## ABSTRAK

## ABSTRACT
UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI FRAKSI n -HEKSANA, ETER DAN AIR DARI EKSTRAK ETANOLIK DAUN JAMBU MEDE ( Anacardium occidentale L.) TERHADAP BAKTERI Shigella dysentariae ATCC 9361 DENGAN METODE DIFUSI
ANTIBACTERIAL ACTIVITY TEST OF n-HEXANE, ETHER, AND WATER FRACTIONS OF CASHEW LEAVES ( Anacardium occidentale L.) AN ETHANOL EXTRACT AGAINST Shigella dysentariae ATCC 9361

## BY DIFFUSION METHOD
1 1
2
Dewi Putri Meirastuti , Fransiska Leviana , Ratno Agung Samsumaharto
1 Fakultas Farmasi Universitas Setia Budi
2 Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Setia Budi
Anacardium occidentale L. merupakan tanaman suku Anacardiaceae yang ditemukan secara luas di daerah tropik dan dapat tumbuh di segala macam tanah. Tujuan penelitian adalah untuk mengetahui efektifitas fraksi n-heksana, eter dan air dari ekstrak etanolik daun jambu mede sebagai antibakteri terhadap Shigella dysenteriae ATCC 9361.
Penyarian daun jambu mede dengan metode maserasi menggunakan pelarut etanol 96% dilanjutkan fraksinasi dengan pelarut n-heksana,  eter  dan  air.  Metode  pengujian  aktivitas  antibakteri  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  metode  difusi. Metode  difusi  untuk  mengukur  diameter  zona  hambat  terhadap  pertumbuhan  bakteri  dengan  konsentrasi  yang  digunakan adalah 50%, 25% dan 12,5%. Fraksi paling aktif diuji kandungan kimianya secara KLT.
Berdasarkan hasil penelitian, metode difusi fraksi n-heksana memiliki diameter zona hambat rata-rata 16,7 mm pada konsentrasi 50%, 15,3 mm pada konsentrasi 25% dan 14,3 mm pada konsentrasi 12,5%. Fraksi eter memiliki diameter zona hambat rata-rata 21,7 mm pada konsentrasi 50%, 20,3 mm pada konsentrasi 25% dan 19,0 mm pada konsentrasi 12,5%. Fraksi air memiliki diameter zona hambat rata-rata 15,3 mm pada konsentrasi 50%, 14,3 mm pada konsentrasi 25% dan 13,3 mm pada konsentrasi 12,5%. Fraksi paling aktif eter diuji kandungan kimia secara KLT. Hasil identifikasi menunjukkan fraksi eter positif mengandung senyawa polifenol, flavonoid dan alkaloid.
Kata kunci : Daun Jambu Mede, fraksi n-heksana, fraksi eter, fraksi air, Shigella dysenteriae ATCC 9361.
Anacardium occidentale L. is a plant of Anacardiaceae family that is found widely in the tropics and can be grown in all kinds of soil. The aim of the study was to find out the effectiveness of n-hexane, ether, and water fractions of cashew leaves ethanol extract against Shigella dysenteriae ATCC 9361.
The extraction of the cashew leaves by maceration method used ethanol 96% solvent, followed by fractination with n-hexane, ether, and water solvents. The antibacterial activity test was by diffusion method. The concentrations used for measuring the diameter of inhibition zone against the growth of bacteria were 50%, 25%, and 12,5%. The chemical contents of the most active fraction were tested by TLC.
According to the result of the study, diffusion method of n-hexane fraction had inhibition zone diameter on average 16.7 mm at concentration of 50%, 15.3 mm at concentration of 25% , and 14.3 mm at concentration of 12,5%. The ether fraction had inhibition  zone  diameter  on  average  21.7  mm  at  concentration  of  50%,  20.3  mm  at  concentration  of  25%,  and  19.0  mm  at concentration of 12,5%. The water fraction had inhibition zone diameter on average 15.3 mm at concentration of 50%, 14,3 mm at concentration of 25%, and 13,3 mm at concentration of 12,5%. The chemical contents of the most effective ether fraction were tested by TLC. The result of identification showed that ether fraction positively contained polyphenol, flavonoid, and alkaloid.

## ARTIKEL PENELITIAN
Keywords: Cashew leaf, n-hexane fraction, ether fraction, water fraction, Shigella dysenteriae ATCC 9361.

## PENDAHULUAN
D i  Indonesia  dikenal  lebih  dari  20.000  spesies tanaman  obat,  namun  baru  1.000  spesies  saja yang  sudah  didata  dan  baru  sekitar  300  spesies  yang sudah  dimanfaatkan  untuk  pengobatan  (Hariana  2004). Lebih  kurang  20%  resep  obat  di  negara  maju  memuat tanaman  obat  atau  bahan  berkhasiat  yang  berasal  dari tanaman,  dan  di  negara  berkembang  mencapai  80%. Obat  tradisional  adalah  obat  yang  berasal  dari  tumbuh- tumbuhan,  hewan,  mineral,  dan  atau  sediaan  galeniknya atau  campuran  dari  bahan-bahan  tersebut  yang  belum mempunyai  data  klinis  dan  dipergunakan  dalam  usaha pengobatan  berdasarkan  pengalaman  (Depkes  1983). Tanaman  berkhasiat  obat  perlu  ditingkatkan  dalam  hal upaya pengenalan, penelitian, pengujian dan pengembangan khasiat  serta  keamanan  suatu  tanaman  obat  agar  peran obat tradisional dalam pelayanan kesehatan dapat meningkat (Depkes 2000), salah satunya adalah tanaman jambu mede ( Anacardium occidentale L . ).
Bagian  dari  tanaman  jambu  mede  yang  sering digunakan sebagai obat adalah buah, daun maupun kulit  batang.  Daun  jambu  mede  mengandung  zat kimia  seperti  saponin,  tanin-galat,  flavonol,  asam anakardiol, asam elagat, senyawa fenol, kardol, dan metil  kardol,  dan  minyak  atsiri  (Dalimartha  2000). Secara  tradisional,  daun  jambu  mede  digunakan untuk mengobati penyakit seperti : kencing manis, disentri dan radang mulut (Raina 2011). Salah  satu  penyakit  yang  secara  tradisional  dapat diobati  dengan  daun  jambu  mede  adalah  disentri (Raina 2011).  Disentri  merupakan  suatu  infeksi  akut radang  colon  yang  salah  satunya  disebabkan  oleh kuman  genus  Shigella.  Disentri  ditularkan  secara  oral melalui air, makanan, lalat yang tercemar oleh ekskreta pasien.  Penyakit  ini  berlangsung  dari  beberapa  jam sampai 3 hari, jarang lebih dari tiga hari. Adapun gejala yang  timbul  yaitu  defekasi  sedikit-sedikit  dan  dapat terus-menerus,  sakit  perut  dengan  rasa  kolik,  mejan, muntah-muntah, dan sakit kepala (Noer et al. 1996).
Shigella  dysenteriae merupakan  bakteri  yang menghasilkan  toksin  sebagai  penyebab  iritasi  dinding usus. Penyakit yang ditimbulkan dari bakteri ini adalah disentri basiler dengan gejala sakit perut, nyeri, diare dan demam, tinja encer mengandung lendir dan darah (Suryono 1995).
Berdasarkan  penelitian  terdahulu  telah  diketahui bahwa ekstrak etanol daun jambu mede terbukti efektif sebagai  antibakteri  terhadap Shigella  dysenteriae (Arekemase et al. 2011). Berdasarkan hal tersebut maka perlu  dilakukan  penelitian  lanjutan  mengenai  aktivitas atibakteri daun jambu mede terhadap Shigella dysenteriae dengan  pemisahan  komponen  senyawa  berdasarkan polaritasnya  secara  fraksinasi  sehingga  diketahui  fraksi teraktif yang mempunyai daya hambat atau daya bunuh terhadap Shigella dysenteriae.
Metode penyarian yang digunakan adalah maserasi kemudian dilanjutkan dengan fraksinasi. Pada metode maserasi  pelarut  yang  digunakan  adalah  etanol  96%. Sedangkan pada fraksinasi digunakan pelarut nonpolar, semipolar, dan polar. Untuk pelarut nonpolar digunakan n- heksana,  pelarut  semipolar  digunakan  eter,  dan pelarut polar menggunakan air.
Uji  aktivitas  antibakteri  dapat  dilakukan  dengan berbagai  metode,  yaitu  metode  difusi  dan  dilusi  atau pengenceran. Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah metode difusi. Metode difusi dapat digunakan untuk mengetahui garis tengah daerah hambatan jernih
Dewi Putri Meirastuti, Fransiska Leviana, Ratno Agung Samsumaharto
yang mengelilingi obat dianggap sebagai ukuran kekuatan hambatan terhadap bakteri yang diperiksa (Jawetz et al. 1986).

## METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan

## Alat
Alat-alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah alat timbang analisa yang mempunyai ketelitian baca minimum 0,1 mg dan daya muat maksimum 100 gram, inkas, ose platina, cawan petri, erlenmeyer, tabung

## Bahan
Bahan sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun jambu mede ( Anacardium occidentale L . ) segar  yang  diambil  dari  daerah  Palur,  Kabupaten Karanganyar,  Jawa  Tengah.  Bakteri  uji  yang  digunakan dalam penelitian ini adalah Shigella dysenteriae yang dibiakkan.  Medium  yang  digunakan  dalam  penelitian ini adalah medium Braint Heart Infusion (BHI) , Sandart Brown  II,  Mueller  Hinton  Agar (MHA) ,  Sulfida  Indol Motility (SIM) , Kligler Iron Agar (KIA) , Lysine Iron Agar (LIA) ,  Citrat,  Salmonella  Shigella  Agar (SSA).  Bahan kimia  yang  digunakan  adalah  pelarut n- heksana , eter, etanol 96% , aquadest, metanol, n -butanol, asam asetat, kloroform, anisaldehid, asam sulfat, toluen, etil asetat. Jalannya penelitian Pengambilan bahan Daun jambu mede ( Anacardium occidentale L.) diambil dari daerah Palur, Kabupaten Karanganyar, Jawa  Tengah. Kondisi  daun  yang  diperoleh  dipilih kualitas yang paling baik.
Pembuatan serbuk Daun  jambu  mede  ( Anacardium  occidentale L.) dicuci dengan air, ditiriskan lalu dikeringkan dengan oven o pada suhu 50  C. Daun kering diblender dan diayak dengan menggunakan ayakan no. 40 sampai didapatkan serbuk daun  jambu  mede  ( Anacardium  occidentale L.)  yang diinginkan.
Penetapan susut pengeringan serbuk daun jambu mede
Penetapan  susut  pengeringan  daun  jambu  mede digunakan  menggunakan  alat Moisture  balance .  Suhu o atau  temperatur  diatur  yaitu  sebesar  105 C  kemudian dimasukkan neraca timbang dengan posisi 0,00. Sampel serbuk daun jambu mede sebanyak 2,000 g dimasukkan. Kemudian  ditunggu  sampai  alat  berbunyi  yang

## Pembuatan ekstrak etanol 96% daun jambu mede
Serbuk daun jambu mede ditimbang sebanyak 200 gram  kemudian  dimasukkan  ke  dalam  wadah  atau bejana,  bersama  dengan  cairan  penyari  yang  telah ditetapkan,  bejana  ditutup  rapat  dan  isinya  dikocok berulang-ulang, selama 5 hari.

## Fraksinasi ekstrak etanolik daun jambu mede
Ekstrak  kental  yang  diperoleh  dari  hasil  ekstraksi daun  jambu  mede  selanjutnya  difraksinasi  cair-cair dengan  menggunakan  50  ml  air  dan  50  ml n -heksana sebanyak  tiga  kali  menggunakan  corong  pisah  sampai membentuk  dua  lapisan  cairan  yang  terpisah  secara nyata.  Fraksi n- heksana  dipisahkan  dari  fraksi  berairnya dan dikumpulkan dalam wadah yang berbeda, kemudian dikering anginkan. Fraksi berair yang diperoleh difraksinasi cair-cair  kembali  dengan  50  ml  eter  sebanyak  tiga  kali menggunakan  corong  pisah  sampai  membentuk  dua lapisan  cairan  yang  terpisah  secara  nyata.  Fraksi  eter dipisahkan  dari  fraksi  airnya  dan  dikumpulkan  dalam wadah yang berbeda, kemudian dikering angikan, sisanya adalah fraksi air dipekatkan dengan waterbath.

## Pembuatan suspensi bakteri uji
Bakteri uji Shigella dysenteriae dalam biakan murni diambil  satu  ose  dan  kemudian  dimasukkan  tabung yang  telah  diisi  media  BHI  ( Brain  Heart  Infusion )  cair o kemudian diinkubasi pada suhu 37  C selama 24 jam,
UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI FRAKSI n-HEKSANA, ETER DAN AIR  DARI EKSTRAK ETANOLIK DAUN JAMBU MEDE
(Anacardium occidentale L.) TERHADAP BAKTERI Shigella dysentariae ATCC 9361 DENGAN METODE DIFUSI
reaksi,  gelas  ukur,  pipet  tetes,  neraca  analitik,  pipet volume (10 ml; 15 ml; 0,5 ml), siring, pinset, inkubator, kain flannel, kapas, corong kaca, boor prop, mikropipet, kapas  lidi  steril,  autoclave,  kertas  saring,  oven  binder, lampu spirtus dan detektor sinar UV 254 nm.
menandakan hasil analisa telah selesai. Susut pengeringan memenuhi  syarat  dimana  susut  pengeringan  suatu serbuk simplisia tidak boleh lebih dari 10% (Depkes 1979).
selanjutnya  diencerkan  dengan  aquadest  steril  sampai didapat kekeruhan yang sama dengan Standart Brown II (Bonang & Koeswardono 1982).

## Pengujian aktivitas antibakteri
Metode  yang  digunakan  yaitu  difusi  dengan menyelupkan  kapas  lidi  steril  pada  suspensi  bakteri yang telah dibuat  kemudian diinokulasikan ke dalam medium MHA dengan metode perataan ( Spread Plate Method )  dan  medium  didiamkan  selama  10  menit pada  suhu  kamar  agar  suspensi  biakan  terdifusi  ke dalam media. Pada media tersebut dibuat 4 sumuran
Dewi Putri Meirastuti, Fransiska Leviana, Ratno Agung Samsumaharto
Kandungan uji Konsentrasi Diameter hambat (mm) Replikasi Rata-rata 1 2 3 Ekstrak etanol 50% 19 18 20 19,0 ± 1,00 25% 17 17 18 17,3± 0,57 12,5% 15 16 17 16,0 ± 1,00 n- heksana 50% 16 17 17 16,7± 0,57 25% 15 16 15 15,3± 0,57 12,5% 14 15 14 14,3± 0,57 Eter 50% 22 21 22 21,7± 0,57 25% 20 20 21 20,3± 0,57 12,5% 19 18 20 19,0 ± 1,00 Air 50% 15 15 16 15,3± 0,57 25% 14 14 15 14,3± 0,57 12,5% 13 13 14 13,3± 0,57 Kontrol positif (+) 15 % 40 40 40 40,0 ± 0,00 Kontrol negatif (-) 0 0 0 0

## Kromatografi lapis tipis
Kromatografi lapis tipis dilakukan untuk menguji fraksi  aktif  dalam  ekstrak  etanol  daun  jambu  mede. Ekstrak  atau  fraksi  aktif  dilarutkan  dalam  pelarut yang  sesuai,  kemudian  ditotolkan  di  atas  lempeng kromatografi,  setelah  totolan  kering,  lempeng  KLT dimasukkan  dalam  bejana  yang  sudah  jenuh  oleh fase  gerak  yang  sesuai.  Pengembangan  dilakukan sampai  jarak  tertentu,  kemudian    dilakukan  deteksi di bawah sinar UV 254 nm dan 366 nm serta pereaksi tertentu. Bercak yang terdeteksi ditentukan harga Rf dan penampakan warnanya.

## HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN

## Hasil penelitian
Tabel 1. Prosentase bobot kering terhadap bobot basah daun jambu mede
Tabel 2. Rendemen ekstrak maserasi daun jambu mede
Serbuk daun jambu mede (gram) Ekstrak kental (gram)
Rendemen ekstrak (% b / b ) 200 86 43 %
Tabel 3. Rendemen hasil fraksinasi fraksi n- heksana, eter, dan air dari ekstrak etanol daun jambu mede
Fraksi Rendemen (%) n- heksana 14,23 Eter 28,10 Air 47,96
Tabel 4. Diameter zona hambat uji aktivitas antibakteri dari ekstrak dan fraksi daun jambu mede terhadap bakteri
Shigella dysenteriae ATCC 9361
Keterangan :
Kontrol negatif (-) : pelarut DMSO 1% Kontrol positif (+) : kotrimoksazol 15%
Tabel 5. Hasil identifikasi fraksi eter daun jambu mede secara Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
Senyawa Pereaksi semprot Warna sinar UV Rf Pustaka (Harborne 1987) Ket pereaksi UV 254 nm UV 366 nm Flavonoid Sitroborat kuning biru gelap Flouresensi b iru 0,73 Flouresensi biru, kuning, ungu padaUV 366 nm (+) Polifenol FeCl 3 Biru Biru kehitaman Biru 0,87 Biru pada sinar biasa (+) Alkaloid Dragendrof Jingga Merah gelap Biru 0,96 Jingga sampai merah tua pada sinar biasa ( + ) Bobot basah (gram) Bobot kering (gram) Prosentase b / b )
3200 1042 32,562 % (%
dengan adanya zona jernih di sekitar sumuran yang tidak ditumbuhi bakteri pada fraksi eter lebih luas.
Hasil pengujian aktivitas antibakteri menunjukkan bahwa ekstrak  etanol,  fraksi n -heksana,  fraksi  eter,  dan  fraksi  air memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri Shigella dysenteriae ATCC  9361  ditunjukkan  dengan  adanya  zona jernih di sekitar sumuran. Fraksi eter lebih efektif dibandingkan dengan ekstrak etanol, fraksi n -heksana, dan air. Hal ini terlihat
Pembahasan
dengan  boor  prop  dengan  jarak  yang  sama.  Pada sumuran  diisi  sampel  uji  yaitu  ekstrak  etanolik,  fraksi n -heksana,  fraksi  eter,  fraksi  air,  kotrimoksazol  15% sebagai  kontrol  positif  dan  pelarut  DMSO  1%  sebagai kontrol  negatif  dengan  menggunakan  pipet  droper. Konsentrasi  ekstrak  dan  fraksi  masing-masing  50%, 25%  dan  12,5%.  Masa  inkubasi  selama  24  jam  pada
o suhu  37 C  dan  diamati  hasilnya,  setelah  itu  diukur diameter zona hambat sekitar sumuran yang dinyatakan dalam satuan mm. Zona yang tidak ditumbuhi bakteri di  sekitar  sumuran  menandakan  adanya  daya  hambat terhadap Shigella  dysenteriae ATCC  9361.  Pengujian dilakukan sebanyak 3 kali replikasi.
Dilakukan  uji  Kruskal-Wallis  karena  data  tidak terdistribusi normal. Pada uji Kruskal-Wallis didapatkan hasil distribusi zona hambat antara ekstrak etanol 96%, fraksi n -heksana,  fraksi  eter,  fraksi  air,  kotrimoksazol
UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI FRAKSI n-HEKSANA, ETER DAN AIR  DARI EKSTRAK ETANOLIK DAUN JAMBU MEDE (Anacardium occidentale L.) TERHADAP BAKTERI Shigella dysentariae ATCC 9361 DENGAN METODE DIFUSI
15%,  dan  pelarut  DMSO  pada  berbagai  konsentrasi berbeda  signifikan.  Selanjutnya  dilakukan  uji  Mann- Whitney  untuk  menguji  kemaknaan  perbedaan  dua sampel tidak berhubungan (independen) dengan berskala ordinal.
Berdasarkan hasil zona hambat pada masing-masing fraksi  terlihat  bahwa  semakin  tinggi  konsentrasinya, zona  hambat  semakin  besar.  Namun,  berdasarkan hasil uji Mann-Whitney zona hambat pada konsentrasi 25% tidak berbeda signifikan dengan konsentrasi 12,5% dan  50%.  Akan  tetapi  zona  hambat  pada  konsentrasi 12,5% berbeda signifikan dengan konsentrasi 50%. Zona hambat paling besar terdapat pada fraksi eter 50%  dan  pada  uji  Mann-Whitney  zona  hambat  fraksi eter  50%  menunjukkan  perbedaan  yang  signifikan dengan  ekstrak  etanol,  fraksi n -heksana,  dan  fraksi air  pada  konsentrasi  yang  sama.  Hasil  analisa  secara KLT  pada  fraksi  eter  menunjukkan  bahwa  fraksi  eter mengandung senyawa flavonoid, polifenol, dan alkaloid.

## DAFTAR PUSTAKA
[Departemen Kesehatan RI]. 1979. Farmakope Indonesia . Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. [Departemen Kesehatan RI]. 1983. Pemanfaatan Tanaman Obat . Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. [Departemen Kesehatan RI]. 2000. Pedoman Pelaksanaan Uji Klinik Obat Tradisional . Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. hlm 1-2.
Arekemase  MO,  Oyeyiola  GP,  Aliyu  MB.  2011.  Antibacterial Activity of Anacardium occidentale L. on Some Enterotoxin Producing Bacteria. International Journal of Biology 3:92-99. Bonang G dan Koeswardono. 1982. Mikrobiologi Untuk Laboratorium dan Klinik . Jakarta: PT Gramedia. hlm 77-78, 176-191. Dalimartha S. 2000. Atlas Tumbuhan Obat Indonesia. Cetakan 1. Jakarta: Trubus Agriwidya.
Hariana A. 2004. Tumbuhan Obat dan Khasiatnya .  Jakarta: Penebar Swadaya.
Jawetz  E,  Melnick  JL,  Adelberg  EA.  1986. Mikrobiologi  untuk Profesi Kesehatan . Ed ke-16. Gerard Bonang, penerjemah; Jakarta: EGC. hlm 239, 241-243. Terjemahan dari: Review of Medical Mikrobiology.
Noer HMS, Waspadji S, Rachman AM, Lesmana LA, Widodo D, Isbagio H, Alwi I, Husodo UB. 1996. Buku Ajar Ilmu Penyakit Dalam . Ed ke-3. Jakarta: PAPDI. hlm: 458-459. Raina. 2011. Ensiklopedi Tanaman Obat untuk Kesehatan. Yogyakarta: Absolut Suryono. 1995. Bakteriologi Umum dan Bakteriologi Klinik . Kediri: Akademi Analisis Kesehatan Bhakti Wiyata.