标题：十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳
简介
十二烷（基）硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳SDS polyacrylamide gel electrophoresis 
在阴离子表面活性剂十二烷（基）硫酸钠（SDS）存在下进行的一种聚丙烯酰胺凝胶电泳。由2－巯基乙醇等将S－S键切断的蛋白质，在SDS溶液中，大多是1克约与1.4克的SDS结合，形成电荷密度大致一定的复合体。所以在凝胶中电泳的速度是由蛋白质的分子量决定的。所以用分子量已知的标准蛋白质，则可以迅速而准确地测出蛋白质的分子量，这已被广泛应用。对含有亚单位的蛋白质来说，可测得各亚单位的分子量。值得注意的是，有的糖蛋白或膜蛋白等有时呈异常值的现象。测定的材料不一定要求很纯，因分离效果好，所以也常用于对蛋白质混合物之分离。与等电点电泳配合，进行双向电泳（O′Farrell法），可分离和测定多种蛋白质。
PAM沉淀的技术流程
PAM沉淀的技术流程
沉淀是发生化学反应时生成了不溶于反应物所在溶液的物质。从字意上理解就是在重力作用下沉淀去除。污水中的悬浮物质，可以这是一种物理过程，简便易行，效果良好，是污水处理的重要技术之一。 　
根据悬浮物质的性质、浓度及絮聚丙烯酰胺凝性能，沉淀可以分为：自然沉淀，絮凝沉淀，区域沉淀。域沉淀的悬浮颗泣浓度较高(5000mg/L以上)，颗粒的沉降受到周围其它颗粒影响，颗粒间相对位置保持不变，形成一个整体共同下沉，与澄清水之间有清晰的泥水界面。二次沉淀池与污泥浓缩池中均有区域沉淀发生。 　
废水中悬浮固体浓度不高，而且不具有凝聚的性能，在沉淀过程中，固体颗粒不改变形状，也不互相粘合，各自独立地完成沉淀过程。（沉砂池和初沉池的初期沉淀）压缩沉淀发生在高浓度悬浮颗粒的沉降过程中，由于悬浮颗粒浓度很高，颗粒相互之间已挤集成团块结构，互相接触，互相支承，下层颗粒间的水在上层颗粒的重力作用下被挤出，使污泥得到浓缩。二沉池污泥斗中的聚丙烯酰胺浓缩过程以及在浓缩池中污泥的浓缩过程存在压缩沉淀。自由沉淀发生在水中悬浮固体浓度不高，沉淀过程悬浮固体之间互不干扰，颗粒各自单独进行沉淀，颗粒的沉淀轨迹呈直线。整个沉淀过程中，颗粒的物理性质，如形状，大小及比重等不发生变化。这种颗粒在沉砂池中的沉淀是自由沉淀。聚丙烯酰胺 　
废水中悬浮固体浓度不高，而且不具有凝聚的性能，在沉淀过程中，固体颗粒不改变形状，也不互相粘合，各自独立地完成沉淀过程。（沉砂池和初沉池的初期沉淀）压缩沉淀发生在高浓度悬浮颗粒的沉降过程中，由于悬浮颗粒浓度很高，颗粒相互之间已挤集成团块结构，互相接触，互相支承，下层颗粒间的水在上层颗粒的重力作用下被挤出，使污泥得到浓缩。二沉池污泥斗中的浓缩过程以及在浓缩池中污泥的浓缩过程存在压缩聚丙烯酰胺沉淀。 　
絮凝沉淀是颗粒物在水中作絮凝沉淀的过程。在水中投加混凝剂后，其中悬浮物的胶体及分散颗粒在分子力的相互作用下生成絮状体且在沉降过程中它们互相碰撞凝聚，其尺寸和质量不断变大，沉速不断增加。悬浮物的去除率不但取决于沉淀速度，而且与沉淀深度有关。地面水中投加混凝剂后形成的矾花，生活污水中的有机悬浮物，活性污泥在沉淀过程中都会出现絮凝沉淀的现象。
应用用途　
1)用于污泥脱水根据污泥性质可选用本产品的相应型号，可有效在污泥进入压滤之前进行污泥脱水，脱水时，产生絮团大，不粘滤布，压滤时不散，流泥饼较厚，脱水效率高，泥饼含水率在80%以下。 　
2)用于生活污水和有机废水的处理，本产品在配性或碱性介质中均呈现阳电性，这样对污水中悬浮颗粒带阴电荷的污水进行絮凝沉淀，澄清很有效。如生产粮食酒精废水，造纸废水，城市污水处理厂的废水，啤酒废水，味精厂废水，制糖废水，有机含量高 废水、饲料废水，纺织印染废水等，用阳离子聚丙烯酰胺要比用阴离子、非离子聚丙烯酰胺或无机盐类效果要高数倍或数十倍，因为这类废水普遍带阴电荷。 　
3)用于以江河水作水源的自来水的处理絮凝剂，用量少，效果好，成本低，特别是和无机絮凝剂复合使用效果更好，它将成为治长江、黄河及其它流域的自来水厂的高效絮凝剂。 　
4)造纸用增强剂及其它助剂。提高填料、颜料等存留率、纸张的强度。[1]
5)用于油田经学助剂，如粘土防膨剂，油田酸化用稠化剂。
6)用于纺织上浆剂、浆液性能稳定、落浆少、织物断头率低、布面光洁。
十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳
SDS-PAGE（十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳） 
试剂
1、电泳缓冲液（5×Tris-Glycine Buffer）：Tris 15.1g，Glycine 94g，SDS 5.0g，用800ml水进行溶解，定容至1L，室温保存。
2、30%丙烯酰胺：丙烯酰胺29g，N,N’-亚甲双丙烯酰胺1g，用60ml水于37℃水浴溶解，定容至100ml，滤纸过滤，置棕色瓶室温保存。
3、1.5mol/L Tris（pH8.8）：Tris碱18.165g，用80ml水进行溶解，待溶液冷却至室温，用浓HCl调pH至8.8，定容至100ml，室温保存。
4、1.0mol/L Tris（pH6.8）：Tris碱12.11g，用80ml水进行溶解，待溶液冷却至室温，用浓HCl调pH至6.8，定容至100ml，室温保存。
5、10%SDS（pH7.2）：SDS 100g，用900ml水进行溶解（加热至68℃可助溶），用浓HCl调pH至7.2，定容至1L，室温保存。
6、10%过硫酸铵：过硫酸铵0.1g，用1ml水进行溶解，4℃保存两周，常现配现用。
7、5×SDS凝胶加样缓冲液：1MTris-HCl（pH6.8）1.25ml，SDS 0.5g，BPB 25mg，甘油2.5ml，用水溶解后定容至5ml，室温保存。
8、染色液：甲醇：水（1：1，v/v）90ml，冰乙酸10ml，考马斯亮蓝R250 0.25g，滤纸过滤。
9、脱色液：即不加染料的染色液。 
SDS-PAGE的有效分离范围 
丙烯酰胺浓度（%）
线性分离范围（kD）
15
12~43
10
16~68
7.5
36~94
5.0
57~212

制胶：薄胶需分离胶约4ml、积层胶约2ml，厚胶需分离胶约6ml、积层胶约3ml。 
15%分离胶
5ml
10ml
15ml
水
1.1
2.3
3.4
30%丙烯酰胺
2.5
5.0
7.5
1.5mol/L Tris（pH8.8）
1.3
2.5
3.8
10%SDS
0.05
0.1
0.15
10%过硫酸铵
0.05
0.1
0.15
TEMED
0.002
0.004
0.006

12%分离胶
5ml
10ml
15ml
水
1.6
3.3
4.9
30%丙烯酰胺
2.0
4.0
6.0
1.5mol/L Tris（pH8.8）
1.3
2.5
3.8
10%SDS
0.05
0.1
0.15
10%过硫酸铵
0.05
0.1
0.15
TEMED
0.002
0.004
0.006

10%分离胶
5ml
10ml
15ml
水
1.9
4.0
5.9
30%丙烯酰胺
1.7
3.3
5.0
1.5mol/L Tris（pH8.8）
1.3
2.5
3.8
10%SDS
0.05
0.1
0.15
10%过硫酸铵
0.05
0.1
0.15
TEMED
0.002
0.004
0.006

5%积层胶
2ml
3ml
5ml
水
1.4
2.1
3.4
30%丙烯酰胺
0.33
0.5
0.83
1.0mol/L Tris（pH6.8）
0.25
0.38
0.63
10%SDS
0.02
0.03
0.05
10%过硫酸铵
0.02
0.03
0.05
TEMED
0.002
0.003
0.005

上样：一般取样10μl。
1、菌液（以大肠杆菌为例）：取1ml菌液，8000rpm离心3min收集菌体，生理盐水洗涤2次，加蒸馏水50μl，加2×上样液50μl，吹打混匀，沸水浴10min，瞬时离心。
2、蛋白溶液：取蛋白溶液10μl，加2×上样液10μl，沸水浴5min，瞬时离心。 
电泳：先60V电泳10～20min至样品泳至积层胶和分离胶的分界处，然后110～120V电泳至样品泳到凝胶末端。 
染色与脱色：将凝胶浸泡在至少5倍体积染色液，沸水浴10min染色，然后将凝胶转移至脱色液，平缓摇动4~8小时。此外，也可将凝胶直接浸泡在预冷的0.25MKCl中轻轻振摇，染色10~20min可见白色条带。 
保存凝胶：脱色后的凝胶可浸于水中，长期封装在塑料袋内，注意不应将凝胶保存于脱色液，否则染色的蛋白带会褪色。