## ABSTRAK

## ABSTRACT
Daun kersen dan daun sirsak merupakan tanaman serta dapat digunakan menjadi obat. Daun kersen memiliki kandungan alkaloid, flavonoid, saponin dan steroid. Daun sirsak memiliki kandungan alkaloid, flavonoid, saponin, dan tanin.  Senyawa-senyawa  tersebut  memiliki  kemampuan  sebagai  antioksidan  untuk  menghambat  radikal  bebas. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antioksidan kombinasi ekstrak daun kersen dan ekstrak daun sirsak dan dibandingkan dengan bentuk tunggal keduanya dalam menangkal radikal bebas.
Penelitian dilakukan sejak bulan Februari   sampai Juli 2018 di B2P2TOOT Tawangmangu dan Laboratorium Kimia STIKES Nasional. Jenis penelitian ini adalah eksperimental dengan teknik quota sampling.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa kombinasi daun kersen dan daun sirsak 2:1 memiliki nilai IC  sebesar 6,9126 50 ppm dan dikategorikan sangat kuat. Nilai IC  bentuk tunggal daun kersen sebesar 15,9999 ppm dan dikategorikan 50 sangat kuat. Bentuk tunggal daun sirsak sebesar 116,5376 ppm dan dikategorikan sedang. Kombinasi daun kersen dan daun sirsak 1:1 sebesar 28,1075 ppm termasuk dalam kategori sangat kuat. Kombinasi daun kersen dan daun sirsak 1:2 sebesar 28,4886 dan dikategorikan sangat kuat.
Aktivitas antioksidan kombinasi ekstrak daun kersen dan daun sirsak sangat kuat dibandingkan bentuk tunggal keduanya. Kombinasi ekstrak daun kersen dan ekstrak daun sirsak 2:1 memiliki aktivitas antioksidan yang sangat kuat.
Uji Aktivitas Antioksidan Kombinasi Ekstrak Daun Kersen ( Muntingia calabura Linn.) dan Daun Sirsak ( Anonna muricata Linn.) Metode DPPH (2,2-diphenyl-1- picrilhidrazyl)
Antioxidant Activity Test Combination of Kersen Leaf Extract (Muntingia calabura Linn.) and Soursop Leaf (Anonna muricata Linn.) DPPH (2,2-diphenyl-1-picrilhidrazyl) Method
Tri Harningsih* dan Wimpy
Program Studi Analis Kesehatan Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Nasional, Surakarta. * Corresponding author : tri.harningsih@gmail.com
Kersen and Soursop are plants which can be used as medicine. Kersen leaf have  alkaloids, flavonoid, saponins and steroid. Soursop leaf have alkaloids, flavonoid, saponins, and tanin. The compounds can be used as an antioxidant for free radical inhibitor. The aim of this study is to find out combination the antioxidant activity between kersen leaf extract and soursop leaf extract and  compared to the singular in counteracting free radical DPPH.
The research was done during February to July 2018 at B2P2TOOT Tawangmangu and Chemical Laboratory of STIKES Nasional. The type of this research was experimental with quota sampling technique.
The result of this research showed that combination of kersen and soursop leaf extract at 2:1 had IC  value of 50 6,9126 ppm and was categorized as strong antioxidant. The value of IC  singular of kersen leaf  was 15,9999 ppm and 50
was  categorized  as  very  strong.  Singular  of  soursop  leaf  was  116,5376  ppm  and  was  categorized  as  medium. Combination of kersen and soursop leaf extract at 1:1 had IC  value of 28,1075 ppm, included in very strong category 50 and combination of kersen leaf and soursop leaf at 1:2 had IC  value of 28,4886 ppm included in very strong category.
50
Antioxidant  combination  of    kersen  leaf  and  soursop  leaf  extract  activity  was  stronger  than  the  singular. Combination of kersen leaf and soursop leaf extract of 2:1 had the strongest antioxidant activity.
Kata kunci : antioksidan, daun kersen, daun sirsak, quota sampling, DPPH.
Keywords : antioxidant, kersen leaf, soursop leaf, quota sampling, DPPH.

## PENDAHULUAN
Kemajuan teknologi dapat memicu terben- tuknya masyarakat modern, namun penggunaan berbagai teknologi tersebut dapat mengakibat- kan timbulnya efek samping berupa pencemar-
an  yang  dapat  menimbulkan  berbagai  macam gangguan  kesehatan.  Sumber  pencemar  dapat berasal  dari  asap  kendaraan  bermotor,  asap rokok dan kebakaran hutan (Romansyah, 2011.) Pencemaran  yang  terjadi  disertai  pola  makan
Available online at http://ejurnal.setiabudi.ac.id/ojs/index.php/biomedika

## BIOMEDIKA
yang  tidak  tepat  dapat  memicu  terbentuknya radikal  bebas  didalam  tubuh.  Radikal  bebas adalah molekul yang mempunyai satu atau lebih elektron bebas yang tidak berpasangan, sehing- ga mudah menarik elektron dari molekul lain- nya  sehingga  radikal  bebas  tersebut  menjadi lebih reaktif (Sumiyani, 2007).
Radikal bebas akan  merusak sel dan jaring- an di dalam tubuh, sehingga menimbulkan ber- bagai penyakit degeneratif, antara lain kanker, penuaan dini, dan kardiovaskuler. Radikal be- bas dapat dicegah dengan adanya senyawa anti- oksidan. Antioksidan merupakan senyawa yang dapat meredam kerja radikal bebas dan meng- ubahnya  menjadi  senyawa  non  radikal.  Anti- oksidan mampu menetralkan radikal bebas atau bahan  yang  dapat  mencegah  sistem  biologi tubuh  dari  efek  yang  merugikan  yang  timbul dari proses atau pun reaksi yang menyebabkan oksidasi  yang  berlebihan.  Kersen  merupakan salah  satu  tumbuhan  yang  berpotensi  sebagai antioksidan (Kuntorini dkk., 2013). Hasil pene- litian  uji  fitokimia  pada  daun  kersen  terdapat adanya  flavonoid,  triterpenoid,  alkaloid, saponin  dan  steroid  (Arum  dkk.,  2012). Penelitian  sebelumnya  daun  kersen  memiliki aktivitas antioksidan dengan   nilai IC sebesar 50 18,214  ppm  (Kuntorini  dkk.,  2013).  Senyawa bioaktif dan antioksidan seperti alkaloid, tanin, flavonoid,  dan  saponin  banyak  terdapat  pada daun sirsak. Senyawa-senyawa tersebut memi- liki  kemampuan  sitotoksik  yang  dapat menghambat  dan  mereduksi  radikal  bebas (Handayani dkk, 2013).
Penelitian sebelumnya daun sirsak memiliki aktivitas  antioksidan  dengan  nilai  IC sebesar 50 22,25 ppm (Tambunan   dkk., 2012 ). Tanaman kersen  dan  sirsak  merupakan  tanaman  yang dapat  berbuah  dan  sering  dikonsumsi  oleh masyarakat.  Selain  buahnya  yang  bermanfaat, daun  dari  tanaman  kersen  dan  sirsak  dapat dimanfaatkan  sebagai  antioksidan  yang  dapat menangkal radikal bebas. Kombinasi beberapa antioksidan  dapat  memberikan  aktivitas  anti-
oksidan lebih besar daripada bentuk tunggalnya, seperti kombinasi ekstrak  sarang semut dan teh hitam  bentuk  kombinasi  menunjukkan  hasil yang  lebih  baik  daripada  bentuk  tunggal keduanya (Utomo, 2012).
Berdasarkan  uraian  tersebut  maka  peneliti tertarik  untuk  melakukan  penelitian  dengan judul  “Uji  Aktivitas  Antioksidan  Kombinasi Ekstrak Daun Kersen  ( Muntingia calabura L.) dan Daun Sirsak ( Anonna muricata L.) Metode DPPH.  Tujuan  dari  penelitian  adalah  untuk mengetahui  perbedaan  aktivitas  antioksidan kombinasi ekstrak daun kersen dan ekstrak daun sirsak  bila  dibandingkan  dengan  aktivitas antioksidan pada bentuk tunggalnya serta untuk mengetahui  kombinasi  yang  memberikan aktivitas antioksidan terbaik bila dibandingkan dengan bentuk tunggal keduanya.

## METODOLOGI PENELITIAN Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  pada  penelitian  ini yaitu Spektrofotometer UV-Visibel (AE LAB- S80-1S), neraca elektrik Acis, pipet tetes, kertas saring, rotary evaporator , alat-alat gelas berupa labu ukur Iwaky Pyrex , gelas ukur Iwaky Pyrex , gelas beker Iwaky Pyrex , pipet ukur, kaca arloji, corong, tabung reaksi, erlenmeyer Iwaky Pyrex , batang  pengaduk,  oven,  botol  vial,  cawan penguap, spatula, bejana maserasi, vortex . Etanol 96 % , serbuk Mg, HCl pekat, amyl alcohol ,  butanol,  CHCl ,    NaOH,  H SO ,
3
2 4
pereaksi  wagner,  mayer,  dragendorf,  FeCl 3
5%,H SO ,  ether,  asam  asetat  anhidrat,
2 4 alumunium foil, larutan induk vitamin C, serbuk DPPH.

## Pengumpulan bahan
Daun kersen harus segar, pengambilan daun kersen  pada  daun  yang  tua  lalu  dibersihkan. Daun segar dikeringkan dengan menggunakan oven pada  suhu  40  ˚C  (kuntorini  dkk.,  2013). Daun  sirsak  harus  segar  pengambilan  daun sirsak urutan ke-5 dari pucuk dalam satu ranting.
Daun segar dikeringkan dengan menggunakan oven pada suhu 40 ˚C (Zuhud, 2011)

## Prosedur pembuatan ekstrak
Sebanyak  250    gram  sampel  yang  sudah dike-ringkan  dan  dihaluskan  ditambah  dengan 2500  mL  etanol  96  %  perbandingan  1:10. Larutan  tersebut  di-  maserasi  dengan  cara dimasukkan  dalam  bejana  maserasi,  tutup  dan dibiarkan selama 5 hari terlin-dung dari cahaya sambil diaduk dan disaring dengan kertas saring sehingga didapatkan maserat. Maserat diuapkan pada  suhu  40  ºC  sampai  didapatkan  ekstrak kental selanjutnya ditimbang untuk mengetahui bobot sampel yang diperoleh.

## Pemeriksaan fitokimia
1)  Alkaloid
Ada 3 uji untuk mengetahui adanya senyawa alkaloid  dalam  sampel  :  sampel  ditambah dengan  15  tetes  H SO   2N,  kemudian  bagi 2 4 menjadi 3 tabung, tabung pertama tambahkan 5 tetes  reagen  dragendrof  (hasil  positif membentuk  endapan  merah  sampai  jingga), tabung kedua tambahkan 5 tetes reagen mayer (hasil  positif  membentuk  endapan  putih  ke- kuningan),  tabung  ketiga  tambahkan  5  tetes reagen  wagner  (hasil  positif  membentuk endapan coklat).
2)  Flavonoid
Sampel  ditambahkan  ±  0,1  mg  serbuk  Mg dan ± 0,4 mL amyl alkohol dan 4 mL alkohol kemudian  dikocok.  Adanya  warna  merah, kuning atau jingga pada lapisan   amil alkohol menunjukkan adanya se- nyawa flavonoid. 3)   Tanin
Sampel  ditambahkan  FeCl   5  %.  Jika 3 terbentuk  warna  hitam  kehjauan  atau  hitam kebiruan  maka  terdapat  sampel  me-  gandung tanin.
4)  Steroid
Sampel  dilarutkan  dalam  2  mL  kloroform dalam  tabung  reaksi  yang  kering.  Kemudian ditambahkan 10 tetes asetat anhidrat dan 3 tetes
asam  sulfat  pekat.  Terbentuknya  larutan berwarna  merah  untuk  pertama  kali  kemudian berubah  menjadi  biru  dan  hijau  menunjukkan reaksi positif.
5)  Saponin
Saponin  dapat  dideteksi  dengan  uji  busa dalamair panas. Adanya busa yang stabil dalam 30 menit dan tidak hilang pada penambahan 1 tetes  HCl  2N  menunjukkan  adanya  saponin.

## Pembuatan larutan induk DPPH
Ditimbang sebanyak 10,0 mg serbuk DPPH dilarutkan dalam 100 mL etanol 96 % sehingga didapatkan larutan DPPH konsentrasi 100 ppm. Larutan  disimpan  pada  suhu  rendah  dan terlindung  dari  sinar  matahari  untuk  segera digunakan (Sumiyani, 2007).

## Pembuatan larutan kerja DPPH
Pembuatan larutan DPPH 40 ppm dilakukan dengan  cara  memipet  larutan  DPPH  100  ppm sebanyak  40,0  mL  kemudian  ditambahkan etanol  96  %  dalam  labu  ukur  100,0  mL (Sumiyani, 2007).

## Skrining panjang gelombang maksimal
Larutan  DPPH  40  ppm  sebanyak  3,0  mL ditambah  dengan  larutan  blanko  etanol sebanyak 1,5 mL. kemudian baca absorbansinya pada  panjang  gelombang  (λ)  400  –  700  nm. Setelah  itu  buat  kurva  absorbansi  dimana panjang  gelombang  dengan  absorban  tertinggi adalah  panjang  gelombang  maksimum. Selanjutnya semua pengukuran dilakukan pada panjang  gelombang  maksimum  tersebut (Sumiyani, 2007).

## Operating time
Operating  time  dilakukan  dengan  cara  1,5 mL  larutan  kontrol  ditambah  3,0  mL  larutan DPPH 40 ppm. Larutan uji tersebut diukur pada menit  ke-44  pada  panjang  gelombang maksimum  yang  diperoleh  dari  skrining  pan- jang  gelombang  maksimal  sampai  diperoleh
Pengukuran  aktivitas  antioksidan  pada ekstrak daun sirsak
Ditimbang  ekstrak  daun  sirsak  sebanyak 20,0 mg dilarutkan dengan 100,0 mL etanol 96 %,  hingga  diperoleh  konsentrasi  100  ppm, kemudian  lakukan  pengenceran  sehingga diperoleh larutan sampel dengan konsentrasi (5, 10,  15,  20,  25,  30  ppm).  Penentuan  aktivitas antioksidaan setiap konsentrasi dipipet 1,5 mL larutan sampel kemudian ditambah-kan 3,0 mL larutan  DPPH  40  ppm,  campuran  campuran tersebut diinkubasi pada suhu ruang. Kemudian campuran dimasukkan dalam kuvet, dan diukur absorbansinya.
Pengukuran aktivitas antioksidan kombinasi ekstrak daun kersen dan ekstrak daun sirsak dengan perbandingan (1:1) (2:1) dan (1:2).
Pembuatan  konsentrasi  dari  perbandingan (1:1)  (1:2)  dan  (2:1)  diperoleh  dari  pemipetan dari konsen-trasi 200 ppm ekstrak daun kersen dan  konsentrasi  200  ppm  dari  ekstrak  daun sirsak (Tabel 1).
Tabel 1. Perbandingan volume untuk masing-masing kombinasi
Kombinasi Daun kersen Daun sirsak Vol Konsentrasi 1:1 12,5 ml 12,5 ml 50 ml 100 ppm 1:2 8,3 ml 16,7 ml 50 ml 100 ppm 2:1 16,7 ml 8,3 ml 50 ml 100 ppm

## Pembuatan dan pengukuran larutan kontrol
Dipipet  1,5  mL  etanol  96  %,  ditambahkan 3,0 mL larutan DPPH 40 ppm, campuran dima- sukkan  dalam    kuvet,  diukur  absorbansinya pada panjang gelombang maksimum.

## Pengukuran aktivitas antioksidan vitamin C
Ditimbang  10,0  mg  vitamin  C  larutkan dengan 100,0 mL etanol 96 %, hingga diperoleh konsentrasi  100  ppm.  Kemudian  lakukan pengenceran dari 100 ppm sampai didapatkan konsentrasi  2,  3,  4,  5  dan  6  ppm.  Pengukuran aktivitas antioksidan setiap konsentrasi dipipet 1,5 mL ditambah 3,0 mL larutan DPPH 40 ppm. Campuran  dikocok  kemudian  diinkubasi  pada suhu  ruang.  Kemudian  campuran  dimasukkan dalam kuvet dan diukur absorbansinya.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Maserasi merupakan metode pengekstrakan simplisia dengan menggunakan pelarut dengan beberapa kali atau pengadukan pada suhu kamar (Depkes RI, 2000). Pengadukan bertujuan un- tuk menjaga adanya derajat perbedaan konsen- trasi yang sekecil-kecilnya antara di dalam dan di  luar  sel.  Melalui  upaya  ini,  dapa  dijamin keseimbangan bahan ekstraktif di dalam cairan yang  lebih  cepat.  Keadaan  diam  selama
Kemudian  dilakukan  pengenceran  pada masing-masing  perbandingan  sehingga diperoleh larutan sampel dengan konsentrasi (2, 4,  6,  8,  10,  12  ppm).  Penentuan  aktivitas antioksidan masing-masing konsentrasi dipipet 1,5 mL larutan sampel kemudian ditambahkan 3,0  mL  larutan  DPPH  40  ppm.  Campuran tersebut diinkubasi pada suhu ruang. Kemudian campuran dimasukkan dalam kuvet, dan diukur absorbansinya.
absorbansi yang stabil.
Pengukuran  aktivitas  antioksidan  pada ekstrak daun kersen
Ditimbang  ekstrak  daun  kersen  sebanyak 20,0  mg  dilarutkan  dengan  100,0  mL  etanol, hingga  diperoleh  konsentrasi  200 ppm, kemudian  dilakukan  pengenceran  sehingga diperoleh larutan sampel dengan konsentrasi (2, 4,  6,  8,  10,  12  ppm).  Dari  masing  –  masing konsentrasi  dipipet  1,5  mL  larutan  sampel kemudian  ditambahkan  3,0  mL  larutan  DPPH 40  ppm,  campuran  tersebut  diinkubasi  pada suhu  ruang.  Kemudian  campuran  dimasukkan dalam kuvet, dan diukur absorbansinya.
maserasi, menyebabkan   turunnya perpindahan bahan  aktif.  Berikut  ini  data  berupa  hasil rendemen ekstrak daun kersen dan daun sirsak dari hasil percobaan yang dilakukan.
Uji  fitokimia  dilakukan  untuk  mengetahui senyawa-senyawa  yang  terkandung  di  dalam sampel  yang  diujikan.  Hasil  uji  kualitatif fitokimia seperti yang disajikan di Tabel 3.
Prosentase inhibisi vitamin C yang diguna- kan  sebagai  control  dalam  penelitian  ini menunjukkan hasil regresi linier sebesar 0,9923 (Gambar 1).
Berdasarkan Gambar 1 diperoleh persama- an  regresi  linier  y  =  4,4297x  +  21,691,maka dapat  diketahui  nilai  IC   sebesar  6,9126 50 sehingga dikategorikan sangat kuat.
Tabel 2. Rendemen ekstrak daun kersen dan daun sirsak
Bahan Berat simplisia Berat ekstrak % rendemen Daun kersen 250 gram 60,00 gram 24% Daun sirsak 250 gram 40,00 gram 16% Tabel 3. Hasil uji kualitatif fitokimia No Uji Daun kersen Daun sirsak 1. Alkaloid: Dragendorf Mayer Wagner positif positif positif positif positif positif 2. Flavonoid positif positif 3. Saponin positif positif 4. 5. Tanin Steroid positif positif positif negatif
Gambar 1. Grafik %inhibisi vit C
Gambar 2. Grafik IC  bentuk tunggal daun kersen dan daun sirsak serta kombinasinya.
Hasil penentuan aktivitas antioksidan yang paling  kuat  dalam  meredam  dampak  radikal bebas yaitu bentuk kombinasi daun kersen dan sirsak  dengan  perbandingan  2:1  karena memiliki nilai IC  kecil sehingga dikategorikan 50 sangat kuat sedangkan yang paling lemah dalam meredam  dampak  radikal  bebas  yaitu  bentuk tunggal daun sirsak karena memiliki nilai IC 50 paling  besar.  Semakin  kecil  nilai  IC   maka 50 semakin kuat dalam meredam dampak radikal bebas sedangkan semakin besar nilai IC  maka 50 semakin lemah dalam meredam dampak radikal bebas.
Seiring bertambahnya konsentrasi   ekstrak maka  absorbansi  sampel  akan  menurun  dan nilai  tingkat  inhibisi  akan  naik.  Absorbansi sampel  akan  menurun  di-  karenakan  elektron pada  DPPH  menjadi  berpasangan  dengan elektron  sampel  yang  mengakibatkan  warna larutan  dari  ungu  berubah  menjadi  kuning pucat. Nilai tingkat inhibisi meningkat seiring meningkatnya  konsentrasi  sampel  yang menghambat radikal bebas DPPH.

## KESIMPULAN
Aktivitas  antioksidan  kombinasi  ekstrak daun kersen ( Muntingia calabura L.) dan daun sirsak ( Anonna muricata L. ) lebih kuat diban- dingkan bentuk tunggal keduanya dengan kom- binasi sangat kuat diperoleh dari perbandingan 2:1 dengan nilai IC  sebesar 6,9126 ppm. 50

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  kepada  Direktorat  Riset  dan Pengabdian  Masyarakat  yang  telah  mendanai pelaksanaan  hibah  penelitian  dosen  pemula tahun 2018 ini.
Arum, YP., Supartono., Sudarmin. 2012. Isolasi Dan Uji Daya Antimikroba  Ekstrak  Daun  Kersen  (Muntingia  calabura L). Jurnal. Jurusan Kimia FMIPA UNNES . Semarang Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia.  Direktorat Pengawasan Obat Tradisional. 2000. Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Depkes RI. Jakarta Handayani, H., Heppy, F., Yuniata. 2016. Ekstraksi Antioksidan Daun  Sirsak  Metode  Ultrasonic  Bath  (Kajian  Rasio Bahan: Pelarut dan Lama Ekstraksi). Jurnal . Universitas Brawijaya. Malang
Kuntorini, Evi Mintowati., Fitriana, Setya., Astuti, Maria Dewi. 2013. Struktur  Anatomi  Dan  Uji  Aktivitas  Antioksidan Ekstrak  Metanol  Daun  Kersen  (Muntingia  Calabura) . FMIPA Universitas Lambung Mangkurat. Lampung Romansyah,  Y.  2011.  Kandungan  Senyawa  Bioaktif Antioksidan  Karang  Lunak Sarcophyton sp.  Alami  dan Transplantasi  si  Perairan  Pulau  Pramuka  Kepulauan Seribu, Skripsi ,  Departemen  Ilmu  dan  Teknologi Kelauatan  Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan  IPB.
Bogor
Sumiyani  dan  Azminah.  2007.  Perbandingan  Aktivitas Peredaman  Radikal  Bebas  1,1  Diphenyl  –  2-  Picryl Hidrazyil  (DPPH)  Dari  Ekstrak  Etanol  Wortel  Lokal, Wortel  Import,  Suplemen Antioksidan  Merck  “TS”  Dan Merck  “SCV”. Jurnal .  Fakultas  Farmasi  Universitas Surabaya. Surabaya
Tambunan, Risma Marisi., Desmiaty, Yati., K.K, Kunthi Wida. 2012. Uji  Pendahuluan  Aktivitas  Sitotoksik  Dan Antioksidan  Ekstrak  Etanol  Daun  Sirsak  (Annona muricataa  Linn)  dan  Batang  Brotowali  (Tinospora crispa). Universitas Pancasila. Jakarta Utomo, A.B., A. Suprijono, dan A. Risdianto. 2012. Uji Aktivitas Antioksidan  Kombinasi  Ekstrak  Sarang  Semut (Myrmecodia  pendans)  &  Ekstrak  Teh  Hitam  (Camellia sinensis)  dengan  Metode  DPPH  (1,1-difenil-2- pikrilhidrazil. Sekolah  Tinggi  Ilmu  Farmasi  Yayasan Pharmasi. Semarang
Zuhud. 2011. Kanker Lenyap Berkat Sirsak. Jakarta. PT Argo Media Pustaka

## DAFTAR PUSTAKA