Potensi Antibakteri Ekstrak Daun Lasianthus Terhadap Bakteri Pseudomonas aeruginosa
R. Subekti Purwantoro 1 , Hartutiningsih-M. Siregar 1* , Sudarmono 1 , Andria Agusta 2
1 Pusat Konservasi Tumbuhan Kebun Raya, LIPI, Jl. Ir.H. Juanda 13 Bogor
2 Pusat Penelitian Biologi, LIPI, Cibinong Science Center

## ABSTRAK
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui sifat antibiotik dari ekstrak tumbuhan Lasianthus terhadap  aktivitas  bakteri Pseudomonas  aeruginosa secara  in-vitro.  Ekstrak yang  diuji  adalah  daun Lasianthus  laevigatus , L.  furcatus ,  dan L.  obscurus .  Ekstraksi tumbuhan  dilakukan  secara  maserasi  bertingkat  dengan  menggunakan  ekstrak  n- heksana,  etil  asetat,  dan  metanol.  Potensi  eskstrak  sebagai  antibakteri  diuji  melalui penghambatan  aktivitas  bakteri P.  aeruginosa dengan  menggunakan  metode  kertas cakram  pada  media  agar  Mueller-Hinton.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  ekstrak metanol  pada  daun L.  furcatus memperlihatkan  daya  hambat  tertinggi  dengan  zona hambat  12  mm  (konsen trasi  50  μg),  19 . 5  mm  (konsentrasi  100  μg),  dan  20  mm (konsentrasi 200 μg), diikuti oleh L. obscurus dengan zona hambat 11 mm (konsentrasi 50  μg),  13  mm  (konsentrasi  100  μg),  dan  18 . 5  mm  (konsentrasi  200  μg),  sedang kan penggunaan ekstrak n-heksana dan etil asetat daya hambatnya rendah di bawah 10 mm, terkecuali  ekstrak  n-heksana  pada  daun L.  obscurus daya  hambat  tinggi  dengan  zona hambat 11 mm (konsentrasi 50 μg).

## PENDAHULUAN
Pemanfaatan  bahan  alam yang  berasal  dari tumbuhan  telah  lama  dilakukan oleh masyarakat Indonesia untuk menangani berbagai masalah kesehatan. Menurut Moeloek (2006)  Indonesia  merupakan  negara  tropis  yang  jenis-jenis  tumbuhan  berkhasiat  obat melimpah.  Dari  30.000  jenis  tumbuhan  obat  1.000  jenis  yang  baru  ditemukan,  sekitar 180 jenis sebagai bahan sediaan baru. Meskipun 76.5% dari 9000 macam sediaan jamu telah  terdaftar  di  BPOM  merupakan  produk  nusantara,  tetapi  kalangan  masyarakat menengah ke atas dan kalangan medis masih belum dapat menerimanya. Sangat penting upaya mengeksplorasi berbagai bahan alam alternatif lain untuk  bahan industri farmasi yang  akan  datang  mengantisipasi  terjadinya  kebutuhan  bahan  obat  yang  lebih  banyak diperlukan.  Suku  kopi-kopian  (Rubiaceae)  merupakan  salah  satu  anggota  tumbuhan Angisopemae  yang  menghasilkan  metabolit  bioaktif  dengan  potensi  farmakologi  yang besar,  bahkan  metabolit  pada  kopi-kopian  tersebut  dapat  digunakan  sebagai  penanda
Penulis
Afiliasi

## Kata Kunci
 Lasianthus
 Pseudomonas aeruginosa
 Uji antibakteri
Diterima 25 September 2014
Direvisi 28 Mei 2015
Disetujui 2 Desember 2016

## *Penulis korespondensi
Hartutiningsih-M.Siregar Pusat Konservasi Kebun Raya – LIPI Jl. Juanda 13 Bogor Email: hartutiningsih@yahoo.co.id
kemotaksonomi  sampai  tingkat  marga  dan  sampai tingkat  anak  suku.  Marga  dari  suku  Rubiaceae  yang mengandung  metabolit  bioaktif  meliputi Uncaria , Psychotria , Hedyotis , Ophiorrhiza dan Morinda . Rubioideae  adalah  anak  suku  yang  telah  dikaji bioaktifnya  terdiri  139  jenis;  kajian  jenis  pada  anak suku lainnya adalah Ixoroideae terdiri 80 jenis dan anak suku  Cinchonoideae  terdiri  dari  74  jenis;  Beberapa kandungan  bioaktif  yang  ditemukan  pada  jenis-jenis Rubiaceae  berupa  iridoid,  triterpen,  alkaloid  dan antrakuinon (Martins & Nunez 2015).
Lasianthus adalah  marga  kopi-kopian  yang  juga berpotensi  sebagai  tumbuhan  obat.  Metabolit sekunder  yang  diperoleh  dari Lasianthus termasuk senyawa antrakuinon, alkaloid, seskuiterpenoid, turunan secolupane ,  glikosida  iridoid  dan  noniridoid, dll.; Sampai sekarang 47 konstituen kimia telah diisolasi dari  jenis Lasianthus yang  berbeda,  beberapa  di antaranya  telah  ditemukan  terbukti  ada  aktivitas biologi secara signifikan (Choudhury et al . 2010). Bader et  al .  (2014)  melaporkan  bahwa  hasil  isolasi  pada L. acuminatissimus ditemukan  2 senyawa iridoid glycosides yaitu asperuloside dan deacetyl asperuloside yang  berkhasiat  untuk  pengobatan  peradangan  kronis pada  sendi  ( rheumatoid  arthritis ).  Menurut  Martins  & Nunez  (2015)  2  jenis Lasianthus yang  mengandung komponen  senyawa  aktif  adalah L.  gardneri mengandung  senyawa  triterpenes:  lupenon;  lupeol; asam ursolik; asam kanarik; 3,4-seko-lupan, sedangkan L.  wallichii mengandung  Iridoid:  iridolakton;  iridoid dimer  asperulosid;  asam  asperulosidik.  Berdasarkan hasil wawancara dengan masyarakat di Cibodas Cianjur Jawa  Barat Lasianthus dikenal  dengan  nama  lokal “k ahitutan ”  (Sunda) telah  diketahui  manfaatnya, Lasianthus  laevigatus secara  tradisional  sering digunakan  untuk mengobati masuk  angin  (Purwantoro et al . 2010). Menurut Rai & Lalramnghinglova (2011) di India  ada  2  jenis Lasianthus yang  mempunyai  khasiat obat,  yaitu  daun  dari L.  hirsutus dapat  untuk menghentikan perdarahan pada masyarakat di wilayah Changneithing dalam bentuk jus, sedangkan di wilayah Ruih-thing  rebusan  daun L.  wallichii dapat  untuk pengobatan yang digolongkan sebagai obat halusinogen.  Melati  (2014)  mengemukakan  bahwa pengobatan  dengan  tumbuhan  berkhasiat  obat  yang bersifat halusinogen dapat menimbulkan efek halusinasi yang bersifat merubah perasaan, pikiran dan sering  kali  menciptakan  daya  pandang  yang  berbeda sehingga seluruh perasaan dapat terganggu.
Bakteri P.  aeruginosa merupakan  bakteri patogen  yang  dapat  menyebabkan  berbagai  gangguan kesehatan antara lain sepsis pneumonia , infeksi saluran kemih  dan  bakteremias  juga  dapat  menyebabkan morbiditas  dan  mortalitas  tinggi  pada  pasien  dengan fibrosis  kistik  karena  infeksi  kronis  yang  akhirnya menyebabkan  paru-paru  mengalami  kerusakan  dan insufisiensi  pernapasan  (Ochoa et  al .  2013).  Menurut
Rukmono & Zuraida (2013) P. aeruginosa menyebabkan  resistensi  terhadap  14  macam  obat antibiotik  seperti  antibiotik  ampisilin,  eritromisin, amoksisilin, sefurosim, seftriason, gentamisin, tetrasiklin, sefadroksil, piperasilin, trimetroprim, tobramisin, kotrimoksasol, nalidisid, sulfonamid kompleks.
Ciri-ciri Lasianthus mudah  dikenal  dengan karakter-karakter  morfologi  spesifik,  antara  lain: berperawakan  semak  tegak  atau  pohon  kecil;  letak daun  tunggal  bersebrangan  berhadapan  dengan pasangan  daun  penumpu;  bunga  hermafrodit, berukuran kecil  posisi terletak  pada  ketiak daun; buah berdaging  seperti  beri,  berwarna  biru,  hitam,  jarang berwarna  putih  (Hua  &  Taylor  2011),  selanjutnya dilaporkan  pula  bahwa  dari  184  jenis Lasianthus di dunia, 160 jenis ditemukan di Asia tropik. Penelitian ini bertujuan  untuk  mengetahui  sifat  antibiotik  dari ekstrak  beberapa  jenis  tumbuhan Lasianthus yang berasal  dari  Jawa  Barat terhadap  aktivitas  biologi  dari bakteri Pseudomonas  aeruginosa secara in-vitro. Diharapkan  hasil  penelitian  ini  dapat  melengkapi  hasil penelitian  sebelumnya  senyawa-senyawa  bioaktif potensial dari jenis-jenis tumbuhan Lasianthus sebagai senyawa antimikroba.

## METODE Bahan
Bahan  penelitian  fitokimia  berupa  sampel  daun Lasianthus yang terdiri atas L. laevigatus dan L. furcatus (hutan  G.  Gede  sekitar  Kebun  Raya  Cibodas,  LIPI  pada bulan  Juli  2009), L.  obscurus (Hutan  G.  Ceremai  pada bulan  Agustus  2009)  yang  dipotong  kecil-kecil  dengan gunting  stek  kemudian  dikeringkan  di  bawah  sinar matahari,  setelah  kering  kemudian  dianalisis  di Laboratorium  Fitokimia,  Bidang  Botani,  Puslit  Biologi untuk uji antibakteri.

## Analisis Fitokimia Ekstraksi Bahan Tumbuhan
Ekstraksi  bahan  tumbuhan  dilakukan  secara maserasi bertingkat menggunakan 3 jenis pelarut yaitu
n-heksana,  etil  asetat  dan  metanol.  Bahan  kering masing-masing  seberat  15  g  direndam  dengan  350  ml n-heksana  selama  24  jam,  kemudian  disaring  dengan penyaringan  kapas  yang  telah  disiapkan  sebelumnya. Filtrat  yang  dihasilkan  dari  penyaringan  kemudian ditampung. Hal ini diulangi sampai 3 kali sampai filtrat yang  tertampung  jernih.  Perlakuan  yang  sama  juga dilakukan  pada  pelarut  etil  asetat  dan  metanol. Masing-masing ekstrak tersebut selanjutnya dipekatkan dengan rotary  evaporator pada  suhu  35  °C.  Ekstrak ditimbang  untuk  mengetahui  rendemen  ekstrak. Rendemen ekstrak  adalah berat  ekstrak  dibagi dengan berat  contoh  dikalikan  100%.  Ekstrak  yang  diperoleh digunakan  untuk  uji  efek  antibakteri  (Siregar et  al . 2009).
Uji Efek Antibakteri Ekstrak dari setiap tumbuhan diuapkan pelarutnya  dengan rotary  evaporator dan  dikeringkan dengan  gas  N 2 .  Masing-masing  ekstrak  selanjutnya dilarutkan  di  dalam  aseton  (untuk  ekstrak n -heksana dan  etil  asetat)  dan  metanol  (untuk  ekstrak  metanol) dengan konsentrasi 100 mg/ml (10 μg/ μl). Uji aktivitas antibakteria dilakukan dengan metoda cakram. Di atas kertas  cakram yang  telah disterilkan,  dipipet  sebanyak 5 μl (50 μg ekstrak), 10 μl (100 μg ) ekstrak), 20 μl (200 μg  ekstrak)  masing -masing  ekstrak  tumbuhan  sampel, kemudian  dikering  anginkan  selama  30  menit  pada temperatur  ruang  di  dalam laminar  air  flow untuk menghilangkan  pelarut.  Setelah  dikeringkan  kemudian diletakkan  di  atas  medium  agar  Mueller-Hinton  yang telah  diinokulasi  dengan  bakteri  uji Pseudomonas aeruginosa . Pengamatan aktivitas antibakteria dilakukan setelah 24 jam inkubasi pada temperatur 37 ° C.  Aktivitas  antibakteria  dari  ekstrak  uji  ditandai dengan  ada  atau  tidak  zona  bening  yang  terbentuk disekeliling ekstrak daun yang diteteskan di atas kertas cakram.  Jarak  zona  bening  dengan  ekstrak  daun  yang ada  di  kertas  cakram  diukur  dalam  milimeter.  Besar kecilnya  diameter  zona  hambat  menunjukkan  tinggi rendahnya  kemampuan  ekstrak  tanaman  dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri P.  aeruginosa (Siregar et al . 2011).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil
Siregar et  al. (2011)  melaporkan  bahwa  daun L. laevigatus,  L.  furcatus, dan L.  obscurus memiliki aktivitas  antibakteri  yang  paling  besar  pada  ekstrak
metanol  yaitu  sebesar  11,2  %,  8,5  %,  dan  7,91  %, kemudian  diikuti  ekstrak  n-heksana  yang  dihasilkan pada  daun L.  laevigatus sebanyak  2,53  %,  dan  ekstrak etil  asetat  pada L.  obscurus sebanyak  2,37  %.Uji AntibakteriHasil  uji  antibakteri  ekstrak  n-heksana,  etil asetat,  dan  metanol  pada  ekstrak  daun Lasianthus terhadap P.  aeruginosa menunjukkan  ada  aktivitas bioaktif.  Secara  in  vitro  ekstrak  n-Heksana  daun L. laevigatus pada  medium  agar  Mueller-Hinton  mampu menghambat pertumbuhan bakteri P. aeruginosa pada konsentrasi  100 μg,  200  μg  dengan  diameter  zona hambat  berturut-turut  sebesar  8  dan  8.5  mm,  tetapi pada  ekstrak  etil  asetat  dan  metanol  tidak  ada penghambatan pertumbuhan bakteri pada konsentrasi 50,  100,  dan  200  μg.  Keadaan  demikian  menunjukkan bahwa  ekstrak  daun  yang  bersifat  non  polar  tersebut mempunyai kemampuan menghambat aktivitas bakteri P. aeruginosa, sedangkan pada daun L. furcatus hanya dapat menghambat pertumbuhan bakteri P. aeruginosa pada konsen trasi 50 μg, yaitu dengan zona hambat sebesar 7 mm. Pada ekstrak etil asetat daun L. furcatus daya  hambat  pertumbuhan P.  aeruginosa lebih  kuat  pada  konsentrasi  50,  100,  dan  200  μg dengan zona hambat berturut-turut 8 mm, 9 mm, dan 9.5  mm,  sementara  itu  juga  terjadi  aktivitas  hambat pada konsentrasi 50 μg dengan diameter z ona hambat 11 mm pada daun L. obscurus . Ekstrak etil asetat daun L.  furcatus mempunyai  daya  hambat  yang  lebih  tinggi dari pada daya hambat ekstrak daun L. laevigatus . Pada ekstrak  metanol  yang  memperlihatkan  daya  hambat tertinggi  dibanding  ekstrak  etil  asetat  dan  n-heksanol terjadi  pada  ekstrak  daun L.  furcatus dan  L.  obscurus. Ekstrak daun L. furcatus memperlihatkan daya hambat lebih  tinggi  dengan  zona  hambat  12  mm  (konsentrasi 50 μg),  19,5  mm  (konsentrasi  100  μg),  dan  20  mm (konsentrasi  200  μg),  diikuti  oleh L.  obscurus dengan zona  hambat  11  mm  (konsentrasi  50  μg),  13  mm (konsentrasi 100 μg), dan 18,5 mm (konsentrasi 200 μg) (Tabel  1).  Praptiwi  &  Harapini  (2002)  mengemukakan bahwa pada  dosis  50,  100  dan  200  μg  sebagai  dosis yang  optimal  untuk  pengujian  larutan  n-heksana,  etil asetat dan metanol. Aktivitas penghambatan pertumbuhan  bakteri  ditunjukkan  pada  Tabel  1  dan Gambar 1.

## Pembahasan
Siregar et  al .  (2011)  melaporkan  hasil  ekstraksi yang dilakukan secara maserasi bertingkat menunjukkan  bahwa  ekstrak  metanol  merupakan
ekstrak  yang  paling tinggi  rendemennya  dibandingkan dengan  ekstrak n -heksana  dan  etil  asetat.  Penemuan dengan  rendemen  yang  tinggi  juga  terjadi  pada beberapa jenis tanaman antara lain Quercus  infectoria (Syukriah et al . 2014), Zingiber cassumunar (Hermansyah  &  Utami  2015), Mangifera  casturi (Firdausi  2015).  Menurut  Yuhernita  &  Yuniarti  (2011) pada  ekstrak metanol  yang  rendemennya  paling  tinggi menunjukkan kandungan seyawa organik yang bersifat polar  relatif  besar  dibandingkan n -heksanol  dan  etil asetat. Metanol adalah pelarut yang baik bagi substansi organik  yang  bersifat  polar  (Marcus  &  Glikberg  1986). Sani et al . (2014) dalam penelitiannya pada Tetraselmis
chuii mengemukakan  bahwa  pelarut  berperan  dalam menghasilkan  rendemen  yang  tinggi  karena  pelarut yang  digunakan  memiliki  sifat  kepolaran  yang  sama dengan sebagian besar komponen yang terdapat  pada biomassa sel seperti protein, karbohidrat dan klorofil.
Banyaknya total flavonoid yang diekstrak dengan pelarut etil asetat dikarenakan sifat dari etil asetat yang merupakan pelarut semi polar sehingga dapat menarik golongan-golongan  flavonoid  yang  bersifat  polar maupun  nonpolar  (Kanifah et  al .  2015).  Zuhud et  al . (2001)  menyatakan  bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi ekstrak  dan  lama  waktu  kontak  maka  aktivitas antimikrobia  ekstrak  daun  makin  baik  sehingga
Tabel 1. Diameter daerah hambat hasil uji antibakteri ekstrak daun Lasianthus terhadap bakteri P. aeruginosa
Ekstrak Konsentrasi (μg) Diameter daerah hambat ekstraksi daun (mm) L. laevigatus L. furcatus L. obscurus n-Heksana 50 - 7.0 - 100 8.0 - - 200 8.5 - - Etil asetat 50 - 8.0 11.0 100 - 9.0 - 200 - 9.5 - Metanol 50 - 12.0 11.0 100 - 19.5 13.0 200 - 20.0 18.5 Keterangan: “ - “ tidak ada aktivitas antibakteri; diameter cakram 6 mm. Masing -masing uji diulang 2 kali
Gambar 1. Zona bening sekitar ekstrak daun Lasianthus menunjukkan hambatan pada aktivitas pertumbuhan bakteri P. aeruginosa
mempermudah  penetrasi  senyawa  tersebut  ke  dalam sel bakteri uji.
Bakteri P.  aeruginosa lebih  sensitif  terhadap ekstrak  metanol  daun L.  obscurus dari  pada  ekstrak daun Lasianthus lainnya. Hal ini diduga disebabkan oleh struktur  dinding  sel  mengandung  lipid  pada  bakteri, lemak  atau  substansi  seperti  lemak  dalam  persentase tinggi sebagai ciri khas bakteri gram negatif, di samping itu  dinding  sel  bakteri  yang  tipis  memperbesar permiabilitas  dinding  sel  sehingga  komponen  yang bersifat  antibakteri  dapat  lebih  mudah  menembus dinding sel bakteri.
Aktivitas antibakteri dari ekstrak daun Lasianthus tersebut  dapat  disebabkan  senyawa  aktif  yang terkandung  di  dalamnya.  Ekstraksi  tumbuhan  adalah proses  penarikan  zat  aktif  dalam  tumbuhan  dengan menggunakan  pelarut  tertentu.  Ekstraksi  tergantung pada  tekstur  dan  kandungan  bahan  dalam  tumbuhan. Senyawa/kandungan  dalam  tumbuhan  memiliki  sifat kelarutan  yang  berbeda-beda  dalam  masing-masing pelarut. Ekstraksi bertingkat  biasanya dilakukan secara bertahap  dimulai  dengan  pelarut  yang  bersifat nonpolar  (kloroform  atau  n-heksana),  semipolar (etilasetat atau dietil eter), dan terakhir dengan pelarut polar (metanol atau etanol) (Praptiwi & Harapini 2004). Pada  penelitian  ini  dapat  diketahui  bahwa  kandungan senyawa kimia pada daun L. laevigatus , L. furcatus , dan L.  obscurus bersifat  non  polar  (n-heksana),  semi  polar (etil  asetat),  polar  (metanol)  dapat  menghambat pertumbuhan bakteri P. aeruginosa (Tabel 1).

## SIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat  disimpulkan bahwa  ekstrak  metanol  pada  daun L.  furcatus mempunyai  daya  hambat  paling  tinggi  dengan  zona hambat  12  mm  (konsentrasi  5 0  μg),  19 .5  mm (konsentrasi 100 μg), dan 20 mm (konsentrasi 200 μg), diikuti  oleh L.  obscurus dengan  zona  hambat  11  mm (konsentrasi  50  μg),  13  mm  (konsentrasi  100  μg),  dan 18.5 mm  (kon sentrasi  200  μg).  Penggunaan  ekstrak  n - heksana dan etil asetat  pada daun L. laevigatus dan L. furcatus daya hambatnya rendah dengan zona hambat di bawah 10 mm, tetapi ekstrak n-heksana pada daun L. obscurus daya  hambat  tinggi  dengan  zona  hambat  11 mm (kon sentrasi 50 μg).

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terima  kasih  kami  sampaikan  kepada Kepala Pusat Konservasi Tumbuhan Kebun Raya Bogor:
Bp.  Ir.  Mustaid  Siregar,  MSi.  melalui  Proyek  Insentif Riset  untuk  Peneliti  dan  Perekayasa:  Kegiatan  Sinergi Penelitian  dan  Pengembangan  Ilmu  Pengetahuan  dan Teknologi  DIKTI  -  LIPI  2009  atas  dana  yang  diberikan untuk penelitian. Terima kasih diampaikan juga kepada Dr. Praptiwi yang telah bekerjasama sangat baik untuk kelancaran  penelitian  fitokimia,  dan  juga  kepada  Sdr. Elly  K.  Agustin,  SP.,  Annisa  Satyanti,  M.Sc.  dan  rekan- rekan di Unit Kerja Pembibitan Kebun Raya Bogor yang ikut  dalam  eksplorasi,  membantu  pemeliharaan  hasil eksplorasi dan mengembangkannya, juga kepada rekan Slamet  dan  Rubono,  staf  dari  Pembibitan  Kebun  Raya Bogor yang membantu kelancaran penelitian ini

## DAFTAR PUSTAKA
Bader  GN,  Mir  PA,  Bhat  ZA.  2014.  Present  status  of antiinflammatory
and antirheumatic phyoconstituents:  a  review. World  Journal  Of Pharmacy And Pharmaceutical Sciences
3(11):272-310.
Choudhury  KD,  Choudhury  MD,  Talukdar  AD.  2010. Chemical Constituents and Biological Activities of the  Genus Lasianthus Jack:  A  Review. Assam University  Journal  of  Science  &  Technology : Biological  and  Environmental  Sciences. 6(1):129- 138.
Firdausi  I,  Retnowati  R,  Sutrisno.  2015.  Fraksinasi ekstrak metanol daun mangga kasturi ( Mangifera  casturi Kosterm)  dengan  pelarut  n- butanol. Jurnal Ilmu Kimia Universitas Brawijaya.
1(1):785 - 790.
Hermansyah  B,  Utami  WS.  2015  Bioactivity  of  a Compound  of  Standardized  Bangle  ( Zingiber cassumunar Roxb.)  Extract  Fraction  as  a Complimentary  Therapy  to  Prevent  Malaria Complications. Journal  of  Agromedicine  and Medical Sciences. 1(2):19-25. Hua Z, Taylor CM. 2011. Lasianthus Jack. Flora of China. 19:185 – 198.
Kanifah U, Lutfi M, Susilo B. 2015. Karakterisasi ekstrak daun  sirih  merah  ( Piper  crocatum )  dengan metode  ekstraksi  non-thermal  berbantukan ultrasonik (kajian perbandingan jenis pelarut dan lama  ekstraksi). Jurnal  Bioproses  Komoditas Tropis . 3(1):73-79.
Melati  R.  2014.  Perilaku  sosial  remaja  putri penyalahguna  narkoba  di  Perumahan  BTN Manggar  Balikpapan  Timur. eJournal  Ilmu Sosiatri. 2(2):1-18.
Marcus Y, Glikberg S. 1986. Recommended methods for the  purification  of  solvents  and  tests  for impurities  methanol  and  ethanol. Pure  and Applied Chemistry. 57(6):855 — 864.
Martins  D,  Nunez  CV.  2015.  Secondary  Metabolites from  Rubiaceae  Species. Molecules. 20:13422- 13495.
Moeloek  FA.  2006.  Herbal  and  traditional  medicine: National  perspectives  and  policies  in  Indonesia. Jurnal Bahan Alam Indonesia. 5(1):293-297.
Ochoa  SA,  López-Montiel  F,  Escalona  G,  Cruz-Córdova A, Dávila LB, López-Martínez B, Jiménez-Tapia Y, Giono  S,  Eslava  C,  Hernández-Castro  R,
Xicohtencatl-Cortes J. 2013. Pathogenic characteristics  of Pseudomonas  aeruginosa strains resistant to carbapenems associated with biofilm  formation. Boletín  Médico  del  Hospital Infantil de México. 70(2):133-144.
Praptiwi,  Harapini  M.  2004.  Pengujian  antibakteri  dan antioksidan ekstrak kulit batang siuri ( Koordersiodendron  pinnatum (Blanco)  Merr.). Majalah Farmasi Indonesia. 15(3):151 – 157.
Praptiwi,  Harapini  M.  2002.  Penapisan  fitokimia  dan  ji anti  bakteri  secara  in-vitro  ekstrak  kulit  batang siuri  (Koordersiodendron  pinnatum).  Laporan Teknik  Pusat  Penelitian  Biologi-LIPI.  DIPA  TA 2002. Puslit Biologi LIPI Bogor.
Purwantoro  RS,  Siregar  HM,  Sudarmono,  Praptiwi. 2010.  Uji  antibakteri Lasianthus ( Rubiaceae ) sebagai tumbuhan berkhasiat obat dan perbanyakannya. Buletin  Kebun  Raya. 13(2):86- 93.
Rahmawati N, Sudjarwo E, Widodo E. 2015. Uji aktivitas antibakteri  ekstrak  herbal  terhadap  bakteri Escherichia  coli. Jurnal  Ilmu-Ilmu  Peternakan.
24(3):24 - 31.
Rai  PK,  Lalramnghinglova  H.  2011.  Ethnomedicinal plants of India with special reference to an Indo-
Burma Hotspot Region: an overview .
Ethnonotany  Research  and    Applications. 9:379- 420.
Rukmono  P,  Zuraida  R.  2013.  Uji  Kepekaan  Antibiotik Terhadap Pseudomonas  aeruginosa penyebab sepsis neonatorum. Sari Pediatri 14(5):332-336.
Sani  RN,  Nisa  FC,  Andriani  RD,  Maligan  JM.  2014. Analisis rendemen dan skrining fitokimia ekstrak etanol  mikroalga  laut, Tetraselmis  chuii . Jurnal Pangan dan Agroindustri. 2 ( 2):121-126.
Siregar HM, Purwantoro RS, Sudarmono, dan Agusta A. 2009.  Pengungkapan  Potensi  Obat  Pada  Tiga Jenis Begonia Terpilih  ( B.  muricata Blume, B. multangula Blume, B. “Bacem Kebo”) Melalui Uji Antibakteri Escherichia  coli Dan Staphylococcus aureus Secara  In  Vitro. Prosiding  Seminar Nasional Sains II: Peningkatan Peran Sains Dalam Pertanian  Dan  Industri.  Bogor,  14  November: 543-551. ISBN: 978-979-95093-5-2.
Siregar HM, Purwantoro RS, Sudarmono, Fijridiyanto IA,
Satyanti  A,  Agusta  A.  2011.  Bio  Pharmacy Potential  of  Begoniaceae  ( Begonia  muricata Blume, B.  multangu Blume, B.  Baliensis Girmansyah)  through  In  Vitro  Antibacterial  Test and  Antifungal  Test.  Proceedings  The  2 nd International  Symposium  on  Temulawak.  The 40 th Meeting  of  National  of  Working  Group  on Indonesian Medicinal Plant. Institute of Research and  Community  Services  -  Bogor  Agricultural University  INDONESIA:  190-195.  ISBN  No.  978- 979-25-1209-0.
Syukriah ARN, Liza MS, Harisun Y, Fadzillah AAM. 2014. Effect  of  solvent  extraction  on  antioxidant  and antibacterial  activities  from  Quercus  infectoria (Manjakani). International Food Research Journal. 21(3):1067-1073.
Yanuar A, Mun’im A, Lagho ABA, Syahdi RR, Rahmat M, Suhartanto  H.  2011.  Medicinal  Plants  Database and Three Dimensional Structure of the Chemical Compounds  from  Medicinal  Plants  in  Indonesia. International  Journal  of  Computer  Science  Issue. 8(1):180-183.
Yuhernita,  Juniarti.  2011.  Analisis  senyawa  metabolit sekunder dari ekstrak metanol daun surian yang berpotensi  sebagai  antioksidan. Makara  Journal of Science. 15(10):48-52.
Zuhud  EAM,  Rahayu  WP,  Wijaya  CH,  Sari  PP.  2001. Aktivitas  Antimikroba  Ekstrak  Kedawung  ( Parkia roxburghii G.  Don)  terhadap  Bakteri  Patogen.
Jurnal  Teknologi  dan  Industri  Pangan. 12  (1):6- 12.