## Efek Supresi Curcumin pada Organogenesis dan Morfogenesis Embrio Ayam Umur 48 Jam
Estiani Kusumaningrum*, Indriati Dwi Rahayu**, Anik Puryatni***

## ABSTRAK
Perkembangan  embrio  diiringi  dengan  peningkatan  nutrisi,  oksigenasi  serta  pembuangan  zat  sisa metabolisme  sel.  Peningkatan  tersebut  merangsang  sel-sel  mesenkimal    untuk  menginduksi  sel  endotel menjadi jaringan pembuluh darah, proses ini disebut vaskulo-angiogenesis. Sistem vaskuler yang terbentuk sempurna akan memfasilitasi proses organogenesis dan morfogenesis embrio berjalan tanpa ada gangguan. Adanya  gangguan  dapat  menyebabkan  defek  kongenital.  Kurkumin  sering  digunakan  sebagai  bahan pengawet  makanan  dan  obat–obatan  di  berbagai  lapisan  masyarakat.  Walau  sudah  menjadi  konsumsi harian,  penelitian  mengenai  keamanan  kurkumin  terhadap  embrio  masih  terbatas  dan  belum  menjelaskan pengaruhnya  terhadap  kondisi  fetal.  Penelitian  ini  mengamati  pengaruh  kurkumin  pada  proses  vaskulo- angiogenesis yang berpengaruh pada proses organogenesis secara in ovo pada embrio ayam. Konsentrasi kurkumin  yang  digunakan  adalah  12,5  µM,  25  µM  dan  50  µM.  Kurkumin  diinjeksikan  pada  telur  ayam berusia  kurang  dari  1  hari  dan  kemudian  diinkubasi  selama  48  jam.  Hasil  penelitian  menunjukan  bahwa kurkumin dapat menghambat organogenesis pada embrio ayam dengan hasil uji ANOVA yang bermakna (p < 0,05). Pada sirkulasi yolk sac , berdasarkan uji Chi square diketahui hasilnya signifikan ( p < 0,05). Kurkumin juga berpengaruh dalam retardasi proses flexi cranial, pada perkembangan  sistem optikus dan penutupan neuropore anterior berdasarkan umur embrio ayam dengan hasil uji Chi square yang bermakna (p < 0,05). Penelitian  ini  menyimpulkan  bahwa  kurkumin  dapat  menghambat  proses  perkembangan  vaskulo- angiogenesis sehingga menyebabkan hambatan pada proses organogenesis embrio.
Kata Kunci : Curcumin, Embrio, in ovo , Organogenesis,Vaskulogenesis.

## Suppresion Effect of Curcumin on Organogenesis and Morphogenesis in 48 Hours Chicken Embryo

## ABSTRACT
Embryonic development is indicate by high nutrition requirement, oxygen, and residual cell metabolism disposal.  These  conditions  stimulates  mesenchymal  cells  to  induce  endothelial  cell  develop  into  vascular tissue,  this  process  is  called  vasculo-angiogenesis.  Fully  vascular  tissue  development  will  facilitate organogenesis  and  morphogenesis  in  embryo  without  interruption.    The  disruption  can  cause  congenital defect. Curcumin has been used as food preservation   and medicine in society . Despite curcumin has been consumed daily, the research about curcumin safety on embryo are still limited and can not explain curcumin negative effect on fetal condition. This study was to investigate curcumin effect on vascular tissue defect that can affect organogenesis in chicken embryio with in ovo method. The concentration of curcumin which used on this research were 12,5 µM, 25 µM and 50 µM. Curcumin solution was injected to chicken egg that aged less than a day then incubated for 48 hours. Based on one way ANOVA analysis showed that curcumin can disrupt  chicken  embryo  organogenesis  with  significant  result  (p  <  0.05).  Based    on  Chi  square  analysis showed significant result (p < 0.05) on yolk sac sirculation. Curcumin also affect growth retardation of flexi cranial, development of optical system and closing of neuropore anterior according to Chi square analysis that was significant (p < 0.05). To conclude, curcumin  can inhibit vasculo-angiogenesis, therefore can disrupt embryo organogenesis.
Keywords : Curcumin, Embryo, in ovo,  Organogenesis, Vasculogenesis.
*   Program Studi Pendidikan Dokter, FKUB
**  Lab Anatomi Histologi, FKUB *** Lab Ilmu Kesehatan Anak, RSSA-FKUB

## PENDAHULUAN
Pertumbuhan  fetus  dalam  proses kehamilan  dipengaruhi  oleh  berbagai  faktor dalam  mekanisme  sistem  tubuh.  Bila regulasi  tubuh  tidak  berlangsung  dengan baik  maka  akan  mengakibatkan  kondisi kehamilan  yang  tidak  diinginkan  yang  bisa berakibat pada abnormalitas dari pertumbuhan  fetus  hingga  menimbulkan kematian  pada  fetus. 1 Berdasarkan  data epidemiologi tahun 2006 di negara USA, dari 10  penyebab  tertinggi  kematian  bayi, penyebab  nomor  satu  adalah congenital anomaly . Congenital  anomaly merupakan kelainan  yang  terjadi  akibat  gangguan proses  pertumbuhan  dan  perkembangan embrio. 2
Pada  kehidupan  fetus  intrauteri, pertukaran  zat  tejadi  melalui  proses  difusi. Sejalan dengan perkembangannya, mudigah tidak  lagi  dapat  mencukupi  akan  zat makanan  hanya  melalui  difusi  saja.  Pada tingkat  ini,  sel-sel  lapisan  mesoderm splanknik  pada  mudigah  presomit  lanjut diinduksi oleh endoderm di bagian bawahnya untuk  membentuk  angioblas  dan  menandai awal  mulanya  vaskulogenesis. 3,4 Perlu diketahui  bahwa  organ  yang  pertama  kali mulai  berkembang  adalah  jantung.  Sel–sel angiogenik sudah mulai  muncul  pada  tahap presomit dari embrio yaitu hari ke-17 hingga ke-18.  Saat  awal  mula  vaskulogenesis, proses  ini  akan  menginisiasi  dan memfasilitasi  perkembangan  organ  internal seperti  otak,  liver,  ginjal,  usus  dan  lainnya yang terjadi pada minggu ketiga kehamilan.
5 Vaskulogenesis diawali dengan pembentukan  angioblas  sebagai  sel endothelial  progenitor yang  akan  bermigrasi dan  menyusun  sistem  vaskuler  secara de
novo .  Proses  vaskulogenesis  ini  ditandai dengan pembentukan  pembuluh primitif dari sel-sel endotel. 6
Proses angiogenesis, yang dikenal juga dengan  istilah  neovaskulerisasi  ditandai
dengan  lanjutan  pertumbuhan  pembuluh darah  baik sprouting maupun remodelling .
Proses ini ditandai dengan proliferasi sel-sel endotel  menuju  jaringan  yang  akan merangsang  stimulus  faktor  pertumbuhan. 7 Tujuan  utama  dari  proses  ini  adalah  setiap sel  yang  didukung  oleh  kinerja  sistem vaskuler  dapat  memperoleh  nutrisi  dan oksigen sesuai kebutuhan dan mengantarkan  hasil  produksi  sel  seperti hormon,  zat  sisa,  dan  bahan  vasoaktif lainnya. 7 Proses  vaskulo-angiogenesis  yang kompleks  ini  membutuhkan  keseimbangan antara  faktor  positif  dan  negatif  dari  proses angiogenesis. Bila terjadi peningkatan faktor antiangiogenik maka dapat memicu apoptosis  sel  sehingga  proses  distribusi udara  dan  nutrisi  menuju  sel-sel  akan terhambat dan bisa mengakibatkan terganggunya proses embryogenesis. 9,10 .
Salah  satu  zat  antiangiogenik  adalah kurkumin  yang  ditemukan    di  dalam
Curcuma longa . Curcuma longa mengandung sekitar 2 - 5 % kurkumin. Saat ini  sudah  banyak  dilakukan  penelitian mengenai efek kurkumin yang memiliki efek terapi. Dalam berbagai penelitian menunjukan  bahwa  kurkumin  berperan sebagai antiinflamasi, antioksidan, antikarsinogenik, hipolipidemia dan antidiabetes. 11-14 Hasil penelitian menunjukan  bahwa  efek  antikanker  dari kurkumin  disebabkan  oleh  salah  satu sifatnya sebagai zat antiangiogenik. 15-17
Penelitian mengenai pengaruh kurkumin terhadap embrio masih sangat terbatas dan belum  bisa  merepresentasikan  kondisi perkembangan  fetal.  Penelitian  yang dilakukan  Vijayalaxmi  (1980)  menunjukkan bahwa  kurkumin  tidak  meningkatkan  tingkat kelainan  pada  kandungan,  bayi  yang dilahirkan  dan  infertilitias  pada  hewan  coba tikus. 18 Dalam  hasil  penelitian  lainnya menunjukan  bahwa  kurkumin  menghambat proliferasi sel endotel manusia secara in vitro dan  menonaktifkan  respon  FGF (fibroblast
growth  factor) secara in  vivo . 19 Penelitian terdahulu  yang  menggunakan  hewan  coba zebrafish  dan  tikus menunjukkan  adanya apoptosis  sel. 20,21 Sejauh  ini,  dari  penelitian tersebut,  kurkumin  tidak  dapat  dibuktikan keamanannya  atau  pengaruh  pastinya terhadap embriogenesis.
Oleh karena itu, penelitian ini bertujuan untuk  mengetahui  pengaruh  kurkumin  pada embrio secara in ovo terutama pada proses vaskulo-angiogenesis  dan  pengaruhnya terhadap  organogenesis  embrio  ayam. Embrio  ayam  diinjeksi  dengan  larutan kurkumin  berbagai  dosis  dan  diinkubasi selama 48 jam yang sebanding dengan umur kehamilan  manusia  24  hari  saat  sistem vasular  sudah  terbentuk  dan  jantung  mulai memompa  darah  sebagai  tanda  awal berfungsinya  sistem  kardiovaskuler  pada tahap organogenesis. 22,23 Penggunaan embrio  ayam  dalam  penelitian  ini  didukung oleh  berbagai  faktor  dari  penelitian sebelumnya.  Dari  segi  harga,  embrio  ayam lebih  murah  dibandingkan  dengan  hewan coba  lainnya.  Hasil  menunjukan  bahwa embrio ayam baik digunakan sebagai model pembelajaran perkembangan hematopoiesis. Ini didukung dari bebagai model pembelajaran, embrio ayam dapat menjelaskan informasi baik secara molekuler maupun  genomik  mengenai  perkembangan hematopietik  dan  morfogenesis  serta abnormalitasnya. 24,25

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  ini  merupakan  eksperimental murni    dengan   menggunakan  rancangan randomized  control  group  post  test  design . Penelitian  dilaksanakan  di  Laboratorium Biomedik  Fakultas  Kedokteran  Universitas
Brawijaya.
Penelitian ini menggunakan hewan coba embrio  ayam  berumur  kurang  dari  1  hari dengan  spesies Gallus  gallus strain  Cobb dari peternakan PT. Randu Agung Singosari,
Malang.  Telur  ayam  yang  sudah  dibuahi dibagi  menjadi  4  kelompok.  Kelompok kontrol  (A)  dengan  injeksi  PBS  200  µl,  dan kelompok perlakuan paparan kurkumin pada kelompok  B  dengan  dosis  12,5  µM, Kelompok  C  dengan  dosis  25  µM,  dan kelompok  D  50  µM.  Perlakuan  dilakuan dengan menginjeksikan kurkumin menggunakan dispossible syringe 1 cc pada ujung  tumpul  telur,  pada  posisi  horizontal. Kemudian  ditutup  dengan  Vynil  tape.  Telur dibalik 180º dari posisi sebelumnya dan siap diinkubasi  selama  48  jam  pada  suhu  37,5 o C.
Pengamatan Sirkulasi Yolk Sac
Setelah  diinkubasi,  telur  dipecah  dan dituangkan  pada  NaCl  0.9  %.  Pengamatan terhadap  sirkulasi  positif  (+)  bila  sudah terdapat  sinus  terminalis.  Jumlah  embrio dengan  sirkulasi  positif  (+)  dibagi  dengan jumlah  telur  dalam  kelompok,  hasilnya merupakan  persentasi  keberadaan  sirkulasi yolk sac pada kelompok tersebut.

## Pengambilan dan Fiksasi Bahan Coba
Embrio  diambil  menggunakan  kertas saring  yang  diletakkan  pada  permukaan embrio.  Kemudian  membran  vitelline digunting  pada  pinggir  kertas  saring  dan embrio  dicuci  perlahan  pada  NaCl  0,9  % sebanyak  dua  kali.  Setelah  itu  embrio difiksasi pada formalin 10 %.

## Prosedur Immunohistokimia
Waktu pengecatan selama 2 hari, pada hari  pertama  preparat  disiapkan  untuk  di tetesi  antibodi  primer  dan  pada  hari  kedua disiapkan  untuk  pewarnaan  embrio  dan counter staining . Warna yang nampak  pada prepaarat  adalah  cokelat  dan  ungu,  di munculkan  dengan  kromagen  DAB  untuk warna  cokelat  dan  Mayer  hematoxilin  untuk warna ungu. Setelah selesai preparat dapat diamati  di  bawah  mikroskop  dengan
mengamati  morfologis  embrio  sesuai parameter yang digunakan.

## HASIL
Sirkulasi Yolk Sac Pada  tahap  ini,  sirkulasi yolk  sac (+) ditandai  dengan  adanya  sinus  terminalis. Pengamatan  keberadaan  sirkulasi yolk  sac embrio  menunjukkan  penurunan  sesuai dengan  dosis  perlakuan  (Gambar  1). Penurunan  persentase  sirkulasi yolk  sac yang  signifikan  terjadi  pada  dosis  25  M. Berdasarkan  uji  Chi-square  diketahui terdapat  penurunan  yang  signifikan  (p  < 0,05).
Gambar  1.  Persentase  sirkulasi yolk  sac pada embrio  ayam  umur  48  jam  dengan  paparan kurkumin 0  M, 12,5  M, 25  M, dan 50  M.

## Flexi Cranial
Flexi  cranial  dianggap  positif  (+)  bila sudah  terdapat slight  flexure .  Pengamatan flexi  cranial  embrio  pada  penelitian  ini menunjukkan  adanya  kecenderungan  untuk menurun  sesuai  dengan  dosis  perlakuan kurkumin (Gambar 2). Berdasar hasil uji Chi square  diketahui  penurunan  tersebut bermakna (p < 0,05).
Gambar  2.  Persentase  flexi  cranial  pada  embrio ayam  umur  48  jam  dengan  paparan  kurkumin  0  M, 12,5  M, 25  M, dan 50  M.

## Neuropore Anterior
Pengamatan  neuropore  embrio  pada penelitian ini menunjukkan adanya kecenderungan  untuk  menurun  sesuai dengan  dosis  perlakuan  kurkumin  (Gambar 3).  Berdasar  uji  statistik  menggunakan  uji
Chi  square  diketahui  penurunan  tersebut bermakna secara statistik (p < 0,05).
Gambar  3.  Persentase  neuropore  anterior  pada embrio  ayam  umur  48  jam  dengan  paparan kurkumin 0 mM, 12,5 mM, 25 mM, dan 50 mM.

## Sistem Optikus
Pengamatan  sistem  optikus  embrio pada  penelitian  ini  menunjukkan  adanya kecenderungan  untuk  menurun  sesuai dengan  dosis  perlakuan  kurkumin  (Gambar
4).  Berdasarkan  hasil  uji  Chi  square diketahui penurunan tersebut bermakna (p <
0,05).
Gambar  4.  Persentase  sistem  optikus  pada embrio  ayam  umur  48  jam  dengan  paparan kurkumin 0 mM, 12,5 mM, 25 mM, dan 50 mM.
Scoring Total Embrio Dalam  penelitian  ini  skor  total  embrio terdiri  dari  sirkulasi yolk  sac ,  neuropore anterior,  sistem  optik  dan  flexi  cranial. Pemberian  skor  dilakukan  menggunakan tabel scoring embrio dari Drake et al (2006) (Tabel  1).  Data scoring bisa  dilihat  pada
Tabel 2. Sistem pembobotan tiap parameter tidak  sama,  dengan  flexi  cranial  sebagai indikator  dengan  rentang  nilai  paling  luas sehingga  skor  total  embrio  banyak dipengaruhi  oleh  parameter  ini.  Hasil perhitungan  skor  total  berdasarkan  uji ANOVA bermakna secara statistik (p < 0,05). Tabel 1. Skor total embrio (Drake et al, 2006).
Tabel 2. Skor total embrio pada embrio ayam umur 48 jam dengan paparan kurkumin 0 mM, 12,5 mM, 25 mM, dan 50 mM.

## PEMBAHASAN

## Sirkulasi Yolk Sac
Pada embrio ayam umur 48 jam ditandai dengan sudah terbentuknya sinus terminalis beserta jantung  yang  berdenyut  yang  dapat dilihat dengan mata tanpa menggunakan alat bantu.  Pada  Kelompok  A  dan  B  tidak terdapat  gangguan  pembentukan  sistem vaskuler  ditandai  adanya  sinus  terminalis. Sementara  pada  kelompok  C  dan  D  hasil menunjukan  tidak  adanya  sinus  terminalis. Hal  ini  mungkin  disebabkan  oleh  supresi kurkumin  pada  tingkat  molekuler  yang mendukung  proses  pertumbuhan  dan perkembangan  sistem  vaskuler  tersebut. Adapun  hipotesis  ini  didukung  oleh penelitian–penelitian  sebelumnya  yang menjelaskan  dari  aspek  molekuler.  Pada penelitian  Bae et  al (2006) , kurkumin
Parameter 0 1 2 3 4 5 6 Yolk sac circulation - - No distinct sinus terminalis Distinct sinus terminalis Circulation; established vascular network - - Neuropore anterior - - Open Closed - Flexi cranial No flexure Cranial flexure indicated Slight cranial flexure Cranial flexure Broad curve Forebrain and hindbrain axes at 90 o Optic system No optic develop- ment - Optic vesicles presents - - - Konsentrasi (µM) Skor SD SEM 0 11.43 0.532 0.202 12.5 11.09 1.221 0.368 25 7.43 2.699 1.020 50 6.63 1.188 0.420
100 90 42,8 37,5 0 12,5 25 50 % Keberadaan sistem optikus
menghambat kerja HIF-1α.HIF-1 α berperan sebagai  faktor  pemicu  hipoksia  pada  awal proses  vaskulogenesis. 26 Kurkumin  juga mensupresi    sekresi  FGF  pada  FGF signaling  pathway yang  berdampak  pada terhambatnya proses sprouting dan remodelling sel endotel. 27
Mekanisme  kerja  kurkumin  sebagai antiangiogenik  juga  mensupresi  faktor proangiogenik salah satunya TGF-β. Proses supresi  dari  TGF-β  ini  dapat  menyebabkan kecacatan pada perkembangan sirkulasi yolk sac dan berakibat pada kelangsungan hidup embrio    tikus. 28,29 Penelitian  tersebut mendukung  hasil  penelitian  ini  karena  bila faktor–faktor  molekuler  yang  mendukung proses  pertumbuhan  dan  perkembangan sistem vaskuler terhambat, maka pembentukannya  akan  terhambat  pula  dan dapat  menyebabkan  retardasi  pembuluh darah.

## Flexi Cranial
Flexi  cranial  merupakan  representasi dari  kemajuan  perkembangan  otak  dan jantung  yang  ditandai  oleh  menekuknya kepala  embrio  dan  disertai  penurunan jantung  dari  cranial  ke  bawah.  Terbentuk slight flexi  cranial  yang  ditandai  dari menekuknya  kepala  ke  depan  dan  posisi jantung  juga  mulai  turun. 30 Pada  penelitian ini,  di  kelompok  A  (kontrol)  dan  B  (injeksi kurkumin  12.5  µM)  hasil  menunjukan terbentuknya  slight  flexi  cranial.  Sementara pada kelompok C dan D hasil menunjukkan baru  terdapat  indikasi  flexi  cranial  bahkan terdapat  sampel  dengan    tidak  ada  indikasi flexi  cranial.  Pada  penelitian  ini  diduga kurkumin menghambat pembentukan jantung dan vaskuler melalui supresi faktor– faktor molekuler sehingga bisa menyebabkan terhambatnya proses penurunan  posisi  jantung  yang  berakibat pada  terhambatnya  proses  flexi  cranial. Proses  organogenesis  salah  satunya perkembangan otak dan jantung,
membutuhkan  nutrisi  dan  oksigen  yang adekuat.  Bila  terdapat  hambatan  pada proses  transportasi  tersebut  maka  proses perkembangannya  tidak  dapat  berjalan dengan baik. Kurkumin diduga menghambat di  sebagian  besar  faktor  proangiogenik termasuk    FGF  dan  TGF-β.  TGF-β  yang berperan  pada  tahap  awal  induksi pembentukan  jantung  dan  mengontrol perkembangan  jantung. 31 Dalam  berbagai riset,  FGF  dibuktikan  peranannya  dalam proses  seluler  seperti  migrasi  sel, angiogenesis,  diferensiasi  dan  menginduksi sel–sel  kardiak. 32 Bila  faktor–faktor  tersebut dihambat  maka  proses  perkembangan jantung  pun  terhambat  sehingga  dapat berakibat pada perkembangan flexi cranial.

## Neuropore Anterior
Neuropore anterior merupakan representasi  perkembangan  awal  sistem saraf  dan  jantung.  Neuropore  anterior merupakan  ujung  cranial  dari  neural  tube yang  masih  terbuka.  Pada  embrio  ayam umur  48  jam  ditandai  dengan  proses penutupan  neuropore  anterior  secara sempurna yang menandakan perkembangan otak  dan  sistem  saraf  bagian  rostral.  Pada kelompok  A    dan  B,  hasil  menunjukan neuropore  anterior  telah  tertutup.  Pada kelompok  C  dan  D,  hasil  menunjukan keadaan  neuropore  anterior  yang  sudah tertutup  di  bawah  50  %  dari  jumlah  sampel masing–masing  kelompok.  Pada  penelitian ini  diduga  kurkumin  dapat    menghambat pertumbuhaan  sistem  vaskuler  melalui supresi  faktor  molekuler  yang  juga berdampak  pada  perkembangan  sistem saraf  (neuropore  anterior).  Penelitian terdahulu  menjelaskan  hubungan  sistem vaskuler  dengan  terjadinya  abnormalitas pada neural tube embrio.
Hasil  penelitian  menunjukan  inaktivasi dari sel–sel endotel menyebabkan perdarahan  embrio,  abnormalitas  pada jantung  dan  penutupan  neural  tube  pada
bagian cranial. 33 Penelitian lain menjelaskan proses  vaskulerisasi  dalam  perkembangan neural  tube  embrio  tikus  tergantung  dari proses sprouting dari peri-neural  vascular plexus  ( PNVP ) yang  mengelilingi  neural tube.  Faktor  penting  yang  mendukung proses ini adalah VEGF yang berperan pula secara spesifik dalam penutupan neural tube khususnya  pada  keadaan  peningkatan oksigen yang dibutuhkan untuk pertumbuhan sel.    VEGF  juga  terekspresi  pada  motor neuron  dan  daerah  sekitarnya  yang mendukung  proses  sprouting  dari  PNVP untuk mendukung sistem transportasi O 2 dan nutrisi  sel–sel  neural. 34 Pengaruh  kurkumin pada perkembangan neural masih perlu diuji untuk  memastikan  peranannya  sebagai faktor  pendukung  atau  penghambat.
Penelitian  Kim et  al (2008),  menjelaskan peran kurkumin adalah mendukung proliferasi  pada  dosis  rendah  yaitu  500  nM dan  pada  dosis  di  atas  10  µM  kurkumin menunjukan  efeknya  dalam  menghambat proliferasi neuro progenitor cell (NPC). 35
Berdasarkan  hasil  penelitian  tersebut dapat  dikaitkan  dengan  hasil  penelitian  ini untuk mengetahui pengaruh kurkumin dalam penutupan  neurophore  anterior    yang membutuhkan  kinerja  sel–sel  neural ditunjukan  terutama  pada  kelompok  C  (25 µM)  terjadi  penurunan  persentasi  yang signifikan. Hal ini diduga pengaruh kurkumin pada embrio adalah dapat menghambat baik sistem vaskuler maupun neural.

## Sistem Optikus
Sistem  optikus  merupakan  representasi dari  cikal  bakal  penglihatan  pada  embrio. Pada  embrio  ayam  umur  48  jam  ditandai adanya bilateral  optic  vesicle pada  area forebrain seluruh sampel di kelompok A dan sebagian besar sampel kelompok B terdapat optic vesicle . Pada kelompok C  dan D hasil pengamatan optic  vesicle di  bawah  50  % dari  total  sampel  tiap  kelompok.  Pada penelitian  ini,  mekanisme  kurkumin  dalam
menghambat  pembentukan optic  vesicle disebabkan  oleh  pengaruh  kurkumin terhadap  faktor  molekuler  yang  mendukung vaskulerisasi  daerah forebrain yang  juga melibatkan  area  perkembangan  sistem optikus.  Selain  itu,  kurkumin  diduga menghambat  sel–sel  neural  yang  dapat berakibat  pada  perkembangan  sistem optikus.  Hal  ini  disebabkan  oleh  sel–sel neural  terutama  area forebrain merupakan sumber  perkembangan  sistem  optikus. Proses  evaginasi optic  vesicle juga  diiringi dengan  perkembangan    vaskuler  primer yang  bersumber  dari perineural  vascular plexus yaitu choroidal  vascular .  Proses vaskulerisasi  tersebut  akan  menutrisi  dan menyalurkan O 2 untuk mendukung
pertumbuhan optic vesicle. 36
Dalam  pertumbuhan  choroidal  vaskuler juga didukung oleh berbagai faktor molekuler seperti basic fibroblast growth factor ( bFGF ), and  vascular  endothelial  growth  factor ( VEGF ). Sama  halnya  dengan  proses vaskuloangiogenesis  di  tiap    pertumbuhan embrio,  faktor  molekuler  yang  mendukung proses  tersebut  berfungsi  dalam  proses remodelling dan sprouting pembuluh darah. 37,38 Penelitian  pendukung  lainnya adalah  pada  ibu  hamil  dengan  umur kehamilan  3  minggu,  senyawa  etanol menyebabkan  kerusakan  primer  pada  area forebrain dan  kemudian  meluas  pada abnormalitas sistem optikus yaitu microphthalmia, anterior segment dysgenesis  (Peters'  anomaly),  iris  dan  optic nerve colobomas, dan persistent hyperplastic  primary  vitreous. 39 Pada penelitian  ini, kurkumin  memberikan pengaruh dalam menghambat perkembangan  vaskuler  berserta  faktor molekuler  seperti  faktor  pertumbuhan  dan transkripsi  untuk  sel–sel  endhotel  tersebut. Begitu  juga  pada  vaskulerisasi  sistem optikus tersebut.

## Scoring Total Embrio
Scoring total  embrio  menggambarkan hasil  pengamatan  makroskopis  terhadap sistem  saraf,  sistem  optikus  dan  sirkulasi yang  bisa  diamati  pada  embrio  ayam  umur 48 jam dengan pengecatan imunohistokimia. Keterkaitan sistem vaskuler yang menopang proses  pertumbuhan  dan  perkembangan sistem  lainnya  pada  embrio  dapat menghasilkan  kesimpulan  bahwa  gangguan yang  terjadi  pada  sistem  vaskuler  diduga berdampak pula pada sistem lainnya, dalam penelitian  ini  diamati  pada  sistem saraf  dan sistem optikus.

## KESIMPULAN
1. Pemberian kurkumin pada embrio ayam umur 48 jam menyebabkan:
• Gangguan  pada  sirkulasi yolk  sac embrio  ayam  melalui  pengaruhnya terhadap  retardasi  perkembangan pembuluh darah.
• Gangguan  pada  perkembangan jantung dan otak pada embrio yang ditandai  dengan    retardasi  bentuk flexi  cranial yang  tidak  sesuai dengan perkembangan usia.
• Gangguan  pada  perkembangan persyarafan  dan  calon  sistem pengelihatan  yang  ditandai  dengan tetap terbukanya neuropore anterior dan  tidak  adanya  sistem  optikus pada embrio yang diberi perlakuan.
2. Dosis batas kurkumin yang memberikan efek signifikan yaitu pada konsentrasi 25
 M.

## SARAN
Perlu  penelitian  lebih  lanjut  mengenai dosis kurkumin yang aman dikonsumsi oleh ibu hamil.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Chaiworapongsa T, Romero R, Kusanovic  JP et  al .  Unexplained  Fetal Death  is  Associated  with  Increased Concentrations    of  Antiangiogenik Factors  in    Amniotic  Fluid. J  Matern Neonatal Med . 2010; 23(8): 794-805.
2. Heron  MP,  Hoyert  DL,  Murphy  SL,  Xu
JQ,  Kochanek  KD,  Tejada-Vera  B.
Deaths: Final data for 2006. National vital statistic reports. Hyattsville MD : National Center for Health Statistics. 2009; 57(14). 3. Sadler TW. Langman's Medical Embryology .  7 th edition.  Baltimore:
William & Wilkins. 1995.
4. Ferguson  JE,  Kelley  RW,  Patterson  C. Mechanisms of Endothelial Differentiation in Embrionic Vasculogenesis. Arterioscler Thromb Vasc  Biol. 2005; 25:2246-2254.
5. van der Guus B. Early Development from a  Phenomenological  Point  of  View.
Amsterdam:  Louis Bolk Instituut. 2001.
6. Wang Y and Zhao S. Vascular Biology of the  Placenta .  California:  Morgan  & Claypool Life Sciences San Rafael. 2010. 7. Oklu R, Walker TG, Wicky S, Hesketh R.
Angiogenesis and Current Antiangiogenik Strategies for the Treatment of Cancer. J Vasc Interv Radiol . 2010; 21:1791–1805.
8. Papetti  M  and  Herman  IM.  Mechanisms of Normal and Tumor-derived Angiogenesis. Am J Physiol Cell Physiol. 2002; 282(5):C947-C970. 9. Romero et  al .  An  Imbalance  between Angiogenik  and  Anti-Angiogenik  Factors Precedes  Fetal  Death  in  a  Subset  of Patients: Results of a   Longitudinal Study. The Journal of Maternal-Fetal and Neonatal Medicine . 2010; 23(12):1384–1399. 10. Edwards et al . Expression of  Angiogenik
Basic  Fibroblast  Growth  Factor  Platelet Derived Growth Factor, Thrombospondin-
1  and  Their  Receptor  the  Porcine Maternal-Fetal  Interface. Reproductive
Biology and Endocrinology . 2011; 9:5. 11. Kunchandy  E  and  Rao  MNA.  Oxygen
Radical Scavenging Activity of Curcumin .
Int J Pharmacol . 1990; 58: 237-40. 12. Huang MT, Lou YR, Ma W et al . Inhibitory
Effects  of  Dietary  Curcumin  on Forestomach,  Duodenal,  and  Colon Carcinogenesis  in  Mice. Cancer  Res . 1994;  54:5841-7. 13. Babu KS and Srinivasan K. Hypolipidemic  Action  of  Curcumin,  the Active  Principle  of  Turmeric  ( Curcuma longa ) in Streptozotocin Induced Diabetic
Rats. Mol  Cell  Biochem .  1997;  166:169- 75.
14. Arun N and Nalini N. Efficacy of Turmeric on  Blood  Sugar  and  Polyol  Pathway  in Diabetic Albino Rats. Plant  Foods  Hum Nutr .  2002; 57:41-52.
15. Li  L,  Braiteh  FS,  Kurzrock  R.  Liposome- Encapsulated  Curcumin:  In  Vitro  And  In Vivo  Effects  on  Proliferation,  Apoptosis, Signaling,  and  Angiogenesis. Cancer . 2005; 104:132-231.
16. Lin YG, Kunnumakkara AB, Nair A et al. Curcumin  Inhibits  Tumour  Growth  and Angiogenesis  in  Ovarian  Carcinoma  by
Targeting  the  Nuclear  Factor-Kappa 
Pathway. Clin  Cancer  Res .  2007;  13: 3423-30.
17. Oyagbemi  AA,  Saba  AB,  Ibraheem  AO. Prevention Curcumin: from Food Spice to Cancer  Prevention. Asian  Pacific  J Cancer Prev. 2010; 10:963-967.
18. Vijayalaxmi.  Genetic  Effect  of  Turmeric and Curcumin in Mice and Rats. Mutation
Research . 1980; 79(2):125-132.
19. Liu  D,  Schwimer  J,  Liu  Z,  Eugene  A, Woltering  and  Frank  LG.  Antiangiogenik Effect  of  Curcumin  in  Pure  Versus  in Extract  Forms. Pharmaceutical  Biology .
2008; 46:677–682. 20. Chen CC, Hsieh MS, Hsuuw YD, Huang FJ, and Chan WH. Hazardous Effects of Curkumin on Mouse Embryonic Development  through  a  Mitochondria- Dependent Apoptotic   Signaling Pathway. Int  J  Mol  Sci. 2010;  11:2839-
2855. 21. Shiau  RJ,  Shih  PC,  Wen  YD.  Effect  of Silymarin on   Curcumin induced
Mortality  in  Zebrafish  ( Danio  rerio )
Embryos  and  Larvae. Indian  Journal  of Experimental Biology . 2011; 49:491-497. 22. O'Rahilly  R.  Early  Human  Development and  the  Chief  Sources  of  Information  on Staged  Human  Embryos. Eur  J  Obstet Gynecol Biol . 1979; 9(4):273-80. 23. O’Rahilly R and Muller F. Developmental
Stages  in  Human  Embryos  Including  a Revision  of  Streeter  “Horizons”  and  a Survey  of  the  Carnegie  Collection.
Washington DC. 1987.
24. Drake  VJ,  Koprowski  SL,  Lough  JW, Smith SM. Gastrulating Chick Embryo as a  Model  for  Evaluating  Teratogenicity:  A Comparison  of  Three  Approaches. Birth Defects  Research  (PartA):  Clinical    and Molecular Teratology . 2006; 76:66–71. 25. Sheng  G.  Primitive  and  Definitive Erythropoiesis  in  the  Yolk  Sac:  A  Bird’s Eye View. Int J Dev Biol . 2010; 54:1033- 1043.
26. Bae  MK,  Kim  SH,  Jeong  JW,  Lee  YM, Kim HS, Kim   SR et al . Curcumin Inhibits Hypoxia-Induced Angiogenesis via Down Regulation  of HIF -1. Oncol  Rep .  2006; 15:1557-62.
27. Mohan R, Sivak J, Ashton P, Russo LA, Pham  BQ,  Kasahara  N et  al . Curkuminoids  Inhibit  the  Angiogenic Response  Stimulated  by  Fibroblast Growth Factor-2, Including Expression of Matrix  Metalloproteinase Gelatinase  B. J Biol Chem . 2000; 275:10405-12.
28. Dickson  MC,  Martin  JS,  Cousins  FM, Kulkarni  AB,  Karlsson  S,  and  Akhurst RJ.  Defective  Haematopoiesis  and Vasculogenesis  in  Transforming  Growth
Factor-Beta  1  Knock  Out  Mice. Development. 1995; 121:1845-1854.
29. Goumans  MJ  and  Mummery  C. Functional  Analysis  of  The TGF beta Receptor/Smad  Pathway  Through  Gene Ablation  in  Mice. Int  J  Dev  Biol. 2000; 44:253-265.
30. Goodrum  GR,  Jacobson  AG.  Cephalic Flexure Formation in the Chick Embryo. J
Exp Zool . 1981; 216:399-408.
31. Wagner  M,  Siddiqui  MAQ.  Signal Transduction in Early Heart Development
(I) :   Cardiogenic  Induction  and  Heart Tube  Formation. Exp  Biol  Med. 2007;
232:852–865.
32. Bottcher RT, Niehrs C. Fiboblast Growth
Factor  Signaling  during  Early  Vertebrate Development. Endocr  Rev .  2005;
26(1):63-77/
33. Zwerts F, Lupu Fl, De Vriese A et al. Lack of  Endothelial  Cell  Survive  in  Causes Embryonic  Defects  in  Angiogenesis, Cardiogenesis, and Neural Tube Closure. The  American  Society  of  Hematology. 2007; 109(11):4742–4752. 34. James  JM,  Gewolb  C,  and  Bautch  VL. Neurovascular Development Uses VEGF - A  Signaling  to  Regulate  Blood  Vessel Ingression  into  the  Neural  Tube. Development. 2006;136:833-841. 35. Kim SJ, Son TG, Park HR et al . Curcumin Stimulates  Proliferation  of  Embryonic Neural Progenitor Cells and Neurogenesis in the Adult Hippocampus. J  Biol  Chem. 2008;  283(21):14497– 14505. 36. Saint-Geniez M, Maldonado AE, D’Amore PA.  VEGF  Expression  and  Receptor
Activation  in  the  Choroid  during Development  and  in  the  Adult. Invest Opthalmol Vis Sci . 2006; 47:3135-3142. 37. Gogat K, Le Gat L, van den Berghe L et al .  VEGF  and  KDR  Gene  Expression During Human Embryonic  and Fetal Eye Development. Invest Ophthalmol Vis Sci .
2004; 45:7–14.
38. Marneros AG, Fan J, Yokoyama Y et al . Vascular  Endothelial  Growth  Factor Expression  in  the  Retinal  Pigment Epithelium is Essential for Choriocapillaris  Development  and  Visual Function. Am J Pathol . 2005; 167:1451–
1459. 39. Cook  C.  Embryogenesis  of  Congenital Eye Malformations. Vet Comp Ophthalmol . 1995; 5:109.