## Aktivitas Antioksidan dan Antibakteri Ekstrak Daun Pometia pinnata
Harlinda Kuspradini*, Whicliffe Fiernaleonardo Pasedan, Irawan Wijaya Kusuma
Fakultas Kehutanan Universitas Mulawarman

## Abstrak
Penelitian  ini  bertujuan  menentukan  aktivitas  antioksidan  dan  antibakteri  berbagai jenis  ekstrak  daun Pometia  pinnata .  Kegiatan  yang  dilakukan  meliputi  proses ekstraksi  daun Pometia  pinnata dari  Kalimantan  Timur  dengan  teknik  maserasi bertingkat  menggunakan  3  pelarut: n -heksana,  etil  asetat,  dan  etanol.  Ekstrak tersebut kemudian dievaluasi aktivitas antioksidan dan antimikrobanya.
Dari  hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun P.  pinnata mengandung alkaloid,  tannin,  dan  kumarin.  Hasil  pengujian  antioksidan  dengan  metode peredaman  radikal  bebas  DPPH,  pada  konsentrasi  100  ppm  menunjukkan  aktivitas antioksidan yang tinggi dengan nilai 89,23%, 89,23% dan 90,38% pada masing-masing ekstrak n -heksana,  etil  asetat  dan  etanol.  Nilai  antioksidan  menunjukkan  nilai  yang hampir  sama  dengan  antioksidan  vitamin  C  sebesar  96  pada  konsentrasi  25.  Hasil pengujian  antimikroba  dengan  metode  pewarnaan  2,  3,  5- triphenyl  tetrazolium chloride (TTC)  menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun P.  pinnata memiliki  kemampuan yang  cukup  kuat  dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri Streptococcus  mutans, Streptococcus sobrinus, Escherichia coli kecuali terhadap Propionibacterium acne.

## Pendahuluan
Indonesia yang terletak di daerah tropis memiliki keunikan dan kekayaan hayati yang sangat luar biasa. Tercatat tidak kurang dari 30.000 jenis tanaman obat yang tumbuh di  Indonesia  walaupun  yang  sudah  tercatat  sebagai  produk  fitofarmaka  (bisa diresepkan)  baru  terdapat  sebanyak  5  produk  dan  obat  herbal  terstandar  tercatat sebanyak 28 produk (Kurdi 2010). Tanaman dari famili Sapindaceae banyak tersebar di wilayah Indonesia dan di antara sudah digunakan sejak dulu oleh masyarakat lokal sebagai tanaman kebutuhan sehari – hari dan obat tradisional. Dari penelitian yang sudah  dilakukan,  beberapa  jenis  tanaman  dari  famili Sapindaceae memiliki  potensi untuk dijadikan obat, antara lain Lepisanthes amoena, Cardiospermum Halicacabum,
Penulis
Afiliasi

## Kata Kunci
 Pometia pinnata
 Antioksidan
 DPPH
 Antibakteri  2, 3, 5- triphenyl tetrazolium chloride (TTC)
Diterima 21 Agustus 2015
Direvisi 5 November 2015 Disetujui 24 Februari 2016

## *Penulis korespondensi
Harlinda Kuspradini Fakultas Kehutanan Universitas Mulawarman Jl. Ki Hajar Dewantara Kampus Gunung Kelua Samarinda. 75117. Kalimantan Timur alinkuspra@gmail.com
Quality control using Image Analysis and Chemometrics 27 Paullinia pinnata, Nephelium lappaceum,
Cardiospermum canescens (Thitilertdecha, et al 2010; Kuspradini et  al. 2012;  Rajasekaran et  al. 2013; Udhayasankar et  al. 2013;  Lunga et  al. 2014). P. pinnata atau dikenal dengan Matoa merupakan jenis tanaman famili Sapindaceae yang tersebar di wilayah Asia  Tenggara  (Malaysia  dan  Indonesia)  dan dimanfaatkan oleh masyarakat sebagai obat – obatan tradisional dan buahnya dapat dimakan. Penyebarannya di wilayah Indonesia meliputi daerah Sumatra,  Jawa,  Kalimantan,  Sulawesi,  P.Sumbawa (NTB), dan Maluku (Sudarmono 2000). Beberapa hasil penelitian  sebelumnya  yang  mengatakan  bahwa ekstrak  daun P.  pinnata mampu  menghambat  virus HIV-1 IN (Suedee 2012) dan kulit batangnya memiliki aktivitas  inhibitor  α-glukosidase  (Mataputun et  al . 2013).  Buah  tumbuhan  Matoa  juga  sudah  sangat terkenal memiliki khasiat sebagai antioksidan, namun bagian  lain  dari  tumbuhan  ini  belum  diketahui aktivitas antioksidannya.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menentukan aktivitas  antioksidan  dan  antimikroba  daun  tanaman P.  pinnata yang  diekstraksi  dengan  cara  metode maserasi bertingkat menggunakan pelarut n -heksana, etil  asetat  dan  etanol.  Pengukuran  aktivitas antioksidan dilakukan menggunakan metode peredaman  radikal  bebas  DPPH  dan  antimikroba terhadap  4  jenis  bakteri  ( Propionibacterium  acnes , Streptococus  mutans , Streptococcus sobrinus ,  dan Escherichia coli ).
Diharapkan  dari  penelitian  ini  dapat  memberikan informasi  mengenai  potensi  antioksidan  dan antibakteri  serta  sebagai  salah  satu  referensi/ perbandingan untuk penelitian lebih lanjut.

## Metode Penelitian
Penelitian  ini  dilakukan  di  Laboratorium  Kimia Hasil Hutan Fakultas Kehutanan Universitas Mulawarman. Proses awal pembuatan ekstrak adalah penyiapan serbuk simplisia kering. Sampel daun yang digunakan  dibersihkan  dari  kotoran  lalu  dikeringkan dalam ruangan dengan suhu konstan. Setelah kering, semua daun diblender hingga menjadi serbuk.
Pengukuran  faktor  kelembaban  dilakukan dengan  menggunakan  standar  TAPPI  T264  om-88. Pengukuran  faktor  kelembapan  dilakukan  untuk mendapatkan  berat  sampel  kering  oven  dari  sampel
daun  yang  digunakan  dalam  pengujian.  Untuk mencari faktor kelembaban digunakan rumus berikut:
Proses ekstraksi menggunakan metode maserasi  suksesif  atau  ekstraksi  bertingkat.  Pada proses awal, sampel direndam menggunakan pelarut n -heksana. Residu dari n -heksana kemudian dimaserasi kembali dengan menggunakan pelarut etil asetat.  Pada  akhir  dari  proses  maserasi,  residu  dari etil  asetat  direndam  menggunakan  pelarut  etanol. Semua  kegiatan  perendaman  sampel  dilakukan pengadukan shaker selama  2  x  24  jam  pada  suhu kamar.  Selanjutnya  larutan  disaring  dan  dipekatkan menggunakan rotary  vacuum  evaporator sehingga didapatkan ekstrak kasar pada setiap pelarut.
Analisis fitokimia dilakukan terhadap ekstrak n - heksana, etil asetat, dan etanol dari 4 jenis tanaman famili  Sapindaceae.  Analisis  fitokimia  yang  dilakukan meliputi  uji  perubahan  warna  yang  mengacu  pada Harborne (1987), Kokate (2001), dan Senthilmurugan et  al .  (2013)  untuk  menguji  adanya  senyawa  aktif, antara lain:
1. Uji alkaloid (Kokate 2001). Sebanyak 5 ml ekstrak ditambahkan  2 ml  HCl,  kemudian  dimasukkan  1 ml  larutan  Dragendorff.  Perubahan  warna larutan menjadi jingga atau merah mengindikasikan  bahwa  ekstrak  mengandung alkaloid.
2. Uji  flavonoid  (Senthilmurugan et  al. 2013).  1  ml ekstrak direbus dengan 5 ml air aquades selama 5 menit, kemudian disaring lalu diukur sebanyak 1  ml  filtrat  dan  ditambahkan  beberapa  tetes larutan  natrium  hidroksida  20%,  jika  pada  saat penambahan  terbentuk  warna  kuning  maka filtrat tersebut mengandung flavonoid.
3. Uji  Triterpenoid  dan  Steroid  (Harborne  1987). Identifikasi  dilakukan  dengan  menggunakan campuran asam asetat anhidrida dan asam sulfat pekat  yang  biasa  dikenal  dengan  pereaksi Liebermann-Burchard.  Pada  pengujian  ini  10 tetes  asam  asetat  anhidrida  dan  2  tetes  asam sulfat pekat ditambahkan secara berurutan
Kuspradini et al. ke  dalam  1 ml  sampel  uji  yang  telah  dilarutkan dalam  aseton.  Selanjutnya  sampel  uji  dikocok dan  dibiarkan  beberapa  menit.  Reaksi  yang terjadi diikuti dengan perubahan warna, apabila terlihat  warna  merah  dan  biru  maka  uji dinyatakan positif adanya steroid.
4. Uji  tanin  (Kokate  2001).  Pengujian  dilakukan dengan  memasukkan  10  ml  larutan  ekstrak  ke dalam  tabung  reaksi  dan  ditambahkan  larutan timbal asetat (CH 3 COO) 2 Pb 1%. Tanin dinyatakan positif  apabila  pada  reaksi  terbentuk  endapan kuning.
5. Uji  saponin  (Harborne  1987).  Pengujian dilakukan dengan menimbang sampel uji 60 mg pada  tabung  reaksi  kemudian  dilarutkan  aseton sebanyak 2 ml, lalu ditambahkan air panas 3 ml. Selanjutnya  larutan  didinginkan  dan  dikocok selama  10  detik.  Terbentuknya  buih  mantap selama kurang lebih 10 menit dengan ketinggian 1–10  cm  dan  tidak  hilang  bila  ditambahkan  1 tetes  HCl  2N  menandakan  bahwa  ekstrak  yang diuji mengandung saponin.
6. Uji  karotenoid  (Senthilmurugan et  al. 2013), sebanyak  1  ml  ekstrak  dicampur  dengan  5  ml kloroform  dalam  tabung  reaksi,  kemudian dikocok  lalu  disaring  kemudian  ditambahkan asam  sulfat  85%.  Jika  terbentuk  warna  biru  di atas  permukaan  maka  menunjukkan  adanya karotenoid.
7. Uji  Kumarin  (Senthilmurugan  et  al.  2013). Sebanyak 1 ml larutan ekstrak dicampur dengan beberapa  tetes  NaOH  kemudian  ditambahkan alkohol  jika  terbentuk  warna  kuning  maka menunjukkan adanya kumarin.
Metode  uji  antioksidan  yang  digunakan berdasarkan  metode  Shimizu et  al. (2001).  Uji dilakukan  dengan  menggunakan  UV/VIS  1200 spektrofotometer  dengan  temperatur  25  °C. Disiapkan  tabung  reaksi  kemudian  sebanyak  33  μl ekstrak  daun  yang  telah  dilarutkan  dalam  DMSO dimasukkan  dalam  tabung,  ditambahkan  467  μl etanol,  lalu  dihomogenkan  antara  pelarut  dan sampel,  kemudian  ditambahkan  500  μl  DPPH (konsentrasi  0,0027  %  pada  pelarut  etanol)  setelah itu  diinkubasi  selama  20  menit  dalam  suhu  ruang tanpa  cahaya.  Sampel  yang  telah  diinkubasi dimasukkan  ke  dalam  cuvette  untuk  melakukan perhitungan peredaman DPPH menggunakan
spektrofotometer. Aktivitas antioksidan dapat ditentukan  melalui  dekolorisasi  dari  DPPH  pada panjang gelombang 514 nm.
Dimana:
 ABS control = Nilai absorbansi tanpa ekstrak
 ABS sampel = Nilai absorbansi dengan ekstrak
Pengujian Antibakteri dilakukan dengan metode  pewarnaan  menggunakan  2,  3,  5- triphenyl tetrazolium  chloride (TTC).  Bakteri  yang  digunakan adalah P. acnes , S. mutans , S. sobrinus , dan E.coli . Sebelum dilakukan pengujian antibakteri, dipersiapkan  sampel  uji  dengan  membuat  stok sampel  uji.  Sampel  uji  ditimbang  sebanyak  5  mg, kemudian ditambahkan etanol 40 %   sebanyak  1 mL untuk  membuat  stok  dengan  konsentrasi  sebesar 5000 ppm.
Media bakteri yang digunakan dalam pengujian ini  adalah  media  cair  dan  padat.  Sebanyak  8  gram nutrient  broth ,  10  gram  glukosa,  dan  20  gram  agar dimasukkan  ke  dalam  1000  ml  akuades dan dididihkan sampai melarut sempurna, lalu dimasukkan  ke  dalam  gelas  piala  untuk  disterilisasi dengan autoclave pada suhu 121 o C selama 20 menit (Thiel, 1999).
Bakteri  yang  digunakan  dalam  pengujian  ini adalah P.  acnes , S.  mutans , S. sobrinus ,  dan E.  coli . Bakteri  dimasukkan  ke  dalam  akuades  lalu dihomogenkan.  Bakteri  yang  digunakan  disesuaikan dengan  standar Mc.  Farland skala  0,5  atau  pada transmitan 74 % dengan panjang gelombang 600 nm (Prolab Diagnostics 2012)
Metode  uji  antibakteri  yang  digunakan berdasarkan metode Elkhair et al . (2010) yang sudah dimodifikasi.  Stok  sampel  dimasukkan  ke  dalam microplate  96  wells sebanyak  50  μl  dan  dilakukan pengenceran  dengan  hasil  konsentrasi  akhir  pada well  1250  –  312.5  µg/ml.  Kemudian  ditambahkan media cair nutrient  broth sebanyak 100 μl dan 50 μl larutan  bakteri  yang  telah  disuspensi  dengan akuades .  Microplate yang  telah  diinokulasi  dengan bakteri  diinkubasi  selama  24  jam  pada incubator dengan suhu 37 °C. Satu jam sebelum proses inkubasi selesai,  ditambahkan  50  μl  larutan  2,  3,  5- triphenyl tetrazolium  chloride (TTC).  Proses  akhir  dari
Tabel 1. Rendemen Ekstrak dengan Pelarut n -Heksana, Etil asetat dan Etanol
No Pelarut Berat Sampel Awal (gram) FK* Berat Ekstrak (gram)  Rendemen (%) 1 n-heksana 180.12 0.86 1.78 0.99 2 Etil Asetat 180.12 0.86 5.18 2.88 3 Etanol 180.12 0.86 22.09 12.26 *FK = Faktor Kelembaban Tabel 2. Kandungan Fitokimia Ekstrak Daun P. pinnata No  Ekstrak dengan pelarut pengekstraksi Fitokimia Alk Flav Terp Tan Sap Ster Krt Kum 1 N - Heksana + + + + - - - + 2 Etil Asetat + + - + - + - + 3 Etanol + + + + + - - +
Ket: Alk: Alkaloid; Flav: Flavonoid; Terp: Terpenoid; Sap: Saponin; Ster: Steroid; Krt: Karotenoid; Kum: Kumarin; + : Ada. - : Tidak ada
pengujian  ini  adalah  timbulnya  warna  merah  yang mengindikasikan masih hidupnya bakteri yang diuji ke masing–masing sampel. Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) dilihat dari well pertama yang tidak berwarna merah.
Setelah  mengetahui  KHM  dari  sampel  uji, Selanjutnya  dilakukan  pengujian  antimikroba  untuk mengetahui  konsentrasi  bunuh  minimum  (KBM)  dari sampel uji. Dimasukkan sebanyak 20 ml media padat ke dalam cawan petri. Kemudian dimasukkan sampel yang sudah diketahui KHM-nya ke dalam media padat dengan  metode streak  plate. Kemudian  diinkubasi selama 18 jam. Proses akhir dari pengujian ini adalah tumbuh  tidaknya  bakteri  yang  sudah  diketahui  KHM untuk  mengetahui  sampel  uji  memiliki  daya  bunuh terhadap bakteri.

## Hasil dan pembahasan
Metode  ekstraksi  yang  digunakan  adalah maserasi bertingkat (non polar - polar) menggunakan pelarut n -heksana,  etil  asetat  dan  etanol.  Hal  ini bertujuan agar zat  aktif  yang ada dalam sampel bisa diekstraksi  secara  maksimal.  Selain  itu  perbedaan pelarut yang digunakan bertujuan untuk mengekstraksi  zat  aktif  yang  berbeda  polaritasnya sehingga  bisa  diekstraksi  dengan  baik.  Serbuk direndam  selama  2  x  24  jam  kemudian  dipekatkan hingga diperoleh ekstrak kasar.
Hasil ekstraksi dari daun P. pinnata menunjukkan  nilai  rendemen  tertinggi  sebesar 12.26%  dengan  menggunakan  pelarut  etanol. Sementara  itu  untuk  rendemen  terendah  terdapat
pada  ekstrak n -heksana  dengan  nilai  rendemen 0,99%.  Maserasi  menggunakan  pelarut  etanol  dinilai lebih  menguntungkan  karena  sifat  etanol  yang mudah melarutkan senyawa yang bersifat non-polar, semi-polar  dan  polar  (Arifin et  al. 2006).  Hal  inilah yang  menyebabkan  rendemen  tertinggi  ekstrak  ada pada pelarut etanol.
Metabolit sekunder adalah senyawa kimia yang umumnya  mempunyai  kemampuan  bioaktivitas  dan berfungsi  sebagai  pelindung  tumbuhan  tersebut  dari gangguan,  misalnya  gangguan  hama.  Senyawa metabolit  sekunder  telah  banyak  digunakan  sebagai zat warna, racun, aroma makanan, obat–obatan dan sebagainya  serta  sangat  banyak  jenis  tumbuh– tumbuhan yang digunakan obat–obatan yang dikenal sebagai  obat  tradisional  sehingga  diperlukan penelitian  tentang  penggunaan  tumbuh–tumbuhan berkhasiat  dan  mengetahui  senyawa  kimia  yang berfungsi  sebagai  obat.  Identifikasi  kandungan metabolit  sekunder  merupakan  langkah  awal  yang penting dalam penelitian pencarian senyawa bioaktif baru  dari  bahan  alam  yang  dapat  menjadi  prekursor bagi  sintesis  obat  baru  atau  prototipe  obat beraktivitas tertentu (Rasyid 2012).
Seluruh  ekstrak  daun P  pinnata mengandung alkaloid.  Tanaman  famili Sapindaceae salah  satu kategori tumbuhan berbuah yang memiliki rasa pahit pada  bagian  daun.  Hal  ini  diduga  terkait  dengan adanya  kandungan  alkaloid  pada  tumbuhan  famili Sapindaceae .  Astarina et  al. (2013)  mengatakan bahwa  hampir  seluruh  alkaloid  berasal  dari tumbuhan  dan  ditemukan  dalam  berbagai  bagian
Kuspradini et al. tanaman.
Menurut Aniszewki (2007), alkaloid merupakan senyawa  yang  memiliki  aktivitas  antimikroba.  yaitu menghambat  esterase  dan  juga  DNA  dan  RNA polimerase.  juga  menghambat  respirasi  sel  dan berperan  dalam  interkalasi  DNA.  Selain  itu.  alkaloid adalah  senyawa  kimia  organik  yang  mengandung nitrogen  heterosiklik  dan  kebanyakan  dari  senyawa ini  bersifat  toksik/beracun  serta  tidak  memiliki  bau yang  sedap.  Alkaloid  dapat  meningkatkan  serapan nutrisi dan melancarkan peredaran darah. mengurangi  rasa  sakit  dan  menstimulasi  sistem syaraf.  Senyawa  alkaloid  juga  dapat  digunakan sebagai  anti  bakteri  dan  anti  jamur  (Rizwana et  al. 2010).
Flavonoid  merupakan  grup  fenolik  yang tersebar  secara  luas  di  dalam  tumbuhan.  berpotensi dan  memiliki  aktivitas  anti  –  kanker  yang  tinggi. Flavonoid  juga  telah  terbukti  diketahui  sebagai senyawa  dengan  efek  farmakologi  yang  cukup  tinggi misalnya  sebagai  antibakteri.  antioksidan.  anti- inflamasi  dan  anti  jamur  pada  salah  satu  metabolit sekundernya (Mbadianya et al. . 2013; Rahimah et al.. 2013).
Disebutkan  dalam  Harborne  (1987)  bahwa tannin terdapat luas dalam tumbuhan berpembuluh. sedangkan  dalam  angiospermae  terdapat  dalam jaringan  kayu.  Tannin  yang  terdapat  dalam  tanaman biasanya  dipakai  sebagai  pewarna  alami.  Kebutuhan pewarna  alami  dipenuhi  dari  beberapa  tanaman diantaranya  adalah:  alpukat  ( Parsea  america  mill ). cengkeh  ( Eugenia  aromatica ).  jambu  ( Jambosa densiflora ).  kunyit  ( Curcuma  domestica ).  srikaya ( Annona  squamosa ).  delima  ( Punica  granatum )  dan lain sebagainya (Martono et al. 2012).Pada pengujian saponin.  hanya  pada  ekstrak  etanol  daun P.  pinnata saja  yang  positif  saponin.  Dalam  Padmasari et  al (2013)  menyebutkan  saponin  merupakan  metabolit sekunder  yang  sangat  familiar  untuk  proses  glikolisis dan merupakan senyawa aktif permukaan yang dapat menimbulkan  busa  jika  dikocok  dalam  air.  Hal tersebut terjadi karena saponin memiliki gugus polar dan non polar yang akan membentuk misel pada saat misel  terbentuk  maka  gugus  polar  akan  menghadap keluar  dan  gugus  non  polar  akan  menghadap  ke dalam.  Keadaan  inilah  yang  akan  tampak  seperti busa.  Selain  itu  juga  karena  gugus  polar  menghadap
keluar. hal ini menyebabkan senyawa saponin mudah ekstraksi di pelarut yang bersifat polar seperti etanol. Rizwana et  al. (2010)  juga  melaporkan  bahwa senyawa  ini  dipercaya  dapat  mengkontrol  kolesterol pada  proses  diet.  dan  juga  digunakan  sebagai  obat beberapa penyakit kulit (seperti ruam). Saponin juga bisa  digunakan  sebagai  anti  –  inflamasi  serta digunakan untuk proses penyembuhan pada penyakit tuberkolosis.
Senyawa triterpenoid biasanya mudah diisolasi jika  terbentuk  minyak  atsiri.  Hal  ini  sejalan  dengan pendapat  Lenny  (2006)  yang  menyebutkan  bahwa triterpenoid adalah komponen – komponen tumbuhan  yang  mempunyai  bau  dan  dapat  diisolasi dari  bahan  nabati  dengan  penyulingan  disebut sebagai minyak atsiri. Dalam Mbadianya et al . (2013) melaporkan  bahwa  steroid  adalah  senyawa  yang memiliki  aktivitas  antibakteri  dan  merupakan senyawa  yang  memiliki  peranan  penting  dalam perkembangan hormon.
Pada  pengujian  kandungan  karotenoid.  semua ekstrak  tidak  menunjukkan  adanya  kandungan senyawa  karotenoid.  Berbeda  dengan  karoteniod. semua  ekstrak  daun P  pinnata mengandungg kumarin.  Isnawati et  al .  (2008)  melaporkan  bahwa kumarin memiliki aktivitas biologis diantaranya dapat menstimulasi pembentukan pigmen kulit, mempengaruhi  kerja  enzim,  anti-koagulan  darah, antimikroba dan menunjukkan aktivitas menghambat efek karsinogen. Selain itu senyawa turunan kumarin polisiklik  aktif  sebagai  anti  karsinogen  yang disebabkan hidrokarbon aromatik polisiklik karsinogen seperti 6 – metil (α) piran.
Dalam  pengujian  antioksidan  masing–masing ekstrak  digunakan  spektrofotometer  UV-Vis  untuk melihat serapan DPPH pada panjang gelombang 514 nm.  Pengujian  yang  dilakukan  menggunakan  asam askorbat  (Vitamin  C)  sebagai  kontrol  positif. Pengujian  antioksidan  menggunakan  3  jenis  pelarut dengan konsentrasi berturut – turut adalah 100 ppm. 50  ppm  dan  25  ppm.  Adapun  hasil  dari  masing  – masing  pengujian  yang  telah  dilakukan  dapat  dilihat pada  Tabel  3.  Diantara  ketiga  ekstrak  yang  diuji. ekstrak  etanol P.  pinnata memperlihatkan  nilai persen  peredaman  DPPH  yang  paling  tinggi.  Nilai aktivitas  tertinggi  diperoleh  pada  ekstrak  etanol dengan konsentrasi 100 ppm dengan nilai 90.38%.
Aktivitas antioksidan dan antibakteri ekstrak daun Pometia Pinnata
Tabel 3. Peredaman Radikal Bebas DPPH dari Ekstrak Daun P. pinnata Sampel Konsentrasi (μg/mL) Absorban % Peredaman DPPH DMSO (-) Sampel uji Vitamin C 100 0.378 0.005 98.59 ± 0.004 50 0.004 98.85 ± 0.002 25 0.012 96.73 ± 0.004 Ekstrak n -Heksana 100 0.378 0.148 60.81 ± 0.028 50 0.233 38.39 ± 0.014 25 0.288 23.74 ± 0.022 Ekstrak Etil Asetat 100 0.378 0.115 69.55 ± 0.010 50 0.112 70.34 ± 0.027 25 0.144 61.96 ± 0.003 Ekstrak Etanol 100 0.378 0.036 90.38 ± 0.002 50 0.041 89.23 ± 0.004 25 0.041 89.23 ± 0.002
Dalam  Yuhernita et  al. (2011)  menjelaskan bahwa  radikal  bebas  dikenal  sebagai  faktor  utama dalam kerusakan biologis. dan DPPH digunakan untuk mengevaluasi aktivitas peredaman radikal bebas dari suatu antioksidan alami. DPPH yang merupakan suatu molekul  radikal  bebas  dengan  warna  ungu  dapat berubah menjadi senyawa yang  stabil dengan warna kuning  oleh  reaksi  dengan  antioksidan.  dimana antioksidan memberikan satu elektronnya pada DPPH sehingga  terjadi  peredaman  radikal  bebas  DPPH.  Uji DPPH  merupakan  metode  yang  mudah  untuk menapis sejumlah molekul antioksidan karena reaksi dapat  diamati  secara  visual.  dan  juga  bisa  dihitung intensitasnya menggunakan spektofotometri sederhana. P. pinnata mengandung flavonoid. tannin. dan  saponin.  Hal  ini  sejalan  dengan  pendapat Rahimah et  al. (2013)  yang  menyebutkan  bahwa daun P.  pinnata diketahui  mengandung  senyawa kimia  berupa  flavonoid.  tannin.  dan  saponin. Ditambahkannya pula bahwa senyawa flavonoid yang telah diisolasi merupakan golongan auron dengan Rf = 0.51.
Selain  itu.  ditemukan  juga  adanya  senyawa yang  mengarah  pada  golongan  saponin  dan  tannin. Suedee  (2012)  yang  menginvestigasi ekstrak  daun P. pinnata dan M.  elengi mendapatkan  bahwa P. pinnata memiliki  senyawa  aktif proanthocyanidin A2 yang mampu menghambat virus HIV-1 IN dengan IC 50
sebesar  30.1  μM.  Adapun  Mataputun et  al (2013) juga  melaporkan  bahwa  ekstrak  etanol  dari  kulit batang P.  pinnata memiliki  aktivitas  inhibitor  α- glukosidase  berturut  turut  sebesar  19.56;  24.79  dan 100  %  pada  konsentrasi  5;  12.5;  25;  dan  50  ppm. Ekstrak  kulit  batang P.  pinnata juga  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus aureus sebesar  14.61 mm  (Ngajow et  al. 2013).  Dari hasil  analisis  fitokimia  juga  menunjukkan  bahwa ekstrak  etanol  kulit  batang  matoa  mengandung senyawa flavonoid. tannin. triterpena dan saponin.
Tabel  4  menunjukkan  hasil  yang  diperoleh pada  pengujian  antibakteri  untuk  menentukan  KHM dan  KBM  menggunakan  metode  dilusi  dan  difusi. Hasil  yang  didapat  menunjukkan  bahwa  semua ekstrak dari berbagai pelarut menunjukkan nilai KHM yang  sama  (312.5  μg/mL)  terhadap  bakteri S. mutants . S.  sobrinus .  dan E.  coli kecuali  ekstrak  n- heksana. Nilai KHM pada bakteri P. acne menunjukan nilai  yang  sama  dari  berbagai  ekstrak  dengan  nilai 1250  μg/mL.  Hasil  KBM  juga  menunjukkan  bahwa semua ekstrak membutuhkan konsentrasi lebih besar dari  1250  μg/mL  untuk  membunuh  bakteri  yang tumbuh.  Salni et  al (2011)  mengungkapkan  bahwa berdasarkan  nilai  KHM  dan  KBM  yang  dimilikinya. maka suatu ekstrak yang memiliki potensi antibakteri dapat  dibedakan  menjadi  4  (Tabel  5).  Dilihat  dari klasifikasi  menurut  Salni  et  al  (2011).  maka  hampir
Tabel 4. Konsentrasi Hambat dan Bunuh Minimum dari Ekstrak Daun P. pinnata
No Pengukuran Ekstrak Bakteri S. mutans S. sobrinus P. acne E. coli 1 KHM (µg/ml) n -Heksana 1250 312.5 1250 312.5 Etil asetat 312.5 312.5 1250 312.5 Etanol 312.5 312.5 1250 312.5 Kontrol + 312.5 312.5 312.5 312.5 2 KBM (µg/ml) n -Heksana >1250 >1250 >1250 >1250 Etil asetat >1250 >1250 >1250 >1250 Etanol >1250 >1250 >1250 >1250 Kontrol + 312.5 312.5 312.5 312.5
Keterangan : KHM : Konsentrasi Hambat Minimum. KBM : Konsentrasi Bunuh Minimum
semua ekstrak yang diuji memiliki kemampuan cukup kuat  dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri S. mutan . S.  sobrinus .  dan E.  coli.  namun  tidak  ada aktivitas dalam menghambat pertumbuhan bakteri P. acne. Pemberian  antibakteri  dalam  jumlah  yang berlebihan dan secara terus–menerus akan menyebabkan sel bakteri menjadi resisten.
Pengujian  yang  dilakukan  untuk  mengetahui  nilai KHM dari suatu sampel uji antibakteri sangat penting. karena  selain  bertujuan  untuk  meningkatkan efektivitas  dari  senyawa  antibakteri  tersebut  juga bertujuan  untuk  mencegah  timbulnya  masalah resistensi  bakteri  karena  penggunaan  dosis  yang berlebihan  sehingga  sel  bakteri  lama  kelamaan  akan menjadi  kebal.  Keberadaan  metabolit  sekunder menjadi  faktor  penting  melalui  mekanismenya terhadap  bakteri  mekanisme  kerja  tannin  sebagai antibakteri  adalah  menghambat  enzim reverse transcriptase  dan  DNA  topoisomerase  sehinnga  sel bakteri  tidak  dapat  terbentuk.  tannin  juga  memiliki aktivitas  antibakteri  yang  berhubungan  dengan kemampuannya menginaktifkan enzim. dan mengganggu  transport  protein  pada  lapisan  sel. Tannin  juga  mempunyai  target  pada  polipeptida dinding  sel  sehingga  pembentukan  dinding  sel menjadi tidak sempurna. sehingga hal ini menyebabkan  bakteri  menjadi  lisis  karena  tekanan osmotik  maupun  fisik  yang  akan  menyebabkan bakteri mati (Ngajow et al. 2013).
Senyawa  terpenoid  juga  diketahui  aktif melawan  bakteri.  tetapi  mekanisme  antibakterial triterpenoid  masih  belum  benar  –  benar  diketahui. Aktivitas  antibakteri  terpenoid  diduga  melibatkan pemecahan  membran  oleh  komponen  –  komponen lipofilik.  Selain  itu.  senyawa  fenolik  dan  terpenoid
memiliki  target  utama  yaitu  membran  sitoplasma yang  mengacu  pada  sifat  alamnya  yang  hidrofobik (Ngajow et al. 2013).
Dari hasil penelitian. selain memiliki kandungan metabolit  sekunder  seperti  alkaloid.  tannin.  dan kumarin;  ekstrak  n-heksana.  etil  asetat  dan  etanol dari  daun P.  pinnata dengan  konsentrasi  100  ppm mengandung  antioksidan  yang  tinggi  dengan  nilai yang hampir sama dengan antioksidan vitamin C pada konsentrasi  25  ppm.  Aktivitas  antimikroba  juga ditunjukkan  pada  ketiga  ekstrak  tersebut  dengan kemampuan  yang  cukup  kuat  melawan  bakteri S. mutans.  S.  sobrinus.  E.  coli. Namun  kurang  mampu menghambat  pertumbuhan P.  acnes. Ekstrak  n- heksana  juga  tidak  memiliki  aktivitas  dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri S.  mutans. Dengan  demikian  dapat  diambil  kesimpulan  bahwa daun P.  pinnata berpotensi  dijadikan  bahan  dan diolah menjadi antioksidan dan antibakteri alami.
Tabel 5. Klasifikasi Penghambatan Bakteri (Salni et al
2011) No Golongan Keterangan 1 < 100 μg/mL Sangat kuat 2 100 - 500 μg/mL Cukup kuat 3 500 - 1.000 μg/mL Lemah 4 > 1000 μg/mL Tidak ada aktivitas Daftar Pustaka Aniszewki T.  2007. Alkaloid-secrets of  life. Amsterdam: Elsevier. pp. 187
Arifin. Helmi. Aggraini. Nelvi. Handayani. Dian. Rasyid. Roslinda.  2006. Standarisasi  Ekstrak  Etanol
Aktivitas antioksidan dan antibakteri ekstrak daun Pometia Pinnata 33
daun Eugenia Cumini Merr . J. Sains Tek. Far. 11 (2).
Astarina  NWG,  Astuti  KW,  Warditiani  NK.  2013. Skrining  Fitokimia  Ekstrak  Metanol  Rimpang Bangle Zingiber  purpureum  Roxb . Jurnal Farmasi Udayana .
Elkhair EA, Fadda H, Mohsen UA. 2010. Antibacterial Activity  and  Phytochemical  Analysis  of  Some Medicinal  Plants  from  Gaza  Strip-Palestine. Journal of Al Azhar University.
Ganiswarna SG. 1995. Farmakologi dan Terapi . Ed 4. Jakarta : Fakultas Kedokteran UI. Harborne JB. 1987. Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern  Menganalisis  Tumbuhan .  Bandung. Penerbit ITB. Holt  JC.  1994. Bergey’s  Manual  of  Determinative Bacteriology .  Edisi  ke-9.  Williams  and  Wilkins Company.
Isnawati  A,  Muhadar  H,  Kamilatunisah.  2008.  Isolasi dan  Identifikasi  Senyawa  Kumarin  dari Tanaman Artemisia  annua  L . Artikel  Media Litbang Kesehatan. Vol. 18 (3):107 – 118. Kokate  CK.  2001. Pharmacognosy. Edisi  ke 16 . Mumbai (IN) : Niali Prakasham. Kurdi  A.  2010. Tanaman  Herbal  Indonesia;  Cara Mengolah  dan  Manfaatnya  Bagi  Kesehatan . Jakarta (ID): Rineka Cipta.
Kuspradini  H,  Susanto  D,  Ritmaleni,  Mitsunaga  T. 2012. Phytochemical and Comparative Study of Antimicrobial  Activity  of Lepisanthes  amoena Leaves  Extract. Journal  of  Biology  Agriculture and Healthcare . 2 (11):80–86.
Lenny  S.  2006. Senyawa  Terpenoida  dan  Steroida . Karya  Ilmiah.  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan  Alam  Universitas  Sumatera Utara.
Lunga PK,  Qin X,  Yang XW,  Kuiate JR,  Du ZZ,  Gatsing D.  2014. Antimicrobial  steroidal  saponin  and oleanane  –  type  triterpenoid  saponins  from Paullinia  pinnata . BMC  Complementary  and Alternative Medicine . 14: 369.
Martono  T,  Haryono  G,  Gustinah  D,  Putra  FA.  2012. Ekstraksi Tannin Sebagai Bahan Pewarna Alami dari  Tanaman  Putri  Malu (Mimosa  Pudica)
Menggunakan Pelarut Organik. Reaktor .
14(1):39 – 45.
Mataputun  SP,  Rorong  JA,  Pontoh  J.  2013. Aktivitas Inhibitor α -Glukosidase  Ekstrak  Kulit  Batang
Matoa (Pometia  pinnata.  Spp.) sebagai  Agen Antihiperglikemik. Jurnal  MIPA  Unsrat  Online . 2(2): 119 – 123.
Mbadianya  JI,  Echezona  BC,  Ugwuoke  KI,  Wokocha RC.  2013.  Phytochemical  Constituens  of  Some Medicinal  Plants. International  Journal  of Science and Research . 2(4):18 – 22.
Ngajow  M,  Abidjulu  J,  Kamu  VS.  2013.  Pengaruh
Antibakteri  Ekstrak  Kulit  Batang  Matoa (Pometia pinnata) terhadap Bakteri
Staphylococcus  aureus  secara  in  vitro. Jurnal MIPA UNSRAT online . 2(2):128 – 132.
Padmasari  PD.  Astuti  KW,  Warditiani  NK.  2013. Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol 70 % Rimpang Bangle Zingiber  purpureum  Roxb . Jurnal Farmasi Udayana .
Prolab  Diagnostics.  2012.  McFarland  Standards. Product  Code  SD2350.  SD2300.  SD2301. SD2302. SD2303. SD2304
Rahmi,  Sayekti  E,  Jayuska  A.  2013.  Karakterisasi Senyawa  Flavonoid  Hasil  Isolat  dari  Fraksi  Etil Asetat Daun Matoa Pometia pinnata. J. R. Frost &  G.  Frost. Jurnal  Kimia  Khatulistiwa .  2(2):84– 89.
Rajasekaran  A,  Kalaiselvan  V,  Sarathikumar  N, Kalaivani M. 2013.  Simultaneous Estimation of Luteolin  and  Apigenin  in  Methanolic  Leaf Extract  of Cardiospermum  Halicacabum by HPLC. International  Research  Journal  of Pharmacy . 4 (7):109-113
Rasyid  A.  2012.  Identifikasi  Senyawa  Metabolit
Sekunder  Serta  Uji  Aktivitas  Antibakteri  dan Antioksidan Ekstrak Metanol Teripang
Stichopus  hermanii. Jurnal  Ilmu  dan  Teknologi Kelautan Tropis . 4(2):360 – 368.
Rina  S.  2011.  Formulasi  Krim  ekstrak  Daun  Pepaya (Carica  papaya  Linn) dan  Madu  sebagai  Anti jerawat  (Antiacne)  yang  diuji  pada  Bakteri. [Skripsi].  Bandung  (ID):  Universitas  Islam Bandung.
Rizwana  JN,  Nazlina  I,  Razehar  ARM,  Noraziah  AZS, Ling CY, Muzaimah SAS, Farina AH, Yaacob WA, Ahmad  IB,  Din  LB.  2010. A Survey  on Phytochemical and Bioactivity of Plant Extracts from  Malaysian  Forest  Reserves. Journal  of Medicinal Plants Research . 4(3):203 – 210. Salni,  Marisa  H,  Mukti  RW.  2011.  Isolasi  Senyawa Antibakteri  Dari  Daun  Jengkol Pithecolobium
Kuspradini et al. lobatum  Benth dan  Penentuan  Nilai  KHM-nya. Jurnal Penelitian Sains . 14 (1): 14109-4138 Senthilmurugan  G,  Vasanthe  B,  Suresh  K.  2013.
Screening and Antibacterial Activity Analysis of some Important Medicinal Plants . International Journal  of  Innovation  and  Applied  Studies.  2 (2):146-152.
Shimizu  K,  Kondo  R,  Sakai  K,  Takeda  N,  Nagahata  T, Oniki T. 2001. Novel Vitamin E Devirate with 4- subsituted  Resorcinol  Moiety  has  Both Antioxidant and Tyrosinase Inhibitory Properties. Lipids . 36:1321–1325.
Sudarmono. 2000. Matoa ( Pometia pinnata J. R. Forst &  G.  Forst)  :  Keragaman  Jenis  dan  Potensi. Proseding Seminar Sehari menggali Potensi dan Meningkatkan  Prospek  Tanaman  Hortikultura Menuju Ketahanan Pangan. Kebun Raya Bogor. LIPI.
Suedee  A. 2012. Phytocemichal Studies  of Mimusops elengi  and  Pometia  pinnata  Leaf  Extract  with Anti-HIV-1  Integrase  Activity [thesis].  Songkla (TH):Prince of Songkla University.
TAPPI  T264  om-88.  1988.  Preparation  of  Wood  for Chemical  Analysis.  in  TAPPI  Test  Methode. Atlanta. GA :  Technical Association of the Pulp and Paper Industry. 1997.
Thiel T. 1995. Science In the Real World . Microbes in Action.  Department  of  Biology.  University  of Missouri. St. Louis.
Thitilertdecha N, Teerawutgulrag A, Rakariyatham N. 2010. Antioxidant and antibacterial activities of Nephelium lappaceum L. extracts. Food Science and Technology . 41:2029-2035.
Udhayasankar MR, Danya U, Punitha D, Arumugasamy  K,  Shalimol  A.  2013.  In  vitro Anti-bacterial Activity of Methanolic Extract of Cardiospermum  canescens  – A  Wild  Medicinal Plant. International Journal of Herbal Medicine . 1(3):73–75.
Yuhernita, Juniarti. 2011. Analisis Senyawa Metabolit Sekunder  Dari  Ekstrak  Metanol  Daun  Surian Yang Ber Potensi Sebagai Antioksidan. Makara Sains. 15(1):48-52.