## ISOLASI DAN IDENTIFIKASI BAKTERI Vibrio sp. PADA KERANG KAPAH (Meretrix meretrix) DI KABUPATEN TRENGGALEK
Burhanuddin Ihsan 1) , Endah Retnaningrum 2)
1) Staf Pengajar Program Studi Manajemen Sumberdaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Borneo Tarakan,
Jl. Amal Lama No.1, Tarakan. Kalimantan Utara. 77123
2) Staf Pengajar Program Studi Biologi Fakultas Biologi Universitas Gadjah Mada Jl. Teknika Selatan, Sekip Utara, Sinduadi, Melati, Kabupaten Sleman, DI.Yogyakarta 55281
1) Email: Ihsan.muslim1924@gmail.com

## ABSTRACT
Meretrix  meretrix  is  one  type  of  shellfish  that  are  included  in  the  bivalves  and  filter feeders.  One  of  bacteria  that  live  in  the  estuary  is  the  Vibrio.  This  research  aims  to determine  the  presence  of  Vibrio  sp.  in  M.  meretrix  from  Trenggalek.  The  Isolation  of Vibrio  bacteria  was  conducted  by  streat  plate  method  on  selective  media  of  TCBS (Thiosulfate  Citrate  Bile  Salt  Sucrose)  and  identify  the  Vibrio  bacterium  through  the morphological and biochemical tests based Bergey's Manual of Systematic Bacteriology In  Microbiology  laboratory  of  Biology  Faculty  of  Gadjah  Mada  University.  The  Result showed  there  are  to  seven  isolates  Vibrio  sp.  bacterias  in  M.  meretrix  they  are  isolate PSBI 1.1, 1.4, 1.7, 1.8. 5.3, 3.5, dan 2.6.
Keyword: Meretrix meretrix, Vibrio, identification,

## PENDAHULUAN
Kerang-kerangan yang termasuk dalam Kelas Bivalvia merupakan organisme yang  menetap  di  dasar  laut  dengan  cara membenamkan  diri  di  dalam  pasir  atau lumpur bahkan menempel pada batu karang. Pada  beberapa  anggota  Kelas Bivalvia seperti  Kerang  Kapah  ( Meretrix  meretrix ) dapat hidup di daerah intertidal dan subtidal karena mampu menutup cangkangnya dengan  rapat  untuk  mencegah  kekurangan air.  Nybakken  (1992)  menyebutkan  bahwa berdasarkan kebiasaan makannya, M. meretrix bersifat  pemakan  suspensi  ( filter feeder ). M.  meretrix merupakan  salah  satu jenis  kerang  yang  berpotensi  dan  bernilai ekonomis serta merupakan  makanan produk hasil laut yang cukup banyak dikonsumsi di
Indonesia. Berdasarkan data statistik Kementrian  Kelautan  dan  Perikanan  (KKP) tahun  2012  produksi  Remis  ( Meretrix spp.) di  Indonesia  tahun  2001-2011,  mengalami peningkatan  rata-rata  sebesar  22,10%. M. meretrix merupakan  salah  satu  anggota Genus Meretrix yang  memiliki  kandungan protein,  EPA  ( Eicosapentaenoic  Acid )  dan DHA ( Docosahexaenoic Acid ) yaitu sebesar 9,39 %, 2,03% dan 6,06% (Gifari, 2011).
Cara  makan M.  meretrix yang bersifat filter  feeder memungkinkan  banyak bakteri  akuatik  yang  terkandung  di  dalam tubuhnya,  salah  satunya  adalah  bakteri Vibrio sp.  Bakteri Vibrio merupakan bakteri akuatik  yang  bersifat  patogen opportunistic yang ditemukan dan dominan di lingkungan air  payau dan  estuaria  seperti  sungai,  muara sungai,  kolam,  dan  laut  (Widowati.  2008). Bakteri Vibrio tumbuh  optimal  pada  air
payau dan laut dengan salinitas antara 20-40 ppt (Feliatra 1999).
Bakteri Vibrio hidup  di  air  laut  dan air  tawar  serta  berasosiasi  dengan  hewan laut  dan  hewan  air  tawar  (krieg  dan  Holt, 1984  Wang et  al, 1995).  Sebagian  besar bakteri Vibrio adalah  bakteri  patogen  yang mampu menghasilkan enzim proteolitic , dan kitinolitic serta bersifat halofilik . bakteri Vibrio dapat  menyebabkan penyakit  bagi  manusia  diantaranya  adalah bakteri V. cholerae dan V. Parahemolyticus . V.  cholerae dapat  menyebabkan  penyakit kolera dan pada infeksi yang parah penderita dapat mengalami diare 20-30 kali sehari dan kehilangan  cairan  ±18  liter  (Mailoa  dan Setha,  2011).  Tujuan  penelitian  untuk mengetahui  kandungan  bakteri Vibrio pada M. meretrix.

## BAHAN DAN METODE

## Waktu dan Tempat
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada Bulan  Agustus  2015  sampai  Oktober  2015. Sampel M.  meretrix diambil  di  lokasi Eduwisata Mangrove Cengkrong Kabupaten Trenggalek.  Isolasi  dan  identifikasi  bakteri Vibrio sp.  dilakukan  di  Laboratorium Mikrobiologi  Fakultas  Biologi  Universitas Gadjah Mada Yogyakarta.

## Alat dan Bahan
Alat yang digunakan untuk penelitian  ini  meliputi  mikropipet,  LAF, autoklaf,  inkubator,  timbangan  digital, vortex, shaker , mortar dan berbagai alat-alat gelas  seperti;  tabung  reaksi,  cawan  petri, ose, rak tabung reaksi, Erlenmeyer dan lain- lain.  Bahan  yang  digunakan  meliputi medium TCBS ( Thiosulfate Citrate Bile Salt Sucrose ),  NB  ( Nutrien  Broth ),  dan  larutan APW  ( Alkali  Pepton Water),  dan  bahan utama  yang  digunakan  sebagai  objek penelitian yaitu M. meritrix
Cara Kerja 1. Sterilisasi Alat dan Bahan
Sterilisasi  alat  dan  bahan  dilakukan dengan menggunakan autoklaf pada temperatur  121ºC  dengan  tekanan  1  atm selama  15  menit  untuk  menghilangkan kontaminasi  bakteri  atau  mikroorganisme lain (Marlina, 2008).

## 2. Isolasi Bakteri Vibrio
Sampel M.  meretrix dihaluskan dengan  menggunakan  mortal,  sebanyak  4 gram sampel diambil kemudian dimasukkan kedalam  erlenmeyer  yang  berisi  200  ml medium APW, selanjutnya diinkubasi selama  6-8  jam  dengan  suhu  37 o C. Inokulum  tersebut  kemudian  diinokulasi pada  medium  TCBS  dengan  metode streak plate kemudian  diinkubasi  selama  24  jam pada suhu 30 o C (Hidayat, 2013).
3. Identifikasi Bakteri Vibrio
Identifikasi bakteri Vibrio
berpedoman  pada  buku Bergey’s Manual of Systematic  Bacteriology (Krieg  and  Holt 1984),  dengan  melihat  karakter  morfologi dan  biokimia;  uji  oksidase,  pengecatan Gram kebutuhan oksigen, motilitas reduktasi nitrat/nitrit, methyl red , dan Voges– Proskauer .

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## A. Isolasi Vibrio
Isolasi  bakteri Vibrio pada M. meretrix di  Kabupaten  Trenggalek  terdapat 22  isolat  (Tabel  1).  Dari  hasil  isolasi  ada beberapa  isolat  bakteri  yang  tidak  mampu tumbuh pada media TCBS, ini menunjukkan bahwa  media  TCBS  mampu  menghambat bakteri  yang  tidak  diinginkan  sehingga medium tersebut tergolong medium selektif. Koloni  bakteri  yang  tumbuh  pada  medium TCBS  memiliki  beberapa  sifat  morfologi koloni; warna koloni (kuning, orange, hijau, dan  hijau  kebiruan),  bentuk  koloni circular ,
Gambar 1. Warna koloni bakteri Vibrio
tepi  koloni entire dan  elevasi  koloni  yang bermacam  pula  ( law  conver,  conver dan effuse ).
Koloni  bakteri  yang  tumbuh  pada media  TCBS  memiliki  karakteristik  warna; hijau,  kuning,  hijau  transparan,  orange  dan hijau kebiruan (Gambar 1). Menurut Mailoa dan  Setha  (2011),  warna  koloni  yang berwarna hijau pada bakteri Vibrio
disebabkan  karena  sifatnya  yang  tidak mampu  memfermentasi  sukrosa  sedangkan warna koloni yang berwarna kuning mampu memfermentasi sukrosa serta mampu menurunkan pH pada media TCBS.
Tabel 1. Hasil isolasi bakteri Vibrio pada M. meretrix
NO KODE ISOLAT BENTUK KOLONI ELEVASI KOLONI TEPI KOLONI WARNA KOLONI 1 PSBI 1.1 Circular Law Conver Entire Kuning 2 PSBI 1.3 Circular Law Conver Entire Kuning 3 PSBI 1.4 Circular Law Conver Entire Kuning 4 PSBI 1.6 Circular Effuse Entire Hijau Transfaran 5 PSBI 1.7 Circular Conver Entire Hijau kebiruan 6 PSBI 1.8 Circular Law Conver Entire Orange 7 PSBI 1.9 Circular Conver Entire Orange 8 PSBI 2.1 Circular Law Conver Entire Kuning 9 PSBI 2.4 Circular Conver Entire Kuning 10 PSBI 2.5 Circular Law Conver Entire Hijau Transfaran 11 PSBI 2.6 Circular Conver Entire Kuning 12 PSBI 2.7 Circular Conver Entire Hijau kebiruan 13 PSBI 3.4 Circular Law Conver Entire Kuning 14 PSBI 3.5 Circular Conver Entire Hijau 15 PSBI 3.6 Circular Law Conver Entire Hijau 16 PSBI 3.7 Circular Law Conver Entire Kuning 17 PSBI 4.1 Circular Law Conver Entire Orange 18 PSBI 4.2 Circular Law Conver Entire Kuning 19 PSBI 4.7 Circular Conver Entire Kuning 20 PSBI 4.8 Circular Law Conver Entire Hijau 21 PSBI 5.1 Circular Law Conver Entire Hijau Transfaran 22 PSBI 5.3 Circular Law Conver Entire Kuning

## B. Identifikasi bakteri Vibrio
Identfikasi  isolat  bakteri  dilakukan dengan  uji  morfologi  dan  sifat  biokimia. Hasil    identifikasi  dan  karakterisasi  isolat bakteri, terdapat 7 isolat yang teridentifikasi sebagai bakteri Vibrio spp. dengan berbagai uji  yang  dilakukan  seperti;  uji  oksidase untuk  mengetahui  sitokrom  oksidase  yang terdapat  pada  bakteri Vibrio ,  uji  reduktasi nitrat/nitrit  untuk  mengetahui  kemampuan mereduktasi nitrat, uji motil untuk mengetahui  pergerakan,  uji  indol  digunakan untuk mengetahui apakah bakteri mempunyai  enzim triptophanase untuk mengoksidasi asam amino triptophan membentuk  indol,  uji methyl  red dilakukan untuk  mengetahui  kemampuan  bakteri  yang mampu menghasilkan asam organik  melalui metabolisme  glukosa,  uji  voges  proskauer untuk  mengetahui  tidak  terjadinya  ikatan antara  guanidin  dan  diasetil  serta  uji kebutuhan  oksigen  untuk  mengetahui  sifat anaerob fakultatif pada bakteri Vibrio . Hasil
identifikasi  didapatkan 7  bakteri Vibrio spp. dapat dilihat pada (Tabel 2).
Menurut Bergey’s Manual of Systematic  Bacteriology (Kreig  and  Holt, 1984),  anggota  bakteri  Genus Vibrio mempunyai  ciri-ciri  antara  lain  berbentuk batang  pendek,  bersifat  gram  negative, memiliki  flagel,  tidak  berspora,  tidak memiliki  kapsul,  bersifat  fakultatif  aerob dan  berkembang  biak  dengan  pembelahan biner, tumbuh pada media selektif Thiosulfate  Citrate  Bile  Salt  Sucrose  Agar (TCBSA) dengan koloni berwarna kekuningan, orange dan hijau.
Menurut Austin et al, (1989) anggota bakteri Vibrio mempunyai sifat-sifat biokimia  seperti  oksidasi,  katalase  dan reduksi  nitrat  bersifat  positif,  fermentasi aerogenik  pada  glukosa,  sensitive  terhadap O/129,  dan  beberapa  spesies  mampu mendegradasi  glatin,  kitin,  lipidamilum  dan aesculin .
Tabel 2. Identifikasi Bakteri Vibrio
Karak ter No Jenis Karakter Isolat Vibrio PSBI 11 PSBI 14 PSBI 17 PSBI 18 PSBI 26 PSBI 35 PSBI 53
M or fologi Koloni 1 Circular + +
+ + + + + + 2 Law Conver + + ‒ ‒ + + ‒ + 3 Entire + + + + + + + + 4 Kuning + + ‒ + + ‒ + + 5 Hijau ‒ ‒ ‒ ‒ ‒ + ‒ + 6 Hijau Kebiruan ‒ ‒ + ‒ ‒ ‒ ‒ + 7 Cat gram ‒ ‒ ‒ ‒ ‒ ‒ ‒ ‒ 8 Sel Batang lurus ‒ + + + + ‒ + + 9 Sel Batang  bengko + ‒ ‒ ‒ ‒ + ‒ +
S if at B ioki mi awi 10 Anaerob Fakultatif +
+ + + + + + + 11 Motilitas + + + + + + + + 12 Reduktasi nitrat/nitrit
+ + + + + + + + 13 Oxidase + + + + + + + + 14 Indole production ‒ ‒ ‒ ‒ ‒ ‒ ‒ ‒ 15 Voges–Proskauer ‒ ‒ ‒ ‒ ‒ ‒ ‒ ‒ 16 Methyl Red + + + + + + + +

## KESIMPULAN
Terdapat  tujuh  isolat  yang  teridentifikasi sebagai  bakteri Vibrio sp.  pada M.  Meretrix yaitu  isolat  PSBI  1.1,  PSBI  1.4,  PSBI  1.7, PSBI 1.8, PSBI 5.3, PSBI 3.5 dan PSBI 2.6.

## DAFTAR PUSTAKA
Austin,  D.A.,  D.  McIntosh  and  B.  Austin. 1989. Taxonomy  of  fish  associated Aeromonas spp., with the description of Aeromonas  salmonicida subsp.
smithia ,  subsp.  nov.,  sp.  nov.  Syst. Appl. Microbiol. 11: 277–290.
Feliatra.  1999.  Identifikasi  bakteri  patogen ( Vibrio sp.)  di  perairan  Nongsa Batam  Propinsi  Riau. Jurnal  Natur Indonesia 11 (1): 28-33.
Gifari,  A.  2011.  Karakteristik  Asam  Lemak Daging  Keong  Macan  ( Babylonia Spirata ),  Kerang  Tahu  ( Meretrix Meretrix ), Dan Kerang Salju ( Pholas dactylus ).  Skripsi  THP  Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor. Bogor.
Hidayat.  AR.  Syarif.  2013. Karakterisasi Bakteri  Genus  Vibrio  Dari  Ikan Kerapu  (Plectropomus  sp.). UIN Alauddin  Makassar.  ISSN  2302- 1616  (Vol  1,  No.  2,  hal  141-143). Gowa.
Holt,  J.G.,  N.R.  Kreigh,P.H.A  Sneath,  J.T.
Stanley. S.T. Williams. 1994.
Bergey’s  manual  of  determinative
bacteriology  ninth  edition.  Williams
K. Hensky (ed) and Wilkins Baltimore. 787 hal.
Krieg,  N.R.  and  J.G.  Holt  (Editors).  1984. Bergey’s  Manual  of  Systematic Bacteriology,  1st  Ed. ,  Vol.  1,  The Williams & Wilkins Co., Baltimore.
Marlina.  2008.  Identifikasi  Bakteri Vibrio parahaemolitycus dengan  Metode BIOLOG dan Deteksi Gen ToxR nya Secara  PCR. Jurnal  Sains  dan Teknologi Farmasi . 13(1):11-17.
Mailoa.  M.C.  dan  Setha.  B.  2011. Karakteristik  Patogenitas Vibrio sp. Diisolasi  dari  Lendir  Sidat  ( Anguilla
Sp.). Jurnal Kedokteran Dan Kesehatan Program Studi Pendidikan Dokter  Universitas  Pattimura.  ISSN: 1979-6358.
Nybakken,  J.  W.  1992.  Biologi  Laut
Pendekatan Ekologis. Gramedia. Jakarta. Wang, F.Y.K., Flower, K. and Desmarchelier,  P.M.  1995. Vibriosis
Due  to  Vibrio  mimicus  in  Australia Freshwater  Crayfish. J.  Acuat  Anim Healt. & (4), pp; 284-291.
Widowati.  R.  2008.  Keberadaan  Bakteri
Vibrio parahaemolyticus Pada Udang  Yang  Dijual  Di  Rumah Makan Kawasan Pantai Pangandaran. Fakultas Biologi Universitas Nasional. Jakarta.