Penulis Nur Amallia 1 , Zainal Alim Mas’ud 2 , Diah Ratnadewi 3
Afiliasi 1 Departemen  Kimia,  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam,  IPB  University,  Bogor, Jawa Barat, 16680, Indonesia.
2 Departemen  Biologi,  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam,  IPB  University,  Bogor, Jawa Barat, 16680, Indonesia.
Kata Kunci  Biomassa
 Cekaman Abiotik
 Triterpena
Keywords  biomass
 abiotic stress
 triterpene
Diterima : 21 Agustus 2019 Direvisi : 6 Juni 2020 Disetujui  : 24 Juni 2020

## *Penulis Koresponding
Nur Amallia email: amallia.nur@gmail.com

## ABSTRAK
Pegagan ( Centella asiatica ) adalah tanaman herbal tradisional yang telah dilaporkan memiliki  berbagai  aktivitas  farmakologis.  Senyawa  pada  pegagan  yang  berperan terhadap  aktivitas  farmakologis  tersebut  adalah  senyawa  golongan  triterpena,  yaitu madekasosida  (MD),  asiatikosida  (AS),  asam  madekasat  (AM),  dan  asam  asiatat  (AA). Cekaman  dapat  mempengaruhi  produksi  biomassa  dan  senyawa  metabolit  sekunder pada  tanaman.  penelitian  bertujuan  menganalisis  pengaruh  cekaman  salinitas  dan kekeringan  terhadap  biomassa  4  senyawa  golongan  triterpene  pada  pegagan. Pemanenan  dilakukan  ketika  tanaman  berumur  8  minggu.  Hasil  panen  dianalisis biomassanya  kemudian  diekstraksi  menggunakan  pelarut  metanol  untuk  selanjutnya dianalisis kadar metabolit sekundernya menggunakan metode kromatografi cair kinerja tinggi  (KCKT).  Biomassa  tanaman  terendah  diperoleh  pada  perlakuan  50%  kapasitas lapang  dan  kadar  garam  3000  ppm.  Kadar  MD  dan  AS  tertinggi  dicapai  pada  kondisi 100%  kapasitas  lapang  dan  kadar  garam  1000  ppm.  Adapun  kapasitas  lapang  50  dan 100% serta kadar garam 1000-3000 ppm tidak mempengaruhi kadar AM dan AS.

## ABSTRACT
Gotu  kola  (Centella  asiatica)  is  a  traditional  herbal  plant  that  has  been  reported have  a  variety  of  pharmacological  activities.  The  compounds  of  gotu  kola  that  play  a role  on  pharmacological  activities  are  triterpene  group  compounds,  namely madecasosside  (MD),  asiaticoside  (AS),  madecassic  acid  (AM),  and  asiatic  acid  (AA). Stress  can  affect  the  production  of  biomass  and  secondary  metabolite  compounds  in plants. The aims of the study is to analyze the effect of salinity and drought stress on biomass and 4 compounds of triterpene in gotu kola. Harvesting is done when the plant is  8  weeks  old.  The  yield  of  the  biomass  was  analyzed  and  then  extracted  using methanol  solvent  to  be  analyzed  secondary  metabolite  levels  using  the  high performance  liquid  chromatography  (HPLC)  method.    The  lowest  crop  biomass  was obtained at 50% of field capacity and 3,000 ppm salt content. The highest levels of MD and  AS  were  established  in  conditions  of  100%  field  capacity  and  1,000  ppm  salt content.  The  50  and  100%  field  capacity  and  1,000-3,000  ppm  salt  content  did  not affect the levels of AM and AA.
Produksi Senyawa Metabolit Sekunder Tanaman Pegagan ( Centella asiatica ) pada Kondisi Cekaman Salinitas dan Kekeringan
Production of Secondary Metabolite Compounds of Gotu Kola (Centella asiatica) Under Salinity and Drought Stress

## PENDAHULUAN
Pegagan  merupakan  tanaman  liar  yang  mudah ditemukan  di  sekitar  perkebunan,  ladang,  tepi  jalan, dan  pematang  sawah.  Walaupun  demikian,  ternyata pegagan  menyimpan  banyak  sekali  manfaat,  baik secara tradisional, maupun modern. Secara tradisional, pegagan  sudah  sejak  zaman  dahulu  dimanfaatkan sebagai  pengobatan  kulit,  di  antaranya  untuk menyamarkan stretch mark , mengobati luka bakar dan jerawat,  serta  mempercepat  penyembuhan  luka. Pegagan  juga  telah  dilaporkan  memiliki  aktivitas farmakologis  sebagai  antipenuaan  (Malamardi et  al. 2003),  antikanker  (Wang et  al. 2013),  antibakteri (Pitinidhipat  dan  Yasurin  2012,  Rattanakom  dan Patchaneeyasurin  2015),  antioksidan  dan  antidiabetes (Dewi dan Maryani 2015), mempercepat penyembuhan luka (Yao et al. 2015), antijamur (Idris dan Nadzir 2017), antiinflamasi  (Saha et  al. 2013),  dan  pengobatan Alzheimer  (Chiroma et  al. 2019).  Banyaknya  manfaat dan  aktivitas  farmakologis  tersebut  disebabkan  oleh tingginya  kandungan  metabolit  sekunder  golongan triterpena dalam pegagan.
Metabolit  sekunder  adalah  produk  metabolisme yang  sifatnya  nonesensial  bagi  pertumbuhan  suatu organisme  dan  ditemukan  berbeda-beda  antarspesies. Senyawa  metabolit  sekunder  tidak  selalu  dihasilkan oleh suatu spesies, tetapi hanya pada fase  atau waktu tertentu  ketika  dibutuhkan.  Fungsi  senyawa  metabolit sekunder pada suatu tanaman meliputi alat pertahanan diri  dalam  suatu  lingkungan  tertentu  dan  alat  untuk berinteraksi  dengan  lingkungannya.  Madekasosida, asiatikosida, asam madekasat, dan asam asiatat adalah metabolit sekunder golongan triterpena yang merupakan  senyawa  penciri  pegagan  (Hashim et  al. 2011).
Cekaman adalah kondisi perubahan lingkungan yang tidak  menguntungkan  dan  dapat  mengganggu pertumbuhan  dan  perkembangan  tanaman.  Respons tanaman  terhadap  keberadaan  cekaman  dapat berbeda-beda  antarspesies,  tergantung  jenis,  waktu, dan  tingkat  cekaman  yang  diberikan.  Secara  umum, cekaman  dibagi  menjadi  cekaman  biotik  dan  abiotik. Menurut  Mahajan  dan  Tuteja  (2005),  cekaman  biotik terdiri  atas  patogen,  serangga,  herbivora,  dan  hewan pengerat; sementara cekaman abiotik terdiri atas suhu, salinitas,  air,  radiasi,  cekaman  kimiawi,  dan  cekaman mekanis. Cekaman salinitas dan kekeringan merupakan cekaman abiotik yang paling memengaruhi pertumbuhan dan perkembangan tanaman. Umumnya respons  tersebut  dapat  diukur  dari  biomassa  dan kandungan metabolit sekundernya.
Basyuni et  al. (2019)  melaporkan  bahwa  cekaman salinitas  yang  diberikan  pada  bakau  spesies Avicennia offinalis dapat meningkatkan kandungan poliisoprenoid pada daunnya. Sementara pada bakau spesies Brugiera cylindrica dan Xylocarpus  granatum, cekaman salinitas meningkatkan  kadar  poliisoprenoid  pada  akar. Penelitian  yang  dilaporkan  Jimenez-Herrera et  al. (2019)  menyatakan  bahwa  cekaman  kekeringan  dapat meningkatkan kandungan triterpena pada buah, daun, dan  batang  pohon  zaitun Olea  europaea. Cekaman yang sengaja diberikan pada suatu tanaman diharapkan dapat meningkatkan jumlah metabolit sekunder dalam tanaman tersebut sebagai respons pertahanan diri.
Penelitian bertujuan menganalisis pengaruh cekaman  salinitas  dan  kekeringan  terhadap  biomassa dan  kadar  senyawa  metabolit  sekunder  golongan triterpena tanaman pegagan ( C. asiatica ).

## METODE Waktu dan Tempat
Penelitian  dilaksanakan  pada  bulan  Oktober 2018−Juli  2019  di  Laboratorium  Kimia  Organik, Departemen  Kimia,  Institut  Pertanian  Bogor  (IPB)  dan Laboratorium Pusat Studi Biofarmaka, IPB.

## Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  antara  lain  bibit pegagan    diperoleh  dari  Balai  Besar  Penelitian  dan Pengembangan Bioteknologi dan Sumber Daya Genetik Pertanian (BB Biogen), Bogor; tanah andosol diperoleh dari  Cikabayan,  Dramaga,  Bogor;  kompos  merk  Aneka Kompos;  polibag  20x20  cm;  metanol  teknis  satu  kali distilasi;  metanol  mutu  KCKT  (Merck,  Darmstadt, Jerman);  asetonitril  mutu  KCKT  (Merck,  Darmstadt, Jerman); akuabides; standar madekasosida, asiatikosida, asam asiatat, dan asam madekasat.

## Alat
Alat-alat yang digunakan antara lain peralatan kaca yang  lazim  terdapat  di  laboratorium,  neraca  analitik (Sartorius,  Bradford,  Jerman),  oven,  radas  distilasi, penguap  putar  ( Rotavapor R-114 waterbath B-480, Swiss)  ,  mikropipet,  membran  filter  Whatman  (ukuran pori  0.45  µm;  PTFE;  P/N  E252,  Buckinghamshire, England), kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) dengan spesifikasi: tipe Hitachi, detector UV-Vis L-2420, oven L- 2300, kolom Shim-pack VP-ODS C18 (150 x 4.6 mm).

## Penanaman
Bibit  tanaman  pegagan  diperoleh  dari  Balai  Besar Penelitian  dan  Pengembangan  Bioteknologi  dan Sumber  Daya  Genetik  Pertanian  (BB  Biogen),  Bogor. Penanaman dilakukan di Dramaga , Bogor dengan titik geografis antara 6° 30’−6° 45’ LS dan 106° 30’−106° 45’
BT,  ketinggian  tempat  antara  145−400  m  dpl,  pada suhu  udara  rata-rata  harian  22.6−32.9  °C  dan  tekanan udara  987.2−991.7  mb.  Setelah  berumur  3  minggu, bibit ditanam pada media campuran tanah andosol dan kompos dengan perbandingan 1:1 (v/v). (Lampiran 1) . Setiap  polybag  terdiri  atas  satu  tanaman  yang  diambil dari  anakan  dengan  jumlah  daun  3−4  helai.  Perlakuan kapasitas  lapang  dan  garam  dimulai  pada  1  minggu setelah  ditanam  di  media  baru.  Perlakuan  yang diberikan yaitu kapasitas lapang (KL) 50 dan 100% serta kadar  garam  (KG)  1  000;  2  000;  dan  3  000  ppm sehingga diperoleh 6 perlakuan. penyiraman dilakukan 2 hari sekali dan disesuaikan dengan kondisi tanaman. Kontrol diberikan dalam bentuk 60% KL tanpa cekaman garam.

## Pemanenan dan Pengukuran Biomassa Tanaman
Tanaman  dipanen  pada  umur  8  PST.  Pengukuran dilakukan  terhadap  produksi  biomassa  berupa  bobot basah dan kering keseluruhan tanaman.
Ekstraksi Ekstraksi dilakukan dengan cara maserasi menggunakan  pelarut  metanol.  Sampel  dimaserasi dengan  metanol  sebanyak  200  mL  selama  2x10  jam, dipekatkan  menggunakan  penguap  putar,  kemudian dihitung rendemennya.

## Analisis KCKT
Analisis  kadar  senyawa  triterpena  mengacu  pada metode  yang  dikembangkan  oleh  Rafi et  al. (2018). Sebanyak  200  mg  ekstrak  disuspensi  dalam  5  mL metanol dan diultrasonikasi selama satu jam pada suhu ruang. Larutan sampel kemudian disaring menggunakan  membran  filter  0.45  µm  dan  ditera dalam  labu  takar  10  mL  menggunakan  metanol sebelum  dianalisis.  Larutan  standar  madekasosida, asiatikosida,  asam  madekasat,  dan  asam  asiatat  yang digunakan adalah 25, 50, 100, 200, dan 250 ppm.
Kondisi  alat  yang  digunakan  meliputi  instrument KCKT  Shimadzu  LC-20A,  detector  diode-array  UV-Vis. Fase  diam  yang  dipakai  yakni  kolom  C18  shim-pack Shimadzu  VP-ODS  150  x  4.6  mm  ukuran  partikel  4.6 µm. Sementara fase geraknya adalah asetonitril dan air menggunakan  program  elusi  gradien  selama  40  menit dengan  laju  alir  1  mL/menit.  Kolom  dijaga  pada  suhu 40°C  dan  analisis  dilakukan  pada  panjang  gelombang 206 nm.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Pengaruh Cekaman Salinitas dan Kekeringan terhadap Biomassa Tanaman
Cekaman  kekeringan  dan  salinitas  merupakan cekaman abiotik yang paling memengaruhi produktivitas  tanaman  dan  berdampak  pada  semua proses  dasar  tanaman,  mulai  dari  perkecambahan hingga  semua  aspek  fisiologis  yang  vital  (Zhang et  al. 2011).  Tanaman  yang  tumbuh  pada  kondisi  cekaman kekeringan dan salinitas menghadapi cekaman osmotik dari  terganggunya  homeostatis  dan  keseimbangan  ion (Guo et al. 2015).
KL  menunjukkan  jumlah  maksimal  air  yang  mampu ditahan  oleh  tanah  terhadap  gravitasi.  Perlakuan  KL yang  digunakan  yaitu  50  dan  100%.  Pemilihan  KL didasarkan pada penelitian Rahardjo et al . (1999) yang melaporkan  bahwa  pegagan  tidak  mampu  tumbuh pada  kondisi  KL  40%  dan  kurang  dari  itu.  KG  1  000;  2 000; dan 3 000 ppm dipilih berdasarkan Ibrahim et al . (2018)  yang  melaporkan  bahwa  pegagan  dapat bertahan  pada  KG  0-5  000  ppm  selama  12  minggu. Kontrol  merupakan  perlakuan  tanpa  cekaman  garam dan  60%  KL  berdasarkan  Rahardjo et  al. (1999)  yang melaporkan  bahwa  asiatikosida,  asam  asiatat,  dan asam  madekasat  mencapai  kadar  yang  optimum  pada kondisi tersebut.

## Tabel 1. Biomassa Tanaman dan Rendemen Hasil Ekstraksi
Perlakuan Bobot (gram) Rendemen KL (%) KG (ppm) Basah Kering Ekstrak (%) 50 1 000 14.4107 3.7298 0.4706 12.62 50 2 000 11.0491 3.0044 0.3961 13.18 50 3 000 8.1195 1.9804 0.2732 13.80 100 1 000 8.5988 2.4753 0.3370 13.61 100 2 000 11.5050 2.8969 0.3673 12.68 100 3 000 11.7757 2.8160 0.3818 13.56 Blanko 8.5206 2.2063 0.2950 13.37
Keterangan: KL = kapasitas lapang, KG = kadar garam
Biomassa dari keenam perlakuan dan kontrol tersaji pada  Tabel  1.  Bobot  terendah  diperoleh  pada perlakuan  50%  KL  dan  KG  3  000  ppm.  Hal  ini  terjadi karena  tingkat  salinitas  yang  tinggi  dan  kurangnya pasokan  air  pada  tanaman  menyebabkan  penurunan serapan hara, menciptakan ketidakseimbangan osmotik, dan gangguan metabolisme yang mengakibatkan  gangguan  dalam  berbagai  aktivitas fisiologis dan penurunan pertumbuhan tanaman secara keseluruhan (Meng et al. 2016). Untuk mengatasi efek samping  ini,  tanaman  merespons  dengan  mengurangi pemanfaatan energi untuk pertumbuhan dan perkembangan  sehingga  energi  tersebut  dapat digunakan  untuk  penyesuaian  kondisi  ekstrem  (Parida et  al. 2018).  Tanaman  juga  merespons  kekeringan secara  fisik  dan  fisiologis  dengan  penutupan  stomata untuk mengurangi laju transpirasi. Stomata merupakan organ  transpirasi  tanaman  tempat  pengambilan  CO 2 dan pelepasan O 2 . Penutupan stomata akibat cekaman kekeringan  menyebabkan  kurangnya  pasokan  CO 2 dan H 2 O  sebagai  bahan  utama  proses  fotosintesis  yang berakibat  pada  terganggunya  proses  fotosintesis  itu sendiri.  Gangguan  pada  proses  fotosintesis  inilah  yang mengakibatkan penurunan biomassa tanaman. Sementara  O 2 yang  tidak  dilepas  dapat  berubah menjadi  ROS  sehingga  kadar  ROS  pada  tanaman tersebut  menjadi  lebih  tinggi.  Biomassa  terbanyak diperoleh  pada  kondisi  50%  KL  dan  KG  1  000  ppm. Menurut  Mittler  (2017),  tingkat  ROS  yang  tepat  dapat menghasilkan  pertumbuhan  tanaman  yang  optimal. Maka, perlakuan 50% KL dan KG 1 000 ppm merupakan
perlakuan  yang  membuahkan  tingkat  ROS  yang  tepat sehingga  menghasilkan  pertumbuhan  tanaman  yang optimal.
Tanaman  yang  diukur  biomassanya  kemudian diekstraksi  dengan  cara  maserasi.  Selain  maserasi, ekstraksi  dapat  dilakukan  dengan  cara  refluks, soxhletasi,  dan  distilasi.  Cara  maserasi  dipilih  untuk mencegah  terjadinya  degradasi  termal  pada  senyawa target.  Maserasi  dilakukan  menggunakan  pelarut metanol. Pelarut  dipilih berdasarkan penelitian Artanti et  al .  (2014)  yang  melaporkan  bahwa  kandungan triterpena  total  tertinggi  dari  pegagan  diperoleh  dari ekstrak  metanol  dibandingkan  dengan  ekstrak  etanol. Selain  itu,  metanol  merupakan  pelarut  yang  dapat digunakan  untuk  mengekstraksi  senyawa  golongan terpena  dan  glikosida  (He et  al .  2012).  Ekstraksi terhadap seluruh bagian tanaman pegagan menghasilkan  rendemen  12.62−13.80%.  Persentasi rendemen  yang  dihasilkan  telah  memenuhi  syarat mutu herba pegagan menurut  Depkes RI (2009), yakni rendemen tidak kurang dari 7.20%.
Gambar 1. Senyawa Penciri Tanaman Pegagan
Pengaruh Cekaman Salinitas dan Kekeringan terhadap Kadar Metabolit Sekunder
Menurut Hashim et al. (2011), madekasosida (MD), asiatikosida  (AS),  asam  madekasat  (AM),  dan  asam asiatat  (AA)  adalah  metabolit  sekunder  golongan triterpena  yang  merupakan  senyawa  penciri  pegagan (Gambar  1).  Kadar  keempat  senyawa  tersebut ditentukan  menggunakan  KCKT.  Menurut  Bahadir- Acikara et  al. (2018),  metode  KCKT  dapat  digunakan untuk  analisis  kuantitatif  senyawa  triterpena  glikosida pada ekstrak kasar.
MD dan AS merupakan senyawa  saponin terpenoid atau  triterpena  glikosida,  yakni  triterpena  hidrofobik yang mengikat gula hidrofilik. Gula yang terdapat pada
MD dan AS adalah 2 glukosa dan 1 rhamnosa. Sanchez et  al. (2012)  melaporkan  bahwa  pada  kondisi kekurangan air, terjadi peningkatan kadar gula, seperti fruktosa, glukosa, galaktosa, dan maltosa. Peningkatan tersebut  terjadi  karena  gula  dapat  berperan  sebagai osmoprotektan,  yakni  senyawa hidrofilik  yang diproduksi  secara  alami  oleh  tanaman  untuk melindungi  sel  dari  cekaman  kekeringan,  baik  secara fisik maupun fisiologis (cekaman salinitas). Penggunaan gula  sebagai  osmoprotektan  diduga  mengakibatkan rendahnya kadar MD dan AS. Maka, kadar MD dan AS tertinggi diperoleh pada kondisi 100% KL dan KG 1 000 ppm  (Tabel  2).  Perlakuan  tersebut  merupakan perlakuan dengan cekaman paling “ringan” dan kondisi
Tabel 2. Kadar Empat Senyawa Triterpena Pegagan
Perlakuan Kadar (mg g -1 sampel) KL (%) KG (ppm) MD AS AM AA 50 1 000 2.21 5.10 1.38 3.61 50 2 000 2.78 5.56 0.90 3.04 50 3 000 2.62 4.90 1.16 2.34 100 1 000 5.56 10.26 1.34 2.68 100 2 000 2.68 5.16 2.04 3.99 100 3 000 2.25 4.20 1.16 2.53 Blanko 2.27 4.30 1.20 2.72
Keterangan: KL = kapasitas lapang, KG = kadar garam, MD = madekasosida,AS = asiatikosida, AM = asam madekasat, AA = asam asiatat
Gambar 1. Mekanisme Degradasi Metakrolein (atas) dan Metil Vinil Keton (bawah) (Schone 2014)
paling optimum tanaman untuk menghasilkan MD dan AS  tertinggi.  Pada  perlakuan  lain  yang  lebih  ekstrem, gula digunakan sebagai osmoprotektan sehingga kadar MD dan AS menjadi lebih rendah.
Parida et  al. (2018)  melaporkan  bahwa  kondisi lingkungan  yang  ekstrem  seperti  salinitas  dan kekeringan  yang  tinggi  dapat  memicu  peningkatan produksi  ROS  dalam  kloroplas  dan  mitokondria. Menurut  Mittler  (2017),  metabolisme  tanaman  yang normal  membutuhkan  ROS  optimal  untuk  proliferasi dan  diferensiasi  seluler  yang  memungkinkan  tanaman mencapai pertumbuhan dan perkembangan  maksimal. ROS  yang  rendah  dapat  menghambat  pertumbuhan dan  perkembangan  tanaman,  sedangkan  ROS  yang terlalu  tinggi  mengakibatkan  terjadinya  stres  oksidatif dan  kerusakan  organel  sel  yang  vital  pada  tanaman. Pencegahan  terhadap  kerusakan  sel  ini  dilakukan tanaman  dengan  memproduksi  lebih  banyak  senyawa antioksidan  yang  dapat  menangkap  ROS.  Senyawa triterpena  terbentuk  melalui  reaksi  penggabungan  6 unit  isoprena dari jalur MEP atau 2 unit seskuiterpena yang  dihasilkan  melalui  jalur  MVA.  Seskuiterpena tersusun  dari  3  unit  isoprena.  Menurut  Affek  &  Yakir (2002)  serta  Fan  &  Zhang  (2004),  isoprena  dapat bereaksi  dengan  ROS  menghasilkan  metakrolein  dan metil vinil keton. Kedua senyawa ini selanjutnya dapat terdegradasi  menjadi  hidroksi  oksobutanal  (HOB), hidroksi  butanadion  (HDMG),  dihidroksi  butanon (DHB),  dihidroksi  metilpropanal  (DHMP),  hidroksi metilmalonaldehida (HMM), asam piruvat, metilglikoksal,  hidroksiaseton,  dan  glikoksaldehida (Schone 2014) (Gambar 2), sehingga dapat memengaruhi  kadar  triterpena  tanaman.  Kadar  MD dan  AS  yang  tinggi  pada  perlakuan  100%  KL  dan  KG  1 000 ppm diduga karena perlakuan tersebut menghasilkan cekaman paling “ringan” dan merupakan kondisi  paling  optimum  tanaman  untuk  menghasilkan MD  dan  AS.  Pada  perlakuan  cekaman  lain,  dihasilkan ROS  dengan  jumlah  lebih  banyak  yang  mengakibatkan terdegradasinya  isoprena  untuk  mengurangi  efek negatif  dari  ROS.  Selain  itu,  tanaman  memproduksi berbagai  antioksidan  seperti  monoterpena,  diterpena, karotenoid  (tetraterpena),  tokoferol,  dan  polifenol untuk menangkap ROS sehingga kadar triterpena yang dihasilkan tanaman tersebut berkurang.
Kadar AM dan AA pada semua perlakuan tidak jauh berbeda  dan  relatif  rendah.  Hal  ini  terjadi  karena  AM dan  AA  merupakan  hasil  dari  hidrolisis  AS  dan  MD. Suasana  air  yang  hampir  sama  pada  perlakuan  yang diberikan  mengakibatkan  kadar  AM  dan  AA  yang dihasilkan  tidak  berbeda  jauh.  Selain  itu,  umur
tanaman  ketika  dipanen  masih  relatif  muda.  Pada tanaman  muda,  biosintesis  metabolit  sekunder  yang terjadi  belum  maksimal  seperti  pada  tanaman  yang sudah  dewasa.  Hal  ini  disebabkan  CO 2 dan  H 2 O  yang diperoleh  ketika  proses  fotosintesis  lebih  banyak digunakan  untuk  pertumbuhan  dan  perkembangan tanaman  daripada  untuk  mempertahankan  diri  dari lingkungan. Menurut  Nomi (2018), kadar MD, AS, AM, dan  AA  maksimal  diperoleh  ketika  tanaman  dipanen pada umur 4 bulan (sekitar 17 minggu).

## SIMPULAN
Biomassa  tanaman  terendah  diperoleh  pada perlakuan 50% kapasitas lapang dan kadar garam 3 000 ppm,  sedangkan  tertinggi  pada  perlakuan  50% kapasitas  lapang  dan  kadar  garam  1  000  ppm.  Kadar madekasosida  dan  asiatikosida  tertinggi  dicapai  pada kondisi 100%  kapasitas  lapang dan kadar garam  1 000 ppm.  Adapun  perlakuan  yang  diberikan  tidak memengaruhi  kadar  asam  madekasat  dan  asam  asitat pada pegagan. Cekaman salinitas berupa kadar garam 1 000−3  000  ppm  serta  cekaman  kekeringan  berupa kapasitas lapang 50 dan 100% memengaruhi biomassa serta  kadar  madekasosida  dan  asiatikosida,  tapi  tidak memberikan  pengaruh  yang  berarti  pada  kadar  asam madekasat  dan  asam  asiatat  tanaman  pegagan berumur 8 minggu.

## DAFTAR PUSTAKA
Affek  HP,  dan  Yakir  D.  2002.  Protection  by  isoprene against  singlet  oxygen  in  leaves. Plant  Physiol. 129:269-277. doi: 10.1104/pp.010909.
Artanti  N,  Dewi  RT,  Maryanti  F.  2014.  Pengaruh  lokasi dan  pelarut  pengekstraksi  terhadap  kandungan fitokimia  dan  aktivitas  antioksidan  ekstrak  pegagan ( Centella asiatica L. Urb ). JKTI. 16(2):88-92. Bahadir-Acikara  O,  Ozbilgin  S,  Saltan-Iscan  G, Dall’Acqua  S,  Rjaskova  V,  Ozgokce  F,  Suchy  V, Smejkal  K.  2018.  Phytochemical  analysis  of Podospermum  and  Scorzonera  n-hexane  extracts and the HPLC quantitation of triterpenes. Molecules. 23:1-12. doi: 10.3390/molecules23071813. Basyuni M, Sagami H, Baba S, Oku H. 2019. Response of polyisoprenoid  concentration  and  profile  in  three groups  of  mangrove  seedlings  of  coping  with  long- term  salinity. Biodiversitas. 20(1):320-326.  doi: 10.13057/biodiv/d200137.
Chiroma  SM,  Baharuldin  MTH,  Taib  CMT,  Amom  Z, Jagadeesan  S,  Adean  MI,  Mahdi  O,  Moklas  MAM. 2019.  Protective  effects  of Centella  asiatica on cognitive  deficits  induced  by  D-gal/AlCl3  via
inhibition  of  oxidative  stress  and  attenuation  of acethylcholinesterase  level. Toxics. 7:1-19.  doi: 10.3390/toxics7020019.
[Depkes RI] Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
2009. Farmakope Herbal Indonesia. Ed ke-1. Jakarta (ID): Depkes RI.
Dewi  RT,  Maryani  F.  2015.  Antioxidant  and  -glusidase inhibitory  compounds  of Centella  asiatica .  17:147- 152. Procedia Chem. doi: 10.1016/j.proche.2015.12.130.
Fan  J,  Zhang  R.  2004.  Atmospheric  oxidation mechanism  of  isoprene. Environ.  Chem. 1:140-149. doi:10.1071/EN04045
Guo R, Yang Z, Li F, Yan C, Zhong X,  Liu Q,  Xia X,  Li H, Zhao L. 2015. Comparative metabolic responses and adaptative  strategies  of  wheat  ( Triticum  aestivum ) to salt and alkali stress. BMC Plant Biologi . 15:1-13. doi: 10.1186/s12870-015-0546-x.
Hashim  P,  Sidek  H,  Helan MHM,  Sabery  A, Palanisamy UD,  Ilham  M.  2011. Molecules. 16:1310-1322.  doi:
10.3390/molecules16021310.
He W, Fu Z, Zeng G, Zhang Y, Han H, Yan H, Ji C, Chu H, Tan N. 2012. Terpene and lignan glycosides from the twigs and leaves of an endangered conifer, Cathaya argyrophylla . J Phytochem. 83:63-69. doi: 10.1016/j.phytochem.2012.07.013.
Ibrahim  MH,  Shibli  NI,  Izad  AA,  Zain  NAM.  2018.
Growth, chlorophyll fluorescence, leaf gas exchange and phytochemicals of Centella asiatica exposed to salinity stress.
ARRB. 27(2):1-13.
doi: 10.9734/ARRB/2018/41014.
Idris  FN,  Nadzir  MM.  2017.  Antimicrobial  activity  of Centella  asiatica on Aspergillus  niger and Bacillus subtilis . Chem  Eng Transactions . 56:1381-1386. doi: 10.3303/CET1756231.
Jimenez-Herrera  R,  Pacheco-Lopez  B,  Peragon  J.  2019. Water  stress,  irrigation,  and  concentrations  of pentacyclic  triterpenes  and  phenols  in Olea europaea L.  cv.  Picual  olive  trees. Antioxidants. 8(294):1-14. doi: 10.3390/antiox8080294.
Mahajan S, Tuteja  N. 2005. Cold, salinity, and drought stresses:  an  overview. Arch  Biochem  and  Biophys. 444:139-158. doi: 10.1016/j.abb.2005.10.018.
Maramaldi G, Togni S, Franceschi F, Lati E,  2013. Anti- inflammaging  and  antiglycation  activity  of  a  novel botanical  ingredient  from  African  biodiversity (Centevita). Clin  Cosmet  Investig  Dermatol .  7:1-9. doi: 10.2147/CCID.S49924.
Meng  F,  Luo  Q,  Wang  Q,  Zhang  X,  Qi  Z,  Xu  F.  2016. Physiological  and  proteomic  responses  of  diploid and tetraploid black locust ( Robinia pseudoacacia L.)
subjected  to  salt  stress. Sci  Rep .  14:20299–20325. doi: 10.3390/ijms141020299.
Mittler  R.  2017.  ROS  are  good. Trends  Plant  Sci. 22(1):11-19. doi: 10.1016/j.tplants.2016.08.002. Nomi  AG.  2018.  Pemrofilan  metabolit  pegagan ( Centella  asiatica )  berdasarkan  umur  tanam menggunakan spektrum infra-merah dan kromatograsi  cair  [tesis].  Bogor  (ID):  Institut Pertanian Bogor.
Parida AK, Panda A, Rangani J. 2018. Plant Metabolites and Regulation Under Environmental Stress. Ahmad P,  Ahanger  MA,  Singh  VP,  Tripathi  DK,  Alam  P, Alyemeni  MN,  editor.  Cambridge  (GB):  Elsevier  Inc. hlm  89-131.  doi:  10.1016/B978-0-12-812689- 9.00005-4.
Pitinidhipat N, Yasurin P. 2012. Antibacterial activity of Chrysanthemum  indicum,  Centella  asiatica  and Andrographis paniculate against Bacullus cereus and Listeria  monocytogenes  under  osmotic  stress. AU J.T . 15(4):239-245.
Rafi  M,  Handayani  F,  Darusman  LK,  Rohaeti  E, Yudiwanti W, Sulistiyani, Honda K, Putri SP. 2018. A combination  of  simultaneous  quantification  of  four triterpenes  and  fingerprint  analysis  using  HPLC  for rapid  identification  of  Centella  asiatica  from  its related plants and classification based on cultivation ages. Ind  Crop  and  Prod. 122(5):93-97.  doi: 10.1016/j.indcrop.2018.05.062.
Rahardjo  M,  Rosita  SMD,  Fathan  R,  Sudiarto.  1999. Pengaruh  cekaman  air  terhadap  mutu  simplisia pegagan (Centella asiatica). Jurnal Littri . 5(3):92-97. Rattanakom  S,  Patchaneeyasurin.  2015.  Chemical profiling  of  Centella  asiatica  under  different extraction  solvents  and  its  antibacterial  activity, antioxidant  activity .  Orient  J  Chem .  31(4):2453- 2459. doi: 10.13005/ojc/310480.
Saha S, Guria T, Singha T, Maity TK. 2013. Evaluation of analgesic and anti-inflammatory activity of chloroform  and  methanol  extracts  of  Centella asiatica Linn. ISRN Pharmacol . 1-6. doi:
10.1155/2013/789613.
Sanchez DH, Schwabe F, Erban A, Udvardi MK, Kopka J. 2012.  Comparative  metabolomics  of  drought acclimation in model and forage legumes . Plant Cell Environ . 35:136-149. doi: 10.1111/j.1365-
3040.2011.02423.x.
Schone  L,  Schindelka  J,  Szeremeta  E,  Schaefer  T, Hoffmann D, Rudzinski KJ, Szmigielski, Herrmann H. 2014. Atmospheric aqueous phase radical chemistry of  the  isoprene  oxidation  products  methacrolein, methyl  vinyl  ketone,  methacrylic  acid,  and  acrylic
Produksi Senyawa Metabolit Sekunder Tanaman Pegagan ( Centella asiatica ) pada Kondisi Cekaman Salinitas dan Kekeringan
75
acid  –  kinetics  and  product  studies. Phys  Chem Chem Phys . 16:6257-6272. doi:
10.1039/C3CP54859G.
Wang  L,  Xu  J,  Zhao  C,  Zhao  L,  Feng  B.  2013. Antiproliferative,  cell-cycle  dysregulation  effects  of novel  asiatic  acid  derivatives  on  human  non-small cell  lung  cancer  cells. Chem  Pharm  Bull . 61(10):1015-1023. doi: 10.1248/cpb.c13-00328. Yao  CH,  Yeh  JY,  Chen  YS,  Li  MH,  Huang  CH.  2015. Wound-healing  effect  of  electrospun  gelatin
nanofibers  containing  Centella  asiatica  extract  in  a rat  model. J  Tissue  Eng  Regen  Med .  11(3):905-915. doi: 10.1002/term.1992.
Zhang J, Zhang Y, Du Y, Chen S, Tang H. 2011. Dynamic metabonomic  responses  of  tobacco  (Nicotiana tabacum)  plants  to  salt  stress. J  Proteome  Res.
10(4):1904-1914. doi: 10.1021/pr101140n.