ISSN: 1693-8615
Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanolik Daun Patikan Kebo ( Euphorbia hirta Linn) dan Herba Rumput Mutiara ( Hydeotis carymbosa L) terhadap Bakteri Penyebab Pneumonia

## OPSTARIA SAPTARINI
Fakultas Farmasi, Universitas Setia Budi Jln. Letjen Sutoyo-Mojosongo Surakarta-57127 Telp. 0271-852518 * Korespondensi: ops_1909@yahoo.com
(Diterima 14 September 2011, disetujui 15 Oktober 2011)

## _________________________________________________________________________

## Abstrak
Pneumonia  merupakan  penyakit  sistem  pernapasan  dimana  alveoli    mengalami  peradangan  dan terjadi  penimbunan  cairan.  Pneumonia  merupakan  infeksi  serius  yang  banyak  diderita  oleh  anak  anak dan  orang  dewasa  secara  fundamental  yang  terjadi  di  seluruh  dunia.  Ada  banyak  bakteri  penyebab penyakit    pneumonia  antara  lain  seperti  yang  digunakan  dalam  pengujian  ini  adalah Streptococcus pneumonia,  Klebsiella  pneumonia,  Streptococcus  haemolyticus  alpha  dan  beta.  Tanaman  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  herba  rumput  mutiara,  dan  daun  patikan  kebo. Metode mikrodilusi digunakan untuk pengujian aktivitas antibakterinya. Pengujian ini dilakukan terhadap ekstrak etanol, ekstrak metanol dan infuse dari daun patikan kebo dan rumput mutiara dengan konsentrasi yang sama  dengan  konsentrasi  terbesar  adalah  1024 μ g/ml  konsentrasi  berikutnya  berdasarkan  pengenceran terus dilakukan sampai pada kolom ketiga yang akan memiliki konsentrasi terkecil. Pelat diinkubasi pada suhu  37°C  selama  24  jam  kemudian  diamati  bagian  yang  jernih  (tidak  ada  pertumbuhan  mikroba). Konsentrasi terkecil di mana tidak terlihat pertumbuhan mikroba ditetapkan sebagai MIC (NCCLS, 2003). Berdasarkan  pengujian  aktivitas  antibakteri    terhadap  infus,  ekstrak  metanol dan  ekstrak  etanol  daun patikan  kebo,  dan  herba  rumput  mutiara,  dengan  metode broth  microdillution,  terlihat  bahwa  ekstrak yang  paling  aktif  adalah  ekstrak  etanol  daun  patikan  kebo  dan  ekstrak  etanolik  herba  rumput  mutiara pada  bakteri ,  Streptococcus  Pneumonia,  Streptococcus  haemolyticus  alpha dan Streptococcus haemoyiticus beta dan Klebsiella pneumonia meskipun efeknya lebih rendah dibandingkan dengan obat standart tetrasiklin.
Kata kunci : Aktivitas antibakteri, mikrodilusi, Patikan kebo dan herba Rumput mutiara, killing time curve, SEM

## Pendahuluan
Pneumonia  merupakan  salah  satu  masalah kesehatan  di  dunia  karena  angka  kematiannya yang  diakibatkan  oleh  penyakit  ini  tinggi,  tidak saja  di  Negara  berkembang,  tapi juga  di  negara maju  seperti  AS,  Kanada  dan  negara-negara Eropa.  Di  AS  terdapat  dua  juta  sampai  tiga  juta kasus  pneumonia  per  tahun  dengan  jumlah kematian rata-rata 45.000 orang dan menghabiskan biaya   lebih dari 20 miliar dollar untuk  sistem  layanan  kesehatan.  Di  Indonesia,
pneumonia  merupakan  penyebab  kematian nomor tiga setelah kardiovaskuler dan tuberkulosis. Faktor sosial ekonomi yang rendah mempertinggi angka kematian. Gejala Pneumonia  berupa  demam,  sesak  napas  dan nadi  cepat,  dahak  berwarna  kehijauan  serta gambaran hasil ronsen memperlihatkan
kepadatan  pada  bagian  paru.  Pneumonia  yang ada  di  masyarakat  umumnya,  disebabkan  oleh bakteri, virus atau mikoplasma.
Pneumonia  yang  dipicu  oleh  bakteri  bisa menyerang  siapa  saja,  dari  bayi  sampai  usia lanjut.  Pencandu  alkohol,  pasien  pasca-operasi, orang-orang dengan penyakit gangguan pernapasan,  sedang  terinfeksi  virus  atau  orang dengan  kekebalan  tubuh  menurun  memiliki resiko  paling  tinggi.  Sebenarnya  bakteri penyebab pneumonia yang paling umum adalah Streptococcus  pneumoniae yang  sudah  ada  di kerongkongan manusia sehat. Begitu pertahanan tubuh  menurun  karena  sakit,  usia  tua,  atau malnutrisi,  bakteri  segera  memperbanyak  diri dan menyebabkan kerusakan.
Bakteri penyebab pneumonia yang termasuk  dalam  bakteri  gram  positif  adalah strain streptococcus dan Staphylococcus, sedangkan  yang  termasuk  dalam  bakteri  basil gram negatif (enterik) adalah Klebsiella pneumonia. Yang termasuk dalam bakteri Gram negatif nonenterik adalah Pseudomonas Aeruginosae,  Haemophilus  Influenzae,  and Moraxella  Catharlis. Seringnya  penggunaan obat  antimikroba      dan    penggunaan antimikroba  yang  kerap  kali  untuk  tujuan profilaksis  telah  dikaitkan  dengan  risiko resistensi  terhadap  antibiotik  pada  infeksi pneumokokus. Frekuensi resistensi juga meningkat pada bakteri yang berbeda, terutama pada negara-negara berkembang dimana antimikroba dapat tersedia  tanpa  resep.
Penelitian terbaru menunjukkan bahwa penggunaan  obat  antibiotika  yang  berlebihan dan  tidak  tepat,  khususnya  di  kalangan  pasien perkotaan merupakan salah satu faktor pencetus resistensi (Hoffmann dkk 2009)
Penggunaan  tanaman  obat-obatan  saat  ini sudah cukup populer. Pada saat ini telah banyak tanaman yang telah diteliti sebagai antimikroba. Para  peneliti  tidak  hanya  meneliti  daun  dari tanaman  tersebut  tapi  juga  bunga,  batang,  biji,
buah  dan  akarnya.  Alasan  dari  pemakaian tanaman  sebagai  obat  adalah  karena  merasa pengobatan  dengan  cara  tersebut  cukup  aman, efektif dan murah.
Pada  penelitian  ini  menggunakan  tanaman patikan  kebo  dan  rumput  mutiara.  Tanaman  ini di  pilih  dengan  alasan  secara  tradisional berdasarkan pengalaman, tanaman obat tersebut dapat menyembuhkan beberapa penyakit akibat infeksi  oleh  jamur  maupun  bakteri.  Hal  ini mengindikasikan  bahwa  dalam  tanaman  obat tradisional  terkandung  suatu  senyawa  yang mempunyai bioaktivitas sebagai antibakteri atau antijamur.  Selain  itu  secara  empiris  tanaman tersebut digunakan oleh masyarakat luas sebagai obat  batuk,  menanggulangi  sesak  napas  sampai dengan  bronchitis.  dan  beberapa  dari  tanaman tersebut  juga  telah  diuji  antibakteri  atau antifungi (Anonim 2005)
Ekstrak  dari  tanaman  yang  akan  diuji aktivitas  antibakteri  dengan  metode  mikrodilusi dibuat  dengan  menggunakan  penyari  etanol hingga diperoleh ekstrak yang kental. kemudian dilakukan  uji  aktivitas  antibakteri  kembali dengan metode mikrodilusi.

## Metode Penelitian

## Bahan
Daun  patikan  kebo  dan  herba  rumput mutiara,  metanol,  etanol  96%,  tetrasiklin, erytromisin,  metanol,  aquadest,  asam  sulfat, acetone, toluena, etil asetat, pereaksi Dragendroff,  pereaksi  Mayer,  serbuk  Mg,  amil alkohol, natrium asetat, besi (III) klorida, larutan gelatin,  natrium  hidroksida,  larutan  amonia, eter,  kloroform,  pereaksi meyer,  pereaksi  FeCl 3 , uap  amoniak,  larutan  citroborat,  kertas  saring, dan  plat  KLT  GF  254.  Media    agar  BHI,  TSA, TSB, MHA, NA.

## Alat
Peralatan  maserasi,  alat  penguap  hampa udara  berputar,  neraca  analitik,  pipa  kapiler,
krus  silikat,  cawan  penguap,  gelas  piala,  labu Erlenmeyer, batang pengaduk, pipet tetes, pipet ukur,  pipet  volume, pipet  automatik,  cawan petri, jarum ose, bunsen, pelat mikro 96 lubang, tabung  reaksi,  tip,  eppendorf,  spatel,  oven, vortex, alat swab dan inkubator.

## Mikroba Uji
Streptococcus  haemolyticus  Alpha  dan Beta,  Streptococcus    pneumonia  dan  Klebsiella Pneumonia diperoleh dari Laboratorium Diagnostik PT. Biofarma.

## Ekstraksi Simplisia
Serbuk  simplisia  ditimbang  sebanyak  200 gram, dimaserasi dengan 1000 mL etanol 96 % dalam  suatu  bejana  gelap.  Perendaman dilakukan  selama  3  hari  dengan  dilakukan pengocokan  secara  berkala.  Residu  dimaserasi kembali  dua  kali  dengan  etanol  96  %.  Filtrat yang diperoleh  disatukan  kemudian  dipekatkan dengan  alat  penguap  hampa  udara  berputar. Ekstrak  dipekatkan  di  atas  tangas  air  bersuhu 50°C sampai diperoleh ekstrak kental.

## Penapisan  Fitokimia  dan  Karakterisasi Ekstrak
Karakterisasi  ekstrak  meliputi  pemeriksaan kandungan  kimia  ekstrak,  penetapan  kadar  air, kadar sari larut etanol, kadar sari larut air, kadar abu dan pola kromatogram. Penapisan fitokimia dilakukan terhadap ekstrak dan fraksi.
Pengujian  Aktivitas  Antimikroba  dengan Metode Broth  Microdilution  Sebanyak  100 μ L nutrient  broth  dimasukkan  dalam  pelat  mikro pada  kolom  pertama  (sebagai  kontrol  negatif). Suspensi  mikroba  sebanyak  5 μ L  ditambahkan ke dalam 10 mL nutrient broth kemudian diaduk dengan alat vortex. Sebanyak 100 μ L campuran tersebut  dimasukkan  dalam  pelat  mikro  pada kolom  kedua  sampai  kedua  belas.  Pada  kolom kedua  belas,  ditambahkan  100 μ L  larutan antibiotik atau ekstrak kemudian dihomogenkan.  Dari  kolom  kedua  belas,
diambil  100 μ L  kemudian  dipindahkan  ke kolom  kesebelas.  Pengenceran  terus  dilakukan sampai  pada  kolom  ketiga  yang  akan  memiliki konsentrasi  terkecil.  Pelat  diinkubasi  pada  suhu 37°C  selama  24  jam  kemudian  diamati  bagian yang  jernih  (tidak  ada  pertumbuhan  mikroba). Konsentrasi  terkecil  di  mana  tidak  terlihat pertumbuhan  mikroba  ditetapkan  sebagai  MIC (NCCLS 2003).
Sebanyak  5 μ L  alikuot  dari  setiap  bagian yang  jernih  dipindahkan  dalam  nutrient  agar dan  diinkubasi  pada  suhu  37°C  selama  24  jam kemudian  diamati.  Konsentrasi  terendah  di mana  tidak  terlihat  adanya  pertumbuhan mikroba ditetapkan sebagai MBC.

## Hasil dan Pembahasan
Pada  awal  penelitian,  tumbuhan  yang digunakan  dideterminasi  untuk  mengetahui kebenaran  identitas  botani  tumbuhan  tersebut. Hasil  determinasi  tumbuhan  menunjukkan bahwa jenis tumbuhan adalah patikan kebo dan herba  rumput mutiara. Ekstraksi  yang  dilakukan dengan  menggunakan  pelarut  metanol,  air  dan etanol.  Kemudian  dilakukan  uji  aktivitas terhadap bakteri Klebsiella Pneumonia,
Streptococcus  haemolyticus  alpha dan beta serta Streptococcus pneumonia.
Etanol  merupakan  pelarut  universal  yang dapat  menarik  sebagian  besar  senyawa  polar, sebagian  kecil  senyawa  semi  polar,  dan sebagian  kecil  senyawa  non-polar  sehingga diharapkan dapat  menarik  berbagai  senyawa dalam  simplisia.  Etanol  dapat  melarutkan alkaloid  basa,  minyak  menguap,  glikosida, kumarin,  flavonoid,  antrakinon,  steroid,  dan klorofil.  Lemak,  malam,  tanin,  dan  saponin hanya  sedikit  larut.  Etanol  dipertimbangkan sebagai  larutan  penyari  karena  lebih  selektif, kapang  dan  kuman  sulit  tumbuh  dalam  etanol 20%  ke  atas,  tidak  beracun,  netral,  absorbsinya baik,  etanol  dapat  bercampur  dengan  air  pada
skala  perbandingan  dan  panas  yang  diperlukan lebih sedikit .
Karakterisasi simplisia
dan ekstrak dilakukan  untuk  mengetahui  parameter  yang perlu  diketahui  dari  simplisia  dan  ekstrak  yang diperoleh.  Karakterisasi  dalam  penelitian  ini hanya dilakukan terhadap ekstrak yang memiliki aktivitas  antibakteri  yang  paling  aktif  yaitu terhadap  simplisia  dan  ekstrak  daun  patikan kebo  dan  herba  rumput  mutiara.  Karakterisasi ekstrak  bertujuan  untuk  mengetahui  spesifikasi ekstrak  yang  digunakan.  Spesifikasi  ekstrak  ini penting  dalam  penggunaan  ekstrak  sebagai bahan  baku  obat.  Karakterisasi  ekstrak  yang dilakukan  meliputi  penetapan  kadar  air,  kadar sari  larut  air,  kadar  sari  larut  etanol,  dan  kadar abu.  Hasil  karakterisasi  ekstrak  dapat  dilihat pada tabel berikut.
Tabel 1. Hasil karakterisasi simplisia Karakteristik Simplisia Patikan kebo Rumput mutiara Kadar air (% v/b) 11,47 9,25 Kadar sari larut etanol (% b/b) 3,315 3,972 Kadar abu (% b/b) 0,60 0,64 Kadar abu tidak larut asam 0,11 0,15 Tabel 2. Hasil karakterisasi ekstrak Karakteristik Ekstrak Patikan kebo Rumput mutiara Kadar air (% v/b) 20 16 Kadar sari larut air (% b/b) 4,3 7,1 Kadar sari larut etanol (% b/b) 6,7 30,8 Kadar abu (% b/b) 4,9 4,5 Kadar abu tidak larut asam 1,4 1,7
Pemeriksaan  kandungan  kimia  ekstrak dilakukan  untuk mengetahui  golongan  senyawa yang  terdapat  di  dalam  ekstrak.  Hasil pemeriksaan kandungan kimia ekstrak dan fraksi dapat dilihat dalam tabel 3.
Berdasarkan  penapisan  fitokimia  yang dilakukan,    ekstrak  etanol  daun  patikan  kebo mengandung  tannin,  flavonoid,  saponin  steroid dan  triterpenoid  dan  herba  rumput  mutiara mengandung    tannin,  flavonoid,  saponin, kuinon, alkaloid dan steroid.
Tabel 3. Hasil penapisan fitokimia ekstrak
Jenis karakteristik Ekstrak etanolik Patikan Kebo Rumput mutiara Tanin + + Flavonoid + + Kuinon - - Saponin + + Alkaloid + + Steroid + + Triterpenoid + - Keterangan : += ekstrak mengandung golongan senyawa tersebut
- =ekstrak tidak mengandung golongan senyawa
Hasil pengujian adanya aktivitas antimikroba  terhadap  bakteri Streptococcus haemolyticus tipe alpha dan beta, Streptococcus pneumonia dan Klebsiella pneumonia dilakukan dengan menggunakan metode broth microdilution. Dari kedua ekstrak tanaman yang digunakan pada pengujian ini yang memberikan aktivitas  penghambatan  (MIC)  yang  paling  baik adalah  ekstrak  etanol  patikan  kebo  yaitu  rata rata  128 μ g/ml  terhadap  bakteri Streptococcus haemolyticus  tipe  alpha,  256 μ g/ml  terhadap bakteri klebsiella  pneumonia dan  konsentrasi 512 μ g/ml untuk bakteri Streptococcus haemolyticus  tipe  beta,  dan  Streptococcus pneumonia.  Sedangkan  pada  ekstrak  herba mutiara  rata  rata  256 μ g/ml  pada  bakteri  uji Streptococcus haemolyticus tipe beta dan alpha dan rata  rata  konsentrasi  512 μ g/ml  terhadap bakteri Klebsiella pneumonia dan Streptococcus pneumonia,  Tetapi  efek  antibakterinya  lebih rendah  jika  dibandingkan  dengan    obat pembanding yaitu tetrasiklin.
Dari  data  hasil  pengujian  mikrodilusi diatas,  aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak  metanol dari  patikan  kebo  memiliki  MIC  pada konsentrasi  1024 μ g/ml  bakteri  yaitu Klebsiella pneumonia, Streptococcus Pneumonia, Streptococcus  alpha  dan  Streptococcus  beta haemolyticus sedangkan  aktivitas  antibakteri infus    dari  patikan  kebo  dan  rumpuit  mutiara memiliki  MIC  dan  MBC  melebihi  dari  1024 μ g/ml terhadap keempat bakteri yaitu Klebsiella
pneumonia,
Streptococcus
Pneumonia,
Streptococcus  alpha  dan  Streptococcus  beta haemolyticus ini  berarti  jika  dibandingkan dengan  obat  standart  dalam  hal  ini  adalah tetrasiklin  atau  dengan  ekstrak  etanol  dari  daun patikan  kebo  dan  rumput  mutiara,  dianggap
bahwa  infus  dan  ekstrak  metanol daun  patikan kebo dan  herba  rumput  mutiara  tidak memberikan  aktivitas  antibakteri  yang  baik  jika akan digunakan sebagai obat.
Tabel 4. Hasil penentuan nilai MIC dan MBC ekstrak  daun patikan kebo terhadap bakteri
Mikroba Infus  PK Ekstrak metanol PK Ekstrak etanolik PK Tetrasiklin MIC MBC MIC       MBC MIC MBC MIC MBC Str α >1024 >1024 1024 >1024 128 512 128 512 Str β >1024 >1024 512 >1024 512 1024 64 128 Klb p >1024 >1024 1024 >1024 256 256 128 512 Str p >1024 >1024 1024 >1024 512 1024 64 256
Tabel 5. Hasil penentuan nilai MIC dan MBC ekstrak herba rumput mutiara terhadap bakteri
Mikroba Infus RM Ekstrak metanol RM Ekstrak etanolik RM tetrasiklin MIC MBC MIC MBC MIC MBC MIC MBC Str α >1024 >1024 1024 >1024 256 1024 128 512 Str β >1024 >1024 1024 >1024 256 1024 64 128 Klb p >1024 >1024 1024 >1024 512 1024 128 512 Str p >1024 >1024 1024 >1024 512 1024 64 256 Keterangan: MIC = Minimum Inhibitory Concentration MBC = Minimum Bactericidal Concentration Str α = Streptococcus  haemolyticus α Str β = Streptococcus haemolyticus β Klb p = Klebsiella pneumonia Dip = streptococcus pneumonia PK = Patikan kebo RM = Rumput mutiara
Aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol  dan ekstrak  metanol  daun    patikan  kebo  dan  herba rumput  mutiara  ini  diduga  karena  kandungan kimia yang dimiliki oleh kedua ekstrak tanaman tersebut.  Namun  menurut  Basma et  al  (2011) ekstrak  etanol daun  patikan  kebo  mengadung terpenoid, alkaloid, steroid, tanin, flavanoid dan komponen fenolik. Sedangkan ekstrak metanoliknya  mengandung  tanin,  flavonoid, alkaloid  and  glikosida  jantung  (oegeke et  al, 2007)  sedangkan  ekstrak  etanol  herba  rumput mutiara mengandung alkaloid, flavonoid, saponin, tannin, gula dan steroid demikian pula ekstrak metanolnya (Sandeep et al 2009; Sultana et  al 2010).  Pada  infus  patikan  kebo, memperlihatkan  aktivitas  yang  rendah  terhadap bakteri  dikarenakan  kandungan  kimia  dari
tanaman ini tidak terlarut  di  dalam  air (Aniel et al 2010).

## Kesimpulan
Berdasarkan  pengujian  aktivitas  antibakteri terhadap  infuse,  ekstrak  metanol dan  ekstrak etanol  daun  patikan  kebo,  dan  herba  rumput mutiara,  dengan  metode broth  microdillution, terlihat  bahwa  ekstrak    yang  paling  aktif  adalah ekstrak  etanol  daun  patikan  kebo  dan  ekstrak etanolik  herba  rumput  mutiara  pada  bakteri , Streptococcus
Pneumonia, Streptococcus haemolyticus  alpha dan Streptococcus
haemoyiticus beta dan Klebsiella pneumonia.

## Daftar Pustaka
Aniel  KO,  Mutyala  NL,  Raja  RKG. 2010. Antibacterial  evaluation  of  snake  weed ( Euphorbia  hirta  L.)  Journal  of  Phytology
2(3): 08–12
Anonim. 2005. Tanaman  obat  Indonesia [online]. Available from  :  URL  :
http://www.iptek.net.id/cakra_obat/tanama nobat.php?id=54. Accesed  Juni 2011.
Basma  AA,  Zakaria  Z,  Latha  LY,  Sasidharan  S.
2011. Antioxidant
activity
and phytochemical  screening  of  the  methanol extracts  of Euphorbia  hirta  L. Asian  Pac  J Trop Med. 4(5):386-90.
Hoffmann et  al. 1995. The  Prevalence  of  drug resistant Streptococcus  pneumonia in Atlanta. N Engl J Med.. 333(8): 481-6. NCCLS. 2008. Methods for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria  that  grow  aerobically  approved standard 8 th edition. Volume 29, Pennsylvania: NCCLS. 15-18.