## Jurnal Ilmiah Biologi Eksperimen dan Keanekaragaman
Hayati (J-BEKH)
Volume 9, Issue 1, June 2022
Article History Received: January 26 2022 Accepted: May 1 2022
Terathogenic Testing of Black Cumin (Nigella sativa L.) Extract on The Number of Fetuses, Length of Front and Back Extremities, and The Number of Malformation Fetus in Mice (Mus musculus L.)
(Uji Teratogenik Ekstrak Jintan Hitam ( Nigella sativa L.) Terhadap Jumlah Fetus, Ukuran Panjang Ekstremitas Depan dan Belakang, Serta Jumlah Fetus Malformasi Pada Mencit ( Mus musculus L.))
Zikra Fardhira, Nuning Nurcahyani*, Rochmah Agustrina, Tugiyono
Jurusan Biologi FMIPA Universitas Lampung *Corresponding author: nuning.nurcahyani@fmipa.unila.ac.id
Abstrak

## Abstract
Pemakaian  obat  tradisional  telah  berkembang  dengan  baik dan saat ini sudah banyak digunakan sebagai obat alternatif untuk  mengatasi  masalah  kesehatan.  Obat  tradisional  akan memberikan  khasiat  yang  baik  apabila  dikonsumsi  dengan cara  dan  dosis  yang  tepat  untuk  tujuan  pengobatan. Berdasarkan  penelitian  sebelumnya  pemberian  jintan  hitam ( Nigella  sativa L)  terhadap  mencit  betina  menyebabkan terjadinya  aktivitas  antifertilisasi, antinociceptif ,  kontrasepsi postcoitus , dan antioksitosin yang diduga dapat melancarkan  menstruasi.  Tingkat  keamanan  konsumsi jintan hitam pada masa kehamilan terhadap perkembangan fetus,  serta  sistem  reproduksi  mencit  betina  yang menimbulkan  malfomasi congenital pada  anaknya  belum banyak  diteliti.  Tujuan  dari  penelitian  ini  untuk  mengetahui pengaruh  ekstrak  jintan  hitam  ( Nigella  sativa L)  terhadap jumlah  fetus  mencit,ukuran  panjang  ekstremitas  depan  dan belakang  pada  fetus  mencit,  dan  jumlah  fetus  malformasi pada    mencit.  Penelitian  ini  menggunakan  20  ekor    mencit betina  yang  sudah  bunting  dan  dibagi  menjadi  4  kelompok yaitu  kelompok  K  (kontrol)  diberi  0,3  mL  aquabides, kelompok  perlakuan  P 1 dengan  dosis  2,1  mg/g  BB  dalam 0,3 mL aquabides, kelompok perlakuan P 2 dengan dosis 8,4 mg/g BB dalam 0,3 mL aquabides, dan kelompok perlakuan P 3 dengan  dosis  33,6  mg/g  BB  dalam  0,3  mL  aquabides. Perlakuan  diberikan  pada  hari  ke  6    sampai  ke  17 kebuntingan.  Hasil  menunjukkan  bahwa  pemberian  ekstrak jintan  hitam  tidak  memberikan  pengaruh  terhadap  jumlah fetus  yang  dikandung  dan  tidak  menurunkan    pertumbuhan ekstrimitas  depan  dan  belakang  fetus  mencit  karena  tidak menunjukkan  hasil  yang  signifikan  antara  kelompok  kontrol (K)  dan  kelompok  perlakuan  (P1,  P2,  dan  P3).  Pemberian ekstrak  jintan  hitam  ( Nigella  sativa  L .)  tidak  meningkatkan jumlah  fetus  malformasi  akan  tetapi  menyebabkan  adanya fetus  yang  mati  pada  saat  kelahiran  dan  mengalami malformasi pada beberapa fetus lainnya.
Keywords: jintan hitam ( Nigella sativa L), teratogenik, malformasi mencit
The  use  of  traditional  medicine  has  developed  well  and  is now  widely  used  as  an  alternative  medicine  to  treat  health problems.  Traditional  medicine  will  provide  good  efficacy  if consumed  in  the  right  way  and  dosed  for  medicinal purposes.  Based  on  previous  research,  giving  black  cumin (Nigella  sativa L)  to  female  mice  caused  infertility, antinociceptive,  postcoitus  contraception,  and  anti-oxytocin activities  which  were  thought  to  be  able  to  launch menstruation.  The  safety  level  of  consumption  of  black cumin  during  pregnancy  on  fetal  development,  as  well  as the  reproductive  system  of  female  mice  that  cause congenital  malformations  in  their  offspring,  has  not  been widely  studied. The  purpose  of  this  study  was  to determine the  effect  of  black  cumin  extract  ( Nigella  sativa L)  on  the number  of  mice  fetuses,  the  length  of  the  front  and  back extremities  in  mice  fetuses,  and  the  number  of  malformed fetuses  in  mice.  This  study  used  20  pregnant  female  mice and was divided into 4 groups, namely group K (control) was given 0.3 mL aquabidest, treatment group P1 with a dose of 2.1 mg/g BW in 0.3 mL aquabidest, treatment group P2 with a  dose  of  8.4  mg/g  BW  in  0.3  mL  aquabidest,  and  the  P3 treatment  group  with  a  dose  of  33.6  mg/g  BW  in  0.3  mL aquabidest. The treatment was given on the 6th to 17th day of pregnancy. The results showed that the administration of black  cumin  extract  had  no  effect  on  the  number  of  fetuses conceived  and  did  not  reduce  the  growth  of  the  front  and rear extremities of the mice fetuses because it did not show significant  results  between  the  control  group  (K)  and  the treatment  group  (P1,  P2,  and  P3).  The  administration  of black  cumin  extract  ( Nigella  sativa L.)  did  not  increase  the number of malformed fetuses but caused fetal death at birth and malformations in several other fetuses.
Keywords: black cumin seeds ( Nigella sativa L), teratogenic, mice malformations
How to Cite : Fardhira, Z., Nurcahyani, N., Agustrina, R., & Tugiyono. (2022). TERATHOGENIC TESTING OF BLACK CUMIN ( Nigella sativa L.) EXTRACT ON THE NUMBER OF FETUSES, LENGTH OF FRONT AND BACK EXTREMITIES, AND THE NUMBER OF MALFORMATION FETUS IN MICE ( Mus musculus L.). Jurnal Ilmiah Biologi Eksperimen Dan Keanekaragaman Hayati (J-BEKH) , 9 (2), 49-56. https://doi.org/10.23960/jbekh.v9i1.218

## PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  salah  satu  negara kepulauan  beriklim  tropis  dan  banyak ditumbuhi tanaman-tanaman yang berkhasiat. Penduduk lokal sudah menggunakan  tumbuhan  sebagai  obat tradisional  untuk  mengatasi  masalah kesehatan. Obat tradisional akan memberikan  khasiat  yang  baik  apabila dikonsumsi  dengan  cara  dan  dosis  yang tepat  untuk  tujuan  pengobatan  (Agusta, 2001).  Jintan  hitam  ( Nigella  sativa L.) merupakan  obat  herbal  yang  memiliki banyak  khasiat  dan  banyak  digunakan belakangan  ini.  Kandungan  zat  aktif thymoquinone serta  berbagai  zat  lain dalam  jintan  hitam  memiliki  banyak manfaat.  Menurut  Hendrik  (2005),  jintan hitam  mengandung  komponen-komponen kimia antara lain alanine, arginine, isoleucine,  lysine,  tryptophane,  thyrosine, asparagine, cystine, glycine, dan glutamic acid. Jintan  hitam  juga  mengandung protein,  mineral  antara  lain  Fe,  Na,  Cu, Zn,  P  dan  Ca.  serta  juga  mengandung senyawa  alkaloid,  flavonoid,  saponin, terpenoid (Gilan et al., 2004). Berdasarkan Keshri et  al. (1995)  jintan  hitam  yang diberikan  kepada  mencit  betina  yang menyebabkan aktifitas antifertilisasi, antinociceptif, kontrasepsi postcoitus, dan antioksitosin yang diduga dapat melancarkan  menstruasi.  Jintan  hitam belum  memiliki  tingkat  konsumsi  yang aman  selama  proses  kehamilan.  Pada periode  organogenesis  embrio  sangat sensitif  terhadap  masuknya  suatu  zat  ke dalam tubuh. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui  efek  uji  teratogenik  ekstrak jintan  hitam    ( Nigella  sativa L.)  terhadap jumlah  fetus,  ukuran  panjang  ekstremitas depan  dan  belakang,  serta  jumlah  fetus malformasi  pada  mencit  ( Mus  musculus L.).

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  dilakukan  di  Laboratorium Botani, Jurusan Biologi FMIPA Unila untuk pembuatan  ekstrak  jintan  hitam  dan
Laboratorium  Zoologi,  Jurusan  Biologi FMIPA  Unila  untuk  tempat  pemberian perlakuan  pada  mencit  dan  pengamatan pada  Desember  2019  sampai  Februari 2020.
Alat  dan  bahan  yang  digunakan  pada penelitian  ini    yaitu  kandang  mencit  yang berukuran  50x30,  tempat  minum  dan makan sebanyak 20 unit, seperangkat alat bedah,  kertas  label,  sonde  lambung, jangka  sorong,  pena,  buku  catatan,  20 ekor mencit jantan dan betina berumur 3-4 bulan  dengan  berat  ±  30  gram,  alkohol 96%,  kloroform,  kapas,  makanan  mencit, aquades, air, dan ekstrak jintan hitam.

## Persiapan Kandang dan Hewan Uji
Kandang disiapkan sebanyak 20 unit.  20 ekor  mencit  jantan  dan  20  ekor  mencit betina  yang  berumur  3-4  bulan  disiapkan dalam  kondisi  fertil  dan  berat  ±  30  gram. Mencit  diaklimatisasi  selama  10  hari  di laboratorium  pada  kandang  yang  telah disiapkan yang bertujuan untuk penyesuaian  lingkungan.  Mencit  jantan dan  mencit  betina  ditempatkan  pada  satu kandang, diberi makan dan air secukupnya setiap hari.

## Pembuatan Ekstrak Jintan Hitam
Jintan  hitam  yang  diperoleh  dibersihkan lalu  dikering  anginkan  kemudian  dioven dengan  suhu  40 0 C  selama  2  jam.  Jintan hitam  yang  telah  kering  dihaluskan dengan blender, bubuk yang telah didapat dimaserasi menggunakan etanol 96% dan disaring  dengan  pompa  vakum  sehingga diperoleh filtrat. Filtrat dievaporasi menggunakan rotary  evaporator hingga diperoleh ekstrak yang berbentuk pasta.

## Penentuan Dosis Ekstrak Jintan Hitam
Berdasarkan  Afranti et  al. (2017)  dosis yang berpengaruh terhadap
perkembangan uterus yaitu 200mg/kg BB, sehingga  dosis  yang  digunakan  pada mencit  yaitu  50mg/kg  BB,  200mg/kg  BB,
800  mg/kg  BB  dengan  perbandingan 1:4:16. Dosis tersebut dikonversikan untuk rata-rata  berat  badan  mencit  ±30  gram. Setelah  dikonversikan  dosis  diberikan kepada  mencit  betina  yang  bunting  yaitu terdiri  dari  4  kelompok.Kelompok  kontrol diberikan  0.3  ml  aquabides  dan  tiga kelompok  perlakuan  diberikan  dosis  2.1 mg/g  BB,  8.4  mg/g  BB,  33.6  mg/g  BB dalam 0.3 ml aquabides.

## Pemberian Perlakuan
20  ekor  mencit  betina  yang  hamil  dibagi menjadi  4  kelompok  yaitu  kelompok kontrol,  kelompok  dosis  2.1  mg/g  BB,  8.4 mg/g  BB  dan  33.6  mg/g  BB.  Setiap kelompok  terdiri dari 5  ekor mencit betina hamil.  Pemberian  perlakuan  pada  hewan uji  dilakukan  secara  oral  selama  10  hari berturut-turut  mulai  dari  hari  ke-6  sampai hari  ke-17  kehamilan.  Pemberian  ekstrak jintan hitam dilakukan dengan
menggunakan sonde
untuk mempermudah
masuknya ekstrak kedalam  tubuh  mencit  melalui  saluran pencernaan sehingga ekstrak dapat masuk  ke  dalam  embrio  melalui  plasenta (Sa’roni & Wahjoedi, 2002).

## Laparaktomi
Mencit  betina  yang  bunting  pada  hari  ke- 17 kehamilan dibius menggunakan klorofrom.  Laparaktomi  dilakukan  untuk mengeluarkan  fetus  dari  tubuh  mencit dengan  membedah  mencit  pada  bagian abdomen  ke  arah  atas  sampai  terlihat uterus  berisi  fetus.  Fetus  dikeluarkan dengan  memotong  plasenta  dan  uterus untuk selanjutnya diamati. Fetus dikeringkan  dengan  tissue  dan  dihitung jumlah yang hidup dan mati, serta diamati ada  atau  tidaknya  cacat  bawaan  (Wilson &Warkany, 1975; Setyawati, 2009).
Fiksasi dan Pengamatan Struktur Anatomi
Setelah  dilakukan  pengamatan  ada  atau tidaknya cacat bawaan pada fetus mencit. Kemudian dilanjutkan pengamatan struktur  anatomi  dengan  melihat  dan mengukur panjang pertulangan ekstrimitas depan  dan  belakang  fetus.  Pengukuran panjang  menggunakan  jangka  sorong, mikrometer  sekrup  dan  kertas  millimeter blok agar pengukuran lebih akurat.

## Analisis Data
Dalam penelitian ini data yang didapatkan terdiri dari jumlah fetus, panjang ekstrimitas  depan  dan  belakang  serta jumlah fetus malformasi dianalisis dengan metode  statistik  ANOVA  ( analysis  of variant )  pada  taraf  nyata  95%  untuk mengetahui  ada  atau  tidaknya  perbedaan efek  yang  ditimbulkan  antar  perlakuan, kemudian  apabila  terdapat  perbedaan yang nyata maka akan dilanjutkan uji BNT (Beda  Nyata  Terkecil)  pada  taraf  nyata 95%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Berdasarkan hasil penelitian, data diperoleh  terdiri  dari  jumlah  fetus  normal tiap kelompok, panjang ekstremitas depan dan  belakang  fetus  mencit,  serta  jumlah fetus malformasi.

## Jumlah Fetus
Hasil  pengamatan  jumlah  fetus  yang dikandung  oleh  setiap  induk  mencit bunting  dan  diberi  ekstrak  jintan  hitam dapat  dilihat  pada  Tabel  1.  Jumlah  yang hidup,  mati,  serta  yang  mengalami malformasi  dihitung  dari  setiap  mencit yang diberi perlakuan.
Tabel 1. Jumlah fetus mencit dari induk yang diinduksi ekstrak jintan hitam
Perlakuan Mencit (Ulangan) Jumlah Fetus Perinduk Hidup Mati Malformasi Kontrol 1 9 - - 2 10 - - 3 11 - - 4 9 - - 5 10 - -
Perlakuan Mencit (Ulangan) Jumlah Fetus Perinduk Hidup Mati Malformasi Total 49 - - Dosis 2.1 mg/g BB 1 10 - - 2 11 - 2 3 10 - - 4 9 - - 5 5 - - Total 44 - 2 Dosis 8.4 mg/g BB 1 5 - - 2 11 - - 3 6 - - 4 5 - - 5 5 - - Total 32 - - Dosis 33.6 mg/g BB 1 6 1 - 2 6 - - 3 11 - - 4 5 - - 5 8 - - Total 36 1 -
Hasil Oneway  ANOVA pada  jumlah  fetus hidup  didapat  nilai  p  >  0.05  yang  berarti tidak  terdapat  perbedaan  nyata  pada jumlah fetus yang hidup  antara perlakuan kontrol  dengan  perlakuan  ekstrak  jintan hitam    (2.1  mg/g  BB,  8.4  mg/g  BB  dan 33.6  mg/g  BB).  Jumlah  fetus  mati  dan yang  mengalami  malformasi  berdasarkan hasil Oneway ANOVA juga tidak menunjukkan  adanya  perbedaan  nyata antara kontrol dengan ketiga perlakuan.
Menurut  Somala  (2006)  Dikutip  Roza (2016)  banyaknya  jumlah  anakan  mencit yang lahir dipengaruhi oleh umur indukan, musim  kawin,  masa  estrus,  jenis  hewan, kualitas  makanan  yang  diberikan  pada setiap  induk,  jumlah  sel  telur  yang dihasilkan,  tingkat  kematian  embrio  serta kondisi lingkungan.
Menurut Jacobsen (2007) Dikutip Andriani (2015),  pengurangan  jumlah  fetus  dari hasil penelitian ini diduga karena terjadinya  tapak  resorpsi.  Tapak  resorpsi adalah  gumpalan  merah  yang  tertanam pada uterus.
Panjang Ekstrimitas Depan dan
Belakang Pada Fetus Mencit
Hasil Oneway  ANOVA pada  (Gambar  1 dan  2)  menujukkan  bahwa,  pemberian ekstrak  jintan  hitam  tidak  memberikan pengaruh  terhadap  pertumbuhan  panjang ekstrimitas  depan  dan  belakang  fetus mencit.  Oleh  karena  itu  hal  ini  dapat membuktikan  bahwa  pemberian  ekstrak jintan  hitam  diinduksikan  pada  induk mencit tidak terjadi perbedaan nyata pada pertumbuhan dan perkembangan ekstrimitas  depan  dan  belakang  fetus mencit.  Hal  ini  diduga  karena  jintan  hitam memiliki  kandungan  berbagai  senyawa, protein,  mineral  antara  lain:  kalsium, magnesium, kalium, natrium, mangan dan zat  besi  (Gilani et  al., 2004).  Kandungan senyawa ini diduga berguna dalam proses pertumbuhan  dan  perkembangan  tulang (Egwuche et  al., 2011).  Menurut  Dewoto (2007),  kalsium  merupakan  nutrisi  yang paling  penting  untuk  pertumbuhan  dan perkembangan  tulang  karena  mineral  ini memiliki  peran  penting  dalam  tubuh seperti  pada  proses  kalsifikasi  sehingga membuat  pertumbuhan  tulang  menjadi keras
Gambar 1. Rata-rata panjang ekstrimitas depan fetus mencit dari induk yang diinduksi ekstrak jintan hitam.
Gambar 2. Rata-rata panjang ekstrimitas belakang fetus mencit dari induk  yang diinduksi ekstrak jintan hitam.

## Malformasi
Hasil  pengamatan  fetus  yang  mengalami malformasi  diperoleh  pada  perlakuan dengan  dosis  ekstrak  jintan  hitam  2.1 mg/g  BB  terdapat  2  ekor  fetus  mencit yang mengalami malformasi atau kecacatan  visual  yaitu  pada  ulangan  ke-2 (Gambar 3 dan 4).
0.878 ±0.07497 a 0.928±0.01924 a 0.932±0.02387 a 0.884±0.03209 a 0.78 0.91 1.04 Kontrol 2.1 mg/g BB 8.4 mg/g BB 33.6 mg/g BB P an jan g E sk tr im it as De p an F et u s M en cit ( m m ) Dosis 1.050±0.05657 a 1.090±0.05612 a 1.064±0.04278 a 1.038±0.03962 a 0.9 1.05 1.2 Kontrol 2.1 mg/g BB 8.4 mg/g BB 33.6 mg/g BB P an jan g E sk tr im it as B ela k an g F et u s M en ci t (m m ) Dosis A B
kekerdilan dari induk mencit yang diberi ekstrak jintan hitam diperoleh pada  dosis  2.1  mg/g  BB,  B.  Fetus hidup normal.
(a) (b)
Gambar 4. A. Fetus yang mengalami
kecacatan  (ekor  bengkok)  dari induk  mencit  yang  diberi  ekstrak jintan  hitam  diperoleh  pada  dosis 2.1 mg/g BB, B. Fetus normal.
Gangguan
pertumbuhan yang
menyebabkan  kelainan  pada  fetus  mencit terjadi diduga akibat induksi zat aktif yang terkandung  dalam  biji  jntan  hitam,  zat tersebut dapat diduga menghambat siklus sel, sebagai anti proliferasi dan menginduksi  apoptosis  (Shoieb, et  al., 2003  dan  Banerjee et  al. ,  2009  dalam Tetrasiwi,  2012).  Hal  ini  memungkinkan biji jintan hitam yang diinduksi pada induk mencit  bunting  masuk  kedalam  tubuh fetus  dan  menghambat  pembelahan  sel. Aktivitas penghambatan ini terkait dengan zat aktif seperti minyak atsiri, alkaloid dan flavonoid yang terkandung dalam biji jintan hitam.  Flavonoid  dapat  menyebabkan kematian sel karena bersifat antiproliferasi, menghambat siklus sel dan menginduksi  apoptosis  (Nigg  &  Seigler, 1992 dalam Tetrasiwi, 2012).
Individu yang mengalami kecacatan (malformasi)  umumnya  memiliki  bentuk yang  lebih  kecil  dibandingkan  individu normal. Oleh karena itu, sebelum dinyatakan abnormalitas pada suatu individu  maka  berat  hewan    yang dilakukan  pengujian  harus  dibandingkan dengan kelompok kontrol untuk memastikan bahwa hambatan
pertumbuhan  suatu  organ  merefleksikan hambatan  pertumbuhan  secara  umum. Teratogen  merupakan  suatu  zat  yang
dapat  menimbulkan  kecacatan,  teratogen juga dapat menimbulkan kelainan visceral maupun  skeletal  tanpa  menunjukkan adanya kelainan morfologi eksternal (Santoso, 2006).
Selain  itu,  1  ekor  fetus  mati  pada perlakuan  dengan  dosis  ekstrak  jintan hitam  33.6  mg/g  BB  ditemukan  pada ulangan  ke-1  dapat  dilihat  pada  Gambar 5.
(a)                          (b)
Gambar 5. (a). fetus yang mengalami kematian  dari  induk  mencit  yang diberi ekstrak jintan hitam diperoleh pada dosis 33.6 mg/g BB, (b). fetus hidup normal.
Fetus yang mati kemungkinan disebabkan oleh  kerusakan  sel-sel  pada  tahap  akhir proliferasi  sehingga  hanya  sebagian  sel yang  dapat  diperbaiki  dan  pada  saat pembedahan  proses  resorbsi  oleh  induk belum sempurna sehingga biasanya fetus yang  mati  ditemukan  dalam  keadaan cacat. Fetus yang masih hidup mempunyai  daya  tahan  paling  tinggi terhadap  zat  asing  yang  masuk.  Fetus yang  hidup  melakukan  perbaikan  kembali sel-sel yang telah rusak atau mati dengan sel-sel yang baru sehingga memungkinkan  untuk  bertahan  hidup. Kematian  intrauterus  seperti  resorbsi  dan fetus  yang  mati    kemungkinan  disebakan oleh adanya  kontraksi otot uterus selama masa  organogenesis  akibat  pemberian ekstrak tanaman (Sumastuti, 2004).

## KESIMPULAN DAN SARAN
Kesimpulan  yang  dapat  diambil  dari penelitian  ini  adalah  pemberian  ekstrak
jintan  hitam  ( Nigella  sativa L.)  Tidak memberikan  pengaruh  terhadap  jumlah fetus  yang  dikandung  pada  induk  mencit. Secara  statistik  pemberian  ekstrak  jintan hitam  tidak  menurunkan  pertumbuhan panjang  ekstrimitas  depan  dan  belakang fetus mencit ( Mus musculus L.),serta tidak meningkatkan jumlah fetus yang mengalami malformasi.
Saran yang dapat diberikan dari penelitian ini  adalah  perlu  dilakukan  penelitian  lebih lanjut  mengenai  senyawa-senyawa  pada ekstrak jintan hitam ( Nigella sativa L.) dan perlu  dikaji  ulang  mengenai  dosis  optimal yang sangat berpengaruh terhadap pertumbuhan  dan  perkembangan  fetus mencit ( Mus musculus L.).

## DAFTAR PUSTAKA
Afrianti,  R.,  P.  Ramadheni.,  N.  I.  Putri.
(2017). Uji Aktivitas Estrogenikekstrak Etanol Jintan Hitam  ( Nigella  Sativa L.)  Terhadap Perkembangan  Uterus  Tikus  Putih Betina. Jurnal Scientia . 7(1): 49-55. Agusta, A. (2001). Awas! Bahaya Tumbuhan Obat . [Internet]. Terdapat pada: http://www.indomedia.com/ Diakses pada : 20 September 2019.
Andriani,  Y.  (2015). Efek  Paparan  Asap Rokok  Pada  Model  Mencit  Selama Fase Organogenesis dan Pertumbuhan. Universitas  Andalas. Padang.
Banerjee  S.,  A.  O.  Kaseb,  Z.  Wang,  D. Kong,  M.  Mohammad,  S.  Padhye,
F. H. Sarkar and R. M. Mohammad. 2009. Antitumor Activity of Gemcitabine  and  Oxaliplatin  Is Augmented  by  Thymoquinone  in Pancreatic Cancer. Cancer Res . 69:5575 –5583.
Dewoto,  H.  R.  (2007). Farmakologi  dan Terapi :Vitamin dan Mineral Edisi 5. Balai Penerbit FK UI. Jakarta.
Egwuche,  R.  U.,  A.  A.  Odetola,  O.  L.
Erukainure. (2011). Prelimary
Investigation into the Chemical
Properties  of  Peperonia  pellucida  L.
Research  Journal  of  Phytochemistry 5 (1) : 48-53.
Hendrik. (2005). Habbatus sauda’, Thibbun Nabawiy Dalam Menangani  Berbagai  Penyakit  dan Memelihara kesehatan Tubuh .
Surakarta:  Pustaka  AlUmmat,  pp: 77-110.
Jacobsens,  K.  L.,  Picciotto.  M.R.,  Heath
C.J.,  Frost.  S.J.,  Tsou.  K.A.,  Dwan. R. A., Jackowski. M. P., Contable. R. T. and Mencl. W. E.  (2007) Prenatal and Adolescent Exposure to Tobacco  Smoke  Modulates  the Development    of    White    Matter Microstructure. The Journal of Neuroscience , 27(49):13491 –13498
Keshri, G., M. M. Singh., V. Lakshmi., and
V.  P.  Kamboj.  (1995).  Post-Coital Contraceptive Efficacy of The Seeds  of Nigella  sativa in  Rats, Indian Journal  of  Physiology  and Pharmacology 39(1): 59-62. Mangkoewidjojo dan Smith. (1998). Pemeliharaan, Pembiakan, dan Penggunaan  Hewan  Percobaan  di Daerah Tropis. UI Press. Jakarta.
Nigg, H. N. and Seigler. (1992). Phytochemical Resources For Medicine  And  Agriculture. Planum Press , New York. 260-276.
Roza  F.  N.,    N.  Nurcahyani,  H.Busman. (2016).  Efek  Teratogenik  Ekstrak Rimpang  Rumput  Teki  ( Cyperus rotundus L.)  Terhadap  Jumlah Fetus,  Panjang  Ekstrimitas  Depan Dan  Belakang,  Serta  Malformasi Fetus  Mencit  ( Mus  musculus L.). Jurnal  Ilmiah  Biologi  Eksperimen dan  Keanekaragaman  Hayati .  3(1): 17-26.
Santoso,  H.B.  (2006).  Pengaruh  Kafein Terhadap  Penampilan  Reproduksi dan  Perkembangan  Skeleton  Fetus Mencit  ( Mus  musculus L.). Jurnal Biologi. X: 39-48.
Setyawati,  I.  (2009).  Morfologi  Fetus Mencit  ( Mus  musculus L.)  Setelah Pemberian Ekstrak Daun Sambiloto (Andrographis  paniculata  Nees ).
Jurnal Biologi . XIII (2) : 41-44.
Shoieb, A. M., M. Elgayyar, P. S. Dudrick,
J.  L.  Bell,  P.  K.  Tithor.  2003.  In VitroInhibition Of Growth And
Induction  Of  Apoptosis  In  Cancer
Cell  Lines  By  Thmoquinone. Int  J Oncol . 22(1): 107-13.
Sumastuti,  R.  (2004).  Pengaruh  Infus Daun dan Buah Makuta Dewa Pada
Rahim  Marmot. Medika 30(1).  16-
23.
Tetrasiwi, E. N. (2012). Pengaruh Pemberian Serbuk Biji Jintan Hitam ( Nigella sativa L.) Terhadap
Embriogenesis  Tikus  Putih  ( Rattus norvegicus ). Skripsi . Fakultas Kedokteran.  Universitas  Sebelas Maret. Surakarta.