Inhibisi Enzim α-Glukosidase oleh Senyawa Flavonoid Daun Kelor ( Moringa oleifera ) In Silico dan In Vitro (In Silico And In Vitro Inhibition Of Α-Glucosidase By Moringa Oleifera Leaves Flavonoid Compounds)
Puspa Julistia Puspita 1 , Shobiroh Nuur Alimah 1 , Laksmi Ambarsari 1* , Riksa Nur Wahyuni 1
1 Departemen Biokimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, IPB University Bogor 16680, Indonesia
Received: 3 March 2023; Revised: 18 July 2023; Accepted: 6 December 2023
Corresponding author, email: laksmi@apps.ipb.ac.id*

## ABSTRACT
Moringa leaves flavonoids have the potential to inhibit α-glucosidase. Nanoparticles are one way to improve the bioavailability of Moringa leaves. However, It is not known yet which specific flavonoid compounds from Moringa leaves have the potential to inhibit α-glucosidase. Through molecular docking, this research aimed to determine the inhibition potential of α-glucosidase by the flavonoid compound from Moringa leaves. It also aimed to determine the inhibitory activity  of  α-glucosidase  by  its  flavonoid  compound  in  extracts  and  nanoparticles  in  vitro.  The  results  of  this  study found that Moringa leaves flavonoid has the potential to be a competitive inhibition of α-glucosidase with the highest to lowest inhibitory potential are crypto chlorogenic acid, quercetin-3-O-beta-D-glucopyranoside, quercetin-3-glucoside, kaempferol-3-O-a-ramnoside, kaempferol-3-O-glucoside, epicatechin, catechins, quercetin, kaempferol, glucomoringin isothiocyanate. Moreover, cryptochlorogenic acid has the best potential with ΔG and Ki values -8.5 kcal/mol and 0.5788 μM.  In  addition,  Inhibition  α-glucosidase  Moringa  leaves  flavonoid  in  extract  and  nanoparticles,  respectively,  are classified as inactive (IC50 = 5.84x103 ppm) and active (IC50 = 1.59x101 ppm) in vitro. Therefore, nanoparticles have the potential to increase inhibitory activity.
Keywords : α-glucosidase, in silico, in vitro, moringa leaves

## ABSTRAK
Flavonoid  daun  kelor  berpotensi  menginhibisi  α-glukosidase,  namun  memiliki  bioavaibilitas  rendah  sehingga ditingkatkan kemampuannya dengan pembuatan nanopartikel. Belum diketahui pula senyawa flavonoid spesifik dari daun kelor yang berpotensi menginhibisi α-glukosidase. Penelitian ini bertujuan menentukan potensi inhibisi α-glukosidase flavonoid daun kelor secara in silico melalui penambatan molekuler dan menentukan aktivitas inhibisi α-glukosidase flavonoid daun kelor dalam sediaan ekstrak dan nanopartikel secara in vitro. Flavonoid daun kelor secara in silico berpotensi menginhibisi α-glukosidase secara kompetitif, dengan daya inhibisi tertinggi hingga terendah adalah asam kriptoklorogenik, kuersetin-3-O-β-D-glukopiranosida, kuersetin-3-glukosida, kaempferol-3-O-a-ramnosida, kaempferol- 3-O-glukosida, epikatekin, katekin, kuersetin, kaempferol, glukomoringin isotiosianat. Asam kriptoklorogenik memiliki potensi terbaik dengan nilai ΔG dan Ki sebesar -8.5 kkal/mol dan 0.5788 μM. Inhibisi α-glukosidase flavonoid daun kelor dalam sediaan ekstrak dan nanopartikel berturut-turut dikategorikan tidak aktif (IC 50 = 5.84 x 10 3 ppm) dan aktif (IC 50 = 1.59 x 10 1 ppm) secara in vitro. Hal ini menunjukkan pembuatan nanopartikel dapat meningkatkan aktivitas inhibisi α-glukosidase.
Kata kunci: α-glukosidase, daun kelor, in silico, in vitro
CURRENT BIOCHEMISTRY
ISSN: 2355-7877 | e-ISSN: 2355-7931
Journal homepage: http://journal.ipb.ac.id/index.php/cbj

## 1.  PENDAHULUAN
Diabetes  mellitus  (DM)  merupakan kelainan  metabolis  dengan  ciri  meningkatnya kadar  glukosa  dalam  darah  postprandial  atau setelah  makan.  Penderita  DM  di  Indonesia menempati  peringkat  keempat  dengan  jumlah penderita  8.4  juta  penduduk  pada  tahun  2000 dan diperkirakan mencapai 21.3 juta penduduk pada tahun 2030 (Riskesdas 2018). Menurunkan kadar glukosa pada masa postprandial menjadi target kunci bagi penderita diabetes, seperti yang ditekankan  dalam  panduan  yang  dikeluarkan oleh  Federasi  Diabetes  Internasional  dan Asosiasi  Diabetes  Amerika  (IDF  2014  dan ADA  2020).  Inhibisi  α-glukosidase  menjadi target  bagi  pengembangan  obat  antidiabetes seperti  akarbosa,  miglitol  dan  vaglibosa  (Van de  Laar  FA et al. 2005).  Obat  ini  berperan penting  untuk  menurunkan  kadar  glukosa setelah  makan  dengan  cara  memperlambat pencernaan  karbohidrat  dan  penyerapan glukosa  gastrointestinal,  sekaligus  telah terbukti  dapat  memperbaiki  kontrol  indeks glikemik dan menurunkan diabetes melitus tipe 2 (DM2) (Van de Laar FA et al. 2005, Alssema M. 2021, Altay M. 2022). Penelitian ini akan menggunakan  akarbosa  sebagai  inhibitor komersial  α-glukosidase  yang  telah  banyak digunakan untuk pengobatan pada pasien DM 2  selama  kurang  lebih  30  tahun.  Beberapa penelitian  juga  menunjukkan  bahwa  akarbosa memiliki efek menurunkan berat badan dengan meningkatkan Glucagon-like peptide 1 (GLP- 1). Efek positif dari akarbosa dan kemampuan untuk  memberikan  perlindungan  pada  sistem kardiovaskular menyebabkan akarbosa menjadi pilihan uatama sebagai agen antidiabetes (Altay M . 2022). Daun kelor ( Moringa oleifera ) merupakan tanaman dengan berbagai kandungan flavonoid, alkaloid, fenol dan saponin (Arora et al. 2013). Pitriya et al. (2017)  menyimpulkan  bahwa ekstrak  daun  kelor  dapat  menurunkan  kadar glukosa  darah  dan  dapat  berperan  sebagai antihiperglikemia.  Senyawa  flavonoid  dalam daun kelor berperan dalam menurunkan kadar glukosa  darah.  Namun,  senyawa  flavonoid memiliki bioavailabilitas rendah di dalam darah (Thilakarathna  dan  Rupasinghe  2013).  Salah satu upaya untuk mengatasi hal tersebut adalah
dengan pembuatan nanopartikel. Nanopartikel dapat  meningkatkan  bioavailabilitas  obat karena adanya pengecilan ukuran partikel yang dapat meningkatkan luas permukaan sehingga kelarutan  meningkat  (Rawat et al. 2020). Gufron (2013) membuktikan sediaan senyawa aktif  metformin  dalam  bentuk  nanopartikel kitosan  lebih  efektif  menurunkan  gula  darah dibandingkan sediaan metformin biasa.
Isnanto  (2020)  berhasil  mendapatkan ekstrak flavonoid daun kelor dan membuatnya dalam  sediaan  nanopartikel,  namun  keduanya belum  diteliti  potensinya  sebagai  inhibitor α-glukosidase. Selain itu, belum diketahui pula senyawa  flavonoid  spesifik  dalam  daun  kelor yang berpotensi sebagai inhibitor α-glukosidase. Oleh  karena  itu,  penelitian  ini  bertujuan menentukan  potensi  inhibisi  α-glukosidase oleh  senyawa  flavonoid  daun  kelor  secara in silico dan  menentukan  aktivitas  inhibisi α-glukosidase  oleh  senyawa  flavonoid  daun kelor  dalam  sediaan  ekstrak  dan  nanopartikel secara in vitro . Penelitian ini diharapkan dapat dimanfaatkan  sebagai  acuan  pengembangan alternatif obat antidiabetes.

## 2.  METODOLOGI
Uji In silico Inhibisi Enzim α-Glukosidase Flavonoid Daun Kelor Preparasi Ligan. Seluruh  ligan  uji diantaranya glukomoringin isotiosianat (penciri daun kelor) (William 2019), epikatekin, katekin, kaempferol,
kaempferol-3-O-glukosida,
kaempferol-3-O-a-ramnosida, kuersetin, kuersetin-3-O-beta-D-glukopiranosida, kuersetin-3-glukosida,  asam  kriptoklorogenik (flavonoid daun kelor) (Perez et al. 2016; Lin et al. 2018)  diunduh  struktur  dua  dimensinya dari  laman  https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/ dalam format sdf kemudian ditransformasikan menjadi  3D  oleh  MarvinView  dalam  format pdb.  Ligan  pembanding  (akarbosa)  diperoleh dari  hasil  pemisahan  dari  reseptor  2QMJ. Semua  ligan  dioptimasi  dan  disimpan  dengan format  pdbqt  menggunakan  Autodock  Tools 1.5.6. Preparasi Reseptor. Reseptor α-glukosidase  (2QMJ)  diperoleh  dari  laman http://www.rscb.org. Preparasi dilakukan pada
Puspita et al. – Inhibisi Enzim Α-Glukosidase oleh Senyawa Flavonoid Daun Kelor
reseptor  dengan  menghilangkan  molekur  air dan ligan menggunakan Discovery Studio dan disimpan dalam format PDB. Penambahan atom hidrogen  pada  gugus  polar  dan  perhitungan muatan  Gasteiger  kemudian  dilakukan menggunakan  Autodock  Tools  dan  disimpan dalam bentuk PDBQT. Reseptor α-glukosidase yang telah dipreparasi dianalisis menggunakan Procheck  untuk  melihat  stabilitas  struktur reseptor  tersebut. Analisis  stabilitas dilakukan menggunakan diagram Ramachandran pada  laman  http://servicen.mbi.ucla.edu/ PROCHECK/ (Lovell et al. 2002).
Validasi Grid Box dan Penambatan Molekuler  (Modifikasi  Farhan  2019 ). Sebelum  melakukan  penambatan  molekuler, dilakukan  beberapa  validasi  terhadap  sisi pengikatan ligan atau daerah pengikatan pada ligan  melalui  validasi gridbox. Validasi  ini dilakukan menggunakan AutoDock Tools 1.5.6 dan  Autodock  Vina  (The  Scripps  Research Institute,  Amerika)  sebanyak  10  kali  ulangan pada  akarbosa  dengan  ukuran gridbox x=14, y=14, z=20, dan koordinat x=-21.782, y=-6.01, z=-5.665  serta  spasi=1  dengan  nilai  RMSD yang  diperoleh  ≤2.  File  reseptor  dan  ligan pembanding  yang  telah  dipreparasi  dalam format  PDBQT  dimasukkan  ke  dalam  folder Vina  yang  ditempatkan  di drive C.  Dokumen configuration (conf) dibuat dan disimpan pada folder Vina.
Setelah itu, dilanjutkan dengan penambatan  molekuler dengan gridbox hasil validasi  terbaik.  Penambatan  molekuler dilakukan  menggunakan  ligan  uji  dengan reseptor α-glukosidase dengan AutoDock Tools 1.5.6 dan Autodock Vina (The Scripps Research Institute,  Amerika)  dengan  aturan  dimensi ( grid box ) yang sama dari hasil tahap validasi. Perintah penambatan molekuler menggunakan command prompt (cmd)  berupa  “C:\Vina  – config conf.txt –log log.txt”. Hasil penambatan molekuler  berupa file dengan  format  PDBQT serta  dokumen  dengan  format  txt  yang  berisi energi bebas gibbs.
Analisis Hasil Penambatan Molekuler (Pratama  2015;  Setiawan  2015). Hasil penambatan  molekuler  dianalisis  berdasarkan interaksi  ligan-reseptor  secara  2D  dan  energi afinitas  serta  ikatan  kimia  yang  terbentuk
ligan-reseptor. Analisis Interaksi Ligan- Reseptor .  Interaksi  ligan-reseptor  dianalisis berdasarkan  visualisasi  2D  menggunakan Discovery  Studio  Visualizer  dan  Ligplot+ 1.5.4.  Ligan  uji  digabungkan  dengan  reseptor tersebut dengan menyalin model terpilih pada layar tab “ ligand ” dan ditempelkan pada layar tab  “ macromolecule ”.  Ligan  ditarik  menuju reseptor  hingga  menyatu  dan  disimpan  ke dalam bentuk format PDB kemudian dianalisis interaksi  residu  asam  amino  menggunakan perangkat  lunak  Ligplot+  1.5.4.  Program Ligplot+  1.5.4  dibuka  dan  dipilih file PDB ligan-reseptor  yang  telah  menyatu  kemudian klik Run . Representasi interaksi ligan-reseptor secara 2D akan terlihat dimana garis putus-putus menunjukkan  interaksi  hidrogen,  sementara garis seperti bulu mata menunjukkan interaksi hidrofobik. Analisis Energi Afinitas dan Ikatan Kimia . Energi  afinitas  dianalisis  berdasarkan hasil penambatan molekuler dengan format txt yang berisi energi bebas gibbs. Energi afinitas ditentukan  dengan  model  penambatan  yang memiliki energi bebas gibbs terendah. Nilai ini juga  digunakan  untuk  menganalisis  konstanta inhibisi (Ki) menggunakan rumus ΔG = RTInKi. Selain itu, dilakukan juga analisis ikatan kimia berupa  ikatan  hidrogen  dan  hidrofobik  dari hasil  visualisasi  2D  menggunakan  perangkat lunak Ligplot+ 1.5.4.
Prediksi Sifat Fisikokimia, Bioaktivitas, dan  Toksisitas  Ligan  (Modifikasi  Pratama 2015;  Setiawan  2015;  Ochieng et al. 2017). Seluruh ligan yang telah diunduh dalam format sdf,  kemudian  dianalisis  sifat  fisikokimianya melalui  laman  http://www.scfbiiitd.res.in/ software/drugdesign/lipinski.jsp. File ligan diunggah  ke  dalam  kolom  input  dan  dipilih submit untuk  memulai  analisis.  Analisis dilakukan pada standar pH 7. Sementara pada analisis  bioaktivitas  dan  toksisitas,  seluruh ligan  diunduh  pada  laman  https://pubchem. ncbi.nlm.nih.gov/  dalam  format  SMILES ( Simplified Molecular-Input Line-Entry System ).  Analisis  bioaktivitas  dilakukan  pada laman molinspiration.com dengan mengunggah ligan dalam format SMILES kemudian dipillih Predict Bioactivity untuk  menampilkan  hasil prediksinya.  Sedangkan  analisis  toksisitas dilakukan  pada  laman  http://lmmd.ecust.edu.
cn/admetsar1/predict/  dengan  mengunggah ligan dalam format SMILES kemudian dipillih Predict untuk menampilkan hasil prediksinya.
Uji In vitro Inhibisi Enzim α-Glukosidase Flavonoid Daun Kelor
Inhibisi enzim α-Glukosidase (Modifikasi  Chen et al. 2014). Sampel  yang digunakan  adalah  ekstrak  flavonoid  daun kelor  dengan  kadar  total  flavonoid  sebesar 5.559  mgQE/g  (konsentrasi  800-2400  ppm), nanopartikel  flavonoid  daun  kelor  dengan ukuran  partikel  264.2  nm,  indeks  polidispersi 0.433  dan  efisiensi  penjerapan  76%  diperoleh dari penelitian Isnanto (2020) (konsentrasi 0.8- 80  ppm),  serta  akarbosa  (konsentrasi  0.1-10 ppm)  sebagai  pembanding.  Sebanyak  50  μL buffer  fosfat  0.1  M  dengan  pH  7  direaksikan dengan  25  μL  larutan  p-nitrofenil-α-D- glukopiranosida  (pNPG)  10  mM  dan  10  μL sampel  kemudian  diinkubasi  pada  suhu  37 °C  selama  5  menit.  Reaksi  dimulai  dengan menambahkan 25 μL enzim α-glukosidase (0.1 unit/mL dalam buffer fosfat 0.1 M pH 7) dan campuran  reaksi  diinkubasi  pada  suhu  37  °C selama  30  menit.  Reaksi  dihentikan  dengan menambahkan 100 μL Na 2 CO 3 0.2 M. Hidrolisis enzimatik  pada  substrat  dihitung  berdasarkan jumlah  p-nitrofenol  yang  dilepaskan  selama reaksi dengan menggunakan microplate reader pada panjang gelombang 410 nm. Setiap sampel diuji sebanyak tiga kali ulangan.
Analisis %Inhibisi dan IC 50 Enzim α-Glukosidase (Sugiwati et al. 2009). Analisis dilakukan dengan cara menghitung persentase inhibisi α-glukosidase menggunakan persamaan:
Perhitungan IC 50 dilakukan menggunakan persaman  regresi  dimana  konsentrasi  sampel sebagai sumbu x dan persentase inhibisi sebagai sumbu y. Nilai IC 50 dihitung dari persamaan y = bx + a dengan menggunakan rumus:

## 3.  HASIL Inhibisi α-Glukosidase Flavonoid Daun
Kelor In silico Penambatan Molekuler
Sebelum dilakukan penambatan, terlebih dahulu  dilakukan  validasi gridbox .  Hasil validasi  menunjukkan  nilai  rata-rata Root Mean Standard Deviation (RMSD)  sebesar 1.68  Å  dan  energi  afinitas  -7.74  kkal/mol. Penambatan kemudian dilakukan pada ukuran grid box x=14, y=14, z=20. Hasil penambatan lalu  divisualisasikan  menggunakan  Ligplot+ 1.45.  Akarbosa  sebagai  ligan  pembanding membentuk  ikatan  hidrogen  pada  residu His600,  Asp327,  Arg526,  Asp203,  Thr205, Asn207,  Thr544  dan  Asp524  sedangkan interaksi  hidrofobiknya  terjadi  pada  residu Asp443,  Ile328,  Trp406,  Tyr299,  Met444, Phe575, Trp539, dan Trp441. Interaksi akarbosa tersebut  kemudian  dibandingkan  dengan interaksi antara ligan uji dengan reseptor untuk menentukan Binding Site Similarity (BSS) dalam persen. Hasil perhitungan menunjukkan glukomoringin  isotiosianat  memiliki  %BSS tertinggi  yaitu  68.75%,  sedangkan  katekin, epikatekin  dan  kaempferol  memiliki  %BSS terendah yaitu 50% (Tabel 1).
Penambatan  molekul  juga  menghasil file  “log”  yang  berisi  energi  afinitas.  Ligan pembanding akarbosa dan ligan uji kaempferol- 3-O-glukosida  tertambat  dengan  energi afinitas  sebesar  -7.7  kkal/mol.  Kaempferol- 3-O-a-ramnosida, kuersetin-3-O-beta-D- glukopiranosida, kuersetin-3-glukosida dan  asam  kriptoklorogenik  memiliki  energi afinitas  lebih  negatif  dari  akarbosa,  sebesar -8.1  kkal/mol,  -8.2  kkal/mol,  -8.1  kkal/mol, dan  -8.5  kkal/mol  sedangkan  glukomoringin isotiosianat,  epikatekin,  katekin,  kaempferol dan  kuersetin  memiliki  energi  afinitas  yang lebih  besar  dibandingkan  dengan  akarbosa, -6.2  kkal/mol,  -7.4  kkal/mol,  -7.4  kkal/mol, -6.9 kkal/mol, -7.1 kkal/mol (Tabel 2). Energi afinitas kemudian digunakan untuk menghitung konstanta  inhibisi.  Nilai  energi  afinitas  yang lebih negatif menunjukkan nilai Ki yang lebih rendah (Tabel 2). Sementara itu, total interaksi setiap ligan berkisar 1-8 untuk ikatan hidrogen dan 8-10 untuk interaksi hidrofobik.
Puspita et al. – Inhibisi Enzim Α-Glukosidase oleh Senyawa Flavonoid Daun Kelor
Prediksi Stabilitas Fisikokimia, Bioaktivitas dan Toksisitas Ligan Prediksi  stabilitas  fisikokimia  ligan dilakukan dengan aturan Lipinski berdasarkan 5 parameter, diantaranya massa atom relatif <500 Da, donor ikatan hidrogen <5, akseptor ikatan hidrogen <10, nilai Log P<5 dan refraktivitas molar  diantara  40-130.  Akarbosa  melanggar 4  aturan  Lipinski,  diantaranya  massa  atom relatif, donor ikatan hidrogen, akseptor ikatan hidrogen,  serta  refraktivitas  molar.  Sementara itu, keseluruhan ligan uji tidak melanggar lebih dari dua aturan Lipinski (Tabel 3). Nilai  bioaktivitas  ligan  digolongan menjadi  tiga  kategori,  diantaranya  aktif (>0.00),  cukup  aktif  (-0.50-0.00),  dan  tidak aktif  (<-0.50).  Hasil  analisis  menunjukkan keseluruhan  ligan  baik  pembanding  maupun ligan uji dikategorikan cukup aktif hingga aktif pada keseluruhan parameter (Tabel 4). Parameter  toksisitas  yang  diprediksi diantaranya,  inhibisi Human Ether-A-Go- Go Related Gene (hERG),  karsinogenisitas, dan  toksisitas  oral  akut.  Skor  1  menunjukkan kemungkinan  selalu  terjadi.  Semua  ligan tergolong  inhibitor  lemah  berdasarkan  hERG dan termasuk non karsinogenik. Sementara itu, pada  parameter  toksisitas  oral  akut,  akarbosa termasuk  kategori  IV  sedangkan  ligan  uji termasuk kategori II atau III (Tabel 5).

## Inhibisi α-Glukosidase Flavonoid Daun
Kelor In vitro Aktivitas inhibisi α-glukosidase ditentukan  berdasarkan  %inhibisi  dan  nilai IC 50 .  Berdasarkan  %inhibisi,  semakin  tinggi konsentrasi  sampel  semakin  tinggi  pula persentase  penghambatan.  Aktivitas  inhibisi α-glukosidase berdasarkan nilai IC 50 digolongan menjadi tiga kategori, diantaranya sangat aktif (<11 ppm), aktif (11-100 ppm) dan tidak aktif (>100  ppm).  Ekstrak  flavonoid  daun  kelor, nanopartikel flavonoid daun kelor dan akarbosa memiliki nilai IC 50 berturut-turut sebesar 5.84 x  10 3 ppm,  1.59  x  10 1 ppm  dan  3.19  x  10 -1 ppm (Tabel 6) sehingga tergolong tidak aktif, aktif  dan  sangat  aktif.  Data  menunjukkan, pembuatan nanopartikel meningkatkan aktivitas
inhibisi  α-glukosidase  dengan  diperolehnya nilai  IC 50 yang  lebih  rendah  dibandingkan ekstrak.  Akarbosa  sebagai  pembanding memiliki kemampuan inhibisi yang lebih baik dibandingkan flavonoid daun kelor baik dalam sediaan  ekstrak  maupun  nanopartikel,  yang ditunjukkan dengan nilai IC 50 paling rendah.

## 4.  PEMBAHASAN

## Inhibisi α-Glukosidase Flavonoid Daun
Kelor In vivo
Penambatan molekul merupakan metode komputasi  untuk  memprediksi  konformasi serta  orientasi  ligan  terhadap  reseptor  untuk membentuk  kompleks  yang  stabil  (Maharani et al. 2020).  Sebelum  dilakukan  penambatan, terlebih  dahulu  dilakukan  validasi  dengan AutoDock  Tools  1.5.6  dan  Autodock  Vina (The  Scripps  Research  Institute,  Amerika) sebanyak  10  kali  ulangan.  Hasil  validasi terbaik menunjukkan nilai RMSD sebesar 1.68 Å.  Mutaqqin et al. (2019)  menyatakan  nilai RMSD ≤2 Å menunjukkan metode penambatan yang digunakan bersifat akurat.
Akarbosa  sebagai  ligan  pembanding merupakan inhibitor kompetitif yang berikatan dengan sisi aktif enzim. Akarbosa pada bagian cincin  akarvosin  berinteraksi  dengan  residu Asp443, Asp542 dan Tyr299 yang merupakan triad katalitik serta berikatan hidrogen dengan residu His600, Asp327, dan Arg526 dari enzim α-glukosidase. Residu Asp443 berperan sebagai nukleofilik  katalitik  dan  Asp542  berpotensi sebagai katalis asam atau basa (Sim et al. 2008). Residu Tyr299 memiliki peran untuk mengenali substrat  dari  enzim  α-glukosidase  (Song et al. 2014).  Sementara  itu,  interaksi  hidrofobik terbentuk  pada  residu Trp406 . Akarbosa  pada bagian  cincin  glikon  berinteraksi  pada  residu Thr544, Thr205 dan Asn207 (Sim et al. 2008). Interaksi  residu  asam  amino  yang terdapat pada ligan uji dianalisis kemiripannya dengan  akarbosa  dan  dinyatakan  sebagai Binding Site Similarity (BSS). Semua ligan uji menghasilkan %BSS terendah sebesar 50% dan tertinggi  sebesar  68.75%  (Tabel  1).  Jeniossa (2018) menyatakan ligan uji yang menghasilkan %BSS  lebih  dari  50%  menandakan  tingginya
tingkat kemiripan interaksi residu asam amino. Hal ini menunjukkan semua ligan uji berpotensi memiliki  jenis  inhibisi  yang  sama  dengan akarbosa yaitu inhibisi kompetitif. Penambatan molekul juga menghasilkan nilai energi afinitas yang kemudian digunakan untuk  menganalisis  stabilitas  ligan-reseptor
(Pratama  dan  Suhartono  2018).  Ligan  uji kaempferol-3-O-a-ramnosida, kuersetin- 3-O-beta-D-glukopiranosida, kuersetin-3- glukosida dan asam kriptoklorogenik memiliki energi  afinitas  lebih  kuat  dibandingkan  ligan pembanding (akarbosa) (Tabel 2). Ligan dengan energi afinitas yang kuat memiliki konformasi
Tabel 2. Energi afinitas dan ikatan kimia ligan terhadap enzim α-glukosidase
Ligan Energi Afinitas (ΔG) (kkal/mol) Ki (μM) Jumlah Ikatan Hidrogen Jumlah Ikatan Hidrofobik Akarbosa (pembanding) -7.7 2.2366 8 9 Glukomoringin isotiosianat (penciri) -6.2 28.2048 3 10 Epikatekin -7.4 3.7131 2 9 Katekin -7.4 3.7131 2 9 Kaempferol -6.9 8.6427 1 8 Kaempferol-3-O-glukosida -7.7 2.2366 5 11 Kaempferol-3-O-a-ramnosida -8.1 1.1378 4 10 Kuersetin -7.1 6.1643 2 9 Kuersetin-3-O-beta-D-glukopoiranosida -8.2 0.9609 5 9 Kuersetin-3-glukosida -8.1 1.1378 5 9 Asam kriptoklorogenik -8.5 0.5788 4 8 Tabel 1. Interaksi ligan terhadap α-glukosidase Ligan Residu asam amino berikatan hidrogen Residu asam amino berinteraksi hidrofobik % BSS Akarbosa (pembanding) His600, Asp327, Arg526, Asp203, Thr205, Asn207, Thr544, Asp542 Asp443, Ile328, Trp406, Tyr299, Met444, Phe575, Trp539, Trp441 100 Glukomoringin isotiosianat (penciri) Asp327, Thr205, Asp203 Asp443, Ile364, Tyr299, Phe575, Asp542, Thr204, Trp406, Arg526, Met444, Ile328 68.75 Epikatekin Tyr605, Gln603 Phe575, Asp542, Trp441, Asp443, Asp327, Trp539, Ile364, Trp406, Tyr299 50 Katekin Tyr605, Gln603 Phe575, Asp542, Trp441, Asp443, Asp327, Trp539, Ile364, Trp406, Tyr299 50 Kaempferol Asp203 Phe575, Tyr299, Asp443, Trp406, Trp441, Ile364, Asp327, Asp542 50 Kaempferol-3-O- glukosida Tyr605, Ser448, Asp203, Asp327, Gln603 Met444, Phe450, Arg526, Asp443, Asp542, Ile364, Trp441, Trp406, Tyr299, Gly602, Phe575 62.5 Kaempferol-3-O-a- ramnosida Tyr605, Asp203, Asp443, Gln603 Phe575, Phe450, Asp327, Arg526, Trp406, Asp542, Ile364, Trp441, Tyr299, Gly602 56.25 Kuersetin Arg526, Asp203 Met444, Asp542, Ile364, Phe575, Asp327, Asp443, Trp441, Tyr299, Trp406 62.5 Kuersetin-3-O-beta-D- glukopiranosida Tyr605, Asp203, Asp443, Arg526, Gln603 Gly602, Trp406, Phe450, Asp327, Ile364, Tyr299, Trp441, Asp542 Phe575 56.25 Kuersetin-3-glukosida Tyr605, Asp203, Asp443, Arg526, Gln603 Gly602, Trp406, Phe450, Asp327, Asp542, Ile364, Phe575, Trp441, Try299 56.25 Asam kriptoklorogenik Asp203, Thr205, Asp443, Arg526 Thr204, Asp542, Trp441, Ile364, Trp406, Asp327, Tyr299, Phe575 62.5 Keterangan: = residu asam amino yang berikatan sama seperti ligan pembanding (akarbosa)

## Puspita et al. – Inhibisi Enzim Α-Glukosidase oleh Senyawa Flavonoid Daun Kelor
Tabel 3. Stabilitas fisikokimia ligan dengan aturan Lipinski Ligan Massa atom relatif (Da) Donor ikatan hidrogen Akseptor ikatan hidrogen Log P Refraktivitas molar Akarbosa (pembanding) 645 14 19 -8.221319 138.726.562 Glukomoringin isotiosianat (penciri) 313 4 6 -0.273710 78.978073 Epikatekin 290 5 6 1.09306 68.131493 Katekin 290 5 6 1.09306 68.131493 Kaempferol 286 4 6 0.64607 62.824192 Kaempferol-3-O-glukosida 448 7 11 1,15331 97.246582 Kaempferol-3-O-a-ramnosida 432 6 10 1.45311 96.367783 Kuersetin 302 5 7 0.52426 64.369995 Kuersetin-3-O-beta-D-glukopoiranosida 464 8 12 1.0315 98.792381 Kuersetin-3-glukosida 463 7 12 1.0895 97.543 Asam kriptoklorogenik 354 6 9 1.28594 78.631287 Keterangan: = tidak memenuhi aturan Lipinski Tabel 4. Bioaktivitas ligan Ligan Ligan GPCR Modulator kanal ion Inhibitor kinase Ligan reseptor nuklir Inhibitor Protease Inhibitor enzim Akarbosa (pembanding) -0.2 -0.49 -0.33 -0.29 0.21 0.21 Glukomoringin isotiosianat (penciri) 0.03 -0.05 -0.40 -0.20 -0.11 -0.49 Epikatekin 0.41 0.14 0.09 0.6 0.26 0.47 Katekin 0.41 0.14 0.09 0.6 0.26 0.47 Kaempferol -0.1 -0.21 0.21 0.32 -0.27 0.26 Kaempferol-3-O-glukosida 0.06 -0.05 0.10 0.20 -0.05 0.41 Kaempferol-3-O-a-ramnosida -0.01 -0.09 0.05 0.16 -0.05 0.36 Kuersetin -0.06 -0.19 0.28 0.36 -0.25 0.28 Kuersetin-3-O-beta-D- glukopoiranosida 0.09 -0.07 0.22 0.35 0.18 0.42 Kuersetin-3-glukosida 0.06 -0.04 0.13 0.20 -0.06 0.42 Asam kriptoklorogenik 0.18 0.02 -0.1 0.66 0.14 0.49 Tabel 5. Toksisitas ligan Ligan Inhibisi Human Ether-A-Go- Go-Related Gene (hERG) Karsinogenisitas Toksisitas oral akut Kategori Skor Kategori Skor Kategori Skor Akarbosa (pembanding) Inhibitor lemah 0.8856 Non karsinogenik 0.9670 IV 0.6165 Glukomoringin isotiosianat (penciri) Inhibitor lemah 0.9011 Non karsinogenik 0.8419 III 0.6886 Epikatekin Inhibitor lemah 0.9781 Non karsinogenik 0.945 II 0.7348 Katekin Inhibitor lemah 0.9781 Non karsinogenik 0.945 II 0.7348 Kaempferol Inhibitor lemah 0.9795 Non karsinogenik 0.9363 II 0.6238 Kaempferol-3-O-glukosida Inhibitor lemah 0.9813 Non karsinogenik 0.9589 III 0.4045 Kaempferol-3-O-a-ramnosida Inhibitor lemah 0.9846 Non karsinogenik 0.9461 III 0.5184 Kuersetin Inhibitor lemah 0.9781 Non karsinogenik 0.945 II 0.7348 Kuersetin-3-O-beta-D- glukopoiranosida Inhibitor lemah 0.9704 Non karsinogenik 0.9513 III 0.4343 Kuersetin-3-glukosida Inhibitor lemah 0.9813 Non karsinogenik 0.9589 III 0.4045 Asam kriptoklorogenik Inhibitor lemah 0.9862 Non karsinogenik 0.9341 III 0.775
yang  stabil  (Chairunnisa  dan  Runadi  2016). Energi  afinitas  akan  berbanding  lurus  dengan konstanta inhibisi (Ki), nilai Ki yang semakin rendah  menunjukkan  afinitas  ligan  yang semakin tinggi (Pratama 2015). Keempat ligan uji  tersebut  serta  ligan  pembanding  akarbosa memiliki potensi inhibisi terbaik yang ditandai dengan  nilai  Ki  yang  lebih  rendah  diantara ligan yang lainnya. Hal ini disebabkan adanya ikatan hidrogen antara akarbosa dengan residu triad  katalitik  Asp542,  sedangkan  keempat ligan  uji  membentuk  ikatan  hidrogen  pada residu  triad  katalitik  Asp443.  Farhan  (2019) menunjukkan kondisi yang sama dimana ligan yang  berinteraksi  secara  hidrogen  dengan residu  triad  katalitik  memiliki  energi  afinitas rendah  sehingga  memiliki  potensi  inhibisi yang baik. Selain itu, nilai energi afinitas juga dipengaruhi oleh jumlah ikatan hidrogen serta ikatan hidrofobik. Jeniossa (2018) menyatakan semakin  banyak  ikatan  hidrogen  maka  nilai energi  afinitas  akan  semakin  negatif  sehingga interaksi lebih stabil. Stabilitas kompleks ligan- reseptor juga dipengaruhi oleh interaksi residu asam  amino  secara  hidrofobik  (Patil et al. 2010). Keseluruhan  ligan  uji  yang  lolos penapisan  virtual  kemudian  dilakukan  uji bioavaibilitas dengan menggunakan parameter pada aturan Lipinski, untuk memastikan ligan
berada pada tingkat absorbsi dan permeabilitas ligan  yang  baik  (Lipinski et al. 2012).  Ligan yang  memenuhi  aturan  Lipinski  adalah glukomoringin  isotiosianat  sebagai  ligan penciri,  epikatekin,  katekin,  kaempferol  dan kuersetin (Tabel 3). Akarbosa tidak memenuhi aturan  Lipinski  yang  menunjukkan  tingkat permeabilitas atau permeasi yang rendah dalam tubuh  Farhan  (2019)  menyimpulkan  bahwa akarbosa  tidak  memenuhi  aturan  Lipinski disebabkan karena target dari akarbosa adalah α-glukosidase  pada  permukaan  saluran pencernaan  tidak  masuk  ke  dalam  sel.  Hal tersebut menyebabkan akarbosa dapat bekerja sebagai  obat  meskipun  tingkat  permeabilitas atau permeasinya rendah.
Nilai  bioaktivitas  ligan  juga  diuji  dan bioaktivitasnya  digolongkan  menjadi  tiga kategori, diantaranya aktif (>0.00), cukup aktif (-0.50-0.00), dan tidak aktif (<-0.50) (Khan et al. 2013).  Semua  ligan  pada  setiap  parameter berada pada kategori cukup aktif sampai aktif sehingga  memiliki  bioaktivitas  yang  baik (Tabel  4).  Ligan  dengan  bioaktivitas  yang baik memiliki aksi farmakologis serta potensi terhadap  target  biologis  suatu  obat  berupa protein, seperti enzim, kanal ion atau reseptor (Ochieng et al. 2017).  Senyawa  flavonoid dapat menginhibisi reseptor tirosin kinase yang berperan  dalam  kanker  payudara,  reseptor
Tabel 6. Inhibisi dan IC 50 akarbosa, ekstrak dan nanopartikel flavonoid daun kelor Sampel Konsentrasi (ppm) Inhibisi (%) IC 50 (ppm) Ekstrak flavonoid daun kelor 800
21.96
5.84 x 10 3 1200 28.49 1600 32.02 2000 34.50 2400 37.78 Nanopartikel flavonoid daun kelor
0.8 25.04 1.69 x 10 1
4
36.31 8 46.32 40 56.96 80 63.85 Akarbosa
0.1 33.39 3.19 x 10 -1 0.5
56.62 1 66.78
5 85.49 10 90.32
Puspita et al. – Inhibisi Enzim Α-Glukosidase oleh Senyawa Flavonoid Daun Kelor
SARS-CoV  3CL  protease  yang  berperan dalam  virus  SARS  ( Severe Acute Respiratory Syndrome ),  dan  reseptor  α-glukosidase  yang berperan  dalam  diabetes  mellitus  (Sohretoglu dan  Sari  2019;  Fleming et al. 2020;  Jo et al. 2020). Ligan  yang  lolos  uji  bioavaibilitas kemudian  dilanjutkan  uji  toksisitas  dengan parameter  inhibisi Human Ether-A-Go-Go Related Gene (hERG),  karsinogenisitas,  dan toksisitas  oral  akut.  Semua  ligan  merupakan inhibitor  lemah  terhadap  hERG  dan  termasuk non-karsinogenik  (Tabel  5).  Cincin  aromatik pada  senyawa  flavonoid  merupakan  struktur yang  paling  berperan  dalam  inhibisi terhadap  hERG.  Inhibitor  lemah  terhadap hERG  menunjukkan  senyawa  tidak  akan menyebabkan  kardiotoksisitas  (Babiaka et al. 2020).  Sementara  itu,  Maharani et al. (2020)  menyatakan  flavonoid  tidak  bersifat karsinogenik karena memiliki antioksidan yang tinggi  serta  dapat  memodulasi  pencegahan karsinogenesis  dengan  melindungi  kerusakan DNA dan menginduksi jalur perbaikannya. Parameter toksisitas oral akut dinyatakan dalam lethal dose 50%  (LD 50 ),  dengan  nilai pada  kategori  I  ≤50  mg/kg  (sangat  toksik),  II ≤500  mg/kg  (cukup  toksik),  III  ≤5000  mg/kg (sedikit  toksik)  dan  IV  >5000  mg/kg  (tidak toksik) (Guan et al . 2018). Akarbosa tergolong tidak  toksik  sedangkan  ligan  uji  lainnya tergolong cukup toksik dan sedikit toksik (Tabel 5).  Senyawa  yang  memiliki  potensi  sebagai inhibitor  α-glucosidase  diuji  secara in vitro dan in vivo dan selanjutnya melewati uji klinis untuk memastikan bahwa aplikasi obat ini tidak berpotensi toksik atau bahaya bagi pasien.

## Inhibisi α-Glukosidase Flavonoid Daun
Kelor In vitro Ekstrak  flavonoid  dibuat  dalam  sediaan nanopartikel  menggunakan  metode  gelasi ionik dengan kitosan dan natrium tripolifosfat sehingga  menghasillkan  nanopartikel  dengan ukuran partikel 264.2 nm, indeks polidispersitas 0.433  dan  efisiensi  penjerapan  74%  (Isnanto 2020).  Nanopartikel  tersebut  telah  memenuhi syarat dalam sistem penghantaran obat karena ukurannya  kurang  dari  300nm  (Ram et al.
2006). Indeks polidispersitasnya dapat diterima karena bernilai antara 0-0.5 yang menunjukkan sistem  dispersi  lebih  stabil  untuk  jangka panjang dan memiliki homogenitas yang tinggi (Prasetyo et al. 2015). Efisiensi penjerapannya juga  menunjukkan  nanopartikel  yang  dibuat memiliki  kapasitas  penjerapan  zat  aktif  yang baik  karena  memiliki  nilai  lebih  dari  60% (Gredi et al. 2017). Aktivitas  inhibisi  α-glukosidase  dilihat berdasarkan  perhitungan  %inhibisi  sehingga didapatkan nilai IC 50 . Semakin kecil nilai IC 50 , aktivitas inhibisinya semakin tinggi (Elmaniar dan  Muhtadi  2017).  Persentase  inhibisi ekstrak  flavonoid  daun  kelor,  nanopartikel flavonoid daun kelor dan akarbosa meningkat sesuai  peningkatan  konsentrasi  karena  pada konsentrasi  tinggi  terdapat  lebih  banyak metabolit  sekunder,  dalam  hal  ini  flavonoid (Tabel 6) (Mataputuna et al. 2013). Nilai  IC 50 ekstrak  flavonoid  daun  kelor sebesar  5.84  x  10 3 ppm  (Tabel  6). Ademiluyi et al. (2018)  melaporkan  ekstrak  daun  kelor menginhibisi  α-glukosidase  dengan  nilai IC 50 sebesar  5.13  x  10 1 ppm.  Perbedaan  hasil ini  disebabkan  oleh  komponen  aktif  berupa metabolit  sekunder  yang  berperan  dalam inhibisi α-glukosidase. Sementara itu, nilai IC 50 nanopartikel flavonoid daun kelor sebesar 1.59 x  10 1 ppm  (Tabel  6).  Hasil  ini  sesuai  dengan penelitian Tambunan et al. (2018)  pembuatan nanopartikel  meningkatkan  aktivitas  inhibisi α-glukosidase meskipun tidak signifikan. Rawat et al. (2020) menyatakan teknologi nanopartikel dapat meningkatkan luas permukaan sehingga absorpsi  dan  kelarutan  meningkat.  Akarbosa sebagai  ligan  pembanding  menunjukkan nilai  IC 50 sebesar  3.19  x  10 -1 ppm  (Tabel  6). Hasil  tersebut  tidak  jauh  berbeda  dengan penelitian  Sumantrapura  (2019)  sebesar  3.11 x  10 -1 ppm.  Aktivitas  inhibisi  akarbosa  yang tinggi disebabkan karena akarbosa merupakan senyawa  murni  sedangkan  sampel  uji  berupa ekstrak  sehingga  terdapat  lebih  dari  satu senyawa  inhibitor  yang  menyebabkan  daya inhibisi lebih rendah (Apriani 2012). Flavonoid  daun  kelor  berpotensi menginhibisi  α-glukosidase  dengan  tipe penghambatan  kompetitif  secara in silico. Potensi  inhibisi  α-glukosidase  terbaik
ditunjukkan  oleh  ligan  asam  kriptoklorogenik dengan nilai ΔG dan Ki sebesar -8.5 kkal/mol dan 0.5788 μM. Aktivitas inhibisi α-glukosidase flavonoid  daun  kelor  dalam  sediaan  ekstrak tergolong tidak aktif, sedangkan dalam sediaan nanopartikel  tergolong  aktif  secara in vitro dengan nilai IC 50 secara berturut-turut sebesar 5.84  x  10 3 ppm  dan  1.59  x  10 1 ppm.  Hal  ini menunjukkan  pembuatan  nanopartikel  dapat meningkatkan  aktivitas  inhibisi  α-glukosidase jika dibandingkan dengan akarbosa yang nilai IC 50 lebih rendah, yaitu sebesar 3.19 x 10 -1 ppm.

## DAFTAR PUSTAKA
[RISKESDAS]  Riset  Kesehatan  Dasar.  2018. Hasil Utama Riskesdas 2018 . Jakarta (ID):
Badan  Penelitian  dan  Pengembangan Kesehatan Kementrian Kesehatan RI. Ademiluyi A, Aladeselu HO, Oboh G, Boligon A.  2018.  Drying  alters  the  phenolic constituents,  antioxidant  properties, α-amylase,  and  α-glucosidase  inhibitory properties of Moringa ( Moringa oleifera ) leaf. Food Science and Nutrition .  6(1): 1-11.
Altay M. 2022. Acarbose is again on the stage. World J Diabetes. 13(1):1-4.
Alssema  M,  Ruijgrok  C,  Blaak  EE,  Egli L,  Dussort  P,  Vinoy  S,  Dekker  JM, Denise  Robertson  M.  2021.  Effects  of alpha-glucosidase-inhibiting  drugs  on acute  postprandial  glucose  and  insulin responses: a systematic review and meta- analysis. Nutr Diabetes. 11(1): 11.
American  Diabetes  Association.  2018.  6. Glycemic  targets:  standards  of  medical care in diabetes. Diabetes Care 41, S55– S64.
Apriani  R.  2012.  Uji  penghambatan  enzim α-glukosidase  dan  identifikasi  golongan senyawa dari fraksi yang aktif pada ekstrak kulit  batang Cinnamomum burmanni (Nees & T. Ness) Blume [skripsi]. Depok (ID): Universitas Indonesia.
Arora  SD,  Onsare  GJ,  Kaur  H.  2013.
Bioprospecting of moringa ( Moringaceae ) microbiological  prespective. Journal of
Pharmacognosy and Phytocemistry . 1(6): 193-215.
Babiaka  SB,  Nia  R,  Abuga  KO,  Mbah  JA, Nziko  VP,  Paper  DH,  Kang  F.  2020. Antioxidant  potential  of  flavonoid glycosides  from Manniophyton fulvum Mull. (Euphorbiaceae): Identification and molecular modeling. Sciencific African 8.
4(23): 1-7.
Chairunnisa  A,  Runadi  D.  2016.  Aktivitas kalkon terhadap reseptor estrogen β (ER- β)  sebagai  antikanker  payudara  secara in vitro dan in silico :  review.  Farmaka. 14(2): 1-8.
Chen P, Zhang Q, Dang H, Liu X, Tian F, Zhao J,  Chen  Y,  Zhang  H,  Chen  W.  2014. Screening  for  potential  new  probiotic based  on  probiotic  properties  and α-glucosidase  inhibitory  activity.  Food Control. 35(1): 65-72.
DiNicolantonio  JJ,  Bhutani  J,  O'Keefe  JH. 2015.  Acarbose:  safe  and  effective  for lowering  postprandial  hyperglycaemia and improving cardiovascular outcomes. Open heart. 2(1): e000327.
Elmaniar  R,  Muhtadi.  2017.  Aktivitas penghambatan enzim α-glukosidase oleh ekstrak  etanol  ubi  jalar  ungu  ( Ipomoea batatas L.)  [skripsi].  Yogyakarta  (ID): Universitas Ahmad Dahlan.
Farhan  M.  2019.  Penambatan  molekuler senyawa  aktif  okra  ( Abelnouschus esculentus L.) pada enzim α-glukosidase sebagai kandidat obat antidiabetes melitus [skripsi].  Bogor  (ID):  Institut  Pertanian Bogor.
Fleming VJ, Saragih M, Tambunan USF. 2020. Utilizatin  of  flavonoids  compounds  as HER2 tyrosine kinase inhibitor in breast cancer using fragment-baseddrug design. Key Engineering Material . 840(1): 230- 236.
Gredi J, Taurina W, Andrie M. 2017. Efektivitas analgetik  nanopartikel  kitosan-ekstrak etanol  daun  pepaya  ( Carica Papaya L.) pada mencit putih jantan (Mus Mucculus). Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia . 15(2): 228-234.
Puspita et al. – Inhibisi Enzim Α-Glukosidase oleh Senyawa Flavonoid Daun Kelor
Guan  L, Yang  H,  Cai Y,  Sun  L,  Di  P,  Li  W, Liu  G,  Tang  Y.  2018.  ADMET-score a  comprehensive  scoring  function  for evaluation  of  chemical  drug-likeness. Medicinal Chemistry Communication. 10(1): 148-157.
Gufron  M.  2013.  Nanoenkapsulasi  metformin dengan  nanokitosan  sebagai  obat antidiabetes tipe II [skripsi]. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor.
International  Diabetes  Federation  Guideline Development  Group.  2014.  Guideline for  management  of  postmeal  glucose in  diabetes.  Diabetes  Res  Clin  Pract. 103(2):256-68.
Isnanto A. 2020. Aktivitas nanopartikel ekstrak daun kelor ( Moringa oleifera L.) sebagai antibiofilm [skripsi]. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor, siap terbit.
Jeniossa  JA.  2018.  Penambatan  molekuler senyawa  kurkuminoid,  xanthorizol, β-elemenon, zedoaron terhadap aktivitas inhibisi  enzim  dipeptidil  peptidase  IV [skripsi].  Bogor  (ID):  Institut  Pertanian Bogor.
Jo  S,  Kim  S,  Shin  DH,  Kim  MS.  2020.
Inhibition of SARS-CoV 3CL protease by flavonoids. Journal of Enzyme Inhibition and Medicinal in Chemistry . 35(1): 145- 151.
Khan  SA,  Kumar  S,  Maqsood  AM.  2013. Virtual screening of molecular properties and  bioactivity  score  of  boswellic acid  derivatives  in  search  of  potent anti-inflammatory lead molecule.
International Journal of Interdisciplinary Multidisciplinary Studies . 1(1): 8-12.
Lin  M,  Zhang  J,  Chen  X.  2018.  Bioactive flavonoids in Moringa oleifera and their health-promoting  properties. Journal of Functional Foods . 47(1): 469-479.
Lipinski CA, Lombardo F, Dominy BW, Feeney PJ. 2012. Experimental and computational approaches  to  estimate  solubility  and permeability  in  drug  discovery  and development  setting.  Advanced  Drug Delivery Review. 64(1): 4-17.
Maharani  MG,  Lestrai  SR,  Luklati.  2020.
Molecular  docking  studies  flavonoid (quercetin, isoquercetin, and kkaempferol) of  single  bulb  garlic  ( Allium sativum ) to  inhibit  lanosterol  synthase  as  anti- hypercholesterol  therapeutic  strategies. American Institute of Physics. 2231(1): 1-6.
Mataputuna SP, Roronga JA, Pontoha J. 2013. Aktivitas inhibitor α-glukosidase ekstrak kulit  batang  matoa  ( Pometia pinnata. Spp.)  sebagai  agen  antihiperglikemik . Jurnal MIPA Unstrat Online. 2(2): 119- 123.
Mutaqqin FZ, Ismail H, Muhammad HN. 2019.
Studi molecular docking, molecular dynamic dan prediksi toksisitas senyawa turunan  alkaloid  naftiridin  sebagai inhibitor protein kasein kinase 2-α pada kanker  leukemia. Pharmacoscript .  2(1): 49-64.
Ochieng  PJ,  Sumaryada  T,  Okun  D.  2017. Molecular docking and pharmacokinetic of  herbal  derivatives  as  maltase- glucoamylase inhibitor. Asian Journal of Pharmaceutical and Clinical Research.
10(9): 392-398.
Patil R, Das S, Stanley A, Yadav L, Sudhakar A, Varma AK. 2010. Optimized hydrophobic interactions and hydrogen bonding at the target-ligand interface leads the pathways of  drug-designing. Plos One .  5(8): e12029.
Perez  CR,  Loper  BG,  Mendiola  JA,  Pine RQ,  Carretero  AS,  Ibanez  E.  2016. Optimization  of  microwave-assisted extraction  and  pressurized  liwuid extraction  of  phenolic  compound  from Moringa oleifera leaves by multiresponse suface  methodology. Electrophoresis . 0(0): 1-9.
Pitriya  IA,  Nurdin,  Sabang  SM.  2017.  Efek buah  kelor  ( Moringa oleifera )  terhadap penurunan kadar gula darah mencit (Mus musculus). J.Akad. Kim . 6(1): 35-42. Prasetyo  YA,  Husni  P,  Mita  SR.  2015.  Long circulation  nanopartikel  menggunakan polimer  PLGA  (Poly-Lactic-co-Glicolyc Acid)  dan  poloxamer.  Farmaka.  15(1):
237-247.
Pratama  R.  2015.  Penambatan  molekuler senyawa  aktif  temulawak  ( Curcuma xanthorriza )  dengan  enzim  COX- 2  sebagai  kandidat  obat  anti  kanker payudara  [skripsi].  Bogor  (ID):  Institut Pertanian Bogor.
Ram  B.  Gupta,  Uday  B,  Kompella.  2006. Nanoparticle Technology for Drug Delivery .  New  York  (US):  Taylor  & Francis Group.
Rawat M, Singh D, Saraf S. 2020. Nanocarriers: promising  vehicle  for  bioactive  drugs. Journal of Biopharmaceutics Sciences . 29(9): 1790-1798.
Setiawan  T.  2015.  Studi  molecular  docking ekstrak  kurkuminoid  asal  wonogiri sebagai inhibitor enzim DNA topoisomerase  II  [skripsi].  Bogor  (ID):
Institut Pertanian Bogor.
Sim  L,  Calvillo  RQ,  Sterchi  EE,  Nichols BL,  Rose  DR.  2008.  Human  intestinal maltase–glucoamylase:  crystal  structure of  the  n-terminal  catalytic  subunit and  basis  of  inhibition  and  substrate specificity. Journal of Molecular Biology . 375(3): 782-792.
Sohretoglu  D,  Sari  S.  2019.  Flavonoids  as alpha-glucosidase inhibitors: mechanistic approaches merged with enzyme kinetic and molecular modelling. Phytochemistry Reviews. 1(1): 1-12. Song  KM,  Okuyama  M,  Nishimura  M, Tagami  T,  Mori  H,  Kimura  A.  2014. Aromatic  residue  on  β→α  loop  1 in  the  catalytic  domain  is  important
to  the  transglycosylation  specificity of  glycoside  hydrolase  family  31  α- glucosidase. Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry . 77(8): 1759-1765. Sugiwati  S,  Setiasih  S,  Afifah  E.  2009.
Antihyperglycemic  activity  of  the mahkotadewa  ( Phaleria macrocarpa (scheff.) Boerl.) leaf extracts as an alpha glucosidase inhibitor. Makara Journal of Health Research . 13(2): 74-78. Sumantrapura  MI.  2019.  Aktivitas  inhibisi enzim  α-glukosidase  dan  toksisitas ekstrak air dan ekstrak etanol daun sengon ( Parasrianthes falcataria (L)  Nielsen) [skripsi].  Bogor  (ID):  Institut  Pertanian Bogor.
Tambunan RM, Rahmat D, Juliyanti WD. 2018. Aktivtias  penghambatan  α-glukosidase dan  formulasi  solid  lipid  nanoparticle mengandung  ekstrak  etanol  70%  daun kumis  kucing  terstandar  ( Orthosiphon stamineus Benth.). Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia . 16(1): 45-48. Thilakarathna  SH,  Rupasinghe  HP.  2013.
Flavonoid bioavailability and attempts for bioavailability  enhancement. Nutrients . 28(5): 3367-3387.
Van de Laar FA, Lucassen PL, Akkermans RP, Van de Lisdonk EH, Rutten GE, Van Weel C.  2005.  Alpha-glucosidase  inhibitors for  type  2  diabetes  mellitus.  Cochrane Database Syst Rev. 2005(2): CD003639.
Williams  FE.  2019.  The  efficacy  of  Moringa oleifera  as  a  practical  application  for sustainable  water  treatment  [tesis]. Adelaide (AT): University of Adelaide.