بسم الله الرحمن الرحيم موضوع محاضرتنا اليوم إن شاء
الله بتحدث عن الـAutomated Hematology Cell
Counters أو الـAutomated Hematology Analysers ما
يُسمى بأجهزة الـCBC راح نتعرف عليها، نتعرف كيف
بتشتغل الـPrinciple اللي لها إيش النتائج اللي
بتطلع يعني أو بيقدر يحسب اللي نياها جهاز الـCBC
إيش الأخطاء اللي ممكن تصيروكيف ممكن أنا أحاول
أعالجها The Colter Principle هذه الـ Principle
اللي راح نتكلم فيها تعتبر هي أول طريقة استخدمت
وأول Principle استخدمت لعد خلايا الدم وتصنيفها
ومعرفة أنواعها لكن اليوم في طرق متقدمة أكترفي
عندنا طرق حديثة في عندنا طرق بالـ Flow cytometry
باستخدام الـ Fluorescence لكن هذا الطرق يعني مكلفة
فبالتالي ما بنلاقي إلها انتشار واسع في المختبرات
يعني يمكن جهاز Flow cytometry في غزة بعرفش واحد أو
اتنين الموجودين ولسه مش شغالين عشان هيك أجهزة الـ
CBC اللي بتشتغل على الـ Culture Principle هذه
موجودة ومتوافرة ومش غالية قياسا بالأجهزة المتقدمة
خلّينا نفهم الـ principle لهذه التقنية using this
technology cells are sized and counted by
detecting and measuring changes in electrical
resistance when a particle passed through a small
aperture this is called an electrical impedance
principle of counting cells إيش يعني الكلام هذا
باستخدام التقنية هذهبتكون الخلايا موجودة في Normal
Saline تمام؟ ويسمح لهذه الخلايا أن تمر بين قطبين
قطب سالب و قطب موجب هدول القطبين موجودين في الـ
Normal Saline نفسه اللي موجودة فيه الخلايا بحيث
أنه هنلاقي يعني بين القطبين أساساً في عندي Saline
يعني في عندي شحنات سالبة أو شحنات موجبةبمعنى إن
الدائرة الكهربائية بتكون مغلقة في هذا المحتوى أو
في هذا الـ Container فلقيت إحنا بنسمح بمرور هذه
الخلايا ما بين القطب السالب والموجب عبر أرفش صغير
عبر فتحة صغيرة جداالآن كل ما مرت خلية، الخلية هذه
بتتميز بإن إلها electrical resistance طبيعة الخلية
مقاومة لمرور التيار الكهربائي فكل ما مرت خلية،
هتعمل فرق جهد نتيجة المقاومة اللي صارت من الخلية
هينتج فرق جهدفرق الجهد هينتج عنه «pulse» الـ
«pulse» هذه عددها بيعبر عن عدد الخلايا اللي مر،
ليش؟ لأن الخلايا هذه بتمر واحدة واحدة يعني ما بيمر
أكتر من خلية في نفس الوقت فكل «pulse» نتجت عن خلية
يعني عدد الـ «pulses» بيعبر عن عدد الخلايا طيب، كل
ما كان حجم الخلية أكبر كل ما كانت الـ «pulse» أعلى
بمعنى أن ارتفاع الـ «pulse» بدل علىحجم الخلية بيتم
ترجمة أو قياس ارتفاع الـ Pulse وبيتم ترجمته إلى
أحجام الخلايا وبالتالي الجهاز بيقوم بتمييز الخلايا
حسب حجمها إلى أنواعها المختلفة زي ما عندنا هنشوف
لقدام إذن نرجع كمان مرة نفرق الكلام المكتوب هل قد
راح نفهمه أكتر Cell are sized and countedBy
detecting and measuring changes تغيرات اللي بتحصل
في الـ in electrical resistance لما particle
passed through a small aperture الـ particle هدمين
اللي مر عبر الفتحة الصغيرة اللي هو الـ erythrocyte
أو الـ white blood cell أنا بحكي erythrocyte مثلا
على سبيل المثال الخلية، خلية الدم تمر، هتعمل
مقاومة This is called the electrical impedance
principle of quantum mechanicsالكلام راح يوضح هنا
بشكل مفصل أكتر إيش اللي بيصير فعليًا في عندي two
tubes تيوب خارجية هذه التيوب الخارجية بيكون الجهاز
عامل dilution لعينة الـ blood بي saline في هذا
التيوب، في التيوب الخارجي في داخل هذا التيوب، تيوب
آخر هله تيوب مجوفالتيوب الداخلي فيه orifice فيه
فتحة صغيرة أو aperture صغير بسمح بمروري الخلايا
خلية خلية تمام؟ يعني أنا عندي الخلايا موجودة وين؟
في الخارجي diluted بال saline في الخارجي الآن
التيوب الخارجي موجود فيه قطب سالب التيوب الداخلي
موجود فيه قطب موجبهك الدائرة الكهربائية بتكون
مكتملة لما أنا أشبك بـ Direct Current هتكون
الدائرة الكهربائية مكتملة ويمشي التيار فيها هلقيت؟
إيش اللي بيصير؟ الجهاز بيعمل vacuum ضغط معين أو
pressure بسيط على صبح السائل في الأنبوبة الخارجية
هذا يؤدي إلى اندفاع السائل حاملا معه الخلايا إلى
الأنبوبة الداخليةعبر الفتحة الصغيرة اللي هي الـ
Orifice فهنلاحظ إنه هتسير الخلايا تدخل واحدة واحدة
كل ما تدخل خلية هتعمل نبضة نتيجة المقاومة انقطاع
بسيط في التيار الكهربائي هينتج عنه فرق جهد يُقرأ
على إنه خلية تمام؟ a blood sample is diluted in
saline a good conductor of electrical current اللي
هو الـ saline and the cells are boiled through an
aperture by creating a vacuum يعني بندفع الخلايا
في الأنبوب في أنبوب التاني عن طريق vacuum معينTwo
electrodes establish an electrical current في عندي
two electrodes بيعملولي electrical current the
external electrode is located in the blood cell
suspension the second electrode is the internal
electrode and is located in the glass hollow tube
which contains the aperture زي ما قلتلكم قطب في
الأنبوب الخارجي وقطب في الأنبوب الداخلي بيمر
مابينهمLow frequency electrical current is applied
to the external electrode and internal electrode
Direct current is applied between the two
electrodes لما بنمرر الـ Direct current between
two electrodes بتمشي الدائرة Electrical resistance
or impedance occurs as the cells pass through the
aperture causing a change in voltage لما تمر
الخلية هينشأ مقاومة بينتج عنها فرق جهدThis change
in voltage generates a pulse طبعاً هذا التغير في
فرق الجهد بعمل عندي pulse The number of pulses is
proportional to the number of cells counted هذا
يتناسب ترضياً مع عدد الخلايا اللي تم عدها The size
of the voltage pulse حجم الحجم البلس اللي نشأت is
directly proportional to the volume or size of the
cell يتناسب ترضياً مع حجم الخلية
هذه كانت مفهومة استخدامها في تجارب أسابيع قبلها
لتخصيص جميع خلايا الخلائي يعني كان التمييز ولزال
في الأجهزة اللي بتستخدم هذه الـ Principle التمييز
فقط على حجم الخلايا يعني كل خلايا إلها حجم معين
بتتم تمييزها إنه هذه مثلا Neutrophil على حجمها هذه
مثلا Red blood cell برضه على حجمها لكنها تستخدم
الأن أساسيًا لتخصيص ومساعدة ردسل وبلاتلتيعني هنا
بقولك يعني يمكن التقنية هذه بس بتستخدم حالياً في
الـ RBCs والـ Platelets في حين أن الـ White Blood
Cells لو أنا بدي أطور الجهاز أو بدي أستخدم أجهزة
متطورة أكتر هتستخدم تقنيات متقدمة أكتر عشان أتميز
عندي أنواع الخلايا أنواع الـ White Blood Cells عن
بعض لكن أنا بطمنكم معظم الأجهزة اللي عندنا بتعد كل
الخلايا وبتميزها على الـ Size تمام؟هذه مجرد صور
لنفس الكلام اللي حكيناه أنبوب خارجي أنبوب داخلي
هذه الصورة حقيقية هي عندك أنبوب وبتنتقل عينة الـ
Blood من واحد إلى واحد بهذا الشكل
طيب، هنا بقولك بالنسبة للأجهزة المتاحة هلاقيت يعني
أنت لو إجتي على أجهزة الـ CPC لو عملتي مثلا فحص
CPC في مختبر في مختبر تاني على جهازين مختلفين
هتلاقي كمية النتائج أو عدد النتائج اللي طلعتلك في
كل CPC ممكن يختلف من جهاز إلى جهاز يعني في CPC
بيطلعلك مثلا 8 نتائج في CPC بيطلعلك 18 نتيجة إيش
الفرق بين هذا الجهاز و هذا الجهاز؟هلقيت بالنسبة
للـ RBCs الـ Parameters اللي هي الـ RBCs count و
الـ Hemoglobin و الـ Hematocrit و الـ Blood
Indices كل الأجهزة بتطلعها و مافيش فرق ما بينها
تمام؟ يعني مافيش فرق كل الأجهزة عندها القدرة أنها
تطلعها لأنها بتعتمد بشكل أساسي على Principles
بسيطة اللي هو على الحجم و على العدلكن نيجي للـ
White PCs في عندي بعض الأجهزة بتعطيك الـ
Differential كامل خمس خلايا يعني بتعطيكي
Neutrophil وExenophil وBesophil وLymphocyte
وMonocyte يعني بتعطيكي five part differential لكن
في أجهزة والجهاز اللي عندنا موجود في الجامعة
بيعطيكي تلاتة كيف؟ بيعطيكي Lymphocyte وNeutrophil
والباقيين التلاتة ضمن حاجة بيسميها Medالخلايا اللي
بتقع في الوسط من ناحية حجم فهذه بتشمل «إزينو» و
«بيزو» و «مونو» إذن الـ «3 part differential» مكون
من الـ «نيوتروفيلوليمفوسايت» و «MED» تمام؟ أو زي
ما قلتلكم «5 part differential» فيه أن بعض الأجهزة
برضه ممكن تعطينا برامتر سادس اللي هو اتعد لـ
«Nucleated RBC» وتميزهاتعنى أجهزة عندها القدرة
أنها تعمل reticulocyte count اللي هو الـ
reticulocyte اللي شغلناه احنا بالطريقة الـ Manual
ممكن لو أنا صبغت الـ RNA ب fluorescence dye ممكن
يتم تمييز الـ reticulocyte يعني حسب نوع الجهاز
هذا عندنا جهاز الـ Celldyne 1800 هذا اللي موجود
عندنا في المختبر بتاع الجامعةزي ما انتوا شايفين
الجهاز متكامل فيه إله شاشة وطبعا مشبوك بطابعة وفيه
وحدة تخزين داخلية وفيه مكان لسحب العينة طبعا هنا
بتم سحب العينة وإنه يعمللها processingإذا كان
الجهاز Ready جاهز للشغل بطلع من هنا برب زي أنبوب
حديد في هذا المكان بسيط بدخل العينة فيه وبكبس
بإيدي على الكبسة الرمادية هذه اللي ورا لما بكبس
بإيدي على الكبسة الرمادية معنى الكلام أنه بقول
للجهاز اشتغل اسحب العينة فبسحب الجهاز العينة
وبيشتغلها كاملة جوا وبطلّع للنتائج خلال دقيقة
واحدةفي عندي هنا زي ما انتوا شايفين إيه شاشة بتطلع
عليها النتاج في عندي keyboard ممكن أدخل بيانات
المريضفي عندي هنا تلت زرار هدولة بيبينوني وضع
الجهاز هل هو بيشغل، هل هو جاهز للشغل، هل في عندي
مثلا مشكلة في الـ Reagent أو Defect أو شغل Reagent
خلص مثلا، حد عاملك Log أحد المسارات مسكر، بيوضحلي
أنه فيه مشكلة، فهذا بشكل عام يعني جهاز الـ CPC،
إذا أنا المكان اللي بلزمني أني هدخل العينة و الـ
Keyboard عشان أدخل الاسم، بعد هيك هو هيعمل كل حاجة
طيب إيش خصائص جهاز الـ Celldyne اللي بنحكي عنه
بيعطيني 18 Parameter يعني بيعطيني 18 نتيجة الـ
Differential 3 part في عندك طريقتين للشغل الطريقة
العادية اللي هي الـ Open Mode و الـ Pre-deleted
Mode الـ Open Mode الـ Open Mode اللي هي أنا بجيب
العينة عينة الـ Editor العادي بدخلها في الجهازو
بقرأ يعني بيسحب الجهاز عينة و بقرأ لحاله الـ Pre
-dilute mode هذه لو انا اضطريت اخد العينة من skin
puncture يعني انا مش قادرة اخد عينة من الوريد لسبب
من الأسباب قد يكون طفل او سبب اخر فباخد ال skin
puncture باخد العينة من ال micro sample باخدها
بعملها dilution خارجيأه بـ Saline بعد هيك بدخلها
على الجهاز و هي أنا عاملالها أصلاً Dilution وبعد
هيك النتائج بحسبها بضربها في معاملة تخفيف هنا
بقولك يعني أنه في عندك إمكانية أنك تشتغلي open
mode المودي العادي أو pre-diluted mode يعني بعينة
holy blood من قدرتها أو إذا كان عندك micro sample
تعمليلها تخفيف وتدخليها على الجهاز في ال open mode
بتنزمني 30 micron ال sampleفيه طبعاً معاه شاشة LCD
Monitor وبتبقى ملونة فيها طبعاً بيكون تلاتة
histogram اللي هي الـ Curve هذه اللي شفتوها وحنفهم
إيش معناها لقدام شوية ال «Lysing solution» اللي
بيستخدم لتكسير الـRBCs وبعد ذلك يكون لون مع
الهيمoglobin هذا ال «Lysing solution» مش toxic مش
cyanide مافيش فيه cyanide على خلاف اللي كنا
نستخدمه في الطريقة الـ Manualالـ Drug كان اللي كنا
نقيس فيه الـ Hemoglobin في الطريقة المانيوال كان
توكسيت فيه cyanide و cyanide مادة سامة Results in
only 60 seconds هذه ميزة يعني انت دوا بتدخل العينة
و بتبتدش تحط البيانات و اسم المريض النتيجة بتطلع
60 ثانية فقط من ساعة ما ياخد العينة لغاية ما يطلع
النتيجة عنده القدرة على إن يخزن 10 ألاف عينات
Inject Printer for Clean Cleary Part بيعطيكي قراءة
واضحة عن طريق متصالب بالطابعة وطبعا تطلعلك النتيجة
مطبوعة بكل سهولة طيب نيجي فعليا كيف الجهاز بيشتغل
بداية لما بيعمل الجهاز suction لعينة الدم لما
بيعمل aspiration بياخد عينة الدم أول حاجة بتصير
أنه بيعمل dilution بنormal salineتمام بعد هيك
بتنقسم ليش؟ لأنه عدد الخلايا كتير احنا متعودين
خلايا الدم سواء manual أو automated بنعمل الـ head
elution ليش؟ لأنه العدد كبير and then divided into
two samples بعد هيك العينة هذه اللي صار الـ head
elution بتمشي بمسارين يعني لها طريقين طريق فيهم
بتتم فيه عد الـ RBCs و الـ platelets والمسار
التاني بتنعد فيهالـ white bcs وبيقاس فيه الـ
hemoglobin one sample is used to analyze the red
blood cells and the platelets while the second
sample is used to analyze the white blood cells
and hemoglobin تمام هيك يعني العينة بإن عملالها
dilution بتنقسم من نصين تمشي في طريقين طريق فيهم
للـ white bcs و الـ hemoglobin وطريق لل RBCs و الـ
plateletsElectrical impedance is used to count the
white blood cells, red blood cells and the
platelets as they pass through the aperture يعني
بتتم عدهم من خلال مرورهم عبر الفتحة اللي حكينا
عنها As each cell is drawn through the aperture a
change in electrical resistance occurs generating
a voltage pulse نفس الكلام اللي حكيناه كل خلية
بتمر بتعمل pulse The number of pulses during a
cycle corresponds to the number of cells counted
يعني عدد الـ pulses بيعبّر عن عدد الخلايا الـ
amplitude of each pulse اللي هو ارتفاع الـ pulse
is directly proportional to the cell volume يتناسب
انترديا مع حجم الـ cell طيب نيجي لل RBCs شمبر طبعا
في عندي احنا زي ما قلنا هم مسارين المسار الأول
اللي هنحكي فيه الـ RBCs والمسار التاني بتاع ال
white piecesاللي هيت في مسار الـ RBCs أنا ما بعمل
حاجة للعينة أو الجهاز ما بتضيف عليها أي إشي غير
الـ Saline بس بيعمللها Dilution وبيبدأ يعد الخلايا
كيف بيعدها؟ بيبدأ يعد الـ Pulses ويربطها بالحجم أي
خلية من 2 إلى 20 femtoliters بيعدها على إنها
Platelet وأي خلية فوق الـ 36 femtoliters بيعدها
على إنها RBCs إذا هو بيميز بشكل أساسي على حسب
الحجمبمعنى لو فى عندي RBCs صغيرة حجمها صغير كتير
أو Schistocyte أو قطعة من RBCs RBCs صغيرة اللي هى
Hemolysis هتنعد علي إنها Platelets تمام؟ إذا هو
بيميز بشكل أساسي على الـ Size هذا ال chamber الأول
نجى لـ chamber التانى في ال chamber التانى بنضاف
Lysing reagent الـ Lysing reagent إيش بيعمل؟ بيكسر
عندى كل ال RBCsلأن الـ RBCs سهل إنها تتكسر لأنها
Unucated Cells فبتروح الـ RBCs بيضل عندى بس الـ
White PCs هلأ الجهاز هيبدأ يعد الـ White PCs لكن
هيميز الخلايا مش على حجمها على حجم أنويتها، ليش؟
لأن الـ Lysing Reagent اللي أنا أضفته كسر الـ RBCs
بالإضافة لإنه عمل Collapsingأو shrinking للـ White
BCs يعني خلّى الخلية كلها تنكمش حوالين النواة كأنه
الـ Cytoplasm بتاعها انعدم فقط ضلت عند النواة
فبالتالي هو بعمل discrimination للـ White BCs مش
على حجم الخلية وإنما على حجم نواتها تمام؟ ليش؟ لأن
الـ Cytoplasm تقريبا انعدم، انكمش واضح هيك؟ وهيبلش
عندي في عد الـ White BCs وتمييزها على حسب حجم
أنويتهاهلاقيت بعد ما يخلص من عدل الـ white pieces
هيقرأ السائل نفسه الجهز هذا اللي عملت للخلايا فيه
lysing طبعا أنا عملت lysing للـRBCs فطلع منها الـ
Hemoglobin تمام؟هو نفسه هذا السائل اللي انعدت عليه
الـ White pieces هيمر الجهاز على ضوء 540 نانومتر
بنفس طريق الـ Hemoglobin ويقرأ تركيز الـ
Hemoglobin فيه إذن هنا عد الـ White pieces وقرأ
الـ Hemoglobin، تمام؟ طيب، الآن في سؤال هيك يعني
ممكن يتبادر إلى الذهم لو لاحظته أنا هنا ماكسرت الـ
White pieces صحيح؟ طيب، هل هتنعد الـ White pieces
مع الـ RPCs؟وأول حاجة الـ White PCs أكبر الجهاز
بيعد من 36 لـ 360 بيعدها تقريبا على إنها RPCs لكن
لو كان في عندي White PCs حجمها وقع في هذا الـ
Range خاصة الـ Lymphocyte وانعدتيا بنات مش هتأثر
على الـ Count لأن عدد الـ White PCs قليل جدا
مقارنة بعدد الـ RPCs يعني الـ White PCs الوحدة
تعيتها ألف يعني بنقول مثلا من 4000 إلى 11000 الـ
RPCs بالملايين يعني تقريبا كل واحدة White PCs
بقابلها 500 RPCs فلو نعدوا أكمين خلية من الـ White
PCs وكانت خلايا الـ White PCs ضمن الـ Normal Range
مش هتأثر كتير على عدد الـ RPCsمش هيكون لها التأثير
الملموس واضح فبالتالي احنا هنا خلّينا الـ White
PCs زي ما هي لأن مافيش عندي حاجة بتكسّل الـ White
PCs و بتبقى على الـ RPCs الـ White PCs أقوى لأن
فيها نوع فصعب إنها تتكسّر و تظل الـ RPCs عشان هي
احنا بنتركها هي خلايا كبيرة ولو ان عدت لو كانت
صغيرة أو ان عدت مش راح تأثر على الـ Count لأن أصلا
هي عددها كتير قليل تمام هك؟ إذا هنا عدينا Platelet
وعدينا RPCs وعدينا White PCsزي ما حكينا الـ
Hemoglobin بتم باستخدام CNID3 Lysing Solution اللي
هو نفسه .. هو نفس ال solution اللي احنا استخدمنا
عشان يعمل Lysing للـ RBCs هيكون عندى Imidazole
Hemoglobin Complex هذا الـ Complexيله لون يتناسب
ترضياً مع كركيز الـ Hemoglobin في العينة وبنقرأ
على 540 نيلومتر هنا بقولك الجهاز بيطلع عندنا اللي
هو الـ Cell Dyn بيطلع عندنا الـ 3 bar differential
بيطلع عندك الـ lymphocyte neutrophil and mid-size
population بيعطيك هذا بيعطيك اللي هو الـالـ
Percent Count أو الـ Relative Count العدد النسبي
كنسبة مئوية وبرضه بيحسبلك الـ Absolute Count يعني
بيعطيك الرقم بطريقتها Relative Count نيجي لمتطلبات
العينة العين عادة مش مسموح تنسحب غير بإيدها لا
سوديامسترات ولا هيبرين ولا أي نوع Anti-coagulant
تاني لأن سترات الـ Particles بتاعته كبيرة قضايبات
بتاعة السترات كبيرة ممكن تنعد على إنها خلاياالـ
Heparin بيأثر على عدد الـ Platelets بس الـ Edita
مسموح إني أستخدمها، تمام؟ الحد الأدنى الـ Minimum
Sample Volume نص ML مع إن هو الجهاز في الـ Open
Mode الطريقة العادية اللي بشتغل عليها الجهاز بياخد
بس 30 ميكروليترلكن لو أنا سحبت عينة أقل من هيك ما
بضمن أنه أخد الـ 30 µL كاملين ممكن لأن العينة
قليلة يكون سحب Air Bubbles يكون سحب هوا فبالتالي
هيكون ال count خاطئ عشان هيك أقل عينة ال minimum
نص ML يعني لو أنا جيت أسحب و أطلع معاها أقل من نص
ML المفروض ما أستخدمهاش أو أسحب عينة تانية العينة
Stable في الـ Room Temperature بنيجي لطرق ال
Analysis يمكن احنا نوّهنا لإلهافي عندي طريقتين
رئيسيات اللي هو «Holy Blood Mode» إنه أنا ساحب
عينة دم في إيدتها بفتح الغطاية و بحطها و بعمل
Aspiration بضغط على الكبسل اللي شوفناها فبيسحب
الجهاز العينة و بشتغل فيها بحط عينة ورا التانية كل
ما تخلص عينة بدخل اللي بعدها الـ «Prediluted Mode»
هنا زي ما قلتلكم العينة كميتها كتير قليلة باخدها
من ال skin من ال baby مثلابعمل لها dilution قبل ما
أدخلها على الجهاز بعمل لها dilution 1 إلى 26 بـ
saline بعد هيك بدخلها على الجهاز بنفس الطريقة
بتاعة الـ whole blood يعني مش هتفرق الطريقة لكن
هنا النتائج بدي أضربها في معامل التخفيف طب أي
نتائج اللي بدي أضربها في معامل التخفيف أي حاجة
إلها علاقة بال count بضربها يعني بضرب ال RBCs ال
white BCsلـ Platelets هدول التلاتة اللي نعدّوا
بالإضافة للـ Hemoglobin هدول بنضربوا بمعامل
التخفيف والـ hematocrit برضه لأنه برضه الـ
hematocrit هيتأثر لكن الـ Parameters اللي ما
بتتأثر اللي هي إلها علاقة بالحجم يعني مش معقول الـ
MCV حجم الخلية يتأثر لأنه خففت صح؟ فأي حاجة إلها
علاقة بالـ Size بالحجم ما بتنضرب تمام هك؟
طيب نيجي لبعض مصادر الخطأ يعني برضه يا بنات زي ما
فيه في الطرق الـ Manual مصادر خطأ في عندنا في
الطرق الـ Automated مصادر خطأ أول حاجة في الـ Cell
Count في عملية الـ Counting للخلايا أول مصدر للخطأ
ممكن انواجهه اللي هو وجود Cold Agglutinin إيش يعني
Cold Agglutinin؟ أعتقد حكيتلكم إياها وجود Auto
Antibodiesتتفاعل مع الخلايا على درجة حرارة الغرفة
وبتعمللها agglutination يعني هنشوف الخلايا متجمعة
مع بعض بهذا الشكل طيب، هذا على إيش رح يؤثر؟
اتخيلوا معايا صار تجمع للخلايا هتصير الخلايا تدخل
في الـ aperture مجموعات يعني بدل ما تدخل خلية
واحدة هيدخل عندك تنتين مع بعض، تلاتة، أربعة على
حسب التجمعات تاعت الـagglutination اللي صارتطيب،
هذا هيأثر أكيد على الحجم ليش؟ لأنه هو الجهاز بيحسب
المتوسط مش هو احنا قولنا ارتفاع الـ Pulse بيعبّر
عن الحجم هيك هيكون في عندي بعض الـ Pulses ارتفاعها
كبير، نظبط؟ وهو عادة كيف بيحسب الـ MCV بياخد متوسط
يعني بيجمع ارتفاع الـ Pulse على عددها تمام؟ هو
بياخد متوسطمجموع ارتفاعات الـ Pulse اللي طلعت معاه
على عدد الـ Pulse بحسب منه الـ MCV فإذا كان في
عندي مجموعات من الخلايا عاملة كأنها خلية واحدة و
هي أساساً تجمع من أكتر من خلية هيكون حجمها كبير و
هتكون الـ Pulse بتاعتها كبيرة فبالتالي هذا هيأثر
على حساب الـ MCV إذن هذه شغلة شغلة تانية هيأثر على
الـ Count بتاع الـ RBCs لأن كل 3، 4، 5 خلاية هتنعد
على إنها واحدةبتخلط مع بعض، هتنعد على إنها خلية
كبيرة لذن هيأثر على الـ count بتاع الـ RBCs وهيأثر
على الـ MCV بإنه بيرفعه can be caused an increased
number of large red cells or red cell agglutinates
بسبب تجمعات الخلايا if agglutinated red cells are
present the automated hematocrit and MCHC are also
incorrect يعني بقيت ال parameters هتكون خاطئةليش؟
لأنها كلها بالأساس يعني بتنحسب يعني في عندنا حاجات
الجهاز بيقيصها وفي حاجات الجهاز بيحسبها احنا قولنا
أيش الأشياء اللي بيقيصها الجهاز الجهاز بيقيص بعد
بيقيص Hemoglobin بيقيص MCV like RBC بيقيص حجم، بس
أما عندك الـMCH و الـMCHC هذه بتنحسب من الأشياء
اللي تم قياسها فبالتالي لو كان في خطأ في الأشياء
اللي تم قياسهاهيكون فيه خطأ يترتب عليه خطأ في
الأشياء اللي بتنحسب حساب يعني حتى الـ Hematocrit
يا بنات في الـ Automated Cell Counters في الأجهزة
هذه بينحسب حساب ما بينقرأش مباشرة عدنا هنشوف كيف
لما ناخدهم بالتفصيل إذن الـ Parameters هتتأثر وكل
ما يترتب عليها من حسابات هيبقى ملحظةCold
agglutinates cause agglutinationof red cells as
the blood cools طبعا زي ما قلنا هي لما بتبرد عينة
الدم بتبدأ الخلايا تتجمع cold agglutinates can be
present in number of disease states including
infectious mononucleosis هذه الحالات المرضية اللي
ممكن أشوف فيها cold agglutinate and mycoplasma
pneumonia if red cell agglutinates are seen يعني
لو أنا يا بنات عملت CBCوأنا شكيت إنه فيه cold
agglutination إيش بروح بعمل؟ بروح بعمل blood film
عشان أشوف يعني في عندي abnormality في عندي لحظة
واضحة في الـCBC وبعدين الـagglutination بيبين في
الـhistogram يعني في الـcurve اللي شفنا اللي مش ده
وقلتلكم بطلع معايا تلت curved احنا هنحكي عنها في
عندي إشارة في الـhistogram على إنه في
agglutination فإذا أنا شوفت agglutination إيش بروح
بعمل؟ بروح بدف العينةأحيانًا كتير الأجلوتناتش انها
ده بيبقى reversible و بعود برجع بشتغلها إذا كان
أعطاني نتائج كويسة كان بها أعطاني لسه نتائج ملخبطة
بروح بسحب عينة جديدة في pre-warmed materials يعني
كل إشي بدفّيه بدفّي السرنجة الـ needle التيوبات
اللي بدي أسحب فيها ومباشرة ما بتركلها فرصة إنها
تبرد مباشرة بدخلها على جهاز الـ CPC العينةوبتعطيني
نتيجة ايه كويسة، تمام؟ يعني إذا اتأكدت أنه فيه
agglutination أحاول أول حاجة أفك الـ agglutination
ما أضبط أسحاب عينه جديدة وما أسمح لها أنها تسير
اللي هيسير فيها agglutination طيب،
مصدر آخر للخطأ طبعا إحنا عارفين إنه في بعض أنواع
الـ Hemolytic Anemia هيسير فيها Schistocyte إيش
يعني Schistocyte؟ خلايا، قطع من الخلايا، قطع من
الـRBCsتمام؟ خاصة في الـ Mechanical Hemolytic
AnemiaThis may cause red cell count to be
decreased ليش؟ لأن هذه الإطعال الصغيرة هتنعد على
إنها platelets مش هتنعد على إنها RBCs، مظبوط؟
وهتعمل ارتفاع في الـplatelet count يعني هتقلل
الـRBCs count وإن كان تأثيرها على الـRBCs count
أقل من تأثيرها على الـplatelet count ليش؟ لأن عدد
الـRBCs كتيرفلمّا يروح جزء منها على الـ Platelet
هيكون تأثيرها على الـ Platelet count أكثر من
تأثيرها على الـ RBCs واضح كيف؟ ان شاء الله طيب زي
ما قلنا and may flag the platelet count as the red
cell become closer in size to the platelets حاجة
ما بيصير زي الـ platelets and cause an abnormal
platelet histogram برضه هتأثر على رسمة الـ
platelet أو على الهستجرام بتاع الـ plateletأيه
دايماً لما بقول هلقيت histogram احنا لسه ماخدناه
أوش لقدام شوية هنفهمه بالتفصيل الـ histogram اللي
هو ال curve أو المنحنيات اللي بتطلع معايا مع جهاز
الـ CPC راح نفهمش هي إن شاء الله الـ population is
visible at the left بلاش هذه، هذه لما ناخد الـ
histogram تفهموها طيب،
من مصادر الخطأ الأخرى اللي ممكن تواجهني وجود
blatant clumps and blatant satellitesالـ Platelet
Clumps أو Aggregates زي ما انتوا شايفين بعض
التجمعات للـ Platelets طبعا هنا هذه هتأدي لنقص ال
count بتاع البلاتلت لأنه هتتعد يعني علينها جسيمات
كبيرة ممكن تتعد علينها RBCs تمام فبالتالي هتأدي
لنقص العدد بتاع البلاتلتز في عندي ظاهرة تانية
بيسموها Platelet Satellitosis أحيانا البلاتلتز
تتجمع حوالين لـ Neutrophilتتجمع حوالين الـ
Neutrophil طبعاً هيك هتاخدها الـ Neutrophil وتروح
فيها ومش هيتم عدها على إنها Platelets طيب، الآن لو
أنا إجيت عملت الـ CPC من الحاجات اللي كتير لازم
أكون حريصة فيها لما أطلع النتيجة عدد البلاتلت لو
لقيت عندي البلاتلت عددها قليل ضروري جداً أتأكد أنه
فعلاً هذا هو عدد البلاتلت مش خطأ لأن البلاتلت من
الحاجات اللي شائع يصير فيها خطأ خاصةلو كانت عملية
السحب بطيقة يعني أنا عمال بسحب و بدور تحت الجلد
تعرفي إن وظيفة الـ Blatlet إنها تعمل Clot و تسكر
المكان اللي فيه defect أو فيه مشكلة أو فيه نزف
فأنا لما باجي بفوت الـ Needle و بعمل جروح هتستفز
الـ Blatlet عشان تروح تشتغل تشتغل و تتعالج هذا
الجروح اللي صار فإذا أنا طولت فعلاً هلاقي إن الـ
Blatlet بدت تشتغل طب كيف أنا بعرف إن الـ أو يعني
إيش اللي ادللي إن الـ Blatlet بدت تشتغل هتلاقيها
عامل Aggregationتجمعات لـ «بلاتلت» هذه وسيلة منها
عشان تعمل زي «plug» أو كتلة كبيرة وتبدأ تشتغل
وتفرز مواد ويعني لها شغل كتير أنه تسد الجروح أو
تسد القطع في الجلد اللي صار أو في النسيج اللي صار،
تمام؟ طيب، فبالتالي، لو أنا لاقيت عدد لـ «بلاتلت»
قليل، أيش لازم أعمل؟ أول حاجة، أنا بشوق أنه فيه
«بلاتلت أجريجيشن» أول حاجة بتحطها في بالي احتمال
«بلاتلت أجريجيشن» هو لنقص العدد، فإيش بدي أسويه؟
بترك العينة حوالي نص ساعة مع shaking خلال و أنا
تركها يعني بترك العينة في مكان معين يعني خلال
الوقت هذا يكون بصير للعينة shaking أو إذا مافيش
عندي جهاز يعمل shaking أنا كل شوية أعمللها shaking
الوقت هذا كافي لو فيه blatant aggregation ينفكفي
كتير أحيان بنفك لـ Blatlet Aggregation من خلال أني
أترك العينة 20 دقيقة إلى 30 دقيقة طيب، برد بشتغلها
على الجهاز لو لاقيت العينة النتيجة أتحسنت معنى
الكلام أنه صح هي كان فيه Aggregation وانفك وهي
النتيجة وبصرفها لو لازالت لـ Blatlet قليلة ضروري
قبل ما أطلع نتيجة الـ CPC أعمل Blood Filmبعمل
blood film و بصبغه و بعد لـ platelet من خلاله أول
حاجة بتطلع هل في في ال blood film platelet
aggregates مش متفككة إذا في platelet aggregates
دُغري بطلب عينة جديدة بتكون هي السبب اللي قدت لنقص
عدد ال platelets طيب لو مافيش platelet aggregates
بروح بعد الـ Estimated Count اللي اتعلمناه في الـ
Blood Film إذا كنتوا فاكرين بعد عشرة Field بجيب
المتوسط لإلهم و بضربه في 20 ألف بطلع عندي عدد لـ
Platelets و الـ Count هذا كويس يعني ممتاز كتير
بنلاقيه مطابق للـ Count بتاع الجهاز و بقارن
النتيجة اللي طلعت معاها فعليًا مع نتيجة الجهاز إذا
كان في تطابق مابين النتيجتان خلاصبكون فعلا ال
patient عنده thrombocytopenia نقص في البلاتلت عشان
هات زي ما بأكد أن البلاتلت من الحاجات الحساسة قبل
ما أطلع نتيجة بلاتلت قليلة هي قداش ال normal من
150 ل450 ألف من 150 ألف ل450 ألف إذا كان في عندنا
نقص في البلاتلت لازم أعمل كل الخطوات هذه قبل ما
أطلع نتيجة فيها بلاتلت عددها قليل تمام هات؟طيب،
وجود Giant Platelets أحيانًا بيبقى فيه خلل معين
فيه الـHemobases في تصنيع الخلايا فبلائي زي ما
أنتوا شايفين في الفيلم هذا في عندي Platelets كبيرة
هي هذه مثلًا Platelets اللي عليها المؤشر شايفينه؟
هي هذه Platelets حجمها قريب جدًا، هذه Platelets
حجمها قريب جدًا من حجم الـRBCs هذه علي إيش هتنعد؟
هتنعد علي إنها RBCs، صح؟طبعاً هذه هتأثر على الـ
count علي بلاتلت هتنقص الـ count علي بلاتلت ليش؟
لأنها مش هتنعد بلاتلت هتنعد علي إنها RBCs الـ
Nucleated Red Cells Nucleated RBCs طبعاً إذا كنتوا
فاكرين لما أخدنا الـ differential cell count حكينا
إن أحياناً بيبقى في عند نucleated RBCsوالـ
Nucleated RBCs هذه بتعمل عندي نسبة خطأ لما أنا أعد
الخلايا من خلال الشرامبر ليش؟ لأن هذه الـ
Nucleated RBCs ما بيصير الـ helices لأنه فيها نواء
مش زي باقية الخلايا و هتنعد على إنها white disease
في الشرامبر فأنا لو فعلا شفت الـ Nucleated RBCs في
الـ Blood Film أنا بحكي على الطريقة الـ Manual
يعني لو شفت فعلا الـ Nucleated RBCsكان في عندنا
قانون نعمل فيه correction ونحسب العدد الحقيقي للـ
White BCs ويعني أني أستفنع أو أطرح منها لـ
Nucleated RBCs نفس الكلام بيصير عندى في الـ
Automated كيف؟ الآن إذا كنتوا فاكرين في الشمبر
بتاع الـ White BCs إحنا كنا نكسر كل الـ RBCs لكن
لو فيه RBCs ما بتتكسر أو فيها نواء هذه الـ RBCs
هتنعد على إنها White BCsتمام؟ وهتعمل عندي نسبة خطأ
وهذه طبعاً تنعد على إنها الـ lymphocyte لكن لاحظني
لحظة الجهاز بيعطيني إشارة في الـ histogram لما كان
يعني إذا في نيوكلياتيد RBCs بعرف بعرف إنه في
نيوكلياتيد RBCs وإذا فعلاً لاقيت ال white pieces
عالية ممكن يكون سببها وجود نيوكلياتيد RBCs طيب
هديك الأخطاء في الـ Count وفي الـ MCV هنا بقولك
بعض الأخطاء في Hemoglobin Measuring أي حاجة بتأثر
على قراءة الـ Spectrophotometry زي الـ Turbidity
ممكن تأثر على نتيجة الـ Hemoglobin زي مثلًا ارتفاع
عدد الـ White PCs لو كانت الـ White PCs عالية
هتعمل الـ Turbidity وتأثر على القراءة لو كان في
عنا ليبيميا وجود لبد عالية في العينة لو كان عنابعض
أنواع الـ hemoglobin اللي بتعمل turbidity أو بتقوم
ال license زي hemoglobin associate هذه برضه هتأثر
عندي على قراءة الـ hemoglobin