Toksisitas Akut Ekstrak Sembukan ( Paederia scandens (Lour.) Merr. pada Mencit ( Mus musculus L .) Galur Swiss
Acute Toxicity of Sembukan Extract (Paederia scandens (Lour.) Merr.) in Swiss Webster Mice (Mus musculus L.)
Ida Fitriana 1* , Agustina Dwi Wijayanti 1 , Puspa Wikan Sari 1 , R. Gagak Donny S. 1 , Dwi Cahyo B.S. 1
1 Departemen Farmakologi Fakultas Kedokteraan Hewan Universitas Gadjah Mada Email : idafitriana.apt@gmail.com

## ABSTRAK
Sembukan  ( Paederia scandens (Lour.)  Merr. termasuk  familia  Rubiaceae  yang  tumbuh liar, dapat  dikonsumsi sebagai  pakan  ternak  dan  obat  herbal  tradisional. Oleh  karena  itu perlu diketahui keamanan penggunaan sembukan. Uji ini bertujuan untuk mengetahui potensi ketoksikan  akut  dari  ekstrak sembukan  dengan    menggunakan  metode Organisation  for Economic  Co-operation  and  Development (OECD) 423,  gejala  klinis  yang  ditimbulkan,  serta gambaran histopatologis organ hati, ginjal, dan jantung akibat pemberian oral.
Lima belas  ekor  mencit betina  galur  swiss dengan  berat  25-35  gram  digunakan  dalam penelitian  ini.  Prosedur  penelitian  mengikuti  metode  OECD  423  dengan  menggunakan  dosis awal  300  mg/kg  BB ekstrak  sembukan. Pemeriksaan  histopatologi dilakukan  dengan pewarnaan  Hematoksilin-Eosin.  Hasil  pengamatan  histopatologi  dan  gejala  ketoksikan  klinis dianalisa secara deskriptif, sedangkan data perubahan BB hewan uji, bobot organ, dan jumlah asupan pakan dianalisis statistik.
Hasil penelitian menunjukkan ekstrak  sembukan aman  digunakan. Menurut Globally Harmonized  Classification  System (GHS),potensi  ketoksikan  akut  oral  ekstrak  sembukan termasuk dalam kategori 5 (tidak terklarifikasi) dengan LD 50 cut  off > 2000 – 5000 mg/kg BB. Pemberian  sediaan  uji  tidak  mempengaruhi  berat  badan,  asupan  pakan, gejala  ketoksikan klinis, dan tidak ada perubahan patologi pada organ jantung.
Kata kunci : ekstrak  sembukan, Paederia  scandens , uji  toksisitas akut, OECD  423, Globally Harmonized Classification System
.

## ABSTRACT
Sembukan  (Paederia  scandens  (Lour.)  Merr. belonging to Rubiaceae  family  that  grows wild,  sometimes was used  as  animal  feed  and  traditional  herbal  medicine. Therefore, it  is important to determine the safety of sembukan when consumed or used as a herbal medicine. This study aimed to  determine  the  potential  acute  toxicity  of  the  extract of sembukan  using Organisation  for  Economic  Co-operation  and  Development (OECD) 423 method which measured the clinical symptoms caused, and histopathologic of liver, kidney, and heart disease due to oral administration.
Fifteen female  Swiss Webster mouse weighing  25-35  gram  used  in  this  study.  The procedure of this study followed the OECD method 423 using an initial dose of 300 mg/kg BW sembukan  extract. Histopathological  examination was  done hematoxylin-eosin  staining.  The observation of histopathology and clinical toxicity symptoms were analyzed descriptively, while data  changes  on  body  weight  of  animals,  organ  weights,  and  the  amount  of  feed  intake  was analyzed statistically.
The  results  showed sembukan extract is safe  to  use. According  to  the Globally Harmonized  System  Classification (GHS),  the  potential  for  acute  oral  toxicity  of  the  extract sembukan  included  in  category  5  (not  clarified)  with  LD50  cut-off >  2000-5000  mg/kg BW. Giving  the  test  preparation  did  not  affect  body  weight,  feed  intake, clinical  symptoms  of toxicity,and there was no pathological changes in the heart organ.
Key words :  sembukan  extract, Paederia  scandens , acute  toxicity,  OECD  423,  Globally Harmonized Classification System

## PENDAHULUAN
Dewasa ini, penelitian dan pengembangan tanaman  obat  baik  di dalam maupun di luar negeri berkembang pesat. Perkembangan penelitian tersebut pada segi farmakologi maupun fitokimia berdasarkan indikasi tanaman obat yang telah  digunakan  sebagian  masyarakat dengan  khasiat  yang teruji  secara empiris. Hasil penelitian tersebut, tentunya lebih memantapkan para pengguna tanaman  obat  akan  khasiat maupun kegunaannya(Utami, 2008).
Sembukan (Paederia scandens
(Lour.) Merr.), dikenal masyarakat dengan sebutan tanaman kentut, karena bau yang  tidak  enak  dari  tanaman tersebut. Tanaman  ini belum  banyak dimanfaatkan. Bahkan, dianggap rumput sebagai imbuhan pakan pada ternak. Di Indonesia,  sembukan  merupakan  salah satu  tanaman  obat  tradisional  yang digunakan oleh masyarakat untuk mengatasi  keluhan  saluran  pencernaan misalnya  karminatif,  penambah  nafsu makan  (Solikin,  2001).  Sedangkan  di masyarakat  China,  Jepang,  Korea  dan Taiwan, sembukan (akar,  daun,  batang dan  buah)  digunakan  untuk  mengobati disentri,  dispepsia,  mengurangi  rasa sakit, antiinflamasi,  obat  batuk, dan anti rematik (Xu dkk., 2006).
Kandungan  yang  terdapat  dalam tanaman  sembukan  cukup  banyak. Senyawa  kimia yang  ditemukan pada bagian daun  dan  batang sembukan adalah asam paederosidik, deasetilasperulosid, dan asam
asperulosidik. pada bagian akar yaitu 6- β-o-sinapoyl scandosida,
asam paederosidik, dan glikosida  iridoid.  Zat aktif glikosida iridoid yang telah diisolasi
adalah paederosida,  scandosida, dan asperulosida(Quang dkk.,2002).
Penelitian sebelumnya mengenai glikosid iridoid tanaman ini telah dilaporkan  menghambat  efek  aktivasi virus Epstein-Barr sebagai agen promotor  tumor (Govind dkk., 1996), menghambat xantin oksidase, antinosiseptif dengan menghambat NO/cGMP, analgesik, antiinflamasi dengan jalan menonaktifkan NF-kB jalur tranduksi  sinyal  transmembran (Mei dkk., 2012; Evi  dkk.,  2011),  bersifat nefroprotektor (Hou dkk., 2014) dan efek menghambat  pembentukan  asam  urat (Ma dkk., 2009). Glikosida  iridoid dari sembukan terbesar lainnya yang diisolasi  yaitu  geniposide,  ditemukan  di bagian akar. Beberapa penelitian menyebutkan bahwa geniposida menghambat proses aktivitas 5- lipoksigenase  dan  mempunyai  efek melawan tumor-promoting 12-o- tetradekanoilporbol-13-asetat dengan mengaktifkan  protein  kinase  C  (Young- Won dkk., 2013). Penggunaan simplisia obat tradisional  untuk  keperluan  pengobatan dan kesehatan perlu diperhatikan keamanannya. Pengujian toksisitas penting  dilakukan  untuk  memperkirakan derajat  kerusakan  yang  diakibatkan suatu senyawa terhadap material biologik  maupun  nonbiologik. Oleh karena  itu perlu dilakukan uji  toksisitas dari tanaman sembukan. Metode pengujian  toksisitas  yang  dipilih  adalah sesuai  dengan  pedoman Organisation for Economic Co-operation and Development (OECD)  423  (OECD,
2001).  Metode  ini  merupakan  metode standar  yang  diakui  oleh  33  negara Eropa  yang  merupakan  anggota  dari
OECD.  Kelebihan  utama  metode  ini adalah  sedikitnya  penggunaan  hewan model  (mencit)  serta  waktu  ujinya  yang relatif  cepat. Penelitian  ini  bertujuan untuk  mengetahui  potensi  ketoksikan akut  dari  ekstrak  sembukan  dengan menggunakan  metode  OECD  423, dan mengamati gejala klinis yang ditimbulkan, serta gambaran
histopatologis  organ hati,  ginjal,  dan jantung pada mencit.

## MATERI DAN METODE

## Bahan
Bahan yang digunakan adalah daun sembukan. Determinasi tanaman dilakukan di Fakultas Farmasi
Universitas  Gadjah  Mada.  Bahan  lain yang digunakan adalah etanol, aquades,
dan pakan mencit.
Alat Kandang mencit,  serutan  kayu, tempat  pakan  dan  minum  mencit, spuit oral, timbangan tikus.

## Aklimatisasi Hewan uji
Hewan  uji  yang  digunakan  adalah mencit betina galur  swiss  webster umur 3 (tiga) bulan dengan berat badan 25-35 g sejumlah 15 ekor. Hewan uji diperoleh dari  UPHP  LPPT  UGM,  yang  kemudian dipelihara dalam kandang hewan Laboratorium Farmakologi Fakultas
Kedokteran  Hewan  UGM,  Yogyakarta. Aklimatisasi  dilakukan  selama  7  (tujuh) hari, hewan uji mendapatkan pakan dan minum ad libitum .

## Perlakuan Sediaan Uji
Sediaan uji  adalah  ekstrak  etanol sembukan yang dibuat secara maserasi dan  pelarutnya  diuapkan. Hewan  uji dibagi menjadi 5 kelompok yaitu sediaan
uji  dengan  dosis  300 dan  2000 mg/kg BB dengan  1  kali  ulangan  serta kelompok kontrol  negatif  (perlakuan dengan
menggunakan aquades), masing-masing 3  (tiga)  ekor  hewan  uji. Dosis sediaan  uji dan  jumlah  hewan  uji sesuai  dengan  ketentuan OECD  423. Prosedur mengikuti  skema  kerja  OECD 423  Annex  2C  dengan  dosis  awal  300 mg/kg BB sediaan uji.
Setelah  diaklimatisasi,  hewan  uji
ditimbang dan dipuasakan terlebih dahulu  selama  ±  4  jam  sebelum perlakuan.Sedian  uji  diberikan secara peroral dengan terlebih dahulu dilarutkan  dalam aquades.  Perlakuan dosis awal tersebut
dilakukan berdasarkan  prosedur  OECD  423  yaitu apabila  tidak  ada  informasi  mengenai dosis  dari  zat  yang  akan  diujikan. Volume pemejanan hewan uji sebesar 1 ml /100  mg.  Apabila  volume  pemberian melebihi  batas  maksimal  pemberian, maka  dapat  diberikan  dalam  beberapa kali dalam waktu tidak lebih dari 24 jam
(OECD, 2001). Dosis tersebut dipejankan  pada  1  (satu)  kelompok hewan uji terdiri dari 3 ekor. Kelompok kontrol negatif mendapatkan Aquades. Kelompok perlakuan pertama mendapatkan sediaan uji dosis 300mg/kg BB. Apabila tidak terjadi kematian selama pengamatan maka ditambahkan kelompok  yang  medapatkan  sediaan  uji dengan dosis yang  dinaikkan  yaitu 2000  mg/kg  BB.  Namun,  apabila  terjadi kematian sebanyak 2-3 hewan uji dalam kelompok  perlakuan  sediaan  uji  300 mg/kg BB, maka dilakukan penambahan kelompok
perlakuan dengan dosis yang diturunkan yaitu 50  mg/kg  BB.  Apabila  tidak  ada hewan  uji  atau  hanya  1  ekor  tikus  yang mati,  maka  dapat  langsung  ditetapkan LD 50 dan  ditambah  kelompok  perlakuan dengan  dosis  yang  sama  (pengujian ulang)  dengan  pengamatan  selama  14 hari. Hewan  uji  tetap  diberikan  makan dan  minum  seperti  biasa  setiap  hari selama pengamatan.
Pengamatan  Gejala  Toksik dan  Berat Badan Hewan Uji
Setelah  pemejanan  sediaan  uji, dilakukan  pengamatan  dalam  24  jam dengan pengamatan intensif pada 4 jam pertama.  Pengamatan  ini  selain  untuk melihat  gejala toksik  yang  timbul,  juga untuk melihat ada atau tidaknya kematian dalam rentang waktu tersebut.
Pengamatan  fisik  gejala toksik dilakukan  pada  setiap  kelompok  selama 24  jam  dengan  pengamatan  intensif pada  4  jam  pertama.  Pengamatan dilanjutkan  selama  14  hari  jika  tidak terjadi  kematian  pada  24  jam  pertama. Pengamatan  ini  dilakukan  untuk  melihat adanya  efek  toksik  tertunda yang mungkin  terjadi  terhadap  organ-organ vital  hewan  uji.  Pengamatan  efek  toksik tertunda  tersebut  dilakukan  dengan pembedahan  hewan  uji  yang  telah diterminasi  dengan  eter  pada  hari  14 setelah  pemejanan,  yaitu  apabila  tidak terjadi  kematian  hewan  uji  pada  24  jam pertama  untuk  selanjutnya  dilakukan pemeriksaan histopatologi organ.
Pengaruh  pemberian  sediaan  uji terhadap berat badan hewan uji dievaluasi dengan menghitung perubahan bobot hewan
uji.
Pengamatan  perubahan  berat  badan dilakukan setiap  tujuh  hari.  Selanjutnya
dihitung  purata  kenaikan  berat  badan per hari (PKBP).
Pemeriksaan histopatologi dan  berat organ
Setelah dilakukan pembedahan organ  hati,  ginjal  dan  jantung  diambil untuk dilakukan pemeriksaan histopatologi. Organ dibersihkan dengan akuades,  ditimbang  kemudian  difiksasi dengan formalin 10%. Kemudian dilakukan dehidrasi menggunakan larutan seri alkohol selanjutnya dilakukan proses embedding menggunakan  parafin.  Organ  dipotong dengan  ketebalan 5 μ m, dilanjutkan dengan pengecatan hemaktoksilin- eosin. Selanjutnya, dilakukan pengamatan histopatologis secara mikroskopis.

## Analisa Data
Data  yang  diperoleh  berupa  data kualitatif  dan  kuantitatif.  Data  kualitatif berupa  data  gejala  toksik  dan  hasil pemeriksaan  histopatologi  organ hati, ginjal,  dan jantung dianalisa  secara deskriptif. Data kuantitatif berupa jumlah kematian  hewan  uji  yang  selanjutnya untuk  menentukan  potensi  toksisitas akut  LD 50 ,  perubahan  BB  hewan  uji, bobot  organ, dan  jumlah  asupan  pakan dianalisis
statistik menggunakan software program SPSS.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Potensi toksisitas akut (LD 50 ).
Penetuan  potensi  toksisitas  akut dalam
pedoman
OECD 423 menggunakan  jumlah  kematian  hewan uji.  Dalam  penelitian  ini tidak terdapat kematian hewan
pada berbagai kelompok perlakuan. Berdasarkan penggolongan LD 50 untuk potensi ketoksikan  akut  oral  ekstrak  sembukan
menurut Globally Harmonized Classification System (GHS) pada pedoman  OECD  423  dengan endpoint kematian hewan uji, maka menunjukkan bahwa  sediaan  uji  dalam  penelitian  ini termasuk  dalam  kategori  5  (tidak terklarifikasi) dengan dengan harga LD 50 cut  off  >  2000–5000  mg/kg  BB(OECD, 2001). Bedasarkan  kategori  tersebut, maka  ekstrak  sembukan  aman  untuk dikonsumsi.

## Pengamatan gejala toksik.
Hasil  pengamatan  gejala  toksik dalam penelitian ini, konsentrasi sediaan uji 300mg/kg BB tidak  menunjukkan gejala  toksik  pada  sebagian  besar hewan  uji.  Sedian  uji  2000  mg/kg  BB menimbulkan gejala toksik berupa kurang aktif, rambut rontok, feses encer berwarna hijau tua dan warna urin gelap.
Pada kelompok kontrol negatif memperlihatkan  perilaku  normal  dan tidak  menunjukkan  gejala  toksik (Tabel 2). Gejala  toksik  yang  timbul  tergantung pada  konsentrasi  sediaan  uji,  semakin tinggi  konsentrasi  sediaan  uji  semakin besar  gejala  toksik  yang  terlihat  pada hewan uji.

## Kondisi umum
Kondisi  umum  yang  diamati  dalam penelitian  ini  adalah  berat  konsumsi pakan,  perubahan  bobot  hewan  uji, dan kematian.  Berat  pakan  dan  perubahan bobot  badan  merupakan  salah  satu parameter yang biasa digunakan
sebagai evaluasi terhadap kondisi kesehatan hewan  uji  secara  umum
(Balasz, 1970). Perubahan bobot hewan uji tersaji  dalam Tabel  3. Berdasarkan analisa statistik menggunakan uji Anova Two  Way diperoleh  bahwa  perubahan bobot hewan uji antara kelompok kontrol negatif  dengan  perlakuan  sediaan  uji 300  mg/kg  BB  dan  2000  mg/kg  BB menunjukkan  hasil  yang  tidak  signifikan (P>0.05). Hal  ini  menunjukkan  bahwa sediaan uji tidak mempengaruhi perubahan bobot mencit. Hal ini menunjukkan bahwa tidak adanya
gangguan  metabolisme  pada  hewan  uji dan  pakan  dapat  tercerna dengan  baik,
sehingga pakan dapat digunakan sebagai sumber energi dan peningkatan masa tubuh.

## Konsumsi Pakan
Konsumsi  pakan  hewan  uji  dapat digunakan  untuk  mengetahui  adanya kaitan antara konsumsi pakan hewan uji dengan  perubahan  bobot  hewan  uji. Perubahan  bobot  yang  terjadi  pada hewan uji dapat mengindikasikan
adanya  gangguan  atau  patologi  pada hewan  uji.  Rata-rata  berat  konsumsi pakan  hewan  uji  per-hari  sesuai  dalam
Tabel 4. Hasil analisis statistik menunjukkan  rata-rata  pakan  antara kelompok kontrol negatif dengan
kelompok  perlakuan  sediaan  uji  300 mg/kg  BB  tidak  berbeda  signifikan
(P>0.05)  artinya  sediaan  uji  yang diberikan ke hewan uji tidak mempengaruhi  asupan  makan  atau nafsu makan hewan uji.

## Tabel 1. Jumlah kematian hewan uji dalam masing-masing perlakuan
Kelompok Perlakuan Jumlah Hewan Uji Jumlah hewan uji mati Kontrol negatif 3 0 Sediaan uji 300mg/kg BB 6 0 Sediaan uji 2000mg/kg BB 6 0
Tabel 2. Hasil Pengamatan Gejala Toksik
Kelompok perlakuan Mencit Gejala toksik Kontrol negatif 1 Tidak ada gejala toksik 2 Tidak ada gejala toksik 3 Tidak ada gejala toksik Sediaan uji 300 mg/kg BB 1a Tidak ada gejala toksik 2a Tidak ada gejala toksik 3a Kurang aktif, penurunan asupan makan 4b Tidak ada gejala toksik 5b Tidak ada gejala toksik 6b Tidak ada gejala toksik Sediaan uji 2000 mg/kg BB 1a Kurang aktif, feses hijau tua 2a Kurang aktif, feses hijau tua 3a feses hijau tua, urin gelap 4b Rambut rontok. feses hijau tua 5b Kurang aktif, rambut rontok 6b Kurang aktif, rambut rontok a = kelompok perlakuan yang pertama, b = kelompok perlakuan pengulangan Tabel 3. Perubahan Bobot Hewan Uji Kelompok perlakuan Mencit Perubahan BB(g/7hr) PKBP ± SD 1 7 15 Kontrol negatif 1 0 0.5 0.4 29.47 ± 0.45 2 0 0.6 0.2 30.47 ± 0.42 3 0 0.2 0.4 31.77 ± 0.31 Sediaan uji 300 mg/kg BB 1a 0 0.2 0.2 29.93 ± 0.12 2a 0 0.5 0.6 25.87 ± 0.32 3a 0 0.2 0.5 29.00 ± 0.26 4b 0 0.4 0.6 28.97 ± 0.50 5b 0 0.4 0.5 29.80 ± 0.26 6b 0 0.2 0.4 28.07 ± 0.31 Sediaan uji 2000 mg/kgBB 1a 0 -0.4 -0.2 31.07 ± 0.31 2a 0 0.3 0.2 33.77 ± 0.25 3a 0 -2.3 0.2 30.33 ± 1.27 4b 0 0.9 0.7 29.93 ± 0.80 5b 0 -0.3 0.8 30.47 ± 0.40 6b 0 0.5 0.6 29.23 ± 0.55 Pemeriksaan  histopatologi dan  berat organ Berdasarkan hasil pemeriksaan
histopatologi hepar pada sediaan uji 300 mg/kg BB tidak menunjukkan perubahan
patologi,  sedangkan  pada  sediaan  uji 2000  mg/kg  BB menunjukkan  adanya degenerasi  melemak  dan  multi  fokal radang  pada  daerah  mid  zonal  dan centro  lobuler .  Degenerasi  melemak,
ditandai adanya vakuola-vakuola berbagai  ukuran  dengan  batas  yang jelas, serta tampak sebagian inti
terdesak ke tepi (Gambar 1A). Degenerasi dapat disebabkan  oleh iskemia,
anemia, metabolisme abnormal, dan  zat kimia  yang  bersifat toksik  (Spector  dan  Spector  1993). Degenerasi merupakan perubahan yang bersifat  reversible,  sehingga  apabila paparan  toksik  dihentikan,  sel  yang mengalami  kerusakan  akan  kembali normal. Multi fokal radang di daerah mid zonal  atau centro  lobuler ,  ditandai adanya  infiltrasi  limfosit  dan  neutrofil  di daerah  mid  zonal  atau centro  lobuler . Hati  merupakan  organ  tubuh  terbesar dan  organ  yang  berfungsi  sebagi pemetabolisme  yang  paling  kompleks  di dalam  tubuh.  Hati,  selain  terlibat  dalam memetabolisme  zat  makanan,  sebagian besar  obat  dan  juga  mendetoksifikasi toksin  (Samuelson, 2007).  Oleh  sebab itu,  hati  menjadi  organ  yang  sangat potensial  menderita  keracunan  terlebih dahulu sebelum organ yang lain.
Berdasarkan  analisa  statistik,  hasil uji Anova  One  Way menunjukkan berbeda  signifikan antara berat  hati sediaan  uji  2000mg/kg  BB terhadap kontrol negatif (P<0.05). Hal ini menunjukkan  bahwa  sediaan  uji 2000 mg/kg  BB dapat  berpengaruh  terhadap kenaikan berat hati (Tabel 5). Peningkatan berat hati tersebut
dimungkinkan  akibat  kenaikan  jumlah darah  yang  mengalir  sebagai  respon tubuh  untuk  memperbaiki  sel  hati  yang mengalami kerusakan.
Organ  sasaran  kedua  adalah  ginjal. Berdasarkan hasil pemeriksaan histopatologi  ginjal  diketahui sediaan  uji 300  mg/kg  BB  tidak  terjadi  perubahan patologi,  sedangkan  sediaan  uji  2000 mg/kg  BB terjadi  vakuolisasi  sebagian epithel  tubulus.  Vakuolisasi  ini  ditandai dengan adanya vakuola-vakuola berbagai  ukuran  dalam  sitoplasma  sel epithel  tubulus  serta  ukuran  sel  menjadi hipertrofi (Gambar 1B).
Tabel 4. Rata – Rata Berat Konsumsi Pakan Hewan Uji
Kelompok perlakuan Jumlah mencit Rata-rata berat konsumsi pakan perhari (gram) + SD Kontrol negatif 3 3.40 ± 0.57 Sediaan uji 300mg/kg BB 6 2.83 ± 1.64 Sediaan uji 2000mg/kg BB 6 2.87 ± 1.01 Tabel 5. Berat Organ Hewan Uji Kelompok Perlakuan Jumlah Mencit Rata – Rata Berat Organ ±SD Hepar Jantung Ginjal Kontrol negatif 3 1.24 ± 0.04 0.37 ± 0.02 0.18 ± 0.03 Sediaan uji 300mg/kg BB 6 1.26 ± 0.14 0.38 ± 0.02 0.23 ± 0.15 Sediaan uji 2000mg/kgBB 6 1.51 ± 0.09 0.41 ± 0.08 0.34 ± 0.28
Gambar 1.  Hasil  pemeriksaan  histopatologi jaringan hati  (a),  ginjal  (b), dan jantung  (c)  pada  sediaan  uji 2000  mg/kg BB. Organ  hati menunjukkan degenerasi melemak (panah hitam) dan jaringan ginjal menunjukkan vakuolisasi (panah merah).
Ginjal  merupakan  salah  satu  organ vital dalam jalur ekskresi sebagian besar zat  toksikan.  Ginjal  menerima  kurang lebih  25%  darah  dari  jantung  hal  ini mengakibatkan  ginjal  memiliki  aliran darah  yang  tinggi,  menyaring  dan mengkonsen-trasikan toksikan pada filtrat oleh glomerulus, membawa toksikan  melalui  sel  tubulus  dan  dapat mengaktifkan  toksikan  tertentu.  Oleh karena itu, perubahan fungsi organ ginjal perlu  diamati  dalam  penelitian  ini sebagai data pendukung dalam pengujian toksisitas akut.
Berdasarkan  analisis  statistik,  hasil uji Anova One  Way menunjukkan  tidak berbeda  signifikan antara  berat  badan ginjal  sediaan  uji  300  mg/kg  BB  dan 2000  mg/kg  BB terhadap  berat  ginjal kontrol negatif (P>0.05). Hal ini menunjukkan  bahwa ada  perubahan
patologis oleh sediaan uji tidak mempengaruhi  perubahan  berat  ginjal (Tabel 5).
Organ sarsaran terakhir yaitu jantung. Berdasarkan  hasil  pemeriksaan menunjukkan  bahwa baik  pada  sediaan uji  300  mg/kg  BB  maupun  sediaan  uji 2000  mg/kg  BB tidak  terjadi  perubahan patologi  pada  organ  jantung (Gambar 1C). Hal ini menunjukkan bahwa
sediaan  uji  tidak  berpengaruh  terhadap organ  jantung  hewan  uji. Jantung merupakan salah satu organ vital dalam mengalirkan  darah  ke  seluruh  tubuh. Oleh karena itu, dalam penelitian ini juga mengamati  ada  atau  tidaknya  pengaruh pemberian  ekstrak  sembukan  terhadap jantung mencit.
Berdasarkan  analisis  statistik,  hasil uji Anova  One  Way menunjukkan  tidak berbeda signifikan terhadap berat jantung  (P>0.05) (Tabel  5).  Hal  ini menunjukkan  bahwa  sediaan  uji  tidak mempengaruhi perubahan berat jantung.

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian,
menunjukkan  potensi  ketoksikan  akut oral  ekstrak  sembukan  menurut  GHS (Globally Harmonized
Classification System) pada  pedoman  OECD  423 termasuk  dalam  kategori  5  (tidak terklarifikasi) dengan LD 50 cut off > 2000 – 5000  mg/kg  BB, sehingga dapat disimpulkan  bahwa  sembukan  aman dikonsumsi untuk hewan.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Penelitian  ini  didukung  oleh  Hibah Penelitian  Bagian  Fakultas  Kedokteran
Hewan UGM No :
A B C
1531/J.01.1.22/HK4/2014. Ucapan terimakasih  disampaikan  kepada  Ketua Bagian Farmakologi dan Patologi Fakultas  Kedokteran  HewanUniversitas Gadjah  Mada  yang  telah  memberikan izin dan mendukung pelaksanaan penelitian. Ucapan terimakasih
juga disampaikan  kepada Wiwin  Herdwiani,
M.  Si.,  Apt. yang  telah  membantu  dan memberi arahan dalam penulisan.

## DAFTAR PUSTAKA
OECD. 2001. Organization for Economic Co-operation and Development  (OECD)  Guidelines for Testing of Chemicals. Test No.
423  :  Acute  Oral  Toxcity – Acute Toxic  Class  Method.  Paris  : OECD. 3-6.
BalaszT.1970. Measurement  of  Acute Toxicyti  in  Paget  G.E.,  (ed) Methods  in  Toxicology  49-75. Blackwell  Scientific  Publications . Oxford& Edinburgh.
Evi TU, Rebecca AK, Islamy RH, Finsa TS,  dan  Juni  H.  2011. Efek antiinflamasi ekstrak daun sembukan  ( Paederia  scandens ) pada  mencit  wistar. Majalah  Obat
Tradisional. 16(2): 95-100.
Govind  JK,  Shekhar  CS,  Harukuni  T, Hoyoku  N,  dan  Shinichi  U.  1996. Inhibitory  Effect  of  Iridoids  on Epstein-Barr  Virus  activation  by  a short-term  in  vitro assay  for  anti- tumor  promoters. Cancer  Letters. 102(4): 223-226.
Hou  S,  Zhu W,  Pang  M,  Jeffry  J,  dan Zhou  L.  2014.Protective  effect  of iridoid  glycosides  from Paederia
scandens (LOUR.) MERRILL (Rubiaceae) on uric acid neuphropathy  rats  induced  by yeast and potassium oxonate. Food and Chemical Toxicology. 64(2): 57–64.
Ma Y,  Zhou  LL,  Yan  HY,  dan  Liu  M. 2009. Effects  of  Extracts  from Paederia  scandens (Lour.)  Merrill (Rubiaceae)  on  MSU  Crystal- Induced  Rats  Gouty  Arthritis. The American  Journal  of  Chinese Medicine. 37(4): 669-683.
Mei  L,  Lanlan  Z,  Zhiwu  C,  dan  Caibiao H. 2012. Analgesic effect of iridoid glycosides from Paederia scandens (Lour.) Merril (Rubiaceae)  on  spared  nerve injury  rat  model  of  neuropathic pain. Pharmacology,  Biochemistry and Behavior. 102(6): 465–470.
Quang  DN,  Hashimoto  T,  Tanaka M,
Dung NX,  dan  Asakawa Y.  2002. Iridoid  glucosides  from  roots  of Vietnamese Paederia  scandens. Phytochemistry. 60 : 505–514.
Samuelson,  D.A. 2007. Texbook  of Veterinary  Histology. Elsevier  Inc. Saunders.
Solikin. 2001. Potensi jenis-jenis herba liar  di  kebun  raya Purwodadi sebagai
obat.http://fisika.brawijaya.ac.id/bs
s- b/proceeding/PDF%20FILES/BSS
_1  18_2.pdfdiakses  tanggal  26 Juni 2014
Spector  WG  dan  Spector  TD.  1993.
Pengantar Patologi Umum. Terjemahan dari:
An Introduction to General Pathology .  Ed  ke-3.  Penerjemah  : Soetipo NS, Harsoyo,  Hana  A,  Astuti  P. Yogyakarta: Gadjah Mada University Press.
Utami  P.2008. Buku  pintar  tanaman
obat . Jakarta :Agromedia. 63– 64.
Xu  Z,  Shulin  P,  Xin  L,  Bingru  B,dan Lisheng D.2006. Sulfur-Containing Iridoid  Glucosides  from Paederia scandens. Fitoterapia. 77(5): 374– 377.
Young-Won C., Kee D.Y., dan Jinwoong K., (2013) Novel Oxooxepane Derivatives and New Phorbic  Acid  Derivative  from
Paederia  scandens,  Bull.  Korean Chem. Soc. 34(2): 683- 685.