## Biodegradasi Minyak Solar Menggunakan Isolat Bakteri Indigenous Mangrove Tritih Kulon, Cilacap
Pangeran Andareas
Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Prima Indonesia, Jl. Raya Babelan KM 9,6, Bekasi
Surel: pangeranandareas@gmail.com

## Abstrak
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mendapatkan  isolat  bakteri  dari  Mangrove Tritih  Kulon,  Cilacap  dan  mengetahui  kemampuan  isolat  bakteri  tersebut  dalam mendegradasi  minyak  solar.  Isolasi  dilakukan  menggunakan  medium  SMSS  +  2% minyak solar. Diperoleh 8 isolat bakteri yang diduga mampu mendegradasi minyak solar. Skrining terhadap 8 isolat dilakukan dengan metode pewarnaan lugol’s iodine untuk  memilih  2  isolat  terbaik  dalam  mendegradasi  minyak  solar.  Identifikasi terhadap ke 2 isolat menggunakan API 20 NE (Biomeriux), diketahui bahwa Isolat F Aeromonas  hydrophila dan  Isolat  H Burkholderia  cepacia .  Uji  biodegradasi minyak  solar  dilakukan  menggunakan  isolat  tunggal,  campuran  dan  kontrol.  Sisa minyak solar hasil uji biodegradasi pada isolat F sebesar 41 %, isolat H sebesar 26 %, campuran (Isolat F + Isolat H)  sebesar 38 % dan  kontrol (tanpa isolat) sebesar 79  %.  Hasil  analisis Gas  Chromatography-Mass  Spectroscopy (GC-MS) menunjukkan  beberapa  senyawa  minyak  solar  yang  mengalami  penurunan konsentrasi.  Senyawa-senyawa  yang  diduga  mengalami  degradasi  pada  perlakuan kontrol  ( hexadecanoic  acid,  methyl  ester dan dodecane ), Aeromonas  hydrophila ( heptadecane dan pentadecane ), Burkholderia  cepacia (heptadecane  dan pentadecane) dan  campuran  ( hexadecanoic  acid,  methyl  ester  dan  octadecenoic acid, methyl ester ).
Kata kunci : mangrove, biodegradasi, gas chromatography-mass spectroscopy

## Abstract
This  study  aims  to  obtain  bacterial  isolates  from  Mangrove  Tritih  Kulon, Cilacap  and  determine  the  ability  of  the  bacterial  isolates  to  degrade  diesel  oil. Isolation  used  SMSS  medium  +  2%  petroleum  diesel.  Retrieved  8  suspected bacterial  isolates  capable  of  degrading  diesel  oil.  Screening  for  8  isolates performed  with  Lugol's  iodine  staining  method  for  selecting  the  best  2  isolates  in degrading diesel oil. Identification of the 2 isolates used API 20 NE (Biomerieux), F isolate was identified as Aeromonas hydrophila and H isolate was Burkholderia cepacia. Diesel oil biodegradation test used a single isolate, consortium of two and control. Residual diesel oil biodegradation test results on F isolate by 41%, 26% H isolate, consortium (F + H Isolates) by 38% and control (without any isolates) by 79%. The analysis of Gas Chromatography-Mass spectroscopy (GC-MS) indicated that  the  biodegradation  processes  decreased  the  concentration  of  various compounds. The compounds were thought to be degraded in the control treatment
(hexadecanoic  acid,  methyl  ester  and  dodecane),  Aeromonas  hydrophila (heptadecane  and  pentadecane),  Burkholderia  cepacia  (heptadecane  and pentadecane)  and  consortia  (hexadecanoic  acid  and  octadecenoic  acid  methyl ester, methyl ester).
Keywords: mangrove, biodegradation, gas chromatography-mass spectroscopy

## 1. Pendahuluan
Ekosistem  mangrove  dikenal  sebagai  salah  satu  ekosistem  yang  dinamik  karena  pengaruh fisika,  kimiawi  dan  biologis  seperti  pasang  surut  air  laut,  asupan  air tawar dari daratan, akumulasi mineral  dan  polutan  dari  daratan  dan  proses  dekomposisi  materi,  serta  aktivitas  mikroorganisme (Soedradjat,  2003).  Ekosistem  mangrove  kaya  akan  bahan  organik,  hal  ini  diduga  akan mempengaruhi  kelimpahan  dan  keanekaragaman  plasma  nutfah  salah  satunya  adalah mikroorganisme, sehingga perlu dilakukan upaya eksplorasi untuk pemamfaatan optimum. Kondisi mangrove yang demikian ternyata memiliki tingkat pencemaran perairan yang cukup tinggi.
Salah  satu  penyebab  pencemaran  ekosistem  mangrove  yaitu  limbah  minyak  solar (hidrokarbon) yang bersifat rekalsitran (sulit mengalami biodegradasi atau dekomposisi) dari antara lain  kegiatan  industri,  transportasi,  pengeboran,  proses  produksi,  dan  tumpahan  minyak. Pencemaran tersebut dapat mempengaruhi kehidupan organisma pada lingkungan tersebut, sehingga perlu dilakukan suatu upaya untuk menyelesaikan pencemaran tersebut.
Usaha  penyelesaian  masalah  pencemaran  perairan  oleh  minyak  solar  dapat  dilakukan dengan  pemanfaatan  mikroba.  Mikroba  pendegradasi  hidrokarbon  akan  mengurai  pencemar lingkungan perairan (minyak solar).
Beberapa  jenis  bakteri  yang  merupakan  pendegradasi  hidrokarbon  yang  efektif  di lingkungan  alami  telah  diisolasi  antara  lain Enterobacter  aerogenes , Proteus  vulgaris , Serratia marcescens , Staphylococcus  aureus , Acinetobacter  calcoaceticus , Aeromonas sp., Alcaligenes paradoxus , Bacillus  licheniformis , Flavobacterium  lutescens , Micrococcus  luteus,  Pseudomonas fluorescens , and Vibrio paraheamolyticus (Kayode-Isola et al ., 2008)
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mendapatkan  isolat  bakteri  dari  Mangrove  Tritih  Kulon, Cilacap  dan  mengetahui  kemampuan  isolat  bakteri  tersebut  dalam  mendegradasi  minyak  solar dengan menggunakan kultur tunggal dan campuran isolat bakteri .

## 2. Metode Penelitian
a. Isolasi Mikroba Pendegradasi Minyak Solar.
Isolasi  mikroba  pendegradasi  minyak  solar  dari  tanah  rhizosfer  tanaman  mangrove  Tritih Kulon,  Cilacap  dengan  menggunakan  media  yang  ditambahkan  minyak  solar  sebagai  satu-satunya sumber  karbon.  Media  yang digunakan adalah medium basal Stone Mineral Salt Solution (SMSS) yang  merupakan  campuran  dari  CaCO 3 ,  NH 4 NO 3 ,  Na 2 HPO 4 .7H 2 O,  MgSO 4. 7H 2 O,  KH 2 PO 4 ,  bacto agar, akuades.
b. Seleksi Isolat Bakteri Terbaik Dalam Mendegradasi Minyak Solar.
Proses  seleksi  dipilih  2  isolat  bakteri  terbaik  dalam  mendegradasi  minyak  solar menggunakan teknik perwarnaan dengan lugol’s iodine berdasarkan luas zona jernih yang terbentuk disekitar koloni bakteri (Lie et al ., 2011).
c. Identifikasi Bakteri Pendegradasi Minyak Solar.
Identifikasi bakteri dilakukan secara biokimia menggunakan API 20 NE. Proses identifikasi diawali dengan menumbuhkan bakteri pada medium Natrium Agar (NA) dan diinkubasi selama 24 jam.
d. Uji  Kemampuan  Bakteri  Dalam  Mendegradasi  Minyak  Solar  (Modifikasi  Odjajare et  al ., 2008).
Isolat  bakteri  dengan  jumlah  10 7 yang  telah  dimurnikan di inokulasikan ke dalam medium mineral cair (SMSS) yang mengandung 2% (v/v) minyak solar. Medium yang berisi biakan tersebut diinkubasi pada suhu 30 o C dan diguncangkan di atas shaker dengan kecepatan 120 rpm. Konsentrasi minyak solar sisa dihitung pada hari ke-0 dan ke-14. Hal tersebut dilakukan pada interval waktu 14 hari dimaksudkan untuk memperoleh nilai yang cukup signifikan pada saat pengukuran konsentrasi minyak  solar  sisa.  Hal  yang  sama  dilakukan  pada  isolat  konsorsium  dan  perlakuan  tanpa penambahan isolat sebagai kontrol sebagai parameter.
e. Ekstraksi Minyak Solar (Modifikasi Greenberg et al. 1992, diacu dari Udiharto 1995).
Medium  perlakuan  diekstraksi  pada  akhir  inkubasi  (14  hari)  dengan  menambahkan  25  ml kloroform ke dalam tabung perlakuan kemudian dimasukkan ke dalam corong pemisah dan dikocok perlahan  selama  15  menit  sampai  larutan  terpisah  dua bagian, diulangi ekstraksi ini sampai 3 kali. Bagian  atas  yang  berupa  air  dikeluarkan  sedangkan  bagian  bawah  ditampung  dalam  pinggan porselin.  Ekstrak  dalam  pinggan  porselin  tersebut  dimasukkan  ke  dalam rotary  evaporator pada suhu 80 ºC selama 15 menit. Ekstrak dimasukkan dalam tabung vial  dan dipanaskan menggunakan hot plate pada suhu 100 o C selama 30 menit kemudian ditimbang sampai bobotnya konstan.
Bobot minyak solar sisa dihitung dengan menggunakan rumus :
Keterangan:
KM  = Kadar minyak solar sisa (%)
A     = Kadar minyak solar awal (g)
B    = Kadar minyak solar setelah uji  biodegradasi (g)
f. Perhitungan Jumlah Bakteri
Masing-  masing  perlakuan  diamati  populasi mikrobanya dengan metode TPC ( Total Plate Count )  didasarkan  pada  nilai  cfu  (c olony  forming  unit ) dengan  cara pour-plate pada  media  NA. Pengamatan dilakukan pada hari ke-0, hari ke-7 dan hari ke-14.

## g. Pengukuran Nilai pH
Sebelum  digunakan,  pH  meter  dikalibrasi  terlebih  dahulu  dengan  menggunakan  buffer standard (pH= 4,01; 7,01 dan 10,01). Penentuan nilai pH menggunakan pH meter yang dicelupkan ke  dalam  larutan  perlakuan  dengan  digerakkan  perlahan  sampai  menunjukkan  nila  konstan.  Setiap kali selesai pengukuran pH larutan, sensitive head electrode dicuci dengan akuades. Pengukuran pH dilakukan pada hari ke-0, hari ke-7 dan hari ke-14.

## 3. Hasil Dan Pembahasan
a. Isolasi, Seleksi dan Identifikasi Bakteri Pendegradasi Minyak Solar
Sebanyak 8 isolat bakteri berhasil diisolasi dari rhizosfer tanaman Mangrove Tritih Kulon, Cilacap. Isolat bakteri yang diperoleh  merupakan isolat yang berasal dari koloni representatif yang tumbuh pada permukaan medium (SMSS padat + 2% solar). Hasil isolasi dapat dilihat pada Tabel 1. Koloni yang tumbuh pada permukaan agar diperkirakan koloni bakteri pendegradasi hidrokarbon. Hal  tersebut  karena  medium  yang  digunakan  untuk  isolasi  merupakan  medium  selektif  yang mengandung  senyawa  hidrokarbon  sebagai  sumber  karbon.  Kemudian  untuk  menentukan  isolat unggul dilakukan seleksi lanjutan, hasilnya disajikan pada Gambar 1.
Konsentrasi  minyak  solar  yang  digunakan  dalam  penelitian  sebesar 2% (v/v). Hal tersebut bertujuan agar bakteri dapat menggunakan minyak solar untuk pertumbuhan. Sadouk et al., (2009) melaporkan  bahwa  konsentrasi  minyak  solar  lebih  dari  3%  (v/v)  akan  menghambat  pertumbuhan bakteri.
Koloni yang tumbuh pada medium (SMSS pada + 2% solar) selanjutnya diinokulasikan ke medium NA dalam cawan petri untuk dilakukan pemurnian dan karakterisasi menggunakan metode strek quadrant . Selanjutnya koloni tunggal yang tumbuh kemudian dipindahkan ke medium miring NA sebagai stok. Isolat yang didapat diberi kode isolat A-H. Seleksi dilakukan terhadap delapan.
Tabel 1.
Karakterisasi hasil isolasi bakteri pendegradasi minyak solar pada media NA.
Isolat  bakteri yang diperoleh untuk memilih dua isolat tebaik dalam mendegradasi minyak solar.  Seleksi  isolat-isolat  tersebut  dilakukan  dengan  menginokulasikan  1  ose  isolat  bakteri      pada media  NA,  kemudian  diinkubasi  selama  24  jam  setelah  itu  koloni  bakteri  ditetesi  dengan Lugol’s iodine .  Zona  jernih  yang  terbentuk  di  sekeliling  koloni  disebabkan  oleh  tingginya  afinitas lugol’s iodine terhadap  biosurfaktan  yang  dihasilkan  bakteri  untuk  mendegradasi  senyawa  organik  dan anorganik (Lie et al ., 2011; Usharani et al ., 2012; Fossi dan Tavea, 2013), diduga interaksi tersebut juga  terjadi  antara lugol’s  iodine dengan  enzim  pendegradasi  minyak  solar  yang  dihasilkan  oleh bakteri  tersebut.  Hasil  seleksi  isolat-isolat  tersebut  dipilih  dua  isolat  terbaik  dalam  mendegradasi minyak  solar  yaitu  isolat  F  dan H (Gambar 1). Seleksi isolat-isolat tersebut dilakukan berdasarkan zona jernih terluas yang terbentuk di sekeliling koloni.
Dua  isolat  terbaik hasil seleksi diidentifikasi menggunakan uji biokimia API 20 NE. Hasil identifikasi  diketahui  yaitu  isolat  F merupakan spesies Aeromonas hydrophila , sedangkan isolat H adalah Burkholderia cepacia . Kedua isolat tersebut merupakan bakteri yang memiliki kemampuan dalam  mendegradasi  hidrokarbon  (Supriadi,  2006;  Hamzah et  al .,  2010).  Selanjutnya  kedua  isolat tersebut diujikan pada medium cair yang mengandung minyak solar untuk mengetahui kemampuan degradasi minyak solar.
Gambar 1. Seleksi isolat unggul pendegradasi minyak solar menggunakan teknik pewarnaan Lugol’s iodine . (A) Isolat A, B, C, D, Kontrol (K) ;       (B) Isolat E, F, G, H, Kontrol (K).
b. Pola pertumbuhan isolat bakteri selama proses biodegradasi minyak solar
Dari  hasil  pengamatan  terhadap  isolat  bakteri Aeromonas  hydrophila , Burkholderia dan isolat campuran dapat tumbuh dan mampu menggunakan minyak solar yang terdapat pada medium, sebagai sumber karbon untuk proses metabolisme. Perhitungan pertumbuhan pada hari ke-0, 7 dan 14 inkubasi menunjukkan pola pertumbuhan yang sama diantara isolat, seperti terlihat pada Tabel 2.

## Sumber: diolah dari data primer
Tabel 2 menunjukkan bahwa pertambahan waktu inkubasi meningkatkan jumlah sel bakteri, hal  ini  disebabkan  tersedianya  nutrisi  yang  cukup  dalam  media  pertumbuhan. Media pertumbuhan yang  merupakan  medium  biodegradasi  SMSS  dengan  penambahan  minyak  solar  sebagai hidrokarbon. Sampai akhir inkubasi populasi bakteri masih menunjukkan peningkatan populasi hal ini  diduga  karena  medium  biodegradasi  masih  mengandung  cukup  nutrisi  yang  dibutuhkan  oleh bakteri  untuk  pertumbuhan.  Horowitz et  al .,  (2005)  menyatakan  bahwa  nutrisi  yang  mengandung karbon  dan  nitrogen  merupakan  salah  satu  faktor  yang  menunjang  petumbuhan  bakteri  penghasil biosurfaktan.
c. Perubahan pH medium biodegradasi
Kondisi  pH  mempengaruhi  pertumbuhan  bakteri  serta  kemampuan  bakteri  dalam mendegradasi  hidrokarbon  minyak  solar.  Kondisi  pH  yang  normal  atau  netral  membuat pertumbuhan  sel  spesies  optimum.  Jumlah  sel  spesies  yang  optimum  akan  meningkatkan kemampuan  spesies  dalam  degradasi  senyawa  hidrokarbon.  Peningkatan  tingkat  degradasi
A B
Tabel 2. Pertumbuhan bakteri Aeromonas hydrophila , Burkholderia cepacia dan Campuran pada medium SMSS + 2% minyak solar.
diindikasikan  dari  penurunan  nilai  kadar  minyak  solar  setiap  harinya.  Kondisi  optimum pH dalam tingkat degradasi minyak solar yang baik adalah pH 7-7,5.
Awal  inkubasi  nilai  pH  medium  semua  perlakuan  adalah  7,  dimana  mayoritas mikroorganisme  akan  tumbuh  subur  pada  pH  tersebut.  Selama  proses  biodegradasi  berlangsung nilai  pH  speises  tunggal  dan  campuran  mengalami  penurunan  (Grafik  1)  diduga  disebabkan  oleh akumulasi metabolit yang dihasilkan oleh bakteri seperi asam organik (Beilen dan Funhoff, 2007).

## d. Analisis kemampuan degradasi hidrokarbon

## 1. Kadar minyak solar sisa
Hasil  yang  diperoleh  pada  Diagram  1  menunjukkan  bahwa  penggunaan  campuran  bakteri memiliki  kemampuan  lebih  rendah  dibandingkan  dengan  kultur  tunggal  (Burkholderia cepacia) dalam  menguraikan  minyak  solar.  Hal  tersebut  menunjukkan  bahwa  kedua  kultur  tidak  bersifat sinergistik dalam mengurai solar.
Bukti  tersebut  dapat  sebagai  indikasi  bahwa A.  hydrophila  dan  B.  cepacia kemungkinan bersifat antagonis atau berkompetisi dalam menggunakan substrat  atau sumber karbon yang ada di dalam  minyak  solar  sehingga  efesiensi  isolat  bakteri  dalam  mendegradasi  minyak  solar  tersebut tidak tercapai (Ghazali et al., 2004).
Diagram 1. Kadar minyak solar sisa pada medium (SMSS + 2% minyak solar) setelah inkubasi selama 14 hari.
Grafik 1. Perubahan PH medium (SMSS + 2% minyak solar) pada masing-masing perlakuan.
Dari  hasil  dapat  terlihat  bahwa  perlakuan  tanpa  inokulasi  bakteri  (kontrol)  mengalami penurunan konsentrasi komponen penyusun minyak solar. Menurut Tam et al ., (2002) menyatakan bahwa  perombakan  hidrokarbon  tidak hanya dilakukan oleh mikroba tetapi juga dapat terurai oleh proses  nonbiologis.  Misalnya  pengaruh  suhu  (penguapan),  foto-oksidasi,  oksidasi  kimia, bioakumulasi dan absorbsi oleh sedimen partikel.

## 2. Perubahan konsentrasi senyawa hidrokarbon yang terdegradasi menggunakan GC-MS
Analisis kemampuan degradasi hidrokarbon dilakukan untuk mengetahui kemampuan isolat bakteri  dalam  menggunakan  senyawa  hidrokarbon  sebagai  sumber  karbon.  Kemampuan  tersebut dapat  dilihat  dari  perubahan  konsentrasi  senyawa  hidrokarbon  awal  dan  akhir.  Perubahan konsentrasi  dapat  dianalisis  menggunakan  kromatografi  gas dan spektrometer massa dalam bentuk perubahan luas area. Kromatografi gas digunakan karena senyawa hidrokarbon merupakan senyawa yang  mudah  menguap  dan  memiliki  titik  didih  yang  tinggi.  Menurut  Milner  (2005),  sampel  yang digunakan  pada  kromatografi  gas  harus  bersifat  mudah  menguap  dan  tidak  cocok  untuk  sampel yang  mudah  rusak  pada  suhu  tinggi.  Penggunaan  kromatografi  gas  dengan  spektrometer  massa bertujuan untuk identifikasi senyawa yang tidak diketahui (Meier et al ., 2000).
Hasil  yang  diperoleh  analisis  GC-MS  berupa  kromatogram  dan  data library .  Hasil kromatografi gas dan data library pada perlakukan kontrol diketahui dua senyawa yang mengalami penurunan  konsentrasi  terbesar  yaitu, Hexadecanoix  acid , methyl  ester dan Dodecane . Hexadecanoix  acid,  methyl  ester merupakan  senyawa  yang  memiliki  rumus  molekul  C 17 H 34 O 2 . Penurunan  senyawa tersebut secara signifikan terjadi pada masa inkubasi hari ke-14, hingga hanya tersisa  3,37%  dari  yang  semula  15,55%. Dodecane merupakan  senyawa  dengan  rumus  molekul C 12 H 6 ,  hasil  analisis  menunjukkan  bahwa  jumlah  konsentrasi  senyawa Dodecane yang tersisa sebasar 0,60% dari yang semula 1,72%. Penurunan konsentrasi senyawa Hexadecanoix acid, methyl ester dan Dodecane diduga  terdegradasi  secara  fisik  atau  kimiawi.  Menurut  Tam et  al .,  (2002) menyatakan bahwa perombakan hidrokarbon tidak hanya dilakukan oleh mikroba tetapi juga dapat terurai  oleh  proses  nonbiologis.  Misalnya  pengaruh  suhu  (penguapan),  foto-oksidasi,  oksidasi kimia, bioakumulasi dan absorbsi oleh sedimen partikel.
Hasil  analisis  perlakuan  yang  diinokulasi A.  hydrophila , B.  cepacia dan  campuran menunjukkan  beberapa  senyawa  yang  mengalami  penurunan  konsentrasi.  Perlakuan  inokulasi A. hydrophila menunjukkan  dua  senyawa  hidrokarbon  yang  diduga  mengalami  degradasi  yaitu Heptadecane dan Pentadecane .  Perlakuan  inokulasi B.  cepacia menunjukkan  dua senyawa hidrokarbon yang  diduga  mengalami  degradasi  yaitu Heptadecane dan Pentadecane .  Perlakuan inokulasi campuran menunjukkan dua senyawa hidrokarbon yang diduga mengalami degradasi yaitu hexadecanoix  acid , methyl  ester dan octadecenoic  acid,  methyl  ester .  Menurut  Madigan et  al ., (2012),  senyawa  hidrokabon  akan  didegradasi  oleh  bakteri  dengan  enzim  monooksigenasi  yang akan  mengubah  hidrokarbon  menjadi  alkohol,  selanjutnya  alkohol  akan  diubah  menjadi  aldehid yang akan diubah menjadi asam dan asam tersebut akan masuk ke dalam jalur β-oksidasi.

## 4. Kesimpulan
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan Aeromonas  hydrophila dan Burkholderia  cepacia yang diisolasi dari lingkungan mangrove Tritih Kulon memiliki kemampuan mendegradasi minyak solar. B.  cepacia memiliki  kemampuan  terbaik  dalam  mendegradasi  minyak  solar  dengan  sisa  minyak
solar  sebesar  26  %.  Campuran A.  hydrophila dan B.  cepacia tidak  bersifat  sinergistik  dalam degradasi  minyak  solar.  Hasil  analisis  GC-MS  menunjukkan  terdapat  beberapa  senyawa  yang mengalami penurunan konsentrasi baik secara fisik maupun biologis.

## Daftar Pustaka
Beilen,  V.J.B.  and  E.G.  Funhoff.  2007.  Alkane  hydroxylases  involved  in  microbial  alkane degradation. Applied Microbiol Biotechnol 74: 13–21.
Fossi,  B.T.  and  F.  Tavea. 2013. Application of Amylolytic Lactobacillus fermentum 04BBA19 in Fermentation  for  Simultaneous  Production  of  Thermostable  α-Amylase  and  Lactic  Acid.
INTECH 27: 633-658.
Georgiou,  G.,  S.  Lin  and  M.M.  Sharma.  1992.  Surface  active  compounds  from  microorganisms.
Bioresource Technology 10: 60-5.
Ghazali,  M.,  F.  Zaliha,  N.  R.,  Abdul,  R.  N.,  Salleh,  A.  B. dan Basri, M. 2004. Biodegradation of Hydrocarbons  in  Soil  by  Microbial  Consortium. International  Biodeterioration  and Biodegradation 54: 61-67.
Hamzah,  A.,  A.  Rabu,  R.F.H.R.  Azmy  dan  N.A.  Yussoff.  2010.  Isolation  and  characterization  of bacterial degradating sumandak and south angsi oils. Sains Malaysiana 39(2): 161-168.
Harayama,  S.,  H.  Kishira,  Y.  Kasai  dan  K.  Shutubo.  1999.  Petroleum  biodegradation  in  marine environments. Journal Molecular Microbiology Biotechnology 1 : 63-70.
Horowitz, A.,  D.  Gutnick  and  E.  Rosenberg.  2005.  Sequential  Growth  of  Bacteria  Crude  Oil. Applied Microbiology. 30(1): 10-19.
Kayode-Isola,  T.M.,  K.I.T.  Eniola,  A.B.  Olayemi  and  O.O.  Igunnugbemi.  2008.  Response  of resident bacteria of a crude oil-polluted river to diesel oil. American-Eurasian Journal of Agronomy 1(1): 06-09.
Leahy,  J.G.  and  R.R.  Colwell.  1990. Microbial  degradation  of hydrocarbons in the environment. Departement of Microbiology , University of Maryland, College Park, Maryland pp. 305 – 315.
Lie, Ai-Xia., Li-Zhong Guo, Qiang Fu and Wei-Dong Lu. 2011. A simple and rapid plate assay for screening  of  inulindegrading  microorganisms  using  Lugol’s  iodine  solution. African Journal of Biotechnology 10(46): 9518-9521.
Madigan, M.T., J. Martinko and J. Parker. 2012. Brocky Biology of Microorganisms . 10 th ed. San Francisco: Benjamin Cummings. 1044 hal.
Meier, R.M., I.L. Pepper dan C.P. Gerba. 2000. Enviromental microbiology . San Diego: Academic Press. xix + 585 hlm.
Miller, J.M. 2005. Chromatography concepts and contrast. 2 nd ed. New Jersey: John Willey & Sons, Inc. xxvi + 490 hlm.
Odjadjare, E., S.O. Ajisebutu, Etinosa O. I., Olayinka A. A., Maria R. T., and Anthony I. O. 2008. Excravos  light  crude  oil  degrading  potentials  of  axenic  and  mixed  bacterial  cultures. Journal of General and Apllied Microbiology 54: 277-284.
Sadouk, Z., A. Tazerouti and H. Hacene. 2009. Biodegradation of diesel oil and production of fatty acid  esters  by  a  newly  isolated Pseudomonas  citronellolis KHA. World  Journal  of Microbiology and Biotechnology 25: 65-70.
Soedradjat,  R.  2003.  Fungsi  model  hidrodinamika  dalam  pengelolaan  ekosistem  mangrove  (studi kasus  pencemaran  minyak  di  estuari  Sungai  Donan  Cilacap). Berkala  Penelitian  Hayati 8(2): 81-84.
Supriadi. 2006. Analisis resiko agens hayati untuk pengendalian pathogen tanaman. Jurnal Litbang Pertanian . Bogor. 80 hal.
Tam, N.F.Y., C.L. Guo, W.Y. Yau and Y.S. Wong. 2002. Preliminary study on biodegradation of phenanthrene  by  bacteria  isolated  from  mangrove  sediments  in  Hong  Kong. Marine Pollution Bulletin 45: 316–324
Udiharto, M., Rahayu S.A. dan Haris A., Zulkifliani. 1995. Peran bakteri dalam degradasi minyak dan  pemanfaatannya  dalam  penanggulangan  minyak  buangan .  Di  dalam:  Prosiding Diskusi Ilmiah VIII PPPTMGB; Jakarta, 13-14 Juni 1995. hlm 235-239.
Usharani,  J.,  T.  Rajasekar  and  B.  Deivasigamani.  2012. Isolation  and  Characterization  of  SDS (Sodium  Dodecyl  Sulfate)  Degrading  Organisms  from  SDS  Contaminated  Areas. Open Access Scientific Reports 1: 148.