Pengaruh purifikasi terhadap Profil Organoleptis, Rendemen, Total Fenol dan Total Flavonoid dari Ekstrak Etanol 96% daun kelor ( Moringa oleifera. L).
Purification effect on Organoleptic Profile, Yield, Total Phenol and Total Flavonoids from 96% Ethanol Extract of Moringa ( Moringa oleifera . L) leaves.
Bayu Herdi Al Huda 1 , Hari Susanti 2 , Nining Sugihartini 3 1 Mahasiswa Pascasarjana Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Ahmad Dahlan
2 Laboratorium Kimia Analisis, Fakultas Farmasi Universitas Ahmad Dahlan
3 Laboratorium Teknologi Farmasi, Fakultas Farmasi Universitas Ahmad Dahlan Email : bayucapatra@gmail.com, email koresponding author : nining.sugihartini@pharm.uad.ac.id
(tanggal diterima: 22-09-2020 , tanggal disetujui: 02-11-2020)

## INTISARI
Purifikasi  ekstrak  etanol  96%  daun  kelor  dilakukan  untuk  meningkatkan  kandungan  zat aktif serta untuk memperoleh warna yang lebih menarik. Tujuan penelitian ini adalah mengetahui jenis pelarut dalam proses fraksinasi yang memberikan kandungan zat aktif lebih tinggi.
Penelitian ini diawali dengan maserasi daun kelor kering dengan etanol 96%. Filtrat yang telah di keringkan di atas waterbath kemudian di purifikasi. Purifikasi diawali dengan melarutkan ekstrak ke  aquades panas  dengan perbandingan  1:10,  setelah  itu  ditambahkan etil  asetat atau  n- heksana sejumlah sama dengan aqu
ades panas dalam corong pisah, dikocok hingga terjadi pemisahan fase. Fase etil asetat atau n-heksana diambil kemudian filtrat yang diperoleh digabungkan. Ekstrak etanol 96% (E1), fraksi etil asetat  (E2)  dan  fraksi  n-heksana  (E3)  kemudian  dievaluasi  dengan  parameter  organoleptis,  % rendemen, total fenol, dan total flavonoid. Data yang diperoleh dianalisis statistik one way ANOVA dengan taraf kepercayaan 95%.
Hasil pengukuran terhadap E1, E2, dan E3 pada setiap parameter secara berturut-turut pada parameter rendemen adalah 15,81%; 22,18%; 20%, total fenol yaitu 28,94±0,54 mg GAE/g; 29,44 ± 0,93  mg  GAE/g;  11,41±0,12  mg  GAE/g,  dan  total  flavonoid  yaitu  3,19±0,13%;  9,92  ±0,06%; 5,81±0,18%.  Secara  organoleptis,  dari  segi  warna  E2  lebih  hijau  kekuningan  dan  cerah,  sehingga lebih menarik. Secara statistik, ada perbedaan bermakna di antara E1, E2, dan E3 pada total fenol dan antara E2 dan E3 pada total flavonoid, sedangkan antara E2 dan E1 tidak berbeda signifikan.
Kata Kunci : ekstrak etanol kelor, purifikasi, total fenol, total flavonoid.

## ABSTRACT
Purification extract ethanol 96% of Moringa dry leaves was carried out to increase the active substance content and to obtain a more attractive color. The study is to determine the type of solvent in the fractionation which provides a higher active substance content.
This research begins with maceration of dried Moringa leaves with 96% ethanol. The filtrate that has been dried then purified. Purification begins with dissolving the extract in hot distilled water with a ratio of 1:10, after that ethyl acetate or n-hexane is added to the same amount as hot distilled water in a separating funnel, shaking it. The ethyl acetate or n-hexane phase is taken then the filtrate obtained is combined. The 96% ethanol extract (E1), ethyl acetate (E2) and n-hexane (E3) were then evaluated with  parameters  of organoleptic,  %  yield,  total phenol, and total flavonoids.  Data  were analyzed statistically one way ANOVA with confidence level of 95%.
The measurement results for E1, E2, and E3 in yield value were 15.81%; 22.18%; 20%, the total  phenol  was  28.94±0.54mgGAE/g;  29.44±0.93mgGAE/g;  11,41±0,12mgGAE/g,  and  total
flavonoids  3,19±0.13%;  9,92±0.06%;  5.81±0.18%  respectively.  E2  is  more  yellowish  green  and brighter, making it more attractive. Statistically, there were significant differences between E1, E2, and E3 in total phenols and between E2 and E3 in total flavonoid, but not in E2 and E1.
Keywords: ethanol extract of Moringa, purification, total phenol, total flavonoids.

## 1. PENDAHULUAN
Hasil  penelitian  membuktikan  bahwa  daun  kelor  mengandung  senyawa fenol,  flavonoid,  fenolat,  karotenoid,  karoten,  dan  vitamin  C  sehingga  dapat berkhasiat sebagai antioksidan, antimikroba[1], anti inflamasi, dan anti penuaan[3]. Senyawa  golongan  flavonoid  yang  ada  dalam  daun  kelor  adalah  karotenoid,  β- karoten,  kuersetin,  dan  flavonoid[4].  Selain  itu  juga  ada  senyawa  fenol  yang kesemuanya bermanfaat sinergis sebagai antioksidan[5].
Aktivitas  farmakologi  daun  kelor  sangat  dipengaruhi  oleh  kandungan senyawa  aktif  dalam  ekstrak.  Senyawa  aktif  dalam  daun  kelor  termasuk  dalam senyawa  fenol  dan  flavonoid[4-5].  Penentuan  total  flavonoid  dapat  digunakan sebagai tolok ukur kemampuan antioksidan, dimana semakin besar maka semakin kuat  dalam  menangkal  radikal  bebas  yang  dapat  menyebabkan  penyakit  [6]. Penentuan  total  fenol  dapat  digunakan  sebagai  dasar  penentuan  aktivitas antioksidan senyawa polifenol dalam kelor. Senyawa fenol diketahui memiliki efek biologis  sebagai  antioksidan,  melindungi  struktur  sel,  anti  inflamasi,  dan antiseptik[7].
Berdasarkan  konsep like dissolve like , senyawa polar dalam tanaman  akan larut dalam pelarut polar, senyawa semipolar akan larut dalam pelarut semipolar, dan  senyawa  non  polar  akan  larut  dalam  pelarut  non  polar.  Optimasi  ekstraksi senyawa  aktif  dari  daun  kelor  seperti  fenol  dan  flavonoid  dilakukan  dengan purifikasi  menggunakan  pelarut  etil  asetat  dan  n-heksana.  Etil  asetat  merupakan pelarut semipolar sehingga dapat melarutkan senyawa semi polar seperti flavonoid dan  tanin,  sedangkan  n-heksana  merupakan  pelarut  non  polar  sehingga  dapat melarutkan  senyawa  non  polar  seperti  lemak,  sterol,  karoten,  kumarin,  dan beberapa terpenoid[8].
Berdasarkan uraian di atas, maka penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh jenis pelarut yang digunakan dalam purifikasi yang dapat mengekstraksi fenol  dan  flavonoid  paling  besar  serta  memperbaiki  warna  ekstrak.  Berdasarkan hasil  penelitian,  diharapkan  akan  diperoleh  informasi  bahwa  purifikasi  dengan pelarut etil asetat ataukah n-heksana yang akan meningkatkan total flavonoid dan total fenol secara signifikan dan memperbaiki warna ekstrak.

## 2. METODE PENELITIAN

## 2.1. ALAT DAN BAHAN
Daun  kelor  yang  digunakan  berupa  simplisia  yang  didapat  dari  petani  di daerah  Sleman,  Yogyakarta  yang  telah  dilakukan  uji  determinasi  pada  Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada. Bahan lain yang digunakan antara lain akuades, etanol p.a (Merck), etil asetat (Merck), n-heksana (Merck), Folin- Ciocalteu (Merck),
Na 2 CO 3 (Merck), AlCl 3 (Merck), quersetin (Aldrich), asam galat (Aldrich). Alat yang digunakan  adalah  Spektrofotometer  UV-VIS  (Shimadzu-1900),  Mikropipet  200µl dan 1000µl (Acura), waterbath (Memmert), Rotavapor (Buchi).

## 2.2. CARA KERJA Maserasi
Ekstraksi dilakukan dengan metode maserasi dengan rasio serbuk simplisia dibanding pelarut adalah 1:40. Serbuk simplisia yang telah ditimbang, direndam dan diaduk setiap hari 1 kali dalam pelarut etanol 96% selama 72 jam pada suhu kamar. Remaserasi  dilakukan  1  kali  supaya  lebih  optimal  penyariannya.  Filtrat  yang diperoleh,  difiltrasi  dengan  kertas  saring  dan  dipompa  vakum  kemudian dievaporasi hingga terbentuk ekstrak kental [9].

## Purifikasi
Ekstrak  etanol  96%  daun  kelor  yang  diperoleh  kemudian  difraksinasi dengan  menggunakan  n-heksana  dan  etil  asetat.  Fraksinasi  diawali  dengan melarutkan ekstrak dalam akuades panas suhu 70° (dengan perbandingan 1:10 [9]). Setelah itu larutan dimasukkan ke dalam corong pisah dan ditambah etil asetat/n- heksana  dengan  jumlah  yang  sama  dengan  akuades  panas  tersebut.  Berdasarkan aktivitas tersebut, maka akan diperoleh 3 jenis ekstrak yaitu ekstrak etanol 96% daun kelor (E1), ekstrak etanol 96% daun kelor yang terpurifikasi etil asetat (E2), ekstrak  etanol  96%  daun  kelor  yang  terpurifikasi  n-heksana(E3).  Masing-masing ekstrak  akan  ditetapkan  profil  organoleptis,  %  rendemen,  total  fenol  dan  total flavonoid.

## Uji Organoleptis
Uji  organoleptik  merupakan  pengenalan  awal  yang  sederhana  seobjektif mungkin.  Uji  organoleptik  dilakukan  dengan  pengamatan  terhadap  konsistensi, warna, bau, dan rasa[10].

## Perhitungan Rendemen
Persen rendemen dihitung dengan rumus sebagai berikut[10] : Rendemen    =  bobot ekstrak  x 100% bobot simplisia
Penentuan Total Fenol E1, E2, & E3.
Total Fenol pada  E1, E2, dan E3 ditentukan secara spektrofotometri UV-Vis dengan  reagen  Folin-Ciocalteu  dan  Na 2 CO 3 dengan  standar  asam  galat  sebagai pembanding. Total fenol dinyatakan sebagai mgGAE/g. Pengujian dilakukan dengan replikasi 3 kali [14].

## Penentuan Total Flavonoid E1, E2, & E3.
Total  flavonoid  E1,  E2,  dan  E3  ditentukan  secara  spektrofotometri  UV-Vis menggunakan  metode  kolorimetri  dengan  reagen  aluminium  klorida  (AlCl 3 )  dan
standar  kuersetin  sebagai  pembanding.  Kadar  total  flavonoid  dinyatakan  dalam bentuk %. Pengujian dilakukan dengan replikasi 3 kali [13].

## Analisis Data
Pada  penelitian  ini  data  kualitatif  berupa  organoleptis  dan  %  rendemen dibahas  dan  disimpulkan  secara  kualitatif  sedangkan  nilai  total  fenol  dan  total flavonoid  di  analisis  statistik  menggunakan One  Way  ANOVA untuk  melihat ada/tidaknya  perbedaan  bermakna  secara  signifikan  dengan  taraf  kepercayaan 95%.

## 3. DISKUSI DAN HASIL
Hasil determinasi daun kelor kering sebelum diproses untuk penelitian pada Fakultas  Farmasi  Universitas  Gadjah  Mada  terdapat  pada  surat  keterangan  hasil determinasi dengan nomor 18.03.08/UN1/FFA/BF/PT/2020 tertanggal 3 Agustus 2020.  Hasil  determinasi  menunjukkan  bahwa  tanaman  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah Moringa  oleifera .L.  Dengan  demikian,  dapat  dilakukan penelitian selanjutnya.

## 3.1. UJI ORGANOLEPTIS
Hasil uji organoleptis disajikan pada gambar 1 dan tabel 1. Pada penelitian ini didapatkan hasil uji organoleptis pada E1, E2, dan E3 masing- masing pada tabel dan gambar 1 berikut :
Gambar 1. Tampilan organoleptis E1, E2, dan E3
Tabel 1. Hasil Uji Organoleptis
Parameter E1 E2 E3 Konsistensi Ekstrak kental Ekstrak kental Ekstrak Kental Warna Hijau Hitam Pekat dominan Hitam Hijau, Kuning Kehitaman Hijau Hitam Bau Khas Khas Khas Rasa Pahit Pahit Pahit
Hasil  uji  organoleptis  menunjukkan  bahwa  ketiga  ekstrak  memiliki konsistensi,  bau  dan  rasa  yang  sama.  Warna  E2  adalah  hijau,  kuning  kehitaman sehingga paling cerah daripada yang lain [11].
E1 E2 E3

## 3.2. RENDEMEN
Hasil perhitungan rendemen E1, E2 dan E3 disajikan pada tabel 2 berikut : Tabel 2. Persentase rendemen
Jenis Ekstrak % Rendemen E1 15,81 E2 22,18 E3 20,00
Hasil  uji  menunjukkan  bahwa  rendemen  tertinggi  diberikan  oleh  ekstrak yang  difraksinasi  dengan  etil  asetat.  Etil  asetat  memiliki  sifat  semipolar  sehingga dapat  melarutkan  flavonoid,  triterpenoid,  dan  tanin  yang  sebagian  besar merupakan  senyawa  aktif  daun  kelor  sehingga  rendemen  lebih  banyak[5].  N- heksana memiliki sifat non polar sehingga dapat melarutkan lemak, sterol, kumarin dan beberapa terpenoid, sehingga rendemennya cenderung lebih sedikit[8].

## 3.3. TOTAL FENOL
Total Fenol dalam ekstrak dan fraksi ditentukan berdasarkan jumlah asam galat.  Asam  galat  digunakan  sebagai  standar  karena  merupakan  salah  satu  fenol alam yang  stabil  serta relatif murah  dibanding  lainnya[16].  Asam  galat  termasuk dalam  senyawa  fenol  turunan  asam  hidroksi  benzoat  yang  tergolong  asam  fenol sederhana. Asam galat menjadi pilihan sebagai standar ketersediaan substansi yang stabil  dan  murni  [16].  Asam  galat  bereaksi  dengan  reagen  Folin-Ciocalteu menghasilkan warna kuning yang menandakan bahwa mengandung fenol, setelah itu ditambahkan dengan larutan Na 2 CO 3 menghasilkan warna ungu kehitaman [16]. Senyawa fenol bereaksi dengan reagen Folin-Ciocalteu hanya dalam suasana basa agar  terjadi  disosiasi  proton  pada  senyawa  fenol  menjadi  ion  fenolat,  sehingga ditambahkan larutan Na 2 CO 3 [17].
Adanya  total  fenol  yang  terukur  dalam  spektrofotometer  UV-Vis membuktikan  daun  kelor  memiliki  senyawa  polifenol  yang  berfungsi  sebagai antioksidan.  Dalam  penelitian  sebelumnya,  senyawa  fenol  diketahui  memiliki berbagai efek biologis sebagai antioksidan, melindungi struktur sel, antiinflamasi, dan sebagai antiseptik [5].
Gambar 2. Kurva Baku Standar Asam Galat
y = 0,0101x + 0,0949 R² = 0,987 0 0,2 0,4 0,6 0,8 0 20 40 60 80 Ab so rb an Kadar Asam Galat (ppm) Kurva Baku Asam Galat
Kurva  baku  asam  galat  disajikan  pada  gambar  2.  Kurva  baku  tersebut memiliki nilai r = 0.987 dan sudah melebihi r tabel yaitu 0.917. Hasil penetapan total fenol disajikan pada Tabel 3. Hasil uji menunjukkan bahwa total fenol pada fraksi etil asetat (E2) memiliki jumlah yang paling tinggi. Senyawa fenolik memiliki sifat polar [18]. Etil asetat memiliki sifat semipolar[19]. Berdasarkan hal tersebut, fenol akan  banyak  tersari  ke  dalam  fraksi  etil  asetat.  Apabila  dibandingkan  dengan  n- heksana yang memiliki sifat non polar[20], maka senyawa fenolik kurang terlarut di dalamnya.  Senyawa  fenol  yang  larut  dalam  etil  asetat  (semipolar)  adalah  tanin, katekol  dan  asam  galat,  sedangkan  senyawa  fenol  yang  larut  dalam  n-heksana antara  lain  flavonoid  yang  cenderung  non  polar  [27].  Jadi  memang  lebih  banyak senyawa fenol yang lebih larut dalam pelarut polar dan semipolar, sehingga total fenol pada fraksi etil asetat lebih besar dibandingkan pada fraksi n-heksana.
Tabel 3. Total Fenol
Sampel
Total Fenol ± SD (mgGAE/g) E1 28,94 ± 0,54 E2 29,44 ± 0,93 E3 11,41 ± 0,12
Pada  uji  statistik  dengan one  way ANOVA,  didapatkan  bahwa  nilai  Sig =0,000(<0,05)  sehingga  didapatkan  kesimpulan  bahwa  ada  perbedaan  signifikan antara nilai total fenol E1, E2, dan E3 secara statistik. Kesimpulan setelah dilakukan post hoc test dengan Bonferroni yaitu total fenol pada E2 secara signifikan paling besar diantara E3 tapi tidak lebih besar secara signifikan dibanding E1.

## 3.4. TOTAL FLAVONOID
Prinsip  penetapan  total  flavonoid  dengan  metode kolorimetri adalah terjadinya  pembentukan  kompleks  antara  aluminium  klorida  dengan  gugus  keto pada atom C-4 dan gugus hidroksi pada atom C-3 atau C-5 yang bertetangga dari golongan flavon dan flavonol[13]. Mekanisme reaksi kompleks antara flavonoid dan AlCl 3 disajikan pada gambar 4.
Total  flavonoid  dalam  ekstrak  dan  fraksi  ditentukan  berdasarkan  kadar kuersetin.  Kuersetin  digunakan  sebagai  standar  karena  merupakan  flavonoid golongan flavonol yang memiliki gugus keto pada atom C-4 dan juga gugus hidroksil pada atom C-3 dan C-5 yang bertetangga. Kuersetin merupakan senyawa flavonoid yang terdapat pada daun kelor, mudah larut dalam etanol, dan penggunaannya yang relatif mudah [21]
Pada  pengukuran  total  flavonoid  dilakukan  penambahan  AlCl 3. Kuersetin bereaksi  dengan  AlCl 3 akan  membentuk  kompleks,  sehingga  terjadi  pergeseran panjang  gelombang  ke  arah visible ditandai  dengan  larutan  menghasilkan  warna yang lebih kuning[13].
Grafik  persamaan  kurva  baku  disajikan  pada  gambar  3.  Nilai  r  pada persamaan adalah 0.994 dan ini sudah melebihi nilai r tabel sebesar 0.834.
Gambar 3. Kurva dan Persamaan Kurva Baku standar Kuersetin
Tabel 4. Total Flavonoid Sampel Total Flavonoid ± SD (%) E1 3,19 ± 0,13 E2 9,92 ± 0,06 E3 5,81± 0,18
Hasil  penetapan  total  flavonoid  disajikan  pada  tabel  4.  Hasil  uji menunjukkan  bahwa  total  flavonoid  pada  fraksi  etil  asetat  memiliki  jumlah  yang paling tinggi. %. Penelitian lain menunjukkan bahwa total flavonoid ekstrak etanol 96% daun kelor sebesar 13,15±0.47 % [23], total flavonoid pada ekstrak etanol 70% daun kelor senilai 5,53% [24] dan total flavonoid pada fraksi etil asetat senilai 37.1 ± 0.03 % [25]. Kandungan rata-rata flavonoid dalam ekstrak etanol dan fraksi etil asetat daun kelor berturut-turut adalah sebesar 8,33% dan 6,2542 % [26]. Senyawa flavonoid  memiliki  sifat  semipolar,  namun  ada  beberapa  yang  memiliki  sifat nonpolar  ( chalcon,  flavanon,  flavon,  flavonol,  isoflavon )  [2].  Senyawa  flavonoid terbagi  ke  dalam  beberapa  jenis,  masing-masing  flavonoid  berbeda  polaritasnya yang  bergantung  pada  jumlah  dan  posisi  gugus  hidroksil  yang  mempengaruhi kelarutannya pada pelarut[22]. Etil asetat memiliki sifat semipolar [19]. N-heksana memiliki  sifat  non  polar  [20]  maka  flavonoid  lebih  sedikit  terlarut  di  dalamnya. Berdasarkan hal tersebut, maka flavonoid akan banyak tersari ke dalam fraksi etil asetat.  Total  flavonoid  pada  fraksi  etil  asetat  lebih  besar  dibandingkan  fraksi  n- heksana, berarti memang lebih banyak flavonoid yang terlarut dalam etil asetat.
Gambar 4.  Reaksi kolorimetri aluminium klorida dengan flavonoid sebagai prinsip uji total flavonoid [12]
y = 0,0356x - 0,0162 R² = 0,994 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 0 5 10 15 20 25 Ab so rb an Kadar Kuersetin (ppm) Kurva Baku Kuersetin
Pada  uji  statistik one  way ANOVA,  diperoleh  nilai  Sig  =  0,000  (<0,05) sehingga didapatkan kesimpulan bahwa ada perbedaan signifikan antara nilai total flavonoid E1, E2, dan E3 secara statistik. Kesimpulan setelah dilakukan post hoc test Bonferroni yaitu E2 secara signifikan paling besar diantara E1 dan E3.

## 4. KESIMPULAN
Purifikasi  daun  kelor  dengan  etil  asetat  (E2)  telah  meningkatkan  jumlah rendemen,  membuat  warna  fraksi  etil  asetat  paling  cerah,  dan  secara  signifikan meningkatkan total fenol dan total flavonoid.

## 5. UCAPAN TERIMAKASIH
Penelitian  ini  terlaksana  atas  dana  dari  Program  Hibah  Penelitian  dari Universitas Ahmad Dahlan dalam skema penelitian pejabat.

## 6. DAFTAR PUSTAKA
[1] Pal S.K., Mukherjee P.K., Saha K., Pal M., Saha B.P. Antimicrobial action of the leaf extract of Moringa oleifera lam. Anc. Sci. Life. 1995;14:197–199.
[2] Abd-Rani  N.Z.,  Husain  K.,  Kumolosasi  E.  2018.  Moringa  Genus:  A  Review  of Phytochemistry  and  Pharmacology.  Front.  Pharmacol.  9:108.  doi: 10.3389/fphar.2018.00108.
[3] Krisnadi  AD.  2013. Kelor  Super  Nutrisi. Pusat  Informasi  dan  Pengembangan Tanaman  Kelor  Indonesia  Lembaga  Swadaya  Masyarakat  Media  Peduli Lingkungan. Blora.
[4] Gopalakrishnan L, Doriya K, Kumar DS. 2016. Moringa oleifera: A review on nutritive importance and its medicinal application. Food Science and Human Wellness 5:49-56
[5] Singh R.S.G., Negi P.S., Radha C. 2013. Phenolic composition, antioxidant and antimicrobial activities of free and bound phenolic extracts of Moringa oleifera seed flour. J. Funct. Foods. 5:1883–1891. doi: 10.1016/j.jff.2013.09.009.
[6] DeGroot  H  (1994)  Reactive  oxygen  species  in  tissue  injury. Hepatogastroenterology 41, 328–332.
[7] Vergara-Jimenez  M.,  Almatrafi  M.M.,  Fernandez  M.L.  2017.  Bioactive Components  in  Moringa  oleifera  Leaves  Protect  against  Chronic  Disease. Antioxidants. 6:91. doi: 10.3390/antiox6040091.
[8] Markham, K. R., 1998, Cara Mengidentifikasi Flavonoid , ITB Press, Bandung.
[9] Vongsak, B., Sithisarn, P., Mangmool, S., Thongpraditchote, S., Wongkrajang, Y., Gritsanapan, W., 2013, Maximizing total phenolics, total flavonoids contents and  antioxidant  activity  of  Moringa  oleifera  leaf  extract  by  the  appropriate extraction method, Industrial Crops and Products. Elsevier B.V., 44: 566–571.
[10] Departemen Kesehatan RI, 2000, Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat , Cetakan Pertama, 3-11, 17-19, Dikjen POM, Direktorat Pengawasan Obat Tradisional.
[11] Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia.  2008. Farmakope  Herbal Indonesia,  Edisi  I, Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia,  Jakarta,
Indonesia.
[12] Abidin, Z., Khaeriah, U., Zuhrina, Z., Pratama, M., & Baits, M. 2019. Tyrosinase Inhibitor  Activity  Measurement  of  Crude  and  Purified  Extract  of  Moringa Leaves  (Moringa  oleifera  L.).  Indonesian  Journal  of  Pharmaceutical  Science and Technology, 1(1). https://doi.org/10.24198/IJPST.V1I1.19152
[13] Chang  C.  Yang  M,  Wen  Hand  Chern  J.  2002.  Estimation  of  Total  Flavonoid Content  in  Propolis  by  Two  Complementary  Colorimetric  Methods,  J.  Food Drug Anal.
[14] Ainsworth  EA,  Gillespie  KM.  Estimation  of  total  phenolic  content  and  other oxidation substrates in plant tissues using Folin- Ciocalteu reagent. Nat Protoc. 2007;2(4):875–877.
[15] Azwar, Saifuddin. 2011. Metode Penelitian . Yogyakarta: Pustaka Pelajar.
[16] Viranda,  P.  M.  2009. Pengujian  Kandungan  Tomat. Jakarta.  Fakultas Kedokteran. Universitas. Indonesia.
[17] Kusbandari, Aprilia; Susanti, Hari. 2011. Kandungan Beta Kroten dan Aktivitas Penangkapan  Radikal  Bebas  terhadap  DPPH  (1,1-difenil  2-pikrilhidrazil) Ekstrak  Buah  Blewah  (Cucumis  melo  var.  Cantalupensis  L)  Secara Spektrofotometri  UV-Visibel.  Yogyakarta.  JURNAL  FARMASI  SAINS  DAN KOMUNITAS, Mei 2017, hlm. 37-42
[18] Orthmer, Kirk. 1961. Encyclopedia of Chemical Technology . 3th edition. Volume 5 dan 19. John Wiley & Son, Inc. New York
[19] Dutia, P, 2004, Ethyl Acetate: A Techno-Commercial Profile, Chemical Weekly, pp: 179-186.
[20] NN. 2008. Hexane. (Online). (http://wikipedia.org, diakses 15 Maret 2015)
[21] Alexandra  B  Bentz.  2009.  A  Review  of  Quercetin:  Chemistry,  Antioxidant Properties, and Bioavailability. Journal of young investigayor.
[22] Narayana,  K.R.,  Reddy,  M.S.,  Chaluvadi,  M.R.,  and  Krishna,  D.R.,  2001, Bioflavonoids  Classification,  Pharmacological,  Biochemical  Effect  and Therapeutic Potential, Indian Journal of Pharmacology, vol. 33, n0.1, pp.2-16.
[23] Mugitasari,  Dessy  Erliani.  2017.  Uji  Aktivitas  Antioksidan,  Antiaging  Dan Penghambatan Enzim Tirosinase Dari Ekstrak Metanol Daun Kelor (Moringa oleifera) Secara In Vitro. Tesis. Universitas Ahmad Dahlan, Yogyakarta.
[24] Nurulita, Nunuk Aries; Sundhano, Elza; Amalia, Irma; Rahmawati, Fifi; Utami, Nina Nurhayati. Uji Aktivitas Antioksidan dan Anti-aging Body Butter dengan Bahan  Aktif  Ekstrak  Daun  Kelor.  Jurnal  Ilmu  Kefarmasian  Indonesia,  April 2019, hlm. 1-8 Vol. 17, No. 1.
[25] Gothai,  Sivapragasam;  Muniandy,Katyakyini;  Zarin,  M.A;  Sean,  Tan  Woan; Kumar, S.S; Chemical Composition of Moringa oleifera Ethyl Acetate Fraction and  Its  Biological  Activity  in  Diabetic  Human  Dermal  Fibroblasts. Pharmacognosy Magazine. Year : 2017. Volume : 13. Issue : 51. Page : 462-469.
[26] Djahilape,  Sari;  Suprijono,  Agus;  Wulan,  Hesti  S.  2016.  Perbedaan  Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Etanol  Dan  Fraksi  Etil  Asetat  Daun  Kelor  ( Moringa oleifera lam) Serta Penetapan Kadar Flavonoid Total. Media Farmasi Indonesia Vol 11 No 1.
[27] Marinova, D; Ribarova, F; Atanassova, M. 2005. Total phenolics and flavonoids in  Bulgarian  fruits  and  vegetables.  Journal  of  the  University  of  Chemical Technology and Metallurgy, 40, 3, 2005, 255-260.