## EFEK PROTEKTIF ZINK TERHADAP STRES OKSIDATIF TESTIS DAN KUALITAS SPERMA PADA MENCIT JANTAN (Mus musculus) SETELAH DIINDUKSI CYCLOPHOSPHAMIDE
Retno Yulianti* 1 , Tiwuk Susantiningsih 2 , M Ibnu Khaldun 3 , M Fadzrul Adhiwirawan 4 1,2,3 Fakultas Kedokteran Universitas Pembangunan Nasional Veteran Jakarta
* 1 e-mail : dr. retnoyulianti@gmail.com

## Abstract
Cyclophosphamide is a class of alkylating agents used for cancer treatment. The side effect of CP is through the depletion mechanism of  the  GSH  cellular pathway  which  generates free radicals by activation by copper/iron in the body to damage the spermatogenesis process. Zinc has antioxidant enzymes and can bind metallothionein to protect the body from the effects of anti-cancer drugs. The purpose of this study was to determine the protective effect of Zn against testicular oxidative stress and sperm quality in male mice ( Mus musculus ) after cyclophosphamide induction. This study used 30  male mice divided into  six  groups, namely negative controls that  were not  given  CP  and  Zn  (K1),  positive controls that were given only Zn (K2) and only CP (K3) and groups that were given CP injections (200 mg / Kg) with 3 doses of Zn, namely 25 mg (K4), 50 mg (K5) and 100 mg (K6). The analysis showed that the mean sperm quality in all  groups  was  significantly  different  (p=0.011).  The  mean  levels  of  MDA  testis  in  all  groups  did  not  differ significantly. There  was no relationship  between  testicular  MDA  levels  with  sperms  quality  (p=0.800)  and  the degree  of  correlation in  a  negative direction (R=  -0.048). This study concluded that  testicular MDA  levels are  not associated with sperms quality, especially the number of sperms cells.

## Keywords : cyclophosphamide, malondialdehid, sperms, zinc

## Abstrak
Cyclophosphamide  (CP) merupakan  golongan  alkylating  agent  yang  digunakan  untuk pengobatan kanker. Efek samping CP melalui mekanisme deplesi jalur seluler GSH yang menghasilkan radikal bebas dengan aktivasi oleh tembaga  atau  besi  dalam  tubuh  sehingga  merusak  proses  spermatogenesis.  Zink  (Zn)  memiliki  enzim–enzim antioksidan  dan  mampu  mengikat  metallothionein  untuk  melindungi  tubuh  dari  efek  obat  anti  kanker. Tujuan penelitian  ini  untuk  mengetahui efek  proteksi  zink  terhadap  stress  oksidatif  testis  dan  kualitas  sperma  pada mencit jantan (Mus musculus) setelah  diinduksi  cyclophospamid .  Penelitian  ini menggunakan 30 mencit jantan yang dibagi enam kelompok yaitu kontrol negatif yang tidak diberi CP dan Zn (K1), kontrol positif yang hanya diberi Zn (K2) dan hanya CP (K3) serta kelompok yang diberikan penyuntikan CP (200 mg/Kg) dengan 3 dosis Zn yaitu 25 mg (K4), 50 mg (K5) dan 100 mg (K6). Hasil analisis menunjukkan rerata kualitas sperma (jumlah sel sperma) pada semua  kelompok  berbeda  siginifikan  (p=0.011).  Rerata  kadar  MDA  testis  pada  semua  kelompok  tidak  berbeda signifikan. Tidak terdapat hubungan antara kadar MDA testis dengan kualitas sperma (jumlah sel sperma) (p =0.800, p>0.05) dan  derajat korelasi  ke  arah  negatif  (nilai  R=  -0.048) Kesimpulan penelitian ini  bahwa  kadar MDA testis tidak berhubungan dengan kualitas sperma terutama jumlah sel sperma.
Kata Kunci: cyclophosphamide, malondialdehid, sperma, zink
JBP Vol.22 No.2, Desember 2020 – Retno Yulianti

## 1.  PENDAHULUAN
Menurut  data International  Agency  for Research on Cancer (IARC) pada tahun 2012 bahwa terdapat 14.067.894 kasus baru kanker dan  8.201.575  kematian  akibat  kanker  di seluruh  dunia.  Penyebab  kematian  utama  di seluruh  dunia  salah  satunya  adalah  penyakit kanker (Pusdatin kementrian RI, 2015). Salah satu  pengobatan  kanker  yang  dianjurkan adalah  kemoterapi  dengan  menggunakan beberapa  obat  antikanker  dalam  kombinasi regimen.  Salah  satu  obat  yang  ada  dalam kombinasi  regimen  obat  kanker  adalah cyclophosphamide (CP) (Perhimpunan Dokter Paru Indonesia, 2003). Lebih dari 50% pasien laki-laki  yang  menderita  jenis  tumor  padat mendapatkan  kemoterapi,  namun  efek  dari kemoterapi  tersebut  menyebabkan  pasien mengalami  kerusakan  berat  pada  epitel seminiferus    yang    berakhir    dengan kemandulan (Abarikwu, S.O, 2012).
Cyclophosphamide (CP)  merupakan alkylating  agent dari  golongan  nitrogen mustard dalam  kelompok  oxazophorin. Cyclophosphamide akan  mengalami  aktivasi oleh  enzim  sel  hepatosit  yaitu Cytochrome P450 enzyme system (CYP) yang selanjutnya akan  menjadi  2  unsur  kimia  berupa  zat  aktif sebagai ankylating  agent, dan  zat  buangan hasil  metabolit  yaitu Phosparamide  Mustard (PM)  dan  Acrolein.  Sifat  Acrolein  sebagai aldehyde  reactive menjadi  penyebab  utama efek  samping  CP  yang  dapat  merusak  sel dengan mekanisme deplesi jalur seluler GSH yang  terkonjugasi  oleh  Acrolein,  sehingga proses cytotoxicity dapat  terjadi  secara  luas. Acrolein  juga  memiliki  efek  terhadap  DNA yang  menyebabkan  terbentuknya Interstrand DNA  dan DNA-protein  cross-links sehingga akan  mengganggu  proses  replikasi  DNA normal  tubuh  (BC  Cancer  Agency  Cancer Drug  Manual©,  2013).  Paparan  CP  dapat menyebabkan gangguan keseimbangan reaksi oksidatif  jaringan  sehingga  menimbulkan stress  oksidatif  jaringan.  Hasil  reaksi  akan terbentuk  hidrogen  peroksida  yang  mampu menyebabkan  dekomposisi  produk  aldehid yang  bersifat  toksik  terhadap  sel  dan berdampak   pada   gangguan   perkembangan
spermatogenesis (S. O.Abarikwu, 2012).
Untuk  proses  penghambatan  tersebut, testis  memiliki  enzim  –  enzim  antioksidan, yaitu superoksida dismutase, GSH Peroksidase dan Glutathione-s-transfarase (GST).  Zink merupakan  suatu  konstituen  dari  superoksida dismutase,  yakni  suatu  enzim  yang  dapat memproteksi  sel-sel  dari  kerusakan  yang disebabkan  oleh  stress  oksidatif.  Selama perkembangan  sel  sperma  yang  aktif  secara metabolik  akan  memproduksi  produk  radikal bebas dan zink akan mengaktifkan sistem enzim yang  menetralkan  radikal  bebas  tersebut (Oktapiani,  Kory;  Wantouw;  Tendean,  2014) Pada jalur counter oleh GSH peroksidase yang merupakan  jalur  utama  untuk  mengubah  H 2 O 2 menjadi  H 2 O  terhambat  oleh  konjugasi Acrolein,  sehingga  H 2 O 2 nantinya  akan mengalami    perubahan    struktur    kimiawi menjadi spesies OH radikal dengan aktivasi oleh tembaga  (Cu)  atau  besi  (Fe)  dalam  tubuh  dan merusak  proses  spermatogenesis  pada  testis. Hal  ini  yang  mendasari  untuk  melakukan  uji fungsi  Zn  yang  mampu  menghambat  proses perubahan  H2O2  menjadi  OH  radikal  melalui peran  Zn      sebagai  antagonis  terhadap  Cu/Fe sehingga  tidak  terjadi  perubahan  kimiawi tersebut.  Selain  itu  Zn  berfungsi  untuk memproduksi molekul antoksidan yaitu metallothionein untuk  melindungi  tubuh  dari paparan radiasi, efek obat – obatan anti kanker dan  berbagai  kondisi  stress  oksidatif  lainnya. Selain  itu  juga  Zink  memiliki  kemampuan menstimulasi  hormon  androgen  (testosteron) pada  sel  Leydig,  sehingga  dalam  proses spermatogenesis zink sangatlah berperan (Payaran, Wantouw , & Tendean, 2014).
Berdasarkan  latar  belakang  di  atas, peneliti  merasa  tertarik  untuk  mengetahui sejauh  mana pengaruh suplemen  zink  terhadap kualitas sperma terutama jumlah sel spermatozoa  dengan  menggunakan  hewan  uji mencit  jantan  (Mus  musculus)  yang  diinduksi cyclophosphamide .

## 2.  METODE PENELITIAN

## 2.1 Persiapan Penelitian
Jenis  penelitian in  vivo ini  termasuk  kategori true  experimental. Metode  perhitungan  jumlah mencit  dengan  rumus  Federer  dan  dilakukan
JBP Vol.22 No.2, Desember 2020 – Retno Yulianti
ramdomisasi  yang  memilih  30  ekor  mencit sesuai  dengan  kriteria  inklusi  untuk  dibagi menjadi  6  kelompok  masing-masing  5  ekor. Rancangan  yang  digunakan post  test  only control  group  design .  Perlakuan  dengan  lima kali  pengulangan.  Sampel  dari  penelitian  ini adalah    mencit    jantan    galur Swiss    Webster ( Mus musculus ), berat badan 20-30 gram, umur 6-8  minggu  yang diperoleh  dari  dari Laboratorium  dan  Teknologi  Pusat  Penelitian Antar  Universitas  Ilmu  Hayati  (PPAU-IH), Institut  Teknologi  Bandung,  Jl  Ganeca  no.10 Lb.Siliwangi  Bandung,  Jawa  Barat  40132. Besar sampel sebanyak 30 ekor. Setelah 30 ekor tikus  diaklimatisasi  selama  1  minggu,  tikus dibagi  menjadi  6  kelompok  secara  acak  yang terdiri  dari  kelompok  kontrol  negatif  dengan aquades (tanpa CP dan Zn) (K1), kontrol positif yang  diberikan  hanya  Zn  (K2)  dan  hanya Cyclophosphamide (CP) 200 mg/kgBB diberikan      secara      intraperitoneal  (K3) (Elangovan,  N,  2006)  (Drumond,Ana  Luiza, 2011) dan tiga perlakuan dengan Zink 25  mg/kgBB/  hari  (K4),  50  mg/kgBB/hr  (K5) dan  100  mg/kgBB/hari  (K6),  masing-masing kelompok  sebanyak  5  ekor  dengan  lima  kali pengulangan.  Bahan  kimia  yang  digunakan Cyclophosphamide vial  500  mL,  Zink  tablet, larutan TCA ( Tri Chroloacetic Acid ) 20% dan larutan  Tiobarbiturat  Na  0.67%,  aquades, larutan  George/JOS.  Pakan  standar  yang diberikan  selama  percobaan  mengandung makan pelet 551 yang diberikan dua kali sehari dan diberi minum ad libitum .

## 2.2     Prosedur Penelitian
Teknik   pengumpulan   data   dilakukan dengan melakukan :
1. Pemeriksaan    karakteristik    sampel   tikus sesuai  dengan  kriteria  inklusi yaitu  diukur  berat badan  mencit  (20-30g),  suhu,  pernapasan, denyut jantung harus dalam batas normal untuk memastikan  mencit  dalam  keadaan  sehat. Kemudian  membagi  kelompok  dan  jumlah mencit sesuai yang dibutuhkan.
2.       Mencit diadaptasikan terlebih dahulu di dalam laboratorium selama 1 minggu  sebelum diberi perlakuan, selama masa adaptasi mencit diberi  makan  pelet  551  dua  kali  sehari  dan diberi minum ad libitum .
3.       Mengukur  berat  badan  mencit  sebelum diberi perlakuan dengan timbangan analitik. 4.        Melakukan    pemberian    Zn    pada    3 kelompok perlakuan (25 mg, 50 mg dan 100 mg) per hari dan penyuntikan obat CP dengan dosis 200mg/kgBB secara intraperitoneal 1 kali setiap minggu selama 35 hari. Untuk kelompok kontrol dibagi menjadi 1 kelompok kontrol negatif yaitu mencit  yang  diberi  aquabidest  tanpa diberi  CP dan  Zn  dan  2  kelompok  kontrol  postitif  yaitu mencit  yang  hanya  diberi  Zn  tanpa  CP  dan mencit yang hanya diberi CP tanpa Zn.
5.      Penyuntikan        obat        CP        secara intraperitoneal pada mencit kelompok perlakuan  menggunakan handscoon  steril menyiapkan  CP  yang  dilarutkan  dengan aquabidest  10  cc  di  dalam  vial,  lalu  lakukan homogenisasi larutan. Kemudian dengan syringe  steril ukuran  3  ml  ambil  CP  sesuai dengan  dosis  yang  telah  dikonversi  untuk mencit  yaitu  sebanyak  0,4  cc.  Setelah  itu ditunggu  efek  kerja  obat  CP  selama  45  menit dan evaluasi keadaan mencit.
6.          Menyiapkan  Zn  tablet  yang  dilarutkan dalam  aquabidest  dan  sesuai  dosis  yang dikonversikan untuk mencit. Lakukan pemberian Zn pada 3 kelompok dosis perlakuan dan  1  kelompok  kontrol  positif  yang  hanya diberikan  Zn  sebesar  100  mg  dengan menggunakan sonde yang diberikan setiap hari pada pagi hari.
7.  Setelah  semua  prosedur  selesai, kembalikan mencit ke kandang mencit.
8.    Setelah  selama  35  hari  dilakukan prosedur pemberian  perlakuan  ke  masing-  masing kelompok , selanjutnya melakukan pembedahan mencit  untuk  mendapatkan  sel  sperma  dari epidydmis  cauda dan  kadar  MDA  dari  organ testis.

## 2.3     Parameter Uji
2.3.1  Pengambilan          Sekresi          Cauda Epididimis
Prosedur mendapatkan sel sperma dengan mengambil epidydimis  cauda mencit  jantan yang  telah  dibedah,  lalu  e pidydimis  cauda dipotong  secara crossectional halus  hingga beberapa  bagian  kecil,  lalu  diletakkan  dalam cawan  petri  yang  berisi  NaCl  0.9%,  kemudian dikeluarkan spermanya dengan cara
JBP Vol.22 No.2, Desember 2020 – Retno Yulianti
dipencet  lalu  dihitung  terlebih  dahulu  volume sperma dan kemudian  ditetesi  larutan George/ JOS  dengan      pengenceran      1000  x  (  50  µl sperma + 950  µl lar George) sebanyak 2 tetes, kemudian lakukan homogenisasi agar mempermudah pemeriksaan.
2.3.2  Perhitungan   Jumlah   Total   Sperma Mencit
Perhitungan sperma menggunakan hemasitometer   Neubauer   pada   pembesaran 1000x, lalu dilakukan  dengan menggunakan 5 kotak yang tersusun diagonal pada hemasitometer Neubauer, dan faktor pengeceran  1000  dengan  nilai  20.  Rumus perhitungan konsentrasi sperma = N x 10.000 x P  x  (Jum  K  x  0.25)  (  N=  jumlah  sperma  dari kotak  yang  dicacah,  P  =  pengeceran  yang dipilih  (10,20  dan  50)  dan  yang  pilih pengeceran 20, K= jumlah kotak yang dicacah dan  ada  5  kotak  yang  dipakai,  angka  10.000= mewakili satuan juta/10 6 , nilai 0.25 mm = luas kotak  kecil  pada  hemasitometer  Neubauer. Nilai    perhitungan    adalah    dalam    satuan juta/mL  dan  dilakukan  pada  setiap  kelompok, kemudian  perhitungan  jumlah  total  sperma mencit  menggunakan  rumus  =  konsentrasi sperma x volume sperma.

## 2.3.3  Penilaian    Kadar    MDA    Jaringan Testis Mencit
Pengukuran  kadar  MDA  organ  testis dilakukan  dengan  cara  menimbang  1  gram jaringan  testis  yang  sudah  bersih  lalu dihomogenasi  di  dalam  tabung appendorf . Sampel  testis  ditambahkan  1  mL  akuades. Pemeriksaan MDA dilakukan dengan penambahan Thiobarbituric acid (TCA) 20% 200 µL dengan homogenate 400 µL. Kemudian campuran  divortex  hingga  terlihat  keruh  lalu disentrifugasi pada kecepatan 5000 rpm selama 10  menit.  Supernatan  dari  campuran  tersebut diambil  dan  ditambahkan 400  µL  larutan  tiobarbiturat  0,67%  kemudian panaskan dalam 95-100 0 C selama 10 menit lalu didinginkan.  Sampel  yang  telah  dingin dimasukkan  dalam  kuvet  lalu  diukur  dengan spektrofotometri pada panjang gelombang 530 nm  (Yulianti,R  and  Astari,  R.V2020).  Hasil pemeriksaan berupa nilai serapan  yang kemudian  dihitung kadar MDA
menggunakan kurva standar.

## 2.4     Analisis Data
Pengolahan data dianalisis dengan menggunakan SPSS 17 dengan tingkat signifikansi  0,05  dan  taraf  kepercayaan  95% (α=0,05)  serta  menggunakan  uji One  way ANOVA untuk  mengetahui  apakah  terdapat perbedaan  kadar  MDA  testis  dan  kualitas sperma  pada  semua  kelompok.  Selanjutnya untuk  mengatahui  letak  perbedaan  yang bermakna  pada  masing-masing  kelompok dilakukan    analisis post-hoc    multiple comparison  test serta  untuk  mengetahui hubungan  antara  kedua  variabel  dependen dengan menggunakan Pearson correlation test .

## 3.    HASIL DAN PEMBAHASAN

## Kadar MDA jaringan testis mencit
Untuk  menilai suatu jaringan mengalami stress  oksidatif  berupa  peningkatan  radikal bebas yang  berdampak  pada  kerusakan membran sel hingga kerusakan fungsi sel pada mitokondria  dapat  menggunakan  indikator penilaian malondialdehid (MDA) yang merupakan   senyawa   hasil   dari   peroksidasi lipid  pada  membran  sel.  Hasil  pemeriksaan kadar  MDA  jaringan      testis      menggunakan metode Thiobarbituric  Acid  Reactive Subtances (TBARs)  didapatkan  kadar  MDA jaringan testis  pada kelompok perlakuan    yang mendapatkan  Zink  dosis  100  mg/kgBB/hari (K6)  yang  diinduksi cyclophosphamide 200 mg/kgBB      lebih  tinggi  dibandingkan  dengan kelompok kontrol negatif (K1), kelompok  yang cenderung mendekati nilai  kadar MDA kontrol negatif  yaitu  kelompok  Zink  dosis  25 mg/kgBB/hari yang diinduksi cyclophosphamide 200  mg/kgBB  sebagaimana terlihat pada Tabel 1 dan Gambar 1.
Tabel 1. Rerata kadar MDA testis (mikroMolar) mencit  ( Mus  musculus )  setelah  perlakuan dengan pemberian Zink selama 35 hari.
JBP Vol.22 No.2, Desember 2020 – Retno Yulianti
Gambar  1.    Rerata  kadar  MDA  testis  mencit ( Mus  musculus )  setelah  perlakuan  dengan pemberian Zink selama 35 hari.
Selanjutnya  data  tersebut  dianalisis dengan    uji    statistik    untuk    membandingkan data  kadar  MDA  testis  pada  semua  kelompok perlakuan. Karena syarat  uji One Way ANOVA terpenuhi yakni data terdistribusi secara normal dengan uji Kolmogorov-Smirnov nilai signifikansi p=0.837 (p>0.05) dan homogenitas data    didapatkan    homogen  dengan  uji Levene nilai  signifikansi  p=0.869  (p>0.05).  Hasil  uji disajikan pada Tabel 2.
Tabel  2.  Hasil  uji One  Way  ANOVA Rerata kadar MDA testis mencit (Mus musculus) pada kelompok  perlakuan  setelah  perlakuan  dengan pemberian Zink selama 35 hari.
Berdasarkan  hasil  uji One  Way  ANOVA pada Tabel 2 menunjukkan bahwa rerata kadar MDA pada  ke-enam  kelompok  perlakuan  tersebut sama dengan nilai signifikan p=0.093 (p>0.05). Pada    uji    Tukey    HSD    menunjukkan    bahwa rerata  kadar  MDA  pada  ke-enam  kelompok perlakuan sama dengan nilai p= 0.111 (p>0.05). Hasil  ini  dapat  disimpulkan  bahwa  tidak  ada kelompok  perlakuan  yang  berpengaruh  secara signifikan  terhadap  perbedaan  rerata  kadar MDA.

## Kualitas sperma
Setelah  dilakukan  perlakuan  pemberian zink  selama  35  hari  dan  induksi  penyuntikan obat cyclophosphamide dengan       dosis 200mg/kgBB   secara   intraperitoneal   1   kali setiap minggu selama 35 hari terhadap kualitas sperma pada masing-masing kelompok.
Pemeriksaan  kualitas  sperma  mencit jantan  ( Mus  musculus )  pada  penelitian  ini berdasarkan  pada  jumlah  sperma  (sel  sperma). Hasil pengamatan rerata kualitas sperma mencit jantan  ( Mus  musculus )  pada  semua  kelompok perlakuan  dapat  dilihat  pada  Tabel  3  dan Gambar 2.
Tabel 3. Rerata jumlah sel sperma mencit ( Mus musculus ) setelah perlakuan dengan pemberian Zink selama 35 hari.
JBP Vol.22 No.2, Desember 2020 – Retno Yulianti
Gambar    2.    Rerata    kualitas    sperma    mencit ( Mus  musculus )  setelah  perlakuan  dengan pemberian Zink selama 35 hari.
Selanjutnya data tersebut  dianalisis dengan uji statistik  untuk  membandingkan  data  jumlah sel  sperma  pada  semua  kelompok  perlakuan. Karena  syarat  uji One  Way  ANOVA terpenuhi yakni  data  terdistribusi  secara  normal  dengan uji Shapiro-Wilk test nilai signifikansi p>0.05 dan  homogenitas  data  didapatkan  homogen dengan  uji Levene nilai  signifikansi  p=0.435 (p>0.05). Hasil uji disajikan pada Tabel 2.
Tabel  4.  Hasil  uji One  Way  ANOVA rerata jumlah sel sperma mencit (Mus musculus) pada kelompok perlakuan setelah  perlakuan dengan pemberian Zink selama 35 hari.
Berdasarkan  hasil  uji One  Way  ANOVA pada Tabel  4  menunjukkan  bahwa  rerata  jumlah  sel sperma  pada  ke-enam  kelompok  perlakuan tersebut berbeda dengan nilai signifikan p=0.011 (p<0.05).  Pada  uji  Tukey  HSD  menunjukkan bahwa  kualitas  sperma  berdasarkan  jumlah  sel sperma pada kelompok kontrol  negatif  terhadap kelompok  Zink  dosis 25  mg/kgBB/hari  yang  diinduksi  CP  dan kelompok  Zink  dosis  100  mg/kgBB/hari  yang diinduksi  CP  berbeda  dengan  nilai  p  masing- masing  adalah  0.041  dan  0.008,  sedangkan rerata kelompok lainnya adalah sama. Hasil ini dapat  disimpulkan  bahwa  kelompok  perlakuan yang  berpengaruh  secara  signifikan  terhadap perbedaan  rerata  jumlah  sel  sperma  kelompok K1, K4, dan K6.

## Hubungan kadar MDA testis dengan kualitas sperma mencit jantan (Mus musculus)
Hasil    analisis    korelasi    diperoleh koefisien  korelasi  (r)  antara  kadar  MDA  testis dengan  kualitas  sperma  (jumlah  sperma)  dapat dilihat pada Tabel 5. Analisis korelasi Pearson antara kadar MDA  testis  dengan  kualitas  sperma  mencit jantan ( Mus musculus )
Tabel 5. Korelasi Pearson antara kualitas sperma dengan  kadar  MDA  testis  mencit  ( Mus musculus ) setelah perlakuan dengan pemberian Zink selama 35 hari.
JBP Vol.22 No.2, Desember 2020 – Retno Yulianti
Berdasarkan Tabel 5 hasil analisis korelasi Pearson  di  atas  menunjukkan  bahwa  tidak terdapat hubungan yang nyata (p=0,800) antara kadar  MDA  testis  dengan  jumlah  sel  sperma. Nilai koefisien korelasi r = -0,048 adalah tidak ada  korelasi  yang  artinya  tidak  ada  keeratan hubungan kadar MDA testis dengan jumlah sel sperma. Nilai negatif pada (r) menunjukkan arah korelasi  negatif  yang  menunjukkan  semakin rendah kadar MDA testis, maka jumlah sperma semakin meningkat.
Masalah  kesuburan  pada  pria  dapat diakibatkan oleh  stres  oksidatif dalam  jaringan testis.  Ketidaksuburan  dikaitan  dengan  proses spermatogenesis.  Banyak  faktor-faktor  yang mempengaruhi  proses  pemkembangan  sel sperma  baik  dari  luar  maupun  dalam  tubuh. Pasien  pria  yang  mendapatkan  pengobatan antikanker  seperti cyclophosphamide (CP) memiliki  risiko  untuk  terjadi  gangguan kesuburaan. Karena zat buangan hasil metabolit CP  berupa  Acrolein  memiliki  sifat  sebagai aldehyde  reactive yang  dapat  merusak  sel melalui  mekanisme  deplesi  jalur  seluler  GSH yang terkonjugasi, sehingga proses cytotoxicity dapat terjadi secara luas. Selain itu juga Acrolein juga  memiliki  efek  terhadap  DNA  yang menyebabkan  terbentuknya Interstrand DNA dan DNA-protein  cross-links sehingga  akan mengganggu  proses  replikasi  DNA  normal tubuh  (BC  Cancer  Agency  Cancer  Drug Manual©, 2013). Akibat gangguan mekanisme jalur GSH peroksidase menyebabkan gangguan keseimbangan reaksi oksidatif jaringan sehingga  jaringan  mengalami  stress  oksidatif. Hasil stress oksidatif   terbentuknya    hidrogen peroksida
yang    mampu    menyebabkan    dekomposisi produk aldehid yang bersifat toksik terhadap sel yang akan berdampak pada gangguan perkembangan spermatogenesis (S. O.Abarikwu, 2012). Malondialdehida (MDA) merupakan
indikator  terjadinya  stres  oksidatif  suatu jaringan. Malondialdehid merupakan salah satu senyawa  produk  radikal  bebas  pada  proses reaksi peroksidasi lipid di membran sel melalui reaksi  oksidasi  reduksi  yang  terjadi  secara berantai  dan  terus  menerus  sehingga  terbentuk molekul  yang  mempunyai  sekelompok  atom dengan  elektron  yang  tidak  berpasangan  yang bersifat reaktif sehingga menyebabkan kerusakan  membran  dan  organel  sel. Radikal bebas  yang  paling  banyak  terbentuk  di  dalam tubuh  adalah  superoksida  yang  diubah  menjadi hidrogen  peroksida  (H 2 O 2 )  yang  akan  bereaksi dengan Poly  Unsaturated  Fatty  Acid (PUFA) pada  membran  sel  yang  dikenal  dengan  reaksi peroksidasi  lipid dan  menghasilkan hidrogen peroksidasi yang dapat menyebabkan dekomposisi produk aldehid yang bersifat toksik terhadap sel, salah satunya adalah malondialdehida  (MDA). Jika  ini  terjadi  terus menerus  akan  menyebabkan  ketidak  seimbangan antara radikal bebas dengan antioksidan endogen yang  disebut  dengan  stres  oksidatif  (Deslo, Jauhari; Ismy, Jufriady; Dasrul, 2019), (Parwata, 2015).
Diketahui  bahwa  zink  merupakan trace mineral  yang  esesensial  bagi  kehidupan manusia,  meski  dibutuhkan  sedikit  tetapi  tetap dijaga  agar  tidak  toksik  karena  perannya  yang sangat vital. Zink memiliki fungsi secara seluler baik  sebagai  katalitik,  dimana  aktivitas  zink sangat  berperan  dalam  proses  enzimatik,  lalu sebagai  struktural,  zink  menjaga  kestabilan struktur  protein  dan  membran  sel  dan  sebagai regulasi, zink memiliki peran dalam meregulasi ekspresi  gene  sebagai  faktor  transkripsi  serta berperan  dalam cell  signalling dan  pelepasan hormon  dan  transmisi  impuls  serta  berperan dalam  meningkatkan  daya  tahan  tubuh.  Dalam reproduksi, suplemen Zink dapat meningkatkan jumlah dan motilitas sperma.
Berdasarkan  hasil  penelitian  ini  terlihat Tabel  1  pada  kelompok  kontrol  negatif  yang tidak  mendapatkan  CP  dan  Zn  (K1)  terdapat kadar MDA testis 11.9±0.259 mikroMolar lebih
JBP Vol.22 No.2, Desember 2020 – Retno Yulianti
rendah  dibandingkan  kelompok  kontrol  positif dan  kelompok  perlakuan  Zn  dan  CP.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  meskipun  tikus  dalam keadaan  normal  atau  sehat  dapat  terbentuk senyawa  MDA  tetapi  dalam  kadar  yang  lebih rendah dibandingkan dengan kadar MDA  pada keadaan  tikus  yang  mendapatkan  pengobatan cyclophosphamide.      Hal  ini  sesuai  dengan penelitian yang menyatakan bahwa pada keadan normal dapat terjadi peningkatan produksi ROS berupa  senyawa  MDA  yang  merupakan  hasil reaksi  oksidasi  reduksi  /lipid  peroksidas  di membran    sel yang dihasilkan  selama metabolisme  di  mitokondria  pada  sel  yang normal.  Pada  organ  testis  terutama  di  tubulus seminiferus  terjadi  respon  fisiologis  (ROS endogen) yaitu  hasil  metabolisme  sel  normal sebagian kecil merupakan hasil paparan dari luar tubuh  (ROS  eksogen) .  Namun,  proses  fisiologi normal  tersebut  terganggu  akan  menyebabkan produksi ROS yang berlebihan hingga menyebabkan  kerusakan  sel  (Deslo,  Jauhari; Ismy,  Jufriady;  Dasrul,  2019),  (Pasupathi, 2009).
Meski      terjadi      peningkatan      produksi ROS  pada  kelompok  K1  namun  tidak mempengaruhi  jumlah  sel  sperma  yang dihasilkan.  Hal  ini  terlihat  pada  Tabel  3 kelompok  K2  menunjukkan  bahwa  jumlah  sel spermatozoa  lebih  tinggi  dibandingkan dengan kelompok perlakuan lainnya. Kemungkinan ini disebabkan keseimbangan enzim-enzim antioksidan  tidak  terganggu  sehingga  radikal bebas yang terbentuk masih bisa dinetralisir.
Reaksi  fisiologi  normal  yang  terganggu menyebabkan  terjadinya  peningkatan  ROS dalam sirkulasi karena pemberian obat cyclophosphamide. Dalam  penelitian  ini  dapat terlihat  bahwa  pada  kelompok  kontrol  yang hanya diberi CP (K3) terdapat kadar MDA testis 19.7±0.266 mikroMolar lebih tinggi dibandingkan dengan kontrol negatif yang tidak mendapatkan CP dan Zn. Hal ini membuktikan selama pemberian CP terjadi aktivasi enzim sel hepatosit  yaitu Cytochrome  P450  enzyme system (CYP)  yang  menghasilkan  zat  aktif sebagai ankylating agent, dan zat buangan hasil metabolit  yaitu Phosparamide  Mustard (PM) dan  Acrolein.  Acrolein  sebagai aldehyde reactive menjadi
penyebab utama kerusakan sel melalui mekanisme deplesi jalur seluler GSH, sehingga proses cytotoxicity dapat terjadi secara luas (BC Cancer Agency Cancer Drug Manual ©, 2013). Paparan CP menyebabkan gangguan keseimbangan  aktivitas  pertahanan  antioksidan enzimatik seperti superoksida dismutase, katalase,  gluthation  peroksidase  dan  asam askorbat  dengan  radikal  bebas  yang  dihasilkan CP menyebabkan stress oksidatif jaringan testis yang    mengganggu    fungsi    normal perkembangan spermatogenesis
(S.
O.Abarikwu, 2012). Akibatnya terjadi kerusakan    seluler    dan    apoptosis    sel spermatozoa  yang  mempengaruhi  jumlah spermatozoa. Dalam penelitian ini dapat  dilihat pada  Tabel  3  yang  memperlihatkan  kelompok perlakuan  yang  mendapatkan  CP  (K3,  K4,  K5 dan K6) terlihat jumlah sel sperma (spermatozoa)  terjadi  penurunan  dibandingkan dengan  jumlah  sel  sperma  pada  kelompok kontrol negatif (K1) dan kelompok yang hanya diberikan Zn (K2).
Kemudian  pada  kelompok  kontrol  yang hanya  diberi  Zn  100  mg/kgBB  (K2)  terdapat kadar MDA testis adalah 13.3±0.175 mikroMolar  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan kelompok kontrol negatif yang tidak mendapatkan CP dan Zn tetapi lebih rendah dari kelompok kontrol positif yang hanya  diberi CP (K3).   Hal ini dikarenakan konsumsi Zn dalam jumlah  tinggi  (≥50  mg  per  hari)  dalam  waktu mingguan  dapat  mempengaruhi  bioavaibilitas Cu  dan  menginduksi  sintesis copper-binding- protein ( metallothionein )  yang  menyebabkan penyerapan  Cu  terhambat.  Hal        ini  akan berakibat  berkurangnya  perlindungan  terhadap stres  oksidatif.  Dengan  demikian  terjadi peningkatan radikal bebas yang ditandai dengan peningkatan kadar MDA yang melebihi kontrol negatif dan berdampak pada penurunan jumlah sel sperma sebesar 790±0.160 mikroliter (Tabel 3).
Pada kelompok perlakuan yang mendapatkan  induksi  CP  selama  5  minggu dengan  dosis  200  mg/kgBB  atau  0,4  cc  tiap minggu  dan  pemberian  Zn  setiap  hari  dengan dosis  bertingkat  25  mg  (K4),  50  mg  (K5)  dan 100  mg  (K6)  terlihat  pada  hasil  pemeriksaan rerata kadar MDA dan kualitas sperma (Tabel 1 dan 3) terjadi kecenderungan peningkatan kadar
JBP Vol.22 No.2, Desember 2020 – Retno Yulianti
MDA  yang  lebih  tinggi  dan  penurunan  jumlah sel  sperma  dibandingkan  dengan  kontrol negatif. Hal ini disebabkan karena pembentukan radikal bebas dalam sirkulasi akibat pemberian CP dan mengganggu penyempurnaandan terjadinya  defisiensi  Cu  akibat  pemberian  Zn dosis  tinggi  sehingga  perlindungan  terhadap radikal bebas berkurang, namun pada kelompok perlakuan  Zn  dosis  25  mg  meski  nilai  kadar MDA  lebih  tinggi  dari  kelompok  kontrol  K2 (12.5±0.350  mikroMolar)  tetapi  tidak  disertai dengan peningkatan jumlah sel sperma. Hal ini mungkin  disebabkan  karena  stres  oksidatif akibat  CP  menyebabkan  poros  hipotalamus- hipofisia-gonad terganggu sehingga mempengaruhi  sekresi  dan  kerja  hormon Follikel  Stimulating  Hormone (FSH)  dan Luteinizing Hormone ( LH) . Kerja FSH berperan dalam  proses  pematangan  sel  spermatogonia dan spermatosit primer, mempengaruhi mitosis dan  meiosis  hingga  terbentuknya  spermatozoa, sedangkan  LH  berperan    dalam    proses spermatogenesis.  Selain  itu  Zn  memiliki  peran dalam  menstimulasi  hormon  testosteron  pada sel  Leydig.  Bila  terjadi  penurunan  jumlah  sel Leydig maka akan berpengaruh pada penurunan kadar hormon testosteron yang akan menghambat  proses spermatogenesis  dan penurunan jumlah spermatozoa (Deslo, Jauhari, 2019) (Oktapiani, Kory, 2014).
Hasil analisis korelasi Pearson menunjukkan  tidak  berkorelasi  antara  kadar MDA  dengan  jumlah  sel  spermatozoa  dengan nilai      signifikansi      p=0.800,      nilai      derajat korelasi (r) adalah -0.048. Hasil ini menunjukan bahwa  tidak  ada  hubungan  yang  antara  antara kadar  MDA  dengan  jumlah  sel  spermatozoa pada masing-masing kelompok perlakuan. Nilai negatif  pada  nilai  korelasi  (r)  menunjukkan arah      korelasi      negatif      yang  berarti  bahwa semakin  rendah  kadar  MDA  testis  akan menyebabkan  semakin  meningkat  jumlah spermatozoa.

## 4. KESIMPULAN
Berdasarkan      hasil      analisis      dan pembahasan    yang    telah    diuraikan    oleh peneliti,  dapat  diambil  kesimpulan  bahwa terdapat   tidak   hubungan   yang   kuat   antara
kadar  MDA  testis  dengan  kualitas  sperma (jumlah  spermatozoa)  mencit  ( Mus  musculus) dengan  nilai  p=0.800  dan  nilai  r  =  -  0,795. Semakin  tinggi  kadar  MDA  testis  semakin rendah    jumlah    spermatozoa    tikus    putih diabetes.

## Ucapan Terima Kasih
Penulis    mengucapkan    terima    kasih kepada LPPM Universitas Pembangunan Nasional  Veteran  Jakarta  atas  ijin  dan  bantuan dana dalam penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Abarikwu,  S.O;  Otuechere,  C.  A;  Ekkor,  M; Monwuba, K; and Osobu, D. (2012). Rutin Ameliorates  Cyclophosphamide-induced Reproductive  Toxicity  in  Male  Rats. Toxicol
Int , 19 (2), 207–214. https://doi.org/doi:               10.4103/0971- 6580.97224 Deslo,  Jauhari;  Ismy,  Jufriady;  Dasrul,  D. (2019). Hubungan Kadar Malondialdehide (MDA) Testis
dengan Kualitas Spermatozoa  pada  Tikus  Putih  Strain Wistar (Rattus novergicus) Diabetes Tipe I.
Indonesian  J  Surg , 47 (2),  82–110. www.jibiikabi.org
Drumond,Ana  Luiza;  Weng, Connie  C;  Wang,
Gensheng; Garcia, Helio Chiarini; Garcia, Leticia  Eras  and  Meistrich,  M.  L.  (2011). Effects of multiple doses of cyclophosphamide on mouse testes: Accessing  the  germ  cells  lost,  and  the functional  damage  of  stem  cells. Reprod
Toxicol , 32 (4), 395–406. https://doi.org/doi: 10.1016/j.reprotox.2011.09.010 Elangovan, N; Chiou,Tzeon-Jye;  Tzeng,Woan- Fang; Chu, S.-T. (2006). Cyclophosphamide treatment causes
impairment  of  sperm  and  its  fertilizing ability  in  mice. Toxicology , 222 ,  60–70. https://doi.org/doi:10.1016/j.tox.2006.01. 027
Oktapiani, Kory; Wantouw; Tendean, L. (2014). Pengaruh  Pemberian  Zink  Terhadap Kualitas Spermatozoa Pada Mencit  Jantan (Mus  musculus)No  Title.
JBP Vol.22 No.2, Desember 2020 – Retno Yulianti
Jurnal    E-Biomedik , 2 (2),    496–500. https://media.neliti.com/media/publicati ons/64471-ID-none.pdf Parwata,  I.  M.  O.  A.  (2015). Antioksidan . Program       Pascasarjana,       universitas
Udayana. Pasupathi, P. (2009). Glutathione, GlutathioneDependent Enzymesand Antioxidant  Status in  Gastric Carcinoma Patients. Journal of Applies Biomedicine ,
7 (2), 101–109.
Yulianti,Retno   and   Astari,   R.   V.   (2020). Efektivitas Ekstrak Daun Sirsak (Annona muricata)  Dan  Latihan  Fisik  Serta Kombinasi Terhadap Kadar Malondialdehid Hepar Pada Model Tikus Hiperkolesterolemia-Diabetes. Jurnal Kesehatan Published By Poltekkes
Ternate , 13 (1), 11–18.
JBP Vol.22 No.2, Desember 2020 – Retno Yulianti