Co-Culture Anoxygenic Photosynthetic Bacteria With Bacillus sp. Isolated From Hanura Beach Against Vibrio sp.
Sumardi*, Salman Farisi, Christina Nugroho Ekowati, Sundari Ayu Oktalia
Jurusan Biologi FMIPA Universitas Lampung, Jl. Soemantri Brojonegoro, Gedung Meneng, Bandar Lampung, 35145, Lampung, Indonesia *Email sumardi_bio@yahoo.co.id

## ABSTRACT
A mangrove forest ecosystem is a place where many special Bacillus sp. found. This study aims to obtain Bacillus  sp.  isolates  that  can  inhibit  the  growth  of  Vibrio  sp.  This  study  was  conducted  by  selecting  77 Bacillus sp. isolates from the Hanura mangrove forest area. In addition, selected bacteria were tested for salt  stress,  pH  stress,  pathogenicity  test,  and  antibiotic  susceptibility  test.  Selected  isolates  were cultivated together with Vibrio sp. for 7 days. Bacillus sp. and Vibrio sp. cultured again with the addition of anoxygenic  photosynthetic  bacteria  for  4  days.  From  the  results  of  the  initial  selection,  4  isolates  could inhibit the growth of Vibrio sp. The final results showed that Bacillus IL2K8 isolates were known to inhibit the  growth  of  Vibrio  sp.,  can  grow  at  salinity  0%,  3%,  6%  and  pH  7  and  pH  10.  IL2K8  isolates  are  not pathogenic,  resistant  to  amplicin  antibiotics,  streptomycin,  nalidixic  acid,  and  chloramphenicol  but sensitive  to  trimethoprim  antibiotics.  In  the  joint  culture  of  liquid  media  IL2K8  together  with  Anoxygenic Photosynthetic Bacteria (APB) isolates IL2K8 can inhibit the growth of Vibrio sp.
Keywords: antibacterial, Bacillus sp., BFA, mangrove, Vibrio sp.

## PENDAHULUAN
Kendala yang sering terjadi dalam budidaya ikan dan udang adalah munculnya serangan penyakit yang disebabkan oleh organisme patogen seperti  bakteri.  Penggunaan  antibiotik sering digunakan sebagai solusi menanggulangi masalah ini. Namun pemberian antibiotik ternyata memunculkan masalah baru yaitu terjadinya  resistensi  antibiotik.  Bakteri probiotik yang dapat menghasilkan antibiotik  alami  dapat  menjadi  solusi  yang lebih baik.
Penggunaan  bakteri  probiotik  sebagai agen  biokontrol  dapat  menjadi  solusi  dari permasalahan  penyakit terhadap  budidaya laut  (Samosir et.  al ,  2017).  Probiotik merupakan  mikroorganisme  hidup  yang dalam  jumlah  yang  cukup  memberikan manfaat bagi kesehatan tubuh dan memiliki  pengaruh menguntungkan karena asosiasinya  dengan  inang  (Wardika et.  al , 2014 dan Anurogo, 2014). Bakteri probiotik mampu menghasilkan asam laktat, hidrogen  peroksida,  dan  bakteriosin  yang dapat  berfungsi  sebagai  antimikroba  dan antibiotik yang mampu menekan
pertumbuhan  bakteri  pathogen  (Samosir et.  al ,  2017).  Bakteri Bacillus dapat dijadikan  kandidat  probiotik  karena  dapat hidup pada berbagai kondisi, salah satunya  dapat  hidup  pada  ekosistem mangrove.  Bakteri  dari  genus Bacillus, Bifidobacteri, Pseudomonas , Lactobacillus, Micrococcus,  Afifella  dan  Rhodobacter dapat  dijadikan  sebagai  kandidat  probiotik dalam saluran pencernaan hewan terutama  hewan  akuatik  (Feliatra  dan Suryadi, 2004; Chumpol et. al , 2017).
Bacillus sp. diketahui memiliki kemampuan menghasilkan  antimikroba  yang  dapat menghambat pertumbuhan bakteri patogen (Sumardi et. al , 2012), karena kemampuannya dalam menghasikan antibiotik  tersebut  bakteri Bacillus dapat dimanfaatkan  sebagai  kandidat  probiotik penghasil  antibakteri  alami  yang  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri Vibrio sp.  dan  dapat  menjadi  salah  satu  solusi bagi permasalahan dalam  usaha budidaya perairan.  Bakteri Vibrio  spp. merupakan salah satu bakteri yang sering menimbulkan  masalah  dalam  budidaya perairan . Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah untuk  mendapatkan  isolat  bakteri Bacillus sp. dari kawasan hutan mangrove
yang  mampu  menghasilkan  antibakteri penghambat vibrio sp.

## METODE PENELITIAN
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini antara lain pepton , ekstrak khamir , gliserol , agar, air  laut,  garam  fisiologis  0,98%, garam  dapur,  NaOH  1  M,  HCl  1  M,  kristal violet,  akuades,  disk  antibiotik  trimetoprim, disk  antibiotik  streptomisin,  disk  antibiotik kloramfenikol  30  µg,  ampisilin  10  µg, streptomisin  10  µg,  trimetoprim  5  µg,  dan asam nalidiksat  30  µg, media Agar  Darah, Sea  Water  Complete  dan  Thiosulfate Citrate  Bile  Salts  Sucrose.  Isolat  yang digunakan yaitu 77 isolat Bacillus sp. yang diisolasi dari  lumpur,  daun,  dan  perakaran mangrove  Hanura,  bakteri Vibrio sp.  dan isolat  Bakteri  Fotosintetik  Anoksigenenik (BFA) koleksi dari Laboratorium Mikrobiologi  Jurusan  Biologi  Fakultas Matematika  dan  Imu  Pengetahuan  Alam Universitas Lampung.
Seleksi  Isolat Bacillus sp.  Penghasil Antibakteri Penghambat Vibrio sp.
Setiap  isolat  dan  bakteri  uji Vibrio sp. dibuat  menjadi  suspensi  cair  sebanyak  10 ml di dalam tabung reaksi, untuk selanjutnya  diuji  dengan  menggunakan metode Kirby  Bauer .  Suspensi Vibrio sp. dimasukkan ke  dalam  cawan  petri  dengan metode pour  plate .  Kemudian  di  atas medium  yang  berisi  bakteri Vibrio  sp . dimasukkan  kertas  cakram  yang  telah dicelupkan ke dalam  isolat  bakteri Bacillus sp .  Selanjutnya  biakan  diinkubasi  pada suhu  ruang  selama  3  hari.  Daerah  terang atau zona jernih yang terbentuk menandakan bahwa isolat mampu menghambat  pertumbuhan  bakteri Vibrio sp.  Zona  jernih  diukur  menggunakan jangka  sorong  dan  selanjutnya  isolat  yang menunjukkan  daerah  terang  atau  jernih dipilih  untuk  dilakukan  karakterisasi  (Sari et. al , 2015).
Karakterisasi Isolat Bacillus sp.
Karakterisasi  isolat Bacillus sp.  meliputi: uji  cekaman  terhadap  kadar  garam;  uji cekaman  terhadap  pH;  uji  patogenisitas; dan uji kepekaan antibiotik.

## Uji cekaman terhadap kadar garam
Isolat Bacillus diambil menggunakan jarum ose  steril  kemudian  diinokulasi  ke  dalam media  SWC  Agar  yang  dimodifikasi dengan  garam  konsentrasi  0%;  3%;  dan 6%. Kultur kemudian diinkubasi selama 24 jam  pada  suhu  ruang.  Pengamatan dilakukan  dengan  mengukur  diameter koloni yang tumbuh (Triyanto et. al , 2009)

## Uji cekaman terhadap pH
Isolat Bacillus diambil menggunakan jarum ose  steril  kemudian  diinokulasi  ke  dalam media  SWC  Agar  yang  dimodifikasi dengan pH 4, pH 7, dan pH 10. Kemudian diinkubasi  selama  24  jam  pada  suhu ruang.  Pengamatan  dilakukan  dengan mengukur  diameter  koloni  yang  tumbuh (Triyanto, et.  al ,  2009).  Isolat  yang menunjukan pertumbuhan yang baik selanjutnya  dipilih  untuk  dilakukan  uji selanjutnya.

## Uji patogenisitas
Patogenesitas ditentukan melalui uji hemolitik  pada  medium  agar  darah.  Isolat Bacillus diambil  menggunakan  jarum  ose steril kemudian diinokulasi ke dalam media SWC Agar Darah.  Kultur  kemudian diinkubasi  selama  24  jam  pada  suhu ruang.  Pengamatan  dilakukan  dengan melihat  zona  yang  terbentuk  disekitar koloni  atau  perubahan  warna  media (Hamtini,  2014).  Uji  hemolitik  positif menunjukkan karakter patogen pada isolat. Isolat yang tidak menunjukan sifat patogen dipilih untuk dilakukan uji selanjutnya.

## Uji kepekaan antibiotik
Isolat  diuji  kepekaannya  terhadap  5  jenis antibiotik  antara  lain  kloramfenikol  30  µg, ampisilin  10  µg,  streptomisin  10  µg, trimetoprim  5  µg,  dan  asam  nalidiksat  30 µg  dengan  menggunakan  metode Kirby- Bauer. Bakteri  uji  diinokulasi  secara  swab pada  media  SWC  Agar  cawan  petri. Kemudian  disk  dari  5  jenis  antibiotik diletakkan pada cawan kultur menggunakan  pinset  steril  dan  diinkubasi pada suhu ruang selama 24 jam. Pengamatan  dengan  melihat  zona  jernih yang  terbentuk  disekitar  disk  antibiotik (Hamtini,  2014  dan  Puspitasari et.  al , 2017).
Uji  Kompatibel  Isolat Bacillus sp.  dan Vibrio sp dalam Media SWC Cair Uji  kompatibel  yang  dilakukan  merupakan metode  kultur  bersama  modifikasi  dari metode Vaseeharan dan Ramasamy (2003).  Suspensi  cair  Isolat Bacillus sp. dan Vibrio sp.  dengan  kepadatan  10 3 sel /ml  dimasukkan  ke  dalam  50  ml  media SWC  cair.  Sebagai  kontrol  isolat Bacillus sp.dan Vibrio sp.  ditumbuhkan masing- masing pada media SWC cair. Selanjutnya diinkubasi  pada  orbital  shaker  dengan kecepatan  100  RPM  pada  suhu  ruang selama  7  hari.  Setiap  hari  kultur  diambil untuk  dihitung  kepadatan  jumlah Vibrio kontrol dan perlakuan yang tumbuh. Kultur dibuat  pengenceran  hingga  seri  10 -3 kemudian 1 ml dari setiap seri pengenceran diinokulasikan  secara pour plate ke  dalam  media  TCBS.  Setelah inkubasi  selama  24  jam  kepadatan Vibrio sp.  dihitung  secara  langsung.  Kontrol Bacillus dihitung  dengan  membuat  seri pengenceran  sampai  dengan  10 -6 ,  lalu diambil  1  ml  dari  pengenceran  10 -4 ,  10 -5 , dan  10 -6 lalu  diinokulasikan  secara pour plate ke  dalam  media  SWC  agar  dan diinkubasi  selama  24  jam  lalu  dihitung secara langsung.
Uji Kompatibel Isolat Bacillus sp., Vibrio sp. dan BFA dalam Media SWC Cair Suspensi  isolat  Bacillus  dan  BFA  dengan kepadatan  10 5 sel/ml  dan Vibrio sp. sebanyak 10 3 sel/ml ke dalam 16 ml media SWC  cair  lalu  diinkubasi  secara  anaerob, pemberian  cahaya  lampu  dan  pada  suhu ruang selama 4 hari. Kontrol isolat Bacillus , Vibrio sp.dan  BFA  yang  ditumbuhkan secara  terpisah  dengan  kepadatan  yang sama dengan perlakuan.
Selanjutnya  kultur  perlakuan  dan  kontrol vibrio  diambil  dan  dibuat  pengenceran sampai dengan 10 -2 kemudian diambil 1 ml dari setiap pengenceran untuk diinokulasikan  secara pour  plate ke  dalam media TCBS. Kontrol dibuat seri pengenceran  hingga  10 -7 lalu  diambil  1  ml dari  pengenceran  10 -5 ,  10 -6 ,  dan  10 -7 lalu diinokulasikan  secara pour  plate ke  dalam media SWC agar.
Setelah inkubasi selama 24 jam kepadatan Vibrio sp.  perlakuan  dan  kontrol  dihitung
secara  langsung.  Semua  perlakuan  dibuat dalam tiga ulangan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Seleksi dan Karakterisasi Isolat Bacillus sp.  Penghasil  Antibakteri  Penghambat Vibrio sp.
Setelah  dilakukan  seleksi  dari  77  isolat, didapatkan  4  jenis  isolat Bacillus sp.  yang positif menghasilkan zona jernih (Tabel 1). Zona  jernih  yang  terbentuk  menandakan adanya reaksi penghambatan pertumbuhan  bakteri Vibrio sp.  hal  ini dapat  terjadi  karena  munculnya  zat antibakteri  dari  isolat  bakteri Bacillus sp. yang  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri  bersifat  Gram  negatif.  Zona  jernih pada media dapat terbentuk karena bakteri Vibrio tidak  dapat  tumbuh  disekitar  koloni isolat Bacillus .  Isolat  yang  menunjukan pertumbuhan  yang  baik  pada  cekaman garam  ekstrim  yaitu  isolat  IL2K8  dan ID2K1 (Tabel 1). Selain itu isolat IL2K8 dan ID2K1  juga  menunjukkan  pertumbuhan yang baik pada pH 7 dan 10, namun tidak ada  isolat  yang  tumbuh  pada  pH  4  (Tabel 1).
Bakteri  dapat  tumbuh  dalam  kadar  garam yang  luas  dengan  cara  mempertahankan keseimbangan osmotik selnya (Marihati et. al , 2014). Bakteri juga dapat tumbuh dalam kisaran konsentrasi ion hidrogen (pH) yang luas  dari  pH  2  hingga  9.  Bedasarkan ketahanannya terhadap pH, bakteri dibedakan  menjadi  bakteri  asidofilik  yaitu bakteri  yang  hidup  pada  pH  asam,  bakteri alkalofilik yaitu bakteri yang hidup pada pH basa  dan  bakteri  neutralofilik  yaitu  bakteri yang  hidup  pada  pH  normal. Bacillus merupakan  jenis  bakteri  bersifat  neutrofilik yang  dapat  hidup  dalam  kisaran  pH  5 hingga  9.  Bakteri  netrofilik  pada  umumnya tidak  dapat  tumbuh  pada  pH  yang  terlalu asam  atau  terlalu  basa,  namun  bakteri  ini dapat  tetap  bertahan  hidup  dengan melakukan homeostasis pH atau kemampuan mikroba untuk mengontrol pH internalnya  agar  dapat  bertahan  (Moat et. al, 2002). Pengaruh pH terhadap pertumbuhan  bakteri  berkaitan  dengan aktivitas  enzim.  Enzim  dibutuhkan  bakteri untuk  mengkatalis  reaksi  metabolisme yang  berhubungan  dengan  pertumbuhan
bakteri, antara lain enzim RNA polimarase, yang  berperan  dalam  proses  transkripsi pada  sintesis  protein.  Apabila  pH  dalam suatu  medium  atau  lingkungan  tidak optimal  maka  akan  mengganggu  kerja enzim  tersebut  (Suriani et.  al ,  2013). Konsentrasi ion H + akan meningkat apabila pH  di  lingkungan  asam,  ion  H + ini  akan mempengaruhi sisi aktif enzim (Ottoleng hi, 1970).
Transpor  ion-ion  esensial  akan  terhambat apabila  pH  di  lingkungan  menjadi  asam, hal ini terjadi karena permeabilitas membran terhadap ion proton naik sehingga  sel  tidak  mampu  menghasilkan Adenosin  Trifosfat  (ATP)  dan  terjadi kegagalan  proses  respirasi  menyebabkan pertumbuhan  sel  lambat  kemudian  mati (Wang et. al , 1079)
Kemampuan  bakteri  untuk  tumbuh  pada cekaman lingkungan yang ekstrim menunjukkan  bahwa  isolat  dapat  bertahan pada berbagai kondisi lingkungan.
Kemampuan  bakteri  probiotik  untuk  hidup pada  kondisi  ekstrim  diperlukan  untuk hidup dengan baik di dalam maupun di luar tubuh organisme inang (Triyanto, 2009).
Setelah  dilakukan  uji  cekaman  terhadap kadar  garam  dan  pH  didapatkan  2  isolat yang dapat dilanjutkan pada uji patogenisitas.  Isolat  yang  memiliki  sifat patogen dilihat dari tingkat kejernihan yang terbentuk  pada  media  agar  darah.  Isolat ID2K 1  diketahui  memiliki  sifat  α  (alfa) hemolisis  dan  isolat  IL2K8  memiliki  sifat  γ (gamma) hemolisis (Tabel 1).
Hemolisis darah dibagi dalam 3 jenis, yaitu alfa  (α)  hemolisis,  beta  (β)  hemolisis  dan gamma  (γ)  hemolisis.  alfa  (α)  hemolisis merupakan kemampuan melisiskan sebagian sel darah merah dan hemoglobin,  beta  (β)  hemolisis  yaitu  yang mampu  melisis  seluruh  sel  darah  merah dan  hemoglobin,  gamma  (γ)  hemolisis yaitu  yang  tidak  menunjukan  kemampuan hemolisis apapun [9]. Bakteri yang bersifat hemolitik  dapat  menghasilkan  metabolik sekunder yang dapat melisiskan sel darah. Hemolisin  merupakan  salah  satu  zat  yang dihasilkan  bakteri  yang  dapat  melisiskan darah. Hemolisin diketahui dapat menghancurkan
hemoglobin dan
mengurangi  jumlah  eritrosit  dalam  darah (Le Marechal et.  al ,  2011) .  Kemampuan bakteri dalam menghemolisis darah merupakan salah satu faktor virulensi yang umum dimiliki oleh bakteri patogen (Lestari et. al , 2016).
Bacillus sp.  IL2K8  tidak  memiliki  sifat patogen.  Isolat  tersebut  selanjutnya  diuji kepekaan
terhadap antibiotik menggunakan  lima  jenis  antibiotik  yaitu ampisilin,  streptomisin,  trimetoprim,  asam nalidiksat  dan  kloramfenikol.  Dari  hasil  uji didapatkan kepekaan yang berbeda terhadap  antibiotik.  Isolat  diketahui  peka terhadap antibiotik trimetoprim dan bersifat resisten  terhadap  ampisilin,  streptomisin, kloramfenikol  dan  asam  nalidiksat  (Tabel 1).  Isolat  IL2K8  peka  terhadap  antibiotik trimetoprim. Antibiotik trimetoprim berfungsi menghambat sintesis asam folat. Resistensi suatu bakteri terhadap antibiotik dapat disebabkan oleh adanya mutasi gen dalam kromosomnya dan atau plasmidnnya (Sudigdoadi, 2015).
Bakteri  yang  memiliki  gen-gen  resistensi akan mengekspresikan enzim yang secara spesifik dapat menghancurkan atau menghalangi keefektifan antibiotik- antibiotik  tertentu.  Gen  resistensi  tersebut dibawa oleh plasmid  yang dikenal sebagai plasmid R atau resistensi (Campbell et. al , 2012).  Hal  ini  didukung  oleh  pernyataan Sudigdoadi  (2015)  bahwa  bakteri  yang resisten  terhadap  kloramfenikol  dapat menghasilkan enzim kloramfenikol asetiltransferase  yang  dapat  merusak aktivitas  dari  kloramfenikol.  Pembentukan enzim ini berada dibawah kontrol plasmid.
Resistensi bakteri terhadap antibiotik dapat memiliki  dampak  positif dan  negatif.  Salah satu  sifat  probiotik  yang  baik  yaitu  tahan terhadap  antibiotik  (Malago et.  al ,  2011). Sedangkan  dampak  negatifnya  adalah apabila isolat bakteri bermutasi dari bakteri nonpatogen menjadi patogen, seperti pada percobaan yang dilakukan Frederick Grifith dalam  Campbell  (2012)  yang  menunjukan bahwa  bakteri Streptococcus  pneumoniae nonpatogen dapat menjadi patogen apabila ditumbuhkan bersama Streptococcus  pneumoniae patogen  yang telah  mati.  Selain  itu  bakteri  patogen  juga
dapat  menjadi  resisten  terhadap  antibiotik apabila  bakteri  mengambil  plasmid  dari bakteri yang memiliki kemampuan resistensi  terhadap  antibiotik.  Penelitian menunjukkan bahwa gen resistensi antibiotika Stphylococcus epidermidis dapat  dipindahkan  ke Staphylococcus aureus dalam  kondisi in  vivo maupun in vitro (Forbes, dan Schaberg. 1983) .
Bakteri patogen diketahui dapat memperoleh  gen  resistensi  antibiotik  dari lingkungan  melalui  transfer  gen  horizontal yaitu tranformasi, transduksi atau konjugasi.  Konjugasi  dianggap  memiliki pengaruh  terbesar  pada  penyebaran  gen resisten  antibiotik  (Wintersdorff et.  al , 2016).
Uji Kompatibel Isolat Bacillus sp. dan Vibrio sp. dalam Media SWC Cair Hasil  yang  didapatkan  yaitu  pertumbuhan bakteri  isolat Bacillus sp.  maupun Vibrio sp. bersifat fluktuatif. Namun, pertumbuhan isolat Bacillus lebih  tinggi  dibandingkan dengan Vibrio sp.,  hal  ini  karena  isolat Bacillus sp. mampu menekan pertumbuhan  bakteri Vibrio sp.  walaupun tidak dapat membunuh Vibrio sp. sepenuhnya  (Gambar  1).  Isolat  bakteri Bacilllus sp. tidak dapat membunuh bakteri Vibrio sp.  dapat  disebabkan  karena  sifat antibakteri  yang  dihasilkan  oleh  isolat hanya  menghambat  pertumbuhan  bakteri lawan (bakteriostatik), tidak bersifat membunuh  bakteri  (bakterisidal)  sehingga Vibrio sp.  masih  dapat  tumbuh  kembali. Hasil  kultur  bersama  isolat Bacillus dan Vibrio sp.  tidak  menunjukkan  penurunan pertumbuhan bakteri Vibrio yang signifikan, hal ini dapat tejadi karena beberapa faktor yang  dapat  mempengaruhi  besar  kecilnya aktivitas  penghambatan  zat  antibakteri antara  lain  jenis  dan  umur  dari  bakteri penghasil  bakteriosin  dan  bakteri  uji ( Noaman et. al, 2014 ) . Antibiotik digolongkan  sebagai  metabolit  sekunder yang  dihasilkan  oleh  bakteri  endofitik  dan antagonis.
Antibiotik atau antibakteri memiliki mekanisme berbeda-beda dalam menghambat sel bakteri diantaranya
dengan  cara  menghambat  sintesa  protein dan asam nukleat, perusakan dan penghambatan  pembentukan  dinding  sel, perubahan  permeabilitas  sel  target  dan penghambatan kerja  enzim  yang  berperan dalam  pertumbuhan  bakteri  (Sudigdoadi, 2015).
Bakteriostatik menghambat pertumbuhan bakteri namun tidak membunuh. Senyawa bakteriostatik umumnya  menghambat  sintesis  protein pada  sel  bakteri  (Madigan  et.  al,  2000). Pertumbuhan  bakteri  yang  fluktuatif  dapat dikarenakan bakteri mengalami pertumbuhan  kembali  setelah  mengalami penurunan  pertumbuhan.  Hal  tersebut disebabkan karena sel-sel bakteri lain yang telah  mengalami  kematian  menghasilkan sumber  nutrien  baru,  sel  bakteri  ini mengalami penguraian sehingga menghasilkan  sumber  nutrien  baru  yang dapat  dimanfaatkan  bakteri  yang  masih hidup  sebagai  bahan  metabolismenya kembali (Respati et. al , 2017).
Uji  Kompatibel  Isolat Bacillus sp.,  BFA dan Vibrio sp. dalam Media SWC Cair Isolat Bacillus sp.  dan Vibrio sp.  diuji kembali  dengan  kultur  bersama  dengan penambahan  isolat  BFA.  Dari  uji  ini didapatkan hasil bahwa Vibrio sp. mengalami kematian setelah kultur bersama  isolat  IL2K8  dan  BFA  selama  4 hari.  Pada  kontrol Vibrio sp.  jumlah  sel akhir bakteri Vibrio sp. mengalami penurunan  namun  tidak  lebih  rendah  dari perlakuan  kultur  bersama Vibrio sp. dengan  isolat Bacillus IL2K8.  Perlakuan dengan menambahkan BFA dan isolat
Bacillus sp.  ternyata  dapat  membantu menghambat  pertumbuhan Vibrio sp. hingga  100%  (Tabel  2).  Isolat Bacillus dengan BFA mampu menekan pertumbuhan Vibrio sp.  karena  BFA memiliki  waktu  hidup  yang  lebih  lama  dan isolat Bacillus memiliki  zat  anti  mikroba yang  dapat  menghambat  pertumbuhan Vibrio sp. Hal ini selaras dengan penelitian yang  dilakukan  Widiyanto et.  al ,  1998), yaitu bakteri BFA diketahui dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri Vibrio harveyi .
Tabel 1. Seleksi dan Karakterisasi Isolat Bacillus sp. Jumlah Isolat Uji Antagonis Uji Cekaman Garam (%) Uji Cekaman pH Uji Patogenisitas Kepekaan Antibiotik Zona Jernih 0 3 6 4 7 10 α β γ A Str T AN C L1I1, L2I2, L2I3, L2I4, …, …, …, …, …, …, …, …, …, …, …, …, IL2K9 L2I4 + + + - + + TU TU TU TU TU TU TU TU A2I4 - - + - - - TU TU TU TU TU TU TU TU ID2K1 + + + + + + - + + + + + - - TU TU TU TU TU IL2K8 + + + + + + - + + + + - - + R R S R R 77 4 2 2 1 1 Keterangan; α = Hemolisis sebagian
β = Hemolisis total
γ =   Tidak terjadi hemolisis
A =   Ampisilin
Str   =   Streptomisin
T = Trimetoprim AN  =   Asam Nalidiksat
C =   Kloramfenikol TU  =   Tidak diuji
R =   Resisten
S =   Peka
+ =   Terjadi reaksi / Pertumbuhan koloni sempit
++  = Pertumbuhan koloni luas
- = Tidak terjadi reaksi
L2I4, A2I4, ID2K1, IL2K8 = Isolat Bacillus sp.
Gambar 1. Grafik pertumbuhan isolat Bacillus sp. (garis terang) dan Vibrio sp. (garis samar) setelah kultur bersama
Keterangan;
Perlakuan 1 = Pertumbuhan Isolat Bacillus ID2K1 (data hitung dari kultur bersama Isolat Bacillus ID2K1dan Vibrio sp.) Perlakuan 2 = Pertumbuhan Isolat Bacillus IL2K8 (data hitung dari kultur bersama Isolat Bacillus IL2K8 dan Vibrio sp.) Perlakuan 3 = Pertumbuhan Isolat Bacillus ID2K1 dan IL2K8 (data hitung dari kultur bersama Isolat Bacillus ID2K1 dan IL2K8 serta Vibrio sp.) Perlakuan 4 = Pertumbuhan Isolat Bacillus ID2K1 (data hitung dari kultur Isolat Bacillus ID2K1) Perlakuan 5 = Pertumbuhan Isolat Bacillus IL2K8 (data hitung dari kultur Isolat Bacillus IL2K8) Perlakuan 6 = Pertumbuhan Isolat Bacillus ID2K1 dan IL2K8 (data hitung dari kultur Isolat Bacillus ID2K1 dan IL2K8) Perlakuan 7 = Pertumbuhan Vibrio sp. (data hitung dari kultur bersama Isolat Bacillus IL2K8 dan Vibrio sp.) Perlakuan 8 = Pertumbuhan Vibrio sp. (data hitung dari kultur bersama Isolat Bacillus ID2K1 dan Vibrio sp.) Perlakuan 9 = Pertumbuhan Vibrio sp. (data hitung dari kultur bersama Isolat Bacillus ID2K1 dan IL2K8 serta Vibrio sp.) Perlakuan 10 = Pertumbuhan Vibrio sp. (data hitung dari kultur Vibrio sp.)
Tabel  2. Pertumbuhan Vibrio sp.  Setelah  Kultur
Bersama Perlakuan Jumlah Sel Awal (sel/ml) Jumlah Sel Vibrio sp. Akhir (sel/ml) Vibrio IL2K8 BFA A - 1 x 10 5 - - B - - 1 x 10 5 - C 1 x 10 3 - - 8,6 x 10 2 D 1 x 10 3 1 x 10 5 - 1,2 x 10 2 E 1 x 10 3 1 x 10 5 1 x 10 5
0
Keterangan;
A = Isolat Bacillus IL2K8 (kontrol)
B = BFA (kontrol) C = Bakteri Vibrio sp. (kontrol) D = Kultur Bersama Vibrio sp. dan Isolat Bacillus IL2K8 E = Kultur Bersama Vibrio sp., Isolat Bacillus IL2K8 dan BFA

## KESIMPULAN
Isolat Bacillus sp.  IL2K8  adalah  isolat  yang diseleksi  dari  77  isolat  yang  berasal  dari lumpur  kawasan  hutan  mangrove  Hanura yang  dapat  menghambat  pertumbuhan Vibrio sp.  setelah  diuji  dengan  metode Kirby  Bauer . Isolat  IL2K8  dapat  tumbuh  dengan  kadar garam 0 %,3 %, 6 % dan nilai pH 7 serta 10. IL2K8 tidak memiliki sifat patogenitas, resisten terhadap  antibiotik  amplisin,  striptomisin, asam  nalidiksat  dan  kloramfenikol  namun peka  terhadap  antibiotik  trimetoprim.  Dalam kultur bersama pada media cair isolat Bacillus IL2K8  bersama  dengan  bakteri  fotosintetik anoksigenik dapat menghambat pertumbuhan Vibrio sp.

## DAFTAR PUSTAKA
Anurogo,  D.  (2014).  Probiotik:  Problematika dan  Progresivitasnya. Medical  Review, 27(3), 46-57.
Campbell,  N.A.,  J.B.  Reece,  L.A.  Urry,  M.L. Cain,  S.A.  Wasserman,  P.V.  Minorsky, R.B.  Jackson.  (2012). Biologi. Jakarta: Erlangga.
Chumpol S, D., Kantachote, T.  Nitoda dan H. Kanzaki.  (2017). The  Roles  Of  Probiotic
Purple  Nonsulfur  Bacteria  To  Control Water Quality And Prevent Acut Hepatopancreatic Necrosis Disease (AHPND)  For  Enhacement  Growth  With Higher Survival In White Shrimp ( Litopenaeus vannamei ) During Cultivation .  Aquaqulture.  Diakses  dari https://www.sciencedirect.com/science/art icle/pii/S0044848616312935
Feliatra E. dan E. Suryadi. (2004). Isolasi dan Identifikasi  Bakteri  Probiotik  dari  Kerapu Macan  ( Ephinephelus  fuscogatus )  dalam Upaya Efisiensi Pakan Ikan. Jurnal Natur Indonesia , 6(2), 75-80.
Forbes,  B.A.  dan  D.R.  Schaberg.  (1983).
Transfer  of  Resistance  Plasmids  from Staphylococcus
epidermidis
to Staphylococcus  auereus :  Evidence  for
Conjugative  Exchange  of  Resistance . Journal of Bacteriology, 153(2), 627-634.
Hamtini.  (2014). Isolation  and  Selection  of Bacillus sp. from Catfish ( Clarias sp.) as
well  Its  potential  as  a  Probiotic .  Bogor: Institut Pertanian Bogor.
Le Marechal,  C.,  Seyffert,  N.,  Jardin,  J., Hernandez,  D.,  Jan,  G.,  Rault,  L., Azevedo  V.,  Francois,  P.,  Schrenzel,  J., van  de  Guchte,  M.,  Even,  S.,  Berkova, N.,  Thiery,  R.,  Fitzgerald,  J.R.,  Vautor, E., Le Loir, Y. (2011). Molecular Basis of Virulence  in Staphylococcus  aureus mastitis . PloS One, 6, e27354.
Lestari,  W.L.,  Agung  B.,  Artini  P.  (2016). Bakteri  Heterotrof  Aerobik  Asal  Saluran Pencernaan  Ikan  Sidat  ( Anguilla  bicolor bicolor ) dan Potensinya sebagai Probiotik. Bioteknologi ,  13(1),  9-17.  doi: 10.13057/biotek/c130102.
Madigan,  M.T.,  J.M.  Martinko,  J.  Parker.
(2000). Brock Biology of Microorganism . New Jersey : Prentice-hall. Inc.
Malago, J.J., J.G.L. Koninkx dan R. Marinsek. (2011). Probiotic  Bacteria  and  Enteric Infection.  Cyoptoprotection  of  Probiotic Bacteria .  New  York:  Springer  Dordrecht
Heidelberg London. Marihati., Nani, H., Muriyati., nilawati.,
Syarifudin, E., dan Danny, W, H.. (2014). Penggunaan  Bakteri  Halofilik  Sebagai Biokatalisator Untuk Meningkatkan
Kualitas  Dan  Produktifitas  Garam  Nacl Di Meja Kristalisasi. Jurnal Riset Industri . 8(3), 191 – 196.
Moat, A. G., J. W. Foster, dan M. P. Spector.
(2002). Microbial Physiologi fourth edition . New York: Wiley-Liss, Inc.
Noaman, N. H., A. Fattah, M. Khaleafa dan S.
H  Zaky.  (2014).  Factors  Affecting Antimicrobial  Activity  of  Synechococcus leopoliensis.  Microbiological  Research, 159 (4): 395-402. Diakses dari https://www.sciencedirect.com/science/a rticle/pii/S0944501304000722.
Ottoleng hi.  P.  1970).  The  Effect  of  Hydrogen Ion  Concentration  on  The  Simplest Steady-State Enzyme System. Biochem.
J , 123, 445-453.
Puspitasari,  Putra  dan  Handayani.  (2017). Senyawa  Antibiotik  dari Bacillus  sp 1 (HA1)  yang  Bersimbiosis  pada  Spon
Laut Haliclona  fascigera . Jurnal  Sains Farmasi dan KliniS, 134-140.
Respati, N.Y., E. Yulianti dan A. Rakhmawati.
(2017).  Optimasi  Suhu  Dan  pH  Media Pertumbuhan Bakteri Pelarut Fosfat Dari Isolat  Bakteri  Termofilik. Jurnal  Prodi Biologi , 6(7).
Samosir,  M.  F.,  D.  Suryanto  dan  Desrita.
2017.  Isolasi  dan  Identifikasi  Bakteri Potensial Probiotik Pada Saluran Pencernaan  Ikan  Mas  ( Cyprinus  Carpio ). Jurnal  Bidang  Manajemen  Sumberdaya Perairan, 15(1).
Sari,  Ranap  J.,  Feliatra  dan  D.  Yoswaty. (2015). The Antagonists Test of Probiotic  Bacteria  Isolated  from  Black Tiger Shrimp ( Penaeus monodon fabricus ) Against Pathogens Pseudomonas sp , Aeromonas
hidrophyla , Vibrio  alginolyticus . Jurnal Online Mahasiswa , 2 (1).
Sudigdoadi,  Sunarjati.  (2015). Mekanisme Timbulnya  Resistensi  antibiotik  Pada
Infeksi  Bakteri .  Mikrobiologi  Fakultas Kedokteran. Bandung: Universitas
Padjajaran. Sumardi, C.N. Ekowati, K. Handayani, Nurhayati. (2012). Isolasi Dan Karakterisasi Bacillus  s p.  Penghasil Antimikroba  dari  Saluran  Pencernaan Ayam  Kampung  ( Gallus  domesticus ). Prosiding SNSMAIP III-2012.  ISBN  No.
978-602-98559-1-3.
Suriani,  Sanita.,  Soemarno,  dan  Soeharjono.
(2013). Pengaruh Suhu dan Ph terhadap Laju  pertumbuhan  Lima  Isolat  Bakteri Anggota  Genus Pseudomonas yang diisolasi dari Ekosistem Sungai Tercemar  Deterjen  di  sekitar  Kampus Universitas Brawijaya. J-PAL , 3(2).
Triyanto,  Isnansetyo,  A.,  Prijambada,  I.  D., Widada,  J.,  dan  Tarmiawati,  A.  (2009). Isolasi,  Karakterisasi  Dan  Uji  Infeksi Bakteri Proteolitik Dari Lumpur Kawasan Hutan  Bakau. Jurnal  Perikanan, XI(1), 13-18.
Vaseeharan,  B.  dan  Ramasamy,  P.  (2003). Control  Of  Pathogenic Vibrio Spp  .  By Bacillus  Subtilis BT23  ,  A  Possible Probiotic  Treatment  For  Black  Tiger Shrimp Penaeus  Monodon . The  Society of Applied Microbiolog, 83 –87 .
Wang,  D.I.C.,  Clooney,  C.L.,  Demain,  A.L.,
Dunnil, P., Humprey, A.E. dan Lily, M.D. (1979). Fermentation and Enzym Technology. John Wiley and Sons. New York.
Wardika, A. S., Suminto, dan Sudaryono, A. (2014). Pengaruh Bakteri Probiotik Pada Pakan Dengan Dosis Berbeda Terhadap Efisiensi Pemanfaatan Pakan, Pertumbuhan dan Kelulushidupan Lele Dumbo ( Clarias Gariepinus ). Journal of Aquaculture Management and Technology, 3(4), 9-17.
Widiyanto,  T.,  Suwantol,  A.,  Adidjuwana,  H.,
dan  Kaswadji,  R.  (1998).  Kemampuan Bakteri  Fotosintetik  Anoksigenik  Dalam Menurunkan Konsentrasi H 2 S dan Menghambat Pertumbuhan Vibrio harveyi . Jurnal  Bioteknologi  Pertanian , 3(1), 17-22.
Wintersdorff CJHv, J. Penders, J.Mv. Niekerk,
N.D.  Mills,  S.  Majumder,  L.Bv.  Alphen, P.H.M. Savelkoul, P.F.G. Wolffs. (2016). Dissemination of Antimicrobial Resistance  in  Microbial  Ecosystems through Horizontal Gene Transfer.
Frontiers in Microbiology, 7, 173.