## VALIDASI METODE ANALISIS CIPROFLOKSASIN  MENGGUNAKAN
HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY
Nugraheni, B., 1)*, Anggoro, A. B. Sekolah Tinggi Ilmu Pharmasi "Yayasan Pharmasi" Semarang Jl. Letjend Sarwo Edi Wibowo Km.1 Plamongansari-Semarang
* Email: bn.nugraheni@gmail.com

## Abstrak
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui valid atau tidaknya suatu metode analisis. Pengembangan metode yang dilakukan yaitu menggunaan fase gerak asetonitril : 0,1 M dapar fosfat pH 4 (70 : 30). Selanjutnya dilakukan validasi ciprofloksasin. Parameter validasi dalam penelitian meliputi selektivitas, akurasi, presisi, linieritas, LOD dan LOQ. Kondisi HPLC meliputi perangkat HPLC merk Waters e2695 Separations, kolom Sunfire TM C18 (150mmx 46 mm, 5µm), dan detektor PDA dan kecepatan alir 1,0 mL/menit. Penelitian ini diperoleh hasil selektif, hal ini dinyatakan dengan tidak munculnya puncak pada matriks. Metode analisis HPLC pada ciprofloksasin memenuhi kriteria keberterimaan nilai akurasi % recovery larutan konsentrasi  ≥100  µg/mL adalah 100,40-103,88% . Memenuhi syarat uji presisi %RSD untuk larutan  konsentrasi  ≥100  µg/mL adalah <5,3%.  Nilai  r  pada  linieritas  ≥0,9974  maka memenuhi syarat. Nilai LOD adalah 5,2471 µg/mL dan nilai LOQ adalah 17,4905 µg/mL.
Kata kunci : ciprofloksasin, HPLC, validasi

## PENDAHULUAN
Golongan fluorokuinolon menjadi salah satu antibiotik yang banyak dipakai. Sejak 1996 hingga saat ini, penggunaan antibiotik golongan fluorokuinolon terus berkembang. Salah satu golongan fluorokuinolon tersebut adalah ciprofloksasin. Ciprofloksasin bekerja dengan menghambat enzim topoisomerase II (DNA gyrase) dan topoisomerase IV pada bakteri. Ciprofloksasin efektif digunakan dalam terapi infeksi saluran kemih, infeksi saluran napas maupun infeksi saluran pencernaan.
Penelitian Sani, et al ., (2011) mengenai validasi Ciprofloksasin menggunakan HPLC detektor UV, kondisi sistem kromatografi sebagai yaitu kolom (LichroCART® 125x4mm, 5µm) dengan fase gerak metanol: dapar asam ortofosfat (0,025M asam ortofosfat ditambah TEA sampai pH 3,0±0,1) (40:60v/v), laju alir 2,0 mL/menit dan panjang gelombang 278 nm.  Penelitian Aksoy, et al ( 2007) mengenai validasi ciprofloxacin HCl menggunakan HPLC detektor UV . Kondisi sistem kromatografi pada penelitian ini menggunakan campuran fase gerak 2,45 gram asam fosfat yang dilarutkan dalam air 1 L. Setelah tercampur, diatur pH 3 menggunakan TEA. Campuran tersebut diambil 870 mL dan dicampur 130 mL asetonitril; kecepatan alir 1,50 mL/menit, panjamg gelombang 278 nm. Hasil diperoleh
LOD dan LOQ yaitu 5,159 dan 15,632 µg/mL.
Penelitian ini mengacu Aksoy, et al.
(2007) tetapi menggunakan pengembangan fase gerak yang berbeda. Kondisi sistem Kromatografi menggunakan HPLC detektor Photo Diode Array (PDA), dengan fase gerak asetonitril : 0,1 M dapar fosfat pH 4 (70:30) dan laju alir 1,0 mL/menit.

## METODOLOGI Uji kesesuaian sistem (UKS)
Dibuat larutan baku ciprofloksasin 500 µg/mL. Kemudian dilakukan pengukuran 6 kali dengan HPLC, fase gerak yaitu asetonitril  : 0,1 M dapar fosfat pH 4 (70:30) dan laju alir 1,0 mL/menit.

## Validasi Uji selektifitas
Dilakukan dengan membandingkan hasil kromatogram dan waktu retensi dua larutan ciprofloksasin 500  µg/mL. Satu larutan ditambahkan matriks sedangkan larutan yang lain tidak ditambah  matriks. Selektifitas dinyatakan dengan tidak munculnya puncak pada matriks yang dapat mengganggu.

## Uji akurasi
Dibuat larutan sampel infus ciprofloksasin 300, 500  dan 700  µg/mL. Masing-masing larutan dilakukan replikasi 3
kali dan diukur dengan HPLC. Nilai akurasi dinyatakan sebagai persen recovery (perolehan kembali).

## Uji presisi
Dibuat larutan baku ciprofloksasin 500 dan 700  µg/mL. Masing-masing larutan dilakukan replikasi 3 kali dan diukur dengan HPLC.

## Uji linieritas
Dibuat deret baku ciprofloksasin konsentrasi 100,  300,  500,  700 dan 900 µg/mL. Diukur dengan HPLC dan dibuat kurva hubungan antara konsentrasi dengan luas area sehingga didapat persamaan y = bx + a.

## Uji LOD dan LOQ
Dibuat larutan baku ciprofloksasin konsentrasi 10, 20, 30, 40  dan 50  µg/mL. Larutan diukur dengan HPLC dan dibuat persamaan regresi linier antara konsentrasi dengan luas area. Kemudian dihitung nilai Y hitung dan slope. Harga LOD dan LOQ dihitung dengan rumus.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Uji kesesuaian sistem
Berikut adalah tabel uji kesesuaian sistem:
Tabel 1. Hasil uji kesesuaian sistem HPLC No. RT (menit) Area Tailing N 1. 1,237 23420935 1,0641 1106,5914 2. 1,238 23196453 1,0591 1136,9261 3. 1,237 23421821 1,0641 1106,5876 4. 1,235 23314794 1,0831 1142,9176 5. 1,233 22534045 1,0783 1147,7052 6. 1,236 23252908 1,1224 1125,4466 Χ 1,236 23190159,6 1,0785 1127,6957 SD 0,002 333742,8 0,0214 16,2976 %RSD 0,18% 1,44% 1,98% 1,45%
Uji kesesuaian sistem HPLC pada perbandingan  fase gerak asetonitril  : 0,1 M dapar fosfat pH 4 (70:30) dengan laju alir 1,0 mL/menit (tabel 1) diperoleh bahwa harga lempeng teoritis (N) yang besar, waktu retensi yang tidak bergeser dan tailing factor ≤  2.  Kriteria  keberterimaan  untuk  UKS adalah % RSD waktu retensi, lempeng
teoritis,  dan  luas  area  ≤  2%  (Gandjar  & Rohman, 2007).

## Validasi
Uji selektifitas
Gambar 1.  Hasil kromatogram uji selektivitas ciprofloxacin baku tanpa matriks
Gambar 2. Hasil kromatogram uji selektivitas ciprofloxacin baku ditambah matriks
Hasil dari uji selektifitas adalah metode analisis dinyatakan selektif ditunjukkan dengan kromatogram yang dihasilkan tunggal tidak terdapat peak lain di sekitar waktu retensi ciprofloksasin. Waktu retensi yang dihasilkan mirip yakni 1,241  menit untuk larutan ciprofloksasin tanpa matriks dan 1,244  menit untuk larutan ciprofloksasin yang ditambahkan  campuran  matriks PVP, Carbopol, HPMC, Talh, dan Mg Stearat

## Uji akurasi
Pengujian akurasi dilakukan dengan menghitung nilai % recovery . Hasil uji akurasi sebesar 100,40-103,88%, hal ini memenuhi kriteria keberterimaan persentase perolehan kembali untuk larutan  dengan konsentrasi  ≥  100  µg/mL  adalah  90-107%
(Huber, 2007 : 146).

## Uji presisi
Hasil uji presisi repeatability sebesar 1,12%, hal ini memenuhi syarat keberterimaan untuk % RSD pada larutan yang mengandung zat aktif dengan konsentrasi ≥ 100 µg/mL adalah <5,3% dan untuk  larutan  yang  mengandung  zat  aktif  ≥ 100 µg/mL adalah < 5,3% (Huber, 2007:144).

## Uji linieritas
Selanjutnya dibuat kurva kalibrasi sehingga diperoleh persamaan linier y = bx + a dan dihitung nilai koefisien korelasi (r). Hasil pengujian linieritas memenuhi syarat keberterimaan nilai koefisien korelasi 0,997 (Chan dkk., 2004 : 17).

## Gambar 3. Kurva uji linieritas

## Uji LOD dan LOQ
Berikut adalah tabel hasil LOD dan LOQ:
Tabel 2. Hasil pengukuran parameter

## LOD & LOQ
Konsentrasi Luas area 10 µg/mL 1385097 20 µg/mL 3324530 30 µg/mL 4347923 40 µg/mL 5740665 50 µg/mL 7028459
LOD merupakan konsentrasi terendah dari suatu sampel yang masih dapat terdeteksi oleh metode analisis namun tidak perlu terkuantisasi sebagai nilai yang tepat. Pada penelitian diperoleh nilai LOD 5,2471 µg/mL.  LOQ adalah konsentrasi sampel terendah yang masih dapat dideteksi secara kuantitatif dengan akurasi dan presisi yang dapat diterima. Pada penelitian diperoleh nilai LOQ 17,4905 µg/mL.

## KESIMPULAN
1.Hasil parameter validasi % perolehan kembali sebesar 100,40-103,88%; %RSD sebesar 1,12%, linieritas r =0,9974, LOD dan LOQ sebesar 5,2471 dan 17,4905 µg/mL.
2. Metode analisis ciprofloksasin secara HPLC memenuhi syarat parameter validasi yaitu selektivitas, akurasi, presisi repeatability , linearitas, LOD, dan LOQ.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis mengucapkan puji syukur atas berkat Tuhan dan menyampaikan terima kasih kepada Niwang Anggarukma atas dukungan dan bantuan yang diberikan.

## DAFTAR PUSTAKA
Aksoy, B., Küçükgüze, I.,  Rollas, S, (2007), Development and Validation of a Stability-Indicating HPLC Method for Determination of Ciprofloxacin Hydrochloride and its Related Compounds in Film-Coated Tablets, J. Chromatographia Supplement, Vol. 66. Chan, CC., Lam, H., Lee., Zang, XM., (2004), Analytical Method Validation and Instrument Performance Verification , John Wiley & Sons Inc, Canada, p 16-18.
Gandjar, IG, & Rohman, A, (2007), Kimia Farmasi Analisis , Pustaka Pelajar, Yogyakarta, hal 53, 401. Huber, L, (2007), Validation and Qualification in Analytical Laboratories Second Edition . New York : Informa Healthcare USA.
Sani A. A., Chijioke, C., Mmuo., Rafat, O. Abdulraheem., Sikirat, S., Abdulkareem., Emmanuel, T.. Alemika., Musa, A. S., Mohammed, I., (2011), High Performance Liquid Chromatography (HPLC) Method Development and Validation Indicating Assay for Ciprofloxacin Hydrochloride, Journal of Applied Pharmaceutical Science 01 (08): 239-243. .