## AKTIVITAS PENANGKAPAN RADIKAL BEBAS PADA
KOMBINASI EKSTRAK ETANOL DAUN MANGGA ( Mangifera indica L.) DAN DAUN SIRSAK ( Annona muricata L.)
Endah Kurniawati 1* , Fajar Setyo Wibowo 2 , Rita Rusmeilina 3 1*,2,3 Program Studi Farmasi (S-1), Universitas Jenderal Achmad Yani Yogyakarta Email: 1* endahae@gmail.com

## ABSTRAK
Antioksidan merupakan suatu senyawa yang bermanfaat dalam melawan kanker dan proses lain yang  berpotensi  mengarah  pada  penyakit-penyakit  degeneratif  seperti  diabetes  dan  penyakit jantung.  Antioksidan  bekerja  dengan  cara  menetralisasi  radikal  bebas  menjadi  bentuk  non radikal.  Banyak  tanaman,  termasuk  buah  dan  sayur,  merupakan  antioksidan  alami  karena kandungan  senyawa  fenolik  dan  flavonoid  yang  berperan  terhadap  aktivitas  tanaman  sebagai antioksidan. Mangga dan sirsak merupakan salah satu tanaman yang tersebar luas di Indonesia. Daun mangga dan daun sirsak mengandung banyak zat aktif salah satunya adalah senyawa fenol yang  menunjukkan  aktivitas  sebagai  antioksidan,  antiinflamasi  dan  antidiabetes.  Kombinasi kedua  tanaman  tersebut  berpotensi  untuk  dikembangkan  aktivitas  antioksidannya.  Aktivitas antioksidan  kombinasi  ekstrak  daun  mangga  dan  daun  sirsak  dapat  diamati  dari  aktivitas penangkapan radikal bebas menggunakan metode DPPH dengan pembanding vitamin C. Nilai IC 50 digunakan  sebagai parameter aktivitas penangkapan radikal bebas menggunakan metode DPPH.  Kombinasi  ekstrak  daun  mangga  dan  sirsak  menunjukkan  adanya  aktivitas  sebagai antioksidan.  Hasil  uji  aktivitas  penangkapan  radikal  bebas  menunjukkan  aktivitas  kombinasi dua ekstrak tersebut lebih rendah dibandingkan dengan standar vitamin C yang memiliki nilai IC 50 sebesar  35,50  ppm.  Namun  kombinasi  kedua  ekstrak  tersebut  memiliki  potensi dikembangkan  sebagai  antioksidan.  Kombinasi  ekstrak  etanol  daun  mangga  dan  daun  sirsak dengan  perbandingan  75:25  memiliki  nilai  IC 50 paling  baik  yaitu  sebesar  94,96  ppm,  diikuti perbandingan  50:50  dengan  nilai  IC 50 140,36  ppm,  dan  perbandingan  25:75  dengan  nilai  IC 50 sebesar 207,79 ppm.
Kata kunci : Mangga, sirsak; penangkapan radikal, DPPH

## ABSTRACT
Antioxidant  has  the  activity  to  fight  cancer  and  other  potential  degenerative  diseases  like diabetic, and heart atack. Antioxidant acts by neutralizing the free radical substances into the non radical one. Many plants, include fruits and vegetables, are natural antioxidants because of fenolic and flavonoids components that have activities as antioxidants. Mango and soursup are one of those plants available in Indonesia. Mango leaves and soursop leaves are parts of plants that contain a lot of active ingredients especially phenols that has antioxidant, antiinflammation and  antidiabetic  activities.  Combination  of  both  plants  has  potentials  as  antioxidants. Antioxidant  activity  through  free radical  scavenging  activity  of  combination  of mango  leaves and soursop leaves are observed by using DPPH methods with ascorbic acid as the standard. Combination extracts show potency to be explored as antioxidant. Compared with the standard, combination  extracts  show  weaker  radical  scavenging  activity.  Combination  75:25  of  extract mango leaves and soursop leaves show the best IC 50 value 35,50 ppm. Then it is followed by combination 50:50 and 25:75 with IC 50 value 140,36 ppm and 207,79 ppm respectively.
Keywords: Mango, Soursop, Radical scavenging, DPPH
Cendekia Journal of Pharmacy STIKES Cendekia Utama Kudus
http://cjp.jurnal.stikescendekiautamakudus.ac.id

## LATAR BELAKANG
Radikal  bebas  merupakan  suatu  senyawa  yang  memiliki  elektron  tidak berpasangan. Radikal bebas dapat diproduksi secara endogen (metabolisme sel normal) maupun  eksogen  (disebabkan  oleh  faktor  paparan  dari  aktivitas  merokok,  alkohol, radiasi  ataupun  dari  lingkungan).  Dalam  sistem  biologis  tubuh,  akumulasi  keberadaan radikal  bebas  dalam  jumlah  yang  berlebihan  tersebut  disebut  dengan  stres  oksidatif (Kurutas,  2016).  Kondisi  stres  oksidatif  tersebut  menyebabkan  radikal  bebas  yang sangat reaktif, untuk bereaksi dan mengganggu DNA, RNA, dan memacu oksidasi lipid dan  protein  dalam  sel.  Pada  akhirnya,  peristiwa  tersebut  dapat  memacu  terjadinya penyakit  kronis  ataupun  degeneratif  (Xu et  al .,  2017).  Antioksidan  dapat  berperan dalam  peningkatan  kualitas  kesehatan  dan  pencegahan  penyakit  degeneratif. Antioksidan dapat membantu melindungi tubuh dari radikal bebas (Sultana et al ., 2012). Antioksidan  bekerja  dengan  cara  menetralisasi  radikal  bebas  menjadi  bentuk  non radikal. Antioksidan terbagi dua berdasarkan sumbernya yaitu antioksidan sintetik dan alami.  Antioksidan  sintetik  banyak  digunakan  karena  stabilitas  yang  baik,  dan  mudah diperoleh.  Akhir-akhir  ini,  antioksidan  alami  banyak  dikembangkan  sebagai  alternatif antioksidan karena pertimbangan masalah keamanan antioksidan sintetik dalam jangka panjang. Sebagian besar antioksidan alami yang diperoleh, berasal dari tanaman seperti buah, sayur-sayuran, herba, bunga dan rempah-rempah. Antioksidan alami dari tanaman tersebut  utamanya  berasal  dari  kandungan  polifenol  (asam  fenolat,  flavonoid, antosianin), karotenoid, dan vitamin (vitamin E dan vitamin C). (Lourenço et al. , 2019). Mangga  dan  sirsak  adalah  tanaman  yang  banyak  ditemukan  di  Indonesia.  Baik daun  mangga  maupun  daun  sirsak  banyak  mengandung  komponen  fenolik  dan flavonoid  (Marjoni et  al. ,  2018;  Nguyen et  al. ,  2020).  Ekstrak  etanol  daun  sirsak ( Annona muricata L.) memiliki aktivitas antioksidan paling poten dibandingkan dengan ekstrak etil asetat, yang ditunjukkan dari kemampuan ekstrak menangkal radikal bebas, dengan nilai IC 50 sebesar 35,51 ppm (Qorina et al ., 2019). Ekstrak etanol daun mangga ( Mangifera indica ) menunjukkan aktivitas antioksidan dengan nilai IC 50 sebesar 79,09 ± 0,42%  (Udem et  al. ,  2018).  Berdasarkan  hal  tersebut,  terkait  adanya  kandungan senyawa  aktif  yang  berperan  sebagai  antioksidan  pada masing-masing  tanaman,  maka penelitian  ini  dilakukan  untuk  menguji  aktivitas  penangkapan  radikal  bebas  pada kombinasi ekstrak etanol daun mangga ( Mangifera indica L.) dan daun sirsak ( Annona muricata L.).  Aktivitas  penangkapan  radikal  bebas  diuji  dengan  metode  DPPH  ( 2,2- difenil-1-pikrilhidrazil )  dan  ditetapkan  aktivitasnya  dalam  nilai Inhibition Concentration 50 (IC 50 ).

## BAHAN DAN METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan  adalah  neraca  analitik  (Ohaus),  bejana  maserasi, moisture analyzer (Ohaus), magnetic stirrer and hot plate (Ika ® ), spektrofotometer UV- Vis (Genesys), dan alat-alat gelas yang lazim digunakan dalam analisis kimia. Bahan- bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  adalah  daun  mangga,  daun  sirsak  (diperoleh dari  desa  Purwosari,  Mlati,  Sleman),  etanol  70%,  metanol p.a (Merck),  2,2-difenil-1- pikrilhidrazil (DPPH), vitamin C, dan akuades.

## Prosedur Penelitian
Ekstraksi Daun Mangga dan Daun Sirsak
Sebanyak 2 kg daun basah mangga dan sirsak dikeringkan selama dua hari dalam oven  suhu  50 o C.  Selanjutnya  simplisia  kering  dihaluskan  dengan  mesin  giling.
Sebanyak 200 gram serbuk daun mangga kering dan daun sirsak kering masing-masing ditimbang dan dimaserasi dengan etanol 70% sebanyak 2 liter dan dilakukan remaserasi sampai  larutan  bening.  Hasil  maserasi  diuapkan  pelarutnya  menggunakan rotary evaporator hingga  diperoleh  ekstrak  kental.  Masing-masing  ekstrak  kental  yang diperoleh, dihitung rendemennya dengan cara :
% Rendemen= Bobot ekstrak akhir Bobot simplisia awal x100%

## Karakterisasi Ekstrak
a. Pengamatan organoleptis ekstrak
Meliputi  penggunaan  panca  indera  untuk  mendeskripsikan  bentuk  (padat,  serbuk, kental, cair) dan warna.
b. pH
Pengujian  pH  dilakukan  dengan  cara  dibuat  larutan  1%  ekstrak  yang  dilarutkan dalam  air dan disaring kemudian larutan diukur dengan indikator pH.
c. Susut pengeringan
Pengukuran  susut  pengeringan  dilakukan  dengan  menggunakan moisture  analyzer . Sebanyak 1 gram ekstrak diletakkan dalam pan aluminium kemudian alat diatur pada suhu 105 o C dan dicatat susut pengeringan yang terukur sampai bobot tetap (Mbah et al ., 2012).
Uji Aktivitas Antioksidan Kombinasi Ekstrak Daun Mangga dan Daun Sirsak a. Pembuatan larutan DPPH (0,1 mM)
Sebanyak 3,94 mg serbuk DPPH dilarutkan dalam 100 mL metanol pa . Larutan DPPH  yang  diperoleh  selanjutnya  diukur operating  time dan  panjang  gelombang maksimumnya.
b. Pembuatan larutan standar vitamin C Sebanyak 10,0 mg vitamin C dilarutkan dalam 10 mL metanol pa . Selanjutnya, konsentrasi larutan dibuat pada rentang 10; 20; 30; 40, dan 50 ppm.
c. Pembuatan larutan sampel ekstrak etanol daun mangga dan daun sirsak. Sebanyak 100 mg ekstrak etanol daun mangga dan daun sirsak, masing-masing dilarutkan dalam 100 mL metanol pa sebagai larutan stok. Selanjutnya dari  larutan stok  tersebut,  konsentrasi  larutan  masing-masing  ekstrak  dibuat  pada  rentang  50; 100; 150; 200, dan 250 ppm. Perbandingan kombinasi ekstrak etanol daun mangga dan  daun  sirsak  yang  digunakan  adalah  25:75;  50:50,  dan  75:25.  Perbandingan kombinasi  tersebut  dilakukan  pada  ekstrak  etanol  daun  mangga  dan  daun  sirsak konsentrasi 50; 100; 150; 200, dan 250 ppm.
Untuk  kombinasi  ekstrak  dengan  perbandingan  25:75,  diambil  50  µL  ekstrak etanol daun mangga dan 150 µL ekstrak etanol daun sirsak. Untuk kombinasi ekstrak dengan perbandingan 50:50, diambil 100 µL ekstrak etanol daun mangga dan 100 µL ekstrak  etanol  daun  sirsak.  Untuk  kombinasi  ekstrak  dengan  perbandingan  75:25, diambil 150 µL ekstrak etanol daun mangga dan 50 µL ekstrak etanol daun sirsak.
d. Uji penangkapan radikal bebas DPPH Penentuan  aktivitas  antioksidan  metode  DPPH  dilakukan  sebagaimana  dalam Badejo dkk (2014) dengan beberapa modifikasi. Sebanyak 200 µL larutan ditambah 2,0  mL  larutan  DPPH  dan  divorteks.  Campuran  diinkubasi  pada  suhu  kamar  dan dalam  ruang  yang  gelap  selama  20  menit  sebagai operating  time dan  dibaca absorbansinya pada λ maksimum 514 nm. Blangko yang digunakan adalah metanol pa. Pengujian direplikasi dua kali.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil Karakterisasi Ekstrak Etanol Daun Mangga dan Daun Sirsak
Hasil karakterisasi ekstrak etanol daun mangga dan daun sirsak dapat dilihat pada tabel 1. Karakterisasi ekstrak etanol daun mangga dan daun sirsak meliputi organoleptis (bentuk dan warna), pH dan susut pengeringan.  Ekstrak etanol daun mangga dan daun sirsak memiliki pH cukup asam, yaitu 4 untuk daun mangga dan 5 untuk daun sirsak.
Tabel 1. Hasil Karakterisasi Ekstrak Etanol Daun Mangga dan Daun Sirsak Karakteristik Ekstrak Hasil Ekstrak daun mangga Ekstrak daun sirsak Organoleptis Ekstrak kental berwarna hijau kecoklatan Ekstrak kental berwarna coklat pH 4 5 Susut pengeringan 1,29% 1,58%
Susut  pengeringan  menggambarkan  indikator  besarnya  senyawa  yang  hilang selama  proses  pengeringan.  Batas  maksimum  susut  pengeringan  menurut  Farmakope Herbal  Indonesia  adalah  tidak  lebih  dari  10%.  Jika  bahan  tidak  mengandung  minyak atsiri atau sisa pelarut organik menguap, maka susut pengeringan identik dengan kadar air.  Kandungan  air  <  10%  dapat  menghambat  reaksi  enzimatis  serta  melindungi  dari tumbuhnya mikroba. Ekstrak etanol daun mangga dan daun sirsak hasil maserasi secara berurutan memiliki nilai % susut pengeringan sebesar 1,29% dan 1,58%. Baik ekstrak etanol  daun  mangga  maupun  ekstrak  etanol  daun  sirsak  memenuhi  persyaratan  susut pengeringan esktrak.
Serbuk  daun  mangga  dan  daun  sirsak  diekstraksi  menggunakan  etanol  70%. Pelarut  etanol  70%  dipilih  karena  merupakan  pelarut  universal,  sehingga  dapat melarutkan  sebagian  besar  senyawa  terutama  senyawa  flavonoid  dan  fenolik  yang terdapat pada daun mangga dan daun sirsak kering. Sehingga senyawa yang memiliki kepolaran berbeda juga dapat terekstraksi dalam etanol. Ekstrak kental yang didapatkan yaitu  daun  mangga  sebanyak  32,55  gram  dan  daun  sirsak  16,2  gram.  Ekstrak  etanol daun mangga dan daun sirsak yang diekstraksi menghasilkan rendemen masing-masing sebesar 16,3% dan 8,1%. Rendemen dipengaruhi oleh kadar  air. Semakin besar kadar air ekstrak, semakin besar rendemen yang diperoleh.
Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Mangga dan Daun Sirsak
Gambar  1  menunjukkan  nilai  %  penangkapan  radikal  bebas  untuk  kombinasi ekstrak  mangga  dengan  ekstrak  daun  sirsak  dan  vitamin  C.  Dari  gambar  tersebut diperoleh  informasi  bahwa,  semakin  besar  konsentrasi  kombinasi  ekstrak  maupun konsentrasi  vitamin  C  yang  digunakan,  semakin  besar  kemampuan  senyawa  tersebut dalam menghambat radikal bebas. Vitamin C sebagai standar memerlukan kadar yang lebih  kecil  dibandingkan  ekstrak  untuk  memperoleh  kisaran  %  penangkapan  radikal yang sama. Tabel 2 menunjukkan nilai IC 50 kombinasi dua ekstrak dan vitamin C yang diukur  dengan  metode  penangkapan  radikal  bebas  DPPH.  IC 50 menunjukkan kemampuan suatu senyawa dalam menghambat 50% radikal bebas. Semakin kecil nilai IC 50 ,  maka  semakin  poten  aktivitas  senyawa  tersebut  sebagai  antioksidan.  Artinya senyawa  tersebut,  dengan  konsentrasi  rendah  sudah  mampu  menghambat  50%  radikal bebas.
Gambar 1. Hubungan Antara Aktivitas Antioksidan Metode Penangkapan Radikal Bebas DPPH dengan Konsentrasi Kombinasi Ekstrak Etanol Daun Mangga, Ekstrak Etanol Daun Sirsak, dan Vitamin C. (M = Ekstrak Etanol Daun Mangga, S = Ekstrak Etanol Daun Sirsak)
Secara  keseluruhan,  dari  data  nilai  IC 50 ,  maka  vitamin  C  sebagai  pembanding memiliki  aktivitas  antioksidan  yang  paling  besar  (IC 50 =  35,50  ppm).  Selanjutnya, kombinasi ekstrak etanol daun mangga dan daun sirsak (75:25) menunjukkan aktivitas antioksidan  paling  baik  setelah  vitamin  C  (IC 50 =  94,96  ppm).  Sementara,  kombinasi ekstrak etanol daun mangga dan daun sirsak (25:75) menunjukkan aktivitas antioksidan paling rendah (IC 50 = 207,79 ppm). Jika dibandingkan dengan nilai IC 50 ekstrak etanol daun  mangga  tunggal  (100%)  dan  ekstrak  etanol  daun  sirsak  tunggal  (100%),  maka ekstrak  etanol  daun  mangga  100%  (IC 50 =  83,73  ppm)  menunjukkan  aktivitas antioksidan  yang  paling  baik  diantara  nilai  IC 50 ekstrak  tunggal  maupun  kombinasi kedua  ekstrak  tersebut.  Meskipun  demikan,  adanya  penambahan  ekstrak  etanol  daun mangga  pada  ekstrak  daun  sirsak  mampu  menyebabkan  peningkatan  aktivitas antioksidan dibandingkan ekstrak etanol daun sirsak tunggal (100%).
Tabel 2. Nilai IC 50 dari Uji Penangkapan Radikal Bebas DPPH pada Ekstrak Etanol Daun Mangga, Daun Sirsak dan Vitamin C. (M= Ekstrak Etanol Daun Mangga, S = Ekstrak Etanol
Daun Sirsak) Bahan IC 50 ± SD (ppm) Vitamin C 35,50 + 1,17 S (100%) 300,04 + 12,58 M:S (25%:75%)  207,79 + 13,74 M:S (50%:50%)  140,36 + 9,33 M:S (75%:25%)  94,96 + 3,64 M (100%) 83,73 + 11,80

## SIMPULAN DAN SARAN

## Simpulan
Kombinasi  ekstrak  etanol  daun  mangga  dan  daun  sirsak  memiliki  aktivitas antioksidan,  tetapi  aktivitas  tersebut  lebih  rendah  dibandingkan  vitamin  C.  Dari  tiga kombinasi  yang  diuji,  kombinasi  ekstrak  etanol  daun  mangga dan  daun  sirsak  dengan perbandingan 75:25 memiliki aktivitas penangkapan radikal bebas paling baik dengan nilai IC 50 sebesar 94,96 µg/mL.
0,00 50,00 100,00 0 50 100 150 200 250 300 % P en an gk ap an R ad ik al Be ba s D PP H Konsentrasi Ekstrak (µg/mL) Kombinasi M:S (25:75)
Kombinasi M:S (50:50) Kombinasi M:S (75:25) Vitamin C

## Saran
Perlu  dilakukan  uji  aktivitas  antioksidan  lebih  lanjut  untuk  kombinasi  ekstrak etanol  daun  mangga  dan  daun  sirsak  menggunakan  metode  lain  seperti  FRAP  dan ABTS.

## DAFTAR PUSTAKA
Badejo,  A.  A.,  Damilare,  A.,  &  Ojuade,  T.  D.  (2014).  Processing  effects  on  the antioxidant  activities  of  beverage  blends  developed  from  Cyperus  esculentus, Hibiscus sabdariffa, and Moringa oleifera extracts. Preventive Nutrition and Food Science , 19 (3). https://doi.org/10.3746/pnf.2014.19.3.227
Kurutas,  E.  B.  (2016).  The  importance  of antioxidants  which  play  the  role in  cellular response  against  oxidative/nitrosative  stress:  Current  state.  In Nutrition  Journal (Vol. 15, Issue 1). https://doi.org/10.1186/s12937-016-0186-5
Lourenço, S. C., Moldão-Martins, M., & Alves, V. D. (2019). Antioxidants of natural plant origins: From sources to food industry applications. In Molecules (Vol. 24, Issue 22). https://doi.org/10.3390/molecules24224132
Marjoni,  M.  R.,  Nofita,  D.,  Rahmi,  N.,  Saifullah,  &  Najla,  N.  A.  (2018).  Phenolics compounds,  flavonoids,  and  antioxidant  activity  methanol  extract  of  arum  manis leaves  (Mangifera  indica  L.  Var.  Arumanis). International  Journal  of  Green Pharmacy , 12 (3).
Mbah, C. C., Builders, P. F., Akuodor, G. C., & Kunle, O. O. (2012). Pharmaceutical characterization  of  aqueous  stem  bark  extract  of  bridelia  ferruginea  Benth (Euphorbiaceae). Tropical  Journal  of  Pharmaceutical  Research , 11 (4),  637–644. https://doi.org/10.4314/tjpr.v11i4.15
Nguyen, M. T., Nguyen, V. T., Minh, L. V., Trieu, L. H., Cang, M. H., Bui, L. B., Le, X. T., & Danh, V. T. (2020). Determination of the phytochemical screening, total polyphenols,  flavonoids  content,  and  antioxidant  activity  of  soursop  leaves (Annona  muricata  Linn.). IOP  Conference  Series:  Materials  Science  and Engineering , 736 (6). https://doi.org/10.1088/1757-899X/736/6/062011
Qorina,  F.,  Arsianti,  A.,  Fithrotunnisa,  Q.,  &  Tejaputri,  N.  A.  (2019).  Phytochemistry and  antioxidant  activity  of  soursop  (Annona  muricata)  leaves. International Journal of Applied Pharmaceutics , 11 (Special Issue 6), 1–6.
https://doi.org/10.22159/ijap.2019.v11s6.33524
Sultana, B., Hussain, Z., Asif, M., & Munir, A. (2012). Investigation on the Antioxidant Activity of Leaves, Peels, Stems Bark, and Kernel of Mango (Mangifera indica L.). Journal of Food Science , 77 (8). https://doi.org/10.1111/j.1750-3841.2012.02807.x
Udem,  G.  C.,  Dahiru,  D.,  &  Etteh,  C.  C.  (2018).  In  vitro  Antioxidant  Activities  of Aqueous  and  Ethanol  Extracts  of  Mangifera  indica  Leaf,  Stem-Bark  and  Root- Bark. Pharmacognosy Communications , 8 (3), 119–124. https://doi.org/10.5530/pc.2018.3.25
Xu, D. P., Li, Y., Meng, X., Zhou, T., Zhou, Y., Zheng, J., Zhang, J. J., & Li, H. Bin.
(2017). Natural antioxidants in foods and medicinal plants: Extraction, assessment and resources. In International Journal of Molecular Sciences
(Vol. 18, Issue 1). https://doi.org/10.3390/ijms18010096