Potensi Ekosistem Mangrove Sebagai Sumber Bakteri Untuk Produksi Protease, Amilase Dan Selulase

## Subagiyo*, Muhammad Salauddin Ramadhan Djarod dan Wilis Ari Setyati
Departemen Ilmu Kelautan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Diponegoro Jl. Prof. Soedarto, SH. Kampus UNDIP Tembalang, Semarang 50275 Email : subagiyo.kelautan13@gmail.com

## Abstract
The mangrove ecosystem is a productive ecosystem. The production and accumulation of  organic  matter  on  the  floor  of  the  mangrove  ecosystem  allows  this  region  to  be  rich  in microbials that are potential to be developed as a source of a wide range of extra cellular enzymes.  In  this  research,  bacteria  were  isolated  and  used  as  the  source  of  enzyme.  The bacteria were isolated from the existing mangrove sediments on the north coast of Semarang, Central Java. The bacterial potential as a source of protease, amylase and cellulase is done semiquantitatively using well diffusion agar method. The results obtained 18 bacteria isolates which were all capable to produce amylase and cellulase, but only 7 isolates were able to produce proteases. Five isolates had amylase activity above 300 mm2 / ml, three isolates with protease activity above 300 mm2 / ml and 2 isolates with cellulase activity of 225.40 and 204.50 mm2 / ml. Seven isolates are capable of producing amylase, protease and cellulase. The results showed  that  mangrove  ecosystem  is  a  potential  source  of  microbes  to  produce  enzymes protaese, amylase and cellulase and also possible for various other extracellular enzymes.
Keyword : bacteria, mangrove, protease, amylase, cellulose

## Abstrak
Ekosistem  mangrove  merupakan  ekosistem  produktif.  Produksi  dan  akumulasi  bahan organik  di  lantai  ekosistem  mangrove  memungkinkan  daerah  ini  kaya  akan  mikrobia  yang potensial untuk dikembangkan sebagai sumber berbagai macam enzim ekstra seluler. Pada penelitian  ini  dilakukan  isolasi  bakteri  sebagai  sumber  enzim.  Bakteri  diisolasi  dari  sedimen mangrove yang ada di pantai Utara Semarang, Jawa Tengah. Pengujian potensi bakteri ini sebagai  sumber  protease,  amilase  dan  selulase  dilakukan  secara  semikuantitatif menggunakan  metode well  diffusion  agar .  Hasil  penelitian  mendapatkan  18  isolat  bakteri yang  seluruhnya  mampu  memproduksi  amylase  dan  selulase,  tetapi  hanya  7  isolat  yang mampu memproduksi protease. Lima isolat memiliki aktivitas amylase diatas 300 mm 2 /ml, tiga isolat dengan aktivitas protease diatas 300 mm 2 /ml dan 2 isolat dengan aktivitas selulase yaitu sebesar 225,40 dan 204,50 mm 2 /ml. Tujuh isolat  yang mampu menghasilkan amylase, protease dan selulase. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekosistem mangrove merupakan sumber potensial  mikrobia  untuk  menghasilkan  enzim  protaese,  amylase  dan  selulase  serta  juga dimungkinkan untuk berbagai macam ensim ekstraseluler lainnya.
Kata kunci : bakteri, mangrove, protease, amylase dan selulase

## PENDAHULUAN
Lahan  lantai  hutan  mangrove  kaya akan  bahan  organik  yang  berasal  dari produksi  seresahnya  (Aida, et  al., 2014  ; Andrianto, et  al., 2015).  Di  pantai  Utara
Jawa Tengah kawasan mangrove biasanya berada atau berdekatan dengan pemukiman dan aktivitas produktif seperti  budidaya  perikanan,  industri pengolahan  hasil  perikanan,  pelabuhan pendaratan ikan. Oleh karena  itu kawasan
mangrove ini mendapat tekanan anthropogenik  yang  tinggi.  Kondisi  ini menjadi  faktor  seleksi  alam  terhadap keragaman mikrobia yang ada di sedimen mangrove.  Seperti  diketahui  bahwa ekosistem  mangrove  merupakan  sumber berbagai mikrobia yang mampu mengha- silkan  enzim  dan  molekul-molekul  yang bermanfaat  bagi  kehidupan  manusia, pertanian, perikanan, industri dan bioremediasi (Dourado et al., 2012; Dias et al., 2009).  Enzim  ekstraseluler  diproduksi oleh  mikrobia    digunakan  untuk mengurai material nutrient organik kompleks menjadi sederhana  sehingga  dapat  di  transport masuk  ke  dalam  sel  sebagai  sumber nutrisinya. Kompleksitas ekosistem mangrove dengan tekanan anthropegenik ini  mengharuskan  mikrobia  menghasilkan enzim  ekstraseluler  yang  mampu  bekerja dalam  kondisi  yang  kompleks  ini.  Enzim adalah  protein  fungsional  yang  sensitive terhadap  faktor  lingkungan,  sehingga enzim yang dihasilkan oleh mikrobia dalam kompleksitas  ekosistem  merupakan  enzim yang  memiliki  toleransi  yang  tinggi terhadap faktor lingkungan. Pada penelitian  ini  dilakukan  kajian  mengenai potensi bakteri mangrove sebagai sumber selulase.  Selulase  merupakan  salah  satu industrial enzyme utama dengan pemanfaatan yang beragam seperti pada industri  pengolahan  kapas,  daur  ulang kertas,  formulasi  pada  detergen,  ekstraksi jus,  aditif  pada  pakan  ternak,  serta aplikasinya  dalam  bioteknologi  pertanian dan juga bioenergi (Phitsuwan, et al., 2013). Protease  dimanfaatkan  secara  beragam pada  berbagai  industri  seperti  detergen, kulit,  makanan,  farmasi,  tekstil,  dan  proses bioremediasi  (Hamza,  2017).  Amilase dimanfaatkan dalam dunia industri meliputi  diantaranya  konversi  pati,  industri detergen, produksi alkohol, industri makanan, tekstil dan kertas (de Souza & E Magalhães, 2010).
Ekosistem  mangrove  merupakan sumber potensial bakteri penghasil proteinase,  amylase  dan  selulase.  Hal  ini terkait  dengan  protein,  karbohidrat  dan selulosa  yang  melimpah  di  sedimen mangrove.  Hasil  penelitian  Aida et  al., menunjukkan  bahwa  komponen  utama seresah  mangrove  adalah  daun  (Aida ,  et
al., 2014  dan  Andrianto,  2015).  Daun mangrove Avicenia marina mengandung selulosa  sebanyak  19  %,  total  gula  4,6  % (Mouafi et  al., 2013).  Sehingga  ekosistem mangrove  merupakan  sumber  penting bacterial proteinase, amylase dan selulase. Pentingnya enzim mikrobia dan bioteknologinya  telah  direview  untuk selulase (Behera et al., 2016), amylase (de Souza & e Magalhães,  2010 dan Dar et al.,
2014), dan protease ( Mienda et al., 2014 ; Sawant & Nagendran,  2014  dan  Hamza, 2017).

## MATERI DAN METODE

## Pengambilan Sampel Sedimen
Sampel
sedimen ekosistem mangrove  diambil  di    Daerah  Tugurejo, Kecamatan  Tugu,  Kota  Semarang,  Jawa Tengah.  Pengambilan  sampel  dilakukan menggunakan  sekop dengan  kedalaman ±10  cm.  Sampel  yang  didapatkan kemudian  dimasukkan  kedalam  plastik zipplock dan  dimasukkan  ke  dalam coolbox .
Isolasi  bakteri  dilakukan  dengan teknik pour  plate menggunakan  media deMann  Rogosa  Sharpe  (MRS)  yang diperkaya  dengan  CaCO 3 1%.  Sepuluh gram sampel sedimen dihomogenasikan di dalam  90  mL  larutan  garam  fisiologis kemudian dibuat seri pengenceran hingga 10 3 .    Tiap  seri  pengenceran  dilakukan penanaman di dalam media MRS+CaCO 3 dengan metode pour plate dan di inkubasi selama  24  jam  pada  suhu  kamar.  Koloni- koloni  bakteri  yang  tumbuh  di  pilih  yang membentuk zona bening (indikator sebagai  bakteri  asam).  Tiap-tiap  koloni dimurnikan dengan teknik streak plate.
Isolat-isolat  bakteri  diuji  kemampuan menghasilkan  enzim  proteolitik,  amilolitik dan selulolitik dengan metode well diffusion agar .  Kultur  isolat  uji  umur  24  jam disentrifugasi  pada  kecepatan  5.000  rpm. Seratus  l supernatant dipipetkan ke dalam sumuran  yang  dibuat  dalam  medium  uji (medium  Zobell  yang  diperkaya  dengan skim  milk  1%  digunakan  untuk  uji  akitivitas protease,  medium  Zobell  yang  diperkaya dengan soluble starch 1% digunakan untuk
uji  akitivitas  amilale,    medium  Zobell  yang diperkaya  dengan  CMC  1%  digunakan untuk  uji  akitivitas  selulase).  Inkubasi dilakukan selama 24 jam pada suhu kamar. Aktivitas  proteolitik  ditunjukkan  dengan munculnya zona bening disekitar sumuran. Aktivitas  amylase  dilakukan  dengan menuangkan larutan iodin 1% ke permukaan  medium  agar.  Terbentuknya zona bening menunjukkan adanya aktivitas  amylase.  Aktivitas  selulase  di diamati  dengan cara meneteskan larutan iodin 1% ke permukaan medium agar dan
kelebihannya dibuang. Terbentuknya zona bening  menunjukkan  adanya  aktivitas selulase.  Aktivitas  enzim  dihitung  sebagai selisih luas zona hidrolisis dengan luas paper disk per ml supernatant kultur.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  isolasi    bakteri  dari  sedimen mangrove  diperoleh  18  isolat  yang berbeda  berdasarkan  karakter  morfologi koloni yang meliputi warna, bentuk, elevasi, permukaan dan margin (Tabel 1).
Gambar 1. Peta lokasi pengambilan sampel
Tabel 1. Karakterisasi  Koloni  Isolat  Bakteri  Penghasil  Asam  dari  Sedimen  Mangrove  di Daerah Semarang, Jawa Tengah No Kode bakteri Warna Bentuk Elevasi Permukaan Margin 1 SMM 1.1 PT Circular Flat HM Entire 2 SMM 1.2 PS Irregular Raised HM Undulate 3 SMM 1.3 PS Irregular Flat HM Undulate 4 SMM 1.4 PB Circular Flat HM Entire 5 SMM 1.5 PS Circular Flat HM Entire 6 SMM 2.4 PT Irregular Flat HM Undulate 7 SMM 3.5 PS Circular Flat HM Lobulate 8 SMT 1.2 PS Irregular Flat HM Entire 9 SMT 1.3 PS Circular Flat HM Entire 10 SMT 1.5 PS Irregular Flat HM Lobulate 11 SMT 1.6 PS Filamentous Flat HM Lobulate 12 SMT 1.7 PT Irregular Flat HM Lobulate 13 SMT 2.5 PT Circular Flat HM Entire 14 SMT 2.6 PT Irregular Raised HM Undulate 15 SMT 2.7 PT Irregular Raised HM Lobulate 16 SMT 3.5 PS Irregular Flat HM Undulate 17 SMT 3.6 PS Circular Raised HM Entire 18 SMT 4.5 PS Irregular Raised HM Lobulate
Keterangan:
SMM merupakan isolat bakteri penghasil asam yang didapatkan dari sedimen mangrove Maron, sedangkan SMT  merupakan  isolat  bakteri  penghasil  asam  yang  didapatkan  dari  sedimen  mangrove  Tapak  Daerah Tugurejo, Kota Semarang, Jawa  Tengah. PT = Putih Tulang, PS =  Putih Susu, PB = Putih Bening, HM = Halus Mengkilap
Hasil  isolasi  bakteri  dari  sedimen mangrove diperoleh 18 isolat yang memiliki kenampakan  koloni  yang  berbeda.  Hasil karakterisasi  koloni  isolat  disajikan  pada Tabel 1.
Hasil  uji  produksi  amilase,  protease dan selulase terhadap 18 isolat menunjukkan
seluruhnya
mampu memproduksi amylase dan selulase, tetapi hanya 7 isolat yang mampu memproduksi protease. Aktivitas amilase ditunjukkan dari luas zona hidrolisis yang terbentuk dari 1 ml supernatant kultur isolat uji. Pada pengujian ini  aktivitas  amylase  dari  18  isolat  berkisar antara 12.690 sampai 47.800 cm 2 /ml.
Berdasarkan hasil perhitungan
besarnya  aktivitas  hidrolitik  enzim  amylase diperoleh  5  isolat  dengan  aktivitas  yang diatas  300  mm 2 /ml  yaitu  SMT  1.6,  SMT  4.5, SMT  1.5,  SMT  2.5,  dan  SMM  1.3,    berturut- turut  dengan  aktivitas  sebesar  478,20; 470,90; 331,30; 323,50 dan 302,40 mm 2 /ml.
Aktivitas  terendah  ditunjukkan  oleh isolat SMM 1.1 yaitu sebesar 126,9 mm 2 /ml. Tiga isolat dengan aktivitas protease diatas 300  mm 2 /ml  SMT  3.5,  SMT  4.5  dan  SMT  3.6 dengan  aktivitas  berturut-turut  sebesar 457,10 ;  406,30 dan  333,40 mm 2 /ml. Isolat yang  menghasilkan  protease  dengan
aktivitas  terendah  adalah  SMM  1.3  yaitu 175,80  mm 2 /ml.  Tidak  ada  satupun  isolat yang  menghasilkan  selulase  dengan aktivitas  diatas  300  mm 2 /ml.  Aktivitas selulase tertinggi dihasilkan oleh isolat  SMT 2.5 dan SMM 2.4 yaitu  sebesar 225,40 dan 204,50  mm 2 /ml.  Pada  penelitian  ini diperoleh  7  isolat    yang  mampu menghasilkan ke tiga jenis enzim yaitu  SMM 1.2, SMM 1.3, SMT 1.3, SMT 2.7, SMT 3.5, SMT 3.6 dan SMT 4.5.
Isolat bakteri mangrove yang memiliki  kemampuan  menghasil  beragam enzim    juga  dilaporkan  oleh  para  peneliti. Tabao et  al (2010)  melaporkan  10  isolat bakteri penghasil selulase yang diisolasi dari berbagai  lokasi  mangrove  di  Filipina. Thompson et  al (2013)  juga  melaporkan isolat  bakteri  selulolitik  dari  mangrove  di Brazil,  Castro, et  al  ( 2014)    mendapatkan bakteri  yang  diisolasi  dari  ekosistem mangrove  Brazil  mampu  menghasilkan protease  dan  amylase.  Foophow  & Tangjitjaroenkun  (2014)  mengidentifikasi jenis-jenis Bacillus yang
mampu menghasilkan enzim proteolitik diisolasi dari sedimen  hutan  mangrove  Chanthabur. Kanimozhi et  al. (2014)  mengidentifikasi jenis-jenis Bacillus penghasil  amilase  dari Muthupettai  mangroves,  India.  Sonawale et  al. (2016)  memperoleh  7  isolat bakteri
Tabel 2. Karakterisasi Koloni Isolat Bakteri Penghasil Asam dari Sedimen Mangrove di Daerah Semarang, Jawa Tengah
Kode Isolat Aktivitas Enzim Ekstraseluler (cm²/ml) Amilase Protease Selulase SMM 1.1 126,9 ± 01,8 0 82,3 ± 12,9 SMM 1.2 242,6 ± 36,3 183,7 ± 6,3 112,5 ± 15,2 SMM 1.3 302,4 ± 17,1 175,8 ± 8,4 94,2 ± 18,3 SMM 1.4 209,1 ± 7,9 0 103,5 ± 4,5 SMM 1.5 214,8 ± 11,3 0 49,1 ± 16,9 SMM 2.4 225,6 ± 16,2 0 204,5 ± 29,4 SMM 3.5 261,5 ± 13,3 0 147,1 ± 33 SMT 1.2 193,5 ± 24,2 0 155,4 ± 30,8 SMT 1.3 259,7 ± 41,9 243,4 ± 3,2 92,3 ± 8,5 SMT 1.5 331,3 ± 40,6 0 105,6 ± 19,5 SMT 1.6 478,2 ± 65,2 0 118,9 ± 7,4 SMT 1.7 284,2 ± 46,3 0 66,4 ± 17,2 SMT 2.5 323,5 ± 10,18 0 225,4 ± 3,7 SMT 2.6 285,2 ± 2,97 0 103,1 ± 3,3 SMT 2.7 210,0 ± 0,51 287,1 ± 25,5 134,9 ± 4,3 SMT 3.5 291,9 ± 3,62 457,1 ± 29,5 121,4 ± 4,7 SMT 3.6 183,6 ± 14,67 333,4 ± 63,6 110,6 ± 1,2 SMT 4.5 470,9 ± 2,34 406,3 ± 3,8 935 ± 6,1
penghasil  selulase  dan  3  isolat  bakteri penghasil  amilase  dari  mangrove  di Ratnagairi,  India.  Chantarasiri  (2016) mengidentifikasi Bacillus  cereus yang memiliki aktivitas selulase dari mangrove di Thailand.  Bibi et  al (2017)  mengidentifikasi 14 bakteri selulotik, 4 proteolitik dan 9 isolat amilolitik dari ekosistem mangrove Thuwal, Jeddah, Saudi Arabia.
Berdasarkan besarnya aktivitas hidrolisis yang dihasilkan isolat SMT 1.6, SMT 4.5, SMT 1.5, SMT 2.5, dan SMM 1.3 potensial untuk  dikembangkan  menjadi  sumber amylase  untuk  berbagai  kebutuhan industri.  Amilase  adalah  enzim  hidrolisis yang telah lama dikenal dan diaplikasikan di bidang industri. Enzim ini secara random memecah  ikatan  glikosida  pada  molekul pati dan menghidrolisisnya dan menghasilkan  dekstrin  dan  oligosakarida (Sundarram, et  al., 2014).  Isolat  SMM  2.4 dan SMT 2.5 potensial untuk dikembangkan sebagai  sumber  selulase.  Selulase  adalah keluarga  dari    sekurang-kurangnya    3 kelompok enzim  endo-(1,4)- β -D-glucanase (EC  3.2.1.4),  exo-(1,4)- β -D-glucanase  (EC 3.2.1.91), dan β -glucosidases (EC 3.2.1.21). Eksoglukanase  bekerja  di  kedua  ujung rantai  selulosa  dan  menghasilkan β - cellobiose, endoglukanase sevara random memecah ikatan O -glycosidic dan menghasilkan  rantaian  glukan  dengan panjang  yang  bervariasi, β -glycosidases secara spesifik bekerja pada disakarida β - cellobiose  dan  menghasilkan  glukosa (Kuhad et al., 2011).
Berdasarkan hasil penelitian ini maka disimpulkan  bahwa  ekosistem  mangrove merupakan  sumber  bakteri  yang  memiliki kemampuan menghasilkan berbagai macam  enzim  ekstraseluler  khususnya protease,  amylase  dan  selulase  yang memiliki  nilai  penting  di  bidang  industri. Pada penelitian ini isolasi bakteri dilakukan di  sedimen  lantai  ekosistem  mangrove, sehingga potensi bagian lain ekosistem ini masih  memberikan  peluang  diperolehnya keragaman  bakteri  dengan  berbagai aktivitas enzim ekstraselulernya.

## DAFTAR PUSTAKA
Aida,  G.R.,  Wardiatno,  Y.,  Fahrudin,  A.,
Mohammad  &  Kamal,  M.,  2014.
Produksi  Serasah  Mangrove  Di  Pesisir Tangerang,  Banten. J.  Ilmu  Pertanian Indonesia . 19(2):91-97
Andrianto,  F.,  Bintoro,  A.  &  Yuwono,  S.B., 2015.  Produksi  Dan  Laju  Dekomposisi Serasah Mangrove (Rhizophora Sp.) Di Desa  Durian  Dan  Desa  Batu  Menyan Kecamatan Padang Cermin Kabupaten  Pesawaran. Jurnal  Sylva Lestari. 3(1):9-20.
Behera, B.C.,  Sethi, B.K., Mishra, R.R., Dutta, S.K.  &  Thatoi,  H.N.,  2017.    Microbial cellulases  –  Diversity  &  biotechnology with reference to mangrove environment: A review. J. Genetic Eng. Biotechnol. 15:197–210 Bibi, F.,  Ullah, I., Alvi, S.A., Bakhsh, S.A., Yasir,
M.,  Al-Ghamdi,  A.A.K.  &  Azhar,  E.I., 2017. Isolation, diversity, and biotechnological  potential  of  rhizo- and  endophytic  bacteria  associated with  mangrove  plants  from  Saudi Arabia. Genetics  and  Molecular  Res.
16:(2). DOI : 10.4238/gmr16029657
Castro, R. A., Quecine, M. C., Lacava, P. T.,
Batista, B. D., Luvizotto, D. M., Marcon, J. &  Azevedo, J. L. 2014. Isolation and enzyme bioprospection of endophytic bacteria  associated  with  plants  of Brazilian
mangrove
ecosystem.
SpringerPlus . 3:382. DOI : 10.1186/2193- 1801-3-382
Chantarasiri,  A.,  2015,  Aquatic  Bacillus cereus  JD0404  isolated  from  the muddy  sediments  of  mangrove swamps in Thailand and
characterization  of  its  cellulolytic activity. Egyp.  J.  Aquatic  Res. 41:257– 264
Dar, G.H., Kamili, A.N.,  Nazir, R., Bandh, S.A.
&  Malik,  T.A.,  2014.  Biotechnological Production Of Α-Amylases For Industrial Purposes : Do Fungi Have Potential To Produce  Α-  Amylases,  International J. Biotechnol. Molecul. Biol. Res. 5(4):35-40 De  Souza,  P.M.  &  Magalhães,  P.De.O.E 2010.  Application  Of  Microbial  β- Amylase In Industry: A Review. Brazilian J. Microbiol. 41: 850-861
Dias, A.C.F,   Andreote, F.D.,   Dini-Andreote, F.,  Lacava,  P.T.,  Sá,  A.L.B.,  Melo, I.S.,  Azevedo,  J.L.  &  Araújo,  W.L.  2009.
Diversity And Biotechnological
Potential  Of  Culturable  Bacteria  From
Brazilian Mangrove Sediment. World J. Microb. Biot . 3(7):1305–1311. Dourado,  M.N.,  Ferreira,  A.,  Araújo,  W.L., Azevedo, J.L., & Lacava, P.T., 2012.  The Diversity Of Endophytic Methylotrophic Bacteria  In  An  Oil-Contaminated  And An  Oil-Free  Mangrove  Ecosystem  And Their  Tolerance  To  Heavy  Metals. Biotechnol. Res. Int. DOI : 10.1155/2012
/759865
Hamza,  T.A.,  2017.  Bacterial  Protease Enzyme:  Safe  And  Good  Alternative For Industrial And Commercial Use. Int. J. Chem. Biomol. Sci. 3(1):1-10 Kanimozhi,  M.,  Johny,  M.,  Gayathri,  N.  & Subashkumar,  R.,  2014.  Optimization and  Production  of  α  -Amylase  from Halophilic Bacillus Species  Isolated from  Mangrove  Soil  Sources. J.  App. Environ. Microbiol. 2(3):70-73 Mienda,  B.S.,  Yahya,  A.,  Galadima,  I.A.  & Shamsir,  M.S.    2014.  An  Overview  Of Microbial  Proteases  For  Industrial Applications. Res.  J.  Pharma.  Biol. Chem. Sci. 5(1):388- 396
Mouafi, F.E., Aziz, S.M.A. & Bashir, A.A. 2013. Nutritive  Value  Of  Ensiled  Mangrove Leaves  By Lactobacillus  Plantarum I.
Fermentation
Characteristics And
Chemical  Composition. World  App. Sci. J. 28(4):499-508
Phitsuwan, P., Laohakunjit, N., Kerdchoechuen,  O.,  Kyu,  K.L.  & Ratanakhanokchai,  K.  2013.  Present And Potential Applications Of
Cellulases  In  Agriculture. Biotechnol. Bioenergy  Folia  Microbiol. 58(2):163– 176
Sawant, R. & Nagendran, S. 2014. Protease: An  Enzyme  With  Multiple  Industrial Applications. World J.
Pharm.
Pharmaceut. Sci. 3(6):568-579.
Sonawale,  S  B.,  2016.  Studies  on  Enzymes Extracted From Microbes Isolated From Mangrove  Sediments. Res  J.  Chem. Environ. Sci. 4(2): 27-31 Tabao,  N.S.C.  &  R.G.  Monsalud.  2010.
Screening And Optimization Of
Cellulase  Production  of Bacillus Strains Isolated  From  Philippine  Mangroves, Philippine J. Systematic Biol. Vol. IV. Thompson,  C.E.,  Beys-da-Silva,  W.O.,  Santi,
L.,  Berger,  M.,  Vainstein,  M.H.,  Guima rães, J.A. & Vasconcelos, A.T.R.,  2013. A  potential  source  for  cellulolytic enzyme  discovery  and  environmental aspects revealed
through metagenomics of Brazilian mangroves,
AMB Express. 3:65.