© (2017) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
JBP Vol. 19, No. 1, April 2017 – Christina Destri

## POTENSI Jatropha multifida TERHADAP JUMLAH FIBROBLAST  PADA APHTHOUS ULCER MUKOSA MULUT TIKUS
Christina Destri* 1 , I ketut Sudiana 2 , Jusak Nugraha 3
1 Jurusan S2 Imunologi Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga Surabaya
2 Departemen Patologi Anatomi, Fakultas Kedokteran, Universitas Airlangga Surabaya
3 Departemen Patologi Klinik, Fakultas Kedokteran, Universitas Airlangga Surabaya Email: * 1 christinadestri@gmail.com

## Abstrak
Peningkatan pemakaian obat dengan kandungan asli untuk lebih bebas efek toksik, mudah didapat dan  harga  yang  terjangkau  telah  menjadi  kebutuhan  masyarakat  dewasa  ini.  Jatropha  multifida,  dengan kandungan  bioaktif  alkaloid,  flavonoid,  saponin,  tanin,  dan  diterpenoid  berperan  dalam  penyembuhan luka.  Tujuan  penelitian  untuk  mengetahui  potensi  ekstrak  Jatropha  multifida  terhadap  jumlah  fibroblast pada  proses  penyembuhan  aphthous  ulcer  atau  sariawan  yang  sering  terjadi  di  masyarakat.  Subyek penelitian adalah 24 ekor tikus Rat norvegicus dibagi menjadi kelompok K0 (CMC-Na), P1 (JM 2,5%); P2 (JM5%),  P3(JM10%).  Perlukaan  pada  mukosa  mulut  tikus  dengan  memakai  burnisher  yang  dipanaskan dan  ekstrak  J.Multifida  diberikan  secara  topikal  2  kali  sehari  selama  5  hari.  Tikus  dikorbankan  dan dibiopsi  incise  pada  hari  ke-5.  Untuk  melihat  jumlah  fibroblast  dilakukan  pembuatan  preparat  dengan pengecatan Hematoxylin Eosin. Hasil: Terdapat perbedaan jumlah fibroblast secara signifikan pada hari ke-5  di  K0  (55,70),  P1(69,60),  P2(48,20),  P3(65,53).  Kesimpulan:  ada  perbedaan  bermakna  antara kelompok kontrol, P1 dan P2 dengan P3. Ektrak  gel Jatropha multifida 5% paling efektif terhadap jumlah fibroblast pada proses penyembuhan mukosa mulut tikus rat norvegicus.
Kata kunci : Aphthous ulcer, Jatropha multifida, fibroblast

## Abstract
Increased use of drugs with the original content to be free of toxic effects, easily obtainable and affordable  prices  has  become  a  necessity  today's  society.  Jatropha  multifida,  with  a  content  of  bioactive components such as alkaloids, flavonoids, saponins, tannins, and diterpenoid play a role in wound healing. The aim of research to determine the potential of Jatropha multifida extract on the number of fibroblast in healing process of aphthous ulcers or sores that often occur in the community. Subjects were 24 rats were divided into groups of Rat norvegicus K0 (CMC-Na 3%), P1 (JM 2.5%); P2 (JM5%), P3 (JM10%). Oral mucosal injury in rats using a heated burnisher and J.Multifida extract topically administered 2 times daily for  5  days.  Mice  were  sacrificed  and  incision  biopsied  on  day  5.  To  see  the  number  of  fibroblasts  done making  preparations  with  Hematoxylin  eosin  staining.  Results:  There  were  differences  in  the  number  of fibroblasts  significantly  on  day  5  in  K0  (55.70),  P1  (69.60),  P2  (48.20),  P3  (65.53).  Conclusion:  There were significant differences between the control group, P1 and P2 to P3. Gel extracts of Jatropha multifida 5% most effective against the number of fibroblasts in the healing process norvegicus rat rat oral mucosa.
Keywords: Fibroblast, Aphthous ulcers, Jatropha multifida.
JBP Vol. 19, No. 1, April 2017 – Christina Destri

## 1. PENDAHULUAN
Aphthous    ulcer  atau  aphthous  stomatitis dikenal sebagai sariawan di kalangan masyarakat  Indonesia  merupakan  penyakit rongga  mulut  yang  paling  umum  terjadi. Aphthous  ulcer  diklasifikasikan  sebagai  ulcer minor, mayor dan herpetiform. Lebih dari 85% apthous  ulcer  adalah  bentuk  minor  dengan diameter  kurang  dari  1cm.  Kejadian  apthous ulcer  cenderung  lebih  banyak  terjadi  pada wanita  (67,4%)  dibandingkan  pria  (22,6%) dengan  lokasi  ulcer  banyak  ditemukan  pada area  bibir  (35,7%)  (Ronald  G.  Shahsy et  al., 2000; Anabel  Diaz et  al., 2015).  Proses inflamasi  memainkan  peran  penting  karena rasa  sakit  yang  terjadi  pada  apthous  ulcer disebabkan  inflamasi  yang  berlebihan  dan psikokimia  akibat  iritasi  ujung  saraf  efferent yang  berhubungan  dengan  lapisan  epitel  dan sub  epitel  (Xiao  Wen  Jiang  et  al.,  2013). Faktor  trauma  paling  banyak  menyebabkan pembentukan ulcer pada satu individu sehingga  timbul  kematian  transepithelial  yang bersifat apoptosis masiv dan mendadak diikuti timbulnya secondary  necrosis yang  mengarah pada  pelepasan  danger  signal  dari  sel  epitel sehingga  terjadi  pengelupasan  lapisan  sel epitel mati dan terbentuklah ulcer (Al Samadi, 2015).  Aphthous  ulcer  merupakan  ulcer  pada mukosa buccal yang ditutup eksudat fibropirulent  dan  infiltrasi  non  spesifik  kronis yang  berbatasan  dengan  lamina  propria (Stephen  T.  Sonis,  2015).  Secara  klinis bentukan  aphthous  ulcer  terlihat  bulat  atau oval  dangkal,  terasa  sangat  sakit  dan  terlihat batas kemerahan karena peradangan akut pada mukosa mulut (bibir, buccal dan lingual)(Ronald  G.  Shahsy,2000).  Anestesi topikal  Lidocaine  2%,  Benzocaine  dan Benzydamine  Hydrochloride  hanya  akan mengurangi  rasa  sakit  dalam  waktu  singkat (Sunday O., 2014).
Dalam  beberapa  tahun  terakhir  terjadi peningkatan penggunaan obat dengan kandungan  asli  karena  dianggap  efek  toksik yang  lebih  kecil  dan  khasiat  yang  lebih  baik. Lebih dari itu peningkatan resistensi antibiotik secara konstan dan berbagai efek samping dari
obat  sintetis  mendorong  pengobatan  herbal dipercaya  bisa  meningkatkan  ketahanan  alami tubuh  dimana  aktifitas  imunomodulator  telah banyak  ditemukan  dalam  tanaman  (Shruti Shukla,  2012). Jatropha  multifida dikenal sebagai  tanaman  betadine  karena  dikenal mampu  untuk  mengobati  luka.  Diketahui bahwa bagian dari daun, akar, biji dan batang dari  tanaman  ini  mengandung secondary metabolite seperti  alkaloid,  tanin,  flavonoid, saponin  dan  phenol  (Nwokocha  et  al.,  2011). Berdasarkan pengalaman empiris, tanaman ini dapat digunakan sebagai obat tradisional untuk obat  luar  seperti  luka  baru  dan  untuk mengobati  berbagai  jenis  infeksi  dengan langsung mengoleskan getah Jatropha multifida  Linn pada  luka  tersebut. Getah  dan daunnya juga digunakan untuk menyembuhkan  infeksi  pada  lidah  bayi (Adesola  A,  Adetunji  O,2007).  Penggunaan Jatropha multifida untuk proses penyembuhan aphthous  ulcer  masih  belum  banyak  diteliti, sehingga penelitian ini bertujuan menganalisis potensi Jatropha  multifida terhadap  jumlah fibroblast  terhadap  ulcer  pada  mukosa  mulut tikus Rat norvegicus .

## 2. TINJAUAN

## 2.1  Aphthous Ulcer
Apthous  ulcer  diklasifikasikan    sebagai  ulcer minor,  mayor  dan  herpetiform.  Lebih  dari  85% aphthous  ulcer  adalah  bentuk  minor  dengan diameter kurang dari 1 cm. Aphthous ulcer bentuk mayor  dikenal  sebagai Sutton  Disease atau periadinitis  mucosa  necrotica  recurrence dengan diameter  lebih  dari  1  cm  dan  dapat  berlangsung selama beberapa minggu bahkan beberapa bulan. Aphthous  ulcer  bentuk  herpetiform  secara  klinis terlihat  berbeda  karena  ulcer  yang  ditimbulkan berupa klaster atau multiple dan didapati hampir di semua bagian rongga mulut (Akintoye SO, 2014). Aphthous  ulcer  bentuk  minor  merupakan  ulcer yang paling banyak terjadi (80%-90%) dibandingkan dengan dua tipe yang lain. Kejadian aphthous  ulcer  cenderung  lebih  banyak  terjadi pada  wanita  (67,4%)  dibandingkan  pria  (22,6%)
JBP Vol. 19, No. 1, April 2017 – Christina Destri
dengan lokasi ulcer banyak ditemukan pada bibir (35,7%)
Hal  yang  paling  banyak  memicu  terjadinya aphthous  ulcer  adalah  faktor  trauma  karena tergigitnya  bagian  bibir  atau  pipi,  abrasi  dari makanan yang keras, proses pada waktu menyikat gigi  maupun  pada  waktu  penggunaan  alat-alat kedokteran (Ronald G. Shahsy et al ., 2000).
Gambar 1 . Minor aphthous ulcer
Faktor trauma lokal cenderung menyebabkan pembengkakan  dan  inflamasi  seluler  yang berasosiasi dengan peningkatan viskositas ekstraselular matriks dari sub mukosa mulut. Ulcer berkembang  pada  mukosa  mulut  non  keratin dengan  bagian  buccal  dan  mukosa  labial  sebagai tempat paling umum terjadi (Akintoye SO, 2014).

## 2.2  Sistim Imunitas Rongga mulut
Keratinosit  pada  mulut  dan  sel  dendrit  pada mukosa  mulut  melalui  molecular  recognition receptor mampu membedakan antara mikroorganisme  komensal  dan  patogenik  dengan memediasi  dihasilkannya  respon  perlindungan berupa  imun  inflamasi  terhadap  invasi  patogen atau  sebagai  media  imun  toleran  terhadap mikroorganisme komensal. Imun toleran di dalam rongga  mulut  merupakan  hasil  dari  kurangnya aktifitas  respon  sel  T  terhadap  presentasi  antigen yang  imunogenik  atau  ditekannya  aktifitas  sel  T efektor oleh sel T regulator. Sekresi IgA di dalam rongga  mulut  berkontribusi  dengan  membatasi kolonisasi dan invasi mikroorganisme terhadap sel epitelium.  Tergantung  atau  tidaknya  switching  Ig isotipe ke IgA terhadap sel t helper akan difasilitasi oleh sekresi sitokin dari sel dendrit atau monosit.
Imunitas  mukosa  mulut  mampu  menetralisir antigen  asing  yang  berbahaya,  membatasi kolonisasi  mikroorganisme  patogen,  sebagai mediator yang menghasilkan respon perlindungan imunoinflamasi dan memediasi toleransi terhadap mikroorganisme  komensal  dan  soluble  antigen non-self  yang  berasal  dari  berbagai  protein eksogeneous.
Gambar 2 . Imunitas rongga mulut
Saliva  yang  mengandung  IgA,  mucin  dan enzim  akan  melindungi  mukosa  mulut  dari kolonisasi  bakteri.  Gingival  crevicular  fluid yang  menjangkau  rongga  mulut  mengandung likosit, IgM dan IgA serta berbagai agen yang berkontribusi  dalam  imunitas  rongga  mulut. Sel  Langerhans  dan  sel  dendrit  myeloid  lain setelah  menangkap  antigen  asing  akan bermigrasi  ke  regional  nodus  limpa  untuk dipertemukan  dengan  sel  imun  efektor.  Sel imun  efektor  akan  bermigrasi  ke  lamina propria  dimana  sel  akan  memediasi  aktifitas respon  imun  atau  imun  toleran  (Feller  et  al., 2013).

## 2.3  Proses Penyembuhan Ulcer
Ulcer  merupakan  luka  terbuka  pada  kulit, mukosa dan membrane mukosa yang seringkali disebabkan karena abrasi dan secara umum  menimbulkan  peradangan  dengan  atau tanpa infeksi (Christian A., 2015).
Proses  penyembuhan  luka  pada  jaringan lunak  di  dalam  rongga  mulut  mempunyai prinsip  yang  sama  dengan  bagian  tubuh  lain misalnya  kulit.  Penyembuhan  luka  selalu diawali  dari  proses  pembekuan  darah  yang
JBP Vol. 19, No. 1, April 2017 – Christina Destri
mempunyai  tujuan  untuk  menutup  luka (Hannu Larjava, 2012).
Gambar 3. Proses penyembuhan luka
Penyembuhan  luka  merupakan  suatu rangkaian proses dengan dinamika yang tinggi dan  tepat,  terdiri  dari  tahapan  yang  saling mengikuti.  Diawali  dari  tahap  inflamasi, proliferasi  sel,  deposisi  matrik  hingga  fase remodeling.  Semua  fase  perbaikan  termasuk fase inflamasi, re-epitelisasi dan pembentukan granulasi  jaringan  merupakan  bagian  yang dipengaruhi  secara  komplek  oleh growth factor dan  sitokin  yang  secara  langsung mengarah  ke  area  luka  (Sule  Coskun  et  al., 2007).
Pada  kaskade  penyembuhan  luka  secara normal,  proses  yang  terjadi  selalu  diawali dengan  proses  hemostasis  dan  deposisi  fibrin yang kemudian mengarah pada kaskade sel-sel inflamasi  yang  dikarakterkan  oleh  netrophil, makrofage,  dan limposit.  Proses  ini  kemudian diikuti  dengan  penarikan  dan  proliferasi fibroblast,  dilanjutkan  dengan  penumpukan
dan  remodeling  kolagen  hingga  terjadi pematangan bekas luka (Robert F.
Diegelmann, 2004).
Gambar  4. Skema  peran  sel  dan  fungsi dalam  proses  penyembuhan luka

## 2.4  Fase Hemostasis
Penyembuhan  luka  selalu  diawali  dengan pembekuan  darah  sebagai  hal  awal  untuk menutup  luka.  Aktivasi  trombosit  selama hemostasis  akan  melepaskan  sejumlah  sitokin penting yang  mengawali proses penyembuhan melalui  signal  kemotaktik  yang  ditujukan kepada sel-sel inflamasi dan sel residen. Selain itu bekuan  fibrin  fibronektin  berperan  sebagai provisional matrik dari sel epitel dan fibroblast untuk  dapat  migrasi  menuju  area  luka. Pelepasan  sitokin  selama  fase  pembekuan mengawali  reaksi  inflamasi  sebagai  penyedia debridement  dengan  menghilangkan  jaringan yang rusak dan mikroba. Selama proses respon imun  innate  ini  terjadi  sel-sel  inflamasi  yang telah direkrut pada area luka akan melepaskan lebih  banyak  lagi  sitokin  dan  kemokin  yang berfungsi  untuk  memodulasi  penyembuhan luka.  Makrofage  merupakan  sel  yang  paling penting  pada  perbaikan  luka.  Sel  makrofage mensekresikan vascular  endothelial  growth factor (VEGF), Fibroblasts  growth  factor (FGF) dan Transforming growth factor (TGF- B) yang merupakan regulator paling signifikan untuk  perbaikan  jaringan  (Hannu  Larjava, 2012).
© (2017) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
JBP Vol. 19, No. 1, April 2017 – Christina Destri
Gambar 5. Overview penyembuhan luka
Luka  pada  jaringan  akan  mengeluarkan ADP  yang  menyebabkan  trombosit  melekat pada  permukaan  luka  terbuka.  Hal  ini  akan mengaktifkan kaskade hemostasis yaitu dengan  memproduksi  trombin  yang  akan merubah  fibrinogen  menjadi  fibrin  sehingga terbentuk  sumbat  hemostasis  yang  stabil. Selain itu juga disekresikan sitokin Fibroblast growth  factor (FGF), Tranforming  growth factor  –  Beta (TGF-B), Platelet  derived growth  factor (PDGF)  dan Epidermal  growth factor (EGF)  sebagai  mekanisme  kemotaktik sehingga  netrophil  dan  monosit  bergerak  kea rah  luka  untuk  memulai  fase  inflamasi (Christian Agyare et a l., 2015)

## 2.5  Fase Inflamasi
Fase  inflamasi  dimulai  saat  netrophil melekat  pada  endothelium  sesaat  setelah trauma. Netrophil dengan elastse dan kolagenase  memfasilitasi migrsi menuju bagian  ekstra  selular  dimana  sel  akan memfagositosis  bakteri,  degradasi  matrik protein  serta  menarik  penambahan  netrophil dan  makrofage.  Sel  inflamasi  yang  paling berperan yaitu sel makrofage akan mendominasi  area  luka  dari  hari  ke-3  hingga hari  ke-5.  Makrofage  akan  memfagositosis organisme  patogenik,  degradasi  debris  dari luka dan menstimulasi pembentukan granulasi
jaringan serta angiogenesis. Growth factor dari makrofage  antara  lain platelet  derived  growth factor,  transforming  growth  factor,  fibroblast growth  factor ,  IL-1,  IL-6  dan tumor  necrosis factor (Laurel M.Morton, 2016).
Gambar 6 . Fagositosis PMN
Dimulai  pada  6-8  jam  setelah  luka, pembuluh darah yang rusak akan mengeluarkan  plasma  dan  netrophil  ke  area luka.  Netrophil  akan  mulai  mencerna  dan membersihkan  sel  debris  dan  se  lasing sehingga  netrophil  akan  mengalami  apoptosis dan  perannya  digantikan  oleh  makrofage. Produk  makrofage  akan  menstimulasi  sel endotel untuk berproliferasi. Degradasi produk fibrin  akan  berfungsi  sebagai  kemotaktik  sel fibroblst dan sel epitel ke area luka (Christian Agyare, 2015).

## 2.6  Fase Proliferasi
Fase  proliferasi  meliputi  fibroplasia, granulasi,  epitelisasi  dan  angiogenesis  yang dimulai  24  jam  setelah  trauma.  Matrik  fibrin sebagai  tempat  migrasi  keratinosit  dimana sebagian  sel  ini  distimulasi  oleh  TGF-B  akan bergerak  dari  tepian  luka  dan  folikel  rambut menggeser  keratinosit  yang  telah  ada  di  area luka  dengan  melompat.  Dalam  waktu  yang sama  VEGF  diinduksi  oksigen  yang  rendah akan mempromosi angiogenesis dan mempengaruhi  sel  endotel  kapiler  terdekat untuk direkrut dan distimulasi untuk berproliferasi.  Platelet  derived  growth  factor
mengatur  fibroblast  yang  bermigrasi  48  jam hingga  72  jam  setelah  terjadi  luka  untuk mengalami  proliferasi  matrik  dermal  (Laurel M.Morton, 2016).
Fase proliferasi dimulai rata-rata hari ke-4 setelah  luka  dan  berlangsung  hingga  hari  ke- 21  pada  luka  akut,  tergantung  pada  ukuran luka  dan  kesehatan  penderita.  Fibroblast  dan sel endotel merupakan sel kunci yang berperan penting  untuk  proses  terjadinya  angiogenesis, proliferasi fibroblast (deposisi kolagen), pembentukan  jaringan  granulasi,  kontraksi luka  dan  re-epitelisasi  yang  diikontrol  oleh FGF, TGF-B dan VEGF.
Gambar 8. Interaksi sel kearah penyembuhan luka

## 2.7  Fase Remodeling
Fase  remodeling  membutuhkan  waktu beberapa minggu hingga tahun. Kontraksi luka dimulai  hari  ke-5  karena  adanya  perubahan fenotip fibroblast menjadi actin-laden myofibroblast (Laurel M.Morton, 2016).
Proses kontraksi akan menarik tepian luka untuk  saling  mendekat,  mengurangi  area permukaan  dan  meningkatkan  kecepatan penutupan  luka.  Kontraksi  luka  secara  aktif dimediasi oleh myofibroblast yang berdifferensiasi dengan menggunakan reseptor integrin  untuk  menarik  matrik  memakai kekuatan sitoskeleton yang kaya dengan aktin. Myofibroblast  berdiferensiasi  dari  residen
fibroblast lokal atau sel progenitor lain dengan molekul  matrik  tertentu  dan growth  factor seperti  EDA-fibronektin  dan  TGF-B.  setelah terjadi  kontraksi  luka  maka  remodeling dilakukan  oleh  jaringan  granulasi.  Selama proses berlangsung terjadi degradasi fibroblast dan remodeling Extra Cellular Matrix (ECM). perubahan  signal  mekanosensori  dari  jaringan remodeling  akan  mengurangi  aktifitas  selular, produksi  matrik  berhenti  dan  myofibroblast mengalami apoptosis. Di beberapa bagian dari mukosa  mulut  ( gingiva, mucosa palatal ) hasil penyembuhan  secara  klinis  terlihat  tanpa bekas luka dengan fitur histologi yang hampir semuanya normal (Hannu Larjava, 2012).
Gambar 9 . Fase remodeling
Fase  perbaikan  dari  proses  penyembuhan luka  seperti  morfogenesis  jaringan  meliputi berbagai  proses  selular  termasuk  diantaranya adalah migrasi sel, proliferasi, diferensiasi dan apoptosis.  Dari  berbagai  bukti  diketahui bahwa Matrix  Metalloproteinase (MMP) merupakan  regulator  positif  dari  proses  yang terjadi  di  fase  ini,  dan  diketahi  pula  bahwa MMP  2  dan  MMP  9  mempunyai  efek menghambat dari proliferasi sel.
Fungsi  lain  dari  MMP  yaitu  degradasi ECM  selain  sebagai  bagian  yang  memproses molekul bioaktif seperti growth factor, sitokin, kemokin serta reseptor. Kemampuan degradasi ECM dilakukan oleh MMP antara lain MMP1, MMP3,  MMP  13,  MMP  14  yang  mampu memecah  kolagen  dan  MMP  7  yang  dapat memproses Syndecan 1 dan elastin.
© (2017) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
Proses  penyembuhan  merupakan  proses yang  komplek  dan  memerlukan  keadaan  yang tepat untuk suatu hubungan yang mengekspesikan signaling molekul dan reseptor,  molekul  adhesi  selular  dan  protein ECM. MMP dan inhibitornya mampu melakukan  berbagai  proses  dari  signaling molekul (Sean E. Gill, 2008).

## 2.8  Peran Fibroblast
Fibroblast  terdapat  di  berbagai  jaringan pengikat  dengan  berbagai  populasi  sel  yang heterogen.  Secara  struktur  fibroblast  banyak mengandung rough endoplasmic reticulum dan golgi  aparatus  yang  merupakan  karakter  sel dengan  aktifitas  biosintesis  yang  tinggi. Fibroblast  merupakan  sumber  utama  dari protein Extra Cellular Matrix terutama bentuk kolagen  dan  fibronektin  yang  merupakan bentuk  granulasi  jaringan  dan  berperan  dalam penyediaan  integritas  struktural  pada  luka. Bentuk spesifik fibroblast adalah
myofibroblast yang merupakan sumber penyokong  kekuatan  kontraksi  dan  berperan penting serta efisien untuk penutupan luka (Ian A. Darby, 2007).
Gambar 10. Interaksi berbalasan dari berbagai  tipe  sel  dengan  sel  fibroblast  secara signifikan mempengaruhi proses
penyembuhan luka.
Fibroblast berada selama proses penyembuhan  luka  dimulai  dari  akhir  fase inflamasi hingga fase epitelisasi selesai. Akhir fase inflamasi dan awal fase proliferasi (24-48 jam  setelah  luka)  merupakan  awal  fibroblast terlihat pada area luka. Infiltrasi dan degradasi dari  bekuan  fibrin  bersal  dari  fibroblast  yang mensekresi beberapa jenis matrix metalloproteinase  dan  mengganti  komponen extra cellular matrix seperti kolagen,
glikoprotein, proteoglikan,
laminin, trombospondin, glikosaminoglikan, hyaluronic acid  dan  heparin  sulphate.  Kompleks  matrik akan  mendukung  dan  mengatur  migrasi  serta aktifitas  fibroblast,  support  signal  untuk angiogenesis,  pembentukan  jaringa  granulasi dan terjadinya epitelisasi.
Gambar  11 .  Peran  aktif  fibroblast  di faseInflamasi.  Myofibroblast  mengaktifkan lekosit untuk memproduksi gelatinase MMP 9 untuk  degradasi  membrane  basal  diikuti dengan migrasi sel endotel.
Fibroblast  yang  telah  sampai  di  area  luka akan berkurang aktifitasnya, terjadi perlekatan di  bekuan  fibrin  dan  dasar  luka  melalui multiple integrin. Fibroblast segera berproliferasi  dan  memproduksi  MMP  serta proteinase  yang  lain  seperti seperinase yang digunakan  untuk  denaturasi  protein  dan provisional  matrik  yang  tidak  diperlukan  lagi untuk  proses  penyembuhan  luka.  Proteinase dikontrol  ketat  oleh  tissue  inhibitor  of metalloproteinase  (TIMP)  yang  diproduksi oleh  fibroblast.  Produksi  ECM  yang  baru
JBP Vol. 19, No. 1, April 2017 – Christina Destri
relatif  kaya  dengan  kolagen  III,  fibronektin dan  hyaluronic  acid.  Degradasi  kembali  oleh protease dilakukan untuk remodeling sehingga fibroblast  akan  mengganti  kolagen  tipe  III  ke tipe  kolagen  I  yang  mempunyai  kekuatan tensile  lebih  tinggi  meskipun  diperlukan beberapa waktu untuk terjadinya deposisi.
Fibroblast  merupakan  kunci  untuk  dapat terjadinya  penyembuhan  luka  secara  normal. Apabila  fibroblast  tidak  teraktifasi  atau migrasi  ke  provisional  matrik  tidak  optimal maka  autolisis  debridement  dari  denaturasi protein  dan  pembentukan  sumbat  fibrin  akan berkurang.  Aktifitas  penting  dari  fibroblast adalah  kontribusi  sel  untuk  produksi  extra cellular  matrix  dan  kontraksi  sel  pada  proses penyembuhan luka (P. Bainbridge, 2014).
Gambar 12 . Skematik evolusi fenotip myofibroblast
2.9. Jatropha multifida Linn
Perkembangan
resistensi antibiotik mikrobial  menjadi  pencarian  global  untuk antimikroba  dengan  kemurnian  alami  seperti pada tanaman asli. Jatropha multifida merupakan  tumbuhan  tahunan  berbentuk semak  dengan  tinggi  2-3  meter.  Jatropha bersal dari bahasa Yunani “jatros” yang berarti dokter  dan  “trophe”  berarti  makanan. Tumbuhan  ini  banyak  ditemukan  di  daerah tropis,  Afrika  bagian  tropis  serta  beberapa daerah  sub-tropis  seperti  Afrika  Utara, Madagskar,  Mauritius,  Afrika,  Asia  dan Amerika  Latin  telah  menggunakan  spesies
Jatropha  sebagai  tumbuhan  obat  tradisional untuk  mengobati  berbagai  penyakit  (Silma  R. et al., 2014)
Di Jawa timur, Jatropha multifida dikenal sebagai  tanaman  yodium.  Nama  umum  di Indonesia  dikenal  dengan  nama  Jarak  tintir, Jarak  gurita  atau  Jarak  cina.  Di  Philippina dikenal  sebagai  tumbuhan  Mana,  Manaku (Malaysia), Kuthirnevala (Thamil) dan Bhadradanti  (Sansekerta)  (S.  Kosasih  et  al., 1989).
Gambar 13. Bentuk daun, bunga dan buah

## Jatropha multifida
Studi  fitokimia  dari  berbagai  spesies Jatropha  mengungkapkan  adanya  kandungan alkaloid, cardiac-glycoside, flobatannis, flavonoid,  tannin  dan  saponin  (Beatrize  C.  et al., 2012).Bagian daun dari Jatropha multifida dan  Jatropha  podagrica  memiliki  komponen flavonoid, phenolic acid, glycoflavones,
proanthocyanidin  dan  steroid.  Kandungan flavonoid  pada Jatropha  multifida terdeteksi sebagai vanilic,  syringic,  p-OH  Benzoic  acid, cis dan trans ferulic, p-coumaric dan phloretic acid (Sallykutty Thomas, 2016).

## 2.10 Pewarnaan Hematoxilin Eosin
Sebagian  besar  sel  dan  ECM  sepenuhnya tidak  berwarna  dan  untuk  mempelajari  secara mikroskopik  setiap  bagiannya  diperlukan pewarnaan.  Metode  pewarnaan  tidak  hanya membuat berbagai komponen jaringan terlihat kontras  namun  juga  dapat  membedakan komponen  sel.  Jaringan  dengan negative charge (anionik)    seperti  asam  nukleat memerlukan basic dye yang disebut basophilic, sedangkan komponen kation seperti  seperti  protein  dengan  berbagai  grup asam  amino  yang  terionisasi  mempunyai affinitas  pada aciditas  dye yang  disebut acidophilic (Anthony L. Mescher, 2013)

## 3.  Metode Penelitian
Penelitian  ini  merupakan  penelitian post test  only  control dengan  eksperimental  murni laboratorium.  Sampel  menggunakan  tikus Rat norvegicus jantan  dengan  pertimbangan  tidak ada  pengaruh  hormonal,  sebanyak  24  ekor. Tehnik  pengambilan  sampel  dilakukan  secara alokasi  random  dan  penelitian  dibagi  menjadi 4  kelompok  dan  masing-masing  kelompok berisi 6 ekor tikus yang telah diberi perlukaan pada  mukosa  mulut  dan  telah  diberi  pakan standard  dan  aquadest  yang  sama.  Kelompok tikus  terdiri  dari  kelompok  K0  (kelompok dengan terapi CMC-Na3% secara topikal),  P1 (kelompok dengan terapi ekstrak gel Jatropha multifida  2,5% ),  P2  (kelompok  dengan  terapi ekstrak  gel Jatropha  multifida  5% ),  P3
(kelompok dengan terapi ekstrak gel Jatropha multifida 10% ).
Peralatan yang
digunakan dalam penelitian  terdiri dari  perlengkapan  perawatan tikus  putih  (kandang  dan  pakan  standart), burnisher  yang  sudah  dimodifikasi,  pinset chirurgis, bejana maserasi, gelas ukur, gunting bedah,  cotton  buds,  burner,  handscoon,  botol pot  untuk  tempat  specimen  jaringan  dan mikroskop.  Bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  antara  lain  tanaman Jatropha
multifida yang  didapatkan  di  kota  Kediri, aquadest,  CMC-Na  3%,  alkohol,  buffer formalin  10%  dan  bahan  untuk  pewarnaan Hematoxylin eosin. Setelah tikus Rat norvegicus diadaptasi  selama  1  minggu selanjutnya  dilakukan  pembagian  kelompok secara  random.  Kelompok  tikus  diberikan anestesi Ketamin supaya tidak mengalami rasa sakit  saat  dibuat  perlukaan  pada  mukosa mulut.
Pembuatan  ulcer  atau  perlukaan  pada mukosa mulut tikus  dilakukan dengan menggunakan burnisher yang sudah dimodifikasi sehingga bisa didapatkan perlukaan  yang  homogen.  Alat  burnisher dipanaskan selama satu menit dengan menggunakan nyala api lampu spirtus kemudian  disentuhkan  ke  mukosa  labial bawah  tikus Rat  norvegicus selama  1  detik. Ulcer akan terbentuk setelah 2 hari. Pemberian ekstrak Jatropha  multifida diberikan  secara topikal  pada  hari  ke-3  setelah  ulcer  terbentuk dengan  gambaran  klinis  eritema  diperifer  dan bagian  tengah  berwarna  putih  kekuningan. Setiap kelompok diberikan terapi 2 kali sehari secara  topikal  pada  bagian  ulcer  dengan menggunakan cutton  bud hingga  hari  ke-5. Pada  hari  ke-6  semua  kelompok  dikorbankan, dilakukan  biopsi  incise,  kemudian  potongan jaringan  diletakkan  pada  kertas  saring  yang sudah  dipersiapkan  dan  ditutup  sedemikian rupa  agar  jaringan  mukosa  bibir  tikus Rat norvegicus tidak  terlipat  ketika  direndam buffer formalin 10%.
Pewarnaan yang dilakukan adalah pewarnaan Hemotoxylin eosin yang digunakan untuk  menghitung  jumlah  fibroblast  di  setiap preparat kelompok tikus dengan menggunakan graticulae  dan  dilihat  dibawah  mikroskop dengan pembesaran 400x.

## 4. HASIL DAN PEMBAHASAN

## 4.1 Hasil  Penelitian
Dari hasil perhitungan jumlah fibroblast di setiap  kelompok  didapatkan  rerata  jumlah fibroblast hari ke-5 dengan konsentrasi ekstrak Jatropha  multifida 5%  menunjukkan  proses penyembuhan  yang  terkendali.  Sedangkan jumlah  fibroblast  pada  hari  ke-3  pada  setiap
JBP Vol. 19, No. 1, April 2017 – Christina Destri
kelompok  perlakuan    memperlihatkan  jumlah fibroblast  lebih  tinggi  dibandingkan  pada kelompok kontrol.
Gambar  14 .  Distribusi  dan  rerata  jumlah fibroblast
Tabel 1 . Hasil Uji Normalitas
Hasil kolomogrov-smirnov  test seperti pada  tabel  diatas  menunjukkan  bahwa  jumlah fibroblast dari tiap kelompok yang diuji adalah berdistribusi  normal.  Hal  ini  terlihat  dari besarnya nilai P dari tiap kelompok > 0,05.
Dari  hasil  data  jumlah  fibroblast  diatas menunjukan  bahwa  pada  hari  ke-3  secara rerata menunjukkan adanya perbedaan signifikan  diantara  kelompok  kontrol  dan kelompok  perlakuan.  Pada  hari  ke-5  secara statistik  terdapat  perbedaan  yang  signifikan (p<0,05)  diantara  kelompok  kontrol  dan kelompok perlakuan namun secara rerata tidak ada  perbedaan  signifikan  jumlah  fibroblast pada kelompok kontrol dan kelompok perlakuan.
Tabel 2. Hasil uji beda variabel jumlah fibroblast
Keterangan: Berbeda huruf superskrip menunjukkan  adanya  perbedaan  bermakna menggunakan  uji  komparasi  berganda  LSD (harga p < 0,05).

## 4.2 Pembahasan
Hasil  data  penelitian  hitung  jumlah fibroblast  pada  hari  ke-3  secara  statistik menunjukkan  adanya  perbedaan  signifikan  di setiap  kelompok  berdasarkan  uji  anova (p<0,05)  namun  secara  rerata  didapatkan jumlah  fibroblast  lebih  tinggi  dikelompok perlakuan dibandingkan kelompok kontrol.
Hal  ini  menunjukkan  bahwa  ekstrak Jatropha  multifida mampu  menstimulasi proliferasi  dan    migrasi  dari  sel  fibroblast. Mengikuti  luka,  fibroblast  yang  berada  di sekeliling  jaringan  akan  terstimulasi  untuk aktif pada hari ke-3. Sel ini bermigrasi ke area luka  karena  tertarik  oleh  faktor  TGF- dan PDGF  yang  dilepaskan  oleh  sel inflamasi  dan trombosit.  Fibroblast  pertama  terlihat  di  area luka  di  hari  ke-3  setelah  luka  dan  akumulasi fibroblast  memerlukan  modulasi  fenotip. Sekali sel fibroblast berada di area luka  maka sel  fibroblast  akan  berproliferasi  sebanyak- banyaknya  dan  membentuk  matrik  yaitu hyaluronan,  proteoglikan  serta  kolagen  tipe  1 dan  3.  Semua  produk  dari  fibroblast diendapkan  di  lingkungan  lokal  setempat  (T. Velnar et al ., 2009). Kelompok Jumlah Fibroblast Hari ke-3 Hari ke-5 K0 (kontrol) 0,934 0,743 P1 (JM 2,5%) 0,758 0,970 P2 (JM 5%) 0,978 0,995 P3 (JM 10%) 0,971 0,618
Kelompok Jumlah Fibroblast Hari ke-3 Jumlah Fibroblast Hari ke-5 Harga p (uji t 2) K0 17,97 ± 4,73 55,70 ± 22,29 bc - P1 45,37 ± 17,70 69,60 ± 24,61 b 0,079 P2 34,83 ± 4,30 48,20 ± 11,00 c 0,020 * P3 65,37 ± 16,74 65,53±10,62 bc 0,813 P (Anova) <0,0001 0,003
© (2017) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
Hasil  hitung  jumlah  fibroblast  pada  hari ke-5  didapatkan  perbedaan  yang  signifikan diantara  setiap  kelompok  berdasarkan  uji anova  (p<0,005),  dimana  kelompok  kontrol berbeda  dengan  kelompok  perlakuan  P1  dan P2  namun  tidak  ada  perbedaan  dengan kelompok  P3.  Dari  penelitian  sebelumnya tentang  TGF- (Sahrah,  2016)  diketahui bahwa  komponen  bioaktif  dalam  ekstrak Jatropha  multifida mampu  meningkatkan ekspresi TGF- .
Induksi  TGF- mampu  memberikan signal  kritis  dan  kontrol  utama  yang  akan meregulasi fungsi fibroblast dan meningkatkan transkripsi  gen  untuk  pembentukan  kolagen, proteoglikan  dan  fibronektin  sehingga  terjadi peningkatan  produksi  protein  pada  matrik. Fungsi  utama  dan  esensial  dari  fibroblast selama penyembuhan luka adalah memproduksi matrik ekstra selular baru untuk memperbaiki jaringan yang rusak serta sebagai sel  ‘sentinel’  yang  memonitor  homeostasis jaringan ikat (Matthias Chiquet et al., 2015).
Data  hasil  penelitian  uji  beda  hitung jumlah fibroblast antara hari ke-3 dan hari ke- 5  didapatkan  secara  rerata  jumlah  fibroblast lebih  tinggi  di  hari  ke-5  di  kelompok  kontrol dan  di  setiap  kelompok  perlakuan  P1,  P2  dan P3. Hal ini menunjukkan bahwa terapi ekstrak Jatropha  multifida  dengan  kandungan  aktif Flavonoid  mampu  menstimulasi  makrofage untuk mensekresikan TGF- sehingga berpengaruh  terhadap  proliferasi,  migrasi  dan differensiasi sel fibroblast. Konsentrasi ekstrak Jatropha multifida di 5% menunjukkan jumlah fibroblast lebih tinggi secara signifikan, hal ini menunjukkan pengaruh terhadap proses penyembuhan yang lebih baik.
Sel  fibroblast  merupakan  sel  yang bertanggung  jawab  untuk  produksi  kolagen, retikular, serat fiber,
sintesis glikosaminoglikan  dan  glikoprotein  yang merupakan  substansi  interselular  dan  juga  sel yang mensintesis MMP, enzim yang bertanggung  jawab  untuk  perubahan  kolagen dan  serat  elastin.  Oleh  karena  itu  aktifitas fibroblast  memerlukan  kontrol  yang  baik. Kontrol  yang  tidak  tepat  di  berbagai  langkah
proses  aktifitas  fibroblast  akan  menghasilkan sintesis yang secara kuantitatif berlebihan atau inadequate, secara kualitatif produk yang tidak sempurna menunjukkan adanya proses penyakit  seperti  scleroderma,  keloid,  fibrosis atau premature aging (E.J.Mazyala, 2008).

## 5. KESIMPULAN DAN SARAN

## 5.1  Kesimpulan
Berdasarkan penelitian ini diperoleh hasil bahwa  pemberian  ekstrak Jatropha  multifida dapat  mempengaruhi  jumlah  fibroblast,  dan dapat  disimpulkan  bahwa  pemberian  ekstrak Jatropha multifida berpengaruh secara signifikan  terhadap  jumlah  fibroblast  yang lebih tinggi  pada konsentrasi 5% untuk dapat mempengaruhi  proses  penyembuhan  berjalan dengan lebih baik pada aphthous ulcer mukosa mulut tikus Rat norvegicus .

## 5.2  Saran
Ekstrak  daun  Jarak  tintir  ( Jatropha multifida )  dengan  komponen  bioaktif  yang terdapat  didalamnya  terbukti  mampu  untuk mempengaruhi  proses  penyembuhan  aphthous ulcer pada mukosa mulut tikus Rat norvegicus . Penelitian ini diharapkan untuk dapat dikembangkan pada penelitian dengan melihat Matrix  Metalloproteinase sebagai  kelanjutan penelitian dari hitung jumlah fibroblast.
Matrix  metalloproteinase yang  merupakan regulator kunci dihubungkan dengan perubahan extra cellular matrix.

## DAFTAR PUSTAKA
Adesola  A,  Adetunji  O.,  2007.Tersedia  dalam jurnal  Ekstraksi  zat  aktif  antimikroba dari tanaman yodium ( Jatropha Multifida  Linn )  sebagai  bahan  baku alternatif  antibiotik  alami  oleh  Sari FM&Sari SM. hal:1
Anabel  Diaz et  al .,  2015.  Behaviour  of  The Recurrent  Aphthous  Stomatitis  as  a Dental Urgency at Vedado’s
University  Policlinic.  Faculty  of Dental  Medicine,  University  of  Porto Portugal Original Research.
© (2017) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
JBP Vol. 19, No. 1, April 2017 – Christina Destri
Al  Samadi et  al .,  2015.  Epithelial  Cell Apoptosis  in  Recurrent  Aphthous
Ulcer.  Journal  of  dental  research. Vol.94  (7)  928-935.  Institute  of Clinical Medicine Biomedicum, Helsinki, Finland. Anthony  L.  Mescher,  2013.  Basic  Histology Text  and  Atlas.  Thirteenth  edition.
Medical McGraw Hill eBook. Indiana
Beatrize C.K. Hirota et al., 2012. C- Glycosyl Flavones  and  Comparative  Study  of The  Antioxidant,  Haemolytic  and Toxic  Potential  of  Jatropha  multifida Leaves and Bark. International Journal of Phytomedicine 4. 01 – 05. Brazil. Christian  Agyare,  Yaw  Duah  Boakye,  2015. African Medicinal Plants With Wound Healing Properties. Journal of Ethnopharmacology Institute for Pharmaceutical Biology and Phytochemistry, University of Munster, Germany. E.  J.  Mazyala,  2008.  Dermal  Fibroblast  :  A Histological  And  Tissue  Culture
Study.  Division  of  anatomy  and histology,  faculty  of  health  science,
University  of  Stellenbosch,  Mwanza, Tanzania. Hannu  Larjava,  2012.  Oral  Wound  Healing  : Cell Biology and Clinical Management,  Faculty  of  Dentistry, University of British Columbia,
Vancouver – Canada.
Ian  A.  Darby,  Tim  D.  Hewitson,  2007.  A
Survey  of  Cell  Biology  :  Fibroblast
Differentiation in Wound Healing and Fibrosis.  The    Royal  Melbourne Hopital and Department of Medicine. Laurel  M.  Morton,  Tania  J.  Phillip  ,  2016.
Wound Healing and Treating Wounds. Differential  diagnose  and  evaluation of chronic wounds. University School of Medicine, Boston. American
Academy of Dermatology. Matthias  Chiquet,  Christos  Katsaros,  Dimitris Kletsas,  2015.  Multiple  Function  of Gingival and Mucoperiostal Fibroblasts  in  Oral  Wound  Healing and Repair. Periodontology 2000, Vol. 68, 2015, 21- 40. John Wiley & Sons, Singapore. Nwokocha,  Blessing  A,  Agbagwa  IO  and Okoli BE., 2011. Comparative
Phytochemical  Screening  of  Jatropha L. Species in the Niger Delta.Research Journal  of  Phytochemistry.  5(2):  107-
114
Nicholas  S.  Greaves  et  al.,  2013.  Current Understanding  of  Molecular  and Cellular  Mechanism  in  Fibroplasia and Angiogenesis During Acute Wound Healing. Journal of Dermatological Science – Elsevier. P. Bainbridge, 2014. Wound Healing and The Role  of  Fibroblast.  Journal  of  Wound care.  Vol  22  no  8,  407  –  8/  410-12. Biomedical Chemistry, Cardiff University, UK. Ronald  G.  Shashy,  Marion  B.  Ridley,  2000. Aphthous  Ulcer  :  A  difficult  Review Article. Clinical entity Am.J. Otolaryngol 2000; 21: 389-393.
Saunders Company.
Salkutty  Thomas,  2016.  Pharmacognostic  and Phytochemical  Constituent  of  Leaves of  Jatropha  multifida  Linn  and Jatropha  podagrica  Hook.  Journal  of Pharmacognosy  and  Phytochemistry 2016; 5 (20: 243-246. India.
Sean  E.Gill,  William  C.  Parks,  2008.
Metalloproteinases and Their Inhibitor: Regulator of Wound
Healing.  Int.  J.  Biochem  Cell  Biol. 2008;  40  (6-7):  1334  –  1347. University  of  Washington,  Seattle, WA.
Silma  Rampadarath,  Daneshwar  Puchoa,
Vijayanti  Mala,  2014.  Antimicrobial, Phytochemical and
Larvicidal Properties  of  Jatropha  multifida  Linn.
Asian  Pasific  Journal  of  Tropical
Medicine.  Faculty  of  Agriculture, University of Mauritius – Elsevier.
S.  Kosasih et  al., 1989.  Labaditin,  A  Novel Cyclic Decapeptide from The Latex of
Jatropha  multifida .  Vol  256,  number 1,2, 91-96. Elsevier Science Publisher Biomedical Division.
Sophie  Van  Lithout,  Kapka  Miteva,  Carsten Tschope,  2014.  Crosstalk  Between Fibroblast  and  Inflammatory  Cells. Cardiovascular  Research  (2014)  102,
© (2017) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
258-259. European Society of Cardiology. Stephen T. Sonis, 2015. Genomic, Personalized Medicine and Oral Disease. Springer International Publishing Switzerland, 2015. Sule  Coskun,  Emine  Gulceri  Gulec,  Barbaros Balabanli,  2007.  Effect  of  Epidermal Growth  Factor  on  Lipid  Peroxidation and  Nitric  Oxide  Level  in  Oral Mucosal Ulcer Healing. A time course study  Surg today (2007) 37; 570-574
Gazi University, Ankara – Turkey. Sunday  O.  Akintoye,  Greenberg  MS.,  2014. Reccurrent  Aphthous  Stomatitis.  Dent
Clin N. Am 2005;49;31-47. School of
Dental Medicine, University Of Pennsylvania, Philadelphia. Shruti  Shukla et  al., 2012.  Plants  as  Potential
Sources of Natural Immuno modulators. Rev.Environ Sci Biotechnol,  Mini  review.  Springer, 2012. T.  Velnar,  T.  Bailey,  V.  Smrkolj,  2009.  The Wound Healing Process : An Overview  of  The  Cellular  and Molecular  Mechanism.  Journal  of
International  Medical  Research  2009 37: 1528. Published by SAGE. Xiao  Wen  Jiang et  al., 2013.  Double  Blind, Randomized, Controlled Clinical Trial of  The  Effects  of  Diosmetite  and
Basic  Fibroblast  Growth  Factor  Paste On  Treatment  of  Minor  Recurrent
Aphthous  Stomatitis.  Oral  Surg  Oral Med  Oral  Pathol  Oral  Radiol  2013; 116:570-575.  University  Of  South China, Chenzou, Hunan, China.