Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol Daun Mimba ( Azadirachta indica A.Juss) terhadap Berat Uterus dan Tebal Endometrium Mencit ( Mus musculus L.)
The Effect of Neem Leaf Ethanol Extract ( Azadirachta indica A.Juss) Toward Weight of Uterine and Endometrial Thickness Mice ( Mus musculus L.)
Anis Alfiyanti 1 *, Agung Janika Sitasiwi 2 , Siti Muflichatun Mardiati 2
1 Mahasiswa Program Studi Biologi, Departemen Biologi, Fakultas Sains dan Matematika, Universitas Diponegoro
2 Departemen Biologi, Fakultas Sains dan Matematika, Universitas Diponegoro Jl. Prof. Soedarto, SH. Tembalang-Semarang 50275
*Email : Anisalfiyanti9@gmail.com
Diterima 19 Desember 2018 / Disetujui 22 Januari 2019

## ABSTRAK
Daun Mimba ( Azadirachta indica A. Juss.) mengandung bahan aktif seperti flavonoid, triterpenoid, alkaloid, tanin  dan  saponin  yang  berpotensi  sebagai  senyawa  antifertilitas.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menguji pengaruh  ekstrak  etanol  daun  mimba  ( Azadirachta  indica A.Juss)  terhadap  berat  uterus  dan  tebal endometrium  mencit  ( Mus  musculus  L .).  Penelitian  menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  yang terdiri  dari  5  perlakuan  yaitu  K-  (Akuades),  K+  (Pil  Kontrasepsi),  P1,  P2  dan  P3  (Perlakuan  ekstrak  etanol daun  Mimba  dengan  dosis  8,4;  11,2  dan  14  mg/kg  BB/hari)  masing-masing  dengan  5  ulangan.  Perlakuan diberikan secara oral dengan volume 0,2 mL selama 21 hari. Pemberian pakan dan minum dilakukan secara ad  libitum .  Uterus  diisolasi,  ditimbang  dan  dibuat  sediaan  histologis  menggunakan  metode  paraffin  dengan tebal sayatan 5 µm dan pewarnaan Hematoksilin Eosin (HE). Pengukuran tebal endometrium dilakukan pada 6  sayatan  di  setiap  sediaan  histologi  uterus.  Data  dianalisis  menggunakan Analysis  of  Variance (ANOVA) pada taraf kepercayaan 95% dan uji lanjut DMRT. Hasil analisis menunjukkan paparan bahan uji memberikan pengaruh yang nyata (p<0,05) terhadap tebal endometrium namun tidak berpengaruh nyata (p>0,05) terhadap bobot  uterus  dan  bobot  total  organ  reproduksi.  Penelitian  ini  dapat  disimpulkan  bahwa  pemberian  ekstrak etanol daun Mimba selama 21 hari dapat memengaruhi fertilitas dengan cara menurunkan tebal endometrium.

## Kata kunci: daun Mimba, tebal endometrium, bobot uterus

## ABSTRACT
Neem leaves ( Azadirachta indica A. Juss.) contain some active ingredients such as flavonoids, triterpenoids, alkaloids,  tannins  and  saponins  compounds  that  have  potencies  antifertility.    The  aim  of  this  studywas  to examine  the  effect  of  neem  leaf  ethanol  extract  ( Azadirachta  indica A.Juss)  toward  weight  of  uterine  and endometrial  thickness  mice  ( Mus  musculus L.).    This  study    was  used  a  Completely  Randomized  Design concist of 5 treatments group with 4 replications, Namely K-(Aquadest), K+(Contaceptive Pills), P1, P2 and P3(each  were  treated  by  neem  leaf  ethanol  extract  with  dosage  of  8,4;  11,2  and  P3  mg/kgBW/day).  The treatment  was  administered  orally  with  0,2  mL  every  morning  for  21  days.  The  feeding  and  drinking  in ad libitum .  The  uterus  were  isolated,  weighed  and  histologically  processed  using  paraffin  method  with  a  5  μm incision  thickness  and  Hematoxylin  Eosin  (HE)  staining.  Measurements  of  endometrial  thickness  were performed  at  6  incisions  in  each  uterine  histologically  processed.  The  data  was  analyzed  using  Analysis  of Variance (ANOVA) at 95% confidence level and continued by DMRT test. The results of the analysis showed that  exposure  to  the  test  material  had  a  significant  effect  (p  <0.05)  on  endometrial  thickness  but  did  not significantly  influence  (p>  0.05)  on  uterine  weight  and  total  weight  of  the  reproductive  organs.  This  study concluded  that  the  administration  of  ethanol  extract  of  Mimba  leaves  for  21  days  can  affect  fertility  by reducing endometrial thickness.
Keywords: neem leaves, endometrial thickness, weight of uterine

## PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  negara  tropis  yang kaya  akan  jenis  tanaman  obat-obatan,  terutama sebagai  bahan  kontrasepsi.  Telah  diketahui terdapat  50  tanaman  dengan  47  genus  dan  32 famili  di  berbagai  negara  yang  memiliki  aktivitas sebagai  bahan  antifertilitas,  salah  satunya  adalah tanaman  Mimba  ( Azadirachta  indica A.Juss) (Priya et  al .,  2012).  Hasil  penelitian  Morovati et al . (2008) menyatakan bahwa kandungan di dalam ekstrak  daun  Mimba  memiliki  efek  antifertilitas, antiimplantasi  dan  dapat  mengakibatkan  abortus. Pemanfaatan  daun  Mimba  pun  telah  banyak dibuktikan di dalam masyarakat sebagai antifertilitas  pada  pria  tanpa  menurunkan  libido serta mencegah implantasi (Suryawanshi, 2011).
Uji  kandungan  telah  dilakukan  pada Laboratorium  Balai  Penelitian  dan  Konsultasi Industri  (BPKI),  dalam  kandungan  daun  mimba terdapat  flavonoid  1,56%  dan  senyawa  bioaktif tripertenoid  0,39%  yang  berpengaruh  terhadap interfertilitas  hewan  jantan  dan  betina  (Indah, 2013). Beberapa senyawa yang digunakan sebagai bahan  antifertilitas  memiliki  syarat  strukturnya mirip hormon estrogen, memiliki gugus yang dapat menempati  reseptor  hormon  tersebut  pada  organ reproduksi  dan  yang  paling  penting  dapat mengganggu sumbu hipotalamus-hipofisis- ovarium atau testis (Lestari, 2001).
Mekanisme kerja senyawa antifertilitas pada uterus  adalah  dengan  cara  menstimulasi  kontraksi uterus sehingga menghambat pertumbuhan blastosis atau mengganggu pertumbuhan endometrium  yang  sudah  siap  menerima  zigot (Hudiyantini,  2006).  Uterus  merupakan  suatu struktur  saluran  muskuler  yang  diperlukan  untuk penerimaan  ovum  yang  telah  dibuahi,  penyediaan nutrisi  dan  perlindungan  fetus.  Dinding  uterus terdiri  dari  tiga  lapisan  yaitu  membran  serosa (perimetrium),  miometrium  dan  endometrium (Muchsin, 2009). Lapisan endometrium merupakan  lapisan  yang  responsif  terhadap perubahan hormon reproduksi, sehingga perubahan lapisan  ini  bervariasi  sepanjang  siklus  estrus  dan dapat  dijadikan  indikator  terjadinya  fluktuasi hormon  yang  sedang  terjadi  pada  hewan  tersebut (Sitasiwi,  2007).  Ketebalan  endometrium  sangat
dipengaruhi  oleh  fase  pada  siklus  estrus, dikarenakan  terjadi  fluktuasi  perubahan  kadar hormon  estrogen  dan  progesteron  pada  setiap fasenya (Narulita dan Prihatin, 2017).
Hasil penelitian Markolinda (2005) mengenai penggunaan ekstrak daun mimba dengan dosis  100  mg/kg/BB  dan  200  mg/kg/BB  yang diberikan  secara  oral  kepada  tikus  putih  betina terbukti mampu mengurangi berat uterus dan berat ovarium.  Penurunan  berat  uterus  dan  ovarium disebabkan  oleh  komponen  estrogenik  yang terdapat pada ekstrak daun mimba. Setyowati dkk. (2015)  menyatakan  bahwa  antiestrogen  bekerja secara  kompetitif  pada  lokasi  reseptor  jaringan sasaran  untuk  menghalangi  aksi  aksi  steroid estrogen. Efek antiestrogen menyebabkan ovarium inaktif,  pertumbuhan  folikel  dan  sekresi  estrogen endogen  terganggu  sehingga  ovulasi  juga  dapat terganggu. Efek lain antiestrogen dapat menyebabkan atrofi endometrium, sehingga meskipun  terjadi  fertilisasi  proses  implantasi  akan terganggu. Berdasarkan uraian tersebut maka perlu dilakukan penelitian tentang pengaruh antifertilitas ekstrak  ethanol  daun  mimba  ( Azadirachta  indica A.Juss) terhadap bobot uterus dan tebal endometrium mencit ( Mus musculus L .)

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini dilaksanakan selama dua bulan di  Laboratorium  Biologi  Struktur  dan  Fungsi Hewan, Universitas Diponegoro, Semarang. Bahan uji berupa daun mimba yang didapat dari Fakultas Sains  dan  Matematika,  Universitas  Diponegoro, Semarang.  Sediaan  kontrasepsi  hormonal  sintetis (Pil  kontrasepsi),  akuades,  garam  fisiologis  NaCl 0.9%,  larutan  BNF,  alkohol, toluol , xylol ,  parafin, perekat  Canada  Balsam,  pakan  mencit  dan  air minum.  Hewan  uji  yang  digunakan  adalah  mencit betina galur Swiss Webster berumur 2,5 bulan.
Alat  yang  diperlukan  adalah  seperangkat kandang  pemeliharaan  dan  perlengkapannya, tempat  pakan  dan  tempat  minum,  sekam  padi, neraca  Ohaus,  neraca  analitik,  pinset,  jarum gavage , spuit volume  1  mL,  cawan  petri,  tabung erlenmeyer,  gelas  ukur,  kompor  listrik,  gelas benda,  blender,  oven  dan  seperangkat  alat pembuatan preparat.

## Persiapan Hewan Uji
Mencit  diaklimasi  selama  2  minggu  yang bertujuan  agar  mencit  dapat  beradaptasi  dengan lingkungan  yang  baru  sehingga  diperoleh  hewan percobaan  dengan  kondisi  yang  sehat,  kemudian diberi makan dan minum secara ad libitum.

## Ekstraksi Daun Mimba
Sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah bagian daun mimba ( Azadirachta indica A. Juss ) dengan kriteria warna daun hijau muda serta daun  diambil  dari  pucuk  daun  hingga  2-3  tangkai di  bawah  pucuk.  Sampel  daun  mimba  yang  telah dikumpulkan  dibersihkan  dari  kotoran,  kemudian dikeringkan  menggunakan  oven  dengan  suhu 45˚C.    Daun  yang  sudah  kering  kemudian  dibuat menjadi  serbuk  dengan  diblender.  Ekstraksi  daun Mimba menggunakan ethanol 70% dengan metode maserasi.  Kristanti  (2008)  menyatakan  bahwa penggunaan ethanol sebagai pelarut karena alkohol merupakan  pelarut  universal  yang  baik  untuk mengekstraksi semua golongan senyawa metabolit sekunder.

## Perlakuan Hewan Uji
Mencit  betina  dipelihara  pada  kandang terpisah  dengan  kepadatan  3  ekor  per  kandang, setelah  diaklimasi  dalam  kondisi  laboratorium selama  2  minggu.  Pemberian  pakan  dan  minum dilakukan ad  libitum. Pemberian  perlakuan  oral dengan  volume  0,2  mL  per  hewan  uji,  pada  pagi hari  (jam  08.00-10.30)  selama  21  hari  berturut- turut  dengan  dosis  yang  telah  dihitung  sesuai dengan  berat  mg/kg  BB  mencit  dan  setelah  2  hari perlakuan  dihentikan.  Bobot  badan  mencit  diukur setiap 7 hari sekali. Konsumsi pakan di ukur setiap 3 hari sekali. Konsumsi minum diukur setiap 1 hari sekali.  Penimbangan  bobot  mencit  dilakukan dengan  menggunakan  neraca  Ohaus  dengan ketelitian  0,1  gram.  Penimbangan  dilakukan  di awal  perlakuan,  setiap  minggu  dan  akhir perlakuan.
Tahap  Pengamatan  dan  Pembuatan  Preparat Ulas Vagina
Rintafiani (2014) menyatakan bahwa Metode  ulas  vagina  mencit  ( Mus  musculus L.) dilakukan  dengan  cara  mengambil  sampel  ulas vagina  menggunakan cotton  buds yang  telah dibasahi  dengan  larutan  NaCl  0,9%. Cotton  buds kemudian  diusapkan  pada  dinding  vagina  dengan diputar  searah  jarum  jam  sebanyak  2-3  kali putaran.  Hasil  ulasan  berupa  sel-sel  epitel  vagina yang terdapat pada cotton buds dioleskan tipis dan searah  diatas  gelas  objek  yang  telah  dibersihkan menggunakan  alkohol  70%.  Pewarna  giemsa selanjutnya diteteskan pada preparat dan dibiarkan selama  30  menit.  Preparat  kemudian  dibilas menggunakan  akuades  dan  dikeringkan.  Sisa  air maupun pewarna giemsa pada preparat dibersihkan menggunakan  tisu.  Preparat  kemudian  diamati menggunakan  mikroskop  untuk  mengamati  sel epitel  yang  masih  berinti  atau  telah  mengalami kornifikasi  sehingga  diketahui  fase  yang  dialami mencit.
Keteraturan  siklus  estrus  hewan  uji ditentukan  dengan  mengamati  fase  penyusun siklus  estrus  setiap  5  hari  sekali,  selama  21  hari. Penentuan  presentase  keteraturan  siklus  estrus hewan  uji  selama  paparan  dilakukan  dengan menghitung  jumlah  hewan  uji  yang  mengalami fase  estrus  dibandingkan  dengan  total  jumlah hewan uji pada kelompok perlakuan yang sama.

## Penimbangan Bobot Uterus
Penimbangan bobot uterus dilakukan dengan mencuci terlebih dahulu uterus menggunakan  NaCl  0,9%.  Uterus  kemudian dikeringkan  menggunakan  tisu  dan  diletakkan pada alumunium foil. Uterus selanjutnya ditimbang menggunakan timbangan digital untuk mengetahui bobot uterus.

## Tahap  Pengamatan  Preparat  dan  Pengukuran Tebal Endometrium
Metode  yang  digunakan  untuk  pembuatan preparat  histologi  uterus  adalah  metode  parafin dan pewarnaan Hemotoksilin dan Eosin. Pengambilan data tebal endometrium uterus sesuai dengan  metode  yang  dilakukan  oleh  Muchsin (2009)  dengan  cara  mengukur  tebal  lapisan
endometrium  pada  sediaan  histologis  uterus  dari setiap  ekor  mencit  masing-masing  1  titik.  1  titik terdiri  dari  6  sayatan.  Setiap  1  sayatan  dilakukan pengamatan  dengan  mengukur  tebal  endometrium terpendek  dan  tebal  endometrium  terpanjang, kemudian  dilakukan  rata-rata  terhadap  tebal endometrium uterus.

## Analisis Data
Data  bobot  uterus,  bobot  total  organ reproduksi  dan  tebal  endometrium  dianalisis dengan  uji  One  way  ANOVA  pada  taraf kepercayaan 95%. Analisis data tebal endometrium  dilanjutkan  dengan  uji  Duncan’s Multiple  Range  Test  (DMRT)  pada  taraf kepercayaan  95%.  Analisis  data  menggunakan program  SPSS  (Statistical  Product  of  Service Solution)for Windows versi 20.0.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  penelitian  mengenai  bobot  uterus, tebal  endometrium  dan  bobot  total  organ
reproduksi  mencit  ( Mus  musculus L.)  betina setelah  paparan  ekstrak  etanol  daun  mimba ( Azadirachta indica Juss.) dapat dilihat pada Tabel 1.  Daun  mimba  berpotensi  sebagai  antifertilitas karena  terdapat  senyawa  aktif  yang  terkandung didalamnya.  Ekstrak  daun  mimba  memiliki kandungan  senyawa  bioaktif  berupa  flavonoid, alkaloid,  saponin,  tanin  dan  triterpenoid.  Hal tersebut  sesuai  dengan  hasil  penelitian  Prasetya dkk.  (2011)  menunjukkan  bahwa  kandungan dalam  ekstrak  daun  mimba  mengandung  bahan aktif  flavonoid  dan  triterpenoid  yang  mempunyai efek  antifertilitas  pada  hewan  betina.  Dabhadkhar et  al .  (2015)  menyatakan  bahwa  senyawa antifertilitas  merupakan  senyawa  yang  memiliki kemampuan mencegah kesuburan dengan mengganggu  beberapa  mekanisme  reproduksi normal,  baik  jantan  maupun  betina.  Menurut Herdiningrat (2002) terdapat dua prinsip kerja dari bahan  antifertilitas,  yaitu  merusak  sel  (efek sitotoksik atau sitostatik) serta mengganggu fungsi hormonalnya (efek hormonal) .
Tabel    1.    Rerata  bobot  uterus,  tebal  endometrium  dan  bobot  total  organ  reproduksi  mencit  betina  setelah paparan ekstrak etanol daun mimba selama 21 hari
Variabel Penelitian Perlakuan K- X ±SD K+ X ±SD P1 X ±SD P2 X ±SD P3 X ±SD Tebal Endometrium (µm) 276,32 a ±55,14 296,22 a ±69,26 381,28 b ±28,83 413,76 b ±47,83  237,29 a ±55,42 Bobot Uterus (g) 0,11 a ±0,034 0,14 a ±0,055 0,11 a ±0,034 0,107 a ±0,039 0,097 a ±0,038 Bobot Total Organ Reproduksi (g) 0,168 a ±0,19 0,190 a ±0,62 0,156 a ±0,04 0,145 a ±0,44 0,137 a ±0,38
Keterangan : Data disajikan berupa rataan ( X ) ± standar deviasi (SD). Rerata yang diikuti superskrip pada baris yang sama menunjukkan bahwa data tidak berbeda bermakna dengan uji ANOVA pada taraf kepercayaan 95%. K-:  kelompok  kontrol  dengan  akuades,  K+:  kelompok  kontrol  dengan  pil  kontrasepsi,  P1  :  kelompok perlakuan  bahan  uji  dosis  8,4  mg/kgBB,  P2  :  kelompok  perlakuan  bahan  uji  dosis  11,2  mg/kgBB,  P3  : kelompok perlakuan bahan uji 14 mg/kgBB
Hafez (2000) menyatakan bahwa mekanisme  kerja  zat  antifertilitas  pada  organ uterus dapat bersifat interseptif maupun abortivum. Keseimbangan  hormon  estrogen  dan  progesteron pada  hewan  uji  sangat  diperlukan  pada  proses implantasi. Progesteron dapat menimbulkan gangguan  keseimbangan  proliferasi  endometrium sehingga  mengganggu  terjadinya  implantasi.
Antiestrogenik yang terdapat dalam ekstrak etanol daun  mimba  dapat  menghambat  implantasi  pada hewan  uji  yang  memerlukan  hormon  estrogen untuk proses implantasi.
Hasil  ANOVA  berdasarkan  Tabel  1. menunjukkan  bahwa  pemberian  ekstrak  etanol daun  Mimba  memberikan  hasil  yang  berbeda bermakna  (p<0,05)  terhadap  tebal  endometrium
mencit.  Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat diketahui  bahwa  kelompok  perlakuan  yang memiliki  tebal  endometrium  terendah  ditunjukkan pada  kelompok  perlakuan  P3  (237,29  ±  55,42). Penurunan ketebalan endometrium pada kelompok perlakuan  P3  (100mg/Kg/BB)  diduga  disebabkan oleh  konsentrasi  bahan  aktif  yang  terdapat  dalam ekstrak etanol daun mimba berada pada konsentrasi  yang  lebih  tinggi  daripada  dosis  pada kelompok perlakuan yang lain. Hal tersebut sejalan dengan  yang  dikemukakan  oleh  Purnomo  (2008) bahwa  pada  umumnya  semakin  tinggi  konsentrasi suatu  formulasi  maka  semakin  tinggi  pula  bahan aktif  yang  dikandung.  Zat  aktif  tersebut  dapat memengaruhi  kerja  hormon  dan  metabolisme  sel sehingga tebal endometrium rendah.
Kandungan  senyawa  aktif  yang  terdapat dalam ekstrak etanol daun mimba berupa alkaloid, flavonoid,  saponin,  tanin  dan  triterpenoid  diduga mampu  memengaruhi  ketebalan  dinding  uterus pada  lapisan  endometrium.  Hal  tersebut  sesuai dengan pendapat Rusmiati (2011) bahwa ketebalan endometrium  yang  rendah,  akan  menyebabkan gangguan pada saat implantasi oleh zigot. Semakin tipis lapisan endometrium maka akan memperkecil terjadinya kebuntingan.
Hasil penelitian Lestari (2001) menyebutkan bahwa  senyawa  yang  dapat  digunakan  sebagai bahan antifertilitas harus memiliki syarat strukturnya  mirip  hormon  estrogen,  memiliki gugus  yang  dapat  menempati  reseptor  organ reproduksi dan dapat mengganggu sumbu hipotalamus-hipofisis.  Hasil  penelitian  Gruber dkk.  (2002)  menyebutkan  bahwa  efek  estrogenik terjadi  karena  adanya  ikatan  antara  fitostrogen dengan reseptor estrogen sehingga terjadi pengaktifan  reseptor  estrogen.  Reseptor  estrogen yang  telah  aktif  akan  berinteraksi  dengan  ERE ( Estrogen Response Element ) yang terdapat dalam nukleus  sehingga  mampu  menginduksi  ekspresi estrogen  responsive  gene.  Hal  tersebut  akan memicu terjadinya sintesis estrogen.
Janquiera  dan  Carneiro  (2007)  menyatakan bahwa  kadar  estrogen  yang  meningkat  akan memberikan  umpan  balik  negatif  terhadap  poros hipotalamus-hipofisis-ovarium yang kemudian akan  menurunkan  sekresi  FSH  maupun  LH.  FSH dan  LH  berperan  dalam  sintesis  hormon  estrogen
dan  progesteron  pada  ovarium.  Sitesis  hormon estrogen  yang  terganggu  akan  menyebabkan terhambatnya  proliferasi  sel  penyusun  dinding dalam uterus atau endometrium.
Berdasarkan hasil penelitian, tebal endometrium  pada  kelompok  perlakuan  P3 (237,29  ±  55,42)  memiliki  hasil  yang  berbeda nyata  jika  dibandingkan  dengan  K(-)  dan  K(+). Perubahan  tebal  endometrium  diduga  juga disebabkan karena adanya senyawa yang terkandung  di  dalam  ekstrak  etanol  daun  mimba yang  memiliki  sifat  sitotoksik.  Semakin  besar dosis  yang  diberikan  pada  kelompok  perlakuan maka  semakin  besar  pengaruh  yang  ditimbulkan terhadap  ukuran  tebal  endometrium.  Rusmiati (2010)  menyatakan  bahwa  senyawa  antifertilitas dapat menyebabkan gangguan pada proses ovulasi dan  fertilisasi.  Pemberian  senyawa  antifertilitas dalam kurun waktu yang lama dapat menyebabkan atrofi  pada  ovarium  dan  uterus,  sehingga  dapat menyebabkan penurunan proses fertilisasi, gangguan pembelahan sel dan proses implantasi.
Tebal endometrium uterus merupakan faktor utama  yang  memengaruhi  bobot  uterus  dan  bobot total  organ  reproduksi.  Hal  tersebut  disebabkan karena  endometrium  uterus  merupakan  lapisan paling  responsif  terhadap  perubahan  hormon reproduksi,  terutama  hormon  estrogen.  Sitasiwi (2008)  menyatakan  bahwa  turunnya  konsentrasi estrogen dalam darah menyebabkan tidak terjadinya  penebalan  endometrium  dan  gangguan sekresi  pada  kelenjar  uterus  sehingga  uterus mengalami atrofi dan penurunan bobot.
Berdasarkan hasil penelitian terdapat perbedaan  fase  penyusun  siklus  estrus  di  setiap kelompok  perlakuan.  Beberapa  fase  penyusun siklus estrus yang terjadi pada penelitian ini antara lain  kelompok  K(-)  dan  K(+)  mengalami  fase estrus,  sedangkan  kelompok  perlakuan  P1  dan  P2 terjadi  fase  proestrus  dan  pada  kelompok perlakuan  P3  terjadi  fase  metestrus.  Schatten  and Constantinescu  (2007)  menyatakan  siklus  estrus pada  hewan  dipengaruhi  oleh  faktor  intrinsik  dan esktrinsik. Faktor intrinsik utama yang mempengaruhi  siklus  estrus  adalah  umur  dan genetik.  Faktor  ekstrinsik  diantaranya  adalah fotoperiodisme, suhu dan suplai makanan. Lusiana (2017)  menyatakan  beberapa  faktor  yang  lain
diantaranya  ialah  faktor  hormon  dan  perbedaan perlakuan dalam hewan uji.
Narulita  dkk.  (2017)  menyatakan  bahwa Fase penyusun siklus estrus memiliki karakteristik yang  berbeda-beda,  hal  tersebut  dapat  dilihat  dari ketebalan  endometriumnya  dikarenakan  terjadi fluktuasi  perubahan  kadar  hormon  estrogen  dan progesteron  pada  setiap  fasenya.  Rahmanisa (2012) menyatakan bahwa proliferasi epitel uterus diatur  oleh  estradiol.  Estradiol  akan  menginduksi proliferasi sel epitel uterus, sedangkan progesteron akan  merangsang  diferensiasi  lapisan  fungsional dan  menghambat  proliferasi  sel  epitel.  Senyawa antifertilitas  yang  terdapat  di  dalam  bahan  uji diduga akan menghambat estrogen untuk menginduksi  proliferasi  sel-sel  epitel  uterus sehingga tebal endometrium rendah.
Hasil  penelitian  menunjukkan  bobot  uterus dan  bobot  total  organ  reproduksi  menunjukkan perbedaan  tidak  nyata  (p<0,05)  pada  semua kelompok  perlakuan.  Berdasarkan  hasil  penelitian bobot  uterus  dan  bobot  total  organ  reproduksi menunjukkan  perbedaan.  Owens et  al .  (2003) menyatakan  bahwa  bobot  uterus  dipengaruhi  oleh beberapa  faktor  antara  lain  ketebalan  lapisan endometrium, lemak, umur mencit, kadar/konsentrasi  hormon  dan  sekret  yang dihasilkan  oleh  kelenjar  uterus.  Hal  tersebut diduga  akibat  tidak  terjadinya  proliferasi  karena terhambatnya pelepasan FSH dan LH.
Marhaeni (2016) menyatakan bahwa hormon  estrogen  berperan  dalam  produksi  sekret uterus.    Menurut  Puspitasdewi  (2007)  perubahan hormon  estrogen  pada  kelompok  perlakuan  yang diberi perlakuan senyawa antifertilitas menunjukkan  hasil  yang  berbeda  tidak  bermakna dengan  kontrol  akan  berdampak  pada  struktur organ reproduksi berupa berat uterus maupun berat total organ reproduksi. Belardin (2014) menyatakan  bahwa  proses  proliferasi  pada endometrium  akan  memengaruhi  berat  uterus. Semakin rendah tebal endometrium maka semakin turun  berat  uterus.  Hal  tersebut  sesuai  dalam penelitian  ini  yang  ditunjukkan  pada  kelompok perlakuan P3.
KESIMPULAN
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan dapat  disimpulkan  bahwa  paparan  ekstrak  etanol pada  dosis  100  mg/kg  BB  selama  21  hari menunjukkan  hasil  berbeda  nyata,  hal  itu menunjukkan  bahwa  pemberian  ekstrak  etanol daun  mimba  dapat  memengaruhi  fertilitas  dengan cara menurunkan tebal endometrium.

## DAFTAR PUSTAKA
Belardin, L.B. 2014. Dose-Dependent Effects And Reversibility  Of The  Injuries  Caused  By Nandrolone Decanoate In Uterine Tissue And  Fertlity  Ofrats. Birth  Defects  Res  B Dev Reprod Toxicol 101(2): 168-177.
Dabhadkhar  D.K.,  V.G.  Thakare,  V.S.  Zade,  A.P. Charjan, M.M. Dhore dan S.M. Deosthale.  2015.  Review  on  Some Ethnobotanical Plants Having
Antifertility  Activity  in  Female  Albino Rats. International  Research  Journal  of Science and Engineering 3(2): 43-46.
Hafez,  E.  S.  E.  2000. Semen  Evaluation.  In: Reproduction  In  Farm  Animals  7  th Edition . Lippincott Wiliams and Wilkins Maryland, USA
Herdiningrat, S. 2002. Efek Pemberian Infus Buah Manggis  Muda  ( Garcinia  mangostana Linn)  terhadap  Spermatozoa  Mencit ( Mus  musculus ). Majalah  Andrologi Indonesia 10:130.
Hudiyantini,  A.  2006.  Uji  Aktivitas  Senyawa Turunan  Benzoilkuersetin  pada  Mencit Jantan ( Mus musculus ). Skripsi . Fakultas Farmasi Universitas
Airlangga,
Surabaya.
Indah,  S.M.,  M.  Sri  dan  H.  Sri.  2013.  Pengaruh
Ekstrak  Daun  Mimba  ( Azadirachta indica ) Terhadap Presentase Kebuntingan pada Mencit ( Mus
musculus ). Jurnal  Media  Kedokteran Hewan 2(29).
Junqueira,   L.C.  dan  J.  Carneiro. 2007.  Histologi Dasar Edisi 10. EGC, Jakarta.
Kristanti,  A.N.  2010.  Potensi  Ekstrak  Daun Pegagan  ( Centella  asciata ( L ) Urban ) Dosis  Tinggi  Sebagai  Antifertilitas  Pada
Mencit  ( Mus  musculus )  Betina. Skripsi .
Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim, Malang.
Lestari,  U.  2001.  Suatu  Kajian:  Isolat  Tumbuhan sebagai  bahan  Antifertilitas. Jurnal MIPA,  Matematika  dan  Pengajarannya 30(1): 27.
Lusiana,  N.  2017.  Pengaruh  Fitoestrogen  Daging Buah Kurma Ruthab ( Phoenyx dactylifera L.)  terhadap  Sinkronisasi Siklus  Estrus  Mencit  ( Mus  musculus L.) Betina. Jurnal Klorofil 1(1):24-31.
Marhaeni,  G.A.    2016.  Keputihan  pada  Wanita. Jurnal Skala Husada 13(1): 30-38.
Markolinda,  Y.  2005.  Ekstrak  Daun  Mimba ( Azadirachta indica A.Juss) Menurunkan Berat  Uterus  dan  Ovarium  pada  Tikus Putih Betina. Tesis . Universitas Udayana,
Bali.
Morovati,  M.,  M.  Mahmond  dan  K.M.  Ghazy. 2008.  Sterility  and  Abortive  Effects  of the  Commercial  Neem  ( Azadirachta indica A.  Juss)  Extract  NeemAzal-  T/S on  Female  Rat  ( Rattus  norvegicus ).
Turkey Journal Zoology 32: 155-162.
Muchsin, R. 2009. Pengaruh Pemberian Monosodium Glutamate terhadap
Histologi  Endometrium  Mencit  ( Mus musculus L.). Tesis . Medan.
Narulita,  E.  dan  J.  Prihatin.  2017.  Kontrasepsi
Hormonal: Jurnal, Fisiologi dan Pengaruhnya bagi Rahim. UPT Penerbitan Universitas Jember, Jember.
Narulita,  E.,  J.  Prihatin  dan  R.S.  Dewi.  2016. Pemanfaatan  Hasil  Induksi  Hormon Estrogen  terhadap  Kadar  Estradiol  dan Histologi Uterus Mencit ( Mus Musculus ) sebagai Buku Suplemen Sistem
Reproduksi di SMA. J urnal Bioedukatika
2(4): 1-7.
Owens, William, J. Ashby, J. Odum dan L. Onyon. 2003.  The  OECD  Program  to  Validate the  Rat  Uterotrophic  Bioassay.  Phase  2:
Dietary Phytoestrogen Analyses.
Enviromental Health Perspectives
111(12): 1559-1567.
Prasetya,  B.F.,  N.  Husen  dan  S.  Supyan.  2011. Identifikasi  Senyawa  Flavonoid  Ekstrak Etanol Daun Mimba ( Azadirachta indica A.juss) menggunakan Kromatografi Gas- Spektrofotometri Massa. Jurnal Fitofarma 1: 24-32. Priya,  G.K.,  Saravanan  dan  C.  Renuka.  2012. Medicinal Plants With Potential Antifertility Activity-A riview Of Sixteen Years Herbal Medicine Research (1994-2000). Int.  Journal  Pharmacy Technology Research 4: 485-488.
Purnomo,  B.  2008. Patofisiologi  Konsep  Penyakit Klinis . EGC, Jakarta.
Puspitadewi,  Sinthia.  2007.  Potensi  Agensia  Anti Fertilitas  Biji  Tanaman  Jarak  ( Jatropha curcas )  dalam  Mempengaruhi  Profil Uterus  Mencit  ( Mus  musculus )  Swiss Webster. Skripsi . Universitas Diponegoro, Semarang.
Rahmanisa, S. 2012. Efek Ekstrak Kunyit terhadap Ketebalan dan  Jumlah Sel Epitel Luminal  Endometrium  Tikus  (Rattus norvegicus)  pada  Fase  Estrus. Prosiding Hasil Penelitian dan Pengabdian
Kepada Mayarakat . Unila, Lampung.
Rintafiani.  2014.  Siklus  Estrus  pada  Mencit  ( Mus musculus L.). Jurnal  Perkembangan Hewan 1-4.
Rusmiati.  2010.  Pengaruh  Ekstrak  Metanol  Kulit Kayu  Durian    ( Durio  zibethinus Murr) pada  Strukstur  Mikroanatomi  Ovarium dan  Uterus  Mencit  ( Mus  musculus L.) Betina. Jurnal Sains dan Terapan Kimia 4(1).
Schatten,  H.  dan  G.M.  Constantinescu.  2007. Comparative Reproductive Biology. Blackwell Publishing, USA.
Setyowati, W.A.E., R.D.A. Sri, Ashadi, M. Bhakti dan H. Arif. 2015. Aktivitas Antifertilitas Kontrasepsi  dari  Kulit  Durian  ( Durio zibethinus
Murr) Varietas Petruk. Seminar Nasional Kimia dan Pendidikan Kimia VII.
Sitasiwi,  A.J.  2008.Hubungan  Kadar  Hormon Estradiol  17-β  dan  Tebal  Endometrium Uterus  Mencit  ( Mus  musculus )  selama Satu  Siklus  Estrus. Buletin  Anatomi
Fisiologi XVI (2): 38-45. Suryawanshi, J.A.S. 2011. Neem-Natural Contraceptive  for  Male  and  Female-  an Overvier. Int.  Journal  Biomol  dan Biomed 1: 1-6.