## Biokimia : Lingkungan

## PENANGANAN LIMBAH FENOL DENGAN PEROKSIDASE HASIL ISOLASI DARI
LOBAK (HORSERADISH)
Damin Sumardjo" dan Wuryanti 2>
Laboraiorium Kimia, Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro - Semarang
2> Laboratoriimi Biokimia. Jurusan Kimia FMIPA Universitas Doponegoro-Semarang

## ABSTRAK
Dalam air limbah industri, banyak dijumpai komponen fenol yang besifat racun Karena itu pada penelitian ini dicoba untuk menghilangkan koinponen fenol dengan cara proses enzimatik F.nzim yang digunakan adalali jieroksidase yang berasal dari jenis tumbuhan yaitn lobak (Horseradish). Ix>bak seberat 0,5 kg dihomogenkan daiain blender dengan 100 ml. K2HPO1 0.1 M, disaring, ditambahkan (N1 I():SOi sccara bertingkat (0-5%, 5-20%, 20-40%, 40-65% ) daiain supematan, kemudian dipisahkan. F.ndapan yang didapat ditainbah buffer Tris-lICl 0,05 M pH 7 dan didialisis dengan inenggunakan membran selopan selama 12 jam dengan buffer yang sama Basil ekstrak kasar dan fraksinasi dengan kejenuhan yang berbeda terhadap (NILÿSCb diaplikasikan pada sampel limbah. Setela'h dilakukan uji pendahuluan, 0,5 ml. air limbah ditambah 0,3 ml, H2O2 0,1 M dan 3 mL enzim ekstrak kasar dan liasil dialisis. Setelah dianalisa, kadar fenol dalam limbah dapat ditunmkan dari 1,068 ppm menjadi 0,689 (35,53%), 0,436 (59,13%), 0,641 (39,96%), 0,736 (31,09%), dan 0,783 ppm (26,66%) masing-masing untuk ekstrak kasar, dan hasil dialisis 0-5%, 5-20%, 20-40%, 40-65%. Dari hasil eksperimen di atas dapat disimpulkan bahwa semakin besar kandungan enzim semakin besar pula penunman kadar fenol dalam air limbah.
Enzim
yang
digunakan
adalah
pcroksidase. PEND AHULL) AN
Dalam air limbah industri, banyak dijumpai komponen fcnol vang bcrsifat racun. Karena itu pada penclitian ini, dicoba untuk mcnghilangkan komponen fenol dengan cara proses enzimatik.
Peroksidasc banyak terdapat pada tumbuhan. hewan. dan mikroba. Pada tumbuhan salah satunya adalah bcrasal dari lobak (Horseradish). Pcroksidasc mcrupakan kalalis yang spesiftk untuk
mcluruh secara spontan. Peroksidase dapat juga menginduksi perangkaian oksidatif dari fcnol dcngan adanja
hidrogen peroksida(2>.
Sccara umum reaksinya adalah, mcngoksidasi
fcnol
dengan mcnambahkan hidrogen peroksida.
Penelitian ini bertujuan untuk menentukan berapa besar peneumnan kadar fenol dalam air limbah sctelah perlakuan dengan peroksidase.
Pcroksidasc HOOH + 2 SH -> 2HzO+2S Dalam industri
MIGAS senyawa
fenol ini terbawa kepermukaan yang kemudian akan berada dalam air limbah
Dalam reaksi rantai, H202 akan bereaksi cepat dengan fenol dan 4- aminoantipirin (donor eleklron) dengan adanya
peroksidase, dan akan menghasilkan quinoneimine dimana intensitas warna maksimum dengan 510 mn. Reaksinya
setelah mengalami proses pemisahan dari minyak bumi. Keberadaan fenol dalam air limbah sering bersumber dari pemakaian bahan kimia tertentu, terutama pada proses pemurnian minyak mentah (refining petroleum). Minyak mentah terdiri dari berbagai macam zat anorganik yang sangat kolor schingga
absorbansi pada adalah,
H202 + fenol + 4-aminoantipirin akan mcrugikan operasi pada unit
itu perlu peroksidase quinoiieiniine + H20 pengolahan. Oleh sebab dihilangkan alau kadamya diturunkan sebeluin rnasuk ke proses dcstilasi dengan proses desalting" akan peroksida sc
dipengaruhi oleh jumlah quinoneimine yang terbentuk. Tcrdapat hubungan linier antara kuantitas peroksidase
dalam
Jumlah
Peroksidase menggunakan hidrogen peroksida sebagai oksidator. Peroksidasc membentuk kompleks dengan hidrogen peroksida yang kemudian pecah menjadi dua radikal hidroksi. Kemudian terjadi pcngambilan dua hidrogen dari substrat oleh
radikal
hidroksi. Karcna pcngambilan dua atom hidrogen tersebut secara berturutan. maka akan tcijadi radikal intermediet yang kemudian dapat
larutan dengan intensutas warna yang terbentuk, dimana intersitas wama dapat diukur dengan spektrofotometer.'31

## EKSPERIMEN
(a) Limbah fcnol yang digunakan sebagai sampcl diperoleh dari Pcrtamina Cilacap.
Diambil 100 tnL sampel kemudian
ditambali NaOH 0,1 M sanipai pH 12.5. Sctclah itu dickslraksi 2 kali dcngan 15 mL CClÿ. Fasa air yang diperoleh ditanibah HC1 0,1 M sampai pH 4.5, kemudian dickstraksi lagi 3 kali dcngan 10 mL CHG3. Fasa organik yang diperoleh ditambah 1,5 mL NH.,C1 10%. ditanibah NLLOH 40% sampai pH 10. dilambah 0.3 mL K3Fc(CN)6 8%. dan ditambah 0.3 mL 4-AAP 2% kemudian digojog selarna 10 menit. Kemudian diukur absorbansinya
pada panjang gclombang 505 speklrofotonicter UV7VIS. (b) Lobak
segar seberat 0.5 kg dihomogenkan dcngan 100 mL K2HP04 0.1 M kemudian diblcnder. dan disaring. Supcrnatan yang diperoleh ditambah (NH4)2S04 sccara bertingkat (0-5%. 5-
20%. 20-40%. 40-65%), kemudian dipisahkan dengan sentrifugc 3400 rpm. Endapan yang didapat ditambah buffer Tris-HCl 0.05 M pH 7 dan didialisis dcngan buffer yang sama. Ekslrak kasar dan hasil dialisis untuk kejenuhan yang berbeda diaplikasikan pada limbah. Uji
menit
pada Absoibansi dibaca
gelombang 650 nm. <5) (d) Perlakuan sampcl oleh enzim : 0,4 mL air limbah ditambah 0,3 mL H202 dan 3 mL larutan enzim, dikocok selama
10 menit,
kemudian absorbansi diukur pada
panjang gelombang 505 nm. lemperatur
kamar.
pada panjang

## IlASEL DAN PEMBAIIASAN
Enzim dari Ekstrak kasar (Ek) dan hasil dialisis 0-5% (FI). 5-20% (F2). 20-40%
(F3). 40-65% (F4) masing-niasing mempunvai aktivitas (dalam u/iiiL) adalah 1.725; 4.810; 1,865; 1,229; dan
1.106. Masing-niasing enzim kasar dan liasil dialisis dapat menurunkan kadar fenol dalam air limbah dari 1.068 ppm menjadi 0.689 (35.53%). 0.436 (59,13%),
0.641 (39.69%). 0.736 (31.09%). dan
0.783 ppm (26.66%). Dari hasil ini tampak balnva
peningkatan aktivitas
enzim sebanding dengan bertambahnya penurunan kadar
fenol.
Dengan
demikian, penurunan kadar fenol dalam
air linibah akan semakin besar dengan semakin besarnva aktivitas enzim Hasil ini juga berarti bahwa peroksidase dapat menurunkan kadar fenol dengan cukup batk.
dengan nm
aktivitas menggunakan rumus u mL = (A.B)/(a.b.t.v). Hl (c) Uji protein digunakan metode Lowry . Scbanyak 0,6 mL sampcl y ang mengandung protein * dilambah 3 mL Lowry C, keniudian didiamkan selama 20 mcnit pada temperatur kamar. Setelah itu ditambah 0,3 mL folin. didiamkan sclama 45
KESIMPULAN DAN SARAN REFERENSI : 1) E. Suhardono. K. Mudjirahardjo, S.
(1995),
Dari hasil dan pembahasan yang iclah
dikemukanan di atas dapat diambil
kesimpulan sebagai berikut : Sockapradjo Senyawa Fenolik Dalam Air Limbah
MIGAS Dengan Kromatografi Gas", Lcmbaran Publikasi PPT MIGAS No.
"Analisis
1. Pcroksidasc
dapat mcnunmkan kadar fenol dalam air limbah. 10/111/08/1995, halaman 16-28. 2) Aida Soeleman. "Penghilangan atau Pcnurunan Kadar Fcnol Dalam Air Limbah Dengan
Menggunakan Enzim Peroksidase",
Bulctin Pcnclitian. Vol. Xvii, No.4. Deprind. halaman 1-7.
3) Paolo Monitto. (1980). "Biosintesis Produk Alami”. Elis Harwood . Publishers John Willey and Sons,
New York, halaman 90-101.
4) P. Tijsscn. (1985), "Practice and Theory7 of Enzyme Immunoassay”, Vol. 15, Elsevier Science Publisher, Tokyo, pp. 175-180.
5) Robert. K. Scopes, (1987). ‘"Protein Purification Principles and Practice”. 2nd ed., Springer-Vcrlag. Berlin, pp. 302-306.
(1995).
2. Besamya penurunan kadar fenol sebanding dengan aktivitas enzim.
Dan dari hasil penelitian ini dapat disarankan :
1. Melakukan penelitian lebih lanjut dengan kemumian en/.im yang le'bih
linggi
2. Melakukan penelitian dengan sumber enzim yang berbeda.
Ucapan Terimakasih. Ucapan tcrima- kasih kepada saudara Yohan Hidayat yang lelah dengan tekun membantu memperoleh data penelitian ini.