ISSN: 1693-8615 EISSN : 2302-4291 Online : http://farmasiindonesia.setiabudi.ac.id/
Analisis Stabilitas Senyawa Aktif Antioksidan Kelopak Bunga Rosella ( Hibiscus sabdariffa L.) Pada Penggunaannya Sebagai Bahan Tambahan Pangan Alami
Stability Analysis of Active Compounds Antioxidants Rosella Flower petals ( Hibiscus sabdariffa L.) As Natural Food Additives
Vivin Nopiyanti 1 , Reslely Harjanti 2 1,2 Fakultas Farmasi Universitas Setia Budi

## Abstrak
Penggunaan  pewarna  alami  sebagai  bahan  tambahan  pangan  merupakan  langkah yang lebih baik untuk mencegah penggunaan bahan tambahanpangansintetik yang berbahaya. Banyak  tanaman  yang  berpotensi  sebagai  sumber  bahan  tambahan  pangan  alami.  Salah satunya  adalah  kelopak  bunga  rosella.  Kepraktisan  penggunaannya  mendorong  masyarakat beralih  pada  penggunaan  bahan  tambahan  pangan  alami  tersebut,  tetapi  terkendala  dengan daya simpannya yang tidak tahan lama. Kelopak bunga rosella mengandung pigmen antosianin dengan  kadar  yang  relatif  tinggi,  sehingga  mempunyai  potensi  untuk  dimanfaatkan  sebagai sumber  bahan  tambahan  pangan  terutama  sebagai  zat  pewarna  yang  bermanfaat  bagi kesehatan  karena  kandungan  giziserta  zat  aktif  yang  mempunyai  aktivitas  farmakologis  di antaranya  antioksidan.  Etanol  adalah  pelarut  yang  diperbolehkan  digunakan  dalam  bahan makanan  ( food  grade )  dalam  batas  tertentu.  Etanol  dapat  berfungsi  sebagai  pengawet sehingga  bahan  makanan  tidak  mudah  rusak.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menganalisis stabilitas  kandungan  senyawa  aktif  kelopak  bunga  rosella  yang  dibuat  dalam  bentuk  sediaan ekstrak  etanol  supaya  dapat digunakan  masyarakat sebagai  bahan  tambahan  pangan  dengan daya simpan lama.
Penelitian  ini  dilakukan  dengan  cara  membuat  sediaan  ekstrak  etanol  kelopak  bunga rosella  dengan  metode  maserasi  dibandingkan  dengan  penggunaannya  di  masyarakat berupa rebusan.  Senyawa  aktif  antioksidannya  diidentifikasi  dan  ditetapkan  aktivitas  antioksidannya dengan  metode  penangkapan  radikal  bebas  DPPH.  Stabilitas  senyawa  aktifnya  dipantau dengan pengujian aktivitas antioksidan setelah digunakan dalam produk makanan.
Hasil  Penelitian  menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  bunga  rosella  sebagai  bahan tambahan  pangan  yang  masih  mempunyai  aktivitas  antioksidan  dengan  nilai  IC 50 33,79  µg/ml dibandingkan  dengan  nilai  IC 50 dari  ekstrak  etanol  bunga  rosella  yaitu  sebesar  8,416  µg/ml. Ekstrak  etanol  mempunyai  aktivitas  antioksidan  lebih  baik  jika  dibandingkan  dengan  rebusan dengan nilai IC 50 19,74 µg/ml
Keywords : kelopak bunga rosella, antioksidan, bahan tambahan pangan alami

## PENDAHULUAN
Penggunaan pewarna alami sebagai bahan aditif makanan merupakan  langkah  yang  lebih  baik untuk  mencegah  penggunaan  bahan aditif makanan yang berbahaya.
Banyak tanaman yang berpotensi sebagai sumber bahan tambahan pangan  alami.  Salah  satunya  adalah
kelopak  bunga  rosella.  Kepraktisan penggunaannya mendorong
masyarakat  beralih  pada  penggunaan bahan tambahan pangan salah satunya pewarna alami makanan. Antioksidan adalah suatu senyawa yang dapat mencegah sel dari kerusakan yang disebabkan oleh
molekul  yang  tidak  stabil  yang  dikenal
sebagai  radikal  bebas  (Deena et  al . 2011).  Radikal  bebas  menyebabkan kerusakan  oksidasi  pada  lipid,  protein, dan  asam  nukleat . Antioksidan  sintesis seperti  BHA,  BHT,  TBHQ  dan  propil galat dapat menyebabkan atau mempromosi efek negatif bagi kesehatan  (Pourmorad et  al .  2006; Karori et al . 2007).
Perhatian  banyak  ditingkatkan dalam  pencarian  untuk  mendapatkan sumber antioksidan alami. Kebanyakan antioksidan  adalah  flavonoid,  isoflavon, kumarin,  lignin,  antosianin,  flavon  dan isokatekin.  Antioksidan    diperoleh  dari sumber  makanan  alami  dan  vitamin  C, vitamin  E,  karoten  dan  tokoferol  (Yalla et  al .  2010).  Dikarenakan  keuntungan yang  potensial  bagi  kesehatan  dari antioksidan  alami  diharapkan  dapat menjadi alternatif pengganti antioksidan  sintetis.  Senyawa  polifenol seperti  senyawa  flavonoid  mampu menghambat autooksidasi melalui mekanisme penangkapan radikal bebas ( radical scavenging ) dengan cara menyumbangkan  satu  elektron  dari elektron yang tidak berpasangan dalam radikal  bebas  sehingga  banyaknya radikal bebas berkurang (Pokorny et al .
2001). Senyawa fenolik adalah senyawa penyusun yang keberadaannya  luas  dalam  tanaman dan telah dipercaya mempunyai
kapasitas  antioksidan  dan  penangkap radikal bebas yang tinggi (Kahkonen et al . 2001). Aktivitas antioksidan senyawa dapat diukur dari kemampuannya menangkap radikal bebas. Senyawa-senyawa yang tergabung  dalam  antioksidan  ini  akan menyerahkan satu atau lebih elektronnya kepada radikal
bebassehingga menjadi bentuk molekul yang normal kembali dan menghentikan berbagai kerusakan yang ditimbulkan (Caroline 2005). Bunga rosella mengandung flavonoid, antosian, dan polifenol (Kuriyan et  al .  2010).  Senyawa  aktif dari  bunga  rosella  yaitu  antosianin berupa 3- sambubioside , protein, lemak, serat,  kalsium,  fosfor,  besi,  karoten, tiamin,  riboflavin,  dan  niasin  selain  itu asam  askorbat  dan  fenolAntosianin adalah kelompok pigmen yang menyebabkan warna kemerah-
merahan,  letaknya  di  dalam  cairan  sel yang  bersifat  larut  dalam  larutan  polar. Larutan  pengekstrak  yang  digunakan umumnya  adalah  aquadestillataillata dan  etanol.  Dipilihnya  etanol  sebagai pelarut  dalam  mengekstrak  karena antosianin adalah pigmen yang sifatnya polar dan akan larut dengan baik dalam pelarut-pelarut polar, sementara aquadestillata digunakan sebagai pelarut pembanding dalam memperoleh antosianin yang terbaik. Salah satu uji untuk menentukan aktivitas antioksidan penangkap  radikal  adalah  metode DPPH (2,2- difenil-2-pikrilhidrazil). Senyawa  DPPH  adalah  radikal  yang distabilkan  oleh  delokalisasi  elektron bebas secara menyeluruh dan menyebabkan  DPPH  tidak  mudah membentuk dimer. Pencampuran
radikal  DPPH    dengan  substansi  yang mampu  menyumbangkan  sebuah  atom hidrogen  akan  memunculkan  bentuk tereduksi yang ditunjukkan oleh perubahan warna unggu menjadi kuning.  Perubahan  ini  dapat  diukur secara spektrofotometri (Molyneux 2004).
Penggunaan  antosianin  yang terkandung dalam kelopak bunga rosella  sebagai  pewarna  alami  telah banyak  digunakan  oleh  masyarakat karena  kelopak  bunga  rosella  memang berwarna merah. Penggunaan pewarna alami  mempunyai  kekurangan  antara lain  warna  kurang  stabil,  tidak  praktis dan  mengganggu  rasa  serta  aroma makanan. Oleh karena itu perlu dilakukan  pembuatan  pewarna  alami dari  kelopak  bunga  rosella  dengan menggunakan  teknik  penyarian  yang tepat  supaya  tidak  terjadi  hal  tersebut. Oleh karena itu perlu dilakukan pembuatan pewarna alami dari kelopak bunga  rosella  dengan  menggunakan teknik  penyarian  yang  tepat  supaya tidak  terjadi  hal  tersebut.  Penggunaan kelopak  bunga  rosella  dalam  keadaan segar  dapat  menyebabkan  rasa  yang pahit jika digunakan.
Sehingga pembuatan  pewarna  kelopak  bunga rosella  dengan  menggunakan  simplisia yang telah dikeringkan (Moeksin, 2009) Selain sebagai pewarna makanan,  antosianin  juga  mempunyai aktivitas antioksidan yang tinggi. Antioksidan mampu menghambat reaksi  oksidasi  yang  terjadi  selama proses  penyimpanan  bahan  pangan.
Sehingga antosianin juga dapat digunakan sebagai pengawet makanan.Pada umumnya di
masyarakat  kelopak  bunga  rosella digunakan dengan cara direbus dengan air.  Tetapi  penggunaan  pelarut  air untuk  mengekstraksi  zat  aktif  dalam kelopak  bunga  rosella  yaitu  antosianin mempunyai  beberapa  kekurangan  di antaranya  tidak  tahan  lama  karena mudah  ditumbuhi  jamur.  Walaupun penggunaannya  cukup  praktis  tetapi
dinilai kurang menguntungkan.
Sehingga pada penelitian ini digunakan pelarut etanol 96%. Etanol adalah jenis pelarut  polar  yang  diharapkan  dapat mengekstraksi antosianin dalam kelopak bunga rosella.
Bahan  makanan  yang  dibuat pada  penelitian  ini  adalah  agar-agar yang ditambah dengan pewarna merah dari  kelopak  bunga  rosella.  Pewarna kelopak  bunga  rosella  dibuat  dengan cara ekstraksi dengan metode maserasi  menggunakan  pelarut  etanol 96%.  Sebagai  pembanding  dibuat pewarna  dari  kelopak  bunga  rosella yang  dibuat  dengan  cara  direbus. Kemudian  akan  dibandingkan  aktivitas antioksidan masing-masing dengan metode DPPH menggunakan spektrofotometri Ultraviolet-visibel. Penelitian  awal  yang  dilakukan menunjukkan  bahwa  200  ppm  ekstrak methanol kelopak bunga rosella memiliki efek yang lebih kuat dibandingkan  dengan  BHA  dan  α- tokoferol  sebagai  antioksidan  yang dilihat  dengan  metode  thiobarbituric acid reactive substance (TBARS) dalam  sistem  asam  linoleat  ( Pau-Ling Tee, et  al 2002) . Bunga  rosella mengandung  flavonoid,  antosian,  dan polifenol (Kuriyan et al . 2010). Moeksin et al . (2009) melaporkan pelarut terbaik untuk  ekstraksi  antosianin  dari  kelopak bunga  rosela  adalah  dengan  pelarut etanol  (96%).  Berdasarkan  pustaka  di atas maka pembuatan bahan tambahan dari  kelopak  bunga  rosella  dilakukan dengan  menggunakan  pelarut  etanol 96% pada simplisia yang telah dikeringkan.Potensi  antioksidan  daun rosella  dinyatakan  dengan  harga  IC 50 yang ditentukan secara
spektrofotometri pada panjang gelombang maksimal dengan spektrofotometer UV-Vis setelah pendiaman selama 30 menit pada suhu ruang  (Caroline  2005).  Harga  IC 50 didefinisikan  sebagai  konsentrasi  yang mampu menghambat 50 persen aktivitas  radikal  bebas  DPPH  pada periode  waktu  30  menit  (Molyneux, 2004).
Penelitian  ini  bertujuan  untuk membuktikan  bahwa  kelopak  bunga rosella  dapat  dibuat  menjadi  bahan tambahan pangan dari dengan ekstraksi  dengan  pelarut  etanol  96% dan  mempunyai  aktivitas  antioksidan terhadap radikal DPPH yang
dinyatakan  dengan  nilai  IC 50. serta Aktivitas  antioksidan  ekstrak  kelopak bunga  rosella  tetap  stabil  setelah digunakan  sebagai  bahan  tambahan pangan alami.

## METODE PENELITIAN
Bahan dan Alat :
Kelopak  Bunga  Rosella,  Agar-agar; reagensia yang digunakan yaitu : etanol p.a,  NaOH,  HCl  pekat  (E.  Merck),
serbuk DPPH ( Sigma-Aldrich), pereaksi semprot. Alat-alat yang
digunakan  meliputi:  plat  Kromatografi Lapis  Tipis  GF  254  nm,  Chamber,
ayakan No.60, seperangkat alat maserasi, Beaker glass, vakum evaporator,  batang  pengaduk,  kertas saring,  labu  takar,  oven,  pipa  kapiler, vial,  sudip,  pengaduk  magnetik  3  cm, corong  gelas,  bejana  Erlenmeyer  250 ml,  penangas  air,  panci,  almari  es, mikropipet,  penggaris,  gunting,  kamera digital, eksikator, pipet tetes, pipet ukur 10,0  mL,  timbangan  analitik  (Meltler, AT-200), spektrofotometer UV- Visible .

## Tahapan Penelitian
Sampel yang digunakan dalam
penelitian  ini  adalah  kelopak  bunga rosella  yang  diambil  di  BP2TO2T daerah  Tawangmangu,  Karanganyar, Jawa Tengah.

## Determinasi tanaman rosella
Determinasi dilakukan di laboratorium  Morfologi  dan  sistematika Tumbuhan,  Universitas  Setia  Budi. Determinasi bertujuan untuk menetapkan  kebenaran  yang  berkaitan dengan ciri-ciri makroskopis berdasarkan studi pustaka. Pembuatan  ekstrak  kelopak  bunga rosella dan sediaan uji Serbuk  kering  daun  rosella diekstraksi dengan cara maserasi dengan pelarut etanol 96%.   Kemudian dilakukan  evaporasi  berdasarkan  titik didih pelarutpada aquadestillata dengan  temperatur  100 o C  dan  etanol dengan  temperatur  80 o C.  Evaporasi bertujuan untukmenguapkan dan mengambil pelarut yang masihbercampur  dengan  antosianin sehingga larutan menjadipekat.Sebagai pembanding dibuat juga rebusan
kelopak  bunga  rosella.  Kelopak  bunga roselladirebus dengan air sampai mendidih. Kemudian air rebusan disaring dan dipekatkan sampai kental. Ekstrak  etanol  dan  rebusan  kelopak bunga rosella diuji aktivitas antioksidannya  dengan  menggunakan Spektrofotometer UV-Vis dan pengamatan terhadap profil KLT dengan menggunakan pereaksi semprot  DPPH  0,2%  dalam  etanol. Ekstrak komponen aktif sebagai senyawa  penangkap  radikal  bebas tampak sebagai bercak berwarna kuning dengan latar belakang ungu.
Penggunaan ekstrak etanol dan rebusan kelopak bunga roselladilakukan  pembuatan  agar-agar dengan  penambahan  ekstrak  kelopak bunga  rosella  yang  dibuat  dengan pelarut 96% serta dengan penambahan rebusan serta digunakan rebusan dengan air sebagai pembanding.

## Penyiapan larutan
Larutan  pereaksi  adalah  larutan DPPH  0,4  mM  dalam  pelarut  etanol. Dibuat  dengan  menimbang  0,0158
gram serbuk DPPH kemudian dimasukkan  ke  dalam  labu  takar  100 ml,  ditambahkan  ke  dalamnya  etanol sampai tanda batas, sehingga didapatkan  konsentrasi  0,4  mM  yang dihitung  terhadap  BM  DPPH  sebesar 394,32 g/mol.
Ekstrak  etanol  dan  masing- masing  fraksi  daun  rosella  masing- masing  ditimbang  50  mg,  dimasukkan labu  takar  50  ml  dan  ditambahkan etanol  sampai  tanda  batas  sehingga didapat konsentrasi 1000 ppm, selanjutnya  disebut  sebagai  larutan induk.  Konsentrasi  larutan  uji  dibuat dengan  memipet  larutan  induk  untuk mendapat  5  seri  konsentrasi.  Sebelum dilakukan  pengujian  terlebih  dahulu ditetapkan operatingtime dari  masing- masing  larutan  uji  untuk  mengetahui reaksi  terhadap  DPPH  sudah  berjalan stabil pada waktu yang diharapkan.
Uji Aktivitas Tahapan awal adalah penentua n  panjang  gelombang  (λ) maksimum larutan DPPH 0,4 mM untuk uji  aktivitas  antioksidan  masing-masing fraksi    danekstrak  dari  daun  rosella, dilakukan  sebagai  berikut:  1,0  ml larutan  DPPH  0,4  mM  ditambah  4,0 ml etanol,  dikocok  homogen  dan  diamati
serapannya  pada  rentang  500-530  nm setelah  pendiaman  selama  30  menit.
Kemudian dilanjutkan dengan penentuan operating time . Tahap berikutnya adalah Uji Aktivitas antioksidan  dilakukan  terhadap  ekstrak etanol,  air  rebusan,  agar-agar  yang ditambah  dengan  ekstrak  etanol  dan agar-agar yang ditambah dengan rebusan kelopak bunga rosella. Sebagai standar/pembanding ditetapkan  juga  kativitas  antioksidan dari  kuersetin  yang  sudah  terbukti poten sebagai antioksidan.
Aktivitas  antioksidan  ditentukan dengan  metode  DPPH  yaitu  sebanyak 4,0  ml  ekstrak  atau  fraksi  dengan berbagai  konsentrasi  ditambah  dengan 1,0  ml  DPPH  0,5  mM.  Campuran divorteks  dan  dibiarkan  selama  30 menit.  Larutan  diukur  absorbansinya pada  panjang  gelombangnya  terhadap blanko  (terdiri  dari  4  ml  ekstrak  dan  1 ml  etanol).  Pengukuran  absorbansi terhadap  kontrol  terdiri  dari  1,0  ml DPPH dan 4,0 ml etanol).
Penetapan  aktivitas  antioksidan dilakukan dengan tiga kali pengulangan. Absorbansi yang diperoleh  selanjutnya  digunakan  pada pengukuran aktivitas penangkap radikal bebas  dari  berbagai  konsentrasi  uji.
Nilai IC 50 diperoleh dari suatu persamaan regresi linear yang menyatakan hubungan antara
konsentrasi  ekstrak  uji  dengan  persen penangkapan  radikal  bebas.  Dari  hasil yang diperoleh  dipilih satu ekstrak atau fraksi  yang  memiliki  nilai  IC 50 yang paling  kecil.Aktivitas  penangkap  radikal DPPH  dihitung  dengan  menggunakan rumus  persen  penangkapan  radikal bebas, selanjutnya data yang diperoleh
diolah  dengan  persamaan  regresi  linier untuk menentukan IC 50 .
Rumus persentase peredaman sebagai berikut  :  Persen  penangkapan  radikal bebas =
(Abs  kontrol –  Abs  sampel)  x  100  % Abs kontrol Kemudian ditentukan aktivitas antioksidan ekstrak etanol dan rebusan kelopak  bunga  rosella  sebelum  dan setelah  digunakan  sebagai  bahan tambahan pangan dan dianalisis datanya  untuk  mengetahui  adakah perbedaan yang bermakna pada
masing-masing perlakuan

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Kelopak  bunga  rosela  yang  telah dipanen kemudian dicuci bersih dengan air  mengalir  untuk  menghilangkan kotoran  dan  cemaran,  ditiriskan  dan disortir  yang  memenuhi  persyaratan.
Kemudian ditimbangberat
basah
kelopak bunga rosella tersebut. Selanjutnya  dikeringkan  dengan  oven pada  suhu  40º  C.  Setelah  kering ditimbang. Pembuatan
serbuk menggunakan  alat  penyerbuk  lalu diayak  dengan  ayakan  ukuran  60
Mesh.  Hasil  penyerbukan  yang  berupa serbuk  kering  disimpan  dalam  wadah kering dan tertutup rapat yang selanjutnya digunakan untuk penelitian. Tahapan  pengeringan  juga  umumnya dilakukan  di  masyarakat  terhadap kelopak  bunga  rosella  yang  akan dikonsumsi sebagai minuman teh (minuman seduh/rebus).
Pembuatan  ekstrak  dari  kelopak bunga rosella.
Hasil  ekstraksi  yang  didapatkan
merupakan ekstrak cair sehingga harus
dievaporasi.
Evaporasi dilakukan berdasarkan  titik  didih  pelarutpada aquadestillata dengan temperatur 100 o C  dan  etanoldengan  temperatur 80 o C. Evaporasi bertujuan untukmenguapkan dan mengambil pelarut  yang  masihbercampur  dengan antosianin sehingga larutan menjadipekat.Meskipun keberadaan
etanol  dalam  ekstrak  dapat  juga bertindak  sebagai  pelarut  tetapi  dalam uji  yang  dilakukan  dikuatirkan  akan mempengaruhi  aktivitas  antioksidan. Sebagai  pembanding  dibuat  rebusan kelopak bunga rosella dengan konsentrasi  100%  b/v.  Kelopak  bunga roselladirebus dengan air sampai mendidih dengan konsentrasi pembuatan adalah 100%. Pengujian aktivitas antioksidan kelopak bunga rosella dengan beberapa perlakuan Sebelum  ditetapkan  aktivitas peredaman antioksidan dengan instrumen spektrofotometer UV-Vis, terlebih dahulu masing-masing perlakuan  yaitu  ekstrak  etanol  kelopak bunga  rosella,  ekstrak  yang  digunakan dalam  agar-agar,  air  rebusan  kelopak bunga serta standar kuersetin diidentifikasi  terlebih  dahulu  aktivitas antioksidannya dengan metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT). Pengamatan terhadap profil KLT dengan menggunakan pereaksi semprot DPPH 0,2%.Ekstrak komponen aktif sebagai senyawa penangkap radikal bebas tampak
sebagai bercak berwarna kuning dengan latar belakang ungu.
ISSN: 1693-8615 EISSN : 2302-4291 Online : http://farmasiindonesia.setiabudi.ac.id/
Gambar 1. Profil KLT hasil uji pendahuluan aktivitas penangkap radikal bebas dengan menggunakan  pereaksi semprot DPPH 0,2% dengan fase gerak n-heksan: etil asetat (1:2,
v/v) terhadap (a) kuersetin, (b) ekstrak etanol, (c) agar-agar, (d) rebusan

## Uji penentuan aktivitas antioksidan
Penetapan  aktivitas  antioksidan yang  telah  dilakukan  terhadap  ekstrak etanol,  air  rebusan,  agar-agar  yang ditambah  dengan  ekstrak  etanol  dan agar-agar yang ditambah dengan rebusan kelopak bunga rosella
dilakukan  pada  panjang  gelombang maksimal  yaitu  516  nm  dan operating
time yaitu 30 menit. Percobaan dilakukan  dengan  5  seri  konsentrasi yang  sama  antara  4  perlakuan  dan
dilakukan  3  kali  pengulangan.  Nilai absorbansi  yang  diperoleh  selanjutnya digunakan  pada  pengukuran  aktivitas penangkap  radikal  bebas  dari  berbagai konsentrasi  uji.  Nilai  IC 50 diperoleh  dari suatu  persamaan  regresi  linear  yang menyatakan hubungan antara konsentrasi  ekstrak  uji  dengan  persen penangkapan  radikal  bebas.  Dari  hasil yang diperoleh  dipilih satu ekstrak atau fraksi  yang  memiliki  nilai  IC 50 yang paling kecil.

## Tabel 1. Data penentuan aktivitas antioksidan standar kuersetin secara DPPH
Konsentrasi (µg/ml) Abs 1 Abs 2 Abs 3 Absorbansi rata-rata Aktivitas antioksidan (%) Y=42,265+1,2 858X r=0,972 IC 50 = 6,02 µg/ml 5 0,401 0,412 0,384 0,399 45,64 10 0,320 0,299 0,311 0,310 57,77 15 0,257 0,260 0,290 0,269 63,35 20 0,233 0,241 0,226 0,230 68,66 25 0,201 0,201 0,207 0,203 72,34 Kontrol DPPH 0,736 0,733 0,733 0,734
a b c d
Tabel  2.  Data  penentuan  aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol  bunga  rosella secara DPPH
Konsentrasi (µg/ml) Abs 1 Abs 2 Abs 3 Absorbansi rata-rata Aktivitas antioksidan (%) Y=40,003+1,1878X
r=0,996
IC 50 =8,416 µg/ml 5 0,400 0,402 0,404 0,402 45,23 10 0,356 0,354 0,340 0,350 52,32 15 0,304 0,305 0,315 0,308 58,04 20 0,250 0,257 0,267 0,258 64,85 25 0,228 0,231 0,231 0,230 68,66 Kontrol DPPH 0,734 0,734 0,735 0,734
Tabel  3.  Data  penentuan  aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol  bunga  rosella dalam agar-agar secara DPPH
Konsentrasi (µg/ml) Abs 1 Abs 2 Abs 3 Absorbansi rata-rata Aktivitas antioksidan (%) Y = -0,009 +1,7758X r =0,936 IC 50 = 33,79 µg/ml 5 0,710 0,708 0,709 0,709 2,87 10 0,675 0,675 0,677 0,677 7,39 15 0,643 0,644 0,642 0,642 11,92 20 0,584 0,584 0,583 0,583 20 25 0,431 0,430 0,432 0,431 40,96 Kontrol DPPH 0,730 0,730 0,730 0,730
Tabel  4.  Data  penentuan  aktivitas  antioksidan  rebusan  bunga  rosella  secara DPPH
Konsentrasi (µg/ml) Abs 1 Abs 2 Abs 3 Absorbansi rata-rata Aktivitas antioksidan (%) Y=20,729+1,483X
r= 0,974
IC 50 = 19,74 µg/ml 5 0,540 0,561 0,564 0.555 24,89 10 0,450 0,452 0,460 0,454 38,57 15 0,410 0,400 0,396 0,402 45,60 20 0,360 0,382 0,386 0,376 49,12 25 0,312 0,336 0,312 0,320 56,69 Kontrol DPPH 0,739 0,738 0,739 0,739
Gambar 2. Perbandingan Nilai IC 50 Kelopak Bunga Rosella dalam beberapa perlakuan

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  dan pembahasan dapat disimpulkan bahwa  kelopak  bunga  rosella  dapat dibuat  menjadi  bahan  tambahan makanan alami yaitu berupa ekstrak etanol  yang  pada  penggunaannya sebagai  bahan  tambahan  tetap mempunyai  aktivitas  antioksidan yang  kuat  yang  ditunjukkan  dengan nilai IC 50 33,79 µg/mL.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  peneliti  sampaikan kepada  Dikti  yang  telah  membiayai penelitian ini pada skema Penelitian Dosen  Pemula  tahun  pendanaan 2016.

## Daftar Pustaka (References)
Caroline, 2005, Uji Aktivitas Antioksidan Antiradikal  Bebas  dan  Penentuan IC 50 dari Daun Cincau Hijau ( Cycla
barbata Miers ), Jurnal Obat Bahan Alam, Vol 4, 11, 12, 14. Deena D.M., Lakshmil M.S.,Kumar.S.A., Kumar.A.G.,Basha.J.D.,and Naganjaneyulu.R., 2011, Antioxidant  Activity  of Sophora interrupta Bedd, International Journal  of  Phytopharmacology .,
43-47.
Kahkonen, M. P., Hopia, A. I., Vuoreia,
H.  J.,  Rauha,  J.P.,  Pihlaja,  K., Kujala,  T.  S.,  and  Heinonen  M., 2001, Antioxidant Activity of Extract Containing Phenolic Compounds, J. Agric.FoodChem .,
47, 3954-3962.
Karori,  S.M.,  Wachira.  F.N.,  Wanyoko,
J.K.,  and  Ngure,  R.M.,  2007, Antioxidant Capacity of Orthosiphon stamineus Benth from Different Geographical Origin, Journal  of  Sustainability
kuersetin Ekstrak etanol Ekstrak etanol dalam agar-agar rebusan
Science  and  Management, 2006. Vol. 1 (2): 14-20.
Kuriyan,  R..  Kumar,  R.D.,  Rajendran,
R.,  and  Kurpad,  V.A . 2010, BMC Complementary  and  Alternative Medicine , 10:27 http://www.biomedcentral.com/14 72-6882/10/27
Moeksin  R.,  Ronald,  S.HP.,  2009. Pengaruh kondisi, Perlakuan, dan Berat  Sampel  terhadap  Ekstraksi antosianin  dari  Kelopak  Bunga Rosella  dengan  pelarut  Aquadest dan  Etanol, Jurnal  Teknik  Kimia ,
No.4.Vol 16.
Molyneux,  P.,  2004, The  Use  of  Stable Free Radical Diphenylpicryhydrazyl  (DPPH)  for Estimating  Antioxidant  Activity, Songklanakarin Journal of ScienceTechnology., 2004, 26 (2) : 211-219.
Pau-Ling Tee., Yusof. S., Mohamed, S.,
2002,  Antioxidative  Properties  of
Roselle ( Hibiscus sabdariffa L.) in
Linoleic  Acid  Model  System, Journal  of  Nutrition  and  Food
Science , 32 (1): 17-20. Pourmorad, F., Hosseinimehr, S.J., and Shahabimajd, N., 2006, Antioxidant  Activity,  Phenol  and Flavonoid Content some Selected Iranian  MedicinalPlants, African Journal  of  Biotechnology, Vol.  5
(11), pp. 1142-1145.
Pokorny,  J.,  Yanishelvia,  N.,  and Gordon,  M.,  2001, Antioxidant  in Food,  Praticial  Aplications ,  CRC Press,  New  York,  1-73,  87-119,
147-155.
Yalla, R. K., Kumar S., Lakshmi M., and
Angothu  S.,    2010,  Antioxidant Properties  of  Methanolic  Extract Of Oxalis Corniculata , International Journal of Phytopharmacology ., 43-46.