ISSN: 1410-8917
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 15 (3) (2012) : 88 – 93
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi Journal of Scientific and Applied Chemistry
Journal homepage: http://ejournal.undip.ac.id/index.php/ksa
Isolasi, Identifikasi dan Uji Sitotoksik Senyawa Flavonoid dari Ekstrak Etil Asetat Daun Binahong ( Anredera Cordiforlia (Tenns) Stennis)
Windi Susmayanti a , Enny Fachriyah a* , Dewi Kusrini a
a Organic Chemistry Laboratory, Chemistry Department, Faculty of Sciences and Mathematics, Diponegoro University, Jalan Prof. Soedarto, Tembalang, Semarang
* Corresponding author: enny.fachriyah@live.undip.ac.id
A r t i c l e   I n f o

## A b s t r a c t
Keywords:
separation, Madeira vine, Anredera cordifolia (Ten). Steenis, Aurones
Separation of flavonoid compound, identification and toxic test from leaves of Madeira Vine (Anredera cordiforlia (Tenns) Stennis) have been conducted. Separation was carried out by Thin Layer Chromatography, Column Chromatography, and preparative Thin Layer
Chromatography.  Purity  test  carried  out  by  chromatography  Layer  Thin  and  two dimension  Thin  Layer  Chromatography.  Identification  carried  out  by  UV-Vis Spectrometry  and  shift  reagent,  and  toxic  testing  carried  out  by  BSLT  (Brine  Shrimp Lethality  Test).  Ethyl  Acetate  Extract  and  fraction  B  column  chromatography  contain flavonoid  compound.  Identification  isolate  using  UV-vis  and  shift  reagent  showed wavelength 377 nm (band I) and 438 nm (band II). Flavonoid isolate showed Aurones. The structure nam e of isolate is 4’,6,7 Tri -hydroxyl Aurones. Cytotoxic test showed that n- hexan extrac, ethylacetate extract, ethanol extract haven’t activity because no toxic with LC50  591,68  ppm  ,  LC50  611,706  ppm,  LC50  1479,151  ppm  and  fraction  B  column chromatography have midly toxic activity with LC50 58,447 ppm.

## A b s t r a k
Kata kunci: pemisahan, binahong, Anredera cordifolia (Ten).
Steenis., Auron
Telah dilakukan isolasi, identifikasi dan uji sitotoksik senyawa flavonoid dari ekstrak etil asetat daun binahong ( Anredera cordiforlia (Tenns) Stennis). Pemisahan dilakukan dengan metode kromatografi lapis tipis (KLT), Kromatografi kolom, KLT Preparatif. Pengujian kemurnian  dilakukan  KLT  dan  KLT  2  dimensi.  Analisis  dilakukan  dengan  analisis spektrometri  UV-Vis  dengan  pereaksi  geser,  sedangkan  pengujian  sitotoksik menggunakan  BSLT (Brine  Shrimp  Lethality  Test). Ekstrak  etil  asetat  dan  fraksi  B  hasil kolom mengandung senyawa flavonoid. Analisis isolat menggunakan spektrometri UV- Vis dengan pereaksi geser menunjukkan panjang gelombang 377nm (pita I) dan 438 nm (pita  II)  merupakan  golongan  auron  dan  senyawa  yang  terkandung  adalah 4’,6,7 trihidroksi Auron. Uji sitotoksik menunjukkan hasil ekstrak n-heksana, ekstrak etanol, ekstrak  etil  asetat  tidak bersifat  toksik  dengan  masing-masing LC 50 591,68  ppm  ,  LC 50 1479,151 ppm LC 50 611,706 ppm, dan hasil fraksi B kolom bersifat sedikit toksik dengan LC 50 58,447 ppm.

## 1. Pendahuluan
Penggunaan obat tradisional cenderung meningkat. Hal ini menandai bahwa kesadaran masyarakat kembali kealam (back to nature) untuk mengatasi penyakit. Salah satu  cara  untuk  memproduksi  obat  tradisional  adalah isolasi  senyawa  obat  langsung  dari  tanaman  obat  [1].
Salah  satu  tumbuhan  yang  mengandung  senyawa  obat adalah Binahong ( Anredera cordiforlia (Tenns) Stennis).
Binahong merupakan salah satu tanaman obat yang banyak tumbuh dan digunakan secara tradisional untuk mengobati  berbagai  penyakit.  Bagian  yang  sering digunakan adalah daun. Daun binahong dapat digunakan
untuk  mengobati  penyakit  asam  urat,  stroke,  maag, diabetes, radang usus, penyembuh luka). Daun binahon berdasarkan  penelitian  memiliki  bioaktivitas  sebagai antioksidan  [2],  antibakteri  [3],  antijamur  [4], antidiabetes  [5],  antiinflamasi  [6],  antiseptik  [7],  dan antibakteri [8].
Daun  binahong  diketahui  mengandung  flavonoid, polifenol [4], alkaloid [3], steroid [9], Triterpenoid [10]. Senyawa  obat  dari  daun  binahong  untuk  mengobati penyakit  adalah  senyawa  flavonoid.  Senyawa  flavonoid dapat dilihat secara kualitatif dari intensitas warna yang tumbuh  setelah  ditambahkan  beberapa  pereaksi  untuk deteksi  senyawa  golongan  flavonoid  [11].  Berdasarkan penelitian  senyawa  flavonoid  pada  ekstrak  metanol menghasilkan  senyawa  golongan  flavonoid.  Senyawa flavonoid  yang  terkandung  didalam  ekstrak  etil  asetat daun binahong belum pernah di teliti dan dipublikasikan.
Jenis  senyawa  tertentu  menjadi  ciri  khas  suatu kelompok tumbuhan. Pada tumbuhan dengan satu family dan  genus  kemungkinan  memiliki  kandungan  senyawa yang sama [12]. Berdasarkan ilmu kemotaksonomi, pada Basella rubra Linn.  berfamili  Basellaceace mengandung senyawa flavonoid yaitu apigenin [13], kaemferol dan jenis flavonoid C-Glycoxylflavonoid [8]. Sedangkan pada daun Anredera  scandens  yang  memiliki  genus  Anredera  juga mengandung  senyawa  flavonoid  yaitu  senyawa 2,4- dihidroksi-6-metoksi-5-formil chalcone [14]. Oleh karena itu,  dapat  diduga  bahwa  daun  binahong  (Anredera cordiforlia  (Tenns)  Stennis)  yang  berfamili  Basellaceae dan bergenus Anredera mengandung flavonoid. Untuk itu dilakukan  penelitian  tentang  isolasi  dan  identifikasi golongan  senyawa  flavonoid  yang  terkandung  dalam daun  binahong  (Anredera  cordiforlia  (Tenns)  Stennis) pada ekstrak etil asetat.

## 2. Metodelogi Penelitian

## Alat & Bahan
Alat yang digunakan adalah satu set alat maserator, satu  set  alat  evaporator  putar bucchi, satu  set  alat  KLT, satu set alat kromatografi kolom, lampu UV 254 dan 366 nm,  spektrometer  UV,  pisau,  tempat  pengering,  alat penyerbuk (blender), neraca analitis, corong pisah, kaki tiga,  erlenmeyer,  labu  ukur,  pipet  tetes,  pipet  mikro, botol  vial,  tabung  reaksi,  gelas  ukur,  gelas  beker,  kaca arloji,  kaca  pembesar,  pengaduk,  botol  semprot,  kertas saring, penggaris.
Bahan yang digunakan dalam penelitian adalah daun binahong  (Anredera  cordiforlia  (Tenns)  Stennis)  yang berasal  dari  Tembalang  Semarang,  etanol,  n-heksana, etil asetat, kloroform, aquades, etanol p.a, HCl 37% p.a, serbuk Mg, amilalkohol p.a, larutan FeCl 3 1%, ammonia 25%  teknis,  H 2 SO 4 2  N  p.a,  H 2 SO 4 pekat  p.a,  pereaksi Meyer (Hg 2 Cl 2 p.a, KI p.a), pereaksi Libermann-Burched (anhidrida asam asetat p.a, H 2 SO 4 pekat p.a), silica gel 60 GF 254  , silica  gel 60,  pereaksi  geser  (  NaOH  2  M,  NaOAc, AlCl 3 5%, HCl, H 3 BO 3) , larutan Tween-20, garam krosok, telur Arthemia salina, silika gel 60, pereaksi semprot AlCl 3 5%.

## Isolasi dan Permurnian
Daun  binahong  sebanyak  2  kg  dibersihkan  dan diiris-iris tipis. Setelah itu, dikerimgkan dan dihaluskan dengan  cara  diblender.  Penyerbukan  ini  menghasilkan 200 gram. Serbuk daun binahong dimaserasi dengan n- heksana  sebagai  pelarut.  Proses  maserasi  dilakukan selama 8 kali dengan penggantian pelarut setiap 24 jam. Ekstrak n-heksana dipekatkan dengan evaporator untuk menguapkan  pelarut.  Setelah  dimaserasi  n-heksana, residu serbuk daun binahong dikeringkan dan dilakukan maserasi  kembali  dengan  etanol.  Proses  maserasi dilakukan  selama  10  kali  dengan  penggantian  pelarut setiap 24 jam. Kemudian dipekatkan untuk memperoleh ekstrak  etanol  kental.  Ekstrak  etanol  dipartisi  dengan pelarut  etil  asetat  dengan  menambahkan  aquades  (1:1). Kemudian  dipisahkan  dan  diuapkan  pelarutnya  untuk memperoleh  ekstrak  etil  asetat  pekat.  Masing-masing ekstrak dilakukan uji penapisan fitokimia.
Ekstrak  etil  asetat  dilakukan  pemisahan  dengan kromatografi lapis tipis dengan fasa gerak dan fasa diam. fasa  gerak  berupa  perbandingan  campuran  pelarut kloroform  :  diklorometana  (5:1)  dan  fasa  diam  berupa plat silika gel 60 GF 254 . Kemudian dilanjutkan pemisahan skala  besar  dengan  kromatografi  kolom  yang menggunakan fasa gerak dari KLT dan fasa diam berupa silica  gel  60.  Kromatografi  kolom  menghasilkan  botol eluat  yang  dapat  digabung  menjadi  fraksi  berdasarkan KLT.  Tiap  fraksi  dilakukan  uji  flavonoid  menggunakan KLT  dan  penampak  bercak  (diuapi  NH 3 dan penyemprotan  AlCl 3 ).  Fraksi  B  yang  positif  flavonoid dilakukan  pemisahan  lebih  lanjut  menggunakan  KLT preparatif.  Hasil  pita  preparatif  dilakukan  pengerokan dan  uji  flavonoid.  Pita  yang  positif  flavonoid  dilakukan preparative  kembali  untuk  memurnikan  kembali sehingga  isolat  yang  diduga  murni.  Isolat  murni dilakukan  uji  kemurnian  menggunakan  KLT  dan  KLT  2 dimensi.

## Identifikasi Struktur
Identifikasi  struktur  menggunakan  pereaksi  geser (NaOH  2  N,  AlCl 3 ,  HCl,  NaOAC,  H 3 BO 3 ).  Isolat  flavonoid dilarutkan  metanol,  dilakukan  pengukuran  spektrum. Larutan  flavonoid  ditambahkan  3  tetes  NaOH  2  N, dilakukan  pengukuran  spektrum,  pendiaman  5  menit dan dilakukan pengukuran spektrum. Larutan flavonoid ditambahkan  6  tetes  AlCl 3 5%  dilakukan  spektrum, kemudian ditambahkan 3 tetes HCl dilakukan spektrum. Larutan  flavonoid  ditambahkan  NaOAC  dilakukan spektrum,  kemudian  ditambahkan  H 3 BO 3 dilakukan spektrum [11].

## Uji Sitotoksik
Telur Artemina Salina ditetaskan dalam air laut selama 48 jam sehingga membentuk larva.
Pembuatan konsentrasi 1000,100,10 ppm ekstrak n- heksana,etanol,etil asetat dan fraksi B sebanyak 125 mg menggunakan  pengenceran  dengan  air  garam  dan Tween-20 . Pengujian dilakukan dengan  pemasukkan 10 larva  kedalam  botol  yang  berisi  larutan  ekstrak. Dilakukan  pendiaman  selama  24  jam.  Setelah  itu,
dilakukan  perhitungan  larva  yang  mati  dan  dianalisis menggunakan analisa probit (Spss versi 16) [15].

## 3. Hasil Dan Pembahasan

## Isolasi dan Pemurnian
Persiapan bahan meliputi
pembersihan, pengeringan  dan  penyerbukan  bertujuan  untuk menghilangkan  kotoran,  penghilangan  air  dalam  daun yang dapat mengganggu isolasi dan penyerbukan untuk memperluas permukaan. Maserasi n-heksana bertujuan untuk  mengikat  senyawa  nonpolar,  maserasi  etanol bertujuan untuk mengikat senyawa polar, dan partisi etil asetat  bertujuan  untuk  mengikat  senyawa  flavonoid. Hasil ekstraksi pada tabel 1 sebagai berikut.
Tabel 1: Hasil ekstraksi Ekstrak Berat (gram) Rendemen (%) Warna n-Heksana 1,01 0,505 Coklat Tua Etanol 12,01 6,05 Hijau Pekat Etil Asetat 4,02 2,01 Hijau
Penapisan  fitokimia  bertujuan  untuk  mengetahui kandungan senyawa yang terdapat pada daun binahong. Hasil Penapisan fitokimia pada tabel 2 sebagai berikut:
Tabel 2: Hasil penapisan fitokimia
Ekstrak  etil  asetat  mengandung  positif  flavonoid dilakukan  KLT  untuk  bertujuan  mengetahui  komponen senyawa.  KLT  menggunakan  eluen  kloroform  : diklorometana (5:1) menunjukkan daya pisah yang baik. Berikut ilustrasi KLT pada gambar 1.
Keterangan : Eluen (kloroform:diklorometana: = 5:1: dan pada lampu UV λ = 365 nm
Gambar 1. Ilustrasi KLT
Tabel 3: Harga Rf
Noda Warna Harga Rf 1 Hitam 0,06 2 Merah 0,09 3 Ungu 0,12 4 Merah 0,17 5 Ungu Kehitaman 0,22 6 Hitam 0,29 7 Merah Kekuningan 0,42 8 Pink Keorangean 0,49 9 Hitam 0,58 10 Pink Keorangean 0,68 11 Ungu Kehitaman 0,75 12 Ungu 0,98 13 Merah Kekuningan 0,99
Pemisahan  komponen-komponen  senyawa dengan kromatografi  kolom  mengunakan  eluen  kloroform  : diklorometana (5:1) menghasilkan 354 botol eluat. Eluat digabung menjadi 5 fraksi berdasarkan KLT dan menguji flavonoid, sebagai berikut :

## Tabel 3: Penggabungan fraksi
Fraksi Botol Uji Flavonoid A 1-11 + B 12-43 +++ C 44-79 ++ D 80-123 +
E 124-354 -
Pengujian  flavonoid  menunjukkan  bahwa  fraksi  B positif  dan  lebih  dominan.  Fraksi  B  dilakukan  KLT preparative menggunakan eluen kloroform : diklorometana:  n-heksana  (1:1:1)  menghasilkan  6  pita. Pita-pita  dilakukan  pengerokan  dan  uji  flavonoid. Ilustrasi KLT preparatif (1) pada gambar 2.
Keterangan : Eluen (kloroform:diklorometana: n-heksana= 1:1:1) dan dilakukan uji flavonoid tiap pita
Gambar 2. Ilustrasi KLT preparatif 1
Uji  flavonoid  menunjukkan  bahwa  pita  ke-3  lebih dominan  mengandung  flavonoid.  Untuk  itu,  dilakukan
Golongan Flavonoid Fenolik Triterpenoid/Steroid Saponim Alkaloid Daun binahong + + +/+ + - Ekstrak n-heksana - - +/+ + + Ekstrak Etanol + + +/+ - + Ekstrak Etil Asetat + + +/+ + +
KLT preparatif menggunakan eluen etanol :etil asetat: n- heksana (3:5:8) dan dilakukan uji flavonoid. Ilustrasi KLT preparatif (2) pada gambar 3.
Keterangan : Eluen (etanol: etil asetat: n-heksana= 3:5:8) dan dilakukan uji flavonoid tiap pita

## Gambar 3. Ilustrasi KLT preparatif 2
Uji  flavonoid  menunjukkan  bahwa  pita  ke-2  lebih dominan  mengandung  flavonoid.  Untuk  itu,  dilakukan KLT preparatif menggunakan eluen etanol dan dilakukan uji flavonoid. Ilustrasi KLT preparatif (2) pada gambar 4.
Keterangan : Eluen ( etanol ) dan dilakukan uji flavonoid tiap pita
Gambar 3. Ilustrasi KLT preparatif (3)
Keseluruhan  pita  diujikan  flavonoid  dengan  diuapi NH 3 dan  penyemprotan  AlCl 3 .  Pita  ke-1  positif mengandung  flavonoid.  Hal  ini  ditunjukkan  pada perubahan warna. Data perubaha warna isolat pada tabel 4 sebagai berikut.
Tabel 4: Data uji flavonoid isolat
Isolat  (kuning  kehijauan)  diujikan  kemurnian menggunakan  KLT  dengan  berbagai  pelarut  dan  KLT  2 dimensi. Hasil KLT berbagai pelarut sebagai berikut.
Keterangan : Eluen A (kloroform: diklorometana = 5:1) B (etil asetat), C (n-heksana), D (etanol: kloroform: n-heksana = 2:1:2), E (etanol: etil asetat: n-heksana = 2:3:2) dan F (etanol:
kloroform: n-heksana = 2: 2: 1)
Gambar 5. Hasil uji kemurnian
Berdasarkan hasil uji kemurnian menghasilkan satu noda.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  isolat  murni.  Untuk meyakinkan  dilakukan  KLT  2  dimensi  pada  gambar  6 sebagai berikut.
Keterangan : KLT dua dimensi. Eluen etanol: etil asetat: n- heksana = 2:3:2) dan etanol: kloroform: n-heksana = 2: 2: 1
Gambar 6. KLT 2 dimensi
KLT 2 dimensi menggunakan eluen etanol :etilasetat :  n-heksana  (2:3:2)  dan  setelah  berputar  90°  dengan eluen  etanol:  kloroform  :n-heksana  (2:2:1).  KLT  2 dimensi  ini  menghasilkan  satu  noda.  Hal  ini menunjukkan bahwa isolat tersebut murni.

## Identifikasi struktur
Penentuan  struktur  senyawa  flavonoid  dalam  pita ke-1  hasil  preparatif  yang  ke-3  (hijau  kekuningan) dilakukan  analisis  spektroskopi  UV  dan  pereaksi  geser. Berdasarkan  data  hasil  isolat  dengan  spektroskopi  uv dapat  diketahui  bahwa  terjadi  adsorpsi  cahaya  pada panjang gelombang 377 nm pada pita II dan 438 nm pada pita  I.  Rentang  serapan  sekitar  370-444  nm  pada metanol merupakan senyawa flavonoid golongan auron. Hal ini menjelaskan bahwa adanya eksitasi electron n- η * yang menunjukkan adanya ikatan konjugasi heteroatom dengan system aromatic (-C=C-C=O) dan adanya eksitasi
Noda Warna pita preparatif Rf Penguapan NH3 Penyemprotan AlCl3 Senyawa flavonoid 1 Hijau Kekuningan 0,88 Tanpa perubahan warna Kuning lebih mencolok (+) Auron 2 Hijau muda 0,76 Merah Merah keorangean (-) 3 Biru tua 0,72 Tanpa perubahan warna Tanpa perubahan warna (-)
electron  π - π*  yang  menyatakan  adanya  ikatan konjugasi (-C=C-C=C-) [16].
Untuk  mengetahui  gugus  hidroksi  pada  senyawa flavonoid maka digunakan pereaksi geser. Pereaksi geser tersebut  adalah  NaOH,  AlCl 3 ,  HCl,  NaOAc,  dan  H 3 BO 3 . Isolat  yang  diperoleh  dilakukan  analisis  menggunakan spektroskopi  uv  dengan  pereaksi  geser.  Hasil  analisis spektroskopi  uv  terhadap  isolat  dengan  penambahan pereaksi geser dapat dilihat pada gambar 7.
Gambar 7. Spektrum UV-vis
Data  spektrum  hasil  analisis  uv-vis  pada  tabel  7 sebagai berikut.

## Tabel 7: Data hasil analisis UV-vis
Letak  hidoksi  pada  struktur  dengan  penambahan pereaksi  geser  NaOH  menunjukkan  ada  pergeseran batokromik sebesar 117 nm tanpa kenaikan kekuatan. Hal ini  menunjukkan  adanya  4’OH  pada  cincin  B.  Pada penambahan AlCl 3 menunjukkan pergeseran 2 nm pada pita  I  menunjukkan  adanya  gugus  ortohidroksi  pada cincin  A.  Al 3+ dapat  membentuk  komplek  tidak  tahan asam pada gugus ortohidroksi.
Sedangkan pada penambahan HCl terjadi pergeseran batokromik sebesar 8 nm. Hal ini menunjukkan adanya gugus komplek dihidroksi.
Penambahan NaOAc mengalami pergeseran hipsokromik  sebesar  168  nm  menunjukkan  adanya ortohidroksi  pada  6-OH  dan  7-OH.  Hali  ini  diperkuat oleh  H 3 BO 3 adanya  pergeseran  hipsokromik  lebih  kecil menunjukkan adanya ortodihidroksi pada cincin A (6 - OH dan 7 - OH).
Berdasarkan hasil spektrum UV-vis dan penambahan  pereaksi  geser  menunjukkan  bahwa  hasil isolasi  memiliki  nama  struktur 4’,6,7 -trihidroksi  auron . Gambar  struktur  dapat  dilihat  pada  gambar  8  sebagai berikut.

## Gambar 8. Struktur hasil isolasi

## Uji Sitotoksik
Uji  sitotoksik  dilakukan  pada  ekstrak  n-heksana, ekstrak etanol, ekstrak etil asetat, dan hasil kolom fraksi B  menggunakan  metode  BSLT (Brine  Shrimp  Lethality Test). Metode ini sangat sederhana dan berfungsi untuk menunjukkan  potensi  aktifitas  senyawa.  Hasil  uji  BSLT ini ditunjukkan analisis probit nilai LC 50.
Berdasarkan  penelitian,  ekstrak  n-heksana  dan ekstrak etil asetat, ekstrak etanol menunjukkan nilai LC 50 591,618  ppm dan  611,706  ppm  yang menunjukkan nilai LC 50 1479,151  ppm  tidak berpotensi  karena  tidak  toksik, sedangkan hasil kolom fraksi B menunujukkan nilai LC 50 sebesar 58,447 ppm yamg beraktivitas sedikit toksik.

## 4. Kesimpulan
Hasil  isolasi  dan  identifikasi  dari  daun  binahong ( Anredera cordiforlia (Tenns) Stennis) diperoleh senyawa flavonoid golongan Auron yaitu 4 ’,6,7 Trihidroksi Auron. Hasil  uji  sitotoksik  dengan  metode  BSLT  menunjukkan berbagai aktivitas. Ekstrak n-heksana, ekstrak etil asetat dan ekstrak etanol tidak bersifat toksik sedangkan hasil fraksi B memiliki aktivitas sebagai antibakteri.

## 5. Daftar Pustaka
[1]  P Tarigan, Beberapa Aspek Kimia Sapogenin Steroid pada  Tumbuhan  di  Indonesia, Alumni,  Bandung ,
(1980)
[2]  Salmah  Orbayinah,  Efikasi  Binahong  (Anredera cordifolia (Tenore) Steenis) terhadap Kadar Alkaline Phosphatase, UMY, Yogyakarta
[3]  TE  Tshikalange,  JJM  Meyer,  AA  Hussein, Antimicrobial activity, toxicity and the isolation of a bioactive  compound  from  plants  used  to  treat sexually transmitted diseases, Journal of Ethnopharmacology , 96, 3, (2005) 515-519 http://dx.doi.org/10.1016/j.jep.2004.09.057
[4]  Nita Rochani, Uji Aktivitas Antijamur Ekstrak Daun Binahong  (Anredera  cordifolia  (Tenore)  Steen) terhadap Candida albicans serta Skrining
Fitokimianya, Univerversitas Muhammadiyah Surakarta,
[5]  M.  Alfin,  Uji  Aktivitas  Antimicrobia  terhadap senyawa triterponoid pada daun Binahong (Anredera cordifolia  (Tenore)  Steen),  skripsi,  Chemistry,
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 15 (3) (2012) : 88 – 93
Fakultas  Farmasi  universitas  Muhammadiyah Surakarta, Surakarta
[6]  León  F  Villegas,  Irma  D  Fernández,  Holger Maldonado, Rosa Torres, Alfonso Zavaleta, Abraham
J  Vaisberg,  Gerald  B  Hammond,  Evaluation  of  the wound-healing  activity  of  selected  traditional medicinal plants from Peru,
Journal of ethnopharmacology , 55, 3, (1997) 193-200
http://dx.doi.org/10.1016/S0378-8741(96)01500-0
[7]  MP  Tornos,  MT  Sáenz,  MD  Garc ı́ a,  MA  Fernández, Antinociceptive effects of the tubercles of Anredera leptostachys, Journal  of  ethnopharmacology ,  68,  1,
(1999)  229-234 http://dx.doi.org/10.1016/S0378- 8741(99)00098-7
[8]  Ray-Yu  Yang,  Shou  Lin,  George  Kuo,  Content  and distribution  of  flavonoids  among  91  edible  plant species, Asia Pacific journal of clinical nutrition , 17, S1,
(2008) 275-279
http://dx.doi.org/10.6133/apjcn.2008.17.s1.66
[9]  Satya  B  Paul,  Sumeru  Singha,  Isolation  and identification  of  physiologically  important  Sterols and sterol glucoside from Basella rubra Linn, Assam University  Journal  of  Science  and  Technology ,  5,  1,
(2010) 120-122
[10] Alfonso  Espada,  Ricardo  Riguera,  Carlos  Jiménez, Boussingoside  E,  a  new  triterpenoid  saponin  from the  tubers  of  Boussingaultia  baselloides, Journal  of Natural
Products , 60, 1, (1997) 17-19 http://dx.doi.org/10.1021/np960392g
[11]  KR  Markham,  Cara  mengidentifikasi  flavonoid, Bandung: ITB , (1988)
[12] JB  Harbone,  Metode  fitokimia:  penuntun  cara modern  menganalisis  tumbuhan, alih  bahasa Padmawinata, K., terbitan ke , 2, (1987)
[13] Seema  Bhagwat,  David  B  Haytowitz,  Joanne  M Holden, USDA database for the flavonoid content of selected  foods,  Release  3.1, US  Department  of Agriculture: Beltsville, MD, USA , (2014)
[14] Fernando  Calzada,  Rachel  Mata,  Robert  Bye, Edelmira  Linares,  A  retrochalcone  from  Anredera scandens, Phytochemistry ,  29,  8,  (1990)  2737-2738 http://dx.doi.org/10.1016/0031-9422(90)85235-8
[15] B.  N.  Meyer,  N.  R.  Ferrigni,  J.  E.  Putnam,  L.  B. Jacobsen,  D.  E.  Nichols,  J.  L.  McLaughlin,  Brine Shrimp:  A  Convenient  General  Bioassay  for  Active Plant Constituents, Planta Med , 45, 05, (1982) 31-34 http://dx.doi.org/10.1055/s-2007-971236
[16] Hardjono
Sastrohamidjojo,
Spektroskopi,
Yogyakarta: Liberty , (1991)