Pengaruh Sediaan Salep Ekstrak Daun Sirih ( Piper betle Linn.) terhadap Jumlah Fibroblas Luka Bakar Derajat IIA pada Tikus Putih ( Rattus norvegicus) Galur Wistar
Aliefia Ditha Kusumawardhani*, Umi Kalsum**, Ika Setyo Rini*

## ABSTRAK
Luka bakar merupakan salah satu insiden yang sering terjadi di masyarakat khususnya rumah tangga dan ditemukan terbanyak adalah luka bakar derajat II. Daun sirih ( Piper betle Linn.) adalah bahan alam yang diduga dapat membantu mempercepat proses penyembuhan luka dan mempunyai pengaruh terhadap pen- ingkatan jumlah fibroblas karena memiliki kandungan aktif seperti saponin, flavonoid, dan tanin. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian ekstrak daun sirih terhadap peningkatan jumlah  fibroblas luka bakar derajat IIa pada tikus putih ( Rattus norvegicus) galur Wistar. Studi eksperimental menggunakan desain penelitian true experiment  post test dilakukan terhadap hewan coba tikus putih galur Wistar jantan dengan usia 2,5-3 bulan dan berat badan 150-250 g. Sampel diambil dengan teknik simple random sampling dan dibagi dalam empat kelompok yaitu kelompok (A) ekstrak daun sirih 15 % (n = 6), (B) ekstrak daun sirih 30 % (n = 6), (C) ekstrak daun sirih 45 % (n = 6) dan kelompok kontrol normal saline 0,9 % (n = 6). Hasil penelitian menunjukkan bahwa terdapat perbedaan yang signifikan pada jumlah fibroblas antara kelompok yang diberi ekstrak daun sirih 15 % ( ̅ = 12,95), 30 % ( ̅ = 10,33), 45 % ( ̅ = 5,90) dan kelompok kontrol normal saline 0,9 % ( ̅ = 4,61) yaitu one way ANOVA p = 0,000 (p < 0,05). Kesimpulan dari penelitian ini adalah pemberian ekstrak daun sirih berpengaruh besar terhadap peningkatan jumlah fibroblas luka bakar derajat IIA pada tikus putih galur Wistar yaitu sebesar 77,6 % dan semakin kecil konsentrasi ekstrak daun sirih maka jumlah fibroblas semakin besar (r = -0.881) sehingga ekstrak daun sirih 15 % adalah konsentrasi yang paling optimal dalam mempercepat proses penyembuhan luka.
Kata kunci: Daun sirih ( Piper betle Linn.), Fibroblas, Luka bakar derajat IIA.
Effect of Betel Leaves Extract Oinment ( Piper betle Linn.) on the Number of Fibroblast in IIA Degree Burn Wound on Rat ( Rattus norvegicus ) Wistar Strain

## ABSTRACT
Burn wound is one of the most happened incident around us especially in household and the 2 nd degree burn wound is often found. Betel leaves ( Piper betle Linn.) is an alternative natural materials that assumed to be able to accelerate wound healing process and due to its active substaces such as saponins, flavonoids, and tannins, is able to increase the number of fibroblast in burn wound. This study is conducted to determine the influence of  betel  leaves extract to increase the number of fibroblast in IIA degree burn wound on rat ( Rattus norvegicus) Wistar strain. The experimental study using true experiment post test design conducted into male Wistar rat with age 2,5-3 months and weight 150-250 g. The samples determined by simple random sampling and divided into four groups, that is (A) 15 % betel leaves extract (n = 6), (B) 30 % betel leaves extract (n = 6), (C) 45 % betel leaves extract (n = 6), and Normal Saline 0,9 % (n = 6) as control group. The result of this research showed some significant differrences in the number of fibroblast found in 15 % betel leaves extract  ( ̅ = 12.95), 30 % ( ̅ = 10.33), 45 % ( ̅ = 5.90) and normal saline 0.9 % ( ̅ = 4.61), one way ANOVA test p = 0.000 (p < 0.05). The conclusion  was betel leaves extract has great influence to in- crease the number of fibroblast in IIA degree burn wound on Wistar rat that is 77.6 % and smaller concentra- tion of  betel leaves extract the greater the number of fibroblast  (r = -0.881). Therefore, 15  % betel leaves extract is the most optimal concentration to accelerate wound healing.
Keywords: Betel leaves (( Piper betle Linn.), Fibroblast,  IIA degree burn.
*   Program Studi Ilmu Keperawatan, FKUB **  Lab Farmakologi, FKUB

## PENDAHULUAN
Luka  bakar  adalah luka pada  kulit atau jaringan  lain  yang  disebabkan  oleh  panas atau  terkena  radiasi,  radioaktivitas,  listrik, sentuhan  atau  kontak  dengan  bahan  kimia. Luka  bakar  terjadi  ketika  beberapa  atau semua  sel  pada  kulit  rusak  karena  cairan panas  (air  mendidih),  benda  panas  dan nyala  api.  Luka  bakar  adalah  masalah kesehatan  masyarakat  secara  global  yang diperkirakan menyebabkan 195.000 kematian.  Luka  bakar  paling  banyak  sekitar 84.000 kasus terjadi di negara berpenghasilan rendah dan menengah yaitu Regio  WHO  Asia  Tenggara. 1 Data  unit  luka bakar  Rumah  Sakit  Cipto  Mangunkusumo Jakarta  pada  Januari  1998-Mei  2001 menunjukkan  penyebab  luka  bakar  adalah 60  %  kecelakaan  rumah  tangga,  20  % kecelakaan kerja dan 20 % sebab lain. Luka bakar  merupakan  salah  satu  insiden  yang sering  terjadi  di  masyarakat  khususnya rumah  tangga  dan  ditemukan  terbanyak adalah luka bakar derajat II. 2
Berdasarkan  kedalamannya  luka  bakar dibagi  menjadi  3  yaitu  derajat  I,  derajat  II, dan derajat III. Kerusakan luka bakar derajat II meliputi epidermis dan dermis. 3 Luka bakar derajat II dibagi menjadi dua yaitu luka bakar derajat  II  dangkal  /  IIA  dan  II  dalam  /  IIB. Luka  bakar  derajat  IIA  memerlukan  balutan khusus  yang  merangsang  pembelahan  dan pertumbuhan sel. 4
Luka  bakar  yang  luas  mempengaruhi metabolisme  dan  fungsi  setiap  sel  tubuh. Semua  sistem  terganggu  terutama  sistem kardiovaskuler.  Semua  organ  memerlukan aliran  darah  yang  adekuat  sehingga perubahan  fungsi  kardiovaskuler  memiliki dampak  luas  pada  daya  tahan  hidup  dan pemulihan  pasien. 4 Oleh  karena  itu,  luka bakar  harus  segera  ditangani  agar  tidak terjadi  komplikasi  dan  terjadi  proses penyembuhan luka. 5
Proses  penyembuhan  luka  adalah proses biologis yang terjadi di dalam tubuh. 6 Proses  ini  dapat  dibagi  ke  dalam  4  fase utama  yaitu  koagulasi,  inflamasi,  proliferasi dan  remodeling.  Pada  fase  proliferasi fibroblas  adalah  elemen  sintetik  utama dalam proses perbaikan dan berperan dalam produksi  struktur  protein  yang  digunakan selama rekonstruksi jaringan. 7
Secara  khusus  fibroblas  menghasilkan sejumlah  kolagen  yang  banyak.  Pada  fase maturasi serabut kolagen menyebar dengan saling  terikat  dan menyatu serta  berangsur- angsur  menyokong  pemulihan  jaringan. Fibroblas  biasanya  akan  tampak  pada sekeliling  luka. 7 Proliferasi  dan  migrasi fibroblas memegang peranan penting dalam pembentukan  jaringan  granulasi  dan penutupan  luka. 8 Fibroblas  merupakan  sel yang paling umum ditemui pada jaringan ikat dan mensitesis beberapa komponen matriks ekstraseluler  (kolagen,  retikuler,  elastin), beberapa makromolekul anionik (glikosaminoglikans,  proteoglikans)  serta glikoprotein  multiadesif  (laminin  dan fibronektin) yang dapat mendorong perlekatan  sel  pada  substrat. 9 Fibroblas memperoleh fenotip khusus di bawah kontrol keratinosit  yang  disebut  miofibroblas. 10
Miofibroblas  adalah  fibroblas  khusus  yang mirip  dengan  sel  otot  polos  dan  berperan dalam penyambungan komponen ekstraseluler  sel.  Aktivitas  sel-sel  tersebut berperan pada penutupan luka akibat cedera jaringan. 11 Banyak tanaman tradisional di Indonesia yang bermanfaat dalam membantu  penutupan  luka,  salah  satunya yaitu daun sirih. Daun sirih ( Piper betle Linn.) tumbuh  subur  di  sepanjang  daerah  Asia tropis  dan  menyebar  hampir  di  seluruh Indonesia. Daun sirih sering ditemukan pada pekarangan-pekarangan rumah di Indonesia sehingga  tanaman  ini  mudah  didapatkan tanpa  mengeluarkan  biaya  yang  mahal. 12 Daun  sirih  telah  lama  digunakan  dalam
pengobatan  tradisional  oleh  nenek  moyang sebagai  obat  kumur,  menghilangkan  bau badan, obat mimisan, pembersih mata yang gatal  atau  merah,  obat  koreng  atau  gatal- gatal,  dan  obat  sariawan. Selain  itu,  daun sirih  bermanfaat  sebagai  antiseptik  dan vulnerary yaitu menyembuhkan luka. 12,13,14
Daun  sirih  mengandung  saponin, flavonoid,  tanin  dan  minyak  atsiri. Kandungan  saponin,  flavonoid  serta  tanin dapat membantu proses penyembuhan luka karena  berfungsi  sebagai  antioksidan  dan antimikroba yang mempengaruhi penyambungan  luka  juga  mempercepat epitelisasi.
15,16 Kandungan saponin dan tanin berperan  dalam  regenerasi  jaringan  dalam proses  penyembuhan  luka. 17 Kandungan saponin  mempunyai  kemampuan  sebagai pembersih  atau  antiseptik. 18 Saponin  dapat memicu vascular  endothelial  growth  factor (VEGF) dan meningkatkan jumlah makrofag bermigrasi  ke  area  luka  sehingga meningkatkan  produksi  sitokin  yang  akan mengaktifkan  fibroblas  di  jaringan  luka. 18 Kandungan  flavonoid  berfungsi  sebagai antioksidan, antimikroba dan juga antiinflamasi  pada  luka  bakar. 19,20 Onset nekrosis sel dikurangi oleh flavonoid dengan mengurangi lipid peroksidasi. Penghambatan  lipid  peroksidasi  dapat meningkatkan  viabilitas  serat  kolagen, sirkulasi  darah,  mencegah  kerusakan  sel dan meningkatkan sintesis DNA. 17 Kandungan  tanin  mempunyai  kemampuan astringen,  antioksidan  dan  antibakteri. 21,22 Kandungan tanin mempercepat penyembuhan  luka  dengan  beberapa mekanisme  seluler  yaitu  membersihkan radikal  bebas  dan  oksigen  reaktif,
meningkatkan  penyambungan  luka  serta meningkatkan  pembentukan  pembuluh darah  kapiler  juga  fibroblas. 23 Sementara minyak  atsiri  mengandung  kavikol  dan phenol  yang  berguna  sebagai  antimikroba,
antibakteri dan disinfektan. 12,21
Salep merupakan sediaan farmasi yang sering  digunakan  untuk  penyembuhan  luka. Salep  merupakan  sediaan  semisolid berbahan  dasar  lemak  ditujukan  untuk  kulit dan  mukosa.  Sediaan  ini  digunakan  karena mudah diserap oleh kulit dan dicuci dengan air. Salep digunakan untuk pengobatan lokal pada  kulit,  melindungi  kulit  pada  luka  agar tidak  terinfeksi  serta  dapat  melembabkan kulit. 24
Penelitian  sebelumnya  membuktikan bahwa  sediaan  salep  ekstrak  etanol  daun sirih  ( Piper  betle Linn.)  dapat  mempercepat penyembuhan luka sayat pada mencit galur Swiss  Webster betina.  Hasil  yang  terbaik adalah  kelompok  perlakuan  yang  diberikan salep ekstrak daun sirih 20 % secara topikal. Hasil  terbaik  setelah  kelompok  perlakuan salep  ekstrak  daun  sirih  20  %  adalah  pov- idone iodine 10 %, ekstrak daun sirih 10 % ekstrak  daun  sirih  30 %, dan  terakhir  vase- line  album  secara  topical. 25 Namun,  hingga saat ini belum ada penelitian untuk menguji khasiat  sediaan  salep  ekstrak  daun  sirih secara  topikal  terhadap  penyembuhan  luka bakar  pada  tikus  putih  ( Rattus  norvegicus ) galur Wistar.
Berdasarkan  uraian  tersebut  daun  sirih dapat berfungsi sebagai antiseptik, antioksi- dan,  antimikroba,  antibakteri,  antiinflamasi, dan astringen sehingga dapat mempercepat proses  penyembuhan  luka.  Daun  sirih  juga berpotensi  menstimulasi  sejumlah  fibroblas yang  berperan  penting  dalam  perbaikan jaringan.  Manfaat  daun  sirih  yang  sangat besar  dalam  penyembuhan  luka  menjadi alasan  penting  dilakukannya  penelitian  ek- sperimental tentang pengaruh sediaan salep ekstrak  daun  sirih  terhadap  peningkatan jumlah fibroblas pada luka bakar derajat IIA.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menge- tahui pengaruh pemberian ekstrak daun sirih ( Piper  betle Linn.)  terhadap  peningkatan jumlah fibroblas luka bakar derajat IIA pada tikus putih ( Rattus norvegicus) galur Wistar.
Manfaat  penelitian  ini  bagi  profesi keperawatan  adalah  menjadi  dasar  penge-
tahuan  untuk  memahami  daun  sirih  ( Piper betle Linn.) berguna sebagai perawatan luka bakar derajat IIA karena dapat mempengaruhi  jumlah  fibroblas  dan  dapat menambah khasanah di bidang keperawatan luka  bakar  dengan  terapi  komplementer.
Sementara  manfaat  bagi  masyarakat  men- jadi pengetahuan untuk memanfaatkan daun sirih  ( Piper  betle Linn. ) sebagai  obat  luka bakar  derajat  IIA  dalam  kehidupan  sehari- hari.  Manfaat  bagi  peneliti  sendiri  adalah dapat menjadi dasar pengetahuan dan pen- dalaman  peneliti  tentang  pengaruh  daun sirih  ( Piper  betle Linn.)  terhadap  jumlah  fi- broblas  pada  luka  bakar  derajat  IIA  serta dapat  digunakan  sebagai  dasar  dalam penelitian selanjutnya.

## BAHAN dan METODE

## Desain Penelitian
Penelitian ini merupakan penelitian true- experiment pasca tes dengan kelompok ek-
sperimen  dan  kontrol. Sampel  dipilih dengan  cara simple  random  sampling ber- jumlah  24  ekor  tikus  putih  jantan  dengan umur  2,5-3  bulan  dan  berat  badan  150-250 gram  kemudian dibagi menjadi  4 kelompok, yaitu 1 kelompok kontrol diberi NS 0,9 % dan 3  kelompok  perlakuan  diberi  ekstrak  daun sirih konsentrasi 15 %, 30 % dan 45 %. Mas- ing-masing kelompok berjumlah 6 ekor tikus.

## Pembuatan Luka Bakar Derajat IIA
Balok  sterofoam  berukuran  2x2  cm  di- lapisi dan dibungkus kassa yang dicelup air panas  98 0 C  selama  3  menit  dan  ditempel- kan  pada  punggung  tikus  selama  30  detik yang  sebelumnya  dianastesi  menggunakan lidokain  non  adrenalin  berdasarkan  hasil studi  eksplorasi  pada  tanggal  17  Desember 2012 di Laboratorium Farmakologi FKUB.
Perawatan Luka Bakar Derajat IIA
Pada kelompok perlakuan luka dibersihkan  dengan  NS  0,9  %,  kemudian diberi  ekstrak  daun  sirih  konsentrasi  15  %, 30  %  dan  45  %  yang  dibuat  dengan  men- campurkan  vaseline  dan  ekstrak  daun  sirih menggunakan  rumus  sesuai  dengan  kon- sentrasinya  dan  masing-masing  diberikan secara  topikal  sebanyak  50  mg  pada  area luka  kemudian  luka  ditutup  dengan  kassa steril  dan  diplester.  Sementara  kelompok kontrol  dibersihkan  dengan  NS  0,9  % kemudian  ditutup  dengan  kassa  steril  yang sudah  direndam  dalam  NS  0,9  %  dan kemudian diperas. Perawatan luka dilakukan sekali  setiap  hari  pukul  10.00-13.00  WIB hingga hari ke-14.

## Pembuatan Ekstrak Daun Sirih
Proses  ekstraksi  menggunakan  100  g serbuk daun sirih ( Piper betle Linn.) kemudi- an  direndam  dengan  etanol  96  %  hingga volume  1000  ml,  dikocok  selama  30  menit lalu  dibiarkan  selama  24  jam  sampai  men- gendap.  Lapisan  atas  dicampur  etanol dengan  zat  aktif,  dimasukkan  dalam  labu evaporasi 1 liter, water bath diisi dengan air sampai  penuh,  kemudian  semua  alat dipasang termasuk rotary evaporator , pema- nas water  bath (atur  sampai  70-80  °C)  lalu disambungkan  dengan  aliran  listrik.  Biarkan larutan  etanol  memisah  dengan  zat  aktif. Tunggu  sampai  aliran  etanol  berhenti menetes pada labu penampung (± 1,5-2 jam untuk  1  labu).  Hasilnya  +  1/3  dari  serbuk daun  sirih.  Hasil  ekstrak  dimasukkan  ke dalam  botol  plastik  dan  disimpan  dalam freezer.

## Pembuatan  Konsentrasi  Ekstrak  Daun Sirih
Ekstrak daun sirih dicampurkan vaseline dengan menggunakan rumus:
Keterangan :
L =   x 100%
L  : Konsentrasi daun sirih (%) a  : Ekstrak daun sirih (mg) b  : Vaseline (mg)
Pembuatan  konsentrasi  ekstrak  daun sirih dilakukan dengan menambahkan vase- line  sebanyak  50  mg  (berdasarkan  studi eksplorasi  luas  luka  2x2  cm 2 )sesuai  rumus di atas, sehingga didapatkan hasil sbb:
 Konsentrasi  15  %:  7,5  mg  ekstrak  daun sirih dicampurkan dengan 50 mg vaseline.
 Konsentrasi  30  %:  15  mg  ekstrak  daun sirih dicampurkan dengan 50 mg vaseline.
 Konsentrasi  45  %:  22,5  mg  ekstrak  daun sirih dicampurkan dengan 50 mg vaseline.

## Pembuatan  Preparat  Histologi  Jaringan Kulit
Sebelum  membuat  preparat  histologi jaringan  kulit,  sampel  dimatikan  terlebih  da- hulu  dengan  cara  memasukkan  sampel  da- lam  stoples  berisi  larutan  chlor.  Setelah  itu dilakukan  pengambilan  jaringan  kulit  dan diproses untuk pembuatan preparat histologi jaringan  kulit.  Pembuatan  preparat  histologi jaringan  kulit  melalui  beberapa  tahap  yaitu fiksasi, embedding,  slicing ,  dan staining . Pada  tahap  fiksasi  dilakukan  perendaman jaringan  kulit  pada  larutan  formalin  10  % selama  18-24  jam  kemudian  jaringan  kulit dicuci dengan air mengalir selama 15 menit. Pada  tahap embedding ,  jaringan  kulit  di- masukkan  pada  beberapa  cairan  yaitu  ace- ton selama 1 jam x 4, xylol selama ½ jam x 4, paraffin cair selama 1 jam x 3, dan pena- naman jaringan kulit pada paraffin blok. Se- lanjutnya  pada  tahap  slicing,  blok  yang  su- dah  tertanam  jaringan  kulit  diletakkan  pada balok  es  selama ±  15  menit kemudian  blok ditempelkan  pada  cakram microtome  rotary kemudian  jaringan  kulit  disayat  secara vertikal  dengan  ukuran  4  mikron.  Sayatan jaringan  kulit  yang  berbentuk  pita  diambil dengan  menggunakan  kuas  kecil  kemudian letakkan pada water bath yang mengandung gelatin dengan suhu 36 °C. Setelah sayatan
jaringan  kulit  merentang,  sayatan  diambil dengan menggunakan object glass dan didi- amkan selama 24 jam. Pada tahap staining, object  glass dimasukkan  ke  dalam    xylol selama  15  menit  x  3,  alkohol  96  %  selama 15  menit  x  3,  kemudian  dicuci  dengan  air mengalir selama 15 menit, setelah itu, object glass dimasukkan pada pewarna hematoxy- lin selama  15  menit  dan  dicuci  dengan  air mengalir  selama  15  menit. Object  glass di- masukkan  pada lithium  carbonat selama  20 detik dan dicuci dengan air mengalir selama 15 menit. Selanjutnya, object glass dimasuk- kan  pada  pewarna eosin selama  15  menit, alkohol 96 % selama 15 menit x 3 dan x ylol selama 15 menit x 3. Tahap terakhir adalah preparat ditutup dengan menggunakan deck glass dan entellan .

## Identifikasi Fibroblas
Proses  identifikasi  fibroblas  dilakukan setelah  perawatan  luka  selesai.  Fibroblas adalah sel yang berbentuk gelendong, mem- iliki inti satu atau lebih, bersifat basofilik, dan tercat  ungu  pada  pewarnaan  hematoxylin eosin  pada  saat  dilakukan  pengamatan preparat histologi jaringan kulit menggunakan  mikroskop  OLYMPUS  seri XC10  yang  dilengkapi  software  OlyVIA dengan  perbesaran  1000  kali  tiap  lapang pandang.

## Analisis Data
Data yang didapatkan dianalisis dengan software SPSS . Metode analisis menggunakan uji normalitas data dengan uji Kolmogorov-Smirnov. Uji homogenitas menggunakan test  of  homogeneity  of    vari-
ence . Uji one way ANOVA untuk mengetahui perbedaan  yang  signifikan  antar  kelompok perlakuan.  Uji post  hoc Tukey  HSD untuk mengetahui kelompok perlakuan mana yang paling  signifikan  di  antara  kelompok- kelompok  uji  coba.  Uji  regresi  linear  untuk mengetahui  ada  tidaknya  pengaruh  ekstrak
daun  sirih  terhadap  jumlah  fibroblas  luka bakar derajat IIA. 26

## HASIL
Hasil penghitungan jumlah fibroblas luka bakar  derajat  IIA  setelah  diberikan  ekstrak daun  sirih  dan  normal  saline  0,9  %    dapat dilihat  pada  Tabel  1.  Berdasarkan  hasil penghitungan  jumlah  fibroblas  luka  bakar derajat  IIA  pada  tikus  putih  seluruh  perla- kuan pada Tabel 1 menunjukkan hasil yang
bervariasi.  Adanya  pengaruh  pemberian ekstrak  daun  sirih  ( Piper  betle Linn.)  ter- hadap jumlah fibroblas luka bakar derajat IIA ditunjukkan dari semakin rendah konsentrasi ekstrak  semakin  tinggi  jumlah  fibroblas.  Ke- lompok  kontrol  menunjukkan  jumlah  fibro- blas terendah dibandingkan kelompok perla- kuan lain. Melalui data tersebut dapat disim- pulkan  bahwa  bahan  aktif  yang  terkandung dalam  ekstrak  daun  sirih  mempunyai pengaruh  terhadap  peningkatan  jumlah  fi- broblas.
Tabel 1. Jumlah fibroblas pada jaringan kulit yang terkena luka bakar derajat IIA pada kelompok perlakuan
Perlakuan Kode Sam- pel Rata-rata Jumlah Fibro- blas Tiap Sampel Rata-rata Jumlah Fi- broblas Tiap Ke- lompok Ekstrak daun sirih 15 % A1 11.9 12.95 A2 19.1 A3 12.1 A4 11.2 A5 12.4 A6 11 Ekstrak daun sirih 30 % B1 11.8 10.33 B2 11.2 B3 8.4 B4 10.4 B5 9.8 B6 10.4 Ekstrak daun sirih 45 % C1 7.5 5.90 C2 4.6 C3 6.7 C4 6.4 C5 5.7 C6 4.5 NS 0,9 % (kontrol) D1 5.2 4.61 D2 4.9 D3 4.7 D4 3.7 D5 3.4 D6 5.8 Fibroblas dapat dengan jelas dilihat pa- da pewarnaan hematoksilin eosin. Fibroblas biasanya  tersebar  sepanjang  berkas  serat kolagen  dan  tampak  sebagai  sel  fusiform atau  gelendong  dengan  ujung  meruncing.
Inti fibroblas berbentuk lonjong dan panjang yang  mengandung  satu  atau  dua  nukleoli dan  gumpalan  kromatin  halus  berdekatan dengan  selaput  inti.  Inti  fibroblas  tampak pucat  dan  terpulas  gelap  apabila  tercat
hematoksilin  (basa)  sehingga  berwarna  biru keunguan,  sedangkan  sitoplasma  tampak relatif  homogen  dan  bersifat  basofil  karena
tingginya  kandungan  retikulum  endoplasma granular. 27
Gambar 1.  Jaringan kulit yang terkena luka bakar derajat iia per lapang pandang pada seluruh kelompok perlakuan (tanda panah menunjukkan fibroblas)
Keterangan:  (A)  Kelompok  kontrol  normal  saline  0,9  %  (1000x),  (B)  Kelompok  ekstrak  daun  sirih  15  % (1000x), (C) Kelompok ekstrak daun sirih 30 % (1000x), (D) Kelompok ekstrak daun sirih 45 % (1000x).
Hasil  uji  Kolmogorov-Smirnov menun- jukkan  nilai  signifikansi  sebesar  0,774  (p  > 0,05)  sehingga  dapat  disimpulkan  bahwa jumlah  fibroblas  terdistribusi  normal.  Hasil test  of  homogeneity  of  variance menunjuk- kan  nilai  signifikansi  sebesar  0,202  (p  > 0,05)  sehingga  dapat  disimpulkan  bahwa jumlah fibroblas pada semua kelompok per- lakuan  memiliki  variansi  yang  sama  (homo- gen). Setelah dilakukan test of homogeneity of  variance terbukti  bahwa  data  memiliki variansi yang sama (homogen).
Hasil uji one way ANOVA menunjuk- kan  nilai  signifikansi  sebesar  0,000  (p  < 0,05)  sehingga  dapat  disimpulkan  bahwa terdapat perbedaan yang signifikan terhadap jumlah fibroblas pada semua kelompok per- lakuan. Setelah dilakukan uji one way ANO- VA terbukti bahwa terdapat perbedaan yang
signifikan  terhadap  jumlah  fibroblas  pada semua  kelompok  perlakuan  sehingga  perlu dilakukan  uji  perbandingan  berganda  ( post hoc test ).
Hasil  uji  perbandingan  berganda  antar kelompok  perlakuan  menunjukkan  bahwa pada kelompok perlakuan ekstrak daun sirih 15  %  berbeda  signifikan  dengan  45  %  dan kelompok  kontrol  normal  saline  0,9  %  se- dangkan  dengan  30  %  tidak  signifikan.  Hal ini  menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun  sirih 30 % tidak kalah optimal dengan 15 %. Per- lakuan  ekstrak  30  %  berbeda  signifikan dengan ekstrak 45 % dan kelompok kontrol normal saline 0,9 % namun dengan ekstrak 15  %  tidak  signifikan.  Kelompok  ekstrak daun  sirih  45  %  berbeda  signifikan  dengan ekstrak 15 % dan 30 % namun tidak berbeda signifikan  dengan  kelompok  kontrol  normal
A C B D
saline 0,9 %. Kelompok kontrol normal saline 0,9  %  berbeda  signifikan  dengan  kelompok ekstrak  daun  sirih  15  %  dan  30  %  se- dangkan dengan ekstrak 45 % tidak berbeda signifikan.
Tabel  2  menunjukkan  bahwa  kelompok ekstrak daun sirih 15 % adalah yang paling optimal  dibandingkan  kelompok  lainnya. Kemudian  ekstrak  30 %  adalah  konsentrasi optimal  setelah  konsentrasi  15%.  Kelompok ekstrak  daun  sirih  45 %  adalah  konsentrasi optimal  setelah  ekstrak  30  %,  sedangkan kelompok kontrol normal saline 0,9 % adalah kelompok optimal yang terakhir.

## Tabel 2. Homogenous subsets
Jenis Perla- kuan Subset for alpha = 0.05 1 2 NS 4.6167 EDS 45 % 5.9000 EDS 30 % 10.3333 EDS 15 % 12.9500
Analisis  terakhir  yang  dilakukan  adalah uji  regresi  linear.  Hasil  uji  regresi  linear menunjukkan  bahwa  angka  korelasinya sebesar  -0,881  (r  =  0,70-1,00)  yang  berarti terdapat  korelasi  atau  pengaruh  yang  tinggi pada pemberian ekstrak daun sirih terhadap jumlah  fibroblas.  Angka  korelasi  negatif  be- rarti hubungan bersifat tidak searah yaitu jika konsentrasi  ekstrak  daun  sirih  ( Piper  betle Linn.) semakin  besar  maka jumlah  fibroblas semakin  kecil  dan  sebaliknya.  R- square sebesar 77,6 % menunjukkan bahwa ekstrak daun  sirih  mempengaruhi  jumlah  fibroblas sebesar  77,6  %  dan  sisanya  dipengaruhi oleh  faktor  lain.  Nilai  signifikansi  sebesar 0,000 (p < 0,05) sehingga dapat disimpulkan bahwa  model  regresi  layak  digunakan  pada penelitian ini.
PEMBAHASAN
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun sirih yang diekstrak dengan etanol  96  %  dengan  metode  maserasi.  Hal ini  karena  bahan  aktif  yang  terkandung  da- lam daun sirih cenderung larut dalam etanol. Ekstrak daun sirih dibuat dalam bentuk salep dengan  menambahkan  vaseline.  Salep merupakan  sediaan  semisolid  berbahan dasar  lemak  ditujukan  untuk  kulit  dan mukosa.  Sediaan  ini  digunakan  karena  mu- dah diserap oleh kulit dan dicuci dengan air.
Penelitian  ini  menggunakan  tiga  kon- sentrasi  ekstrak  daun  sirih  yang  dipilih  ber- dasarkan  studi  pendahuluan.  Berdasarkan studi  pendahuluan  tersebut  dapat  disimpul- kan  bahwa  ekstrak  daun  sirih  dengan  kon- sentrasi  30  %  mempunyai  kemampuan mempercepat  penyembuhan  luka  yang  op- timal. Berdasarkan penelitian tersebut dipilih tiga konsentrasi ektrak daun sirih yaitu 15 %, 30  %,  dan  45  %  serta  kelompok  kontrol negatif  menggunakan  normal  saline  0,9  %. Konsentrasi  15  %  dan  45  %  diberikan  se- bagai  konsentrasi  yang  diambil  dari  seten- gah  di  atas  dan  di  bawah  konsentrasi  opti- mal.
Fibroblas  merupakan  sel  yang  paling umum ditemui pada jaringan ikat. 9 Fibroblas adalah  sel  yang  menghasilkan  komponen ekstrasel  dari  jaringan  ikat  yang  berkem- bang. 27 Fibroblas  biasanya  tersebar  sepan- jang  berkas  serat  kolagen  dan  tampak  se- bagai  sel  fusiform  atau  gelendong  dengan ujung  yang  meruncing.  Inti  fibroblas  ber- bentuk  lonjong  dan  panjang  yang  mengan- dung  satu  atau  dua  nukleoli  dan  gumpalan kromatin  halus  berdekatan  dengan  selaput inti. Fibroblas dapat dengan jelas dilihat pa- da pewarnaan hematoksilin eosin. 27 Data penelitian ini dianalisis menggunakan  SPSS.  Hasil  uji one  way ANOVA menunjukkan nilai signifikansi 0,000
(p  <  0,05)  yang  berarti  terdapat  pengaruh yang  signifikan  pada  pemberian  ekstrak daun  sirih  ( Piper  betle Linn.)  terhadap  pen- ingkatan  jumlah  fibroblas luka  bakar  derajat
IIA  pada  tikus  putih.    Uji  perbandingan  ber- ganda  ( post  hoc  test )  menunjukkan  perbe- daan  yang  signifikan  pada  pemberian ekstrak  daun  sirih  antara  masing-masing perlakuan  terhadap  peningkatan  jumlah  fi- broblas  pada  luka  bakar  derajat  IIA  pada tikus putih meskipun pada beberapa konsen- trasi  menunjukkan  tidak  adanya  perbedaan yang  signifikan.  Hasil  uji  regresi  linear menunjukkan  bahwa  angka  korelasinya sebesar  -0,881  (r  =  0,70-1,00)  yang  berarti terdapat  korelasi  atau  pengaruh  yang  tinggi pada pemberian ekstrak daun sirih terhadap jumlah fibroblas pada luka bakar derajat IIA. R- square sebesar  77,6  %  menunjukkan bahwa  ekstrak  daun  sirih  mempengaruhi jumlah fibroblas sebesar 77,6 %. Angka ko- relasi negatif berarti hubungan bersifat tidak searah  yaitu  jika  konsentrasi  ekstrak  daun sirih    semakin  kecil  maka  jumlah  fibroblas semakin besar.
Peningkatan  jumlah  fibroblas  ini  diduga karena  efek  kandungan  senyawa  aktif  yang berasal dari  ekstrak  etanol  daun  sirih.  Hasil ekstraksi etanol daun sirih mengandung be- berapa kandungan  senyawa aktif yaitu  sap- onin,  flavonid,  tannin  serta  minyak  atsiri. Kandungan  tersebut  dapat  membantu  pros- es  penyembuhan  luka  dengan  mekanisme yang berbeda-beda.
Saponin  merupakan  steroid  atau glikosida  triterpenoid  dan  banyak  terdapat pada tumbuhan yang berperan penting pada kesehatan  manusia  dan  hewan.  Saponin berfungsi sebagi antitumor, antimutagen dan aktivitas sitotoksik. 28 Saponin dapat memicu vascular  endothelial  growth  factor (VEGF) dan  meningkatkan  jumlah  makrofag  ber- migrasi ke area luka sehingga meningkatkan produksi  sitokin  yang  akan  mengaktifkan fibroblas di jaringan luka. 18 Saponin berpo- tensi  membantu  menyembuhkan  luka dengan  membentuk  kolagen  pertama  yang mempunyai  peran  dalam  proses  penyem- buhan luka. 29
Flavonoid  merupakan  salah  satu senyawa metabolit sekunder yang dihasilkan suatu  tanaman  dan  bisa  dijumpai  pada bagian  daun,  akar,  kayu,  kuit,  tepung  sari, bunga  dan  biji. 30 Kandungan  flavonoid berfungsi  sebagai  antioksidan,  antimikroba dan  juga  antiinflamasi  pada  luka  bakar. 19,20 Flavonoid  dapat  membantu  penyembuhan luka  dengan  meningkatkan  pembentukan kolagen,  menurunkan  makrofag  dan  edema jaringan serta  meningkatkan  jumlah fibroblas. 31 Onset nekrosis sel dikurangi oleh flavonoid dengan mengurangi lipid peroksidasi. Penghambatan lipid peroksidasi dapat meningkatkan viabilitas serat kolagen, sirkulasi  darah,  mencegah  kerusakan  sel dan meningkatkan sintesis DNA. 17
Tanin  merupakan  senyawa phenolic yang  larut  air.  Tanin  berpotensi  sebagai antoksidan  yang  melindungi  dari  kerusakan oksidatif  seperti  kanker,  arthritis  dan penuaan. 32 Kandungan  tanin  berguna sebagai  astringen  atau  menghentikan perdarahan,  mempercepat  penyembuhan luka  dan  inflamasi  membran  mukosa,  serta regenerasi  jaringan  baru. 17,21 Selain  itu, kandungan  tanin  mempunyai  kemampuan antioksidan  dan  antibakteri. 22 Kandungan tanin  mempercepat  penyembuhan  luka dengan  beberapa  mekanisme  seluler  yaitu membersihkan  radikal  bebas  dan  oksigen reaktif,  meningkatkan  penutupan  luka  serta meningkatkan  pembentukan  pembuluh darah kapiler juga fibroblas. 23 Minyak atsiri atau disebut juga essential oil berasal dari daun, bunga, kayu, biji-bijian bahkan  putik  bunga.  Manfaat  minyak  atsiri adalah  sebagai  obat  anti  nyeri,  anti  infeksi dan  pembunuh  bakteri  (disinfektan). 33 Minyak  atsiri  mengandung  phenol  dan kavikol  yang  berguna  sebagai  antimikroba, antibakteri  dan  disinfektan. 21 Semua kandungan  daun  sirih  tersebut  dapat membersihkan luka dan mencegah terjadinya infeksi sehingga dapat
mempercepat  berakhirnya  fase  inflamasi pada proses penyembuhan luka.
Hasil  analisis  data  tersebut  didukung oleh  data  pada  beberapa  literatur.  Salah satu  penelitian  dari  Sari  dan  Isadiartuti menyebutkan  bahwa  daun  sirih  ( Piper  betle Linn.)  dapat  digunakan  sebagai  antiseptik tangan  dalam  bentuk  gel.  Daun  sirih merupakan  salah  satu  tanaman  yang berkhasiat  sebagai  antiseptik.  Melalui penelitian tersebut dapat disimpulkan bahwa sediaan gel dengan kadar ekstrak daun sirih mulai  15  %  mempunyai  kemampuan menurunkan  mikroorganisme  di  telapak tangan hingga 57 %, sedangkan ekstrak 25 % mampu menghilangkan semua mikroorganisme. 13 Kebersihan  luka  akan mencegah terjadinya infeksi serta mempercepat proses penyembuhan. Penelitian sebelumnya menguji pengaruh pemberian infusa daun sirih merah ( Piper cf. fragile Benth)  secara  topikal terhadap penyembuhan luka pada tikus putih diabet.  Hasil  penelitian  tersebut  adalah pemberian  infusa  daun  sirih  merah  secara topikal dengan konsentrasi 10 %, 20 % dan 40 % memiliki efek penyembuhan luka pada tikus  yang  dibuat  diabetes.  Konsentrasi infusa  daun  sirih  merah  40  %  memiliki pengaruh  lebih  baik  terhadap  peningkatan presentase penyembuhan luka dibandingkan infusa daun sirih merah 10 % dan 20 %. 34
Penelitian yang dilakukan oleh Pramana membuktikan  bahwa  sediaan  salep  yang mengandung  ekstrak  etanol  daun  sirih dapat  mempercepat  penyembuhan  luka sayat  pada  mencit  galur  Swiss  Webster betina.  Hasil  yang  terbaik  adalah  kelompok perlakuan yang diberikan salep ekstrak daun sirih  20  %  secara  topikal.  Hasil  terbaik setelah  kelompok  perlakuan  salep  ekstrak daun  sirih  20  %  adalah  povidone  iodine  10 %,  ekstrak  daun  sirih  10  %,  ekstrak  daun sirih  30  %,  dan  terakhir  vaseline  secara topikal. 25
Berdasarkan  hasil  penelitian  pengaruh ekstrak daun sirih terhadap jumlah fibroblas luka bakar derajat IIA pada tikus putih galur Wistar  dapat  ditarik  kesimpulan  bahwa penelitian ini memiliki validitas internal yang tinggi  ditandai  dengan  perbedaan  signifikan antar  kelompok  perlakuan  berdasarkan analisis  uji one  way ANOVA.  Penelitian ekstrak  daun  sirih  ini  mempunyai  efek terhadap  peningkatan  jumlah  fibroblas namun  masih  diperlukan  uji  lebih  lanjut tentang  farmakokinetik,  farmakodinamik, toksisitas,  dan  efek  ekstrak  daun  sirih  ini pada  hewan  coba  dan clinical  trial pada manusia.
Aplikasi  klinis  dari  penelitian  ini  masih memerlukan penelitian lebih lanjut mengenai standarisasi bahan aktif apa saja yang dapat digunakan. Penelitian lebih lanjut diperlukan untuk  mengetahui  konsentrasi  yang  aman dan  tepat  untuk  ekstrak  daun  sirih  agar dapat  berfungsi  sebagai  obat  luka  bakar derajat  IIA  sehingga  dapat  digunakan sebagai  pengobatan  alternatif  untuk berbagai kalangan masyarakat di Indonesia.

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa sediaan salep  ekstrak  daun  sirih  berpengaruh  ter- hadap  peningkatan  jumlah  fibroblas  pada luka bakar derajat IIA yang ditandai dengan semakin  rendah  pemberian  konsentrasi ekstrak  daun  sirih  akan  menyebabkan  pen- ingkatan  jumlah  fibroblas.  Jumlah  fibroblas antar kelompok perlakuan berbeda signifikan karena  tingkat  keefektifan  dan  keoptimalan konsentrasi  yang  juga  berbeda-beda  yaitu dengan  urutan  kelompok  perlakuan  yang mempunyai hasil jumlah fibroblas terbanyak adalah  ekstrak  daun  sirih  konsentrasi  15  % ( ̅ = 12,95), 30 % ( ̅ = 10,33), 45 % ( ̅ = 5,90) dan terakhir normal saline 0,9 % ( ̅ = 4,61).

## SARAN
1. Diperlukan  penelitian  lebih  lanjut  ter- hadap  uji  toksisitas  penggunaan  ekstrak daun  sirih  agar  pemanfaatan  ekstrak daun  sirih  aman  diaplikasikan  kepada manusia.
2. Diperlukan penelitian lebih lanjut dengan rentang  dosis  yang    lebih  sempit  untuk mengamati dose-effect relationship yang lebih  jelas  agar  pemanfaatan  ekstrak daun  sirih  dapat  diaplikasikan  kepada manusia.
3. Diperlukan penelitian lebih lanjut tentang pengaruh  ekstrak  daun  sirih  terhadap jumlah  fibroblas  luka  bakar  derajat  IIA pada tikus putih  galur Wistar dalam ben- tuk  sediaan  yang  lebih  sederhana  yaitu dekok  agar  lebih  mudah  diaplikasikan pada masyarakat.

## DAFTAR PUSTAKA
1. (WHO)  World  Health  Organization. Burns. 2012. (Online). http://www.who.int/mediacentre/factshee ts/fs365/en/. Diakses 7 Agustus 2012. 2. Nurdiana,  Hariyanto,  dan  Musrifah. Perbedaan  Kecepatan  Penyembuhan Luka Bakar Derajat II antara Perawatan Luka  Menggunakan  Virgin  Coconut  Oil ( Cocos nucifera ) dan Normal Salin pada
Tikus  Putih  ( Rattus  novergicus )  Strain Wistar. 2008. (Online), (http://elibrary.ub.ac.id/bitstream/123456 789/18039/1/Perbedaan-kecepatan- penyembuhan-luka-bakar-derajat-II- antara-perawatan-luka-menggunakan- virgin-coconut-Oil-%28Cocos- nucifera%29-dan-normal-salin-pada- tikus-putih-%28Rattus-norvegicus%29- strain-wistar.pdf.  Diakses  13  Maret 2012).
3. Betz CL. Buku Saku Keperawatan Pedi- atri . Edisi ke-5. Jakarta: EGC. 2009.
4. Corwin  EJ. Buku  Saku  Patofisiologi.
Edisi ke-3. Jakarta: EGC. 2009.
5. Morison MJ. Manajemen Luka . Jakarta: EGC. 2003.
6. Guo S and DiPietro LA. Factors Affect- ing  Wound  Healing. J  Dent  Res .  2010;
89(3): 219-229.
7. Suriadi. Perawatan  Luka .  Jakarta:  Sa- gung Seto. 2004.
8. Kanazawa et  al .  bFGF  Regulates  PI3- Kinase-Rac1-JNK  Pathway  and  Pro- motes  Fibroblasts  Migration  in  Wound Healing. PLoS One . 2010; 5(8).
9. Djuwita H, Widyaputri T, Efendi A, Kaiin EM,  dan  Nurhidayat.  Tingkat  Pertum- buhan  dan  Analisa  Protein  Sel-Sel  Fi- broblas Fetal Tikus Hasil Kultur In Vitro. Indonesian  Journal  of  Veterinary  Sci- ence & Medicie. 2010; 1(2): 9-16.
10. Werner  S,  Krieg  T  and  Smola  H.
Keratinocyte-Fibroblast  Interaction  in Wound Healing. Journal of Investigative Dermatology . 2007; 127: 998-1008.
11. Porter  S.  The  Role  of  the  Fibroblast  in Wound  Contraction  and  Healing.
Wounds UK . 2007; 3(1): 33-40. 12. Moeljanto RD. Khasiat & Manfaat Daun Sirih: Obat Mujarab dari Masa ke Masa , Jakarta: Agro Media Pustaka. 2003. 13. Sari R. dan Isadiartuti D. Studi Efektivi- tas  Sediaan  Gel  Antiseptik  Tangan Ekstrak  Daun  Sirih  ( Piper  betle Linn.). Majalah Farmasi Indonesia . 2006; 17(4): 163-169. 14. Fauzi  A. Aneka  Tanaman  Obat  dan Khasiatnya . Yogyakarta: Media Pressindo. 2009. 15. Senthil P, Kumar AA, Manasa M, Kumar KA, Sravanthi K, and Deepa D. Wound Healing  Activity  of  Alcoholic  Extract  of “ Guazuma  ulmifolia” Leaves  on  Albino Wistar  Rats. International  Journal  of Pharma  and  Bio  Sciences. 2011;  2(4):
34-38.
16. Saroja M, Santhi R and Annapoorani S. Wound  Healing  Activity  of  Flavonoid
Fraction  of Cynodon  dactylon in  Swiss Albino  Mice. International  Research Journal  of  Pharmacy .  2012;  3(2):  230-
231.
17. Reddy  BK,  Gowda  S,  and  Arora  AK. Study  of  Wound  Healing  Activity  of Aqueous and Alcoholic Bark Extracts of
Acacia  catechu on  Rats. RGUHS  Jour- nal  of  Pharmaceutical  Sciences .  2011; 1(3): 220-225.
18. Kimura  Y,  Sumiyoshi  M,  Kawahira  K, and  Sakanaka  M.  Effects  of  Ginseng Saponins  Isolated  from  Red  Ginseng Roots on Burn Wound Healing in Mice. British  Journal  of  Pharmacology. 2006; 148: 860-870.
19. Harborne JB and Williams CA. Advanc- es  in  Flavonoid  Research  Since  1992. Phytocemistry . 2000; 481-504.
20. Park et  al .  Protection  of  Burn-Induced Skin  Injuries  by  the  Flavonoid Kaempferol. BMB Reports . 2010; 43(1): 46-51.
21. Nafiu,  Olugbemiro,  Mikhail  A,  Adewumi M, Yakubu, Toyin M. Phytochemical and
Mineral  Contituents  of Cochlospernum planchonii (Hook.  Ef.  X  Planch)  Root.
Bioresearh Bulletin . 2011; 5:51-56.
22. Lai  HY,  Lim  YY  and  Kim  KH.  Potential Dermal Wound Healing Agent in Blech- num  orientale Linn. BioMed  Central
Complemantary  and  Alternative  Medi- cine . 2011; 11: 62.
23. Sheikh  AA,  Sayyed  Z,  Siddiqui  AR, Pratapwar AS, and Sheakh SS. Wound Healing  Activity  of Sesbania  grandiflora Linn Flower Ethanolic Extract Using Ex- cision  and  Incision  Wound  Model  in Wistar  Rats. International  Journal  of PharmTech  Research .  2011; 3(2):  895-
898.
24. Yanhendri SWY. Berbagai Bentuk Sedi- aan  Topikal  dalam  Dermatologi. CDK- 194 . 2012; 39(6): 423-430.
25. Pramana  KA.  Efek  Sediaan  Salep Ekstrak  Etanol  Daun  Sirih  ( Piper  betle
Linn.)  dalam  Mempercepat  Penyem- buhan  Luka  pada  Mencit  Galur  Swiss Webster  Betina.  Tugas  Akhir.  Tidak diterbitkan.  Abstrak.  Bandung:  Fakultas Kedokteran Universitas Kristen Marana- tha. 2009.
26. Suliyono, J. 6 Hari Jago SPSS 17 . Yog- yakarta: Cakrawala. 2010.
27. Bloom dan Fawcet. Buku Ajar Histologi . Edisi ke-12. Jakarta: EGC. 2002.
28. Wahed  RA.  Effect  of  Crude  Saponin Extracted from Alfalfa ( Medicago Sativa L ) on Neoplastic and Normal Cell Lines. Journal  of  Al-Nahrain  University .  2009; 12(1): 107-112.
29. Astuti SM, Sakinah M, Andayani R, dan Risch  A.  Determination  of  Saponin Compound  from Anredera  cordifolia (Ten)  Steenis  Plant  (Binahong)  to  Po- tential  Treatment  for  Several  Diseases. Journal  of  Agricultural  Science .  2011;
3(4): 224-232.
30. Sriningsih, Adji HW, Sumaryono W, Wi- bowo  AE,  Caidir,  Firdayani,  Kusuman- ingrum  S,  Kartakusuma,  Pertamawati. Analisa  Senyawa  Golongan  Flavonoid Herba  Tempuyung  ( Sonchus  arvensis L.). Jakarta: Fakultas Farmasi Universi- tas Pancasila. 2002.
31. Ambiga, Narayanan, Gowri D, Sukumar, and  Madhavan.  Evaluation  of  Wound Healing Activity of Flavonoids from Ipo- moea  carnea Jacq. Ancient  Science  of Life . 2007; XXVI: 45-51. 32. Hagerman AE. Tannins as Antioxidants. 2002. (Online). http://www.users.muohio.edu/hagermae/ Biologi- cal%20Activities%20of%20Tannins.pdf .
Diakses 31 Maret 2013. 33. Gunawan  W.  Kualitas  dan  Nilai  Minyak Atsiri,  Implikasi  pada  Pengembangan Turunannya. Di dalam: Himpunan Kimia Indonesia  Jawa  Tengah. Kimia  Berisi SETS  (Science,  Environment,  Technol- ogy, Society) Kontribusi Bagi Kemajuan
Pendidikan  dan  Industri .  Seminar  Na- sional. Semarang. 21 Maret 2009.
34. Mun’im  A,  Azizahwati,  Fimani  A. Pengaruh  Pemberian  Infusa Daun  Sirih
Merah  ( Piper cf. fragile ,  Benth)  secara
Topikal  Terhadap  Penyembuhan  Luka pada Tikus Putih Diabet. 2010. (Online).
(http://herbalnet.healthrepository.org/bits tream/123456789/2547/1/WOUND%20
HLAING%20%20OF%20SIRIH%20MER
AHrev01.pdf).