EISSN: 2407-7690 https://ejournal3.undip.ac.id/index.php/jmr

## Analisa Genetika Gastropoda Nudibranchia dari Pulau Panjang, Jepara
Wilhelmina br Sinulingga, Diah Permata Wijayanti * , Munasik, Dwi Haryanti Departemen Ilmu Kelautan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Diponegoro Jl. Prof. Jacub Rais, Tembalang, Semarang, Jawa Tengah 50275 Indonesia *Corresponding author, e-mail: diahpermata@lecturer.undip.ac.id,
ABSTRAK: Gastropoda Nudibranchia memiliki karakteristik insang telanjang atau insang berbulu atau  tanduk  di  punggungnya  merupakan  anggota  Ordo  Opisthobranchia,  kelompok  Gastropoda terbesar dengan anggota lebih dari 3.000 species. Nudibranchia diketahui hidup di Pulau Panjang, salah  satu  destinasi  wisata  terkenal  di  Jepara. Pergerakannya  yang  lambat  dan  bentuknya  yang menarik,  dapat  mengganggu  keberadaannya  di  habitat  alaminya.  Penelitian  mengenai Nudibranchia  belum  banyak  dilakukan  di  Indonesia,  termasuk  analisa  genetiknya.  Penelitian  ini bertujuan untuk menganalisis keanekaragaman genetik Nudibranchia dari Perairan Pulau Panjang. Analisa  DNA  dilakukan  di  Laboratorium  Terpadu  Universitas  Diponegoro,  dengan  metode  PCR- sequencing menggunakan mtDNA-COI (cytochrome oxidase subunit I gene dari DNA mitokondrial). Primer yang digunakan pada penelitian yaitu primer forward: LCOI1490: 5'- GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3  dan  reverse:  HCOI2198:  5'-TAAACTTCAGGGTGACC AAAAAATCA-3'. Rekonstruksi pohon filogenetik dan keragaman genetik dilakukan menggunakan software  MEGA  6.06  (Analysis  of  the  Evolution  of  Molecular  Genetics).  Hasil  analisis  sampel Nudibranchia berdasarkan susunan DNA mitokondria, ditemukan 2 spesies dengan 8 individu yaitu, spesies Jorunna funebris dan Chromodoris lineolata . Tingkat kesamaan (homologi) dalam analisa BLAST (Basic Local Alignment Search Tool) sebesar 98 % - 100 %. Hasil analisis filogenetik secara menyeluruh memperlihatkan pengelompokan yang terjadi berdasarkan kemiripan genetiknya.
Kata kunci: Nudibranchia; Keanekaragaman Genetik; Jorunna funebris; Chromodoris lineolata

## Genetic Analysis of Nudibranch on Panjang Island, Jepara
ABSTRACT: Nudibranchia gastropods have the characteristics of naked gills or hairy gills or horns on their backs and are members of the Order Opisthobranchia, the largest group of Gastropods with more than 3,000 species. Nudibranchia are known to live on Panjang Island, one of the famous tourist destinations in Jepara. Its slow movements and attractive shape can disrupt its existence in its natural habitat. Not much research has been done on Nudibranchia in Indonesia, including genetic analysis. This research aims to analyze the genetic diversity of Nudibranchia from Panjang Island waters. DNA analysis was carried out at the Diponegoro University Integrated Laboratory, using the PCR-sequencing method using mtDNA-COI (cytochrome oxidase subunit I gene from mitochondrial DNA). The primers used in the research were forward primer: LCOI1490: 5'- GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3 and reverse: HCOI2198:
5'-
TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3'.  Phylogenetic  tree  reconstruction  and  genetic  diversity  were carried out using MEGA 6.06 (Analysis of the Evolution of Molecular Genetics) software. The results of analysis of Nudibranchia samples based on mitochondrial DNA structure found 2 species with 8 individuals, namely, Jorunna funebris and Chromodoris lineolata species. The level of similarity (homology) in BLAST (Basic Local Alignment Search Tool) analysis is 98% - 100%. The results of a comprehensive phylogenetic analysis show that grouping occurs based on genetic similarity.

## Keywords: Nudibranchia, Genetic Diversity; Jorunna funebris; Chromodoris lineolata

## PENDAHULUAN
Kekayaan hayati laut Indonesia dikenal sangat beragam, salah satunya adalah invertebrata laut. Invertebrata laut dalam sistem rantai makanan merupakan herbivora, predator dominan, dan
biota  penentu  dari  sistem  piramida  makanan  (Salanggon et  al.,  2020 ;  Dharmawan,  2018). Nudibranchia  adalah moluska  tidak  bercangkang  yang  seringkali  berwarna  terang  dan mencolok dan  sangat  beragam,  dengan  karakteristik  utama  berupa  insang  telanjang,  atau  insang  berbulu, atau berupa tanduk di punggung darimana Siput Laut ini memperoleh namanya (Paulangan et al ., 2021; Permadani and Retnoaji, 2018). Rosyid et al ., (2022) dan Zhao et al., (2015) mendata bahwa ada  2000  jenis  Nudibranchia  di  perairan  Indo-Pasifik,  dengan  keragaman  jenis  dapat  bervariasi menurut lokasi. Nudibranchia pada umumnya memakan algae , sponge , karang keras dan lunak, bryozoans dan hydroids (Asrul et al. , 2021) dan biasanya tersedia di daerah yang memiliki terumbu karang.
Proses  identifikasi  spesies  secara  konvensional  pada  Nudibranchia  menggunakan karakterisasi morfologi memiliki berbagai keterbatasan (Zhao et al. 2015;  Waldchen et al, 2018). Pertama, ciri fenotipik dan variasi genetik bisa menyebabkan kesalahan identifikasi. Kedua, masih banyak taksa yang belum jelas/samar (Mashar et al ., 2019). Ketiga, kunci morfologi hanya efektif di suatu  tahap  perkembangan  makhluk  hidup  saja,  sehingga  banyak  individu  yang  belum  dapat diidentifikasi.  Keempat,  penggunaan  kunci  identifikasi  sering  kali  memerlukan  tingkat  keahlian tertentu, sehingga bisa saja terjadi kesalahan pada saat proses identifikasi. Kelima membutuhkan waktu yang lama (Zhao et al. , 2015; Kowalska et al., 2018; Waldchen et al ., 2018). Salah satu cara untuk mengidentifikasi nudibranchia dapat menggunakan metode molecular.
Salah  satu  penanda  molekuler  yang  saat  ini  banyak  digunakan  identifikasi  genetik  adalah DNA barcode yang merupakan sekuen pendek DNA mitokondria yang dapat menunjukkan variasi genetik  dalam  suatu  spesies  (Martiansyah,  2021).  DNA  barcoding  dapat  digunakan  untuk  untuk memecahkan keterbatasan proses identifikasi spesies secara konvensional (Waldchen et al ., 2018). Menggabungkan sekuen DNA dengan karakter morfologi yang ada dapat memfasilitasi identifikasi dan klasifikasi spesies (Kowalska et al., 2018; Waldchen et al ., 2018). Penelitian ini menggunakan DNA barcoding untuk mengetahui jenis Nudibranchia dari Perairan Pulau Panjang, Jepara.Materi yang digunakan adalah beberapa individu Nudibranchia yang diambil dari Pulau Panjang, Jepara. Pengambilan  sampel  di  kedalaman  1-2  meter  menggunakan  alat  selam  dasar  atau Skin  Dive dengan  pengambilan  sampel  pada  dua  titik  sampling.  Pengambilan  sampel  dilakukan  secara manual.  Sampel  yang  diambil  dimasukkan  kedalam  botol  sampel  yang  telah  diberi  label  dan difiksasi Ethanol 96%  untuk  diproses  lebih  lanjut  di  laboratorium.  Sampel  yang  didapatkan  dari Pulau  Panjang  sebanyak  8  individu  dengan kode  label  yaitu  H1,  H2,  H3,  J1,  J2, J3,  J4,  dan J5. Sampel selanjutnya diekstraksi menggunakan dua metode yaitu, Chelex 10% dan DNA exctraction KIT ZymoResearch .

## MATERI DAN METODE
Proses  PCR  dilakukan  dengan  menggunakan  alat Thermocycler yang  diprogram  untuk melakukan  35  siklus  dengan  setiap  siklusnya  terdiri  dari  peroses  penempelan  utas  ganda  ( pre denaturation )  pada  suhu  95 o C  selama  3  menit, denaturation pada  suhu  94 o C  selama  45  detik, annealing pada  suhu  45 o C  selama  45  detik,  dan extention pada  suhu  72 o C  selama  2  menit. Kemudian  dilanjutkan  dengan final  elongated pada  suhu  72 o C  selama  10  menit.  Primer  yang digunakan pada penelitian ini merupakan primer dengan target lokus CO1 yaitu HCO (5’ - GGT CAA CAA ATC ATA AAG ATA TTG G - 3’) dan primer LCO (5’ - TAA ACT TCA GGG TGA CCA AAA AAT CA  - 3’).  Sebelum  melakukan  elektroforesis,  terlebih  dahulu  dibuat  media  elektroforesis  yaitu agarosa  1%  ( agarose 0.8  g  dan  80  mL  TAE Buffer )  dengan  2  μL FloroSave sebagai  pewarna. Langkah selanjutnya adalah 2 μ L sampel hasil PCR tersebut kemudian dimasukkan ke dalam sumur agarose .  Elektroforesis  menggunakan  mesin  elektroforesis  tegangan  100  V  dan  arus  400  mA dengan  waktu  30  menit.  Panjang  untaian  basa  DNA  dapat  diukur  dengan  menggunakan  2  μ  L Lowmass ladder yang dimasukkan pada sumur pertama pada agarose . Hasil elektroforesis berupa pita-pita yang dapat dilihat dengan menggunakan alat UV transluminator . Analisis data hasil sekuen dilakukan dengan menggunakan program MEGA 6.06 ( Moleculer Evolutionary  Genetic  Analysis ).  Data  selanjutnya  diedit  agar  sejajar  menggunakan  program ClustalW yang terdapat pada MEGA 6.06 (Tamura et al., 2013). Analisis hasil sekuen DNA terbaik
dibandingkan  dengan  sekuen  DNA  yang  ada  pada  basis  data  ( database )  DNA.  Penelusuran dilakukan  dengan  menggunakan  internet  melalui  program  pelacakan  database Basic  Local Alignment  Search  Tool (BLAST)  pada  National  Center  for  Biotechnology  Information,  National Institute for Health, USA ( www.ncbi.nlm.nih.gov ). Hasil data sekuen DNA yang sesuai menunjukan query  cover dan identification dengan  persentase  lebih  dari  90%,  sehingga  menyatakan  bahwa adanya kesamaan dari perbandingan data sekuen DNA dengan yang ada  pada basis data DNA, kemudian dilakukan pembuatan pohon filogenik dari data tersebut. Data yang diperoleh dari hasil pengolahan data sampel nudibranchia dari Pulau Panjang sebanyak 7 hasil sekuen. Sekuen basa nitrogen dari sampel kemudian dicocokkan ulang untuk menyeleksi hasil sekuen yang akan dipilih guna melihat hubungan rekontruksi pohon filogenetik lebih lanjut. Menurut Meilindo (2014), Analisa Filogenetik  dipergunakan  untuk  mengetahui  tingkat  kekerabatan  dan  jarak  genetik  pada  spesies makhluk hidup seperti Nudibranchia. Jarak genetik dipergunakan untuk mengetahui ukuran genetik yang berbeda antar populasi yang menyebabkan evolusi akibat adanya persilangan acak, seleksi, mutasi, dan hanyutan gen.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Sampel yang diambil dari Pulau Panjang, Jepara sebanyak 8 individu memiliki perbedaan bentuk,  warna,  dan  ukuran.  Perbedaan  spesifik  tersebut  dapat  disimpulkan  seperti  pada  Tabel1. Semua individu tersebut diambil pada 2 titik sampling dengan sampel H1, H2, dan H3 diambil pada titik yang  sama  dan sampel  J1,  J2,  J3,  J4,  dan J5  diambil  pada  titik  yang  sama  pula.  Kedua  titik sampling yang dimaksud memiliki parameter perairan pada Tabel 2. Sesuai dengan morfologi setiap individu  Nudibranchia  pada  Tabel  1.  dan  Tabel  2.,  individu  Nudibranchia  terbagi  menjadi  2  jenis spesies  yang  berbeda  yaitu  sampel  H1,  H2,  dan  H3  adalah  sampel  dengan  spesies  yang  sama, sedangkan pada sampel J1, J2, J3, J4, dan J5 adalah sampel dengan spesies yang sama seperti pada Gambar 1.
Sebanyak 8 individu sampel Nudibranchia yang diambil di Pulau Panjang, Jepara, hanya 7 individu  yaitu  sampel  H1,  H2,  J1,  J2,  J3,  J4,  dan  J5  yang  berhasil  diekstraksi  dengan KIT ZymoResearch dan didapatkan DNA Nudibranchia-nya. Ketujuh sampel berhasil diamplifikasi dan menghasilkan  pita  tunggal  pada  setiap  sampel.  Hasil  tersebut  ditunjukkan  dengan  visualisasi menggunakan  mesin  elektroforesis.  Hasil  visualisasi  elektroforesis  pada  ketujuh  sample  memiliki pita DNA berukuran 600-700 pasang basa (bp). Analisis homologi hasil sekuen selanjutnya
Tabel 1. Hasil morfologi Nudibranchia di Pulau Panjang, Jepara
Keterangan Sampel H1 – H3 Sampel J1 – J5 Panjang Rata-rata ± 2 cm ± 6,5 cm Jumlah Tubernakel Rata-rata 0 0 Warna Mantel Coklat, Hitam, Putih Putih, Hitam Rinotubernakel Ada Ada Rinovor Bergelambir Ada Ada Warna Rinovor Coklta, Hitam, Putih Hitam Tabel 2. Parameter Perairan Habitat Nudibranchia di Pulau Panjang, Jepara Sampling Suhu (°C) DO (ppm) Salinitas (ppm) Kecerahan (m) Kec. Arus (m/s) pH Koordinat Titik 1 29,43 7,65 35 3,33 4,5 7,89 110°37’51.62” Tirik 2 29,13 7,65 36 3,4 4,5 7,67 110°37’51.10”
Gambar 1. Sampel Penelitian ( a. Sampel H1, H2, dan H3; b. Sampel J1; c. Sampel J2; d. Sampel J3; e. Sampel J4; dan f. Sampel J5). Keterangan: sampel H1, H2, dan H3 berada pada titik  sampling  yang  sama  (berkoloni);  Sampel J1,  J2, J3,  J4,  dan  J5  berada  pada titik sampling yang sama (berpencar/individualis).
H1 H2 H1 H3 a. b. c. d. e. f.
H2 H1 H3 a. b. c. d. e. f. J3 J4 H2 H1 Ledder H3 J2 J1 J5 Ledder
Tabel 3. Hasil BLAST sampel Nudibranchia di Pulau Panjang, Jepara
Kode Sampel Panjang Basa Nama Hasil BLAST Query Cover (%) Identify (%) Accesion Code J1 681 Jorunna funebris 98 99,26 MN690307.1 J2 668 Jorunna funebris 98 99,85 MG883233.1 J3 668 Jorunna funebris 100 99,70 MN690307.1 J4 668 Jorunna funebris 100 100 MN690306.1 J5 668 Jorunna funebris 100 99,25 MN690307.1 H1 678 Chromodoris lineolata 96 99,24 MG883233.1 H2 673 Chromodoris lineolata 99 99,11 MN690306.1
Tabel 4. Sampel Data Outgroup dari Database GenBank Accesion Code Panjang Basa Nama Hasil BLAST Lokasi KU496481.1 656 Nudibranchia sp . Jordania MG883233.1 678 Chromodoris lineolata Australia MN690307.1 668 Jorunna funebris Singapura
digunakan metode Basic Local Alignment Search Tool (BLAST) yang menunjukkan bahwa seluruh sampel  memiliki  kesamaan  dengan database GenBank  dengan  persentase  yang  beragam  yaitu, 99,11-100%. Pada ketujuh sampel, 2 sampel memiliki kesamaan dengan Chromodoris lineolata dan 5 sampel memiliki kesamaan dengan Jorunna funebris . Hasil tersebut dapat dilihat pada Tabel 3. Hasil  sekuen  selanjutnya  dianalisis  dengan  merekonstruksi  pohon  filogenetik.  Analisis  ini dilakukan  untuk  mengintepretasikan  kekerabatan  antar  Nudibranchia.  Selain  mengintepretasikan sampel,  analisis  filogenetik  dilakukan  untuk  memverifikasi  lebih  lanjut  dalam  identifikasi  spesies (Layton et al ., 2018) pada sampel Nudibranchia dan membandingkan dengan jenis yang sama pada database GenBank.  Penyusunan  pada  pohon  filogenetik  dilakukan  dengan  penambahan  data pembanding outgroup Tabel 4.
Hasil analisis pohon filogenetik pada sampel Nudibrnchia membentuk clade yang terdiri dari 2 sub-clade (Gambar  3.). Sub-clade 1 terdiri dari 5 sampel, yaitu J1, J2, J3,  J4, dan J5. Kemudian sub-clade 2 terdiri 2 sampel, yaitu H1 dan H2. Sampel Nudibranchia dari spesies Jorunna funebris, Chromodoris  lineolate,  dan  Nudibranchia sp.  diambil  dari  GenBank  untuk  digunakan  sebagai outgroup . Dari ketiga sampel ini, hanya Nudibranchia sp. yang tidak masuk ke dalam sub-clade pada phon filogenetik. Namun, sampel Jorunna funebris dan Chromodoris lineolata terdapat pada sub- clade tersebut. Sampel Jorunna funebris masuk ke dalam sub-clade yang pertama dan sampel J1, J2, J3, J4, dan J5 berada pada sun-clade yang sama. Pada sampel Chromodoris lineolata , sampel ini masuk kedalam sub-clade yang kedua dengan sampel H1 dan H2 juga berada pada sub-clade yang sama. Hasil memverifikasi bahwa sampel J1,  J2, J3, J4, dan J5 termasuk kedalam spesies Jorunna funebris dan sampel H1 dan H2 juga termasuk kedalam spesies Chromodoris lineolata . Hasil morfologi pada setiap sampel, jika dianalisa morfologi setiap individu dapat dibedakan dengan jelas. Pada sampel H1, H2, dan H3, memiliki ciri morfologi yang sama. Pada sampel J1, J2, J3, J4, dan J5 juga terdapat ciri morfologi yang sama dan berbeda dengan sampel H1, H2, dan H3. Hasil tersebut secara sementara dapat dipastikan semua individu digolongkan menjadi 2 spesies yang berbeda. Menurut Zhao et al . (2015), tahap ini masih belum dapat dipastikan bahwa identifikasi ini  belum  tentu  benar,  sehingga  diperlukan  identifikasi  yang  lebih  akurat  dengan  menggunakan identifikasi secara genetik.
Sampel  yang  didapatkan  pada  saat  sampling  di  Pulau  Panjang,  Jepara  adalah  8  individu, namun yang berhasil diekstraksi hanya 7 individu. Penamaan sampel pada setiap individu adalah H1, H2, H3, J1, J2, J3, J4, dan J5. Gagalnya sampel H3 untuk diekstraksi diakibatkan karena pada

## Journal of Marine Research Vol 13, No. 3 Agustus 2024, pp. 547-554
saat diekstraksi, daging sampel yang dipilih masih memiliki lendir/selaput lendir Nudibranchia yang banyak. Hal ini sangat berpengaruh dalam proses ekstraksi dalam menghancurkan membrane dan dinding sel.
Gen COI memiliki  panjang  sekitar  1500  bp  dan  digunakan  sebagai  DNA barcode untuk identifikasi spesies juga sudah terstandarisasi untuk mempelajari variasi genetik. Adapun panjang DNA sampel Nudibranchia dari penelitan ini sekitar 600 – 700 bp, sudah dapat mengidentifikasi jenis spesies berdasarkan pada database COI pada GenBank.  Persentase sampel juga tinggi dengan ragam  99,11 –  100%  sama  dengan database yang  ada.  Dari  hasil  BLAST  dapat  dilihat  bahwa sampel H1 dan H2 99,11 – 99,24% memiliki nama BLAST yaitu Chromodoris lineolate dan sampel J1 – J5 99,25 – 100% memiliki nama BLAST yaitu Jorunna funebris .
Gambar 3. Pohon Filogenetik
Gambar 4. Matrix Jarak Genetik Antar Sampel
1 2 3 4
5 6 7 4117711_J5 4117709_J4 0.007 4117707_J3 0.004 0.003 4117701_J2 0.013 0.006 0.009 4117703_J1 0.000 0.007 0.004 0.013 4117705_H2 0.193 0.193 0.193 0.192 0.193 4117699_H1 0.192 0.192 0.192 0.190 0.192 0.007
Pada  pohon  filogenetik,  terdapat  dua sub-clade yang  ditampilkan  dimana  pada sub-clade pertama  sample  J1 –  J5  berada  disana  dengan  sampel outgroup yaitu  sample Jorunna  funebris dimana ini menandakan bahwa sample J1 – J5 adalah satu spesies yang sama. Pada sub-clade yang  kedua,  sampel  H1  dan  H2  berada  pada sub-clade yang  sama  dengan  sample outgroup Chromodoris lineolata yang jyga dapat diartikan bahwa sample-sample tersebut merupakan spesies yang sama. Berbeda dengan sample outgroup Nudibranchia sp. sample ini tidak berada pada kedua sub-clade yang  ada,  melainkan  membentuk sub-clade tersendiri.  Dari  hasil  ini  diketahui  bahwa, sample outgroup ini  memiliki  spesies  yang  berbeda  dan  belum  diketahui  spesiesnya.  Pada  hasil pohon filogenetik terdapat  bahwa sampel data outgroup Nudibranchia sp. terpisah dari sub-clade sampel penelitian. Terpisahnya sampel dalam pohon filogenetik dapat disebabkan oleh perbedaan sub-clade atau jenis spesies.
Outgroup digunakan  pada  pohon  filogenetik  yang  didapatkan  dari  GenBank  untuk mendapatkan  informasi  yang  meyakinkan  dari  sekuen  sampel  yang  berhubungan  (Dharmayanti, 2011).  Adapun  ketentuan  sebagai  data outgroup adalah  memiliki  kedekatan  taksonomi  dengan sampel.  Hasil  data outgroup yang  terpisah  dengan  sampel  pada  pohon  filogenetik  merupakan verifikasi sampel bahwa sampel berada pada spesies yang sama.

## KESIMPULAN
Hasil dari identifikasi molekuler dengan menggunakan teknik PCR pada Nudibranchia adalah rekonstruksi  pohon  filogenetik  pada  Nudibranchia  memiliki  2 sub-clade .  Kedua sub-clade terbagi berdasarkan spesies nudibranchia yaitu, Chromodoris lineolata dan Jorunna funebris . Kedua sub- clade meiliki  data  yang  sama  dengan  data outgroup sehingga  dapat  dipastikan  sampel  dan  data pada database NCBI adalah spesies yang sama. J1 – J5 berada pada sub-clade pertama adalah nudibranchia dengan spesies Jorunna funebris . Pada sampel H1 dan H2 yang berada pada sub- clade kedua adalah nudibranchia dengan spesies Chromodoris lineolata.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Sebagian penelitian dibiayai oleh “Hibah Penelitian Riset Dasar” dengan No. Kontrak : 225 – 62/UN7.6.1/PP/2021

## DAFTAR PUSTAKA
Asrul, H.A., Bahar, A., Syafiuddin., & Yasir, I., 2021. Nudibranchia Density in Spermonde Islands, South Sulawesi. Jurnal Kelautan Spermonde , 7(2):1 –11.
Dharmawan,  I.G.W.D.,  2018.  Karakterisasi  Morfogenetik  Nudibranch  dari  Beberapa  Populasi  di Indonesia. Institut Pertanian Bogor.
Harahap,  M.R.,  2018.  Elektroforesis:  Analisis  Elektronika  Terhadap  Biokimia  Genetika. Circuit: Jurnal Ilmiah Pendidikan Teknik Elektro , 2(1):21 –26. DOI: 10.22373/crc.v2i1.3248
Kowalska,  Z.,  Pniewski  F.,  &  Latala,  A.,  2019.  DNA  Barcoding –  A  New  Device  in  Phycologist’s Toolbox. Echohydrology & Hydrobiology, 19(3):417 –427. DOI:10.1016/j.ecohyd.2019.01.002 Layton, K.K.S., Gosliner, T.M., & Wilson, N.G., 2018. Flexible Colour Patterns Obscure Identification and  Mimicry  in  Indo-Pacific  Chromodoris  Nudibranchs  (Gastropoda:  Chromodorididae). Molecular Phylogenetics and Evolution , 124:27 –36. DOI:10.1016/j.ympev.2018.02.008 Madduppa, H., 2014. Bioekologi dan Biosistematika Ikan Terumbu. IPB Press. Martiansyah, I., 2021. Mini Review : Pendekatan Molekuler DNA Barcoding: Studi Kasus Identifikasi dan  Analisis  Filogenetik Syzygium (Myrtaceae). Journal  UIN  Alauddin .  Pusat  Penelitian Konservasi Tumbuhan dan Kebun Raya. LIPI. Mashar, M.V., Kusuma, P.D., & Ansori A.S.R., 2019. Pengembangan Motif Karang Jenis Leptoseris Explanata pada Aplikasi Batik Berbasis WEB. E-Proceeding of Engineering , 6(1):1508 – 1513.
Meilindo,  W.,  2014.  Variasi  Genetik  dan  Morfologi  serta  Tingkat  Kekerabatan  Kelinci  Laut ( Phyllidiidae ) antara Populasi Papua dan Australia. Institut Pertanian Bogor.
Paulangan, Y.P., Kalor, J.D., & Supoyo, A.S., 2021. Indeks Keanekaragaman, Keseragaman, dan Dominasi  Nudibranch  di  Perairan  Teluk  Humbolt  Kota  Jayapura  papua  Indonesia. Jurnal Pengolahan Perikanan Tropis, 5(1):59 –64. DOI:10.29244/jppt.v5i1.34406
Permadani,  K.G.,  &  Retnoaji,  B.,  2018.  Histological  Study  of  Phulidia  coelestis  (Nudibranchia) Epidermal Tissue from Pasir Putuh, Situbondo . Indonesian Journal of Biology and Education , 1(1):44 –47. DOI:10.31002/ijobe.v1i1.1047
Rosyid,  A.,  Krisanti,  M.,  &  Yulianto,  G.,  2022.  Kelimpahan  dan  Keanekaragaman  Siput  Laut Opisthobranch di  Bangsring Underwater dan  Pulau  Tabuhan,  Banyuwangi. Jurnal  Sains  dan Teknologi , 11(1): 213 – 222. DOI:10.23887/jst-undiksha.v11i1.45048 Salanggon, A.M., Aswani, S., Hermawan, R., Dewanto, D.K., Tanod, W.A., Hasanuddin, A., & Riyadi,
P.H.  2020.  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Karang  Lunak Sinularia sp.  dengan  Metode Broth- Dilution . Jurnal Kelautan Nasional , 15(3):153 –164. DOI:10.15578/jkn.v15i3.9057
Tallei, T.E., Irwan, P.D., & Kolondam, B.J., 2016. DNA Barcoding Analysis of matK Gene of Some Syzygium  Spesies.,  Bioinformatics  Workshop  2016:  Developing  Knowledge  and  Skill  in Bioinformatics for Young Indonesian Scientists in Improving Research Quality in Life Science and Sustainable Exploration of Biodiversity in Indonesia. Al-Azhar University. Jakarta.
Tamura,  K.,  Stecher,  G.,  Peterson,  D.,  Filipski,  A.,  &  Kumar,  S.,  2013.  Mega6:  Molecular Evolutionary  Genetic  Analysis  Version  6.0 . Molecular  Biology  And  Evolution ,  30(12):  2725 –
2729. DOI:10.1093/molbev/mst197
Waldchen, J., Rzanny, M., Seeland, M., & Mäder, P., 2018. Automated Plant Spesies Identification-
Trends and Future Directions . Plos Computational Biology , 14(4):1 –19. DOI:10.1371/journal.pcbi.1005993
Zhao, C., Chan, S.S.F., Cham, W.K., & Chu, L.M., 2015. Plant Identification Using Leaf Shapes? A Pattern  Counting  Approach. Pattern  Recognition ,  48(10):3203 –3215.  DOI:  10.1016/j.patcog. 2015.04.004