## Original Research
UJI ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL DAUN TAHONGAI ( Kleinhovia hospita Linn) TERHADAP PERTUMBUHAN BAKTERI Actinobacillus actinomycetemcomitans IN-VITRO
Cynthia Clarissa a , Masyhudi Amir b , Verry Asfirizal c
a Program Studi Kedokteran Gigi, Fakultas Kedokteran, Universitas Mulawarman, Samarinda, Indonesia b Laboratorium Mikrobiologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Mulawarman, Samarinda, Indonesia c Laboratorium Parasitologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Mulawarman, Samarinda, Indonesia
Korespondensi: cynthiaclrss@yahoo.co.id

## Abstrak
Tahongai  ( Kleinhovia  hospita Linn)  merupakan  tanaman  herbal  yang  banyak  dijadikan  obat  tradisional oleh  masyarakat  suku  Dayak.  Tahongai  memiliki  berbagai  khasiat  yang  dapat  digunakan  untuk menunjang  kesehatan  tubuh.  Didalam  tanaman  ini  juga  terdapat  senyawa  aktif  yang  dapat  berfungsi sebagai zat antibakteri. Terutama pada bagian daun Tahongai, memiliki kandungan senyawa aktif seperti flavonoid, alkaloid, saponin, dan terpenoid yang dapat berfungsi sebagai senyawa antibakteri. Penelitian ini  bertujuan  untuk  mengetahui  efek  antibakteri  dari  ekstrak  daun  tanaman  Tahongai  terhadap pertumbuhan bakteri Actinobacillus actinomycetemcomitans secara In-vitro. Desain penelitian ini adalah post test only control group design dengan menggunakan uji Disc Diffusion ( Kirby-Bauer ). Penelitian ini menggunakan  bakteri A.  actinomycetemcomitans yang  diberi  perlakuan  ekstrak  etanol  daun  Tahongai ( K.  hospita Linn)  dengan  konsentrasi  5%,  10%,  15%,  dan  20%.  Kemudian  dilakukan  pengulangan sebanyak lima kali. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun Tahongai ( K. hospita Linn) tidak mampu menghambat pertumbuhan bakteri A. actinomycetemcomitans pada konsentrasi 5%, 10%, 15%, dan 20%.
Kata kunci: Antibakteri, Tahongai ( Kleinhovia hospita Linn), Actinobacillus actinomycetemcomitans

## Abstract
Tahongai  (Kleinhovia  hospita Linn )  is  an  herbal  plant  used  as  traditional  medicine  for  Dayak  ethnic. Tahongai has various benefits that can be used to support body health. On these plants, there are active compounds such as antibacterial agents. Especially leaf of Tahongai, contains active compounds such as flavonoids, alkaloids, saponins, and terpenoids, which can function as antibacterial agents. This research aims  to  determine  the  antibacterial  effect  of  Tahongai  leaf  extract  (K.  hospita  Linn)  on  the  growth  of Actinobacillus  actinomycetemcomitans  in-vitro.  T his  research’s design  was  the  post-test  only  control group  design  with  Disc  Diffusion  (Kirby-Bauer)  test.  This  research  used  A.  actinomycetemcomitans bacteria were treated with ethanol extract of Tahongai leaf (K. hospita Linn ) at 5%, 10%, 15%, and 20% concentrations.  Then,  the  test  was  repeted  five  times.  The  research  result  showed  that  the  ethanol
extract of Tahongai leaf was not able to inhibit the growth of A. actinomycetemcomitans bacteria at 5%, 10%, 15%, and 20% concentrations.
Key words: Antibacterial, Tahongai (Kleinhovia hospita Linn), Actinobacillus actinomycetemcomitans

## PENDAHULUAN
Prevalensi  penyakit  periodontal  di  Asia Tenggara pada usia 35-44 tahun mencapai 45%. 1 Di Indonesia  sendiri,  prevalensi  penduduk  yang mengalami  masalah  gigi  dan  mulut  sebesar  57,6% dan didalamnya termasuk juga penyakit periodontal. 2 Penyakit  periodontal  yang  paling sering  dijumpai  yaitu  gingivitis  dan  periodontitis. 3
Gingivitis yang tidak tertangani dengan tepat akan mengalami  kerusakan  jaringan  periodontal  yang lebih  kompleks  dan  dapat  menjadi  periodontitis. 4 Data  RISKESDAS  pada  tahun  2018  menunjukkan prevalensi  periodontitis  mencapai  angka  74,1% untuk semua kalangan usia. 2
Periodontitis  disebabkan  oleh  bakteri  yang banyak  ditemukan  pada  plak  gigi. 5 Keberadaan bakteri anaerob gram negatif seperti Actinobacillus actinomycetemcomitans dapat  ditemukan  juga dalam  pembentukan  plak  penyebab  periodontitis. Bakteri  ini  merupakan  salah  satu  bakteri periopatogen sebagai penyebab utama periodontitis.  Selain  itu,  bakteri  ini  juga  memiliki virulensi  tinggi  karena  dapat  menembus  jaringan ikat  periodontal  dan  memproduksi  toksin  yang dapat  menghambat  komponen-komponen  sistem imun,  sehingga  menghambat  proses  perbaikan jaringan  dan  menyebabkan  kerusakan  host. 6,7 A. actinomycetemcomitans dapat  ditemukan  pada pasien  periodontitis  agresif  sekitar  90%  dan periodontitis  kronis  sekitar  21%. 8 Oleh  karena  itu, diperlukan  cara  untuk  mengatasi  permasalahan periodontitis tersebut.
Salah satu cara untuk mengatasi permasalahan periodontitis tersebut adalah penggunaan  obat  tradisional.  Penggunaan  obat tradisional  secara  umum  dinilai  lebih  aman daripada  penggunaan  obat  generik  karena  obat
tradisional  dianggap  memiliki  efek  samping  yang relatif  lebih  sedikit  daripada  obat  generik. 9 Profil Kesehatan  Indonesia  tahun  2014  menunjukan bahwa  Kalimantan  Timur  menduduki  peringkat ketiga  terendah  dalam  rata-rata  penggunaan  obat generik  di  fasilitas  pelayanan  kesehatan. 10 Data RISKESDAS  tahun  2018  menunjukkan,  dari  61,5% penduduk yang memiliki masalah gigi dan mulut di Kalimantan  Timur,  hanya  13,8%  penduduk  yang menerima  perawatan  dari  tenaga  medis  gigi. 2 Hal ini  menggambarkan,  masih  banyak  penduduk  di Kalimantan  Timur  yang  menggunakan  cara  lain untuk  mengatasi  masalah  gigi  dan  mulut  selain melakukan  perawatan  dan  penggunaan  obat generik di pusat pelayanan kesehatan.
Salah  satu  cara  yang  dapat  dilakukan  untuk mengatasi  permasalahan  gigi  dan  mulut  yaitu penggunaan  tanaman  tradisional  sebagai  obat. Tanaman  tradisional  di  Kalimantan  Timur    yang dapat dijadikan obat salah satunya adalah tanaman Tahongai  ( Kleinhovia  hospita Linn).  Tanaman  ini tumbuh  secara  alami  di  pinggiran  sungai  di Kalimantan  Timur.  Masyarakat  Suku  Dayak mempercayai  tanaman  Tahongai  sebagai  tanaman yang  sangat  berkhasiat  bagi  kesehatan  tubuh, seperti  anti  hipertensi,  anti  diabetes,  menurunkan kadar  kolesterol,  dan  dapat  memperkuat  fungsi hati.  Daun  tanaman  Tahongai  ( K.  hospita Linn) memiliki  senyawa  aktif  seperti  flavonoid,  alkaloid, saponin,  dan  terpenoid  yang  dapat  digunakan sebagai antibakteri. 11-13
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui efek antibakteri dari ekstrak etanol daun Tahongai ( K. hospita Linn) terhadap pertumbuhan salah satu bakteri  di  rongga  mulut  penyebab  periodontitis yaitu A. actinomycetemcomitans secara In-vitro.

## METODE PENELITIAN
Jenis penelitian ini merupakan penelitian True experiment ,  dengan post  test  only  control  group design .  Digunakan  uji Disc  Diffusion  (Kirby-Bauer) untuk  melihat  respon  pertumbuhan  bakteri terhadap senyawa antibakteri.
Sampel  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  daun  dari  tanaman  Tahongai  ( K.  hospita Linn)  yang  diambil  dari  Perkebunan  Tahongai Abihira  Herbal  Center  Lempake  Samarinda. Sedangkan bakteri yang digunakan dalam penelitian ini
adalah bakteri
A. actinomycetemcomitans yang  berasal  dari  biakan Laboratorium  Mikrobiologi  Fakultas  Kedokteran Hewan  (FKH)  Universitas  Gajah  Mada  (UGM) Yogyakarta.
Penelitian ini menggunakan 6 perlakuan yang dibagi  menjadi  2  kelompok  yang  berbeda  dalam 1 wadah.  Kelompok  pertama  (kelompok  uji)  terdiri dari    4  perlakuan  yang  diberi  ekstrak  etanol  daun Tahongai  dengan  konsentrasi  5%,  10%,  15%,  dan 20%.  Kelompok  kedua  (kelompok  kontrol)  terdiri dari  2  perlakuan  yang  diberi Chlorhexidine gluconat e  0,2%  sebagai  kontrol  positif  dan aquadest steril sebagai kontrol negatif. Dan setiap perlakuan dilakukan pengulangan sebanyak 5 kali.

## Bahan
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  2  kg  daun  Tahongai,  biakan  bakteri A. actinomycetemcomitans, etanol  96%,  akuades steril, Chlorhexidine gluconat e 0,2%, Muller Hinton Agar (MHA), dan NaCl 0,9%.
Alat
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  alat  tulis,  alat  pemotong, handscoon dan masker,  jangka  sorong,  ose,  timbangan  analitik, kertas  nampan,  toples  dan  bejana  kaca,  lemari
pengering, autoclave ,  kertas  saring,  pinset,  gelas ukur,  corong buchner , rotary  evaporator ,  pipet tetes, pipet eppendorf , pipet ukur, rak dan tabung reaksi, paper disc , petridish , erlenmayer , almunium foil, inkubator, lampu spiritus, dan vortex .

## Metode
1. Sterilisasi alat
Alat  yang  akan  digunakan  dalam  penelitian ini disterilisasi dengan menggunakan autoclave dan menggunakan etanol 96%.
2. Ekstraksi daun Tahongai ( K. hospita Linn)
Sebanyak  2  kg  daun  tahongai  disortir  dan dicuci  bersih,  dikeringkan  ±7  hari,  dihaluskan menjadi  serbuk.  Ekstraksi  dilakukan  dengan metode  maserasi,  serbuk  daun  direndam dengan  pelarut  etanol  96%  sebanyak  2  liter selama 3x24 jam. Kemudian lakukan penyaringan  dari  rendaman  serbuk  daun dengan  kertas  saring Watt-man dan  corong Buchner sehingga  didapatkan  filtrat.  Filtrat kemudian dipekatkan dengan rotary evaporator suhu  50 o C  sehingga  didapat  ekstrak  kental.
Ekstrak  kental  daun  Tahongai  diencerkan dengan  akuades  sampai  diperoleh  konsentrasi uji 5%, 10%, 15%, dan 20%.
3. Uji bakteri
Suspensi dibuat dengan menginokulasikan 1-
2 ose biakan bakteri A. actinomycetemcomitans
dari  media Muller  Hinton  Agar (MHA)  miring kedalam tabung berisi NaCl 0,9%. Homogenkan dengan vortex ,  lalu  disetarakan  kekeruhannya dengan  larutan  Mc  Farland  0,5  (1,5x10 8
CFU/ml).
Siapkan petridish berisi MHA dan beri tanda pada  bagian  bawah  sesuai  perlakuan  yang digunakan.  Inokulasikan  suspensi  bakteri  pada bagian atas media MHA dengan kapas lidi steril.
Ambil  4  buah paper  disc dengan  pinset  lalu rendam ke dalam setiap larutan konsentrasi uji
5%, 10%, 15%, dan 20%. Lalu ambil lagi 2 buah
paper disc dengan pinset dan rendam kedalam
Chlorhexidine  gluconat e  0,2%  sebagai  kontrol positif  dan aquadest steril  sebagai  kontrol negatif.  Kering  anginkan  selama  5  menit kemudian  tempelkan  pada  bagian  atas  media MHA  sesuai  dengan  tanda  yang  telah  dibuat.
Petridish di inkubasi dalam inkubator pada suhu 37 o C selama 24 jam.
4. Pengamatan dan pengukuran
Setelah 24 jam inkubasi, lakukan pengamatan, pengukuran, dan difoto. Pengukuran  dilakukan  dengan  mengukur  sisi vertikal dan horizontal dari daerah bening yang terbentuk  disekitar paper  disc menggunakan jangka sorong. 14
Gambar 1. Rumus Pengukuran Zona Hambat
Keterangan :
DV : Dimensi Vertikal (mm)
DC : Dimensi Disc (mm)
DH : Dimensi Horizontal (mm)

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  penelitian  dilihat  dengan  mengukur zona  hambat  yang  ditandai  dengan  terbentuknya daerah  bening  disekitar paper  disc pada  masing- masing  kelompok  konsentrasi  uji  yaitu  5%,  10%, 15%,  20%  dan  kelompok  kontrol  positif  serta kontrol negatif setelah 24 jam diberikan perlakuan. Hasil penelitian dapat dilihat pada Gambar 2.
Gambar 2. Hasil Uji Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Tahongai Terhadap Pertumbuhan Bakteri A ctinobacillus actinomycetemcomitans dalam Lima kali Pengulangan
Gambar  2.  di  atas  menunjukkan  tidak  terlihat daerah bening yang terbentuk disekitar paper disc untuk tiap konsentrasi uji yaitu 5%, 10%, 15%, dan 20%  serta  kontrol  negatif.  Hanya  pada  kontrol positif  di  bagian  tengah petridish ,  terlihat  daerah bening  yang  terbentuk  disekitar paper  disc tersebut.  Daerah  yang  memiliki  zona  hambat kemudian dilakukan pengukuran dengan menggunakan jangka sorong dan dimasukan dalam tabel 1.
Tabel  1. Hasil  Zona  Hambat  Pertumbuhan  Bakteri A.  actinomycetemcomitans pada  Ekstrak  Daun Tahongai
Tabel  1.  di  atas  menunjukkan  bahwa  tiap konsentrasi  uji  ekstrak  daun  Tahongai  yaitu  5%,
Konsentrasi %
Pengulangan Mean (mm) I II III IV V 5% - - - - - - 10% - - - - - - 15% 0.5 - - - - 0.1 20% - - - - - - Clorhexidine gluconate 0,2% 4.75  5  5.25 7 5.5 5.5 Aquadest - - - - - -
(DV-DC) + (DH-DC) 2 1 4 5 2 3
10%,  15%,  dan  20%  tidak  terbentuk  zona  hambat terhadap pertumbuhan bakteri A. actinomycetemcomitans
dalam lima kali pengulangan. Hanya pengulangan I pada konsentrasi  15%,  tebentuk  zona  hambat  dengan daya  hambat  yang  minimum  yaitu  0.5  mm. Sedangkan  pada Clorhexidine  gluconate 0,2% sebagai  kontrol  positif  diketahui  memiliki  zona hambat yang terbentuk dengan zona hambat rata- rata 5.50 mm. Sementara Aquadest sebagai kontrol negatifnya  juga  tidak  menunjukkan  terbentuknya zona hambat.
Tidak  terbentuknya  zona  hambat  atau kecilnya  zona  hambat  yang  dihasilkan  dapat disebabkan oleh beberapa faktor seperti kandungan  senyawa  aktif  dalam  ekstrak  uji,  jenis bakteri  yang  digunakan  dalam  penelitian,  dan konsentrasi ekstrak uji yang digunakan. 15
Daun  Tahongai  memiliki  banyak  kegunaan seperti mengobati sakit kuning (Sulawesi tenggara), menurunkan  enzim  SGPT  dalam  darah  sehingga berkhasiat  untuk  mencegah  kerusakan  hati. 16
Masyarakat  di  Sulawesi  Selatan  memanfaatkan daun  Tahongai  sebagai  obat  penyakit  hati, hipertensi, dan diabetes. 17 Selain itu, daunnya juga dapat digunakan untuk menurunkan kadar glukosa dalam  darah. 18 Masyarakat  pulau  seram  Maluku menggunakan  daun  muda  Tahongai  sebagai  obat mata  dan  wasir. 19 Masyarakat  suku  Kaili  Ledo menggunakan tumbuhan Tahongai untuk mengobati gatal-gatal, sementara masyarakat suku Kalili Ija di Sulawesi Tengah menggunakan tanaman Tahongai  untuk  mengobati  penyakit  ginjal  dengan cara direbus daunnya lalu diminum. 20 Daunnya juga dapat  dipakai  sebagai  obat  sakit  kepala  dan mengurangi asam lambung. 21
Daun  Tahongai  juga  memiliki  kandungan senyawa  aktif  yang  dapat  berperan  dalam penghambatan pertumbuhan bakteri yaitu alkaloid,  flavonoid,  saponin,  dan  terpenoid. 13,18
Alkaloid  dapat  menghambat  proses  replikasi  DNA dari  bakteri A.  actinomycetemcomitans .  Selain  itu, flavonoid yang dibantu oleh saponin dan terpenoid akan merusak permeabilitas dari dinding sel bakteri A. actinomycetemcomitans sehingga pembentukkan  membran  dan  dinding  sel  menjadi terganggu.  Akibatnya  pertumbuhan  bakteri A. actinomycetemcomitans menjadi terhambat. 22
Namun,  senyawa-senyawa  aktif  tersebut  diduga tidak cukup kuat untuk merusak dinding sel bakteri A. actinomycetemcomitans dan masuk kedalam sel bakteri tersebut.
Bakteri A. actinomycetemcomitans merupakan bakteri gram negatif yang memiliki tiga lapisan  yang  membungkus  selnya  yaitu,  membran luar  ( outer  membrane ),  peptidoglikan,  dan membran  dalam. 23,24 Lapisan  pembungkus  pada sel  bakteri  gram  negatif  memiliki  sifat  nonselektif permeabel,  terutama  pada outer  membrane . 25 Karena  sifatnya  ini, outer  membrane berfungsi sebagai permeability  barier yang  menyebabkan senyawa eksternal lain seperti senyawa antibakteri akan  sukar  untuk  menembus  kedalam  sel. 22 Sehingga  dinding  sel  bakteri  terhindar  dari kerusakan  yang  dapat  disebabkan  oleh  senyawa antibakteri  dan  dapat  mempertahankan  keutuhan sel  tersebut. 23 Outer  membrane mengandung fosfolipid,  lipopolisakarida  (LPS)  dan  berbagai protein. 26 Protein  dibawa  oleh  struktur  yang  ada pada permukaan outer membrane yang dinamakan vesikel.  Protein  berbentuk  seperti  pori-pori  atau celah  pada  permukaan outer  membrane yang disebut  sebagai  porin.  Pada  saat  terjadi  paparan
senyawa  antibakteri,  maka  akan  terjadi  aktivitas penutupan  pori  atau  celah  tersebut  pada  dinding sel  bakteri.  Akibatnya,  senyawa  antibakteri  yang melintasi membran sel akan berkurang jumlahnya. Pertahanan  sel  bakteri  juga  diperlihatkan  dengan adanya aktivitas transport aktif yaitu pompa keluar ( efflux  pumps )  yang  akan  mengeluarkan  senyawa antibakteri  dari  dalam  bakteri  sehingga  senyawa antibakteri  tersebut  tidak  dapat  mengganggu keutuhan  sel  dan  membuat  sel  bakteri  lebih resisten terhadap senyawa antibakteri tersebut. 23,27
Konsentrasi  ekstrak  uji  yang  digunakan dalam penelitian ini juga diduga dapat mempengaruhi  terbentuknya  diameter  zona hambat. Konsentrasi ekstrak yang tidak menghasilkan zona hambat kemungkinan disebabkan karena senyawa aktif yang ada didalam ekstrak  tidak  terdeteksi  didalam  konsentrasi  uji yang  dipilih  atau  kadar  hambatnya  belum tercapai. 14 Oleh  karena  itu,  semakin  tinggi konsentrasi  uji  yang  dipilih  maka  kemungkinan senyawa  aktif  yang  terlarut  akan  semakin  banyak jumlahnya.  Hal  ini  akan  mempermudah  senyawa aktif  berpenetrasi  ke  dalam  sel  bakteri  dan  zona hambat yang terbentuk juga akan semakin besar. 28
Dalam  penelitian  terdahulu  yang  dilakukan  oleh Yunus  dan  Malik  (2019)  menyebutkan,  ekstrak daun K.  hospita memiliki  zona  hambat  terkecil pada  konsentrasi  uji  45%  untuk  bakteri  Gram negatif Escherichia  coli sebesar  7.67  mm. 29
Penelitian  Magvirah,  mawarti  dan  Ardhani  (2019) juga  menyebutkan  bahwa  ekstrak  daun  Tahongai pada  konsentrasi  1g/L  dan  3  g/L  tidak  terdapat zona  hambat,  tetapi  pada  konsentrasi  10  g/L,  30 g/L, 100 g/L menunjukkan kenaikkan diameter zona hambat masing-masing sebesar 6.42 mm, 7.94 mm,
dan 13.04 mm. 30 Ini membuktikan bahwa semakin tinggi  konsentrasi  ekstrak  yang  diberikan,  maka semakin  besar  pula  diameter  zona  hambat  yang terbentuk di sekeliling paper disc .
Perbedaan  metode  yang  dilakukan  juga kemungkinan  dapat  berpengaruh  terhadap  hasil penelitian.  Antara  lain,  proses  pencucian  daun dengan  menggunakan  air  yang  terlalu  lama  untuk menghilangkan  kotoran  dan  benda  asing  juga  bisa mempengaruhi kandungan senyawa aktif yang ada di  dalam  daun  tersebut.  Akibatnya,  senyawa  aktif yang  mudah  larut  air  akan  ikut  larut  pada  saat proses  pencucian.  Proses  pembuatan  konsentrasi ekstrak  uji  yang  kurang  steril  juga  dapat mempengaruhi kandungan senyawa aktif didalamnya.  Penyimpanan  ekstrak  yang  terlalu lama  juga  akan  menurunkan  kualitas  dan kemampuan daya hambat ekstrak tersebut. Bakteri A.  actinomycetemcomitans yang  tidak  tersuspensi dengan  sempurna  didalam  larutan  NaCl  0,9% sehingga  dapat  mempengaruhi  hasil  penelitian. Tidak  meratanya  penggolesan  suspensi  bakteri pada  media  agar.  Keterlambatan  pemasangan paper  disc berisi  ekstrak  uji  yang  menyebabkan kesempatan bakteri memperbanyak diri lebih tinggi dan pH lingkungan yang tidak dapat dikontrol oleh peneliti.
Sedangkan
bakteri A.
actinomycetemcomitans dapat  berkembang  baik pada kisaran pH 7-8,5 . 31

## SIMPULAN
Ekstrak  etanol  daun  Tahongai  ( K.  hospita Linn)  tidak  mampu  menghambat  pertumbuhan bakteri A. actinomycetemcomitans pada konsentrasi 5%, 10%, 15%, dan 20%.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terima  kasih  kepada  pengelola Abihira  Herba  Center  Lempake  Samarinda  sebagai penyedia  daun  Tahongai  ( K.  hospita Linn),
Laboratorium  Mikrobiologi  Fakultas  Kedokteran Hewan  (FKH)  Universitas  Gajah  Mada  (UGM) Yogyakarta sebagai penyedia bakteri A. actinomycetemcomitans , UPTD. Laboratorium
Kesehatan Samarinda sebagai tempat pelaksanaan penelitian, dan semua pihak yang telah membantu dalam pelaksaan penelitian.

## DAFTAR PUSTAKA
1. WHO (World Health Organization). Strategy for Oral Health in South-East Asia . 2013.
2. Kemenkes RI (Kementerian Kesehatan Republik Indonesia). Laporan  Nasional  Riskesdas  2018 . Jakarta:  Badan  Penelitian  dan  Pengembangan Kesehatan; 2018.
3. Saputri  D.  Gambaran  Radiograf  Pada  Penyakit Periodontal. J Dentistry Society . 2018;: p. 21-16.
4. Mardiyantoro  F,  Munika  K,  Sutanti  V,  Cahyati M,  Pratiwi  AR. Penyembuhan  Luka  Rongga Mulut . Malang. 2018.
5. Lamont  RJ,  Burne  RA,  Lantz  MS,  Leblang  DJ. Oral Microbiology and Immunology . Washington DC. 2006.
6. Wolf  H. Clinical  of  Dental  Hygiene .  German. 2006.
7. Kesic  L,  Petrovic  M,  Obradovic  R,  Pejcic  A.  The
Importance of Aggregatibacter actinomycetemcomitans in Etiology of Periodontal  Disease. Acta  Medica  Medianae . 2009;: p. 37-35.
8. Carranza  F  A,  Newman  MG,  Takei  HH. Clinical Periodontology  13th  Ed. California:  Elsevier Saunders; 2006.
9. Katno. Tingkat  manfaat,  keamanan  dan efektifitas  tanaman  obat  dan  obat  tradisional. Karanganyar:  Balai  Besar  Penelitian  dan
Pengembangan  Tanaman  Obat  dan  Obat Tradisional (B2P2TOOT); 2008.
10. Kemenkes RI (Kementerian Kesehatan Republik Indonesia). Profil  Kesehatan  Indonesia  Tahun 2014. Jakarta: Kementerian Kesehatan Republik Indonesia; 2015.
11. Raflizar AC dan Tuminah S. Dekok daun paliasa ( Kleinhovia  hospita Linn)  sebagai  obat  radang hati akut. Cermin Dunia Kedoktera . 2006;: p. 14- 10.
12. Taebe  B.  Skripsi:  Standarisasi  Ekstrak  Daun Paliasa ( Kleinhovia hospita Linn.) Sebagai Bahan Baku Sediaan Fitofarmaka. Makassar:
Universitas Hasanuddin ; 2004.
13. Yunita  IA  dan  Nurmasari  R.  Skrining  Fitokimia Daun  Tumbuhan  Katimaha  ( Kleinhovia  hospita L.). Sains  dan  Terapan  Kimia .  2009;  3(2):  123- 112.
14. Toy  TSS,  Lampus  BS,  dan  Hutagalung  BSP.  Uji Daya Hambat Ekstrak Rumput Laut Gracilaria Sp Terhadap Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aureus. Jurnal E-gigi . 2015; 3(1): 159-153.
15. Jawetz  E,  Melnick  J,  dan  Adelberg  E. Mikrobiologi Kedokteran. 20 th ed . Jakarta: EGC;
1996.
16. Raflizar  dan  Sihombing.  Dekok  Daun  Paliasa ( Kleinhovia  hospita Linn)  Sebagai  Obat  Radang Hati. Jurnal Ekologi Kesehatan . 2009; 8(2): 993- 984.
17. Dini  I  dan  Darminto.  Metode  Isolasi  Senyawa Bioaktif  Pada  Tumbuhan  Paliasa  ( Kleinhovia hospita ). Jurnal Chemica . 2012; 13(2): 16-11.
18. Yuliana  WT,  dan  Wiranatha  G.  Pemberian Ekstrak  Methanol  Daun  Paliasa  Menurunkan Kadar Glukosa Darah Tikus Hiperglikemik. Jurnal Veteriner . 2013;: p. 500-495.
19. Susiarti  S.  Pengetahuan  dan  Pemanfaatan Tumbuhan  Obat  Masyarakat  Lokal  di  Pulau Seram  Maluku. PROS  SEM  NAS  MASY  BIODIV INDON . 2015;: P. 1087-1083.
20. Megawati,  Syariful  A,  Ramadhanil  P.  Studi Etabotani  Tumbuhan  Obat  Pada  Masyarakat Suku  Kaili  Ija  Di  Desa  Bora  Kecamatan  Sigi Biromaru  Kabupaten  Sigi  Sulawesi  Tengah. Biocelebes . 2016;: p. 90-76.
21. Siharis FS dan Fidrianny I. Etnofarmakologi dan Uji  Aktivitas  Salah  Satu  Tumbuhan  Yang Ditemukan  Di  Suku  Moronene  Tobu  Hukakea Laea  Kabupaten  Bombana  Sulawesi  Tenggara.
Indonesia  Natural  Research  Pharmaceutical Journal . 2016; 1(1): 42-36.
22. Afrina CS dan Aulia CR. Konsentrasi Hambat dan
Bunuh  Minimum  Ekstrak  Buah  Kapulaga (Amomum compactum) Terhadap Aggregatibacter  actinomycetemcomitans . J Dentistry Society . 2016; 1(2): 200-192.
23. Rodrigues  R,  Goncalves  C,  Souto  R,  Filho-Feres EJ,  Uzeda  M,  dan  Colombo  A.  Antibiotic resistance profile of the subgingival microbiota following systemic or local tetracycline therapy.
J Clin Periodontal . 2004;: p. 420-7.
24. Quirynen  M,  Teughels  W,  Haake  SK,  dan
Newman MG. Carranza's Clinical Periodontology :  Microbiology  of  periodontal
disease.  10 th ed.  St.  Louis:  Elsevier.  2006;:  p. 134-69.
25. Brooks GF, Botel JS, Ornston LN, Jawetz M, dan Adelberg. Medical  Microbiology . 19 th Ed . Conecticut: USA. 1989.
26. Murwani  S,  Santosaningsih  D,  dan  Ramadhona A.  Pola  Protein  dari  Outer  Membrane  Protein yang  Diisolasi  Menggunakan  N-Octyl  Glucoside dan  Menggunakan  Sarcosyl  Pada  Salmonella Typhi. Majalah  Kedokteran  Unibraw .  2002;:  p.
96-89.
27. Bockstael  K  dan  Aerschot  AV.  Antimicrobial resistance in  bacteria. Review  Article .  2006;:  p.
16-1.
28. Moja  FK.  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak Metanol  Daun  Mangga  Bacang  ( Mangifera
Foetida L.) Terhadap Salmonella Typhi Secara In Vitro. Jurnal  Mahasiswa  Fakultas  Kedokteran Untan. 2015.
29. Yunus  R  dan  Malik  N.  Uji  Bioaktivitas  Ekstrak Daun  Tawa  Ndokulo  (Kleinhovia  hospita  Linn). Jurnal  Endurance:  Kajian  Ilmiah  Problema Kesehatan . 2019;: p. 79-70.
30. Magvirah  T,  Marwati,  dan  Ardhani  F.  Uji  Daya Hambat Bakteri Staphylococcus aureus menggunakan ekstrak
daun Tahongai ( Kleinhovia  hospita L.). Jurnal  Peternakan Lingkungan Tropis . 2019;: p. 50-41.
31. Henderson B, Wilson M, Sharp L, dan Ward JM. Actinobacillus actinomycetemcomitans. J. Med.
Microbiol Vol. 51 . 2002; 51: 1020-1013.