## ZONA
ISSN : 2775-4065 (Online)
https://doi.org/10.52364/zona.v8i1.111 RESEARCH ARTICLE
OPEN ACCESS

## Dampak Paparan Logam Berat Besi (Fe) Terhadap Hemoglobin (Hb) Pada Darah Tikus Wistar
Dewi Yudiana Shinta 1* , Muhammad Diki Juliandi 2 , Def Primal 3
1,2,3 Universitas Perintis Indonesia Jl Adinegoro Km 17 Simpang Kalumpang Lubuk Buaya Padang *Correspondent email: dyshinta76@gmail.com
Diterima: 9 Februari 2024 | Disetujui: 28 April 2024 | Diterbitkan: 30 April 2024
Abstract. Iron  (Fe)  heavy  metal,  in  certain  amounts  is  an  essential  heavy  metal,  much  needed  by  living  organisms; however, in excessive amounts, iron metal can be toxic. Iron (Fe) metal has adverse effects on health, as it is harmful to organs and causes physiological problems especially Hb levels in the blood. This study aims to see the impact of exposure to heavy metal iron (Fe) on living things represented by Wistar rats. The benefit of this study is to provide an overview of the exposure of living things, especially humans, will have an impact on hemoglobin levels that make humans can be affected by anemia. This research design with a post test group design only with a total sample of 10 rats divided into 3 groups,  namely  negative  control,  treatment  1  with  a  dose  of  0.54  mg  /  BW  and  treatment  2  with  a  dose  of  1.08 mg/BW,  giving  (Fe)  is  given  from  the  first  day  to  the  14th  day  and  then  taking  rat  blood  through  the  orbital  eye. Examination  of  heavy  metal  Fe  with  atomic  absorption  spectrophotometry  and  for  Hb  levels  with  Hemosmart  Gold Hemoglobin Test Strip. The results of this study heavy metal (Fe) levels in the blood of rats are the highest levels found in the sample 1.08mg / BW T3 (H14) with Fe levels of 44.14 µg / L and the lowest Fe levels found in the sample with Fe levels of 14.78 µg / L and control of rats, Fe levels are 9.85 µg / L. Hb levels in the blood of rats were 0.54mg/BB dose was (7.4 g/dl & 6.8g/dl), 1.08mg/BB dose obtained hemoglobin results (7.2g/dl & 7.6g/dl). The normal Hb level of control rats in rat blood is 6.1 g/dL. The conclusion of this study is that the  level of Fe that enters the body of rats greatly affects the hemoglobin (Hb) of wistar rats where if the level of heavy metal Fe increases in the blood there will be a decrease in hemoglobin (Hb) levels in the blood which will cause anemia.
Keywords: heavy metal Iron (Fe), Hemoglobin (Hb) levels, Wistar rats, anemia

## PENDAHULUAN
Buangan industri  yang mengandung persenyawaan logam berat besi tidak hanya  berbahaya  bagi tumbuhan. tetapi juga terhadap manusia dan hewan. Ini terkait dengan karakteristik logam berat yang sulit untuk  dipecahkan,  sehingga  mudah  terkumpul  di  lingkungan  perairan  dan  keberadaan  alaminya  tidak mudah  dihilangkan,  dapat  terkumpul  dalam  biota  yang  hidup  di  perairan  seperti  kerang,  ikan,  dan makhluk hidup lainnya, memiliki waktu paruh yang lama dalam tubuh  makhluk laut dan memiliki nilai faktor  konsentrasi  yang  signifikan  di  dalam  tubuh  benda  hidup  seperti  manusia.  Logam  besi keberadaannya  dijumlah  tertentu  sangat  penting  untuk  organisme  yang  hidup,  tetapi  dalam  jumlah  kecil dan berlebihan dapat menyebabkan racun.
Perkembangan  industri  yang  semakin  sangat  pesat  menimbulkan  adanya  dampak  negatif  bagi lingkungan.  Hal  ini  disebabkan  karena  pembuangan  limbah  yang  dihasilkan  dari  aktifitas  industri  dapat mencemari  lingkungan  terutama  pada  lingkungan  perairan  karena  dapat  menurunkan  kualitas  perairan. Penurunan kualitas air diakibatkan oleh adanya masukan zat pencemar, baik berupa komponen-komponen organik maupun anorganik. Komponen- komponen anorganik tersebut antara lain yaitu logam berat yang berbahaya (Siaka, 2008).
Kualitas lingkungan yang sehat tergantung pada pencapean standar kualitas kesehatan lingkungan dan  persyaratan  kesehatan.  Komponen  lingkungan  tersebut  diantaranya  adalah  air  bersih  (Wispriyono, 2019).  Data World  Health  Organization (WHO)  pada  tahun  2015  terdapat  663  juta  penduduk  yang  masih kesulitan  memperoleh  air  bersih.  United  Nations  Educational  Scientific  and  Cultural  Organization (UNESCO)  memprediksikan  pada  tahun  2025  akan  didapatkan  hampir  dua  pertiga  penduduk  dunia berada di daerah dengan kekurangan air. Badan Perencanaan dan Pembangunan Nasional (BAPPENAS) mempekirakan  akan  terjadi  krisis  air  di  Indonesia,  yang  diakibatkan  oleh  peningkatan  jumlah  penduduk dan tidak diiringi dengan ketersediaan air bersih (Utami & Handayani, 2017).
Air minum yang aman bagi kesehatan adalah air yang memenuhi persyaratan fisik, mikrobiologi, kimia,  dan  radiologi  yang  dijelaskan  dalam  parameter    wajib  dan  parameter  tambahan.  Batas  maksimal cemaran logam besi yang diizinkan dalam kualitas air minum sesuai dengan Peraturan Mentri Kesehatan RI No.495/MENKES/PER/2010 yaitu dengan kadar maksimal 0,3 mg/L.
Analisa  kandungan  logam  ini  sangat  penting  untuk  dilakukan  mengingat  dampak  yang  dapat ditimbulkannya sangat berbahaya bagi kesehatan manusia. Dampak negatif yang dapat ditimbulkan logam besi  (Fe)  menyebabkan  gangguan  kesehatan  yaitu  bersifat  toksi  terhadap  organ  melalui  gangguan  secara fisiologis, misalnya kerusakan dinding sel usus. Kadar logam mangan yang tinggi juga dapat menimbulkan

## ZONA
gangguan kesehatan seperti serangan jantung, gangguan pembuluh darah bahkan kanker hati dan anemia. (Wardhana, 2004).
Anemia  secara  langsung  dipengaruhi  oleh  konsumsi  makanan  rendah  zat  besi  tiap  harinya, menimbulkan  kosongnya  cadangan  zat  gizi  besi  didalam  tubuh  sehingga  mengganggu  pembentukan hemoglobin. Zat gizi besi merupakan unsur utama dalam pembentukan hemoglobin. Anemia difisiensi besi adalah masalah gizi yang paling umum mempengaruhi sekitar 2 miliar orang diseluruh dunia, kebanyakan dari mereka 89% berada pada Negara berkembang (Hermiaty et al., 2021). Masalah kekurangan asupan zat gizi  besi  di  Indonesia  merupakan  masalah  dalam  kategori  yang  cukup  tinggi  dengan  persentase  sebesar 50% (Meryani et al., 2019).
Hal  ini  dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor,  yaitu  kurangnya  asupan  sumber  makanan  hewani sebagai salah satu sumber zat gizi besi yang mudah diserap ( heme iron ), sedangkan bahan makanan nabati ( non-heme iron ) merupakan sumber zat besi yang tinggi tetapi sulit diserap sehingga dibutuhkan porsi yang cukup  besar  untuk  memenuhi  kebutuhan  zat  besi  dalam  seharinya.  Pola  makan  masyarakat  Indonesia masih  didominasi  oleh  sayur-sayuran  yang  merupakan  sumber  zat  besi  yang  sulit  diserap,  ditambah dengan kebiasan mengonsumsi makanan yang dapat mengganggu penyerapan zat besi, seperti kopi dan teh secara bersamaan pada waktu makan menyebabkan serapan zat besi semakin rendah.
Kelebihan  zat  besi  dapat  mengarah  pada  peningkatan  radikal  bebas,  jika  radikal  bebas  tidak diimbangi  dengan  antioksidan  maka  dapat  menyebabkan  stress  oksidatif  yang  dapat  mengakibatkan kerusakan sel, jaringan dan organ. Kelebihan zat besi dapat masuk kedalam tubuh melalui tiga rute yaitu rute enteral, rute parateral, dan rute plasenta selama kehidupan janin (Alberto Piperno, 1998)
Besi mampu berikatan dengan reaktif oksigen spesies menjadi radikal hidroksil yang terbentuk dari oksigen melalui reaksi fenton. Radikal hidroksil dapat  merusak  membrane sel yang mengandung banyak asam  lemak  tidak  jenuh  menjadi  peroksida  lipid,  sehingga  terjadi  peroksidasi  lipid  berantai.  Peroksidasi lipid  berantai  meningkatkan  pembentukan  radikal  bebas.  Peningkatan  jumlah  radikal  bebas  merupakan terjadinya  stress  oksidasi  (Niki  E,  2009).  Radikal  hidroksil  menyebabkan  asam  lemak  tak  januh  pada membran  fosfilipid  mengalami  konversi  menjadi  peroksida  lipid,  pembentukan  peroksida  lipid  membuat radikal bebas lebih toksik merusak sel endotel (Aziz Aryani, 2016).
Penggunaan hewan model (hewan coba) sangat perlu dalam penelitian in vivo dibidang biomedik. Hewan model berkontribusi untuk memahami tentang fungsi gen, etiologi dan mekanisme suatu penyakit, uji efektifitas dan keamanan suatu obat atau bahan kimia. Hewan yang banyak digunakan untuk penelitian antara  lain  tikus,  mencit  dan  hewan  pengerat  lainnya  (Johnson  2012).  Tikus  sebagai  hewan  model  telah banyak  digunakan  pada  penelitian  dikarenakan  siklus  hidupnya  pendek,  biaya  perawatan  lebih  murah, relatif  mudah  perawatannya  dan  tersedia  database  dalam  menginterpretasikan  data  yang  relevan  untuk manusia  (Said  dan  Abiola  2014).  Dari  75-100  juta  pertahun  hewan  vetebrata  yang  digunakan  dalam penelitian,  pendidikan  dan  pengujian,  hampir  sekitar  33%  diantaranya  adalah  tikus  (Baumans  2016). Penelitian  ini  bertujuan  untuk  melihat  dampak  paparan  logam  berat  besi  (Fe)  terhadap  makhluk  hidup yang  diwakilkan  oleh  tikus  wistar.  Manfaat  penelitian  ini  untuk  memberikan  gambaran  terpaparnya makhluk hidup terutama manusia akan memberikan dampak terhadap kadar hemoglobin yang membuat manusia bisa terdampak anemia .

## METODE PENELITIAN
Jenis  penelitian  merupakan  eksperimental  laboratorium  dengan  desain  penelitian post  test  group desain  only yaitu  rancangan  yang  digunakan  untuk  melihat  pengaruh  pada  kelompok  eskperimen  dengan kelompok  kontrol,  penelitian  ini  bersifat  kualitatif.  Penelitin  kualitatif  dilkukan  untuk  mendeskripsikan gambaran  kadar  hemoglobin  pada  tikus  pasca  di  papari  logam  berat  besi  (Fe).  Pemeliharaan,  perlakuan dan pembedahan hewan uji coba dilakukan di Laboratorium Tikus Falkutas Farmasi Universitas Perintis Indonesia, untuk pemeriksaan Hemoglobin darah tikus menggunakan alat Hemosmart Gold Hemoglobin Test Strip yang dilakukan di laboratorium medis Analis Kesehatan Universitas Perintis Indonesia. Populasi yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah  tikus  putih  yang  dipapari  logam  berat  besi  (Fe)  sebanyak  10 ekor.  Sampel  yang  diambil  adalah  10  ekor  tikus  dibagi  menjadi  3  kelompok  yaitu:  kelompok  pertama  2 ekor tikus sebagai tanda atau kontrol, kelompok kedua adalah 2 ekor tikus dengan dosis 0,54 dan 2 ekor tikus dengan dosis 1,08 minggu pertama, kelompok ketiga adalah 2 ekor tikus dengan dosis 0,54 dan 2 ekor tikus dengan dosis 1,08 minggu kedua.

## Persiapan Penelitian Persiapan Alat
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  Hemosmart  Gold  hemoglobin  Test  Strip,  stik podc, tissue, mikropipet, neraca analitik, labu ukur, pipet Pasteur/pipet tetes, jarum sonde tikus, kandang tikus ukuran 30 x 20, masker, sarung tangan (latex), rak tabung, tabung ungu EDTA.

## ZONA
ISSN : 2775-4065 (Online)
https://doi.org/10.52364/zona.v8i1.111
Persiapan Bahan Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah tikus, minum dan makanan tikus, alkhol 70%, darah tikus yang terpapar logam Fe, Aquadest, larutan logam Fe, eter 10%.

## Prosedur Kerja Pembuatan Larutan Logam Fe
Disiapkan  spuit  steril  yang  bersih  dan  tidak  ada  kontaminasi  pada  spuit  tersebut.  Ditimbang  dan dilarutkan 0,54 mg (dosis I) dan 1,08 mg (dosis II) logam Fe dengan 100 ml air. Dimasukan larutan logam Fe ke dalam spuit yang sudah disiapkan.

## Pemeriksaan Kadar Fe Dalam Darah
Pembuatan Larutan Standar Fe, dari larutan induk Fe 1000 ppm (buatan pabrik Merck) diencerkan menjadi  100  dalam  labu  100  ml,  100  ppm  diencerkan  menjadi  10  ppm  dalam  labu  10  ml,  10  ppm diencerkan  menjadi  2  ppm,  4  ppm,  8  ppm,  dalam  labu  10  ml.  Kemudian  diukur  menggunakan Spektrofotometri Serapan Atom. Preparasi Sampel, Pipet 2 ml sampel whole blood dan masukan kedalam labu kjhedahl100 ml. Ditambahkan 1 ml HCL04 dan tambahkan 5 ml HNO³ pekat. Kemudian, destruksi hingga  larutan  jernih.  Dinginkan,  saring  dan  masukan  dalam  labu  ukur  50  ml  dan  ditambah  aquadest sampai tanda batas, kocok sampai homogen. Saring dengan kertas Whatman No 41. Beri label dan larutan siap diuji kandungan logam Fe menggunakan SSA dengan panjang gelombang 248,3 nm.
Pengukuran Pemeriksaan Sampel Dengan Alat SSA, Diatur panjang gelombang menurut instruksi manual SSA,  logam  Fe  dengan  gelombang  panjang  248,3  nm.  Panjang  gelombang  yang  diperoleh  pada  kurva absorbs  maksimum  digunakan  untuk  pengukuran  konsentrasi  logam  Fe  dalam  sampel.  Set  zero  alat menggunakan  larutan  blanko,  lalu  ukur  absorban  larutan  standar  Fe  dari  konsentrasi  rendah  sampai konsentrasi  tinggi,  sampel  yang  udah  didestruksi  hingga  didapatkan  larutan  jernih  diukur  absorbannya, sehingga didapatkan kadar logam Fe pada sampel.

## Persiapan Hewan Coba
Sampel  yang  diperlukan  ini  adalah  tikus  putih  yang  berusia  2  bulan  dan  memiliki  berat  badan sekitar 200 gram. Sebelum dilakukan pengambilan darah tikus diberikan proses adaptasi sesuai kelompok perlakuan dan hanya memberikan makanan dan minum setiap harinya.

## Pembagian Kelompok Hewan Coba
Hewan  coba  dibagi  3  kelompok,  1  kelompok  kontrol  dan  2  kelompok  perlakuan  yang  masing- masing  terdiri  dari  10  ekor  tikus  jantan  dengan  rincian  sebagai  berikut:  Kelompok  control,  Tanpa  diberi larutan  logam  besi  (Fe).  Kelompok  perlakuan,  Perlakuan  1:  diberi  larutan  logam  besi  (Fe)  dengan  dosis 0,54mg/hari  selama  7  hari  dan  14  hari.  Perlakuan  2:  diberikan  larutan  logam  besi  (Fe)  dengan  dosis 1,08mg/hari selama 7 hari dan 14 hari.

## Penentuan Dosis
Dosis  suplemen  besi  (Fe)  yang  digunakan  terdiri  dari  3  kelompok  perlakuan  dosis  yaitu  :  30mg, 60mg. Masing-masing dosis dikonversikan menjadi dosis untuk tikus dengan satuan faktor konversi 0,018 untuk  tikus  dewasa  dengan  berat  200gr  (Laurence  dan  Bacharach,  1994).  Maka  didapatkan  dosis  tikus sebagai  berikut:Dosis  suplementasi  besi  (Fe)  sebanyak  60  mg  dikonversikan  menjadi  dosis  untuk  tikus menjadi  =  0,018  Fe  (200g)  =  0,018  x  30mg  =  0,54mg,  Dosis  suplementasi  besi  (Fe)  sebanyak  120mg dikonversikan menjadi dosis untuk tikus 200g menjadi = 0,018 Fe (200g) = 0,018 x 60mg = 1,08mg.
Cara Kerja Alat  dan  bahan  untuk  pengambilan  sampel  darah  dan  tabung  vacutainer  ungu  EDTA.  Sebelum melakukan  pengambilan  darah  tikus  dianestasi  terlebih  dahulu  dengan  menggunakan  larutan  eter  10% setelah  tikus  terbius.  Dilakukan  pengambilan  darah  dari  10  tikus,  2  kontrol  dan  6  tikus  yang  terpapar logam  berat  Fe  diambil  dibagian  sinus  orbital  mata.  Siapkan  mikrohematokrit  dan  tabung  EDTA. Goreskan mikrohematokrit tersebut kebagian sinus orbitalis atau medical canthus mata dibawah bola mata kearah  foramen  opticus,  sementara  ujung  yang  lain  diarahkan  ke  tempat  tabung  EDTA,  putar mikrohematokrit  hingga  melukai  plexus  tersebut  darah  yang  keluar  segera  ditampung  kedalam  tabung EDTA sebanyak 2 cc dan siap digunakan untuk keperluan penelitian.

## Pemeriksaan Kadar Hemoglobin
Alat  Hemosmart  Gold  Test  Strip  dan  sampel  darah  tikus  yang  telah  didapat  dari  pengambilan sampel. Kemudian hidupkan alat hemosmart gold dan masukan test strip ke dalam alat, tunggu alat ready dan siap digunakan. Homogenkan sampel dengan suhu ruangan lalu buka tutup tabung EDTA, masukan test strip ke dalam tabung tunggu alat menyedot darah sendiri dan tunggu hasil 5 detik.

## ZONA
ISSN : 2775-4065 (Online)

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil Kadar Hemoglobin Pada Tikus
Pemeriksaan  kadar  hemoglobin  pada  tikus  yang  terpapar  logam  berat  besi  (Fe)  yaitu  melalui proses adaptasi dengan pemberian makan dan minum yang dicampur dengan larutan Fe dengan dosis 0,54 mg/BB  dan  1,08  mg/BB,  perlakuan  ini  dilakukan  selama  satu  minggu  sampai  dua  minggu.  Dari pemeriksaan menggunakan Hemosmart Gold Hemoglobin Test Strip didapatkan hasil sebagai berikut:
Tabel 1. Hasil Pemeriksaan Hemoglobin
NO Lama paparan Dosis Sampel mg/BB Hewan Hemoglobin (g/dL) 1
2 minggu 1
minggu 2 0,54 0,54 1,08
1,08 0,54 0,54 1,08 1,08 Tikus 1 Tikus 2 Tikus 3 Tikus 4 Tikus 1a Tikus 2a Tikus 3a Tikus 4a 7,4 6,8 7,2 7,6 5,0 6,1 4,1 4,8 kontrol 6,1

## Ket : Jenis sampel darah
Tabel  1  dapat  dilihat  perbedaan  dari  sampel  kontrol  dan  sampel  perlakuan  dengan  dosis  0,54 mg/BB  dan  1,08  mg/BB  bahwa  didapatkan  kadar  hemoglobin  yang  lebih  rendah  dari  pada  kontrol. Dengan  nilai  kontrol  6,1g/dL,  kadar  hemoglobin  perlakuan  minggu  pertama  didapatkan  hasil  dengan dosis  0,54mg/BB  adalah  (7,4  g/dl  &  6,8g/dl),  sedangkan  pada  perlakuan  minggu  pertama  dengan  dosis 1,08mg/BB di dapatkan hasil hemoglobin (7,2g/dl & 7,6g/dl).
Namun  perubahan  kadar  hemoglobin  terlihat  pada  minggu  kedua  yang  memiliki  kadar hemoglobin  berada  jauh  di  bawah  nilai  kontrol.  Dosis  0,54mg/BB  pada  perlakuan  minggu  kedua didapatkan kadar hemoglobin (5,0g/dl & 6,1g/dl), pada dosis 1,08mg/BB didapatkan kadar hemoglobin (4,1g/dl & 4,8g/dl).
Tabel 2. Hasil kadar Fe dalam darah Kode Sampel Konsentrasi (µg/dL) Perlakuan Tikus 1 14,78 P1 Kelompok 7 hari Tikus 2 26,37 P1 Kelompok 7 hari Tikus 3 27,96 P2 Kelompok 7 hari Tikus 4 35,26 P2 Kelompok 7 hari Tikus 1a 33,38 P1 Kelompok 14 hari Tikus 2a 36,74 P1 Kelompok 14 hari Tikus 3a 44,14 P2 Kelompok 14 hari Tikus 4a 44,01 P2 Kelompok 14 hari Kontrol 9,85 kontrol
Ket : P1= kelompok tikus 1 P2 = kelompok tikus 2
Hasil  analisis  menunjukan  bahwa  konsentrasi  logam  Fe  tertinggi  pada  sampel  P1  dan  P2  pada kelompok  7  hari  adalah  0,54mg/BB,  T2  (7H)  yaitu  26,37µg/dl,  sedangkan  1,08mg/BB,  T2  (7H)  yaitu 35,26µg/dl. Sedangkan hasil sampel P1 dan P2 pada kelompok 14 hari adalah 0,54mg/BB, T4 (14H) yaitu 36,74µg/dl dan 1,08mg/BB T3 (14H) 44,14µg/dl. Dan nilai terendah di dapatkan pada sampel kontrol 2; 9,85µg/dl. Rata-rata kadar logam Fe darah tikus seluruhnya yaitu 29,43 µdg/L. Hasil tersebut sangat tinggi dalam  batas  normal  kadar  Fe  dalam  darah  tikus  berdasarkan  menurut  (Kapil  Thakur  et  al.,  2019)  yaitu antara 114,8 µg/dL hingga 77 µg/dL atau 1.148 mg/dL hingga 0,77 mg/dL.
Zat  besi  merupakan  mikroelemen  yang  dibutuhkan  untuk  membentuk  sel  darah  merah  yang berguna  mengangkut  okesigen  dan  karbon  dioksida  dalam  tubuh.  Zat  ini  terutama  diperlukan  dalam hematopoesis  (pembentukan  darah)  yaitu  sintesis  hemoglobin  (Hb)  (Soebroto,  2009).  Kelebihan  zat  besi dalam  tubuh  dan  tidak  diimbangi  dengan  antioksidan  dapat  meningkatkan  kadar  reaktif  oksigen  sistem (ROS)  yang  dapat  berikatan  dengan  logam  transisi  yang  dapat  mengubah  valensi  seperti  besi  menjadi radikal hidroksil melalui reaksi venton. Radikal hidroksil merupakan suatu radikal bebas yang mempunyai reaktifitas tinggi memiliki potensi untuk merusak sel, organ, dan jaringan dalam tubuh. Radikal hidroksil

## ZONA
ISSN : 2775-4065 (Online)
dapat merusak tiga jenis senyawa yang penting untuk mempertahankan intregritas sel seperti asam lemak tak jenuh, DNA dan protein (Halliwel & Gutteridge, 2001).
Logam  Fe  merupakan  logam  esensial  yang  keberadaannya  dalam  jumlah  tertentu  sangat dibutuhkan  oleh  organisme  hidup,  namun  dalam  jumlah  berlebih  dapat  menimbulkan  efek  racun  . Tingginya  kandungan  logam  Fe  akan  berdampak  terhadap  kesehatan  manusia  diantaranya  bisa menyebabkan  keracunan  (muntah),  kerusakan  usus,  penuaan  dini  hingga  kematian  mendadak,  radang sendi,  cacat  lahir,  gusi  berdarah,  kanker,  sirosis  ginjal,  sembelit,  diabetes,  diare,  pusing,  mudah  lelah, hepatitis, hipertensi, insomnia (Supriyantini & Endrawati, 2015).
Dosis  zat  besi  yang  paling    tepat  untuk  mencegah  anemia  ibu  masih  belum  jelas,  namun  dalam penelitian  yang  dilakukan  oleh  Esther  disebutkan  bahwa  kelebihan  zat  besi  dapat  mengarah  ke  radikal bebas,  jika  radikal  bebas  tidak  diimbangi  dengan  antioksidan  maka  dapat  menyebabkan  stress  oksidatif yang dapat mengakibatkan kerusakan sel, jaringan dan organ (Esther Casanueva & Fernando, 2003).
Hasil  penelitian  yang  didapatkan  kelainan  kadar  hemoglobin  yaitu  memiliki  penurunan  kadar hemoglobin pada tikus perlakuan. Dengan nilai kontrol 6,7g/dL dan 6,1g/dL, ada beberapa sampel pada darah tikus putih yang mengonsumsi logam berat besi Fe mengalami peningkatan kadar hemoglobin dari pada  kontrol  yaitu  dengan  kode  sampel  0,54T1(H7),  0,54T2(H7),  1,08T1(H7)  dan  1,08T2(H7),  kadar hemoglobin  yang  didapat  adalah  7.4,  6.8,  7.2,  dan  7.6  pada  minggu  pertama  dalam  perlakuan  tikus. Namun  hasil  kadar  hemoglobin  berubah  pada  perlakuan  minggu  ke  dua,  didapatkan  nilai  kadar hemoglobin  berada  dibawah  nilai  kontrol  pada  tikus  putih  yang  mengonsumsi  larutan  Fe.  Pengukuran kadar hemoglobin dilakukan setelah didapatkan darah tikus putih yng mengonsumsi larutan Fe, sampel di masukan kedalam tabung EDTA ungu dan langsung dilakukan pengukuran kadar hemoglobin.
Penelitian ini yang sama dilakukan oleh Aqqilah,Z.A, (2022) dengan judul pengaruh Pemberian Suplementasi Besi Fe Dosis Tinggi Terhadap Keadaan Plasenta Pada Tikus Putih ( Rattus norvegicus ) Strain Wistar Bunting dalam penelitian tersebut dia juga mengatakan Suplementasi besi (Fe) dosis tinggi memiliki pengaruh terhadap keadaan plasenta tikus putih rattus norvegicus.
Kelebihan  zat  besi  dapat  menyebabkan  radikal  bebas,  yang  dapat  memiliki  dampak  negatif  seperti kerusakan  oksidatif  terhadap  protein,  DNA,  lemak  membran,  dan  kerusakan  jaringan.  Radikal  hidroksil mengubah  asam  lemak  tak  jenuh  pada  membran  fosfilipid  menjadi  peroksida  lipid,  dan  pembentukan peroksida  lipid  menyebabkan  radikal  bebas  menjadi  lebih  toksik  dan  merusak  sel  endotel  (Aziz  Aryani, 2016). Kalsium intraseluler dan ekstraseluler dapat tergabung dengan fosfat saat membrane sel rusak atau tidak  berfungsi,  menghasilkan  kristal  hidrosiapatit,  yang  menyebabkan  plak  putih  atau  kalsifikasi  Ini menghasilkan peningkatan kalsifikasi plasenta pada kelompok perlakuan dibandingkan dengan kelompok kontrol, mendukung temuan penelitian sebelumnya yang menunjukkan bahwa kalsifikasi plasenta rata-rata lebih  rendah  pada  kelompok  kontrol.  Toksisitas  logam  Fe  terhadap  darah  dapat  memiliki  efek  yang merugikan  melalui  beberapa  mekanisme,  yang  melibatkan  kerusakan  sel  darah  merah,  gangguan metabolisme  besi  dan  efek  oksidatif.  Radikal  bebas  yang  di  hasilkan  karena  kelebihan  zat  besi  melalui reaksi  fenton  dapat  merusak  membrane  sel  darah  merah.  Proses  ini  menyebabkan  peroksidasi  lipid  dan merusak protein serta DNA dalam eritrosit yang akhirnya mengakibatkan hemolisis atau penghancuran sel darah merah. Hemolisis ini dapat menyebabkan anemia hemolitik (Youssef & Spitalnik, 2019). Selain itu, besi berlebih juga dapat memicu produksi radikal bebas bebas seperti superoksida dan hydrogen peroksida, yang dapat mengakibatkan kerusakan oksidatif pada sel darah merah. Sistem antioksidan dalam eritrosit, meskipun  cukup  kuat,  tidak  selalu  bisa  menetralkan  semua  radikal  bebas  ini,  terutama  saat  hemoglobin teroksidasi  sebagian  membrane  eritrosit.  Akibatnya,  sel  darah  merah  jadi  lebih  kaku  dan  mudah  rusak, mempercepat penuaan dan penghapusan mereka dari sirkulasi oleh makrofag (Vallelian et al., 2022).
Analisa kandungan Fe pada sampel darah tikus dilakukan dengan menggunakan spektrofotometer serapan atom, panjang gelombang Fe yang digunakan sebesar  248,3 nm. Spektroftometer Serapan Atom (SSA) ditujukan untuk analisa kuantitatif terhadap unsur-unsur logam. Alat ini memiliki sensitivitas yang sangat  tinggi,  sehingga  sering  dijadikan  sebagai  pilihan  utama  dalam  menganalisis  unsure  logam  yang konsentrasinya  sangat  kecil  (ppm  sampai  ppb).  Prinsip  dasar  pengukuran  dengan  Spektrofotometer Serapan Atom adalah penyerapan energi oleh atom-atom dalam keadaan dasar menjadi atom-atom dalam keadaan tereksitasi (Harahap & Harahap, 2018).
Berdasarkan  analisa  yang  dilakukan  secara  Spektrofotometer  Serapan  Atom  diperoleh  hasil  dari rata-rata kadar Fe pada sampel adalah 29,43 µg/L, nilai ini termasuk sangat tinggi dari batas normal kadar Fe dalam darah tikus yaitu antara 114.8 µg/dL hingga 77 µg/dL atau 1.148 µg/L hingga 0.77 µg/L. Kadar tertinggi  pada  sampel  didapati  pada  sampel  1,08mg/BB  T3(H14)  dengan  kadar  Fe  sebanyak  44,14  µg/L dan kadar Fe terendah didapati pada sampel control 2 dengan kadar Fe sebanyak 9,85 µg/L. Kadar normal Fe dalam darah tikus adalah 11,12±1,75 g/dL(Fitria.L,2014). Kadar Fe pada seluruh sampel penelitian ini tidak  ada  yang  memenuhi  standar  batas  normal  kadar  Fe  dalam  darah  tikus  karena  tujuan  peletian  ini untuk melihat pengaruh dari paparan logam berat besi Fe, sehingga kemugkinan tikus mengalami toksisitas Fe tingkat kronis.
Kadar  zat  besi  (Fe)  pada  tikus  percobaan  dipengaruhi  oleh  berbagai  faktor  yang  mirip  dengan faktor yang mempengaruhi kadar Fe pada manusia. Beberapa faktor yang mempengaruhi kadar Fe seperti

## ZONA
ISSN : 2775-4065 (Online)
Volume 8, No 1, April 2024, p. 57-63 http://zona.pelantarpress.co.id https://doi.org/10.52364/zona.v8i1.111
asupan makanan atau jenis makanan yang dimakan tikus dan kandungan zat besi dalam makanan tersebut, genetik  dan  strain  tikus  yang  memiliki  kemampuan  penyerapan  dan  metabolisme  zat  besi  yang  berbeda, kondisi kesehatan tikus, faktor lingkungan seperti stress, kebersihan kandang, serta kondisi fisiologis seperti usia dan jenis kelamin pada tikus (Yang et al., 2023).
Tingginya kadar Fe dalam darah tikus didukung dengan gambaran kadar hemoglobin pada darah tikus.  Kelebihan  besi  yang  toksi  dapat  menyebabkan  kerusakan  pada  pada  struktur  dan  fungsi  sel  darah merah  melalui  berbagai  mekanisme  yang  mengarah  pada  penurunan  kadar  hemoglobin  dan  penurunan daya tahan sel darah merah. Perubahan-perubahan ini  ditemukan dalam pemeriksaan kadar hemoglobin yang  mengalami  penurunan  nilai  kadar  hemoglobin  yang  berbeda  dari  nilai  pada  kontrol  pada  sampel darah tikus yang menunjukan kemungkinan tikus mengalami anemia. Kelebihan besi dalam tubuh dapat menghasilkan  radikal  bebas  melalui  reaksi  fenton,  yang  mengubah  hydrogen  peroksida  (H²O²)  menjadi radikal hidroksil (-OH) yang sangat reaktif. Radikal bebas ini dapat merusak membrane sel darah merah, protein, dan DNA yang menyebabkan perubahan morfologi dan fungi sel. Kadar normal Hb dalam darah tikus  adalah  10,09±0,34  g/dL  (Fitria.L,  2014).  Pada  penelitian  ini  dapat  dilihat  jika  darah  terpapar  oleh logam berat yang bersumber dari lingkungan akan menyebabkan menurunnya kadar Hb dalam darah yang akan  diikuti  oleh  kejadian  penyakit  anemia.  Sumber  paparan  dari  Fe  dilingkugan  bersumber  dari  air minum yang mengandung kadar Fe yang tinggi.

## SIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan, kesimpulan sebagai berikut:
1. kadar logam berat (Fe) dalam darah tikus adalah Kadar tertinggi didapati pada sampel 1,08mg/BB T3(H14)  dengan  kadar  Fe  sebanyak  44,14  µg/L  dan  kadar  Fe  terendah  didapati  pada  sampel dengan kadar Fe sebanyak 14,78 µg/L dan control dari tikus, kadar Fe nya 9,85 µg/L.
2. Kadar  Hb  dalam  darah  tikus  adalah  kadar  hemoglobin  perlakuan  minggu  pertama  didapatkan hasil  dengan  dosis  0,54mg/BB  adalah  (7,4  g/dl  &  6,8g/dl),  sedangkan  pada  perlakuan  minggu pertama  dengan  dosis  1,08mg/BB  di  dapatkan  hasil  hemoglobin  (7,2g/dl  &  7,6g/dl).  Kadar  Hb normal tikus control dalam darah tikus 6,1 g/dL.
3. Kadar  logam  berat  dengan  kadar  Hb  dalam  darah  tikus  memiliki  pengaruh  terhadap  kadar hemoglobim  pada  darah  tikus  putih  Dimana  jika  kadar  logam  berat  tinggi  dalam  darah  akan diikuti dengan menurunnya kadar Hb dalam darah tikus.

## DAFTAR PUSTAKA
Fitria, L., & Sarto, M. (2014). Profil Hematologi Tikus (Rattus norvegicus Berkenhout, 1769) Galur Wistar Jantan  dan  Betina  Umur  4,  6,  dan  8  Minggu,  Biogenesis  Jurnal  Ilmiah  Biologi,  2(2):  94-100. https://doi.org/10.24252/bio.v2i2.473.
Halliwel,  B.,  &  J.M.C.  Gutteridge.  (2001).  Free  Radicals  in  Biology  and  Medicine.  Oxford  University Press, New York.
Harahap,  F.,  &  Harahap,  F.  S.  (2018).  Analisa  Kadar  Besi  (Fe)  Dalam  Air  Zam-Zam  Secara Spektrofotometri  Serapan  Atom  (Ssa).  Eksakta:  Jurnal  Penelitian  Dan  Pembelajaran  MIPA,  2(1):  62- 67.  https://jurnal.um-tapsel.ac.id/index.php/eksakta/article/view/399.
Hermiaty,N,.  Syamsu,  R.  F.,  &  Permatasari,  D.  (2021).  Angka  Kejadian  Anemia  Pada  Remaja  di Indonesia. Jurnal Kesehatan Andalas, 6(3): 507-511. http://dx.doi.org/10.25077/jka.v6i1.671.
Jacobus  MC,  Mantik  MFJ,  Umboh  A.  (2016).  Perbedaan  kadar  hemoglobin  pada  remaja  gizi  baik  yang tinggal  di  pegunungan  dengan  yang  tnggal  di  tepi  pantai.  Jurnal  e-Clinic  (eCI),  ,4(1):1-6. https://doi.org/10.35790/ecl.v4i1.11696.
Kementrian  Kesehatan  Republik  Indonesia.  (2014).  Peraturan  Mentri  Kesehatan  Republik  Indonesia Nomor 41 tahun 2014 Tentang Pedoman Gizi Seimbang. Kementrian Kesehatan Republik Indonesia. Jakarta: Kementrian Kesehatan Indonesia.
Kennelly  PJ,  Rodwell.  Mioglobulin  dan  Hemoglobin.  (2009)  dalam:  Muuar  K,  Granner  DK,  Roodwell VM. Biokimia Harper.

## ZONA
ISSN : 2775-4065 (Online)
Volume 8, No 1, April 2024, p. 57-63 http://zona.pelantarpress.co.id https://doi.org/10.52364/zona.v8i1.111
Norsiah,  W.  (2015).  Perbedaan  Kadar  Hemoglobin  Metode  Sianmethemoglobin  Dengan  dan  Tanpa Sentrifugasi  Pada  Sampel  Leukositosis.  Medical  Laboratory  Technology  Journal.  1(2):  72-83. https://doi.org/10.31964/mltj.v1i2.19.
Parulian, A. 2009.  Monitoring dan Analisis Kadar  Alumunium (Al) dan Besi (Fe)  Pada Pengolahan Air Minum PDAM Tirtanadi Sunggal. Medan: Pascasarjana Universitas Sumatera Utara (USU).
Putri, N. T. (2021). Pengaruh Serbuk Cacing Tanah (Pheretin Javanica K.) Keping Terhadap Gambaran Morfologi,  Histopatologi  Jantung  dan  Viskositas  Darah  Tikus  Putih  (Rattus  norvegicus  B)  Strain Wistar. Universitas Jember, September 2019, 2019-2022.
Rejeki, P. S., Putri, E. A. C., & Presety, R. E. (2018). Ovariektomi Pada Tikus Dan Mencit. In Airlangga University Press.
Siaka, I, M. (2008). Korelasi antara kedalaman sedimen di pelabuhan benoa dan konsentrasi logam berat Pb dan Cu. Jurnal kimia, 2: 61-70.
Sinurat, I., F. (2018). Uji Efek Penurunan Kadar Glokosa Darah Tikus Putih (Rattus norvegicus) Dengan Pemberian  Ekstra  Etanol  Kayu  Manis  (Cinnamomon  verum  J.  S.  Presl)  Yang  Diinduksi  Glikosa Sebagai Antihiperglikemik. In Journal of Chemical Informations and Modeling. 53(9).
Soebroto, l., 2009. Cara mudah mengatasi problem Anemia. Yogyakarta: Bangkit.
Supriyanti, E., &  Endrawati, H. (2015). Kandungan  Logam Berat Besi  Pada Air, Sedimen,  Dan Kerang Hijau  (Perna  viridis)  Di  Perairan  Tanjung  Emas  Semarang.  Jurnal  Kelautan  Tropis,  18(4),  38-45. https://doi.org/10.1111/j.1600-0404. 1962.tb01105.x.
Utami, S., & Handayani, S. K. (2017). Ketersediaan air Bersih untuk kesehatan: kasus dalam pencegahan diare pada anak. Tanggerang: Universitas terbuka.
Vallelian, F., Buehler, P. W., & Schaer, D. J. (2022). Hemolysis, free hemoglobin toxicity, and scavenger protein therapeutics. Blood, 140(17), 1837-1844. https://doi.org/10.1182/blood.2022015596.
Yang, J., Li, Q., Feng, Y., & Zeng, Y. (2023). Iron Deficiency and Iron Deficiency Anemia: Potensial Risk Factors in Bone Loss. International Journal of Molecular Sciences, 24(8).
https://doi.org/10.3390/ijms24086891.
Youssef, L. A., & Spitalnik, S. L. (2019). Ferroptosis in Hemolytic  Disorders BT  – Ferroptisis in Health and Disease (D. Tang (ed); pp. 257-272). Springer International Publishing. https://doi,org/10.1007/978-3-030-26780-3_15.
Paravicini TM, Touyz RM (2008). NADPH oxidase,, reactive oxygen spesies, and hypertension. Diabetes Care, 31(2): S170-S180.