Aktivitas Antibakteri Ekstrak dan Fraksi Herba Kemangi ( Ocimum Sanctum L) Terhadap Staphylococcus Aureus ATCC 25923 dan Pseudomonas Aeruginosa ATCC 27853
Antibacterial Activity of Basil ( Ocimum sanctum L ) Herb Extracts and Fractions Against Staphylococcus aureus ATCC 25923 and Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
Taufik Turahman, Ghani Nurfiana Fadma Sari Fakultas Farmasi Universitas Setia Budi Surakarta Jln. Letjen Sutoyo-Mojosongo Surakarta-57127 Telp. 0271-852518 email: taufikturahman@gmail.com
(Diterima :  2019-08-29, disetujui : 2019-11-27)

## ABSTRAK
Penyakit infeksi masih menjadi salah satu masalah kesehatan masyarakat khususnya di negara  berkembang.  Etiologi  secara  umum  disebabkan  oleh Staphylococcus  aureus dan Pseudomonas  aeruginosa. Herba  kemangi  ( Ocimum  sanctum  L) merupakan  tanaman  yang dikenal  sebagai  lalapan  ini  memiliki  khasiat  sebagai  antioksidan,  antikanker  dan  antimikroba namun  belum  banyak  informasi  ilmiah  sebagai  antibakteri.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui  kandungan  kimia  dan  aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak  etanol,  fraksi  n-heksan,  etil asetat dan air herba kemangi terhadap pertumbuhan Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa secara difusi dan dilusi.
Herba kemangi diekstraksi dengan metode maserasi menggunakan etanol 96%. Ekstrak yang diperoleh kemudian disuspensi dengan air selanjutnya difraksinasi dengan  n-heksan dan etil  asetat.  Ekstrak  herba  kemangi  beserta  fraksi  yang  didapatkan  selanjutnya  diuji  aktivitas antibakterinya  dengan  konsentrasi  12.5,  25  dan  50%  menggunakan  metode  difusi.  KHM  dan KBM dari fraksi teraktif diketahui menggunakan uji dilusi dengan konsentrasi 0.78, 1.56, 3.125, 6.25%,  12. 5%,  25%  dan  50%.  Kontrol  positif  ciprofloksasin  5μg/15μl  dan  kontrol  negatif menggunakan tween 80 steril konsentrasi 5%. Identifikasi golongan senyawa dilakukan dengan metode uji tabung dan kromatografi lapis tipis (KLT).
Hasil  uji  aktifitas  antibakteri  menunjukan  diameter  zona  hambatan  pada  bakteri  Gram negatif  secara  umum  lebih  besar  dibandingkan  bakteri  Gram  positif.  Diameter  zona  hambat terbesar  pada  bakteri Pseudomonas  aeruginosa pada  fraksi  etil  asetat  herba  kemangi konsentrasi  50%  dengan  diameter  zona  hambat  10  mm,  pada  bakteri Staphylococcus  aureus terdapat  pada  fraksi  etil  asetat  pada  konsentrasi  50%  memiliki  daya  hambat  sebesar  8,6  mm. Hasil identifikasi kandungan kimia menunjukkan bahwa dalam ekstrak dan fraksi herba kemangi mengandung senyawa flavonoid, saponin steroid, dan tanin
Kata  kunci: Antibakteri,  Herba  kemangi  ( Ocimum  sanctum  L) , Staphylococcus  aureus, Pseudomonas aeruginosa

## ABSTRACT
Infectious  disease  is  still  one  of  the  public  health  problems,  especially  in  developing countries. Etiology is generally caused by Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa . Basil  ( Ocimum  sanctum L)  is  a  plant  known  as  lalapan  which  has  antioxidant,  anticancer  and antimicrobial properties but there is not much scientific information as an antibacterial. This study aims  to  determine  the  chemical  content  and  antibacterial  activity  of  ethanol  extract,  n-hexane fraction,  ethyl  acetate  and  basil  herb  water  on  the  growth  of Staphylococcus  aureus and Pseudomonas aeruginosa by diffusion and dilution.
Herbs are macerated using 96% ethanol. The extract obtained was then suspended with water  and  then  fractionated  with  n-hexane  and  ethyl  acetate.  Basil  extract  and  the  fractions obtained were then tested for antibacterial activity at concentrations of 12.5, 25 and 50% using the diffusion method. The MIC and MBC of the most active fractions can be known using dilution
tests with concentrations of 0.78, 1.56, 3.125, 6.25%, 12.5%, 25% and 50%. Ciprofloxacin positive control 5μg/15μl and negative control using tween 80 sterile 5% concentration. Identification of groups of compounds is done by the test tube method and thin layer chromatography (TLC).
Antibacterial activity test results showed that the zone of inhibition zone in Gram-negative bacteria  in  general  tends  to  be  larger  than  Gram-positive  bacteria.  The  largest  inhibition  zone diameter  in  the  bacterium Pseudomonas  aeruginosa in  the  ethyl  acetate  fraction  basil concentration  50%  with  a  diameter  of  inhibition  zone  (10  mm),  in  the Staphylococcus  aureus bacteria found in the ethyl acetate fraction at a concentration of 50% has inhibitory power of (8.6 mm). The results of the identification of the chemical content showed that the extract and fraction of basil herbs contain flavonoids, saponins steroids and tanins
Keywords:  Antibacterial,  Basil  ( Ocimum  sanctum  L ), Staphylococcus  aureus , Pseudomonas aerugino

## PENDAHULUAN
Pengembangan obat di Indonesia yang  berasal  dari  produk  alam  telah terbukti  berhasil  di  masa  lalu  dan teknologi  baru  telah  dikembangkan untuk  memperoleh  senyawa-senyawa turunan  dari  berbagai  jenis  tanaman. Kemangi,  kemangen  (Indonesia,  Jawa) Tanaman  yang  banyak  tumbuh  di daerah tropis ini merupakan herba tegak tinggi 0,3-1,5 m. Batang pokoknya tidak jelas,  berwarna  hijau  sering  keunguan, dan  berambut  atau  tidak.  Kemangi mengandung  tanin,  flavonoid,  alkaloid, terpenoid,  saponin,  glikosida,  asam amino  primer  dan  sekunder  (Sarah, 2015).  Berdasarkan  penelitian  (Atikah, 2013)  yang  berjudul  uji  aktivitas antimikroba  ekstrak  herba  kemangi
(Ocimum sanctum L) terhadap
Staphylococcus  aureus dan Candida
albicans menyatakan  bahwa  ekstrak etanol  70%  herba  kemangi  memiliki aktivitas antimikroba terhadap Staphylococcus  aureus dan Candida
albicans . Berdasarkan  uraian  diatas,  peneliti tertarik untuk meneliti golongan senyawa kimia dari herba kemangi yang aktif sebagai antibakteri, sehingga perlu dilakukan pemisahan untuk memperoleh fraksi aktif dengan
kandungan  senyawa  lebih  sederhana. Fraksi aktif diperoleh dari hasil fraksinasi menggunakan  pelarut  n-heksan,  etil- asetat dan air. Masing-masing fraksi dan ekstrak  akan  diuji  antibakteri  secara difusi  dan  dilusi  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus ATCC  25923 dan Pseudomonas  aeruginosa ATCC 27853.

## METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  adalah bejana  maserasi,  cawan  porselen,
moisture balance , corong pisah, evaporator, ayakan nomor 40, peralatan gelas  ( Pyrex ),  neraca  analitik,  lampu UV, kertas saring, lempeng KLT, tabung reaksi,  cawan  petri,  jarum  Ose,  kapas lidi steril, kotak aseptis inkas, gelas ukur, batang  pengaduk
Bahan  yang  digunakan  adalah herba  kemangi,  etanol  96%,  n-heksan, etil asetat, aquadest, pereaksi dragendorff, Lieberman Burchard, anisaldehid,  sitro  borat,  Media Nutrient Agar (NA), Brain  Heart  Infusion (BHI), dan Vogel Johnson Agar (VJA), bakteri Staphylococcus  aureus ATCC  25923 dan Pseudomonas  aeruginosa ATCC
27853
Pembuatan  Ekstrak. Serbuk  kering sebanyak 1000 gram diekstraksi
menggunakan etanol 95% perbandingan (1:10) dengan cara dimaserasi pada suhu kamar selama 5 x 24  jam.  Seluruh  ekstrak  yang  didapat ditampung dan dipekatkan menggunakan rotary vacum evaporator serta disempurnakan pengeringannya di dalam oven suhu 40 o C sehingga didapat ekstrak etanol ( Crude extract) (Kemenkes RI 2013).
Pembuatan  Fraksi. Sebanyak  10  g ekstrak  etanol  herba  kemangi  dipartisi menggunakan  75  ml  pelarut  n-heksan: 75  ml  air.  Fraksinasi  dengan  n-heksan dilakukan sebanyak tiga kali menggunakan  corong  pisah.  Sari  n- heksan selanjutnya
dikumpulkan
kemudian dipekatkan di vaccum
evaporator ,  sari n -heksan  yang  sudah kental  disebut  fraksi  n-heksan.  Lapisan berair  sisa  dari  fraksinasi  dengan  n- heksan  kemudian  difraksinasi  lagi menggunakan  75  ml  etil  asetat  dan dilakukan  sebanyak  tiga  kali.  Lapisan etil  asetat  dipisahkan  dan  dipekatkan dengan vaccum evaporator dan diperoleh  fraksi  etil  asetat.  Lapisan  air sisa fraksinasi etil asetat dipekatkan dan disebut fraksi air (Kemenkes RI 2013) Identifikasi Kandungan Dalam
Ekstrak  Dan  Fraksi  Herba  Kemangi.
Identifikasi golongan senyawa dilakukan dengan  menggunakan  uji  tabung  dan KLT.  Identifikasi  golongan  senyawa dilakukan  terhadap  ekstrak  dan  fraksi yang diperoleh dengan melihat hasil dari penampak bercak yang bereaksi dengan  reagen  di  antaranya:  flavonoid (uap ammonia dan pereaksi sitroborat), alkaloid  (pereaksi  dragendroff),  steroid (pereaksi  liberman  bourchard),  tanin (pereaksi  FeCl 3 ),  saponin  (pereaksi anisaldehid) (Harborne, J. B., 1987)
Uji  kualitatif  ini  dilakukan  untuk membuktikan kebenaran bahan/zat aktif yang  terkandung  pada  herba  kemangi yang berperan dalam aktivitas antibakteri  terhadap Staphylococcus aureus ATCC 25923 dan Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853. (Novianti et.al 2014) Pengujian Aktivitas Antibakteri. Metode difusi digunakan untuk menentukan  diameter  daerah  hambat dari ekstrak, fraksi n-heksan, etil asetat dan  air  dari  herba  kemangi  dengan konsentrasi 12.5, 25 dan 50%. Pertama membuat suspensi bakteri yang disesuaikan dengan standar Mc Farland 0,5  dioleskan  pada  cawan  petri  yang berisi  media  MHA,  kemudian  pada setiap  sumuran  ditambahkan  sampel menggunakan mikropipet dengan larutan  ekstrak  dan  fraksi  dari  herba kemangi.  Kontrol  positif  menggunakan antibiotik
ciprofloxacin. Inkubasi dilakukan selama 24 jam pada suhu 37 o C, setelah itu diukur zona hambat yang terbentuk.  Pengujian  tiap  ekstrak  dan fraksi  dilakukan  sebanyak  3  kali replikasi.  Pengukuran  zona  hambat  di sekitar
sumuran dilakukan menggunakan  jangka  sorong  dengan ketelitian 1 mm.
Tahap uji antibakteri yang kedua adalah  metode  dilusi  menggunakan beberapa  pengenceran  yang  bertujuan untuk menentukan kadar hambat minimum  KHM  dan  kadar  bunuh minimum  (KBM)  terhadap  bakteri S aureus ATCC 25923 dan P aeruginosa ATCC 27853 (Jawetz, 2007).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil Ekstraksi Dan Fraksinasi
Ekstrak  etanol  kental  yang didapatkan  dari  1000  g  serbuk  adalah
83,45  g  dengan  rendemen  sebesar 8,34%.    Ekstraksi  dilakukan  dengan etanol  96%  karena  merupakan  pelarut universal sehingga dapat mengekstraksi hampir  semua  kandungan  kimia  dalam simplisia. Ekstrak kental etanolik sebanyak  10  g  kemudian  dilakukan fraksinasi dengan n -heksana, etil asetat, dan air. Hasil dapat dilihat pada Tabel 1. Hasil  identifikasi  kandungan  kimia.
Analisis kandungan kimianya menggunakan metode skrining fitokimia dengan tabung reaksi dan KLT. Senyawa yang diidentifikasi merupakan senyawa yang memiliki aktivitas antibakteri  yaitu  alkaloid,  flavonoid, steroid,  dan  saponin.  Hasil  identifikasi kandungan  senyawa  tersebut  dapat dilihat pada Tabel 2.
Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Dengan Metode  Difusi  Cakram. Hasil  uji aktivitas  antibakteri  ekstrak  dan  fraksi herba kemangi dengan variasi konsentrasi  50,  25  dan  12,5%,  dengan tiga  kali  replikasi  setelah  diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 0 C memiliki respon  yang  bervariasi  berkisar  7-10 mm.  respon  zona  hambat  dapat dikategorikan  lemah  sampai  sedang yaitu  <11  mm.  Menurut  (Riska  dkk
2014).  Kontrol  positif  ciprofloxacin konsentrasi  5  µg  menunjukkan  adanya aktivitas antibakteri yang ditandai
dengan  adanya  zona  hambat  dengan diameter zona hambat rata-rata 26 mm pada S aureus ATCC 25923 dan 28 mm pada P  aeruginosa ATCC  27853 sehingga  respon  zona  hambat  pada kontrol positif dapat dikategorikan sangat  kuat. Hasil  dapat  dilihat  pada Tabel 3 dan Gambar 1.
Hasil  pengujian  difusi  yang  telah dilakukan  menunjukan  diameter  zona hambat  pada  bakteri  Gram  negatif secara  umum  cendrung  lebih  besar dibandingkan  bakteri  Gram  positif, diameter  zona  hambat  terbesar  pada bakteri Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853.  terdapat  pada  fraksi  etil  asetat pada konsentrasi 50% dengan diameter zona  hambat  10  mm.  untuk  bakteri Gram  positif Staphylococcus  aureus ATCC  25923  terdapat  pada  fraksi  etil asetat  dan  ekstrak  dengan  konsentrasi 50% memiliki zona hambat sebesar (8,6 mm).  Hal  tersebut  menunjukan  bahwa bakteri  Gram  negatif  lebih  rentan  oleh senyawa pada ekstrak dan fraksi herba kemangi  dibandingkan  bakteri  Gram positif.
Tabel 1. Hasil fraksinasi ekstrak etanol herba kemangi
Tabel 2. Hasil identifikasi senyawa setiap fraksi dari ekstrak herba kemangi
Pelarut Ekstrak (g) Berat fraksi (g) Rendemen (%) n-heksan 30 7,12 23,7 etil asetat 113,52 9,82 32,7 air 121,78 12,56 41,8 Uji Alkaloid Flavonoid Steroid Saponin Tanin ekstrak - + + - + n -heksan - - + - - etil asetat - + + - + air - + - + -
Tabel 3. Rata –rata diameter zona hambat yang dihasilkan ekstrak.
Bakteri Rata –Rata Diameter Zona Hambat (mm) Konsentrasi % Ekstra k n – heksa n Etil asetat Air Kontrol Positif Kontrol negatif Staphylococcus aureus 50 8 8 8,6 - 26 - 25 7 8 8 - 12,5 7 7 - - Pseudomonas aeruginosa 50 9 8,7 10 - 28 - 25 8,7 8 8,9 - 12,5 7 7 7 -
Hal ini disebabkan Pseudomonas aeruginosa merupakan  bakteri  Gram negatif dengan membran luar terdiri dari lipid, protein dan lipopolisakarida. Menurut Madduluri et al , 2013 senyawa yang  dapat  merusak  membrane  lipid, menyebabkan integritas membran menurun  dan  morfologi  membran  sel terganggu  sehingga  lisis  dan  rapuh salah  satunya  adalah  senyawa  steroid yang  juga  terkandung  didalam  fraksi kemangi.
Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Dengan Metode  Dilusi. Pada  metode  dilusi sampel  yang  digunakan  adalah  fraksi etil  asetat  karena  pada  fraksi  ini  yang memiliki  daya  hambat  paling  besar terhadap bakteri S aureus ATCC 25923 dan P aeruginosa ATCC 27853. Kadar  hambat  minimum  (KHM) fraksi  etil  asetat  dibuat  melalui  seri konsentrasi  dari  50%  sampai  0,78% ditanamkan pada media cair yang berisi biakan  bakteri S  aureus ATCC  25923 dan P  aeruginosa ATCC  27853  dan diinkubasi selama 24 jam.
Herba  kemangi  memiliki  kadar hambat minimum pada bakteri S aureus dan P  aeruginosa yang  dilakukan menunjukan  kadar  hambat  minimum
masing-masing pada konsenrasi 12,5% terbukti  dengan  tidak  berwarna  keruh (tidak  adanya  endapan)  pada  tabung reaksi begitu pula pada kontrol negatifnya. Sedangkan konsentrasi 6,25%  ke  bawah  menunjukan  larutan berwarna keruh dan (memiliki endapan) sama dengan kontrol positif  hasil dapat dilihat pada Tabel 4. Pengujian KBM dilakukan dengan  menanam  kembali  sediaan  uji yang telah diketahui KHM-nya kedalam Nutrient agar tanpa senyawa uji selama 24  jam  kemudian  diamati  ada  atau tidaknya pertumbuhan bakteri. Dari hasil penelitian dapat dilihat bahwa konsentrasi  bunuh  minimum  fraksi  etil asetat  herba  kemangi  terhadap  bakteri
S  aureus dan P  aeruginosa yang dilakukan dengan 2 kali replikasi. Kadar bunuh  minimum  (KBM)  pada  bakteri S aureus pada  konsenrasi  25%  terbukti dengan  tidak  tumbuhnya  bakteri  dari hasil  KHM  yang  di  inokulasikan  pada media  Nutrient  agar  setelah  diinkubasi selama  24  jam  pada  suhu  37°C. sedangkan  kadar  bunuh  minimum (KBM)  pada P  aeruginosa pada konsentrasi  12,5%.  Hasil  dapat  dilihat pada Tabel 5.
Tabel 4. Kadar Hambat Minimum Fraksi Etil Asetat Herba Kemangi
Mikroba Kontro l Negatif KHM Fraksi Etil Asetat Herba Kemangi % Kontro l Positif 50 25 12, 5 6,2 5 3,12 1,5 6 0,78 s. aureus 1 - - - - + + + + + s. aureus 2 - - - - + + + + + P. aeruginosa 1 - - - - + + + + + P. aeruginosa 2 - - - - + + + + +
Tabel 5. Kadar bunuh minimum fraksi etil asetat herba kemangi
Mikroba Kontro l negatif KBM fraksi etil asetat herba kemangi %  Kontro l Positif 50 25 12, 5 6,2 5 3,1 2 1,56   0,78 S. aureus 1 - - - + + + + + + S. aureus 2 - - - + + + + + + P. aeruginosa 1 - - - - + + + + + P. aeruginosa 2 - - - - + + + + + KESIMPULAN Ekstrak dan fraksi herba kemangi  memiliki  aktivitas  antibakteri terhadap S. aureus ATCC 25923 dan P.
aeruginosa ATCC 27853 dengan diameter  zona  hambat  maksimal  10
mm.  Sedangkan  fraksi  etil  asetat memiliki  aktivitas  antibakteri  tertinggi dengan  diameter  daya  hambat  10  mm terhadap bakteri P. aeruginosa dan 8,6 mm  terhadap  bakteri S.  aureus pada konsentrasi  50%.  Fraksi  etil  asetat herba  kemangi  memiliki  kadar  hambat minimum KHM sebesar 12,5% terhadap S.  aureus ATCC  25923 dan P. aeruginosa ATCC  27853.  Sedangkan fraksi etil asetat herba kemangi memiliki kadar  bunuh  minimum  KBM  sebesar 25%  terhadap S.  aureus ATCC  25923 dan  12.5%  terhadap P.  aeruginosa
ATCC 27853.
Ekstrak dan fraksi herba
kemangi  memiliki  kandungan  senyawa flavonoid,  steroid  dan  saponin  yang berperan  dalam  uji  aktivitas  bakteri S. aureus ATCC 25923 dan P. aeruginosa ATCC 27853.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Tim Peneliti menyampaikan banyak  terima  kasih  kepada  LPPM Universitas  Setia  Budi  Surakarta  yang telah  mendanai  penelitian  ini  sehingga penelitian ini bisa berjalan  dengan baik dan  bermanfaat  bagi  perkembangan ilmu pengetahuan.

## DAFTAR PUSTAKA
Sarah  SM  dan  Lamia  A.M.  2015. Estimation  of  the  phitochemical constituens  and  biological  activity of  iraqi  Ocimum  sanctum  L. extracts. Int  J  Pharm  Bio  Sci
2015 Jan.; 6(1): (B) 999 –1007 Nur Atikah. 2013. Uji Aktivitas Antimikroba Ekstrak Herba Kemangi terhadap Staphylococcus  aureus Skripsi Jakarta. Fakultas Farmasi Universitas Islam Negeri. Kemenkes  RI  [Kementerian  Kesehatan Republik Indonesia]. 2013 Farmakope Herbal Indonesia .
Edisi  I. Suplemen  III.  Jakarta: Kemenkes RI. Harborne, J. B., 1987, Metode Fitokimia Penuntun Cara Modern Menganalisis  Tumbuhan ,  Edisi kedua, Hal 5, 69-76,
diterjemahkan oleh
Kosasih Padmawinata dan Iwang Soedira,
ITB Press, Bandung Madduliri, Suresh, Rao, K. Babu. Sitram, B. 2013. In vitro evaluation of five
Indegenous plants extract Againts five bacterial Phatogens of
Human. International  Journal  of
Pharmacy  and  Pharmaceutical Science 5(4): 679-684. Noviyanti Y, P.P. Subur, dan T. Daniel. 2014. Uji Fitokimia, Toksisitas Dan Aktivitas  Antibakteri  Terhadap Ekstrak  Etanol  Daun  Rambusa ( Passiflora  Foetida L.)  Terhadap
Bakteri Staphylococcus  aureus Dan Escherichia coli . Jurnal Kimia Mulawarman Volume 12 Nomor 1. ISSN  1693-5616  Kimia  FMIPA Unmul Kimia FMIPA Unmul 31 Jawetz, E., Melnick, J. L. dan Adelberg, E.  A.  2007. Medical  Microbiology
24 2 th  Edition .  Geo.  F.  Brooks,
San Fransisco
Riska  F,  Puguh  S,  Sarwiyono,  2014,
Inhibition Activityof Moringa oleifera  Leaf  Juice  to  Growth  of Streptococcus agalactiae and
Streptococcus uberis Bacteris Caused  Mstitisin  Dairy  Cows , Jurnal, Fakultas Pertanian Universitas Brawijaya, Malang.