Jurnal Teknologi Kesehatan Borneo, Vol. 3, No 2 (2022) 69-75 Available online at: http://jtk.poltekkes-pontianak.ac.id/index.php/JTKB/
p-ISSN: 2723-3790 e-ISSN 2723-3782

## Combination of Aloe Vera and Chocolate to Reduce The
Number of The Colony of Staphylococcus Aureus
Edy Suwandi 1) , Ari Nuswantoro 1)* , Sugito 3)
1 Department of Medical Laboratory Technology, Poltekkes Kemenkes Pontianak, Pontianak,  Indonesia
* Correspondence: arinuswantoro82@gmail.com
Abstrak. Aloe  vera  (AV)  dan  coklat  merupakan  contoh  makanan  fungsional  yang  baik  karena mengandung  prebiotik  yang  dapat  membantu  inang  bertahan  melawan  infeksi  bakteri  berbahaya seperti Staphylococcus aureus. Sudah banyak penelitian yang menggunakan AV atau coklat saja dalam membantu melawan infeksi, namun pemanfaatan keduanya secara bersama-sama masih belum banyak diketahui. Penelitian ini bertujuan untuk menghitung jumlah koloni bakteri S. aureus yang diinfeksikan pada kulit mencit (Mus musculus) setelah diberi AV dan coklat dalam dosis tertentu per kilogram berat badan. Sebanyak 35 ekor mencit jantan yang sehat diinfeksi dengan S. aureus pada area superfisial kulit tengkuk. Setelah itu dibagi menjadi tujuh kelompok yang masing-masing terdiri dari 5 ekor mencit dan diberi perlakuan sebagai berikut: diberi 50 mg/kg BB AV (kelompok A), diberi 50 mg/kg BB coklat (B), diberi 50 mg/kg BB kombinasi AV dan coklat (C), diberi 75 mg/kg BB AV (D), diberi 75 mg/kg BB coklat (E),  diberi  75  mg/kg  BB  kombinasi  AV  dan  coklat  (F),  dan  kontrol  (tanpa  pemberian  prebiotik,  K). Mencit  yang  diberi  75  mg/kg BB  AV/coklat/AV+coklat  memiliki  kemampuan  yang lebih baik dalam menurunkan jumlah bakteri daripada yang diberi 50 mg/kg BB AV/coklat/AV+coklat. Selain itu, tikus yang diberi AV dan coklat secara bersama-sama memiliki kemampuan lebih baik dalam menurunkan jumlah bakteri daripada yang hanya diberi salah satu dari AV atau  coklat saja. Prebiotik sama-sama terdapat di dalam AV dan coklat, namun dengan substansi yang berbeda. Hal ini menyebabkan mencit yang  diberi  kombinasi  prebiotik  dianggap  lebih baik dibandingkan  yang diberi  satu  macam  sumber prebiotik saja.

## Kata kunci: Lidah buaya; Coklat; Prebiotik; Staphylococcus aureus; Jumlah koloni bakteri
Abstract. Aloe vera (AV) and chocolate are good examples of functional foods because they contain prebiotics that can help the host defend itself against harmful bacterial infections such as Staphylococcus aureus. Many studies have used AV or chocolate alone to help fight infection, but not much is known about using both together. This study aims to count the number of colonies of S. aureus infected on mice ’ s skin (Mus musculus) after being given AV and cocoa in certain doses per kilogram of body weight. A total of 35 healthy male mice were infected with S. aureus in the superficial area of the nape of the skin. After that, they were divided into seven groups, each consisting of 5 mice, and given the following treatments: given 50 mg/kg BW AV (group A), 50 mg/kg BW brown (B), 50 mg/kg BW combination of AV and chocolate (C), given 75 mg/kg BW AV (D), given 75 mg/kg BW brown (E), given  75  mg/kg  BW  combination  of  AV  and  chocolate  (F),  and  control (without  prebiotic  administration),  K). Mice  that  were  given  75  mg/kg  BW  AV/chocolate/AV+chocolate  had  a  better  ability  to  reduce  the  number  of bacteria than those that were given 50 mg/kg BW AV/chocolate/AV+chocolate. In addition, rats that were given AV and chocolate together had a better ability to reduce the number of bacteria than those that were given either only  AV  or  chocolate  alone.  Prebiotics  are  both  found  in  AV  and  chocolate  but  with  different  substances.  This causes mice given a combination of prebiotics to be considered better than those given only one type of prebiotic source.
Keywords: Aloe vera; Chocolate; Prebiotics; Staphylococcus aureus; Number of bacterial colonie

## Research Article

## 1. Latar Belakang
Permintaan  pangan  fungsional  semakin  meningkat  karena  konsumen  tidak  hanya membeli  produk  pangan  yang  memiliki kemampuan menghilangkan  rasa  lapar  tetapi  juga mencegah  beberapa  jenis  penyakit  yang  berkaitan  dengan  metabolisme  nutrisi  untuk meningkatkan kesehatan fisik dan mental (Palanivelu et al., 2022). Pengayaan produk pangan dengan  probiotik  dan  prebiotik,  serta  penyiapan  suplemen  yang  mengandung  keduanya untuk  memberikan  efek  simbiosis  merupakan  salah  satu  proses  teknologi  penting  untuk pengembangan berbagai pangan fungsional (Brahma et al., 2019).
Probiotik  telah  diusulkan  sebagai  mikroorganisme  hidup  yang  digunakan  sebagai suplemen  makanan dengan manfaat klinis  bagi  kesehatan  inang  (Cunningham  et  al.,  2021) sedangkan prebiotik adalah sumber dominan bakteri probiotik dalam makanan. Mikrobiota dan prebiotik yang bermanfaat ini meningkatkan sistem kekebalan dengan mengubah nutrisi dan  fitokimia  tertentu  menjadi  senyawa  yang  bermanfaat  (Delivery  et  al.,  2019).  Prebiotik dikenal  sebagai  senyawa yang  tidak dapat  dicerna yang  meningkatkan  kesehatan  manusia dengan merangsang  pertumbuhan  atau aktivitas  bakteri  tertentu  seperti  bifidobacteria  dan lactobacilli karena ketahanannya terhadap pencernaan di usus kecil manusia dan difermentasi oleh mikroflora usus termasuk pati, serat makanan, gula lain yang tidak terserap, gula alkohol, dan oligosakarida (Beane et al., 2021; Kaur et al., 2021). Beberapa efek kesehatan dari konsumsi prebiotik  adalah  penurunan  gastroenteritis  akut,  penurunan  risiko  kanker,  peningkatan penyerapan mineral, dan regulasi lipid (Karakan et al., 2021). Selain itu, prebiotik juga dapat berkontribusi untuk mengobati penyakit, antara lain dermatitis kontak alergi (allergy contact dermatitis,  ACD),  jerawat,  dan  penuaan,  terutama  dengan  meningkatkan  pertumbuhan probiotik. (Lolou et al., 2019).
Simbiosis  antara  probiotik  dan  prebiotik  secara  langsung  maupun  tidak  langsung berperan  dalam  menciptakan  kulit yang sehat.  Probiotik  terbukti  mendekolonisasi  patogen kulit (misalnya, Pseudomonas aeruginosa , Staphylococcus aureus , Acne vulgaris , dll.). Akhirnya, prebiotik (misalnya, Frukto-oligosakarida (FOS), galakto-oligosakarida (GOS) dan hidrolisat glukomanan konjac) dapat berkontribusi pada pengobatan penyakit termasuk ACD, jerawat dan  penuaan  foto  terutama  dengan  meningkatkan  pertumbuhan  probiotik.  (Lolou  & Panayiotidis, 2019; Roudsari et al., 2015).
Produk pangan asal tumbuhan sudah lama digunakan untuk membantu kesehatan, dua yang  paling  terkenal  adalah  lidah  buaya  ( aloe  vera ,  AV)  dan  kakao  ( Theobroma  cacao )  yang diolah menjadi coklat. AV diketahui mengandung acemanann dan fruktan, yang berpotensi sebagai prebiotik dan membantu melawan infeksi bakteri patogen, anti inflamasi, dan sifat penyembuhan  (Cuvas-Limon  et  al., 2022;  Quezada  et  al., 2017;  Samtiya  et al.,  2021).  Coklat dapat mengandung prebiotik dari bahan dasar atau ditambahkan selama proses produksi. Zat prebiotik utama yang ditambahkan dalam produksi  coklat adalah inulin dan polidekstrosa, sedangkan beberapa literatur menyebutkan GOS dan FOS (Konar et al., 2016).
Hubungan menguntungkan antara prebiotik dan probiotik (disebut sinbiotik) sehingga mempengaruhi  komposisi  mikrobiota  usus,  selanjutnya  secara  sistemik  mempengaruhi homeostasis  saluran  pencernaan,  sistem  kekebalan  tubuh,  sensorik,  otot,  metabolisme,  dan fungsi otak telah dijelaskan dalam penelitian sebelumnya (Quigley, 2019). Lebih khusus lagi, peran  sinbiotik  dalam  kondisi  kulit  yang  sehat  dan  sakit  juga  telah  dipelajari  (Lolou  & Panayiotidis, 2019), di mana probiotik telah terbukti berperan dalam melawan S. aureus , salah satu patogen paling umum yang menginfeksi dan menyebabkan penyakit kulit (Piewngam & Otto,  2020;  York,  2018;  Yusho  Huang  et  al.,  2020).  Studi-studi  tersebut  umumnya menggunakan  senyawa  prebiotik  tunggal/murni,  atau  secara  langsung  dengan  pemberian
probiotik untuk melawan patogen. Kekurangan dari desain ini adalah sulitnya menyiapkan prebiotik  dan  probiotik  sebelum  diuji.  Desain  yang  lebih  mudah  untuk  dikerjakan  adalah menyediakan  makanan  dari  sumber  alami  yang  mengandung  prebiotik.  Penelitian  ini bertujuan untuk melihat dampak pemberian AV dan coklat sebagai sumber prebiotik dalam menurunkan jumlah koloni bakteri S. aureus yang diinfeksikan ke kulit.
2. Metode
2.1 Desain Penelitian
Penelitian ini bersifat deskriptif analitis dengan rancangan eksperimen semu yang bertujuan untuk mengetahui kemampuan mencit yang telah diberi AV dan coklat dengan dosis 50 mg dan 75 mg/kg berat badan dalam menurunkan jumlah koloni bakteri S. aureus yang diinfeksikan ke kulit.
2.2 Populasi dan Sampel
Sebanyak 35 ekor Mus musculus jantan sehat, berumur 3 bulan, dan berat badan 20- 30 gram dibagi menjadi enam kelompok perlakuan dan satu kelompok kontrol, sehingga masing-masing kelompok terdiri dari 5 ekor mencit.
2.3 Preparasi Sampel
Kelompok  perlakuan  pada  penelitian  ini  adalah:  50  mg  AV/kg  berat  badan (kelompok A), 50 mg coklat/kg BB (B), 50 mg AV + coklat/kg BB (C), 75 mg AV/kg BB (D), 75 mg coklat/kg BB (E), 75 mg AV + coklat/kg BB (F), dan kontrol (K).
Suspensi bakteri dibuat dengan menambahkan koloni S. aureus ke dalam 5 mL NaCl 0,89%  dan  diatur  kekeruhannya  sampai  setara  dengan  standar  McFarland  0,5;  jumlah bakteri pada suspensi ini adalah 1,5x10 8 CFU/mL. Diambil 1 mL suspensi bakteri tersebut dan dioleskan pada kulit mencit seluas 1 cm 2 sehingga jumlah bakteri pada kulit adalah 1,5x10 8 CFU/cm 2 .  Selanjutnya  mencit  diberi  perlakuan  sehari  sekali  sesuai  dengan kelompok  yang  disebut  di  atas  selama  tujuh  hari  berturut-turut.  Setelah  tujuh  hari perlakuan,  kulit  mencit  yang  terinfeksi S.  aureus diusap  dengan  kapas  basah  dan diinokulasikan  pada  media  plate  count  agar  (PCA)  (Thermo  Scientific ™ Oxoid),  dan dihitung jumlah koloni yang muncul setelah diinkubasi pada 37° C selama 24 jam.

## 2.4 Analisis Data
Data  yang  diperoleh  kemudian  diuji  secara  statistik  untuk  mengetahui  apakah terdapat perbedaan antar kelompok dan di dalam kelompok. Uji statistik yang digunakan adalah Kruskal-Wallis H dan Mann-Whitney U.

## 3. Hasil
Penelitian  dirancang  dengan  menggunakan  6  kelompok  perlakuan  dan  1  kelompok kontrol yang masing-masing terdiri dari 5 ekor mencit. Namun pada akhir penelitian hanya diperoleh  32  data  karena  terdapat  3  ekor  mencit  yang  mati,  masing-masing  1  ekor  dari kelompok B, D dan kontrol.
Semua  kelompok  penelitian menunjukkan  penurunan  rata-rata  jumlah koloni  bakteri dari  semula  1,5x10 8 CFU/cm 2 .  Penurunan  terendah  terjadi  pada  kelompok  kontrol,  dan penurunan  tertinggi  terdapat  pada  kelompok  yang  diberikan  kombinasi  AV  dan  coklat dengan dosis 75 mg/kg BB yaitu 5x10 6 CFU/cm 2 , disusul kelompok yang diberikan kombinasi AV dan coklat dengan dosis 50 mg/kg BB (8,4x10 6 CFU/cm 2 ). Tikus yang diberi kombinasi AV dan coklat menunjukkan hasil yang lebih baik daripada tikus yang diberi AV atau coklat saja. Nilai rata-rata seluruh kelompok penelitian dapat dilihat pada Gambar 1.
Gambar 1. Rata-rata jumlah koloni bakteri (x 10 6 CFU/cm 2 )
Hasil uji Kruskal-Wallis H pada semua kelompok mendapatkan nilai signifikansi p 0,000 (<α  0,05),  menunjukkan  bahwa  terdapat  perbedaan  jumlah  koloni  bakteri di  antara  semua kelompok perlakuan. Demikian pula antara kelompok yang menerima dosis masing-masing 50  mg/kg  BB  (kelompok  A,  B,  dan  C)  dan  75  mg/kg  BB  (kelompok  D,  E,  dan  F)  terdapat perbedaan dengan nilai signifikansi masing-masing adalah 0,003 dan 0,008.
Berdasarkan dosis yang diberikan, maka pemberian AV 50 mg/kg BB dapat menurunkan jumlah  koloni  bakteri  menjadi  25,4  x  10 6 CFU/cm 2 (penurunan  88,08%),  dan  jika  dosis  AV ditingkatkan menjadi 75 mg/kg BB maka jumlah koloni bakteri dapat turun hingga menjadi 12,8 x 10 6 CFU/cm 2 (90,10%). Perbedaan kedua kelompok ini diuji dengan Mann-Whitney U dan mendapatkan nilai signifikansi (p) 0,014 yang berarti terdapat perbedaan yang signifikan antara jumlah bakteri di antara kedua kelompok tersebut.
Pada kelompok yang diberi coklat, pemberian dengan dosis 50 mg/kg BB dan 75 mg/kg BB berturut-turut dapat menurunkan jumlah koloni menjadi 35,3 x 10 6 CFU/cm 2 (penurunan 72,68%) dan 14,8 x 10 6 CFU/cm 2 (88,55%). Uji Mann-Whitney U mendapatkan nilai signifikansi (p) 0,012 yang berarti juga terdapat perbedaan signifikan di antara kedua kelompok tersebut.
Selanjutnya,  pemberikan  AV +  coklat 50 mg/kg  BB  menurunkan  jumlah koloni  bakteri menjadi 8,4 x 10 6 CFU/cm 2 (penurunan 93,50%), sedangkan penurunan paling tinggi terjadi pada pemberian AV + coklat 75 mg/kg BB dengan jumlah koloni bakteri turun hingga menjadi 5,0 x 10 6 CFU/cm 2 (96,13%). Nilai signifikansi dari uji Mann-Whitney U yang diperoleh dari kedua  kelompok  tersebut  adalah  0,015  yang  berarti  juga  terdapat  perbedaan  signifikan  di antara kedua kelompok tersebut.
Jika  uji  beda  dilakukan  antar  kelompok  dengan  dosis  yang  sama-sama  50  mg/kg  BB namun  beda  sumbernya,  maka  pemberian  AV  +  coklat  dianggap  lebih  baik  dibandingkan pemberian AV saja (p 0,009) atau coklat saja (p 0,014). Begitu juga jika dosisnya 75 mg/kg BB maka pemberian AV + coklat tetap dianggap lebih baik dibandingkan pemberian AV saja (p 0,013) atau coklat saja (p 0,008). Nilai signifikansi uji Kruskal-Wallis H dan Mann-Whitney U dapat dilihat lebih jelas pada tabel 1.
A B C D E F K Series1 25.4 35.3 8.4 12.8 14.8 5.0 129.3 0.0 20.0 40.0 60.0 80.0 100.0 120.0 140.0 160.0 x 1 0 6 C FU/ cm 2

## Tabel 1. Nilai Signifikansi Uji Kruskal-Wallis H dan Mann-Whitney U
Groups Nilai signifikansi uji Kruskal-Wallis H Nilai signifikansi uji Mann-Whitney U A B C D E F A 0.000 0.003 0.009  0.014 B 0.014 0.012 C 0.009  0.014 0.015 D 0.008 0.014 0.013 E 0.012 0.008 F 0.015  0.013  0.008

## 4. Pembahasan
Perbedaan  yang  ditemukan  baik  secara  keseluruhan  maupun  antar  kelompok (berdasarkan dosis dan jenis sumber prebiotik) menunjukkan bahwa setiap sumber prebiotik mengandung  komponen  prebiotik  tertentu  yang  spesifik  dan  memiliki  mekanisme  yang berbeda  sehingga  pengaruhnya  terhadap  penurunan  jumlah  koloni  bakteri  juga  berbeda. Lidah  buaya  mengandung  polisakarida  tinggi  yaitu  acemannan  dan  fruktan  yang  dapat berperan  sebagai  prebiotik,  antibakteri,  antiinflamasi  dan  membantu  penyembuhan  luka (Kocik et al., 2014; Pothuraju et al., 2016; Sierra-García et al., 2014); sedangkan  coklat/kakao ( Theobroma cacao ) mengandung inulin, FOS dan GOS (Gonzalez et al., 2011; Morais et al., 2014) yang  sudah  diketahui  memiliki  efek  menguntungkan  bagi  populasi  mikroba  usus  (Di Bartolomeo  et  al.,  2013).  Semuanya  ini  secara  umum  berkhasiat  sebagai  prebiotik,  karena dosisnya  yang  berbeda,  maka  efeknya  dalam  membantu  penyembuhan  luka  juga  berbeda; semakin tinggi dosisnya, semakin baik efeknya. Begitu juga jika prebiotik digabungkan maka hasilnya akan lebih baik dalam mengurangi jumlah bakteri yang menginfeksi kulit.
Fruktans  secara  selektif  dapat  merangsang  perkembangbiakan  bakteri  probiotik sedangkan  GOS  dilaporkan  memiliki  aktivitas  dalam  membantu  kinerja Bifidobacteria dan Lactobacilli .  Selain  menjadi  antagonis  bagi  bakteri  patogen,  prebiotik  juga  bermanfaat  bagi probiotik dengan menjadi sumber energi melalui jalur asam lemak rantai pendek, mengurangi diare,  melindungi  dari  kanker  usus  besar,  mengurangi  radang  usus  dan  masalah  terkait pencernaan. Selanjutnya, prebiotik berperan dalam meningkatkan ketersediaan mineral dan mengurangi risiko penyakit jantung (Attri et al., 2021). Secara khusus, hasil penelitian in-vitro yang  menyatakan  bahwa  FOS,  GOS  dan  kombinasi  prebiotik  lain  dapat  memodulasi mikrobiota kulit  ( Staphylococcus  skin  strain ) sehingga berperan dalam proses penghambatan mikroorganisme patogen (Di Lodovico et al., 2020) sejalan dengan hasil penelitian in-vivo ini.

## 5. Kesimpulan
Penelitian ini membuktikan bahwa pemberian lidah buaya dan coklat sebagai sumber prebiotik efektif menurunkan sampai dengan 96,13% jumlah koloni Staphylococcus aureus yang menginfeksi kulit mencit. Pemberian sumber prebiotik secara kombinasi lebih baik dari hanya satu jenis sumber prebiotik dan pemberian dosis 75 mg/kg BB lebih baik dari 50 mg/kg BB.

## Daftar Pustaka
Attri, S., Singh, N., Nadda, A. K., & Goel, G. (2021). Probiotics and Their Potential Applications: An Introduction . 1 – 26. https://doi.org/10.1007/978-981-15-6795-7_1
Beane, K. E., Redding, M. C., Wang, X., Pan, J. H., Le, B., Cicalo, C., Jeon, S., Kim, Y. J., Lee, J. H., Shin, E. C., Li, Y., Zhao, J., & Kim, J. K. (2021). Effects of dietary fibers , micronutrients , and phytonutrients on gut microbiome : a review. Applied Biological Chemistry , 64 (36).
https://doi.org/10.1186/s13765-021-00605-6 Brahma,  S.,  Bilal  Sadiq,  M.,  &  Ahmad,  I.  (2019).  Probiotics  in  Functional  Foods. Reference Module in Food Science , 1 – 17. https://doi.org/10.1016/B978-0-08-100596-5.22368-8
Cunningham, M., Azcarate-peril, M. A., Barnard, A., Benoit, V., Grimaldi, R., Guyonnet, D., Holscher,  H.  D.,  Hunter,  K.,  Manurung,  S.,  Obis,  D.,  Petrova,  M.  I.,  Steinert,  R.  E., Swanson, K. S., Sinderen, D. Van, Vulevic, J., & Gibson, G. R. (2021). Shaping The Future of Probiotics and Prebiotics.
Trends in Microbiology , 29 (8), 667 – 685. https://doi.org/10.1016/j.tim.2021.01.003
Cuvas-Limon, R. B., Ferreira-santos, P., Cruz, M., Belmares, R., & Nobre, C. (2022). Novel Bio-
Functional  Aloe  vera  Beverages  Fermented  by  Probiotic  Enterococcus  faecium  and
Lactobacillus lactis. Molecules , 27 (8), 1 – 23.
https://doi.org/https://doi.org/10.3390/molecules27082473
Delivery, E., Singh, A. K., Cabral, C., Kumar, R., Ganguly, R., & Pandey, A. K. (2019). Beneficial Effects  of  Dietary  Polyphenols  on  Gut  Microbiota  and  Strategies  to  Improve  Delivery Efficiency. Nutrients , 11 (9). https://doi.org/https://doi.org/10.3390%2Fnu11092216
Di  Bartolomeo,  F.,  Startek,  J.  B.,  &  Van  Den  Ende,  W.  (2013).  Prebiotics  to  Fight  Diseases:
Reality or Fiction? Phytotherapy Research , 27 (10), 1457 – 1473.
https://doi.org/10.1002/PTR.4901
Di Lodovico, S., Gasparri, F., Di Campli, E., Di Fermo, P., D’ercole, S., Cellini, L., & Di Giulio, M.  (2020).  Prebiotic  Combinations  Effects  on  the  Colonization  of  Staphylococcal  Skin Strains. Microorganisms 2021, Vol. 9, Page 37 , 9 (1), 37.
https://doi.org/10.3390/MICROORGANISMS9010037
Gonzalez, N. J., Adhikari, K., & Sancho-Madriz, M. F. (2011). Sensory characteristics of peach- flavored  yogurt  drinks  containing  prebiotics  and  synbiotics. LWT  -  Food  Science  and Technology , 44 (1), 158 – 163. https://doi.org/10.1016/J.LWT.2010.06.008
Karakan,  T.,  Tuohy,  K.  M.,  &  Solingen,  G.  J.  (2021).  Low-Dose  Lactulose  as  a  Prebiotic  for Improved Gut Health and Enhanced Mineral Absorption. Nutritional Immunology , 8 (July),
1 – 15. https://doi.org/10.3389/fnut.2021.672925
Kaur, A. P., Bhardwaj, S., Dhanjal, D. S., Nepovimova, E., Cruz- martins, N., Kuˇ, K., Chopra, C.,  Singh,  R.,  Kumar,  H.,  Fatih,  S.,  Kumar,  V.,  Verma,  R.,  &  Kumar,  D.  (2021).  Plant Prebiotics  and  Their  Role  in  the  Amelioration  of  Diseases. Biomolecules , 11 (3),  1 – 25. https://doi.org/https://doi.org/10.3390/biom11030440
Kocik, J., Bałan, B. J., Zdanowski, R., Jung, L., Skopińska - Rózewska, E., & Skopiński, P. (2014). Feeding  mice  with  Aloe  vera  gel  diminishes  L-1  sarcoma-induced  early  neovascular response  and  tumor  growth. Central-European  Journal  of  Immunology , 39 (1),  14. https://doi.org/10.5114/CEJI.2014.42116
Konar, N., Toker, O. S., Oba, S., & Sagdic, O. (2016). Improving functionality of chocolate: A review on probiotic, prebiotic, and/or synbiotic characteristics. Trends in Food Science & Technology , 49 , 35 – 44. https://doi.org/10.1016/J.TIFS.2016.01.002
Lolou, V., & Panayiotidis, M. I. (2019). Functional Role of Probiotics and Prebiotics on Skin Health and Disease. Fermentation 2019, Vol. 5, Page 41 , 5 (2), 41. https://doi.org/10.3390/FERMENTATION5020041
Lolou,  V.,  Panayiotidis,  M.  I.,  Lolou,  V.,  &  Panayiotidis,  M.  I.  (2019).  Functional  Role  of Probiotics  and  Prebiotics  on  Skin  Health  and  Disease. Fermentation , 5 (2),  41. https://doi.org/10.3390/fermentation5020041
Morais, E. C., Morais, A. R., Cruz, A. G., & Bolini, H. M. A. (2014). Development of chocolate dairy dessert with addition of prebiotics and replacement of sucrose with different high-
intensity sweeteners.
Journal of Dairy Science , 97 (5), 2600 – 2609. https://doi.org/10.3168/JDS.2013-7603
Palanivelu,  J.,  Thanigaivel,  S.,  Vickram,  S.,  Dey,  N.,  Mihaylova,  D.,  &  Desseva,  I.  (2022). Probiotics  in  Functional  Foods :  Survival  Assessment  and  Approaches  for  Improved Viability. Applied Sciences , 12 (1). https://doi.org/https://doi.org/10.3390/app12010455 Piewngam,  P.,  &  Otto,  M.  (2020).  Probiotics  to  prevent  Staphylococcus  aureus  disease? Gut Microbes , 11 (1), 94. https://doi.org/10.1080/19490976.2019.1591137
Pothuraju, R., Sharma, R. K., Onteru, S. K., Singh, S., & Hussain, S. A. (2016). Hypoglycemic and  Hypolipidemic  Effects  of  Aloe  vera  Extract  Preparations:  A  Review. Phytotherapy Research : PTR , 30 (2), 200 – 207. https://doi.org/10.1002/PTR.5532
Quezada, M. P., Salinas, C., Gotteland, M., & Cardemil, L. (2017). Acemannan and Fructans from Aloe vera (Aloe barbadensis Miller) Plants as Novel Prebiotics. Journal of Agricultural and Food Chemistry , 65 (46), 10029 – 10039. https://doi.org/10.1021/ACS.JAFC.7B04100/ASSET/IMAGES/LARGE/JF-2017- 04100J_0007.JPEG
Quigley, E. M. M. (2019). Prebiotics and Probiotics in Digestive Health. Clinical Gastroenterology and Hepatology , 17 (2), 333 – 344. https://doi.org/10.1016/J.CGH.2018.09.028
Roudsari, M. R., Karimi, R., Sohrabvandi, S., & Mortazavian, A. M. (2015). Health Effects of Probiotics  on  the  Skin. Critical  Reviews  in  Food  Science  and  Nutrition , 55 (9),  1219 – 1240. https://doi.org/10.1080/10408398.2012.680078
Samtiya, M., Aluko, R. E., & Dhewa, T. (2021). Potential Health Benefits of Plant Food-Derived
Bioactive Components : An Overview. Foods , 10 (4), 1 – 25. https://doi.org/https://doi.org/10.3390%2Ffoods10040839
Sierra-García, G. D., Castro-Ríos, R., González-Horta, A., Lara-Arias, J., & Chávez-Montes, A.
(2014). Acemannan, an Extracted Polysaccharide from Aloe vera: A Literature Review.
Natural Product Communications , 9 (8), 1217 – 1221.
https://doi.org/10.1177/1934578X1400900836
York, A. (2018). Silencing Staphylococcus aureus with probiotics. Nature Reviews Microbiology 2018 16:12 , 16 (12), 715 – 715. https://doi.org/10.1038/s41579-018-0111-3
Yusho  Huang,  T.  A.,  Raymond  Herr,  D.  C.,  Huang,  C.-M.  A.,  &  Jiang,  Y.  E.  (2020). Amplification  of  probiotic  bacteria  in  the  skin  microbiome  to  combat  Staphylococcus aureus infection. Microbiology Australia . https://doi.org/10.1071/MA20018