## Boosting Sperm Count Using Red Ginger in Mice Induced by Paraquat Dichloride (1.1-dimethyl-4.4 bipyridinium)
Siti Umairoh, *Sutyarso, M. Kanedi, Hendri Busman
Jurusan Biologi, FMIPA, Universitas Lampung Jalan Prof. Dr. Soemantri Brodjonegoro No. 1 Bandar Lampung, Lampung 35145 *Email: sutyarso@yahoo.co.id

## ABSTRACT
Paraquat dichloride (1.1'-dimethyl-4.4'-bipyridinium dichloride) was commonly herbicide used by most farmers in Indonesia. It raises herbicide-free radicals and affects male reproductive organs.  It  caused  infertility  such  as  a  decrease  in  the  number  of  spermatogenic  cells. Fortunately,  red  ginger  has  capable  of  dealing  with  infertility  problems.  This  study  aims  to see whether the ethanol extract of red ginger can increase the number of spermatocyte and spermatid  cells  induced  by  paraquat  dichloride.  This  study  uses  a  completely  randomized design  with  24  male  mice  were  divided  into  six  treatment  groups  with  four  replications. Group K as a control (H2O), J (Ginger 18 mg / ml), Pq (Paraquat 20mg / BB), P1 (Pq 20 mg / BB +  EEJM 6 mg / ml), P2 (Paraquat 20mg / BB +  EEJM 12 mg / ml) and P3 (Paraquat 20mg  /  BB  +  EEJM  18  mg  /  ml).  Paraquat  is  given  2  times  a  week  for  21  days,  while  the ethanol  extract  of  red  ginger  added  for  35  days.  The  number  of  cells  spermatocyte  and spermatid  cells  of  male  mice  and  performed  analysis  of  variance  (ANOVA)  and  Least Significant  Difference  Test  (BNT)  level  of  5%  observed  as  the  parameter.  The  results showed  that  ethanol  extract  of  red  ginger  6,  12  and  18  mg/ml  increased  the  number  of spermatocyte and spermatid cells of male mice induced by paraquat dichloride.
Keywords : infertility,  red  ginger,  spermatogenic  cells, Mus  musculus L ., paraquat dichloride

## PENDAHULUAN
Penerapan  agrokimia  berupa  peng- gunaan  herbisida  di  bidang  pertanian merupakan  suatu  cara  yang  lazim dilakukan  oleh  para  petani.  Hal  itu merupakan  salah  satu  upaya  dalam pengendalian hama maupun pemupukan tanaman untuk meningkatkan hasil pertanian yang optimal.
Petani
merupakan  kelompok  kerja  terbesar  di berbagai  negara  di  dunia  termasuk  di Indonesia (Prijanto, 2009) .
Herbisida  yang  banyak  digunakan  pada bidang  pertanian  dan  perkebunan  adalah jenis paraquat (1,1−dimethyl,4,4− bipyridylium). Paraquat  merupakan  salah satu bahan aktif herbisida jenis gramoxone yang telah lama dan sampai saat ini paling banyak digunakan dalam budidaya
tanaman  di  seluruh  dunia,  termasuk  di Indonesia.  Dipicu  oleh  semakin  langkanya tenaga  kerja  dan  tersedianya  herbisida yang relatif mudah dan murah, peningkatan penggunaan pestisida di Indonesia, khususnya  herbisida,  semakin  terlihat nyata  pada  20  tahun  terakhir.  Tingginya intensitas  aplikasi  dan  jumlah  herbisida yang diaplikasikan menimbulkan kekhawatiran  yang  cukup  besar  mengenai bahaya  pencemaran  yang  berasal  dari residu herbisida yang tertinggal di lingkungan,  khususnya  dalam  tanah  dan air.  Selain  itu  herbisida  juga  dapat  masuk ke dalam  tubuh manusia melalui beberapa cara yaitu dapat melalui oral/mulut, respirasi/pernapasan,  dan  penetrasi  kulit yang  dikhawatirkan  akan  menimbulkan gangguan kesehatan bagi manusia (Sriyani & Salam, 2008).
Permasalahan mengenai gangguan
kesehatan  pada  manusia  akibat  dari peningkatan  penggunaan  herbisida  di lingkungan  menimbulkan  terbentuknya radikal  bebas.  Hal  ini  disebabkan herbisida paraquat yang masuk ke dalam tubuh akan menyebabkan induksi toksisitas  dikarenakan  kemampuannya untuk  mempengaruhi  siklus  redoks  dan membentuk Reactive  Oxygen  Species (ROS)  yang  mengakibatkan  masalah infertilitas (Kartikeya, 2009).
Pada pasangan yang mengalami infertilitas  tentunya  secara  pasti  akan menjalani  berbagai  pengobatan  untuk dapat  mempunyai  keturunan.  Untuk melihat kesuburan pada pria dapat dilihat dari  kemampuan  spermatozoa  yang dihasilkan  dalam  melakukan  proses fertilisasi.
Adapun faktor
yang mempengaruhi  proses  tersebut  yaitu kemampuan  organ  dan  hormon  yang mempengaruhi  proses  reproduksi  untuk bekerja  secara  optimal.  Pengoptimalan kerja  dari  organ  dan  hormon  reproduksi selain  dipengaruhi  oleh  unsur  genetik juga  dipengaruhi  oleh  faktor  lingkungan (Hardjopranjoto, 1995).
Dalam mengatasai permasalahan infertilitas diperlukan suatu tanaman obat yang  meiliki  kandungan  antioksidan untuk  menangani  kasus  infertilitas  yang terjadi.  Terapi  kasus  infertilitas  lebih banyak  menggunakan  tanaman  herbal karena  memiliki  efek  samping  yang minimal.  Salah  satu  tanaman  yang dipercayai  mengandung  zat  antioksidan dan  mampu  mengatasi  permasalahan reproduksi yang diakibatkan oleh pengaruh  radikal  bebas  adalah  tanaman Jahe  ( Zingiber  officinale Roxb.  var. rubrum ).  Jahe  merupakan  salah  satu tumbuhan  yang  berasal  dari  suku Zingiberaceae,  jahe  memilki  posisi  yang penting  dalam  berbagai  aspek  antara lain aspek kesehatan dan perekonomian, aspek kegunaan,
adat serta kepercayaan sebagai tumbuhan
etnobotani  dalam  masyarakat  Indonesia. Jahe banyak digunakan sebagai tumbuhan  tradisional  yang  dikonsumsi masyarakat sebagai minuman dan
bahan  makaanan,  bahan  pewarna  serta obat-obatan (Palaniyappan et al ., 2013) Tanaman  jahe  merah  merupakan  salah satu  tanaman  obat  yang  mempunyai kandungan  antioksidan  yang  kuat  dan mampu  mengurangi  serta  mencegah terbentuknya radikal-radikal bebas. Sebagai hasil dari aktivitas antioksidanya, jahe merah akan memacu aktivitas  androgenik  untuk  organ  testis sebagai  hasil  dari  peningkatan  hormone
LH,  FSH,  dan  testoteron  (Ali et  al ., 2008).
Hal  ini  yang  melatarbelakangi  peneliti untuk  membuktikan  bahwa  jahe  merah ( Zingiber  officinale Roxb.  var. rubrum ) dapat meningkatkan jumlah sel spermatogenik mencit (Mus musculus L.) jantan yang diinduksi herbisida paraquat. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui  efek  pemberian  ekstrak etanol  jahe  merah  ( Zingiber  officinale Roxb.  var. rubrum )  terhadap  jumlah  sel spermatosit  dan  sel  spermatid  yang dinduksi herbisida paraquat.

## METODE PENELITIAN

## Bahan
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian ini adalah rimpang jahe merah sebanyak 1  kg  yang  diperoleh  dari  pembudidaya jahe merah di daerah Bataranila Lampung.  Selain itu bahan kimia lainnya yang  dipakai  untuk  menginduksi  hewan uji  adalah  paraquat  diklorida  yang diperoleh  melalui  toko  pertanian  di  jalan Teuku Umar, Lampung.

## Pembuatan ekstrak jahe merah
Proses  pembuatan  ekstrak  jahe  merah dalam  penelitian  ini  mengunakan  etanol 96%  sebagai  pelarut.  Ekstraksi  jahe dibuat  dengan  menggunakan  metode ekstraksi  basah.  Ekstraksi  dimulai  dari penimbangan  jahe  merah.  Selanjutnya jahe dikupas dan dicuci dengan menggunakan  aquadest  setelah  itu dipotong-potong  tipis  dan  kemudian dikeringanginkan dibawah sinar matahari hingga  kering.  Selanjutnya  jahe  yang sudah  dipotong  diletakkan  ke  dalam wadah  atau  beaker  glass  berukuran  1 liter.  Kemudian  ditambahkan  etanol
teknis dengan kadar 96% untuk
melakukan ekstraksi basah ini didiamkan selama  24  jam  dan  diaduk  setiap  6  jam sekali. Setelah itu hasil filtratnya ditampung pada erlenmeyer dan ampasnya  juga  ditampung  dan  disaring dengan  kertas  saring  pada  bejana  yang berbeda  untuk  dapat  dipakai  kembali dalam  ekstraksi  basah.  Filtrat  yang didapat  akan  diteruskan  ke  tahap evaporasi yang dilakukan di laboratorium instrumentasi  jurusan  Kimia  FMIPA, Universitas  Lampung  sehingga  akhirnya diperoleh ekstrak kental.

## Hewan uji dan rancangan percobaan
Pada  penelitian  ini  kami  menggunakan hewan  uji  Mencit  ( Mus  musculus L.) jantan  sebanyak  24  ekor  dengan  berat badan berkisar 30-40gram dengan kondisi  sehat.  Mencit-mencit  tersebut dibagi  menjadi  6  kelompok  perlakuan dan  masing-masing  terbagi  menjadi  4 ulangan.  Kelompok  perlakuan  tersebut, yaitu:
1. Kelompok  K sebagai  kontrol (H 2 O),
2. Kelompok J (Jahe18 mg/ml),
3. Kelompok  Pq (Paraquat  20mg/ BB),
4. Kelompok  P1 (Pq  20  mg/BB  +
EEJM 6 mg/ml),
5. Kelompok P2 (Paraquat 20mg/BB + EEJM 12 mg/ml) dan 6. Kelompok P3 (Paraquat 20mg/BB + EEJM 18 mg/ml). Paraquat diberikan 2 kali dalam seminggu  selama  21  hari,  sedangkan ekstrak  etanol  jahe  merah  diberikan selama 35 hari.

## Pembuatan  preparat  tubulus  semini- ferus
Proses pembuatan  preparat  dilakukan di
Balai Veteriner Lampung dengan pewarnaan Hematoksilin dan Eosin. Pengamatan  dan  perhitungan  jumlah sel spermatogenik
Pengamatan  sel  spermatosit  dan  sel spermatid menggunakan mikroskop dengan perbesaran 400x.

## Analisis data
Analisis  data  dilakukan  menggunakan One  Way ANOVA (α=5%),  apabila terdapat  perbedaan  yang  nyata  maka dilanjutkan  Uji  Beda  Nyata  Terkecil (BNT) pada taraf nyata 5%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil
Jumlah  sel  spermatosit  mencit  dapat dilihat pada tabel 1.
Pada tabel 1 dapat dilihat bahwa adanya perbedaan  bermakna  (p<0,05)  pada kelompok kontrol (K) terhadap kelompok Pq,  P1  dan  P2.  Kemudian  pada kelompok  J  terhadap  kelompok  Pq,  P1 dan P2. Selanjutnya perbedaan bermakna  juga  terdapat  pada  kelompok Pq  terhadap  P1,  P2  dan  P3.  Perbedaan tidak  bermakna  terdapat  pada  kelompok Pq  terhadap  P1  dan  kelompok  P2 terhadap P3.
Berdasarkan  data  hasil  penelitian  dari rata-rata  jumlah  sel  spermatosit  mencit jantan  mengalami  penurunan  jumlah pada kelompok
paraquat (Pq) dibandingkan  dengan  kelompok  kontrol (K),  setelah  itu  terjadi  peningkatan kembali  pada  kelompok  P1,  P2  dan  P3. Namun  pada  kelompok  jahe  (J)  memilki rata  rata  jumlah  sel  spermatosit  tertinggi
Tabel  1. Jumlah  sel  spermatosit  mencit  pada masing-masing kelompok perlakuan Perlakuan Rerata Jumlah Sel Spermatosit X ± SD K (Kontrol) 142,35 ± 35,42 ab J ( Jahe 18 mg/ml) 167,30 ± 38,47 a Pq (Paraquat 0,6 mg/BB) 77,20 ± 25,91 cd P1 (Pq 0,6 mg/BB + EEJM 6 mg/ml (200mg/kgbb)) 93,95 ± 9,07 c P2 ( Pq 0,6 mg/BB + EEJM 12 mg/ml (400mg/ kgbb)) 123,20 ±26,12 b P3 ( Pq 0,6 mg/BB + EEJM 18 mg/ml (600 mg/kgbb)) 138,80 ± 24,94 ab
dibandingkan  dengan  semua  kelompok perlakuan.
Jumlah  sel  spermatid  mencit  dapat dilihat pada tabel 2 .
Pada  tabel  2  dapat  dilihat  adanya perbedaan  bermakna  (p<0,05)  pada kelompok kontrol (K) terhadap kelompok Pq,  P1  dan  P2.  Kemudian  pada kelompok  J  terhadap  kelompok  Pq,  P1 dan  P2.  Perbedaan  tidak  bermakna terdapat  pada  kelompok  K  terhadap  J dan  kelompok  Pq  terhadap  P1.  Dengan demikian,  nilai  rata  rata  jumlah  sel spermatid terendah adalah pada kelompok  paraquat  (Pq).  Sedangkan, pada  kelompok  kontrol  (K)  menunjukan peningkatan jumlah sel spermatid tertinggi.    Kelompok  kontrol  juga  tidak berbeda  nyata  pada  kelompok  jahe  (J), akan  tetapi  menunjukan  perbedaan bermakna pada kelompok lainnya.

## Gambaran histologi tubulus seminiferus
Hasil  histopatologi  testis  mencit  dengan perhitungan  jumlah  sel  spermatogenik menggunakan  lima  lapang  pandang (Gambar  1),  terbukti  bahwa  pemberian herbisida  paraquat  melalui  oral  dapat mengakibatkan  penurunan  jumlah  sel spermatosit  dan  sel  spermatid.  Hal  ini
disebabkan  herbisida  paraquat  yang masuk kedalam tubuh akan menyebabkan induksi toksisitas dikarenakan kemampuannya untuk mempengaruhi siklus redoks dan membentuk Reactive  Oxygen  Species (ROS). ROS terdiri dari yang  bersifat -Kontrol -Jahe 18mg/ml - Paraquat
-P1
-P2
- P3
Gambar  1.  Histologi  tubulus  seminiferus mencit  jantan  pada  masing- masing kelompok perlakuan
radikal  ( hydroxyl  ion,  superoxyde,  nitric oxid,  peroxyl) dan  non  radikal  (ozone, singletoxygen,  lipid  peroxide,  hydrogen peroxide). Paraquat termasuk ROS jenis lipidperoksida sehingga mekanisme paraquat  mengganggu  spermatogenesis yaitu  dengan  proses  peroksida  lipid (Kartikeya, 2009).
Terbentuknya lipid peroksidase dapat menyebabkan  gangguan  fungsi  sel membran dan mencetuskan apoptopsis. Lipid  peroksidase  juga dianggap  sebagai  salah  satu  kunci utama  proses  patofisiologi  pertama  kali pada  intoksikasi  paraquat.  Oleh  karena itu  terjadinya  perubahan  struktur  dan
Tabel  2.  Jumlah  sel  spermatid  mencit  pada masing-masing kelompok perlakuan
Perlakuan Rerata Jumlah Sel Spermatid X ± SD K (Kontrol) 182,55 ± 23,67 a J ( Jahe 18 mg/ml) 172,60 ± 27,59 a Pq (Paraquat 0,6 mg/BB) 94,85 ± 10,04 b P1 (Pq 0,6 mg/BB + EEJM 6 mg/ml (200
mg/kgbb)) 102,35 ± 8,58 b
P2 ( Pq 0,6 mg/BB +
EEJM 12 mg/ml (400
mg/kgbb)) 123,35 ±6,86 b P3 ( Pq 0,6 mg/BB + EEJM 18 mg/ml (600
mg/kgbb))
165,75 ± 55,37 a
fungsi sel lipid dan protein menyebabkan hilangnya  regulasi  intra  seluler  oleh kalsium  adenosine  trifosfatase  (Ca 2+
ATPase).  Hilangnya  regulasi  ini  dapat menyebabkan  kematian  sel,  sehingga menyebabkan kerusakan lokal dan disfungsi organ (Indika & Buckley, 2011).
Terbentuknya  peroksidasi  lipid  dapat menyebabkan  gangguan  sintesis  dan sekresi  GnRH  hipotalamus.  Kegagalan ini akan menyebabkan kegagalan hipofisis  untuk  melakukan  sintesis  dan sekresi  FSH  maupun  LH.  Selanjutnya, akan  diikuti  oleh  kegagalan  sel  leydig mensintesis  testosteron  dan  sel  sertoli tidak mampu melakukan fungsinya sebagai nurse cell (Nugroho, 2007).
Pemberian  dosis  paraquat  sebanyak  20 mg/kgbb
secara oral dapat
menyebabkan  penurunan  jumlah  sel spermatogenik.  Hal  ini  disebabkan  oleh kadar  radikal  bebas  yang  terdapat  pada paraquat menyebabkan menurunnya produksi  hormon  LH  dan  FSH  yang merangsang pembentukan
hormon testoteron.  Testoteron  menurun  dan akhirnya spermatogenesis pun ikut terhambat  sehingga  menurunkan  jumlah sel  spermatosit  dan  sel  spermatid (Mostafa, 2010).
Pada  tabel  1  dan  2  menunjukkan  pada pemberian  dosis  tunggal  ekstrak  jahe merah sebanyak 600 mg/kgBB berpengaruh dalam proses pembentukan sel-sel spermatogenik dengan menunjukkan peningkatan rata-rata jumlah  sel  spermatosit  dan  spermatid, namun pada sel-sel spermatid peningkatan  jumlah  sel  tidak  lebih  besar daripada  kelompok  kontrol.  Sedangkan pada  mencit  yang  diberikan  dosis ekstrak  jahe  merah  sebanyak  200 mg/kgBB, 400 mg/kgBB dan 600 mg/kgBB yang sebelumnya telah diinduksi  herbisida  paraquat  dengan dosis  20  mg/kgBB  menunjukkan  hasil jumlah  sel  spermatogenik  yang  tampak mengalami perbaikan berupa
peningkatan dibandingkan dengan
kelompok yang hanya diinduksi paraquat saja.  Hal  ini  terjadi  karena  jahe  merah
memiliki  kandungan  antioksidan  yang bekerja menangkap radikal bebas. Kandungan  aktif  jahe  merah  yang berfungsi sebagai antioksidan diantaranya gingerol, shogaol, zingibrene,  gingerdiol,  dan  zingerone . Zat-zat  ini  mampu  mencegah  kerusakan yang  diakibatkan  oleh  radikal  bebas. Ekstrak  jahe  merah  mampu  mencegah terjadinya  peroksidasi  lipid  dengan  cara membantu aktivitas enzim-enzim antioksidan  endogen  seperti superoxide dismutase,  catalase,  dan gluthtione peroxides pada tikus (Khaki dkk., 2009). Jahe merah berpengaruh positif terhadap kelompok mencit yang diinduksi  herbisida  paraquat.  Namun pada  pemberian  dosis  ekstrak  jahe merah  sebanyak  200  mg/kgBB  dan  400 mg/kgBB tidak terlalu berpengaruh terhadap peningkatan jumlah sel
spermatosit  maupun  sel  spermatid, sebab  pada  dosis  200  mg/kgBB-400 mg/kgBB masih merupakan dosis efektif .
Setelah  dilakukan  perhitungan  terhadap jumlah sel-sel spermatosit dan spermatid bila dibandingkan pada sel-sel spermatid memiliki  peningkatan  jumlah  rerata  sel yang lebih tinggi dibanding jumlah sel sel spermatosit.  Namun  secara  mikroskopis terlihat  pada  mencit  yang  diberikan ektrak  etanol  jahe  merah  sebanyak  200 mg/kgBB  yang  telah  diinduksi  paraquat sebelumnya menunjukkan gambaran tubulus  seminiferus  pada  histologi  testis mencit masih terdapat perubahan renggangnya susunan sel spermatogenik. Kerusakan serta penurunan  jumlah  sel-sel  spermatogenik terjadi karena penurunan hormon testoteron.  Sebab  pada  perkembangan sel  spermatogenik  dipengaruhi  oleh hormon  testoteron  dan  FSH  (Barlett, 1989).
Sedangkan pada pemberian dosis eksrak jahe sebanyak 400 mg/kgBB dan 600 mg/kgBB secara mikroskopis terlihat adanya perbaikan susunan pada sel. Hal ini  terjadi  dikarenakan  kerja  dari  efek salah  satu  kandungan  yang  terdapat pada jahe merah adalah arginin. Srivasta et  al .,  (2006)  menyatakan  bahwa  jahe
merah  memiliki  kandungan  khusus  yaitu arginin  yang  merupakan  asam  amino non-esensial. Arginin merupakan prekursor dari Nitrit Oxide (NO) endogen.
Arginin  dipecah  oleh  suatu  enzim bernama Nitrit  Oxide  Synthases (NOS) menjadi citrulline dan  NO. Nitrit  Oxide yang dihasilkan arginin berperan penting terhadap  spermatozoa  yaitu  pertama berperan meningkatkan motilitas spermatozoa dengan cara meningkatkan metabolisme  dan  menghasilkan  ATP lebih banyak, selanjutnya ATP digunakan sebagai sumber energi motilitas  spermatozoa.  Selain  itu  arginin juga  berperan  melindungi  membran aksonema  dari  proses  peroksidase  lipid yang disebabkan oleh stress oksidatif.

## KESIMPULAN
Pemberian herbisida paraquat mengakibatkan penurunan jumlah sel-sel spermatogenik, baik pada
sel spermatosit  maupun  sel  spermatid  pada tubulus seminiferus mencit jantan. Pemberian  ektrak  etanol  jahe  merah ( Zingiber  officinale Roxb.  var. rubrum ) dosis  6  mg/ml,  12  mg/ml  dan  18  mg/ml dapat  menyebabkan  peningkatan jumlah sel spermatosit dan sel spermatid mencit jantan  yang  diinduksi  herbisida  paraquat diklorida.  Pemberian  ekstrak  etanol  jahe merah  ( Zingiber  officinale Roxb.  var. rubrum ) pada dosis 18 mg/ml memberikan  peningkatan  jumlah  rerata sel spermatosit dan spermatid baik pada pemberian  dosis  tunggal  maupun  pada mencit  yang  telah  diinduksi  herbisida paraquat diklorida.

## DAFTAR PUSTAKA
Ali,  B.H.,  Blunden,  G.,  Tanira,  M.O.  dan
Nemmar, A. (2008). Some Phytochemical, Pharmacological and  Toxicological  Properties  of
Ginger ( Zingiber officinale Roscoe).
A  review  of  recent  research . Food Chem Toxicol (46), 409 –420.
Hardjopranoto, S. (1995). Ilmu Kemajiran pada  Ternak .  Surabaya:  Airlangga
University Press.
Indika  G,  Buckley  N.  (2011).  Medical management  of  paraquat  ingestion. British Journal of Clinical Pharmacology :  University  of  New South  Wales,  Sydney,  Australia. Diakses dari: http://www.ncbi.nlm.noh.gov/.
Khaki  A,  Fathiazad  F,  Nouri  M,  Amir  K, Ozanci C, Novin G, dkk.  (2009). The effect  of  ginger  on  spermatogenesis and sperm parameters of rat. Iranian Journal  of Reproductive  Medicine, 7, 7-12. Mostafa MH, Osfor, Ibrahim HS, Mohamed  YA,  Ahmed  SM,  Azeem ASAE,  &  Hegazy  AM.  (2010).  Effect of  Alpha  Acid  and  Vitamin  E  on Heavy  Metals  Intoxication  in  Male
Albino  Rats. Journal  of  American Science , 6(8), 56-63. Nugroho, CA. (2007). Pengaruh minuman beralkohol terhadap jumlah lapisan  sel  spermatogenik  dan  berat vesikula  seminalis  mencit. Widya Warta Jurnal Ilmiah Universitas Katolik  Widya  Mandala  Madiun , 33(1). Palaniyappan,  V.,  Bommireddy,  E.P., Gudipudi, H., Chitturi, R.D., Yandamala,  N.  (2013). In Vivo Fertility Enhancing Activity (Aprodisiac)  of Ficus  Carica Fruit  on Male Wistar Rats . International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical  Sciences, 5(2),  516- 518. Prijanto,  TB.  (2009). Analisis  faktor resiko keracunan pestisida organofosfat  pada  keluarga  petani holtikultura  di  Kecamatan  Ngablak Kabupaten Magelang (Tesis). Semarang: Universitas Diponegoro. Srivasta,  S.,  Desai,  P.,  Coutinho,  E., Govil,  G.  (2006).  Mechanism  of
Action of L-Arginine on the Vitality of Spermatozoa  is  Primarily  Through Increased  Biosynthesis  of  Nitric Oxide .  Tata  Institute  of  Fundamental
Research.  India .  Biology  of  Reproduction Journal , 74, 954-958.
Sriyani,  N.,  dan  A.K  Salam.  (2008). Penggunaan  metode  bioassay  untuk
mendeteksi pergerakan herbisida pascatumbuh  paraquat  dan  2,4-D dalam  tanah. Jurnal  Tanah  Tropika , 13(3), 199-208.