Online : http://farmasiindonesia.setiabudi.ac.id/
Efek Antihiperkolesterolemia Ekstrak Etanol Herba Alfafa ( Medicago sativa ) Pada Tikus Putih Jantan
Antihypercholesterolemia Effect Of Ethanol Extract Of Alfafa ( Medicago sativa ) In White Male Rats Ika Puspitaningrum 1* , Lia Kusmita 1 , Wahyuning Setyani 2 1 STIFAR “Yayasan Pharmasi” Semarang,
2 Universitas Sanata Dharma Yogyakarta * korespodensi: ika2vita@gmail.com

## ABSTRAK
Hiperkolesterolemia adalah  kelainan  yang  ditandai  dengan  peningkatan  konsentrasi kolesterol dalam  darah. Alfafa (Medicago  sativa)  merupakan  salah  satu tanaman  yang dipercaya  dapat mengendalikan  kolesterol  darah. Penelitian ini bertujuan  untuk  mengetahui efek antihiperkolesterolemia ekstrak etanol herba Alfafa dan dosis efektifnya.
Uji antihiperkolesterolemia ekstrak  etanol herba Alfafa  menggunakan  tikus  putih  jantan galur Wistar  sebanyak  30  ekor  yang  dibagi  menjadi  6  kelompok.  Kelompok  1  (kontrol  normal) diberikan pakan  standart. Kelompok  2  (kontrol  negatif) diberikan CMC  Na  0,5%.  Kelompok  3 (kontrol  positif) diberikan Simvastatin.  Kelompok  4,  5  dan  6 diberikan ekstrak  etanol herba Alfafa  270,  540  dan  1080  mg/kg  BB.  Semua  perlakuan  diberikan  7  hari  secara  oral.  Induksi hiperkolesterol dengan pakan tinggi lemak yaitu campuran makanan standar tikus dengan 15% lemak  babi  dan  5%  kuning  telur  bebek,  serta  fruktosa 1,8  g/kgBB  tikus.  Induksi  diberikan kepada  semua kelompok selama  50  hari,  kecuali  kontrol  normal.  Pengukuran  kadar  kolesterol total  darah  dilakukan  pada  hari  ke  0,  51  dan  58.  Kadar  kolesterol  yang  diperoleh  dihitung  % penurunan yang selanjutnya diuji statistika dengan SPSS release 16.
Hasil  uji  statistika  menunjukkan  adanya  perbedaan  signifikan  antara  kelompok  kontrol negative, dengan  ekstrak  etanol herba Alfafa  ketiga  dosis. Dan  terdapat  perbedaan  yang signifikan juga dengan kontrol positif dengan ekstrak etanol herba Alfafa ketiga dosis. Hal ini membuktikan bahwa ekstrak etanol herba Alfafa dapat berefek antihiperkolesterolemia, namun belum  sebanding  dengan  Simvastatin. Dosis ekstrak  etanol  herba  Alfafa yang  memberikan efek tertinggi sebagai antihiperkolesterolemia adalah 270 mg/kgBB tikus.
Kata kunci: ekstrak etanol, herba Alfafa, kolesterol

## ABSTRACT
Hypercholesterolemia  is  a  disorder  characterized  by  an  increased  concentration  of cholesterol in the blood. Alfalfa (Medicago sativa) is one of the plants that are believed to control blood  cholesterol. This  study  aims  to  determine antihypercholesterolemia effect  of herb alfafa ethanol extract and the effective dose.
Test antihypercholesterolemia ethanol  extract  of herb alfalfa  using  male  Wistar  rats  as many as 30 individuals were divided into 6 groups. Group 1 (normal control) was given standard feed. Group 2 (negative control) was given CMC Na 0,5%. Group 3 (positive control) was given Simvastatin. Groups 4, 5 and 6 was given herb alfafa ethanol extract 270, 540 and 1080 mg/kg rat.  All  treatments  are  given  7  days  orally.  Induction  hypercholesterolemia  with  high-fat  feed  a mixture of standard rat food with lard and egg  yolk duck (3:1), as well as fructose 1.8 g/kg rat. Induction  was given  to  all  groups  for  50  days,  except  for  the  normal  control.  Measurement  of total blood cholesterol levels was done on days 0, 51 and 58. Cholesterol levels were obtained calculated % decline further tested with SPSS statistical release 16.
The  test  results  showed  a  statistically  significant  difference  between  the  negative  control group  with  the ethanol  extract  of  herb  Alfalfa  three  doses. While  the  comparison  between  the
positive  control  with  the  ethanol  extract  of  the  herb  alfalfa  three  doses  showed  no  significant differences.  It  was  provided that  the  ethanol  extract  of  the  herb  alfalfa  could affected antihypercholesterolemia,  but  not  comparable to Simvastatin.  The  effective  dose  of  ethanol extract of alfalfa as antihypercholesterolemia was 270 mg/kg rat .

## Keywords: ethanol extract, herb alfalfa, cholesterol

## PENDAHULUAN
Kolesterol  adalah  lemak  berwarna kekuningan  dan  berupa  seperti  lilin yang diproduksi oleh tubuh, terutama di dalam  liver  (hati)  (Heslet,  2007).
Kolesterol merupakan bahan
pembangun  esensial  bagi  tubuh  untuk sintesa zat-zat penting, seperti membran  sel  dan  bahan  isolasi  sekitar serat saraf, begitu pula hormon kelamin dan  anak  ginjal,  vitamin  D  serta  asam empedu (Tjay dan Rahardja, 2008).
Sebagian besar kebutuhan kolesterol  tubuh dibuat  oleh  hati,  tetapi tubuh juga mendapat tambahan kolesterol  dari  makanan  seperti  dari kuning  telur,  daging,  ayam,  makanan laut,  susu,  dan  produk  olahan  susu. Kolesterol  yang  berlebihan  di  dalam tubuh atau disebut juga hiperkolesterolemia  tidak  baik  bagi tubuh.  Hiperkolesterolemia  merupakan salah satu penyebab terjadinya
penyakit jantung koroner (PJK).
Penyakit  jantung  koroner  menduduki peringkat  pertama  sebagai  penyebab kematian  akibat  penyakit  jantung  yaitu 80% (Santoso, 2005). Alfafa ( Medicago sativa ) merupakan  salah  satu  tanaman  yang secara empiris dipercaya dapat menurunkan  kadar  kolesterol. Hal  ini disebabkan  oleh  kandungan  senyawa aktif  dalam  Alfafa.  Alfafa  mempunyai kandungan  senyawa  aktif  diantaranya klorofil,  alkaloid  (Bo-Ping  dkk.,  2010), coumestrol  (Hong  dkk.,  2011),  saponin
(Colodny,2001),  dan  flavonoid,  tanin, serta  triterpenoid  (Laurennia,  2016). Fraksi  etil  asetat  Alfafa  telah  terbukti berefek sebagai antiinflamasi (Kusmita, dkk.  2014).  Ekstrak  etanol  Alfafa  juga telah terbukti berefek sebagai imunostimulan (Laurensia, 2016). Berdasarkan  latar  belakang tersebut, penelitian perlu dilakukan untuk membuktikan efek hiperkolesterol Alfafa  ( Medicago  sativa ) serta  dosis efektifnya.

## METODOLOGI

## Bahan
Bahan  utama  adalah herba Alfafa ( Medicago sativa ) tropis yang diperoleh dari  perkebunan  Selopass  Boyolali, larutan  etanol 96%, CMC  Na, aqua destilata ,  minyak  babi,  telur  bebek, fruktosa,  Simvastatin  tablet,  larutan pereaksi kolesterol dari DIASYS ( Diagnostic Systems Holzheim Germany ) terdiri  dari  Good’s  buffer  pH 6-7  50  mmol/l,  fenol  5  mmol/l,  4- aminoantipirin  0,3  mmol/l,  kolesterol esterase  200  U/l,  kolesterol  oksidase 50  U/l,  peroksidase  3  U/l,  dan  standar 200  mg/dl  (2,3  mmol/l),  tikus  putih jantan galur Wistar usia 1-2 bulan.
Alat
Alat yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  seperangkat  alat gelas,  waterbath,  batang  pengaduk, rotary evaporator, timbangan hewan uji, spuit injeksi,
sonde tikus, Spektrofotometer UV-VIS, hematokrit.
Ekstraksi Ditimbang 200  gram  serbuk  herba alfafa, dimaserasi
dengan menggunakan  pelarut  etanol  96% selama  5  hari  dan  diaduk  dengan bantuan  shaker  rotator  selama  2  jam kemudian  didiamkan  selama  24  jam. Dilakukan  penyarian  setelah  24  jam sehingga terpisah antara filtrate (ekstrak  etanol)  dengan  residu.  Residu yang didapat ditambah lagi dengan 500 ml  etanol  96%  dan  dilakukan  proses yang sama selama 5 hari. Semua filtrat dicampur dan dipekatkan dengan rotary evaporator .

## Uji Antihiperkolesterolemia
Disiapkan  30  ekor  tikus  putih jantan galur Wistar berat 150-250 gram. Sebelum perlakuan, tikus terlebih dahulu  diadaptasikan  dalam  kondisi laboratorium selama satu minggu dengan diberi makan yang cukup.
Hewan  percobaan  dibagi  dalam  6 kelompok,  tiap  kelompok  terdiri  dari  5 ekor tikus. Kelompok I (normal)
diberikan pakan  standart  hari  ke 0-57 serta  aqua destilata secara oral.
Kelompok  II (kontrol  negatif)  diberikan diet  lemak  tinggi  berupa  campuran lemak babi dan kuning telur bebek (3:1) dan fruktosa 1,8 g/kgBB tikus hari ke 0- 50, dan suspensi NaCMC 0,5% hari ke 51-57 secara oral. Kelompok III (kontrol positif)  diberikan  diet  lemak  tinggi berupa  campuran  lemak  babi  dan kuning  telur  bebek  (3:1) dan  fruktosa 1,8 g/kgBB  tikus  hari  ke  0-50,  dan Simvastatin  0,9 mg/kgBB  tikus  hari  ke 51-57 secara oral. Kelompok IV, V dan VI  diberikan  diet  lemak tinggi  berupa campuran  lemak  babi  dan  kuning  telur bebek  (3:1) dan  fruktosa  1,8  g/kgBB tikus hari ke 0-50, dan suspensi ekstrak
etanol herba Alfafa 270;  540;  1080 mg/kg  BB  tikus hari  ke  51-57  secara oral.
Pada hari ke 0 (sebelum diberi diet lemak  tinggi dan  fruktosa), 51 dan  58, semua hewan percobaan diambil darahnya  melalui vena optimalis mata. Selanjutnya  darah  didiamkan  selama 15  menit,  disentrifuse  kecepatan  3000 rpm  selama  15  menit,  dan  bagian jernih,  yang  disebut  serum  diambil untuk dilakukan penetapan kadar kolesterol total.

## Pengukuran Kadar Kolesterol Total
Serum  darah  dipipet  dengan  pipet mikro  sebanyak  0,01  ml  dimasukkan dalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan larutan pereaksi kolesterol sebanyak  1  ml,  lalu  dicampurkan dengan  vortex,  dan  diinkubasi  selama 20  menit  pada  suhu  kamar.  Serapan diukur  pada  panjang  gelombang  546 nm  terhadap  blanko.  Sebagai  blanko digunakan pereaksi kolesterol 1 ml dan akuades  0,01  ml.  Pengukuran  serapan standar  (sebanyak  0,01  ml)  sama dengan  pengukuran  serapan  kolesterol total. Hasil yang terbaca dalam Microlab  300  berupa  kadar  kolesterol total (mg/dl).

## Analisa Data
Data  kadar  kolesterol  total  yang diperoleh  selanjutnya  dihitung  persen penurunan  untuk  melihat  besarnya penurunan senyawa uji. Persen penurunan kadar kolesterol total dianalisis  statistika  dengan  SPSS  versi 16.0 taraf kepercayaan 95%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek antihiperkolesterolemia dan dosis
efektif herba Alfafa  (Medicago  sativa). Simplisia Alfafa yang  telah  diperoleh dilakukan  maserasi dengan pelarut etanol  96% guna  menarik  kandungan zat  aktif  baik  polar  maupun  semipolar dalam Alfafa. Maserasi dilakukan selama 5 hari dan filtrat yang diperoleh dipekatkan dengan rotary evaporator. Ekstrak etanol herba Alfafa
selanjutnya diuji efek antihiperkolesterol pada  hewan  uji.  Hewan  uji  yang digunakan  adalah  tikus  galur  Wistar usia 1-2 bulan. Awal perlakuan seluruh tikus  dikondisikan  menjadi  keadaan hiperkolesterolemia. Induksi yang
digunakan  adalah  pemberian  lemak babi  dan  kuning  telur  bebek,  serta fruktosa  1,8  g/kgBB  tikus. Induksi
dilakukan selama 50 hari agar peningkatan  kadar  kolesterol  total terjadi  secara  signifikan.  Hasil  yang diperoleh terdapat perbedaan signifikan kadar kolesterol total seluruh hewan uji antara  hari  ke 0  (awal)  dibandingkan hari  ke  50  (induksi),  kecuali kelompok normal. Hal  ini  menujukkan bahwa induksi diet lemak tinggi berupa minyak babi  dan  kuning  telur  bebek serta fruktosa  dapat  menyebabkan  keadaan hiperkolesterol secara signifikan.
Minyak  babi  dapat meningkatkan kadar  kolesterol  karena kandungan asam  lemak  yang  terdapat  dalam minyak  babi  terdiri  dari  saturated  fats sebesar  39  gram,  monounsaturated  fat sebesar  45  gram,  polyunsaturated  fat sebesar  11  gram  serta  kolesterol sebesar  95  mg  (Hebean  et  al.,  2005). Sedangkan kuning telur bebek mengandung  lemak  yang terikat  dalam bentuk  lipoprotein  terdiri dari  85% lemak dan 15% protein (Ariyani, 2006).
Pemberian  fruktosa  juga  dapat meningkatkan  kadar  kolesterol  total dalam darah. Pemberian fruktosa secara  signifikan  meningkatkan  LXRα, dan  sterol  receptor  element  binding protein  1-C  (SREBP-1),  merupakan faktor yang mempunyai peranan dalam mengaktifkan  de  novo  lipogenesis (DNL).  SREBP-1  merupakan  faktor transkripsi  yang  meregulasi  biosintesis asam  lemak  dan  kolesterol.  SREBP-1 berikatan  dengan  sterol  responsive elements  (SRE)  dan  mengaktifkan serangkaian  enzim  yang  terlibat  dalam biosintesis  kolesterol  seperti  HMG-CoA reduktase  dan  fatty acid  sintase
(Prahastuti, 2011). Setelah tikus menjadi
hiperkolesterol,  seluruh  tikus  diberi perlakuan  CMC  Na  0,5%  (kontrol negatif),  Simvastatin  (kontrol  positif), dan  suspensi  ekstrak  etanol  herba Alfafa  dosis  270,  540  dan  1080  mg/kg BB  tikus  selama  7  hari.  Selain  itu  juga terdapat  kelompok  normal.  Kelompok kontrol  normal  bertujuan  untuk  melihat kadar  kolesterol  total  hewan  uji  normal dan pengaruh lingkungan serta stressing  terhadap  kadar  kolesterol total  hewan  uji  selama  perlakuan.  Hari ke 7 seluruh kelompok perlakuan diukur kadar  kolesterol  total  sebagai  kadar perlakuan.  Hasil kadar  kolesterol  total awal,  induksi  dan  perlakuan  dapat dilihat pada tabel 1.
Berdasarkan  tabel  I,  kelompok kontrol negatif menunjukkan perbedaan signifikan  terhadap  ketiga  kelompok dosis  ekstrak  etanol  herba  Alfafa.  Hal ini  membuktikan  bahwa  ekstrak  etanol herba Alfafa berefek.
Tabel 1. Rerata Kadar Kolesterol Total (mg/dl)  SD, Persentase Kenaikan dan Persentase Penurunan Seluruh Kelompok Perlakuan Kelompok Kadar Kolesterol Total (mg/dl) % Kenaikan % Penurunan H0 H51 H58 Normal 85,37  4,7 103,67  4,2 102,80  4,3 21,54  3,3 4,79  0,8 CMC  Na  0,5% (Kontrol -) 77,21  9,4 278,09  5,1 275,70  3,9 264,33  43,2 1,19  0,6 b Simvastatin (Kontrol +) 68,96  11,7 285,02  5,9 96,16  4,7 322,09  66,3 87,58  6,0 a Alfafa 270 mg/kgbb tikus 73,11  12,1 273,49  47,0 190,85  4,4 288,58  111,2 36,97  18,7 ab Alfafa 540 mg/kgbb tikus 76,16  10,8 230,12  44,3 175,46  5,3 211,60  94,6 30,5418,2 ab Alfafa 1080 mg/kgbb tikus 68,92  15,8 267,20  45 166,85  3 310,90  128,7 47,10  16,1 ab
Keterangan:
a: berbeda bermakna (p<0,05) terhadap kelompok negatif dengan uji Mann Whitney b: berbeda bermakna (p<0,05) terhadap kelompok positif dengan uji Mann Whitney
antihiperkolesterolemia dengan  dosis yang mampu memberikan efek terbesar adalah 270 mg/kgBB tikus. Dosis efektif merupakan  dosis  terkecil  yang  telah dapat  berefek  antihiperkolesterolemia. Namun  efek antihiperkolesterolemia
ekstrak  etanol herba Alfafa  belum
sebanding dengan kontrol positif Simvastatin. Simvastatin mempunyai
efek antihiperkolesterolemia yang  lebih  kuat dibanding  ekstrak  etanol herba Alfafa. Hal  ini  mungkin  disebabkan  masih banyaknya  kandungan  senyawa  aktif dalam ekstrak etanol herba Alfafa yang mungkin  dapat  saling berinteraksi.
Ekstrak etanol Alfafa berefek antihiperkolesterolemia diduga  karena adanya  kandungan    flavonoid,  saponin
dan tanin. Flavonoid mempunyai mekanisme  dalam  menurunkan  kadar kolesterol  total  dalam  tubuh  dengan cara  menghambat  enzim  HMG-CoA reduktase  (Fajrin,  2010). Saponin  dan tanin dapat berfungsi sebagai penghambat  aktivitas  enzim  lipase pankreas  (Birari  and  Bhutani,  2007; Martins et al ., 2009). Selain itu, saponin dapat  menurunkan  kadar  kolesterol total  yang  disebabkan  karena  aksi saponin  seperti  resin.  Saponin  mampu mereduksi  sirkulasi  enterohepatik  dari asam  empedu,  sehingga  konversi  dari kolesterol menjadi asam empedu ditingkatkan di dalam hati yang menghasilkan  efek  hipokolesterolemia (Umbare, et al. , 2009).
Gambar 1. Diagram % Kenaikan Kadar Kolesterol Total Setelah Induksi dan % Penurunan Kadar Kolesterol Setelah Perlakuan Senyawa Uji

## KESIMPULAN
Ekstrak etanol herba Alfafa ( Medicago  sativa ) terbukti  mempunyai
efek antihiperkolesterolemia dengan dosis ekstrak  yang  memberikan  efek terbesar adalah 270 mg/kgBB tikus.

## DAFTAR PUSTAKA
Ariyani, E. 2006. Penetapan Kandungan  Kolesterol  dalam Kuning Telur pada Ayam Petelur. Temu  Teknis  Nasional
Tenaga  Fungsional  Pertanian Bogor Birari,  RB  &  Bhutani,  KK.  2007 Pancreatic Lipase Inhibitors From Natural Sources: Unexplored Potential. Drug Discovery Today . 12: 879-889 Bo-ping,  W.,  Yong-mei,  Z.,  Zhi-Zhong, C.,  and  Yong-zhil,  T.  2010 Study on Extraction of Flavonoids  in  Alfalfa  Assisted With  Ultrasonic  Wave. Acta Agrestia Sinica . 6
Colodny  LR,  Montgomery  A,  Houston
M. 2001. The  Role  Of  Esterin
Processed  Alfalfa  Saponins  In Reducing  Cholesterol. J  Am
Nutraceutical Assoc. 3
Fajrin,  FA.  2010.  Aktivitas  Ekstrak Etanol Ketan Hitam Untuk Menurunkan  Kadar  Kolesterol. Jurnal  Farmasi  Indonesia . (5): 63-69
Hebean,  V,  Habeanu,  M,  and  Neagu,
M.  2005. Influence  of  The
Unsaturated  Fatty  Acids  From Different  Sources  on  Pig  Meat Quality. Archiva  Zootechnica . 8: 79-86
Heslet,  L.  2007. Kolesterol. Jakarta  : Kesaint Blanc. Terjemahan Anton Adiwiyoto Hong,  Y.,  Wang,  S.,  Hsu,  C., Lin,  B., Kuo,  Y.,  and  Huan,  C.  2011.
Phytoestrogenic  Compounds  in Alfalfa Sprout ( Medicago Sativa ) Beyond  Coumestrol. J.  Agri. Food Chem . 59: 131-137 Kusmita L, Puspitaningrum I, Mutmainah.  2014. Uji  Efek Antiinflamasi  Fraksi  Etil  Asetat
Ekstrak Alfafa ( Medicago sativa )
Pada  Tikus  Putih  Jantan  Yang Diinduksi  Karagenin.  Seminar Nasional Universitas Wahid Hasyim Semarang. Laurensia, V. 2016. Efek Imunomodulator  Ekstrak  Herba Alfafa ( Medicago sativa L) Terhadap  Respon  Imun  Non Spesifik  dan  Respon  Imun
Spesifik  Pada  Mencit  Galur Swiss. Skripsi . Semarang: Stifar “Yayasan Pharmasi”. Martins, F, Noso, TM, Porto, VB, Curiel, A, Gambero, A, Bastos, DHM et al .  2009 Mate  Tea  Inhibits  in vitro  Pancreatic  Lipase  Activity and has Hypolipidemic Effect on High-fat  Diet-Induced  Obese Mice. Obesity Journal . 18: 42-47 Prahastuti, S. 2011. Konsumsi Fruktosa Berlebihan  dapat  Berdampak Buruk bagi Kesehatan Manusia.
JKM . 10(2): 174-189 Santoso  M.,  2005, Penyakit  Jantung
Koroner ,  SMF  Penyakit  Dalam RSUD Koja/Departemen  Ilmu Penyakit Dalam Fakultas Kedokteran Ukrida, Jakarta Tjay,  T.H  dan  Kirana  R.  2008.  Obat- Obat  Penting.  Edisi  V.  Jakarta :
PT Elex  Media Komputindo Umbare  RP,  Mate  GS,  Jawalkar  DV,
Patil  SM,  Dongare  SS.  Quality evaluation of Phyllantus amarus
(Schumach)  leaves  extract  for
its hypolipidemic
activity.
Biology  and  medicine .  2009. 1(4): 1-8 Windarini, L.G.E., Astuti, K.W., Warditiani,  N.K.  2013.  Skrining Fitokimia  Ekstrak  Metanol  Kulit Buah Manggis ( Garcinia mangostana L.). Jurusan
Farmasi  Fakultas  Matematika dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam
Universitas Udayana