Aktivitas Antiasma Rebusan Kombinasi Daun Sembung ( Blumea balsamifera L. DC.), Herba Patikan Kebo ( Euphorbia hirta L.), Biji Kemukus ( Piper cubeba L.) Dan Rimpang Teki ( Cyperus rotundus Linn.)
Pada Marmut Jantan Secara In Vitro Dan In Vivo
Antiasthma Activity Of Combination Of Decoction Of Sembung Leaves ( Blumea balsamifera L. DC.), Patikan Kebo Herbs ( Euphorbia hirta L.), Kemukus Seeds ( Piper cubeba L.), and Teki Rhizomes ( Cyperus rotundus Linn.) at Male Guinea Pig In Vitro and In Vivo
Kiki Damayanti 1,* , Agung Endro Nugroho 2 , dan Arief Nurrohmad 2 1 Fakultas Farmasi, Universitas Setia Budi
2 Fakultas Farmasi, Universitas Gadjah Mada

## ABSTRAK
Secara  empiris,  rebusan  kombinasi  daun  sembung,  herba  patikan  kebo,  biji  kemukus, dan  rimpang  teki  telah  digunakan  untuk  menangani  asma.  Secara  individu  keempat  tanaman tersebut  telah  diketahui  beraktivitas  sebagai  obat  asma.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui  aktivitas  rebusan  kombinasi  keempat  tanaman  tersebut  dalam  beberapa perbandingan sebagai antiasma secara in vitro dan in vivo . Pengujian  aktivitas  antiasma  secara in  vitro dilakukan  menggunakan  otot polos  trakea marmut terisolasi yang direndam dalam bufer Krebs bebas ion kalsium. CaCl 2 digunakan sebagai induktor kontraksi otot polos trakea marmut. Persen kontraksi otot polos trakea marmut sebelum dan  sesudah  perendaman  rebusan  dibandingkan  untuk  menyatakan  adanya  aktivitas  sebagai penghambat  kontraksi  akibat  peningkatan  kadar  ion  kalsium  intraseluler.  Aktivitas  antiasma secara in  vivo diketahui  menggunakan  marmut  yang  diinduksi  dengan  ovalbumin  secara  sub kutan  dan  nebulasi  sebagai  model  hewan  uji  asma.  Marmut  asma  diberi  rebusan  antiasma selama  29  hari.  Otot  polos  trakea  marmut  dibuat  preparat  dengan  pewarna  hematoksilin  dan eosin untuk mengetahui jumlah eosinofil dan persen udem yang terjadi.
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  salah  satu  jenis  rebusan  mempunyai  aktivitas dalam  menghambat  kontraksi  otot  polos  trakea  marmut  akibat  peningkatan  kadar  ion  kalsium intraseluler pada menit ke 14 – 26. Tidak ada perbedaan jumlah eosinofil dan persen udem pada preparat  trakea  marmut  yang  diberi  rebusan  dibandingkan  marmut  yang  diberi  aquadest, sehingga secara in vivo rebusan  tidak mempunyai efek sebagai penghambat infiltrasi eosinofil dan penghambat udem.
Kata kunci: Rebusan, asma, in vitro , in vivo

## ABSTRACT
Empirically, combination of decoction of sembung leaves, patikan kebo herbs, kemukus fruits,  and  teki  rhizomes  has  been  used  to  relief  asthma.  Individually,  those  plants  known  had activity  as  antiasthma.  The  goal  of  the  research  are  to  assess  the  activity  of  combination  of decoction in different proportion as antiasthma in vitro and in vivo.
The antiasthma activity testing in vitro is done using isolated guinea pig traceal muscle in the Krebs Buffer without calcium. CaCl 2 used as inductor of trachea smooth muscle contraction. Percent of contraction before and after immersion of decoction compared to reveal the activity of decoction as a smooth muscle contraction inhibitor. The antiasthma activity in vitro testing is done using  guinea  pig  as  asthma  animal  model.  Asthma  inductor  was  subcutan  and  nebulation  of ovalbumin. Asthma guinea pig were given combination of decoction for 29 days. Tracheal smooth muscle stained with hematoxilin-eosin to count eosinophils, and percent of edema.
The  result  showed  that  one  kind  of  decoction  has  activity  as  contraction  inhibitor  of smooth muscle trachea at minute 14 – 26.  There was no different eosinophil count and percent
of  smooth  muscle  edema.  The  decoction  has  no  activity  as  eosinophil  infiltration  inhibitor  and edema of smooth muscle trachea.
Keywords: decoction, asthma, in vitro, in vivo

## PENDAHULUAN
Asma  merupakan  gangguan kronis  pada  saluran  pernafasan  yang komplek  dan  dikarakterisasi  dengan gejala  yang  bervariasi  dan  berulang,
penghambatan aliran udara, hiperesponsivitas bronkial dan inflamasi (USDHHS,  2007).  Prevalensi  asma  di
Indonesia  secara  nasional  dilaporkan melalui riset kesehatan dasar
(Riskesdas)  sebesar  4,5%.  Kelompok usia  yang  menderita  asma  didominasi oleh kelompok usia 15 – 44 tahun yang merupakan  kelompok  usia  produktif (Kemenkes  RI,  2013).  Prevalensi, morbiditas, mortalitas dan beban ekonomi  merupakan  bentuk  beban akibat  asma.  Secara  global,  asma menyebabkan 180.000 kematian setiap tahunnya.  Sebagian  besar  kematian dialami pasien asma yang usianya lebih dari  45  tahun,  meskipun  sebenarnya kematian  tersebut  dapat  dihindarkan. Kematian  terutama  disebabkan  tidak adekuatnya  terapi  pemeliharaan  dan terlambatnya penanganan saat serangan  akut.  Beban  ekonomi  akibat asma di negara-negara barat bervariasi antara $ 300 hingga $ 1.300 per pasien per  tahun,  tergantung  pada  keparahan asma (Braman, 2006).
Penyakit  asma  yang  bersifat kronis  membutuhkan  terapi  jangka panjang.  Konsekuensi  logis  dari  terapi jangka  panjang  berupa  beban  finansial menjadi tak terelakkan. Semakin mahalnya  biaya  pengobatan  telah  ikut mendorong pemanfaatan kembali bahan alam untuk pengobatan. Proporsi
rumah  tangga  yang  memanfaatkan pelayanan kesehatan tradisional berupa penggunaan  ramuan  dalam  setahun terakhir  sebesar  49,0%  (Kemenkes  RI, 2013).  Penggunaan  obat  tradisional  di Indonesia didukung dengan fakta bahwa distribusi  tumbuhan  tingkat  tinggi  yang terdapat di hutan tropis Indonesia lebih dari  12%  dari  yang  terdapat  di  muka bumi (250.000) (Sulandjari, 2009). Hasil penelitian  yang  dilakukan  oleh  Chen et al .  (2016)  mengungkapkan  bahwa
36,8% responden yang menderita asma menggunakan pengobatan komplementer  dan  alternatif  selama setahun terakhir. Pengobatan
komplementer  dan  alternatif  berupa obat-obatan  herbal  digunakan  oleh 10,1% penderita asma. Di antara sekian banyak  jenis  tumbuhan  di  Indonesia, sebagian sudah digunakan secara turun temurun sebagai obat tradisional termasuk  untuk  menangani  asma.
Penggunaan  obat  tradisional  perlu disertai  dengan  kajian  ilmiah  agar penggunaannya menjadi  lebih  rasional. Kajian ilmiah dapat membantu menentukan  efektivitas  dan  keamanan obat tradisional.
Secara individu, daun sembung, herba  patikan  kebo,  biji  kemukus,  dan rimpang teki telah diketahui mempunyai aktivitas  antiasma.  Keempat  tanaman tersebut  juga  diketahui  mengandung flavonoid (Nessa et al. , 2005, Kumar et al. ,  2010,  Nahak  dan  Sahu,  2011,
Krishna  dan  Renu,  2013).  Uji  klinik terhadap  flavonoid  mengungkapkan efek perbaikan gejala yang
berhubungan  dengan  asma  (Tanaka dan  Takahashi,  2013).  Penelitian  ini bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas kombinasi daun sembung, herba patikan kebo, biji kemukus, dan rimpang teki  dalam  bentuk  rebusan  sebagai antiasma secara in vitro dan in vivo .

## METODE PENELITIAN Bahan
Simplisia  sebagai  bahan  uji terdiri dari daun sembung, herba patikan kebo,  biji  kemukus,  dan  rimpang  teki.
Bahan-bahan  yang  digunakan  untuk membuat  bufer  Krebs  terdiri  dari  NaCl (Nacalai Tesque), KCl (Merck),
MgSO 4 .7H 2 O  (Merck),  EDTA  (Merck), NaH 2 PO 4 .2H 2 O (Merck), NaHCO 3 (Merck), dan glukosa (Nacalai Tesque). Bahan kimia lain yang digunakan adalah formalin, KCl (Merck), ovalbumin (Nacalai Tesque), Al(OH) 3 (Merck), dan verapamil  HCl.  Organ  trakea  dibuat preparat  dengan  pewarna  hematoksilin dan  eosin.  Gas  yang  digunakan  untuk aerasi  bufer  Krebs  dalam organ  bath adalah campuran 95% oksigen dan 5% karbondioksida  (PT  Samator).  Bahan untuk mengikat trakea dalam organ bath adalah benang bedah. Air yang digunakan untuk melakukan percobaan dengan  organ  terisolasi  adalah sterile water for irrigation USP (PT Otsuka). Air non  steril  yang  digunakan  adalah  aqua destillata yang diperoleh dari Laboratorium Kimia Instrumental, Fakultas  Farmasi,  Universitas  Gadjah
Mada.

## Alat
Alat  yang  digunakan  untuk preparasi  organ  adalah  gunting  bedah (Surgical  Sutures,  Bio-Dynamics)  dan scalpel blade (Aesculap, B Braun). Alat pengujian  secara in  vitro terdiri  dari pengaduk magnetik termostat (B
Braun),  pengatur  suhu  organ  bath, transduser  isotonik  (Level  Transduser tipe  368,  HSE),  rekorder  (Kipp  and Zonnen,  BBD  41),  dua  set organ  bath , bridge  amplifier (tipe  336,  HHS),  dan pipet  mikro  berbagai  ukuran  (Gilson). Selain itu, alat-alat lain yang digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  nebulizer (Omron  NE-C  28),  mikroskop,  spuit injeksi  (Terumo),  timbangan  bahan (Ohaus) dan timbangan hewan uji.

## Hewan Uji
Hewan  uji  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  marmut jantan  ( Cavia  porcellus )  dengan  berat badan 400 – 600 g dan berumur di atas tiga  bulan.  Marmut  diperoleh  dari Laboratorium Farmakologi dan Toksikologi Fakultas Farmasi UGM. Jalannya Penelitian Pembuatan Rebusan Cara pembuatan rebusan mengadopsi cara pembuatan infus yang tertera  dalam  Farmakope  Indonesia edisi III (Depkes RI, 1979).
Perbandingan  tiga  kombinasi  rebusan antiasma  yang  terdiri  dari  campuran daun sembung, herba patikan kebo, biji kemukus,  dan  rimpang  teki  terangkum dalam tabel 1.

## Tabel 1. Perbandingan kombinasi rebusan antiasma
Komponen Rebusan antiasma 1  Rebusan antiasma 2  Rebusan antiasma 3 Daun sembung 31,25 % 16,04 % 10,14 % Herba patikan kebo 18,75 % 27,99 % 34,56 % Biji kemukus 18,75 % 22,39 % 13, 82 % Rimpang teki 31,25 % 33, 58 % 41,47 %
Sepuluh gram campuran simplisia dicampur dengan aqua destillata  sampai  100  ml.  Campuran dipanaskan di atas penangas air hingga suhunya  mencapai  90ºC.  Pemanasan dilakukan  selama  30  menit  semenjak campuran mencapai suhu 90ºC. Selama pemanasan  campuran  sesekali  diaduk. Setelah 30 menit campuran didinginkan, kemudian dipisahkan ampasnya dengan cara disaring dengan kain flanel. Ampas  ditambah  aqua  destillata  panas secukupnya  hingga  diperoleh  volume 100 ml. Rebusan selalu dibuat baru.

## Preparasi Trakea Marmut
Marmut  dikorbankan  dengan cara  dislokasi  leher  dan  trakea  segera dipisahkan  dari  tubuh  marmut.  Trakea kemudian diletakkan dalam cawan yang berisi bufer Krebs secukupnya.
Jaringan-jaringan  yang  melekat  di trakea marmut dibersihkan. Trakea yang sudah  bersih  dipotong  dengan  cara sedemikian  rupa  sehingga  membentuk pita dengan panjang disesuaikan dengan  panjang  tabung  organ  bath. Kedua  ujung  tulang  rawan  pita  trakea diikat dengan benang bedah. Salah satu ujung  dikaitkan  dengan  tuas  bagian bawah  pada organ  bath ,  sedangkan ujung  yang  lain  diikatkan  pada  bagian yang terhubung dengan transduser (Lee et al ., 1997).
Uji  Aktivitas  Penghambat  Kontraksi Akibat Peningkatan Kadar Ion Kalsium Intraseluler Otot  polos  trakea  yang  sudah
diekuilibrasi  hingga  stabil  dalam organ bath berisi  bufer  Krebs  bebas  ion kalsium sebanyak 20,0 ml diberi KCl 5 N sebanyak  200  µl.  Kontraksi  otot  polos trakea  yang  terjadi  akan  tercatat  pada rekorder.  Setelah  kontraksi  maksimal,
dilakukan pemberian CaCl 2 2 M sebanyak 100 µl. Kontraksi yang terjadi hingga maksimum disebut kontrol. Otot polos  trakea  kemudian  dicuci  dengan penggantian  bufer  Krebs  bebas  ion kalsium  setiap  10  menit.  Bila  respon kontraksi  sudah  hilang,  ditambahkan 200  µl  KCl  5  N.  Selanjutnya  dilakukan inkubasi  otot  polos  trakea  dengan rebusan  antiasma  sebanyak  200  µl selama  10  menit.  Setelah  10  menit dilakukan  pemberian  CaCl 2 kembali seperti  sebelum  pencucian  otot  polos trakea. Verapamil HCl kadar 2 × 10 -3 M sebanyak  100  µl  diinkubasi  ke  dalam organ bath sebagai kontrol positif (Pang et al. , 2002).
Uji  Aktivitas  Penghambat  Infiltrasi Eosinofil dan Penghambat Udem
Langkah sensitisasi marmut dilakukan  dengan  cara  menginjeksi marmut secara subkutan dengan suspensi  yang  mengandung  10  µg ovalbumin dan 1 mg Al (OH) 3 dalam 0,5 ml  larutan  NaCl  0,9%.  Dosis  yang disuntikkan adalah 0,5 ml/kgBB.
Suspensi diinjeksikan kembali pada hari ke  14  sesudah  penyuntikan  pertama. Pada  hari  ke  15  dimulai  pemberian rebusan  antiasma  sampai  hari  ke  29. Rebusan antiasma diberikan secara per oral dengan dosis 12 ml/kgBB. Nebulasi pada  marmut  dilakukan  dengan  0,25% ovalbumin dalam NaCl 0,9% selama 10 menit  pada  hari  ke  18,  21,  24,  dan  29. Dua  puluh  empat  jam  setelah  nebulasi hari  ke  29,  marmut  dikorbankan, trakeanya  diambil,  kemudian  dibuat preparat  (Mahajan  dan  Metha,  2011). Preparat  otot  polos  trakea  marmut diwarnai  dengan  pewarna  hematoksilin dan  eosin  untuk  menghitung  jumlah eosinofil dan menentukan persen udem.
Persen udem dihitung dengan membagi tebal  udem  (µm)  dengan  tebal  mukosa serosa (µm), kemudian dikali 100%.
Hasil dan Pembahasan Hasil Uji Aktivitas Penghambat Kontraksi  Akibat  Peningkatan  Kadar

## Ion Kalsium Intraseluler
Ion  kalsium  berperan  dalam kejadian  asma.  Kalsium  terlibat  dalam kontraksi eksitasi otot polos bronkial dan juga  proses  sekresi  mediator  dari  sel mast yang menyebabkan inflamasi dan bronkokonstriksi.  Depolarisasi  cairan intraseluler  akan  membuka  kanal  ion kalsium  di  membran  sel,  sehingga
kalsium di luar sel akan masuk ke dalam sel. Meningkatnya kadar kalsium dalam sel  selanjutnya  menimbulkan  kontraksi sel  otot  polos.  Depolarisasi  cairan intraseluler dalam penelitian ini dilakukan  dengan  cara  menambahkan
KCl  dalam organ  bath .  CaCl 2 yang ditambahkan
akan
menimbulkan
kontraksi  otot  polos  trakea.  Kurva hubungan  rata-rata  persen  kontraksi setelah  perendaman  otot  polos  trakea dengan  rebusan  antiasma  3  dan verapamil  HCl versus waktu  tersaji dalam gambar 1 dan 2.
Gambar 1. Kurva hubungan persen kontraksi otot polos trakea marmut terisolasi versus waktu sebelum (-- ♦--) dan sesudah (--■--) perendaman rebusan antiasma 3
Gambar 2. Kurva hubungan persen kontraksi otot polos trakea marmut terisolasi
versus waktu sebelum (-- ♦--) dan sesudah (--■--) perendaman verapamil HCl
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 K o ntr a k si (%) Menit ke 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 K o ntr a k si (%)
Secara  umum  perendaman  otot polos  trakea  marmut  terisolasi  dengan rebusan  antiasma  tidak  mengurangi kontraksi otot polos yang dipicu pemberian  CaCl 2 .  Rebusan  antiasma  3 tampak  menghambat  kontraksi  otot polos  trakea  pada  menit  ke  14  hingga 26, ditunjukkan dengan adanya perbedaan  persen  kontraksi  tanpa  dan dengan perendaman rebusan antiasma. Hasil  yang  berbeda  ditunjukkan  oleh verapamil  HCl  dalam  menghambat kontraksi  otot  polos  yang  disebabkan pemberian  CaCl 2 .  Verapamil  mampu menghambat  kontraksi  otot  polos  pada menit  ke  12  hingga  38,  ditunjukkan dengan persen kontraksi dengan
perendaman  verapamil  HCl  yang  lebih kecil  secara  bermakna  dibandingkan persen  kontraksi  tanpa  perendaman verapamil HCl. Berdasarkan data tersebut dapat dinyatakan bahwa rebusan  antiasma  1  dan  2  tidak mempunyai aktivitas penghambat
kontraksi  akibat  peningkatan  kadar  ion kalsium intraseluler, sedangkan rebusan antiasma  3  hanya  mempunyai  aktivitas sebagian.
Penggunaan  obat  tradisional
selama  ini  sering  ditujukan  sebagai terapi komplementer. Usaha pencegahan timbulnya penyakit tertentu dan  penunjang  terapi  utama  suatu penyakit dapat menjadi tujuan
penggunaan  obat  tradisional.  Usaha pencegahan  kekambuhan  asma  dari beberapa guideline dilakukan  dengan penggunaan kortikosteroid inhalasi yang  dikombinasikan  dengan  LABA. Pembuktian kemampuan rebusan antiasma dalam pencegahan kekambuhan asma dilakukan melalui uji aktivitas penghambatan kontraksi akibat
peningkatan kadar ion kalsium intraseluler. Hasil penelitian menunjukkan  bahwa  rebusan  antiasma 3  berpotensi  untuk  digunakan  sebagai terapi pemeliharaan asma. Hasil Uji Aktivitas Penghambat Infiltrasi  Eosinofil  dan  Penghambat
Udem
Kejadian  asma  berhubungan dengan  infiltrasi  eosinofil  pada  saluran pernafasan.  Penelitian  ini  mengungkap kemampuan  rebusan  antiasma  dalam menghambat  infiltrasi  eosinofil  di  otot polos  trakea  marmut.  Semakin  besar kemampuan  rebusan  antiasma  dalam menghambat infiltrasi eosinofil ditunjukkan  dengan  semakin sedikitnya eosinofil  yang  ditemukan  di  otot  polos trakea.  Rangkuman  hasil  uji  aktivitas rebusan antiasma sebagai penghambat infiltrasi  eosiofil  dapat  dilihat  pada gambar 3.
Jumlah eosinofil pada otot polos trakea  marmut  yang  diberi  rebusan antiasma 1 dan 3 lebih kecil dibandingkan  kelompok  kontrol  negatif, namun  tidak  ada  perbedaan  yang bermakna. Kelompok yang diberi
rebusan antiasma 2 jumlah eosinofilnya lebih  banyak  dibandingkan  dengan kelompok  kontrol  negatif  dan  secara statistik berbeda
bermakna.
Berdasarkan hasil ini, dapat dinyatakan bahwa  rebusan  antiasma  1,  2,  dan  3 tidak  mempunyai  aktivitas  sebagai penghambat infiltrasi eosinofil pada otot polos trakea.
Keadaan  asma  ditandai dengan ditemuinya  udem  pada  otot  polos saluran pernafasan. Udem akan mempersempit diameter trakea, sehingga  secara  klinis  menimbulkan sesak nafas.
Keterangan:  RA 1 : rebusan antiasma 1 RA 2 : rebusan antiasma 2 RA 3 : rebusan antiasma 3 A : aqua destillata
* ada perbedaan bermakna (p<0,05) dengan aqua destillata Gambar 3. Rata-rata jumlah eosinofil pada otot polos trakea marmut akibat perlakuan rebusan antiasma dan aqua destillata
. Keterangan:  RA 1 : rebusan antiasma 1 RA 2 : rebusan antiasma 2 RA 3 : rebusan antiasma 3 A : aqua destillata * ada perbedaan bermakna (p<0,05) dengan aqua destillata Gambar 3. Rata-rata  persen  udem  pada  otot  polos  trakea  marmut  akibat perlakuan rebusan antiasma dan aqua destillata
Besarnya  persen  udem  yang  terjadi pada otot polos trakea marmut berbagai kelompok  perlakuan  terdapat  pada gambar  4.  Persen  udem  otot  polos trakea marmut akibat rebusan antiasma
1  dan  3  lebih  kecil  dibandingkan  % udem  kelompok  kontrol  negatif,  namun secara  statistik  tidak  ada  perbedaan yang bermakna diantara ketiga kelompok  tersebut.  Berbeda  dengan RA 1 RA2 RA 3 A Eosinofil 19,25 74,75
29,75 37,50 * 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 J um la h eo sino fil A RA 1 RA 2
RA 3 Udem (%) 19,44 8,63
19,59 19,01 0 5 10 15 20 25 30 U dem ( %)
rebusan antiasma 1 dan 3, persen udem pada  otot  polos  trakea  marmut  yang diberi  rebusan  antiasma  2  lebih  besar daripada  kelompok  kontrol  negatif, namun perbedaan tersebut tidak bermakna. Berdasarkan analisa statistika dapat dikatakan bahwa rebusan  antiasma  1,  2,  dan  3  tidak mempunyai  efek  menghambat  udem otot polos trakea marmut.
Uji  aktivitas  rebusan  antiasma secara in  vivo dilakukan  menggunakan marmut  yang  dibuat  asma  dengan pemberian  ovalbumin.  Secara in  vivo semua rebusan antiasma tidak mempunyai aktivitas sebagai penghambat  infiltrasi  eosinofil  maupun penghambat udem. Berdasarkan literatur, empat macam tanaman dalam rebusan  antiasma  berpotensi  untuk digunakan sebagai antiasma (Prasaja et al .,  2005;  Youssouf et  al .,  2007;  Chen dan  Er,  2010;  Wahyono et  al .,  2005),
namun hasil penelitian tidak menunjukkan hasil yang selaras dengan penelitian  sebelumnya.  Penggunaan marmut yang dipapari ovalbumin
sebagai model hewan uji asma
mempunyai  keterbatasan  dalam  hal variasi respon biologis. Prosedur sensitisasi  dan  pemaparan  ovalbumin pada  marmut  telah  dibuat  seragam, namun  respon  marmut  kemungkinan beragam, sehingga menjadi
keterbatasan  dalam  pengujian  aktivitas secara in  vivo .  Dugaan  ini  diperkuat dengan  matinya  beberapa  marmut
selama dilakukan penelitian. Pemaparan  ovalbumin  secara  nebulasi dilakukan  beberapa  kali  setelah  fase sensitisasi dengan tujuan mempertahankan  keadaan  asma  pada marmut. Kematian marmut
kemungkinan disebabkan respon marmut  terhadap  nebulasi  ovalbumin menyebabkan  keadaan  asma  berat. Kematian  marmut  selama  penelitian juga  mempengaruhi  jumlah  replikasi penelitian.  Idealnya  replikasi  penelitian dibuat  sebanyak  mungkin,  sehingga kecenderungan respon hewan uji terhadap  perlakuan  dapat  teramati. Jumlah  replikasi  yang  rendah  dalam penelitian ini disertai dengan hasil yang bervariasi antar replikasi yang ditunjukkan dengan besarnya nilai SEM menjadikan  hasil  penelitian  menjadi bias.  Perlu  dilakukan  pengulangan penelitian
dengan modifikasi pembuatan  marmut  sebagai  model hewan  uji  asma.  Modifikasi  dapat dilakukan  dengan  menentukan  derajat keparahan  asma  dalam  pembuatan model hewan uji asma. Parameter yang dapat  digunakan  untuk  menentukan derajat keparahan asma adalah pengukuran  kadar  IgE  dalam  darah. Pengulangan  penelitian  perlu  juga dilakukan dengan jumlah hewan uji yang lebih besar.

## KESIMPULAN
Rebusan antiasma 3 mempunyai aktivitas  sebagian  dalam  menghambat kontraksi  akibat  peningkatan  kadar  ion kalsium  intraseluler.  Semua  rebusan antiasma  tidak  mempunyai  aktivitas sebagai  penghambat  infiltrasi  eosinofil dan penghambat udem.

## DAFTAR PUSTAKA
Braman SS. 2006. The global burden of asthma. Chest 130:4S – 12S
Chen  YS,  Er  HM.  Antioxidant,  anti- proliferative  and  bronchodilatory
activities  of Euphorbia  hirta
extracts. MJS 29:22 – 29 [Depkes  RI]  Departemen  Kesehatan Republik Indonesia. 1979. Farmakope  Indonesia .  Ed  III. Jakarta: Depkes RI [Kemenkes RI] Kementerian Kesehatan Republik  Indonesia.  2013. Riset
kesehatan dasar Riskesdas 2013 . Jakarta. Badan Penelitian dan  Pengembangan  Kesehatan Kementerian Kesehatan Republik Indonesia Krishna S, Renu S. 2013. Isolation and identification  of  flavonoids  from Cyperus  rotundus Linn.  in  vivo and in vitro. JDDT 3:109 – 113
Kumar  S,  Malhotra  R,  Kumar  D.  2010.
Euphorbia  hirta :  it’s  chemistry, traditional  and  medicinal  uses, and  pharmacological  activities. Pharmacogn Rev 4:58 – 61
Lee  TL,  Adaikan  PG,  Lau  LC,  Ratnam SS, Dambisya YM. 1997. Effects of bupivacain and its isomers on guinea  pig  tracheal  smooth muscle. Methods  Find  Exp  Clin Pharmacol 19:27 – 33 Mahajan SG, Mehta AA. 2011. Suppression of ovalbumin- induced Th2-driven airway inflammation by β-Sitosterol in a guinea pig model of asthma. Eur J Phar 650:458 – 464 Nahak G, Sahu RK. 2011. Phytochemical  evaluation  and antioxidant  activity  of Piper cubeba and Piper nigrum. JAPS
01:153 – 157
Nessa  F,  Ismail  Z,  Karupiah  S, Mohamed  N.  2005.  RP-HPLC method  for  the  quantitative analysis  of  naturally  occuring flavonoids  in  leaves  of Blumea balsamifera DC. Journal Chromatogr Sci 43:416 – 420
Pang  JJ,  Xu  BB,  Li  HF,  Zhang  XY,
Zheng TZ. 2002. Inhibiti on of β- estradiol  on  tracheal  smooth muscle contraction in vitro and in vivo. Acta Pharmacol Sin 23:273 – 277
Prasaja Y, Adreanus AS, Sigit JI. 2005. Uji  aktivitas  antiasma  ekstrak etanol  daun  sembung  ( Blumea balsamifera (L.) DC.) berdasarkan  pola  pernafasan marmut jantan. [Skripsi]. Bandung: Sekolah Farmasi, Institut Teknologi Bandung Sulandjari, 2009, Pendekatan Bioregion dalam Pengembangan Budidaya Tanaman Biofarmaka . disampaikan dalam acara Sidang Senat Terbuka Universitas Sebelas Maret Surakarta Tanaka T, Takahashi R. 2013. Flavonoids and Asthma. Nutrients 5:2128 – 2145 [USDHHS]  US  Departement  of  Health and  Human  Services.  2007. Expert Panel Report 3: Guidelines for the Diagnosis and Management of Asthma . National  Heart,  Lung  and  Blood Institute, National Asthma Education and Prevention Program