Penulis Mulyati Effendi 1 , Yulianita 2 , Nina Herlina 2* , Wilda Nurhikmah 2
Afiliasi
1 Biologi, FMIPA, Universitas Pakuan, Jl. Pakuan, Tegallega. Kecamatan Bogor Tengah, Kota Bogor. Jawa Barat 16143, Indonesia.
2 Farmasi,  FMIPA,  Universitas  Pakuan,  Jl.  Pakuan,  Tegallega.  Kecamatan  Bogor  Tengah,  Kota  Bogor. Jawa Barat 16143, Indonesia.
Kata Kunci  rumput kebar
 fitoestrogen
 siklus estrus
 tikus
Keywords  Kebar grass
 Phytoestrogen
 estrous cycle
 rat
Diterima 23 November 2021 Direvisi 16 Juli 2022 Disetujui 3 Agustus 2022

## *Penulis Koresponding
Nina Herlina email: nina.herlina@unpak.ac.id

## ABSTRAK
Rumput  Kebar  digunakan  secara  empiris  oleh  masyarakat  Papua  untuk  mengobati masalah  kesuburan.  Metabolit  aktif  yang  terkandung  dalam  rumput  kebar  diduga berperanan  terhadap  efek  estrogenik.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menentukan  efek estrogenik rumput kebar pada ekstrak dan fraksi yang berbeda. Sebanyak 36 ekor tikus yang digunakan  dalam  penelitian  ini  dibagi  dalam  6  kelompok  perlakuan  yang  terdiri  dari  6  kali ulangan.  Kelompok  I  (K)  sebagai  kelompok  kontrol  diberi  Na  CMC  1%,  Kelompok  II  diberi etinil  estradiol,  Kelompok  III-VI  diberikan  ekstrak  rumput  kebar  (ERK);  fraksi  n-Heksan (FHRK);  fraksi  etil  asetat  (FERK);  fraksi  akuades  (FARK)  rumput  kebar  dengan  dosis  4,32 mg/200 gBB tikus secara per oral selama 7 hari pemberian. Efek estrogenik diamati dengan memeriksa  panjang  siklus  estrus  dan  fase  estrus  secara  sitologis  menggunakan  metode apusan  vagina.  Swab  vagina  dikoleksi  setiap  hari  selama  14  hari,  diwarnai  dengan  Giemsa dan dilihat secara mikroskopis. Data panjang siklus dan fase estrus dianalisis secara statistik dengan menggunakan analysis of variance (ANOVA) rancangan acak kelompok (RAK) dan uji lanjut  Duncan  dengan  tingkat  kepercayaan  95%.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa pemberian  ekstrak  dan  fraksi  etil  asetat  rumput  kebar  memiliki  efek  estrogenik  karena mampu  memperpendek  siklus  estrus  dan  meningkatkan  panjang  fase  estrus.  Efek  paling besar diperoleh setelah pemberian FERK pada tikus betina.

## ABSTRACT
Kebar grass is used empirically by Papuans to treat fertility problems. Active metabolites contained in kebar grass are thought to play a role in estrogenic effects. This study aims to determine the estrogenic effect of kebar grass in different  extracts and fractions. A total of 36  rats  used  in  this  study  were  divided  into  6  treatment  groups  consisting  of  6  replicates. Group I (K) as a control group was given 1% Na  CMC,  Group II was given Ethinyl estradiol, Groups  III-VI  were  given  kebar  grass  extract  (ERK);  n-Hexan  fraction  (FHRK);  ethyl  acetate fraction (FERK); distilled water fraction (FARK) of kebar grass at a dose of 4.32 mg/200 gBB rats orally for 7 days of administration. The estrogenic effect was observed by examining the estrus cycle  length and estrus phase cytologically using the vaginal smear method. Vaginal swabs  were  collected  daily  for  14  days,  stained  with  Giemsa,  and  viewed  microscopically. Data on cycle length and estrus phase were analyzed statistically using analysis of variance (ANOVA)  randomized  group  design  (RAK)  and  Duncan's  further  test  with  a  95%  confidence level.  The  results  showed  that  the  administration  of  extracts  and  ethyl  acetate  fractions  of kebar grass had estrogenic effects because they were able to shorten the estrous cycle and increase  the  length  of  the  estrous  phase.  The  greatest  effect  was  obtained  after  the administration of FERK to female rats.

## Efek Estrogenik Rumput Kebar ( Biopyhtum Petersianum ) dalam Ekstrak Etanol 96% dan Berbagai Fraksi Pelarut
Estrogenic Effects of Kebar Grass (Biopyhtum Petersianum) in 96% Ethanol Extract and Various Solvent Fractions

## PENDAHULUAN
Tahap  reproduksi  yang  sering  kali  ditakuti  wanita adalah  tahap  menopause.  Ovarium  pada  tahap menopause  tidak  lagi  memberikan  respon  terhadap sinyal gonadotropin untuk mensintesis dan mensekresikan  estrogen,  sehingga  terjadi  penurunan hormone estrogen. Rendahnya kadar estrogen dampak serius  diantaranya  penurunan  kepadatan  tulang, meningkatnya resiko penyakit  jantung koroner, kanker kolon,  Alzheimer  dan  gangguan  hubungan  seksual (Suparni & Astutik 2016).
Terapi  sulih  hormon  (TSH)  menggunakan  etinill estradiol  telah  terbukti  dapat  menangani  sindrom tersebut, tetapi meningkatkan resiko kanker payudara, endotrium  dan  ovarium.  Dengan  adanya  resiko  dari TSH,  maka  perlu  dicari  terapi  alternatif  dalam mengatasi sindroma menopause tersebut. Fitoestrogen adalah  zat  kimia  yang  ditemukan  pada  tumbuhan  dan memiliki  efek  yang  sama  dengan  estrogen  endogen (Maheswari et al 2016) . Fitoestrogen dapat mengurangi  aktivitas  estrogen  dengan  menghambat aktivitas  reseptor  ketika  kadar  estrogen  sangat  tinggi. Di  sisi  lain  ketika  kadar  estrogen  rendah,  fitoestrogen yang  terikat  pada  reseptor  dapat  memberikan  efek sebagai  estrogen  alami  (Desmawanti  &  Sulastri  2019). Salah satu tanaman yang berperan sebagai firoestrogen adalah rumput kebar (Biophytum petersianum ).
Penelitian terdahulu (Claudia 2018) telah membuktikan bahwa pemberian ekstrak etanol rumput kebar  dosis  378  mg/200  g  BB  selama  7  hari  dapat memperpendek  siklus  estrus  dan  meningkatkan panjang  fase  estrus  pada  tikus,  akan  tetapi  dosis  yang digunakan  dalam  penelitian  tersebut  terhitung  sangat tinggi  jika  dikonversikan  ke  dosis  manusia  yaitu mencapai  21,17  g/70  kg  BB  manusia.  Oleh  karena  itu, perlu  penelitian  lebih  lanjut  untuk  memperoleh  dosis yang lebih kecil.
Aminudin et  al., (2020)  melaporkan  bahwa kandungan  aktif  yang  mendominasi  rumput  kebar adalah flavonoid, tannin dan saponin. Selain itu rumput kebar  juga  memiliki  aktivitas  antioksidan  yang  baik setara dengan vitamin C dan vitamin E. Sambodo et al., (2015)  menyebutkan  bahwa  adanya  kandungan saponin,  steroid,  dan  flavonoid  berkontribusi  dalam efek  estrogenik.  Senyawa-senyawa  tersebut  memiliki tingkat  kepolaran  yang  berbeda,  sehingga  untuk menarik  senyawa  tersebut  membutuhkan  pelarut dengan tingkat kepolaran yang berbeda pula.
Berdasarkan  uraian  di  atas,  maka  dilakukan penelitian  lebih  lanjut  mengenai  efek  estrogenik rumput  kebar  pada  ekstrak  dan  fraksi  dengan  pelarut
yang  berbeda.  Pelarut  yang  digunakan  untuk  ekstraksi adalah  etanol  96%  dengan  pertimbangan  dapat menarik  senyawa  dipilih  untuk  menarik  flavonoid, saponin,  steroid  lebih  banyak.  Tahap  selanjutnya dilakukan fraksinasi dengan menggunakan pelarut yang berbeda yaitu n-heksana, etil asetat, dan akuades. Efek estrogenik  dilakukan  pada  tikus  betina  dengan menentukan  panjang  siklus  dan  fase  estrus  secara sitologi.  Penelitian  ini  diharapkan  akan  meningkatkan inovasi  ilmu  pengetahuan  dan  teknologi  dalam penerapan  ilmu  farmasi,  selain  itu,  penelitian  ini  juga diharapkan  dapat  meningkatkan  nilai  guna  rumput kebar sehingga lebih bermanfaat secara ekonomi.
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah corong  pisah  (Pirex®),  alat-alat  gelas  (Pirex®),  gelas objek (Pirex®), grinder, kaca arloji, mesh 40, mikroskop, neraca  analitik,  pengaduk  gelas,  perlengkapan  untuk membuat  preparat  apus  vagina  yaitu cotton  bud , vacuum  dryer, sonde,  stopwatch,  spuit,  waterbath, perlengkapan kandang tikus.
Bahan  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  yaitu herba  rumput  kebar  yang  diperoleh  dari  Papua  Barat, etanol 96%, etil asetat, n-hexan, akuades. Hewan coba yang  digunakan  yaitu  tikus  putih  betina  dan  jantan galur Sprague-Dawley .

## METODE
Tahapan penelitian meliputi pembuatan ekstrak dan fraksi,  pengujian  fitokimia,  kadar  air  dan  kadar  abu serta uji efek estrogenik rumput kebar.

## Pembuatan Ekstrak Rumput Kebar
Rumput kebar dikumpulkan, dibersihkan dengan air mengalir,  kemudian  dikeringkan  dengan  oven  pada suhu  60°C  dan  diserbukkan.  Ekstraksi  rumput  kebar menggunakan metode maserasi dengan pelarut etanol 96% dengan rasio 1:10. Serbuk rumput kebar sebanyak 800  g  dimasukkan  ke  dalam  botol  maserasi  dan  diisi dengan etanol 96%, direndam selama 3x24 jam sambil dikocok 6 jam sekali selama 15 menit. Maserat disaring, filtrat  dipekatkan dengan vacuum  dryer pada suhu 30- 40˚C  hingga  diperoleh  ekstrak  kental  rumput  kebar. Ekstrak diuji karakteristik dan fitokimia. Uji karakteristik meliputi uji organoleptik, kadar air, kadar abu. Uji kadar air  dilakukan  dengan  metode  gravimetri  sementara kadar  abu  mengacu  pada  metode  parameter  standar umum  ekstrak  tumbuhan  obat  (Depkes  2000).  Uji fitokimia  dilakukan  secara  kualitatif,  adapun  uji fitokimia  yang  dilakukan  adalah  uji  flavonoid,  alkaloid, saponin,  kuinon,  steroid-triterpenoid,  dan  tanin  yang mengacu pada metode uji menurut Hanani (2015).

## Pembuatan Fraksi Rumput Kebar
Fraksinasi  dilakukan  dengan  metode  ekstraksi  cair- cair  (ECC)  dengan  pelarut  n-Heksan  (non  polar),  etil asetat  (semi  polar),  dan  akuades  (polar).  Ekstrak dilarutkan ke dalam air kemudian dicampurkan dengan n-Heksana perbandingan 1:1. Campuran dimasukkan ke dalam  labu  pisah  kemudian  dikocok  secara  perlahan setelah  didiamkan  terjadi  pemisahan  antara  fraksi  n- Heksan  dengan  campuran  ekstrak  dan  air.  Fraksi  n- Heksan  dipisahkan.  Fraksi  dengan  pelarut  n-Hexan diulangi  sebanyak  3  kali.  Fraksinasi  dilanjutkan menggunakan  etil  asetat  dengan  proses  yang  sama dengan n-Heksan. Fraksi n-Heksan cair, fraksi etil asetat cair,  fraksi  air  diuapkan  menggunakan vacuum  dry er hingga  sedikit  kental  kemudian  dikentalkan  kembali dengan waterbath , sehingga diperoleh fraksi kental.

## Uji Efektivitas Estrogenik
Prosedur  ini  telah  mendapatkan  persetujuan  dari komite  etik  penggunaan  hewan  FMIPA  Universitas Pakuan  dengan  SK  Komite  Etik  No.82/KEPHP- UNPAK/01-2020.  Uji  efek  estrogenik  rumput  kebar, meliputi  tahap  pra  penelitian,  pengambilan  sampel preparat  ulas  vagina,  kemudian  penentuan  efek estrogenik  berupa  panjang  siklus  dan  fase  estrus kumulatif  dari  akhir  estrus  sampai  awal  estrus berikutnya.
Pada  tahap  pra-penelitian  dilakukan  adaptasi  dan penyeragaman  birahi  menggunakan  metode Whitten Effect . Selama masa adaptasi selama 7 hari tikus diberi pakan  dan  air  minum ad  libitum .  Sinkronisasi  estrus pada  tikus  betina  dilakukan  dengan  metode Whitten Effect ,  kandang  tikus  betina  diletakkan  di  bawah kandang tikus jantan. Feromon yang terkandung dalam urin tikus jantan dapat menstimulasi sinkronisasi estrus (Whitten 1957). Ciri-ciri hewan estrus dapat dilihat dari keadaan  vulva  yang  bengkak,  berwarna  merah  dan basah (Byers 2012).
Sebanyak  36  ekor  tikus  dikelompokkan  secara  acak menjadi 6 kelompok. Kelompok I (K) sebagai kelompok kontrol  negatif  diberi  Na  CMC  1%,  Kelompok  II  diberi etinil  estradiol,  Kelompok  III-VI  diberikan  ekstrak rumput  kebar  (ERK);  fraksi  n-Heksan  (FHRK); fraksi etil asetat  (FERK);  fraksi  akuades  (FARK)  rumput  kebar dengan  dosis  masing-masing  4,32  mg/200  gBB  tikus. Pemberian  sediaan  uji  dilakukan  selama  7  hari  secara oral  dan  pengamatan  panjang  siklus  estrus  dan  fase estrus  dilakukan  setiap  hari  selama  14  hari.  Pada  hari ke-8  pemberian  sediaan  uji  dihentikan,  akan  tetapi pengamatan terhadap siklus dan fase estrus dilanjutkan dari hari ke-8 sampai hari ke-14.
Data  Panjang  siklus  estrus  dan  fase  estrus  diamati secara  sitologi  dengan  memeriksa  preparat apusan vagina .  Swab  vagina  dikoleksi  setiap  hari  dengan interval  2  kali  sehari  selama  14  hari.  Swab  vagina diambil  dengan cotton  bud yang  telah  dibasahi  NaCl fisiologis  0,9%  dan  dimasukkan  ke  dalam  vagina  tikus. Ulas  diputar  360°  dengan  lembut  dan  dan  digulung  ke dinding vagina kemudian dilepas. Ulas vagina dioleskan pada gelas objek kering dan direndam dalam 82ongerin 10%  selama  5  menit,  diangkat,  dan  dibiarkan mengering.  Preparat  ulas  vagina  diwarnai  dengan Giemsa 1%  selama 30 menit,  dicuci  pada  air mengalir, kemudian dikeringkan dan diamati dibawah mikroskop dengan pembesaran 400x.
Penentuan  siklus  estrus  berdasarkan  gambaran perubahan  bentuk  sel  epitel.  Fase  proestrus  ditandai dengan  adanya  sel-sel  epitel  berinti  dan  epitel terkornifikasi,  fase  estrus  didominansi  sel  epitel terkornifikasi,  fase  metestrus  ditandai  adanya  sel-sel leukosit  diantara  sel-sel  epitel  terkornifikasi,  dan  fase diestrus  ditandai  dengan  adanya  dominasi  sel  leukosit yang  lebih  banyak  dibandingkan  dengan  sel  epitel  inti dan epitel terkornifikasi.

## Analisis Data
Data  panjang  siklus  dan  fase  estrus  diolah  secara statistik  menggunakan  analisis  sidik  ragam  (ANOVA) rancangan  acak  kelompok  (RAK),  uji  lanjut  duncan tingkat kepercayaan 95%.

## HASIL & PEMBAHASAN Simplisia dan Ekstrak Rumput Kebar
Simplisia  dan  ekstrak  rumput  kebar  memiliki  kadar air sebesar 6,57 % dan 6,84%, kadar abu sebesar 4,8% dan 4,66%. Hasil uji fitokimia menunjukkan bahwa baik simplisia maupun ekstrak positif mengandung alkaloid, flavonoid, saponin, tannin dan steroid. Aminudin et al. (2020)  menyatakan  bahwa  komposisi  senyawa  fenolik tanaman  rumput  kebar  didominasi  oleh  flavonoid, tanin,  dan  saponin.  Adanya  dominasi  kandungan fenolik  yang  tinggi,  tanaman  rumput  kebar  berpotensi sebagai tanaman obat.

## Efek  ekstrak  dan  Fraksi  Rumput  Kebar  Terhadap Panjang Siklus Estrus
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menentukan efek  estrogenik  dari  rumput  kebar  pada  ekstrak  dan fraksi yang berbeda. Efek estrogenik diamati dari siklus dan  fase  estrus  tikus.  Secara  umum  rata-rata  panjang waktu  siklus  estrus  pada  tikus  terjadi  pada  4-5  hari, dimana dalam 1 siklus estrus terdapat 4 fase yaitu fase
proestrus 12 jam, estrus 12 jam, metestrus 21 jam dan fase  diestrus  60-70  jam  (Goldman et  al. 2007), mempersingkat waktu siklus estrus akan mempercepat terjadi fase estrus kembali selama 7 hari.
Penentuan tahapan-tahapan
siklus estrus sebagaimana dimaksud pada Gambar 1 . Fase proestrus didominasi  dengan  sel-sel  epitel  berinti  yang  muncul secara  tunggal,  stadium  ini  menandakan  akan datangnya  birahi.  Fase  estrus  ditandai  dengan  adanya sel kornitifikasi atau sel menanduk  dimana stadium ini merupakan  periode  birahi.  Fase  metestrus  ditandai dengan  munculnya  leukosit  dan  berkurangnya  sel kornitifikasi,  stadium  ini  terjadi  setelah  ovulasi  antara estrus  dan  diestrus.  Fase  diestrus  ditandai  dengan banyaknya  leukosit  yang  ditemukan  dan  tidak  adanya sel kornitifikasi.

## Gambar 1. Sel  Epitel  dalam  Preparat  Apus  Vagina Perbesaran 400X
Keterangan: A. Proestrus, B. Estrus, C. Matestrus, D. Diestrus. 1. sel epitel berinti, 2. Sel kornifikasi, 3. Leukosit
Pengukuran  panjang  siklus  estrus  secara  kumulatif dimulai dari akhir estrus sampai awal estrus berikutnya dapat  dilihat  pada Gambar  2 .  Pemberian  FERK,  FHRK dan  kontrol  positif  pada  menyebabkan  panjang  siklus estrus  menjadi  lebih  pendek  dibandingkan  dengan kontrol  negatif  (123,2  jam),  akan  tetapi  FARK  dan  ERK masih  memiliki  waktu  estrus  yang  lebih  panjang. Meskipun demikian, hasil analisis statistik menunjukkan bahwa pengaruhnya tidak berbeda signifikan (P >0,05). Hal  ini  menyatakan  bahwa  pemberian  sediaan  uji selama  7  hari  belum  memperlihatkan  efek  yang signifikan terhadap panjang siklus estrus.
Gambar 2 .  Hasil  pengamatan  efek  rumput  kebar terhadap  panjang  siklus  estrus  kumulatif tikus
Keterangan  :  tanda  (*)  menyatakan  berbeda  signifikan  terhadap kontrol negative (P <0,05) tanda (#) menyatakan berbeda signifikan terhadap kontrol positif ( P <0,05)
Pengamatan  dilanjutkan  dari  hari  ke-8  sampai  hari ke-14,  dalam  waktu  tersebut  pemberian  sediaan  uji dihentikan. Hal ini ditujukan untuk melihat adanya efek dari akumulasi pemberian sediaan uji selama seminggu sebelumnya.    Berdasarkan Gambar  2 dapat  dilihat bahwa  kontrol  negatif  memiliki  waktu  siklus  estrus paling  panjang  diantara  semua  kelompok.    Meskipun semua  kelompok  memiliki  waktu  estrus  yang  lebih pendek dibandingkan kontrol negatif, akan tetapi hasil analisis  statistik  menunjukkan  FERK,  ERK  dan  kontrol positif memiliki perbedaan yang signifikan dibandingkan  kontrol  negative  (P<0,05).  Hal  ini menyatakan  bahwa  FERK,  ERK  dan  kontrol  positif memiliki efek untuk memperpendek siklus estrus tikus. Kelompok  yang  diberi  FERK  memiliki  efek  paling  tinggi dalam  memperpendek  siklus  estrus  dibandingkan dengan  kelompok  ERK  maupun  kontrol  positif.  Rata- rata  panjang  siklus  estrus  pada  pemberian  FERK  yaitu 88,8  jam.  Dengan  memperpendek  waktu  siklus  estrus akan mempercepat terjadi fase estrus kembali selama 7 hari.

## Efek  Ekstrak  Dan  Fraksi  Rumput  Kebar  Terhadap Panjang Fase Estrus
Karakterisasi  setiap  fase  didasarkan  pada  proporsi antara  tiga  jenis  sel  yang  diamati  pada  apusan  vagina yaitu sel epitel, sel kornifikasi dan leukosit. Berdasarkan Gambar  3 pemberian  sediaan  uji  dan  kontrol  positif menyebabkan  fase  estrus  tikus  pada  semua  kelompok lebih  panjang  dibandingkan  kontrol  negatif  pada  hari ke-1  sampai  ke-7.  Berdasarkan  hasil  analisis  statistik,
K on tro l N eg at if K on tro l P os iti f Fr ak si n- He xa n RK Fr ak si Et il A se ta t R K Fr ak si Ak ua de s R K Ek str ak R K 0 50 100 150 200 Kelompok Perlakuan To ta l W ak tu s ik lu s es tr u s (j am ) Hari 1-7 Hari 8-14 * * * *
hanya kelompok FERK yang memiliki fase estrus secara signifikan lebih Panjang (P <0,05) kontrol negatif. Hal ini berarti  bahwa  FERK  dapat  memiliki  efek  terhadap panjang  fase  estrus  pada  minggu  awal  pemberian sediaan dengan panjang fase estrus selama 139,2 jam. Hari ke-8 pemberian sediaan uji dihentikan, akan tetapi pengamatan  terhadap  fase  estrus  tetapi  dilanjutkan sampai hari ke-14. Berdasarkan Gambar 3 dapat dilihat bahwa panjang waktu estrus hari ke-8 sampai 14 pada kelompok  kontrol  positif,  ERK,  FHRK  dan  FERK  secara signifikan  (P  <0,05)  lebih  panjang  dibandingkan  fase estrus kelompok kontrol negatif dan FARK. Maka dapat dinyatakan bahwa FHRK, ERK dan FERK masih memiliki efek  estrogenik  pada  hari  ke-14  meskipun  pemberian perlakuan  dihentikan  pada  hari  ke-7.  Fase  estrus  FERK paling panjang (72 jam) dan sebanding dengan kontrol positif (P>0,05).

## Gambar 3 . Hasil  pengamatan  efek  rumput  kebar terhadap panjang fase estrus
Keterangan  :  tanda  (*)  menyatakan  berbeda  signifikan  terhadap kontrol negative (P <0,05) tanda (#) menyatakan berbeda signifikan terhadap kontrol positif ( P <0,05)
Efek  pemberian  ERK  Claudia  (2018)  melaporkan bahwa  pemberian  ekstrak  etanol  70%  rumput  kebar dosis 378 mg/200 g BB selama 7 hari memberikan efek estrogenik pada tikus dengan panjang siklus estrus dan fase  estrus  setelah  pemberian  ekstrak  adalah  152  jam dan  168  jam.  Hal  ini  sejalan  dengan  penelitian  ini, namun  panjang  siklus  estrus  dan  fase  estrus  pada penelitian tersebut lebih panjang dibandingkan dengan penelitian ini.
Siklus  estrus  adalah  proses  berulang  yang menggambarkan  perubahan  kadar  hormon  reproduksi yang  disebabkan  oleh  ovarium  aktivitas  di  bawah pengaruh  hormon  hipofisis  (Aritonang et  al .  2017).
Siklus  dikendalikan  oleh Lutheinizing  Hormone (LH), Folicle  estrus,  produksi  Follicle  stimulating  hormone (FSH)  dan  LH  yang  saling  bekerja  sama  dalam mengendalikan  estrus,  dimana  produksi  FSH  ditekan dan  LH  meningkatkan  sehingga  terjadi  pematangan folikel-folikel menjadi Folikel de Graaf. Folikel de Graaf yang  matang  akan  menghasilkan  hormone  estrogen yang berperanan dalam timbulnya gejala estrus. Setiap  perlakuan  memiliki  panjang  siklus  estrus berbeda-beda dan hal ini berkaitan dengan panjangnya fase  estrus.  Perpanjangan  siklus  estrus  bermanfaat karena  memberikan  efek  penting  pada  reproduksi karena  dapat  mengurangi  jumlah  siklus  kumulatif  dan sangat  potensial  dalam  hal  fertilitas  (Maheswari et  al. 2016).  Dengan  memperpanjang  waktu  birahi  pada betina sehingga waktu kawin akan panjang.
Rumput  kebar  teridentifikasi  mengandung  senyawa alkaloid,  flavonoid,  saponin,  tannin  dan  steroid. Senyawa-senyawa  yang  teridentifikasi  dalam  rumput kebar  memiliki  tingkat  kepolaran  yang  berbeda, sehingga untuk menarik senyawa tersebut membutuhkan  pelarut  dengan  tingkat  kepolaran  yang berbeda  pula.  Sulaiman et  al., (2011)  dan  Ngo et  al. (2017)  menyatakan  bahwa  salah  satu  faktor  penting yang  mempengaruhi  efisiensi  senyawa  bioaktif  dari tanaman adalah metode ekstraksi dan pelarutnya. Secara  keseluruhan  FERK  dinyatakan  memiliki  efek yang  paling  baik  diantara  sediaan  rumput  kebar lainnya.  Hal  ini  diduga  disebabkan  karena  FERK kemungkinan  dapat  menarik  lebih  banyak  senyawa aktif yang berperanan dalam efek estrogenik. Selain itu rumput  kebar  juga  memiliki  aktivitas  antioksidan  yang baik setara dengan vitamin C dan vitamin E (aminudin et al. 2020).
Pemberian  fitoestrogen  dengan  dosis  yang  tepat diharapkan dapat memberikan efek yang menguntungkan  pada  keseimbangan  hormon  dalam tubuh, terutama pada pasien menopause. Fitoestrogen dapat  berperan  dalam  menstabilkan  fungsi  hormonal, dengan  menghambat  aktivitas  estrogen  berlebihan yang  dapat  menyebabkan  kanker  dan  juga  dapat menggantikan  ketika  kadar  estrogen  dalam  tubuh rendah (Maheswari et al. 2016).
Rumput  kebar  yang  dapat  berperan  sebagai fitoestrogen  dapat  memperpendek  siklus  estrus  dan memperpanjang  fase  estrus.  Fenomena  ini  diduga disebabkan  oleh  pemblokiran  reseptor  estrogen  oleh fitoestrogen  sehingga  reseptor  tidak  dapat  ditempati oleh  estrogen.  Dengan  kata  lain,  fitoestrogen  dapat bersaing  dan  menggantikan  fungsi  estrogen  (Mostrom &  Evans 2018).  Untuk memperkuat  dugaan,  penelitian
Ko nt ro l N eg at if
Ko nt ro l P os iti f
Fr ak si N H ex an Fr ak si e til A se ta t Fr ak si A ku ad es Ek st ra k 0 50 100 150 200 Kelompok Perlakuan L am a F as e E st ru s (J am ) Hari Ke 1-7 Hari Ke 8-14 * * * * * *
efek  estrogenik  rumput  kebar  masih  memerlukan  uji lanjut  terutama  terkait  pengaruh  terhadap  hormon estrogen dan juga histologi ovarium.

## SIMPULAN
Pemberian  ERK  dan  FERK  memiliki  efek  estrogenik dengan memperpendek siklus estrus menjadi memperpanjang  fase  estrus.  Siklus  estrus  terpendek dan  fase  estrus  terpanjang  diperoleh  setelah pemberian  FERK  selama  7  hari  perlakuan,  dengan potensi sebanding dengan kontrol positif.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Kami ucapkan terimakasih sebesar-besarnya kepada LPPM  Universitas  Pakuan  yang  telah  mendanai penelitian ini pada Tahun 2021.

## DAFTAR PUSTAKA
[DepKes  RI]  Departemen  Kesehatan  RI.  2000. Parameter  standar  umum  ekstrak  tumbuhan  obat. Direktorat  Jendral Pengawasan Obat dan Makanan, Jakarta.
Aminudin, Andarwulan N, Palupi NS, Arifiantini I. 2020. Characteristics  and  Antioxidant  Activity  of  Kebar Grass ( Biophytum
petersianum ) Extract.
Biosaintifika: Journal of Biology & Biology Education . 12. 178-185.
Aritonang,  T.  R.,  Rahayu,  S.,  Sirait,  L.  I.,  Br  Karo,  M., Simanjuntak, T. P., Natzir, R., Sinrang, A. W., Massi, M.  N.,  Hatta,  M.  and  Kamelia,  E. 2017.  The  Role of FSH,  LH,  Estradiol,  and  Progesterone  Hormone  on Estrus Cycle of Female Rats. IJSBAR ; 35:1: 92100.
Byers  SL,  Wiles  MV,  Dunn  SL,  Taft  RA.  2012.  Mouse estrous  cycle  identification  tool  and  images.  PLoS One.;7(4).
Claudia  N.  2018.  Uji  Efektivitas  Ekstrak  Etanol  70% Rumput  Kebar  ( Biophytum  petersianum )  Sebagai Estrogenik  Pada  Tikus  Putih.  [Skripsi].  Bogor  (ID): Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam, Universitas Pakuan.
Desmawati  D,  Sulastri  D.  2019.  Phytoestrogens  and
Their Health Effect. J Med Sci . 14;7(3):495-499. doi:
10.3889/oamjms.2019.044. PMID: 30834024;
PMCID: PMC6390141.
Goldman,  J.  M.,  Murr,  A.  S.,  Cooper,  R.  L.  2007. The rodent  estrous  cycle:  Characterization  of  vaginal cytology and its utility in toxicological studies. Birth Defects Res B 80, 84 – 97.
Hanani, E. 2015. Analisis Fitokimia. Jakarta (ID): EGC.
Maheshwari H, Satyaningtijas AS, Harlina E, Cahyaningsih  U,  Effendi  M,  Mustofa  MA,  Bekalani YK.  2016.  The  Role  of  Fennel  Infusion  on  Estrous Cycle  and  Follicles  Development  of  White  Rats. Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia 14(1): 19-25. Mostrom  M,  Evans  TJ  .2018.  Phytoestrogens,  in:
Veterinary  toxicology:  basic  and  clinical  principles: Third Edition. Kentucky (USA) :Elsevier , pp. 817 – 833. https://doi.org/10.1016/B978-0-12-811410- 0.00060-X
Ngo,  T.  V.,  Scarlett,  C.  J., Bowyer, M.  C.,  Ngo, P.  D.,  & Vuong,  Q.  V.  2017.  Impact  of  different  extrac-  tion solvents  on  bioactive  compounds  and  antioxi-  dant capacity from the root of Salacia chinensis L. Journal of Food Quality , 1(11), 1-8.
Sambodo,P.,  Thethool,  A.N.  dan  Rumetor,  S.D.  2015. Efek  antikolesterol  fraksi  n-Heksana  rumput  Kebar pada hewan model hiperlipidemia. Jurnal Kedokteran Hewan. 9 (1): 59-60 Sulaiman, S. F., Sajak, A. A. B., Ooi, K. L., Su- priatno, & Seow,  E.  M.  2011.  Effect  of  solvents  in  extracting polyphenols  and  antioxidants  of  se-  lected  raw Vegetables .  Journal  of  Food  Composition  and Analysis , 24, 506 – 515.
Suparni  IE &  Astutik  RY.  2016.  Menopouse  Masalah dan Penangannya. Yogyakarta: Deepublish : 79. Turner  JV,  Agatonovic-Kustrin  S,  Glass  BD.  2007.
Molecular  aspects  of  phytoestrogen  selective binding  at  estrogen  receptors.  J  PharmSci. 96(8):1879 – 85.
Whitten MK. 1957 Effect of exteroceptive factorson the œstrous  cyc le  of  mice. Nature. 180,  1436.
(doi:10.1038/1801436a0)