## PENGARUH SALINITAS TERHADAP PERTUMBUHAN SEL, KONSENTRASI FENOLIK, DAN FLAVONOID SPIRULINA PADA MEDIA KULTUR MODIFIKASI WALNE DAN AIR LIMBAH

## BUDIDAYA IKAN
EFFECT OF SALINITY ON CELL GROWTH, PHENOLIC CONCENTRATION AND FLAVONOID OF SPIRULINA IN WALNE MODIFIED CULTURE MEDIA AND FISH CULTIVATION WASTEWATER
Anggraeni * 1 , Robby Gus Mahardika 2 , dan Eva Utami 3
1 Program Studi Biologi, Universitas Bangka Belitung, Gedung F Kampus Terpadu UBB Desa Balunijuk Kecamatan Merawang Kabupaten Bangka, Indonesia 33172
2 Program Studi Kimia, Universitas Bangka Belitung, Gedung B Kampus Terpadu UBB Desa Balunijuk Kecamatan Merawang Kabupaten Bangka, Indonesia 33172
3 Program Studi Ilmu Kelautan, Universitas Bangka Belitung, Gedung D Kampus Terpadu UBB Desa Balunijuk Kecamatan Merawang Kabupaten Bangka, Indonesia 33172
* e-mail: anggraeni@ubb.ac.id

## ABSTRAK
Spirulina merupakan  mikroalga  potensial  untuk  dikultur  karena  mengandung bahan  aktif  pada  pangan  fungsional,  seperti  pigmen  fikosianin,  fenolik  dan senyawa  flavonoid.  Pertumbuhan  dan  produksi  senyawa  aktif Spirulina optimal apabila  dikultur  pada  media  yang  mengandung  nutrisi  yang  cukup,  terutama nitrogen. Penyerapan nitrogen dipengaruhi oleh salinitas. Penelitian ini bertujuan untuk  menganalisis  salinitas  optimum  yang  mampu  meningkatkan  pertumbuhan sel  dan  senyawa  aktif Spirulina .  Penelitian  dilakukan  secara  eksperimental laboratoris. Perlakuan salinitas digunakan 6 taraf konsentrasi, yaitu 0, 10, 15, 20, 25,  dan  30  ppt.  Modifikasi  media  kultur  berupa  pupuk  walne  dan  air  limbah budidaya  ikan  dengan  perbandingan  1:1.  Parameter  yang  diamati  berupa  laju pertumbuhan  sel,  konsentrasi  senyawa  fenolik  dan  flavonoid  secara  kuantitatif. Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  perlakuan  salinitas  yang  berbeda berpengaruh  terhadap  laju  pertumbuhan,  sintesis  senyawa  fenolik  dan  flavonoid. Salinitas 30 ppt menghasilkan pertumbuhan sel Spirulina tertinggi dengan jumlah 34.575  unit/mL.  Pemberian  perlakuan  salinitas  meningkatkan  kadar  fenolik  dan flavonoid  apabila  dibandingkan  tanpa  perlakuan  salinitas.  Peningkatan  salinitas memberikan  reaksi  positif  terhadap  peningkatan  kadar  flavonoid,  namun menunjukkan reaksi negatif pada kadar fenolik.
Kata Kunci: Fenolik, Flavonoid, Salinitas, Spirulina

## ABSTRACT
Spirulina is  a  potential  microalgae  to  be  cultured  because  it  contains  active ingredients  in  functional  foods,  such  as  phycocyanin  pigments,  phenolic  and flavonoid  compounds.  The  growth  and  production  of Spirulina's active compounds  are  optimal  when  cultured  on  media  containing  sufficient  nutrients, especially nitrogen. Nitrogen uptake is affected by salinity. This research aims to analyze the optimum salinity that can increase cell growth and active compounds of Spirulina . The research was conducted in  an  experimental laboratory. Salinity
treatment  used  6  concentration  levels,  namely  0,  10,  15,  20,  25,  and  30  ppt. Modification  of  culture  media  in  the  form  of  walne  fertilizer  and  fish  farming wastewater  in  a  ratio  of  1:1.  Parameters  observed  were  cell  growth  rate, concentration  of  phenolic  compounds  and  flavonoids  quantitatively.  The  results showed  that  different  salinity  treatments  affected  the  growth  rate,  synthesis  of phenolic  compounds  and  flavonoids.  Salinity  of  30  ppt  produced  the  highest Spirulina cell growth with 34,575 units/mL. Salinity treatment increased phenolic and  flavonoid  levels  when  compared  to  no  salinity  treatment.  Increasing  salinity gave a positive reaction to the increase in flavonoid levels, but showed a negative reaction to phenolic levels.
Keywords: Phenolic, Flavonoids, Salinity, Spirulina

## PENDAHULUAN
Spirulina merupakan salah satu mikroalga yang mengandung sediaan bahan aktif  dalam  pangan  fungsional  (Deamici et al. ,  2018),  yang  bernilai  tambah  tinggi seperti senyawa fitokimia fenolik, flavonoid dan  protein yang  memiliki  potensi  sebagai suplemen  kesehatan  (Notonegoro et  al ., 2018). Spirulina termasuk dalam kelompok cyanophyta  dan  dikenal  dengan  sebutan Arthrospira ,  memiliki  nilai  nutrisi  20% karbohidrat,  6-10%  lipid,  dan  55-70% protein  (Borowitzka  e t  al. ,  2016).  Wells et al. (2017)  menyatakan  bahwa  tingginya kandungan nutrisi ini menyebabkan Spirulina banyak  dikultivasi  di  dunia  dan sebagai  bahan  tambahan  pada  banyak makanan  untuk  meningkatkan  kandungan protein  dan  senyawa  aktif  makanan,  serta suplemen  kesehatan.  Kultivasi Spirulina dapat  dilakukan  secara in  vitro maupun kultur  secara  massal  di  lapangan.  Teknik kultivasi Spirulina dipengaruhi  oleh  faktor fisika,  kimia  dan  biologi,  antara  lain  jenis, konsentrasi,  nutrisi  dan  mineral  media pertumbuhan,  pencahayaan,  pH,  dan  aerasi (Rangkuti dan Suyono, 2021).
Salah  satu  upaya  untuk  memenuhi kebutuhan  nutrisi  berupa  nitrogen  pada media  kultur Spirulina yaitu  dengan memanfaatkan  air  limbah  budidaya  ikan. Amalia  (2014)  menyatakan  bahwa  air limbah  budidaya  ikan  mengandung  sekitar 75%  nitrogen.  Hal  serupa  disampaikan Nogueira et  al .  (2018),  bahwa  kandungan nitrogen total  sebesar 39,5 mg/L dan fosfat
sebesar  0,96  mg/L  pada  air  limbah budidaya  ikan  dapat  digunakan  sebagai pupuk  untuk  media  kultur Spirulina . Kandungan nitrogen dalam kultur Spirulina dibutuhkan  untuk  metabolisme  sel  (Putri dan  Sopandi,  2021).  Namun, Spirulina dalam  menyerap  nitrogen  pada  media pertumbuhan  dipengaruhi  berbagai  faktor salah  satunya  adalah  salinitas  (Astiani et al. , 2016).
Ismaiel et  al .  (2016)  menyatakan bahwa salinitas mempengaruhi produktivitas  biomassa  dan  pertumbuhan sel,  fotosintesis,  dan  aktivitas  metabolisme seluler Spirulina .  Hal  ini  mempengaruhi penyerapan nutrisi sehingga mempengaruhi kandungan  senyawa  organik  atau  fitokimia sel  seperti  flavonoid,  dan  protein,  serta senyawa  yang  berperan  sebagai  pelindung organisme seperti fenolik. Flavonoid secara alami  terdapat  pada  tumbuhan  yang memiliki  aktivitas  penting  sebagai  bahan aktif  pangan  fungsional  dan  suplemen karena  adanya  senyawa  aktif  potensial (Notonegoro et al ., 2018). Senyawa fenolik sendiri  dihasilkan  suatu  organisme  sebagai respon  terhadap  stress  lingkungan  (Hanin dan Pratiwi, 2017). Pada penelitian Rangkuti  dan  Suyono  (2021)  menyatakan bahwa Spirulina sendiri sebenarnya memiliki toleransi yang cukup luas terhadap  kadar  salinitas.  Namun,  tingginya kadar salinitas pada media juga berpengaruh terhadap penghambatan proses pembentukan  sel  anakan,  penghambatan proses fotosintesis, respirasi, dan menghasilkan  tekanan  osmosis  sehingga
justru  menghambat  penyerapan  nutrisi (Pramedistian, 2019).
Berdasarkan beberapa informasi diatas, maka pengaruh perbedaan konsentrasi  salinitas  pada  kultur Spirulina dengan  media  modifikasi  menarik  untuk diteliti.  Penelitian  ini  penting  dilakukan untuk menganalisis salinitas optimum untuk meningkatkan pertumbuhan sel dan senyawa fitokimia Spirulina .

## METODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada bulan  Maret  hingga  Oktober  2022.  Kultur Spirulina dilakukan  di  Laboratorium  Ilmu Kelautan,  sedangkan  pengukuran  laju pertumbuhan  dan  analisis  senyawa  fenolik dan  flavonoid  dilakukan  di  Laboratorium
Biologi
dan Laboratorium Dasar Universitas Bangka Belitung.

## Alat dan Bahan
Alat yang digunakan adalah refraktometer, wadah kultur, aerator, mikroskop,  spektrofotometer,  destilator, mikropipet,  hand  counter,  pH  meter  dan pipet ukur. Sedangkan bahan yang digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah kultur  murni  mikroalga Spirulina ,  air  laut, akuades,  walne  dan  air  limbah  budidaya ikan sebagai pupuk, vitamin B1 dan B12.

## Metode Penelitian
Metode yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  metode  eksperimen dengan  rancangan  acak  lengkap.  Perlakuan salinitas yang digunakan yaitu 0, 10, 15, 20, 25, dan 30 ppt dengan 2 ulangan. Parameter yang  diamati  berupa  laju  pertumbuhan populasi Spirulina ,  konsentrasi  senyawa fenolik  dan  flavonoid.  Prosedur  kerja penelitian berupa:

## Sterilisasi
Alat  kaca  tahan  panas  untuk  kultur Spirulina disterilisasi menggunakan
autoclave selama  15  menit  pada  suhu 121⁰C. Sterilisasi peralatan yang tidak tahan panas dan berukuran besar dapat  dilakukan dengan penyemprotan alkohol 70%. Sterilisasi  media  kultur  (air  laut)  dilakukan dengan  kaporit  20  ppm  selama  24  jam  dan diberi aerasi, kemudian dilakukan pemberian natrium thiosulfat 10 ppm.

## Pengenceran Media Kultur
Salinitas  air  laut  yang  digunakan sebagai  media  kultur  awal  adalah  32  ppt. Pengenceran  media  dengan  menambahkan akuades. Salinitas media disesuaikan dengan perlakuan, yaitu 10, 15, 20, 25, dan 30  ppt.  Sebagai  kontrol  digunakan  media kultur  dengan  salinitas  0  ppt.  Pengenceran ini  menggunakan  rumus  sebagai  berikut (Bangun et al. , 2015):
V1 x N1 = V2 x N2
Keterangan: V1 = Volume yang diinginkan V2 = Volume air yang dibutuhkan N1 = Salinitas awal air N2 = Salinitas yang diinginkan

## Kultivasi Spirulina
Perhitungan  kepadatan  sel  jumlah awal inokulan yang akan dikultur pada bibit Spirulina kultur murni dilakukan menggunakan spektrofotometer pada panjang  gelombang  560  nm  (Saeid  &
Chojnacka, 2016). Untuk perlakukan dilakukan dengan mengultur Spirulina pada media  tumbuh  Walne  dengan  tambahan  air limbah  ikan  dengan  perbandingan  1:1 sesuai  konsentrasi  optimun  media  tumbuh Spirulina , kemudian diberi perlakuan perbedaan  salinitas.  Volume  kultur  10.000 mL,  dengan  volume starter  Spirulina 500 mL,  walne  20  mL  dan  air  limbah  ikan  20 mL,  vitamin  B1  dan  B12  masing-masing  4 mL.  Kultur  dikultivasi  dengan  selalu memberi aerasi, pH 7 dan diberi pencahayaan.

## Pemanenan dan Pengeringan Spirulina
Pemanenan  dilakukan  pada  saat Spirulina berada pada fase stasioner karena pada  fase  tersebut  metabolit  sekunder banyak  diproduksi.  Pemanenan Spirulina dengan  cara  penyaringan  menggunakan saringan plankton net 40 mikron, kemudian dibilas  dengan  akuades  steril.  Pengeringan dilakukan  dengan  menyimpan  biomassa basah  diatas  plastik  kemudian  diangin- anginkan dengan suhu ruang selama 24 jam agar  kandungan  senyawa  organik  tetap terjaga.

## Parameter Pengamatan

## Laju Pertumbuhan Populasi Spirulina
Pengamatan laju pertumbuhan populasi Spirulina dengan  menghitung jumlah  sel  di  bawah  mikroskop  dengan perbesaran  100x  selama  20  hari  dengan interval  2  hari  sekali  menggunakan hand counter sampai  populasinya  menurun. Penghitungan pertumbuhan Spirulina dalam satuan unit/mL.

## Penentuan Total Fenolik dan Flavonoid
Penentuan total fenolik mengacu pada Nur et  al. (2019).  Biomassa Spirulina kering  dimaserasi  menggunakan  metanol selama 24 jam dengan perbandingan sampel dan  pelarut  1:5  (w/v),  kemudian  dishaker selama  kurang  lebih  24  jam,  lalu  disaring. Untuk  pengukuran  fenolik,  filtrat  diambil 0,5 mL dan ditambahkan 0,5 mL mL reagen Folin  –  Ciocalteau  lalu  divortex  selama  30 detik  kemudian  ditambahkan  2,5  mL larutan  Na2CO3  7%  dan  divortex  kembali selama 30 detik. Larutan tersebut didiamkan  pada  suhu  ruang  selama  30 menit dan dihitung absorbansinya menggunakan  spektrometer  UV-VIS  pada panjang  gelombang  760  nm.  Sedangkan untuk  pengukuran flavonoid,  filtrat diambil 0,5  mL  dan  ditambahkan  0,1  mL  AlCl 3 10%  ,  1,5  mL  metanol  p.a,  0,1  mL CH 3 COONa  1  M  dan  2,8  mL  akuades. Larutan tersebut kemudian dilakukan pengadukan  menggunakan vortexer selama
30  detik  lalu  diinkubasi  pada  suhu  ruang selama 30 menit. Setelah diinkubasi larutan standar  tersebut  diukur  absorbansinya menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis pada panjang gelombang 420 nm.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Laju Pertumbuhan Populasi Spirulina
Pada  awal  penelitian  atau  sebelum dilakukan perlakuan, dilakukan perhitungan jumlah  sel  awal  kultur  stok  yang  akan menjadi  kultur  starter  perlakuan.  Dari  hasil perhitungan jumlah sel menggunakan mikroskop,  didapat  jumlah  sel awal berjumlah  30.733  unit  /mL.  Berdasarkan hasil  perlakukan  dapat  dilihat  bahwa pertumbuhan Spirulina pada  penelitian  ini menunjukkan  pola  pertumbuhan  yang terbagi  dalam  fase  lag,  fase  eksponensial, fase  stasioner,  dan  fase  kematian.  Hasil penelitian  menunjukkan  pada  hari  ke-2 sampai  ke-10  setelah  kultur  perlakuan salinitas, pertumbuhan Spirulina mengalami penurunan  jumlah  sel  (Gambar  1).  Hal  ini dikarenakan Spirulina memasuki  fase  lag, yaitu  fase  adaptasi  fisiologi  terhadap  media yang  baru.  Tewal et  al. (2021)  menyatakan bahwa  pada  fase  lag,  mikroalga  mengalami perubahan metabolisme sel dalam pertumbuhan,  seperti  peningkatan  kadar enzim  dan  metabolit  yang  terlibat  dalam pembelahan  sel  akibat  adaptasi  terhadap media.  Selain  itu,  perbedaan  konsentrasi salinitas  pada  perlakuan  dengan  kultur starter  dapat  menyebabkan  efek  pada Spirulina , antara lain menyebabkan cekaman  osmotik  dari  ion  garam  pada membran  sel Spirulina (Hariyati,  2008).
Gambar 1 . Kurva Pertumbuhan Spirulina pada Kadar Salinitas Berbeda
Berdasarkan  grafik  pada  Gambar  1, jumlah  sel  pada  fase  lag  untuk  perlakuan  0 ppt  berkisar  antara  1.475-9.200  unit/mL, perlakuan  10  ppt  berkisar  antara  5.250- 10.425  unit/mL,  perlakuan  15  ppt  berkisar antara  5.150-12.025  unit/mL,  perlakuan  20 ppt  berkisar  antara  3.100-7.950  unit/mL, perlakuan  25  ppt  berkisar  antara  9.600- 15.825  unit/mL,  dan  perlakuan  30  ppt berkisar antara 16.750-19.125 unit/mL.
Peningkatan pertumbuhan secara signifikan pada perlakuan terjadi pada kultur mulai  hari  ke-11  hingga  12,  artinya  pada kondisi  ini Spirulina memasuki  fase eksponensial,  dengan  populasi  tertinggi (puncak)  pada  konsentrasi  10,  15,  25,  dan 30  ppt  terjadi  pada  hari  ke-12.  Sedangkan untuk  perlakuan  0  dan  20  ppt  populasi tertinggi terjadi pada hari ke-8. Hal tersebut memperlihatkan bahwa dalam proses pertumbuhannya  diperlukan  waktu  tertentu. Hal ini sesuai dengan pernyataan Maharsyah et  al. (2013),  bahwa  mikroalga memerlukan  waktu  untuk  beradaptasi.  Pada fase  ini, Spirulina sudah  beradaptasi terhadap media tumbuh dan secara fisiologi telah melakukan metabolisme secara maksimal. Pada fase eksponensial, Spirulina memanfaatkan nutrien yang diberikan dalam
media  kultur  untuk  pembelahan  sel, sehingga  perlahan  kepadatan  sel  mulai meningkat (Tawel et al ., 2021). Penambahan  jumlah  sel Spirulina tertinggi terjadi  pada  perlakuan  30  ppt  dengan kisaran  antara  32.700-34.575  unit/mL. Berdasarkan  hasil  laju  pertumbuhan  ini dapat  dilihat  bahwa  perlakuan  salinitas  30 ppt  menghasilkan  tingkat  pertumbuhan populasi  sel  tertinggi  dibandingkan  dengan perlakuan  salinitas  yang  lain.  Peningkatan pertumbuhan yang baru terjadi pada hari ke- 11  ini lebih lama  bila dibandingkan dengan penelitian  Mahardika et  al .  (2023)  yang terjadi  pada  hari  ke-4.  Hal  ini  dikarenakan adanya  penambahan  air  limbah  budidaya ikan  sebagai  modifikasi  media  kultur, sehingga  dapat  dilihat  bahwa  penambahan air limbah budidaya ikan pada media kultur tidak  memberi  pengaruh  yang  signifikan terhadap pertumbuhan sel Spirulina . Hal ini diduga  karena  air  limbah  ikan  tidak mengandung nutrisi yang kompleks dibandingkan dengan pupuk walne, sehingga  memberikan  respon  pertumbuhan sel  yang  lambat  dan  memerlukan  waktu untuk beradaptasi pada media yang mengandung  air  limbah  ikan  (Anggraeni et al ., 2022).
Pertumbuhan populasi Spirulina mulai konstan  terjadi  pada  hari  ke-13-14  pada perlakuan  salinitas  10,  15,  20,  25,  dan  30 ppt,  dimana  populasi Spirulina mulai memasuki  fase  stasioner.  Pada  fase  ini pertumbuhan  sel  mulai  melambat  karena nutrisi  dan  faktor  fisika  kimianya  mulai membatasi pertumbuhan. Fase ini dipengaruhi oleh berkurangnya nutrien yang ada  pada  media  kultur  (Mahardika et  al. , 2023).  Fase  stasioner  ditandai  dengan kematian Spirulina hampir  sama  dengan laju  pertumbuhannya  sehingga  kepadatan Spirulina relatif  konstan  (Tawel at  al ., 2021).  Fase  penurunan  dan  kematian  mulai terjadi  pada  hari  ke-15  hingga  20  ditandai dengan  menurunnya  kandungan  nutrisi media dan menurunnya kondisi kualitas air, sehingga  kepadatan  sel  menurun  cepat karena  laju  kematian Spirulina lebih  tinggi daripada laju pertumbuhannya.
Total Fenolik dan Flavonoid Spirulina Analisis fenolik dilakukan dengan menggunakan  metode  follin  ciocalteu,  dan flavonoid menggunakan alumunium
klorida. Pengujian ini dilakukan menggunakan  larutan  standar  uji,  fenolik menggunakan  standar  asam  galat  dengan pengukuran  pada  panjang  gelombang  760 nm  dan  flavonoid  menggunakan  standar kuersetin  yang  diukur  pada  panjang gelombang  420  nm.  Ekstraksi  senyawa fenolik  dan  flavonoid  dari Spirulina dilakukan  dengan  metode  maserasi  dengan pelarut metanol.
Berdasarkan  hasil  analisis  kadar fenolik  terlihat  bahwa  media  kultur  yang diberi  perlakuan  salinitas  memiliki  kadar fenolik  yang  lebih  tinggi  dibandingkan tanpa perlakuan salinitas, dengan konsentrasi tertinggi pada perlakuan 10 ppt dengan nilai 193,42 ppm (Tabel 1). Hal ini menunjukkan bahwa salinitas rendah memiliki  kadar  fenolik  yang  cenderung tinggi,  sebaliknya  meningkatnya  salinitas menyebabkan  penurunan  kadar  senyawa golongan fenolik yang dihasilkan S pirulina sp  selama  kultivasi.  Peningkatan  salinitas memberikan  reaksi  negatif  terhadap  kadar fenolik.
Tabel 1. Hasil pengujian fenolik ekstrak Spirulina Salinitas (ppt) Absorbansi Konsentrasi (ppm) 0 1,98 93,71 10 4,00* 193,42 15 3,21 154,36 20 3,57 172,57 25 3,11 149,46 30 2,88 138,27 * Konsentrasi terlalu pekat
Untuk kadar flavonoid, dapat dilihat bahwa konsentrasi flavonoid yang diberi perlakuan salinitas menunjukkan reaksi positif, semakin  tinggi  kadar  salinitas  maka semakin tinggi pula kadar flavonoid. Hal ini diduga  pemberian  salinitas  membuat  sel Spirulina beradaptasi  dengan menghasilkan metabolit sekunder flavonoid untuk
melindungi  terhadap  cekaman.  Fithriani et al .  (2015)  menyatakan  bahwa  flavonoid merupakan  salah  satu  dari  banyak  molekul yang  digunakan  oleh  sel  untuk  melindungi bahaya  reaktif  oksigen  spesies.  Hasil pengujian  flavonoid  berdasarkan  kurva standar  dan  pengukuran  absorbansi  ekstrak dapat dilihat pada Tabel 2 berikut.
Tabel 2. Hasil pengujian flavonoid ekstrak Spirulina Salinitas (ppt) Absorbansi Konsentrasi (ppm) 0 0,355 55,27 10 1,981 301,64 15 0,917 140,42 20 4,000* 607,55* 25 0,882 135,12 30 4,000* 607,55* *Konsentrasi terlalu pekat
Fenolik  dan  flavonoid  yang  merupakan antioksidan  dihasilkan  sebagai  respon adaptasi  sel  terhadap  pemberian  salinitas untuk  menjaga  stabilitas  metabolisme  di dalam  sel  dan  mencegah  kerusakan  sel
Spirulina . Pada penelitian ini menunjukkan bahwa  respon adaptasi sel terhadap peningkatan  salinitas  lebih  diperankan  oleh flavonoid dibandingkan fenolik.

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Peningkatan  salinitas  menunjukkan peningkatan laju pertumbuhan sel Spirulina dengan  puncak  laju  pertumbuhan  tertinggi pada  salinitas  30  ppt  yaitu  34.575  unit/mL. Peningkatan  salinitas  memberikan  reaksi positif terhadap peningkatan kadar flavonoid, namun memberikan reaksi negatif terhadap kadar fenolik. Penambahan air limbah budidaya ikan pada media kultur tidak berpengaruh terhadap peningkatan laju pertumbuhan  sel  dan  konsentrasi  senyawa aktif fenolik dan flavonoid.

## Saran
Perlu  penelitian  lanjut  mengenai kandungan  nutrisi  yang  terdapat  di  dalam air  limbah  budidaya  ikan,  serta  pengujian pada produksi pigmen Spirulina .

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih kepada  LPPM  UBB  yang  telah  mendanai kegiatan ini melalui hibah program Penelitian Dosen Tingkat Universitas (PDTU) Tahun 2022 dengan nomor kontrak LPPM No. 193.C/UN50/L/PP/2022.

## DAFTAR PUSTAKA
Amalia,  F.  2014.  Kapasitas  Fitoremediator Lemna  perpusila dalam  Mereduksi Limbah  Nitrogen  dan  Fosfat  Pada Sistem  Resirkulasi  Budidaya  Ikan Lele  ( Clarias  gariepinus ).  Thesis. Sekolah Pascasarjana. Institut
Pertanian Bogor. Anggraeni,  Eva  Utami  &  Robby  Gus Mahardika. (2022). Pengaruh Salinitas Terhadap Kepadatan Populasi  dan  Konsentrasi  Klorofil-a Spirulina Pada Media Kultur
Modifikasi  Walne  dan  Air  Limbah Budidaya  Ikan. Ekotonia:  Jurnal Penelitian  Biologi,  Botani,  Zoologi dan Mikrobiologi . 07 (2):112-120.
Astiani,  F.,  Dewiyanti,  I.,  &  Mellisa,  S.
2016.  Pengaruh  Media  Kultur  Yang Berbeda  Terhadap  Laju  Pertumbuhan dan Biomassa Spirulina sp. JIM , 1(3): 441-448.
Bangun,  HH.,  Hutabarat,  S.,  &  Ain,  C.
(2015). Perbandingan
Laju
Pertumbuhan Spirulina platensis Pada Temperatur  yang  Berbeda  Dalam Skala Laboratorium. Diponegero Journal of Maquares, 4(1) , 74-81.
Borowitzka,  M.A.,  Beardal,  J.,  &  Raven,
J.A.,  2016. The  Physiology  of Microalgae . London: Springer International Publishing Switzerland.
Deamici,  K.  M.,  Santos,  L.  O.,  &  Costa,  J. A. V. 2018. Magnetic Field Action on Outdoor  and  Indoor  Cultures  of Spirulina:  Evaluation  Of  Growth, Medium  Consumption  And  Protein Profile. Bioresource  Technol .,  249:
168-174.
Fithriani  D,  Amini  S,  Melanie  S.  &
Susilowati  R.  2015.  Uji  Fitokimia Kandungan Total Fenol dan Aktivitas Antuoksidan  Mikroalga  Spirulina  sp, Chlorella sp. dan Nannochloropsis sp.
Jurnal  JPB  Kelautan  dan  Perikanan , 10(2): 101–109.
Hanin,  N.N.F  &  Pratiwi,  R.  2017. Kandungan  Fenolik,  Flavonoid  dan Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Daun Paku  Laut  ( Acrostichum  aureum L.)
Fertil  dan  Steril. Journal  of  Tropical Biodiversity and BiotechnologyJournal  of  Tropical Biodiversity  and  Biotechnology ,  2: 51-56.
Hariyati,  R.,  2008.  Pertumbuhan  dan Biomassa Spirulina sp  Dalam  Skala Laboratoris.  Laboratorium  Ekologi dan Biosistematik Fakultas Matematika  dan  IPA  Universitas
Diponegoro.
Ismaiel,  M.M.S.,  El-Ayouty,  Y.M.,  &
Piercey-Normore,  M.,  2016.  Role  of pH  on  Antioxidants  Production  by Spirulina (Arthrospira) platensis . Brazilian  Journal  of  Microbiology . 47(2): 298-304.
Mahardika,
D.N., Hartati, R., & Widianingsih. 2023. Pengaruh Salinitas  Terhadap  kandungan  Lutein
Spirulina platensis . Journal of marine Research , 12(1): 83-88.
Maharsyah, T., Lutfi, M., & Nugroho, W.A. 2013.  Efektifitas  Penambahan  Plant Growth Promoting Bachteria (Azospirillum sp.) dalam Meningkatkan Pertumbuhan Mikroalga (Chlorella sp.) pada Media Limbah  Cair  Tahu  Setelah  Proses Anaerob. Jurnal Keteknikan Pertanian Tropis dan Biosistem , 1(3): 258-264.
Nogueira,  S.M.S.,  Junior,  J.S.,  Maia,  H.D,
Saboya,  J.P.S.,  &  Farias,  W.R.L. (2018).  Use  of  Spirulina  platensis  in Treatment of
Fish Farming
Wastewater. Scientific Article , 49 (4), 599-606.
Notonegoro,  H.,  Setyaningsih,  I.,  &
Tarman, K., 2018. Kandungan
Senyawa  Aktif Spirulina  Platensis Yang  Ditumbuhkan  Pada  Media
Walne  Dengan  Konsentrasi  NaNO3 berbeda.
JPB Kelautan dan
Perikanan , 13 (2): 111- 122.
Nur,  S.,  Sami,  F.J.,  R,  W.,  Awaluddin,  A., Indah,  M.,  Afsari,  A.  2019.  Korelasi Antara  Kadar  Total  Flavonoid  dan Fenolik dari Ekstrak dan Fraksi Daun
Jati  Putih  ( Gmelina  arborea Roxb.) Terhadap Aktivitas Antioksidan. Jurnal  Farmasi  Galenika ,  5(1):  33- 42.
Putri,  S.A  &  Sopandi,  T.  2021.  Konsumsi Nitrogen  dan  Karbon  Oleh Spirulina platensis dari  Kotoran  Burung  Puyuh sebagai  Media  Kultivasi. Stigma , 14(1): 1-9.
Pramedistian, AA. 2019. Pengaruh Perbedaan Salinitas Terhadap Pertumbuhan Spirulina sp.  Pada Skala Laboratorium. Skripsi.
Universitas Muhammadiyah Malang. Rangkuti,  PM  &  Suyono,  EA.  2021. Pengaruh Salinitas Terhadap
Kontaminasi, Pertumbuhan, dan
Kandungan  Metabolit  Kultur  Massal
Spirulina ( Arthrospira platensis
Gomont).  Thesis.  Universitas  Gadjah Mada.
Saeid A. & Chojnacka K. 2016. Evaluation
Of  Growth  Yield  of  Spirulina Maxima  In  Photobioreactors. Chem.
Biochem. Eng. Q . 30(1): 127- 136.
Tewal,  F.,  Kemer,  K.,  Rimper,  JRTSL.,
Mantiri,  DMH,  Pelle,  WE.,  & Mudeng, JD. 2021. Laju Pertumbuhan dan Kepadatan Mikroalga Dunaliella sp. Pada
Pemberian  Timbal  Asetat  dengan Konsentrasi  yang  Berbeda. Jurnal Pesisir dan Laut Tropis. 9(1): 30-37.
Wells, M.L., Potin, P., Craigie, J.S., Raven,
J.A.,  Merchant,  S.S.,  Helliwell,  K.E., &  Brawley,  S.H.  2017.  Algae  as Nutritional  and  Functional  Food Sources: Revisiting Our Understanding. J.  Appl.  Phycol ., 29(2): 949-982.