标题：乌贼墨
简介
乌贼（Sepia），本名乌鲗，又称花枝、墨斗鱼或墨鱼，属于软体动物门头足纲乌贼目乌贼科，与章鱼和鱿鱼（又称枪乌贼）近缘。乌贼科动物，种类繁多，常见的有：金乌贼（Sepia esculentaHoyle，别名：乌鱼、墨鱼）、虎斑乌贼（SepiapharaonisEhrenberg，别名：花旗、花西、墨姆）、白斑乌贼（Sepia LatimanusQuoy et Gaimard，别名：花斑墨）、拟目乌贼（Sepia LycidasGray、别名：眼墨、花鸡姆、墨公）、罗氏乌贼（SepiarobsoniSasaki）、曼氏无针乌贼（Sepiellamaindronide Rochebrune，别名：日本无针乌贼、花拉子、麻乌贼、墨鱼、目鱼、疴血乌贼、血墨）等。其体内直肠末端膨大部分形成贮存墨的墨囊，乌贼墨主要取自乌贼科动物（曼氏无针乌贼和金乌贼）的墨囊，是乌贼在遇敌时喷出的黑色物质以保护自身安全。[1-2]
乌贼墨作为一种中药，文献上早有记载。《本草拾遗》中有：“腹中墨，主治血刺心痛”。在《本经》中有记载：“可收敛止血，固精止带，制酸定痛， 除湿敛疮”。乌贼墨制剂临床上主要作为止血剂，治疗出血性疾病如：功能性子宫出血、胃出血等。中国海洋药物辞典收录的可做药用的乌贼墨有三种，主要为拟目乌贼（Sepia subaculeata Sasaki）、金乌贼（Sepia esculenta Hoyle）和针乌贼（Sepia andreana Steenstrup），分布于中国福建南部、广东海域，日本海域亦有分布。春至夏季捕捞，捕捞后，取乌贼墨囊，扎紧囊口，晒干或烤干，将墨囊内的墨汁研粉备用。通常乌贼墨会作为废弃物被扔掉，自从日本学者发现其抗肿瘤活性后，乌贼墨的研究逐渐与日俱增，很多日本食品企业也开始将乌贼墨用于食品中。[3-4]
理化性质
乌贼墨是由墨囊中的分泌腺合成，在墨囊中储存，遇敌时通过直肠经肛门喷出。墨囊是一个非常发达的直肠盲囊，位于内脏团的后腹侧，前端为一细长的管子，即墨囊管，在近肛门处与直肠相通，开口附近有两组环形的括约肌。因墨囊内储存的墨汁多少不定，故其形状和大小变化较大。对金乌贼而言，可重达50g。墨腺位于墨囊底部，构成墨囊壁的一部分。墨囊的腺体部分有两类上皮细胞：一类是柱状的典型的腺细胞，含有黑色素颗粒;另一类位于腺体的颈部，高柱状，极少或不含黑色素。乌贼墨的合成是从酪氨酸开始，生成多巴，直到合成真正的黑色素。墨腺中有非常细的白色纤维，纵横交错，集结着黑色、兰色、茶色、金色等各种色素，以及丰富的岩藻糖（Fuc）、葡萄糖醛酸（Ga1NAc）及半乳糖（GlcA）等各种糖转移酶的含量也很丰富。故该腺体是合成黑色素及蛋白多糖复合体的加工厂。[5]  高效液相检测乌贼墨酶解物寡肽纯度检测[6]
不同种类的乌贼墨的含量不同，其干重的变化范围约为1-10g，约占乌贼全部体重的1.28%。研究发现，墨汁是由肉眼看不到的黑色颗粒构成的粘稠状的混悬液，在每mL墨汁中约有200mg颗粒即20%（W/V），乌贼墨颗粒成球型，直径变化较大，在90-250nm之间。新鲜的乌贼墨中，含有水、色素、蛋白质、糖类、脂类等成分，其组成比例约为75：15.5：6.3：3.0：0.2，黑色颗粒有两层结构，高密度的内核和低密度的外壳，内核就是所谓的乌贼墨黑色素，外核部分可能是连接在黑色素上的蛋白多糖复合物。黑色素是吲哚醌的聚合物，与蛋白结合或不与蛋白结合。Nicolaus等对纯化后的乌贼墨黑色素进行了分析，认为乌贼墨黑色素是吲哚-5，6-醌（Ⅰ）与2-羧基吲哚-5，6-醌（Ⅱ）的共聚物。通过酪氨酸在酪氨酸酶的作用下形成多巴醌，进一步氧化，经多巴色素、5，6-二羟基吲哚、黑素原色素，最后形成的。日本有关研究人员运用生化分离技术对乌贼墨的蛋白多糖复合体进行分析，从中分离出一组抗肿瘤活性的肽聚糖，分别是：SIPG02-A、SIPG02-B、SIPG02-C。从化学组成上看，SIPG02-A和SIPG02-B比SIPG02-C有更多的糖组分，但用Actinase E消化后在乙酸纤维膜电泳中只显示一个区带，说明这三种肽聚糖中只有一种多糖链并被连到一种肽上，其重复结构为（-6GaINAca1-GIcAβ1-3Fucα1-）n，只是聚合度不同。糖类部分主要含有等分子质量的葡萄糖酸（GlcA）、N-乙酰半乳糖胺、墨色藻糖（Fuc）。多糖部分本身无抗肿瘤活性，这表明其抗肿瘤活性来自多糖同其他组分的复合体，如肽聚糖和色素。肽链部分主要的氨基酸为：天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、丙氨酸。[7-9]
乌贼墨中有丰富的酶系，有学者从中检测到酪氨酸酶，壳多糖酶，β-N-乙酰己糖胺酶及一种可以催化多巴色素重排的黑色素酶的活性。而日本有关研究人员运用生化分离技术，从乌贼墨中分离出一组具有抗肿瘤活性的肽聚糖：SIPG02-A，SIPG02-B，SIPG02-C。多糖链为带有分支结构的糖胺聚糖（GAG），主链为葡萄糖醛酸-海藻糖（GlcA-Fuc）二糖单元的串联重复，N-乙酰半乳糖胺（GalNAc）分支于海藻糖，完整的三糖重复单元为[-3GlcAβ1-4（GalNAcα1-3）Fucα1-] n。多糖部分本身无抗肿瘤活性，起作用的可能是多糖和蛋白的结合物。[10-13]  乌贼墨色素重排反应式[14]
雷敏对乌贼墨汁的一般成分的测定结果为：粗蛋白17.3%，粗脂肪1.7%，灰分2.5%，水分76.5%，其它11%。郑高利、吕昌龙等对乌贼墨灰分中金属元素（包括微量元素）的含量进行了测定，结果显示乌贼墨中含有铝、钙、镉、钴、铜、铁、锗、钾、锂、镁、锰、钠、锶、钡、锌等21种微量元素，其中镁、钠、铁、锌、钙和锶等元素的含量较高。[6][15-16]
乌贼墨不溶于水， 是一种吲哚醌类物质，化学性质非常稳定，在许多有机溶剂，如乙醇、乙醚、氯仿和强酸中仍保持颗粒状态，但可溶于二氯乙醇、二乙胺和碱性溶液;对许多物理、化学处理，如加热、超声波处理耐受性极强。在乙醚、酒精、氯仿等有机溶剂和强酸中仍保持颗粒状态。但乌贼墨可溶于二甲基亚砜，二氯乙醇和碱性溶液，而在酸性环境下又产生沉淀。[5]
药理作用
抗肿瘤活性20世纪90年代初，日本研究人员通过动物实验证明乌贼墨可明显抑制甚至消除大鼠的移植纤维恶性肿瘤，同时认为这不是因为乌贼墨直接作用于癌细胞，而是通过提高免疫力而杀死癌细胞。吕昌龙等观察了经口服乌贼墨对小鼠移植瘤的生长抑制作用，结果发现乌贼墨对MethA和S180两种肉瘤的生长有明显的抑制作用，抑制率分别为95.48%和73.91%;并且还可在一定程度上抑制移植瘤的形成，两个组分别有67 %（6/9）和50%（5/10）的小鼠未形成肿瘤。黄枚对乌贼墨抑瘤作用的研究表明，高、中、低剂量的乌贼墨对荷人肝癌HHC15裸小鼠瘤重抑制率分别为82.2%、70.1%与35.5%（P<0.05），并呈明显的剂量依赖关系。赫甡等应用成纤维细胞增殖实验检测乌贼墨诱导巨噬细胞产生白细胞介素-1（IL-1）的生物学活性，结果显示乌贼墨能诱导BALB/C鼠巨噬细胞产生IL-1，且分泌活性较强，与对照组比较有显著性差异，在48h分泌活性最高。此结果表明，乌贼墨对巨噬细胞有较强的刺激作用，使巨噬细胞活化成为效应细胞，参与抗肿瘤免疫。[17-20]  零/一般/高剂量乌贼墨治疗肿瘤细胞[21]
谢光麟等通过研究乌贼墨对小鼠脾细胞天然杀伤（NK）细胞活性的诱生作用，证明乌贼墨能增强BALB/C小鼠NK细胞杀伤活性，活化的NK细胞合成和分泌多种细胞因子，直接抑制肿瘤细胞分化增殖。同时乌贼墨还可使S180和MethA荷瘤鼠NK细胞杀伤活性增强，瘤体缩小。NK细胞表面有IL-2亲和性受体，IL-2可诱导NK细胞的活化和分化，并且IL-2能够活化肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）。赫甡等通过MTT比色法检测出经乌贼墨诱导的小鼠IL-2分泌活性显著增高，这提示了乌贼墨致使NK细胞抗肿瘤的作用机制。王群等则证明，乌贼墨可显著提高干扰素-γ（IFN-γ）水平。IFN-γ主要由活化的T细胞和NK细胞产生，同时又是NK细胞的活性激活剂，可增强NK细胞杀伤活性，充分激活单核-巨噬细胞。同时他们的研究也显示了乌贼墨对淋巴因子激活杀伤细胞（LAK）细胞活性的激活作用。[22-24]
除上述巨噬细胞和NK细胞为主体的抗肿瘤细胞免疫外，红细胞免疫也参与了乌贼墨的抗肿瘤免疫作用。刘成玉等检测了乌贼墨对正常人和肿瘤患者红细胞C3b受体活性及红细胞免疫黏附肿瘤细胞能力的影响。结果显示，乌贼墨对正常人和肿瘤患者红细胞具有激活红细胞C3b受体活性和增强红细胞免疫黏附肿瘤细胞能力的作用，这种作用是通过激活红细胞C3b受体而完成的。乌贼墨对红细胞C3b受体激活的机制可能是乌贼墨中的多糖类物质与红细胞膜C3b受体巯基和淋巴细胞相关抗原3（LAF-3）结合，引起C3b受体变构，增加C3b受体的集簇分布，提高其活性。红细胞C3b受体活性增强，不仅使其本身免疫黏附肿瘤细胞能力增强，而且还增加了白细胞对肿瘤细胞的免疫黏附和杀伤作用，这对防止肿瘤细胞的血行和淋巴结转移具有重要作用。乌贼墨还可以从整体上提升细胞免疫的作用。谢光麟等经口给小鼠服用乌贼墨，检测乌贼墨对小鼠骨髓细胞的影响。结果证明乌贼墨能诱生BALB/C小鼠骨髓细胞产生多重集落刺激因子，促进骨髓细胞体外增殖形成集落。多重集落刺激因子能刺激多能干细胞和多种祖细胞的增殖与分化，促进血液中的粒细胞、单核细胞及组织中的巨噬细胞增加，从而发挥抗肿瘤作用。[25-26]
蛋白激酶是一种磷酸转移酶，与细胞内信使系统有着密切的联系，其中尤以酪氨酸蛋白激酶（TPK）、蛋白激酶C（PKC）和蛋白激酶A（PKA）最为重要。PKA与细胞分化性增殖有关，而PKC和TPK则与去分化性增殖有关，PKA、PKC在Ras MAPK信号传导系统中起正、负调节作用。侯雪云等利用γ-32P-ATP作为反应启动剂搀入外源性底物的方法测定乌贼墨对H22癌细胞TPK、PKC及PKA活性的影响，结果发现：癌细胞TPK活性显著升高且以质膜TPK活性升高最显著，PKC活性显著升高且以胞核PKC升高最明显，胞质内PKA活性升高（可能是代偿性升高）。经乌贼墨作用后，癌细胞TPK活性及PKC活性均显著下降，胞质PKA活性却继续明显升高，抑制了Ras MAPK信号传导作用，表明乌贼墨可能属于蛋白激酶抑制剂类物质。提示乌贼墨的抗肿瘤机制之一可能是逆转癌细胞TPK、PKC和PKA活性的异常改变，引起Ras MAPK信号传导系统抑制，使癌细胞由去分化性增殖向分化性增殖转变，产生抗癌促分化作用。c-fos和c-jun基因均为核内基因，属早期反应基因，调节基因转录、细胞分裂、分化及增殖。在静止细胞中，如受到有丝分裂原的刺激，能瞬时性地增强表达，它们的表达受许多信号系统的调节，特别是受Ca2+水平变化的影响。王成斌等用乌贼墨给小鼠灌胃后，利用Fura 2/AM荧光探针标记、免疫组织化学及生化方法，测定H22癌细胞内Ca2+水平、核膜Ca2+/Mg2+-ATP酶活性及c-jun和c-fos表达的变化，结果表明：Ca2+水平随给药剂量的增加而明显下降，与对照组相比，两种剂量的乌贼墨分别使Ca2+水平下降了69.4%和78.6%，差异有高度显著性。Ca2+水平的降低会影响到细胞核上Ca2+依赖性Ca2+/Mg2+-ATP酶的活性，经检测两种剂量的乌贼墨使酶的活性分别下降了21%和37%，从而减少了Ca2+向细胞核内的转运，减弱了Ca2+对c-fos及c-jun表达的促进作用，抑制了细胞的分裂增殖。[21][27-28]
血液活性据中国海洋药物辞典记载，乌贼墨有止血、调经之功效，主治功能性子宫出血，咳血、月经过多等症，用量1-2克，日服2次。唐代陈藏器的《本草拾遗》中便记载了乌贼墨有“主血刺心痛”的作用。现代临床证明它是一种良好的全身性止血药，对妇科、外科、内科等多种出血效果显著，且无副作用。例如，对子宫出血、肺结核咳血，消化道溃疡及炎症等引起的出血效果良好，对子宫出血、尿血、肺癌咳血、宫颈癌出血等也有不同程度的疗效。0例以上子宫出血患者，口服乌贼墨后，67.5%的患者得到近期控制（开始服药后5～7d流血停止，42.1%的患者经一个或几个周期的治疗后获得治愈（服药后5～7d流血停止，停药后3个月未复发）。这说明乌贼墨不仅可以止血，而且有可能通过有效地控制出血使全身机能状况改善，调动机体自身调节功能，使功能恢复正常。观察10例由于溃疡病、胃炎等引起的出血，用乌贼墨治疗，治愈率为100%。用安络血、维生素K和对氨甲基苯甲酸（PAMBA）肌肉注射或静脉注射的对照组虽也全部治愈，但不如乌贼墨见效快，乌贼墨平均止血天数为5.8d，对照组为8.6d。口服乌贼墨治疗肺结核咯血，18例中浸润型肺结核13例，空洞型肺结核5例，总有效率为67%，平均止血天数为6.8d。对长期小量咯血者效果明显，但对大量咯血者效果不明显。对支气管扩张咯血、鼻出血、尿血、肺癌咯血、宫颈癌出血等也有一定的疗效。[3][29-30]
谢光临等证明，乌贼墨可缩短小鼠的凝血时间，使兔血清中纤溶酶活性明显降低，但对兔血小板数量无影响。因此，乌贼墨的止血作用机制可能是通过抑制纤溶酶的活性，导致纤维蛋白溶解减少，从而促进凝血，其凝血作用可能与乌贼墨中铁和钙的含量较高有关。[31-32]
乌贼墨具有升高白细胞的作用，在给小鼠连续二天腹腔注射环磷酰胺（50mg/kg）后，造成外周血白细胞急剧下降模型，治疗组用含有乌贼墨的饲料，观察其外周血白细胞数（WBC）。结果表明：食用含墨饲料的治疗组的白细胞回升较快，提前回升到正常范围内，15-20天时分别高于对照组24.02%和29.02%，并较对照组提前5天恢复原有正常水平。对照组注射环磷酰胺后Hb略有下降，实验组添加乌贼墨后对Hb无影响，治疗组与对照组实验前后体重无明显差异。提示乌贼墨有显著促使环磷酰胺所致白细胞降低的回升作用。王光等人研究发现乌贼墨多糖可以显著提升化疗损伤小鼠的脾脏指数和脾脏组织的抗氧化能力，治疗组小鼠的脾脏SOD活性显著增加，MDA含量明显下降，同时对环磷酰胺引起的骨髓DNA含量下降有明显的提升作用，提示乌贼墨对造血功能的影响能是通过增加脾脏组织的抗氧化机能，保护造血系统免受化疗药物影响，缓解化疗药物对骨髓的抑制而其作用。另据逄龙等研究表明，乌贼墨制品能够促进骨髓造血，其作用途径可能通过调节机体的免疫机能，诱导产生多种细胞因子，促进造血干细胞、粒单系祖细胞的增殖，并向粒系分化，促进小鼠的粒系造血。[33-35]
抗菌活性日本学者指出在一种腌制发酵的鱿鱼产品中加乌贼墨能明显改善该产品的保存性能。添加了乌贼墨的鱿鱼化学变化缓慢，在成熟期也显示出微生态环境的显著性差异，贮存期延长。Yamanaka等也对乌贼墨的抗菌活性进行了报道，鱿鱼肉在保存时添加3%的乌贼墨后，其TVB-N 的含量较没有加乌贼墨的对照组低，贮藏期明显延长。杜铁平等从乌贼墨中提取到一种浅黄色吸湿粉末，经实验证实其对金黄色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus Rosenbach）、大肠杆菌（Esaherichia coli）有抑菌作用，对该产物进行了溶菌酶活性检测，结果显示其并不具有溶菌酶活性，其抑菌机理尚需进一步探讨。对乌贼墨多糖的研究中发现使用乌贼墨多糖浸泡后的小鱿鱼，在冷藏期间保质期明显变长，pH值、菌落总数、挥发性盐基氮和感官评分均较空白组有明显变好，可见乌贼墨多糖具有一定的保鲜效果。不过研究乌贼墨抗肿瘤作用时，对其种类及提取条件并未严格限制，不同海域乌贼墨的成分及作用是否相同、不同种类的乌贼墨抗肿瘤活性是否相同、乌贼墨粗提物和纯化产物的抗肿瘤及免疫调节作用有无差异等尚待进一步深入研究。[14][36-38]
乌贼墨提取物抑菌情况(4张)乌贼墨提取物抑菌情况效果图及显微镜图片。[39-40]
抗氧化作用电离辐射对生物机体的损伤除直接作用于细胞外，主要通过间接作用诱导产生超氧阴离子自由基、羟自由基等活性氧自由基。而活性氧自由基是辐射损伤细胞和组织的重要因素，可引起细胞内DNA 的氧化、断裂或碱基错配等现象，并诱发细胞凋亡。陈士国等研究表明，乌贼墨中的黑色素具有抵抗光氧化危害的重要功能，起着类似于超氧化物歧化酶的作用，能够催化O-2转变为H2O2和O2，从而起到抵抗光氧化的作用。张永军等研究复方乌贼墨胶囊对小鼠SOD活性的影响，结果显示：老龄小鼠三个剂量组血清、肝脏和肾脏中SOD活性均较对照组有显著增高并呈良好的剂量效应关系;幼龄组小鼠两个剂量组的血清中SOD活性较对照组明显增高并有剂量效应关系，肝脏和肾脏中SOD活性在高剂量组时较对照组增高。此结果表明，复方乌贼墨胶囊能增强血清和组织中SOD活性，对老龄机体效果尤佳。王光等人在研究乌贼墨是同样发现了乌贼墨可以提升化疗损伤小鼠肝脏、脾脏、心肌和脑组织中的SOD 活性，降低其MDA 含量，提示乌贼墨对化疗小鼠的保护作用可能与增加脏器组织的抗氧化能力有关。[41-43]