## ABSTRAK
Penuaan  merupakan  proses  alami  yang  terjadi  pada  semua  mahluk  hidup,  termasuk manusia. Salah satu bentuk terjadinya penuaan adalah terbentuknya wrinkle (kerutan) pada kulit akibat berkurangnya aktivitas enzim elastase. Aktivitas enzim elastase dapat dihambat oleh  senyawa  golongan  flavonoid  dan  fenolik.  Salah  satu  tanaman  asli  Indonesia  yang diketahui  memiliki  kandungan  flavonoid  dan  fenolik  adalah  tanaman  zodia  ( Evodia suaveolens )  dari  familia Rutaceae .  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas antioksidan dan anti- aging dari ekstrak etanol buah dan daun zodia. Ekstrak buah dan daun zodia dibuat secara refluks menggunakan pelarut etanol 96%. Ekstrak yang diperoleh ditapis golongan  fitokimia,  ditentukan  aktivitas  antioksidan  dengan  metode  2,2-difenil-1- pikrilhidrazil  (DPPH)  dan  uji  aktivitas  anti  elastase  sebagai  anti-penuaan . Hasil  penapisan fitokimia  terhadap  ekstrak  buah  dan  daun  zodia  menunjukan  adanya  senyawa  flavonoid, saponin,  tanin  katekuat,  steroid,  dan  minyak  atsiri.  Hasil  uji  aktivitas  antioksidan  dengan metode  peredaman  DPPH  diperoleh  IC 50 dari  ekstrak  daun  zodia,  yang  lebih  besar  dari ekstrak buah zodia sebesar 264,15 ppm dan 121,59 ppm. Aktivitas antielastase dilanjutkan terhadap ekstrak buah zodia dan didapat nilai IC 50 sebesar 145,67 ppm. Senyawa fitokimia yang terkandung di dalam buah zodia diperkirakan sebagai metabolit yang berperan sebagai antioksidan dan anti-penuaan.

## ABSTRACT
Aging is a natural process that occurs in every living organism, including humans. Skin wrinkle, caused by deterioration activity of the elastase enzyme, is one example of the aging process.  The  activity  of  the  elastase  enzyme could  be  inhibited  by  flavonoid  and  phenolic compounds. Zodia (Evodia suaveolens) from the family of Rutaceae is one of the indigenous Indonesian plants widely known as rich in flavonoid and phenolic compounds. The purpose of this study is to explore antioxidant and anti-aging activity from ethanolic extract of fruit and leaf Zodia. The extracts were prepared by refluxing fruit and leaf zodia in 96% ethanol. The  obtained  extracts  were  characterized  for  the  phytochemical  constituent  and  its antioxidant  activity  determined  using the  2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl method  as well  as anti-elastase  activity  for  anti-aging  evaluation.  Phytochemical  analysis  of  both  samples showed  the  presence  of  flavonoids,  saponins,  tannins,  steroids  and  essential  oils.  The calculation  of  IC 50 in  antioxidant  activity  using  the  DPPH  method  showed  that  ethanolic extract of zodia leaf (264.15 ppm) was higher compared to fruit extract (121.59 ppm). The fruit  extract  was  further  tested  for  anti  elastase  activity  with  IC 50 of  145.67  ppm.  In conclusion,  the  presence  of  phytochemicals  in  zodia  fruit  may  be  responsible  for  the antioxidant and anti-aging activities.
Penulis
Greesty F. Swandiny 1  , Yesi Desmiaty 1 , Haura Usna Rahmah 1
Afiliasi 1 Fakultas Farmasi Universitas Pancasila
Aktivitas Antioksidan dan Anti- aging dari Ekstrak Buah dan Daun Zodia ( Evodia suaveolens J.R. Forst & G. Forst)
Antioxidant and Anti-aging Activities from Zodia (Evodia suaveolens J.R. Forst & G. Forst ) Fruit and Leaf Extract
Kata Kunci  antioksidan
 anti elastase
 Evodia suaveolens
Keywords  antioxidants
 anti elastases
 Evodia suaveolens

## Diterima 3 Maret 2020
Direvisi 19 Februari 2022
Disetujui 13 Mei 2022

## *Penulis Koresponding
Greesty F. Swandiny email: greestyfinotory@univpanc asila.ac.id

## PENDAHULUAN
Penggunaan  tanaman  sebagai  obat  herbal  dan kosmetik  yang  terus  meningkat,  berdampak  pada industri  obat  dan  kosmetik  bahan  alam  yang  terus berkembang  (Moeloek,2006).  Banyak  tanaman  hasil eksploitasi  dari  hutan  yang  diuji  dan  memiliki  aktivitas biologi  akhirnya  dibudidayakan,  dipanen  dan  diekspor ke luar Indonesia sebagai bahan baku obat bahan alam dan kosmetik alami (Pribadi,2009).
Salah  satu  aktivitas  biologi  penting  adalah  sifat sebagai  antioksidan  dari  tanaman  obat  yang  dapat digunakan  untuk  mengurangi  stress  oksidatif  yang disebabkan oleh paparan radikal bebas. Stress oksidatif merupakan keadaan kerika radikal bebas di dalam tubuh melebihi kapasitas tubuh untuk menetralkannya. Korac dan  Khambholja  (2011)  menyatakan  bahwa  ekstrak yang  memiliki  akitivitas  antioksidan  dapat  bekerja sebagai agen pelindung dari paparan sinar Ultra-Violet (UV),  sehingga  penuaan  ekstrinsik  dapat  dihindari. Polifenol,  sebagai  salah  satu  antioksidan  kuat merupakan  senyawa  kimia  dengan  banyak  gugus hidroksi  (-OH)  yang  dalam  konsentrasi  kecil  mampu mencegah  oksidasi  substrat.  Radikal  bebas  terbukti sangat  berpengaruh  terhadap  kerusakan  serat  elastin yang  menyebabkan  penurunan  elastisitas  kulit (Weihermann et al ., 2017).
Degradasi elastin oleh enzim elastase menyebabkan penurunan elastisitas kulit. Elastin, yaitu sebuah protein pada kulit dan jaringan tubuh yang menjaga kulit tetap fleksibel  dan  kencang  bersama-sama  dengan  kolagen. Elastin  memberikan  kesan  elastis  sedangkan  kolagen bertugas  memberikan  kesan  kaku  pada  jaringan  ikat. Enzim elastase merupakan enzim protease yang dapat berkerja  mendegradasi  elastin  di  kulit  oleh  adanya paparan  sinar  UV.  Beberapa  penelitian  menunjukkan bahwa  kosmetik anti-aging dengan  efek anti-wrinke berhubungan dengan penurunan aktivitas anti elastase, dimana  aktivitas  anti  elastase  akan  menurunkan degradasi elastin sehingga elastisitas kulit terjaga (Moon JY, 2010).
Tumbuhan  suku Rutaceae telah  sering  digunakan dalam pengobatan tradisional masyarakat Papua. Salah satu tanaman yang sering digunakan dari suku Rutaceae adalah  zodia  ( Evodia  suaveolens )  yang  digunakan sebagai  repelant  nyamuk  dan  penghilang  bau  badan. Dalam  penelitian  Kardinan  (2004)  zodia  mengandung evodiamin,  linalool  (46%),  α -pinena  (13,26%)  dan rutaekarpin. Tanaman zodia juga telah diuji toksisitasnya menggunakan Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) dengan nilai LC 50 sebesar 131,34 ppm (Lestari MS, 2015).  Kandungan  polifenol  sebagai  salah  satu
antioksidan  bersifat  kuat  diperkirakan  berperan  dalam penghambatan degradasi elastin di kulit.
Tanaman  yang  memiliki  kandungan  polifenol (antioksidan)  yang  tinggi  dapat  berpotensi  digunakan sebagai  bahan  baku  kosmetika,  terutama  kosmetika pencegah  kerutan  ( anti-wrinkle ).  Berdasarkan  hal tersebut  dilakukan  penelitian  yang  bertujuan  untuk mengetahui potensi ekstrak etanol 96% daun dan buah zodia  sebagai  antioksidan  dengan  menggunakan metode DPPH dan anti elastase secara in-vitro .

## METODE Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah simplisia buah dan daun tanaman zodia, etanol 96%, aquadest, 1,1-difenil-2-pikrihidrazin (DPPH) (Sigma D9132),  Vitamin  C  pro  analisis  (ASEAN  reference standart  I103122),  amonia,  kloroform,  asam  klorida, eter,  asam  asetat  anhidrat,  asam  sulfat,  serbuk megnesium, asam klorida, amil alkohol, besi (III) klorida, formaldehida,  natrium  asetat,  natrium  hidroksida, petroleum  eter,  alkohol,  metanol  proanalisis,  pereaksi Tris  (Sigma  T1503), Elastase  from  porcine  pancreas (Sigma E1250), substrat  SANA (N-  Succinyl-(Alanin)3- p - nitroanilide) (Sigma 54700).

## Metode Persiapan Bahan
Simplisia  daun  dan  buah  tanaman  zodia  ( Evodia suaveolens J.  R.  Forst  &  G.  Forst.)  diperoleh  dari BALITTRO (Balai Penelitian Tanaman Rempah dan Obat), Bogor,  Jawa  Barat.  Determinasi  dilakukan  di  Pusat Penelitian Biologi Herbarium Bogoriense, Bidang Botani, LIPI-Cibinong, Bogor.

## Pembuatan Ekstrak
Sebanyak  250  g  simplisia  daun  dan  buah  zodia masing-masing  di  ekstraksi  dengan  metode  refluks menggunakan pelarut etanol 96% dengan menggunakan labu alas bulat ukuran 1 L selama 60 menit. Setelah 60 menit,  maserat  disaring  dengan  kertas  saring,  dan dipekatkan  dengan  rotavapor  pada  suhu  40  ºC  dan tekanan 175 mbar hingga didapat ekstrak kental etanol 96%.

## Skrining Fitokimia
Skrining  fitokimia  dilakukan  untuk  mengetahui kandungan  golongan  senyawa  alkaloid,  flavonoid, saponin,  tannin,  kuinon,  steroid,  minyak  atsisi  dan kumarin.  Keberadaan  senyawa  alkaloid  dideteksi dengan  pereaksi  Dragendorf  dan  Mayer,  golongan flavonoid  menggunakan  pereaksi  Shinoda,  saponin
menggunakan  uji  buih,  tannin  menggunakan  pereaksi Stiassny, kuinon menggunakan NaOH, steroid menggunakan  Lieberman-Burchard,  minyak  atsiri  dan kumarin dengan pereaksi amonia (Harborne, 1987).
Uji Aktivitas Antioksidan Metode DPPH dan IC 50 Uji  aktivitas  antioksidan  dilakukan  berdasarkan Artanti  et  al.  (2016).  Ekstrak  daun  dan  buah  zodia dengan  konsentrasi masing-masing  100,  200,  300,  400 dan  500  ppm  diuji  aktivitas  antioksidan  menggunakan metode  DPPH.  Vitamin  C  digunakan  sebagai  standar positif  dan  pengujian  dilakukan  tiga  kali  pengulangan (triplo). Nilai yang diperoleh pada saat aktivitas sebesar 50% ditentukan sebagai nilai IC 50 .

## Uji Aktivitas Anti Elastase
Pengujian aktivitas anti elastase dilakukan berdasarkan metode yang telah dilakukan oleh Thring et al.  (2009).  Konsentrasi  daun  zodia  yang  digunakan dalam uji aktivitas anti elastase adalah 6,25; 12,5; 25; 50 dan  100  ppm,  sedangkan  untuk  buah  zodia  adalah 18,75;  37,5;  75;  150  dan  300  ppm. Epigalocatechin gallate (EGCG)  digunakan  sebagai  kontrol  positif. Pengujian  dilakukan  menggunakan  96  well  plate.  Tiap sumuran  diisi  dengan  20  µL  larutan  enzim  elastase (konsentrasi  200  µg/mL)  dan  ditambahkan  10  µL sampel. Setelah diinkubasi selama 15 menit pada suhu ruang,  10  µL  substrat N-Succinyl-Ala-Ala-Ala-p- nitroanilide ditambahkan  dan  inkubasi  dilanjutkan kembali  selama  20  menit.  Pembacaan  aktivitas dilakukan  dengan  menggunakan  ELISA  reader  pada panjang gelombang 405 nm sebagai absorbsi pelepasan para -nitroanilin.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Determinasi Tanaman
Hasil determinasi simplisia di laboratorium Herbarium  Bogoriense  menunjukkan  bahwa  simplisa merupakan tanaman Evodia suaveolens J. R. Forst & G. Forst dari suku Rutaceae .

## Hasil Ekstraksi
Ekstraksi  senyawa  pada  daun  dan  buah  zodia dilakukan  dengan  menggunakan  pelarut  96%  etanol dikarenakan  sifatnya  yang  mampu  menarik  senyawa- senyawa bioaktif golongan alkaloid, flavonoid, tanin dan polifenol.  Rendemen  ekstraksi  yang  diperoleh  untuk daun  zodia  sebesar  11.17%  (24.9  g)  dan  buah  zodia sebesar 12.06% (30.2 g).

## Penapisan Fitokimia
Penapisan  fitokimia  pada  ekstrak  kental  daun  dan buah zodia menunjukkan tidak ada perbedaan golongan senyawa yang terkandung didalamnya ketika diekstraksi dengan  menggunakan  pelarut  96%  etanol.  Hasil penapisan fitokimia menunjukkan bahwa ekstrak kental daun  dan  buah  zodia  mengandung  alkaloid,  flavonoid, saponin, tanin katekuat, steroid dan minyak atsiri ( Tabel 1 ), identik dengan penelitian yang telah dilaporkan oleh Mutakin et al . (2021).
Aktivitas Antioksida n
Aktivitas antioksidan dengan menggunakan metode penghambatan  radikal  bebas  DPPH  menunjukkan
Tabel 1. Kandungan Fitokimia
Penapisan Ekstrak Etanol 96% Daun Buah Alkaloid - - Flavonoid + + Saponin + + Tanin katekuat + + Tanin galat - - Kuinon - - Steroid + + Triterpenoid - - Minyak atsiri + +
Keterangan: Terdeteksi (+) dan Tidak terdeteksi (-)
bahwa  nilai  IC 50 ekstrak  kental  etanol  96%  buah  zodia memiliki aktivitas antioksidan yang lebih tinggi dari daun zodia (Tabel  2 ).  Nilai  IC 50 merupakan  nilai  yang menunjukkan  kemampuan  penghambatan  50%  radikal bebas oleh suatu konsentrasi sampel. Semakin kecil nilai IC 50 menunjukkan  semakin  tinggi  aktivitas  antioksidan. Aktivitas  antioksidan  dari  suatu  senyawa  dapat digolongkan berdasarkan nilai IC 50 yang diperoleh. Nilai IC 50 dibedakan menjadi sangat kuat (IC 50 < 50 ppm), kuat (IC 50 50 -100 ppm), sedang (IC 50 100 -150 ppm), lemah (IC 50 150 -200 ppm) dan sangat lemah (IC 50 > 200 ppm) (Molyneux, 2004).
Ekstrak  buah  zodia  merupakan  esktrak  yang  lebih aktif  dibandingkan  daun  zodia,  sehingga  yang dilanjutkan  untuk  uji  aktivitas  anti  elastase  hanya ekstrak buah zodia. Hal tersebut didasarkan pada hasil uji  aktivitas  antioksidan  dan  penapisan  fitokimia. Meskipun ekstrak kental daun dan buah zodia memiliki kandungan  golongan  kimia  yang  sama,  akan  tetapi konsentrasi  yang  terdapat  pada  ekstrak  daun  zodia memiliki kadar yang lebih rendah yang ditunjukkan oleh lemahnya intensitas warna pada uji kadar flavonoid.
Kandungan flavonoid dengan intensitas warna yang tinggi  menunjukkan  kadar  flavonoid  tinggi  di  dalam buah zodia. Flavonoid merupakan senyawa fenolik yang diketahui  memiliki  beberapa  aktivitas  biologis,  salah satunya  adalah  sebagai  antioksidan  (Panche et  al ., 2016). Sebagai antioksidan, flavonoid dapat menangkap radikal  bebas  yang  dapat  merusak  sel  tubuh  (Pietta, 2000).  Radikal  bebas  merupakan  hasil  samping  proses metabolisme  normal  yang  dapat  melibatkan  oksigen, seperti  senyawa  oksigen  reaktif  (SOR)  dan  senyawa nitrogen  reaktif  (SNR).  Reaktivitas  SOR  dan  SNR disebabkan adanya elektron tidak berpasangan (radikal) pada  molekulnya  sehingga  dapat  menarik  elektron- elektron molekul lain disekitar senyawa radikal tersebut. Akumulasi SOR dan SNR dalam jumlah yang tidak wajar didalam  tubuh  akan  mengakibatkan oxidative  stress yang  dapat  menyebabkan  kerusakan  sel,  gangguan fungsi  sel,  bahkan  kematian  sel  (Trachootham et  al ., 2009).  Molekul  penting  di  dalam  tubuh  yang  rentan dirusak  oleh  radikal  bebas  yaitu deoxyribonucleic  acid (DNA), lemak, dan protein (Shukla et al ., 2011).

## Aktivitas Anti Elastase
Ekstrak  buah  zodia  yang  memiliki  aktivitas antioksidan  selanjutnya  dilakukan  uji  aktivitas  anti elastase secara in-vitro .  Hasil  uji  aktivitas  anti-elastase terhadap kontrol positif EGCG dan ekstrak kental etanol 96% buah zodia menunjukkan bahwa ekstrak buah zodia memiliki  IC 50 sebesar  145,67  ±  15,53  ppm  jauh  lebih rendah  dibandingkan  kontrol  positif  EGCG  dengan  IC 50 4,41 ± 0,18 ppm.
Penuaan  atau aging merupakan  salah  satu  proses alami yang terjadi, telah lama diyakini bahwa salah satu penyebab penuaan adalah akibat akumulasi kerusakan sel oleh radikal bebas (Harman, 1950; Stadtman, 1992; Kirkwood dan Kowald, 2012). Dari hasil uji antioksidan dan  anti  elastase  terdapat  korelasi  dimana  buah  zodia dengan aktivitas antioksidan yang lemah juga memiliki aktivitas anti elastase yang rendah.

## SIMPULAN
Hasil uji aktivitas antioksidan dengan menggunakan metode  penghambatan  DPPH  menunjukkan  bahwa ekstrak kental etanol 96% daun dan buah zodia memiliki aktivitas  sebagai  antioksidan.  Uji  aktivitas anti-aging secara in-vitro dengan  menggunakan  enzim  elastase terhadap  ekstrak  buah  zodia  menunjukkan  bahwa ekstrak tersebut memiliki aktivitas yang lemah sebagai anti elastase.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Kami mengucapkan terima kasih kepada laboratorium  Fakultas  Farmasi  Universitas  Pancasila untuk  fasilitas  yang  telah  diberikan  selama  penelitian berlangsung.

## DAFTAR PUSTAKA
Artanti N, Maryani F, Mulyani H, Dewi RT, Saraswati V, Murniasih  T.  2016.  Bioactivities  Screening  of Indonesian  Marine  Bacteria  Isolated  from  Sponges. Annales Bogoriensis. 20(1): 23-28
Harborne  JB.  1987.  Metode  fitokimia  penuntun  cara modern menganalisis tumbuhan. Edisi II. Diterjemahkan  oleh  Padmawinata  K.,  Soediro  I. Bandung: ITB; 1987.
Tabel 2. Aktivitas Antioksidan Daun dan Buah Zodia
Sampel IC 50 (ppm) Vitamin C 1,74 ± 0,04 Ekstrak kental 96% daun zodia 264.15 ± 8,04 Ekstrak kental 96% buah zodia 121,59 ± 2,37
Harman D. 1956. Aging: A Theory Based on Free Radical and Radiation Chemistry. J Gerontol. 11: 298-300. Kardinan  A.  2004.  Zodia  ( Evodia  suaveolens )  Tanaman Pengusir Nyamuk. Tabloid Sinar Tani, 23 Juni 2004. Kirkwood  TB  and  Kowald  A.  2012.  The  Free-Radical Theory  of  Aging  -  Older,  Wiser  and  Still  Alive: Modelling Positional Effects  of  The  Primary  Targets of ROS Reveals New Support. Bioassays. 34: 692-700. Korac  RR,  Khambholja  KM.  2011.  Potential  of  Herb  in Skin Protection from Ultraviolet Radiation. Pharmacognosy Reviews. 5(10): 164-173.
Lestari  MS,  Himawan  T,  Abadi  AL,  Retnowati  R.  2015. Toxicity and phytochemistry test of methanol extract of  several  plants  from  papua  using  Brine  Shrimp Lethality Test (BSLT). JOCPR. 7(4): 866-871
Moeloek  FA.  2006.  Herbal  Traditional  Medicine:
National perspective and policies in Indonesia. Jurnal Bahan Alam Indonesia. 5(1): 293-297.
Molyneux  P.  2004.  The  use  of  the  stable  free  radical diphenylpicrylhydrazyl (DPPH) for estimating antioxidant  activity.  Songklanakarin  J.  Sci.  Technol. 26(2): 211-219
Moon  JY,  Yim  EY,  Song  G,  et.al.  2010.  Screening  of elastase and tyrosinase  inhibitory activity from Jeju Island plants. EurAsia J BioSci. 4: 41-45.
Mutakin, Yunita W and Nikodemus TW. 2021. Isolation and Characterization of Chemical Compounds From n-Hexane Extract of Zodia ( Evodia suaveolens Scheff.)
Leaves.  Indonesian  Journal  of  Pharmaceutical Science and Technology. 8(2): 86-95.
Panche AN, Diwan AD and Chandra SR. 2016. Flavonoids: An Overview. Journal of Nutritional Sciences. 5(47): 1-15.
Pietta  Pier-Georgio.  2000.  Flavonoids  as  Antioxidant. Journal of Natural Products. 63: 1035-1042.
Pribadi  ER.  2009.  Pasokan  permintaan  tanaman  obat Indonesia serta arah penelitiannya dan perkembangannya. Perspektif. 8(1): 52-54.
Stadtman  ER.  1992.  Protein  oxidation  and  aging. Science. 257: 1220 – 1224.
Shukla V, Mishra SK and Pant HC. 2011. Oxidative Stress in Neurodegeneration. Advances in Pharmacological Sciences. 2011: 1-15
Thring  SA,  Hill  P,  and  Naughton  PD.  2009.  Anti- collagenase, anti-elastase, and anti- oxidant activities of extracts from 21 plants. BMC Complementary and Alternative Medicine. 9(27): 1-10.
Trachootham  D,  Alexandre  J  and  Huang  P.  2009. Targeting Cancer Cells by ROS-mediated Mechanisma:  A  Radical  Terapeutic  Approach? Nature Review Drug Discovery. 8: 579-591 Weihermann  AC,  Lorencini  M,  Brohem  CA  and  de Carvalho  M.  2017.  Elastin  Structure  and  Its Involvement in Photoageing. International Journal of Cosmetic Science. 39: 241-247