## ANALISIS PERTUMBUHAN Pseudomonas aeruginosa DAN Bacillus subtilis
PADA MEDIA KNO 3

## ANALYSIS OF Pseudomonas aeruginosa AND Bacillus subtilis GROWTH IN KNO3 MEDIA
Afifah Nurazizatul Hasanah 1 , Fitri Afina Radityani 1 *, Devi Faustine Elvina Nuryadin 1 , Yesika Sipahutar 2 , Putri Nadia 2 , Jeaneatte Gracia 2 , Sella Oktavia 2
1 Program Studi Ilmu Kelautan, Universitas Sultan Ageng Tirtayasa
2 Program Studi Ilmu Perikanan, Universitas Sultan Ageng Tirtayasa *e-mail: fitriafinaradityani@untirta.ac.id

## ABSTRAK
Ammonia,  nitrit,  dan  nitrat  merupakan  bentuk  dari  nitrogen  anorganik  yang  bila melebihi baku mutu perairan dapat mencemari lingkungan dan bersifat toksik bagi biota akuatik. Namun sifat toksik pada senyawa nitrogen di air dapat dikendalikan oleh mikroorganisme melalui proses nitrifikasi dan denitrifikasi. Pada penelitian ini digunakan  dua  jenis  bakteri  denitrifikasi  yaitu Pseudomonas  aeuruginosa dan Bacillus subtilis .  Kedua  jenis  bakteri  ditumbuhkan  secara  anaerob  dalam  media Nutrient Broth (NB) yang sudah ditambahi pupuk KNO 3 sebagai bahan pencemar untuk  diamati  selama  7  hari.  Penelitian  ini  dilakukan  untuk  membandingkan performa  dari Bacillus  subtilis dan Pseudomonas  aeruginosa dalam  proses denitrifikasi. Hasil yang diperoleh dari pengamatan performa Bacillus subtilis dan Pseudomonas aeruginosa dalam proses denitrifikasi adalah kedua bakteri mampu menurunkan  konsentrasi  nitrat  secara  signifikan  dalam  waktu  2  hari,  dengan performa terbaik ditunjukkan oleh Pseudomonas aeruginosa yaitu sebesar 99,91% mampu  menurunkan  konsentrasi  nitrat  pada  media,  sedangkan Bacillus  subtilis mampu menurunkan sebanyak 99,77% konsentrasi nitrat pada media.
Kata kunci: Bacillus subtilis ; denitrifikasi; Pseudomonas aeruginosa

## ABSTRACT
Ammonia, nitrite, and nitrate are forms of inorganic nitrogen which if they exceed the water quality standards it can pollute the environment and be toxic to aquatic biota. However, the toxicity of nitrogen compounds in water can be controlled by microorganisms through nitrification and denitrification processes. In this study, two  types  of  denitrifying  bacteria  were  used  Pseudomonas  aeuruginosa  and Bacillus subtilis. Both types of bacteria were grown anaerobically in Nutrient Broth (NB) media which had been added by KNO3 fertilizer as a pollutant to be observed for 7 days. This research aimed to find the difference between Bacillus subtilis and Pseudomonas aeruginosa performa in the denitrification process. The results from observing the performance of Bacillus subtilis and Pseudomonas aeruginosa in the denitrification  process  were  that  both  bacteria  were  able  to  reduce  the  nitrate concentration  significantly  within  2  days.  The  best  performance  shown  by Pseudomonas  aeruginosa,  which  was  99.91%  able  to  reduce  the  nitrate concentration in the media, while Bacillus subtilis was able to reduce as much as 99.77% of the nitrate concentration in the media.
Keywords : Bacillus subtilis ; denitrification ; Pseudomonas aeruginosa
Analisis Pertumbuhan Pseudomonas Aeruginosa … ( Afifah Nurazizatul Hasanah , dkk)

## PENDAHULUAN
Peningkatan  pertumbuhan  penduduk menjadi  penyebab  utama  meningkatnya kebutuhan  akan  air  bersih,  ditunjukkan dengan adanya peningkatan urbanisasi yang masif, industrialisasi, dan kebutuhan irigasi untuk sektor agrikultur. Adanya peningkatan aktivitas antropogenik mengakibatkan meningkatnya volume limbah organik yang dihasilkan,  terutama  dalam  bentuk  limbah cair atau limbah cair domestik (Sulistia dan Septisya  2020).  Air  yang  sudah  tercemar limbah  domestik  baru  dapat  dimanfaatkan setelah  melalui  proses  pengolahan  (Gufran dan Mawardi 2019). Hal ini dikarenakan air limbah  domestik  dapat  membawa  polutan organik,  anorganik,  logam  berat,  hingga mikroorganisme  patogen  (Al  Kholif  2020). Pengurangan  penggelontoran  air  limbah murni ke badan air merupakan hal yang patut menjadi prioritas negara di dunia (Dhewa et. al., 2015).
Level  pencemaran  suatu  perairan dapat ditentukan berdasarkan nilai parameter  kualitas  air  yang  dianalisis, seperti parameter pH, DO, Nitrogen, Fosfor, COD, dan lain-lain. Hasil analisis parameter kualitas  air  tersebut  kemudian  harus dibandingkan  dengan  baku  mutu  perairan yang  sudah  diatur  dalam  PP  No  21  Tahun 2021 tentang penyelenggaraan perlindungan dan  pengelolaan  lingkungan  hidup.  Jika hasil  dari  analisis  parameter  kualitas  air melampaui baku mutu kualitas air, perairan dapat dikategorikan sudah tercemar.
Nitrogen dan fosfor sebagai salah satu parameter  kualitas  air  juga  merupakan elemen  pembatas  yang  keberadaannya mempengaruhi  kesuburan  suatu  perairan (Yogaswara 2020). Adapun senyawa nitrogen di perairan dapat ditemukan dalam dua  bentuk,  yaitu  nitrogen  organik  dan anorganik.  Ammonia,  nitrit,  dan  nitrat merupakan  bentuk  dari  nitrogen  anorganik yang bila melebihi baku mutu perairan dapat mencemari  lingkungan  dan  bersifat  toksik bagi biota akuatik. Sifat toksik pada senyawa nitrogen  di  air  dapat  dikendalikan  oleh mikroorganisme  melalui  proses  nitrifikasi dan  denitrifikasi  (Syahputra et  al. 2011).
Adapun proses pengendalian bahan pencemar  menggunakan  agen  biologis dikenal dengan istilah bioremediasi.
Bioremediasi merupakan pemanfaatan organisme  biotik  untuk  mengurangi  bahan pencemar  atau  polutan  di  lingkungan (Priadie  2012).  Bacillus  dan  Pseudomonas merupakan  salah  satu  kelompok  bakteri fakultatif  yang  mampu  mereduksi  nitrat menjadi  nitrit  dalam  kondisi  anaerob (Suryani  dan  Taufiqurrahman  2021).  Pada penelitian  ini  digunakan  dua  jenis  bakteri sebagai  agen  biologis  dalam  proses bioremediasi,  bakteri Bacillus sp.  dan Pseudomonas sp., yang merupakan kelompok bakteri saprofitik. Bakteri saprofitik  yaitu  kelompok  bakteri  yang mampu menguraikan bahan organik pada air limbah  (Kholif,  2020).  Salah  satu  agen biologis  yang  dapat  dimanfaatkan  dalam proses bioremediasi adalah mikroorganisme yang bersifat saprofitik. Bacillus subtilis dan Pseudomonas  aeruginosa merupakan  dua jenis  bakteri  yang  termasuk  ke  dalam kelompok  tersebut  dan  diketahui  memiliki kemampuan untuk mereduksi nitrat. Adanya perbedaan  kemampuan  setiap  jenis  bakteri saprofitik  dalam  memanfaatkan  bahan pencemar,  maka  pada  penelitian  ini dilakukan  analisis  kurva  pertumbuhan  dari bakteri Bacillus sp.  dan Pseudomonas sp. pada  media  yang  sudah  ditambahkan senyawa Nitrogen sebagai bahan pencemar, sehingga  dapat  diketahui  perbandingan kemampuan  masing-masing  bakteri  dalam mereduksi nitrat.

## METODOLOGI

## Waktu dan tempat
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Juli - Agustus 2023 di laboratorium Fakultas Pertanian, Universitas Sultan Ageng Tirtayasa  dan  laboratorium  produktivitas lingkungan perairan Departemen
Manajemen  Sumberdaya  Perairan  Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan IPB.

## Alat dan Bahan
Pada  penelitian  ini,  bahan  yang  kami gunakan  adalah  isolat  bakteri Bacillus subtilis dan Pseudomonas  aeruginosa yang diperoleh secara komersil dari PT Agritama Sinergi  Inovasi sebagai  objek  penelitian, tabung Eppendorf (Onemed) sebagai wadah untuk  menumbuhkan  bakteri,  akuades, paraffin cair, medium Nutrient Broth (NB), pupuk  kalium  nitrat  (KNO 3 ),  larutan brucine ,  serta  asam  sulfat  pekat  (H 2 SO 4 ). Adapun alat yang digunakan adalah tabung reaksi  (PYREX),  botol  Duran  1000  mL (SCHOTT),  mikropipet,  vortex,  inkubator, autoclave  (GEA  YX-18LDJ),  laminar air flow, serta  spektrofotometer  (HACH  DR- 3900)  untuk  mengukur  OD  bakteri  dan konsentrasi  nitrat  selama  masa  perlakuan. Isolat  bakteri  didapat  secara  komersil, kemudian dikultur di Laboratorium Teknologi  Hasil  Perikanan,  Universitas Sultan Ageng Tirtayasa.

## Metode
Limbah cair yang digunakan merupakan  limbah  buatan,  diperoleh  dari media  NB  yang  ditambahi  pupuk  KNO 3 sebanyak  500  ppm.  Limbah  cair  tersebut ditampung  dalam  botol  duran  kemudian diaduk  menggunakan magnetic  stirrer hingga homogen. Analisis kurva pertumbuhan bakteri dan nitrat dilakukan di Laboratorium  Teknologi  Hasil  Perikanan dan Laboratorium Agroekoteknologi, Universitas Sultan Ageng Tirtayasa.
Uji Pertumbuhan Bakteri dan Uji

## Kuantitatif Aktivitas Denitrifikasi
Bacillus dan
Pseudomonas
ditumbuhkan  dalam  tabung  eppendorf (Onemed) menggunakan media denitrifikasi berupa medium Nutrient Broth (NB) + 500 ppm  KNO 3 dengan  volume  total  30  mL. Untuk menciptakan kondisi aerob, ditambahkan  paraffin  cair  sebanyak  15  mL ke dalam tabung eppendorf 50 mL. Limbah cair  yang  sudah  diisi  koloni  bakteri kemudian dipindahkan dari tabung eppendorf  sebanyak  5-10  mL  ke  tabung
reaksi. Pertumbuhan bakteri diukur menggunakan  metode optical  density (OD) dengan  panjang  gelombang  600  nm menggunakan spektrofotometer HACH DR- 3900 . Adapun  blanko  yang  digunakan berupa media denitrifikasi + paraffin cair.
Analisis nitrat dilakukan
menggunakan metode brucine yang mengacu  pada  APHA  (2017).    Sebanyak  1 mL  contoh  diambil  dari  tabung  eppendorf Bacillus anaerob  dan  tabung  Eppendorf Pseudomonas anaerob, kemudian diencerkan  dengan  4  mL  aquades.  Analisis konsentrasi nitrat pada sampel menggunakan  metode brucine .  Adapun blanko  yang  digunakan  berupa  media denitrifikasi  +  paraffin  cair  yang  juga dianalisis dengan metode brucine .

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil

## Kurva Pertumbuhan Bakteri
Pengukuran laju pertumbuhan bakteri dilakukan  setiap  24  jam  selama  7  hari berdasarkan  hasil  pada  kurva  pertumbuhan bakteri Bacillus  subtilis dan Pseudomonas aeruginosa seperti  yang  disajikan  pada Gambar 3.1. Diketahui bahwa pertumbuhan Bacillus subtilis mengalami penurunan / fase kematian  sel  pada  hari  ke-1  hingga  ke-3, kemudian  meningkat  di  hari  ke-4  dan  hari ke-5, kemudian mengalami sedikit penurunan kembali di hari ke-6 dan kembali meningkat di hari ke-7. Sementara Pseudomonas aeruginosa setelah mengalami  fasi  kematian  pada  hari  ke-1 hingga hari ke-3, Pseudomonas aeruginosa mengalami  fase  pertumbuhan  yang  lebih stabil,  yakni  pada  hari  ke-4  hingga  ke-7. Pada hari ke-7, diketahui adanya peningkatan  pertumbuhan  pada  kedua bakteri.  Berdasarkan  nilai  R 2 pada  Gambar 3.1  diketahui  bahwa  hubungan  antara  OD Bacillus subtilis dengan waktu amatan erat, yaitu  sebesar  0,507.  Adapun  hubungan antara OD Pseudomonas aeruginosa dengan waktu amatan kurang erat, yaitu 0,2962.
Analisis Pertumbuhan Pseudomonas Aeruginosa … ( Afifah Nurazizatul Hasanah , dkk)

## Gambar 3.1 Kurva pertumbuhan bakteri selama masa perlakuan

## Analisis Nitrat
Berdasarkan  hasil  analisis  nitrat, terjadi penurunan konsentrasi nitrat dari 500 ppm  menjadi  1,3  ppm  di  hari  ke-7  untuk perlakuan  kedua  bakteri.  Meskipun  terjadi penurunan konsentrasi nitrat yang signifikan sejak  hari  pertama,  setelah  diamati  dalam waktu  7  hari  terlihat  adanya  perbedaan kemampuan pada kedua jenis bakteri dalam proses denitrifikasi. Pada Gambar 3.2 diduga bahwa  kedua  jenis  bakteri  membutuhkan waktu untuk beradaptasi selama 6 hari, dari
media  awal  hidup,  yang  merupakan  media aerob, ke media uji, yang merupakan media anaerob,  untuk  kemudian  kedua  bakteri sama-sama menunjukan kemampuan dalam menurunkan konsentrasi nitrat pada hari ke- 7.  Nilai  R 2 pada  hasil  proses  denitrifikasi oleh Bacillus  subtilis sebesar  0,6688 menunjukkan bahwa adanya hubungan yang erat  antara  pertambahan  jumlah  waktu amatan dengan perubahan konsentrasi nitrat, sedangkan  pada  hasil  proses  denitrifikasi oleh Pseudomonas  aeruginosa adalah kurang erat, yaitu 0,282.
Gambar 3.2 Perubahan konsentrasi nitrat selama masa perlakuan
Berdasarkan hasil analisis konsentrasi nitrat  untuk  perlakuan  kedua  jenis  bakteri, diketahui  bahwa  persentase  penurunan konsesntrasi  nitrat  oleh Bacillus  subtilis
berkisar antara 99,72% - 99, 79% sedangkan pada Pseudomonas  aeruginosa berkisar antara 99,70 % - 99,91%.
y(BS) = -0.1055x + 0.9859 R² = 0.507 y(PA) = -0.0673x + 0.917 R² = 0.2962 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2 1,4 1 2 3 4 5 6 7 BS PA y(BS) = 0.0466x + 1.0134 R² = 0.6688 y(PA) = 0.0829x + 0.8529 R² = 0.282 0,000 0,200 0,400 0,600 0,800 1,000 1,200 1,400 1,600 1 2 3 4 5 6 7 BS PA
Tabel 1. Persentase penurunan konsenstrasi nitrat oleh Bacillus subtilis dan Pseudomonas aeruginosa Hari ke- BS Nitrat PA Nitrat 1 99.79% 99.77% 2 99.77% 99.91% 3 99.75% 99.74% 4 99.78% 99.74% 5 99.77% 99.70% 6 99.72% 99.74% 7 99.74% 99.75%

## Pembahasan
Berdasarkan  hasil  penelitian  pada Gambar 3.1, diketahui bahwa B. subtilis dan P.  aeruginosa mulai  mampu  hidup  pada medium  KNO 3 dalam  kondisi  anaerob  di hari  ke-  7. B.  subtilis merupakan  bakteri yang  diketahui  mampu  mereduksi  nitrat menjadi  nitrit  (Gordon  1973). B.  subtilis termasuk  dalam  klan  bakteri  aerobik fakultatif,  yaitu  bakteri  yang  berhasil bertahan  hidup  pada  kondisi  dengan  atau tanpa  oksigen  (Rokhim  2023). Menurut Bohin et al . (1976), kultur B. subtilis dalam kondisi  anaerob  dapat  memicu  sel  untuk menghasilkan  enzim  nitrat  reduktase  yang terikat  pada membran  sel,  sehingga  adanya nitrat pada medium pertumbuhan menyebabkan B.  subtilis dapat  tetap  hidup meskipun tanpa aerasi.
P. aeruginosa sebagai bakteri denitrifikasi juga mampu hidup pada kondisi anaerob. Hal ini dikarenakan P. aeruginosa merupakan bakteri yang cenderung mengutamakan  respirasi  aerob  meskipun termasuk  dalam  klan  bakteri  anaerob fakultatif. P. aeruginosa mampu hidup pada kondisi anaerob apabila terdapat nitrat (NO 3 - )  yang  bertindak  sebagai  akseptor  elektron terakhir (Schreiber et al . 2007).
Apabila dilihat dari kemampuan kedua jenis bakteri denitrifikasi dalam mendegradasi  nitrat  (Gambar  3.1  dan  3.2), kedua  bakteri tersebut  mampu  menurunkan konsentrasi  nitrat  yang  terkandung  dalam medium pertumbuhan secara signifikan pada hari pertama. Namun, diduga karena adanya penurunan  Konsentrasi  nitrat  pada  media secara  signifikan  menyebabkan  munculnya
persaingan  dalam  populasi  pada  masing- masing bakteri dalam memanfaatkan Konsentrasi  nitrat  yang  tersisa  di  media, sehingga  menyebabkan  penurunan  jumlah bakteri pada hari ke-1 sampai ke-3 (Gambar 3.1).  Dugaan  ini  didasarkan  pada  pendapat dari  Aimia  dan  Ratin  JAR  (2023)  yang menyatakan  bahwa  bakteri  denitrifikasi dapat melakukan proses denitrifikasi dengan baik pada kondisi optimum dalam waktu 8- 10 jam, sedangkan jika kondisi kurang baik maka proses denitrifikasi dapat terjadi dalam waktu  2-3  hari.  Adapun  Su et  al. (2019) menyatakan  bahwa  menurunnya  jumlah bakteri  bersamaan  dengan  penurunan  nitrat diindikasikan karena sebagian bakteri sudah mencapai  waktu  lisis  akibat  berkurangnya substrat atau sumber energi untuk tumbuh.
Pada  Gambar  3.1  dan  gambar  3.2 diketahui  terdapat  aktivitas  denitrifikasi pada  hari  ke-3  hingga  ke-7.  Kondisi  ini sesuai  dengan  pendapat  dari  Aimia  dan Ratin  JAR  (2023)  yang  menyatakan  bahwa proses  denitrifikasi  pada  kondisi  yang kurang  baik  dapat  berlangsung  dalam  2–3 hari. Berdasarkan Gambar 3.2 diketahui pula bahwa  kemampuan  bakteri Pseudomonas aeruginosa dalam  proses  denitrifikasi  dari hari ke-0 sampai dengan hari ke-2 lebih baik daripada Bacillus subtilis . Berdasarkan hasil perhitungan persentase penurunan konsentrasi  nitrat  oleh Bacillus  subtilis dan Pseudomonas aeruginosa pada  Tabel  1 diketahui bahwa proses denitrifikasi dengan penurunan konsentrasi nitrat terbesar terjadi pada hari ke-2 oleh Pseudomonas aeruginosa yaitu sebesar 99,91%,
sedangkan  pada  hari  yang  sama  penurunan
Analisis Pertumbuhan Pseudomonas Aeruginosa … ( Afifah Nurazizatul Hasanah , dkk)
konsentrasi  nitrat  oleh Bacillus subtilis
sebesar 99,77%. Adanya perbedaan kemampuan dalam proses denitrifikasi oleh kedua bakteri sesuai dengan pendapat yang disampaikan oleh Suryani dan Taufiqurrahman  (2021)  bahwa  beberapa
Pseudomonas memiliki tahap reaksi reduksi lebih lengkap, yaitu NO 3 🡪 NO 2 🡪 NO 🡪 N 2 O
🡪 N 2 .

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Hasil yang didapatkan dari pengamatan  performa Bacillus  subtilis dan Pseudomonas  aeruginosa dalam  proses denitrifikasi  adalah  kedua  bakteri  mampu menurunkan konsentrasi nitrat secara signifikan  dalam  waktu  2  hari,  dengan performa terbaik ditunjukkan oleh Pseudomonas  aeruginosa yaitu  sebesar 99,91%  mampu  menurunkan  konsentrasi nitrat  pada  media,  sedangkan Bacillus subtilis mampu  menurunkan  sebanyak 99,77% konsentrasi nitrat pada media.

## Saran
Sebaiknya dilakukan pengamatan performa  bakteri  dalam  proses  denitrifikasi dengan  interval  waktu  yang  lebih  rapat, misalnya  setiap  6  jam,  untuk  melihat  tren pertumbuhan  bakteri  serta  penurunan  nitrat yang tidak terlalu jauh. Selain itu, perlu juga dilakukan  penelitian  lanjutan  mengenai kinetika penurunan konsentrasi nitrat setiap 3 jam selama 24 jam.

## Ucapan Terima kasih
Ucapan terima kasih diberikan kepada Fakultas Pertanian Universitas Sultan Ageng Tirtayasa sebagai pemberi dana riset dalam kompetisi  Peneliti  Dosen  Pemula  (PDP) tahun anggaran 2022/2023, Kepala Laboratorium  Teknologi  Hasil  Perikanan Program  Studi  Ilmu  Perikanan  Kepala Laboratorium Program Studi
Agroekoteknologi
Fakultas Pertanian
Universitas  Sultan  Ageng  Tirtayasa,  dan
Kepala
Departemen
Manajemen Sumberdaya  Perairan  Fakultas  Perikanan dan Ilmu Kelautan Institut Pertanian Bogor yang  telah  menjadi  sponsor  utama  dan mengizinkan penulis melaksanakan penelitian  ini  sehingga  penelitian  ini  dapat terlaksana dengan baik.

## DAFTAR PUSTAKA
Aimia  TA  dan  Ratni  JARN.  2023. Penyisihan cod, tss, dan tn pada lindi tpa  klotok  menggunakan anoxic-oxic moving bed biofilm reactor . Insologi:
Jurnal Sains dan Teknologi . 2(4): 771-
779.
DOI: 10.55123/insologi.v2i4.2418.
Al Kholif M. 2020. Pengelolaan Air Limbah Domestik . Surabaya: Scopindo Media Pustaka.
APHA,  AWWA,  WEF.  2017. Standard Method for Examination of Water and Wastewater 23 rd Edition . Washington (AS): American Public Health Association.
Bohin  JP,  Bohin  A,  dan  Shaeffer  P.  1976. “Increased nitrate reductase A activity as  a  sign  of  membrane  alteration  in early  blocked  asporogenous  mutants of  Bacillus  subtilis”. Biochimie 58, 99–108
Dhewa,
T. 2015. “Biosensor for environmental monitoring:
An update”. International  Journal  of Environmental  Research ,  3(2),  212– 218.
Gordon  RE,  Haynes  WC,  dan  Pang  CH.
1973. The Genus Bacillus. Agricultural  Handbook  No.  427 .    US Department of Agriculture:
Washington, DC
Gufran  M  dan  Mawardi.  2019.  Dampak pembuangan limbah domestik terhadap  pencemaran  air  tanah  di kabupaten pidie jaya. Serambi
Engineering .  4(1):  416-425.  ISSN: 2528-3561.
Kholif, M.A. 2020. Pengelolaan Air Limbah
Domestik. Surabaya: Scopindo Media Pustaka.
Priadie  B.  2012.  “Teknik  Bioremediasi sebagai  Alternatif  dalam  Upaya Pengendalian Pencemaran Air”. Jurnal Ilmu Lingkungan , 10(1), 38-48. Rokhim N. 2023. Isolation of Staphylococcus  aureus and Bacillus
sp. on garbage at tpasegawe, tulungagung regency. Asian Journal of
Natural  Sciences .  2(1):  1-8.  DOI: https://doi.org/10.55927/ajns.v2i1.300 5 .
Schreiber  K,  Krieger  R,  Benkert  B, Eschbach M, Arai H, Schobert M, dan Jahn  D.  2007.  “The  Anaerobic Regulatory  Network  Required  for Pseudomonas aeruginosa Nitrate Respiration”. Journal of Bacteriology 189(11). https://doi.org/10.1128/jb.00240-07
Su J, Gao C, Huang T, Gao Y, Bai X, & He
L. 2019. Characterization and mechanism  of  the  Cd(II)  removal  by anaerobic  denitrification  bacterium Pseudomonas sp. H117. Chemosphere .  222:  970-979.  DOI: https://doi.org/10.1016/j.chemosphere .2019.01.192 .
Sulistia  S  dan  Septisya  AC.  2020.  Analisis kualitas air limbah domestik perkantoran. Jurnal Rekayasa Lingkungan . 12(1): 41-57.
Doi: https://doi.org/10.29122/jrl.v12i 1.3658 .
Suryani  Y  dan  Taufiqurrahman  O.  2021.
Mikrobiologi Dasar . Bandung: LP2M UIN SGD Bandung.
Syahputra K, Rusmana I, dan Widyastuti U.
2011. Isolasi dan karakterisasi bakteri denitrifikasi sebagai agen bioremediasi nitrogen anorganik. J. R.
Akuakultur. Vol 6 (2): 197-209.
Yogaswara  D.  2020.  Distribusi  dan  siklus nutrient  di  perairan  estuari  serta pengendaliannya.  Oseana  45(1):  28- 39. p-ISSN: 0216-1877.