## BIOMEDIKA
ISSN : 1979 - 035X (printed edition)
ISSN : 2302 - 1306 (electronic/Portal e-Journal)
Available online at www.biomedika.ac.id
Volume 7, No.2, September 2014
Uji Efektivitas Ekstrak Seledri ( Apium graveolens L) Sebagai Penghambat Produksi Biofilm Pada Salmonella typhi
The Test Effectiveness of Extract ( Apium graveolens L) As
Inhibitor the Production of Biofilm on Salmonella typhi
Celery
Didik Wahyudi
Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta, email: didikww@gmail.com

## ABSTRAK
Biofilm adalah kumpulan sel-sel bakteri baik sejenis ataupun beberapa jenis yang melekat pada subsrat, jaringan, atau sel  yang  diselimuti  oleh  lapisan  pengikat  polisakarida  hasil  ekskresi  sel-sel  bakteri,  menyebabkan  kerusakan  pada permukaan  sel,  mukosa  dan  jaringan  yang  dilekatinya.  Salmonella  typhi  yang  berada  dalam  biofilm  biasanya  resisten terhadap  antibiotik  dan  lebih  virulen.  Seledri  (Apium  graveolens  L)  memiliki  kandungan  apigenin  mampu  menghambat pembentukan  biofilm.  Tujuan  Penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  kemampuan  ekstrak  seledri  (Apium  graveolens  L) fraksi  etanol  dan  etil  asetat  dalam  menghambat  pembentukan  biofilm  Salmonella  typhi.  Penelitian  ini  diawali  dengan ekstraksi tanaman seledri (akar, batang, daun, biji) seledri dengan etanol dan etil asetat menggunakan metode maserasi, kemudian  dibuat  konsentrasi  0%,  2%,  4%,  6%,  8%,  dan  10%.    Salomonella  typhi  diisolasi  dari  pasien  demam  tifoid, kemudian  dilakukan  karakterisasi  fisiologisnya  dan  uji  sensitifitas  antibiotik.  Uji  penghambatan  biofilm  Salmonella typhi dilakukan dengan metode microtiter plate clorida dengan menggunakan spektrofotometer pada panjang gelombang 595nm,  Hasil  pengukuran  produksi  biofilm  berupa  besarnya  nilai  Optical  Density  crystal  violet,  setiap  perlakuan menggunakan ulangan tiga kali, data yang didapatkan dianalisis dengan One Way Anova. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak Apium graveolens L dengan pelarut etanol mampu menghambat produksi biofilm Salmonella typhi pada konsentrasi  6%,  dan  dengan  pelarut  etil  asetat  mampu  menghambat  pada  konsentrasi  4%.  Tidak  ada  perbedaan kemampuan penghambatan biofilm antara esktrak Apium graveolens L fraksi etanol dan etil asetat.
Kata kunci : biofilm, Salmonella typhi, seledri (Apium graveolens L).

## ABSTRACT
Biofilms have a collection of cells or some kind of good bacteria attached to subsrat types, tissues, or cells are covered by a layer of binder polysaccharide excretion results of bacterial cells, causing damage to the cell surface, and mucosal tissues.  Salmonella  typhi  which  are  in  biofilms  are  usually  resistant  to  antibiotics  and  more  virulent.  Celery  (Apium graveolens L) contains apigenin could inhibit biofilm formation. The purpose of this study was to determine the ability of extracts of celery (Apium graveolens L) of ethanol and ethyl acetate fractions inhibit biofilm formation in Salmonella typhi.  This  research  has  been  carried  out  by  extraction  celery  plants  (roots,  stems,  leaves,  seeds)  celery  with  ethanol and ethyl acetate using maseration methods, then made a concentration of 0%, 2%, 4%, 6%, 8%, and 10%. Salomonella typhi  has  isolated  from  patients  with  typhoid  fever,  and  in  doing  their  physiological  characterization  and  antibiotic sensitivity  testing.  Salmonella  typhi  biofilm  inhibition  test  was  conducted  using  microtiter  plate  chloride  using  a spectrophotometer at a wavelength of 595nm, the measurement results of biofilm production in the form of the value of the  Optical  Density  crystal  violet,  using  replicates  of  each  treatment  three  times,  the  data  obtained  were  analyzed  by One Way Anova. Results showed that the extract of Apium graveolens L with ethanol was able to inhibit the production of biofilm Salmonella typhi at a concentration of 6%, and the solvent ethyl acetate was able to inhibit at a concentration of 4%. There is no difference between the biofilm inhibition ability Apium graveolens L extract fraction of ethanol and ethyl acetate.
Key word : biofilm, Salmonella typhi, seledri (Apium graveolens L).
PENDAHULUAN
pusing,  muntal,  mual,  nafsu  makan  berkurang dan nyeri pada bagain perut. Di Indonesia demam tifoid bisa menyerang balita, anak-anak dan dewasa, dengan prevalensi atau angka kejadian penyakitnya di Indonesia 380 – 780 kasus per 1000 penduduk atau kurang lebih 625.000 – 1,35 juta kasus setiap
Salmonella  typhi merupakan  bakteri  yang menyebabkan  penyakit  demam tifoid ,  bakteri ini  menyebabkan  infeksi  pada  manusia  melalui makanan dan air. Menyerang sistem saluran cerna pada  manusia,  dengan  gejala  demam  tinggi,
tahun  dan  75  –  90  %  nya  adalah  anak  berusia 2  –  19  tahun.  (Dep.  Kes,  2009).    Beberapa  kasus infeksi tifoid dilaporkan  sering  kambuh  kembali ada  sekitar  5  –  25  %  kasus,  dilaporkan  bahwa kejadian resistensi kuman Salmonella sp penyebab demam  tifoid  mengalami  peningkatan  sejumlah 35 – 65 % selama 3 tahun terakhir (2009 – 2012). Kasus  resistensi  bakteri  tersebut  disebabkan  oleh banyak  hal,  antara  lain  ketidaktaatan  minum  obat antibiotik, mutasi bakteri, kesalahan dalam perilaku pengobatan. Penyebab lainnya adalah karena bakteri membentuk  biofilm  dalam  jaringan,  sehingga  sulit ditembus  oleh  beberapa  antibiotik  (Kemen.  Kes, 2012).
Biofilm  bakteri  adalah  sebuah  komunitas bakteri yang satu spesies maupun beberapa spesies yang  berada  dalam  satu  substrat  atau  jaringan sebanyak  72%  bakteri  penyebab  penyakit  infeksi mengalami resistensi terhadap antibiotik dan lebih dari 50% kasus resistensi bakteri disebabkan karena pembentukan  biofilm  dalam  jaringan  tubuh (Rasmussen , 2005). Ketika Salmonella typhi yang berada  dalam  jaringan  berinteraksi  dengan  bakteri sejenis ataupun jenis lain yang bisa menyebabkan demam  tifoid  ( S.  paratyphi  A,  S.  Paratyhi  B,  S. typhimurium )  maka  bakteri  tersebut  akan berkolonisasi  membentuk  biofilm,  dan  pada kondisi tersebut maka akan sulit dimatikan dengan berbagai jenis antibiotik.(Fuqua, 1997 dan Federle, 2003).
Menurut  Rukayadi  (2010)  pembentukan biofilm Salmonella typhi dan Streptococcus mutans dikendalikan  oleh  sistem quorum  sensing. Sistem quorum sensing merupakan suatu proses pelepasan molekul sinyal antara bakteri, ketika jumlahnya di dalam  lingkungan  (jaringan)  sudah  mencukupi maka  bakteri  akan  mengeluarkan  faktor  virulensi, setelah  mengeluarkan  faktor  virulensi,  apabila bakteri  masih  terus  berkolonisasi  maka  akan membentuk  biofilm  yang  bisa  menyebabkan bakteri resisten terhadap antibiotik (Mustika, 2009). Pada  kasus  infeksi  demam tifoid ,  sering  terjadi pada  kantung  dan  cairan  empedu, Salmonella typhi mengadakan  kolonisasi  dan  membentuk biofilm  dalam  kantung  empedu,  hal  ini menyebabkan Salmonella  typhi sulit  untuk dimusnahkan  dengan  antibiotik,  dan  dalam  waktu
Beberapa  penelitian  antara  lain,  Kool et  al (2003),  Magdalena  dan  Yogiara  (2006),  Wijiono (2009), Rukayadi (2009), menyatakan bahwa biofilm Streptococcus  mutans (penyebab  plak  gigi)  bisa dihambat  oleh  beberapa  senyawa  antara  lain xanthorizol,  apiin,  apigenin,  dan  tt-farnesol  yang diekstrak  dari  beberapa  tanaman  obat.  Taga et  al (2005)  menyatakan  bahwa  sistem  pengendalian pembentukan biofilm pada Streptococcus mutans dan Salmonella typhi dikendalikan oleh Gen pengendali yang  sama  yaitu:  LuxS  dan  AI-2,  Hal  tersebut diperkuat  oleh  Lapidot  (2006)  menyatakan Salmonella typhi dan Streptococcus mutan s memiliki mekanisme  produksi  dan  penghambatan  biofilm yang serupa.
Wijiyono  (2008)  dan  Listyawati  (2012) menyebutkan  bahwa  senyawa  apigenin  dan  tt- farnesol mempunyai kemampuan untuk menghambat biofilm Stretococcus  mutans .  Senyawa  apigenin terdapat banyak pada tanaman seledri (Gunawandan Mulyani.  2004)  Penelitian  tentang  penghambatan biofilm  pada Streptococcus  mutans sudah  cukup banyak,  tetapi  penelitian  tentang  penghambatan biofilm  pada Salmonella  typhi oleh  ekstrak  seledri ( Apium graveolens L) yang mengandung apiin dan apigenin belum pernah dilakukan.
Seledri  ( Apium  graveolens L.)  merupakan sayuran  yang  sering  digunakan  sebagai  bumbu masakan, lalapan dan penyedap sup.  Batang, daun dan  biji  seledri  mengandung  apiin  dan  apigenin. Menurut Dalimartha (2000) apigenin yang terdapat dalam  seledri  bisa  diisolasi  dengan  pelarut  etanol maupun etil asetat.
yang lama penderita bisa mengeksresikan bakteri ini melalui tinjanya (Janssens, 2008).

## METODE PENELITIAN
Alat dan Bahan Penelitian.
Autoclave ,  inkubator, Laminar  air  flow , waterbacth , petridish, jarum ose, bunsen, lemari es, pH meter, spektrofotometer, kuvet, shaker , sentrifuge , mikropipet,  jangka  sorong,  timbangan  elektrik, Elenmeyer, bekerglass ,  Aluminium  foil, Rotary evaporator .  Tabung  biakan  kuman,  Rak  Tabung Reaksi, vortek, kertas saring.
Tanaman seledri (Akar, batang, daun, bunga, biji, dan buah) Apium  graveolens ,  Isolat  kuman Salmonella
typhi (diisolasi  dari  Rumah  Sakit  Dr.  Moewardi Surakarta) , Medium  Luria-Bertani  (LB), trichloroacetic  acid  (TCA),  NaOH  0,5  M,  buffer fosfat  pH  8.  Media  Trypticase  soy  broth–0.6% yeast  extract  (TSBYE),  5%  glicerol, Trypticase soy agar (TSA), microtiter plate PVC, Etanol 70%, Hexane, Aquades steril, crystal violet, glukosa 5%. Media  Brain  Heart  Infusion  ( BHI), MacConkey (MC).  Media  Uji  Biokimia: Kliger  Iron  Agar (KIA), Sulfide  Indol  Motility (SIM),  Urea,  Citrat, Methyl Red (MR), Voges Proskauer (VP), Phenyl Alanine  Deaminase (PAD).  Media  Gula-  Gula (Glukosa, Laktosa, Manitol, Maltosa, Sukrosa). NaCl  0,9  %  steril.  Reagen Erlich,  Methyl  Red (MR),  Ferri  Klorida  (FeCl )  10  %,  Kalium 3 Hidroksida (KOH) 40 %, Barried , Cat Gram A, B, C, dan D. disk antibiotik lengkap.
flow chart rancangan penelitian.
Gambar 1 merupakan Seledri ( Apium graveolens L) Ekstrak Etanol
Seledri Fraksi Etil Asetat Seledri
Pasien Demam Tifoid Isolasi Salmonella typhi Preparasi Salmonella typhi Uji Penghambatan Biofilm Salmonella typhi oleh ekstrak seledri dengan metode Microtiter Plate Clorida
Ekstrak Etanol Seledri 0%, 2%, 4%, 6%, 8%, 10% ditambahkan ke dalam media Luria bertani Fraksi Etil Asetat  Seledri 0%. 2%, 4%, 6%, 8%, 10% ditambahkan ke dalam media Luria bertani Karakterisasi dan uji Sensitifitas Antibiotik Salmonella typhi
Prosedur Penelitian

## 1. Karakterisasi dan Ekstraksi Apium graveolensL
Apium  graveolens  L (seledri)  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  jenis  yang  biasa digunakan untuk memasak berumur 3 bulan, yang didapatkan  dari  Perkebunan Tanaman  Sayur  dan Obat  di  Kecamatan  Karangpandan,  Kabupaten
Karanganyar,   Provinsi   Jawa   Tengah. Pembuatan  fraksi  etanol  70%  seledri  dibuat dengan  cara  sebagai  berikut,  herbal  tanaman seledri  yang  telah  dikeringkan  pada  suhu  50°C selama 5 hari diambil sebanyak 2 kg. Setelah kering dilakukan ekstraksi dengan metode maserasi, herbal seledri  dimasukkan  ke  dalam  bejana,  kemudian ditambahkan dengan 10 L etanol 70% ditutup dan dibiarkan  selama  5  hari.  Diserkai,  dan  diperas ampasnya.  Sari  dari  fraksi  etanol  yang  diperoleh kemudian  dilakukan  pemekatan  sampai  dihasilkan ekstrak etanolik seledri.
Pembuatan fraksi etil asetat seledri dilakukan dengan cara sebagai berikut, seratus gram ekstrak etanolik  seledri  disuspensi  dengan  air  panas sebanyak  100  mL  kemudian  diekstrasi  dengan mempergunakan larutan n-hexane 50 ml sebanyak dua  kali.    Air  hasil  ekstrasi  tersebut  kemudian dilakukan  ekstrasi  ulang  dengan  menggunakan pelarut etil asetat 50 ml sebanyak dua kali. Hasil yang  didapatkan  dari  fraksi  etil  asetat  tersebut selanjutnya dilakukan pemekatan.

## 2.Isolasi dan Karakterisasi Bakteri Uji
Bakteri Salmonella typhi diperoleh dari isolasi dari  pasien  Rumah  Sakit  Umum  Dr.  Moewardi
Volume 7, No.2, September 2014
Biomedika    3
standar pada masing-masing antibiotik.
3. Uji Pembentukan Biofilm dengan Microtiter Plate Polivinil Klorida.
(Djordjevic et al , 2002; Rukayadi dan Hwang, 2006)
Kultur Salmonella typhi pada media LB segar yang mengandung ekstrak Apium graveolens pada konsentrasi 0% (sebagai kontrol)  2%, 4%, 6%, 8% dan 10%, kemudian diinkubasi dalam 10 mL media
0 diperkaya TSBYE, pada suhu 32 C semalam. Tes produksi  biofilm  dilakukan  dengan  media  Luria Bertani.  Kultur  semalam  di  TSBYE  dipindahkan (0,1 mL) ke 10 mL Luria Bertani dan divortex.
Labware, Franklin Lakes, NJ), sebelumnya dibilas dengan 70% etanol dan udara kering. Plate tersebut dibuat dalam rangkap dua, diinkubasi, dan ditutup pada  32°C  selama  20  dan  40  jam.  Setiap plate termasuk delapan sumur MWB tanpa P. aeruginosa sebagai  kontrol.  Kekeruhan  sel  dipantau menggunakan pembaca piring microtiter (Bio-Rad, Richmond,  Calif),  dengan  densitas  optik  595  nm (OD595),  dan  dicatat  pada  interval  waktu  yang berbeda.
Set plate pertama digunakan untuk pembentukan biofilm  pengukuran  setelah  40  jam  pembentukan biofilm.  OD  rata-rata  dari  sumur  kontrol  itu dikurangkan  dari  OD  dari  semua  tes  sumur. Setelah  40  jam  periode  inkubasi,  media  telah dihilangkan  dari  sumuran,  dan  sumur microtiter plate dicuci  lima  kali  dengan  air  suling  steril untuk  menghilangkan  bakteri  yang  tidak  terikat kuat.
Plate dikeringkan  di  udara  selama  45  menit dan masing-masing dilakukan pewarnaan dengan 150  µL  dari  kristal  violet  1%  larutan  dalam  air selama  45  menit.  Setelah  pewarnaan, plate yang dicuci  dengan  air  suling  steril  lima  kali.  Pada kondisi  ini,  biofilm  yang  terlihat  sebagai  cincin ungu yang terbentuk di sisi masing-masing dengan baik.  Analisis  kuantitatif  produksi  biofilm dilakukan dengan menambahkan 200 µL dari 95% etanol  ke  dalam  sumur.  Sebanyak  100  µL  dari masing-masing  dipindahkan  ke  microtiter plate baru dan OD ungu kristal yang ada diukur dengan spektrofotometerpada 595 nm. Uji biofilm dengan microtiter plate dilakukan tiga kali ulangan.
di  Surakarta.  Karakterisasi  dilakukan  dari  sampel darah yang didapatkan dari penderita demam tifoid dimasukkan  ke  dalam  media  BHI  secara  aseptis kemudian  dihomogenkan  dan  diinkubasi  pada
0 suhu  37 C  selama  24  jam.  Kemudian  diinokulasi ke  media Mac  Conkey agar,  digunakan  ohse  bulat secara goresan dengan aseptis, kemudian diinkubasi o pada  suhu  37   C  selama  24  jam.  Setelah  itu dilanjutkan  uji  biokimia.  Dan  uji  sensitivitas antibiotik  lengkap  dengan  metode  difusi  agar (Bauer,  1966).  Dengan  cara  diambil  beberapa koloni Salmonella  typhi dari  pertumbuhan  24  jam pada agar, disuspensikan ke dalam 0,5 mL BHI cair,
o diinkubasikan  4  jam  pada  suhu  37 C.  Suspensi yang  telah  terbentuk  tersebut  ditambahkan  aquades steril hingga kekeruhan tertentu, yang sama dengan
8 standar  konsentrasi  kuman  10   CFU  pel  ml  (CFU = Coloni Forming Unit ). Sebanding dengan setengah Mc  Farland,  kemudian  kapas  lidi  steril  dicelupkan ke  dalam  suspensi  kuman  lalu  ditekan-tekan  pada dinding tabung hingga kapasnya tidak terlalu basah, kemudian  kapas  lidi  tersebut  dioleskan  pada permukaan  media  agar  hingga  rata.    Setelah  itu diletakan beberapa disk antibiotik yang ingin diujikan o di atas media, kemudian diinkubasi pada suhu 37 C selama 18 – 24 jam.
Pembacaan  hasil  dilakukan  berdasarkan adanya  diameter  zona  radikal,  yaitu  daerah  di sekitar  disk  antibiotik  yang  sama  sekali  tidak ditemukan adanya pertumbuhan bakteri, kemudian diameter  yang  telah  diukur  dibandingkan  dengan
Setelah divortex, 100µL dialihkan ke dalam delapan pelat PVC microtiter (Becton Dickinson

## 4.Analisis statistik
Penurunan  produksi  biofilm  pada Salmonella typhi dilihat dari hasil uji produksi biofilm dengan metode Microtiter  Plate  Polivinil  Klorida pada media Luria bertani yang telah ditambahkan ekstrak etanol  dan  etil  asestat  pada  masing-masing konsentrasi 0%, 2%, 4%, 6%, 8% dan 10%.  Hasil pengukuran produksi biofilm berupa besarnya nilai Optical Density ungu kristal yang ada diukur pada 595 nm.
Semua eksperimen dilakukan dengan ulangan tiga  kali.  Data  dianalisis  menggunakan  analisis varians (ANOVA) satu arah dengan P-nilai 0,05,
Biomedika
biokimia  pada  media  gula-gula  (fermentasi karbohidrat)  didapatkan  hasil  karakteristik Salmonella  typhi hasil  isolasi  dari  Rumah  Sakit Dr.  Moewardi  Surakarta  sebagai  berikut:  pada media TSIA terlihat Alkali Acid (memfermentasikan glukosa  tetapi  tidak  memfermentasikan  laktosa, hal  ini  terlihat  dari  media  yang  berwarna  kuning pada dasar dan merah pada lereng permukaan media agarnya,  dengan  menghasilkan  H S,  Pada  Media 2 SIM  terlihat Salmonella  typhi Motil,  dengan  indol negative, dan menghasilkan H S. Pada uji biokimia 2 terlihat  bahwa  urea  (-), methilen  red (+), citrat (-), Voges-Proskauer (-), phenil  alanin Deaminase  (-). Pada  media  Uji  fermentasi  karbohidrat  terlihat bahwa Salmonella typhi memfermentasikan glukosa, maltose dan manitol, tetapi tidak memfermentasikan laktosa  dan  sakarosa.  Setelah  dilakukan  uji sentitivitas tes terhadap Salmonella typhi ditemukan bahwa dari 27 tes antibiotik yang ada 13 antibiotik (48%) sudah resisten terhadap Salmonella typhi . Hasil isolasi Salmonella typhi hasil isolasi dari Rumah  Sakit  Dr.  Moewardi  Surakarta  sudah resisten  multi  obat  hal  ini  menyebabkan  sulit
mekanisme  pemompa  yang  dapat  mengirim antibiotika keluar sel sehingga antibiotika tersebut tidak  akan  pernah  dapat  mencapai  sasarannya (Mustika, 2009).
Bakteri bisa mendapatkan gen-gen resisten terhadap antibiotika  dari  bakteri  lain  dengan  beberapa  cara. Dengan  melakukan  proses  perkawinan  sederhana yang  disebut  “konjugasi,”  bakteri  dapat  mentransfer materi  genetik,  termasuk  kode-kode  genetik  yang resisten  terhadap  antibiotika  (ditemukan  dalam plasmid  dan  transposon)  dari  satu  bakteri  ke  bakteri yang lainnya (Mustika, 2009).
Hasil penelitian uji sensitivitas (Tabel 1) antibiotik terhadap Salmonella typhi hasil isolasi dari bahan klinis tersebut, sejalan dengan hasil penelitian dan pernyataan yang dikemukakan oleh Lapidot et al (2006), bahwa Salmonella typhi hasil isolasi dari pasien cenderung resisten terhadap beberapa jenis antibiotik.
Beberapa  jenis  antibiotik  yang  sering  dipakai dalam pengobatan penyakit infeksi cenderung resisten terhadap Salmonella  typhi (misalnya  amoxicilin, trimetrhoprim,  penicilin  G,  ciprofloxacin)  (Tabel  1),

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Karakteristik Bakteri Uji, Salmonella typhi. Salmonella    typhi merupakan  patogen  utama bagi  manusia  yang  kadang-kadang  mengkoloni pada  manusia  dan  menimbulkan  infeksi  yang sering  disebut  sebagai  demam tifoid atau  tifus abdominalis. Setelah dilakukan identifikasi secara
diobati  jika  bakteri  tersebut  menimbulkan  infeksi (Tabel  1).  Adanya  resistensi  tersebut  bisa dikarenakan  beberapa  hal  antara  lain  adanya mutasi  ataupun  rekombinasi  struktur  gen  yang terjadi  di  dalam  sel  bakteri.    Beberapa  bakteri secara  alami  memang  resisten  terhadap  antibiotik tipe tertentu. Mekanisme resisten bakteri terhadap suatu  antibiotik  bisa  melalui  dua  cara  yaitu: 1)  dengan  mutasi  genetika  atau  2)  dengan mendapatkan resistensi dari bakteri lainnya. (Kievit dan Iglewsski, 2000 dan Todar, 2004)
menggunakan perangkat lunak statistik paket SPSS versi 16 for Window's.
Mutasi merupakan perubahan spontan yang jarang terjadi  pada  materi  genetis  bakteri,  diperkirakan
terjadi  pada  satu  dari  satu  juta  hingga  satu  dari sepuluh juta sel. Mutasi genetis yang berbeda akan menghasilkan  tipe  resistensi  yang  berbeda  juga. Beberapa  mutasi  mengakibatkan  bakteri  dapat menghasilkan  zat  kimia  (enzim)  yang  cukup  untuk menonaktifkan  antibiotika,  ada  juga  tipe  mutasi yang  dapat  menghilangkan  organel  atau  bagian  sel yang menjadi target serangan antibiotika, sedangkan mekanisme  mutasi  jenis  lain  bisa  terjadi  dengan cara  menutup  “gerbang”  tempat  masuknya antibiotika ke dalam sel, ada juga yang menghasilkan
hal  ini  disebabkan  karena Salonella  typhi maupun beberapa  bakteri  penyebab  infeksi  yang  lain  jarang terpapar  dengan  antibiotik  tersebut  sehingga  bakteri tidak membentuk zat anti terhadap beberapa antibiotik tersebut.  Hal  tersebut  justru  memberikan  peluang untuk pengobatan beberapa penyakit infeksi, namun hal ini tidak menjamin penggunaan antibiotik tersebut secara  terus-menerus,  karena  kasus  resistensi antibiotik akan terus berkembang.
tetapi  justru  beberapa  antibiotik  yang  jarang digunakan  pada  dunia  medis  beberapa  sensitive terhadap P.  aeruginosa, misalnya  fosfomycin, meropenem, imipenem, gentamycin, piperacillen,
Volume 7, No.2, September 2014
Biomedika    5
Pembentukan Biofilm dengan Microtiter Plate Polivinil Klorida
Biofilm adalah suatu istilah yang digunakan untuk menggambarkan  suatu  lingkungan  kehidupan  yang khusus  dari  sekelompok  mikroorganisme,  yang melekat ke suatu permukaan padat dalam lingkungan perairan.  Hal  ini  menjadi  mikrolingkungan  yang unik dimana mikroorganisme dalam biofilm berbeda secara  struktural  maupun  fungsional  dengan  yang
Setelah  dilakukan  pengujian  penghambatan Biofilm Salmonella  typhi oleh  ekstrak Apium graveolens L dengan pelarut etanol dan etil asetat didapatkan hasil di Tabel 2.
Tabel 1. Hasil Uji Sensitivitas antibiotik terhadap Salmonella typhi Hasil Isolasi dari RSU Dr. Moewardi Jawa Tengah.
NO NAMA OBAT KODE POTENSI OBAT (µ GRAM) HASIL 1 Amoxycillin AML 10 Resisten 2 Amoxycillin Clav.Acid AMC 30 Sensitif 3 Cefriaxone CRO 30 Sensitif 4 Ceffazidime CAZ 2 Resisten 5 Clindamisin DA 5 Resisten 6 Ciprofloxacine CIP 5 Resisten 7 Penicillin G P 30 Resisten 8 Sulfamethaxazole SXT 100 Sensitif 9 Fosfomycin FOS 50 Sensitif 10 Trimetrhoprim W 5 Resisten 11 Streptomycin SXT 10 Sensitif 12 Meropenem MEM 30 Sensitif 13 Imipenem IPM 30 Sensitif 14 Nalidic Acid NA 30 Resisten 15 Amikacin AK 300 Resisten 16 Cloramphenicol C 30 Sensitif 17 Gentamycin CN 10 Sensitif 18 Netilmycin NET 15 Sensitif 19 Novobiocin NV 5 Resisten 20 Cephalothin KF 20 Resisten 21 Cefuroxime CXM 30 Resisten 22 Kanamycin KF 15 Resisten 23 Cefepime FEP 30 Sensitif 24 Cefoxitin FOX 30 Resisten 25 Coumpounds CMP 300 Sensitif 26 Ofloxacin OFL 30 Sensitif 27 Piperacillin PPR 100 Sensitif
hidup bebas  atau planktonik (Bauman, 2009). Ada lima tahap perkembangan biofilm pada Salmonella typhi , yaitu (1). initial attachment , (2). i rreversible attachment ,  (3). maturation  I. (4). maturation  II . (5). dispersion (Allison, 2000).
Bakteri yang berada di sebuah biofilm dapat memiliki sifat sangat berbeda dari bakteri yang
Pada hasil pengujian biofilm pada Salmonella typhi terlihat  bahwa  semakin  besar  konsentrasi ekstrak Apium graveolens L maka semakin besar pula  penghambatan  produksi  biofilm  pada Salmonella typhi , baik pada ekstrak dengan pelarut etanaol  dan  etil  asetat  memiliki  kemampuan menghambat  produksi  biofilm  yang  dihasilkan Salmonella typhi .
yang dapat dilihat pada Tabel 1 bahwa Salmonella typhi yang diisolasi dari sampel penderita demam tifoid resisten terhadap beberapa antibiotik.
hidup bebas. Sebagai lingkungan yang padat dan dilindungi  dalam  lapisan  film  memungkinkan mereka  untuk  bekerja  sama  dan  berinteraksi dengan berbagai cara. Apabila suatu bakteri telah membentuk  biofilm  dan  berkolonisasi  dalam suatu jaringan atau organ biasanya sudah resisten terhadap  beberapa  jenis  antibiotik  (Adonizio, 2008) hal ini sejalan dengan hasil penelitian ini,
Uji  Penghambatan  Biofilm Salmonella  typhi Oleh Ekstrak Apium graveolens L dengan Pelarut Etanol Hasil  uji  normalitas  menunjukkan  nilai significannya  semua  di  atas  0,05  sehingga  bisa disimpulkan  bahwa  data  normal,  demikian  juga untuk uji homogenitas didapat nilai signifikannya 0,068 atau lebih dari 0,05, sehingga data homogen, dari hasil uji tersebut bisa dilakukan uji One Way
6    DIDIK WAHYUDI
Biomedika
Gambar 2. Nilai Optical Density penghambatan biofilm Salmonella typhi oleh ekstrak Apium graveolens L dengan pelarut Etanol dan Etil asetat.
Tabel 3. Uji One way Anova kemampuan penghambatan Ekstrak Apium graveolens L terhadap produksi biofilm Salmonella typhi .
ANOVA Optical_Density Sum of Squares df Mean Square F Sig. Between Groups 8.386 5 1.677 2.478E3 .000 Within Groups .008 12 .001 Total 8.394 17 Pelarut 0 2 4 6 8 10 Etanol 2,793 2,832 2,773 2,667 1,837 1,004 2,814 2,773 2,786 2,668 1,776 1,023 2,853 2,766 2,767 2,675 1,832 0,976 Rata-rata 2,820 2,790 2,775 2,670 1,815 1,014 Etil Asetat 2,776 2,674 2,511 2,324 1,854 1,167 2,763 2,758 2,474 2,405 1,784 1,154 2,846 2,705 2,330 2,386 1,635 1,239 Rata-rata 2,795 2,712 2,438 2,372 1,758 1,187
Anova  karena  memenuhi  persyaratan  normalitas dan homogenitas data. Uji One Way Anova untuk uji  penghambatan  biofilm Salmonella  typhi oleh ekstrak Apium graveolen L dengan pelarut etanol didapatkan hasil di Tabel 3.
Hasil  uji  One  Way  Anova  didapatkan  nilai signifikannya  0,000  (kurang  dari  0,05),  sehingga bisa disimpulkan bahwa ada minimal dua kelompok data yang berbeda nyata, sehingga perlu dilanjutkan dengan uji Posh Hock Tes (Tabel 4).
Uji Penghambatan Biofilm Salmonella typhi Oleh Ekstrak Apium graveolens L dengan Pelarut Etil Asetat.
signifikannya  semua  di  atas  0,05  sehingga  bisa disimpulkan  bahwa  data  normal,  demikian  juga untuk uji homogenitas didapat nilai significannya 0,068 atau lebih dari 0,05, sehingga data homogen, dari hasil uji tersebut bisa dilakukan uji One Way Anova  karena  memenuhi  persyaratan  normalitas dan homogenitas data. Uji One Way Anova untuk uji  penghambatan  biofilm Salmonella  typhi oleh ekstrak Apium  graveolens dengan  pelarut  etanol didapatkan hasil di Tabel 5.
Hasil uji normalitas menunjukkan nilai
Hasil  uji  One  Way  Anova  didapatkan  nilai signifikannya  0,000  (kurang  dari  0,05),  sehingga bisa disimpulkan bahwa ada minimal dua kelompok data yang berbeda nyata, sehingga perlu dilanjutkan dengan uji Posh Hock Tes (Tabel 6).
Volume 7, No.2, September 2014 Biomedika    7
Tabel 2.  Hasil Optical density pada Uji daya hambat Biofilm Salmonella typhi oleh ekstrak Apium graveolens L dengan pelarut atanol dan etil asetat.
Tabel 4. Hasil Uji posh hock Produksi Biofilm Salmonella typhi pada beberapa konsentrasi ekstrak Apium graveolens L dengan pelarut etanol.
Konsentrasi 0 2 4 6 8 10 Etanol 2.793 2.832 2.773 2.667 1.837 1.004 2.814 2.773 2.786 2.668 1.776 1.023 2.853 2.766 2.767 2.675 1.832 0.976 Rata-rata 2.820 a 2.790 a 2.775 a 2.670 b 1.815 c 1.014 d
Ket : Huruf yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata.
Tabel 5. Uji One way Anova kemampuan penghambatan Ekstrak Apium graveolens L terhadap produksi biofilm Salmonella typhi .
ANOVA Optical_density Sum of Squares df Mean Square F Sig. Between Groups 5.774 5 1.155 236.132 .000 Within Groups .059 12 .005 Total 5.833 17
Tabel 6.  Hasil Uji posh hock Produksi Biofilm Salmonella typhi pada beberapa konsentrasi ekstrak Apium graveolens L dengan pelarut etanol.
Pelarut 0 2 4 6 8
10 Etil Asetat 2.776 2.674 2.511 2.324 1.854 1.167 2.763 2.758 2.474 2.405 1.784 1.154 2.846 2.705 2.330 2.386 1.635 1.239 Rata-rata 2.795 a 2.712 a 2.438 b 2.372 b 1.758 c 1.187 d
Ket : Huruf yang sama menunjukkan tidak berbeda Nyata
Hasil Uji Kemampun Ekstrak Apium graveolens L dengan pelarut Etanol dan Etil Asetat.
Hasil uji statistik kemampuan ekstrak Apium graveolens L dengan pelarut etanol dan etil asetat menunjukkan bahwa nilai signifikan kemampuan ekstrak etanol dan etil asetat tidak berbeda nyata hal  ini  ditunjukkan  dengan  nilai  signifikannya 0,217  (lebih  besar  dari  0,05).  Seperti  hasil  uji Mann-Whitney di tabel 7.
Tabel 7. Hasil Uji Kemampun Ekstrak Apium graveolens L dengan pelarut Etanol dan Etil Asetat.
Optical_Density Mann-Whitney U 123.000 Wilcoxon W 294.000 Z -1.234 Asymp. Sig. (2-tailed) .217 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .226 a a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Pelarut
Hasil  uji  kemampuan  ekstrak Apium  graveolens L pelarut etanol dan etil asetat terlihat sama dari hasil uji statistik di atas, walaupun pada konsentrasi 2 – 8 % terlihat kemampuan ekstrak dengan pelarut etil asetat dalam  menghambat  biofilm Salmonella  typhi lebih
baik, namun pada konsentrasi 10 % terlihat kemampuan ekstrak dengan pelarut etanol terlihat lebih baik.
Ada beberapa faktor yang menentukan pembentukan biofilm  suatu  bakteri,  bakteri  dalam  biofilm berkomunikasi  melalui  pesan  kimia  untuk  membantu mengatur  dan  membentuk  struktur  tiga  dimensi. Arsitektur  suatu  biofilm  menyediakan  perlindungan daripada  bakteri  yang  berenang  bebas.  Sebagai contoh  pada  saat  kadar  oksigen  rendah  di  bagian dalam  biofilm  maka  akan  lebih  mengaktifkan  zat antibiotik.  Lebih  dari  itu,  kehadiran  begitu  banyak jenis  bakteri  dalam  biofilm  akan  meningkatkan kemungkinan  bakteri  dalam  komunitas  biofilm dalam melawan dan menjadi kebal tehadap pemberian
8    DIDIK WAHYUDI
Biomedika

## Metode pemeriksaan pembentukan biofilm pada
Salmonella  typhi tersebut  mengacu  pada  penelitian sebelumnya  yang  dilakukan  oleh  Djordjevic et  al (2002) secara prinsip hasil penelitian yang diperoleh bisa  menjadi  acuan  bahwa  pembentukan  biofilm dipengaruhi  oleh  banyak  faktor,  terutama  zat  kimia penghambat,  lamanya  inkubasi,  jenis  bakteri  yang diuji,  dan  terutama  diawali  dari  sistem quorum sensing. Sistem quorum  sensing diawali  dari terpenuhinya  jumlah  minimal  suatu  bakteri  di lingkungan,  kemudian  pelepasan  molekul  sinyal (bahasa),  setelah  konsentrasinya  di  lingkungan bakteri  terpenuhi,  akan  memicu  pengeluaran  faktor virulensinya,  dan  tahapan  selanjutnya  adalah pembentukan biofilm.  Sehingga untuk menghambat pembentukan  biofilm  suatu  bakteri  bisa  dilakukan dengan cara menghambat sistem quorum sensing nya.
Ekstrak Apium graveolens L diharapkan mampu mencegah  patogenitas Salmonella  typhi sehingga infeksi bisa dicegah dan pengobatan bisa berlangsung dengan  lebih  cepat.  Sistem quorum  sensing bisa menjadi  jawaban  atas  pemasalahan  di  atas,  dengan cara  mencegah  bakteri  mengekspresikan  gen  yang mensandi pembentukan faktor virulensi, pembentukan toksin,  dan  pelepasan  antigen  dengan  mekanisme competitive  inhibition ,  yaitu  senyawa  yang  struktur kimiawinya  homolog  dengan  molekul  sinyal  yang digunakan  bakteri  untuk  berkomunikasi  baik  antar maupun inter spesies .
Hasil penelitian juga bisa diterapkan dalam industri pengawetan bahan makanan dan minuman, beberapa bakteri  sering  mengkontaminasi  makanan  atau minuman  terutama  bakteri  pembusuk,  akan berkolonisasi  pada  substrat  makanan  ataupun minuman  tersebut  yang  pada  akhirnya  bisa mengeluarkan  toksin  yang  bisa  merusak  produk makanan  atau  minuman,  ekstrak Apium  graveolens L  diharapkan  mampu  mengontrol  atau  menghambat produksi  biofilm bakteri  melalui  penghambatan quorum  sensing, sehingga  pencegahan  pengumpulan massa  dan autoinducer pada  substrat  bisa  dihambat dan  produksi  toksin  dan  faktor  virulensinya  bisa dicegah.
Nasional  Indonesia  (SNI)  untuk  produk-produk makanan  maupun  minuman  secara  bakteriologi pada  bahan  makanan  mentah  tetap  dicantumkan batas  maksimal  jumlah  total  bakteri  yang  masih diperbolehkan,  padahal  kalau  bahan  makanan tersebut  dipanaskan  seharusnya  mikroorganisme pencemarnya  akan  mati,  tetapi  hal  tersebut  tetap diberlakukan karena untuk mencegah terbentuknya biofilm  yang  memicu  bakteri  untuk  enterotoksin yang  bersifat  tahan  panas,  sehingga  walaupun dipanaskan  toksinnya  akan  tetap  bisa  bekerja merusak  jaringan  tubuh,  disinilah  peran  sistem quorum  sensing dan  pembentukan  bioflim  pada bakteri bisa dimaksimalkan, dengan memanfaatkan sistem komunikasi pada bakteri ini banyak manfaat yang  akan  diperoleh  yang  perlu  terus  dikaji  lagi sehingga  bisa  muncul  penemuan-penemuan  baru untuk  kehidupan  yang  lebih  baik  di  masa  yang akan datang.
antibiotik. (Bauman, 2009).  Seperti terlihat pada penelitian  ini Solmonella  typhi yang  digunakan ternyata telah kebal dengan beberapa antibiotik.
Seperti telah kita ketahui, bahwa dalam Standar

## KESIMPULAN
Ekstrak Apium graveolens L dengan pelarut etanol dan  etil  asetat  mampu  menghambat  pembentukan biofilm Salmonella  typhi .  Ekstrak Apium  graveolens L  dengan  pelarut  etanol  konsentrasi  6  %  mampu menghambat  produksi  biofilm Salmonella  typhi , sedangkan  pelarut  etil  aseta  pada  konsentrasi  4  %. Tidak ada perbedaan antara esktrak Apium graveolens L  dengan  pelarut  etanol  dan  etil  asetat  dalam menghambat produksi biofilm Salmonella typhi .

## DAFTAR PUSTAKA
Annous,  B. A.,  Solomon,  E.  B.,  Cooke,  P.  H.  and  Burke, A. 2005. Biofilm formation by Salmonella spp. Oncantaloupe melons. Journal of Food Safety 25: 276- 287. Bauman, 2009., biofilm, Pseudomonas putida, Streptococcus mutans .,  http://biobakteri.wordpress.com/2009/06/07/8- biofilm/. (4 November 2012).
Borucki, M. K., Peppin, J. D., White, D., Loge, F. andCall, D.  R.  2003.  Variation  in  biofilm  formationamong strains  of Listeria  monocytogenes .  Applied  and Environmental Microbiology 69: 7336-7342.
Chavant,  P.,  Gaillard-Martinie,  B.,  Talon,  R.,  Hebraud,M. and Bernardi, T. 2007. A new device for rapid evaluation of  biofilm  formation  potential  by  bacteria.Journal  of Microbiological Methods 68: 605-612.
Chia, T. W. R., Goulter, R. M., McMeekin, T., Dykes,G. A. and Fegan, N. 2009. Attachment of different Salmonella serovars  to  materials  commonly  used  in  apoultry processing plant. Food Microbiology 26: 853-859. DepKes, 2009. Penelitian Epidemiologi Beberapa Penyakit Infeksi  Daerah  Khusus  Ibu  Kota  Jakarta,  Penerbit Departemen Kesehatan DKI Jakarta tahun 2010 Djordjevic D, Wiedmann M, McLandsborough LA. 2002. Microtiter plate assay for assessment of Listeria monocytogenes biofilm
Volume 7, No.2, September 2014 Biomedika    9
formation. Appl Environ Microbiol 68:2950-2958.de Kievit TR, Iglewski  BH.  2000,  Bacterium  quorum  sensing  in  pathogenic relationships. Infect Immun; 68(9):4839–49 Kool,  DH,  Mitzuarees  MJ,  Bassler  BL.2003,  Interspecies communication in bacteria. J Clin Invest 2003; 112:1291–9 Fuqua, C., Winans, S. C. & Greenberg, E. P. (1997). Quorum sensing in bacteria: the LuxR–LuxI family of cell density- responsive transcriptional regulators. J Bacteriol 176, 269- 275
Gunawan, D. dan S. Mulyani. 2004. Ilmu Obat Alam (Farmakognosi) Jilid 1. Penebar Swadaya. Jakarta. 140 hlm.
Janssens,  J.  C. A.,  Steenackers,  H.,  Robijns,  S.,  Gellens,E.,  Levin, J.,  Zhao,  H.,  Hermans,  K.,  Coster,  D.  D.,Verhoeven,  T.  L., Marchal, K., Vanderleyden, J.,Vos, D. E. D. and Keersmaecker, S.  C.  J.  D.  2008.Brominated  furanones  inhibit  biofilm formation  by Salmonella  enterica serovar  Typhimurium. Appliedand Environmental Microbiology 74 (21): 6639-6648. Jawetz, Melnick, Adelberg, 2008, Mikrobiologi Kedokteran (Medical Microbiology) Ed. 22., EGC, Jakarta Kemenkes RI, (2012); Laporan Epidemiologi beberapa kasus infeksi Endemis di Indonesia tahun 2012, Cermin Dunia Kedokteran Vol. 35, No.5, Edisi Jauari –Maret 2013. Koo H, B. Schobel, K. Scott-Anne, G. Watson, W. H. Bowen, J. A. Cury,P. L. Rosalen,and Y. K. Park, 2005., Apigenin and tt- Farnesol with Fluoride on S. mutans Biofilm and Dental Caries., J Dent Res. Author manuscript; available in PMC 2006 July 10., Published in final edited form as: J Dent Res. 2005 November; 84(11): 1016–1020., http://www.ncbi.nlm. nih.gov/pmc/articles/PMC1490022  (Diunduh  03  desember 2013)
Kroupitski, Y., Pinto, R., Brandl, M., Belausov, E. andSela, S. (2009)  Interactions  of Salmonella  enterica with  lettuce leaves. Journal of Applied Microbiology106: 1876-1885. Lapidot, A., Romling, U. and Yaron, S. 2006. Biofilmformation and  the  survival  of Salmonella Typhimuriumon  parsley. International Journal of Food Microbiology109: 229-233. Listyasari,  NA.,  2012,  Pengaruh  pasta  gigi  dengan  kandungan propolis terhadap pembentukan plak, e-journal Media Medica Muda FK - Universitas Diponegoro. http://ejournal-s1.undip. ac.id/index.php/medico/article/viewFile/1924/1922  (diunduh 6 Desember 2013).
Magdalena, dan  Yogiara, 2006., Screening of Bioactive Compound from Plant Extract Inhibiting Biofilm Formation ". Proseding PERMI tahun 2006.
Manijeh,  M.,  Mohammad,  J.  and  Roha,  K.  K.  2008.Biofilm formation by Salmonella enteritidi s on foodcontact surfaces. Journal of Biological Sciences 8 (2):502-505.
Mustika  F.,  2009.,    Isolation  and  screening  of  Biofilm  forming bacteria for optimation of biofilm production by addition of sugar and antibiotics variation and its concentration in Nile tilapia  oral  vaccines  development  ( Oreochromis  niloticus Lac), School of Life Sciences andTechnology- ITB
Oliveira, K., Oliveira, T., Teixeira, P., Azeredo, J.,Henriques, M. and Oliveira, R. 2006. Comparison ofthe adhesion ability of different Salmonella Enteritidisserotypes  to  materials  used in kitchens. Journal ofFood Protection 69: 2352-2356.
Pui,  C.  F.,  Wong,  W.  C.,  Chai,  L.  C.,  Lee,  H.  Y.,  Nillian,  E., Ghazali F. M., Cheah, Y. K., Nakaguchi, Y., Nishibuchi,M. and  Radu,  S.  2011.  Simultaneous  detection  of Salmonella spp .,  Salmonella Typhi  and  S almonella Typhimurium  in sliced fruits using multiplex PCR.Food Control 22: 337-342. Rahayu DE., 1999., Kandungan Kimiawi Tanaman Obat Indonesia., Penerbit Pelita Karya Pustaka., Surabaya – Indonesia. Rasmussen  TB,  Thomas  Bjarnsholt,  Mette  Elena  Skindersoe, Morten  Hentzer,Peter  Kristoffersen,  Manuela  Ko¨te,  John Nielsen, Leo Eberl, and Michael Givskov1, 2005., Screening for  Quorum-Sensing  Inhibitors  (QSI)  by  Use  of  a  Novel., Genetic System, the QSI Selector Journal of Bacteriology , Mar. 2005, p. 1799–1814 Vol. 187, No. 5 0021-9193/05/$08. 00_0  doi:10.1128/JB.187.5.1799–1814.2005.,  American Society for Microbiology. All Rights Reserved.
Rukayadi  Y,  Hwang  JK.  2006.  Effect  of  xanthorrhizol  on Streptococcus mutans biofilm in vitro. J Mikrobiol Indones (11):40-43.
Rukayadi Y dan Hwang Jae Kwan, 2009., Pencegahan Quorum Sensing:  Suatu  pendekatan  baru  untuk  mengatasi  infeksi bakteri., Cermin  Dunia  Kedokteran Vol.  22,  No.1,  Edisi Maret - Mei 2009.
Soewito, DS.M., 2009. Memanfaatkan Lahan-6 : Bercocok Tanam Seledri. Titik Terang, Jakarta.
Suwanto, A., 2005 Strategi Baru Mengendalikan Penyakit Infeksi, http:/www.kompas.com/kompas-cetak/0211/081/iptek/mema 36.htm (20 Mei 2011).
Taga ME, Semmelhack JL, Bassler BL, 2005,. The LuxS-dependent autoinducer AI-2 controls the expression of an ABC transforter that functions in AI-2 uptake in Salmonella typhimurium . Mol Microbiol 2005 ; (42):77-93 Wahyudi D., Sutarno, Pangastuti A, 2010 Penghambatan Sistem Quorum  Sensing  Pseudomonas  aeruginosa  Oleh  ekstrak Lengkuas (Alpinia galangga L ), Simposium Penelitian bahan Obat Alami XV; UNS Press.
White, A.P.,  Gibson,  D.L.,  Collinson,  S.K.,  Banser,  P.A.,  Kay, W. W.,  2003.Extracellular  polysaccharides  associated  with  thin aggregative fimbriae of Salmonella enterica serovar Enteritidis. J. Bacteriol. 185, 5398–5407.
Wijiono, 2009, Pencegahan Biofilm Ggigi dengan Apigenin dan tt-farnesol, Penerbit Universitas Sumatra Utara Zogaj, X., Nimtz, M., Rohde, M., Bokranz, W., Romling, U., 2001. Themulticellular  morphotypes  of  Salmonella  typhimurium and Escherichia coliproduce cellulose as the second component of the extracellular matrix. Mol.Microbiol. 39, 1452–1463.
10    DIDIK WAHYUDI
Biomedika