EFEK EKSTRAK KACANG TUNGGAK ( Vigna unguiculata ) TERHADAP KADAR SUPEROKSIDA DISMUTASE (SOD) SERUM TIKUS GALUR WISTAR ( Rattus norvegicus ) YANG DIPAPAR DENGAN ASAP MESIN BERBAHAN BAKAR BENSIN
Arum Gladys Kusumaningrum*, Bambang Prijadi**  , Moch. Aris Widodo***

## Abstrak
Emisi  kendaraan  bermotor  mengandung  komponen particulate  matter (PM)  yang  memiliki  efek proinflamasi melalui pembentukan reactive oxygen species (ROS). Peningkatan ROS akan berdampak pada stres  oksidatif  yang  menyebabkan  penurunan  kadar  antioksidan.  Kacang  tunggak  mengandung  senyawa genistein yang  dapat  bekerja  sebagai  antioksidan  sehingga  mampu  mencegah  terjadinya  stres  oksidatif akibat paparan asap. Tujuan penelitian ini adalah untuk menentukan pengaruh pemberian ekstrak kacang tunggak terhadap kadar SOD serum  pada tikus Wistar . Studi eksperimental ini menggunakan post test only control group design. Sebanyak tiga puluh enam tikus Wistar jantan dibagi secara acak dalam 9 kelompok, terdiri dari kelompok kontrol negatif (N), kelompok yang diberi oksigen 4 menit (N+O 4 ), kelompok yang diberi ekstrak  kacang  tunggak  (N+G),  kelompok  yang  diberi  perlakuan  asap  2,  3  dan  4  menit,  masing-masing diberikan oksigen 4 menit tanpa ekstrak kacang tunggak (A 2 O 4 (-)G, A 3 O 4 (-)G, A 4 O 4 (-)G) dan dengan ekstrak kacang  tunggak  (A 2 O 4 (+)G,  A 3 O 4 (+)G,  A 4 O 4 (+)G).  Pemaparan  asap  dilakukan  setiap  hari  selama  30  hari. Variabel  yang diukur pada penelitian ini adalah kadar SOD serum.  Hasil uji ANOVA menunjukkan adanya perbedaan  antar  kelompok  yang  signifikan  (p  <  0,05).  Hasil  analisis  statistik post  hoc  LSD menunjukkan bahwa kadar SOD serum kelompok tikus A 2 O 4 (+)G, A 3 O 4 (+)G, A 4 O 4 (+)G meningkat signifikan dibandingkan dengan kelompok tikus A 2 O 4 (-)G, A 3 O 4 (-)G, A 4 O 4 (-)G. Kesimpulan dari penelitian ini adalah ekstrak kacang tunggak  dapat  mencegah  penurunan  kadar  SOD  serum  tikus  wistar  yang  dipapar  asap  mesin  berbahan bakar bensin
Kata  Kunci:  asap  mesin  berbahan  bakar  bensin,  kacang  tunggak, particulate  matter (PM) , superoksida dismutase.
THE EFFECT OF COWPEA (Vigna unguiculata) EXTRACT ON SUPEROXIDE DISMUTASE (SOD) SERUM OF WISTAR RATS ( Rattus norvegicus ) EXPOSED TO

## PETROL-FUELED ENGINE EXHAUST

## Abstract
Petrol-fueled engine exhaust consisting of particulate matter exerts pro-inflammatory effects through the generation of reactive oxygen species (ROS). Excessive generation of ROS leads to oxidative stress causing antioxidant  level  to  decrease.  Cowpea  contains  genistein  as  an  antioxidant,  prevent  oxidative  stress  after being  exposed  to  petrol-fueled  engine  exhaust.  The  purpose  of  this  study  was  to  determine  the  effect  of cowpea extract on SOD serum in Wistar rat after being exposed to petrol-fueled engine exhaust. This study use post test only control group design. Thirty six male wistar rats were randomly selected and divided into nine  groups,  consisted  of  control  negative  group  (N),  normal  +  oxygen  (N+O 4 ),  normal  +  cowpea  extract (N+G), wistar rat with 2, 3, and 4 minutes exposure + oxygen without cowpea extract (A2O4(-)G, A3O4(-)G, A4O4(-)G) and with cowpea extract (A2O4(+)G, A3O4(+)G, A4O4(+)G). Intervention was given each day for thirty days. The measured variable was SOD serum. ANOVA test showed a significant difference between all groups  (p  <  0.05).  The  post  hoc  LSD  test  showed  significant  increase  of  SOD  serum  in  A2O4(+)G, A3O4(+)G, A4O4(+)G compared to A2O4(-)G, A3O4(-)G, A4O4(-)G. The conclusion was cowpea prevent the decreasing of SOD serum level in Wistar rat exposed to petrol-fueled engine exhaust.
Keywords: cowpea, particulate matter (PM), petrol-fueled engine exhaust, superoxide dismutase.
* Program Studi Pendidikan Dokter, FKUB ** Lab Biokimia dan Biomolekuler, FKUB *** Lab Farmakologi, FKUB
 bambang.prijadi@yahoo.com

## Pendahuluan
Hingga  2010  lalu  jumlah  kendaraan bermotor  di  dunia  telah  mencapai  1,015 miliar  unit.  Peningkatan  jumlah  kendaraan bermotor juga terjadi di Indonesia. Data dari Gabungan  Industri  Kendaraan  Bermotor Indonesia  (Gaikindo)  dan  Asosiasi  Industri Sepeda Motor Indonesia (AISI) menunjukkan bahwa    jumlah  kendaraan  bermotor  di Indonesia  hingga  2010  lalu  mencapai 50.824.128 unit, dimana rasio antara jumlah penduduk  dengan  kendaraan  bermotor  di Indonesia  1:4,6.  Bahkan  jumlah  kendaraan di  Indonesia  menempati  urutan  pertama  di kawasan  Asia  Tenggara  karena  pada  saat yang  sama  jumlah  kendaraan  di  negara ASEAN  lainnya  di  bawah  26  juta  unit. Diperkirakan jumlah kendaraan di Indonesia dalam  beberapa  tahun  terakhir  akan  terus bertambah 10-15 persen. 1 Emisi kendaraan bermotor mengandung senyawa kompleks yang terdiri dari fase gas dan partikulat. Fase gas mengandung bahan iritan  dan  noniritan  seperti  NOx,  SOx,  dan COx  serta  hidrokarbon  seperti  senyawa alkohol,  aldehid,  dan  derivat  keton.  Fase partikulat atau diesel exhaust particle (DEP) merupakan particulate matter (PM),
berukuran sangat kecil dan mudah terhirup. 2
Sumber  utama  PM  meliputi  proses kombusi, mekanis, dan debu environmental. PM  dikategorikan  secara  luas  menurut diameter  aerodinamisnya  yaitu fine  particle (<2,5µm  [PM2.5])  dan ultrafine (<0,1µm [UFP],  yang  kebanyakan  berasal  dari  gas diesel  serta coarse  particle (2,5  sampai
10µm [PM10-2,5]), yang berasal dari proses penghancuran  dan  pengasahan  suatu permukaan benda. 3 Mekanisme  PM  dalam  menimbulkan dampak  terhadap  kesehatan  adalah menginduksi  efek  proinflamasi  sel  target, seperti sel endothel, makrofag, dan sel epitel melalui  pembentukan reactive  oxygen species (ROS)  dan  stres  oksidatif.  Efek prooksidatif  ini  dipicu  oleh  molekul-molekul organik siklus redoks dan metal transisi yang terdapat pada permukaan partikel. 4
Superoksida dismutase (SOD) merupakan suatu antioksidan yang mendismutase  ROS  seperti  superoksida (O 2- ) yang reaktif menjadi O 2 dan H 2 O 2 . SOD melindungi  sel  terhadap  gangguan  oksidan (radikal  bebas)  dan  juga  memelihara keseimbangan  beberapa  oksigen  yang toksik. 5 Reactive oxygen species (ROS)  seperti superoksida  menginduksi  terjadinya  stres oksidatif.  Stres  oksidatif  merupakan  suatu keadaan  dengan  tingkat  ROS  yang  toksik melebihi pertahanan antioksidan endogen. 6 Kacang tunggak mengandung genistein, yaitu  golongan  isoflavone  fitoestrogen  yang selain  mempunyai  efek  estrogenik  juga mempunyai  efek  antioksidan. Potensi antioksidatif  genistein  dapat  melindungi terjadinya  stres  oksidatif. 7 Genistein  yang terkandung  dalam  kacang  tunggak  dapat menurunkan  kadar  lipid  peroksidase  dan meningkatkan kadar SOD. 8 Melihat  potensi  genistein  pada  ekstrak kacang tunggak berperan sebagai antioksidan  dalam  menurunkan  stres oksidatif perlu dilakukan pembuktian tentang efek ekstrak kacang tunggak terhadap kadar SOD serum tikus  Wistar yang dipapar asap mesin berbahan bakar bensin.
Bahan dan Metode

## Desain Penelitian
Penelitian ini menggunakan metode true experimental  design dengan post  test  only control  group  design .  Sampel  dipilih  secara acak  dan  kemudian  dibagi  dalam  sembilan kelompok yang masing-masing terdiri dari 4 hewan  coba,  yaitu  kelompok  kontrol  negatif (N),  kelompok  yang  diberi  oksigen  4  menit (N+O 4 ),  kelompok  yang  diberi  ekstrak kacang  tunggak  (N+G),  kelompok  yang diberi  perlakuan  asap  2,  3  dan  4  menit, masing-masing  diberikan  oksigen  4  menit dengan  ekstrak  kacang  tunggak  (A 2 O 4 (+)G, A 3 O 4 (+)G,  A 4 O 4 (+)G)  dan  tanpa  ekstrak kacang    tunggak    (A 2 O 4 (-)G,    A 3 O 4 (-)G, A 4 O 4 (-)G).  Variabel    tergantung  pada penelitian  ini  adalah  kadar  SOD  serum.
Proses  adaptasi  hewan  coba  dilakukan
selama 7 hari dilanjutkan dengan  perlakuan selama 30 hari.

## Ekstraksi Kacang tunggak
Kacang tunggak yang digunakan adalah KT-6  tersertifikasi  dari  BALITKABI  Malang. Kacang  tunggak  dikering-anginkan  dan digiling  hingga  halus.  Sebanyak  100  g serbuk  kering  kacang  tunggak  dimaserasi dengan  metanol  95%  untuk  mendapatkan bahan  aktifnya,  yaitu  genistein.  Selanjutnya etanol  yang  mengandung  bahan  aktif dievaporasi menggunakan rotary evaporator hingga didapatkan substrat berbentuk pasta yang merupakan hasil ekstraksi. Kandungan genistein diukur menggunakan LC-MS.

## Perlakuan  Asap  dan  Pemberian  Ekstrak Kacang Tunggak
Tikus dimasukkan dalam kandang yang ditutup  anyaman  kawat  berongga-rongga. Tiap  kandang  berisi  3  tikus.  Kandang diletakkan  pada  suhu  ruang  20-25  °C. Sebelum perlakuan, tikus diadaptasikan dulu dengan  kondisi  laboratorium  selama  1 minggu  agar  tidak  stres.  Alas  sekam  pada kandang  diganti  2  kali  setiap  minggu. Pengukuran  berat  badan  tikus  dilakukan  1 kali  minggu.  Tikus  diberi  pakan  standar Comfeed  PARS  40  g/ekor.  Minum  tikus diletakkan  pada  botol  minum  dengan kebutuhan  harian  60  ml/ekor.  Pemaparan dilakukan  setiap  hari  pada  pagi  dan  sore. Ekstrak  kacang  tunggak  diberikan  30  menit sebelum  pemaparan  melalui  alat  sonde dengan  dosis  0,5  mg/kgBB/hari.  Setelah  30 hari tikus dibedah kemudian diambil sampel darah  dari  jantung  untuk  diambil  serum kemudian  dilakukan  penghitungan  kadar SOD serum dengan spektrofotometer. Pengukuran Kadar Superoksida Dismutase (SOD) Serum Prinsip pemeriksaan kadar SOD adalah sebagai berikut. Reaksi antara xanthine dan xanthine  oxidase menghasilkan  radikal superoksida.  Radikal  superoksida  akan mereduksi nitroblue  tetrazolium (NBT ) menjadi  formazan  berwarna  ungu.  SOD dapat  menghambat  reduksi  NBT  melalui reaksinya  dengan  radikal  superoksida  yang menghasilkan  O 2 dan  H 2 O.  Pengukuran dilakukan  dengan  metode  kolorimetri menggunakan spektrofotometer. Pengukuran  kadar  SOD  dilakukan  secara tidak  langsung,  karena  yang  diukur  dengan spektrofotometer adalah
absorbansi formazan.  Kemudian  ditentukan  konsentrasi SOD  dengan  menggunakan  kurva  standar SOD.

## Analisis Data
Hasil  penghitungan  jumlah  sel  endotel dan  pengukuran  ketebalan  dinding  arteri koroner  dianalisis  secara  statistik  dengan program  SPSS  16.0. for  Windows. Uji statistik dilakukan pada derajat kepercayaan 95% (α = 0,05) dengan tingkat signifikansi p <  0,05.  Analisis  data  menggunakan  uji statistic one-way ANOVA , uji post hoc LSD.

## Hasil

## Kadar SOD Serum
Setelah  hewan  coba  diberi  perlakuan selama  tiga  puluh  hari,  dilakukan pembedahan dan pengambilan darah hewan coba  melalui  jantung.  Dari  sampel  darah tersebut  dilakukan  pengukuran  kadar  SOD dengan  menggunakan  spektrofotometer. Rerata  kadar  SOD  serum  ditunjukkan  pada Gambar 1 di bawah ini.

## Gambar 1. Rerata kadar SOD serum antar kelompok hewan coba
Keterangan: N: kontrol negatif, N+O 4 : normal + oksigen 4 menit, N+G: normal + ekstrak kacang tunggak, A 2 O 4 (-)G: Asap 2 menit + oksigen 4 menit, A 2 O 4 (+)G: asap 2 menit + oksigen 4 menit + ekstrak kacang tunggak, A 3 O 4 (-)G: asap 3 menit + oksigen 4 menit,  A 3 O 4 (+)G: asap 3 menit + oksigen 4 menit + ekstrak kacang tunggak, A 4 O 4 (-)G: asap  4  menit  +  oksigen  4  menit,  A 4 O 4 (+)G:  asap  4  menit  +  oksigen  4  menit  +  ekstrak  kacang  tunggak.

## Uji Shapiro Wilk
Untuk  mengetahui  distribusi  data, dilakukan  uji  normalitas  menggunakan Shapiro-Wilk  test. Kadar  SOD  serum memiliki  p  >  0.05  pada  semua  kelompok menunjukkan bahwa distribusi data normal.

## Uji Homogenitas
Dari uji homogenitas, kadar SOD serum memiliki  nilai  p  =  0,517  yang  menunjukkan bahwa  data  memiliki  varians  homogen  (p  > 0,05).

## Uji One-way ANOVA
Analisis  dengan  menggunakan  uji one way  ANOVA bertujuan  untuk  menilai perbedaan  kadar  SOD  serum  antar kelompok  dengan  cara  melihat  nilai signifikansi  (p).  Dari  hasil  pengujian didapatkan  bahwa  nilai  p  =  0,009  dan berdasarkan  hasil  tersebut  maka  p  <  0,05 sehingga dapat disimpulkan bahwa terdapat perbedaan yang bermakna pada kadar SOD serum antar dua kelompok yang berbeda.

## Uji Post Hoc LSD
Selanjutnya menggunakan analisis post- hoc untuk  mengetahui  kelompok  mana yang  memiliki  perbedaan  secara  bermakna. Pada  uji post-hoc suatu  data  dikatakan berbeda  secara  bermakna  apabila  nilai signifikansi  p  <  0,05  serta  interval kepercayaan 95%. Hasil komparasi ditunjukkan  pada  Tabel  2.  Kelompok  N terdapat perbedaan yang signifikan dibandingkan dengan kelompok A2O4(-)G (p =  0,011),  kelompok  A3O4(-)G  (p  =  0,027), dan  kelompok  A4O4(-)G  (p  =  0,031). Kelompok  A 2 O 4 (+)G  terdapat  peningkatan kadar  SOD  serum  yang  signifikan dibandingkan dengan kelompok A 2 O 4 (-)G (p =  0,017).  Kelompok  A 3 O 4 (+)G  terdapat peningkatan  kadar  SOD  serum  yang signifikan  dibandingkan  dengan  kelompok A 3 O 4 (-)G  (p  =  0,016).  Kelompok  A 4 O 4 (+)G terdapat  peningkatan  kadar  SOD  serum yang  signifikan  dibandingkan  dengan kelompok  A 4 O 4 (-)G  (p  =  0,040).  Pada kelompok A 2 O 4 (-)G tidak dijumpai perbedaan kadar  SOD  serum  yang  signifikan
dibandingkan  dengan  kelompok  A 3 O 4 (-)G dan A 4 O 4 (-)G (p = 0,694; p = 0,655).
Tabel 2. Hasil Uji Post Hoc LSD
Keterangan: * terdapat perbedaan yang bermakna ** tidak terdapat perbedaan yang bermakna P1= N, P2= N + O4, P3= N + G, P4= A2O4(-)G P5= A2O4(+)G, P6= A3O4(-)G, P7= A3O4(+)G, P8= A4O4(-)G, P9= A4O4(+)G

## Pembahasan
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui  pengaruh  genistein  pada ekstrak kacang tunggak ( Vigna unguiculata ) terhadap  kadar  SOD  serum  hewan  coba yang  dipapar  asap  mesin  berbahan  bakar bensin.  Hasil  penghitungan  kadar  SOD serum  menunjukkan  bahwa  rerata  kadar SOD  serum  kelompok  kontrol  negatif  yaitu 44,19±4,74,  lebih  tinggi  dibandingkan dengan kelompok A 2 O 4 (-)G yaitu 28,78±4,89)  yang  dipapar  asap  dua  menit tanpa  ekstrak  kacang  tunggak.  Pada kelompok  A 3 O 4 (-)G  sebesar  31,02±5,10 yang  dipapar asap tiga menit  tanpa  ekstrak kacang  tunggak,  dan  kelompok  A 4 O 4 (-)G yaitu  31,33±10,7.  Dari  analisis  statistik post hoc  LSD didapatkan  nilai  signifikansi sebesar  p  =  0,011,  p  =  0,027,  p  =  0,031 antara  kelompok  kontrol  negatif  dengan
kelompok yang dipapar asap dengan variasi waktu yang berbeda.
Pembakaran  yang  tidak  sempurna  dari mesin  diesel  menghasilkan  bermacam- macam gas dan partikel yang padat maupun cair.  Dibandingkan  dengan  mesin  berbahan bakar  bensin,  mesin  diesel  menghasilkan lebih  sedikit  karbon  monoksida,  tetapi menghasilkan  jauh  lebih  banyak  nitrogen oksida,  aldehida,  dan  yang  paling  penting partikel  jelaga  submikron  yang  dapat merugikan  kesehatan. 9 Partikel  dalam  asap kendaraan atau yang disebut sebagai diesel exhaust particulate (DEP ) terdiri dari fine dan ultrafine, yaitu fraksi particulate matter (PM) dengan  diameter  <2,5  dan  <0,1μm.  DEP yang  terinhalasi  akan masuk dan  terdeposit dengan  mudah  di  saluran  nafas  dimana partikel-partikel yang berukuran sangat kecil ini  memicu  reaksi  inflamasi  dari  sel  target, yaitu makrofag, sel endothel, sel epitel, dan sitokin  proinflamasi  lain.  Telah  diketahui
Kelompok Perlakuan P1 P2 P3 P4 P5 P6 P7 P8 P9 P1 - 0,936**  0,539** 0,011* 0,849** 0,027* 0,808** 0,031* 0,908** P2 0,936** - 0,488** 0,013* 0,912** 0,033* 0,746** 0,037* 0,972** P3 0,539**  0,488** - 0,002* 0,423** 0,006* 0,710** 0,007* 0,467** P4 0,011* 0,013* 0,002* - 0,017* 0,694** 0,006* 0,655** 0,014* P5 0,849**  0,912**  0,423** 0,017* - 0,042* 0,665** 0,047* 0,940** P6 0,027* 0,033* 0,006* 0,694** 0,042* - 0,016* 0,957** 0,035* P7 0,808**  0,746**  0,710** 0,006* 0,665** 0,016* - 0,018* 0,720** P8 0,031* 0,037* 0,007* 0,655** 0,047* 0,957** 0,018* - 0,040* P9 0,908**  0,972**  0,467** 0,014* 0,940** 0,035* 0,720** 0,040* -
bahwa DEP mengandung metal transisi dan komponen  organik  siklus  redoks  pada permukaan partikel yang merupakan pemicu produksi ROS pada sel di berbagai tempat. 4 Terdapat  perbedaan  yang  signifikan antara kelompok A 2 O 4 (-)G dengan kelompok A 3 O 4 (-)G  (p  =  0,694)  dan  A 4 O 4 (-)G  (p  = 0,655). Dapat disimpulkan bahwa perbedaan lama  paparan  tidak  berpengaruh  terhadap kadar  SOD  serum  tikus.  Hal  ini  mungkin dipengaruhi oleh beberapa faktor, antara lain perbedaan  durasi  pengasapan  yang  tidak terlalu  lama.  Terdapat  peningkatan  rerata kadar  SOD  serum  pada  kelompok  yang dipapar asap tanpa ekstrak kacang tunggak. Rerata  kadar  SOD  serum  kelompok  A 2 O 4 (- )G  (28,78±4,89)  lebih  rendah  dibandingkan dengan  kelompok  A 3 O 4 (-)  (31,02±5,10)  dan kelompok A 4 O 4 (-)G (31,33±10,7).   Semakin lama  pemaparan  asap,  kadar  SOD  serum semakin  meningkat.  Diduga  paparan  asap mesin berbahan bakar bensin menyebabkan peningkatan  radikal  superoksida  dalam serum,  namun  belum  sampai  pada  taraf stres  oksidatif.    Berdasarkan  hipotesis tingkatan  stres  oksidatif,  tingkatan  stres oksidatif  paling  bawah  dikaitkan  dengan induksi antioksidan dan enzim pendetoksifikasi.
10
Rerata  kadar  SOD  serum  pada kelompok  yang  dipapar  asap  dua  menit tanpa  ekstrak  kacang  tunggak  A 2 O 4 (-)G (28,78±4,89)  lebih  rendah  dibandingkan dengan  kelompok  yang  dipapar  asap  dua menit  disertai  ekstrak  kacang  tunggak A 2 O 4 (+)G  (43,10±6,82).  Berdasarkan  hasil analisis  statistik Post  Hoc  LSD, terdapat perbedaan signifikan antara kelompok A 2 O 4 (- )G dengan kelompok A 2 O 4 (+)G (p = 0,017). Rerata  kadar  SOD  serum  kelompok  yang dipapar  asap  tiga  menit  tanpa  ekstrak kacang tunggak A 3 O 4 (-)G (31,02±5,10) lebih rendah dibandingkan dengan kelompok yang dipapar  asap  tiga  menit  disertai  ekstrak kacang  tunggak  A 3 O 4 (+)G  (45,58±7,35). Berdasarkan  hasil  analisis statistik post hoc LSD, terdapat  perbedaan  signifikan  antara kelompok  A 3 O 4 (-)G  dengan  kelompok A 3 O 4 (+)G  (p  =  0,016).  Rerata  kadar  SOD serum  kelompok  yang  dipapar  asap  empat
menit  tanpa  ekstrak  kacang  tunggak  A 4 O 4 (-
)G (31,33±10,77) lebih rendah dibandingkan dengan kelompok yang dipapar asap disertai ekstrak kacang tunggak A 4 O 4 (+)G (43,53±11,30).  Berdasarkan  hasil  analisis statistik post  hoc  LSD, terdapat  perbedaan signifikan antara kelompok A 4 O 4 (-)G dengan kelompok A 4 O 4 (+)G (p = 0,040). Hasil  penghitungan  rerata  kadar  SOD serum  menunjukkan  bahwa  tidak  terdapat perbedaan yang signifikan (p > 0,05) antara kelompok  kontrol  negatif  dengan  kelompok yang  dipapar  asap  disertai  dengan  ekstrak kacang tunggak dengan durasi pengasapan masing-masing kelompok selama dua menit (p  =  0,849),  tiga  menit  (p  =  0,808),  dan empat  menit  (p  =  0,908).  Dapat  diartikan bahwa  rerata  kadar  SOD  serum  pada kelompok yang dipapar asap disertai dengan ekstrak  kacang  tunggak  mendekati  rerata kadar SOD serum kelompok kontrol negatif.
Genistein  merupakan  suatu  derivat isoflavon  yang  memiliki  efek  antioksidan penting  antara  lain  mempengaruhi  ekspresi gen.  Genistein  yang  banyak  terkandung dalam  diet  protein  kedelai  memiliki  banyak manfaat  kardioprotektif,  diantaranya  dapat menurunkan  kolesterol  LDL,  inhibisi  sitokin proinflamatori,  menginduksi  protein  untuk adhesi sel, mencegah oksidasi partikel LDL, serta  inhibisi  agregasi  platelet  dan memperbaiki reaktivitas vaskular. 11
Mekanisme  antioksidan  genistein  meliputi antara  lain,  supresi  pembentukan  ROS dengan cara inhibisi enzim atau mengkelasi trace  element yang  terlibat  dalam  proses pembentukan  radikal  bebas,  sebagai scavenger ROS,  dan up-regulation enzim antioksidan. 12 Genistein juga telah diketahui secara  signifikan  meningkatkan  aktivitas enzim  antioksidan  seperti  SOD,  katalase (CAT), dan glutathione peroxidase (GPx).
Dengan  demikian  dapat  disimpulkan bahwa  pemberian  ekstrak  kacang  tunggak meningkatkan  kadar  SOD  serum  pada Rattus norvegicus strain Wistar yang dipapar asap  mesin  berbahan  bakar  bensin.  Hal  ini didukung  oleh  penelitian  sebelumnya, dimana tikus yang diberi diet rendah protein kedelai    terdapat  penurunan  ekspresi  gen
antioksidan dan kadar eNOS disertai dengan gangguan reaktivitas vaskular dan peningkatan  tekanan  darah  pada  tikus. Selanjutnya tikus diberikan diet kaya protein kedelai  dan  menunjukkan  peningkatan eNOS  dan  enzim  antioksidan  dua  sampai tiga  kali  serta  perbaikan  relaksasi  endothel dan penurunan tekanan darah. 13

## Kesimpulan
Penelitian  ini  menyimpulkan  bahwa paparan asap mesin berbahan bakar bensin dapat  menurunkan  kadar  SOD  serum  tikus Wistar  dan  tidak  dipengaruhi  oleh  lama waktu  paparan  (2  menit,  3  menit,  dan  4 menit).  Serta  pemberian  ekstrak  kacang tunggak ( Vigna unguiculata ) dapat meningkatkan kadar SOD serum tikus Wistar yang  dipapar  asap  mesin  berbahan  bakar bensin  secara signifikan.

## Saran
1. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut dengan  variasi  waktu  paparan  asap dengan  perbandingan  durasi  yang lebih lama disertai dengan modifikasi alat  pengasapan  dengan  pengatur tekanan yang stabil dan variasi model pengasapan  agar  tikus  tahan terpapar  dalam  waktu  yang  cukup lama. 2. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk mengetahui mekanisme molekular  kacang  tunggak  dalam menghambat  penurunan  kadar  SOD serum tikus Wistar yang dipapar asap mesin berbahan bakar bensin. 3. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai  berbagai  jenis  ekstrak kacang tunggak yang efektif terhadap penghambatan  penurunan  kadar
SOD serum tikus Wistar yang dipapar asap  mesin  berbahan  bakar  bensin serta  meningkatkan  penggunaannya di  masyarakat  untuk  mencegah dampak penyakit akibat polusi.

## Daftar Pustaka
1.    Arianto  A.  Kendaraan  Bermotor  di Indonesia  Terbanyak  di  ASEAN. (Online). 2011. .Http://Www.Tempo.Co/Read/News/20 11/08/19/124352572/Kendaraan- Bermotor-Di-Indonesia-Terbanyak-Di-
ASEAN.    Diakses  15  Januari  2012, pukul 14.41 WIB.
2.    Sagai  M,  Hiroki  S,  Takamichi  I, Masahiko  K,  and  Yoki  Mori.  Biological Effects of Diesel Exhaust Particles I In Vitro  Production  of  Superoxide  and  In Vivo  Toxicity  in  Mouse. Free  Radical Biology  and  Medicine .  1993;  4(1):37- 47.
3.    Cozzi E, Surovi H, Howard WS, Wayne EC, Robert BD, Robert ML, Christopher JW, and Michael R Van Scott. Ultrafine Particulate  Matter  Exposure  Augments Ischemia-Reperfusion  Injury  in  Mice.
Am J Physiol Heart Circ Physiol . 2006; 291(2):H894-H903.
4.    Araujo  JA,  Berenice  B,  Michael  K, Xuping W, Brian JB, Ke WG, Mohamad N, et al . Ambient Particulate Pollutants in  the  Ultrafine  Range  Promote  Early Atherosclerosis and Systemic Oxidative Stress. Circulation  Research .  2008;
102(5):589-596.
5.   Scandalios  JG.  Oxidative  Stress: Molecular Perception and Transduction of Signals Triggering Antioxidant Gene Defenses. Braz J Med Biol Res . 2005;
38(7):995-1014.
6.    Davies,  Kelvin  JA.  Oxidative  Stress, Antioxidant  Defenses,  and  Damage Removal,  Repair,  and  Replacement Systems.  IUBMB  life.  2000;  50(4 ‐
5):279-289.
7.   Vedavanam K, Srijayanta S, O’Reilly J, Raman  A,  Wiseman  H.  Antioxidant Action  and  Potential  Antidiabetic Properties of Anisoflavonoid-Containing Soybean Phytochemical Extract (SPE). Phytothes Res . 1999; 13:601-608.
8.   Pawiroharsono  S.  Prospek  dan Manfaat  Isoflavon  untuk  Kesehatan. (Online). 2001. http://www.tempo.co.id/medika/arsip/04 2001/pus-2.htm. 9.    Sydbom  A,  Blomberg  A,  Parnia  S,
Stenfors  N,  Sandström  T,  and  Dahlen SE.  Health  Effects  of    Diesel  Exhaust Emissions. European  Respiratory
Journal. 2001; 17(4): 733-746. 10.   Nel  A,  Tian  X,  Lutz  M,  and  Ning  Li. Toxic  Potential  of  Materials  at  the Nanolevel.
Science. 2006; 311(5761):622-627. 11.    Rimbach  G,  Saadatmandi  CB,  Jan  F, Dagmar  F,  Uwe  W,  Hannelore  D,
Wendy L.  Hall,  and  Peter  DW.  Dietary Isoflavones  in  the  Prevention  of Cardiovascular  Disease–A  Molecular
Perspective. Food  and  Chemical Toxicology. 2008; 46(4):1308-1319.
12.  Pietta  PG.  Flavonoids  as  Antioxidants. Journal  of  natural  products. 2000; 63(7):1035-1042.
13.   Mahn K, Consuelo B, Greg AK, Paul T, Imran  YK,  David  S,  Lucilla  P  et  al. Dietary  Soy  Isoflavone  Induced Increases  in  Antioxidant  and  eNOS Gene  Expression  Lead  to  Improved Endothelial  Function  and  Reduced Blood  Pressure  In  Vivo. The  FASEB journal. 2005; 19(12):1755-1757.