Uji Stabilitas Spironolakton Terhadap  Perubahan p H dengan Menggunakan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT)
Spironolactone Stability Test on p H Changes Using High Performance Liquid Chromatography (HPLC)
Nelly Suryani 1 *, Yardi, Supandi 1 , Ririn Astri Sabdowati 1
email: nelly.suryani@uinjkt.ac.id

## Abstrak
Spironolakton  merupakan  obat  diuretic  antagonis  aldosterone  untuk  hipertensi.  Pada prakteknya spironolakton terkadang digabungkan dengan obat-obat lain, dan pada pasien yang tidak  sadarkan  diri  pemberian  obat  harus  menggunakan feeding  tube dan rentan  akan ketidakstabilan.
Objek  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  melihat  pengaruh  perubahan p H  pada spironolakton  tablet  yang  digerus  dan  disuspensikan  di  dalam  air.  Metode  pengukuran  kadar spironolakton  menggunakan  Kromatografi  Cair  Kinerja  Tinggi  berdasarkan  metode  dalam United  State  Pharmacopeia.  Suspensi  spironolakton  dibuat  dalam p H  3,  5,  7,  dan  9  dengan waktu pengambilan sampel pada menit ke 0, 15, 30, 45, dan 60.
Hasil  menunjukkan  bahwa  persen  kadar  spironolakton  pada p H  3  adalah  ≤  40%, p H  5 adalah  74%  -  100%.  Pada p H  7  berada  dikisaran  27%  -  61%,  dan  pada  pH  9  adalah  38%  - 54%.  Hal ini menjelaskan bahwa persen kadar spironolakton pada p H 3,7, dan 9 pada semua waktu  pengambilan  sampel  sudah  tidak  sesuai  dengan  kadar  terapi  minimum  dalam monograph. Hanya pada p H 5 kadar spironolakton masih sesuai dengan kadar yang ditentukan dalam  monograph.  Dalam  penelitian  ini  dapat  disimpulkan  bahwa  perubahan p H  dapat menurunkan kadar spironolakton dalam suspensi secara signifikan.
Spironolactone  is  an  aldosterone  diuretic  antagonist  for  hypertension.  In  practice spironolactone is sometimes combined  with other drugs, and in unconscious patients the  drug must use a feeding tube and be susceptible to instability.
The  object  of  this  study  was  to  see  the  effect  of p H  changes  on  spironolactone  tablets which  were  crushed  and  suspended  in  water.  The  method  of  measuring  spironolactone  levels using  High  Performance  Liquid  Chromatography  based  on  methods  in  the  United  State Pharmacopeia. Spironolactone suspension was made at p H 3, 5, 7, and 9 with sampling time in minutes 0, 15, 30, 45, and 60.
The results showed that the level of spironolactone at p H 3 was ≤ 0%, p H  5  was 74%  - 100%, at p H 7 it was in the range of 27% - 61%, and at p H 9 was 38% - 54%. This explains that percent  of  spironolactone  at p H  3.7,  and  9  at  all  sampling  times  did  not  match  the  minimum therapeutic level in the monograph. Only at p H 5 does the level of spironolactone still match the levels  specified  in  the  monograph.  In  this  study  it  can  be  concluded  that  changes  in p H  can significantly reduce spironolactone levels in suspension.
1 Jurusan Farmasi, Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan, Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta
Jakarta/Tangerang Selatan, Indonesia.
Kata  kunci  : Stabilitas,  Spironolakton,  Suspensi,  pH,  KCKT
Abstact
Keyword : Stability, Spironolactone, suspension, pH, HPLC

## PENDAHULUAN
Spironolakton  merupakan  obat diuretic  antagonis  aldosterone  untuk hipertensi.  Umumnya  dibuat  dalam bentuk  tablet  salut  film  tidak  dalam bentuk larutan ataupun suspensi.(Mahmoud, banker) Spironolakton merupakan senyawa ester yang memiliki struktur lakton yang mudah  terhidrolisis.  Menurut  studi  oleh kaufman,  senyawa  yang  mengandung struktur  lakton  mudah  terhidrolisis. (Banker  et  al  2002,  Min  Li  2012,  Niazi and Sarfaraz 2006).
Pada  prakteknya  spironolakton terkadang  digabungkan  dengan  obat- obat  lain,  dan  pada  pasien  yang  tidak sadarkan  diri  pemberian  obat  harus menggunakan feeding tube . Cara pemberian  melalui feeding  tube rentan akan  ketidakstabilan.  Ketidakstabilan dapat dideteksi melalui perubahan sifat fisika,  kima,  serta  penampilan  dari sediaan.  (Niazi  and  Sarfaraz  2006, Ansel H.C 1994)
Bila  bentuk  sediaan  obat  diubah seperti diserbukkan, dilarutkan, ditambahkan  dengan  bahan  lain  atau dilakukan  modifikasi  faktor  lingkungan kemungkinan  dapat  merubah  stabilitas obat tersebut. Beberapa hal yang dapat mempengaruhi  stabilitas  dari  sediaan adalah  interaksi  bahan  aktif  dengan bahan  aktif  lainnya.  Faktor  lingkungan seperti  temperatur  juga  mempengaruhi stabilitas  obat.  (Lachman  et  al  2007, David  et  al  2006,  The  United  States
Pharmacopeial Convention 2007, Attwood dan Florence 2011). Satu  studi  yang  dilakukan  oleh
Nahata et  al. mengemukakan  bahwa suspensi  spironolakton  selama  ±  90 hari  stabil  dalam  pendingin  dan  suhu kamar. Dekomposisi spironolakton
terhadap  pH  menunjukkan  bahwa  nilai pH  optimum  spironolakton  adalah  pH
4.5 pada suhu 40 o C. Pada pH tersebut menunjukkan nilai dekomposisi minimum  dengan  nilai  K:  0.00095  [9, 10].  Tujuan  dari  studi  ini  adalah  untuk menganalisa kadar
suspensi
spironolakton dalam variasi pH.

## Material
Material yang digunakan dalam studi ini adalah  zat  aktif  standar  dari  sigma- aldrich,  tablet  spironolakton  (Letonal) 25  mg,    aquabidest  dari  Wida  dan metanol HPLC grade dari Merck. Untuk pengujian pH larutan dapar yang dibuat dari KH 2 PO 4 dan K 2 HPO 4 .

## Instrument
Alat  yang  digunakan  dalam  pengujian ini  adalah  KCKT  (Dionex  Ultimate 3000)  dengan  software  chromaleon sebagai intrumen utama. Selain itu juga menggunakan spectrophotometer (hitachi  u-2910)  untuk  menentukan panjang gelombang.
METODE PENELITIAN Penentuan panjang gelombang maksimum
Larutan  standar  spironolakton  dibuat dengan  cara  melarutkan  zat  standard hingga  didapat  konsentrasi  10  ppm yang  kemudian  diuji  menggunakan spectrophotometer  untuk  mendapatkan panjang gelombang maksimum.

## Uji kesesuaian sistem
Larutan  standar  spironolakton  dibuat dalam  konsentrasi  100  ppm,  kemudian diinjeksikan ke instrument KCKT sebanyak  10μL  dengan  menggunakan fase gerak metanol : aquabidest 60 : 40 (v  /  v)  dengan  column  C18  (5μm 4,6x250mm),  diulang  sebanyak  6  kali (Attwood  D  dan  Florence  2011). Kemudian  dilihat  nilai  dari theoretical
plates, RSD (Relative Standard Deviation),  peak  area,  retention  time dan tailing  factor .  Sistem  ini  dilakukan untuk memverifikasi dan menguji stabilitas instrument. Pengujian verifikasi instrument Akurasi dan Presisi Pengujian menggunakan larutan standar spironolakton dengan konsentrasi  80,  100  dan  120  ppm. Larutan standar masing masing diinjeksikan  dan  diuji  dengan  sistem yang  sesuai.  Pada  tes  akurasi,  larutan standar  masing  masing  diinjeksikan sebanyak 3 kali dan kemudian dihitung nilai persentase recovery dan persentase differensiasi. Pada uji presisi,  larutan  standar  diinjeksikan sebanyak  3  kali  dan  dihitung  nilai  SD dan  RSD.  Pada  pengujian  antar  waktu proses injeksi dilakukan pada jam ke 0 dan ke 6, dan pada pengujian intra hari dilakukan  pada  hari  pertama  dan  hari kedua  dan  kemudian  dihitung  nilai  SD dan RSD (Harmita. 2004).
Determinasi kurva kalibrasi Larutan  standar  spironolakton  dibuat menjadi  seri  25,  50,  75,  100,  125,  and 150  ppm.  Kemudian  diinjeksikan  dan diuji menggunakan sistem yang sesuai. Kemudian akan didapatkan nilai absobansi  dan  dibuat  dalam  bentuk kurva  yang  linear.  Serta  dihitung  nilai LOD dan LOQ (Harmita. 2004).

## Pengujian Stabilitas
Suspensi  sederhana  spironolakton dalam  air  yang  diuji  dalam  perbedaan nilai  pH  dalam  rentang  waktu  yang berbeda. Waktu yang ditentukan dalam pengujian  sampel  adalah  0,  15,  30,45 dan  60  menit  dengan  nilai  pH  3,  5,  7 dan 9.
Suspensi  dibuat  dengan  cara menggerus  tablet  dan  dilarutkan  atau
disuspensikan  dengan  air.  Sampel didiamkan selama rentang waktu pengujian,  dan  disonifikasi  setiap  1 menit  sebelum  waktu  pengambilan cuplikan.  Setelah  cuplikan  diambil kemudian diencerkan menjadi 100 ppm dengan  metanol  dan  di  adjust  dengan dapar  fosfat  untuk  menyamakan  pH sampel dengan pH optimum spironolakton yaitu pH 4.5 dan kemudian  di  vortex  selama  5  menit. Lalu  disentrifugasi  selama  5  menit dengan  kecepatan  5000  rpm  dengan temperatur 25°C. Supernatan kemudian diambil  dan  disaring  menggunakan syringe  filter  0.45  dan  dimasukan kedalam vial untuk diuji dengan menggunakan  KCKT.  Kemudian  luas area  peak  yang  muncul  dihitung dengan menggunakan persamaan regresi  linear  dari  kurva  kalibrasi (Suryani et al 2013).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Uji Kesetaraan Sistem
Hasil  pengujian  menunjukkan  nilai efisiensi  kolom  dan  nilai  RSD  of  peak area,  dan  waktu  retensi  RSD  yang sesuai  dan  didapatkan  hasil  sistem yang sesuai sebagai berikut: spironolakton  yang  diinjeksikan  ke KCKT  sebanyak  100 μL  dengan  fase gerak methanol : aquabidest 60 : 40 (v /
v)  menggunakan  column  C18  (5μm 4,6x250mm).
Uji Verifikasi Akurasi dan Presisi Hasil pengujjian menunjukan nilai
recovery  dalam  rentang  94-104%, sesuai dengan nilai batas yang ditentukan  yaitu  pada  rentang  90- 107%. Hasil pengujian juga menunjukan  nilai  RSD  tiap  konsentrasi adal ah ≤2%, sesuai dengan ketentuan.
Fig. 1 Chromatogram dari Spironolactone, 1) Larutan standar; 2) spironolakton tablet yang disuspensikan

## Kurva Kalibrasi
Hasil  pengujian  menunjukan  nilai  dari  r
=  0.9998,  y  =  1.7856x  +  2.5175,  nilai koefisien determinasi = 99.939%, Theoritical  plates  (USP)  =  2560,  dan Peak Asymetry = 0.871.

## Uji Stabilitas
Berdasarkan  literatur  USP  30, persen  kandungan  kadar  spironolakton
yang  sesuai  adalah  tidak  kurang  dari 95% dan tidak lebih dari 105%.
Berdasarkan  grafik  perbandingan pH  terhadap  waktu  ( Gambar  2 ),  pada pH  3,7,  dan  9  terjadi  penurunan  kadar secara  drastis  dari  kadar  sejak  awal pengujian  yaitu  >60%  dari  kadar  awal. Sedangkan  pada  pH  5  penurunan kadar  saat  awal  pengujian  tidak  terjadi secara drastis.
Tabel. 1 Konsentrasi (%) Spironolakton
Waktu (menit) Konsentrasi (%) pH 3 pH 5 pH 7 pH 9 0 19 100 61 54 15 21 88 46 50 30 22 85 38 41 45 27 74 27 38 60 40 91 35 38

## Gambar 2. Kurva degradasi spironolakton
Berdasarkan  grafik gambar  2 juga dapat  terlihat  bahwa  pada  menit  ke-60 terjadi  kenaikan  kadar.  Kenaikan  ini kemungkinan  besar  di  sebabkan  oleh terjadinya reaksi hidrolisis pada struktur spironolakton.  Setelah  spironolakton mengalami hidrolisis, kemungkinan terbentuk  senyawa  baru  yang  mirip dengan  spironolakton.  Hail  inilah  yang mungkin menyebabkan terjadinya perubahan  luas  peak  area.  Senyawa yang  terbentuk  dari  hasil  hidrolisis  ini mungkin  terbaca  pada  waktu  retensi yang  hampir  sama  atau  sama  dengan spironolakton (Jankowski et al 1996).
Oleh  karena  itu,  perlu  dilakukan studi  lanjutan  dengan  menggunakan metode  analisa  dengan  menggunakan
metode gradient untuk dapat memisahkan hasil degradasi dari
spironolakton dan mengetahui apa hasil degradasi dari spironolakton tersebut.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian kadar spironolakton  pada  semua p H  tidak
memenuhi pesyaratan sesuai ketentuan kadar spironolakton dalam sediaan.

## DAFTAR PUSTAKA
Banker,  Gilbert  S  and  C  T  Rhodes, 2002,  Modern  Pharmaceutics: Fourth  Edition,  Revised,  and Expanded, Marcel Dekker, Inc,
New York Min  Li,  2012,  Organic  Chemistry  of Drug  Degradation,  The  Royal Society of Chemistry, Cambridge Niazi,  Sarfaraz,  2006,  Handbook  of Preformulation: Chemical, Biological, and Botanical Drugs, Informa Healthcare USA Inc, New York Ansel  H.C,  1994.,  Pengantar  Bentuk Sediaan Farmasi, ed 4, Penerjemah  Farida  Ibrahim, Universitas  Indonesia  Press, Jakarta, 155-164
Lachman,  L.,  Lieberman,  H.  A.,  Kanig,
J.  L.,  2007,  Teori  dan  Praktek Farmasi  Industri,  Edisi  ketiga,
diterjemahkan  oleh:  Suyatmi, S., Penerbit Universitas Indonesia,  Jakarta,  760-779, 1514 – 1587 David  B.  Troy,Paul  Beringer,  2006, Remington's Pharmaceutical Sciences,  21th  ed,  Lippincott Williams & Wilkins, The  United  States  Pharmacopeial Convention.  2007. The  United States Pharmacopeia 30 th Edition-  National  Formulary
25 th Edition. USA
Attwood  D  dam  Florence,  2011,
Physicochemical  Principles  of
Pharmacy Ed.5, Chapman and
Hall Inc
Pramar,  Yasoda  and  V,  D.  Gupta, 1990,  Preformulation  Studies of  Spironolactone  :  Effect  of pH,  Two  Buffer  Species,  Ionic Strength,  and  Temperature  on
Stability, Departemen of
Pharmaceutics,  University  of
Houston, TX 77030 BasuSarkar,A,  Kandimalla  A,  Dudley  R ,2013,  Chemical  Stability  of Compounded  Spironolactone
Suspension in Proprietary Oral Mix  Over  a  90-day  Period  at Two  Controlled  Temperatures in Different Storage Containers,  Int.  J.  Pharm.  Sci. Rev.  Res.,  23(1),  Nov-Dec 2013, ISSN 0976044X International Conference on Harmonisation/ICH. 2005. Validation of Analytical Procedures: Text and Methodology Q2(R1). ICH Harmonised Tripartite Guideline . 2(1): 6.
Harmita.  2004.    Petunjuk  Pelaksanaan Validasi  Metode  dan  Cara
Perhitungannya. Majalah  Ilmu Kefarmasian ,  Vol.I,  No.3,  117-
135. ISSN: 1693-9883 Suryani,  N,  Sato  H,    Sugiyama  E, Kurata  N,  2013.  Stability  of Ester Prodrugs with Magnesium  Oxide  Using  The Simple  Suspenssion  Method. Jpn. J. Pharm Health Care Sci . 39 (6) 375-380 Jankowski A 1 , Skorek-Jankowska A, Lamparczyk H. Simultaneous  determination  of spironolactone and its metabolites  in  human  plasma, J  Pharm  Biomed  Anal. 1996 Jun;14(8-10):1359-65