السلام عليكم ورحمة الله وبركاته معملنا بعنوان
Enumeration of Staphylococcus Aureus in Foods
هنعدّ Staphylococcus Aureus في عينة الغذء معناته هنشتغل
نفس الشغل المرة الماضية اللي كان عنوانه باللغة العربية
Clinic Count أو Total Viable Count لكن الاختلاف
هيكون فقط في الميديا المستخدمة المعمل الماضي كنت
بدي أعدّ جميع أنواع البكتيريا بغض النظر عن نوعها
لهيك كنا بنستخدم General Media زي الـ Nutrient Agar
ما فيها Selective Agent ما فيها أي Inhibitors اليوم
معنيّة بعدّ Staphylococcus Aureus معناته الميديا حتكون
Selective Media يعني Select the organism
that will grow on it بتختاري أو بتختار إيش هي الـ
organism اللي بإمكانها تنمو على هذه الـ media و
بتعمل Inhibition لأنواع ثانية أنا بحكي بتعمل
Inhibition، ما بتعمل Death، إيش المقصود فيها
Inhibition؟ Inhibition يعني بتثبت نموّ البكتيريا
كمان في المعمل هنسمع كلمة Differential Media أو
Differential Agent Differential معناته بتميّز ع
سبيل المثال لو عندي Media بتنمّي لـ Staphylococci بجميع
الـ Species لها و بتعمل Inhibition لأنواع ثانية
طب أنا عندي لـ Staphylococci فيه عندي Aureus Staphylococcus
Coccus Epidermidis طب كيف بدّي أميّز Staphylococcus Aureus عن
الـ Epidermidis هي بسمّيها الـ Differential إشي بيمّيز
في المقصود فيها it makes the organism different الـ
organism اللي أنا بأدور عليه بتخليه مختلف عن
التاني وليكن مثلًا من خلال اللون بأميّز بينهم مثلًا
إذا أعطتني لون أصفر على Media MSA معناته هاي Staphylococcus
Aureus إذا أعطتني لون أحمر معناته هاي
Staphylococcus Epidermidis وهكذا فاللي هيكون عند
الاختلاف فقط في الـ Media يعني بدّي أجيب Flask بدّي
أحط عليها 25 مل من عينتي بنشتغليهم على الـ Milk
الـ Milk بحاجة إلى تخفيف قولنا ما بنفع أخده وأسرع
مباشرة على الطبق لأنه هيك هيأتيني Too Numerous To
Count شو بعمل؟ بعمل أول شيء تخفيف 1 لـ 10 كيف بتعمل
تخفيف 1 لـ 10 وأنا عندي عينة 25؟ بحتاج لـ 225 مل
من الـ Normal Saline تمام بعملها Mix بعدين بيكون في
عندي أربعة من الـ Tubes كل واحد فيه تسعة مل Normal
Saline بيروح بعمل Serial Dilution باخد واحد مل
من الـ Flask على أول Tube بعمل Mix واحد مل من أول
Tube على الثاني وعلى الثالث وعلى الرابع في الأخير
بتخلص من واحد مل هذا هو بيكون شغلنا لليوم وين
بيكون موجود لـ Staphylococcus Aureus؟ بيقول بيكون
موجود في الـ Naturally Contaminated Meats في
اللحوم، في الـ Fish، في الـ Poultry، الدواجن، في
الـ Vegetables وفي الـ Cereals المقصود فيها الحبوب
برضه بيكون موجود في الـ Dairy Products هي منتجات
الألبان وبرضه Artificially Contaminated Foods كمان
بقدر أعدّ Staphylococcus إذا كانت موجودة في الـ
Food في الـ Food Ingredient مكونات الطعام في الـ
Environmental Samples عينات من البيئة Certain
Staphylococci Produce Enterotoxin مش كلّ
Staphylococcus بتطلق التوكسين Certain في نوع معيّن
منها، السلالات معيّنة من الـ Staphylococcus Aureus
Strains معينة قلنا الـ Staph، الـ Staphylococcus
هاي اللي بسمّيها الـ Genus Aureus، الـ Species اللي
بعد الـ Aureus هيكون Strains فبيقول لي في Strains معيّن
من Staphylococcus Aureus بتطلّع الـ Enterotoxin إيش
المقصود بالـ Enterotoxin؟ هو التوكسين شغله بيكون في
الـ Intestine Enterotoxin شغله في الـ Intestine بيعمل Food
Poisoning فبالتالي بقدر أسمّي هاي الـ Strains
Spoilage Organism هذا التعريف معاكم في أول معمل،
إيش هو الـ Spoilage Organism؟ اللي هو الـ Organism
who create undesirable characteristics in food،
بيعطينا خصائص غير مرغوب فيها في الـ Food من ناحية
اختلاف الـ Texture في الـ Smell، في الـ طعم، طيب
احنا عارفين في عندنا نوعين من التوكسين وهذا مرة
معاكم في الـ Essential Microbiology أنواع التوكسين
بتطلّعها البكتيريا إمّا إنها تكون Endotoxin أو
Exotoxin إيش الاختلاف بيناتهم؟ الـ Endotoxin بتطلّع
البكتيريا لما تموت Until Death Of Cell، بتموت
الخلية، بعدين بتطلّع منها التوكسين، فهذا بنسمّيه
Endotoxin من أيّ نوع من البكتيريا بتطلّع
الـ Endotoxin، بتطلّع Gram-Negative Bacteria
بتكون مصبوغة باللون الأحمر طيب الـ Exotoxin بتطلّع
والخلية لسه عايشة Viable Cell خلية على قيد الحياة
اللي بيصير الخلية بتضلّ تتكاثر تتكاثر بتصل عندي
عدد معيّن أو Concentration معيّن بعد هيك بتروح بتطلّع
التوكسين الغالب اللي بيطلّع الـ Exotoxin هي الـ Gram
-Positive Bacteria طيب الـ Enterotoxin هاد بدّي أحطّه
لأيّ نوع من الـ Endotoxin لـ Exotoxin هاد بيكون من ضمن الـ
Exotoxin لإنه قلنا هاد بيطلّع من الـ Staph Aureus
والـ Staph Aureus هي الـ Gram-Positive فبالتالي
الـ Enterotoxin هو من ضمن الـ Exotoxin This
Ability To Produce Enterotoxin Is Limited To Those
Strains That Are Coagulase Positive فبيقول ليه؟ أيّ
نوع من أنواع Staphylococcus اللي بتطلّع
الـ Enterotoxin هي اللي بتكون لها Coagulase لما بدّي
أجي أعمل Biochemical Test فأفحص هل هي البكتيريا
عندها Coagulase أو لأ لو لقيت عندها الـ Coagulase،
معناته High، بتطلّع كمان الـ Enterotoxin ثاني،
الشيء اللي لسه فيه Staphylococcus Aureus عندها إنزيم اسمه
Nuclease، Thermonuclease (TNase) هو Heat Stable Nuclease Heat Stable
يعني بتحمّل درجات الحرارة العالية لاحظوا فيه اختلاف
بين كلمة Heat Stable وبين Heat Labile Heat Labile
معناته بتتكسر مع درجات الحرارة العالية فاللي صار
عندي لحدّ الآن Staphylococcus Aureus بتطلّع الـ
Enterotoxin اللي هو من ضمن الـ Exotoxin بتعمل Food
Poisoning فهي Spoilage Organism عندها Coagulase و
عندها TNase أو Heat Stable Nuclease This Method
Determines The Presence Of Staphylococcus Aureus كيف بدنا
نحدّد أو بدنا نعدّ وجود Staphylococcus Aureus من خلال
الـ Plating Known Quantities Of Food Sample Volume
Plate يعني أداش باخد Volume من الـ Tubes من كل
تخفيف وبروح أحطّه على الطبق اللي فيه الـ Media
بتحفظهم All The Stuff Or استعمل انهي شيء
للأنواع الثانية بعد ما أزرعه وراح أحطّه في الـ
Incubator After Incubation, Presumptive
Staphylococcus Aureus Are Selected And Subjected
To Confirmatory Tests بيقول لي Okay أنا هاي بحطّ
أول شيء Media وبنمّي عليها البكتيريا اللي بتطلّع
عندنا ما بكون متأكدة 100% إنه هاي على الأكيد
Staphylococcus Aureus بحاجة إنه أعمل Confirmatory
Test فحص تأكيدي زي مثلًا Coagulase Test زي مثلًا الـ
Biochemical Test فلمّا أزرعها على الطبق لسه هاد
أول مرة بنسمّيها Presumptive Test Presumptive
يعني Screening Test مش متأكدة 100% فبروح بعمل
Selection لهيّ الكولونيز وبأشتغل عليها
Confirmatory Test From The Result Of This Test بعد
ما أشتغل عليها ومن النتائج بقدر أعدّ Listها في
Aureus Per Gram Or Ml من خلال القانون Concentration
بساوي N على S في D الـ N هو الـ Number Of Colonies
الـ S هو الـ Volume Plated أداش باخد Volume من كل
التيوب وبحطّه على الطبق شرط أساسي تكون الوحدة
بالمِل الـ D هي الـ Dilution فالـ Concentration
للبكتيريا حتكون الوحدة اللي له كونيه Colony Forming Unit
CFU Per Gram أو Per Ml حسب الحالة الفيزيائية
للمادة لو بحكي مثلًا عن سلطة حتكون Per Gram لو
بحكي عن Milk Per Ml تمام The Numbers Present May
Indicate A Potential For The Presence Of
Enterotoxin إيش بقدر أستفيد من الـ Concentration
اللي طلع معي بعد ما عوضت في القانون بروح بأقارن
طبعًا الـ Standards المعايير العالمية بتكون حاطّالي
قيمة لو زاد عدد الـ Concentration إن البكتيريا High
عن عدد معيّن Had معناته البكتيريا حتطلّع الـ Enterotoxin
معناته حتعمل Food Poisoning وهذا الـ Food غير صالح
للهيوم الـ Consumption فبروح بأقارن الـ Concentration
اللي طلع معاه مع الـ Concentration اللي حاطّه الـ
Standards وبقى أشوف هل فيه Enterotoxin أو لا لو
العدد أكثر من اللي حاطّته الـ Standard معناته فيه
Enterotoxin لو أقل بكثير معناته لأ مافيها
Enterotoxin وبتالي بقدر أكل من الـfood كمان شغل
ثاني بقدر استفيدها من خلال الـ concentration لـ
البكتيريا also indicate a lack of adherence to
good hygienic practice بشوف إذا كان فيه التزام
بمعايير النظافة أو لأ كيف؟ شو علاقة معايير النظافة
بالـ Staph aureus؟ بقولي الـ Staph aureus موجودة
في جسم الإنسان بشكل طبيعي على الـ skin وفي النازل
cavity في تجويف الأنف فعلى سبيل المثال لو كنت أنا في
مصنع لـ .. لليوغورت مثلا روحت بدي أشوف قداش فيها
staff areas لقيت أن الـ staff areas ال
concentration في هذا الـ food أعلى بكثير من اللي
حطته الـ standard معناته الشخص هذا اللي كان بيشتغل
ما كان لابس الـ gloves أو صار فيه تلامس بين الجلد
وبين الـ food فراحت انتقلت الـ Staph Aureus من
جلده لـ الفود فمعناته ما كان فيه التزام بمعيار
النظافة طيب، في عندي ميديات بقدر أستخدمها لأنمي
عليها الـ Staph Aureus وبعد هيك أعد الكولونيز و
أطبق عليها الـ confirmatory test في ميديا اسمها الـ
Bird Barker Agar Bird Barker Agar هي تعتبر ميديا
selective and differential media selective قلنا
بتعمل select لأنواع معينة بحيث أنها تنمو على هذه
الميديا وبتعمل inhibition لأنواع المتبقية
differential لو نام عندي أكثر من نوع تقدر أنها
تتميز بين الأنواع المختلفة طيب الـ bird barker agar
بيقول لي هي بتيجي لي على شكل powder الـ bottles بيكون
جواه powder بقرا الـ instruction اللي على الـ
bottles بقى أشوف قداش بحتاج لـ powder قداش بحط
عليه distilled water كلهم بحطهم في الـ flask على
الـ hot plate وبعدين بحطهم في الـ autoclave for
sterilization لحظة في كلمة «base» المقصود بالكلمة
«base» أنه في شغلات بدي أضيفها على الـ media بعد
ما تطلع من التعقيم
تمام طب ليش مو أنا عمالي بأحضر الـ media بإمكاني
أحط الشغلات هاي معها وأدخلهم كلهم في الـ
autoclave وكلهم هي كانوا بيتعقموا؟ بقول لي لأ أول ما
تشوف كلمة base معناته هاي المواد بدي أضيفها بعد ما
تطلع الـ media من التعقيم لو ضفتها ودخلتها في
التعقيم في الـ autoclave هتكسر المواد هاي تمام هاي
المواد اللي بنضيفها على الـ media بعد ما تتعقم
بنسميها الـ supplement فالـ supplements اللي بنضيفها
في الـ Bird Barker Agar ميديا أول شيء هنضيف الـ egg
يوك صفار البيض صفار البيض شو دوره في الـ ميديا هاي
بقول لـ صفار البيض زي ما هو معروف فيها مادة اسمها
الليستين فلو اللي كان نمت عندي Staph Aureus فالـ
Staph Aureus عندها إنزيم اسمه الليستيناز الليستينيز
يعني إنزيم بيكسر الليستين لما يكسّر الليستين
بيصير حوالين الـ colonies clear zone منطقة بتكون
clear هي عند الميديا بقصدها على الطبق من ضمن
مكوناتها الـ egg yolk اللي هو صفار البيض بقضيفه بعد
ما تطلع الميديا من الـ autoclave صفار البيض من ضمن
مكوناته الليستين فطلعت عند الـ staph aureus على شكل
colony الكولوني هي أو إن البكتيريا هي عندها إنزيم
بتروح تطلع هات الإنزيم حوالين الكولوني فبروح بيكسر
الليستين اللي حوالين الكولوني فبلاحظ فيه منطقة بتكون
عاملة زي الهالو وبتكون منطقة clear هذه أول مادة
بقضيفها الـ egg yolk المادة الثانية بقضيفها على الـ
media بعد ما تطلع من الـ Autoclave 1% بوتاسيوم
تليوريد شو الهدف من الـ بوتاسيوم تليوريد؟ الـ
Potassium Telluride يُعتبر كـ Selective and
Differential Agent Selective Agent عارفين كيف إنها
بتنمي تسمح إنه اللي يلمع هاي الميديا فقط لـ Staff
Aureus الـ Staphylococcus وبتعمل Inhibition للأنواع
الثانية غير الـ Staphylococcus هي معناها Selective
Agent طيب، كيف هي الـ Differential Agent؟ كيف
بتميز الـ Staph Aureus عن غيرها من أنواع أو الـ
Species من الـ Staphylococcus؟ بقول لي الميديا
فيها 1% بوتاسيوم تليوريد لو اللي كان نامي عندي هي
Staph Aureus فالـ staff أو البكتيريا يجب تعمل reduction
لـ telluride اللي في الميديا reduction
اختزال لما تختزل الـ Telluride بتروح تكون مركب
لونه أسود فاللون الأسود هذا بلون الـ colonies إلى
لون أسود فلو لقيت الـ colonies لونها أسود معناته
عندي بكتيريا staphylococcus aureus راحت اشتغلت على
الـ Telluride اللي في الـ media عملت له reduction
حولت الـ Telluride إلى مركب لونه أسود وبالتالي
ميزات الأنواع اللي نامي عندي على الطبق من خلال
اللون «بيرت باركر أجار بيز» «it's a selective» حطوا
جانبها كمان «and differential media»
for isolation and presumptive identification طيب،
إيش يعني presumptive؟ معناته الـ bert barker ما
بقدر أجزم إن هاي اللي نمت عندي هي Staphylococcus
Aureus لازم أعمل confirmatory test فالـ bert barker
أجار هي screening media screening يعني بحتاج أعمل
بعد كده confirmatory test أعمل biochemical أو بعمل
serology تمام فهي Presumptive Identification of
Coagulase Positive Staphylococci أول ما تشوفوا
Coagulase Positive Staphylococci عطول هنعرف
المقصود فيها Staphylococcus aureus لأن هي الوحيد
اللي عندها Coagulase enzyme هذه الميديا استخدمت
كثيرًا لاكتشاف Staphylococcus aureus هذه الميديا
بستخدمها لأكشف عن الـ Staph Aureus الموجودة سواء
بالطعام، بالتجارب، بالمثالات البيئية
طيب Coagulase Positive Staphylococci المقصود فيها
زي ما قلنا الـ Staph Aureus can grow and
reproduce in cosmetic products برضه الـ Staph
Aureus ممكن نلاقيها في مستحضرات التجميل قبل أربع
سنوات بالجامعة الإسلامية في بنات كان بحث تخرجهم عن
إنهم يروحوا لكوافير يشوفوا عندهم في المستحضرات
اللي بيستخدموها للعرايس هل فيها Staph Aureus أو لا
فأخذوا عدد مسحة من الإسفنجة من الباودر من شغلات
عندهم كثير وبعد هيك زرعوها على ميديا عملوا عليها
الـ biochemical test for identification وبالفعل طلع
Staph Aureus موجودة في الـ cosmetic products these
products are tested for the presence of coagulase
بص في Staphylococcus aureus راحوا أخذوا مسحات منها عملوا
عليها فحوصات ونموها على ميديات خاصة بالـ Staph
Aureus وبالفعل لقوها موجودة على الشغلات هاي هاي
بقول لي بالنسبة للمكونات بتاعة الميديا الـ Bird
Barker Agar enzymatic digest of casein هيكون فيه
إنزيمات بتكسر مادة الـ casein Beef Extract مستخلص من
اللحوم البقرية Yeast Extract مستخلص من الخميرة
ليثيوم كلوريد جليسين حمض أميني الصوديوم بيروفيت
وكمان في الأجار مهم جدا نعرف إيش الفائدة لكل مكوّن
طبعا هذا كله موجود بالـ slide الثانية الـ Enrichment
أو الـ Supplement هاي شغلات بقضيفها على الميديا
بعد ما تطلع من الـ Autoclave قلنا بنضيف الـ
Chicken، Egg Yolk، صفار البيض وبنضيف 1% بوتاسيوم
تليوريد بالنسبة للـ Enzymatic Digest of Casein
والـ Beef Extract الهدف منهم هدول يعتبروا مصادر
للكربون والنيتروجين للبكتيريا جوا الميديا مصادر
الكربون والنيتروجين في بيرت باركر أجار Yeast
Extract الهدف من الـ Yeast Extract أنه بيزود
البكتيريا بـ B Complex Vitamins الفيتامينات
المختلفة لها الـ B اللي هي B12 وB6 في أنواع ثانية
طيب شو الهدف من الـ B Complex Vitamins؟ Stimulate
bacterial growth بتحفز نمو البكتيريا الـ
Glycine والصوديوم بيروفيت هدول بيحفظوا من نمو
الاستافيلوكوكس طيب، إيش هو الـ Selective Agent في
الـ Bird Park الأجار؟ شيئين، Selective Agent يعني
هدول اثنين بينموا لستافيلوكوكس وبيعملوا Inhibition
لأنواع ثانية غير لستافيلوكوكس فالـ Selective Agent
في الميديا الليثيوم كلوريد 1% بوتاسيوم تليورايد
شو بيعمل؟ Suppressing Growth، لاحظوا بحكي كلمة
Suppressing أو Inhibition بتعمل inhibition أو
suppression لـ الـ organism other than
Staphylococcus يعني بتنمي لـ species المختلفة من
الـ Staphylococcus فقط والبقية بتعملهم inhibition
طيب إيش هو الـ differential agent لـ الـ coagulase
بُست في Staphylococcus المقصود فيها اللي هو أشياء
بتتميز لـ Staphylococcus aureus هيكون في عندي
البوتاسيوم تليوريت قلنا كـ selective
and differential agent explain how قلنا selective
بتعمل inhibition للجميع الأورجينيزم عدا
الاستافيلوكوكس قلنا الاستافيلوكوكس differential
أوريس بتعمل reduction للتليوريت بتحوله إلى مركب
بيعطي اللون الأسود للكلونيز الـ egg yolk emulsion
برضه هاد باعتبره كـ differential agent كيف؟ من خلال
الـ clear zone إنه لو كان نامي عنده الاستفيلوكو
كاتوريت بتطلع الـ enzyme بروح يكسر الـ lecithin اللي في
الـ egg yolk وبالتالي هيظهر الـ clear zone حوالين الـ
colonies الاستفيلوكو القايدة that contain
الـ enzyme هي break down the egg yolk and cause
clear zone around the colonies ممكن كمان نلاحظ
أوباكزون لون معتم حوالين الكلونيز سببه بيكون ناميا
برضه Staph aureus هذه الـ Staph aureus عندها إنزيم
اسمه ليبايز بيروح إنزيم الـ lipase بيشتغل على
الليبيد، بيكسره، بيطلع منه الـ fatty acid هذه الـ
fatty acid بيصيلها precipitation، بتترسب فلما
تترسب، بيصير أوباكزون لون معتم حوالين الكلونيز may
form due to lipase activity هاي بقوللي بالنسبة لها
reduction of potassium telluride is a
characteristic of coagulase positive الـ تفكير
الكوكاي and cause blackening of colonies دائما في
أي ميديا إيش الفائدة من الـ agar هي solidifying
agent هي اللي بتخلي الميديا إنها تتصلم بالنسبة لها
الشغل زي ما قلته بيكون في عندي الفلوسك بتحط فيه 25
مل من الـ milk 225 مل من الـ normal saline بعملهم
mix و بغطيه بالسولفان بعد هيك هيكون في عندي 4
إيتيوبز كل واحد فيه 9 مل normal saline إيه اللي
بدي أعمله بروح أخد 1 مل من الفلوسك لتخفيف 1 لـ 10 و
بروح أحط على أول إيتيوبز هيك أول الـ tube صار تخفيفه
1 لـ 10 لكن الـ total dilution 1 لـ 10 اللي هو
تخفيفه في تخفيف اللي أخدت منه 1 لـ 10 في 1 لـ 10 صار
1 لـ 100 أقصى لـ 2 فبأكتب بالـ marker على الـ tube 10
أقصى لـ 2 قبل اللي أاخد واحد من الـ tube الأول على
الـ tube الثاني لازم أعمل mix عشان أضمن اللي واحد
من اللي أنا أخدته من الـ flask اتوزع في كل الـ tube
شو بعمل؟ بعمل mix من خلال الـ vortex بحطه على الـ
vortex بعد هيك بروح أخد 1 مل من أول تيوب على
التيوب الثاني سارتخفيف للتيوب الثاني كله 10 أسار
ب3 اللي بعده 10 أسار ب4 والأخير 10 أسار ب5 وضروري
أتخلص من 1 مل من آخر تيوب بعد هيك بروح أخد من كل
تخفيف 100 مايكرو بأزرع على الطبق ثم بعد ما أزرع
بحطه في الـ incubator درجة حرارة 37 لمدة 24 ساعة و
بعد هيك بشوف الـ colonies اللي عندي لو كان العدد
واقع من 25 لـ 250 بعوب في القانون لو كان أكثر من
250 بحكي عنه too numerous to count لو كان أقل من
25 بحكي عنه too few to count الـ result examinable
having 25 لـ 250 colonies counting colonies typical
of Staphylococcus aureus طيب، Coagulase بوظيفة
الاستفيلوكوكاي المقصود فيها لـ Staph Aureus الشكل
الـ Coagulase لإلها على الـ media Bird Parker هيكون
Black لونها أسود، سبب اللون الأسود نتيجة إنها عملت
reduction للتليورايت حولته إلى مركب أعطاه اللون
الأسود Shiny، لامع، Convex، الكون يكون شكلها محدب
with entire margin بيكون الحدود لهاي الـ colonies
متساوية بتكون regular لإن في أنواع تانية ممكن تنمو
غير الـ staff course بيكون شكلها irregular أو مثلا
بتكون شكلها وافي أنا بهمني أطلع على الـ colonies اللي
بتكون الحدود لإلها منتظمة بيكون لونها أسود، لامعة
ومحدبة حواليها الـ Clear zone ممكن كمان نلاحظ الـ
opaque zone إيش سبب الـ Clear zone قلنا إنه
البكتيريا عندها الـ lecithinase بتروح تكسر الـ lecithin
حوالين الـ colonies بتعطيهم الـ clear zone إيش سبب
الـ opaque zone البكتيريا بيكون عندها الـ lipase بتروح
تكسر الـ lipid اللي في الـ media بترسب الـ fatty acid
وبالتالي هيصير لون معتم opaque Coagulase نيجاتف
استفيله ككاى المقصود فيها الاستفيله كوكس سترينز
عدى الاستفاريس produce poor or no growth لو بدأت
أجي أنميها على الـ bird parker بقول لي ممكن أنها ما
تنمو أو ممكن أن يكون لها نمو لكن ضعيف طيب لما تنمو
هيكون شكل الكيونس أسود برضه ممكن يكون فيه clear أو
opaque zone لكن هذا نادر لما يتواجد عند الـ
Coagulase Negative في السفينة الكوكاية مع أن
الكلام الـ colonies اللونها أسود ممكن نلاحظها لـ Staph
Aureus و استفيلوكوكس strains other than Staph
Aureus معناه الكلام ما بقدر أجزم أن هاي هي استفيل
الكوكس Aureus لازم أعمل confirmatory test معناه
الكلام الـ Bird Parker أجار هي screening media not
confirmatory media نفس الأشي كمان بيقولّي the
majority of other organisms are inhibited or grow
poorly احنا قلنا بتنمي لستافيلوكوكس بالـ strands
بتاعونها وبتعمل inhibition لجميع الأنواع التانية
غير الاستافيلوكوكس طيب، بقولي هاي الأنواع التانية
بسها inhibition ممكن ما تنمو خالص أو ممكن تنمو،
بيكون نموها poor كمان، فيما لو نمت، هيكون لونها
أسود، light to brown black with no clear or opaque
zone معنى الكلام ممكن لو أشوف اللون الأسود ممكن
تكون أنها أنواع تانية غير الـ Staphylococcus
aureus أو غير الـ Staphylococcus بشكل عام فهي
Screening test وده أشي بيأكد أنها Screening not
confirmatory بالنسبة للصورة اللي عندي بيحكيلي
Black Colonies سببها ناتج أنه البكتيريا عملت
reduction لـ Telluride فبالتالي
عطت مركب لون أسود فلوّنت الـ colonies الـ opaque
zone حوالين الـ colonies سبب الـ opaque zone أن
البكتيريا عندها ليباس كسّر الليبيد فعمل
precipitation للفاتي أسد وهذا عمل الـ opaque zone
الـ clear zone سببها البكتيريا عندها الـ lecithinase
بتكسر الـ lecithin اللي في الـ egg yolk وبتعمل clear
zone طيب، إحنا قلنا إن الـ Bird Parker أجار high
screening media فبالتالي لازم أخد هاي الـ colonies اللي
طلعت معي لونها أسود بدي أتأكد هل هي Staph Aureus
أو إنها نوع ثاني فبروح بعمل confirmatory test
فحوصات تأكيدية أهم فحص بعمله اللي هو من ضمن الـ
biochemical test هو فحص الـ coagulase و هاد الفحص
مسؤول عن التجلد هتاخدوه معاكم بالتفصيل في الـ
essential microbiogen احنا قلنا الـ Staph Aureus هي
الوحيدة من ضمن الـ Staph اللي بيكون عندها إنزيم
الـ Coagulase فبقى أشتغله لو لاقيت موجود معناته
هاي على الأكيد Staphylococcus Aureus ممكن فحص ثاني
اللي هي Staphylococcus الـ Enterotoxin S بروح أدور
على الـ Enterotoxin B هذا بمثابة أنتجن بشوف هل
البكتيريا عندها Enterotoxin B أو لا باستخدام الـ
PCR اللي هي الـ Real-time PCR الشغل التالي التالتة
Latex Agglutination Kits هاد فحص السيرولوجيا كيف
فحص السيرولوجيا هاد بيكون؟ أنا بدي أشوف موجود
Staph Aureus أو لا فهي الـ Staph Aureus بمثابة
أنتجن الشركة المصنعة بتكون محضرالي Antibody لهاد
الانتجن فبيكون في عندي زي هي Card الـ Card هي بروح
أحط عليه الـ Drop من الـ Antibody بيكون عندي colonies
من الـ Staph Aureus اللي بدي أفحص هل هي Staph
Aureus أه أو لا بحطهم مع بعض وبعد كده بالـ
Applicator بأمزجهم بعملهم Mix و Rotation بحركهم
بإيدي بأستنى عليهم فترة لو ظهر عندي Agglutination
أو ظهر على شكل حبيبات معناته الـ Antigen لنفس الـ
Antibody ارتبطوا في بعض فطل عندي حبيبات أو
agglutination طيب لو كان عندي مثلا استفيله كوكاس
Epidermidis روحت أنا حطيته Antibody للـ Staph
Aureus عملتلهم mix استنيت عليهم أكيد مش راح يطلع
معي هذا الـ agglutination ليش؟ لأن الـ Antibody مش
لنفس الـ Antigen في ميديا ثانية عندنا برضه للـ staff
areas اسمها Manitoulin Salt Agar الـ media هي أنا
شرحتها المعمل الماضي اللي كنت بحكي فيه عن أهمية
أنه نضبط الـ pH للـ food Manitoulin Salt Agar
بنرمزلها MSA هي الـ media برضه selective and
differential media Selective medium used for
isolation of pathogenic Staphylococcus يعني
Selective انتقائية للـ Staphylococcus بتنمي الـ
Staphylococcus وبتعمل Inhibition للأنواع التانية
غير الـ Staphylococcus the medium contain Mannitol
Phenol Red Indicator 7.5% Sodium Chloride هذه
مكونات الميديا اسمها مانيتول Salt Agar فيها مانيتول
هو بمثابة سكر عندها الـ Salt أهم شيء ما يميزها
فيها high concentration of salt 7.5% احنا قلنا
الطبيعي البكتيري بتتحمل 85% من 100% هذا كان الـ
normal saline NaCl هاي 7.5% NaCl فهذا 7.5% NaCl هو
selective agent فبيقول لي اللي بتحمل التركيز العالي
هاد من الملح بيعيش اللي ما بتحمل فبيسيله
Inhibition فمعناته 7.5% NaCl هو selective agent
بينمي الاستفيلوكوكس وبيعمل Inhibition لأنواع
ثانية أخرى دان استفيلوكوكس طيب بالنسبة لـ
Mannitol هاد differential agent نمت عندي أنواع
مختلفة من الاستفيلوكوكس تمام؟ نمت عندي أكثر من
نوع كيف بدي اميزهم عن بعض من خلال مين منهم بتعمل
fermentation وبتغير لون الـ pH Indicator فبقول لي
الـ Staph Aureus فقط هي اللي بتعمل fermentation
لسكر المانيتول دائما أي fermentation لأي سكر
بيطلع عنه acid زي ما قلنا في المعمل الماضي الـ
Medium فيها pH Indicator اسمه Phenol Red لون
الميديا بالأساس بيكون لونها أحمر لو البكتيريا عملت
fermentation للسكر، طلعت منه acid، يعني هيقل الـ
pH، الـ acid هيلون الميديا إلى لون أصفر، لما يصير
لون الميديا أصفر، لون الـ colonies أصفر، معناته هي
البكتيريا عملت fermentation طيب، لو البكتيريا ما
بتعمل fermentation لـ mannitol، مش راح تكون acid،
هتظل alkaline، alkaline معناه اللون هيظل أحمر
تمام يعني selective agent 7.5% NaCl الـ
differential كله من الـ Mannitol و الـ pH
Indicator مهم أنكم تكونوا عارفين الـ Phenol Red
هو الـ pH Indicator اللي بنستخدمه في الـ MSA إيش هو
selective agent؟ high salt concentration شو بتعمل؟
inhibit the growth of most bacteria other than
Staphylococci the high salt content doesn't kill
gram-negative bacteria احنا قلنا ما بتعمل kill، ما
بتعمل death، إنها بتعمل inhibition or suppressing
يعني بتثبط من نمو البكتيريا، بتظل موجودة لكن ما
بتنمو طيب On Mannitol salt agar, pathogenic
Staphylococcus aureus produce small colonies كيف
بيكون شكل الـ colonies في الـ ... في الـ Mannitol salt
agar؟ بتكون صغيرة، الحجم صغير وبيكون حواليها
yellow zones إيش سبب الـ yellow zones؟ سببها إن
البكتيريا عملت fermentation للمانيتول فغيرت لون الـ pH
إلى اللون الأصفر السبب في هذا التغيير في اللون
الأصفر هو أن الـ Staph Aureus فرمنت المانيتول
Change the color للبيئة إلى اللون yellow أدرس تفيلو
كوكس don't ferment Mannitol احنا قلنا بس لـ Staph
Aureus هي بتعمل fermentation Staph Aureus
Epidermis ما بتعمل fermentation للمانيتول لكنها
بتتحمل إنها تنمو على 7.5% NaCl هلاحظ في Colonies
لكن هاي الـ Colonies ما تلونت للون أصفر ليش؟ لأنها
ما بتعمل fermentation للمانيتول بالتالي حيظل لون
الـ colonies و لون الـ media red to pink the growth
of other types of bacteria is generally inhibited
حيصير Inhibition لنمو الأنواع الثانية غير الـ
Staphylococcus فاللي حيصير عندي لـ Staph aureus هل
هي بتحمل 7.5% NaCl أهم ما يميز لـ Staph aureus
إنها بتحمل 7.5% NaCl برضه كمان عندها Coagulase
عندها الـ DNase وعندها الـ Enterotoxin بتعمل food
poisoning هذه كلها شغلات مميزة للـ Staph aureus
كمان هي من ضمن الـ gram positive بتعمل
fermentation برضه للمانيتول أو هذا كمان ميزه
لها لما تعمل fermentation هيصير حواليها yellow
zone هيتلون الـ media لون أصفر بدل ما هي لون أحمر
الاستفيلوكوكس ايبيديرملس معناته هي من ضمن ال
Staph معناته بتتحمل هي الـ concentration العالية
NaCl لكن ما بتعمل fermentation للمانيتول وبالتالي
هيظل لونها أحمر Micrococcus luteus هي جرام
positive لكن مش من ضمن الـ Staph Aureus مش من
ضمنها معناته مش هتتحمل الـ concentration لـ الـ salt
معناته مش راح تنمو خالص مش هلاحظ أي Colonies عندي
فبالتالي برضه ما بتعمل fermentation للمانيتول
ليش؟ لأنها ما بتنمو على high الـ medium هي عند كيف
بيكون شكل الاستفيلوكوكس اوريوس الاستاف قلنا
هتنمو على هاي الميديا Mannitol Salt Agar لأنها
بتحمل 7.5% NaCl كمان بتعمل fermentation
للمانيتول هتغير اللون إلى لون الأصفر الاستفيلوكوكس
الكوكس Epidermis هي من ضمن الاستاف معناته هتنمو
لكن ما بتعمل fermentation هيظهر اللون أحمر Micro
coccus Luteus هي مش من ضمن الاستاف لا هتنمو ولا
هتعمل fermentation وهيك بنكون خلصنا المعمل