e- ISSN: 2715-033X                                      JURNAL AGROPLASMA, Vol. 10 No. 1, Mei  2023: 237-251
Pengaruh Beberapa Formulasi Sitokinin Terhadap Penyediaan Bibit dan Pertumbuhan Eksplan Tanaman Pule Pandak ( Rauvolfia serpentina (L.) Benth. ex Kurz) Secara In Vitro
Anita Widya Karyaningtyas 1 , Ani Lestari 2 , Edhi Sandra 3
1, 2 Program Studi Agroteknologi, Fakultas Pertanian, Universitas Singaperbangsa Karawang
3 Esha Flora, Bogor, Jawa Barat email : karyaningtyasa@gmail.com

## ABSTRACT
Propagation  of  pule  pandak  (Rauvolfia  serpentina  (L.)  Benth.  Ex  Kurz)  conventionally  shows growth  from  seeds  and  stem  cuttings  of  less  than  15%.  The  low  growth  percentage  is  due  to  the seeds have hard coats, so the germination of the seeds is very low. One of the technologies that can be used and provides hope in the supply of seeds in large quantities and in a relatively short time is the  in  vitro  culture  technique.  The  aim  of  this  study  was  to  determine  does  the  several  cytokinin formulations administration affected the growth of pule pandak (Rauvolfia serpentina (L.) Benth. ex Kurz) plant explants. The study was conducted at Esha Flora, Bogor from April 2022 to July 2022. The experiment  used a  single factor Completely Randomized Design  (CRD) consisting of 1 factor using  4  combinations  of  cytokinins  (2-IP,  TDZ,  BAP  and  Kinetin)  and  repeated  10  times  so  that there  are  40  experimental  units  for  12  weeks.  The  data  obtained  were  then  analyzed  using  the ANOVA  test  at  a  significant  level  of  5%. The  results  showed  that  the  S1  treatment  (Modified  MS Media + 2-IP 2 mg/l + TDZ 0.1 mg/l + BAP 0.5 mg/l and Kinetin 0.5 mg/l) was the best cytokinin formulation to produce the highest  average number of  shoots was 8.87 shoots, the highest  explant height  was  2.49  cm  and  the  fastest  average  of  somatic  embryogenesis  emergence  time  was  23.3 DAP.  Somatic  embryo  phase  in  treatment  S1,  S2 and  S3  experienced  globular,  heart  and  torpedo phases.
Keywords: Cytokinine, Somatic Embryogenesis, Tissue Culture, Rauvolfia serpentina (L.) Benth. Ex Kurz

## ABSTRAK
Perbanyakan  pule  pandak  (Rauvolfia  serpentina  (L.)  Benth.  Ex  Kurz)  secara  konvensional menunjukkan pertumbuhan biji dan stek batang kurang dari 15%. Persentase tumbuh yang rendah disebabkan  karena  biji  memiliki  tempurung  yang  keras,  sehingga  daya  kecambah  biji  sangat rendah.  Salah  satu  teknologi  yang  bisa  digunakan  dan  memberikan  harapan  dalam  penyediaan bibit  dalam  jumlah  besar  dan  waktu  relatif  singkat  adalah  teknik  kultur  in  vitro.  Tujuan  dari penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  ada  tidaknya  pengaruh  pemberian  beberapa  formulasi sitokinin terhadap pertumbuhan eksplan tanaman pule pandak (Rauvolfia serpentina (L.) Benth. ex Kurz).  Penelitian  dilakukan  di  Esha  Flora,  Bogor  dari  bulan  April  2022  sampai  pada  bulan  Juli 2022. Percobaan menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) faktor tunggal yang terdiri dari 1 faktor  dengan  menggunakan  4  kombinasi  sitokinin  (2-IP,  TDZ,  BAP  dan  Kinetin  )  dan  diulang sebanyak  10  kali  sehingga  terdapat  40  satuan  unit  percobaan  selama  12  minggu.  Data  yang diperoleh kemudian dianalisis menggunakan uji ANOVA pada taraf signifikan 5%. Hasil penelitian menunjukkan bahwa perlakuan S1 (Media MS Modifikasi + 2-IP 2 mg/l + TDZ 0.1 mg/l + BAP 0.5 mg/l  dan  Kinetin  0.5  mg/l)  merupakan  formulasi  sitokinin  terbaik  untuk  menghasilkan  rerata jumlah  tunas  terbanyak  yaitu  8.87  buah,  rerata  tinggi  eksplan  tertinggi  yaitu  2.49  cm  dan  rerata waktu muncul embrio somatik tercepat yaitu 23.3 HSK. Fase embrio somatik pada perlakuan S1, S2 dan S3 mengalami fase globular, hati dan torpedo.
Kata Kunci: Sitokinin, Embriogenesis Somatik, Kultur Jaringan, Rauvolfia serpentina (L.)Benth. Ex Kurz

## PENDAHULUAN
Indonesia  diprediksi  memiliki  lebih dari  9.606  jenis  tumbuhan  obat  yang  tersebar di  berbagai  jenis  hutan,  salah  satunya  adalah pule  pandak,  Pule  pandak  adalah  tumbuhan obat  Indonesia  yang  sangat  terkenal  akan khasiatnya  dalam  menyembuhkan  berbagai macam penyakit terutama hipertensi (Khisbah,  2003).  Pule  pandak  dimanfaatkan sebagai obat tradisional yang digunakan untuk pengobatan  sesak  nafas,  nyeri  perut,  murus, sakit  kepala  dan  gigitan  ular.  Pule  pandak juga  dapat  digunakan  sebagai  obat  penurun panas, penurun tekanan darah tinggi, disentri, kolera,  kehilangan  selera  makan,  radang  usus dan  lain  –  lain  (Hyne,  1987 dalam Sugito, 2006).
Data menunjukkan
bahwa
diperkirakan  penggunaan  simplisia  pule pandak dalam negeri pada tahun 2000 sebesar 6.898 kg dengan pertambahan sebesar 25,89% per  tahun  (Yahya et  al .,  2001 dalam Sulandjari,  2008).  Pule  pandak  dinyatakan langka karena pengambilannya secara langsung di alam  yaitu dibawah naungan  jati. Kunwar  (2019),  mengemukakan  pule  pandak termasuk  ke  dalam  daftar  tanaman  yang terancam  punah  oleh International  Union  of Conservation of Nature (IUCN) dan masuk ke dalam CITES ( the Convention on International Trade in Endangered Species of Wild  Fauna  and  Flora )  Appendix  II  yaitu daftar spesies yang tidak terancam kepunahan, tetapi  mungkin  akan  terancam  punah  jika terus  diperdagangkan  secara  terus-menerus. Faktor lain  penyebab  terjadinya  kelangkaan pule  pandak  yaitu  karena  bagian  yang dimanfaatkan sebagai bahan obat adalah akar, sehingga tanaman ini sulit diperbanyak secara konvensional  dan  penyebarannya  terbatas. Sudiarto et  al. (1985) dalam Yunita  dan
Lestari(2011),
mengemukakan
jika perbanyakan pule pandak ( Rauvolfia serpentina )secara  konvensional  menunjukkan pertumbuhan biji dan stek batang kurang dari 15%. Persentase tumbuh yang rendah disebabkan  karena  biji  memiliki  tempurung yang  keras,  sehingga  daya  kecambah  biji sangat  rendah.  Hal  tersebut  menyebabkan perbanyakan  tanaman  pule  pandak  melalui
biji  tidak  optimal.  Untuk  mengimbangi  laju permintaan  simplisia  pule  pandak  dan menyelamatkannya  dari  kepunahan,  perlu dilakukannya  konservasi  maupun  budidaya. Untuk  itu  perlu  adanya  produksi  bibit  secara massal.  Salah  satu  teknologi  yang  bisa digunakan  dan  memberikan  harapan  dalam penyediaan  bibit  dalam  jumlah  besar  dan waktu  relatif  singkat  adalah  teknik  kultur in vitro (Yunita dan Lestari,2011).
Kultur in vitro adalah teknik menumbuhkan bagian-bagian tumbuhan seperti  protoplas,  sel,  jaringan  ataupun  organ dalam  suatu  medium  yang  sesuai  dibawah kondisi aseptik (Prasetyorini, 2019). Keberhasilan kultur jaringan dipengaruhi oleh beberapa  faktor,  salah  satunya  adalah  zat pengatur  tumbuh  (ZPT).  Menurut  Lestari (2011),zat pengatur tumbuh memainkan peran penting    dalam    mengendalikan    proses biologis  jaringan  tanaman.  Hapsoro  dan Yusnita    (2018) dalam Alfiana    (2020), mengemukakan  zat  pengatur  tumbuh  adalah senyawa  organik  non-hara  yang  dalam konsentrasi rendah dapat mendukung pertumbuhan  dan  perkembangan  tanaman serta  berperan  penting  dalam  meningkatkan metabolisme eksplan.
Salah  satu  zat  pengatur  tumbuh  yang sering  digunakan  dalam  kultur  jaringan  yaitu kelompok sitokinin. Kelompok sitokinin yang umum  digunakan  dalam  kultur  jaringan adalah  2-IP  ( 2-Isopentenyl  adenine ),  TDZ ( Thidiazuron ),  BAP  ( 6-benzylaminopurine ) dan  Kinetin  ( 6-furfurylaminopurine ).  Secara umum,  sitokinin  berfungsi  untuk  pembelahan sel,  pembesaran  sel,  menghambat  penuaan bunga  dan  buah,  dan  deferensiasi  akar  dan tunas  (Heddy,  1996 dalam Budi,  2020). Berdasarkan  uraian  tersebut,  penelitian  ini diarahkan  untuk mengkaji pengaruh  beberapa formulasi sitokinin  terhadap  penyediaan  bibit dan  pertumbuhan  eksplan  tanaman  pule pandak  ( Rauvolfia  serpentina (L.)  Benth.  ex Kurz) secara in vitro.

## BAHAN DAN METODE
Waktu dan Tempat
Penelitian  dilakukan  di  Esha  Flora yang  terletak  di  Jl.  Kemuning  VI  Jalan  Raya
Taman Cimanggu Blok M6 No.9 RT.02/RW.10, Kedung  Waringin, Kecamatan Tanah  Sareal,  Kota  Bogor,  Provinsi  Jawa
Barat 16164 dengan Letak koordinat 6°33´40´´S dan 106°46´40´´E.
Waktu pelaksanaan  penelitian  ini  akan  dilakukan selama 3 bulan dimulai pada bulan April 2022 sampai pada bulan Juli 2022.

## Bahan dan Alat
Bahan  yang  akan  digunakan  dalam penelitian ini antara lain eksplan yang berasal dari  planlet  tanaman Rauvolfia  serpentina (L.)    Benth.      ex      Kurz,      aquades  steril, spirtus,  betadine,  alkohol  70%,  gula,  agar- agar, NaOH 4%, HCl 10%, 2-IP( 2-
Isopentenyl  adenine ),  TDZ  ( Thidiazuron ), BAP  ( 6-benzylaminopurine ),  Kinetin  ( 6- furfurylaminopurine )  dan  Giberelin  (GA3) dengan  konsentrasi  yang  telah  ditentukan untuk membantu pertumbuhan eksplan tanaman  pule  pandak  dan  untuk  membuat media MS ( Murashige and Skoog ) dibutuhkan bahan-bahan  yaitu  larutan  stok  A  sampai  F, vitamin  B  complex,  vitamin  E,  myo  inositol, glisin,  pepton,  dan  kasein  hidrolisat  dengan konsentrasi yang telah ditentukan.
Peralatan  yang  akan  digunakan  dalam penelitian ini adalah LaminarAir Flow (LAF) , lemari  pendingin , rak  kultur ,  Autoclave, kompor, panci, timbangan analitik, gelas ukur (1000  ml,  500  ml,  100  ml),  botol  kultur, sprayer ,  bunsen,  cawan  petri,  pinset, scalpel , mata  pisau,  pipet tetes,  pH  indikator,  spatula, suntikan, karet, alumunium foil , plastik, kertas koran,  tisu,  kapas,  sarung  tangan,  masker, penutup kepala  medis,  jas  lab, gunting, korek api,  sendok,  kertas  label,  plastik wrap ,  sikat botol, kamera, dan alat tulis.

## Metode Penelitian
Metode yang digunakan dalam penelitian  ini  merupakan  metode  eksperimen dengan menggunakan Rancangan Acak Lengkap  (RAL)  faktor  tunggal  yang  terdiri dari  1  faktor  dengan  menggunakan  4 kombinasi  sitokinin  (2-IP,  TDZ,  BAP  dan Kinetin)  dan  GA3,  diulang  sebanyak  10  kali sehingga  terdapat  40  satuan unit percobaan. Faktor  sitokinin  dengan  menggunakan  4 kombinasi, yaitu :
S0 (Kontrol) = Media MS + Vit. B Complex 1 pil/l + Vit. E 1 pil/l + Myo inositol 100 mg/l + Glisin  5  mg/l  +  Pepton  100  mg/l  +  Kasein 100  mg/l  +  GA3  1  mg/l  (MS  Modifikasi) S1 =  Media  MS  Modifikasi  +  2-IP  2  mg/l  + TDZ 0,1 mg/l + BAP 0.5 mg/l dan Kinetin 0.5 mg/l
S2 =  Media  MS  Modifikasi  +  2-IP  4  mg/l  + TDZ  0,2  mg/l  +  BAP  1  mg/l  dan  Kinetin  1 mg/l
S3 =  Media  MS  Modifikasi  +  2-IP  6  mg/l  + TDZ 0,3 mg/l + BAP 1.5 mg/l dan Kinetin 1.5 mg/l
Data  yang  diperoleh  dari hasil pengamatan pada eksplan tanaman Rauvolfiia serpentina (L.)Benth.  ex  Kurz  selanjutnya akan diuji secara statistik dengan menggunakan  uji  F  pada  taraf  nyata  5% . Parameter  yang  akan  diamati  antara  lain waktu  muncul  tunas,  jumlah  tunas,  panjang tunas,  jumlah  daun,  tinggi  eksplan,  waktu muncul  embrio  somatik,  diameter  embrio somatik, dan fase embrio somatik.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Waktu Muncul Tunas
Hasil uji LSD taraf 5% diperoleh rata- rata  waktu  muncul  tunas  sebagai  berikut (Tabel 1).
Tabel  1.  Pengaruh  Pemberian  Beberapa  Formulasi  Sitokinin  Terhadap  Rerata  Waktu  Muncul Tunas pada Eksplan Rauvolfia serpentina (L.) Benth. Ex Kurz Selama 12 MSK
Kode Perlakuan Rerata Waktu Muncul Tunas (HSK)
S0 Kontrol [Media MS + Vit. B Complex 1 pil/l + Vit. E 1 pil/l + Myo inositol 100 mg/l + Glisin 5 mg/l + Pepton 100 mg/l + Kasein  100  mg/l  +  GA3  1  mg/l  (MS  Modifikasi)] 15.4 a S1 Media MS Modifikasi + 2-IP 2 mg/l + TDZ 0,1 mg/l + BAP 0.5 mg/l dan Kinetin 0,5 mg/l 16.8 a S2 Media MS Modifikasi + 2-IP 4 mg/l + TDZ 0,2 mg/l + BAP 1 mg/l dan Kinetin 1 mg/l 26.6 a S3 Media MS Modifikasi + 2-IP 6 mg/l + TDZ 0,3 mg/l + BAP 1.5 mg/l dan Kinetin 1,5 mg/l 16.1 a Keterangan: Nilai rata-rata yang diikuti huruf yang sama pada setiap kolom yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata pada uji LSD taraf 5% HSK (Hari Setelah Kultur)
Berdasarkan  hasil  pada  Tabel  1  data menunjukkan  semua  perlakuan  menghasilkan rerata  waktu  muncul  tunas  berkisar  antara 15.4  HSK  –  26.6  HSK.  Perlakuan  S0  diduga menghasilkan  waktu  muncul  tunas  tercepat yaitu  15.4  HSK.  Munculnya      tunas
merupakan   salah   satu faktor penting dalam kultur in vitro. Dengan munculnya tunas baru pada eksplan menandakan adanya pertumbuhan  dan  respon  terhadap  hormon yang  digunakan.  Grafik  rata-rata  waktu muncul tunas disajikan pada Gambar 1.
Gambar 1. Grafik waktu muncul tunas tanaman pule pandak semua perlakuan
Pada  penelitian  ini  diketahui  jika perlakuan  S0  tidak  diberikan  zat  pengatur tumbuh namun perlakuan S0 mampu memunculkan tunas lebih cepat dibandingkan dengan perlakuan yang diberikan zat pengatur tumbuh  sitokinin.  Menurut  Kartini  dan Karyanti  (2017),  adanya  hormon  endogen dapat  menyebabkan  eksplan  tumbuh  secara normal atau lebih tinggi.
Pada  perlakuan  S0  media  kultur mengandung kasein hidrolisat. Kasein hidrolisat  merupakan  asam  amino  yang berperan  sebagai  sumber  nitrogen  organik
yang  mampu  merangsang  pertumbuhan  dan perkembangan  jaringan  (Widiastoety  dan Nurmalinda, 2010).
Pada penelitian
Maulidina (2020), pemberian kasein hidrolisat 150  mg/l  pada  eksplan  tanaman  Porang ( Amorphopahallus muelleri
Blume)
menunjukkan bahwa kasein hidrolisat mampu menumbuhkan  tunas  dengan  rerata  8,6  HST (Hari  Setelah  Tanam)  dan  kasein  hidrolisat 200 mg/l mampu menumbuhkan tunas dengan rerata 9.33 HST.
Kosmiatin et  al .(2014),  menyatakan bahwa  ketersediaan  sumber  nitrogen  organik
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 S0 7 7 49 7 21 21 0 14 14 14 S1 14 14 14 14 14 21 14 14 35 14 S2 63 7 35 49 28 28 21 7 7 21 S3 7 28 21 21 0 21 28 14 21 0 0 10 20 30 40 50 60 70 Ulangan Waktu Muncul  Tunas (HSK)
e- ISSN: 2715-033X                                      JURNAL AGROPLASMA, Vol. 10 No. 1, Mei  2023: 237-251
pada  media  kultur  dapat  meningkatkan akumulasi  asam  amino  sebagai  penyusun protein.  Nitrogen  berperan  dalam  proses pertumbuhan  tunas  dengan  dua  cara  yaitu mengatur metabolisme nitrogen dan mengatur hormon  endogen  (Kartini  dan  Karyanti,
2017).Penambahan  asam  amino  jenis  kasein hidrolisat  dalam  media  kultur  juga  dapat dilakukan  untuk  merangsang  pertumbuhan eksplan (Istiningdyah et al. , 2013).
Munculnya tunas disajikan pada Gambar 2.

## Gambar 2. Munculnya tunas pada eksplan

## Jumlah Tunas
Tunas  merupakan  calon  tanaman  baru yang  belum  terdiferensiasi.  Tanda  awal terbentuknya  tunas  adalah  dengan  adanya
tonjolan pada ujung eksplan atau ketiak daun. Banyaknya  tunas  yang  terbentuk  dan  tumbuh menjadi salah satu dasar utama jumlah planlet yang  akan  dihasilkan.  Grafik  rerata  jumlah tunas dapat dilihat pada Gambar 3.
Gambar 3. Grafik rerata jumlah tunas tanaman pule pandak semua perlakuan
Dilihat pada Gambar 3, grafik menunjukkan  perlakuan  S1  (Media  MS Modifikasi  +  2-IP  2  mg/l  +  TDZ  0,1  mg/l  + BAP  0.5  mg/l  dan  Kinetin  0,5  mg/l)  diduga memiliki  rerata  jumlah  tunas  terbanyak  yaitu 8.87  buah  dibandingkan  dengan  perlakuan lainnya.
Hasil  penelitian  Yunita  dan  Lestari (2011), menyatakan pemberian BAP 0.5 mg/l dan  TDZ  0.2  mg/l  memberikan  rerata  jumlah tunas yaitu 7.7 buah, lalu pemberian BAP 0.3 mg/l + 2-IP 2 mg/l juga mampu menghasilkan
rerata  jumlah  tunas  sebanyak  2.4  buah  pada tanaman  pule  pandak.  Selanjutnya,  pada penelitian  Menaga et  al. (2021),  penggunaan BAP  0.5  mg/l  +  Kinetin  0.5  mg/l  pada tanaman Pentatropis  capensis (L.f.)  Bullock menunjukkan  rerata  jumlah  tunas  sebanyak 3.9  buah.  Menurut  Parzymies  dan  Dabski (2012) dalam Ranganatha et  al .  (2020), kombinasi sitokinin merupakan zat   pengatur tumbuh  terbaik  dalam  banyak  penelitian untuk induksi tunas aksila.
2.425 8.866666667 8.608333333 5.666666667 0 5 10 S0 S1 S2 S3 R e r a t a   J u m l a h   Tu n a s ( B u a h )
e- ISSN: 2715-033X                                      JURNAL AGROPLASMA, Vol. 10 No. 1, Mei  2023: 237-251
George dan Sherrington (1984) dalam
Lestari (2015),
menyatakan bahwa keberhasilan  pembentukan  tunas  memerlukan media  dengan  zat  pengatur  tumbuh  berupa kombinasi  sitokinin  dengan  auksin  yang rendah  atau  sitokinin  tanpa  auksin.  Sitokinin jenis  BAP  aktif  dalam  memacu  pembentukan dan  penggandaan  tunas  lebih  aktif  dari  pada kinetin  dan  2-IP.Menurut  Shinta  (2017), kinetin  mempunyai  pengaruh      untuk mempercepat  induksi  tunas.  Pemberian  BAP dan TDZ secara bersamaan dapat meningkatkan
kemampuan
tunas bermultiplikasi  dibandingkan  BAP  atau  TDZ secara bersamaan dapat meningkatkan
kemampuan tunas bermultiplikasi dibandingkan  BAP  atau  TDZ  secara  tunggal. Sedangkan  2-IP  merupakan  ZPT  golongan sitokinin  yang  berperan  sebagai  promotor dalampembentukanjaringan (Yunita dan Lestari, 2011).

## Jumlah Daun
Daun  muncul  pada  semua  perlakuan. Jumlah  daun  yang  dihitung  merupakan  daun yang  sudah  terbuka  penuh  dan  tidak menempel  pada  batang.  Grafik  rerata  jumlah daun dapat dilihat pada Gambar 4.
Gambar 4. Grafik rerata jumlah daun tanaman pule pandak semua perlakuan
Berdasarkan  grafik  pada  Gambar  4 diduga  menunjukkan  rerata  jumlah  daun terbanyak terdapat  pada perlakuan S2 (Media MS Modifikasi + 2-IP 4 mg/l + TDZ 0,2 mg/l +  BAP  1  mg/l  dan  Kinetin  1  mg/l)  yaitu sebanyak  17.62  helai.  Hasil  penelitian  Mirah et al. (2021), pemberian BAP 1mg/l + Kinetin 1mg/l  memberikan  jumlah  daun  sebanyak 18.08  helai  pada  tanaman Stevia  rebaudiana Bert.  Menurut  Sukma  dan  Artina  (2014) dalam Karyanti  (2017),  pengaruh  BAP  atau kinetin terhadap pertumbuhan daun, menunjukkan  bahwa  BAP  atau  kinetin sebagai  salah  satu  jenis  sitokinin  lebih berperan  dalam  mendorong  pembentukan tunas  dan  menghambat  pertambahantinggi sehinggamenekan  jumlah  daun.  Semakin
meningkat  konsentrasi  kinetin  maka  semakin meningkat  pula  jumlah  daun  (Wulansari et al. ,  2017).  Selanjutnya,  pada  penelitian Nurmaningrum et  al. (2017), kombinasi BAP 0.3 mg/l + TDZ 0.9 mg/l menghasilkan rerata jumlah  daun  relatif  banyak  yaitu  1.33  helai. Hal  ini  dikarenakan  konsentrasi  TDZ  pada media  kultur  lebih  tinggi.  TDZ  merupakan sitokinin yang memiliki aktivitas biologi yang lebih  tinggi  dibandingkan  BAP  sehingga mampu  menumbuhkan  daun  pada  tanaman alfalfa ( Medicago sativa L.). Menurut Nurana et  al. (2017),  penambahan  2-IP  pada perlakuan memberikan respon pada pertumbuhan  jumlah  daun  dan  panjang  daun. Daun yang tumbuh disajikan pada Gambar 5.
9.625 13.375 17.61666667 12.375 0 5 10 15 20 S0 S1 S2 S3 R e r a t a   J u m l a h   D a u n ( h e l a i )
e- ISSN: 2715-033X                                      JURNAL AGROPLASMA, Vol. 10 No. 1, Mei  2023: 237-251

## Gambar 5. Daun yang tumbuh pada eksplan tanaman pule pandak

## Tinggi Eksplan
Grafik rata-rata tinggi eksplan dapat dilihat pada Gambar 6.
Gambar 6. Grafik rerata tinggi eksplan tanaman pule pandak semua perlakuan
Berdasarkan grafik rerata tinggi eksplan pada Gambar 6, data hasil menunjukkan tinggi eksplan tertinggi terdapat pada  perlakuan  S1  (Media  MS  Modifikasi  + 2-IP 2 mg/l + TDZ 0,1  mg/l + BAP 0.5  mg/l dan  Kinetin  0,5  mg/l)  yaitu  2.49  cm.  Pada penelitian Ranganatha et al. (2020), pemberian NAA 0.1 mg/l + BAP 1 mg/l + 2- IP  3mg/l  memberikan  rerata  tinggi  eksplan setinggi  8  cm  pada Decalepis  hamiltonii. Selanjutnya, Menaga et al. (2021), menyatakan  bahwa  pemberian  BAP2  mg/l  + Kinetin  2  mg/l  menunjukkan  rerata  tinggi eksplan  setinggi  2.9  cm  pada  tanaman Pentatropis capensis (L.f.) Bullock.
Pada  penelitian  Yunita  dan  Lestari (2011),  pemberian  BAP  0.3  mg/l  yang dikombinasikan  dengan  2-IP  2  mg/l  pada eksplan pule pandak ( Rauvolfia serpentina L.) memberikan rerata tinggi eksplan setinggi 1.7 cm.  Pemberian  BAP  dan  2-IP  secara
bersamaan  mampu  meningkatkan  proses pembelahan dan pembesaran sel.2-IP termasuk  ZPT  golongan  sitokinin  yang berperan sebagai promotor dalam pembentukan  jaringan.Menurut  Yeyen et  al. (2021),  pemberian  IAA0,01  ml/l  +  BAP  4 ml/l  +  TDZ  0,1  ml/l  +  2IP  2,5  ml/l  pada eksplan  pisang  barangan  ( Musa  acuminata ) menunjukkan  rerata  tinggi  eksplan  terbaik yaitu  2.78  cm  dibandingkan  perlakuan lainnya.  TDZ  dalam  kultur in  vitro tidak hanya berperan dalam peningkatan pembentukan  tunas,  tetapi  berperan  juga dalam  peningkatkan  tinggi  eksplan  dan jumlah daun per eksplan (Supriati et al. , 2006 dalam Suminar et al. ,2017). Adanya penambahan  kasein  hidrolisat  pada  media kultur juga berpengaruh terhadap pertumbuhan  tinggi  eksplan.  Hal  ini  sejalan dengan  penelitian  Maulidina  (2020),  dimana pemberian  TDZ  0.2  mg/l  +  kasein  hidrolisat
2.235 2.489166667 2.265833333 1.986666667 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 S0 S1 S2 S3 R e r a t a   T i n g g i   E k s p l a n ( c m )
e- ISSN: 2715-033X                                      JURNAL AGROPLASMA, Vol. 10 No. 1, Mei  2023: 237-251
100  mg/l  menghasilkan  rerata  tinggi  eksplan tanaman  porang  ( Amorphopahallus  muelleri
Blume) terbaik yaitu 0.51 cm. Tinggi eksplan disajikan pada Gambar 7.
Gambar 7. Tinggi eksplan tanaman pule pandak

## Waktu Muncul Embrio Somatik
Hasil  uji  LSD  taraf  5%  diperoleh  rata-rata  waktu  muncul  embrio  somatik  sebagai  berikut (Tabel 2).
Tabel  2.  Pengaruh  Pemberian  Beberapa  Formulasi  Sitokinin  Terhadap  Rerata  Waktu  Muncul Embrio  Somatik  pada  Eksplan Rauvolfia  serpentina (L.)  Benth.  ex  Kurz  Selama  12 MSK
Kode Perlakuan Waktu Muncul Embrio Somatik (HSK) S1 Kontrol (Media MS + Vit. B Complex 1 pil/l + Vit. E 1 pil/l + Myo inositol 100 mg/l + Glisin 5 mg/l + Pepton 100 mg/l + Kasein  100  mg/l  +  GA3  1 mg/l  (MS  Modifikasi)) 23.3 a S2 Media MS Modifikasi + 2-IP 4 mg/l + TDZ 0,2 mg/l + BAP 1 mg/l dan Kinetin 1 mg/l + GA3 1 mg/l 30.1 a S3 Media MS Modifikasi + 2-IP 6 mg/l + TDZ 0,3 mg/l + BAP 1.5 mg/l dan Kinetin 1,5 mg/l + GA3 1 mg/l 35.1 a Keterangan: HSK (Hari Setelah Kultur) Pada  penelitian  ini,  perlakuan  yang menghasilkan embrio somatik adalah perlakuan S1, S2 dan S3 secara embriogenesis somatik  tidak  langsung.  Embrio  somatik secara tidak langsung terjadi melalui dua fase, yaitu  dengan  membentuk  kalus  dan  kembali menjadi meristematik dari sel yang diferensiasi (Santos dan Paz, 2016). Berdasarkan  hasil  pada  Tabel  2  data
menunjukkan  perlakuan  S1,  S2  dan  S3 menghasilkan  rerata  waktu  muncul  embrio somatikberkisar antara 23.3 HSK – 35.1 HSK. Perlakuan  S1  diduga  menghasilkan  waktu muncul  embrio  somatik  tercepat  yaitu  23.3 HSK,   tidak berbeda nyata dengan perlakuan S2  dan  S3.  Grafik  rerata  waktu  muncul embrio somatik dapat dilihat pada Gambar 8.
e- ISSN: 2715-033X                                      JURNAL AGROPLASMA, Vol. 10 No. 1, Mei  2023: 237-251
Gambar 8. Grafik waktu muncul embrio somatik tanaman pule pandak
Berdasarkan  grafik  pada  gambar  8, rerata  waktu  muncul  embrio  somatik  pada eksplan  tanaman  pule  pandak  tercepat ditunjukkan  oleh  perlakuan  S1  dengan  rerata waktumuncul  embrio  somatik  yaitu  23.3HSK (Hari  Setelah  Kultur).  Penelitian  Banu et    al. (2020),    menyatakan    bahwa    tanaman  pule pandak  ( Rauvolfia  serpentina L.)  yang diberikan  1  mg/l  BAP  dan  0,5  mg/l  Kinetin pada media kultur menunjukkan embriosomatik  mulai  muncul  pada  6  –  8 minggu  setelah  kultur.  Juliana et  al. (2019) yang menyatakan bahwa pemberian konsentrasi  BAP  yang  semakin  rendah  pada media  kultur  akan  mempercepat  waktu pembentukan kalus.
Penelitian  Naaty et  al. (2017), menyatakan  bahwa  pemberian  2  mg/l  BAP  +
0.8 mg/l  Kinetin + 0.4  mg/l  NAA + 0.5  mg/l TDZ  merupakan  formula  yang  efektif  untuk pembentukan  embrio  somatik  pada  tanaman Mpelepele  ( Schizozygia  Coffeoides Baill.). Pemberian  ZPT  pada  konsentrasi  yang berbeda berpengaruh pada tahapanperkembangan embrio. Pada
penelitian ini konsentrasi TDZ yang digunakan yaitu 0.1 – 0.3 mg/l, hal ini sejalan dengan  pernyataan  Lestari  (2015)  yang menyatakan bahwa TDZ mampu menginduksi embrio  somatik  jika  dilakukan  dengan menggunakan konsentrasi rendah, yaitu sekitar 0,1  –  0,5 mg/l. Munculnya kalus pada eksplan sebelum terbentuknya embrio somatik disajikan pada Gambar 9.
Gambar 9. Munculnya kalus pada eksplan tanaman pule pandak

## Diameter Embrio Somatik
Grafik rerata waktu muncul embrio somatik dapat dilihat pada Gambar 9.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 S1 28 40 42 0 41 0 27 28 0 27 S2 26 40 35 44 0 34 35 27 27 33 S3 34 40 41 42 41 0 36 39 42 36 0 10 20 30 40 50 Hari Setelah Kultur (HSK) Rerata Waktu Muncul Embrio Somatik (HSK)
e- ISSN: 2715-033X                                      JURNAL AGROPLASMA, Vol. 10 No. 1, Mei  2023: 237-251
Gambar 10. Grafik rerata diameter embrio somatik tanaman pule pandak
Berdasarkan  grafik  pada  gambar  10, rerata  diameter  embrio  somatik  terbesar diduga  ditunjukkan  pada  perlakuan  S2  yaitu 0.89  cm.Pada  penelitian  Peeris  dan  Senarath (2015),  pemberian  2.5  mg/l  2,4-D  +  3.0  mg/l Kinetin  pada  media  MS  menghasilkan  rerata diameter  kalus  embriogenik  sebesar  3.22  cm pada  eksplan  tanaman  cendana  ( Santalum album L.).  Sedangkan,  pada  penelitian Toharah et  al. (2015),  pemberian  2  mg/l BAPdan3 mg/l BAP tunggal mampu memberikan pertumbuhan kalus terbaik sehingga  diperoleh  diameter  kalus  yang  lebih besar dibandingkan dengan pemberian kombinasi antara BAP dan 2,4-D.
Pemberian  kombinasi  antara  TDZ  0.5 mg/l  +  2,4-D  0.1  mg/l  pada  eksplan  tanaman anggrek  lintang  ( Dendrobium  lineale Rolfe) menghasilkan rerata diameter kalus yaitu 3.25 cm (Hoesen et  al. , 2008). Menurut George et al. (2008) dalam Pardede et  al. (2021), penggunaan  TDZ  dengan  konsentrasi  lebih
tinggi  atau  kurang  dari  0,5  mg/l  dapat menyebabkan  proses  diferensiasi  embrio somatik  tidak  efektif.  Penelitian  Lubis et  al. (2018),  menyatakan  bahwa  pemberian  2-IP  7 ppm  +  IAA  2  ppm  menghasilkan  rerata diameter  kalus  pisang  barangan  ( Musa paradisiaca )  terbaik  yaitu  sebesar  1.203  cm. Gunawan  (1987) dalam Sihotang et  al. (2016), menyatakan bahwa pemberian sitokinin berpengaruh terhadap proses pembelahan sel, poliferasi kalus dan morfogenesis.

## Fase Embrio Somatik
Pada  penelitian  ini  perlakuan  S1,  S2 dan  S3  ditemukan  embrio  dalam  fase globular,  hati  dan  torpedo.  Sedangkan  pada perlakuan S0 tidak ditemukan embrio somatik namun  menghasilkan  planlet.  Fase  embrio somatik disajikan pada Gambar 10.
Gambar 10. Fase embrio somatik pada eksplan tanaman pule pandak
0.775833333 0.890833333 0.713333333 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 S1 S2 S3 D i a m e t e r  E m b r i o S o m a t i k   ( c m )
Globular Heart Torpedo
e- ISSN: 2715-033X                                      JURNAL AGROPLASMA, Vol. 10 No. 1, Mei  2023: 237-251
Pemberian  sitokinin  diperlukan  pada fase  awal  embriogenesis  somatik,  guna mendorong  pembelahan  sel  dan  proliferasi kalus serta pembentukan embrio somatik pada fase  globular  (Nawrot-Chorabik,  2011 dalam Ajijah  dan  Hartati,  2016).  Menurut  Hartati et al. (2018),  fase  globular  adalah  fase  dimana sel  berkumpul  dan  membentuk  massa  sel dengan  struktur  bulat.  Fase  hati  adalah  fase dimana terlihat adanya penonjolan pada kedua sisi  daerah  terminal,  sehingga  massa  sel membentuk struktur seperti jantung.
Sedangkan fase torpedo adalah tahap pembesaran dari fase hati.
Arnold et al. (2002) dalam Ardiyani et al. (2020), menyatakan bahwa cara merangsang  perkembangan  embrio  somatik adalah  dengan  menambahkan  sitokinin  dan mengurangi  atau  menghilangkan  penggunaan auksin.  Dalam  penelitian  ini,  pemberian kombinasi beberapa sitokinin mampu menghasilkan  embrio  somatik  dari  fase globular  hingga  torpedo  terbanyak  yaitu  17.6 helai  dan  rerata  diameter  embrio  somatik terbesar  yaitu  0.89  cm.  Sikder et  al. (2006) dalam Viola et al. (2017), menyatakan bahwa penggunaan media dasar dan penambahan zat pengatur  tumbuh  menggunakan  jenis  dan konsentrasi  yang  tepat  mampu  merangsang pembentukan embrio somatik.

## KESIMPULAN
1. Perlakuan S1, S2 dan S3 mengalami fase embrio  somatik  yaitu  fase  globular,  hati dan torpedo.
2. Terdapat  pengaruh  pemberian  beberapa formulasi  sitokinin  terhadap  persentase eksplan hidup, persentase eksplan membentuk  embrio  somatik,  waktu muncul  tunas,  jumlah  tunas  dan  daun, tinggi
eksplan, waktu muncul embriosomatik, diameter embrio somatik  dan  fase  embrio  somatik tanaman pule pandak ( Rauvolfia serpentina (L.)  Benth.  ex  Kurz)  selama periode pengamatan 12 MSK.
3. Perlakuan  S0  (Media  MS  +  Vit.  B Complex  1  pil/l  +  Vit.  E  1  pil/l  +  Myo inositol  100  mg/l  +  Glisin  5  mg/l  +
Pepton  100  mg/l  +  Kasein    100  mg/l [MS  Modifikasi]  +  GA3  1  mg/l) merupakan  formulasi  sitokinin  terbaik untuk menghasilkan rerata waktu muncul tunas tercepat yaitu 15.4 HSK.
4. Perlakuan  S1  (Media  MS  Modifikasi  +
2-IP 2 mg/l  + TDZ 0.1  mg/l + BAP 0.5 mg/l  dan  Kinetin  0.5  mg/l  +  GA3  1 mg/l)  merupakan  formulasi  sitokinin terbaik untuk menghasilkan rerata jumlah tunas terbanyak  yaitu 8.87 buah, rerata tinggi  eksplan tertinggi  yaitu 2.49 cm  dan  rerata  waktu  muncul  embrio somatik tercepat yaitu 23.3 HSK.
5. Perlakuan  S2  (MS  Modifikasi  +  2-IP  4 mg/l + TDZ 0.2 mg/l + BAP 1 mg/l dan Kinetin  1  mg/l  +  GA3  1  mg/l) merupakan  formulasi  sitokinin  terbaik untuk  menghasilkan  rerata  jumlah  daun terbanyak  yaitu  17.6  helai  dan  rerata diameter  embrio  somatik  terbesar  yaitu 0.89 cm.

## DAFTAR PUSTAKA
Ajijah, N., dan R.R.S. Hartati. 2016. Pengaruh Sitokinin, Jenis Eksplan, dan Genotipe Terhadap Embriogenesis Somatik
Kakao. Jurnal  Tanaman  Industri  dan Penyegar. 3(2) : 71 – 82
Alfiana,  I.  2020.  Pengaruh  Kombinasi  Zat Pengatur  Tumbuh  Air  Kelapa,  BAP dan NAA pada Media DKW Terhadap Pertumbuhan  Eksplan  Rumput  Gajah ( Pennisetum  Purpureum Schumach) Secara In Vitro . [Skripsi]. Tasikmalaya  (ID).  Fakultas  Pertanian. Universitas Siliwangi. Ardiyani,  F., E.S.W Utami., H. Purnobasuki., dan S.A. Paramita. 2020. Development  and  regeneration  of somatic  embryos  from  leaves-derived calli  of Coffea  liberica.  Biodiversitas Journal. 21(12)  :  5829  –  5834
Organogenesis Kultur/ZvVitro Dendrobium lineale
Rolfe. Berita Biologi. 9(3) : 333 – 341 Banu,  T.A.,  S.  Khan.,  B.  Goswami.,  S. Arifin., A. Habib., dan S. Akter. 2020. Indirect  Organogenesis  and  Somatic Embryogenesis  For  Regeneration  Of
e- ISSN: 2715-033X                                      JURNAL AGROPLASMA, Vol. 10 No. 1, Mei  2023: 237-251
Rauvolfia   serpentina L.  from   Root Explants. Bangladesh  J.  Bot. 49(4)  :
1021 – 1027
Basri,  A.H.H.  2016.  Kajian  Pemanfaatan
Kultur  Jaringan  Dalam  Perbanyakan Tanaman Bebas Virus. Agrica Ekstensia . 10(1) : 64 – 73 Budi, R.S. 2020. Uji  Komposisi Zat Pengatur Tumbuh Terhadap Pertumbuhan
Eksplan  Pisang  Barangan  ( Musa paradisiaca L.)  pada  Media  MS
Secara In  Vitro . Best  Journal .  3(1)  :
101 – 111
Binish,  T.  2018.  Micropropagation  of  iron Deficiency  Prevent  Plant Ceropegia spiralis.The Pharma InnovationJournal. 7(11) : 400 – 404 Faheem,  M.,  S.  Singh.,  B.S.  Tanwer.,  M.
Khan., dan A. Shahzad. 2011. In Vitro Regeneration of Multiplication Shoots in Catharanthus  roseus -  an  Important
Medicinal  Plant. Advances  in  Applied
Science Research . 2(1) : 208 – 213 Febriyanti,  D.  D.  2015.  Pengaruh  konsentrasi hormon  TDZ  ( thidiazuron )  terhadap pembentukan  somatik  embriogenesis gaharu  ( Gyrinops  versteegii (Gigl) Domke)  melalui  teknik in    vitro . [Skripsi].    Jember  (ID).  Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendirikan.
Universitas Jember. Hartati.,  H.  Agani.,  N.S.  Hartati.,  dan  E. Sudarmonowati. 2018. Kecepatan Regenerasi Kalus Somatik Embriogenik  Terung  pada  Beberapa Media  Maturasi. Jurnal  Ilmu  Dasar. 19(2) : 125 – 134
Hoesen,  D.S.H.,  Witjaksono.,  dan  L.A.
Sukamto.  2008.  Induksi      Kalus  dan Embriogenesis  Somatik  dariJaringan Endosperma Jeruk Siam ( Citrus nobilis Lour.)  cv  Simadu. J.  Agron. Indonesia . 42(1) : 44 – 51
Istiningdyah,  A.,Y.  Tambing.,  dan  M.U. Bustami.  2013.  Pengaruh  BAP  dan Kasein Hidrolisat Terhadap
Pertumbuhan  Tunas  Melon  ( Cucumis melo L.)  Secara In  Vitro . E-J Agrotekbis . 1(4) : 314 – 322 Juliana,  T.,  M.N.  Isda.,  dan  D.  Iriani.  2019.
Embriogenesis  Somatik  dari  Kalus
Manggis  ( Garcinia  mangostana L.) Asal  Bengkalis  dengan  Pemberian BAP  dan  Madu  Secara In  Vitro . Journal of Biology . 12(1) : 8 – 17 Kartini,  M.,  dan  Karyanti.  2017.  Pengaruh Thidiazuron  dan  Hidrolisat  Kasein Terhadap  Multiplikasi  Tunas  Satoimo ( Colocasia  esculenta (L.)  Schott  Var Antiquorum )  Secara In  Vitro . Jurnal Bioteknologi  dan  Biosains  Indonesia . 4(1) : 70 – 77
Karyanti.  2017.  Pengaruh  Beberapa  Jenis Sitokinin  pada  Multiplikasi  Tunas Anggrek Vanda  douglas Secara In Vitro . Jurnal Bioteknologi dan Biosains Indonesia . 4(1) : 36 – 43 Khisbah,  A.  2003.  Potensi  Tumbuhan  Obat Pule  Pandak  ( Rauvolfia  serpentina Benth.)  di  RPH  Selogender,  BKPH Selogender, KPH Randublatung. [Skripsi]. Bogor (ID). Fakultas
Kehutanan. IPB. Kosmiatin, M., A. Purwito., G.A. Wattimena., dan  I.  Mariska.Induksi American Journal of Plant Sciences . 3(4) : 437 – 442
Kunwar, B.B. 2019. Establishing In Situ Gene
Bank  of Rauvolfia  serpentina (L.) Benth ex Kurtz in Western Nepal with a Focus on Conservation and
Sustainability. Biodiversity
International Journal. 3(4) : 134 – 143
Lestari  E.G.,  dan  S.  Hutami.  2005.  Produksi Bibit Kencur ( Kaempferia galanga L.) Melalui Kultur Jaringan. Berita
Biologi. 7(6) : 315 – 321
Lestari,  E.G.  2015.  Peran  Thidiazuron  dalam Peningkatan  Kemampuan  Proliferasi Tanaman  Secara In  Vitro.  Jurnal Litbang Pertanian . 34(2) : 87 – 93
Lestari,  N.K.D.,  N.W.  Deswiniyanti.,  I.A. Astarini.,  dan  N.L.  Arpiw.  2019. Bioteknologi  In  Vitro  Lili. Penerbit Deepublish, Yogyakarta Lubis, E., M.I. Pinem., dan R. Febrian. 2018.
Contributions  of  IAA  ( Indole  Acetic Acid )  and  2-Ip  ( Dimethyl  Allyl  Amino Purine ) on Multiplication of Red Plant Banana  Explants  ( Musa  paradisiaca ) In  MS  Media  by  In  Vitro.  Proceeding International Conference on
e- ISSN: 2715-033X                                      JURNAL AGROPLASMA, Vol. 10 No. 1, Mei  2023: 237-251
Sustainable  Agriculture  and  Natural Resources  Management.  Medan:  28- 29 Agustus 2018. Hal. 300 – 306
Mardiana, D.N. 2019. Pengaruh Media Pupuk Daun  terhadap  Multiplikasi  Pisang
Barangan (Musa acuminata L.)
Secara  In  Vitro. [Tesis].  Bandung
(ID).  Fakultas  Sains  dan  Teknologi. UIN Sunan Gunung Djati.
Mallick,  S.R.,  R.C.  Jena.,  dan  K.C.  Samal. 2012. Rapid In Vitro Multiplication of an Endangered Medicinal Plant Sarpgandha  ( Rauwolfia  serpentina ).
2021.  In  Vitro  Micropropagation  of Pentatropis  capensis (L.f.)  bullock (Apocynaceae). International  Journal of Botany Studies. 6(5) : 131 – 136 Mirah,  T.,  Undang.,  Y.  Sunarya.,  T.M. Ermayanti. 2021.Pengaruh
Konsentrasi Sitokinin dan Jenis Media
Terhadap  Pertumbuhan  Eksplan  Buku Stevia  ( Stevia  rebaudiana Bert.) Tetraploid. Media  Pertanian. 6(1)  :  1 – 11
Murthy,  K.S.R.,  R.  Kondamudi.,  dan  T.
Pullaiah. 2010. High Frequency
Somatic  Embryogenesis  in Ceropegia spiralis Wight—An  Endemic  and Endangered  Medicinal  Plant. Indian Journal of Biotechnology . 9(1) : 414 – 418
Naaty,  B.,  C.M  Mbithe.,  A.B.  Nyende.,  P. Njenga., dan J.K. Muli . 2017. In Vitro Regeneration via Somatic Embryogenesis of Schizozygia coffeoides Baill (Mpelepele). American  Journal  of  Plant  Biology. 2(2) : 66 – 72 Nurana,  A.R.,  G.  Wijana.,  dan  R.  Dwiyani. 2017.  Pengaruh  2-ip  dan  NAA
Terhadap Pertumbuhan Planlet Anggrek  Dendrobium  Hibrida  pada Tahap Subkultur. Agrotrop . 7(2) : 139
– 146
Nurmaningrum,  D.,  Y.  Nurchayati.,  dan  N.
Setiari.  2017.Mikropropagasi  Tunas Alfalfa  ( Medicago  sativa L.)  pada Kombinasi Benzil Amino Purin (BAP) dan Thidiazuron (TDZ). Buletin Anatomi  dan  Fisiologi .  2(2)  :  211  – 217
Oliveira,  A.J.B  de.,  V.M.  de  Carvalho.,  A.
Ferreira.,  F.Y.  Sato.,  M.  de  F.P.  da  S.
Machado. 2003. In Vitro Multiplication  of Tabernaemontana fuchsiaefolia
L. (Apocynaceae).
Sociedade de Investigações Florestais . 27(4) : 421 – 425
Pant,  K.K.,  dan  S.D.  Joshi.  2008.  Rapid Multiplication of Rauvolfia serpentina Benth.  ex.  Kurz  Through  Tissue Culture. Scientific  World. 6(6)  :  58  – 62
Pardede, Y., E. Mursyanti., dan B.R. Sidharta. 2021.  Pengaruh  Hormon  Terhadap Induksi  Embrio  Somatik  Kacapiring ( Gardenia  jasminoides )  dan  Potensi Aplikasinya  Dalam  Pembuatan  Benih Sintetik. Biota  :  Jurnal  Ilmiah  Ilmu- Ilmu Hayati . 6 (3): 162 – 177 Peeris,  M.K.P.,  dan  W.T.P.S.K.  Senarath. 2015.In vitro propagation of Santalum album L. Journal  of  the  National Science  Foundation  of  Sri  Lanka . 43(3) : 265 – 272
Prasetyorini.  2019. Kultur  Jaringan .  LPPM Universitas Pakuan, Bogor Ranganatha,  M.,  A.  AS.,  A.  Sharma.,  dan N.N.  Rao.  2020.  In  Vitro  Shoot Regeneration Of Swallow Root ( Decalepis  hamiltonii )  –  A  Steno- Endemic  Red  Listed  Medicinal  Plant. Asian  Journal  of  Pharmaceutical  and Clinical Research . 13(3) : 188 – 191 Rineksane,  I.A.,  D.  Nurjaman.,  dan  B.H.
Isnawan.  2015.  Kajian  Penggunaan Jenis  Eksplan  dan  Thidiazuron  untuk Multiplikasi Tunas  Adventif Tanaman
Sarang  Semut  ( Myrmecodia  pendens
Merr. & L.M.Perry). Prosiding
Seminar  Nasional  FKPTPI  2015. Banjarmasin:  September  2015.  Hal. 204 – 208 Rusdianto, dan A. Indrianto. 2015.
Peningkatan  Pembentukan  Embrio Somatik  pada  Wortel  ( Daucus  carota L) Menggunakan N6- Benzylaminopurine (BAP). Jurnal
Bionature . 16(2) : 91 – 97
Santos, M.R.A., dan E.S. Paz. 2016. Effect of 2,4-D  on  Callus  Induction  In  Leaf Explants  of  Peach  Palm  ( Bactris
e- ISSN: 2715-033X                                      JURNAL AGROPLASMA, Vol. 10 No. 1, Mei  2023: 237-251
gasipaes H.B.K.).
International
Journal  of  Current  Research ,  8(9)  :
38688 – 38691
Saputra,  N.T.  2019.  Pengaruh  Jenis  Medium dan Konsentrasi BAP Terhadap
Pertumbuhan  Tunas  Anggrek Vanda
tricolor. [Skripsi].  Yogyakarta  (ID). Fakultas Pertanian. Universitas
Muhammadiyah Yogyakarta.
Shinta,  D.  2017.  Pengaruh  BAP  dan  Kinetin
Terhadap  Pertumbuhan  Tunas  Pisang Barangan  ( Musa  paradisiaca L.)
Secara In  Vitro .  [Skripsi].  Bengkulu (ID).  Fakultas  Pertanian.  Universitas Bengkulu.
Sihotang,  S.,  E.H.  Kardhinata.,  dan  Riyanto.
2016. Stimulasi Tunas Pisang Barangan ( Musa acuminata L.) Secara
In Vitro Dengan Berbagai Konsentrasi IBA  ( Indole3-  butyridacid )  dan  BA
( Benzyladenin ). Jurnal Biologi
Lingkungan,  Industri,  Kesehatan .  3(1)
: 18 – 30
Sudiyanti,  S.,  T.B.  Rusbana.,  dan  Sudiyanti. 2017.  Inisiasi  Tunas  Kokoleceran ( Vatica  bantamensis )  pada  Berbagai Jenis  Media  Tanam  dan  Konsentrasi BAP ( Benzyl Amino Purine ) Secara In Vitro . Jurnal Agro . 4(1) : 1 – 14 Sugito,  H.  2006.  Penggunaan  Thidiazuron,
2,4-D dan Giberellin dalam Pembentukan  Embrio  Somatik  Pule Pandak  ( Rauvolfia  serpentina (L.) Benth.  ex  Kurz)  Melalui  Kultur In Vitro .  [Thesis].  Bogor  (ID).  Sekolah Pascasarjana. IPB.
Sulandjari.  2008.  Hasil  Akar  dan  Reserpina Pule  Pandak  ( Rauvolfia  serpentina Benth.)  pada  Media  Bawah  Tegakan Berpotensi  Alelopati  dengan  Asupan Hara. Jurnal  Biodiversitas. 9(3)  :  180
– 183
Sundari,  L.,  L.A.M.  Siregar.,  dan  D.S.
Hanafiah. 2015.Kajian  Awal :  Respon Eksplan  Nodus  dalam  Inisiasi  Tunas Mikro Tanaman Karet ( Hevea brasiliensis Muell. Arg.) dalam Medium WPM. Jurnal Online Agroteknologi. 3(1) : 179 – 187
Suminar,  E.,  Sumadi.,  S.  Mubarok.,  T.
Sunarto.,  dan  N.S.E.  Rini.  2017.
Percepatan  Penyediaan  Benih  Sumber Kedelai Unggul Secara In Vitro.Jurnal Agrikultura. 28 (3) : 126 – 135 Suwal,  M.  M.,  Lamichhane,  J.,  &  Gauchan, D.  P.  2020.  Regeneration  Technique of  Bamboo  Species  through  Nodal Segments:  A  Review. Nepal  Journal of Biotechnology . 8(1) : 54 – 68 Toharah,  N.I.,  D.S.D.  Jekti.,  dan  L.  Zulkifli.
2015. Pertumbuhan Kalus Daun
Melon  ( Cucumis  melo )  Varietas  Mai 119  dengan  Pemberian  BAP  ( Benzyl Amino  Purine )  Dan  2,4-D  ( 2,4 Dichlorophenoxyacetic  Acid ). Jurnal Penelitian  Pendidikan  IPA  (JPPIPA) .
1(2) : 38 – 48 Ugraiah,  A.,  V.R.  Sreelatha.,  P.V.K.  Reddy.,
K. Rajasekhar., S.S. Rani., S.
Karuppusamy.,  dan  T.  Pullaiah.  2011. In  Vitro  Shoot  Multiplication  And Conservation of Caralluma bhupenderiana Sarkaria - an
Endangered  Medicinal  Plant  from South  India. African  Journal  of Biotechnology . 10(46) : 9328 – 9336 Varnika., R. Sharma., A. Singh., Shalini., dan N.  Sharma.  2020.  Micropropagation and  Screening  of  Phytocompounds Present  Among In  Vitro Raised  and Wild  Plants  of Rauvolfia  serpentine. Walailak Journal Science & Technology. 17(11) : 1177 – 1193 Viola,  Y.R.N.,  M.  Roviq.,  dan  T.  Wardiyati.
2017.  Pengaruh Konsentrasi  BA Terhadap Pembentukan Embrio Somatik  pada  Tanaman  Kentang ( Solanum  tuberosum L.)  Secara In
Vitro. Plantropica Journal of Agriculture Science. 2(1) : 10 – 17 Widiastoety,  D.,  dan  Nurmalinda.  2010. Pengaruh Suplemen Nonsintetik terhadap Pertumbuhan Planlet Anggrek  Vanda. J.  Hort .  20(1)  :  60  – 66
Wulansari,  A., D.R. Wulandari., L. Sari., dan
T.M.  Ermayanti.  2017.  Pengaruh Perlakuan Sitokinin Terhadap Pertumbuhan In  Vitro Talas  Diploid Pontianak  Dan  Talas  Triploid  Bolang Hitam.  Prosiding  Seminar  Nasional
e- ISSN: 2715-033X                                      JURNAL AGROPLASMA, Vol. 10 No. 1, Mei  2023: 237-251
2017  Fak.  Pertanian  UMJ.  Bogor:  8
November 2017. Hal. 138 – 146. Yahya,  A.F.  2001.  Pertumbuhan,  Biomassa dan  Kandungan  Alkaloid  Akar  Pule Pandak  ( Rauwolfia  serpentina Benth.) Hasil Kultur In Vitro . [Skripsi]. Bogor
(ID). Fakultas Kehutanan. IPB.
Yeyen,  Y.,  T.  Nopsagiarti.,  dan  Seprido.
2021.Uji  Berbagai  Sitokinin  pada Media  Ms  Terhadap  Pertumbuhan
Globular  Eksplan  Pisang  Barangan ( Musa  acuminata ). Jurnal  Green Swarnadwipa . 10(2) : 176 – 184
Yelnititis.  2020.  Induksi  Kalus  Embriogenik dan  Embrio  Somatik  dari  Eksplan Daun Kulim ( Scorodocarpus borneensis Becc.). Jurnal  Pemuliaan
Tanaman Hutan . 14(2) : 75 – 83
Yunita, R., dan E.G. Lestari. 2011. Perbanyakan  Tanaman  ( Rauwolfia serpentina L.)  dengan  Teknik  Kultur Jaringan. Jurnal  Natur  Indonesia . 14(1) : 68 – 72
Ziraluo,  Y.P.B.  2021.  Metode  Perbanyakan
Tanaman  Ubi  Jalar  Ungu      ( Ipomea batatas Poiret)  dengan  Teknik  Kultur
Jaringan  atau  Stek  Planlet. Jurnal
Inovasi Penelitian. 2(3) : 1039 – 1046