## AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL DAN FRAKSI UMBI
LOBAK PUTIH ( Raphanus Sativus L .) TERHADAP BAKTERI STAPHYLACOCCUS AUREUS SECARA IN VITRO
Nadian Jelita Putri 1* , Dwintha Lestari 2 , Anis Puji Rahayu 3 , Titian Daru Asmara Tugon 4 , Fauzia Ningrum Syaputri 5 1-5 Program Studi Farmasi, Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Muhammadiyah Bandung Email: nadianjelita99@gmail.com

## ABSTRAK
Umbi  lobak  putih  ( Raphanus  sativus  L .)  merupakan  salah  satu  bahan  alam  yang  memiliki  senyawa  aktif yang  dapat  berpotensi  sebagai  antibakteri.  Pertumbuhan  bakteri  patogen  yang  berlebihan  dapat mengakibatkan  penyakit  berupa  infeksi  pada  tubuh.  Dampak  negatif  dari  pertumbuhan  bakteri Staphylacoccus  aureus  dapat  menyebabkan  infeksi  kulit  dan  saluran  pernapasan.  Penelitian  ini  bertujuan untuk  mengetahui  aktivitas  antibakteri,  KHM  dan  KBM  ekstrak  etanol  dan  fraksi  umbi  lobak  putih terhadap  bakteri Staphylacoccus  aureus .  Aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol  dan  fraksi  umbi  lobak  putih diujikan  menggunakan  metode  difusi  cakram,  Konsentrasi  Hambah  Minimum  (KHM)  dan  Kadar  Bunuh Minimum  (KBM)  ditentukan  dengan  metode  dilusi  padat.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  ekstrak etanol  dan  fraksi  umbi  lobak  putih  dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri  lemah  pada  konsentrasi  40 mg/mL dengan diameter hambatan 9,25 mm pada ekstrak etanol umbi lobak putih, 7,5 mm pada fraksi air, 8,5 mm pada fraksi etil asetat dan tidak terdapat daya hambat pada fraksi n-Heksan. Berdasarkan pengujian KHM  dan  KBM  pada  ekstrak  etanol  umbi  lobak  putih  tidak  terdapat  nilai  KHM  dan  KBM  begitupun dengan  fraksi  air  dan  fraksi  n-Heksan.  Adapun pada  fraksi  etil  asetat  terdapat  KHM  pada  konsentrasi  10 mg/mL dan KBM pada konsentrasi 20 mg/mL.
Kata Kunci : Umbi Lobak Putih, Staphylacoccus aureus , Fraksi, dan Makrodilusi Padat.

## ABSTRACT
The white radish (Raphanus sativus L .) is one of the natural ingredients that possesses active compounds potentially serving as antibacterial agents. Excessive growth of pathogenic bacteria can result in diseases such as bodily infections. The adverse effects of Staphylococcus aureus bacteria proliferation can lead to skin  infections  and  respiratory  tract  infections.  This  study  aims  to  determine  the  antibacterial  activity, Minimum  Inhibitory  Concentration  (MIC),  and  Minimum  Bactericidal  Concentration  (MBC)  of  ethanol extracts  and  fractions  derived  from  white  radish  roots  against  Staphylococcus  aureus  bacteria.  The antibacterial  activity  of  ethanol  extract  and  fractions  of  white  radish  tuber  was  tested  using  the  disc diffusion method. The Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Bactericidal Concentration (MBC) were determined using the solid dilution method. The research results indicate that ethanol extract and  fractions  of  white  radish  tuber  can  inhibit  the  growth  of  weak  bacteria  at  a  concentration  of  40 mg/mL. The inhibition diameters observed were 9.25 mm for the ethanol extract of white radish tuber, 7.5 mm for the water fraction, 8.5 mm for the ethyl acetate fraction, and no inhibitory effect was observed for the n-Hexane fraction. Based on the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Bactericidal Concentration (MBC) testing of the ethanol extract of white radish tuber, there were no discernible MIC and MBC values, and the same applies to the water fraction and n-Hexane fraction. However, for the ethyl acetate  fraction,  the  MIC  was  observed  at  a  concentration  of  10  mg/mL,  while  the  MBC  was  noted  at  a concentration of 20 mg/mL.
Keywords: Fraction, Solid Macrodilution, Staphylococcus aureus and White Radish Tubers.
Cendekia Journal of Pharmacy
ITEKES Cendekia Utama Kudus P-ISSN 2559 – 2163     E-ISSN 2599 – 2155 VOL. 8, No. 1, Januari 2024 http://cip.jurnal.stikescendekiautamakudus.ac.id

## LATAR BELAKANG
Infeksi  adalah  salah  satu  penyebab  utama  penyakit  di  dunia  tak  terkecuali  di  negara berkembang seperti Indonesia (Zeniusa, Ramadhian, Nasution, & Karima, 2019). Setiap tahunnya dilaporkan  Sembilan  juta  orang  meninggal  karena  penyakit  infeksi  (WHO,  2018).  Infeksi  dapat disebabkan oleh bakteri. Bakteri yang paling sering menyebabkan infeksi adalah Staphylacoccus aureus .  Infeksi Staphylacoccus  aureus merupakan  salah  satu  penyebab  meningkatnya  jumlah penyakit  dan  kematian.  Pada  hidung  dan  kulit  manusia,  terdapat  bakteri  yang  berkolonisasi sehingga  dapat  menyebabkan  beberapa  penyakit  seperti  infeksi  kulit,  endokarditis,  bakteremia, pneumonia, osteomyelitis, sepsis dan toxic shock syndrome (Rahmadani, Budiyono, & Suhartono, 2017).
Studi  epidemiologi  menunjukkan  bahwa  infeksi  akibat Staphylococcus  aureus di  dunia meningkat  pada  dua  dekade  terakhir.  Data  di  Amerika  Serikat  dan  Eropa  menunjukkan  bahwa Staphylococcus  aureus merupakan  bakteri  patogen tersering  penyebab infeksi  dengan  prevalensi 18-30%, sedangkan di wilayah Asia Staphylococus aureus memiliki angka kejadian infeksi yang hampir sama banyak (Mehraj J, 2014).
Staphylacoccus aureus merupakan bakteri komensial dan patogen pada manusia. sekitar 30%  dari  populasi  manusia  dikolonisasi  oleh Staphylacoccus  aureus ,  umumnya  bakteri  ini terdapat  pada  kulit,  saluran  pernapasan  dan  saluran  pencernaan  tanpa  menyebabkan  masalah kesehatan.  Bakteri  ini  menyebabkan  infeksi  pada  kulit  seperti  luka  yang  ditandai  dengan peradangan  dan  pembentukan  abses  terjadi  nekrosis  pada  jaringan  luka  (Paju,  Yamlean,  & Kojong,  2013).  Antibiotik  yang  tepat  dapat  membunuh  bakteri Staphylacoccus  aureus ,  tetapi resistensi  bakteri  ini  terhadap  beberapa  antibiotik  memaksa  manusia  untuk  mencari  alternatif antibiotik. Adapun tanaman yang dapat digunakan sebagai alternatif antibiotik salah satunya yaitu umbi lobak putih ( Raphanus sativus L.).
Masyarakat Indonesia sudah mengenal dan memanfaatkan tumbuhan obat sebagai media penyembuhan  yang  sangat  efektif.  Hal  ini  karena  ketersediaannya  yang  mudah  ditemukan, ekonomis dan efek sampingnya yang relatif rendah sehingga banyak digunakan oleh masyarakat di  era  negara  berkembang  sekarang  ini.  Salah  satu  tumbuhan  yang  dapat  dimanfaatkan  oleh masyarakat untuk mengobati penyakit adalah umbi lobak putih ( Raphanus sativus L.).
Secara  tradisional  umbi  lobak  putih  ( Raphanus  sativus L.)  tidak  memiliki  lemak  atau kolestrol  dan  rendah  kalori,  sehingga  bermanfaat  untuk  mengurangi  nyeri  sendi  dan  arthritis (radang  sendi),  penyakit  jantung,  stroke,  tekanan  darah  tinggi,  dan  gangguan  pernapasan.  Umbi lobak putih mengandung vitamin dan antibiotik yang tinggi dan dapat digunakan untuk berbagai keperluan dalam kehidupan sehari-hari. Umbi lobak putih kaya akan serat, vitamin C, folat, dan kalium, serta riboflavin. Vitamin B6, kalsium, dan magnesium (Rasyid, 2015).
Kandungan  kimia  yang  terdapat  pada  umbi  lobak  putih  ( Raphanus  sativus L.)  yaitu saponin  dan  flavonoid  yang  merupakan  kelompok  utama  bahan  kimia  yang  dapat  menghambat pertumbuhan bakteri. Dilihat dari kandungan kimianya, umbi Lobak Putih ( Raphanus sativus L.) mempunyai  potensi  untuk  membunuh  bakteri  patogen  penyebab  infeksi  yang  masih  menempati urutan teratas penyebab kesakitan dan kematian di negara berkembang, termasuk Indonesia. Oleh karena  itu,  umbi  lobak  putih  ( Raphanus  sativus L.)  selalu  digunakan  sebagai  antibiotik  alami, agen  inti  inflamasi  pada  kulit,  dan  sebagai  penghambat  kuat  aktivitas  bakteri  gram  positif  dan gram negatif. Meskipun demikian, perlu dilakukan pengujian secara ilmiah, sehingga diharapkan bisa  menjadi  solusi  untuk  mengobati  berbagai  penyakit  yang  disebabkan  oleh  bakteri  patogen seperti Staphylacoccus  aureus yang  merupakan  penyebab  umum  terjadinya  infeksi  kulit  (Singh, 2013).
Berdasarkan  latar  belakang  di  atas  serta  penelitian  yang  telah  dilakukan,  maka  peneliti memiliki  ketertarikan  dalam  melakukan  penelitian  menggunakan  umbi  lobak  putih  ( Raphanus sativus L.) yang memiliki banyak kandungan senyawa kimia dengan judul “Aktivitas antibakteri ekstrak  etanol  dan  fraksi  umbi  lobak  putih  ( Raphanus  sativus L.)  terhadap  pertumbuhan  bakteri Staphylacoccus  aureus secara  in  vitro”.  Metode  pengujian  yang  dilakukan  dalam  penelitian  ini yaitu menggunakan metode difusi cakram dengan konsentrasi 20 mg/mL, 40 mg/mL, 60 mg/mL, dan 80 mg/mL dan 100 mg/mL. Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui kemampuaan aktivitas ekstrak  umbi  lobak  putih  ( Raphanus  sativus L.)  dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri Staphylacoccus aureus . Oleh karena itu melalui penelitian ini diharapkan dapat memberikan bukti ilmiah  terkait  penggunaan  umbi  lobak  putih  yang  berpotensi  dalam  pengembangan  obat antibakteri.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  menggunakan  jenis  penelitian Quasy  Eksperimen Laboratorium.  Lokasi penelitiaan  dilakukan  di  Laboratorium  Mikrobiologi  Fakultas  Sains  dan  Teknologi  Universitas Muhammadiyah Bandung. Populasi dari penelitian ini yaitu umbi lobak putih  ( Raphanus sativus L.)  yang  diperoleh  dari  daerah  Kampong  Kebon  Awi,  Desa  Cigugur  Girang  Parongpong, Kabupaten  Bandung  Barat.  Proses  preparasi  sampel  meliputi  pencucian,  pengeringan,  dan penghalusan.  Pengeringan  sampel  umbi  lobak  putih  ( Raphanus  sativus L .) dilakukan  dengan menggunakan  cara  kering  jemur.  Variasi  konsentrasi  yang  diujikan  20  mg/mL,  40  mg/mL,  60 mg/mL, dan 80 mg/mL dan 100 mg/mL. Data hasil penelitian dianalisa dengan menggunakan uji univariant,  dengan  melihat  zona  hambat  pertumbuhan  bakteri  dari  masing-masing  konsentrasi ekstrak etanol dan fraksi umbi lobak putih.

## Alat dan Bahan
Corong pisah 250 mL (Pyrex), batang pengaduk, botol vial 20 mL, beaker glass, cawan petri,  gunting,  incubator  (Jenaco®),  jangka  sorong,  kapas,  korek  api,  labu  erlenmeyer,  lemari pendingin,  mikropipet  volume  1  µl  –  10  µl,  mikropipet  volume  10  µL  –  100  µL  (Socorex), mikropipet volume 10 µL – 1000 µL (Socorex), mikroplate, neraca analitik, ose, oven (Memmert 200  dan  Memmert  400-800),  paper  disc,  pembakar  bunsen,  penangas  air,  pinset,  pipet,  rotary evaporator  (BIBBY  RE  200B  dan  IKA®  RV10  Basic),  spatel,  spektrofotometri  UV,  tabung reaksi,  tip  mikropipet,  vortex  mixer  (Health®  HVM-300)  dan  water  bath  (SMIC  Thermostatic Water Bath).
Umbi  lobak  putih,  etanol  96%,  media  Mueller  Hinton  Agar  (MHA),  MHA,  media Nutrient  Broth  (NB),  antibiotik  kloramfenikol,  DMSO  10%,  akuades,  alkohol  70%,  alumunium foil,  biakan  murni Staphylococcus  aureus ,  ammonia,  kloramfenikol,  reagen  mayer,  reagen dragendorff,  reagen  wagner,  pereaksi  Lieberman  burchard,  serbuk  magnesium,  larutan  besi  (III) klorida, asam klorida 2 N, metanol, kloroform.

## Prosedur Kerja

## A. Ekstraksi
Ekstraksi  sampel  dilakukan  dengan  cara  maserasi.  Sampel  sebanyak  100  gram direndam  dengan  1  liter  etanol  96%  di  dalam  botol  gelap  selama  3  hari  sambil  diaduk sesekali  dan  disimpan  pada  tempat  yang  terlindung  dari  cahaya.  Kemudian  dilakukan penyariaan  dan ampasnya  dimaserasi  kembali  selama  3  hari  (Indarto,  Narulita,  Anggoro, &  Aulia,  2019)  Hasil  maserasi  yaitu  maserat  dipekatkan  menggunakan  alat  rotary evaporator sampai diperoleh ekstrak kental umbi lobak putih.

## B. Skrinning Fitokimia

## 1. Alkaloid
Sebanyak  1  mg  ekstrak  etanol  umbi  lobak  putih  dimasukkan  ke  dalam  3 tabung  reaksi,  kemudian  ditambahkan  kloroform  sebanyak  5  tetes  pada  masing- masing  tabung  reaksi.  Tabung  1  ditambahkan  pereaksi  mayer  dan  jika  terbentuk endapan  warna  putih  maka  positif.  Tabung  2  ditambahkan  pereaksi  dragendorff, jika positif maka akan terbentuk endapan jingga, kemudian tabung 3 ditambahkan pereaksi  wagner  dan  terbentuknya  endapan  coklat  menunjukkan  positif  (Santoso, Sudarsono, Nugroho, & Murti, 2017).

## 2. Flavonoid
Sebanyak  1  mg  ekstrak  etanol  umbi  lobak  putih  ditempatkan  pada  plat tetes,  lalu  dimasukkan  10  tetes  methanol,  diaduk  menggunakan  spatula  sampai larut. Selanjutnya ditambahkan 6 potongan pita magnesium dan 4 tetes HCl pekat ke  dalam  campuran.  Timbulnya  warna  kuning,  biru,  jingga  maupun  merah menunjukkan hasil positif.

## 3. Tanin
Sebanyak  1  mg  ekstrak  etanol  umbi  lobak  putih  dimasukkan  ke  dalam tabung  reaksi,  kemudian  ditambahkan  3  tetes  FeCl3  1%  ke  dalam  tabung  reaksi. Hasil positif dapat dilihat berdasarkan terbentuknya warna pada sampel yaitu biru tua dan hitam kehijauan (Anggraeni, Fasya, Abidin, & Hanapi, 2014).

## 4. Saponin
Sebanyak  1  mg  ekstrak  etanol  umbi  lobak  putih  diletakkan  pada  tabung reaksi,  lalu  ditambahkan  5  mL  aquades  dan  digoyang  selama  1  menit.  jika terbentuk  buih,  ditambahkan  4  tetes  larutan  HCl  1  M.  Jika  tidak  ada  buih, dilanjutkan  pemanasan  ±  3  menit.  kemudian  dibiarkan  dingin  lalu  dikocok  kuat- kuat.  Terbentuknya  buih  stabil  dalam  waktu  ±  10  menit  menandakan  terdapat senyawa saponin dalam sampel.

## 5. Terpenoid dan Steroid
Sebanyak  1  mg  ekstrak  etanol  umbi  lobak  putih  ditambahkan  asam  asetat anhidrat  dan  asam  sulfat  pekat.  Uji  positif  menunjukkan  golongan  senyawa terpenoid  dengan  terbentuknya  warna  merah  keunguan  dan  warna  biru,  untuk steroid berwarna hijau.

## C. Fraksinasi
Fraksinasi  ekstrak  umbi  lobak  putih  dengan  metode  corong  pisah.  Ekstrak  kental diencerkan terlebih dahulu menggunakan etanol 96% sebanyak 20 mL dan di aduk sampai homogen, kemudian ad akuades 100 mL, selanjutnya dimasukan kedalam corong pisah, di tambahkan  pelarut  heksana  sebanyak  100  mL,  kemudian  di  homogenkan  dan  didiamkan sampai  terlihat  batas  pisah  antara  kedua  pelarut  tersebut.  Setelah  terpisah  fraksi  heksana dan fraksi air di keluarkan dari corong pisah. Sisa fraksi air di tambah etil asetat 100 mL, kemudian di homogenkan dan didiamkan sampai terlihat batas pisah antara kedua pelarut tersebut,  setelah  setelah  terpisah  fraksi  etil  asetat  dan  fraksi  akuades  di  keluarkan  dari corong  pisah.  Hasil  fraksinasi  dari  masing-masing  pelarut  di  pekatkan  menggunakan
rotary  evaporator  pada  suhu  40oC  hingga  pelarut  hampir  teruapkan  semua.  Fraksi  kental yang  di  peroleh  kemudian  dikeringkan  menggunakan  waterbath  kemudian  dihitung rendemen masing-masing fraksi pekat (Keumala, Sukmiwati, & Diharmi, 2021).

## D. Penentuan Uji Aktivitas Antibakteri dengan Metode Kertas Cakram
Kultur bakteri Staphylococcus aureus diambil sebanyak 20 µL lalu dituangkan ke dalam  media  MHA  dan  dihomogenkan,  kemudian  didiamkan  selama  15-20  menit  agar bakteri  terserap  seluruhnya  ke  dalam  media.  Selanjutnya  kertas  cakram  diambil  secara aseptis  menggunakan  pinset  yang  telah  disterilkan.  Kertas  cakram  tersebut  dicelupkan selama  1  jam  ke  dalam  masing-masing  variasi  konsentrasi  ekstrak  umbi  lobak  putih  dan kontrol  positif,  kemudian  diletakkan  pada  media  yang  berisi  bakteri  uji.  Variasi konsentrasi  ekstrak  umbi  lobak  putih  yang  digunakan  yaitu  20  mg/mL,  40  mg/mL,  60 mg/mL,  80  mg/mL,  100  mg/mL  dan  kloramfenikol  sebagai  kontrol  positif.  Media diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 o C. setelah media diinkubasi selama 24 jam maka zona bening yang terbentuk diamati pertumbuhannya.

## E. Penentuan Niali KHM dan KBM
Metode  yang  digunakan  untuk  menilai  KHM  dan  KBM  ekstrak  etanol  dan  fraksi umbi  lobak  putih  yaitu  metode  makrodilusi.  Pertama,  disiapkan  larutan  pengenceran ekstrak  dan  fraksi  dengan  konsentrasi  2  mg/mL,  4  mg/mL,  6  mg/mL,  8  mg/mL,  10 mg/mL, 20 mg/mL, 30 mg/mL dan 40 mg/mL. Microplate terdiri dari 6 kolom dan 4 baris dengan  total  keseluruhan  terdapat  24  well  /  sumuran.  Kemudian  sebanyak  50  µL  tiap konsentrasi yang telah diencerkan dimasukkan pada kolom. Media MHA yang masih cair ditambahkan ke dalam well yang telah berisi konsentrasi ekstrak dan fraksi sebanyak 950 µL,  lalu  dihomogenkan.  Agar  dibiarkan  memadat  selama  30  menit  pada  suhu  ruang. Setelah campuran zat aktif dan media MHA memadat, sebanyak 3 µL suspensi bakteri 107 CFU/mL  dan  diinokulasikan  pada  masing-masing  media  agar  padat  dengan  cara menyentuhkan ujung tip pada permukaan media MHA padat. Diamkan selama 15 menit, lalu  diinkubasi  pada  suhu  37 o C  selama  18  jam  (Golus,  Sawicki,  Widelski,  &  Ginalska, 2016).
Kemudian,  pada  microplate  diamati  dan  diindikasikan  dengan  adanya  kekeruhan dan  endapan  pada  dasar  tabung  mikrodilusi.  Nilai  KHM  ditentukan  pada  hari  pertama setelah  inkubasi  dan  nilai  KBM  pada  hari  kedua  inkubasi.  KHM  dapat  diduga  berada konsentrasi  yang  menghambat  pertumbuhan  bakteri  sedangkan  KBM  adalah  konsentrasi terendah  pada  larutan  ekstrak  dan  fraksi  umbi  lobak  putih  yang  tidak  terdapat  endapan sama  sekali.  KHM  ditentukan  berdasarkan  konsentrasi  terkecil  dari  setiap  ekstrak  yang dapat  menghambat  90%  pertumbuhan  bakteri  uji,  sedangkan  KBM  adalah  konsentrasi terendah pada larutan ekstrak umbi lobak putih yang seluruh bakteri dalam kultur terbunuh (99%). (CLSI, 2020).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## A. Ekstraksi
Ekstraksi  umbi  lobak  putih  dilakukan  dengan  menggunakan  metode  maserasi.  Filtrasi dibuat  menggunakan  metode  maserasi  dengan  menggunakan  pelarut  etanol  96%.  Pemilihan pelarut yang akan digunakan harus diperhatikan sifat kandungan kimia (metabolit sekunder) yang akan  diekstraksi.  Pelarut  etanol  96%  dipilih  karena  mempunyai  gugus  polar  sekaligus  gugus nonpolar  sehingga  dapat  melarutkan  senyawa-senyawa  kimia  yang  bersifat  polar,  nonpolar maupun semipolar (Adibi, 2017). Selain itu, pelarut etanol 96% juga memiliki kadar air rendah,
dapat mencegah pertumbuhan jamur yang akan mengganggu proses maserasi (Susanti & Ningsih, 2016)  Adapun  dari  100  gram  serbuk  umbi  lobak  putih  dalam  1  L  etanol  96%  dihasilkan  40,59 gram ekstrak kental umbi lobak putih.
Gambar 1. Ekstrak Etanol Umbi Lobak Putih

## B. Skrinning Fitokimia
Pengujian  skrining  fitokimia  bertujuan  untuk  memberi  gambaran  awal  mengenai kandungan  golongan  senyawa  metabolit  sekunder  yang  terdapat  dalam  ekstrak  maupun  fraksi. Kandungan metabolit sekunder ekstrak etanol umbi lobak putih dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil Skrinning Fitokimia Ekstrak Umbi Lobak Putih
Golongan Senyawa Hasil uji Alkaloid + Flavonoid + Saponin + Tanin + Steroid & Triterponoid -

## C. Fraksinasi
Fraksinasi  ekstrak  etanol  umbi  lobak  putih  pada  penelitian  ini  menggunakan  metode ekstraksi  cair-cair  dengan  corong  pisah. Prinsip  pemisahan  pada  proses  fraksinasi  menggunakan corong  pisah  yaitu  didasarkan  oleh  perbedaan  massa  jenis  kedua  fraksi  serta  adanya  perbedaan tingkat kepolaran. Fraksi yang mempunyai massa jenis lebih kecil akan berada pada fese atas dan fraksi  yang  mempunyai  massa  jenis  lebih  besar  terdapat  pada  fase  bawah  (Budilaksono, Wahdaningsih, & Fahrurroji, 2014).
Berdasarkan  persen  rendemen  yang  dihasilkan,  fraksi  dengan  hasil  rendemen  terbesar dibanding  dengan  pelarut  lain  adalah  fraksi  air  yaitu  48,67%.  Menurut  Kant,  Shukla,  &  Shukla (2018), tingginya rendemen fraksi air dari sampel buah kemungkinan disebabkan karena adanya beberapa  senyawa  dengan  berat  molekul  tinggi  yang  larut  air  seperti  jenis  gula,  glikosida, karbohidrat, dan komponen fenol yang strukturnya kompleks. Fraksi kental yang didapatkan dapat dilihat pada gambar 2.
Tabel 2. Hasil Rendemen Fraksi Umbi Lobak Putih Fraksi Berat ekstrak Berat fraksi Rendemen (%) Air 50 gram 24,3351 48,67% n-Heksan 50 gram 0,7017 2,017% Etil asetat 50 gram 1,2508 2,5016%

## Gambar 2. Fraksi Kental Umbi Lobak Putih

## D. Uji Aktivitas Antibakteri
Aktivitas  antibakteri  adalah  senyawa  aktif  atau  bahan  yang  dapat  membunuh  atau menghambat aktivitas bakteri. Senyawa aktif yang dapat menghambat aktivitas antibakteri terdiri dari  beberapa  kelompok,  salah  satunya  yaitu  senyawa  Flavonoid.  Senyawa  tersebut  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri  Gram  positif  dan  Gram  negatif  selain  itu  juga  sebagai antijamur (Memar et al ., 2017).
Digunakan  antibiotik  kloramfenikol  sebagai  pembanding  antibiotik  yang  merupakan antibiotik  spektrum  luas  yaitu  dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri  gram  positif  dan  gram negatif. Selain itu, penggunaan kloramfenikol sebagai kontrol positif karena sifatnya yang stabil dan dapat berdifusi dengan baik pada media pertumbuhan sehingga zona hambat yang terbentuk akan  lebih  jelas  untuk  diamati  (Ardhuha,  2010).  Konsentrasi  kloramfenikol  yang  digunakan sebagai pembanding antibiotik adalah 30 µg/mL. Adapun konsentrasi bakteri  uji yang digunakan sebesar 1x10 8 yang disesuaikan dengan larutan standar 0,5 McFarland yang diukur menggunakan spektrofotometer  pada  panjang  gelombang  625  nm.  Hasil  pengujian  antibakteri  ekstrak  etanol umbi lobak putih dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 3. Hasil Uji Aktivitas Ekstrak Etanol Umbi Lobak Putih Bakeri Konsentrasi (mg/mL) Pengulangan 2 kali Interpretasi Daya Hambat Rerata Zona Hambat (mm) Staphylacoccus Aureus 100 6,76 Lemah 80 6,75 Lemah 60 7,25 Lemah 40 9,25 Lemah 20 9 Lemah Kontrol kloramfenikol 17,5 Sedang Kontrol DMSO 0 -

## Gambar 3. Aktivitas Antibakteri Duplo Ekstrak Etanol Umbi Lobak Putih
Hasil  rendemen  fraksi  yang  didapat  pada  Tabel  2  dilakukan  pengujian  aktivitas antibakteri dengan metode Kirby baure dan didapatkan daya hambat paling besar yaitu fraksi etil asetat. Hasil pengujian antibakteri fraksi umbi lobak putih dapat dilihat pada Tabel 4.
Tabel 4. Hasil Uji Aktivitas Fraksi  Umbi Lobak Putih Fraksi Uji Konsentrasi (mg/mL) Diameter Daya Hambat (mm) Rata-rata Zona Hambat (mm) Intepretasi Daya Hambat I II 100 0 6 3 Lemah 80 6 0 3 Lemah Air 60 7 6 6,5 Lemah 40 9 6 7,5 Lemah 20 8 7 7,5 Lemah 100 0 0 0 - 80 0 0 n- Heksan 60 0 0 40 0 0 20 0 0 100 8 6 7 Lemah 80 7 7 7 Lemah Etil asetat 60 8 7 7,5 Lemah 40 8 9 8,5 Lemah 20 8 8 8 Lemah
Gambar 4. Hasil Aktivitas Antibakteri Fraksi Air Umbi Lobak Putih
Gambar 5. Hasil Aktivitas Antibakteri Fraksi n-Heksan Umbi Lobak Putih
Gambar 6. Hasil Aktivitas Antibakteri Fraksi Etil Asetat Umbi Lobak Putih Keterangan : Interpretasi Daya Hambat (CLSI, 2020),
≤ 14 mm : Lemah
15-19 mm
: Sedang ≥ 20 mm
: Sangat Kuat
Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanol dan fraksi umbi lobak putih mampu menghambat pertumbuhan bakteri Staphylacoccus aureus , namun kekuatan daya hambatnya lebih rendah  dibandingkan  dengan  antibiotik  kloramfenikol.  Zona  hambat  yang  dibentuk  oleh  ekstrak terjadi akibat kandungan senyawa aktif yang dimiliki ekstrak etanol dan fraksi umbi lobak putih dapat bekerja dalam menghambat pertumbuhan bakteri (Nweze & Nwafor, 2014).
Rendahnya kemampuan dalam menghambat pertumbuhan bakteri uji pada ekstrak etanol umbi lobak putih jika dibandingkan dengan Kloramfenikol sebagai sediaan antibiotik komersial, diduga terkait dengan tingkat purifikasi yang masih rendah pada ekstrak. Hal ini mengakibatkan senyawa  aktif  memiliki  konsentrasi  yang  lebih  kecil  dari  sediaan  komersial  untuk  kadar  yang sama.  Selain  itu  bakteri Staphylacoccus  areus mempunyai  susunan  dinding  sel  dengan  lapisan peptidoglikan  tebal  sebagai  bakteri  gram  positif  dapat  menyebabkan  ekstrak  etanol  umbi  lobak putih  lebih  sulit  menembus  dinding  sel  bakteri  dibanding  dengan  bakteri  gram  negatif  yang memiliki lapisan peptidoglikan lebih tipis (Ulul et al ., 2020).
Keefektifitasan  kerja  dan  penyerapan  berbagai  senyawa  antibakteri  yang  terkandung dalam umbi lobak putih juga tidak terlepas dengan larutan ekstrak yang digunakan. Ekstrak etanol umbi lobak putih memiliki senyawa aktif yang bersifat polar dimana akan lebih mudah dilarutkan oleh  senyawa  polar  seperti  pelarut  DMSO.  Pelarut  DMSO  mempunyai  kadar  kepolaran  yang
tinggi dibandingkan pelarut air, sehingga lebih mudah untuk menarik senyawa bioaktif sekunder yang terkandung pada umbi lobak putih (Vinoth, Manivasagaperumal, & Balamurugan, 2012).

## E. Uji KHM dan KBM
Pada  penelitian  ini  Konsentrasi  Hambat  Minimum  (KHM)  dan  Konsentrasi  Bunuh Minimum (KBM) dilakukan menggunakan metode mikrodilusi padat pada konsentrasi 2 mg/mL, 4  mg/mL,  6  mg/mL,  8  mg/mL,10  mg/mL,  20  mg/mL,  30  mg/mL  dan  40  mg/mL,  serta  DMSO sebagai  kontrol  negatif  dan  kloramfenikol  sebagai  kontrol  positif  yang  diujikan  terhadap  bakteri Staphylacoccus  aureus .  Konsentrasi  Hambat  Minimum  (KHM)  adalah  konsentrasi  terendah  dari agen  antimikroba  yang  dapat  mencegah  pertumbuhan  mikroorganisme  yang  terlihat  dalam  uji mikrodilusi  padat  sedangkan  Konsentrasi  Bunuh  Minimum  (KBM)  adalah  konsentrasi  terendah pada  larutan  ekstrak  etanol  dan  fraksi  umbi  lobak  putih  dimana  seluruh  bakteri  dalam  kultur terbunuh (CLSI, 2012).
Pemilihan metode mikrodilusi padat dalam penentuan KHM dan KBM terkait kelarutan sampel  ekstrak  yang  digunakan  tidak  secara  sempurna  terlarut  dalam  pelarut,  sehingga  tidak memungkinkan  jika  menggunakan  metode  mikrodilusi  cair  yang  penentuannya  berdasarkan kekeruhan secara visual pada well yang diduga sebagai pertumbuhan bakteri. Ekstrak yang tidak larut  memungkinkan  memberikan  kekeruhan  visual  palsu,  sehingga  dapat  mempengaruhi  hasil pengamatan.  Sedangkan  pada  mikrodilusi  padat,  prinsip  penentuan  KHM  dilihat  dari  well  yang tidak terdapat pertumbuhan bakteri sama sekali pada inkubasi hari pertama, dan penentuan KBM dilihat dari konsentrasi minimum pada well yang tetap jernih tidak ada pertumbuhan bakteri pada inkubasi hari kedua. Prinsip tersebut memudahkan mendeteksi media dengan kasat mata, sehingga dalam  kasus  media  yang  berwarna  ataupun  buram,  penenetuan  pertumbuhan  bakteri  pada permukaan agar dapat dinilai dengan lebih jelas dan sederhana tanpa perlu melakukan subkultur (Tan & Lim, 2015). Hasil uji KHM dan KBM dapat dilihat pada Tabel 5 & 6.
Gambar 7. (A) Hasil Uji KHM (B) KBM Ekstrak dan Fraksi Etil Asetat
Tabel 5. Hasil Uji KHM Ekstrak dan Fraksi Etil Asetat
Uji Konsentrasi (mg/mL) Keterangan Ekstrak Etanol Umbi Lobak Putih 2 Tumbuh bakteri 4 Tumbuh bakteri 6 Tumbuh bakteri 8 Tumbuh bakteri
10 Tumbuh bakteri 20 Tumbuh bakteri 30 Tumbuh bakteri 40 Tumbuh bakteri Kontrol (+) Tumbuh bakteri Kontrol (-) Jernih Fraksi Etil Asetat Umbi Lobak Putih 2 Tumbuh bakteri 4 Tumbuh bakteri 6 Tumbuh bakteri 8 Tumbuh bakteri 10 Jernih 20 Jernih 30 Jernih 40 Jernih Kontrol (+) Tumbuh bakteri Kontrol (-) Jernih Tabel 6. Hasil Uji KBM Ekstrak dan Fraksi Etil Asetat Uji Konsentrasi (mg/mL) Keterangan Ekstrak Etanol Umbi Lobak Putih 2 Tumbuh bakteri 4 Tumbuh bakteri 6 Tumbuh bakteri 8 Tumbuh bakteri 10 Tumbuh bakteri 20 Tumbuh bakteri 30 Tumbuh bakteri 40 Tumbuh bakteri Kontrol (+) Tumbuh bakteri Kontrol (-) Jernih Fraksi Etil Asetat Umbi Lobak Putih 2 Tumbuh bakteri 4 Tumbuh bakteri 6 Tumbuh bakteri 8 Tumbuh bakteri 10 Tumbuh bakteri 20 Jernih 30 Jernih 40 Jernih Kontrol (+) Tumbuh bakteri Kontrol (-) Jernih
Pada  pengujian  ini  tidak  ditemukan  KHM  dan  KBM  pada  ekstrak  etanol  umbi  lobak putih yang ditandai dengan tumbuhnya bakteri pada semua konsentrasi ekstrak etanol umbi lobak putih.  Hal  ini  disebabkan  karena  pada  ekstrak  etanol  umbi  lobak  putih  senyawa  yang  memiliki
aktivitas  antibakteri  masih  tersebar  luar  sedangkan  pada  fraksi  senyawa  yang  terkandung  lebih jelas  berdasarkan  tingkat  kepolarannya.  Adapun  ekstrak  etanol  umbi  lobak  putih  ini  sebagai antibakteri  dengan  aktivitas  bakteriostatik,  yaitu  memiliki  aktivitas  menghambat  pertumbuhan bakteri  namun  tidak  memiliki  aktivitas  membunuh  bakteri  (Setia,  2019).  Sedangkan  pada pengujian  fraksi  etil  asetat  didapatkan  hasil  KHM  pada  konsentrasi  10  mg/mL  yang  ditandai dengan tidak tumbuhnya bakteri di hari inkubasi pertama dan tumbuhnya bakteri pada konsentrasi 10  mg/mL  pada  inkubasi  hari  kedua.  Sedangkan  nilai  KBM  fraksi  etil  asetat  didapatkan  pada konsentrasi 20 mg/mL yang ditandai dengan tidak tumbuhnya bakteri pada inkubasi hari pertama dan kedua. Hasil ini dapat dilihat pada gambar 7 dan 8.
Ditemukan  KHM  dan  KBM  menunjukkan  bahwa  fraksi  etil  asetat  umbi  lobak  putih bersifat  bakteriostatik,  artinya  dengan  konsentrasi  10  mg/mL  bakteri  dapat  dihambat pertumbuhannya  dan  bersifat  bakterisidal  yang  dimana  dengan  konsentrasi  20  mg/mL  bekerja mematikan  bakteri  atau  memiliki  aktivitas  membunuh  bakteri.  Kemampuan  bakteriostatik  dan bakterisidal  ini  kemungkinan  berasal  dari  senyawa  yang  terkandung  di  dalam  fraksi  etil  asetat umbi lobak putih yang dapat menembus dinding sel bakteri (Ulul et al ., 2020).

## SIMPULAN DAN SARAN

## Simpulan
1. Ekstrak  etanol  dan  fraksi  umbi  lobak  putih  ( Raphanus  sativus L . )  memiliki  aktivitas antibakteri  terhadap  bakteri Staphylacoccus  aureus dengan  daya  hambat  9,25  mm  pada ekstrak etanol umbi lobak putih, 7,5 mm pada fraksi air dan 8,5 pada fraksi etil asetat umbi lobak putih.
2. Ekstrak etanol umbi lobak putih tidak ditemukan nilai KHM dan KBM nya, sedangkan pada fraksi  etil  asetat  ekstrak  etanol  umbi  lobak  putih  terdapat  nilai  KHM  pada  konsentrasi  10 mg/mL dan KBM pada konsentrasi 20 mg/mL.

## Saran
1. Dilakukan uji aktivitas antibakteri pada bakteri lainnya selain bakteri yang diujikan dalam penelitian ini.
2. Penentuan jumlah pergantian pelarut setiap fraksinasi dilakukan berdasarkan pada hasil uji KLT untuk memastikan sudah tidak ada senyawa pada ekstrak umbi lobak putih yang di fraksinasi sehingga menghasilkan fraksi yang lebih banyak.

## DAFTAR PUSTAKA
Adibi,  S.  (2017).  Aktivitas  Antioksidan  dan  Antibakteri  Ekstrak  Daun  Strobilanthes  crispus  Bl (Keji Beling) Terhadap Staphylacoccus aureus dan Escherichia coli. Alotrop , 148-154. Anggraeni, N., Fasya, G., Abidin, M., & Hanapi, A. (2014). Uji Aktivitas Antioksidan Fraksi Etil Asetat,  Kloroform,  Petroleum  Eter  dan  n-Heksan  Hasil  Hidrolisis  Ekstrak  Metanol Mikroalga Chlorella sp. Alchemy , 173-188.
Ardhuha,  F.  (2010).  Uji  Aktivitas  Antimikroba  Ekstrak  Metanol  Daun  Sygyzium  cordatum terhadap Escherichia coli dan Staphylacoccus aureus menggunakan metode Kirby-bauer. Jurnal Ilmiah Mahasiswa Kedokteran Indonesia , 4-6.
Budilaksono, W., Wahdaningsih, S., & Fahrurroji, A. (2014). Uji Aktivitas Antioksidan Fraksi n- Heksana Kulit Buah Naga Merah (Hylocereus lemairei Britton dan Rose) Menggunakan Metode  DPPH  (1,1-Difenil-2-Pikrilhidrazil). Jurnal  Mahasiswa  Farmasi  Fakultas Kedokteran UNTAN , 1-11.
Golus,  J.,  Sawicki,  R.,  Widelski,  J.,  &  Ginalska,  G.  (2016).  The  Agar  Microdilution  Method-  a new  Method  For  Antimicrobial  Susceptibility  Testing  for  Essential  oils  and  Plant Extracts. Journal of Applied Microbiology , 1291-1299.
Indarto,  Narulita,  W.,  Anggoro,  S.  B.,  &  Aulia,  N.  (2019).  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Daun Binahong Terhadap Propionibacterium Acnes. BIOSFER: Jurnal Tadris Biologi , 67-78. Keumala,  T.  S.,  Sukmiwati,  M.,  &  Diharmi,  A.  (2021).  Fraksi  Aktif  Rumput  Laut  Coklat Sargassum  cinereum  sebagai  Antioksidan  dan  Antibakteri. Jurnal  Penelitian  Terapan , 66-74.
Mehraj  J,  A.  M.  (2014).  Staphylacoccus  aureus  Nasal  Carriage  in  a  Random  Simple  of  Non- Hospitalized Adult Population in Nothern Germany. One Plus Journal .
Nweze,  N.,  &  Nwafor,  F.  (2014).  Phytochemical,  Proximate  And  Mineral  Composition  Of  Leaf Extracts Of Moringa Oleifera Lam. From Nsukka, South- Eastern Nigeria . IOSR Journal Of Pharmacyand Biological Sciences. , 99-103.
Paju,  N.,  Yamlean,  P.  V.,  &  Kojong,  N.  (2013).  Uji  Efektivitas  Salep  Ekstrak  Daun  Binahong Anredera  cordifolia  (Ten  Steenis)  pada  kelinci  yang  Terinfeksi  Bakteri  Staphylacoccus aureus. Jurnal Ilmiah Farmasi , 2302-2493.
Rahmadani,  A.,  Budiyono,  B.,  &  Suhartono,  S.  (2017).  Gambaran  Keberadaan  Bakteri Staphylacoccus aureus, Kondisi Lingkungan dan angka Lempeng Total di Udara Ruang Rawat  Inap  RSUD  Prof.  Dr.  M.  A.  Hanafiah  SM  Batusangkar. Jurnal  Kesehatan Masyarakat , 492-501.
Santoso,  B.  S.,  Sudarsono,  Nugroho,  A.  E.,  &  Murti,  Y.  B.  (2017).  Perbandingan  Aktivitas Antioksidan  Antara  Jus  Buah  Mengkudu  (Morinda  citrifolia)  dan  Jus  Rimpang Temulawak (Curcuma xanthorriza). Jurnal Ilmiah Farmasi , 341-349. Singh, P. (2013). Medical and The rapetic Utilities of Raphanus sativus. Journal of Plant, Animal and Environmental Science. .
Susanti,  E.,  &  Ningsih,  T.  S.  (2016).  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Umbi  Lobak  Putih (Raphanus  sativus  L.)  Terhadap  Lima  Bakteri  Patogen  dengan  Metoda  Difusi.  . Enzia Pratiwi Journal Manager , 1-7.
Tan,  J.,  &  Lim,  Y.  (2015).  Antioxidant  and  Tyrosinase  Inhibition  Activity  of the Fertile  Fronds and Rhizomes of Three Different Drynaria Species. BMC Research Notes , 1-6.
Vinoth,  B.,  Manivasagaperumal,  R.,  &  Balamurugan,  S.  (2012).  Phytochemical  Analysis  And Antibacterial  Activity  Of  Moringa  oleifera  Lam. International  Journal  Of  Research  In Biological Sciences , 98-102.
Zeniusa,  p.,  Ramadhian,  r.  M.,  Nasution,  h.  S.,  &  Karima,  N.  (2019).  Uji  Daya  Hambat  Etanol Teh Hijau Terhadap Escherichia coli Secara In Vitro. Majority , 136-143.