## ANALISIS KANDUNGAN HORMON TIROKSIN DENGAN METODE ELISA
PADA INDUK BETINA KEPITING BAKAU ( Scylla serrata )
Heppi Iromo 1) ,  Nuril Farizah 1)
1) Staff Pengajar Program Studi Budidaya Perairan
FPIK Universitas Borneo Tarakan (UBT) Kampus Amal Lama Gedung E Jl. Amal Lama No. 1 Tarakan Timur Kota Tarakan Kal-Tim HP.085213396636 / E-mail : sholat_dhuha@yahoo.co.id

## ABSTRACT
The  mud  crab  was high  commercial  value . To  develop  hatchery  techniques for female reproduction were investigated. Experiments were studi of thyroxine hormone for female reproduction in stages vitellogenesis. Thyroxine hormone is known to be controlled growth, and mature ovary. The occurrence of thyroxine hormone, female reproduction is yet to be determeined. The level of thyroxine hormon in ovary, hemolymp and the hepatopancreas of the mud crab female  were reproduction analyzed in different vitellogenic in order to establish a correlation hormon profile and stages of vitellogenesis. It  was observed that the level of thyroxine hormon increased steeply in the tissues of vitellogenesis. The higest concentration of thyroxine hormon was seen in ovary then hepatopancreas and hemolymp.
Keywords : Female reproduction, thyroxine hormone, vitellogenesis.

## PENDAHULUAN
Latar belakang Indonesia menargetkan menjadi
penghasil  kepiting  terbesar  di  pasar internasional.  Nilai  ekspor    kepiting mengalami  peningkatan  tajam  dari  tahun 2003 yaitu sekitar 12.041 ton ke tahun 2004 menjadi  20.903  ton.  Total  produksi Indonesia  tahun  2008  mencapai  jumlah 34.270 ton  (KKP, 2011).
Budidaya  kepiting  bakau  saat  ini masih belum menunjukkan hasil yang sesuai dengan harapan. Masih kurangnya ketersediaan  benih  kepiting  dimasyarakat merupakan  salah  satu  barometer  kurang berhasilnya budidaya kepiting bakau.
Masalah  yang  dihadapi  dalam  pembenihan kepiting  bakau  adalah  masih  tingginya mortalitas  benih  pada  saat  fase  larva terutama  pada  fase  zoea  dan  megalopa (Suprayudi, et.al., 2004).
Telah  banyak  penelitian  mengenai nutrisi dan lingkungan untuk benih kepiting
bakau  namun  sampai  saat  ini  masih  belum menunjukkan  hasil  yang  optimal  seperti budidaya udang. Penelitian pakan yang telah dilakukan,  mulai  dari  menentukan  jenis pakan  alami  yang  baik,  kuantitas  dan kualitas  pakan  alami,  kepadatan  dan frekuensi pemberian pakan hingga pengayaan  pakan  alami  serta  kombinasi pakan alami dengan pakan buatan (Hamasaki et.al .,  2002  ;  Holme,  2007  ; Aslamyah  dan  Fujaya,  2009).    Demikian pula  dengan  penelitian  lingkungan  seperti kondisi  salinitas  yang  baik,  subtrat  dasar, suhu  dan  lainnya.    Hasilnya  secara keseluruhan masih belum menjawab permasalahan  yang  ada.    Hal  ini  diduga karena masih banyak kondisi fisiologis dari kepiting  tersebut  mulai  dari  induk  hingga benih yang belum terungkap.
Penelitian  tentang  fisiologi  kepiting bakau masih sangat kurang terutama tentang hormon endokrin yang merupakan salah satu faktor  penting  dalam  proses  kimiawi  di dalam  tubuh.  Salah  satunya  adalah  tentang
keberadaan hormon tiroksin di dalam tubuh induk betina.
Hormon  tiroksin  telah  lama  dikenal memiliki peranan penting dalam
perkembangan  awal.  Peranan  penting  dari tiroksin  adalah  sebagai  media  absorpsi penyerapan kuning telur, pembentukan sirip dan  rangka,  metamorphosis,  transformasi dari  larva  ke  juvenile  dan  pertumbuhan. Hormon  tiroksin  ternyata  juga  mampu meningkatkan konversi dan efisiensi pakan. Suplementasi hormon tiroksin telah diujikan pada beberapa jenis ikan untuk meningkatkan  kualitas  induk  agar  dapat meningkatkan  kualitas  dan  kuantitas  benih. Hal ini belum pernah diujikan pada kepiting karena  karakteristik  fisiologis  tentang keberadaan dan konsentrasi hormon ini pada crustacea  terutama  pada  kepiting  bakau masih belum diketahui. Itulah yang menjadi dasar  peneliti  untuk  melakukan  penelitian dasar  tentang  fisiologis  hormon  tiroksin pada kepiting bakau.

## Perumusan masalah
Saat ini teknologi pembenihan belum menghasilkan benih untuk budidaya sehingga  masih  bergantung  pada  hasil penangkapan  di  alam.  Upaya  untuk mengembangkan teknologi budidaya kepiting  bakau  sudah  mulai  dirintis  namun hasilnya  belum  optimal  seperti  budidaya udang.  Penelitian-penelitian  dasar  tentang kepiting  dari  berbagai  spesies  sudah dilakukan. Namun jumlahnya belum banyak sehingga  masih  banyak  hal  yang  belum terungkap.
Kepiting bakau memiliki kemampuan  fekunditas  yang  tinggi  namun kelangsungan hidup larvanya rendah. Berbagai  penelitian  sudah  dilakukan  untuk meningkatkan  kelangsungan  hidup  larva, mulai  dari  penelitian  tentang  lingkungan yang cocok untuk hidup larva seperti kondisi salinitas  dan  suhu  (Baylon et  al .,  2001  ; Karim,  2007).    Penelitian  tentang  pakan alami untuk larva juga telah dilakukan baik itu  mengenai  jenis  pakan  seperti  rotifer, artemia    (Hamasaki,  2003  ;  Linddy et  al .,
2004) pengkayaan pakan alami (Han et al.,
2001  ;  Suprayudi, et  al .,  2004).    Pengujian pakan buatan untuk crustacea (Genodepa et al .,  2004  ;  Holme et  al .,  2006).    Penelitian pada  induk  kepiting  juga  sudah  dilakukan diantaranya  perbaikan  pakan  dan  substrat (Millamena et al ., 2001 ; Djunaidah, 2004), dan  mengenai  penggunaan  hormon  dan ablasi  (Riani,  2001  ;  Alfaro et  al .,  2004  ; Fujaya,  2004  ;  Pattiasina,  2010),  namun hingga saat ini benih hasil budidaya kepiting bakau masih sulit ditemukan.
Penggunaan  hormon  tiroksin  sudah diujikan  pada  ikan  untuk  meningkatkan kelangsungan hidup dan pertumbuhan larva namun belum pernah diujikan pada kepiting. Penelitian tentang fisiologis hormon tiroksin pada  kepiting  bakau  merupakan  salah  satu penelitian  dasar  yang  bertujuan  untuk meningkatkan  kelangsungan  hidup  dan kualitas benih. Penelitian ini ingin menunjukkan  keberadaan  dan  efektifitas hormon  tiroksin  pada  induk  kepiting  bakau yang matang ovari dalam proses penyerapan nutrisi dan proses vitelogenesis.
Untuk mendeteksi keberadaan hormon tiroksin pada induk kepiting bakau, akan digunakan metode analisis yang cepat, sensitif,  dan  spesifik  yaitu enzyme  linked immunosorbent assay (ELISA).
Keuntungan  dari  teknik  analisis  ini adalah  sangat  sensitif  dan  spesifik  dengan menggunakan  antibodi.    Selain  itu,  waktu analisisnya cepat, baik pada contoh tunggal maupun banyak.
Penelitian ini bertujuan untuk menganalisis  kesediaan  dan  konsentrasi hormon  tiroksin  secara  ELISA  pada  induk betina kepiting yang matang ovari.
Hasil  dari  penelitian  diharapkan dapat memberikan informasi tentang keberadaan dan konsentrasi hormon tiroksin pada  induk  betina  kepiting  bakau  sehingga dapat  dijadikan  dasar  untuk  pengembangan penelitian lanjut seperti suplementasi hormon  tiroksin  pada  induk  kepiting  bakau untuk  meningkatkan  kualitas  dan  kuantitas benih.

## MATERI DAN METODE

## Lokasi penelitian
Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Teknologi Budidaya Perairan Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan Universitas  Borneo  Tarakan    dan  analisis hormon  dan  proksimat  dilakukan  di laboratorium Reproduksi Fakultas Kedokteran Hewan Institut Pertanian Bogor.

## Bahan dan alat
Bahan yang digunakan dalam penelitian  ini  yaitu  kepiting  bakau  ( Scylla serrata ).    Bobot  hewan  uji  berupa  induk betina kepiting bakau ( Scylla serrata ) yang digunakan  sekitar  325-350  g/individu. Hewan uji tersebut berasal dari penangkapan nelayan  di  wilayah  perairan  sekitar  Pulau Tarakan.  Hewan  uji  yang  digunakan  telah mengalami  kopulasi  dan  telah  matang ovarium. Kit antibodi hormon tiroksin yang digunakan adalah kit total thryroxine DRG Internasional Inc., USA.

## Metode
Induk  betina  kepiting  bakau  yang digunakan  telah  matang  ovari  pada  tingkat kematangan  ovari  (TKO)  I,  II,  dan  III. Sampel  organ  yang  diambil  berasal  dari hemolimfa,  ovarium,  dan  hepatopankreas. Pengambilan  hemolimfa  dilakukan  dengan menggunakan spuit 1 ml pada pangkal kaki renangnya, sedangkan pengambilan ovarium dan  hepatopankreas  dilakukan  dengan membedah kepiting.
Percobaan dilakukan
dengan menggunakan  perangkat  ELISA  komersial hormon tiroksin dari DRG International Inc.,
USA.  Komposisi  dari  kit  hormon  tiroksin yang digunakan adalah sebagai berikut:
1. Antibody-Coated  Wells  (1  plate,  96 wells),  Microtiter  wells  coated  with sheep anti-T4.
2. Enzyme  Conjugate  Concentrate  11X (1.3 mL), Contains T4-HRP Conjugate.
3. Enzyme Conjugate Diluent (1 bottle, 13
mL),  Contains  ANS,  TRIS  buffer, pH=7.60 and ProClin-300.
4. Reference  Standard  Set  (1  mL/vial), Contains 0, 2.0, 5.0, 10.0, 15.0 and 25.0 μg/dL  in  T3/T4-free  stripped  human serum, 1 set, liquid, ready-to-use. 5. TMB  Reagent  (1  bottle,  11  mL), Contains 3, 3’, 5, 5’
tetramethylbenzidine  (TMB)  stabilized in buffer solution.
6. Stop  Solution  (1N  HCl)  (1  bottle,  11 mL), Contains  diluted  hydrochloric acid.
Pengujian keberadaan dan konsentrasi hormon  tiroksin  dari  sampel  di  atas, ditentukan  dengan  menggunakan  metode ELISA dan masing-masing sampel dilakukan ulangan 3 (tiga) kali.  Urutan kerja pengujian  sampel  dengan  menggunakan metode ELISA adalah sebagai berikut :
1. Well dilapisi  atau  ditempeli  antigen, dengan diisi 25 μl larutan standars
2. Sampel  (antibodi)  yang  ingin  diuji ditambahkan.  Menambahkan  100  μl Conjugate reagent ke dalam setiap well
3. Biarkan tercampur selama 30 detik
4. Diinkubasikan pada suhu ruang (18 o C - 25 o C) selama 60 menit 5. Mikroplate dicuci dalam waste container
6. Keringkan Plate dengan kertas towel
7. Ditambahkan  100  μl  TBM  reagent  ke dalam  setiap  well  dan  dibiarkan bercampur selama 5 detik
8. Inkubasi ditemperatur ruang dan dalam ruang gelap selama 20 menit
9. Untuk menghentikan reaksi ditambahkan 100 μl Stop Solution pada setiap well 10. Dilakukan  pengamatan  secara  visual terhadap  perubahan  warna  yang  terjadi pada  larutan.  Bila  terjadi  perubahan warna, ada indikasi bahwa sampel yang diuji positif
11. Pembacaan hasil juga dilakukan dengan menggunakan  ELISA  reader  dengan panjang gelombang 450 nm.
Konsentrasi  hormon  tiroksin  dari sampel  tentukan  dengan  menggunakan  kit antibodi T-4 (total  thyroxine, DRG
Internasional  Inc.,  USA).  Kisaran  standar yang  digunakan  untuk  membuat  kurva standar  adalah  mulai  dari  1  sampai  dengan 25 µg/dl. Untuk akurasi konsentrasi hormon T4, setiap sampel dianalisis secara duplo .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Induk betina kepiting bakau
Induk kepiting bakau yang
digunakan dalam penelitian ini adalah induk kepiting  matang  ovari  yang  berasal  dari penangkapan  di  pulau-pulau  kecil  disekitar pulau  Tarakan.    Lahan  di  pulau-pulau tersebut sebagian besar dimanfaatkan sebagai lahan tambak tradisional.  Disekitar tambak tersebut masih ditumbuhi oleh hutan mangrove yang berfungsi sebagai pelindung tambak tradisional dari derasnya gelombang arus  laut  karena  umumnya  lahan  tambak berbatasan langsung dengan laut.
Kepiting  bakau  menjalani  sebagian besar hidupnya di ekosistem mangrove dan memanfaatkan ekosistem mangrove sebagai habitat  alami  utamanya,  yakni  sebagai tempat  berlindung,  mencari  makan,  dan pembesaran. Kepiting bakau melangsungkan  perkawinan  di  perairan hutan  mangrove,  dan  secara  berangsur- angsur sesuai dengan perkembangan telurnya, kepiting bakau betina akan beruaya dari  perairan  hutan  mangrove  ke  perairan laut  untuk  memijah,  sedangkan  kepiting bakau  jantan  akan  tetap  berada  di  hutan mangrove  untuk  melanjutkan  aktifitas hidupnya.  Setelah memijah, kepiting bakau betina  akan  kembali  ke  hutan  mangrove. Demikian  pula  dengan  juvenil  kepiting bakau yang akan bermigrasi ke hulu estuari, untuk kemudian berangsur-angsur
memasuki hutan mangrove.
Ekosistem  mangrove,  merupakan tempat  ideal  bagi  kepiting  bakau  untuk berlindung. Kepiting bakau muda pascalarva yang  berasal  dari  laut,  banyak  dijumpai  di sekitar  estuari  dan  hutan  mangrove,  karena terbawa  arus  dan  air  pasang  dan  akan menempel  pada  akar-akar  mengrove  untuk berlindung    (Hutching  &  Saenger  1987). Sedangkan kepiting bakau dewasa
merupakan penghuni tetap hutan mangrove, dan  sering  dijumpai  membenamkan  diri dalam  substrat  lumpur,  atau  menggali lubang  pada  substrat  lunak  sebagai  tempat persembunyian.
Induk  kepiting  betina  yang  ditangkap dari  alam  biasanya  telah  kawin  (Robertson dan Kruger, 1994) dan membawa spermatophor dalam  thekanya  yang  dapat disimpan untuk waktu yang lama, sehingga dapat  memproduksi  telur  sampai  dengan  6 bulan  setelah  tertangkap  tanpa  perlu  kawin lagi (Nghia et al ., 2001).
Induk  kepiting  bakau  yang  akan digunakan dalam uji ini adalah induk-induk yang  sudah  matang  ovarinya.  Penentuan tingkat  kematangan  ovari  induk  kepiting bakau  dilakukan  melalui  pengamatan  ciri morfologi. Dimana bentuk abdomen dijadikan sebagai salah satu penentu tingkat kematangan  ovari/gonad  (TKO)  induk kepiting  bakau.  Selanjutnya  dilakukan  pula pengamatan  dengan  mengamati  warna gonad  melalui  sambungan  antara  abdomen dan karapak.
Induk  kepiting  betina  yang  akan digunakan  dikelompokan  sesuai  dengan sesuai dengan tingkat kematangan ovarinya. Kemudian untuk mendapatkan karakteristik ovari  pada  setiap  tingkatan  kematangan ovari  dilakukan  pula  pembedahan  agar diperoleh gambaran yang jelas. Berdasarkan pada  pengamatan  (Gambar  4),  warna  ovari pada  masing-masing  tingkatan  kematangan sangat  berbeda.  Tingkat  kematangan  ovari tingkat  I  (TKO  I)  ovari  berwarna  kuning namun  masih  sedikit.  TKO  II,  ovari  juga berwarna  kuning  namun  lebih  besar gonadnya.  TKO  III,  ovari  berwarna  orange dan  tampak  padat.  Selanjutnya  diambil sampel  telur  dan  hepatopankreas  dari masing-masing induk yang Tingkat kematangan ovarinya berbeda.
Sebelum  kepiting  uji  dibedah, masing-masing  sampel  diambil  terlebih dahulu hemolimfanya dengan menggunakan spuit  1  ml.  Hemolimfa  tersebut  diletakan dimasukan ke dalam efendove dan disimpan dalam freezer dengan suhu -20 o C.
Pengambilan sampel juga dilakukan pada induk kepiting yang sedang membawa telur ( sponge ).  Pada saat ini sedang terjadi proses  perkembangan  embrio  di  luar  tubuh induk.  Warna dari sponge tersebut berlainan sesuai dengan tingkat perkembangan embrio. Perkembangan awal hingga menetas telur pada sponge berwarna kuning, orange, coklat dan hitam.

## Hormon tiroksin
Kelenjar tiroid terdapat pada seluruh vertebrata,  namun  saat  ini  belum  ada informasi  tentang  keberadaan  kelenjar  ini pada  crustacea  termasuk  pada  kepiting bakau. Pada vertebrata rendah, folikel tiroid ada,  namun  folikel  ini  tidak  terorganisasi menjadi  suatu  kelenjar  yang  mampat  dan berkapsul.  Folikel  pada  tiroid  teleostei cenderung  bertebaran  sepanjang  sebelah ventral aorta dan sering ditemukan sepanjang arteri brankialis.
Hormon  tiroid  telah  lama  dikenal memiliki peranan penting dalam
perkembangan  awal.    Hormon  ini  terdapat pada telur dan larva yang baru menetas.    Hormon  tiroid  ini  juga  dapat ditransfer  dari  induk  ke  gonad  dan akumulasi  pada  oosit  selama  proses pematangan  oosit  selanjutnya  ke  larva. Peranan  penting  tiroid  lainnya  adalah sebagai  media  absorpsi  penyerapan  kuning telur,  pembentukan  sirip  dan  rangka, metamorphosis,  transformasi  dari  larva  ke juvenile dan  pertumbuhan.    Hormon  tiroid juga  mampu  meningkatkan  konversi  dan efisiensi pakan, absorpsi nutrient, mempengaruhi  gelembung  renang  serta sistem  pencernaan  sehingga  meningkat kemampuan  dalam  menangkap  pakan  dan meningkatkan pertumbuhan.
Penelitian ini menganalisis keberadaan  hormon  tiroksin  pada  induk matang  ovari  untuk  mengungkap  beberapa faal dari kepiting terutama yang berhubungan  dengan  hormon  tersebut.
Pendeteksi keberadaan hormon tiroksin pada induk  kepiting  menggunakan  metode  yang sudah lazim dalam pengujian hormon yaitu metode ELISA.
Uji  kekebalan  enzimatis  sering  kali disebut enzyme-linked immuno-sorbent assay (ELISA)  yang  menghubungkan spesifitas  antibodi  dengan  kepekaan  uji enzimatis  dengan  spektrofotometer  biasa atau  antigen  dilekatkan  pada  enzim  yang mudah  ditera  (Sudarmadji,  1996).    Ciri utama  dari  teknik  ini  adalah  dipakai indikator enzim untuk reaksi imunologi.
ELISA  adalah  suatu  teknik  deteksi dengan  metode  serologis  yang  berdasarkan atas  reaksi  spesifik  antara  antigen  dan antibodi, mempunyai sensitivitas dan spesifisitas yang
tinggi dengan menggunakan  enzim  sebagai  indikator. Prinsip dasar ELISA (Burgess 1995) adalah analisis  interaksi  antara  permukaan  fase padat dengan menggunakan konjugat antibodi  atau  antigen  yang  dilabel  enzim. Enzim ini akan bereaksi dengan substrat dan menghasilkan  warna.  Warna  yang  timbul dapat  ditentukan  secara  kualitatif  dengan pandangan  mata  atau  kuantitatif  dengan pembacaan  nilai  absorbansi    (OD)  pada ELISA plate reader .
Prinsip dasar ELISA yang dipergunakan  adalah  prinsip  dasar  secara kompetitif  langsung . Analisis  berlangsung dalam wadah microwell (mikroplat) dengan konsentrasi  antibodi  yang  dilapiskan  pada mikroplat  0  mg/mL.  Hormon  tiroksin  yang terdapat  pada  contoh  yang  diperiksa  akan berkompetisi  dengan  antibodi  yang  berada dalam mikroplat. Bahan atau pereaksi yang tidak  berikatan  akan  terbuang  setelah mengalami  proses  pencucian.  Dengan menambahkan substrat pada mikroplat akan terbentuk warna pada ikatan antara antibodi dan enzim konjugat. Hasil analisis ditentukan dengan membaca optical density (OD) pada ELISA reader .

## Analisis hormon tiroksin
Sebelum  pengujian  sampel  dengan menggunakan metode Elisa perlu dilakukan uji pengukur akurasi absorbansi kit DRG T- 4  untuk  konsentrasi  yang  akan  digunakan. Hasil tes dapat dilihat pada tabel 1.
Tabel 1. Absorbansi dan pemulihan standar kit DRG T-4.
Standard Ecpected Conc. (ug/dL) Measured Absorbance Measured Conc. (ug/dL) Recovery (%) 1 1 2,057 1,04 103,8 2 2 1,802 1,87 93,5 3 5 1,365 5,56 111,2 4 10 1,017 10,06 100,6 5 15 0,797 13,94 92,9 6 25 0,337 24,55 98,2 Berdasarkan  tabel  di  atas  terlihat bahwa Concertation ecpected adalah konsentrasi standart hormon tiroksin memiliki  nilai  yang  hampir  sama  dengan konsentrasi  kit  yang  akan  digunakan.  Ini berarti  kit  tersebut  masih  layak  digunakan untuk  menguji  konsentrasi  hormon  tiroksin pada sampel yang akan digunakan.
Penelitian  dilakukan  pada  setiap perkembangan  vitelogenesis  berdasarkan dari pendapat John dan Sivadas (1979), yang mengatakan  bahwa  ada  empat  tingkatan kematangan  gonad  pada  kepiting  bakau  ; akan  matang,  belum  matang,  matang  dan salin.
Penelitian ini menganalisa mengenai ketersediaan  hormon  tiroksin  pada  induk kepiting  di  tingkat  vitellogenin,  maka dilakukan  pengujian  ketersediaan  hormon tersebut  dari  hemolimfa,  hepatopankreas, dan ovarium pada setiap tingkatan kematangan  ovarinya.  Setelah  diamati bahwa  ketiga  organ  tersebut  mengandung hormon  tiroksin  dengan  jumlah  yang
signifikan.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa hormon  tiroksin  terdapat  pada  setiap tingkatan  vitellogenin.    Berdasarkan  hasil penelitian bahwa konsentrasi hormon tiroksin pada sampel ovarium, hepatopankreas  dan  hemolimfa  disetiap tahapan  perkembangan  ovarium  (I-III) menunjukkan nilai yang berbeda.
Konsentrasi  hormon  tiroksin  induk kepiting meningkat tajam pada ovarium dan hemolimfa pada proses  vitellogenesis tahap I  sampai  tahap  III.  Sebaliknya  pada hepatopankreas konsentrasi hormon tiroksin menurun dari tahap I sampai tahap III (Tabel 2).
Jumlah  konsentrasi  hormon  tiroksin dari  hemolimfa  induk  kepiting  selama pematangan  meningkat  dari  vitelogenesis  I sampai III (8.50 ± 2,17-15,33 ± 7.20 ng / ml) demikian  pula  pada  ovarium,    konsentrasi hormon  tiroksin    juga  meningkat  dari vitelogenesis  I  sampai  III  (18,47  ±  2,06- 42,27 ± 3,17 ng/ml).
Tabel 2.  Data (mean ± SD, n = 27) konsentrasi hormon tiroksin pada induk betina kepiting bakau (ng / ml)
Organs Vitelogenesis I Vitelogenesis II Vitelogenesis III Hemolimfa 8.50±2.17 11.23±2.06 15.33±7.20 Hepatopankreas 108.43±1.91 78.90±3.30 39.73±5.31 Ovary 18.47±2.06 27.07±1.92 42.27±3.17 Pada hepatopankreas, perkembangan konsentrasi  hormonnya  berbeda.  Selama proses pematangan konsentrasinya menurun dari  vitelogenesis  I  sampai  III  (108,43  ± 1,91-39,73  ±  5,31  ng/ml).    Berdasarkan analisis  varians tingkat  konsentrasi  hormon tiroksin  pada  hemolimfa,  hepatopankreas dan  ovarium  menunjukkan  hasil  yang berbeda nyata (P <0,05).
Perkembangan ovarium mulai dengan  proses  vitelogenesis,  adalah  proses pembentukan kuning ditandai oleh deposisi vitelogenin  ke  sel  telur.  Vitelogenin disekresikan  ke  hemolimfa  dan  dibawa  ke sel telur yang akan disintesis menjadi kuning telur.  Yano (1992) mengatakan vitelogenin yang  merupakan  bahan  baku  atau  kuning telur protein prekursor  yang disintesis pada
sel-sel  telur  yang  matang  (oosit).    Kuning telur  akan  menjadi  sumber  nutrisi  untuk perkembangan  embrio  (Silversand et  al ., 1993).  Bahan baku dari vetelogenin adalah vitelin,  yang  disintesis  oleh  jaringan ekstraovarium dan dilepaskan ke hemolimp untuk respon vitellogenin ovarium stimulating hormone (VSOH).
Ketika induk betina akan bertelur, sel telur  (oosit)  dikeluarkan  dari  ovarium melalui  wadah  penampungan  spermatozoa
( sepermatheka ) sehingga terjadi pembuahan di daerah itu.  Telur yang dibuahi,  rata-rata berukuran  sekitar  ±  0,25  mm,  yang kemudian  menjadi  extruded  besar,  massa kohesif  atau  " sponges "  yang  tetap  melekat pada  bulu-bulu  halus  di  bawah  perutnya sampai menetas.
Pada  penelitian  ini  juga  dilakukan pengamatan  ketersediaan  hormon  tirosksin pada perkembangan sponges kepiting bakau (Tabel 3).
Tabel 3. Konsentrasi hormon T4 pada tahapan perkembangan sponge No Sampel Warns sponge Konsentrasi hormon (ng/ml) 1 Sponge Kuning 99,5 2 Sponge Orange 101,9 3 Sponge Coklat 119,1 4 Sponge Hitam 108,3 Konsentrasi hormon tiroksin meningkat  selama  awal  perkembangan embrio  dan  kemudian  menurun  seiring selesainya penyerapan kuning telur.
Selama  awal kehidupan kadar hormon  tiroksin meningkat  secara  bertahap dan secara signifikan selama transformasi ke tahap remaja.
Berdasarkan  hasil  pengujian  pada ketersediaan hormon tiroksin kepiting bakau itu  telah  mendeteksi  adanya  hormon  ini dalam proses vitelogenesis dari induk.  Hal ini sesuai dengan pendapat Ayson dan Lam (1993)  yang  menyatakan  bahwa  hormon tiroksin  dalam  sirkulasi  induk  dapat ditransfer  ke  dalam  oosit,  sel  telur  dan kemudian ke indung telur ( yolk sac ) sebelum ovulasi. Hormon tiroid secara tidak langsung membantu  dalam  penyerapan  kuning  telur.
Hormon tiroksin dapat dengan mudah masuk ke  dalam  sel  target  melalui  dinding  sel (membran plasma) dengan cara transpor aktif.
Penelitian  ini,  telah  diujikan  pula mengenai keberadaan hormon tiroksin pada hepatopankreas,  ovarium  dan  hemolimfa pada  kepiting.  Penggunaan  analisa  metode ELISA  diperoleh  informasi  mengenai ketersedian dan konsentrasi hormon tiroksin pada ke tiga jaringan tersebut. Berdasarkan pengamatan  hormon  tiroksin  pada  masing-
masing tahapan vitelogenesis I-III, menunjukkan  bahwa  konsentrasi  hormon tiroksin  pada  hepatopankreas  ditemukan lebih  tertinggi  dibandingkan  ovarium  dan hemolymph .  Karakteristik hormon ini pada hepatopankreas menunjukkan nilai konsentrasi  yang  menurun  dari  tahap vitellogenik I-III.
Hal  ini  diduga  karena  hormon tiroksin  yang  ada  pada  hepatopankreas diangkut  melalui  hemolymfa  ke  ovarium. Konsentrasi  hormon  tiroksin  yang  tinggi pada  hepatopankreas  menunjukkan  bahwa hormon  tiroksin  tersimpan  pada  organ tersebut.  Hemolimp  kemudian  mentransfer hormon  tersebut  ke  ovarium  dan  target lainnya  sehingga  peningkatan  konsentrasi hormon  tiroksin  pada  ovarium  selama vitellogenesis.
Tingginya tingkat hormon tiroksin di hepatopankreas, seperti yang diamati dalam penelitian ini, menunjukkan bahwa hormon tiroksin  memiliki  peran  penting  dalam proses  vitellogenik.    Diduga  hormon tersebut  juga  berperan  meningkatkan  dan mengatur  sintesis  pada  proses  vitelogenisis seperti  pada  vertebrata,  atau  dapat  pula merangsang jalur metabolisme dimulai pada tahap vitellogenesis hingga  lipogenesis dan dapat pula sebagai transportasi antar ion.

## KESIMPULAN
1. Hormon  tiroksin  juga  terdapat  pada induk  betina  baik  di  hemolymph, hepatopankreas,  ovarium  dan  sponge kepiting bakau ( Scylla serrata ).
2. Konsentrasi    hormon  tiroksin  dalam hepatopankreas lebih tinggi dari lainnya.

## DAFTAR PUSTAKA
Chen, H. Y., R. D. Watson., J. C. Chen., H. F. Liu., C. Y. Lee. 2007. Molecular characterization and gene expression  pattern  of  two  putative molt-inhibiting hormones from Litopenaeus  vannamei. General and  Comparative  Endocrinology 151: 72–81.
Davis, S. L., N. B. Wehr, D. M. Laird and A.
C.  Hammond.  1994. Serum  growth hormone-binding protein (GHBP) in domestic  animals  as  measured  by ELISA . J Anim Sci 72 :1719-1727.
Djunaidah I.S. 2004. Kajian pola pemijahan kepiting bakau (Scylla paramamosain  Estampador)  dan peningkatan tampilan reproduksinya melalui  perbaikan  kualitas  pakan alami  dalam  substrat  pemeliharaan teruji. Disertasi. Sekolah Pascasarjana Institut Pertanian Bogor. Entwistle,  K.  W.,  dan  C.  A.  J.  Ridd.  1995. Teknologi  ELISA  dalam  diagnosis dan penelitian : Asai hormon dengan ELISA. Editor G. W. Burgess. Gajah Mada University Press. Yogyakarta. (Diterjemahkan : W. T.  Artama dan E. Moeljono).
Hamasaki,  K.,  Suprayudi,  M.A.,  Takeuchi,
T.,  2002. Mass  mortality  during
metamorphosis  to  megalops  in  the seed production of mud crab, Scylla serrata (Crustacea, Decapoda, Portunidae). Fish.  Sci.  68:  1226–
1232.
Haussmann,  M.  F.,  C.  M.  Vleck,  and  E. S. Farrar.  2007. A  laboratory  exercise to  illustrate  increased  salivary cortisol in response to three stressful conditions using competitive ELISA. Adv. Physiol. Educ. 31: 110–115.
John  S,  Sivadas  P.  1978. Morfological changes  in  development  of  the ovary  in  the  eyestalk  ablated estuarine  crab,  Scylla  serrata (Forskal). Mahasagar 11: 57-62.
Oda,  H,  Y.  Shiina,  K.  Seiki,  N.  Sato,  N. Eguchi,  and  Y.  Urade.  2002. Development  and  Evaluation  of  a Practical ELISA for Human Urinary Lipocalin-Type  Prostaglandin  D Synthase. Clinical Chemistry 48 (9):
1445–1453.
Vaysse,  J.,  M.  Beaugrand,  and  M.  Pontet. 1998. Measurements  of  Total  and Desialylated  Sex  Hormonebinding Globulin  in  Serum  by  ELISA. Clinical Chemistry 44 (4): 882 – 884.
Sugiono,  S,  Debby  A,  Aurelia  L,  Erna  S.,
Ruth  S.  H,  Budianto  G.  2011.
ELISA. http:// www.scribd.com/doc/39010855/ELI
SA.html.  Diakses  tanggal  25  Mei 2011.
Suprayudi,  M.A.,  Takeuchi,  T.,  Hamasaki, K.,  2004. Essential  fatty  acids  for larval  mud  crab,  Scylla  serrata: implications of lack of the ability to bioconvert  C18  unsaturated  fatty acids  to  highly  unsaturated  fatty acids. Aquaculture 231, 403–416.