Journal of Aquaculture and Fish Health Vol. 9(2) - June 2020 DOI : 10.20473/jafh.v9i2.16192

## Analisis Kondisi Kesehatan Ikan Patin Pangasius sp. yang

## Terinfeksi Bakteri Edwardsiella tarda
Health Condition Analysis of Catfish Pangasius sp. Infected by Edwardsiella tarda Bacteria
Qurrota A’yunin 1* , Budianto 1 , Sri Andayani 1 dan Dwi Candra Pratiwi 2
1 Program Studi Budidaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Brawijaya, Jl. Veteran, Ketawanggede, Lowokwaru, Malang 65145, Indonesia
2 Program Studi Ilmu Kelautan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Brawijaya, Jl. Veteran, Ketawanggede, Lowokwaru, Malang 65145, Indonesia

## Abstrak
Penyakit infeksi menjadi satu masalah yang masih sering timbul  pada  budidaya  ikan  patin.  Salah  satu  penyakit  yang sering  timbul  dalam  budidaya  ikan  patin  adalah  penyakit MES ( Motile Edwardsiella Septicemia ) atau yang biasa dikenal dengan Edwardsielliosis .  Penyebab  penyakit  MES  adalah adanya  infeksi  dari  bakteri Edwardsiella  tarda .  Bakteri E. tarda merupakan  bakteri  patogen  yang  memiliki  dampak negatif  bagi  budidaya  ikan  air  tawar.  Tujuan  penelitian  ini adalah untuk mengetahui kondisi kesehatan ikan patin yang terinfeksi  Bakteri E.  tarda. Metode  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  diantaranya  yaitu  isolasi  dan  identifikasi bakteri,  uji  patogenitas,  dan  imunogenitas.  Analisis  darah dilakukan  untuk  mengetahui  kondisi  kesehatan  ikan  yang terinfeksi  bakteri E.  tarda .  Sampel  ikan  patin  diambil  dari pembudidaya  ikan  di  Kabupaten  Sidoarjo.  Hasil  identifikasi isolat  bakteri  dari  ikan  patin  menggunakan  uji  biokimia diperoleh  ikan  positif  terinfeksi  Bakteri Edwardsiella  tarda . Kondisi  kesehatan  ikan  dapat  dilihat  melalui  pemeriksaan darah  meliputi  eritrosit,  leukosit,  diferensial  leukosit (limfosit, monosit, dan neutrofil) dengan hasil 2,480±0.032; 3,460±0.087;  80,38±0.34;  12,85±0.12;  dan  6,77±0.28 secara  berturut-turut  pada  ikan  patin  normal,  sedangkan pada  ikan  patin  yang  terinfeksi  bakteri E.  tarda yaitu 1,695±0,041;  7,795±0,095;  52,15±0.26;  33,61±0.52;  dan 14,24±0.47 secara berturut-turut. Ikan patin yang terinfeksi bakteri Edwardsiella  tarda menunjukkan  kondisi  kesehatan yang  kurang  baik,  yang  ditunjukkan  dari  peningkatan  nilai leukosit,  monosit,  dan  neutrofil  sebagai  bentuk  respons kekebalan tubuh terhadap infeksi bakteri.

## Abstract
Infection  disease  is  a  problem  that  still  often  arises  in catfish culture. One of the diseases that often arise in catfish culture  is  MES  (Motile  Edwardsiella  Septicemia)  or
*Correspondence : qurrota_ayunin@ub.ac.id
Received : 2019-11-20 Accepted : 2020-02-18
Kata Kunci : Budidaya Ikan, Hematologi, Penyakit, Sistem Imun
Keywords : Fish Culture, Haematology, Disease, Immune System.
commonly  known  as  Edwardsielliosis.  The  cause  of  MES disease is an infection from the bacterium Edwardsiella tarda . E.  tarda are  pathogenic  bacteria  that  harm  freshwater  fish farming.  The  purpose  of  this  study  was  to  determine  the health  condition  of  catfish  infected  with  E.  tarda  bacteria. The  methods  used  in  this  study  include  isolation  and identification  of  bacteria,  test  for  pathogenicity,  and immunogenicity. Blood analysis was conducted to determine the  health  condition  of  fish  infected  with E.  tarda bacteria. Catfish  samples  were  taken  from  fish  farmers  in  Sidoarjo District.  The  results of  the identification  of bacterial  isolates from catfish  by biochemical  tests  were  positive  fish  infected with Edwardsiella tarda bacteria. Fish health conditions could be  seen  through  blood  tests  including  erythrocytes, leukocytes, differential leukocytes (lymphocytes,  monocytes, and neutrophils) with the results of 2,480 ± 0.032; 3,460 ± 0.087;  80.38  ±  0.34;  12.85  ±  0.12;  and  6.77  ±  0.28, respectively  in  normal  catfish,  whereas  in  catfish  infected with E.  tarda bacteria  that  was  1.695  ±  0.041;  7.795  ± 0.095;  52.15  ±  0.26;  33.61  ±  0.52;  and  14.24  ±  0.47, respectively.  The  catfish  infected  with  the  bacterium Edwardsiella  tarda exhibit  poor  health,  as  indicated  by  the increased  values  of  leukocytes,  monocytes,  and  neutrophils as  forms  of  the  body's  immune  response  to  bacterial infections. PENDAHULUAN Ikan patin ( Pangasius sp.) merupakan  ikan  konsumsi  air  tawar unggulan  yang  banyak  dibudidayakan. Berbagai upaya dilakukan untuk meningkatkan  produksi  ikan  patin,  salah satunya  dengan  intensifikasi  budidaya.
Namun,  pengelolaan  yang  kurang  tepat pada
sistem budidaya intensif
menyebabkan munculnya penyakit.
Infeksi  penyakit  menjadi  satu masalah  yang  masih  sering  timbul  pada budidaya ikan patin. Salah satu penyakit yang  sering  timbul  dalam  budidaya  ikan patin  adalah  penyakit  MES  ( Motile Edwardsiella  Septicemia )  atau  yang  biasa dikenal dengan edwardsielliosis . Penyebab penyakit MES adalah adanya infeksi dari bakteri Edwardsiella  tarda .  Bakteri E. tarda merupakan  bakteri  patogen  yang memiliki  dampak  negatif  bagi  budidaya ikan  air  tawar.  Infeksi E.  tarda
menimbulkan  penurunan  produktivitas budidaya ikan patin sehingga menyebabkan kerugian bagi pembudidaya  (Oktafa et  al .,  2017). Penularan  infeksi  bakteri E.  tarda terjadi
secara  horizontal  yaitu  melalui  kontak antara  inang  satu  dengan  inang  lainnya atau  melalui  air  sebagai media  budidaya (Tan et al ., 2005).
Analisis  darah  perlu  dilakukan untuk mengetahui kondisi kesehatan ikan yang terinfeksi bakteri E. tarda . Pengujian hematologi  dilakukan  untuk  mengamati ketahanan  tubuh  atau  gambaran  sistem imun  ikan  terhadap  organisme  patogen serta  tingkat  infeksi  suatu  penyakit  pada ikan  (Sugiani et  al .,  2012).  Pemeriksaan darah  pada  ikan  meliputi  leukosit, eritrosit,  hematokrit,  hemoglobin  dan diferensial  leukosit  (neutrofil,  limfosit dan  monosit).  Tujuan  penelitian  ini adalah untuk mengetahui kondisi kesehatan  ikan  patin  yang  terinfeksi Bakteri E.  tarda. Menurut  Nadirah et  al. (2012), ikan yang terjangkit edwardsiellosis akan  memperlihatkan gejala  sebagai  berikut:  terjadi  luka  pada kulit  yang  kemudian  akan  meluas  ke bagian  daging,  sehingga  dengan  segera akan  mengakibatkan  perdarahan.  Luka semacam  ini  sering  dijumpai  pada  hati
ikan.  Jika  tidak  segera  diobati,  luka-luka ini  akan  berkembang  menjadi  bisul  dan mengeluarkan  nanah  (abses).  Pada jaringan  daging,  hati  dan  ginjal  sering terjadi nekrosis.

## METODOLOGI Waktu dan Tempat
Penelitian ini dilakukan pada bulan Oktober  2018  –  April  2019  di Laboratorium  Parasit  dan  Penyakit  Ikan Universitas  Brawijaya  Malang,  dan  Balai Karantina Ikan Kelas I Juanda, Surabaya.

## Materi Penelitian
Alat  yang  digunakan  meliputi inkubator,  oven, autoclave ,  neraca analitik, laminar  flow ,  tabung  reaksi, cawan petri, bunsen , erlemeyer , jarum ose, haemocytometer ,  spuit,  pipet  thoma eritrosit  dan  leukosit, object  glass ,  dan cover  glass .  Sampel  ikan  didapatkan  dari pembudidaya ikan.
Bahan  yang  digunakan  adalah larutan  Turk,  media  TSB  ( Tripticase  Soy Broth ),  TSA  ( Tripticase  Soy  Agar ),  anti Koagulan  (Na-sitrat  3.8%),  giemsa, larutan  hayem,  alkohol,  metanol,  sampel darah  ikan,  ginjal  ikan,  H 2 O 2 ,  oksidase strip,  spiritus, covac  indol ,  KOH  40%, a - Naftol, methyl  Red, parafin,  TSI  ( Triple Sugar  Iron )  agar, Tryptophan  broth ,  SIM medium, Lysin  Iron  Agar ,  MIO,  O/F, Simmons  Citrate  Agar ,  urea,  glukosa, maltosa,  manitol,  sorbitol,  arabinosa, trehalosa,  xilosa, nutrient  agar ,  pereaksi pewarnaan gram, glukosa, sukrosa, kertas oksidase, dan akuades.

## Rancangan Penelitian
Sampel  ikan  patin  berasal  dari pembudidaya ikan di Kabupaten Sidoarjo. Sampel yang digunakan berukuran ± 200 gram.  Sampel  dimasukkan  ke  dalam coolbox yang  berisi  air  dan  dilengkapi aerator  set ,  kemudian  sampel  dibawa  ke laboratorium untuk diamati.

## Prosedur Kerja Persiapan Hewan Uji
Sampel  ikan  patin  didapatkan  dari pembudidaya  ikan  patin  di  Kabupaten Sidoarjo,  Jawa  Timur.  Ikan  patin  yang diambil adalah ikan patin yang sehat dan ikan  patin  yang  menunjukkan  gejala klinis  ikan  sakit  sebanyak  20  ekor. Menurut  Hardi  dan  Handayani  (2015), gejala klinis ikan yang terinfeksi patogen dapat  diamati  dari  perubahan  pola renang,  tingkah  laku  makan,  perubahan anatomi organ luar dan organ dalam.
Inokulasi dan Identifikasi Bakteri E. tarda Bakteri  diinokulasi  dari  organ target  ikan  seperti  ginjal.  Cara  inokulasi bakteri  yaitu  dengan  menggoreskan inoculation needle pada bagian ginjal dan ditanam pada media TSA. Hasil inokulan murni  kemudian  diidentifikasi  secara biokimia.

## Pengambilan Sampel Darah
Sampel darah ikan patin ( Pangasius sp.)  diambil  dengan  menggunakan spuit yang  telah  berisi  Na  Sitrat  3,8%  sebagai anti koagulan. Pengambilan sampel darah dilakukan  pada  bagian linea  lateralis . Ikan  disuntik  dengan  posisi  jarum  45° dan ditarik perlahan sampai darah masuk ke dalam spuit . Sampel darah dimasukkan ke dalam eppendorf.

## Pemeriksaan Hematologi Perhitungan Jumlah Eritrosit
Metode perhitungan jumlah eritrosit  menurut  Samsisko et  al .  (2013) diawali  dengan  pengambilan  darah  di mana  ikan  diletakkan  dengan  kepala  di sebelah  kiri .  Spuit dibilas  dengan  Na- Sitrat 3,8% yang berfungsi anti koagulan. Sampel  darah  diambil  pada  bagian linea lateralis menggunakan spuit 1  ml.  Darah yang telah diambil, dimasukkan ke dalam tabung tube .  Darah  dihisap  dengan  pipet Thoma yang berisi bulir pengaduk warna merah sampai skala 0,5. Lalu ditambahkan  larutan  Hayem  yang berfungsi  untuk  mematikan  (melisiskan)
sel.  Kemudian  dihomogenkan  dengan cara  mengayunkan  tangan  selama  3-5 menit.  Tetesan  pertama  larutan  darah dalam pipet Thoma dibuang, selanjutnya diteteskan  pada haemacytometer tipe Neubauer yang telah ditutup dengan cover glass .  Jumlah  eritrosit  dapat  dihitung dengan  rumus  berikut  (Nabib  dan Pasaribu, 1989):
Eritrosit = A N x L V xFp
Keterangan: A  : Σ sel terhitung V   : Volume kotak haemocytometer N  : Σ kotak haemocytometer yang diamati Fp  : Faktor Pengenceran
Perhitungan Jumlah Leukosit Perhitungan  jumlah  leukosit  diukur sesuai prosedur dari Blaxhall dan Daisley (1973).  Pertama,  darah  sampel  dihisap dengan  pipet  yang  berisi  bulir  pengaduk berwarna  putih  sampai  skala  0,5.  Lalu, tambahkan larutan Turk sampai skala 11, pipet  diayun  membentuk  angka  8  (sama dengan pengadukan untuk penghitungan jumlah  sel  darah  merah)  selama  3-5 menit  sehingga  darah  bercampur  rata. Setelah  itu,  dua  tetes  pertama  larutan darah  dari  dalam  pipet  dibuang, selanjutnya  larutan  diteteskan  pada haemocytometer,  setelah  itu  ditutup dengan  gelas  penutup.  Cairan  akan memenuhi  ruang  hitung  secara  kapiler. Jumlah sel darah putih atau leukosit total dihitung  dengan  bantuan  mikroskop dengan  pembesaran  400x.  Jumlah leukosit  total  dihitung  dengan  cara menghitung  sel  yang  terdapat  dalam  4 kotak  kecil,  dan  jumlahnya  dihitung menurut rumus :
Jumlah leukosit = ΣNx pengencer
volumr Keterangan:
N  : Jumlah leukosit yang terhitung

## Perhitungan Diferensial Leukosit
Perhitungan  diferensial  leukosit yaitu  neutrofil,  limfosit,  dan  monosit dilakukan  dengan  pengamatan  pada preparat  ulas  darah.  Metode  pembuatan
preparat ulas darah adalah sampel darah sebanyak  10  µL  diteteskan  pada  gelas objek.  Gelas  objek  lain  diletakkan  pada gelas  objek  pertama  yang  terdapat sampel darah dengan sudut 45° dari gelas objek  pertama.  Gelas  objek  yang menyentuh  sampel  darah  digeser  secara berlawanan  arah  sehingga  membentuk lapisan  tipis  darah,  setelah  itu  ulasan darah  dikering  udarakan.  Ulasan  darah yang sudah kering difiksasi menggunakan metanol  selama  5  menit,  lalu  dikering udarakan.  Ulasan  darah  selanjutnya diwarnai dengan pewarna Giemsa selama 20  menit.  Preparat  darah  dibilas  dan dicuci dengan akuades atau air mengalir. Jenis leukosit diamati dari 100 jumlah sel terhitung (Klontz, 2009). Jumlah diferensial  leukosit  dapat  dihitung dengan  rumus  berikut  (Hartika et  al ., 2014):
Neutrofil = ΣNeutrofil 100 x100% Limfosit = ΣLimfosit 100 x100% Monosit = ΣMonosit 100 x100%

## Analisis Data
Analisis sampel dilakukan secara in- situ dan ex-situ .  Analisis  secara in-situ dilakukan  di  lokasi  penelitian  di  kolam pembudidaya  ikan  patin,  Kabupaten Sidoarjo,  sedangkan  analisa  sampel secara ex-situ yaitu  sampel  yang  diambil dari  lokasi  penelitian  dianalisis  di Laboratorium  Parasit  dan  Penyakit  Ikan Universitas  Brawijaya  Malang,  dan  Balai Karantina Ikan Kelas I Juanda, Surabaya. Selanjutnya  data  hasil  analisis ex-situ dianalisis secara deskriptif.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Identifikasi Bakteri
Hasil  identifikasi  bakteri  yang dilakukan melalui pengamatan morfologi dan  uji  biokimia  menunjukkan  hasil karakteristik  bakteri  yang  tersaji  pada Tabel 1.
Tabel 1. Karakteristik uji biokimia bakteri
E. tarda . Parameter Kontrol (+) Sampel Gram - - Katalase + + Oksidase - - Uji TSIA K/A K/A Gas - - H 2 S + + Motilitas + + Indol + + Ornithine decarboxylase + + Citrate - - Urea - - Methyl Red + + Voges Proskauer - - Lysine Decarboxylase + + Glukosa + + Maltosa + + Manitol - - Sorbitol - - Arabinose - - Trehalose - - Xilosa - -
Gambar 1.  Morfologi bakteri Edwardsiella tarda.
Gambar 2.   (i) Hasil pengujian TSIA (A) TSIA yang belum diinokulasikan dengan bakteri; (B) K/K, H2S; (C) K/A; (D) A/A. (ii) Hasil uji indole.
Berdasarkan  hasil  uji  biokimia menunjukkan  bahwa  isolat  bakteri  yang berasal  dari  sampel  ikan  merupakan
bakteri Edwardsiella tarda dengan tingkat kecocokan  95%  dengan  referensi  dari Austin et al. (1995).
i ii
Edwardsiella tarda merupakan golongan  bakteri  Gram  negatif  (Gambar 1),  yang  memiliki  bentuk  morfologi bakteri batang pendek, dapat menghasilkan indol dan H 2 S (Gambar 2). Hal  ini  sesuai  dengan  pernyataan Hefdiyah  dan  Sovitri  (2014),  bahwa E. tarda merupakan  bakteri  Gram  negatif yang  memiliki  bentuk  batang,  dapat menghasilkan  indol,  H 2 S,  dan  dapat menghasilkan enzim urease.

## Analisa Hematologi
Hasil  pengamatan  dan  perhitungan jumlah  eritrosit,  leukosit,  limfosit, monosit,  dan  neutrofil  ikan  patin  tersaji pada Gambar 3 dan Tabel 2.
Jumlah  rerata  eritrosit  pada  ikan patin  sakit  (terinfeksi  bakteri E.  tarda ) lebih  rendah  dibandingkan  dengan  ikan yang  normal  (tidak  terinfeksi  bakteri E. tarda ).  Menurut  Grant  (2015),  jumlah eritrosit  pada  ikan  patin  yang  normal berkisar  antara  1,91-2,83 × 10 6 sel/mm 3 .
Analisa  hasil  terkait  jumlah  eritrosit menunjukkan  jumlah  eritrosit  yang rendah,  hal  ini  menandakan  ikan  dalam keadaan  anemia.  Hal  tersebut  sesuai dengan pernyataan Susandi et al . (2017),
bahwa  anemia  pada  ikan  terjadi  karena adanya infeksi penyakit yang menyebabkan  nilai  eritrosit  menurun sehingga suplai makanan ke sel, jaringan dan  organ  akan  berkurang,  dan  proses metabolisme ikan menjadi terhambat.
Gambar 3.  Apusan darah. E= Eritrosit, L=Limfosit, M=Monosit, dan N=Neutrofil.
Tabel 2.   Rerata jumlah eritrosit, leukosit, limfosit, monosit, dan neutrofil ikan patin.
Parameter Ikan patin normal Ikan patin terinfeksi E. tarda Eritrosit (10 6 sel/mm 3 ) 2,480±0.032 1,695±0,041 Leukosit (10 4 sel/mm 3 ) 3,460±0.087 7,795±0,095 Limfosit (%) 80,38±0.34 52,15±0.26 Monosit (%) 12,85±0.12 33,61±0.52 Neutrofil (%) 6,77±0.28 14,24±0.47 Leukosit  atau  sel  darah  putih merupakan  komponen  sel  darah  yang mengandung  inti.  Leukosit  memiliki
peran  penting  dalam  pertahanan  tubuh dari infeksi patogen seperti bakteri. Pada ikan  patin  yang  terinfeksi  bakteri
N E M L
menunjukkan  nilai  rerata  leukosit  lebih tinggi  dibandingkan  ikan  patin  yang normal.  Menurut  Hartika et  al. (2014), jumlah leukosit ikan normal adalah 2-5 ´ 10 4 sel/mm ³ .  Data  hasil  penelitian menunjukkan  tingginya  jumlah  leukosit, hal  ini  merupakan  salah  satu  tanda adanya  infeksi  dan  ikan  berusaha meningkatkan  daya  tahan  tubuhnya.  Hal ini  didukung  pernyataan  Maftuch et  al . (2012),  bahwa  peningkatan  jumlah  sel darah putih terjadi karena ikan berusaha meningkatkan  daya  tahan  tubuhnya  dari infeksi bakteri, sehingga leukosit bergerak  aktif  menuju  tempat  yang terkena infeksi.
Pengamatan  diferensial  leukosit dilakukan  untuk  mengetahui  perbedaan persentase  komponen  sel  leukosit  yang terdiri  dari  limfosit,  monosit  dan neutrofil.  Menurut  Rustikawati  (2012), limfosit berperan dalam sistem kekebalan spesifik  yang  dapat  melindungi  tubuh dari  infeksi  patogen,  monosit  berperan penting  untuk  memfagosit  antigen  yang masuk  ke  dalam  tubuh  dan  memberikan informasi tentang infeksi penyakit kepada leukosit,  sedangkan  neutrofil  merupakan jenis  leukosit  yang  berperan  dalam mekanisme  pertahanan  tubuh  yang bekerja  sebagai  respons  adanya  infeksi dalam tubuh.
Jumlah  limfosit  ikan  patin  normal lebih tinggi dibandingkan dengan jumlah limfosit  ikan  patin  yang  terinfeksi E. tarda .  Hal  ini  sesuai  dengan  pernyataan Preanger et al . (2016), bahwa persentase limfosit ikan patin normal berkisar antara 71,12-82,88%.  Berdasarkan  data  hasil penelitian menunjukkan rendahnya jumlah  limfosit  pada  ikan  patin  yang terinfeksi E.  tarda berhubungan  dengan penurunan  daya  tahan  tubuh  ikan. Menurut  Mahasri et  al .  (2011),
menurunnya  jumlah  limfosit  dapat menurunkan  dosis  antibodi  sehingga menyebabkan meningkatnya infeksi penyakit.  Hal  ini  diperkuat  pendapat Rustikawati  (2012),  bahwa  adanya peningkatan  intensitas  infeksi  oleh patogen tertentu akan memicu kebutuhan
limfosit  dan  mengakibatkan  terjadinya pengurangan sel limfosit.
Jumlah  monosit  pada  ikan  patin yang  terinfeksi E.  tarda lebih  tinggi daripada  pada  ikan  patin  normal. Tingginya  jumlah  monosit  berkaitan dengan  respons  daya  tahan  tubuh  untuk melawan  infeksi  penyakit.  Menurut Lukistyowati et  al .  (2007),  jumlah monosit  ikan  patin  normal  berkisar antara 5-13%.
Ikan  patin  normal  memiliki  jumlah neutrofil lebih rendah dibandingkan ikan patin  yang  terinfeksi E.  tarda .  Tingginya jumlah  neutrofil  pada  ikan  patin  yang terinfeksi E.  tarda mengindikasikan adanya  respons  sistem  kekebalan  tubuh untuk  melawan  infeksi.  Hal  ini  sesuai dengan  pernyataan  Utami et  al .  (2013), bahwa  peningkatan  jumlah  neutrofil merupakan  akibat  dari  mekanisme kekebalan  tubuh  yang  bekerja  sebagai respons  adanya  infeksi  dalam  tubuh. Peningkatan  jumlah  neutrofil  pada  ikan menunjukkan  adanya  aktivitas  sel neutrofil  dalam  menyerang  antigen (patogen)  yang  masuk  ke  dalam  tubuh yang  menunjukkan  terjadinya  proses fagositosis.

## KESIMPULAN
Kondisi kesehatan ikan patin dapat dilihat  melalui  pemeriksaan  darah.  Ikan patin yang terinfeksi bakteri Edwardsiella tarda menunjukkan  kondisi  kesehatan yang  kurang  baik,  yang ditunjukkan  dari peningkatan  nilai  leukosit,  monosit,  dan neutrofil sebagai bentuk respons kekebalan tubuh terhadap infeksi bakteri.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  kami  ucapkan  kepada Universitas Brawijaya dan Balai Karantina Ikan  Kelas  I  Juanda,  Surabaya  atas dukungan  dan  bantuan  yang  diberikan untuk menyelesaikan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Austin,  B.,  Austin,  D.A.  dan  Munn,  C.B., 1995.  Bacterial  fish  pathogens: Disease  in  farmed  and  wild  fish.
Reviews  in  Fish  Biology  and Fisheries , 5 (1),  pp.  123-124. https://doi.org/10.1007/978-1- 4020-6069-4.
Blaxhall,  P.C.  dan  Daisley,  K.W.,  1973. Routine  haematological  methods for  use  with  fish  blood. Journal  of fish  biology , 5 (6),  pp.  771-781. https://doi.org/10.1111/j.1095- 8649.1973.tb04510.x.
Grant,  K.R.,  2015.  Fish  hematology  and associated  disorders. Veterinary Clinics:  Exotic  Animal  Practice ,
18 (1),  pp.  83-103.  https://doi.org/ 10.1016/j.cvex.2014.09.007. Hardi,  D.  dan  Handayani,  E.,  2015. Parasit  biota  akuatik .  Mulawarman University Press. Samarinda. 110 p. https://repository.unmul.ac.id/bitst ream/handle/123456789/1295/file _1021900025.pdf?sequence=1&isA llowed=y.
Hartika, R., Mustahal, M. dan Putra, A.N., 2014.  Gambaran  darah  ikan  nila ( Oreochromis  niloticus )  dengan penambahan  dosis  prebiotik  yang berbeda  dalam  pakan. Jurnal Perikanan  dan  Kelautan , 4 (4). http://dx.doi.org/10.33512/jpk.v4i 4.174.
Hefdiyah,  H.  dan  Shovitri,  M.,  2014. Potensi  isolat  bakteri Edwardsiella dan Corynebacterium dari  Pulau Poteran  Sumenep  sebagai  pelarut fosfat. Jurnal  Sains  dan  Seni  ITS ,
3 (2), pp. E75-E79. https://doi.org/ 10.12962/j23373520.v3i2.6910.
Klontz, G.W., 2009. Fish hematology . Ace Learning  Company.  California.  243
p.
Lukistyowati,  I.,  Windarti  dan  Riauwaty,
M.,  2007.  Analisis  hematologi sebagai  penentu  status  kesehatan ikan  air  tawar  di  Pekanbaru.
Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu Kelautan Universitas Riau. Pekanbaru. Jurnal  Akuatika , 2 (2), pp. 1-14.
Maftuch,  M.,  Nursyam,  H.  dan  Sukarni, S.,  2012.  Kajian  penggunaan Ciprofloxacin  terhadap  hematologi ikan  botia  ( Botia  macracanthus ,
Bleeker)  yang  diinfeksi  bakteri Aeromonas  hydrophila . The  Journal of  Experimental  Life  Science , 2 (2), pp.65-69. http://dx.doi.org/10. 21776/ub.jels.2012.002.02.02. Mahasri,  G.,  Widyastuti,  P.  dan Sulmartiwi,  L.,  2011.  Gambaran leukosit  darah  ikan  koi  ( Cyprinus carpio ) yang terinfestasi Ichthyophthirius  multifiliis pada derajat  infestasi  yang  berbeda dengan metode kohabitasi
[Leukocyte  profil  of  koi  fish ( Cyprinus carpio ) which infested by Ichthyophthirius  multifilii s  on  the different  infestation  degree  with cohabitation method]. Jurnal Ilmiah  Perikanan  dan  Kelautan , 3 (1),  pp.  91-96.  http://dx.doi.org/ 10.20473/jipk.v3i1.11629.
Nabib,  R.  dan  Pasaribu,  F.H.,  1989.
Patologi dan penyakit ikan . Departemen Pendidikan dan
Kebudayaan.  Direktorat  Jenderal
Pendidikan  Tinggi.  Pusat  Antar Universitas  Bioteknologi.  Institut Pertanian  Bogor.  UPT  Produksi
Media Informasi LSI. IPB. Bogor. Nadirah,  M.,  Najiah,  M.  dan  Teng,  S.Y.,
2012. Characterization of Edwardsiella  tarda isolated  from Asian  seabass, Lates  calcarifer . International Food Research Journal , 19(3), pp. 1247-1252. http://www. ifrj.upm.edu.my/19%20(03)%2020 12/(63)%20IFRJ%2019%20(03)% 202012%20Nadirah.pdf Oktafa,  U.,  Suprastyani,  H.,  Handayani, S.,  Gumala,  G.A.,  Fatikah,  N.M., Wahyudi,  M.,  Farida,  A.  dan Pratama,  R.,  2017.  Pengaruh pemberian  bakteri Lactobacillus plantarum terhadap  histopatologi dan  hematologi  ikan  patin  jambal ( Pangasius  djambal )  yang  diinfeksi bakteri Edwarsiella tarda . JFMR- Journal  of  Fisheries  and  Marine Research , 1 (1),  pp.  31-38.  http:// dx.doi.org/10.21776/ub.jfmr.2017. 001.01.6.
Preanger,  C.,  Utama,  I.H.  dan  Kardena,
I.M.,  2016.  Gambaran  ulas  darah
ikan lele di Denpasar Bali. Indonesia Medicus Veterinus , 5 (2), pp. 96-103. https://ojs.unud.ac.id/index.php/i mv/article/view/22876. Rustikawati,  I.,  2012.  Efektivitas  ekstrak Sargassum sp. terhadap diferensiasi leukosit  ikan  nila  ( Oreochromis niloticus ) yang diinfeksi Streptococcus iniae . Jurnal Akuatika ,
3 (2). http://jurnal.unpad.ac.id/ akuatika/article/view/1609. Samsisko, R.L.W, Suprapto, H. dan Sigit, S. 2013. Hematological response of humpback grouper fish ( Cromileptes altivelis )  in  different  temperatures of  media. Journal  of  Aquaculture and  Fish  Health .  1(1),  pp.  1-13. http://journal.unair.ac.id/downloa d-fullpapers-aquaculture5590ed f674full.pdf.
Sugiani,  D.,  Sukenda,  S.,  Harris,  E.  dan
Lusiastuti,  A.M.,  2012.  Pengaruh ko-infeksi  bakteri Streptococcus agalactiae dengan Aeromonas hydrophila terhadap  gambaran hematologi  dan  histopatologi  ikan tilapia ( Oreochromis niloticus ). Jurnal  Riset  Akuakultur , 7 (1),  pp. 85-91.  https://doi.org/10.15578/ jra.7.1.2012.85-91. Susandi, F., Mulyana, M. dan Rosmawati, R.,  2017.  Peningkatan  imunitas benih  ikan  gurame  ( Osphronemus gouramy Lac.)  terhadap  bakteri Aeromonas hydrophila
menggunakan  Rosella  ( Hibiscus sabdariffa L.). JURNAL MINA SAINS ,
3 (2),  pp.  1-13.  http://dx.doi.org/ 10.30997/jms.v3i2.889. Tan,  Y.P.,  Zheng,  J.,  Tung,  S.L., Rosenshine,  I.  dan  Leung,  K.Y., 2005.  Role  of  type  III  secretion  in
Edwardsiella tarda
virulence.
Microbiology , 151 (7),  pp.  2301- 2313. https://doi.org/10.1099/mic. 0.28005-0. Utami,  D.T.,  Prayitno,  S.B.,  Hastuti,  S. dan  Santika,  A.,  2013.  Gambaran parameter  hematologis  pada  ikan nila  ( Oreochromis  niloticus )  yang diberi  vaksin  DNA Streptococcus iniae dengan  dosis  yang  berbeda.
Journal of Aquaculture Management And  Technology ,  pp.  7-20.  https:// ejournal3.undip.ac.id/index.php/ja mt/article/view/4803/4635.