标题：传染性胰腺坏死病毒IPNV
鉴别
（IDENTIFICATION）
传染性胰腺坏死病病毒（IPNV），Dodos等建议IPNV为双RNA病毒属（Birnavirus）。病毒颗粒呈正20面体，无囊膜，有92个壳粒，直径约50～75nm，衣壳内包有1由2个片段组成的双股RNA基因；是已知鱼类病毒中最小韵RNA病毒。
传入和分布
（INTRODUCTION AND DISTRIBUTION）
l 首次记录（年，地区，参考文献）
l 定殖 最重要的传染源是带有病毒的成鱼，病后残存的鱼可数年以至终身成为带有病毒者，从肾、脾、肝、性腺、粪便中均可检出IPNV，其中以肾脏的检出率为最高。另外从圆口类到硬骨鱼类20个科的鱼体上也发现有IPNV，且多数肉眼观察鱼呈正常状态；在软体动物、甲壳动物和鱼类寄生吸虫的后囊蚴上也分离到IPNV；人工将IPNV强制投喂鸡、猫头鹰、海鸥及鼬后，在它们的粪便中均检出具有感染力的IPNV，这些暗示它们也可能是IPN的传播者。
l 主要宿主范围及传播途径 敏感鱼类有美洲红点鲑、虹鳟、河鳟、克氏鲑、银大马哈鱼、大口玫瑰大马哈鱼、湖红点鲑、大西洋鲑、大鳞大马哈鱼等，主要危害14～70日龄的鱼苗、鱼种，在水温10～12℃之死亡率可高达80～100%，鱼越小死亡率越高。
l 来源 加拿大、美国
l分布 IPN最早发生在加拿大、美国后来在丹麦、法国、希腊、捷克斯洛伐克、英国、德国、挪威、意大利、南斯拉夫、瑞典、日本等国发生流行，于本世纪80年代又传入朝鲜、中国台湾省及东北、山西、山东、甘肃等地。是鱼类口岸检疫的第一类检疫对象。
基本特征
1、理化特性
在氯化铯中，病毒的浮力密度为1.33g/mL，沉降系数为；435S，病毒颗粒的分子量为55×10s道尔顿，全部衣壳蛋白重量为50.2×106道尔顿；RNA为4.8×10道尔锁，占病毒颗粒重量的8.7%；RNA在硫酸铯中的浮力密度为1.60～1.615g/mL，在蔗糖梯度溶液中沉降系数为14S。病毒的铂构蛋白按大小可分为三个等级，最大一个多肽重105 000道尔顿，占整个分子量4%，它是连结RNA的多聚酶；中等大小多肽重54 000道尔顿，占总重62%，它是主要的壳粒蛋白，抗体由它刺激产生；两个内部的小蛋白分别重31 000道尔顿，占总重28%和29 000道尔顿，占总重6%。IPNV现已知有VR299、Sp、Ab、He株等，这些株在血清学上、敏感性上及病原性上都有些不同。
病毒易在RTG-2、PG、RI、CHSE-214、AS、BP-2、EPC等鱼细胞株上增殖，出现CPE；而接种到CAR、CLC及CO等鱼细胞株上无CPE出现，病毒滴度也低。生长温度为4～27.5℃；如在培养时温度慢慢地升高，病毒能在30℃生长；最适生长温度为15～20℃。病毒在胞浆内合成和成熟，并形成包涵体。病毒生长在RTG-2细胞株上，24℃时5小时内产生新病毒，而15℃时产生新病毒须8小时，但此温度产生病毒量更多。病毒引起RTG-2细胞病变，26℃时在感染9小时后出现，20℃在感染18小时后出现，4℃需几天后才出现，20℃时2～3天就可看到空斑，核固缩，细胞变长，相互分离，并脱离瓶壁；但对病毒抵抗力强的细胞，核虽已固缩，仍贴在瓶壁上，因此空斑大多呈网状，特别是空斑的边缘，健全和变性的细胞相互混杂。Ab株不能在FHM细胞株上生长。
IPNV对乙醚及氯仿不敏感，对甘油也很稳定，能保：存在50%甘油中数年以上（法国的Kerlo株在50%甘油中，4℃3个月内即失去感染力；pH的忍耐范围是4～10；较能耐高温，在60℃的生理盐水中30分钟才失活；在过滤除菌的4℃水体，感染力可保持5～6个月以上；在10℃自来水中，可保持7个月以上，但在未经处理、且有藻类的水中，14天后就不能检测到病毒；大部分株能耐一20℃以下低温，冷冻干燥后，保存在4℃，至少在4年内不丧失感染力。对酸不敏感，pH 3中30分钟，侵染率为100%；对碱敏感，pHll时侵染率仅0.01%。氯、福尔马林、碘、臭氧和pH在一定浓度和时间下都具有杀病毒作用。
病毒可在培养细胞上诱导产生干扰素，VR299株在FHM细胞株上诱出的干扰素量取决于温度，在15℃、20℃、26℃、30℃中，26℃干扰素产量最高：干扰素对热、pH不敏感，并具有不透析性，在高速离心下不沉降，其活力易受胰酶和。·巯基乙醇影响，对DNA和RNA酶有抗性。在RTG-2细胞株上产生的干扰素的分子量估计为94 000道尔顿。
2、症状
病鱼游动失调，常作垂直回转游动，不久便沉入水底，伺歇片刻后又重复以上游动，直至死亡，一般从开始回转游动至死亡仅1～2小时。在流水池中失去游动能力的病鱼汇集在排水口的拦网上。病鱼体色发黑、眼球突出、腹部膨大，腹部及鳍基部充血，鳃呈淡红色，肛门处常拖有1条线状粘液便。剖开鱼腹有时可见有腹水，幽门垂出血，肝、脾、肾、心脏异常苍白；消化道内通常没有食物，而有乳白色或淡黄色粘液，这些粘液祥物通常在5～10%的福尔马林中不凝固，这具有诊断价值。
3、病理变化
最明显的特征是胰腺坏死，胰腺泡、胰岛及所有的细胞几乎都发生异常，多数细胞坏死，特别是核固缩、核碎裂十分显著，有些细胞的胞浆内有包涵体。工藤等（1973）用光镜观察到的胞浆内包涵体及其类似体，用电镜确认为细胞溶酶体，其中不仅有病毒颗粒，还有变性的细胞器。IPNV存在于胰腺泡细胞、肝细胞、枯否氏细胞的胞浆内，浸润在胰腺的巨噬细胞和游走细胞的胞浆内也有病毒颗粒。胰腺周围的脂肪组织也发生坏死，骨骼肌发生玻璃样变；疾病后期，肾脏的造血组织和肾小管也发生变性、坏死，肝脏局灶性坏死，消化道的粘膜发生变性、坏死、剥离。
4、诊断
（1）根据症状及流行情况进行初步诊断。首先观察发病的鱼是否是对传染性胰腺坏死病易感的种类，然后结合病鱼游动行为及特有的内、外部症状作出初步判断。病鱼的内脏器—宫通常苍白，尤其是肠道中没有食物，而有许多在5～10%福尔马林中不凝固的粘液样物质，这些可增加此病诊断的正确性；同时还必须调查鱼卵、鱼种的来源，水源状况，发病史。
（2）病理学检查可发现胰腺坏死，但如果病鱼出现和IHN、VHS样的肾、肝、肠组织病变，则给诊断造成困难，不过IPN不发生像IHN那样的消化道颗粒细胞坏死现象。
（3）用RTG-2细胞株分离病毒，观察CPE，可作出进一步诊断。但当发生混合感染，如IPN和VHS混合感染时，则接种在RTG-2细胞株上，24小时后CPE与IPN的相似，48小时后则与VHSV的相似，这时就必须进行对乙醚、甘油、pH的敏感性试验，IPNV在RTG-2细胞株上，pH7.2～7.6都显示明显CPE，对乙醚不敏感，对甘油稳定；而VHSV在RTG-2细胞株上，pH7.2不显示CPE或不明显，pH7.6时显示明显CPE，对乙醚敏感，在50%甘油中失去感染性。
（4）最后确诊
①中和试验，由于IPNV的血清型很多，作为诊断有必要使用多价抗血清，美国东部鱼病研究所现已制成多价抗IPNV血清（7株）。
②补体结合法，采用已知病毒可镕性抗原以测定病鱼血清中有无相应抗体，特异性较中和试验低，但由于补体结合抗原出现早，消失快，可用于早期诊断。
③直接荧光抗体法能迅速正确地检出在组织及培养细胞内的病毒。用RTG—2细胞，20~C培养3～4小时就可检出，且血清型丕同株伺不会引起交叉反应。
④酶联免疫吸附试验（ELISA），在发病季节，可在24小时内确诊流行病是否由IPNV引起，鱼卵可在48小时左右确定是否被IPNV污染；·对外观无疲状的成鱼可在24小时左右检测血中是否有抗IPNV的抗体。该方法具有速度快、灵敏度高；特异性强、操作方便等优点。中国科学院水生生物研究所鱼病宝病毒组已制备成试剂盒。
生态影响
（ECOSYSTEM）
IPNV在河水、井水中，4℃能保持10天，15℃保持5天稳定；在?4～10℃的海水中，经4～10星期感染力几乎无损失，5～6个月后丧失99%；在室内于燥状态5星期后还保留少量感染力，所以水和空气都可能是传播的媒介。IPNV可经过卵而进行垂直传播，也可随病鱼的粪、尿、性腺分泌物而排入水中，进行水平传播。经鳃及口而感染。潜伏期的长短与鱼种大小、水温高低等有关，鱼种越大，潜伏期越长；在病毒生长适温范围内，温度越高，潜伏期越短，如在水温12～14℃时，鱼苗至小鱼种感染后5～8天就发病，同时开始死亡，稍大些的鱼种须10～12天才开始死亡。
（1）加强综合预防措施，严格执行检疫制度，不将带有IPNV的鱼卵、鱼苗、鱼种及亲鱼输出或运人。
（2）发现疫情要进行彻底消毒，病鱼必须销毁，用浓度为200×10的有效氯消毒鱼池；在8～10℃时，工具用2%福尔马林或氢氧化钠水溶液（pH12.2）消毒10分钟。
（3）建立基地，培育无IPNV的鱼种，严禁混养未经检疫的其他种类的鱼。
（4）发眼卵用伏碘（Betadine，PVP-I，商品名为10%复方皮维碘溶液）水溶液消毒，浓度为50×10的有效碘水溶液，药浴15分钟；如水的pH高，须用（60～100）×10浓度。经该方法处理后的鱼卵孵出的鱼苗，有时仍发生IPN，可能IPNV还在卵内或药液难以到达的卵表面的某些部位。
（5）疾病早期用PVP—I拌饲投喂，每千克鱼每天用有效碘1.64～1.91g，连喂15天，死亡率可降低。
（6）一般在水温10℃以下可减少IPN发生和降低死亡率，因此可将病鱼放在低水温的环境中饲养，以控制疾病的发展，或在发病季节将易感幼鱼放在低水温中饲养，待发病期过后再迁回，但这方法较难推广。
（7）大黄等中草药拌饲投喂，有防治作用。
（8）2 500尾0.4g仔鱼投喂6mg植物血球凝集素（PHA），分两次喂，间隔15天，据报道对预防IPN有一定效果。[1]