Ekstrak Kulit dan Biji Anggur ( Vitis vinifera ) Menurunkan Jumlah Sel Neuron yang  Rusak, Volume Infark, dan Memperbaiki Fungsi Motorik pada Tikus Wistar Model Stroke Iskemik
Astrid Nandikasari Lukito*, Mohammad Rasjad Indra**

## ABSTRAK
Stroke  iskemik  merupakan  penyakit  karena  tersumbatnya  pembuluh  darah  ke  otak  sehingga menyebabkan  kerusakan  neurologis.  Kerusakan  ini  akibat  perubahan  seluler  yang  menyebabkan kerusakan  neuron,  edema  otak,  dan  penurunan  fungsi  motorik.  Ekstrak  kulit  dan  biji  anggur  ( Vitis vinifera ) mengandung resveratrol yang mampu melintasi sawar darah otak dan memperbaiki kematian neuron  melalui  jalur  patofisiologi  seluler  serta  menginduksi  ERK  1/2 pathway untuk  regenerasi  otak.
Pada penelitian ini ingin diketahui korelasi antara perbaikan jumlah neuron yang rusak, volume infark, dan fungsi motorik setelah pemberian ekstrak kulit dan biji anggur pada tikus. Penelitian eksperimental ini menggunakan tikus ( Rattus norvegicus) yang terbagi menjadi 5 kelompok yaitu (1) kontrol positif (+),
(2) kontrol negatif (-), (3)  dosis ekstrak 50 mg/kgBB, (4)  dosis ekstrak 100 mg/kgBB, dan (5) dosis ekstrak  200  mg/kgBB.  Ekstrak  diberikan  selama  2  minggu.  Tikus  diinduksi  stroke  dengan  metode unilateral  carotid  artery  occlusion selama  45  menit.  Kemudian  diuji  fungsi  motoriknya  dengan ladder rung walking test . Setelah 2 minggu, dianalisis fungsi motorik, jumlah neuron yang rusak dan volume infark  dengan  metode  hematoksilin  &  eosin.  Berdasarkan  uji  Pearson  terdapat  korelasi  yang  cukup antara  fungsi  motorik  dengan  jumlah  neuron  yang  rusak  maupun  volume  infark  (berturut-turut  R  = 0,306; R = 0,346). Sementara antara jumlah neuron yang rusak dengan volume infark terdapat korelasi yang kuat (R = 0,645, p = 0,002; p  0,05). Kesimpulannya terdapat korelasi antara perbaikan jumlah sel neuron yang  rusak, volume infark, dan fungsi motorik.
Kata kunci: Kulit dan biji anggur, Motorik, Infark, Regenerasi otak, Resveratrol, Stroke.
Grape ( Vitis vinifera ) Peel and Seed Extract Decrease the Damaged Neurons, Infarc Volume, and Repair Motoric Function in Ischemic Stroke Rat Model

## ABSTRACT
Ischemic stroke is a disease that caused by blockage of blood circulation in brain, then resulting in neurological failure. This is due to cellular changes that lead to damaged neurons, brain edema, and motoric  function  impairment.  Grape  ( Vitis vinifera ) peel  and  seed  extract contain  resveratrol  which  is able to pass through blood brain barrier and improve neuron death through cellular pathway and induce ERK 1/2 pathway for brain regeneration. This study aim is to find the  correlation between damaged neurons, infarct volume, and motoric function improvement after grape peel and seed extract treatment in  rats.  This  experimental  study  used  rats  that  were  divided  into  5  groups,  (1)  positive  control,  (2) negative control, (3) extract concentration 50 mg/kgBB, (4) extract concentration100mg/kgBW, and (5) extract concentration  200mg/kgBW. They were treated with grape peel and seed extract  in 2 weeks. Inducing stroke performed with unilateral carotid artery occlusion for 45 minutes. Motoric function was assessed by ladder rung walking test. After 2 weeks, motoric function reassessment, damaged neurons and infarct volume were evaluated by hematoxylin & eosin staining. Based on Pearson correlation test, there  are  moderate  correlation  between  motoric  function  and  the  number  of  damaged  neurons  and infarct volume (R = 0.306 and R = 0.346) respectively and strong correlation between damaged neurons and infarct volume (R = 0,645, p = 0.002; p  0,05 ). In conclusion, there are correlation between the number of damaged neurons, infarct volume, and motoric function improvement.
Keywords: Grape peel and seed, Motoric, Infarc, Brain regeneration, Resveratrol, Stroke.
* Program Studi Pendidikan Dokter, FKUB
** Laboratorium Fisiologi, FKUB

## PENDAHULUAN
Stroke  merupakan  penyakit  yang ditandai dengan hilangnya sirkulasi darah ke otak  secara  tiba-tiba  dan  mengakibatkan penurunan  fungsi  neurologis. 1 Stroke  di dunia,  87  %  nya  disebabkan  karena  stroke iskemia. 2 Prevalensi  stroke  di  dunia  adalah 30,7  juta. 3 Setiap  4  menit,  1  orang meninggal dunia karena stroke. Di Indonesia penyakit  stroke  merupakan  penyebab kematian nomor 1 yaitu sebesar 15,4 % dari seluruh kematian. 4
Stroke  iskemik  terjadi  bila  pembuluh darah  yang  memasok  darah  ke  otak tersumbat  oleh  gumpalan  darah  sehingga sel-sel  di  daerah injury tidak  menerima oksigen dan glukosa yang dibutuhkan. 5 Otak merupakan  organ  yang  sangat  bergantung pada  oksigen  dan  glukosa.
6 Peristiwa  ini menyebabkan  mekanisme  eksitotoksisitas yang dimulai dengan berkurangnya adenosine  triphosphate (ATP)  sehingga mengakibatkan  Na + /K + -ATPase  tidak  dapat bekerja  sehingga  Na + yang  juga  bersama- sama  dengan  air  akan  terperangkap  di dalam  sel  dan  K + tidak  dapat  keluar, akibatnya  terjadi  edema  sitotoksik. 7,8 Hal  ini juga mengakibatkan  peningkatan  pelepasan glutamat  yang  menyebabkan  meningkatnya Ca 2+ dan kemudian meningkatkan kerusakan mitokondrial,  membran  sel,  sitoskeleton, fragmentasi  DNA,  dan  produksi  radikal bebas sehingga pada akhirnya menyebabkan  kematian  sel  neuron. 7 Meningkatnya radikal bebas juga mengakibatkan kerusakan sel endotel sawar darah  otak  yang  menyebabkan  edema vasogenik. 9 Kematian neuron mengakibatkan  defisit  fungsi  neurologis primer. 10 Penderita  dapat  mengalami kehilangan salah satu penglihatan, kesulitan berbicara,  dan  kelumpuhan  ekstremitas, serta kesulitan dalam memori.
Neuron  otak  memiliki  plastisitas  yaitu kemampuan untuk beradaptasi seumurhidup
terhadap perubahan, mengatasi cedera, dan mengkompensasi  hilangnya  fungsi  dalam satu bagian otak dengan bekerja lebih keras di  daerah  lain. 11 Kemampuan  bertahan  dan plastisitas  yang  dimiliki  neuron  diaktifkan melalui  ERK  ( extracellular  sinyal-regulated kinease )  1/2  pathway.  ERK  1/2  diaktifkan melalui growth  factor seperti  neurothropin, aktivitas  neuronal,  atau  cAMP  ( cyclic adenosine  monophosphate ). 12 Neutrophin, termasuk nerve growth factor (NGF) & brain- derived  neutrophic  factor (BDNF)  juga melindungi neuron dari proses eksitotoksisitas. 13
Rehabilitasi  pasca  stroke  iskemik  yang sudah  ada  saat  ini  memiliki  2  tujuan,  yaitu meminimalkan  cedera  dan  komplikasi  yang terjadi. 14 Obat utama yang digunakan antara lain antiplatelet, antikoagulan, dan
trombolitik. 15 Aspirin  merupakan  antiplatelet akan  tetapi  tidak  dapat  memperbaiki kerusakan yang disebabkan stroke. 16 Tissue plasminogen  activator (TPA)  merupakan trombolitik    yang  digunakan  untuk  stroke akut  dan  mengembalikan  sirkulasi  darah  ke otak,  akan  tetapi  TPA  menginduksi keluarnya toksin seperti glutamate sehingga mengakibatkan  neurodegenerasi. 17 Kedua obat  ini  tidak  mampu  memperbaiki kerusakan saraf yang sudah terjadi. Resveratrol merupakan senyawa polifenol yang  ditemukan  pada red  wine , anggur,  dan  kacang.  Studi  perkembangan mengindikasikan ekstrak resveratrol mengurangi insiden age-related neurological disorders termasuk  degenerasi  makular, stroke, dan demensia. 18 Resveratrol mampu berfungsi  sebagai  neuroprotektif  membantu menguptake  glutamat,  dan  menurunkan radikal  bebas. 19,20 Resveratrol  menginduksi pengeluaran neurotrophic  factor seperti GDNF  ( glial  cell  line-derived  neutrophic factor )  dan  BDNF  yang  berkontribusi  untuk
perkembangan  dan  kemampuan  neuron untuk hidup. 21
Kandungan  resveratrol  terbesar  dapat ditemukan  pada  anggur (Vitis  vinifera) terutama  pada  bagian  kulit  dan  bijinya. Kandungan  resveratrol  dalam  ekstrak  kulit anggur  kira-kira  24,06  µg/ml  dan  pada ekstrak  biji    anggur  0,9850  µg/ml. 22,23 Ekstrak  biji  anggur  mampu  melintasi  sawar darah otak yang bersifat selektif permeabel. 24 Selain resveratrol, anggur juga memiliki  kandungan  phenol  lainnya  seperti asam  phenolat  dan  flavonoid  (catechins, quercetin, dan antosianin). 25,26 Anggur dapat tumbuh  dengan  baik  di  Indonesia  terutama di  daerah  Jawa  Timur  (Probolinggo, Pasuruan,  Situbondo),  Bali,  dan  NTT (Kupang).
Karena  salah  satu  kandungan  anggur ( Vitis vinifera ) mengandung resveratrol yang dapat  membantu uptake glutamat  dan menurunkan  radikal  bebas  sehingga  dapat mengurangi kerusakan akibat eksitotoksisitas  yang  dapat  berkontribusi dalam  perbaikan  jumlah  sel  neuron  yang rusak,  edema  sel  dan  fungsi  motorik,  maka diperlukanlah suatu penelitian yang membuktikan  korelasi  antara  perbaikan jumlah sel neuron yang rusak, volume infark akibat edema sel, dan fungsi motorik setelah pemberian ekstrak anggur dalam meningkatkan  regenerasi  neuron.  Jadi, dengan mengetahui korelasi perbaikan yang dihasilkan,  didapatkan  suatu  pengobatan alternatif  terbaru  berbasis  pengobatan regeneratif serta dapat memaksimalkan efek regenerasi  sel  yang  dihasilkan  oleh  ekstrak kulit dan biji anggur tersebut.

## BAHAN DAN METODE
Desain Penelitian Penelitian ini adalah penelitian eksperimental  untuk  mengetahui  adanya korelasi antara perbaikan jumlah sel neuron otak  yang  rusak,  volume  infark,  dan  fungsi motorik  pada  tikus  model  stroke  iskemik
setelah  pemberian  ekstrak  kulit  dan  biji anggur (Vitis  vinifera) dalam  meregenerasi sel  saraf  pusat.  Desain  penelitian  ini menggunakan randomized  pre  test  -  post test  controlled  group  design untuk  menguji fungsi  motorik  dengan  metode ladder  rung walking  test dan  menggunakan post  test only,  control  group  design untuk  mengukur perbaikan jumlah sel neuron yang rusak dan edema  otak  dengan  metode  pengecatan H&E.
Lokasi dan Waktu Penelitian Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium  Farmakologi,  Fisiologi,  dan
Patologi  Anatomi  Fakultas  Kedokteran Universitas  Brawijaya,  Laboratorium  Sentral Ilmu  Hayati  Universitas  Brawijaya,  dan Rumah  Sakit  Islam  Aisiyah  pada  bulan Maret-April 2013.

## Sampel Penelitian
Sampel  penelitian  ini  terdiri  dari  30  tikus percobaan  yang  diambil  secara  random sampling  dan  memenuhi  kriteria  yaitu  tikus Rattus  norvegicus  Wistar jantan  berumur  8- 10  minggu,  dengan  berat  badan  rata-rata 150 gram, berwarna putih sehat, bertingkah laku  normal,  dan  tidak  ada  kelainan anatomik,  tikus  memiliki  nafsu  makan  yang baik  selama  penelitian,  kondisi  kesehatan yang  stabil,  dan  hidup  selama  penelitian berlangsung.

## Persiapan Hewan Coba dan Pakan Hewan Coba
Persiapan  pemeliharaan  hewan  coba dimulai  dengan  persiapan  alat  dan  bahan penelitian  meliputi  kandang,  sekam,  tempat makan  dan  minum,  pakan  tikus,  alkohol  70 %,  tikus  jantan  galur  wistar,  dan  dilakukan seleksi tikus berdasarkan usia, berat badan, jenis  kelamin,  dan  kesehatan.  Kelompok perlakuan dibagi menjadi 5 kelompk yaitu (1) kontrol  negatif  (-),  (2)  kontrol  positif  (+),  (3) ekstrak dosis 50 mg/KgBB, (4) ekstrak dosis
100  mg/KgBB,  (5)  ekstrak  dosis  200 mg/KgBB.  Diet  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  pakan  ayam/ParS (dengan  kandungan  air,  protein,  lemak, serat,  abu,  Ca,  Phospor,  antibiotika, coccidiostat) 66,6 % dan tepung terigu 33,4 %. 27

## Pembuatan Ekstrak Kulit dan Biji Anggur
Kulit  dan  biji  anggur  dikeringkan dengan sinar matahari dan kemudian digiling hingga  lebih  halus.  Ekstraksi  kulit  dan  biji anggur dilakukan dengan metode maserasi.
Kulit  dan  biji  anggur  yang  sudah  digiling diletakkan di dalam labu erlenmeyer masing- masing  sejumlah  100  gram.  Maserasi dilakukan dengan merendam hasil penggilingan  kulit  dan  biji  anggur  di  dalam larutan yang terdiri dari 80 % etanol dan 20 %  air  selama  72  jam.  Larutan  tersebut digunakan  untuk  melarutkan  resveratrol. Setelah  proses  maserasi  selesai,  cairan yang  berada  di  atas  labu  Erlenmeyer diletakkan di dalam alat yang bernama rotary evaporator hingga  air  tidak  lagi  menetes.
Hasil ekstraksi tersebut dipanaskan kembali di dalam oven dengan suhu 60 o C selama 15 menit.

## Studi Pendahuluan
Studi  pendahuluan  bertujuan  untuk membuktikan  bahwa  oklusi  karotis  interna dan  eksterna  yang  dilakukan  untuk penginduksian stroke berhasil mengakibatkan  stroke  iskemik  pada  tikus. Studi  pendahuluan  ini menggunakan  3  ekor tikus yang diinduksi dengan diikat pada arteri karotis  interna  dan  eksterna  selama  45 menit.  Pada  percobaan  dengan  ketiga  tikus tersebut,  tikus  kedua  dan  ketiga  terbukti mengalami stroke. Kemudian tikus dieutanasia, lalu jaringan otak diambil untuk dilakukan uji makroskopis. Tujuannya adalah untuk  mengetahui  adanya  daerah  iskemik pada  jaringan  otak,  dengan  menggunakan metode  pewarnaan  H  &  E . Dari  uji
makroskopis  jaringan  otak  tersebut,  terbukti bahwa  tikus  kedua  dan  ketiga  mengalami stroke iskemik.

## Aklimatisasi
Seluruh kelompok tikus ditimbang berat badannya dan kemudian dilakukan randomisasi  dalam  pemilihan  kelompok perlakuan  agar  setiap  tikus  memiliki kesempatan  yang  sama  untuk  mendapat perlakuan.  Kemudian,  tikus  diaklimatisasi selama  12  hari.  Selama  aklimatisasi  tikus diberikan  minum  dan  pakan  30  g/hari dengan komposisi 13,32 g PARS + 16,68 gr terigu  +  10  ml  air.  Penggantian  sekam dilakukan 3 hari sekali. Di akhir aklimatisasi, berat  badan  tikus  ditimbang  kembali  dan beratnya berkisar antara 150-200 gram.

## Induksi Stroke
Metode induksi stroke dilakukan dengan metode unilateral  carotid  artery  occlusion , yaitu  dengan  melakukan  ligasi  pada  arteri karotis  interna  dan  eksterna  tikus  pada  sisi kiri.  Sebelum  prosedur,  tikus  dianestesi menggunakan  ketamin  dengan  dosis  40 mg/kgBB.  Kemudian  tikus  difiksasi  dalam posisi  supinasi  di  atas  tempat  pembedahan Selanjutnya  bulu  pada  bagian  leher  dicukur lalu  kulit  bagian  leher  dibersihkan menggunakan  alkohol  70  %,  Setelah  itu dilakukan  insisi  dengan  skalpel  pada  garis tengah  leher  secara  vertikal  sepanjang  2–3 cm. Setelah melokalisir arteri karotis interna dan  eksterna,  dilakukan  ligasi  selama  45 menit dengan menggunakan benang prolene ukuran 6.0. Setelah 45 menit, ikatan benang prolene  dilepas.  Lalu  luka  insisi  tersebut ditutup  dan  dijahit  dengan  menggunakan benang catgut dan diolesi dengan antiseptik, kemudian  luka  ditutup  dengan  kasa  steril. Tikus  lalu  disonde  dengan  dextrose  10  %. Pada  hari  berikutnya  darah  tikus  diambil melalui ekor untuk dicek kadar marker MMP- 9  yang  bertujuan  untuk  membuktikan  tikus tersebut mengalami stroke.

## Pemberian Ekstrak
Pemberian  ekstrak  dilakukan  dengan
cara oral  gavage selama  14  hari.  Ekstrak kulit  dan  biji  anggur  dilarutkan  dengan konsentrasi  1  %  Hal  ini  bertujuan  untuk mempermudah penyerapan.

## Pengambilan sampel
Sehari  setelah  hari  terakhir  pemberian sonde  ekstrak  kulit  dan  biji  anggur,  tikus dieutanasia  dengan  dimasukkan  ke  dalam tabung  yang  berisi  eter.  Setelah  itu, dilakukan  pembedahan  untuk  mengambil jaringan otaknya. Otak kemudian dimasukkan  dalam  larutan  fiksasi,  yaitu larutan PFA dengan konsentrasi 4 %.

## Penghitungan Jumlah Sel Neuron
Pemotongan  jaringan  dilakukan  secara koronal  dimulai  dari  kiasma  optikus  menuju ke  arah  anterior.  Jaringan  otak  dipotong dengan  menggunakan  mikrotom  setebal  5
 m.  Pengecatan  dilakukan  dengan  H&E.
Evaluasi  dilakukan  dengan  menghitung jumlah sel neuron yang rusak. Neuron yang rusak  ditandai  dengan  adanya  perikarion yang mengkerut, nukleus piknosis,
eosinopilic  cytoplasm, dan  vakuolisasi.
Dalam  melakukan  pengamatan,  digunakan mikroskop  cahaya  yang  terintegrasi  dengan kamera  dengan  pembesaran  400x.  Setelah itu penghitungan dilakukan dengan menggunakan software countcell.

## Penghitungan Volume Infark
Volume  infark  merupakan  area  yang rusak pada otak. Area infark ditandai dengan area  yang  berwarna  merah  muda  pucat pada  pewarnaan  H&E.  Rumus  yang digunakan  (L1+L21+L41+L61)*200  m.  L adalah  luas  area  infark  dan  angka  di belakang  L  menunjukkan  potongan  ke berapa.  L  ditentukan  menggunakan  kamera Olympus  XC  10  dan  software dotslide microscope. Potongan  pertama  dihitung mulai  dari  kiasma  optikus  dan  jarak  antar
potongan adalah 10  m.

## Ladder Rung Walking Test
Untuk  menilai  fungsi  motorik  tikus, digunakan uji ladder rung walking test. Pada uji  ini, tikus  berjalan  pada  besi  berbentuk silinder yang disusun secara teratur dengan jarak tertentu sepanjang 1 meter. Kemudian diamati gerakan kaki kiri, kanan, dan jumlah langkah tikus. Apabila tikus terpeleset maka ini  merupakan  tanda-tanda  kelemahan motorik tikus. 28

## Analisis Data
Data  MMP9  diambil  dari  serum  darah tikus  1  hari  setelah  penginduksian  stroke iskemik,  data  skor  fungsi  motorik  diambil setelah dilakukan induksi stroke iskemik dan setelah  pemberian  ekstrak  biji  dan  kulit anggur  selama  14  hari,  sedangkan  jaringan diambil  setelah  pemberian  ekstrak  biji  dan kulit  anggur  selama  14  hari.  Analisis  yang dilakukan adalah uji korelasi Pearson. Jika R ≠  0  dapat  dikatakan  terdapat  hubungan antar  variabel.  Uji  Pearson  digunakan  juga untuk menilai kekuatan hubungan.

## HASIL
Penelitian ini  mengukur korelasi antara fungsi  motorik,  jumlah  neuron  yang  rusak, dan volume infark. Data rata-rata selisih skor ladder  rung  walking test  pasca  stroke  dan pasca  sonde  didapatkan  pada  kelompok  1 s/d 5 berturut-turut sebesar 0; 0,001 ± 0,011; 0,123  ±  0,019;  0,064  ±  0,024;  0,037  ± 0,006.  Penghitungan  jumlah  neuron  yang rusak  didapatkan  rata-rata  jumlah  neuron yang  rusak  dalam  10  lapangan  pandang, pada  kelompok  1-5  berturut-turut  sebesar 192.5  ±  20.68;  111,1  ±  44.43;  90  ±  24,92; dan  46,5  ±  20,09.  Penghitungan  volume infark didapatkan rata-rata pada kelompok 1 s/d  5  berturut-turut  sebesar  63960149  ± 26835017  µm 3 ;    49533004  ±  36458729 µm 3 ;  49512981  ±  35055126  µm 3 ;  dan 8782341 ± 8743553 µm 3.
Gambar  1.  Morfologi  neuron  antar  kelompok  perlakuan  ekstrak  kulit  dan  biji  anggur  setelah  2 minggu. Morfologi neuron yang normal (panah kuning) pada kelompok 1, sedangkan neuron yang rusak (panah hitam) terlihat pada kelompok 2-5.
Gambar 2. Deteksi daerah infark pada otak tikus setelah pemberian ekstrak kulit dan biji anggur pada kelompok 3-5 dibandingkan kelompok 1 (kontrol negatif) dan kelompok 2 (kontrol positif). Garis merah menunjukkan daerah infark yang terjadi akibar edema sel. Selanjutnya  dilakukan  uji  korelasi Pearson.  Hasil  korelasi  ditampilkan  pada Tabel 1. Pada uji normalitas didapatkan nilai p  >  0,05  yang  berarti  Ho  diterima  dan sebarannya mengikuti distribusi normal.
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5

## Tabel 1. hasil uji korelasi Pearson
Korelasi Ladder_rung Kerusakan_neuron Volume_infark Ladder_rung Pearson Correlation 1 ,306 ,346 Sig. (2-tailed) ,189 ,136 N 20 20 20 Kerusakan_neuron Pearson Correlation ,306 1 ,645 * Sig. (2-tailed) ,189 ,002 N 20 20 20 Volume_infark Pearson Correlation ,346 ,645 * 1 Sig. (2-tailed) ,136 ,002 N 20 20 20
Keterangan: * menunjukkan korelasi yang signifikan pada hasil 0.05 (2-tailed)

## PEMBAHASAN
Berdasarkan  uji  korelasi  Pearson didapatkan semua variabel menunjukan hasil R  >  0  yang  berarti  ada  hubungan  antara selisih skor ladder rung walking test , jumlah sel  neuron  yang  rusak  dan  volume  infark. Dari uji ini didapatkan korelasi antara selisih skor ladder rung walking test dengan jumlah neuron  yang  rusak  sebesar  0,306  yang berarti  korelasi  yang  cukup  kuat.    Hal  ini menunjukkan  bahwa  kerusakan  neuron terutama  yang  terjadi  pada  daerah  girus presentralis  area  frontal  otak  (korteks motorik)  menyebabkan  penurunan  fungsi motorik  yaitu  melemahnya  ekstremitas kontralateral. 29 Sehingga  perbaikan  pada jumlah  sel  neuron  yang  rusak  juga  akan memperbaiki fungsi motorik.
Selisih skor ladder rung walking test dan volume  infark  menunjukan  korelasi  sebesar 0,346 yang berarti korelasi yang cukup. Hal ini berarti adanya volume infark terjadi akibat edema  sel  neuron  otak. 30 Fungsi  motorik tubuh  dapat  bekerja  dengan  baik  apabila neuron  sebagai  penyalur  impuls  juga berfungsi  normal. 31 Adanya  gangguan berupa edema memungkinkan fungsi motorik juga terganggu. Dengan demikian, pemberian ekstrak kulit dan biji anggur dapat memperbaiki  edema  otak  juga  memperbaiki fungsi motorik.
Adanya peningkatan volume infark dan penurunan fungsi motorik memiliki penyebab yang  sama  yaitu  ROS. 32,33 ROS  yang terakumulasi  ini  mengakibatkan  kerusakan permeabilitas endotel sehingga meningkatkan  edema  vasogenik,  ROS  juga menyebabkan  kerusakan  neuron  yang menurunkan  fungsi  motorik.  Resveratrol sebagai antioksidan bersama-sama
menyebabkan  perbaikan  pada  edema sehingga  terjadi  pengurangan  volume infark dan perbaikan fungsi motorik. 32
Sementara  itu,  antara  jumlah  neuron yang  rusak  dan  volume  infark  menunjukkan korelasi kuat (0,645) dengan signifikansi p = 0,002 (p < 0,05 ). Hal ini disebabkan karena peningkatan permeabilitas sawar darah otak yang  bermanifestasi  dengan  peningkatan volume infark dapat  mengakibatkan kerusakan  sel  neuron  sehingga  dengan pemberian ekstrak kulit dan biji anggur yang mampu  memperbaiki  permeabilitas  sawar darah  otak  juga  mampu  memperbaiki  sel neuron  yang  rusak.  Pada  proses  terjadinya kerusakan neuron dan edema juga memiliki jalur  mekanisme  yang  sama  yaitu eksitotoksisitas. Efek dari eksitotoksisitas ini mengakibatkan  akumulasi  air  yaitu  edema sitotoksisitas,  dan  juga  mengakibatkan peningkatan  ekspresi  NMDA,  Ca 2+ ,  yang kemudian  terjadi  apoptosis  dan  kerusakan
neuron. 34 Terganggunya stabilitas sel neuron yang  terjadi  pada  kedua  parameter  ini menampakkan  adanya  korelasi  yang  kuat antara  kedua  parameter  ini.  Resveratrol memiliki fungsi dalam memperbaiki keadaan eksitotosisitas. 35 Adanya fungsi perbaikan ini menunjukkan  hubungan  yang  kuat  pada penurunan  jumlah  neuron  yang  rusak  yang akan  menyebabkan  penurunan  volume infark.
Pada  penelitian  terdahulu  belum  ada informasi  tentang  efek  ekstrak  kulit  dan  biji anggur yang memiliki kandungan resveratrol terhadap kekuatan korelasi antara jumlah sel neuron  yang  rusak,  volume  infark,  dan perbaikan  fungsi  motorik.  Namun  juga  ada penelitian  yang  mengungkapkan  efek resveratrol terhadap jumlah sel neuron yang rusak,  volume  infark,  atau  fungsi  motorik. Seperti  pada  penelitian  pada  tikus  yang mengalami traumatic brain injury yang diberi resveratrol  murni  100  mg/kgBB  mampu menurunkan  keparahan  pada  gangguan fungsi motorik dan kognitif serta menurunkan volume  kontusio,  akan  tetapi  tidak  dinilai pula  korelasi  antara  perbaikan  fungsi  tadi dengan menurunnya volume kontusio otak. 36 Penelitian  ini  menunjukkan  bahwa pemberian ekstrak kulit dan biji anggur ( Vitis vinifera )  yang  mengandung  resveratrol mampu menurunkan jumlah sel neuron yang rusak,  menurunkan  volume  infark,  dan memperbaiki  fungsi  motorik  serta  terdapat korelasi  antara  ketiga  parameter  tersebut, dengan  korelasi  yang  paling  kuat  terdapat pada  hubungan  antara  jumlah  neuron  yang rusak dan volume infark.

## KESIMPULAN
Pemberian  ekstrak  kulit  dan  biji  anggur (Vitis  vinifera) dapat meregenerasi  sel  saraf pusat.  Terdapat  korelasi  yang  cukup  antara perbaikan  fungsi  motorik  dengan  perbaikan jumlah  sel  neuron  otak  yang  rusak  dan perbaikan  fungsi  motorik  dengan  volume infark,  dan  ada  korelasi  yang  kuat  antara
perbaikan jumlah sel neuron otak yang rusak dengan  volume  infark  pada  tikus  model stroke iskemik.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Cruz-Flores  S,  Rabinstein  A, Biller J, Elkind MS, Griffith P, Gorelick PB, Howard  G, Leira  EC, Morgenstern LB, Ovbiagele B, Peterson E, Rosamond W, Trimble B, Valderrama AL.  Racial-Ethnic  Disparities  in  Stroke Care:  the  American  Experience:  a
Statement  for  Healthcare  Professionals from  the  American  Heart  Association. American  Stroke  Association.Stroke. 2006; 42(7):2091-116.
2. Roger  VL et  al .  Heart  Disease  and Stroke Statistics-2012 Update: a Report from  the  American  Heart  Association. Circulation . 2012; 125(1):e2-220.
3. (WHO)  World  Health  Organization.  The International  Agenda  for  Stroke.  Stroke AHA/  ASA.  Norrving  B.  1st  Global Conferences  on  Healthy  Lifestyles  and Noncommunicable  Diseases  Control. USW:  University  of  Massachussets.
2011. 4. Riset Kesehatan Dasar. Jakarta: Badan penelitian dan Pengembangan Kesehatan,  Departemen  Kesehatan, Republik Indonesia. 2007. 5. Zieve  D. Stroke. Los  Angeles:  National Library of Medicine.  2011.
6. Mergenthaler  P,  Dirnagl  U,  and  Meisel A.  Pathophysiology  of  Stroke:  Lessons from  Animal  Models. Metabolic  Brain Disease . 2004; 19 (3-4): 151-167.
7. Breton  RR  and  Rodriguez  CG. Excitotoxicity  and  Oxidative  Stress  in Acute  Ischemic  Stroke .  Intech,  Croatia. 2012. p29-58.
8. Liang D, Bhatta S, Gerzanich V, Simard JM.  Cytotoxic  Edema:  Mechanism  of Pathological  Cell  Swelling. Neurosurg
Focus . 2007; 22(5): E2.
9. Rosenberg  GA. Molecular  Physiology and  Metabolism  of  The  Nervous System. New  York:  Oxford  University Press. 2012. p158.
10. Soyuer  F.  Ischemic  Stroke:  Motor Impairment  and  Disability  with  Relation to  Age  and  Lesion  Location. The Internet  Journal  of  Neurology .  2005; 3(2): DOI: 10.5580/9b4.
11. Caplan  A.  Adult  Mesenchymal  Stem Cells  for  Tissue  Engineering  Versus Regenerative  Medicine. J  Cell  Physiol . 2007; 213(2):341-347.
12. Cavanaugh  J et  al .  Differential
Regulation of Mitogen-Activated Protein Kinases  ERK1/2  and  ERK5  by
Neurotrophins,  Neuronal  Activity,  and cAMP  in  Neurons .  The  Journal  of
Neuroscience. 2008.
13. Nguyen  TL et  al . Neuroprotection Signaling  Pathway  of  Nerve  Growth Factor  and  Brain-Derived  Neurotrophic Factor  against  Staurosporine  Induced Apoptosis  In  Hippocampal  H19-7/IGF- IR. Korea: Department of Molecular Cell Biology, Samsung Biomedical Research Institute,  Sungkyunkwan  University School of Medicine. 2010.
14. Flaster  M.  How  to  Minimize  Damage from Stroke. (Online). 2012. http://scienceparis.over-blog.com/article how-to-minimize-damage-from-strokes- loyola-murray-flaster-
ischaemicorthopnea-statin- 105224810.html.  Diakses  13  Oktober 2012. 15. Mayo  Clinic.  Stroke:  Treatment  and Drug. (Online). 2012. http://mayoclinic.com/health/stroke/DS0 0150/DSECTION=treatments-and- drugs. Diakses 13 Oktober 2012. 16. Hennekens CH  and Dyken ML. Aspirin as a Therapeutic Agent in Cardiovascular  Disease. Circulation . 1997;  96:2751-2753. 17. Wang YF, Tsirka SE, Strickland S, Stieg PE,  Soriano  SG,  Lipton  SA.  Tissue Plasminogen  Activator  (tPA)  Increases Neuronal  Damage  after  Focal  Cerebral
Ischemia in Wild-Type and tPA-Deficient Mice. Nat Med . 1998; 4:228-231. 18. Bastianetto S and Quirion R. Resveratrol and Red Wine Constituents:  Evaluation  of  Their Neuroprotective  properties .  Pharm
News . 2001; 8:33–38.
19. de  Almeida  LMV,  Celintano  Piñeiro  C, ConcliLeite M,  Giovana  B,  Tramontina F, Feoli AM, Gottfried C, Gonçalves CA. Resveratrol Increases Glutamate Uptake,  Glutathione  Content,  and S100B  Secretion  in  Cortical  Astrocyte Cultures.  (Abstract).  Cellular  and
Molecular  Neurobiology.    2007; 27(5):661-668.
20. Simao  F, Matté  A, Matté  C, Soares FM, Wyse AT, Netto CA, Salbego CG et al. Resveratrol  Prevents  Oxidative Stress  and  Inhibition  of  Na(+)K(+)- ATPase  Activity  Induced  by  Transient Global  Cerebral  Ischemia  in  Rats. (Abstract). J  Nutr  Biochem .  2011; 22(10):921-8.
21. Zhang  F et  al . Resveratrol  Promotes Neurotrophic  Factor  Release  from Astroglia. China:  Department  of Pharmacology  and  Key  Lab  of  Basic Pharmacology  of  Guizhou,  Zunyi
Medical College. 2012.
22. Pe´rez  AIR,  Ravento´s  RML,  Lacueva CA,  Boronat  MCT.    Method  for  the Quantitative  Extraction  of  Resveratrol and  Piceid  Isomers  in  Grape  Berry Skins. Effect of Powdery Mildew on the Stilbene  Content. J  Agric  Food  Chem. 2001; 49: 210-215.
23. Xiang  Y,  Zhang  T, Zhang  X, Ma  L.
Quantitative  Analysis  of  Resveratrol from Grape Seeds  and Grape Skins by High Performance Liquid
Chromatography  Method. PubMed . 2003; 32(5):490-2.
24. Jalil  EC et  al. Resveratrol  Potently
Reduces  Prostaglandin  E 2 Production and  Free  Radical  Formation  in Lipopolysaccharide-Activated  Primary Rat Microglia. Journal of Neuroinflammation . 2007; 4:25. DOI:10.1186/1742-2094-4-25. 25. Bunea CI, Nastasia POP, Babes Hodor
AML, Ciobanu  F,  Bunea  A et  al . Qualitative  and  Quantitative  Analysis  of
Phenolic Acids using High Performance Liquid  Chromatography  (HPLC)  from Organic  and  Conventional  Grapes. Bulletin  UASVM  Horticulture.  2012; 69(1).
26. Geros  H,  Chaves  M,  Delrot  S. The Biochemistry  of  the  Grape  Berry .  US: Bentham eBooks. 2012. p 180.
27. Murwani  S,  Mulyohadi  A,  dan  Ketut  M. Diet  Aterogenik  pada  Tikus  Putih ( Rattus  novergicus )  strain  Wistar sebagai  Model  Hewan  Aterosklerosis. Indonesia  Scientific  Journal  Database .
2006; 22(1): 6-9. 28. Schaar KL, Brenneman MM, Savitz  SI. Functional  Assessments  in  the  Rodent Stroke Model. Experimental & Transitional  Stroke  Medicine .  2010; 2:13. 29. Liu  C, Shi  Z, Fan  L, Zhang    C, Wang K, Wang  B.  Resveratrol  Improves
Neuron  Protection  and  Functional Recovery  in  Rat  Model  of  Spinal  Cord Injury.  (Abstract). Brain  Res .   2011;
16(1374):100-9.
30. Lin TN, He YY, Wu G, Khan M, Hsu CY. Effect of Brain Edema on Infarct Volume in  a  Focal  Cerebral  Ischemia  Model  in Rats. American Heart Association. 1993; 24(1):117-121.
31. Chamorro  A,  Marshall  RS,  Sole    JV, Tolosa  E,  Mohr  JP.  Motor  Behavior  in
Stroke  Patients  with  Isolated  Medial
Frontal  Ischemic  Infarction. American
Heart Association . 1997; 28:1755-1760.
32. Rosenberg  GA.  Molecular  Physiology and Metabolism of the Nervous System. New  York:  Oxford  University  Press.
2012. p 158.
33. Ng  JMJ,  Chen  MJ,  Leung  JYK,    Peng ZF,  Manikandan  J,  Qi  RZ,  Chuah    MI, West  AK,  Vickers  JC,  Lu  J,  Cheung NM, Chung RS. Transcriptional Insights on  the  Regenerative  Mechanics  of Axotomized Neurons in Vitro. Journal of Cellular and Molecullar Medicine. 2012;
16:789-811.
34. Yenari MA and Han HS. Neuroprotective Mechanism  of  Hypothermia  in  Brain Ischemia. Nature Reviews Neuroscience. 2012; 13:267-278. 35. Tsai  RY.  Resveratrol  Regulates  N- Methyl-D-Aspartate Receptor Expression and Suppresses Neuroinflammation in Morphine-Tolerant Rats.  (Abstract). Anesth  Analg . 2012;
115(4):944-52. 36. Singleton  RH,  Hong  QY,  C  Edward Dixon. Resveratrol Attenuates Behavioral  Impairments  and  Reduces Cortical and Hippocampal Loss in a Rat Controlled  Cortical  Impact  Model  of
Traumatic  Brain  Injury. Journal  of
Neurotrauma . 2010;  27(6):1091-1099.