Peningkatan Aktivitas Antioksidan pada Ekstrak Daun Kelor (Moringa oleifera) melalui Fermentasi: Studi Perbandingan Kandungan Fenolik dan Aktivitas Antioksidan
Enhancement of Antioxidant Activity in Moringa oleifera Leaf Extract through Fermentation: A Comparative Study of Phenolic Content and Antioxidant Activity
Hery Muhamad Ansory, Afif Meilana Sindani Putri, Windia Wulantika, Nuraini Harmastuti Fakultas Farmasi Universitas Setia Budi Surakarta email: hery. Ansory89@gmail.com
(tanggal diterima : 22-09-2022 , tanggal disetujui: 29-03-2023)

## INTISARI
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menginvestigasi  pengaruh  fermentasi  terhadap  aktivitas antioksidan dan kandungan fenolik dalam ekstrak etanol 96% dari daun kelor (Moringa oleifera). Meskipun  potensi  antioksidan  daun  kelor  telah  diketahui, penelitian  ini  memperkenalkan  konsep baru menggunakan metode fermentasi untuk meningkatkan kandungan senyawa aktif. State of the art saat ini terkait aktivitas antioksidan dan fermentasi digunakan untuk memvalidasi peningkatan aktivitas  antioksidan  yang  signifikan.  Hasil  penelitian  ini  memberikan  wawasan  baru  dalam pemanfaatan  daun  kelor  sebagai  sumber  antioksidan  alami  yang  diperoleh  melalui  metode fermentasi.
Metode  penelitian  ini  melibatkan  fermentasi  ekstrak  etanol  96%  dari  daun  kelor menggunakan bakteri Lactobacillus B selama 24, 48, dan 72 jam. Kandungan fenolik diukur dengan metode analisis Folin-Ciocalteu, sedangkan aktivitas antioksidan diuji menggunakan metode DPPH (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil).
Hasil penelitian ini menunjukkan peningkatan signifikan dalam kadar fenolik setelah proses fermentasi. Kadar fenolik ekstrak daun kelor yang difermentasi selama 24 jam adalah 86,133±5,925 mgGAE/gram,  meningkat  menjadi  91,244±7,374  mgGAE/gram  pada  48  jam,  dan  mencapai 122,578±9,576 mgGAE/gram pada 72  jam. Selain  itu,  aktivitas  antioksidan  juga meningkat  seiring dengan waktu fermentasi. Nilai IC50 untuk sampel yang difermentasi selama 24 jam adalah 60,887 µg/ml,  58,742  µg/ml  pada  48  jam,  dan  53,169  µg/ml  pada  72  jam.  Hasil  ini  menunjukkan  bahwa fermentasi pada ekstrak daun kelor dapat meningkatkan kandungan fenolik dan aktivitas antioksidan secara signifikan.
Kata kunci: Ekstrak daun kelor; Fermentasi; Kadar fenolik; Aktivitas antioksidan; Lactobacillus B.

## ABSTRACT
This study aimed to investigate the  effect of fermentation on the antioxidant activity and phenolic content of 96% ethanol extract from Moringa oleifera leaves. While the antioxidant potential of  Moringa  leaves  has  been  recognized,  this  research  introduces  a  novel  concept  of  utilizing fermentation to enhance the levels of active compounds. The state of the art in antioxidant activity and fermentation is used to validate the significant improvement in antioxidant activity. The findings provide new insights into utilizing Moringa leaves as a natural antioxidant source obtained through fermentation.
The  research  methodology  involved  fermenting  the  96%  ethanol  extract  from  Moringa leaves using Lactobacillus B bacteria for 24, 48, and 72 hours. The phenolic content was measured using the Folin-Ciocalteu method, while the antioxidant activity was evaluated using the DPPH (2,2- diphenyl-1-picrylhydrazyl) method.
The results demonstrated a significant increase in phenolic content after the fermentation process. The phenolic content of the fermented Moringa leaf extract was 86.133±5.925 mgGAE/gram after 24 hours, increased to 91.244±7.374 mgGAE/gram at 48 hours, and reached 122.578±9.576 mgGAE/gram  at  72  hours.  Additionally,  the  antioxidant  activity  also  increased  with  fermentation
time. The IC50 values for samples fermented for 24, 48, and 72 hours were 60.887 µg/ml, 58.742 µg/ml,  and  53.169  µg/ml,  respectively.  These  results  indicate  that  fermentation  of  Moringa  leaf extract can significantly enhance phenolic content and antioxidant activity.
Keywords: Moringa leaf extract; Fermentation; Phenolic content; Antioxidant activity; Lactobacillus B.

## 1. PENDAHULUAN
Meskipun  daun  kelor  (Moringa  oleifera  L.)  dikenal  memiliki  senyawa antioksidan yang bermanfaat bagi kesehatan manusia, diketahui bahwa daun kelor memiliki kandungan senyawa fenolik (1–3). Dalam penelitian lain diketahui bahwa fermentasi dapat mengkatkan kadar fenolik dalam sampel (4–7). Oleh karena itu, penelitian ini dilakukan dengan tujuan untuk meningkatkan kadar senyawa fenolik dalam daun kelor dengan melakukan fermentasi menggunakan starter Lactobacillus bulgaricus.
Kebaruan  dari  penelitian  ini  adalah  dilakukan  fermentasi  menggunakan Lactobacillus  bulgaricus  untuk  meningkatkan  kandungan  senyawa  fenolik  dalam daun kelor. Meskipun beberapa penelitian sebelumnya telah menunjukkan bahwa fermentasi  dengan  mikroorganisme  tertentu  dapat  meningkatkan  kandungan senyawa fenolik dalam bahan  pangan  (8), namun penelitian tentang penggunaan Lactobacillus  bulgaricus  untuk  meningkatkan  kandungan  senyawa  fenolik  dalam daun kelor masih terbatas.
Penelitian ini juga memiliki research gap, karena masih sedikit penelitian yang  mengkaji  penggunaan  daun  kelor  yang  telah  difermentasi  dengan Lactobacillus bulgaricus sebagai antioksidan. Oleh karena itu, penelitian ini dapat menjadi  kontribusi  baru  dalam  mengembangkan  potensi  daun  kelor  sebagai sumber antioksidan alami yang lebih efektif.
Dalam  konteks  pentingnya  pengembangan  alternatif  pengobatan  yang aman  dan  efektif  untuk  mencegah  berbagai  penyakit  degeneratif,  peningkatan kandungan senyawa fenolik dalam daun kelor juga menjadi urgensi yang penting. Dengan  meningkatkan  potensi  antioksidan  alami  dalam  daun  kelor,  diharapkan dapat  memberikan  manfaat  kesehatan  yang  lebih  besar  bagi  konsumen  serta memberikan solusi baru dalam upaya pencegahan berbagai penyakit degeneratif.
Dengan  demikian,  penelitian  ini  dapat  memberikan  kontribusi  yang signifikan dalam pengembangan sumber antioksidan alami yang aman dan efektif, serta dapat memberikan solusi baru dalam upaya  pencegahan berbagai penyakit degeneratif.

## 2. METODE PENELITIAN 2.1. ALAT DAN BAHAN
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  peralatan  gelas (Pyrex), magnetic  stirrer  (B-One),  timbangan,  ayakan  mesh  nomor  40, p H  meter,  oven, blender, kertas saring, dan silika KLT. Bahan yang digunakan adalah daun kelor tua dari (Gedog kecamatan Sanan Wetan, kota Blitar, Jawa Timur), etanol 96%, bakteri Lactobacillus  bulgaricus ,  asam  galat,  MRSA,  MRSB,  larutan  Folin  ciocalteu  (FC), Natrium  karbonat  (Na 2 CO 3 ),  1-1-difenil-2-pikrilhidrazil  (DPPH),  dan  susu  sapi murni.

## 2.2. CARA KERJA Determinasi tanaman
Determinasi  tanaman  kelor  pada  penelitian  ini  dilaksanakan  di  UPT Laboratorium Herba Materia Medica Batu, Malang Jawa Timur.

## Pembuatan ekstrak
Daun  kelor  disortasi,  dibersihkan,  dikeringkan,  dihaluskan  memakai blender dan Serbuk diayak menggunakan ayakan mesh nomor 40. ekstraksi daun kelor  menggunakan  metode  maserasi  1:10  dengan  pelarut  etanol  96%,  hasil dievaporasi    memakai  alat rotary  evaporator ,  hasil  diuji  kandungan  kimia  secara kualitatif dilakukan dengan  uji kandungan  alkaloid, falavonoid, tanin,  fenolik  dan safonin.

## Fermentasi ekstrak daun kelor
Fermentasi  ekstrak  daun  kelor  menggunakan  starter  susu  sapi  murni dengan penambahan bakteri Lactobacillus bulgaricus . 50 gram ekstrak daun kelor dilarutkan  menggunakan  50  ml  aquadest  steril.  20  ml  susu  sapi  yang  sudah dipasteurisasi ditambahkan bakteri asam laktat Lactobacillus bulgaricus sebanyak 3,3 x 10 7 CFU/ml dan aduk hingga tercampur. Setelah itu, tambahkan 2 ml ekstrak daun  kelor  yang  sudah  dilarutkan  dan  aduk  hingga  tercampur,  kemudian dimasukkan kedalam inkubator dengan suhu 37 ° C selama 24 jam, 48 jam dan 72 jam.

## Penentuan kadar fenolik total
Penetapan  kadar  fenolik  total  dilakukan  dengan  menggunakan spektrofotometri  UV-Vis  menggunakan  larutan  standar  asam  galat  dengan pembentukan kompleks warna dengan  larutan Folin-Ciocalteu. Sampel yang diuji adalah sampel ekstrak daun kelor, hasil fermentasi 24 jam (F1), hasil fermentasi 48 jam (F2), dan hasil fermentasi 72 jam (F3).

## Uji aktivitas antioksidan
Uji  aktivitas  antioksidan  dilakukan  secara  in-vitro  dengan  menggunakan metode DPPH. Sampel yang diuji adalah sampel ekstrak daun kelor, hasil fermentasi 24 jam (F1), hasil fermentasi 48 jam (F2), dan hasil fermentasi 72 jam (F3).

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN Determinasi tanaman
Berlandaskan  temuan  verifikasi  melalui  surat  keterangan  Nomor 074/675/102.20-A/2022 ditetapkan daun tanaman yang dipakai melalui penelitian ini adalah tanaman kelor (Moringa oleifera L.).

## Pembuatan ekstrak
Daun kelor sebanyak 12 kg yang dikeringkan dan didapatkan 11 Kg daun kering dengan 5,9 ± 0,4 % susut pengeringan. Susut pengeringan serbuk daun kelor yang didapat telah memenuhi persyaratan yaitu susut pengeringan yang baik tidak lebih dari 10%, apabila pengeringan >10% maka dapat menyebabkan pertumbuhan mikroorganisme  semakin  cepat  pada  serbuk  sehingga  serbuk  mudah  rusak  dan tidak tahan lama.
Esktraksi dilakukan dengan menggunakan 1000 g serbuk daun kelor dan didapatkan 182 g ekstrak daun kelor, sehingga rendemen ekstrak etanol daun kelor yang diperoleh yaitu 18,2%. Kadar air dalam ekstrak didapatkan sebesar  6,318 ± 0,294 %, Persen kadar air yang optimal dari FHI <10%, kadar air ekstrak daun kelor mencukupi kriteria. Pengujian bebas etanol menunjukkan hasil negatif yang berarti
bahwa ektrak sudah bebas pelarut dan siap untuk diuji dan difermentasi. Pengujian kandungan  kimia  ekstrak  menunjukan  bahwa  ekstrak  mengandung  senyawa golongan flavonoid, alkaloid, tannin, saponin, dan fenol, seperti pada Tabel 1 .
Tabel 1. Uji Secara Kualitatif Ekstrak Etanol Daun Kelor Kandungan kimia Ekstrak Keterangan Flavonoid Terbentuk warna kuning atau orange + Alkaloid Terbentuk endapan jingga + Tannin Terbentuk warna hijau kehitaman + Saponin Terbentuk busa atau buih selama lebih dari 10 menit + Fenol Terbentuk warna hitam +
Keterangan: (+)  : positif adanya kandungan ( - ) : negatif adanya kandungan
Hasil  ekstraksi  daun  kelor  sejalan  dengan  penelitian  lain  sejenis  yang menjukkan  bahwa  ektrak  daun  kelor  memiliki  kandungan  senyawa  flavonoid, alkaloid, tannin, saponin, dan fenol (1,2).

## Fermentasi ekstrak daun kelor
Bakteri yang digunakan untuk fermentasi adalah L. Bulgaricus, bakteri ini termasuk dalam  kelompok asam laktat karena mampu mengubah gula menjadi asam laktat, bakteri ini dipilih karena dalam penelitian lain berhasil meningkatkan kadar fenolik dari ekstrak buah naga merah (4), dan temu giring (7). Bakteri L. Bulgaricus diremajakan pada media NA dan inkubasi selama 24 jam untuk pembelahan total sel meninggi, dimana  jumlah sel yang didapat dapat mencapai 10-15 milyar sel bakteri per  mililiter  (9).  Berdasarkan  identifikasi  peremajaan  bakteri  hasil  penggoresan zigzag pada tabung reaksi terbentuk goresan zig-zag dengan sempurna, menandakan bakteri berhasil diremajakan.
Identifikasi  bakteri  asam  laktat  secara  mikroskopis  delakukan  dengan pewarnaan  gram  secara  langsung,  pengamatan  secara  mikroskopis  memberikan hasil bahwa sel bakteri berwarna ungu yang menandakan bakteri tersebut  termasuk golongan gram positif dan berbentuk batang. Hasil ALT menunjukan bahwa koloni bakteri paling banyak pada pengenceran 10 -6 dengan 3,3 x 10 -7 bakteri.
Gambar 1. Lactobacillus bulgaricus
Keberhasilan  fermentasi  dilihat  dari  penurunan p H  (tabel  )  hal  ini  sesuai  dengan penelitian lain yang menunjukkan penurunan p H ketika proses fermentasi akibat aktivitas dari bakteri asam laktat yang digunakan (4,7,5).
Tabel 2. Hasil p H ekstrak daun kelor sebelum dan sesudah difermentasi Waktu inkubasi p H sebelum fermentasi p H sesudah fermentasi 24 jam 7 6 48 jam 7 6 72 jam 7 5
Semakin  lama  fermentasi  dilakukan  maka  akan  menurunkan p H  menjadi lebih  asam, Lactobacillus  bulgaricus merupakan  bakteri  asam  laktat  yang  memiliki kemampuan  untuk  mengubah  karbohidrat  menjadi  asam  organik,  terutama  asam laktat, akumulasi asam laktat dalam medium fermentasi menyebabkan penurunan p H secara bertahap. Pengaruh ini berhubungan dengan peningkatan keasaman medium karena pelepasan asam organik (4,7,5,6).

## Penentuan kadar fenolik total
Kadar  fenolik  ekstrak  diuji  menggunakan  spektrofotometri  UV-Vis menggunakan pereaksi Folin Ciocalteu. Prinsip Folin-Ciocalteu melibatkan oksidasi pereaksi  Folin  oleh  fenolat  (garam  alkali)  atau  gugus  fenolik-hidroksil  yang kemudian mereduksi asam fosfomolibdat-fosfotungstat yang terdapat dalam Folin- Ciocalteu. Akibat reaksi ini, terbentuk kompleks molibdenum-tungsten (Mo-W) yang memiliki warna biru. Reaksi ini hanya terjadi dalam suasana basa, yang dapat dicapai dengan  menambahkan  20%  Na 2 CO 3 untuk  menyebabkan  disosiasi  proton  pada senyawa  fenolik  menjadi  ion  fenolat.  Seiring  dengan  peningkatan  konsentrasi senyawa  fenolik,  jumlah  ion  fenolat  yang  beragam  juga  meningkat.  Hal  ini menyebabkan  penurunan  asam  heterofili  dan  keberagaman  dalam  kompleks molibdenum-tungsten, sehingga warna biru yang terbentuk menjadi semakin gelap.
Gambar 2. Reaksi pembentukan kompleks molibdenum-tungsten (Mo-W) Dalam  penelitian  ini,  senyawa  fenol  yang  digunakan  sebagai  pembanding adalah asam galat atau asam 3,4,5-trihidroksibenzoat (C 6 H 2 (OH) 3 CO 2 H). Asam galat dipilih karena merupakan turunan dari asam hidroksibenzoad yang termasuk dalam kelompok  asam  fenolik  sederhana.  Selain  itu,  asam  galat  juga  digunakan  sebagai patokan  karena  keberadaannya  stabil  dan  alami  dalam  substansi  yang  dikaji (7,10,11).
Dari  standar  yang  digunakan,  didapatkan  panjang  gelombang  maksimum yang  terukur  adalah  785  nm  sejalan  dengan  hasil  beberapa  penelitian  terdahulu (7,5), dan persamaan regresi linier yang didapatkan adalah y = 0,0003x + 0,4048, dengan  nilai  koefisien  determinasi  (R²)  sebesar  0,9946.  Kemudian  hasil  ini digunakan untuk menentukan kadar fenol dari sampel ektrak, hasil fermentasi 24 jam, hasil fermentasi 48 jam dan hasil fermentasi 72 jam.
Konsentrasi  fenolik  total  dalam  ekstrak  etanol  daun  kelor  sebelum difermentasi  ditemukan  sebesar  71,244±6,012  mg  GAE/gram.  Namun,  setelah proses  fermentasi  selama  24  jam,  48  jam,  dan  72  jam,  terjadi  peningkatan konsentrasi fenolik total menjadi 86,133±5,925; 91,244±7,374; dan 122,578±9,576 mg GAE/gram secara berurutan.

## Gambar 2. Grafik kandungan senyawa fenolik total ekstrak sebelum dan sesudah
terfermentasi
Kelompok ekstrak terfermentasi diperoleh kadar fenolik paling tinggi pada fermentasi  72  jam.  Hal  ini  menggambarkan  bahwa  proses  fermentasi  dapat mempengaruhi kadar total fenolik meningkat, dimana hubungan fermentasi dengan kenaikan  kadar  fenolik  total  dipengaruhi.  Kenaikan  kadar  fenolik  yang  terjadi setelah proses fermentasi dapat disebabkan oleh beberapa alasan. Pertama, selama fermentasi,  mikroorganisme  yang  terlibat  dalam  proses  tersebut  dapat memproduksi enzim-enzim spesifik yang mampu mengubah senyawa-senyawa non- fenolik  menjadi  senyawa  fenolik.  Enzim-enzim  ini  dapat  merombak  struktur senyawa  organik  kompleks  menjadi  senyawa  fenolik  yang  lebih  sederhana  dan mudah  terukur  (8).  Kedua,  selama  fermentasi,  terjadi  aktivitas  metabolisme mikroorganisme  yang  menghasilkan  berbagai  senyawa  metabolit  sekunder. Beberapa  senyawa  metabolit  sekunder  yang  dihasilkan  selama  fermentasi  dapat memiliki  sifat  fenolik  atau  dapat  diubah  menjadi  senyawa  fenolik  oleh mikroorganisme  tersebut.  Sebagai  hasilnya,  kadar  fenolik  total  dalam  ekstrak meningkat  (3).  Perubahan  kadar  fenolik  yang  terjadi  selama  fermentasi  dapat bergantung pada jenis mikroorganisme yang digunakan, kondisi fermentasi, serta komposisi  dan  sifat  kimia  substrat  yang  difermentasi.  Oleh  karena  itu,  optimasi kondisi  fermentasi  dapat  digunakan  untuk  meningkatkan  produksi  fenolik  dapat dikaji lebih jauh.

## Uji aktivitas antioksidan
Metode uji aktivitas antioksidan dengan menggunakan metode DPPH dan spektrofotometri UV-Vis dipilih karena kepraktisannya dan kemampuannya untuk memberikan  informasi  kuantitatif  secara  cepat.  Metode  ini  menggunakan  DPPH sebagai senyawa indikator yang berubah warna saat teroksidasi oleh antioksidan. Pengukuran  perubahan  absorbansi  dengan  spektrofotometer UV-Vis  memberikan hasil yang dapat diinterpretasikan sebagai kapasitas antioksidan sampel. Metode ini efisien  dan  dapat  digunakan  untuk  menguji  aktivitas  antioksidan  dalam  waktu singkat, membuatnya menjadi pilihan yang baik dalam analisis antioksidan.
Persentase pengurangan radikal bebas DPPH pada sampel dapat dihitung dengan menggunakan persamaan:
% I = Abs.Blanko – Abs.Sampel Abs.Blanko
x 100%        ............................................. (persamaan 1) (12) nilai IC 50 dapat  dihitung  dengan  menggunakan  persamaan  regresi  linier,  di  mana konsentrasi  sampel  digunakan  sebagai  variabel  independen  (sumbu  X)  dan persentase inhibisi sebagai variabel dependen (sumbu Y).
Berdasarkan hasil pengukuran, diketahui bahwa nilai IC 50 dari asam galat, yang merupakan baku pembanding, adalah 5,169 µg/ml, menunjukkan kemampuan penangkapan  radikal  bebas  yang sangat  tinggi.  Sementara  itu, IC 50 ekstrak  etanol 96% daun kelor adalah 63,993 µg/ml, menunjukkan kekuatan aktivitas antioksidan yang cukup besar, aktivitas antioksidan hasil penelitian ini lebih baik dibandingkan dengan penelitian lain yang menunjukkan aktivitas antioksidan IC 50 127,92-108,67 µg/mL  pada  ektrak  etanol  daun  kelor  (13),  perbedaan  ini  sangat  wajar  terjadi mengingat  perbedaan  dari  bahan  yang  digunakan.  Hasil  pengujian  aktivitas antioksidan terhadap ekstrak etanol 96% dari daun kelor (Moringa oleifera L.) yang telah  mengalami  proses  fermentasi  dengan  menggunakan  metode  DPPH menunjukkan nilai IC 50 yang berbeda pada berbagai waktu. Pada waktu 24 jam, nilai IC 50 ditemukan sebesar 60,887 µg/ml, pada waktu 48 jam sebesar 58,742 µg/ml, dan pada waktu 72 jam ditemukan nilai IC50 sebesar 53,169 µg/ml Tabel 3. Nilai IC 50 sampel No Sampel Nilai IC 50 1 Ekstrak 63,993 bcd 2 Fermentasi 24 jam 60,887 acd 3 Fermentasi 48 jam 58,742 abd 4 Fermentasi 72 jam 53,169
abc
Keterangan: a= Berbeda dengan no 1; b=  Berbeda  dengan  no  2; c= Berbeda  dengan  no  3; d=  Berbeda dengan no 4 Terdapat hubungan antara kadar fenolik dalam sampel ekstrak etanol 96% dari  daun  kelor  (Moringa  oleifera  L.)  dan IC 50 -nya.  Semakin  tinggi  kadar  fenolik dalam sampel, maka semakin rendah nilai IC 50 yang dihasilkan, yang menandakan semakin  kuat  aktivitas  antioksidannya.  Hal  yang  sama  juga  terjadi  pada  ekstrak etanol 96% dari daun kelor (Moringa oleifera L.) yang sudah difermentasi selama 24, 48, dan 72 jam, dimana semakin lama waktu fermentasi maka semakin meningkat pula kadar fenolik dalam sampel dan semakin rendah nilai IC 50 yang dihasilkan, yang menunjukkan  adanya  peningkatan  aktivitas  antioksidan.  Dengan  demikian,  kadar fenolik  dalam  sampel  dapat  digunakan  sebagai  indikator  untuk  memprediksi aktivitas  antioksidan  pada  sampel  ekstrak  etanol  96%  dari  daun  kelor  (Moringa oleifera L.) baik sebelum atau setelah difermentasi.
Meningkatnya  kadar  fenolik  setelah  difermentasi  pada  sampel  ekstrak etanol 96% dari daun kelor (Moringa oleifera L.) menunjukkan bahwa fermentasi memiliki efek positif dalam meningkatkan kandungan senyawa fenolik dalam sampel tersebut.  Senyawa  fenolik  memiliki  sifat  antioksidan  yang  kuat,  sehingga peningkatan kadar fenolik setelah difermentasi berpotensi meningkatkan aktivitas antioksidan sampel. Manfaat fermentasi dalam penelitian ini adalah meningkatkan kandungan  senyawa  fenolik  dalam  sampel  ekstrak  etanol  96%  dari  daun  kelor. Dengan meningkatnya kadar fenolik, sampel tersebut memiliki potensi lebih tinggi dalam  melawan  radikal  bebas  dan  melindungi  sel-sel  dari  kerusakan  oksidatif. Aktivitas  antioksidan  yang  ditingkatkan  ini  memiliki  manfaat  kesehatan  yang
penting,  seperti  melawan  stres  oksidatif,  mengurangi  risiko  penyakit  degeneratif, dan meningkatkan sistem kekebalan tubuh.
Selain  menggunakan  nilai IC 50 ,  hasil  aktivitas  antioksidan  juga  dapat dievaluasi  menggunakan  metode Antioxidant  Activity  Index (AAI).  AAI memungkinkan  perbandingan  relatif  aktivitas  antioksidan  antara  sampel  berbeda berdasarkan kemampuan mereka dalam melindungi substrat dari oksidasi. Dengan memperhitungkan faktor-faktor seperti penangkapan radikal bebas dan penundaan oksidasi, AAI memberikan gambaran holistik tentang potensi antioksidan sampel. Dengan demikian, kombinasi penggunaan IC 50 dan AAI dapat memberikan informasi yang  lebih  komprehensif  mengenai  aktivitas  antioksidan  suatu  sampel  (14). Persamaan yang digunakan adalah:
AAI = Konsentrasi DPPH (ppm)
IC50 sampel (ppm) ............................................ (persamaan 2) (15)
Berdasarkan  perhitungan  aktivitas  antioksidan  menggunakan  metode Antioxidant Activity Index (AAI), ekstrak daun kelor menunjukkan nilai AAI sebesar 1,844. Nilai ini mengindikasikan bahwa ekstrak tersebut memiliki tingkat aktivitas antioksidan yang kuat, karena berada dalam rentang 1-2. Hasil perhitungan AAI pada fermentasi ekstrak daun kelor selama 24 jam dan 48 jam juga menunjukkan tingkat aktivitas antioksidan yang kuat. Selanjutnya, nilai AAI pada fermentasi ekstrak daun kelor  selama  72  jam  mencapai  2,219,  yang  berada  di  atas  angka  2.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  aktivitas  antioksidan  pada  sampel  tersebut  sangat  kuat. Dengan  demikian,  fermentasi  pada  ekstrak  daun  kelor  dalam  waktu  72  jam  telah meningkatkan aktivitas antioksidan secara signifikan, melebihi 2 yang menandakan kekuatan antioksidan yang sangat tinggi (16,17). Dengan hasil ini, dapat disimpulkan bahwa  fermentasi  ekstrak  daun  kelor  memiliki  efek  positif  dalam  meningkatkan aktivitas antioksidan.

## 4. KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian,  ekstrak  etanol  96%  dari  daun  kelor mengandung senyawa fenolik dan memiliki aktivitas antioksidan yang kuat. Setelah difermentasi,  kadar  fenolik  dan  aktivitas  antioksidan  meningkat,  terutama  pada fermentasi 24 jam dan 48 jam. Metode DPPH dan AAI digunakan untuk mengukur aktivitas antioksidan, dan hasil keduanya menunjukkan hasil yang serupa. Hasil ini menunjukkan  potensi  penggunaan  ekstrak  daun  kelor  sebagai  antioksidan  alami dan  manfaat  fermentasi  dalam  meningkatkan  kandungan  senyawa  aktif  dalam ekstrak tersebut.

## 5. DAFTAR PUSTAKA
1.   Agung  A,  Oka  G,  Made  L,  Pendidikan  M,  Dokter  P,  Hewan  FK,  et  al.  Identifikasi Senyawa  Kimia  Ekstrak  Etanol  Daun  Kelor  (  Moringa  oleifera  L  )  di  Bali. 2016;5(5):464–73.
2.   Diah AWM, Jura R. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Air Dan Ekstrak Etanol Daun Kelor ( Moringa Oleifera LAM ). 2017;6(May):125–31.
3.   Yati SJ, Sumpono S, Candra IN. Potensi Aktivitas Antioksidan Metabolit Sekunder
dari Bakteri Endofit Pada Daun Moringa oleifera L. Alotrop. 2018;2(1):82–7.
4.   Wardani AK. Pengaruh Fermentasi Menggunakan Bakteri Lactobacillus bulgaricus Terhadap Kandungan Fenol Total Dan Aktivitas Antioksidan Jus Buah Naga Merah (Hylocereus polyrhizus). Skripsi Univ Jember. 2011;
5.   Rahmi N, Khairiah N, Rufida, Hidayati S, Muis A. Pengaruh fermentasi terhadap total  fenolik,  aktivitas  penghambatan  radikal  dan  aktivitas  antibakteri  ekstrak tepung biji teratai ( Nymphaea pubescens Willd .). Jbi. 2020;11(1):9–18.
6.   Adi  Wira  Kusuma  GP,  Ayu  Nocianitri  K,  Kartika  Pratiwi  IDP.  Pengaruh  Lama Fermentasi  Terhadap  Karakteristik  Fermented  Rice  Drink  Sebagai  Minuman Probiotik  Dengan  Isolat  Lactobacillus  sp.  F213.  J  Ilmu  dan  Teknol  Pangan. 2020;9(2):181.
7.   Murelina E, Wijayanti E. Perbandingan Kadar Fenolik Total Sari Rimpang Temu Giring (Curcuma heyneana) Segar dan Terfermentasi. JC-T (Journal Cis-Trans) J Kim dan Ter. 2018;2(2):20–4.
8.   Rahmadi A. Bakteri asam laktat dan mandai cempedak. Mulawarman Univ Press. 2019;(October 2018):1–203.
9.   Ifnawati  K.  Pengaruh  enzim  kitinase  kasar  dari  bakteri  Pseudomonas pseudomallei  dan  Klebsiella  ozaenae  terhadap  pertumbuhan,  morfologi,  dan kadar  N-asetilglukosamin  Fusarium  oxysporum.  Undergrad  thesis,  Univ  Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim. 2013;
10.  Widyastuti  W.  Formulasi  Lotion  Ekstrak  Etanol  Buah  Stroberi  (Fragaria  x ananassa  Duchesne  ex  Weston)  Sebagai  Tabir  Surya.  Sci    J  Farm  dan  Kesehat. 2020;10(2):120.
11.  Dedak  M,  Varietas  B,  Sugiat  D,  Hanani  E,  Mun  A.  Aktivitas  Antioksidan  dan Penetapan  Kadar  Fenol  Total  Ekstrak  Metanol  Dedak  Bebeapa  Varietas  padi (Oryza sativa L.). Pharm Sci Res. 2010;7(1).
12.  Ansory HM, Sari EN, Nilawati A, Handayani S, Aznam N. Sunscreen and Antioxidant Potential  of  Myristicin  in  Nutmeg  Essential  Oils  (Myristica  fragrans).  The proceedings  of  the  2nd  Bakti  Tunas  Husada-Health  Science  International Conference  (BTH-HSIC  2019)  [Internet].  Paris,  France:  Atlantis  Press;  2020.  p. 138–42. Available from: https://www.atlantis-press.com/article/125941115
13.  Apriyati  E,  Murdiati  A,  Triwitono  P.  Pengaruh  Lama  Waktu  Maserasi  Terhadap Kadar Flavonoid Dan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Daun Kelor. J Teknol Pangan. 2022;16(1):116–23.
14.  Gangavaram Maheshwar Reddy. Evaluation of antioxidant activity index (AAI) by the 2, 2-diphenyl-1-picryl hydrazyl method of 40 medicinal plants. J Med Plants Res. 2012;6(24):4082–6.
15.  Scherer  R,  Godoy  HT.  Antioxidant  activity  index  (AAI)  by  the  2,2-diphenyl-1- picrylhydrazyl method. Food Chem. 2009;112(3):654–8.
16.  Luís  Â,  Domingues  F,  Gil  C,  Duarte  AP.  Antioxidant  activity  of  extracts  of Portuguese shrubs: Pterospartum tridentatum, Cytisus scoparius and Erica spp. J Med Plants Res. 2009;3(11):886–93.
17.  Lamoussa Paul O, F Saoudia DW, Jotham Yhi-pênê D, Rémy BK, Idrissa M, H Roger NC. Phytochemical screening, phenolic content and antioxidant activity of Entada africana and Sterculia stigera two plants used in the treatment of cough. J Appl Biosci [Internet]. 2022;178:18658–69. https://doi.org/10.35759/JABs.178.9