EKSTRAK ETANOL DAUN JERUK PURUT ( Citrus hystrix D.C ) MENGHAMBAT
PERTUMBUHAN Bacillus cereus : UJI IN VITRO
Ridha Nugraheni *  , Noorhamdani ** , Hanif ***

## Abstrak
Hospital-acquired  infections (HAIs)  merupakan  infeksi  yang  terjadi  pada  pasien  saat  menerima perawatan  di  rumah  sakit  dalam  waktu  lebih  dari  48  jam.  Sebagian  besar  HAIs  disebabkan  oleh  bakteri yang  resisten  terhadap  antibiotik.  Salah  satu  penyebabnya  adalah  bakteri Bacillus  cereus . B.  cereus memiliki dua jenis toksin yang menyebabkan gejala gastrointestinal. Pada individu immunocompromised , B. cereus dapat menyebabkan sejumlah infeksi sistemik dan lokal fatal . Upaya untuk mengurangi resistensi bakteri  adalah  dengan  mengurangi  penggunaan  antibiotik  yang  tidak  rasional,  salah  satunya  dengan menggunakan alternatif pengobatan herbal. Daun jeruk purut ( Citrus hystrix D.C ) mengandung flavonoid, alkaloid, tannin, kuinon, dan terpenoid yang terbukti memiliki efek antimikroba. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun jeruk purut terhadap B. cereus secara in vitro . Dalam penelitian  ini  digunakan 7  perlakuan  yaitu  konsentrasi  3,125%;  6,25%;  12,5%;  25%;  50%;  100%;  0% sebagai  kontrol  negatif,  dan  antibiotik  kloramfenikol  10  mg/mL  sebagai  kontrol  positif.  Pengulangan sebanyak  empat  kali  menggunakan  metode  difusi  sumuran.  Hasil  menunjukkan  rata-rata  terbentuknya diameter zona hambat pertumbuhan pada konsentrasi 6,25%; 12,5%; 25%; 50%; 100% berturut-turut 5,93 mm; 7,05 mm; 8,23 mm; 10,41 mm; 12,00 mm. Uji post hoc Tukey HSD menunjukkan ekstrak mulai efektif sebagai  antibakteri  terhadap B.  cereus pada  konsentrasi  6,25%  (p  <  0,05).  Uji  korelasi Pearson menunjukkan adanya hubungan signifikan antara konsentrasi ekstrak terhadap zona hambat pertumbuhan (p < 0,05). Disimpulkan bahwa ekstrak etanol daun jeruk purut efektif sebagai antibakteri B. cereus secara in vitro dan signifikan bila dibandingkan dengan kloramfenikol.
Kata kunci: antibakteri, Bacillus cereus, daun jeruk purut ( Citrus hystrix D.C )
ETHANOL EXTRACT OF KAFFIR LIME (Citrus hystrix D.C) LEAVES INHIBIT

## THE GROWTH OF Bacillus cereus: IN VITRO STUDY

## Abstract
Hospital-acquired  infections  (HAIs)  are  infections  that  occur  in  patients  when  they  receive  hospital treatment for more than 48 hours. Most HAIs are caused by bacteria that are resistant to antibiotics. One of the causes is Bacillus cereus . B. cereus has two types of toxins that can cause gastrointestinal symptoms. In immunocompromised persons, B. cereus can cause several fatal systemic and local infections. One of the  efforts  to  reduce  bacterial  resistance  is  by  reducing  the  irrational  use  of  antibiotics  using  herbal medicine  as  an  alternative.  Kaffir  lime  ( Citrus  hystrix  D.C )  leaves  contain  flavonoids,  alkaloids,  tannins, quinones,  and  terpenoids  which  are  proven  to  have  antimicrobial  effects.  This  in  vitro  study  is  aimed  to determine the antibacterial activity of ethanol extract of kaffir lime leaves against B. cereus . In this study, 7 different treatments were used with the concentrations of 3.125%; 6.25%; 12.5%; 25%; 50%; 100%; 0% as negative control, and 10 mg/mL of chloramphenicol as positive control. It was repeated four times using the well  diffusion  method.  The  results  showed  that  the  average  diameter  of  inhibition  zone  was  formed  at  a concentration of 6.25%; 12.5%; 25%; 50%; 100%, consecutively: 5.93 mm; 7.05 mm; 8.23 mm; 10.41 mm; 12.00  mm.  Post  hoc  Tukey  HSD  test  showed  that  the  extract  began  to  be  effective  as  an  antibacterial against B.  cereus at  a  concentration  of  6.25%  (p  <  0.05).  Pearson  correlation  test  showed  a  significant relationship between the concentration of extract and the growth inhibition zone (p < 0.05). In conclusion, ethanol  extract  of  kaffir  lime  leaves  was  effective  as  an  antibacterial  against B.  cereus in  vitro  and significant when compared to chloramphenicol.
Keywords: antibacteria, Bacillus cereus, kaffir lime ( Citrus hystrix D.C ) leaves
*   Program Studi Pendidikan Dokter (S1), Fakultas Kedokteran, Universitas Brawijaya **  Departemen Mikrobiologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Brawijaya
*** Departemen Anestesiologi dan Terapi Intensif, Fakultas Kedokteran, Universitas Brawijaya
 E-mail: ridhanugraheni@student.ub.ac.id

## Pendahuluan
Hospital-acquired  infections atau  HAIs merupakan  infeksi  yang  terjadi  pada  pasien saat  menerima  perawatan  kesehatan  yang pertama kali muncul dalam 48 jam atau lebih setelah  masuk  rumah  sakit,  atau  dalam  30 hari  setelah  menerima  perawatan  kesehatan. Sebagian besar HAIs disebabkan oleh bakteri yang  resisten  terhadap  antibiotik  dan  dapat menyebabkan sepsis hingga kematian. Faktor utama  yang  memicu  penyebab  kontaminasi silang  ini  adalah  karena  turunnya  respons imun pasien ( immunocompromised ). 1,2
Bacillus  cereus merupakan  bakteri  basil Gram positif yang dapat ditemukan di hampir seluruh  permukaan  di  lingkungan. B.  cereus memiliki dua jenis toksin utama (toksin emetik dan  diare)  yang  menjadi  faktor  virulensi bakteri  ini. 3 Kedua  toksin  ini  menyebabkan timbulnya gejala gastrointestinal pada individu yang  terinfeksi.  Selain  itu, B.  cereus juga dapat menyebabkan infeksi lokal dan sistemik seperti  septikemia,  endoftalmitis,  pneumonia, endocarditis,  meningitis  dan  ensefalits  ter- utama  pada  individu immunocompromised seperti  neonatus  yang  mengakibatkan kematian sekitar 10% dari kasus. 3
Infeksi B.  cereus umumnya  diobati dengan  antibiotik.  Namun,  seiring  meningkat- nya  resistensi  terhadap  antibiotik,  infeksi menjadi  lebih  sulit  diobati.  Untuk  mengontrol kejadian  resistensi  antibiotik  lebih  lanjut, pemberian  antibiotik  secara  rasional  harus diterapkan,  seperti  dengan  memperhatikan dosis  optimal,  interval  pemberian  obat  dan durasi  pemberian  terapi.  Untuk  mengurangi pemakaian  antibiotik  berlebih  dan  memini- malisir  kejadian  resistensi  antibiotik,  maka dibutuhkan  alternatif  pengobatan  lain  seperti penggunaan obat-obatan herbal yang memiliki efek  samping  minimal,  salah  satunya  daun jeruk purut ( Citrus hystrix D.C).
Menurut  hasil  penelitian,  ditemukan beberapa  zat  aktif  yang  terkandung  dalam ekstrak etanol daun jeruk purut ( Citrus hystrix D.C),  antara  lain  ialah  alkaloid,  karbohidrat,
flavonoid,  glikosida,  fitosterol,  tannin,  kuinon, monoterpenoid  dan  seskui-terpenoid. 4,5 Beberapa  dari  zat  aktif  tersebut  diketahui memiliki  aktivitas  antibakteri  yang  telah  diuji efeknya  terhadap  bakteri  baik  Gram  positif maupun Gram negatif secara in vitro. 6,7
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun C.  hystrix D.C  terhadap B.  cereus dan mengetahui  hubungan  antara  konsentrasi ekstrak etanol C. hystrix D.C dengan diameter zona  hambat  pertumbuhan  bakteri B.  cereus yang  terbentuk.  Berdasarkan  dari  latar belakang  yang  ada,  maka  dianggap  perlu untuk  melakukan  uji  efektivitas  antibakteri C. hystrix terhadap B. cereus secara in vitro .

## Bahan dan Metode

## Rancangan Penelitian
Penelitian  ini  merupakan  penelitian true experimental untuk  mengetahui  aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun C. hystrix D.C terhadap B.  cereus secara in  vitro menggunakan  metode  uji  sensitivitas  difusi sumuran.

## Sampel Penelitian
Sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah biakan strain B. cereus NTCC 8055 yang  didapatkan  dari  Balai  Laboratorium Kesehatan  dan  Kalibrasi  Yogyakarta  yang telah  melalui  uji  isolasi  dan  identifikasi  dan mendapatkan  sertifikat  hasil  uji,  yaitu menggunakan  metode  identifikasi  Gram (teridentifikasi batang Gram positif ditunjukkan oleh  Gambar  1)  dan  isolasi  pada  medium Blood  Agar  Plate (teridentifikasi  zona hemolisis penuh (β) ditunjukkan pada Gambar 2).

## Variabel Penelitian
Variabel  penelitian  terdiri  dari  ekstrak etanol  daun C.  hystrix D.C  dengan  konsen- trasi  0%;  3,125%;  6,25%;  12,5%;  25%;  50%; 100% sebagai variabel bebas.
Lalu,  zona  hambat  pertumbuhan  bakteri B. cereus yang  terbentuk  sebagai  variabel tergantung.

## Lokasi Penelitian
Penelitian  ini  dilakukan  di  Laboratorium Mikrobiologi  Klinik,  Fakultas  Kedokteran, Universitas Brawijaya, Malang.

## Identifikasi Bakteri Uji
Untuk  memastikan  bakteri  yang  diujikan benar B. cereus , dilakukan identifikasi bakteri uji dengan metode pewarnaan Gram (Gambar 1)  dan  penanaman  pada  medium  BAP (Gambar 2).
Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Jeruk Purut (C. hystrix D.C) Daun  jeruk  purut  diperoleh  dari  UPT
Materia  Medika  Kota  Batu,  Malang.  Daun jeruk purut sejumlah 200 gram ditimbang dan
dibersihkan  dengan  air  mengalir,  ditiriskan dan  dipotong-potong  menjadi  bagian  kecil. Sampel  daun  jeruk  purut  kemudian  dikering- kan  dalam  oven  pada  suhu  40-60  ºC  dan diblender  hingga  menjadi  sediaan  serbuk. Pembuatan ekstrak dilakukan dengan metode maserasi  dengan  cara  merendam  200  gram serbuk  daun  jeruk  purut  ke  dalam  bejana, kemudian  sampel  kering  dicampur  dengan  1 L pelarut etanol 96% dan dikocok selama 30 menit,  kemudian  direndam  semalam  hingga mengendap.  Lapisan  atas  yang  terpisah merupakan campuran dari pelarut dan senya- wa  aktif.  Lapisan  ini  diambil  dan  diulang langkah  yang  sama  hingga  sebanyak  3  kali. Setelah itu, hasil yang diperoleh dimasukkan ke dalam labu evaporasi dan dipasang pada evaporator.  Proses  evaporasi  ini  dilakukan untuk  memisahkan  pelarut  etanol  96% dengan  zat  aktif  daun  jeruk  purut  yang diinginkan. 8
Gambar 1. Hasil pewarnaan Gram bakteri Bacillus cereus didapatkan gambaran bakteri basil Gram positif (1000x)
Gambar 2. Hasil uji aktivitas hemolitik pada bakteri Bacillus cereus Keterangan.  Didapati  zona  bening  (A)  berukuran  2-4  mm  di  sekitar  pertumbuhan  koloni  bakteri Bacillus cereus (B) yang menandakan adanya zona hemolisis penuh (β)

## Persiapan Bakteri Uji
Uji  sensitivitas  antibakteri  dengan  me- tode  difusi  sumuran  membutuhkan  suspensi bakteri B. cereus dengan kepadatan 10 5 CFU/ mL. Pembuatan suspensi bakteri uji dilakukan dengan  langkah-langkah  sebagai  berikut: koloni  bakteri B.  cereus dimasukkan  ke tabung  reaksi  steril  berisi nutrient  broth menggunakan  ose  dan  dicampur  denga vortex, kemudian diinkubasi pada suhu 35-37 ºC  selama  18-24  jam.  Untuk  mendapatkan hasil  konsentrasi  bakteri  sebesar  10 5 CFU/ mL,  suspensi  diencerkan  dengan menggunakan  rumus  pengenceran yang setara dengan nilai OD sebesar 0,1. 9

## Uji Aktivitas Antibakteri
Pembuatan  konsentrasi  ekstrak  dilaku- kan  dengan  cara  melarutkan  ekstrak  etanol daun  jeruk  purut  (100%)  dengan  akuades sehingga  diperoleh  konsentrasi  50%,  25%, 12,5%, 6,25%, 3,125% dengan pengenceran bertingkat.  Kontrol  positif  yang  digunakan adalah  antibiotik  kloramfenikol  dan  kontrol negatif akuades (0%).
Uji  sensitivitas  antibakteri  dilakukan dengan  menggunakan  metode  difusi sumuran.  Media  dipersiapkan  dengan
mencampurkan suspensi bakteri uji sebanyak 0,5 mL dengan 25 mL nutrient agar cair pada 5 petri  dish berbeda.  Setelah  media memadat,  dibuat  7  lubang  sumuran  dengan diameter 5 mm dan kedalaman 4 mm. Untuk media  kontrol  positif,  dibuat  4  lubang sumuran.  Kemudian  pada  masing-masing lubang  sumuran  yang  telah  dibuat, dimasukkan  berbagai  konsentrasi  ekstrak daun jeruk purut dan juga dosis antibiotik 200 mg/mL, 10 mg/mL, 1 mg/mL, dan 0,1 mg/mL. Media  sumuran  diinkubasi  pada  suhu  37  ºC selama  18-24  jam  dan  diukur  diameter  zona hambat  pertumbuhan  yang  terbentuk menggunakan jangka sorong. 10

## Hasil
Hasil  uji  sensitivitas  antibakteri  ekstrak etanol  daun  jeruk  purut  terhadap  bakteri B. cereus secara in  vitro dengan  konsentrasi ekstrak  daun  jeruk  purut  100%,  50%,  25%, 12,5%,  6,25%,  3,125%,  0%  (kontrol  negatif), dan  kontrol  positif  antibiotik  kloramfenikol yang mulai sensitif pada dosis 10 mg/mL me- nunjukkan  hasil  pada  Gambar  3  dengan keterangan  rata-rata  diameter  yang  disajikan pada Tabel 1.
Gambar 3. Hasil uji difusi sumuran 7 konsentrasi berbeda dari ekstrak etanol daun jeruk purut dengan 4 kali pengulangan (I-IV) dan kontrol kloramfenikol (KP) terhadap Bacillus cereus Keterangan: (I-IV) merupakan hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun jeruk purut terhadap bakteri B. cereus dengan pengulangan 4 kali. K1: Ekstrak daun jeruk purut konsentrasi 0%. K2: Ekstrak daun  jeruk  purut  konsentrasi  3,125%.  K3:  Ekstrak  daun  jeruk  purut  konsentrasi  6,25%.  K4: Ekstrak daun jeruk purut konsentrasi 12,5%. K5: Ekstrak daun jeruk purut konsentrasi 25%. K6: Ekstrak daun jeruk purut konsentrasi 50%. K7: Ekstrak daun jeruk purut konsentrasi 100%. (KP) merupakan  merupakan  kontrol  positif  menggunakan  antibiotik  kloramfenikol  dengan  berbagai dosis, sensitif mulai dosis 10 mg/mL
Tabel 1. Hasil pengukuran diameter zona hambat pertumbuhan Perlakuan Diameter Zona Hambat Pertumbuhan (mm) Rata-Rata I II III IV KN (0%) 0 0 0 0 0 K1 (3,125%) 0 0 0 0 0 K2 (6,25%) 5,57* 5,94* 5,89* 6,30* 5,93* K3 (12,5%) 6,91* 7,30* 6,79* 7,21* 7,05* K4 (25%) 8,17* 8,54* 7,90* 8,29* 8,23* K5 (50%) 10,41* 10,58* 10,22* 10,42* 10,41* K6 (100%) 11,54* 11,89* 12,19* 12,35* 12,00* KP (Kloramfenikol 10 mg/mL) 14,43*
Keterangan:  KN: Kontrol Negatif, KP: Kontrol Positif, K1-6: 6 konsentrasi berbeda ekstrak etanol daun jeruk purut yang diujikan. *: Hasil signifikan terhadap kelompok kontrol negatif (p < 0,05)

## Analisis Data
Uji statistik yang pertama kali dilakukan adalah  uji  normalitas  dan  homogenitas.  Uji normalitas  dilakukan  menggunakan  uji Saphiro-Wilk dan  menunjukkan  data berdistribusi  normal  (p  >  0,05).  Uji  homo- genitas  dilakukan  menggunakan Lavene  test dan didapatkan hasil bervarian homogen (p > 0,05).  Dengan  data  penelitian  terdistribusi normal dan homogen, maka uji statistik meng- gunakan  uji  parametrik  yaitu  uji  komparasi one  way ANOVA,  uji post  hoc  Tukey HSD, dan  uji  korelasi Pearson .  Uji  komparasi one- way ANOVA menunjukkan bahwa setidaknya terdapat  2  kelompok  yang  memiliki  rerata zona  hambat  pertumbuhan  yang  berbeda secara signifikan (p < 0,05). Uji korelasi post hoc  Tukey HSD  menunjukkan  adanya perbedaan  kelompok  perlakuan  secara signifikan dimulai dari konsentrasi 6,25% (p <
0,05).  Uji  korelasi Pearson menunjukkan adanya  hubungan  yang  signifikan  antara konsentrasi  ekstrak  terhadap  zona  hambat pertumbuhan yang terbentuk (p < 0,05). Pada hasil uji tersebut didapatkan nilai R (koefisien korelasi)  yang  bersifat  positif  sebesar  0,809 (pada  selang  0,8-1,0)  yang  menunjukkan bahwa  pemberian  ekstrak  daun  jeruk  purut ( Citrus  hystrix  D.C )  dengan  zona  hambat pertumbuhan  yang  terbentuk  memiliki
hubungan yang sangat kuat. 11
Uji regresi liniear digunakan untuk meng- hitung  besarnya  pengaruh  variabel  bebas terhadap  variabel  tergantung  pada  penelitian ini.  Hasil  uji  regresi  linear  didapatkan persamaan Y = 3,255 + 0,106 X, yang artinya tanpa  memperhatikan  pengaruh  dari konsentrasi  ekstrak  etanol  (X=0),  zona hambat  pertumbuhan  terbentuk  rata-rata sebesar 3,255 mm, dan besar pengaruh untuk setiap  pertambahan  1%  konsentrasi  ekstrak etanol  (X=1,2,3,dst.),  zona  hambat  per- tumbuhan  akan  meningkat  sebesar  0,106 mm.  Kurva  persamaan  regresi  linear  dapat dilihat pada Gambar 4.

## Pembahasan
Hasil  penelitian menunjukkan  terbentuk- nya  zona  hambat  pertumbuhan  yang  ber- banding  lurus  dengan  besar  konsentrasi ekstrak  yang  digunakan.  Artinya  semakin besar  konsentrasi  ekstrak  daun  jeruk  purut, semakin  besar  pula  diameter  zona  hambat pertumbuhan  yang  terbentuk.  Penelitian herbal lain menggunakan ekstrak daun nipah terhadap bakteri B. cereus yang memperoleh hasil  zona  hambat  pertumbuhan  meningkat seiring  bertambahnya  konsentrasi  ekstrak daun nipah. 12
Gambar 4. Kurva regresi linear zona hambat pertumbuhan terhadap konsentrasi ekstrak etanol

## daun jeruk purut
Keterangan:  Titik-titik  plot  data  membentuk  pola  garis  lurus  yang  berdekatan  dengan  garis  linear persamaan. Hal ini menunjukkan adanya hubungan linear dan positif antar kedua variabel
Peningkatan  diameter  zona  hambat  per- tumbuhan  ini  dimungkinkan  karena  seiring tingginya konsentrasi ekstrak yang digunakan maka  semakin  banyak  kandungan  zat  anti- bakteri di dalamnya.
Menurut  kategori  sensitivitas  antibakteri berdasarkan  diameter  zona  hambat  per- tumbuhan  yang  terbentuk,  perlakuan  pada konsentrasi 6,25%, 12,5% dan 25% termasuk dalam  sensitivitas  antibakteri  sedang (diameter  5-10  mm),  sementara  konsentrasi 50%  dan  100%  termasuk  dalam  sensitivitas antibakteri kuat (diameter 10-20 mm). 13
Hasil  penelitian  tersebut  menunjukkan adanya  aktivitas  antimikroba  ekstrak  etanol daun jeruk purut ( Citrus hystrix D.C ) terhadap Bacillus cereus secara in vitro . Kesimpulan ini dibuktikan oleh hasil analisis data uji statistik yang  menunjukkan  adanya  signifikansi  (p  < 0,05)  pada  konsentrasi  yang  diujikan  (Tabel 1),  yaitu  konsentrasi  6,25%,  12,5%,  25%, 50%,  dan  100%.  Pada  perlakuan  kontrol positif,  didapatkan  data  diameter  zona hambat  pertumbuhan  yang  terbentuk terhadap  pemberian  antibiotik  kloramfenikol 10  mg/mL  yang  menunjukkan  perbedaan signifikan  (p  <  0,05)  terhadap  pemberian konsentrasi  ekstrak  etanol  daun  jeruk  purut
yang  berbeda  (Tabel  1).  Perbedaan  yang signifikan terhadap antibiotik kloramfenikol ini menunjukkan  bahwa  pada  pemberian  kon- sentrasi  ekstrak  etanol  daun  jeruk  purut sebesar 6,25%, 12,5%, 25%, 50%, dan 100% mampu  meningkatkan  besar  diameter  zona hambat  pertumbuhan Bacillus  cereus secara signifikan.
Selain  itu,  hasil  penelitian  ini  didukung oleh  hasil  penelitian  sebelumnya  tentang adanya  kandungan  zat  aktif dengan aktivitas antibakteri  pada  ekstrak  etanol  daun  jeruk purut  ( Citrus  hystrix  D.C ). 4,5 Aktivitas antibakteri  ekstrak  etanol  daun  jeruk  purut juga  telah  dievaluasi  efeknya  terhadap beberapa  bakteri  lain  pada  penelitian sebelumnya,  di  antaranya  terhadap  bakteri basil  Gram  negatif Vibrio  cholerae dan Escherichia  coli yang  mulai  sensitif  pada konsentrasi 7%. Sementara hasil terhadap E. coli mulai sensitif pada konsentrasi 10%. 6,7 Merujuk  pada  hasil  penelitian  terhadap kedua  bakteri  Gram  negatif  tersebut,  maka dibutuhkan  konsentrasi  ekstrak  etanol  daun jeruk  purut  yang  lebih  tinggi  untuk  dapat memberikan  efek  antibakteri  terhadap  basil Gram  negatif,  dibandingkan  dengan  efeknya terhadap basil Gram positif ( Bacillus cereus ).
Hal  ini  selaras  dengan  sifat  dari morfologi  sel  yang  berbeda  antara  bakteri Gram positif dan negatif. Bakteri Gram negatif memiliki  struktur  dinding  sel  yang  lebih kompleks dari bakteri Gram positif. Selain itu, terdapat  molekul  lipopolisakarida  pada membran  terluar  bakteri  Gram  negatif  yang tidak  dimiliki  oleh  bakteri  Gram  positif  yang membuat  bakteri  Gram  negatif  cenderung kurang sensitif terhadap zat antibakteri. 14,15
Dari  hasil  penelitian  ini  serta  penelitian terdahulu menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun jeruk purut memiliki aktivitas antibakteri baik  terhadap  bakteri  Gram  positif  maupun bakteri  Gram  negatif.  Hal  ini  berarti  aktivitas antibakteri  ekstrak  etanol  daun  jeruk  purut dapat  dikatakan  berspektrum  luas  karena dapat  menargetkan  pada  kedua  bakteri  baik Gram negatif maupun positif.
Selain  efek  antibakteri  terhadap  bakteri Gram  postitif  dan  negatif,  telah  dinilai  juga efek antijamur dari ekstrak etanol daun jeruk purut.  Dari  penelitian  sebelumnya  yang dilakukan  oleh  Lindariyanti,  terbukti  bahwa ekstrak etanol daun jeruk purut memiliki efek antibakteri  terhadap  jamur Colletotrichum gloeosporioides Penz.  Sacc. , dengan diameter  zona  hambat  pertumbuhan  yang terbentuk  sebesar  11,37  mm  pada  konsen- trasi  50%. 16 Hal  ini  menunjukkan  bahwa ekstrak etanol daun jeruk purut juga memiliki efek  terhadap  pertumbuhan  jamur.  Apabila dibandingkan  efeknya  terhadap B.  cereus, ekstrak  etanol  daun  jeruk  purut  lebih  efektif dalam  menghambat  pertumbuhan  jamur daripada menghambat pertumbuhan bakteri.
Selain  itu,  beberapa  penelitian  telah meneliti  efek  herbal  lain  sebagai  antibakteri terhadap Bacills  cereus .  Dibandingkan  hasil efek  antibakteri  ekstrak  etanol  daun  jeruk purut dengan hasil efek antibakteri herbal lain terhadap  bakteri Bacillus  cereus ,  diketahui bahwa ekstrak etanol daun jeruk purut kurang poten  terhadap B.  cereus apabila  dibanding-
kan  efeknya  dengan  ekstrak  angkak ( Monascus  purpureus )  yang  telah  meng- hambat  pertumbuhan  bakteri  pada konsentrasi  4%,  dan  ekstrak  rumput  laut ( Eucheuma cottonii ) yang telah menghambat pertumbuhan  bakteri  pada  konsentrasi  4%. Namun,  jika  dibandingkan  efeknya  dengan sari daun binahong ( Anredera cordifolia ) yang menghambat  pertumbuhan  bakteri  pada konsentrasi  25%,  ekstrak  etanol  daun  jeruk purut  ( Citrus  hystrix  D.C )  lebih  efektif menghambat  pertumbuhan  bakteri Bacillus cereus. 17,18,19

## Kesimpulan
Ekstrak  etanol  daun  jeruk  purut  ( Citrus hystrix  D.C )  mulai  efektif  sebagai  antibakteri tehadap Bacillus  cereus pada  konsentrasi 6,25% dengan sensitivitas antibakteri kategori sedang secara in vitro . Dibandingkan dengan efeknya  terhadap  kloramfenikol,  ekstrak etanol daun jeruk purut mampu menghambat pertumbuhan Bacillus  cereus secara signifikan.

## Daftar Pustaka
1.  Haque  M,  Sartelli  M,  McKimm  J,  Abu Bakar  M.  Health  Care-Associated Infections:  an  Overview. Infection  and Drug Resistance . 2018; 11:2321-2333. 2. Centers  for  Disease  Control and Prevention  (CDC).  Healthcare-Associated Infections.  (Online).  2017.  https:// www.cdc.gov/winnablebattles/report/ HAIs.html. diakses 8 Apr. 2019.
3.  Glasset B, Herbin S, Granier S, Cavalié L, Lafeuille  E,  Guérin  C  et  al. Bacillus cereus ,  a  Serious  cause  of  Nosocomial Infections:  Epidemiologic  and  Genetic Survey. PLOS  ONE .  2018;  13
(5):e0194346.
4.  Ali  M,  Akhter  R,  Najah  Narjish  S, Shahriar  M,  Ahmed  Bhuiyan  M.  Studies of  Preliminary  Phytochemical  Screening, Membrane  Stabilizing  Activity,
Thrombolytic  Activity  and  In-Vitro Antioxidant  Activity  of  leaf  Extract  of Citrus  hystrix  D.C . International  Journal of  Pharmaceutical  Sciences  and Research . 2015; 6(6):2367-2374.
5.  Arfania  M.  Telaah  Fitokimia  Ekstrak
Etanol  Daun  Jeruk  Purut  ( Citrus  hystrix D.C ) di Kabupaten Karawang. Jurnal Ilmu
Farmasi . 2017; 2(2):131-135.
6.  Melany.  Efektivitas  Ekstrak  Etanol  Daun Jeruk  Purut  ( Citrus  hystrix  D.C )  sebagai Antimikroba  terhadap Vibrio  cholerae Isolat  Standar  secara  In  Vitro.  Skripsi. Tidak  Diterbitkan.  Universitas  Brawijaya. Malang. 2014.
7.  Nadyasari  N.  Daya  Antibakteri  Ekstrak Etanol  Daun  Jeruk  Purut  ( Cytrus  hystrix D.C .)  terhadap  Bakteri Escherichia  coli serta  Kesetaraannya  terhadap
Kloramfenikol.  Skripsi.  Universitas Surabaya. Surabaya. 2007. 8.  Nugroho, A. Buku Ajar: Teknologi Bahan Alam . Banjarmasin: Lambung Mangkurat
University Press. 2017. Hlm. 72-89. 9.  Wiegand  I,  Hilpert  K,  Hancock  R.  Agar and Broth Dilution Methods to Determine the  Minimal  Inhibitory  Concentration (MIC)  of  Antimicrobial  Substances. Nature Protocols . 2008; 3(2):163-175.
10.  Balouiri, M., Sadiki, M. and Ibnsouda, S. Methods  for  In  Vitro  Evaluating Antimicrobial  Activity:  A  Review. Journal of  Pharmaceutical  Analysis .  2016;  6 (2):71-79.
11.  Sugiyono S. Metode Penelitian Kuantitatif Kualitaif  dan  R&D .  Bandung:  Alfabeta; 2007.
12.  Lestari  Y,  Ardiningsih  P,  Nurlina  N. Aktivitas  Antibakteri  Gram  Positif  dan Negatif  dari  Ekstrak  dan  Fraksi  Daun
Nipah  ( Nypa  fruticans  Wurmb .)  Asal Pesisir  Sungai  Kakap  Kalimantan  Barat. Jurnal Kedokteran dan Kesehatan . 2016; 5(4):1-4.
13.  Davis  W,  Stout  T.  Disc  Plate  Method  of Microbiological  Antibiotic  Assay. Applied
Microbiology . 1971; 22(4):659-665.
14.  Albrecht  T,  Baron  S. Medical Microbiology . Galveston, Tex.: University of  Texas  Medical  Branch  at  Galveston, Dept.  of  Microbiology  &  Immunology. 1996.
15.  Breijyeh  Z,  Jubeh  B,  Karaman  R. Resistance of Gram-Negative Bacteria to Current  Antibacterial  Agents  and Approaches  to  Resolve  It. Molecules . 2020; 25(6):1340.
16.  Lindariyanti,  AZ.  Pengaruh  Berbagai Konsentrasi  Ekstrak  Daun  Jeruk  Purut ( Citrus  hystrix  D.C )  terhadap  Zona Hambat  Jamur Colletotrichum gloeosporioides  (Penz.)  Sacc .  sebagai Kajian  Analisis  Sumber  Belajar.  Skripsi. Tidak  Diterbitkan.  Universitas Muhammadiyah Malang. Malang. 2019. 17.  Sumaryati E, Sudiyono S. Kajian Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Angkak  terhadap Pertumbuhan Bakteri Bacillus cereus dan Bacillus  stearothermophillus . Jurnal Teknologi Pangan . 2015: 6(1):1-11. 18.  Hutabarat M.A.A, Sari N.I, Leksono T. Uji Efektivitas  Antibakteri  Ekstrak  Rumput Laut  ( Eucheuma  cottonii )  terhadap Bakteri Bacillus  cereus dan Pseudomonas aeruginosa . Skripsi. Tidak Diterbitkan. Universitas Riau. Pekanbaru. 2016.
19.  Rahmawati F, Bintari S.H. Studi Aktivitas Antibakteri  Sari  Daun  Binahong ( Anredera  cordifolia )  Terhadap
Pertumbuhan Bacillus  cereus dan Salmonella  enteritidis . Unnes  Journal  of Life Science . 2014; 3(2).