i

## EFEK ANGIOGENESIS GEL EKSTRAK DAUN LAMTORO (LEUCAENA LEUCOCEPHALA) PADA LUKA INSISI TIKUS
Ahyana Fitrian *1 , Achmad Bashor 2 , I.Ketut Sudiana 3
1 Mahasiswa Program Studi S2 Ilmu Kedokteran Dasar Fakultas Kedokteran, Universitas Airlangga; Jalan Mayjend Prof. Dr. Moestopo no 47 Surabaya, telp.
031-5030251,fax:031-5022472
2 Departeman Farmakologi Fakultas Kedokteran, Universitas Airlangga; Jalan Mayjend Prof. Dr. Moestopo no 47 Surabaya, telp. 031-5030251,fax:031-5022472 3 Departemen Patologi Anatomi, Fakultas Kedokteran, Universitas Airlangga; Jalan Mayjend Prof. Dr. Moestopo no 47 Surabaya, telp. 031-5030251,fax:031- 5022472
e-mail : H42juna@yahoo.co.id

## Abstrak
Proses  penyembuhan  luka  berjalan  melalui  fase   hemostatik,  inflamasi,  proliferasi dan  remodelling.  Angiogenesis  adalah  proses  pembentukan  vaskuler  baru  dari  vaskuler yang  telah  ada  sebelumnya.  Dalam  proses  penyembuhan  luka  vaskuler  berperan  dalam mensuplai  oksigen  dan  nutrien  yang  dibutuhkan  untuk  proses  metabolisme  sel  dan penghilangan  sel  debris.                  kegagalan  angiogenesis  mengakibatkan  tertundanya kesembuhan  luka.  Daun  lamtoro  mengandung  metabolit  tannin,  saponin  dan  flavonoid yang  berperan  merangsang  angiogenesis  pada  proses  penyembuhan  luka.  penelitian ini bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh pemberian  ekstrak  daun lamtoro dalam berbagai konsentrasi   dalam   meningkatkan   angiogenesis   pada   luka   insisi   menggunakan model tikus.   Metode  penelitian  menggunakan  Rattus  novergicus  jantan,  150-200  gram yang  dibagi  ke  dalam  8  kelompok  yang  terdiri  dari  kelompok  kontrol  negatif  hari  ke  3 dan  hari  ke   5,  kelompok  ekstrak  daun  lamtoro  15   %  hari   ke  3  dan  hari  ke  5, kelompok  ekstrak daun  lamtoro  30  %  hari  ke  3  dan  hari  ke  5  serta  kelompok  ekstrak daun  lamtoro  45  % hari  ke  3 dan  hari  ke 5.  Luka  dibuat  dengan  menginsisi  punggung tikus  (1,5x1,5  cm)  lalu  pada  masing-masing  kelompok  dioleskan  gel  100  mg  1x  sehari hingga  hari  pengamatan.  Tikus  dikorbankan   hari  ke   3   dan  ke  5  dan  dilakukan identifikasi  dengan  metode  hematoxilin  Eosin  (HE)  dan  pengamatan  jumlah  vaskuler. Hasil  penelitian  menunjukkan  jumlah  vaskuler  kelompok  perlakuan  gel  ekstrak  daun lamtoro  30% dan  45  % berbeda signifikan dibanding kelompok kontrol, baik pada hari ke  3  maupun  ke  5.  Kesimpulan  penelitian  menunjukkan  ekstrak  daun  lamtoro meningkatkan jumlah vaskuler pada luka insisi rattus novergicus.
Kata kunci: angiogenesis, daun lamtoro, jumlah vaskuler

## Abstract
Wound   healing   process  goes   through   the   hemostatic   phase,   inflammation, proliferation   and   remodeling.   Angiogenesis   is   the   procces   of   forming   a   new vascular  from  the  vascular  that  has  existed  before.  In  wound  healing  vascular  plays  a role  in  supplying  oxygen  and  nutrients  that  needed  for  cell  metabolism  and  debris  cell removal.  Failure  of  angiogenesis  results  in  delayed  wound  healing.  Lamtoro  leaves contain  metabolites     of     tannin,     saponins     and     flavonoids     which     stimulate angiogenesis   in   the wound healing. This  study aims to determine the effect  of lamtoro leaf  extract  at  various  concentrations  for  increasing  angiogenesis  in  incision  wounds using  mice.  The  research  method  used  male  Rattus  novergicus,  150-200  grams  divided into 8 groups consisting of negative control group at 3 rd and 5 th days,  15% lamtoro leaf extract  group  at  3 rd and  5 th days,   30%  lamtoro  leaf  extract  group  at  3 rd and  5 th days and  45%  lamtoro  leaf  extract  group  at  3 rd and  5 th .  Wounds  were  made  by  incising  the back  of  the  mouse  (1.5  x  1.5  cm)  then  in  each  group  was  applied  by  100  mg  gel  until observation day finished . Mice were sacrificed  at  3rd  and  5th  days  and  were  identified with  hematoxylin  eosin  (HE)  method  and  observation  of  vascular  counts.  The  results showed that vascular number in 30% and 45%  gel  lamtoro  leaf’s  extract  significantly  different  compared  to  the  control  group, both  on  the  3rd  and  5th  days.  Conclusion:  The  study  showed  that  lamtoro  leaf  extract increase the vascular number in the rattus novergicus incision wound.
Key word : angiogenesis, lamtoro leaf, vascular amount

## 1.   PENDAHULUAN
Luka   merupakan   kondisi   jaringan kulit  yang  terputus,  robek     atau  rusak  oleh suatu  sebab  (  Librianty,2015)  ataupun kerusakan  integritas  dan  atau  terputusnya integritas  kulit  /jaringan  (Saputro,  2014).
Menurut Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Kementrian
Kesehatan  RI  tahun  2013,  prevalensi  cedera secara  nasional              (8,2  %),  mengalami peningkatan  dibanding  tahun  2007  (7,5%). Penyebab  cedera  terbanyak  adalah  jatuh (40,9%)  dan  kecelakaan  sepeda  motor (40,6%).  Tiga  urutan  terbanyak  luka  jenis cedera  adalah  luka  lecet/memar  (70,9%), terkilir   (27,5%),dan   luka   robek    (23,2%). Data    tersebut    menunjukkan  bahwa  angka kejadian   luka   di   Indonesia   masih   cukup tinggi  dan  memerlukan  alternatif  penanganan untuk  mempercepat  penyembuhan          luka. Sejumlah  bahan  alam  diketahui  memiliki kandungan  senyawa  aktif  yang  berpotensi untuk  meningkatkan  proses  angiogenesis. Saponin  diketahui  menstimulasi  merangsang Vascular    Endothelial    Growth    Factor (VEGF),  mempercepat  fase  inflamasi  dan mempercepat  proses  penyembuhan  luka (Rohmah et    al ,    2016).  Daun    lamtoro
( Leucaena
leucocephala ) diketahui mengandung    senyawa    saponin,    tanin, alkaloid dan flavonoid (Sartimah et al., 2010) yang  berpotensi  sebagai  bahan  alam  yang dapat digunakan untuk mempercepat penyembuhan luka.
Prinsip pengobatan luka adalah untuk mencapai  penutupan  luka  dengan  cepat, pengembalian  fungsi  dan  bekas  luka  secara estetik  (  Tonnesen et  a.l ,  2000).  Tujuan  ini diperoleh  melalui  proses  pencegahan  infeksi, trauma lebih lanjut dan memberikan lingkungan yang optimal bagi proses penyembuhan  luka  itu  sendiri  (Ariningrum, et    al, 2017).   Fase   penyembuhan   luka secara          umum          meliputi homeostasis , inflamasi, proliferasi dan remodeling . Homeostasis  merupakan  fase  yang  terjadi paling  awal  dalam  fase  penyembuhan  luka di mana pembuluh darah mengalami vasokonstriksi  dan  endotel  serta  platelet terdekat  mengaktifkan  bagian  intrinsik  dari cascade koagulasi    sekaligus    melepaskan
sitokin dan faktor pertumbuhan yang mengawali  respon  inflamasi.  Fase  inflamasi melibatkan    sel    leukosit,    makrofag    dan netrofil  yang  memiliki  peran  penting  dalam proses  desinfektan  sekaligus  mengaktifkan growth factor serta sitokin lain  yang berperan penting    dalam    fase    proliferasi.    Fase proliferasi meliputi angiogenesis dan epitelialisasi  untuk  mengembalikan  integritas barier  kulit  yang  mengalami  disrupsi.  Pada fase  terakhir      jaringan  luka  akan  mengalami remodeling        yaitu  pematangan  jaringan  dan mengembalikan  normalitas  kulit  menuju kondisi  normal  sesuai  kondisi  kulit  sebelum mengalami  luka  (Broughton et  al. ,  2006). Kegagalan pada salah  satu  fase  penyembuhan terutama dalam proses angiogenesis
mengakibatkan  luka  gagal  sembuh  secara penuh  serta  mengakibatkan  terjadinya  luka kronis (Johnson dan Wilgus, 2013).
Bahan  bahan  yang  mempercepat  proses angiogenesis  dapat  dikategorikan  sebagai bahan          penyembuh          luka.  Penggunaan ramuan  obat  dari  tanaman  untuk  mengobati lesi  kulit,  khususnya          luka  bakar  dan  luka kulit    sudah    dilakukan   masyarakat    sejak lama.    Berbagai    jenis    tanaman    dengan aktivitas      penyembuhan    luka    telah    diteliti pada berbagai model binatang untuk menunjukkan  potensi  senyawa  aktif  yang berperan  (  Al  Basal, et  al, 2001).  Indonesia merupakan  negara  yang  kaya  dengan  bahan alam  dan  tanaman  yang  berpotensi  sebagai terapi  alternatif  untuk  pengobatan  luka,  salah satu  diantaranya  adalah  daun  lamtoro  ( Leucaena  leucocephala ).  Daun  lamtoro  ( Leucaena leucocephala ) secara empirik irasional  sering  dipakai  masyarakat  untuk membantu    menyembuhkan    luka    iris,    lecet dan  jenis luka accidental yang  lain. Penggunaannya  dengan  jalan  menghaluskan pucuk  daun  dan  menempelkannya  pada  area luka.
Salah      satu      faktor      penentu kesuksesan       dalam   proses   penyembuhan luka  adalah  kecukupan      oksigen  dan  nutrisi yang   dibutuhkan   oleh   sel   yang   berperan dalam  penyembuhan            luka.  Ketersediaan nutrisi dan  oksigen tersebut sangat  ditentukan oleh  keberadaan  vaskular.  Pada  saat  terjadi luka  sebagian  pembuluh  vaskular  mengalami kerusakan oleh karenanya diperlukan pembentukan   vaskular   baru    ( neovaskular ).
Angiogenesis  adalah  proses  pembentukan pembuluh    darah  baru  dari  pembuluh  darah yang  sudah  ada  sebelumnya.  Pada  saat angiogenesis    terjadi                        pertumbuhan pembuluh  kapiler  yang  saling  terhubung membentuk  vaskular  yang  bersifat  tetap  pada jaringan  yang  mengalami  perlukaan  sehingga peran  penting  pada  proses  penghilangan debris,  penyediaan  nutrien dan  oksigen  untuk proses  metabolisme  selama  berlangsungnya proses  perbaikan   jaringan  pada  daerah  luka dapat terjadi. Stimulator yang berperan dalam proses terjadinya angiogenesis selama perbaikan  luka  antara  lain      kadar      laktat yang  tinggi,  pH  asam,  ROS  dan  penurunan tekanan  oksigen  dalam  jaringan.  Sitokin  dan faktor   pertumbuhan   yang   terlibat   dalam proses        angiogenesis  antara  lain basic Fibroblast Growth Factor ( bFGF),Transforming Growth Factor ( TGFα,
TGF β), Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF)  dan  prostaglandin  (  Ramasastry et al. ,2005). Permukaan  sel  endotel     memiliki reseptor growth  factor yang  berperan  aktif dalam  pelarutan  matriks  ekstraselular  untuk memudahkan  proses  migrasi  dan  proliferasi sel endotel selanjutnya (Johnson dan Wilgus, 2014).
Salah    satu   alternatif    terapi    yang digunakan   untuk   merangsang   angiogenesis
Rancangan  penelitian  ini  merupakan jenis  penelitian  murni  ( true  experiment ), dengan    desain    penelitian    the randomized post      test      only      control  group      design . Pemilihan  kelompok  menggunakan  teknik acak      yang      dibagi  menjadi  8  kelompok dengan  jumlah  6  ekor  tiap  kelompok.  Pada semua kelompok dioleskan    gel    sebanyak 100    mg    1x    sehari    dimana    kelompok K3   akan mendapatkan perlakuan perawatan luka    dengan    menggunakan    basis    gel, Kelompok    K5    menggunakan    basis    gel, kelompok    P1    dan    P4    dioleskan    gel ekstrak  daun  lamtoro        15%,  kelompok  P2 dan  P5  dioleskan  gel  ekstrak  daun  lamtoro 30%,  kelompok  P3  dan  P6  dioleskan  gel ekstrak   daun   lamtoro      45%  hingga   hari pengamatan.  Kriteria  inklusi  hewan  coba pada  penelitian  ini      yaitu  jenis    kelamin jantan,     berat     badan     150-   200     gram, sehat.   Sedangkan    Kriteria  eksklusi  dalam penelitian ini yaitu cacat dan tidak sehat dan drop out jika tikus mengalami kematian.

## 2.2. Tempat  dan Waktu Penelitian
Penelitian            dilakukan            di laboratorium hewan coba departemen farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga penelitian ini dilakukan    selama    bulan    Februari-Maret dalam      upaya   penyembuhan  luka   adalah 2018
Hyperbaric    Oxygen  Therapy ( HBOT)  dan Topical   Oxygen   Therapy (Schremi et   al. , 2010), namun dalam pelaksanaannya memerlukan peralatan khusus dan biaya yang kurang       ekononomis       oleh       karenanya diperlukan   bentuk   pengobatan   baru   yang dapat   diterapkan    sebagai    alternatif    serta terapi    komplementer     yang   lebih    murah dan  mudah.        Daun  lamtoro  ( Leucaena leucocephala )    mengandung    senyawa metabolit  sekunder      tanin  ,  saponin  dan senyawa  aktif  lain  yang  diharapkan  berperan dalam proses angiogenesis. Namun, pengaruh pemberian daun lamtoro ( Leucaena leucocephala )  terhadap  peningkatan  jumlah vaskular  pada  proses  penyembuhan  luka hingga saat ini belum bisa dijelaskan.

## 2.  METODE PENELITIAN
2.1. Rancangan Penelitian

## 2.3. Variabel Penelitian
Variabel  pada  penelitian  ini  terdiri dari   variabel   bebas   yaitu   pemberian   gel ekstrak  etanol  daun  lamtoro  15%  dan  45% sebanyak    100    mg    .    Variabel    terikat  pada penelitian  ini  adalah  jumlah  vaskuler  pada proses  penyembuhan  luka  tikus  yang  diamati pada  hari  ke  3  dan  5.  Variabel  terkendali pada  penelitian  ini  adalah  cara  pembuatan luka,  tempat  pemberian  luka,  ukuran  luka  , cara  pemberian  gel  ,cara  pemeliharaan  dan waktu pengamatan yaitu pada hari ke 3 dan 5.

## 2.4. Definisi Operasional
a)  Gel  ekstrak daun lamtoro  konsentrasi adalah daun yang diekstrak dengan menggunakan    pelarut    etanol    95%    dengan cara   maserasi   menggunakan vaccum   rotary
© (2018) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
evaporator     dengan     suhu     40-50 0 C. Ekstrak  ini   dibuat sediaan gel dengan kadar 15%,30%  dan  45  %,  kemudian  diaplikasikan secara    topikal    dan    dioleskan    sepanjang luka  sebanyak  100  mg  sekali sehari.
b) Luka  insisi  pada  binatang coba adalah luka jaringan  kulit pada  bagian epidermis   dan  1/3  dermis  di  daerah punggung  tikus  berbentuk  persegi empat dengan  ukuran   1,5  x   1,5  cm,   kedalaman luka  1,5   mm   yang ditandai dengan adanya diskontinuitas jaringan
c)   Jumlah   vaskuler   adalah   jumlah pembuluh   darah   yang  terdapat   pada   regio luka  pada  proses  penyembuhan  luka  yang merupakan   hasil    pertumbuhan   pembuluh darah     lama     yang     memiliki     ukuran berkisar   7-9   µ m,   dan bewarna  kemerahan dilapisi  oleh  selapis  sel  endotel  yang berbentuk  gepeng  yang  merupakan  lempeng tipis melengkung dengan inti lonjong.

## 3.   PROSEDUR PENELITIAN

## 3.1.    Prosedur pembuatan ekstrak
Serbuk    daun    lamtoro    dilakukan maserasi    dengan    pelarut    etanol    96% selama    24  jam    dan    di shaker dengan kecepatan  putaran  50  rpm.Ekstrak  cair disaring dengan kain penyaring dan ditampung  di  tabung  Erlenmeyer.  Ampas hasil  penyaringan  di  remaserasi  selama  24 jam.  Re-maserasi  dilakukan   sampai  filtrat atau  ekstrak  lebih  jernih.  Hasil  ekstrak  cair diuapkan dengan menggunakan rotary evaporator .  Ekstrak  hasil  evaporasi  dengan menggunakan rotary  evaporator diuapkan kembali diatas water bath selama 2 jam

## 3.2.    Prosedur pembuatan gel
Pembuatan     gel     diawali     dengan mencampur    Na    CMC   dengan    aquades hingga  homogen,  lalu  ditambah  gliserin  dan propilen  glikol  hingga  terbentuk  gel  yang mengembang    dan        jernih.    Gel        yang terbentuk    ditambahkan    ekstrak        daun lamtoro    yang   dilarutkan    dalam   sedikit etanol,    diaduk    hingga    homogen    dan disimpan  dalam  wadah  tertutup  rapat. Formula  gel  ekstrak  daun  lamtoro  disajikan dalam tabel 1.

## 3.3.      Persiapan dan perlakuan  sampel penelitian
Dilakukan  pengelompokkan  sampel  menjadi 8   kelompok   dengan   cara   random,      lalu hewan   coba   diadaptasikan   dalam   kandang selama     7       hari       dalam    kandang    dan lingkungan  yang  sesuai.  Tikus  putih  diberi diet  3x/hari.  Pembuatan  model    luka    insisi dilakukan      dengan            mencukur      bulu punggung   ±   4   cm 2 . Dilakukan desinfeksi pada area kulit yang akan dilukai menggunakan  kapas  swap  alkohol  70%. Dilakukan anastesi lokal menggunakan lidokain    1%    sebanyak    0,1  ml    secara subcutan.  Bagian  yang  akan  dilukai  dipasang duk  steril.  Selanjutnya  dilakukan  penyayatan area yang telah ditandai dengan ukuran 1,5 x 1,5  cm  berbentuk  persegi  empat  dengan ketebalan  penuh        (kedalaman  1,5  mm  ) ditandai  dengan  terangkatnya  kulit  bagian epidermis,        dermis        dan        subkutan. Pembuatan  luka  insisi  dilakukan  dengan menggunakan            teknik  aseptis  untuk meminimalisir  terjadinya  infeksi  sekunder pada luka insisi.

## 3.4.      Perlakuan hewan coba
Area       luka        tikus       dibersihkan dengan       menggunakan       kapas       steril, selanjutnya dilakukan perawatan luka. Kelompok  K3    dan  K5  diberikan  basis gel,kelompok    P1    dan    P4    diberikan    gel ekstrak  daun  lamtoro  100  mg  ,  P2  dan  P5 diberikan    gel  ekstrak  daun  lamtoro  30  %  , P3 dan P6 diberikan gel ekstrak daun lamtoro 45  %  masing  masing  sebanyak  100  mg diberikan     1     kali     sehari     dengan    cara dioleskan   merata   pada   area   luka   hingga waktu   pengamatan.   Luka   insisi   kemudian ditutup  dengan  kasa  dan  direkatkan  dengan plester  yang  tidak  menyebabkan  iritasi.
Komposisi Bahan Tabel 1 Formulasi Gel Ekstrak Daun Lamtoro Formula (Gram) Gel ekstrak daun Gel ekstrak daun Gel ekstrak daun Gel ekstrak daun Ekstrak 0,000 7,500 15,000 22,500 Na- CMC 2,500 2,125 1,750 1,375 Gliserin 5,000 4,125 3,500 2,750 Propilen 2,500 2,125 1,750 1,375 Glikol Ad 50,000 Ad 50,000 Ad 50.000 Ad 50.000 Aqua 3.5.      Prosedur pemeriksaan
Hewan  coba  dieutanasia  via  inhalasi dengan  chloroform.  Setelah  itu  diambil  kulit hewan    coba    untuk    pembuatan    sediaan histopatologi        dan        immunohistokimia. Pembuatan  preparat  imunohistokmia  diawali dengan biopsi area tepi luka   tikus, kemudian dilanjutkan  teknik  proses  jaringan  dengan metode  parafin  untuk  dilakukan  identifikasi pembentukan  vaskuler  dengan  pewarnaan Haematoxylin-Eosin  (HE).  Hasil  pewarnaan diamati  dengan  mikroskop  (NIKON  E100, kamera  Sony  A7),  dengan  pembesaran  400 kali.
3.6.      Pengolahan dan Analisis data Data  yang  didapat  dilakukan  analisa deskriptif   untuk   melihat   nilai mean dan standar  deviasinya  menggunakan  program SPSS   versi   22.0   (IBM   Corp).  Normalitas distribusi   data   diuji   dengan   uji Saphiro   – Wilk ,  homogenitas  data  diuji  dengan Lavene test .  Uji  komparasi  menggunakan  OneWay Annova dilajutkan dengan uji Post Hoc LSD . 3.7.      Ethical clearance
Uji  etik  terhadap  protokol  penelitian dilakukan oleh Komite Etik  Fakultas Kedokteran     Gigi     Universitas     Airlangga Surabaya.

## 4.   HASIL DAN PEMBAHASAN
K-         15%       30%          45% Hari 3 Hari 5
Gambar 1. Pembentukan vaskuler pada jaringan luka tikus akibat pemberian basis gel,gel ekstrak daun lamtoro 15%, 30% dan 45% pada hari ke 5 dan hari ke 5
Gambar  2.  Grafik  rerata  jumlah  vaskuler pada  proses  penyembuhan  luka  dengan pemberian  basis  gel,  gel  ekstrak  daun lamtoro  15%,30%  dan  45%  hari  ke  3  dan ke 5
Gambar  2  menunjukkan  rerata jumlah  vaskuler  pada  area  penyembuhan luka  antara  kelompok  kontrol  dengan kelompok  perlakuan  yang  mendapat  gel ekstrak  daun  lamtoro.  Uji  normalitas  dan homogenitas  menunjukkan  bahwa  data berdistrbusi    normal    dan    homogen (p>0,05),    sehingga    dilakukan    uji parametrik dengan OneWay anova dilanjutkan  dengan  uji PostHoc  LSD .  Uji OneWay Annova terhadap jumlah vaskulermenunjukkan bahwa terdapat perbedaan  antar  kelompok  perlakuan  yang ditunjukkan    dengan    nilai    sig.0,000 (P<0,05).
Tabel  2  Nilai  Signifakansi  Uji Posthoc  LSD Jumlah  Vaskuler  Hari  Ke  3  dan  Ke  5 Pada Proses Penyembuhan Luka Tikus
Kelompok K3               P1               P2 P3 K5 P4 P5 P6 K3 -      0,087          0,003 0,000 0,158 0,000 0,000 0,000 P1 0,087                  -      0,158 0,015 0,751 0,010 0,000 0,000 P2 0,003          0,158                  - 0,270 0,087 0,209 0,010 0,000 P3 0,000          0,015          0,270 - 0,006 0,874 0,015 0,010 K5 0,158          0,751          0,087 0,006 - 0,004 0,000 0,000 P4 0,000          0,010          0,209 0,874 0,004 - 0,021 0,015 P5 0,000          0,000          0,001 0,015 0,000 0,021 - 0,874 P6 0,000          0,000          0,000 0,010 0,000 0,015 0,874 -
Uji post  hoc  LSD terhadap  data  jumlah Vaskuler  hari  ke  3  menunjukkan  bahwa terdapat    perbedaan    signifikan    antara kelompok  K3  dengan  kelompok  P2  dan kelompok    K3    dengan    kelompok    P4, namun   tidak   terdapat   perbedaan signifikan antara  kelompok  K3  dengan  kelompok  P1, antara  kelompok  P1  dengan  kelompok  P2 serta  antara  kelompok  P2  dengan  kelompok P3. Hal ini menandakan bahwa  pada  hari  ke 3    pemberian    ekstrak    daun    lamtoro ( Leucaena  leucocephala )  15%  belum  secara signifikan meningkatkan pembentukan pembuluh  darah,  sedangkan  ekstrak  daun lamtoro  ( Leucaena  leucocephala )  30%  dan 45% dapat meningkatkan pembentukan vaskuler   pada   hari   ke   3.   Uji post   hoc terhadap data jumlah pembuluh darah hari ke 5  menunjukkan  bahwa  terdapat  perbedaan signifikan  antara  kelompok  K5  dengan kelompok    P4,    K5    dengan    P5,    antara kelompok  K5  dengan  kelompok  P6,  antara Kelompok  P4  dengan     kelompok  P5  serta antara  kelompok  P4  dengan  kelompok  P6, namun  tidak  terdapat  perbedaan  signifikan antara   kelompok   P5   dengan   P6.   Hasil tersebut  membuktikan  bahwa  pemberian ekstrak daun
lamtoro ( Leucaena leucocephala )   dosis   15%,30%   dan   45% secara signifikan meningkatkan jumlah pembentukan pembuluh darah pada hari ke 5.
Secara  umum,  proses  angiogenesis dikontrol  melalui  perubahan  level  molekul pro    angiogenik    dan    anti    angiogenik    yang hadir      diantara microenvironment disekitar vaskular.  Beberapa  proangiogenik  antara  lain bFGF, IL-8,   PDGF,    TGF-β,    dan   VEGF, sedangkan  anti  angiogenik  antara  lain angiostatin, thrombospondin-1 dan endostatin.        Kelangsungan  hidup  pembuluh darah  pada  fase quiescence diduga  terjadi ketika    level signal anti    angiogenik    lebih besar      dibanding      level      signal      pro angiogenik,      sedangkan      pada      periode aktifasi  terjadi      pergeseran      keseimbangan mediator      dimana      level signal proangiogenic lebih  besar  dibanding  dengan level signal  antiangiogenic berdasarkan  teori angiogenic  switch .  Ketika  terjadi  perlukaan pada  kulit  angiogenesis  distimulasi  melalui peningkatan  produksi  beberapa  mediator proangiogenik      diantaranya  adalah      VEGF ( Vascular Endothelial Growth Factor) (Johnson dan Wilgus, 2014)
Daun  lamtoro  diketahui  mengandung senyawa  metabolit  flavonoid  yang  memiliki aktifitas,  anti  bakteri  dan      scavenger  radikal bebas  sehingga  berpotensi  sebagai anti inflamasi. Selain flavonoid kandungan terpen,coumarin    dan    sterol  juga  dilaporkan ada  dalam  ekstrak  daun  lamtoro  ( Leucaena
© (2018) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
leucocephala )  yang  berpotensi    sebagai    anti oksidan    (    Mohammed, et    al., 2015    dan Hasan et  al. ,2014).      Amirah      (2014) membuktikan  bahwa  ekstrak  daun  lamtoro ( Leucaen   leucocephala )     0,5%     memiliki efek    anti    inflamasi    pada    tikus    yang diinduksi  dengan  karagenan  dibandingkan dengan    kontrol(Amirah et    al ,    2014). Senyawa  kimia  yang  terkandung  dalam  daun lamtoro  ( Leucaena  leucocephala ),  terutama senyawa polisakarida dilaporkan dapat meningkatkan  limfosit  serta      kapasitas  dan aktifitas  makrofag          dibandingkan  dengan kontrol sehingga berpotensi sebagai imunomodulator    (    Gamal-Eldeen, et    al , 2007).    Makrofag    merupakan    sel    yang berperan  penting  dalam  proses  penyembuhan luka  pada  fase  inflamasi.  Aktivasi  Makrofag memiliki  implikasi      yang  bervariasi  pada penyembuhan  luka,  misalnya  fagisitosis  sel debris,  sintesis  matriks  ekstra  seluler  dan sintesis    sitokin    yang    merangsang peningkatan vaskuler permeability , angiogenesis      dan      epitalialisasi.      Sel makrofag  selain  berperan  sebagai  anti inflamasi    juga    berperan    dalam    fase proliferasi.  Selama  fase  penyembuhan  luka normal,  makrofag  dapat  mengalami switch dari  M1  menjadi  M2.  Makrofag  M1 merupakan  makrofag  pro  inflamasi  dan berperan  dominan  pada  fase  inflamasi, sedangkan  M2  merupakan  makrofag  pro healing /anti  inflamasi  yang  berperan  dalam meregulasi  inflamasi  sehingga  mencegah terjadinya  inflamasi  yang  berkepanjangan. Selain  meregulasi  inflamasi,  makrofag  M2 juga  mengekspresikan            beberapa growth factor yang  penting  untuk  keterlanjutan  fase penyembuhan  luka,  salah  satunya  adalah VEGF (Johnson dan Wilgus, 2014).
Fase  inflamasi  merupakan  fase  yang  penting dalam    proses    penyembuhan    luka,    dimana pada  fase  ini  diperlukan  dalam  rangka fagositosis  patogen  dan  sel  debris  yang berpotensi  mengakibatkan  terjadinya  infeksi dan  menghambat  proses  penyembuhan  luka, namun inflamasi yang terjadi secara berkepanjangan
akan mengakibatkan penundaan  penyembuhan  dan  kegagalan vaskularisasi  dan  kegagalan  penyembuhan luka.   Peralihan   dari   fase   inflamasi menuju fase   proliferasi   memegang   peranan    yang
sangat    penting    dalam    proses  penyembuhan luka.    Setelah    fase    inflamasi    terjadi selanjutnya        proses  penyembuhan  akan memasuki  fase  proliferasi  yang terjadi  mulai 36  jam  setelah  terjadinya  luka  (Ramasastry et al., 2005) . Makrofag merupakan satu kunci dalam transisi dari fase inflamasi  menuju fase proliferasi  (Sorg, et  al ,  2016).      Makrofag memproduksi    faktor-faktor       lain    seperti PDGF  ,TGF  beta  dan  VEGF  yang  berlaku sebagai  sitokin  kunci  yang  dibutuhkan  untuk merangsang              pembentukanvaskuler  dan jaringan  granulasi.  Terjadinya  pembentukan pembuluh darah di hari ke 3 ini kemungkinan terjadi  akibat  kemampuan  metabolit  yang terkandung  dalam  ekstrak  daun  lamtoro ( Leucaena leucocephala ) dalam meningkatkan  jumlah  dan  aktifitas  makrofag sehingga  fase  proliferasi  terjadi  lebih  awal akibat  fase  inflamasi  yang  berjalan  lebih singkat.
Daun  lamtoro  mengandung  senyawa tanin  terkondensasi  dan  saponin  (Kerman dalam  Sartimah  2010,  Zarin et  al. ,  2016). Beberapa  penelitian  sebelumnya  menyatakan bahwa   jenis tanaman lain yang mengandung tanin,  saponin  dan  flavonoid  memiliki  efek proangiogenesis dengan meningkatkan ekspresi        VEGF        (Majewska        dan Darmach,  2011).  Apriasari  (2016)  juga menyatakan  bahwa  tanin,  saponin  dan flavonoid  yang  terkandung  dalam  batang pisang  mauli  meningkatkan  ekspresi  VEGF dan  meningkatkan  angiogenesis  pada  ulkus rongga  mulut.  Saponin juga  berperan  sebagai immunomodulator , sedangkan flavonoid memiliki efek radical scavenger (Apriasari et al., 2016). Beberapa tanaman yang mengandung komponen tanin, saponin,
flavonoid  diketahui  juga  memiliki  efek proangiogenik    (Apriasari et    al., 2017). Ekstrak tanaman tersebut menstimulasi angiogenesis    melalui    dua    jalur         yaitu MAPK  dependen  dan  PI3K  Akt-eNOS signaling    pathway .    ERK1/2    merupakan salah  satu  dari  target  utama  jalur  signaling MAPK  yang  memainkan  peran  penting  pada proses  migrasi  sel  endotel      dan      proliferasi (Majewska    dan    Darmach,    2011). Kemampuan              ekstrak    daun    lamtoro ( Leucaena leucocephala ) dalam meningkatkan    angiogenesis    kemungkinan
akibat  terjadinya  regulasi  VEGF  oleh  tannin, saponin   dan   flavonoid   yang   terkandung dalam    daun    lamtoro    ( Leucaena leucocephala ).
Perbedaan mean jumlah   vaskuler yang  signifikan  antara  kelompok  kontrol dengan kelompok perlakuan dosis kemungkinan  terjadi  akibat  ekstrak  lamtoro ( Leucaena leucocephala ) mampu meningkatkan jumlah makrofag dan meregulasi  inflamasi  dengan  merangsang pergeseran   M1   menuju   M2.   Pergeseran fenotip  M1  menuju          M2          tersebut meningkatkan ekspresi VEGF yang
merupakan      growth   factor   utama   dalam proses  migrasi  dan  proliferasi  sel  endotel vaskuler.    Regulasi  inflamasi    dari  daun lamtoro    ( Leucaena    leucocephala )    juga diduga  memberikan  dampak  percepatan  fase inflamasi sehingga tahap penyembuhan dapat
segera   memasuki   fase   proliferasi   dimana angiogenesis terjadi didalamnya.
5. Kesimpulan dan Saran Berdasarkan penelitian dan pengolahan  data  statistik      dapat  disimpilkan bahwa      ekstrak      daun      lamtoro      dapat merangsang   terjadinya   angiogenesis   pada luka tikus insisi.
Berdasarkan penelitian penelitian tersebut  maka  disarankan  agar  dilakukan penelitian  lebih  lanjut  tentang  efek  ekstrak daun  lamtoro  terhadap  proses  yang  terjadi dalam        fase  penyembuhan  lain  dalam perjalanan        penyembuhan        luka,  seperti proses  epitelialisasi  pada  fase  proliferasi  dan pembentukan jaringan scar pada fase remodelling.

## DAFTAR PUSTAKA
Al   Basal,A   M   .2001.The   Influenze   of Some  Local  Medicinal  Plant Extracts on Skin Wound Healing.Activity  Evaluated  By Histological And Ultra Structural Studies Phd.Thesis.University of Jordan,Amman,Jordan Amirah,  S  .,  Kosman,  R  .,  Novianti,  R.
2014.’Uji     efek     anti-inflamasi ekstrak n- Butanol dan Etil Asetat Daun     Petai     Cina     ( Leucaena leucocephala (Lamk.)de
wit)terhadap  mencit  jantan  ( Mus musculus )        yang        diinduksi karagenan.Jurnal    bionature,    15
(2):123-126.
Apriasari,M.L.,Dachlan,Y.P.,,Ernawati,
D.S.    2016.’    Effect    of Musa acuminata stem             By
Immunohistochemistry    Test    ini
Ulcer.       Asian       Journal       of Biochemistry. 11(3):135-141.
Apriasari,M.L.,Dachlan,Y.P.,,Ernawati, D.S.    2017.     Potensi    Bahan
Alam Penyembuh Ulkus Mukosa
Mulut, Salemba Medika, hal 4-8.
Ariningrum,D.,   dan   Subandono,J.   2017.
Buku   Pedoman   Ketrampilan Klinis Manajemen Luka . Surakarta : FK Universitas  Sebelas Maret. Surakarta Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Kementrian Kesehatan
RI. 2013.Riset Kesehatan
Dasar.pp.101-104 Broughton,G., Janis JE, Attinger CE. 2006 The Basic Science of Wound healing..Surg.117 (Suppl):12S Gamaldeen,A.M.,Amer,H.,Helmy,W.A.,Tal aat,R.M.,Ragab.H.2007.’Chemica lly-    modified        polysaccharide extract   derived   from Leucaena leucocephala alter    Raw    264.7 murine                         macrophage function’.international immunopharmacology.     Elsevier 7:871-878 Hassan, R.A.,Tawfik, W.A.,Abou- Setta,L.M.,2014.’The Flavonoid Constituents of Leucaena leucocephala Growing  in  Eigypt, and  theirBiological  Activity.Afr  J Tradit  Complement  Altern  Med.  11
(1):67-72
Johnson,K.E.,  Wilgus,  T.A.2014.’  Vascular Endothelial  Growth  Factor  and Angiogenesis  in  the  regulation  of Cutaneous Woun Repair. Advanvences    in    Wound    Care. 3(10).Mary Ann Lieber,Inc Librianty  N.2015.Gejala  Penyakit  dan Penanganannya  dalam  Panduan Mandiri Melacak Penyakit. Penyunting Chan S cet 1,Jakarta:Lintas Kata hal 8 Majewska.I.,Darmach, E.G.2011.’ proangiogenic  activity  of  plant extracts  in  accelerating  wound healing  –  a  new  face  of  old phytomedicine.  Acta  Biochimica Polonika.    Polandia.    58(4):449- 460.
Mohammed,     R.S.,     ElSouda,S.S.,
Taie,H.A.A.,Moharam,M.E.,Shake r,K.H.,2014.’Antioxidant,antimicr obial activities of flavonoid glycoside from Leucana leucocephala leaves’.Journal   of Applied   Pharmaceutical Science 5(06):138-147
Jurnal Biosains Pascasarjana Vol. 20 (2018) pp © (2018) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
Ramasastry,SS. 2005. Acute Wound.Clinic in Plastic surg 32: 195-228. Elsevier
Rohmah,S.N.  Fuadah D.Z & Girianto .W.R. 2016.  Efektifitas  Daun  Petai  Cina
(Leucaena    leucocephala) dan
Daun    Jarak    Pagar (Jatropha cucas) terhadap                Proses Penyembuhan        Luka        Bakar
GradeII  pada  Tikus   Putih ( Rattus Novergicus ). Jurnal Ilmu Keperawatan.pp 20-33
Saputro,I.D.   2014.   Dasar   Dasar Biomolekuler   Penyembuhan Luka.   GlobalPersada Press. Surabaya. Halaman:1-15
Sartinah   A.,Astuti,P.,Wahyuono,   S.   2010. Isolasi   dan   Identifikasi SenyawaAntibakteri dari Daun Petai Cina (Leucaena Leucicephala (Lam) De Wit). Majalah obat tradisional; p 22-28
Schremi,S.,Szeimies,R.M.,Prantl,L.,Karrer,S., Landthaler,M.,dan Babilas,M..2010.Oxygen   in Acute   and   Chronic   Wound
Healing,Regensburg:BrithisJournal of Dermatology,163,pp.257-268
Sorg,  H.,Tilkorn,  D.J.,  Hager,  S.,  Hauser,
J.,Mirastschijski,U.2016.’
Skin
Wound Healing : an Update on the Current  Knowledge  and  Concepts. European Surgical Resesrch.58:81-
94.S.Karger AG. Basel
Tonnesen,M.G.,Feng   X   dan   Clark,R.A.F. 2000.   “Angiogenesis   in   Wound Healing”. The Cosiety for Investigative Dermatology. Vol 5(1)
Zarin,M.A.,Wan ,Y.Hisha,A.,Armania,N.2016.’anti oxidant,antimicrobia  and  cytotoxic potential    of    condensed    tannins from Leucana       leucocephala hybrid-Rendang.food   and   human wellnes. Elsevier. 5:65-75.