## POTENSI EKSTRAK METANOL DAUN MANGGA BACANG (Mangiferafoetida L.) SEBAGAI ANTIBAKTERI TERHADAP Enterobacter aerogenes DAN IDENTIFIKASI GOLONGAN SENYAWA AKTIFNYA
Ely Setiawan*, Tien Setyaningtyas, Dwi Kartika, Dian Riana Ningsih
Jurusan Kimia FMIPA Universitas Jenderal Soedirman * email: elsant_13@yahoo.com
Received 16 Oktober 2017
Accepted 28 Nopember 2017

## Abstrak
Enterobacter aerogenes merupakan bakteri penyebab berbagai macam infeksi. Salah satu pengobatan  berbagai  penyakit  infeksi  yaitu  dengan  pemberian  antibiotik.  Penggunaan antibiotik  sintetik  secara  terus    menerus    dapat  menyebabkan  resistensi,  sehingga  untuk mengatasinya  diperlukan  pencarian  bahan  obat  alami.  Ekstrak  tanaman  yang  berpotensi sebagai antibakteri, salah satunya yaitu ekstrak daun mangga bacang (Mangifera foetida L.). Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  potensi  ekstrak  daun  mangga  bacang  sebagai antibakteri  terhadap E.  aerogenes ,  penentuan  konsentrasi    hambat  tumbuh  minimum (KHTM) dan mengidentifikasi golongan senyawa aktif dari  ekstrak daun mangga bacang. Daun mangga bacang di ekstraksi secara maserasi menggunakan pelarut metanol.  Ekstrak yang  diperoleh  diuji  aktivitas  antibakteri  dengan  menggunakan  metode  difusi  sumur. Penentuan  konsentrasi  hambat  tumbuh  minimum  ekstrak  mangga  bacang  menggunakan konsentrasi 1000 ppm, 500 ppm, 250 ppm, 125 ppm, 65 ppm, 30 ppm, 15 ppm, 10 ppm, 5 ppm.  Ekstraksi  daun  mangga  bacang  menunjukan  rendemen  sebesar  10,61%  (b/b)  dan diameter zona hambat aktivitas antibakteri konsentrasi 1000 ppm sebesar5,46 mm. KHTM ekstrak metanol daun mangga bacang   terhadap E. aerogenes yaitu pada konsentrasi 5 ppm dengan  diameter  zona  hambat  sebesar  1,78  mm.  Berdasarkan  hasil  uji  fitokimia  ekstrak metanol daun mangga bacang menunjukkan adanya senyawa golongan alkaloid, flavonoid, stereoid, polifenol, tanin, dan saponin.
Katakunci: antibakteri, Enterobacter aerogenes, Mangifera foetida L., metanol

## Abstract
Enterobacter  aerogenes is  causes  various  bacterium  infections.  One  of  the  treatment  of various  infectious  diseases  is  by  antibiotics  treatment.  The  long-term  use  of  synthetic antibiotics  causes  antibiotic  resistance,  so  that  research  exploration  of  new  antibiotic  is needed. Plant extracts potentially as an antibacterial, one of the misleaves extract of mango bacang ( Mangifera foetida L.). This study aimed to examine the potential of leaves mango bacang  extract  as  an  antibacterial  againts E.aerogenes ,  the  minimum  inhibition concentration (MIC) and active compounds of leaves mango bacang extract. Mango leaves were extracted by maceration using methanol . The extract obtained was tested anti bacterial activity  using  the  diffusi  on  wells  method.  The  determination  of  MIC  was  used  various concentrations of 1000 ppm, 500 ppm, 250 ppm, 125 ppm, 65 ppm, 30 ppm, 15  ppm,10 ppm,  and  5  ppm.  The  extraction  mango  bacang  leaves  with  yielded  10.61%(b/b)  and diameter of zone of the antibacterial activity extract of 1000 ppm was 5.46 mm. The MIC
of the methanol extract against E.aerogenes was 5 ppm with the zone diameter of 1.78 mm. Phytochemistry analysis of mango bacang leaves extract using methanol result the alkaloid, flavonoid, stereoid, catakin, tannin, and saponin.
Keywords: antibacterial, Enterobacter aerogenes, Mangifera foetida L., methanol

## Pendahuluan
Infeksi  bakteri  merupakan  invasi  dan multiplikasi mikroorganisme dalam jaringan  tubuh  yang  menghasilkan  tanda dan  gejala  seperti  respon  imun.  Berbagai jenis  penyakit  infeksi  disebabkan  oleh adanya bakteri patogen seperti,
Enterobacter  aerogenes,  Staphylococcus aureus, Eschericiacoli dan Vibrio cholera (Irawati,  2011). E.  aerogenes merupakan bakteri  nosokomial  dan  patogen  yang dapat  menyebabkan  infeksi  opurtunistik diantaranya  infeksi  saluran  pernafasan bawah,  infeksi  kulit,  saluran  kemih  dan sepsis.  Dewasa  ini,  infeksi  oportunistik menyebabkan 1,4 juta kematian setiap hari di seluruh dunia (UNAIDS, 2007).
Salah satu penyembuhan atau pengobatan berbagai penyakit infeksi yaitu dengan  pemberian  antibiotik  sintetik. Namun  penggunaan  antibiotik  sintetik memiliki beberapa kekurangan, diantaranya  kecenderungan  menimbulkan hipersensitivitas  secara  lokal  pada  kulit seperti  reaksi  alergi  dan  reaksi  toksik. Selain  itu  penggunaan  antibiotik  sintetik secara  terus  menerus  dapat  menyebabkan resistensi  (Ganiswara,  2003).Mengatasi masalah  tersebut,  diperlukan  penelitian guna mencari alternatif baru yang bersifat alami  yaitu  dengan  mengisolasi  senyawa aktif  dari  tumbuhan  yang  berkhasiat  obat untuk selanjutnya dapat dijadikan sebagai antibiotik alami.
Antibiotik  alami  pada  saat  ini  banyak digunakan  karena  menurut  beberapa penelitian  memiliki  efek  samping  yang ringan  karena  masih  bisa  dicerna  oleh tubuh. Salah satu tumbuhan yang berpotensi  sebagai  obat  alami  yaitu tanaman  mangga  bacang  ( Mangifera feotida L). Bagian dari tumbuhan mangga yang dapat dimanfaatkan untuk obat alami
salah satunya yaitu daunnya. Daun mangga bacang  mudah  diperoleh  dan  jumlahnya melimpah  akan  tetapi  belum  banyak dimanfaatkan meskipun memiliki potensi yang  besar.  Potensi  ekstrak  daun  mangga ( M.  indica L.)  yaitu  sebagai  senyawa antimikrobia  yang  dapat  menghambat pertumbuhan  bakteri  diantaranya E.  Coli, S. aureus, Klebsiella pneumonia,
Salmonella typhi, Listeria monocytogeneses,  Campylobacter  jejuni, Candidasp, Zygosaccharomyces sp., Fusarium sp., Aspergillus sp., Rhizopus sp. dan Penicillium  sp. (Masibo  and  He,
2009).
Berdasarkan uraian tersebut, maka akan dilakukan penelitian tentang potensi daun mangga  bacang  ( M.  Foetida L.)  sebagai antibakeri  terhadap E.  aerogenes dan mencari  senyawa  aktif  yang  berpotensi sebagai antibakteri.
Penentuan
Konsentrasi  Hambat  Tumbuh  Minimum (KHTM)  terhadap E.  aerogenes untuk mengetahui  konsentrasi  minimal  suatu senyawa antibakteri yang dapat menghambat pertumbuhan mikroorganisme.  Aktivitas  antibakteri menggunakan metode difusi dan aktivitas antibakteri  ekstrak  daun  mangga  bacang (Mangifera  foetidaL) ditandai  adanya zona bening disekitar lubang.

## Metode Penelitian

## Bahan dan Alat
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun mangga bacang (Mangifera  foetida L. ) yang  diambil  dari kelurahan Sumampir Purwokerto, akuades,  isolat  bakteri Enterobacter aerogenes dari laboratorium Mikrobiologi Fakultas  Biologi  Unsoed,  media Nutrient Agar (NA),  media Nutrient  Broth (NB), media Pepton  Yeast  Glucose  Agar
(PYGA), akuades steril, tetrasiklin, kertas saring,  I 2 ,  KOH,  HCl,  Hcl  pekat,  serbuk Mg,  pereaksi Mayer ,  pereaksi  FeCl 3 , pereaksi Liberman-Burchard ,  dan  tisue. Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah blender , oven, autoklaf, timbangan analitik,  alat rotary  evaporator (Buchii , Indonesia), waterbath, filler,  pipetukur, hotplate,  mikropipet,  lampu  spiritus, jarumose, Drugalsky ,  cawan  Petri,  lampu UV Cabinet II 366 nm, alat spektrofotometer UV-Vis (Shimadzu UV1601 SA, Japan).

## Prosedur Penelitian Ekstraksi (Ningsih, dkk., 2014)
Sebanyak  kurang  lebih  100  gram serbuk  daun  mangga  diekstraksi  secara maserasi  dengan  menggunakan  350  mL metanol  sampai  semua  serbuk  terendam dan  diaduk  lalu  ditutup  dan  disimpan selama  tiga  hari.  Pengadukan  dilakukan kurang  lebih  sebanyak  tiga  kali  sehari. Selanjutnya dilakukan penyaringan sehingga didapat filtrat dan residu. Residu yang  dihasilkan  kemudian  dimaserasi kembali  dengan  penambahan  50  mL metanol  selama  3  hari  dan  dilakukan penyaringan setiap hari. Semua filtrat yang dihasilkan  disatukan  menjadi  satu  dalam satu wadah sebagai filtrat ekstrak metanol. Kemudian  filtrat  tersebut  dipekatkan dengan vacuum rotary evaporator hingga didapatkan  ekstrak  yang  kental  kemudian ditimbang.

## Regenerasi bakteri uji
Bakteri  yang  akan  dipakai  untuk  uji antibakteri  harus  diregenerasikan  terlebih dahulu  sebelum  digunakan.  Bakteri  stok yang merupakan kultur primer, mula-mula dibiakkan  ke  dalam  media  NA  miring, yaitu sebanyak satu ose bakteri digoreskan ke media NA miring lalu diinkubasi pada suhu  37  °C  selama  24  jam.  Biakan  ini merupakan  aktivitas  awal  stok  bakteri yang kemudian disimpan pada suhu 5 °C.

## Uji  aktivitas  antibakteri  dengan  metode difusi
Uji awal aktivitas antibakteri dilakukan dengan  cara  difusi  (Ningsih,  dkk,  2014). Sebanyak satu ose bakteri dari stok biakan diambil  lalu  diinkubasi  di  dalam  10  mL media cair ( Nutrient Broth ) selama 18-24 jam pada suhu 37  °C dan sambil dikocok menggunakan  penangas  air  bergoyang dengan  kecepatan  100  rpm.  Kemudian sebanyak 5 mL biakan bakteri diambil lalu diukur Odnya dengan nilai kurang dari satu pada  panjang  gelombang  620  nm.  Bila nilai  OD>1  diambil  biakan  sebanyak  50 µL, bila OD<1 biakan diambil 100 µL, lalu dituangkan  15  mL  media Pepton  Yeast Glucose  Agar (PYGA)  bersuhu  ±40  °C dan  dibiarkan  memadat  kemudian  biakan yang  diambil  disebarkan  dalam  cawan Petri.  Setelah  itu  agar  dilubangi  dengan diameter  ±8  mm  menggunakan crockbor . Ke  dalam  lubang  tersebut  dimasukkan ekstrak  daun  mangga  sebanyak  50  µL dengan konsentrasi yang digunakan untuk uji pendahuluan daya hambat adalah 1000 ppm  lalu  diinkubasi  pada  suhu  37  °C selama 24 jam.
Zona bening  yang terlihat di sekeliling lubang,  menandakan  adanya  aktivitas antibakteri  pada  sampel  kemudian  zona bening yang terbentuk diukur menggunakan  jangka  sorong.  Setelah diketahui  bahwa  ekstrak  daun  mangga mempunyai aktivitas antibakteri, kemudian ekstrak daun mangga ditentukan Konsentrasi  Hambat  Tumbuh  Minimum (KHTM)  terhadap  bakteri E.  aerogenes dengan metode yang sama.

## Penentuan  Konsentrasi  Hambat  Tumbuh Minimum (KHTM)
Konsentrasi Hambat Tumbuh Minimum (KHTM) merupakan
konsentrasi terendah yang masih memberikan efek penghambatan pertumbuhan pada mikroorganisme.
Penentuan  KHTM  mempunyai  tujuan untuk  mengetahui  kadar  minimum  bahan aktif  yang  diperlukan  untuk  menghambat pertumbuhan  mikroorganisme.  Penelitian
ini  menggunakan  mikroorganisme  berupa bakteri Enterobacter aerogenes . Penentuan ini dilakukan dengan konsentrasi ekstrak metanol daun mangga bacang  yang  diencerkan  secara  berseri, yaitu 1000, 500, 250, 125, 65, 30, 15, 10, 5, dan 1 ppm. Metode penentuan dilakukan dengan  cara  difusi  agar  (sumuran). Biakkan  bakteri  diinokulasikan  pada cawan  petri  dengan  media  NA  kemudian diberi  lubang  dengan  bantuan crock  bor . Ekstrak  berbagai  konsentrasi  dimasukkan dalam lubang pada media NA sebanyak 50 µL,  setelah  itu  diinkubasi  selama  1  x  24 jam pada suhu 37°C. Kontrol negatif yang digunakan  adalah  aquades  sedangkan kontrol  positif  menggunakan  larutan tetrasiklin  1000  ppm.  KHTM  ditentukan dengan  mengukur  zona  hambat  yang terdapat  disekitar  lubang  pada  masing- masing konsentrasi ekstrak dengan jangka sorong.
Identifikasi  senyawa  kimia  ekstrak  daun mangga(Harborne, 1987)

## Uji senyawa alkaloid
Sebanyak  2  mL  sampel  dilarutkan dalam 2 mL HCl 2%, dipanaskan 5 menit dan disaring. Filtrat yang diperoleh ditetesi dengan pereaksi Mayer sebanyak 2-3 tetes. Adanya  senyawa  alkaloid  ditujukkan dengan terbentuknya endapan putih.

## Uji senyawa flavonoid
Sebanyak  2  mL  sampel  dilarutkan dalam 2 mL metanol, kemudian ditambahkan  serbuk  Mg  dan  HCl  pekat sebanyak  5  tetes.  Adanya  senyawa flavanoid ditunjukkan dengan terbentuknya warna merah atau jingga.

## Uji senyawa saponin
Sebanyak  2  mL  sampel  dilarutkan dalam  aquades  pada  tabung  reaksi ditambah  10  tetes  KOH  dan  dipanaskan dalam penangas air 50 o C selama 5 menit, dikocok  selama  15  menit.  Jika  terbentuk busa mantap setinggi 1 cm dan tetap stabil selama  15  menit  menunjukkan  adanya senyawa saponin.

## Uji senyawa stereoid dan terpenoid
Sebanyak  2  mL  sampel  ditambah dengan  pereaksi Liberman-Burchard 1 mL. Adanya senyawa terpenoid ditujukkan dengan  terbentuknya  warna  biru  tua  atau hijau kehitaman.

## Uji senyawa polifenol
Sebanyak  2  mL  sampel  dilarutkan dalam aquades 10 mL, dipanaskan 5 menit dan  disaring.  Filtrat  yang  terbentuk ditambahkan  dtambahkan  4-5  tetes  FeCl 3 5% (b/v). Adanya fenol ditujukkan dengan terbentuknya  warna  biru  tua  atau  hijau kehitaman.

## Uji senyawa tanin
Sebanyak  2  mL  sampel  ditambah dengan  pereaksi  FeCl 3 .  Adanya  senyawa tanin  ditunjukkan  dengan  terbentuknya warna biru tua atau hijau kehitaman.

## Hasil dan Pembahasan

## Preparasi Sampel
Sampel daun mangga bacang yang telah dicuci  bersih  dikeringkan  tanpa  terkena sinar  matahari  langsung  selama  17  hari sampai kering patah. Pengeringan bertujuan untuk mendapatkan sampel yang tidak  mudah  rusak,  sehingga  dapat disimpan dalam waktuyang lama. Pengeringan  dapat  mengurangi  kadar  air dalam  sampel  yang  dapat  menyebabkan terjadinya reaksi enzimatis yang mengakibatkan  rusaknya  sampel  karena susunan  senyawa  yang  terdapat  dalam daun tersebut telah berubah. Sampel daun manga  bacang  yang  telah  kering  patah dibuat  serbuk  dengan  cara  diblender  agar ukuran  partikelnya  lebih  kecil  sehingga dapat memperluas kontak dan
meningkatkan  daya  interaksi  sampel dengan pelarut. Pembuatan sampel menjadi serbuk dapat merusak dinding sel yang  menyebabkan  pelarut  lebih  mudah menarik  senyawa  yang  terkandung  di dalam sel tersebut sehingga jumlah ekstrak yang  diperoleh  optimal.  Serbuk  daun mangga  selanjutnya  dilakukan  ekstraksi secara maserasi.

## Maserasi Sampel
Sampel daun mangga bacang diekstrak menggunakan  metode  maserasi.  Maserasi adalah proses penyaringan pelarut dengan beberapakali pengadukan pada temperatur ruang.  Teknik  ini  mempunyai  beberapa kelebihan  antara  lain  alat  yang  dipakai sederhana,  hanya  dibutuhkan  bejana perendaman  tetapi  menghasilkan  produk yang baik, selain itu dengan teknik ini zat- zat yang tidak tahan panas tidak akan rusak (Voigt,  1994).  Sampel  yang  digunakan pada  proses  maserasi  berupa  serbuk bertujuan  untuk  memperluas  permukaan sehingga interaksi pelarut dengan senyawa yang  akan  diambil  lebih  efektif  dan senyawa dapat terekstrak secara sempurna. Proses  perendaman  menyebabkan  cairan menembus  dinding  sel  dan  masuk  ke dalam  rongga  sel  yang  mengandung metabolit  sekunder,  metabolit  sekunder akan  larut  dan  karena  adanya  perbedaan konsentrasi antara larutan di dalam dan di luar  sel,  maka  larutan  yang  lebih  pekat akan  keluar  sel  membawa  metabolit sekunder. Proses ini terus berulang sampai terjadi  keseimbangan  konsentrasi  antara larutan di dalam dan di luar sel.
Maserasi  sampel  dilakukan  dengan menggunakan  pelarut  metanol  karena sifatnya  yang  mampu  melarutkan  hampir semua  zat,  baik  yang  bersifat  polar,  semi polar,dan  nonpolar.  Filtrat  yang  telah dihasilkan  kemudian  dipekatkan  dengan rotary  evaporator pada  suhu  60  °C mendekati  titik  didih  metanol  64,5  °C dengan  laju  perputaran  55  rpm.  Prinsip rotary evaporator adalah proses pemisahan  ekstrak  dari  cairan  sampel dengan  pemanasan  yang  dipercepat  oleh putaran dari labu, sehingga  cairan sampel dapat  menguap  5-10  °C  di  bawah  titik didih  pelarutnya  disebabkan  oleh  karena adanya penurunan tekanan. Hasil maserasi menghasilkan ekstrak metanol pekat yang berwarna hijau kehitaman sebanyak 10,61 gram  dengan  rendemen  10,61%  (b/b). Ekstrak  pekat  metanol  yang  diperoleh disimpan dalam gelas piala yang dibungkus dengan alumunium foil,
diletakan  dalam  lemari  pendingin  agar tahan  lama  dan  terhindar  dari  cahaya, selanjutnya dilakukan uji aktivitas antibakteri. Hasil penelitian lain menyatakan  maserasi  ekstrak  n-butanol daun  mangga  katsuri  sebanyak  450  g menghasilkan  ekstrak  pekat  n-butanol sebesar  1,69%  (Firdausi,  2015).  Maserasi menggunakan metanol menghasilkan rendemen  lebih  besar  dibandingkan  n- butanol. Penggunaan pelarut metanol pada proses  maserasi  karena  pelarut  tersebut dapat  melarutkan  hampir  semua  senyawa metabolit sekunder yang bersifat nonpolar, semipolar,  dan  polar.  Selain  itu  metanol mempunyai titik didih yang relatif rendah sehingga  mudah  diuapkan,  sedangkan senyawa  polar  yang  terekstrak  dalam pelarut n-butanol hanya kelompok senyawa  yang  mempunyai  titik  didih mendekati  titik  didih  n-butanol  dan metabolit  sekunder  yang  bersifat  polar (Arifin, 2006).

## Uji Aktivitas Antibakteri
Uji  aktivitas  antibakteri  daun  mangga bacang  terhadap  bakteri E.  aerogenes dilakukan  dengan  metode  difusi  sumur. Metode  difusi  sumur  digunakan  karena hasil  dari metode ini akan lebih menampakan  hasil  zona  hambat  yang nyata  dan  sampel  dapat  di  absorbsi  oleh media secara menyeluruh sehingga pertumbuhan  bakteri  merata  pada  media agar (Volk, 1990). Media yang digunakan untuk  uji  aktivitas  antibakteri  adalah medium  PYGA  ( Pepton  Yeast  Glucose Agar ).  Medium  ini mengandung    glukosa dalam  jumlah  banyak  yang  dibutuhkan untuk pertumbuhan bakteri.
Sebanyak50µL  inokulum E.aerogenes dalam  medium  NB  ( Nutrient  Broth ) disebar  pada  medium  PYGA  secara aseptis.  Sampel  daun  mangga  bacang sebanyak  50  µL  dimasukkan  ke  dalam medium  PYGA  yang  telah  dilubangi dengan crockbor dan  diinkubasi  selama 1x24 jam pada suhu 37°C. Setelah proses inkubasi  dilakukan  pengukuran  diameter zona hambat berupa zona bening disekitar
sumur  yang  menunjukkan  penghambatan pertumbuhan  mikroba  atau  aktivitas antibakteri (Pelczar dan Chan, 1996).
Uji  aktivitas  antibakteri  menggunakan tetrasiklin  1000  ppm  sebagai  kontrol positif dan aquades untuk kontrol negatif. Uji  pendahuluan  aktivitas  antibakteri ekstrak    metanol  daun    mangga  bacang digunakan    konsentrasi  1000  ppm. Tetrasiklin  banyak  digunakan  karena selain bersifat sebagai antibakteri, tetrasiklin  memiliki  spektrum  luas  yang artinya  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri  gram  negatif  dan  gram  positif (Mycek,2001).
Berdasarkan  pengujian  yang  telah dilakukan  menunjukkan  adanya  aktivitas antibakteri  ekstrak  metanol  daun  mangga bacang  dengan  terbentuknya  zona  bening di sekitar lubang sampel dengan diameter tertentu yang disebut dengan zona hambat. Zona  hambat  yang  terbentuk  diukur dengan  menggunakan  jangka  sorong secara  vertical,  horizontal  dan  diagonal, kemudian  dirata-rata  dalam  milimeter (Pratiwi,  2008).  Uji  aktivitas  antibakteri konsentrasi  1000  ppm  memiliki  aktivitas sebesar  5,46  mm.  Aktivitas  antibakteri kontrol positif tetrasiklin1000 ppm menghasilkan diameter zona hambat 23,29 mm  dan  aquades  sebagai  kontrol  negatif tidak  menghasilkan  aktivitas  antibakteri yaitu 0 mm.
Hasil  penelitian  menunjukan  bahwa aktivitas antibakteri ekstrak metanol daun mangga bacang memiliki aktivitas sedang. Menurut Dewi (2010), aktivitas antibakteri ekstrak etanol buah mengkudu terhadap E. Aerogenes juga  memiliki  daya  hambat sedang  terhadap E.  Aerogees .  Kekuatan daya hambat bakteri dikatagorikan menurut  Davis  dan  Stout  (1971)  dibagi menjadi  tiga  yaitu,  sangat  kuat  (zona bening > 20 mm), kuat (zona bening 10– 20 mm), sedang (zona bening 5–10 mm), dan  lemah  (zona  bening  <  5  mm)  (Dewi, 2010).
Penentuan  Konsentrasi  Hambat  Tumbuh Minimum Ekstrak Metanol Daun Mangga bacang
Penentuan  konsentrasi  hambat  tumbuh minimum  dilakukan  untuk  mengetahui konsentrasi hambat minimum ekstrak daun mangga  bacang  yang  dibuat  dengan  cara pengenceran. Konsentrasi ekstrak metanol daun  mangga  bacang  yang  digunakan dalam penentuan KHTM yaitu 1000 ppm, 500  ppm,  250  ppm,125ppm,65ppm,30 ppm,15  ppm,  10  ppm,  5  ppm,  1  ppm. Kontrol  positif  yang  digunakan  pada penentuan  KHTM  digunakan  tetrasiklin HCl 500 mg (generik) dengan konsentrasi 1000  ppm  sebagai  antibiotik  standar terhadap  daya  hambat  ekstrak  metanol daun  mangga  bacang  pada E.  aerogenes .
Antibakteri dikatakan mempunyai aktifitas yang tinggi bila KHTM terjadi pada kadar sampel  yang  rendah  namun  mempunyai daya  hambat  besar  terhadap  bakteri  uji (Wattimena, et.al. , 1991).Hasil penentuan konsentrasi  hambat  minimum  ekstrak metanol daun mangga bacang terhadap E. aerogenes dapat dilihat pada Gambar 1. Berdasarkan  hasil  penelitian  pada Gambar 1 menunjukan aktivitas antibakteri  ekstrak  metanol  daun  mangga bacang  menurun  dengan  menurunnya konsentrasi. Konsentrasi ekstrak 1000 ppm sampai  dengan  5  ppm  menunjukkan aktivitas daya hambat dengan terbentuknya zona bening sedangkan pada konsentrasi  1  ppm  sudah  tidak  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri E. Aerogenes. Konsentrasi  paling  rendah yang mampu menghambat pertumbuhan E. Aerogenes terdapat  pada  konsentrasi  5 ppm  dengan  zona  hambat  sebesar  1,78 mm. Berdasarkan analisis data menggunakan One Way ANOVA menunjukkan nilai yang signifikan, kemudian  uji  dilanjutkan  menggunakan metode  DUNCAN.  Hal  ini  menunjukkan perbedaan  yang  nyata  antara  ekstrak metanol daun mangga bacang konsentrasi 5  ppm  berbeda  nyata  dengan  konsentrasi ekstrak lainnya. Konsentrasi 10 ppm tidak berbeda nyata dengan konsentrasi 15 ppm dan  30  ppm,  sehingga  dapat  dikatakan konsentrasi 10 ppm, 15 ppm, dan 30 ppm mempunyai  pengaruh  yang  sama.  Begitu
pula  konsentrasi  65  ppm  tidak  berbeda nyata dengan konsentrasi 125 ppm dan 250 ppm  yang  memiliki  pengaruh  sama. Konsentrasi  500  ppm,  1000  ppm  dan kontrol  positif  menunjukan  hasil  yang berbeda  nyata.  Hal  ini  menunjukkan ekstrak  metanol  daun  mangga  bacang memiliki aktivitas antibakteri lebih rendah dari  tetrasiklin  namun  dapat  menghambat pertumbuhan bakteri E. Aerogenes hingga
konsentrasi  ekstrak  5  ppm.  Berdasarkan hasil penelitian, tetrasiklin dengan konsentrasi  1000  ppm  memberikan  zona hambat  terhadap E.  aerogenes sebesar 23,29 mm. Menurut Gan dan Setia (1987), tetrasiklin  merupakan  antibiotik  yang berspektrum luas.  Mekanisme  kerja tetrasiklin  yaitu  dengan  menghambat sintesis protein pada ribosomnya.
Gambar 1. Grafik Konsentrasi Hambat Tumbuh Minimum (KHTM) Ekstrak Metanol Daun Mangga Bacang terhadap E. aerogenes
Identifikasi  Senyawa Kimia  Ekstrak Metanol Daun Mangga
Identifikasi senyawa
metabolit sekunder  yang  terkandung  dalam  daun mangga  bacang  dilakukan  menggunakan metode  uji  fitokimia.  Uji  fitokimia digunakan  untuk  mengetahui  adanya golongan  senyawa  metabolit  sekunder seperti  alkaloid,  flavonoid,  polifenol, terpenoid/steroid, saponin dan tanin. Hasil uji fitokimia ekstrak metanol daun mangga bacang dapat dilihat pada Tabel 1.
Berdasarkan hasil uji fitokimia golongan  senyawa  metabolit  sekunder yang terdapat dalam daun mangga bacang yaitu  flavonoid,  alkaloid, terpenoid, polifenol, tanin dan saponin. Uji fitokimia
yang  dilakukan  menggunakan  pelarut metanol  yang    bersifat  polar,  sehingga diharapkan dapat menarik senyawa metabolit  yang  bersifat  polar  seperti alkaloid,  flavonoid,  fenol,  tanin,  saponin dan  steroid,  sedangkan  terpenoid  bersifat nonpolar  sehingga  tidak  dapat  ditemukan pada skrining fitokimia (Markham,1998)
Uji fitokimia senyawa flavonoid menggunakan  metode  Wilstater.  Menurut Sabir  (2005),  senyawa  flavonoid    dapat merusak    permeabilitas  dinding  sel mikroba,    berikatan  dengan  protein fungsional sel dan DNA sehingga mampu menghambat pertumbuhan mikroba. Flavonoid  dapat  menghambat  komponen sel  yang  berfungsi  mengeluarkan  zat
antimikroba.  Komponen  sel  tersebut terdapat  pada  membran  lipopolisakarida sel (Kuete, 2010).
Uji senyawa alkaloid dilakukan dengan menggunakan  metode  Mayer  dimana penambahan  HCl  pada  pereaksi  Mayer berfungsi untuk membuat suasana menjadi asam  karena  golongan  alkaloid  bersifat basa.  Hasil  positif    adanya  alkaloid
ditandai  dengan  terbentuknya  endapan putih  kekuningan.  Alkaloid  berperan sebagai antibakteri dengan cara berinteraksi  dengan  dinding  sel  bakteri yang berujung pada kerusakan dinding sel dapat berikatan dengan DNA bakteri yang menyebabkan  kegagalan  sintesis  protein (Cowan, 1999).
Tabel 1 . Hasil Identifikasi Senyawa Kimia Ekstrak Metanol Daun Mangga Bacang Senyawa Hasil Keterangan Flavonoid Alkaloid Steroid Terpenoid Polifenol
Tanin Saponin positif positif positif negatif positif positif positif Terbentuk warna jingga Terbentuk endapan putih Larutan berwarna hijau Larutan berwarna hijau
Larutan biru tua Larutan berwarna biru tua Busa yang stabil ±1,5 cm
Alkaloid  merupakan  senyawa  nitrogen yang  memiliki  kemampuan  bioaktivitas dan    memiliki  aktivitas  fisiologi  yang tinggi  dan  telah  digunakan  secara  luas dalam bidang pengobatan Pada uji alkaloid dengan  pereaksi Mayer ,  diperkirakan nitrogen  pada  alkaloid  akan  bereaksi dengan  ion  logam  K + dari  kalium
tetraiodomerkurat(II) membentuk
kompleks
kalium-alkaloid yang mengendap (Mustikasari, 2010).
Uji terpenoid dan steroid menggunakan pereaksi Libermann-Burchard yang merupakan  campuran  asam  sulfat  pekat dan  asam  asetat  glasial.  Hasil  uji  positif ditandai dengan terbentuknya warna merah jingga atau ungu untuk terpenoid dan hijau atau  biru  untuk  steroid  (Harborne,  1996). Hasil  uji  terpenoid  dan  steroid  ekstrak metanol daun mangga bacang menunjukan hasil positif untuk steroid dengan terbentuknya  warna  hijau.  Aktivitas antibakteri  dari  steroid  melalui  interaksi ion Mg 2+ dan Ca 2+ yang ada di membran sel yang mengakibatkan peningkatan permeabilitas  membran  luar  pada  bakteri gram negatif (Kayser,2005).
Uji polifenol dilakukan dengan menambahkan  FeCl 3 5%  pada  ekstrak
metanol daun mangga bacang, hasil positif polifenol  ditandai  dengan  terbentuknya kompleks berwarna hijau, ungu, biru, atau hitam  (Harborne,  1996).  Fenol  memiliki aktivitas antibakteri karena dapat mendenaturasi  protein  dan  mengganggu fungsi membran sel sehingga menyebabkan sel menjadilisis.
Tanin  memiliki  aktivitas  antibakteri yang berhubungan dengan kemampuannya untuk menginaktifkan adhesin sel mikroba juga menonaktifkan enzin, dan mengganggu transpot protein pada lapisan dalam sel (Cowan, 1999). Tanin menyerang polipeptida dinding sel sehingga pembentukan dinding sel menjadi  kurang  sempurna.  Hal  ini menyebabkan  sel  bakteri  menjadi  lisis karena  tekanan  osmotik  maupun  fisik sehingga  sel  bakteri  akan  mati.  Struktur astrigen tanin berikatan dengan enzim dan substrat  bakteri  (Doughari,  2008).  Tanin juga  merupakan  senyawa  yang  bersifat lipofilik  sehingga  mudah  terikat  pada dinding sel dan mengakibatkan kerusakan dinding sel (Sudira, et.al , 2011).
Uji  saponin  dilakukan  menggunakan metode  Forth,  yaitu  hidrolisis  saponin dalam air. Timbulnya busa pada uji  Forth
menunjukkan  adanya  glikosida  yang mempunyai kemampuan membentuk buih dalam  air  yang  terhidrolisis  menjadi glukosa  dan  senyawa  lainnya  (Marliana, 2005).  Hasil  positif  ditunjukkan  pada ekstrak metanol daun mangga bacang yang ditandai  dengan  terbentuknya  busa  yang stabil  setinggi  1,5  cm.  Saponin  bekerja dengan meningkatkan permeabilitas membran  sel  yang  terjadi  karena  struktur bipolar  yang  dimiliki  oleh  saponin berinteraksi  dengan  komponen  membran sel.
Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian ini diperoleh simpulan bahwa ekstrak metanol daun  mangga  bacang  dapat  menghambat pertumbuhan E. Aerogenes pada konsentrasi  1000  ppm  dengan  diameter zona  hambat  sebesar  5,46  mm.  Ekstrak metanol  daun  mangga  bacang  memiliki Konsentrasi  hambat  tumbuh  minimum (KHTM) terhadap E. Aerogenes yaitu pada konsentrasi  5  ppm  dengan  diameter  zona hambat  1,78  mm.  Golongan  senyawa metabolit  sekunder  yang  terdapat  dalam ekstrak metanol daun mangga berdasarkan uji  fitokimia  yaitu  senyawa  flavonoid, alkaloid,  stereoid,  polifenol,  tanin,  dan saponin

## DaftarPustaka
Arifin, H., Anggraini,  N.,  Handayani, D., &  Rasyid,    R.    (2006).  Standarisasi Ekstrak  Etanol  Daun Eugeniacumini Merr. J. SainsTek. Far , Vol.11, No.2, Hal 88-93.
Brooks,  G.F.,  J.S.  Butel  dan  S.A.  Morse. (2007). Mikrobiologi  Kedokteran, Buku1. Penerjemah dan editor: Bagian Mikrobiologi
Fakultas
Kedokteran  Universitas  Airlangga, Edisi  Pertama,  Salemba  Medika, Jakarta , hlm. 30-8, 317 -26.
Cowan (1999). Plant Product as
Antimicrobial Agents, Clinical Microbiology  Reviews ,  October,  Vol. 12, No. 4, Hal. 564-582.
Davis & Stout. (1971). Disc Plate Method of  Microbiological  Antibiotic  Essay. Journal  Of  Microbiology.  Vol  22  No
4.
Dewi,  F.  K.  (2010). Aktivitas  Antibakteri
Ekstrak  Etanol  Buah  Mengkudu (Morinda Citrifolia, Linnaeus) Terhadap  Bakteri  Pembusuk  Daging
Segar (Doctoral dissertation, Universitas Sebelas Maret Surakarta).
Doughari,  J.  And  Manzara,  S.  (2008).  In Vitro Antibacterial Activity of Crude Leaf  Extracts  of Mangifera  indica Linn , African Journal of Microbiology
Research., 2(1) 67-72.
Firdausi, I., Retnowati, R., & Sutrisno, S. (2015).  Fraksinasi  Ekstrak  Metanol Daun  Mangga Kasturi(Mangifera casturi  Kosterm)  dengan  Pelarut  n- butanol. Jurnal      Ilmu        Kimia Universitas  Brawijaya ,  Vol.1,  No.  1,
Hal.785.
Gandan Setia, B.(1987). Farmakologi dan Terapi Edisi IV . Fakultas Kedokteran. Depok:Universitas Indonesia.
Ganiswara, S.G. (2003). Farmakologi dan Terapi ,  Edisi  4.  Jakarta:  Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia.
Harborne, J.B. (1987). Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan Edisi Kedua .
Bandung:ITB.
Harborne,  J.B.  (1996). Phytochemical Methods:  A  Guide  to  Modern Technique of Plant Analysis. London: Chapman & Hall.
Irawati , H. (2011). Kontaminasi Awal dan Dekontaminasi  Bakteri  Patogen  pada Jeroan Sapi dengan Iradiaso Gamma.
Jurnal  Penelitian. Jakarta:    Pusat Aplikasi dan Radiasi, BATAN. Kayser,  F.,  Bienz,  K.,  Eckert,  J., Zinkernagel,  R.  (2005).  Medical Microbiology. Thieme. New York.
Kuete, V., Ngameni,  B., Mbaveng,  A. T., Ngadjui, B., Meyer, J. M., & Lall, N. (2010). Evaluation of Flavonoids from Dorstenia  Barteri  for  their  Anti mycobacterial,  Antigonorrheal  and Anti-reverse  Transcriptase  Activities. Actatropica , 116 (1), 100-104. Markham, K.R. (1988). Cara Mengidentifikasi Flavonoida .
Terjemahan  Kosasih  Padmawinata. Bandung:ITB
Marliana,  S.  D.,  &  Suryanti,  V.  (2005).
Skrining  Fitokimia  dan  Analisis Kromatografi  Lapis  Tipis  Komponen Kimia Buah Labu Siam (Sechiumedule  Jacq.  Swartz.)  dalam
Ekstrak Etanol. B iofarmasi , 3 (1), 26- 31.
Masibo,  Mand  He,Q.  (2009).  In  Vitro Antimicrobial Activity and The Major
Polyphenol  in  Leaf  Extract  of
Mangifera indica L. Malaysian Journal of Microbiology. 5(2):73-80.
Mustikasari,  K  &  Ariyani,  D.    (2010). Skrining  Fitokimia  Ekstrak  Metanol Biji  Kalangkala  ( Litseaangulata ).
Sains dan Terapan Kimia . Vol. 4, No. 2, Hal. 131-136.
Mycek,  Mary  J.  (2001). Farmakologi, ulasan  bergambar  Ed.2 .  Jakarta: Widya Medika.
Ningsih, D.R., Zusfahair, Purwati. (2014). Potensi  Ekstrak  Daun  Kamboja ( Plumeria Alba L.) Sebagai Antibakteri Dan Identifikasi Golongan Senyawa Bioaktifnya.
Artikel Ilmiah . 2-4. Pelczar,  M.J.  dan  Chan,  E.C.S.  (1996).
Dasar-dasar  Mikrobiologi .  Jilid  2. Penerjemah  Ratna  Sirihadioetomo.
Jakarta:Universitas Indonesia Press.
Pratiwi,  Suthanty  Ika.  (2008).  Aktivitas Antibakteri  Tepung  Daun  Jarak ( Jatropha  curcas L.)  pada  Berbagai Bakteri  Saluran  Pencernaan  Ayam Broiler Secara in vitro. Skripsi .
Bogor:Fakultas  Peternakan  Institut Pertanian Bogor.
Purwaningsih, E., Hanani, E., Arnalia, P.,
Krisnamurti,  D.  (2013).  Efek  Kelasi
Ekstrak  Air  Mangifera  foetida  pada Serum Penderita Talesemi. J. IndonMed Assoc. 61(8);321-325. Sabir,  A.  (2005).  Aktivitas  Antibakteri Flavonoid Propolis Trigona sp . Terhadap Bakteri Streptococcus mutans (in  vitro). Jurnal  Kedokteran Gigi . Vol.38, No.3, Hal. 135-141.
Sudira,  IW,  Merdana,  IM  &  Wibawa,  IP (2011).Uji  Daya  Hambat  Ekstrak Daun  Kedondong  ( Lannea    grandis Engl )  terhadap  Pertumbuhan  Bakteri
Erwinia Carotovora , Buletin Veteriner  Udayana ,  Vol.  3,  No.  1,
Hal. 45-50. UNAIDS. (2007). AIDS Epidemic
Update:  Global  Summary  of  The AIDS  Epidemic.  Geneva:  WHO
Library Cataloguing Data
Voigt, R. (1995). Buku Pelajaran Teknologi  Farmasi.  Diterjemahkan oleh Soendani N. S.
Yogyakarta:UGM Press. Volk  dan  Wheeler.  (1990). Mikrobiologi Dasar  Edisi  Kelima  Jilid  I .  Jakarta: Erlangga
Wattimena, J. R. (1991). Farmakodinamik dan  Terapi  Antibiotik .  Yogyakarta: UGM Press.
.