Penulis
Nina Herlina 1 *, Mulyati 1 , Yulianita 1 , Putri Ananda 1
Afiliasi 1 Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengatahuan  Alam,  Universitas  Pakuan,  Jawa  Barat,
16144, Indonesia
Kata Kunci  ampas tahu
 hipoglikemik
 glukosa darah
 isoflavon
 Danio rerio
Keywords  blood glucose levels
 hypoglycaemic
 Isoflavones
 tofu residue
 Danio rerio
Diterima 26 Agustus 2019 Direvisi 16 Oktober 2019 Disetujui 16 April 2020

## *Penulis Koresponding
Nina Herlina email: nina.herlina@unpak.ac.id

## ABSTRAK
Ampas  tahu mengandung isoflavon  genistein  dan  daidzein  yang  diduga  memiliki  efek hipoglikemik.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menguji  efek  hipoglikemik  fraksi  etil  asetat ampas  tahu  (FEAAT).  Ekstraksi  isoflavon  ampas  tahu  dilakukan  dengan  metode  refluks menggunakan  etanol  dan  HCl,  kemudian  fraksinasi  menggunakan  etil  asetat.  Efek hipoglikemik  FEAAT  dibuktikan  menggunakan  ikan  zebra  sebagai  hewan  uji.  Kelompok perlakuan terdiri dari kontrol negatif (akuades), FEAAT1 dan FEAAT2 dengan konsentrasi 3,75%  dan  5%  serta  kontrol  positif  (metformin).  Hiperglikemia  diinduksi  dengan perendaman menggunakan aloksan 0,05% selama 30 menit, glukosa 1% selama 30 menit. Selanjutnya  dilakukan  pemberian  sampel  uji  selama  120  menit  secara  berurutan  untuk menguji efek hipoglikemik dari sampel uji. Cuplikan darah diambil pada menit ke-0, 30, 60, 90,  dan  120  untuk  diuji  kadar  glukosa  darah.  Hasil  uji  menunjukkan  bahwa  terdapat perbedaan  yang  nyata  pada  luas Area  Under  Curve (AUC 0-120 ) kontrol  negatif  dengan FEAAT2  dan  metformin  (p  <  0,01).  Sementara  hasil  nilai  AUC 0-120 FEAAT1  tidak  berbeda nyata  dengan  kontrol  negatif.  FEAAT2  efektif  sebagai  agen  hipoglikemik  pada  model hewan ikan zebra yang diinduksi hiperglikemik.

## ABSTRACT
Tofu  residue  contain  isoflavones  genistein  and  daidzein.  Which  are  thought  to  be responsible  for  the  hypoglycemic  effect.  The  aim  of  this  study  was  to  determine  the hypoglycemic effect of ethyl acetate fraction tofu residue (FEAAT). Extraction isoflavone of tofu  residue  was  conducted  by  reflux  method  using  ethanol  and  HCl,  then  fractionation used  ethyl  acetate.  The  hypoglycemic  effect  of  FEAAT  was  verified  using  zebrafish  as  an animal  test.  The  treatment  group  consisted  of  water  as  negative  control,  FEAAT1  and FEAAT1 concentration of 3.75% and 7.5%, respectively, and metformin as positive control. Hyperglycemia  in  the  fish  was  induced  by  soaking  them  in  alloxan  0.05%  for  30  min, glucose 0,1% for 30 min, and tested sample for 60 min in sequence. The blood glucose level was  measured  every  30  minutes  for  2  hours.  The  results  showed  that  significantly differences in the area of the  Under-Curve Area (AUC 0-120 ) between negative control with FEAAT2  and metformin  (p <  0.01). While  the  FEEAT1  was  not  significantly  different  than negative  controls.  FEAAT2  effective  as  hypoglycemic  agent  at  hyperglycemic  zebrafish model.
Efektivitas  Hipoglikemik  Fraksi  Etil  Asetat  Ampas  Tahu  menggunakan  Model  Hewan Ikan Zebra ( Danio rerio )
Hypoglycemic Activity of Ethyl Acetate Fraction of Tofu Residue Using Danio rerio as an Animal Model

## PENDAHULUAN
Sekitar 8,3% orang dewasa di dunia (382 Juta orang) menderita  diabetes  mellitus  dan  peningkatan  yang dramatis  di  negara-negara  seluruh  dunia  (IDF  2015). Jumlah ini diprediksi akan meningkat secara dramatis di tahun-tahun  mendatang,  menghasilkan  tantangan kesehatan  dan  ekonomi  yang  serius.  Diabetes  melitus (DM) merupakan gangguan metabolisme kronis dengan multi  etiologi  yang  ditandai  dengan  tingginya  kadar gula  darah  disertai  dengan  gangguan  metabolisme karbohidrat,  lipid  dan  protein  sebagai  akibat insufisiensi fungsi insulin (Dipiro et al. 2008).
Hiperglikemia  diperkirakan  menjadi  salah  satu faktor  utama  yang  berkontribusi  terhadap  komplikasi DM  termasuk  penyakit  yang  mempengaruhi  sistem kardiovaskular  dan  saraf,  mata  atau  ginjal.  Setiap tahun,  4,9  juta  orang  meninggal  akibat  DM  (IDF 2015) sekitar 50% dari pasien dengan komplikasi kardiovaskular.  Risiko  komplikasi  DM  dapat  dikurangi secara efektif.  Indonesia memiliki potensi ampas tahu (AT)  cukup  tinggi,  karena  produksi  kedelai  mencapai 779.074  ribu  ton  pada  tahun  2012  (BPS  2012),  hal  ini berpengaruh  pada  produksi  tahu  yang  menggunakan bahan  baku  kedelai.  Pada  industri-industri  pembuatan tahu,  ampas  tahu  dianggap  sebagai  limbah  yang  tidak bernilai  ekonomis  sehingga  biasanya  dibuang  tanpa diolah  lebih  lanjut  untuk  dijadikan  produk  bernilai ekonomis.
Menurut Balai
Penelitian dan Pengembangan  Industri  yang  dikutip  oleh  Arbaiyah (2003), industri tahu di Indonesia sebagian besar masih melakukan  pengolahan  secara  sederhana  sehingga kandungan  bermanfaat  yang  terdapat  di  ampas  tahu masih cukup banyak. Hal ini dibuktikan oleh penelitian yang  dilakukan  oleh  Sulistiani  (2004)  dimana  dalam tepung  ampas  tahu  mengandung  protein  (11,04%), lemak  (19,69%),  karbohidrat  (51,50%),  serat  pangan tidak  larut  (42,75%)  dan  serat  pangan  larut  (8,75%). Selain  kandungan  tersebut,  ampas  tahu  juga  terbukti masih  mengandung  isoflavon  berupa  genistein  dan daidzein  meskipun  kandungannya  setengah  dari kandungan  isoflavon  yang  terdapat  pada  kedelai (Jannatun 2009).
Kandungan  isoflavon  pada  ampas  tahu  diduga memiliki  peranan  dalam  regulasi  glukosa  darah. Bhattamisra et  al. (2013)  dan  Babu et  al. (2013)  serta Cheong et  al. (2014)  mengkonfirmasi  bahwa  isoflavon dari  kedelai  dapat  membantu  memperbaiki  kondisi hiperglikemia. Akan tetapi belum ada yang mengkonfirmasi  efek  isoflavone  yang  terdapat  pada ampas tahu sebagai agen hipoglikemik.  Oleh karena itu dalam  penelitian  ini  dilakukan  pengujian  efek
hipoglikemik pada ampas fraksi etil asetat ampas tahu terhadap  ikan  zebra.  Ikan  zebra  digunakan  sebagai hewan  percobaan  dengan  berbagai  pertimbangan yaitu,  ikan  zebra  memiliki  kesamaan  genetik  dan psikologi  dengan  mamalia  dan  dinilai  cukup  baik digunakan  sebagai  model  hewan  diabetes  (Shin et  al . 2012).  Dari  hasil  penelitian  ini  diharapkan  nilai  guna ampas tahu semakin meningkat  dan komoditas ampas tahu  semakin  berkembang  sehingga  meningkatkan pendapatan produsen tahu.

## METODE Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  adalah  akuarium,  glukometer (Easy  touch, Miaoli  County,  Taiwan), strip  test glukosa (Accu check, indianapolis, USA). Bahan yang digunakan ampas  tahu  (Pabrik  Tahu  Sumedang  Bumi  Armasta, Bogor,  Indonesia),  etanol  70%,  HCl  4N,  etil  asetat, kloroform,  NH 4 OH,  H 2 SO 4 2M,  serbuk  magnesium, alkohol, akuades, FeCl 3 1%, metanol, pakan (Tetramin ® , Blacksburg, USA), Metformin (Hexapharm Jaya, Jakarta, Indonesia), aloksan 0.1% (Sigma Aldrich, St Louis, USA), glukosa  1%,  es  batu,  tissue.  Ikan  zebra  ( Danio  rerio ) yang berumur sekitar 118 hari dengan ukuran M (1-1.5 inci)  sebanyak  120  ekor  diperoleh  dari  petani  ikan  di daerah Cibinong, Bogor Indonesia.

## Ekstraksi dan Fraksinasi Ampas Tahu
Ampas  tahu  segar  dikeringkan  menggunakan vacuum  dryer hingga  diperoleh  ampas  tahu  kering. Setelah itu dilakukan ekstraksi dengan metode refluks. Sampel  ampas  tahu  sebanyak  1  kg  direfluks menggunakan  campuran  HCl  4N  dan  etanol  dengan perbandingam  1:8  selama  2  jam  pada  suhu  70°C. Campuran  disaring  dengan  menggunakan  pompa vakum  dan  kertas  saring  Whatman  nomor  41.  Filtrat yang  diperoleh  kemudian  dipekatkan  menggunakan rotavapor.  Ekstrak  ampas tahu  difraksinasi  dengan  etil asetat  (1:1)  menggunakan  corong  pisah.  Fraksi  etil asetat  yang  diperoleh  kemudian  disaring,  dan dipekatkan dengan rotavapor.

## Uji Mutu dan Uji Fitokimia
Sampel  uji  yang  diperoleh  dianalisis  meliputi  kadar air,  kadar  abu  dan  uji  fitokimia.  Metode  Pengecekan kadar  air  mengacu  pada  Materia  Medika  (Depkes 1995),  kadar  abu  mengacu  pada  Parameter  Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat (Depkes 2000) serta uji fitokimia mengacu pada Harborne (1987).
Herlina et al .

## Pembuatan Pakan Jamu
Pakan  kering  dimasukkan  ke  dalam  tabung  plastik, kemudian  sampel  uji  ditambahkan  ke  dalam  pakan sedikit demi sedikit sambil terus diaduk. Variasi nisbah pakan: FEAAT yaitu 1:0,3, 1:0,6, 1:0,9 sementara nisbah pakan: metformin adalah 1:0,6 (Littleton et al. 2012).

## Persiapan dan Pemeliharaan Ikan Zebra
Persiapan  dan  Pemeliharaan  ikan  zebra  sebagai hewan  uji  mengacu  pada  Avdesh et  al. (2012)  melalui persetujuan  Komite  Etik  Penggunaan  Hewan  FMIPA UNPAK  dengan  SK  No.2/KEPH-UNPAK/3-2019.  Jenis ikan  zebra  yang  digunakan  ialah  ekor  panjang,  warna abu-abu  dengan  garis  metalik  yang  melintang sepanjang  badan  hingga  ekor.    Semua  ikan  zebra disesuaikan dengan kondisi laboratorium yang konstan (14 jam cahaya: 10 jam gelap, diet) selama setidaknya satu  minggu  di  akuarium  persediaan  sebelum percobaan dilakukan. Ikan diberi makan dua kali sehari dengan  pakan  komersil  Tetramin ® sebanyak  4%  BB /ekor/hari.  Semua  ikan  zebra  yang  digunakan  dalam percobaan  ini  adalah  ikan  dewasa  yang  dipilih  secara acak.  Setelah  kondisi  ruangan  dan  akuarium  siap,  ikan zebra  ditempatkan  dalam  7  akuarium  dengan  ukuran 30 x 25 x 25 cm 3 masing-masing sebanyak 25 ekor lalu dilakukan masa adaptasi selama 1 minggu.

## Uji Efektivitas Hipoglikemik FEAAT
Induksi hiperglikemik akut mengacu pada penelitian Shin et al. (2012) dengan adanya modifikasi waktu yaitu perendaman  dengan  aloksan  0,05%  (b/v)  dalam  NaCl 0,45%  selama  30  menit,  perendaman  glukosa  1% selama  30  menit,  kemudian  perendaman  dengan akuades  yang  mengandung  larutan  uji  selama  120 menit.  Pembagian  kelompok  uji  sebagaimana  tertera pada  Tabel  1.  Pengukuran  kadar  gula  darah  dilakukan pada  menit  ke-30,  60,  90,  dan  120.  Pengukuran  kadar glukosa  darah  dilakukan  dengan  memindahkan  ikan zebra  ke  dalam  wadah  berisi  air  dingin  dengan  suhu yang diturunkan secara perlahan dari 17 ᵒ C menjadi 12 ᵒ C dengan tujuan membuat ikan pingsan. Ikan yang sudah pingsan dikeluarkan dari larutan, ditepuk dan keringkan dengan  tisu.  dan  ditempatkan  di  permukaan  keramik dengan posisi ikan melintang. Darah diperoleh dengan memotong bagian ekor ikan menggunakan pisau tajam. Sampel darah ditempelkan pada glukometer yang akan secara otomatis menyerap darah (Capiotti et al. 2014).

## Analisis Data
Data  kadar  glukosa  darah  ikan  zebra  dinyatakan sebagai  rata-rata  ±  SD.  Efektivitas  hipoglikemik dinyatakan dengan kadar glukosa darah (rata-rata ± SD) dan nilai Area Under Curve 0-120 (AUC 0-120 ). Data AUC 0-120 dianalisis  secara  statistika  dengan  metode  analisis keragaman  ( one  way  anova) menggunakan  uji  lanjut Duncan dengan tingkat kepercayaan 95 %.

## Tabel 1. Kelompok Pemberian Perlakuan
Kelompok Perlakuan I Kontrol negatif, Induksi + akuades II Kontrol positif , Induksi + Metformin (7,5% b/v) III Dosis I, Induksi + fraksi etil asetat ampas tahu (3,75% b/v) IV Dosis II, Induksi + fraksi etil asetat ampas tahu (7,5% b/v)
Keterangan:  *Dosis  perbandingan  pakan:  sampel  berdasarkan  Littleron et  al. (2012)  yang  dimodifikasi,  yaitu perbandingan  pakan  dengan  bahan  uji  1:0,6  kemudian  dilarutkan  dalam  500  mL  air  sehingga konsentrasinya menjadi 7,5% b/v.

## Tabel 2. Kadar Air dan Kadar Abu Ampas Tahu
Uji Karakteristik Sampel Hasil Rata-rata Standar Kadar Air Serbuk kering 10,38 % 10,95 % ≤ 10% 11,53 % Ekstrak etanol 34,58 % 35,37 % 36,17 % Kadar Abu Serbuk kering 1,95 % 10,95 % ≤16 1,93 % Ekstrak etanol 13,52 % 12,79 % 12,07 %

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Kadar  Air,  Kadar  Abu  dan  Kandungan  Fitokimia Ekstrak Ampas Tahu
Ampas  tahu  kering  mengandung  kadar  air  10,45% dan  kadar  Abu  sebesar  10,95%.  Setelah  diekstraksi dengan  etanol  70%  dan  HCl  kadar  air  ampas  tahu 35,37%  dan  kadar  abu  12,79%  sebagaimana ditunjukkan  pada  Tabel  2.  Ekstrak  ampas  tahu mengandung  flavonoid  dan  tanin  sebagaimana ditunjukkan pada Tabel 3.

## Efektivitas Hypoglikemik Fraksi Ampas Tahu
Kadar  glukosa  darah  ikan  zebra  diukur  pada  menit ke-0, 30, 60, 90 dan 120. Hasil pengukuran KGD dapat dilihat pada Tabel 4.
Tabel  4  menunjukkan  bahwa  semua  kelompok mengalami  kenaikan  kadar  glukosa  darah  pada  menit ke-30,  akan  tetapi  kenaikan  tertinggi  terjadi  pada kontrol  negatif,  sekitar  6  kali  lipat  dari  kondisi  awal. Pada  menit  ke-60  semua  kelompok  mengalami penurunan  KGD,  akan  tetapi  pada  menit  ke-90 kelompok  FEEAT2  mengalami  kenaikan  KGD.  Namun pada menit ke-120 terjadi penurunan KGD dengan nilai KGD  mendekati  nilai  awal.  Nilai  KGD  kelompok Metformin juga mengalami penurunan pada menit ke- 120  mendekati  nilai  KGD  normal,  kecuali  pada kelompok  negatif  dan  FEAAT1.  AUC 0-120 digunakan sebagai  gambaran  efek  hipoglikemik  dari  fraksi etilasetat  ampas  tahu  (FEAAT).  Semakin  kecil  nilai AUC 0-120 maka  efek  hipoglikemik  semakin  besar.  Data AUC 0-120 dapat dilihat pada Gambar 1.
Gambar 1 menunjukkan bahwa kelompok Metformin  memiliki  Nilai  AUC 0-120 paling  kecil  diantara semua kelompok, kemudian FEEAT2, FEEAT1 dan yang terbesar  adalah  kelompok  negatif.  Hasil  uji  statistik menggunakan  ANOVA  diketahui  bahwa  perlakuan memberikan pengaruh yang nyata terhadap nilai AUC 0- 120 (P  Value  0,009).  Perbedaan  respon  yang  nyata  ini ditunjukkan  oleh  kelompok  FEEAT2  dan  Metformin terhadap  kelompok  negatif  (P  Value  =  0,001).  Hal tersebut  menunjukkan  bahwa  kedua  kelompok tersebut memiliki kemampuan sebagai agen hipoglikemik. FEAAT1 memiliki nilai AUC 0-120 lebih kecil dibandingkan  kontrol  negatif,  akan  tetapi  hasil  uji analisis menunjukkan belum ada perbedaan yang nyata (P  Value  =  0,16),  sehingga  dapat  dikatakan  bahwa FEAAT1  belum  memiliki  kemampuan  sebagai  agen hipoglikemik.
Penelitian  ini  menggunakan  ikan  zebra  sebagai model  hewan  hiperglikemia  dengan  memodifikasi metode induksi Shin et al (2012). Hiperglikemia adalah suatu  kondisi  di  mana  tingginya  kadar  glukosa  dalam plasma darah (Lim 2013). Ikan zebra direndam di dalam larutan  aloksan  0,05%  (b/v)  dalam  NaCl  0,45%  selama 30  menit,  dilanjutkan  peremdaman  dalam  glukosa  1% selama 30 menit dan perendaman dalam akuades yang mengandung  larutan  uji  selama  120  menit.  Shin et  al (2012)  menyatakan  bahwa  setelah  dilakukan  induksi tersebut,  ikan  zebra  mengalami  kondisi  hiperglikemia akut.  Model  semacam  ini  dibuat  untuk  eksperimen jangka  pendek,  dan  penelitian  lebih  lanjut  diperlukan untuk  mengembangkan  model  zebrafish  hiperglikemia permanen (Lee et al. 2011).

## Tabel 3. Hasil Uji Fitokimia Ampas Tahu
Senyawa Serbuk Ampas Tahu Ekstrak Etanol Ampas Tahu Alkaloid + - Flavonoid + + Tanin + + Saponin - - Tabel 4. Rata-rata kadar glukosa darah ikan zebra (mean±sd) Kelompok Kadar Glukosa Darah (mg/dl) pada menit ke- 0 30 60 90 120 Kontrol Negatif 28,67±13,05 158,67±50,54 84,67±44,52 51,00±23,06 51,67±2,08 Metformin 25,75±13,60 58,25±24,80 47,75±27,28 35,25±9,87 26,00±5,56 FEAAT1 28,00±24,04 93,00±10,23 50,00±37,38 32,75±10,82 36,67±22,03 FEAAT2 24,67±7,05 56,00±14,14 26,50±3,69 57,25±37,07 28,25±8,01
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  fraksi  etil asetat  ampas  tahu  konsentrasi  7,5%  b/v  (FEAAT2) terbukti dapat menurunkan kondisi hiperglikemia pada ikan  zebra.  Efek  penurunan  kadar  glukosa  ini  diduga karena  kandungan  senyawa  yang  dimiliki.  Ampas  tahu dilaporkan mengandung isoflavon berupa genistein dan daidzein  (Arbaiyah  (2003)  dan  Jannatun  (2009)). Kandungan  ini  diduga  menjadi  salah  satu  yang berperanan  dalam  menurunkan  kadar  glukosa  darah. Beberapa penelitian menyatakan bahwa Isoflavon baik genistein dan daidzein memiliki peranan penting dalam regulasi  glukosa  darah.  Bhattamisra et  al (2013)  dan Babu et al. (2013) melaporkan bahwa isoflavon kedelai terbukti dapat memperbaiki toleransi glukosa oral dan memperbaiki toleransi insulin. Gilbert & Liu (2013) juga telah  menunjukkan  bahwa  genistein  adalah  agen antidiabetogenik melalui efeknya pada proliferasi sel-β dan sekresi insulin oleh stimulasi glukosa terlepas dari efisiensinya  sebagai  antioksidan.  Selain  itu,  Cheong et al. (2014)  mengkonfirmasi  bahwa  daidzein  dapat meningkatkan  ambilan  glukosa  dalam  adiposit  dan  sel otot  serta  dapat  menekan  peningkatan  glukosa  dalam serum.
Selain  itu,  ampas  tahu  juga  mengandung antioksidan  yang  dapat  berperan  kuat  dalam pengendalian  diabetes  mellitus  Ampas  tahu  juga mengandung  tanin  (Tabel  3).  Tanin  mempunyai aktivitas hipoglikemik dengan mekanisme meningkatkan  glikogenesis  dan  berfungsi  sebagai pengkhelat  yang  dapat  mengerutkan  membran  epitel
usus  halus  sehingga  mengurangi  penyerapan  sari makanan  dan  sebagai  akibatnya  menghambat  asupan glukosa  sehingga  laju  peningkatan  glukosa  darah  tidak terlalu tinggi (Tandi et al. 2007).

## SIMPULAN
Fraksi  etil  asetat  ampas  tahu  konsentrasi  7,5% (FEAAT2) efektif sebagai agen hipoglikemik pada model ikan zebra ( Danio rerio) .

## UCAPAN TERIMAKASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih  sebanyak- banyaknya kepada LPPM Universitas Pakuan yang telah memberikan support pendanaan kepada penulis.

## DAFTAR PUSTAKA
Arbaiyah,  Ita.  2003.  Kandungan  Protein  dan  Kalsium serta  Daya  Terima  Susu  Kedelai  yang  dibuat  dari Ampas Tahu dengan Penambahan Bahan Pengental [Skripsi]. Medan (ID). Universitas Sumatera Utara. Avdesh A, Chen M, Martin-Iverson MT, Mondal A, Ong D,  Rainey-Smith  S,  Taddei  K,  Lardelli  M,  Groth  DM, Verdile  G,  Martins  RN.  2012.  Regular  care  and maintenance  of  a  zebra  Fish  (Danio  rerio) laboratory:  an  introduction .  J.  Vis.  Exp .  69(4196):1-
8.
Babu  PV,  Liu  D,  Gilbert  ER.  2013.  Recent  advances  in understanding  the  anti-diabetic  actions  of  dietary flavonoids. J Nutr Biochem.; 24(11):1777-89.
Gambar 1. Area  di  bawah  kurva  (AUC 0-120 ).  Kumpulan  data  yang  ditampilkan  adalah  perwakilan  dari  tiga percobaan.  Data  direpresentasikan  sebagai  rata-rata  ±  SD  (n  =  3  /  grup).  *  P  <0,05  vs  kontrol negatif
Badan  Pusat  Statistik  (BPS).  2012.  Pola-pertanian- jagung-kedelai-dan-kacang-tanahkabupaten-pati- 2012  [internet].  Diakses  tanggal  27  Oktober 2018.www. patikab.bps.go.id
Bhattamisra,  Subrat  &  Mohapatra,  L  &  Panda,  B  & Parida,  S.  2014.  Effect  of  Isoflavone  rich  Soya  seed extract  on  glucose  utilization  and  endurance capacity  in  diabetic  rat. Diabetologia  Croatica .  42. 42.
Capiotti  KM,  Junior  RA,  Kist  LW,  Bogo  RM,  Bonan  CD, Silva  RSD.  2014.  Persistent  impaired  glucose metabolism  in  a  zebrafish  hyperglycemia  model. Comparative  Biochemistry  and  Physiology .  171:  58- 65.
Cheong,  S.  H.,  Furuhashi,  K.,  Ito,  K.,  Nagaoka,  M., Yonezawa,  T., Miura,  Y.,  Yagasaki  K.  2014.  Daidzein promotes glucose uptake through glucose transporter 4 translocation to plasma membrane in L6  myocytes  and  improves  glucose  homeostasis  in Type  2  diabetic  model  mice. J.  Nutr.  Biochem .  25, 136–143.
Depkes  RI.    1995. Materia  Medika  Indonesia ,  Jilid  VI. Jakarta  (ID)  :  Departemen  Kesehatan  Republik Indonesia.
Depkes  RI.  2000. Parameter  Standar  Umum  Ekstrak Tumbuhan  Obat .    Jakarta  (ID):  Direktorat  Jendral Pengawasan Obat dan Makanan.
Dipiro, J. T., Talbert R. L., Yee G. C., Matzke G. R., Wells B.  G  dan  Posey  L.  M.  2008 Pharmacotherapy  –  A Pathophysiologic Approach 7th ed. New York (USA): McGraw Hill Medical, 1220-1227.
Gilbert,  E.R.  &  Liu,  D.  2013.  Anti-diabetic  function  of soy  isoflavone  genistein:  mechanism  underlying  its effects  on  pancreatic  beta-cell  function. Food  and Function. 4 (2): 200-212. Harborne,  J.B.  1987. Metode  Fitokimia  Penuntun  Cara Modern Menganalisa Tumbuhan. Bandung (ID): ITB.
International  Diabetes  Federation.  2015.  IDF  Diabetes Atlas,  7th  edn. International  Diabetes  Federation [internet].  Diakses  pada  tanggal  17  Maret  2019. Edisi 7. http://www.diabete satlas.org Jannatun,R.  2009.  Kadar  Genistein  Dan  Daidzein  Pada Kedelai,  Ampas  Tahu,  Dan  Oncom  Merah  [Skripsi]. Bogor (ID): Insitut Pertanian Bogor.
Lee  JH,  Yang  SH,  Oh  JM,  Lee  MG.    2011. Pharmacokinetics  of  drugs  in  rats  with  diabetes mellitus  induced  by  alloxan  or  streptozocin: Comparison  with  those  in  patients  with  type  I diabetes mellitus. J. Pharm. Pharmacol . 62:1-23. Lim,  T.K.  2013. “Edible  Medicinal  and  Non-Medicinal Plants: Volume 6, Fruits ”. Newyork (USA): Springer. Littleton,  Robert  M.,  Matthew  Miller  and  Jay  R.  Hove. 2012. Whole plant based treatment of hypercholesterolemia  with  Crataegus  laevigata  in  a zebrafish model. BMC complementary and alternative  medicine.  12:105  Doi:  10.1186/1472- 6882-12-105.
Shin  E,  Hong  B  N,  and  Kang  T  H.  2012.  An  optimal establishment  of  acute  hyperglicemia  ikan  zebra model. African Journal of Pharmacy and Pharmacology . 6(42):2922-2928.
Sulistiani.  2004.  Pemanfaatan  Ampas  Tahu  dalam Pembuatan Pangan Tinggi Serat dan Protein sebagai Alternatif  Bahan  Baku  Pangan  Fungsional  [Skripsi]. Bogor (ID). Fateta IPB.
Tandi,  J.,  H  Z,  M.,  Yuliet,  Y.,  &  Yusriadi,  Y.  2016. Efektivitas  Ekstrak  Daun  Gedi  Merah  terhadap Glukosa Darah, Malondialdehid, 8-Hdroksi-
Deoksiguanosin,  Insulin  Tikus  Diabetes. Journal  of Tropical  Pharmacy  and  Chemistry , 3 (4),  264-276. https://doi.org/10.25026/jtpc.v3i4.114