UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ALGA COKLAT Sargassum polycystum DAN Turbinaria deccurens ASAL PULAU DUTUNGAN  SULAWESI

## SELATAN TERHADAP RADIKAL DPPH
Fitriyanti Jumaetri Sami *1,2 , Nunuk Hariani Soekamto 1 , Firdaus 1 , Jalifah Latip 3
1 Jurusan Kimia Universitas Hasanuddin Makassar
2 Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Makassar
3 School of Chemical Sciences and Food Technology, The National University of Malaysia
* email: fitriyantijumaetri_sami@yahoo.com
Received 27 Desember 2018
Accepted 28 Juni 2019

## Abstrak
Penelitian ini bertujuan untuk menyelidiki aktivitas antioksidan dari  ekstrak metanol,  etil asetat,  dan  n-heksana  dari  alga  coklat  spesies Sargassum  polycystum dan Turbinaria decurrens. Ekstraksi  sampel  dengan  metode  maserasi,  uji  aktivitas  antioksidan menggunakan  metode  perendaman  DPPH  (1,1-Diphenyl-2-picryl  Hidrazil)  diukur penyerapan pada panjang gelombang 515 nm dan dibandingkan dengan kontrol antioksidan vitamin C. Hasil penelitian menunjukkan bahwa aktivitas antioksidan dari ekstrak metanol, etil  asetat,  n-heksana  dari S.  polycystum memiliki  aktivitas  antioksidan  kategori  rendah dengan nilai IC 50 340,06, 180,54, dan 502,25 mg/mL. Ekstrak metanol, etil asetat, n-heksana dari T. deccurens memiliki aktivitas antioksidan kategori rendah dengan nilai IC 50 491,02, 411,80, dan 502,7 mg/mL. Potensi ini lebih rendah dari nilai IC 50 vitamin C sebesar 1,72 mg/mL.
Katakunci : Antioksidan, S. polycystum, T. deccurens, Pulau Dutungan

## Abstract
The research was aimed to investigate antioxidant activites of methanol, ethyl acetate, and n-hexane extract of brown algae Sargassum polycystum and Turbinaria decurrens spesies. Extraction of samples by maceration method, antioxidant activity assay using the immersion method of DPPH (1,1-Diphenyl-2-picryl Hidrazil) measured absorption at a wavelength of 515 nm and compared with the control of antioxidant vitamin C. The results showed that antioxidant activity of the methanol, ethyl acetate, n-hexane extract of S. polycystum have low category antioxidant activity with the value IC 50 340,06, 180,54, and 502,25 mg/mL. Methanol, ethyl acetate, n-hexane extracts of T. deccurens have low category antioxidant activity  with  value  IC 50 491,02,  411,80,  and  502,7  mg/mL.  This  potential  is  lower  than vitamin C IC 50 value of 1,72 mg/mL.
Keywords: Antioxidant, S. polycystum, T. deccurens, Dutungan Island

## Pendahuluan
Indonesia  memiliki  keanekaragaman hayati  laut  yang  cukup  besar,  pantai Indonesia  mempunyai  potensi  alga  yang cukup tinggi (Bengen, 2001).
Phaeophyceaea merupakan kelompok alga
coklat  yang  banyak  tersebar  di  wilayah Indonesia.  Menurut  Permana  (2008), pemanfaatan  alga  coklat  dalam  bidang industri diantaranya untuk industri makanan,  minuman,  kosmetik,  kertas,
detergen,  cat,  tekstil,  dan  obat-obatan. Turbinaria  deccurens dan Sargassum polycystum merupakan  jenis  alga  coklat yang belum dimanfaatkan maupun dibudidayakan.  Oleh  karena  itu  perlu dilakukan penelitian mengenai kandungan senyawa  bioaktif  terutama  yang  dapat dijadikan sebagai obat.
Phaeophyceae  menunjukkan  aktivitas antioksidan
tertinggi di antara Rhodophyceae dan
Chlorophyceae
(Yangthong et  al .,  2009;  Kelman et  al .,
2012).  Phaeophyceae    di    daerah    tropis memproduksi    metabolit    sekunder    lebih baik sebagai suatu sistem proteksi terhadap radiasi  sinar  UV  (Ultra  Violet).  Senyawa fenol  dan  turunannya  diduga  menjadi komponen  utama  senyawa  antioksidan yang dihasilkan oleh Phaeophyceae (Budhiyanti et al., 2012). Proses ekstraksi dapat  menggunakan  tiga  jenis  pelarut dengan  tingkat  kepolaran  yang  berbeda, yaitu  n-heksana  (nonpolar),  etil  asetat (semipolar),  dan  etanol/metanol  (polar). Perbedaan jenis pelarut ini akan mempengaruhi karakteristik  dari  senyawa bioaktif    yang    terdapat    pada S. polycystum dan T.  deccurens yang dimungkinkan  memiliki  aktivitas  sebagai antioksidan.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menguji aktivitas antioksidan dan skrining
fitokimia pada ekstrak S.  polycystum dan T.  deccurens .  Selanjutnya,  data  hasil aktivitas antioksidan dan skrining fitokimia  dari S.    polycystum dan T. deccurens tersebut    dapat    memberikan informasi  dalam rangka pemanfaatan  alga coklat.
Metode Penelitian Alat dan bahan Alat-alat yang digunakan dalam penelitian  ini  antara  lain  seperangkat  alat gelas laboratorium, neraca analitik, rotary evaporator ,  dan  spektrofotometer  UV VIS.
Sampel yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  alga  coklat S. polycystum dan T.  deccurens yang diperoleh dari pulau Dutungan Kabupaten
Barru  Sulawesi  Selatan.  Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini yaitu metanol, etil asetat, n-Heksan, DPPH, HCl 2%,  H 2 SO 4 pekat,  asam  asetat  anhidrida, FeCl 3 1%,  pereaksi  Meyer,  Dragendorff, Wagner, dan serbuk logam Mg.

## Preparasi Sampel
Alga  coklat S.    polycystum dan T. deccurens dibersihkan  dari  kotoran  yang menempel  dengan  air  laut,  kemudian dicuci  dengan  air  mengalir.  Sampel selanjutnya dikeringkan pada oven simplisia  pada  suhu  38 0 C  selama  48  jam, dan  dihaluskan  menggunakan  blender hingga menjadi serbuk.

## Ekstraksi
Ekstraksi dilakukan dengan cara maserasi  bertingkat  menggunakan  n- heksan,  etil  asetat,  dan  methanol.  Serbuk alga S.    polycystum dan T.  Deccurens dimaserasi dengan  pelarut n-heksan selama  3  x  24  jam,  kemudian  disaring. Residu dimaserasi kembali selama 24 jam dan  disaring,  lalu  filtrat  dipekatkan menggunakan rotary evaporator sehingga diperoleh ekstrak n-heksan. Residu diekstrak  kembali  berturut-turut  dengan etil  asetat  dan  metanol  dengan  cara  yang sama.

## Uji Aktivitas Antioksidan
a. Pembuatan Larutan DPPH (Molyneux, 2004)
DPPH ditimbang sebanyak 0,01577 g, dilarutkan  dengan  etanol,  dicukupkan volumenya dengan metanol p.a hingga 100 mL dalam labu ukur.
b. Pengukuran  serapan  larutan  blanko DPPH
Larutan  DPPH  dipipet  sebanyak  1  mL dan  dicukupkan  volumenya  sampai  5  mL dengan  metanol  p.a  dalam  labu  ukur. Larutan ini kemudian diukur absorbansinya  dengan  Spektrofotometer
UV-Vis pada panjang gelombang 515 nm.
c. Pengukuran aktivitas pengikatan DPPH
Ekstrak  metanol  dan  etil  asetat  dibuat konsentrasi  100,  200,  300,  400,  500 µg/mL,  dan  ekstrak  n-Heksan  200,  400, 600,  800,  1000  µg/mL.  Masing-  masing konsentrasi  ekstrak  dipipet  sebanyak  1 mL,  ditambahkan  1  mL  larutan  pereaksi DPPH,  dicukupkan  sampai  5  mL  dengan metanol  p.a  pada  labu  ukur.  Campuran dihomogenkan  dan  dibiarkan  30  menit, diukur  dengan  spektrofotometer  UV-Vis pada  panjang  gelombang  515  nm. Besarnya  aktivitas  antioksidan  dihitung dengan rumus:
%Inhibisi = 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝐵𝑙𝑎𝑛𝑘𝑜 −   𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑆𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝐵𝑙𝑎𝑛𝑘𝑜 × 100%

## Uji fitokimia (Harborne, 1987)
a. Uji fenolik
Sebanyak 2 mL sampel ditambahkan 10 tetes 𝐅𝐞𝐂𝐥 𝟑 1%.  Hasil  positif  ditandai dengan warna biru sampai biru kehitaman.
b. Uji flavonoid
Sebanyak  2  mL  sampel  ditambahkan dengan 2 mL air panas, didihkan selama 5 menit, kemudian  disaring. Filtrat sebanyak  5  mL  ditambahkan  0,05  mg serbuk Mg dan 1 mL HCl pekat, kemudian dikocok  kuat-kuat.  Hasil  positif  ditandai dengan warna merah, kuning atau jingga.
c. Uji terpenoid/steroid
Sebanyak 2 mL masing-masing ekstrak ditambahkan 1 mL kloroform, ditambahkan 0,5 mL asam asetat anhidrat, ditambahkan  2  ml 𝐇 𝟐 𝐒𝐎 𝟒 .  Hasil  positif ditandai dengan terbentuknya cincin ungu pada perbatasan dua pelarut menunjukkan adanya triterpenoid, sedangkan jika terbentuk warna hijau kebiruan menunjukkan  adanya  steroid. Sedangkan jika berwarna merah menandakan terpenoid.
d. Uji alkaloid
Ekstrak  dimasukkan  dalam  tabung reaksi,  ditambah  0,5  mL  HCl  2%  dan larutan dibagi dalam dua tabung. Tabung I ditambahkan 2-3 tetes reagen Dragendorff, tabung  II  ditambahkan  2-3  tetes  reagen Mayer.  Jika  tabung  I  terbentuk  endapan jingga  dan  pada  tabung  II  terbentuk
endapan kekuning-kuningan, menunjukkan adanya alkaloid.
e. Uji saponin
Ekstrak  dimasukkan  dalam  tabung reaksi  ditambah  air  (1:1)  sambil  dikocok selama 1 menit, apabila menimbulkan busa ditambahkan HCl 1 N, busa yang terbentuk dapat  bertahan  selama  10  menit  dengan ketinggian  1-3  cm,  maka  ekstrak  positif mengandung saponin.

## Hasil dan Pembahasan
Aktivitas antioksidan Dalam penelitian ini aktivitas antioksidan
ditentukan dengan menggunakan  metode  DPPH.  Metode  uji aktivitas  antioksidan  dengan  DPPH  (2,2- difenil-1-pikrilhidrazil) dipilih karena metode  ini  adalah  metode  sederhana, mudah, cepat dan peka (Molyneux, 2004). Aktivitas  peredaman  radikal  bebas  dapat dinyatakan  dengan  nilai  IC 50 (Inhibitory concentration) , yaitu besarnya konsentrasi senyawa uji yang mengakibatkan hilangnya  50%  aktivitas  radikal  bebas. Semakin  kecil  nilai  IC 50 maka  semakin tinggi aktivitas antioksidannya. Nilai IC 50
dapat ditentukan secara grafis menggunakan  kurva  kalibrasi  dengan memplotkan konsentrasi ekstrak dengan % inhibisi  (Komala  dkk.,  2005).  Nilai  IC 50 untuk  ekstrak  dan  pembanding  vitamin  C dapat dilihat pada Tabel 1.
Pada pengujian ini digunakan vitamin C sebagai  kontrol  pembanding,  vitamin  C memiliki  gugus  hidroksi  bebas  yang bertindak sebagai penangkap radikal bebas dan  gugus  polihidroksi  yang  dapat meningkatkan  aktivitas  antioksidan  (Kim et  al .,  2005).  Berdasarkan  perhitungan diperoleh nilai IC 50 vitamin C sebesar 1,72 µg/mL,  aktivitas  antioksidan  vitamin  C tergolong kategori sangat kuat dibandingkan  dengan  sampel  yang  ada. Aktivitas antioksidan ekstrak S. polycystum lebih  tinggi  dibandingkan ekstrak T.  deccurens ,  dan  ekstrak  etil asetat memiliki nilai IC 50 yang lebih tinggi dibandingkan ekstrak yang lain. Molyneux,  (2004)  menyatakan  bahwa,
nilai  IC 50 <  50  µg/mL  daya  antioksidan sangat  kuat,  IC 50 50-100  µg/mL  daya antioksidan  kuat,  IC 50 101-150  µg/mL daya  antioksidan  sedang  dan  IC 50 >150 µg/mL lemah.
Tabel  1. Nilai  IC 50 ekstrak  metanol,  etil asetat, n-heksan dari Turbinaria deccurens dan Sargassum  polycystum ,  serta  kontrol vitamin C Ekstrak Nilai IC 50 (µg/mL) Daya Antioksidan T. deccurens Metanol 340,06 Lemah Etil asetat 180,54 Lemah n-Heksan 502,25 Lemah S. polycystum Metanol 491,02 Lemah Etil asetat 411,80 Lemah n-Heksan 502,70 Lemah Kontrol Vitamin C 1,72 Sangat Kuat Aktivitas antioksidan ekstrak berhubungan dengan kandungan metabolit sekunder  yang  terkandung  di  dalamnya.
Salah satu senyawa yang bertindak sebagai antioksidan yaitu flavonoid, yang merupakan  kelompok  fenolik  terbesar yang  secara  luas  terdapat  pada  tanaman. Berdasarkan  Molyneux  (2004),  aktivitas antioksidan  yang  dihasilkan  tergolong lemah,  beberapa  faktor  yang  dapat menyebabkan  berkurangnnya  aktivitas antioksidan yaitu flavonoid yang ada pada ekstrak  kemungkinan  masih  merupakan flavonoid terglikosida, glikosida diketahui dapat  menurunkan  aktivitas  antioksidan. Ekstrak  juga  dapat  memberikan  aktivitas yang  lemah  karena  masih  belum  murni yang  terdiri  dari  berbagai  komponen senyawa  (Sami,  2016).  Faktor  lain  yaitu lebih  dominannya  metabolit  sekunder steroid  dan  terpenoid  pada  alga  coklat T. deccerens  dan  S.  polycystum juga mempengaruhi  hasil  pengukuran  dalam menghambat radikal DPPH.

## Skrining Fitokimia
Uji fitokimia dilakukan untuk mengetahui kandungan metabolit sekunder suatu  sampel.  Hasil  kandungan  senyawa metabolit  sekunder pada ekstrak metanol, etil asetat, dan n-heksana dari T. deccurens dan S. polycystum ditunjukkan pada Tabel
2.
Semua  ekstrak  mengandung  golongan senyawa terpenoid dan steroid. Ekstrak S. polycystum tidak  mengandung  flavonoid dan  saponin,  sedangkan T.  decurrens positif mengandung flavonoid pada ekstrak  metanol  dan  etil  asetat,  serta saponin pada ekstrak metanol. Mekanisme antioksidan dalam meredam radikal DPPH dengan cara mendonorkan atom hidrogen. Sampel yang memiliki aktivitas antioksidan akan mereduksi DPPH menjadi DPPH-H (Molyneux, 2004).
Aktvitas  antioksidan  kedua  sampel tergolong  lemah.  Hal  ini  terjadi  karena senyawa-senyawa golongan terpenoid dan steroid  tidak  dapat  mendonorkan  atom hidrogen  untuk  meredam  radikal  DPPH. Sedangkan beberapa ekstrak yang mengandung  golongan  flavonoid  tidak cukup banyak sehingga aktivitas antioksidannya lemah.
Tabel 2. Hasil skrining fitokimia T.deccurens dan S. polycystum
Ekstrak Sampel Alkaloid  Flavonoid  Fenol  Saponin  Terpenoid  Steroid T. deccurens Metanol - + - + +++ ++ Etil asetat - - + - ++ +++ n-Heksan - + - - +++ ++ S. polycystum Metanol - - + - + +++ Etil asetat - - ++ - + +++ n-Heksan - - - - + +++
Keterangan:
+++   : kandungan senyawa lebih banyak (warna sangat pekat)
++ : mengandung senyawa (warna cukup pekat)
+ : mengandung senyawa (sedikit berwarna) - : tidak mengandung senyawa

## Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang dilakukan,  dapat  disimpulkan  bahwa kandungan  fitokimia  ekstrak  metanol T. deccurens yaitu flavonoid, saponin, terpenoid  dan  steroid.  Ekstrak  etil  asetat mengandung  senyawa  fenolik,  terpenoid dan  steroid,  sedangkan  ekstrak  n-heksan mengandung senyawa flavonoid, terpenoid dan steroid. Kandungan fitokimia  yang  terdapat  pada  ekstrak metanol S.  polycystum yaitu  fenolik, terpenoid,  steroid.  Ekstrak  etil  asetat
mengandung fenolik, terpenoid dan steroid,  sedangkan  ekstrak  n-heksan mengandung  terpenoid  dan  steroid. S. polycystum memiliki aktivitas antioksidan yang  lemah  untuk  ekstrak  metanol,  etil asetat,  dan  n-heksan  dengan  nilai  IC 50 340,06, 180,54, dan 502,25 µg/mL dan T. deccurens memiliki  aktivitas  antioksidan yang  lemah  dengan  nilai  IC 50 ekstrak metanol, etil asetat, dan n-heksan berturut- turut  491,02, 411,80, dan 502,7 µg/mL.

## Daftar Pustaka
Bengen,  D. G., 2001,  Sinopsis  Ekosistem dan  Sumber  Daya  Alam  Pesisir  dan Laut.  Pusat  Kajian  Sumber  Daya Pesisir  dan  Lautan,  Pusat  Kajian Sumber Daya Pesisir dan Lautan, IPB,
Bogor.
Budhiyanti,  S.  A.,  Raharjo,  S.,  Marseno, D.  W.,  and  Lelana,  I.  Y.  B.,  2012, Antioxidant Activity of Brown Algae Sargassum  Species  Extract  from  The Coastline  of  Java  Island, American
Journal of Agricultural and Biological Sciences, 7 (3), 337–346.
Harborne.  J.B,  1987,  Metode  Fitokimia: Penuntun  Cara  Modern  Menganalisis
Tumbuhan (Diterjemahkan oleh
Kokasih  Padmawinta  dan  Iwang Soediro), Penerbit ITB, Bandung.
Kelman, D., Posner, E. K., McDermid, K. J.,  Tabandera,  N.  K.,  Wright,  P.  R., and Wright, A. D., 2012,  Antioxidant Activity  of  Hawaiian  Marine  Algae,
Marine Drugs, 10, 403 – 416.
Kim,  J.  S.,  2005,  Radical  Scavenging Capacity and Antioxidant Activity of the E  vitamer Fraction  in  Rice  Bran,
Journal of Food Science, 70, 208 – 213
.
Komala,  I.,  Azrifitria,  Y.,  Betha,  O.  S., Muliati,  F.,  Ni’mah,  M.,  2015, Antioxidant  and  Anti-inflammatory Activity  of  The  Indonesian  Ferns Nephrolepis  falcata and Pyrrosia lanceolata , International  Journal  of
Pharmacy and Pharmaceutical
Sciences, Vol  7, 12.
Molyneux, P., 2004, The Use of The Stable
Free  Radical  Diphenylpicryl-hydrazil (DPPH)  for  Estimating  Antioxidant Activity. Songklanakarin  J.  Science Technology, 26 (2), 211 – 219.
Permana,  R.  A.,  2008,  Karakteristik Serbuk  Minuman  Sari  Buah  Jeruk Lemon (Citrus  medica var  lemon) dengan  Penambahan  Na-alginat  yang
Diekstraksi dari Rumput Laut
Sargassum filipendula , Skripsi , Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, IPB , Bogor. Sami,  F.  J.,  Rahimah,  S.,  2016,  Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Metanol  Bunga  Brokoli (Brassica Oleracea  L.  Var.  Italica) dengan Metode  Dpph  (2,2  Diphenyl-1- picrylhydrazyl) dan Metode Abts (2,2
Azinobis (3-etilbenzotiazolin)-6-asam Sulfonat), Jurnal Fitofarmaka Indonesia, 2 (2). Yangthong,  M.,      N.,      Hutadilok- Towatana, W., Phromkunthong,
2009, Antioxidant  Activities  of  Four Edible  Seaweeds  from  The  Southern Coast  of  Thailand, Plant  Foods Human Nutrition, 64, 218 – 223.