标题：电化学发光免疫分析法检测血浆C肽的临床评价
基本信息
作者：吴晓珺,李琳
作者单位：武汉市普爱医院、武汉市第一医院
来源：医学期刊 / 医药科学综合   
写作目的
探讨电化学发光免疫分析法(ECLIA)测定血浆C肽的效果及临床应用价值。方法：采用电化学发光免疫分析法和酶联免疫分析法(ELISA)分别测定糖尿病病人的血浆C肽含量,并用电化学发光免疫分析法同时测定胰岛素含量,并对测定结果通过SPSS统计软件进行相关统计分析。结果：ECLIA测定C肽的平均批内与批间变异系数分别为2.13 %,4.27 % ,平均回收率是98.9 %,灵敏度为0.01 ng/mL; ELISA法的平均批内与批间变异系数分别为10.8 %,16.5 %,平均回收率是91.9 %,灵敏度为0.06 ng/mL; ECLIA 及ELISA 法所测C肽含量与ECL IA法所测胰岛素含量均呈正相关( r = 0. 96, r =0.89 , P 均< 0. 05) 。结论：ECLIA 法测C肽的各技术参数优于ELISA 法,且操作简便,检测速度快,具有重要临床应用价值。
英文翻译
Clinical Evaluation of Electro Chemiluminescence Immunoassay for Determination of C-Peptide in Plasma
WU Xiao-jun ,LI  Lin
(The Puai Hospital of Wuhan,Wuhan,HuBei  430030, China)
Abstract: Objective To evaluate the clinical effectiveness of the detection of Connecting Peptide (C-Peptide) in plasma by electro chemiluminescence immunoassay (ECLIA). Methods Plasma C-Peptide of diabetic patients was detected by ECLIA and enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). Insulin was measured by ECLIA simultaneously. Using SPSS software for analysis. Results The coefficient of variations (CVs) of within run and between run of ECLIA was2.13 %, 4.27 
%respectively, while that of ELISA was 10.8 % and 16.5 %. The limit of detection of ECLIA was 0.01 ng/mL and ELISA was 0.06ng/mL.The average rate of recovery of ECLIA was 98.9 % and ELISA was 91.9 %. The concentration of plasma c-peptide measured by both ECLIA and ELISA was positively correlated with insulin (r = 0.96, r = 0.89, P < 0.05). Conclusion All the technical parameters of ECLIA in measuring C-Peptide are more efficient than those of ELISA. This method is important valuable for clinical application because it is easy and quick to do.
Key words: C- Peptide; ECLIA; ELISA
方法介绍
C肽（Connecting Peptide，CP）又称连接肽，与胰岛素都是由胰岛β细胞分泌，并从胰岛素原分裂而成的等克分子肽类物质。其在体内清除率慢，几乎不被肝脏所摄取，且不受外源型胰岛素影响。因此，外周血中浓度较高，较稳定，故能较准确的反应胰岛β细胞的功能，用以指导临床的诊断、治疗及预后的评价。C肽测定方法多种多样,包括酶联免疫分析(Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay ,ELISA)、放射免疫分析(Radio Immunoassay，RIA)、电化学发光免疫分析(Electro Chemiluminescence Immunoassay，ECLIA)法等。本研究旨在对电化学发光免疫法测定C肽进行初步临床评价,以探讨ECL IA 的临床应用价值。1  材料与方法1.1  试剂与仪器   
全自动电化学发光免疫分析仪为瑞士Roche公司的Elecsys 2010，C肽测定用配套试剂和配套定标品。酶联免疫分析法的试剂盒为北京尚柏生物医学技术有限公司产品，测量仪器为芬兰的MK2型酶标仪。质控品为美国BIO-RAD公司的免疫分析质控品。
1.2  标本   
80例标本采自确诊的糖尿病病人,男48例,女32 例,年龄42岁～71岁,平均年龄57岁。病人均无肝肾等急慢性疾患,未用胰岛素治疗,口服降糖药物治疗者停药3 d后采血。将血浆置于-20℃冰箱待测。
1.3  方法   
严格按试剂盒说明书操作,用配套试剂测定质控品,数值在标定值允许范围内。按文献[1,2]继续做精密度测试,线性试验,相关性试验,回收试验等评价试验。2   结果2.1 精密度试验    
取病人高、中、低3个浓度的标本,每个浓度分10 份检测,计算批内误差。结果ECLIA法所测批内平均变异系数(CV)=2.13 %, ELISA法所测批内平均CV=10.8 %;用高、中、低3个浓度标本3次独立试验测定,每次10 份,计算批间误差。ECLIA法所测平均批间CV=4.27 %, ELISA法所测平均批间CV=16.5 %。
2.2 线性试验   
用通用稀释液按1: 1、1: 2、1: 4、1: 8的比例稀释高值质控血清,分别用ECL IA和ELISA法测定,将测定值连成直线, ECLIA法与标准曲线的线性关系好于ELISA法。
2.3 相关性试验  
分别用ECLIA 法和ELISA 法检测, 标本C肽含量为(2.7±1.1)ng/ ml 和(2.9±1.8)ng/ml,结果进行相关分析。用SPSS 软件包进行相关性分析, 结果相关系数r= 0.987回归方程为YECLIA =1.13X ELISA－0.16, P <0.05，显示两种方法具有良好的相关性。
2.4 回收试验   
取病人低、中、高3组定值血浆,检测3次回收率,回收率= (实测值－原血清值)/加入值×100 %,ECLIA法分别为98.4 %,101.0 %, 97.4 % ,平均98.9%。ELISA法分别为90.4 %,95.0 %, 90.2 % ,平均91.9 %。
2.5 灵敏度试验    
取定值质控血清分20份平行测定,计算均数和标准差,用均数减去2倍标准差值即为最小可测量, ECL IA法的值为0.01 ng/ml, ELISA法的值为0.06 ng/ml。
2.6 两种方法所测C肽含量与胰岛素的相关性  
将所有标本同时用ECLIA法测胰岛素含量为(12.5±10.4) mU/L,并与ECL IA和ELISA法测得C肽含量进行相关分析。ECL IA 法测得C肽与胰岛素的相关系数是0.96,ELISA法测得C肽与胰岛素的相关系数是0.89 ,两相关系数的差别无统计学意义。3  讨论C肽是含31个氨基酸的多肽,它和胰岛素的A、B链组成胰岛素原,是A、B链的连接链,在胰岛素原分子的折叠、二硫键的正确配对中起重要作用。C肽与胰岛素共同存在于同一颗粒囊内最终以等分子分泌。C肽不通过肝脏酶的代谢,而主要经过肾脏消除,其消除速率慢,半衰期为20 min。C肽最初被认为是无生物活性的,开始仅用于与胰岛素结合起来判断胰岛β细胞功能,目前认为[3]C肽是一种具有多种生物学活性的肽类激素，是胰岛β细胞分泌胰岛素缺陷的重要病理生理基础。由于C肽与胰岛素结构不一样,两者无交叉免疫原性,对已使用胰岛素或已产生胰岛素抗体的糖尿病患者, C肽的测量对内源性胰岛素的分泌能力评价更具有临床意义。
电化学发光免疫分析属于第4代化学发光免疫分析。于20世纪90年代问世,是一种新型的化学发光免疫分析。ECLIA 是集电子发光技术、纳米微粒子技术、生物素-亲和素系统、抗原-抗体免疫反应、电磁场分离整合为一体而设计的一种自动化标记免疫分析系统[4]。ECLIA是电化发光和免疫测定相结合的产物。它包括了电化学和化学发光两个过程, 整个过程在一个全封闭的反应体系中进行, 全自动控制, 反应时间短,且灵敏度高。电化学发光免疫分析( ECL IA) 是用磁珠微球作为固相载体, 三联吡啶钌[ Ru ( bpy) 3 ]2 +作为发光物质, 由电极激发,在三丙胺参与下循环反应,迅速稳定发光,使得检测结果稳定可靠,精密度、准确度均优于酶联免疫法。它既具有发光检测的高度灵敏性, 又具有免疫分析的高度特异性,整个反应过程在一个全自动化的封闭体系中进行, 无人为操作误差影响[5]。
本实验结果证明：ECLIA法测定血浆C肽精密度较ELISA 法好,其原因一是试剂稳定,二是ECLIA法为全自动分析仪操作完成,从而避免了ELISA法复杂的人工操作所造成的误差。ECLIA法所测C肽的线性和回收率亦均高于ELISA法，而且抗干扰能力强。此外，ECLIA和ELISA法所测的C肽含量均与胰岛素含量呈正相关,且无统计学差异,说明两种方法都能用于评价胰岛β细胞功能, ECLIA法检测范围更宽, 标本可以随到随测, 20 min内出结果,而且可以同时检测胰岛素和C肽两项指标，较ELISA法大大缩短了检测时间,能充分满足临床需求。总之，电化学免疫发光法检测C肽灵敏、快速、准确、稳定, 具有重要的临床应用价值。
【参考文献】
[1-5]