Efektifitas Hidrogel Binahong ( Anredera cordifolia ( Ten .) Steenis ) terhadap Penurunan Jumlah Makrofag pada Penyembuhan Luka Fase Proliferasi Tikus Putih ( Rattus norvegicus ) Galur Wistar Kondisi Hiperglikemia
Gadis Mutiara PI*, Nurdiana**, Yulian Wiji Utami*

## ABSTRAK
Hiperglikemia adalah kondisi kadar gula darah ≥ 126 mg/dl yang menyulitkan penyembuhan luka. Kan- dungan daun binahong berupa saponin, flavonoid, polifenol, triterpenoid, antosianin, asam ursolat dan kar- bonat diduga dapat membantu mempercepat proses penyembuhan luka. Makrofag sebagai sel yang mem- fagosit  daerah  luka  dan  membersihkan  debris  akan  meningkat  pada  fase  inflamasi  dan  akan  menurun jumlahnya pada fase proliferasi ketika luka mulai menutup.  Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui pengaruh perawatan luka kondisi hiperglikemia menggunakan hidrogel binahong terhadap jumlah makrofag. Desain penelitian adalah true experiment dengan metode randomized posttest only controlled group design dilakukan terhadap hewan coba tikus putih jantan galur Wistar. Jumlah sampel adalah 30 tikus (n = 5) dan dibagi dalam 6 kelompok yaitu 4 kelompok perlakuan yaitu menggunakan basis hidrogel, hidrogel binahong konsentrasi 2,5 %, 5 %, 7,5 %, dan 2 kelompok kontrol normal saline (NS) pada tikus kondisi sehat dan kon- disi hiperglikemia. Data yang diukur adalah jumlah makrofag pasca perawatan luka selama 12 hari. Analisis uji one-way ANOVA didapatkan p = 0,000 ( p < 0,05). Melalui uji post hoc test hidrogel binahong 5 % mem- iliki perbedaan signifikan ( p < 0,05) dengan K (-) NS ( p = 0,004), K (+) NS ( p = 0,000), basis hidrogel ( p = 0,001), hidrogel binahong 2,5 % ( p = 0,018). Dapat disimpulkan bahwa perawatan luka menggunakan hidro- gel binahong dapat menurunkan jumlah makrofag pada penyembuhan luka fase proliferasi di jaringan kulit luka tikus dengan kondisi hiperglikemia.
Kata kunci: Hiperglikemia, Hidrogel binahong, Jumlah makrofag.
The Effectiveness of Binahong Hydrogel ( Anredera cordifolia (Ten) Steenis) to Reduce Macrophages Number in Proliferation Phase of Wound on Hyperglycemia Rats ( Rattus norvegicus ) Wistar Strain

## ABSTRACT
Hyperglycemia is a condition with high blood sugar (≥ 126 mg/dl) which complicate wound healing. Bi- nahong is consist of saponin, flavonoid, polyphenol, triterpenoid, anthocyanin, ursolic acid and carbonate that can  accelerate  wound  healing  process.  Macrophages,  cells  that  engulfs  cells  debris  and  damaged  tissue, will increase in inflammatory phase and will reduced when the wound start closing. This study was to deter- mined the effect of topical hyperglycemia wound care using hydrogels binahong to reduce macrophages in male rat Wistar strain. This study used true-experiment using randomized posttest only controlled group de- sign. The sample were 30 rats (n = 5) and divided into six groups: hydrogel base, hydrogel binahong with concentration 2.5 %, 5 %, 7.5 %, and two control groups normal saline (NS) that are non hyperglycemia and and hyperglycemia rats. The recorded data are macrophages number on post-treatment wound for 12 days. One way ANOVA showed p = 0.000 (p < 0.05) and post hoc test showed 5 % hydrogels binahong  have sig- nificant differences (p < 0.05) with K (-) NS (p = 0.004), K (+) NS (p = 0.000), hydrogel base (p = 0.001), hy- drogel binahong 2.5 % (p = 0.018). It can be concluded that hydrogel binahong can reduce macrophages on proliferation phase in rats with hyperglycemia wound.
Keywords : Binahong hydrogel, Hyperglycemia, Macrophage.
*   Program Studi Ilmu Keperawatan, FKUB
**  Lab Farmakologi, FKUB

## PENDAHULUAN
Menurut  WHO (2000),  hiperglikemia
adalah  kadar  gula  darah  ≥  126  mg/dL  (7,0 mmol/L),  dengan  kadar  gula  darah  antara 100 dan 126 mg/dL (6,1 sampai 7,0 mmol/L) dikatakan  suatu keadaan toleransi abnormal glukosa. Hiperglikemia biasanya disebabkan oleh defisiensi insulin, seperti yang dijumpai pada diabetes tipe 1 atau karena penurunan responsifitas  sel  terhadap  insulin  seperti yang  dijumpai  pada  diabetes  tipe  2.  Pada kondisi  hiperglikemia  yang  tidak  terkontrol dapat  menyebabkan  berbagai  macam komplikasi  seperti  gangguan  elektrolit  dan meningkatnya resiko infeksi. 1 Prevalensi  penderita  hiperglikemia belum  diketahui  secara  pasti  tetapi berdasarkan  studi  populasi  dinyatakan bahwa  prevalensi  hiperglikemia  sangat bervariasi. Berdasarkan studi observasi yang dilakukan  oleh  Umpierrez et  al. pada  tahun 2002 melaporkan prevalensi hiperglikemia di dunia  mengalami  peningkatan  dari  32  % menjadi  38  %  yang  dirawat  di  rumah  sakit, dengan  16  %  diantaranya  tidak  memiliki riwayat  diabetes  mellitus.  Dari  persentase tersebut,  sekitar  70  %  pasien  diabetes dengan sindrom koroner akut dan sekitar 80 %  pasien  bedah  jatung  pada  fase perioperatif di rumah sakit. 2
Hiperglikemia  sangat  erat  kaitannya dengan  penyakit  diabetes  mellitus.  Menurut Diabetic  Federation ,  jumlah  penderita diabetes  mellitus  yang  ada  di  Indonesia tahun 2001 terdapat 5,6 juta jiwa untuk usia di  atas  20  tahun.  Pada  tahun  2020 diestimasikan  akan  meningkat  menjadi  8,2 juta,  apabila  tidak  dilakukan  upaya perubahan  gaya  hidup  sehat  pada penderita. 3 Kadar  gula  yang  tinggi  sering menimbulkan komplikasi diantaranya adalah terjadinya  perubahan  patologis  pada ekstremitas. Salah satu perubahan patologis yang  terjadi  pada  ekstremitas  adalah timbulnya luka. Luka yang bila tidak dirawat
dengan  baik  akan  berkembang  menjadi ulkus dan gangren, dan dapat berujung pada amputasi. 4 Untuk itu, sangatlah penting bagi perawat  mengetahui  penatalaksanaan  yang tepat  untuk  luka  dengan  keadaan  kadar glukosa yang tinggi.
Pada  penderita  dengan  keadaan  kadar glukosa  yang  tinggi  (hiperglikemia)  dapat menimbulkan  pengapuran  dan  penyempitan pembuluh  darah.  Gangguan  peredaran pembuluh  darah  besar  dan  kecil, mengakibatkan  sirkulasi  darah  menjadi kurang  baik,  pemberian  nutrisi  dan oksigenasi  berkurang,  penyumbatan  aliran darah terutama pada daerah kaki, sehingga dapat  menyebabkan  terjadinya  luka  yang sukar  sembuh. 5 Hal  ini  menyebabkan penderita dengan kadar glukosa yang tinggi memerlukan perawatan luka yang baik.
Pada  umumnya  perawatan  luka  di masyarakat  dilakukan  dengan  balutan disertai  dengan  kompres betadine dan normal  saline karena  bahan-bahan  tersebut mudah  didapatkan.  Namun  penggunaan jangka  panjang  balutan  tersebut  dapat menyebabkan  penyembuhan  luka  yang lambat  dan dapat muncul berbagai infeksi. 3 Hal  ini  menyebabkan  masyarakat  mencari alternatif  pengobatan  lain  salah  satunya dengan  tanaman  herbal.  Penggunaan tanaman  herbal  semakin  digemari  oleh masyarakat  dengan  adanya trend  back  to nature .  Masyarakat  menengah  ke  bawah banyak  menggunakan  bahan-bahan  dari bahan alam terutama dalam upaya preventif,
promotif, dan rehabilitatif untuk menanggulangi berbagai penyakit. 6
Tanaman  herbal  saat  ini  mengalami perkembangan  yang  cukup  pesat,  salah satunya  adalah  binahong.  Binahong  adalah salah  satu  tanaman  di  Indonesia  yang  oleh masyarakat  dipercayai  sebagai  obat  yang dapat mempercepat penyembuhan luka.
Daun  binahong  ( Anredera    cordifolia (Ten.) Steenis)  mengandung  senyawa flavonoid,  alkaloid,  polifenol,  terpenoid,
antosianin, asam ursolat, asam askorbat dan saponin. Pada penelitian eksperimental yang dilakukan oleh Astuti (2011) tentang ekstrak etanol  binahong  dengan  hidrogel  sangat efektif dalam penyembuhan luka insisi tanpa menimbulkan iritasi. Binahong terbukti efektif sebagai  antiinflamasi  dan  antibakteri, pembentukan  prostaglandin,  pelepasan histamin, merangsang pembentukan kolagen,  sebagai  antimikroba,  perangsang pertumbuhan  sel-sel  baru  pada  luka  dan memicu makrofag bermigrasi ke daerah luka untuk membunuh organisme yang menyerang  dan  menghasilkan  sitokin  untuk mencegah  terjadinya  inflamasi.  Kemudian dalam waktu singkat sitokin akan diproduksi yang dapat mengaktifkan fibroblas, keratinosit dan mengikat makrofag ke dalam luka. 7
Makrofag merupakan sel yang berperan pada fase inflamasi dan proliferasi. Makrofag berasal  dari  monosit  dalam  sirkulasi  yang diinduksi  untuk  bermigrasi  menembus endotel oleh kemokin atau kemotraktan lain. Makrofag mensekresi sejumlah produk yang aktif  secara  biologik  sesaat  setelah diaktifkan.  Makrofag  sebagai  sel  yang memfagosit daerah luka dan membersihkan debris  akan  meningkat  pada  fase  inflamasi dan  akan  menurun  jumlahnya  pada  fase proliferasi ketika luka mulai menutup. 8
Tujuan  penanganan  luka  adalah melakukan penyembuhan luka dalam waktu sesingkat mungkin dengan mengurangi rasa sakit  dan  ketidaknyamanan  hingga  semini- mal  mungkin.  Perawatan  luka  harus menghasilkan  lingkungan  fisiologis  yang kondusif untuk proses perbaikan dan regen- erasi  jaringan  luka. 9 Lingkungan  fisiologis yang  kondusif  dapat  diperoleh  dari  bentuk sediaan  yang  digunakan  untuk  perawatan luka.  Bentuk  sediaan  perawatan  luka sebaiknya  mampu  memberikan  lingkungan yang lembab. Lingkungan yang lembab akan mencegah  dehidrasi  jaringan  dan  kematian sel,  dan  mempercepat  angiogenesis.  Oleh
karena  itu,    diperlukan  tambahan  terapi dengan bentuk sediaan yang ditujukan untuk luka  hiperglikemia  salah  satunya  adalah sediaan hidrogel. Hidrogel untuk penggunaan  dermatologi  secara  umum mempunyai  sifat  tidak  berminyak,  mudah menyebar, dan mudah dibersihkan. 10 Berdasarkan data di atas, peneliti tertar- ik  untuk  melakukan  penelitian  tentang  efek- tifitas hidrogel binahong ( Anredera  cordifolia (Ten.) Steenis)  terhadap  jumlah  makrofag pada  luka  tikus  ( Rattus  norvegicus) galur Wistar kondisi hiperglikemia.
Manfaat  teoritis  penelitian  ini  adalah menambah  khasanah  keilmuan  akan manfaat ekstrak  binahong sebagai tanaman obat  keluarga.  Sementara  manfaat  praktis adalah menambah pengetahuan bagi profesi keperawatan tentang potensi perawatan luka tikus  putih  ( Rattus  norvegicus) galur  Wistar kondisi  hiperglikemia  menggunakan  ekstrak binahong  ( Anredera    cordifolia  (Ten.) Steenis),  serta  mengembangkan  intervensi asuhan  keperawatan  pada  pasien  dengan luka  tikus  putih  galur  Wistar  kondisi hiperglikemia  dan  sebagai  dasar  teori  bagi penelitian lebih lanjut yang berkaitan dengan perawatan luka hiperglikemia.

## BAHAN DAN METODE

## Desain Penelitian
Penelitian  ini  merupakan true  experi- ment dengan pengamatan randomized post- test  only  controled  group  design .  Pada rancangan  penelitian  ini  terdapat  dua  ke- lompok  kontrol  dan  empat  kelompok  perla- kuan.  Kelompok  kontrol  ke-1  perawatan menggunakan normal saline pada tikus kon- disi sehat , kelompok kontrol ke-2 perawatan menggunakan normal saline pada tikus kon- disi  hiperglikemia , kelompok perlakuan  ke-1 perawatan  menggunakan  basis  hidrogel pada  tikus  kondisi  hiperglikemia,  kelompok perlakuan  ke-2  perawatan  menggunakan hidrogel binahong 2,5 % tikus kondisi hiper-
glikemia,  kelompok  perlakuan  ke-3  perawa- tan  luka  tikus  kondisi  hiperglikemia menggunakan  hydrogel  binahong  5  %,  dan kelompok  perlakuan  ke-4  perawatan  luka tikus  kondisi  hiperglikemia  menggunakan hidrogel binahong 7,5 %.

## Kriteria Sampel
Sampel  yang  digunakan  tikus  putih ( Rattus  norvegicus )  galur  Wistar  jantan, umur 2,3 – 3 bulan, berat badan 180  - 250 gram  dan diinduksi  STZ  hingga  terjadi  pen- ingkatan gula darah ≥ 126 mg/dl.

## Pembuatan Ekstrak Daun Binahong
Daun binahong diperoleh dari Balai Ma- teria  Medika  di  kota  Batu  pada  bulan  Juni 2013.  Setelah  daun  binahong  kering  dil- akukan  proses  penghalusan  menggunakan blender sehingga  menjadi  bentuk  serbuk. Serbuk binahong ditimbang kemudian diren- dam dengan etanol sampai volume 1000 ml, kemudian  kocok  hingga  tercampur.  Lalu didiamkan selama 24 jam hingga menguap, setelah itu masuk dalam proses evaporasi.

## Pembuatan Hidrogel Binahong
Langkah-langkah pembuatannya adalah basis  hidrogel  dan  ekstrak  daun  binahong disiapkan  sesuai  dengan  jumlah  yang  dibu- tuhkan  untuk  pembuatan  konsentrasi  yang ditetapkan (2,5 %, 5 % dan 7,5 %). Kemudi- an  basis  hidrogel  ditambahkan  dengan ekstrak  daun  binahong  dan  diaduk  hingga homogen dengan menggunakan cawan dan sendok  pengaduk.  Formula  standar  dasar hidrogel  binahong yang  digunakan  menurut Astuti  (2011). 7 Jadi,  total  sediaan  hidrogel yang  digunakan  dalam  penelitian  ini sebanyak  5.700  mg  dan  ekstrak  daun  bi- nahong sebanyak 3.600 mg.

## Pembuatan Tikus Kondisi Hiperglikemia
Pertama  berat  badan  tikus  ditimbang. Kadar  glukosa  diukur  menggunakan  glu- kometer.  STZ  dilarutkan  pada  buffer  sitrat
0,2 ml dalam 10 mmol sehingga pH larutan menjadi  4,5.  STZ  disuntikkan  pada  tikus secara  intraperitonial  dosis  55  mg/kgBB. Tiga  hari  kemudian  dilakukan  pengukuran kadar glukosa  darah  ekor  dengan  glukome- ter. Tikus yang menjadi hiperglikemia (> 126 mg/dL) akan digunakan dalam penelitian. Pembuatan Luka Tikus Kondisi Hiperglikemia Lakukan cek kadar gula darah sebelum dilakukan  pembuatan  luka.  Dilakukan pembuatan  luka  hiperglikemia  jika  kadar gula  darah  puasa  mencapai  ≥  126  mg/dL. Daerah luka dibuat dengan ukuran 2 x 1 cm, dan  kedalaman  <  2  mm.  Punggung  tikus dicukur menggunakan mesh dengan ukuran 5 x 3 cm. Anestesi umum pada tikus dengan ketamine  hydrochloride 1  ml  (120  mg/kg) secara  intraperitonial.  Tikus  dimasukkan  ke dalam kandang dan ditunggu selama 5 menit hingga  hewan  coba  hilang  kesadaran. Kemudian  disinfeksi  menggunakan povidon iodine di  bagian  yang  akan  dilukai.  Cubit bagian  kulit  dengan  pinset  kemudian  eksisi bagian  kulit  yang  yang  sudah  ditandai menggunakan  gunting  bedah.  Setelah  luka dibuat  lakukan  perawatan  luka  dengan prosedur yang  sudah  ditentukan.  Masukkan tikus  ke  dalam  kandang  dan  biarkan kesadarannya kembali.

## Analisis Data
Hasil  penelitian  dianalisis  dengan  soft- ware  SPSS  version  17.00 dengan  uji  nor- malitas  data  menggunakan  uji Kolmogorov- Smirnov , uji homogenitas menggunakan test of homogenity of variance , one-way ANOVA, dan uji post hoc Tukey HSD.

## HASIL
Pada  hari  ke-12,  tikus  dimatikan  dan dilakukan  pembedahan  untuk  mengambil jaringan  luka  yang  masih  tersisa.  Tujuan pengambilan  jaringan  luka  ini  untuk
mendapatkan gambaran luka secara histolo- gis  menggunakan  mikroskop Olympus yang dikonversi  ke software OlyVIA ( viewer  for histology examination).
Gambar 1. Tampilan histologi makrofag (tanda lingkaran warna merah atau anak panah) dengan pewarnaan hematoxylin-eosin menggunakan mikroskop Olympus XC10 (400x).
Keterangan:  (A)  Batas  luka  yang  diukur,  (B)  Kelompok  kontrol  ke-1  (tikus  sehat  dengan  perawatan  luka menggunakan  normal  saline),  (C)  Kelompok  kontrol  ke-2  (tikus  hiperglikemia  dengan  perawatan  luka menggunakan  normal  saline),  (D)  Kelompok  perlakuan  ke-1  (tikus  hiperglikemia  dengan  perawatan  luka menggunakan  basis  hidrogel),  (E)  Kelompok  perlakuan  ke-2  (tikus  hiperglikemia  dengan  perawatan  luka menggunakan hidrogel binahong 2,5 %), (F) Kelompok perlakuan ke-3 (tikus hiperglikemia dengan perawa- tan luka menggunakan hidrogel binahong 5  %), (G) Kelompok perlakuan ke-4 (tikus hiperglikemia dengan perawatan luka menggunakan hidrogel binahong 7,5 %)
G F E D C B A
Gambar 2. Pengaruh jenis perlakuan terhadap jumlah makrofag
Pada  Gambar  1  dan  Gambar  2  dapat terlihat  penurunan  jumlah  makrofag  pada fase  proliferasi  jaringan  luka  kondisi  hiper- glikemia. Penurunan jumlah makrofag berva- riasi  setiap  jaringan  dan  perlakuan.  Pada penelitian ini dilakukan pengujian efek perla- kuan  hidrogel  binahong  konsentrasi  2,5  %, hidrogel  binahong  konsentrasi  5  %,  dan  hi- drogel binahong konsentrasi 7,5 % terhadap jumlah  makrofag  pada  hari  ke-12  setelah perawatan luka pada kondisi hiperglikemia.

## ANALISIS DATA
Pada test  of  homogenity  of  variance didapat  nilai signifikansi  0,111.  Oleh karena signifikansi  >  0,05  maka  H 0 diterima  atau berarti  jumlah  makrofag  pada  semua  ke- lompok  perlakuan  memiliki  variansi  yang sama  atau  homogen.  Dengan  demikian, asumsi kesamaan varians untuk uji ANOVA sudah terpenuhi.
Langkah  selanjutnya  yaitu  pengujian one-way  ANOVA dengan  selang  ke- percayaan  95  %  atau  taraf  kesalahan  5  %. Pada  uji  ANOVA  terlihat  bahwa  F  hitung adalah  12,536  dengan  signifikansi  0,000. Oleh  karena  signifikansi  <  0,05,  maka  H 0 ditolak, atau rata-rata jumlah makrofag anta- ra  empat  kelompok  tersebut  memang  ber- beda.
Nilai  signifikansi  antar  kelompok  dilihat dari  tabel multiple  comparison dengan melihat ada tidaknya tanda bintang  (*)  pada kolom mean difference dan nilai signifikan < 0,05  adalah  kelompok yang memiliki  perbe- daan paling signifikan. Pada Tabel 1 menun- jukkan  bahwa  kelompok  perlakuan  hidrogel binahong 5 % memiliki perbedaan signifikan dengan  kelompok  kontrol  1  dengan  normal saline kondisi  sehat,  kelompok  kontrol  2 dengan  normal  saline kondisi  hiperglikemia, kelompok  perlakuan  dengan  basis  hidrogel, dan  kelompok  perlakuan  dengan  hidrogel binahong  2,5 % yang  masing-masing  mem- iliki  nilai  signifikansi  atau p - value sebesar 0,004, 0,000, 0,001, dan 0,018. Berdasarkan hasil  uji post  hoc juga  menunjukkan  bahwa kelompok hidrogel binahong konsentrasi 5 % tidak  memiliki  perbedaan  yang  signifikan dengan  kelompok  perlakuan  hidrogel  bi- nahong  konsentrasi  7,5  %  dengan p  value sebesar 0,062.
Tabel 1. Hasil post hoc test
Dengan  demikian  dapat  disimpulkan bahwa  terdapat  pengaruh  perawatan  luka hiperglikemia menggunakan hidrogel binahong  terhadap  penurunan  jumlah makrofag pada tikus.

## PEMBAHASAN
Penelitian  tentang  penggunaan  daun binahong telah banyak dilakukan tetapi perlu dikembangkan dan diteliti lebih lanjut karena banyak  mengandung  zat  yang  berguna dalam  mengatasi  berbagai  penyakit  berat. Menurut  Astuti (2006),  saponin  yang  ada dalam  daun  binahong  berguna  sebagai antimikrobial  dan  perangsang  pertumbuhan sel-sel  baru  pada  luka.  Saponin  memicu makrofag  bermigrasi  ke  daerah  luka  untuk membunuh organisme yang menyerang dan menghasilkan  sitokin  untuk  mencegah terjadinya  inflamasi. 7 Daun  binahong    yang sifatnya  mudah  ditemukan  di  Indonesia menjadi referensi sehingga timbul pemikiran untuk  melakukan  penelitian  ini.  Di masyarakat  tanaman  ini  dikenal  dapat menyembuhkan  luka  dengan  sudah dibuktikan  di  beberapa  penelitian  tentang luka  seperti  luka  bakar  dan  luka  insisi. Namun  untuk  penelitian  terhadap  kondisi hiperglikemia  belum  ada  penelitian  lebih lanjut,  sehingga  dapat  dilakukan  penelitian untuk mendasari penelitian-penelitian selanjutnya sehingga dapat digunakan untuk pengembangan  potensi  binahong  sebagai tanaman  obat.  Tujuan  penelitian  ini
dilakukan  untuk  membuktikan  pengaruh perawatan  hidrogel  binahong  ( Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) terhadap penurunan jumlah makrofag pada luka tikus putih  ( Rattus  norvegicus) galur  Wistar dengan kondisi hiperglikemia. Makrofag  diproduksi  di  sumsum  tulang belakang  dari  sel  induk  mieolid  yang mengalami  proliferasi  dan  dilepaskan  ke dalam  darah  sesudah  atau  satu  periode melalui  fase  monoblas  promonosit.  Monosit yang  telah  meninggalkan  sirkulasi  darah akan  mengalami  perubahan-perubahan untuk kemudian menetap di jaringan sebagai makrofag. 11 Makrofag dapat digerakkan atau didistribusikan  ke  jaringan  lain  yang mengalami  peradangan.  Makrofag  bergerak dengan  mempergunakan  gerakan  amuboid, gerakan  amuboid  ini  juga  terjadi  jika  ada rangsangan.
Makrofag akan membersihkan luka dari bakteri, sel-sel mati, dan debris dengan cara fagositosis.  Makrofag  juga  mencerna  dan mendaur ulang zat-zat tertentu, seperti asam amino  dan  gula,  yang  dapat  membantu dalam  perbaikan  luka.  Makrofag  akan melanjutkan proses pembersihan debris luka dan menarik lebih banyak makrofag. Setelah makrofag membersihkan luka dan
menyiapkannya  untuk  perbaikan  jaringan, sel  epitel  bergerak  dari  bagian  tepi  luka  di bawah  dasar  bekuan  darah  atau  keropeng. Sel epitel terus berkumpul di bawah rongga luka selama sekitar 48 jam. Akhirnya di atas luka  akan  terbentuk  lapisan  tipis  dari jaringan  epitel  dan  menjadi  barier  terhadap organisme penyebab infeksi dan dari zat-zat beracun. 12
Makrofag  sebagai  sel yang memfagosit daerah luka dan membersihkan debris, akan meningkat pada hari ke-3 dan bertahap akan mulai  berkurang.  Makrofag  pada  fase proliferasi  akan  mulai  berkurang  ketika  luka mulai menutup. Makrofag akan memproduksi  fibroblas  bersamaan  dengan limfosit. Fibroblas berperan dalam
pembentukan  jaringan  dan  memproduksi kolagen dalam jumlah besar. 8
Pada  penelitian  ini  digunakan  empat kelompok  perlakuan,  dengan tiga  perlakuan menggunakan  ekstrak  binahong  dan hidrogel  pada  perawatan  luka  tikus  putih galur  Wistar  kondisi  hiperglikemia,  satu perlakuan menggunakan normal saline pada tikus  kondisi  hiperglikemia  dan  satu perlakuan menggunakan normal saline pada tikus  sehat  sebagai  kelompok  kontrol. Kelompok  perlakuan  dengan  hidrogel binahong diberikan  dengan  tiga  konsentrasi berbeda  yaitu  2,5  %,  5  %,  dan  7,5  %. Penurunan makrofag dianalisis pada hari ke- 12  karena  pada  fase  proliferasi  mencapai puncaknya pada hari ke-12. 13
Penurunan jumlah makrofag yang paling signifikan  ditunjukkan  pada  rerata  jumlah makrofag yang terkecil yaitu pada perlakuan hidrogel  binahong  5  %  dengan  rata-rata jumlah makrofagnya mencapai 11,45 sel per lapang pandang. Rata-rata jumlah makrofag semakin  meningkat  pada  perlakuan  dengan hidrogel binahong 7,5  % sebanyak 17,05 sel per lapang pandang, hidrogel binahong  2,5 % sebanyak 18,15 sel per lapang pandang. Kelompok kontrol ke-1 dengan normal saline pada  luka  sehat  sebanyak  19,50  sel  per lapang  pandang  dilanjutkan  dengan perlakuan  menggunakan  basis  hidrogel sebanyak  20,80  sel  per  lapang  pandang pada  luka  kondisi  hiperglikemia.  Rata-rata jumlah  makrofag  paling  tinggi  didapatkan pada kelompok kontrol ke-2 yaitu perlakuan dengan  normal  saline  pada  luka  kondisi hiperglikemia sebanyak 25,30 sel per lapang pandang.  Perbedaan  jumlah  makrofag mungkin  dipengaruhi  oleh  pemberian konsentrasi hidrogel binahong  yang diberikan  dan  juga  cara  perawatan  yang dilakukan.
Berdasarkan  hasil  uji one  way ANOVA menunjukkan  nilai  signifikasi  0,000  (P  < 0,05)  yang  berarti  terdapat  perbedaan  rata- rata jumlah makrofag antara masing-masing
kelompok  perlakuan  baik  dengan  basis hidrogel, hidrogel binahong 2,5 %, 5 %, dan 7,5  %  maupun  kelompok  kontrol  ke-2 dengan  normal  saline  pada  tikus  kondisi hiperglikemia  dan  kontrol  ke-1  dengan normal saline pada tikus sehat.
Pada  uji post  hoc dapat  dilihat  bahwa terdapat  perbedaan  rata-rata  jumlah makrofag  yang  signifikan  antara  pemberian hidrogel  binahong 5  % memiliki  perbedaan signifikan  dengan  kelompok  kontrol  ke-1 dengan normal saline , kelompok kontrol ke-2 dengan normal  saline ,  kelompok  perlakuan dengan  basis  hidrogel,  dan  kelompok perlakuan  dengan  hidrogel  binahong  2,5  % yang masing-masing memiliki nilai signifikansi  atau p - value sebesar  0,004, 0,000,  0,001,  dan  0,018.  Berdasarkan  hasil uji post  hoc juga  menunjukkan  bahwa kelompok hidrogel binahong konsentrasi 5 % tidak  memiliki  perbedaan  yang  signifikan dengan  kelompok  perlakuan  hidrogel binahong konsentrasi 7,5 % dengan p-value sebesar 0,062.
Perlakuan dengan menggunakan normal  saline  telah  dilakukan  sejak  lama. Penggunaan normal saline untuk perawatan luka menggunakan metode balutan kasa wet dry. Cairan  normal  saline bersifat  fisiologis, non  toksik,  dan  ekonomis.  Ketika  kasa lembab  menjadi  kering  akan  menekan permukaan  jaringan  yang  berarti  segera diganti  balutannya.  Hal  ini  mengakibatkan terganggunya  pertumbuhan  jaringan  sehat dan  menimbulkan  rasa  nyeri  yang berlebihan. Penggantian kasa akan merusak pertumbuhan  jaringan  yang  dalam  masa perbaikan,  sehingga  akan  menambah  fase inflamasi.  Fase  inflamasi  yang  lama  akan meningkatkan pertumbuhan jumlah makrofag  yang  berarti  terdapat  proses infeksi pada penyembuhan luka. Perlakuan dengan menggunakan normal  saline  pada  fase  proliferasi  luka kondisi  hiperglikemia  menghasilkan  rerata jumlah  makrofag  25,30  sel  per  lapang
pandang,  dan  jumlah  ini  merupakan  jumlah yang  paling  tinggi.  Hasil  penelitian  ini menunjukkan  bahwa  sifat  isotonis  normal saline  dinilai  tidak  efektif  untuk  perawatan luka kondisi hiperglikemia.
Pada  perlakuan  menggunakan  basis hidrogel    terdapat  penurunan  jumlah makrofag pada fase proliferasi dengan rerata jumlah  makrofag  20,80  sel  per  lapang pandang.  Hal ini  menunjukkan  bahwa basis hidrogel  tidak  mampu  secara  signifikan dalam  menurunkan  jumlah  makrofag  pada fase  proliferasi  luka  kondisi  hiperglikemia. Sifat  fisik  sediaan  hidrogel  penyembuh  luka dapat  dipengaruhi  oleh  proses  sterilisasi yang  digunakan  dan  formula  sediaan. Proses sterilisasi dapat mengubah viskositas hidrogel.  Hidrogel  untuk  penggunaan dermatologi  secara  umum  mempunyai  sifat tidak berminyak, tiksotropi, mudah menyebar, mudah dibersihkan dan mempunyai sifat emolien. Penurunan  makrofag  pada  fase proliferasi  terbentuk  pada  kelompok perlakuan  ekstrak  daun  binahong  yang dicampur  dengan  hidrogel.  Hal  ini  diduga karena  efek  kandungan  senyawa  aktif seperti saponin, tannin, flavonoid, fenol, dan minyak  atsiri.  Kandungan  tersebut  dapat membantu  proses  penyembuhan  luka dengan  mekanisme  seluler  yang  berbeda- beda, yaitu sebagai antiinflamasi, antimikroba,  dan  antioksidan.  Selain  itu, menurut  Prasetyo  (2008)  efek  dari  hidrogel itu  sendiri  yang  secara  umum  mempunyai sifat  tidak  berminyak,  tiksotropi,  mudah menyebar, mudah dibersihkan dan mempunyai  sifat  emolien.  Kandungan- kandungan  tersebut  diduga  bekerja  secara sinergis  sehingga  dapat  menghasilkan penyembuhan  luka  secara  optimal  pada hiperglikemia. 6
Binahong  ( Anredera  cordifolia  (Ten.) Steenis) sebagai antiinflamasi,  diperkirakan karena adanya senyawa golongan flavonoid dan  asam  ursolat.  Mekanisme  flavonoid
dalam  menghambat  proses  terjadinya inflamasi  melalui  efek  penghambatan  pada jalur  metabolisme  asam  arakhidonat, pembentukan  prostaglandin,  dan  pelepasan histamin  pada  radang.  Jadi  pada  fase  ini makrofag  bisa  dengan  mudah  menjalankan fungsinya sebagai fagosit bagi sel-sel debris dan  mikroorganisme  lain  yang  ada  dalam luka.
Asam  ursolat  dapat  menstimulasi keluarnya reseptor  peroxisome  proliferator- activated receptor (PPAR), PPAR
merupakan  ligan  yang  mengaktivasi  faktor- faktor  transkripsi  intraselluler  yang  telah berimplikasi  dalam  proses  biologikal  yang sangat penting seperti inflamasi, remodelling jaringan,  dan  aterosklerosis.  PPAR  dalam ranah biologi molekuler merupakan sekelompok  reseptor  protein  nuklear  yang berfungsi  sebagai  faktor-faktor  transkripsi yang  meregulasi  pengeluaran  dari  gen. Stimulasi  PPAR  ini  akan  meningkatkan diferensiasi epidermis yang merupakan fase formasi  jaringan. 14 PPARs  juga  mengatur respon  inflamasi,  dengan  mengurangi inflamasi  serta  mengendalikan  peradangan pada  sel.  Pada  kondisi  hiperglikemia  terjadi peningkatan glukosa dalam darah yang pada mekanisme tertentu menjadikan tubuh tahan terhadap  efek  insulin,  sedangkan  PPAR akan meningkatkan sensitivitas insulin dalam tubuh  dengan  metabolisme  lemak  dan glukosa  dalam  tubuh  serta  berperan  dalam difensiasi sel. 10 Binahong  ( Anredera  cordifolia  (Ten.) Steenis )  sebagai  antimikroba,  mengandung alkaloid,  polifenol,  triterpenoid  dan  saponin sebagai  efek  antimikroba  dan  bakteri. Mekanisme  alkaloid  dan  polifenol  dengan mengganggu komponen penyusun peptidoglikan  pada  sel  bakteri,  sehingga lapisan  dinding  sel  tidak  terbentuk  secara utuh  dan  menyebabkan  kematian  sel tersebut.  Sel  yang  mati  akan  difagosit  oleh makrofag sehingga dapat mempercepat fase penyembuhan luka. Beberapa hasil
penelitian  menunjukkan  bahwa  senyawa terpenoid  dapat  menghambat  pertumbuhan dengan    mengganggu  proses  terbentuknya membran  dan  atau  dinding  sel,  membran atau  dinding  sel  tidak  terbentuk  atau terbentuk tidak sempurna.
Sementara  mekanisme  kerja  saponin mengganggu  permeabilitas  membran  sel bakteri,  yang  mengakibatkan  kerusakan membran  sel  dan  menyebabkan  keluarnya berbagai  komponen  penting  dari  dalam  sel bakteri  yaitu  protein,  asam  nukleat  dan nukleotida. Saponin mempunyai kemampuan  sebagai  pembersih  dan antiseptik  yang  berfungsi  membunuh  atau mencegah pertumbuhan dari mikroorganisme  yang  timbul  pada  luka sehingga luka  tidak mengalami  infeksi yang berat.
Daun  binahong  ( Anredera  cordifolia (Ten.)  Steenis )  sebagai  antioksidan, antioksidan  mampu  menetralisir  radikal bebas  yang  dapat  menyerang  dan menyebabkan  kerusakan  pada  sel-sel protein, lipid, dan karbohidrat. Radikal bebas mampu mengganggu integritas, struktur, dan fungsi  sel  sehingga  dibutuhkan  antioksidan untuk  menetralisir  dampak  negatif  radikal bebas tersebut. Ekstrak binahong mempunyai  zat  yang  bersifat  sebagai antioksidan, seperti antosianin dan flavonoid. Cara  kerja  antioksidan  adalah  dengan memutus  reaksi  berantai  dari  radikal  bebas sehingga  dapat  mencegah  kerusakan jaringan.  Flavonoid  memiliki  mekanisme kerja dengan menghambat proses peroksidasi lemak yang berfungsi mengurangi  radikal  bebas  sehingga  dapat memperlambat kematian jaringan, meningkatkan vaskularisasi, kolagen, mencegah kerusakan sel dan meningkatkan sintesa  DNA. 15 Sementara  mekanisme antioksidan dari antosianin adalah menginduksi  makrofag  untuk  mensekresi tumor  nekrosis  alpha  dan  menunjukkan peran dalam melawan bakteri. Kandungan  nutrisi  pada  binahong
( Anredera  cordifolia  (Ten.) Steenis)  antara lain mengandung asam askorbat yang dapat meningkatkan  daya  tahan  tubuh  terhadap infeksi,  berfungsi  dalam  pemeliharaan membran mukosa, mempercepat penyembuhan  dan  sebagai  antioksidan. 16 Asam  askorbat  merupakan  kofaktor  dari proses  hidroksilasi  prolin  dan  lisin  yang esensial  terhadap  pembentukan  kolagen.
Hidroksiprolin dan hidroksilisin dari kandungan  asam  askorbat  termasuk esensial  dalam  menstabilasi  struktur  tripel helix  dari  kolagen  dengan  ikatan  hidrogen yang  kuat  dan  adanya cross-link .  Tanpa stabilisasi  ini,  struktur  akan  mengalami disentrigitas  secara  cepat. 17 Asam  askorbat juga  berperan  dalam  kekuatan  kelenturan. Kekuatan  kelenturan  ( tensile  strenght ) penting  dalam  menekan  penyembuhan ulserasi  karena  luka  tekan  yang  telah sembuh beresiko untuk mengalami gangguan.
Vitamin  C  juga  dibutuhkan  untuk perbaikan  sistem  imun.  Vitamin  C merupakan  komponen  penting  yang diperlukan  untuk  proses  hidroksilasi  prolin dan  lisin  menjadi  prokolagen  yang  penting untuk  sintesis  kolagen.  Selain  berperan dalam  sintesis  kolagen,  vitamin  C  juga berperan  meningkatkan  fungsi  neutrofil  dan angiogenesis.  Karbohidrat  dan  protein merupakan  sumber  energi  terpenting  yang diperlukan  dalam  sintesis  kolagen.  Bahan mineral,  yaitu seng  berperan dalam  sintesis kolagen dan proses epitelisasi.
Semakin  tinggi  konsentrasi  hidrogel binahong  maka  senyawa-senyawa  aktif seperti  flavonoid,  asam  ursolat  dan  saponin yang  terkandung  akan  semakin  banyak dikombinasikan  dengan  sifat  hidrogel sebagai topikal penyembuh luka yang cepat. Kandungan  binahong  yang  semakin  tinggi akan  menjadikan  daya  anti  bakteri  ekstrak binahong  menjadi  lebih  kuat,  kematian  sel menjadi berkurang, serta penyembuhan luka
akan  berlangsung  lebih  cepat.  Akan  tetapi batas  konsentrasi  hidrogel  binahong  adalah tidak lebih dari 5 %, karena pada konsentrasi
7,5  %  mungkin  dapat  mengiritasi  kulit  tikus sehingga dosis ini kurang efektif. Perlakuan hidrogel binahong konsentrasi  5  %  merupakan  konsentrasi yang  paling  optimal  untuk  perawatan  luka kodisi  hiperglikemia.  Hidrogel  binahong konsentrasi 5 % terbukti mampu menurunkan  jumlah  makrofag  pada  fase proliferasi perawatan luka kondisi hiperglikemia  sebesar  11,45  sel  per  lapang pandang.  Hal  ini  menunjukkan  kandungan yang  ada  pada  daun  binahong  khususnya saponin mampu membantu makrofag dalam proses  penyembuhan  pada  fase  inflamasi sehingga  produksi  makrofag  pada  fase proliferasi menurun. Saponin yang ada pada daun binahong akan merangsang munculnya  makrofag  pada  fase  inflamasi dan  antibakterinya  membantu  makrofag mempercepat proses penyembuhan. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa terdapat pengaruh perawatan luka hiperglikemia menggunakan hidrogel binahong dalam penurunan jumlah makrofag sehingga dapat disimpulkan bahwa hipotesis yang  telah  disusun  adalah  benar.  Namun masih  diperlukan  uji  lebih  lanjut  tentang farmakokinetik,  farmakodinamik,  toksisitas, dan  efek  hidrogel  binahong  ini  pada  hewan coba dan clinical trial pada manusia.

## KESIMPULAN
 Perlakuan  efektif  secara  signifikan dalam  menurunkan  jumlah  makrofag pada penelitian ini adalah menggunakan hidrogel binahong 5 % pada perawatan luka tikus kondisi hiperglikemia.
 Pemberian hidrogel binahong (Anredera cordifolia  (Ten.) Steenis)  secara  topikal berpengaruh positif terhadap penurunan jumlah  makrofag  pada  fase  proliferasi luka  tikus  putih (Rattus  novergicus) galur Wistar kondisi hiperglikemia.

## SARAN
Berdasarkan  kesimpulan  yang  telah dikemukakan  maka  diberikan  saran-saran untuk  mengadakan  perbaikan  di  masa mendatang yaitu:
1. Diperlukan  penelitian  lebih  lanjut mengenai  dosis  STZ yang efektif untuk pembuatan  tikus  hiperglikemia  dan pengecekan  gula  darah  secara  berkala untuk  memastikan  hewan  coba  tetap pada kondisi hiperglikemia.
2. Diperlukan  penelitian  lebih  lanjut mengenai  perbedaan  jumlah  makrofag pada  jaringan  normal  dengan  jaringan yang  mengalami  proses  penyembuhan luka  setelah  dirawat  menggunakan hidogel  binahong  ( Anredera  cordifolia (Ten.) Steenis).
3. Perlu  penelitian  lanjut  pada  hidogel binahong  ( Anredera  cordifolia  (Ten.) Steenis)  sebagai  obat  perawatan  luka kondisi  hiperglikemia  dalam  bentuk sediaan  yang  lain  seperti  sediaan  obat padat atau cair.
4. Preparat  histologi  yang  digunakan sebaiknya  dipersiapkan  dengan  lebih baik, agar mendapatkan hasil scan yang maksimal untuk mempermudah identifikasi dan penghitungan.
5. Aplikasi  klinis  dari  penelitian  ini  masih memerlukan penelitian lebih lanjut untuk mengetahui dosis yang aman dan tepat untuk  hidrogel  binahong  ( Anredera cordifolia  (Ten.) Steenis)  agar  dapat berfungsi  untuk  menurunkan  jumlah makrofag  pada  terapi  luka  kondisi hiperglikemia, sehingga dapat mencegah  terjadinya  ulkus  dan  dapat digunakan sebagai pengobatan alternatif  untuk  berbagai  kalangan masyarakat di Indonesia.

## DAFTAR PUSTAKA
1. (WHO)  World  Health  Organization. Definition, Diagnosis, and Classification
of Diabetes Mellitus  and Its Complication.  Part  1:  Diagnosis  and Classification  of  Diabetes  Mellitus. Report  of  WHO  Consultation . 2000.
(online).http://www.staff.ncl.ac.uk/philip.
home/who_dmg. pdf. Diakses 29 Maret 2013.
2. Decroli E, Jazil K, Asman M, Syafril S.
Profil  Ulkus  Diabetik  pada  Penderita Rawat  Inap  di  Bagian  Penyakit  Dalam RSUP  Dr  M.  Djamil  Padang. Majalah
Kedokteran  Indonesia. 2008 . Vol  58. (online).
http://indonesia.digitaljournals.org/index .php/idnmed/article/download/561/557.
Diakses 31 maret 2013. 3. Departemen  Kesehatan  RI.  Laporan Survey  IMT  di  12  kota  Besar  tahun 2005. Jakarta: Direktorat Jenderal Bina
Kesehatan  Masyarakat,  Departemen Kesehatan RI. 2005.
4. Frykberg  RG. The  High  Risk  Foot  in Diabetes  Melitus .  New  York:  Churchill
Livingstone. 2000.
5. Mayfield  JA,  Reiber  E,  Sanders  LJ,
Janisse D, Pogach LM. Preventive Foot Care  in  People  with  Diabetes.  2004. http://www.gensurg.co.uk/diabetic%20f oot%20-%20treatment.htm.  Diakses  6 April 2013. 6. Prasetyo BF. Aktivitas dan Uji Stabilitas Sediaan  Gel  Ekstrak  Batang  Pisang Ambon ( Musa paradisiaca var sapientum) dalam Proses Persembuhan  Luka  pada  Mencit  ( Mus musculus albinus) . Magister  Sains. Bogor:  Fakultas  Kedokteran  Hewan
IPB. 2008.
7. Astuti  SM.  Determination  of  Saponin Compound  from Anredera  cordifolia (Ten)  Steenis  Plant  (Binahong)  to Potential  Treatment  for  Several
Diseases. Journal  of  Agricultural Science. 2011; 3 . 8. Suhariyanto B. Antibiotik Topikal untuk Penyakit  Kulit  Pada  Wisatawan. 2011.
(online).
http://rsudrsoetomo.jatimprov.go.id/id/in dex.php?option=com _docman&task=doc_download&gid=34 &Itemid=118. Diakses 2 April 2013. 9. Granick  MS  and  Gamelli. Surgical Wound Healing and Management . New
York: Informa Healthcare. 2007.
10. Yuliani  SH. Formula  Sediaan  Hidrogel
Penyembuh Luka Ekstrak Etanol Daun
Binahong. Yogyakarta:  Universitas Gadjah Mada. 2012.
11. Efendi  Z. Daya  Fagosit  Pada  Jaringan Longgar  Tubuh .  Medan:  Universitas Sumatra Utara. 2003.
12. Potter  PA,  dan  Perry  GA. Buku  Ajar Fundamental  Keperawatan  Konsep, Proses,  dan  Praktik .  Jakarta:  EGC.
2002.
13. Wahyuningsih  SPA.  Pemanfaatan Ekstrak Jamur Coriolus versicolor untuk Meningkatkan  Jumlah  Total  Leukosit dan  Makrofag  pada  Tikus  Wistar setelah  Pemaparan  2-Methoxyethanol. Berk Penel Hayati . 2008; 13:173-177. 14. Lim  H  and  Dey  SK.  PPAR  Delta Functions  as  A  Prostacyclin  Receptor in  Blastocyst  Implantation. Trends
Endocrinol Metab . 2000; 11:137-42. 15. Nayak  S,  Nalabothu  P,  Sandiford  S et al .  Evaluation  of  Wound  Healing Activity  of Allamanda cathartica L. and Laurus nobilis L. Extract on Rats. BMC Complement  Alt  Med. 2006;  6:12. doi:10.1186/1472-6882-6-12.
16. Hidayati  I.  Uji  Aktifitas  Salep  Ekstrak Daun  Binahong  ( Anredera  cordifolia (Ten.)  Steen)  sebagai  Penyembuh
Luka  Bakar  pada  Kulit  Punggung Kelinci . Surakarta: Universitas Muhammadiyah. 2009. 17. Collins  N.  The  Facts  about  Vitamin  C and  Wound  Healing.  2009.  (online). http://www.o-wm.com/content/the-facts- about-vitamin-c-and-wound-healing. Diakses 29 Maret 2013.