Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Suruhan  ( Peperomia pellucida L.
Kunth) terhadap Klebsiella pneumoniae
Antibacterial Activity of Suruhan Leaf Extract ( Peperomia pellucida L. Kunth) against Klebsiella pneumoniae
Destik Wulandari 1* dan Isna Jati Asih 2* Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Setia Budi email: destikhakim@gmail.com

## ABSTRAK
Klebsiella  pneumoniae merupakan  salah  patogen  yang  merupakan  bakteri  gram negative  penyebab  penyakit  pneumonia.  Pengobatan  infeksi  bakteri Klebsiella  pneumoniae dilakukan  melalui  penggunaan  antibiotik.  Fenomena  resistensi  telah  mendorong  pencarian antimikroba  berbasis  natura  dimana  salah  satu  tanaman  yang  mempunyai  potensi  besar sebagai antibakteri adalah suruhan ( Peperomia pellucida L. Kunth).
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  aktivitas  antibakteri,  nilai Konsentrasi  Hambat  Minimum  (KHM)  dan  Konsentrasi  Bunuh  Minimum  (KBM)  dari  ekstrak daun  suruhan  terhadap Klebsiella  pneumoniae menggunakan  metode  dilusi  cair.  Metode ektraksi  yang  digunakan dalam penelitian  ini adalah  dengan maserasi.  Ekstrak yang diperoleh kemudian  diujikan  dengan  konsentrasi  100%;  50%;  25%;  12,5%;  6,25%;  3,125%;  1,562%; 0,781%; 0,391% dan 0,195% (v/v).
Hasil  penelitian  menunjukkan  ekstrak  daun  suruhan  mempunyai  aktivitas  antibakteri terhadap Klebsiella pneumoniae dengan nilai KBM sebesar 25%.
Kata Kunci: Klebsiella pneumoniae , Peperomia pellucida L. Kunth, dilusi cair, KBM

## ABSTRACT
Klebsiella pneumoniae is one of the pathogens which are gram negative bacteria and that  causes  pneumonia.  Treatment  of  Klebsiella  pneumoniae  bacterial  infection  is  performed through  the  use  of  antibiotics.  The  phenomenon  of  resistance  has  encouraged  the  search  for natura-based  antimicrobials  where  one  of  the  plants  with  antibacterial  potency  is  suruhan (Peperomia pellucida L. Kunth).
The purpose of this study was to determine the antibacterial activity, the value of the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and the Minimum Killer Concentration (KBM) from the leaf  extract  of  suruhan  leaves  on  Klebsiella  pneumoniae  using  a  liquid  dilution  method.  The extraction  method  used  in  this  study  was  maceration.  The  extract  obtained  tested  with  a concentration  of  100%;  50%;  25%;  12.5%;  6.25%;  3.125%;  1.562%;  0.781%;  0.391%  and 0.195% (v / v).
The  results  showed  that  leaf  extract  had  antibacterial  activity  against  Klebsiella pneumoniae with a KBM value of 25%.
Keywords: Klebsiella pneumoniae , Peperomia pellucida L. Kunth, broth dilution, MKC

## PENDAHULUAN
Klebsiella  pneumoniae adalah  salah satu  bakteri  patogen  menyebabkan infeksi  pada  manusia.  Bakteri  ini merupakan  bakteri  gram  Gram  negatif
yang menyebakan infeksi pada saluran kemih,  pernafasan    dan  menyebakan terjadinya  bakteremia  pada  individu yang  mempunyai  daya  tahan  tubuh lemah  (Schroll, et  al .,  2010).  Infeksi yang disebabkan oleh Klebsiella
pneumoniae adalah  infeksi  nosokomial (Adisasmito  &  Hadinegoro,  2004). Klebsiella pneumoniae e ditemukan pada  tubuh  manusia  di  bagian  saluran napas dan feses pada sekitar 5% orang normal (Jawetz et al.,1996).
Salah satu penyakit yang diakibatkan oleh adanya infeksi
Klebsiella adalah  pneumonia  yang ditandai  oleh    demam  tinggi,  lesu  dan disertai batuk kering. Batuk kering akan berlanjut  menjadi  batuk  produktif  yang disertai  dengan  sputum  berdarah  dan purulent  (nanah).  Penyakit  ini  berlanjut akan  menyebabkan  abses,  nekrosis pada  jaringan  paru  dan  fibriosis  paru- paru. Angka kematian yang disebabkan oleh  penyakit  ini  sekitar  40%-60% (Entjang 2003).
Upaya  yang  dilakukan  untuk pengobatan  yang  disebabkan  oleh infeksi Klebsiella  pneumoniae adalah dengan  antibiotik.  Antibiotik  yang  biasa digunakan  untuk  menangani Klebsiella pneumoniaee adalah netilmisin, amikasin,  seftriakson,  dan  amokxisilin asam  klavulanat  (Refdanita et  al ., 2004).  Solusi  yang  digunakan  untuk mengurangi penggunaan antibiotik salah satunya adalah dengan menggunakan bahan yang berasal dari alam. Tanaman yang mempunyai potensi besar sebagai antibakteri adalah suruhan ( Peperomia pellucida L. Kunth).  Tumbuhan  ini  sangat  mudah tumbuh  diberbagai  tempat  terutama  di daerah  tropis  yang  lembab.  Senyawa aktif  yang  terkandung  dalam  tanaman ini  diantaranya  adalah  tanin  dan flavonoid,  dimana  kedua  senyawa  ini dapat  berperan  sebagai  antimikroba. Wei et  al (2011)  menyatakan  bahwa
tanaman  suruhan  mempunyai  potensi sebagai antimikroba. Berdasarkan penelitian  yang  pernah  dilakukan  yang menyatakan  bahwa  daun  suruhan mempunyai  aktivitas  antimikroba  maka perlu dilakukan penelitian lainnya untuk menguji  senyawa  aktif  pada  daun suruhan dalam menghambat dan membunuh  bakteri,  salah  satunya
adalah Klebsiella pneumoniaee.

## METODE PENELITIAN

## Bahan
Bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  dalah  daun  suruhan, bakteri Klebsiella  pneumoniae , media Muller  Hinton  Agar  ( MHA), Brain  Brain Heart  Infusion (BHI), Nutrient  agar (NA),  etanol  70%,  quadest,  DMSO,  cat
Gram  A,  Gram  B,  Gram  C,  dan  Gram D.
Alat
Erlenmeyer, lampu spiritus, timbangan  analitis,  gelas  Beker,  gelas ukur, pipet volume, cawan Petri, tabung reaksi,  inkas,  jarum  Ose,  rak  tabung reaksi,  penangas  air,  ayakan    nomer 60,    oven,  seperangkat  alat rotary evaporator, pinset,  gelas  penyimpanan ekstrak, kertas saring, tabung ekstraksi, mikroskop, batang pengaduk, autoklaf

## Jalannya Penelitian
Tahap  penelitian  dimulai  dari identifikasi daun suruhan. Identifikasi ini bertujuan untuk menghindari kesalahan bahan  sampel  yang  akan  digunakan untuk  penelitian.Tanaman  suruhan  di determinasi  di  Laboratoriun  Morfologi dan  Sistematika  Tumbuhan,  fakultas
Farmasi, Universitas Setia Budi Surakarta. 1.  Pembuatan ekstrak daun suruhan
Tumbuhan  suruhan  yang  telah dideterminasi,  diambil  daunnya  dan diekastraksi. Pembuatan
ekstrak dilakukan  dengan  mengeringkan  10  kg daun  suruhan  yang  telah  dicuci  bersih. Daun  suruhan  yang  telah  bersih kemudian  dihaluskan  dengan  cara diblender  hingga  berbentuk  serbuk yang  biasa  disebut  dengan  simplisia. Serbuk yang diperoleh kemudian diekstraksi  dengan  metode  maserasi. Pelarut  yang  digunakan  adalah  etanol 70%  dengan  perbandingan  antara serbuk  dan  pelarut  adalah  1:5  selama lima  hari  terlindung  cahaya.  Selama proses maserasi sesekali diaduk.
Endapan dipisahkan dengan cara disaring dan dipisahkan dari pelarutnya dengan vaccum  evaporator hingga diperoleh ekstrak kental. 2.  Pembuatan suspensi bakteri
Suspensi  bakteri Klebsiella pneumoniae yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  bakteri  dengan kepadatan  10 6 CFU/ml.  Pembuatan suspensi  bakteri  distandarisasi  dengan standar  McFarland  0,5  yakni  setara dengan  kepadatan  bakteri  10 6 CFU/ml (Sutton,  2011).  Pembuatan  suspensi bakteri menggacu pada metode Assidqi dkk (2012). Bakteri diambil sebanyak 1 Ose  dari  media  NA  yang  telah diinkubasi  selama  24  jam,  dimasukkan kedalam tabung yang berisi media BHI.
Suspensi bakteri
disetarakan
kekeruhannya  dengan  larutan  standar McFarland 0,5. 3.  Identifikasi Klebsiella pneumonia Identifikasi bakteri secara mikroskopis dilakukan dengan pewarnaan Gram dan kapsul. Pewarnaan  Gram  untuk  membedakan bakteri dalam dua golongan
berdasarkan sifat Gramnya yakni Gram positif atau negatif. Klebsiella pneumoniae termasuk  bakteri  Gram negatif  yang  ditandai  dengan  warna merah pada sel bakteri diakhir pewarnaan.  Pewarnaan  Gram  dimulai dengan  membuat  preparat  apusan pada objek glass dan dilakukan fiksasi. Selanjutnya  apusan  ditetesi  dengan Gram A (kristal violet) kemudian ditetesi dengan  Gram  B  (mordant)  kemudian ditetesiGram  C  (pelarut),  dan  terakhir ditetesi  dengan  Gram  D  (safranin). Preparat  kemudian  diamati  dibawah mikroskop perbesaran 100x
Pewarnaan  kapsul  dilakukan dengan  menggunakan  metode Burry Gins .  Dua  buah  objek  glass  disiapkan, kemudian satu tetes tinta cina diletakkan  disalah  satu  ujung  objek glass  dan  dicampurkan dengan  1 tetes biakan Klebsiella  pneumoniae. Apusan dibuat  dengan  menggunakan  objek glass  yang  lain  dan  dibiarkan  kering tanpa difiksasi. Preparat apusan kemudian  ditetesi  dengan  kristal  violet dan didiamkan selama 2 menit kemudian  kelebihan  cat  dicuci  dengan air  mengalir.  Selanjutnya  preparat dikeringkan dan diamati dengan
mikroskop pada perbesaran 100x. 4.  Penentuan KHM dan KBM. Uji  aktivitas  anti  bakteri  dengan metode dilusi dilakukan untuk menentukan  nilai  KHM  dan  KBM. Penelitian  ini  menggunakan  12  tabung reaksi  yang  terdiri  dari  10  konsentarsi pengenceran  yakni  100%;  50%;  25%; 12,5%; 6,25%; 3,125%; 1,562%; 0,781%;  0,391%;  0,195%  dan  kontrol negatif  serta  kontrol  positif.  Pengencer yang  digunakan  untuk  membuat  seri pengenceran adalah DMSO 2%
KHM dari ekstrak daun suruhan diperoleh dengan cara menambahkan  0,5  ml  biakan  cair Klebsiella pneumoniaee
dengan kepadatan  10 6 CFU/ml  ke  dalam masing-masing  tabung  reaksi  yang berisi 1  ml larutan uji dengan berbagai seri pengenceran. Tabung reaksi tersebut  diinkubasi  selama  24-48  jam pada  suhu  37 0 C.  Pertumbuhan  bakteri ditandai  dengan  terjadinya  kekeruhan pada  tabung  reaksi  yang  berisi  ekstrak etanol daun suruhan.  Kekeruhan yang dihasilkan  selanjutnya  dibandingkan dengan kontrol.
Penentuan KBM dilakukan dengan  metode streak  plate. Kultur ulang ini dilakukan dengan
menggoreskan  larutan  pada  tabung reaksi  yang  tetap  bening  setelah dilakukan  perlakuan  (hasil  KHM)  pada media  MHA.  Kultur  diinkubasi  selama 24-48  jam  dalam  suhu  37 0 C.  KBM diperoleh  dengan  cara  melihat  ada tidaknya  koloni  bakteri  yang  tumbuh. Media  MHA  yang  tidak  ditumbuhi bakteri ditentukan sebagai KBM.
.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
1.  Determinasi dan pembuatan ekstrak daun suruhan Tanaman yang digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  tanaman suruhan  yang  telah  diidentifikasi  di Laboratorium Morfologi dan Sistematika Tumbuhan, Fakultas Farmasi, Universitas Setia Budi Surakarta. Daun suruhan yang digunakan dalam
penelitian  ini  adalah  seberat  60  kg, dikeringkan  dan  dibuat  serbuk.  Serbuk yang  diperoleh  adalah  sebesar  650  gr.
Serbuk
kemudian diekstrak menggunakan  pelarut  etanol  70%  dan
jumlah  ekstrak  yang  diperoleh  adalah sebesar  114  gr  dengan  rendemen sebesar 17,53%.
2.  Identifikasi Klebsiella pneumoniae Identifikasi dilakukan secara mikroskopis yakni dengan cara pewarnaan Gram dan pewarnaan kapsul,  selain  itu  juga  dilakukan identifikasi  secara  biokimia  dengan ditanam  di  media  KIA,  SIM,  LIA  dan Citrat.
Hasil  pewarnaan  Gram  pada Klebsiella  pneumoniae menunjukkan warna  sel  adalah  merah,  sehingga disimpulkan bahwa Klebsiella pneumoniae bersifat  Gram  negatif. Bentuk  sel  dari  bakteri  ini  adalah batang  pendek  dan  tidak  berkoloni. Metode pewarnaan kapsul yang digunakan  adalah  metode  Burri-Gins. Hasil  pewarnaannya  adalah  sel  bakteri berwarna  violet  (ungu),  latar  belakang berwarna  hitam  dan  kapsul  akan berwarna  transparan  (Gambar  1A.). Kapsul  pada    bakteri  tidak  berwarna dikarenakan kapsulpada bakteri mudah ditembus  oleh  cat  warna  tetapi  tidak dapat  mengikat  cat  warna  (Gambar 1B).
Gambar  1.  Pewarnaan  Gram,  sel berwarna merah (A), pewarnaan kapsuldengan  menggunakan  metode
Burri-Gins (B).
Identifikasi  lain  yang  digunakan untuk memastikan kebenaran Klebsiella pneumoniae adalah    uji  biokimia dengan  ditanam  pada media  SIM,  KIA, LIA  dan  Sitrat.  Hasil  uji  biokimia  dapat dilihat di Tabel 1 dan Gambar 2.
Tabel 1. Hasil uji biokimia Uji Hasil Pustaka SIM --- --- KIA A/A G + S - A/A G + S - LIA K/K S K/K S Citrat + +
Gambar  2.  Hasil  uji  biokimiadengan media KIA, SIM, Citrat dan LIA
3.  Uji aktivitas antibakteri ekstrak daun suruhan terhadap Klebsiella pneumoniae dengan metode dilusi Uji  aktivitas  anti  bakteri  ekstrak daun suruhan  terhadap Klebsiella pneumoniae menggunakan metode dilusi. Tahap pertama dalam uji aktivitas  anti  bakteri  ini  dimulai  dengan pembuatan  suspensi  dengan  cara menanam  bakteri  pada  media  BHI kemudian  diinkubasi  pada  suhu  37 o C selama 24 jam kemudiansuspensibakteri disetarakan
dengan  McFarland  0,5  yang  setara dengan 10 6 CFU/ml bakteri.
Suspensi  bakteri  yang  sudah dihitung kepadatannya kemudian
digunakan  untuk  uji  antibakteri  dengan metode  dilusi  untuk  nilai  KHM)  dan KBM)  ekstrak  daun  suruhan  terhadap Klebsiella pneumoniae . Nilai KHM tidak dapat  diketahui  karena  warna  ekstrak daun  suruhan  yang  gelap  yakni  hijau tua sehingga kekeruhan yang
diakibatkan  oleh  pertumbuhan  bakteri tidak  dapat  dilihat  (Gambar  3).  Dzen (2003)  salah  satu  cara  yang  dapat dilakukan  untuk menentukan nilai  KHM jika  hasil  ekstrak  terlalu  keruh  adalah dengan cara difusi cakram atau metode E  test. Pertumbuhan  bakteri  terjadi pada  kontrol  positif  yang  berisi  biakan bakteri, sedangkan pada kontrol negatif yang  berisi  ekstrak  daun  suruhan  tidak terjadi pertumbuhan bakteri.
Gambar  3.  Uji  aktivitas  antibakteri dengan metode dilusi Keterangan:
A: ekstrak  daun  Suruhan  100%  + bakteri Klebsiella pneumoniae
B: ekstrak  daun  Suruhan  50%  + bakteri Klebsiella pneumoniae
C: ekstrak  daun  Suruhan  25%  + bakteri Klebsiella pneumoniae
D: ekstrak  daun  Suruhan  12,5%  + bakteri Klebsiella pneumoniae
E: ekstrak  daun  Suruhan  6,25%  + bakteri Klebsiella pneumoniae
F: ekstrak  daun  Suruhan  3,125%  + bakteri Klebsiella pneumoniae
G: ekstrak  daun  Suruhan  1,562%  + bakteri Klebsiella pneumoniae
H: ekstrak daun Suruhan 0,781%,  + bakteri Klebsiella pneumoniae
I: ekstrak  daun  Suruhan  0,391%  +
bakteri Klebsiella pneumoniae
J: ekstrak  daun  Suruhan  0,19%,    + bakteri Klebsiella pneumoniae K(+): Suspensi Bakteri K(-):   Ekstrak daun suruhan 100%
Penentuan  nilai  KBM  dilakukan dengan  cara  menggoreskan  campuran pada  masing-masing  tabung  reaksi hasil  uji  aktivitas  bakteri  dengan  teknik dilusi cair ke media MHA (Gambar 4).
Hasil  positif  ditandai  dengan
terjadinya pertumbuhan bakteri di media  MHA.  Hasil  penggoresan  dapat dilihat di Tabel 2
Data  yang  diperoleh  dari  hasil penggoresan  setiap  konsentrasi  hasil uji  aktivitas  antibakteri  metode  dilusi cair  pada  media  MHA  menunjukkan pada  replikasi  1  dan  2  nilai  KBM ekstrak daun suruhan terhadap
Klebsiella  pneumoniaee adalah  25%.
Hal  ini  ditunjukkan  dengan  tidak ditumbuhinya  bakteri  25%  di  kuadran pada konsentarsi 25%.
Gambar 4. Hasil uji penentuan nilai KBM dengan penggoresan pada media MHA
Tabel  2.  Penentuan  nilai  KBM  dengan penggoresan pada media MHA Konsentrasi (%) Replikasi 1 2 3 50 - - - 25 - - + 12,5 + + + 6,25 + + + 3,125 + + + 1,562 + + + 0,781 + + + 0,391 + + + 0,19 + + + K + + + + K - - - - + :    terdapat pertumbuhan bakteri - :  tidak  terdapat  pertumbuhan
Bakteri

## KESIMPULAN
1.  Ekstrak  daun Piperomia  pellucida  L.
Kunt)    mempunyai  aktivitas  antibakteri terhadap Klebsiella pneumoniae.
2.  Secara in vitro nilai KHM, ekstrak daun suruhan terhadap Klebsiella pneumoniae tidak  dapat  ditentukan,
sedangkan nilai KBM-nya adalah sebesar 25%.

## DAFTAR PUSTAKA
Adisasmito,  A. W.  &  Hadinegoro,  S.  R. S., 2004,Infeksi Bakteri Gram Negatif  di  ICU  Anak:Epidemiologi, Manajemen Antibiotik dan Pencegahan, Sari  Pediatri ,  6  (1), 32-39. Azrifitria, Aziz S, Chairul. 2010. Aktivitas antibakteri ekstrak etanolik daun dan umbi Crinum asiaticum L. terhadap  bakteri  penyebab  jerawat. Majalah Farmasi Indonesia 21(4):256-241 Brooks GF, JS. Butel, SA Morse. 2005. Medical  Microbiologi  Kedokteran. Jakarta:  Binarupa  Aksara.  Hlm  39- 46 Cappucino, James G., LaboratoryManual,  6 t h Edition. Sinaeur Associates, Inc. Sunderland Dalimartha,  S.2006.  Atlas  Tumbuhan Obat Indonesia Jilid 4.Puspas Dzen SM. 1994. Dasar-dasar Mikrobiologi. Laboratorium Mikrobiologi  Fakultas  Kedokteran Universitas Brawijaya Malang.
Edwars  P.R  and  W.  H.  Ewing,  1972.
Identification  of  Enterobactericeae
.Third  edition  .  Burgess  Publishing
Company. Entjang,  I.,  2003, Mikrobiologi  dan Parasitologi untuk Akademi Keperawatan. PT Citra Aditya Bakti: Bandung Harbone  JB,  1987. Metode  Fitokimia : Penuntun Cara Modern Menganalisis  Tumbuhan  Terbitan kedua. Bandung: ITB Press.
Hariana,  H.A.  2006.  Tumbuhan  Obat dan  Khasiatnya,  seri  3  Agrisehat. Penebar Swadaya, Jakarta
Jawetz, E, J. L., Adelberg, E. A., 1996, MikrobiologiKedokteran ,  Edisi  XXII, Diterjemahkan oleh Bagian Mikrobiologi Fakultas
KedokteranUniversitas Airlangga, Salemba Medika.: Jakarta. Miranti  M,  Prasetyorini  dan  Suwary  C. 2013. Perbandingan aktivitas antibakteri  ekstrak  etanol  30%  dan 96% kelopak bunga rosella ( Hibiscus sabdariffa l ) terhadap bakteri Staphylococcus aureus.Ekologia 13 (1): 9-18 Pulak,  M,  Priya,  A,  Satya  V.  2011. Ethno-medicinal, Phytochemical and  Pharmacological  review  of  an amazing  medicinal  herb  Peperomia pellucida (L.) HBK, Research Journal of Pharmaceutical, Biological  and  Chemical. Vol  2(4), 358-364
Refdanita., Maksum, R.,  Nurgani, A., & Endang,  P.,  2004, Pola  Kepekaan Kuman  Terhadap  Antibiotika  Di Ruang  Rawat  Intensif  Rumah  Sakit Fatmawati  Jakarta  Tahun  2001- 2002. Repositori UI Schroll,  C.,  Barken,  K.  B.,  Krogfelt,  K. A.,  &  Struve,  C.,  2010,  Role  Of Type  1  AndType  3  Fimbriae  In Klebsiella  pneumoniaeee Biofilm Formation,  biomedcentral.  1471- 2180 / 10 / 179.
Syarfati,  Eriani  dan  Damhoeri.  2011.  A the potential of Jarak China Jatropa multifida  L) Secretion  in  healing new-wounded  mice. Jurnal  Natural :11. Tarigan,  I.M.  br,  S.  Bahri  dan  A. Saragih. 2012. Aktivitas Antihiperurisemia  Ekstrak  Etanol Herba Suruhan ( Peperomia pellucida (L.)  Kunth)  Pada  Mencit
Jantan. Journal  of  Pharmaceutics and Pharmacology 1(1):37-43.
Wei, L.S., W. Wee, J.Y.F. Siong, & D.F. Syamsumir.  2011.  Characterization of Anticancer, Antimicrobial, Antioxidant Properties and Chemical Compositions of Peperomia  pellucida Leaf  Extract.
Acta  Medica  Iranica 49(10):  670- 674