EFEKTIVITAS PENGGUNAAN WHOLE CELL DARI Vibrio alginolyticus SEBAGAI VAKSIN ORAL MELALUI ARTEMIA PADA BENIH IKAN KERAPU TIKUS ( Chromileptes altivelis )
EFFECTIVENESS OF USING V ibrio alginolyticus WHOLE CELL AS ORALVACCINE WITH ARTEMIA TO HUMPBACK GROUPER FRY ( Chromileptes altivelis )
Titik Desi Sukmawati dan Hari Suprapto
Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Airlangga Kampus C Mulyorejo - Surabaya, 60115 Telp. 031-5911451

## Abstract
Humpback grouper is the one of marine fish which can culture. The major problem of humpback grouper  culture  is  high  mortality  at  short  time  caused  by  pathogen  infection  include  virus,  bacterial, parasite  and  fungi.  Pathogen  infection  at  humpback  grouper  fry  caused  by  bacterial  from  genus Vibrio spp. There  was  exceeding  with  vaccination.  This  research  use  oral  vaccination  with  whole  cell. Vibrio alginolyticus Whole cell as oral vaccine is suggested to prevent high mortality at humpback grouper fry. The purpose of this research  is to know the successful about using Vibrio  alginolyticus Whole Cell  as  Oral  Vaccine  to  prevent  high  mortality  of  humpback  grouper  fry  ( Chromileptes  altivelis ).  The experiment was done June until December 2009 at Gastroenteritis of Laboratory Tropical Disease Centre (TDC) of Airlangga University Surabaya and PT Benur Puteri Situbondo. The methods of this research is descriptive.  Major  parameter  observed  in  this  research  was  survival  rate  (%)  and  Relative  Percentage Survival  (RPS)  of  humpback  grouper  fry.  Other  parameter  observed  in  this  research  was  water  quality include water temperature, pH, water salinity and Dissolved Oxygen (DO).
Result  of  research  shows  that  there  are  difference  of  survival  rate  between  fingerling  fish vaccination  and  fingerling  fish  non  vaccination  (control).  Survival  rate  of  humpback  grouper  fry  which vaccine  of Whole  Cell 66  %  even  though  survival  rate  of  humpback  grouper  fry  which  non  vaccine  of Whole Cell (control) 46 %. Relative Percentage Survival (RPS) of humpback grouper fry which vaccine of Whole  Cell 37  %.  The  value  of  RPS  was  resulted  at  this  research  shows  low  value  so  that  must  to perfecting  and  must to  do  again  research.  Water temperature  27-29 o C,  pH  7,3-7,5,  water  salinity  31-32 ppt and dissolved oxygen 5-6 ppm.
Keywords : Humpback grouper , Whole Cell Vaccine, Vibrio alginolyticus , oral vaccination.

## Pendahuluan
Kerapu  adalah  salah  satu  jenis  ikan yang  memiliki  nilai  ekonomis  tinggi  serta memiliki  peluang  pasar  dalam  dan  luar  negeri yang sangat baik (Akbar dan Sudaryanto, 2002). Indonesia  merupakan  negara  produsen  kerapu terbesar di dunia dengan produksi 13,94 % atau 41.000  MT  (Metrik  Ton)  pada  tahun  1995. Hasil  produksi  tersebut  90  %  diperoleh  dari hasil  tangkapan  di  alam  (Suprapto,  2008). Berdasarkan  catatan  Dinas  Perikanan  dan Kelautan Propinsi Jawa Timur tahun 2000-2004 hasil  produksi  tangkap  ikan  kerapu  semakin menurun  hampir  60  %.  Salah  satu  alternatif terbaik untuk mengantisipasi penurunan produksi adalah dengan mengembangkan budidaya  ikan  (Akbar  dan  Sudaryanto,  2002). Kerapu  tikus  dapat  dibudidayakan.  Kendala utama  budidaya  ikan  kerapu  tikus  adalah tingginya  kematian  benih  dalam  waktu  singkat yang disebabkan karena adanya infeksi patogen yang  berasal  dari  virus,  bakteri,  parasit  dan
jamur.  Sebagian  besar  infeksi  patogen  pada benih  ikan  kerapu  disebabkan  oleh  bakteri  dari genus Vibrio. Di  Indonesia  diketahui  ada  dua jenis bakteri vibrio yang menyerang ikan kerapu yaitu V.  alginolyticus dan V.  anguillarum (Murdjani, 2002).
Salah  satu  cara  untuk  mencegah  dan menanggulangi  kematian  pada  benih  ikan kerapu  akibat  vibriosis  adalah  dengan  cara vaksinasi. Vaksinasi dapat meningkatkan mekanisme  pertahanan  diri  spesifik  dan  non spesifik,  pertahanan  diri  spesifik  misalnya pembentukan antibodi (Ellis, 1988). Berdasarkan latar belakang permasalahan tersebut,  perlu  dilakukan  penelitian  mengenai vaksinasi  pada  stadia  benih  untuk  mencegah angka  kematian  yang  tinggi  akibat  vibriosis. Penggunaan Whole  Cell diharapkan  dapat mencegah  infeksi  bakteri Vibrio  alginolyticus . Whole Cell Vaccine yaitu vaksin dari sel bakteri utuh yang dimatikan dengan cara
menginaktifasi  sel  bakteri  dengan  bahan  kimia
Tabel 1. Sintasan (%) Benih Ikan Kerapu Tikus
Perlakuan Jumlah Benih (ekor) Sintasan (%) RPS (%) Bak 1 Bak 2 Bak 3 Bak 4 Awal  Akhir  Awal  Akhir  Awal  Akhir  Awal  Akhir WCV 50 35 50 34 50 31 66 37 Kontrol 50 23 46 0
Gambar 1.   Sintasan (%) dan RPS (%) dari perlakuan WCV dan kontrol
atau  melalui  pemanasan  (Austin  and  Austin, 1999).  Vaksin whole  cell digunakan  dalam penelitian ini karena vaksin whole cell memiliki ukuran  molekul  yang  besar  seperti  yang dikemukakan  oleh  Nindarwi  (2006)  bahwa Whole  Cell  Vaccine (WCV) memiliki  berat molekul  45-66  kDa.  Pada  penelitian  ini vaksinasi  dilakukan  secara  oral  karena  ukuran benih  yang  masih  terlalu  kecil  dan  untuk mencegah  terjadinya  stress  pada  ikan.  Austin and Austin (1999) menyatakan bahwa vaksinasi melalui oral kurang efektif apabila dibandingkan dengan injeksi ataupun rendaman, karena  antigen  akan  cepat  larut  di  sepanjang saluran  pencernaan  ikan.  Oleh  karena  itu, pemberian vaksin ini dilakukan melalui artemia karena  artemia  berfungsi  melindungi  antigen supaya  tidak  rusak  oleh  suasana  asam  dalam saluran pencernaan ikan.

## Metodologi
Air  Pemeliharaan. Bak  plastik  yang  akan digunakan  dicuci  terlebih  dahulu  dengan  air tawar,  kemudian  disterilkan  menggunakan kaporit 10 ppm, setelah itu dibilas menggunakan  air  tawar  sampai  bersih.  Bak plastik  dikeringkan  selama  24  jam  agar  bau kaporit  hilang  (Subyakto  dan  Cahyaningsih, 2003).  Bak  plastik  tersebut  diisi  air  laut sebanyak 100 liter.
Ikan Uji. Benih ikan kerapu tikus ( Chromileptes  altivelis )  sehat  yang  berumur  40 hari  dengan  panjang  total  2-3  cm  dan  berat badan  rata-rata  0,7-1  gram  sebanyak  200  ekor dibeli  dari  PT  Benur  Puteri  Situbondo  Jawa Timur  dipelihara  dalam  bak  plastik  yang berjumlah 4 bak, setiap bak berisi 50 ekor benih ikan  kerapu  tikus.  Tiga  bak  berisi  ikan  yang akan  divaksin  dengan Whole  cell  Vibrio alginolyticus sedangkan  1  bak  berisi  ikan  yang tidak  divaksin  (kontrol).  Sebelum  diberi
perlakuan,  benih  diaklimatisasikan  terlebih dahulu selama satu minggu.
Pembuatan Whole Cell . Pembuatan Whole Cell atau  sel  utuh  dari  bakteri Vibrio  alginolyticus yang akan digunakan sebagai vaksin berdasarkan  metode  dari  Suprapto et  al. (1996)
adalah  sebagai  berikut  :  Bakteri Vibrio alginolyticus dikultur  terlebih  dahulu  pada media  cair  TSB  selama  24-48  jam.  Setelah bakteri  tumbuh  disentrifuse  atau  dicuci  dengan kecepatan  5000  rpm  selama  10  menit, pencucian  ini  dilakukan  sebanyak  dua  kali. Antara supernatan dan pelet yang diperoleh dari hasil sentrifuse dipisahkan, pelet/endapan bakteri  yang  telah  dicuci  tersebut  direndam dengan  formalin  3  %  selama  72  jam  dan pelet/endapan yang didapatkan ini adalah Whole Cell yang berfungsi sebagai antigen. Whole Cell yang  telah  dimatikan  dengan  3  %  formalin tersebut  kemudian  dicuci  menggunakan  PBS sebanyak 3 kali masing-masing selama 10 menit dengan kecepatan 5000 rpm. Kepadatan bakteri dibuat  sebanyak  50  mg/ml  dan  disimpan  di dalam freezer bersuhu –4 o C sampai digunakan.
Vaksinasi  Oral. Vaksinasi  dilakukan  melalui oral,  dimana  50  mg/ml whole  cell  vaccine diencerkan pada 5 ml PBS sehingga didapatkan dosis  vaksinasi  yang  diberikan  sebanyak  0,005 ml  lalu  dicampur  dengan  250  ml  Artemia (kepadatan  30000  artemia),  ditunggu  selama  5 menit  lalu  diberikan  kepada  benih  ikan  kerapu tikus  yang  berada  pada  bak  plastik.  Penelitian ini  menggunakan  2  perlakuan  yaitu  vaksinasi dengan Whole  Cell dan  tanpa  vaksinasi (kontrol).

## Hasil dan Pembahasan
Sintasan  dan Relative  Percentage  Survival (RPS) Data Kualitas Air
0 10 20 30 40 50 60 70 Sintasan (%) & RPS (%) WCV Kontrol Vaksin Sintasan (%) RPS (%)
Tabel 2.  Hasil  Rata-rata  Pengamatan  Kualitas Air  pada  Media  Pemeliharaan  Benih Ikan Kerapu Tikus Tahap DO (ppm) Suhu ( o C) Salinitas (ppt) pH Aklimatisasi benih 6 27- 29 31-32 7,3- 7,5 Vaksinasi benih 5 27- 29 31-32 7,3- 7,5 Pemeliharaan 6 27- 29 31-32 7,3- 7,5
Vibriosis  adalah  salah  satu  penyakit yang  disebabkan  oleh  bakteri  yang  berasal  dari genus Vibrio .  Vibriosis  yang  disebabkan  oleh Vibrio  anguillarum biasanya  menyerang  jenis ikan  laut  terutama  ikan  salmon  (Woo  and Bruno, 1998). Berdasarkan hasil uji laboratorium  yang  dilakukan  oleh  Murdjani
(2002) menunjukkan bahwa bakteri V. alginolyticus dan V. anguillarum dapat menyebabkan  kematian  pada  larva  ikan  kerapu tikus. V.  alginolyticus dapat  mematikan  100  % ikan  uji  sedangkan V.  anguillarum dapat mematikan 20 % ikan uji dalam waktu 96 jam.
Austin and Austin (1999)
mengemukakan    bahwa  salah  satu  cara  yang digunakan  untuk  mencegah  penyakit  yang disebabkan  oleh  bakteri  pada  ikan  budidaya adalah  dengan  cara  vaksinasi.  Vaksin  yang digunakan dalam pencegahan penyakit Vibriosis yang disebabkan oleh Vibrio  alginolitycus pada penelitian  ini  adalah  vaksin whole  cell .  Vaksin sel  utuh  atau Whole  Cell  Vaccine yaitu  vaksin dari  sel  bakteri  utuh  yang  dimatikan  dengan cara  menginaktifasi  sel  bakteri  dengan  bahan kimia  atau  melalui  pemanasan  (Austin  and Austin,  1999).  Vaksin whole  cell digunakan dalam  penelitian  ini  karena  vaksin whole  cell memiliki  ukuran  molekul  yang  besar  seperti yang dikemukakan oleh Nindarwi (2006) bahwa Whole  Cell  Vaccine (WCV) memiliki  berat molekul 45-66 kDa.
Pemberian  vaksin  pada  benih  ikan kerapu  tikus  ini  dilakukan  secara  oral  melalui artemia.  Menurut  Austin  and  Austin  (1999), pemberian vaksin secara oral tidak menyebabkan stress pada benih ikan akan tetapi vaksin  yang  diberikan  akan  mudah  larut  pada saluran pencernaan ikan. Vaksin yang diberikan kepada  benih  ikan  kerapu  tikus  terlebih  dahulu dicampurkan  ke  artemia.  Artemia  berperan melindungi  antigen  dari  suasana  asam  pada saluran pencernaan ikan.
Berdasarkan  penelitian  yang  telah dilakukan  terdapat  perbedaan  antara  benih  ikan yang  divaksin  dengan  yang  tidak  divaksin. Benih  ikan  kerapu  tikus  yang  tidak  divaksin
memiliki  sintasan  46  %  sedangkan  pada  benih ikan  kerapu  tikus  yang  divaksin  memiliki sintasan  sebesar  66  %.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  penggunaan  vaksin whole  cell dari V. alginolyticus efektif  untuk  menekan  tingginya kematian massal pada benih ikan kerapu tikus.
Penghitungan  nilai  RPS  berfungsi
untuk mengetahui apakah vaksin yang digunakan  ideal  atau  tidak  jika  diaplikasikan pada  kegiatan  budidaya.  Berdasarkan  hasil penghitungan  nilai  RPS  (%)  didapatkan  hasil bahwa  RPS  benih  ikan  kerapu  tikus  yang divaksin  oral  dengan whole  cell sebesar  37  %. Apabila  dilihat  dari  segi  ekonomisnya,  vaksin ini masih belum bisa dikomersilkan karena nilai RPSnya  kurang  dari  70  %.  Vaksin  dapat dikomersilkan  apabila  nilai  RPSnya  mencapai 70  %  (Varvarigos,  2005).  Nilai  RPS  yang rendah  kemungkinan  disebabkan  benih  ikan tidak dapat  membentuk sistem kekebalan tubuh yang  sempurna  karena  dalam  pembentukan sistem  kekebalan  tubuh  /  respon  imun  juga tergantung  pada  jenis  dan  kualitas  vaksin,  cara vaksinasi.
Dilihat  dari  hasil  kualitas  airnya menunjukkan  bahwa  kualitas  air  masih  dalam kondisi  normal  untuk  kelangsungan  hidup  ikan kerapu  tikus,  sehingga  kematian  yang  terjadi pada  benih  ikan  kerapu  tikus  disebabkan  oleh infeksi bakteri Vibrio alginolyticus . Kualitas air merupakan  faktor  yang  harus  diperhatikan dalam pemeliharaan ikan. Parameter kualitas air yang  diamati  selama  penelitian  yaitu  suhu,  pH, salinitas dan oksigen terlarut.
Parameter  kualitas  air  pada  media pemeliharaan  baik  kontrol  maupun  yang  diberi perlakuan  menunjukkan  hasil  yang  hampir sama.  Suhu  untuk  semua  perlakuan  sama  yaitu 27-29 o C. pH untuk semua perlakuan sama yaitu berkisar antara 7,3-7,5, kondisi ini sudah sesuai dengan standar mutu air laut untuk pembenihan kerapu tikus  yaitu  berkisar  antara  7-8.  Salinitas untuk  semua  perlakuan  berkisar  antara  31-32 ppt,  hal  ini  sudah  sesuai  dengan  rentang salinitas  yaitu  antara  30-33  ppt.  Parameter oksigen  terlarut  pada  semua  perlakuan  berkisar antara  5-6  ppm,  hal  ini  juga  sudah  sesuai dengan  standar mutu air laut untuk pembenihan kerapu tikus.

## Kesimpulan
Penggunaan Whole  Cell  Vaccine dari Vibrio alginolyticus sebagai vaksin oral melalui artemia pada benih ikan kerapu tikus ( Chromileptes  altivelis )  efektif  dapat  mencegah tingginya kematian pada benih ikan kerapu tikus ( Chromileptes altivelis ) karena terdapat
peningkatan  sintasan  sebesar  20  %  yaitu
sintasan  pada  perlakuan    kontrol  sebesar  46  % sedangkan pada perlakuan setelah diberi Whole Cell  Vaccine adalah  66  %.  Nilai  RPS  yang dihasilkan sebesar 37 %.
Dari  hasil  penelitian  perlu  dilakukan aplikasi  penggunaan  vaksin  whole  cell  dari
Vibrio alginolyticus
sebagai upaya penanggulangan  vibriosis  pada  budidaya  skala massal.

## Daftar Pustaka
Austin, B and D. A. Austin. 1987. Methods for
The  Microbiological  Examination  of  Fish and Shellfish. Ellis Horwood Ltd. England. 317 pp.
Austin,  B  and  D.  A.  Austin.  1999.  Bacterial Fish  Pathogen  :  Diseases  of  Farmed  and Wild  Fish.  Third  (Revised)  Edition.
Springer-Praxis  Publishing.  Chicester.  p 29-238.
Ellis,  A.  E.  1988.  Optimizing  Factor  for  Fish Vaccination in Fish vaccination. Academic Press Ltd. 71 pp.
Murdjani.  2002.  Identifikasi  dan  Patologi Bakteri Vibrio  alginolyticus pada  Ikan Kerapu  Tikus  ( Chromileptes  altivelis ). Disertasi. Program Pasca Sarjana. Universitas Brawijaya. Malang. 122 hal.
Nindarwi,  D.D.  2006.  Penggunaan  Whole  Cell dan  Extracelluler  Product  dari Vibrio alginolyticus sebagai  Vaksin  secara  Oral pada Benih Ikan Kerapu Macan ( Epinephelus fuscogutatus ). Skripsi. Program  Studi  S-1  Budidaya  Perairan Fakultas  Kedokteran  Hewan.  Universitas Airlangga. Subyakto,  S  dan  S.  Cahyaningsih.  2003. Pembenihan Kerapu Skala Rumah Tangga.
Agromedia Pustaka. Jakarta. 62 hal.
Suprapto, H., T. Hara, T. Nakai and K. Muroga. 1996.  Purification  of  a  Lethal  Toxin  of Edwardsiella  tarda .  Fish  Pathology  31  : 203-207.
Varvarigos,  P.  2005.  Immersion  or  Injection  ?
Practical  Consideration  of  Vaccination Strategies. www.vetcare.gr/Fish_Vaccination_Strategi es.htm. 10 Mei 2010. 9 hal.
Woo,  P.T.K  and  D.W.  Bruno.  1999.  Fish Diseases  and  Disorders  Volume  3  Viral, Bacterial  and  Fungal  Infections.  CABI Publishing. p 523.