## KULTUR JARINGAN RUMPUT LAUT (Gracilaria verrucosa) DI MEDIA BERBEDA TERHADAP PERTUMBUHAN THALLUS
Gloria Ika Satriani 1) , Asfie Maidie 2) , Sri Handayani 3) , Ema Suryati 4)
1) FPIK Universitas Borneo Tarakan
2,3) FPIK Universitas Mulawarman
4) Balai Riset Perikanan Budidaya Air Payau Maros
1) Email: glosatriani@borneo.ac.id

## ABSTRACT
The  aims  of  this  experiment  are  to  know  the  effect  of  different  medium  to seaweed (G. verrucosa) cultured in vitro expressed total number of thallus. The experiment was conducted in the Biotechnology Laboratory of Research Institute  for  Coastal  Aquaculture  (RICA)  Maros,  South  Sulawesi.  The experiment was arranged in Completely Randomized Design (CRD) with 10 replications and 4 treatments of medium, those are: Sterile Sea Water / SSW 25 ppt, Prevasoli ES Medium / PES, Agrodyke / AG, and Conwy / CW. The last  analyze  was  Least  Significant  Difference  (LSD)  to  know  the  best medium  to  support  total  number  of  thallus.  The  result  of  the  experiment shows that the highest total number of thallus was achieved by SWS (3,75).
Keywords: Gracilaria verrucosa, tissue culture, thallus, medium

## PENDAHULUAN
Rumput laut merupakan komoditas  perikanan  yang  potensial untuk dibudidayakan karena
manfaatnya  yang  sangat  besar  bagi kehidupan  manusia.  Rumput  laut  dapat menjadi  sumber  pangan  yang  bergizi dan  memiliki  khasiat  obat,  sebagai bahan  baku  berbagai  industri  serta peranannya yang penting dalam menjaga  kelestarian  sumberdaya  hayati perairan  yaitu  sebagai  produsen  primer perairan dan biofilter alami.
Usaha untuk meningkatkan produksi  rumput  laut  terus  diupayakan, mengingat  besarnya  permintaan  pasar akan  kebutuhan  rumput  laut  serta
luasnya  potensi  lahan  budidaya  yang belum tergarap secara maksimal.
Rendahnya produksi rumput laut disebabkan  oleh  ketidaksinambungan benih dari alam yang sangat dipengaruhi  pada  musim.  Selain  itu, benih alam yang digunakan secara terus menerus  akan  mengalami  kemerosotan mutu  maupun  jumlah  sehingga  rentan terhadap  perubahan  mutu  lingkungan dan  penyakit  (Malingkas,  2002).  Untuk itu  upaya  penyediaan  bibit  rumput  laut yang  berkesinambungan  sebagai  kunci awal  penunjang  keberhasilan  dalam usaha  budidaya  rumput  laut  harus mampu  memenuhi  kriteria  unggul  baik dari  segi  waktu,  kualitas  dan  kuantitas bibit yang dihasilkan.
Salah  satu  alternatif  yang  dapat digunakan  untuk  mendukung  pasok
benih rumput laut adalah melalui kultur jaringan  yaitu  kultur  secara  aseptik  di
laboratorium.  Kemudian  diaklimatisasi di lapangan hingga siap untuk dibudidayakan  secara  luas  (Gunawan, 1987). Menurut Suryati (2007) pertumbuhan benih rumput laut hasil in vitro di laboratorium  lebih baik dibandingkan  pertumbuhan  rumput  laut yang berasal dari alam. Permasalahan  yang  dihadapi dalam teknik kultur  jaringan G. verrucosa adalah  adanya  perbedaan respon  jaringan  rumput  laut  terhadap jenis  media  yang  digunakan  sebagai media  tumbuh  bagi  eksplan  (bagian tubuh  organisme  yang  diisolasi  untuk dikultur  secara in  vitro, yaitu  potongan thallus G. verrucosa ). Perbedaan respon ini  diduga  disebabkan  oleh  perbedaan nutrisi  yang  terkandung  dalam  media tumbuh,  sehingga  perlu  dilakukan penelitian untuk mengetahui  jenis media yang paling cocok untuk mendukung  kultur in  vitro jaringan rumput laut ( G. verrucosa ).
Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui pengaruh penggunaan media  kultur  berbeda  terhadap  titik tumbuh  dan  panjang  thallus  jaringan rumput laut G.verrucosa
yang
dibudidayakan secara in vitro . Memberikan informasi
mengenai  jenis  media  kultur  yang optimal dalam menunjang pertumbuhan eksplan dan meningkatkan keberhasilan teknik  kultur in  vitro jaringan  rumput laut ( G. verrucosa ).

## BAHAN DAN METODE

## Waktu dan Tempat
Penelitian ini dilaksanakan selama  kurang  lebih  2  (dua)  bulan  di Laboratorium  Bioteknologi  Balai  Riset Perikanan Budidaya Air Payau (BRPBAP) Maros, Sulawesi Selatan. Bahan dan Alat
Bahan  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah, jaringan muda dari
potongan  thallus  rumput  laut G. verrucosa yang  kondisinya  segar,  sehat (berwarna  hijau  tua  dan  tidak  terdapat tanda-tanda  pemutihan  jaringan),  dan percabangannya rimbun sebagai
eksplan.  Rumput  laut  diambil  di Jonggoa  Desa  Cikuang  Kabupaten Takalar, Sulawesi Selatan. Air laut yang digunakan  adalah  stok  air  laut  yang diambil dari Labuange Kabupaten Barru Sulawesi  Selatan.  Stok  media  pupuk Conwy  (CW)  menurut  Liao  (1983), media  Provasoli  ES  Medium  (PES) menurut Provasoli (1968 dalam
Kuncoro 2005), media pupuk Agrodyke (AG)  dan  Steril  Sea  Water  salinitas  25 ppt (SSW). Aquades untuk pengenceran air  laut  dan  pembilasan  alat.  Alkohol 70%  untuk  sterilisasi  alat  dan  ruangan. Alumunium  foil, wrapping  plastic ,  dan karet  gelang  untuk  menutup  botol kultur.  Sabun  cair  dan  HCl  10%  untuk pencucian botol kultur. Bahan antibiotik dan desinfektan untuk sterilisasi eksplan secara bertingkat (Rosmiati, 2005) yaitu campuran antibiotik 0,1% (streptomycin,  penicillin  G,  rifampicin, dan  kanamicin)  dan    betadine  1%. Kertas  timbang,  kapas  beralkohol,  dan kertas  label  untuk  penimbangan  bahan, dan kertas tisu.
Peralatan yang digunakan antara lain  ember  dan  lap  kain  bersih  untuk wadah  pengambilan  dan  pengangkutan rumput  laut.  Aquarium  untuk  wadah aklimatisasi  di  laboratorium,  aerator, selang,  dan  batu  aerasi.  Penyaring ultrafiltrasi  untuk  penyaringan  air  laut bebas  kotoran,  partikel  dan  padatan.
Hand  refraktometer  untuk  mengukur salinitas. Alat-alat yang digunakan pada proses pembuatan media yaitu timbangan  analitik  (ketelitian  1  mg), spatula,  gelas  ukur  (500  mL),  gelas piala,  erlenmeyer  (2000  mL),  hot  plate stirer,  dan  gunting.  Alat-alat  yang digunakan    selama  proses  inokulasi yaitu autoclafe listrik, botol-botol kultur
(200  mL)  tahan  panas,  hand  spryer sebagai  wadah  penyimpanan  alkohol 70%,  hand  gloves,  masker,  cutter, pinset,  cawan  petri,  baskom  pencucian eksplan,  mikropipet  ukuran  1000  µL dan  50  µL,  mikrotip,  labu  erlenmeyer (1000  mL),  gelas  ukur  (1000  mL), shakker,  rak  kultur,  lampu  TL  20  Watt dengan  intensitas  cahaya  1500  lux,  dan ruangan  steril  yang  dilengkapi  dengan pendingin  ruangan  (AC)  yang  suhunya dipertahankan 25˚C.

## Pelaksanaan Penelitian
1. Sterilisasi dan Preparasi Alat Disiapkan gelas-gelas kultur ukuran  200  mL  tahan  panas  sebanyak 40  botol,  yang  telah  dicuci  dengan menggunakan  sabun  cair  kemudian dibilas  dengan  air  mengalir  dan  HCl 10%. Setelah itu dibilas kembali dengan air  mengalir  hingga  kesat  dan  bau  HCl hilang.  Terakhir  gelas-gelas  kultur tersebut  dibilas  dengan  menggunakan aquades,  kemudian  dikeringanginkan. Kertas  tissue,  labu  erlenmeyer,  gelas ukur,  gelas  piala,  cawan  petri,  dan bersama  40  gelas  kultur  yang  telah dikeringanginkan,  ditutup  alumunium foil
dan disterilisasi kering
menggunakan  oven  pada  temperatur 180°C  selama  2  jam.  Kemudian  alat- alat  yang  telah  disterilisasi  kering tersebut  disimpan  ke  dalam  inkubator dengan  suhu  40°C  selama  alat-alat tersebut belum digunakan untuk menjaga  kondisi  steril  untuk  alat (Dwijoseputro, 1994).
Preparasi yaitu penyiapan media kultur  berupa  air  laut  steril  (SSW) dengan salinitas 25 ppt melalui pengenceran  air  laut  stok  34  ppt  (yang sudah disaring menggunakan ultrafiltrasi) kemudian disterilkan menggunakan autoclave pada
temperature  120°C,  tekanan  uap  1,5 kg/cm 2 selama  15  menit  (Hadioetomo, 1985).
2. Pembuatan Media
Bahan makro dan mikro ditimbang dengan menggunakan timbangan  analitik,  kemudian  masing- masing bahan dilarutkan dalam aquades steril dan dihomogenkan dengan menggunakan  hot  plate  dan  stirer. Masing-masing  larutan  stok  disimpan dalam  botol  penyimpanan  dan  diberi label,  dan  sebaiknya  disimpan  dalam rak  khusus  untuk  penyimpanan  dan ditempatkan  pada  ruangan  bersuhu 25°C,  agar  larutan  stok  yang  telah dibuat tidak rusak dan tahan lama. 3. Inisiasi Inisiasi adalah pengambilan eksplan  dari  bagian tanaman  yang  akan dikultur  secara in  vitro ,  diawali  dengan pencucian  tanaman  ( G.  verrucosa ) yang  berasal  dari  alam  dengan  air  laut bersih  25  ppt  hasil  penyaringan  alat ultrafiltrasi  hingga  partikel-partikel  dan kotoran  yang  menempel  pada  rumput laut hilang terbilas. Aklimatisasi rumput laut  di  laboratorium  dilakukan  24  jam, kemudian dilakukan pemotongan
jaringan  tanaman  yang  telah  diseleksi, yaitu  dipilih  thallus  muda  yang  segar dan memiliki percabangan yang banyak. Thallus dipotong seragam dengan  ukuran  1  cm  menggunakan cutter  steril,  dan  diletakan  dalam baskom  bersih  berisi  air  laut  25  ppt steril sebanyak 400 eksplan rumput laut ( G.  verrucosa )  kemudian  dilanjutkan dengan proses sterilisasi dan penanaman ke dalam media. 4. Sterilisasi eksplan Proses sterilisasi dilakukan secara bertingkat dengan metode penggojogan. Penggojogan pertama
eksplan direndam dalam larutan antibiotik 0,1% selama 3 menit. Larutan antibiotik  dibuat  dengan  menimbang masing-masing  0,2  gram  streptomycin, penicillin  G,  rifampicin,  dan  kanamicin yang kemudian dicampur ke dalam 200 mL  air  laut  steril  25  ppt.  Dilanjutkan
dengan  pembilasan  lagi  menggunakan air  laut  steril  sampai  larutan  antibiotik terbilas. Penggojogan kedua eksplan direndam  dalam  1%  betadine  selama  3 menit.  Larutan  betadine  dibuat  dengan melarutkan  2  mL  betadine  dalam  200 mL  air  laut  steril  25  ppt.  Dilanjutkan dengan  pembilasan  lagi  menggunakan air  laut  steril  sampai  larutan  betadine terbilas.  Usahakan  kondisi  kesegaran eksplan  terus  terjamin  selama  waktu proses penanaman dengan tetap
merendam  eksplan  dalam  air  laut  steril 25 ppt.
5. Penanaman Eksplan (Inokulasi) Teknik  kultur  yang  digunakan dalam penelitian ini adalah teknik kultur meristem. Eksplan yang telah disterilisasi  siap  untuk  ditanam  dalam media kultur. Proses inokulasi dilaksanakan  pada  ruangan  steril  untuk mencegah  kontaminasi  mikroba  yang dapat menghambat
pertumbuhan eksplan  dalam  media  kultur.  Eksplan diambil  dengan  menggunakan  pinset steril  dengan  cermat  dan  hati-hati  agar tidak  melukai  jaringan  yang  akan dikultur.  Setiap  botol  kultur  yang  telah berisi media kultur ditanam 10 eksplan. Botol-botol  berisi  eksplan  tersebut diletakkan  pada  shaker  yang  disusun pada  rak  kultur  dengan  pencahayaan lampu  TL  1500  lux  dan  bersuhu  ruang 25°C.
Seminggu sekali dilakukan penggantian  media.  Hal  ini  untuk mencegah  kekurangan  nutrisi  namun harus segera diwaspadai, apabila terjadi pemutihan  eksplan,  dan  kekeruhan media,  maka  harus  segera  diambil tindakan penyelamatan dengan
membuang  eksplan  yang  putih,  dan sesegera mungkin menggantinya
dengan  media  yang  baru.  Namun, eksplan  yang  kurang  dari  atau  sama dengan 50% bagian jaringannya mengalami  pemutihan  masih  mampu
diselamatkan,  dengan  cara  membuang bagian yang memutih, dan sisanya yaitu jaringan  yang  masih  sehat,  dapat  tetap diinokulasi.
6. Pengamatan dan Pencatatan Data Pengamatan yang dilakukan dengan mengambil data tingkat kelangsungan hidup eksplan (per
minggu),  jumlah  titik  tumbuh  dan panjang thallus (per minggu), serta data penunjang  berupa  uji  kualitas  air;setiap 2 minggu untuk mengetahui kandungan amoniak, nitrat, nitrit dan fosfat terlarut.

## Rancangan Penelitian
Penelitian  ini  menggunakan  4 perlakuan  media  berbeda  yaitu  SSW sebagai  kontrol,  CW,  PES  dan  AG dengan masing-masing perlakuan memiliki  ulangan  sebanyak  10  kali, sehingga  terdapat  40  satuan  percobaan. Percobaan  ini  dilaksanakan  dengan menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL). Analisis Data Analisis varians (Anova)
dilakukan  untuk  mengetahui  pengaruh media  terhadap  jumlah  eksplan  yang hidup, jumlah thallus yang tumbuh, dan panjang  thallus  pada  jaringan  eksplan rumput  laut, G.  verrucosa dengan selang  kepercayaan  95%  dan  99% (Gaspersz,  1994).  Jika    terdapat perbedaan  antar  perlakuan  dilanjutkan dengan uji BNT.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Berdasarkan analisis varians (Anova)  menunjukan  bahwa  perlakuan media berbeda yaitu media SSW, media PES,  media  AG  dan  media  CW memberikan  pengaruh  yang  sangat nyata  terhadap  jumlah  thallus  yang tumbuh  disajikan  pada  tabel  1  berikut ini.
Tabel 1. Pengaruh media kultur berbeda terhadap jumlah titik tumbuh (thallus) eksplan rumput laut, G. verrucosa akhir penelitian umur 6 minggu Ulangan Perlakuan SSW CW PES AG 1 4,2 0,7 1,6 0,5 2 4,5 0,5 0,7 0,4 3 4,4 0,7 0,8 0 4 2,6 0 0,6 0,3 5 3,7 0 0,2 0,5 6 3,5 0 1,4 0,4 7 3,5 0,5 2,9 0 8 3,5 0 1,2 0,4 9 3,4 0,6 2,6 1,0 10 4,2 0 0,3 0 Total 37,5 3,0 12,3 3,5 Rata-rata 3,75 0,30 1,23 0,35 Hasil analisis ragam menunjukan  bahwa  perlakuan  media kultur  memberi  pengaruh  yang  sangat nyata  (P<0,01)  terhadap  jumlah  titik tumbuh  eksplan  rumput  laut, G. verrucosa .
Tabel  2.  Perbedaan  antar  perlakuan  terhadap  jumlah  titik  tumbuh  (thallus)  eksplan rumput laut, G. verrucosa akhir penelitian umur 6 minggu  berdasarkan uji
BNT
Perlakuan Rata-rata Beda dengan BNT SSW PES AG CW 0,05 0,01 SSW 3,75 0,5426 0,7260 PES 1,23 2,52** AG 0,35 3,40**  0,88** CW 0,30 3,45**  0,93** 0,05 tn
tn   = tidak berbeda nyata pada taraf 0,05 *    = berbeda nyata pada taraf 0,05 **  = berbeda sangat nyata pada taraf 0,01
Hasil uji BNT di atas
menunjukkan  bahwa  perlakuan  media SSW  berbeda  sangat  nyata  (P<0,01) dengan  media  PES,  AG,  dan  CW. Perlakuan  media  PES  berbeda  sangat nyata  (P<0,01)  dengan  media  AG  dan
CW. Perlakuan media AG tidak berbeda nyata (P>0,05) dengan media CW.
Kualitas Air dan Cahaya Hasil uji kualitas air menunjukan  bahwa  kualitas  air  media kultur  adalah  sesuai  untuk  menunjang pertumbuhan  eksplan  rumput  laut, G. verrucosa . Demikian pula untuk intensitas  cahaya  yang  digunakan, adalah sesuai untuk menunjang pertumbuhan  eksplan  rumput  laut  yang dibudidayakan secara in vitro .
Tabel  3.  Data kimia kualitas air dan intensitas cahaya
Kandungan Media SSW PES AG CW Amoniak (mg/L) 0,0547 0,0486 0,0500 0,0955 Nitrat (mg/L) 0,2610 0,9124 0,8097 1,2915 Nitrit (mg/L) 0,0103 0,5150 0,0798 0,1909 Phospat (mg/L) 0,0250 0,5841 0,3738 2,1543 Intensitas Cahaya (lux) 1500 1500 1500 1500 Sumber: Data primer yang diolah

## PEMBAHASAN
Jumlah  thallus  yang  tumbuh pada  masing-masing  eksplan  rumput laut ( G. verrucosa ) dihitung
berdasarkan  banyaknya  titik  tumbuh yang muncul untuk setiap eksplan yang dikultur  secara in  vitro .  Adapun  dari hasil  pengamatan  menunjukan  waktu pertama  kali  muncul  titik  tumbuh  pada eksplan  yang  dikultur,  yaitu  saat berumur 12 hari pemeliharaan secara in vitro .
Berdasarkan  hasil  pengamatan, jumlah  tunas  yang  muncul  dipengaruhi oleh  banyaknya  eksplan  yang  mampu bertahan hidup. Semakin banyak jumlah eksplan mengakibatkan semakin banyak jumlah  titik  tumbuh.  Jumlah  rata-rata thallus  untuk  setiap  eksplan  pada  akhir penelitian  yaitu  umur  6  minggu  adalah SSW (3,75 mata tunas), PES (1,23 mata tunas),  AG  (0,35  mata  tunas),  dan  CW (0,30 mata tunas).
Perlakuan media SSW
memperlihatkan jumlah thallus tertinggi (3,75).  Hal  ini  disebabkan  karena  di dalam  media  SSW  terdapat  kandungan mikroelemen  essensial  yang  komplit dan  komposisi  yang  optimal  memenuhi kebutuhan  eksplan  rumput  laut, G. verrucosa
sehingga merangsang munculnya titik tumbuh. Sesuai dengan pendapat Kuncoro (2005) bahwa mikroelemen,  mikronutrien,  ataupun trace  elemen,  merupakan  zat  yang diperlukan  oleh  rumput  laut  dalam kadar  yang  sangat  sedikit.  Keberadaan mikroelemen  essensial  tidak  dapat
diabaikan  walaupun  jumlahnya  sangat kecil  karena  berkaitan  erat  dengan kemampuan  regenerasi  sel,  sedangkan dalam  jumlah  yang  besar  akan  bersifat racun. Salah satu mikroelemen essensial di  dalam  media  SSW  adalah  unsur  besi (Fe),  yang  diduga  jumlahnya  sudah optimal  merangsang  munculnya  titik tumbuh  bagi  eksplan  rumput  laut, G.
verrucosa .  Hal  ini  didukung  oleh pendapat Lakitan (1993) yang menyatakan  bahwa  besi  adalah  unsur hara  essensial  sebagai  bagian  dari enzim-enzim  yang  berfungsi  sebagai pembawa elektron pada fotosintesis dan respirasi.
Kualitas Air dan Intensitas Cahaya Hasil uji kualitas air menunjukan kandungan nitrat dan fosfat yang  mencukupi  untuk  menunjang pertumbuhan  eksplan  rumput  laut, G. verrucosa . Chu (1963 dalam Malingkas 2005)  menyatakan    bahwa  setiap  alga mempunyai  kebutuhan  nitrogen  yang berlainan untuk pertumbuhan
optimumnya, dimana pertumbuhan optimum pada konsentrasi nitrat 0.9-3.5 ppm.  Pada  konsentrasi  0.1  ppm  ke bawah  pengaruh  pembatasan  nitrogen terjadi,  sedangkan  45  ppm  ke  atas pengaruh penghambatan mulai nampak.
Kuncoro  (2005)  menyatakan kandungan fosfat 0.05 mg/L merupakan batas  terendah  bagi  lingkungan in  vitro untuk  organisme  karena  fosfat  yang mengandung  fosfor  dan  oksigen  juga sangat diperlukan bagi organisme hidup.  Menurut  Nugroho  (2004)  bahwa
fosfor berperan sebagai komponen ATP dan asam nukleat.
Kuncoro  (2005)  menyatakan hasil  akhir  produksi  protein  adalah amonium  (NH 4 ).  Adapun  perubahan NH 4 menjadi  NH 3 (amoniak)  melalui reaksi sebagai berikut:
NH 4 + + OH - NH 3 + H 2 O ion      ion hidroksi amoniak  air Nitrat  tidak  sebahaya  nitrit maupun amoniak, sehingga   kandungan nitrit  dan  amoniak  harus  lebih  rendah. Menurut  Nugroho  (2004)  bahwa  nitrat berguna sebagai penyusun asam amino, protein, dan asam nukleat.
Intensitas cahaya yang digunakan dalam penelitian adalah 1500 lux karena  intensitas cahaya ini dianggap paling sesuai untuk menunjang  pertumbuhan  eksplan G. verrucosa , sebab pada intensitas cahaya 1500 lux energi cahaya yang diabsorbsi berada  pada  tingkat  optimal  untuk mendukung pertumbuhan panjang tunas yang  terbaik  (Fatanah,  1995 dalam Malingkas 2002).

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian tentang  kultur in  vitro jaringan  rumput laut, G.  verrucosa di  media  berbeda (media  Steril  Sea  Water/SSW  25  ppt, media  Prevasoli  ES  Medium/PES, media Agrodyke/AG, dan media
Conwy/CW) terhadap pertumbuhan optimal  bagi  kemunculan  titik  tumbuh
(pertumbuhan  thallus)  eksplan  rumput laut, G.  verrucosa ialah  media  SSW (3,75  mata  tunas)  yang  dikultur  secara in vitro diikuti berturut-turut oleh media PES  (1,23  mata  tunas),  AG  (0,35  mata tunas), dan CW (0,30 mata tunas).
Dalam  kultur  jaringan  rumput  laut, G.  verrucosa terhadap  kelangsungan hidup  eksplan  dan  pertumbuhan  thallus secara
in vitro ,
disarankan menggunakan  media  SSW  25  ppt  yang
secara  umum  sesuai  bagi  eksplan rumput  laut, G.  verrucosa .  Selain  itu, media SSW lebih mudah untuk diperoleh. Perlu  diteliti  mengenai  kandungan unsur  di  dalam  media  PES  yang  paling spesifik merangsang perpanjangan thallus untuk ditambahkan dalam memperkaya    nutrien  media  SSW, sehingga  akan  didapatkan  hasil  yang lebih  optimal  pada  penggunaan  media SSW 25 ppt.

## DAFTAR PUSTAKA
Akbar,  S.,  Kurnia,  B  dan  Istiqomah. 2001. Kandungan dan Kegunaan Rumput  Laut.  Balai  Budidaya Laut Lampung. 42 hlm.
Amini,  S  dan  Parenrengi,  A.  1995. Pengaruh  Variasi  Komposisi Pupuk  terhadap  Pertumbuhan Rumput  Laut Eucheuma  cotonii
pada  Kultur In  Vitro .  Jurnal Penelitian  Perikanan  Indonesia 1(3):47-53. Anggadiredja, J.T., Zatnika, A., Purwoto,  H  dan  Istini,  S.  2006. Rumput Laut. Penebar Swadaya.
Jakarta. 147 hlm.
Ditjen  Perikanan  Budidaya.  2005. Petunjuk  Pengendalian  Penyakit Ice-Ice  pada  Budidaya  Rumput Laut. DKP. Jakarta. 11 hlm.
Doty,  M.  S.  2000.  The  Production  an Use Eucheuma .  Department  of Botany  University  of    Hawaii Honolulu. Hawai. 45 pp.
Dwidjoseputro,  D.  1994.  Dasar-Dasar
Mikrobiologi. Penerbit Djambatan. Jakarta.
Effendi, I. 2004. Pengantar Akuakultur.
Penebar  Swadaya.  Jakarta.  188 hlm. Fadhillah,  S.  N  dan  Suryana,  I.  2005. Laporan  PKL  di BRPBAP Kabupaten Maros Sulawesi Selatan. Universitas Mulawarman.  Samarinda.  Hal 13. Gaspersz, V. 1994. Metode Perancangan  Percobaan.  (Untuk Ilmu-Ilmu  Pertanian,  Ilmu-Ilmu Teknik dan Biologi). CV Armico. Bandung. 623 hlm.
Gunawan,  L.  W.  1987.  Teknik  Kultur
Jaringan.  Laboratorium  Kultur Jaringan  Tanaman.  Pusat  Antar Universitas  (PAU)  Bioteknologi IPB. Bogor. 163 hlm. Gunawan, L. W. 1994. Teknik Kultur In Vitro Dalam Hortikultura. Penebar  Swadaya.  Jakarta.  115 hlm. Hadioetomo,  R.  S.  1985  Mikrobiologi Dasar  Dalam  Praktek.  Teknik dan Prosedur Dasar Laboratorium. Gramedia. Jakarta. 103 hlm. Hendaryono,  Daisy  P.  Sriyanti  dan Wijayani,  A.  1994.  Teknik Kultur Jaringan. Kanisius.
Yogyakarta. 137 hlm.
Kuncoro,  E.  B.  2004.  Akuarium  Laut. Kanisius. Yogyakarta. 227 hlm.
Lakitan,  Benyamin.  2000.  Dasar-Dasar Fisiologi  Tumbuhan.  Rajawali
Pers. Jakarta. 203 hlm.
Lee,  R.  E.  1980.  Phycology.  In
Handbook on Commercial
Seaweeds: Cultivation and Processing  Part  II.  Yellow  Sea Fisheries Research Institute China. IDRC. Canada. 309 pp. Liao, I.C., H. M. Su and J.H. Lin. 1983 Larvae foods for Penaeid Prawns. In M.C. Vey J. P and J. R  Moore  (eds)  CRC  Handbook of Mariculture, Crustacean Aquaculture.  Volume  I.  CRT Press  Inc.  Boca  Raton.  Florida. pp 43-69. Malingkas, R. 2002. Perbanyakan Benih Rumput Laut Gracilaria verrucosa (H)  Papenfus  Melalui Kultur In  Vitro pada  Berbagai Media  Kultur  serta  Aplikasinya. Tesis. Program Pascasarjana Sistem-Sistem Pertanian. Universitas  Hasanudin.  Ujung Pandang. 83 Hal. Nugroho,  A  dan  Sugito,  H.  1996. Teknik Kultur Jaringan. Penebar Swadaya. Jakarta. 71 hlm. Nugroho,  L.  H  dan  Sumardi,  I.  2004. Biologi Dasar. Penebar Swadaya. Jakarta. 144 hlm. Parenrengi,  A  dan  Amini,  S.  1994. Kultur  Rumput  Laut Gracilaria verrucosa Secara In  Vitro pada Bebagai Panjang Eksplan. Jurnal Penelitian Budidaya Pantai 1(2):29-33. Parenrengi,  A  dan  Sulaeman.  2004. Mengenal Rumput Laut, Kappaphycus alvarezii . Makalah BRPBAP Maros. Sulawesi Selatan. 11 Hal. Poncomulyo,  T.,  Maryani,  H  dan Kristiani, L. 2006. Budidaya dan Pengolahan Rumput Laut.
Agromedia  Pustaka.  Jakarta.  67 hlm.
Rosmiati,  Suryati,  E  dan  Tenriulo,  A. 2005.  Sterilisasi  Eksplan  pada
Kultur  Jaringan  Rumput  Laut Kappaphycus alvarezii . Makalah BRPBAP Maros. Sulawesi Selatan. 9 hlm. Suryati,  E.,  Rosmiati.,  Parenrengi.,  A dan  Tenriulo,  A.  2007.  Kultur Jaringan Rumput Laut ( Gracilaria  sp )  dari  Sumber Tallus  yang  Berbeda  Lokasi. Jurnal Riset Akuakultur 2(2):143-147. Suryati,  E.,  Sulaeman.,  Parenrengi,  A dan  Rosmiati.  2005.  Teknik Perbanyakan Benih Rumput Laut, Gracillaria verrucosa Melalui  Teknik  Kultur  Jaringan. BRPBAP Maros. Sulawesi Selatan. 28 hlm.
Susanto,  A.  B.,  dan  A.  Mucktiany.
2004.  Studi  Kasus  Budidaya Gracilaria di  Bekasi.  (Makalah disampaikan pada Forum Rumput Laut Nasional di Mataram-NTB  pada  tanggal  29 Juni-1 Juli 2004). 10 hlm. Winarno,  F.  G.  1990.  Teknologi Pengolahan Rumput Laut. Pustaka  Sinar  Harapan.  Jakarta. 112 hlm. Welsh,  J.  R.  1991. Dasar-Dasar Genetika dan Pemuliaan Tanaman. (Terjemahan J.P Mogea).  Erlangga.  Jakarta.  Hal 206-207. Yusnita.  2003.  Kultur  Jaringan.  Cara Memperbanyak Tanaman Secara Efisien. Agromedia Pustaka.
Jakarta. 80 hlm.