## ABSTRAK
Piper  retrofractum Vahl.  (cabe  jawa)  dan Piper  nigrum L.  (lada  hitam)  merupakan bagian dari famili Piperaceae. Kandungan alklaoid utama dalam buah cabe jawa dan lada hitam  yaitu  piperin,  yang  memiliki  khasiat  sebagai  antimikroba,  antidiabetik, antiinflamasi, antikanker dan sebagainya. Penelitian bertujuan untuk menetapkan kadar senyawa  piperin  pada  ekstrak  buah  cabe  jawa  dan  lada  hitam  menggunakan  metode spektrofotometri UV-Visibel. Tiap sampel buah dimaserasi dengan pelarut etanol 95%. Identifikasi  kualitatif  senyawa  piperin  dilakukan  menggunakan  kromatografi  lapis  tipis (KLT). Penetapan kadar senyawa piperin dilakukan menggunakan spektrofotometer UV- Visibel dengan panjang gelombang maksimal pada 253,8 nm. Hasil menunjukkan bahwa kadar piperin yang terdapat pada ekstrak etanol 95% buah cabe jawa dari dataran rendah (Lampung), dataran sedang (Madura) dan dataran tinggi (Bogor) berturut-turut sebesar 1,54  0,02%;  1,44  0,02%;  dan  1,41  0,02%  (b/v).  Sedangkan,  buah  lada  hitam  dari dataran  rendah  (Luwu  Timur),  dataran  sedang  (Lampung  Tengah)  dan  dataran  tinggi (Bogor) berturut-turut sebesar 5,63  0,14%; 5,38  0,05%; dan 4,87  0,09% (b/v).

## ABSTRACT
Piper retrofractum Vahl. (java chili or cabe jawa) and Piper nigrum L. (black pepper or lada hitam) are parts of the Piperaceae. One of the chemical constituents found in the fruit of the two plants is piperine, which has properties as antimicrobial, antidiabetic, anti- inflammatory, anticancer etc. This study aims to determine the piperine levels contained in 95% ethanol extract of java chili and black pepper fruits  from regions with different altitude using UV-Visible spectrophotometer. Each sample were extracted by maceration method using 95% ethanol. Qualitative identification of piperine was  carried out  using thin layer chromatography (TLC). Determination of piperine levels was carried out with UV-Visible spectrophotometer at maximum wavelength of 253.8 nm. The results showed that the levels of piperine contained in the 95% ethanol extract of java chili fruit from low altitude (Lampung), medium altitude (Madura) and high altitude (Bogor) are 1.54  0.02%;
1.44  0.02%; and 1.41  0.02% (w/v), respectively. Whereas the levels of piperine contained in the 95% ethanol extract of black pepper fruit from low altitude (East Luwu), medium altitude (Central Lampung) and high altitude (Bogor) are 5.63  0.14%; 5.38  0.05%; and 4.87  0.09% (w/v), respectively.
Penulis
Ni Putu Ermi Hikmawanti 1 *, Endang Hanani 1 , Shintia Maharani 1 , Ajeng Istiningtyas Wahyudi Putri 1
Afiliasi 1 Departemen  Farmakognosi  dan  Fitokimia,  Universitas  Muhammadiyah  Prof.  DR.  HAMKA,  Jakarta,  DKI Jakarta, 13460, Indonesia, *

## Kadar Piperin Ekstrak Buah Cabe Jawa dan Lada Hitam dari Daerah dengan Ketinggian Berbeda

## Piperine Levels in Java Chili and Black Fruits Extracts from Regions with Different Altitude
Kata Kunci  cabe jawa
 lada hitam
 piperin
 spektrofotometer UV-Visibel
Keywords  java chilli  black pepper
 piperine
 UV-Visible
Spectrophotometer
Diterima 23 Maret 2020 Direvisi 25 Januari 2021
Disetujui 17 Maret 2021
*Penulis Koresponding Ni Putu Ermi Hikmawanti email: ermy0907@uhamka.ac.id

## PENDAHULUAN
Indonesia kaya akan tanaman yang digunakan untuk pengobatan tradisional, seperti halnya cabe jawa ( Piper retrofractum Vahl.)  dan  lada  hitam  ( Piper  nigrum L.). Kedua tanaman ini termasuk dalam keluarga Piperaceae dan  merupakan  tanaman  asli  Indonesia.  Indonesia termasuk negara penghasil dan pengekspor lada hitam yang  tinggi  di  dunia  (Parthasarathy et  al. 2008). Tanaman  cabe  jawa  tumbuh  di  Jawa,  Bali  dan  Maluku pada  ketinggian  0  sampai  600  mdpl  (Departemen Kesehatan RI, 2010a).
Buah cabe jawa dan buah lada hitam memiliki banyak kandungan senyawa esensial didalamnya, salah satunya adalah piperin. Piperin (C 17 H 19 NO 3 ) atau (E,E)-1-[5-(1,3- benzodioksol-5-il)-1-okso-2,4-pentadienil] piperidin merupakan  suatu  alkaloid  dalam  bentuk  prisma monosiklik  dari  alkohol  yang  memiliki  titik  lebur  128- 130°C.  Piperin  mudah  larut  dalam  etanol,  eter  namun hampir tidak larut dalam air. Senyawa piperin berbentuk kristal  berwarna  putih  kekuningan  (Vasavirama  & Upender, 2014).
Ekstrak  alkohol  dari  buah  tanaman  cabe  jawa  dan piperin komponennya menunjukkan aktivitas imunomodulator dan antitumor yang signifikan (Joy et al. 2010).  Ekstrak  etanol  95%  buah  lada  hitam mempunyai  aktivitas  farmakologi  sebagai  aprodisiaka (Sutyarso et al . 2015). Senyawa piperin pada buah cabe jawa dapat diekstraksi menggunakan metode maserasi (Istiqomah, 2013).  Kadar  piperin  pada  buah  cabe  jawa tidak  kurang  dari  1,10%  (Kementerian  Kesehatan  RI, 2008).  Kandungan  piperin  pada  buah  lada  hitam  yang dianalisis menggunakan HPLC mempunyai kadar sebesar 3‒6% (Santosh et  al. 2005).  Ekstrak  alkaloid  yang diperoleh dari ekstrak etanol-air (60%) buah lada hitam mengandung  piperin  sebesar  52,81±4,66  (%b/v)  yang dianalisis  dengan  KLT-densitometer  (Hikmawanti et  al. 2016).
Tanaman  budidaya  memberikan  keuntungan  yang lebih  dibanding  tanaman  yang  diperoleh  secara  liar. Faktor  yang  berpengaruh  terhadap  pertumbuhan  dan perkembangan  tanaman  memberikan  hasil  nyata terhadap  sifat  dan  kuantitas  metabolit  sekunder  yang dihasilkan  (Shah  dan  Seth,  2010).  Variasi  kandungan senyawa  dalam  produk  hasil  panen  tumbuhan  obat salah satunya disebabkan oleh faktor eksternal seperti lingkungan tempat tumbuh (Departemen Kesehatan RI, 2000).  Ketinggian  tempat  tumbuh  merupakan  faktor yang  sangat  penting  dalam  budidaya  tanaman  obat (Shah dan Seth, 2010). Produsen tanaman cabe jawa di Indonesia  antara  lain  meliputi  daerah  Madura  dan Lampung  (Haryudin  and  Rostiana,  2009).  Sedangkan
lada  hitam  banyak  dihasilkan  dari  daerah  Lampung Tengah  dan  Luwu  Timur  (Direktorat  Jenderal Perkebunan, 2020). Kedua tanaman budidaya tersebut juga dapat ditemukan di Bogor. Daerah Madura berada pada  ketinggian  8-47  mdpl  (dataran  rendah)  (BPS Provinsi  Jawa  Timur,  2015),  Lampung  Tengah  berada ketinggian 25-75 mdpl (dataran rendah) (BPS Kabupaten Lampung Tengah, 2015), Bogor berada pada ketinggian 190-330  mdpl  (dataran  rendah)  (Pemerintah  Kota Bogor,  2016),  dan  Luwu  timur  mempunyai  ketinggian >1000  mdpl  (dataran  tinggi)  (BPS  Kabupaten  Luwu Timur, 2019).
Upaya untuk menjamin mutu ekstrak perlu dilakukan salah satunya melalui penentuan baik kualitatif maupun kuantitatif  dari  senyawa  penanda  yang  terdapat didalamnya  (Kumari  and  Kotecha,  2016).  Kandungan piperin dari genus Piper berhasil dianalisis menggunakan spektrofotometer  UV-Vis.  Metode  ini  baik  digunakan untuk tujuan tersebut karena cepat, sederhana, akurat, sensitif  dan  reproduksible  (Chauhan et  al. 1998) . Penelitian ini dilakukan untuk menetapkan kadar piperin pada buah cabe jawa dan buah lada hitam dari daerah dengan  ketinggian  yang  berbeda  yang  diekstraksi dengan pelarut etanol 95% menggunakan spektrofotometer UV-Vis.

## METODE Persiapan Bahan
Buah tua yang belum masak dari tanaman budidaya cabe  jawa  dan  lada  hitam  dipanen  sekitar  bulan  Juli- Agustus tahun 2018. Simplisia buah cabe jawa diperoleh dari  kebun  Unit  Konservasi  Budidaya  Biofarmaka, Institut  Pertanian  Bogor  (IPB),  Bogor;  Kabupaten Sumenep,  Madura;  dan  Kecamatan  Sendang  Agung, Kabupaten Lampung Tengah. Simplisia buah lada hitam diperoleh dari Kabupaten Lampung Tengah, kebun Unit Konservasi  Budidaya  Biofarkama,  Institut  Pertanian Bogor  (IPB),  Bogor;  dan  Kabupaten  Luwu  Timur, Sulawesi  Selatan.  Determinasi  tanaman  dilakukan  di Pusat  Konservasi  Tumbuhan  Kebun  Raya  Bogor, Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI), Indonesia.

## Proses Ekstraksi
Masing-masing sebanyak 150 g simplisia dimaserasi menggunakan  1,5 L  etanol  95%.  Saat  proses  maserasi, dilakukan  pengadukan  sesekali.  Proses  perendaman dilakukan  selama  18  jam  dan  ampas  diremaserasi kembali  dengan  cara  yang  sama  sebanyak  2  kali. Maserat  dikumpulkan  dan  dipekatkan  menggunakan vacuum  rotary  evaporator pada  suhu  50  °C.  Proses pemekatan  dilanjutkan  menggunakan waterbath pada
suhu  maksimal  50  °C  hingga  diperoleh  ekstrak  kental (Kementerian Kesehatan RI, 2008).

## Karakteristik Ekstrak
Pemeriksaan karakteristik ekstrak meliputi pemeriksaan  organoleptis,  perhitungan  rendemen, pengujian kadar air dengan metode Karl Fischer (Evans, 2009) yang dilakukan di Laboratorium Teknologi Farmasi dan Medika, BPPT,  Serpong serta pengujian kadar abu dengan metode gravimetri (Kementerian Kesehatan RI, 2008).

## Skrining Fitokimia
Skrining  fitokimia  dilakukan  untuk  mengidentifikasi keberadaan senyawa alkaloid, flavonoid, fenolik, tanin, saponin,  triterpenoid,  steroid  dan  minyak  atsiri. Prosedur  identifikasi  dilakukan  sesuai  metode  yang tercantum  pada  Hanani  (2015).  Keberadaan  flavonoid diidentifikasi  menggunakan  pereaksi  Shinoda,  fenolik menggunakan  pereaksi  FeCl 3 ,  tanin  menggunakan pereaksi  gelatin  10%,  saponin  menggunakan  uji  buih, triterpenoid menggunakan pereaksi Liebermann Burchard, steroid menggunakan pereaksi Salkowski, dan minyak  atsiri  menggunakan  pereaksi  vanillin-asam sulfat.

## Identifikasi Piperin Pada Ekstrak dengan KLT
Ekstrak  etanol  95%  buah  cabe  jawa  dan  buah  lada hitam  dibuat  dengan  konsentrasi  200  µg/ml  dalam etanol  95%  (p.a).  Standar  piperin  (Merck,  Damstadt, Jerman)  dibuat  dengan  konsentrasi  100  µg/ml  dalam etanol 95% (p.a). Sampel dan standar dianalisis dengan menggunakan  lempeng  KLT  silika  gel  60  F 254 (Merck,
Damstadt,  Jerman)  sebagai  fase  stasioner  dan diklorometan-etil  asetat  dengan  perbandingan  7:3 sebagai  fase  gerak.  Sampel  dan  standar  piperin ditotolkan  sebanyak  3  µl  pada  lempeng  KLT  kemudian diamati  di  bawah  lampu  UV  Cabinet  4  (CAMAG, Switzerland,  Swiss)  pada  panjang  gelombang  254  nm dan dihitung nilai Rf-nya (Hanani, 2015).

## Penetapan  Kadar  Piperin  dengan  Spektrofotometer UV-Vis
Larutan baku piperin (100 µg/ml) dalam etanol (p.a) diukur absorbansi dan panjang gelombang maksimumnya  pada  spektrofotometer  UV-Vis  Seri  UV- 1601  (Shimadzu,  Kyoto,  Jepang)  sekitar  200-400  nm. Panjang  gelombang  maksimum  yang  diperoleh  adalah 253,8 nm.

## Pembuatan Kurva Kalibrasi Piperin
Larutan  baku  piperin  dibuat  dengan  lima  variasi konsentrasi  yaitu  80;  140;  200;  260  dan  320  µg/ml. Absorbansi masing-masing larutan tersebut diukur pada panjang  gelombang  253,8  nm.  Hasil  absorbansi  yang diperoleh  (y)  dan  konsentrasi  larutan  piperin(x)  diplot dalam  kurva  kalibrasi  hingga  diperoleh  persamaan regresi linier y=bx±a.

## Penetapan Kadar Piperin dalam Ekstrak
Bercak  piperin  yang  diperoleh  pada  lempeng  KLT dikerok dan kemudian ditambahkan dengan 5 mL etanol 95% (p.a) lalu disaring. Filtrat diukur absorbansinya pada panjang gelombang 253,8 nm.
Tabel 1. Hasil Perolehan Ekstrak Etanol 95% dari Buah Cabe Jawa dan Buah Lada Hitam
Ekstrak Buah Cabe Jawa Ekstrak Buah Lada Hitam Lampung Tengah Madura Bogor Lampung Tengah Bogor Luwu Timur Ekstrak (g) ±SD 38,86±0,15 33,19±0,25 29,77±0,21 12,68±0,18 15,27±0,38 11,52±0,09 Rendemen (%) b/v ±SD 25,89±0,09 22,08±0,12 19,84±0,14 8,44±0,12 10,31±0,08 7,66±0,06
Tabel 2 .  Hasil Pengujian Kadar Air Ekstrak Etanol 95% dari Buah Cabe Jawa dan Buah Lada Hitam
Ekstrak Buah Cabe Jawa Ekstrak Buah Lada Hitam Lampung Tengah Madura Bogor Lampung Tengah Bogor Luwu Timur Kadar Air (%) 2,11 4,42 1,70 6,87 3,96 4,86

## Analisa Data
Data absorbansi yang diperoleh dari tiap larutan uji ekstrak kemudian dimasukan ke dalam persamaan garis linear y=bx±a. Kadar senyawa piperin dinyatakan dalam bentuk persen (%, b/b). Pengujian dilakukan triplo untuk tiap sampel dari masing-masing daerah.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil Ekstraksi
Ekstraksi  buah  cabe  jawa  dan  buah  lada  hitam diekstraksi  dengan  menggunakan  etanol  95%  karena sifatnya yang mampu menarik senyawa bioaktif seperti tannin, polifenol, flavonol, terpenoid dan alkaloid (Azmir et al. 2013), termasuk piperin (Hikmawanti et al. 2016).
Tabel 3 .  Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol 95% Buah Cabe Jawa dan Buah Lada Hitam
Senyawa yang diidentifikasi Ekstrak Buah Cabe Jawa Ekstrak Buah Lada Hitam Lampung Tengah Madura Bogor Lampung Tengah Bogor Luwu Timur Alkaloid + + + + + + Flavonoid + + + + + + Tanin + + + + + + Polifenol + + + + + + Saponin + + + + + + Minyak Atsiri + + + + + + Terpenoid + + + + + + Steroid - - - - - -
Keterangan: Pengujian dilakukan sebanyak 3 kali pengulangan (triplo) (+): Teridentifikasi senyawa ( − ): Tidak teridentifikasi senyawa
Keterangan: P : Standar Piperin M : Sampel Madura B : Sampel Bogor
LT : Sampel Lampung Tengah LW : Sampel Luwu Timur
1,2,3
: Replikasi ekstrak ke-1, ke-2, ke-3
Gambar 1. Hasil Identifikasi Piperin pada Ekstrak Etanol 95% Buah Cabe Jawa (A) dan Lada Hitam (B) yang Diamati di Bawah Sinar UV 254 nm
Hasil  ekstraksi  masing-masing  daerah  ditampilkan seperti pada Tabel 1 .
Persentase  rendemen  menunjukkan  efektivitas proses ekstraksi. Efektivitas proses ekstraksi dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor,  diantaranya  adalah metode  ekstraksi,konsentrasi  pelarut  yang  digunakan dalam proses  ekstraksi, ukuran partikel simplisia, suhu dan  lamanya  proses  ektraksi  (Tiwari et  al. 2011). Menurut  Kementerian  Kesehatan  RI  (2008),  rendemen ekstrak  buah  cabe  jawa  ≥12%.  Hasil  perolehan rendemen  ekstrak  buah  cabe  jawa  pada  penelitian  ini menunjukan hasil yang baik. Sedangkan nilai rendemen untuk ekstrak buah lada hitam tidak kurang dari 11,3% (Departemen  Kesehatan  RI,  2010b).  Namun,  hasil perolehan rendemen dari semua daerah pada penelitian ini menunjukan hasil <11,3%. Menurut  hasil penelitian Hikmawanti et al. (2016), perolehan rendemen ekstrak etanol 96% buah lada hitam lebih kecil dibanding ekstrak yang  diperoleh  dari  pelarut  etanol  70%  dan  60% menggunakan metode ekstraksi sokletasi. Hal ini diduga karena senyawa-senyawa yang terkandung dalam buah lada hitam lebih banyak suka larut dalam pelarut yang sifatnya lebih polar.
Persentase  kadar  air  ekstrak  merupakan  gambaran kandungan  air  yang  terdapat  di  dalam  suatu  ekstrak (Departemen Kesehatan RI, 2000). Hasil dari pengujian
kadar air ekstrak etanol 95%  buah cabe jawa dan lada hitam masing-masing daerah dapat dilihat pada Tabel 2. Hasil  tersebut  menunjukkan  semua  ekstrak  memiliki mutu  yang  baik  dari  penilaian  parameter  kadar  air (<10%).

## Hasil Skrining Fitokimia
Skrining  fitokimia  adalah  suatu  metode  penapisan sederhana  untuk  mengidentifikasi  secara  kualitatif keberadaan senyawa-senyawa metabolit  dari tanaman (Hanani, 2015). Adapun hasil identifikasi tersebut pada ekstrak  buah  cabe  jawa  dan  lada  hitam  dari  masing- masing daerah adalah sebagaimana tertera pada Tabel 3 .
Berdasarkan  hasil  pada Tabel  3 ,  dapat  disimpulkan bahwa  ekstrak  etanol  95%  buah  cabe  jawa  dan  buah lada  hitam  dari  setiap  daerah  mengandung  senyawa alkaloid,  flavonoid,  tanin,  polifenol,  saponin,  minyak atsiri, dan terpenoid.

## Hasil Identifikasi Piperin Pada Ekstrak dengan KLT
Prosedur  uji  dengan  KLT  dilakukan  untuk memisahkan  piperin  yang  terdapat  pada  ekstrak  buah cabe  jawa  maupun  buah  lada  hitam  sehingga  lebih mudah  dianalisis  lebih  lanjut.  Pemilihan  fase  gerak dilakukan dengan cara trial and error . Fase gerak untuk
Gambar 2. Kurva Kalibrasi Baku Piperin
Tabel 4 .  Kadar Senyawa Piperin pada Ekstrak Etanol 95% dari Buah Cabe Jawa dan Lada Hitam
Ekstrak Buah Cabe Jawa Ekstrak Buah Lada Hitam Lampung Tengah Madura Bogor Lampung Tengah Bogor Luwu Timur Kadar (%)b/v±SD 1,54±0,02 1,44±0,02 1,41±0,02 5,38±0,05 4,87±0,09 5,63±0,14
Keterangan: Pengujian dilakukan sebanyak 3 kali pengulangan (triplo)
y = 0,0016x + 0,1083 R² = 0,9987 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0 100 200 300 400 A b sor b an si Konsentrasi (µg/ml)
KLT senyawa piperin
diantaranya adalah diklorometan:etil  asetat  (3:1)  (Hanani,  2015).  Deteksi piperin  secara  kualitatif  ini  dilakukan  dengan  melihat bercak  yang  timbul  dari  masing-masing  sampel  dan disesuaikan Rf nya dengan Rf baku piperin seperti yang tertera pada Gambar 1 . Nilai Rf senyawa piperin pada ekstrak  buah  cabe  jawa  dari  masing-masing  daerah adalah 0,592. Senyawa piperin pada ekstrak lada hitam mempunyai nilai Rf yaitu 0,625.

## Hasil  Penetapan  Kadar  Senyawa  Piperin  dengan Spektrofotometer UV-Vis
Kurva  kalibrasi  dibuat  dengan  memplot  lima konsentrasi yang berbeda (pada rentang 80 − 320 µg/mL) terhadap absorbansinya hingga menghasilkan persamaan regresi linier seperti pada Gambar 2 . Adapun perolehan  kadar  piperin  pada  masing-masing  ekstrak buah  cabe  jawa  dan  lada  hitam  dari  masing-masing daerah tercantum pada Tabel 4 .
Berdasarkan hasil pada Tabel 4. , dapat disimpulkan bahwa  terdapat  perbedaan  kadar  piperin  pada  kedua ekstrak  dari  masing-masing  daerah  dengan  ketinggian yang  berbeda.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  tempat tumbuh tanaman dapat mempengaruhi kadar senyawa yang terkandung didalamnya. Tempat tumbuh tanaman sangat berkaitan dengan lingkungan baik faktor kondisi tanah maupun atmosfer, cuaca, curah hujan, suhu, dan cahaya matahari. Selain itu materi seperti air, senyawa organik  dan  anorganik  dari  lingkungan  juga  berperan pada  kondisi  tempat  tumbuh  yang  nantinya  ikut berpengaruh  terhadap  produksi  metabolit  dalam tanaman (Departemen Kesehatan RI, 2000).

## SIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian,  dapat  disimpulkan bahwa lokasi tumbuh tanaman budidaya cabe jawa dan lada hitam mempengaruhi besarnya kadar piperin yang terdapat pada ekstrak etanol 95% buah cabe jawa dan lada hitam yang dipanen pada bulan yang sama.

## DAFTAR PUSTAKA
Azmir,  J. et  al. (2013)  ‘Techniques  for  extraction  of bioactive  compounds  from  plant  materials:  A review’, Journal  of  Food  Engineering .  Elsevier  Ltd, 117(4), pp. 426 – 436.
BPS Kabupaten Lampung Tengah (2015) Tinggi Wilayah dari  Permukaan  Laut  Menurut  Kecamatan  Di Kabupaten  Lampung  Tengah,  2015 .  Available  at: https://lampungtengahkab.bps.go.id/statictable/20 16/10/18/450/tinggi-wilayah-dari-permukaan-laut-
menurut-kecamatan-di-kabupaten-lampung-tengah- 2015.html (Accessed: 17 January 2021).
BPS  Kabupaten  Luwu  Timur  (2019) Kecamatan  Towuti dalam angka . Towuti.
BPS Provinsi Jawa Timur (2015) Tinggi Wilayah di Atas Permukaan  Laut  (DPL)  Menurut  Kabupaten/Kota  di
Provinsi Jawa Timur . Available at:
https://jatim.bps.go.id/statictable/2016/07/26/347/ tinggi-wilayah-di-atas-permukaan-laut-dpl-menurut- kabupaten-kota-di-provinsi-jawa-timur-2015.html (Accessed: 17 January 2021).
Chauhan,  S.  K. et  al. (1998)  ‘A  spectrophotometric method  to  estimate  piperine  in  piper  species’, Ancient science of life , 18(1), pp. 84 – 87. Available at: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22556874%0 Ahttp://www.pubmedcentral.nih.gov/articlerender. fcgi?artid=PMC3331057.
Departemen  Kesehatan  RI  (2000) Parameter  Standar Umum  Ekstrak  Tumbuhan .  Jakarta:  Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
Departemen  Kesehatan  RI  (2010a) Acuan  Sediaan Herbal Volume 5 Edisi I . Jakarta: Direktorat Obat Asli Indonesia,  Badan  Pengawas  Obat  dan  Makanan Republik Indonesia.
Departemen Kesehatan RI (2010b) Suplemen
Farmakope  Herbal  Indonesia .  Jakarta:  Direktorat Jenderal  POM,  Departemen  Kesehatan  Republik Indonesia.
Direktorat Jenderal Perkebunan (2020) Luas Areal Lada Menurut Provinsi di Indonesia, 2016-2020 . Evans, W. C. (2009) Trease and Evans Pharmacognosy . 16th ed. Toronto: Elsevier.
Hanani,  E.  (2015) Analisis  Fitokimia .  Jakarta:  Buku Kedokteran EGC.
Haryudin,  W.  and  Rostiana,  O.  (2009)  ‘Karakteristik morfologi  tanaman  cabe  jawa  (Piper  retrofractum. Vahl) di beberapa sentra produksi’, Buletin Penelitian Tanaman Rempah dan Obat , 20(1), pp. 1 – 10. Hikmawanti,  N.  P.  E. et  al. (2016)  ‘ Kandungan  piperin dalam ekstrak buah lada hitam dan buah lada putih (Piper  nigrum  L.)  yang  diekstraksi  dengan  variasi konsentrasi  etanol  menggunakan  metode  KLT- densitometri’, Media Farmasi , 13(2), pp. 173 – 185. Istiqomah  (2013) Perbandingan  Metode  Ekstraksi Maserasi dan Sokletasi Terhadap Kadar Piperin Buah Cabe  Jawa  (Piper  retrofracti  fructus)  Dengan  KLT- Densitometri . UIN Syarif Hidayatullah, Jakarta. Joy, B; Sandhya, CP; and Remitha, K. (2010) ‘Comparison and  Bioevaluation  of  Piper  longum  Fruit  Extracts’, Journal  of  Chemical  and  Pharmaceutical  Research , 2(4), pp. 612 – 622.
K  Santosh,  M. et  al. (2005)  ‘RP -HPLC  Method  for Determination  of  Piperine  from  Piper  longum  Linn. and Piper nigrum Linn.’, E-Journal of Chemistry , 2(2), pp. 131 – 135. Available at: http://www.e- journals.net.
Kementerian  Kesehatan  RI  (2008) Farmakope  Herbal Indonesia  (FHI) .  Ed.  1.  Jakarta:  Kementerian Kesehatan RI.
Kumari,  R.  and  Kotecha,  M.  (2016)  ‘A  review  on  the Standardization  of  herbal  medicines’, International Journal of Pharma Sciences and Research , 7(02), pp.
97 – 106.
Parthasarathy, V. A., Chempakam, B. and Zachariah, T. J. (2008) Chemistry of spices , Chemistry of Spices . doi: 10.4327/jsnfs1949.32.267.
Pemerintah  Kota  Bogor  (2016) Letak  Geografis  Kota Bogor . Available at:
https://kotabogor.go.id/index.php/page/detail/9/le tak-geografis (Accessed: 12 July 2018).
Shah,  Biren  N;  Seth,  A.  K.  (2010) Textbook  of Pharmacognosy  and  Phytochemistry .  first  edit. Edited by S. K. Chauhan. Haryana: Elsevier.
Sutyarso, Kanedi, M. and Rosa, E. (2015) ‘Ef fects of black pepper (Piper nigrum Linn.) extract on sexual drive in male mice’, Research Journal of Medicinal Plant , 9(1), pp. 42 – 47. doi: 10.3923/rjmp.2015.42.47. Tiwari,  P. et  al. (2011)  ‘Phytochemical  screening  and Extraction: A Review’, Internationale Pharmaceutica Sciencia , 1(1), pp. 98 – 106.
Vasavirama,  K.  and  Upender,  M.  (2014)  ‘Piperine:  A valuable  alkaloid  from  piper  species’, International Journal  of  Pharmacy  and  Pharmaceutical  Sciences , 6(4), pp. 34 – 38.