标题：重组乙型肝炎疫苗
基本信息
重组乙型肝炎疫苗
拼音名：Chongzu Yixingganyan Yimiao
英文名：Recombinant Hepatitis B Vaccine
书页号：2000年版二部-1114
批准文号：国药准字S20100002
药物用法
(1)本疫苗注射时要充分摇匀。
(2)注射部位为上臂三角肌肌内。
(3)新生儿第1针在出生后24小时内注射，1个月及6个月后注射第2、3针;其他人群免疫程序为第0、1、6个月，剂量均为5ug/支。
制备及注意事项
【制法】取国家批准的重组酵母乙型肝炎疫苗的原始菌种，经一代扩增，制成生产菌种，逐级扩增后接种于发酵罐，在适宜温度和时间内进行三级发酵，收集细胞，经破碎，吸附粗提，疏水色谱法精提乙型肝炎表面抗原，再经硫氰酸盐处理，除菌滤过，甲醛灭活，氢氧化铝吸附等，加入硫柳汞作为防腐剂。
取国家批准的重组CHO乙型肝炎疫苗的细胞株，用静置培养或旋转法培养细胞，当乙型肝炎表面抗原的分泌量达到每1.0mg/L时，收获培养液，经硫酸铵盐析，2～3次密度梯度离心和色谱法纯化后，再经浓缩，除菌滤过，甲醛灭活，氢氧化铝吸附等，加硫柳汞作为防腐剂，分装制成。
【鉴别】取本品，照《中国生物制品规程》酶联免疫吸附法，与已知乙型肝炎表面抗体确证其为乙型肝炎表面抗原。
【检查】照《中国生物制品规程》规定的方法检查如下项目。
纯度 不得低于98%。
氢氧化铝 每1ml不得过1mg。
硫柳汞 不得过0.01%。
甲醛 不得过0.01%。
异常毒性 取本品，依法检查，应符合规定。
热原 取本品，依法检查，应符合规定。
无菌 取本品，用直接接种法检查，应符合规定。
【效价测定】取本品，照《中国生物制品规程》测定，应符合规定。
酵母乙型肝炎疫苗的ED50不得过1.5μg。体外相对效力试验抗原含量与参比苗的抗原比值不低于0.5。
CHO乙型肝炎疫苗的ED50与参比苗的ED50比值不低于1.0。
【类别】亚单位疫苗。
【规格】酵母乙型肝炎疫苗 0.5ml:5μg
CHO乙型肝炎疫苗 1ml:10μg
【贮藏与效期】在2～8℃的暗处保存。有效期2年。
重组乙型肝炎疫苗的种类及生产现状
血源乙肝疫苗经过十年上亿人份人群接种，证明具有良好的安全性的免疫原性，但存在对生产者和献血者健康有潜在危险性，生产成本高等缺陷，我国已经完成同重组乙肝疫苗对血源疫苗的替代工作。
目前重组乙肝疫苗主要分为酵母，（酿酒酵母和甲基营养型酵母）以及中国仓鼠卵巢细胞（Chinese Hamster Ovary cell,CHO）表达疫苗。
（一） 酿酒酵母酿酒酵母（Saccharomyces cervisae） 
1982年Valenzuela首先在酿酒酵母中成功表达乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg），1986年9月美国默克公司的重级酵母乙肝疫苗首次取得专利并得到美国FDA的批准。1989年7月比利时史克比成公司的另一重组酵母乙肝炎疫苗也取得专利。目前重组酵母乙肝疫苗的生产厂家除默克公司，史克公司外，我国北京天坛生物，深圳康泰公司也大量生产该种疫苗。其优点为：酵母为低等真核微生物，易于在营养成份简单的培养基中高密中发酵培养，利用工业化生产，表达量高，目前世界上大规模生产和上市的疫苗大多数由该表达系统制备而成。
（二） 甲基营养型酵母共有4种表达系统。甲基营养型酵母生产HbsAg具有培养基廉价，目的基因与酵母染色整合的优点， 不仅可克服质粒丢失，还可提高表达量。汉逊酵母（Hansenula Polymorpha，H.P.）和毕赤酵母（Pichia Pastoris，P.P.）系统已应用于工业化生产。已上市的酿酒酵母和甲基营养型酵母表达乙肝疫苗为含HbsAg成份的疫苗。
（三） CHO疫苗
国产酵母乙肝疫苗的效果
研究证明：国产血源乙肝疫苗的保护效果至少维持9-10年，国产重组乙肝疫苗（主要为酵母疫苗）的免疫效果和免疫持久性如何，是人们关心的重点。因为乙肝病毒缺乏易感动物模型，乙肝疫苗的免疫效果考核只能应用人体考核来评价，既往研究证明应用乙肝苗阻断HbsAg、HbeAg双阳性母亲的新一儿传播HBV是评价乙肝疫苗的效力的最直接指标，且1-10岁儿童对乙肝疫苗反应较好。我们选择新生儿和儿童作为疫苗考核对象，进行国产酵母乙肝疫苗的免疫效果和持久性研究。阶段结果报告如下：
免疫效果新生儿：
（1） 母婴传播阻断保护率：应用6批国产量5 μg酵母疫苗对163例HbsAg，HbeAg双阳性母亲的新生儿进行母婴传播阻碍断效果考核，结果保护率在81.48-92.07%之间，远高于文献报道的10 μg（59.2%）和20 μg（74.3%）血源乙肝疫苗,与30 μg血源乙肝疫苗的保护率(85.1%)相当,而进口5 μg M苗(46例,)10 μgA苗(58例)和10 μg S酵母疫苗(30例)的保护率分别为90.33%、86.59%和92.58%。表明国产酵母疫苗免疫效果达到国外同类产品和30 μg国产血源乙肝疫苗的保护水平。 
（2） 抗体GMT：未发现第一针免后3、9、12月时，HbsAg、HbeAg双阳性孕妇所生新生儿的抗体GMT与HbsAg单阳性及健康孕妇所生新生儿抗体GMT有显著差异。 
小学生： 
（1） 抗体阳性率：第一针免后1年时，进口酶母疫苗，国产酵母疫苗和国产CHO疫苗抗体阳性率在第一针免疫后3、9、12月均无显著差异。 
（2） 抗体CMT比较：第一针免后一年时，进口酶母疫苗（10 μg）和国产CHO疫苗（10 μg）抗体GMT峰值较高，国产酵母疫苗（5 μg）较低。
免疫持久性对应用0、1、6月程序免疫的小学生进行了随访观察。随访年及3年时，2批国产酵母疫苗具有保护性抗体（10mIU/ml）的阳转率分别为81.48%；68.66%和92.11%；74.14%，而进口A和M疫苗分别为90.38%；69.56%和93.10%；78.05%。2批国产酵母疫苗抗体GMT分别为123.99；146.10和92.11；83.52，A和M疫苗分别为120.56；67.07和145.75；74.62。 
对应用0、1、2月程序免疫的400名小学生进行了免后4年的随访观察，结果3批国产酵产疫苗阳性率分别为87.50%；77.33%；79.49%，而对照M（5 μg）疫苗为91.89,抗体GMT分别为：65.57；71.40；59.20和74.84。由抗体峰值6月至4年时，3批国产疫苗抗体阴转率分别为7.2；5.26和13.79%，对照M苗为5.17%。无论抗体阳性一率，抗体GMT以及4年抗体阴转率，3批国产疫苗和M苗间增无显著差异。 
我们最近随该结果表明，2批国产酵母乙肝疫苗免后5年时抗体阳性率已降至70%以下，而同期血源乙肝抗体阳性率在81-69%之间。 
结果表明：国产酵母重组乙肝疫苗的近期免疫效果达到了进口酵疫苗的免疫水平，但抗体阳性率和抗体GMT下降较快，考虑当前乙肝疫苗供应充足，酵母疫苗的加强接种应提到议事日程。
乙肝疫苗的发展
（一）联合疫苗： 
联合疫苗具有减少注射针次、接种副反应及提高接种覆盖率的优点。已上市的联合疫苗如SB公司的百白破-乙肝四联疫苗、甲-乙肝联合疫苗，MSD公司的流感嗜血杆菌乙型肝炎偶联疫苗等。我国全细胞百白破-乙肝四联疫苗和无细胞百白破-乙肝四联疫苗已完成临床前研究，甲-乙肝联合疫苗的开发研究制也在进行。 
（二）治疗性疫苗 
1） 现有疫苗增加前S基因或替换现有铝佐剂 
研究开发植物来源、细胞因子、人工合成和可生物降解的高分子聚合物等佐剂，目的在于提高细胞免疫效果，国外已有制品进行临床研究。 
2） DNA疫苗：可以肌肉细胞内表达乙肝表面抗菌原，诱导细胞免疫应答，同时具有长期表达抗原，可减少加强免疫及成本低，储存方便的特点。 
3） 增大剂量酵母疫苗（10 μg/支）的生产：
我国现阶段生产和使用的酵母乙肝疫苗均为5 μg/支，由于以下原因：①、实际应用反映5 μg酵母疫苗的抗体阳性率和滴度较低。②、我们对接种5 μg疫苗的120例成人进行检测，发现免后抗体阳性率和滴度较低，第二针免后1个月时抗体阳性率为70.00%，抗体GMT为9.83；完成全程免疫后1个月时抗体阳性率为80.77%，抗体GMT为151.46。③、MSD疫苗成人剂量为10 μg/支。目前国内正进行10 μg疫苗的临床考核。此外还应结合临床（血透析，肾脏移植等）和实际需要，生产不同剂量的乙肝疫苗。 
（三）对现有疫苗生产线的生产能力进一步开发，以及研制高表达量的新一代重组乙肝疫苗，以降低成本，提高疫苗的覆盖率。
（四）加强疫苗保护机制和免疫持久性的研究。
新生儿打乙肝疫苗注意事项
所有的孕妇在早期产前检查时应常规检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)。乙型肝炎表面抗原阳性的孕妇应在妊娠后期再查乙型肝炎e抗原(HBeAg)。如果乙型肝炎表面抗原为阳性，在分娩前就要准备好乙肝疫苗。同时要问清楚婴儿出生后能否在24小时内进行疫苗注射，第2针和第3针在什么地方注射等问题。
乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎e抗原(HBeAg)双阳性母亲的婴儿，如无异常，应在出生后6—12小时内肌内注射1支高效价乙肝免疫球蛋白，生后1个月再注射1支高效价乙肝免疫球蛋白(≥100单位/毫升)。2、3、6月龄时各注射1支20微克的乙肝疫苗。
乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性而乙型肝炎e抗原(HBeAg)阴性母亲所生新生儿，应在0(出生后24小时内)、1、6个月龄分别以10微克、10微克、10微克的剂量接种乙肝疫苗。在不具备检查乙型肝炎e抗原(HBeAg)条件的地区，对乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性母亲的新生儿，均应按双阳性者接种疫苗。
不具备检查乙型肝炎表面抗原(HBsAg)条件的地区，应对所有新生儿在0、1、6月龄分别以10微克、10微克、10微克的剂量接种疫苗。