Efek Stimulansia Ekstrak Etanolik Umbi Bawang Putih Tunggal ( Allium Sativum Var.Solo Garlic) Terhadap Mencit Galur Swiss
Stimulantia Effect Of Single Bulb Garlic Extract ( Allium Sativum Var.Solo Garlic) in Swiss Webster Mice
Ika Buana Januarti, Fadzil Latifah, Ana Ibrir Wajha Program Studi Farmasi Fakultas kedokteran Universitas Islam Sultan Agung Semarang, Indonesia email: bjanuarti@unissula.ac.id
(tanggal diterima: 23-01-2020 , tanggal disetujui: 05-08-2020)

## INTISARI
Stimulansia adalah zat kimia yang bekerja di sistem saraf pusat dengan cara memberikan stimulus pada fisik dan mental manusia serta meningkatkan ambang rasa  kelelahan. Penggunaan stimulan  sintetik  kafein  sebesar  10  mg/kg  BB  diketahui  memiliki  efek  samping  meningkatkan kolesterol total dan meningkatkan LDL, oleh karena itu diperlukan stimulan alternatif dari bahan alam. Bahan alam yang sudah diteliti memiliki kandungan flavonoid dan fenolik sebagai senyawa stimulan adalah  umbi  bawang putih  tunggal. Tujuan penelitian ini adalah  untuk mengetahui  efek stimulansia ekstrak etanolik umbi bawang putih tunggal terhadap mencit dilihat dari selisih waktu renangnya.
Metode penelitian adalah eksperimental Pre test and Post test control design . Sampel yang digunakan  adalah  mencit  yang  dibagi  menjadi  6  kelompok.  Kelompok  1  pretest  dosis  5  g/kgBB, kelompok 2 disonde pelarut ekstrak yang merupakan kontrol negatif, kelompok 3 (kafein), kelompok 4 ekstrak dosis 5g/kgBB, kelompok 5  dosis 10g/kgBB dan kelompok 6 dosis 20 g/kgBB. Analisis data menggunakan one way Anova dilanjutkan dengan uji Post Hoc . Kelompok ekstrak dosis 20 g/kgBB memiliki efek stimulansia paling tinggi dengan selisih waktu  lelah  222,722  menit  serta  berbeda  signifikan  (p<0,05)  dengan  kelompok  kontrol  negatif. Kelompok  ekstrak  dapat  mempengaruhi  waktu  lelah  mencit  dengan  cara  memperpanjang  waktu berenang  mencit  sehingga  memiliki  waktu  lelah  lebih  lama  yang  berarti  mempunyai  efek stimulansia.
Kata kunci : bawang putih tunggal; kafein; stimulansia

## ABSTRACT
Stimulance is a chemical that works in the central nervous system by providing a stimulus to the physical and mental human and increase the threshold of fatigue. The use of synthetic caffeine stimulants of 10 mg / kg body weight is known to have side effects of increasing total cholesterol and increasing  LDL,  therefore  alternative  stimulants  from  natural  ingredients  are  needed.  Natural materials that have been studied contain flavonoids and phenolic as a stimulant compound is a single garlic bulbs. The purpose of this study was to determine the stimulant effect of ethanolic extract of a single garlic bulb on mice viewed from the difference in swimming time.
The research method is experimental Pre test and Post test control design. The sample used was mice which  were divided into 6 groups. Group 1 pretest dose 5 g / kgBB, group 2 extracted solvent extract which  was a negative control, group 3 (caffeine), group 4 extract dose 5g / kgBB, group 5 dose 10g / kgBB and group 6 dose 20g / kgBB. Data analysis using one way Anova continued with Post Hoc test.
The extract group dose of 20 g / kgBB had the highest stimulant effect with a difference of 222,722 minutes of fatigue time and was significantly different (p <0.05) with the negative control group. Extract group can influence the time of fatigue of mice by extending the swimming time of mice so that it has a longer fatigue time which means it has a stimulant effect.
Keyword : single garlic bulb; caffeine; stimulant

## 1. PENDAHULUAN
Di dalam kitab pengobatan India Ayurveda mencantumkan bahwa tanaman bawang  memiliki  khasiat  sebagai  stimulan  sistem  syaraf  pusat  (1).  Stimulansia merupakan  suatu  zat  yang  dapat  merangsang  sistem  saraf  pusat  yang  dapat mempercepat  proses-proses  dalam  tubuh,  dapat  meningkatkan  kemampuan  fisik dan mental, meningkatkan konsentrasi, dapat membuat seseorang lebih siaga serta dapat meminimalisasi kelelahan (2,3). Salah satu jenis bawang adalah bawang putih tunggal  yang  banyak  digunakan  secara  empiris  di  masyarakat  Indonesia  sebagai campuran jamu, namun belum dapat dibuktikan khasiat dan keamanannya secara ilmiah. Melalui penelitian maka tanaman ini dapat dimanfaatkan untuk peningkatan kesehatan  tubuh.  Saat  ini  penelitian  tentang  bawang  sebagai  stimulansia  masih terbatas  dari  kulit  bawang  putih  (4),  belum  ada  yang  berasal  dari  bawang  putih tunggal.
Bawang  putih  tunggal  ( Allium  sativum var.solo  garlic)  mempunyai  potensi berefek  stimulansia  karena  mengandung  flavonoid  sebesar  12,183  ±  0,194  mg  - 14,483  ±  0,591  ekuivalen  kuersetin/gram  ekstrak  serta  kadar  fenolik  sebesar 70,244  -  92,222  mg  ekuivalen  asam  galat/gram  (5).  Kandungan  flavonoid  dapat mengurangi produksi ROS (reactive oxidative species) yaitu suatu radikal bebas di dalam tubuh yang menyebabkan oksidasi lipid, protein dan asam nukleat sehingga merusak  biomembranes  dan  struktur  otot.  Hal  ini  mempunyai  efek  mendorong kerusakan dan kelelahan otot. Jumlah ROS yang berkurang dengan adanya flavonoid dapat  menambah  ketahanan  kinerja  sehingga  mengurangi  kelelahan  otot  (6). Kandungan  fenolik  dapat  merangsang  sistem  syaraf  pusat  (SSP)  sehingga memberikan efek stimulansia seperti terdapat di dalam biji pinang (7). Kandungan organosulfur dari umbi bawang yaitu Diallil sulfida (DAS), diallil disulfida (DADS), and  diallil  trisulfida  (DATS)  dan  ajoene  juga  diketahui  banyak  berkontribusi  di dalam aktivitas biologis (8).
Penelitian tentang efek farmakologi umbi bawang putih tunggal masih sangat terbatas sehingga dapat menjadi referensi bukti ilmiah untuk masyarakat di dalam menjaga  kesehatan  dan  dapat  digunakan  untuk  melandasi  penggunaan  umbi bawang putih tunggal sebagai stimulansia.
Berdasarkan  hal  tersebut,  maka  perlu  dilakukan  penelitian  untuk mengeksplorasi efek stimulansia bawang putih tunggal sehingga saat masyarakat menggunakan sudah terdapat pembuktian secara ilmiah.

## 2. METODE PENELITIAN
2. 1. ALAT DAN BAHAN
Rotary Vacuum evaporator (Heidolph), timbangan analitik (Mettler Toledo), kandang kaca, spuit dan sonde lambung 1 ml, umbi bawang putih tunggal, kafein
(Sigma Aldrich), CMCNa 1% grade teknis, etanol 95% grade teknis , akuades grade teknis.

## 2. 2. CARA KERJA

## Determinasi dan Ekstraksi
Bawang putih tunggal dideterminasi terlebih dahulu di Laboratorium Biologi Universitas  Negeri  Semarang  kemudian  dilanjutkan  pembuatan  ekstrak  etanolik dengan cara mencuci umbi kemudian dikeringkan hingga tidak terdapat air. Umbi dihaluskan dengan sebagian etanol, kemudian dimasukan ke dalam bejana maserasi dan diekstraksi dengan pelarut etanol 95% perbandingan 1 kg ekstrak dan 10 liter etanol  selama  3  hari  sambil  diaduk,  Hasil  maserasi  kemudian  disaring  hingga didapatkan filtrat yang akan diuapkan dengan rotary evaporator dengan suhu 50 O C hingga menjadi ekstrak kental.
Skrining Fitokimia
a. Identifikasi kandungan alkaloid
Satu  ml  ekstrak  dan  5  tetes  ammonia  pekat  diaduk  kemudian  disaring. Larutan selanjutnya ditambah 2 ml asam sulfat 2 N lalu dikocok hingga membentuk lapisan atas dan bawah. Larutan kemudian ditambah 1 tetes pereaksi Dragendorf, apabila terbentuk endapan maka menandakan adanya alkaloid.
b. Identifikasi kandungan saponin
Satu ml ekstrak ditambah 2 ml akuades kemudian dikocok sampai homogen dan dipanaskan  selama  2-3  menit.  Larutan  tersebut  didinginkan  dan  dikocok  dengan kuat. Adanya busa yang stabil selama 30 detik menunjukkan adanya saponin.
c. Identifikasi kandungan flavonoid
Satu  ml ekstrak dan 5 tetes etanol dimasukkan ke tabung reaksi lalu dikocok sampai homogen. Larutan ekstrak ditambah dengan serbuk Mg dan 5 tetes HCl pekat. Jika menghasilkan warna kuning, oranye atau merah menunjukkan adanya flavonoid.
d. Identifikasi kandungan fenolik
Sebanyak 3  tetes  ekstrak  dan  beberapa  tetes methanol diaduk    sampai  homogen kemudian ditambah FeCl 3 .  Larutan akan berwarna hijau, kuning, oranye atau merah bila terdapat fenolik.

## Uji Stamina
Hewan uji menggunakan 30 ekor mencit galur Swiss yang dibagi menjadi  6 kelompok  uji.  Kelompok  1  diberikan  ekstrak  dua  kali  (pada  hari  pertama  dan ketiga). Kelompok 2 kontrol negatif (CMC-Na), kelompok 3 kontrol positif (kafein dosis 100 mg/kgBB). Kelompok 4, 5 dan 6 diberikan ekstrak etanolik umbi bawang putih tunggal dosis 5 g/kgBB, 10 g/kgBB dan 20 g/kgBB.
Perlakuan dilaksanakan selama dua hari. Hari pertama, mencit kelompok 1 direnangkan  dan  dicatat  waktu  lelahnya  (t0).  Waktu  lelah  dihitung  mulai  dari memasukkan  hewan  uji  ke  dalam  kandang  kaca    hingga  timbul  tanda  lelah  yang
ditandai dengan hewan uji membiarkan kepalanya di bawah permukaan air selama 4-5 detik. Kemudian hewan uji diangkat dari wadah renang dan dicatat waktunya. Mencit kemudian diberi ekstrak dosis 5 g/kbBB secara peroral. Kelompok yang lain tidak diberikan perlakuan apapun.
Hari ke dua, semua kelompok mencit direnangkan dalam kandang kaca dan dicatat waktu lelahnya (t1). t1 adalah lama waktu renang dari hewan uji sebelum mendapat  perlakuan  dosis  uji  hingga  menunjukkan  tanda  kelelahan.  Mencit kemudian diistirahatkan selama 30 menit.  Setelah itu mencit diberikan perlakuan sediaan  peroral.  Mencit  kembali  dimasukkan  ke  dalam  kandang  kaca  dan  dicatat waktu  lelahnya  (t2).  Selisih  waktu  lelah  dihitung  sebelum  dan  setelah  diberi perlakuan (t2-t1) (4).

## Analisis Hasil
Data  waktu  lelah  diuji  normalitas  menggunakan Shapiro-wilk dan homogenitasnya  dengan  tes Levene, dilanjutkan  dengan  metode  parametric menggunakan  uji one  way ANOVA  data  yang  dihasilkan  signifikan  sehingga dilanjutkan uji Post Hoc .

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Determinasi  tanaman  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  dilakukan  di Laboratorium  Biologi  FMIPA  Universitas  Negeri  Semarang.  Hasil  determinasi diperoleh sebagai berikut : Divisio  : Magnoliophyta, Classis : Liliopsida, Sub Classis : Liliidae, Ordo: Liliales, Familia : Liliaceae, Genus : Allium, Species : Allium sativum L., Varietas : Allium sativum L. Var. Sativum, Cultivar : Allium sativum L. Ctv. Solo Hasil ekstrak kental yang diperoleh sebesar 237,80 gram dari 3,5 kg umbi bawang  putih  tunggal  sehingga  rendemennya  adalah  6,79%  dengan  kadar  air 7,79%.    Ekstrak  didapatkan  dari  umbi  bawang  segar  yang  dihaluskan  dengan blender dengan pelarut etanol untuk mencegah hilangnya allisin dan 1 -propenil allil thiosulfonat, allil metilthiosulfonat, (E,Z)-4,5,9-trithiadodekal,6,11-triena 9- oksida (ajoene),  and  y-Lglutamil-S-alkil-L-sistein  (9).  Kandungan-kandungan  ini merupakan  senyawa  bioaktif  penting  yang  dapat  berperan  dalam  aktivitas stimulansia. Adapun gambar ekstrak tersaji pada Gambar 1.
Gambar 1. Ekstrak umbi bawang putih tunggal
Kandungan ekstrak diuji kualitatif dengan hasil yang tersaji pada Tabel 1.

## Skrining Fitokimia Ekstrak
Hasil uji fitokimia ekstrak menunjukkan adanya kandungan alkaloid, saponin, flavonoid dan fenolik (Tabel 1). Hal ini sesuai dengan penelitian yang telah  dilakukan  oleh  (5)  bahwa  umbi  bawang  putih  tunggal  mengandung flavonoid  sebesar  12,183  ±  0,194  mg  -  14,483  ±  0,591  ekuivalen kuersetin/gram  ekstrak  serta  kadar  fenolik  sebesar  70,244  -  92,222  mg ekuivalen asam galat/gram.
Tabel 1. Hasil skrining fitokimia ekstrak
Uji Reagen Hasil Keterangan Alkaloid Wagner Endapan kuning Positif Dragendrof Endapan coklat Positif Saponin Akuades,HCl Terdapat busa lebih dari 30 detik Positif Flavonoid Etanol,serbuk Mg, HCl 2 N Kuning Positif Fenolik Metanol, FeCl 3 Oranye Positif

## Hasil Uji Stamina
Hasil  uji  stamina  diukur  melalui  selisih  waktu  lelah  mencit  di  dalam berenang  yang  dapat  dilihat  pada  tabel  2  dan  gambar  2.  Pada  gambar  2 menunjukkan bahwa semakin tinggi dosis yang diberikan (kelompok 4, 5  dan 6) maka semakin besar efek stimulansia yang dihasilkan.
Tabel 2. Hasil pengukuran selisih   waktu lelah mencit (t2-t1) ( x ±SD) Kelompok  Selisih waktu lelah mencit (menit)
1 87,605 ± 62,923
2 42,45 ± 37,313 3 69,872 ± 68,041 4 22,132 ± 21,340 5 56,197 ± 57,390
6 222,722 ± 111,719
Hasil  uji  statistik  menggunakan  metode  one  way  Anova  menunjukkan perbedaan signifikan dengan nilai signifikansi 0,009 (p<0,05) sehingga dilanjutkan dengan uji Post hoc. Hasil uji Post Hoc tercantum pada tabel 3. Perbedaan bermakna ditunjukkan antara kelompok kontrol negatif dengan kelompok 6 dosis 20 g/kgBB (p>0,05).  Tidak  terdapat  perbedaan  yang  bermakna    antara  kelompok  kontrol
positif dengan dengan kelompok pretest; kelompok 4 ekstrak dosis 5 g/kgBB dan kelompok 5 ekstrak dosis 10 g/kgBB (p<0,05).
Gambar 2. Rata-rata selisih waktu lelah mencit (t2-t1)
Selisih  waktu  lelah  dari  yang  tertinggi  secara  berurutan  seperti  yang tercantum dalam tabel 2 adalah  kelompok 6 yaitu kelompok ekstrak 20 g/kgBB  > kelompok  mencit  pretest  ekstrak  5  g/kgBB double  dose pada  hari  pertama  dan ketiga > kelompok mencit yang diberi kafein dengan dosis 100 mg/kgBB> kelompok mencit  ekstrak  10  g/kgBB>  kelompok  mencit  yang  diberi  Na  CMC  >  kelompok mencit ekstrak 5 g/kgBB pada hari ketiga saja. Penggunaan kafein sebagai kontrol positif karena zat ini telah diketahui mempunyai efek sebagai stimulan, akan tetapi apabila  dikonsumsi  lebih  dari  10  mg  per  kg  berat  badan  dapat  meningkatkan kolesterol total, LDL, menurunkan HDL darah dan menyebabkan tekanan darah naik (10,11).
Tabel 3. Data hasil uji Post Hoc t2-t1 Kelompok  Sig. Makna 1 dan 2 1 dan 3
1 dan 4 1 dan 5 1 dan 6
2 dan 3
2 dan 4 2 dan 5 2 dan 6
3 dan 4 3 dan 5
3 dan 6
4 dan 5 4 dan 6 5 dan 6 0,423 0,619 0,246 0,573 0,010* 0,201 0,708 0,810 0,002* 0,105 0,294 0,028 0,541 0,001* 0,003*
Tidak signifikan Tidak signifikan Tidak signifikan Tidak signifikan Signifikan Tidak signifikan Tidak signifikan Tidak signifikan Signifikan Tidak signifikan Tidak signifikan Tidak signifikan Tidak signifikan Signifikan Signifikan
0 50 100 150 200 250 1 2 3 4 5 6 W ak tu ( men it ) Kelompok Perlakuan
Penelitian efek stimulansia dari famili Allium telah beberapa kali dilakukan yaitu dari (12) yang menyatakan bahwa ekstrak etanolik Allium sativum dosis 200 mg/kgBB  mampu  memperpanjang  waktu  berenang  dengan  peningkatan  yang signifikan  (p<0,001)  waktu  lelah  sebesar  27,3  menit.  Pada  penelitian  (4)  juga menunjukan bahwa kulit umbi bawang putih berefek stimulansia pada dosis efektif 10 g/kgBB dengan waktu lelah 4,225 menit. Umbi bawang putih tunggal masih satu taksonomi  dengan  bawang  putih  maka  senyawa  metabolit  sekunder  yang dikandung sebagian besar adalah sama.
Ekstrak  etanolik  umbi  bawang  putih  tunggal  memiliki  efek  stimulansia karena  adanya  kandungan  senyawa  fitokimia  flavonoid,  alkaloid,  saponin  dan fenolik. Senyawa identitas bawang yang merupakan senyawa allisin dan turunannya juga dapat berperan untuk melindungi sistem kardiovaskular dengan meningkatkan status  antioksidan  melalui  penurunan  kadar  ROS  dan  menstimulasi  produksi glutation  sehingga  menyebabkan  vasorelaksasi  (13).  Mekanisme  flavonoid  dan alkaloid dalam mengurangi kelelahan otot seperti disebutkan dalam penelitian (4) dengan  bekerja  sebagai  antagonis  adenosin  untuk  memberikan  efek  stimulan. Alkaloid  dan  flavonoid  akan  berikatan  dengan  reseptor  dari  adenosine  yaitu  A1, A2a, A2b dan A3 dalam sistem syaraf kemudian menyebabkan efek balik adenosine yaitu meningkatkan gerakan otot dan memperlancar aliran darah yang masuk ke otak sehingga membuat tubuh lebih aktif dan menghilangkan rasa kantuk (14,15).
Mekanisme lain dari alkaloid dan flavonoid sebagai stimulansia dengan cara menghambat enzim fosfodiesterase. Fosfodiesterase adalah enzim yang berfungsi mengubah adenosin-3',5'-monofosfat (siklik AMP = CAMP) menjadi AMP. 3',5'AMP akan menstimulasi enzim fosforilakinase dari  inaktif menjadi aktif yang nantinya akan  mengubah  glikogen  dalam  tubuh  menjadi  glukosa  1  fosfat.  Dengan  adanya enzim  glukofosfomutase,  glukosa  1  fosfat  akan  diubah  menjadi  glukosa  6  fosfat. Pembentukan  glukosa  6  fosfat  ini  yang  menjadi  sumber  energi  tambahan  atau memberikan  efek  stimulansia  (15).  Senyawa  saponin  di  dalam  ekstrak  juga berperan memberikan efek stimulansia karena mengandung asam triterpen  dalam bentuk ester dari gula yang merevitalisasi pembuluh darah sehingga aliran darah menjadi lancar (16).
Hasil  dari  penelitian  menunjukkan  bahwa  dosis  efektif  yang  memberikan efek stimulansia adalah 20 g/kgBB dengan waktu lelah 222,72 menit dan semakin besar  dosis  ekstrak  etanolik  umbi  bawang  putih  tunggal  maka  efek  stimulannya makin baik. Berdasarkan hasil ini maka ekstrak umbi bawang putih tunggal dapat dikembangkan  untuk  diformulasi  menjadi  sediaan  obat  tradisional  penambah stamina  atau  ekstrak  dapat  dipurifikasi  untuk  dapat  diteliti  senyawa  yang bertanggung jawab dalam efek stimulansia.

## 4. KESIMPULAN
Ekstrak umbi bawang putih tunggal mempunyai efek stimulansia terhadap hewan uji mencit paling efektif pada dosis 20 g/kg BB karena memiliki kandungan saponin, alkaloid, flavonoid, fenolik

## 5. UCAPAN TERIMAKASIH
Terimakasih  kami  ucapkan  kepada  LPPM  Unissula  melalui  pendanaan penelitian internal.

## 6. DAFTAR PUSTAKA
[1]. Rane, P.S. dan Gaikwad, S.T., 2019. Medicinal Properties of Onion and Garlic : A Review. Journal of Emerging Technologies and Innovative Research . May 2019 Vol.6 Issue 5. Page 50-57. ISSN-2349-5162
[2]. Naji,  K.M.,  Elham,  S.  ,  Fatima  A.  ,  Safa’a,  A.  and  Myrene  R.  D’souza.  2017. Hepatoprotective And Antioxidant Effects Of Single Clove Garlic Against CCl4- Induced  Hepatic  Damage  In  Rabbits. BMC  Complementary  and  Alternative Medicine. https://doi.org/10.1186/s12906-017-1916-8
[3]. Suyatno,M. 2001. Pengaruh Penggunaan Doping Terhadap Penampilan Atlet pada  Pekan  Olah  Raga  Nasional  XIV/1996  dan  South  East  Asian  Games XIX/1997 di Jakarta. Jurnal Kesehatan Masyarakat Vol 1 (1), 32-38
[4]. Febrinasari,  N.,  Wijayanti  R.  dan  Apriyadi,  A.  2016.  Uji  Stimulansia  Ekstrak Kulit Umbi Bawang Putih ( Allium sativum L.) Pada Mencit Galur Swiss. Jurnal Farmasi Sains Dan Praktis , Volume 1 No. 2. https://doi.org/10.31603/pharmacy.v1i2.229
[5]. Januarti,  I.B.,  Taufiq,  H.  dan  Sulistyaningsih.  2019.  The  Correlation  Of  Total Flavonoid And Total Phenolic With Antioxidant Activity Of Single Bulb Garlic ( Allium sativum) From Tawangmangu And Magetan . Jurnal Farmasi Sains dan Komunitas. Vol 16 No 2 . http://dx.doi.org/10.24071/jpsc.001798
[6]. Yu, Fa-Rong,. Ying Liu,. Yong-Zhi Cui. 2010. Effects of a Flavonoid Extract from Cynomorium songaricum on the Swimming Endurance of Rats. The American Journal of Chinese Medicine , Vol. 38, No. 1, 65–73 World Scientific Publishing Company  Institute  for  Advanced  Research  in  Asian  Science  and  Medicine. https://doi.org/10.1142/S0192415X10007774
[7]. Aprilia  F.,  dan  Siregar,  T.  2013.  Uji  Aktifitas  Stimulan  Sistem  Syaraf  Pusat Ekstrak Biji Pinang ( Areca catechu L.) terhadap Mencit Putih ( Mus musculus ) dan Penentuan ED50 Yang Diberikan Secara Oral. Prosiding Seminar Nasional Matematika , Sains dan Teknologi.(4). 51-58.
[8]. Martins, N., Petropoulos, S., and Ferreira, I. C. F. R. 2016. Chemical composition and bioactive compounds of garlic ( Allium sativum L.) as affected by pre- and post-harvest  conditions:  a  review. Food  Chem .  211,  41–50.  doi: 10.1016/j.foodchem.2016.05.029
[9]. Bayan,  L.,  Koulivand,  H.P.  dan  Gorji,  A.  2014.  Garlic  :  a  review  of  potential therapeutic effects. Avicenna J Phytomed. Jan-Feb; 4(1): 1–14. PMC4103721
[10]. Adebayo, J.O., Akinyinka, A.O., Odewole, G.A. dan Okwusidi, J.I., 2007. Effect of Caffeine  on  The  Risk  of  Coronary  Heart  Disease-  A  Re-Evaluation. Indian Journal of Clinical Biochemistry . Vol. 22 (1) : 29-32.
http://dx.doi.org/10.1007/BF02912877
[11]. Martiani,  A  dan  Lelyana,  R.  2012.  Faktor  Risiko  Hipertensi  Ditinjau  dari Kebiasaan  Minum  Kopi  (Studi  Kasus  di  Wilayah  Kerja  Puskesmas  Ungaran pada  Bulan  Januari-Februari  2012). Journal  of  Nutrition  College .  Vol  1:  79- 84.  https://doi.org/10.14710/jnc.v1i1.678
[12]. Chan  JY,  Yuen  AC,  Chan  RY,  Chan  SW.  2013.  A  review of  the  cardiovascular benefits and antioxidant properties of allicin. Phytother Res . 27: 637-646. First published:08 August 2012. https://doi.org/10.1002/ptr.4796
[13]. Roshan, S,. Abdullah, Khan dan Sadath, Ali. 2009. To Study The Effect Of Allium sativum On Swimming Endurance, Anoxia Tolerance And Cold Stress. Journal of Global Pharma Technology . ISSN 0975 – 8542 [14]. Debnath, B., Singh, W. S., Das, M., Goswami, S., Singh, M. K., Maiti, D., & Manna, K.  2018.  Role  of  plant  alkaloids  on  human  health:  A  review  of  biological activities. Materials Today Chemistry, 9, 56– 72. https://doi.org/10.1016/j.mtchem.2018.05.001
[15]. Mills, S. dan Bone K. 2000. Principles And Practice Of Phytotheraphy : Modern Herbal Medicine. Churchill Livingstone. London
[16]. Sunarti,  Yane  D.K,  Purnamasari,  N  D.  2017.  Tonic  Effects  Test  of  Pegagan ( Centella Asiatica L) Syrups on White Male Mice. Pharmacy Faculty Universitas
Setia Budi Surakarta, Journal  of  Chemical  and  Pharmaceutical
Research .  https://doi.org/10.35617/jfi.v8i2.518