Journal Syifa Sciences and Clinical Research (JSSCR)
Volume 4 Nomor 1, Maret 2022
Journal Homepage: http://ejurnal.ung.ac.id/index.php/jsscr , E-ISSN: 2656-9612 P-ISSN:2656-8187 DOI : https://doi.org/10.37311/jsscr.v4i1.15536
Isolasi dan Karakterisasi Bakteri Endofit dari Akar Pare (Momordica charantia L.)
Mahdalena Sy. Pakaya 1* ,Julianty Akuba 1 , Dizky Ramadani Putri Papeo 1 , Andi Makkulawu 1 , Ade Ari Puspitadewi 1
1 Jurusan farmasi, Fakultas Olahraga dan Kesehatan, Universitas Negeri Gorontalo, Jl. Jenderal Sudirman No. 06 Kota Gorontalo 96128, Indonesia
* Penulis Korespondensi. Email: mahdalena@ung.ac.id

## ABSTRAK
Bakteri endofit  ialah mikroba yang tumbuh pada jaringan tumbuhan juga bisa berbentuk salah satu  koloni  pada  jaringan  tumbuhan  tidak  dengan  menghasilkan  pengaruh  negatif  dalam inangnya. Bakteri endofit berpotensi memiliki aktivitas dan menghasilkan metabolit sekunder yang  sama  seperti  inangnya.  Akar  pare (Momordica  charantia  L.) telah  diketahui  memiliki aktivitas  sebagai  antibakteri  sehingga  memungkinkan  adanya  bakteri  endofit  yang  juga berpotensi  sebagai  antibakteri.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengisolasi  dan  karakterisasi bakteri  endofit  yang  terdapat  pada  tanaman  pare (Momordica  charantia  L) Metode  yang digunakaan  pada  tahap  isolasi  ialah  metode  tanam  langsung  sehingga  didapatkan  bakteri endofit dari  jaringan tumbuhan; tahap  karakterisasi  secara makroskopik dan   mikroskopik; tahap uji daya hambat ; tahap uji daya hambat menggunakan metode cakram (Kirby-Bauer). Jumlah  bakteri  yang  berhasil  diisolasi  sebanyak  2  isolat;  AP1  dan  AP2.  Berdasarkan  hasil karakterisasi  secara  makroskopik  dan  mikroskopik,  kedua  bakteri  tersebut  menunjukkan karakteristik yang berbeda.
Kata Kunci: Bakteri endofit, Isolat bakteri, Momordica charantia L
Diterima:
17-01-2022 Disetujui: 20-02-2022 Online: 01-03-2022

## ABSTRACT
Endophytic bacteria are microbes that grow on plant tissue and can form a colony on plant tissue without producing a negative effect on the host. The endophytic bacteria have the potential to  have the same activity and produce secondary metabolite as their host. The root of bitter melon (momordica charantia L.) has been known to have antibacterial activity, thus enabling the presence of  endophytic bacteria, which also have antibacterial potential.This present research aims to isolate and characterize endophytic bacteria found in bitter melon (Momordica charantia L. The method used in the isolation stage is direct lanting  so  that  the  endophytic  bacteria  are  obtained  from  plant  tissue;  macroscopic  and  microscopic characterization stage; inhibition test stage; inhibition test stage using disc method (Kirby-Bauer). In accordance  with  the  results  of  macroscopic  and  microscopic  characterization,  the  two bacteria indicate different characteristics.
Copyright © 2022Jsscr. All rights reserved.
Keywords:
Endophytic bacteria, Bacterial isolate, Momordica charantia L.
Diterima: 17-01-2022 Disetujui: 20-02-2022 Online: 01-03-2022

## 1. Pendahuluan
Beraneka ragamnya tanaman Indonesia termasuk kekayaan alam dimana patut disyukuri.  Tumbuhan  termasuk  suatu  sumber  daya  alam  yang  terpenting  terhadap usaha  penyembuhan  dengan  usaha  menjaga  kesehatan  masyarakatnya.  Sampai sekarang berdasarkan perkiraan badan kesehatan dunia (WHO), 80% penduduk dunia tetap gantungkan dirinya dalam penyembuhan tradisional mencakup pemakaian obat yang asalnya melalui tumbuhan.  Tanaman termasuk sumber kekayaan alamiah yang berpotenasi pada Indonesia. Suatu kegunaan yang didapatkan melalui tumbuhan ialah berkhasiat untuk obat melalui bahagian tumbuhan misalnya daun bunga, biji maupun buah, kulit pohon dengan akar [4].
Kedudukan  bakterial  endofite  pada  jaringan  tumbuhan  dikenali  bisa  memicu kehidupan  tumbuhan  dengan  berguna  untuk  agent  pengendalian  hayati.  Bakterial endofite  ialah  organisme  hidup  yang  berukuran  mikroskopis  yang  tumbuh  pada jaringan  tumbuhan,  akar,  daun,  batang,  juga  buah  hingga  periode  tersebut  melalui siklus  kehidupannya.  Bakterial  endofite  bisa  berbentuk  kolonial  pada  jaringan tumbuhan tidak dengan membahayakan inangnya. Sifat bakterial endofite yang belum berpengaruh  negative  terhadap  jaringan  tumbuhan  memperlihatkan  memungkinkan terdapat keterkaitan simbiosis mutualisme terhadap bakterial endofite serta inangnya [2].
Bakterial  endofite  yang  hidup  di  dalam  jaringan  tanaman  inang  tanpa menyebabkan gejala-gejala penyakit. Bakteri endofit masuk ke dalam jaringan tanaman umumnya melalui akar, namun bagian tanaman yang terpapar udara langsung seperti bunga, batang dan kotiledon, juga dapat menjadi jalur masuk bakteri endofit oleh sebab itu,  bakteri  endofit  dianggap  memiliki  peran  dalam  proses  penghasilan  senyawa metabolit sekunder yang terdapat pada hampir seluruh bagian tanaman [17]. Saat ini telah  diketahui  pula  bahwa  hubungan  antara  mikroba  endofit  dengan  tanaman inangnya adalah karena senyawa kimia yang dihasilkan oleh mikroba yang memiliki peran sebagai jenis senyawa bioaktif [9].
Hal ini menunjukkan bahwa kemampuan suatu tanaman baik dari batang, daun, maupun akar yang menghasilkan senyawa antibakteri akan mampu membunuh atau menghambat pertumbuhan mikroorganisme lain dalam hal ini yakni bakteri patogen penyebab  penyakit  [3].  Bakterial  endofite  sifatnya  bisa  obligate  ataupun  fakultative ketika  mengkolonisasikan  inangnya  terhadap  suatu  tumbuhan  inang  utamanya tersusun  melalui  berbagai  genus  dengan  spesies.  Walaupun  bakterial  tersebut mempunyai  kisaran  inang  terluas,  tetapi  terdapat  berbagai  bakterial  endofite  yang cukup  bisa  mengasosiasikan  inang  melalui  famili  tersebut.  Simbiosis  terhadap tumbuhan dalam bakterial endofite sifatnya netral,  mutualisme maupun komensalisme Simbiosis  mutualisme  terhadap  bakterial  endofite  dalam  tumbuhan,  pada  perihal tersebut  bakterial  endofite  memperoleh  nutrisi  melalui  hasil  metabolisme  tumbuhan dengan memperoteksikan tumbuhan ketika menghambat patogenik, namun tumbuhan memperoleh derivate nutrisi dengan zat aktif yang dibutuhkan hingga kehidupannya Salah  satu  tanaman  obat  yang  dapat  dijadikan  sumber  bakteri  endofit  adalah pare  ( Momordica  charantia L)  yang  merupakan    tanaman  semusim  dari  famili
Cucurbitaceae  yang  dapat  hidup  di  daerah  beriklim  tropis.  Pare  memiliki  rasa  yang pahit  dibalik  rasa  pahit  pare  memiliki  banyak  manfaat,  terutama  untuk  kesehatan. Kandungan  gizi  yang  terdapat  dalam  pare  antara  lain  kalori,  protein,  lemak, karbohidrat, serat, kalsium, zat besi, natrium, fosfor, niasin, kalium, vitamin A, Vitamin B1, vitamin B2, vitamin c dan air. Daerah penyebaran pare di indonesia mencakup Jawa, Sumatera, Nusa Tenggara, dan Sulawesi.
Berdasarkan  latar  belakang  tersebut  maka  peneliti  tertarik  dalam  melakukan penelitian  untuk  mengetahui  isolat  dan  karakteristik  bakteri  endofit  yang  dihasilkan dari akar pare (Momordica charantia L) .

## 2.  Metode Penelitian
Penelitian  ini  dilakukan  pada  bulan  Desember  2021-  Februari  2022  di Laboratorium  Mikrobiologi  Jurusan  Biologi  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Negeri Gorontalo. Penelitian ini menggunakan medode eksperimental  untuk  mengetahui  isolasi,dan  karatristik  dari  akar  pare  ( Momordicae charatia L.) terhadap bakteri patogen dengan metode cakram (Kirby-Bauer)

## Alat dan Bahan
Alat yang akan dipakai pada pengamatan tersebut ialah autoclave (Gemmy®), bunsen, cawan petri, cover glass, camera, erlemeyer, gelas kimia , gelas ukur, incubator (Carbolite®), jarum  ose,  gunting  steril,  laminar  air  flow (YENE®), mikropipet (Eppendrorf®), mikroskop (Nikon Eclipse®) , neraca analitik (KERN®), oven (Memmert® ), objek glass, pengaduk kaca, pinset, sentrifuge, shaker (IKA®), tabung reaksi. Bahannya yang dipakai pada pengamatan tersebut ialah akar pare ( Momordica charatia  L) yang  segar.  Aquadest  steril,  alkohol    70%,  alkohol  96%,aluminium  foil, iodium, kapas, kristal violet, larutan Natrium Hipoklorit 1%, media NA ( Nutrient Agar ), safranin, spiritus, tisuue, sampel akar pare ( Momordicae charatia L.). Prosedur Penelitian

## Sterilisasi dan Isolasi Bakteri Endofit Dari Akar Pare
Sterilisasi  alat dan  bahan dengan cara alat-alat dibungkus dengan  kertas, lalu dimasukkan  kedalam  oven    pada  suhu  160 o -180 o C  selama  1-2  jam.  Akar  pare  segar pencuciannya memakai air mengalir hinggga 5 menit.  Sterilisasikan permukaan  akar dilaksanakan  dalam Laminare  Air Flows  Cabinets (LAFC).  Akar  direndamkan  pada alkohol 70%  hingga 1  menit,  disertai  pengocokkan  perlahan,  selanjutnya  pencelupan dalam  cairan  Hipoklorite  1%  hingga  5  menit  sesudah  itu  pencelupan  kembali  pada alkohol 70% hingga 30 detik. Akar dibilas memakai aqua pro injeksi hingga 1 menit serta pengulangan  sejumlah  tiga  kali.  Potong  akar  Pare  2x1  cm  lalu  ditanam  pada  cawan petris yang berisi media NA dan diinkubasi pada suhu 37 o C selama 1x24 jam karena pada  waktu  tersebut  bakteri  melakukan  pembelahan  secara  konstan  dan  jumlah  sel meningkat.  Pengamatan  tersebut  dilakukan  setiap  hari  sampai  tampak  bakteri  yang tumbuh pada sekitar potongan akar pare. Bakterial yang hidup dalam media isolasian NA, disubkulturkan dalam cawan petri yang isinya media NA dengan cara streaks plates dalam temperature 37ºC hingga 1x24 jam sampai didapatkan koloni termurni. Koloni termurni selanjutnya terpindahkan dalam media agar NA miring dengan diinkubasikan dalam temperature 37ºC hingga 1x24 jam. Tiap isolate bakterial endofite dibentuk dua dalam media agar miring.

## Identifikasi Bakteri Akar Pare
Mengidentifikasi  bakterial  endofite  memakai  dua  tata  cara  ialah  metode makroskopis  dengan  mikroskopis.  Pengujian  metode  makroskopis  ialah  mengenali morfologis  koloni  bakterial  yang  mencakup  :  berbentuk  koloni,  berbentuk  tepian, mengelevasi, warnanya koloni dengan ukuran koloni dalam memakai protokol [7].
Pengujian dengan cara mikroskopis dilaksanakan dalam cara Pewarnaan Gram ialah  mengamati  sejenis  gram  bakterial  dengan  membentuk  sel  bakterial  pada laboratoriume. Bakterial yang sudah diisolasikan dikulture dalam tata cara Goresane Kuadrane dalam media dengan diinkubasikan hingga 48 jam, selanjutnya penyiapan kaca  objek  dengan  dibersihkan  dalam  alkohol  70%,  kemudian  penambahan  air  steril digunakan pipet tetesan pada permukaan kaca objek dalam memakai teknik aseptist. Ambilah beberapa bakterial memakai jarum ose, selanjutnya meletakan dalam tetesan air steril yang terdapat pada permukaan kaca objek dengan pengadukan sampai merata sampai  preparate  bakterial  belum  pengumpulan,  selanjutnya  preparate  didiamkan hingga  mengering  dengan  difiksasikan  permukaan  memakai  api  bunsent  supaya bakterial tertempel dalam kaca objek, selanjutnya siapkan dalam mewarnai.
Pewarnaannya  diawali  dalam  penyiapan  senyawa  pewarnaan  diantaranya cairan  cristale  violete,  iodium,  alkohol  96%  dengan  safranine,  kemudian  dituangkan kristal violet didiamkan selama 30 detik, setelah itu preparat dicuci dengan air mengalir, kemudian    dikeringkan  di  udara  terbuka,  lalu  tuang  iodium  biarkan  menggenangi preparat selama 30 detik dan bilas kembali dengan air mengalir. Preparat dipucatkan dengan alkohol 96%, lalu bilas  dengan air  mengalir, selanjutnya dituangkan safranin dengan tujuan sebagai warna pembanding, lalu didiamkan selama 30 detik, membilas safranin dari preparat dengan menggunakan air mengalir. Miringkan kaca objek untuk mengalirkan sisa air pada preparat dan dibiarkan preparat kering di udara bebas. Tahap terakhir yaitu preparat yang sudah dikeringkan dilihat di mikroskop. Jika bakteri gram positif memiliki lapisan peptidoglikan tebal sehingga akan berwarna biru sampai ungu, sedangkan  bakteri  gram  negatif  memiliki  lapisan  peptidoglikan  tipis  sehingga  akan berwarna merah sampai merah muda. .

## 3. Hasil dan Pembahasan
Bakteri endofit yang di peroleh
Pada hasil isolasi ini didapatkan 2 isolat bakteri endofit, isolate bakteri ini yang akan digunakan pada pengujian karakterisasi. Hasil Bakteri endofit dapat dilihat pada tabel berikut
Tabel 1. Hasil Isolasi Bakteri Endofit dari Akar Pare ( Momordica charantia L. )
Sampel Bakteri Endofit Akar pare ( Momordica charantia L. ) AP1 AP2
Sumber: Data primer yang diolah, 2022 Keterangan : AP1 = Isolat Bakteri Endofit 1 AP2 = Isolat Bakteri Endofit 2
Pada penelitian ini, dilakukan isolasi bakteri endofit dari akar pare (Momordica charantia  L.) menggunakan  metode  tanam  langsung  pada  media  padat Nutrient  agar (NA)  untuk  pertumbuhan  bakteri  endofit.  Sampel  akar  pare  yang  digunakan  harus dalam  keadaan  segar,  hal  ini  akan  menjamin  jaringan  tanaman  sehat  sehingga  tidak
terdapat bakteri patogen. Penelitian ini menggunakan akar dari tanaman pare, karena pada akar tanaman bakteri endofit banyak ditemukan [7].
Gambar 1. Bakteri Endofit Akar Pare ( Momordica charantia L.)
Proses isolasi bakteri dengan akar pare dicuci bersih dengan air mengalir selama 5  menit.  Sterilisasi  permukaan  akar  pare  dilakukan  dalam Laminar  Air  Flow  Cabinet (LAF). Akar direndam dalam alkohol 70% selama 1 menit , larutan hipoklorit 1% selama 5 menit dan alkohol 70% selama 30 detik. Hiploklorit dan alkohol 70% berfungsi sebagai desinfektan  yang  berguna  untuk  mensterilkan  permukaan  akar  pare  dari  mikloflora secara kimiawi. kemudian pembilasan sampel dengan aqua pro injeksi setelah sterilisasi bertujuan  untuk  membersihkan  sisa  desinfektan  yang  menempel  pada  permukaan sampel agar tidak menggangu proses pertumbuhan bakteri endofit dan sebagai kontrol. sterilisasi  permukaan  dikatakan  berhasil  apabila  tidak  terdapat  pertumbuhan mikroorganisme pada cawan petri yang diberi bilasan terakhir sterilisasi permukaan. Sterilisasi dilakukan sebanyak 3 kali untuk memaksimalkan proses sterilisasi [6].
Akar pare yang telah disterilisasi dipotong  2x1 cm  menggunakan pisau steril secara vertikal dan ditanam langsung pada cawan petris yang berisi media NA secara aseptis. Posisi bekas potongan akar pare yang tertanam pada permukaan media sehingga bakteri endofit  yang  hidup  dalam  jaringan  tanaman  mendapatkan  nutrisi  dari  media  NA. Sebelumnya  media  NA  telah  ditambahkan  Nistatin®  0,01%  (v/v)  agar  tidak  terjadi pertumbuhan jamur dan menjamin bahwa yang tumbuh pada media NA benar- benar hanya  bakteri  endofit.  Penambahan  Nistatin®  (antifungi)  pada  media  NA  bertujuan untuk mengoptimalkan hasil isolasi [17]. Kemudian di inkubasi selama 1x24 jam pada suhu 37 o C. Pada waktu 1x24 jam bakteri  melakukan pembelahan secara konstan dan jumlah sel meningkat. Setelah masa inkubasi, akan terlihat pertumbuhan bakteri endofit pada cawan petri (Gambar 1).
Berdasarkan hasil yang telah dilakukan, terdapat 2 isolat yang tampak pada cawan petri  yang  ditumbuhkan  pada  media  nutrient  agar  (NA),  dengan  memiliki  ciri-ciri utama yaitu pertumbuhan bakteri endofit yang tumbuh pada sekitar sampel. Jika terjadi kontaminasi, maka akan terlihat pertumbuhan yang tidak beraturan dan cenderung jauh dari  sampel.  Sumber  nutrisi  dari  bakteri  endofit  awalnya  berasal  dari  tanaman inangnya, akan tetapi saat bagian dalam sampel di tanamkan pada media NA, maka bakteri  endofit  ikut  pindah  ke  media  yang  baru,  proses  ini  disebut  dengan  isolasi. Berdasarkan gambar 1 terdapat 2 isolat bakteri yang terlihat secara makroskopik.

## Pemurnian Bakteri Endofit
AP2 AP1
Bakteri endofit yang telah tumbuh pada media NA dimurnikan pada cawan petri berisi  NA  secara  streak  plate.  Metode streak  plate bertujuan  untuk  mengisolasi mikroorganisme dari campurannya atau meremajakan kultur kedalam media baru [1].. Koloni bakteri yang tumbuh dipisahkan berdasarkan warna, ukuran dan bentuk koloni serta dimurnikan dengan menumbuhkannya pada media yang sama hingga didapatkan koloni  murni  [16].  Pemindahkan  tiap  satu  koloni  pada  media  yang  baru  untuk mendapatkan isolate tunggal dilakukan dengan menggunakan Laminar Air Flow (LAF) untuk meminimalisir terjadinya kontaminasi dari udara. pada suhu 37 o C selama 1x24 jam dan mendapatkan koloni murni.
Morfologi Isolat Bakteri Endofit Akar Pare (Momordica charantia L.)
AP1 AP2
Gambar 2. Hasil Pemurnian Isolate AP1 Dan AP2 Bakteri Endofit Dari Akar Pare
(Momordica charantia L.)
Proses ini dilakukan berulang kali sehingga yang didapatkan hanya isolate tunggal. Pada pemurnian bakteri endofit didapatkan 2 isolat tunggal terdiri dari 2 isolat bakteri yang diberi kode AP1 untuk isolate 1 akar pare dan kode AP2 untuk isolate 2 akar pare. Dari kedua isolate yang didapatkan, masing-masing goresan 1 ose jika dalam 1 cawan terdiri dari 3 ose. Sebanyak 1 ose pemurnian di pindahkan ke media baru yaitu media NA  sebagai working culture dan stock culture.

## Karakteristik Bakteri Endofit
Karakterisasi  yang  dilakukan  bertujuan  untuk  mengetahui  karakter  bakteri secara  makrokopis  dan  mikrokopis.  Pada  pengamatan  morfologi  bakteri  secara makrokopis, hal-hal yang diamati antara lain: bentuk, tepi, elevasi dan warna koloni. Sedangkan  secara  mikroskopis  dilakukan  dengan  metode  pewarnaan  Gram  yang bertujuan untuk mengetahui jenis Gram bakteri dan bentuk bakteri secara mikroskopis. Hasil  karakterisasi  mikroba  endofit  secara  makrokopis  maupun  mikrokopis  dapat dilihat pada gambar dan tabel berikut.
Tabel 2. Karakteristik Morfologi Makroskopik Bakteri Endofit Pada Akar Pare ( Momordica charantia L.) Kode Isolat Warna Koloni Bentuk koloni Tepian koloni  Elevasi koloni AP1 Putih Gading Irregular Berombak Datar AP2 Merah Muda Irregular Berombak Timbul datar
Sumber: Data primer yang diolah, 2022 Keterangan : AP1 = Isolat Bakteri Endofit 1 AP2 = Isolat Bakteri Endofit 2
Pengamatan  secara  makrokopis,  Makrokopis  merupakan  pengujian  yang  di lakukan dengan mata telanjang atau dengan bantuan kaca pembesar terhadap berbagai organ makhluk hidup. Identitas makrokopis di dasarkan pada bentuk, ukuran, warna, dan karakteristik permukaan [9].
AP1
AP2
Gambar 3. Hasil Pengamatan Makroskopik Isolate AP1 Dan AP2 Bakteri Endofit Dari Akar Pare (Momordica charantia L.)
Pada  uji    makrokopis  Isolat  bakteri  endofit  menunnjukkan  bahwa  kode isolat AP1  berwarna  koloni  putih  kekuningan,  bentuk  takberaturan  dan  menyebar  dengan tepian bergelombang dan elevasi seperti kawah. Pada isolaat kode AP2 warna koloni putih,  bentuk  irregular,  tepian  berombak  dan  permukaan  halus.  Dikatakan  bakteri endofit jika warna pada permukaan koloni yaitu putih kekuningan atau putih kental seperti susu. Selain itu bakteri endofit di cirikan dengan bentuk sel individu yang batang maupun bulat, serta bentuk koloni yang bulat, oval atau tidak beraturan. Bakteri endofit tergolong bakteri gram negative atau positif [11].
Pengamatan mikroskopik, Mikroskopik pada umumnya meliputi pemeriksaan irisan bahan atau serbuk dan pemeriksaan anatomi jaringan itu sendiri. Kandungan sel dapat langsung dilihat dibawah mikroskop atau dilakukan pewarnaan [12].
Tabel 3 Karakteristik Morfologi Mikroskopik Bakteri Endofit Pada Akar Pare
( Momordica charantia L.) Kode isolate Gram Bentuk AP1 Positif (+) COCCUS AP2 Positif (+) COCCUS
Sumber: Data primer yang diolah, 2022 Keterangan : AP1 = Isolat Bakteri Endofit 1 AP2 = Isolat Bakteri Endofit 2
AP1

## AP2
Gambar 4. Hasil Pengamatan Mikroskopik Isolate AP1 Dan AP2 Bakteri Endofit Dari
Akar Pare (Momordica charantia L.)
Hasil mikrokopis pada kode AP1 termasuk gram positif dengan bentuk coccus yang  berbentuk  bulat  tersusun  seperti  untaian  buah  anggur  dan  pada  kode  AP2 termasuk  gram  positif  berbentuk Coccus (bulat)  bergandengan  seperti  rantai. Mikroskopik  ini di lakukan dengan pewarnaan gram yaitu diamati jenis gram bakteri dan  bentuk  sel  bakteri  di  laboratorium.  Pewarnaan  gram  ini  bertujuan  untuk membedakan bakteri gram positif dan gram negative berdasarkan warna akhir yang di tampilkan  [14].  Hal  ini  terjadi  karena  perbedaan  kultur  dinding  sel  dari  kelompok bakteri  itu  sendiri  sehingga  dapat  menyebabkan  terjadinya  perbedaan  reaksi permeabilitas  zat  pewarna. Prinsip  pewarnaan gram  adalah  kemampuan  dinding  sel terhadap zat warna dasar (Kristal violet) setelah pencucian alkohol. Bakteri gram positif terlihat warna biru karena dindingnya selnya mengikat Kristal  violet lebih kuat [14]. Bakteri  gram  positif  memiliki  dinding  sel  berupa  peptidoglikan  yang  tebal.  Setelah dengan  pewarnaan  dengan  Kristal  violet,  pori-pori  dinding  sel  menyempit  akibat dekolorasi oleh aklohol sehingga dinding sel tetap menahan warna biru atau ungu [15]. Hasil  mikroskopik  dapat  dilihat  pada  ganbar  4.  Berdasarkan  hasil  yang  didapatkan tnaman akar pare (Momordica Charantia L.) memiliki 2 isolat dengan kode AP1 dan AP2 dan mempunyai karakteristik yang berbeda.

## 4. Kesimpulan
Berdasarkan Hasil Penelitian yang telah ilakukan, maka dapat ditarik kesimpulan sebagai berikut. Pada akar tanaman pare (Momordica charantia L.) terdapat 2 isolat mikroba endofit, yakni isolate AP1dan isolat AP2. Isolat bakteri endofit yang berhasil diisolasi menunjukkan karakteristik yang berbeda secara makrokopis dan mikrokopis.

## Referensi
[1]. Abbas, A. H. (2017). Uji Aktivitas Antioksidan Dan Antibakteri Ekstrak Etil Asetat Kapang  Endofit  Dari  Akar  Tanaman  Kayu  Jawa  (Lannea  Coromandelica  (Houtt.)
Merr.) .  UIN  Syarif  Hidayatullah  Jakarta:  Fakultas  Kedokteran  Dan  Ilmu Kesehatan, 2017
[2]. Desriani, D., Safira, U. M., Bintang, M., Rivai, A., & Lisdiyanti, P. (2014). Isolasi Dan Karakterisasi Bakteri Endofit Dari Tanaman Binahong Dan Katepeng China . Jurnal Kesehatan Andalas , 3 (2).
[3]. Fajri, M. A., Adelina, A., & Aryani, N. (2015). Penambahan Probiotik Dalam Pakan Terhadap Pertumbuhan Dan Efisiensi Pakan Benih Ikan Baung (Hemibagrus Nemurus) . Riau University.
[4]. Fithriyah, N. L. (2015). Isolasi Dan Identifikasi Bakteri Endofit Dari Rumput Kebar (Biophytum Sp.) Sebagai Penghasil Senyawa Antibakteri Terhadap Bakteri Eschericia Coli Dan Staphylococcus Aureus . Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim.
[5]. Fitriana, Y. A. N., Fatimah, V. A. N., & Fitri, A. S. (2020). Aktivitas Anti Bakteri Daun  Sirih:  Uji  Ekstrak  KHM  (Kadar  Hambat  Minimum)  Dan  KBM  (Kadar Bakterisidal Minimum). Sainteks , 16 (2).
[6]. Guranda, I., & Maulanza, H. (2016). Uji Effektfitas Tanaman Jarak Pagar (Jatropha Curcas  L.)  Sebagai  Anti  Mikroorganisme  Pada  Bakteri  Escherechia  Coli . Serambi Saintia: Jurnal Sains Dan Aplikasi , 4 (2).
[7]. Irfan M. (2019). Isolasi dan Karakterisasi Plant Growth Promoting Rhizobacteria dari Rizosfer Kebun Karet Rakyat . Dinamika Pertanian 35(3),57-64.
[8]. Kusumawati,  D. E., Pasaribu, F. H., & Bintang, M. (2014). Aktivitas Antibakteri Isolat Bakteri Endofit Dari Tanaman Miana (Coleus Scutellariodes [L.] Benth.) Terhadap Staphylococcus Aureus Dan Escherichia Coli . Current Biochemistry , 1 (1), 45–50 [9]. Nurchayati,  N.  (2017). Identifikasi  Profil  Karakteristik  Morfologi  Spora  Dan Prothalium  Tumbuhan  Paku  Familia  Polypodiaceae .  BIOEDUKASI:  Jurnal  Biologi Dan Pembelajarannya, 14(2).
[10]. Pratiwi,  R.  H.  (2019). Peranan  Mikroorganisme  Endofit  Dalam  Dunia  Kesehatan: Kajian  Pustaka . Sainmatika: Jurnal  Ilmiah  Matematika  Dan  Ilmu  Pengetahuan Alam, 16(1), 21–32.
[11]. Pulungan, A. S. S., & Tumangger, D. E. (2018). Isolasi Dan Karakterisasi Bakteri Endofit  Penghasil  Enzim Katalase  Dari  Daun  Buasbuas  (Premna  Pubescens  Blume) . BIOLINK (Jurnal Biologi Lingkungan Industri Kesehatan), 5(1), 71–80.
[12]. Purnawati,  A.,  Rahmadhini,  N., &  Syafriani,  E. (2019). Uji  Antagonisme Bakteri Endofit  Asal  Tanaman  Pertanian  Dataran  Rendah  Pada  Medium  Agar .  Plumula: Berkala Ilmiah Agroteknologi, 7(1), 1–6.
[13]. Safira, U.  M.,  Pasaribu, F.  H., &  Bintang, M.  (2014). Isolasi  Bakteri Endofit  Dari Tanaman  Sirih  Hijau  (Piper  Betle  L.)  Dan  Potensinya  Sebagai  Penghasil  Senyawa Antibakteri . Current Biochemistry, 1(1), 51–57.
[14]. Sari, N. I. (2014). Isolasi Dan Karakterisasi Bakteri Tanah Di Kecamatan Pattallassang Kabupaten Gowa . Universitas Islam Negeri Alauddin Makassar [15]. Wahdiniar,  A.  (2013). Isolasi  Dan  Karakterisasi  Bakteri  Dangke  Susu  Kerbau Kecamatan Curio Kabupaten Enrekang . UIN Alauddin Makassar.
[16]. Wondal, B., Ginting, E. L., Warouw, V., Wullur, S., Tilaar, S. O., & Tilaar, F. F. (2019 ). Isolasi Bakteri Laut Dari Perairan Malalayang, Sulawesi Utara. Jurnal Pesisir Dan Laut Tropis, 7(3), 183–189.
[17]. Wulandari,  W.  R.  (2019). Eksplorasi  Jamur  Endofit  Daun  Tanaman  Karet  (Hevea Brasiliensis Muell. Arg) Serta Potensi Antagonismenya Terhadap Penyebab Penyakit Gugur Daun (Pestalotiopsis Sp.) Secara In Vitro .