Studi Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanolik, Ekstrak Metanol dan Infus Daun Bayam Duri ( Amaranthus spinousus ) dan Herba Cakar Ayam ( Sellaginella doederleinii Hieron) terhadap Bakteri Penyebab Pneumonia
Antibacterial Activity Studies Ethanolic Extract, Methanol  Extract and The Infusion of Bayam Duri (Amaranthus spinousus) Leaves and Cakar Ayam (Sellaginella doederleinii Hieron ) Herbs toward Bacteria Caused Pneumonia

## OPSTARIA SAPTARINI
Fakultas Farmasi, Universitas Setia Budi Jln. Letjen Sutoyo-Mojosongo Surakarta-57127 Telp. 0271-852518
(Diterima 18 Februari 2011, disetujui 2 Maret 2011)

## Abstrak
Pneumonia merupakan penyakit sistem pernapasan dimana alveoli mengalami peradangan dan terjadi penimbunan cairan. Ada banyak bakteri penyebab penyakit pneumonia antara lain seperti yang  digunakan  dalam  pengujian  ini  adalah Streptococcus  pneumonia,  Klebsiella  pneumonia, Streptococcus haemolyticus alpha dan beta . Tanaman yang digunakan dalam penelitian ini adalah herba cakar ayam dan daun bayam duri. Metode mikrodilusi digunakan untuk pengujian aktivitas antibakterinya. Pengujian ini dilakukan terhadap ekstrak etanol, ekstrak methanol dan infuse dari daun  bayam  duri  dan  cakar  ayam  dengan  konsentrasi  yang  sama  dengan  konsentrasi  terbesar adalah 1024 μg/ml konsentrasi berikutnya berdasarkan pengenceran terus dilakukan sampai pada kolom ketiga yang akan memiliki konsentrasi terkecil. Pelat diinkubasi pada suhu 37°C selama 24 jam kemudian diamati bagian yang jernih (tidak ada pertumbuhan mikroba). Konsentrasi terkecil di mana tidak terlihat pertumbuhan mikroba ditetapkan sebagai MIC (NCCLS 2003). Berdasarkan pengujian aktivitas antibakteri terhadap infus, ekstrak methanol dan ekstrak etanol daun bayam duri dan herba cakar ayam, dengan metode broth microdillution , terlihat bahwa ekstrak yang paling aktif adalah ekstrak etanol daun bayam duri dan ekstrak etanolik herba cakar ayam pada bakteri Streptococcus  Pneumonia,  Streptococcus  haemolyticus  alpha dan Streptococcus  haemoyiticus beta dan Klebsiella pneumonia meskipun efeknya lebih rendah dibandingkan dengan obat standart tetrasiklin.
Kata kunci : Aktivitas antibakteri, mikrodilusi, daun bayam duri dan herba cakar ayam, tetrasiklin, bakteri pneumonia
ISSN: 1693-8615 Jurnal Farmasi Indonesia, Maret 2011, hal 50-56

## Abstract
Pneumonia is a respiratory system disease which the alveoli become inflamed and have fluid accumulation. Pneumonia is a serious infection that affects many children and adults in a fundamental way around the world. There are many bacteria that cause diseases such as pneumonia, among others, are used in this test are Streptococcus pneumonia , Klebsiella pneumonia , Streptococcus haemolyticus alpha and beta . Plants used in this study are bayam duri leaves and cakar ayam herbs.
Mikrodilusi  methods  used  for  testing  antibacterial  activity.  The  test  is  performed  to  extract ethanol, methanol extracts and infusions of leaves patikan kebo and herbaceous rumput mutiara with the same concentration with the largest concentration is 1024 ug / ml following concentration by  dilution  continued  until  the  third  column  will  have  the  smallest  concentration.  Plates  were incubated at 37 ° C for 24 h and then observed the clear (no microbial growth). The smallest concentration at which no visible microbial growth defined as the MIC (NCCLS, 2003).
Based  on  the  testing  of  antibacterial  activity  of  the  infusion,  methanol  extract  and  ethanol extract of leaves of bayam duri leaves and cakar ayam herbs, with the broth method microdillution, it appears that the most active extracts were ethanolic extract of bayam duri leaves and ethanolic extract cakar ayam herbs on the bacteria Streptococcus pneumoniae, Streptococcus haemolyticus alpha and Streptococcus haemoyiticus beta, and Klebsiella pneumonia although the effect is lower than the standard drug tetracycline
Keywords :  antibacterial  activity,  mikrodilusi, Amaranthus  spinousus , Sellaginella  doederleinii Hieron, tetracycline, bacterial pneumonia

## Pendahuluan
Pneumonia merupakan masalah kesehatan di dunia karena angka kematiannya tinggi, tidak saja di negara berkembang, tapi juga di negara maju  seperti  AS,  Kanada  dan  negara-negara Eropa. Di AS misalnya, terdapat dua juta sampai tiga  juta  kasus  pneumonia  per  tahun  dengan jumlah  kematian  rata-rata  45.000  orang.  Di Indonesia,  pneumonia  merupakan  penyebab kematian  nomor  tiga  setelah  kardiovaskuler dan  tuberkulosis.  Faktor  sosial  ekonomi  yang rendah mempertinggi angka kematian. Gejala pneumonia adalah demam, sesak napas, napas dan  nadi  cepat,  dahak  berwarna  kehijauan atau seperti karet, serta gambaran hasil ronsen
memperlihatkan kepadatan pada bagian paru. Kepadatan  terjadi  karena  paru  dipenuhi  sel radang dan cairan yang sebenarnya merupakan reaksi tubuh untuk mematikan luman.
Bakteri  penyebab  pneumonia  yang termasuk  dalam  bakteri  gram  positif  adalah strain  Streptococcus  dan  Staphylococcus, sedangkan  yang  termasuk  dalam  bakteri basil  gram  negatif  (enterik)  adalah Klebsiella pneumonia .  Yang  termasuk  dalam  bakteri Gram negatif non enterik adalah Pseudomonas aeruginosae,  Haemophilus  influenzae, and Moraxella  catharlis. Seringnya  penggunaan
obat antimikroba dan penggunaan antimikroba yang  kerap  kali  untuk  tujuan  profilaksis  telah dikaitkan  dengan  risiko  resistensi  terhadap antibiotik pada infeksi pneumokokus.
Frekuensi  resistensi  juga  meningkat  pada bakteri  yang  berbeda,  terutama  pada  negara- negara  berkembang  dimana  antimikroba dapat  tersedia  tanpa  resep.  Penelitian  terbaru menunjukkan  bahwa  penggunaan  obat antibiotika  yang  berlebihan  dan  tidak  tepat, khususnya  di  kalangan  pasien  perkotaan merupakan salah satu faktor pencetus resistensi (Hofmann et al 2009)
Pada penelitian ini menggunakan tanaman bayam duri dan cakar ayam. Tanaman ini di pilih dengan  alasan  secara  tradisional  berdasarkan pengalaman,  tanaman  obat  tersebut  dapat menyembuhkan  beberapa  penyakit  akibat infeksi  oleh  jamur  maupun  bakteri.  Hal  ini mengindikasikan  bahwa  dalam  tanaman  obat tradisional  terkandung  suatu  senyawa  yang mempunyai  bioaktivitas  sebagai  antibakteri atau  antijamur.  Selain  itu  secara  empiris tanaman  tersebut  digunakan  oleh  masyarakat luas  sebagai  obat  batuk,  menanggulangi sesak  napas  sampai  dengan  bronchitis.  dan beberapa dari tanaman tersebut juga telah diuji antibakteri  atau  antifungi  (Linsuwitri  2005; Depkes RI 1992; Anonim 2005)
Ekstrak dari tanaman yang akan diuji aktivitas antibakteri dengan metode mikrodilusi dibuat dengan  menggunakan  penyari  etanol  hingga diperoleh ekstrak yang kental sedangkan infuse dibuat dengan cara menambahkan air sebanyak 100  ml  kedalam  10  gram  serbuk  tanaman.
kemudian  dilakukan  uji  aktivitas  antibakteri dengan metode mikrodilusi.

## Metode Penelitian

## Bahan
Daun  bayam  duri  dan  herba  cakar  ayam, metanol,  etanol  96%,  tetrasiklin,  aquadest, asam  sulfat,  acetone,  toluena,  etil  asetat,. Media agar BHI, TSA, TSB, MHA, NA.

## Alat
Peralatan  maserasi,  alat  penguap  hampa udara  berputar,  neraca  analitik,  pipa  kapiler, krus silikat, cawan penguap, gelas piala, labu Erlenmeyer,  panic  infuse,  batang  pengaduk, pipet  tetes,  pipet  ukur,  pipet  volume, pipet automatik ,  cawan  petri,  jarum  ose,  bunsen, pelat  mikro  96  lubang,  tabung  reaksi,  tip, eppendorf, spatel, oven, vortex, alat swab dan inkubator.

## Mikroba Uji
Streptococcus  haemolyticus  Alpha dan Beta, Streptococcus pneumonia dan Klebsiella pneumonia diperoleh  dari  Laboratorium Diagnostik PT. Biofarma.

## Ekstraksi Simplisia
Serbuk  simplisia  ditimbang  sebanyak  200 gram,  dimaserasi  dengan  1000  mL  etanol  96 %  dalam  suatu  bejana  gelap.  Perendaman dilakukan  selama  3  hari  dengan  dilakukan pengocokan secara berkala. Residu dimaserasi kembali  dua  kali  dengan  etanol  96  %.  Filtrat
yang diperoleh disatukan kemudian dipekatkan dengan  alat  penguap  hampa  udara  berputar. Ekstrak  dipekatkan  di  atas  tangas  air  bersuhu 50°C sampai diperoleh ekstrak kental.

## Pembuatan Infuse Tanaman
Menambahkan aquadest sebanyak 100 ml ke dalam 10 gram serbuk tanaman, kemudian di panaskan dalam paci infuse selama 15 menit terhitung  setelah  suhu  mencapai  90  derajat celcius
Pengujian Aktivitas Antimikroba dengan Metode Broth Microdilution
Sebanyak 100 μL nutrient broth dimasukkan dalam  pelat  mikro  pada  kolom  pertama (sebagai  kontrol  negatif).  Suspensi  mikroba sebanyak 5 μL ditambahkan ke dalam 10 mL nutrient  broth kemudian  diaduk  dengan  alat vortex.  Sebanyak  100  μL  campuran  tersebut dimasukkan  dalam  pelat  mikro  pada  kolom kedua sampai kedua belas. Pada kolom kedua belas,  ditambahkan  100  μL  larutan  antibiotik atau  ekstrak  kemudian  dihomogenkan.  Dari kolom kedua belas, diambil 100 μL kemudian dipindahkan ke kolom kesebelas. Pengenceran terus  dilakukan  sampai  pada  kolom  ketiga yang akan memiliki konsentrasi terkecil. Pelat diinkubasi  pada  suhu  37°C  selama  24  jam kemudian diamati bagian yang jernih (tidak ada pertumbuhan  mikroba).  Konsentrasi  terkecil di  mana  tidak  terlihat  pertumbuhan  mikroba ditetapkan sebagai MIC (NCCLS 2003).
Sebanyak  5  μL  alikuot  dari  setiap  bagian yang  jernih  dipindahkan  dalam  nutrient  agar
dan  diinkubasi  pada  suhu  37°C  selama  24 jam  kemudian  diamati.  Konsentrasi  terendah di  mana  tidak  terlihat  adanya  pertumbuhan mikroba ditetapkan sebagai MBC.

## Hasil dan Pembahasan
Pada  awal  penelitian,  tumbuhan  yang digunakan  dideterminasi  untuk  mengetahui kebenaran identitas botani tumbuhan tersebut. Hasil  determinasi  tumbuhan  menunjukkan bahwa jenis tumbuhan adalah bayam duri dan herba  cakar  ayam.  Ekstraksi  yang  dilakukan dengan  menggunakan  pelarut  metanol,  air dan  etanol.  Kemudian  dilakukan  uji  aktivitas terhadap  bakteri Klebsiella  pneumonia , Streptococcus  haemolyticus  alpha dan beta serta Streptococcus pneumonia .
Etanol  merupakan  pelarut  universal  yang dapat menarik sebagian besar senyawa polar, sebagian  kecil  senyawa  semi  polar,  dan sebagian  kecil  senyawa  nonpolar  sehingga diharapkan  dapat  menarik  berbagai  senyawa dalam  simplisia.  Etanol  dapat  melarutkan alkaloid  basa,  minyak  menguap,  glikosida, kumarin,  flavonoid,  antrakinon,  steroid,  dan klorofil.  Lemak,  malam,  tanin,  dan  saponin hanya  sedikit  larut.  Etanol  dipertimbangkan sebagai  larutan  penyari  karena  lebih  selektif, kapang dan kuman sulit tumbuh dalam etanol 20% ke atas, tidak beracun, netral, absorbsinya baik, etanol dapat bercampur dengan air pada skala perbandingan dan panas yang diperlukan lebih sedikit .

## Tabel 1. Hasil penapisan fitokimia ekstrak
Golongan senyawa Ekstrak etanolik Bayam duri Cakar ayam tanin + + flavonoid + + kuinon - - saponin - - alkaloid - - steroid + - triterpenoid - - Keterangan: +  =  ekstrak mengandung golongan
senyawa    tersebut
-   =  ekstrak tidak mengandung golongan senyawa tersebut
Berdasarkan  penapisan  fitokimia  yang dilakukan,  ekstrak  etanol  bayam  duri mengandung  tannin,  flavonoid,  dan  steroid dan  herba  cakar  ayam  mengandung  tannin, flavonoid,  saponin,  kuinon,  alkaloid  dan steroid.
Tabel 2. Hasil penentuan nilai MIC dan MBC daun bayam duri Mikroba Ekstrak etanolik Ekstrak metanol Infus Tetrasiklin MIC MBC MIC MBC MIC MBC MIC MBC Str α 512 >1024 1024 >1024 1024 >1024 128 512 Str β 256 >1024 1024 >1024 512 >1024 64 128 Klb p 512 >1024 256 >1024 1024 >1024 128 512 Str p 256 >1024 512 >1024 1024 >1024 64 256 Tabel 3. Hasil penentuan nilai MIC dan MBC herba cakar ayam Mikroba Ekstrak etanolik Ekstrak metanol infus Tetrasiklin MIC MBC MIC MBC MIC MBC MIC  MBC Str α 256 1024 512 >1024 512 >1024 128 512 Str β 256 1024 512 >1024 >1024 >1024 64 128 Klb p 1024 1024 256 >1024 512 >1024 128 512 Str p 512 1024 1024 >1024 >1024 >1024 64 256 Keterangan: MIC  = Minimum Inhibitory Concentration MBC = Minimum Bactericidal Concentration Str α = Streptococcus haemolyticus α
Str β = Streptococcus haemolyticus β Klb p = Klebsiella pneumonia Dipl  = Streptococcus pneumonia
Hasil pengujian adanya aktivitas antimikroba terhadap  bakteri Streptococcus  haemolyticus tipe alpha dan beta, Streptococcus pneumonia dan Klebsiella  pneumonia dilakukan  dengan menggunakan  metode broth  microdilution . Dari  ke  dua  tanaman  yang  digunakan  pada pengujian  ini  yang  memberikan  aktivitas penghambatan  (MIC)  yang  paling  baik adalah  ekstrak  etanol  daun  bayam  duri yaitu  rata  rata  512  μg/ml  terhadap  bakteri Streptococcus  haemolyticus  tipe  alpha ,  512 μg/ml  terhadap  bakteri Klebsiella  pneumonia dan  konsentrasi  256  μg/ml  untuk  bakteri Streptococcus  haemolyticus  tipe  beta,  dan Streptococcus  pneumonia .  Sedangkan  pada ekstrak herba cakar ayam rata rata 512 μg/ml pada  bakteri  uji Streptococcus  haemolyticus tipe  beta  dan  Streptococcus  pneumonia dan rata  rata  konsentrasi  1024  μg/ml  terhadap bakteri Klebsiella  pneumonia, tetapi  efek antibakterinya lebih rendah jika dibandingkan dengan obat pembanding yaitu tetrasiklin.
Dari  data  hasil  pengujian  mikrodilusi di  atas,  aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak metanol  dari  daun  bayam  duri  memiliki MIC  pada  konsentrasi  1024  μg/ml  bakteri yaitu Streptococcus  alpha  dan  Streptococcus beta  haemolyticus sedangkan  untuk  bakteri Klebsiella pneumonia,
Streptococcus pneumonia memiliki  MIC  pada  konsentrasi 256  dan  512  μg/ml.  aktivitas  antibakteri  dari ekstrak metanol dari herba cakar ayam memiliki MIC  pada  konsentrasi  512  μg/ml  bakteri yaitu Streptococcus  alpha  dan  Streptococcus beta  haemolyticus sedangkan  untuk  bakteri Klebsiella  pneumonia  dan  Streptococcus
pneumonia, memiliki  MIC  pada  konsentrasi 1024 μg/ml. Aktivitas antibakteri infus dari herba cakar  ayam  memiliki  MIC  pada  konsentrasi 1024 μg/ml bakteri yaitu Streptococcus alpha dan  Streptococcus  Pneumonia  haemolyticus sedangkan untuk bakteri Klebsiella pneumonia dan  Streptococcus  beta, memiliki  MIC  pada konsentrasi  512  μg/ml.  Aktivitas  antibakteri infus  dari  daun  bayam  duri  memiliki  MIC dan MBC melebihi dari 1024 μg/ml terhadap keempat  bakteri  yaitu Klebsiella  pneumonia, Streptococcus  pneumonia,  Streptococcus alpha dan Streptococcus beta haemolyticus.
Ini  berarti  jika  dibandingkan  dengan  obat standart  dalam  hal  ini  adalah  tetrasiklin  atau dengan  ekstrak  etanol  dari  daun  bayam  duri dan  herba  cakar  ayam  diasumsikan  bahwa infus dan ekstrak metanol daun bayam duri dan herba cakar  ayam tidak  memberikan aktivitas antibakteri  yang  baik  jika  akan  digunakan sebagai obat.
Aktivitas antibakteri pada tanaman tersebut di atas ini diduga karena kandungan kimia yang dimiliki oleh kedua ekstrak tanaman tersebut.

## Kesimpulan
Berdasarkan pengujian aktivitas antibakteri terhadap  infus,  ekstrak  metanol  dan  ekstrak etanol daun bayam duri dan herba cakar ayam, dengan  metode broth  microdillution ,  terlihat bahwa ekstrak yang paling aktif adalah ekstrak etanol  daun  bayam  duri  dan  ekstrak  etanolik herba cakar ayam pada bakteri , Streptococcus Pneumonia, Streptococcus haemolyticus alpha
dan Streptococcus  haemoyiticus  beta dan Klebsiella pneumonia.

## Daftar Pustaka
Aniel  KO,  Mutyala  NL,  Raja  KG.  2010. Antibacterial evaluation of snake weed ( Euphorbia hirta L.). Journal of Phytology 2(3):08–12.
Antoniadou  A,  Kontopidou  F,  Poulakou  G, Koratzanis E, Galani I, Papadomichelakis E, Kopterides P, Souli M, Armaganidis A, Giamarellou H. 2006. Colistin-resistant isolates  of Klebsiella  pneumoniae emerging in intensive care unit patients: first  report  of  a  multiclonal  cluster. J Antimicrob Chemother. 59(4): 786-790.
Anonim.  2005. Tanaman  obat  Indonesia [online]. Available from: URL: http://www.iptek.net.id/cakra_obat/ tanamanobat.php?id=54.  [  15  Juni 2011].
Ariyanti  R,  Wahyuningtyas  N,  Wahyuni  A.
2009. Pengaruh pemberian infusa daun salam  terhadap  penurunan  kadar  asam urat mencit putih yang diinduksi dengan potassium  oxonate. Pharmacon 8(2): 56–63.
Basma  AA,  Zakaria  Z,  Latha  LY,  Sasidharan S.  2011.    Antioxidant  activity  and phytochemical  screening  of  the methanol  extracts  of Euphorbia  hirta L .  Asian  Pac  J  Trop  Med.  (5):386-390.
Epub 2011 Jun 22.
Hariana  A.  2004. Tumbuhan  Obat  dan Khasiatnya. Seri  1.  Jakarta:  Penerbit Penebar Swadaya. 72- 74.
Hariana  A.  2005. Tumbuhan  Obat  dan Khasiatnya .  Seri  2.  Jakarta:  Penerbit Penebar Swadaya. 170- 172.
Hugo  and  Russel.  1998. Pharmaceutical Microbiology. 6 th edition.  Toronto:
MCgraw- Hill.
Hofmann J, Cetron MS, Farley MM, Baughman
WS,  Facklam  RR,  Elliott  JA,  Deaver KA, and Breiman RF. 2005. Prevalence of drug resistant Streptococcus pneumoniaae in Atlanta. N Engl J Med. 333(8): 481.
Kakizoe  and  Tadao.  2003.  Chemoprevention of cancer focusing on clinical trials. Jpn J. Clin. Oncol . 33(9): 421-442.
Kasper DL and Harrison TR. 2005. Harrison’s Principles of Internal Medicine. 16 th Ed.
New York: McGraw-Hill.
NCCLS  [National  Committee  for  Clinical Laboratory  Standards].  2008. Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria that Grow Aerobically Approved Standard. 8 th edition. Volume 29. Wayne: NCCLS. 15-18.
Sandhyarani N. 2008. Klebsiella pneumoniae. U RL www.buzzle.com/articles/ klebsiella-pneumoniae. [Mei 2011].
Sofyan T. 2005. Ramuan Tradisional Madura. Jakarta: Penebar Swadaya. 39.