذوا بالكم النسبة لازم
تكون 1 إلى 1 حطيت 1 مل من الـ media الأولى هتكون 1 مل
من الـ media الثانية و 1 مل من الـ seminal fluid أو
العينة حطيت 2 مل 80% و 2 مل 40% بعدين ضفت العينة و
قلت هتكون 2 مل من عينة الـ semen ما بعمل mix؟ وعملية
الإضافة بتكون بشكل very slowly على الجدار الداخل
للأنبوبة عشان ما يصيرش mix بين الطبقات الداخلية من
الأسفل لأعلى media 80% و 20% و 40% ورقم 3 seminal
fluid بعمله centrifugation على 300xg لمدة 20 minute
بأطلع الأنبوبة بكل بساطة وبدون استعجال عشان
ما أعملش mix حلاجة في عندي انقسام separating من
الأعلى للأسفل سيكون في الأعلى الـ Seminal Fluid
يليه بالـ sperm, other debris, bacteria,
debris, immature, non mature, spermatozoa,
pellet, other target يعني سيكون عندي فقط طبقتين
الطبقة العلوية هي الـ Seminal Fluid بكل ما ذكرنا و
الطبقة السفلية هي الـ pellet اللي فيها الـ target
بأخذ
كل الطبقة العلوية بدون أعمل أي touch للـ pellet و
برميها بعملها discard we don't need it بعد كده
transfer the sperm pellet to the new tube and then
add 5ml of the sperm wash في ناس بتاخد الـ pellet
ل test tube جديدة وفي ناس أصلاً بتضيف على الـ pellet
مباشرة وبتعملها mixing من pure media و pure wash
media خمسة مل بضيفه على الـ pellet بعمله
resuspension centrifugation لمدة 10 دقائق على 500
XG بعمل remove all the sperm washing except
the last one ml بمعنى آخر بعد ما أضفت الخمسة مل
وعملت centrifugation لمدة عشر دقائق بأخذ الـ test
tube برفع أربعة مل من الخمسة مل برميهم وبأخلي آخر
واحد مل اللي فيه spermatozoa اللي أنا بديها اللي
سميتها target spermatozoa ممكن أخد منها عشرة micro
وأعمل evaluation للعينة وأشوف كمية الـ sperm من
حيث الـ concentration وقداش كمية الـ sperm من حيث
motility as percentage طبعاً هذه شكل الـ conical
test tube أنا أضفت الـ layer الأولى 2 مل وليكن من
الـ media التركيز أو كثافتها 80 بعض الأحيان 90 وطبقة
ثانية 2 مل من الـ media اللي كثافتها 40 وبعض الأحيان
طبعاً 45 فهو بنبدأ بناء على شركة على شركة في شركة
بتعمل 80 40 وفي شركة بتعمل 90 40 و 45
40 وكذا بعد أنضفت اتنين مل من العينة أدخلتهم
الـ centrifugation بعد انتهاء الـ centrifugation
اللي جاءت فيه عند كل الـ seminal fluid في الأعلى بما
يحتوي من material unwanted والـ target material
الموجودة في الـ sediment بتخلص من الـ supernatant
وبضيف عليها خمسة مل من pure washing solution
بعملها mixing و centrifugation بعد كده بتخلص من
أربعة مل وبأترك الواحد مل كما هو وهو اللي فيه
target إذا الواحد مل الأخير هو اللي فيه target
spermatozoa with high quality بأخذ منها عشرة micro
بعملها evaluation assessment عشان يشوف كداش الـ
total count كداش الـ concentration، كداش الـ
motility، كداش الـ progressive motility، و كده بتكون
العينة جاهزة للـ exit سنستكفي بهذا القدر إن شاء الله
على أمل أن نلتقي في محاضرات مستقبلية تم تم في حفظ
الوريعات