طيب هاد بمثابة ملخص للمعمل وحاليا هنمشي على ال
slides ونشوف إذا في شغلات ما قولتها بالنسبة لل
objectives إيش الأهداف في المعمل؟ ال preparing and
sterilizing media, reagents and supplies كيف نحضر
ال media كيف نعملها sterilization كيف نعقم كمان ال
reagents وال supplies وال equipment و أي إشي راح
أستخدمه في زراعة البكتيريا to familiarize the
student with media quality assurance procedures
أنه هيتعرفوا على طريقة تحضير الميديا بجودة عالية
مافيها أي contamination to familiarize the student
with safety concerns such as autoclave safety and
warning of powders برضه كمان هيتعرفوا على ال
autoclave إيش ال principle اللي له، لإيش بنستخدمه،
إيش الظروف اللي بوفرها وكمان كيف نوزن ال powder
قولنا إن ال media بتجيني على شكل powder طب ليش ما
تجيني على شكل media جاهزة ما عليها إلا غير أصبها
في الأطباق وأزرع للإجابة على السؤال إحنا بنعرف إنه
من طرق حفظ الطعام التشفيف لما يكون الطعام منزوع
منه المي فهذا الأشي حيزود من عمرهيعني هيطول لعند
ما يخرب فنفس الاشي ال powder لما تكون ال powder ال
media powder هذا الاشي راح يزود من ال shelf life
لإلها لو كانها rehydration يعني فيها ميه هذا راح
يأثر من ال shelf life هاي واحد الشغل التاني احنا
قولنا قبل شوية media ال SSA بدنا حضر 52 جرام بحط
عليها واحد liter يعني بالنهاية ألف milحضرنا من ويل
من 52 جرام فقط عشان بيه المثال ان ال media كانت 1
kilogram فبالتالي راح احضر أطباق كتير كبيرة
وبالتالي هذا الاشي راح يستهلك او راح ياخد عندي حيز
فمشان نقلل من الحيز فبتيجينا على شكل powder و انا
بروح استخدم و بحضر على قد ما بحتاجه لأن لو حضرت
الكمية كلهافبتحتاج بس في الأربع لخمس أسابيع و بعد
كده خلاص بتخرب، لكن لو كانت عندي على شكل powder
ممكن أتضالها عند الأسنينتمام نيجي على كيف نحضر ال
media preparation of culture media أول أشيه ال
media قولنا بتجينها شكل powder بدي أستخدم على قد
ما بدي باخد powder فبعمل rehydrate powder
according to manufacture’s instructions بعمل
rehydration يعني بضيف distil water على الوزنة من
وين باخد الوزنة وقدرش بضيف distil water حسب ال
instructions أو التعليمات الموجودة على البوتل من
براقبل اللي أعمل sterilization بال Autoclave
ensure ingredients are completely dissolved بدي
أضمن أنه كل المكونات كل ال powder دابت كيف بدي
أعرف أنها دابت قولنا بعد ما أحطها على ال hot plate
بقى أشوف ال solution إذا clear وإذا كان ال wall أو
الجدران ل .. ل ال flask كان برضه كمان clean إذا
نضيفش فيه أي حبيبات معناته هيك ال media دابت avoid
wastage by preparing only sufficient for either
immediate use or use in the near future بقوللي
اتجنب انك تضيع ال media كاف انه بس بحضر ال media
على قد ما بحتاج
لكن بإمكاني أضيف allowing extra for mistakes يعني
لو تجربتي تحتاج لسبع أطباق بقولي حضري عشرة ليش
الزيادة هدول؟ لإن ممكن و أنا بزرع اللوب اللي
بستخدمه للزراع ممكن ييجي فيخبط بالأجار فيصير فيه
خدش فيه فبروح بستبدله بطبق تاني فيما لو صار
mistake بقدر أنه أستبدلهقال لو خمسة عشر لعشرين ملي
لتر أو سنتمتر مكعب من ال media بحطه في ال petri
dish قولنا تقريبا لربع الطبق بحط mediadispense in
a volume appropriate for sterilization in the
autoclave or pressure cooker pressure cooker هي
معناها تنجرة تتضغط فاحنا قولنا ال autoclave بيشبه
تنجرة تتضغط من ناحية ال principle و من ناحية كمان
الشكل steam under a pressure فبقوللي انه ال
autoclave له أحجام مختلفة لصغير و لكبير فقداش
ساعته بتتحمل بقى حط فيه tubes و flask مشان ال
sterilization حسب ساعته بقىبقى حاط فيه ل glassware
agar slopes are prepared in test tubes by allowing
sterile molten cooled medium to solidify in a
slope position احنا قلنا ممكن نصب الميديا في
بلايات ممكن اصبها في ال tubes عفرد انا بحكي على ال
tubes صبيتها سكرتها اما بال swab او بال screw cap
بعدين حضرتهم في ال rack و كل ال rack بال tubes
غطيتهم ب سولفان و دخلتهم بال autoclave لما يطلع
بال autoclave هيكون ال media عندى liquid بديهنها
تكون slope مائلة لإن طبعا في biochemical tests
هتعرفوا عليها في ال essential microbiology بتحتاج
ان تكون عندى ال mediaslop مائلة طب كيف تخليها
مائلة؟ بمجرد ما تطلع من autoclave و هي لسه سخنة
بحط الراك و بحط تحته شغلة زي مثلا كتاب أو قلم و
هيك بيصير الراك مائل بزاوية بقطركه على هذه الوضع
اللي عامة تتصل بال mediaهي الصورة بتميلني ال
bottles اللي بيكون فيها ال powder و كيف من برا في
عليها ال instructions اللي من خلالها بتدلني على
طريقة تحضير ال media و هاي بتقولي كيف احنا لما
نغطي the flask بالسلفان و الصورة هاي بتبين انه
كيف لما يكون في حبيبات على جدار the flask معناه
ان لسه ال media ما دابتحضرنا ال media طالع يانا
بدنا نصب ال media في أطباق petri قبلات طبعا هاي
ال procedure استحالة أجابلكم بالامتحان شو هي ال
procedure لصب ال media لكن انتوا هيتحاسبوا في
العمل على طريقة صبكم ل ال media collect one bottle
of sterile molten agar from the water bath المقض
بال bottle of sterile molten agar يعني هي لما تكون
ال media liquid لسه في ال flask تمام بروح أطلحها
من ال autoclave قولنا هتكون سخنة بس تانا عليها لما
تصير 45 بعد هيك hold the flask in the left hand
بإيد اليسار رح أكون ماسكة ال flaskو بإيدي اليميني
بآخر إصبع راح أشيل السلفان عن ال flask بإيدي
اليسار أمسك فيها ال flask و الإصبع الأخر بإيدي
اليميني راح أشيل السلفان عن ال flask بعدين بروح
أعقم فوهة the flask تمام flame the neck of the bottle
بعقمل فوها lift the lid of the petri dish slightly
with the right hand قلنا الإيدي اليسار فيها
الفلاسك الإيدي اليمين هيكون في عندي صفة من الأطباق
فوق بعض راح أجي لآخر واحد من تحت ورح أرفع الغطاية
بإيدي اليمين شوية slightly مابفتحها على .. انا
بفتحها بزاوية 45بروح أفتحها شوية تمام بعدين pour
the sterile molten agar into the Petri dish and
replace the lid بروح أصب الميدا تقريبا من 15 ل20
مل وبعدين بسكر الغطاية لفلسك بروح أعقم الفوهة تاني
وبسكر بالسلفان flame the neck of the bottle and
replace the lid gently rotate the dish to ensure
that the medium covers the plate evenly
قلنا بعد ما صبينا في الطبق بروح أحرك و بعمله
agitation ال agitation هاد لحتى أضمن أن ال media
موزعة بالتساوي في كل الطبق allow the medium to
solidify خلاص طبعا بعد ما خلص أول طبق من تحت فبروح
للي فوقه ولي فوقه و هكذا لعند ما كلهم أصبهم بقى
أتركهم لعند ما يتصلبوا to solidify seal and
incubate the medium in an inverted position و اللي
ممكن انه احطها في ال incubator لو بدى استخدمها
حاليا ممكن احطها في التلاجة و بتظلها من 4 ل 5
أسابيع طبعا لو بدى احطها سواء بال incubator او
بالتلاجة هتكون مقلوبة inverted position ليش؟ انه
بتكون الغطاية لتحت لحتى مايصير condensation و
قطرات الماء انها تنزل تاني على ال media و تخربها
note the base of the plate must be covered لازم
يكون القاعللطبق مغطى لهك بعمل agitation و لازم
الكمية تكون من 15 ل20 مش أقل من هك agar must not
touch the lid مش لازم أحط الأجار بكمية كتير كبيرة
بحيث أنه الأجار يخبط بالغطاة
the surface must be smooth with no bubbles وانا
بصب ال media لازم ما يتكون air bubbles لو اتكون
air bubbles قلنا الحل بمرر افلام على ال surface و
هيك نتخلص من ال air bubbles طبعا احنا قلنا المبدأ
عندنا و الطريقة لحتى اصب ال media في الأطباء انها
تكون عندى صفة أطباء في أبعاد تقريبا عشرة لكن في
ناس شو ممكن تعمل بتوزع الأطباء على ال bench و
بتصير تصب في كل طبقطيب الأفضل مين؟ الطريقة بتاعت
أنه أن يكونوا موزّعين ولا الطريقة أن يكون في صفّة،
الأفضل أن يكون في صفّة فوق بعض، ليش؟ لأن طريقة
توزيع الأطباق على الـ bench هتُعمل contamination
كيف contamination؟ لما يكون كل واحد لحاله فبيصير
عندي مدى أكثر أن أنا أفتح الغطاء أكثر بزاوية 45
فبالتالي هيصير فيه contamination لما يكون في صفّة
فوق بعض بقدر أن أنا أتحكم بالفتحة بحيث لو فتحت
أكثر هيوقع كل فوق فهيك هيقلل من الـ ... من الـ
contamination الشغل الثاني لما كلهم أفردهم على الـ
bench فهيك هتاخد حيز كبير، فالأفضل زي ما قلنا أن
يكون الصفّة فوق بعض، وأسير أبدأ من اللي تحت بعدين
اللي فوقه
Storage of media من ناحية تخزين الـ media Store
stocks of prepared media الـ stocks المقصود فيها الـ
media قبل ما أعملها الـ rehydration يعني ما
المقصود فيها هي الـ bottles فبدي أخزن الـ bottles
اللي فيها الـ powder بحطها على الـ room temperature
ببعدها عن direct sunlight ببعدها عن أشعة الشمس ليس
لأن في ممكن بعض الـ media مكوناتها بتتكسر مع الشمس
وين بحطها؟ a cupboard is ideal ممكن أحطها في خزانة
أو ممكن أحطها في open shelf اللي هي في الرفوف
قلنا أن الـ bottles اللي فيها البودر بخزنها بعيد
عن أشعة الشمس حتى كمان بتكون في bottles اللونها
غامق Media in vials closed by cotton, wooly blocks
that are stored for future use will be subject to
evaporation لو الميديا أنا حطاها مثلًا في ... في
flask على أساس أن بدي أستخدمها فيما بعد أو مثلًا
حطاها في ... في tubes وكنت مغطياها بالسواب أو ... أو
مثلًا بالقطن بيقول لي هاي بعد فترة هتصير عرض للـ
evaporation ممكن الـ media تتبخر فبالتالي هتقل الـ
size لها فالأفضل أن أستبدل القطن بـ screw cap
بالغطاية اللي بنلفها لحتى نسكرها
تمام re-melt stored agar media لو أنا نسيت الـ media
في الـ flask ولاقيتها متصلبة بسيحها ثاني كيف بـ ...
بحطها boiling water bath boiling يعني هتكون درجة
حرارة الـ water bath مية أو ممكن أحطها بالـ pressure
cooker اللي هي الـ autoclave ممكن أحطها بالـ
microwave oven ممكن كمان أحط ... أحطها بالـ hot
plate وهذه كلها عندها القدرة أن تسيح الـ media
sterile agar plates can be pre-bored and stored
in well-sealed plastic bags قلنا بعد ما طلعنا الـ
plates من الـ ... من الـ plastic bags اللي كانت فيها
بُقَصّ فيها الـ media وبتركها لعمل تتصلب وبعدين
برُجّحها بنفس الكيس اللي كانت فيه لكن هتكون مقلوبة
ليش مقلوبة؟ لحتى نمنع الـ condensation وما يتكون
قطرات الماء اللي تيجي على الـ media وتخربها، في
عندنا مصطلحين هنتعرف عليهم الـ sterilization والـ
disinfection الـ sterilization هي القضاء على جميع
أنواع الـ micro organism يعني بتعمل تدمير كامل لكل
الـ micro organism بما فيها الـ spores أو الأبواغ
complete destruction of all the microorganism
including spores طب ليش الـ spores؟ بيقول لي هاي بتكون
كثير resistance ساعد نقضي عليها لكن بالـ
sterilization هنتمكن نُلقي الضاء على الـ spores طب شو ممكن
شغلات بنستخدمها بتعمل تعقيم sterilization من خلال
الحرارة الـ heat زي مثلًا بأستخدم الـ oven أو الـ
autoclave باستخدام الـ filtration وباستخدام الـ
radiation وبرضه ممكن نستخدم الـ chemicals إنه في
أنواع chemical بتعمل sterilization بتقدر على جميع
أنواع الـ microorganism لكن في أنواع chemical تقدر
فقط على نوع معين مش على كل الـ microorganism نيجي
للـ disinfection disinfection فقط هي بتقضي على
البكتيريا الممرضة destruction أو inhibition أو
removal للميكروبس that may cause disease يا بتعمل
disease يا بتعمل spoilage فساد للـ food إيش الأمثلة
على الشغلات اللي بتعمل disinfection يعني التطهير
اللي هي مثلًا زي الكيميكا زي ما أستخدم الديتول
وأمسح فيه البنش فهذا مش راح يقضي على كل أنواع الـ
micro organism من الأمثلة على الـ sterilization،
الـ autoclave إيش الـ principle للـ autoclave؟ اللي
هي steam under a pressure فهذه بتوفر درجة حارة 121
لمدة 15 minute وضغط 15 psi وبالتالي all
microorganisms including bacteria and the spores
will be destroyed
كيف ده نعمل الـ sterilization للـ equipment والـ
materials المعدات والمواد زي مثلًا الـ wire loop الـ
wire loop هذا مستخدم لزراعة البكتيريا بيكون هو سلك
في نهايته زي دائرة فبأمسك من الدائرة هاي بحط فيها
كوليني وبروح أسرحها في طبق فاضي الـ wire loop كيف
بدي أعقمه بروح أعرضه لـ flame لما يصير لونه أحمر
معناته هيك أتعقم heat redness in Bunsen burner
flame طيب بالنسبة للـ glassware للزجاجيات اللي
بتكون إمتي فاضية بالنسبة كمان للـ glass pipet مش
لبلاستيك لجلّاس وكمان بالنسبة للـ petri dishes برضه
كمان لجلّاس بحطهم بالـ hot air oven في الفرن أو ممكن
أن ... أن أغطيهم بـ مادة مقاومة للحرارة heat
resistant زي مثلًا الـ grease proof paper أو
الالمنيوم اللي هي السولفان بالنهاية فاروح أغطيهم و
بحطهم في الفرن هذا الفرن بيوفر درجة حارة 160 لمدة
ساعتين وهيك بيعمل الـ sterilization وبيقدر جميع
أنواع الـ micro organism بقول لي هذا بيسمح لـ
allowing additional time for items to come to
temperature يعني نحط درجة حرارة 160 هتبدأ أن تعلق
تعليق تعليق لما تصير 160 هيبدأ يحسب ساعتين خلصوا
الساعتين هتبدأ درجة الحرارة cool down هتنزل