## Identification of Biofilm-Producing Bacteria From Nangka Island Marine Water in District of Bangka Tengah

## Identifikasi Bakteri Pembentuk Biofilm Dari Perairan Pulau
Nangka, Kabupaten Bangka Tengah
Robika, Rahmad Lingga(*), Budi Afriansyah Jurusan Biologi Universitas Bangka Belitung, Balunijuk, Kecamatan Merawang, Kabupaten Bangka, Provinsi Kepulauan Bangka Belitung, *Corresponding author: linkgarahmad@gmail.com

## Diterima 03 Februari 2022 dan disetujui 28 Februari 2022

## Abstrak
Komunitas bakteri merupakan elemen penting dari sebuah ekosistem baik di darat maupun air. Pada  ekosistem  air,  bakteri  yang  memiliki  kemampuan  dalam  menghasilkan  biofilm  memiliki kelebihan karena dapat dengan mudah menempel pada suatu substrat. Adapun fungsi dari biofilm adalah membantu dalam penyerapan nutrisi dari air serta membantu bakteri bertahan dari kondisi lingkungan  yang  kurang  menguntungkan.  Penelitian  ini  dilakukan  untuk  mengisolasi  dan mengidentifikasi serta menguji potensi bakteri dalam membentuk biofilm secara invitro. Tahapan metodologisnya  antara  lain  pengukuran  parameter  fisik-kimia  perairan;  isolasi  dengan  metode cawan tuang; karakterisasi dan identifikasi secara morfologi, biokimia dan pewarnaan Gram; serta pengujian  aktivitas  pembentukan  biofilm  dengan  teknik  pembacaan  menggunakan microplate reader . Kelimpahan bakteri tertinggi 3,3x10 6 cfu/ml ditemukan pada titik 3 (substrat berlumpur). Isolat bakteri yang memiliki kemampuan tertinggi dalam membentuk biofilm secara invitro adalah isolat Bb3, Bb4 dan Bb1 dengan nilai masing-masing 0.3315, 0.2370) dan 0.2131. Bakteri yang berpotensi  membentuk  biofilm  dari  berbagai  substrat  di  perairan  pulau  Nangka  berasal  dari kelompok Alcaligenes dan Meniscus .  Dari  hasil  penelitian  dapat  disimpulkan  bahwa  bakteri  dari substrat berbatu memiliki kemampuan dalam menghasilkan biofilm lebih baik dibandingkan isolat dari substrat lain.
Kata Kunci: Bangka Tengah, Bakteri, Biofilm, Identifikasi, Pulau Nangka

## Abstract
Bacterial community is an important element of an ecosystem both on land and in water. In aquatic ecosystems, bacteria that have the ability to produce biofilms have the advantage of being able to easily attach on a substrate. The main function of biofilm is assisting nutrition absorption from water and facilitating bacteria surviveness from unfavorable environmental conditions. This research was conducted  to  isolate  and  identify and  test  the  potential  of  bacteria  to form  biofilms  in  vitro.  The methodological steps included measuring the physical-chemical parameters of the waters; isolation by pour plating method; characterization and identification  based on morphological, biochemical and Gram staining; as well as testing the activity of biofilm formation by reading technique using microplate reader. The highest bacterial abundance was found at Station 3 (muddy substrate) which was 3.3x106 cfu/ml. Bacterial isolates that had the highest ability to form biofilms in vitro were Bb3, Bb4 and Bb1 isolates with values of 0.3315, 0.2370) and 0.2131, respectively. Bacteria that have the potential  to  form  biofilms  from  various  substrates  in  the  waters  of  Nangka  Island  belong  to Alcaligenes and Meniscus genera. From the results of the study, it can be concluded that  bacteria from rocky substrates have the ability to produce biofilms better than isolates from other substrates. Keywords : Bacteria, Biofilm, Identification, Central Bangka, Nangka Island
Jurnal Pembelajaran dan Biologi Nukleus is Licensed Under a CC BY SA Creative Commons Attribution-Share a like 4.0 International License . https://doi.org/10.36987/jpbn.v8i1.2492.

## PENDAHULUAN
Ekosistem  laut  merupakan  habitat  alamiah  bagi  beragam  jenis  mikrob  yang memiliki  peranan  ekologis  dan  potensi  bioteknologi (Passerini et  al. 2019) .  Mikrob memiliki kemampuan untuk mengkolonisasi berbagai jenis habitat termasuk ekosistem laut karena kemampuannya untuk membentuk agregat sel yang dikenal dengan Biofilm. Biofilm merupakan sebuah struktur yang dibangun oleh bakteri dengan memanfaatkan matriks  ekstraseluler,  terutama  polisakarida  yang  berikatan  dengan  suatu  permukaan pada ekosistem yang  lembab atau berair (Barral-Fraga et al . 2018; Mora-Gómez et al., 2016) .  Biofilm  merupakan  strategi  bakteri  dalam  mempertahankan  diri  dari  berbagai macam kondisi dan memungkinkan bakteri untuk mengkolonisasi semua jenis habitat di permukaan bumi. Bakteri memperoleh keuntungan zona interfase padat-cair, terutama terkait dengan kondisi hidrodinamis dan penyerapan nutrien pada permukaan (Westall et al. 2001; Carvalho 2018) .
Banyak penelitian yang melaporkan bahwa ekosistem perairan laut merupakan salah satu ekosistem yang banyak menerima dampak dari aktivitas pertambangan seperti halnyapenurunan  kualitas  lingkungan  pesisir  yang  seperti  kerusakan  terumbu  karang, erosi pantai, serta sedimentasi (Marfirani & Adiatma 2012) . Di Pulau Bangka, aktivitas pertambangan  timah  sudah  berlangsung  hampir  300  tahun  lamanya  dengan penambangan timah di laut baru berlangsung kurang lebih 30 tahun. Akibat dari adanya aktivitas penambangan timah di hulu sungai dan di sepanjang pantai Pulau Bangka telah menyebabkan  terjadinya  penumpukan  sedimen  di  dasar  perairan,  naiknya  tingkat kekeruhan air, terganggunya ekosistem,hilangnya biota perairan serta pencemaran logam berat (Prianto  &  Husnah  2009) .  Perubahan  jenis  sedimen  juga  dapat  mempengaruhi fauna yang terpengaruh oleh arus lokal. Kerusakan yang terjadi dapat bersifat permanen dan sulit dikembalikan seperti semula (Pirwanda & Pirngadie 2015; Jabbari 2018) . Aktivitas pertambangan juga dapat mempengaruhi komunitas mikrob yang hidup di  dasar  perairan.  Sebagai  contoh  misalnya,  komunitas  mikrob  pada  dasar  perairan terutama yang berada di daerah lapisan yang bersifat aerob dapat terpengaruh perubahan kimiawi  air  laut  sehingga  dapat  merubah  respons  respon  fisiologis  komunitas  mikrob tersebut (Raulf et  al .  2015) .  Gangguan  terhadap  komunitas  mikrobial  pada  ekosistem sedimen dapat memberikan pengaruh negatif terhadap keseimbangan ekosistem tersebut (Lingga et al. 2020) karenakomunias mikrob berperan dalam mendukung berlangsungnya siklus  biogeokimia  seperti  produktivitas  primer  dan  remineralisasi  senyawa  organik (Hewson et al . 2007) serta melindungi organisme yang lebih besar dengan membentuk biofilm (Mouchka et al . 2010) .
Mikrob merupakan salah satu komponen utama dalam sebuah ekosistem yang berperan dalam keberlangsungan suatu siklus ekologis. Pada suatu ekosistem perairan, mikrob dapat hidup secara bebas sebagai organisme planktonik ataupun melekat dalam suatu  permukaan.  Mikrob  yang  hidup  dengan  melekat  pada  suatu  permukaan  dikenal
dengan  biofilm.  Biofilm  merupakan  suatu  struktur  yang  dibentuk  mikrob  dengan memproduksi metabolit berupa eksopolisakarida yang dieksresikan dari dalam sel dan dimanfaatkan  sebagai  media  komunikasi  antar  sel  mikrob.  Kelompok  bakteri  yang membentuk biofilm memiliki banyak keuntungan berupa kemudahan dalam memperoleh nutrisi dari lingkungan serta perlindungan terhadap cekaman pada habitatnya.
Pada sutu ekosistem yang telah mengalami gangguan akibat aktivitas manusia, kajian tentang pembentukan biofilm oleh mikrob sangat diperlukan untuk mengetahui bagaimana  suksesi  mikrobial  yang  terjadi  pada  ekosistem  tersebut.  Perairan  Pulau Nangka  tidak  terlepas  dari  aktivitas  manusia  seperti  perikanan  dan  pertambangan. Aktivitas manusia di pulau tersebut kemungkinan dapat memberikan pengaruh terhadap dinamika  mikrobial  dalam  ekosistem  mikrobial  di  wilayah  tersebut.  Penelitian  ini dirancang untuk mengungkap pengaruh aktivitas manusia terhadap komunitas mikrob pembentuk biofilm di perairan Pulau Nangka. Penelitian seperti menjadi sangat penting karena mikrob merupakan entitas yang berperan penting dalam siklus material dan kimia yang  berlangsung  dalam  perairan  laut,  sehingga  jelas  akan  berpengaruh  terhadap keberlangsungan hidup organisme lainnya yang terdapat dalam ekosistem tersebut.

## METODE

## Lokasi dan Waktu Pelaksanaan Penelitian
Penelitian  ini  dilakukan  mulai  bulan  Mei  s/d  November  2021.  Penelitian dilakukan  di  kawasan  sekitar  Perairan  Pulau  Nangka,  Kecamatan  Sungai  Selan, Kabupaten  Bangka  Tengah,  Provinsi  Kepulauan  Bangka  Belitung.  Pemilihan  lokasi dilakukan  dengan  mempertimbangkan  karakteristik  lokasi  berdasarkan  jenis  aktivitas manusia  di  Pulau  Nangka,  antara  lain:  pelabuhan  nelayan,  pertambangan  timah  dan tanpa aktivitas manusia. Lokasi penelitian ditampilkan pada Gambar 1.
Gambar 1. Lokasi penelitian Pulau Nangka

## Pengambilan sampel
Sampel  diambil  dari  perairan  Pulau  Nangka.  Sampel  biofilm  diambil  dari permukaan  substrat  pada  dasar  perairan  dengan  kedalaman  1  meter.  Substrat  yang diambil  antara  lain  batu,  pasir  dan  permukaan  struktur  pelabuhan  nelayan.  Substrat digerus  dan  dicuci  dengan  NaCl  untuk  kemudian  disimpan  dalam  botol  sampel  dan dibawa ke laboratorium. Botol sampel diberi label dan disimpan dalam tabung pendingin.

## Pengamatan Kondisi Lokasi dan Pengukuran Sifat Fisik Kimia
Pengamatan  kondisi  lokasi  penelitian  dilakukan  secara  langsung  dengan mencatat kondisi area, aktivitas manusia, karakteristik perairan secara umum. Sifat fisik kimia  perairan  dan  sedimen  yang  diukur  beserta  alat  yang  digunakan  dan  lokasi pengujian ditampilkan dalam Tabel 1.
Tabel 1. Parameter sifat fisik kimia perairan yang diukur pada saat pengambilan sampel
Parameter Sampel Alat Satuan Lokasi Pengujian Suhu Air & sedimen Thermometer o C Pulau Nangka pH Air pH meter - Lab Biologi UBB Salinitas Air Refraktometer ‰ Lab Biologi UBB Kejernihan Air Secchi Disk m Pulau Nangka Kekeruhan Air Turbiditimeter NTU Lab Biologi UBB TDS Air TDS meter ppm Lab Biologi UBB

## Pengenceran Sampel
Sampel  yang  digunakan  untuk  isolasi  berupa  substrat  yang  ditempatkan  pada wadah cawan petri berisi air laut steril. Sebanyak 10 ml sampel yang telah dihomogenkan dimasukkan  ke  dalam  labu  erlenmeyer  yang  berisi  90  ml  air  laut  steril,  kemudian dihomogenkan sehingga diperoleh pengenceran 10 -1 . Sebanyak 1 ml sampel dipindahkan ke  dalam  9  ml  aquadest  steril,  demikian  selanjutnya  untuk  memperoleh  pengenceran lebih besar.Pengenceran yang dilakukan untuk memperoleh pengenceran 10 -3 , 10 -4 dan 10 -5 .

## Isolasi Bakteri
Isolat bakteri yang berada di dalam tabung reaksi hasil pengenceran  diisolasi ke dalam  media  NA  menggunakan  metode  cawan  sebar  ( spreak  plate )  dan  setiap  dibuat pengulangan sebanyak 3 kali. Isolat lalu diinkubasi pada inkubator dengan suhu 37°C selama 1 hari.

## Seleksi dan Pemurnian Isolat
Isolat  bakteri  yang  tumbuh  diseleksi  menurut  perbedaan  morfologi  (bentuk, permukaan  dan  warna)  lalu  diisolasi  dan  dimurnikan.  Pemurnian  isolat  dilakukan sebanyak 2(dua) kali. Pemurnian pertama dilakukan dengan metode Quadrant Streak pada media  yang  sama,  sedangkan  pemurnian  kedua  dilakukan  dengan  metode Continous Streak Plate pada media yang sama. Isolat yang telah dimurnikan dikarakterisasi lanjut meliputi pengamatan bentuk dan penataan sel, kelompok Gram serta uji biokimia antara lain uji indol, motilitas, H 2 S, metil red, Poger-Proskauer, dan katalase.
Uji Pembentukan Biofilm secara in vitro
Aktivitas  membentuk  biofilm  bakteri  dari  koloni  bakteri  menggunakan  teknik kristal  ungu  dengan  menggunakan microplate .  Isolat  bakteri  ditanam  pada  media  agar selama 48 jam di 37 °C. Setiap koloni diambil dengan jarum ose steril  dan dicelupkan ke dalam  (diinokulasi)  tiga  sumur  paralel  dari  pelat microplate yang  mengandung  200 μ l media air laut dan diinkubasi selama 6 hari pada suhu 37 ° C. Setelah masa inkubasi, sumur dibilas dengan garam fisiologis dan difiksasi dengan 2 μ L etanol 99,99% selama 10 menit. Bahan bakteri yang melekat kemudian diwarnai dengan menambahkan 2 μ L kristal violet (2%) selama 20 menit. Microplate dibilas dengan air keran dengan lembut dan biomassa  yang  dipasang  diperlukan  menggunakan  microplate  reader  pada  570  nm (Julistiono et al . 2018) .

## Analisis Data
Analisis data dilakukan secara deskriptif dengan menampilkan data dalam bentuk tabel dan grafik. Data yang diperoleh dibahas dan dibandingkan dengan literatur yang sesuai.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil Kondisi lingkungan
Berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilakukan,  secara  umum  kondisi  fisik-kimia lingkungan  lokasi  penelitian  dapat  dilihat  pada  Tabel  2.  Secara  umum  seluruh  lokasi memiliki karateristik yang mirip dari parameter suhu, kejernihan, keasaman dan TDS. Perbedaan parameter yang mencolok terlihat pada parameter salinitas, dimana lokasi 1 (substrat berpasir) memiliki salinitas yang paling rendah dibandingkan dua titik lainnya.
Tabel 2. Parameter sifat fisik kimia perairan pada lokasi pengambilan sampel
Faktor Abiotik Stasiun 1 Stasiun 2 Stasiun 3 Suhu (º) 35 34 32 Salinitas (‰) 22,6 24,1 24,2 Kejernihan (m) 1,0 1,0 1,2 Kekeruhan (NTU) 0,86 0,00 0,00 Derajat Keasaman (pH) 7,81 7,78 7,78 TDS (ppm) 7,77 7,02 7,56 Keterangan: S1: substrat berpasir, S2: substrat berbatu, S3: substrat berlumpur

## Kepadatan bakteri pembentuk biofilm
Jumlah  populasi  bakteri  pada  masing-masing  lokasi  untuk  masing-masing substrat  memiliki  perbedaan.  Populasi  bakteri  tertinggi  ditemukan  pada  substrat berlumpur  yaitu  3,3x10 6 cfu/ml.  Sementara  itu,  kepadatan  populasi  bakteri  terendah ditemukan pada substrat berpasir yaitu 1,3x10 5 cfu/ml (Tabel 3).
Tabel 3. Kepadatan populasi bakteri pada tiga titik pengambilan sampel
Stasiun Titik Sampling Keterangan 1 2 3 Substrat Berpasir 1,7x10 5 0,9x10 5 1,4x10 5 1,3x10 5 Substrat Berbatu 2,8x10 5 2,3x10 5 2,8x10 5 2,6x10 5
Substrat Berlumpur 3,4x10 6 2,7x10 6 3,8x10 6 3,3x10 6

## Karakteristik makroskopik bakteri
Berikut  ditampilkan  data  karakteristik  isolat  bakteri  yang  berhasil  diisolasi berdasarkan  ciri  makroskopik  koloni  yang  ada.  Diperoleh  sebanyak  31  isolat  yang memiliki karakteristik makroskopik berbeda (Tabel 4). Karekteristik koloni bakteri yang berhasil diisolasi dibedakan berdasarkan ukuran, pigmentasi, karakteristik optis, bentuk, elevasi permukaan dan margin koloni.
Tabel 4. Karakteristik makroskopik Hasil Isolasi koloni bakteri Pada 3 Tipe Substrat
Kode Isolat Ukuran Pigmentasi Karakteristik Optik Bentuk Elevasi Permukaan Margin Substrat Berpasir BP1 Moderate Putih Tanslucent Irreguler Flat Berkerut Undulate BP2 Moderate Putih Translucent Irreguler Flat Berkerut Lobate BP3 Small Putih Opaque Circular Flat Halus mengkilap Entire BP4 Moderate Putih Translucent Rhizoid Raised Berkerut Serrate BP5 Small Putih Opaque Circular Raised Halus mengkilap Entire BP6 Moderate Putih Translucent Irreguler Flat Halus Lobate BP7 Large Putih Transparant Irreguler Flat Halus Lobate BP8 Moderate Putih Opaque Circular Raised Halus Entire BP9 Small Putih Translucent Circular Raised Halus Entire BP10 Large Putih Translucent Rhizoid Flat Halus Lobate Substrat Berbatu BB1 Large Putih Translucent Irreguler Flat Halus Undulate BB2 Moderate Putih Translucent Irreguler Raised Halus Undulate BB3 Small Krim Opaque Circular Raised Halus mengkilap Bergerigi BB4 Moderate Putih Transparant Irregular Flat Halus mengkilap Entire BB5 Moderate Putih bening Transparant Irreguler Flat Halus Entire Substrat Berlumpur BL1 Pinpoint Putih Opaque Spindle Flat Halus mengkilap Entire BL2 Moderate Putih Translucent Filamentous Raised Berkerut Lobate BL3 Moderate Putih Translucent Filamentous Flat Halus Lobate BL4 Large Putih Translucent Irregular Flat Halus Lobate BL5 Small Putih Translucent Circular Raised Halus Entire BL6 Small Putih Translucent Irregular Flat Halus Undulate BL7 Point Putih Translucent Circular Raised Halus mengkilap Entire BL8 Small Putih Translucent Circular Raised Halus mengkilap Entire BL9 Moderate Putih Translucent Circular Raised Halus Entire BL10 Small Putih Translucent Irregular Flat Halus Entire BL11 Small Putih Translucent Irregular Raised Halus Entire BL12 Moderate Putih Translucent Irregular Raised Halus Entire BL13 Small Putih Opaque Circular Raised Halus mengkilap Entire BL14 Small Kuning Opaque Circular Raised Halus mengkilap Entire BL15 Small Putih Opaque Circular Flat Halus mengkilap Entire
BL16 Small Putih Translucent Irregular Raised Halus mengkilap Lobate

## Kemampuan membentuk biofilm secara in vitro
Aktivitas  bakteri  pembentuk  biofilm  dari  koloni  bakteri  diamati  secara kualitatif menggunakan teknik kristal violet pada microplate . Microplate yang  berisi isolat bakteri setelah  dilakukan  pencucian  akan  menghasilkan  warna  yang  pekat  jika  merupakan bakteri  pembentuk  biofilm.  Hasil  visualisasi  pewarnaan  isolat  bakteri  memperlihatkan warna kristal violet sebagaimana ditampilkan pada Gambar 2. Data visualisasi bersifat kualitatif,  artinya  hanya  menggambarkan  keberadaan  lapisan  biofilm,  tidak menggambarkan berapa ketebalan biofilmnya secara kuantitatif. Untuk memperoleh data kuantitatif, maka dibutuhkan pembacaan dengan microplate reader.
Gambar 2. Visualisai terbentuknya biofilm pada microplate
Hasil  pembacaan dengan microplate reader, diperoleh  hasil  bahwa dari 12  isolat yang diuji dari ketiga titik pengambilan sampel, isolat bb3 (asal substrat berbatu) sebagai isolat bakteri dengan kemampuan membentuk biofilm tertinggi dengan nilai absorbansi 0,3315  dan  isolat  bl9  sebagai  isolat  dengan  kemampuan  membentuk  biofilm  terendah yaitu 0,1146. Dari keseluruhan isolat yang diuji terlihat bawa sebanyak 3 isolat dengan kemampuan membentuk biofilm tertinggi yaitu bb3, bb4 (0,2370) dan bb1 (0,2131) yang semuanya  berasal  dari  substrat  berbatu.  Ketiga  isolat  potensial  ini  selanjutnya dikarakterisasi karakteristik mikroskopiknya agar bisa diidentifikasi lebih lanjut.
Gambar  3. Nilai  absorbansi  pembentukan  biofilm  isolat  bakteri  dari  tiga  substrat  berbeda  (bp: substrat berpasir, bl: substrat berlumpur, bb: substrat berbatu)
0,0000 0,0500 0,1000 0,1500 0,2000 0,2500 0,3000 0,3500 N ilai ab sor b an si ( n m ) Isolat Bakteri bp1 bp4 bp2 bp6 bl1 bl10 bl11

## Identifikasi bakteri penghasil biofilm
Isolat  yang  terkonfirmasi  dapat  membentuk  biofilm  diidentifikasi  karakteristik mikroskopiknya serta uji biokimia. Hasil identifikasi dijadikan dasar untuk menetapkan nama  takson  isolat  bakteri  sampai  ke  level  Genus  atau  Jenis.  Hasil  karaterisasi  isolat bakteri  pembentuk  biofilm  diperlihatkan  pada  Tabel 5  berikut  ini.  Isolat  bb3  memiliki kemiripan dengan Genus Alcaligenes sedangkan isolat bb4 dan bb1 memiliki kemiripan dengan Genus Meniscus .
Tabel 5. Hasil Identifikasi Isolat Bakteri Penghasil Biofilm
Karakteristik Isolat Bb3 Bb4 Bb1 Makroskopis -Warna Krem Putih Putih -Bentuk Bulat Bulat Bulat -Permukaan Halus Halus mengkilap Halus -Tepi Bergerigi Utuh Undulate Mikroskopis -Bentuk sel Batang Batang Batang -Gram Negatif Negatif Negatif Fisiologis -Simon Sitrat - - - -Indol - - - -Motil + - - -H 2 S - - - -MR - - - -VP - - - -Katalase + - - Fermentasi -Glukosa + + + -Laktosa + + + -Sukrosa + + + Genus Alcaligens Meniscus Meniscus

## Pembahasan
Berdasarkan hasil penelitian, karakteristik fisik kimia lokasi pengambilan sampel di Pulau Nangka tidak jauh berbeda antara masing-masing titik. Beberapa parameter tersebut diantaranya suhu, salinitas, kejernihan, TDS, dan Nilai pH. Suhu perairan pada titik  pengambilan  sampel  di  pulau  Nangka  diperoleh  dengan  menggunakan  alat Termometer raksa yang berkisar antara 32ºC sampai 35ºC. Suhu terendah didapat pada stasiun 3 yaitu 32ºC, sementara suhu tertinggi diperoleh di stasiun 1 yaitu 35ºC. Suhu di stasiun 2 mendekati angka suhu di stasiun 1 yaitu berkisar 34ºC. Suhu air yang dicatat berkaitan dengan waktu pengambilan data yang dilakukan di jam-jam suhu sedang naik yaitu sekitar 13.00 WIB. Effendi (2003) mengatakan bahwa suhu perairan berhubungan dengan  kemampuan  pemanasan  oleh  sinar  matahari,  waktu  dalam  hari  dan  lokasi. Pernyataan  tersebut  didukung  oleh Basmi  (1999) dan Hutabarat  (2000) yang mengatakan  bahwa  perairan  lebih  lambat  menyerap  panas  tetapi  akan  menyimpan panas lebih lama dibandingkan dengan daratan. Kisaran nilai salinitas yang didapatkan pada air laut di Pulau Nangka antara lain nilai terendah pada stasiun 1 yaitu 22,6% dan nilai tertinggi pada stasiun 3 yaitu 24,2 ‰. Adanya perbedaan kisaran salinitas terutama
pada perairan laut disebabkan karena berbagai faktor seperti sirkulasi air, penguapan, dan curah hujan (Akib et al ., 2015) .
Kejernihan perairan di bibir pantai di pulau Nangka berkisar antara 1 hingga 1,2 m. Sebaran kecerahan tertinggi berada pada stasiun 2 yang berkisar  1,2 m,sedangkan sebaran  kecerahan  pada  stasiun  1  dan  3  berkisar  1  m.  Hal  yang  mempengaruhi perbedaan  tingkat  kecerahan  pada  setiap  lokasi  pengambilan  sampel seperti halnya kedalaman  tempat  pengambilan  sampel,  jenis  sedimen,  kecepatan  arus  serta  kapan waktu  pengambilan  sampel    dilakukan.  Kekeruhan  atau turbidity menggambarkan kurangnya  kecerahan  perairan  akibat  bahan-bahan  koloid  dan  tersuspensi  seperti lumpur, bahan organik dan anorganik dan mikroorganisme perairan (Wilson 2010) . Curah  hujan  yang  tinggi  terjadi  di  musim  barat  mengakibatkan  banyaknya substrat berupa lumpur, limbah rumah tangga dan sampah melalui aliran run-off dari daratan masuk ke perairan, serta kuatnya arus yang menyebabkan teraduknya substrat hingga air laut keruh. Kondisi menunjukkan bahwa tingkat kekeruhan tertinggi di Pulau Nangka  berada  di  stasiun  1  yaitu  1  NTU  sedangkan  stasiun  2  dan  3  dengan  angka kekeruhan yaitu 0,00 NTU. Kecenderungan tingginya kekeruhan air laut di stasiun 1 berkaitan dengan tingkat kebersihan perairan terutama pada saat hujan, namun tidak melebihi baku mutu air laut untuk biota laut yaitu <5 NTU (Kepmen LH No 51 Tahun 2004). Tingkat kekeruhan air laut dapat dipengaruhi oleh berbagai faktor seperti kondisi pasang surut, faktor cuaca dan efek dari aktivitas penambangan timah (Muffakir 2017; Arinda & Wardhani 2018; Mentari et al. 2017) .
Pengukuran nilai pH di perairan Pulau Nangka dengan menggunakan pH meter memperlihatkan kisaran nilai antara 7.78 sampai 7.81. Nilai pH terendah terdapat pada stasiun 2 dan 3 yaitu 7.78 sementara nilai tertinggi pada stasiun 1 yaitu 7.81. Perubahan konsentrasi pH dalam perairan mempunyai siklus harian. Siklus ini merupakan fungsi dari karbondioksida. Keberadaan kandungan karbondioksida bebas dan ion karbonat menyebabkan pH air cenderung asam, dan pH akan kembali meningkat jika CO2 dan HCO3  mulai  berkurang (Effendi  2003) Hasil  penelitian  memperlihatkan  adanya perbedaan pH pada tiap lokasi pengambilan sampel, tetapi secara keseluruhan nilai rata- rata pH di perairan zona pemanfaatan budidaya rumput laut berada dalam kisaran yang mendukung untuk dilakukannya budidaya rumput laut. TDS adalah benda padat yang terlarut  yaitu  semua  mineral,  garam,  logam,  serta  kation-anion  yang  terlarut  di  air. Termasuk semua yang terlarut diluar molekul air murni (H2O).
Secara umum, konsentrasi benda-benda padat terlarut merupakan jumlah antara kation dan anion didalam air. TDS terukur dalam satuan Parts per Million (ppm) atau perbandingan rasio berat ion terhadap air. Berdasarkan hasil pengukuran dan analisis di lab nilai TDS di perairan laut Pulau Nangka yaitu antara 7,56 ppm sampai 7,77 ppm. Nilai  TDS  yang  sangat  tinggi  ini  kemungkinan  dipengaruhi  oleh  pelapukan  batuan, limpasan dari tanah dan pengaruh antropogenik (berupa limbah domestik dan industri). Pada dasarnya, kandungan material yang terlarut secara alamiah dalam perairan tidak bersifat  beracun,  hanya  saja  jika  kadarnya  terlalu  tinggi  maka  dapat  menyebabkan tingkat  kekeruhan  naik  sehingga  menghalangi  masuknya  cahaya  ke  badan  air sehingga dapat  mengurangi  laju  fotosintesis dalam  ekosistem    tersebut (Wibowo  dan Rachman 2020) .

## Keragaman Bakteri
Hasil  isolasi  dan  purifikasi  bakteri  primer  pembentuk  biofilm  diambil  dari substrat pasir (stasiun  1),  batu  (stasiun  2)  dan  lumpur (stasiun  3)  yang  terdapat  pada perairan Pulau Nangka. Setiap isolat bakteri diberi kode bp, bb, dan bl, dimana untuk substrat pasir terdiri dari 11 isolat, substrat batu 5 isolat, dan substrat mangrove 18 isolat (Tabel 2). Berdasarkan hasil data terlihat bahwa isolat bakteri banyak terdapat di substrat lumpur daripada substrat batu dan pasir. Jika ditelaah, salah satu alasan bakteri dapat hidup alami karena ketersediaan nutrisi. Ekosistem mangrove yang berlumpur dianggap cocok  untuk  mendukung  siklus  nutrisi  dari  hasil  interaksi  vegetasi  mangrove  dengan mikroba yang ada.
Selanjutnya, pada Tabel 2 menunjukkan karakteristik isolat bakteri pada masing- masing  substrat  melalui  pengamatan  morfologi  koloni  dengan  melihat  ukuran, pigmentasi, karakteristik optik, bentuk, elevasi, permukaan, dan margin. Berdasarkan karakteristik  koloni,  ada  31  isolat  bakteri  yang  di  amati  dan  mempunyai  ukuran moderate, small, large, pinpoint dan point . Isolat bakteri mempunyai pigmentasi berwana putih,  putih  bening,  krim  dan  kuning.  Karakteristik  optik  pada  isolate  bakteri mempunyai tiga macam yaitu  tanslucent, opaque dan transparant. Bentuk dari isolat bakteri yang umum ditemui antara lain irreguler, circular, rhizoid, spindle, dan filamentous. Isolasi bakteri mempunyai elevasi flat dan raised . Permukaan isolasi bakteri ada yang berkerut, halus mengkilap, dan halus. Hasil margin dari isolat bakteri undulate, lobate, entire, serrate, dan undulate . Menurut Cappucino & Sherman (1987) tujuan karakterisasi morfologi adalah untuk mengamati baik morfologi koloni maupun morfologi sel bakteri pada  isolat  bakteri  yang  telah  lolos  seleksi,  dimana  akan  terdapat  penampakan  yang berbeda pada pertumbuhannya.
Perbedaan  ini  disebut  dengan  karakteristik  kultur,  yang  digunakan  sebagai dasar  untuk  memisahkan  mikroorganisme  dalam  kelompok  taksonomik.  Hasil  pada Tabel  2  jelas  terlihat  bahwa  koloni  bakteri  primer  pembentuk  biofilm  di  lingkungan perairan Pulau Nangka cukup beragam. Pertama, dilihat dari segi ukuran, terdiri dari moderate, small, large, point, dan pinpoint . Kedua, dilihat dari segi pigmentasi, terdiri dari putih, krim, putih mengkilat, dan kuning. Ketiga, dilihat dari segi karakteristik optik, terdiri dari translucent, opaque, dan transparant . Keempat, dilihat dari segi bentuk, terdiri dari irregular, circular, rhizoid, spindle, dan filamentous . Kelima, dilihat dari segi elevasi, terdiri dari flat dan raised . Keenam, dilihat dari segi permukaan, terdiri dari berkerut, halus, dan halus mengkilap. Ketujuh, dilihat dari segi margin, terdiri dari undulate, lobate, entire, dan serrate . Sidharta (2000) menyatakan bahwa berdasarkan morfologi, ada sekitar 80%  bakteri  laut  yang  diketahui  berbentuk  batang  dan  bersifat  gram  negative. Pleomorfisme juga umum terjadi pada bakteri laut dibandingkan bakteri sungai, danau, dan  tanah.  Lebih  lanjut Sidharta  (2000) juga  menyatakan  bahwa  sekitar  seperlima bakteri batang dari laut berbentuk kumparan helicoid , sehingga sering diklasifikasikan sebagai Vibrio atau Spirulina . Bakteri laut bergerak secara aktif, antara 75-85% sediaan murni yang diamati memiliki flagel. Diperkirakan kemampuan bergerak ini sebagai hasil adaptasi kehidupan perairan.

## Biofilm
Aktivitas  pembentukan  biofilm  dari  koloni  bakteri  menggunakan  teknik  kristal
violet  pada microplate dengan  modifikasi.  Bakteri  yang  telah  tumbuh  di  microplate dilakukan beberapa tahap pencucian dengan berbagai macam pewarnaan. Sehingga jika bakteri  tersebut  membentuk  biofilm  maka  warna  ungu  akan  melekat.  Pengukuran menggunakan microplate reader bertujuan untuk memastikan bakteri pembentuk biofilm secara kuantitatif. Pengukuran tersebut dilakukan dengan panjang gelombang 450 nm disajikan dalam bentuk nilai Optical Dencity (OD). Isolat bakteri ditanam pada media cair (zobell) selama 48 jam di 37°C. Setiap koloni diambil dengan jarum ose steril dan dicelupkan ke dalam (diinokulasi) dalam tiga sumur paralel dari pelat microplate yang mengandung 200 μ l media air kolong dan diinkubasi selama 7 hari pada suhu 37°C. Setelah masa inkubasi, sumur dibilas dengan garam fisiologis dan difiksasi dengan 2 μ L etanol 99,99% selama 10 menit. Bahan bakteri yang melekat kemudian diwarnai dengan menambahkan 2 μ L kristal violet (2%) selama 20 menit. Microplate dibilas dengan air keran dengan lembut dan biomassa yang diukur menggunakan microplate reader pada 570 nm.
Biofilm  berperan  dalam  membantu  mikrob  untuk  dapat  beradaptasi  pada lingkungan  akuatik,  terutama  berkaitan  dengan  penempelan  dan  penyerapan  nutrisi serta pertahan terhadap kondisi yang tidak menguntungkan serta meningkatkan peluang terjadinya interaksi dengan organisme lainnya. Meskipun demikian, keberadaan mikrob pembentuk  biofilm  juga bukan  tanpa  pengaruh  negatif.  Biofilm  yang  dihasilkan  oleh mikrob pada ekosistem air dapat menyebabkan biofouling , biocorrosion , serta timbulnya resistensi  terhadap  perlakuan  antibiotik (Dang  &  Lovell  2016) .  Pengaruh  positif  dan negatif dari mikrob pembentuk biofilm ini menyebabkan perlunya penelitian lebih lanjut mengenai  bidang  ini,  dengan  harapan  dampak  negatif  mikrob  biofilm  dapat diminimalkan  sedangkan  manfaatnya  juga  dapat  dioptimalkan  bagi  kepentingan manusia.

## KESIMPULAN
Kelimpahan  bakteri  tertinggi  ditemukan  di  Titik  3  (substrat  berlumpur)  yaitu 3,3x10 6 cfu/ml.  Isolat  bakteri  yang  memiliki  kemampuan  tertinggi  dalam  membentuk biofilm secara invitro adalah isolat Bb3, Bb4 dan Bb1 dengan nilai masing-masing 0.3315, 0.2370 dan 0.2131. Bakteri yang berpotensi membentuk biofilm dari berbagai substrat di perairan Pulau Nangka berasal dari kelompok Alcaligenes dan Meniscus .

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian  ini  didanai  oleh  Lembaga  Penelitian  dan  Pengabdian  Kepada Masyarakat Universitas Bangka Belitung tahun anggaran 2021.

## DAFTAR PUSTAKA
Arinda  A,  Wardhani  E.  (2018).  Analisi  Profil  Konsentrasi  Pb  di  Air  Waduk  Saguling. Jurnal Rekayasan Hijau 3(2), 213-219.
Barral-Fraga  L,  Martiñá-Prieto  D,  Teresa  Barral  M,  Morin  S,  Guasch  H.  (2018).  Mutual interaction between arsenic and biofilm in a mining impacted river. Sci Tot Environ . 636, 985-998.
Cappucino  JG  &  Sherman  N.  (1987).  Microbiology:  A  Laboratory  Manual.  The  Benjamin Cummings Publishing Company Inc. California USA.
Dang H & Lovell CR. (2016). Microbial surface colonization and biofilm development in marine environments. Microbiol. Mol. Biol. Rev, 80, 91-138
de Carvalho CCCR. (2018). Marine Biofilms: A Successful Microbial Strategy With Economic Implications. Front. Mar Sci , 5, 126. doi: 10.3389/fmars.2018.00126.
Donlan  R  &  Costerton  J.  (2002).  Biofilms:  Survival  Mechanisms  of  Clinically  Relevant Microorganisms. Clin. Microbiol . Rev, 15(2), 167-193.
Effendi H. (2003). Telaah Kualitas Air Bagi Pengelolaan Sumberdaya dan Lingkungan Perairan. Jakarta (ID): Kanisius.
Hewson I, Jacobson Meyers ME, Fuhrman JA. (2007). Diversity and biogeography of bacterial assemblages  in  surface  sediments  across  the  San  Pedro  Basin,  Southern  California Borderlands. Environ Microbiol. 9, 923– 933. doi:10.1111/j.1462-2920.2006.01214.x.
Jabbari  S.  (2018).  Dampak  Pertambangan  Timah  Terhadap    Kualitas  Air  Tanah  Dangkal  dan Sikap  Masyarakat  Desa  Bencah  Kecamatan  Air  Gegas    Kabupaten  Bangka  Selatan [skripsi].  Bandar  Lampung:  Fakultas  Keguruan  Dan  Ilmu  Pendidikan,  Universitas Lampung. 81 hlm.
Julistiono H, Hidayati Y, Yuslaini N, Nditasari A. (2018). Identification of biofilm-forming bacteria from steel panels exposed in sea waters of Jakarta Bay and Madura Strait prosperous future through biological research and tropical biodiversity management. AIP Conf Proc 020029-1–020029-7.
Kunarso DH  dan Agustin TI. (2012). Kajian bakteri heterotropik di perairan Laut Lamalera. Ilmu Kel. 17(2), 63-73.
Lingga  R,  Afriyansyah  B  ,  Septiani  R,  Miranti  I.  (2020).  Kepadatan  Bakteri  Sedimen  Laut Terdampak Aktivitas Tambang Timah di Pantai Sampur Bangka Selatan. Herb Med J . 3 (1), 19-25.
Leksono,  A.S.  (2007). Ekologi  Pendekatan  Diskriptif  dan  Kuantitatif. Malang  (ID):  Bayumedia Publising.
Lugioyo GM, Loza S, Abreu PC. (2007). Biomass distribution of heterotrophic and autotrophic microorganisms of the photic layer in Cuban southern oceanic waters. Rev Biol Trop 55(2), 449-457.
Maranon E, Cermeno P, Perez V. (2005). Continuity in the photosynthetic production of dissolved organic carbon from eutrophic to oligotrophic waters. Mar Ecol Prog Ser. 299, 7-17.
Marfirani  R  dan  Adiatma  I.  (2012).  Pergeseran  mata  pencaharian  nelayan  tangkap  menjadi nelayan apung di Desa Batu Belubang. Prosiding Seminar Nasional Pengelolaan Sumberdaya Alam dan Lingkungan. Semarang, 11 September 2012.
Mentari, Umroh, Kurniawan. (2017). Pengaruh Aktivitas Penambangan Terhadap Kualitas Air Di Sungai Baturusa Kabupaten Bangka. Jurnal Sumberdaya Perairan 11(2), 23-30.
Mora-Gómez J, Freixa A, Perujo N, Barral-Fraga L, Romaní AM. (2016). Limits of the biofilm concept and types of aquatic biofilms. Dalam: Guasch,H.,Balaguer,M.D.(Eds.), Aquatic Biofilms:  Ecology,Water  Quality  and  Wastewater  Treatment,  In  Press.  (ISBN:978-1- 910190-17-3).
Mouchka  ME,  Hewson  I,  Harvell  CD.  (2010).  Coralassociated  bacterial  assemblages:  current Knowledge and the potential for climate-driven impacts. Integr Comp Biol . 50, 662–674. doi:10.1093/icb/icq061.
Muffakir AD. (2017). Fluktuasi Oksigen Terlarut, Suhu, dan pH Air Selama 3 x24 Jam, Periode Juli  2015-Januari  2016  Di  Cengkareng Drain ,  Pantai  Indah  Kapuk,  Jakarta  Utara. [skripsi]. Bogor (ID): Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor. 48 hlm.
Passerini  D,  Fécamp  F,  Marchand  L,  Kolypczuk  L,  Bonnetot  S,  Sinquin  C,  Verrez-Bagnis  V, HervioHeath D, Colliec-Jouault S, Delbarre-Ladrat C. (2019). Characterization of biofilm extracts from two marine bacteria. Appl Sci , 9, 4971 doi:10.3390/app9224971.
Pirwanda F, Pirngadie BH. (2015). Dampak Kegiatan Tambang Timah Inkonvensional Terhadap Perubahan Guna Lahan Di Kabupaten Belitung. Jurnal Planologi 3(2), 177-194.
Prianto  E,  Husnah.  (2009).  Penambangan  timah  Inkonvensional:  Dampaknya  Terhadap Kerusakkan Biodiversitas Perairan Umum Di Pulau Bangka. Bawal 2(5), 193-198.
Raulf FF, Fabricius K, Uthicke S, Beer D, Abed RMM, Ramette A. (2015). Changes in microbial communities in coastal sediments along natural CO2 gradients at a volcanic vent in Papua New Guinea. Environ Microbiol . 17(10), 3678-3691.
Sidharta BR. (2000). Sifat-sifat Bakteri Laut; Pengantar Mikrobiologi Kelautan. Yogyakarta (ID): Universitas Atma Jaya.
Thyssesn M, Lefevre D, Caniaux G, Ras J, Fernandez CI, Denis M. (2005). Spatial distribution of heterotrophic bacteria in the northeast Atlantic (POMME stud area) during spring 2001. J Geophys Res. 110, 1-16.
Watrick P, Kolter R. (2000). Biofilm City of Microbes. Jurnal of Bacteriology 182(10), 2675-2679.
Westall F, de Wit MJ, Dann J, van der Gaast S, de Ronde CEJ, Gerneke D. (2001). Early Archean fossil bacteria and biofilms in hydrothermally-influenced sediments from the Barberton Greenstone  Belt,  South  Africa. Precambrian  Res .  106,  93-116.  doi:  10.1016/S0301- 9268(00)00127-3.
Wiadnya  DGR.  (2012).  Kawasan  konservasi  perairan  dan  pengelolaan  perikanan  tangkap  di Indonesia. http://wiadnyadgr. lecture.ub.ac.id/files/2012/01/4C_1-Ikan-Hasil- Tangkap-1.pdf.
Wibowo M & Rachman AR. (2020). Kajian Kualitas Perairan Laut Sekitar Muara Sungai Jelitik Kecamatan Sungailiat – Kabupaten Bangka. J Presipitasi. 17 (1), 29-37. https://doi.org/10.14710/presipitasi.v17i1.29-37.
Wilson PC. (2010). Water Quality Notes: Water Clarity (Turbidity, Suspended Solids, and Color). Florida (US): Department of Soil and Water Science, University of Florida.

## Sitasi APA style :
Robika,  R.,    Lingga  R.,  Afriyansyah  B.  (2022).  Identification  of  Biofilm-Producing bacteria from Nangka Island marine Water in District of Bangka Tengah, Jurnal Pembelajaran dan Biologi Nukleus , 8(1), 179-191. https://doi.org/10.36987/jpbn.v8i1.2492.