Normality of The Mice's Fetal Spine during Fennel Flower Extract ( Nigella sativa ) Feeding
Nur Anita Suciyati * , Nuning Nurcahyani, Sutyarso, Emantis Rosa
Jurusan Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Lampung Jl. Prof. Soemantri Brodjonegoro, No 1, Bandar Lampung 35145
*Email: anitasuciyati@gmail.com

## ABSTRACT
Black  cumin (Nigella  sativa )  is  an  annual  flowering  herbal  plant  that  is  widely  planted  in India,  Egypt,  and  the  Middle  East.  Black  cumin  essential  oil  contains  p- cymene,  α-pinene, dithymoquine, thymohydroquinone, and thymoquinone (more than 50%). This study aims to determine  the  effect  of  black  cumin  extract  on  the  structure  of  the  spine,  length,  and  fetal weight of the mouse. The study was conducted in December 2019 to February 2020 at the Zoology  and  Botany  Laboratory  of  the  Faculty  of  Mathematics  and  Natural  Sciences, Universitas Lampung. This study uses a Completely Randomized Design (CRD) consisting of  4  groups,  each  group  with  5  repetitions  (K1,  P1,  P2,  P3).  Black  cumin  extract  is  given orally  as  much  as  0.3  ml/day  on  the  6th  to  17th  day  of  pregnancy.  The  control  group  K1 (Aquabides),  P1  was  given  black  cumin  extract  (2.1  mg/30  g),  P2  (8.4  mg/30  g),  and  P3 (33.6  mg/30  g).  Data  on  the  structure  of  the  spine  were  observed  descriptively  while  the length and weight of the fetus of mice were analyzed using ANOVA (Analysis of Variance) with a significance level of α = 5%. The results obtained on the structure of the spine from each treatment did not cause abnormalities in the structure of the mice's fetal spine. Black cumin  contains  calcium,  magnesium,  potassium,  sodium,  and  iron  which  are  useful  in  the process  of  bone  growth  and  development.  Besides,  the  results  of  fetal  length  and  weight data based on the ANOVA test one factor level α = 5% statistically did not show a decrease in the length and weight of the fetus of mice.
Keywords: Mice ( Mus musculus L.), black cumin ( Nigella sativa ), spinal anatomical structure, fetal length, fetal weight.

## PENDAHULUAN
Saat  ini,  tanaman  obat  masih  menjadi sebagai  salah  satu  alternatif  dalam pengobatan  masyarakat  Indonesia.  Obat tradisional sangat diminati dan berkembang dengan baik sebagai alternatif  yang  lebih  aman,  memberikan efek  samping  yang  lebih  rendah  dan memberikan  hasil  yang  optimal  apabila dikonsumsi  dengan  tujuan  pengobatan (Agusta, 2001).
Jintan hitam atau Nigella sativa merupakan  salah  satu  tanaman  yang tumbuh subur di wilayah tropis. Nama lain jintan  hitam  adalah Habbatussauda yang berasal  dari  bahasa  arab,  dari  kata habbah yang  berarti  biji  atau sauda yang berarti  hitam,  jika  diterjemahkan  dalam bahasa Indonesia menjadi biji jintan hitam
dan dalam bahasa inggris Blackseed atau Blackcumin. Tanaman  ini  termasuk  famili Ranunculaceae, yang merupakan tanaman berbiji. Jintan hitam juga tergolong  tanaman  gulma  yang  tumbuh semusim dengan tinggi 20-50 cm. Penyebaran  tanaman  ini  meliputi  wilayah Mediterania Timur hingga ke wilayah India dan  Asia  Tenggara  termasuk  Indonesia. Jintan  hitam  telah  lama  dimanfaatkan sebagai  tanaman  obat  khususnya  pada bagian  biji.  Selain  telah  lama  digunakan sebagai obat tradisional, tanaman ini juga banyak digunakan sebagai bumbu masakan  di  daerah  Timur  Tengah  (Gilani dan Anwarul Hasan,  2004). Penelitian
Attaurrahman
(1995)
menyebutkan bahwa pada biji jintan hitam telah  diketahui  mengandung  beberapa senyawa  alkaloid  seperti  Nigelidin.  Selain
itu  dari  penelitian  sebelumnya  juga  telah diketahui pada biji jintan hitam terkandung beberapa alkaloid lain dari seperti nigelisimin,  nigelisin,  nigelisimin  Oksida, minyak  atsiri  yang  mengandung  nigellon dan  lainnya  (Rastogi,  dan  Mehrotra. 1993).
Pada  minyak  atsiri  jintan  hitam diketahui mengandung dithymoquinone, thymohydroquinone,  nigellone,  carvacrol, d-limonene,  dcitronellol,  methoxypropyl benzenediol dan thymol yang  memiliki aktivitas farmakologi, diantaranya sebagai penghilang sakit (analgesik), antipembengkakan (antiinflamasi), antialergi
(antihistamin), mampu menghambat  proliferasi  (produksi)  sel kanker,  antiangiogenesis  (menghentikan pembentukan  pembuluh  darah  bagi  sel kanker),  antioksidan  dan  antidiabetes mellitus dll (Junaedi et al. , 2011).
Berbagai  bahan  kimia  yang  terkandung dalam  jintan  hitam  ( Nigella  sativa )  salah satunya  yaitu  senyawa thymoquinone yang diketahui dapat menyebabkan relaksasi otot polos pada uterus sehingga dapat mengakibatkan peningkatan pendarahan haid dan dapat menyebabkan abortus spontan pada kehamilan (Wijayanti et al. , 2011).
Dalam  upaya  pemanfaatan  tanaman sebagai bahan obat maka perlu dilakukan uji  keamanan  nya  termasuk  juga  untuk ekstrak  jintan  hitam.  Uji  keamanan merupakan  suatu  uji  dengan  memberikan faktor  atau  zat  tertentu  untuk  melihat  ada tidaknya  kelainan  pada  fetus  hewan  uji akibat  pemberian  zat  tersebut.    Pada penelitian  ini  digunakan  ekstrak  jintan hitam yang diberikan kepada mencit yang sedang hamil selama periode organogenesis  yaitu  pada  kehamilan  hari ke-6  sampai  ke-17.    Uji  teratogenik tersebut  diharapkan  dapat  menjadi  dasar bagi  penggunaan  jintan  hitam  sebagai bahan  baku  obat-obatan  agar  dapat
diaplikasikan  pada  manusia  sehingga tidak menimbulkan akibat yang berbahaya (Almahdy, 2011).

## BAHAN DAN METODE

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini meliputi  :  Mikropipet,  mikroskop  steril, timbangan analitik, seperangkat alat bedah, sonde lambung, rotary evaporator, jarum suntik, kertas
label dsb.dilaksanakan  pada  bulan  Desember 2019 –  Februari  2020  di  Laboratorium Zoologi dan Botani Jurusan Biologi FMIPA Universitas Lampung
Bahan  yang  digunakan:  20  ekor  mencit dengan  berat  sekitar  30  gram  yang didapatkan  dari  Balai  Veteriner  Lampung, etanol 96%, ekstrak jintan hitam, aquabides,  pur  ayam  ,  gliserin,  larutan Alizarin Red, kloroform,  dan larutan KOH 01%.

## Cara Kerja

## Persiapan kandang dan hewan uji
Kandang mencit beserta penutupnya yang digunakan  yaitu  berukuran  50  x  50  cm dari  bahan  kawat  berukuran  15  x  15  mm sebanyak  20  unit,  dibersilkan  dengan alkohol  dan  diberi  alas  berupa  sekam padi. Mencit dalam kondisi fertil kemudian diaklimatisasi  selama  1  minggu  dengan diberi  pakan  berupa  pur  ayam  dan  air minum setiap harinya.

## Persiapan  dan  Pembuatan  Ekstrak  Jintan Hitam
Pembuatan  ekstrak  jintan  hitam  dengan metode maserasi. Biji jintan hitam dibersihkan,  dicuci,  dan  dijemur  hingga kering  kemudian  dihancurkan  hingga menjadi serbuk. Dilakukan  maserasi dengan cara merendam 500 gram serbuk biji  jintan  hitam  dalam  ±2  liter  larutan etanol  dengan  3  tahapan  yaitu  selama 3x24  jam,  1x  24  jam,  dan  1x24  jam. Kemudian  disaring  menggunakan  kertas saring,  cairan  hasil  saringan  tersebut  lalu dipekatkan  menggunakan  alat rotary evaporator selama  4  jam  dengan  suhu 50ºC  dan  tekanan  120  atm,  setelah  itu  di oven    dengan  suhu  40ºC  hingga
didapatkan  ekstrak  jintan  hitam  yang kental.

## Pemberian Perlakuan
Satu ekor mencit betina disatukan dengan satu  ekor  mencit  jantan  ke  dalam  satu kandang lalu diberi pakan dan air minum. Pemberian  ekstrak  jintan  hitam  pada induk  mencit  dilakukan  dengan  cara dicekok  (secara  oral)  menggunakan  alat sonde  lambung  mulai  dari  kehamilan  hari ke 6 sampai ke 17 (Silvia, 2011).
Pemberian  ekstrak  jintan  hitam  diberikan secara  oral  sebanyak  0,3  ml/hari  pada induk mencit, dengan dosis :
1.  Kontrol,  diperlakukan  dengan  diberi aquabides (K1)
2.  Dosis perlakuan 1= 2,1 mg/30 gBB
3.  Dosis perlakuan 1= 8,4 mg/30 gBB
4.  Dosis perlakuan 1= 33,6 mg/30 gBB

## Pengamatan
Pembedahan  terhadap  mencit  betina dilakukan dengan menggunakan seperangkat alat bedah setelah kehamilan hari  ke-18.    Seluruh  mencit  baik  dari kelompok  kontrol  maupun  perlakuan dibius  menggunakan  kloroform.    Mencit dibedah lalu fetus dikeluarkan dari uterus, Selanjutnya dibersihkan dengan air mengalir. Setelah itu, dilakukan penimbangan berat fetus dan pengukuran panjang  fetus.  Selanjutnya  dilakukan preparasi  tulang  belakang  fetus  dengan pewarna  Alizarin  Red  dengan  cara menambahkan  6  mg  bubuk  Alizarin  Red ke dalam 1 liter larutan KOH 1% (Manson dkk,  1982).  Pengamatan  struktur  tulang belakang  diamati  secara  deskriptif  untuk melihat  ada  atau  tidaknya  kelainan dibandingkan dengan fetus kontrol.

## Analisis data
Data  hasil  penelitian  berupa  anatomi struktur  tulang  belakang  fetus  dianalisis secara  deskriptif.  Sedangkan,  panjang dan  berat  fetus  dianalisis  menggunakan ANOVA  ( Analysis  of  Variance ).  Apabila terdapat  perbedaan  yang  nyata  maka akan  dilanjutkan  dengan  uji  beda  nyata terkecil (BNT) pada taraf 5%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil

## Panjang dan Berat Fetus Mencit
Pada kehamilan hari ke 18, induk mencit dibedah dan fetus di keluarkan dari uterus. Data panjang badan fetus mencit disajikan pada Gambar 1.
Gambar 1. Penurunan panjang badan fetus setelah pemberian ekstrak jintan hitam. Angka yang diikuti huruf superskip tidak menunjukkan beda nyata berdasarkan uji BNT 5%
Berdasarkan  Gambar  1,  dapat  diketahui bahwa  pengaruh  ekstrak  jintan  hitam ( Nigella sativa )    terhadap panjang badan fetus  mencit  secara  statistik  (One  Way ANOVA α=5%) tidak menunjukkan adanya perbedaan yang signifikan (α<0,05),  sehingga  tidak  dilakukan  uji lanjut  BNT  taraf  α=5%.  Semua  kelompok kontrol  dengan kelompok  dosis  perlakuan 1 yaitu 2,1 mg/g BB, perlakuan 2 yaitu 8,4 mg/g BB, dan perlakuan 3 yaitu 33,6 mg/g BB menunjukkan bahwa terjadi penurunan panjang  badan  fetus  mencit.  Penurunan panjang  badan  fetus  mencit  tertinggi terdapat  pada  dosis  perlakuan  3  yaitu 33,6 mg/g BB.
Data  Berat  badan  fetus  mencit  disajikan pada Gambar 2.
Gambar  2.  Penurunan  berat  badan  fetus setelah  pemberian  ekstrak  jintan hitam.  Angka  yang  diikuti  huruf superskip tidak menunjukkan
beda  nyata  berdasarkan  uji  BNT
5%
Berdasarkan Gambar 2,
setelah dilakukan  uji  statistik  (One  Way  ANOVA α=5%)    dapat  diketahui  bahwa  pengaruh ekstrak jintan hitam terhadap berat badan fetus mencit tidak menunjukkan perbedaan  yang  signifikan  (α<0,05). Sehingga  tidak  diperlukan  uji  lanjut  BNT taraf  α=5%.  Semua  kelompok  kontrol dengan kelompok dosis perlakuan 1 yaitu 2,1  mg/g  BB,  perlakuan  2  yaitu  8,4  mg/g BB,  dan  perlakuan  3  yaitu  33,6  mg/g  BB menunjukkan  terjadinya  penurunan  berat badan  fetus  mencit.  Penurunan  berat badan fetus mencit tertinggi terdapat pada dosis perlakuan 3 yaitu 33,6 mg/g BB.

## Tulang Belakang Fetus
Fetus mencit yang sudah dikeluarkan dari uterus  dan  dibersihkan  organ  dalamnya Selanjutnya  dilakukan  preparasi  tulang belakang  fetus  dengan  menggunakan larutan Alizarin Red.
Berdasarkan  Gambar  3,  pengamatan terhadap kelainan struktur tulang belakang  fetus  mencit  dilakukan  dengan cara  mengamati  struktur  tulang  belakang fetus  yang  meliputi  servikalis,  torakalis, dan lumbaris dengan menggunakan pewarnaan  Alizarin  Red.  Pada  penelitian ini tidak ditemukan adanya kelainan tulang belakang  fetus  kontrol  dengan  tulang belakang fetus yang diberi perlakuan.
Gambar 3. Anatomi struktur tulang belakang fetus mencit ( Mus musculus L.) setelah pemberian ekstrak jintan hitam ( Nigella sativa ) pada induknya. K1 : Kontrol; P1 : dosis 2,1 mg; P2 : dosis 8,4 mg; P3 : dosis 33,6 mg
Keseluruhan K1 Kepala K1 Tulang Belakang K1 Keseluruhan P1 Kepala P1 Tulang Belakang P1 Keseluruhan P2 Kepala P2 Tulang Belakang P2 Keseluruhan P3 Kepala P3 Tulang Belakang P3

## Pembahasan
Panjang dan Berat fetus mencit Pengamatan panjang badan fetus merupakan  parameter  yang  sensitif  yang menandakan  adanya  hambatan  pada pertumbuhan  fetus  mencit.    Penurunan panjang  badan  fetus  merupakan  efek teringan  dari  ekspresi  teratogen  dari kandungan  ekstrak  jintan  hitam  ( Nigella sativa ) sehingga mampu menjadi indikator menghambat
pertumbuhan
akibat gangguan  terhadap  proses-preoses  yang mendasari pertubuhan
seperti metabolisme,  sintesis  didalam  sel,  dan pembelahan  sel  (Santoso,  2006).  Pada penelitian  ini  panjang  rata-rata  fetus  tidak memiliki  perbedaan  secara  bermakna setelah  dilakukan  analisa  statistik  (One Way  ANOVA  α=5%).    Namun  demikian, dari  Gambar  1  dapat  terlihat  penurunan panjang  badan  fetus  seiring  dengan kenaikan dosis ekstrak jintan hitam.
Gangguan  pertumbuhan  yang  terjadi diduga  akibat  induksi  zat  aktif  yang terkandung dalam ekstrak jintan hitam, zat tersebut diduga dapat menghambat siklus sel, sebagai anti proliferasi, dan menginduksi  apoptosis  (Shoeib et  al., 2003).
Hal  ini  dimungkinkan  ekstrak  jintan  hitam masuk  ke  dalam  tubuh  fetus  dan menghambat  pembelahan  sel.  Aktivitas penghambatan  ini  terkait  dengan  zat  aktif seperti minyak atsiri, alkaloid dan flavonoid  yang  terkandung  dalam  ekstrak jintan  hitam.  Namun  jika  dilihat  pada penurunan  panjang  badan  fluktuatif  yang didapatkan secara statistik masih menunjukkan  hasil  yang  tidak  signifikan, hal tersebut dimungkinkan karena kandungan  yang  bersifat  negatif  dari ekstrak jintan hitam masih dapat ditoleransi  oleh  tubuh  fetus  baik  karena adanya  kandungan  zat  positif  seperti mineral  dan  nutrisi  maupun  kemampuan fetus untuk melakukan recovery .
Rata-rata  berat  badan  fetus  mencit  di setiap  kelompok  perlakuan    mengalami penurunan  di  setiap  perbedaan  dosis, namun  secara  statistik  tidak  memiliki
perbedaan  yang  nyata.  Penurunan  berat badan  fetus  adalah  efek  dari  pemberian ekstrak jintan hitam pada fase organogenesis  sehingga  menyebabkan kelainan  berupa  berat  badan  yang  tidak normal.  Berat  badan  yang  tidak  normal terjadi  karena  senyawa  teratogen  pada ekstrak  jintan    hitam  mempengaruhi poliferasi  sel,  sehingga  terjadi  hambatan pada  sintesis  asam  nukleat,  protein,  atau polisakarida  (Wilson,  1973  dan  Siburuan dan Marlinza, 2009).
Berbagai senyawa yang terkandung dalam  ekstrak  jintan  hitam  membuat ekstrak jintan hitam memiliki efek sitotoksik.  Pada  saat  fetus,  sel-sel  tubuh mampu membelah dengan cepat sehingga sangat rentan terhadap
senyawa  yang  bersifat  toksik,  dengan adanya  efek  sitotoksik  dari  ekstrak  jintan hitam ini dimungkinkan dapat menyebabkan  berat  badan  fetus  yang diberi perlakuan lebih
rendah dibandingkan  dengan  kontrol.  Hal  itu dapat terjadi karena ekstrak yang diberikan  kepada  induk  mencit  akan berpindah  ke  fetus  melalui  palasenta, yaitu melalui jalan yang sama yang dilalui oleh  zat  gizi  yang  diperlukan  untuk pertumbuhan  dan  perkembangan  fetus (Suryawati, 1990 dan Muna et al., 2011).

## Tulang Belakang Fetus
Pengamatan  anatomi  struktur  tulang belakang dapat diamati secara visual atau deskriptif.  Hasil  pengamatan  penelitian  ini menunjukkan  dari  induk  mencit  tidak adanya  kelainan  ataupun  tidak  adanya pengaruh pada semua janin yang diamati. Hal ini dapat diketahui dengan membandingkan  tulang  belakang  fetus semua kelompok, baik antara fetus kontrol (normal)  dengan  fetus  dari  induk  yang telah  diberikan  perlakuan  ekstrak  jintan hitam ( Nigella sativa ).
Pengamatan  terhadap  tulang  belakang fetus secara visual
dengan membandingkan  tulang  belakang  fetus kontrol dengan fetus yang diberi perlakuan.  Pada  fetus  normal  terdapat  7 tulang  servik,  13  tulang  thorak,  6  tulang
lumbalis,  6  tulang  sakral,  dan  2-3  tulang kaudal (Sukandar et al. , 2008). Kemudian hasil  pengamatan  tersebut  dibandingkan dengan  tulang  pada  fetus  yang  telah diberi  ekstrak  jintan  hitam  ( Nigella  sativa) dengan dosis 2,1 mg/g BB, dosis 8,4 mg/g BB,  dan  dosis  33,6  mg/g  BB.  Dari  hasil perbandingan  tersebut  tidak  ditemukan adanya  perbedaan  antara  fetus  kontrol dengan  fetus  perlakuan  baik  jumlah  ruas tulang belakang maupun strukturnya.
Tidak  terjadinya  kelainan  struktur  tulang belakang  pada  ketiga  kelompok  dosis perlakuan fetus tersebut diduga disebabkan  oleh  fetus  yang  sedang tumbuh mengambil prioritas dari banyaknya jenis nutrisi dalan cairan induk sehingga tulang fetus dapat terus mengalami pertumbuhan dan berkembang. Hal ini berhubungan dengan fungsi plasenta sebagai tempat penyimpanan nutrisis bagi fetus. Plasenta menyimpan banyak nutrisi seperti kalsium, besi, protein, dan glukosa yang digunakan untuk pertumbuhan fetus. Selain plasenta, sebagian  kalsium  juga  disimpan  dalam tubuh seperti pada gigi dan tuang. Apabila kebutuhan  kalsium  fetus  berkurang  maka simpanan  kalsium  pada  tulang  dan  gigi inilah  yang  akan  dimobilisasi  untuk osifikasi tulang pada fetus (Guyton, 1990).

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan  bahwa  pengaruh  pemberian ekstrak  jintan  hitam  ( Nigella  sativa ) terhadap  mencit  hamil  tidak  menghambat pertumbuhan    struktur  tulang  Belakang, panjang dan berat badan fetus mencit

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut terhadap  efek    teratogenik  ekstrak  jintan hitam  dengan  penambahan  dosis  untuk melihat  hubungan  antara  dosis  dengan efek. Selain itu perlu dilakukan pengamatan  lebih  lanjut  pada  organ dalam fetus mencit.

## DAFTAR PUSTAKA
Agusta, A. (2001). Awas Bahaya Tumbuhan Obat. (Internet ). Terdapat pada:
http://www.Indomedia.com/  Diakses pada: 23 september 2019
Almahdy, A. (2011). Uji aktivitas vitamin A terhadap  efek  teratogen  warfarin pada  fetus  mencit  putih .  Medan  : USU Press
Attaurrahman.  (1995).  Nigellidine  A  New
Indazole Alkaloid From The Seed of Nigella sativa.
Tetrahedrom Left: 36(12): 1993-1994 Gilani,  dan  A.  Hasan.  (2004).  A  review  of medicinal
uses and
pharmacological activities of Nigella sativa.  Department  of  Biological and Biochemical Sciences The Aga Khan  University  Medical  College, Karachi, Pakistan. Pakistan Journal of  Biological  sciences 7  (4).  Hal:
441-451. Pakistan
Guyton, A.C. (1990). Fisiologi Kedokteran . Terjemahan  Dharma,  A.,  dan  P.,
Lukmanto. EGC. Jakarta.
Junaedi  E,  S.  Yulianti,  S.  Suty,  ES.
Kuncari. (2011). Kedahsyatan Habbatussauda . Agro Media Pustaka. Jakarta.
Manson,  J.M.,  H.  Zenick,  dan  R.D. Costlow.  (1982). Teratology  Test Method  for  Laboratory  Animals . Ravent Press. New York.
Muna,  L.,  Astirin,  O.P.,  dan  Sugiyarto.
(2011).  Uji  Teratogenik  Ekstrak Panduanusconoideus Varietas Buah Kuning Terhadap Perkembangan  Embrio  Tikus  Putih (Rattus norvegicus). Nusantara
Bioscience . 2. Pp 126-134.
Rastogi,  R.P.,  dan  Mehrotra,  BN.  (1993). Compendium  Of  Indian  Medical Plants New Delhi : CSIR.
Santoso,  H.B.  (2006).  Pengaruh  Kafein Terhadap  Penampilan  Reproduksi
dan  Perkembangan  Skeleton  Fetus Mencit  ( Mus  musculus L.). Jurnal Biologi X:39-48
Setyawati,  I.  (2009).  Morfologi  Fetus Mencit  (Mus  musculus  L.)  Setelah Pemberian Ekstrak Daun Sambiloto (Andrographis  paniculata  Nees). Jurnal Biologi . 13 (2). pp 41-44.
Shoeib,  M.,  N.  Sidhpura,  S.  Shafait. (2003). Investigating The Actions Of
Bupropion On Dependence Related
Effects Of Nicotine In Rats.
Psychopharm ;165:405-12.
Siburuan,  J.,  dan  R.  Marlinza.  (2009).
Efek Pemberian Ekstrak Akar Pasak  Bumi  (Eurcyoma  Longifolia Jack)  pada  Tahap  Prakopulasi Terhadap  Fertilitas  Mencit ( Mus musculus L.)  Betina. Biospecies ,
2:24-30.
Silvia,  G.A.  (2011).  Pengaruh  Pemberian
Suspensi  Akar  Manis  Terhadap Perkecambahan  Janin  pada  Mencit Bunting. Skripsi. FMIPA. Universitas  Indonesia.  Jakarta.  pp 14-15.
Sukandar,  E.Y.,  I.  Fidrianny,  dan  ,  A.N.
Garmana. (2008). Pengaruh Kombinasi  Ekstrak  Umbi  Lapis Bawang Putih Dan Ekstrak Rimpang  Kunyit  Tehadap  Janin Mencit . JKM . 8(1). pp 36-44. Swiss- Webster.
Wilson  dan  Warkany.  (1975). Teratology Principles and Techniques . University of Chicago Press.
Chicago IL.