## M K M I
Media Kesehatan Masyarakat Indonesia
ISSN: 1412-4920 https://ejournal.undip.ac.id/index.php/mkmi Fakultas Kesehatan Masyarakat Universitas Diponegoro
DOI: 10.14710/mkmi.19.1.68-76
Kemampuan  Hidrogen  Peroksida  dan  Formaldehid  dalam  Menurunkan Bakteri Pseudomonas aeruginosa pada Limbah Jarum Suntik di RS X Kota Semarang
Riza Dwi Utami 1* , Nur Endah Wahyuningsih 1 , Budiyono 1
1 Bagian Kesehatan Lingkungan, Fakultas Kesehatan Masyarakat, Universitas Diponegoro, Semarang *Corresponding author : rizadwiu@gmail.com
Info Artikel : Diterima 24 Juli 2019 ; Disetujui 7 Januari 2020 ; Publikasi 1 Februari 2020

## ABSTRAK
Latar belakang: Pada limbah jarum suntik ditemukan jumlah koloni bakteri Pseudomonas aeruginosa sebanyak 1,3x10 3 dan  2,1x10 3 CFU/ml.  Desinfeksi  dengan  Hidrogen  Peroksida  dan  Formaldehiddapat  digunakanuntuk menurunkan  mikroorganisme  pathogen.  Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  efektifitas desinfektan  Hidrogen  Peroksida  dan  Formaldehid  dengan  variasi  dosis  dan  lama  waktu  kontak  terhadap penurunan jumlah koloni bakteri Pseudomonas aeruginosa pada limbah jarum suntik. Metode: Jenis penelitian ini adalah quasi experimental dengan rancangan non equivalent control group design. Analisis statistikmenggunakan uji Repeated ANOVA (α=5%). Hasil: Hasil  penelitian  pada  sampel  sebelum  diberikan  perlakuan  pada  desinfektan  Hidrogen  Peroksida  dan formaldehid masing-masing adalah 2,2x10 3 dan 2,0x10 3 CFU/ml. Dosis Hidrogen Peroksida diberikan sebanyak 0,75% dan 1,5% (v/v). Dosis Formaldehid sebanyak 0,0185% dan 0,037%(v/v), masing-masing menggunakan variasi  lama  waktu  kontak  1  menit,  5  menit,  10  menit  dengan  4  kali  pengulangan.  Hidrogen  Peroksida  dapat menurunkan  jumlah  koloni  bakteri Pseudomonas  aeruginosa dosis  1,5%  ( p =0,032),  waktu  kontak  10  menit ( p =0,024). Sedangkan Formaldehid menurunkan jumlah koloni bakteri Pseudomonas aeruginosa dosis 0,037% ( p =0,027), waktu kontak 10 menit ( p =0,049). Simpulan: Hidrogen  Peroksida  dan  Formaldehid  mampu  menurunkan  jumlah  koloni  bakteri Pseudomonas aeruginosa pada limbah jarum suntik meskipun belum semuanya hilang.
Kata kunci: Hidrogen Peroksida, Formaldehid, Pseudomonas aeruginosa, Limbah jarum suntik

## ABSTRACT
Title: The Ability of Hydrogen Peroxide and Formaldehyde in Reducing Pseudomonas aeruginosa Bacteria in Syringe Waste in X Hospital Semarang City
Background:In  needle  syringe  waste,  the  number  of  colonies  of  Pseudomonas  aeruginosa  was  1,3x10 3 and 2,1x10 3 CFU/ml.  Disinfection  with  Hydrogen  Peroxide  and  Formaldehyde  can  be  used  to  reduce  pathogenic microorganisms.  The  purpose  of  this  study  was  to  determine  the  effectiveness  of  Hydrogen  Peroxide  and Formaldehyde disinfectants with variations in dosage and contact time to decrease the number of colonies of Pseudomonas aeruginosa bacteria in needle syringe waste.
Method:This  type  of  research  is  quasi  experimental  with  a  non  equivalent  control  group  design.  Statistical analysis using Repeated ANOVA test (α= 5% ).
Result:The results of the study on the sample before being given treatment for disinfecting Hydrogen Peroxide and  formaldehyde  were  2,2x10 3 and  2,0x10 3 CFU/ml.  The  dose  of  Hydrogen  Peroxide  is  given  as  much  as 0.75%  and  1.5%  (v/v).  Formaldehyde  dosages  are  0.0185%  and  0.037%  (v/v),  each  using  a  variation  of  the duration of contact time 1 minute, 5 minutes, 10 minutes with 4 repetitions. Hydrogen Peroxide can reduce the number  of  colonies  of  Pseudomonas  aeruginosa  bacteria  by  1.5%  (p=0.032),  contact  time  10  minutes (p=0.024). Whereas Formaldehyde reduced the number of colonies of Pseudomonas aeruginosa bacteria by a dose of 0.037% (p=0.027), contact time of 10 minutes (p=0.049).
Conclusion:Hydrogen  Peroxide  and  Formaldehyde  can  reduce  the  number  of  colonies  of  Pseudomonas aeruginosa bacteria in syringe waste even though not all of them are lost.
Keywords: Hydrogen Peroxide, Formaldehyde, Pseudomonas aeruginosa, Syringe waste

## PENDAHULUAN
Saat  ini,  jumlah  limbah  medis  yang bersumber  dari  fasilitas  pelayanan  kesehatan diperkirakan  semakin  lama  semakin  meningkat. Penyebabnya  yaitu  jumlah rumah  sakit,  puskesmas, balai pengobatan, maupun laboratorium medis yang jumlahnya terus bertambah. 1 Pengelolaan  limbah  medis  maupun  non medis  rumah  sakit  sangat  diperlukan  untuk kenyamanan dan kebersihan rumah sakit karena bisa memutuskan  mata  rantai  penyebaran  penyakit menular,  terutama  infeksi  nosokomial  di  rumah sakit. 2
Salah  satu  limbah  padat  medis  rumah  sakit yaitu  limbah  benda  tajam,  dalam  hal  ini  adalah limbah  jarum  suntik.  Limbah  jarum  suntik  bisa berpotensi  menjadi  sumber  penyebaran  penyakit baik  bagi  petugas,  pasien,  pengunjung,  ataupun masyarakat  di  sekitar  lingkungan  rumah  sakit. Berdasarkan  penelitianpendahuluan  di  rumah  sakit X  Kota  Semarang  didapatkan  hasil  positif  adanya bakteri Pseudomonas aeruginosa pada limbah jarum suntik . Bakteri Pseudomonas aeruginosa merupakan bakteri  pathogen  oportunistik  dan  sangat  adaptif, dan  merupakan  bakteri  utama  di  rumah  sakit. Bakteri  ini  tahan  terhadap  berbagai  tekanan lingkungan,  dan  mampu  bertahan  di  lingkungan selama lebih dari 40 hari. 3
Penelitian  pendahuluan  menemukan  jumlah koloni bakteri Pseudomonas aeruginosa 1,3x10 3 dan 2,1x10 3 CFU/ml  pada  limbah  jarum  suntik. Walaupun  belum  ada  baku  mutu  yang  mengatur parameter mikrobiologis  limbah medis padat rumah sakit.  Namun, limbah  medis padat harus  bebas  dari cemaran mikroba.
Hidrogen Peroksida merupakan larutan tidak berwarna,  larut  dalam  air  dan  memiliki  bobot molekul  34,01.  Hidrogen  Peroksida    memiliki spektrum  yang  luas  untuk  melawan  virus,  bakeri, ragi  dan  spora  bakteri. 4 Sedangkan  Formaldehid dapat menunda proses polimerisasi. 5
Namun  demikian,  penggunana  Hidrogen Peroksida  dan  Formaldehid  belum  sepenuhnya diketahui  mampu  untuk  menurunkan  bakteri Pseudomonas aeruginosa pada limbah jarum suntik. Penelitian ini membuktikkan kemampuan desinfektan  Hidrogen  Peroksida  dan  Formaldehid dalam menurunkan bakteri Pseudomonas aeruginosa pada limbah jarum suntik.

## MATERI DAN METODE
Jenis penelitian ini adalah penelitian eksperimen  yang  bertujuan  untuk  mengetahui hubungan  sebab  akibat  dengan  cara  memberikan
perlakuan pada satu atau lebih kelompok eksperimen  dengan  metode quasi  experimental dan menggunakan  rancangan non  equivalent  control group design. 6
Populasi  dalam  penelitian  ini  adalah  limbah jarum  suntik  dengan  ukuran  3  ml  yang  berasal  dari semua pelayanan di rumah sakit X Kota Semarang. Sampel  dari  penelitian  ini  adalah  5  buah  limbah jarum  suntik  yang  diambil  dari  TPS  limbah  B3. Pengambilan  sampel  dilakukan  secara composite sampel  yaitu  pengambilan  sampel  limbah  jarum suntik  pada  waktu-waktu  tertentu. 7 yaitu  setiap  hari Senin  pada  pukul  09.00  WIB.  Sampel  diambil  dari safety  box secara  aseptis  dengan  menggunakan bunsen  dan  sarung  tangan  lateks  kemudian dimasukkan ke dalam plastik zipper lock ukuran 30 cm x 20 cm. Sampel dirancang dengan 6 perlakuan, yaitu pada desinfektan Hidrogen Peroksida menggunakan  variasi  dosis  0,75%  dan  1,5%,  serta lama  waktu  kontak  1  menit,  5  menit,  10  menit. Perlakuan pada desinfektan Formaldehid menggunakan  variasi  dosis  0,0185%  dan  0,037% serta lama waktu kontak 1 menit, 5 menit, 10 menit. Penelitian  ini  menggunakan  pengulangan  sebanyak 4  kali.  Dilakukan  juga    pengukuran  suhu  dan  pH pada  larutan  desinfektan  sebelum  dilakukan pengujian.
Pengujian dilakukan dengan beberapa tahapan, antara lain:
1. Pengambilan Sampel
Sampel  limbah  jarum  suntik  berukuran  3  ml diambil  dari  TPS  limbah  B3  dengan  masa simpan  lebih  dari  2  hari;Pengambilan  jarum dari safety  box dilakukan  secara  aseptis menggunakan  bunsen  dan  sarung  tangan lateks;Penyimpanan selama pengangkutan dari lokasi  pengambilan  sampel  ke  laboratorium dilakukan  dengan  menggunakan cooler  box dilengkapi  dengan ice  gel dan  membutuhkan waktu  selama  19  menit  untuk  sampai  ke tempat pengujian.
2. Pembuatan  larutan  NaCl  Fisiologis  0,85% untuk Identifikasi Bakteri
Natrium  klorida  ditimbang  sebanyak  0,85 gram  dan  dimasukkan  ke  dalam beaker glass; Ditambahkan aquades ke dalam beaker glass hingga mencapai volume 100 ml;Larutan  yang  terbentuk  dipindahkan  ke dalam Erlenmeyer dan disterilkan
menggunakan autoclave pada  suhu  121˚C dan tekanan 1 atm selama 15 menit.
3. Persiapan  medium Nutrient  Agar (NA) Tabung untuk Peremajaan Bakteri
Bubuk  NA  sebanyak  23  gram  dilarutkan dalam  1  liter  aquades  dan  dipanaskan  serta diaduk  hingga  homogen;Setelah  mendidih, larutan  dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi sebanyak  5  ml,  kemudian  disterilkan menggunakan autoclave pada  suhu  121˚C dan tekanan 1 atm selama 15 menit;Tabung- tabung reaksi kemudian dimiringkan sebelum medium  agar  mengeras;Medium  yang  sudah mengeras akan digunakan dalam peremajaan bakteri.
4. Persiapan  Medium Nutrient  Broth (NB) untuk Pembuatan Inokulum Bakteri Bubuk  NB  sebanyak  8  gram  dilarutkan dalam  1  liter  aquades  ke  dalam  Erlenmeyer kemudian  diaduk  hingga  homogen;Media disterilkan dengan autoclave suhu 121˚C dan tekanan  1  atm  selama  15  menit;Medium dimasukkan  ke  dalam tabung reaksi masing- masing 5 ml.
5. Persiapan  Medium Nutrient  Agar (NA) Cawan Petri untuk Pengujian Desinfektan Bubuk  NA  sebanyak  23  gram  dilarutkan dalam  1  liter  aquades  dan  dipanaskan  serta diaduk  hingga  homogen;Setelah  mendidih, larutan  dimasukkan  kedalam  Erlenmeyer kemudian  disterilkan  dengan autoclave suhu 121˚C  dan  tekanan  1  atm  selama  15 menit;Didinginkan  dulu  pada  suhu  ±  60 ˚C;Medium  dituang  ke  dalam  cawan  petri steril sebanyak 20-25 ml;Medium yang sudah mengeras akan digunakan untuk menumbuhkan bakteri yang telah dikontakkan dengan desinfektan uji. 6. Pengenceran Desinfektan Desinfektan  yang  digunakan  yaitu  Hidrogen
Peroksida dan Formaldehid. Hidrogen
Peroksida yang digunakan dengan
konsentrasi  0,75%  dan  1,5%.  Formaldehid yang digunakan dengan konsentrasi 0,0185% dan  0,037%.  Larutan  ini  diencerkan  dengan volume  100  ml  pada  setiap  pengulangan;
Pengenceran Hidrogen Peroksida dan
Formaldehid  dilakukan  berdasarkan  rumus berikut 8 :
M1 x V1 = M2 x V2
Keterangan:
M1 : Konsentrasi awal V1   : Volume awal M2 : Konsentrasi setelah pengenceran
V2   : Volume setelah pengenceran
a. Pengenceran Hidrogen Peroksida 0,75% M1 x V1 = M2 x V2
3% x V1 = 0,75% x 100 ml V1  = 25 ml Jadi untuk  membuat pengenceran Hidrogen  Peroksida  0,75%  sebanyak 100  ml,  dibutukan  25  ml  Hidrogen
Peroksida  3%  ditambahkan  aquades sebanyak 75 ml. b. Pengenceran Hidrogen Peroksida 1,5%
M1 x V1 = M2 x V2
3% x V1 = 1,5% x 100 ml
V1  = 50 ml Jadi untuk  membuat pengenceran
Hidrogen Peroksida 1,5% sebanyak 100 ml, dibutukan 50 ml Hidrogen
Peroksida  3%  ditambahkan  aquades sebanyak 50 ml.
c. Pada  pengenceran  larutan  Formaldehid 37%, diencerkan terlebih dahulu menjadi 0,37% agar lebih mudah untuk diencerkan ke dosis yang lebih rendah.
d. Pengenceran Formaldehid 0,37% M1 x V1 = M2 x V2 37% x V1 = 0,37% x 100 ml V1 = 1 ml Jadi untuk  membuat pengenceran
Formaldehid  0,37%  sebanyak  100  ml, dibutukan  1  ml  Formaldehid  37% ditambahkan aquades sebanyak 99 ml.
e. Pengenceran Formaldehid 0,0185%
M1 x V1 = M2 x V2 0,37% x V1  = 0,0185% x 100 ml V1 = 5 ml
Jadi untuk  membuat pengenceran Formaldehid  0,0185%  sebanyak  100 ml, dibutukan 5 ml Formaldehid 0,37% ditambahkan aquades sebanyak 95 ml.
f. Pengenceran Formaldehid 0,037%
M1 x V1 = M2 x V2 0,37% x V1 = 0,037% x 100 ml V1 = 10 ml
Jadi untuk  membuat pengenceran
Formaldehid  0,037%  sebanyak  100  ml, dibutukan  10  ml  Formaldehid  0,37% ditambahkan aquades sebanyak 90 ml.
7. Identifikasi Bakteri NaCl 0,85% sebanyak 10 ml dimasukkan ke dalam Erlenmeyer yang berukuran 250 ml; 5 buah  jarum  suntik  dimasukkan  kemudian dihomogenkan  selama  2-3  menit;  Larutan hasil  bilasan  limbah  jarum  suntik  diambil menggunakan pipet sebanyak 2-3 ml;Ditanam pada media Nutrient Broth (NB) dan  diinkubasi  selama  24  jam  pada  suhu 37˚C;  Dilakukan  isolasi  pada  media Mac Conkey selama  selama  24  jam  pada  suhu 37˚C;  Jika  positif  maka  akan  membentuk koloni  berukuran  sedang  dengan  tepi  yang tidak  rata  dan  kadang  berwarna  kehijau- hijauan atau putih kemerah-merahan (pink). Setelah  mengidentifikasi  bakteri  secara  fisik kemudian  dilanjutkan  uji  secara  biokimia. Uji  biokimia  yang  dilakukan  meliputi  uji oksidase, motilitas, indol, TSIA dan uji gula; Uji  oksidase  bertujuan  untuk  mengetahui
keberadaan  enzim  oksidase  pada  bakteri dengan  menggunakan paper  oxidase yang dapat  dilihat  dari  perubahan  warna  yang terbentuk;  Uji  motilitas  digunakan  untuk mengetauhi  motil  atau  tidaknya  bakteri;  Uji indol  digunakan  untuk  mengetahui  produksi indol  dari tryptophane; Uji  TSIA (Triple Sugar Iron Agar) dilakukan untuk membedakan  jenis  bakteri  berdasarkan kemampuan  memecahkan  lakosa,  sukrosa dan pembebasan sulfide. TSIA juga berfungsi  untuk  mengetahui  apakah  bakteri tersebut  menghasilkan  gas  H 2 S  atau  tidak; Uji  gula  dilakukan  dengan  tujuan  untuk membandingkan  kemampuan  bakteri  dalam mendegradasi  gula  dan  menghasilkan  asam organik yang berasal dari tiap-tiap jenis gula yaitu  glukosa,  sukrosa, maltose  dan  manitol; Hasil  uji  biokimia  bakteri Pseudomonas aeruginosa yaitu  Oksidase  (+),  Motilitas  (-), Indol  (-),  TSIA Slant (alcalise/merah),  TSIA Bult (alcalise/merah),H 2 S  (-),  Glukosa  (+),
Sukrosa (-), Maltose (-), Manitol (-), Laktosa (-), Citrat (+), MR/ Methyl Red (-), VP/ Vages Proskauer (-), urea (-).
8. Peremajaan Bakteri Bakteri  uji  diremajakan  selama  24  jam kemudian  dengan  diinokulasikan  ke  dalam media NA miring;Diinkubasi selama 24 jam.
9. Pembuatan Inokulum pada Nutrient Broth Bakteri yang telah diremajakan dalam media NA miring selama 24 jam kemudian diambil sebanyak 1 ose dan diinokulasikan ke tabung reaksi  berisi  masing-masing  5  ml media  NB steril;Diinkubasi  selama  24  jam  pada  suhu 37˚C.
10. Pembuatan Stok Suspensi Isolat Bakteri Bakteri  yang  telah  diremajakan  pada NB  selanjutnya  dibuat  pengenceran  dari kepekatan 10 9 sampai 10 3 , adapun mekanisme pengenceran yaitu sebagai berikut:
a. Bakteri yang telah diremajakan pada NB selanjutnya  dibuat  pengenceran  mulai dari 10 -1 sampai 10 -6 ;
b. Enam  tabung reaksi  steril  disiapkan  dan diletakkan  secara  berderet  berurutan  di rak  tabung;  Tabung  1  sebagai  tempat pengenceran  ke-1  (10 -1 ),  tabung    2 sebagai  tempat  pengenceran  ke-2  (10 -2 ), tabung  3  sebagai  tempat  pengenceran ke-3 (10 -3 ) dan seterusnya hingga tabung ke  6  sebagai  tempat  pengenceran  ke-6 (10 -6 );
c. Dilengkapi  masing-tabung  dengan  label yang berisi keterangan tingkat pengenceran;
d. Masing-masing tabung diisi NaCl fisiologis 9 ml melalui cara aseptik;
e. Satu  ml  suspensi  isolat  baktei  dipipet dan  dimasukkan  ke  tabung  reaksi  1 kemudian  dihomogenkan  selama  2-3 menit. 1 ml suspensi isolat baktei dipipet dan  dimasukkan  ke  tabung  reaksi  2 dilakukan  begitu  seterusnya  hingga tabung rekasi  ke-6.
11. Pengujian  Desinfektan  terhadap  Bakteri

## Pseudomonas aeruginosa
Setelah  didapatkan  hasil  pengenceran bakteri  ke  6  dengan  perkiraan  kepekatan bakteri  10 3 ,  langkah  selanjutnya  yaitu melakukan mekanisme pengujian desinfektan terhadap  bakteri Pseudomonas  aeruginosa yaitu sebagai berikut: a. Dipindahkan  1  ml  stok  suspensi  isolat bakteri  dari  tabung  reaksi  6  (10 -6 )  ke dalam  botol  ulir  yang  berisi  NaCl fisiologis 9% sebanyak 9 ml;
b. Dipindahkan  1  ml  suspensi  isolat  dari tabung reaksi 6 (10 -6 ) dan dimasukkan ke dalam  tabung  yang  berisi  desinfektan  uji sebanyak 9 ml. Perlu diperhatikan bahwa semua  proses  pemindahan  ini  dilakukan secara aseptis;
c. Dicatat  waktu  kontak  pada  saat  bakteri dikontakkan dengan NaCl 0,85% maupun desinfektan  uji.    Dipastikan  larutan  uji maupun  kontrol  telah  homogen,  dengan cara dihomogenkan selama 2-3 menit;
d. Dipindahkan suspensi dari masing- masing kelompok (kontrol dan uji) 0,1 ml larutan  yang  telah  dikontakkan  pada  1 menit  pertama  pada  media  NA  di  cawan petri  dan  diratakan  menggunakan  batang gelas  bengkok  lalu  dibiarkan  inokulum sampai  terserap  ke  media  kira-kira  10 menit;
e. Pada  4  menit  selanjutnya  (5  menit), dipindahkan  masing-masing  (kontrol  dan uji) 0,1 ml larutan yang telah dikontakkan pada  media  NA  di  cawan  petri  dan diratakan  menggunakan  batang  gelas bengkok  lalu  dibiarkan  inokulum  sampai terserap ke media kira-kira 10 menit;
f. Pada  5  menit  selanjutnya  (10  menit), dipindahkan  masing-maasing  (kontrol dan  uji)  0,1  ml  larutan  yang  telah dikontakkan  pada  media  NA  di  cawan petri  dan  diratakan  menggunakan  batang gaelas  bengkok  lalu  dibiarkan  inokulum sampai  terserap  ke  media  kira-kira  10 menit;
g. Semua  media  NA  di  cawan  petri diinkubasi  dengan  posisi  terbalik  selama 24 jam pada suhu 37˚C;
h. Dihitung  jumlah  koloni  bakteri  yang terbentuk  pada  masing-masing  cawan petri;
i. Begitu juga dilakukan dengan desinfektan uji  yang  lainnya  dan  disesuaikan  dengan lama waktu kontak;
j. Diinterpretasikan  hasil  yang  didapatkan. Penghitungan  jumlah  koloni  bakteri Pseudomonas aeruginosa dilakukan dengan  metode  hitung  cawan (Standart
Plate Count). Analisis  statistik  terlebih  dahulu dilakukan  uji  normalitas  data  desinfektan Hidrogen Peroksidadan Formaldehid, didapatkan  hasil  bahwadata  berditribusi normal  ( Shapiro  Wilk )  karena  sampel  <  50.
Setelah  diketahui  data  berdistribusi  normal kemudian  uji  beda  dilakukan  dengan  uji Repeated ANOVA (α=5%) dilakukan uji beda pada  masing-masing  variasi  dosis  dan  lama waktu kontak dari masing-masing desinfektan .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pada  penelitian  ini  didapatkan  hasil  bahwa limbah jarum suntik setelah diberi perlakuan dengan Hidrogen  Peroksida  dan  Formaldehid  menunjukkan terjadinya penurunan jumlah koloni bakteri Pseudomonas  aeruginosa. Jumlah  koloni  bakteri Pseudomonas  aeruginosa sebelum  perlakuan  pada
desinfektan  Hidrogen  Peroksida  21,9x10 2 CFU/ml. sedangkan  jumlah  koloni  bakteri Pseudomonas aeruginosa sebelum  perlakuan  pada  desinfektan Formaldehid 19,9 x10 2 CFU/ml.
Hidrogen  Peroksida  menghasilkan  sebuah radikal bebas hidroksil (*OH) yang dapat menyerang  komponen  sel  penting,  termasuk  lipid, protein,  bahkan  DNA  bakteri.  Selain itu  juga  dapat mengalami  peruraian  menjadi  O 2 ,  O 2 inilah  yang akan membunuh bakteri anaerob termasuk Pseudomonas  aeruginosa dimana  bisa  tumbuh secara  aerob  dan  anaerob  jika  terdapat  nitrat  yang biasa ditemukan sebagai akseptor electron terminal. 9 Formaldehid  memiliki  efek  dehidrasi  (bakteri  akan kekurangan  air),  sehingga  bakteri  akan  kering, mengikat dan menonaktifkan protein, mebunuh sel- sel  dan  membentuk  lapisan  baru  di  permukaan, artinya  formaldehid  tidak  saja  membunuh  bakteri tetapi juga membentuk lapisan baru yang melindungi  lapisan  di  bawahnya,  supaya  tahan terhadap  serangan  bakteri  lain.  Hasil  uji  jumlah koloni  bakteri Pseudomonas  aeruginosa pada limbah jarum suntik setelah diberi perlakuan dengan variasi  dosis  dan  lama  waktu  kontak  pada desinfektan  Hidrogen  Peroksida  dapat  dilihat  pada tabel berikut:
Tabel 1. Hasil Uji Jumlah Koloni Bakteri pada Kelompok Perlakuan Desinfektan Hidrogen Peroksida
Berdasarkan  Tabel  1.  menunjukkan  bahwa jumlah  koloni  bakteri Pseudomonas  aeruginosa yang mengalami penurunan paling tinggi pada dosis 0,75%  yaitu  pada  waktu  kontak  10  menit  rata-rata sebesar  8,5x10 2 CFU/ml,  sedangkan  pada  dosis 1,5%  juga  pada  waktu  kontak  10  menit  rata-rata
sebesar  1,4x10 2 CFU/ml.    Hasil  uji  jumlah  koloni bakteri Pseudomonas aeruginosa pada limbah jarum suntik setelah diberi perlakuan dengan variasi dosis dan lama waktu kontak pada desinfektan Formaldehid dapat dilihat pada tabel berikut:
Tabel 2. Hasil Uji Jumlah Koloni Bakteri pada Kelompok Perlakuan Desinfektan Formaldehid
Pengulangan Ke- Jumlah Koloni Bakteri Pseudomonas aeruginosa (CFU/ml) Pretest Posttest Formaldehid 0,0185% Formaldehid 0,037% 1 menit 5 menit 10 menit 1 menit 5 menit 10 menit Pengulangan Ke- Jumlah Koloni Bakteri Pseudomonas aeruginosa (CFU/ml) Pretest Hidrogen Peroksida 0,75% Hidrogen Peroksida 1,5% 1 menit 5 menit 10 menit 1 menit 5 menit 10 menit 1 2 3 4 Rata-rata Minimum Maksimum 1,7x10 3 3,4x10 3 2,6x10 3 1,1x10 3 2,2x10 3 1,1x10 3 3,4x10 3 1,3x10 3
3,1x10 3 2,1x10 3 8,3x10 2 1,8x10 3 8,3x10 2
3,1x10 3 9,2x10 2
2,6x10 3 2,1x10 3 5,5x10 2 1,5x10 3 5,5x10 2
2,6x10 3 7,9x10 2 1,6x10 3 9,5x10 2 5x10 1 8,5x10 2 5x10 1
1,6x10 3 1,1x10 3 2,7x10 3 2,1x10 3 7,8x10 2 1,7x10 3 7,8x10 2 2,7x10 3 6,2x10 2 1,5x10 3 1,3x10 3 2,8x10 2 9,1x10 2 2,8x10 2 1,5x10 2 0 3,6x10 2 2x10 2 0 1,4x10 2 0
3,6x10 2 Posttest
1 2 3 4 Rata-rata Minimum Maksimum 1,8x10 3 2,7x10 3 2,5x10 3 1,1x10 3 2,0x10 3 1,0x10 3
2,7x10 3
1,6x10 3
2,5x10 3 2,1x10 3 8,8x10 2 1,8x10 3 8,8x10 2
2,5x10 3
14x10 2
2,2x10 3 2,1x10 3 6,1x10 2 1,6x10 3 6,1x10 2
2,2x10 3 1,1x10 3
1,5x10 3 1,6x10 3 2,9x10 2 1,1x10 3 2,9x10 2
1,6x10 3 1,6x10 3
2,1x10 3 2,0x10 3 7,9x10 2 1,6x10 3 7,9x10 2
2,1x10 3 4,4x10 2
1,9x10 3 1,5x10 3 5,3x10 2 1,1x10 3 4,4x10 2
1,9x10 2
3,6x10 2 8x10 2
5,6x10 2 3 4,3x10 2
3
8x10 2
Berdasarkan  Tabel  2.  menunjukkan  bahwa
jumlah  koloni  bakteri Pseudomonas  aeruginosa yang mengalami penurunan paling tinggi pada dosis 0,0185% yaitu pada waktu kontak 10 menit rata-rata sebesar  1,6x10 3 CFU/ml,  sedangkan  pada  dosis 0,037%  juga  pada  waktu  kontak  10  menit  rata-rata
sebesar  4,3x10 2 CFU/ml.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  semakin  lama  waktu  kontak    dan  semakin
besar dosis maka penurunannya semakin besar pula.
Walaupun  belum  ada  baku  mutu  yang  mengatur mengenai  parameter  mikrobiologis  pada  limbah medis  padat  rumah  sakit.  Namun,  limbah  medis padat harus bebas dari cemaran mikroba. Efektivitas penurunan  jumlah  koloni  bakteri Pseudomonas
aeruginosa pada  desinfektan  Hidrogen  Peroksida dapat dilihat pada gambar berikut:
Berdasarkan  gambar  di  atas  variasi  dosis Hidrogen  Peroksida  1,5%  pada  waktu  kontak  10 menit  merupakan  efetivitas  tertinggi  yaitu  95,4%. namun  dosis  tersebut  belum  efektif  menurunkan jumlah  koloni  bakteri Pseudomonas  aeruginosa
karena belum sepenuhnya mencapai 100% . Efektivitas  penurunan  jumlah  koloni  bakteri Pseudomonas  aeruginosa desinfektan  Formaldehid dapat dilihat pada gambar berikut:
Berdasarkan  gambar  di  atas  dapat  diketahui bahwa variasi dosis Formaldehid 0,37% pada waktu kontak 10 menit merupakan efetivitas tertinggi yaitu 81,1%.  Hal  ini  menunjukkan  semakin  lama  waktu
kontak  dan  semakin  besar  dosis  yang  digunakan maka efektivitas penurunan semakin besar. Penelitian  ini  sejalan  dengan  penelitian  yang dilakukan  oleh  Kose  tahun  2017  dalam  inaktivasi
18.6 25.2 34.1 61.3 66.4 95.4 0 20 40 60 80 100 120 0.75% 1.50% E fe k ti v it a s (% ) Variasi Dosis Presentase  Efektivitas  Penurunan Jumlah Koloni  Bakteri 1 menit 5 menit 10 menit
11.6 19.1 23.6 57 47.8 81.8 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 0.02% 0.04% E fe kt ivi ta s (% ) Variasi Dosis Presentase  Efektivitas  Penurunan  Jumlah Koloni  Bakteri 1 menit 5 menit 10 menit
mikroorganisme  dengan  menggunakan  Hidrogen Peroksida  menunjukkan  bahwa  pada  dosis  5% dengan  waktu  kontak  15  menit  persentase pertumbuhan bakteri Pseudomoas aeruginosa sebesar 27,5% dan mengalami peningkatan penurunan  menjadi  34,6%  pada  waktu  kontak  30 menit. 10 Semakin lama waktu kontak mikroorganisme  dengan  desinfektan  maka  daya bunuhnya akan semakin besar. 11 Efektivitas proses desinfeksi selain dipengaruhi  oleh  konsentrasi/dosis  zat  kimia  dan lawa waktu kontak, juga dipengaruhi oleh:
1. pH pH  bisa  menjadi  penentu  apakah  suatu  agen bersifat penghambat atau membunuh mikroorganisme. 12 Rata-rata  pH  pada  penelitian ini  termasuk  netral  yaitu  7,  sehingga  pada rentang  pH  tersebut,  bakteri Pseudomonas aeruginosa masih  dapat  tumbuh.  Berdasarkan pH  mikroorganisme  dibagi  menjadi  3  yaitu asidofil,  mesofil  (neutrofil)  dan  alkalifil. 13
Bakteri Pseudomonas aeruginosa hidup pada pH optimum  6,6-7.0,  pH  minimum  5,6,  pH maksimum 8,0. Rata-rata pH pada penelitian ini termasuk  netral  yaitu  7,  sehingga  pada  rentang pH  tersebut,  bakteri Pseudomonas  aeruginosa masih  dapat  tumbuh.  Efisiensi  proses  desinfeksi akan  menurun  apabila  pH  lingkungan  sesuai dengan  pH  optimum  yang  dibutuhkan  oleh bakteri untuk tumbuh.
2. Suhu Suhu  rata-rata  desinfektan  Hidrogen  Peroksida adalah  30˚C  dan  rata-rata  suhu  desinfektan Formaldehid  adalah  31˚C.  Suhu  tersebut merupakan suhu optimum untuk bakteri melakukan pertumbuhan. Efisiensi proses desinfeksi akan menurun apabila suhu lungkungan  sesuai  degan  suhu  optimum  yang dibutuhkan  oleh  bakteri  untuk  tumbuh.  Suhu yang  tinggi  juga  akan  mempengaruhi  aktivitas desinfektan karena kenaikan temperatur menghasilkan pemusnahan mikroorganisme yang lebih cepat. 14
3. Konsentrasi/jumlah mikroorganisme Konsentrasi  atau  jumlah  mikroorganisme  pada limbah  juga  berdampak  pada  lamanya  waktu desinfeksi.  Semaikn  tinggi  konsentrasi  suatu bakteri  maka  waktu  yang  dibutuhkan  untuk menurunkan konsentrasinya juga semakin lama.
Hasil penelitian ini pada desinfektan Hidrogen  antara  pada  variasi  dosis,  terdapat perbedaan  yang  signifikan  antara  kontrol  dengan dengan dosis 1,5% ( p =0,032), Hal ini menunjukkan semakin  besardosis  desinfektan  yang  digunakan maka  daya  bunuh  terhadap  mikrorganisme  juga semakin  besar.  Penelitian  ini  sejalan  dengan penelitian  yang  dilakukan  oleh  Ridarsyah  tahun 2015  mengenai  efektivitas  Hidrogen  Peroksida dalam membunuh bakteri air ultra scaler pada dental unit  di  RSIGM  Sultan  Agung  Semarang,  yaitu  ada
perbedaan  signifikan  antara  sebelum  dan  sesudah pemberian  Hidrogen  Peroksida  konsentrasi  2%, 4,5%  dan  6%  (<0,05). 15 Selanjutnya  tidak  ada perbedaan  yang  signifikan  antara  kontrol  dengan dengan dosis 0,75% ( p =0,276), Hal ini menunjukkan  semakin  kecil  desinfektan  yang digunakan maka daya bunuh terhadap mikrorganisme  juga  semakin  menurun.  Penelitian ini  didukung  dengan  penelitian  sebelumnya  yang menyatakan  bahwa  konsentrasi  Hidrogen  Peroksida 2% hanya dapat mengontrol lapisan biofilm yang di dalamnya  terdapat  bakteri,  tetapi  kurang  efektif dalam membunuh semua bakteri. Penelitian tersebut menyatakan  bahwa  Hidrogen  Peroksida  dengan konsentrasi 6% efektif dalam membunuh bakteri. 16
Selanjutnya pada variasi lama waktu kontak, terdapat  perbedaan  signifikan  kontrol  pada  jumlah koloni  bakteri  dengan  dengan  waktu  kontak  10 menit  ( p= 0,024).  Hal  ini  menunjukkan  semakin lama  waktu  kontak  mikroorganisme  dengan desinfektan  maka  daya  bunuhnya  akan  semakin besar.  Penelitian  ini  sejalan  dengan  penelitian  yang dilakukan  oleh  Hamijaya  tahun  2014  mengenai perbedaan  daya  anti  bakteri  Tetrachlorodecaoxide, Povidon  Iodin,  dan  Hidrogen  Peroksida  terhadap bakteri Pseudomonas  aeruginosa secara  invitro, yaitu  terdapat  perbedaan  yang  signifikan  terhadap waktu  kontak  10  menit  yang  digunakan  untuk membunuh  bakteri  ( p <0,005). 9 Penelitian  ini  juga sejalan dengan penelitian yang dilakukan oleh Kose (Turki) tahun 2017 mengenai inaktivasi mikroorganisme  dengan  menggunakan  Hidrogen Peroksida  bahwa  terdapat  perbedaan  antara  kontrol dengan jumlah koloni setelah perlakuan pada waktu kontak  15 menit  pada  bakteri S.aureus ( p =0,001). 10 Penelitian  ini  juga  sejalan  dengan  penelitian  yang dilakukan  oleh  DeQueiroz  (USA)  tahun  2007 tentang  aktivitas  antimikroba  dan  efektivitas kombinasi  Natrium  Hipoklorit  dan  Hidrogen Peroksida  dalam  membunuh  dan  menghilangkan pada biofilm P.aeruginosa, yaitu terdapat perbedaan antara  kontrol  dengan  perlakuan  setelah  waktu kontak 1 menit ( p <0,05). Pada waktu kontak 1 menit sudah  dapat  digunakan  untuk  membunuh  bakteri dikarenakan  perlakuan  menggunakan  kombinasi dari  2  desnfektan  sehingga  daya  bunuh  semakin kuat. 17
Selanjutnya  tidak  terdapat  perbedaan  antara kontrol  pada  jumlah  koloni  bakteri  dengan  dengan waktu kontak 1 menit ( p= 1,000) dan waktu kontak 5 menit  ( p= 0,375).  Hal  ini  dikarenakan  variasi  lama waktu  kontak  mempengaruhi  proses  desinfeksi, semakin  kecil  waktu  kontak  yang  digunakan  maka efek  antimikrobialnya  juga  akan  lebih  kecil. Penelitian  ini  sejalan  dengan  penelitian  yang dilakukan Hamijaya tahun 2014 yaitu tidak terdapat perbedaan  terhadap  waktu  kontak  5  menit  dalam membunuh bakteri. 9
Hasil  uji  pada  desinfektan  Formaldehid berdasarkan  variasi  dosis,  terdapat  perbedaan  yang
signifikan  antara  kontrol  dengan  dosis  0,037% ( p =0,027), Hal ini menunjukkan semakin besardosis desinfektan  yang  digunakan  maka  daya  bunuh terhadap  mikrorganisme  juga  semakin  besar. Penelitian  ini  sejalan  dengan  penelitian  yang dilakukan  oleh  Popova  dan  Bayko  (Bulgaria) tahun 2017 tentang dekontaminasi limbah dengan desinfektan  Formaldehid  didapatkan  hasil  bahwa terdapat  perbedaan  antara  kontrol  dengan  dosis  2% dalam  penurunan  bakteri S.aureus, kontrol  dalam penelitian  ini  yaitu  4,10x10 4 CFU/g. 18 Selanjutnya tidak  terdapat  perbedaan  yang  signifikan  antara kontrol  dengan  dosis  0,0185%  ( p =0,454).  Hal  ini menunjukkan  semakin  kecil  desinfektan  yang digunakan maka daya bunuh terhadap mikrorganisme  juga  semakin  menurun.  Penelitian ini  sejalan  dengan  penelitian  yang  dilakukan  oleh Popova  dan  Bayko  (Bulgaria)  tahun  2017 didapatkan  hasil  bahwa  tidak  terdapat  perbedaan antara dosis 0,5%, 1%, dan 2 % dalam menurunkan bakteri. Hal ini  dikarenakan kontrol pada kelompok perlakuan sebanyak 1,93x10 5 CFU/g. 18 Selanjutnya berdasarkan variasi waktu kontak,  terdapat  perbedaan  yang  signifikan  antara kontrol  pada  jumlah  koloni  bakteri  dengan  waktu kontak  10  menit  ( p =0,049),  Hal  ini  menunjukkan bahwa semakin lama waktu kontak mikroorganisme dengan  desinfektan  maka  daya  bunuhnya  akan semakin  besar.  Penelitian  ini  sejalan  dengan penelitian  yang  dilakukan  oleh  Popova  dan  Bayko (Bulgaria) tahun 2017 tentang dekontaminasi limbah dengan  desinfektan  Formaldehid  didapatkan  hasil bahwa  setelah  24  jam  perlakuan  bakteri  tersebut mengalami  penurunan  yang  signifikan  ( p <0,001), sehingga  terdapat  perbedaan  antara  sebelum  dan sesudah  diberikan  perlakuan  dengan  waktu  kontak. Waktu yang digunakan 24 jam karena kontrol pada bakteri  sebanyak      1,93x10 5 CFU/g. 18 Penelitian  ini juga  sejalan  dengan  penelitian  yang  dilakukan Chino (Tokyo) tahun 2017 tentang efek desinfektan tingkat  tinggi  asam  perasetat  terhadap  biofilm S.aureus dan P.aeruginosa, yaitu terdapat perbedaan yang  signifikan  setelah  30  menit  yaitu  bakteri mengalami  kerusakan  struktural.  Membutuhkan waktu  30  menit  dikarenakan  kontrol  bakteri sebanyak  1,5x10 8 CFU. 19 Selanjutnya  tidak  terdapat perbedaan antara kontrol pada jumlah koloni bakteri dengan dengan waktu kontak 1 menit ( p= 1,000) dan waktu  kontak  5  menit  ( p= 0,560).  Hal  ini dikarenakan variasi lama waktu kontak mempengaruhi  proses  desinfeksi,  semakin  kecil waktu kontak yang digunakan maka efek antimikrobialnya  juga  akan  lebih  kecil.  Penelitian ini  sejalan  dengan  penelitian  yang  dilakukan  oleh Hamijaya tahun 2014 mengenai perbedaan daya anti bakteri  Tetrachlorodecaoxide,  Povidon  Iodin,  dan Hidrogen  Peroksida  terhadap  bakteri Pseudomonas aeruginosa secara  invitro,  yaitu  tidak  terdapat perbedaan  terhadap  waktu  kontak  5  menit  dalam membunuh bakteri. 9

## KESIMPULAN
Desinfektan Hidrogen Peroksida dan Formaldehid  mampu  menurunkan  jumlah  koloni bakteri Pseudomonas  aeruginosa. Pada  desinfektan Hidrogen  Peroksida  efektivitas  penurunan  tertinggi yaitu  pada  dosis  1,5%  dengan  waktu  kontak  10 menit  yaitu  95,4%.  Sedangkan  pada  desinfektan Formaldehid  efektivitas  penurunan  tertinggi  yaitu pada  dosis  0,037%  dengan  waktu  kontak  10  menit yaitu  81,8%.  Dosis  tersebut  mampu  menurunkan jumlah  koloni  bakteri Pseudomonas  aeruginosa , walaupun  belum  semuanya  hilang.  Sebaiknya  perlu dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  dengan  variasi dosis  dan lama  waktu  kontak  desinfektan  Hidrogen Peroksida dan Formaldehid.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Sitepu,  Putri  Yani  br.,  Nurmaini,  dan  Surya Dharma.  Sistem  pengelolaan  limbah  medis padat  dan  cair  serta  faktor-faktor  yang berkaitan  dengan  pelaksanaan  pengelolaan limbah  medis  padat  dan  cair  di  rumah  sakit umum kabanjahe Kabupaten Karo Tahun 2015. Universitas Sumatera Utara: Indonesia. 2015.
2. Astuti, Agustina. Kajian pengelolaan limbah di rumah  sakit  umum  Provinsi  Nusa  Tenggara Barat. Fakultas Kedokteran Universitas Udayana. Jurnal Penelitian. 2014.
3. Hossain,  Md.  Sohrab.,  Nik  Norulaini  Nik  Ab Rahman, Venugopal Balakrishnan, Vignesh R. Puvanesuaran,  Md.  Zaidul  Islam  Sarker,  and Mohd  Omar  Ab  Kadir.  Infectious  risk assessment  of  unsafe  handling  practices  and management  of  clinical  solid  waste.  Int.  J. Environ. Res. Public Health 2013;556-67.
4. Block, S. S. Peroxygen compounds. 1991;167- 181.
5. Power,  E.  G.  M.  Aldehydes  as  biocides. 1995;34:149-201.
6. Neolaka,  Amos.  Metode  penelitian  dan statistik.  Bandung:  PT  Remaja  Rosdakarya. 2014.
7. Effendi, H. Telaah kualitas air bagi pengelolaan  sumber  daya  dan  lingkungan perairan. Jakarta:Kasinius. 2003.
8. Lestari,  Sri.  Kumpulan  rumus  kimia  SMA. Jakarta: Kawan Pustaka. 2008.
9. Hamijaya,  Legawa.,  Prihatiningsih,.  Mario Goreti Widiastuti. Perbedaan daya anti bakteri Tetrachlorodecaoxide,  povidon  iodine,  dan Hidrogen Peroksida terhadap Bakteri pseudomonas aeruginosa secara  invitro. 2014;5(4):329-35.
10. Kose,  Hatice.,  Nur  Yapar.  The  comparison  of various desinfectans’ efficacy on Staphyloococcus  aureus  and  Pseudomonas aeruginosa  biofilm  layer.  Turkish  Journal  of Medical Sciences. 2017;47: 1287-94.
11. Busyairi,  M.,  Dewi  YP,  Widodo  DI. Efektivitas  kaporit  pada  proses  klorinasi terhadap  penurunan  bakteri Coliform dari limbah  cair  rumah  sakit  X  Samarinda. J  Mns dan Lingkung. 2016;23(2): 156-162.
12. Volk,  WA.,  Wheeler  MF.  Mikrobiologi  dasar. Jakarta: Penerbit Erlangga. 1993.
13. Lud,  W.  Mikrobiologi  umum.  Malang:  UMM Press. 2005.
14. Ariani,  D.,  Razif  M.  Penentuan  waktu  kontak dan  dosis  optimum  klor  akibat  pengaruh  pH, bakteri Coliform dan  kekeruhan  pada  proses desinfeksi. J Purifikasi. 2000;1(5): 295-300. 15. Ridarsyah,  Laily  Maghfira  Noor.,  Djoko Priyanto,  Grahita Aditya. Efektivitas hydrogen proksida  dalam  membunuh  bakteri  air  ultra scaler  pada  dental  unit  di  RSIGM  Sultan Agung Semarang. 2015;2(1).
16. Lin, Shing Ming., Svoboda Kathy K.H, Giletto A,  Seibert  J,  Puttaiah  R.  Effect  of  hydrogen
peroxide  on  dental  unit  biofilm  and  treatment water  contamination,  Europhian  Journal  of Dentistry, Vol5 (2001).
17. Dequeiroz,  G.A.,  D.F.  Day.  Antimicrobial activity  and  effectiveness  of  a  combination  of sodium hypochlorite and hydrogen peroxide in killing and removing Pseudomonas aeruginosa biofilm from surfaces. 2007: 794-802.
18. Popova,  Teodora  Petrova.,  Bayko  Dimitrov Baykov. Decontamination of sewage sludge by treatment with formaldehyde in vitro.
2014;3(10):982-9.
19. Chino, T., Y. Nukui, Y. Morishita, K. Moriya. Morphological  bactericidal  fast-acting  effects of  peracetic  acid,  a  high-level  disinfectant, against Staphylococcus aureus
and
Pseudomonas  aeruginosa biofilms  in  tubing. 2017;6:122.