27 / Jurnal Biologi Eksperimen dan Keanekaragaman Hayati                                                     Puty Orlando Arismedi STRUKTUR HISTOLOGI KARTILAGO EPIFISIALIS FETUS MENCIT ( Mus musculus L.) SETELAH PEMBERIAN EKSTRAK METANOL RIMPANG TEKI ( Cyperus rotundus L.)
HISTOLOGYCAL STRUCTURE OF FETUS MICE ( Mus musculus L.) EPIPHYSEAL CARTILAGE TREATED BY Cyperus rotundus L. RHIZOME METHANOL EXTRACT
Puty Orlando Arismedi 1 *, Nuning Nurcahyani 1 , Hendri Busman 1
1 Jurusan Biologi FMIPA Universitas Lampung Jl. Prof. Dr. Sumantri Brodjonegoro No.1 Bandar Lampung 35145 *e-mail: putyorlando@gmail.com

## ABSTRAK
Rimpang  teki  ( Cyperus  rotundus L. ) mengandung  senyawa  saponin,  sineol,  pinen,  siperon,  rotunol, siperenon,  tanin,  siperol,  alkaloid,  flavonoid,  tanin,  pati,  glikosida  dan  furochromones,  serta seskuiterpenoid.  Dengan  hadirnya  senyawa  ini  diperlukan untuk  menguji  efek  samping  penggunaannya pada  janin.  Tujuan  penelitian ini  adalah  untuk  mengetahui  efek  pemberian  ekstrak  rimpang  rumput  teki terhadap kelainan struktur histologi tunas anggota depan fetus mencit ( Mus musculus L) yang diberikan pada  masa  prenatal.    Dosis  ekstrak  rimpang  rumput  teki  yaitu:  45  mg/40g  BB  dalam  0,4  ml  aquabides (P2), 90 mg/40g BB dalam 0,4 ml aquabides (P3), 135 mg/40g BB dalam 0,4 ml aquabides (P4), dan 0,4 ml  aquabides  (K)  sebagai  kontrol.    Parameter  yang  diamati  mencakup  zona  cadangan  kondrosit,  zona proliferasi,  zona  maturasi,  dan  zona  kartilago  yang  mengalami  mineralisasi.    Data  dianalisis  dengan analisis  ragam  dan  diuji  lanjut  dengan  uji  beda  nyata  terkecil  (BNT)  pada  taraf  5%.    Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  peningkatan  perlakuan  dosis  ekstrak  rimpang  rumput  teki  memberikan  pengaruh nyata  terhadap  penurunan  ketebalan  zona  cadangan  kondrosit,  zona  proliferasi,  dan  zona  maturasi. Perlakuan  dosis  135  mg/40g  BB  dalam  0,4  ml  aquabides  (P4)  memberikan  pengaruh  terhadap penurunan  ketebalan  zona  kartilago  yang  mengalami  mineralisasi  yaitu  dari  rerata  563,33µm  menjadi 481,66µm.
Kata kunci : efek teratogen, Cyperus rotundus L., mencit ( Mus musculus L.), dan tunas anggota depan

## ABSTRACT
Rhizome of Cyperus rotundus L. contains of saponin, cineol, pinene, siperon, rotunol, siperenon, tannins, siperol, alkaloids, flavonoids, tannins, starch, glycosides, furochromones, and sesquiterpenoids.  With the presence  of  these  compounds  it  is  necessary  to  observe  the  side  effects  of  those  on  the  fetus  of  mice ( Mus  musculus L).    The  purpose  of  this  study  to  determine  the  effect  of Cyperus  rotundus L.  rhizome methanol  extract  on  histologycal  structure  abnormalities  of  fetus  epiphyseal  cartilage  treated  during prenatal.  The dosage of Cyperus rotundus L. rhizome extract were: 45 mg/40g BB in 0.4 ml aquabidest (P2),  90  mg/40g  BB  in  0.4  ml  aquabidest  (P3),  135  mg/40g  BB  in  0.4  ml  aquabidest  (P4),  and  0.4 aquabidest ml (K) as a control. The parameters observed include chondrocytes reserve zone, proliferative zone, maturation zone, and zone of mineralized cartilage.  Data were analyzed using Anova and followed with LSD test with significancy 5%.  The results of this study showed that the dose of Cyperus rotundus L. rhizome  methanol  extract  increased  significant  effect  on  the  reduction  in  thickness  of  chondrocytes reserve zone, proliferative zone, and maturation zone.  The dose of 135 mg/40g BB in 0.4 ml aquabidest (P4)  to  decrease  the  thickness  of  the  mineralized  zone  of  cartilage  with  of  the  average 563,33μm  be 481,66μm.
Key words : teratogenic effects, Cyperus rotundus L., mice ( Mus musculus L.), and epiphyseal cartilage

## PENDAHULUAN
Pemakaian  obat  tradisional  berkembang dengan  baik  sebagai  salah  satu  alternatif untuk  menanggulangi  masalah  kesehatan
(Agusta, 2001).  Salah satu tumbuhan obat yang  digunakan  oleh  masyarakat  sebagai obat tradisional adalah rumput teki
( Cyperus rotundus L.) yang tergolong famili Cyperaceae (Sudarnadi et al ., 1996).
Rimpang  teki  berkhasiat  menormalkan siklus  haid,  melancarkan  vital  energi  yang tersumbat,  tonik  pada  lever,  meredakan nyeri,  penenang,  dan  antibakteri  (Hariana, 2007).    Studi  fitokimia  sebelumnya  pada rimpang  teki  mengungkapkan  adanya senyawa  alkaloid,  flavonoid,  tanin,  pati, glikosida, furochromones, serta seskuiterpenoid (Lawal dan Adebola,
2009).    Adanya  senyawa  kimia  tersebut dapat digunakan sebagai bahan kontrasepsi yang menyebabkan sulit terjadinya proses kehamilan, namun apabila terjadi kehamilan maka kemungkinan  embrio  akan  mengalami abnormalitas karena mempengaruhi proses hormonal, reproduksi, serta perkembangan embrio (Winarno dan Sundari, 1997).
Besarnya  potensi  yang  dimiliki  oleh  teki sebagai  tumbuhan  berkhasiat  obat  serta minimnya informasi mengenai efek samping  pemanfaatan,  termasuk  pema- kaian  pada  masa  kehamilan  memerlukan adanya  suatu  uji  untuk  mengetahui  ada tidaknya  efek  samping  pemakaiannya terhadap janin oleh induk yang mengonsumsi. Salah satu metode pengujian  yang  dilakukan  adalah  uji teratogenik.  Suatu teratogen yang bekerja pada tahap organogenesis akan menyebabkan  embrio  mati  atau  tumbuh abnormal  sesuai  tingkatan  dosis  teratogen yang diberikan (Yelvita et al ., 2014).  Tunas anggota depan merupakan bagian ekstrimitas  yang  pertama  kali  tumbuh,
sehingga  dapat  diamati  adanya  kelainan akibat pemberian suatu zat asing.
Berdasarkan kenyataan diatas, maka dilakukan  penelitian  mengenai  uji  efek teratogenik  ekstrak  metanol  rimpang  teki terhadap  kelainan  tunas  anggota  depan fetus  mencit  ( Mus  musculus L.)  yang ditinjau secara histologi.

## METODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan November 2015 – Februari 2016 bertempat di  Laboratorium  Zoologi  Jurusan  Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan  Alam  untuk  pemeliharaan dan  pemberian  perlakuan.    Pembuatan ekstrak dilaksanakan di Laboratorium Kimia Organik
Jurusan Kimia Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam, sedangkan  pembuatan  preparat  histologi dilaksanakan  di  Balai  Veteriner  regional  III Bandar Lampung.

## Alat dan Bahan
Alat-alat  dalam  penelitian  ini  antara  lain kertas  label,  seperangkat  alat  bedah, desikator,  spuit  yang  telah  ditumpulkan, kamera,  botol  100  ml  yang  telah  dilubangi disertai  pipa  aluminium  sebagai  tempat minum  mencit,  dan  kandang  mencit  yang terbuat dari kawat dan papan sebanyak 20 unit.  Bahan yang digunakan antara lain 20 ekor mencit betina dan jantan berumur 3-4 bulan  dengan  berat  sekitar  40  gram,  eter, alkohol  70%,  formalin  10%,  kapas,  pelet sebagai  makanan  mencit,  aquabides,  air, dan ekstrak rimpang rumput teki.
Prosedur Penelitian

## Persiapan kandang dan hewan uji
Kandang  disiapkan  sebanyak  20  unit  dari bahan kawat berukuran 15x15 mm kemudian disiapkan hewan uji yaitu mencit betina dan jantan dengan kondisi fertil yang berumur  10  minggu  dengan  berat  sekitar 40 gram yang diperoleh dari Balai Veteriner regional  III  Bandar  Lampung.    Hewan  uji kemudian  diaklimatisasi  selama  1  minggu. Di  dalam  kandang  ditempatkan  1  ekor mencit  jantan  dan  1  ekor  mencit  betina. Setiap  hari  diberi  makanan  berupa  pelet dan air minum secukupnya.

## Persiapan dan pembuatan ekstrak
Rimpang  teki  dibersihkan  dengan  dicuci, dijemur  hingga  kering,  kemudian  digiling hingga  menjadi  serbuk.    Serbuk  tersebut dibuat  ekstrak  dengan  cara  soklet  dengan pelarut  metanol.    Lalu  ekstrak  dipekatkan dengan rotary  evaporator pada  suhu  35 o C dengan  kecepatan  60  rpm  selama  1  jam (Busman, 2013).

## Pemberian perlakuan
Pada  penelitian  ini  ekstrak  rimpang  teki diberikan  secara  oral.    Dosis  ekstrak rimpang  teki  yang  dipakai  pada  penelitian ini dihitung berdasarkan pemakaian ekstrak rimpang  teki  pada  penelitian  sebelumnya yang menggunakan hewan percobaan tikus putih.    Setelah  dikonversikan  terhadap mencit,  maka  pada  hari  kebuntingan  ke  6- 17 mencit diberi perlakuan sebagai berikut: 1. Kelompok kontrol, diperlakukan
dengan diberi 0,4 ml aquabides (K) 2. Kelompok dosis 45 mg/40 g BB dalam 0,4 ml aquabides (P2)
3. Kelompok dosis 90 mg/40 g BB dalam 0,4 ml aquabides (P3)
4. Kelompok  dosis  135  mg/40  g  BB dalam 0,4 ml aquabides (P4)
Pada  hari  ke-18  kebuntingan  fetus  di keluarkan dari uterus dengan cara pembedahan bagian perut. Fetus dibersihkan dan diambil bagian ekstremitas posteriornya dengan cara amputasi. Preparat kemudian difiksasi dengan larutan formalin 10% selama 2 jam.  Sampel tulang tersebut  kemudian  dipreparasi  dengan metode parafin, diwarnai dengan menggunakan  pewarnaan  Hematoxylin- Eosin (Balai veteriner, 2014).

## Pengamatan
Pengamatan terhadap sediaan penampang membujur tunas anggota depan mencakup zona  cadangan  kondrosit,  zona  proliferasi, zona  maturasi,  dan  zona  kartilago  yang mengalami  mineralisasi.    Secara  deskriptif kualitatif, juga diamati struktur sel kondrosit terhadap  ada  tidaknya kerusakan sel  pada masing-masing zona.

## Rancangan Percobaan
Rancangan  percobaan  yang  digunakan pada penelitian ini adalah Rancangan Acak Lengkap  (RAL)  dengan  4  perlakuan  dan  5 pengulangan.

## Analisis Data
Data  hasil  penelitian  berupa  rerata  tebal lapisan  setiap  zona  dalam  tunas  anggota depan fetus dianalisis menggunakan analisis  ragam  (ANARA)  dan  di  uji  lanjut dengan uji  beda  nyata  terkecil  (BNT)  pada taraf 5%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengamatan  terhadap  kartilago  epifisialis fetus dilakukan untuk mengetahui terjadinya osteogenesis endokondralis ekstrimitas.    Pengamatan  meliputi  tebal zona  cadangan  kondrosit,  zona  proliferasi, zona  maturasi  dan  zona  kartilago  yang mengalami mineralisasi.  Hasil penelitian ini menunjukkan  bahwa  ekstrak  rimpang  teki mampu  menghambat proses  osifikasi kartilago  epifisialis  fetus  yang  ditandai dengan semakin menipisnya zona cadangan  kondrosit,  zona  proliferasi,  dan zona maturasi.  Sedangkan ketebalan pada zona kartilago yang mengalami mineralisasi  tidak  menunjukkan  adanya perbedaan yang nyata (Gambar 4).

## Zona cadangan kondrosit
Hasil  pengamatan  tebal  lapisan  zona cadangan  kondrosit  kelompok  kontrol  dan kelompok  perlakuan  menunjukkan  adanya kartilago  hialin  yang  terdiri  dari  kondrosit yang  berbentuk  bundar  (ovoid).    Kondrosit berada  dalam  keadaan  istirahat  dan  tidak mengalami  perubahan  morfologi  (Gambar 5).  Hasil pengamatan tebal zona cadangan kondrosit kartilago epiﬁalis tercantum pada Gambar 1.
Dari  uji  lanjut  dengan  uji  BNT  antar kelompok kontrol dengan kelompok perlakuan  didapatkan  adanya  penurunan ketebalan  zona.    Hal  ini  menunjukkan bahwa  ekstrak  rimpang  teki  mempunyai efek terhadap pertumbuhan kondrosit pada zona cadangan kondrosit.
Gambar  1.  Rerata  ketebalan  zona  cadangan kondrosit  kartilago  epifisialis  fetus mencit dari induk yang diberi ekstrak metanol  rimpang  teki  selama  masa organogenesis.  Keterangan:  angka yang  diikuti  oleh  huruf  yang  sama tidak  berbeda  nyata  pada  BNT dengan α=5%.

## Zona proliferasi
Hasil pengamatan zona proliferasi kelompok  kontrol  menunjukkan  adanya kondrosit  yang  membelah  diri  secara mitosis  menjadi  banyak,  sel-sel  pipih  dan saling  berdekatan,  serta  tidak  membentuk deretan kumpulan  sel  yang  sejajar  dengan sumbu  panjang  tulang  (Gambar  5). Pada zona  proliferatif  terdapat  sel-sel  proliferatif berbentuk  sel  kolumnar  yang  mengalami maturasi seluler (bermitosis). Hasil pengamatan tebal zona proliferasi kartilago epifisialis tercantum pada Gambar 2.
Gambar  2.  Rerata  ketebalan  zona  proliferasi kartilago  epifisialis  fetus  mencit  dari induk  yang  diberi  ekstrak  metanol rimpang teki selama masa organogenesis.  Keterangan:  angka yang  diikuti  oleh  huruf  yang  sama tidak  berbeda  nyata  pada  BNT dengan α=5%.
Dari  hasil  uji  statistik  pada  taraf  5% didapatkan  adanya  perbedaan  yang  nyata pada  kelompok  kontrol  dengan  kelompok perlakuan.    Dari  uji  lanjut  dengan  uji  BNT antar  kelompok  kontrol  dengan  kelompok perlakuan  menunjukkan  perbedaan  yang nyata  pada  kelompok dosis  90 mg/40g BB dan 135 mg/40g BB.  Hal  ini menunjukkan bahwa  pada  kelompok  perlakuan  terjadi gangguan  pada  zona  proliferatif. Diduga hal  ini  disebabkan  oleh  ekstrak  rimpang teki yang berinteraksi pada proses pembelahan  sel  dengan  menghambat kecepatan mitosis, sehingga terjadi hambatan proliferasi  sel. Menurut  Bennet, Proffit, dan Norton (1967), adanya intervensi  zat  asing  pada  proses  mitosis yang  terjadi  pada  zona  proliferasi  akan menyebabkan  perubahan  integritas  DNA dan  menghambat  sintesis  protein.    Jika ekstrak rimpang teki mempunyai kemampuan  merusak  integritas  DNA  dan menghambat sintesis protein maka selanjutnya  dapat  menghambat  proliferasi sel pada zona ini sehingga akan mempengaruhi  kondrosit  pada  zona-zona selanjutnya dalam kartilago epifisialis.

## Zona maturasi
Hasil pengamatan zona maturasi kelompok kontrol  menunjukkan menunjukkan  adanya kondrosit  yang  hipertrofi,  yaitu  kondrosit tidak  lagi  membelah  diri,  tetapi  bertambah besar  dan  bervakuola  (Gambar  5) .    Hasil pengamatan  tebal  zona  maturasi  kartilago epifisialis fetus tercantum pada Gambar 3.
Dari  hasil  uji  statistik  pada  taraf  5% didapatkan  adanya  perbedaan  yang  nyata antara  kelompok  kontrol  dengan  kelompok perlakuan.    Dari  uji  lanjut  dengan  uji  BNT antar  kelompok  kontrol  dengan  kelompok perlakuan juga didapatkan adanya perbedaan yang nyata pada dosis 135  mg/40g  BB.    Hal  ini  berarti  ekstrak rimpang teki menghambat kecepatan mitosis  kondrosit  dalam  zona  proliferasi sehingga  zona-zona  dibawahnya  akan semakin tipis ketebalannya. Menurut Ham dan  Cormack  (1979),  kondrosit  yang hipertroﬁ akan selalu diganti oleh kondrosit yang baru sebagai hasil proliferasi kondrosit  dalam  zona  proliferasi.    Jika proliferasi  kondrosit  dalam  zona  proliferasi dihambat  oleh  ekstrak  rimpang  teki  maka kondrosit  yang  hipertropi  dalam  zona maturasi  juga  akan  semakin  menipis  jika dibanding  kontrol. Pada  zona  maturasi  ini ekstrak  rimpang  teki  juga  mempunyai pengaruh  yang  nyata,  sehingga  semakin tinggi  dosis  ekstrak  rimpang  teki  yang diberikan,  maka  semakin  menurun  pula ketebalan zona maturasinya.
Gambar  3.  Rerata  ketebalan  zona  maturasi kartilago  epifisialis  fetus  mencit  dari induk  yang  diberi  ekstrak  metanol rimpang teki selama masa organogenesis.  Keterangan:  angka yang  diikuti  oleh  huruf  yang  sama
tidak  berbeda  nyata  pada  BNT dengan α=5%.

## Zona kartilago
Hasil
pengamatan pada kelompok perlakuan  menunjukkan  adanya zona kartilago  mengalami  pendarahan  (Gambar 5). Beberapa  mekanisme  yang  memung- kinkan  terjadinya  pendarahan  yaitu  akibat ketidakseimbangan  osmotik  (Widiyani  dan Sagi, 2001) .  Hasil pengamatan tebal zona kartilago  yang  mengalami  mineralisasi pada  kartilago  epifisialis  fetus  tercantum pada Gambar 4.
Gambar  4.    Rerata  ketebalan  zona  kartilago yang mengalami mineralisasi kartilago  epifisialis  fetus  mencit  dari induk  yang  diberi  ekstrak  metanol rimpang teki selama masa organogenesis.
Pengamatan zona kartilago yang mengalami  mineralisasi  pada  kelompok kontrol  dan  kelompok  perlakuan  menun- jukkan  adanya  beberapa  lapisan  kondrosit yang hipertrofi dan mati (Gambar 5). Matrik kartilago  dalam  zona  ini  mulai  mengalami kalsifikasi  dengan  adanya  pengendapan hidroksiapatit  sehingga  tampak  septa  tipis atau sekat pembatas di sekeliling kondrosit yang  hipertrofi  dan  mati.    Dari  hasil  uji statistik  pada  taraf  5%  didapatkan  tidak adanya  perbedaan  yang  nyata  antara
kelompok kontrol dengan kelompok perlakuan.
Gambar  5.  Fotomikroskopi  kartilago  epifisialis
fetus  Mencit  (Mus  musculus  L.) penampang longitudinal dengan pewarnaan  Hematoxylin-Eosin  dan perbesaran  100x.  Keterangan:  (a) zona  cadangan  kondrosit,  (b)    zona proliferasi,  (c)  zona  maturasi,  (d) zona  kartilago  yang  mengalami mineralisasi,  (K)  kelompok  kontrol; (P2)  kelompok  perlakuan  dosis  45 mg/40 g BB; (P3) kelompok perlakuan dosis 90 mg/40 g BB; (P4)
kelompok perlakuan dosis 135 mg/40 g BB.

## KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  didapatkan simpulan bahwa pemberian ekstrak rimpang  teki  per  oral  dosis  45  mg/40g  BB, 90  mg/40g  BB,  dan  135mg/40g  BB mengakibatkan  penurunan  ketebalan  zona cadangan  kondrosit,  zona  proliferasi,  dan zona maturasi, sedangkan dosis 45 mg/40g BB,  90  mg/40g  BB,  dan  135  mg/40g  BB mengakibatkan peningkatan ketebalan
33 / Jurnal Biologi Eksperimen dan Keanekaragaman Hayati                                                     Puty Orlando Arismedi
zona kartilago yang mengalami mineralisasi.

## Saran
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut terhadap  zat  aktif  ekstrak  rimpang  teki sehingga  peran  masing-masing  zat  dalam pertambahan  panjang  kartilago  epifisialis menjadi jelas.

## DAFTAR PUSTAKA
Agusta, A. 2001. Awas! Bahaya Tumbuhan
Obat.  [internet].  (diunduh  17  Oktober 2015). Tersedia pada. http://www.indomedia.com/.
Balai  Penyidikan  dan  Pengujian  Veteriner Regional III (BPPV Regional III).2014.
Metode  Uji  Histopatologi .  BPPV Regional III. Bandar Lampung.
Bennet,  J.C.,  W.R.  Proffit,  &  L.  A.  Norton.
1967. Determination of growth inhibitory concentration of tetracycline for  bone  in  organ  culture. Nature London 216: 176-177.
Busman,  H.  2013.  Histologi  Ulas  Vagina dan Waktu Siklus Estrus Masa Subur
Mencit  Betina  Setelah  Pemberian
Ekstrak Rimpang Rumput Teki. Prosiding Semirata FMIPA Universitas Lampung .
Ham,  A.W.  dan  D.  H.  Cormack.  1979. Histology .  8  ed.  J.B.  Lippincot Company. Philadelphia
Hariana,  A.  H.  2007. Tumbuhan  Obat  dan
Khasiatnya . Penebar Swadaya.
Jakarta.
Lawal  ,  O.  A.  dan  O.  Adebola.  2009.
Chemical Composition Of The Essential  Oils  Of  Cyperus  Rotundus L. From South Africa. Journal
Molecules.
Sudarnadi,  Pujirianto,  A.  Gunawan,  D.
Wahyono, S. Donatus, I .A, Drajat, M. Wibowo, dan Ngatidjan. 1996. Tumbuhan  Obat,  Hasil  Penelitian, Sifat-sifat  dan  Penggunaan .  Pusat Penelitian  Obat  Tradisional  (PPOT UGM), Yogyakarta. P 112-117.
Widiyani,  T.  dan  M.  Sagi.  2001.  Pengaruh aflatoksin  B1  terhadap  pertumbuhan dan perkembangan embrio dan skeleton  fetus mencit  ( Mus musculus L.). Teknosains 14 (3): 409-427.
Winarno,  W.M.  dan  M.,  Sundari.  1997. Informasi Tanaman Obat Untuk Kontrasepsi Tradisional . Pusat Penelitian Dan Pengembangan Farmasi. Badan Penelitian Dan Pengembangan Kesehatan Departemen Kesehatan RI.
Yelvita,  S.,  M.  Warnety,  dan  A.Yohanes.
2014. Uji Teratogenitas Ekstrak Bungo Timah ( Peperomia pellucida L. Kunth.,)  terhadap  Organ  Viseral Embrio  Mencit  Putih  ( Mus  musculus L.). Jurnal ilmiah biologi .