Jurnal Teknologi Kesehatan Borneo, Vol.1, No. 2 (2020) 70-77
http://jtk.poltekkes-pontianak.ac.id/index.php/JTKB/
Inhibitory activity of pineapple fruit ( Ananas comosus (L.) Merr .)
Meat Extract On Bacteria Streptococcus pyogenes and Proteus mirabilis )
Venny Patricia 1)* , Wawan Sofwan Z 1) , Ahmad Yani 1) , Puji Hidayati 1)
1 Poltekkes Kemenkes Banten
* Correspondence: pujihdyntt@gmail.com
Abstract. Pineapple (Ananas comosus (L.) Merr.) is a fruit that is much in demand by the public. Pineapple contains bromelain  enzyme  which  is  believed  to  kill  bacteria.  The  purpose  of  this  study  was  to  determine  the  effectiveness  of pineapple fruit extracts (Ananas comosus (L.) Merr.) in inhibiting the growth of Streptococcus pyogenes and Proteus mirabilis bacteria. Extraction was carried out using the maceration method using 96% ethanol solvent. This research is an  experimental  research  laboratory.  Antimicrobial  activity  testing  is  done  by  the  liquid  dilution  method.  The concentration of pineapple (Ananas comosus (L.) Merr.) Extract used was 25 mg/ml, 50 mg/ml, 100 mg/ml, and 200 mg/ml with 10% DMSO as negative control and Chloramphenicol as positive control. The results of this study indicate that the pineapple (Ananas comosus (L.) Merr.) extract can optimally inhibit the growth of Streptococcus pyogenes at a concentration of 50 mg/ml and Proteus mirabilis bacteria at a concentration of 100 mg/mL and 200 mg/mL. Data analysis using  the  Kruskal-Wallis  test  showed  that  there  were  significant  differences  (p<0.05)  between  the  concentrations  of pineapple (Ananas comosus (L.) Merr.) meat extract in inhibiting the growth of Streptococcus pyogenes and Proteus mirabilis bacteria. Based on the Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI, 2018), it can be concluded that the extract of pineapple (Ananas comosus (L.) Merr.) has an antibacterial effect on the bacteria Streptococcus pyogenes and Proteus mirabilis.

## Keywords: pineapple, Streptococcus pyogenes, Proteus mirabilis, antibacterial inhibition

## 1. Latar Belakang
Penyakit infeksi masih merupakan penyebab paling tinggi  Angka kesakitan dan kematian di negara  berkembang  termasuk  Indonesia.  Penyebab  penyakit  infeksi  diantaranya  adalah  bakteri patogen  (Novard,  2019),  Contohny  bakteri Streptococcus  pyogenes yang  dapat  menyebabkan penyakit  faringitis  (radang  tenggorokan)  (Argapermana,  2016).  Faringitis  dapat  digolongkan sebagai bagian dari Infeksi Saluran Pernafasan Akut (ISPA). Banten merupakan daerah lima besar memiliki  prevalensi  penyakit  ISPA  tertinggi  (RISKESDAS,  2018). Proteus  mirabilis dapat menyebabkan Infeksi Saluran Kemih (ISK) (Delost, 2018). Ginjal merupakan bagian saluran kemih dan  urogenital  yang  terdiri  dari  urethra,  vesica  urinaria  (buli),  ureter.  Infeksi  Ginjal  merupakan bagian  dari  jenis  infeksi  saluran  kemih, prevalensi  penyakit  ginjal kronis di Banten  sekitar 1.8  % (RISKESDAS,  2018).  Infeksi  Saluran  Kemih  merupakan  infeksi  kedua  setelah  infeksi  saluran pernafasan yang dilaporkan 8.3 juta kasus pertahun (Darojah, 2018).
Pemanfaatan  obat  dari  bahan  alam  sudah  menjadi  tren  pengobatan  saat  ini,  karena mempertimbangkan  efek  samping  dari  obat  sintetik.  Gaya  hidup  kembali  ke  alam  membawa masyarakat berulang-ulang memanfaatkan bahan alam dengan tanaman berkhasiat obat. Penelitian ini  menggunakan  tanaman  nanas (Ananas  comosus  (L.)  Merr.) .  Buah  nanas  mengandung  enzim bromelin yang bersifat antibakteri. Beberapa penelitian khasiat buah nanas yang memiliki efek anti bakteri  adalah  S treptococcus  mutans pada  konsentrasi  25%  dan  100%  dari  jus  nanas  dan  pada  air
Jurnal Teknologi Kesehatan Borneo 2020 . Vol. 1 ,No. 2, pp. 70-77 perasan daging buah nanas terlihat efektivitas nya di uji pada bakteri Kleibsiella pneumoniae yang ditunjukkan dengan peningkatan rata-rata zona hambatnya.
Penelitian ini bertujuan untuk melihat aktivitas daya hambat ekstrak daging buah nanas terhadap bakteri S.pyogenes dan P. mirabilis dengan metode dilusi cair yang dimodifikasi menggunakan media cair Brain Heart Infusion Broth (BHIB) serta diukur absorbansi dengan densitometer.

## 2. Metode

## 2.1 Desain Penelitian
Penelitian  bersifat  eksperimental  laboratorik,  yaitu  dengan  melakukan  uji  daya  hambat ekstrak daging buah nanas terhadap pertumbuhan bakteri Streptococcus pyogenes dan Proteus mirabilis .  Cara  penelitian  ini  adalah  metode  dilusi  cair Kirby-Bauer yang  dimodifikasi menggunakan  media  cair Brain  Heart  Infusion  Broth (BHIB)  dan  diukur  absorbansi menggunakan  densitometer  sebelum  dan  sesudah  inkubasi  untuk  melihat  pertumbuhan bakteri  uji.  Penentuan  Konsentrasi  Hambat  Minimum  (KHM)  dilakukan  dengan membandingkan  kadar  kekeruhan  setelah  perlakuan  inkubasi  dikurangi  kadar  kekeruhan sebelum  perlakuan.  Apabila  didapatkan  konsentrasi  terendah  yang  dapat  menghambat pertumbuhan bakteri, maka didapatkan Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) atau Minimal Inhibitory  Concentration (MIC)  (Fatisa,  2013).  Hasil  nilai kadar kekeruhan  ditampilkan  dalam bentuk tabel dan dianalisis menggunakan metode non-parametrik Kruskall-Wallis .

## 2.2 Populasi dan Sampel
Populasi pada penelitian ini adalah buah nanas jenis Madu. Sampel yang diambil berasal dari  bagian  daging  buah  yang  diekstrak  dibuat  ke  dalam  beberapa  konsentrasi.  Perhitungan sampel  menggunakan  rumus  Gomez,  sehingga  penelitian  ini  menggunakan  4  variasi konsentrasi dan dilakukan 3 kali pengulangan.

## 2.3 Pembuatan Konsentrasi Ekstrak Daging Buah Nanas
Ekstrak daging buah nanas dibuat menjadi 4 variasi konsentrasi dengan perbandingan 25, 50, 100 dan 200 mg/ml (Tabel 1).

## Tabel 1. Konsentrasi Ekstrak Etanol Daging Buah Nanas
Ekstrak Buah nanas Dimetil Sulfoksida 10 % Konsentrasi (mg/ml) 25 mg 1 ml 25 50 mg 1 ml 50 100 mg 1 ml 100 200 mg 1 ml 200

## 2.4 Pembuatan Suspensi Bakteri
Stok kultur bakteri S. pyogenes dan Prot mirabilis diambil dari masing-masing koloni dan dimasukkan ke media NaCl 0.9%, divortex lalu diukur kekeruhannya hingga tabung masing- masing  suspensi  NaCl  bernilai  0.5  Mc.  Farland.  Kontrol  Negatif  menggunakan  Dimetil Sulfoksida 10% (DMSO) dan Kontrol positif menggunakan antibiotik kloramfenikol.
Jurnal Teknologi Kesehatan Borneo 2020 . Vol. 1 ,No. 2, pp. 70-77

## 2.5 Penentuan Uji KHM
Penentuan  KHM  dilakukan  dengan  metode  dilusi  cair  Kirby-Bauer  yang  dimodifikasi menggunakan media cair Brain Heart Infusion Broth (BHIB) lalu diukur absorbansi nya dengan densitometer  sebelum  dan  sesudah  inkubasi  untuk  melihat  pertumbuhan  bakteri  uji.  Media BHIB yang disediakan 12 tabung yang masing-masing tabung volume nya 4 mL.
Media BHIB ditambahkan 0.5 mL ekstrak dengan konsentrasi 4 variasi kedalam masing- masing media BHIB, selanjutnya ke dalam media tersebut ditambahkan pula suspensi bakteri sebanyak  0.5  mL  yang  kekeruhan  nya  sudah  0.5  Mc  Farland.  Lalu  masing-masing  tabung diukur kekeruhan nya dengan menggunakan densitometer, lalu diinkubasi selama 18-24 jam pada  suhu  37 o C  dalam  inkubator.  Keesokan  hari  nya  dilakukan  pengukuran  kembali kekeruhannya. KHM ditentukan dengan membandingkan kadar kekeruhan setelah perlakuan inkubasi  dikurangi  kadar  kekeruhan  sebelum  perlakuan,  selisih  konsentrasi  tersebut didapatkan Konsentrasi Hambat Minimum (KHM).

## 2.6 Analisis Data
Nilai  kadar  kekeruhan  dari  perlakuan  ditampilkan  dalam  bentuk  tabel  dan  dianalisis statistik menggunakan    metode non-parametrik Kruskall-Wallis .

## 3. Hasil
Tabel 2. Hasil Pengujian Konsentrasi Hambat Minimum Ekstrak Daging Buah Nanas Terhadap

## S. pyogenes
No. Perlakuan Konsentrasi Mc Farland Unit P1 P2 P3 Sebelum Sesudah Sebelum Sesudah Sebelum Sesudah 1 25 mg/ml 0.9 4.4 0.9 1.4 1 7.6 2 50 mg/ml 0.9 5.1 0.9 5.2 0.9 1.5 3 100 mg/ml 0.8 4.8 1 5 0.7 4.7 4 200 mg/ml 1 4.9 1 6.3 1 5.9 5 K(+) 0.5 1 0.5 1 0.8 1.2 6 K (-) 0 0 0 0 0 0
Keterangan : K (+) = Kontrol Positif, K (-) = Kontrol Negatif, P1, P2, P3 ini berlaku semua tabel

## Tabel 3. Hasil Pengujian Konsentrasi Hambat Minimum Ekstrak Daging Buah Nanas Terhadap P. mirabilis
No. Perlakuan Konsentrasi McFarland Unit P1 P2 P3 Sebelum Sesudah Sebelum Sesudah Sebelum Sesudah 1 25 mg/ml 0.8 8.8 1 8.9 1 8.9 2 50 mg/ml 0.9 8.8 0.9 8.8 0.9 8.8 3 100 mg/ml 0.9 8.8 0.9 8.4 0.9 8.5 4 200 mg/ml 0.9 8.5 0.9 8.4 1 8.9 5 K(+) 0.6 6.5 0.6 6.5 0.5 6.4 6 K (-) 0 0.3 0.4 0.4 0 0
Ket : K (+) = Kontrol Positif, K (-) = Kontrol Negatif
Jurnal Teknologi Kesehatan Borneo 2020 . Vol. 1 ,No. 2, pp. 70-77
Pengujian  aktivitas  daya  hambat  ekstrak  daging  buah  nanas  ( Ananas  comosus (L.) Merr. ) terhadap  pertumbuhan  bakteri S. pyogenes dan Proteus  mirabilis dilakukan menggunakan  metode dilusi cair dengan 3 kali pengulangan pada variasi konsentrasi yaitu 25 mg/ml, 50 mg/ml, 100 mg/ml dan  200  mg/ml.  Selanjutnya  dilakukan  pengukuran  kekeruhan  larutan  uji  setelah  dilakukan perlakuan pada saat sebelum dan sesudah inkubasi selama 24 jam (Tabel 2).
Terdapat perbedaan antara kekeruhan larutan uji pada saat sebelum dan sesudah dilakukan inkubasi selama 24 jam (Tabel 3).
Tabel 4. Hasil uji KHM Ekstrak daging buah nanas terhadap bakteri S. pyogenes dan P. mirabilis
No Konsentrasi Uji McFarland Unit Streptococcus pyogenes Proteus mirabilis P1 P2 P3 Rata-Rata P1 P2 P3 Rata-Rata 1 25 mg/ml 3,5 (S) 0,5 (S) 6,6 (I) 3,53 8,0 (S) 7,9 (S) 7,9 (S) 7,93 2 50 mg/ml 4,2 (S) 4,3 (S) 0,6(S) 3,03 7,9 (S) 7,9 (S) 7,9 (S) 7,9 3 100 mg/ml 4,0 (S) 4,0 (S) 4,0 (S) 4,0 7,9 (S) 7,5 (S) 7,6 (S) 7,67 4 200 mg/ml 3,9 (S) 5,3 (S) 4,8 (I) 4,67 7,6 (S) 7,5 (S) 7,9 (S) 7,67 5 K(+) 0,5 0,5 0,4 0,47 5,9 5,9 5,9 5,9 6 K (-) 0,0 0,0 0,0 0,0 0,3 0,0 0,0 0,1
Keterangan : (S) Sensitif, (I) Intermediate, (R) Resisten
Tampak  pada  tabel  4  terlihat  adanya  perbedaan  rerata  kadar  kekeruhan  pada  hasil  uji  daya hambat  ekstrak  daging  buah  nanas  terhadap  pertumbuhan  bakteri S.  pyogenes dan P.  mirabilis . Bakteri Streptococcus pyogenes memiliki rerata kadar kekeruhan pada konsentrasi 25 mg/ml(3,53), 50 mg/ml(3,03), 100 mg/ml(4,0) dan 200 mg/ml(4,67). Kontrol positif kloramfenikol memiliki kekeruhan dengan  rata-rata  0,47  dan  kontrol  negatif  menggunakan  DMSO  10%  dengan  rata-rata  kadar kekeruhan 0.
Bakteri Proteus  mirabilis rerata  kadar  kekeruhan  yang  terbentuk  yaitu  pada  konsentrasi  25 mg/ml adalah 7,93. Pada konsentrasi 50 mg/ml adalah 7,9. Pada konsentrasi 100 mg/ml adalah 7,67 dan pada konsentrasi 200 mg/ml adalah 7,67. Pengujian kontrol positif menggunakan kloramfenikol dengan  rata-rata  5,9  dan  kontrol  negatif  menggunakan  DMSO  10%  dengan  rata-rata  kadar kekeruhan 0,1.
Selanjutnya data yang diperoleh diolah secara statistik menggunakan uji One-Way ANOVA ada program  SPSS.  Pada  uji  ANOVA  terdapat  prasyarat  yang  harus  dipenuhi,  yaitu  data  harus terdistribusi normal dengan p > 0,05 dan variasi data homogen dengan p > 0,05. Oleh karena itu, data terlebih dahulu dilakukan Uji Normalitas menggunakan uji normalitas Shapiro-Wilk (Tabel 5).
Tabel 5. Hasil Uji Normalitas Shapiro-Wilk Streptococcus pyogenes Proteus mirabilis Konsentrasi Statistic Df Sig. Konsentrasi Statistic Df Sig. 25 mg/ml 1 3 0.982 25 mg/ml 0.75 3 0 50 mg/ml 0.77 3 0.045 100 mg/ml 0.923 3 0.463 200 mg/ml 0.974 3 0.688 200 mg/ml 0.923 3 0.463 K+ 0.75 3 0 K- 0.75 3 0
Jurnal Teknologi Kesehatan Borneo 2020 . Vol. 1 ,No. 2, pp. 70-77
Berdasarkan  Tabel  uji  Normalitas Shapiro-Wilk didapatkan  data  yang  tidak  terdistribusi normal pada data hasil penelitian dengan nilai signifikansi 0.00 dan 0.045 pada uji normalitas bakteri S. pyogenes dan nilai signifikansi 0.00 pada uji normalitas bakteri P.    mirabilis . Hasil data tersebut menunjukan bahwa data hasil penelitian tidak terdistribusi secara normal sehingga data tidak dapat dilanjutkan  dengan  uji One-Way ANOVA.  Oleh  karena  itu,  dilakukan  uji  alternatif  lain  yaitu Uji Non-Parametrik Kruskal-Wallis dengan nilai signifikansi bermakna jika p < 0,05 (Tabel 6).
Tabel 6. Hasil Uji Analisis Kruskal-Wallis Test
Test Statistics S. pyogenes P. mirabilis Chi-Square 12.097 14.88 Df 5 5 Nilai signifikan 0.033 0.011
Hasil uji statistik Kruskal-Wallis didapatkan nilai signifikansi 0.033 pada penelitian S. pyogenes dan 0.011 pada penelitian P. mirabilis . Hal tersebut menujukan bahwa data hasil penelitian ini dapat diterima dengan dasar keputusan jika nilai Asymp.Sig > 0,05 maka tidak ada perbedaan atau H 0 diterima dan H a ditolak. Sedangkan jika Asymp.Sig < 0,05, maka ada perbedaan atau H 0 ditolak dan H a diterima. Berdasarkan hasil uji statistik Kruskal-Wallis bahwa data hasil penelitian menunjukkan adanya  perbedaan  hasil  antar  varian  konsentrasi  kstrak  daging  buah  nanas  yang  diujikan  pada bakteri Streptococcus pyogenes dan Proteus mirabilis .

## 4. Pembahasan
Penelitian yang dilakukan adalah aktivitas daya hambat ekstrak daging buah nanas ( Ananas comosus (L.) Merr .) terhadap pertumbuhan bakteri Streptococcus pyogenes sebagai bakteri uji Gram positif  dan Proteus  mirabilis sebagai  bakteri  uji  Gram  negatif.  Penelitian  ini  dilakukan  dengan menggunakan  metode  Dilusi  cair Kirby-Bauer yang  dimodifikasi  menggunakan  media  cair Brain Heart  Infusion  Broth (BHIB)  dan diukur menggunakan alat  Densitometer. Ekstrak  dibuat menjadi empat kelompok konsentrasi yaitu 25 mg/ml, 50 mg/ml, 100 mg/ml, dan 200 mg/ml dengan kontrol positif menggunakan kloramfenikol dan kontrol negatif menggunakan DMSO 10%. Kontrol positif yang  digunakan  adalah  kloramfenikol.  Kloramfenikol  merupakan  antibiotik  bakteriostatik berspektrum  luas  yang  aktif  terhadap  organisme-organisme  aerobik  dan  anaerobik  Gram  positif maupun Gram negatif (Maharani, 2012).
Pada  penelitian  ini  konsentrasi  antibiotik  yang  digunakan  sebesar  30μg,  merujuk  pada standar  yang  terdapat  pada Clinical  Laboratory  Standards  Institute (CLSI)  untuk  uji  KHM  atau Minimum  Inhibitory  Concentration (MIC)  menggunakan  metode  Dilusi  cair.  Pelarut  DMSO  10% digunakan  sebagai  kontrol  negatif  karena  merupakan  pelarut  organik  dan  tidak  bersifat bakterisidal. Selain itu, pelarut ini juga dapat melarutkan hampir semua senyawa polar maupun non polar (Assidqi et al, 2012).
Penentuan KHM pada penelitian ini menggunakan metode Dilusi cair. Parameternya adalah adanya  kekeruhan  (ada  pertumbuhan  bakteri)  dan  kejernihan  (tidak  ada  pertumbuhan  bakteri) yang  terlihat  setelah  proses  inkubasi  selama  24  jam  pada  suhu  37°.  Nilai  Konsentrasi  Hambat
Jurnal Teknologi Kesehatan Borneo 2020 . Vol. 1 ,No. 2, pp. 70-77
Minimum  (KHM)  ditentukan  dengan  mengamati  kadar  terendah  yang  dapat  menghambat pertumbuhan bakteri.
Pada  Tabel  4.  menunjukkan  bahwa  ekstrak  daging  buah  nanas (Ananas  comosus  (L.)  Merr.) terbukti berpengaruh terhadap pertumbuhan bakteri Streptococcus pyogenes dan Proteus mirabilis . Hal ini disebabkan karena buah nanas memiliki kandungan enzim bromelain yang merupakan enzim antibakteri. Enzim bromelin mempunyai kemampuan memecah protein sebesar 1.000 kali beratnya. Bromelin dapat menghidrolisis beberapa ikatan peptida yang ada pada dinding sel bakteri. Senyawa yang  terdapat  dalam  enzim  bromelin  antara  lain  karbohidrat,  glikoprotein,  fosfat,  glukosida, peroksida, sellulase dan inhibitor protease lainnya (Hafid, 2016).
Ekstrak  daging  buah  nanas  berpengaruh  terhadap  pertumbuhan Streptococcus  pyogenes . Streptococcus pyogenes merupakan bakteri Gram positif flora normal yang terdapat pada manusia. Setiap  individu  normal  diperkirakan  memiliki  5  sampai  15%  bakteri Streptococcus  pyogenes dan umumnya  terdapat  pada  saluran  pernafasan  (Repi et  al ,  2016).  Berdasarkan data  hasil  penelitian yang  telah dilakukan  pada  bakteri Streptococcus  pyogenes rerata  kadar  kekeruhan yang  terbentuk yaitu  pada  konsentrasi 25 mg/ml adalah  3,53; konsentrasi  50 mg/ml  adalah 3,03; konsentrasi  100 mg/ml  adalah  4,0  dan  pada  konsentrasi  200  mg/ml  adalah  4,67.  Pada  pengujian  kontrol  positif menggunakan  kloramfenikol  dengan  rerata  0,47  dan  kontrol  negatif  menggunakan  DMSO  10% dengan rerata kadar kekeruhan 0.
Menurut Clinical  Laboratory  Standards  Institute (CLSI,  2018),  untuk Streptococcus spp.  β - Hemolytic Group kriteria kemampuan daya hambat antimikroba dengan Kadar Hambat Minimum (KHM)  yaitu  ≤4  dikategorikan  sebagai  sensitive,  8  dikategorikan  sebagai  intermediate,  dan  ≥16 dikategorikan sebagai resisten. Kadar terendah terdapat pada konsentrasi 50 mg/ml yaitu dengan kadar  kekeruhan  rerata  3,03,  sedangkan  kadar  tertinggi  terdapat  pada  konsentrasi  200  mg/ml dengan kadar kekeruhan rerata 4,67. Pada konsentrasi 25 mg/ml, 50 mg/ml dan 100 mg/ml termasuk kedalam  kategori  sensitif  Karena  hasil  kadar  kekeruhan  yang  didapat kan  ≤4.  Sedangkan  pada konsentrasi 200 mg/ml menunjukkan intermediate karena hasil kadar kekeruhan yang didapatkan >4. Dari data tersebut dapat diketahui bahwa hasil kadar kekeruhan yang didapatkan menunjukkan terjadinya perbedaan yang signifikan antar varian konsentrasi.
Pada  bakteri Streptococcus  pyogenes rerata  kadar  kekeruhan  terbentuk  yang  paling  optimal yaitu  pada  konsentrasi  50  mg/ml  sebesar  3,03,  dikarenakan  pada  konsentrasi  tersebut  terbentuk kadar  kekeruhan  terendah.  Hal  ini  tidak  selaras  dengan  pernyataan  Rozlizawaty  (2013),  bahwa efektivitas suatu zat antibakteri dipengaruhi oleh konsentrasi zat tersebut. Peningkatan konsentrasi zat  menyebabkan  meningkatnya  kandungan  senyawa  aktif  yang  berfungsi  sebagai  antibakteri, sehingga kemampuan dalam membunuh suatu bakteri juga semakin besar (Audies, 2015). Beberapa kemungkinan yang dapat menyebabkan terjadinya kesalahan pada saat tahap pra-analitik seperti kebersihan  alat  yang  digunakan,  tahap  analitik  seperti  pada  saat  proses  yang  tidak  steril,  serta faktor-faktor lain seperti suhu dan kontaminasi.
Ekstrak  daging  buah  nanas  memiliki  pengaruh  terhadap  pertumbuhan P.  mirabilis . Proteus mirabilis merupakan  bakteri  Gram  negatif  yang  termasuk  dalam  family Enterobactericeae yang ditemukan  di  dalam  lingkungan,  tanah  dan  air  serta  merupakan  flora  normal  saluran  cerna manusia. Organisme ini merupakan penyebab penting Infeksi Saluran Kemih (ISK) (Delost, 2018). Berdasarkan data hasil penelitian yang telah dilakukan pada bakteri Proteus mirabilis rerata kadar kekeruhan  yang  terbentuk  yaitu  pada  konsentrasi  25  mg/ml  adalah  7,93;  konsentrasi  50  mg/ml
Jurnal Teknologi Kesehatan Borneo 2020 . Vol. 1 ,No. 2, pp. 70-77 adalah  7,9;  konsentrasi  100  mg/ml  adalah  7,67  dan  pada  konsentrasi  200  mg/ml  adalah  7,67. Pengujian  kontrol  positif  menggunakan  kloramfenikol  dengan  rata-rata  5,9  dan  kontrol  negatif menggunakan  DMSO  10%  dengan  rata-rata  kadar  kekeruhan  0,1.  Pada  bakteri Proteus  mirabilis rerata  kadar kekeruhan  yang  terbentuk yang  paling  optimum yaitu  pada konsentrasi 100  mg/ml dan 200  mg/ml  sebesar  7,67.  Kadar kekeruhan  tersebut  tidak  lebih  baik dari  pada kontrol  positif sebesar 5,9.
Menurut Clinical  Laboratory  Standards  Institute (CLSI,  2018),  untuk Enterobactericeae kriteria kemampuan  daya  hambat  antimikroba  dengan  Konsentrasi  H ambat  Minimum  (KHM)  yaitu  ≤ 8 dikategorikan  sebagai  sensitive,  16  dikategorikan  sebagai  intermediate,  dan  ≥31  dikategorikan sebagai resisten. Kadar terendah terdapat pada konsentrasi 100 mg/ml dan 200 mg/ml yaitu dengan kadar kekeruhan rerata 7,67, sedangkan kadar tertinggi terdapat pada konsentrasi 25 mg/ml dengan kadar kekeruhan rerata 7,93. Dari data tersebut dapat diketahui bahwa hasil kadar kekeruhan yang didapatkan tidak menunjukkan terjadinya perbedaan yang terlalu besar antar varian konsentrasi. Hasil  penelitian  menggunakan  bakteri Proteus  mirabilis menunjukkan  hasil  yang  lebih  selaras dibandingkan dengan pemeriksaan menggunakan bakteri Streptococcus pyogenes . Semua konsentrasi termasuk ke dalam kategori sensitive karena hasil kadar kekeruhan yang didapatkan ≤8.
Hasil  uji  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  terdapat  perbedaan  nilai  Konsentrasi  Hambat Minimum (KHM) antara Gram positif Streptococcus pyogenes dan Gram negatif Proteus mirabilis . Hal ini  dapat  disebabkan  karena  adanya  perbedaan  komponen  penyusun  dinding  sel  antara  bakteri Gram  positif  dengan  bakteri  Gram  negatif.  Dinding  sel  bakteri  Gram  positif  strukturnya  lebih sederhana dibandingkan dengan struktur dinding sel bakteri Gram negatif yang lebih kompleks. Pada bakteri Gram positif, dinding sel terdiri dari peptidoglikan dan asam teikoat. Peptidoglikan merupakan  polimer  kompleks  yang  terdiri  dari rangkaian n- asetil  glukosamin  dan  asam n- asetil muramat yang disusun secara berganti-ganti. Pada bakteri Gram negatif dinding selnya terdiri dari lapisan peptidoglikan, lipoprotein selaput luar, dan lipopolisakarida. Lipopolisakarida dinding sel Gram  negatif  terdiri  dari  suatu  lipid  yang  kompleks  yang  dinamakan  lipid  A.  Susunan  yang kompleks  pada  bakteri  Gram  negatif  yang  menyebabkan  suatu  antimikroba  sulit  untuk menembusnya,  sehingga  kadar  kekeruhan  yang  dihasilkan  lebih  besar  dibandingkan  dengan bakteri Gram positif (Nuraini, 2015).

## 5. Kesimpulan
Ekstrak  daging  buah  nanas (Ananas  Comosus  L.  Merr.) dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri Streptococcus pyogenes dan Proteus mirabilis dapat dilihat dari e fektivitas antimikroba ekstrak daging  buah  nanas (Ananas  Comosus  L.  Merr.) .  Konsentrasi  ekstrak  50  mg/ml  merupakan  kadar paling  efektif  menghambat  pertumbuhan  bakteri Streptococcus  pyogenes ,  sedangkan  pada konsentrasi 100 mg/ml merupakan kadar paling efektif menghambat pertumbuhan bakteri Proteus mirabilis apabila  dibandingkan  dengan  standar  MIC  pada  kontrol.  Ekstrak  daging  buah  nanas (Ananas  comosus  (L.)  Merr.) memiliki  efektivitas  antimikroba  yang  lebih  besar  pada  bakteri  Gram positif dibandingkan dengan bakteri Gram negatif.

## Daftar Pustaka
Argapermana,  M.A. (2016). Uji Antibakteri Fraksi Etil Asetat Daun Sirsak ( Annona muricata Linn ) Terhadap Streptococcus  pyogenes Secara In  Vitro . Skripsi .  Universitas  Islam  Bandung.
Bandung.
Jurnal Teknologi Kesehatan Borneo 2020 . Vol. 1 ,No. 2, pp. 70-77
Assidqi,  K., Tjahjaningsih,  W.  and  Sigit, S.  (2012).  Potensi  ekstrak  daun  patikan kebo  (Euphorbia hirta) sebagai antibakteri terhadap Aeromonas hydrophila secara in vitro. Journal of marine and coastal science , 1 (2), pp.113-124.
Audies, Annisa. (2015). Uji Efektivitas Antibakteri Ekstrak Kulit Nanas (Ananas comosus.L ) Terhadap Pertumbuhan Streptococcus  mutans Penyebab  Karies  Gigi ( Doctoral  dissertation,  UPT. Perpustakaan Unand) . Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Andalas. Padang.
Clinical & Laboratory Standards Institute (CLSI).  (2018). M07-A9 Method for Dilution Antimicrobial Susceptibility Test for Bacteria That Grow Aerobically ; Approved Standart – Ninth Edition.
Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute.
Darojah,  Umi.  (2018). Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etil  Asetat  Daun  Binahong  ( Anredera cordifolia  (Ten.)  Steenis )  Terhadap  Penghambatan  Bakteri Proteus  mirabilis Secara  In Vitro. Undergraduate thesis . Fakultas Kedokteran UNISSULA. Semarang.
Delost,  Maria  Dannessa.  (2018).  Mikrobiologi  Diagnostik  untuk  Teknologi  Laboratorium  Medik. Penerbit EGC. Jakarta.
Fatisa,  Yuni.  (2013).  Daya  Antibakteri  Estrak  Kulit  Dan  Biji  Buah  Pulasan  ( Nephelium  mutabile ) Terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli Secara In Vitro . Fakultas Tarbiyah dan Keguruan. Universitas Islam Negeri Sultan Syarif Kasim. Riau.
Hafid, Puspa Sari.  (2016).  Pengaruh Berkumur Larutan Ekstrak Bonggol Nanas ( Ananas comosus (L.) Merr .) Terhadap Peningkatan Ph Saliva Rongga Mulut. Skripsi . Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Hasanuddin. Makassar.
Maharani,  Krisnina.  (2012). Uji  Antibakteri  Ekstrak  Kulit  Buah  Dan  Biji  Manggis  ( Garcinia mangostana )  pada  Bakteri  Penyebab  Jerawat  ( Staphylococcus  epidermidis )  Dengan Menggunakan Solven Etanol. Skripsi thesis , Universitas Airlangga. Surabaya.
Novard, M.F.A., Suharti, N. and Rasyid, R. (2019). Gambaran Bakteri Penyebab Infeksi Pada Anak Berdasarkan Jenis Spesimen dan Pola Resistensinya di Laboratorium RSUP Dr. M. Djamil Padang Tahun 2014-2016. Jurnal Kesehatan Andalas , 8 (2S), pp.26-32.
Nur Aini. H., Chairul, S., dan Erwin. (2015). Uji Toksisitas dan Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Merah  Tanaman  Pucuk  Merah  ( Syzygium  myrtifolium  Walp.) Terhadap  Bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli. Jurnal Kimia Mulawarman Volume 13 Nomor 1 November 2015.
Repi,  N.,  Mambo,  C.,  dan  Wuisan,  J.  (2016).  Uji  efek  antibakteri  ekstrak  kulit  Kayu  Manis ( Cinnamomum burmannii ) terhadap Escherichia coli dan Streptococcus pyogenes . Jurnal E-Biomedik (EBm).
RISKESDAS. (2018). Hasil Utama Riset Kesehatan Dasar 2018. Kementerian Kesehatan RI. Jakarta. Roslizawaty,  dkk.  (2013).  Aktivitas  Antibakterial  Ekstrak  Etanol  dan  Rebusan  Sarang  Semut ( Myrmecodia sp.) Terhadap  Bakteri Escherichia coli .  Jurnal  Medika  Veterinaria. Vol.  7 No.2, Agustus. ISSN: 0853-1943.