Pengaruh Pemberian Salep Kombinasi Ekstrak Daun Morinda citrifolia dan Batang Euphorbia tirucalli terhadap Penyembuhan Luka
Reza Pertiwi 1 *, Syalfinaf  Manaf 2 ,  Rochmah Supriati 2 , Hari Marta Saputra 2 , Fitri Ramadhanti 3
1 Program Studi S1 Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Bengkulu, Bengkulu Indonesia
2 Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Bengkulu, Bengkulu, Indonesia
3 Rumah Sakit Umum Daerah Tais, Kabupaten Seluma, Provinsi Bengkulu, Indonesia
*Corresponding author: rpertiwi@unib.ac.id
Submitted: 16 Maret 2020 Accepted: 5 Mei 2020 Published: 25 Juni 2020

## Abstract
Background :  Wound  healing  is  a  process  of  replacing  dead  or  damaged  tissue  through  the  process  of  cell regeneration. The branches of Euphorbia tirucalli contains  alkaloids, flavonoids, saponins, and tannins, while Morinda  citrifolia  contains  alkaloids,  tannins,  saponins,  flavonoids,  and  triterpenoids.  The  ability  of  ointment combination  of  Morinda  citrifolia  leaves  extract  and  the  stem  of  Euphorbia  tirucalli  can  accelerate  wound healing. Objective :  This  study  aimed  to  determine  the  effective  formulation  and  the  effect  of  ointment combination extract on Morinda citrifolia leaves and the stem of Euphorbia tirucalli extracts on the healing of rats’  superficial  incision  wound. Methods :  28  male  white  rats  divided  into  7  treatment  groups.  Group  K  (-) without  treatment,  group  K  (+)  given  Povidone  Iodine  10%,  F1  with  ointment  of  Euphorbia  tirucalli  stem extract, F2 with ointment Morinda citrifolia leaf extract, P3 with ointment combination Morinda citrifolia leaves and Euphorbia tirucalli stem 0.75:0.25; F4 with ointment combination Morinda citrifolia leaves and Euphorbia tirucalli  stem  extract  1:1,  and  F5  giving  ointment  combination  with  Morinda  citrifolia  leaves  and  Euphorbia tirucalli  stem  0.25:0.75.  Histopathology  observation  of  incised  wound  skin  was  descriptively  analyzed  by comparing  the treatment  and the control  group. Results : Formulation III  is the effective formulation  where on the  5th  and  6th  day  the  wound  started  to  close  while  on  the  7th  and  8th  day  the  wound  completely  closed. Conclusion :  The  use  of  ointment  formulations  affects  the  regeneration  of  superficial  incision  wound  healing cells through the inflammatory phase, TNF-α, re-vascularization, and proliferation phase.
Keywords : Euphorbia tirucalli, Morinda citrifolia, wound healing, superficial incision wound healing

## Abstrak
Pendahuluan :  Penyembuhan  luka  adalah  proses  terjadinya  penggantian  jaringan  yang  rusak  atau  mati  dengan jaringan  yang  baru  melalui proses regenarasi  sel.  Ranting Euphorbia  tirucalli mengandung alkaloid, flavonoid, saponin, dan tannin, sedangkan Morinda citrifolia memiliki kandungan alkaloid, tanin, saponin, flavonoid serta triterpenoid. Kemampuan kandungan dari kombinasi salep ekstrak daun Morinda citrifolia dan batang Euphorbia tirucalli diduga  dapat  mempercepat  penyembuhan  luka  dan  periode  fibroblas,  neovaskularisasi  dan  epitelisasi. Tujuan :  Penelitian  ini  bertujuan untuk mengetahui  formulasi  salep  yang efektif dan  pengaruh salep kombinasi ekstrak daun Morinda citrifolia dan batang Euphorbia tirucalli terhadap penyembuhan  luka insisi dangkal pada tikus. Metode :  Sebanyak  28  ekor  tikus  jantan  dibagi  kedalam  7  kelompok  perlakuan.  Kelompok  K(-)  tanpa perlakuan,  kelompok  K(+)  dengan  pemberian Povidon  Iodine 10%,  F1  dengan  pemberian  salep  kombinasi ekstrak  batang Euphorbia  tirucalli ,  F2  dengan  pemberian  salep  ektrak  daun Morinda  citrifolia ,  F3  dengan pemberian  salep  kombinasi  ekstrak  daun Morinda  citrifolia dan  batang Euphorbia  tirucalli perbandingan 0,75:0,25; F4 dengan pemberian salep kombinasi ekstrak daun Morinda citrifolia dan batang Euphorbia tirucalli dengan perbandingan 1:1 dan F5 dengan pemberian salep kombinasi ekstrak daun Morinda citrifolia dan batang Euphorbia  tirucalli perbandingan  0,25:0,75.  Pengamatan  histopatologi  kulit  tikus  dianalisis  secara  deskriptif
dengan membandingkan antara kelompok kontrol dan kelompok perlakuan. Hasil : Formulasi  salep yang efektif adalah  formulasi III dimana hari ke-5 dan hari ke-6 luka sudah mulai menutup sedangkan pada hari ke-7 dan 8 luka  sudah  menutup. Kesimpulan :  Pemberian  salep  kombinasi  daun Morinda  citrifolia dan  batang Euphorbia tirucalli efektif  dalam  menyembuhkan  luka  insisi  dangkal  melalui  fase  inflamasi,  TNF-α,  re-vaskularisasi  dan fase proliferasi.
Kata kunci : Euphorbia tirucalli, Morinda citrifolia, penyembuhan luka, luka insisi dangkal

## PENDAHULUAN
Penyembuhan  luka  adalah  proses  terjadinya penggantian  jaringan  yang  rusak  atau  mati  dengan jaringan  yang  baru  melalui  proses  regenerasi  sel. Proses  penyembuhan  dari  sel  parenkim  dengan mengganti  sel  yang  rusak  dengan  sel  yang  baru  dan sama  sehingga  fungsi  tubuh  atau  jaringan  akan  pulih kembali  dengan  sempurna  dikenal  sebagai  regenerasi. Proses yang kemudian terjadi pada jaringan yang rusak tersebut  ialah  proses  penyembuhan  dan  regenerasi  sel yang  terjadi  sebagai  respon  fisiologis  tubuh.  Proses penyembuhan luka terdiri dari tiga fase yaitu inflamasi, proliferasi  atau  granulasi  dan  fase  remodeling (Sjamsuhidajat & Jong, 2010).
Fase  inflamasi  merupakan  reaksi  awal  bila  tubuh terkena  luka  (Ambiyani,  2013).  Fase  ini  terjadi  segera setelah cedera dan dapat berlangsung sampai 4 - 6 hari (Broughton  dkk.,  2006).  Fase  proliferasi  dimulai setelah respon akut dari hemostasis dan inflamasi mulai berhenti, ancang-ancang perbaikan luka mulai dilakukan  dengan  angiogenesis,  fibroplasia  dan epitelisasi.  Fase  ini  dimulai  sekitar  hari  ketiga  yang ditandai dengan peningkatan drastis dari koloni sel dan produksi  kolagen.  Produksi  kolagen  sebenarnya  telah dapat  dideteksi  mulai  sepuluh  jam  setelah  trauma, mencapai  puncaknya  pada  hari  ketujuh,  dimana  luka telah  terisi  penuh  oleh  jaringan  kolagen  (Lawrence  & Lowenstein,  2001).  Fase Remodeling merupakan  fase terpanjang  penyembuhan  luka  yaitu  pematangan proses,  yang  meliputi  perbaikan  yang  sedang berlangsung  pada  jaringan  granulasi  yang  membentuk lapisan  epitel  yang  baru  dan  meningkatkan  tegangan pada luka (Ueno dkk . , 2006).
Penanganan luka dapat dilakukan dengan memberikan  antiseptik,  antibiotik,  dan  perawatan  luka pada  umumnya  dengan  pemberian povidone  iodine yang  berfungsi  sebagai  antiseptik  yang  dapat membunuh  mikroorganisme  seperti  bakteri,  jamur, virus, protozoa, dan spora bakteri (Putra, 2016).
Mengkudu adalah satu dari tanaman tropikal  yang memiliki  kandungan  senyawa  metabolit  sekunder
tannin,  alkaloid,  saponin,  flavonoid  serta  triterpenoid (Soni  &  Singhai,  2012).  Pada  kulit,  flavonoid  dapat menghentikan pendarahan dari luka dan meningkatkan aktivitas  vitamin  C  sebagai  antioksidan  (Nabilla, 2014).  Tanin  dan  saponin  diketahui  juga  berperan sebagai  antimikroba  dan  antioksidan,  meningkatkan kontraksi  luka  dan  meningkatkan  kecepatan  epitelisasi (Thakur  dkk.,  2011).  Daun  segar  mengkudu  secara tradisional dikonsumsi sebagai obat untuk patah tulang, luka sayat, luka bakar dan nyeri (Rasal dkk ., 2008). Batang Euphorbia tirucalli mengandung glikosida, saponin,  dan  asam  elagat  (Dalimartha,  2003),  ranting patah tulang mengandung senyawa alkaloid, flavonoid, saponin  dan  tanin  (Absor,  2006).  Senyawa  aktif  dari Euphorbia  tirucalli yaitu  saponin  yang  dapat mempengaruhi  kolagen  dengan  menghambat  produksi jaringan  luka  yang  berlebihan  sebagai  tahap  awal perbaikan  jaringan  (Setyoadi  &  Sartika,  2010). Senyawa aktif  tanin juga berpengaruh  dalam penyembuhan luka yang bermanfaat sebagai astringent (Suprapto, 2012).
Kemampuan  kombinasi  salep  kombinasi  ekstrak daun  mengkudu  dan  batang  patah  tulang  diduga  dapat mempercepat  penutupan  luka  dan  periode  fibroblas, neovaskularisasi  dan  epitelisasi  yang  belum  terungkap secara  ilmiah  sampai  saat  ini,  sehingga  penelitian  ini dilakukan  untuk  mengetahui  efektivitas  kombinasi ekstrak daun mengkudu dan batang patah tulang bentuk formulasi  salep  dalam  mempercepat  kesembuhan  luka sayat  tikus  jantan  melalui  penutupan  luka  dan  periode fibroblas, neovaskularisasi dan epitelisasi.

## BAHAN DAN METODE

## Bahan
Bahan  yang  digunakan  adalah  ekstrak  daun mengkudu, ekstrak batang patah tulang, Alkohol 70 %, etanol 96%, Povidon Iodine 10%, vaselin album, adeps lanae, Aquades, formalin 10%, etanol 96%, 90%, 80%, 70%,  60%,  50%,  40%,  30%,  etanol  absolut  1,  alkohol absolut 2, blok paraffin I dan II, xylol I, II,  III,  IV, V, kaca  objek,  kaca  penutup,  HE,  canada  balsem,  kain
kasa,  makanan  dan  minum  standar  untuk  tikus,  air panas, serbuk Mg, HCl pekat,  larutan FeCl 3 10%, HCl 2N, kertas saring, aluminium foil, kloroform.

## Alat
Alat  yang  digunakan  adalah  kandang  tikus, timbangan  analitik,  gelas  ukur, waterbath ,  saringan, blender,  sarung  tangan, cuttonbud ,  batang  pengaduk, gunting,  mata  pisau,  alat  cukur,  kamera  digital,  blok parafin,  mikrotom,  inkubator,  mikroskop  trinokuler, pipet  volumetrik,  tabug  reaksi,  mortar,  sutil,  lempeng kaca, killing bottle .

## Metode

## Pembuatan ekstrak daun mengkudu
Daun  mengkudu  yang  masih  segar  dipilih  dan dikumpulkan  sebanyak  1  Kg.  Ektraksi  dilakukan dengan  cara  maserasi  dengan  menggunakan  pelarut etanol 96%.

## Pembuatan ekstrak batang patah tulang
Pembuatan  ekstrak  batang  patah  tulang  dengan mengambil batang patah tulang yang muda sebanyak 1 Kg.  Batang  patah  tulang  yang  sudah  kering  diblender dan  diekstrak  dengan  metode  maserasi  menggunakan pelarut alkohol 70%.
Formulasi salep kombinasi ekstrak daun mengkudu dan batang patah tulang
Formulasi  salep  dibuat  dengan  mengacu  pada formulasi  dari  Akhtar  dkk . (2014)  dalam Rakhim (2016)  yang  kemudian  dimodifikasi.  Dosis  ekstrak yang  digunakan  dalam  formulasi  salep  yaitu  10%. Sediaan  salep  dibuat  menjadi  5  formulasi  berbeda dengan variasi konsentrasi ekstrak daun mengkudu dan batang patah tulang dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1 . Formulasi sedian salep kombinasi ekstrak daun mengkudu dan batang patah tulang
Komposisi Formulasi salep (gram) F1 F2 F3 F4 F5 Ekstrak daun mengkudu 0 2,0 1,5 1 0,5 Ekstrak batang patah tulang 2,0 0 0,5 1 1,5 Vaselin album 15,3 15,3 15,3 15,3 15,3 Adeps lanae 2,7 2,7 2,7 2,7 2,7 Jumlah 20
*F1: Formulasi salep ekstrak batang patah tulang; F2: Formulasi salep ekstrak daun mengkudu; F3:
Formulasi  salep  kombinasi  ekstrak  daun  mengkudu  dan  batang  patah  tulang  perbandiangan 0,75:0,25;  F4:  Formulasi  salep  kombinasi  ekstrak  daun  mengkudu  dan  batang  patah  tulang perbandingan 1:1; F5: Formulasi salep kombinasi ekstrak daun mengkudu dan batang patah tulang perbandingan 0,25:0,75.

## Preparasi tikus jantan
Penelitian  ini  menggunakan  hewan  coba  berupa tikus  jantan  ( Rattus  novergicus )  Sprague  Dawley sebanyak  28  ekor  yang  terbagi  dalam  7  kelompok perlakuan.  Bulu  daerah  punggung  tikus  dicukur sampai  licin,  kemudian  dibersihkan  menggunakan kapas  beralkohol  70%.  Setelah  itu,  punggung  tikus dilukai  menggunakan  mata  pisau  yang  steril, sepanjang 1 cm sedalam 0,2 cm.
Pemberian formulasi salep kombinasi ekstrak daun mengkudu dan ektrak batang patah tulang
Pemberian salep berdasarkan pada  formulasi salep dengan  ekstrak  daun  mengkudu  dan  batang  patah tulang yang terdiri dari:
1. Kelompok 1 (K-) adalah kelompok yang merupakan  kontrol  negatif  tanpa  pemberian perlakuan.
2. Kelompok  2  (K+)  adalah  kelompok yang merupakan  kontrol  positif  dengan  pemberian Povidon Iodine 10% sebanyak 2 tetes.
3. Kelompok  3  (P1)  adalah  kelompok  yang  diberi salep dengan ekstrak batang patah tulang.
4. Kelompok  4  (P2)  adalah  kelompok  yang  diberi salep dengan ekstrak daun mengkudu.
5. Kelompok  5  (P3)  adalah  kelompok  tikus  jantan yang  diberi  salep  dengan  perbandingan  ekstrak daun mengkudu dan batang patah tulang 0,75:0,25.
6. Kelompok  6  (P4)  adalah  kelompok  tikus  jantan yang  diberi  salep  dengan  perbandingan  ekstrak daun mengkudu dan batang patah tulang 1:1.
7. Kelompok  7  (P5)  adalah  kelompok  tikus  jantan yang  diberi  salep  dengan  perbandingan  ekstrak daun mengkudu dan batang patah tulang 0,25:0,75.
Pemberian perlakuan dilakukan 2 kali sehari (pagi dan sore) dan pengamatan luka dilakukan sekali sehari. Pembuatan preparat histopatologi
Pembuatan preparat histopatologi dengan pengambilan  sampel  organ  kulit  tikus  pada  hari  ke  2 dan  8  yang  dipotong  sampai  dengan  subkutan  dengan
ketebalan kurang lebih 3 mm dan panjang 2 cm. Semua hewan  percobaan  dieuthanasia  dengan killing  bottle . Daerah  punggung  yang  diambil  kulitnya,  dibersihkan terlebih dahulu dari bulu yang mulai tumbuh kembali.
Kulit dimasukkan dalam kain kasa, didehidrasi dan direndam  dalam  larutan  etanol  bertingkat  yaitu  70%, 80%,  90%,  100%,  100%  dan  100%  masing-masing selama  60  menit  pada  suhu  kamar,  Proses  selanjutnya dilakukan  penjernihan  ( clearing )  menggunakan  xylol selama  15  menit  pada  suhu  kamar  sebanyak  tiga  kali. Setelah  proses clearing dilakukan  proses  infiltrasi dengan parafin cair sebanyak 3 kali pemidahan masing- masing 60  menit dalam  inkubator suhu 60ºC. Jaringan kemudian  dibenamkan  dalam  parafin  cair  dan didinginkan  dalam  suhu  kamar  sehingga  menjadi  blok parafin.  Selanjutnya  dilakukan  proses embedding dan pemotongan  dengan  mikrotom  arah  horisontal  dengan ketebalan  3µ.  Pengecatan  toluidin blue dilakukan dengan  prosedur  sebagai  berikut  :  parafin  dihilangkan dengan xylol ,  kemudian  dimasukkan  dalam  etanol 100%,  95%  dan  70%  masing-masing  selama  5  menit, kemudian  dimasukkan    dalam  aquades.  Pengecatan dengan  toluidin blue selama  40-60  menit  dalam  oven suhu  600°  C,  kemudian  dimasukan  ke  dalam  etanol 70%,  95%  dan  100%.  Setelah  diberi  Canada  balsam ditutup dengan dek glass (Ahmad, 2009).

## Pengamatan histopatologi
Pengamatan histopatologi kulit luka insisi dangkal tikus  dilakukan  dengan  pengambilan  sampel  organ kulit tikus pada  hari ke 2  dan 8  yang dipotong  sampai dengan subkutan dengan ketebalan kurang lebih 3 mm dan  panjang  2  cm.  Semua  hewan  percobaan dieuthanasia  dengan killing  bottle .  Daerah  punggung yang diambil kulitnya, dibersihkan terlebih dahulu dari bulu yang mulai tumbuh kembali.
Analisis data
Hasil histopatologi yang diperoleh dalam penelitian ini dianalisis dengan membandingkan antara kelompok  kontrol  dan  kelompok  perlakuan  secara deskriptif.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penanganan  luka  insisi  dengan  menggunakan bahan  yang  terdapat  di  alam  dapat  dibuat  dalam sediaan  salep  yaitu  salep  kombinasi  ekstrak  daun mengkudu  dan  batang  patah  tulang.  daun  mengkudu dan  batang  patah  tulang  terdapat  senyawa  aktif metabolit  sekunder  berupa  saponin,  flavonoid  dan tannin yang berperan dalam penyembuhan luka.
Saponin  dapat  merusak  permeabelitas  membran yang  mengakibatkan  dinding  sel  bakteri  rusak  atau hancur sehingga saponin diduga memiliki kemampuan sebagai  antibakteri  dan  antiseptik  (Absor,  2006). Flavonoid  juga  diduga  mempunyai  kemampuan sebagai  antibakteri  karena  kemampuannya  yang  dapat merusak  susunan perubahan  mekanisme permeabilitas pada dinding sel bakteri yang terjadi pada luka,  selain itu  flavonoid  disebut  sebagai  antiseptik  dan  memiliki aktivitas  biologis  seperti  antioksidan  (Djamil  dkk., 2012).  Tanin  diduga  mempunyai  kemampuan  sebagai astringent , antioksidan dan antibakteri (Absor, 2006).
Pengamatan  hari  ke-2  (Gambar  1)    histopatologi kulit  tikus  luka  insisi  dangkal  setelah  perlukaan  ini terjadi  fase  inflamasi  respon  seluler,  pada  bagian lapisan  epidermis  terlihat  epitel  rusak  dan  dilapisan dermis terlihat fibroblas. Fibroblas yang terdapat pada kelompok  kontrol  negatif  belum  terlihat  secara  jelas sedangkan pada kontrol positif fibroblas sudah terlihat secara  jelas  dan  fibroblas  pada  kelompok  kontrol positif  lebih  banyak  daripada  fibroblas  kelompok perlakuan. Hal ini dimungkinkan karena fase inflamasi berjalan normal (0-3 hari), tidak mengalami gangguan, dan  fungsi  dari  sel-sel  yang  berperan  pada  respon seluler, termasuk perangsangan terbentuknya  berbagai Growth  Factor tidak  terhambat,  sehingga  dapat meneruskan  kepada  fase  selanjutnya  (fase  proliferasi) dengan  cepat  pada  kelompok  kontrol  positif  maupun kelompok kontrol.
Gambar 1 . Histologi kulit tikus luka insisi dangkal hari ke-2 hasil pewarnaan HE (400x) :        Epidermis yang rusak,         fibroblas,        neovaskularisasi.
A) kontrol negatif, B) kontrol positif, C) formulasi I, D) formulasi II, E) formulasi III, F) formulasi IV, G) formulasi V
Gambar 2 . Histologi kulit tikus luka insisi dangkal hari ke-8 hasil pewarnaan HE (400x) :          epidermis yang rusak           fibroblas,           neovaskularisasi.
A) kontrol negatif, B) kontrol positif, C) formulasi I, D) formulasi II, E) formulasi III, F) formulasi IV, G) formulasi V
C D
Penggunaan  basis  salep  yaitu  vaselin  album  dan adeps lanae diketahui dapat membantu perbaikan luka. Hal  ini  dikarenakan sifat adeps  lanae  yang  membantu penyerapan  zat  aktif  untuk  dapat  masuk  ke  kulit, sedangkan vaselin album membantu salep untuk dapat bertahan  lama  dikulit  sehingga  penyerapan  zat  aktif dapat maksimal (Sentat & Permatasari, 2015).
Pengamatan  hari  ke-8  (Gambar  2)  histopatologi kulit tikus luka insisi dangkal setelah perlukaan terjadi fase  proliferasi  yang  ditandai  dengan  jaringan  dermis yang  sudah  mulai  terinvasi  dan  terbentuknya epitelisasi,  pada  bagian  lapisan  epidermis  terjadi proses  epitelisasi  kecuali  pada  kelompok  kontrol negatif dan pada bagian lapisan dermis sudah terinvasi dengan  jaringan  granulasi.  Epitel  yang  terdapat  pada kelompok kontrol negatif belum mengalami epitelisasi dan  masih  terlihat  celah  luka,  namun  jaringan  dermis sudah  mulai  terinvasi  oleh  jaringan  granulasi,    pada kelompok kontrol positif  belum terlihat epitel tumbuh namun  pada  bagian  epidermis  bawah  sudah  mulai
terinvasi  dan pada  bagian dermis  sudah terinvasi  oleh jaringan granulasi sedangkan pada kelompok perlakuan  dengan  fomulasi  I,  epitel  sudah  mengalami epitelisasi  tetapi  jaringan  dermis  belum  sepenuhnya terinvasi  oleh  jaringan  granulasi,  pada  kelompok perlakuan dengan  formulasi II, IV dan V,  epitel sudah mengalami  epitelisasi  namun  belum  sempurna  dan jaringan  dermis  telah  sepenuhnya  terinvasi  oleh jaringan  granulasi,  pada  kelompok  perlakuan  dengan formulasi  III, epitel  sudah  mengalami  epitelisasi  yang mendekati  sempurna  dan  jaringan  dermis  telah sepenuhnya terinvasi oleh jaringan granulasi. Keadaan ini  karena  adanya  berbagai antioksidan kuat ditambah dengan antibakteri yang terdapat pada daun mengkudu dan  batang  patah  tulang,  membantu  fase  inflamasi berjalan  normal  dan  mempercepat  terjadinya  fase proliferasi,  sehingga  migrasi  dan  proliferasi  sel-sel epidermal  tidak  terhambat.  Hasil  pengamatan  dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Penilaian parameter pada hasil preparat hari ke-2 dan ke-8 Kelompok perlakuan Hari ke- Penilaian parameter Fibroblas Neovaskularisasi Epitelisasi Kontrol Negatif 2 + ++ - 8 + ++ - Kontrol Positif 2 +++ ++ - 8 + + - P1 2 ++ ++ - 8 + ++ ++ P2 2 + +++ - 8 + ++ + P3 2 ++ ++ - 8 + + ++ P4 2 ++ ++ - 8 + + + P5 2 ++ ++ - 8 + + +
Keterangan :
+   : Terdapat fibroblas, neovaskularisasi, dan epitelisasi ++  : Terdapat banyak fibroblas, neovaskularisasi, dan epitelisasi +++ : Terdapat lebih banyak fibroblast dan neovaskularisasi - : Tidak terbentuk epitelisasi
Pada salep kombinasi ekstrak daun mengkudu dan batang  patah  tulang  mengandung  beberapa  senyawa metabolit  sekunder  seperti  flavonoid,  tannin  dan saponin yang bekerja secara sinergis  dalam membantu penyembuhan luka insisi dangkal dalam regenerasi sel. Flavonoid  berperan  dalam  fase  inflamasi,  tanin berperan dalam proses angiogenesis atau neovaskularisasi (re-vaskularisasi) dan saponin bereperan  dalam  proses  fibroblas  yang  akan  menjadi
epitel (re-epitelisasi) (Suprapto 2012; Soni  & Singhai, 2012; Sibi dkk . , 2012).
Senyawa  metabolit  sekunder  yang  terdapat  di dalam batang patah tulang dan daun mengkudu dapat ditentukan  dengan  metode  skrining  fitokimia. Senyawa  metabolit sekunder  yang dianalisis  meliputi flavonoid, tanin dan saponin. Hasil skrining fitokimia batang patah tulang dan daun mengkudu dapat dilihat pada Tabel 3 dan Tabel 4.
Tabel 3 . Hasil uji fitokimia batang patah tulang Uji Fitokimia Hasil Keterangan Flavonoid + Berwarna Jingga Tanin + Berwarna Biru Tua Saponin + Terdapat Sedikit Buih yang Stabil Tabel 4 . Hasil uji fitokimia daun mengkudu Uji Fitokimia Hasil Keterangan Flavonoid + Berwarna Jingga Tanin + Berwarna Hijau Kehitaman Saponin ++ Terdapat Banyak Buih yang Stabil KESIMPULAN Formulasi salep kombinasi ekstrak daun mengkudu dan batang patah tulang dapat memperbaiki histopatologi  kulit  pada  luka  insisi  dangkal    dalam penyembuhan  luka    pada  tikus.  Formulasi  salep  yang paling efektif adalah formulasi III dengan perbandingan ekstrak daun mengkudu dan batang patah tulang  0,75:0,25  yang  terlihat  dari  penurunan  jumlah fibroblas, penurunan neovaskularisasi menjadi vaskularisasi  dan  peningkatan  proses  epitelisasi (pembentukan sel epitel) secara signifikan (Tabel 2).
Pemanfaatan  formulasi  kombinasi  salep  ekstrak daun  mengkudu  dan  batang  patah  tulang,  berpengaruh terhadap  regenerasi  sel  penyembuhan  luka  insisi dangkal pada tikus putih  jantan  yang  melalui  beberapa fase  penyembuhan  yaitu  fase  inflamsi,  TNF-α,  re- vaskularisasi dan fase proliferasi, yang ditandai dengan ditemukannya fibroblas, neovaskularisasi dan epitelisasi  secara  histopatologi  dalam  2  satuan  waktu pengambilan.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Dengan  selesainya  penelitian  ini,  kami  ucapkan terima  kasih  kepada  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan  Alam  Universitas  Bengkulu  atas  fasilitas yang diberikan untuk membantu pelaksanaan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Absor,  U.  (2006). Aktifitas  Antibakteri  Batang Patah Tulang (Euphorbia  tirucalli Linn ) . Skripsi;
Fakultas  Matematika    dan  Ilmu  Pengetahuan Alam Institut Pertanian Bogor, Bogor Ahmad,  A.  J.  (2009).  Histoteknik  Dasar.  Jakarta:
Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia.
Akhtar, M. M., Srivastava, S., Sinha, P., Singh, K. D.,
Luqman,  S.,  Tandon,  S.  &  Yadav,  P.  N. (2014).  Antimicrobial  Potential  of  Topical Formulasition  Containing  Essential  Oil  of Encalyptus citriodora Hook, Journal of Annals Phytomedicine ; 3 ; 37-42.
Ambiyani, W. (2013). Pemberian Salep Ekstrak Daun Mengkudu  Meningkatkan  Proses  Regenerasi Jaringan  Luka  pada  Tikus  Putih  Galur  Wistar jantan. Tesis ;  Fakultas  Kedokteran Universitas Udayana Bali, Bali.
Broughton,  I.  I.  G.,  Janis,  J.  E.  &  Attiger,  C.  E. (2006). Wound Healing: An Overview. Plastic Reconstruction Surgery; 117 ; 1-32.
Dalimartha,  S.  (2003).  Atlas  Tumbuhan  Obat Indonesia (Jilid 4). Jakarta:  Pustaka Bunda.
Djamil, R., Wahyudi, P.  S., Wahono, S.  & Hanari,  M. (2012).  Antioxidant  Activity  of  Flavonoid  from Anredera  cordifolia (Ten) Steenis  Leaves. International Research Journal of Pharmacy; 3 ; 241- 243.
Lawrence,  W.  T.  &  Lowenstein,  A.  (2001).  Wounds: Biology,  Pathology,  and  Management.  In: Norton JA, Bollinger RR, Chang AE, Lowry SF, Mulvihill  SJ,  Pass  HI,  Thompson  RW  (ed.). Surgery:  Basic  Science  and  Clinical  Evidence; 221-236. New York: Springer-Verlag.
Nabilla,  R.  F.  (2014).  Pengaruh  Pemberian  Salep Ekstrak  Daun  Binahong  ( Anredera  cordifolia (Tenore)  Steenis)  terhadap  Re-epitelisasi  pada Luka  Bakar  Tikus  Sprague  Dawley. Skripsi ; Universitas  Islam  Negeri  Syarif  Hidayatullah, Jakarta.
Rakhim,  M.  (2016). Formulasi Sediaan Salep  Minyak Atsiri Kemangi ( Ocimum basilicum L.) dan Uji
Aktivitas  Antibakteri  terhadap Staphylococcus aureus . Skripsi; Fakultas  Farmasi  Universitas Muhammadiyah Surakarta, Surakarta.
Rasal,  V.  P.,  Sinnathambi,  A.,  Ashok,  P.  & Yeshmaina,  S.  (2008).  Wound  Healing  dan Antioxidant  Activities  of Morinda  citrifolia Leaf  Extract  in  Rats .  Iranian  Journal  of Pharmacology & Therapeutics; 7 ; 49-52. Putra, F. M. (2016). Penggunaan Chlorhexidine 0,2%
dengan Povidone Iodine 1% Sebagai Dekontaminasi  Mulut  Terhadap  Kolonisasi Staphylococcus  aureus Pada  Pasien  Pasca Operasi  Anestesi  Umum. Nurse  Line  Journal ; 1 ; 177.
Sentat,  T.  &  Permatasari,  R.  (2017).  Uji  Aktivitas Ekstrak Etanol Daun Alpukat ( Persea americana Mill.) terhadap Penyembuhan Luka Bakar  pada  Punggung  Mencit  Putih  Jantan ( Mus musculus ). Jurnal Ilmiah Manuntung ; 1 ; 100-106.
Setyoadi  &  Sartika,  D.  D.  (2010).  Efek  Lumatan
Daun Dewa ( Gynura segetum ) dalam Memperpendek  Waktu  Penyembuhan  Luka Bersih  pada  Tikus  Putih. Jurnal  Keperawatan Soedirman ; 5 ; 127-135.
Sibi, G., Chatly, P., Adhikari, S. & Ravikumar, K. R. (2012).  Phytoconstituent  and  Their  Influence
Antimicrobial Properties of Morinda citrifolia L. Research  Journal  of  Medicinal Plant; 6 ; 441-448.
Sjamsuhidajat,  R.  &  Jong,  W.  D.  (2010).  Buku  Ajar Ilmu  Bedah (Edisi  3). Jakarta: EGC.
Soni, H. & Singhai, A. K. (2012). A Recent Update of Botanicals  for  Wound  Healing  Activity.
International Research Journal of Pharmacy ; 3 ; 1-7.
Suprapto,  A.  K.  (2012).  Efek  Salep  Ekstrak Metanoldan  Salep  Serbuk  Daun  Sosor  Bebek ( Kalanchoe pinnata (Lamk)) terhadap
Penyembuhan  Luka  Sayat  pada  Mencit. Tesis ;
Fakultas Kedokteran Universitas Kristen Maranatha, Bandung.
Thakur,  R.,  Jain,  N.,  Pathak,  R.  &  Sandhu,  S.  S.
(2011). Practices in Wound Healing Studies of Plants. Evidence-based  Complementary  and Alternative Medicine ; 2011 ; 1-17.
Ueno,  C., Hunt, T. K.  & Hopf, H.  W. (2006). Using Physiology  to  Improve  Surgical  Wound Outcomes. Plastic and Reconstructive Surgery ; 117 ; 59S-71S.