## Jurnal Analis Laboratorium Medik

## EFEK PEMBERIAN EKSTRAK ETANOL DAUN PIRDOT ( SAURAUIA VULCANI KORTH. ) TERHADAP EKSPRESI GEN INTERLEUKIN 6 (IL-6) PADA JARINGAN ADIPOSA PUTIH TIKUS GALUR WISTAR YANG DIBERI DIET TINGGI LEMAK
Nova Eininta Sitepu 1 , Nurul Amalia Sofyan 2 1 Program Studi Keperawatan, Universitas Murni Teguh
2 Program Studi D-3 Analis Kesehatan Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Nahdlatul Ulama Sumatera Utara
Email : novaeininta@gmail.com , nurulamaliasofyan@gmail.com

## ABSTRAK
Penumpukan  lemak  dalam  tubuh  manusia  terbukti  dapat  meningkatkan  Reactive  Oxygen  Species (ROS). Kondisi ini dipicu oleh produksi NADH dan FADH2 yang berlebihan. Tingkat ROS yang tinggi menyebabkan gangguan siklus sel dan kerusakan DNA. Jaringan adiposa merupakan salah satu tempat penyimpanan  lemak  yang  telah  banyak  diteliti  untuk  menggambarkan  berbagai  risiko  penyakit, terutama  gangguan  metabolik.  Peningkatan  ROS  pada  jaringan  adiposa  dapat  meningkatkan  risiko gangguan  metabolik  yang  dapat  dideteksi  oleh  IL-6  (interleukin  6).  IL-6  berperan  penting  dalam regenerasi sel dan aktivitas antiinflamasi. Daun Pirdot (Saurauia vulcani korth.) mengandung berbagai bahan  bioaktif  seperti  flavonoid,  fenolik,  aponin,  tanin  dan  triterpenoid.  Komponen-komponen  ini diketahui  memiliki  aktivitas  antiinflamasi  dalam  tubuh.  Penelitian  ini  menggunakan  metode  true experimental post-test control group. Sampel terdiri dari 20 ekor tikus yang dibagi menjadi 4 kelompok, yaitu Kn: kelompok tanpa perlakuan; Kp: kelompok yang diberi diet tinggi lemak; P1: kelompok yang diberi diet tinggi lemak dan ekstrak pirdot 100 mg dan, P2: kelompok yang diberi diet tinggi lemak dan ekstrak pirdot 200 mg. Ekspresi gen IL-6 dinilai menggunakan PCR realtime (RT-PCR) dan dihitung dengan  Metode  Livak  2^∆∆Ct.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  ada  perbedaan  berat  badan sebelum  dan  sesudah  perlakuan  pada  kelompok  tikus  (p=0,000).  Tidak  terdapat  perbedaan  yang signifikan pada nilai ekspresi gen IL-6 antar kelompok perlakuan. Terdapat ekspresi gen IL-6 lebih rendah pada kelompok tikus yang diberi diet tinggi lemak dengan ekstrak pirdot 100 mg (P1) dan 200 mg (P2) dibandingkan dengan kelompok kontrol (Kn)dan kelompok yang hanya diberi diet tinggi lemak saja (Kp).
Kata Kunci : Diet tinggi lemak; interleukin 6; ekstrak daun Pirdot

## ABSTRACT
Fat  accumulation  in  human  body  proven  can  promotes  the  increasing  of  Reactive  Oxygen  Species (ROS). This condition is provoked by the NADH and FADH2 excessive production.  High degree of ROS cause cell cycle disruption and DNA damage. Adipose tissue is one of the fat storage areas that has  been  widely  studied  to  describe  various  disease  risks,  especially  metabolic  disorders.  The increasing of ROS in adipose tissue can increase risk of metabolic disorders which can be detected by IL-6  (interleukin  6).  IL-6  plays  essential  role  in  cell  regeneration  and  anti-inflammatory  activities. Pirdot leaf (saurauia vulcani korth.) Pirdot leaf extract contains various bioactive ingredients such as flavonoids, phenolic, aponins, tannins and triterpenoids. These components are known to have anti- inflammatory activity in the body. This study used a true experimental post-test control group method. Sample consisted of 20 rats divided into 4 groups, where Kn: group without treatment; Kp: group given high-fat diet; P1: the group given a high-fat diet and 100 mg of pirdot extract and, P2: the group given a  high-fat  diet  and  100  mg  of  pirdot  extract  200  mg.  Gene  expression  of  IL-6  was  assessed  using realtime PCR (RT- PCR) and accounted with Livak Method 2^∆∆Ct. The results showed tha t there was a  difference  in  body  weight  before  and  after  treatment  in  the  rat  group  (p=0.000).  There  were  no significant differences in the expression values IL-6 genes between the treatment groups. IL-6 gene expression was lower in the group of rats fed a high-fat diet with 100 mg and 200 mg of pyrdot extract compared to the control group and the group fed a high-fat diet only.
Keywords : High fat diet; interleukin 6; Pirdot leaf extract

## PENDAHULUAN
Konsumsi makanan dengan nilai gizi yang tidak seimbang dan mengandung banyak kalori  memiliki  peran  yang  signifikan terhadap  peningkatan  angka  penyakit  salah satunya  gangguan  metabolik,  kanker  dan keganasan.  Konsumsi  makanan  tinggi  kalori dan  lemak  mengalami  peningkatan  yang signifikan hampir diseluruh dunia. Penelitian menyebutkan  bahwa  peningkatan  populasi dengan  obesitas  telah  mencapai  angka  1 triliun  orang  dimana  650  orang  diantaranya adalah  dewasa,  340  juta  anak  remaja,  dan sisanya  adalah  anak-anak.  Penambahan populasi  obesitas  ini  dihubungkan  juga dengan  peningkatan  angka  kematian  yang terjadi  sebanayk  4  juta  orang  setiap  tahun (World  Health  Organization,  2022).  Di Indonesia  angka  obesitas  meningkat  bukan saja  di  masyarakat  dengan  ekonomi menengah  keatas.  Peningkatan  populasi dengan  obesitas  di  Indonesia  diketahui  telah terdeteksi  sejak  tahun  2018,  dimana  terdiri atas  40%  merupakan  orang  dewasa,  14,3% anak-anak  (Data  Riset  Kesehatan  Dasar, 2018).
Mengkonsumsi makanan tinggi kalori yang  tidak  diimbangi  dengan  aktivitas  fisik menyebabkan penumpukan lemak diberbagai jaringan tubuh manusia. Kondisi ini nantinya akan  mengganggu  fungsi  dan  kerja berbagai organ  tubuh  dan  menyebabkan  berbagai penyakit  metabolik  yang  seperti  penyakit diabetes,  kanker  serta  penyakit  jantung  dan pembuluh  darah,  baik  pada  orang  dewasa maupun anak-anak (United Nations Internationak  Children’s  Emergency  Fund, 2022).
Kerusakan  jaringan  tubuh  akibat penumpukan lemak merupakan kondisi kronis dan terjadi secara berangsur-angsur.
Penumpukan
lemak menyebabkan peningkatan Reactive Oxygen Species (ROS) pada sel. Kadar ROS yang terlalu tinggi dalam sel menyebabkan sel tidak dapat menjalankan fungsi  metabolisme  dan  fungsi  regenerasi. Dengan  kata  lain  ROS  akan  mengakibatkan kekacauan  dalam  proses  sel  serta  gangguan siklus  DNA.  Gangguan  siklus  yang  terjadi dalam tubuh merupakan proses yang panjang
dan  kompleks.  Protein  P16,  dan  P53-P21 akan    melakukan  aktivitas  penuaan  sel sebagai  mekanisme  terhadap  gangguan siklus.  Sayangnya  penuaan  sel  ( cell senescence ) tidak selalu dapat dipertahankan dalam waktu yang panjang. cell  senescence yang  berkelanjutan  dapat memicu kekacauan DNA yang lebih parah dan  memicu  berbagai  faktor  inflamasi dilepaskan  dari  sel,  antara  lain  Citokin, Cemik Reactive  Oxygen  Species  (ROS apabila  tidak  dapat  diperbaiki  oleh  sel, maka  akan  memicu  sekresi  berbakai Cytokine,  Chemokine,  Growth  Factor , ataupun Matrix Matrix  Remodeling Factors. Keempat  sekresi  ini  selanjutnya dikenal dengan istilah SASP ( Senescence- associated  Secretory  Phenotype ).  SASP misalnya IL-6, IL-8, IL- 1β, TGF - β1, TGF - β3, dan lain sebagainya.
Kondisi obesitas diketahui memiliki  hubungan  yang  erat  dengan penuaan  sel  yang  ditunjukkan  dengan peningkatan  kadar  protein  penanda penuaan sel yaitu P53 dan p21 (Tam B. T et al ., 2019). Hal ini dipicu oleh produksi NADH  dan  FADH2  secara  berlebihan akibat kondisi obesitas (Wlodarczyk M et al ., 2019). Penuaan sel yang tidak teratasi selanjutnya akan menyebabkan pelepasan SASP. Interleukin 6 (IL-6) dapat dijadikan salah satu indikator kuat penanda penuaan sel yang berkelanjutan (SASP) mengingat produksinya  yang  dapat  meningkat  2-3 kali lebih tinggi pada jaringan adiposa.
Jaringan adiposa merupakan jaringan  yang  sangat  sensitif  terhadap peningkatan  lemak  tubuh, endocrin signaling ,  dan  sistem  imunitas  sehingga menjadi  pilihan  yang  tepat  untuk mempelajari  berbagai  mekanisme  kerja tubuh.  Jaringan  adiposa  viseral  yaitu jaringan  adiposa  yang  terdapat  disekitar organ dalam tubuh dan bersifat metabolik aktif. (Frasca D, and Blomberg B, 2020). Jaringan adiposa sangat mudah mengalami penuaan  baik  yang  diakibatkan  oleh kondisi  aging  maupun  obesitas.  Penuaan sel  pada  jaringan  adiposa  dapat  dideteksi dalam waktu yang cukup singkat yaitu  2-
3  minggu  pemberian  makanan  tinggi  lemak (Smith U et al . 2021) dan (Pini et al. 2021). Ekstrak  daun  pirdot  ( Saurauia  vulcani korth) merupakan tanaman pohon herbal yang dapat tumbuh di wilayan daratan Asia, salah satunya  di  Indonesia.  Pirdot  diketahui memiliki  kandungan  berbagai  antiinflamasi alami yang telah dimanfaatkan secara empiris oleh masyarakat di Asia. Pirdot mengandung senyawa  bioaktif  antara  lain  flavonoid, penolik,  aponin,  tannin  dan  triterpenoid. Pirdot  telah  diuji  memiliki  efek  antibakteri, antidiabetik, antikolesterol, immun stimulator,  serta    hepatoprotektor  dan immunomodulator  (Silalahi et  al. 2021), (Musa et  al., 2019),  (Sinaga et  al, 2019). Selain  itu  ekstrak  pirdot  memiliki  aktivitas antiinflamasi yang sangat tinggi.
Tikus  galur  wistar  merupakan  pilihan hewan  coba  yang  paling  sering  digunakan dikarenakan  memiliki  genome  yang  paling menyerupai
manusia yang dapat dimanfaatkan  untuk  oengujian  berbagai model  penyakit  manusia.  Pemberian  diet tinggi kalori pada wistar dapat menyebabkan tikus  menjadi  obesitas  sehingga  dapat dilakukan  pengujian  berbagai  gangguan metabolic.

## TINJAUAN PUSTAKA
Penuaan Sel ( Cellular Senescence) Merupakan  kondisi  dimana  sel  berhenti melaksanakan  fungsinya  untuk  berkembang melalui  mekanisme  yang  teratur  dan  secara berurutan  yang  dapat  dipicu  oleh  berbagai faktor yang ada di dalam maupun luar sel itu sendiri  (Kumari et  al.  2021). Sel  secara normal  merespon  stimultan  yang  datang dengan  berbagai  mekanisme  diantaranya petumbuhan  dan  perkembangan  melalui ploriferasi  sesuai  batas  usia  pertumbuhan makhluk  hidup.  Sel  juga  dapat  memberi respon  berupa  perbaikan  diri,  kematian  sel dan bahkan penuaan sel. Penuaan sel sendiri ditandai  dengan  sel  yang  sudah  tua  masih tetap  aktif  secara  metabolik  namun  tidak dapat  melakukan  fungsi  perbaikan  maupun kematian (untuk merangsang pertumbuhan sel baru). Kondisi sel tua yang semakin lama dan semakin  banyak  ini  memicu  pengeluaran
sitokin pro infamasi yang kumidian dapat menyebabkan  peradangan  kronis  bahkan kerusakan  DNA  dan  jaringan  yang  berat (Demarian and Velarde, 2019).

## Simultan Penuaan Sel
Kerusakan  DNA  yang  dipicu  oleh penuaan sel dapat diinduksi oleh berbagai faktor diantaranya:
1. Telomer memendek ( Telomere shortening )
2. Radikal  Bebas  ( Reactive  Oxygen Species) 3. Disfungsi Mitokondrial ( Mitochondrial Dysfunction ) 4. Peningkatan Sinyal Mitogenik Onkogenik 5. Remodeling Kromatin

## Mekanisme Penuaan Sel
Mekanisme penuaan sel dapat terjadi melalui 2 jalur yaitu
1. Jalur  Penuaan  Sel  oleh  p53/p21 WAF1/CIP1
2. Jalur Penuaan Sel p16 INK4A /pRB 3. Penghentian Siklus Sel Yang Dimediasi Oleh Komplek DREAM Perbedaan  pada  ketiga  jalur  yang  saling berhubungan  tersebut  dapat  dilihat  pada diagram berikut: Proliferative Exhaustion Genotoxic Stress Mithocondrial Dysfunction Oncogene Activation Other
Stresses
Short Telomeres ROS DSB Low NAD + / NADH Ras P13K INK/ARF Locus ATM/ATR CHK1/ CHK2 Low ATP AMPK Raf MEK 1/2 ERK MKK 3/6 P38MAPK AKT TSC1/TSC2 mTOR ARF MDM2 CDK2- CyclinE CDK4/6 - CyclinD P16 INK4a P21 WAF1/Cip1 P53 Disruption of DREAM complex B-MYB- MuvB (MMB complex) MMB- FOXM1 complex Cell cycle progression DREAM complex assembly E2F DP MuVB P130/p107 RB RB/E2F BMYB FOXM1 RB P P + Cell cycle progression E2F RHEB Senescence Mekanisme pengsinyalan penuaan sel (cellular senescence) yang disebabkan oleh penghentian siklus sel.
Sumber: Kumari and Jat, 2020
SASP (Senescence-Associated Secretory Phenotype)
Ketika terjadi penuaan sel dalam waktu yang lama yang mengakibatkan penumpukan sel- sel  tua,  maka  hal  ini  akan  mempengaruhi lingkungan  sel  tersebut  yang  kemudian memicu  kondisi  lingkungan  sel  yang  tidak kondusif.  Hal  ini  diakubatkan  karena  sel tersebut  menghasilkan  molekul-molekul antiinflamasi  yang  tidak  wajar  yang  sering dikenal dengan SASP (Senescence- Associated  Secretory  Phenotype) .  Beberapa
faktor SASP yang disekresikan antara lain:
No Penyebab Penuaan SASP Komponen 1 Replicative senescence COX-2,  Angiogenin,  bFGF, Interferon-1, IGFBP2, IGFBP3, IGFBP1,  IGFBP5,  IGFBP4, IGFBP6,  IL-1B,  Interleukin-6, dan Leptin
2 Senesens terkait kerusakan DNA IL-1B  dan  IL-6,  Leptin,  MIF, MIP-1a/3a,  MSP-a,  Oncostatin M, Osteoprotegerin, PDGF-BB, Thrombopoietin 4 Senesens terkait terapi WNT16B, PAI-1, AREG, CXCL8,  SPINK1,  IL/1B/1A/6,
MMP3, MMP2, t-PA,
Sumber: Kumari et al , 2020
Interleukin -6
Merupakan molekul dengan ukuran 22 hingga 27  kDa  yang  berbentuk  glikosilat  multiple. Molekul  ini  diproduksi  secara  masiv  pada jaringan  lemak  dan  dapat  menjadi  indikator terjadinya  inflamasi  pada  jaringan  lemak. Peningkatan kadar asam lemak dan IL-6 pada sel  hati  berhubungan  dengan  peningkatan risiko  terhadap  disfungsi  autokrin,  endokrin dan  parakrin.    Penuaan  sel  pada  jaringan lemak  adiposa  akan  merangsang  pelepasan IL-6 yang lebih banyak.
SASP yang dinduksi oleh senescence di jaringan adiposa. Sumber: Clair Crewe et al (2017) Tumbuhan Pirdot Pirdot (saurauia  vulcani  korth.) merupakan tanaman  herbal  yang  banyak  tumbuh  di
daratan  Asia  dan  pulau  Sumatera. Tanaman  ini  telah  lama  dikonsumsi masyarakat  untuk  mengobati  berbagai masalah  kesehatan  antara  lain  diare, gangguan  pernafasan,  diabetes,  dan hiperkolesterolemia.  Tanaman  pirdot memiliki senyawa bioaktif kuat yang juga memiliki efek sebagai antiinflamasi antara lain Saponin, Tanin, dan Flavonoid.

## Kerangka Konseptual
Adapun  kerangka  konseptual  pada penelitian  ini  digambarkan  sebagai berikut:

## Hipotesis Penelitian
Berdasarkan  kerangka  penelitian diatas,  maka  hipotesis  penelitian  dapat dirumuskan sebagai berikut:
1. Terdapat  perbedaan  ekspresi  gen p21,  p16  dan  IL-6  pada  tikus kelompok  Kn,  Kp,  P1  (ekstrak daun  pirdot  100mg),  dan  P2 (ekstrak pirdot 200 mg)
2. Terdapat  penurunan  ekspresi  gen p21, p16 dan IL-6 kelompok tikus yang diberi ekstrak pirdot 100 mg dan 200 mg dibandingkan dengan kelompok kontrol

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini adalah true eksperimental study menggunakan  hewan  coba  dengan post-test only control group design untuk mengetahui  ekstrak  daun  pirdot  terhadap kadar  kadar  interleukin  6.  Penelitian dilakukan  pada  bulan  Maret  2024  di Laboratorium  Farmakologi  dan  Terapi Fakultas  Kedokteran  USU.  Adapun Jumlah  sampel  sebanyak  24  ekor  hewan coba yang dibagi dalam 4 kelompok secara acak yaitu:
Kn = Kelompok tidak diberi diet tinggi lemak dan tidak diberi ekstrak daun pirdot Kp = Kelompok diberi diet tinggi lemak dan tidak diberi ekstrak daun pirdot
Ekstrak Daun Pirdot) Kadar IL-6
P1  = Kelompok diberi diet tinggi lemak dan diberi ekstrak daun pirdot 100 mg P2  = Kelompok diberi diet tinggi lemak dan diberi ekstrak daun pirdot 200 mg

## Pembuatan Ekstrak Daun Pirdot
Daun  pirdot  dibuat  menjadi  simplisia kemudian  diproses  menjadi  ekstrak  dengan etanol  96%  menggunakan  metode  maserasi dengan  ekstraski  cara  dingin.  Dosis  yang 100mg  dan 200mg  ditentukan  sebagai  doses yang  akan  diberikan  untuk  melihat perbandingan  efek  pemberian  ekstrak  daun pirdot  terhadap  perubahan  kadar  Interleukin 6.

## Pembuatan  Diet  Tinggi  Lemak  Model Hewan Coba
Untuk diet tinggi lemak yang dibuat dengan mengcampurkan 200 gram kuning telur bebek dan 300 gram lemak babi ke dalam 100 ml air steril dan 1 ml larutan CMC. Dosis pemberian diet adalah 3 gram/200 gram BB/Hari. Tikus berusia  6-8  minggi  diberi  diet  tinggi  lemak secara  oral  selama  8  minggu.  Pemberian pakan dilakukan dengan metode ad libitum.

## Prosedur Isolasi RNA dan PCR
Adapun tahapan pengerjaan pada isolari RNA adalah sebagai berikut:
a) Ekstraksi RNA
b) Pemisahan
c) Isolasi RNA
d) Prosedur Real Time PCR Adapun  metode  analisis  ekspresi  gen  pada pemeriksaan  PCR  yang  digunakan  adalah dengan  metode  perhitungan  Ct  dengan referensi gen sebagai berikut:
Primer IL-6  : Forward 5’ - CTGCAAGAGACTTCCATCCAG- 3’ Reverse 5’ -
AGTGGTATAGACAGGTCTGTTGG- 3’
Primer β -actin :
Forward 5’ - GCAGATGTGGATCAGCAAGC- 3’ Reverse 5’ - GGTGTAAAACGCAGCTCAGTAA- 3’ HASIL DAN PEMBAHASAN Uji Normalitas
Peneliti  melakukan  uji  normalitas dengan  menggunakan  uji Shapiro-Wilk dengan  melihat  tingkat  signifikansinya. Distribusi  data  penelitian  dinyatakan normal jika nilai probabilitas (sig) > 0,05. Hasil  uji  normalitas  adalah  sebagai berikut:
Tabel. Hasil Hasil uji normalitas Shapiro-

## Wilk
Berdasarkan  tabel  diatas,  maka diketahui  bahwa  nilai  signifikansi  lebih besar  dari  0,05.  Maka  dengan  demikian dapat  disimpulkan  bahwa  data  yang  diuji tidak berdistribusi normal.
Perbedaan  Ekspresi  Gen  IL-6  Setelah Pemberian Ekstrak daun Pirdot
Untuk mengetahui perbedaan ekspresi  gen  IL-6  diantara  kelompok dilanjutkan dengan uji Kruskal-Wallis.
Kelompok ∆CT Median Min-Max 2 ^∆∆CT Mean P Value* Kn Kp P1 P2 0,09 0,05 ˗ 0,12 0,05 0,03 ˗ 0,12 0,07
0,02 ˗ 0,12 0,08 0,06 ˗ 0,12 1
1,04 1,01 1,01 0,298 Kn = Kelompok kontrol tanpa perlakuan;
Kp = Kelompok yang diberi diet tinggi lemak;
P1 = Kelompok yang diberi diet tinggi lemak dan EEDP  100mg; P2 =  Kelompok  yang  diberi  diet tinggi  lemak  dan  EEDP  200mg;  *  Uji Kruskal- Wallis
Tabel  tersebut  diatas  menunjukkan  bahwa ekspresi  gen  IL-6  tertinggi  didapatkan  pada kelompok  hewan  coba  yang  hanya  diberi pakan  lemak  (Kp),  dan  ekspresi  gen  IL-6 terendah  didapatkan  pada  kelompok  yang diberi ekstrak daun pirdot 100mg dan 200mg (P1 dan P2). Hasi uji menunjukkan perbedaan yang  tidak  signifikan  pada  kelompok perlakuan dengan nilai p=0.298
Perbedaan  Ekspresi  Gen  IL-6  Kelompok yang  diberi  Ekstrak  Pirdot  200mg  (P2) dengan  Kelompok  Perlakuan  Diberi  Diet Tinggi Lemak (Kp)
Tabel tersebut dibawah menunjukkan terdapat  nilai  ekspresi  gen  IL-6  yang  lebih rendah  pada  kelompok  yang  mendapat ekstrak pirdot 200 mg 0.98 kali dibandingkan kelompok perlakuan diberi diet tinggi lemak (Kp).
Kel ∆CT Median Min-Max 2 ^∆∆CT
Mean P Value * Keterangan Kp P2 0,05 0,03 ˗ 0,12 0,08 0,06 ˗ 0,12 1,04
1,01
0,090 P2 lebih rendah 0,98 kali dari Kp
Kp =  Kelompok  yang  diberi  diet  tinggi  lemak; P2 = Kelompok  yang  diberi  diet  tinggi  lemak  dan  EEDP 200mg; * Uji Mann-Whitney Hasil  uji  tidak  terdapat  perbedaan yang  signifikan  antar  kedua  kelompok tersebut (p=0.090).
Perbedaan  Ekspresi  Gen  IL-6  Kelompok yang  diberi  Ekstrak  Pirdot  200mg  (P2) dengan  Kelompok  diberi  Ekstrak  Pirdot 100mg (P1)
Tabel tersebut dibawah menunjukkan terdapat  nilai  ekspresi  gen  IL-6  yang  lebih rendah  pada  kelompok  yang  mendapat ekstrak  pirdot  200mg  (P2)  0.99  kali dibandingkan  kelompok  ekstrak  pirdot  100 mg (P1).
Kel ∆CT Median Min-Max 2 ^∆∆CT Mean P Value * Keterangan P1 P2 0,07 0,02 ˗ 0,12 0,08 0,06 ˗ 0,12 1,01 1,01 0,523 P2 lebih rendah 0,99 kali dari P1
P1 =  Kelompok  yang  diberi  diet  tinggi  lemak  + EEDP  100mg; P2 =  Kelompok  yang  diberi  diet tinggi lemak + EEDP 200mg; * Uji Mann-Whitney
Hasil  uji  tidak  terdapat  perbedaan yang signifikan antar kedua kelompok P2 dan P1 (p=0.523).

## Pembahasan
Interleukin-6 merupakan salah satu sitokin yang dapat menjadi indikator baik untuk  mengetahui  tingkat  inflamasi  pada jaringan  lemak  adiposa.  Peningkatan interleukin-6 dan asam lemak pada sel hati meningkatkan  risiko  aterosklerosis  yang disebabkan  oleh  pengaruh  autokrin, endokrin, dan parakrin.
Hasil  penelitian  menunjukkan tidak  terdapat  perbedaan  yang  signifikan rerata  ekspresi  gen  interleukin  6  pada kelompok  hewan  coba  dengan  nilai p=0.298. Walapun demikian hasil penelitian  membuktikan  terdapat  rerata nilai cycling  threshold paling tinggi  pada kelompok dengan pemberian ekstrak daun pirdot  200mg  diikuti  dengan  kelompok daun  pirdot  100mg.  Sedangkan  nilai cycling threshold paling rendah didapatkan  pada  kelompok  hewan  coba yang  diberi  perlakuan  diet  tinggi  lemak (Kp).  Hasil  penelitian  ini  sesuai  dengan studi  terdahulu  (Smith  U et  al. 2019) dimana  peningkatan  kadar  ROS  pada jaringan adiposa memicu pelepasan sitokin Interleukin-6 sebanyak 2-3 kali.
Pemberian  ekstrak  pirdot  yang memiliki  berbagai  senyawa  bioaktif memberi  efek  antiinflamasi  di  jaringan adiposa.    Ekstrak  daun  pirdot  memiliki nilai IC50 = 22.37 μg/ml yang merupakan antioksidan yang sangat kuat. Kandungan Saponin  pada  daun  pirdot  berfungsi sebagai  pengambat  penuaan  sel  dengan cara mencegah akumulasi lemak (antihiperlipidemia). Selain itu kandungan
Triterpenoid  pada  daun  pidot  merupakan penghambat  enzim  lipase  yang  baik  untuk mencegah terjadinya obesitas, perlemakan di sel hati, dan kondisi hipertrigliserida.

## KESIMPULAN DAN SARAN
Berdasarkan  hasil  analisis  data  dan pembahasan  yang  telah  dilakukan  maka disimpulkan bahwa:
1. Tidak terdapat perbedaan signifikan nilai ekspresi  gen  IL-6  pada  kelompok penelitian
2. Terdapat Ekspresi gen Interleukin 6 lebih rendah  pada  kelompok  yang  diberi  diet tinggi lemak + ekstrak daun pirdot 200mg dan  100  mg  dibandingkan  dengan kelompok  yang  hanya  diberi  diet  tinggi lemak
Proses penuaan sel merupakan proses kronis, dimana  semakin  lama  hewan  coba  terpapar dengan  diet  tinggi  lemak,  maka  penuaan  sel akan  semakin  memburuk.  Sehingga  adapun saran yang diberikan sebaiknya penelitian ini dilanjutkan dengan menambah waktu paparan diet  tinggi  lemak  pada  hewan  coba  untuk mendapatkan data yang lebih signifikan.

## DAFTAR PUSTAKA
Badan Penelitian dan Pengembangan
Kesehatan.  2019.  Laporan  Nasional Riskesdas  2018.  Lembaga  Penerbit Balitbangkes. Hal 580
Demaria M and Velarde M C. 2019. Bulletin Du  Cancer;  Senescence  and  Cellular Immortality. Elseiver .  97(11):1275-
1283 Gurning dan Simanjuntak. 2020. Karakterisasi  dan  Skrining  Fitokimia
Daun Pirdot ( Saurauia Vulcani Korth .).
Stikes Senior Medan. 5(2):98-105
Kumari  R  and  Jat  P.  2021.  Mechanisms  of Cellular Senescence: Cell Cycle Arrest and  Senescence  Associated  Secretory Phenotype.  Frontiers  in  Cell  and
Developmental Biology. 9:645593
Musa  et  al.  2019.  Anti-Cholesterol Triterpenoid  Acids  from  Saurauia Vulcani Korth. International Journal of
Food Properties . 22:1, 1439-14444
Ningsih et  al. 2021.  Uji  Anti Hiperkolesterolemia  Daun  Pirdot (Saurauia  Vulcani  K.)  Pada  Mencit (Mus  Musculus  L.)  Jantan  Yang Diberi  Diet  Kuning  Telur  Puyuh. Repositori Institusi USU
Pini et  al., 2021.  Adipose  Tissue Senescence Is Mediated by Increased  ATP  Content  After  a Short-Term High-Fat Diet Exposure.
Aging Cell . 20(8): e13421 Silalahi  E  K,  Tamrin,  Marpaung  L,  and Siburian  R.  2021.  Preliminary Activity  Test  of  Pirdot  (Saurauia Vulcani  Korth.)  Leaves  Collected from  Aek  Nauli  Forest,  North Sumatera Indonesia. AIP

## Conference Proceedings
Sinaga  dan  Erlintan.  2020.  Analisis Imunostimulan Ekstrak Etanol Daun Pirdot  (Saurauia  vulcani  Korth.) pada  Tikus  (Rattus  Norvegicus  L.). Repositori  Institusi-  Universitas Sumatera Utara
Sitorus  P,  Rosidah  and  Satria  D.  2018. Hypoglycemic Activity of Ethanolic Extract  of  Saurauia  Vulcani  Korth. Leaves. Asian Journal of Pharmaceutical and Clinical Research. 11(13):35
Smith  U, Li Q, Ryden M, Spalding K L.
2021.  Review  Article  Cellular Senescence  and  Its  Role  in  White
Adipose
Tissue. International Journal of Obesity. 45(5):934-943
Tam  B  T,  Morais  J  A,  Santosa  S.  2019. Etiology and Pathophysiology
Obesity  and  Ageing;  Two  Sides  of The  Same  Coin. Obesity  Reviews . Issue 4. 21(4):e12991