## PENGARUH CROSSLINK AGENT PADA PEMBUATAN NANOKITOSAN TERHADAP KADAR FLAVONOID EKSTRAK ETANOL BUAH PARIJOTO
Susan Primadevi 1 , Rohmatun Nafi'ah 2 1,2 Program Studi Farmasi, STIKES Cendekia Utama Kudus Jl. Lingkar Raya Kudus-Pati Km.5 Jepang Kec.Mejobo, Kab.Kudus Email: sanchemic.nnes@gmail.com, nafie_qudsy@yahoo.com

## ABSTRAK
Parijoto telah dilaporkan banyak mengandung flavonoid, alkaloid, tanin, saponin. Flavonoid dalam buah  parijoto  telah  banyak  diteliti  aktivitas  antioksidannya.  Namun  ekstrak  etanol  buah  parijoto memiliki  kelemahan  yaitu  mudah mengalami reaksi  oksidasi  akibat  pengaruh  suhu  dan  intensitas cahaya.  Proses  penyalutan  nanokitosan  diharapkan  mampu  memperbaiki  sifat  dan  stabilitas  dari ekstrak etanol buah parijoto. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh crosslink agent pada pembuatan  nanokitosan  sebagai  bahan  penyalut  ekstrak  etanol  buah  parijoto.  Preparasi  sampel meliputi  pembuatan  simplisia  buah  parijoto  menggunakan  pengeringan  sinar  matahari  langsung, ekstraksi  dengan  metode  remaserasi  etanol  70%.  Proses  mikroenkapsulasi  melalui  tahapan pembuatan nanokitosan dengan mencampurkan larutan kitosan 0,2% dan ekstrak etanol buah parijoto menggunakan 2 jenis crosslink agent yaitu natrium tripolifosfat (NaTPP) dan asam sitrat masing- masing dengan konsentrasi 0,1%. Kadar flavonoid ekstrak etanol buah parijoto tersalut nanokitosan dan yang tidak tersalut ditentukan dengan metode AlCl 3 menggunakan alat spektrofotometer UV-Vis. Hasil  menunjukkan  bahwa  ukuran  partikel  nanokitosan-NaTPP  sebesar  5860,7  nm,  sedangkan nanopartikel-asam  sitrat  sebesar  2291,1  nm.  Kadar  flavonoid  pada  ekstrak  tanpa  penyalutan, penyalutan  dengan  nanokitosan-NaTPP  dan  nanokitosan-asam  sitrat  berturut-turut  sebesar  6,245 ppm, 10,208 ppm, dan 9,642 ppm.
Kata Kunci: Natrium Tripolifosfat, Asam sitrat, Nanokitosan, Mikroenkapsulasi, Flavonoid

## ABSTRACT
Parijoto has been reported to contain lots of flavonoids, alkaloids, tannins, saponins. Flavonoids in parijoto have been widely studied for their antioxidant activity. However, ethanol extract of parijoto has  a  weakness,  namely  that  it  is  easily  oxidized  by  high  temperature  and  light  intensity. Nanochitosan coating process is expected to improve the properties and stability of parijoto ethanol extract. This study aims to determine the effect of crosslink agent in the manufacture of nanochitosan as a coating material for parijoto ethanol extract. Sample preparation includes the manufacture of parijoto simplicia using direct sunlight drying and extraction method via  remaceration with ethanol 70%.  Microencapsulation  process  through  the  stages  of  making  nanocitosan  by  mixing  chitosan solution  0,2%  and  parijoto  ethanol  extract  used  2  types  of  crosslink  agents,  namely  sodium tripolyphosphate (NaTPP) 0,1% and citric acid 0,1%. Flavonoid content of parijoto ethanol extract coated with  nanochitosan and uncoated were determined using a UV-Vis spectrophotometer with
Cendekia Journal of Pharmacy STIKES Cendekia Utama Kudus P-ISSN 2559 – 2163          E-ISSN 2599 – 2155 Vol. 4, No. 2, November 2020 http://cjp.jurnal.stikescendekiautamakudus.ac.id
AlCl 3 method. The results showed that the particle size of nanocitosan-NaTPP was 5860,7 nm, while nanoparticles-citric acid was 2291,1 nm. Flavonoid content in the uncoated extract, coated extract with nanocitosan-NaTPP and nanocitosan-citric acid were 6,245 ppm, 10,208 ppm, and 9,642 ppm, respectively.
Keywords : Sodium tripolyphosphate, Citric Acid, Nanocitosan, Microencapsulation, Flavonoids

## LATAR BELAKANG
Parijoto merupakan tanaman yang banyak ditemukan di Desa Colo Kecamatan Dawe Kabupaten Kudus Jawa Tengah. Senyawa aktif yang ada di dalam buah parijoto antara lain tanin, saponin, flavonoid dan glikosida (Wachidah, 2013). Senyawa flavonoid dalam buah parijoto telah banyak dilaporkan memiliki aktivitas antioksidan (Wachidah, 2013; Geraldine & Hastuti, 2018; Pertiwi dkk., 2019; Pujiastuti & Saputri, 2019). Senyawa flavonoid sebagai antioksidan berfungsi untuk menstabilkan kekurangan elektron pada radikal bebas sehingga dapat mencegah terjadinya reaksi berantai dari radikal bebas (Michalak, 2006).
Kelemahan dari senyawa flavonoid yaitu mudah teroksidasi oleh pengaruh suhu dan intensitas cahaya yang tinggi (Anlysn, 2006). Salah satu cara untuk mengatasi kelemahan tersebut adalah dengan  metode mikroenkapsulasi  yang bertujuan untuk melindungi bahan aktif berupa cairan, padatan atau gas dengan suatu bahan penyalut atau pembungkus yang berukuran  nanopartikel  (1-1000  nm)  (Tiyaboonchai,  2003;  Bansode  dkk.,  2010).  Jenis penyalut yang digunakan untuk proses mikroenkapsulasi harus bersifat  tidak beracun dan tidak bereaksi dengan bahan inti.
Bahan  penyalut  yang  digunakan  dalam  mikroenkapsulasi  dapat  terdiri  hanya  satu jenis penyalut atau penggabungan dari jenis penyalut yang berbeda. Bahan penyalut yang biasa  digunakan  dalam  proses  mikroenkapsulasi  antara  lain  kitosan  (Ningsih  dkk. , 2018; Mauliyani dkk., 2018; Luntungan dkk., 2017), hidroksipropil metilselulosa, polietilen glikol 400 (Basri, 2009), alginat (Jayanudin dkk., 2017), pati singkong-CMC (Setiyadi, 2017). Proses  mikroenkapsulasi  terjadi  antara  ekstrak  dengan  sisi  aktif  kitosan.  Sisi  aktif kitosan berupa gugus amina yang terletak pada permukaan polimer (Lusiana dkk., 2013). Berat  molekul  kitosan  berpengaruh  terhadap  efisiensi  mikroenkapsulasi.  Kitosan  yang memiliki berat molekul rendah akan memiliki efisiensi mikroenkapsulasi yang lebih tinggi dibanding dengan kitosan dengan berat molekul tinggi (Yang & Hon, 2009).
Selain berat molekul kitosan, jenis crosslink agent juga berpengaruh dalam proses mikroenkapsulasi.  Efisiensi  mikroenkapsulasi  kitosan  dapat  ditingkatkan  dengan memodifikasinya  menggunakan  agen crosslink agent (Bhumkar  &  Pokharkar,  2006). Crosslink agent yang bisa ditaut silang dengan kitosan yaitu dekanol EX841, glutaraldehida, epiklorohidrin,  tripolifosfat,  1,6-heksametilenadiisosianat,  turunan  etildiamina  dan  asam sitrat (Sugita dkk., 2009; Prasojo & Siahaan, 2015). Crooslink agent polianion yang paling banyak digunakan yaitu sodium tripolifosfat dan asam sitrat, karena bersifat multivalent dan tidak  toksik.  Proses crosslinking secara  fisika  ini  tidak  hanya  menghindari  penggunaan pelarut  organik,  namun  juga  mencegah  kemungkinan  rusaknya  bahan  aktif  yang  akan dienkapsulasi dalam nanopartikel kitosan (Fan, dkk., 2012). Penelitian ini bertujuan untuk
mengetahui pengaruh crosslink agent pada pembuatan nanokitosan terhadap kadar flavonoid ekstrak etanol buah parijoto.

## BAHAN DAN METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Alat  yang digunakan yaitu oven, blender, rotary evaporator, batang pengaduk , pipet mikro (pirex), tabung reaksi (pirex), erlemeyer (herma), labu ukur (herma) pipet tetes, kertas saring,  cawan  penguap,  pipet  volume  (pirex),  ayakan  (ukuran  44  mesh)  dan  timbangan elektrik  (ohaus),  seperangkat  alat  maserasi,  spektrofotometer  UV-Vis  (Genesys  10),  PSA (Horiba SZ-100), dan SEM. Bahan yang digunakan yaitu buah parijoto berasal dari daerah Colo, Kabupaten Kudus, etanol 70%, etanol p.a, akuades, HCl pekat, serbuk Mg, NaOH 10%, kuersetin, AlCl 3 10%, natrium asetat 1 M, kitosan, natrium tripolifosfat, asam sitrat, asam asetat glasial, FeCl 3 1%, reagen Dragendorff.

## Pembuatan Simplisia
Buah  parijoto  diambil  dari  daerah  Colo  Kabupaten  Kudus.  Buah  parijoto  dicuci, dibersihkan dari kotoran dan debu yang menempel, kemudian dikeringkan dengan  metode sinar  matahari  langsung.  Pengeringan  ini  berlangsung  hingga  diperoleh  kadar  air  ≤10% (Manoi,  2006).  Buah  parijoto  kering  dihaluskan  dengan  menggunakan  blender  hingga menjadi serbuk, kemudian diayak dengan  ayakan no 44 mesh untuk mendapatkan serbuk halus.

## Pembuatan Ekstrak Parijoto
Pembuatan ekstrak dilakukan dengan metode remaserasi. Buah parijoto sebanyak 100 gram ditimbang, kemudian direndam dalam 1000 mL etanol 70 % selama 24 jam. Filtrat disaring dengan menggunakan kertas saring. Ampas simplisia ditambahkan kembali pelarut yang  sama  dan  proses  tersebut  diulangi  sampai  semua  ekstrak  tersari.  Hasil  maserat kemudian  diuapkan  dengan  rotary  evaporator  pada  suhu  40 o C  kemudian  dikentalkan menggunakan  waterbath  pada  suhu  40 o C  sampai  menjadi  ekstrak  kental  (Nurhasnawati, Handayani, & Sukarmi, 2017).

## Skrinning Fitokimia
Ekstrak kental sebanyak 1 gram dilarutkan ke dalam 10 mL akuades kemudian larutan diambil  masing-masing  1  mL  dan  dimasukkan  ke  dalam  4  tabung  reaksi  yang  berbeda. Larutan ekstrak pada tabung reaksi pertama ditambah dengan FeCl 3 1% (uji tanin), tabung reaksi kedua ditambah dengan HCl pekat dan serbuk Mg (uji flavonoid), tabung reaksi ketiga ditambah dengan reagen Dragendorff (uji alkaloid), tabung reaksi ketiga ditambah dengan akuades kemudian dikocok sampai berbusa dan ditambah HCl (uji saponin).

## Pembuatan Nanokitosan
Larutan kitosan 0,2% dibuat dengan cara melarutkan 0,2 gram kitosan ke dalam 100 mL asam asetat glasial  1% selanjutnya dihomogenkan dengan magnetic  stirrer selama 30 menit. Larutan kitosan ditetesi secara perlahan dengan masing-masing crosslink agent yaitu NaTPP  0,1%  dan  asam  sitrat  0,1%  (5:1)  serta  50  mikroliter  tween  80  0,1%  sebagai homogenizer. Pengadukan larutan dilanjutkan kembali selama 2 jam dengan magnetic stirrer.

## Penyalutan Ekstrak dengan Nanokitosan
Ekstrak parijoto sebanyak 1 gram dilarutkan ke dalam 35 mL etanol p.a dan 15 mL akuades. Ekstrak terlarut kemudian disalut dengan 25 mL larutan nanokitosan dan diaduk dengan magnetic stirrer selama 2 jam. Ekstrak tersalut disentrifugasi selama 1 jam dengan kecepatan 1000-2000 rpm. Endapan dipisahkan dari supernatan dan disimpan dalam freezer (± -4 o C) selama 2 hari.  Penyimpanan dipindahkan ke dalam lemari es (± 3 o C) sampai kering.

## Pembuatan Larutan Induk Kuersetin
Larutan standar kuersetin dibuat dengan cara menimbang 25 mg kemudian dilarutkan dalam 25 mL etanol p.a sehingga didapatkan larutan standar kuersetin 1000 ppm. Larutan induk kuersetin 1000 ppm kemudian diencerkan menjadi 100 ppm.

## Penetapan Panjang Gelombang Maksimum
Larutan baku kuersetin konsentrasi 50 ppm di ambil 1 mL ditambah dengan 0,1 mL AlCl 3 10%  ,  0,1  mL  natrium  asetat  1  M  dan  1,5  mL  etanol  p.a,  kemudian  diukur absorbansinya pada panjang gelombang 400-800 dengan spektrofotometri UV-Vis.

## Penetuan Waktu Stabil (Operating Time)
Larutan baku kuersetin konsentrasi 50 ppm diambil sebanyak 1 mL ditambah dengan 0,1 mL AlCl 3 10% , 0,1 mL natrium asetat 1 M dan 1,5 mL etanol p.a. Selanjutnya larutan tersebut  diukur  absorbansinya  dengan  panjang  gelombang  maksimum  yang  telah  didapat selama 60 menit dengan interval waktu tiap 1 menit sampai diperoleh absorbansi yang stabil.

## Penetapan Kadar Flavonoid Ekstrak Buah Parijoto
Ekstrak etanol buah parijoto yang telat disalut dengan kitosan dan yang tidak disalut ditimbang 10 mg lalu dilarutkan etanol p.a sampai tanda batas pada labu ukur 10 mL. Larutan diambil  1 mL, ditambahkan 0,1 mL AlCl 3 10%, 0,1 mL natrium asetat 1 M, dan 1,5 mL etanol  p.a.  Larutan  kemudian  diinkubasi  pada operating  time yang  diperoleh  dan  diukur absorbansinya  menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis  dengan  panjang  gelombang maksimal yang didapatkan. Larutan sampel dibuat 3 kali replikasi sehingga kadar flavonoid yang diperoleh sebagai ekuivalen kuersetin.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil Pembuatan Simplisia
Buah  parijoto  dikeringkan  dengan  sinar  matahari  langsung  selama  7  hari.  Proses pengeringan  menyebabkan  perubahan  warna  buah  parijoto  yang  awalnya  merah-ungu menjadi hijau-orange. Buah parijoto kering kemudian dihaluskan dan dihomogenkan ukuran partikelnya menggunakan ayakan 44 Mesh. Hasil pengeringan dan penyerbukan disajikan pada gambar 1 dan tabel 1.
Gambar 1. Buah parijoto sebelum pengeringan (a), setelah pengeringan (b), serbuk buah parijoto (c)
Tabel 1. Hasil Pengeringan dan Penyerbukan Buah Parijoto
Buah Parijoto Segar (gram) Buah Parijoto Kering (gram) Serbuk Buah Parijoto (gram) Susut Pengeringan (%) Susut Bobot (%) Kadar Air (%) 2925 511 435 82,5 14,8 8,2
Berdasarkan  tabel  1  dapat  dilihat  bahwa  simplisia  buah  parijoto  memiliki  susut pengeringan, susut bobot dan kadar air berturut-turut sebesar 82,5%, 14,8% dan 8,2%.

## Hasil Pembuatan Ekstrak Parijoto
Proses  ektraksi  dilakukan  menggunakan  metode  remaserasi  sebanyak  4  kali menggunakan pelarut etanol 70%. Ekstrak etanol kemudian dikentalkan menggunakan rotary evaporator. Hasil ektraksi disajikan pada tabel 2.
Tabel 2. Hasil Ekstraksi Berat Serbuk Parijoto (gram) Berat Ekstrak (gram) Rendemen Ekstrak (%) Warna Ekstrak 100 14,04 14,04 Coklat-merah
Berdasarkan  tabel  2  ekstrak  etanol  buah  parijoto  memiliki  warna  coklat-merah dengan rendemen sebesar 14,04%.

## Hasil Skrinning Fitokimia
Uji  skrinining  fitokimia  dilakukan  untuk  mengetahui  golongan  senyawa  yang terkandung dalam buah parijoto. Hasil skrinning fitokimia disajikan pada tabel 3.
Tabel 3. Hasil Skrining Fitokimia Uji Golongan Pereaksi Hasil Kesimpulan Flavonoid HCl pekat + serbuk Mg Endapan jingga Positif Alkaloid FeCl 3 1% Endapan jingga Positif Tanin Reagen Dragendorff Endapan hijau Positif Saponin Akuades dikocok + HCl  Terbentuk busa Positif
Berdasarkan tabel 3 diketahui bahwa buah parijoto mengandung flavonoid, alkaloid, tanin dan  saponin.  Uji  positif flavonoid ditandai dengan terbentuknya endapan jingga setelah  ditambah dengan HCl pekat dan serbuk Mg karena terbentuk garam flavilium seperti reaksi pada gambar 2.
O O OH O OH OH OH O OH OH O OH OH O OH OH 2HCL Mg Flavonoid MgCl 2 2 2 MgCl 2 MgCl 2 2 Garam Flavilium Jingga

## Gambar 2. Reaksi Flavonoid dengan Logam Mg dan HCl (Septyangsih, 2010)

## Hasil Pembuatan Nanokitosan dan Penyalutan Ekstrak
Nanokitosan dibuat dengan melarutkan kitosan ke dalam larutan asam asetat glasial dengan croslink  agent Na-TPP  dan  asam  sitrat.  Pengecilan  ukuran  partikel  dilakukan menggunakan magnetic stirer. Hasil pembuatan nanokitosan dan penyalutan ekstrak dapat dilihat  pada  gambar  3  dan  4.  Sedangkan  hasil  karakterisasi  ukuran  partikel  nanokitosan- NaTPP dan nanokitosan-asam sitrat disajikan pada gambar 5 dan 6.
(a) (b)
Gambar 3. Nanokitosan-NaTPP (a) dan Nanokitosan-Asam sitrat (b)
(a)
(b)
Gambar 4. Hasil penyalutan ekstrak dengan Nanokitosan-NaTPP (a) dan Nanokitosan-Asam sitrat (b)

## Gambar 5. Hasil PSA Nanokitosan-NaTPP

## Gambar 6. Hasil PSA Nanokitosan-Asam sitrat
Berdasarkan  gambar  5  dan  6  menunjukkan  bahwa  ukuran  partikel  nanokitosan- NaTPP  sebesar  5860,7  nm,  sedangkan  nanopartikel-asam  sitrat  memiliki  ukuran  partikel 2291,1 nm. Penambahan crosslink agent yang berbeda dapat mempengaruhi ukuran partikel dari nanokitosan yang dihasilkan. Penambahan asam sitrat sebagai crosslink agent mampu menghasilkan ukuran partikel yang lebih kecil dibandingkan NaTPP.

## Hasil Penetapan Kadar Flavonoid
Baku kuersetin memiliki panjang gelombang maksimal sebesar 435 nm, sedangkan operating time diperoleh pada menit ke-7. Hasil penentuan panjang gelombang dan operating time disajikan pada gambar 7 dan 8.
Gambar 7. Hasil Penentuan Panjang Gelombang Maksimum
Gambar 8. Hasil Penentuan Operating Time
Pembuatan kurva baku menggunakan larutan baku kuersetin konsentrasi 10, 30, 50, 70 dan 90 ppm. Kurva baku kuersetin disajikan pada gambar 9.
Gambar 9.  Kurva Baku Kuersetin
Kadar flavonoid ekstrak etanol tanpa penyalutan dan dengan penyalutan nanokitosan disajikan pada tabel 4 dan gambar 10.
y = 0,0053x + 0,0969 R² = 0,9827 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0 20 40 60 80 100 A bs or ba ns i Konsentrasi (ppm)
Tabel 4. Kadar Flavonoid Hasil Penyalutan dengan Nanokitosan Sampel Absorbansi Rata-rata Absorbansi Kadar Flavonoid (ppm) Ekstrak  Etanol  Buah Parijoto 0,134 0,130 6,245 0,128 0,129 Ekstrak  Etanol  Buah Parijoto tersalut Nanokitosan-NaTPP 0,137 0,151 10,208 0,141 0,176 Ekstrak  Etanol  Buah Parijoto tersalut Nanokitosan-Asam sitrat 0,133 0,148 9,642 0,165 0,147

## Gambar 10. Kadar Flavonoid Tanpa dan Tersalut Nanokitosan
Berdasarkan  tabel  4  dan  gambar  10,  kadar  flavonoid  pada  ekstrak  etanol  buah parijoto yang tersalut nanokitosan lebih tinggi dibandingkan dengan kadar flavonoid pada ekstrak  etanol  buah  parijoto  yang  tidak  tersalut  nanokitosan.  Hal  tersebut  terjadi  karena nanokitosan berperan sebagai elisitor terhadap pelepasan enzim fenilalanin ammonia liase sehingga menjadi faktor terjadinya peningkatan flavonoid pada ekstrak buah parijoto. Enzim ini  mengkatalisis  reaksi  deaminasi  fenilalanin  menjadi  asam  sinamat.  Pembentukan  asam sinamat  dapat  menyebabkan  peningkatan  kadar  flavonoid  pada  ekstrak  buah  parijoto (Luntungan dkk., 2017).
Pengaruh  penambahan  jenis crosslink  agent juga  menyebabkan  perbedaan  kadar flavonoid dalam  ekstrak buah parijoto. Kadar flavonoid pada  ekstrak  etanol yang tersalut nanokitosan-NaTPP lebih tinggi daripada kadar flavonoid yang tersalut nanokitosan-Asam sitrat.  Hal  ini  terjadi  karena  ikatan  nanokitosan-NaTPP  lebih  stabil  dibandingkan  ikatan nanokitosan-asam  sitrat.  Ikatan  nanokitosan-NaTPP  lebih  stabil  karena  NaTPP  memiliki lebih banyak muatan negatif sehingga dapat berinteraksi lebih kuat dibandingkan polianion
0 2 4 6 8 10 12 Tanpa penyalutan Tersalut Nanokitosan-NaTPP Tersalut Nanokitosan-Asam sitrat K ad ar f la vo no id ( pp m )
lain seperti asam sitrat (Zeng dkk., 2010). Proses crosslink NaTPP dan asam sitrat dengan nanokitosan disajikan pada gambar 11 dan 12.
Gambar 11. Reaksi Crosslinking Nanokitosan-NaTPP (Hsieh et al ., 2008)
Gambar 12. Reaksi Crosslinking Nanokitosan-Asam Sitrat (Priyadarshi dkk., 2018)

## SIMPULAN DAN SARAN

## Simpulan
Nanokitosan-NaTPP  memiliki  ukuran  partikel  yang  lebih  besar  jika  dibandingkan dengan  nanokitosan-asam  sitrat.  Namun  pada  saat  proses  penyalutan  ternyata  ikatan nanokitosan-NaTPP lebih stabil jika dibandingkan dengan nanokitosan-asam sitrat, sehingga kadar  flavonoid  pada  ekstrak  buah  parijoto  tersalut  nanokitosan-NaTPP  lebih  besar  jika dibandingkan dengan esktrak buah parijoto tersalut nanokitosan-asam sitrat.

## Saran
Ukuran partikel nanokitosan perlu diperkecil lagi dengan melakukan optimasi lama pengadukan, kombinasi pengadukan dengan magnetic stirer dan sonikator, komposisi kitosan dengan crosslink  agent ,  komposisi  ekstrak  dengan  nanokitosan  sehingga  kadar  flavonoid pada esktrak lebih tinggi.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Ucapan  terima  kasih  disampaikan  kepada  Ketua  LPPM  STIKES  Cendekia  Utama Kudus,  Laboratorium  Mikrobiologi  dan  Teknologi  Farmasi  STIKES  Cendekia  Utama Kudus, Laboratorium Fisika dan Kimia FMIPA UNNES yang telah membantu pelaksanaan penelitian  dengan  baik.  Terima  kasih  juga  kami  ucapkan  kepada  Kemenristek  BRIN  dan LLDIKTI Wilayah VI yang telah memberikan Dana Hibah Penelitian Dosen Pemula, dan semua pihak yang telah memberikan dukungan terhadap kelancaran proses penelitian.

## DAFTAR PUSTAKA
Anlysn, E. & D. Dennis. (2006). Modern physical organic chemistry. California: university science books sausalito.
Bansode.  S.S.,  Banarjee,  S.K.,  Gaikwad,  S.L.,  Jadhav,  R.  &  Thorat  R.M.  (2010). Microencapsulation: A review. International J. Pharmaceutical Sciences Review and Research 1: 38-43.
Basri. (2009). Formulasi tablet salut film ekstrak etanolik batang brotowali (Tinospora crispa (L) Miers) dengan bahan penyalut hidroksipropil metil selulosa dan polietilen glikol 400. Skripsi. Fakultas Farmasi. Surakarta: Universitas Muhammadiyah Surakarta.
Bhumkar,  D.R.,  &  Pokharkar,  V.B.  (2006).  Studies  on  effect  of  pH  on  cross-linking  of chitosan with sodium tripolyphosphate: A technical note, AAPS PharmSciTech, 7, 2, E138-E143. http://dx.doi.org/10.1208/pt070250.
Fan, W., Yan, W., Xu, Z., & Ni, H. (2012). Colloids and Surfaces B: Biointerfaces, 90: 21- 27.
Geraldine, E.T. & Hastuti, E.D. (2018). Formulasi krim tabir surya ekstrak buah parijoto (Medinilla speciosa Blume) dan uji nilai SPF secara in vitro. Jurnal Farmasi Sains dan Komunitas. vol. 15 (2), p. 92-98.
Hsieh,  F.M.,  Huang,  C.,  Lin,  T.  F.,  Chen,  Y.  M.,  dan  Lin,  J.  C.,  2008,  Study  Of SodiumTripolyphosphate-Crosslinked Chitosan Beads Entrapped With Pseudomonas Putida For Phenol Degradation. Proc. Biochemi, 43(1), 83-92.
Jayanudin,  J.;    Rochmadi,    R,;  M.  Kemal,  R.;  &  Pangihutan,  P.  (2017).  Pengaruh  bahan penyalut  terhadap    efisiensi  enkapsulasi  oleoresin  jahe  merah,    ALCHEMY  J. Penelitian Kimia, vol.13, p.275-287.
Luntungan,  A.H.,  Mandey,  L.C.  Rumengan,  I.F.M.  &  Suptijah,  P.  (2017).  Pengaruh penyalutan  Nanokitosan  pada  kandungan  fenolik  ekstrak  daun  kemangi  (Ocimum basilicum L.). Jurnal Ilmudan Teknologi Pangan. vol. 5(2), p.20-25.
Lusiana, R.A., Siswanta, D., Mudasir, & Hayashita, T. (2013). The Influence of Pva.Cl.Citric Acid/Chitosan Membrane Hydrophicility on The Transport of Creatinine and Urea, Indonesian Journal of Chemistry, 13, 3, 262-270.
Mauliyani, A., Zaharah, T.A. & Ardiningsih, P. (2018). Aktivitas antibakteri dan antioksidan fraksi etil asetat kulit batang nangka (Artocarpus heterophyllus Lam.) yang tersalut kitosan-tripolifosfat. Jurnal Kimia Khatulistiwa. p.97-103.
Manoi,  F.  (2006).  Pengaruh  cara  pengeringan  terhadap  mutu  simplisia  sambiloto.  (1),  5. Ebook Bul. Littro. Vol. XVII No. 1, 2006, 1 – 5.
Michalak, A. (2006). Phenolic compounds and this antioxidant activity in plants growing under heavy metal stress. Polish J. Environ. Stud. vol.15, p.523-530.
Ningsih,  N.,  Yasni,  S.  &  Yuliani,  S.  (2017).  Sintesis  nanopartikel  ekstrak  kulit  manggis merah  dan  kajian  sifat  fungsional  produk  enkapsulasinya.  J.  Teknol.  dan  Industri Pangan. vol. 28 (1), p.27-35.
Nurhasnawati,  H.,  Handayani,  F.,  &  Sukarmi.  (2017).  Perbandingan  metode  ekstraksi maserasi dan sokletasi terhadap aktivitas antioksidan ekstrak etanol daun jambu bol (Syzygium malaccense L.). Jurnal Ilmiah Manuntung, vol. 3(1), p.91-95.
Pertiwi,  R.B.,  Hidayah,  I.  N.,  Andrianty,  D.  &  Hasbullah,  U.H.A.  (2019).  Aktivitas antioksidan ekstrak buah parijoto pada berbagai suhu pengolahan pangan. Jurnal Ilmu Pangan dan Hasil Pertanian. vol. 3(1), p.22-30.
Prasojo,  B.  A.  &  Siahaan,  P.  (2015).  Pengaruh  berat  molekul  kitosan  terhadap  efisiensi enkapsulasi  bsa  (bovine  serum  albumin)  menggunakan  agen  crosslink  asam  sitrat. Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi, vol.18 (2), p.62 – 66.
Priyadarshi, R., Sauraj, Kumar, B., & Negi, Y.S. (2018). Chitosan Film Incoporated with Citric Acid and Glycerol as an Active Packaging Material for Extension of Green Chilli Shelf Life. Carbohydrate Polymers. Vol. 195, p. 329-338.
Pujiastuti,  E.  &  Saputri,  R.S.  (2019).  Pengaruh  metode  pengeringan  terhadap  aktivitas antioksidan  ekstrak  etanol  buah  parijoto  (Medinilla  speciosa  Blume).  Cendekia Journal of Pharmacy. vol. 3(1), p. 44-64.
Setiyadi, A.D.P. (2017). Evaluasi sifat fisik dan kandungan fenol mikrokapsul ekstrak daun jahe merah dengan pati singkong dan CMC sebagai bahan penyalut. Skripsi. Program Studi  S-1  Teknologi  Pangan  Fakultas  Peternakan  dan  Pertanian.  Semarang: Universitas Diponegoro.
Sugita,  P.,  Wukirsari,  T.,  Sjahriza,  A.  &  Wahyono,  D.  (2009).  Sumber  biomaterial  masa depan. Bogor: ITB Press.
Tiyaboonchai, W.  2003.  Chitosan  nanoparticles :  A  promising  system  for drug  delivery  . Naresuan University Journal. vol.11 (3), p.51-56.
Wachidah, L.N. (2013). Uji aktivitas antioksidan  serta penentuan kandungan fenolat dan flavonoid  total  dari  buah  parijoto  (Medinilla  speciosa  Blume).  Skripsi.  Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan, Prodi Farmasi. Jakarta: UIN Syarif Hidayatullah.
Zeng R, Tu M, Liu H, Zhao J, Zha Z & Zhou C. 2009. Preparation, structure, drug release and  bioinspired  mineralization  of  chitosan-based  nanocomplexes  for  bone  tissue engineering. Carbohyd Polym 78: 107–111.