Uji Aktivitas Anti-Hiperglikemik, dan Penghambatan Stres Oksidatif Ekstrak Etanol Daun Jeruk Nipis ( Citrus aurantifolia ) pada Tikus Diabetes yang Diinduksi Aloksan

## ABSTRAK

## ABSTRACT

## BIOMEDIKA
ISSN : 1979 - 035X (printed edition)
ISSN : 2302 - 1306 (electronic/Portal e-Journal)
Test of Anti-Hyperglycemic Activity, and Oxidative Stress Inhibition of Ethanol Extract of Lime ( Citrus aurantifolia ) Leaf in Diabetes Rats Alloxan-Induced
Yithro Serang * dan Felisia Bani Akademi Farmasi Nusaputera, Semarang * Corresponding author: ithoserang@gmail.com
Volume 10, No. 1, Maret 2017

## PENDAHULUAN
Pada keadaan patologik seperti diabetes, peningkatan stress oksidatif dalam tubuh akan menyebabkan penurunan aktivitas antioksidan endogen dalam tubuh sehingga tubuh tidak mampu mendetoksifikasi radikal bebas dan mencegah kerusakan sel. Salah satu sumber antioksidan alami sebagai antidiabetes adalah daun jeruk nipis (Citrus aurantifolia). Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui aktivitas anti hiperglikemia ekstrak etanol daun jeruk nipis dan aktivi- tas enzim antioksidan SOD dan GPX.
Penelitian ini adalah penelitian eksperimental laboratorium dengan menggunakan rancangan post test only group design. Subyek penelitian ini adalah 30 ekor tikus putih jantan galur Wistar yang dikondisikan DM tipe 2 dengan in- duksi aloksan. Tikus dikelompokkan menjadi 6 kelompok : kelompok I netral, kelompok II tanpa perlakuan, kelompok III kontrol positif glibenklamid 80 mg/Kg BB, Kelompok IV, V dan VI adalah kelompok perlakuan dengan dosis bertu- rut-turut 62,5 mg/Kg BB, 125 mg/Kg BB dan 250 mg/Kg BB. Kemudian dilakukan uji aktivitas SOD dan GPX.
Kata kunci: Diabetes melitus tipe 2, Antioksidan, Citrus aurantifolia
In pathological state such as diabetes, increase of oxidative stress in the body will cause decrease in endogenous antioxidant activity in the body so that the body is unable to detoxify free radicals and prevent cell damage. One source of  natural  antioxidant  as  antidiabetic  is  lime  (Citrus  aurantifolia)  leaf.  The  purpose  of  this  study  was  to  determine the anti-hyperglycemic activity of ethanol extract of lime leaf and activity of antioxidant enzymes SOD and GPX. The study was an laboratory experimental research by using post test only group design. The subjects of this study were 30 male rats Wistar strain which conditioned diabetes type 2 with induction of alloxan. Rats were grouped into 6 groups: group I neutral, group II non-treated, group III positive control of glibenclamide 80 mg/kg, Group IV, V and VI were the treated group with doses of 62.5 mg/kg, 125 mg/kg and 250 mg/kg, respectively. Then conducted test of SOD and GPX activities.
Keywords: Diabetes mellitus type 2, Antioxidant, Citrus aurantifolia
Diabetes  mellitus  (DM)  adalah  sekelompok penyakit yang dikarakterisasi oleh tingginya level glukosa darah sebagai akibat dari penurunan ke- mampuan  tubuh  untuk  memproduksi  dan  atau menggunakan insulin (American Diabetes Asso- ciation, 2011). Penyakit DM dapat terjadi akibat kelainan sekresi insulin, kerja insulin, atau kedua- duanya  (Arisman,  2011).  DM  menjadi  salah satu  penyakit  terbesar  di  dunia.  WHO  memper- kirakan  sekitar  347  juta  orang  di  seluruh  dunia mengidap diabetes. Diperkirakan bahwa pada ta-
hun 2030, diabetes menjadi penyebab utama tu- juh  kematian  di  dunia.  Jumlah  kematian  akibat diabetes  diproyeksikan  meningkat  lebih  dari 50% dalam 10 tahun ke depan. Pada tahun 2005, diperkirakan  1,1  juta  orang  meninggal  karena diabetes, hampir 80% diantaranya terjadi di ne- gara berpenghasilan rendah dan menengah, dan setengah  dari  pada  orang  di  bawah  usia  70  ta- hun,  55%  dari  kematian  diabetes  pada  wanita. WHO  memprediksi  Indonesia  sebagai  negara no 4 di dunia dengan jumlah penderita DM se- besar  21,3  juta  pada  tahun  2030  setelah
India, Cina, dan Amerika Serikat. Penyakit DM dapat meningkatkan produksi radikal bebas oksigen melalui autooksidasi glu- kosa dan glikasi protein. Degradasi oksidatif da- ri radikal-radikal ini berperan dalam pembentu- kan produk peroksidasi lipid. Peningkatan kadar radikal  oksigen  reaktif  ini  disebabkan  ketidak- sempurnaan sistem pertahanan antioksidan atau ketidakmampuan kapasitas perbaikan kerusakan oksidatif. Pada pasien DM, hiperglikemia meng- induksi terjadinya stres oksidatif. Stres oksidatif ini  memicu  terjadinya  berbagai  kerusakan  sel (Monroy, 2013).
Peredaman  stress  oksidatif  tersebut  memer- lukan  antioksidan.  Antioksidan  adalah  senyawa yang  mampu  menangkal  atau  meredam  dampak negatif oksidan dalam tubuh. Antioksidan secara umum  dikelompokkan  menjadi  antioksidan  en- dogen  dan  eksogen.  Antioksidan  endogen  yaitu sejumlah komponen protein dan enzim yang di- sintesis  dalam  tubuh  yang  berperan  dalam  me- nangkal oksidasi oleh radikal bebas. Antioksidan endogen  dibagi  menjadi  2  kelompok  yaitu  ke- lompok enzimatis (enzim superoksida dismutase (SOD),  katalase,  dan  glutation  peroksidase)  dan non  enzimatis  (tokoferol,  karotenoid,  flavonoid, quinon, bilirubin, asam askorbat, asam urat, pro- tein pengikat logam, dan protein pengikat heme) (Erejuwa, 2010). Antioksidan eksogen bersumber dari  makanan,  terdiri  atas  tokoferol  (vitamin  E), asam  askorbat  (vitamin  C),  karotenoid  dan  fla- vonoid. Antioksidan  jenis  eksogen  ini  dapat  di- modifikasi dengan makanan dan suplemen.
Sel yang normal mempunyai sejumlah enzim pertahanan yang beraksi sebagai antioksidan en- dogen (katalase, glutation peroksidase dan super- oksida  dismutase)  untuk  mendetoksifikasi  radi- kal  bebas  dan  mencegah  kerusakan  sel.  Keren- tanan suatu jaringan terhadap kerusakan oksida- tif tergantung pada mekanisme pertahanan oksi- datifnya, antara lain oleh aktivitas dan kandung- an  enzim  antioksidan  endogen.  Pada  keadaan patologik  seperti  diabetes,  peningkatan  stress
oksidatif dalam tubuh akan meningkatkan pema- kaian  enzim  antioksidan  intrasel  sehingga  me- nyebabkan  penurunan  aktivitas  antioksidan  en- dogen dalam tubuh. Adanya peningkatan suplai antioksidan yang cukup dalam tubuh akan mem- bantu  mengurangi  resiko  komplikasi  pada  pen- derita diabetes (Monroy, 2013).
Telah  banyak  dilakukan  studi  tentang  anti- oksidan alami dan menunjukkan jika antioksidan alami  juga  mampu  melindungi  tubuh  terhadap kerusakan  yang  disebabkan  spesies  oksigen  re- aktif dan mampu menghambat penyakit degene- ratif.  Beberapa  penelitian  telah  menunjukkan bahwa  senyawa  fenolik  seperti  flavonoid  mem- punyai  aktivitas  antioksidan  penangkap  radikal. Senyawa  golongan  flavonol  dan  flavon  menun- jukkan sifat antidiabetes pada uji invivo pada ti- kus (Loizzo, 2011).
Banyak  obat  konvensional  yang  digunakan dalam menurunkan kadar gula darah namun me- miliki  efek  samping  seperti  hipoglikemik  dan penambahan  berat  badan  (Aliyan,  2012).  Oleh sebab itu banyak dilakukan penelitian-penelitian tanaman  tradisional  yang  memiliki  efek  yang sama dengan obat sintetik namun memiliki efek samping  yang  jauh  lebih  ringan  dibandingkan dengan obat konvensional (Purwanti, 2012). Ekstrak etanol daun jeruk nipis ( Citrus auran- tifolia )  dibuktikan  memiliki  efek  antioksidan  de- ngan  metode  DPPH  (Fajarwati,  2013).  Selain itu, penelitian Loizzo MR (2012) telah membuk- tikan ekstrak kulit dan daun jeruk nipis memiliki komposisi  kimia  yang  memiliki  aktifitas  antiok- sidan dan antikolisneterase.
1.    Untuk mengetahui aktivitas anti hiperglike- mia ekstrak etanol daun jeruk nipis.
Tujuan penelitian yang akan dilakukan yaitu:
3.    Untuk mengetahui korelasi antara aktivitas anti hiperglikemia, antioksidan.
2.    Untuk mengetahui kemampuan ekstrak eta- nol daun jeruk nipis dalam meningkatkan aktivi- tas enzim antioksidan SOD dan GPX.
Hasil penelitian ini diharapkan dapat mem-
berikan penjelasan zat aktif dan mekanisme kerja tanaman jeruk nipis dalam menurunkan kadar gu- la darah dan mencegah kerusakan pankreas pada pasien  DM  tipe  2.  Hasil  penelitian  ini  nantinya dapat digunakan dalam pemanfaatan sediaan obat tradisional  antidiabetes  dan  sebagai  terapi  pen- cegahan  terjadinya  komplikasi  yang  disebabkan stres oksidatif yang diinduksi hiperglikemia.

## MATERI DAN METODE PENELITIAN
1. Pengambilan bahan
Simplisia dibeli dalam keadaan segar di Ban- dungan, Semarang, selanjutnya dikeringkan dan dilakukan pembuatan serbuk dengan mengguna kan mesin serbuk dan diayak dengan mess no 40. 2. Ekstraksi
Ditimbang sejumlah 500 g simplisia kering, ditambah  etanol  96%  (3  kali  bobot  serbuk)  ke- mudian dimasukan ke dalam bejana maserasi se- lama 3 hari sambil sesekali diaduk. Cairan hasil ekstraksi  disaring  dengan  kertas  saring. Ampas dimaserasi lagi dengan pelarut etanol, dilakukan dengan  cara  yang  sama  dan  diulangi  beberapa kali  hingga  hasil  maserat  yang  diperoleh  telah jernih. Semua ekstrak dipekatkan dengan vakum evaporator.
3. Pembuatan larutan aloksan dalam larutan salin 0,15 M
Larutan  aloksan  digunakan  untuk  induksi diabetes terhadap tikus putih jantan galur Wistar yang telah dipuasakan semalam. Aloksan dilarut- kan dalam salin (0,15 M) dan diberikan intrape- ritoneal pada dosis 150 mg/kg bb.
4. Penyiapan hewan uji
Digunakan 30 ekor tikus putih jantan galur Wistar umur 16 minggu dengan berat antara 150- 250  gram,  dipelihara  dalam  kondisi  kandang yang  terjaga  tempratur  suhu  21°C    kelembapan 55% dan diberi pakan dan air ad libitum . Secara acak tikus dikelompokkan menjadi 6 kelompok. Setiap  kelompok  terdiri  dari  5  ekor  tikus  dan akan  mendapat  perlakuan  yang  berbeda  yaitu  : kelompok I adalah kelompok netral. Tikus hanya mendapat sejumlah ekuivalen CMC Na, kelom-
pok  II  adalah  control  negatif,  tikus  diinduksi aloksan  tanpa  perlakuan,  kelompok  III  adalah control positif, tikus diinduksi aloksan dan dibe- ri glibenklamid 80 mg/Kg BB, Kelompok IV, V dan  VI  adalah  kelompok  perlakuan.  Tikus  diin- duksi  dengan  aloksan,  dilanjutkan  pemberian ekstrak etanol Daun jeruk nipis dengan dosis ber- turut-turut  adalah  62,5  mg/Kb  BB,  125  mg/Kb BB dan 250 mg/Kg BB selama 28 hari.
Tikus ditimbang dan dikelompokkan, dipu- asakan  terlebih  dahulu  selama  16  jam.  Tujuan penimbangan  berat  badan  ini  adalah  untuk  me- ngetahui  pertambahan  berat  badan  tikus  selama perlakuan. Pada hari pertama dilakukan pengam- bilan darah awal untuk pengukuran kadar gluko- sa  darah  awal  (T ) sebelum tikus diberi perlaku- 0 an.  Sampel  darah  diambil  dari  vena  lateral  ekor tikus dengan cara menusuk ekor tikus, kemudian darah  diteteskan  pada  strip  yang  telah  dipasang pada  glukometer,  ditunggu  11  detik  dan  sampel darah  bisa  terbaca.  Pada  hari  itu  juga  diberikan larutan aloksan monohidrat 125 mg/ kg bb tikus secara intraperitoneal. Setelah 4 hari induksi de- ngan larutan aloksan, hewan uji yang positif dia- betes melitus (kadar gula darah > 200 mmHg) di- kelompokkan  kemudian  diambil  darahnya  untuk pengukuran  kadar  glukosa  darah  hari  pertama (T ). Pengambilan darah dilakukan pada pembu- 1 luh darah ekor tikus.
5. Pengujian aktivitas efek anti hiperglikemik
Masing-masing  kelompok  diberi  suspensi CMC  0,5  %  (kontrol  negatif),  suspensi  gliben- klamid  0,45  mg/  kg  bb  tikus  (kontrol  positif), suspensi ekstrak etanol daun jeruk nipis dengan dosis berturut-turut adalah 62,5 mg/Kb BB, 125 mg/Kb BB dan 250 mg/Kg BB  (kelompok per- lakuan) selama 28 hari. Pengambilan darah dila- kukan pada hari ke-7 (T2), hari ke-14 (T3), hari ke-21 (T4) dan hari ke-28 (T5).
6. Pengujian aktivitas antioksidan
Pada  hari  ke  -28  tikus  dikorbankan  dengan pentobarbital Na. Hati diambil, dibersihkan, di- keringkan dan diproses untuk uji biokimia. Hati dihomogenkan dalam buffer posfat 50 nM (pH

## 7. Analisis Hasil
Data  kuantitatif  hasil  penelitian  dinyatakan sebagi rata-rata (mean) (±) standar deviasi (SD). Signifikansi statistic dihitung dengan mengguna- kan analisis varians satu arah (ANOVA) dilanjut- kan denga t-test. Data kualitatif diperoleh dari ha- sil  gambar  histopatologi  jaringan  pankreas  de- ngan  pewarnaan  hematoxaline  dan  eosine  dapat dilihat masa sel islet beta pankreas. Korelasi an- tara  antioksidan,  efek  anti  hiperglikemik,  akan dilakukan  dengan  analisis  uji  korelasi  taraf  ke- percayaan 95%. Nilai-nilai yang dianggap signi- fikan  secara  statistic  ketika  P-nilainya  kurang dari 0,05 (p<0,05).
7,4)  yang  mengandung  inhibitor  protease,  0,2 mM PMSF  dan 1 mM EDTA, pada suhu 4°c se- lama 30 detik (2-15 detik dengan 15 detik inter- val  pendinginan).  Homogenat  disaring  dan  fil- trate disentrifuse pada 1088 g (pada µ max 108 mm)  selama  5  menit  dalam  kondisi  dingin.  Su- pernatan yang dihasilkan digunakan untuk peng- ukuran aktivitas enzim antioksidan.

## HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN Hasil Pemeriksaan Ekstrak Etanolik Daun Jeruk
Hasil pemeriksaan ekstrak etanolik daun je- ruk adalah bentuk kental (tidak dapat dituang), warna hijau pekat, dan rasa sepat.

## Identifikasi kandungan kimia
Identifikasi  ekstrak  etanolik  daun  jeruk  se- cara  kualitatif  dilakukan  di  Laboratorium Aka- demi Farmasi Nusaputera. Hasil identifikasi ter- hadap ekstrak etanolik daun jeruk menunjukkan adanya kandungan senyawa kimia berupa alka- loid dan flavonoid.

## Hasil Perhitungan Rata-rata Kadar Glukosa Darah Tikus
Untuk  melihat  kemampuan  ekstrak  etanol daun jeruk nipis dalam menurunkan kadar gluko- sa darah, maka hewan uji akan diinduksikan agen diabetogenik yaitu aloksan secara intraperitoneal.
Pada  awal  penelitian,  terlebih  dahulu  dila- kukan pengukuran kadar glukosa darah pada he- wan uji yaitu pada T  (5 hari sebelum perlakuan), 0 dimana pengukuran kadar glukosa ini digunakan sebagai pembanding untuk melihat apakah berha- sil atau tidaknya induksi streptozotosin pada he- wan  uji.  Setelah  itu,  dilanjutkan  dengan  induksi aloksan secara intraperitoneal pada semua kelom- pok kecuali kelompok kontrol normal.
Pada  hari  ke-5  setelah  induksi  aloksan,  ka- dar glukosa darah kembali diukur sebagai T  un- 1 tuk memastikan bahwa hewan uji telah mengala- mi  DM.  Kadar  glukosa  darah  tikus  yang  telah mencapai 200 mg/dL diindikasikan sebagai kea- daan  hiperglikemia.  Pada  kelompok  perlakuan terjadi  peningkatan  kadar  glukosa  darah  tikus >200 mg/dl. Hal ini menunjukkan bahwa peng- induksian agen diabetogenik berhasil dilakukan, dan tikus dapat dinyatakan DM.
Aloksan dapat menyebabkan stres oksidatif pada sel  β,  demikian  pula  pasien  menderita  diabetes sering  mengalami  stres  oksidatif  (Halliwel  dan Gutteridge 1994).
Hasil  pengukuran  kadar  glukosa  darah  tikus setelah  diberikan  sediaan  uji  selama  24  hari  (T3) menunjukkan  bahwa  kelompok  kontrol  positif glibenklamid 0,45 mg/kg BB tikus memiliki nilai rata-rata penurunan kadar glukosa darah tertinggi, artinya  kelompok  kontrol  positif  memiliki  aktivi- tas  yang  lebih  tinggi  terhadap  penurunan  kadar glukosa darah tikus, diikuti kelompok ekstrak eta- nol daun jeruk nipis 250 mg/kg BB tikus, kelom- pok  ekstrak  etanol  daun  jeruk  nipis  125  mg/kg BB tikus, kelompok ekstrak etanol daun jeruk ni- pis  62,5  mg/kg  BB  tikus  dan  yang  terendah  ada- lah  kelompok  kontrol  negatif  CMC  0,5%.  Dari grafik Gambar 1 dapat dilihat bahwa kelompok ek- strak etanol daun jeruk nipis 250 mg/kg BB tikus memiliki  aktifitas  yang  paling  baik  dalam  menu- runkan  kadar  glukosa  darah,  walaupun  belum  se- banding  dengan  kelompok  kontrol  positif.  Hal ini  menunjukkan  bahwa  besarnya  dosis  dapat mempengaruhi  aktivitas  antihiperglikemi.  Pada penelitian  ini,  semakin  besar  dosis  maka  aktivitas
antihiperglikeminya semakin baik.
Rata-rata  penurunan  kadar  glukosa  darah tikus setelah diberi sediaan uji dapat dilihat se- lengkapnya  pada  Lampiran  16.  Glibenklamid telah  diketahui  sebagai  obat  antidiabetik  oral yang  mampu  menurunkan  kadar  glukosa  darah dengan cara menstimulasi sel β pankreas untuk melepaskan insulin yang tersimpan dan mening- katkan sekresi insulin akibat rangsangan gluko- sa (Soegondo, 2005). Hasil uji statistik rata-rata penurunan  kadar  glukosa  darah  tidak  terdistri- busi normal, sehingga dilanjutkan menggunakan Kruskal-Walllis, dan diperoleh nilai Asymp. Sig . <0,05 yang menunjukkan bahwa ada perbedaan signifikan rata-rata penurunan kadar glukosa da- rah  pada  tiap  kelompok.  Dengan  demikian  da- pat  diketahui  bahwa  pemberian  ekstrak  etanol daun  jeruk  nipis  dapat  memberikan  pengaruh dalam  rata-rata  penurunan  kadar  glukosa  darah tikus yang di induksi aloksan Ekstraksi  dengan  etanol  akan  mengekstraksi semua senyawa kimia/bioaktif yang terdapat pa- da daun jeruk nipis, diantaranya flavonoid, alka- loid  dan  saponin,  dimana  setiap  senyawa  terse- but  mempunyai  kemampuan  untuk  menurunkan kadar  glukosa  darah  (Ambarwati et  al ,  2015). Berdasarkan tabel dibawah, dapat dilihat peruba- han luas daerah dibawah kurva kadar glukosa da- rah tikus sebelum dan sesudah permberian sedia- an  uji  ekstrak  etanol  daun  jeruk  nipis  dihitung dari  T   sampai  T .  Hasil  perhitungan  rata-rata 0 4 AUC  kadar  glukosa  darah  memperlihatkan  hu-
Berdasarkan  luas AUC   pada  tabel  di  atas total kadar glukosa darah pada seluruh kelompok per- lakuan  memberikan  efek  penurunan  kadar  glu- kosa  darah  setiap  minggunya.  Rata-rata  luas AUC   kelompok  perlakuan  berada  di  bawah  l total uas AUC  kontrol negatif. Hal ini sesuai dengan total pernyataan sebelumnya bahwa semakin kecil ni- lai AUC  maka  aktivitas  antihiperglikeminya  se- makin  baik.  Diagram  balok  nilai  rata-rata  luas AUC  dapat dilihat pada Gambar 2. total
bungan yang berbanding terbalik yaitu semakin kecil nilai AUC total maka efektifitas antihiperg- likeminya semakin besar.

## Hasil Pengukuran Aktivitas Enzim SOD, dan GPx
Kemampuan  ekstrak  etanol  dan  fraksi-fraksi ekstrak etanol daun jeruk nipis dalam meningkat- kan  aktivitas  enzim  antioksidan  dapat  dievaluasi dengan mengukur peningkatan kadar enzim SOD dan  GPx  pada  darah  tikus  yang  telah  diberikan perlakuan selama 28 hari. Hasil pengukuran kadar SOD dan GPx dapat dilihat pada Lampiran 26-28. Nilai  SOD  dan  GPx  yang  tinggi  menunjuk- kan bahwa tikus berada dalam kondisi yang nor- mal.  Dari  Tabel  2  terlihat  bahwa  kelompok kontrol  normal  adalah  tikus  yang  sehat.  Nilai SOD  (%)  menyatakan  jumlah  anion  superoksida yang  berhasil  dihambat,  nilai  GPx  menyatakan jumlah  enzim  yang  dibutuhkan  untuk  mengkata- lisis oksidasi dari 1 nmol NADPH per menit da- lam satu mg protein.

## Tabel 1. Perhitungan AUC
Kelom pok Kode hewan Perhitungan AUC Hari ke 0-3 Hari ke 3-10 Hari ke 10-17 Total AUC Rata- rata AUC SD KN I.1 191,60
451,90 461,01 1104,52
1096,19 17,2 4
I.2 188,16 451,50 477,77 1117,43 I.3 187,01 439,09 456,55 1082,65 I.4 182,99 443,46 475,08 1101,53 I.5 185,28 437,59 451,97 1074,84 K(-) II.1 425,01
1536,60 1599,03 3560,63
3529,43 33,7 9 II.2 418,14 1523,65 1549,32 3491,11 II.3 411,78 1521,35 1572,44 3505,57 II.4 422,73 1536,46 1562,50 3521,69 II.5 427,93 1549,55 1590,65 3568,12 K(+) III.1 422,75
1268,88 836,08 2527,71
2504,67 40,4 5 III.2 427,91 1269,41 818,10 2515,42 III.3 419,83 1248,56 824,02 2492,42 III.4 423,84 1266,15 856,41 2546,41 III.5 413,49 1227,97 799,90 2441,37 KD1 IV.1 411,22
1360,47 1092,06 2863,75
2894,27 57,0 1 IV.2 414,08 1361,97 1061,79 2837,83 IV.3 412,37 1365,52 1081,22 2859,11 IV.4 427,38 1410,91 1126,79 2965,08 IV.5 419,89 1411,07 1114,60 2945,56 KD2 V.1 422,15
1295,63 923,65 2641,42
2650,08 36,7 5
V.2 416,96 1280,09 903,21 2600,25 V.3 425,05 1303,53 908,68 2637,25 V.4 418,73 1312,55 946,20 2677,48 V.5 416,37 1306,97 970,66 2694,01
KD3
VI.1 418,71
1286,63 898,40 2603,74 2596,08
30,7 3
VI.2 409,49 1260,73 874,50 2544,72 VI.3 416,35 1289,65 900,97 2606,96 VI.4 416,98 1287,59 893,37 2597,94 VI.5 417,62 1301,63 907,78 2627,03
Tabel 2. Hasil rata-rata aktivitas SOD, dan GPx
Kelompok N Hasil rata-rata aktivitas SOD, GPx ± SD SOD (%) GPx (U/mg) KN 5 82,22 ± 3,84 74,08 ± 1,22 K (-) 5 18,89 ± 4,42 20,99 ± 1,48 K (+) 5 70,74 ± 3,56 71,77 ± 1,81 KD1 5 37,41 ± 4,79 41,83 ± 1,82 KD2 5 52,22 ± 3,56 53,09 ± 1,48 KD3 5 58,89 ± 3,56 67,91 ± 1,22
Kelompok KN K (-) K (+)
KD1 KD2 KD3 N Hasil rata-rata aktivitas SOD, GPx ± SD SOD (%) GPx (U/mg) 5 82,22 ± 3,84 74,08 ± 1,22 5 18,89 ± 4,42 20,99 ± 1,48 5 70,74 ± 3,56 71,77 ± 1,81 5 37,41 ± 4,79 41,83 ± 1,82 5 52,22 ± 3,56 53,09 ± 1,48 5 58,89 ± 3,56 67,91 ± 1,22 Keterangan:
KN = Kontrol normal K (-)= Kontrol negatif (CMC 0,5%) K (+)= Kontrol positif (Glibenklamid  0,45 mg/ kg BB tikus) KD1= Ekstrak etanol daun jeruk nipis dosis 62,5 mg/Kb BB tikus KD2= Ekstrak etanol daun jeruk nipis dosis 125 mg/Kb BB tikus KD3 = Ekstrak etanol daun jeruk nipis dosis 250 mg/Kg BB tikus
Selain  itu,  pada  kondisi  hiperglikemia,  glu- kosa akan mengalami metabolisme melalui jalur alternatif  yaitu  jalur  autooksidasi  glukosa,  serta glikasi dan pembentukan dikarbonil, dimana jalur ini  akan  menghasilkan  radikal  bebas  hidroksil -
-
(OH ) dan radikal superoksida (O ). Pembentuk-
2 an yang berlebih tersebut tidak dapat dinetralkan oleh enzim SOD dan GPx (Suarsana et al ., 2011).
Pada  penelitian  ini  digunakan  aloksan  sebagai agen radikal bebas yang menyebabkan kerusakan oksidatif  pada  pankreas  tikus.  Keadaan  hipergli- kemia akan menyebabkan terjadinya pembentuk- an  radikal  bebas  yang  lebih  tinggi.  Pada  kelom- pok kontrol negatif terjadi penurunan kadar SOD dan GPx.
Berdasarkan  analisis  statistik,  kelompok kontrol  positif  menunjukkan  peningkatan  kadar yang  signifikan  (p>0,05).  Glibenklamid  bekerja dengan  meningkatkan  sekresi  insulin  dari  pan- kreas  yang  menyebabkan  intake  glukosa  darah meningkat sehingga kadar glukosa darah menja- di turun. Selain itu glibenklamid juga menyebab- kan  homeostasis  pada  pankreas  berjalan  baik, sehingga pertahanan enzim endogen dapat beker- ja menetralisir radikal bebas (Kamlasi, 2015). Hasil  uji  statistik  menggunakan One  Way Anova pada kadar SOD dan GPx juga menunjuk- kan  bahwa  semua  kelompok  perlakuan  ekstrak etanol daun jeruk nipis memiliki perbedaan yang signifikan dengan kontrol negatif. Dengan demi- kian  dapat  diketahui  bahwa  pemberian  ekstrak
Pada  uji  statistik,  semua  kelompok  perlaku- an ekstrak etanol daun jeruk nipis memiliki per- bedaan  secara  signifikan  dengan  kelompok  kon trol  positif  yaitu  glibenklamid  dan  kelompok kontrol  negatif.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  - statistik, kemampuan ekstrak etanol daun jeruk nipis belum bisa sebanding dengan kontrol posi- tif  (glibenklamid)  dalam  meningkatkan  kadar SOD  dan  GPx.  Namun,  jika  di  lihat  dari  grafik rata-rata kadar SOD dan GPx, terlihat dosis yang paling besar yaitu dosis ekstrak etanol daun jeruk nipis dosis 250 mg/Kg BB tikus terjadi penurun- an kadar SOD dan GPx yang signifikan. Hal ini sebanding  dengan  penurunan  kadar  glukosa  da- rah, dimana pada dosis-dosis tersebut terjadi pe- nurunan  kadar  glukosa  yang  signifikan.
etanol daun jeruk nipis dapat memberikan peng- aruh  dalam  peningkatan  kadar  SOD  dan  GPx. Penurunan  stress  oksidatif  berarti  menurunkan proses degenerasi sel β pankreas sehingga akan mempercepat  proses  dari  regenerasi  sel  β  pan- kreas.
Senyawa  yang  diduga  memiliki  aktivitas sebagai  antioksidan  yaitu  flavonoid,  alkaloid, dan saponin.   Flavonoid memiliki potensi seba- gai antioksidan karena memiliki gugus hidroksil yang terikat pada karbon cincin aromatik sehing- ga dapat menangkap radikal bebas yang dihasil- kan dari rekasi peroksidasi lemak. Senyawa fla- vonoid akan menyumbangkan satu atom hydro- gen  untuk  menstabilkan  radikal  peroksi  lemak.
Kemampuan flavonoid telah banyak diteliti be- lakangan ini, dan dimana salah satu kemampuan flavonoid dapat merubah atau mereduksi radikal bebas dan juga sebagai anti radikal bebas (Gior- gio, 2000).
Mekanisme kerja saponin dalam menurun- kan kadar glukosa darah yaitu dengan merubah struktur membran usus menjadi lebih permeabel terhadap makromolekul sehingga absorbsi terha- dap mikromolekul seperti glukosa menjadi ter- hambat (Miura, 1996). Selain itu, saponin juga dapat menstimulasi pelepasan insulin dan meng- hambat pembentukan glukosa dalam aliran darah Reddy, 2012).  Sedangkan menurut Bunting et al (2006), alkaloid dapat bekerja dengan mensti- mulasi hipotalamus untuk meningkatkan sekresi Growth Hormone Releasing Hormone (GHRH), sekresi Growth Hormone (GH) pada hipofise akan meningkat, dimana kadar GH yang tinggi akan menstimulasi hati untuk mensekresikan Insulin like Growth Factor-1 (IGF-1) yang mem- punyai efek dalam menginduksi hipoglikemia dan menurunkan glukoneogenesis sehingga kadar glukosa darah dan kebutuhan insulin menurun. Hasil  fitokimia  dari  tanaman  ekstrak  daun jeruk nipis terdapat berbagai metabolit sekunder di antaranya flavonoid, alkaloid, dan saponin, di- mana senyawa-senyawa ini dapat bertindak seba- gai  antihiperglikemia  dan  juga  sebagai  antioksi- dan (Loizzo, 2012).

## DAFTAR PUSTAKA
Reddy LJ, Jalli RD, Jose B, Gopu S. 2012. Evaluation of Anti- bacterial & Antioxidant Activities of The Leaf Essential Oil & Leaf Extract of Citrus Aurantifolia. Asian Journal of bio- chemical and Pharmaceutical Research . 2:346-53.
Monroy ML, Mejia CF. 2013. Oxidative stress in Diabetes Melli- tus and the role of vitamins with antioxidant actions. Mexi- co Ntech. 9:210-215.
Loizzo MR, Tundis R, Bonesi M, Menichini F, De Luca D, Co- lica  C.  2012.  Evaluation  of  Citrus  aurantifolia  peel  and leaves extracts for their chemical composition, antioxidant and anti-cholinesterase activities. J Sci Food Agric. 92 (15): 2960-7.
Ikawati Z. 2008. Pengantar Farmakologi Molekuler . Gadjah mada University Press. 25-26.
Harborne JB. 1987. Metode Fitokimia . Edisi II. Bandung: Institut Teknologi Bandung.
Fajarwati N. 2013. Uji Aktivitas Antioksidan pada Ekstrak Daun Jeruk Nipis ( Citrus aurantifolia) dengan Menggunakan Me- tode DPPH. [ Laporan Penelitian ]. Jakarta: UIN Syarif Hi- dayatullah.
Erejuwa O et al . 2010. Antioxidant protective effect of Gliben- clamide and Metformin in combination with honey in pan- creas of Streptozotocin induced Diabetic rats. Int. J. Mol. Sci. 11: 2056-2066.
[Depkes].  2000. Inventaris  Tanaman  Obat  Indonesia (1).  Jilid III. Jakarta: Departemen Kesehatan dan Kesejahteraan So- sial Republik Indonesia Badan Penelitian dan Pengembang- an Kesehatan.
Arisman MB. 2011. Obesitas, Diabetes Millitus dan Dislipidemia Konsep, Teori dan Penanganan Aplikatif . Jakarta: EGC.
Aliyan AH. 2012. Uji penghambatan aktivitas alfa glukosidase dan identifikasi golongan senyawa kimia dari fraksi aktif ekstrak biji mahoni. [ Skripsi ]. Jakarta: FMIPA, UI.
[ADA]. 2012. Standards of Medical Care in Diabetes. American Diabetes Association Journal . Vol. 35.
[ADA].  2011.  Standards  of  medical  care  in  diabetes,  diabetes care. Supplement_1. American Diabetes Association Jour- nal . Volume 34:512