ISSN-online 2615-601
Efektivitas Penambahan Enzim Papain Pada Pakan Buatan Terhadap Laju Metamorfosis dan Kandungan Glikogen Larva Kepiting Bakau ( Scylla olivacea )
Effectiveness of Addition Papain Enzyme in Artificial Diet on the  Metamorphosis Rate and Glycogen Content of Mangrove Crab Larvae ( Scylla olivacea )
Haryati 1  , Yushinta Fujaya 1 , Edison Saade 1 , dan Dwi Fajrianti 1
1 Jurusan Perikanan, Fakultas Ilmu Kelautan dan Perikanan, Universitas Hasanuddin, Jln. Perintis Kemerdekaan Km 10, Makassar, 90245
 corresponding author: haryati_fikpunhas@yahoo.com

## Abstrak
Dalam pemeliharan larva ikan,  pakan buatan dapat diberikan apabila enzim pencernaan sudah dihasilkan. . Untuk  meningkatkan  kemampuan  larva  memanfaatkan  pakan  buatan  dapat  dilakukan  dengan  penambahan enzim eksogen ke dalam pakan. Penelitian ini bertujuan  menentukan dosis enzim papain dan stadia pemberian pakan buatan predigest yang  tepat terhadap laju metamorfosis dan kandungan glikogen larva kepiting bakau ( Scylla olivacea ). Rancangan percobaan yang digunakan adalah  pola faktorial dengan rancangan dasar acak lengkap, faktor pertama adalah dosis enzim papain (0%, 1,5%, 3,0% dan 4,5%), sedangkan faktor kedua adalah stadia pemberian pakan buatan predigest (zoea 2 dan zoea 3).  Hasil penelitian menunjukkan bahwa perbedaan dosis  enzim  papain  dan  stadia  pemberian  pakan  buatan  predigest  berpengaruh  nyata  (p<0,05)  terhadap  laju metamorfosis  pada  larva  umur    9,  10,  12,  13,  16  dan  17  hari,  tetapi  interaksi  diantara  keduanya  tidak berpengaruh nyata (p>0,05). Laju metamorfosis pada dosis enzim papain  0% dan 1,5% lebih lama dan berbeda nyata (p<0,05) dibandingkan dosis 3% dan 4,5%.  Laju metamorfosis pada dosis 3,0% dan 4,5% tidak berbeda nyata (p>0,05). Perbedaan dosis enzim papain dan stadia pemberian pakan buatan predigest juga berpengaruh nyata  (p<0,05)  terhadap  kandungan  glikogen,  tetapi  interaksi  diantara  keduanya  tidak  berpengaruh  nyata (p>0,05).  Kandungan glikogen larva pada dosis enzim papain 4,5% tidak berbeda dibandingkan dosis 1,5% dan 3,0% tetapi lebih tinggi dan berbeda nyata dibandingkan dosis 0%.. Kandungan glikogen pada dosis 0%, 1,5% dan 3,0% tidak berbeda nyata (p>0,05) . Berdasarkan hasil penenelitian tersebut untuk menghidrolisis protein pakan dapat digunakan enzim papain dengan dosis 4,5%.
Kata  kunci:  enzim  papain,  laju  metamorfosis,  larva  kepiting  bakau  ( Scylla  olivacea ),  kandungan glikogen

## Abstract
In  the  rearing  of  fish  larvae,  artificial  feed  can  be  given  when  digestive  enzymes  have  been  produced.  To improve the ability of fish larvae to utilize artificial feeds can be done with the addition of exogenous enzyme into  the  artificial  feeds.  The  aim  of  this  study  was  to  determine  the  dose  of  papain  enzyme  and  the  correct predigest artificial feeding stadium on metamorphosis rate and glycogen content of mangrove larvae ( Scylla olivacea ). The experimental design used was a factorial pattern with a complete randomized baseline design, the first factor being the dose of papain enzyme (0%, 1.5%, 3.0% and 4.5%), while the second factor was the predigest  artificial  feeding  stage  (zoea  2  and  3).    The  results  showed  that  the  difference  of  dose  of  papain enzyme and predigest artificial feeding stages had significant effect (p <0.05) on the metamorphosis rate of  7, 9, 10, 12, 13, 16 and 17 day larvae, but the interaction between them was not significant (p>0,05). The rate of metamorphosis  at  doses  of  enzyme  papain  was  0%  and  1.5%  longer  and  significantly  different  (p  <0.05) compared to 3% and 4.5% doses. The rate of metamorphosis at doses of 3.0% and 4.5% was not significantly different (p> 0.05). The content of glycogen larvae  in dose of enzyme papain 4,5% not  different than dose 1,5% and 3,0% but higher and significantly different than dose 0%. Glycogen content at dose 0%, 1,5% and 3,0%. was not significantly different (p> 0.05). Based on the results of these studies to hydrolyze feed proteins can be used papain enzyme with a dose of 4.5%.
Keywords:  papain  enzyme,  metamorphosis  rate,  mangrove  crab  larvae  ( Scylla  olivacea ),  glycogen content
Volume 1 (2) June 2018: 31-39

## Pendahuluan
Kepiting bakau  ( Scylla olivacea ) merupakan komoditas perikanan ekonomis penting. Dalam kegiatan budidaya komoditi tersebut, salah satu faktor penentu adalah ketersediaan benih.  Sampai saat ini kebutuhan benih dalam budidaya kepiting bakau  masih diperoleh dari hasil tangkapan  di alam  yang sifatnya fluktuatif dan ketersediaannya menjadi  faktor pembatas.    Untuk  mengatasi  masalah  tersebut  cara  yang  dapat  dilakukan  yaitu  dengan melakukan pembenihan.
Pakan  merupakan  salah  satu  faktor  penentu  keberhasilan  usaha  pembenihan  biota perairan.  Penggunaan  pakan  buatan  dalam  bentuk  mikro  (microdiet)  dapat  menjamin ketersediaan, biaya produksi lebih rendah dan fleksibilitasnya lebih tinggi (Gatesoupe dan Luquet, 1981), namun  penggunaan pakan buatan dalam pemeliharaan larva menunjukkan perkembangan dan kelangsungan hidup larva tidak sebaik yang diberi pakan alami.  Salah satu faktor disebabkan belum lengkapnya organ pencernaan pada stadia awal pertumbuhan larva, yang mengakibatkan rendahnya aktivitas enzim pada larva tersebut (Lauff dan Hofer, 1984).  Pavasovic et al. (2004) mengemukakan bahwa keberhasilan  teknologi pembenihan kepiting bakau membutuhkan pemahaman yang comprehensive  tentang proses pencernaan pada  larva.  Peningkatan  aktivitas  enzim  yang  cukup  tinggi,  yang  ditunjukkan  oleh peningkatan  relatif  terbesar  aktivitas  enzim  dapat  dijadikan  dasar  untuk  menentukan  saat pakan  buatan  dapat  digunakan.    Hal  ini  sesuai  pendapat  Gawlicka et  al. (2000),  bahwa aktivitas enzim pencernaan adalah suatu indikator  untuk menentukan kapasitas pencernaan, ketika terjadi peningkatan aktivitas cukup tinggi dapat diindikasikan secara fisiologis larva siap untuk  memproses  pakan dari luar.  Perubahan relatif terbesar aktivitas enzim tripsin, lipase dan amilase  paling awal  terjadi pada larva kepiting bakau ( Scylla olivaacea )  dari stadia zoea2 ke zoea 3 (Haryati et al. 2014)   Berdasarkan kajian perkembangan aktivitas enzim  tersebut  pakan  buatan    diduga  dapat  diberikan  mulai  stadiazoea  3.    Selanjutnya Haryati et al. (2015) telah melakukan penelitian pengaruh penggantian pakan alami dengan pakan  buatan  di  mana  pakan  yang  digunakan  adalah    pakan  komersial,      hasil  penelitian tersebut menunjukkan bahwa pada pemeliharaan larva kepiting bakau mulai stadia zoea 1 sampai megalopa, pakan buatan baru dapat diberikan mulai stadia zoea 3.
Untuk mempercepat penggunaan pakan buatan dalam pemeliharaan larva ikan dapat dilakukan  dengan  melakukan  predigest,  yaitu  dengan  menambahkan  enzim  eksogen  ke dalam  pakan.    Salah  satu  enzim  eksogen  yang  potensial  adalah  enzim  papain.    Menurut Suhartono (2005), enzim papain berfungsi memecah ikatan peptida, sehingga protein terurai menjadi  ikatan  peptida  yang  lebih  sederhana.  Dalam  bentuk  molekul  sederhana,    protein dapat  digunakan  oleh  larva  sebagai  sumber  enersi  dan  pertumbuhan,  termasuk  untuk
metamorfosis.    Karbohidrat  yang  terkandung  di  dalam  pakan  apabila  tidak  digunakan sebagai sumber enersi akan disimpan dalam bentuk glikogen.
Penelitian  tentang  peningkatan  pemanfaatan  protein  pakan  menggunakan  enzim papain telah dilakukan oleh beberapa peneliti. Menurut Amalia et al. (2013),  dosis terbaik penggunaan papain pada pakan benih lele dumbo ( C. Gariepinus )  adalah 2,25%, sedangkan hasil  penelitian  Hamzah  (2015)  pada  larva    ikan  bawal  bintang  ( Trachinotus  blochhii ) menunjukkan bahwa  pakan buatan yang sudah di predigest  enzim papain dengan dosis 4% dapat  diberikan  pada  larva  mulai  umur  12  hari,      pakan  buatan  yang  tidak  mengalami predigest  baru  dapat  diberikan  pada  ikan  bawal  bintang  setelah  berumur  18  hari    (Putri, 2015).    Hasil  penelitian  Hutabarat et  al. (2015)  pada  benih  lobster  air  tawar Cherax quadricarinatus menunjukkan  bahaw  penambahan  enzim  papain  dengan  dosis  3,375%  di dalam pakan memberikan respon terbaik pada efisiensi pemanfaatan pakan, protein efisiensi rasio  dan  laju  pertumbuhan  relatif  dibandingkan  dosis  0%,  1,125%  dan  2,25%,  namun memberikan respon yang sama pada tingkat kelangsungan hidup.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menentukan  dosis  enzim  papain  dan  dan  stadia  yang tepat  pemberian  pakan  buatan  yang  dipredigest  dengan  menggunakan  enzim  papain  pada pemeliharaan larva kepiting bakau (Scylla olivacea)  ditinjau dari   laju metamorfosis dan kandungan glikogen larva.

## Bahan dan Metode
Larva kepiting bakau ( Scylla olivacea )  yang  digunakan dalam penelitian ini berasal dari  penetasan  telur.  Induk  kepiting  bakau  betina  yang  matang  gonad    dipelihara  dalam kurungan  yang  terbuat  dari  kayu,  kurungan  tersebut  selanjutnya  dimasukkan  dalam  bak beton yang diisi air laut dengan salinitas sekitar 32 ppt.  Tiap kurungan diisi satu ekor induk. Selama pemeliharaan  diberi  pakan berupa cumi-cumi dan ikan rucah sebanyak 15% dari biomasa per hari dengan frekuensi pemberian pakan dua kali per hari yakni jam 06.00  dan jam 18.00.
Air media yang  digunakan dalam pemeliharaan larva adalah air laut dengan salinitas sekitar  32  –  34  ppt.    Sebelum  digunakan,  air  laut    disaring  terlebih  dahulu  dengan menggunakan  sand  filter,  selanjutnya  didisinfeksi  dengan  menggunakan  kaporit  40  ppm, didiamkan  selama  kurang  lebih  12  jam  sambil  diberi  aerasi  kuat,  setelah  itu  dinetralisir dengan menggunakan thiosulfat 20 ppm, didiamkan selama 1 – 2 jam.
Wadah yang digunakan dalam pemeliharaan larva berupa ember plastik warna hitam volume  30  liter,  tiap  wadah  diisi  air  dengan  salinitas  berkisar  antara  30  –  32  ppt.  Enzim papain  yang  digunakan  dalam  percobaan  ini  merk  Newzime  yang  diproduksi  oleh  Balai Budidaya  Air  Payau  (BBAP)  Jepara.  Cara  penyiapan  dan  penambahan  enzim  papain  ke dalam  pakan  adalah  sebagai  berikut:  pertama-tama  bubuk  enzim  papain  (sesuai  dosis
perlakuan)  dilarutkan  dalam  10  ml  aquadest.    Larutan  tersebut  selanjutnya  di vortex dan didiamkan selama  10 – 15 menit.  Enzim tersebut selanjutnya disemprotkan ke dalam 100 g  pakan  buatan  dan  diinkubasikan  selama  60  menit  (Hasan,  2000).    Pakan  yang  telah diinkubasi tersebut siap untuk diberikan pada larva.
Pakan alami yang digunakan adalah Brachionus sp. dan diberikan pada saat adaptasi terhadap pakan buatan dengan kepadatan  sebanyak 30 individu/ml dan pada saat larva masih harus diberi pakan alami. Pada stadia zoea 1 sampai stadia zoea 3, untuk larva yang diberi pakan alami  diberi pakan berupa Brachionus dengan kepadatan  sebanyak 30 individu/ml. Pakan buatan yang digunakan adalah pakan buatan komersial berbentuk bubuk merk Jp 0 dan Jp 1.  Jp 0 diberikan pada saat adaptasi mulai stadia zoea 1 sedangkan Jp 1 diberikan mulai stadia zoea 3. Pada larva kepiting bakau stadia zoea 1 sampai 3 diberi pakan buatan sebanyak 5,0 mg/l /hari, sedangkan mulai stadia zoea 3 sampai  megalopa sebanyak 10  mg/l. Pakan buatan  diberikan enam  kali per hari, yaitu pada pukul 06.00, 09.00, 12.00 , 15.00, 18.00 dan 21.00.  Komposisi nutrisi pakan yang digunakan disajikan pada Tabel 1.

## Tabel 1. Hasil analisis proksimat pakan (% bobot kering)
Komposisi Pakan JP 0 Pakan JP 1 Protein Lemak Serat kasar BETN Abu 45,69 9,01 2,13 29,16 13,99 44,53 9,37 1,43 29,65 14,80
Percobaan menggunakan  pola faktorial dengan rancangan dasar acak lengkap. Faktor pertama adalah dosis enzim papain, yaitu: 0%, 1,5%, 3,0% dan 4,5%,  adapun faktor kedua yaitu stadia pemberian pakan buatan  yang  sudah  dipredigest dengan menggunakan enzim papain, yaitu, mulai stadia zoea 2 dan  zoea 3.
Untuk mengetahui laju perkembangan larva  diambil sampel 10 ekor  larva  setiap hari pada  pukul  06.00  dan  dilakukan  pengamatan  morfologi  larva.    Laju  perkembangan  larva dihitung menggunakan Larval Stage Index (LSI) merujuk pada metode yang digunakan oleh Redzuari et al. (2012).  Untuk menghitung LSI, indek stadia larva disajikan pada Tabel 2.

## Tabel 2. Pembobotan nilai LSI tiap stadia perkembangan larva
Stadia larva Nilai Larva Stage Index Kesimpulan LSI Zoea 1 (Z-1) Zoea 2 (Z-2) Zoea 3 (Z-3) Zoea 4 (Z-4) Zoea 5 (Z-5) Megalopa 1 – 1,5 1,6 – 2,5 2,6 – 3,5 3,6 – 4,5 4,6 – 5,5 >5,5 1 2 3 4 5 6
Sumber: Modifikasi metode Redzuari et al . (2012)
LSI = [(St x nt) + (St-1 x nt-1)] : N
Keterangan: LSI = Larval Stage Index; St = LSI stadia t; nt = Jumlah larva stadia t (ekor); St-1  = LSI  stadia  t-1 (sebelum stadia t); nt-1  = Jumlah larva stadia t-1 (ekor); N  = Jumlah sampel (ekor)
Analisis  kandungan  gllikogen  dilakukan  pada  akhir  percobaan,  yaitu  pada  stadia megalopa.  Penentuan kadar glikogen  dilakukan dengan menggunakan seluruh bagian tubuh larva  karena  sulit  memisahkan  antara  hepatopankreas  dengan  bagian  tubuh  yang  lain. Metode  perhitungan kandungan glikogen dengan menggunakan formula:
𝐺𝑙𝑖𝑘𝑜𝑔𝑒𝑛  ( 𝑚𝑔 𝑔 ) 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 = 𝑎𝑏𝑠. 𝑠𝑝𝑙 𝑎𝑏𝑠. 𝑠𝑡𝑑 × 𝑘𝑜𝑛𝑠𝑡. 𝑠𝑡𝑑 × 1 1000 ⁄ ⁄
𝑏𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 (𝑔)
Keterangan:  Abs.  spl    =  absorban  sampel  pada  λ  670  nm;  Abs.stda    =  absorban  stándar; Kons.  std  =  konsentrasi  standar    (500  μg/mL);  Fp  =  faktor  pengenceran  (5X);  1/1000  = perubahan dari mikrogram menjadi milligram
Sifat fisik dan kimia air yang  diukur  meliputi kandungan oksigen terlarut, pH, suhu dan salinitas.  Suhu dan salinitas akan diukur setiap  hari sedangkan pH dan oksigen terlarut akan diukur pada setiap stadia.
Untuk  mengetahui  pengaruh  perlakuan  terhadap  laju  metamorfosis  dan  kandungan glikogen larva digunakan analisis ragam,  apabila  berpengaruh nyata terhadap   dilanjutkan dengan  uji  W-Tukey  untuk  menentukan  perlakuan  yang  menghasilkan  respon  terbaik. Terhadap  kualitas air media  dianalisis secara diskriptif sesuai kriteria  tingkat kelayakan bagi larva kepiting.

## Hasil dan Pembahasan

## Laju Metamorfosis
Laju  metamorfosis larva kepiting bakau mulai  stadia zoea 1 sampai megalopa  yang diberi pakan buatan yang sudah di predigest dengan menggunakan enzim papain mulai stadia zoea 2 dan 3 disajikan pada Tabel 3. Berdasarkan tabel  tersebut menunjukkan bahwa lama perkembangan stadia zoea-1 menuju zoea-2 selama 3 hari, zoea-2 menuju zoea-3 selama 4 hari,  zoea-3  menuju  zoea-4  selama  3  hari,  zoea-4  menuju  zoea-5  selama  3  hari,  zoea-5 menuju  megalopa  selama  4  hari.  Menurut  Kasry  (1991),    lamanya  metamorfosa  kepiting bakau mulai dari stadia zoea hingga megalopa umumnya diperlukan waktu berkisar 17-26 hari, dimana waktu yang diperlukan untuk setiap stadia zoea umumnya 3-5 hari. Lamanya waktu metamorfosa mulai stadia zoea 1 sampai megalopa sama yaitu 18 hari.
Tabel 3. Rata-rata  Larvae Stage Index (LSI) Scylla olivacea yang dipelihara pada berbagai dosis enzim papain dan stadia pemberian pakan buatan
Perlakuan Umur larva (hari) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 E 0 Z 2 LSI 1 1 1,4  1,6  1,6  1,7 2 2,6  2,7 3 3,6  3,6 4 4,6  4,6  5,1  5,2 5,6 Stadia  Z1  Z1 Z1 Z2 Z2 Z2 Z2 Z3 Z3 Z3 Z4 Z4 Z4 Z5 Z5 Z5 Z5 M E 1.5 Z 2 LSI 1 1 1,1  1,6  1,6  1,6 2 2,6  2,6  3,1  3,6  3,6  3,8  4,6  4,6  5,1  5,2 5,6 Stadia  Z1  Z1 Z1 Z2 Z2 Z2 Z2 Z3 Z3 Z3 Z4 Z4 Z4 Z5 Z5 Z5 Z5 M E 3.0 Z 2 LSI 1 1 1,4  1,6  1,6  1,6  2,3  2,6  3,1  3,4  3,6  3,9  4,5  4,6  4,6  5,1  5,3 5,6 Stadia  Z1  Z1 Z1 Z2 Z2 Z2 Z2 Z3 Z3 Z3 Z4 Z4 Z4 Z5 Z5 Z5 Z5 M E 4.5 Z 2 LSI 1 1 1,2  1,6  1,6  1,6  2,3  2,6  3,1  3,5  3,6  4,1  4,5  4,6  4,6  5,2  5,4 5,6 Stadia  Z1  Z1 Z1 Z2 Z2 Z2 Z2 Z3 Z3 Z3 Z4 Z4 Z4 Z5 Z5 Z5 Z5 M E 0 Z 3 LSI 1 1 1,1  1,6  1,6  1,6  2,2  2,6  2,6  2,7  3,6  3,6  3,6  4,6  4,6  5,1  5,1 5,6 Stadia  Z1  Z1 Z1 Z2 Z2 Z2 Z2 Z3 Z3 Z3 Z4 Z4 Z4 Z5 Z5 Z5 Z5 M E 1.5 Z 3 LSI 1 1 1,2  1,6  1,6  1,6  2,4  2,6  2,6  3,1  3,6  3,6  3,8  4,6  4,6  5,1  5,1 5,6 Stadia  Z1  Z1 Z1 Z2 Z2 Z2 Z2 Z3 Z3 Z3 Z4 Z4 Z4 Z5 Z5 Z5 Z5 M E 3.0 Z 3 LSI 1 1 1,3  1,6  1,6  1,6  2,4  2,6  2,7  3,3  3,6  3,7  4,4  4,6  4,6  5,1  5,4 5,6 Stadia  Z1  Z1 Z1 Z2 Z2 Z2 Z2 Z3 Z3 Z3 Z4 Z4 Z4 Z5 Z5 Z5 Z5 M E 4.5 Z 3 LSI 1 1 1,2  1,6  1,6  1,6  2,6  2,6  2,9  3,4  3,6  3,9  4,5  4,6  4,6  5,2  5,4 5,6 Stadia  Z1  Z1 Z1 Z2 Z2 Z2 Z3 Z3 Z3 Z3 Z4 Z4 Z4 Z5 Z5 Z5 Z5 M
Hasil  analisis  ragam  menunjukkan  bahwa  perbedaan  dosis  enzim  papain  dan  stadia pemberian pakan predigest berpengaruh nyata (P<0,05) terhadap terhadap laju metamorfosis (LSI) larva kepiting bakau pada larva umur 7, 9, 10, 12, 13, 16 dan 17 hari (Tabel 4)  Interaksi antara  dosis  enzim  dan  perbedaan  stadia  pemberian  pakan  buatan  predigest    tidak berpengaruh nyata (P>0,05).
Tabel 4. Nilai  rata-rata  Larva  Stage  Index  (LSI)  larva  kepiting  bakau  (Scylla  olivacea)  pada  berbagai  dosis enzim papain) Dosis Laju Metamorfosis (Umur/hari) 7 9 10 12 13 16 17 0 2.15 ± 0.24 a 2.65 ± 0.12 a 2.87 ± 0.26 a 3.62 ± 0.04 a 3.80 ± 0.28 a 5.12 ± 0.04 a 5.18 ± 0.08 a 1.5 2.18 ± 0.32 a 2.60 ± 0.00 a 3.13 ± 0.05 b 3.60 ± 0.00 a 3.80 ± 0.31 a 5.12 ± 0.04 a 5.17 ± 0.05 a 3.0 2.38 ± 0.08 b 2.97 ± 0.29 b 3.38 ± 0.10 c 3.85 ± 0.27 ab 4.48 ± 0.08 b 5.17 ± 0.05 ab 5.37 ± 0.08 b 4.5 2.47 ± 0.19 b 3.03 ± 0.22 b 3.47 ± 0.08 c 4.03 ± 0.22 b 4.52 ± 0.10 b 5.25 ± 0.08 b 5.43 ± 0.10 b
Keterangan :  Huruf yang berbeda pada kolom yang sama menunjukkan perbedaan yang nyata antar perlakuan pada taraf 5% (P < 0.05)
Hasil uji W-Tukey menunjukkan bahwa Larva Stage Index (LSI)   pada dosis enzim papain 0% dan 1,5% tidak berbeda nyata (P>0,05) pada larva umur 7, 9, 12, 13 dan 17 hari, tetapi lebih lambat dan berbeda nyata (P<0,05) dibandingkan dosis 3,0% dan 4,5%.  Pada saat larva umur 12 dan 16 hari laju metamorfosis pada dosis enzim pada dosis enzim papain 0%, 1,5% dan 3,0% tidak berbeda nyata. Laju metamorfosis pada dosis enzim papain 3,0 % dan 4,5% tidak berbeda nyata.  Aktivitas enzim protease pada larva yang diberi pakan buatan mulai stadia zoea 2  dengan dosis enzim papain 0% dan 1,5% juga lebih rendah dan  berbeda dibandingkan  pada  dosis  enzim  papain  3,0%  dan  4,5%.    Hal  ini  disebabkan  pada  stadia tersebut enzim belum dihasilkan, sehingga larva belum dapat menghidrolisa protein dengan
baik (Haryati et al. 2017). Hasil penelitian Haryati et al. (2014) juga menunjukkan bahwa enzim protease, lipase maupun α- amilase pada larva kepiting bakau ( Scylla olivacea )  mulai dihasilkan pada stadia zoea 3, pada stadia tersebut pakan buatan diduga baru dapat diberikan.
Aktivitas  enzim  antara  lain  dipengaruhi  oleh  konsentrasi  enzim,  pada  dosis  enzim papain 3,0% dan 4,5%  enzim papain dapat menghidrolisa protein secara optimal, sehingga asam  amino  yang  dihasilkan  dapat  digunakan  untuk  pertumbuhan,  termasuk  laju metamorfosis.  Hal  ini  didukung  oleh  pendapat  Sorgeloss et  al .  (1998)  yang  menyatakan bahwa adanya enzim eksogen dalam pakan akan menghidrolisa nutrien pakan dalam bentuk makromolekul menjadi molekul yang lebih sederhana, sehingga larva dapat memanfaatkan pakan dengan baik.

## Kandungan glikogen larva
Kandungan glikogen larva pada stadia megalopa disajikan pada Tabel  5. Hasil analisis ragam    menunjukkan  bahwa  dosis  enzim  papain  dan  perbedaan  stadia  pemberian  pakan predigest    berpengaruh  nyata  (P<0,05)  terhadap  kandungan  glikogen  pada  larva  kepiting bakau stadia megalopa.  Interaksi antara dosis enzim papain dan stadia yang berbeda tidak berpengaruh nyata (P>0,05).  Kandungan glikogen pada larva yang diberi pakan predigest pada  stadia  zoea  3  lebih  tinggi  dibandingkan  pada  stadia  zoea  2.    Hasil  uji  W  Tukey menunjukkan  bahwa  kandungan  glikogen  pada  larva  yang  diberi  pakan  buatan  predigest dengan enzim papain  4,5%  lebih tinggi dan berbeda nyata (P<0,05) dibandingkan  pada larva  yang  diberi  pakan  tanpa  predigest  (enzim  papain  0%),  tetapi  tidak  berbeda  nyata (P>0,05) dibandingkan pada dosis enzim papain 1,5% dan 3,0%.  Kandungan glikogen pada larva yang diberi pakan buatan predigest  dosis enzim papain 0%, 1,5% dan 3% juga tidak berbeda nyata.
Tabel 5. Rata-rata kandungan glikogen kepiting bakau pada stadia megalopa yang diberi pakan predigest pada dosis enzim papain yang berbeda
Dosis enzim (%) Kandungan glikogen (%) 0,0 1,5 3,0
4,5 5,8735±0,060 a 6,0965±0,054 ab 6,3315±0,041 ab
6,5185±0,582 b
Keterangan :  Huruf yang berbeda pada kolom yang sama menunjukkan perbedaan yang nyata antar perlakuan pada taraf 5% (P < 0.05)
Lebih tingginya kandungan glikogen pada larva yang diberi pakan predigest dengan dosis  enzim  papain  4,5%  dibandingkan  dosis  0%  karena  pada  dosis  tersebut  pakan  dapat dihidrolises  dengan  baik.  Enzim  papain  merupakan  enzim  protease  yang  akan menghidrolisis  protein  menjadi  asam  amino.    Asam  amino  hasil  hidrolisis  protein  dapat dimanfaatkan dengan baik sebagai  sumber enersi  dan pertumbuhan. Karena protein  dapat
dihidrolisa dengan baik, enersi tersedia dalam jumlah yang cukup sehingga karbohidrat yang tidak dimanfaatkan sebagai sumber enersi akan disimpan dalam bentuk glikogen.
Glikogen terbentuk di dalam tubuh melaui proses glikogenesis.  Glukosa yang berasal dari  makanan  apabila  tidak  dimanfaatkan  sebagai  sumber  energi  akan  disimpan.  Melalui proses glikogenesis oleh enzim glycogen synthetase glukosa yang merupakan monosakarida akan mengalami proses metabolisme dihasilkan glikogen. Glikogen inilah yang selanjutnya akan  berfungsi  sebagai  cadangan  energi.  Menurut  Handayani  (2011),  bahwa  peningkatan kadar glikogen menunjukkan adanya glukosa darah setelah kebutuhan energi metabolisme terpenuhi, yang segera dikonversi menjadi glikogen dan selanjutnya disimpan di dalam otot dan hati.

## Simpulan
1. Laju  metamorfosis  larva umur larva umur 7, 9,  10, 12, 13, 16 dan 17 hari, pada dosis enzim papain 0,0% dan 1,5% lebih lama dibandingkan dosis 3,0% dan 4,5%.
2. Kandungan glikogen pada larva yang diberi pakan buatan yang tidak dipredigest  yaitu pada dosis enzim papain 0% relatif sama dibandingkan dosis 1,5% dan 3,0% tetapi lebih rendah dibandingkan  dosis 4,5%.

## Daftar Pustaka
Amalia  R,  Subandiyono,  Endang  A.    2013.    Pengaruh  penggunaan  papain  terhadap  tingkat pemanfaatan protein pakan dan pertumbuhan ikan lele dumbo ( Clarias gariepinu ). Journal of Aquaculture Management and Technology . 2 (1): 136 - 143
Gatesoupe  F,  Luquet  P. 1991.    Practical  diet for  mass  culture of the  rotifer Brachionus  plicatilis : application to larval rearing of sea bass, Dicentrarchus labrax. Aquaculture . 22:149 - 163
Gawlicka  A,  Parent  B,  Horn  MH,  Ross  N,  Opstad  I,  Torrisen  OJ.    2000.    Activity  of  digestive enzymes  in  yolk-sac  larvae  of  Atlantic  halibut  ( Hippoglossus  hippoglossus ):  indication  of readness for first feeding. Aquaculture . 184:303 – 314.
Hamzah H.  2005.  Efektivitas penambahan enzim papain pada pakan buatan terhadap kelangsungan hidup dan pertumbuhan larva ikan bawal bintang ( Trochinotus blochii Lacepede 1801).  Tesis Program Pascasarjana UNHAS, 53 Hal.
Handayani, H, W.Widodo. 2011.  Nutrisi Ikan. UMM press Malang.
Haryati,  Fujaya  Y,  Zainuddin,  S.  Aslamyah,  Saade  E.  2014.  Perkembangan  aktivitas  enzim pencernaan  kepiting  bakau  ( Scylla sp.)  dari  stadia  zoea  ke  megalopa  dalam  hubungannya dengan kemampuan memanfaatkan pakan buatan . Jurnal Aquaculture Indonesiana . Vol. 15 (1):  35 - 41
Haryati, Fujaya Y, Anugrah.  2015.  Pengaruh pergantian pakan alami dengan pakan buatan terhadap aktivitas  enzim  pencernaan  kepiting  bakau  ( Scylla  olivacea ).  Prosiding  Seminar  Nasional Perikanan dan Kelautan XII, jilid I Budidaya Perikanan, hal: 137 - 144.
Haryati, Fujaya Y, Saade E. 2017. Optimalisasi penggunaan pakan buatan dalam pembenihan larva kepiting bakau ( Scylla olivacea ) untuk menunjang penyediaan benih berkelanjutan.  Laporan Penelitian UPT tahun I
Hasan ODS. 2000. Pengaruh penggunaan enzim papain dalam pakan buatan terhadap pemanfaatan protein  dan  pertumbuhan  benih  ikan  gurame  ( Ospronemus  Gouramy Lac.).    Tesis  Institut Petanian Bogor, 57 Hal.
Hutabarat GM, Rachmawati D, Pinandoyo. 2015.  Performa pertumbuhan lobster air tawar ( Cherax quadraicarinatus .  Melalui  penambahan  enzim  papain  dalam  pakan  buatan. Journal  of Aquaculture Management and Technology . 4(1): 10 – 18.
Lauff , M, Hofer R . 1984.  Proteolitic enzymes in fish development and the importance of dietary enzymes. Aquaculture . 37: 335 - 346
Pavasovic M, Richardson NA, Anderson AJ, Mann D, Mather PB.  2004.  Effect of pH, temperature and diet on the digestive enzyme profiles in the mud crab, Scylla serrata . Aquaculture. 242: 641 – 654
Putri, D.S. 215.  Pengaruh penggantian pakan alami dengan pakan buatan  terhadap kelangsungan hidup  dan  pertumbuhan  larva  ikan  bawal  bintang  ( Trachinotus  blochii ,  Lacepede).    Tesis Universitas Hasanuddin
Redzuari,  A.,  M.N.  Azra,  A.B.  Abol-Munafi,  Z.A.  Aizam,  Y.S.  Hii  &  M.  Ikhwanuddin,  2012. Effects  of  feeding  regimes  on  survival,  development  and  growth  of  blue  swimming  crab, Portunus pelagicus (Linnaeus, 1758) larvae. World Applied Sci. Journal . 18: 472-478.
Sorgeloos P, Cotteu P,  Dhert P, Merchie G, Lavens P.  1998.  Use of brine shirmp, Artemia sp. In larval crustacean nutrition. Review in Fisheries Science . (182): 55 – 68
Suhartono MT. 2005. Protease. Pusat Antar Universitas, Bioteknologi IPB, 76 Hal.8.