标题：抑制素
简介
抑制素是一种由女性卵巢颗粒细胞及男性睾丸支持细胞分泌的异二聚体蛋白质激素。它选择性抑制卵泡刺激素（FSH）的分泌，对性腺也有局部旁分泌作用。完整的抑制素分子是一个分子量约为32KD的分子，由两个不同的亚单位（a亚单位和b亚单位）经二硫键连接而成。卵泡液和血清中也可以发现a亚单位。此外，游离的a亚单位与b亚单位没有生物活性。
DSL的二聚体抑制素BELISA使用一对高度特异的抗体，仅与有功能的抑制素B分子特异性结合，不检测体液中的游离a亚单位。
抑制素B由a亚单位和bB亚单位组成。抑制素B的主要作用是通过对FSH的负反馈作用调节配子发育。几种已发表的报告均表明，抑制素B可作为一种内分泌标记物，通过对它的检测，可以监测男性或女性的性腺功能。
检测原理
DSL-10-84100ACTIVE®InhibinBELISA试剂盒使用酶增强“双位点”“两步”双抗体夹心免疫测定法。在实验中，标准品、质控及待测血清样本都在包被有抗抑制素bB亚单位抗体的微孔板中孵育。孵育及洗板之后，所有孔都加入生物素标记的抗抑制素a亚单位的检测抗体。再孵育及洗板之后，所有孔加入链霉和素-辣根过氧化物酶结合物。第三次孵育及洗板之后，加入TMB底物孵育。之后加入终止液，最后用双波长、在450nm及620nm处测吸光度。测得的吸光度与抑制素B的浓度成正比。标准品用于描绘吸光度的标准曲线，待测抑制素B的浓度可从此曲线中读出。
试剂运用
试剂准备1.洗液：在100ml浓缩洗液中加入900ml去离子水稀释。室温密封情况下可保存1个月。
2.微孔板：选择实验所需的板条数。剩余不用的部分随同干燥剂密封放回原袋。试剂组成1.包被有抗抑制素bB亚单位抗体的微孔板（Anti-InhibinB-CoatedMicrotitrationStrips）：96孔，2-8&ordm;C下密封保存。
2.标准品A/样本稀释液（InhibinBStandardA/SampleDiluent）：2ml×1瓶，胎牛血清，含0pg/mL二聚体抑制素B。使用前2-8&ordm;C下保存。打开后2-8&ordm;C下可保存2周。于-20&ordm;C可长期保存。
3.标准品B-G（InhibinBStandardsB-G）：1ml×6瓶，胎牛血清，含二聚体抑制素B的浓度为10,30,100,250,500,1000pg/mL。使用前2-8&ordm;C下保存。打开后2-8&ordm;C下可保存2周。于-20&ordm;C可长期保存。
4.质控（InhibinBControls）：1ml×2瓶，浓度I、II，胎牛血清，含低浓度和高浓度的抑制素A二聚体。使用前2-8&ordm;C下保存。打开后2-8&ordm;C下可保存2周。于-20&ordm;C可长期保存。
5.样本稀释液A（InhibinBSampleBufferA）：10ml×1瓶，2-8&ordm;C下保存。
6.样本稀释液B（InhibinBSampleBufferB）：10ml×1瓶，2-8&ordm;C下保存。
7.抗体-生物素结合物（InhibinBAntibody-BiotinConjugate）（即用型）：10ml×1瓶，含生物素标记的抗抑制素a亚单位抗体。2-8&ordm;C下保存。
8.酶结合物（浓缩）（Streptavidin-EnzymeConjugate）（即用型）：10ml×1瓶，含链霉和素-辣根过氧化物酶结合物。2-8&ordm;C下保存。  “肌肉抑制素前肽”转基因山羊
9.TMB底物溶液（TMBChromogenSolution）：15ml×1瓶，2-8&ordm;C下保存。
10.终止液（StoppingSolution）：15ml×1瓶，为0.2M的硫酸。2-8&ordm;C下保存。
11.浓缩洗液（WashConcentrate）：100ml×1瓶，2-8&ordm;C下保存。操作步骤操作前所有试剂都应平衡至室温(~25&ordm;C)并充分混匀。标准品、质控及待测样本需同时做双份。
1.取出实验所需板条，并记录各孔位置。
2.在对应的孔中加入标准品、质控及待测样本各50ul。
3.每孔加入25ul样本稀释液A。
4.每孔加入25ul样本稀释液B。
5.封板，以300-400rpm速度震荡，室温下过夜（14-18小时）。
6.洗板3次，在吸水纸上拍干。
7.每孔加入50ul抗体-生物素结合物。
8.封板，以500-700rpm速度震荡，室温下孵育1.5小时。
9.洗板6次，在吸水纸上拍干。
10.每孔加入50ul链霉和素-辣根过氧化物酶结合物。
11.封板，以500-700rpm速度震荡，室温下孵育20分钟。
12.洗板6次，洗完最后一次以后，将洗液在孔内停留15分钟再除去。在吸水纸上拍干。
13.在每孔中加入100ulTMB底物溶液。
14.以500-700rpm速度震荡，室温下避光孵育15-30分钟。
15.每孔加入100ul终止液。  生长素抑制素的合成
16.30分钟内在450nm处读数。
注：必须以零标准作空白。如果能做到双波长测定，可在600或620nm处读数，将600（620）nm吸收值从450nm处减去，这样可以减少光学误差。样本收集及保存使用血清样本，静脉穿刺术采集血液。样本于2-8&ordm;C可保存24小时，-20&ordm;C或以下可保存30天。避免反复冻融样本。不应采用溶血或脂血的样本。冰冻的样本在实验前应解冻，并充分混匀。
结果计算
1.计算标准品、质控、待测样本的平均吸光度。
2.使用数据缩减软件，用线/线或对数/对数图分析，根据各不同浓度标准品，以浓度（pg/ml）为X轴，所测得的吸光度为Y轴作标准曲线。通过双孔数据的平均值描绘最佳曲线。
3.在标准曲线上，按质控及待测样本各自的平均吸光度找到相对应的浓度。
4.超过曲线最高浓度的样本应经过0pg/ml的标准品适当稀释后重新实验。
5.低于曲线最低浓度的样本应如实报告。  抑制素a亚基基因PCR-RFLP电泳图谱
6.经过稀释的值需乘以相应的稀释倍数。如果样本的吸光度超出了标准曲线的范围，则此样本可在405nm处第二次读数，再作一条新的标准曲线（方法同上，如能做到双波长测定，则设置600或620nm为双波长值），取值。
临床应用
1.颗粒细胞瘤：颗粒细胞瘤属于卵巢性索间质肿瘤，可在患者体内产生雌二醇，使患者出现不同程度的第二性征的改变，部分患者因此就诊，但至少有30%的颗粒细胞瘤无雌激素活性及明显体征改变，给临床诊断带来困难。近年来的研究表明，颗粒细胞瘤中抑制素较正常值升高数倍或数十倍，且随肿瘤细胞的有无发生明显变化。应用125I标记的纯化牛血清抑制素抗体作为示踪物，以RIA法测定出颗粒细胞瘤患者血清中抑制素的浓度平均为2 831 U/L，高于正常的7倍以上，阳性率为100%。并建议将绝经后妇女血清中抑制素浓度＞3 000 U/L，联合FSH浓度＜5 U/L作为临床可疑颗粒细胞瘤的标准。另外，抑制素还可作为随访的指标之一，预测颗粒细胞瘤有无复发。抑制素很早就可监测到颗粒细胞瘤是否复发。
2.卵巢粘液性癌与其他卵巢上皮性癌：卵巢粘液性癌及交界性粘液性癌尚无有效的肿瘤标记物，临床上常用的CA125、癌胚抗原（CEA）等肿瘤标记物对于粘液性癌的敏感性较低，寻找理想的肿瘤标记物对于临床诊断与追踪粘液性癌有一定意义。专家认为，抑制素在卵巢肿瘤恶性转化的早期阶段就升高。专家研究发现，卵巢粘液性癌分泌抑制素的能力较高，应用CA125检测方法，卵巢粘液性癌阳性率为75%，交界性粘液性癌为11%；应用抑制素检测，对应肿瘤阳性率各为89%、77%，均较前提高。抑制素对于交界性粘液性癌的诊断意义更大，并且在卵巢粘液性癌患者血清中的平均浓度高于其他上皮性恶性肿瘤。对于其他卵巢上皮性肿瘤如浆液性癌、子宫内膜样癌、透明细胞癌、未分化癌等，抑制素的阳性率则低于CA125。对这些肿瘤进行诊断，需要结合血清CA125浓度。联合应用抑制素与CA125可诊断出临床上90%的卵巢上皮性癌患者，在临床上有一定应用价值。因此，检测抑制素亦可作为筛查卵巢上皮性肿瘤的一种辅助方法。 
  人睾丸支持细胞中INH-α样免疫反应
3.卵巢性索间质肿瘤与其他卵巢肿瘤：依靠病理学检查有时难以鉴别卵巢性索间质肿瘤与其他肿瘤如纤维肉瘤、子宫内膜间质肉瘤、部分转移癌等，而抗抑制素染色可以发挥辅助诊断作用。专家研究发现，性索间质肿瘤抗抑制素染色阳性。应用该方法，卵巢颗粒细胞瘤、泡膜细胞瘤、睾丸间质细胞瘤等性索间质肿瘤染色阳性，而其他肿瘤如子宫内膜间质肉瘤、胃肠道转移肉瘤、小细胞癌等染色阴性。而且进一步指出抗抑制素抗体，特别是抗α亚单位抗体在性索间质肿瘤中表现阳性，可以用于排除与性索间质肿瘤类似的其他卵巢病变。但报道的病例较少，尚需积累资料。