标题：维生素D2（麦角钙化醇）
国家标准
GB 14755-2010 食品安全国家标准 食品添加剂 维生素D2（麦角钙化醇）
本标准代替GB 14755-1993
本标准适用于以麦角甾醇为原料制得的食品添加剂维生素D2。
GB 14755-2010 维生素D2（麦角钙化醇）
中华人民共和国国家标准 
GB 14755—2010 
食品安全国家标准 
食品添加剂 维生素D2（麦角钙化醇） 
2010-12-21 发布 2011-02-21 实施 
中华人民共和国卫生部 发布
前 言 
本标准代替GB 14755—1993《食品添加剂 维生素D2 》。 
本标准与GB 14755—1993 相比，主要变化如下： 
——增加了红外光谱鉴别； 
——维生素D2的测定系统适用性试验所用样品由维生素D2改为维生素D3，高效液相色谱含量测定方法由内标法改为外标法； 
——洋地黄皂苷试验检查麦角甾醇修改为薄层色谱法； 
——增加了还原性物质指标和试验方法； 
——增加了重金属指标和试验方法； 
——增加了砷指标和试验方法。 
本标准的附录A 和附录B 为规范性附录，附录C 为资料性附录。 
本标准所代替标准的历次版本发布情况为： 
——GB 14755-1993
食品安全国家标准 
食品添加剂 维生素D2（麦角钙化醇） 
1 范围 
本标准适用于以麦角甾醇为原料制得的食品添加剂维生素 D2。 
2 规范性引用文件 
本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。 
3 化学名称、分子式、结构式和相对分子质量 
3.1 化学名称 
9,10-开环麦角甾-5,7,10 （19）,22-四烯-3β-醇 
3.2 分子式 
C28H44O 
3.3 结构式 
3.4 相对分子质量 
396.66 （按2007 年国际相对原子质量） 
4 技术要求 
4.1 感官要求：应符合表 1 的规定。 
4.2理化指标：应符合表 2的规定。 
检验方法

A.1 安全提示 
本标准试验方法中使用的部分试剂具有毒性或腐蚀性，按相关规定操作，使用时需小心谨慎。若溅到皮肤上应立即用水冲洗，严重者应立即治疗。在使用挥发性酸时，要在通风橱中进行。 
A.2 一般规定 
本标准所用试剂除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T 6682—2008 中规定的三级水。
试验方法中所用杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按 GB/T 602、GB/T 603 之规定制备。 
A.3 鉴别试验 
A.3.1 醋酐浓硫酸呈色试验 
A.3.1.1 试剂和材料 
A.3.1.1.1 三氯甲烷。 
A.3.1.1.2 乙酸酐。 
A.3.1.1.3 硫酸。 
A.3.1.2 分析步骤 
取约0.5 mg实验室样品，加5 mL三氯甲烷溶解后，加0.3 mL醋酐与0.1 mL硫酸，振摇，初显黄色，渐变红色，迅即变为紫色，最后变为绿色。 
A.3.2 红外光谱试验
采用溴化钾压片法，按照GB/T 6040 进行试验，实验室样品的红外光谱应与对照的图谱一致 （对照图谱见附录B ）。 
A.4 维生素D2 的测定 
A.4.1 方法提要 
用高效液相色谱法，在选定的工作条件下，通过色谱柱使样品分离，用紫外吸收检测器检测，用外标法定量，计算样品中维生素D2 的含量。 
A.4.2 试剂和材料 
A.4.2.1 正戊醇：色谱纯。 
A.4.2.2 正己烷：色谱纯。 
A.4.2.3 异辛烷：色谱纯。 
A.4.2.4 维生素D2对照品。
A.4.2.5 维生素D3对照品。 
A.4.3 仪器和设备 
高效液相色谱仪（HPLC）。 
A.4.4 色谱分析条件 
推荐的色谱柱及典型色谱操作条件见表 A.1，维生素D3 系统适用性试验高效液相色谱图参见图C.1，各组分的相对保留时间参见表C.1。其他能达到同等分离程度的色谱柱和色谱条件均可使用。 
表A.1 色谱柱和典型色谱操作条件 
色谱柱：柱长250mm，柱内径4.6mm，硅胶色谱柱 
流动相：正己烷-正戊醇（1000+3） 
流速： 2mL/min 
检测器检测波长： 254 nm 
A.4.5 分析步骤 
A.4.5.1 维生素D3对照品系统适应性试验贮备液的制备 
称取约25mg 维生素D3 对照品，精确至 0.0001g，置 100mL 棕色容量瓶中，加80mL 异辛烷，用超声处理助溶 1min，避免加热，使完全溶解，再加异辛烷至刻度，摇匀充氮密塞，避光，0℃以下保存。 
A.4.5.2 实验室样品溶液的制备 
称取约25mg 实验室样品，精确至0.0001 g，置100mL 棕色容量瓶中，加80mL 异辛烷，用超声处理助溶 1min，避免加热，使完全溶解，再加异辛烷至刻度，摇匀。量取5mL±0.05mL 上述溶液，置10mL棕色容量瓶中，加正己烷至刻度，摇匀。
A.4.5.3 维生素D2对照品溶液的制备 
称取约25mg 维生素D2对照品，精确至 0.0001g，置 100mL 棕色容量瓶中，加80mL 异辛烷，用超声处理助溶1min，避免加热，使完全溶解，再加异辛烷至刻度，量取上述溶液5mL±0.05mL，置10mL 棕色容量瓶中，加正己烷至刻度，摇匀。 
A.4.5.4 系统适用性试验 
以硅胶为填充剂的色谱柱，正己烷-正戊醇（1000+3）为流动相，检测波长254nm，流速约为2mL/min 。量取维生素D3对照品贮备溶液5mL，置具塞玻璃容器中，充氮后密塞，置90℃水浴加热1h，取出迅速冷却，加正己烷5mL±0.05mL，摇匀，置1cm具塞石英吸收池中，在2支主波长分别为254nm和365nm的紫外光灯下，将石英吸收池斜放成45°，并距灯管5cm～6cm，照射5min，使溶液中含有前维生素D3、反式维生素D3 、维生素D3和速甾醇D3。取此溶液注入液相色谱仪，测定维生素D3的峰值，先后进样5次，相对标准偏差应不大于2.0%，前维生素D3（与维生素D3的比保留时间为0.5）与反式维生素D3（与维生素D3 的比保留时间约为0.6）以及维生素D3与速甾醇D3 （与维生素D3的比保留时间约为1.1）的峰分离度均应大于1.0。 
A.4.5.5 测定 
取20μL实验室样品溶液注入液相色谱仪,记录色谱图，另取维生素D2对照品溶液，同法测定。 
按外标法以峰面积计算出供试品中维生素D2 的含量。 
A.4.6 结果计算
根据色谱图计算维生素D2 的质量分数w1 ，数值以%表示，按公式(A.1)计算
式中： 
m1——对照品溶液中维生素D2的进样量的数值，单位为微克（μg）； 
A2——实验室样品溶液中维生素D2的峰面积的数值； 
A1——对照品溶液中维生素D2 的峰面积的数值； 
m2——实验室样品溶液中维生素D2的进样量的数值，单位为微克（μg）。 
取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行测定的允许绝对差不大于 1.5 %。 
麦角甾醇的测定

A.5.1 方法提要 
将维生素D2 溶液点样于薄层板上，经展开，显色后，所得的色谱图与对照品溶液按同法所得的色谱图作对比，对维生素D2 进行杂质检查。 
A.5.2 试剂和材料 
A.5.2.1 角鲨烷氯仿溶液：10 g/L。 
A.5.2.2 展开剂:环己烷-乙醚（1+1）。 
A.5.2.3 维生素D2对照品。
A.5.2.4 麦角甾醇对照品。 
A.5.3 分析步骤 
A.5.3.1 对照品溶液的配制 
称取约 50mg 维生素D2对照品，精确至 0.0002g，用 1mL 角鲨烷氯仿溶液溶解，得对照品溶液。 
A.5.3.2 实验室样品溶液的配制 
称取约50mg维生素D2实验室样品，精确至0.0002g，用1 mL角鲨烷氯仿溶液溶解，得实验室样品溶液。 
A.5.3.3 麦角甾醇对照溶液的配制 
称取约5mg麦角甾醇对照品，精确至0.1mg，置于50mL容量瓶中，加角鲨烷氯仿溶液40mL溶解并稀释至刻度，摇匀。 
A.5.3.4 显色剂的配制 
取1.0g三氯化锑，加20mL乙酰氯溶解。 
A.5.3.5 测定 
分别取10μL对照品溶液、实验室样品溶液及麦角甾醇对照溶液，分别点于以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G 薄层板上，用展开剂暗处展开，晾干，用显色剂显色。实验室样品溶液与对照品溶液的主斑点R f值及颜色应一致，实验室样品溶液的杂质斑点不得深于麦角甾醇对照溶液相应的斑点。 
A.6 比旋光度的测定 
A.6.1 试剂和材料 
无水乙醇。 
A.6.2 仪器和设备 
旋光仪。 
A.6.3 分析步骤 
取实验室样品适量，精确至0.0002g，加无水乙醇制成1mL中约含40mg的溶液，其他按GB/T613-2007规定的方法进行。（注：在溶液配制后30min内测定）。 
A.6.4 结果计算 
比旋光度аm(20℃,D)按公式(A.2)计算：
式中： 
α——得的旋光角,单位为度(°)； 
l——旋光管的长度,单位为分米(dm)； 
ρα—— 溶液中有效组分的质量浓度,单位为克每毫升(g/mL)。 
A.7 质量吸收系数的测定 
A.7.1 试剂和材料 
无水乙醇。 
A.7.2 仪器和设备 
分光光度仪。 
A.7.3 分析步骤 
称取实验室样品适量，精确至0.0002g，加乙醇制成每1mL中约含10μg样品的溶液，按照GB/T9721在265nm±1nm的波长处测定吸光度A ，求其质量吸收系数。 
A.7.4 结果计算 
根据吸光度A计算维生素D2 的质量吸收系数α，数值以 ( &ordm;)·dm2·kg -1表示，按公式(A.3)计算：
式中： 
A——样品溶液的吸光度的数值； 
b——光路长度（即吸收池厚度）的数值，单位为厘米（cm）； 
ρα——实验室样品溶液的质量浓度的数值，单位为克每升（g/L）。 
A.8 还原性物质的测定 
A.8.1 方法原理 
还原性物质在强碱性溶液中能将四唑蓝还原为有色甲月替（formazan），与对甲二酚无水乙醇还原物质的标准溶液颜色比较做限量检查。 
A.8.2 试剂和材料 
A.8.2.1 无水乙醇。 
A.8.2.2 甲醇。 
A.8.2.3 冰乙酸。 
A.8.2.4 四唑蓝甲醇溶液：50mg/mL。 
A.8.2.5 羟化四甲铵溶液：羟化四甲铵水溶液(100 g/L) -无水乙醇（1+9）。 
A.8.2.6 对甲二酚无水乙醇溶液：0.2μg/mL。 
A.8.3 分析步骤 
A.8.3.1 实验室样品溶液的制备 
称取约0.1g实验室样品，精确至0.001g，溶解于无水乙醇中，稀释至10mL，加入0.5mL四唑蓝甲醇溶液和0.5mL羟化四甲铵溶液，静置5min，加入1.0mL冰乙酸，摇匀。 
A.8.3.2 对照溶液的制备 
量取10mL±0.05mL 0.2μg/mL对甲二酚无水乙醇溶液，加入0.5mL四唑蓝甲醇溶液和0.5mL羟化四甲铵溶液，静置5min，加入1.0mL冰乙酸，摇匀。 
A.8.3.3 空白溶液的制备 
取10mL 无水乙醇，加入0.5mL 四唑蓝甲醇溶液和0.5mL 羟化四甲铵溶液，静置 5min，加入1.0mL 冰乙酸，摇匀。 
A.8.3.4 测定 
在525nm波长处，用空白溶液调零，分别测定实验室样品溶液与对照溶液的吸光度，实验室样品溶液的吸光度不得大于对照溶液。
A.9 砷的测定 
取5g±0.01g实验室样品，用干灰化法处理样品。取相同量的氧化镁、硝酸镁与试样同法处理，做试剂空白试验。量取10mL±0.05mL砷标准溶液（含砷2.0μg），同法处理，制备砷限量标准。按GB/T5009.76—2003砷斑法的规定进行。 
重金属的测定

A.10.1 试剂和材料 
A.10.1.1 硝酸。 
A.10.1.2 硫酸。 
A.10.1.3 盐酸。 
A.10.1.4 甘油。 
A.10.1.5 乙酸铵。 
A.10.1.6 硝酸铅。 
A.10.1.7 硫代乙酰胺。 
A.10.1.8 氨试液：400→1000。
A.10.1.9 氢氧化钠溶液：c（NaOH）=1mol/L。 
A.10.1.10 盐酸溶液：c（HCl）=2mol/L。 
A.10.1.11 盐酸溶液：c（HCl）=7mol/L。 
A.10.1.12 氨水溶液：c（NH3·H2O）=5mol/L。 
A.10.1.13 酚酞指示液：10g/L乙醇溶液。 
A.10.1.14 乙酸盐缓冲液（pH3.5）：取25g乙酸铵，加水25mL溶解后，加7mol/L盐酸溶液38mL，用2mol/L盐酸溶液或氨水溶液准确调节pH至3.5（pH计），用水稀释至100mL。 
A.10.1.15 硫代乙酰胺试液：取4g硫代乙酰胺，精确至0.01g，加水使溶解成100mL，置冰箱中保存。临用前取5.0mL混合液（由1mol/L 15mL氢氧化钠溶液、5.0mL水及20mL甘油组成），加上述1.0mL硫代乙酰胺溶液，置水浴上加热20s，冷却，立即使用。 
A.10.1.16 铅标准溶液：称取0.160g硝酸铅，精确至0.0002g,置于1000mL容量瓶中，加5mL硝酸与50mL水溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，移取（10±0.02）mL贮备液，置于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每1mL相当于10 &micro;g的Pb）。配置与贮存用的玻璃仪器均不得含铅。 
A.10.2 分析步骤 
按《中华人民共和国药典》2005年版二部 附录Ⅷ H 重金属检查法第二法，具体方法如下： 
取 1g±0.01g 实验室样品，缓缓灼烧至完全炭化，放冷，加0.5mL～1.0mL 硫酸，使恰湿润，用低温加热制硫酸除尽后，加0.5mL 硝酸，蒸干，至氧化氮蒸气除尽后，放冷，在 500℃±50 ℃炽灼至完全灰化，放冷，加2 mL 盐酸，置水浴上蒸干后加 15mL 水，滴加氨试液至对酚酞指示液显中性，再加2 mL 乙酸盐缓冲液（pH3.5 ），微热溶解后，移置纳氏比色管甲管中，加水稀释成25mL；另取配制实验室样品溶液的试剂，置瓷皿中蒸干后，加2mL 乙酸盐缓冲液（pH3.5 ）与15mL 水，微热溶解后，移置纳氏比色管乙管中，加2 mL±0.02mL 标准铅溶液，再用水稀释成25mL；再在甲乙两管中分别加2mL 硫代乙酰胺试液，摇匀，放置 2min，同置白纸上，自上向下透视，甲管中显示的颜色与乙管比较，不得更深。
附 录 B 
（规范性附录） 
维生素D2红外光谱图
注：引自《药品红外光谱集》第一卷（1995） 
图B.1 维生素D2红外光谱图
附 录 C 
（资料性附录） 
系统适用性试验高效液相色谱图和相对保留时间