Jurnal Biologi Eksperimen dan Keanekaragaman Hayati Vol. 5 No. 2 Juni 2019: hal. 21-30 ISSN : 2338-4344
PENGARUH ARANG AKTIF, BENZILADENIN, DAN KINETIN TERHADAP PERTUMBUHAN TUNAS JATI SOLOMON ( Tectona grandis Linn. f) IN VITRO
Husen Hariadi 1) , Yusnita 1) , Melya Riniarti 1) , Dwi Hapsoro4 ) ,
1) Fakultas Pertanian, Universitas Lampung email:hariadihusen93@gmail.com email: yusnita.said@yahoo.com

## ABSTRACT
Tissue  culture  techniques  can  be  used  for  propagation  of  uniformaly  large  teak  solomon seeds.The  purpose  of  this  research  was  knowing  the  effect  of  activated  charcoal,  the addition of benzyladenine (BA) and combination of BA with 6-furfurylaminopurine (kinetin) to the growth of shoots of solomon teak in vitro.  The solomon teak explants used were single- stem  cuttings  from  aseptic  shoots  obtained  from  in  vitro  cultures.  This  research  was conducted  in  laboratory  with  complete  randomized  design  with  3  replications.    The experimental treatment was a single factor consisting of basic MS medium (Murashige and Skoog,  1962), with 6 treatments: MS without growth regulator  (control), MS without  growth regulator + 2 g/l activated charcoal, MS + 0,1 m/l BA , MS + 0,2 m/l BA, MS + 0,1 m/l BA + 0,1 m/l kinetin and MS + 0,2 m/l BA + 0,1 m/l kinetin.  Observation on the number of books/ shoots,  number  of  leaves/  shoots,  shoot/  bud  height  and  visual  apperance  of  culture  was taken  at  8  weeks  after  planting.    The  data  were  analyzed  for  variety  and  continue  the separation  of  the  LSD  at  5%  level.    The  results  showed  that  in  general,  all  six  treatments could  be  used  for  propagation  of  in  vitro  teak  solomon  (Tectona  grandis  Linn.  f)  and produced at least 6,22 books/ shoots every 8 weeks.  The best media were MS medium + 0,1 m/l BA and MS + 0,1 m/1 BA + 0,1 m/l kinetin, because it able to produce 7,78 books/ shoots.    The  highest  number of  leaves was  obtained  at  the  treatment  of  MS  +  0,1 m/l  BA, while the average shoots/ shoots produced were not different for all.
Keywords: Activated charcoal, benzyladenine, kinetin, teak solomon, tissue culture

## PENDAHULUAN
Industri  perkayuan  memiliki  kualitas dan nilai jual yang sangat tinggi. Kebutuhan akan kayu jati selalu meningkat  baik  di  dalam  maupun  luar negeri sedangkan populasi dan pasokannya  semakin  menipis  karena siklus  umur  panen jati konvensional  relatif lama (sekitar 45 tahun).  Untuk mengatasi masalah  tersebut,  diperlukan  tanaman  jati yang  memiliki  umur  panen  relatif  cepat dengan  keindahan  dan  kualitas  serat memadai yang dapat memenuhi
kebutuhan pasar (Balai
Penelitian Bioteknologi  dan  Sumberdaya  Genetik Pertanian, 2003).
Perbanyakan  tanaman  jati  umumnya dilakukan melalui biji atau bagian vegetatif seperti  stek  atau  sambungan.    Untuk menyediakan  tanaman  jati  yang  seragam secara genetika ( true-to-type ) dalam jumlah banyak, sulit dilakukan melalui cara
perbanyakan
konvensional (biji).
Perbanyakan  tanaman  jati  melalui  setek menghasilkan bibit yang true-to-type namun  tanaman  tumbuh  lambat.    Oleh karena  itu,  saat  ini  banyak  digunakan perbanyakan  tanaman  melalui  teknik kultur jaringan (Balai
Penelitian Bioteknologi  dan  Sumberdaya  Genetik Pertanian, 2003).
Kultur  jaringan  adalah  suatu  metode untuk mengisolasi bagian-bagian tanaman seperti  sel,  jaringan  atau  organ  serta menumbuhkannya secara aseptik di dalam  suatu  medium  buatan  eksplan sehingga bagian-bagian tanaman tersebut dapat memperbanyak diri dan beregenerasi  menjadi  tanaman  lengkap kembali (Yusnita, 2003).
Salah satu faktor penentu keberhasilan perbanyakan tanaman secara kultur jaringan  adalah  penggunaan  zat  pengatur pertumbuhan  (ZPT)  yang  tepat.  ZPT
adalah  senyawa  organik  bukan  hara  yang dalam konsentrasi rendah dapat mempengaruhi pertumbuhan dan perkembangan  tanaman.    ZPT  yang banyak  digunakan  dalam  teknik  kultur jaringan  adalah  golongan  sitokinin  dan auksin.    Penggunaan  sitokinin  dalam konsentrasi yang tepat dapat merangsang terbentuknya  tunas  pada  tanaman.    Jenis sitokinin  yang  banyak  digunakan  adalah benziladenin (BA) (Purwanta, 2015).
Perbanyakan jati dengan kultur jaringan umumnya dilakukan melalui pola regenerasi  percabangan  tunas  aksilar nodus  eksplan  potongan  batang  satu buku.  Setelah  dikulturkan  selama  6 –  8 minggu,  maka  akan  dihasilkan  tunas mempunyai  beberapa  buku.    Buku-buku pada  tunas  tadi  dapat  disubkulturkan menjadi eksplan-eksplan baru yang masing-masing akan menghasilkan tunas- tunas  beberapa  buku  lagi.    Demikian seterusnya  hingga  dihasilkan  banyak tunas (Yusnita, 2015).
Penelitian  ini  bertujuan  mempelajari pengaruh  pemberian arang  aktif (AC), benziladenin (BA) dan kombinasi benziladeni n + 6-furfurylaminopurine (kinetin)  terhadap  pertumbuhan  tunas (penggadaan  buku)  jati  solomon  ( Tectona grandis Linn f.) secara in vitro.

## KAJIAN TEORI
Perbanyakan jati solomon pada umumnya  dilakukan  secara  vegetatif, seperti  setek  pucuk/setek  batang  dan kultur  jaringan.    Metode  kultur  jaringan dikembangkan untuk membantu memperbanyak  tanaman.    Bibit  yang dihasilkan  dari  kultur  jaringan  mempunyai keunggulan, antara lain mampu menghasilkan  bibit  dalam  jumlah  besar dengan waktu singkat dan tidak membutuhkan tempat yang luas, kesehatan  dan  mutu  bibit  lebih  terjamin, kecepatan  tumbuh  bibit  lebih  cepat dibandingkan dengan perbanyakan secara konvensional, dan mempunyai sifat identik dengan induknya.
Regenerasi in  vitro dalam  penelitian  ini dilakukan  dengan  penggandaan  tunas (pertumbuhan tunas) jati Solomon
( Tectona  grandis Linn  f.) in  vitro yang berasal  dari  potongan  satu  nodal  eksplan tunas  jati  solomon in  vitro ,  kemudian mengkulturkan  tunas  jati  solomon in  vitro
ke dalam media yang mempunyai komposisi  yang  sesuai  untuk  proliferasi tunas  sehingga  diperoleh  penggandaan tunas  dengan  cepat.Setiap  tunas  yang dihasilkan dapat dijadikan sebagai sumber untuk  penggandaan  tunas  selanjutnya sehingga  diperoleh  tunas  yang  banyak dalam  waktu  yang  relatif  lebih  singkat (Yusnita,  2015).  Media  yang  digunakan untuk  perbanyakan  tunas  jati  solomon in vitro adalah  media  dasar  MS  ( Murashige and  Skoog ,  1962).Zat  pengatur  tumbuh didefinisikan  sebagai  senyawa  organik bukan nutrisi yang aktif dalam jumlah kecil yang  disintesiskan  pada  bagian  tertentu tanaman  dan  pada  umumnya  diangkut  ke bagian  lain  tanaman  dimana  zat  tersebut menimbulkan  tanggapan  secara  biokimia, fisiologis  dan  morfologis  (Wattimena, 1988).
Dua golongan ZPT yang penting dalam kultur  jaringan  yaitu  auksin  dan  sitokinin. Sitokinin  mempengaruhi  berbagai  proses fisiologi  di  dalam  tanaman.    Aktivitas utama  sitokinin  adalah  sitokinesis  atau pembelahan  sel.Aktivitas  ini  yang  menjadi kriteria utama untuk menggolongkan suatu zat  pengatur  tumbuh  ke  dalam  sitokinin (Wattimena, 1988).
Fungsi  ZPT  dalam  hal  ini  adalah membantu pembelahan dan perkembangan  sel  serta  meningkatkan metabolisme dalam tubuh eksplan.
Sitokinin  juga  berperan  dalam  mengontrol pembelahan  sel,  inisiasi  meristem  tunas, diferensiasi  daun  dan  akar,  biogenesis kloroplas,  dan  toleransi  stress.  Sitokinin bersifat memacu pembelahan sel sehingga  sering  digunakan  sebagai  zat perangsang  tumbuh  tunas.  Oleh  karena itu,  untuk  mempercepat  pertumbuhan tunas  jati  solomon in  vitro diperlukan pengaplikasian ZPT berupa sitokinin (Yusnita dan Hapsoro, 2002).
Sitokinin  yang  sering  digunakan  untuk mempercepat  pertumbuhan  tunas  adalah BAP/BA( 6-benzyl amino purine/6- benzyladenine )dankinetin ( 6- furfurylaminopurine ) merupakan zat pengatur  tumbuh  golongan  sitokinin  yang telah  banyak  digunakan  dalam  kultur jaringan.    Pemberian  sitokinin  (BA  dan kinetin)  dan  arang  aktif  (AC)  pada  1  L media dasar (Murashige and Skoog, 1962) diharapkan mampu meningkatkan keberhasilan  pertumbuhan  eksplan  jati solomon  ( Tectona  grandis Linn  f.) in  vitro
yang ditunjukkan oleh meningkatnya jumlah  buku  /tunas,  tinggi  tunas,  jumlah daun  /tunas,  jumlah  akar  /tunas,  jumlah kalus  /tunas  dan  penampilan  visual eksplan /tunas dengan pengamatan selama 8 minggu.
Pada  zat  pengatur  tumbuh  yang digunakan sitokinin (BA dan Kinetin) dapat merangsang pembelahan sel dan pembesaran  sel  pada  daun  yang  layu, perkembangan  kloroplas  dan  sintesis klorofil,  memacu  perkembangan  lanjut etioplas  menjadi  kloroplas  khususnya mendorong  pembentukan  grana,  setelah itu BA dan kinetin meningkatkan pembentukan  klorofil.    Arang  aktif  juga berperan  untuk  menyerap  racun  dan senyawa  inhibitor  yang  disekresikan  oleh planlet ke  dalam  media.    Selain  dapat menyerap  senyawa  etilen,  arang  aktif mampu  menyerap  senyawa  fenol  yang berasal dari eksplan (Yusnita, 2015).
Dari  kerangka  pemikiran  yang  telah dikemukakan, dapat  disimpulkan hipotesis sebagai berikut;
1.  Perbedaan  Peningkatan  konsentrasi
benzyladenine 0,1 mg/l dan benzyladenine 0,2 mg/l dapat
meningkatkan  pertumbuhan  tunas  jati solomon in vitro . 2.  Pemberian benzyladenine dan kinetin dapat meningkatkan pertumbuhan tunas jati solomon in vitro lebih banyak dibandingkan penggunaan BA tunggal. 3.  Peningkatan konsentrasi benzyladenine yang  dikombinasikan  dengan kinetin dapat meningkatkan pertumbuhan tunas jati solomon in vitro .

## METODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat
Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium  Ilmu  Tanaman,  Fakultas Pertanian,  Universitas  Lampung,  Bandar Lampung.  Penelitian ini dilaksanakan dari tanggal  2  Mei  2017  sampai  21  Desember 2017.

## Alat dan Bahan
Alat-alat digunakan pada tahap persiapan  dan  pembuatan  media  antara lain  timbangan  digital,  neraca  analitik, botol  kultur,  labu  takar,  labu erlenmeyer , pipet  tetes,  gelas  piala,  gelas  ukur, spatula,  sendok  spatula,  pH  meter,
kompor,  autoklaf  ( Budenberg  dan  Tomy ), panci, destillator ,  botol  aquades,  botol scott, magnetic  stirrer dan  alat  tulis  serta look  book  penilitian.    Selain  itu,  alat-alat yang  digunakan  pada  tahap  penanaman, seperti laminar  air  flow  cabinet (LAFC), landasan,  cawan  petri,  lampu  bunsen, hand  sprayer , shaker ,  kapas  steril,  tisu steril,  karet  steril  dan  alat-alat  diseksi ( scalpel , surigical blade , pinset).
Bahan tanaman yang digunakan dalam percobaan  ini  adalah  planlet  jati  klon ( Tectona  grandis Linn  f.).    Media  dasar yang  digunakan  adalah  berisi  garam- garam  MS  yang  diperkaya  dengan  20 gram/l gula ( sukrosa ), tiamin –HCl 0,1 mg/l, asam nikotinat 0,5 mg/l, piridoksin –HCl 0,5 mg/l, glisin 2,0  mg/l, asam  askrobat 0,5 mg/l  serta  dipadatkan  dengan  7  gram/l agar-agar, air aquades steril, alkohol 70%, KOH  1  N,  HCL  1  N,  dan  kertas  label. Sedangkan media perlakuan yang digunakan  berupa  media  MS  dengan penambahan  ZPT  yaitu  2  g/l  arang  aktif, 0,1 mg/l benzyladenine (BA ) dan 0,2 mg/l benzyladenine (BA ) dengan penambahan
berbagai konsentrasi kombinasi benzyladenine (BA)  dengan 0,1  mg/l 6-furfurylaminopurine (kinetin) sesuai perlakuan.

## Rancangan Penelitian
Rancangan  perlakuan  yang  digunakan adalah  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL) dengan  3  ulangan  dan  6  perlakuan. Masing-masing  unit  (satuan)  percobaan terdiri  dari  1  botol  kultur  yang  masing- masing  berisi  2  eksplan.    Penelitian  ini menggunakan  media  dasar  MS.    Media kontrol berisi garam-garam MS tanpa ZPT. Media  perlakuan  yang  digunakan  adalah media kontrol dan berupa 2 g/l arang aktif, 0,1  mg/l  dan  0,2  mg/l benzyladenine (BA ) dengan penambahan berbagai
konsentrasi  kombinasi benzyladenine (BA) dengan 0,1 mg/l 6- furfurylaminopurine (kinetin) sesuai
perlakuan.

## Analisis Data
Homogenitas  data  setiap  variabel  diuji dengan Uji Bartlet ( Bartlett's Test of Equal Variances ), Uji Analisis One-Way AOVdan Uji  Analisis  Anova  ( Analysis  of  Variance ), Uji Tukey’s ( Tukey's 1 Degree of Freedom
Test  for  Nonadditivity )  dan  rerata  jumlah setiap  variabel  yang  diamati.    Apabila asumsi terpenuhi, selanjutnya akan dilakukan analisis ragam.  Pemisahan nilai tengah  dilakukan  dengan  uji  beda  nyata terkecil  (BNT)  atau  ( LSD  All-Pairwise Comparison Test ) dengan taraf 5%.

## Sterilisasi Botol dan Alat
Semua  alat  yang  digunakan  dalam kegiatan  kultur  jaringan  harus  berada dalam  kondisi  aseptik.    Sterilisasi  botol sebagai tempat kultur merupakan langkah pertama  yang  harus  dilakukan.   Sterilisasi botol  dilakukan  dalam  2  tahapan.    Tahap pertama  botol  hasil  kultur  sebelumnya disterilisasi menggunakan autoklaf selama 30  menit  pada  suhu  121 o C  dan  tekanan 1,5  kg/cm 2 .    Selanjutnya  botol  dicuci dengan  menghilangkan  sisa  media  tanam sebelumnya dan direndam dalam air yang telah  dicampur  40  gram  detergen  dan  15 ml  desinfektan  selama  1  malam.    Tahap kedua,  botol  yang  sudah  direndam  dicuci bersih  seluruh  bagiannya  dan kertas  label yang tertera pada botol dihilangkan.  Botol yang  sudah  bersih  dibilas  menggunakan air  mengalir  lalu  direndam  air  mendidih selama  15  menit  hasil  penyulingan  alat destilator.
Botol hasil rendaman kemudian ditiriskan  dan  ditutup  dengan  plastik menggunakan  karet.    Sterilisasi  tahap akhir  dilakukan  menggunakan  autoklaf selama 30 menit pada suhu 12 o Ctekanan 1,5  kg/cm 2 .    Alat  yang  digunakan  berupa alat  diseksi  (pinset  dan scalpel ),  cawan petri, keramik, kapas, dan gelas ukur.  Alat diseksi, cawan petri, dan landasan (keramik)  yang  sudah  bersih  dibungkus menggunakan  kertas  lalu  dimasukkan  ke dalam  plastik  tahan  panas.    Kapas  bersih dimasukkan  ke  dalam  botol  kultur  steril untuk  diautoklaf    yang  nantinya  akan digunakan  dalam  proses  subkultur  atau menanam eksplan.
Seluruh alat disterilisasi menggunakan autoklaf selama  30  menit  pada  suhu  121 o C  dan tekanan 1,5 kg/cm 2 .

## Pembuatan Media
Penelitian  ini  menggunakan  media dasar  MS  ( Murashige  and  Skoog ,  1962). Terdapat 2 macam media yang digunakan yaitu  media  kontrol  dan  media  perlakuan. Media  kontrol  berisi  garam-garam  MS tanpa  ZPT.    Media  perlakuan  yang
digunakan  adalah  media  kontrol  berupa penambahan  2  g/l  arang  aktif,  0,1  mg/l dan  0,2  mg/l benziladenin (BA ) dengan penambahan berbagai konsentrasi kombinasi benzyladenine (BA)  dengan
0,1  mg/l 6-furfurylaminopurine (kinetin) sesuai perlakuan.
Pembuatan  media  dilakukan  dengan melarutkan  garam-garam  MS;  2  g/l  arang aktif  ,  0,1  mg/l  BA;  0,2  mg/l  BA,  0,1  mg/l kinetin  dan sukrosa hingga  homogen.
Larutan  yang  telah  homogen  kemudian ditera  dengan  menambahkan  aquades menggunakan  labu  ukur  1  L.    Stok  gelas ukur dan labu untuk pembuatan media MS 1  liter  dan  lemari  es showcase tempat penyimpanan  stok  larutan  agar  tetap sterilisasi.    Setelah  formulasi  media  MS dan  hormon  zat  pengatur  tumbuh  sudah disiapkan.    Selanjutnya  pH-media  diatur menjadi  5,8  jika  pH  kurang  dari  5,8  maka diberi  penambahan  KOH  1  N  sedangkan jika pH lebih dari 5,8 maka diberi HCl 1 N Setelah itu ke dalam media ditambahkan  7  g/l  bubuk  agar-agar kemudian media dimasak hingga mendidih lalu  dimasukkan  ke  dalam  botol-botol kultur  sebanyak  30  botol  dan  setiap  botol berisi  30  ml.    Botol  yang  berisi  media ditutup  dengan  plastik  bening  kemudian diikat  dengan  karet  dan  disterilisasi dengan  autoklaf  selama  7  menit  pada suhu  121ºC  dan  tekanan  1,5  kg/cm 2 . Setelah sterilisasi berakhir media dikeluarkan dari autoklaf, didiamkan hingga  dingin,  lalu  disimpan  dalam  ruang kultur.

## Penanaman Eksplan
Penanaman  eksplan  dilakukan  di dalam  LAFC  ( laminar  air  flow  cabinet ).
Eksplan  berupa  tunas  satu  buku  ( nodal explant )  dengan  ukuran  1  x  1,5  cm. Setiap  botol  berisi  2  eksplan.    Botol-botol kultur  tersebut  kemudian  diletakkan  pada rak  kultur  ( growth  chamber )  dalam  ruang terang  dan  ber-AC  ( air  conditioner ) dengan suhu ruang 25ºC + /- 2 ºC  selama 2  bulan.    Pencahayaan  di  ruang  kultur menggunakan  lampu  fluoresens  (TL) dengan  kuat  penerangan  antara  1000 hingga  2.000  lux  secara  terus  menerus dan  fotoperiodisitasnya  16  jam  terang/  8 jam gelap setiap hari.

## Pengamatan
Pengamatan dilakukan terhadap jumlah  buku-buku  /tunas,  tinggi  tunas /tunas,  jumlah  daun  /tunas,  penampilan visual  kultur  pada  umur  8  minggu  setelah penanaman  eksplan.    Variabel  yang diamati  adalah:  buku-buku  /tunas,  tinggi tunas dihitung menggunakan kertas milimeterblock  dan  penggaris,  jumlah daun /tunas menggunakan
kaca pembesar,  dan  penampilan  visual  kultur diamati dengan mengambil gambar eksplan  menggunakan  kamera  DSLR (lensa  fix  dan  lensa  tele)  sampai  8  MST pendokumentasikan  ini  dilakukan  sebagai penunjang  hasil  pengamatan  variabel lainnya.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Perkembangan umum kultur
Eksplan berupa potongan batang satu buku  tanpa  daun  yang  ditanam  pada media perlakuan berbeda
mulai menunjukkan  pertumbuhan  mata  tunas setelah  berumur  kurang  lebih  1  minggu setelah  tanam.    Pada  minggu-minggu berikutnya  hingga  minggu  ke  8  setelah tanam,  eksplan  menunjukkan  respons pertumbuhan  lebih  lanjut  yang  berbeda- beda terhadap 6 perlakuan yang dicobakan.
Persentase  pertumbuhan  tunas  Jati Solomon In Vitro selama 8 MST.
Tingkat  persentase  eksplan  atau  tunas hidup  pada  tunas  jati  solomon  dengan  6 perlakuan  yang  dicobakan  menunjukan hasil 100% terhadap pada semua percobaan  yang  digunakan  terhadap  9 botol pra-perlakuan yang dicobakan dengan  selama  pengamatan  8  minggu. Persentase  eksplan  hidup  di  media  6 perlakuan 8 MST dapat dilihat pada Tabel 1.
Rekapitulasi  Hasil  Analisis  Ragam Pengaruh  media  Arang  Aktif,  BA  dan Kinetin  terhadap  pertumbuhan  tunas Jati Solomon In Vitro.
Hasil rekapitulasi ragam dapat dilihat pada Tabel  2.    Dari  Tabel  2  terlihat,  bahwa perlakuan ZPT yang
dicobakan berpengaruh  nyata  terhadap  €  jumlah buku  /tunas  dan  €  jumlah  daun  /tunas,
namun  tidak  berpengaruh  terhadap  € tinggi tunas pada umur 8 MST
Tabel  1 . Persentase  eksplan  hidup  di  Media
Pra-pelakuan 8 MST. Media ∑ Eksplan awal ∑ Eksplan hidup % Eksplan hidup MS 0 9 9 100 MS + 2 g/l AC 9 9 100 MS + BA 0,1 mg/l 9 9 100 MS + BA 0,2 mg/l 9 9 100 MS + BA 0,1 mg/l + Kinetin 0,1 mg/l 9 9 100 MS + BA 0,2 mg/l + Kinetin 0,1 mg/l 9 9 100 Keterangan :
MS       : Murashige and Skoog, 1962 Kinetin : 6-furfurylaminopurine BA       : Benzyladenine AC       : Arang Aktif (Carbon Aktif)

## Jumlah Buku / Tunas
Hasil  uji  beda  nyata  terkecil  (BNT) 0,05 menunjukkan bahwa perlakuan MS 0 (tanpa  ZPT)  menghasilkan  €  jumlah  buku /tunas yang palingsedikit yaitu antara 6,22 buku /tunas (Gambar 1).  Perlakuan MS + BA  0,1  mg/l  dan  MS  +  BA  0,1  mg/l  + kinetin 0,1 menghasilkan buku-buku paling banyak dibandingkan dari perlakuan lainyaitu  7,44  dan  7,78  buku  /tunas. Sedangkan,  perlakuan  MS  +  BA  0,2  mg/l dan  MS  +  BA  0,2  mg/l  +  kinetin  0,1  mg/l menghasilkan  jumlah  buku  yang  lebih banyak dibandingkan kontrol tanpa zpt.
Tabel  2 . Rekapitulasi  Hasil Analysis  of
Variance Sumber Keragaman Signifikasi Pada Variabel € Jumlah Buku /tunas € Tinggi Tunas € Jumlah Daun /tunas Perlakuan * tn *
Keterangan :
* = Berbeda nyata pada taraf 5% tn = Tidak berbeda nyata pada taraf 5%
Gambar 1.  Rata-rata jumlah buku-buku /tunas pada kultur in vitro jati
solomonumur  8  MST  (minggu setelah pengamatan). Nilai tengah  yang  diikutidengan  huruf yang  sama  berbeda  nyata  pada taraf  dengan  uji  BNT  pada  taraf 5%.

## Tinggi Tunas
Hasil  analisis  ragam  menunjukkan bahwa  perlakuan  arang  aktif,  BA  dan kinetin  tidak  berpengaruh  nyata  terhadap tinggi  tunas  jati  solomon in  vitro setelah dikulturkan  selama  8  minggu,  kisaran tinggi tunas antara 10,92 cm hingga 12,61 cm.
Gambar 2 . Rata-rata jumlah tinggi tunas  pada kultur in  vitro jati  solomon  umur 8 MST (minggu setelah pengamatan).  Nilai tengah yang diikuti  dengan  huruf  yang  sama tidak  berbedanyata  pada  taraf dengan uji BNT pada taraf 5%.

## Jumlah Daun / Tunas
Hasil  uji  beda  nyata  terkecil  (BNT) 0,05  dapat  dilihat  pada  Gambar  3, menunjukkan  bahwa  perlakuan  MS  +  BA 0,1  mg/l  menghasilkan  jumlah  helai  daun paling banyak yaitu 15 helai € daun /tunas dibandingkan  perlakuan  lainnya  yang menghasilkan  kisaran  12,33 –  13,89  helai daun /tunas.
Penampilan Visual Eksplan Penampilan visual kultur pertumbuhan dan perkembangan  tunas-tunas  jati  solomon yang  diamati  pada  8  minggu  setelah dikulturkan Gambar 4.
Gambar 3.  Rata-rata jumlah tinggi tunas pada kultur in  vitro jati  solomon  umur  8 MST (minggu setelah pengamatan).    Nilai  tengah  yang diikuti  dengan  huruf  yang  sama tidak  berbedanyata  pada  taraf dengan uji BNT pada taraf 5%.
Gambar  4.Salah  satu  ulangan  penampilan kultur  tunas  jati  solomon in  vitro pada 6 perlakuan yang dicobakan pada umur 8 MST .
Keterangan : A  = Media MS tanpa ZPT B  = Media MS + 2 g/l Arang Aktif C  = Media MS + Benziladenin 0,1 mg/l D  = Media MS + Benziladenin 0,2 mg/l
E  =  Media  MS  +  Benziladenin  0,1  mg/l + Kinetin 0,1 mg/l
F  =  Media  MS  +  Benziladenin  0,2  mg/l
+ Kinetin 0,1 mg/l

## PEMBAHASAN
Perbanyakan  tanaman  dengan  teknik kultur jaringan tanaman dapat menghasilkan tanaman yang secara genetik  sama  dengan  induknya  serta waktu  yang  dibutuhkan  lebih  cepat  Pada hasil pengamatan 8 MST dari 6 perlakuan yang  dicobakan  berpengaruh  nyata  pada €  jumlah  buku  /tunas  dan  €  jumlah  daun /tunas  tetapi  tidak  berpengaruh  nyata pada € tinggi tunas.  Hal ini diduga karena kandungan  nitrogen  yang  tinggi  pada media  1L  MS.    Kandungan  nitrogen  pada media  1L  MS  sebesar  2.816  mg/l. Menurut  Yusnita  (2003),  dalam  kultur
6,22c 6,56bc 7,78a 6,67b 7,45a 6,67b 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 MS 0 MS + AC MS + BA 0,1 MS + BA 0,2 MS + BA 0,1 + KIN 0,1 MS + BA 0,2 + KIN 0,1 J um la h buku per t unas BNT 0,05 = 0,4 11,26a 10,92a 12,61a 11,74a 11,09a 12,40a 0 5 10 15 MS 0 MS + AC MS + BA 0,1 MS + BA 0,2 MS + BA 0,1 + KIN 0,1 MS + BA 0,2 + KIN 0,1 T inggi t unas (c m ) BNT 0,05 = 2,99 13,11ab 13,22ab 15,00a 13,89ab 12,58b 12,33b 0 5 10 15 20 MS 0MS + AC MS + BA 0,1 MS + BA 0,2 MS + BA 0,1 + KIN 0,1 MS + BA 0,2 + KIN 0,1 J um la h daun per t unas (helai ) BNT 0,05 = 2,37
jaringan,  proses  pertumbuhan  maupun morfogenesis  eksplan  yang  dikulturkan sangat  dipengaruhi  oleh  ketersediaan nitrogen.  Nitrogen merupakan unsur hara makro  esensial  bagi  tanaman  serta penyusun utama protein dan asam amino, unsur  ini  juga  terdapat  pada  klorofil tanaman.    Apabila  jumlah  nitrogen  lebih banyak dibandingkan dengan unsur lainnya, maka tanaman akan
menghasilkan  protein  lebih  banyak  dan daun akan tumbuh lebih lebar.
Selain  kandungan  nitrogen,  juga diduga bahwa media dasar MS mengandung komponen unsur hara makro dan  mikro  lebih  lengkap.    Pembesaran tunas  membentuk  struktur  organ  tanaman (tinggi  tanaman/batang,  daun  dan  akar) adalah fase morfogenesis. Fase morfogenesis adalah proses pertumbuhan dan  diferensial  sel-sel  individu  menjadi jaringan  kemudian  menjadi  organ  dan akhirnya  menjadi  organisme  yang  dapat dikenali.    Proses  ini  dipengaruhi  oleh faktor-faktor  lingkungan,  salah  satunya adalah  cahaya.    Morfogenesis  pada tanaman terutama terjadi melalui pertumbuhan diferensial (Yusnita, 2010).
Hasil penelitian menunjukkan bahwapada  perlakuan  MS  +  BA  0,1  mg/l dan  MS  +  BA  0,1  mg/l  +  Kinetin  0,1 menghasilkan  buku-buku  /tunas  paling banyak  dibandingkan  dari  perlakuan  lain yang  berkisar  antara  7,44  hingga  7,78dan jumlah daun sebanyak 12,56 hingga 15,00 helai daun. Hal ini dikarenakan penambahan  BA  secara  eksogen  pada konsentras  itertentu  dapat  meningkatkan konsentrasi  sitokinin  endogen  sehingga pertumbuhan dan perbanyakan bukudan daun dapat menghasilkan jumlah  yang  lebih  banyak.  Yusnita(2015) menyebutkan  bahwa  apabila  konsentrasi sitokinin  lebih  besar  dari  auksin  maka akan  menstimulasi  pertumbuhan  dan perbanyakan buku-buku dan daun.  Selain itu,  Sandra  (2013)  menyebutkan  bahwa sitokinin  dapat  menghambat  dominansi apikal  dan  merangsang  proliferasi  tunas ketiak  dan  munculnya  tunas-tunas  ketiak baru  sehingga  secara  signifikan  dapat meningkatkan jumlah tunas ketiak. Semakin banyak tunas ketiak yang muncul akan  meningkatkan  jumlah  buku  pada eksplan  sehingga,  peningkatan  jumlah tunas berbanding lurus dengan peningkatan jumlah buku.
Setiap  tumbuhan  memiliki  kandungan
ZPT endogen pada kadar yang berbeda di dalam tubuhnya.
Abbas (2011) menyebutkan bahwa BA merupakan salah satu jenis sitokinin yang dibutuhkan dalam multiplikasi  tunas  dari  jaringan  dewasa dalam  medium  MS.    Menurut  Yusnita (2015) benziladenin (BA)  merupakan salah  satu  jenis  sitokinin  yang  berperan dalam proses pembelahan sel.
Pemberian BA secara eksogen menyebabkan  peningkatan  konsentrasi sitokinin endogen sehingga dapat meningkatkan aktivitas pembelahan sel .
Hasil  analisis  ragam  menunjukkan bahwa  perlakuan  arang  aktif,  BA  dan kinetin  tidak  nyata  terhadap  pada  tinggi tunas  jati  solomon,  yang  menghasilkan tinggi  tunas  berkisar  antara  10,92  cm hingga  12,61  cm  tinggi  tunas  dari  6 perlakuan  yang  dicobakan.    Nursyamsi dkk (2007) menunjukkan perlakuan berbagai  konsentrasi  BAP  ( Benzyl  Amino Purin ) berpengaruh sangat nyata terhadap tinggi tunas, memperlihatkan bahwa konsentrasi  0,5  ppm  BAP  memberikan hasil  yang  terbaik  yaitu  mencapai  tinggi tunas  rata-rata  7,2  cm  dan  tidak  berbeda nyata  dengan  perlakuan  0,10  dan  0,15. Hal  ini  berarti,  pemberian  BAP  dengan konsentrasi rendah, sudah dapat memacu pertumbuhan tinggi tunas pada planlet jati. Pertumbuhan tinggi tunas menujukkan ciri keberhasilan  pembiakan  kultur  jaringan, dan  semakin  tinggi  tunas  suatu  planlet maka  lebih  banyak  ruas  yang  dapat diperoleh  untuk  dijadikan  sebagai  stek mikro, untuk tahap multiplikasi bibit.
Berdasarkan  hasil  uji  BNT  0,05  pada tunas jati solomon menunjukkan bahwapada  perlakuan  BA,  kinetin  dan arang  aktif  yang  dicobakan  berpengaruh nyata  terhadap  €  jumlah  daun  /tunas. Hasil  uji  beda  nyata  terkecil  (BNT)  0,05 menunjukkan  bahwa  perlakuan  MS  +  BA 0,1  mg/l  +  kinetin  0,1  mg/l  dan  MS  +  BA 0,2  mg/l  +  kinetin  0,1  mg/l  menghasilkan jumlah  daun  /tunas  yang  paling  sedikit yaitu  12,33  helai  dan  12,56  helai  daun. Sedangkan,  perlakuan  MS  +  BA  0,1  mg/l dan  MS  +  BA  0,2  mg/l  menghasilkan jumlah  daun  /tunas  yang  lebih  banyak dibandingkan  perlakuan  lain  yaitu  13,89 helai  dan  15,00  helai  daun.    Pada perlakuan MS 0 dan MS + 2 g/l arang aktif menghasilkan  jumlah  daun  /tunas  yaitu 13,11  helai  dan  13,22  helai  daun  lebih
banyak dari perlakuan MS + BA 0,1 mg/l + kinetin  0,1  mg/l  dan  MS  +  BA  0,2  mg/l  + kinetin 0,1 mg/l dan lebih sedikit dibandingkan  pada  perlakuan  MS  +  BA 0,1  mg/l  dan  MS  +  BA  0,2  mg/l  (Gambar 3).
Hasil  percobaan  menunjukkan  bahwa tunas-tunas  yang  dihasilkan  pada  media perlakuan yang menggunakan zat pengatur tumbuh 1L MS, MS + BA tunggal 0,1  dan  0,2  dan  MS  +  BA  0,1  mg/l  + kinetin 0,1 mg/l dengan MS + BA 0,2 mg/l +  kinetin  0,1    mg/l  menghasilkan  tunas- tunas  yang  lebih  tinggi  dibandingkan dengan  perlakuan  MS  0  tanpa  zat pengatur  tumbuh  dan  2  g/l  AC.    Namun demikian,  tunas-tunas  yang  dihasilkan pada media dengan penambahan 2 g/l AC dan  MS  0  tanpa  ZPT  jauh  lebih  pendek daripada tunas-tunas tunggal yang dihasilkan pada media dasar
menggunakan BA tunggal dan kombinasi.
Menurut Yusnita (2004) dalam perbanyakan  tanaman in  vitro ,  perolehan tunas  adventif  atau  tunas  aksilar  yang paling banyak karena menggunakan sitokinin  pada  konsentrasi  tertentu  tidak berarti  yang  terbaik,  karena  seringkali tunas-tunas  yang  dihasilkan  mempunyai internode  yang  pendek  dengan  kualitas yang  kurang  bagus.    Dalam    percobaan ini,  tunas-tunas  jati  solomon  yang  pendek hasil  dari  perlakuan  penggunaan  2  g/l  AC dan  MS  0  tanpa  ZPT,  dapat  tumbuh normal  memanjang  ketika  disubkultur  ke media dasar dengan penambahan BA dan kombinasi  BA  dengan  kinetin.    George and  Klerk  (2008)  juga  membahas,  bahwa untuk  mengatasi  masalah  kualitas  tunas yang  kurang  bagus  dengan  buku-buku yang  pendek  dapat  dilakukan  dengan subkultur  ke  media  dengan  konsentrasi sitokinin  lebih  rendah  atau  ke  media dengan penambahan ZPT.
Pada  akhir  minggu  ke  8,  tunas  yang ditanam  pada  media  1L  MS  dari  6 perlakuan yang dicobakan dengan disubkultur  ke  media  MS  +  2  g/l  AC. Kemudian pada minggu-minggu selanjutnya setelah tanam pada media MS +  2  g/l  AC,  tunas-tunas  pendek  hasil  6 perlakuan  yang  dicobakan  menunjukkan pertumbuhan    yang  normal  dengan  jarak internode  yang  awalnya  rapat  menjadi merenggang  sehingga  tanaman  menjadi tinggi,  lebar  daun  menjadi  lebih  lebar  dan tunas  yang  berakar  panjang.    Hal  ini
diduga  karena  media  mengandung  arang aktif yang memberikan efek gelap sehingga dapat menstimulasi pertumbuhan dan perkembangan akar dan fungsi  dari  arang  aktif  sebagai  absorben yaitu  penyerapan  substansi  penghambat pertumbuhan yang diproduksi oleh eksplan atau media (Hapsoro dan Yusnita, 2015).
Dalam percobaan yang telah dilakukan bahwa penambahan 2 g/l arang aktif  mampu  meningkatkan  jumlah  dan panjang  akar,  menyebabkan  penyerapan air  dan  nutrisi  yang  ada  pada  media menjadi  optimal  sehingga  menghasilkan banyaknya  akar  primer  dan  penampilan visual  tunas  atau  tanaman  lebih  baik dibandingkan  tanpa  penambahan  arang aktif.    Kesulitan  dalam  penggunaan  arang aktif  pada  media  kultur  adalah  selain menyerap  senyawa-senyawa  yang  tidak diinginkan,  arang  aktif  mungkin  juga menyerap  senyawa-senyawa  yang  tidak diinginkan,  arang  aktif  mungkin  juga menyerap hormon-hormon yang dibutuhkan,  vitamin  atau  ion-ion  metal seperti  Cu +2 dan  Zn +2 .    Penggunaan arang  aktif  menyebabkan  para  peneliti tidak  dapat  memastikan  secara  tepat kuantitas  setiap  komponen  media  yang tersedia  bagi  tanaman  (Thomas,  2008). Constantin  (1977)  dalam  Sanputawong dkk., (2015) menyatakan bahwa kapasitas penyerapan  arang  aktif  menunjukkan pengaruh terhadap komposisi media kultur dalam  cara  yang  selektif,  dimana  thiamin- HCl dan asam nikotinat dihilangkan dalam media  sedangkan  inositol  dan  sukrosa tidak.    Meskipun  demikian  dari  berbagai laporan yang telah dipublikasikan sehubungan  dengan  penggunaan  arang aktif  dalam  kultur  jaringan  tanaman  hasil- hasil penelitian lebih banyak yang berpengaruh  positif  dibandingkan  dengan yang negatif (Thomas, 2008).
Sebagian eksplan yang tidak responsif
mengalami
pencoklatan
( browning ).    Pencoklatan  ini  terjadi mungkin  karena  kandungan  senyawa fenol  pada  eksplan  cukup  tinggi.    Sintesis senyawa  fenolik  dipicu  oleh  pelukaan pada eksplan yang menyebabkan keluarnya isi sel yang rusak dan menyebabkan kematian dini sel-sel tertentu di sekitar sel yang rusak (Yusnita, 2015).    Suyanti  dan  Supriadi  (2008) menyatakan bahwa warna coklat
menandakan  sintesis  senyawa  fenolik yang dipacu oleh cekaman atau gangguan pada  sel  tanaman.    Senyawa  ini  sangat toksik bagi tanaman dan dapat menghambat pertumbuhan. Menurut Yusnita (2015), untuk mengurangi  pembentukan  fenol  yang paling  umum  adalah  dengan  mentransfer eksplan ke media baru atau subkultur dan pencoklatan  pada  eksplan  dapat  diatasi dengan perendaman eksplan dalam larutan  antioksidan  seperti  larutan  asam askorbat dan asam sitrat sebelum dilakukan sterilisasi eksplan.
Hasil  pengamatan  menunjukkan  bahwa semua perlakuan yang dicobakan menyebabkan  tunas-tunas  yang  terbentuk semua  membentuk  kalus  yang  sehat  dan besar,  karena  dalam  proses  pemotongan eksplan dan penanaman eksplan dilakukan  dengan  steril  dan  aspetik sehingga  menghasilkan  kalus-kalus  yang sehat  baik dari pertumbuhan kalus,  warna kalus  dan  tekstur  kalus.    Menurut  Lakitan (2007), pertumbuhan eksplan pada masing-masing
media perlakuan
memberikan  pengaruh  yang  berbeda terhadap  pertumbuhan  kalus,  warna,  dan tekstur kalus.

## Kesimpulan
Berdasarkan percobaan yang telah diujikan, maka didapatkan simpulan sebagai berikut;
1.  Pemberian  zat  pengatur  tumbuh  BA atau  BA  dan  kinetin  menyebabkan peningkatan jumlah buku /tunas secara nyata,  sedangkan  pemberian  arang aktif  tidak berpengaruh nyata terhadap jumlah buku /tunas.
2.  Peningkatan  konsentrasi  BA  dari  0,1 –
0,2  mg/l  baik  tanpa  kinetin  maupun dengan kinetin menyebabkan penurunan jumlah buku /tunas 3.  Jumlah  buku  /tunas  terkecil  dihasilkan oleh,  yaitu  6,22  buku  /tunas  pada konsentrasi  media  MS  tanpa  ZPT, sedangkan jumlah buku /tunas terbanyak  dihasilkan  oleh  perlakuan media  MS  ditambahkan  dengan  0,1 mg/l BA atau 0,1 mg/l BA dan 0,1 mg/l kinetin, yaitu 7,78 buku /tunas.

## DAFTAR PUSTAKA
Abbas,  B.    2011. Prinsip  Dasar  Teknik Kultur Jaringan .  Alfabeta.  Bandung.  123 – 143 hlm.
Abidin  dan  Zaenal.    1985. Dasar-Dasar Tentang  Zat  Pengatur  Tumbuhan. Bandung.    Buku  Angkasa.  113 – 118 hlm.
Balai Penelitian Bioteknologi dan Sumberdaya Genetik Pertanian. 2003. Perbanyakan  Bibit  Jati  Melalui Kultur  Jaringan .    Bogor.    Jawa Barat.  78 – 102 hlm.
George,  E.F.,  M.A.  Hall  &  G.J.  De  Klerk. 2008. Plant Propagation by Tissue Cultur  3rd  Edition .    Springer,
Dordrecht, Netherlands: 501p.
Kasutjianingati.  2004.    Pembiakan  mikro berbagai  genotipe  pisang  ( Mus a spp.)    dan  potensi  bakteri  endofitik terhadap  layu  fusarium  ( Fusarium oxysporum f.sp. cubense ).  (Tesis). Sekolah  Pascasarjana.    Institut Pertanian Bogor. Bogor.
Lakitan,  B.  2007. Dasar-dasarFisiologi Tumbuhan . Raja Grafindo
Persada.  Jakarta.  244 hlm.
Lina, F.R., E. Ratnasari., dan R. Wahyono.
2013 .    Pengaruh    6-benzylamino purine    (BAP)  dan  6-furfuryl  amino purine  (Kinetin)  pada  Media  MS terhadap  Pertumbuhan  Eksplan Ujung  Apikal  Tanaman  Jati  secara In Vitro .  Jurnal: Universitas Negeri Surbaya.
Murashige  T.  dan  F.  Skoog.    1962. A revised medium  for  rapid  growth  and  bio assay  with  tobacco  tissue  culture . Jurnal Department Botany. University  of  Wisconsin.Wisconsin. 473-497p.
Rahardja,  P.C.    1994. Kultur  Jaringan.
Teknik Perbanyakan Tanaman Secara  modern .    Buku  Penebar Swadaya.  Jakarta. 143 – 151 hlm.
Rusyadi.    2000. Multiplikasi  Tunas Tanaman  Melinjo  Melalui  Kulturin vitro .Balai  Penelitian  Bioteknologi dan Sumberdaya Genetik Pertanian.  Bogor. Salisbury,  F.  B.,  dan  C.  W.  Ross.    1995. Fisiologi Tumbuhan Jilid 3 . Bandung:  Penerbit ITB. 335p.
Sandra,  E.  2013. Cara  Mudah Memahami  dan  Menguasai  Kultur Jaringan .  IPB Press.  Bogor.
Sanputawong,  S.,  T.  Raknim,  and  S. Benchasri.    2015. Influence  of Different  Type  of  Culture  Media and  Activated  Charcoal  on  Callus Induction  and  Shoot  Multiplication of  Cadaminelyrata .    Journal  of Agricultural
Technology11(8):
1697-1704. Sugi.  P,  Pujo.  S,  Hesti.  D.  S,  dan  Cahyo. S.    2015. Budidaya  dan  Bisnis Kayu Jati . Buku Penebar Swadaya.  Jakarta.  107 hlm. Suhartati, dan Nursyamsi. 2007. Pengaruh  komposisi  media  WPM dan  BAP  pada  pertumbuhan  bibit jati  (Tectona  grandis)  dengan perbanyakan  secara  invitro .    Info Hutan 4(4): 379-384.
Sulistiani,  E  dan  Ahmad,  Y.S.    2012.
Produksi Bibit Tanaman dengan menggunakan Teknik Kultur Jaringan .    Bogor:  Seameo  biotrop ( southeast  asian  centre  for  tropical biology ).
Suyanti  dan  A.  Supriadi.    2008.    Pisang, Budidaya, Pemasaran dan Prospek
Pasar .    Buku  Penebar  Swadaya. Jakarta.  128 hlm.
Thomas,  T.  D.    2008. The  Role  of Activated Charcoal  in  Plant  Tissue  Culture.
Biotechnology  Advances .    26:618-
631.
Wattimena, G. A. 1998. Zat PengaturTumbuh Tanaman . Institut  Pertanian  Bogor.  Bogor. 143 hlm.
Yusnita.    1990.    “ Micropropagation  of White  Flowering  Eastern  Redbud ( Cercis  canadensis L.  Var.  Alba)”,
Thesis Master of Science ,
Unversity  of  Kentucky,  Lexington, USA.
Yusnita.  2003. Kultur Jaringan Cara Memperbanyak  Tanaman  Secara Efisien. Buku  Agromedia  Pustaka. Jakarta.  105 hlm.
Yusnita  dan  D.  Hapsoro.    2002. Teknik Kultur  Jaringan  untuk  Pembiakan Tanaman.  Makalah  training  kultur jaringan .    Institut  Pertanian  Bogor.
Bogor.  10-21 hlm.
Yusnita., W. Pungkastiani, dan D. Hapsoro. 2011. In Vitro Orgaanogenesis of Two Sansevieria  Cultivars  on  Different Concentrations  of  Benzlyadenine . Agrivita 33 : 147 – 153.
Yusnita,  2015. Kultur Jaringan Tanaman Sebagai Teknik Penting Bioteknologi Untuk Menunjang Pembangunan  Pertanian. Orasi
Ilmiah  Guru  Besar  Bioteknologi Pertanian  Unversitas  Lampung. Aura Publishing.  Lampung.  23-54 hlm.