标题：梨火疫病
病  原
梨火疫病菌:Erwinia amylovora, 亚洲梨火疫病:E. pyrifoliae属欧氏杆菌属。
分布
美国、加拿大、墨西哥、危地马拉、百慕大、海地、新西兰、英国、荷兰、波兰、丹麦、德国、比利时、法国、卢森堡、瑞典、挪威、爱尔兰、北爱尔兰、捷克共和国、瑞士、前南斯拉夫、亚美尼亚、罗马尼亚、保加利亚、意大利、希腊、埃及、塞浦路斯、以色列、土耳其、黎巴嫩、约旦、津巴布韦。 亚洲梨火疫病分布 于日本和韩国。[1]
寄主
梨火疫病菌寄主范围很广，能为害梨、苹果、山楂、木旬子、李等40多个属220多种植物，大部分属蔷薇科Pomoideae亚科。从流行和经济重要性考虑，有如下几个属：康棣属(Amelanchier spp.)、腺肋花楸属(Aronia spp.)、Arracacia spp.、假升麻属(Aruncus spp.)、木瓜属(Chaenomeles spp.)、木旬子属(Cotoneaster spp.)、Cowania、Crataegomespilus spp.、山楂属属(Cretaegus spp.)、木曰皿木孛(Cydonia spp.)、牛筋条属(Dichotomanthes spp.)、柿(Diospyros spp.)、火棘属(Pyracantha spp.)、梨属(Pyrus spp.)、石斑木属(Raphiolepis spp.)、鸡麻属(Rhodotypos spp.)、蔷薇属(Rosa spp.)、木多木衣属(Docynia spp.)、多瓣木属(Dryas spp.)、枇杷属(Eriobotrya spp.)、白鹃梅属(Exochorda spp.)、草莓属(Fragaria spp.)、路边青属(Geum spp.)、heteromeles spp.、Holodiscus spp.、胡桃属(Juglans spp.)、Kageneckia spp.、棣棠花属(Kerria spp.)、苹果属(Malus spp.)、欧查属(mespilus spp.)、小石积属(Osteomeles spp.)、酸果木属(Peraphyllum spp.)石楠属(Photinia spp.)、风箱果属(Physocarpus spp.)、委陵菜属(Potentilla spp.)、扁桃木属(Prinsepia spp.)、李属(Prumus spp.)、悬枸子属(Rubus spp.)、珍珠梅属(Sorbaria spp.)、花楸属(Sorbus spp.)绣线菊属(Spiraea spp.)、红果树属(Stranvaesia spp.)。[1]
症状表现
花器被害后呈萎蔫状，深褐色，并向下蔓延至花柄，使花柄呈水渍状。叶片发病，先从叶缘开始变黑色，然后沿叶脉发展，最终全叶变黑、凋萎。病果初生水渍状斑，后变暗褐色，并有黄色粘液溢出，最后病果变黑而干缩。枝干被害，初呈水渍状，有明显边缘，后病部凹陷出现溃疡状呈褐色至黑色。[2]
      梨火疫病病原培养
主要鉴定特征
症状　梨火疫病最典型的症状是花、果实和叶片受火疫病菌侵害后，很快变黑褐色枯萎，犹如火烧一般，但仍挂在树上不落，故此得名。目前国际上将其症状据受侵害的部位，分成5个阶段。
花枯萎　病原直接侵染开放的花引起花枯萎。一般发生于早春，病菌直接从花器侵入，初为水渍状斑，花基部或花柄暗色，不久萎蔫。病菌可扩展至花梗及花簇中其它的花；在温暧潮湿条件下，花梗上有菌脓渗出。随着枯萎发展，花梗、花等变褐至黑褐色，在某些情况下仅限于花梗，条件适宜时可继续侵染并杀死小枝并形成小溃疡斑。
溃疡枯萎　溃疡枯萎是指前一季越冬溃疡边缘的病菌重新复活的结果。最初的症状是在复活的溃疡附近的健康树皮组织上出现窄的水渍状区，几天后，树皮内部组织出现褐色条斑，随后病菌侵入附近的繁殖枝内部并引起萎蔫死亡。这些枝条特别是嫩枝与下面谈及的枝枯萎有明显区别，即在萎蔫之前枝尖芽褪色（黄至桔黄色）。
枝枯萎　花被侵染后，枝和嫩枝是最易感病的植物部位。细菌直接侵入前 1～3叶的枝尖，然后杀死整个枝条及支持枝。最初症状是枝尖萎蔫，但萎蔫前不褪色，象拐杖状。枝枯萎发展很快，条件适宜时，几天内可移动15～30cm以上，造成整枝死亡，病枝、枝皮、叶通常变黑。潮湿时，枝条上出现菌脓。生长后期，终芽前出现的枝枯萎一般不会萎蔫，且仅在枝的最上部出现坏死。随着病菌不断深入，并侵染主干，皮层收缩，下陷，形成溃疡斑。
病菌亦可直接从气孔、水孔等自然孔口或蕾苞，或由风引起的伤口侵入叶片，初叶边坏死，并向中脉、中柄、茎扩展，后变黑，通常有菌脓。
损伤枯萎和砧木枯萎　这二种比较特殊，前者主要是由于晚霜、冰雹或大风损伤引起，如果实，很容易引起果实枯萎。后者仅限于高感品种EMAL-26、 EMLA-9和MARK-39砧木。通常是由感病的接穗在这些砧木上发病后引起，最终成溃疡带而杀死树体。[1]
病原特点
直杆菌，有荚膜，周生鞭毛，能运动，大小为0.9～1.8～1.8× 0.6～1.5?m，多数单生，有时成双或短时间内3～4个呈链状。革兰氏染色阴性，兼性厌氧，过氧化物酶阳性，氧化酶阴性，从葡萄糖、半乳糖、果糖、蔗糖和?-甲基葡萄糖苷、海藻糖产酸不产气。不能利用木糖和鼠李糖在NA+5%%蔗糖培养基上，菌落白色，粘性，圆顶状，27℃培养2天，菌落直径3～7cm，有1稠绒毛状的中心环，表面光滑，边缘整齐。水解明胶，不水解酪蛋白，不还原硝酸盐，不产吲哚和H2S，生长最适温度25～27℃，最高温度33～34℃，生长所需的温度范围为6～37℃，致死温度45～50℃。病菌世代时间在25℃下为74.9分钟，最适 pH为6。不降解果胶酸和氧化葡萄糖盐，从核糖和海藻糖产酸，大多数从阿拉伯糖产酸，不从甘露糖、水杨苷、?-甲基葡萄糖苷、木糖、蜜二酸、内消旋肌醇、乳糖、麦芽糖或纤维二糖产酸，生长需尼咕丁酸，DNAG+Cmol%为 53.6～54.1%(Bd.)。[1]
生物学特性
梨火疫病菌以简单的细胞分裂繁殖，一个细胞在条件适宜时，3天内在寄主植物组织中能达到109细胞，每个细胞都是一个侵染源，感染寄主而引起病害的发展。除蛋白酶外，病菌不产任何有助于侵入寄主的酶，主要是在环境条件适宜时，通过胞间组织侵入薄壁组织的病菌产生胞外多糖。胞外多糖在病害发展过程中起重要的作用，其是菌脓的重要成份。菌脓的理化性质随湿度变化而变化，干时皱、硬，大时膨胀易被雨水扩散，中等湿度的菌脓粘易被昆虫、风传播。
梨火疫病菌在病株病疤边缘组织处越冬，挂在树上的病果也是它的越冬场所，如冬季温和，病菌还能在病株树皮上度过，来年早春病菌在上年的溃疡处迅速繁殖，遇到潮湿、温和的天气，从病部渗出大量乳白色粘稠状的细菌分泌物，即为当年的初侵染源，通过昆虫、雨滴、风、鸟类以及人的田间操作将病菌传给健株。病菌亦通过伤口、自然孔口（气孔、蜜腺、水孔）、花侵入寄主组织，有一定损伤的花、叶、幼果和茂盛的嫩枝最易感病。其详细的侵染循环可参考 Beer(1979)。[1]
传播途径
梨火疫病的传播，除风、雨、鸟类和人为因素外，昆虫对梨火疫病的传播扩散起一定的作用。据记载，传病昆虫包括蜜蜂在内有77个属的100多种昆虫，其中密蜂的传病距离约为200～400m，一般情况下，梨火疫病的自然传播距离约为每年6km。
在传病的气候因子中，雨水是果园短距离传播的主要因子，从越冬或新鲜接种源至花和幼枝，经常在溃疡斑下面枝条上观察到圆锥形侵染类型。其次风亦是中短距离传播的重要因子，往往在沿着盛行风的方向，病原菌以单个菌丝、菌脓或菌丝束被风携带到较远距离。
梨火疫病远距离传播主要是感病寄主繁殖材料，包括种苗、接穗、砧木、水果、被污染的运输工具、候鸟及气流。但对于如我国、澳大利亚等国，目前最有可能亦最危险的传播途径是通过病接穗、苗木、果实的传带。Psaltidas(1990)认为，梨火疫病在地中海地区扩散，并不能排除烟雾。 [1]
检验方法
由于梨火疫病在世界各国均很重视，研究亦相对较多，其检验方法亦很多，从经典的分离培养、致病性测定、症状观察等到先进的分子生物学技术，包括DNA探针、PCR技术的应用及脂肪酸分析、单克隆抗体的应用等等，但在目前检疫上仍采用免疫荧光染色结合致病性测定确诊的方法。
症状观察　梨火疫病的症状很典型，是鉴定的重要方法，但必须与其他症状相似的梨梢枯病区分开。主要区别见（Zwet和Keill1979）
分离培养　对于症状明显材料可直接分离病原，而症状不明显的材料如水果、幼枝等，可先进行IF（免疫荧光法）检测，再进行分离。分离可采用选择性培养基和鉴别性培养基进行。
MS培养基　这是Miller和Schroth专为梨火疫病菌设计的选择性培养基。梨火疫病菌菌落为红橙色，背景为兰绿色。配方如下：琼脂20g，甘露醇10g， L-天门冬酰胺3g，牛胆酸钠2.5g，磷酸氢二钾2.0g，烟酸0.5g，MgSO4·7H2O0.2g，次氮基三乙酸0.2g，硫酸十七烷基钠0.1ml，0.5%溴麝香草酚兰水溶液9ml，0.5%中性红2.5ml，蒸馏水970ml，pH7.3灭菌后加1%放线菌酮5ml，1%硝酸铯水溶液1.75ml。
CG培养基　这是Cross和Googman设计的高糖培养基，梨火疫病菌在28℃培养60小时后形成典型的火山口状菌落，特别是在立体显微镜下。配方如下：水380ml，蔗糖160g，营养琼脂12g，结晶紫0.8ml（1%乙醇溶液），0.1%放线菌酮20ml。
TTC培养基　该培养基是Weise(1981)设计的四氮锉-福美联培养基。梨火疫病菌在27℃培养2～3天后，可产生红色肉疣状菌落。配方如下：营养琼脂37g，蔗糖100g，酵母粉5g，葡萄糖15g,水100ml，pH6.8～7.2。灭菌后加0.5%TTC10ml，福美联85～250ml。
CCT半选择性培养基　这是Tshimaru和Kios于1984设计的。梨火疫病菌 28℃培养48小时后，形成淡紫色透明菌落，中央颜色略深，配方如下：蔗糖10g；山梨醇10g；1%SDS30ml，0.1%结晶紫乙醇溶液2ml，营养琼脂23g，蒸馏水 970ml。灭菌后加入1%硝酸铯水溶液2ml和放线菌酮0.05g。
Zeller改良高糖培养基　梨火疫病菌在此培养基上27℃培养2～3天后，菌落大小为3～7mm，橙红色半球形，高度凸起，中心色深，有蛋黄状中心环，表面光滑，边缘整齐。配方如下：牛肉浸膏8g，蔗糖50g，放线菌酮50mg，0.5%溴百里酚兰9ml，0.5%中性红2.5ml，琼脂20g，水1000ml，pH7.4。
另外，梨火疫病菌在NA+5%蔗糖等培养基上，典型菌落果聚糖阳性，在紫外灯下无荧光。
免疫荧光染色（IF）　对于呈现梨火疫病症状的材料，可直接平板分离，后免疫学试验即可确诊。对于表面健康的材料，可能携带潜伏或附生的梨火疫病菌，可先用IF法筛选，若阳性，再分离和其他生理生化试验、致病性试验确诊。
取样和抽提　随机选取100株不同种或品种植株上约10cm长的100根枝条为一样品。每个样品随机抽取30根枝条，其余5℃保存备用。每根枝条切成4段（共120小段）。室温下将上述小段放于烧瓶，加0.01MpH7.2PBS吐温溶液浸泡，并振荡1.5小时。上清液经烧结玻璃滤器（Whatman1号滤纸）过滤后，在10000g离心20分钟，沉淀用1ml灭菌的PBS悬浮，其中0.6ml悬浮液加一滴 Difco甘油于-20℃保存备用。
间接免疫荧光抗体染色(IFAS)　采用抗梨火疫病菌的抗血清，设同源抗原对照及阴性对照、正常血清对照和空白对照。在12孔载玻片上，每孔加20ml试验悬浮液，及对照孔PBS。阳性菌等，火焰热固定后，各加2?l一定稀释度的抗血清，37℃保湿孵育30分钟，用0.01MPBS轻轻换洗3次。洗干后每孔加20?l1:10稀释的FITC标记的Ig，37℃保湿孵育30分钟，同上洗、干后，每孔加1滴 0.1MpH7.6的磷酸甘油封片，并在有上荧光光源和适宜滤光片的荧光显微镜下检查。观察形态典型的荧光细胞若IF阳性，再进行分离病原及有关试验。
玻片凝集试验　典型形成果聚糖，无荧光的菌落在载玻片上与1滴1:20稀释(0.01MPBS)抗梨火疫病菌的抗血清进行玻片凝集试验。
生理生化试验　在某些特定情况下，对形成果聚糖，凝集试验阳性，无荧光菌落进行生理生化鉴定及有关鉴定是必要的。最简单的途径是用IF和API-20快速生化鉴定板。
致病性实验　梨火疫病菌致病性试验可用梨片或梨嫩枝测定，亦可用烟草过敏反映检查。NA上培养48小时的细菌配成108cells/ml的悬液，注入烟草叶片或接种于1cm厚梨片、或针刺接种于1丈长的巴黎枝条，28℃下培养，一般10～12小时后，烟草注射区出现白色坏死斑。1～3天后，梨片或枝条上出现白色菌脓，则可确诊。
其他鉴定方法　梨火疫病的检测鉴定技术发展较快，其中目前应用较多有脂肪酸分析，该方法在美国、英国用于鉴定菌种，并建立了相应的数据库(Zwet)。另外，DNA探针、PCR技术亦用于梨火疫病菌的检测和鉴定，特别是美国、新西兰、德国、加拿大等均已开始应用于实际检疫，特别是新西兰利用DNA探针检测水果的带菌情况。[1]
有关检疫规定
梨火疫病是《中华人民共和国进境植物检疫危险性病、虫、杂草名录》中规定的一类危险性病害，并且是中俄、中匈、中南、中罗、中蒙植检植保双边协定规定的检疫性病害，应严格限制自疫区引进寄主植物种苗，引进后需经隔离措施，来自疫区的水果、植株、带菌昆虫也应严格施检。[1]
发病规律
病原细菌在枝干病部越冬，翌年通过昆虫和雨水传播。此病于初春随新稍生长而发生，夏季之后几乎不发生。病菌寄主范围广，可侵害蔷薇科大多数植物，其中已洋梨为多，日本梨较少。苹果、杏、李、樱桃及榅桲等亦能被害 。[3]
病害防治
1.栽培抗病品种是防治此病经济有效的方法。
2.冬季剪除病稍及刮除枝干上的病皮，加以烧毁或深埋。花器发现病花，应立即剪除。
3.在发病前喷布1:2:160～200波尔多液，以保护新稍等感病器官。注意及时防治传病昆虫。