Available online at http://ejurnal.setiabudi.ac.id/ojs/index.php/biomedika P-ISSN : 1979 - 035X & E-ISSN : 2302 - 1306
Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanolik Kayu Secang (Caesalpinia sappan L.) terhadap Staphylococcus aureus

## Antibacterial Activity Test of Secang Wood (Caesalpinia sappan L.) Ethanolic Extract against Staphylococcus aureus
Diah Mukti Cahyaningtyas 1 , Nony Puspawati 1 dan Rinda Binugraheni* 2
1 Program Studi D4 Analis Kesehatan
2 Program Studi D3 Analis Kesehatan Fakultas Ilmu Kesehatan, Universitas Setia Budi Surakarta, Jl. Let. Jend. Sutoyo, Mojosongo, Surakarta, 57127, Jawa Tengah, Indonesia
*Corresponding author: rinda.binugraheni@gmail.com
Received: Agustus 24, 2019; Revise: October 23., 2019;  Accepted: November 8, 2019 DOI : https://doi.org/10.31001/biomedika.v12i2.614

## ABSTRAK
Infeksi  piogenik  merupakan  infeksi  yang  ditandai  dengan  terjadinya  peradangan  lokal  yang parah disertai nanah (pus) dan umumnya disebabkan oleh kuman piogenik, salah satu yang paling umum adalah Staphylococcus  aureus .  Salah  satu  tanaman  yang  banyak  dimanfaatkan  sebagai  bahan  obat tradisional  dan  sebagai  antibakteri  adalah  tanaman  secang.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanolik  kayu  secang  ( Caesalpinia  sappan L.)  terhadap Staphylococcus aureus isolat  laboratorium  dan  isolat  pus  pasien  dan  mengetahui  perbedaan  daya  hambat  antara  kedua bakteri  tersebut.  Serbuk  kayu  secang  sebanyak  300  gram  diekstraksi  dengan  metode  maserasi menggunakan  pelarut  etanol  70%  (1:10).  Maserat  digunakan  untuk  uji  aktivitas  antibakteri  terhadap Staphylococcus aureus isolat laboratorium dan isolat pus pasien Rumah Sakit menggunakan metode difusi dan  dilusi.  Hasil  uji  difusi  kemudian  dianalisis  menggunakan  uji  Anova  dua  arah.Hasil  penelitian menunjukkan  ekstrak  etanolik  kayu  secang  mempunyai  aktivitas  antibakteri.  Hasil  metode  dilusi menunjukkan  nilai  KBM  pada  konsentrasi  3%  untuk Staphylococcus  aureus isolat  laboratorium  dan konsentrasi  4%  untuk Staphylococcus  aureus isolat  pus  pasien.  Analisis  statistik  hasil  uji  difusi menunjukkan  konsentrasi  paling  baik  dalam  menghambat  pertumbuhan  kedua  bakteri  tersebut  adalah konsentrasi  25%  dan  kesensitifan Staphylococcus  aureus isolat  laboratorium  dan  isolat  pus  pasien terhadap ekstrak adalah sama.
Kata kunci: antibakteri; ekstrak etanolik kayu secang; Staphylococcus aureus

## ABSTRACT
Piogenic infection is an infection characterized by the occurrence of severe local inflammation with  pus  formation  (pus).  Generally  caused  by  piogenic  germs,  one  of  the  most  common    is Staphylococcus  aureus.  One of  the  plants  used as  an  ingredient  in  traditional  medicine  and  used as  an anti-bacterial  is  a  secang  plant.  This  study  aims  to  determine  the  anti-bacterial  activity  of  ethanolic extract  of  secang  wood  (Caesalpinia  sappan  L.)  on  pure  cultivation  Staphylococcus  aureus  Laboratory and isolates pus Hospital patients and find out the difference in inhibition between the two bacterias.300 grams of secang wood powder was extracted by maceration method using 70% ethanol (1:10). Maserate was used to test the anti-bacterial activity of Staphylococcus aureus from pure  cultivation laboratory and isolates of pus patients in hospital using diffusion and dilution methods. Then, the results of the diffusion test were analyzed using a two-way Anova test.The results of the study showed that ethanolic extracts of wood have anti-bacterial activity. Result of dilution method showed the value of KBM at a concentration of 3% for Staphylococcus aureus cultivation Laboratory and a concentration of 4% for Staphylococcus aureus isolates pus patients of the Hospital. The statistical analysis of diffusion test results showed that the best concentration in inhibiting the growth of these two bacterias were the concentration of 25% and the sensitivity of Staphylococcus aureus from Laboratory pure cultivation and the Pus patients isolate of the Hospital toward extracts were the same.
Key word:anti-bacterial; ethanolic extract of secang wood; Staphylococcus aureus

## PENDAHULUAN
Infeksi  piogenik  ditandai  dengan terjadinya  peradangan  lokal  yang  parah dan  pembentukan  nanah  (pus).  Infeksi  ini umumnya  disebabkan  oleh  salah  satu kuman  piogenik.  Kuman  piogenik  yang paling  umum  adalah Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, Streptococcus  pyogenes,  Streptococcus pneumonia,  Escherichia  coli,  Klebsiella pneumonia,  Pseudomonas aeruginosa, Neisseria  gonorrhoeae,  Salmonella  typhi, Mycobacterium  tuberculosis (Singh et  al ., 2013).
Infeksi piogenik salah satu penyebab  adalah  bakteri Staphylococcus aureus . Bakteri ini paling sering menyebabkan sakit pada kulit dan jaringan superfisial,  seperti  luka  bakar,  pustule, koreng, abses, dan infeksi karena kecelakaan  dan  infeksi  sesudah  menjalani operasi. Staphylococcus  aureus dalam jumlah kecil merupakan flora normal pada kulit,  tenggorokan,  mulut,  dan  hidung manusia (Iskamto, 2009).
Berdasarkan hasil penelitian Nurmala et  al (2015),  didapatkan  bahwa terdapat  21  jenis  bakteri  dari  seluruh sampel yang Pus diperiksa dan diantaranya didapatkan Staphylococcus aureus (0,9%).
Resistensi  terjadi  pada  bakteri-bakteri yang  ditemukan  pada  spesimen  pus tersebut  terhadap  40  jenis  antibiotik  dari 46  antibiotik  yang  diperiksa.  Sampel  pus tersebut berasal RSU  dr.  Soedarso Pontianak yang diperiksa di Unit Laboratorium Kesehatan Provinsi
Kalimantan Barat tahun 2011-2013.
Bahaya resistensi antibiotik saat ini telah  menjadi  masalah  kesehatan  dunia yang serius.Antibiotik biasanya digunakan untuk  mengobati  penyakit  infeksi  yang
disebabkan oleh Staphylococcus aureus namun  pada  beberapa  kasus  telah ditemukan beberapa strain Staphylococcus aureus yang  resisten  terhadap  antibiotik seperti Methicillin-Resistan Staphylococcus areus (MRSA). Di Indonesia  pada  tahun  2010  proporsi
MRSA  diperkirakan  28%  (Chen  dan Huang,  2014).  Pemanfaatan  bahan  alami dapat digunakan sebagai alternatif pengobatan tradisional, salah satunya yaitu menggunakan  tanaman  obat  (Artanti  dan Fatimah, 2017).
Indonesia  merupakan  negara  yang kaya  akan  berbagai  jenis  tanaman  yang dapat  dimanfaatkan  sebagai  bahan  obat- obatan, diantaranya sebagai obat tradisional,  herbal  dan  jamu.  Salah  satu tanaman yang banyak dimanfaatkan sebagai  bahan  obat  tradisional  adalah tanaman  secang.  Bagian  tanaman  secang ( Caesalpinia  sappan L.)  yang  sering dimanfaatkan sebagai bahan obat tradisional  adalah  kayu  dalam  potongan- potongan  atau  serutan  kayu.  Kayu  secang sebagai  minuman  herbal  digunakan  untuk antimikroba,  pengobatan  darah  kotor, antitumor, antivirus, antikoagulan,
antidiabetik,  dan  sebagai  antiinflamasi (Kusuma,  2007).  Berdasarkan  penelitian Sa’diah et  al (2013),  ekstrak  secang  yang berasal  dari  Semarang  setelah  diformulasi menjadi  krim  efektif  sebagai  obat  anti jerawat  yang  disebabkan  oleh  bakteri Propionibacterium acnes .
Berdasarkan penelitian Kusmiati et al (2014),  hasil  analisis  kandungan senyawa  kimia  ekstrak  kayu  secang ( Caesalpinia  sappan L.)  menggunakan Kromatografi Gas-Spektrofotometri Massa (KG-SM)  menunjukkan  bahwa  ekstrak kayu  secang  mengandung  senyawa  fenol dan  asam  lemak  yang  bersifat  sebagai
Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanolik Kayu Secang …
antibakteri.  Hasil  penelitian  Kumala et  al. (2009)  menunjukkan  bahwa  air  rebusan kayu  secang  mampu  menurunkan  jumlah koloni  pada  cairan  intraperitonium  mencit yang diinfeksi Escherichia coli .
Berdasarkan  penelitian-penelitian yang  terdahulu,  sudah  banyak  dilakukan penelitian  mengenai  khasiat  Ekstrak  kayu secang  ( Caesalpinia  sappan L.),  namun sampai  sekarang  belum  ada  penelitian tentang  khasiat  Ekstrak  kayu  secang ( Caesalpinia sappan L.) terhadap Staphylococcus  aureus dari  isolat  pus pasien maupun isolat laboratorium kaitannya  dengan  resitensi  antibiotik .
Penelitian  ini  ingin  mengetahui  aktivitas antibakteri  ekstrak  etanolik  kayu  secang ( Caesalpinia sappan
L.) terhadap Staphylococcus  aureus yang  bersumber dari  isolat  laboratorium  dan  pus  pasien
Rumah Sakit di Surakarta untuk mengetahui apakah ada perbedaan aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanolik  kayu secang  ( Caesalpinia  sappan L.)  terhadap kedua sumber sampel tersebut.

## METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan Penelitian
Alat  yang  digunakan  adalah  oven, ayakan  40  mesh,  neraca  analitik,  klem, statif,  rangkaian  alat Bidwell-sterling ,
ratory  evaporator ,  pembakar  spirtus, jarum  oshe, autoclave ,  inkubator,  kapas lidi steril, mikroskop.
Bahan  yang  digunakan  adalah ekstrak  etanolik  kayu  secang,  media  NA ( Nutrient  Agar ),  media  BHI  ( Brain  Heart Infusion ),  media  VJA  ( Vogel  Johnson Agar ), media MHA ( Muller Hinton Agar ), kalium  telurit,  larutan  H 2 O 2 3%,  plasma
citrat,  xylen,  etanol  70%,  DMSO  2%, spirtus, minyak imersi, cat Gram A (kristal violet),  Gram  B  (lugol  iodine),  Gram  C (alkohol-aceton),  Gram  D  (safranin), Ciprofloxacin,  larutan  pengencer  berupa NaCl 0,9%.
Penelitian ini menggunakan serutan kayu secang ( Caesalpinia sappan L.) yang berasal  dari  Pedagang  di  Pasar  Gede Surakarta,  Jawa  Tengah.  Bakteri  uji  yang digunakan  adalah Staphylococcus  aureus ATCC  25923  dari  isolat  Laboratorium Mikrobiologi Universitas Setia Budi Surakarta  dan  isolat  pus  pasien  Rumah
Sakit di Surakarta.

## Prosedur Penelitian
Pembuatan Ekstrak Etanolik Kayu Secang (Caesalpinia sappan L.) Serbuk  kayu  secang  diekstraksi dengan metode maserasi dengan perbandingan  serbuk  dan  pelarut  yaitu 1:10.  Serbuk  kayu  secang  ditimbang sebanyak 300 gram kemudian dimasukkan dalam  botol  reagen  coklat  dan  ditambah 3000  ml  etanol  70%.  Botol  ditutup  lalu ekstrak  direndam  selama  5  hari  dengan beberapa  kali  dihomogenkan.  Maserat kemudian  disaring  dengan  menggunakan kain  flanel  dan  kertas  saring.  Filtrat  yang didapatkan  kemudian  dipekatkan  dengan alat ratory  evaporator hingga  terbentuk ekstrak kental.
Uji  Fitokimia  Ekstrak  Etanolik  Kayu Secang (Caesalpinia sappan L.)
Uji  fitokimia ekstrak etanolik kayu secang menggunakan reaksi tabung.
Golongan  senyawa  yang  diuji  meliputi flavonoid,  saponin,  alkaloid,  tanin  dan fenolik.
Identifikasi  flavonoid  diuji  dengan cara  ekstrak  sebanyak  1  ml  ditambahkan
serbuk  magnesium  (Mg)  secukupnya kemudian  ditambah  10  tetes  larutan  HCl pekat.  Diamati  terbentuknya  warna  hitam kemerahan,  kuning  atau  jingga  indikasi adanya flavonoid (Endarini, 2016).
Identifikasi  saponin  diuji  dengan cara ekstrak ditambah 10 ml air panas lalu ditambah HCL 1% kemudian dikocok kuat selama  10  detik.  Diamati  terbentuknya busa  stabil  indikasi  adanya  saponin (Harborne, 1987).
Identifikasi  tanin  diuji  dengan  cara ekstrak  sebanyak  1  ml  ditambahkan  2-3 tetes  larutan  FeCl 3 1%  lalu  diamati terbentuknya  warna  hitam  kebiruan  atau hijau  indikasi  adanya  tanin  (Endarini, 2016).  Identifikasi  alkaloid  diuji  dengan cara  ekstrak  ditambah  2  ml  larutan  HCl lalu  dipanaskan  selama  5  menit  dan disaring.  Filtrat  ditambah  2-3  tetes  reagen Dragendorff.  Hasil  positif  ditunjukkan dengan  terbentuknya  endapan  jingga (Endarini,  2016).  Identifikasi  fenolik  diuji dengan  caraekstrak  ditambah  2-3  tetes FeCl 3 1%  kemudian  diamati  reaksi  warna yang  terbentuk.  Hasil  positif  ditunjukkan dengan  terbentuknya  warna  hijau,  merah, ungu,  biru,  atau  hitam  yang  kuat (Harborne, 1987).

## Identifikasi Sampel Bakteri
1. Isolasi  pada  Media  VJA  (Vogel Johnson Agar)
Sampel Staphylococcus  aureus kultur murni  Laboratorium  dan  isolat  pus pasien diisolasi pada media VJA yang telah  ditetesi  kalium  telurit  1% sebanyak  4  tetes  lalu  diinkubasi  pada suhu 37 o C selama 24-48 jam.
2. Pengecatan Gram
Koloni  bakteri  yang  tumbuh  pada media  VJA  kemudian  dibuat  preparat di  atas  objek  glass  dan  dilakukan
pengecatan Gram. Preparat yang telah mongering kemudian diamati dibawah mikroskop  dengan  perbesaran  1000 kali.

## 3. Uji Katalase
Koloni  yang  tumbuh  berwarna  hitam pada media VJA diambil menggunakan jarum oshe dan diletakkan  di  atas  obyek  glass  lalu diteteskan  larutan  H 2 O 2 3%.  Hasil yang  positif  ditunjukkan  dengan terbentuknya  gelembung-gelembung gas (Cappucino dan Sherman, 2013).

## 4. Uji Koagulase
Plasma  dipipet  sebanyak  200  µl  lalu dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi steril.  Biakan Staphylococcus  aureus ditambahkan  sebanyak  3  –  4  koloni dan  dicampurkan  dengan  hati-hati. Hasil positif apabila terbentuk gumpalan  atau  endapan  di  dasar tabung (Dewi, 2013).

## Pembuatan Suspensi Bakteri
Koloni  pada  media Vogel  Johnson Agar (VJA)  kemudian  diinokulasikan  ke media Brain  Hearth  Infusion (BHI). Tingkat  kekeruhan  disetarakan  dengan Standart Mc. Farland 1,5 x 10 8 cfu/ml.

## Uji  Aktivitas  Antibakteri  Metode  Difusi Kirby Bauer
Kertas  cakram  direndam  dalam ekstrak  etanolik  kayu  secang  konsentrasi 25%, 50%, 75% dan 100% selama 2-4 jam kemudian  di  letakkan  di  atas  media  MHA yang telah diinokulasikan suspensi bakteri Staphylococcus aureus kultur murni Laboratorium dan isolat pus pasien Rumah Sakit  lalu  diinkubasi  pada  suhu  37 o C selama  24  jam.  Percobaan  dilakukan sebanyak  3  kali  pengulangan.  Hasil  zona hambat  ekstral  etanolik  kayu  secang  yang
Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanolik Kayu Secang …
terbentuk  disekitar  kertas  cakram  diukur diameternya dengan penggaris.
Ciprofloxacin  digunakan  sebagai  kontrol positif  dan  DMSO  2%  digunakan  sebagai kontrol negatif.

## Uji Aktivitas Antibakteri Metode Dilusi
Pengujian pertama aktivitas antibakteri  metode  dilusi  menggunakan konsentrasi  ekstrak  etanolik  kayu  secang 100%,  90%,  80%,  70%,  60%,  50%,  40%, 30%,  20%,  dan  10%  dengan  pengencer berupa  NaCl  0,9%.  Kemudian  dilanjutkan menggunakan konsentrasi ekstrak 9%, 8%, 7%,  6%,  5%,  4%,  3%,  2%,  dan  1%. Kontrol  positif  berupa  suspensi  bakteri Staphylococcus aureus kultur murni Laboratorium dan isolat pus pasien Rumah Sakit  sedangkan  kontrol  negatif  berupa ekstrak  etanolik  kayu  secang  konsentrasi 100%  untuk  pengujian  pertama  dan konsentrasi  10%  untuk  pengujian  kedua. Tabung-tabung tersebut kemudian diinkubasi  pada  suhu  37 o C  selama  24  jam lalu  digores  pada  media  VJA.  Nilai  KBM ditentukan  setelah  media  VJA  diinkubasi pada  suhu  37 o C  selama  24-48  jam.  Nilai KHM  pada  penelitian  ini  tidak  dapat ditentukan  dikarenakan  ekstrak  kayu secang  yang  berwarna  merah  orange sehingga  pada  tabung  tidak  dapat  diamati kekeruhannya.

## Analisis Data
Data  hasil  uji  difusi  dilakukan  uji statistika  menggunakan  uji Shapiro-Wilk dan  dilanjutkan  dengan  uji  parametrik berupa uji Two Way Anova.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil Uji Fitokimia
Hasil  uji  fitokimia  ekstrak  etanolik kayu  secang  menunjukkan  hasil  positif mengandung  senyawa  saponin,  flavonoid,
tanin  dan  fenolik,  sedangkan  senyawa alkaloid  menunjukkan  hasil  negatif.  Hasil tersebut  berbeda  dengan  hasil  penelitian Kusmiati et  al (2014)  yang  menyebutkan bahwa  serbuk  kayu  secang  mengandung senyawa  alkaloid.  Perbedaan  hasil  ini kemungkinan  dapat  disebabkan  karena adanya  perbedaan  proses  pengeringan, pengayakan, metode ekstraksi, pelarut dan metode  identifikasi  kandungan  dalam ekstrak secang.

## Hasil Identifikasi Staphylococcus aureus
1. Isolasi  pada  Media  VJA  (Vogel
Johnson Agar)
Staphylococcus aureus kultur laboratorium  dan  isolat  pus  pasien  pada media  VJA  tumbuh  dengan  ciri  koloni bulat  berwarna  hitam,  cembung  dan disekitar koloni berwarna kuning.
(a) (b)
Gambar  1. Hasil  pertumbuhan  koloni Staphylococcus  aureus pada  media  VJA  (a) Sampel Laboratorium (b) Sampel Rumah Sakit
2. Pengecatan Gram
Staphylococcus aureus kultur murni dan isolat pus pasienpada pengecatan  Gram  bersifat  Gram  positif berwarna  ungu,  berbentuk  bulat  dan terlihat tersusun sendiri atau bergerombol.
(a)
(b)
Gambar 2. Hasil pengecatan Gram
(a)  Sampel  Laboratorium  (b)  Sampel  Rumah Sakit
3. Uji Katalase
Staphylococcus aureus kultur murni
dan  isolat  pus  pasien  pada  uji  katalase menghasilkan  gelembung-gelembung  gas yang menandakan bakteri tersebut menghasilkan enzim katalase.
(a) (b)
Gambar  3. Hasil  uji  katalase  (a)  Sampel
Laboratorium (b) Sampel Rumah Sakit
4. Uji Koagulase
Staphylococcus aureus kultur murni dan  isolat  pus  pasien  pada  uji  koagulase menunjukkan  adanya  endapan  di  dasar tabung yang menandakan enzim koagulase positif.
(a) (b)
Gambar  4. Hasil  uji  koagulase  (a)  Sampel Laboratorium (b) Sampel Rumah Sakit
Hasil  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Metode Difusi Cakram
1. Sampel Kultur Murni Laboratorium Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak  etanolik  kayu  secang  terhadap Staphylococcus  aureus dari  kultur  murni Laboratorium dapat dilihat pada Gambar 5 dan Tabel 1.
Gambar  5.  Hasil  uji  difusi  cakram  ekstrak etanolik kayu secang terhadap Staphylococcus aureus kultur murni Laboratorium
Keterangan: 1 : Kontrol negatif (DMSO 2%) 2 : Kontrol positif (Ciprofloxacin) 3 : Ekstrak konsentrasi 25% 4 : Ekstrak konsentrasi 50% 5 : Ekstrak konsentrasi 75%
6 : Ekstrak konsentrasi 100%
Tabel  1 .  Hasil  Uji  Aktivitas  Antibakteri
Staphylococcus aureus Kultur Murni Jenis Diameter Zona Hambat Rata-rata Diameter Zona Hambat (mm) R1  R2  R3 Kontrol (+) 36 31 21 29.3 Konsentrasi 25% 30 31 22 27.7 Konsentrasi 50% 33 32 22 29 Konsentrasi 75% 29 34 23 28.7 Konsentrasi 100% 34 36 25 31.7 Kontrol (-) 0 0 0 0
Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanolik Kayu Secang …
Berdasarkan  rerata  diameter  zona hambat  yang  diperoleh  dapat  dinyatakan bahwa  daya  hambat  yang  dihasilkan  oleh ekstrak  etanolik  kayu  secang  terhadap Staphylococcus aureus kultur murni Laboratorium  pada  semua  konsentrasi yaitu  konsentrasi  25%,  50%,  75%  dan 100%  adalah  sangat  kuat.  Rerata  diameter zona  hambat  yang  dihasilkan  antibiotik Ciprofloxacin lebih kecil dibanding dengan  rerata  diameter  zona  hambat  yang dihasilkan  ekstrak  etanolik  kayu  secang pada konsentrasi 100%. Hal ini menunjukkan  bahwa  daya  hambat  ekstrak etanolik  kayu  secang  konsentrasi  100% terhadap Staphylococcus  aureus kultur murni  Laboratorium  lebih  kuat  dibanding dengan  daya  hambat  yang  dihasilkan antibiotik Ciprofloxacin
2. Sampel Isolat Pus Pasien Rumah Sakit
Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak  etanolik  kayu  secang  terhadap Staphylococcus  aureus dari  isolat  pus pasien  dapat  dilihat  pada  Gambar  6  dan Tabel 2.
Gambar  6. Hasil  uji  difusi  cakram  ekstrak etanolik kayu secang terhadap Staphylococcus aureus isolat pus pasien Rumah Sakit Keterangan:
1 : Kontrol negatif (DMSO 2%) 2 : Kontrol positif (Ciprofloxacin) 3 : Ekstrak konsentrasi 25%
4 : Ekstrak konsentrasi 50%
5 : Ekstrak konsentrasi 75%
6 : Ekstrak konsentrasi 100%
Berdasarkan  rerata  diameter  zona hambat  yang  diperoleh  dapat  dinyatakan bahwa  daya  hambat  yang  dihasilkan  oleh ekstrak  etanolik  kayu  secang  terhadap Staphylococcus  aureus isolat  pus  pasien Rumah Sakit pada semua konsentrasi yaitu konsentrasi  25%,  50%,  75%  dan  100% adalah  sangat  kuat.  Rerata  diameter  zona hambat yang dihasilkan antibiotik Ciprofloxacin  adalah  24,7  mm.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  daya  hambat  yang dihasilkan  ke  empat  konsentrasi  ekstrak etanolik kayu secang terhadap Staphylococcus  aureus isolat  pus  pasien Rumah  Sakit  lebih  kuat  dari  antibiotik Ciprofloxacin.
Tabel  2. Hasil  Uji  Aktivitas  Antibakteri Staphylococcus aureus pus pasien
Jenis Diameter Zona Hambat Rata- rata Diameter Zona Hambat (mm) R1 R2 R3 Kontrol (+) 27 25 22 24.7 Konsentrasi 25% 32 31 23 28.7 Konsentrasi 50% 35 31 25 30.3 Konsentrasi 75% 35 33 23 30.3 Konsentrasi 100% 37 34 26 32.3 Kontrol (-) 0 0 0 0
Hasil  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Metode Dilusi
1. Sampel isolat  Laboratorium
Hasil  uji  dilusi  ekstrak  etanolik kayu  secang  terhadap Staphylococcus aureus isolat  Laboratoriumdapat  dilihat pada Gambar 7 dan  Tabel 3.
(a) (b)
Gambar  7. Hasil  uji  dilusi  ekstrak  etanolik kayu secang terhadap Staphylococcus aureus kultur murni Laboratorium
Keterangan:    (a)  Ekstrak  konsentrasi  100% sampai  10%:  (1)  Kontrol  positif  (2)  Kontrol negatif,  (3,4,5,6,7,8,9,10,11,12)  berturut  turut Ekstrak  konsentrasi  100%,  90%,80%,70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, dan 10%. Keterangan (b) Ekstrak konsentrasi 9% sampai 1%:  (1)  :  Kontrol  positif(2)  :  Kontrol  negatif, (3,4,5,6,7,8,9,10,11,12)  berturut  turut  ekstrak konsentrasi  9%,8%,7%,6%,  5%,4%,  3%,  2%, dan  1%.
Tabel  3. Hasil  Uji  Dilusi  Ekstrak  Etanolik Kayu  Secang  terhadap Staphylococcus  aureus Kultur Murni Laboratorium
Konsentrasi  Hasil  Konsentrasi Hasil Kontrol negatif - Kontrol negatif - 100% - 9% - 90% - 8% - 80% - 7% - 70% - 6% - 60% - 5% - 50% - 4% - 40% - 3% - 30% - 2% + 20% - 1% + 10% - Kontrol positif + Kontrol positif +
Keterangan: Negatif (-) → tidak ada pertumbuhan bakteri Positif (+) → ada pertumbuhan bakteri
Hasil  uji  dilusi  ekstrak  etanolik kayu  secang  terhadap Staphylococcus aureus kultur murni terdapat pertumbuhan koloni  pada  media  VJA  pada  konsentrasi ekstrak  1%  dan  2%  sehingga  nilai KBMnya adalah pada konsentrasi 3%.

## 2. Sampel Isolat Pus Pasien Rumah Sakit
Hasil  uji  dilusi  ekstrak  etanolik kayu  secang  terhadap Staphylococcus aureus isolat  pus pasien  Rumah Sakitdapat dilihat pada Gambar 8 dan Tabel 4.
(a) (b)
Gambar  8. Hasil  uji  dilusi  ekstrak  etanolik kayu  secang  terhadap Staphylococcus  aureus isolat pus pasien Rumah Sakit Keterangan  (a)  Ekstrak  konsentrasi  100% sampai  10%:  (1)  Kontrol  positif  (2)  Kontrol negatif,  (3,4,5,6,7,8,9,10,11,12)  berturut  turut Ekstrak  konsentrasi  100%,  90%,80%,70%, 60%,  50%,  40%,  30%,  20%,  dan  10%. Keterangan (b) Ekstrak konsentrasi 9% sampai 1%: (1) : Kontrol positif (2) : Kontrol negatif, (3,4,5,6,7,8,9,10,11,12)  berturut  turut  ekstrak konsentrasi  9%,8%,7%,6%,  5%,4%,  3%,  2%, dan  1%.
Hasil  uji  dilusi  ekstrak  etanolik kayu  secang  terhadap Staphylococcus aureus isolat pus pasien terdapat pertumbuhan koloni pada media VJA pada
Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanolik Kayu Secang …
konsentrasi  ekstrak  1%,  2%  dan  3% sehingga  nilai  KBMnya  adalah  pada konsentrasi 4%.
Staphylococcus  aureus merupakan bakteri  gram  positif  berdiameter  0,7  –  1,2 µm, berbentuk bulat, tersusun secara tidak teratur  menyerupai  buah  anggur,  tidak bergerak,  bersifat  fakultatif  anaerob,  dan tidak  membentuk  spora. Staphylococcus aureus yang  patogen  bersifat  invasif,
membentuk koagulase,
mencairkan gelatin,
menyebabkan hemolisis, membentuk  pigmen  kuning  emas,  dan mampu memfermentasi
manitol (Kuswiyanto, 2018). Staphylococcus aureus paling  sering  menyebabkan  sakit pada  kulit  dan  jaringan  superfisial,  seperti luka  bakar,  pustula,  koreng,  abses,  dan infeksi  karena  kecelakaan  dan  infeksi sesudah menjalani operasi (Iskamto, 2009).  Patogenitas  bakteri  ini  sering dihubungkan dengan infeksi luka bernanah,  yang  merupakan  penyebab utama  kasus  piemia.  Infeksi  serius  dari bakteri Staphylococcus  aureus dapat berupa  pneumonia,  mastitis,  meningitis, dan  infeksi  saluran  kemih  (Kuswiyanto, 2018).
Tabel  4. Hasil  Uji  Dilusi  Ekstrak  Etanolik Kayu  Secang  terhadap Staphylococcus  aureus Isolat Pus Pasien Rumah Sakit
Konsentrasi  Hasil  Konsentrasi Hasil Kontrol negatif - Kontrol negatif - 100% - 9% - 90% - 8% - 80% - 7% - 70% - 6% - 60% - 5% -
50% - 4% - 40% - 3% + 30% - 2% + 20% - 1% + 10% - Kontrol positif + Kontrol positif + Keterangan: Negatif (-) → tidak ada pertumbuhan bakteri Positif (+) → ada pertumbuhan bakteri
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang telah  dilakukan  menunjukkan  bahwa ekstrak etanolik  kayu secang ( Caesalpinia sappan L.)  memiliki  aktivitas  antibakteri terhadap Staphylococcus  aureus dengan melihat adanya zona hambat yang terbentuk  pada  uji  difusi.  Pengujian ekstrak etanolik kayu secang menunjukkan rerata  zona  hambat  terbesar  terhadap Staphylococcus  aureus kultur  murni  pada konsentrasi  100%  yaitu  sebesar  31,7  mm, sedangkan  pada Staphylococcus  aureus isolat  pus  pasien  pada  konsentrasi  100% yaitu sebesar 32,3 mm. Hasil difusi ekstrak etanolik  kayu secang terhadap kedua jenis bakteri  menunjukkan  daya  hambat  yang lebih  besar  dari  daya  hambat  kontrol positif  antibiotik  Ciprofloxacin,  yang menandakan  bahwa  ekstrak  kayu  secang sangat  baik  dalam  menghambat  kedua jenis  bakteri  tersebut    terutama  yang bersumber  dari  isolat  pus  pasien  Rumah Sakit.  Hal  ini  sejalan  dengan  penelitian Silviani  dan  Handayani  (2017)  yang menyimpulkan  bahwa  kombinasi  rebusan kayu  secang  ( Caesalpinia  sappan L.)  dan madu  mampu  menghambat  pertumbuhan bakteri Staphylococcus  aureus dengan kombinasi optimal 6:2.
Hasil uji dilusi menunjukkan ekstrak  etanolik  kayu  secang  konsentrasi 100%,  90%,  80%,  70%,  60%,  50%,  40%, 30%, 20%, dan 10% terhadap Staphylococcus aureus kultur murni Laboratorium dan isolat pus pasien Rumah Sakit  pada  media  VJA  tidak  ditemukan pertumbuhan koloni bakteri, hal ini berarti bahwa pada konsentrasi-konsentrasi tersebut  ekstrak  etanolik  kayu  secang masih  mampu  membunuh Staphylococcus aureus kultur murni dan isolat pus pasien. Berdasarkan hasil uji dilusi diatas diketahui  bahwa Staphylococcus  aureus isolat pus pasien memiliki nilai KBM yang lebih  tinggi  dibanding  dengan  nilai  KBM pada Staphylococcus  aureus kultur  murni, namun  perbedaan  nilai  KBM  dari  kedua jenis bakteri tersebut tidaklah berbeda jauh sehingga dapat dikatakan bahwa kemampuan  ekstrak  etanolik  kayu  secang dalam menghambat pertumbuhan Staphylococcus  aureus kultur  murni  dan isolat  pus  pasien  adalah  sama  baiknya. Menurut  penelitian  Sunraini  dan  Enlita (2015)  ekstrak  kayu  secang  ( Caesalpinia sappan L.)  dengan  metode  dilusi  juga mampu  menghambat  pertumbuhan  jamur Candida  albicans dengan  memiliki  nilai KBM pada konsentrasi 80%.
Data  hasil  uji  difusi  dilakukan  uji statistika menggunakan uji Shapiro- Wilk sebagai  uji  normalitas  kemudian dilanjutkan  dengan  uji  parametrik  berupa uji Two  Way Anova  dan  dilanjutkan dengan  uji Post  Hoc dan  uji One  Way Anova.  Uji  statistika  ini  dilakukan  untuk mengetahui  konsentrasi  ektrak  etanolik kayu  secang  yang  paling  efektif  dalam menghambat pertumbuhan Staphylococcus aureus kultur  murni  dan  isolat  pus  pasien serta  untuk  mengetahui  dari  kedua  jenis bakteri  tersebut  manakah  yang  lebih
sensitif terhadap ekstrak. Hasil uji normalitas Shapiro-wilk menunjukkan nilai  signifikansi  kedua  data  uji  difusi adalah  lebih  besar  dari  0,05  (H o diterima) yang  berarti  bahwa  data  terdistribusi normal. Hasil uji parametrik menunjukkan konsentrasi  ekstrak  etanolik  kayu  secang yang  paling  efektif  dalam  menghambat pertumbuhan Staphylococcus aureus kultur  murni  dan  isolat  pus  pasien  adalah konsentrasi  25% serta aktivitas antibakteri ekstrak  etanolik  kayu  secang  konsentrasi 25%  terhadap Staphylococcus  aureus kultur  murni  dan  isolat  pus  pasien  adalah sama.
Ekstrak  etanolik  kayu  secang mempunyai  aktivitas  antibakteri  karena mempunyai  senyawa  metabolit  sekunder yaitu flavonoid, fenolik, tanin dan saponin. Flavonoid sebagai antibakteri dapat menimbulkan  denaturasi  protein  yang terdapat  pada  dinding  sel  sehingga  dapat merusak susunan dan merubah mekanisme permeabilitas  dari  mikrosom,  lisosom  dan dinding  sel  (Erianti et  al ,  2015).  Fenolik pada kayu secang menghambat pertumbuhan bakteri dengan cara menginaktivasi enzim seluler yang dipengaruhi  oleh  kemampuannya  dalam melakukan  penetrasi  ke  dalam  sel  atau disebabkan oleh adanya perubahan permeabilitas membran sel akibat bergabungnya senyawa  antibakteri  dengan membran  sel,  hal  ini  menyebabkan kerusakan  fungsi  integritas  membran sitoplasma,  makromolekul  dan  ion  sel keluar,  kemudian  disorientasi  komponen- komponen  lipoprotein  serta  mencegah berfungsinya  membran  sebagai  pelindung terhadap  tekanan  osmotik  (Jawetz,  2001). Tanin  mempunyai  kemampuan  sebagai antimikroba  diduga  karena  tanin  akan membentuk  kompleks  dengan  enzim
Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanolik Kayu Secang …
Cahyaningtyas, D.M., et. al. | 215
ekstraseluler yang dihasilkan oleh patogen atau dengan mengganggu proses metabolisme  patogen  tersebut  (Cordoves et al , 2001). Saponin mempunyai kemampuan  sebagai  antibakteri  dengan cara  menurunkan  tegangan  permukaan sehingga mengakibatkan naiknya permeabilitas  atau  kebocoran  sel  dan mengakibatkan  senyawa  intraseluler  akan keluar  (Nuria et  al ,  2009).  Saponin  dapat berdifusi  melalui  membran  luar  dan dinding  sel  yang  rentan,  lalu  mengikat membran  sitoplasma  serta  mengganggu dan  mengurangi  kestabilannya.  Hal  ini menyebabkan  sitoplasma  bocor  keluar  sel yang  mengakibatkan  kematian  sel.  Agen antimikroba  yang  mengganggu  membran sitoplasma  bersifat  bakteriosida  (Lorent et al , 2014).
Penelitian  ini  bakteri  uji  pada penelitian ini hanya menggunakan Staphylococcus  aureus dari  1  sumber sampel pus dan belum mewakili Staphylococcus aureus dari isolat pus yang mengalami resistensi sehingga perlu dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  uji aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanolik  kayu secang terhadap bakteri Methicillin- Resistant Staphylococcus aureus (MRSA).
Hasil  yang  diperoleh  pada  penelitian  ini menunjukkan ekstrak etanolik kayu secang memiliki  kemampuan  sebagai  antibakteri sehingga  perlu  dilakukan  penelitian  lebih lanjut  terhadap  ekstrak  etanolik  kayu secang  ( Caesalpinia  sappan L.)  untuk dikembangkan menjadi antiseptik.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  penelitian  yang  telah dilakukan, maka dapat disimpulkan bahwa ekstrak etanolik  kayu secang  ( Caesalpinia sappan
L.)
mempunyai aktivitas
antibakteri terhadap
Staphylococcus aureus .Konsentrasi  ekstrak  etanolik  kayu secang  ( Caesalpinia  sappan L.)  yang paling efektif dalam menghambat Staphylococcus  aureus isolat  Laboratorium dan  isolat  pus  pasien  Rumah  Sakit  adalah pada konsentrasi 25%. Nilai KBM ekstrak etanolik  kayu secang ( Caesalpinia  sappan L.)  terhadap Staphylococcus  aureus isolat Laboratorium  adalah  konsentrasi  3%  dan Staphylococcus  aureus isolat  pus  pasien Rumah  Sakit  adalah  konsentrasi  4%. Bakteri Staphylococcus aureus isolate Laboratorium dan isolat pus pasien Rumah Sakit  memiliki  kesensitifan  yang  sama terhadap  ekstrak  etanolik  kayu  secang ( Caesalpinia sappan L.).

## DAFTAR PUSTAKA
Artanti,  D.,  dan  Fatimah,  S.  2017.  Efektivitas Perasan  Daun  Keji  Beling  (Sericocalyx crispus Linn) Dalam Menghambat Pertumbuhan Staphylococcus  aureus .  The Journal Of Muhammadiyah Medical
Laboratory Technologist, 2(1), 78–83. http://dx.doi.org/10.30651/jmlt.v1i1.1012
Cappucino,  J.G.  dan  N.  Sherman.  2013. Manual Laboratorium Mikrobiologi , terjemahan oleh Nur Miftahurahmah. Jakarta: Penerbit EGC.
Chen  C.  J.,    dan  Huang,Y.  C..  2014.  New epidemiology  of  Staphylococcus  aureus infection  in  Asia.  Clin  Microbiol  Infect, 20(7), 605-606. https://doi.org/10.1111/1469-0691.12705 Cordoves,  C.G.,  Bartolome  B.,  Vieira  W.,  dan Virador  VM.  2001.  Effects  of  Wine Phenolics and Sorghum Tanins on Tyrosinase Activity and Growth of Melanoma  Cells. J  Agric  Food  Chem ,  49:
1620-1624. https://doi.org/10.1021/jf00111h Dewi,  A.  2013.  Isolasi,  Identifikasi  dan  Uji Sensitivitas Staphylococcus  aureus terhadap Amoxcillin dari  Sampel  Susu  Kambing Peranakan Ettawa (PE) Penderita Mastitis di
Wilayah Girimulyo, Kulonprogo, Yogyakarta. Jurnal  Sain  Veteriner ,  31(2): 138-150. http://i- lib.ugm.ac.id/jurnal/detail.php?dataId=1249 6
216 | Cahyaningtyas, D.M., et. al.
Endarini,  L.H. 2016. Farmakognisi  dan  Fitokimia . Jakarta: Kemenkes RI.
Erianti,  F.,  Marisa,  D.  dan  Suharto,  E.  2015. Potensi  Antiinflamasi  Jus  Buah  Belimbing ( Averrhoa carambola L.) terhadap Denaturasi  Protein In  Vitro . Berkala Kedokteran , 11(1): 33-39. http://dx.doi.org/10.20527/jbk.v11i1.18
Harborne,  J.B.  1987. Metode  Fitokimia:  Penuntun Cara  Modern  Menganalisis  Tumbuhan , terbitan  ke-2.  Terjemahan  Padmawinata,  K. dan I. Soediro. Bandung: Penerbit ITB.
Iskamto, B. 2009. Bakteriologi Kesehatan . Surakarta: Yayasan Lingkungan Hijau.
Jawetz,  E.,  J.J.  Melnick  and  E.A.  Adelberg.  2001.
Mikrobiologi  Kedokteran  Buku  1 .  Bagian Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga (Penerjemah). Jakarta: Salemba Medika. Kumala,  S.,  Yuliani,  Tulus,  D.  2009.  Pengaruh Pemberian Rebusan Kayu Secang
( Caesalpinia  sappan L.)  Terhadap  Mencit
Yang  Diinfeksi  Bakteri Escherichia  coli. Jurnal Farmasi Indonesia, 4(4). https://doi.org/10.35617/jfi.v4i4.28
Kusmiati,  Dameria,  dan  D.  Priadi.  2014. Analisa Senyawa  Aktif  Ekstrak Kayu  Secang (Caesalpinia  sappan  L.)  yang  Berpotensi sebagai  Antimikroba .  Seminar  Nasional Teknologi  Industri  Hijau  1.  Pusat  Penelitian
Bioteknologi LIPI-Institut Sains dan Teknologi Nasional. Hal 169-174. https://www.researchgate.net/publication/26 7627083_Analisa_Senyawa_Aktif_Ekstrak_ Kayu_Secang_Caesalpinia_sappan_L_yang_
Berpotensi_Sebagai_Antimikroba_Analysis _on_Compound_Extract_Secang_Wood_Ca esalpnia_sappan_L_as_Potential_Antimicro bial Kusuma,  I.W.  2007.  Secang  ( Caesalpinia  sappan L.):  Telaah  Aktifitas  Biologis  dan  Potensi Pemanfaatannya. JRTI, 1 (2), 14-23.
doi: http://dx.doi.org/10.26578/jrti.v1i2.1398
Kuswiyanto.  2018. Bakteriologi  2:  Buku  Ajar Analis  Kesehatan .  Jakarta:  Penerbit  Buku Kedokteran EGC.
Lorent J.H., J. Quetin-Leclerq., and M.P. Mingeot- Leclerq. 2014. The Amphiphilic Nature of Saponins and their effects on artificial and biological membranes and potential consequences  for  red  blood  and  cancer
cells. Org  Biomol  Chem ,  12(44):  8803- 8822. http://dx.doi.org/10.1039/C4OB01652A Nurmala,  I.G.N.  Virgiandhy,  Andriani,  &  D.F. Liana.  2015.  Resistensi  dan  Sensitivitas Bakteri  terhadap  Antibiotik  di  RSU  dr. Soedarso  Pontianak  Tahun  2011-2013. eJournal  Kedokteran  Indonesia , 3 (1),  21- 28. https://doi/org/10.23886ejki.3.4803 Nuria,  M.C.,  A.  Faizatun  A.,  dan  Sumantri.  2009. Uji Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Jarak Pagar  (Jatropha  cuircas  L)  terhadap Bakteri  Staphylococcus  aureus  ATCC 25923, Escherichia coli ATCC 25922 dan Salmonella typhi TCC 1408 . Jurnal Ilmu- ilmu Pertanian , 5(2); 26-37. https://publikasiilmiah.unwahas.ac.id/inde x.php/Mediagro/article/view/559/680
Sa’diah, S., Darusman, L.K., Triwahyuni,  W., dan Batubara,  I.  2013.  Efektivitas  Krim  Anti
Jerawat Kayu Secang ( Caesalpinia sappan ) terhadap Propionibacterium acnes pada  Kulit  Kelinci. Jurnal  Ilmu Kefarmasian  Indonesia ,  11(2):  175-181. http://jifi.farmasi.univpancasila.ac.id/index .php/jifi/article/download/214/151/
Singh  S.,  M.  Khare,  R.K.  Patidar,  S.  Bagde,  K.N. Sahare,  D.  Dwevedi  and  V.  Singh.  2013. Antibacterial  Activities  Against  Pyogenic Pathogens. Int.  Jour.  of  Pharmaceutical Sciences  and  Research .  4(8):2974-2979. Doi: http://dx.doi.org/10.13040/IJPSR.0975- 8232.4(8).2974-79
Silviani,Y.  dan  Handayani,  S.2017.  Pengaruh Variasi  Kombinasi  Rebusan  Kayu  Secang (caesalpinia sappan l.) dan Madu Terhadap Pertumbuhan Staphylococcus aureus, 8(1), 42-46. http://jurnal.stikeskusumahusada.ac.id/ind ex.php/JK/article/download/210/208 Sunraini  dan  Enlita.  2015.  Uji  Potensi  Ekstrak Kayu  Secang  ( Caesalpinia  sappan L.) dalam  Menghambat  Pertumbuhan  Jamur Candida  albicans . Jurnal  Kesehatan Perintis , 47-56. https://www.neliti.com/id/publications/27 5139/uji-potensi-ekstrak-kayu-secang- caesalpina-sappan-li-dalam-menghambat- pertumbuhan