Volume 12, No. 02, September  2019
Available online at http://ejurnal.setiabudi.ac.id/ojs/index.php/biomedika P-ISSN : 1979 - 035X & E-ISSN : 2302 - 1306
Pengaruh Penambahan Molase pada produksi Bioethanol dari Limbah Padat Industri Pati Aren
Effect of Addition of Molasses on Bioethanol Production from Palm Starch Industrial Solid Waste
Dewi Astuti Herawati* 1 & D. Andang Arif Wibawa 2
1 Program Studi S1 Teknik Kimia, Fakultas Teknik
2 Program Studi D4 Analis Kesehatan, Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Setia Budi Surakarta
Jl. Let. Jend. Sutoyo, Mojosongo, Surakarta, 57127, Jawa Tengah, Indonesia *Corresponding Author: dewitkusb@gmail.com
Received: Agustus 25, 2019; Revise: October 21., 2019;  Accepted: November 8, 2019 DOI : https://doi.org/10.31001/biomedika.v12i2.619

## ABSTRAK
Penelitian  ini  telah  dilakukan  untuk  mengetahui  pengaruh  penambahan  molase  terhadap produksi bioetanol dari limbah padat  industri pati aren. Tahapan penelitian ini meliputi persiapan bahan baku, delignifikasi limbah padat pati aren, analisis kadar lignin, produksi enzim, fermentasi anaerob dan analisa  kadar  etanol.  Delignifikasi  limbah  padat  pati  aren  menggunakan  larutan  NaOH  3%.  Produksi enzim dihasilkan dari jamur A. Niger dan Trichoderma sp. Fermentasi menggunakan 5 gram sampel hasil delignifikasi  ditambahkan  larutan  nutrisi,  gabungan  enzim selulase dari A.  niger dan Trichoderma  sp. dengan  perbandingan  (1:2),  larutan  molase  35  %  dan Saccharomyces  cereviseae dari  ragi  roti.  Analisis kadar etanol dilakukan setiap hari hingga hari ke-6. Delignifikasi menggunakan larutan NaOH 3% dapat menurunkan  kadar  lignin  pada  sampel  17,15%.  Penambahan  molase  mengandung  gula  35%  sebagai sumber gula pada limbah padat pati aren akan meningkatkan kadar bioethanol dari 0,0904 % menjadi 3, 5407  %,  sedangkan.  molase  dengan  kadar  gula  40  %    menghasilkan  kadar  bioethanol  lebih  rendah. Semakin  tinggi  kadar  gula  akan  diperoleh  kadar  bioethanol  semakin  tinggi,  tetapi  apabila  kadar  gula terlalu pekat mengakibatkan proses fermentasi lambat pada produksi bioethanol.
Kata kunci: bioetanol; molase; limbah padat pati aren; NaOH; delignifikasi

## ABSTRACT
Research  has  been  carried  out  to  determine  the  effect  of  the  addition  of  molasses  to  on bioethanol  production  from  palm  starch  industrial  solid  waste. The  stages  of  this  research  were  the preparation of raw materials, delignification of palm starch solid waste, lignin content analysis, enzyme production,  anaerobic  fermentation  and  ethanol  content  analysis.  Delignification  of  palm  starch  solid waste  using  3%  NaOH  solution.  Enzyme  production  is  produced  from  A.  Niger  and  Trichoderma  sp. Fermentation  using  5  grams  of  delignified  sample  added  a  nutrient  solution,  a  mixture  of  cellulase enzymes  from  A.  niger  and  Trichoderma  sp.  by  comparison  (1:  2),  molasses  and  Saccharomyces cereviseae. Analysis of ethanol levels was carried out every day until the 6th day.  Delignification using 3%  NaOH  solution  can  reduce  the  level  of  lignin  samples  up  to  17.15%.  The  addition  of  molasses containing  35%  sugar  as  a  source  of  sugar  in  the  palm  starch  solid  waste  will  increase  the  levels  of bioethanol  from  0.0904%  to  3,  5407%,  whereas  molasses  with  40%  sugar  content  results  in  lower bioethanol  levels.    The  higher  the  sugar  content,  the  higher  the  level  of  bioethanol,  but  if  the  sugar content is too concentrated, it causes a slow fermentation process in the production of bioethanol.
Key word: bioethanol; mollase; the palm starch industrial solid waste; NaOH; delignification

## PENDAHULUAN
Pabrik  pati aren di  dusun  Bendo,
desa Daleman Kecamatan Tulung dengan  rata-rata  kapasitas  produksinya 200  ton/tahun  menghasilkan  limbah padat  17.500  kg  per  hari  sehingga  perlu perlakuan  khusus  untuk  mengurangi dampak  negatifnya  (Haryanto,  2015). Limbah  padat  memiliki  kadar  alfa selulosa  yang  tinggi  sebesar  95,34% (Sudarsono  dkk.,  2013).  Bahan  yang mengandung  selulosa  merupakan  bahan baku bioetanol.
Bioetanol  merupakan  salah  satu jenis  energi  terbarukan,  diharapkan membantu  pemenuhan  energi  pengganti minyak  bumi.  Bioetanol  diproduksi melalui  3  tahapan  yaitu  hidrolisis, fermentasi  dan  pemurnian.  Hidrolisis merupakan  tahap  pemecahan  selulosa menjadi senyawa karbohidrat, sedangkan fermentasi merupakan tahapan pemecahan senyawa karbohidrat menjadi etanol.  Tahap  pemurnian  dilakukan untuk  memperbesar  kadar  alkohol  yang diinginkan.  Proses  hidrolisis  memiliki hambatan  yaitu  adanya  struktur  kristalin dan  lignin,  sehingga  selulosa  sulit  untuk diuraikan (Judoamidjojo dkk.,1989). Hal ini  menunjukkan  bahwa  limbah  padat pati  aren  yang  akan  digunakan  untuk produksi  bioetanol  perlu  dilakukan pretreatment berupa delignifikasi.
Delignifikasi merupakan proses
penghancuran lapisan lignin yang melindungi  selulosa.    Delignifikasi merupakan  proses  penghancuran  lapisan lignin yang melindungi selulosa sekaligus  merusak  strukturnya  dan melepaskan senyawa
karbohidrat. (Zheng et  al .,  2009).  Salah  satu  larutan yang  digunakan  untuk  delignifikasi lignoselulosa  adalah  larutan  NaOH
(Sahare et  al ,  2012).  Larutan  NaOH yang  digunakan  untuk  mendelignifikasi merupakan  larutan  encer  agar  tidak merusak struktur selulosa dan
hemiselulosa.  Menurut  Elwin  (2014) bahwa delignifikasi pada tanaman eceng gondok dengan larutan  NaOH 2M dapat menurunkan lignin sebesar 0,5%.
Produksi bioetanol dengan metode SSF (Simultaneous of Saccarification and Fermentation) memerlukan  bantuan  mikroorganisme untuk mengubah glukosa menjadi etanol. Metode  SSF  merupakan  metode  yang menggabungkan  proses  hidrolisis  dan fermentasi  sehingga  lebih  efektif  dan efisien  dari  penggunaan  alat.  Menurut penelitian Herawati dkk (2016) fermentasi ampas aren dengan menggunakan metode SSF dan konvensional  lebih  efektif  karena  kadar etanol  yang  diperoleh  dari  metode konvensional mengalami penurunan sejak  hari  pertama  hingga  hari  ke-5 sedangkan  metode  SSF  diperoleh  kadar etanol yang meningkat sejak hari ke-2.
Hasil penelitian terdahulu menunjukkan  bahwa  bioethanol  hasil produksi  fermentasi  limbah  padat  pati arenn  tidak  optimal  diduga  disebabkan karena  jumlah  substrat  yang  tersedia belum  mencukupi.  Substrat  berupa  gula yang  langsung  dapat  digunakan  pada proses  fermentasi.  Molase    merupakan hasil  samping  dari  pengolahan  gula kristal  tebu.  Kadar  gula    yang  terdapat dalam molase sekitar 45 - 54,6 %. Kadar gula  dalam  molase  yang  cukup  tinggi berpotensi  sebagai  tambahan  substrat gula  dalam  limbah  padat  pati  aren. Perbaikan proses pada produksi bioetanol  dari  limbah  padat    aren    dan molase  diharapkan  dapat  memperbaiki
mutu produk yang didapatkan Penelitian ini  bertujuan  mengetahui  pengaruh penambahan  molase  terhadap  produksi bioetanol  dari  limbah  padat  pati  aren menggunakan metode SSF.

## METODE PENELITIAN

## Peralatan dan Bahan
Peralatan yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah crusher, oven , Autoclave ,  neraca  analitis  ,  ayakan ukuran  40  mesh, shaker , centrifuge , peralatan  gelas,  Spektrofotometer  UV- Vis kromatografi gas, inkas dan thermometer.
Bahan  –  bahan  penelitian  meliputi Limbah  padat  industri  pati  aren,  Jamur Trichoderma  sp., Jamur A.  Niger, Saccharomyces
cereviseae ; media
tumbuh Potato  Dextrose  Agar (PDA); (NH 4 ) 2 SO 4 (10  g/L),  urea  (3  g/L), CaCl.H 2 O  (0,5  g/L),  KH 2 PO 4 (3  g/L), MgSO 4 .7H 2 O  (0,5  g/L),  1  liter  akuades; NaOH  p.a  padat;  Asam  Sulfat;  Alkohol 70 %; Benzene p.a; dan Tween 80 0,1%.

## Pengambilan Sampel
Sampel burupa serat limbah industri pati aren  yang  diambil  secara  acak  dari  tiap- tiap industri kemudian dicampur dibersihkan, dikeringkan, diperkecil ukuran  dan  diayak  lolos  40  mesh disediakan  dalam  jumlah  yang  cukup untuk penelitian

## Pretreatment Serat Aren
Serbuk  Sampel  sebanyak  30  gram, larutan  NaOH  3  %  (b/v)  sebanyak  800 ml  keduanya    dimasukkan  ke  dalam Erlenmeyer 1 L yang dilengkapi  dengan kondensor.
Kemudian sampel dipanaskan  secara  langsung  selama  90
menit  dimulai  dari  waktu  pertama sampel  telah  mendidih.  Setelah  itu,
campuran didiamkan agar dingin kemudian  dituang  ke  dalam  kain  untuk dinetralkan  dengan  cara  dialiri  air.
Setelah  sampel  netral  kemudian  sampel dikeringkan  pada  oven.  Sampel  yang sudah  melalui  tahap pretreatment diuji kadar  ligninnya  menggunakan  metode Klason (SNI 0492:2008).
Tahap Produksi Bioetanol Sampel yang telah mengalami
delignifikasi  sebanyak  5  gram,  larutan nutrisi  steril  sebanyak  100  mL  dan molase  sebanyak  35  %  (  v/v)  dicampur dalam  erlenmeyer  500  mL  .  Enzim selulase  produksi  jamur A  niger dan Trichoderma  sp ditambahkan  sebanyak 45  ml  dengan  perbandingan  1:  2 (Herawati,  dkk.,  2016)  dan  ragi  roti konsentrasi 0,8%       (b/v) (Kusmiati dan Arifin,  2010)    ke  dalamnya.  Sampel tersebut  difermentasi  selama  7  hari  dan setiap hari menganalisis kadar
alkoholnya  menggunakan  Kromatografi gas.  Melakukan  percobaan  yang  sama dengan diatas tanpa penambahan molase dan tanpa sampel.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
1. Pretreatment sampel (limbah ampas pati aren)
Pretreatment adalah proses yang dilakukan  untuk  mempersiapkan  bahan baku  agar  memenuhi  kondisi  yang diharapkan  ,  yang  dilakukan  antara  lain perlakuan  fisik  dan  kimiawi  (Mosier et al., 2005).  Pengurangan  ukuran  dan pretreatment merupakan tahap  awa yang diperlukan untuk bahan
lignoselulosa.  Perlakuan  fisik  meliputi pengeringan  bahan  baku,  penggilingan dan penyesuaian ukuran yang
dibutuhkan.  Proses  ini  merupakan  salah satu  cara pretreatment secara  fisika.
Pretreatment secara fisika/mekanik ditujukan  dalam  rangka    menurunkan ukuran  partikel  bahan  baku.  Cara tersebut diatas merupakan salah satu cara yang  paling  efektif  untuk  menaikkan aksesibilitas  enzim  ke  dalam  bahan lignoselulosa.  Kelebihan  metode  ini adalah  tidak  menggunakan  bahan-bahan kimia  serta  tidak  meninggalkan  residu berbahaya.
Menurut  Taherzadeh  dan  Karimi,  2008 menyatakan  bahwa  proses  penggilingan ini  bertujuan  untuk  memperkecil  ukuran partikel,  mengubah  ultrastruktur  serta tingkat kristalinitas lignoselulosa.
Perubahan  tersebut  berdampak  pada peningkatan  efektifitas  enzim  selulase pada bahan lignoselulosa.
Proses penggilingan ini dilakukan sebelum  tahap  hidrolisis  enzimatik  atau tahap pretreatment lainnya.
Preatreatment
secara kimia dilakukan  dengan  cara  delignifikasi limbah  ampas  pati  aren  menggunakan larutan  NaOH.  Berdasarkan  penelitian Sudarsono  (2013)  serat  aren  memiliki kandungan  α  selulosa  sebesar  95,34%. Kadar  selulosa  yang  tinggi  pada  serat aren  dapat  dihidrolisis  menggunakan enzim  selulase  dari  jamur Trichoderma sp. (Hamelinck  dkk.  2005).  Namun limbah  padat  pati  aren  merupakan tanaman  lignoselulosa  sehingga  ada beberapa  penyusun  tanaman  tersebut diantaranya  yaitu  lignin,  selulosa  dan hemiselulosa.
Hal ini bertujuan untuk mengurangi  kadar  lignin  pada  limbah padat pati aren. Lignin dapat
memperlambat  penetrasi  enzim  ,  hal  ini dikarenakan  adanya  ikatan  silang  dari struktur aromatik lignin dan berpengaruh pada
proses hidrolisis
dalam memproduksi glukosa.
Hasil  delignifikasi  ampas  pati
aren  menunjukkan  kadar  lignin  yang
tersisa  dalam  sampel  menurun  17,15  % yaitu  dari    kadar  lignin  91,5364  % menjadi    75,8350 % (Tabel 1).
Tabel 1. Kadar Lignin Ampas Pati Aren Sebelum delignifikasi Sesudah delignifikasi Kadar lignin (%) 91,5364 75,8350
Proses  delignifikasi  merupakan proses  saponifikasi  terhadap  ikatan intermolekular  ester  yang  mengelilingi xilan,  hemiselulosa  dan  komponen- komponen  lainnya,  seperti  lignin  dan hemiselulosa  lainnya.  Zheng et  al ,  2009 dalam  penelitiannya  menyatakan  bahwa proses delignifikasi menyebabkan kerusakan  terhadap  struktur  lignin  dan melepaskan senyawa karbohidrat. Penelitian ini menggunakan delignifikasi secara kimiawi yaitu metode  alkali.  Bahan  pelarut  yang digunakan yaitu NaOH. Menurut Gunam dan  Antara,  1999  menyatakan  bahwa struktur  lignin  pada  bagian  kristalin  dan amorf  dapat  dirusak  dan  diserang  oleh larutan  NaOH  ini  serta  memisahkan sebagian hemiselulosa. Proses delignifikasi dengan larutan alkali biasanya  menggunakan    larutan  NaOH, KOH dan NH 4 OH hidroksida ( Zhang et al ,  2009;  Wang et  al ,  2010).    Menurut
Widiasari (2011), NaOH dapat mendegradasi lignin dengan cara memutus ikatan silang ester pada lignin. Gambar 1 menunjukkan degradasi lignin menggunakan NaOH.
Gambar 1. Reaksi degradasi lignin menggunakan larutan NaOH pada proses pretreatment
Metode pretreatment basa dalam pengolahan biomassa lignoselulosa
menyebabkan dekristalisasi parsial selulosa,  solvasi  parsial  hemiselulosa dan  mengakibatkan  selulosa  membesar. Disamping itu juga menyebabkan perubahan  struktur  lignin  dengan  cara mendegradasi  ester  dan  rantai  samping glikosidiknya.  Proses  pretreatment  basa dilakukan dengan cara biomassa direndam  dalam  larutan  alkali  pada kondisi tertentu.. Lignin dan zat inhibitor (misalnya  garam,  asam  fenoloik,  dan aldehid)  pada  proses  perendaman  alkali dapat dihilangkan dengan cara netralisasi. Proses ini  dilakukan sebelum masuk tahap hidrolisis enzimatik.(Menon dan Rao 2012).
Kelebihan  pretreatment  basa    adalah lebih  efektif  dalam  solubilisasi  lignin daripada  pretreatment  asam  akan  tetapi kurang dalam mendegradasi selulosa dan hemiselulosa.
Pengaruh Penambahan Molase terhadap Produksi Bioethanol Kadar glukosa dalam ampas aren yang  digunakan  untuk  mengubah  ke dalam  etanol  harus  sesuai.  Menurut  Eka dkk  (2009)  kadar  gula  yang  baik  untuk proses  fermentasi  sebesar  10-18%. Kadar  gula  yang  tinggi    dalam  bahan akan  menyebabkan    efek  buruk  pada aktivitas dan pertumbuhan mikroorganisme.  Kadar  gula  dalam bahan    terlalu  pekat  mengakibatkan pertumbuhan mikroorganisme akan terhambat  menyebabkan    waktu  untuk proses  fermentasi  menjadi  lambat  dan terdapat  sisa  gula  yang  tidak  digunakan, Apabila  kadar  gula  dalam  bahan  terlalu rendah  maka  proses  fermentasi  tidak berjalan dengan baik.
Analisa gula total dengan metode  Nelson  Somogy  limbah  padat aren  memiliki  kadar  gula  total  sebanyak 0,904%.  Hal  tersebut  menyebabkan limbah  padat  aren  perlu  tambahan glukosa  agar  dapat  terfermentasi  dengan
baik. Kadar gula reduksi semakin tinggi, maka  semakin  banyak      yang    dapat dimanfaatkan oleh khamir (S. cerevisiae ) maka  semakin  tinggi  pula  kadar  etanol yang  dihasilkan.  Penelitian  ini  sesuai dengan  pendapat  Winarti  (1996),  bahwa semakin banyak gula yang dapat dipecah oleh  sel  khamir  menjadi  bioetanol  maka semakin tinggi pula konsentrasi bioetanol  yang  dihasilkan.  Penelitian  ini menggunakan  molase  35  %  untuk penambahan  kadar  glukosa  pada  limbah padat aren menjadi 13%.
Fermentasi molase kadar  gula 40 %  dilakukan  dengan  perlakuan  yang sama tanpa menggunakan sampel limbah padat pati aren. Molase dan sampel yang difermentasi  dianalisa  kadar  etanolnya menggunakan  kromatografi  gas  dengan waktu  pengamatan  tiap  hari  sampai  hari ke-6.  Kadar  bioetanol  yang  dihasilkan dipengaruhi oleh lama Fermentasi. Hasil fermentasi  molase  dan  ampas  pati  aren dengan  analisa  kromatografi  gas  selama 6 hari berturut-turut (Tabel 2).
Tabel  2  menunjukkan  bahwa fermentasi alkohol dengan subtrat molase  kadar  gula  40  %  menghasilkan bioethanol  paling  tinggi  sebesar  0,7850
%  sedangkan  pada  ampas  pati  aren dengan  tambahan  subtrat  gula  dari molase    kadar  gula  13  %    didapatkan kadar  etanol  lebih  tinggi  yaitu  sebesar 3,5407  %.  Fermentasi  bioetanol  dari ampas  pati  aren  tanpa  tambahan  molase dihasilkan  kadar  ethanol  yang  hampir tidak  ada  yaitu  paling  tinggi    sebesar 0,0940 %. Hasil penelitian menunjukkan bahwa  penambahan  molase    35%    pada substrat ampas pati aren dapat meningkatkan kadar bioetanol sedangkan molase kadar gula 40% kadar etanol  lebih  rendah.  Kadar  gula  yang
terlalu  pekat  dapat  mengakibatkan  laju fermentasi  menjadi lambat,  karena
kandungan gula lebih banyak digunakan untuk reproduksi sel terlebih dahulu.
Tabel 2. Kadar Etanol pada Fermentasi Molase dan Ampas Pati Aren Hari ke- Kadar Ethanol ( % ) Molase ( kadar gula 40%) Ampas pati aren dan molase 35% (kadar gula total 13 %) Ampas Pati Aren (kadar gula total 0,904%) 1 0,0000 0,0000 0,0000 2 0,6671 0,7866 0,0000 3 0,6961 1,2617 0,0500 4 0,7850 3,5407 0,0940 5 0,6836 1,3544 0,0200 6 0,0000 0,0000 0,0000 Berdasarkan Tabel 2 dapat
diketahui  bahwa  kadar  etanol  pada ampas  aren  paling  tinggi  di  hari  ke-4.
Hari ke-1 terlihat bahwa proses
fermentasi ampas aren belum
menghasilkan etanol. Hal ini disebabkan Saccharomyces  cereviseae masih  pada tahap  penyesuaian  diri  dengan  substrat yang  akan  diubah  menjadi  bioetanol. Jika  kadar  bioetanol  yang  terkandung  di dalam  substrat  tinggi  maka  justru  akan berdampak  buruk terhadap pertumbuhan Saccharomyces  cerevisiae ,  pada  kadar alkohol 2,5% pertumbuhan Saccharomyces Cerevisiae akan terhambat. Kadar alkohol yang diperoleh dari  fermentasi  kulit  nanas  sebesar 2,25%  pada  hari  ke-3  dan  mengalami penurunan  pada  hari  ke-4  dengan  kadar 1,71%  (Azizah  dkk  2012).  Setelah  hari ke-4  produksi  bioetanol  mulai  menurun yaitu  pada  hari  ke-5  hingga  hari  ke-6 terus  mengalami  penurunan.  Hal  itu disebabkan  karena  pada  hari  ke-4  kadar
bioetanol  sudah  mencapai  lebih  dari 2,5%  sehingga  kemungkinan  pada  saat itu pertumbuhan Saccharomyces cereviseae mulai terhambat dan mengalami penurunan. Gambar 2 menunjukkan kurva pertumbuhan Saccharomyces cereviseae pada penelitian ini ditunjukkan pada Gambar 2. Kurva Pertumbuhan Saccharomyces  cereviseae pada  berbagai kadar  gula  yang  ditunjukkan  dengan produksi etanol.
Fermentasi  ampas  aren  dan molase ini bergantung pada pertumbuhan Saccharomyces cereviseae . Awalnya Saccharomyces cereviseae
sedang berada pada fase adaptasi dengan kondisi  subtrat.  Setelah  melalui  fase adaptasi Saccharomyces cereviseae telah menemukan  nutrisi  yang  tepat  yang terdapat  pada  sampel  maupun  blanko sehingga  mampu  memproduksi  etanol secara  bertahap.  Hal  itu  dikarenakan Saccharomyces  cereviseae berada  pada fase pertumbuhan dahulu hingga
mengalami  fase  logaritmik  yaitu  fase dimana Saccharomyces cereviseae mampu  memproduksi  etanol  dalam jumlah  lebih  banyak  dari  pada  awal pertumbuhan. Kandungan glukosa dalam substrat akan berkurang seiring bertambahnya etanol sehingga kemampuan Saccharomyces  cereviseae
pun menurun karena nutrisi sudah mulai habis.  Hal  ini  disebut  fase  menuju kematian.  Jika  nutrisi  serta  glukosa dalam  substrat  sudah  habis  maka Saccharomyces cereviseae akan mengalami kematian karena tidak memiliki  makanan  untuk  melakukan metabolisme.

## KESIMPULAN
Produksi bioetanol sangat dipengaruhi oleh substrat yang
digunakan,  penambahan  molase  sebagai sumber  gula  pada  subtrat  pati  aren  akan meningkatkan  kadar  bioethanol  dari 0,0904  %  menjadi  3,  5407  %  dengan penambahan  molase  kadar  gula  35  %. Molase  dengan  kadar  gula  40  % menghasilkan  kadar  bioethanol  lebih rendah.  Semakin  tinggi  kadar  gula  akan diperoleh kadar bioethanol yang semakin tinggi,  akan  tetapi  apabila  kadar  gula terlalu  pekat  mengakibatkan  proses fermentasi lambat.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Ucapan  terimakasih  disampaikan kepada Universitas Setia Budi yang telah mendanai  penelitian  ini  melalui  Hibah Penelitian Terapan Internal tahun 2018.

## DAFTAR PUSTAKA
Azizah, N , A N Al-Barrii dan S Mulyani. 2012. Pengaruh  Lama  Fermentasi  Terhadap Kadar  Alkohol,  pH,  Dan  Produksi  Gas
Pada  Proses  Fermentasi  Bioetanol  Dari Whey  Dengan  Subtitusi  Kulit  Nanas. Research Note. Jurnal Teknologi Aplikasi Pangan. Vol. 1 No. 2 (72-77) Elwin,  Lutfi,  M.,  dan  Hendrawan,  Y.  2013. Analisis  Pengaruh  Waktu  Pretreatmet dan Konsentrasi NaOH terhadap Kandungan Selulosa, Lignin, dan Hemiselulosa Eceng Gondok Pada Proses Pretreatment Pembuatan Bioetanol . Keteknikan  Pertanian  Tropis dan Biosistem , 2(2): 104—110
Eka  P,    dan  Halim  Amran,  2002,  Pembuatan Bioethanol  dari  Nira  Siwalan  secara Fermentasi  Cair  menggunakan  Fermipan,
Reaktor Guidelines. Gunam, I.B.W., dan  Antara N.S. 1999. Study on Sodium  Hydroxide  Treatment  of  Corn Stalk to Increase Its Cellulose Saccharification  Enzymatically  by  Using Culture  Filtrate  of  Trichoderma  reesei. Gitayana. Agric. Technol. J . 5 (1):34-38 Hamelinck, C.N., G. van Hooijdonk,  dan A.P.C. Faaij.  2005.  Ethanol  from  lignocellulosic biomass:  Techno-economic  performance in  short-,  midle-  and  long-term. Biomass and Bioenergy 28: 384 − 410.
Haryanto, V. I. 2015. Pemanfaatan Limbah Cair Industri Tepung Aren dan Mikroorganisme  Lokal  sebagai  Larutan Nutrisi Terhadap Pertumbuhan dan Hasil Tanaman Baby Kailan (Brassica oleracea)  dengan  Sistem  Hidroponik . Universitas Sebelas Maret Herawati,  D  A;  Kusumawardhani    ,  E; Puspawati N, 2016.  “ Pemanfaatan Limbah  Ampas  Pati  Aren  Menjadi Bioetanol  Secara  Enzimatis  Metode Konvensional  dan  SSF ”,  Simposium Nasional RAPI XV Tahun 2016 FT UMS. Judoamidjojo,  R.M.,  E.G.  Sa’id,  dan  L.Hartoto.
1989. Biokonversi. Departemen Pendidikan  dan  Kebudayaan,  Dirjen Dikti, Pusat Antar Universitas Bioteknologi Institut Pertanian Bogor. Kusmiyati,    dan  Arifin,  A.  N.  2010. Konversi Umbi Iles-Iles Menjadi Bioetanol Dengan  Metode  Konvensional  dan  SSF (Sakarifikasi  dan  Fermentasi  Secara Serentak). RAPI  IX  (pp.  K-116  -  K- 123). Surakarta: Universitas Muhammadiah Surakarta. Menon  V  dan  Rao  M.  2012.  Trends  in bioconversion of lignocellulose: Biofuels, platform chemicals & biorefinery concept. Progress in Energyand Combustion Science 8(4): 522–550. Mosier,  N.S,  Dale,  B.E,  Wyman  C  E  dan, Elander  S.  2005.    Features  of  promising technologies for pretreatment of lignocellulosic biomas Bioresource Technology 96 , pp. 673–686
Saharee, P., Singh, R., Laxman, S., dan Rao, M., (2012). Effect  Of  Alkali  Pretreatment  On The  Structural  Properties  And  Enzymatic Hydrolysis of Corn Cob . Appliedbiochemistry  and  biotechnology. 168(7),1806-1819
SNI  0492  (2008). Pulp-Cara  Uji  Kadar  Lignin Metode Klason . Sudarsono, Huda, S., Yuniwati, M., & Purnawan. (2013). Pemanfaatan  Limbah  Serat  Pati
Aren  Sebagai  Material  Komposit  -
Poliester .  Yogyakarta:  Institut  Sains  & Teknologi AKPRIND. Taherzadeh MJ dan Karimi K. 2008.
Pretreatment  of  lignocellulosic  wastes  to improve ethanol and biogas production: A
Review. Int. J. Mol. Sci. 9: 1621-1651.
Wang,  Z.,  Keshwani,  D.R.,  Redding,  A.P.,  dan Cheng,  J.J.,  2010.  Sodium  hydroxide pretreatment and enzymatic hydrolysis of coastal Bermuda grass. BioresourceTechnology.  101,  pp.3583- 3585 Widyasari, R.2011. Pengaruh Konsentrasi Enzim Selulase  untuk  Menghidrolisis  Selulosa dan  Hemiselulosa  TKKS  menjadi  Gula Reduksi sebagai Bahan Baku Bioethanol,., Skripsi Universitas Lampung , Bandar Lampung. Winarti,  S..  1996. Pengaruh  Lama  Fermentasi dan  Kadar  Substrat  Terhadap  Produksi Etanol  Pada  Fermentasi  Onggok  oleh Saccharomyces cerevisiae , Fakultas MIPA, Universitas Brawijaya, Malang
Zheng,  Y.,  Pan,  Z.,  dan  Zhang,  R.,  2009.
Overview  of  biomass  pretreatment  for cellulosic  ethanol  production. Int  J Agric&  Biol  Eng. 2(3),  pp.  51-68