Penghambatan Enzim Asetilkolinesterase Pada Penyakit Alzheimer Dari Ekstrak Etanol Daun Kelor ( Moringa oleifera Lam.)
Inhibition of Acetylcholinesterase Enzymes in Alzheimer's Disease from Ethanolic Extract of Moringa Leaves ( Moringa oleifera Lam.)
1. Fakultas Farmasi, Universitas Pancasila Jalan Raya Lenteng Agung, Jakarta.
2. Pusat Teknologi Bioindustri, Badan Pengkajian dan Penerapan Teknologi, Serpong, Banten.
3. Pusat Penelitian Bioteknologi, Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia, Cibinong, Jawa Barat
e-mail: jonathanreubun90@gmail.com

## INTISARI
Daun  kelor  telah  dikenal  oleh  masyarakat  sebagai  pengobatan.  Salah  satu  penyakit  tersebut adalah penyakit Alzheimer dimana cara kerja dari tanaman ini adalah dengan menghambat kerusakan yang terjadi di sistem saraf di otak. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mendapatkan ekstrak etanol daun  kelor  dengan  dilakukannya  proses  skrining  fitokimia  untuk  mengetahui  kandungan  kimia  yang terkandung dalam tanaman tersebut.
Daun  kelor  yang  diperoleh  dilakukan  proses  grinding  hingga  di  dapatkan  serbuk  simplisia. Setelah itu dilakukan ekstraksi dengan cara merendam daun kelor dengan etanol 96% selama 11 kali hingga  di  dapatkan  ekstrak  tersari  sempurna.  Setelah  itu  dilakukan  pemekatan  dengan Rotary Evaporator hingga di dapatkan ekstrak kental daun kelor. Setelah itu ekstrak kental dilanjutkan kembali proses Freeze Drying guna mendapatkan ekstrak kental yang stabil dan tahan dalam penyimpanan. Setelah  itu,  ekstrak  diujikan  terhadap  penghambatan  enzim  asetilkolinesterase  berdasarkan metode Ellman didapatkan hasil IC 50 ekstrak daun kelor sebesar 819.7517 ppm . Sementara itu, kontrol positif eserin dengan nilai IC 50 sebesar 5,010 ppm. Kinetika penghambatan asetilkolinesterase adalah kompetitif. Sehingga dikatakan bahwa ekstrak Moringa oleifera mempunyai efek terhadap pengobatan penyakit alzheimer.
Kata kunci: Alzheimer; Moringa oleifer; asetilkolinesterase; Metode Ellman.

## ABSTRACT
The  public  has  recognized  moringa  leaves  as  a  treatment.  One  such  disease  is  Alzheimer's disease,  where  the  way  this  plant  works  is  to  inhibit  the  damage  that  occurs  in  the  brain's  nervous system. This study aimed to obtain ethanol extract of Moringa leaves by carrying out a phytochemical screening process to determine the chemical content contained in these plants.
The moringa leaves obtained subjected to a grinding process to obtain simplicia powder. After that, the extraction is done by soaking the Moringa leaves with 96% ethanol 11 times until the extract is perfect. After that, the concentration is done with a Rotary Evaporator until you get a thick extract of Moringa leaves. After that, the thick extract is followed by the Freeze Drying process to get a thick extract that is stable and can hold in storage.
After that, the extract was tested against the inhibition of the acetylcholinesterase enzyme based on the Ellman method. The IC50 yield of Moringa leaf extract was 819.7517 ppm. Meanwhile, Eserin positive  control  with  an  IC50  value  of  5.010  ppm.  Acetylcholinesterase  inhibition  kinetics  were
Yonathan Tri Atmodjo Reubun 1* , Shirly Kumala 1 , Siswa Setyahadi 2 , Partomuan Simanjuntak 3
competitive.  So  it  is  said  that  Moringa  oleifera  extract  has  an  effect  on  the  treatment  of  Alzheimer's disease.
Keywords: Alzheimer; Moringa oleifera; acetylcholinesterase; Ellman’s Method.

## 1. PENDAHULUAN
Penyakit alzheimer adalah salah satu bagian dari penyakit demensia yang paling umum dan banyak terjadi. Dimana pada penyakit demensia merupakan sindrom yang ditandai  dengan  adanya  gangguan  fungsi  otak  seperti  berkurangnya  daya  ingat seseorang,  disorientasi,  penurunan  komprehensif,  ketidakmampuan  dalam  hal menghitung, ketidakmampuan dalam berbicara, serta manifestasi lainnya (1). Penyakit Alzheimer  merupakan  salah  satu  akibat  dari    gangguan  fungsi  asetilkolin. Asetilkolinesterase (AChE) merupakan enzim yang berfungsi sebagai katalisator pada pemecahan asetilkolin (ACh) menjadi bentuk yang tidak aktif yaitu asetat dan kolin (2).
Terapi Alzheimer menggunakan beberapa obat sintetis yang dapat menghambat asetilkolinesterase seperti fisostigmin, donepezil, atau takrin. Obat ini diketahui masih memiliki  efek  samping  seperti  hepatotoksisitas,  gangguan  pada  saluran  pencernaan, serta  harga  yang  cukup  mahal.  (2).  Senyawa  bioaktivitas  antara  lain  vitamin, karotenoid, polifenol, asam fenolat, flavonoid, alkaloid, glukosinolat, isotiosianat, tanin dan saponin, dari berbagai bagian tumbuhan termasuk daun, akar, kulit kayu, getah, bunga,  buah-buahan,  biji-bijian,  dan  tanah  benih  telah  dilaporkan  memiliki  efek terhadap penyakit Alzheimer (3).
Daun kelor ( Moringa oleifera Lam.), adalah salah satu tanaman yang berasal dari keluarga  Moringaceae  dan  diyakini  berasal  dari  anak  India  tetapi  saat  ini  sudah tersebar luas di banyak negara Afrika dan Asia. Senyawa bioaktif tersebut antara lain vitamin,  karotenoid,  polifenol,  asam  fenolat,  flavonoid,  alkaloid,  glukosinolat, isotiosianat,  tannin  dan  saponin.  Sehingga  berpotensi  sebagai  antimikroba, antihiperkolesterolemia,  antitumor,  antidiabetes,  peningkatan  memori  otak,  anti inflamasi, dan antioksidan (10). Kelor menyediakan kombinasi yang kaya dan langka dari zeatin, kuersetin, β -sitosterol, asam caffeoylquinic dan kaempferol (14) Pada penyakit alzheimer, daun kelor dilaporkan memiliki efek nootropik dengan meningkatkan  peroksidasi  lipid  terdisregulasi  yang  diinduksi  oleh  kolkisin, pengurangan  enzim  glutathione,  katalase,  superoksida  dismutase  (SOD),  asetilkolin, dan  asetilkolinesterase  (4)(5).  Tanaman  daun  kelor  yang  mengandung  senyawa kuersetin mampu menghambat enzim asetilkolinesterase yang merupakan penyebab utama dari terjadinya penyakit Alzheimer. Dalam studi toksisitas akut pemberian dosis kepada  tikus  dalam  waktu  24  jam  sebanyak  20g  /  kg  tidak  menyebabkan  gejala toksisitas akut, lesi kotor dan kematian (15).
Pengeringan beku atau liofilisasi atau juga dikenal dengan freeze drying adalah suatu  proses  di  mana  air  yang  dibekukan  untuk  dihilangkan  dari  sampel,  awalnya
proses  ini  diawali  dengan  proses  sublimasi  (pengeringan  primer)  dan  kemudian dilanjutkan lagi dengan proses desorpsi (pengeringan sekunder).
Pengeringan beku adalah proses pengeringan di mana air disublimasikan dari sampel  setelah  dibekukan.  Proses  pengeringan  ini  berlaku  untuk  pembuatan  obat- obatan dan proses biologi tertentu yang termolabil atau tidak stabil dalam larutan air untuk periode penyimpanan yang lama, tetapi yang stabil dalam kondisi kering (11).
Mekanisme ini berbeda dengan proses pengeringan biasa; dimana pengeringan biasa  terjadi  melalui  mekanisme  penguapan  (evaporasi)  yang  biasanya  terjadi  pada suhu  tinggi.  Perbedaan  antara  proses  pengeringan  beku  dengan  pengeringan  biasa Proses  pengeringan  biasa  terjadi  melalui  mekanisme  penguapan  pada  suhu  panas, sehingga bagian pangan yang kering akan terjadi perubahan kimia (gelatinisasi pati, karamelisasi  gula,  dan  denaturasi  protein)  yang  menyebabkan  terbentuknya  kerak (crust) di permukaan; yang akan memberikan hambatan bagi difusi uap dari bagian basah  ke  udara  lingkungan.  Akibatnya,  proses  pengeringan  akan  terhambat  dan terhenti, menghasilkan produk yang bagian luar sudah kering, bahkan terlalu kering dan  menjadi  kerak-  tetapi  bagian  tengahnya  masih  basah.  Kasus  demikian  sering disebut sebagai casehardening.
Proses pengeringan beku terjadi melalui mekanisme sublimasi yang terjadi pada suhu dingin. Karena itu, proses gelatinisasi, karamelisasi, dan denaturasi tidak terjadi, sehingga pada bagian pangan yang kering tidak terjadi perubahan pembentukan kerak. Dengan  demikian,  uap  air  bisa  berdifusi  dengan  baik  dari  bagian  basah  ke  udara lingkungan, sehingga bisa dihasilkan produk yang kering dengan baik (12)
Berdasarkan  uraian  diatas,  pada  penelitian  ini  dilakukan  pengujian penghambatan  enzim  asetilkolinesterase  dari  ekstrak  daun  kelor  ( Moringa  oleifera Lam.) hasil freeze drying. Dimana pada sebelum dilakukan uji IC 50 dilakukan pengujian skrining  fitokimia.  Pengujian  yang  dilakukan  berupa  uji  penghambatan  enzim asetilkolinesterase dengan menggunakan metode Ellman.

## 2. METODE PENELITIAN

## 2.1. ALAT DAN BAHAN
Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah rotary evaporator (IKA), freeze dry (New  Brunswick),  ELISA reader (EL x 800),  Shaker  (Innova  40),  peralatan  gelas, micro pipet (Eppendorf).
Bahan  uji  yaitu  daun  kelor  ( Moringa  oleifera )  yang  diperoleh  dari  Moringa Organik  Indonesia,  Blora,  Jawa  Tengah.  Serta  di  determinasi  di  Lembaga  Ilmu Pengetahuan  Indonesia  (LIPI)  Cibinong,  Jawa  Barat,  etanol  96%  (sigma  aldrich), metanol p.a (Merck), DTNB ( (5,5’ -ditiobis-(asam 2-nitrobenzoat) (Sigma aldrich), AchI (asetilkolin iodida) (Sigma aldrich), Bovine Serum Albumin 0,1% (Sigma aldrich), AchE (asetilkolinesterase)  (Sigma  aldrich);  Natrium  hidroksida  (Sigma  aldrich),  eserin (Sigma aldrich).

## 2.2. CARA KERJA Determinasi Tanaman.
Dilakukan  determinasi  tanaman  untuk  menetapkan  kebenaran  sampel  yang digunakan  dalam  penelitian.  Determinasi  daun  kelor  dilakukan  di  Lembaga  Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI) Cibinong, Jawa Barat.
Ekstraksi daun kelor .
Daun kelor yang diperoleh dimasukan kedalam wadah dan dilakukan ekstraksi dimana serbuk daun kelor dilarutkan dengan etanol 96% selama sebelas hari. Setelah itu  dilakukan  pemekatan  hasil  ekstrak  maserasi  dengan  menggunakan  rotary evaporator.
Freeze drying ekstrak daun kelor.
Liofilisasi atau freeze drying dilakukan pada kondisi suhu dan tekanan di bawah tiga titik atau 0 O C, untuk memungkinkan sublimasi es. Seluruh proses dilakukan pada suhu  dan  tekanan  rendah,  karenanya  cocok  untuk  pengeringan  senyawa  termolabil. Langkah-langkah yang terlibat dalam liofilisasi dimulai dari persiapan sampel diikuti dengan  pembekuan,  pengeringan  primer  dan  pengeringan  sekunder,  untuk mendapatkan  produk  akhir  yang  dikeringkan  dengan  kadar  air  yang  diinginkan. Gradien konsentrasi uap air antara bagian depan pengeringan dan kondensor adalah kekuatan pendorong untuk menghilangkan air selama proses liofilisasi. Tekanan uap air meningkat dengan peningkatan suhu selama pengeringan primer. Oleh karena itu, suhu pengeringan primer harus dijaga setinggi mungkin, tetapi di bawah suhu proses kritis, untuk menghindari hilangnya strukturnya. Temperatur ini adalah suhu runtuh untuk zat amorf, atau leleh eutektik untuk zat kristalin. Selama pembekuan, kristal es mulai berpisah hingga larutan terkonsentrasi secara maksimal. Pada pendinginan lebih lanjut, pemisahan fase antara zat terlarut dan es terjadi (11).

## Penapisan fitokimia
Identifikasi  alkaloid. Sampel  uji  ditimbang  sebanyak  0,5  g  kemudian ditambahkan 1 ml asam klorida 2N dan 9 mL air suling, dipanaskan di atas penangas air selama 2 menit, didinginkan dan disaring. Filtrat yang diperoleh dipakai untuk uji alkaloid, diambil 3 tabung reaksi, lalu ke dalamnya dimasukan 0,5 mL filtrat. Masing- masing  tabung  reaksi  pertama  ditambahkan  2  tetes  pereaksi  Mayer  akan  terbentuk endapan  berwarna  putih  atau  kuning.  Tabung  reaksi  kedua  ditambahkan  2  tetes pereaksi  Bauchardat  akan  terbentuk  endapan  coklat.  Tabung  reaksi  ketiga ditambahkan  2  tetes  pereaksi  Dragendorf  akan  terbentuk  endapan  putih.  Sampel dikatakan  mengandung  alkaloid  jika  terjadi  endapan  atau  kekeruhan  pada  paling sedikit dua dari tiga percobaan di atas.
Identifikasi saponin. Sampel uji ditimbang sebanyak 0,5 g dan dimasukan ke dalam tabung reaksi lalu ditambahkan 10 mL air panas, didinginkan kemudian dikocok kuat selama 10 detik. Jika berbusa dan tidak hilang dengan ditambahkan asam klorida 2N menunjukan adanya kandungan saponin.
Identifikasi  Tanin. Sampel  uji  ditimbang  sebanyak  1  g,  dididihkan  selama  3 menit dalam 100  mL air suling  lalu didinginkan dan disaring. Larutan diambil 2 mL ditambahkan 1-2 tetes pereaksi besi (III) klorida 1%. Jika terjadi warna biru tua atau hijau kehitaman menunjukan adanya tanin.
Identifikasi  Fenolik . Identifikasi  senyawa  fenolik  dapat  dilakukan  dengan penambahan  natrium  hidroksida.  Sampel  yang  mengandung  senyawa  fenolik ditunjukan dengan timbulnya warna merah.
Identifikasi Flavonoid . Sebanyak 10 g sampel uji ditambahkan 10 mL air panas, didihkan  selama  5  menit  dan  disaring  dalam  keadaan  panas,  ke  dalam  5  mL  filtrat ditambahkan  0,1  g  serbuk  magnesium  dan  1  mL  asam  klorida  pekat  dan  2  mL  amil alkohol, dikocok dan dibiarkan memisah. Sampel disebut mengandung flavonoid jika terjadi warna merah pada lapisan amil alkohol.
Identifikasi  Glikosida .  Identifikasi  senyawa  glikosida  dilakukan  dengan penambahan asam asetat glasial lalu ditambahkan besi (III) klorida dan ditambahkan asam  sulfat  pekat  dan  dikocok.  Sampel  dikatakan  mengandung  senyawa  glikosida ditunjukan dengan timbulnya cincin warna ungu.
Identifikasi Triterpenoid/Steroid . Sebanyak 1 g sampel dimaserasi selama 2 jam  dengan  pelarut  non  polar  n  heksana  sebanyak  20  mL  dan  disaring.  Filtratnya diuapkan  di  dalam  cawan  uap.  Tambahkan  3  tetes  pereaksi  Liebermann-Burchard ditambahkan  ke  dalam  sisa  filtrat.  Timbulnya  warna  hijau  menandakan  adanya kandungan senyawa steroid dan warna merah atau ungu yang dikatakan mengandung senyawa triterpenoid.

## Pengujian aktivitas penghambatan AChE.
Pengujian aktivitas penghambatan AChE dengan Metode Ellman. Pengujian ekstrak mengunakan substrat ATCh , indikator warna DTNB, dan enzim AChE. Sebagai pembanding digunakan donepezil HCl. Absorbansi warna hasil reaksi tersebut diukur pada menit ke 30 dengan panjang gelombang 400 nm (6).

## Pengujian Kinetika Penghambatan AChE.
Ekstrak etanol daun kelor diinkubasi selama 10 sampai 30 menit pada suhu kamar, terlindung dari cahaya.Pengukuran serapan dilakukan pada panjang gelombang 410 nm.Persamaan dibuat dengan sumbu x sebagai 1/Kecepatan (1/V) dan sumbu y sebagai  1/Konsentrasi  Substrat  (1/[S])  dari  masing-masing  konsentrasi  larutan uji.Titik  potong  persamaan  tersebut  menenukan  kinetika  AChE-I.  Titik  potong persamaan dengan sumbu x adalah -1/Km. Titik potong persamaan dengan sumbu y adalah 1/Vmaks (7)(8).

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN Determinasi Tanaman
Determinasi bertujuan untuk mengetahui atau memastikan kebenaran identitas tanaman yang akan diteliti, untuk menghindari kesalahan dalam pengumpulan bahan penelitian.  Hasil  dari  determinasi  tersebut  menyatakan  bahan  tanaman  yang  akan
digunakan dalam penelitian ini adalah benar - benar tanaman daun kelor dari keluarga Moringaceae spesies Moringa oleifera Lam. Hasil Ekstraksi Daun Kelor.
Ekstrak  daun  kelor  seberat  1.000g  dimaserasi  dengan  pelarut  etanol  96% selama 11 hari. Didapatkan data seperti di bawah ini (Tabel 1):
Tabel 1. Hasil ekstraksi daun kelor dengan etanol 96%
Hari Ke- Jumlah pelarut Filtrat maserat Maserasi ke 1 3.000 mL 450 mL Maserasi ke 2 2.000 mL 2.000 mL Maserasi ke 3 2.000 mL 2.200 mL Maserasi ke 4 2.000 mL 2.000 mL Maserasi ke 5 2.000 mL 2.000 mL Maserasi ke 6 1.800 mL 1.800 mL Maserasi ke 7 2.000 mL 1.500 mL Maserasi ke 8 2.000 mL 1.500 mL Maserasi ke 9 2.000 mL 1.800 mL Maserasi ke 10 2.000 mL 1.700 mL Maserasi ke 11 2.000 mL 1.300 mL Total 22.800 mL 18.250 mL
Pada  ekstraksi  ini  didapatkan  ekstrak  daun  kelor  yang  sempurna  ditunjukan dengan filtrat yang sudah tidak mengandung zat aktif dengan melakukan pengujian di kromatografi lapis tipis. Ekstrak cair hasil maserasi yang didapat dilanjutkan kembali dengan  menggunakan  rotary  evaporator  untuk  mendapatkan  hasil  ekstrak  kental. Ekstrak kental yang didapatkan adalah sebagai berikut (Tabel 2):

## Tabel 2. Hasil ekstrak kental daun kelor
Nama bagian Jumlah Berat wadah + ekstrak daun kelor 766.80 g Berat wadah 299.68 g Berat ekstrak daun kelor 467.12 g
Berdasarkan  tabel  2  didapatkan  hasil  ekstrak  kental  daun  kelor  sebanyak 467.12 g dari 1.000 g dengan persentase rendemen sebesar 46.71%. hasil ini dikatakan memenuhi persyaratan literatur pada Farmakope Herbal Indonesia dimana rendemen ekstrak daun kelor tidak kurang dari 10%.
Ekstrak  kental  hasil  evaporasi  lalu  dilakukan  tahapan freeze  drying dengan tujuan agar menjaga kualitas mutu dari seuatu ekstrak sehingga dapat dibuat menjadi
sediaan yang stabil dalam penyimpanan. Dari hasil pengujian diperoleh hasil ekstrak freeze drying adalah sebagai berikut:
Tabel 3. Hasil ekstrak daun kelor dengan metode freeze drying
Nama bagian Jumlah Berat wadah + ekstrak daun kelor 467.42 g Berat wadah 181.39 g Berat ekstrak daun kelor 286.03 g
Berdasarkan tabel 3 hasil dari ekstrak daun kelor dengan metode freeze drying maka  didapatkan  berat  ekstrak  sebanyak  286.03  g  dengan  persentase  rendemen sebesar 28,60%. Hasil ini dikatakan memenuhi persyaratan pada Farmakope Herbal Indonesia dimana rendemen ekstrak tidak kurang dari 10%.
Gambar 2. Grafik regresi linier larutan standar eserin
Ekstrak  yang  dihasilkan  dari  metode  freeze  dry  ini  merupakan  ekstrak  yang stabil dimana mempunyai densitas yang rendah serta mempunyai keunggulan dimana pada  pembuatan  menjadi  produk  sediaan  memiliki  waktu  penyimpanan  yang  lebih lama. Hal ini berawal dari produk segar yang diubah menjadi produk beku dan dengan proses  penyubliman  akan  menghilangkan  kadar  uap  air  pada  produk  beku  untuk menjadi produk kering beku(11).
Skrining Fitokimia. Penapisan  fitokimia  dilakukan  untuk  mengetahui  golongan  senyawa  ( Class  of compound )  yang  terkandung  di  dalam  ekstrak  yang  diperoleh  dari Moringa  oleifera . Hasil uji penapisan fitokimia ditampilkan pada tabel 4.
Pada  hasil  penapisan  fitokimia  didapatkan  bahwa  pada  ekstrak  daun  kelor ( Moringa oleifera Lam.) ditemukan beberapa kandungan kimia sperti alkaloid, saponin, tanin,  fenolik,  flavonoid,  glikosida,  dan  steroid.  Senyawa  utama  yang  terdapat  pada daun  kelor  adalah  senyawa  flavonoid  yang  dikenal  sebagai  kuersetin.  Selain  itu
y = 1,2696x + 36,34 R² = 0,6269 0 20 40 60 80 100 0,000 5,000 10,000 15,000 20,000 25,000 30,000 35,000

## standar eserin
terdapat  juga  kandungan  seperti  asam  sinamat,  fitosterol,  vanilin,  katekin,  dan epikatekin (9).

## Tabel 4. Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak Daun Kelor
No Kandungan Senyawa Ekstrak Daun Kelor 1 Alkaloid + 2 Saponin + 3 Tanin + 4 Fenolik + 5 Flavonoid + 6 Glikosida + 7 Triterpenoid - 8 Steroid + Keterangan:
(+) : terdapat kandungan kimia (-)  : tidak terdapat kandungan kimia
Pengujian Aktivitas Penghambatan AChE.
Pengujian  aktivitas  penghambatan  AChE  dilakukan  dengan  menggunakan microplate reader. Hasil pengujian aktivitas penghambatan AChE oleh ekstrak Moringa oleifera ditunjukkan pada Tabel 5 berikut:
Tabel 5. Hasil uji aktivitas penghambatan AChE No Sampel Uji Persamaan Regresi Nilai IC 50 1 Eserin
y = 5.0196x + 24.851  5.010 ppm
2 Ekstrak Etanol Daun Kelor  y = 0.0443x + 13.685  819.7517 ppm
Pada tabel 5, Satuan standar yang digunakan adalah nilai IC 50 dimana merupakan satuan  standar  yang  dipergunakan  untuk  menentukan  suatu  ekstrak  yang  dapat  dijadikan sebagai  obat  Alzheimer  berdasarkan  aktivitasnya. Setelah  itu  dilakukan  regresi  linier sehingga di dapatkan pada gambar 2 dan 3.
Gambar 3. Grafik regresi linier ekstrak daun kelor y = 0,0146x + 20,632 R² = 0,7929 0,00 10,00 20,00 30,00 40,00 0 200 400 600 800 1000 1200 Kelor
Pada penelitian ini ekstrak yang dipilih untuk pengobatan penyakit Alzheimer adalah ekstrak daun kelor dimana ekstrak yang dipilih mempunyai IC 50 . Nilai IC 50 ini masih jauh dari nilai IC 50 kontrol positifnya yaitu Eserin. Berdasarkan hasil pengujian ini  menunjukan  bahwa  ekstrak  daun  kelor  memiliki  daya  hambat  yang  signifikan terhadap  penghambatan  enzim  AChE.  Ekstrak  daun  kelor  yang  mengandung kuersetin  dapat  memperbaiki  kerusakan  memori  pada  manusia  yang  diinduksi dengan penghambat kolinergik dimana ekstrak daun kelor menginduksi potensiasi jangka  panjang  pada  hipokampus,  memblokir  enzim  AChE  serta  memfasilitasi masuknya kalsium ke dalam sel neuron (13).

## 4. KESIMPULAN
Pada  hasil  penelitian  ini  didapatkan  bahwa  ekstrak  daun  kelor  hasil  freeze drying  mempunyai  aktivitas  penghambatan  AChE  sebesar  819.7517  ppm  dengan kontrol positif eserin sebesar IC 50 5,010 ppm.

## 5. DAFTAR PUSTAKA
(1) Holtzman DM, Morris JC, Goate AM. 2011. Alzheimer’s disease: the challenge of the second century. Sci Transl Med ; 3(77): 77.
(2) Yulanri  D.  2018.  Uji  Aktivitas  Anti  Alzheimer  Secara  In  Vitro  Dengan Penghambatan Enzim Asetilkolinesterase (Ache) Oleh Ekstrak Etanol Kulit Buah Petai (Parkia speciosa Hassk.)  (skripsi).  Palembang: Universitas Sriwijaya. H 8- 14.
(3) Leone A, Spada A, Battezzati A, Schiraldi A, AristilJ, Bertoli S. 2015. Cultivation, genetic,  ethnopharmacol-ogy,  phytochemistry  and  pharmacology  of  moringa oleiferaleaves:  An  overview. International  Journal  of  Molecular  Sciences ;  16, 12791-12835
(4) Sutalangka C, Wattanathorn J, Muchimapura S, Thukham-mee W. 2013. Moringa oleifera mitigates memoryimpairment and neurodegeneration in animal model of age-related dementia. Oxid Med Cell Longev , 695936.
(5) Roy C. 2014. A nootropic effect of Moringa oleifera onAch and ChAT activity in colchicine  induced  experimen- tal  rat  model  of  Alzheimer’s  disease:  Possible involvementof antioxidants. Al Ameen J Med Sci . 7(2). 125-133.
(6) Ellman GL, Courtney KD., Andres VJ. & Featherstone RM. 1961, A new and rapid colorimetric determination of acetylcholinesterase activity, Pharmacol , 7: 88 – 95
(7) Silverman  RB.  2002.  The  Organic  Chemistry  of  Enzyme  Catalysed  Reaction. Academic Press. 563-84.
(8) Wetwitayaklung  P,  Limmatvapirat  C,  Phaechamud  T,  &  Keokitichai  S.  2007. Kinetics  of  acetylcholinesterase  inhibition  of  ( Quisqualis  indica Linn)  flower extract. Silpakorn University Science and Technology Journal . 1(2); 20-27.
(9) Nwidu  LL,  Elmorsy  E,  Aprioku  JS,  Siminialayi  I,  Carter  WG.  2018.  In  vitro anticholinesterase and antioxidant activity of extracts of Moringa oleifera plants from  River  State,  Niger  Delta,  Nigeria. Multidisciplinary  Digital  Publishing Institute Journal ; 5(71); 1-17.
(10) Razak  MY,  Salissou  MT,  Yuman  W,  Liu  R.  2018. Moringa  oleifera alleviates homocysteine  induced  alzheimer  disease  like  pathology  and  cognitive impairments. Journal of Alzheimer disease ; 63(3): 1-20.
(11) Gaidhani  KA.  2015.  Lyophilization  /  Freeze  Drying. World  Journal  of Pharmaceutical Research; 4(8): 516-543.
(12) Hariyadi P. 2018. Freeze Drying Technology: for better quality & flavor of dried products. 8 th ed. Bandung, Indonesia: Bogor Agricultural University.
(13) Dina  SP, Herowati  R,  Nurrochmad  A.  2019.  Uji  In  Vitro  Penghambatan  Enzim Asetilkolinesterase dan Identifikasi Fitokimia Fraksi Aktif Ekstrak Etanol Buah Mengkudu ( Morinda citrifolia L.). Farmasains . 6(1). 1-9
(14) Krisnadi  D.  2012.  Kelor  Super  Nutrisi.1st  ed.  Blora:  Pusat  Informasi  dan Pengembangan Tanaman Kelor Indonesia.
(15) Chivapat  S,  Sincharoenpokai  P,  Saktiyasuthorn  N, Shuaprom  A,  thongsrirak  P, Sakpetch A. 2011. Acute and Chronic Toxicity of Moringa oleifera Linn Leaves Extracts . Journal of Thai Veterinary Medicine ; 41(4): 417-424.