## PAPER NAME
CRP 2263-8619-1-5-20231215 Ghani A

## M indonesia.docx

## AUTHOR

## Hery Ansory

## WORD COUNT
6147 Words CHARACTER COUNT 35900 Characters

## PAGE COUNT
15 Pages FILE SIZE 225.2KB SUBMISSION DATE Dec 25, 2023 6:56 AM GMT+7

## REPORT DATE
Dec 25, 2023 6:57 AM GMT+7

## 8% Overall Similarity
The combined total of all matches, including overlapping sources, for each database.
8% Internet database 2% Publications database Crossref database Crossref Posted Content database

## Excluded from Similarity Report
Submitted Works database Bibliographic material Quoted material Cited material Small Matches (Less then 10 words) Manually excluded text blocks
Corresponding Author: Hery Muhamad Ansory Faculty of Pharmacy, Universitas Setia Budi Surakarta Jl. Letjen Sutoyo, Mojosongo, Kec. Jebres, Kota Surakarta, Jawa Tengah 57127 email: hery.ansory89@setiabudi.ac.id ; hery.ansory89@gmail.com
This is an open-access article under the CC BY-SA license.
Journal homepage: http://jfi.setiabudi.ac.id

## Toksisitas Akut Minyak Atsiri Biji Pala pada Mencit Jantan Acute Toxicity of Nutmeg Essential Oil on Male Mice
Ghani Abhi Majid 1 , Yane Dila Keswara 2 , Hery Muhamad Ansory 2*
1 Department of Pharmacy, Faculty of Pharmacy, Universitas Setia Budi Surakarta, Surakarta, Indonesia
2 Faculty of Pharmacy, Universitas Setia Budi Surakarta, Surakarta, Indonesia
Article Info ABSTRAK (10 PT) Article history: Received    10 03, 2023 Revised       11 19, 2023 Accepted   11 25, 2023 Minyak  atsiri  biji  pala,  dengan  berbagai  aktivitasnya,  mendorong  perlunya pemahaman terhadap tingkat toksisitasnya agar penggunaan minyak atsiri biji pala dapat dilakukan dengan aman dan efektif. Pada penelitian ini, minyak atsiri pala diisolasi dengan metode distilasi dari biji pala, kemudian kandungan kimia dalam  minyak  atsiri  pala  dianalisis  dengan  GC-Ms.  Uji  toksisitas  akut  pada penelitian  ini  menggunakan  metode  fixed  dose  (dosis  5,  50,  300,  2000,  dan 5000  mg/KgBB  mencit).  Parameter  pengamatan  hewan  uji  meliputi  gejala toksik,  berat  badan,  serta  makropatologi  organ.  Hasil  menunjukkan  minyak pala memiliki kandungan kimia pinen (23,90%) dan Sabinen (21,49%), β-pinen (14,79%),  dan  Miristisin  (9,69%).  Minyak  atsiri  pala  memiliki  LD 50 yang melebihi dosis 5000 mg/kgBB, menunjukkan ketidaktoksikan praktis. Namun, gejala  toksisitas  dan  kerusakan  organ  lambung  dan  hati  pada  dosis  5000 mg/KgBB menunjukkan adanya efek toksik minyak atsiri biji pala pada mencit.
Penelitian  ini  memberikan  pandangan  lebih  mendalam  terkait  batas  dosis aman dan perlu kewaspadaan ekstra terkait penggunaan minyak atsiri biji pala pada tingkat dosis tinggi. Kata kunci Minyak atsiri biji pala Toksisitas akut
Mencit putih Dosis aman

## Keywords:
Nutmeg essential oil Acute toxicity White mice Safe dosage

## ABSTRACT (10 PT)
The  essential oil  of  nutmeg  seeds,  with  its diverse activities,  emphasizes  the need for an understanding of its toxicity level to ensure the safe and effective use of nutmeg essential oil. In this study, nutmeg essential oil was isolated from nutmeg  seeds  using  the  distillation  method,  and  the  chemical  content  in  the essential  oil  was  analyzed  with  GC-Ms.  Acute  toxicity  testing  in  this  study utilized the fixed dose method (5, 50, 300, 2000, and 5000 mg/kgBW in mice). Parameters observed in the test animals included toxic symptoms, body weight, and  organ  macro-pathology.  The  results  showed  that  nutmeg  oil  contains chemical compounds such as pinene (23.90%), sabinene (21.49%), β-pinene (14.79%), and myristicin (9.69%). Nutmeg essential oil has an LD 50 exceeding the  5000  mg/kgBW  dose,  indicating  practical  non-toxicity.  However,  toxic symptoms  and  damage  to  the  stomach  and  liver  organs  at  the  dose  of  5000 mg/kgBW  indicate  the  toxic  effects  of  nutmeg  essential  oil  in  mice.  This research provides a deeper insight into the safe dosage limits and emphasizes the  need  for  extra  caution  regarding  the  use  of  nutmeg  essential  oil  at  high dosage levels.
1
3

## 1. PENDAHULUAN (12 pt)
Minyak  atsiri  pala,  yang  telah  diakui  memiliki  sejumlah  aktivitas  seperti antidepresan, antibakteri, pengobatan rematik, sakit perut, masuk angin, dan insomnia [1]–[3],  merupakan  bahan  yang  telah  dikenal  sejak  lama  untuk  berbagai  manfaat kesehatannya  [4],  [5].  Meskipun  begitu,  beberapa  penelitian  menyoroti  potensi toksisitasnya, terutama dalam dosis yang tinggi [6]. Dilaporkan bahwa satu sampai tiga buah pala atau 5-30 gram pala dapat menginduksi efek psikogenik, dan dosis minimal 5 gram pala bubuk dianggap sebagai dosis toksik. Bahkan, stimulasi otak yang ringan dapat terjadi dengan konsumsi 400 mg miristisin, setara dengan 15 gram bubuk pala [1], [7]. Meskipun  dalam  dosis  tertentu  miristisin  dapat  memberikan  "stimulasi  otak  ringan", namun  adanya  dosis  toksik  dan  bahkan  kasus  keracunan  menunjukkan  pentingnya memahami  dan  menilai  tingkat  toksisitas  dari  minyak  atsiri  biji  pala.  Oleh  karena  itu, penelitian ini diarahkan untuk mengetahui profil toksisitas akut minyak atsiri biji pala pada mencit, dengan tujuan untuk memberikan wawasan lebih mendalam terkait batas dosis aman dalam penggunaan minyak atsiri biji pala pada tingkat dosis tinggi.
Pala (Myristica fragrans), buah asli Indonesia, memiliki tiga bagian utama: daging buah pala, fuli pala (selaput biji), dan biji pala. Minyak atsiri dapat diisolasi dari ketiga bagian tersebut dan menghasilkan minyak dengan kadar senyawa kimia yang bervariasi [3], [8]–[10]. Minyak atsiri pala terdiri dari hidrokarbon terpen, seperti α-pinen, Sabinen, β-pinen,  Limonen,  dan  Terpineol-4,  sebagai  senyawa  dengan  presentase  yang  cukup tinggi. Senyawa lain berupa turunan fenilpropanoid, seperti Miristisin, Safrol, elemisin, eugenol, juga terkandung dalam jumlah tertentu [4], [11]–[14].
Saat menggunakan produk herbal, pemahaman terhadap tingkat keamanannya menjadi hal penting guna mencegah kemungkinan efek berbahaya yang tidak diinginkan. Namun, saat ini, data yang mendukung klaim keamanan terkait kandungan minyak atsiri biji pala masih terbatas. Hanya nilai LC 50 yang telah diukur dari hasil uji toksisitas minyak atsiri pala menggunakan metode BSLT, yaitu sebesar 177,072 ppm [15]. Oleh karena itu, untuk menjamin keamanan penggunaannya, diperlukan pengujian tambahan pada hewan laboratorium  guna  menilai  potensi  efek  toksik  yang  mungkin  timbul.  Hasil  penelitian diharapkan  dapat  memberikan  pemahaman  mengenai  LD 50 ,  menentukan  dosis  yang aman  dalam  formulasi  minyak  pala,  dan  mengidentifikasi  gejala  toksik  yang  mungkin muncul.

## 2. METODE ALAT DAN BAHAN
Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah satu set destilasi uap, GC-Ms-QP2010S SHIMADZU, kandang mencit ukuran P 37 cm x L 28 cm x T 13 cm. Bahan sampel yang digunakan adalah biji pala (Myristica fragrans H.) dari Bogor, Jawa Barat, mencit putih jantan dengan usia 30-120 hari dan berat badan 20-30 gram, CMC 0,5% sebagai kontrol negatif dan pelarut aquadest CARA KERJA

## Isolasi Minyak Atsiri Pala
Isolasi minyak atsiri dilakukan dengan cara destilasi uap dari 5 Kg serbuk biji pala, hasil dianalisis meliputi uji organoleptis, identifikasi minyak atsiri, penetapan indeks bias, uji kelarutan etanol, dan uji GC-MS dengan kondisi analisis: suhu pada oven 80°C, suhu pada injector 200°C, suhu pada detector 230°C. Gas pembawa helium dengan kecepatan aliran 1 ml/menit. Waktu retensi 40 menit, dan mass range 40-400m/z.
1
5 8 13

## Uji Toksisitas Akut
Penelitian ini melibatkan penetapan dosis minyak atsiri biji pala dengan menggunakan metode  fixed  dose,  yaitu  pada  dosis  5,  50,  300,  2000,  dan  5000  mg/KgBB.  Sebelum administrasi  sediaan  uji,  mencit  menjalani  puasa  selama  3-4  jam  dengan  tetap  diberi akses minum. Setelah itu, mencit ditimbang untuk menentukan volume pemberian yang sesuai.  Pemberian  sediaan  uji  dilakukan  secara  oral  melalui  sonde  oral  dalam  dosis tunggal, dengan pengamatan individual selama 30 menit pertama, setiap 4 jam dalam 24 jam  awal,  dan  sekali  sehari  selama  14  hari  berikutnya.  Durasi  pengamatan  dapat disesuaikan  berdasarkan  respons  toksik  dan  waktu  onset  serta  durasi  penyembuhan. Pencatatan sistematis dilakukan terhadap waktu timbul atau hilangnya gejala toksisitas, termasuk gejala yang mungkin tertunda. Pengamatan tambahan diterapkan jika mencit menunjukkan  gejala  toksik  secara  berkelanjutan.  Pada  akhir  penelitian,  mencit  yang masih  hidup  ditimbang  dan  kemudian  dikorbankan.  Pengamatan  makropatologi dilakukan  pada  organ-organ  utama,  termasuk  lambung,  paru-paru,  jantung,  hati,  dan ginjal.  Perbandingan  indeks  organ,  dihitung  sebagai  persentase  dari  bobot  badan, dilakukan  untuk  setiap  kelompok.  Indeks  organ  kelompok  yang  menerima  sediaan  uji dibandingkan  dengan  kelompok  plasebo.  Organ-organ  seperti  lambung,  paru-paru, jantung,  hati,  dan  ginjal  diamati  secara  makropatologi  dan  dibandingkan  dengan kelompok placebo.

## 3. HASIL Isolasi Minyak Atsiri Biji Pala
Hasil isolasi dari 5 kg biji pala didapatkan minyak atsiri biji pala sebanyak 61 mL dengan rendemen minyak atsiri 1,22 %. Minyak dianalisis organoleptis dan sifat fisika. Hasil seperti yang disajikan dalam Tabel 1.
Tabel 1. Hasil analisis organoleptis dan sifat fisika minyak atsiri biji pala
Organoleptis Hasil analisis sampel SNI 06-2388 2006 Bentuk Cair Cair Rasa Pedas - Warna Bening kekuningan Tidak berwarna-kuning pucat Bau Khas minyak pala Khas minyak pala Indeks bias 1,4781 1,470 – 1,497 Bobot jenis 0,8964 0,880 – 0,910 kelarutan dalam etanol 1:3 1:3
Minyak  hasil  isolasi  dianalisis  kandungan  kimia  dengan  Kromatogrfi  gas spektrometri massa, dan didapatkan hasil kromatogram GC seperti pada Gambar 1 dan hasil analisis MS kandungan senyawa pada Tabel 2.
Gambar 1. Hasil kromatogram GC minyak atsiri pala hasil isolasi
1 1 4 6 9 12
Tabel 2. Kandungan senyawa pada minyak atsiri biji pala berdasarkan hasil GC-Ms. No. R. Time (menit) Kandungan Senyawa % Area senyawa 1 10,283 α-pinen 1,31 2 10,640 α-pinen 23,90 3 11,205 Champen 0,40 4 12,170 Sabinen 21,49 5 12,356 ꞵ -pinen 14,79 6 12,728 ꞵ -Mirsen 2,38 7 13,370 α-Phellandren 0,59 8 13,454 α-3-Caren 2,03 9 13,770 α-4-Caren 1,88 10 14,061 1-metil-4-(1-metiletil)-benzena 1,21 11 14,250 Limonen 5,75 12 15,296 γ-Terpinen 2,80 13 15,729 Trans-Sabinenhidrat 0,23 14 16,261 Terpinolen 1,21 15 16,747 Linalool 0,38 16 16,824 Cis-Sabinenhidrat 0,14 17 17,645 Trans-Pinenhidrat 0,16 18 18,256 Isobornilasetat 0,15 19 19,584 Terpineol-4 4,36 20 19,736 Phenilaseton 0,09 21 20,027 α-Terpineol 0,91 22 22,818 Bornil asetat 0,12 23 23,008 Safrol 1,53 24 23,341 p-Pentilanisol 0,11 25 24,630 Mircenilasetat 0,32 26 24,781 Eugenol 0,28 27 25,453 Geranilasetat 0,31 28 25,561 α-Cubeben 0,33 29 26,099 Metil Eugenol 0,34 30 27,481 Eugenol 0,22 31 28,729 Anisilaseton 0,09 32 29,547 Miristisin 9,69 33 30,021 Elemicin 0,29 34 31,295 3,5-Dodecadin, 2-metil- 0,21

## Hasil Uji Toksisitas Akut
Tabel 3 memuat data persentase kematian hewan uji pada berbagai dosis minyak atsiri  biji  pala.  Analisis  kematian  hewan  uji  memberikan  gambaran  yang  jelas  tentang respons toksik dan tingkat keamanan pada masing-masing dosis yang diujikan.
Tabel 3. Persentase kematian hewan uji
No Kelompok Dosis (mg/KgBB)  Jumlah hewan mati  % kematian 1 Kelompok plasebo CMC 0,5% 0 0 2 Dosis I 5 0 0 3 Dosis II 50 0 0 4 Dosis III 300 0 0 5 Dosis IV 2000 0 0 6 Dosis V 5000 1 20
Informasi mengenai hasil pengamatan gejala toksik berupa "grooming" pada hewan uji tersaji pada Tabel 4, data ini memberikan pemahaman yang tingkat keparahan dan frekuensi perilaku "grooming" pada berbagai dosis minyak atsiri biji pala.
Tabel 4. Hasil pengamatan gejala toksik grooming pada hewan uji Kelompok Dosis Jumlah mencit yang mengalami grooming Jam ke-0 Jam ke-0,5 Jam ke-1 Jam ke-2 Jam ke-4 Jam ke-6 Jam ke-24 Kelompok plasebo (CMC 0,5%) 0 0 0 0 0 0 0 Dosis I (5 mg/KgBB) 0 0 2 1 0 0 0 Dosis II (50 mg/KgBB) 0 1 2 2 1 1 0 Dosis III (300 mg/KgBB) 0 0 1 2 2 0 1 Dosis IV (2000 mg/KgBB) 0 1 4 3 0 1 1 Dosis V (5000 mg/KgBB) 0 2 4 3 1 0 1
Tabel 5 menyajikan hasil pengamatan gejala toksik berupa perubahan piloereksi pada hewan uji selama periode penelitian.
Tabel 5. Hasil pengamatan gejala toksik perubahan piloereksi pada hewan uji Kelompok Dosis Jumlah mencit yang mengalami piloereksi Jam ke-0 Jam ke-0,5 Jam ke-1 Jam ke-2 Jam ke-4 Jam ke-6 Jam ke-24 Kelompok plasebo (CMC 0,5%) 0 0 0 0 0 0 0 Dosis I (5 mg/KgBB) 0 0 0 0 0 0 0 Dosis II (50 mg/KgBB) 0 0 0 0 0 0 0 Dosis III (300 mg/KgBB) 0 0 0 0 0 0 0 Dosis IV (2000 mg/KgBB) 0 0 0 0 0 0 0 Dosis V (5000 mg/KgBB) 0 2 2 1 0 0 0
Tabel 6 menyajikan hasil pengamatan gejala toksik berupa perubahan tremor pada hewan uji selama periode penelitian.
Tabel 6. Hasil pengamatan gejala toksik tremor pada hewan uji Kelompok Dosis Jumlah mencit yang mengalami tremor Jam ke-0 Jam ke-0,5 Jam ke-1 Jam ke-2 Jam ke-4 Jam ke-6 Jam ke-24 Kelompok plasebo (CMC 0,5%) 0 0 0 0 0 0 0 Dosis I (5 mg/KgBB) 0 0 0 0 0 0 0 Dosis II (50 mg/KgBB) 0 0 0 0 0 0 0 Dosis III (300 mg/KgBB) 0 0 0 1 1 0 0 Dosis IV (2000 mg/KgBB) 0 0 0 0 2 0 0 Dosis V (5000 mg/KgBB) 0 0 2 1 1 0 1
Tabel 7 menyajikan hasil pengamatan gejala toksik berupa  bernafas pendek dan tersendat pada hewan uji selama periode penelitian.
Tabel 7. Hasil pengamatan gejala toksik bernafas pendek dan tersendat pada hewan uji Kelompok Dosis Jumlah mencit yang bernafas pendek dan tersendat Jam ke-0 Jam ke-0,5 Jam ke-1 Jam ke-2 Jam ke-4 Jam ke-6 Jam ke-24 Kelompok plasebo (CMC 0,5%) 0 0 0 0 0 0 0 Dosis I (5 mg/KgBB) 0 0 0 0 0 0 0 Dosis II (50 mg/KgBB) 0 0 0 0 0 0 0 Dosis III (300 mg/KgBB) 0 0 0 0 0 0 0 Dosis IV (2000 mg/KgBB) 0 0 1 0 0 0 0 Dosis V (5000 mg/KgBB) 0 1 2 2 0 0 0
Tabel  8  menyajikan  hasil  pengamatan  gejala  toksik  berupa  ptosis,  penurunan kelopak mata atas, sehingga tampaknya mata bagian atas atau kelopak mata terlihat lebih rendah dari biasanya, pada hewan uji selama periode penelitian.
1
Tabel 8. Hasil pengamatan gejala toksik ptosis pada hewan uji.
Kelompok Dosis Jumlah mencit yang gejala ptosis Jam ke-0 Jam ke-0,5 Jam ke-1 Jam ke-2 Jam ke-4 Jam ke-6 Jam ke-24 Kelompok plasebo (CMC 0,5%) 0 0 0 0 0 0 0 Dosis I (5 mg/KgBB) 0 0 0 0 0 0 0 Dosis II (50 mg/KgBB) 0 0 0 0 0 0 0 Dosis III (300 mg/KgBB) 0 0 1 0 0 0 0 Dosis IV (2000 mg/KgBB) 0 1 2 1 0 0 0 Dosis V (5000 mg/KgBB) 0 0 3 3 1 0 0
Tabel 9 menyajikan hasil pengamatan gejala toksik berupa diare pada hewan uji selama periode penelitian.
Tabel 9. Hasil pengamatan gejala toksik diare pada hewan uji.
Kelompok Dosis Jumlah mencit yang gejala diare Jam ke-0 Jam ke-0,5 Jam ke-1 Jam ke-2 Jam ke-4 Jam ke-6 Jam ke-24 Kelompok plasebo (CMC 0,5%) 0 0 0 0 0 0 0 Dosis I (5 mg/KgBB) 0 0 0 0 0 0 0 Dosis II (50 mg/KgBB) 0 0 0 0 0 0 0 Dosis III (300 mg/KgBB) 0 0 0 0 0 0 0 Dosis IV (2000 mg/KgBB) 0 0 0 0 0 0 0 Dosis V (5000 mg/KgBB) 0 1 2 1 0 0 0
Hasil pengukuran berat badan mencit pada hari ke 1, 7, dan 14 sebagai parameter penting  dalam  evaluasi  dampak  pemberian  sediaan  uji  disajikan  dalam  Tabel  9.  Data tersebut  memberikan  gambaran  perkembangan  berat  badan  mencit  selama  periode pengamatan yang dapat menjadi indikator respons terhadap perlakuan yang diberikan. Tabel 9. Hasil pengukuran berat badan mencit hari ke 1, 7 dan 14.
Kelompok Dosis Berat badan mencit (g) hari ke- 1 7 14 Kelompok placebo (CMC 0,5%) 21.40±1.341 28.80±1.303 33.40±1.140 Dosis 5 mg/KgBB 24.80±2.167 32.20±1.788 35.40±1.341 Dosis 50 mg/KgBB 21.60±1.140 30.60±2.302 35.60±2.408 Dosis 300 mg/KgBB 21.60±1.140 27.60±2.509 32.40±1.516 Dosis 2000 mg/KgBB 22.60±1.949 26.60±3.286 30.00±2.549 Dosis 5000 mg/KgBB 23.60±1.140 26.25±3.095 31.00±3.162
Dalam  Tabel  10  disajikan  hasil  pengukuran  bobot  organ  mencit  sebagai  bagian integral  dari  analisis  efek  sediaan  uji  terhadap  organ  tubuh.  Data  ini  memberikan gambaran  tentang  potensi  dampak  perlakuan  terhadap  organ-organ  utama  mencit, termasuk lambung, paru-paru, jantung, hati, dan ginjal.
Tabel 10. Hasil pengukuran bobot organ mencit
Rata-rata bobot organ (mgram) ± SD (n=5) Kelompok dosis Lambung Paru-paru Jantung Hati Ginjal Kelompok plasebo (CMC 0,5%) 20.0±1.0 6.0±0.0 4.0±0.0 55.0±10.0 13.0±0.0 Dosis I (5mg/KgBB) 23.0±1.0 5.0±0.0 4.0±0.0 47.0±10.0 13.0±0.0 Dosis II (50mg/KgBB) 31.0±1.0 6.0±0.0 4.0±0.0 61.0±10.0 13.0±0.0 Dosis III (300mg/KgBB) 24.0±0.0 6.0±0.0 4.0±0.0 53.0±10.0 12.0±0.0 Dosis IV (2000mg/KgBB) 20.0±0.0 6.0±0.0 4.0±0.0 39.0±0.0 9.0±0.0 Dosis V (5000mg/KgBB) 42.0±2.0 5.0±0.0 4.0±0.0 43.0±10.0 11.0±0.0
Dalam Tabel 11, terdapat data hasil pengukuran indeks organ pada mencit yang telah  diberikan  sediaan  uji.  Indeks  organ  mencit  ini  dihitung  dengan  membandingkan bobot organ (lambung, paru-paru, jantung, hati, dan ginjal) dengan bobot badan mencit. Pengukuran indeks organ ini memberikan informasi tentang potensi dampak sediaan uji terhadap organ-organ vital mencit,
Tabel 11. Hasil pengukuran indeks organ mencit.
Kelompok Indeks organ (%) Lambung Paru-paru Jantung Hati Ginjal Kelompok plasebo (CMC) 2.01±0.61 0.57±0.07 0.43±0.05 5.61±0.54 1.29±0.18 Dosis 5 mg/KgBB 2.28±0.61 0.52±0.04 0.43±0.06 4.71±1.17 1.31±0.11 Dosis 50 mg/KgBB 3.07±0.55 0.59±0.04 0.42±0.06 6.06±0.65 1.30±0.14 Dosis 300 mg/KgBB 2.44±0.47 0.59±0.04 0.45±0.06 5.29±1.08 1.21±0.17 Dosis 2000 mg/KgBB 2.04±0.46 0.56±0.14 0.42±0.03 3.88±0.44 0.94±0.15 Dosis 5000 mg/KgBB 4.22±1.77 0.51±0.06 0.40±0.06 4.28±1.04 1.07±0.17

## 4. PEMBAHASAN Isolasi Minyak Atsiri Biji Pala
Hasil isolasi 5 kg biji pala menghasilkan minyak atsiri sebanyak 61 mL, dengan tingkat rendemen mencapai 1,22%. Hasil ini memperlihatkan perbedaan yang menarik jika  dibandingkan  dengan  penelitian  sebelumnya,  isolasi  minyak  atsiri  pala  pada penelitian sebelumnya memiliki rendemen minyak atsiri sebesar 2% [6] dan 3,56% [14]. Perbedaan  tersebut  dapat  disebabkan  oleh  berbagai  faktor  seperti  jenis  tanaman  pala yang digunakan dan metode pengeringan bahan baku [9], [10]. Selain faktor tadi, kualitas dan  kuantitas  isolasi  minyak  atsiri  pala  dapat  dipengaruhi  oleh  variabel  seperti  lokasi penanaman  tanaman,  umur  panen  buah  pala,  dan  teknik  penyulingan  [16].  Selain pengaruh  diatas,  pada  penelitian  lain  mengatakan  bahwa  cara  pengeringan  dapat mempengaruhi hasil rendemen dan mutu minyak atsiri [8]. Perbandingan ini menambah kompleksitas dalam pemahaman tentang variabilitas hasil isolasi minyak atsiri biji pala, dan menunjukkan bahwa faktor-faktor seperti jumlah bahan baku dan metode isolasi juga berpotensi memengaruhi rendemen minyak atsiri. Dengan demikian, hasil penelitian ini memberikan  kontribusi  penting  dalam  melengkapi  pemahaman  kita  terhadap  faktor- faktor yang dapat mempengaruhi produksi dan kualitas minyak atsiri pala.
Dalam  memeriksa  kesesuaian  minyak  atsiri  biji  pala  dengan  Standar  Nasional Indonesia  (SNI)  06-2388  tahun  2006,  dilakukan  analisis  berdasarkan  beberapa parameter organoleptis dan fisik yang telah ditetapkan. Hasil analisis tersebut dicocokkan dengan nilai standar yang tercantum, Tabel 1. Dari segi organoleptis, minyak atsiri biji pala  memenuhi  SNI  06-2388  tahun  2006.  Bentuk  cair,  rasa  pedas  yang  sesuai  dengan karakteristik  minyak  pala,  warna  bening  kekuningan  yang  tidak  melampaui  batas berwarna-kuning  pucat,  dan  bau  khas  minyak  pala  menunjukkan  kesesuaian  dengan standar.  Selanjutnya,  hasil  analisis  fisik  juga  menunjukkan  kesesuaian  dengan  standar yang telah ditetapkan dengan nilai indeks bias, bobot jenis, dan kelarutan dalam etanol yang berada dalam rentang nilai standar, dapat disimpulkan bahwa minyak atsiri biji pala juga memenuhi persyaratan fisik sesuai dengan SNI. Oleh karena itu, dari hasil analisis organoleptis  dan  fisik,  dapat  diambil  kesimpulan  bahwa  minyak  atsiri  biji  pala  yang digunakan dalam penelitian ini sepenuhnya sesuai dengan standar SNI 06-2388 tahun 2006.  Kesesuaian  ini  menandakan  kualitas  dan  kemurnian  minyak  atsiri  yang  dapat diandalkan untuk keperluan penelitian.
10
Hasil  pengamatan  identifikasi  minyak  atsiri  menunjukkan  bahwa  uji  tetes  pada permukaan air memberikan hasil yang sesuai dengan karakteristik minyak atsiri, yaitu menyebar dan tidak membuat air menjadi keruh [18]. Pemeriksaan uji tetes minyak atsiri pada kertas saring memiliki tujuan untuk mengidentifikasi apakah ada noda lemak yang tertinggal saat minyak atsiri menguap sempurna. Hasil dari uji tetes minyak atsiri di atas kertas  saring  menunjukkan  bahwa  minyak  menguap  tanpa  meninggalkan  bercak  yang tertinggal. Oleh karena itu, kesimpulan yang dapat diambil dari uji identifikasi minyak atsiri  biji  pala  adalah  bahwa  sampel  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  merupakan minyak  atsiri  biji  pala  yang  murni  dan  tidak  mengandung  zat-zat  lain  yang  dapat meninggalkan noda atau kotoran pada permukaan uji.
Berdasarkan hasil analisis kandungan kimia dalam minyak atsiri pala hasil isolasi menggunakan metode GC-Ms, sejumlah senyawa telah diidentifikasi. Dominasi α-pinen (23,90%)  dan  Sabinen  (21,49%)  mencerminkan  kontribusi  signifikan  dari  komponen- komponen ini dalam profil kimia minyak atsiri pala. Selain itu, ditemukan pula β-pinen (14,79%),  Limonen  (5,75%),  dan  Terpineol-4  (4,36%)  sebagai  senyawa  dengan presentase  yang  cukup  tinggi.  Senyawa  lainnya  adalah  Miristisin  (9,69%),  α-Terpineol (0,91%), dan Safrol (1,53%).
Penting  untuk  menyoroti  kandungan  miristisin  dalam  minyak  atsiri  pala,  yang merupakan senyawa khas dan memberikan kontribusi penting pada karakteristik minyak tersebut.  Pada  penelitian  sebelumnya  minyak  atsiri  biji  pala  yang  didapatkan  dengan metode distilasi menunjukkan kandungan miristisin sebesar 30,82% [14], menegaskan bahwa bahan yang digunakan sangat menuntukan komposisi dari minyak atsiri pala yang didapatkan, juga menunjukan peran dominan senyawa ini dalam profil kimia minyak pala yang diisolasi. Perbandingan dengan penelitian lainnya menambah dimensi pemahaman, di  mana  hasil  isolasi  dari  berbagai  bagian  pala,  seperti  daging  buah,  fuli,  dan  biji, menghasilkan  kadar  miristisin  yang  bervariasi.  Distilasi  uap  dari  daging  buah  pala menghasilkan 0,75% dengan kadar miristisin 10,54%, fuli pala memiliki kadar miristisin tertinggi yaitu 38,45% dengan 4,77%, sementara biji pala mengandung 6,62% miristisin dengan kadar 9,24% [8]. Perbandingan ini menunjukkan variasi yang signifikan dalam kandungan miristisin antara berbagai bagian pala, dan hal ini dapat berpengaruh pada toksisitas dari minyak atsiri pala itu sendiri.

## Hasil Uji Toksisitas Akut
Tabel  3  menunjukkan  hasil  persentase  kematian  hewan  uji  pada  pengujian toksisitas akut dengan dosis tetap (fixed doses). Kelima kelompok, termasuk kelompok plasebo dengan CMC 0,5%, menunjukkan bahwa tidak ada kematian yang terjadi pada dosis  yang  diberikan.  Meskipun  pada  dosis  V  dengan  konsentrasi  5000  mg/KgBB, terdapat  satu  ekor  hewan  yang  mengalami  kematian  (20%).  Hal  tersebut  dapat disebabkan  konsentrasi  kandungan  kimia  dari  minyak  atsiri  biji  pala  tidak  mencapai kadar yang menyebabkan toksisitas akut. Kematian hewan uji diduga disebabkan oleh faktor  fisiologis,  terutama  gagal  pernafasan  yang  terkonfirmasi  dengan  mengecilnya organ  paru-paru  dilihat  secara  makropatologi.  Menurut  penelitian  lain  yang  mengkaji mengenai  toksisitas,  selain  karena  pemberian  senyawa  yang  bersifat  toksik,  kematian hewan  uji  dapat  disebabkan  oleh  faktor  fisiologis  dan  stres  yang  dapat  menurunkan sistem imun tubuh [19]. Oleh karena itu, untuk penentuan toksisitas akut, penggunaan nilai LD 50 tidak dapat dihitung, sehingga LD 50 dinyatakan sebagai LD 50 semu, yaitu nilai dosis tertinggi yang diberikan pada hewan uji tidak dapat menimbulkan kematian di atas 1
2 4

## 50% hewan uji. Jadi, nilai LD
50 sediaan tunggal minyak atsiri biji pala untuk hewan uji mencit  adalah  lebih  dari  5000  mg/kg  BB  dan  termasuk  kategori  praktis  tidak  toksik, mengacu pada tabel kategori toksisitas [18]. Selain dapat terlihat dari kematian, tingkat toksisitas  juga  dapat  dinilai  melalui  adanya  gejala-gejala  seperti  grooming,  piloereksi, tremor,  bernafas  pendek  dan  tersendat,  ptosis,  diare,  perubahan  berat  badan  mencit, bobot organ mencit, dan indeks organ.
Perubahan  perilaku,  dievaluasi  melalui  tindakan  grooming,  menggambarkan kecenderungan  mencit  untuk  menjilati  sebagian  tubuhnya,  terutama  wajah,  yang mungkin  dipicu  oleh  depresi  dalam  sistem  saraf  pusat  [20].  Data  observasi  grooming mencit selama periode pengamatan, tercetak dalam Tabel 4, menunjukkan respons yang bervariasi  tergantung  pada  dosis  dan  waktu.  Kelompok  plasebo  tidak  menunjukkan kebiasaan grooming, sedangkan dosis I menunjukkan peningkatan pada jam ke-1 dan ke- 2. Dosis II hingga dosis V menunjukkan kecenderungan peningkatan grooming pada jam ke-1 hingga ke-4, diikuti oleh penurunan pada jam ke-6 dan ke-24. Dosis IV mencapai lonjakan signifikan pada jam ke-2 dan ke-4, dengan penurunan selanjutnya. Peningkatan frekuensi  grooming  mencit  dapat  dianggap  sebagai  indikator  peningkatan  sensitivitas terhadap rasa nyeri [21]. Selain itu, tindakan grooming dapat disebabkan oleh adaptasi mencit  terhadap  bahan  uji  yang  masuk  ke  dalam  tubuh  [21],  [22].  Dari  data  Tabel  4 terlihat bahwa dosis minyak atsiri biji pala memengaruhi jumlah mencit yang melakukan grooming.  Secara  umum,  dosis  yang  lebih  tinggi  cenderung  meningkatkan  frekuensi grooming,  menunjukkan  respons  yang  proporsional  terhadap  dosis.  Ini  menandakan sensitivitas mencit terhadap minyak atsiri biji pala dan dapat digunakan sebagai pedoman dalam mengevaluasi dampak dosis terhadap perilaku mencit dalam konteks toksisitas. Selanjutnya,  analisis  lebih  lanjut  diperlukan  untuk  memahami  pola  waktu  grooming dengan  lebih  mendalam  dan  implikasinya  terhadap  respons  mencit  terhadap  minyak atsiri pala.
1
14
Gambar 1. Jumlah mencit yang mengalami gejala toksik.
Pengamatan  mencakup  evaluasi  piloereksi  setelah  pemberian  sediaan  uji  pada hewan  uji.  Piloereksi  merujuk  pada  tegaknya  bulu  pada  bagian  tubuh  mencit,  yang disebabkan oleh reaksi sensitivitas terhadap sentuhan. Piloereksi dikendalikan oleh saraf simpatis,  khususnya  oleh  arrector  pili  muscle  (APM),  yang  berperan  sebagai  regulator suhu [23]. Tabel 5 menunjukkan bahwa piloereksi tidak terjadi pada dosis I hingga dosis IV.  Namun,  pada  dosis  V,  pada  jam  ke-0,5,  jam  ke-1,  dan  jam  ke-2  dengan  dosis  5000 mg/KgBB,  terjadi  piloereksi,  menunjukkan  kurangnya  aktivitas  simpatomimetik  dari sediaan yang diberikan. Sistem saraf otonom merupakan bagian dari sistem saraf motorik yang  aktivitasnya  tidak  dikontrol  secara  langsung  oleh  kesadaran.  Salah  satu  jenis neurotransmitter  yang  berperan  dalam  sistem  saraf  otonom  adalah  asetilkolin,  yang disintesis  dan  dilepaskan  oleh  saraf  kolinergik  [24].  Dosis  dan  efek  berlebih  pada antikolinergik  dapat  mengakibatkan  keracunan  antikolinergik  atau  sindrom antikolinergik,  termasuk  midriasis  pada  mata  dan  kekeringan  membran  mukosa  pada kulit  [25].  Namun,  pada  uji  toksisitas  akut  yang  dilakukan,  tidak  terjadi  pada  hampir semua kelompok dosis.
Gejala toksik berupa tremor diamati pada mencit saat dalam keadaan diam atau bergerak,  ditandai  dengan  getaran  pada  salah  satu  bagian  tubuh.  Tremor  dapat disebabkan  oleh  efek  toksik  sediaan  uji  yang  mengganggu  sistem  saraf  pusat  dalam mengendalikan kontraksi otot, menyebabkan getaran pada otot [23], [26], [27]. Analisis data pada Tabel 6 menunjukkan bahwa tremor tidak terjadi pada semua kelompok dosis, dengan gejala pertama kali muncul pada jam ke-1 pada kelompok dosis V. Pada jam ke-2, kelompok dosis III dan V menunjukkan tremor, sedangkan kelompok dosis IV pada jam ke-4. Kelompok dosis V menunjukkan tremor pada jam ke-24. Meskipun gejala tremor teramati  pada  hampir  semua  kelompok  dosis,  namun  tidak  ada  peningkatan  atau
0 1 2 3 4 5 groom in g pilo erek si trem or pto sis diare gro om ing pilo erek si tremor pto sis diare gro om ing pilo erek si trem or pto sis diare gro om ing pilo erek si trem or pto sis diare gro om ing pilo erek si trem or pto sis diare gro om ing pilo erek si trem or pto sis diare gro om ing pilo erek si trem or pto sis diare 0 0.5 1 2 4 6 24 JUMLAH M ENCI T GEJALA TOKSIK WAKTU PENGAMATAN (JAM) Kelompok plasebo (CMC 0,5%)
Dosis I (5 mg/KgBB) Dosis II (50 mg/KgBB)
Dosis III (300 mg/KgBB)
Dosis IV (2000 mg/KgBB)
Dosis V (5000 mg/KgBB) 1 1 1 1 1 2 2
penurunan yang signifikan. Oleh karena itu, dapat disimpulkan bahwa minyak atsiri biji pala tidak menunjukkan gejala tremor yang berarti pada tingkat dosis yang diuji.
Pengamatan  gejala  toksik  mencakup  kondisi  breathless,  yang  ditandai  oleh bernafas  pendek  dan  tersendat.  Gangguan  pernafasan  menciptakan  hambatan  dalam fungsi  paru-paru,  memengaruhi  kemampuan  bernafas  hewan  uji  [28],  [29].  Data  pada Tabel  7  menunjukkan  bahwa  perubahan  pernafasan,  seperti  bernafas  pendek  dan tersendat, tidak terjadi dalam pengamatan 24 jam setelah pemberian sediaan uji. Hasil pengamatan perubahan pernafasan tidak diamati pada seluruh kelompok mencit, kecuali pada dosis 2000 mg/KgBB dan 5000 mg/KgBB, di mana kondisi breathless dapat terjadi, mungkin disebabkan oleh faktor fisiologis pada hewan uji.
Data  pada  Tabel  8  mengindikasikan  adanya  gejala  ptosis  pada  kelompok  dosis tertentu. Ptosis, yang ditandai dengan kelopak mata mencit yang terlihat menutup seperti sedang  mengantuk,  terjadi  pada kelompok  IV  30  menit  setelah pemberian  sediaan  uji. Sementara itu, kelompok III dan V menunjukkan gejala ptosis setelah 1 jam pemberian sediaan  uji.  Pada  jam ke-2,  hanya  kelompok  IV  dan V  yang  masih menunjukkan  gejala ptosis.  Pada  jam  ke-4,  hanya  kelompok  V  yang  mengalami  ptosis,  dan  hal  ini mungkin terkait  dengan  efek  sedatif  yang  berkaitan  dengan  analgetik.  Mekanisme  ptosis melibatkan penekanan transmisi simpatis retikular di otak dan perubahan permeabilitas membran sel, yang mengurangi rangsangan dan menyebabkan rasa kantuk [30].
Tabel  9  mencatat  bahwa  mencit  dengan  dosis  tertinggi,  yaitu  5000  mg/KgBB, mengalami perubahan gastrointestinal, di mana 2 ekor mencit menunjukkan gejala diare. Hal ini menandakan bahwa minyak atsiri biji pala pada dosis tersebut dapat menimbulkan efek  diare.  Minyak  pala  dikenal  memiliki  aktivitas  antibakteri  dengan  zona  hambat kategori  lemah  terhadap  bakteri  Escherichia  coli  [31]–[33].  Meskipun  sebagian  besar bakteri Escherichia coli berada dalam saluran pencernaan hewan dan manusia, mereka memiliki sifat patogen yang dapat menyebabkan diare [34].
Berdasarkan analisis data berat badan mencit dari Tabel 10. Pengujian Shapiro- Wilk  menunjukkan  bahwa  data  berdistribusi  normal  (p>0,05).  Selanjutnya,  uji  ANOVA dilakukan untuk mengevaluasi perbedaan berat badan mencit antara kelompok plasebo dan kelompok perlakuan yang menerima sediaan uji. Hasilnya menunjukkan bahwa tidak ada perbedaan signifikan dalam rata-rata berat badan mencit antara kelompok plasebo dan kelompok perlakuan dengan dosis 5 mg/kgBB dan 50 mg/kgBB. Pada hari ke-7 dan ke-14,  kelompok  dosis  300  mg/kgBB,  2000  mg/kgBB,  dan  5000  mg/kgBB  mengalami penurunan  berat  badan,  tetapi  tidak  signifikan.  Penurunan  berat  badan  mencit  dapat disebabkan oleh faktor seperti nafsu makan yang berkurang, pemberian pakan, dan stres [35]. Namun, berat badan mencit kembali naik pada hari-hari berikutnya, menunjukkan pemulihan  nafsu  makan  yang  normal.  Pada  pemeriksaan  indeks  organ  (jantung,  paru- paru,  lambung,  hati,  dan  ginjal),  uji  ANOVA  menunjukkan  bahwa  tidak  ada  perbedaan yang signifikan dalam bobot organ antara kelompok plasebo dan kelompok perlakuan. Analisis data organ juga menunjukkan distribusi normal (p>0,05). Kesimpulannya, tidak ada  perbedaan  signifikan  dalam  berat  badan  maupun  bobot  organ  mencit  antara kelompok plasebo dan kelompok perlakuan.
Indeks organ menjadi indikator penting dalam evaluasi efek toksik suatu bahan atau  sampel  uji  terhadap  organisme,  meskipun  tidak  dijadikan  standar  untuk  menilai kerusakan organ [19], [20]. Indeks organ memberikan gambaran umum apakah terjadi pembesaran atau penyusutan pada organ, dan perbandingan bobot organ dengan berat
1 3 5 6 7 11 15
badan  mencit  digunakan  untuk  mencari  indeks  organ  [20].  Data  pada  Tabel  15 menunjukkan rata-rata indeks organ untuk organ lambung, hati,  ginjal, paru-paru, dan jantung dari semua kelompok uji.
Dari  hasil  pengamatan,  terlihat  bahwa  kelompok  dosis  2000  mg/kgBB menunjukkan  berat  organ  paling  kecil  dibanding  kelompok  lain,  yang  mungkin disebabkan oleh penurunan berat badan pada kelompok ini. Pengujian statistik dengan uji  ANOVA  menunjukkan  perbedaan  yang  signifikan  (p>0,05),  dan  uji  Post  Hoc  Tukey mengidentifikasi  perbedaan  signifikan  pada  indeks  organ  lambung  dan  hati  pada  satu mencit  di  dosis  5000  mg/KgBB.  Hal  ini  mungkin  terkait  dengan  usia,  berat  badan, makanan, atau efek toksik pada lambung yang dapat menyebabkan tukak lambung [28], [29].
Meskipun  indeks  organ  hati  dosis  5000  mg/KgBB  tidak  jauh  berbeda  dengan kelompok plasebo, terlihat perbedaan dengan kelompok dosisnya. Perubahan ini dapat disebabkan  oleh  cedera  pada  sel  hati,  mengakibatkan  penyerapan  air  yang  menyebar hingga organel dan sitoplasma, menyebabkan pembengkakan sel dan peningkatan indeks organ  [19].  Sedangkan,  organ  paru-paru,  jantung,  dan  ginjal  tidak  menunjukkan perbedaan berarti pada indeks organ.
Pemeriksaan makroskopis pada semua kelompok uji menunjukkan organ-organ tersebut dalam keadaan normal, kecuali pada dosis 5000 mg/kgBB, di mana satu mencit mati  dan  terjadi  perubahan  pada  bentuk  paru-paru,  dugaan  karena  gagal  pernafasan. Namun,  pengamatan  makroskopis  pada  sisa  hewan  uji  dari  dosis  5000  mg/KgBB menunjukkan  organ  normal,  menunjukkan  bahwa  perubahan  bentuk  organ  mungkin terjadi  karena  faktor  fisiologis  bukan  akibat  sediaan  uji.  Dalam  keseluruhan,  dapat disimpulkan  bahwa  sediaan  minyak  atsiri  biji  pala  tidak  memberikan  pengaruh  yang signifikan pada organ-organ mencit secara makroskopis.
Minyak atsiri pala, yang menjadi fokus utama penelitian ini, dapat dikategorikan sebagai  sampel  yang  relatif  tidak  toksik.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa penggunaan  minyak  atsiri  pala  dalam  dosis  yang  diberikan  tidak  menimbulkan  efek samping  yang  serius  pada  subjek  uji.  Namun,  perlu  dicatat  bahwa  penelitian  ini  juga memiliki beberapa kekurangan. Penelitian ini terbatas pada dosis tertentu, dan informasi lebih lanjut mungkin diperlukan untuk memahami efek pada dosis yang lebih tinggi atau lebih rendah. Durasi penelitian tidak mencakup efek jangka panjang dari paparan minyak atsiri pala. Oleh karena itu, untuk penelitian selanjutnya, disarankan untuk memperluas cakupan  dosis  dan  memperpanjang  durasi  penelitian  guna  mendapatkan  pemahaman yang lebih komprehensif tentang potensi dampak minyak atsiri pala. Selain itu, penelitian selanjutnya  dapat  mengeksplorasi  tingkat  toksisitas  dari  senyawa-senyawa  yang  aktif dalam minyak atsiri pala dan interaksi minyak atsiri pala dengan faktor-faktor lingkungan lainnya yang dapat mempengaruhi respons tubuh secara lebih holistik.

## 5. KESIMPULAN
Minyak  atsiri  pala  memiliki  LD 50 yang  lebih  dari  dosis  5000  mg/kgBB, menunjukkan  ketidaktoksikan  praktis.  Namun,  gejala  toksisitas  dan  kerusakan  organ lambung dan hati pada dosis 5000 mg/KgBB menunjukkan adanya efek toksik minyak atsiri biji pala pada mencit.

## 6. DAFTAR PUSTAKA
[1] E.  Istriningsih,  K.  Khoirunnisa,  and  D.  I.  Kurnianingtyas,  “Efek  Antidepresan Kombinasi  Infusa  Biji  Pala  (Myristica  fragrans)  dan  Daun  Kemangi  (Ocimum
2
3
basilicum) pada Mencit Jantan Putih (Mus musculus),” Parapemikir  J. Ilm. Farm., vol. 7, no. 2, p. 256, 2018, doi: 10.30591/pjif.v7i2.926.
[2] I.  N.  Hasanusi,  P.  Y.  Silalahi,  J.  B.  Bension,  L.  B.  S.  Huwae,  and  W.  Ony,  “Hasil Penelitian  EFEK  PEMBERIAN  EKSTRAK  ETANOL  BIJI  PALA  (  Myristica  fragrans Houtt ) TERHADAP ANSIETAS MENCIT ( Mus musculus ) EFFECTS OF ETHANOL EXTRACT  OF  NUTMEG  SEEDS  (  Myristica  fragrans  Houtt  )  ON  MICE  ANXIETY  1 Mahasiswa Fakultas Kedokteran Univers,” Pattimura Med. Rev., vol. 2, no. 1, pp. 36– 46, 2020, [Online]. Available: file:///C:/Users/HP/Downloads/1590-Article Text- 7996-1-10-20200501.pdf
[3] N.  ‘Aini  Hidayah,  H. M.  Ansory,  P.  K.  K.  Putri,  and  A.  Nilawati,  “Analisis  Senyawa Minyak  Atsiri  Fuli  Pala  Secara  GC-MS  dan  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Terhadap Ecschericia coli dan Staphylococcus aureus,” Maj. Farm., vol. 13, no. 2, p. 56, 2018, doi: 10.22146/farmaseutik.v13i2.40915.
[4] D. P. Wibowo, Y. Febriana, H. Riasari, and D. L. Auilifa, “Essential Oil Composition, Antioxidant and Antibacterial Activities of Nutmeg (Myristica fragrans Houtt) from Garut  West  Java,”  Indones.  J.  Pharm.  Sci.  Technol.,  vol.  5,  no.  3,  p.  82,  2018,  doi: 10.24198/ijpst.v5i3.16030.
[5] S. E. Sudradjat, “Pala ; dari Obat Tradisional ke Obat Modern,” J. Kedokt. Meditek, vol. 23, no. 62, pp. 77–82, 2017, [Online]. Available:
http://ejournal.ukrida.ac.id/ojs/index.php/Meditek/article/view/1557
[6] E.  A.  Abourashed  and  A.  T.  El-Alfy,  “Chemical  diversity  and  pharmacological significance of the secondary metabolites of nutmeg (Myristica fragrans Houtt.),” Phytochem.  Rev.,  vol.  15,  no.  6,  pp.  1035–1056,  2016,  doi:  10.1007/s11101-016- 9469-x.
[7] T.  H.  E.  Effect,  O.  F.  Extract,  E.  Nutmeg,  and  T.  O.  The,  “PENGARUH  EKSTRAK ETANOL  BIJI  PALA  (  Myristica  fragan  Houtt  )  TERHADAP  JUMLAH  GELIATAN MENCIT  BALB  /  C  YANG  DIINJEKSI  ASAM  ASETAT  0  ,  1  %  UNIVERSITAS DIPONEGORO TAHUN 2010,” 2010.
[8] H. M. Ansory, H. Sastrohamidjoyo, and B. Purwono, “Perbandingan Kualitas Minyak Pala Hasil Isolasi Dari Bagian-Bagian Buah Pala Berdasarkan Kadar Miristisin,” J. Farm. Indones., vol. 12, no. 2, pp. 127–136, 2015.
[9] S.  Ketaren,  S.  Ngudiwaluyo,  and  A.  Friyadi,  “ISOLASI  MIRISTISIN  DARI  MINYAK PALA  (Myristica  fragrans)  DENGAN  METODE  PENYULINGAN  UAP,”  J. Agroindustrial Technol., vol. 17, no. 1, pp. 23–28, 2007.
[10]  R. Astuti, “Pengaruh Waktu Distilasi Minyak Biji Pala (Myristica fragrans) dengan Metode Distilasi Uap dan Identifikasi Komponen Kimiawi,” Indones. J. Lab., 2019, doi: 10.22146/ijl.v1i2.44741.
[11]  A.  D.  Gupta,  V.  K.  Bansal,  V.  Babu,  and  N.  Maithil,  “Chemistry,  antioxidant  and antimicrobial  potential  of  nutmeg  (Myristica  fragrans  Houtt),”  Journal  of  Genetic Engineering  and  Biotechnology,  vol.  11,  no.  1.  pp.  25–31,  2013.  doi: 10.1016/j.jgeb.2012.12.001.
[12]  H. M. Ansory, I. N. Fitriani, and A. Nilawatii, “Chemical Separation and Antibacterial Activity of Nutmeg seed Essential Oil against Shigella sp. and Escherichia coli ATCC 25922,”  IOP  Conf.  Ser.  Mater.  Sci.  Eng.,  vol.  846,  no.  1,  2020,  doi:  10.1088/1757- 899X/846/1/012005.
[13]  T. D. Ayunani, I. T. Hastuti, H. M. Ansory, and A. Nilawati, “Pemisahan Senyawa 1,4-
terpineol dan Safrol dari Minyak Atsiri Biji Pala (Myristica Fragrans Houtt) dan Uji Aktivitas Antibakteri Terhadap Shigella dysenteriae,” J. Farm. Indones., 2019, doi: 10.31001/jfi.v15i1.357.
[14]  H.  Muhamad  Ansory,  P.  Khania  Kusuma  Putri,  A.  Hidayah,  and  A.  Nilawati,  “The Analysis of Nutmeg Mace Essential Oil Compound Using GC-MS and Antibacterial Activity Test Toward Ecschericia coli and Staphylococcus aureus,” | Maj. Farm., vol. 16, no. 1, pp. 1–8, 2020, doi: 10.22146/farmaseutik.v16i1.35985.
[15]  A. Rahmasari, “Formulasi dan Karakterisasi Nanoemulsi Minyak Atsiri Daun Pala (Myristica  fragrans  Houtt)  serta  Uji  Toksisitas  dengan  Metode  Brine  Shrimp Lethality Test (BSLT),” Universitas Jenderal Soedirman, 2023. [Online]. Available: http://www.nber.org/papers/w16019
[16]  F.  Polii,  “PENELITIAN  PENYULINGAN  MINYAK  PALA  ”SIAUW”  METODE  UAP BERTEKANAN DAN KARAKTERISTIK MUTU MINYAK PALA,” J. Penelit. Teknol. Ind., 2018, doi: 10.33749/jpti.v8i1.1301.
[17]  S. G. Sipahelut and I. Telussa, “Karakteristik Minyak Atsiri Dari Daging Buah Pala Melalui  Beberapa  Teknologi  Proses  Characteristic  of  the  Essential  Oil  of  Fruit Nutmeg By Some Process Technology,” J. Teknol. Has. Pertan., 2011.
[18]  Kemenkes  RI,  FARMAKOPE  HERBAL  INDONESIA,  II.  Jakarta:  Kementerian Kesehatan Republik Indonesia, 2017. doi: 10.1201/b12934-13.
[19]  F. Ubang, V. O. Siregar, and H. Herman, “Efek Toksik Pemberian Ekstrak Etanol Daun Mekai  (Albertisia  papuana  Becc.)  Terhadap  Mencit,”  Proceeding  Mulawarman Pharm.  Conf.,  vol.  16,  no.  November  2022,  pp.  49–57,  2022,  doi: 10.25026/mpc.v16i1.672.
[20]  S. Amal, N. S. Gunarti, D. S. Saragih, and H. Hidayah, “Uji Toksisitas Akut Ekstrak Etanol Daun Tempuyung (Sonchus arvensis L.) pada Mencit Betina Dengan Metode Fixed  Dose.,”  J.  Pharmacopolium,  vol.  5,  no.  2,  pp.  190–198,  2022,  doi: 10.36465/jop.v5i2.912.
[21]  C. S. Sulastra, K. Khaerati, and I. Ihwan, “Toksisitas Akut dan Lethal Dosis (LD50) Ekstrak  Etanol  Uwi  Banggai  Ungu  (Dioscorea  alata  L.)  pada  Tikus  Putih  (Rattus norvegicus),” J. Ilm. Medicam., vol. 6, no. 1, pp. 2356–4818, 2020.
[22]  C. Estanislau et al., “Rat self-grooming and its relationships with anxiety, dearousal and perseveration: Evidence for a self-grooming trait,” Physiol. Behav., vol. 209, no. April, p. 112585, 2019, doi: 10.1016/j.physbeh.2019.112585.
[23]  C. A. Calhoun, C. Lattouf, V. Lewis, H. Barrientos, and S. T. Donaldson, “Chronic mild stress induces differential depression-like symptoms and c-Fos and 5HT1A protein levels  in  high-anxiety  female  Long  Evans  rats,”  Behav.  Brain  Res.,  vol.  438,  no. November 2022, p. 114202, 2023, doi: 10.1016/j.bbr.2022.114202.
[24]  D. D. Wisudanti, F. Herdiana, and T. S. Qodar, “Diazinon Toxicity to Kidney and Liver of Wistar Male Rats in terms of Biochemical and Histopathological Parameters,” J. Agromedicine Med. Sci., vol. 5, no. 2, p. 51, 2019, doi: 10.19184/ams.v5i2.11575.
[25]  NTP,  Niehs,  Nih,  and  DHHS,  “Toxicity  Report  95:  NTP  Technical  Report  on  the Toxicity  Studies  of  Myristicin  (CASRN  607-91-0)  Administered  by  Gavage  to F344/NTac  Rats  and  B6C3F1/N  Mice,”  no.  March,  2019,  [Online].  Available: https://manticore.niehs.nih.gov/cebssearch.
[26]  Y.  Hao,  H.  Ge,  M.  Sun,  and  Y.  Gao,  “Selecting  an  appropriate  animal  model  of depression,”  Int.  J.  Mol.  Sci.,  vol.  20,  no.  19,  pp.  1–16,  2019,  doi:
10.3390/ijms20194827.
[27]  T. D. Gould, D. T. Dao, and C. E. Kovacsics, “Mood and Anxiety Related Phenotypes in Mice,” Neuromethods, vol. 42, no. March 2009, pp. 1–20, 2009, doi: 10.1007/978- 1-60761-303-9.
[28]  B. Srinivasan, T. E. Johnson, R. Lad, and C. Xing, “Structure - Activity relationship studies  of  chalcone  leading  to  3-hydroxy-4,3′,4′,5′-tetramethoxychalcone  and  its analogues as potent nuclear factor κB inhibitors and their anticancer activities,” J. Med. Chem., vol. 52, no. 22, pp. 7228–7235, 2009, doi: 10.1021/jm901278z.
[29]  E.  C.  Miller,  A.  B.  Swanson,  D.  H.  Phillips,  A.  Liem,  J.  A.  Miller,  and  T.  L.  Fletcher, “Structure-activity studies  of the carcinogenicities  in the  mouse  and  rat  of  some naturally occurring and synthetic alkenylbenzene derivatives related to safrole and estragole,” Cancer Res., vol. 43, no. 3, pp. 1124–1134, Mar. 1983.
[30]  J. C. Morales-Medina, N. Pugliese, A. Di Cerbo, C. Zizzadoro, and T. Iannitti, “Evidence for Endogenous Opioid Dependence Related to Latent Sensitization in a Rat Model of  Chronic  Inflammatory  Pain,”  Int.  J.  Mol.  Sci.,  vol.  24,  no.  3,  2023,  doi: 10.3390/ijms24032812.
[31]  A. Nilawati and H. M. Ansory, “Aktivitas Antibakteri Pada Senyawa Turunan Kalkon Hasil Sintesis Dari Miristisin Buah Pala Antibacterial Activity of Kalkon Derivative Compounds from Miristisin Nutmeg Pendahuluan Indonesia negara penghasil pala terbesar didunia dengan total produksi 76 %,” vol. 14, no. 2, pp. 154–159, 2017.
[32]  L. R. Agaus and R. V. Agaus, “Manfaat Kesehatan Tanaman Pala (Myristica fragrans) (Health Benefits of Nutmeg (Myristica fragrans )),” Medula, vol. 6, no. 3, pp. 662– 666, 2019, doi: 10.46496/medula.v6i3.9648.
[33]  A. Nilawati, A. T. J. Atmajaningtyas, and H. M. Ansory, “The Influence of Myristicin Lost in Myristica Fragrans Volatile Oils to Antimicrobial Activity Against B. Subtilis, E. Coli and S. Aureus,” vol. 26, pp. 143–145, 2020, doi: 10.2991/ahsr.k.200523.035.
[34]  E. Denamur, O. Clermont, S. Bonacorsi, and D. Gordon, “The population genetics of pathogenic Escherichia coli,” Nat. Rev. Microbiol., vol. 19, no. 1, pp. 37–54, 2021, doi: 10.1038/s41579-020-0416-x.
[35]  K.  Saravanakumar  et  al.,  “Chemical  composition,  antioxidant,  and  anti-diabetic activities  of  ethyl  acetate  fraction  of  Stachys  riederi  var.  japonica  (Miq.)  in streptozotocin-induced  type  2  diabetic  mice,”  Food  Chem.  Toxicol.,  vol.  155,  no. April, p. 112374, 2021, doi: 10.1016/j.fct.2021.112374.

## 8% Overall Similarity
Top sources found in the following databases:
8% Internet database 2% Publications database Crossref database Crossref Posted Content database

## TOP SOURCES
The sources with the highest number of matches within the submission. Overlapping sources will not be displayed.
1 repository.setiabudi.ac.id 3% Internet 2 prosiding.farmasi.unmul.ac.id <1% Internet 3 researchgate.net <1% Internet 4 core.ac.uk <1% Internet 5 neliti.com <1% Internet 6 scribd.com <1% Internet 7 repository.ar-raniry.ac.id <1% Internet 8 repository.unri.ac.id <1% Internet 9 docplayer.info
<1%
Internet

## 10
repository.ub.ac.id <1% Internet 11 repository.unfari.ac.id <1% Internet 12 123dok.com <1% Internet 13 patpi.or.id <1% Internet 14 repository.uinjkt.ac.id <1% Internet 15 simakip.uhamka.ac.id <1% Internet

## Excluded from Similarity Report
Submitted Works database Bibliographic material Quoted material Cited material Small Matches (Less then 10 words) Manually excluded text blocks

## EXCLUDED TEXT BLOCKS

## xx, No. xx, Month 20xx, page. xx~xx
{"linkText":"Universitas Sebelas Maret on 2021-11-25","glimpseId":"oid:1:2183019750_1_overview","collectio...