Tabel 1. Hasil penetapan kadar air  serbuk kulit batang mundu
No Penimbangan (g) Volume pada skala (ml) Kadar (%) 1 30 2,8 9,33 2 30 2,9 9,67 3 30 2,8 9.33 Rata-rata 9,44
Berdasarkan  hasil  penetapan  kadar  air  dalam  serbuk kulit batang mundu didapatkan rata-rata kadar air sebesar 9,4%.  Kadar  air  serbuk  kulit  batang  mundu  memenuhi persyaratan  kadar  air  suatu  serbuk  simplisia  yaitu  kurang dari 10%. Dengan jumlah kadar air tersebut kerusakan bahan dapat  ditekan  baik  dalam  pengolahan  maupun  waktu penyimpanan.
2.  Hasil pembuatan ekstrak etil asetat kulit batang mundu Proses  ekstraksi  serbuk  kulit  batang  mundu  ( Garcinia dulcis Kurz.) sebanyak 800 g yang dilakukan dengan metode maserasi bertingkat menggunakan pelarut n-heksan dan etil asetat didapatkan ekstrak etil asetat 84, 037 g dan rendemen sebesar 10,5 %. Rendemen dihitung berdasarkan fraksi yang diperoleh terhadap berat serbuk yang diekstraksi.
Pemeriksaan  kualitatif  menggunakan  KLT  dilakukan untuk mengetahui kandungan kimia yang terkandung dalam ekstrak etil asetat kulit batang mundu.
2.1.
(A)                                       (B)                                   (C) Gambar 1. Hasil identifikasi golongan alkaloid dari ekstrak etil asetat dengan deteksi: a. sinar UV 254, b. sinar UV 366,
c. pereaksi semprot Dragendorf
fase gerak kloroform : etil asetat (6:4) dan fase diam silika  gel  GF-254.  Hasil  pengamatan  pada  sinar UV  254  nm  terdapat  peredaman  warna  coklat  dan pada  sinar  UV  366  nm  berfluoresensi  warna  hijau. Dengan  pereaksi  semprot  Dragendorf  ekstrak  etil asetat  kulit  batang  menghasilkan  satu  bercak berwarna  hijau  dengan  nilai  Rf  =  0,18.  Menurut Harborne,  (1987)  dengan  deteksi  di  bawah  sinar UV 254 berwarna coklat gelap dan UV 366 berwarna hijau, pada penelitian ini bercak yang dihasilkan telah sesuai dengan pustaka. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak  etil  asetat  kulit  batang  mundu  diduga mengandung alkaloid.
(A)                                     (B)                                      (C) Gambar  2. Hasil  identifikasi  golongan  saponin  dengan  deteksi: a. sinar UV 254, b. sinar UV 366, c. pereaksi semprot anisaldehid
Uji  kandungan  kimia  golongan  saponin    dengan kromatografi  lapis  tipis  pada  gambar  2  menggunakan fase  gerak  kloroform  :  etil  asetat  (6:4)  dan  fase  diam silika  gel  GF-254.  Hasil  pengamatan  pada  sinar  UV 254  nm  terdapat  peredaman  warna  kuning  dan  pada sinar  UV  366  nm  terdapat  flourescen  dengan  warna hijau.  Dengan  pereaksi  semprot  anisaldehid  ekstrak etil  asetat  menghasilkan  warna  kekuningan.  Dengan pereaksi semprot anisaldehid, menghasilkan satu bercak berwarna  kuning  yang  lebih  intensif  dengan  nilai Rf = 0,29. Menurut Harborne, (1987) dengan deteksi di bawah  sinar  UV  254  berwarna  kuning  dan  UV  366 berwarna hijau, pada penelitian ini bercak yang dihasilkan berwarna kuning dan hijau. Hal ini menunjukkan bahwa
(A)                                     (B)                                      (C) Gambar  3. Hasil  identifikasi  golongan  tanin  dari  ekstrak  etil  asetat dengan deteksi: a. sinar UV 254, b. sinar UV 366, c. pereaksi semprot FeCl 3
Uji  kandungan  kimia  golongan  tanin  dengan kromatografi  lapis  tipis  pada  gambar  3  menggunakan fase  gerak  kloroform  :  etil  asetat  (6:4)  dan  fase  diam silika gel GF-254. Hasil pengamatan pada sinar UV 254 nm terjadi  peredaman  warna  ungu  gelap,  sedangkan  pada sinar  UV  366  nm  berflourescen  dengan  warna  hijau. Dengan pereaksi semprot FeCl  menghasilkan satu bercak 3, berwarna coklat gelap dengan nilai Rf = 0,18 dan Rf = 0,13. Harborne, (1987) menyatakan bahwa senyawa tanin bila dideteksi di bawah sinar UV pendek menunjukkan warna lembayung,  pada  penelitian  ini  bercak  yang  dihasilkan berwarna ungu gelap. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak diduga mengandung tanin.
fraksi etil asetat dan sub fraksi IV diduga mengandung saponin.
(A)                                       (B)                                   (C) Gambar 4. Hasil identifikasi golongan flavonoid  dari ekstrak etil asetat dengan deteksi: a. sinar UV 254, b. sinar UV 366, c. pereaksi semprot uap amoniak dan sitroborat
Uji  kandungan  kimia  golongan  flavonoid  ekstrak  etil asetat  kulit  batang  mundu  dengan  kromatografi  lapis tipis  pada  gambar  4  menggunakan  fase gerak  kloroform  : etil  asetat  (6:4)  dan  fase  diam  silika  gel  GF-254.  Hasil pengamatan  pada  sinar  UV  254  nm  terjadi  peredaman berwarna gelap, sedangkan pada sinar UV 366 nm terdapat flourescen dengan warna kuning. Dengan pereaksi semprot uap amoniak dan sitroborat fraksi etil asetat menghasilkan satu  bercak  berwarna  kuning  yang  lebih  intensif  dengan nilai  Rf  =  0,18.  Menurut  Harborne,  (1987)  dengan  deteksi sinar UV 254 terdapat peredaman berwarna gelap dan sinar UV  366  membentuk  fluoresensi  biru,  kuning,  ungu  gelap. Pada  penelitian  ini  bercak  yang  dihasilkan  terdapat peredaman berwarna gelap dan flourescen berwarna kuning. Hal  ini  dapat  disimpulkan  bahwa  fraksi  etil  asetat  kulit batang mundu diduga mengandung flavonoid. Uji kandungan kimia golongan xanton ekstrak etil asetat dan sub fraksi IV kulit  batang  mundu  menggunakan  fase  diam  silika  gel GF-254, fase gerak kloroform : etil asetat (6:4) dan kloroform : etil  asetat  (3:7).  Pada  deteksi  sinar  UV  254  terdapat peredaman berwarna gelap sedangkan pada sinar UV 366 memberikan  flourescen  warna  biru.  Dengan  pereaksi semprot DNPH menghasilkan satu bercak berwarna kuning yang lebih intensif dengan nilai Rf = 0,15. Harborne, (1987) menyatakan bahwa senyawa xanton bila dideteksi di bawah sinar UV menunjukkan warna kuning-jingga, pada penelitian ini bercak yang dihasilkan berwarna kuning.
Dosis yang diberikan ke hewan uji untuk ekstrak etil asetat kulit batang mundu yaitu 12,5; 25; 50; 100 mg/gr BB mencit Swiss.  Dosis  tablet  klorokuin  5  mg/kg  bb  didapatkan 0.91  mg/  20g  bb  dan  sebagai  kontrol  normal  CMC  0.5% didapatkan 500 mg/ 100ml.Uji farmakologi digunakan untuk mengetahui  aktivitas  dari  ekstrak  etil  asetat  kulit  batang mundu  yang  dihasilkan  sebagai  antiplasmodium.  Persentase (%)  parasitemia  dihitung  berdasarkan  jumlah  eritrosit  yang terinfeksi  oleh Plasmodium  berghei .  Berdasarkan  gambar sediaan apus eritrosit dari masing-masing perlakuan, bentuk eritrosit  yang  terinfeksi  menjadi  pucat,  bertitik-titik  dan membesar  menandakan  bahwa  plasmodium  telah menginfeksi  eritrosit  tersebut  setelah  mencit  diinduksi oleh Plasmodium berghei .
2.2. Uji aktivitas antiplasmodium secara in vivo

## Mamik Ponco Rahayu, Reslely Harjanti, Gunawan Pamudji
Kontrol (-)             Ekstrak kulit mundu 50 mg/kg bb Gambar 5. Sediaan apus eritrosit
Berdasarkan  gambar  di  atas,  mencit  yang  diberi perlakuan pada dosis kulit mundu 50 mg/kg bb terlihat banyak  eritrosit  yang  normal  dari  pada  yang  terinfeksi. Pada dosis ini masih banyak ditemukan bentuk eritrosit cakram bikonkraf, berwarna kekuningan dan tidak berinti, mengandung  hemoglobin  dan  oksigen.  Pada  kontrol negatif banyak ditemukan eritrosit terinfeksi plasmodium bergei.
Pada  semua  dosis  perlakuan  ekstrak  kulit  batang mundu mampu memberikan efek sebagai antiplasmodium dibandingkan  dengan  kontrol  negatif.  Hal  ini  dikarenakan ekstrak  mengandung  senyawa  xanton  yang  mampu memperbaiki  atau  mencegah  eritrosit  terinfeksi  oleh Plasmodium  berghei yang  tidak  banyak  mengalami perubahan  hematologi,  sehingga  eritrosit  yang  baru terbentuk  tidak  terinfeksi  oleh  Plasmodium  dan  ada keseimbangan  produksi  dengan  kematian  eritrosit.  Pada kontrol  negatif,  banyak  bentuk  eritrosit  yang  pucat, membentuk cincin, bertitik-titik atau berinti dan membesar, serta  mengalami  peningkatan  jumlah  eritrosit  terinfeksi dari hari ke-1, ke-2 hingga ke-4. Hal ini karena CMC tidak mengandung senyawa aktif yang dapat menurunkan tingkat infeksi  Plasmodium  dalam  darah  sehingga  mengalami banyak  perubahan  hematologi.  Perubahan  hematologi menyebabkan  anemia  karena  kandungan  Hb  jauh  lebih rendah  dari  normal  dan  tidak  ada  keseimbangan  antara proses  produksi  dengan  kematian  eritrosit  yang mengakibatkan  pemendekan  usia  sel  darah  merah  dari hari ke hari. Banyaknya eritrosit yang terinfeksi menyebabkan fungsi  sel  tubuh  di  dalam  darah  akan  menurun  sehingga
Persentase parasitemia dapat dihitung dengan cara melakukan  perhitungan  jumlah  eritrosit  yang  terinfeksi dalam  1000  eritrosit  pada  hari  ke-0  yaitu  mencit  telah terinfeksi  plasmodium  namun  belum  mendapatkan perlakuan, hari ke-1 sampai ke-4 setelah mencit diberikan perlakuan  ekstrak.  Data  hasil  perhitungan  penurunan persentasi dapat dilihat pada tabel berikut.
Tabel 2. Rata-rata Persentase Parasitemia Masing-masing Kelompok Perlakuan
PERLAKUAN Rata-rata % parasitemia ± SD H 1 H 2 H 3 H 4 Ekstrak dosis 12,5mg/kg BB 3,13 ± 0,36 2,73 ± 0,46 2,24 ± 0,21 2,36 ± 0,40 Ekstrak dosis 25 mg/kg BB 2,51 ± 0,18 2,18 ± 0,18 1,89 ± 0,20 1,82 ± 0,11 Ekstrak dosis 50 mg/kg BB 2,25 ± 0,49 2,05 ± 0,25 1,77 ± 0,24 1,28 ± 0,17 Ekstrak dosis 100 mg/kg BB 2,22 ± 0,33 1,74 ± 0,25 1,56 ± 0,13 0,86 ± 0,24 Kontrol positif 2,05 ± 0,24 1,70 ± 0,28 1,15 ± 0,25 0,46 ± 0,11 Kontrol negative 2,16 ± 0,64 4,27 ± 0,61 4,56 ± 0,50 6,17 ± 1,24
Hasil  perhitungan  persen  parasitemia  pada  hari  ke-1, sampai  hari  ke-4  menunjukkan  bahwa  ada  kenaikan persen  dari  penurunan  jumlah  parasit  di  dalam  eritrosit dari  kontrol  positif  dan  perlakuan  jika  dibandingkan dengan hari ke-0. Pemberian ekstrak dosis 12,5 mg/kg BB mempunyai penurunan yang sedikit terhadap parasitemia dari hari ke hari. Tingkat persen parasitemia pada hari ke pertama sampai ke empat berturut turut adalah 3,13 %; 2,73  %;  2,24  %;  2,36%.    Penurunan  parasitemia  pada dosis  ini  kurang  memperbaiki  perubahan  hematologi pada  mencit  yang  mengalami  perubahan  cukup  banyak yaitu ditandai dengan masih banyak eritrosit yang terinfeksi dan tidak ada keseimbangan antara proses produksi dengan kematian eritrosit, tetapi pada dosis ini masih memiliki efek sebagai antiplasmodium ditandai dengan adanya penurunan jumlah  parasit  dari  hari  ke  hari.  Pemberian  ekstrak  dosis 100 mg/kg BB mempunyai tingkat persen parasitemia hari ke pertama sampai ke empat berturut turut adalah 2,22 %; 1,74%; 1,56 % dan 0,86%. Dari ketiga dosis ekstrak mundu maka dosis yang memiliki aktivitas menurunkan parasitemia paling rendah adalah dosis 12,5 mg/kg BB, sedangkan dosis
suplai makanan, oksigen berkurang dan fungsi tubuh keseluruhan akan menurun.
Berdasarkan kurva diatas terlihat bahwa penghambatan parasitemia pada H1-H4 untuk masing masing kelompok ekstrak dengan dosis yang berbeda mempunyai penuruan eritrosit  yang  terinfeksi  berbeda  pula.  Pada  dosis  ekstrak mundu 100 mg/kg BB merupakan penurunan paling kecil dari  perlakuan  dosis  yang  lain,  kemudian    pada  dosis 100 mg/kg BB mengalami penurunan tingkat parasitemia yang  hampir  sama  dengan  kontrol  positif,  terjadi  pada perlakuan  pemberian  ekstrak  pada  hari  ke-2.  Dapat diketahui  pula  bahwa  tingkat  penurunan  pada  dosis 100  mg/kg  BB  mendekati  penurunan  yang  terjadi  pada kontrol positif, dari ketiga dosis tersebut dosis 100 mg/kg BB
Sesuai  dengan  metode  Peters  bahwa  pengujian antiplasmodium dilakukan dengan mengamati persentase parasitemia  pada  hari  keempat.  Data  persentase parasitemia pada hari keempat pengujian antiplsmodium disajikan  dalam  tabel  2.  Data  persentase  parasitemia hari ke empat tersebut dianalisis menggunakan program SPSS 17.0 dengan uji ANOVA satu jalan untuk mengetahui perbedaan  semua  kelompok  perlakuan  dengan  tingkat kepercayaan  95%.  Dari  analisis  diperoleh  harga sig.0,007  <  0,05  menunjukkan  ada  beda  nyata  antar kelompok  perlakuan.  Dari  data-data  di  atas  dilakukan analisis probit, sehingga dari hasil analisis probit tersebut diperoleh  informasi  mengenai  dosis  efektif  50  (Effective Dose  50  =  ED50)  dari  ekstrak  etil  asetat  kulit  batang mundu  ( Garcinia  dulcis Kurz)    terhadap  pertumbuhan Plasmodium  berghei pada  mencit.  Harga  ED50  ini menunjukkan  besarnya  dosis  bahan  uji  yang  dapat menghambat  50%  pertumbuhan Plasmodium  berghei . Semakin kecil harga ED50 maka semakin besar efektivitas penghambatan  ekstrak  terhadap  pertumbuhan Plasmodium  berghei. Hasil  analisis  probit  dapat  dilihat pada tabel 3.
yang memiliki aktivitas penurunan paling besar adalah dosis 100  mg/kg  BB.  Dosis  ekstrak  50  mg/kg  BB  lebih  rendah aktivitasnya jika dibandingkan dengan dosis 100 mg/kg BB. Pemeriksaan  persentase  parasitemia  darah  mencit  yang diinduksikan Plasmodium  berghei dilakukan  dengan membuat  preparat  darah  tipis  (apusan).  Pada  tabel  diatas terlihat  bahwa  efek  penghambatan  perkembangan Plasmodium berghei pada mencit tergantung pada besarnya dosis 12,5 mg/kg bb dan dosis 50 mg/kg bb tidak terlihat kenaikan  efek  lagi  bahkan  cenderung  menurun.  Hal  ini kemungkinan karena pada ekstrak dosis ini terdapat kurang banyak  senyawa  lain  yang  tidak  memiliki  aktivitas  untuk menurunkan tingkat plasmodium yang dapat mempengaruhi atau menghambat efek sebagai antiplasmodium pada dosis tersebut.
memiliki efek sebagai antiplasmodium yang paling efektif.
Perlakuan
Dosis (mg/kg BB) Log dosis (x) % penghambatan parasitemia Probit (y) Ekstrak dosis 12,5mg/kgBB 12,5 1,097 61,65 5,33 Ekstrak dosis 25mg/kgBB 25 1,398 70,45 5,58 Ekstrak dosis 50mg/kgBB 50 1,699 79,25 5,81 Ekstrak dosis 100mg/kgBB 100 2 86,06 6,08
Tabel 3. Hubungan probit % penghambatan dengan log dosis
Gambar 6. Kurva Penghambatan Parasitemia
Dari hasil analisis data didapatkan harga ED50 dari ekstrak  etil  asetat  kulit  batang  mundu  ( Garcinia  dulcis Kurz) adalah 5,01mg/kg BB. Hal ini menunjukkan ekstrak etil asetat kulit batang mundu efektif dalam menghambat pertumbuhan Plasmodium  berghei .  Menurut  Andrade- Neto et  al. (2003)  suatu  ekstrak  dikatakan  aktif  dalam menurunkan parasitemia apabila ekstrak tersebut dapat menurunkan parasitemia lebih dari 30%.
Mamik Ponco Rahayu, Reslely Harjanti, Gunawan Pamudji