Optimasi Metode KCKT untuk Penetapan Kadar 4-Isobutilasetofenon dan 2-(4-Isobutirilfenil) Asam Propanoat dalam Tablet Ibuprofen
Rara Dyah Chrissanti 1 , Asri Darmawati 2 , Mochammad Yuwono 2 *
1 Balai Besar Pengawas Obat dan Makanan (BPOM) Surabaya, Surabaya, Indonesia
2 Departemen Kimia Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Airlangga, Surabaya, Indonesia
*Corresponding author: yuwono05@yahoo.com
Submitted: 17 Januari 2020 Accepted: 17 Februari 2020 Published: 25 Juni 2020

## Abstract
Background :  Ibuprofen  (IBP)  is  widely  used  as  an  antipyretic  and  pain  reliever  drug,  the  drug  is  sensitive  to oxidation  and  thermal  decomposition.  The  4-isobutylacetophenone  (IBP  related  compound  C)  and  2-(4- isobutyrilphenyl) propanoic acid (IBP related compound J) are the IBP organic impuities and their presence in tablet  must  be  fulfilled  the  limit  test  requirement.  The  standard  procedure  for  the  impurities  analysis  need  to optimize  because  of  the  variation  of  the  tablet  matrix  could  influence  the  compendia  chromatographic performance. Objective : To obtain a column and HPLC operational condition which are selective, efficient and fulfilled the compendia requirement for IBP and its impurities. Methods : This study was designed to compare the chromatographic  performance  (resolution,  tailing  factor  and  theoretical  plate)  of  several  C 18 HPLC  columns based on the United States Pharmacopoeia (USP) method and requirement for organic impurities determination of  ibuprofen  tablet.  The  instrument  was  Shimadzu  Prominence  with  Photo  Diode  Array  (DAD).  Optimum analysis conditions  were applied for analysis of  3 different  IBP tablet brands. Results : The optimum condition was achieved through C 18 -C column of 4.6 x 250 mm, 5 µm using  a mobile phase of  1% chloroacetic acid  pH 3.0: acetonitrile (45:55, v/v), flow rate of 1.5 mL/min, ambient column temperature, the DAD was set at 254 nm, 10 µL injection volume with analysis time of 11 minutes. Symmetrical peaks were obtained and chromatographic performances  met  the  USP  requirement. Conclusion :  The  optimized  method  was  successfully  applied  to  3 different  marketed  tablets  dosage  form  and  can  be  applied  for  routine  testing  for  monitoring  the  ibuprofen tablets quality.
Keywords : ibuprofen, high performance liquid chromatography, impurities

## Abstrak
Pendahuluan :  Ibuprofen  (IBP)  banyak  digunakan  sebagai  obat  anti  piretik  dan  pereda  nyeri,  obat  ini  sensitif terhadap  oksidasi  dan  suhu.  Cemaran  IBP  yang  keberadaannya  dalam  tablet  harus  memenuhi  syarat  uji  batas adalah  4-isobutilasetofenon  (IBP  RC  C)  dan  2-(4-isobutirilfenil)  asam  propanoat  (IBP  RC  J).  Variasi  matriks tablet seringkali membuat prosedur standar untuk analisis cemaran perlu dioptimasi karena dapat menyebabkan kinerja  kromatografi  yang  tidak  memenuhi  syarat  kompendia. Tujuan :  Penelitian  ini  bertujuan  untuk memperoleh kolom dan kondisi operasional KCKT yang selektif, efisien dan memenuhi persyaratan kompendia untuk  pengujian  IBP  dan  cemarannya. Metode :  Penelitian  ini  dirancang  untuk  membandingkan  kinerja kromatografi  (resolusi,  faktor  ikutan  dan  jumlah  lempeng  teoritis)  beberapa  kolom  KCKT  C 18 yang  sesuai persyaratan  United  States  Pharmacopoeia  (USP)  untuk  penetapan  cemaran  organik  dalam  tablet  ibuprofen. Instrumen  KCKT  yang  digunakan  adalah  Shimadzu  Prominence  dengan  detektor  Photo  Diode  Array  (PDA). Kondisi  analisis  optimum  yang  diperoleh  diaplikasikan  untuk  analisis  3  macam  sediaan  tablet  IBP. Hasil : Kondisi optimum diperoleh melalui kolom C 18 -C 4,6 x 250 mm, 5 µm,  menggunakan fase gerak larutan asam kloroasetat  1%  pH  3,0  :  asetonitril  (45:55,  v/v),  laju  alir  1,5  mL/menit,  suhu  kolom  ambient,  detektor  PDA 254 nm, volume injeksi 10 µL dengan waktu analisis 11 menit. Diperoleh puncak-puncak yang simetris dengan kinerja  kromatografi  yang  memenuhi  persyaratan  USP. Kesimpulan :  Metode  yang  telah  dioptimasi  berhasil
diaplikasikan  pada  3  sediaan  tablet  yang  beredar  di  pasaran  dan  dapat  digunakan  untuk  pengujian  rutin  dalam rangka pengawasan kualitas produk obat tablet ibuprofen.
Kata kunci : ibuprofen, kromatografi cair kinerja tinggi, cemaran

## PENDAHULUAN
Kualitas,  keamanan  dan  efektivitas  adalah  faktor yang  paling  penting  untuk  produk  farmasi  (Maggio dkk., 2013). Bahan baku farmasi dihasilkan dari proses sintesis yang berbeda-beda, sehingga bisa memberikan profil cemaran yang tidak sama (Huidobro dkk., 2006). Jaminan  atas  kualitas  dan  keamanan  obat  umumnya dilakukan  melalui  pengawasan  dan  pengendalian cemaran  secara  efektif.  (Melo  dkk.,  2014;  Nageswara & Nagaraju, 2003; United States Pharmacopeia, 2019). Produk  obat  harus  memenuhi  persyaratan  yang berlaku.
Ibuprofen  (IBP)  sebagai  obat  anti  inflamasi  non steroid, banyak digunakan sebagai obat analgesik, anti
piretik dan anti  inflamasi karena  sifatnya  yang efektif, aman  dan  relatif  terjangkau  harganya.  Ibuprofen merupakan obat yang paling banyak digunakan setelah parasetamol  (Hersh  &  Dionne,  2017).  Ibuprofen (Gambar 1a) sensitif terhadap oksidasi dan suhu, dapat terdegradasi  menjadi  4-isobutilasetofenon  (IBP  RC  C, Gambar  1b)  dan  2-(4-isobutirilfenil)  asam  propanoat (IBP RC J, Gambar 1c) (Persson Stubberud & Åström, 1998). Penelitian terhadap IBP RC C secara in vivo dan in  vitro menunjukkan  bahwa  senyawa  ini  toksik terhadap  fibroblast  yang  dikultur  ( connective  tissue cells )  serta  pada  sel  darah  merah  (Castell  dkk.,  1987; Caviglioli dkk., 2002; Cory, dkk., 2010).
Gambar 1. Struktur molekuldari; a) ibuprofen (IBP); b) 4-isobutilasetofenon (senyawa sejenis C IBP); dan c) 2-(4- isobutirilfenil) asam propanoat (senyawa sejenis J IBP)
Ibuprofen  diproduksi  dalam  berbagai  bentuk sediaan  dengan  berbagai  jenis  eksipien  sesuai formulasinya.  Sebagian  besar  bahan  obat  diformulasi dalam  bentuk  tablet,  karena  mudah  dikonsumsi sehingga  tingkat  kepatuhannya  tinggi,  formulasinya cepat,  ekonomis  dan  secara  umum  memiliki  stabilitas yang baik (Anderson, 2012). Penyimpanan obat di luar kondisi  yang  disarankan  dapat  memicu  terjadinya degradasi  (Cory  dkk.,  2010).  Secara  berturut-turut, kriteria  lolos uji  batas IBP  RC C dan IBP  RC  J  untuk uji  cemaran  organik  pada  sediaan  tablet  IBP  menurut USP  adalah  tidak  lebih  dari  0,25%  dan  0,2% menggunakan  Kromatografi    Cair    Kinerja    Tinggi (KCKT)  (United States Pharmacopeia, 2018).
Penggunaan  KCKT  lebih  populer  daripada kromatografi  gas,  karena  dapat  diaplikasikan  untuk analisis  senyawa  non  volatile  dan  termolabil  (Skoog dkk.,  2014).  Kolom  sebagai  tempat  terjadinya pemisahan,  memegang  peranan  penting,  karena  jenis kolom  yang  sama  dari  produsen  yang  berbeda  atau bahkan dari produsen yang sama namun berbeda batch
dapat  menunjukkan  profil  kromatografi  yang  berbeda, (Lembke dkk., 2001).
Variasi  matriks  tablet  seringkali  menyebabkan prosedur  standar  untuk  analisis  cemaran  harus dioptimasi  guna  memberikan  profil  dan  kinerja kromatografi  yang  memenuhi  persyaratan.  Beberapa penelitian  untuk  penetapan  cemaran  dalam  sediaan tablet  IBP  tunggal  menggunakan  kolom  silika  C 18 Spherisorb  (Merck)  dan  Zorbax  (Agilent)  telah dilakukan  (Caviglioli  dkk.,  2002;  Cory  dkk.,  2010; Farmer  dkk.,  2002).  Kebanyakan  metode  tersebut membutuhkan  waktu  analisis  yang  panjang,  sehingga tidak  sesuai  untuk  analisis  rutin.  Hasil  penelitian  ini diharapkan dapat  memberikan  informasi tentang  profil kromatografi IBP dan cemarannya dari beberapa kolom C 18 yang  banyak digunakan di  laboratorium  pengujian berdasarkan  persyaratan  USP  serta  mengoptimasi kondisi  pemisahannya  menggunakan  kolom  yang terpilih.  Tujuan  studi  ini  adalah  untuk  memilih  kolom yang  cocok,  cara  preparasi  sampel  yang  sederhana serta  metode  analisis  yang  sensitif  dan  akurat  untuk penetapan  cemaran  ibuprofen  yang  dipersyaratkan
dalam ibuprofen tablet, yaitu IBP RC C dan IBP RC J. Metode yang digunakan adalah KCKT dengan detektor PDA.  Kondisi  optimum  yang  diperoleh  diterapkan untuk analisis IBP RC C dan IBP RC J dalam 3 sediaan tablet yang beredar di pasaran.

## BAHAN DAN METODE Bahan
Certified  Reference  Material IBP  RC  C  (CAS  # 38861-78-8)  (Sigma-Aldrich)  dan  IBP  RC  J  (CAS  # 65813-55-0), ibuprofen BPFI (Badan POM), asetonitril (ACN)  HPLC grade (J.T.  Baker),  asam  kloroasetat (Merck),  amonium  hidroksida  pro  analisis  (Merck), ultra pure water diproduksi di laboratorium menggunakan  Ultra  Clear®  TP  (Evoqua).  Tablet ibuprofen dari 3  industri obat  yang  berbeda (diperoleh dari industri obat dan apotek).

## Alat
Sistem  KCKT  elusi  isokratik  dari  Shimadzu Prominence  dengan software LC Solution yang dilengkapi pompa (LC 20 AD), detektor PDA (SPD-M 20A),  CBM  20A,  kolom  oven  (CTO  20AC),  sistem deggaser (DGU 20A) dan autosampler (SIL 20A HT).
Kolom  KCKT  yang  akan  dibandingkan  adalah  kolom C 18 dengan kode A; B dan C (3 merk yang berbeda dari 2  pabrikan)  dengan  dimensi  4,6  x  250  mm,  5  µm,  pH meter  Mettler  Toledo-Seven  Compact,  neraca  analitik Sartorius CP 224S dan micro balance Sartorius MSA 6 GS. Membran filter MF-Millipore™ GVWP 0,22 μm.

## Metode

## Pembuatan fase gerak dan pelarut
Fase  gerak  untuk  optimasi  dibuat  dari  campuran asetonitril dengan larutan asam kloroasetat 1% (pH 2,8; 3,0;  3,2)  pada  beberapa  perbandingan  (55:45;  60:40; 65:35,  v/v).  Setelah  larutan  disaring  dengan  membran filter 0,22 μm, kemudian digetarkan dengan ultrasonik selama  15  menit.  Larutan  asam  kloroasetat  1%  dibuat dengan  melarutkan  10  g  asam  kloroasetat  dalam 1000  mL ultra  pure  water ,  pH  larutan  diatur  dengan larutan amonium  hidroksida. Laju alir  yang digunakan untuk  optimasi  metode  adalah  1,5  mL/menit, 1,75 mL/menit dan 2,0 mL/menit.

## Pembuatan larutan baku pembanding
Larutan stok baku pembanding IBP RC C dan IBP RC J dibuat dengan mencampur baku pembanding IBP RC  C  dan  IBP  RC  J  berturut-turut  200  μg/mL  dan 50 μg/mL  (tidak  ditambahkan  dengan  baku pembanding  IBP  BPFI,  karena  selanjutnya  akan digunakan  dalam  pembuatan  kurva  kalibrasi  untuk perhitungan kadar) kemudian dilarutkan dengan pelarut
sesuai fasa gerak dalam labu ukur yang sesuai. Setelah digetarkan  dengan  ultrasonik  selama  15  menit, ditambahkan  pelarut  sampai  tanda.  Larutan  baku pembanding campuran (IBP, IBP RC C dan IBP RC J) untuk  uji  kesesuaian  sistem  (UKS)  dipreparasi  dalam labu ukur yang sesuai dengan membuat campuran yang mengandung  10.000  μg/mL  IBP  BPFI  dan  masing- masing 10 μg/mL baku pembanding IBP RC C dan IBP RC J  yang dipipet dari  larutan stok baku pembanding. Larutan  di  injeksikan  10  μL  ke  dalam  sistem kromatografi  dengan  replikasi  6  kali.  Larutan  ini digunakan untuk optimasi metode dan UKS.
Larutan  baku  campur  IBP  RC  C  dan  IBP  RC  J untuk  pembuatan  kurva  kalibrasi  dipreparasi  dengan melakukan pengenceran larutan stok baku  pembanding dalam labu ukur yang sesuai dengan pelarut yang sama sampai  diperoleh  rentang  konsentrasi  0,1  -  13  μg/mL. Kurva kalibrasi merupakan hubungan antara konsentrasi  (x)  dan  rata-rata  area  puncak  (y).  Larutan disaring  dengan  membran filter  milipore GVWP 0,22  μm  sebelum  diinjeksikan  sebanyak  10  μL  dalam sistem kromatografi.

## Pembuatan larutan sampel
Preparasi sampel dilakukan dengan menimbang 20 tablet  dan  menghitung  bobot  rata-rata  tablet.  Setelah tablet  dihaluskan,  ditimbang  teliti  sejumlah  serbuk tablet  setara  dengan  berat  IBP  untuk  konsentrasi 10.000  μg/mL  IBP  dalam  labu  ukur  25,0  mL.  Setelah ditambah  dengan  lebih  kurang  15  mL  pelarut, digetarkan  dengan  ultrasonik  selama  15  menit, dibiarkan mendingin sampai suhu kamar dan ditambah pelarut  sampai  tanda.  Pada  penelitian  ini  dilakukan pengujian  terhadap  tiga  macam  tablet  ibuprofen  dari produsen  yang  berbeda.  Masing-masing  sampel dipreparasi  dengan  replikasi  3  kali.  Setiap  larutan disaring  dengan  membran  filter  GVWP  0,22  μm sebelum diinjeksikan sebanyak 10 μL.

## Sistem kromatografi
Kondisi  analisis  diadopsi  dari  USP  untuk penetapan  IBP  RC  C  dan  IBP  RC  J  dalam  sediaan tablet  ibuprofen.  Persyaratan  USP  untuk  UKS  adalah simpangan baku relatif (RSD) IBP RC C dan IBP RC J serta IBP tidak lebih dari 6,0%, resolusi (Rs) IBP RC J –  IBP  dan  IBP  –  IBP  RC  C  adalah  tidak  kurang  dari 2,5 dan waktu retensi relatif (RRT) IBP RC J, IBP dan IBP  RC  C  berturut-turut  adalah  0,47;  1,0  dan  1,62. Kondisi kromatografi untuk pemilihan kolom (selektifitas)  dan  kondisi  terpilih  setelah  dioptimasi ditunjukkan pada Tabel 1.
Tabel 1 . Sistem kromatografi Parameter Metode Selektivitas Kolom (USP) Metode Hasil Optimasi Kolom C 18 (250 mm x 4,60 mm, 5 μm). C 18 - C (250 mm x 4,60 mm, 5 μm). Fase gerak Larutan  asam  kloroasetat  1%  pH 3.0 : asetonitril (40:60, v/v) Larutan  asam  kloroasetat  1%  pH 3.0 : asetonitril (45:55, v/v) Detektor (panjang gelombang) PDA, 254 nm PDA, 254 nm Laju alir 2,0 mL/menit 1,5 mL/menit Volume injeksi 10 μL 10 μL Waktu analisis 5 menit 11 menit

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Beberapa  penelitian  untuk  penetapan  cemaran dalam  ibuprofen  telah  dilakukan.  Metode  KCKT  elusi gradien  digunakan  pada  penelitian  Caviglioli  dkk. (2002)  dengan  waktu  analisis  selama  70  menit. Lamanya  waktu  analisis  menyebabkan  metode  ini kurang  sesuai  diterapkan  untuk  analisis  rutin. Penelitian  Cory  dkk.  (2010)  menggunakan  kolom  C 18 dengan  panjang  kolom  15  cm  dan  waktu  analisis 20  menit. Dimensi kolom tersebut tidak sesuai dengan metode standar kompendia, demikian pula dengan fase gerak  dan  pelarut  yang  digunakan  sehingga  validasi metode  diperlukan  untuk  metode  tersebut.  Sedangkan data  validasi  metode  tidak  terdapat  dalam  penelitian tersebut. Kolom C 18 dengan dimensi yang sama seperti penelitian Cory dkk. (2010) digunakan pada penelitian Jahan  dkk.  (2014)  dengan  fase  gerak  yang  berbeda, namun  penelitian  ini  lebih  fokus  pada  analisis famotidin  dan  ibuprofen  dalam  sediaan  tablet  dan bukan  cemaran    ibuprofen  (IBP  RC  C  dan  IBP  RC  J) (Jahan dkk., 2014).
Monografi  pengujian  cemaran  organik  ibuprofen (IBP  RC  C  dan  IBP  RC  J)  dalam  sediaan  tablet menurut  USP  41  digunakan  sebagai  acuan  dalam penelitian  ini  dengan  beberapa  perubahan  untuk mengoptimasi  kinerja  kromatografi.  Dalam  metode USP,  valerofenon  digunakan  sebagai  baku  internal namun pada penelitian ini valerofenon tidak digunakan sebagai  baku  internal.  Selektifitas  kolom  dilakukan dengan  membandingkan  profil  kromatogram  dan pemisahan  IBP  dari  cemarannya  (IBP  RC  C  dan  IBP RC J) menggunakan sistem kromatografi seperti tertera dalam  Tabel  1.  Kolom  yang  digunakan  adalah  kolom C 18 dengan  dimensi  yang  sama  yaitu  kolom  dengan kode  A,  B  dan  C.  Hasil  uji  selektifitas  kolom  tersaji pada  Gambar  2  dan  Tabel  2.  Data  tersebut menunjukkan  bahwa  kesamaan  dimensi  dan  jenis  fase diam (C 18 ) kolom dapat memberikan profil kinerja dan kromatogram  puncak  yang  berbeda.  Hal  ini  dapat dipengaruhi  oleh  matriks  sampel  yang  bervariasi, sehingga  optimasi  perlu  dilakukan  untuk  memperoleh profil  dan  kinerja  kromatografi  yang  memenuhi persyaratan.
Tabel 2 . Profil kinerja KCKT menggunakan kolom A, B, C dan sistem kromatografi sesuai USP Parameter Kolom Kriteria Keberterimaan A B C RRT Senyawa sejenis J IBP 0,64 0,71 0,62 0,47 IBP 1,00 1,00 1,00 1,00 Senyawa sejenis C IBP 1,32 1,16 1,46 1,62 Rs Senyawa sejenis J IBP - 1,3 2,4 ≥ 2,5 IBP 2,5 1,4 2,9 Senyawa sejenis C IBP 1,3 2,7 8,6 N Senyawa sejenis J IBP 4565 3112 4096 ≥ 2000 IBP 5904 4043 6668 Senyawa sejenis C IBP 9599 6749 9768
Gambar 2. Kromatogram senyawa sejenis J IBP, IBP, dan senyawa sejenis C IBP dari sampel tablet menggunakan sistem kromatografi sesuai USP . (a) Kolom C 18 -A;  (b) Kolom C 18 -B; (c) Kolom C 18 -C
Beberapa  faktor  dapat  mempengaruhi  performa kolom, yaitu pada pH tinggi (di atas pH 8) silika dapat terlarut  sedangkan  pada  pH  <  2  menyebabkan hidrolisis  ikatan  siloksan  meskipun  modifikasi  kimia sudah  dilakukan  untuk  meningkatkan  stabilitasnya sampai dengan pH 10  (Kazakevich  & LoBrutto, 2007; Moldoveanu  &  David,  2017).  Gambar  2a  dan  2b menunjukkan  pemisahan  puncak-puncak  target  yang belum  sempurna,  sedangkan  dari  Tabel  2  dapat  di amati  bahwa  performa  KCKT  (resolusi  dan  jumlah lempeng  teoritis)  terbaik  diperoleh  dari  penggunaan kolom  C  dimana  RRT  puncak  target  pada  kolom tersebut  paling  mendekati  persyaratan  USP.  Sehingga kolom  terpilih  adalah  kolom  C,  namun  dari  profil puncak target menunjukkan optimasi masih diperlukan.
Optimasi metode dilakukan pada sistem kromatografi meliputi perubahan pada rasio komposisi fase  gerak,  pH  larutan  asam  kloroasetat  dan  laju  alir fase gerak dengan menginjeksikan larutan baku campur UKS  sebanyak  10  μL.  Hasil  optimasi  metode  yang tersaji  pada  Gambar  3  menunjukkan  bahwa  waktu analisis  tidak  dipengaruhi  oleh  perubahan  pH  pada
komposisi dan  laju alir fase gerak yang sama. Semakin rendah  komposisi  fase  organik  dari  fase  gerak,  maka RRT analit semakin mendekati persyaratan kompendia. Fase gerak yang paling optimum  untuk analisis adalah 55% asetonitril :  45%  larutan asam kloroasetat pH 3,0 dengan  laju  alir  1,5  mL/menit.  Perubahan  tersebut masih memenuhi persyaratan method adjustment dalam USP. Fase gerak tersebut menghasilkan bentuk puncak analit  simetris,  pemisahan  memuaskan  serta  RRT mendekati  kriteria  USP.  Meskipun,  waktu  analisis menjadi  lebih  lama.  Metode  tersebut  diaplikasikan untuk  pengujian  IBP  RC  C  dan  IBP  RC  J  dalam sediaan  ibuprofen  tablet.  UKS  dilakukan  terlebih dahulu  untuk  memastikan  bahwa  sistem  telah  siap sebelum pelaksanaan pengujian, dengan menginjeksikan  larutan  UKS  yang  baru  dipreparasi. Hasil  UKS  dapat  diamati  pada  Tabel  3,  sedangkan profil  salah  satu  kromatogram  dari  baku  UKS  dan sampel  ditunjukkan  pada  Gambar  4.  Hasil  UKS memenuhi  kriteria  keberterimaan  yang  menunjukkan bahwa sistem sudah siap untuk digunakan.
Gambar 3. Profil kondisi optimasi pada komposisi fase gerak dan laju alir yang berbeda. (A) waktu analisis;  (B) relative RT dari senyawa sejenis J IBP; (C) Relative RT dari senyawa sejenis C IBP
Tabel 3. Hasil uji kesesuaian sistem
Parameter Hasil* Kriteria keberterimaan Senyawa sejenis J IBP IBP Senyawa sejenis C  IBP Senyawa sejenis J IBP IBP Senyawa sejenis C  IBP t R (menit) 3,187 6,217 9,601 - - - RSD t R (%) 0,25 0,17 0,15 ≤ 6,0% ≤ 6,0% ≤ 6,0% Area 274054 3743113 356678 - - - RSD area (%) 0,35 0,15 0,29 ≤ 6,0% ≤ 6,0% ≤ 6,0% Tf 1,31 1,72 1,22 ≥ 2,5 ≥ 2,5 ≥ 2,5 Rs 14,43 11,47 ≥ 2,5 ≥ 2,5 N 6689 8864 13879 Makin tinggi nilainya, efisiensi pemisahan semakin baik
*Merupakan rata-rata dari 6 replikasi injeksi;  RSD adalah Relative Standard Deviation ; Rs merupakan resolusi puncak senyawa sejenis J IBP dengan IBP dan IBP dengan senyawa sejenis C IBP
Gambar 4. Profil kromatogram larutan baku UKS (A) dan sampel (B) dengan metode yang optimum
Kurva kalibrasi dari  larutan  baku campur IBP RC C  dan  IBP  RC  J  dipreparasi  pada  rentang  konsentrasi untuk IBP RC  C   adalah 0,12  -  13,94  μg/mL dan IBP RC  J    adalah  0,13  -  13,24  μg/mL,  seperti  yang  dapat diamati  pada  Tabel  4  dan  Gambar  5.  Kurva  kalibrasi menunjukkan  adanya  hubungan  yang  linier  antara
konsentrasi  dengan  area  puncak  dari  IBP  RC  C  dan IBP  RC  J  yang  ditunjukkan  dengan  kedekatan  nilai koefisien  korelasi  (R2)  dengan  1,0000.  Persamaan linier untuk IBP RC C adalah 36.029,1617x - 296,1667 dengan  R2  =  1,0000  sedangkan  IBP  RC  J  adalah 25.963,7996x + 634,5911 dengan R2 = 1,0000.
Tabel 4. Kurva kalibrasi senyawa sejenis J IBP dan senyawa sejenis C IBP Senyawa sejenis J IBP Senyawa sejenis C IBP Konsentrasi  (µg/mL) Area puncak Konsentrasi  (µg/mL) Area puncak 0,1324 3513 0,1195 4621 0,5295 14046 0,4781 17530 2,1180 55764 1,9123 67807 3,9712 104202 4,7808 172042 6,6187 173860 5,9760 215226 7,9424 206554 7,9680 285002 10,5899 274919 11,9520 430913 13,2374 344209 13,9440 502570 y = 25.963,7996x + 634,5911; R 2 = 1,0000 y = 36.029,1617x – 296,1667; R 2 = 1,0000
Gambar 5. Kurva kalibrasi senyawa sejenis J dan C IBP (konsentrasi vs area puncak)
Metode  yang  telah  dioptimasi  ini  diaplikasikan pada  pengujian  sampel  tablet  ibuprofen  dari  tiga produsen  yang  berbeda,  masing-masing  dengan replikasi  3  kali.  Prosedur  USP  pada  preparasi  sampel meliputi proses sentrifugasi 3000 rpm selama 10 menit, namun  dalam  penelitian  ini  sentrifugasi  tidak dilakukan, sebab cairan sampel dapat dengan mudah di filtrasi  menggunakan  membran  berpori  0,22  μm. Penelitian  yang  dilakukan  oleh  Massad  dkk.  (2002) menyatakan  bahwa  tidak  ada  perbedaan  hasil  analisis antara  sampel  yang  disentrifugasi  dengan  yang langsung  difiltrasi  melalui  membran  filter  untuk
memisahkan padatan dari larutan sampel (Massad dkk., 2002).  Kuantisasi  IBP  RC  C  dan  IBP  RC  J  dilakukan dengan  membandingkan  area  puncak  dari  target dengan  baku  pembanding.  Syarat  keberterimaan menurut  USP  41  untuk  IBP  RC  C  adalah  tidak  lebih dari 0,25% dan IBP RC J adalah tidak lebih dari 0,2%. Monografi Farmakope Indonesia edisi V untuk sediaan tablet  IBP,  hanya  mencantumkan  persyaratan  untuk IBP  RC  C  yaitu  tidak  lebih  dari  0,1%  (Farmakope Indonesia,  2014).  Hasil  analisis  semua  sampel  tablet adalah memenuhi syarat dan dapat diamati pada Tabel 5.
Tabel 5. Hasil  pengujian sampel tablet ibuprofen Sampel Senyawa sejenis J IBP Senyawa sejenis C IBP Kadar (%) Syarat (%) Kadar (%) Syarat (%) SPL tablet A 5,68E-04 ≤ 0,20E+01 - ≤ 0,25E+01 SPL tablet B 5,85E-02 6,16E-03 SPL tablet C - -

## KESIMPULAN
Tidak  semua  kolom  KCKT  mampu  memberikan performa  yang  baik sesuai dengan persyaratan  metode standar  kompendia  untuk  analisis  cemaran  obat. Metode  KCKT  yang  selektif  dan repeatable dengan detektor  PDA  untuk  pengujian  cemaran  organik ibuprofen  (IBP  RC  C  dan  IBP  RC  J)  dalam  sediaan tablet  telah  diperoleh  dalam  penelitian  ini.  Profil kromatografi  yang  memuaskan dapat dicapai,  meliputi bentuk  puncak  yang  simetris,  pemisahan  (resolusi), jumlah  lempeng  teoritis  dan  faktor  ikutan  dengan waktu analisis 11 menit. Metode tersebut telah berhasil diaplikasikan untuk menganalisis beberapa produk obat ibuprofen dalam sediaan tablet yang berada di pasaran, sehingga  metode  ini  dapat  digunakan  secara  efektif untuk analisis rutin.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Penulis  mengucapkan  terimakasih  yang  sebesar- besarnya  kepada  pihak-pihak  yang  telah  banyak membantu  dalam  penelitian  ini.  Ucapan  terima  kasih juga  disampaikan  penulis  kepada  Badan  POM  RI  dan khususnya  Balai  Besar  POM  di  Surabaya  atas kesempatan dan fasilitas yang diberikan.

## DAFTAR PUSTAKA
Anderson,  N.  G.  (2012).  Final  Product  Form  and Impurities.  In:  Anderson  NG  (ed.). Practical Process  Research  and  Development ;  365–395. Jacksonville: Elsevier.
Castell,  J.  V.,  Gomez-L.,  M.  J.,  Miranda,  M.  A.  &
Morera,  I.  M.  (1987).  Photolytic  degradation  of
Ibuprofen. Toxicity of the Isolated
Photoproducts  on  Fibroblast  and  Erythrocytes.
Photochemistry and Photobiology ; 46 ; 991–996. Caviglioli,  G.,  Valeria,  P.,  Brunella,  P.,  Sergio,  C.,
Attilia,  A.  &  Gaetano,  B.  (2002).  Identification of  Degradation  Products  of  Ibuprofen  Arising from  Oxidative  and  Thermal  Treatments. Journal  of  Pharmaceutical  and  Biomedical Analysis; 30; 499–509.
Cory,  W.  C.,  Harris,  C.  &  Martinez,  S.  (2010).
Accelerated  Degradation  of  Ibuprofen  in Tablets. Pharmaceutical  Development  and
Technology ; 15 ; 636–643.
Farmakope  Indonesia.  (2014).  Tablet  Ibuprofen  (Edisi
5). Jakarta: Departemen Kesehatan RI.
Farmer,  S.,  Anderson,  P.,  Burns,  P.  &  Velagaleti,  R.
(2002).  Forced  Degradation  of  Ibuprofen  in Bulk  Drug  and  Tablets:  Determination  of
Specificity,  Selectivity,  and  the  Stability- Indicating  Nature  of  the  USP  Ibuprofen  Assay Method. Pharmaceutical  Technology  North America ; 26; 28–42.
Hersh,  E.  V  &  Dionne,  R.  A.  (2017).  Nonopioid Analgesics.  In:  Hersh  EV,  Dionne  RA  (ed.).
Pharmacology  and  Therapeutics  for  Dentistry ; 257–275. St. Louis: Elsevier.
Huidobro,  A.  L.,  Rupérez,  F.  J.  &  Barbas,  C.  (2006).
Tandem Column for the Simultaneous Determination  of  Arginine,  Ibuprofen  and Related  Impurities  by  Liquid  Chromatography. Journal of Chromatography A ; 1119; 238–245. Jahan,  M.  S.,  Islam,  M.  J.,  Begum,  R.,  Kayesh,  R.  &
Rahman,  A.  (2014).  A  Study  of  Method
Development, Validation, and Forced
Degradation  for  Simultaneous  Quantification  of Paracetamol  and  Ibuprofen  in  Pharmaceutical Dosage  form  by  RP-HPLC  Method. Analytical Chemistry Insights ; 9; 75–81.
Kazakevich,  Y.  &  LoBrutto,  R.  (2007).  Stationary Phases.  In:  Kazakevich  Y,  Lobrutto  R  (ed.).
HPLC  for  Pharmaceutical  Scientists ;  75–132. Hoboken:  John Wiley & Sons, Inc.
Lembke,  P.,  Günter,  H.,  Cabrera,  K.,  Brunner,  W.  & Muller,  E.  (2001).  Handbook  of  Analytical
Techniques. In: Gunzler H. & Williams A. (ed.).
Handbook  of  Analytical  Techniques ;  261–326.
Weinheim: Wiley-VCH.
Maggio,  R.  M.,  Vignaduzzo,  S.  E.  &  Kaufman,  T.  S.
(2013). Practical and Regulatory Considerations for Stability-indicating Methods for the Assay of Bulk  Drugs  and  Drug  Formulations. TrAC Trends in Analytical Chemistry ; 49 ; 57–70. Massad,  L.,  Anderson,  P.,  Ward,  J.,  Burns,  P.  & Velagaleti,  R.  (2002).  Validation  of  Changes  to the  USP  Assay  Method  for  Ibuprofen  Tablets:
Extraction and Filtration Techniques.
Pharmaceutical Technology ; 26; 90–100.
Melo, S. R. D. O., Homem-De-Mello, M., Silveira, D. &  Simeoni,  L.  A.  (2014).  Advice  on Degradation  Products  in  Pharmaceuticals:  A Toxicological  Evaluation. PDA  Journal  of Pharmaceutical  Science  and  Technology ; 68; 221–238.
Moldoveanu,  S.  C.  &  David,  V.  (2017).  RP-HPLC Analytical  Columns.  In:  Moldoveanu  SC, David  V  (eds.). Selection  of  the  HPLC  Method in  Chemical  Analysis ;  279–328.  Amsterdam: Elsevier.
Nageswara, R. R. & Nagaraju, V. (2003). An Overview of the  Recent  Trends  in  Development of HPLC Methods  for  Determination  of  Impurities  in Drugs. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis ; 33; 335–377.
Persson.  S.,  K.  &  Åström,  O.  (1998).  Separation  of
Ibuprofen, Codeine Phosphate, Their Degradation Products and Impurities by Capillary Electrophoresis II. Validation. Journal of Chromatography A ; 826 ; 95–102.
Skoog,  D.  A.,  West,  D.  M.,  Holler  F.  J.  &  Crouch,  S. R. (2014). Fundamentals of Analytical Chemistry. Belmont-USA: Mary Finch.
United States Pharmacopeia. (2018). Ibuprofen Tablets Monographs  (USP  41-NF).  Rockville:  United States Pharmacopeia.
United  States  Pharmacopeia.  (2019).  Impurities  in Drug Substances and Drugs Products   (USP 42- NF. Rockville: United States Pharmacopeia.