AKTIVITAS ANTIBAKTERI FRAKSI ETANOL DAUN KEMANGI ( Ocimum americanum ) TERHADAP Enterococcus faecalis ATCC 29212
Ame Suciati Setiawan*, Diani Prisinda**, Fajar Fatriadi**

## ABSTRACT
Background : Ocimum americanum (O. americanum) is a natural plant with anti- bacterial effects inhibits the growth of gram-positive and gram-negative anaerobic bacteria in the oral cavity. Enterococcus faecalis (E. faecalis) is a gram-positive anaerobic bacteria in the root canal which is resistance to intracanal medicament. The  purpose  of  this  study  is  to  analyze  the  antibacterial  effect  of  ethanol fractionation  of O.  americanum towards E.  faecalis ATCC  29212. Ocimum americanum is  a  natural  plant  that  has  antibacterial  properties  against  gram- positive  and  gram-negative  anaerobic  bacteria  in  the  oral  cavity. Enterococcus faecalis is  an  anaerobic  gram-negative  bacteria  was  found  in  root  canals  and resistant  to  various  root  canal  medicament. The  purpose  of  this  study  was  to analyze  the  antibacterial  effect  of  the  ethanol  fraction  of Ocimum  americanum against Enterococcus faecalis . Methods: The research method was experimental used disc diffusion technique. The fraction is made from solid extract into a polar solution with ethanol solvent with  concentration  20%,  40%,  60%  and  80%.  The  test  was  performed  by measuring the inhibition zones around the disc after 24 hours.
Results: Chemical properties of O.americanum are alkaloid, flavonoid, saponin, tanin,  steroid,  dan  terpenoid.  Inhibition  zone  of O.  americanum fraction  with concentration 20%, 40%, 60% and 80% is 8.8 cm, 9.8 cm, 11.1 cm and 16.7 cm.
The  measurement  of O.  americanum inhibition  zone  showed  better  results compared than positive control (Minosep). Conclusion: Ethanol fraction of O.americanum has antibacterial effect towards E. faecalis.

## PENDAHULUAN
Daun  kemangi  ( Ocimum  americanum/ O.americanum )  adalah  tanaman  herbal  yang banyak  digunakan  di  Asia  dan  Afrika. O.americanum merupakan tanaman  yang memiliki aroma yang khas dengan ketinggian 0,7 m, tangkai yang  lurus,  daun  oval  berwarna  sangat  hijau, dengan  bunga  berwarna  merah  muda-putih. O. americanum memiliki  efek  antibakteri  terhadap beberapa  bakteri  rongga  mulut  dan  penyebab penyakit  periodontal. 1 Minyak  esensial O. americanum memiliki   efek    antibakteri    terhadap
P.  gingivalis dan P.  intermedia dengan konsentrasi  hambat  minimum  0.35  mg/ml sedangkan  terhadap F.  nucleatum 0.70 mg/ml. Konsentrasi bunuh minimum terhadap P.  gingivalis dan P.  intermedia adalah  0.70 mg/ml  sedangkan  terhadap F.  nucleatum adalah  1.4  mg/ml. 1 Penelitian  lain  yang dilakukan  terhadap Streptococcus  mutans
menunjukkan zona hambat sebesar
28 mm dengan konsentrasi hambat minimum 0,04 %v/v.      Zona       hambat         terhadap

## Keywords:
Enterococcus faecalis, Fraksi Etanol, Ocimum
Americanum
* Departemen Farmakologi Kedokteran Gigi dan Farmakologi Bahan Alam, Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Padjadjaran ** Departemen Konservasi Gigi, Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Padjadjaran
Correspondence : Ame  Suciati  Setiawan,  Departemen  Farmakologi  Kedokteran  Gigi  dan  Farmakologi  Bahan  Alam, Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Padjadjaran Email : ame.suciati@fkg.unpad.ac.id

## TERHADAP Enterococcus faecalis ATCC 29212
Candida albicans dari     rongga mulut menunjukkan penghambatan    sebesar  >30  mm  dengan konsentrasi  hambat  minimum  0,04%  v/v.  Hal  ini menunjukkan bahwa O. americanum menunjukkan efek yang baik terhadap mikroorganisme di dalam rongga  mulut. 2 Hasil  penelitian  yang  dilakukan menunjukkan bahwa O. americanum memiliki efek anti  bakteri  terhadap  bakteri  anaerob  gram  positif dan negatif di dalam rongga mulut. 2
Enterococcus  faecalis  (E.  faecalis) adalah bakteri anaerob gram positif di dalam saluran akar yang  mengalami  infeksi  pada  jaringan  periapikal, dan  tetap  bertahan  didalamnya  meskipun  telah dilakukan perawatan . 3,4,5 Walaupun E. faecalis ada dalam  jumlah  sedikit  sebagai  flora  awal  pada saluran  akar  gigi  yag  belum  dilakukan  perawatan, namun pada 90% gigi yang telah dirawat endodontik ditemukan E. faecalis. 5
Kegagalan  perawatan  endodontik  dapat disebabkan karena adanya bakteri E. faecalis yang masuk  ke  bagian  terdalam  tubuli  dentin  dengan cepat  dan  bertahan  lebih  lama  dibandingkan dengan mikroorganisme  patogen  lainnya  di  dalam saluran akar, hal ini menimbulkan bakteri ini sangat resisten terhadap obat-obatan saluran akar. 6,7,8
Ocimum  sanctum dan Ocimum  basilicum merupakan  jenis  kemangi  lainnya  yang  memiliki efek  antibakteri.  Beberapa  penelitian  yang  telah dilakukan menunjukkan efek antibakteri dari minyak esensial  daun  kemangi  jenis Ocimum  sanctum terhadap  bakteri E.  faecalis dengan  konsentrasi 20.000  ppm  memiliki  zona  hambat  sebesar  11,70 mm, konsentrasi 10.000 ppm sebesar 9,25 mm dan konsentrasi  5.000  ppm  sebesar  8,90  mm. 9 Penelitian lain yang dilakukan dengan menggunakan minyak esensial Ocimum basilicum konsentrasi  40.000  ppm  menunjukkan  tidak  ada perbedaan  efek  yang  signifikan  dibandingkan dengan parachlorophenol  campher  menthol (ChKm). 10 Hasil dari penelitian tersebut
menunjukkan bahwa kedua jenis kemangi memiliki efek  antibakteri  terhadap E.  faecalis ,            tetapi belum  ada  penelitian  yang  menunjukkan  adanya efek antibakteri dari O. americanum terhadap E. faecalis sehingga  peneliti  ingin  mengetahui efektivitas antibakteri dari O. americanum terhadap bakteri E. faecalis .

## METODE PENELITIAN
Metode  yang  dilakukan  adalah  eksperimental dengan menguji fraksi etanol (larutan polar) dari O. americanum terhadap bakteri E. faecalis . Tanaman yang digunakan diperoleh dari Cisarua Kabupaten Bandung Barat dan dideterminasi di Sekolah Ilmu Teknik  Hayati  (SITH)  Institut  Teknologi  Bandung. Penelitian  dilakukan  di  Laboratorium  mikrobiologi Sekolah  Farmasi  ITB.  Daun  kemangi  ( O. americanum )  yang  dikeringkan  dibuat  menjadi eksrak padat kemudian dilakukan fraksinasi dengan menggunakan  pelarut  etanol  10%  untuk menghasilkan  larutan  polar.  Hasil  fraksinasi  diuji fitokimia  untuk  melihat  kandungan  yang  terdapat dalam ekstrak O. americanum .
Bakteri  yang  digunakan  adalah  bakteri E. faecalis ATCC  29212.  Uji  antibakteri  dilakukan menggunakan  metode disc  diffusion  method dengan  mengencerkan  larutan  menggunakan aquades steril sampai mencapai konsentrasi 20%, 40%, 60% dan 80% yang diteteskan pada cakram dan  diukur  besar  zona  bening  yang  dihasilkan  di area  cakram  tersebut.  Hasil  pengukuran dibandingkan  dengan  Khlorheksidin  (Minosep) sebagai kontrol positif.
Penelitian  ini  telah  lulus  etik  melalui Komite  Etik  Penelitian  Universitas  Padjadjaran Bandung dengan nomor sertifikat Etik 1279/UN6.KEP/EC/2018

## HASIL PENELITAN
Daun  kemangi  diuji  determinasi  di  Sekolah  Ilmu Teknik  Hayati  Institut  Teknologi  Bandung,  dengan spesifikasi sebagai berikut:
Divisi  : Magnoliophyta Kelas  : Magnoliopsida (Dicots)
Anak kelas: Asteridae Bangsa : Lamiales Familia : Lamiaceae (Labiatac)
Spesies : Ocimum americanum L Nama umum: Hoary basil , American basil (Inggris), Kemangi,  Selasih  putih  (Indonesia),  Surawung (Sunda)
Hasil  inokulasi  bakteri  dengan  perhitungan menggunakan  Angka  Lempeng  Total  ditemukan Jumlah Populasi bakteri E. faecalis = 3,3 x 10 7 dan 2,6    x  10 7 .  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa ekstrak  etanol O.  americanum memiliki efektivitas antibakteri  terhadap  bakteri E.  faecalis .  Hal  ini ditunjukkan  dengan  adanya  zona  bening  disekitar cakram.  Larutan O.  americanum memiliki  zona hambat  yang  lebih  baik  dibandingkan  dengan Minosep.
Tabel 1. Hasil Uji Fitokimia Ekstrak Daun Kemangi Uji sampel Pereaksi Hasil +/- Keterangan Alkaloid Dragendorf Mayer + HCl + + Merah Endapan putih Flavonoid Amil alkohol + Mg + HCl + kuning Saponin Air + HCl + Berbusa stabil Kuinon NaOH - tidak ada perubahan Tanin FeCl 3 1% Gelatin + + Hitam Endapan putih Steroid/ Triterpenoid  H 2 SO 4 + As. asetat + Merah hijau biru
Tabel 2. Hasil pengukuran zona hambat efektivitas antibakteri ekstrak polar O. americanum terhadap kotrol Minosep pada bakteri E. faecalis
Gambar 1. Zona hambat larutan polar O. americanum yang dilakukan secara duplo dengan hasil pengukuran pada lempeng (A) dan (B) kemudian diambil nilai rata-rata dari kedua lempeng. Zona hambat dilakukan dengan menggunakan 4 konsentrasi (1) 80%, (2) 60%, (3) 40% dan (4) 20%
Gambar 2. Zona hambat kontrol positif (Minosep) yang dilakukan secara duplo dengan hasil pengukuran pada lempeng (A) dan (B) kemudian diambil nilai rata-rata dari kedua lempeng. Zona hambat dilakukan dengan menggunakan 4 konsentrasi (1) 0,2%, (2) 0,1%, (3) 0,05% dan (4) 0,025%

## DISKUSI
Enterococcus  faecalis  ATCC  29212 pada penelitian  ini  diuji  coba  terhadap  ekstrak O. americanum untuk uji aktivitas antibakteri. Penelitian uji  aktivitas  antibakteri  dilakukan  pada  empat konsentrasi fraksi Ocimum americanum yaitu 80%, 60%, 40% dan 20% sedangkan untuk kontrol positif menggunakan  Minosep  dengan  konsentrasi  yaitu 0,2%,  0,1%,  0,05%  dan  0,025%.  Pengujian dilakukan  dengan  dua  kali  pengulangan  (duplo) dengan  menggunakan  metode  cakram.  Hasil penelitian pada tabel 2 menunjukkan semakin tinggi konsentrasi  fraksi  etanol O.  americanum semakin besar  hasil  zona  hambatnya.  Fraksi  etanol O. americanum pada  konsentrasi  80%  menunjukkan angka  zona  hambat  16,7  mm.  Kekuatan  daya antibakteri  zona  hambat  melalui  pengukuran diameter  zona  hambat  5  mm  atau  kurang dikategorikan  lemah,  diameter  zona  hambat  5-10 mm  sedang,  diameter  10-20  mm  dikategorikan kuat. Indikator     kategori       tersebut     menunjukkan
fraksi  etanol O.  americanum termasuk  kedalam kategori antibakteri kuat.
Aktivitas  antibakteri  dari  penelitian  ini menunjukkan  besarnya  diameter  hambat  sebesar 8,8 mm, hal ini menunjukkan bahwa O. americanum termasuk ke dalam antibakteri sedang. 2 Penelitian lain  yang  dilakukan  Prisinda,  dkk  (2018)  dengan pengujian  antibakteri  ekstrak  metanol  Ocimum sanctum  terhadap  E.  faecalis  menunjukkan diameter  zona  hambat  minimum  sebesar  8,8  mm tetapi  pada  penelitian  ini  metanol  sebagai  pelarut juga  menunjukkan  adanya  daya  hambat  terhadap E.  faecalis  sehingga  daya  antibakteri  yang dihasilkan  oleh  O.  sanctum  dapat  dibantu  oleh adanya daya antibakteri metanol sebagai pelarut. 9 Dapat  disimpulkan  bahwa  daya  antibakteri  fraksi etanol  O.  americanum  memiliki  daya  antibakteri yang lebih baik dibandingkan dengan O. sanctum. Berbeda  dengan  penelitian  minyak  esensial Ocimum      basilicum        (O. basilicum)    terhadap
bakteri  E.  faecalis,  menunjukkan  diameter  hambat minimal  sebesar  9,5  mm,  lebih  besar  dibandingan diameter hambat minimum O. americanum. 10 Hal ini dapat  menunjukkan  bahwa  minyak  esensial  O. basilikum  memiliki  daya  hambat  lebih  baik dibandingkan fraksi etanol O. americanum.
Efek  antibakteri O.  americanum yang  terjadi disebabkan  adanya  kandungan  zat-zat  aktif  yang dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri.  Hasil  uji fitokimia  pada  tabel  1  menunjukkan  kandungan senyawa  dari  ekstrak  etanol O.  americanum yaitu Alkaloid, Flavonoid, Terpenoid, Saponin, dan Tanin. Flavonoid  dan  tanin  termasuk  dalam  golongan senyawa  fenol.  Senyawa-senyawa  tersebut merupakan  senyawa  yang  aktif  yang  mempunyai efek antibakteri.
Mekanisme kerja flavonoid dapat meningkatkan permeabilitas  membran  dan  hilangnya  potensial membran  sel bakteri. 12 Senyawa fenol  yang terikat dengan  bakteri  akan  mengganggu  permeabilitas membran  yang  mengakibatkan  kation  dan makromolekul dari sel hilang sehingga menyebabkan  terganggunya  pertumbuhan  sel  dan menjadi mati. 13 Selain itu senyawa fenol telah banyak diteliti  karena  mempunyai  multiple  mekanisme terhadap  aktivitas  anti  bakteri  yaitu  dapat berinteraksi  dengan  protein  dan  dinding  bakteri, menyebabkan  kerusakan  membran  sitoplasma, menurunkan  fluiditas  membran,  menghambat sintesis  asam nucleic ,  sintesis  dinding  atau metabolisme energi sel. 14
Kontrol  positif  yang  digunakan  pada pengujian ini adalah klorheksidin glukonat (Minosep  ) dengan zona  hambat  12,1  mm  pada  konsentrasi  0,2%. Pengujian  ini  membuktikan  bahwa  klorheksidin mempunyai efek daya hambat kuat terhadap bakteri Enterococcus  faecalis tetapi  masih  lebih  baik  efek antibakteri fraksi etanol
O. americanum . Klorheksidin merupakan   agen   kation yang       dapat
menghambat  aktivitas  bakteri. 15 Mekanisme antibakterinya berhubungan dengan struktur molekul kation bibisguanid. Molekul kation diserap  ke  membran  sel  dan  menyebabkan kebocoran dari komponen intraselularnya. 15
Klorheksidin  pada  konsentrasi  yang  rendah (0,02  %)    dapat  bertindak  sebagai  bakteriostatik sedangkan  pada  konsentrasi  yang  lebih  tinggi bersifat bakterisid karena   menyebabkan koagulasi dan presipitasi sitoplasma. 6,15,16

## KESIMPULAN
Ekstrak  fraksi  etanol Ocimum  americanum dengan  konsentrasi  80%  memberikan  efek antibakteri  terhadap  pertumbuhan Enterococcus faecalis ,  ditunjukkan  dengan  menghasilkan diameter  zona  hambat  (16,7  mm)  lebih  baik dibandingkan dengan Minosep 0,2 % (12,1 mm).

## UCAPAN TERIMA KASIH
Kami ingin mengucapkan banyak terima kasih kepada  Universitas  Padjadjaran  yang  telah membiayai  penelitian  kami  dan  seluruh  kerabat yang terlibat dalam penelitian ini. Terima kasih atas segala bantuan dan dukungan yang diberikan

## DAFTAR PUSTAKA
1. Sroisiri.T., Boonyanit.T. Phytopharmacy Journal Ocimum  americanum  Ocimum  americanum  L. Essential  Oil  Exhibits  Antimicrobial  Activity Against  Oral  Bacteria  Related  To  Periodontal Disease. Phytopharm .2012
2. Sroisiri.T.,  Boonyanit.T. In  Vitro  Antimicrobial Activity Of Ocimum americanum L. Essential Oil Against  Oral  Microorganisms.  South  Asian  J Trop Med Public Health , 2009;40:1025-1033.
3. Rocas, I.N & Siqueira, J.F. Characterization Of Microbiota  Of  Root  Canal  Treated  Teeth  With Post  Treatment  Disease.  Journal  Of  Clinical

## TERHADAP Enterococcus faecalis ATCC 29212
Microbiology , 2012;50(5): 1721-1724
4. Torabinejad  M,  Walton  RE. Endodontics: Principles  and  Practice,  5th  edition.  Elsevier . 2014
5. Hargreaves  KM,  Berman  LH.  Cohen’s: Pathways  of  The  Pulp  Eleventh  Edition. Elsevier . 2016
6. Dammanschke.  T.,  Jung.  N.,  Harks.  I., Schafer.E. The  Effect  Of  Different  Root  Canal Medicament Of Enterococcus Faecalis Ex Vivo. European Journal Of Dentistry , 2013;7(4): 442- 448
7. Abbaszadegan.  A.,  Sahebi.  S.,  Gholami.  A., Delroba. A., Kiani. A., Iraji. A. Time Dependent Antibacetrial  Efects  Of  Aloe  Vera  And  Zataria
Multiflora  Plant  Essential  Oils  Compared  To Calcium  Hydroxide  In  Teeth  Infected  With Enterococcus Faecalis. Journal Of Investigative
And Clinical Dentistry , 2016;7(1): 93-101
8. M.A. Mozayeni, A. Haeri, O. Dianat, A.R. Jafari. Antimicrobial  Effect  Of  Four  Intracanal
Medicaments On Enterococcus Faecalis; An In
Vitro  Study.  Iranian  Endodontic  Journal,
2014;9(3):195-198
9. Prisinda.D.,  Suciati.A.,  Fatriadi.F. Antibacterial Potential Of Ocimum Sanctum Oils In Relation To  Enterococcus  Faecalis  Atcc  29212.  Dental
Journal , 2018;51(3): 104–107
10. A.S.  Setiawan.,  Fatriadi.  F., Prisinda.D. Differences  Of  Basilicum  Leaf  (Ocimum
Basilicum) Essential Oil’s Inhibition Zones And
Parachlorophenol (Chkm) Against Enterococcus
Faecalis.  International  Journal  Of  Medical
Science  And  Clinical  Invention ,  2018;  5(12):
4237-4239
11. D. Kandaswamy., Venkateshbabu N. Root canal irrigants.  Journal  of  Conservative  Dentistry
2010. 13 (4); 256-264
12. Siti S., Diki P.W., Sohadi W. Uji Anti Bakteri Obat Kumur  Ekstrak  Etanol  Herba  Kemangi (Ocimum americanum L) Terhadap
Streptococcus  mutans.  Indonesian  Journal  of Pharmaceutical  Science  and  Technology.
2012.1 (2):20-8.
13. Diah  Ayu  L,.  Apriliana  E. Efek  Potensial  Daun Kemangi  (Ocimum  basilicum  L)    Sebagai Pemanfaatan  Hand  Sanitizer.  Majority .  2016.
5(5):124-128.
14. Livia  Sobodnikova., Silvia  Fialova  et  all. Antibiofilm  Activity  of  Plant  Polyphenols.
Molecules . 2016. 21(1717):1-15.
15. Garg N, Garg A. Textbook of Endodontics 2nd edition. 3rd ed. India: Jaypee Brothers Medical
Publishers ; 201. 555
16. Horner  C,  Mawer  D,  Wilcox  M. Reduced susceptibility  to  chlorhexidine  in  staphylococci: Is it increasing and does it matter? J Antimicrob Chemother . 2012;67(11):2547–59.