Uji Daya Anthelmintik Ekstrak Etanol Daun Kumis Kucing ( Orthosiphon aristatus ) sebagai Anthelmintik Terhadap Ascaris suum secara in vitro
Nikmatul Ulya*, Agustina Tri Endharti**, R Setyohadi***

## ABSTRAK
Askariasis  merupakan  salah  satu  infeksi  cacing  terbanyak  di  Indonesia  yang  disebabkan  oleh  cacing Ascaris  lumbricoides yaitu  nematoda  patogen  pada  usus  halus  yang  dapat  menyebabkan  malnutrisi, gangguan  pertumbuhan,  gangguan  kognitif,  dan  obstruksi  saluran  pencernaan.  Dengan  adanya  efek samping  dan  harga  yang  mahal  pada  obat  anthelmintik  konvensional,  maka  perlu  dilakukan  evaluasi terhadap tanaman obat sebagai alternatif obat anthelmintik. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui daya anthelmintik dari ekstrak daun kumis kucing ( Orthosiphon aristatus ) terhadap Ascaris suum secara in vitro serta  mengetahui lethal  time (LT100)  dan lethal  concentration (LC100)  dari  ekstrak  etanol  daun  kumis kucing.  Penelitian  ini  merupakan  penelitian  eksperimental  laboratorium  dengan  rancangan  penelitian post test  only  control  group  design .  Subjek  dari  penelitian  ini  adalah Ascaris  suum yang  didapat  dari  Rumah Pemotongan Hewan Gadang, Malang. Penelitian ini menggunakan 5 kelompok perlakuan yaitu NaCl 0,9 % sebagai  kontrol  negatif  dan  pirantel  pamoate  1  %  sebagai  kontrol  positif  serta  ekstrak  daun  kumis  kucing dengan konsentrasi 20 %, 30 %, dan 40 %. Data yang diperoleh diuji secara statistik dengan analisis probit untuk mengetahui lethal concentration (LC100) dan lethal time 100 (LT100) dari ekstrak etanol daun kumis kucing. Hasil uji normalitas menunjukkan distribusi normal (p > 0,05). Hasil analisis probit menunjukkan lethal concentration 100  (LC100)  ekstrak  etanol  daun  kumis  kucing  adalah  39,2  %,    sedangkan lethal  time 100 (LT100) pada konsentrasi 40 % adalah 13 jam 14 menit. Dari penelitian ini dapat disimpulkan bahwa ekstrak etanol daun kumis kucing memiliki daya antihelmintik terhadap Ascaris suum secara in vitro .
Kata kunci : Anthelmintik, Ascaris suum , Daun kumis kucing.
The Efficacy Of Cat's Whiskers Leaf ( Orthosiphon Aristatus ) Ethanol Ekstract as Anthelmintik againts Ascaris suum in vitro

## ABSTRACT
Ascariasis  is one of  the  most  common  human  helminthic infections  in  Indonesia  caused  by Ascaris lumbricoides which  is  the  highly  pathogenic  nematode  parasite  of  small  intestine causing  malnutrition, growth  and  cognitive  disorder,  and  digestive  tract  obstruction.  The  adverse  effect  and  high  cost  of conventional  anthelmintic drugs led to the evaluation of medicinal plants as an alternative of anthelmintic drugs.  The  aim  of  this  study  was  to  investigate  the  ethanol  extract  of  kumis  kucing  leaves  ( Ortosiphon aristatus ) as an anthelmintic againts Ascaris suum in vitro and to identify lethal time 100 (LT100) and lethal concentration 100 (LC100) toward ethanol extract of kumis kucing leaves. This study was an experimental laboratory with post only controlled group design. The research subject was actively living Ascaris suum , which were obtained from a slaughter house in Gadang, Malang. Samples were divided into five treatment groups,  there  were  negative  control  (0.9  %  NaCl),  positive  control  (0.1  %  pirantel  pamoate),  and  the treatment group with concentration of 20 %, 30 % and 40 %, respectively. The data were statistically tested with  the  probit  analysis  in  order  to  know  lethal  concentration  100  (LC100)  and  lethal  time  100  (LT100) toward ethanol extract of kumis kucing leaves. The result of normality test shown normal distribution (p > 0.05).  The result  of  probit  analysis  shown  that  the  lethal  concentration  100  (LC100)  of  ethanol  extract  of kumis kucing leaves was 39.2 % while the lethal time 100 (LT100) in 40 % leaves extract was 13 hours 14 minutes. It was concluded that ethanol extract of kumis kucing leaves has the effect of anthelmintic againts Ascaris suum in vitro.
Keyword : Anthelmintic, Ascaris suum , Kumis kucing leaf.
* Program Studi Pendidikan Dokter, FKUB
**  Lab Parasitologi, FKUB
***  Lab Biokimia Biomolekuler, FKUB

## PENDAHULUAN
Askariasis  merupakan  penyakit  yang diakibatkan  oleh  manifestasi Ascaris lumbricoides yang ada di dalam tubuh ma- nusia dengan angka kejadian yang tinggi di dunia  maupun  di  Indonesia. 1 Parasit  ini banyak  terdapat  di  daerah  iklim  dingin maupun  iklim  panas,  tetapi cacing  ini  lebih umum  ditemukan  di  daerah  beriklim  panas dengan kelembaban yang tinggi dan paling banyak ditemukan di tempat-tempat dengan sanitasi  yang  jelek.  Askariasis  ditemukan pada  semua  umur,  tetapi  lebih  sering  dite- mukan  pada  anak-anak  usia  5  samapi  10 tahun. 2 Prevalensi  askariasis  di  Indonesia masih  tinggi  terutama  pada  anak,  yaitu antara  60-90  %.  Seperti  prevalensi askariasis di propinsi DKI Jakarta adalah 4 - 91%, Jabar 20-90 %, Yogyakarta 12-85 %, Jatim  16-74  %,  Bali    40-95  %,  NTT  10-75 %,  Sumut  46-75  %,  Sumbar  2-71  %, Sumsel 51-78 %, dan  Sulut 30-72 %. 3
Di  Indonesia, Ascaris  lumbricoides dikenal  sebagai  cacing  gelang.  Predileksi cacing dewasanya terdapat di dalam lumen usus  halus  manusia,  tetapi  kadang-kadang dijumpai di bagian usus lainnya. Penularan dapat  terjadi  melalui  beberapa  cara,  yaitu masuknya  telur  infektif  melalui  makanan dan  minuman  yang  tercemar  dan  melalui tangan  yang  kotor  atau  terhirup  bersama debu udara yang tercemar telur infektifnya. 4 Askariasis merupakan penyakit endemik  di  daerah  tropis  dan  subtropis  te- tapi secara sporadis dapat terjadi di seluruh dunia. Penduduk pedesaan dengan kondisi sanitasi yang buruk mempunyai resiko yang tinggi  terhadap  infeksi  cacing  ini.  Orang dewasa  biasanya  terinfeksi  karena  makan sayur mentah yang terkontaminasi  oleh te- lur  cacing,  baik  dari  feses  penderita  mau- pun dari tanah yang tercemar feses pende- rita,  sedangkan  pada  anak–anak  biasa  te- rinfeksi dengan cara tangan ke mulut ( hand
to mouth ) atau karena kebiasaan mengulum benda  –  benda  atau  mainan  yang  terkon- taminasi telur cacing ini. 11
Obat  anti  cacing  (anthelmintik)  yang sekarang banyak digunakan untuk mengobati askariasis antara lain mebenda- zol, albendazole, pirantel pamoat, levamisol hidroklorida,  garam  piperazin  dan  cyclo- bendazole. 6 Obat-obat  tersebut  masih dikhawatirkan  mempunyai  efek  samping, sehingga  perlu  dicari  alternatif  lain  untuk mengobati  askariasis  dengan  harga  murah tetapi  tetap  mempunyai  khasiat  yang  am- puh dan tidak memberi efek samping pada penggunanya. Sampai saat ini di pedesaan masih banyak yang melakukan pengobatan dengan  obat  tradisional  yang  merupakan pengetahuan  turun-temurun  untuk  mengo- bati anak yang kurang nafsu makan karena kecacingan.  Tetapi  ternyata  masih  banyak obat  cacing  (anthelmintik)    dari  alam  Indo- nesia yang belum dibuktikan secara ilmiah. 7 Di Indonesia masih banyak pengobatan alami  untuk  obat  cacing  (anthelmintik). Bahan  obat  yang  dapat  digunakan  untuk pengobatan  askariasis  murah  dan  ter- jangkau  adalah  dengan  memanfaaatkan penggunaan  daun  kumis  kucing  ( Orthosi- phon  aristatus )  yang  banyak  ditemukan  di Bangkalan, Madura. Bagian tanaman kumis kucing    yang  digunakan  untuk  obat  cacing (anthelmintik) adalah daunnya. Daun kumis kucing  mengandung komponen-komponen bioaktif  seperti senyawa  sinensetin,  flavon- flavon,  2  flavonol  glikosida,  zat  samak, saponin,  garam  kalium,  asam-asam organik,  dan  tannin. 8 Sementara  penelitian Nalule et  al tentang  daya  anthelmintik ekstrak etanol akar Zanthoxylum chalybeum terhadap Ascaris  suum secara in  vitro memiliki daya anthelmintik karena
kandungan  flavonoid,  tanin,  dan  saponin yang  terdapat  pada  ekstrak  etanol  akar Zanthoxylum  chalybeum . 9 Kejadian  yang banyak  menginfeksi  manusia  disebabkan oleh Ascaris  lumbricoides.  Ascaris  suum
mempunyai  kemiripan  morfologi  dan kesamaan  cara  infeksi  seperti Ascaris lumbricoides. 10
Cacing  yang  digunakan  dalam  pe- nelitian  ini  adalah Ascaris  suum . Ascaris suum merupakan cacing yang hidup di usus halus  babi  sehingga  mudah  untuk  menda- patkannya.  Sementara  cacing  yang  ada  di dalam  tubuh  penderita  sukar  dikeluarkan kecuali dengan pemberian obat cacing dan biasanya menyebabkan cacing mati. Tujuan umum penelitian ini adalah untuk mengeta- hui  daya  anthelmintik  dari  ekstrak  etanol daun  kumis  kucing  sebagai  anthelmintik terhadap  cacing Ascaris  suum secara in vitro . Tujuan khusus dari penelitian ini yaitu untuk  mengetahui lethal  concentration 100 dari  pemberian  ekstrak  etanol  daun  kumis kucing  pada Ascaris  suum secara in  vitro dan  untuk  mengetahui lethal  time 100  dari ekstrak  etanol  daun  kumis  kucing  pada Ascaris  suum secara in  vitro .  Manfaat penelitian  ini  antara  lain  sebagai  dasar penelitian  lebih  lanjut  tentang  manfaat tanaman  kumis  kucing  terhadap Ascaris suum dan  menambah  informasi  untuk  pe- luang  pengembangan  tanaman  kumis  kuc- ing  sebagai  anthelmintik.  Selain  itu,  untuk memberikan  informasi  kepada  masyarakat tentang  ekstrak  etanol  daun  kumis  kucing sebagai  anthelmintik  terhadap  askariasis dan sebagai usaha peningkatan kesehatan masyarakat.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  ini  merupakan  penelitian eksperimental laboratorium ( true eksperimental-post  test  only  control  group design )  yang  bertujuan  untuk  mengetahui daya ekstrak etanol daun kumis kucing se- bagai  anthelmintik  terhadap Ascaris  suum . Daun kumis kucing yang dipakai untuk pe- nelitian  ini  adalah  daun  kumis  kucing  yang muda dan tua yang didapat dari Bangkalan, Madura.  Ekstrak  etanol  daun  kumis kucing
adalah  ekstrak  etanol  yang  dihasilkan  dari daun  kumis  kucing  yang  dikeringkan  den- gan  teknik  ekstraksi  maserasi  dengan penggunan  pelarut  athanol  96  %.  Proses pembuatan  ekstrak  dimulai  dari  pengerin- gan sampai terbentuk ekstrak yang dikerja- kan  oleh  tenaga  ahli  di  Politeknik  Negeri Malang.
Sampel  penelitian  yang  digunakan adalah Ascaris  suum yang  diperoleh  dari Rumah  Potong  Hewan  Gadang,  Malang dengan  kurun  waktu  kurang  lebih  1  jam setelah  penyembelihan  babi.  Tiap  perla- kuan  membutuhkan  5  ekor  cacing.  Setiap kali  percobaan  dibutuhkan  tiga  kali  perla- kuan, yaitu dengan konsentrasi 20 %, 30 % dan  40  %  dan  satu  kontrol  negatif  dengan NaCl  0,9  %  serta  satu  kontrol  positif  yaitu pirantel  pamoat  1  %.  Penelitian  ini  diulang sebanyak  empat  kali.  Larutan  untuk  perla- kuan  dibuat  dengan  melarutkan  ekstrak daun kumis kucing 20 g, 30 g dan 40 g da- lam 100 ml NaCl 0,9 %. Masing-masing la- rutan ekstrak sebanyak 20 ml dengan kon- sentrasi  20  %,  30  %  dan  40  %  terlebih dahulu  dihangatkan  dalam  inkubator  pada suhu  37  ºC  selama  kurang lebih  15  menit. Ascaris suum sebanyak 5 ekor ditaruh pada masing-masing  cawan  petri  dan  diinkubasi pada suhu 37 ºC. Penelitian dilakukan 4 kali pengulangan.  Untuk  mengetahui  bahwa cacing  telah  mati  setelah  diinkubasi,  maka cacing-cacing  tersebut  diusik  dengan batang  pengaduk.  Cacing  yang  diam kemudian  dipindahkan  ke  dalam  air    suhu 50  ºC.  Apabila  dengan  diusik  tetap  diam, berarti  cacing  tersebut  telah  mati  dan  jika masih  bergerak  berarti  cacing  hanya mengalami paralisis.
Pegamatan  dilakukan  pada  jam  ke-1, ke-2, ke-3, ke-4, ke-5, ke-6, ke-7, ke-8, ke- 9,  ke-10,  ke  11,  dan  jam  ke-24.  Jumlah cacing  yang  mati  dihitung  dan  dimasukan ke  dalam  tabel  dan  dianalisis  dengan  uji statistik.

## Analisis data
Data  jumlah  kematian  cacing  setiap jamnya  diolah  menggunakan  tabel  dan grafik. Data yang diperoleh dianalisisis den- gan  uji  Kolmogorov-Smirnov  untuk  menge- tahui  normalitas  datanya.  Kemudian  dieva- luasi lagi menggunakan metode Probit den- gan  menggunakan  aplikasi  SPSS  untuk mengetahui LC100 dan LT100 ekstrak eta- nol daun kumis kucing.

## HASIL
Data  jumlah  kematian  cacing  setiap jamnya  dianalisis  dengan  uji  Kolmogorov-
Smirnov  untuk  mengetahui  normalitas datanya.  Dari  hasil  analis  diketahui  bahwa sebaran  data  normal  (p  >  0,05),  hasil  ini membuktikan  bahwa  tidak  ada  beda signifikan dalam ekstrak etanol daun kumis kucing. Hasil uji kemudian dievaluasi secara statistik  menggunakan  metode  probit dengan menggunakan aplikasi SPSS untuk mengetahui  LC100  dan  LT100  ekstrak etanol  daun  kumis  kucing.  Dari  hasil analisis  probit  didapatkan  LC100  ekstrak etanol daun kumis kucing 39,2 %.Gambar 1 di  bawah  ini  adalah  grafik  hasil  analisis probit pada konsentrasi 40 %.
Gambar 1. Hasil analisis probit pada konsentrasi ekstrak etanol daun kumis kucing 40 %
Efektivitas  ekstrak  etanol  daun  kumis kucing dibandingkan dengan pirantel pamoat 1 % dilakukan  dengan cara mencari waktu kematian  antara  perlakuan  dengan  ekstrak etanol daun kumis kucing 40 % dan pirantel pamoat  1  %.  Hasilnya  dapat  dilihat  pada Gambar 2 dibawah ini.
Gambar  2.  Efektivitas  ekstrak  etanol  daun  kumis  kucing  40  %  dibandingkan  dengan  pirantel pamoat 1 %
9,6 18,7 24,8 29,4 34,5 39,2 0 20 40 60 80 100 0 10 20 30 40 50 Ke m at ian Cac ing Konsentrasi Ekstrak Etanol Daun Kumis Kucing (%) LC100 8,39 10,37 11,39  11,51 12,21 13,14
3,63  3,87  4,05  4,22 4,47 4,81 0 5 10 15 20 0 20 40 60 80 100 Le tal T im e (jam ) Kematian Cacing (%) LT100 kumis kucing 40% LT100 pirantel pamoat 1%
Dari  hasil  analisis  probit  didapatkan bahwa  LT100  ekstrak  etanol  daun  kumis kucing  40  %  adalah  13  jam  14  menit sedangkan  LT100  pirantel  pamoat  1  % adalah 4 jam 81 menit.

## PEMBAHASAN
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui daya anthelmintik ekstrak etanol daun  kumis  kucing  ( Orthosiphon  aristatus ) terhadap Ascaris  suum secara in  vitro .  Dari analisis  probit  didapatkan  LC100  ekstrak etanol  daun  kumis  kucing  adalah  39,2  % yang  berarti  bahwa  kemampuan  ekstrak daun kumis kucing untuk membunuh 100 % jumlah Ascaris suum diperlukan konsentrasi sebanyak 39,2 % sedangkan LT100 ekstrak etanol  daun  kumis  kucing  13  jam  14  menit. Pirantel  pamoat  1  %  sebagai  kontrol  positif memiliki  LT100    yang  lebih  singkat  yaitu  4 jam 81 menit.
Dari  hasil  penelitian,  terbukti  bahwa ekstrak  etanol  daun  kumis  kucing  memiliki daya  anthelmintik  terhadap Ascaris  suum secara in  vitro tetapi  daya  anthelmintik tersebut lebih rendah dari pirantel pamoat 1 %.  Konsentrasi  ekstrak  daun  kumis  kucing yang berbeda menunjukan daya anthelmintik yang  berbeda  pula.  Hal  ini  tampak  pada rerata waktu kematian cacing yang semakin cepat  pada  konsentrasi  ekstrak  yang semakin tinggi.
Daya  anthelmintik  pirantel  pamoat sudah  banyak  diketahui  karena  pirantel pamoat  merupakan  obat  pilihan  pada askariasis.  Mekanisme  pirantel  pamoat menghambat  enzim  kolinesterase  yang meningkatkan  kontraksi  ototnya. 11 Dari penelitian  ini  diketahui  bahwa  pirantel pamoat  memiliki  daya  anthelmintik  yang lebih  kuat  daripada  ekstrak  etanol  daun kumis kucing pada semua konsentrasi.
Kemampuan ekstrak etanol daun kumis kucing  untuk  membunuh Ascaris  suum disebabkan  adanya  senyawa  aktif  tertentu
yang terkandung didalamnya. Ekstrak etanol daun  kumis  kucing  diketahui  mengandung flavonoid,  tanin,  saponin.  saponin  dapat berpotensi  sebagai  anthelmintik  karena bekerja  dengan  cara  menghambat  enzim asetilkolinesterase,  sehingga  cacing  akan mengalami paralisis otot dan berujung pada kematian. 7 Flavonoid  yang  bersentuhan dengan  tubuh  cacing,  akan  cepat  diserap dan menyebabkan denaturasi protein dalam jaringan  cacing  sehingga  menyebabkan kematian  cacing. 12 Ekstrak  etanol  daun kumis  kucing  juga  mengandung  tannin. Mekanisme tanin membunuh cacing dengan cara  masuk  ke  dalam  saluran  pencernaan dan secara langsung mempengaruhi proses pembentukan protein yang dibutuhkan untuk aktivitas  cacing.  Zat  aktif  ini  akan menggumpalkan protein pada dinding cacing gelang  ( Ascaris  lumbricoides )  sehingga menyebabkan  gangguan  metabolism  dan homeostasis cacing. 13
Penelitian  Nalue et  al menggunakan ekstrak etanol akar Zanthoxylum chalybeum yang mengandung senyawa flavonoid, tanin, dan  saponin  memiliki  daya  anthelmintik secara in  vitro . 9 Ekstrak  etanol  akar Zanthoxylum  chalybeum konsentrasi  10  % dapat membunuh cacing pada jam ke 93.33 menit.  Perbedaan  waktu  kematian  antara ekstrak etanol akar Zanthoxylum chalybeum dan  ekstrak  etanol  daun  kumis  kucing terletak pada penggunaan kadar etanol yang berbeda, pada akar Zanthoxylum chalybeum menggunakan etanol 70 % sedangkan pada ekstrak  etanol  daun  kumis  kucing menggunakan etanol 96 %.
Pada  penelitian  ini  masih  ada keterbatasan  yaitu  tidak  diketahuinya konsentrasi  masing-masing  bahan  aktif tanin, saponin, dan flavonoid yang terdapat pada  ekstrak  etanol  daun  kumis  kucing. Selain itu, belum diketahuinya  penggunaan kadar  etanol  yang  tepat  agar  bahan  aktif pada setiap bahan alam mendapatkan hasil yang  optimal.  Keterbatasan  juga  terjadi  di
tempat  pengambilan  cacing.  Pada  setiap pengambilan  tidak  dapat  diprediksi  berapa jumlah  cacing  yang  ada  dan  setiap pengambilan  tidak  dapat  digunakan  untuk pengulangan  sekaligus.  Hal  ini  karena sedikitnya  jumlah  babi  yang  dipotong  di RPH  Gadang.

## KESIMPULAN
Kesimpulan  dari  penelitian  ini  adalah ekstrak  etanol  daun  kumis  kucing  memiliki daya  anthelmintik  terhadap Ascaris  suum
secara in  vitro dengan  konsentrasi  ekstrak etanol  daun  kumis  kucing  yang  diperlukan untuk  membunuh Ascaris  suum (LC100) selama  24  jam  adalah  39,2 %.  Waktu  yang diperlukan ekstrak etanol daun kumis kucing 40  %  untuk  membunuh  seluruh Ascaris suum (LT100) adalah 13.14 jam.

## SARAN
1. Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut untuk  mengetahui  konsentrasi  masing- masing bahan aktif pada ekstrak etanol daun kumis kucing.
2. Perlu dicari sumber pengambilan cacing alternatif  untuk  mempermudah  jalannya penelitian selanjutnya. Hal ini dikarenakan pada penelitian  ini pengulangan  penelitian  tidak  dapat dilakukan  sekaligus  pada  hari  yang sama.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Margono SS ,  Suroso  T,   Wandra  T,  Ito A. Challenges for Control of Taeniasis/Cysticercosis  in  Indonesia. Parasitol Int . 2005; 55 Suppl:S161-5.
2. Onggowaluyo  JS. Parasitologi  Medik  I (Helmintologi): Pendekatan Aspek Indentifikasi , Diagnosis,  dan  Klinik . Jakarta: EGC. 2001. hlm 11-31. 3. Oktavianto  RR.  Uji  Daya  Anthelmintik
Infusa  Bawang  Putih  ( Allium  Sativum Linn.)  Terhadap  Cacing  Gelang  Babi ( Ascaris  suum )  secara in  vitro .  Tugas Akhir.  Surakarta:  Fakultas  Kedokteran Universitas Muhammadiyah. 2009.
4. Soedarto. Parasitologi Klinik . Surabaya:
Airlangga  University  Press.  2008.  hlm 71-96.
5. Palgunadi  BU.  Faktor-Faktor  yang Mempengaruhi  Kejadian  Kecacingan yang  Disebabkan  oleh Soil-Transmitted Helminth di  Indonesia.  Surabaya: Fakultas Kedokteran Universitas Wijaya
Kusuma. 2011.
6. Rusmantini  T.  Penyakit  Parasit  pada
Usus.  Di  dalam  Natadisastra  D  dan Agoes  R. Parasitologi  Kedokteran
Ditinjau  dari  Organ  Tubuh  yang
Diserang .  Jakarta:  Penerbit  Buku
Kedokteran EGC. 2009. 7. Kuntari  T.  Daya  Antihelmintik  Air Rebusan  Daun  Ketepeng  ( Cassia  alata
L)  terhadap  Cacing  Tambang  Anjing in vitro . Logika. 2008; 5(1): 23-26.
8. Mahendra  B. 13  Jenis  Tanaman  Obat
Ampuh . Jakarta:  Penebar  Swadaya.
2005. 9. Nalue AS, Mbaria JM, and Kimenju JW. In  Vitro  Anthelmintic  Potensial  and Phytochemical Composisition of Ethanolic and Aquos Crude Exstracts of Zantholium  chalibeun Engl. African journal of pharmacy and pharmacology .
2013; 7(23):605-1614.
10. Bayu  S,  Raharjo  ND.  Pengaruh Pemberian  Air  Rebusan  Akar  Delima ( Punica granatum L.) terhadap Mortalitas Ascaris suum Goesze. secara in vitro . Surabaya : Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Negeri Surabaya. 2010.
11. Syarif A, Purwantyastuti A, Ari E, Rianto S,  Arini  S,  Armen  M,  dkk. Farmakologi dan  Terapi .  Edisi  ke-5.  Jakarta:  Gaya
Baru. 2009.
12. Nadia  H.  Efektivitas  Ekstrak  Etanol Daun  Miana  ( Coleus  blumei )  terhadap Infeksi Hymenolepis  microstoma pada Mencit ( Musmusculus albinicus ). Skripsi. Bogor:    Fakultas  Kedokteran  Hewan Institut Pertanian Bogor. 2008.
13. Budiyanti  RT.  Efek  Antihelmintik  Infusa Herba Sambiloto ( Andrographis paniculata Nees)  terhadap Ascaris
Suum  s ecara in  vitro .  Surakarta: Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret. 2010.