标题：动物细胞工程
动物细胞培养
动物细胞培养：从动物机体中取出相关的组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，生长，增殖。
1丶选材：动物胚胎或幼龄动物的器官或组织。
2丶细胞分离：使器官组织分离成单个细胞，
常用方法，物理：剪刀剪碎，
化学法：胰蛋白酶，胶原蛋白酶​
3丶制作细胞悬浮液，方法：加培养液。形成细胞悬浮液
4丶培养细胞株，原代培养，传代培养
5丶形成细胞系，传代培养，遗传物质的改变。
动物细胞融合
方法：
物理法，电刺激，振动，离心。
化学法，聚乙二醇（PEG）强烈的吸水性，有凝聚蛋白质的作用。
病毒法，紫外线照射后灭活仙台病毒，丧失了感染活性，保留了融合活性
原理：细胞膜的流动性。
用途及意义：制备单克隆抗体。
单克隆抗体的制备
单克隆：由一个细胞通过有丝分裂形成一个细胞群。
单克隆抗体：由一个浆细胞通过有丝分裂形成一个细胞群，这个细胞群可以产生特异性抗体。
原理利用了免疫，细胞融合，动物细胞培养等原理。
B淋巴细胞在抗原的刺激下，能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力。B细胞的这种能力和量是有限的，不可能持续分化增殖下去，因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的。将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，再进一步克隆化，这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤的无限生长的能力，又具有产生特异性抗体的B淋巴细胞的能力，将这种克隆化的杂交瘤细胞进行培养或注入小鼠体内即可获得大量的高效价、单一的特异性抗体。这种技术即称为单克隆抗体技术。
材料效应B细胞（只有效应B淋巴细胞才能产生出特异性的抗体）
骨髓瘤细胞（能无限增殖）
过程1）免疫脾细胞的制备 制备单克隆抗体的动物多采用纯系Balb/c小鼠。免疫的方法取决于所用抗原的性质。免疫方法同一般血清的制备，也可采用脾内直接免疫法。
2）骨髓瘤细胞的培养与筛选 在融合前，骨髓瘤细胞应经过含8-AG的培养基筛选，防止细胞发生突变恢复HGPRT的活性（恢复HGPRT的活性的细胞不能在含8-AG的培养基中存活）。骨髓瘤细胞用10%小牛血清的培养液在细胞培养瓶中培养，融合前24h换液一次，使骨髓瘤细胞处于对数生长期。
3）细胞融合的关键:
1技术上的误差常常导致融合的失败。例如，供者淋巴细胞没有查到免疫应答。这必然要失败的。 
2融合试验最大的失败原因是污染，融合成功的关键是提供一个干净的环境，以及适宜的无菌操作技术。
4）阳性克隆的筛选 应尽早进行。通常在融合后10天作第一次检测，过早容易出现假阳性。检测方法应灵敏、准确、而且简便快速。具体应用的方法应根据抗原的性质，以及所需单克隆抗体的功能进行选择。常用的方法有RIA法、ELISA法和免疫荧光法等。其中ELISA法最简便，RIA法最准确。阳性克隆的筛选应进行多次，均阳性时才确定为阳性克隆进行扩增。
5）克隆化 克隆化的目的是为了获得单一细胞系的群体。克隆化应尽早进行并反复筛选。这是因为初期的杂交瘤细胞是不稳定的，有丢失染色体的倾向。反复克隆化后可获得稳定的杂交瘤细胞株。克隆化的方法很多，而最常用的是有限稀释法。
（1）显微操作法：在显微镜下取单细胞，然后进行单细胞培养。这种方法操作复杂，效率低，故不常用。
（2）有限稀释法：将对数生长期的杂交瘤细胞用培养液作一定的稀释后，按每孔1个细胞接种在培养皿中，细胞增值后成为单克隆细胞系。第一次克隆化时加一定量的饲养细胞。由于第一次克隆化生长的细胞不能保证单克隆化，所以为获得稳定的单克隆细胞株需经2～3次的再克隆才成。应该注意的是，每次克隆化过程中所有有意义的细胞都应冷冻保存，以便重复检查，避免丢失有意义的细胞。
（3）软琼脂法：将杂交瘤细胞稀释到一定密度，然后与琼脂混悬。在琼脂中的细胞不能自由移动，彼此互不相混，从而达到单细胞培养的目的。但此法不如有限稀释法好。
（4）荧光激光细胞分类法：用抗原包被的荧光乳胶微球标记杂交瘤细胞，然后根据抗原与杂交瘤细胞结合的特异性选出细胞，并进行单细胞培养。
6）细胞的冻存与复苏
7）大规模单克隆抗体的制备 选出的阳性细胞株应及早进行抗体制备，因为融合细胞随培养时间延长，发生污染、染包体丢失和细胞死亡的机率增加。抗体制备有两种方法。一是增量培养法，即将杂交瘤细胞在体外培养，在培养液中分离单克隆抗体。该法需用特殊的仪器设备，一般应用无血清培养基，以利于单克隆抗体的浓缩和纯化。最普遍采用的是小鼠腹腔接种法。选用BALB/c小鼠或其亲代小鼠，先用降植烷或液体石蜡行小鼠腹腔注射，一周后将杂交瘤细胞接种到小鼠腹腔中去。通常在接种一周后即有明显的腹水产生，每只小鼠可收集5～10ml的腹水，有时甚至超过40ml。该法制备的腹水抗体含量高，每毫升可达数毫克甚至数十毫克水平。此外，腹水中的杂蛋白也较少，便于抗体的纯化。
应用1.作为诊断试剂：单克隆抗体在疾病的诊断，治疗及预防方面与常规抗体相比具有特异性强，灵敏度高的特点，优越性非常明显。
2.用于治疗疾病和运载药物：为治疗癌症，可在单克隆抗体上连接抗癌药物，制成”生物导弹”将药物定向带到癌细胞所在部位，既消灭了癌细胞又不会伤害健康细胞，
意义用于以下各种生命科学实验并具有医用价值
（1）沉淀反应：Precipitation reaction
（2）凝集实验：haemaglutination
（3）放射免疫学方法检测免疫复合物
（4） 流式细胞仪：用于细胞的分型和细胞分离。
（5）ELISA 等免疫学检测
（6）BIAcore biosensor:检测Ab-Ag或与蛋白的亲和力 。
(7) 免疫印记（western blotting)
（8） 免疫沉淀：
（9） 亲和层析：分离蛋白质
（10） 磁珠分离细胞
（11）临床疾病的诊断和治疗；
试管动物和胚胎移植
试管动物：是用人工方法让卵细胞和精子在体外受精，并进行早期胚胎培养，然后移植到母体子宫内发育而诞生的动物。
胚胎移植：将雌性动物的早期胚胎，或者通过体外受精及其他方式得到的胚胎，移到同种的，生理状态相同的其他雌性动物体内，使之继续发育成新个体。
胚胎移植的优势：可以充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力。
同名图书
基本信息书名:动物细胞工程(现代生物技术丛书) 
ISBN:750254099 
作者:徐永华编 
出版社:化学工业出版社 
定价:35 
页数:247 
出版日期:2003-8-1 
版次: 1
开本:16开
简介“现代生物技术丛书”是化学工业出版社重点策划、隆重推出的一套精品图书，已被国家新闻出版总署列为“十五”国家重点图书。该套书由我国著名生物技术专家焦瑞身先生担任编委会主任，各相关领域科研、教学、产业一线具有权威性的专家学者共同撰写。本书系统全面地介绍了动物细胞工程的基本原理、基本技术、成果应用和未来发展。在概述动物细胞工程的发展、内容及其应用之后，对细胞培养细胞融合的原理和基本技术，以及利用细胞融合产生杂交瘤和单克隆抗体的动物细胞工程发展的基础进行了介绍；着重阐述了动物细胞基因表达系统和基因打靶的技术、利用染色体载体转移基因和构建人工染色体的技术及其应用；并且基于干细胞生物学在医学上应用的重大意义，对胚胎干细胞和组织干细胞的研究进展进行了介绍；
目录第一章 总论
第一节 细胞生物学的发展和细胞工程的兴起
第二节 动物细胞工程的发展和内容
第三节 动物细胞工程的应用
第二章 动物细胞培养
第一节 引言
第二节 细胞培养及其应用
第三节 细胞培养的基本技术
第四节 培养细胞的鉴定
第五节 细胞培养实验室
第六节 细胞污染的检验
第七节 其他同体外动物细胞有关的问题
第三章 细胞融合
第一节 细胞融合的基本技术
第二节 融合细胞的筛选
第三节 融合细胞的克隆化
第四节 细胞融合的交瘤
第四章 淋巴细胞杂交瘤和单克隆抗体
第一节 B淋巴细胞杂交瘤和单克隆抗体
第二节 单克隆抗体的特性和应用
第三节 人杂交瘤单克隆抗体和基因工程抗体
第四节 T淋巴细胞杂交瘤
第五章 外源基因在真核细胞中的表达
第一节 外源基因在毕赤酵母中的表达
第二节 杆状病毒和昆虫细胞表达系统
第三节 哺乳动物细胞表达系统
第四节 基因表达产物的检测 第六章 基因打靶
第一节 胚胎干细胞的获得和培养
第二节 打靶栽体的构建
第三节 重组ES细胞的筛选
第四节 嵌合体小鼠的制备
第五节 基因敲除小鼠的建立
第六节 Cre-loP系统、FLP/FRT系统和条件性基因敲除
第七节 基因敲入
第八节 大规模ES细胞突变库的建立
第七章 染色体工程
第一节 染色体介导的基因转移
第二节 染色质介导的基因转移
第三节 酵母人工染色体
第四节 细菌人工染色体
第五节 哺乳类人工染色体
第八章 胚胎性干细胞
第一节 概述
第二节 ES细胞和EG细胞培养建系技术
第三节 ES细胞和EG细胞体外诱导分化
第四节 诱导分化细胞的永生化
第五节 ES细胞和EG细胞技术学在医学中的应用
第九章 成体干细胞
第一节 概论
第二节 成体干细胞分化和可塑性
第三节 成体干细胞的体外培养和特性
第四节 细菌人工染色体
第五节 哺乳类人工染色体 第十章 胚胎性干细胞
第一节 概述
第二节 ES细胞和EG细胞培养建系技术
第三节 ES细胞和EG细胞体外诱地分化
第四节 诱导分化细胞的永生化
第五节 ES细胞和EG细胞技术学在医学中的应用
第九章 成体干细胞
第一节 概论
第二节 成体干细胞分化的可塑性
第三节 成体干细胞的体外培养和特性
第四节 成体干细胞研究中的问题
第五节 成体干细胞在再生医学中的应用
第十章 转基因动物
第一节 转基因动物实验的常用方法
第二节 转基因动物技术
第三节 转基因小鼠的鉴定
第四节 纯合子转基因小鼠的建立
第十一章 胚胎工程
第一节 胚胎移植技术
第二节 胚胎冷冻保存技术
第三节 胚胎分割技术
第四节 体外受精技术
第五节 胚胎工程研究中的胚胎干细胞技术
第六节 动物克隆技术 第十二章 鱼类细胞工程
第一节 鱼类细胞培养
第二节 鱼类细胞核移植
第三节 鱼类染色体组操作
第四节 鱼类基因转移
第十三章 人造细胞 第十四章 发展和展望