BIOASSAY EKSTRAK Selaginella willdenowii DENGAN BRINE SHRIMP LETHALITY TEST (BSLT)
BIOASSAY EKSTRACT Selaginella willdenowii WITH BRINE SRIMP LETHALITY TEST (BSLT)
Wida Witriani 1 , Endang L. Widiastuti 1 , M Kanedi 1 , Nuning Nurcahyani 1
1 Jurusan Biologi Fakultas MIPA Universitas Lampung e-mail : wida_witriani@yahoo.co.id
Jurusan Biologi Fakultas MIPA Universitas Lampung Jl. Soemantri Brojonegoro No.1, Bandar Lampung, Lampung, Indonesia, 35145

## Abstrak
Selaginella merupakan  tumbuhan  paku  yang  banyak  tersebar  di  wilayah  Indonesia  salah satunya  di wilayah  Lampung. Selaginella memiliki  banyak  kegunaan  diantaranya  dapat  digunakan  sebagai bahan  kerajinan  tangan,  ornamen  dan  sebagai  obat  tradisional.    Potensi Selaginella yang  dapat memberikan  manfaat  positif  terutama  sebagai  obat  tradisional  belum  banyak  diketahui  dan dioptimalkan penggunaanya oleh masyarakat. Penelitian untuk mengetahui pengaruh toksisitas telah dilakukan  dengan  Uji Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT).  Ektraksi Selaginella diambil  dengan  cara maserasi  menggunakan  aquades  kmudian  disaring  dan  di  keringkan  hingga  menjadi  pasta.  Pasta Selaginella di  encerkan  dan  dibuat  menjadi  0,2,4,6,8,10,12,  dan  20%.  Analisis  data  menggunakan varian satu arah (ANOVA)(α=0,05). Uji BSLT diterapkan pada 8 konsentrasi ekstrak Selaginella yang berbeda  dengan  12  dan  24  jam  pengamatan.  Pada  jam  ke  12  konsentrasi  2%  menunjukkan  nilai mortalitas  terendah  sebesar  14,28%  pada  konsentrasi  20%    mnunjukkan  nilai  tertinggi  sebesar sebesar  26,78%,  kemudian  pada  jam  ke  24  nilai  mortalitas  terendah  adalah  pada  konsentrasi  2% sebesar 8,90% dan pada nilai tertinggi pada konsentrasi 20% yaitu sebesar 26,78%. Ekstrak aquades Selaginella willdenowii bersifat toksik tetapi toksisitasnya rendah terhadap Artemia salina Leach juga tidak menunjukkan perbedaan yang nyata pada konsentrasi rendah.
Kata kunci: Selaginella wildenowii, Artemia salina, LC 50.

## Abstract
Selaginella  is  one  of  ferns  which  widely  distribute  throughout  Indonesia  including  Lampung  region. Many  uses  can  be  made  from  Selaginella  including  handycraft,  ornaments,  as  well  traditional medicine.    Yet,  potential  use  of  Selaginella  as  traditional  medine  has  not  been  thoroughly  explored especially for anticancer.  In order to study its toxicity effect the study was conducted by undergone Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). The aim of the study was to determine the lethal concentration of the Selaginella extract. Masseration by aquadest was applied for extraction of Selaginella followed by dehydration.  The paste of Selaginella then was diluted and made into 0, 2, 4, 6, 8, 10, 12, and 20 %. The  BSLT  then  was  applied  to  these  8  different  concentration  of  Selaginella  for  12  and  24  hours observation.  ANOVA with α 5 % was used to analyze the data.  The result indicated that in 12 hours of observation the highest mortality (26.78 %) was showed by 20 % selaginella concentration and the lowest  mortality  (14.28  %)  showed  by  2  %  of  Selaginella  concentration.  In  24  hours  observation indicated  that  the  highest  mortality  (26.78  %)  was  showed  by  20  %  of  selaginella  concentration and the  lowest  mortality  (8.90  %)  showed  by  2  %  of  Selaginella  concentration. Selaginella  willdenowii aquadest extract  show  any  toxic  but  the  low  level  toxicity  on  the Artemia  salina as  well  it  did  not significantly different compare to those lower concentrations.
Key words : Selaginella wildenowii, Artemia salina, LC 50.

## PENDAHULUAN
Selaginella merupakan  salah  satu  tumbuhan paku  yang  dapat  digunakan  sebagai  tanaman obat  tradisional. Sellaginella adalah  tumbuhan yang  mengandung  flavonoid  yang  merupakan antioksidan  ampuh  sebagai  pencegah  kanker
dan juga  memiliki efek antimikroba. Prinsip su- atu tanaman dapat digunakan sebagai antikan- ker  adalah  apabila  tanaman  tersebut  mengan- dung senyawa yang bersifat sitotoksik.
Yohana  (2005),  mengungkapkan  bahwa  pe- ngobatan  dengan  obat  tradisional  secara  u-
mum  dinilai  lebih  aman  dibandingkan  dengan pengobatan  modern,  karena  efek  samping yang  ditimbulkan oleh obat tradisional lebih se- dikit.  Menurut  Departemen  Kesehatan  (2002), obat tradisional tidak dapat dipisahkan dari ke- hidupan  masyarakat  Indonesia  karena  sudah menyatu  dengan  budaya  bangsa  serta  banyak digunakan di berbagai lapisan masyarakat. Se- suai standar mutu WHO, obat tradisional harus memenuhi  beberapa  persyaratan  meliputi  kua- litas, keamanan, dan khasiat.
Senyawa yang diduga memiliki khasiat obat se- perti sebagai bahan anti kanker, harus diujikan terlebih  dahulu  pada  hewan  percobaan.  Salah satu  langkah  awal  pengujian  adalah  dengan menerapkan  metode Brine  Shrimp  Lethality Test (BSLT),  yaitu  uji  dengan  menggunakan larva udang Artemia salina Leach (Meyer et al, 2010, Mc Laughlin dan Rogers, 2011, Carballo et  al ,  2005).  Metode  ini  merupakan  salah  satu metode  yang  banyak  digunakan  untuk  penca- rian senyawa anti kanker baru yang berasal da- ri tanaman. Hasil uji toksisitas  dengan metode ini telah terbukti memiliki  korelasi dengan daya sitotoksis senyawa anti kanker (Rahman 2007). Selain  itu,  metode  ini  juga  mudah  dikerjakan, murah,  cepat,  dan  cukup  akurat.  Bentuk  eks- trak  dipilih  dengan  harapan  akan  didapatkan kandungan  senyawa  aktif  yang  ada  dalam Se- laginella .  Hasil  penelitian  ini  diharapkan  dapat dijadikan  bahan  informasi  tentang  potensi  anti kanker pada Selaginella sebagai salah satu ta- naman obat tradisonal.

## BAHAN dan METODE

## Persiapan Tanaman Selaginella
Sampel  paku  Selaginella  diambil  di  sekitar  su- ngai yang berada di sekitar Taman Hutan Raya Wan  Abdul  Rachman.  Bagian  tumbuhan Sela- ginella yang  akan  digunakan  sebagai  bahan aktif  adalah  seluruh  bagian  tanaman  batang, daun, dan akar.
Pembuatan Ekstrak Selaginella
Bagian yang dibuat ekstrak merupakan keselu- ruhan dari bagian tumbuhan yaitu akar, batang dan daun Selaginella . Tumbuhan Selaginella di- keringkan di dalam oven dengan suhu 40-50 ºC selama  5x24  jam  sampai  benar-benar  kering. Selaginella yang  telah  kering  dipotong-potong lalu  dihaluskan  dengan  blender  kering.  Setelah itu direndam (maserasi) menggunakan aquades selama  24  jam  kemudian  disaring,  langkah  ini diulang  sebanyak  3  kali  untuk  menghasilkan ekstrak  cair Selaginella. Ekstrak Selaginella di- homogenkan  dengan  cara  digoyang  menggu- nakan  shaker  selama  24  jam  pada  kecepatan rendah agar ekstrak benar-benar homogen, ke- mudian  diuapkan  di  dalam  oven  dengan  suhu
40-50 ºC hingga menjadi pasta selanjutnya siap digunakan sebagai larutan stok.

## Persiapan Tempat Penetasan Hewan Uji
Tempat  untuk  menetaskan Artemia dirancang menggunakan  botol  berukuran  1,5  l,  dibagi menjadi  dua  bagian  kemudian  bagian  atas  bo- tol  dimasukkan  ke  dalam  badan  botol.  Bagian tengah botol di lubangi dan diberi selang peng- hubung  pada  botol lainnya untuk  tempat  jalan- nya Artemia yang telah menetas.

## Penetasan hewan Uji Arthemia
dilakukan  dengan  cara  merendam  kista  dalam bentuk  kering  di  dalam  air  laut  yang  diinkubasi dengan  menggunakan  sinar  lampu  TL  hingga menetas menjadi larva nauplius. Larva nauplius selanjutnya  dipisahkan  dalam  wadah  baru,  lar- va yang dapat digunakan sebagai hewan uji  a- dalah larva yang telah berumur 48 jam.

## Tempat perlakuan
Tempat  yang  digunakan  untuk  perlakuan  pada penelitian  ini  adalah plate tetes  yang  terbuat dari  porselin.  Satu plate tetes  memiliki  cekung- an  sebanyak  16  cekungan  dengan  kedalaman 4 cm. Cekungan ini yang akan diisi Artemia se- banyak 14 ekor dan diberi ekstrak Selaginella.

## Persentase pemberian ekstrak
Penelitian  ini  menggunakan  rancangan  acak Lengkap  (RAK)  dengan  8  perlakuan  dan  ma- sing-masing perlakuan diulang sebanyak 4 kali. Setiap  perlakuan  menggunakan Artemia seba- nyak  14  ekor  untuk  melihat  berapa  banyak Artemia yang  mati  sebagai  respon  toksik  ta- naman Selaginella . Perlakuan tersebut adalah
1.  14 Artemia sebagai kontrol tanpa pemberian ekstrak.
2.  14 Artemia diberi  ekstrak Selaginella seba- nyak 2%
3.  14 Artemia diberi  ekstrak Selaginella seba- nyak 4%
4.  14 Artemia diberi  ekstrak selaginella seba- nyak 6%
5.  14 Artemia diberi  ekstrak Selaginella seba- nyak 8%
6.  14 Artemia diberi  ekstrak Selaginella seba- nyak 10%
7.  14 Artemia diberi  ekstrak Selaginella seba- nyak 12%.
8.  14 Artemia diberi  ekstrak Selaginella seba- nyak 20 %

## Parameter yang diamati
Parameter  penelitian  yang  digunakan  adalah angka  mortalitas  larva Artemia ,  angka  mor- talitas dihitung dengan LC 50 dengan memasuk- kan  nilai  probit  (50%  kematian).  Angka  morta- litas larva dihitung dengan rumus berikut :
Angka  mortalitas  Larva  =  (akumulasi  ma- ti/jumlah akumulasi hidup dan mati) x 100%
Angka  probit  dicari  dengan  menggunakan  per- samaan garis y= a+b X
Keterangan: y = log konsentrasi x = Angka probit

## Analisis Data
Data  yang  diperoleh berupa  data  kematian Ar- temia yang dianalisis menggunakan varian satu arah  (ANOVA ) dengan α=5%,  untuk  mengeta- hui adanya perbedaan yang signifikan antar ke- lompok perlakuan

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Nilai Mortalitas Arthemia Salina Leach
Hasil  uji  mortalitas  larva Artemia  salina Leach yang  telah  diberikan  perlakuan  ekstrak Selagi- nella  wildenowii dengan  berbagai  konsentrasi disajikan pada Tabel 1 berikut :
Tabel 1.  Rerata  mortalitas larva Arthemia sali- na Leach  yang  telah  diberi  ekstrak Selaginella  wildenowii pada  12  jam inkubasi
No. Konsentrasi X±SEM (individu) Nilai Mortalitas (%) 1 0% 0,14±0,028 14,28 2 2% 0,19±0,033 19,64 3 4% 0,21±0,059 21,43 4 6% 0,21±0,028 21,43 5 8% 0,23±0,017 23,21 6 10% 0,23±0,033 23,21 7 12% 0,24±0,020 25,00 8 20% 0,26±0,017 26,78
Keterangan :  X  ±  SEM  merupakan  nilai  rerata  mortalitas
Arthemia salina L ± galat dalam %
Nilai mortalitas Artemia berkisar antara  14,28- 26,68 % pada Tabel 1. menunjukan bahwa nilai mortalitas Arthemia yang diberi ekstrak Selagi- nella willdenowii dengan konsentrasi yang ber- beda  (0%,  2%,  4%,  6%,  8%,  10%,  12%  dan 20%)  tidak  menunjukan  adanya  perbedaan yang nyata pada α = 0,05.
Pada  12  jam  pengamatan  semakin  tinggi  kon- sentrasi  ekstrak  yang  diberikan  maka  semakin tinggi  tingkat  toksisitasnya  terhadap Arthemia . Sesuai dengan teori Harborne (1994) yang me- nyatakan  bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi ekstrak  maka  akan  semakin  tinggi  sifat  toksik- nya, sehingga dapat membunuh Arthemia. Un- tuk  lebih  lanjut  dilakukan  uji  dengan  inkubasi selama 24 jam, data hasil penelitian terlihat pa- da Tabel 2.
Tabel  2  menunjukkan  waktu  inkibasi  24  jam menunjukan  bahwa  nilai  mortalitas Arthemia yang  diberi  ekstrak Selaginella  willdenowii de- ngan  konsentrasi  yang  berbeda  (0%,  2%,  4%,
6%, 8%, 10%, 12% dan 20%) tidak menujukan adanya perbedaan yang nyata ( α=0,05).
Tabel 2.  Rerata mortalitas larva Arthemia Sali- na Leach  yang  telah  diberi  ekstrak Selaginella willdenowii pada 24 jam No. Konsentrasi X±SEM (individu) Nilai Mortalitas (%) 1 0% 0,08±0,017 8,90 2 2% 0,16±0,059 16,07 3 4% 0,23±0,033 23,21 4 6% 0,23±0,033 23,21 5 8% 0,23±0,033 23,21 6 10% 0,24±0,067 25,00 7 12% 0,24±0,020 25,00 8 20% 0.26±017 26,78
Keterangan :  X  ±  SEM  merupakan  nilai  rerata  mortalitas
Arthemia salina L ± galat dalam %
Hal  yang  sama  juga  ditunjukan  pada  inkubasi 24  jam,  yaitu  semakin  tinggi  konsentrasi  yang digunakan semakin tinggi tingkat toksisitasnya. Harmita  dan  Radji  (2008)  menyatakan  bahwa ekstrak Selaginella wildonevii dikatagorikan se- bagai tumbuhan yang cukup toksik. Efek toksik diduga  karena  kandungan  bahan  bioaktif  yang terkandung di dalam ekstrak Selaginella , di an- taranya saponin dan alkaloid.  Hasil uji fitokimia menunjukkan  bahwa  ekstrak Selaginella  will- denovii memiliki kandungan saponin yang lebih banyak dibandingkan ekstrak Selaginella plana dan Selaginella ornata (Chikmawati et al . 2009) Bahan  bioaktif  lainnya  yaitu  alkaloid  yang mempunyai  rasa  pahit  dan  berfungsi  sebagai anti serangga yang diduga juga dapat mempe- ngaruhi efek toksik (Zuhud et al . 2006).
Disamping mortalitas , Artemia yang mati dalam vial  percobaan    karena  perlakuan,  mengalami disorientasi  gerak  (gerakannya  tidak  teratur). Artemia dalam vial ini tetap aktif bergerak, akan tetapi gerakannya berputar-putar pada satu titik kemudian mati.
Hubungan  konsentrasi ekstrak Selaginella will- denowii dengan  mortalitas Arthemia  salina Le- ach dapat dilihat pada Gambar 1 berikut :
Gambar 1. Pemberian  ekstrak S.  willdenowii
dengan persentase kematian Artemia pada 12 jam
Pada  Gambar  1  terlihat  hubungan  antara  per- sentase  kematian Arthemia salina yang  diberi perlakuan  ekstrak Selaginella  willdenowii me- nunjukkan  persamaan  regresi  linear  adalah  y= 0,532x+17,74,  dengan  nilai  regresi  sebesar 7,99. Walau tidak menunjukan perbedaan yang nyata  antar  konsentrasi  yang  berbeda  ekstrak Selaginella willdenowii menunjukan adanya pe- ningkatan kematian dengan adanya peningkat- an  konsentrasi  yang  dibuat,  yaitu  dengan  r  = 7,99.  Untuk  lebih  lanjut  inkubasi  dilakukan  pa- da 24 jam pengamatan  menunjukan hubungan yang serupa dengan nilai regresi 0,608.
Gambar 2. Pemberian  ekstrak Selaginella  will- denowii dengan  persentase  kema- tian Arthemia pada 24 jam.
Pada  Gambar  2  terlihat  hubungan  antara  per- sentase  kematian Arthemia  salina yang  diberi perlakuan  ekstrak Selaginella  willdenowii sela- ma  24  jam  pengamatan.  Persamaan  regresi li- near  menunjukkan  persamaan  y  =  0,731x  + 15,75.
Semakin  tinggi  konsentrasi  yang  dipakai  juga menunjukan  tingkat  kematian  yang  tinggi.  Na- mun  seperti  halnya  pada  pengamatan  12  jam ekstrak Selaginella  willdenowii belum  menun- jukan  tingkat  toksik  seperti  yang  disarankan o- leh  Meyer et  al. Menurut  Meyer et  al .  (1982), ekstrak  tanaman  dikatakan  toksik  jika  memiliki LC 50 <1000  μg/ml.  melalui  uji  BSLT  toksisitas tidak terlihat pada penelitian ini , diduga senya- wa toksik yang dikandung oleh Selaginella will- denowii hanyan  sedikit  yang  didapat  dari  pro- ses ekstraksi karena Selaginella willdenowii di- ekstraksi menggunakan aquades, dengan cara simplisia Selaginella  willdenowii direndam  de- ngan aquades tanpa dididihkan. Dengan demi- kian  biflavonoid  yang  terkandung  di  dalam Selaginella willdenowii tidak terekstrak dengan baik.  Setyawan  dan  Darusman  (2008)  me- ngungkapkan  bahwa  pelarut  dan  cara  isolasi yang  digunakan  untuk  mengekstraksi Selagi- nella sangat  mempengaruhi  keragaman  struk- tur  kimia  yang  diperoleh.  Keragaman  struktur kimia biflavonoid ini sangat mempengaruhi bio- aktivitas ekstrak tersebut.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilakukan dapat  disimpulkan  bahwa  pemberian  ekstrak Selaginella terhadap Arthemia salina Leach pa- da jam ke 12 dan 24 menujukan nilai mortalitas tertinggi sebesar 26,78%.

## DAFTAR PUSTAKA
Chikmawati  T,  Wijayanto  A,  Miftahudin.  2009. Potensi  Selaginella  Sebagai  Antiok-sidan .
Seminar  Nasional  Biologi  XX:  Universitas Islam Negeri Malang.
Harborne,  J.  B.  1994.  The  Flavonoids.  Chap- man and Hall. London.
Meyer,  B.  N.,  Ferrigni,  N.  R.,  Putman,  J.  E., Jacbsen,  L.  B.,  Nicols,  D.  E.,  and McLaughlin,  J.  L.  1982. Brine  Shrimp  :  A Comvenient  general  Bioassay  For  Active Plant Constituents . Plant Medica.
Rahman M, Rias M, Desai UR. 2007. Synthesis of  biologically  relevan  biflavonoid .  Reviev. Chemistri and Biodiversity 4: 2495-2527.
Scheuer,  J.  S.  1994. Produk  Alami  Lautan . Cetakan  pertama.  IKIP  Semarang  Press. Semarang.
Setyawan,  A.D  dan  Darusman,  L.k.  2008. Senyawa Biflavonoid pada Selaginella Pal. Beauv.  dan  Pemanfaatannya .  B  I  O  D  I  V E R S I T A S ISSN: 1412-033X Volume 9, Nomor  1  Januari  2008  Halaman:  64-81. Bogor.  Departemen  Kimia,  FMIPA,  Institut Pertanian Bogor (IPB).
Setyawan,  A.D.  2011. Natural  products  from Genus Selaginella (Selaginellaceae). Nusantara Bioscience 3: 44-58.
Yohana,  A.  Y.  2005. Khasiat  Tanaman  Obat . Pustaka Buku Murah. Jakarta.
Zuhud  EAM,  Ekarelawan,  Riswan  S.  1994 . Indonesian  tropical  forests  as  a  source  of medicinal plant genetic diversity . In: Zuhud EAM, Hary (ed). 2006. Preservation of the utilization  of  medicinal  plant  diversity  of Indonesian  tropical  forests.  Faculty  of Forestry IPB-LATIN. Bogor.