## Jurnal Ilmiah Biologi Eksperimen dan Keanekaragaman Hayati
(J-BEKH)
Volume 9, Issue 2, Nov 2022
Article History Received: Jun 04 2022 Accepted: Nov 11 2022
Salt Stress Resistance of In Vitro Selection Results-Moon Orchid (Phalaenopsis amabilis (L.) Blume)
(Cekaman Garam (NaCl) Secara in Vitro Terhadap Resistensi Anggrek Bulan ( Phalaenopsis amabilis (L.) Blume) Hasil Seleksi in Vitro )
Dwi Septiani 1 , Endang Nurcahyani 2 *, Yulianty 1 , Mahfud 1
1 Program Studi Biologi, Jurusan Biologi FMIPA Universitas Lampung 2 Program Studi Biologi Terapan, Jurusan Biologi FMIPA Universitas Lampung *Corresponding author: endang.nurcahyani@fmipa.unila.ac.id Abstrak Abstract Anggrek  bulan  adalah satu  jenis anggrek  yang  banyak diminati  karena  mempunyai  keindahan  yang  dapat dilihat  dari  ukuran,  bentuk,  dan  warna – warni bunganya sehingga menjadikan produksi anggrek bulan meningkat,  tetapi  terdapat  kendala lahan  pertanian yang  semakin  luas  dialihfungsikan  ke  sektor  lainnya dan lahan kurang produktif akibat cekaman garam atau salinitas.  Salah  satu  cara  alternatif  yang  efisien  dan efektif  untuk  mengatasi  cekaman  garam  yaitu  dengan menggunakan varietas yang toleran terhadap cekaman garam  dengan  agen  seleksi  yaitu  NaCl.  Penelitian  ini bertujuan untuk  menentukan  tingkat  konsentrasi NaCl yang  toleran terhadap anggrek bulan  dan menentukan tingkatan  resistensi  anggrek  bulan  terhadap  cekaman garam  (NaCl)  secara  in  vitro.  Rancangan  percobaan pada  penelitian  ini  menggunakan  Rancangan  Acak Lengkap dengan 5 taraf konsentrasi NaCl 0 % ; 0,25 % ; 0,50 % ; 0,75 %, dan 1 % pada medium Vacin and Went. Parameter  yang  diamati  yaitu,  persentase  jumlah planlet,  visualisasi  planlet,  tinggi,  jumlah  daun,  indeks stomata,  berat  basah,  kandungan  klorofil,  dan  indeks resistensi  cekaman  garam.  Data  kuantitatif  dari setiap parameter  dianalisis  dengan  menggunakan  Analisis Ragam  pada  taraf  nyata  5%  dan  uji  lanjut  dengan  Uji Tukey  pada  taraf  nyata  5%.  Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  tingkat  konsentrasi  NaCl  0,25% sampai  0,50%  yang  ditoleransi  oleh  tanaman  anggrek bulan  secara  in  vitro  terdapat  pada  kisaran  0,25-0,5 dikategorikan cekaman sedang, sedangkan konsentrasi NaCl  0,75%  sampai  1%  terdapat  pada  kisaran  0,5-1,0 yang  dikategorikan  cekaman  berat  dan  tingkatan resistensi  anggrek  bulan  seluruh  konsentrasi  adalah resistensi moderat.
Kata  kunci:  cekaman  garam,  NaCl, Phalaenopsis amabilis (L.)  Blume,  resistensi,  seleksi  in vitro,
Moon  orchid  is  the  one  of  orchids  that  most  people  like because  it  has  a  beauty  that  can  be  seen  on  its  size, shape,  and  its  colors so  that  it  makes  the  production  of moon orchid becoming increase, but has a problem such as  the  larger  of  agricultural  land  that  converted  into other sector, the land becomes less productive because of the  salt  stress  or  salinity.  The  one  alternative  way  that efficient and effective to overcome the salt stress is with using  varieties  that  are  tolerant  to  salt  stress  with selection  agent  such  as  NaCl.  This  research  aims  to determine  the  level  of  of  NaCl  concentrations  that  are tolerant  to  moon  orchid  and  determine  the  level  of resistance of moon orchid with the salt stress by in vitro. The experimental design of this research used completely randomized design with 5 concentration level NaCl 0%; 0,25%;  0,50%;  0,75%;  and  1%  in  Vacin  and  Went medium. Parameters observed were plantlet percentage, plantlet visualization, height, number of leaves, stomata index,  wet  weight,  chlorophyll  content,  and  salt  stress resistance  index.  The  quantitative  data  from  each parameter  is  analyzed  by  using  Analysis  of  Variance  at 5% significance level and further test with Tukey test at the  significant  level  5%.  The  result  of  this  research showed  that  the  concentration  level  of  NaCl  0,25%  to 0,50%  that  tolerated  by  moon  orchid  plants  by  in  vitro was  in  the  range  of  0,25  -  0,5 categorized  by  moderate stress, and 0,75% to 1% was in the range 0,5 – 1,0 that categorized with severe stress and the resistance level of the  whole  concentration  in  moon  orchid  is  moderate resistance.
Keywords: NaCl, Phalaenopsis amabilis (L.) Blume , selection in vitro , salt stress, resistance
How to Cite : Septiani, D., Nurcahyani, E., Yulianty., & Mahfud. (2022). The Effect Of Salt Stress (Nacl) By In Vitro To Resistance Of Moon Orchid ( Phalaenopsis amabilis (L.) Blume) The Result Of Selection In Vitro. Jurnal Ilmiah Biologi Eksperimen Dan Keanekaragaman Hayati (J-BEKH) , 9(2), 12 – 22. 10.23960/jbekh.v9i2.215

## PENDAHULUAN
Phalaenopsis termasuk  salah  satu  anggrek yang  mempunyai  manfaat  dan  nilai ekonomi  yang  tinggi  karena  dapat digunakan  sebagai  induk  persilangan, koleksi,  penghias  ruangan  maupun  taman serta  sebagai  bunga potong  (Widiarsih  dan Dwimahyani,  2013).  Menurut  Badan  Pusat Statistik  (2018),  produksi  anggrek  sebagai bunga  potong  di  Indonesia  pada  tahun 2017 – 2018 mengalami
peningkatan sebesar  23,33  %.  Tahun  2017  produksi anggrek  sebesar  20.045.57  tangkai  dan tahun 2018 sebesar 24.717.840 tangkai.
Peningkatan  produksi  pertanian  memiliki kendala    yaitu  lahan  pertanian  yang semakin  luas  dialihfungsikan  ke  sektor lainnya,  sehingga  luas  lahan  pertanian semakin  sempit  (Sudana,  2017).  Menurut Rachman  (Karolinoerita  dan  Annisa,  2020), Lahan salin di Indonesia mencapai 440.300 ha  yang  terbagi  menjadi  lahan  agak  salin mencapai  304.000  ha  dan  lahan  salin mencapai  140.300  ha.  Hal  ini  disebabkan karena  lahan  kurang  produktif  akibat cekaman  lingkungan  seperti  cekaman garam atau salinitas.
Cekaman  garam  terjadi  karena  adanya konsentrasi garam yang terlarut berlebihan pada  tanaman.  Tanaman  dengan  keadaan kadar  NaCl  yang  tinggi  terdapat  toksik  Na +
dan toksik Cl - yang menyebabkan ketidakseimbangan  ion  hara.  Salinitas  yang tinggi mengakibatkan air terikat oleh garam NaCl  sehingga  ketersediaan  air  menurun yang  mengakibatkan  salinitas  menekan proses  pertumbuhan  tanaman  dengan menghambat  pembelahan  dan  pembesaran sel.  Tanaman  dengan  keadaan  cekaman garam tidak menunjukkan respon kerusakan langsung tetapi dengan
mengalami  perubahan  secara  perlahan (Wiraatmaja, 2017).
Berdasarkan penelitian  Adelia et  al .  (2018) meneliti tentang uji beberapa varietas cabai rawit (Capsicum  frutescens L .) pada  kondisi cekaman  garam  (NaCl)  secara in  vitro menggunakan  konsentrasi  0,  2500,  5000,
7500,  dan  10000  ppm.  Hasil  penelitian tersebut  menunjukkan  bahwa  konsentrasi NaCl  berpengaruh  nyata  pada  karakter tinggi  planlet,  panjang  akar,  jumlah  daun, bobot  basah  tajuk,  bobot  basah  akar, persentase  planlet  normal,  persentase planlet  tidak  tumbuh.  perlu  dilakukan penelitian mengenai anggrek bulan (Phalaenopsis  amabilis (L.)  Blume ) yang toleran  terhadap  kondisi  cekaman  garam secara in  vitro dengan  menggunakan  agen seleksi NaCl pada medium tanam.
Berdasarkan  uraian  diatas, perlu  dilakukan penelitian mengenai anggrek bulan
(Phalaenopsis  amabilis (L.)  Blume ) yang diduga  toleran  terhadap  kondisi  cekaman garam secara in vitro dengan menggunakan agen  seleksi  NaCl  pada  medium  tanam. Tujuan  penelitian  adalah  menentukan tingkat  konsentrasi  NaCl  yang  bisa ditoleransi  oleh  tanaman  anggrek  bulan (Phalaenopsis amabilis (L.) Blume ) secara in vitro dan  menentukan  tingkatan  resistensi anggrek  bulan (Phalaenopsis  amabilis (L.) Blume ) terhadap  cekaman  garam  (NaCl) secara in vitro .

## METODE PENELITIAN
Waktu dan Tempat Penelitian Penelitian dilaksanakan pada bulan Desember  sampai  dengan  Januari  2022  di Ruang Kultur Jaringan Tumbuhan, Laboratorium  Botani,  Jurusan  Biologi,
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Lampung.

## Alat dan Bahan
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  planlet  tanaman  anggrek  bulan (Phalaenopsis  amabilis (L.)  Blume ) ,  NaCl, alkohol  96%,  alkohol  70%,  akuades, sukrosa, agar-agar, medium Vacin and went (VW),  PPM  0.5  ml/l,  cat  kuku  transparan, dan aseton.

## Rancangan Penelitian
Rancangan  penelitian  ini  disusun  dengan pola  dasar  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL) yang  terdiri  dari  faktor  tunggal  yaitu konsentrasi NaCl dengan 5 taraf yaitu: 0 %; 0,25 % ; 0,50 % ; 0,75 %, dan 1 %. Masing- masing  konsentrasi  dilakukan  5  kali ulangan  dan  setiap  ulangan  terdiri  dari  1 planlet P.  amabilis (L.)  Blume  dalam  setiap botol kultur.

## Prosedur Penelitian
Pelaksanaan  penelitian  dilakukan  dengan cara  alat  dan  bahan  serta  ruang  kerja  di sterilisasikan terlebih dahulu menggunakan autoklaf  dan  alkohol  70%  dan  dilanjutkan pembuatan  medium  tanam  dengan  cara agar-agar  sebanyak  7  g/l,  sukrosa  30  g/l,
PPM  0,5  ml/l,  dan Vacint  and  Went sebanyak 1,67 g/l serta akuades dimasukkan  ke  dalam beaker  glass 1  liter sampai  tanda  1  liter.  Setelah  itu,  pH  diatur 5,5-5,8.  Larutan  medium  dipanaskan  untuk melarutkan  agar-agar  sampai  mendidih, kemudian dituangkan ke dalam botol kultur sebanyak  20  ml/botol  lalu  ditambahkan NaCl sebanyak 0,1 ml ke dalam medium VW selanjutnya  di  inkubasi  selama  7  hari. Proses  inkubasi  selesai  maka  dilakukan penanaman  planlet  dengan  cara  planlet  di sterilisasi  terlebih  dahulu  .  Planlet-planlet dari  botol  kultur  diambil  dengan scalpel steril  dan  satu-persatu  diletakkan  di  atas cawan  petri  berdiameter  10  cm,  kemudian planlet  ditanam  pada  masing-masing  botol kultur  yang  berisi  medium  perlakuan masing-masing 5 kali ulangan yang terdiri 1 planlet.
Pengamatan  dilakukan  3  minggu  setelah tanam  dengan  mengamati  parameter seperti  persentase  jumlah  planlet  hidup, visualisasi  planlet,  tinggi  tanaman,  jumlah daun,  indeks  stomata,  berat  basah, kandungan  klorofil,  dan  indeks  resistensi cekaman garam.

## Analisis Data
Data  yang  diperoleh  dari  pertumbuhan planlet P. amabilis (L.) Blume selama seleksi
dengan NaCl berupa data kualitatif dan data kuantitatif.  Data  kualitatif  disajikan  dalam bentuk  deskriptif  komparatif  dan  didukung foto.  Data  kuantitatif  dari  setiap  parameter dianalisis  dengan  menggunakan  Analisis Ragam.  Analisis  yang  dilakukan  yaitu  Uji one  way ANOVA  pada  taraf  nyata  5%  dan jika diperlukan uji lanjut, maka menggunakan  Uji  Tukey  pada  taraf  nyata 5%

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pemberian  NaCl  masing-masing  dengan konsentrasi  0%,  0.25%,  0.50%,  0.75%,  dan 1%  dalam  medium  VW (Vacint  and  Went) dapat  menyeleksi  dan  menunjukkan karakteristik planlet anggrek bulan ( Phalaenopsis  amabilis L.  Blume)  yang tumbuh  pada  kondisi  cekaman  garam. Penelitian  dilakukan  selama  3  minggu dengan  parameter  pengamatan  yaitu persentase jumlah planlet hidup, visualisasi planlet,  tinggi  planlet,  jumlah  daun,  berat basah,  panjang  akar,  indeks  stomata,  dan kandungan  klorofil,  dan  indeks  resistensi cekaman garam.

## Persentase Jumlah Planlet Hidup
Pengamatan  pertumbuhan  planlet  anggrek bulan  dilakukan  selama  3  minggu. Persentase  jumlah  planlet  hidup  pada medium  VW  ( Vacint  and  Went) yang diinduksi  NaCl  dengan  masing-masing konsentrasi  0%,  0.25%,  0.50%,  0.75%,  dan 1% adalah 100 % planlet hidup. Persentase jumlah  planlet  anggrek  bulan  yang  hidup pada  berbagai  konsentrasi  NaCl  disajikan dalam Tabel 1.
Pertumbuhan  planlet  anggrek  bulan diberikan  perlakuan  NaCl  dengan  berbagai konsentrasi menghasilkan respon yang baik terhadap  parameter  jumlah  presentase planlet hidup. Jumlah planlet anggrek bulan yang  hidup  dapat  dilihat  dari  ciri-ciri  yang ada  pada  jumlah  daun,  jumlah  tunas,  dan akar    yang  tumbuh  (Nurcahyani et  al ., 2020).

## Tabel 1. Persentase jumlah planlet anggrek bulan yang hidup pada berbagai konsentrasi NaCl
Konsentrasi NaCl (%) Jumlah planlet anggrek bulan yang hidup pada minggu ke- I II III 0 100% 100% 100% 0.25 100% 100% 100% 0.50 100% 100% 100% 0.75 100% 100% 100% 1 100% 100% 100%
Visualisasi Planlet Pengamatan  visualisasi  planlet  dilihat berdasarkan  warna  planlet  (hijau,  hijau kuning  dan  cokelat)  (Nurcahyani, et  al., 2014 ) . Hasil pengamatan visualisasi planlet anggrek  bulan  pada  berbagai  konsentrasi NaCl disajikan dalam Tabel 2.
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan  oleh  Purwaningrahayu  dan Taufiq  (2017)  yang  menyatakan  bahwa keracunan  garam  pada  tanaman  kedelai daun  mulai  bagian  bawah  terlihat menguning atau klorosis, daun menggulung ke bagian dalam, dan tepi daun mongering.
Planlet  anggrek  bulan  diberikan  perlakuan NaCl  pada  berbagai  konsentrasi  disajikan dalam  Gambar  1.  Berdasarkan  hasil pengamatan,  terdapat  konsentrasi  NaCl yang  kurang  efektif  untuk  pertumbuhan tanaman  anggrek  bulan  yaitu  pada konsentrasi  0,75%  dan  1%.  Hal  ini disebabkan  karena  konsentrasi  0.25%, 0.50%,  0.75%  dan  1%  memiliki  warna planlet  yang  menguning  atau  klorosis  dan konsentrasi  0.75%  dan  1%  juga  memiliki warna  planlet  yang  menjadi  hijau  cokelat atau nekrosis.

## Tabel 2. Visualisasi planlet anggrek bulan
Visualisasi planlet anggrek bulan Visualisasi planlet anggrek bulan yang hidup pada minggu ke- I II III 0 100% H 100% H 100% H 0.25 100% H 80% H 20% HK 80% H 20% HK 0.50 100% H 80% H 20% HK 80% H 20% HK 0.75 60% H 40% HK 60% H 40%HK 60% H 40%HC 1 60 % H 40% HK 40% H 60% HK 40% H 40%HK 20% HC
Keterangan: H = Hijau; HK = Hijau Kuning; HC = Hijau Cokelat.
Gambar 1. Planlet anggrek bulan setelah diberikan perlakuan NaCl; A) NaCl konsentrasi 0%; B) NaCl konsentrasi 0,25%; C) NaCl konsentrasi
0,50%; D) NaCl konsentrasi 0,75%; E) NaCl konsentrasi 1%.

## Tinggi Planlet
Hasil  uji  statistik  tinggi  planlet  anggrek bulan dengan perlakuan NaCl pada berbagai konsentrasi disajikan pada Tabel 3.
Tabel 3. Hasil uji statistik tinggi planlet anggrek bulan Konsentrasi NaCl (%) Tinggi Planlet Y±SE 0% 1,64 ± 0,09 a 0,25% 1,60 ± 0,10 ab 0,50% 1,60 ± 0,14 ab 0,75% 1,56 ± 0,04 ac 1% 1,06 ± 0,12 cd Keterangan: Nilai yang diikuti huruf yang sama tidak berbeda nyata pada taraf 5%.
Y = Nilai rata-rata stomata planlet SE = Standar Error
Gambar 2. Konsentrasi NaCl dan tinggi planlet anggrek bulan.
Hasil  uji  statistik  Annova  dan  uji  lanjut Tukey  berdasarkan  Tabel  3  menunjukkan bahwa  perlakuan  NaCl  berpengaruh  nyata dan  menunjukkan  kontrol  berbeda  nyata dengan perlakuan 1%. Perlakuan NaCl pada konsentrasi  0,25%  berbeda  nyata  dengan perlakuan  NaCl  pada  konsentrasi  1%. Perlakuan  NaCl  pada  konsentrasi  0,50% berbeda nyata dengan perlakuan NaCl pada konsentrasi  1%.  Perlakuan  NaCl  0,75% tidak  menunjukkkan  perbedaan  yang  nyata pada  konsentrasi  yang  lain.  Korelasi antara konsentrasi  NaCl  dengan  tinggi  planlet disajikan pada Gambar 2.
Berdasarkan hubungan antara kurva regresi konsentrasi  NaCl  dengan  tinggi  planlet anggrek bulan pada Gambar 1 menunjukkan bahwa  konsentrasi  NaCl  berkorelasi  linier negatif dengan tinggi planlet anggrek bulan dengan  persamaan  y=  -0,48x  +  1,732. Koefisien  determinasi  adalah  R 2 =  0,6089, sedangkan koefisien korelasi adalah r= 0,78 yang  menunjukkan  hubungan  yang  kuat ( strong  relationship) antara  konsentrasi NaCl dengan tinggi planlet anggrek bulan.
Hal ini sesuai dengan penelitian Pratiwi dan Krisjayanti  (2021)  menyatakan  bahwa konsentrasi  NaCl  dapat  mempengaruhi pertumbuhan tanaman tomat cherry. Hal ini dikarenakan  konsentrasi  NaCl  yang  tinggi dapat  menyebabkan  pengambilan  air  oleh tanaman terhambat dan dapat mengganggu proses  metabolisme,  sehingga  aktifitas
y = -0.48x + 1.732
R² = 0.6089 0 0.5 1 1.5 2 0 0 . 2 5 0 . 5 0 . 7 5
1
TIN G G I P LA N LE T (CM ) KONSENTRASI NACL (%) A A A A B C D E 2,3 cm 2,3 cm
2,3 cm
2,3 cm
2,3 cm
meristematik dan perbesaran sel terhambat. Kandungan garam yang terlarut khususnya  ion  Na + sebagai  unsur  esensial yang  dibutuhkan  tanaman  seperti  Ca,  Mg, dan  K  dapat  menyebabkan  tinggi  tanaman mengalami  penurunan    (Nurcahyani, et  al., 2021).

## Jumlah Daun
Hasil  uji  statistik  jumlah  daun  planlet anggrek bulan dengan perlakuan NaCl pada berbagai  konsentrasi  disajikan  pada  Tabel 4.
Tabel  4.  Hasil  uji  statistik  jumlah  daun  planlet anggrek bulan Konsentrasi NaCl (%) Jumlah Daun Planlet Y±SE 0% 6,4 ± 1,52 0,25% 5,4 ± 0,49 0,50% 4,8 ± 0,36 0,75% 3,6 ± 0,49 1% 3,2 ± 0, 36 Keterangan: Nilai yang diikuti huruf yang sama tidak berbeda nyata pada taraf 5%. Y = Nilai rata-rata stomata planlet SE = Standar Error
Hasil uji statistik Annova berdasarkan Tabel 4  menunjukkan  bahwa  perlakuan  NaCl tidak  berpengaruh  nyata  terhadap  jumlah daun  planlet.  Gambar  histogram  rata-rata jumlah  daun  planlet  anggrek  bulan disajikan pada Gambar 3.
Berdasarkan  Gambar  3 menunjukkan  rata- rata  jumlah  daun  mengalami  penurunan. rata-rata  jumlah  daun  tertinggi  yaitu  pada perlakuan  kontrol  dan  0,25%,  sedangkan rata-rata  jumlah  daun  terendah  yaitu  pada perlakuan 1%.
Gambar 3. Histogram rata-rata jumlah daun planlet  anggrek  bulan  setelah  21 hari.
Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Levitt  (1980)  dalam  Andriani  (2017) penurunan jumlah daun disebabkan karena inisiasi daun tertunda akibat laju pembelahan  sel  primordia  terhambat. Kondisi ini dapat mencegah pertukaran ion Na + dan  Cl - Oleh  karena  itu,  laju  transpirasi berkurang.

## Panjang Akar
Tabel  5. Hasil  uji  statistik  panjang  akar  planlet anggrek bulan Konsentrasi NaCl (%)  Panjang Akar Planlet Y±SE 0% 5,22 ± 0,48 a 0,25% 4,3 ± 0,40 ab 0,50% 2,66 ± 0,83 bc 0,75% 1,88 ± 0,42 cd 1% 1,78 ± 0,41 cd Keterangan: Nilai yang diikuti huruf yang sama tidak berbeda nyata pada taraf 5%. Y = Nilai rata-rata  panjang akar planlet SE = Standar Error
Hasil  uji  statistik  Annova  dan  uji  lanjut Tukey  berdasarkan  Tabel  5  menunjukkan bahwa  perlakuan  NaCl  berpengaruh  nyata terhadap  panjang  akar  planlet.  Korelasi antara  konsentrasi  NaCl  dengan  panjang akar  planlet  anggrek  bulan  setelah  21  hari disajikan pada Gambar 4. 6.4 5.4 4.8 3.6 3.2 0 2 4 6 8 0% 0.25% 0.50% 0.75% 1% Juml ah D aun ( hel ai ) Konsentrasi NaCl
Gambar  4.  Kurva  regresi  konsentrasi  NaCl panjang  akar  planlet  anggrek bulan.
Berdasarkan hubungan antara kurva regresi konsentrasi  NaCl  dengan  panjang  akar planlet  anggrek  bulan  pada  Gambar  4 menunjukkan  bahwa  konsentrasi  NaCl berkorelasi  linier  negatif  dengan  panjang akar planlet anggrek bulan dan menunjukkan  hubungan  yang  sangat  kuat ( strong relationship ) antara  panjang  akar planlet  anggrek  bulan  dengan  konsentrasi NaCl  serta  rata-  rata  panjang  akar  planlet mengalami  penurunan.  Semakin  tinggi konsentrasi  NaCl,  maka  semakin  rendah rata-rata  panjang  akar  planlet  anggrek bulan.
Berdasarkan  penelitian  Dachlan et  al . (2013) proses pembentukan akar terhambat  diakibatkan  karena  adanya akumulasi  garam  NaCl  disekitar  akar. Akumulasi  tersebut  pada  keadaan  semakin tinggi maka akan mengakibatkan penurunan  panjang  akar.    Penurunan panjang  akar  ini  diakibatkan  oleh konsentrasi  garam  yang  tinggi  dan mengakibatkan tanaman mengalami cekaman  osmotik  dan  pembelahan  sel terhambat. Cekaman osmotik yang diakibatkan  oleh  NaCl  pada  medium tumbuh  dapat  menyebabkan  sel  menjadi kekurangan  air,  sehingga  turgiditas  sel rendah dan pembesaran sel juga menurun.

## Berat Basah
Hasil  uji  statistik  berat  basah  planlet anggrek bulan dengan perlakuan NaCl pada berbagai  konsentrasi  disajikan  pada  Tabel 6.
Tabel  6.  Hasil  uji  statistik  berat  basah  planlet anggrek bulan Konsentrasi NaCl (%)  Berat Basah Planlet Y±SE 0% 0,8599 ± 0,1368 a 0,25% 0,7037 ± 0,1368 ac 0,50% 0,5025 ± 0,1386 ac 0,75% 0,4817 ± 0,1305 ac 1% 0,3143 ± 0,0635 bc Keterangan: Nilai yang diikuti huruf yang sama tidak berbeda nyata pada taraf 5%. Y = Nilai rata-rata stomata planlet SE = Standar Error
Hasil  uji  statistik  Annova  dan  uji  lanjut Tukey  berdasarkan  Tabel  6  menunjukkan bahwa  perlakuan  NaCl  berpengaruh  nyata terhadap  berat  basah  planlet.  Korelasi antara konsentrasi NaCl dengan berat basah planlet  anggrek  bulan  setelah  21  hari disajikan pada Gambar 5.
Gambar  5.  Kurva  regresi  konsentrasi  NaCl dengan berat basah planlet anggrek bulan.
Berdasarkan hubungan antara kurva regresi konsentrasi  NaCl  dengan  berat  basah planlet  anggrek  bulan  pada  Gambar  5 menunjukkan  bahwa  konsentrasi  NaCl berkorelasi  linier  negatif  dengan  berat basah planlet anggrek bulan dan menunjukkan  hubungan  yang  sangat  kuat ( strong  relationship) antara  konsentrasi
NaCl  dengan  berat  basah  planlet  anggrek bulan  serta  rata-  rata  berat  basah  planlet mengalami penurunan.
Menurut Samanhudi et al . (2021) menyatakan  bahwa  semakin  meningkatnya konsentrasi NaCl maka semakin turun berat
y = -3.72x + 5.028
R² = 0.9264 0 2 4 6 0 0 . 2 5 0 . 5 0 . 7 5 1 P A N JA N G A K A R (CM ) KONSENTRASI NACL (%) y = -0.5253x + 0.8351 R² = 0.9601 0 0.5 1 0 0 . 2 5 0 . 5 0 . 7 5 1 B ER A T B A SA H (G ) KONSENTRASI NACL (%)
basah  yang  diperoleh.  Penurunan  berat basah disebabkan karena adanya hambatan cekaman  garam.  Cekaman  garam  ini  juga menyebabkan  penyerapan  air  dan  unsur hara berkurang, sehingga
dapat mengganggu  proses  metabolisme  pada tanaman. Oleh karena itu, konsentrasi NaCl mem-pengaruhi  penurunan  berat  basah sebesar 66% terhadap kontrol.

## Indeks Stomata
Hasil  uji  statistik  stomata  planlet  anggrek bulan dengan perlakuan NaCl pada berbagai konsentrasi disajikan pada Tabel 7.
Tabel  7.  Hasil  uji  statistik  stomata  planlet anggrek bulan Konsentrasi NaCl (%)  Stomata Planlet Y±SE 0% 7,234 ± 0,705 a 0,25% 4,927 ± 0,587 bc 0,50% 4,997 ± 0,300 bc 0,75% 4,494 ± 0,319 bc 1% 3,195 ± 0,426 bc Keterangan: Nilai yang diikuti huruf yang sama tidak berbeda nyata pada taraf 5%.
Y = Nilai rata-rata stomata planlet SE = Standar Error
Hasil  uji  statistik  Annova  dan  uji  lanjut Tukey  berdasarkan  Tabel  7  menunjukkan bahwa  perlakuan  NaCl  berpengaruh  nyata terhadap  indeks  stomata  planlet.  Korelasi antara  konsentrasi  NaCl  dengan  indeks
stomata  planlet  anggrek  bulan  setelah  21 hari disajikan pada Gambar 6.
Gambar 6 menunjukkan bahwa konsentrasi NaCl  berkorelasi  linier  negatif  dengan stomata  planlet  anggrek  bulan  dan menunjukkan  hubungan  yang  sangat  kuat ( strong  relationship) antara  konsentrasi NaCl  dengan  stomata  planlet  anggrek bulan.serta  rata-  rata  stomata  planlet mengalami  penurunan.  Semakin  tinggi konsentrasi  NaCl,  maka  semakin  rendah rata-rata stomata planlet anggrek bulan.
Gambar  6.  Kurva  regresi  konsentrasi  NaCl dengan  stomata  planlet  anggrek bulan.
Konsentrasi  NaCl  dapat  menyebabkan  laju transpirasi  menurun,  sehingga  tanaman mengurangi  laju  transpirasi  dengan  cara penghematan  air  yang  keluar  dari  jaringan tanaman melalui proses penguapan. Kondisi ini  dapat  meminimalkan  kehilangan  air melalui  transpirasi  pada  saat  stomata tertutup (Sobir et al ., 2018).  Stomata daun planlet  anggrek  bulan  disajikan  pada Gambar 7.
Gambar 7. Stomata daun planlet anggrek bulan; A) NaCl konsentrasi 0%; B) NaCl konsentrasi 0,25%; C) NaCl konsentrasi 0,50%; D) NaCl konsentrasi 0,75%; E) NaCl konsentrasi 1%.
y = -3.4044x + 6.6716 R² = 0.8517 0 2 4 6 8 0 0 . 2 5 0 . 5 0 . 7 5 1 IN D EK S ST O M A TA KONSENTRASI NACL (%) A B C D E Sel penutup Sel epidermis Sel tetangga Sel penutup Sel tetangga Sel epidermis Sel tetangga Sel epidermis Sel penutup Sel penutup Sel tetangga Sel epidermis Sel penutup Sel tetangga Sel epidermis

## Uji Klorofil
Hasil  uji  statistik  kandungan  klorofil    A dengan  perlakuan  NaCl  disajikan  pada Tabel  8 . Hasil  uji  statistik  Annova berdasarkan  Tabel  8  menunjukkan  bahwa perlakuan  NaCl  tidak  berpengaruh  nyata terhadap  kandungan  klorofil.  Hal  ini  sesuai dengan  penelitian  yang  dilakukan  (Yildiz
dan  Terzi,  2013)  pada  tanaman  Barley  var Tokak  yang  diinduksi  NaCl  menunjukkan bahwa  NaCl  dan  kandungan  klorofil  pada daun  Barley  var  Tokak  tidak  berpengaruh nyata. Hal ini dikarenakan karena NaCl yang tinggi  tidak  akan  menghentikan  sintesis klorofil  secara  langsung  (Harjadi  dan Yahya,1988 dalam (Asih et al., 2015).
Tabel 8. Hasil uji statistik kandungan klorofil   planlet anggrek bulan Konsentrasi NaCl Jumlah Kandungan Klorofil Y±SE Klorofil A Klorofil B Klorofil Total 0% 2,960 ± 1,278 2,603± 0,209 2,603± 0,209 0,25% 2,587 ± 0,708 2,352 ± 0,418 2,352 ± 0,418 0,50% 3,679 ± 0,389 2,999 ± 0,231 2,999 ± 0,231 0,75% 3,509 ± 0,421 2, 625 ± 0,259 2, 625 ± 0,259 1% 4,002 ± 0,204 2,890 ± 0,192 2,890 ± 0,192 Keterangan: Nilai yang diikuti huruf yang sama tidak berbeda nyata pada taraf 5%. Y = Nilai rata-rata stomata planlet SE = Standar Error

## Indeks Resistensi Cekaman Garam
Hasil  analisis  indeks  IC  pada  resistensi cekaman  garam  terhadap  anggrek  bulan dapat disajikan pada Tabel 9.
Analisis  indeks  IC  pada  resistensi  cekaman garam terhadap anggrek bulan dapat dilihat pada  Tabel  9 yang  menunjukkan  bahwa nilai indeks IC pada konsentrasi NaCl 0,25% sampai  0,50%    terdapat pada  kisaran  0,25- 0,5. Nilai indeks tersebut dapat dikategorikan  pada  tingkatan  cekaman sedang. Konsentrasi NaCl 0,75% sampai 1% menunjukkan  bahwa  nilai  indeks  IC terdapat  pada  kisaran  0,5-1,0.  Nilai  indeks tersebut dapat dikategorikan pada tingkatan  cekaman  berat.  Hasil  analisis indeks  ISC  pada  resistensi  cekaman  garam terhadap  anggrek  bulan  dapat  disajikan pada Tabel 10.

## Tabel 9. Hasil analisis indeks IC
Konsentrasi (%) Nilai indeks IC Tingkatan 0,25 0,2857 Cekaman Sedang
Konsentrasi (%) Nilai indeks IC Tingkatan 0,50 0,4899 Cekaman Sedang 0,75 0,5110 Cekaman Berat 1 0,6809 Cekaman Berat Tabel 10. Hasil analisis indeks ISC Konsentrasi (%) Nilai indeks ISC Tingkatan 0,25 0,9999 Resistensi Moderat 0,50 0,9999 Resistensi Moderat 0,75 0,9999 Resistensi Moderat 1 1 Resistensi Moderat
Analisis indeks ISC pada resistensi cekaman garam terhadap anggrek bulan dapat dilihat pada  Tabel  10 yang  menunjukkan  bahwa nilai  indeks  ISC  pada  seluruh  perlakuan NaCl  yang  terdapat  pada  kisaran  >0,95- 1,10.
Nilai indeks tersebut dapat dikategorikan  pada  tingkatan  resistensi yang moderat.
Analisis  nilai  indeks  cekaman  (IC)  dapat digunakan  untuk  menentukan  tingkatan cekaman  salinitas  yang  diberikan  terhadap tanaman, sedangkan nilai indeks sensitivitas cekaman salinitas dapat digunakan untuk mengkategorikan resistensi  yang  diuji  terhadap  cekaman salinitas.  Penelittian  yang  telah  dilakukan menunjukkan  hasil  bahwa  nilai  ISC  pada tanaman  kacang  hijau  tidak  terdapat tanaman  yang  tidak  tahan  salinitas  atau rentan.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa tanaman tersebut dapat berpotensi memiliki  sifat  resistensi  terhadap  cekaman salinitas  yang  baik  terhadap  cekaman salinitas  yang  sedang  (Anugrahtama et  al ., 2020)

## KESIMPULAN
1. Tingkat  konsentrasi  NaCl  0,25%  sampai 0,50%  yang  ditoleransi  oleh  tanaman anggrek  bulan  (P halaenopsis  amabilis L. Blume)  secara in  vitro terdapat  pada
0,25-0,5  yang  dikategorikan  cekaman sedang,  sedangkan  konsentrasi  NaCl 0,75%  sampai  1%  terdapat pada  0,5-1,0 yang dikategorikan cekaman berat.
2. Tingkatan  resistensi  anggrek  bulan (P halaenopsis amabilis L. Blume) terhadap  cekaman  garam  (NaCl)  pada seluruh  konsentrasi  adalah  resistensi moderat.

## DAFTAR PUSTAKA
Adelia, L., Siregar, L. A. M., dan Khairunnisa Lubis.  (2018).  Respon  Ketahanan Beberapa  Varietas  Cabai  Rawit (Capsicum  frutescens  L.) Terhadap Pemberian  NaCl  secara  In  Vitro.  5
(1):61 – 66.
Andriani,  V.  (2017).  Pertumbuhan  Dan
Kadar  Klorofil  Tanaman  Pakcoy ( Brassica rapa L.) Terhadap Cekaman NaCl. STIGMA: Jurnal Matematika dan Ilmu  Pengetahuan  Alam  Unipa .  10
(02): 58 – 67.
Anugrahtama,  P.  C.,  Supriyanta,  dan Taryono.  (2020).  Pembentukan  Bintil Akar Dan Ketahanan Beberapa Aksesi Kacang  Hijau  ( Vigna  radiata L.)  Pada Kondisi  Salin. Journal  of  Agriculture Innovation . 3 (1): 1 – 5. Asih, E. D., Mukarlina, dan Lovadi, I. (2015). Toleransi  Tanaman  Sawi  Hijau ( Brassica  juncea L  .)  Terhadap Cekaman Salinitas Garam NaCl. Jurnal Protobiont . 4 . 203 – 208. Badan  Pusat  Statistik.  (2018). Produksi Anggrek . Jakarta.
Dachlan,  A.,  Kasim,  N.,  dan  Kurnia  Sari,  A.
(2013).  Uji  Ketahanan  Salinitas
Beberapa  Varietas  Jagung  ( Zea  mays L.)  Dengan  Menggunakan  Agen Seleksi NaCl. Biogenesis: Jurnal Ilmiah Biologi . 1 (1):9 – 17. Karolinoerita,  V.,  dan  Annisa,  W.  (2020). Salinisasi Lahan dan Permasalahannya di Indonesia. Jurnal Sumberdaya Lahan . 14(2): 91.
Kartikaningtyas,  O.  Quirena,  Suharyanto,  S.
S.  (2013).  Respon  Anatomis Acacia mangium Willd  Terhadap  Kondisi Cekaman  Garam :  Observasi  Aawal Untuk  Program  Pemuliaan  Tanaman. Wana Benih . 14 (2) : 95 – 102.
Nurcahyani,  E.,  Lindawati.,  dan  Zulkifli. (2014).  Kandungan  Klorofil  Daun Planlet Tomat ( Lycopersicum esculentum mill) Hasil Seleksi dengan
Asam  Salisilat  Secara  In  Vitro. Jurnal ilmiah:Biologi  Eksperimen  dan  Hayati. 2 (2): 77-81. Nurcahyani,  E.,  Pratiwi,  D.,  Zulkifli.,  dan Lande, M.L. (2021). Analisis kandungan  karbohidrat    Terlarut Total Planlet Bayam Merah [ Alternanthera  amoena (lem.)  Voss]
Resisten  terhadap  Cekaman  Garam (NaCl)  secara in  Vitro.  Analit: Analytical and Environmental Chemistry. 6 (2) Nurcahyani, E., Rahmadani, D. D.,
Wahyuningsih, S., dan Mahfut. (2020).
Analisis  Kadar  Klorofil  Pada  Buncis ( Phaseolus  vulgaris L  .)  Terinduksi Indole  Acetic  Acid  (IAA)  Secara  In Vitro. Journal Analytical and Environmental  Chemistry ,  5 (1):  15 – 23.
Pratiwi,  A.,  dan  Krisjayanti,  E.  W.  2021. Respon  Pertumbuhan  Tomat  Cherry (Solanum lycopersicum var. cerasiforme) Terhadap  Konsentrasi Salinitas NaCl . 9(2): 494 – 503. Purwaningrahayu, R., dan Taufiq, A. (2017). Respon  Morfologi  Empat  Genotip Kedelai  Terhadap  Cekaman  Salinitas. Jurnal  Biologi  Indonesia , 13 (2),  175 –
188.
Samanhudi,  Rahayu,  M.,  Sakya,  A.  T.,  dan Susanti,  Y.  D.  (2021).  Seleksi Ketahanan Beberapa Varietas Sorgum Manis  ( Sorghum  bicolo r  L.)  Pada Berbagai  Konsentrasi  Salinitas. Jurnal Pertanian Presisi. 5 (1). Sudana,  W.  (2017).  Potensi  Dan  Prospek Lahan Rawa Sebagai Sumber Produksi Pertanian. Analisis kebijakan pertanian . 3 (2): 141 – 151.
Widiarsih,  S.,  dan  Dwimahyani,    dan  I. (2013). Gamma Irradiation Application For Mutation Breeding In Early Flowering Moth Orchid ( Phalaenopsis  amabilis Bl.). Jurnal Ilmiah  Aplikasi  Isotop  dan  Radiasi ,  9 (1): 59 – 66. Wiraatmaja,  I.  W.  (2017).  Bahan  Ajar  "Cara Tanaman Beradaptasi terhadap Cekaman Fisiologis". Fakultas Pertanian UNUD. Denpasar. Yildiz,  M.,  dan  Terzi,  H.  (2013).  Effect  of NaCl Stress on Chlorophyll Biosynthesis, Proline, Lipid Peroxidation and Antioxidative Enzymes  in  Leaves  of  Salt-Tolerant and  Salt-Sensitive  Barley  Cultivars. Journal  of  Agricultural  Sciences .  19: 79 – 88.