标题：乙肝病毒DNA检测
乙肝病毒DNA检测
以往乙肝患者抗病毒治疗的指征是：乙肝病毒e抗原阳性（大三阳）患者HBVDNA数值  乙肝病毒(HBV)结构示意图要求达到10的5次方拷贝/毫升（20000U/ml），乙肝病毒e抗原阴性（小三阳）患者乙肝病毒DNA数值要求达到10的4次方拷贝/毫升（2000U/ml），但是10的4次方拷贝/毫升以下也不能认为就没有问题了，最新的国际研究资料表明：和肝脏疾病进展相关的病毒DNA水平域值尚不清楚，即使HBVDNA水平持续低于20000U/ml，也可能乙肝病毒情仍在进一步发展，因此HBVDNA数值应该越低越好，目前国际建议的HBVDNA检测正常值应该是：< 50U/ml 。
检测的作用
目前，乙肝病毒DNA检测在乙肝检查化验中使用的越来越普遍，可见乙肝病毒DNA检测在乙肝检查化验中占的分量越来越重，这是因为乙肝病毒DNA检测对确诊乙肝和评估乙肝治疗效果具有十分重要的作用。主要表现在以下七个方面：
1、了解乙肝病毒在体内存在的数量。
2、乙肝病毒是否复制。
3、乙肝是否传染，传染性有多强。
4、是否有必要服药。
5、肝功能异常改变是否由病毒引起。
6、判断病人是适合用哪类抗病毒药物。
7、判断药物治疗的疗效。
检测的临床意义
所以说HBV—DNA定量检测指标降低在乙肝治疗中有着非常重要的意义，是乙肝转阴的前奏，也是康复最为关键的一步，只有体内的HBV—DNA定量指标降低，病毒的复制繁殖才会停止，乙肝的彻底治愈才有希望。
乙肝病毒DNA检测的临床意义一、对医生的诊断和用药非常重要。通过乙肝病毒DNA检测能够判定判断乙肝患者适合用哪类抗病毒药物；乙肝病毒DNA检测对用药的剂量、用药时间、是否需要联合用药以及用药的效果等提供重要的参考依据，也是临床上评价抗病毒或免疫增强药物疗效的最客观的指标。
乙肝病毒DNA检测的临床意义二、能够直接反映乙肝病毒复制状态及传染性的最佳指标，通过乙肝病毒DNA的含量能直接反映病毒在体内存在的数量、是否传染，传染性有多强。但是需要说明的一点是：乙肝病毒载量的多少并不代表肝脏的损伤程度，也无法判断病情的严重程度。
乙肝病毒DNA检测的临床意义三、反映病毒复制的活跃程度，间接地反映机体的免疫应答水平。
复制过程
不同于一个真正的生物体，病毒并不通过生长和分裂等方式繁殖自身，而是像铸造机器零件一样，按照一定的模具拷贝出来的。病毒DNA中包含有一些程序，指导病毒的遗传物质和其它一些结构蛋白组分增殖。另外，病毒DNA中还包含有一些信息，使得单一组分能够在细胞因子的帮助下，自发组装成新的病毒颗粒。 
在医学上，病毒的繁殖被称之为“复制”，在复制的过程中，有两个很重要的因素：一个是催化剂，另一个是模板。没有这两个因素，乙肝病毒就不能复制。乙肝病毒复制的“催化剂”就是乙肝病毒DNA（即HBV-DNA）聚合酶。没有这种聚合酶的作用，乙肝病毒的复制就会停止。 
乙肝病毒的基因组（HBV-DNA）是由两条螺旋的DNA 链围成的一个环形结构。其中一条较长负链已经形成完整的环状；另一条长度较短的正链，呈半环状。在感染肝细胞之后，这条半环状的DNA链就会以负链为模板，在催化剂──HBV-DNA聚合酶的作用下延长，最终形成完整的环状。这时的乙肝病毒基因组就形成了一个完全环状的双股DNA。把这种DNA称做共价闭合环状DNA（即cccDNA），可以把它看作是病毒复制的原始模板。模板形成后，病毒基因会以其中的一条cccDNA为模板，利用肝细胞基因中的酶和DNA 聚合酶的“催化”，一段基因又一段基因地复制，形成负链和正链。最后再装配到一起形成新的HBV-DNA颗粒。 复制的第一步：黏附HBV人侵人体后，依靠其外膜(表面抗原，HBsAg)能粘附在肝细胞膜上，当然，粘附的首要条件是HBsAg先要识别肝细胞膜。一旦粘附成功，HBv的外膜也就完成了它的使命，甩掉了外膜，HBV钻进肝细胞内。 复制的第二步:脱壳HBV核心部分来到肝细胞内，在肝细胞浆中还要脱掉它的“核壳”(核心抗原即HBcAG及E抗原即HbEAG)，这样，就暴露出了它最核心部分，即乙肝病毒核酸(HBv DNA)，HBV大有“赤膊上阵”之意。HBV-DNA包涵着乙肝病毒的全部基因，是它主宰着HBv的复制的。 复制的第三步：入核HBv-DNA从肝细胞浆内进入肝细胞核，在这里它要进一步发育完善，形成了HBv的“共价闭合环状脱氧核塘核酸”(HBv cccDNA)。这个cccDNA十分了得，它深深藏匿在肝细胞核内，而肝细胞核外面有一层坚韧的核膜，目前所有药物都难以通过这坚韧的核膜，因而对cccDNA也无可奈何，但cccDNA却掌控着HBv所有的遗传信息，指令着HBv的复制。因此．现有的药物想彻底消灭人体内的HBv真比登天还难，这些药物只能抑制HBv的繁殖或复制，“全部转阴”也只能是一种幻想。 复制的第四步：转录HBV在这一阶段会以cccDNA为“模子”，像录音带似的把HBv cccDNA上的所有信息全都转录到“信息核糖核酸”(mRNA)上。这个转录过程需要人体内的酶类帮忙，因为所有的病毒都不能自己独立生活．必须有生物的机体帮忙，才能完成这个转录过程。HBv也是这样。在人体酶类的帮助下完成它的复制环节。 复制的第五步：翻译在mRNA上已录取了HBv的所有信息，然后就是“翻译”了，其实就是开始制造病毒蛋白。MRNA通过“翻译”过程，可将HBv的各种蛋白制造出来，如HBv的外膜蛋白(HBsAg)、核壳蛋白(HBeAg、HBcAg)、HBvDNA多聚酶等；至此，HBv的外膜有了，HBv的核壳也有了，这些东西只是零件，飘浮游离着的，还有重要的HBv最核心部分没有“制造”山来。 复制的第六步：逆转录啥叫“逆转录””把HBv的遗传信息从DNA转录到RNA上叫做“转录”，是正常的“顺转录”；而将HBv的遗传信息从RNA上再转录到DNA上，就叫做“逆转录”了。那么，HBv的mRNA上的遗传信息最后就转录成了HBV的DNA，这时，HBv的最核心部分(即HBv DNA)也算制造完成。 复制的第七步：组装从第五步和第六步的复制看来，HBv的所有零件均已制作完毕，到了第七步也就简单了，把这些零件进行组装，装配妥了，HBv的复制也算大功告成了。 
HBv就是这样繁殖或复制的。看起来好像挺复杂，其实HBv复制过程是很快的．一个复制周期不到48小时。复制出的下一代HBv或侵入另外的健康的肝细胞，或被释放到血液中去，在人们抽血化验时也就被检测到了。
DNA检测的频率
无论是大三阳还是小三阳的病人，发现患有乙肝的时候就建议检测HBV DNA。一般来说，病人的具体情况可能会不太一样，如果在一个病毒的活动期，乙肝病毒DNA检测可能需要勤一些，一到两个月就应检测一次，如果是在病毒的耐受期，病情相对比较稳定，可以3—6个月检测一次。在进行抗病毒治疗的过程中，也是需要定期检测HBV DNA。一般来说至少三个月要检查一次。
检测的注意事项
检查注意事项：
1、 这个检查与是否进餐没有任何关系,所以如果你只做HBV DNA检查,可以检查前进餐.
2 、如果你还要做肝功能检查,建议你在检查前避免进餐,避免熬夜,避免酗酒,避免用药,女性生理期避免做肝功能检查.
对于乙肝结果的认识,有这几点注意事项：
1、关于单位的换算.最常见的单位是copies/ml,也有重量的单位,比如fg/ml,pg/ml.1 pg = 1000 fg,那么1 pg/ml = 283,000 copies/ml.
2、由于PCR的方法虽然精确度高,但是误差相对较大,而且假阳性率也比较高,所以,对于每次乙肝DNA检查的结果,在两个数量级之内的变化,通常会认为没有变化或变化不大.而且DNA也在不断的波动,所以不能以一次或两次的检查结果酒简单的判断是否好转,应该综合其它结果以及DNA的变化趋势.
3、对于乙肝阴性的标准,我们一般认为是10的3次方,但不能一概而论,应该视化验单上具体给出的参考值而定.阴性最准确的表达方式是,未检测到,化验单表示为<参考值copies/ml,并没有具体的数值.
4、DNA复制程度的大小并不代表肝脏实际损害的程度,DNA复制程度高,并非就代表损害严重.
目前使用的检测方法
主要有：荧光定量PCR技术、竞争PCR技术、PCR酶联免疫吸附法、荧光标记引物法和PCR酶联化学发光法。
临床上最先进的乙肝病毒DNA检测方法是实时荧光定量PCR方法，由于此技术要求较高，目前只有少数大型医院有条件使用实时荧光定量PCR方法。
如何看检测报告
1、乙肝病毒DNA检测报告：主要包括定性和定量。 
2、定性，即确定是阴性还是阳性。乙肝病毒DNA的正常值为阴性，即乙肝病毒DNA<1x10的3次方拷贝/ml 
3、定性测得的阳性通常说明病毒容易传染给他人，阴性说明不容易传给他人。对于乙肝大三阳来说，由于乙肝病毒e抗原(HBeAg)是阳性，所以乙肝病毒-DNA也是阳性的，表示乙肝病毒-DNA>1 x 10的3次方拷贝/ml ，这时体内的乙肝病毒复制活跃。 
4、定量，即检测乙肝病毒在血液中的含量。定量检测结果主要是对抗病毒治疗提供检测和疗效参考。由于结果是数字的，而不是“高/低”、“阴/阳”、“正常/不正常”，所以看起来比较麻烦。确定正常值指标一定要知道所做实验的参考范围。参考范围因检测仪器、方法、试剂的不同而有差异。
5、“+”：阳性，体内病毒存在复制。对应于定量方式中HBV-DNA>1x10E3 copies/ml。
6、“－”：阴性，病毒的复制程度低于检测限。对应于定量方式中HBV-DNA<1x10E3 copies/ml。
7、定量：HBV-DNA定量单位在报告单上通常用“copies/ml”、“拷贝数/ml”或“IV/ml”表示，表示每毫升的血清或血浆中病毒基因组的个数，该数据越大，表明病毒在人体的复制越厉害，例如“HBV-DNA=4.3x10E3 copies/ml”代表每毫升血清中有4.3乘以10的3次方，也即4300个乙肝病毒。
乙肝病毒DNA检测费用
乙肝患者到医院检查确诊病情或者复查时，都要进行乙肝病毒DNA检测，这一检测项目已经成为观察乙肝病毒实际情况的最重要和最关键的指标，在抗病毒治疗时，也需要进行乙肝DNA病毒检查。 
乙肝病毒DNA检测费用受不同因素的影响而有一定差异。乙肝病毒DNA检测费用大概在100元左右。如果用进口试剂化验定量大约需要150-200元。 
乙肝病毒DNA检测系统技术要求严格，对肝病医院人员，医疗技术，环境有很高的要求，只有正规，具备一定等级的大型医院具备乙肝HBV-DNA检测系统的资格。
检测要空腹吗
单纯检测乙肝病毒DNA时是不需要空腹的，这主要是因为乙肝病毒DNA指的是乙肝病毒的核心物质和病毒复制的基础，是不受饮食、运动以及休息等因素影响的，也就是说进不进食食物是不会直接影响乙肝病毒DNA检测结果准确性的，所以说单纯检测乙肝病毒DNA时是不需要特别注意空腹的。但如果在检测乙肝病毒DNA的同时需检测肝功能、肝脏B超等则应注意空腹检测。