Tarigan et al.;Studi Efek Antidepresan Ekstrak…..Pharmacoscript Volume 7 No. 2, Agustus 2024
STUDI EFEK ANTIDEPRESAN EKSTRAK DAUN KRATOM ( Mitragyna speciosa (KORTH.) PADA MENCIT JANTAN GALUR Swiss Webster
Selvianita Tarigan 1 , Kusnandar Anggadiredja 2*
1 Magister Farmasi, Sekolah Farmasi, Institut Teknologi Bandung
2 Departemen Farmakologi-Farmasi Klinik, Sekolah Farmasi, Institut Teknologi Bandung *Email: kusnandar_a@itb.ac.id
Received: 19/06/2024 , Revised: 25/07/2024 , Accepted: 25/07/2024, Published: 08/08/2024

## ABSTRAK
Antidepresan  yang  selama  ini  telah  digunakan  memiliki  beberapa  kekurangan  terutama  terkait keamanannya. Bahan alam dapat menjadi alternatif, dan salah satunya adalah kratom ( Mitragyna speciosa Korth.), yang telah ditunjukkan memiliki aktivitas biologi pada sistem saraf.  Penelitian ini bertujuan untuk mempelajari aktivitas antidepresan ekstrak etanol kratom pada model mencit depresi. Sebanyak 25 ekor mencit dibagi ke dalam 5 kelompok dengan perlakuan berbeda, yaitu kelompok  kontrol  negatif,  kelompok  kontrol  positif  (fluoksetin  5  mg/kgBB)  dan  kelompok perlakuan  dengan  konsentrasi  dosis  50mg/kgBB,  100mg/kgBB  dan  200mg/kgBB.  Tingkat depresi  diukur dengan 5 parameter  yang didapat  melalui open-field  test (T center , T border, T periphere , dan jarak tempuh) dan forced swimming test ( immobility time ), dilanjutkan dengan pengamatan konsentrasi  kortisol.  Selanjutnya,  dilakukan  uji  statistic  dengan  metode  ANOVA  dan post-hoc dengan  metode  Tukey  untuk  melihat  signifikansi  perbedaan  ke-3  kelompok  perlakuan  dengan kelompok  kontrol  negatif.  Berdasarkan  hasil  pengamatan,  mencit  yang  mengonsumsi  ekstrak daun  kratom  sebesar  100  mg/kgBB  dianggap  memiliki  efek  antidepresan  paling  kuat,  ketika dibandingkan dengan kelompok kontrol pada pengamatan T center (rata-rata 6,92 ± 4,27%), T perifer (80,02 ± 12,44%), jarak tempuh (7.033,08 ± 1.541,85 cm), dan immobility time (98,89 ± 13,95 detik).  Hal  tersebut  diperkuat  dengan  perbandingan  konsentrasi  kortisol  antara  kelompok  yang diadministrasikan daun kratom dengan dosis 100 mg/kgBB.
Kata kunci : Antidepresan, kratom ( Mitragyna speciosa Korth.), kortisol, mencit

## ABSTRACT
Antidepressants  that  have  been  used  so  far  have  several  shortcomings,  especially  regarding their  safety.  Natural  ingredients  can  be  alternatives,  and  one  of  them  is  kratom  (Mitragyna speciosa Korth.). which has been shown to have biological activity in the nervous system. This research aims to study the antidepressant activity of kratom ethanol extract in a mouse model of depression. A total  of  25 mice were divided into 5 groups  with different  treatments.   namely a negative control group. a positive control group (fluoxetine 5 mg/kg) and treatment groups with doses  of  50mg/kg,  100mg/kg  and  200mg/kg.  The  level  of  depression  was  measured  using  5 parameters obtained through an open-field test (T center , T border , T periphere , and distance travelled) and  a  forced  swimming  test  (immobility  time),  followed  by  observation  of  cortisol concentrations. Then, statistical tests were carried out using the ANOVA method and a post-hoc using the Tukey method to see the significance of the differences between the 3 treatment groups and the negative  control  group.  Based on the results of  observations. mice that  consumed 100

## Pharmacoscript Volume 7 No. 2 Agustus 2024
mg/kg of kratom leaf extract were considered to have the strongest antidepressant effect, when compared  with  the  control  group  in  T center observations  (average  T center value  6.92  ±  4.27%), T periphere (80.02  ±  12.44%).  distance  travelled  (7.833.08  ±  1.541.85  cm)  and  immobility  time (98.89  ±  13.95  seconds).  This  was  confirmed  by  the  comparison  of  cortisol  concentrations between groups administered kratom leaves at a dose of 100 mg/kg.
Keywords : Antidepressant, kratom ( Mitragyna speciosa Korth.), cortisol, mice

## PENDAHULUAN
Depresi merupakan salah satu penyakit  yang  umum  terjadi  dan  telah mempengaruhi  lebih  dari  200  juta  jiwa orang  diseluruh  dunia.  Menurut  Riskesdas (2018), sebanyak 700.000 penduduk Indonesia  dengan  usia  di  atas  15  tahun mengalami  gangguan mental emosional dan depresi. Umumnya, depresi dianggap sebagai keadaan tonus perasaan yang secara umum  ditandai  oleh  rasa  kesedihan,  apati, pesimisme,  dan  kesepian  (Mayasari  2020). Kondisi  tersebut  dapat  menjadi  kronis  dan berulang,  dan  secara  substansial  dapat mengganggu  kemampuan  individu  dalam menjalankan  tanggung  jawab  sehari-hari (Dianovinina  2018).  Tanda  awal  dari depresi adalah meningkatnya tingkat kortisol  yang  disebabkan  oleh  disregulasi adrenal  hipofisi  hipotalamus  (HPA)  yang dipicu  oleh  stress  kronis  yang  berulang (Apriansyah 2017).
Indonesia merupakan salah satu negara  dengan  tingkat  keanekaragaman hayati  tertinggi  di  dunia.  Namun,  masih belum  banyak  informasi  mengenai  manfaat dan  potensi  berdasarkan  jenis  tumbuhan, khususnya  di  bidang  farmasi  (Nugroho
2010).  Salah  satu  yang  dianggap  memiliki potensi herbal adalah daun kratom ( Mitragyna  speciosa )  yang  tersebar  di Indonesia,  Malaysia,  dan  Thailand  (Hassan et  al .  2013).  Beberapa  penelitian  tentang daun  kratom  menunjukkan  aktivitas  efek farmakologi  antara  lain;  analgesik  dan stimulan  (Reanmongkol et  al .  2007), antidepresan (Idayu et al . 2011), antiinflamasi  dan  antinosiseptif  (Mossadeq et  al .  2009),  antioksidan  dan  antibakteri (Parthasathy et al . 2009).
Penelitian ini dilakukan guna mengetahui  aktivitas  antidepresan  ekstrak etanol  daun  kratom  ( Mitragyna  speciosa (Korth.))  serta  mengetahui  konsentrasi optimum  dari  ekstrak  daun  tersebut  yang memiliki  efek  antidepresan  pada  mencit Swiss webster .

## METODE PENELITIAN

## Alat
Perangkat  OFT,  dan  alat  FST. Selanjutnya,  ELISA kit  mouse  cortisol dan perangkat  lunak  SPSS  versi  25  digunakan dalam proses pengolahan data. Penelitian ini menggunakan kode etik KEP/I/VIII/H050823ST/PEKM.
Penelitian  menggunakan  25  ekor mencit  putih  jantan  webster  swiss  sebagai hewan uji dengan bobot 20-25 gram dengan rentang  usia  8-14  minggu.  Hewan  uji tersebut didapat dari CV Kencana.

## Bahan
Material utama yang digunakan adalah simplisia  kratom  yang  didapat  dari  antara lain  akuades,  etanol  95%,  kloroform,  Na- CMC.
Jalannya Penelitian

## 1. Protokol Pemberian Obat
25  mencit  dibagi  ke  dalam  5 kelompok.  Kelompok  1  sebagai  sebagai kontrol  negatif  diadministrasikan  yaitu  Na- CMC 0,5%. Kelompok 2 sebagai pembanding  diberi  fluoksetin  dengan  dosis 5  mg/kg  yang  digunakan  dosis  671,58 mg/kg  BB  Kelompok  3  diberikan  ekstrak kratom  dengan  dosis  50  mg/kg  BB. Kelompok  4  diadministrasikan  ekstrak kratom  dengan  dosis  100  mg/kg  BB. Kelompok  5  diadministrasikan  ekstrak kratom  dengan  dosis  200  mg/kg  BB. Pemberian obat dilakukan selama 14 hari.

## 2. Open Field Test (OFT)
Mencit  diletakan  pada  sebuah  kotak berbahan stainless berukuran  40  x  40  x  60 cm.  Pada  ketinggian  60  cm,  diletakkan lampu  pijar  dengan  daya  40  watt  di  atas kotak tersebut. Dasar kotak dibagi menjadi 3 area,  yaitu  area  tengah  ( center ),  pembatas ( border ),  dan  sisi  ( periphere )  kotak,
Parameter  yang  diamati  adalah  proporsi waktu  mencit  berada  pada  area center (T center ), border (T border ),  dan periphere (T periphere )  serta  jarak  yang  tempuh  mencit selama  berada  perangkat  tersebut.  Hasil pengamatan diolah dengan bantuan perangkat lunak AnimalTA.
3. Forced Swim Test (FST)
Pengujian  ini  dilakukan  pada  gelas toples berbentuk tabung dengan diameter 15 cm  dan  tinggi  25  cm.  Toples  tersebut  diisi air  dengan  ketinggian  15  cm  dan  suhu sebesar 25°C. Pengamatan dilakukan selama 5  menit.  Parameter  yang  diukur  pada  FST adalah  durasi  waktu  mencit  berhenti berenang ( immobility time ).
4. Homogenisasi  Otak  dan  Analisis Kortisol dengan ELISA
Otak mencit dihomogenkan
menggunakan homogenizer
HO-4.
Pengukuran  kortisol  dilakukan  dengan Mouse  Dopamine  ,DA  BT-LAB  Kit menggunakan  panjang  gelombang  450  Nm. mengetahui konsentrasi kortisol pada masing-masing sampel supernatant.

## Analisis Statistik
Analisis  statistik  dilakukan  dengan metode  ANOVA one-way dan post-hoc metode  Tukey  dengan  membandingkan hasil pengukuran pada setiap parameter dari masing-masing kelompok perlakuan dengan kelompok kontrol negatif.

## Pharmacoscript Volume 7 No. 2 Agustus 2024

## HASIL DAN PEMBAHASAN
1. Karakteristik Ekstrak dan Penapisan Fitokimia
Karakteristik  ekstrak  daun  kratom dinilai dengan perhitungan rendemen ekstrak,  penetapan  kadar  sari  larut  etanol dan  kadar  air  pada  simplisia  maupun ekstrak, penetapan bobot jenis dan kadar air ekstrak,  serta  penapisan  fitokimia.  Hasil pengamatan  menyatakan  bahwa  bobot ekstrak  sebesar  94,92  gram,  atau  sekitar 23,74%  dari  bobot  simplisia.  Bobot  jenis ekstrak  didapat  sebesar  0,806  gram/mL. Sementara  itu,  kadar  air  sampel  ekstrak masing-masing adalah sebesar 4,90%.
Sementara  itu,  hasil  pengamatan penapisan  fitomikia  menyatakan  bahwa ekstrak daun kratom mengandung flavonoid, tannin  galat,  tannin  gelatin,  tannin  FeCl3, saponin,  alkaloid,  dan  steroid.  Sementara itu,  tidak  ditemukan  tannin  katekat  pada ekstrak daun kratom. Selanjutnya, dilakukan analisis  kadar  sari  larut  etanol  dan  air  pada simplisia  dan  ekstrak  daun  kratom  yang memperoleh hasil kadar sari larut etanol dan air  pada  simplisia  secara  berturut-turut sebesar  29,6%  dan  26,5%.  Kadar  sari  larut etanol  dan  kadar  sari  larut  air  pada  sampel ekstrak daun kratom didapat masing-masing sebesar  61,3%  dan  33,5%.  Karakteristik Ekstrak dan Penapisan Fitokimia
Daun kratom atau Mitragyna speciosa (Korth.)
memiliki fungsi
rekreasional  seperti  meningkatkan  rasa bahagia dan euphoria (Meireles et al. 2019).
Selain itu, daun kratom juga dianggap dapat digunakan untuk penerapan potensi farmasetik (Ghazalli et al. 2021). Karakteristik  ekstrak  daun  kratom  dinilai dengan  perhitungan  rendemen  ekstrak, penetapan  kadar  sari  larut  etanol  dan  kadar air pada simplisia maupun ekstrak, penetapan bobot jenis dan kadar air ekstrak, serta  penapisan  fitokimia.  Hasil  pengujian bobot  jenis  dan  kadar  air  ditampilkan  pada Tabel  1
Tabel    1. Hasil  Penetapan  Bobot  Jenis  dan Kadar Air
Parameter Nilai Bobot ekstrak 94,93  gram Persentase rendemen 23,74  % Bobot jenis ekstrak 0,806  gram/mL Kadar air ekstrak 4,90  % Tabel  1. Hasil Penapisan Fitokimia Ekstrak Daun Kratom Metabolit Sekunder Hasil Flavonoid + Tannin + Saponin Alkaloid Steroid/Triterpenoid + + + 2. Open-Field Test (OFT)
Parameter  yang  diamati  antara  lain proporsi  waktu  mencit  berada  pada  area center (T center ), border (T border ), dan periphere (T periphere ) serta jarak yang tempuh mencit  selama  berada  perangkat  tersebut.
Tarigan et al.;Studi Efek Antidepresan Ekstrak…..Pharmacoscript Volume 7 No. 2, Agustus 2024
Hasil  pengamatan  T center ditampilkan  pada Gambar 1.
Berdasarkan Gambar 1, terjadi penurunan  rata-rata  proporsi  waktu  pada area  center  kotak  antara  T 0 dan  T 16 pada kelompok  1,  3,  dan  5,  masing-masing sebesar  3,50%  pada  hari  ke-1  menjadi 1,38%  pada  hari  ke-16;  5,70%  menjadi 1,78%;  dan  10,22%  menjadi  1,30%. Sementara  itu,  kelompok  2  dan  4  sedikit mengalami  kenaikan,  masing-masing  dari 0,70%  menjadi  1,32%  dan  5,06%  menjadi 6,92%.  Kelompok  hewan  dengan  proporsi Tcenter  tertinggi  adalah  hewan  pada kelompok  4.  Selanjutnya,  hasil  pengamatan T border ditampilkan oleh Gambar 2.
Pada  hari  pertama,  rata-rata  proporsi waktu  hewan  uji  kelompok  1,  2,  3,  4,  5 berada  pada  area border masing-masing sebesar 2,54%; 3,08%; 11,94%; 6,52%, dan 2,90%;  sedangkan  pada  hari  ke-16  masing- masing kelompok memiliki rata-rata proporsi  waktu  sebesar  2,70%;  2,26%; 3,24%;  13,06%;  dan  8,54%.  Kelompok  4 dan  5  mengalami  kenaikan  secara  drastis pada pengamatan kedua, sedangkan kelompok  1  mengalami  sedikit  kenaikan. Sementara itu, kelompok 2 dan 3 mengalami penurunan proporsi waktu pada pengamatan kedua. Nilai rata-rata proporsi waktu hewan uji  berada  pada  area periphery tercantum pada Gambar 3.
Area periphery merupakan area dengan proporsi waktu tertinggi dibandingkan dengan area lainnya. Berdasarkan  hasil  yang  tercantum  pada Gambar  3,  kelompok  1,  2,  3,  dan  5 mengalami skenaikan proporsi waktu hewan uji berada pada area periphery pada hari ke- 16  (masing-masing  dari  93,96%  menjadi 95,92%;  82,36%  menjadi  94,98%;  96,22% menjadi  96,42%,  dan  96,88%  menjadi 90,16%),  sedangkan  penurunan  proporsi waktu  hanya  terjadi  pada  kelompok  4  (dari 88,42%  menjadi  80,02%).  Pada  hari pertama,  mencit  dengan  T perifer tertinggi adalah  kelompok  2,  sedangkan  yang terendah  adalah  kelompok  3.  Setelah  16 hari, T perifer tertinggi dimiliki oleh kelompok 2 sedangkan yang terendah adalah kelompok  4.  Selain  proporsi  waktu  hewan uji  berada  pada  area center , border ,  dan periphere kotak,  jarak  tempuh  masing- masing  hewan  uji  pada  setiap  kelompok juga  diamati.  Hasil  pengamatan  jarak tempuh tercantum pada Gambar 4.
Rata-rata  jarak  tempuh  hewan  uji selama 15 menit pengamatan pada kelompok 1, 2, 3, 4, dan 5 pada pengamatan pertama  masing-masing  adalah  sebesar 3.060,38  cm;  5.318,09  cm;  8.285,49  cm; 5.721,26  cm;  dan  5.355,74  cm;  sedangkan pada  pengamatan  kedua,  rata-rata  jarak tempuh hewan uji pada kelompok 1, 2, 3, 4, dan  5  adalah  sebear  3.860,98  cm;  4.685,67
cm;  5.391,96  cm;  7.033,08  cm;  dan 3.391,99  cm.  Penurunan  rata-rata  jarak tempuh  terjadi  pada  hewan  uji  pada kelompok  2,  3,  dan  5;  sedangkan  rata-rata jarak  tempuh  hewan  uji  pada  kelompok  1 dan 4 mengalami kenaikan.
3. Forced Swimming Test (FST)
Metode F orced Swimming Test dilakukan untuk mengamati nilai immobility time dari  masing-masing  kelompok  hewan uji.  Berdasarkan  hasil  pengamatan,  hanya kelompok  2  yang  mengalami  penurunan immobility time .
4. Uji Elisa
Uji ELISA dilakukan dengan instrumen ELISA microplate reader sehingga  memperoleh  nilai  absorbansi  yang digunakan untuk menentukan pola konsentrasi  kortisol  pada  ekstrak  kratom dengan  bantuan  kurva.  Kelompok  4  (dosis 100  mg/kg  BB)  dipilih  karena  hanya kelompok tersebut yang memiliki perbedaan signifikan  dengan  kelompok  1,  yaitu  pada parameter  T center ,  T perifer ,  jarak  tempuh,  dan immobility time . Berdasarkan hasil
pengukuran untuk memperoleh kurva standar,  didapatkan  persamaan  linear  y  =  -
0,0034x  +  1,8006  dengan  nilai  R 2 sebesar 0,9381.  Berdasarkan  persamaan  tersebut, didapat  konsentrasi  kortisol  pada  5  sampel kelompok 1 masing-masing sebesar 371,35; 401,35;  400,47;  405,18;  dan  432,24  mg/L; sedangkan  sampel  kelompok  4  masing- masing  sebesar  336,94;  357,38;  361,09; 341,21; dan 255,18 mg/L. Hasil perhitungan konsentrasi  kortisol  pada  sampel  kelompok 1 dan 4 ditampilkan pada Tabel 1.
Selanjutnya, dilakukan uji signifikansi antara  varian  konsentrasi  kortisol  pada kelompok  1  dan  4  menggunakan  metode ANOVA. Hasil uji signifikansi mendapatkan  nilai p-value sebesar  0,047. Hal  ini  dapat  mengindikasikan  terdapat perbedaan  signifikan  (p-value  <0,05)  pada konsentrasi  kortisol  kelompok  1  dan kelompok  4,  sehingga  dapat  disimpulkan bahwa  administrasi  kratom  dengan  dosis 100 mg/kg BB memiliki efek antidepresan.
Gambar 1. Hasil pengamatan T center
Keterangan: (*) p-value< 0,05; dibandingkan dengan kelompok 1 berdasarkan hasil uji ANOVA dan post-hoc metode Tukey
Gambar 2. Hasil pengamatan T border 1 2
3 4 5 T0 3.50 0.70 5.70 5.06 10.22 T16 1.38 1.32 1.78 6.92 1.30 0.00 10.00 20.00 30.00 40.00 Pro p o rs i W ak tu (% ) Keterangan: (1) pembawa Na-CMC 0,5% (2) Fluoksetin 5 mg (3) Kratom 50 mg (4) Kratom 100 mg (5) Kratom 200 mg * 1 2 3 4
5 T0 2.54 3.08 11.94 6.52 2.90 T16 2.70 2.26 3.24 13.06 8.54 0.00 10.00 20.00 30.00 Pe rs en ta se Wakt u (% ) Keterangan: (1) pembawa Na-CMC 0,5%
(2) Fluoksetin 5 mg (3) Kratom 50 mg
(4) Kratom 100 mg
(5) Kratom 200 mg

## Pharmacoscript Volume 7 No. 2 Agustus 2024
Gambar 3 . Hasil pengamatan T periphere
Keterangan:  (*) p-value< 0,05;  dibandingkan  dengan  kelompok  1  berdasarkan  hasil  uji  ANOVA  dan post-hoc metode Tukey
Gambar 4 . Hasil pengamatan jarak tempuh mencit
Keterangan:  (*) p-value< 0,05;  dibandingkan  dengan  kelompok  1  berdasarkan  hasil  uji  ANOVA  dan post-hoc metode Tukey
1 2 3 4 5 T0 93.96 96.22 82.36 88.42 86.88 T16 95.92 96.42 94.98 80.02 90.16 0.00 20.00 40.00 60.00 80.00 100.00 Pers en ta se Wa kt u (% ) Keterangan: (1) pembawa Na-CMC 0,5% (2) Fluoksetin 5 mg (3) Kratom 50 mg (4) Kratom 100 mg (5) Kratom 200 mg * 1 2 3 4
5 T0 3,060.38 5,318.09 8,285.49 5,721.26 5,355.74 T16 3,860.98 4,685.67 5,391.96 7,833.08 3,391.99 0 2,500 5,000 7,500 10,000 12,500 Ja ra k T empuh (c m) Keterangan: (1) pembawa Na-CMC 0,5% (2) Fluoksetin 5 mg (3) Kratom 50 mg (4) Kratom 100 mg (5) Kratom 200 mg *
Tarigan et al.;Studi Efek Antidepresan Ekstrak…..Pharmacoscript Volume 7 No. 2, Agustus 2024
Gambar 5. Hasil pengamatan immobility time
Keterangan:  (*) p-value< 0,05;  dibandingkan  dengan  kelompok  1  berdasarkan  hasil  uji  ANOVA  dan post-hoc metode Tukey
Tabel 3 . kortisol pada kelompok 1 dan 4
No hewan Konsentrasi Kortisol (mg/L) P-value Pembawa Na-CMC 0,5% Kratom 100 mg/kg 1 371.35 336.94 0.047*
2
401.35 357.38 3 400.47 361.09 4 405.18 341.21 5 432.24 255.18 Mean 402.12 330.36 Daun kratom atau Mitragyna speciosa memiliki fungsi rekreasional seperti  meningkatkan  rasa  bahagia  dan euphoria  (Meireles et  al .  2019).  Selain  itu, daun kratom juga dianggap dapat digunakan untuk penerapan potensi farmasetik (Ghazalli et  al .  2021).  Hasil  penetapan bobot jenis dan kadar air pada penelitian ini tidak  jauh  berbeda  dengan  penelitian  yang dilakukan  oleh  Maulida et  al .  (2022),  yang menyatakan  bahwa  presentase  rendemen pada  sampel  ekstraksi  daun  kratom  yang
diteliti  adalah  sebesar  32,1-34,49%  dan kadar  air  sebesar  6,5-8%.  Sementara  itu, Torres-Ortiz  (2022)  menemukan  bahwa bobot  jenis  ekstraksi  kratom  sebesar  1,02 gram/mL.  Sementara  itu,  hasil  penapisan fitokimia  pada  penelitian  ini  juga  sejalan dengan  penelitian  yang  dilakukan  oleh Maulida et  al .  (2022),  yang  menemukan bahwa terdapat metabolit sekunder golongan alkohol, flavonoid, tannin, saponin, dan triterpenoid/steroid pada ekstrak  daun  kratom.  Juanda et  al .  (2019)
1 2 3 4 5 T0 142.30 149.12 127.79 151.67 169.16 T16 168.74 139.94 146.48 98.89 179.82 0.00 40.00 80.00 120.00 160.00 200.00 240.00 Imm o b ili ty T im e (d etik ) Keterangan: (1) pembawa Na-CMC 0,5% (2) Fluoksetin 5 mg (3) Kratom 50 mg (4) Kratom 100 mg (5) Kratom 200 mg *
juga  menyatakan  bahwa  ekstrak  daun kratom  mengandung  alkaloid,  flavonoid, saponin,  tanin,  fenol,  dan  steroid.  Lestari et al .  (2018)  menyatakan  bahwa  kadar  sari larut  etanol  95%  simplisia  daun  kratom yang  tumbuh  di  Kabupaten  Kapuas  Hulu dan  Kabupaten  Melawi  masing-masing sebesar  1,237%  dan  1,704%;  sedangkan kadar larut etanol 95% ekstrak daun kratom adalah  sebesar  2,677%  dan  2,920%. Sementara  itu,  kadar  sari  larut  air  simplisia daun  kratom  adalah  0,821%  dan  1,096% sedangkan  kadar  sari  larut  air  ekstrak  daun kratom adalah 1,103% dan 1,410%.
Metode open field test umum digunakan sebagai prosedur untuk memeriksa  efek  pengobatan  pada  perilaku hewan  (Choleris et  al .  2001).  Pengamatan proporsi  waktu  dilakukan  guna  menilai tingkat kegelisahan hewan uji (Eldahshan et al .  2021).  Hazim et  al .  (2014)  menyatakan bahwa  hewan  yang  mengalami  administrasi daun  kratom  dengan  dosis  40  mg/kg memiliki nilai T center lebih tinggi dibandingkan dengan hewan yang mengalami administrasi daun kratom dengan dosis 10 dan 20 mg/kg. Schulz et al . (2022) menyatakan bahwa hewan uji dengan proporsi  waktu  di  area  center  tinggi menandakan hewan tersebut tidak mengalami ketakutan. Menurut La-Vu et al . (2020),  kecenderungan  hewan  uji  menjauhi area  pusat  atau  center  mengindikasikan
tingginya  kecemasan  atau  ansietas  pada hewan tersebut. Berdasarkan hasil penelitian ini,  administrasi  ekstrak  daun  kratom dengan  dosis  100  mg/kg  merupakan  dosis efektif    dalam  menekan  tingkat  kecemasan pada  hewan  uji.  Semakin  pendek  waktu yang dihabiskan di area periphery menunjukkan  penurunan  tingkat  ansietas pada hewan uji (Figueiredo Cerqueira et  al . 2023),  sehingga  dapat  disimpulkan  bahwa administrasi  ekstrak  daun  kratom  dengan dosis  100  mg/kg  dinilai  efektif  untuk menurunkan  tingkat  ansietas.  Pengamatan jarak  tempuh  digunakan  sebagai  salah  satu metode  penilaian  tingkat  ansietas  dan lokomotor  pada  hewan  uji.  Semakin  tinggi jarak  tempuh  yang  dilakukan  oleh  hewan uji,  maka  semakin  rendah  tingkat  ansietas yang dimiliki oleh hewan tersebut (Horka et al .  2024).  Peningkatan  jarak  tempuh  antara pengamatan  pertama  dan  kedua  yang dialami  oleh  hewan  uji  pada  kelompok  4 mengindikasikan  administrasi  ekstrak  daun kratom  dengan  dosis  100  mg/kg efektif untuk menurunkan tingkat ansietas.
Metode  FST  didasarkan  pada  asumsi bahwa  ketika  hewan  uji  diletakkan  pada suatu  wadah  yang  terisi  air,  hewan  tersebut akan  berusaha  keluar  atau  tidak  bergerak sama sekali  yang merefleksikan sikap putus asa  (Yankelevitch-Yahav et  al .  2015). Menurut Rodrigues et al . (2023), penggunaan  antidepresan  dapat  mengurangi
immobility time dan meningkatkan pergerakan atau swimming time .
Berdasarkan  hasil  pengamatan,  kelompok  2 dan 4 mengalami penurunan immobility time
hasil statistiknya, berbeda bermakna dengan control positif. Hal
tersebut mengindikasikan administrasi fluoksetin dan ekstrak  daun  kratom  dengan  dosis  100 mg/kg memiliki efek antidepresan dibandingkan dengan kontrol positif.
Uji ELISA memiliki tingkat spesivisitas  dan  sensitivitas  sebesar  100% (Jasim et  al .  2023)  sehingga  dinyatakan valid  dan  reliabel  untuk  digunakan.  Uji ELISA dilakukan dengan bantuan spektrofotometer  UV-Vis  guna  menghitung konsentrasi kortisol pada panjang
gelombang  absorbansi  sebesar  520  mm (Kim et  al .  2021).  ELISA  didapat  dengan menghubungkan nilai absorbansi dan konsentrasi  kortisol  kit  yang  digambarkan dengan  sebuah  kurva  linear.  Berdasarkan kurva  tersebut,  didapat  sebuah  persamaan linear  dengan  nilai-x  mewakili  konsentrasi kortisol (mg/L), sedangkan nilai-y mewakili nilai  absorbansi.  Selanjutnya,  didapat  nilai R 2 atau  koefisien  determinasi.  Nilai  R 2 mendekati 1 mengindikasikan model tersebut sesuai (Giao J 2023). Buckhalter et al .  (2021)  menyatakan  bahwa  semakin tinggi  dosis  kratom,  maka  semakin  tinggi pula  potensi  adanya  efek  biologis,  seperti ketamine, yang dianggap sebagai
antidepresan  efektif  pada  dosis  rendah, namun  memiliki  efek  psikosis  pada  dosis yang tinggi (Anticevic et al . 2015).

## KESIMPULAN
Administrasi kratom dengan dosis 100 mg/kg  memiliki  pengaruh  antidepresan ketika  dibandingkan  dengan  kelompok pembawa (NaCMC) pada pengamatan T center (rata-rata  6,92  ±  4,27),  T perifer (80,02  ± 12,44), jarak tempuh (7.033,08 ± 1.541,85), dan immobility  time (98,89  ±  13,65) ata .Sementara itu, tidak ada satu parameter pun pada administrasi kratom 50 mg/kg, dan 200  mg/kg  yang  memiliki  perbedaan signifikan dengan kelompok pembawa.

## DAFTAR PUSTAKA
Anticevic  A.,  Corlett  P.  R.,  Cole  M.  W.,
Savic A., Gancsos  M., Tang  Y., et  al. (2015).
N-methyl-D-aspartate Receptor Antagonist Effects on Prefrontal Cortical Connectivity Better  Model  Early  Than  Chronic Schizophrenia. Biological  Psychiatry . Vol 77(6): 569–580
Apriansyah MA, Putranto R, Salim EM, and Shatri  H.  Korelasi  Tingkat  Depresi dengan Kadar Tumor Necrosis Factor- Alpha  (TNF-α)  pada  Penderita  Asma Bronkial  Tidak  Terkontrol.  Jurnal Penyakit Dalam Indonesia. 2017; 3(2). https://doi.org/10.7454/jpdi.v3i2.12

## Pharmacoscript Volume 7 No. 2 Agustus 2024
Buckhalter  S,  Soubeyrand  E,  Ferrone  SAE,
Rasmussen  DJ,  Manduca  JD,  Al- Abdul-Wahid  MS,  Frie  JA,  Khokhar JY,  Akhtar  TA,  Perreault  ML.  2021. The  antidepressant-like  and  analgesic effects  of  kratom  alkaloids  are accompanied  by  changes  in  low frequency oscillations but not ΔFOSB accumulation. Frontiers in Pharmacology . Vol 12: 696461.
Choleris  E,  Thomas  AW,  Kavaliers  M,  dan Prato FS. 2001. A detailed ethological analysis  of  the  mouse  open  field  test: effects  of  diazepam,  chlordiazepoxide and  an  extremely  low  frequency pulsed  magnetic  field. Neuroscience
&  Biobehavioral  Reviews .  Vol  25(3):
235-260.
Dianovinina,  K.  2018.  Depresi  pada
Remaja: Gejala dan Permasalahannya. Jurnal Psikogenesis. Vol 6 No 1 Eldahsan W, Sayed MA, Awad ME, Ahmed HA,  Gillis  E,  Althomali  W,  Pillai  B, Alshammari A, Jackson L, Dong G, et al . 2021. Stimulation of angiotensin II receptor 2 preserves cognitive function  and  is  associated  with  an enhanced  cerebral  vascular  density after  stroke. Vascular  Pharmacology . Vol 141: 106904.
Figueiredo  Cerqueira  MM,  Lopses  Casrto MM,  Vieira  AA,  Kurosawa  JAY,  do Amaral  Junior  FL,  de  Siqueira
Mendes FCC, Sostehenes MCK. 2023. C  omparative  analysis  between  Open Field and Elevated Plus  Maze tests  as a  method  for  evaluating  anxiety-like behavior  in  mice. Heliyon .  Vol  9(4): e14522.
Ghazalli  MN,  Md  Sah  MS,  Mat  M,  Awang K,  Jaafar  MA,  Mirad  R,  Zaini  AZ, Mohd  Nordin  AR,  Mohd  Rusli  N, Mohamad SS, Mohd Dalee AS. 2021. Leaf  Anatomy  and  Micromorphology Characteristics  of  Ketum  [ Mitragyna speciosa (Korth.) Havil.] (Rubiaceae). Vol 32(1): 107-117.
Giao  J.  2023.  R-Squared  (R 2 )  –  How  much variation  is  explained?  Research Methods  in  Medicine  &  Health Sciences.
Hassan,  Z.,  Muzaimi,  M.,  Navaratnam,  V.,
Yusoff,  N.  H.,  Suhaimi,  F.  W., Vadivelu,  R.,  …..  &  Jayabalan,  N. (2013).  From  Kratom To Mitragynine And  Its  Derivatives:  Physiological And  Behavioural  Effects  Related  To Use, Abuse, And Addiction. Neuroscience & Biobehavioral
Reviews, 37(2), 138-151.
Hazim  AI,  Ramanathan  S,  Parthasarathy  S,
Muzaimi  M,  Mansor  SM.  2014. Anxiolytic-like  effects  of  mitragynine in  the Open-field and  elevated  plus- maze  tests  in  rats. The  Journal  of
Psysiological  Sciences .  Vol  64:  161- 169.
Horka  P,  Langova  V,  Hubeny  J,  Vales  K,
Chrtkova  I,  Horacek  J.  2024.  Open field  test  for  the  assessment  of anxiety-like behavior in Gnathonemus petersii fish. Individual  and  Social Behaviors . Vol 17.
Idayu,  F.  N.,  Taufik  Hidayat,  M.,  Moklas,
M. A. M., Sharida, F., Nurul Raudzah, A. R., Shamima, A. R., & Apryani, E. (2011). Antidepressant-Like Effect Of Mitragynine  Isolated  From Mitragyna speciosa Korth  In  Mice  Model  Of Depression.  Phytomedicine,  18(5), 402–407. 1
Jasim  RK,  Singh  D,  Gam  LH.  2023.
Development and validation of ELISA for  screening  of  Kratom  ( Mitragyna speciosa )  habitual  users  using  urinary AZ122  biomarker. Biotechnology  and
Applied  Biochemistry .  Vol  70:  707- 715.
Juanda  E,  Andayani  S,  Maftuch.  2019.
Phytochemical screening and antibacterial  activity  of  kratom  leaf ( Mitragyna  speciosa Korth.)  against Aeromonas  hydrophilla . The  Journal of  Experimental  Life  Science .  Vol 9(3).
Kim  Y,  Yang  J,  Hur  H,  Oh  S,  Lee  HH.
2021.  Highly  sensitive  colorimetric assay of ortisol using cortisol antibody
and aptamer sandwich assay.
Biosensors (Basel) . Vol 11(5): 163.
La-Vu M, Tobias BC, Schuette PJ, Adhikari A.  2020.  To  approach  or  avoid:  An introductory  overview  of  the  study  of anxiety using rodent assays. Frontiers in Behavioral Neuroscience .
Lestari RF, Suhaimi S, Wildaniah W. 2018.
Penetapan parameter standar simplisia dan  ekstrak  etanol  daun  kratom ( Mitragyna  speciosa Korth.)  yang tumbuh  di  Kabupaten  Kapuas  Hulu dan  Kabupaten  Melawi. Jurnal  Insan Farmasi Indonesia . Vol 1(1).
Mayasari,  N.  W.  S.,  &  Hermawan,  D.
(2021).  Pemberian  terapi  soft  music dengan penurunan gejala depresi pada lansia.  JOURNAL  OF  Mental  Health 54 Concerns, 1(1), 1-9.
Maulia  SW,  Jubaidah  S,  Siswanto  E.  2022.
Uji toksisitas akut ekstrak etanol daun kratom  ( Mitragyna  speciosa Korth.) dengan  metode  maserasi  dan  refluks terhadap larva Artemia salina Leach.
Meireles V, Rosado T, Barroso M, Soares S,
Gonçalves  J,  Luís  A,  Caramelo  D, Simão  AY,  Fernández  N,  Paula Duarte A, Gallardo E. 2019. Mitragyna speciosa : Clinical, toxicological  aspects  and  analysis  in biological and non-biological samples. Medicines (Basel) . Vol 6(1): 35.
Mossadeq, W. M., Sulaiman, M. R., Tengku Mohamad,  T.  A.,  Chiong,  H.  S., Zakaria, Z. A., Jabit, M. L.,
Baharuldin,  M.  T.  H.,  &  Israf,  D.  A.
(2009). Anti Inflammatory And Antinociceptive  Effects  Of Mitragyna speciosa Korth  Methanolic  Extract.
Medical  Principles  And  Practice,
18(5),
378–384.
Https://Doi.Org/10.1159/000226292 Nugroho,  A.  Y.  Tinjauan  Keragaman Genetik  Dan  Implikasi  Konservasi Pulai  (Alstonia  Scholaris  (L).  Rb).
Mitra Hutan
Parthasarathy, S., Azizi, J. Bin, Ramanathan, S., Ismail,
S., Sasidharan,  S.,  Mohd,  M.  I.,  & Mansor,  S.  M.  (2009).  Evaluation  Of Antioxidant And Antibacterial Activities  Of  Aqueous,  Methanolic And Alkaloid Extracts From Mitragyna speciosa (Rubiaceae
Family)  Leaves.  Molecules,  14(10), 3964–3974. https://doi.Org/10.3390/molecules141
03964
Reanmongkol,  W.,  Keawpradub,  N.,  & Sawangjaroen,  K.  (2007).  Effects  Of
The Extracts From Mitragyna
speciosa Korth  Leaves  On  Analgesic And Behavioral Activities In Experimental Animals.
Songklanakarin  Journal  Of  Science And Technology, 29(Suppl. 1), 39–48. Riset  Kesehatan  Dasar  (Riskesdar).  (2018).
Badan  Penelitian  dan  Pengembangan Kesehatan  Kementerian  RI  tahun
2018. 66
Http://Www.Depkes.Go.Id/Resources/ Download/Infoterkini/Materi_rakorpo p_20
18/Hasil%20Riskesdas%202018.Pdf Rodrigues  ACC,  de  Lima  Moreira  CV,
Prado  CC,  Silva  LSB,  Costa  RF, Arikawe  AP,  Pedrino  GR,  Costa  EA, Silva  ON,  Napolitano  HB,  Oliveira- Silva  I,  Fajemiroye  JO.  2023.  A comparative  analysis  of  depressive- like  behavior:  Exploring  sex-related differences  and  insights. PLoS  One . Vol 18(11): e0294904.
Schulz  M,  Zieglowski  L,  Kopaczka  M,
Tolba RH. 2022. The open field test as a  tool  for  behaviour  analysis  in  pigs: Recommendations for set-up standardization – A systematic review. European  Surgical  Research .  Vol 64(1): 80-99.
Torres-Ortiz A, Al Zein S, Alqudsi M. 2022.
A  case  of  hyperkalemia  induced  by kratom ( Mitragyna speciosa ). Cureus .
Vol 14(4): e24036.
Yankelevitch-Yahav R, Franko M, Hully A,
Doron  R.  2015.  The  forced  swim  test as a model of depressive-like
behavior. Journal of Visualized
Experiments . (97): 52587.