Vol 8 (3): 733-743, November 2022

## In Vitro
Antidiabetic Activity Of Apis Dorsata Binghami Nest Extract
Aktivitas Antidiabetes In Vitro Ekstrak Sarang Apis Dorsata
Binghami
Veronika Pratasik(*), Revolson Mege, Yermia Mokosuli Biologi, Fakultas Matematika, Ilmu Pengetahuan Alam dan Kebumian, Universitas Negeri Manado, Jl. Kampus Unima, Tonsaru, Kec. Tondano Selatan., Kabupaten Minahasa, Sulawesi Utara 95618, Indonesia
*Corresponding author: veronikapratasik4@gmail.com
Diterima 09 September 2022 dan disetujui 21 Oktober 2022
Abstrak
Indonesia  berada  di  urutan  ke-7  dari  10  negara  dengan  penderita  diabetes  mellitus  tertinggi diperkirakan  meningkat  setiap  tahunnya.  Enzim α -amilase adalah  enzim  yang  mengkatalisis hidrolisis ikatan α -1,4 glikosidik polisakarida menghasilkan dekstrin, oligosakarida, maltose dan D- glukosa.  Sarang  lebah Apis  dorsata Binghami  mengandung  metabolit  sekunder  yang  berpotensi antidiabetes  antara  lain  menghambat  kerja  enzim α -amilase.  Tujuan  dari  penelitian  ini  untuk mengetahui  potensi  antidiabetes in  vitro ekstrak  sarang Apis  dorsata binghami.  Penelitian  ini menggunakan  metode  peneltian  deskriptif  dimana  data  hasil  penelitian  diperoleh  melalui eksperimen  laboratorium.  Ekstraksi  sarang  lebah  menggunakan  metode  maserasi.  Analisis kandungan total flavonoid menggunakan metode spektrofotometri UV-Vis . Uji potensi antidiabetes menggunakan metode penghambatan enzim α -amilase. Hasil penelitian ekstraksi menunjukkan hasil % rendemen ekstrak 11,82% dengan warna kuning kecoklatan. Analisis kandungan flavonoid total menunjukkan hasil 3,33 mgQE/g. Aktivitas penghambatan enzim α -amilase nilai IC 50 ekstrak yang diperoleh sebesar 158,48±7,42 μ g/mL, nilai akarbose sebesar 165.96±7,08 μ g/mL. Hasil ini menunjukkan ekstrak sarang A.dorsata Binghami mempunyai aktivitas hiperglikemia dengan cara menghambat enzim penghidrolisis karbohidrat kompleks seperti penghambatan enzim α -amilase yang baik dibandingkan akarbose karena nilai IC 50 ekstrak lebih kecil. Jika nilai IC 50 lebih kecil maka penghambatan enzimnya lebih kuat. Untuk penelitian lanjutan disarankan menggunakan enzim yang lebih spesifik yaitu enzim α -glukosidase.
Kata Kunci: Antidiabetes, Enzim α -Amilase , Potensi, Sarang Apis dorsata Binghami

## Abstract
Indonesia is ranked 7th out of 10 countries with the highest number of people with diabetes mellitus, which is estimated to increase every year. α -amylase is an enzyme that catalyzes the hydrolysis of α -1,4 glycosidic bonds of polysaccharides to produce dextrins, oligosaccharides, maltose and D-glucose. Apis dorsata Binghami honeycomb contains secondary metabolites that have antidiabetic potential, including inhibiting the action of the α -amylase enzyme. The purpose of this study was to determine the in vitro antidiabetic potential of Apis dorsata binghami nest extract. This study uses a descriptive research method where  the  research  data  are  obtained  through  laboratory  experiments.  Honeycomb  extraction  using maceration  method.  Analysis  of  total  flavonoid  content  using  UV-Vis  spectrophotometric  method. Antidiabetic potency test using -amylase enzyme inhibition method. The results of the extraction study showed that the % yield of the extract was 11.82% with a brownish yellow color. Analysis of the total flavonoid content showed the results of 3.33 mgQE/g. The inhibitory activity of the -amylase enzyme, the IC50 value of the extract obtained was 158.48±7.42 g/mL, the acarbose value was 165.96±7.08 g/mL. These results indicate that the extract of A.dorsata Binghami nest has hyperglycemic activity by inhibiting complex carbohydrate hydrolyzing enzymes such as inhibition of the -amylase enzyme which is better than acarbose because the IC50 value of the extract is smaller. If the IC50 value is smaller then
Vol 8 (3): 733-743, November 2022
the enzyme inhibition is stronger. For further research, it is recommended to use a more specific enzyme, namely the -glucosidase enzyme.
Keywords : Antidiabetic, Apis dorsata Binghami Nest, Potensy, α -Amilase enzyme.
Jurnal Pembelajaran dan Biologi Nukleus is Licensed Under a CC BY SA Creative Commons Attribution-Share a like 4.0 International License . https://doi.org/10.36987/jpbn.v8i3.3196

## PENDAHULUAN
Indonesia  menempati  urutan  ke  tujuh  setelah  China,  Amerika,  Rusia  dan  Meksiko memiliki jumlah penderita diabetes yang terus bertambah menurut perkiraan terbaru dari IDF ( International Diabetes Federation ). Pada kehidupan manusia termasuk di Indonesia makanan  banyak  menjadi  penyebab  penyakit-penyakit  yang  tergolong  sangat  sulit disembuhkan,  salah  satunya  adalah  diabetes  mellitus.  Diabetes  mellitus  (DM)  adalah gangguan  kronis  metabolisme  karbohidrat,  lipid,  dan  protein,  yang  ditandai  dengan peningkatan kadar gula darah, Disebabkan oleh penurunan sensitivitas dan sekresi insulin yang  menyebabkan  komplikasi  mikrovaskular,  makrovaskular  dan  neuropatik  kronis (Messerli  &  Grossman  2001) .  Masyarakat  pada  umumnya  banyak  menggunakan tanaman  herbal  untuk  pengobatan  diabetes,  pemanfaatan  tumbuhan  sebagai  obat  erat kaitannya dengan kandungan kimia tumbuhan terutama zat aktif biologisnya. Senyawa bioaktif yang terdapat pada tumbuhan umumnya merupakan metabolit sekunder seperti flavonoid,  alkaloid,  steroid,  saponin,  terpenoid,  tanin  dan  banyak  lagi (Semuel et al., 2018) .
Indonesia merupakan negara tropis dengan sumber daya alam yang melimpah tumbuhan merupakan sumber untuk obat alami dan mengandung zat aktif yang dapat digunakan sebagai penghambat enzim α -amilase (Kang et al., 2011) salah satu cara untuk menurunkan  gula  darah  adalah  dengan  menghalangi  aktivitas  enzim α -amilase ,  lebah adalah  serangga  sosial  dengan  banyak  manfaat  kesehatan,  selain  menghasilkan  madu lebah  juga  menghasilkan  serbuk  sari  yang  berkhasiat,  royal  jelly,  propolis,  lilin lebah,racun lebah, larva lebah, dan roti lebah. Lebah hutan Apis dorsata adalah lebah asia yang  menghasilkan  madu  dan  sarang  paling banyak  dengan hanya  satu  sisiran  sarang menggangtung di dahan, ranting, langit-langit dan tebing berbatu. Penelitian sebelumnya menunjukkan  bahwa  lebah  madu Apis  dorsata Binghami  memiliki  aktivitas  bioaktif, aktivitas  antioksidan  dan  antihiperlipidemia.  Selain  madu,  sarang  lebah  merupakan sumber  obat  bioaktif  potensial  yang  berpotensi  untuk  diteliti (Semuel  et  al.,  2019) . Berdasarkan  penjelasan  diatas,  oleh  karena  itu  peneliti  berniat  untuk  melakukan penelitian tentang aktivitas antidiabetes dari ekstrak sarang lebah Apis dorsata binghami. Pengujian aktivitas antidiabetes dapat dilakukan secara in vitro menggunakan pengujian enzim α -amilase merupakan  Sebuah  penelitian  untuk  menemukan  kelompok  senyawa dengan  aktivitas  hipoglikemik  in  vitro  dan  in  vivo  yang  secara  tradisional  diyakini memiliki aktivitas antidiabetes harus diselidiki (Erlidawati et al., 2018).
Vol 8 (3): 733-743, November 2022

## METODE
Alat dan bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah Toples, Kertas saring, Spektrofotometer  UV_Vis Parkin  Elmer ,  kuvet,  Mikropipet Eppendorf ,  Inkubator,  Erlen mayer,  Labu  ukur,  Gelas  ukur,  Tabung  reaksi,  Corong  buchner,  Batang  pengaduk, Timbangan  analitik,  Autoclave,  Oven,    Rotary  evaporator, sarang  lebah Apis  Dorsata Binghami,  Aquadest,  Etanol  96%,  Enzim α -Amilase  ( Merck ),  Buffer  fosfat  (pH  7,0), Amilum,  Akarbose,  Dimetil  Sulfoksida  (DMSO),  Aluminium  Klorida  (AICI 3 ), Potassium  asetat,  Pottasium  iodide,  Iodine,  Kuersetin.  Penelitian  ini  menggunakan metode penelitian deskriptif dimana data hasil penelitian diperoleh melalui eksperimen laboratorium, adapun tahapan penelitian diantaranya,

## Ekstraksi
Ekstraksi sarang Apis Dorsata Binghami dilakukan dengan menggunakan pelarut etanol, Sarang lebah di blender menjadi serbuk, kemudian ditimbang 250 gram bubuk kemudian di heating di oven ± 10 menit pada suhu 80 o C dan dilarutkan dalam 1000 mL etanol 96%, dengan takaran 1:4 b/v kemudian serbuk dimaserasi dengan menggunakan pelarut etanol selama  2x24  jam/48  jam  pada  suhu  kamar,  Kemudian  dilakukan  penyaringan  dan didapat filtratnya. Filtrat yang didapat diuapkan dengan menggunakan rotary evaporator pada suhu 50 o C dengan kecepatan 48-50 rpm.

## Analisis Total Flavonoid
Kandungan  flavonoid  total  ekstrak  sarang Apis  dorsata binghami  dilakukan  dengan metode spektrofotometri UV-Vis menggunakan AICI 3 dan kuersetin sebagai pembanding (Stankovi 2011) .
1) Penentuan panjang gelombang maksimum kuarsetin Penentuan panjang gelombang maksimum kearsetin dilakukan dengan menganalisis larutan  kuersetin  pada  rentang  panjang  gelombang  400-500  nm.  Hasil  analisis menunjukan  panjang  gelombang  maksimum  standar  baku  kuersetin  berada  pada panjang  gelombang  435  nm.  Panjang  gelombang  maksimum  digunakan  untuk mengukur absorbansi sampel ekstrak etanol sarang lebah.
2) Pembuatan kurva standar kuersetin
Ditimbang  sebanyak  25  mg  baku  standar  kuersetin  dan  dilarutkan  dalam  25  mL etanol, larutan stok dipipet sebanyak 1 mL dan dicukupkan volumnya hingga 10 mL dengan  etanol  sehingga  diperoleh  konsentrasi  100  ppm.  Dari  larutan  standar kuersetin 100 ppm, kemudian dibuat beberapa konsentrasi yaitu 6 ppm, 8 ppm, 10 ppm,  12  ppm,  14  ppm.  Dari  masing-masing  larutan  kuersetin  dipipet  1  mL. Kemudian ditambahkan 1 mL AICI 3 2% dan 1 mL kalium asetat 120 mM. Sampel diinkubasi selama 60 menit pada suhu kamar. Absorbansi ditentukan menggunakan metode spektrofotometri UV-Vis pada panjang gelombang maksimum 435 nm.
3) Pengukuran kadar flavonoid total ekstrak etanol sarang lebah Apis dorsata binghami Ekstrak 15 mg yang dilarutkan dalam 10 mL etanol sehingga diperoleh konsentrasi 1500 ppm. Dari larutan tersebut dipipet 1 mL kemudian ditambahkan 1 mL larutan AICI 3 2% dan 1 mL kalium asetat 120 mM. Sampel diinkubasi selama 60 menit pada suhu kamar. Absorbansi ditentukan menggunakan metode spektrofotometri UV-Vis
Vol 8 (3): 733-743, November 2022
pada  panjang  gelombang  maksimum  435  nm.  Sampel  dibuat  dengan  3  kali pengulangan untuk setiap analisis dan diperoleh nilai rata-rata absorbansi.
Aktivitas Penghambatan Enzim α -Amylase
1) Pengujian blanko
Pengujian  blanko  dapat  diukur  dengan  mengambil  1000  µl  buffer  fosfat  pH  7,0 kemudian  diinkubasi  selama  10  menit  pada  suhu  37 o C,  kemudian  pada  sampel ditambahkan 500 µl amilum 0,5%, lalu diinkubasi kembali selama 15 menit pada suhu 37 o C  setelah  masa  inkubasi  selesai,  maka  ditambahkan  10  µl  iodine  0,5%.  Ukur absorbansinya dengan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 601 nm.
2) Pengujian kontrol blanko Pengujian kontrol blanko dapat dilakukan dengan mengambil 1000 µl dapar fosfat Ph 7,0 kemudian diinkubasi selama 10 menit pada suhu 37 o C. kemudian pada sampel ditambahkan  500  µl,  lalu  diinkubasi  kembali  selama  15  menit  pada  suhu  37 o C. Setelah masa inkubasi selesai maka ditambahkan 10 µl dapar fosfat Ph 7,0. Diukur absorbansinya dengan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 601 nm.
3) Pengujian sampel
Pengujian sampel dilakukan dengan pembuatan berbagai konsentrasi yaitu (15, 30, 45, 60, 75 µg/ml). Dari masing-masing Konsentrasi sampel diambil 500 µl dan 500 µl enzim α -amilase dicampurkan, kemudian diinkubasi selam 10 menit pada suhu 37 o C. selanjutnya ditambahkan 500 µl amilum 0,5%, lalu inkubasi kembali selama 15 menit pada suhu 37 o C. Setelah masa inkubasi selesai ditambahkan 10 µl iodine 0,5%. Diukur absorbansinya dengan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 601 nm.
4) Pengujian kontrol sampel Pengujian  kontrol  sampel  dilakukan  dengan  mengambil  500  µl  sampel  dengan berbagai konsentrasi (15, 30, 45, 60, 75 µg/ml) dan 500 µl enzim α -amilase, kemudian diinkubasi  selama  10  menit  pada  suhu  37 o C.  Selanjutnya  ke  dalam  sampel ditambahkan 500 µl dapar fosfat ph 7,0. Lalu diinkubasi kembali selama 15 menit pada  suhu  37 o C.  setelah  masa  inkubasi  selesai,  ditambahkan  10  µl  iodine  0,5%. Diukur absorbansinya dengan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 601 nm (Wirasti et al., 2021).

## Analisis Data
Analisis  data  dilakukan  dengan  cara  menghitung  presentase  inhibisi  %  enzim α - amilase,  data  yang  diperoleh  dari  hasil  pengukuran  absorbansi  dapat  dihitung  % penghambatan (Pujiyanto et al., 2019) menggunakan persamaan pada rumus :
% Inhibitor = A.Kontrol−A.Sampel
A.Kontrol 𝑋 100%
Data yang diperoleh diolah Nilai IC 50 sampel dihitung dengan menggunakan rumus persamaan  regresi  linier  dimana  konsentrasi  sampel  sebagai  sumbu  x  dan  % penghambatan sebagai sumbu y. Dari Persamaan regresi y = bx + a digunakan untuk menentukan IC50 dengan persamaan:
IC 50 = 50−a b
Vol 8 (3): 733-743, November 2022

## HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil Ekstraksi
Sarang Apis dorsata Binghami yang digunakan untuk ekstraksi dengan metode maserasi berumur sekitar 2 bulan. Ekstrak yang diperoleh berwarna kuning kecoklatan ditunjukkan pada  (Gambar  1)  dan  beraroma  khas  sarang  lebah.  Ekstraksi  yang  dilakukan menggunakan perbandingan 1:4 antara simplisia dan volume pelarut. Perhitungan total rendemen ekstrak sarang A. dorsata ditunjukkan dalam (Tabel 1). Sarang lebah A. dorsata yang digunakan sebanyak 250 gram kemudian dimaserasi menggunakan pelarut etanol 96% volume 1000 mL yang kemudian mendapatkan ekstrak sebanyak 29,55 gram dengan total rendemen ekstrak 11,82%.
Tabel 1. Rendemen Ekstrak Sampel Volume pelarut Berat Sampel Berat ekstrak Rendemen Sarang Lebah 1000 mL 250 gr 29,55 gr 11,82 %
Gambar 1. Ekstrak Sarang A.dorsata Binghami ekstrak Etanol 96%

## Analisis Kadar Total Flavonoid
Hasil  pengukuran  absorbansi  larutan  standar  kuersetin  dengan  maksimal  panjang gelombang 435 nm dengan menggunakan spektrofotometri UV-Vis. Untuk menentukan kadar  total  flavonoid  pada  sampel  maka  digunakan  kuersetin  sebagai  larutan  standar dengan deret konsentrasi 6, 8, 10, 12, 14 ppm. Deret konsentrasi tersebut digunakan untuk penentukan  kadar  sampel  yang  dilakukan  dengan  menggunakan  metode  persamaan kurva  baku.  Deret  konsentrasi  harus  dibuat  terlebih  dahulu  untuk  mendapatkan persamaan linear yang digunakan untuk menghitung kadar. Dari kadar kuersetin yang telah  dibuat  tersebut maka diperoleh nilai  absorbansi yang  ditunjukan  pada  (Tabel 2). Nilai  tersebut  membuktikan  bahwa  semakin  tinggi  nilai  konsentrasi  larutan  yang digunakan, maka semakin tinggi nilai absorbansi yang diperoleh. Hasil baku kuersetin yang diperoleh diplotkan antara kadar dan absorbansinya, sehingga diperoleh persamaan regresi linear yaitu y = 0,044x + 0,152 dengan nilai R² = 0,904. Persamaan kurva kalibrasi kuersetin  pada  (Gambar  2)  dapat  digunakan  sebagai  pembanding  untuk  menentukan konsentrasi senyawa flavonoid pada total ekstrak sampel.
Vol 8 (3): 733-743, November 2022
Tabel 2. Absorbansi Kuersetin Konsentrasi (ppm) Absorbansi 6 ppm 0,215 8 ppm 0,216 10 ppm 0,277 12 ppm 0,362 14 ppm 0,366
Gambar 2. Kurva Kuersetin
Dari hasil perhitungan maka ekstrak sarang A. dorsata pada penelitian ini memiliki kandungan flavonoid total sebesar 3,33 mgQE/g ekstrak yang dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 3. Kadar Flavonoid Total Ekstrak Sampel Absorbansi (y) KFT (mgQE/g) Ekstrak Sarang Lebah 0,398 3,33
Aktivitas Penghambatan enzim α -amilase
Hasil absorbansi yang diukur dalam Spektrofotometer UV-Vis pada gelombang maksimum 601 nm menunjukkan absorbansi sampel ekstrak dan akarbose pada Tabel 4 dan 5.
Tabel 4. Absorbansi Ekstrak Konsentrasi Abs Kontrol Abs Sampel 15 0,156 0,149 30 0,179 0,160 45 0,193 0,161 60 0,219 0,176 75 0,233 0,179 Tabel 5. Absorbansi Akarbose Konsentrasi Abs Kontrol Abs Akarbose 15 0,166 0,157 30 0,190 0,170 45 0,203 0,171 60 0,229 0,186 75 0,243 0,189
0,215 0,216 0,277 0,362 0,366 0,215 0,216
0,277
0,362 0,366 y = 0,044x + 0,152 R² = 0,904 0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35 0,4 0,45 Absor ba nsi Konsentrasi (ppm) Kuersetin
Vol 8 (3): 733-743, November 2022
Perhitungan  sampel  diawali  dengan  menghitung  nilai  %  inhibisi  dari  masing- masing  konsentrasi  ekstrak  dan  akarbose.  Nilai  %  inhibisi  menunjukkan  kemampuan ekstrak dalam konsentrasi tertentu dapat menghambat aktivitas enzim α -amilase. Dapat dilihat  pada  Tabel  6  menunjukkan  hasil  perhitungan  nilai  %  inhibisi,  dapat  diketahui bahwa ekstrak sarang A. Dorsata pada konsentrasi 75 μ g/mL mempunyai nilai % inhibisi lebih tinggi yaitu 23,18% daripada akarbose pada konsentrasi 75 μ g/mL yang mempunyai nilai inhibisi yaitu 22,22%. Aktivitas penghambatan α -amilase ini mampu menghambat kerja enzim α -amilase sehingga mampu menurunkan kadar gula darah.
Tabel 6. Nilai Inhibisi Ekstrak dan Akarbose Konsentrasi % Inhibisi Ekstrak % Inhibisi Akarbose 15 4,49 4,22 30 10,61 10,53 45 16,58 15,76 60 19,63 18,78 75 23,18 22,22
Nilai  IC50  ditentukan  melalui  regresi  linier,  dimana  sumbu  x  menunjukan konsentrasi sampel dan sumbu y menunjukan % inhibisi. Berdasarkan persamaan y = bx +  a  pada  (Gambar  3)  dan  (Gambar  4)  dapat  dihitung nilai  IC 50. Hasil  pengujian  pada Tabel  7,  sampel  ekstrak  sarang  lebah  dalam  menghambat  aktivitas  enzim α -amilase menunjukkan nilai rata-rata IC 50 sebesar 154,46±7,42 μ g/mL dengan nilai r = 0,976 dan persamaan  regresi  linear  y  =  0,309x  +  0,979.  Hasil  pengujian  Akarbose  dalam menghambat aktivitas enzim α -amilase menunjukan nilai rata-rata sebesar 165.96±7,08 dengan nilai r = 0,975 dan persamaan regresi y = 0.295x + 1.027 .
Gambar 3. Kurva Inhibisi Ekstrak
Table 7. Nilai IC50
Sampel Nilai IC50 ( μ g/ml)±SD Sarang lebah 158,48±7,42 Acarbose 165.96±7,08
4,49 10,61 16,58 19,63 23,18 y = 0,3093x + 0,9792 R² = 0,9762 0 1 0 2 0 3 0
4 0 5 0 6 0 7 0 8 0 INH IB IS I % KONSENTRASI Inhibisi % Linear (Inhibisi %)
Vol 8 (3): 733-743, November 2022
Gambar 4. Kurva Inhibisi Akarbose

## Pembahasan
Pada sarang lebah terkandung senyawa flavonoid,saponin dan steroid dalam intensitas yang lebih tinggi dibandingkan dengan metabolit sekunder lainnya (Semuel et al., 2019) . Flavonoid  pada  sarang  lebah  bertindak  sebagi  scavenger  radikal  bebas  dengan memberikan atom hydrogen pada radikal bebas (Silva et al., 2002). Berdasarkan analisis terdapat lebih dari 20 jenis flavonoid yang terkandung dalam ekstrak sarang Apis dorsata Binghami (Semuel  et  al.,  2019). Metode  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah metode  maserasi,  karena  metode  maserasi  ini  merupakan  metode  yang  umum  atau banyak digunakan untuk proses ekstrasi tumbuhan-tumbuhan ataupun bahan alam yang lain  karena  metode  maserasi  yang  sederhana  dan  mudah.  Maserasi  atau  perendaman pelarut  merupakan  cara  sederhana  yang  dapat  dilakukan  dengan  merendam  serbuk sarang lebah. Pelarut akan menembus dinding sel masuk ke rongga sel yang berisi bahan aktif, memungkinkan bahan aktif terlarut. Pelarut yang digunakan dalam penelitian ini adalah etanol 96%. Etanol digunakan sebagai pelarut karena bersifat polar dan mudah didapat.  Senyawa  polar  adalah  senyawa  yang  larut  dalam  air.  Senyawa  metabolit sekunder yang akan di ambil pada sarang lebah bersifat polar sehingga proses ekstraksi menggunakan  pelarut  polar.  Maserasi  yang  dilakukan  selama  2  x  24  jam  dengan pengadukan bertujuan untuk mempercepat kontak antara sampel dan pelarut. Kemudian hasil  maserasi  disaring  dengan  kertas  saring  dan  didapat  filtratnya  kurang  lebih  filtrat yang  di  dapat  700  ml.  kemudian  filtrat  dipekatkan  dengan  menggunakan  alat  rotary evaporator  sehingga  diperoleh  ekstrak  pekat.  penentuan  rendemen  berfungsi  untuk mengetahui  kadar  metabolit  sekunder  yang  terbawa  oleh  pelarut  naun  tidak  dapat mengetahui senyawa yang terbawa oleh pelarut (Ahmad et al., 2015).
Analisis kuantitatif senyawa flavonoid total dengan menggunakan spektrofotometri UV-Vis  dilakukan  untuk  mengetahui  seberapa  besar  kadar  flavonoid  total  yang terkandung  pada  ekstrak  sarang  lebah Apis  dorsata Binghami.  Analisis  flavonoid dilakukan dengan menggunakan Spektrofotometri UV-Vis karena flavonoid mengandung sistem aromatik yang terkonjugasi sehingga menunjukkan pita serapan kuat pada daerah spektrum  sinar  ultraviolet  dan  spektrum  sinar  tampak.  Flavonoid  dihitung  dengan menggunakan persamaan regresi linear dari kurva kalibrasi kuersetin yang telah diukur
4,22 10,53 15,76 18,78 22,22 y = 0.295x + 1.027 R² = 0.9754 0 5 10 15 20 25 0 1 0 2 0 3 0 4 0 5 0 6 0 7 0 8 0 % I N H IB IS I KONSENTRASI
Vol 8 (3): 733-743, November 2022
sebelumnya.  Kadar  flavonoid  dihitung  sebagai  kadar  flavonoid  total  dalam  sampel. Perhitungan ini berdasarkan hukum Lambert-Beer yang menunjukkan hubungan lurus antara absorbansi dan kadar analit.
Pada  penelitian  ini  untuk  menentukan  kadar  flavonoid  total  pada  sampel digunakan  kuarsetin  sebagai  larutan  standar  dengan  deret  konsentrasi  karena  metode yang di pakai dalam menentukan kadar adalah metode yang menggunakan persamaan kurva baku, untuk membuat kurva baku terlebih dahulu dibuat beberapa deret konsentrasi untuk mendapatkan persamaan linear yang dapat digunakan untuk menghitung persen kadar.  Digunakan  kuarsetin  sebagai  larutan  standar  karena  kuersetin  merupakan flavonoid golongan flavonol yang mempunyai gugus keto pada C-4 dan memiliki gugus hidroksil pada atom C-3 atau C-5 yang bertetangga dari flavon dan flavonol (Azizah et al., 2014) . Inkubasi selama 60 menit sebelum mengukur absorbansi agar reaksi berjalan sempurna, sehingga intensitas warna yang dihasilkan lebih maksimal . Persamaan kurva kalibrasi kuersetin dapat digunakan sebagai pembanding untuk menentukan konsentrasi senyawa  flavonoid  total  pada  ekstrak  sampel.  Pengujian  analisis  kuantitatif  dengan spektrofotometri  UV-Vis  digunakan  larutan  blanko  sebagai  kontrol  yang  berfungsi sebagai pemblank senyawa yang tidak perlu dianalisis (Heidelberger & Treffers 1942). Aktivitas  penghambatan  ekstrak  sarang  lebah  terhadap  enzim α -amilase .  Metode yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  metode in  vitro .  Larutan  iodine  pada dasarnya  berwarna  kuning  coklat  akan  membentuk  senyawa  kompleks  berwarna  biru ketika bereaksi dengan pati. Jadi absorbansi diukur dalam Spektrofotometer UV-Vis pada gelombang maksimum 601 nm menunjukkan jumlah pati yang tidak terhidrolisis oleh enzim.  Prinsip  pengujian  sampel  yaitu  semakin  aktif  ekstrak  yang  digunakan,  maka semakin sedikit pati yang terhidrolisis sehingga glukosa yang dihasilkan semakin sedikit, karena ekstrak dapat menghambat aktivitas enzim α -amilase. Aktivitas enzim α -amilase yang  dihambat  oleh  ekstrak  tidak  dapat  bereaksi  dengan  substrat  amilum,  sehingga intensitas warna yang dihasilkan akan semakin berkurang (Wirasti et al., 2021) . Ekstrak yang  paling  aktif  adalah  ekstrak  yang  menunjukkan  inhibisi  %  yang  paling  tinggi. Pengujian sampel diawali dengan menghitung % inhibisi dari masing-masing konsentrasi ekstrak  sarang  lebah  dan  pembanding  yaitu  akarbose.  Nilai  %  inhibisi  menunjukkan kemampuan  ekstrak  dalam  konsentrasi  tertentu  dapat  menghambat  aktivitas  enzim α - amilase . Aktivitas inhibisi enzim α -amilase dari ekstrak sarang lebah pada konsentrasi 75 μ g/mL mempunyai nilai inhibisi paling tinggi, semakin tinggi konsentrasi sampel yang digunakan maka semakin tinggi aktivitas penghambatan enzim.
Pengujian standar akarbose bertujuan untuk mengetahui nilai IC 50 dari akarbose sebagai kontrol positif pengujian dan sebagai pembanding dengan nilai IC 50 ekstrak yang diuji. Sarang lebah mempunyai senyawa kimia aktif yang dapat menghambat aktivitas enzim α -amilase. Senyawa-senyawa  tersebut  dapat  dilihat  dari  hasil  skrining  fitokimia, namun  senyawa  yang  berpotensi  dalam  menghambat enzim α -amilase adalah  senyawa golongan glikosida, alkaloid, dan flavonoid (Pujiyanto et al., 2019). Selain itu senyawa xanton  yang  terbukti  secara in  vitro  menghambat  aktivitas  enzim α -amilase.  Senyawa flavonoid lainnya juga terbukti menghambat enzim α -glukosidase dan enzim α -amilase (Tadera et al., 2006) .
Vol 8 (3): 733-743, November 2022

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  diperoleh  bahwa  ekstrak  sarang  lebah Apis dorsata Binghami  dapat  menghambat  aktivitas  enzim α -amilase dengan  nilai  IC 50 lebih kecil dibandingkan akarbose. Nilai IC 50 ekstrak sarang 154,46±7,42 μ g/mL dan nilai IC 50 Akarbose 165.96±7,08 μ g/mL. Lebih kecil nilai IC 50 maka lebih kuat penghambatanya, maka  dapat  disimpulkan    bahwa  ekstrak  sarang  lebah Apis  dorsata Binghami  memiliki potensi  untuk  dapat  dikembangkan  dan  dipertimbangkan  sebagai  kandidat  obat antidiabetes, khususnya diabetes mellitus tipe II. Untuk penelitian selanjutnya disarankan menggunakan  enzim yang lebih  spesifik yaitu enzim α -glukosidase , dan  juga disarankan menggunakan metode secara in vivo .

## DAFTAR PUSTAKA
Ahmad,  Aktsar  Roskiana,  Juwita  Juwita,  and  Siti  Afrianty  Daniya  Ratulangi.  (2015). Penetapan Kadar Fenolik Dan Flavonoid Total Ekstrak Metanol Buah Dan Daun Patikala (Etlingera Elatior (Jack) R.M.SM). Pharmaceutical Sciences and Research 2 (1): 1–10. https://doi.org/10.7454/psr.v2i1.3481.
Azizah, Dyah Nur, Endang Kumolowati, and Fahrauk Faramayuda. (2014). Penetapan
Kadar  Flavonoid  Metode  AlCl3  Pada  Ekstrak  Metanol  Kulit  Buah  Kakao (Theobroma  Cacao  L.). Kartika  Jurnal  Ilmiah  Farmasi, 2 (2),  171-179. https://doi.org/10.26874/kjif.v2i2.14.
Erlidawati,  Erlidawati,  Safrida  Safrida,  and  Mukhlis  Mukhlis.  (2018).  Potensi Antioksidan Sebagai Antidiabetes. Potensi Antioksidan Sebagai Antidiabetes . Skripsi Universitas Syiah Kuala. https://doi.org/10.52574/syiahkualauniversitypress.350. Heidelberger, Michael, and Henry P. Treffers. (1942). Quantitative Chemical Studies on
Hemolysins:  I.  The  Estimation  of  Total  Antibody  in  Antisera  to  Sheep Erythrocytes  and  Stromata. Journal  of  General  Physiology, 25 (4),  523–31. https://doi.org/10.1085/jgp.25.4.523.
Kang,  Wen-Yi,  Yan-Li  Song,  and  Li  Zhang.  (2011). α -Glucosidase  Inhibitory  and Antioxidant  Properties  and  Antidiabetic  Activity  of  Hypericum  Ascyron  L.” Medicinal Chemistry Research, 20(7), 809–16. https://doi.org/10.1007/s00044-010- 9391-5.
Messerli, F. H., and E. Grossman. (2001). Diabetes, Hypertension, and Cardiovascular
Disease: An Update. Hypertension 38 (3), 211-218. https://doi.org/10.1161/01.hyp.38.3.e11.
Pujiyanto,  Sri,  W  Wijanarka,  Budi  Raharjo,  and  Via  Anggraeni.  (2019).  Aktivitas Inhibitor α -Amilase Ekstrak Etanol Tanaman Brotowali (Tinospora Crispa L.).
Bioma : Berkala Ilmiah Biologi, 21 (2), 91–99.
https://doi.org/10.14710/bioma.21.2.91-99.
Semuel, Mokosuli Yermia, Eva S N Kaunang, and Jacklin S S Manoppo. (2019). Potensi
Vol 8 (3): 733-743, November 2022
Bioaktif  Dari  Apis  Dorsata  Binghami,  Lebah  Madu  Endemik  Sulawesi .  CV  Mentari jaya, 98 halaman.
Semuel,  Mokosuli  Yermia,  Rudi  Alexander  Repi,  and  Rantje  Lilly  Worang.  (2018). Potential  Antioxidant  and  Anticancer  Effect  of  Apis  Dorsata  Binghami  Crude Venom  from  Minahasa, North  Sulawesi  Potential  Antioxidant  and  Anticancer Effect of Apis Dorsata Binghami Crude Venom from Minahasa , North Sulawesi,
Journal of Entomology and Zoology Studies, 5 (2), 112-119.
Silva, M Manuela, Marta R Santos, Gonçalo Caroço, Rui Rocha, Gonçalo Justino, and Lurdes Mira. (2002). Structure-Antioxidant Activity Relationships of Flavonoids: A Re-Examination. Free Radical Research 36(11), 1219–27. https://doi.org/10.1080/198-1071576021000016472. Stankovic,  Milan  S.  (2011).  Total  Phenolic  Content,  Flavonoid  Concentration  And Antioxidant Activity Of Marrubium Peregrinum L. Extracts, Kragujevac Journal of Science, 33 (3), 63–72.
Tadera,  Kenjiro,  Yuji  Minami,  Kouta  Takamatsu,  and  Tomoko  Matsuoka.  (2006). Inhibition of α -Glucosidase and α -Amylase by Flavonoids. Journal of Nutritional Science and Vitaminology, 52 (2), 149–53. https://doi.org/10.3177/jnsv.52.149.
Wirasti, Wirasti, Titi Lestari, and Isyti’aroh Isyti’aroh.  (2021). Penghambatan Ekstrak Daun  Kremah  (Alternanthera  Sessilis)  Terhadap  Enzim α -Amilase  Secara  In- Vitro. Pharmacon: Jurnal Farmasi Indonesia , 18 (1), 68–74. https://doi.org/10.23917/pharmacon.v18i01.14657.
How To Cite This Article, with APA style : Pratasik,  V.,  Mege  R.,  &  Mokosuli,  Y.  (2022). In  Vitro Antidiabetic  Activity  of Apis Dorsata Binghami  Nest  Extract. Jurnal  Pembelajaran  dan  Biologi  Nukleus ,  8(3),
733-743. https://doi.org/10.36987/jpbn.v8i3.3196