## BIOPROSPEK AKTIVITAS METABOLIT SEKUNDER
DARI LAMUN ( Seagrass ) DAN BEBERAPA JENIS MAKROALGA ( Seaweeds ) SEBAGAI KANDIDAT AGEN ANTIBAKTERI PATOGEN Vibrio harveyi YANG MENYERANG UDANG WINDU ( Penaeus monodon )
( Studi in-vitro )

## Mochamad Untung Kurnia Agung, Yuniar Mulyani, dan Indah Riyantini
Fakultas Perikanan dan Ilmu kelautan, Universitas Padjadjaran (UNPAD), Bandung Jalan Jatinangor-Sumedang Km.21 Bandung HP. 081575094241 / Email : m.untung@unpad.ac.id / mochamad.untung@gmail.com

## A B S T R A C T
Bacterial  deseases  are  seriousness  problem  in  aquaculture.  The  uncontrolled  of quality degradation of pond sites because of wastes and organic matters decompotition and also global climate changes has been predicted affect triggered the bacterial infections. Vibrio harveyi is one of patogenic bacteria which againts Tiger shrimp (Penaeus monodon). The recovery strategies has been applied both in the rehabilitation of pond sanitary and also it has been focussed in curative methods to overcome infection activities. The usage of synthetic antibiotics has been reported gift any  negative  effects,  either  for  environment  and  rised  pathogenic  resintance  because  of uncontrolled exposure.
Environmental  friendly  and  based  on  biological  methods  has  been  promoted  to  overcome  this problem.  The  usage  of  antibacterial  agents  derived  from  natural  compounds    has  been recommended as an effective method. Several marine resources has been predicted as candidates of  antibacterial  agents  againts  Vibrio  harveyi.  Several  seaweeds  (macroalga)  and  seagrass  has been explored in this research at in-vitro level of study to inhibit the activity of Vibrio harveyi. The result showed that all of the crude extracts derived from seagrass (Thallasia sp) and several kinds of  seaweeds    (Padina  sp,  Gracilaria  sp  and  Sargassum  sp)  could  inhibit  the  growth  of  Vibrio harveyi from the lowest concentration level (10 µg/mL). The highest inhibition activity has been showed from the antibacterial sensitivity test of crude extract of Thallasia sp at the concentration level of 10.000 µg/mL.
Keywords : macroalgae, seagrass, secondary metabolite, antibacteria, Vibrio harveyi

## PENDAHULUAN
Penyakit  bakterial  merupakan  salah satu  ancaman  yang  saat  ini masih dikhawatirkan  oleh  para  pembudidaya udang  di  Indonesia. Beberapa  spesies Vibrio sp  diketahui  telah  menyerang komoditas udang windu, sehingga dikenal dengan  penyakit  Vibriosis.  Setiap  spesies vibrio  memiliki  intensitas  parasitas  yang berbeda-beda.  Penyakit  yang  disebabkan oleh  bakteri  ini  dapat  menyebabkan
kematian larva udang sampai 100% dalam waktu 1-2 hari. Kondisi ini tentunya sangat merugikan kegiatan budidaya udang, yang selama ini menjadi primadona ekspor non migas di Indonesia. Permintaan konsumen dunia terhadap udang rata-rata naik 11,5% per  tahun.  Secara  khusus, udang  windu ( Panaeus monodon FAB) merupakan salah satu produk unggulan perikanan Indonesia yang  paling banyak  diminati  konsumen. Permintaan  pasar  terhadap  udang  windu
sangat tinggi, baik di dalam negeri maupun dari luar negeri.
Namun  demikian,  pada  saat permintaan  udang  dunia  terus  meningkat, terjadi  penurunan  produksi  udang  di Indonesia dari 133,836 ton tahun 2003, dan 127,119  ton  tahun  2004  menjadi  100,000 ton  pada  tahun  2005  (Dirjen  Perikanan Budidaya  2006).  Penurunan  produksi udang  di  Indonesia  mulai  tahun  2003 hingga sekarang terutama disebabkan oleh serangan  infeksi  virus dan  bakteri akibat buruknya kondisi  perairan (Purnomo 1997). Beberapa  bahan  alam  yang  dapat diprediksi  sebagai  kandidat  bahan  dapat mengatasi  serangan  penyakit  vibriosis  ini adalah beberapa makroalga laut ( seaweed ) dan lamun ( seagrass ). Penggunaan bahan- bahan  alam  dalam  mengatasi  serangan penyakit vibriosis lebih efektif dibandingkan dengan menggunakan bahan-bahan  kimia  sintetis,  karena  selain tidak  menimbulkan  efek  samping  juga mudah untuk didapatkan. Lamun  ( seagrass )  telah  diketahui memiliki kandungan alkaloid dan terpenoid  yang  tinggi  (Angka  dan Suhartono  2000),  yang  berpotensi  sebagai antibakteri,  antijamur  dan  antiinflamasi (Kristanti  2008).  Sementara itu,  beberapa jenis makroalgae  ( seaweed )  juga  telah dieksplorasi  potensi  fitokimianya  yang kaya  akan  alkaloid,  flavonoid,  saponin, polifenol  dan  beberapa  jenis  terpenoid (Angka  dan  Suhartono  2000)  dan  terbukti mampu menghambat pertumbuhan beberapa bakteri patogen (Agung 2004). Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui bioprospek dari  lamun
( Thallassia sp)  dan  beberapa  jenis makroalga Gracillaria sp, Padina sp dan Sargassum sp yang dikoleksi dari perairan Pantai  Pangandaran sebagai sumber metabolit sekunder yang dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri Vibrio harveyi yang  menyebabkan  penyakit vibriosis pada udang windu, dalam lingkup
studi in-vitro sehingga  dapat  dijadikan kandidat Agen Antibakteri Patogen Vibrio harveyi

## BAHAN DAN METODE
Pengambilan  sampel lamun  dan makroalga dilakukan  di  Perairan  Pantai Pangandaran,  Kabupaten  Ciamis.  Proses ekstraksi  dan  uji  sensivitas  antibakteri dilakukan  di    Laboratorium Mikrobiologi dan Bioteknologi  Kelautan  Fakultas Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan  Universitas Padjadjaran Bandung.  Uji  fitokimia dilakukan  di  Laboratorium  Kimia  Jurusan Kimia  FMIPA  Universitas  Padjadjaran Bandung.  Isolat  bakteri Vibrio  harveyi didapatkan  dari  Laboratorium  Hama  dan Penyakit  Ikan  di  BBPBAP Kabupaten Jepara .
Prosedur  Pengambilan  Sampel  Lamun dan Makroalga Sampel  lamun  ( Thallassia sp)  dan makroalga yaitu Gracillaria sp, Padina sp dan Sargassum sp) dikoleksi dari perairan Pantai  Pangandaran,  Kabupaten  Ciamis.
Masing-masing jenis lamun dan makroalga diambil dari lingkungan perairan, dibersihkan dari kotoran dan substrat yang menempel kemudian  dimasukan  ke  dalam plastik  berlabel  untuk  dicatat  lokasi  dan waktu  pengambilannya  setelah  terlebih dahulu diidentifikasi dengan bantuan Buku Identifikasi  Lamun  dan Makroalga (Edward  1987). Sampel  kemudian  di simpan di dalam cool box untuk dibawa ke laboratorium.
Prosedur  Uji  Fitokimia  Lamun  dan Makroalga Potensi  fitokimia  lamun  dan makroalga  diterminasi  untuk  beberapa senyawa meliputi  : Alkaloid,  Flavonoid, Polifenol, Saponin, Steroid dan Terpenoid. Pengujian  fitokimia  dilakukan  dengan reagen  spesifik  menurut  panduan yang dikembangkan  oleh  Kristanti  dkk.  (2008)
Prosedur Ekstraksi Lamun dan Makroalga Ekstraksi  daun  lamun  dan thallus makroalga dari  masing-masing  jenis dilakukan  dengan  metode  maserasi. Sebanyak  1  kg  sampel  (untuk  setiap  jenis lamun  dan makroalga)  yang  telah dikeringanginkan  selama  48  jam  hari, dicacah  halus  kemudian  direndam  dengan pelarut methanol (MeOH) dalam erlenmeyer  hingga seluruh bagian sampel terendam.  Maserasi  dilakukan  selama 72 jam dengan  pengambilan  filtrat  dan penggantian  pelarut  dilakukan  setiap  24 jam. Filtrat disaring dengan menggunakan kertas  saring Whattman No  1,  kemudian filtrat  ditampung  dalam  gelas  becker  dan diukur  volumenya.  Filtrat  yang  sudah dipisahkan  kemudian  diuapkan  dengan Rotary Evapourator ( Rotavapour )  pada suhu 60 0 C hingga terbentuk ekstrak kasar dalam  bentuk  pasta  di  dinding flash . Ekstrak  kasar  (pasta)  yang  didapat kemudian  ditimbang  beratnya  dan ditempatkan  di  dalam vial (Burgess et al . 2003).
Prosedur  Elusidasi  Ekstrak  Lamun  dan Makroalga Ekstrak  kasar  dari  masing-masing sampel  lamun  dan makroalga difraksinasi melalui  Kromatografi  Kolom  Terbuka (KKT)  dengan adsorbent Silika  Gel dengan eluen yang  digunakan  adalah campuran  Kloroform-Methanol  yang ditingkatkan  kepolarannya  yakni  dengan perbandingan  Kloroform  :  Methanol berturut-turut (4 : 1), (3 : 1), (2 : 1), dan (1 : 1). Fraksinasi dengan menggunakan eluen yang  ditingkatkan  kepolarannya  ini dimaksudkan agar senyawa yang terkandung  dalam  ekstrak  dapat  terpisah dengan baik berdasarkan kepolarannya.
Setiap 20 mL eluat atau fraksi yang keluar ditampung dalam gelas-gelas vial. Setiap fraksi dianalisis dengan Kromatografi Lapis Tipis (KLT), kemudian  noda  yang  muncul  divisualisasi dengan cara mencelupkan plate KLT pada larutan Vanilin Sulfat kemudian dibakar di atas Hot Plate . Fraksi  yang  menunjukkan pola spot dan nilai Rf yang sama digabung.
(Burgess et al . 2003).
Prosedur  Uji In-Vitro (Uji  Sensitivitas Antibakteri) Uji sensitivitas antibakteri  pada penelitian ini menggunakan metode Difusi Lempeng  Agar  ( Agar  Disk-Diffusion Assay )  yang mengacu pada prosedur  yang dilakukan  oleh  Laboratorium  Hama  dan Penyakit BBPBAP Jepara dengan 5 (lima) variasi  konsentrasi  ekstrak  uji  yaitu 10 μg/mL, 100 μg/mL,  1000 μg/mL  dan 10.000 μg/mL  untuk  masing-masing sampel  lamun  dan makroalga, dengan  uji kontrol  pelarut  menggunakan  Methanol. Adapun  pengulangan  dilakukan  sebanyak 3 (tiga) kali.
Adapun  Uji  Sensitivitas  Antibakteri menurut prosedur Laboratorium Hama dan Penyakit  BBPBAP  Jepara  yaitu diawali dengan penyiapan isolat bakteri uji ( Vibrio harveyi ) dalam media Nutrient Broth (NB) dengan  kepadatan 10 7 .  Suspensi  biakan kemudian  dioleskan  secara  merata  pada permukaan  media Nutrient  Agar (NA) pada cawan petri dengan menggunakan lidi kapas  steril. Sebanyak 20 μL ekstrak kemudian diteteskan  pada  kertas  disk dengan  menggunakan  pipet  mikro, selanjutnya  kertas  disk  yang  telah mengandung  ekstrak  diletakkan  pada permukaan  media  inokulasi  dengan menggunakan  pinset steril. Biakan selanjutnya diinkubasi selama 24 jam pada suhu  inkubator  37 0 C. Diameter  zona hambatan yang  terbentuk  diukur  dengan menggunakan jangka sorong.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengambilan Sampel Pengambilan sampel lamun
( seagrass )  dan  makroalga  ( seaweed ) dilakukan di perairan Pantai Pangandaran, Kabupaten  Ciamis (Pantai  Timur  dan
Pantai  Karapyak).  Pengambilan  sampel dilakukan melalui purposive random sampling . Adapun jenis lamun dan makroalga yang  berhasil  didapatkan  disajikan  dalam Tabel 1 sebagai berikut :
Tabel 1 . Jenis sampel lamun ( seagrass ) dan makroalga ( seaweed ) yang terambil
No Jenis
Jumlah Terambil Lokasi 1 Sargassum sp 750 gram Pantai Karapyak 2 Padina sp 500 gram Pantai Karapyak 3 Gracillaria sp 500 gram Pantai Timur 4 Thallasia sp 3000 gram Pantai Karapyak Sampel  yang  telah  didapat kemudian dikeringanginkan di laboratorium  selama  5  (lima)  hari  hingga siap untuk dilakukannnya ekstraksi. Uji  Fitokimia  Thallasia  sp  dan Sargassum sp Hasil pengujian kandungan fitokimia  lamun  ( Thallasia sp)  dan makroalga  ( Sargassum sp)  memberikan hasil sebagai berikut :
Tabel 2 . Uji Fitokimia Thallasia sp dan Sargassum sp No Golongan Senyawa Pereaksi Hasil Thallasia sp Sargassum sp 1 Alkaloid Dragendorf + - 2 Flavonoid HCl+Mg+Amylalkohol + + 3 Saponin Aquades + + 4 Steroid Lieberman Burchard + + 5 Triterpenoid Lieberman Burchard - - 6 Polifenol Fe(III) Cholride - - Dari hasil di atas diketahui bahwa, pada Thallasia sp  (sebagai  tumbuhan kelompok angiospermae ) ditemukan keberadaan  alkaloid,  sedangkan  pada makroalga Sargassum sp  tidak  terdeteksi keberadaan  alkaloid. Triterpenoid  dan Polifenol  juga  tidak  terdeteksi  dari  kedua jenis  bahan  tersebut. Sementara  itu, Flavonoid, Saponin dan Steroid ditemukan pada  lamun  ( Thallasia sp)  maupun  pada makroalga ( Sargassum sp).

## Maserasi dan Ekstraksi
Proses maserasi sampel lamun
( seagrass ) dan  makroalga  ( seaweed ) dilakukan  dengan  menggunakan  pelarut Methanol  (MeOH)  dengan  perbandingan sampel  :  pelarut  (1  :  3).  Proses  maserasi dilakukan  selama  72  jam,  dengan pengambilan  filtrat  dan  penggantian pelarut dilakukan setiap 24 jam.
Filtrat  yang  tersaring  kemudian dikisatkan  untuk  mendapatkan  ekstrak pasta  dengan  menggunakan rotary evapourator .  Adapun  hasil  ekstrak  pasta yang  dihasilkan  disajikan  dalam  tabel  3 sebagai berikut :
Tabel 3 . Hasil ekstraksi sampel lamun ( seagrass ) dan makroalga ( seaweed )
No Maserasi Volume Filtrat Ekstrak didapat 1 Sargassum sp 500 mL 1,20 gram 2 Padina sp 450 mL 0,94 gram 3 Gracillaria sp 400 mL 0,72 gram 4 Thallasia sp 1000 mL 2,7 gram
Berdasarkan  data  di  atas  dapat  diketahui bahwa  rendemen  ekstrak  yang  dihasilkan rata-rata 1 gram untuk 500 mL filtrat.
Analisis Kromatografi Lapis Tipis (KLT) Analisis  Kromatografi  Lapis  Tipis (KLT)  dilakukan  untuk  mengetahui sebaran  polaritas  dari  senyawa  aktif  yang terkandung  dalam  ekstrak  hasil  evaporasi.
KLT  dilakukan  dengan mobile  phase berupa  campuran  Chloroform  :  Methanol (4  :1)  yang  telah  diuji  memiliki kemampuan untuk menarik fraksi senyawa dengan  baik  pada plate Silica  Gel,  yang menjadi stationer phase nya. Adapun hasil visualisasi KLT tersaji dalam tabel 4 sebagai berikut :
Tabel 4 . Hasil visualisasi KLT dari ektrak sampel lamun ( seagrass ) dan makroalga ( seaweed ) dengan mobile phase Chloroform : Methanol (4:1) Ekstrak Jumlah Noda Sargassum sp Padina sp Gracilaria sp Thallasia sp 5 3 3 4
Berdasarkan  data  tabel  4  di  atas terlihat  bahwa  ekstrak Sargassum sp (seaweed)  dan Thallasia sp  (seagrass) memiliki  jumlah  noda  yang  terbanyak dibandingkan  dengan  dua  sampel  yang lainnya.  Banyaknya  jumlah  noda  (spot) pada  TLC  dapat  mengindikasikan banyaknya  sebaran  polaritas  metabolit sekunder  yang  terkandung  di  dalam ekstrak kasar.
Uji  In  Vitro  Ekstrak Kasar Lamun (seagrass)  dan Makroalga (seaweeds) terhadap Bakteri Vibrio harveyi Ekstrak lamun  ( seagrass )  dan makroalga  ( seaweed ) selanjutnya  diuji aktivitas  antibakterinya  terhadap Vibrio harveyi dengan 5 (lima) variasi konsentrasi ekstrak  uji  yaitu  10 μg/mL,  100 μg/mL, 1000 μg/mL  dan  10.000 μg/mL  dan dengan  uji  kontrol  pelarut  menggunakan Methanol.  Adapun  hasil  uji  sensitivitas antibakteri  ekstrak  kasar  ini  dapat  dilihat pada Tabel 5 berikut ini :
Tabel 5 .  Rerata  Diameter  Zona  Hambatan  Pertumbuhan  Bakteri Vibrio  harveyi yang Terbentuk dari Uji Sensitivitas Antibakteri terhadap Ekstrak Lamun ( Seagrass ) dan Beberapa Jenis Makroalga ( Seaweeds )
Jenis Ekstrak Kons. Ekstrak (μg/mL) Diameter Zona Hambatan (mm) Rata-rata (mm) ISD (1) (2) (3) Padina sp 10000 1000 100 10 0 (Methanol) 7,14 5,99 5,89 5,49 5,38 7,77 7,23 6,09 5,86 5,47 7,27 5,64 5,54 5,52 5,82 7,39 6,29 5,84 5,62 5,56 0,33 0,84 0,28 0,21 0,23 Sargassum sp 10000 1000 100 10 0 (Methanol) 8,04 8,17 7,58 7,30 5,57 8,19 8,03 7,32 6,53 5,62 8,47 7,78 7,44 6,55 5,56 8,23 7,99 7,45 6,79 5,58 0,22 0,20 0,13 0,44 0,03 Gracilaria sp 10000 1000 100 10 0 (Methanol) 8,20 7,47 6,34 5,91 5,68 7,47 7,03 6,12 5,83 5,67 7,62 7,44 6,47 5,93 5,52 7,76 7,31 6,31 5,89 5,62 0,39 0,25 0,18 0,05 0,09 Thallasia sp 10000 1000 100 10 0 (Methanol) 8,25 8,11 7,53 7,19 5,50 8,24 8,07 7,50 7,20 5,53 8,26 8,14 7,56 7,21 5,50 8,26 8,11 7,53 7,20 5,51 0,01 0,04 0,03 0,01 0,02 ISD = Indeks Standar Deviasi
Berdasarkan  data  rerata  diameter zona hambatan pertumbuhan bakteri Vibrio harveyi yang  terbentuk  dari  hasil  uji sensitivitas  antibakteri  terhadap  ekstrak lamun  ( seagrass )  dan beberapa  jenis makroalga ( seaweed ) pada Tabel 5 di atas dapat  diketahui  bahwa  diameter  rata-rata zona  hambatan  yang  terbesar  diperoleh dari  uji  ekstrak Thallasia sp pada konsentrasi  10.000 μg/mL yaitu  sebesar 8,26 mm,  sedangkan  diameter  rata-rata zona hambatan yang terkecil diperoleh dari uji ekstrak Padina sp pada konsentrasi 10 μg/mL  yaitu  sebesar 5,62 mm.  Sementara
itu,  untuk  kontrol  uji  negatif  yaitu Methanol,  diameter  rata-rata  zona hambatan  yang  terbesar  diperoleh dari  uji ekstrak Gracilaria sp yaitu  sebesar 5,62 mm,  sedangkan  diameter  rata-rata  zona hambatan  yang  terkecil  diperoleh dari  uji ekstrak Thallasia sp yaitu  sebesar 5,51 mm. Hubungan  antara  pembentukan diameter  zona  hambatan  pertumbuhan bakteri Vibrio harveyi hasil uji sensitivitas antibakteri ekstrak  beberapa  jenis  lamun ( seagrass )  dan  makroalga  ( seaweed ) tertera pada Gambar 1 berikut ini.
Gambar 1 . Grafik pembentukan diameter zona hambatan pertumbuhan bakteri Vibrio harveyi hasil uji sensitivitas antibakteri ekstrak lamun ( seagrass ) dan beberapa jenis makroalga ( seaweed )
Diameter zona hambatan (Gambar. 1)  yang  terbentuk  untuk  semua  jenis ekstrak akan tampak semakin besar seiring dengan kenaikan konsentrasi ekstrak  yang diujikan.  Informasi  ini  menunjukkan bahwa semakin  tinggi  konsentrasi  ekstrak apa??  maka  semakin  tinggi  pula kandungan bahan bioaktifnya, yang berarti pula semakin kuat kemampuan antibakterinya.  Hal  ini  sesuai  dengan pernyataan  dari  Prijono  (1994)  yang menyatakan  bahwa  semakin  tinggi konsentrasi  ekstrak,  maka  semakin  tinggi kandungan  bahan  aktifnya  yang  dapat meningkatkan  kemampuan  bahan  dalam menghambat pertumbuhan bakteri uji.
Data  yang  ada  juga  menunjukkan bahwa  ekstrak lamun  ( seagrass )  dan beberapa jenis makroalga ( seaweeds ) telah mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri Vibrio  harveyi pada  konsentrasi  uji  yang terendah  yaitu  10 μg/mL.  Menurut Sammes  (1978),  suatu  bahan  dapat dikatakan  memiliki  potensi antibakteri bila  mempunyai  kemampuan  untuk menghambat
pertumbuhan bahkan
sanggup  untuk  membunuh bakteri  pada konsentrasi  yang  rendah. Keberadaan senyawa  alkaloid  pada  lamun  ( Thallasia sp)  (hasil  Uji  Fitokimia  Tabel  2) memberikan  pengaruh  terhadap  besarnya daya  hambat  ekstrak  kasarnya  terhadap bakteri Vibrio  harveyi bila  dibandingkan dengan  jenis  bahan  penelitian  lain  yang diujikan.  Hal  ini  dapat  dijelaskan  bahwa alkaloid merupakan bahan alam yang telah diketahui  memiliki  kemampuan  sebagai agen  antibakteri  (Angka  dan  Suhartono 2000).

## KESIMPULAN
Ekstrak  lamun  ( Thallasia sp)  dan beberapa  jenis  makroalga  ( Padina sp, Gracilaria sp  dan Sargassum sp)  mampu menghambat  pertumbuhan  bakteri Vibrio harveyi mulai dari konsentrasi yang paling rendah  (10  µg/mL)  dengan  konsentrasi penghambatan  tertinggi  diperoleh  dari  uji sensitivitas antibakteri Vibrio harveyi oleh ekstrak  lamun Thallasia sp  pada konsentrasi uji 10.000 µg/mL.
Ekstrak  lamun  ( Thallasia sp)  dan beberapa  jenis  makroalga  ( Padina sp, Gracilaria sp  dan Sargassum sp)  dapat dijadikan sebagai kandidat bahan antibakteri patogen Vibrio harveyi .

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan    terima  kasih  kami  sampaikan kepada  LPPM  Universitas  Padjadjaran yang  telah  membantu  pembiayaan penelitian  ini  melalui  Hibah Penelitian Peneliti  Muda (Litmud) Dana  DIPA Universitas  PadjadjaranTahun  Anggaran 2010, juga kepada asisten riset kami : Dedi Hidayat,  S.Pi.  dan  Karina  Beiby  Yulian,
S.Pi.

## DAFTAR PUSTAKA
Achmad,  S.A.  1995. Prosiding  Seminar dan Lokakarya Nasional Etnobotani . Yogyakarta Agung,  M.  U.  K.  2007. Isolasi  Fraksi Gabungan  Aktif  Agen  Antibakteri dari  Ekstrak  Klorofom  Bakteri Photobacterium phosphoreum yang  Bersimbiosis  pada  Organ Cahaya Cumi-cumi Loligo duvauceli .  Prosiding  Seminar Nasional  Moluska.  BRKP-DKP - Jurusan  Ilmu  Kelautan  FPIK. Universitas Diponegoro : Semarang. Hal 54-62 Agung,  M.  U.  K.  2007. Penelusuran Efektifitas  Beberapa  Bahan  Alam Sebagai  Kandidat  Antibakteri dalam Mengatasi Penyakit Vibriosis  pada  Udang  Windu. Makalah . Fakultas  Perikanan  dan
Ilmu  Kelautan  :  Universitas Padjadjaran. 36 Hal..
Anggadiredja, J. T., Achmad Zatnika, Heri Purwoto,  Sri  Istini.  2006. Rumput Laut .  Penebar  Swadaya.  Jakarta. 147 Hal.
Angka, Sri  Lestari dan  Suhartono, Maggy T.  2000. Bioteknologi  Hasil  Laut . PKSPL. IPB. Hal 79-98.
Angkasa,  Wisman  Indra.,  Purwoto,  Heri., dan  Anggadiredja,  Jana. Teknik Budidaya  Rumput  Laut .  Blog diambil dari http://kenshuseidesu.tripod.com/id 49.html  (diakses  pada  tanggal  26 April 2010).
Anonim. 1998. Teknik Pemisahan Kimia : Teknik  Pemisahan  Antibiotika. Kursus Singkat Teknik  Pemisahan Kimia. Yogyakarta Bonang, G. dan Koeswardono, E.S. 1982. Mikrobiologi  Kedokteran  untuk Laboratorium  dan  klinik .  PT. Gramedia. Jakarta. 199 hlm. Bradley,  S.M.  1999. Biosynthesis  of Marine  Natural  Product  : Microorganisms  and  Macroalgae. University of Washington. Seattle, USA. 143 pp.
Breed, R.S., Murray, E.G.D. and Hitchens, A.P. 1948. Antimicrobial  and Cytotoxic Terpenoid from TropicalGreen  Algae  of  Family Udoteacea. Hydrobiologia.  18  :
135 – 170. Burgess,  J.G.,  Boyd,  K.G.,  Amstrong,  E.,
Zhong  Jiang,  Liming  Yan,  Matz, B., May, U., Pisacane, T., Granmo, A.  and  Adam,  D.R.  2003. The Development  of  Marine  Natural Product  based  Antifouling  Paint Biofouling.  Volume  19.  Taylor  & Francis Ltd.
Cahyono,  M.S.  dan  Lia,  D.Y.  1996.
Senyawa  Bioaktif  dalam  Daun Pace  Alas  :  Suatu  Uji  Biologis dengan  Brine  Shrimp  Lethally
Test .  Fakultas  MIPA  Universitas Diponegoro. Semarang. 47 hlm. Dahuri,  R. 2005. Kelautan,  Potensi Memakmurkan  Rakyat . Harian Kompas, Senin 20 Juni 2005.
Dwidjoseputro,  D.  1987. Dasar-Dasar
Mikrobiologi . Penerbit Djambatan. Jakarta. 214 hlm.
Egidius, E. 1987. Vibriosis : Pathogenicity and Pathology . Aquaculture (Review). 27 : 15-28 Fardiaz,  S.  1989. Analisis Mikrobiologi
Pangan.  Edisi  Pertama.  PT  Raja Grafindo  Persada.  Jakarta.  127 hlm. Farkas,  J.  dan Malik,  S.E.  1986. Vibrio Disease  of  Sheatfish  (Silurus  sp) .
Aquaculture. 24 : 81-88
Fenical,  W.  and Paul,  V.J.  1984. Antimicrobial and Cytotoxic Terpenoid  from  Tropical  Green Algae  of  Family  Udoteacea. Hydrobiologia. 17 : 135-170 Fessenden  and Fessenden.  1983. The Technique  and  Experiments  of Organic Chemistry . PWS Publisher. USA Harborne,  J.W.  1987. Metode  Fitokimia  : Penuntun Cara Modern Menganalisis  Tumbuhan. Penerbit ITB. Bandung
Helianti, Is. 2005. Metagenomik, Era Baru Bioteknologi . Harian  Kompas, Senin 6 Juni 2005
http://www.dio.davidson.edu/course/anphy
s/1999/cody/definition.htm
Jawestz,  E.,  Melnick,  J.L.  and  Adelberg,
E.A.  1984. Review  of  Medical Microbiology. Lange  Medical
Publication. California. 34 : 56-67 Kadi, Achmad. 2004. Potensi Rumput Laut Dibeberapa  Perairan  Pantai
Indonesia .  OSEANA.  Vol  29  (4). Hal 25-36.
Kadi,  Achmad.  2005. Beberapa  Catatan Kehadiran  Marga  Sargassum  di perairan  Indonesia . Oseana.  Vol 30 (4). Hal 19-29.
Kristanti,  Alfinda  Novi.,  Aminah,  Nanik Siti.,  Tanjung,  Mulyadi.,  dan Kurniadi,  Bambang. 2008. Buku
Ajar fitokimia . Penerbit Airlangga
University  Press  :  Surabaya.  174 Hal.
Lay,  B.W.  1994. Analisis Mikroba  di Laboratorium .  PT  Rajagrafindo Persada. Jakarta. 168 hlm. Lightner,  D.V.  1983. Disease  of  Cultured Penaeid  Shrimp  in  J.P.  Mc  Very. CRC  Handbook  of  Mariculture. Vol.  I.  CRC  Press.  Florida.  1  : 289-298 Manitto,  P.  1981. Biosynthesis of  Natural Product .  Ellis  Harwood  Ltd. England. 211 pp. Mariam,  A.  dan  Mintarjo,  K.  1987. Premilinary  Study  on  Bacteria Isolated  from  Shrimp  Larvae
Infected  with  Shrimp  Disease. Bulletin Brackish Water Aquaculture  Development  Center. 8 : 71-80 Nybakken, J.W. 1992. Biologi Laut : Suatu Pendekatan  Ekologis .  PT  Pustaka Utama Gramedia. Jakarta
Pelczar,  M.A.,  Chan,  J.E.C.S.,  dan  Kreig, H.R.  1993. Microbiology  : Concept and Aplication. Mc. Graw
Hill Inc. 952 pp Romimohtarto,  K.  dan  Juwana,  S.  1999. Biologi  Laut  :  Ilmu  Pengetahuan tentang  Biologi  Laut .  Puslitbang Oseanologi LIPI. Jakarta. 527 hlm Rukyani, A. 1999. Pengenalan Jenis-Jenis Penyakit  Utama  pada  Udang Windu serta Cara Penanggulangannya. BALITKANWAR. Puslitbang Perikanan. 10 : 1-6 Samways,  M.J.  1981. Biological  Control of  Pest  and  Weeds . Mc  Millan India Ltd. Bangalore, India Soemadihardjo, S., Romimohtarto, K., dan Suhardjono. 1999. Prosiding Seminar VI Ekosistem. Pekanbaru, 15-18  September  1998. LIPI.
Jakarta. 326 hlm.
Sudiro, I. 1998. Produk Alam Hayati Laut dan  Prospek  Pemanfaatannya  di Bidang  Kesehatan  dan Kosmetika
dalam Soemadihardjo et al., (Ed.). Prosiding  Seminar  Bioteknologi Kelautan Indonesia I. LIPI. Jakarta Sumaryono, W. 1994. Fenomena Metabolit  Sekunder  Tanaman  dan Pengembangan Fitofarmako . Buletin  Ristek  Dewan  Riset Nasional. 28 : 25-30 Suryabrata, S. 2003. Metodologi Penelitian .  Edisi  Kedua. PT  Raja
Grafindo Persada. Jakarta Taslihan,  A.  1988. Penyakit  Udang  dan Cara  Penanggulangannya .  BPAP. Jepara Taslihan,  A.  1992. Vibriosis  pada  Udang Windu. BPAP. Jepara.  (Tidak dipublikasikan
.