## UJI TOKSISITAS DAN ANALISIS KANDUNGAN FITOKIMIA EKSTRAK
METHANOL DAN KLOROFORM DAUN PAKU UBAN ( Nephlorepis bisserata )

## TOXICITY AND PHYTOCHEMICALS ANALYSIS OF METHANOL AND TRICHLOROMETHANE OF LEAVES EXTRACTS OF
PAKU UBAN ( Nephlorepis bisserata )

## Diana Maulianawati*, Awaludin
Program Studi Budidaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Borneo Tarakan, Jalan Amal Lama No 1, Tarakan Kalimantan Utara Telepon (0551) 2052558, HP. 0811 530 7023
*Corresponding author: diana_perikanan@borneo.ac.id

## ABSTRAK
Paku uban ( Nephlorepis bisserata ) merupakan salah satu jenis tanaman paku yang  diketahui memiliki manfaat sebagai tanaman herbal. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui senyawa fitokimia  dan  toksisitas  dari  ekstrak  methanol  dan  kloroform  paku  uban.  Senyawa  fitokimia diuji secara kualitatif dan toksisitas ekstrak di uji dengan menggunakan metode BSLT. Hasil uji menunjukkan bahwa ekstrak methanol paku uban mengandung senyawa flavonoid, saponin, fenol  hidrokuinon  dan  steroid  dengan  nilai  LC50  1489  mg/L.  ekstrak  kloroform  paku  uban mengandung senyawa flavonoid, alkaloid dan steroid dengan nilai LC50 2704 mg/L.
Keywords: Neprolephis bisserata, Toksisitas, Paku Uban, Fitokimia, BSLT

## ABSTRACT
Paku Uban (Nephlorepis bisserata) is one of fern which is known to have benefits as an herbal plant. This study is aims to determine the phytochemical compounds and toxicity of methanol and trichloromethane of leave extracts of N. bisserata. Phytochemical screening was carried out  by  using  the  standard  of  analysis  and  the  toxicity  of extracts  was  tested  using  the  BSLT method. Phytochemical screening indicated that methanol extract of  N. bisserata contained flavonoids, saponins, phenol hydroquinone and steroids with  LC 50 1489 mg / L. Chloroform extract of N. bisserata contains flavonoids, alkaloids and steroids with LC50 2704 mg / L.
Keywords: Neprolephis bisserata, Toxicity, Paku Uban

## PENDAHULUAN
Pemanfaatan  tanaman  sebagai  sumber alami  untuk  menangani  berbagai  jenis penyakit  telah  banyak  diketahui  oleh masyarakat secara umum. Hal ini mendorong  para  peneliti  menghasilkan pandangan  baru  untuk  dapat  mengisolasi, mengidentifikasi  serta  menguji  berbagai
jenis  tanaman  yang  memiliki  potensi sebagai  obat  untuk  berbagai  penyakit  [1], baik  sebagai  antibakteri,  antioksidan, antikanker,  sumber  hormone,  vitamin, pendorong  pertumbuhan  serta  berbagai tujuan  lainnya  (Jayaprakas  and  Sambhu 1996).
Tanaman  paku  yaitu  jenis  Nephrolepis
(Swartz) merupakan
family dari Nephrolepidaceae  and  ordo  Filicales. Terdapat lebih dari 40 spesies Nephrolepis yang  tersebar  di  seluruh  dunia,  dan beberapa diantaranya terdapat di Indonesia (Friedrich, 2005). Tanaman paku dari genus Nephrolepis  banyak  dimanfaatkan  oleh masyarakat  sebagai  tanaman  hias,  kontrol terhadap  serangga  bahkan  sebagai  sumber pangan  dan  obat-obatan  tradisional  [2], Nephlorepis terutama dari jenis N. bisserata diketahui  memiliki  aktivitas  antioksidan dan  antidiabetes  [3].  Ekstrak  Nephlorepis dari jenis Cycas revoluta Thumb diketahui memiliki kandungan senyawa steroid yaitu fitoekdisteroid dalam bentuk 20-
Hydroxyecdyson atau Ecdysteron, penggunaan tanaman paku uban C. revoluta memberikan  hasil  yang  psositif  terhadap proses  moulting  udang  windu  (Penaeus monodon)  [4].    Ekdisteroid  merupakan hormon  steroid  yang  terdapat  pada atrhropoda  dan  invertebrata  lainnya  yang mengatur moulting, metamorfosis, reproduksi  dan  diapause  [5].  Sebagaimana yang  telah  dikemukakan  oleh  [6]  bahwa hasil  analisis  fitokimia  Paku  Uban  (N. biserrata) positif megandung ekdisteroid.
Indonesia  merupakan  salah  satu  wilayah penyebaran tanaman paku termasuk jenis N. bisserata,  informasi  fitokimia  N.  bisserata di  wilayah  lain  cukup  banyak  diketahui. Namun  informasi  mengenai  pemanfaatan serta  kandungan  senyawa  N.  bisserata  di wilayah Tarakan belum dilaporkan. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui toksisitas dan senyawa fitokimia daun paku uban  (N.  bisserata)  yang  diambil  dari wilayah Kota Tarakan Provinsi Kalimantan Utara  menggunakan  metode  BSLT  dan pengujian senyawa fitokimia secara kualitatif.  Hasil  penelitian  ini  merupakan riset dasar untuk dapat diambil kesimpulan apakah  daun  paku  uban  dapat  digunakan pada  krustasea  serta  kegiatan  budidaya perairan  terutama  yang  berkaitan  dengan penggunaan hormon ekdisteroid.

## METODOLOGI

## Sampel tanaman
Tanaman paku uban ( Nephrolepis bisserata )  diperoleh  dari  kawasan  hutan Kota  Tarakan.  Tanaman  yang  telah dikumpulkan  dicuci  bersih  kemudian dikering  anginkan  selama  kurang  lebih  1 minggu. Daun yang sudah kering kemudian dihaluskan  sehingga  diperoleh  serbuk halus.

## Bahan-bahan kimia yang digunakan
Bahan  yang  digunakan  pada  penelitian terdiri  kloroform  (Merck,  co),  asam  sulfat (Merck,  co),  asam  klorida  (Merck,  co), DMSO  (Merck,  co),  FeCl3  (Merck,  co), pereaksi  Mayer,  Dragendorff,  Wagner,  air laut dan methanol (Merck, co).

## Ekstraksi Paku Uban
Ekstraksi  tanaman  pakis  dilakukan  dengan cara  maserasi,  daun  paku  uban  yang  telah dihaluskan ditimbang sebanyak ± 100 g dan ± 250 g, daun paku dimaserasi selama 3 hari menggunakan pelarut  methanol 80% sebanyak 400 mL dan kloroform sebanyak 1000 mL (b/v 1:4). Setelah 3 hari maserasi, ekstrak  di  shaker  selama  ±  3  jam,  larutan disaring menggunakan kertas saring whatman  dan  ekstrak  yang  telah  disaring dievaporasi  hingga  didapatkan  ekstrak pekat.

## Uji Toksisitas
Uji toksisistas bertujuan untuk mendapatkan  nilai  LC 50 dari  ekstrak tanaman pakis, uji ini perlu dilakukan untuk mengetahui batasan konsentrasi yang dapat diaplikasikan  pada  biota,  sehingga  tidak menyebabkan  kematian.  Uji  toksisitas dilakukan  dengan  metode  Brine  Shrimp Lethality  Test  (BSLT)  yaitu  suatu  metode uji tantang Artemia salina terhadap ekstrak pada  konsentrasi  tertentu  (0,  10,  50,  100, 300, 500 dan 1000 ppm). Tahapan prosedur yang  dilakukan  pada  pegujian  BSLT meliputi  pembuatan  larutan  uji  ekstrak methanol  dan  metil  klorida  paku  uban  ( N. bisserata ), penetasan larva A. salina , dan uji toksisitas  larutan  ekstrak  paku  uban  ( N. bisserata )  terhadap A.  salina .  Larva A.
salina yang  telah  diberikan  larutan  uji didiamkan  selama  24  jam,  setelah  itu jumlah  larva  yang  mati  dan  masih  hidup dihitung dari masing-masing vial, data yang didapatkan  dihitung  menggunakan  analisa probit  untuk  menentukan  LC 50 [7][8][9], pada penelitian ini digunakan SPPS 21.

## Skrining Fitokimia
Skrining  fitokimia  ekstrak  methanol  dan kloroform  paku  uban  di  uji  dengan menggunakan  metode  dari  [10]  dan  [11], dengan  modifikasi  metode  [12].  Skrining fitokimia  dilakukan  secara  kualitatif  yang meliputi  uji  alkaloid,  steroid,  fenol  dan saponin.

## Uji  Alkaloid  (Pereaksi  Dragendorff  dan Pereaksi Meyer’s)
Sebanyak 4 g ekstrak kasar ditambahkan 10 mL  kloroform-amoniak,  lalu  disaring  ke dalam  tabung  reaksi.  Filtrat  ditambahkan dengan  beberapa  tetes  H 2 SO 4 2  M  dan dikocok  sehingga  terpisah  dua  lapisan. Lapisan asam  yang terdapat di bagian atas dipipet  ke  dalam  tabung  reaksi  lain,  lalu ditambahkan pereaksi Meyer’s dan Dragendorff.  Terbentuknya endapan putih dengan menggunakan pereaksi Meyer’s dan endapan jingga dengan pereaksi dragendorff menunjukkan keberadaan alkaloid.

## Uji Steroid
Sebanyak  4  g  ekstrak  kasar  diekstraksi dengan  dietil  eter  dan  fraksi  yang  larut dalam  dietil  eter  dipisahkan.  Fraksi  yang larut  dalam  dietil  eter  ditambahkan CH 3 COOH  glasial  dan  H 2 SO 4 pekat.
Larutan  dikocok  perlahan  dan  dibiarkan selama beberapa menit. Steroid memberikan  warna  biru  atau  hijau, sedangkan tri-terpenoid memberikan warna merah atau violet.

## Uji Fenol
Sebanyak 4 g ekstrak kasar ditambahkan air panas,  kemudian  ditambahkan  beberapa tetes  pereaksi  FeCl 3 1%.  Uji  positif ditunjukkan oleh terbentuknya warna hijau, biru atau ungu.

## Uji Saponin
Sebanyak 4 g ekstrak kasar ditambahkan air panas,  kemudian  ditambahkan  beberapa tetes HCl pekat. Uji positif ditunjukkan oleh terbentuknya busa permanen ± 15 menit.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Ekstraksi Daun Paku Uban
Nilai  rendemen  hasil  ekstraksi  daun  paku uban  pelarut  dihitung  dalam  persen rendemen.  Hasil  ekstraksi  daun  paku  uban menggunakan  pelarut  metanol  diperoleh ekstrak  sebanyak  2,23  g  berwarna  hijau pekat  .  Hasil  ekstraksi  daun  paku  uban menggunakan  pelarut  kloroform  diperoleh ekstrak  sebanyak  4,08  g  berwarna  hijau pekat.  Terdapat  perbedaan  tekstur  antara ekstrak methanol dengan kloroform, dikarenakan perbedaan jenis kedua pelarut. Pelarut methanol akan cenderung mengikat senyawa yang lebih polar sedangkan pelarut kloroform  cenderung  melarutkan  senyawa non polar.
Uji Toksisitas Ekstrak N. bisserata
Metode  BSLT  merupakan  suatu  metode dengan menghitung respons kematian 50% larva A. salina (LC 50 ) dan mengkorelasikan jumlah  kematian  larva  udang  dengan konsentrasi  uji.  Tingkat  toksisitas  dari ekstrak tumbuhan dapat ditentukan dengan melihat nilai LC 50 yang dihasilkan menggunakan analisis probit. Apabila nilai LCso kurang dari 1000 mg/L, maka ekstrak tumbuhan  yang  diuji  dikatakan  toksik  dan jika lebih dari 1000 mg/L ekstrak tumbuhan yang  diuji  tidak  toksik  [7].  [13]  telah menguji toksisitas beberapa ekstrak tanaman  dan  menyatakan  bahwa  suatu senyawa dapat dikategorikan sangat beracun  jika  nilai  LC50  <  0  –  80  mg/L, kategori  beracun  jika  nilai  LC50  80  –  250 mg/L  dan  kategori  racun  lemah  jika  nilai LC50 > 250 mg/L.
Pada  penelitian  ini  toksisitas  ekstrak methanol dan ekstrak kloroform daun paku uban  ( N.  bisserata )  di  uji  dengan menggunakan  metode  BSLT.  Gambar  1 menunjukkan persentase kematian A. salina
yang diberikan masing-masing ekstrak pada konsentrasi yang berbeda.Persentase kematian A.  salina meningkat  seiring dengan  meningkatnya  konsentrasi  ekstrak yang  diberikan.  Persentase  kematian A. salina yang  tertinggi  sebesar  %.  Setelah didapatkan  presentase  kematian A.  salina , data  tersebut  dianalisis  menggunakan metode analisis probit menggunakan program SPSS 21 dengan taraf kepercayaan 95 %, hasil analisis probit dapat dilihat pada Gambar 1 dan 2 dari masing-masing ekstrak kasar    daun  paku  uban  dalam  pelarut metanol  dan kloroform. Berdasarkan analisis  SPSS  nilai  LC50  untuk  ekstrak methanol  adalah  1489  mg/L  dan  ekstrak kloroform adalah 2704 mg/L.
Nilai toksisitas suatu ekstrak  menunjukkan korelasi positif dengan total flavonoid yang terkandung  dalam  ekstrak.  Budi  (2017) melaporkan bahwa seiring dengan peningkatan  senyawa  flavonoid  pada ekstrak daun Averrhoa carambola mengakibatkan  peningkatan  kematian  A. salina.  Pada  penelitian  ini  persentase kematian A. salina meningkat karena dosis ekstrak  yang  diberikan  juga  meningkat yang  mendorong  meningkatnya  senyawa kimia  yang  bersifat  toksik  bagi  A.  salina. Berdasarkan  nilai  LC50  yang  didapatkan lebih  dari  1000  mg/L  maka  dapat disimpulkan  ekstrak  paku  uban  tidak
bersifat toksik. Meskipun Paku Uban tidak bersifat  toksik,  hal  ini  tidak  selalu menunjukkan  bahwa  paku  uban  tidak memiliki  senyawa  bioaktif,  tetapi  nilai LC50 yang didapatkan menunjukkan bahwa paku  uban  cukup  aman  jika  digunakan sebagai salah satu sumber herbal atau untuk diaplikasikan pada uji in-vivo.

## Uji fitokimia
Senyawa  kimia  yang  memiliki  manfaat sebagai  sumber    antibakteri,  antioksidan, antikanker,  sumber  hormone,  vitamin, pendorong  pertumbuhan  maupun  manfaat lain  merupakan  metabolit  sekunder  yang dihasilkan oleh tanaman, metabolit sekunder ini dapat berupa alkaloid, steroid/ terpenoida,  flavonoida  atau  fenolik  [14]. Metabolit  sekunder  merupakan  senyawa yang tidak dibutuhkan bagi tanaman untuk pertumbuhan,  tetapi    merupakan  respon perlindungan suatu tanaman, yang memberikan  sinyal  tertentu  baik  karena adanya serangan serangga maupun terjadinya  perubahan  kondisi  lingkungan [15].  Metabolit  sekunder  juga  diketahui sebagai  senyawa  bioaktif,  yaitu  suatu senyawa  yang  mempunyai  kemampuan untuk    berinteraksi  dengan  satu  atau  lebih komponen  dalam  jaringan  hidup  suatu organism yang dapat memberikan efek atau pengaruh  tertentu  terhadap  organimes terestial maupun akuatik [16].
Tabel 2. Skrining fitokimia secara kualitatif ekstrak methanol dan klorofrm daun paku uban ( N. bisserata )
Sampel Flavonoid Saponin Alkaloid Fenol hidrikuinon Steroid Me-NB + +++ - + + Ch-NB + - + - +++ Keterangan: Me-NB : ekstrak methanol paku uban Ch-NB : ekstrak kloroform paku uban +++ : Konsentrasi tinggi + : konsentrasi rendah - : Negatif
Pada  penelitian  ini  didapatkan  bahwa ekstrak  daun  paku  uban  ( N.  biserrata ) memiliki  kandungan  fitokimia  (tabel  2), ekstrak  methanol  dan  ekstrak  kloroform
memiliki kandungan fitokimia yang berbeda. Perbedaan kandungan ini, dikarenakan setiap senyawa kimia memiliki tingkat  kelarutan  yang  berbeda  terhadap suatu  pelarut  serta  sifat  senyawa  yang berbeda.  Ekstrak  chloroform  daun  paku uban  ( N.  biserrata )  menunjukkan  terdapat steroid  pada  konsentrasi  yang  lebih  tinggi dibandingkan  dengan  ekstrak  methanol, tetapi  saponin  dan  fenol  hidrokuinon terdapat dalam ekstrak methanol dan tidak terdapat  dalam  ekstrak  kloroform.  Tidak terdeteksi  alkaloid  pada  ekstrak  methanol, tetapi  alkaloid  terdeteksi  pada  ekstrak kloroform.    Semua  ekstrak  paku  uban memiliki kandungan flavonoid.

## Flavonoid
Flavonoid  merupakan  suatu  senyawa  yang berperan sebagai antibakteri, anti inflamasi, antivirus,  antioksidan  dan  antikanker  [17]. Flavonoid  merupakan  suatu  senyawa  yang lebih  cenderung  larut  pada  senyawa  polar, meskipun  demikian  senyawa  flavonoid terdiri dari beberapa jenis, dimana tiap jenis flavonoid  mempunyai  kepolaran  yang berbeda  beda  tergantung  dari  jumlah  dan posisi  gugus  hidroksil  tiap  jenis  flavonoid sehingga  akan  mempengaruhi  kelarutan flavonoid  pada  suatu  pelarut  [10].  Pada penelitian  ini,  flavonoid  terdapat  pada ekstrak methanol paku uban yang merupakan  pelarut  polar  dan juga  terdapat pada  ekstrak  chloroform  paku  uban,  hasil ini  menunjukkan  terdapat  jenis  flavonoid berbeda yang dapat larut di dalam masing- masing pelarut.

## Saponin
Saponin  merupakan  golongan  senyawa glikosida  yang  bersifat  polar  tetapi mempunyai struktur steroid, sehingga akan membentuk  koloidal  serta  buih  ketika dilakukan  pengocokan.    Berdasarkan struktur  aglikonnya,  terdapat  2  macam saponin  yaitu  saponin  dengan  tipe  steroid dan  tipe  triterpenoid  [18].    Uji  kualitatif menunjukkan hasil positif yang ditunjukkan dengan keberadaan buih hanya pada ekstrak methanol,  diduga  pelarut  kloroform  hanya
mengikat saponin dengan tipe steroid  yang mengandung lipid [19].

## Alkaloid
Alkaloid  merupakan  senyawa  dengan stuktur heterosiklik yang bersifat non polar yang  merupakan  golongan  senyawa  basa bernitrogen.  Alkaloid  sulit  larut  didalam pelarut polar seperti methanol tetapi mudah larut  dalam  pelarut  semi  polar  seperti Kloroform.  Alkaloid  merupakan  suatu senyawa yang berperan sebagai antipiretik, anti  malaria,  antihipertensi,  antitumor, sebagai agen stimulant dan reseptor [20].

## Fenol Hidrokuinon
Fenol  meliputi  berbagai  senyawa  yang berasal dari tumbuhan yang memiliki cincin aromatik  dengan  satu  atau  dua  gugus hidroksil. Kuinon adalah senyawa berwarna dan  mempunyai  kromofor  dasar,  yaitu kromofor  pada  benzokuinon,  yang  terdiri atas dua gugus karbonil yang berkonjugasi dengan  dua  ikatan  rangkap  karbon-karbon [10].  Kelarutan  senyawa  fenolik  sangat bergantung  pada  jenis  pelarut  yang digunakan.  Senyawa  fenolik  lebih  mudah larut dalam pelarut etil asetat dibandingkan dengan  pelarut  lain,  sebagaimana  yang dilaporkan  oleh  [21]  bahwa  kandungan fenolik total yang terdapat di dalam ekstrak etil  asetat  Indian  Plum  ( Flacourtia jangomas L.)  lebih  besar  dibandingkan dengan ekstrak metanol dan kloroform.

## Steroid
Steroids  merupakan  suatu  senyawa  yang berkaitan  dengan  prosess  reproduksi  serta hormon yang dapat memicu perkembangan reproduksi  hewan  [22].  Pada  penelitan  ini didapatkan  hasil  uji  yang  positif  terhadap keberadaan steroid dalam ekstrak methanol dan kloroform. Beberapa jenis paku-pakuan (Pteridophyta) diketahui memiliki kandungan  steroid  yaitu  fitoekdisteroid dalam  bentuk  20-Hydroxyecdyson  atau Ecdysteron  berfungsi  sebagai  molting stimulan  pada  krustase  yang  kemudian dimanfaatkan  untuk  mempercepat  proses molting  induk udang windu [4]. Dari hasil penelitian  ini,  ekstrak  paku  uban  diduga
dapat  dimanfaatkan  untuk  mempercepat proses molting pada krustasea.

## KESIMPULAN
Hasil  studi  fitokimia  dan  toksisitas  yang dilakukan terhadap tanaman paku uban ( N. biserrata )  menunjukkan  terdapat  potensi sebagai  antibakteri,  antioksidan,  sumber hormone  serta  pendorong  pertumbuhan. Studi lebih lanjut seperti isolasi, identifikasi,  karakterisasi  dan  struktur senyawa  bioaktif  paku  uban  dibutuhkan sehingga  dapat  diketahui  manfaat  dari tanaman paku uban ( N. biserrata ).

## DAFTAR PUSTAKA
[1] A.  Gurib-Fakim,  H.  Subratty,  F. Narod, J. Govinden-Soulange, and F. Mahomoodally,  “Biological  activity from indigenous medicinal plants of Mauritius,” Pure and Applied
Chemistry , vol. 77, no. 1, pp. 41–51,
2005.
[2] M.  Mannar  Mannan,  M.  Maridass, and  A.  Victor,  “Review  on  the potential uses of ferns,”
Ethnobotanical Leaflets , vol. 12, pp.
281–285, 2008.
[3] E.  U.  Ofoego,  “The  Phytochemical Analysis  And  Evaluation  Of  The Antioxidant And Antidiabetic Potentials Of Ethanolic Leaf Extract Of Nephrolepis biserrata,” University  Of  Technology  Owerri, 2015. [4] E.  Suryati,  A.  Tenriulo,  and  S. Tonnek, “Sebagai Moulting
Stimulan Pada Induk Udang Windu,”
Jurnal Riset Akuakultur , vol. 8, no. 2, pp. 221–229, 2013.
[5] D.  R.  Williams,  J.  H.  Chen,  M.  J. Fisher, and H. H. Rees, “Induction of enzymes involved in molting hormone  (ecdysteroid)  inactivation by ecdysteroids and an agonist, 1,2- dibenzoyl-1-tert- butylhydrazine (RH-5849),” Journal  of  Biological Chemistry ,  vol.  272,  no.  13,  pp.
8427–8432, 1997.
[6] J. Astuti, Rudiyansyah, and Gusrizal, “Uji fitokimia dan aktivitas antioksidan tumbuhan,” Jurnal Kimia Khatulistiwa , vol. 2, no. 2, pp. 118–122, 2013.
[7] B. . Meyer, N. . Ferrigni, J. . Putnam, L.  .  Jacobsen,  D.  .  Nichols,  and  J.  . McLaughlin,  “Brine  Shrimp:  A
Convenient  General  Bioassay  for Active  Plant  Constituents,” Journal of Medicinal Plant Research , vol. 45, pp. 31–34, 1982.
[8] D. Osmeli, B. Kimia, F. Kedokteran, and U. Yarsi, “Kandungan Senyawa Kimia , Uji Toksisitas ( Brine Shrimp Lethality Test ) Dan Antioksidan ( 1
,  1-diphenyl-2-pikrilhydrazyl  )  Dari Ekstrak Daun Saga ( Abrus precatorius L .),” vol. 13, no. 1, pp.
50–54, 2009. [9] J.  .  McLaughlin  and  L.  L.  Rogers,
“The  Use  Of  Biological  Assays  To
Evaluate Botanicals,” Drug Information  Journal ,  vol.  32,  pp. 513–524, 1998.
[10]  J. . Harbone, Phytochemical Methods .  London:  Chapman  and Hall, 1983.
[11]  H.  Wagner,  S.  Blandt,  and  E.  . Zgainski, Plant Drug Analysis . New York: Spring-Verlag, 1984.
[12]  I.  Kadarisman,  “Kadarisman,  I. 2000. Isolasi dan Identifikasi
Senyawa Kimia Bioaktif dari Rimpang Bangle (Zingiber cassumunar Roxb.),” Institut
Pertanian Bogor, 2000.
[13]  S. C. S. Ramos, J. C. S. De Oliveira, C. A. G. Da Câmara, I. Castelar, A. F.  F.  U.  Carvalho,  and  J.  V.  Lima- Filho,  “Antibacterial  and  cytotoxic properties  of  some  plant  crude extracts  used  in  Northeastern  folk medicine,” Brazilian  Journal  of Pharmacognosy , vol. 19, no. 2 A, pp. 376–381, 2009.
[14]  A.  Bernhoft,  “A  brief  review  on bioactive  compounds  in  plants,”  in Bioactive  compounds  in  plants  –
benefits  and  risks  for  man  and animals , 2010, no. November 2008.
[15]  A.  Altemimi,  N.  Lakhssassi,  A. Baharlouei,  and  D.  G.  Watson, “Phytochemicals: Extraction,
Isolation,  and  Identification  of Bioactive  Compounds  from  Plant Extracts,” Plants , vol. 6, p. 42, 2017.
[16]  A.  Guaadaoui,  S.  Benaicha,  N. Elmajdoub,  M.  Bellaoui,  and  A. Hamal,  “What  is  a  bioactive compound ?  A  combined  definition for a preliminary consensus,” vol. 3, no. 3, pp. 174–179, 2014.
[17]  S.  Kumar  and  A.  K.  Pandey, “Chemistry and Biological Activities of  Flavonoids:  An  Overview,” The Scientific  World  Journal ,  vol.  2013,
p. 16, 2013.
[18]  M.  S.  Sangi,  L.  I.  Momuat,  and  M. Kumaunang,  “Uji  Toksisitas  Dan Skrining  Fitokimia  Tepung  Gabah Pelepah  Aren  (Arenga  pinnata),” Jurmal  Ilmiah  Sains ,  vol.  12,  no.  2, pp. 127–134, 2012.
[19]  G. P. Savage, “Saponins,”
Encyclopaedia  of  Food  Science, Food Technology andNutrition .
ACADEMIC  PRESS,  INC.,  pp. 5095–5098, 1993.
[20]  N.  Babbar,  “An  introduction  to alkaloids  and  their  applications  in pharmaceutical  chemistry,” The Pharma  Innovation  Journal ,  vol.  4, no. 10, pp. 74–75, 2015.
[21]  M. M. Rahman, R. M. Habib, R. M. Hasan, A. M. Taufiqual Islam, and I. N. Khan, “Comparative Antioxidant Potential  Of  Different  Extracts  Of Flacourtia  Jangomas  Lour  Fruits,” Asian  Journal  of  Pharmaceutical and Clinical Research , vol. 5, no. 1,
pp. 73–75, 2012.
[22]  H.  Edeoga,  D.  Okwu,  and  B. Mbaebie,
“Phytochemical
constituents of some Nigerian medicinal plants,” African Journal of Biotechnology ,  vol.  4,  pp.  685–688,
2005.