PENGARUH NANOPARTIKEL PLGA Nigella sativa DALAM MENURUNKAN RADIKAL BEBAS MALONDIALDEHIDA HEPAR TIKUS MODEL DM TIPE 2
Ema Pristi Yunita *  , Rizta Widya Pangestika * , Efta Triastuti *

## Abstrak
Diabetes  melitus  (DM)  dengan  glukosa  darah  yang  tidak  terkontrol  dapat  memicu  pembentukan  radikal bebas  yaitu  produk  malondialdehida  (MDA)  di  hepar.  Radikal  bebas  tersebut  dapat  diturunkan  menggunakan senyawa  antioksidan  (timokuinon).  Timokuinon  terkandung  dalam  biji Nigella  sativa .  Produk  herbal  sering mengalami kegagalan efikasi akibat rendahnya bioavailabilitas. Oleh karena itu, dilakukan terobosan baru yaitu formulasi  ekstrak  biji Nigella  sativa dengan  sistem  penghantaran  nanopartikel  PLGA.  Penelitian  ini  dillakukan untuk mengetahui pengaruh nanopartikel PLGA dalam memperbaiki efektivitas ekstrak biji jintan hitam  dalam menurunkan  produk  radikal  bebas  berupa  malondialdehida  (MDA)  di  hepar  tikus  model  DM  tipe  2.  Desain penelitian adalah true experimental posttest-only controlled design. Sebanyak 24 tikus yang diinduksi DM tipe 2 menggunakan streptozocin, kemudian dibagi menjadi empat kelompok yaitu kelompok yang diberi akuades dan pakan normal tanpa terapi (P n ), glibenklamid 0,45 mg/kgBB (P p ), non-nanopartikel ekstrak biji Nigella sativa 48 mg/kgBB/hari (P 1 ), dan nanopartikel PLGA ekstrak biji Nigella sativa 48 mg/kgBB/hari (P 2 ) selama 26 hari. Data dianalisis  menggunakan  uji  hipotesis  Kruskal  Wallis.  Untuk  mengetahui  kadar  MDA  digunakan  metode  asam tiobarbiturat.  Rerata  kadar  MDA  dari  yang  terendah  adalah  P 2 (0,3652±0,0363  ng/mL),  P 1 (0,3749±0,0242 ng/mL), P n (0,4084±0,0719 ng/mL), dan P p (0,4329±0,0588 ng/mL). Terdapat perbedaan kadar MDA hepar tikus model DM tipe 2 yang tidak berbeda bermakna pada semua kelompok perlakuan (Kruskal Wallis, p = 0,199). Hasil  penelitian  ini  masih  belum  dapat  menunjukkan  kemampuan  nanopartikel  PLGA Nigella  sativa dalam menurunkan radikal bebas MDA di hepar.
Kata kunci: malondialdehida hepar, nanopartikel PLGA, Nigella sativa .
THE INFLUENCE OF Nigella sativa PLGA NANOPARTICLES IN REDUCING THE FREE RADICALS MALONDIALDEHYDE LIVER TYPE 2 DM RATS MODEL

## Abstract
Diabetes  mellitus  with  uncontrolled  blood  glucose  might  trigger  the  formation  of  free  radicals  namely malondialdehyde  (MDA)  product  in  liver.  The  free  radicals  could  be  reduced  using  antioxidant  compounds (thymoquinone). Thymoquinone contained in Nigella sativa seeds. Herbal products often fail efficacy due to low bioavailability.  Therefore,  made  a  new  breakthrough  that Nigella  sativa seed  extract  formulation  with  PLGA nanoparticle  delivery  systems.  This  study  was  to  determine  the  influence  PLGA  nanoparticles  to  improve  the effectiveness of black cumin seed extract in reducing free radical products in the form of malondialdehyde (MDA) in  liver  rat  model  of  type  2  DM.  This  study  design  was  a  true  experimental  posttest-only  controlled  design. Twenty four rats were divided into four groups that were induced type 2 DM using streptozocin, then divided into four  groups  that  were  given  distilled  water  and  feed  normally  without  treatment  (P n ),  0.45  mg/kgBW glibenclamide (P p ), 48 mg/kgBW/day of non-nanoparticle Nigella sativa seed extract (P 1 ), and 48 mg/kgBW/day of  PLGA  nanoparticles Nigella  sativa seed  extract  (P 2 )  for  26  days.  Data  were  analyzed  with  Kruskal  Wallis hypothesis test. The thiobarbituricacid method was used to determine MDA level. The mean of MDA level from the lowest were P 2 (0.3652 ± 0.0363 ng/mL), P 1 (0.3749 ± 0.0242 ng/mL), P n (0.4084 ± 0.0719 ng/mL), and P p (0.4329  ±  0.0588  ng/mL).  There  were  differences  in  the  rat  model  of  liver  MDA  levels  type  2  DM  was  not significantly different in all treatment groups (Kruskal Wallis, p = 0,199). The results of this research still could not show the ability of Nigella sativa PLGA nanoparticles in reducing free radicals in the liver MDA.
Keywords: liver malondialdehyde, PLGA nanoparticles, Nigella sativa .
* Program Studi Farmasi, FKUB
 E-mail: emapristi@gmail.com

## Pendahuluan
Diabetes  melitus  (DM)  merupakan  suatu penyakit  metabolik. 1 Penderita  DM  di Indonesia  diperkirakan  akan  meningkat menjadi 14,1 juta pada tahun 2035. 2 DM tipe 2 merupakan  90%  dari  kasus  penderita diabetesdi dunia. 3
Pada  kondisi  DM,  peningkatanglukosa darah  dapat  mendorong  pembentukan  radikal bebas. Adanya radikal bebasdapat dikontrololehantioksidan. 4 Biji jintan hitam yang mengandung  timokuinon  terbukti  memiliki aktivitas antioksidan kuat. 5
Penelitian  ini  perlu  dilakukan  untuk mengetahui pengaruh pemberian nanopartikel PLGA  dalam  memperbaiki  efektivitas  ekstrak biji  jintan  hitam.  Dengan  demikian  mampu meningkatkan  efektivitas  terapi  ekstrak  biji jintan hitam melalui penurunan produk radikal bebas berupa malondialdehida (MDA) di hepar tikus model DM tipe 2.
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk mengetahui perbedaan kadar MDA hepar tikus model  DM  tipe  2  yang  diberi  nanopartikel PLGA  ekstrak  biji  jintan  hitam,  non- nanopartikel ekstrak biji jintan hitam, kelompok yang  tidak  diberi  terapi,  dan  kelompok  yang diberi glibenklamid.

## Bahan dan Metode

## Hewan Coba
Hewan  coba  pada  penelitian  ini  adalah  tikus Sprague  dawley jantan  yang  berusia  18  bulan  dan memiliki berat badan 180-400 g. Induksi DM tipe 2 dilakukan  dengan  pemberian  pakan  Diet  Tinggi Lemak (DTL) dan streptozocin (STZ) 35 mg/kgBB. Pemberian  terapi  dilakukan  selama  26  hari. Sebanyak  24  ekor  tikus  dibagi  menjadi  empat kelompok  perlakuan  secara  acak,  tiap  kelompok berisi  6  ekor  tikus.  Kelompok  kontrol  negatif  (P n ) yaitu tikus yang diinduksi DM tipe 2 diberi akuades dan  pakan  normal  tanpa  terapi  ekstrak  biji  jintan hitam.Kelompok kontrol positif (P p ) yaitu tikus yang diinduksi DM tipe 2 diberi terapi glibenklamid dosis 0,45 mg/kgBB.Kelompok perlakuan (P 1 ) yaitu tikus yang  diinduksi  DM  tipe  2  diberi  non-nanopartikel ekstrak  biji  jintan  hitam  dosis  48  mg/kgBB/hari. Kelompok perlakuan (P 2 ) yaitu tikus yang diinduksi DM  tipe  2  diberi  nanopartikel  PLGA  ekstrak  biji jintan hitam dosis 48 mg/kgBB/hari.

## Desain Penelitian
Penelitan  ini  menggunakan  desain true experimental dengan  metode posttest-only controlled  design. Prosedur  dalam  penelitian ini telah mendapatkan persetujuan dari Komisi Etik Penelitian Kesehatan Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya.

## Ekstraksi Biji Jintan Hitam
Serbuk  biji  jintan  hitam  sebanyak  150  g diekstraksi  dengan  etanol  95%  900  mL menggunakan  alat extraction  unit E-816. Ekstraksi soxhlet dilakukan  selama  3  jam. Ekstrak  dipisahkan  dari  pelarutnya  dengan dievaporasi  pada  suhu  60°C  menggunakan water bath rotary evaporator sampai terbentuk ekstrak semisolid.
Identifikasi Timokuinon dengan Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
Plat  KLT  silika  gel  disiapkan  dengan ukuran  20  x  4  cm.  Diukur  eluen  yang  terdiri dari  n-heksan  :  etil  asetat  =  9  :  1  (12). Ditotolkan 2 μL ekstrak biji jintan hitam dan 2 μL standar timokuinon pada plat KLT. Diamati noda  pada  Lampu  UV  dengan  panjang gelombang 254 nm.

## Pembuatan Diet Tinggi Lemak (DTL)
Diet  ini  diberikan  selama  40  hari  dengan ketentuan jumlah makanan rata-rata 25 g/hari untuk  setiap  tikus.  Sebanyak  25  g  DTL mengandungkonsentrat  PARS  50%,  tepung terigu  25%,  kolesterol  1%,  asam  kolat  0,1%, dan minyak babi 2,5%. 6

## Pembuatan Nanopartikel PLGA
Ekstrak  biji  jintan  hitam  ditimbang  3,456 mg  dengan  neraca  analitis.  PLGA  ditimbang 17,28  g  dengan  neraca  analitis. Propylene carbonate (PC)  diukur  1036,8  mL  dengan gelas ukur. Ekstrak biji jintan hitam dan PLGA dilarutkan  dalam  PC  menggunakan magnetic stirrer 500  rpm  selama  30  menit  sampai tercampur. Pluronic F68  ditimbang  69,12  g dengan neraca analitis. Aquabidestilata diukur 6,912  L  dengan  gelas  ukur.  Pluronic  F68 dilarutkan dalam aquabidestilata
menggunakan magnetic  stirrer 1250  rpm selama  30  menit  hingga  larut.  Campuran ekstrak,  PLGA,  dan  PC  dipipet  kemudian ditambahkan ke dalam campuran Pluronic F68
dan aquabidestilata dengan laju 0,5 mL/menit. Campuran tersebut disentrifugasi 10000 g T = 4°C  selama  30  menit.  Pellet  yang  terbentuk dipisahkan  dan  ditimbang  menggunakan neraca analitis. 7

## Karakterisasi Morfologi Nanopartikel PLGA
Pellet  nanopartikel  dipipet  lalu  diletakkan pada carbon  tip. Diberi  etanol  absolut  agar cairan  cepat  menguap.  Pellet  nanopartikel dikonduktifkan lalu diamati ukuran nanopartikel pada Scanning  Electron  Microscope (SEM) merek FEI tipe inspect S 50 pada perbesaran 20.000x, dan 50.000x.
Pemeriksaan  Kadar  Glukosa  Darah  Puasa (GDP)
Sebelum dilakukan pengukuran kadar GDP, tikus  dipuasakan  selama  10-12  jam.  Dilakukan pemeriksaan  kadar  GDP  sebelum  perlakuan, satu  kali  setelah  40  hari  DTL,  tiga  hari  setelah diinduksi  STZ,  dan  satu  kali  setelah  26  hari diberikan terapi.

## Pengukuran Kadar MDA Hepar
Organ  hepar  dibersihkan  dan  dicuci dengan phosphate buffer saline (PBS) hingga bersih.  Diambil  sebanyak  110  mg  dan  dicuci dengan  PBS.  Dihancurkan  dengan  batang penumbuk  lalu  homogenat  ditambah  1  mL PBS.  Dilakukan  sentrifugasi  pada  kecepatan 2800  rpm  selama  7  menit  pada  suhu  4 o C. Sebanyak  0,5  mL  supernatan  dipindahkan pada  mikrotube  baru.  Sebanyak  0,2  mL supernatan  dipindahkan  pada  falkon  baru, ditambahkan  dengan  0,05  mL  NaOH  3  M, dilakukan  vortex,  dan  diinkubasi  pada  suhu 60 o C  selama  30  menit.  Ditambahkan  2  mL H 2 SO 4 0,05  M  dan  1  mL  larutan  TCA  (20% b/v),  dilakukan  vorteks,  disentrifugasi  dengan kecepatan 3000 rpm pada suhu 4 o C selama 10 menit. Sebanyak 2  mL supernatan dipindahkan ke falkon baru, ditambahkan 1 mL larutan TBA ( thiobarbituric acid ) (0,355% b/v), dilakukan  vortex,  dan  diinkubasi  pada  suhu 90 o C  selama  40  menit.  Dilakukan  sentrifugasi dengan  kecepatan  3000  rpm  pada  suhu  4 o C selama  10  menit.Setelah  dingin  pada  suhu ruang, konsentrasinya diukur dengan
spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang gelombang maksimum yaitu 532 nm. 8

## Hasil

## Ekstraksi  dan  Uji  Fitokimia  Kualitatif Ekstrak Biji Jintan Hitam
Hasil ekstraksi didapatkan ekstrak cair biji jintan  hitam  berwarna  coklat  kehitaman sebanyak  75,3  g  (50,2%).  Warna  ekstrak  biji jintan  hitam  yang  diperoleh  telah  sesuai dengan  literatur  yaitu  berwarna  coklat kehitaman.

## Identifikasi  Timokuinon  Ekstrak  Biji  Jintan Hitam
Hasil  identifikasi  menunjukkan  bahwa ekstrak biji jintan hitam dan standar timokuinon memiliki  noda  pada  plat  KLT  dengan  nilai  Rf yang  sama  yaitu  0,765.  Dari  hasil  identifikasi ini menunjukkan bahwa ekstrak biji jintan hitam positif mengandung timokuinon.

## Nanopartikel  PLGA  Ekstrak  Biji  Jintan Hitam
Total  pellet  yang  diperoleh  untuk  terapi selama  26  hari  adalah  4,09  g.  Pellet  yang diperoleh memiliki warna putih keruh.

## Karakterisasi Morfologi Nanopartikel PLGA Ekstrak Biji Jintan Hitam
Hasil uji SEM pada Tabel 2 menunjukkan bahwa  sediaan  nanopartikel  yang  dibuat memiliki  ukuran  partikel  yang  berukuran nanometer. Hasil pembuatan sediaan nanopartikel  PLGA  ekstrak  biji  jintan  hitam memiliki  diameter  terendah  50,14  nm; diameter  tertinggi  93,98  nm;  dan  rerata diameter  yaitu  68,80  nm.  Dari  hasil  uji  SEM dapat  dilihat  bahwa  terdapat  permukaan partikel  yang  halus  dan  kasar  serta  partikel tidak berbentuk.
Tabel 1. Hasil uji fitokimia kualitatif Jenis Uji Fitokimia Pereaksi Hasil Keterangan Minyak atsiri Sudan III Terbentuk warna merah tua + Alkaloid Mayer Tidak terbentuk endapan putih atau krim - Wagner Terbentuk endapan coklat kemerahan + Dragendroff Tidak terbentuk endapan kuning atau jingga - Saponin - Terbentuk buih yang stabil selama 10 menit dengan tinggi 1 cm, dan terbentuk emulsi setelah penambahan minyak zaitun + Flavonoid Amonia encer dan H 2 SO 4 Terbentuk warna kuning + 1% larutan aluminium (Al) Terbentuk warna kuning + Etil asetat dan ammonia encer Terbentuk warna kuning + Tanin Larutan NaCl 0,9% panas dan FeCl 3 Terbentuk endapan berwarna biru, biru kehitaman, hijau, atau biru kehijauan + 1% larutan gelatin dan FeCl 3 Terbentuk endapan berwarna biru, biru kehitaman, hijau, atau biru kehijauan + Gelatin-NaCl dan FeCl 3 Terbentuk endapan berwarna biru, biru kehitaman, hijau, atau biru kehijauan + Terpenoid Kloroform dan H 2 SO 4 pekat Terbentuk warna coklat kemerahan pada permukaan +
Keterangan:
(+)  = positif mengandung zat yang diuji (-)  = negatif/tidak mengandung zat yang diuji

## Tabel 2. Hasil uji SEM sediaan nanopartikel
Gambar Keterangan Perbesaran 20.000 X
- Perbesaran 50.000 X
- Diameter yaitu 50,14 nm; 60,85 nm; 63,04 nm; 75,99 nm; 93,98 nm - Rerata diameter adalah 68,80 nm

## Induksi DM Tipe 2
Induksi  DM  tipe  2  pada  penelitian  ini menggunakan  pakan  DTL  dan  STZ  dosis rendah  yaitu  35  mg/kgBB.Apabila  dilihat  dari hasil  GDP  setelah  40  hari  pemberian  pakan
DTL,  didapatkan  21  tikus  mengalami peningkatan  GDP.  Setelah  pemberian  STZ dosis 35 mg/kgBB, gejala-gejala fisiologis yang terjadi  pada  tikus  meliputi  poliuri  (ditandai dengan  sekam  basah),  polidipsi  (ditandai
dengan  air  minum  yang  diberikan  setiap  hari habis),  dan  polifagi  (ditandai  tidak  terdapat sisa  pakan).  Semua  tikus  mengalami peningkatan  kadar  GDP  dan  dinyatakan  DM karena kadar GDP telah melebihi 126 mg/dL. 14

## Kadar MDA Hepar
Rerata  kadar  MDA  hepar  dapat  dilihat pada  Tabel  3.  Dari  hasil  rerata  kadar  MDA hepar  tikus,  kelompok  P 2 dan  kelompok  P 1 menunjukkan  kadar  MDA  yang  rendah  yaitu 0,3652±0,0363  ng/mL  dan  0,3749±0,0242 ng/mL  jika  dibandingkan  kontrol  negatif  yaitu 0,4084  ±  0,0719  ng/mL.  Dari  semua kelompok,  P 2 adalah  kelompok  dengan  kadar MDA hepar terendah. Sebaliknya, kelompok P p
memiliki  kadarMDA  hepar  tertinggi  yaitu 0,4329±0,0588 ng/mL.
Apabila  dibandingkan  dengan  kelompok P n ,  kelompok  P 2 mengalami penurunan  kadar MDA  hepar  sebesar  10,58%,  diikuti  oleh kelompok  P 1 yang  mengalami  penurunan kadar MDA hepar sebesar 8,20%. Sementara pada  kelompok  P p mengalami  peningkatan kadar MDA hepar sebesar 6,00%.
Untuk  mengetahui  adanya  perbedaan antar  kelompok perlakuan, maka dilakukan uji Kruskal  Wallis  dengan  hasil  p  =  0,199  (p  > 0,05).  Hasil  ini  menunjukkan  bahwa  tidak terdapat  perbedaan  kadar  MDA  hepar  yang signifikan  secara  statistik  antara  keempat kelompok perlakuan.
Tabel 3. Kadar MDA hepar tikus DM tipe 2

## Pembahasan
Ekstraksi  dan  Uji  Fitokimia  Kualitatif Ekstrak Biji Jintan Hitam
Hasil  ekstraksi  yang  diperoleh  pada penelitian  ini  berbeda  dengan  jurnal  rujukan. Pada  jurnal  rujukan  yang  menggunakan metode  ekstraksi soxhlet dan  perbandingan pelarut yang sama, diperoleh ekstrak semisolid sebanyak  22,78%,  dan  proses  ekstraksi dilakukan  selama  3  jam  sedangkan  jurnal rujukan menggunakan waktu selama 30 menit. 9
Sehingga diperoleh ekstrak yang lebih banyak dan  memiliki  konsistensi  cair  Dari  hasil  uji fitokimia  kualitatif  (lihat  Tabel  1)  diketahui ekstrak  biji  jintan  hitam  positif  mengandung minyak  atsiri,  saponin,  flavonoid,  tanin,  dan terpenoid  yang  sesuai  dengan  literatur. 9,11 Hal ini  menunjukkan  bahwa  proses  ekstraksi dengan  metode soxhlet dan  pelarut  etanol dapat  menarik  senyawa-senyawa  yang terkandung  dalam  biji  jintan  hitam  terutama minyak  atsiri.  Namun,  pada  hasil  uji  alkaloid menunjukkan  hasil  negatif  dan  kurang  sesuai dengan literatur.

## Identifikasi  Timokuinon  Ekstrak  Biji  Jintan Hitam
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa ekstrak  biji  jintan  hitam  positif  mengandung timokuinon dengan nilai Rf pada plat KLT yaitu 0,765. Pada penelitian lain didapatkan nilai Rf timokuinon 0,048±0,040 dan 0,820. 12,13 Adanya perbedaan  nilai  Rf  ini  dapat  diakibatkan  oleh penggunaan  pelarut  ekstrak  yang  berbeda sehingga  zat  aktif  timokuinon  yang  dapat terekstraksi  pun  juga  berbeda.  Penggunaan eluen  dan  metode  yang  berbeda  juga berpengaruh  dalam  proses  eluasi  zat  aktif timokuinon  yang  terkandung  pada  ekstrak maupun timokuinon standar.

## Karakterisasi  Morfologi  Nanopartikel  PLGA Ekstrak Biji Jintan Hitam
Hasil  pembuatan  nanopartikel  PLGA ekstrak biji jintan hitam pada penelitian ini tidak sejalan  dengan  penelitian  oleh  Slutter et  al (2010), yang menunjukkan bahwa nanopartikel PLGA yang dibuat dengan metode penguapan pelarut  memiliki  permukaan  yang  halus  dan partikel  berbentuk  sferis. 15 Bentuk  tidak seragam  seperti  yang  terlihat  pada  penelitian ini dapat dipengaruhi oleh banyak faktor antara lain  peningkatan  jumlah  polimer  PLGA sehingga terbentuk partikel tidak sferis, adanya
Perlakuan N Rerata Kadar MDA Hepar ± SD (ng/mL) Median (Min-Maks) (ng/mL) Kontrol Negatif (P n ) 6 0,4084 ± 0,0719 0,4075 (0,3282-0,4868) Kontrol Positif`(P p ) 5 0,4329 ± 0,0588 0,4128 (0,3652-0,5132) Perlakuan 1 (P 1 ) 6 0,3749 ± 0,0242 0,3732 (0,3494-0,4022) Perlakuan 2 (P 2 ) 6 0,3652 ± 0,0363 0,3626 (0,3282-0,4075)
polimer  yang  mengalami  aglomerasi  dan  tidak berbentuk,  serta  peningkatan  ukuran  partikel; peningkatan jumlah ekstrak yang menyebabkan rata-rata diameter dan distribusi granul  menjadi  lebih  besar;  makin  tingginya konsentrasi stabilizer yang digunakan sehingga mengurangi  ukuran  partikel  dari  nanopartikel yang  dihasilkan;  serta  peningkatan  waktu sonikasi  yang  menurunkan  ukuran  diameter partikel. 16

## Induksi DM Tipe 2
Pemberian  pakan  DTL  pada  penelitian  ini bertujuan untuk menghasilkan kondisi
resistensi  insulin  sedangkan  injeksi  STZ bertujuan untuk menghasilkan kerusakan sel β pankreas  secara  parsial  sehingga  akan menggangu  dalam  proses  sekresi  insulin. 17
Setelah  40  hari  pemberian  pakan  DTL,  terjadi peningkatan  berat  badan  yang  cukup  tinggi pada  semua  kelompok.  Peningkatan  berat badan  ini  disebabkan  karena  konsumsi makanan  yang  kaya  energi  dalam  bentuk lemak  jenuh  dan  akan  terdeposisi  dalam berbagai  bantalan  lemak  tubuh.  Pemberian pakan  DTL  dapat  mengakibatkan  kadar trigliserida meningkat yang merupakan sumber peningkatan  ketersediaan  asam  lemak. Penggunaan  asam  lemak  dapat  mengganggu efek  hambatan  hormon  insulin  terhadap produksi  glukosa  di  hepar  dan  mengurangi pengambilan glukosa oleh otot rangka. 17 Hal ini yang  menyebabkan  terjadinya  peningkatan GDP  pada  hewan  coba.  Seluruh  tikus  dalam penelitian ini telah dinyatakan DM karena STZ masuk  ke  dalam  sel  β  pankreas  melalui pengangkut  glukosa  GLUT2  yang  selanjutnya mengakibatkan  perubahan  pada  DNA  sel  β pankreas  sehingga  terjadi  penghambatan dalam sintesis dan sekresi insulin. 18

## Kadar MDA Hepar
Dari  rerata  hasil  pengukuran  kadar  MDA hepar,  kelompok  P 2 memiliki  nilai  yang  paling rendah.  Hal  ini  dapat  diduga  nanopartikel PLGA  termetabolisme  dengan  baik  dalam hepar  sehingga  timokuinon  memberikan  efek lebih  maksimal  sebagai  antioksidan  untuk menurunkan  kadar  MDA  pada  hepar.Hal  ini diperkuat  oleh  penelitian  yang  menunjukkan bahwa  hasil  autoradiografi  seluruh  tubuh  dan eksperimen  distribusi  kuantitatif  pada  tikus
menunjukkan  bahwa  beberapan  formulasi  dari PLGA  seperti  nanopartikel  akan  terakumulasi cepat salah satunya pada organ hepar. 19 Hasil penelitian  tentang  evaluasi  besarnya  distribusi dan  retensi  jaringan  setelah  pemberian nanopartikel  PLGA  secara  oral  selama  7  hari pada  mencit  menunjukkan  bahwa  persentase rata-rata  partikel  yang  terlokalisasi  tertinggi terdapat pada hepar (40,04%). 20 Pada  kelompok  P 1 menunjukkan  bahwa ekstrak  biji  jintan  hitam  dapat  menurunkan kadar  MDA  hepar  apabila  dibandingkan dengan  kontrol  negatif.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  ekstrak  biji  jintan  hitam  dapat memberikan efek dalam menurunkan peroksidasi  lipid  pada  hepar  walaupun  lebih rendah  kemampuannya  jika  dibandingkan ekstrak  yang  dibuat  sebagai  sediaan nanopartikel.  Efek  penurunan  peroksidasi  lipid ini diduga merupakan aktivitas antioksidan dari timokuinon  dalam  ekstrak  biji  jintan    hitam. Aktivitas  antioksidan  minyak  biji  jintan  hitam yang  terutama  mengandung  timokuinon bekerja  dengan  menghambat  peroksidasi  dan penangkapan  radikal. 21 MDA  merupakan  hasil dari peroksidasi lipid sehingga zat aktif berupa timokuinon  yang  terdapat  dalam  ekstrak  biji jintan  hitam  harus  memiliki  sifat  lipofilik  untuk dapat  bekerja  secara  optimal  dalam menurunkan  MDA.  Timokuinon  merupakan antioksidan  larut  lemak  sehingga  mampu melewati  membran  lapisan  lemak  dan menurunkan  pembentukan  ROS  ( Reactive Oxygen Species ) di mitokondria.

## Kesimpulan
Dapat  disimpulkan  dari  penelitian  ini bahwa  terdapat  perbedaan  kadar  MDA  hepar tikus  model  DM  tipe  2,  tetapi  tidak  signifikan secara  statistik  pada  kelompok  yang  diberi nanopartikel  PLGA  ekstrak  biji  jintan  hitam, non-nanopartikel  ekstrak  biji  jintan  hitam, kelompok  yang  tidak  diberi  terapi,  dan kelompok yang diberi glibenklamid.Kadar MDA hepar pada kelompok yang diberi nanopartikel PLGA  ekstrak  biji  jintan  hitam  menghasilkan penurunan kadar MDA hepar yang paling besar dibandingkan  dengan  kelompok  perlakuan yang lain.

## Saran
Dari  hasil  ini  dapat  disarankan  pemberian biji jintan hitam sebagai terapi tambahan pada pasien  DM  tipe  2.  Selain  itu,  diperlukan pengukuran  kadar  HOMA-IR  dan  HOMA-β untuk  mengetahui  apakah  model  hewan  coba telah mengalami kondisi resistensi insulin pada penelitian serupa.

## Daftar Pustaka
1. American Diabetes Association.. Standards  of  Medical  Care  in  Diabetes– 2014. Diabetes Care .  2014; 37(1):14-90.
2. International  Diabetes  Federation.. IDF
Diabetes  Atlas. 6 th edition . Brussels: International Diabetes Federation. 2013. 3. (WHO) World Health Organization.Diabetes . (Online).2013.http:/
/www.who.int/mediacentre/factshees/ fs312/en/. Diakses 17 September 2014.
4. Winarsi  H. Antioksidan  Alami  dan  Radikal Bebas,  Potensi  dan  Aplikasinya  dalam Kesehatan .  Yogyakarta:  Kanisius.  2007.
Hlm 21-24.
5. Alimohammadi  S,  Hobbenaghi  R, Javanbakht J, Kheradmand D, Mortezaee R,  Tavakoli  M, et  al .  Protective  and Antidiabetic Effects of Extract from Nigella sativa on  Blood  Glucose  Concentrations Against  Streptozotocin  (STZ)-Induced Diabetic  in  Rats:  An  Experimental  Study with Histopathological Evaluation. Diagnostic Pathology . 2013;8(137):1-7. 6. Pranata  FJ.  Pengaruh  Pemberian  Ekstrak Daun  Pare  terhadap  Kadar  Insulin  pada Tikus  Putih  Strain  Wistar  Model  Diabetes Mellitus  Tipe  2  dengan  Hiperinsulinemia. Tugas  Akhir.  Tidak  Diterbitkan.  Malang: Universitas Brawijaya. 2010.
7. Paul  S,  Bhattacharyya  SS,  Boujedaini  N, Khuda-Bukhsh  AR.  Anticancer  Potentials of Root Extract of Polygala senega and Its
PLGA  Nanoparticles-encapsulated  Form .
Evidence-Based  Complementary  and
Alternative Medicine . 2011; 1-13.
8. Moselhy  HF,  Reid  RG,  Yousef  S,  and Boyle  S.  A  Specific,  Accurate  and
Sensitive  Measure  of  Total  Plasma
Malondialdehyde  by  HPLC. Journal  of Lipid Research . 2013; 54(3): 852-858. 9. Dwarampudi  LP,  Palaniswamy  D,
Nithyanantham  M,  and  Raghu  PS. Antipsoriatic  Activity  and  Cytotoxicity  of Ethanolic Extract of Nigella sativa Seeds. Pharmacognosy  Magazine .  2012;  8(32): 268-272.
10. Bashir  MU  and  Qureshi  HJ.  Analgesic
Effect  of Nigella  sativa Seeds  Extract  on Experimentally  Induced  Pain  in  Albino Mice. Journal of the College of Physicians and  Surgeons  Pakistan .  2010;  20(7):  64-
467.
11. Tembhurne  SV,  Feroz  S,  More  BH,  and Sakarkar  DM.  A  Review  on  Therapeutic Potential of Nigella sativa (Kalonji) Seeds. Journal  of  Medicinal  Plants  Research . 2014; 8(3):167-177.
12. Suthar MP, Patel PN, Shah TG, and Patel RK.  In  Vitro  Screening  of Nigella  sativa Seeds for Antifungal Activity. International Journal  of  Pharmaceutical  and  Applied Sciences . 2010; 1(2): 4-91.
13. Alam  P,  Yusufoglu  H,  and  Alam  A. HPTLC Densitometric Method for Analysis of Thymoquinone in Nigella sativa Extracts and Marketed Formulations. Asian Pacific Journal of Tropical Disease . 2013;3(6):467-471. 14. Jung  JY,  Lim  Y,  Moon  MS,  Kim  JY,  and Kwon  O.  Onion  Peel  Extracts  Ameliorate Hyperglycemia  and  Insulin  Resistance  in High  Fat  Diet/Streptozotocin-Induced Diabetic  Rats. Nutrition  &  Metabolism . 2011; 8(18):1-8.
15. Slutter  B,  Bal  S,  Keijer  C,  Mallants  R, Hagenaars  N,  Que  I, et  al .  Nasal
Vaccination  with  N-Trimethyl  Chitosan and PLGA based Nanoparticles: Nanoparticle  Characteristics  Determine Quality  and  Strength  of  the  Antibody Response in Mice  against the Encapsulated  Antigen. Vaccine .  2010;
28(38):6282-6291.
16. Mainardes  RM  and  Evangelista  RC. PLGA Nanoparticles Containing Praziquantel:  Effect  of  Formulation
Variables on Size Distribution. International  Journal  of  Pharmaceutics .
2005; 290(1-2):137–144.
17. Srinivasan  K,  Viswanad  B,  Asrat  L,  Kaul CL, Ramarao P. Combination of High-Fat
Diet-Fed  and  Low-Dose  Streptozotocin-
Tretaed  Rat:  A  Model  For  Type  2
Diabetes and Pharmacological Screening. Pharmacological Research . 2005;
52(4):313-320.
18. Szkudelski  T.  The  Mechanism  of  Alloxan and Streptozotocin Action in Β Cells of the Rat  Pancreas. Physiological  Research . 2001; 50(6):537-546.
19. Makadia  HK  and  Siegel  SJ.  Poly  Lactic- co-glycolic Acid (PLGA) as Biodegradable Controlled Drug Delivery Carrier. Polymer .
2011;3(3):1377-1397.
20. Semete  B,  Booysen  L,  Lemmer  Y, Kalombo  L,  Katata  L,  Verschoor  J, et  al .
In  Vivo  Evaluation  of  The  Biodistribution and  Safety  of  PLGA  Nanoparticles  as Drug  Delivery  Systems. Nanomedicine .
2010; 6(5):622-671.
21. Singh  S,  Das  SS,  Singh  G,  Schuff  C, Lampasona  MP,  and  Catalan  CAN. Composition,  in  Vitro  Antioxidant  and Antimicrobial  Activities  of  Essential  Oil and  Oleoresins  Obtained  from  Black Cumin Seeds (Nigella sativa L .). Hindawi Publishing Corporation BioMed Research International . 2014; 1-10.