Aktivitas Antioksidan Ekstrak dan Fraksi Daun Manggis ( Garcinia mangostana) terhadap DPPH (1,1-Difenil-2-Pikrilhidrazil)
Antioxidant Activity of Mangosteen ( Garcinia mangostana ) Leaves Extract and Fraction toward DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil)
Ghani Nurfiana*, Lukito Mindi, Masyitah Novia
Fakultas Farmasi Universitas Setia Budi Jln. Letjen Sutoyo-Mojosongo Surakarta-57127 Telp. 0271-852518 Email:ghani.nurfiana@rocketmail.com

## ABSTRAK
Antioksidan  sangat  penting  dalam  menjaga  kesehatan  tubuh  manusia  karena  mampu menangkal  radikal  bebas.  Daun  manggis  ( Garcinia  mangostana  ) oleh  masyarakat  digunakan sebagai  obat  tradisional  yang  diketahui  mengandung  flavonoid,  tanin,  alkaloid  dan  saponin. Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  aktivitas  antioksidan  ekstrak  dan  fraksi  daun manggis  terhadap  radikal  DPPH  (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil)  dengan  parameter IC 50 serta  untuk mengetahui golongan senyawa yang berperan dalam uji aktivitas antioksidan.
Daun manggis diekstraksi dengan metode maserasi menggunakan etanol 96%. Ekstrak yang diperoleh kemudian disuspensi dengan air selanjutnya difraksinasi dengan n -heksana dan etil  asetat.  Ekstrak  daun  manggis  dan  fraksi  yang  didapatkan  selanjutnya  diuji  aktivitas antioksidannya  terhadap  radikal  DPPH.  Pengujian  dilakukan  dalam  5  seri  konsentrasi  dengan cara menambahkan 4,0 ml larutan uji dengan 1,0 ml DPPH 0,45 mM. Aktivitas terhadap radikal bebas diukur dengan alat spektrofotometer pada panjang gelombang 517 nm dan ditentukan nilai IC 50 dengan menggunakan analisis probit. Kontrol positif yang digunakan yaitu Rutin. Identifikasi golongan  senyawa  dapat  dilakukan  dengan  menggunakan  metode  Kromatografi  Lapis  Tipis (KLT) yang hasilnya bisa diidentifikasi dengan pereaksi semprot atau dibandingkan dengan baku standart.
Hasil menunjukkan bahwa daun manggis memiliki aktivitas antioksidan dengan nilai IC 50 ekstrak etanol, fraksi n -heksana, fraksi etil asetat, fraksi air  berturut turut sebesar 17,64  mg/ml, 45,36  mg/ml,  13,71  mg/ml,  12,10  mg/ml.  Fraksi  air  mempunyai  aktivitas  yang  paling  kuat dibandingkan yang lainnya dengan nilai IC 50 yang mendekati IC 50 Rutin yaitu 15,24 mg/ml sebagai kontrol  positif.  Identifikasi  senyawa  dalam  ekstrak  dan  fraksi  secara  KLT  dengan  berbagai penampak bercak mengandung golongan senyawa : flavonoid, saponin dan steroid.
Kata Kunci : Antioksidan, Daun Manggis ( Garciniamangostana) , DPPH

## ABSTRACT
Antioxidant  is  very  important  to  keep  human’s  health  because  it  can  scavenge  free radical. Garcinia mangostana L. which is used by people as traditional herbal medicine and it has traditional name mangosteen is known contain of flavonoid, tannin and saponin. The aim of the experiment was to find out the antioxidant activity of extracts and fractions of mangosteen folium against  the  DPPH  radicals  (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)  to determine  the  IC 50 and  classes  of compounds that play a role in antioxidant activity assay.
Mangosteen  leaves  were  extracted  by  maceration  method  using  96%  ethanol.  Extract was partitionedwith water and n-hexane, and then with ethyl acetate. The antioxidant activity of fraction was tested against DPPH radicals. The test was conducted in 5 series of concentrations by adding 4.0 ml test solutions with 1.0 mlDPPH 0.45 mM. The radicals scavenging activity was measured  with  spectrophotometer  at  517  nm  wavelength  anddetermined  the  IC 50 value.  The experiment  used  Rutin  as  positive  control.The  identification  of  the  class  of  compounds  can  be carried out using the Thin Layer Chromatography (TLC) method whose results can be identified by spray reagents or compared with the standard standard.
The result of the experiment showed that Mangosteen folium had antioxidant activity with IC 50 of ethanol extract, n -hexane fraction, ethyl acetate fraction and water fraction: 17.64 μg / ml, 45.36 μg / ml, 13.71  μg /  ml, 12.10 μg  / ml respectively. The  water fraction has the strongest activity  compare  to the  other  with  the  IC 50 is  almost  near  often  Ru tin’s IC 50 is 15.24 μg as the positive  control.  Extracts  and  fractions  of  TLC  with  various  spotting  agents  contain  a  class  of compounds: flavonoids, saponins and steroids
Keywords: Antioxidant, leaves Mangosteen (Garcinia mangostana), DPPH

## PENDAHULUAN
Antioksidan  merupakan  suatu senyawa  yang  mampu  menghambat oksidasi  molekul  lain.  Tubuh  manusia tidak mempunyai cadangan antioksidan dalam  jumlah  berlebih,  sehingga  jika terjadi  paparan  radikal  berlebih  maka tubuh membutuhkan antioksi dan eksogen  (Sunarni  2005).  Antioksidan sintetik seperti BHA, (butil hidroksianisol),  BHT  (butil  hidroksi toluen),  PG  (propil  galat),dan  TBHQ (tert-butil Hidrokuinon) dapat meningkatkan terjadinya karsinogenesis sehingga penggunaan antioksidan alami mengalami peningkatan (Rohman and  Riyanto  2005).  Senyawa-senyawa polifenol  seperti  flavonoid  dan  galat mampu  menghambat  reaksi  oksidasi melalui mekanisme penangkapan radikal  ( radical  scavenging )  dengan cara  menyumbangkan  satu  elekron pada  elektron  yang  tidak  berpasangan dalam radikal bebas sehingga
banyaknya radikal bebas menjadi
berkurang (Pokorny et al 2001).
Daun  manggis  dapat  digunakan sebagai  antioksidan,  antiradang  dan antikanker, dan baru-baru ini dinyatakan memiliki aktivitas anti HIV (Williams et al
1995). Daun manggis diketahui mengandung  quersetin  (Falodun  and Agbakwuru 2004). Quersetin
diindikasikan  sebagai  flavonoid  yang
mempunyai  kemampuan  antioksidan paling kuat (De Groot 1994).
Salah satu uji untuk menentukan aktivitas  antioksidan  penangkap  radikal adalah  metode  DPPH  (1,1-difenil-2- pikrilhidrazil). DPPH memberikan serapan kuat pada panjang gelombang 515 nm yang diikuti reaksi reduksi oleh senyawa  antioksidan  (Pokorny et  al 2001). Penangkap radikal bebas menyebabkan elektron menjadi berpasangan yang menyebabkan penghilangan warna sebanding dengan jumlah  elektron  yangdiambil  (Sunarni 2005). Pada  penelitian  ini  dilakukan  uji antiradikal bebas DPPH untuk mengetahui potensi aktivitas antioksidan  ekstrak  etanolik,  fraksi n - heksane, etil asetat, dan fraksi air daun manggis    dalam  menghambat  radikal bebas  DPPH.  Pengujian  ini  bertujuan untuk mengetahui manakah dari seluruh zat uji yang memiliki potensi tinggi untuk dikembangkan  sebagai  bahan  yang bersifat  antioksidan.  Manfaat  penelitian ini yaitu  untuk memberikan dasar ilmiah potensi daun manggis sebagai antioksidan  dan  memberikan  acuan dalam usaha menemukan serta menyelidiki  senyawa  yang  berkhasiat sebagai antioksidan dari tanaman yang tumbuh di Indonesia.

## METODE PENELITIAN Bahan
Bahan  utama  yang  digunakan adalah  daun  manggis  yang  ditanam  di daerah Wonogiri, Jawa Tengah.
Bahan  kimia  yang  digunakan meliputi n -heksana, etil asetat, etanol 96 %, metanol p.a. (Merck, Germany ), 1,1 difenil-2-pikrilhidrazil ,  Rutin.  Lempeng
KLT  GF  254,  pereaksi lieberman bourchardad ,  sitroborat,  anisaldehida,
FeCl 3

## Alat
Alat  yang  digunakan  adalah botol maserasi, vacuum rotaevaporator, dan  alat  gelas.  Alat  kromatografi  dan spektrofotometri
adalah bejana kromatografi ( chamber ), lampu UV, pipa kapiler,  oven,  spektrofotometer  UV-Vis, kondensor,  labu  destilasi,  timbangan analisis, kuvet, labu takar. Alat lain yang digunakan seperti stopwatch , timbangan miligram,
waterbath, timbangan  analitik, beaker  glass ,  pipet volume,  mikropipet, pipet ukur, siring. Persiapan Bahan
Tanaman  sebelum  digunakan harus dipastikan terlebih dahulu dengan dilakukan determinasi tanaman berdasarkan kunci determinasi menurut Backer and Van der Brink (1968). Daun manggis yang
telah ditetapkan identitasnya,  dipilih  yang  tidak  terlalu muda, tidak terlalu tua, masih segar dan dipetik  siang  hari.  Daun  selanjutnya dicuci  dengan  air,  dikeringkan  dengan oven  pada  suhu  50 o C.  Pembuatan serbuk menggunakan ayakan ukuran 40 mesh.
Pembuatan  Ekstrak  Etanolik  Daun manggis
Ekstrak  etanolik  dibuat  dengan cara,  1000  g  serbuk  daun  manggis
dimasukkan dalam botol gelap kemudian ditambah dengan etanol 96%
sebanyak  7500  ml.  Maserasi  dilakukan selama  lima  hari  dengan  penggojogan. Setelah  itu  dipisahkan  antara  filtrat dengan ampas. Ekstrak yang diperoleh dipekatkan dengan ` vacuum rotaevaporator suhu 40°C ), selanjutnya disebut ekstrak etanolik daun manggis Pembuatan Fraksi n -Heksana, Fraksi Etil Asetat, dan Fraksi Air
Ekstrak  etanolik  sebanyak  10  g kemudian disuspensi dengan air
sebanyak 75 ml lalu dipartisi dengan n-
heksana 75 ml dan di replikasi sebanyak tiga  kali  menggunakan  corong  pisah.
Lapisan n- heksana selanjutnya dikumpulkan  dan  dipekatkan  dengan vaccum rotaevaporator , filtrat n- heksana yang kering ini selanjutnya disebut fraksi n- heksana.  Lapisan  air  sisa  partisi dengan n- heksan kemudian dipartisi lagi dengan 75 ml etil asetat dan di replikasi sebanyak  tiga  kali.  Lapisan  etil  asetat dipisahkan  dan  dipekatkan  dengan vaccum  rotaevaporator dan  diperoleh fraksi etil asetat. Lapisan air diuapkan di atas waterbath sampai  kental,  yang kemudian disebut fraksi air. Fraksi yang didapat masing-masing ditimbang untuk mendapat  persen  rendemen  terhadap bobot awal.
Identifikasi  Kandungan  Flavonoid secara  Kromatografi  Lapis  Tipis (KLT)
Identifikasi  golongan  senyawa dapat  dilakukan  dengan  menggunakan KLT.  Identifikasi  golongan  senyawa dilakukan  terhadap  ekstrak  dan  fraksi yang diperoleh dengan melihat hasil dari penampak bercak yang bereaksi dengan reagen di antaranya : flavonoid
(uap Ammonia dan pereaksi Sitroborat),
alkaloid  (pereaksi  Dragendroff),  steroid (pereaksi  Liberman  bourchard),  tanin (Pereaksi  FeCl 3 ),  saponin  (Pereaksi Anisaldehid).  Uji  kualitatif  ini  dilakukan untuk membuktikan
kebenaran bahan/zat  aktif  yang  terkandung  pada daun  manggis    yang  berperan  dalam aktivitas antioksidan terhadap DPPH. Penentuan Panjang Gelombang

## Maksimum DPPH
Sebanyak  1,0  ml  larutan  DPPH 0,45  mM  ditambah  4,0ml  metanol, dikocok homogen dan diamati
serapannya pada rentang λ 500-523 nm dengan menggunakan blanko methanol p.a.  Sebelum  dilakukan  penentuan panjang gelombang maksimum tersebut terlebih  dahulu  ditetapkan operating time untuk  mengetahui kestabilan larutan DPPH.
Penetapan Aktivitas Antioksidan Penetapan  aktivitas  antioksidan dilakukan  terhadap  ekstrak  etanolik, fraksi n -heksana,  etil  asetat  dan  fraksi air daun manggis beserta Rutin sebagai kontrol  positif  dibuat  menjadi  4  seri konsentrasi.  Setiap  konsentrasi  larutan uji dipipet 4,0 ml dimasukkan ke dalam vial,  kemudian  ditambahkan  1,0ml larutan  pereaksi  DPPH  0,45  mM, dikocok homogen dan didiamkan selama  30  menit  kemudian  diamati absorbansinya pada panjang gelombang  maksimum  yang  telah ditentukan. Percobaan
dilakukan sebanyak tiga kali pengulangan dengan kontrol  negatif  larutan  DPPH  0,45  mM tanpa zat uji. Analisis Data Aktivitas antioksidan penangkap radikal DPPH dihitung dengan menggunakan rumus persentase
peredaman sebagai berikut:
Peredaman(%) = 𝐴𝑏𝑠𝑏𝑙𝑎𝑛𝑘𝑜−𝐴𝑏𝑠𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝐴𝑏𝑠𝑏𝑙𝑎𝑛𝑘𝑜 x 100% Data selanjutnya dihitung dengan persamaan  regresi  linier  berdasarkan rumus Y = a + bX dengan metode probit. Persamaan  regresi  linier  digunakan untuk menghitung IC 50 .

## HASIL DAN PEMBAHASAN Determinasi Daun Manggis
Determinasi dilakukan di laboratorium Biologi Universitas
Sebelas  Maret.  Bagian tumbuhan  yang digunakan  sebagai  bahan  determinasi adalah daun Manggis. Hasil determinasi menunjukkna  bahwa  tanaman  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah benar  tanaman  manggis  ( Garcinia mangostana)

## Hasil Ekstraksi dan Fraksinasi
Ekstrak  kental  etanolik  yang didapatkan  dari  1000  g  serbuk    adalah 296,43  g  sehingga  memiliki  rendemen sebesar  29,64%.    Ekstraksi  dilakukan dengan etanol karena etanol merupakan pelarut universal sehingga dapat mengekstraksi hampir semua
kandungan  kimia  dalam  simplisia. Ekstrak  kental  etanolik  sebanyak  10  g kemudian  dilakukan  fraksinasi  dengan n -heksana, etil asetat, dan air dimaksudkan untuk memisahkan senyawa berdasarkan polaritasnya, dimana fase n -heksana akan melarutkan kandungan senyawa tanaman  yang  bersifat  nonpolar,  fase etil  asetat  melarutkan  senyawa  yang bersifat semipolar, dan fase air melarutkan  kandungan  senyawa  kimia tanaman  yang  bersifat  polar.  Hasil partisi dapat dilihat pada Tabel 1 setelah dilakukan 3 kali replikasi.
Tabel  1.  Hasil  fraksinasi  ekstrak etanolik daun manggis Nama pelarut Berat (g) Rendemen (%) n -heksan 8,997 26,67 etil asetat 19,287 32,14 air 23,425 39,04 Hasil identifikasi kandungan senyawa  kimia  ekstrak  etanol  daun manggis menggunakan metode KLT Ekstrak  etanol  herba  manggis yang diperoleh melalui metode maserasi, kemudian dianalisis
kandungan kimianya menggunakan metode  kromatografi  lapis  tipis  (KLT). Senyawa  yang  akan  diidentifikasi  yaitu alkaloid,  flavonoid,  steroid,  tannin  dan saponin.  Fase  diam  yang  digunakan yaitu Silika Gel GF 254 dan menggunakan fase gerak yang
berbeda-beda berdasakan polaritas senyawa,  Hasil  identifikasi  kandungan senyawa  tersebut  dapat  dilihat  pada tabel 2.
Dari hasil identifikasi kandungan senyawa  ini  dapat  disimpulkan  bahwa herba  manggis  mengandung  senyawa flavonoid, steroid dan saponin baik pada ekstrak  maupun  pada  masing-masing fraksinya. Hasil Penentuan Aktivitas Antioksidan Panjang  gelombang  maksimum
DPPH  dalam  metanol  yang  didapatkan pada  penelitian  ini  adalah  517  nm. Pengukuran aktivitas peredaman radikal DPPH  selanjutnya  dilakukan  pada panjang gelombang 517 nm. Perubahan warna  violet  larutan  DPPH  menjadi warna  kuning  karena  bereaksi  dengan antioksidan  diikuti  dengan  penurunan serapan  pada  panjang  gelombang  517 nm. Perubahan warna tersebut menunjukkan  adanya  aktivitas  yang dapat dilihat dari prosentase peredamannya. Rutin digunakan sebagai  kontrol  positif  sebab  telah terbukti  aktivitas  antioksidannya.  Nilai IC 50 merupakan yakni daya konsentrasi larutan uji yang mampu menangkal 50% larutan  radikal  bebas  DPPH.  Semakin kecil  nilai IC 50 ,  maka  semakin  efektif sebagai  antioksidan.  Nilai IC 50 dapat dilihat pada Gambar 1.
Tabel  2. Hasil identifikasi senyawa setiap fraksi dari ekstrak daun manggis
Uji Alkaloid Flavonoid Steroid Saponin Tanin Ekstrak - + + + - n -heksana - + + + - Etil asetat - + + + - Air - + - + -
Gambar  1.  Aktivitas  antioksidan penangkap radikal bebas berdasarkan nilai IC 50 .
Fraksi n- heksana  memiliki  nilai IC 50 tertinggi  yaitu  45,36  mg/ml  yang menunjukkan  bahwa  fraksi n -heksana memiliki  aktivitas  antioksidan  paling lemah  dibanding  fraksi  lainnya.  Fraksi air  memiliki  aktivitas  antioksidanpaling kuat  dengan  nilai IC 50 terendah  yaitu 12,10  mg/ml  bahkan  lebih  rendah daripada  ekstrak  etanolik  yang  belum terfraksinasi  dengan  nilai IC 50 17,64 mg/ml.  Aktivitas  fraksi  air  yang  lebih tinggi dari ekstrak etanolik menunjukkan bahwa  aktivitas  antioksidan  dari  hasil penelitian ini bukan karena efek sinergis dari  campuran  senyawa  tetapi  karena adanya  kemungkinan  senyawa  aktif antioksidan yang terkandung pada fraksi air.  Selain  itu,  berdasarkan  identifikasi KLT fraksi air menunjukkan bercak yang mengarah  pada  senyawa  flavonoid dengan  salah  satu  bercak  terdeteksi mempunyai  karakteristik  seperti  pada bercak Rutin.
Aktivitas antioksidan pada fraksi etil asetat hanya selisih sedikit dari pada fraksi  air  dan  bahkan  juga  lebih  tinggi dari  ekstrak  etanolik  yaitu  dengan  nilai IC 50 13,71  mg/ml.  Hal  ini  kemungkinan karena  fraksi  etil  asetat  meskipun
mengandung  senyawa  yang  mengarah flavonoid  pada  identifikasi  KLT  tetapi senyawa  tersebut  memiliki  aktivitas antioksidan yang lebih tinggi dibandingkan fraksi air. Berdasarkan hasil penelitian tersebut  maka  fraksi  air  mempunyai potensi yang tinggi untuk dikembangkan sebagai bahan
yang bersifat antioksidan.

## KESIMPULAN
1.  Daun  Manggis  memiliki  aktivitas antioksidan penangkap radikal DPPH.
2.  Ekstrak  etanolik,  fraksi n- heksana,
fraksi etil asetat dan fraksi air secara berturut-turut memiliki aktivitas antioksidan dengan nilai IC 50 sebesar  17,64 mg/ml,  45,36  mg/ml, 13,71 mg/ml, dan 12,10 mg/ml.
3.  Fraksi  air  memiliki  aktivitas  paling kuat  dibandingkan  lainnya  dengan nilai IC 50 mendekati IC 50 Rutin  yaitu 15,24 ppm sebagai kontrol positif.
4.  Daun  manggis  memiliki  senyawa yang berpotensi sebagai antioksidan yaitu  golongan  senyawa  flavonoid, steroid dan saponin.

## DAFTAR PUSTAKA
Backer CA and Van der Brink RBC. 1968. Flora of Java. N.V.D.
Noordhoff.  Groningen.De  Groot  H.
1994. Reactive oxygen species in tissue injury. J. Hepatogastroentrology . 41:328-332. Hernani  M.  dan  Rahardjo,  M.  2005. Tanaman Berkhasiat Antioksidan .  Jakarta:  Penebar Swadaya. 17.64
45.36
13.71 12.10 15.24 - 5,00 10,00 15,00 20,00 25,00 30,00 35,00 40,00 45,00 50,00 N ila i I C 5 0 (µ g/ml )
I  S  Young,  J  V  Woodside.  2001.
Antioxidants  in  health  and disease. J Clin Pathol : 54 : 17 Pokorny J, Yanishlieva N, and Gordon
M.  2001. Antioxidant  in  Food:
Practical  Applications. CRC
Press. New York.
Rohman  A,  Riyanto  S.  2005.  Daya antioksidan ekstraketanol daun kemuning  ( Murraya  paniculata (L)Jack) secara In Vitro . Jurnal
Farmasi Indonesia ,16(3):136 –
140.
Sunarni T. 2005. Aktivitas antioksidan penangkap  radikalbebas  dari daun  kepel  ( Stelechocarpus
burahol (BI).  Hook  f.  &  Th.). Jurnal Farmasi Indonesia ,2(1):12-15. Williams CA, Hoult, JRS, Harborne JB, Greenham J.1995. A biologically active lipophilic flavonolfrom Tanacetum parthenium . Phytochemistry 38
(1): 267-270. Winarsi  W.  2007. Antioksidan  Alami dan Radikal Bebas . Yogyakarta:  Kanisius.  Halm  : 21, 26-27
Zarena, A. S., dan Sankar, K.U. 2009. Study of Antioxidant Properties from  Garcinia  mangostana  L. Pericarp  Extract. Acta  Sci.
Pol.Technol . Aliment. 8 (1): 23- 34