Pengaruh Pemberian Tablet Effervescent Mawar Merah ( Rosa damascena Mill.) terhadap Kadar Ureum Darah Tikus Putih ) Rattus norvegicus ) Galur Wistar yang Diinduksi Karbon Tetraklorida (CCl 4 )
Nurdiana*  , Aulia Chaya Kusuma*

## ABSTRAK
Karbontetraklorida adalah senyawa kimia organik volatil, yang dapat menyebabkan kerusakan jaringan, terutama pada hati dan ginjal.Telah diketahui pula bahwa antosianin pada bunga mawar merah memiliki sifat antioksidan.  Tujuan  penelitian  ini  untuk  mengetahui  pengaruh  tablet effervescent mawar  merah  ( Rosa damascenaMill .) terhadap kadar ureum darah tikus putih galur wistar ( Rattus norvegicus ) yang diinduksi oleh CCl 4 sebagai  penyebab  stres  oksidatif.  Penelitian  ini  merupakan  studi  eksperimental  laboratorium in  vivo pada  hewan  coba  tikus  Wistar  dengan post  test  only  control  group  design .  Hewan  coba  yang  digunakan adalah tikus jantan galur Wistar (n=25), dan kerusakan ginjal pada tikus diinduksi dengan pemberian CCl 4 secara intraperitoneal dengan dosis  0,36 ml/136 gBB/3hari. Tablet effervescent sebagai antioksidan (1,25 mg,  2,5mg,  5mg)  diberikan  melalui  oral  selama  14  hari.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  CCl 4 dapat menyebabkan peningkatan kadar ureum secara signifikan pada kelompok kontrol positif. Peningkatan ureum mengindikasikan  adanya  kerusakan  pada  ginjal  tikus.  Pemberian  tablet effervescent dapat  menurunkan kadar  ureum  darah  tikus  secara  signifikan  (p<0,05),  sehingga  dapat  disimpulkan  bahwa  pemberian  tablet effervescent mawar merah dapat melindungi ginjal dari stres oksidatif yang diakibatkan oleh CCl 4 .
Kata kunci: antosianin, CCl 4 , ureum darah, tablet effervescent , mawar merah.
Effect of Effervescent Tablet from Red Rose (Rosa damascena Mill. ) on Blood Ureum Level of Rat (Rattus norvegicus) Induced by Carbon Tetrachloride (CCl 4 )

## ABSTRACT
Carbon tetrachloride is a volatile organic compound, which can cause tissue damage, especially to the liver and kidneys. It is known that anthocyanin have antioxidative properties.  The aim of this study was to evaluate  the  effect  of  red  rose  effervescent  tablet  ( Rosa  damascena Mill.)  treatment  on  CCl 4 -induced oxidative  stres  and  nephrotoxicity  in  rats  using  blood  ureum  level  as  parameter.  This  study  was  an experimental  laboratory  with  post-test  only  controlled  group  design.  The  study  was  employed  male  rats (n=25), and nephrotoxicity was induced by intraperitoneal injection of CCl 4 0.36 ml/136 g BW/3 days. Rats were orally administered with the red rose effervescent tablet in many doses  (1.25 mg, 2.5 mg, 5 mg) for 14 days. The results showed that CCl 4 caused significant increasing blood ureum level on positive control group. The  pathological  evaluation  indicated  the  kidney  was  damage  by  CCl 4 .  The  red  rose  effervescent  tablet decreased  blood  ureum  level  compared  to  positive  control  group  (p<0,05).  Therefore,  the  red  rose effervescent tablet can protect the kidney against CCl 4.
Keywords: anthocyan, blood ureum level,CCl 4 , effervescent tablet, red rose.
* Program Studi Pendidikan Dokter, FKUB
 E-mail: farmakodes@gmail.com

## PENDAHULUAN
Ginjal  adalah  sepasang  organ  saluran kemih yang terletak di rongga retroperitoneal bagian  atas. 1 Fungsi  utama  ginjal  adalah untuk  membuang  sisa-sisa  metabolisme segera  setelah  tidak  diperlukan  lagi  oleh tubuh. 2 Ginjal  melakukan  fungsinya  yang paling  penting  dengan  cara  menyaring plasma  dan  memisahkan  zat  dan  filtrat dengan kecepatan yang bervariasi, bergantung  kebutuhan  tubuh.  Besar kecepatan  berbagai  zat  yang  “dibersihkan” dari  plasma  merupakan  cara  yang  berguna untuk  menghitung  efektivitas  ginjal  dalam mengeksresikan  berbagai  zat.  Beberapa  uji faal  ginjal  yang  sering  diperiksa  adalah pemeriksaan  klirens  kreatinin,  kreatinin  dan ureum  plasma. 1 Kreatinin  merupakan metabolit  dari creatine  phosphate ,  yang merupakan energi cadangan untuk regenerasi  ATP  dan  ditemukan  dalam jumlah  besar  di  otot  skelet  dan  hampir seluruhnya  dibersihkan  dari  tubuh  oleh filtrasi glomerulus. 2
Tanpa  disadari  dalam  tubuh  kita terbentuk  radikal  bebas  secara  terus menerus. 3 Tapi,  tubuh  juga  mempunyai mekanisme  yang  dapat  menetralisir  bahaya radikal  bebas  dengan  sistem  antioksidan. Peningkatan  produksi  radikal  bebas  dan stres  oksidatif  dapat  juga  disebabkan  oleh berbagai faktor seperti radiasi atau paparan logam  berat  dan  xenobiotik. 4 Hal  ini menyebabkan  timbulnya  berbagai  macam penyakit  dan  gangguan  pada  organ-organ tubuh.
5 Senyawa  CCl 4 diketahui sebagai  bahan kimia yang dapat menyebabkan hepatotoksik dan nefrotoksik. CCl 4 diaktifkan di hepar menjadi trichloromethyl (CCl 3* ) dan radikal trichloromethyl  peroxyl (CCl 3 O 2* )
yang menginisiasi terjadinya peroksidasi lipid pada  fosfolipid  membran  sel  dan menyebabkan  perubahan  fungsional  serta
morfologi  membran  sel,  menyebabkan akumulasi lipid-derived  oxidant sehingga terjadi  kerusakan  hepar. 6 Penelitian  secara in vitro dan in vivo menyatakan bahwa CCl 4 mempercepat  peroksidasi  lipid,  mengurangi NADPH  sitokrom  P450  renal,  dan mengurangi  rasio  glutation  (GSH/GSSG) pada  korteks  ginjal  seperti  halnya  pada mikrosomal dan mitokondria ginjal. 7
Selanjutnya,  jika  terjadi  kerusakan  ginjal yang  parah,  maka  akan  terjadi  kenaikan kreatinin  serum,  level  BUN  ( blood  urea nitrogen )  dan  penurunan  klirens  kreatinin dan ureum. 8
Di  era  global,  kehidupan  dengan aktivitas  fisik  berat,  serta  pengaruh lingkungan  akan  menyebabkan  radikal bebas  sulit  dihindari,  sehingga  perlu diusahakan untuk meningkatkan antioksidan di  dalam  tubuh.  Salah  satunya  adalah pigmen  antosianin  yang  terdapat  dalam bunga mawar.
Bunga  mawar  merupakan  flora  yang tumbuh  subur  di  Indonesia.  Hasil  penelitian terhadap bunga mawar yang segar maupun yang  telah  dipajang  selama  4-6  hari, ekstraknya  masih  berpotensi  digunakan sebagai  zat  pewarna  sekaligus  sebagai antioksidan.
9 Kandungan senyawa antioksidan  yang  tinggi    membuat  potensi pigmen  bunga  mawar  tidak  hanya  sebagai pewarna makanan, namun juga telah diolah menjadi  tablet effervescent yang  akhir-akhir ini digemari konsumen karena praktis, cepat disajikan dan dapat menjadi suplemen.
Berdasarkan  penjelasan  di  atas  maka perlu  dilakukan  studi  lebih  lanjut  mengenai efektivitas tablet effervescent ekstrak mawar merah  ( Rosa  damascena Mill.)  untuk memproteksi  ginjal  dari  radikal  bebas  yaitu CCl 4 dengan  melihat  kadar  kreatinin  darah tikus putih ( Rattus norvegicus ) galur Wistar. Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk mengetahui  pemberian  tablet effervescent ekstrak  mawar  merah  ( Rosa  damascena
Mill.)  peroral  mampu  memberikan  proteksi terhadap  ginjal  tikus  putih ) Rattus norvegicus )  galur  Wistar  yang  diinduksi karbon  tetraklorida  (CCl 4 )  dengan  kadar ureum  darah  sebagai  parameter.  Manfaat yang diharapkan adalah untuk meningkatkan nilai  guna  dan  nilai  ekonomi  dari  bunga mawar  merah  ( Rosa  damascena Mill.)  dan memberikan  alternatif  sebagai  suplemen alami yang lebih menyehatkan.

## BAHAN DAN METODE

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  dilakukan  di Laboratorium  Farmakologi  FKUB  dan laboratorium Kimia FKIP-UMM.

## Hewan Coba dan Kelompok Perlakuan
Hewan  coba  yang  digunakan  untuk penelitian ini adah tikus putih jantan (Rattus norvegicus) galur Wistar yang sehat berumur 6-8 minggu sebanyak 25 ekor. Hewan coba dibagi  dalam  5  kelompok  perlakuan,  yang masing-masing  terdiri  atas  5  ekor  tikus. Penelitian  dimulai  dengan  mengondisikan lingkungan  awal  bagi  tikus  selama  7  hari. Kemudian  tikus  dibagi  menjadi  kelompok kontrol  dan  kelompok  perlakuan.  Kelompok kontrol  terdiri dari kontrol  positif  dan kontrol negatif.Kelompok  kontrol  negatif  adalah kelompok  tikus  yang  hanya  diberi  diet normal.  Kelompok  kontrol  positif  adalah kelompok  tikus  yang  diberi  diet  normal  dan induksi  CCl 4 dengan  dosis  0,36  ml/136
gBB/3  hari.  Kelompok  perlakuan  adalah kelompok  yang  diberi  proteksi  tablet effervescent mawar  merah  lokal  ( Rosa damascena Mill.) dalam tiga dosis  yaitu P1 (1,25  mg),  P2  (2,5  mg),  dan  P3  (5  mg) secara oral, lalu diinduksi CCl 4 dengan dosis 0,36  ml/  136  g  BB/3  hari.  Perlakuan  ini dilakukan selama 14 hari.
Pemberian Tablet Effervescent Dosis  tablet  effervecent  ekstrak  mawar ( Rosa  damascena Mill.)  yang  diberikan secara  oral  pada  kelompok  perlakuan  P1, P2, dan P3 yaitu berturut-turut 1,25 mg, 2,5 mg, dan 5 mg.
Pemberian Karbon Tetraklorida (CCl 4 ) Sediaan  CCl 4 yang  diberikan  sebesar 0,18  ml/136gBB/3  hari  yang  dilakukan secara subkutan menggunakan spuit.

## Kadar Ureum
Kadar  ureum  adalah  jumlah  zat  sisa metabolisme  yang  terdapat  dalam  serum darah  yang  diukur    dengan  metode spektofotometri.

## Analisis Data
Hasil  data  dianalisis  secara  statistik dengan  taraf  keprcayaan  95%  (α=0,05). Metode analisis data menggunakan uji one- way ANOVA dan dilanjutkan dengan uji LSD untuk  mengetahui  kelompok  mana  yang berbeda secara signifikan.

## HASIL

## Gambar 1. Kadar ureum darah tikus pada kelompok kontrol dan perlakuan
Keterangan: Kontrol negatif K(-); Kontrol positif K(+) diberi CCl 4 0,36 ml/136 gBB/3 hari; P1 diberi ekstrak mawar merah 1,25 mg + CCl 4 0,36 ml/136 gBB/3 hari; P2 diberi ekstrak mawar merah 2,5 mg + CCl 4 0,36 ml/136 gBB/3 hari; P3 diberi ekstrak mawar merah 5 mg + CCl 4 0,36 ml/136 gBB/3 hari.
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa kadar  ureum  antar  kelompok  perlakuan berbeda  antara  satu  dengan  lainnya.  Kadar normal  ureum  darah  adalah  10-50  mg/dL, hal  ini  sesuai  dengan  kelompok  kontrol negatif  yang  menunjukkan  rata-rata  kadar ureum  sebesar  19,72  mg/dL.  Sementara pada  kelompok  kontrol  positif,  setelah diinduksi  oleh  CCl 4 dengan  dosis  0,18 ml/136  gBB/3  hari,  kadar  ureum  meningkat menjadi 51,08 mg/dL.
Pada  kelompok  P1,  P2,  dan  P3, pemberian  tablet effervescent mawar  merah menunjukkan  peranan  yang  berarti  dalam menurunkan  kadar  ureum  darah  tikus  putih galur  Wistar.  Kelompok  P1  dengan  dosis tablet effervescent mawar  merah  1,25  g/hr memberikan  kadar  ureum  rata-rata  sebesar 39,16  mg/dL.  Namun,  pada  P2,  pemberian dosis  tablet effervescent mawar  merah sebesar 2,5 g/hr menunjukkan kadar ureum yang  makin  menurun,  yaitu  28,21  mg/dL, dan  pada  P3  kadar  ureum  turun  menjadi 25,05 mg/dL pada dosis tablet effervescent mawar  merah  sebesar    5  g/hr. Jadi  disimpulkan  bahwa  pemberian  tablet effervescent mawar merah dapat mempengaruhi  (menurunkan)  kadar  ureum darah tikus putih galur Wistar.

## PEMBAHASAN
Ureum  adalah  produk  akhir  utama katabolisme  protein  yang  harus  dikeluarkan dari tubuh  untuk memastikan kelangsungan metabolisme  protein  dalam  sel. 2 Biosintesis urea  terjadi  dalam  empat  tahap:  (1) Transaminasi  yang  mengonversi  hampir semua asam amino protein dan membentuk glutamat,  (2)  glutamat  mengubah  nitrogen α-amino  menjadi  amonia  yang  disebut transdeaminasi. (3) L-amino oksidase di hati dan  ginjal  mengalami  dekomposisi  menjadi asam  α-keto  disertai  pembebasan  ion amonium.  (4)  dan  terjadi  reaksi  siklus  urea dan  menghasilkan  produk  akhir  berupa ureum. 10 Konsentrasi ureum dalat meningkat sampai  10  kali  normal  selama  satu  sampai dua minggu pada orang gagal ginjal. Dengan alasan  ini,  pengukuran  konsentrasi  ureum
19,72 51,08 38,16 28,21 25,05 0 10 20 30 40 50 60 Kelompok K (-) K (+) P1 P2 P3 µg/dL
merupakan cara yang penting untuk menilai fungsi ginjal. 2 Berbagai  macam  bahan  kimia  yang berasal  dari  lingkungan  dan  bahan  kimia yang  dapat  digunakan  untuk  pengobatan, seperti  asetaminofen  dan  gentamisin,  dapat menyebabkan  kerusakan  organ  tubuh melalui aktivasi metabolik sehingga menghasilkan  radikal  bebas  termasuk superoksida  dan  ROS.
11 Salah  satu  bahan kimia  yang  banyak  digunakan  untuk penelitian  adalah  CCl 4 yaitu  suatu  pelarut yang  sering  digunakan  dalam  industri  dan dapat  menginduksi  berbagai  macam kerusakan organ, termasuk ginjal.
Penelitian  secara in  vitro dan in  vivo menunjukkan  bahwa  CCl 4 mempercepat peroksidasi lipid, mengurangi sitokrom P450 NADPH,  dan  mengurangi  GHS/GSSG  pada kortek  ginjal,  yaitu  pada  mikrosom  dan mitokondria ginjal. 12 Pemberian CCl 4 secara intraperitoneal  akan  terdistribusi  dan terdeposit  pada  berbagai  macam  organ, seperti  hepar,  otak,  ginjal,  paru-paru,  dan jantung. 13 Pada  penelitian  ini,  kerusakan organ  akan  difokuskan  pada  organ  ginjal dengan  parameter  berupa  peningkatan kadar kreatinin darah tikus.
CCl 4 secara  aktif  dimetabolisme  oleh jaringan  tubuh  sehingga  menghasilkan reaktif  metabolit  terhalogenasi  (.CCl 3 dan .Cl)  dan  metabolit  tersebut  menimbulkan serangkaian  reaksi  yang  melepaskan  ROS yang  termasuk  dalam  radikal  bebas.
14 CCl 3- memiliki  molekul  derivatif  yang  juga  sangat reaktif,  yaitu  radikal trichloromethylperoxyl (Cl 3 COO - ) yang dapat menyebabkan induksi peroksidasi lipid. 15-17 Radikal bebas tersebut mampu  menginisiasi  serangkaian  reaksi peroksidasi  lipid  dengan  menghilangkan hydrogen  dari  PUFA.  Hilangnya  hydrogen dari  PUFA  yang  merupakan  struktur pembentuk  membran  sel  menyebabkan perubahan  pada  membran  sel  sehingga kerusakan  sel  tidak  dapat  dihindari.  Hal  ini merupakan  mekanisme  penting  dalam
patogenesis  yang  mendasari  timbulnya berbagai  penyakit  yang  disebabkan  oleh radikal bebas. 15
Penelitian  Tom et  al menunjukkan bahwa  hal  tersebut  melibatkan  berbagai sistem reaksi enzimatik dan non-enzimatik. 18 Ketika  tubuh  menerima  radikal  bebas  yang berlebihan,  sistem  pertahanan  tubuh  tidak cukup  untuk  menetralisir  radikal  bebas tersebut.  Selain  itu,  ROS  juga  dapat menurunkan sistem antioksidan tubuh alami seperti  GSH  dan  juga menurunkan  aktivitas dari SOD, CAT, dan GSH-Px. 19.
Parameter yang diamati pada penelitian ini  adalah  kadar  ureum  darah  tikus  putih setelah diberikan tablet effervescent ekstrakmawar  merah  yang memengaruhi  fungsi  organ  ginjal.  Hal  ini didasarkan prinsip bahwa ureum merupakan produk  sisa  yang  diekskresikan  oleh  ginjal terutama melalui filtrasi glomerulus.
Ureum  merupakan  metabolit  protein akhir  yang  dapat  ditemui  dalam  plasma darah.  Urea  direabsorbsi  ke  darah  dengan cara  difusi.  Molekul  urea  sangat  kecil sehingga bisa menembus membran dengan cara  difusi  lipid.  Proses  ini  adalah  proses pasif  sehingga  urea  terdifusi  ke  darah sampai gradien konsentrasi urea pada filtrat dan  darah  sama.  Karena  itulah  sebagian urea melewati ginjal dan keluar melalui urin, sedangkan  sebagian  lagi  tetap  berada  di darah dan bisa dihitung kadarnya.
Percobaan yang dilakukan Ruqiah et al (2007) menyebutkan bahwa pemberian CCl 4 0,1 ml/kg BB dan 1 ml/kg BB mengakibatkan peningkatan kadar kreatinin, masing-masing 52,12 mg/dL dan 84,47 mg/dL. 20
Peningkatan  kreatinin  ini  mungkin  berkaitan dengan  terjadinya  kerusakan  sel  hati  yang disebabkan oleh CCl 4 .
Antosianin  merupakan  pigmen  yang larut  dalam  air  dan  tergolong  ke  dalam senyawa  flavonoid. 21 Pigmen  antosianin adalah  pewarna  alami  kelompok  flavonoid yang  tergolong  jenis  polifenol,  penyebab
warna merah, oranye, ungu dan biru, banyak terdapat  pada  bunga  dan  buah-buahan (seperti  bunga  mawar,  pacar  air,  kembang sepatu, krisan, pelargonium, aster cina, dan buah  apel,  chery,  anggur,  strawberi). 22
Kurangnya  elektron  natural  pada  antosianin membuat  komponen  ini  reaktif  terhadap radikal  bebas.  Antosianin  merupakan antioksidan yang poten karena kemampuannya  yang  secara  cepat  untuk mereduksi spesies oksigen dan merubahnya menjadi  radikal aryloxyl yang  lebih stabil. 23,24 Pada  kenyataannya,  penelitian menunjukkan  bahwa  antosianin  dapat memiliki  aktivitas  antioksidan  yang  lebih tinggi  daripada  vitamin  E,  asam  askorbat, dan beta karoten. 25,26
Penelitian  yang  dilakukan  oleh  Lin-Hua et  al (2010),  menyatakan  bahwa  ekstrak antosianin dari buah blueberry dapat secara langsung  meredakan  gejala  kolitis  pada tikus.  Dosis  antosianin  yang diberikan  pada penelitian ini adalah 10, 20 dan 40/mg/kg per hari  selama  6  hari.  Semua  dosis  tersebut dapat mencegah diare sehingga mengurangi penurunan  berat  badan  dan  kematian  pada hewan  coba.  Secara  histologis  dan makroskopis  juga  menunjukkan  bahwa pemberian  ekstrak  antosianin blueberry per oral dapat meredakan inflamasi usus. 27 Pada kondisi fisiologis normal, pemberian  ekstrak  antosianin  per  oral secara  signifikan  (p<0,05)  meningkatkan kapasitas  absorbansi  radikal  bebas  dari serum  deproteinasi  sekitar  50%  setelah  10 hari  pemberian  ekstrak  antosianin. 28 Kadar antosianin  dalam  plasma  segera  meningkat setelah  pemberian  ekstrak  antosianin  per oral. 28-31 Oleh karena itu, terjadi peningkatan aktivitas  antioksidan  sejalan  dengan peningkatan kadar antosianin plasma.
Pada penelitian ini, antosianin diberikan dalam  bentuk  tablet effervescent ekstrak
mawar  merah.  Tablet effervescent yaitu tablet yang dimaksudkan untuk menghasilkan  larutan  secara  cepat  dengan
menghasilkan  CO 2 secara  serentak.  Tablet khususnya dibuat dengan cara pengempaan bahan-bahan  aktif  dengan  campuran  asam- asam  organik,  seperti  asam  sitrat  dengan sodium  bikarbonat. 32 Penggunaan  mawar merah didasarkan atas penelitian Saati pada tahun 2011 yang membandingkan kandungan  antosianin  pada  mawar  merah dengan  bunga  kana  dan  pacar  air.  Hasil penelitian  tersebut  didapatkan  bahwa kandungan  tertinggi  antosianin  terdapat pada  bunga  mawar,  yaitu  sebesar  19,43 mg/100  ml/35  g  kelopak  bunga.  Pemilihan bentuk  sebagai  tablet effervescent adalah berdasarkan  dari  penggunaannya  yang praktis dan lebih menarik. Namun demikian, kandungan  antosianin  dalam  bentuk  tablet effervescent akan  menurun  dibandingkan dengan  pigmen  pekat  dan  bubuk  pigmen. Penurunan  daya  antioksidan  pada  tablet effervescent sebesar 78,25%. 33
Sesuai  dengan  hasil  penelitian  ini, didapatkan bahwa tablet effervescent mawar merah.

## KESIMPULAN
1. CCl 4 merupakan zat yang menyebabkan  kerusakan  ginjal  yang ditandai  dengan  peningkatan  kadar ureum  darah  tikus  putih  galur  Wistar
(Rattus norvegicus) .
2. Pemberian  tablet effervescent mawar merah  mampu  menurunkan  kadar ureum  darah  tikus  putih  galur  Wistar (Rattus  norvegicus) yang  telah diinduksi oleh CCl 4 .
3. Dosis tablet effervescent mawar merah yang  menunjukkan  pengaruh  secara signifikan adalah sebesar 5 g.

## SARAN
1. Perlu  adanya  penelitian  lebih  lanjut mengenai indikator kerusakan ginjal yang lain seperti TGF-ß1, TBARS, MDA ginjal,
penurunan  kadar  GSH,  SOD,  GR,  GPX dan GST. 2. Perlu  adanya  penelitian  lebih  lanjut tentang efek pemberian tablet effervescent mawar  merah  pada manusia.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Purnomo  BB. Dasar-Dasar  Urologi . Jakarta: CV. Sagung Seto. 2000.
2. Guyton AC,John EH. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran. Irawati  dkk  (Penerjemah).
Rachman  LY  dkk  (Editor).  Edisi  ke-11. Jakarta: EGC.2007.
3. Setiati  S.  Radikal  Bebas,  Antioksidan dan  Proses  Menua .Majalah  Medika. 2003; 6(19):366-368.
4. Kim  HJ,  Odendhal  S,  Bruckner  JV. Effect  of  Oral  Dosing  Vehicles  on  the Acute Hepatotoxicity of Carbon Tetrachloride  in  Rats. Toxicol  Appl Pharmacol. 1990; 102:34-49.
5. Halliwell  B.  The  Biological  Toxicity  of Free  Radicals  and  Other  Reactive Oxygen Species . In : Free Radicals and Food Additives . Aruoma OI, Halliwell B,
Taylor  &  Francis  (Editor).  London,  New York, Philadelphia. 1991:41-45.
6. Poli  G,  Albano  E,  Dianzani  MU.  The Role  of  Lipid  Peroxidation  in  Liver Damage. Chem Physiol Lipids. 1987;45(2–4):117–42. 7. Rungby  J,  Ernst  E.  Experimentally Induced  Lipid  Peroxidation  after Exposure  to  Chromium,  Mercury  or Silver:  Interactions  With  Carbon Tetrachloride. Pharmacol Toxicol . 1992:70(3):205-207. 8. Adewole  SO, et  al .  Effect  of  Melatonin on Carbon Tetrachloride-Induced Kidney  Injury  in  Wistar  Rats. African Journal  of  Biomedical  Research .  2007;
10:153-164. 9. Saati  ES,  Mujianto,  Susestyarini  RE.
Optimalisasi  Fungsi  Ekstrak    Pigmen
Bunga  Kana  ( Canna sp.)  sebagai  Zat Pewarna dan Antioksidan Alami Melalui Isolasi  dan  Karakterisasi.  Laporan Fundamental  Research  (Tahun  I-II). DP3M-DIKTI DIKNAS. Jakarta.2006.
10. Murray  RK,  Daryl  KG,  Victor  WR.
Biokimia Harper . Jakarta: EGC.2009.
11. Abraham  P,  Wilfred  G,  Cathrine  SP.
Oxidative  Damage  to  the  Lipids  and Proteins of the Lungs, Testis and Kidney of  Rats  during  Carbon  Tetrachloride Intoxication. Clin Chim Acta . 1999;289(1–2):177–9. 12. Walker  G,  Kunz  D,  Pignat  W, Wiesenberg  I,  Van  den  Bosch  H, Pfeilschifter  J.  Tetranactin  Inhibits Interleukin-1β  and  cAMP  Induction  of Group II Phospholipase A2 in Rat Renal Messangial  Cells. Eur  J  Pharmacol . 1996; 306(3):265-270.
13. Ko  KM,  Ip  SP,  Poon  MK,  Wu  SS,  Che CT,  Ng  KH,  Kong  YC.  Effect  of  A
Ligninenriched Fructus  schisandrae Extract on Hepatic Glutathione Status in Rats:  Protection  against  Carbon Tetrachloride  Toxicity. Planta  Med.
1995;,61:134-137. 14. Slater  TF.  Free  Radical  Mechanism  in Tissue Injury. Biochemistry Journal .1984; 222:1-15. 15. Aleynik SI, Leo MA, Ma X, Aleynik MK, Lieber  CS.  Polyenylphosphatidycholine Prevents  Carbon  Tetrachloride-Induced Lipid  Peroxidation  While  It  Attenuates Liver Fibrosis. J Hepatol. 1997;27: 554- 561.
16. Charbonneau  M,  Brodeur  J,  Du  Souich P,  Plaa  GL.  Correlation  between Acetone-Potentiated CCl4-Induced Liver Injury  and  Blood  Concentrations  after Inhalation  or  Oral  Administration. Toxicology  and  Applied  Pharmacology. 1986; 84:286-294.
17. Ozturk  F,  Ucar  M,  Ozturk  IC,  Vardi  N, Batcioglu K. Carbon Tetrachlorideinduced Nephrotoxicity and
Protective Effect of Betaine in Sprague- Dawley  Rats. Urology .  2003;  62:353- 356. 18. Tom  WM,  Fong  D,  Woo  B, Prasongwatana V, Boyde TR. Microsomal  Lipid  Peroxidation  and Oxidative  Metabolism  in  Rat  Liver. Chemical  and  Biological  Interactions.
1984;  50:361-363.  doi:  10.1016/0009- 2797(84)90043-7Tom WM.
19. Yamamoto  Y,  Yamashita  S.  Plasma Ubiquinone  to  Ubiquinol  Ratio  in
Patients  with  Hepatitis,  Cirrhosis,  and
Hepatoma, and in Patients Treated with Percutaneous  Transluminal  Coronary Reperfusion. BioFactors. 1999;  9:241-
145.
20. Panjaitan  RGP,  HaryaniE,  Chairul, Masriani,  Zakiah  Z,  Manalu  W. Makara Kesehatan . 2007; 11(1):11-16.
21. Saati EA. Pigmen sebagai Zat Pewarna dan  Antioksidan  Alami .  Malang:  UMM
Press.2008. 22. Lewis  RJ. Hawley’s  Condensed Chemical  Dictionary .  22 th Edition.  New
York:  Van  Nostrand  Reihold  Company.
1993.
23. Khkonen  MP,  Heinonen  M.  Antioxidant Activity  of  Anthocyanins  and  their Aaglycons. J  Agric  Food  Chem. 2003; 51:628-633.
24. Moran JF, Klucas RV, Grayer RJ, Abian
J,  Becana  M.  Complexes  of  Iron  with Phenolic  Compounds  from  Soybean Nodules  and  Other  Legume  Tissues: Prooxidant and Antioxidant Properties. Free  Radic  Biol  Med. 1997;
22:861-870.
25. Galvano  F,  La  Fauci  L,  Lazzarino  G, Fogliano  V,  Ritieni  A,  Ciappellano  S,
Battistini  NC,  Tavazzi  B,  Galvano  G. J Nutr Biochem . 2004; 15:2.
26. Kowalczyk  E,  Krzesiński  P,  Kura  M, Szmigiel  B,  Blaszczyk  J.  Antthocyanins in  Medicine. Pol  J  Pharmacol .  2003;
55:699.
27. Lin-Hua  Wu et  al .  Protective  Effect  of Anthocyanins Extract from Blueberry on TNBS-Induced  IBD  Model  of  Mice. Evidance-Based  Complementary  and Alternative  Medicine .2010;  (2011). Article ID 525462.
28. Lionetto et  al. Effect  of  the  Daily Ingestion  of  a  Purified  Anthocyanin Extract  from  GrapeSkin  on  Rat  Serum Antioxidant  Capacity. Physiol  Res . 2011; 60:637-645.
29. Bub A, Watzl B, Heeb D, Rechkemmer G, Briviba K.Malvidin-3-Glucoside Bioavailability in Humans after Ingestion of  Red  Wine,  Dealcoholized  Red  Wine and Red Grape Juice. Eur J Nutr. 2001; 40:113-120.
30. Mazza G, Kay CD, Cottrell T, Holub BJ. Absorption  of  Anthocyanins  from
Blueberries  and  Serum  Antioxidant
Status in Human Subjects. J Agric Food Chem. 2002; 50:7731-7737.
31. Wu X, Cao G, Prior Rl. Absorption and Metabolism  of  Anthocyanins  in  Human Subjects  Following  Consumption  of Elderberry  or  Blueberry. J  Nutr. 2002; 132:1865-1871. 32. Mustofa Z. Pembuatan Tablet Effervescent dari Ekstrak Mawar Merah ( Rosa sp.): Kajian Varietas Bunga, Jenis Pelarut dan Jenis Gula. Skripsi. Malang: Jurusan  Ilmu  dan  Teknologi  Pangan, UMM.2008.
33. Saati ES, Sukardi, Zainab S.  Formulasi Tablet    Effervescent  Kaya  Antioksidan dari  Ekstrak  Pigmen  Tiga  Varietas Bunga Mawar Merah ( Rosa sp.) . Hibah bersaing DIKTI. 2011.