Uji Toksisitas Subakut Ekstrak Etanol Daun Asam Jawa Dosis  Efektif Sebagai Antihiperglikemia Terhadap Kadar AST, ALT, dan Kreatinin

## Tikus (Rattus norvegicus)
Subacute Toxicity Test of Ethanol Extract of Tamarind Leaf as Effective Dosage as Antihyperglycemia Against AST, ALT, and Creatinine Levels
in Rats (Rattus norvegicus)
Sitti Rahimah, Dzulkifli, Suwahyuni, Rahmad Aksa, Mirnawati Salampe, Akbar Awaluddin Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Makassar, STIFA Makassar, Indonesia email: st.rahimah07@gmail.com
(tanggal diterima: 10-12-2020, tanggal disetujui: 17-03-2021)

## INTISARI
Uji  toksisitas  merupakan  salah  satu  tahap  pengujian  farmakologi  yang  harus  dilakukan untuk menilai keamanan penggunaan suatu obat. Penelitian uji aktivitas ekstrak etanol daun Asam jawa  ( Tamrindus  indica L)  dosis  14  mg/200gBB  sebagai  antihiperglikemia  terhadap  hewan  coba memberikan  hasil  yang  tidak  berbeda  signifikan  terhadap  aktivitas  obat  standar  Glibenklamid sebagai  Antidiabetes  mellitus,  sehingga  penelitian  ini  dilakukan  dengan    tujuan  untuk  melihat keamanan penggunaan dosis ekstrak etanol daun asam jawa ( Tamrindus indica L) tersebut selama 30 hari terhadap kadar enzim AST, ALT, dan Kreatinin tikus  ( Rattus norvegicus ). Pengujian  toksisitas  subakut  ini  menggunakan  Hewan  uji  sebanyak  14  ekor  dibagi  2 kelompok, tiap kelompok terdiri dari 7 ekor tikus. Kelompok I diberikan perlakuan Na CMC 0,5 % sebagai kontrol dan kelompok II diberikan perlakuan ekstrak etanol daun asam jawa dengan dosis 14  mg/200  g  BB  selama  30  hari.  Pada  hari  ke-31  dilakukan  pengukuran  serum  darah  dengan parameter AST,ALT DAN kreatinin menggunakan alat humalyzer.
Hasil  pengujian  toksisitas  subakut  menunjukkan  bahwa  pemberian  ekstrak  etanol  daun asam jawa sebagai antihiperglikemia tidak menyebabkan peningkatan enzim AST,ALT DAN kreatinin melebihi batas normal.
Kata kunci : Uji Toksisitas; Asam Jawa; AST; ALT; Kreatinin

## ABSTRACT
The toxicity test is one of the pharmacological testing stages that must be carried out to assess  the  use  of  a  drug.  Research  on  the  activity  test  of  the  ethanol  extract  of  Tamarind  leaves (Tamrindus indica L) at a dose of 14 mg / 200 g BW as an antihyperglycemia in experimental animals gave results that were not significantly different from the standard drug activity of Glibenclamide as an  antidiabetic  mellitus,  so  this  study  was  conducted  with  the  aim  of  looking  at  the  ethanol  of tamarind leaves. (Tamrindus indica L) for 30 days on levels of the enzymes AST, ALT, and creatinine in rats (Rattus norvegicus).
This  sub-acute  toxicity  test  used  14  test  animals  divided  into  two  groups,  each  group consisting of 7 rats. Group I was given 0.5% Na CMC treatment as a control, and group II was treated with ethanol extract of tamarind leaves at a dose of 14 mg / 200 g BW for 30 days. On the 31st day, blood serum measurements were taken with AST, ALT, and creatinine parameters using a humalyzer.
The results of the subacute toxicity test showed that giving tamarind leaves ethanol extract as an antihyperglycemia did not cause an increase in the AST, ALT AND creatinine enzymes beyond normal limits.
Keyword: Toxicity test, Tamarindus indica L; AST; ALT, Creatinin

## 1. PENDAHULUAN
Uji  toksisitas merupakan  salah  satu  uji  farmakologi  yang  dilakukan  dengan tujuan untuk  menilai  tingkat  ketoksikan  atau  keamanan  penggunaan  suatu zat/bahan  dalam  pengobatan. Hasil  penelitian  ekstrak  etanol  daun  asam  jawa dengan dosis ekstrak 2 mg/20 gBB (14 mg/200 gBB) terhadap hewan coba diabetes mellitus  memiliki  kemampuan  optimal  dalam  menurunkan  kadar gula  darah dan memiliki kemampuan yang hampir sama dengan kontrol positif glibenklamid (0,013 mg/20 g BB) (1).
Meskipun  bahan  alam  seperti  jamu  relatif  lebih  aman  digunakan  dalam pengobatan, akan tetapi penggunaan dalam jangka waktu yang lama tetap memiliki potensi  untuk  menimbulkan  efek  samping  ataupun  efek  toksik  (2).  Beberapa  hal yang  perlu  dipertimbangkan  dalam  penggunaan  bahan  alam  sebagai  pengobatan diantaranya adalah: penggunaan dosis yang tepat, menggunakan pada waktu dan cara yang tepat serta melakukan telaah informasi (3). Pada penelitian uji toksisitas teratogenik yang kami lakukan sebelumnya dengan menggunakan dosis yang sama (14  mg/200  gBB)  pada  ekstrak  etanol  daun  asam  jawa  didapatkan  hasil  bahwa ekstrak  tersebut  tidak  memiliki  efek  teratogenic  pada  fetus  tikus  (4),  sehingga dengan dilakukannya penelitian ini akan menambah data penelitian mengenai hasil uji toksisitas dari ekstrak etanol daun asam jawa ( Tamarindus indica L) terhadap fungsi organ hati dan ginjal.
Beberapa parameter  lain yang digunakan dalam uji  keamanan sediaan obat adalah ketoksikan terhadap beberapa organ vital dalam tubuh diantarnya hati dan ginjal.  Kedua  organ  ini  mempunyai  volume  aliran  darah  yang  tinggi  karenanya menjadi sasaran utama efek toksik (5). Hati merupakan organ sentral yang berperan pada proses metabolisme dalam tubuh. Pemeriksaan biokimia seperti pengukuran kadar  AST  dan  ALT  merupakan  parameter  yang  umumnya  digunakan  dalam pemeriksaan kerusakan hati (6). Sedangkan ginjal berperan dalam penyaringan dan pembuangan zat-zat toksik yang ada dalam darah. Untuk mendeteksi terjadianya gangguan atau kerusakan pada ginjal, dapat dilakukan dengan melakukan analisa urin atau pemeriksaan kadar kreatinin dan ureum (7)
Berdasarkan  uraian  diatas  semakin  memperjelas  pentingnya  pengujian toksisitas  dan  keamanan  produk  herbal  dan  bahan  alam.  Bahkan  WHO menempatkan  perihal  keamanan  obat  tradisional  menjadi  salah  satu  langkah penting di dalam strategi pengembangan obat tradisional periode 2014-2023 (8).

## 2. METODE PENELITIAN

## 2. 1. ALAT DAN BAHAN
Alat  yang  digunakan dalam  penelitian berupa alat Humalyzer junior , pipa kapiler,  timbangan  analitik  (mettler  toledo),  sentrifuge  (phoenix),  spuit  oral (kanula)  tabung  evendroff  (stardec),  dan  vacum  tube.  Bahan  yang  digunakan adalah  aquadest  ,  asam  asetat  glasial  (Merck),  asam  sulfat  pekat  (Merck),  daun
asam jawa (Tamarindus indica L. ) dipetik dari Kab.Maros Sulawesi Selatan, etanol 70% (OneMed), dan Na. CMC (Merck).

## 2. 2. PENGOLAHAN SAMPEL
Daun  asam  jawa  sebanyak  1  kg  disortasi  basah  terlebih  dahulu  dengan tujuan  menghilangkan  kotoran-kotoran  yang  terdapat  pada  daun,  selanjutnya dilakukan  pencucian  dengan  air  mengalir  kemudian  dirajang,  daun  asam  jawa dikeringkan dengan parameter daun hancur ketika diremas,  kemudian  dilakukan sortasi  kering  untuk  memisahkan sisa-sisa kotoran.
Simplisia daun asam jawa (Tamarindus indica L. ) 500 gram diekstraksi secara maserasi  dengan  etanol  70%  (1:10)  sambil  sesekali  diaduk.  Proses  ekstraksi dilakukan secara berulang dengan menggunakan cairan penyari yang baru hingga filtrat  yang  diperoleh  tampak  bening.  Filtrat  dikumpulkan  kemudian  diuapkan hingga  diperoleh  ekstrak  kental,  kemudian  dilanjutkan  dengan  uji  identifikasi kandungan kimia untuk flavonoid, alkaloid dan tanin.

## 2. 3. PERLAKUAN HEWAN UJI
Tikus  jantan  ( Rattus  Norvegicus) sebagai  hewan  uji  dipuasakan  selama  8  jam . Kemudian ditimbang berat badannya. Tikus dikelompokkan menjadi 2 dengan tiap kelompok  masing-masing  terdiri  dari  7  ekor  tikus.  Kelompok  I  memperoleh perlakuan sebagai kontrol negatif (Suspensi Na.CMC) dan kelompok II  diberikan ekstrak daun asam jawa (Tamarindus indica L. ) . Perlakuan diberikan sekali sehari selama  30  hari  dan  Pada  hari  ke-31  dilakukan  pengambilan  darah  untuk pemeriksaan kadar AST, ALT dan Kreatinin.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Pada  penelitian  ini  simplisia  daun  asam  jawa  diekstraksi  menggunakan metode  maserasi  sehingga  diperoleh  ekstrak  kental  berwarna  cokelat  kehitaman sebanyak 72,23 g dengan persen rendemen 14,44% dari 500 g simplisia. Berbeda dengan  hasil  ekstraksi  yang  dilakukan  oleh  Dedi  (9)  dan  Endah  (10)  dengan menggunakan cairan penyari yang sama diperoleh hasil persen rendemen masing- masing adalah 5,79% dan 15,29%. perbedaan ini dapat dipengaruhi oleh berbagai faktor, antara lain: perbedaan tempat tumbuh, umur, musim dan penanganan pasca panen.  Ekstraksi  dengan  metode  maserasi  cocok  untuk  untuk  mengekstrak komponen-komponen yang tidak tahan akan pemanasan sehingga meminimalkan terjadinya kerusakan komponen kimia yang terkandung di dalam daun asam jawa. Pemilihan  cairan  penyari  etanol  70%  didasarkan  pada  tingkat  kepolaran  yang bersifat  semipolar  sehingga  diharapkan  zat-zat  yang  bersifat  polar  ataupun nonpolar dapat terlarut dalam cairan penyari yang digunakan (11).
Asam  jawa  merupakan  salah  satu  tanaman  yang  secara  empiris  banyak digunakan oleh masyarakat sebagai obat tradisional. Penelitian sebelumnya yang dilakukan  oleh  Arnindya  bertujuan  untuk  melihat  pengaruh  pemberian  ekstrak daun asam jawa pada mencit Diabetes Mellitus dan diperoleh hasil dosis 2 mg/20
gBB (14 mg/200 gBB) memiliki pengaruh dalam menurunkan kadar glukosa darah hewan  coba  (2).  Ekstrak  daun  asam  jawa  berperan  dalam  menurunkan  diabetes mellitus karena mengandung beberapa senyawa kimia yang memiliki kemampuan sebagai antidiabetes. Hasil uji identifikasi kandungan kimia, senyawa tersebut yaitu alkaloid, flavonoid dan tanin dan hasil ini sesuai dengan penelitian yang dilakukan oleh Winda (12) dan Endah (10). Penelitian Mun’im (13) dan Dedi (9) juga diperoleh hasil  positif  terhadap  kandungan  flavonoid  dan  tannin  tetapi  hasil  negative terhadap alkaloid. Perbedaan hasil kandungan kimia yang diperoleh dari beberapa penelitian tersebut juga dapat dipengaruhi oleh factor-faktor yang telah disebutkan sebelumnya.
Alkaloid memiliki aktivitas farmakologi yang menonjol sehingga digunakan secara luas dalam bidang pengobatan (14). Flavonoid bekerja dengan merangsang sekresi  hormon  insulin  dari  pancreas  serta  meregenerasi  kerusakan  yang  terjadi pada sel β pulau Langerhans (15). Tanin memiliki aktivitas sebagai antioksidan dan mengaktifkan enzim yang meregenerasi  kerusakan sel β dari pancreas, selain itu tannin  juga  menghambat  absorbsi  glukosa  di  saluran  pencernaan.  Tanin  juga bertindak memperbaiki stress oksidatif patologik pada situasi diabetik (16).
Tujuan penelitian adalah untuk membuktikan keamanan pemberian ekstrak etanol  daun  asam  jawa (Tamarindus  indica L. ) sebagai  antihiperglikemia  (14 mg/200 gBB) selama 1 bulan (30 hari) pada tikus putih jantan ( Rattus norvegicus ) dengan parameter kadar AST, ALT dan Kreatinin. Pengujian dilakukan sebanyak 7 kali pengulangan pada 2 kelompok perlakuan yaitu Na CMC sebagai control negatif (-) dan suspensi ekstrak daun asam jawa dosis 14 mg/200 gBB. Volume pemberian pada  hewan  uji  berbeda-beda  berdasarkan  berat  badan  ,  selain  itu  dilakukan pengukuran  serum  darah  sebelum  dan  setelah  perlakuan  dengan  tujuan  untuk melihat perbedaan kadar AST, ALT dan kreatinin darah tikus antara sebelum dan setelah dilakukan pemberian ekstrak daun asam jawa.
Dari hasil pemeriksaan serum darah diperoleh rerata hasil pengukuran yang dapat dilihat pada tabel 1. di bawah ini:
Tabel 1. Rata-rata Kadar AST, ALT, dan kreatinin tikus sebelum dan sesudah perlakuan
Hasil  pengukuran  pada  serum  14  hewan  uji  tikus  sebelum  dan  sesudah perlakuan dengan pemberian suspensi Na. CMC dan suspensi ekstrak daun asam jawa selama 30 hari  menunjukkan kadar AST, ALT dan kreatinin yang berbeda  – beda pada masing – masing tikus.
Kelompok Perlakuan Rerata Kadar AST, ALT, dan Kreatinin Sebelum dan Sesudah Perlakuan AST (IU/l) ALT (IU/l) Kreatinin (mg/dL) Sebelum Sesudah Sebelum Sesudah Sebelum Sesudah Kontrol – (Na CMC 0.5%) 113,38 SD ± 15,67 140,54 SD ± 13,86 47,97 SD ± 9,45 49,52 SD ± 14,53 0.233 SD ± 0,14 0.384 SD ± 0.18 Susp. Ekstrak Daun Asam Jawa 14 mg/200 gBB 142,22 SD ± 25,02 151,70 SD ± 30,10 47,30 SD ± 10,79 46,31 SD ± 11,10 0.229 SD ± 0.06 0.519 SD ± 0.12
Kadar  normal  enzim  SGPT/ALT  pada  tikus  ada  pada  rentang  17,5-30,2 (IU/L),  sedangkan  kadar  SGOT/AST  normal  tikus  yaitu  45,7-80,8  (IU/L).  Sumber literatur  yang  lain,  kadar  normal  SGPT/ALT  tikus  jantan  pada  range  42,9-67,4 (IU/L) sedangkan tikus  betina 34,2-61,6 (IU/L), SGOT/AST tikus jantan 92,3-122,5 dan betina 82,7-139,6 (IU/L) (17). Sedangkan kadar kreatinin serum normal pada tikus adalah 0.578-1,128 mg/dl (18)
Hasil penelitian menunjukkan bahwa kadar enzim AST, ALT, dan Kreatinin serum  Tikus  mengalami  peningkatan  setelah  30  hari  perlakuan  namun  kadar tersebut masih berada pada range normal.
Nilai klinik suatu pemeriksaan laboratorium tergantung pada  sensitivitas, spesifik,  dan  akurasi.  AST  merupakan  parameter  yang  memiliki  sensitivitas maksimum 90% namun hanya 18% yang spesifik pada hati, ini menunjukkan bahwa AST  sensitif  tetapi  tidak  spesifik  untuk    melihat  kerusakan  hati.  Hal  ini    diduga berhubungan  dengan  distribusi  enzim  AST  yang  relatif  lebih  luas  pada  jantung dibandingkan  dengan  ALT  yang  spesifik  untuk  melihat  kerusakan  hati.  AST  pada jantung  digunakan  sebagai  parameter  untuk  diagnose  penyakit  infark  miokard, akan  tetapi  peningkatan  AST  tidak dapat  dijadikan  parameter  utama  karena  AST juga dapat meningkat pada kondisi lain yang perlu dipertimbangkan (19).
Berdasarakan  dari  hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  penggunaan ekstrak etanol sebagai antihiperglikemia pada dosis 14 mg/200gBB (2), selain tidak menyebakan terjadinya efek teratogenic pada fetus tikus (5), juga memiliki hasil uji toksisitas  subakut  terhadap  kadar  enzim  AST,ALT,  dan  Kreatinin  mengalami peningkatan  tetapi  masih  dalam  range  kadar  normal,  sehingga  perlu  dilakukan penelitian lanjutan terhadap uji toksisitas subkronik ataupun kronik. Peningkatan kadar  enzim  tersebut  dapat  dipengaruhi  oleh  penggunaan  cairan  penyari  yang bersifat  semipolar  sehingga  jenis  komponen  kimia  yang  dapat  terekstrasi  dapat bervariasi dan memilki pengaruh farmakologi yang berbeda-beda.
Hasil uji statistic dengan menggunakan metode t-Test menunjukkan bahwa tidak terdapat perbedaan pengaruh pemberian antara ekstrak daun asam jawa 14 mg/200 gBB dengan control negative Na CMC terhadap kadar AST tikus. Sedangkan terhadap pengaruh kadar ALT dan kreatinin tikus, pemberian ekstrak daun asam jawa 14 mg/200 gBB dengan control negative Na CMC memberikan pengaruh yang tidak signifikan diantara keduanya.

## 4. KESIMPULAN
Dari hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa pemberian per oral ekstrak etanol daun asam jawa (Tamarindus indica L. ) selama 30 hari terhadap tikus putih jantan  ( Rattus  norvegicus )  sebagai  antihiperglikemia    dapat  menyebabkan terjadinya peningkatan kadar serum AST, ALT dan kreatinin.

## 5. DAFTAR PUSTAKA
[1]. Arnindya  WM.  Pengaruh  ekstrak  daun  asam  jawa (Tamarindus  indica L. ) terhadap kadar gula darah mencit (Mus musculus L. ) jantan diabetes mellitus
dan pemanfaatannya sebagai buku ilmiah populer. Jurusan Pendidikan MIPA, Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan Universitas Jember. 2016.
[2]. Winarno  M,  Widowati  L,  Sundari  D.  Studi  keamanan  ramuan  jamu  untuk hiperurisemia  dan  hipertensi. Bulletin  Penelitian  Kesehatan .  2015;  43(3), 137-146.
[3]. Sari LORK. Pemanfaatan obat tradisional dengan pertimbangan manfaat dan keamanannya. Majalah Ilmu Kefarmasian . 2016; 3(1), 01-07.
[4]. Rahimah S, Mirnawati S, Nurbaiti R. Uji Toksisitas Teratogenik Ekstrak Etanol Daun  Asam  Jawa  ( Tamarindus  Indica L)  terhadap  Tikus  Putih  ( Rattus norvegicus ). Jurnal As-Syifaa . 2020; 12(1), 29-35
[5]. Puspitasari D. Uji toksisitas ekstrak air daun katuk (Sauropus androgynus) terhadap histologi dan berat ginjal tikus ( Rattus novergicus ) betina. Fakultas Sains dan Teknologi. Universitas Islam Negeri: Malang. 2015.
[6]. Sadikin M. Biokimia Enzim. Jakarta : Widya Medika; 2002; pp. 299-316.
[7]. Pravitasari, Lucy. Pengaruh pemberian ekstrak air daun jambu biji (Psidium Guajava Linn) terhadap kadar kreatinin dan urea serum tikus putih (Rattus Norvegicus) Jantan. KTI Farmasi UGM Yogyakarta. 2006.
[8]. WHO  Traditional  Medicine  Strategy  2014-2023.  (2013).  Geneva,  World Health Organization.
[9]. Irawan, Dedi, Nina J. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol 70% Daun Asam Jawa ( Tamarindus indica L) dan Formulasi Sediaan Obat  Kumur Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus. Skripsi Univ.17 Agustus 1945. 2019.
[10]. Kartikawati, Endah, Dytha AD, Bentari P. Uji Efek Analgetik Ekstrak Etanol Daun Asam Jawa ( Tmarindus indica L) pada Mencit Putih Jantan Galur Swiss Webster. Jurnal Sabdariffarma . 2020; 1(2), 11-18.
[11]. Depkes  RI. Pharmaceutical  Untuk  Penyakit  Hati .  Direktorat  Bina  Farmasi Komunitas  Dan  Klinik  Ditjen  Bina  Kefarmasian  Dan  Alat  Kesehatan Departemen Kesehatan RI. 2007.
[12]. Oktiwilianti W, Umi Y, Ratu C. Uji Aktivitas Antiinflamasi Ekstrak Etanol Daun Asam  Jawa  ( Tmarindus  indica L)  Terhadap  Tikus  Wistar  Jantan. Prosiding Penelitian SPeSIA Unisba . 2015; 111-117.
[13]. Mun’im, Abdul, Endang H, Rahmadiah. Karakterisasi Ekstrak Etanolik Daun Asam Jawa ( Tamarindus indica L). Majalah Ilmu Kefarmasian . 2009; 1(1), 38- 44.
[14]. Harborne  JB.  Metode  Fitokimia:  Penuntun  cara  modern  menganalisis tumbuhan. Bandung: Penerbit ITB. 1987.
[15]. Widyowaty  W.  Potensi  antioksidan  sebagai  antidiabetes. Jurnal  Kesehatan Mayarakat. 2008; Vol.7 [16]. Sudjaroen  Y,  Haubner  R,  Wurtele  G,  Hull  WE,  Erben  G,  Spiegelhalder  B. Isolation  and  structure  elucidation  of  phenolic  antioxidant  from  tamarind (Tamarindus indica L) seeds pericarp. Food Chem Toxicol. 2005.
[17]. Azizah T, Arifah SW, Muhammad Da’I. Pengaruh pemberian ekstrak etanol meniran  ( Phyllanthus  niruri L)  selama  90  hari  terhadap  fungsi  hati  tikus.
Fakultas Farmasi : Universitas Muhammadiyah Surakarta. 2015.
[18]. Dewi  P,  Hairrudin,  Rena  N.  Pengaruh  stres  fisik  terhadap  kadar  kreatinin serum tikus wistar jantan ( Rattus norvegicus ). E-Jurnal Pustaka Kesehatan.
2016; Vol.4. No.2
[19]. Qodriyati  NLY,  Erna  S,  Budi  Y.  Kadar  serum glutamic  oxaloacetic transaminase (SGOT)  pada  tikus  wistar  ( Rattus  norvegicus )  jantan  yang dipapar  stresor  rasa  sakit electrical  foot  shock selama  28  hari.  Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Jember. 2016.