## PENGARUH PEMBERIAN VAKSIN WHOLE CELL Aeromonas hydrophilla DENGAN DOSIS YANG BERBEDA TERHADAP KELULUSHIDUPAN DAN TOTAL LEUKOSIT IKAN GURAMI (Osphronemus gouramy)
Effect of Different Dose Whole Cell Aeromonas hydrophilla  Vaccine to Survival Rate and Total Leucocyte Osphronemus gouramy
Linnya Prima Agustin 1 *, Rahayu Kusdarwati 2 dan Gunanti Mahasri 2
1 Program Studi Budidaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Kelautan, Universitas Airlangga, Surabaya
2 Departemen Manajemen Kesehatan Ikan dan Budidaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Kelautan, Universitas Airlangga, Surabaya *linnyaprima@gmail.com

## Abstrak
Budidaya ikan gurami telah menyebar ke seluruh Indonesia, bahkan sentra budidaya ikan gurami tidak hanya di Jawa tetapi juga di luar Jawa.  Salah satu kendala dalam budidaya ikan gurami adalah menurunnya jumlah produksi yang disebabkan oleh penyakit  bakterial. Salah satu penyebab penyakit pada ikan gurami adalah bakteri A.  hydrophila. Penyakit ini dapat menyebabkan wabah pada budidaya ikan air tawar dengan tingkat kematian yang tinggi berkisar 80-100% dalam kurun waktu 1-2 minggu. Pencegahan yang efektif terhadap penyakit tersebut adalah vaksinasi. Vaksinasi dapat meningkatkan kekebalan tubuh ikan terhadap suatu patogen tertentu, sehingga angka kematian dapat ditekan sekecil mungkin. Penelitian ini dilakukan dengan tujuan untuk mengetahui pengaruh perbedaan dosis vaksin whole cell A. hydrophilla terhadap kelulushidupan ikan gurami, total leukosit ikan gurami, dan dosis optimum vaksin. Metode penelitian mengunakan metode eksperimental Rancangan Acak Lengkap dengan enam perlakuan serta tiga ulangan. Perlakuan yang diberikan adalah perbedaan dosis vaksin A (Kontrol -), B (Kontrol +), C (10 5 sel/ml), D (10 6 sel/ml), E (10 7 sel/ml), dan F (10 8 sel/ml). Parameter utama yang diamati adalah kelulushidupan,  total leukosit  dan gejala klinis. Parameter pendukung adalah kualitas air pada media pemeliharaan. Perhitungan kelulushidupan dilakukan pada akhir penelitian. Perhitungan total leukosit dilakukan pada hari ke-0, hari ke-7, hari ke-14, dan hari ke-21. Pengamatan gejala klinis dilakukan setelah uji tantang selama satu minggu. Berdasarkan hasil penelitian, perbedaan  dosis vaksin berpengaruh nyata (p<0,05) terhadap kelulushidupan dan total leukosit ikan. Kelulushidupan tertinggi diperoleh pada perlakuan D yaitu 54,17%. Total leukosit tertinggi diperoleh pada perlakuan D (20,43x10 3 sel/mm 3 ). Perlakuan D dengan dosis vaksin 10 6 sel/ml memberikan hasil optimum pada kelulushidupan dan total leukosit ikan, meskipun total leukosit antara perlakuan D, E, dan F tidak berbeda nyata tetapi tingkat kelulushidupan ikan tertinggi pada perlakuan D. Gejala klinis ikan kontrol lebih nampak dibandingkan gejala klinis pada ikan yang telah divaksinasi.
Kata Kunci: O. gouramy , Vaksin Whole Cell A. hydrophila , Kelulushidupan, Total Leukosit, Gejala Klinis

## Abstract
O.  gouramy cultivation was in Indonesia, moreover central of  cultivation not only in Java but non Java. One of cultivation constraint is production decrease caused by bacterial. A.  hydrophilla cause of O. gouramy disease. This disease become an epidemic on 1-2 week  in fresh water cultivation with high mortality about 80-100%.  Vaccination is more effective measure to prevent bacterial disease. Vaccination can increase immune system on fish body to specific pathogen and suppress mortality. The research to determine different dose whole cell A. hydrophilla effect of survival rate, total leucocyte O. gouramy, and optimum dose of vaccine. Research method used  an  experimental test with Completely Randomized Design, six treatment with three replication. There are two control and four different dose, A (control -), B (control +), C (10 5 cell/ml), D (10 6 cell/ml), E (10 7 cell/ml), and F (10 8 cell/ml). Main parameter are survival rate of fish, total leucocyte of fish and clinical sign. Second parameter is water quality of cultivation. Survival rate of fish was calculation after finished. Total leucocyte was calculation in day-0, day-7, day-14, and day-21. Monitoring of clinical sign during 7 days  after challenge test. Based on the result of research, different dose of vaccine have significant effect (p<0,05) to survival rate and total leucocyte of fish. The highest of survival rate of fish in treatment D 54,17%. The highest total leucocyte in treatment D (20,43x10 3 cell/mm 3 ). Treatment D with dose vaccine 10 6 sel/ml was given optimum result on survival rate and total leucocyte of fish, although total leucocyte between treatment D,
E, and F not significant but the highest survival rate on treatment D. Clinical sign of fish control more appear than fish which vaccination.
Keywords: O.  gouramy, Whole Cell Vaccine A.  hydrophilla , Survival Rate  of Fish, Total Leucocyte, Clinical Sign

## PENDAHULUAN
Ikan gurami ( O.  gouramy ) meru- pakan salah satu komoditi perikanan air tawar yang cukup penting. Menurut Nugroho (2010), tiga hal yang patut diper- timbangkan untuk mengembangkan budi- daya ikan gurami adalah ikan gurami me- miliki nilai jual tinggi, biaya pemeliharaan relatif rendah dan dapat hidup pada perainan berkadar oksigen rendah. Salah satu kendala dalam budidaya ikan gurami adalah menurunnya jumlah produksi yang disebabkan oleh penyakit bakterial (Setiawan dkk., 2012). Minaka dkk. (2012) melaporkan bahwa salah satu penyebab penyakit pada ikan gurami adalah A. Hydrophila. Bakteri tersebut dapat menye- babkan penyakit Motile Aeromonas Septi- cemia (MAS)  dengan tingkat kematian yang tinggi berkisar 80-100% dalam kurun waktu 1-2 minggu.
Upaya penanggulangan penyakit pada ikan banyak menggunakan antibiotik atau bahan kimia. Hal tersebut dianggap tidak efektif untuk digunakan karena dapat meninggalkan residu pada tubuh ikan sehingga membahayakan bagi manusia yang mengkonsumsinya (Utami dkk., 2013).  Pencegahan yang efektif dilakukan adalah vaksinasi. Vaksinasi dapat menggu- nakan vaksin atau patogen yang telah dilemahkan dengan bahan kimia atau pemanasan. Jenis vaksin yang digunakan dalam penanggulangan penyakit bakteri, antara lain vaksin whole cell (sel utuh), vaksin dari dinding sel bakteri Gram negatif yang masih mengandung lipo- polisakarida (LPS), vaksin dari sitoplasma bakteri, vaksin dari debris dan lain-lain (Mulia, 2006). Pemberian vaksin dapat memicu peningkatan total leukosit ikan, sehingga respon pertahanan tubuh dan tingkat kelulushidupan ikan meningkat (Utami  dkk., 2013). Perhitungan total leu-
kosit ikan merupakan salah satu parameter hematologi yang dapat digunakan sebagai aspek pendukung dalam menentukan status kesehatan ikan dan memastikan diagnosa suatu penyakit (Purwanto, 2006).

## METODOLOGI Waktu dan Tempat
Kegiatan penelitian ini telah  dila- kukan di Balai Karantina Ikan, Pengen- dalian Mutu dan Keamanan Hasil Peri- kanan Kelas I Surabaya II (identifikasi bakteri), Laboratorium Kering dan Labora- torium Basah Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Airlangga (pembua- tan vaksin dan pemeliharaan ikan uji). Penelitian ini telah dilakukan pada bulan Maret - Agustus 2016.

## Materi Penelitian
Peralatan Penelitian Alat yang digunakan adalah akua- rium (60x40x40) cm, alat suntik 1 ml, aerator, gelas objek, gelas penutup, mikro- tube, haemocytometer, pipet bulir penga- duk, mikroskop, hand counter, erlen- mayer, autoclave, hot plate, centrifuge, gelas ukur, tabung reaksi, dan inkubator.

## Bahan Penelitian
Bahan-bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah ikan gurami ukuran 12-13 cm (19,65 gr), darah ikan gurami, Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) kering 1-1,5 mg/ml darah atau cair 0,01 ml/1 ml darah, larutan Turk’s, isolat A. hydrophila, media Tryptic Soy Broth (TSB), Tryptic Soy Agar (TSA), aquadest, Phosphate Buffer Saline (PBS), formalin 2%, dan pakan pelet.

## Metode Penelitian
Penelitian ini menggunakan metode eksperimental dengan rancangan acak
lengkap (RAL) yang terdiri dari enam perlakuan dan tiga kali ulangan. Perlakuan yang diberikan adalah tingkatan dosis vaksin, antara lain A (K-), B (K+), C (10 5 sel/ml), D (10 6 sel/ml), E (10 7 sel/ml), dan F (10 8 sel/ml).  Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh perbedaan dosis vaksin whole cell A. hydrophilla terhadap kelulushidupan, total leukosit dan gejala klinis ikan gurami.

## Prosedur Kerja
Penentuan  Lethal Dose 50 (LD 50 )  A. hydrophilla
Uji patogenisitas menggunakan ikan uji berukuran ±12 cm sebanyak 120 ekor. Ikan gurami diinfeksi dengan A. hydrophilla secara injeksi intraperitoneal dengan dosis 0,1 ml suspensi bakteri dengan kepadatan 0 (kontrol), 10 4 , 10 5 , 10 6 , 10 7 , dan 10 8 sel/ml. Konsentrasi bakteri dihitung dengan spektrofotometer ( λ=625  nm) mengacu pada standar McFarland (Sari  dkk., 2013). Pengamatan dilakukan setiap hari selama 7 hari untuk mengetahui kematian pada masing-masing perlakuan. Perhitungan LD 50 dilakukan dengan metode Reed and Muench (1938). Dosis LD 50 Aeromonas hydrophilla yang diperoleh adalah 8,3023 x 10 5 sel/ml. Hasil tersebut selanjutnya digunakan sebagai dosis untuk uji tantang vaksin. Data mortalitas hasil uji LD 50 dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Data mortalitas pada uji LD 50 Kepadatan Bakteri (sel/ml)  Mortalitas
10 4 13, 3333% 10 5 32,2033% 10 6 51,5625% 10 7 59,6774% 10 8 84,2105%

## Persiapan Wadah
Wadah yang digunakan yaitu akuarium (40x40x60) cm. Akuarium ter- lebih dahulu dibersihkan dan direndam klorin, kemudian dibilas hingga tidak ber- bau klorin dan dikeringkan. Akuarium diisi air setinggi 30 cm dan diberi aerasi.

## Persiapan Ikan Uji
Ikan gurami ( Osphronemus gou- ramy ) dengan ukuran panjang 12,17 cm dan berat 19,65 gr sebanyak 180 ekor atau 10 ekor per akuarium. Ikan diaklimatisasi selama seminggu sebelum  diberikan per- lakuan untuk memberikan waktu pada ikan beradaptasi dengan lingkungan yang baru. Selama masa adaptasi dan perlakuan, ikan diberi pakan pelet sebanyak dua kali sehari (pagi dan sore).

## Kultur Bakteri A. hydrophilla
Isolat bakteri Aeromonas hydro- phila diperoleh dari isolasi pada ikan gurami yang terserang Aeromonas hydro- phila. Isolat tersebut telah di suspect (dikembalikan virulensinya). Isolat bakteri dikultur pada media cair Tryptic Soy Broth (TSB)  10 ml yang dimasukkan ke dalam Erlenmeyer,  kemudian diinkubasi selama 24 jam pada suhu ruang.
Pembuatan Vaksin Whole Cell  A.

## hydrophila
Pembuatan vaksin whole cell A. hydrophila menggunakan metode yang telah digunakan Kamiso dan Triyanto (1990) dalam Mulia (2006). Biakan bakteri dimatikan dengan 2% formalin selama 24 jam. Biakan disentrifus dengan kecepatan 3000 rpm selama 15 menit, selanjutnya supernatan dibuang. Pelet vaksin dicuci dengan Phosphate Buffer Saline (PBS) sebanyak tiga kali masing- masing selama 10 menit dengan kecepatan 1500 rpm.  Konsentrasi bakteri dihitung dengan spektrofotometer ( λ=625  nm) mengacu pada standar McFarland (Sari dkk., 2013) . Uji viabilitas dan keamanan vaksin perlu dilakukan.  Vaksin yang telah diperoleh distreak pada medium spesifik Glutamate Starch Phenol Red Agar (GSP) dan diinkubasi selama 24 jam pada suhu ruang.
Penyuntikan Vaksin Whole Cell A.

## hydrophilla
Penyuntikan vaksin dilakukan se- cara intraperitoneal, dengan enam per-
lakuan yaitu (A) ikan divaksinasi 0,1 ml/ikan (10 5 sel/ml)  tetapi tidak di infeksi Aeromonas hydrophila (kontrol  -), (B) ikan tidak divaksinasi tetapi diinfeksi Aeromonas hydrophila (kontrol +),  (C) kepadatan  10 5 sel/ml dengan volume 0,1ml/ikan, (D) kepadatan 10 6 sel/ml dengan volume 0,1ml/ikan, (E) kepadatan 10 7 sel/ml dengan volume 0,1ml/ikan, dan (F) kepadatan 10 8 sel/ml dengan volume 0,1ml/ikan. Vaksinasi dilakuan pada hari ke-1, kemudian dilakukan booster (vak- sinasi kedua) dengan dosis dan metode yang sama pada hari ke-8.

## Uji Tantang
Ikan gurami yang telah diberi vaksin kemudian diuji tantang dengan cara me- nginfeksikan bakteri A. hydrophila yang telah ditentukan nilai LD 50. Uji tantang dilakukan secara injeksi intraperitoneal dengan dosis 0,1 ml/ikan pada hari ke 15. Ikan yang telah diinjeksi kemudian dipe- lihara selama 7 hari. Selama pemeliharaan dilakukan pengamatan total leukosit, kelu- lushidupan ikan gurami dan gejala klinis. Gejala klinis diamati secara deskriptif selama 7 hari.
Perhitungan kelulushidupan meng- gunakan rumus menurut Zonneveld dkk. (1991) sebagai berikut:
Keterangan: SR  = Survival Rate
Nt  = Jumlah ikan yang hidup pada waktu (t) akhir penelitian N0 = Jumlah Ikan yang hidup pada awal penelitian

## Pengambilan dan perhitungan Darah
Pengambilan darah dilakukan setiap 7 hari sekali sebelum vaksinasi (hari ke-0), setelah vaksinasi (hari ke-7 dan ke-14) dan pasca uji tantang (hari ke-21). alat suntik telah dibilas dengan Ethylenediamine- tetraacetic acid (EDTA) kemudian darah diambil pada bagian vena caudalis yaitu
pembuluh darah yang terletak tepat di bagian ventral tulang vertebra (Maswan, 2009).
Metode perhitungan total leukosit menggunakan metode yang telah diguna- kan oleh Blaxhall and Daisley (1973). Sampel darah dihisap dengan pipet yang berisi bulir pengaduk warna putih hingga skala 0,5 kemudian larutan Turk’s ditam- bahkan hingga skala 11. Pengadukan dila- kukan  di dalam pipet dengan cara menga- yunkan tangan yang memegang pipet seperti membentuk angka delapan selama 3-5 menit hingga darah tercampur rata, kemudian teteskan sampel darah pada haemocytometer dan ditutup dengan gelas penutup. Jumlah total leukosit dihitung sebanyak 4 kotak besar dengan rumus sebagai berikut :
Total Leukosit = jumlah sel leukosit terhitung x 50 sel/mm 3

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Perhitungan kelulushidupan dilaku- kan setelah uji tantang. Perhitungan kelu- lushidupan berdasarkan angka  hidup ikan awal dan akhir penelitian. Data rata-rata kelulushidupan disajikan pada Tabel.2.
Hasil Analisis Varian (ANAVA) dengan selang kepercayaan 95% menun- jukkan bahwa perbedaan dosis vaksin berpengaruh nyata (p<0,05) terhadap kelu- lushidupan ikan gurami. Data rata-rata ke- lulushidupan menunjukkan bahwa kelulus- hidupan tertinggi diperoleh pada perlakuan D yaitu 54,17%. Kelulushidupan yang dihasilkan dalam penelitian ini masih rendah dibandingkan penelitian Mulia (2007) dengan antigen yang sama dan pada ikan yang sama yaitu 58%. Hal ini diduga karena perbedaan ukuran berat ikan gurami. Penelitian Mulia (2007) meng- gunakan berat ikan 28 gr, sedangkan pada penelitian ini menggunakan berat ikan dengan rata-rata 19,65 gr. Berat ikan yang lebih kecil dalam satu spesies menun- jukkan umur yang lebih muda. Ikan muda belum memiliki sitem pertahanan tubuh
yang sempurna. Hal ini dapat diartikan bahwa sistem pertahanan tubuh ikan uji yang digunakan pada penelitian ini lebih rendah dibandingkan dengan ikan yang digunakan pada penelitian Mulia (2007). Menurut Irianto (2005), masing-masing individu memiliki daya tahan tubuh yang berbeda, hal tersebut dipengaruhi oleh beberapa faktor antara lain umur, jenis kelamin, status nutrisi, dan stres.
Perhitungan total leukosit dilakukan pada saat sebelum vaksinasi (H0), setelah vaksinasi pertama (H7), setelah vaksinasi kedua (H14) dan setelah uji tantang (H21) dengan menggunakan metode kamar hitung big block . Data rata- rata total leukosit ikan disajikan pada Tabel.3.
Tabel.2. Data rata-rata kelulushidupan Ikan
Perlakuan Kelulushidupan (%) ± SD Transformasi ± SD A (K-) 41,67 a ± 7,21 6,43 ± 0,54 B (K+) 12,50 b ± 12,50 2,84 ± 2,57 C 37,50 a ± 0,00 6,12 ± 0,00 D 54,17 a ± 7,21 7,34 ± 0,48 E 33, 33 a ± 19,09 5,57 ± 1,83 F 50,00 a ± 21,65 6,93 ± 1,67
Keterangan : Notasi yang ditunjukkan dengan huruf superscript berbeda pada kolom yang sama menunjukkan adanya perbedaan yang nyata (p < 0,05).
Tabel.3. Total leukosit ikan gurami ( Osphronemus gouramy ) Perlakuan Peningkatan Total Leukosit (x 10³ sel/mm³) ± SD H0 H7 H14 H21 A(K-) 9,46 a ± 0,03 19,55 b ± 0,03 15,67 a ± 0,23 11,18 c ± 0,04 B(K+) 8,35 ab ± 0,03 8,99 d ± 0,04 13,35 a ± 0,05 13,85 b ± 0,01 C (10 5 sel/ml) 7,81 b ± 0,03 18,97 b ± 0,03 15,41 a ± 0,02 10,65 c ± 0,03 D (10 6 sel/ml) 8,93 a ± 0,02 18,83 b ± 0,006 20,43 a ± 0,20 15,08 ab ± 0,05 E (10 7 sel/ml) 8,90 a ± 0,02 27,43 a ± 0,02 14,11 a ± 0,02 17,00 a ± 0,01 F (10 8 sel/ml) 8,67 ab ± 0,01 16,13 c ± 0,01 14,50 a ± 0,05 17,17 a ± 0,03 Keterangan : Notasi yang ditunjukkan dengan huruf superscript berbeda pada kolom yang sama menunjukkan adanya perbedaan yang nyata (p < 0,05).
Hasil Analisis Varian (ANAVA) dengan selang kepercayaan 95% menun- jukkan bahwa perbedaan dosis vaksin berpengaruh nyata (p<0,05) terhadap total leukosit ikan gurami pada H0, H7 dan H21, tetapi tidak berpengaruh nyata (p>0,05) terhadap total leukosit ikan gurami pada H14. Data hasil rata-rata total leukosit ikan gurami sebelum perlakuan (H0) berkisar antara 7,81-9,46  x 10 3 sel/mm 3 , kemudian mengalami pening- katan pasca vaksinasi (hari ke-7). Data hasil rata-rata total leukosit hari ke-7 mengalami peningkatan pada semua per-
lakuan. Peningkatan tersebut berhubungan dengan masuknya benda asing dalam tubuh dan respon leukosit sebagai alat pertahanan tubuh. Hal ini menunjukkan bahwa vaksin whole cell bersifat imuno- genik sehingga berhasil meningkatkan res- pon pertahanan seluler. Alifuddin (2002) menyatakan bahwa vaksin yang diberikan harus bersifat antigenik, imunogenik dan protektif agar memacu terbentuknya respon imun.
Data rata-rata total leukosit hari ke- 14 menunjukkan bahwa total leukosit perlakuan A,C, E, dan F mengalami
penurunan, sedangkan perlakuan B dan D meningkat. Peningkatan total leukosit per- lakuan D sebesar 20,43x10 3 sel/mm 3 me- nunjukkan bahwa dosis vaksinasi 10 6 sel/ml masih mampu memperkuat sistem pertahanan seluler. Penurunan dan pening- katan total leukosit disebabkan perbedaan kemampuan ikan untuk merespon bahan asing yang masuk. Menurut Anderson (1992), respon kekebalan non spesifik dan spesifik dipengaruhi oleh beberapa faktor, salah satunya ialah imunosupresi. Imunosupresi disebabkan oleh dosis yang terlalu rendah atau tinggi, sehingga tubuh ikan tidak mampu merespon rangsangan antigenik yang masuk kedalam tubuh ikan.
Data rata-rata total leukosit hari ke- 21 (pasca uji tantang) menunjukkan terjadinya penurunan total leukosit pada perlakuan C dan D. Penurunan tersebut disebabkan adanya infeksi bakteri. Leu- kosit pada pembuluh darah bergerak menuju jaringan yang terinfeksi untuk melakukan perlawanan terhadap bakteri. Hal tersebut sependapat dengan Utami dkk. (2013) bahwa penurunan total leu- kosit terjadi setelah tujuh hari uji tantang dan sebagian besar leukosit pada pem- buluh darah bergerak menuju jaringan- jaringan yang terinfeksi. Hal berbeda ditunjukkan pada perlakuan B, E dan F. Menurut Nurjannah dkk. (2013), total leukosit ikan meningkat pada hari ke-4 pasca uji tantang, sedangkan pada pene- litian ini leukosit perlakuan B, E, dan F masih meningkat sampai hari ke-7 pasca uji tantang. Total leukosit  pada perlakuan B (kontrol +) meningkat akibat infeksi bakteri, sedangkan perlakuan E dan F diduga akibat pengaruh imunosupresi. Imunosupresi pada tubuh ikan yang divaksinasi dengan dosis 10 7 sel/ml dan 10 8 sel/ml mengakibatkan menurunnya kemampuan tubuh ikan dalam membentuk respon imun yang ditunjukkan dengan rendahnya total leukosit pada hari ke-14. Hal ini menunjukkan bahwa tubuh ikan pada perlakuan yang tidak divaksin maupun yang divaksin dengan dosis 10 7 sel/ml dan 10 8 sel/ml masih lebih banyak
membutuhkan sel fagosit, sehingga tubuh ikan masih memproduksi sel leukosit untuk melawan bakteri yang menginfeksi.
Dosis optimum vaksin diperoleh pada perlakuan D yaitu dosis 10 6 sel/ml, meskipun dilihat dari total leukosit perlakuan E dan F tidak menunjukkan perbedaan yang nyata, tetapi jika dilihat dari kelulushidupan ikan yang tertinggi pada perlakuan D yaitu 54,17%. Ter- bentuknya respon imun tubuh dipicu oleh masuknya antigen ke dalam tubuh kemu- dian dihadapi oleh sel-sel makrofag. Sel makrofag menempel pada antigen dan melakukan fagositosis (Setiawan dkk., 2012). Mekanisme fagositosis diawali dengan adanya sinyal kimiawi yang dilepaskan oleh sel-sel yang berinteraksi dengan antigen. Sinyal tersebut merang- sang peningkatan jumlah neutrofil dan monosit dalam darah, kemudian terjadi kemotaksis dan memasuki jaringan awal masuknya antigen tersebut (Campbell et al., 1999).
Pengamatan gejala klinis pada ikan dilakukan setelah uji tantang. Pengamatan tersebut bertujuan untuk mengetahui peru- bahan pada tubuh ikan baik  ikan kontrol maupun ikan yang telah divaksinasi. Gejala klinis akibat infeksi A. hydrophilla tampak pada hari kedua, yaitu sirip geripis, bercak merah atau hemorragic pada tubuh, sirip berwarna keputih-putihan dan luka pada tubuh. Gejala klinis ikan gurami pasca uji tantang dengan A. hydrophilla dapat dilihat pada Gambar 1.
Menurut Cipriano (2001), ikan yang terserang A. hydrophilla umumnya akan menimbulkan ulcer atau luka pada kulit, ekor, mata, erythrodermatitis , hemo- ragi atau kemerah-merahan pada tubuh. Pada infeksi akut menunjukkan septicemia yang parah.  Minaka dkk.,  (2012) juga mengemukakan bahwa gejala klinis ikan gurami yang terserang A.hydrophila adalah terdapat luka kemerahan (hemoragi) di bagian tubuh, luka-luka di beberapa tubuh, sirip geripis dan berwarna kemerahan. Berdasarkan hal tersebut dapat diketahui bahwa gejala klinis pada ikan gurami yang
telah divaksinasi maupun tidak divaksinasi tidak terlalu parah, namun kondisi ikan
yang divaksinasi lebih baik dibandingkan dengan ikan kontrol.
Keterangan : A : kontrol (-) vaksinasi 10 5 sel/ml tanpa infeksi, B : kontrol (+) tanpa vaksinasi, tapi diinfeksi, C : vaksinasi 10 5 sel/ml dan diinfeksi    D : vaksinasi 10 6 sel/ml dan diinfeksi, E : vaksinasi 10 7 sel/ml dan diinfeksi, dan  F : vaksinasi 10 8 sel/ml dan diinfeksi. Bagian yang dilingkari adalah hemorrhagic dan luka.
Gambar 1. Gejala klinis ikan gurami pasca uji tantang dengan A. Hydrophilla
Ikan gurami dapat hidup pada suhu optimum  27-30 ̊ C, pH 7-8, dan DO 4-5 ppm (Sulhi, 2007). Mulia (2007)
melaporkan bahwa ikan gurami hidup pada kisaran suhu 26- 28 ̊  C, pH 6,7-7,3, DO 4,6-6,9 ppm, dan CO 2 bebas 5,2-11,5 ppm. Berdasarkan hasil pengamatan selama penelitian, parameter kualitas air tidak menunjukkan keragaman yang besar. Pengukuran dilakukan pagi dan sore hari untuk mengetahui titik terendah dan tertinggi nilai kualitas air.  Suhu pagi hari berkisar  26,30-28, 25   ̊  C dan sore hari berkisar 27,05-28, 25 ̊ C. Nilai pH pagi hari berkisar 7,51-8,4  dan sore hari 7,88-8,17. Nilai oksigen terlarut (DO) pagi hari berkisar 4,66-6,16 dan sore hari berkisar 4,58-6,03 ppm. Kualitas air tersebut masih dalam kisaran normal, sehingga menun- jukkan bahwa kualitas air bukan meru- pakan faktor penyebab kematian ikan gurami dalam penelitian ini.

## KESIMPULAN DAN SARAN
Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa pemberian vaksin whole cell A. hydrophilla dengan dosis yang berbeda dapat berpengaruh terhadap kelulushidupan  dan  total leukosit ikan gurami. Tingkat kelulushidupan dan total leukosit tertinggi diperoleh  pada perlakuan dosis vaksin 10 6 sel/ml.

## Saran
Dosis vaksin whole cell A. hydrophila 10 6 sel/ml dapat diterapkan dalam upaya pencegahan penyakit pada ikan yang disebabkan oleh bakteri A. hydrophilla.

## DAFTAR PUSTAKA
Alifuddin, M. 2002. Imunostimulasi pada Hewan Akuatik. Jurnal Akuakultur Indonesia. 1 (2): 87-92.
Anderson, D. P. 1992. Immunostimulans, Adjuvants, and Vaccine Corries in Fish Aplication to Aquaculture.
U.S. Fish and Wildlife Service.
Kearneysville, West Virginia, USA.
Blaxhall, P. C., and Daisley, K. W. 1973. Routine Haemotological Methods for Use with Fish Blood. Journal of Fish Biology. 5 (6): 771-781. Campbell, N. A., Jane B. R., and Lawrence
G. M. 1999. Biologi. Terjemahan :
W. Manatu. Erlangga. Jakarta. hal 74-81.
Cipriano, R.C. 2001. Aeromonas hydro- phila and Motile Aeromonas Septi- cemia of Fish. Fish Disease Leaflet 68: 25 page.
Lillehaug, A. 2014. Vaccibation Strategies and Procedures. In : R. Gudding, A. Lillehaug, and Ø.  Evensen
(Eds.). Fish Vaccination. 1 rd edition. John Wiley and Sons, Ltd. Norway. Pp.140-150. Maswan, N. A. 2009. Pengujian Efekti- vitas Dosis Vaksin DNA dan Korelasinya Terhadap Parameter Hematologi Secara Kuantitatif. Skripsi. Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan. Institut Pertanian Bogor. Bogor. 70 hal. Mulia. 2006. Keefektifan Vaksin Aero- monas hydrophilla untuk Mengen- dalikan Penyakit MAS ( Motile Aeromonas Septicemia ) pada Gurami ( Osphronemus gouramy ). Jurnal Pembangunan Pedesaan. 7 (1):43-52.
Mulia,  D. S., dan C. Purbomartono. 2007. Perbandingan Efikasi Vaksin Pro- duk Intra dan Ekstraseluler Aero- monas hydrophila untuk Menang- gulangi Penyakit Motile Aero- monas Septicemia (MAS) pada Lele Dumbo ( Clarias sp.). Jurnal of Fisheries Sciences. 9(2): 173-181.
Nugroho, E., J. Subagja, dan Sulhi. 2010. Optimasi Budidaya Ikan Gurame. Penelitian. Balai Riset Perikanan Budidaya Air Tawar. Bogor. 34 hal.
Purwanto, A. 2006. Gambaran Darah Ikan Mas ( Cyprinus carpio ) yang Terin- feksi Koi Herpes Virus. Skripsi.
Program Studi Teknologi dan Manajemen Akuakultur. Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan. Institut Pertanian Bogor. Bogor. 35 hal.
Reed, L. J., and H. Muench. 1938. A Simple Method of Estimating Fifty Per Cent Endopoints. The American Journal of Hygiene. 27 (3): 493-497.
Sari, R. H., Agus. H, dan Suparmono. 201. Peningkatan Imunogenisitas Vak- sin Inaktif Aeromonas salmonicida dengan Penambahan Adjuvant pada Ikan Mas ( Cyprinus carpio ). Jurnal Rekayasa dan Teknologi Budidaya Perairan. 1 (2) : 87-94.
Setiawan, R B., Dulm’ia, I., dan Rosidah. 2012. Efektivitas Vaksin dari Bak- teri Mycobacterium fortuitum yang Diinaktivasi dengan Pemanasan Untuk Pencegahan Penyakit Mycobacteriosis pada Ikan Gurami ( Osphronemus gouramy). Laporan Penelitian. Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Padjajaran . Bandung. 16 hal.
Sulhi, M. 2007. Produksi Benih Gurame Dilahan Sempit. Seminar Nasional Hari Pangan Sedunia. Balai Riset Perikanan Budidaya air Tawar. Bogor. pp 174-179.
Utami, D. T., S. B. Prayitno, S. Hastuti, dan A. Santika. 2013. Gambaran Parameter Hematologis pada Ikan Nila ( Oreochromis niloticus ) yang Diberi Vaksin DNA Streptococcus iniae dengan Dosis yang Berbeda. Journal of Aquaculture Mana- gement and Technology. 2 (4): 7- 20.
Zonneveld, E. A., dan Huisman. 1991. Prinsip-prinsip Budidaya Ikan. Gramedium. Jakarta.