Cite  this  as  Sulistyowaty,  M.I.,  Nusandari,  R.,  Rudyanto,  M.,  &  Ekowati,  J.  (2024)  ‘A  Comparitive  Study  of  Synthesis  3-(4- Methoxyfenil)propanehydrazide by Conventional Heating and Microwave Irradiation’, Berkala Ilmiah Kimia Farmasi , 11(1), pp. 12-19 doi: 10.20473/bikfar.v11i1.56153.
Copyright: © 2024 by the authors. Submitted for possible open-access publication under the terms and conditions of the Creative Commons  Attribution-ShareAlike 4.0 International (CC BY-SA) license
Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, Vol.11 No.1 June 2024 Page 12-19 P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048

## A Comparative Study of Synthesis 3-(4-Methoxyfenil)propanehydrazide by Conventional Heating and Microwave Irradiation

## Studi Perbandingan Sintesis 3-(4-Metoksifenil)propanhidrazida dengan Pemanasan Konvensional dan Iradiasi Gelombang Mikro
Melanny Ika Sulistyowaty 1,2) * , Ratna Nusandari 3) , Marcellino Rudyanto 1) , Juni Ekowati 1)
1 Department of Pharmaceutical Science, Faculty of Pharmacy, Universitas Airlangga, Surabaya, Indonesia
2 Graduate School of Pharmaceutical Sciences, Hoshi University, Japan
3 Study Program of Pharmacy, Faculty of Pharmacy, Universitas Airlangga, Surabaya, Indonesia
*Corresponding author E-mail: melanny-i-s@ff.unair.ac.id
Article History:
Received: March, 20 2024; Revised: June 19, 2024; Accepted: June 28, 2024; Online: June 30, 2024

## ABSTRACT
Previous studies had shown that ethyl p -methoxycinnamate (EPMS) had various bioactivities, such as analgesic and anti-inflammatory through COX inhibition. Due to its unique structure, this compound was modified into a selective COX-2 inhibitor. In this research, EPMS was isolated from Kaempferia galanga L.  and  used  as  a  starting  material  to  be  reacted  with  hydrazine  hydrate  to  obtain  3-(4- methoxyfenil)propanehydrazide.  This  synthesis  was  carried  out  using  conventional  heating  and microwave irradiation. The microwave irradiation was chosen because of its potential to reduce reaction time and increase yield. Next, the crude product was purified using column chromatography to produce a pure product, where characterization and structural analyses of the compound were carried out using the  TLC  test,  melting  point  test,  IR, 1 H-NMR,  and  UV  spectroscopy.  The  results  showed  that  the product produced was 3-(4-methoxyphenyl)propanehydrazide with a yield of 0,76% by conventional thermal heating and 7,90% by microwave irradiation.
Keywords:  EPMC, Hydrazine Hydrate, 3-(4-Metoxyphenyl)propanehydrazide, Conventional Heating, Microwave Irradiation

## ABSTRAK
Penelitian  sebelumnya  menunjukkan  bahwa  etil  p-metoksisinamat  (EPMS)  memiliki  beragam bioaktivitas,  seperti  analgesik  dan  anti  inflamasi  melalui  penghambatan  COX.  Senyawa  tersebut dimodifikasi sebagai inhibitor selektif COX-2 berdasarkan strukturnya yang khas. Dalam penelitian ini EPMS  diisolasi  dari Kaempferia  galanga L.  dan  dijadikan  bahan  awal  untuk  direaksikan  dengan hidrazin  hidrat  sehingga  diperoleh  p-metoksi  sinnamoil  hidrazida.  Sintesis  ini  dilakukan  dengan menggunakan  pemanasan  termal  konvensional  dan  iradiasi  gelombang  mikro,  yang  dipilih  karena potensinya dalam mengurangi waktu reaksi dan meningkatkan rendemen. Produk dimurnikan dengan kromatografi  kolom  sehingga  menghasilkan  produk  murni.  Uji  karakteristik  dan  analisis  struktur dilakukan menggunakan uji KLT, uji titik leleh, IR, 1 H-NMR, dan spektroskopi UV. Hasil penelitian menunjukkan  bahwa  produk yang  dihasilkan  3-(4-metoksifenil)  propanahidrazida  dengan  rendemen 0,76% pada pemanasan termal konvensional dan 7,90% pada iradiasi gelombang mikro.
Kata kunci: EPMC, Hidrazin Hidrat, 3-(4-metoksiphenil)propanahidrazida, Pemanasan Konvensional, Iradiasi Helombang Mikro

## PENDAHULUAN
Prostaglandin  (PG)  dan  Tromboksan  A2  (TXA 2 ) atau  yang  disebut  prostanoid  merupakan  zat  yang dibentuk  ketika  asam  arakidonat  dilepas  dari  membran plasma  oleh  enzim  fosfolipase  dan  dimetabolisme  oleh enzim  siklooksigenase  (COX)  dan beberapa  enzim lain. Produksi  PG  yang  dikenal  sebagai  salah  satu  mediator inflamasi  tergantung  pada  aktivitas  dua  isoform  COX,
yaitu  COX-1  dan  COX-2.  COX-1  menghasilkan prostanoid  yang  berperan  dalam  fungsi  penjagaan, sementara COX-2 aktif terutama dalam kondisi inflamasi dan  penyakit  keganasan  (Riccioti  &  FitzGerald,  2011). COX  merupakan  target  dari  obat  anti  inflamasi  seperti golongan Non-Steroidal Anti-Inflammatory Drug (NSAID),  yang  bertindak  sebagai  inhibitor  kompetitif pada active  site COX  (Riccioti  &  FitzGerald,  2011).
Namun,  efek  samping  obat  golongan  NSAID  akibat
Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, Vol.11 No.1 June 2024 Page 12-19 P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048
hambatan pada COX-1 sangat besar pada saluran cerna. Maka  dari  itu,  penelitian  ini  bertujuan  mengembangkan inhibitor  selektif  pada  COX-2  untuk  mengurangi  efek samping tersebut (Michaux et al ., 2006).
Pengembangan inhibitor selektif COX-2 dilakukan melalui  sintesis  senyawa p- metoksi  sinamoil  hidrazida. EPMS  digunakan  sebagai  bahan  awal  dalam  sintesis senyawa ini. Bahan awal ini didapat dengan mengisolasi EPMS  dari  rimpang  kencur  karena  tanaman  ini  mudah diperoleh  di  Indonesia  (Winingsih et  al. ,  2021).  EPMS dipilih karena telah terbukti memiliki aktivitas analgesik dan  anti-inflamasi  melalui  penghambatan  COX-1  dan COX-2  (Ekowati  &  Diyah,  2013).  Selain  itu,  EPMS menunjukkan  aktivitas  hambatan  proliferasi  sel  tumor pada percobaan in vitro (Nurani et al ., 2020).
Target senyawa pada penelitian ini yang sebenarnya adalah  senyawa p- metoksisinamoilhidrazida  dengan analisis retrosintetik pada dapat dilihat pada (Gambar 1) , menggunakan senyawa awal EPMS. Metode sintesis yang digunakan  yaitu  pemanasan  konvensional  dan  iradiasi gelombang  mikro.  Jika  membandingkan  kedua  metode tersebut, metode iradiasi gelombang mikro dipilih karena dapat  meminimalisasi  penggunaan  pelarut,  memerlukan waktu  reaksi  yang  lebih  singkat,  dan  pada  beberapa penelitian  dapat  meningkatkan  persentase  hasil  sintesis (Belwal,  2013).  Selain  itu,  panas  yang  dihasilkan  dari iradiasi  gelombang  mikro  tersebar  secara  serentak  dan merata  ke  seluruh  sistem,  sehingga  hasil  reaksi  lebih banyak bila dibandingkan dengan pemanasan konvensional  yang  seringkali  terjadi over  heating dan mengakibatkan lebih banyak produk maupun reagen yang terdegradasi (Kappe et al., 2009). Senyawa target sintesis ini,  diharapkan  dapat  diteliti  sehingga  mengalami modifikasi  struktur  lanjutan  terutama  untuk  memenuhi keberadaan gugus farmakofor inhibitor COX-2.
Gambar  1 .  Analisis  retrosintetis  senyawa  target, p - metoksisinamoilhidrazida

## METODOLOGI PENELITIAN

## Alat
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  yakni Neraca  Sartorius  BL-600,  spektrofotometer  FTIR Shimadzu 8400S, spektrofotometer UV-Vis Lambda EZ 201  Perkin  Elmer,  spektrometer  NMR  JEOL  ECS  400 MHz, Mel-Temp electrothermal melting point apparatus, lampu  UV-254  nm,  rotavapor  ( Rotary  Vaccum Evaporation )  Heidolph  Laborata  4000,  oven,  dan microwave  oven  low Watt  400  W  Sanyo  EM-S26125 220V- 50Hz.

## Bahan
Rimpang kencur ( Kaempferia galanga L.) yang telah dideterminasi  oleh  Balai  Materia  Medika  Batu-Jawa Timur  digunakan  sebagai  bahan  baku.  Selain  itu  bahan lain  yakni  hidrazin  hidrat p.a (Merck),  etanol  96% p.a (Merck), etanol teknis, kloroform p.a (Merck), aseton p.a (Merck), metanol p.a (Merck), n -heksana p.a (Merck), etil asetat p.a (Merck),  silika  gel  60  (Merck),  dan  lempeng KLT silika gel F 254 .

## Pengambilan Sampel
Rimpang  kencur  sebanyak  5  kg  dicuci,  dipotong tipis,  lalu  dikeringkan  tanpa  sinar  matahari  langsung sekitar  enam  hari  dan  dihaluskan  menjadi  serbuk. Langkah selanjutnya, serbuk tersebut diperkolasi dengan etanol  dan  didiamkan  selama  sekitar    24  jam.  Perkolat yang berwarna cokelat diteteskan pada wadah penampung dan  diulang  hingga  diperoleh  perkolat  tidak  berwarna (Ekowati, 2012).
Perkolat yang diperoleh kemudian dipekatkan pada suhu 40°C menggunakan rotavapor, lalu disimpan untuk membentuk  padatan  kuning.  Padatan  disaring  dengan corong  Buchner  dan  dilarutkan  dalam  etanol  70%  yang dipanaskan  dengan  penambahan  norit.  Larutan  disaring dalam  keadaan  panas,  filtrat  didinginkan  hingga membentuk kristal putih, lalu disaring dan dikeringkan di lemari  asam.  Isolat  diuji  kemurniannya  menggunakan KLT  dengan  tiga  macam  fase  gerak  serta  dilakukan penentuan jarak lebur.

## Sintesis  senyawa  target  dengan  Metode  Pemanasan Konvensional
Sebanyak  1,5  mmol  (310  mg)  kristal  EPMS dimasukkan ke dalam labu alas bulat, lalu ditambahkan 3 ml  etanol  96%  dan  7,5  mmol  (0,36  ml)  hidrazin  hidrat. Campuran  tersebut  direfluks  pada  suhu  antara  78-80°C sekitar  6,5  jam.  Pengujian    kesempurnaan  reaksi digunakan uji KLT dengan fase gerak aseton : kloroform (3:4)  dan  lempeng  KLT  silika  gel  F 254 ,  sebagai pembanding  digunakan  EPMS.  Hasil  reaksi  diuapkan pelarutnya, kemudian dilakukan pemisahan dan pemurnian menggunakan kromatografi kolom.

## Sintesis  senyawa  target  dengan  Metode  Iradiasi Gelombang Mikro
Sebanyak  1,5  mmol  (310  mg)  kristal  EPMS dimasukkan  ke  dalam  labu  Erlenmeyer,  kemudian ditambahkan  3  ml  etanol  96%  dan  7,5  mmol  (0,36  ml) hidrazin  hidrat.  Campuran  dimasukkan  ke  dalam microwave dan diradiasi dengan gelombang mikro (daya 120 W)  selama  25  menit.  Kesempurnaan  reaksi  diamati menggunakan KLT dengan fase gerak aseton : kloroform (3:4)  dan  lempeng  KLT  silika  gel  F 254 ,  serta  sebagai pembanding  digunakan  EPMS.  Hasil  reaksi  diuapkan pelarutnya, kemudian dilakukan pemisahan dan pemurnian menggunakan kromatografi kolom.

## Uji Pemantauan Hasil Reaksi dengan KLT
Pengujian  dilakukan  menggunakan  fase  diam lempeng  KLT  silika  gel  F 254 .  Selanjutnya  bahan  awal EPMS dan hidrazin hidrat digunakan sebagai pembanding.  Larutan  yang  akan  diuji  dan  pembanding ditotolkan pada lempeng KLT dan dimasukkan ke dalam bejana  kromatografi  yang  telah  dijenuhkan  dengan  fase gerak  aseton  : kloroform  (3:4). Eluasi  dihentikan  ketika
O NH H 2 N O
Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, Vol.11 No.1 June 2024 Page 12-19 P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048
fase  gerak  sudah  mencapai  garis  batas  atas.  Kemudian dilakukan  pengamatan  di  bawah  sinar  UV  254  nm (Ekowati, 2012).

## Pemisahan  dan  Pemurnian  dengan  Kromatografi Kolom
Pemurnian  dan  pemisahan  hasil  reaksi  dilakukan menggunakan  kromatografi  kolom.  Alat  kromatografi kolom  disiapkan dengan  menambahkan kapas  di bagian bawahnya. Pembuatan bubur silika gel 60 sebanyak 20 g menggunakan  fase  gerak  campuran  aseton  :  kloroform (3:4).  Bubur  tersebut  dituang  perlahan  ke  dalam  kolom, diikuti  dengan  fase  gerak  yang  ditampung  dalam  labu erlenmeyer. Setelah itu, pelarut yang diuapkan dari hasil reaksi  dicampur  dengan  sedikit  fase  gerak,  kemudian dimasukkan perlahan ke dalam kolom. Fase gerak dituang secara terus-menerus dalam kolom, dan eluat yang keluar ditampung  dalam  vial.  Satu  noda  dengan  nilai  Rf  yang sama  dari  seluruh  vial  dikumpulkan  dalam  pengujian kemurnian  menggunakan  kromatografi  lempeng  tipis dengan eluen aseton: kloroform (3:4) (Ekowati, 2010).

## Penentuan  Jarak  Lebur  pada  Uji  Kemurnian Senyawa
Sejumlah kecil kristal senyawa yang akan ditentukan jarak  leburnya  digerus  dan  dimasukkan  ke  dalam  pipa kapiler  dengan  cara  menekan-nekan  pipa  kapiler  yang salah  satu  ujungnya  tertutup  pada  serbuk  yang  telah dihaluskan sampai pipa terisi sekitar 2-3 mm. Pipa kapiler dimasukkan  ke  dalam  alat MelTemp  Electrothermal Melting Point Apparatus untuk penentuan jarak leburnya dengan minimal dua kali replikasi (Ekowati, 2012).

## Uji Kemurnian Senyawa dengan KLT
Senyawa  dilarutkan  dalam  etanol  serta  ditotolkan pada  lempeng  silika  gel  F 254 dan  dieluasi  dengan  fase gerak yang berbeda,  yakni  aseton :  kloroform (3:4),  etil asetat  :  metanol  (5:4),  dan n -heksana  :  etil  asetat  (4:1) (untuk EPMS). Sementara pengujian kemurnian senyawa hasil  sintesis  digunakan  fase  gerak  aseton  :  kloroform (3:4),  etil  asetat  :  metanol  (70:1),  dan n -heksana  :  etil asetat : metanol (1:3:2). Hasil eluasi diamati dengan sinar UV-254  nm.  Kemunculan  noda  tunggal  pada  tiga lempeng yang telah dieluasi dengan tiga sistem fase gerak berbeda  menunjukkan  bahwa  senyawa  tersebut  murni (Ekowati, 2012).
Identifikasi Senyawa Hasil Reaksi dengan Spektrofotometri IR
Sampel  senyawa  0,5  –  1,0  mg  yang  telah  murni, dicampur  dengan  serbuk  kering  kalium  bromida  (KBr) sebanyak  100  mg.  Campuran  digerus  dalam  mortir hingga  homogen,  kemudian  dimasukkan  ke  dalam  alat pembuat  pelet  dan  ditekan  menggunakan  alat  penekan hidrolik  di  bawah  tekanan  sebesar  10.000  –  15.000  Psi sampai  diperoleh  pelet  yang  transparan.  Pelet  yang
dihasilkan  diletakkan  pada sample  holder dari  alat spektrofotometri inframerah untuk direkam dan dilakukan analisis data (Silverstein et al ., 2005).
Identifikasi Senyawa Hasil Reaksi dengan Spektrometri 1 H-NMR
Sebanyak  0,1  mg  sampel  dilarutkan  dalam  0,4  ml CDCl 3 kemudian ditambahkan TMS di dalam glass tube berdiameter  5  mm,  serta  diletakkan  dalam probe .
Spektrum  resonansi  magnet  proton  diamati  pada  daerah pergeseran kimia 0-15 ppm (Silverstein et al ., 2005).
Identifikasi Senyawa Hasil Reaksi dengan Spektrofotometri UV
Sejumlah  sampel  dilarutkan  dalam  etanol p.a ,  lalu serapannya  diukur  pada  daerah  UV  dengan  panjang gelombang 200-400 nm, dan diamati panjang gelombang maksimumnya (Ekowati, 2012).

## Perhitungan Berat Senyawa Hasil Sintesis
Perhitungan berat hasil sintesis senyawa target dapat dilihat pada Tabel 1 dengan rumus:
Presentase Hasil = 𝐴 𝐵 𝑥 100%
Keterangan: A = Berat senyawa hasil reaksi
B = Berat senyawa hasil perhitungan teoritis
Mol senyawa bereaksi x BM = 1,5 mmol x 188 = 282 mg Berdasarkan perhitungan di atas, maka pada penelitian ini diharapkan  akan  memperoleh  senyawa  target  sebanyak 282 mg, jika bereaksi sempurna.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Isolasi EPMS
Isolasi EPMS dari 5 kg rimpang kencur ( Kaempferia galanga L.)  yang  telah  dikeringkan  dan  dihaluskan menjadi  800  g  serbuk  kencur,  menggunakan  metode 4.4.1,  diperoleh  rendemen  sebesar  2,17%  (EPMS sebanyak  17,328  g.  Uji  organoleptis  terhadap  isolat, menunjukkan  bahwa  isolat  berbentuk  kristal  jarum, berwarna  putih,  serta  memiliki  aroma  aromatik (Sriarumtias et al. , 2010).
Penentuan  Kemurnian  Isolat  Rimpang  Kencur dengan KLT
Isolat rimpang kencur diuji kemurniannya menggunakan  KLT  dengan  tiga  jenis  eluen. Tabel  2 menunjukkan  uji  kemurnian  isolat  dengan  KLT  hanya tampak  satu  noda,  yang  mengindikasikan  adanya  satu senyawa pada isolat tersebut.
Tabel 1 . Perhitungan Persentase Hasil Senyawa Target Secara Teoritis Nama Zat BM (g/mol) Jumlah yang digunakan Jumlah mol awal (mmol) Jumlah mol yang bereaksi (mmol) Jumlah mol yang tersisa (mmol) EPMS 206,24 310,00 mg 1,5 1,5 0,0 Hidrazin hidrat 50,06 0,36 ml 7,5 1,5 6,0 p- metoksi sinamoil hidrazida 188,00 1,5 1,5
Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, Vol.11 No.1 June 2024 Page 12-19 P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048

## Pengukuran Jarak Lebur Isolat Rimpang Kencur
Penentuan jarak lebur isolat rimpang kencur dengan hasil pengamatan dapat dilihat pada Tabel 3 . Pengukuran jarak lebur  kristal EPMS  menunjukkan jarak lebur  rata- rata antara 47 - 49,3°C. Hasil ini mengindikasikan bahwa isolat  cukup  murni.  Menurut  LeFevre  (1997),  senyawa murni  umumnya  memiliki  rentang  lebur  1-2°C, sedangkan  penelitian  Nurani  (2020)  melaporkan  bahwa EPMS yang diisolasi dari rimpang kencur memiliki jarak lebur antara 48 - 49°C.

## Hasil  Identifikasi  Struktur  Isolat  Rimpang  Kencur Dengan Spektrofotometri IR
Hasil
identifikasi menggunakan metode spektrofotometri  IR  tersaji  dalam Tabel  4 .  Hasil interpretasi spektrum IR menunjukkan adanya gugus C- O, yang ditandai dengan pita serapan pada 1173 cm -1 dan gugus  C=O  ester  ditunjukkan  dengan  adanya  serapan
pada 1707 cm -1 . Gugus C=C alkena yang teridentifikasi melalui  pita  serapan  pada  1602  cm -1 ,  dan  829  cm -1 , memberikan informasi bahwa pada isolat rimpang kencur tersebut terdapat cicin aromatik tersubstitusi pada posisi para .
Identifikasi Struktur Isolat Rimpang Kencur dengan Spektrometri 1 H-NMR Spektrum 1 H-NMR isolat rimpang kencur menunjukkan  adanya  tujuh  puncak  dengan  pergeseran kimia yang berbeda. Informasi dari pola ini sesuai dengan keberadaan gugus etoksi yang terikat pada suatu atom C karbonil,  sedangkan  puncak  serapan  singlet  dengan
geseran kimia 3,82 ppm sesuai dengan keberadaan proton pada  gugus  metoksi.  Pergeseran  kimia  proton  6,29  dan 7,62 ppm sama-sama membentuk puncak doblet dengan tetapan  kopling  yang  sama,  yakni  16,0  Hz.  Menurut Silversetin et  al .  (2005),  rentang  nilai  tetapan  kopling antara  12-17  Hz  adalah  ciri  khas  ikatan  -C=C-  dengan konfigurasi  trans.  Oleh  karena  itu,  hasil  tersebut  sesuai dengan  struktur  EPMS  yang  telah  diketahui  memiliki ikatan  -C=C-  dengan  konfigurasi  trans  (Luger et  al ., 1996). Tetapan kopling ini menunjukkan bahwa masing- masing  proton  terletak  pada  posisi  orto,  sehingga  inti aromatik yang dimaksud mempunyai dua substituen pada posisi  para.  Dari  hasil  identifikasi  tersebut  diketahui bahwa isolat rimpang kencur dalam penelitian ini identik dengan  struktur  senyawa  EPMS  yang  sesuai  dengan pustaka (Ekowati, 2012).

## Identifikasi Struktur Isolat Rimpang Kencur dengan Spektrofotometri UV
Identifikasi  dengan  metode  spektrofotometri  UV spektrum UV isolat rimpang kencur menunjukkan adanya dua  puncak,  yakni  pada  284,5  nm  dan  221,5  nm. Berdasarkan  hal  tersebut  diketahui  bahwa  λ maks isolat tersebut adalah 284,5 nm .

## Optimasi  Sintesis  senyawa  target  menggunakan Metode Pemanasan Konvensional
Metode  pemanasan  konvensional  pada  optimasi sintesis senyawa target menunjukkan bahwa hingga reaksi berlangsung selama 6 jam noda EPMS masih terlihat, dan noda  EPMS  yang  digunakan  sebagai  pembanding  tidak lagi tampak (habis) pada sampel yang diambil saat reaksi telah  berlangsung  selama  6,5  jam.  Dari  hasil  optimasi yang  telah dilakukan,  waktu  reaksi  adalah  6,5  jam pada suhu  78-80°C  (titik  didih  etanol).  Proses transfer  energi ke  dalam  sistem  ini terjadi perlahan  dan  kurang  efisien, karena temperatur labu alas bulat atau wadah akan lebih tinggi  dibandingkan  dengan  temperatur  yang  mencapai campuran  reaksi.  Akibatnya  campuran  reaksi  yang letaknya  lebih  dekat  dengan  wadah  akan  mengalami pemanasan  berlebih  dan  menyebabkan  terjadinya dekomposisi produk atau pun reagen.

## Optimasi  Sintesis  senyawa  target  menggunakan Metode Iradiasi Gelombang Mikro
Metode  iradiasi  gelombang  mikro  pada  optimasi sintesis  senyawa  target menggunakan  bahan  awal  1,5 mmol EPMS dan 7,5 mmol hidrazin hidrat dengan daya 40, 80, dan 120 W. Pada setiap daya yang berbeda diambil sampel  setiap  sepuluh  menit  untuk  mengetahui kesempurnaan  hasil  reaksi  (waktu  reaksi).  Daya gelombang  mikro  yang  dipilih  yakni  120  W  dan  waktu reaksi  terpilih  adalah  25  menit.  Sebagai  hasilnya, campuran  reaksi  akan  terdistribusi  secara  serentak  dan merata. Panas ini berasal dari interaksi antara gelombang mikro  dengan  komponen-komponen  dalam  campuran
Tabel 3. Jarak Lebur Isolat Rimpang Kencur Replikasi Jarak Lebur Isolat (°C) Rata-rata Jarak Lebur Isolat Jarak lebur EPMS ( ◦ C) 1 47-50 47 – 49,3 48 - 49 2 47-49 3 47-49
Tabel 4. Interpretasi Spektrum IR Isolat Rimpang  Kencur
Gugus Fungsi Bilangan Gelombang (cm -1 ) Pustaka a Isolat EPMS b C-O (ester, eter) C=O (ester) 1300-1000 1750-1730 1173 1707 1174 1707 C-H (aromatik,ulur) 3150-3050 3007 3007 C=C (alkena) 1680-1600 1602 1604 C-H (alifatik,ulur) 3000-2850 2978 2936 Cincin aromatik Tersubstitusi para 850-800 829 830
Keterangan: a : bilangan gelombang yang diambil dari pustaka sebagai referensi untuk identifikasi gugus fungsi.
b : spektrum  infra  merah  EPMS  (Etil  p-metoksisinamat), yang digunakan sebagai pembanding untuk isolat yang dianalisis
Tabel 2. Harga Rf Isolat Rimpang Kencur pada Tiga Macam Eluen
Eluen Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3 Jumlah Noda Rf Jumlah Noda Rf Jumlah Noda Rf Etil Asetat: Metanol (5:4) Satu 0,81 Satu 0,81 Satu 0,81 Aseton: Kloroform (3:4) Satu 0,72 Satu 0,72 Satu 0,72 n -Heksana: Etil Asetat (4:1) Satu 0,42 Satu 0,42 Satu 0,42
Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, Vol.11 No.1 June 2024 Page 12-19 P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048
reaksi.  Dengan  panas  yang  lebih  efesien,  diharapkan sintesis  menggunakan  metode  ini  membutuhkan  waktu yang  lebih  singkat  dengan  persentase  hasil  reaksi  lebih besar  dibanding  menggunakan  metode  pemanasan konvensional, karena tidak terjadi pemanasan berlebih/overheating  yang  menyebabkan  degradasi produk atau pun reagen (Kappe et al ., 2009).

## Pemisahan  Komponen  dalam  Campuran  Hasil Sintesis dengan Kromatografi Kolom
Uji  KLT  mengindikasikan  lebih  dari  satu  noda sehingga pemurnian dan pemisahan hasil reaksi dilakukan melalui kromatografi kolom dan menandakan keberadaan beberapa  senyawa  dalam  hasil  sintesis.  Nilai  Rf  yang sama dalam fase gerak kromatografi kolom dikumpulkan untuk uji kemurnian dengan penentuan jarak lebur dan uji KLT.  Pada  kedua  fraksi  hasil  sintesis  uji  KLT menggunakan  metode  pemanasan  konvensional  dan iradiasi  gelombang  mikro  menunjukkan  nilai  Rf  yang identik (0,66) dan berbeda dengan Rf EPMS bahan awal. Penentuan jarak lebur campuran fraksi menghasilkan rata- rata  71-74,5°C,  mendekati  jarak  lebur  fraksi  tunggal metode iradiasi gelombang mikro (71,3-74°C). Perbedaan yang  tidak  signifikan  memperkuat  asumsi  bahwa  kedua fraksi  tersebut  sama. Gambar  2 menunjukan  hasil  uji kemurnian  dengan  KLT  menggunakan  tiga  campuran eluen  berbeda,  mengindikasikan  adanya  satu  noda  pada setiap  replikasi,  menandakan  kemurnian  senyawa  hasil
sintesis.  Dengan  demikian,  dapat  ditarik  kesimpulan bahwa senyawa yang dihasilkan dari sintesis adalah baru dan memiliki perbedaan dengan bahan awal.

## Identifikasi Struktur Senyawa Hasil Sintesis
Selanjutnya,  analisis  dilakukan  terhadap  senyawa hasil  sintesis menggunakan spektrofotometri IR, spektrofotometri  UV,  dan  spektrometri 1 H-NMR.  Hasil interpretasi  spektrum  IR  senyawa  hasil  sintesis dibandingkan  dengan  spektrum  IR  EPMS,  dan  hasilnya tercantum pada Tabel 5 . Pembawa yang digunakan adalah pellet  KBr.  Senyawa  target  sintesis  adalah p -metoksi sinamoil hidrazida dan pada spektrum IR senyawa hasil reaksi  menunjukkan  adanya  gugus  C-N  (amida),  N-H, C=O (amida), C-O, dan cincin aromatik tersubstitusi para. Semua  gugus  fungsi  hadir  pada  senyawa p -metoksi sinamoil  hidrazida,  namun  gugus  -C=C-  alkena  tidak terlihat pada spektrum IR dari senyawa hasil sintesis. Oleh karena  itu diduga  bahwa  struktur  senyawa  hasil sintesis bukanlah  struktur  senyawa  target,  melainkan  identik dengan  struktur  senyawa  target  yang  kehilangan  ikatan rangkap (C=C) nya.
Hasil  analisis  menggunakan  spektrofotometri  UV menunjukkan  bahwa  adanya  pergeseran  ke  arah hipsokromik  (panjang  gelombang  yang  lebih  pendek), yang  disebabkan  berkurangnya  gugus  kromofor  berupa ikatan  rangkap  (-C=C-).  Namun,  proton  gugus  N-H (amida) dan –NH 2 tidak muncul pada spektrum tersebut. Menurut Field et al . (2008), fenomena ini disebabkan oleh sifat labil dari proton, di mana pergeseran kimianya sangat dipengaruhi oleh pelarut, konsentrasi, dan suhu, selain itu sifat labil dari proton tidak menunjukkan ciri khas berupa rentang pergeseran kimia.
Dari hasil analisis dengan spektrofotometri IR yang menunjukkan  ketiadaan  gugus  -C=C-  alkena  pada senyawa hasil sintesis, serta pergeseran yang sesuai untuk proton-proton pada –CH 2 -CH 2 -. Menurut Silverstein et al .
(2005),  pada  uji  dengan  menggunakan  spectrometer NMR,  struktur  -C=C-  dengan  konfigurasi  trans  seperti EPMS serta senyawa target memiliki tetapan kopling 12- 17 Hz, namun pada Tabel 6 diketahui spektrum senyawa hasil  sintesis  tidak  ada  puncak  dengan  tetapan  kopling tersebut. Dengan demikian, disimpulkan bahwa senyawa yang dihasilkan bukanlah senyawa target, p- metoksisinamoilhidrazida, melainkan 3-(4- metoksiphenil)propanahidrazida.
Hal  tersebut  dimungkinkan  dapat  terjadi  karena adanya  pembentukan  diimida.  Menurut  Roberts  & Caserio  (1997) hidrazin  dapat  mengalami  dehidrogenasi menjadi  diimida  (HN=NH).  Diimida  dapat  digunakan untuk hidrogenasi ikatan rangkap, namun pada temperatur normal  (suhu  ruang),  diimida  hanya  dapat  dijumpai sebagai  senyawa  antara  yang  tidak  dapat  diisolasi. Sehingga  salah  satu  cara  yang  paling  sederhana  untuk menghasilkan  diimida  adalah  dengan  mendehidrogenasi hidrazin  menggunakan  oksidator  (misalnya  H 2 O 2 atau O 2 ). Ada dua kemungkinan mekanisme reaksi pembentukan senyawa 3-(4-metoksifenil)propana hidrazida  yang  merupakan  senyawa  hasil  sintesis  ini. Kemungkinan  pertama  adalah  reaksi  antara  EPMS  dan hidrazin hidrat menghasilkan p -metoksisinamoilhidrazida yang  kemudian  ikatan  rangkap  (C=C  alifatik)  pada senyawa  ini  mengalami  reduksi  karena  adanya  hidrazin hidrat,  sehingga  hasil  sintesisnya  berupa  senyawa  3-(4-
Gambar 2. Uji kemurnian senyawa hasil sintesis Sistem Eluen: R1= n- Heksana : Etil asetat : Metanol (1:3:2)
R2= Aseton : Kloroform (3:4) R3= Etil asetat : Metanol (70:1)
Tabel 5 . Interpretasi Spektrum IR Senyawa Hasil Sintesis
Gugus Fungsi Bilangan Gelombang (cm -1 ) Pustaka* Isolat C-N (amida) 1550 1512 N-H (ulur) 3500-3100 3316 C=O (amida) 1680-1630 1674 C-H (aromatik, ulur) 3150-3050 3100 C-O (eter) 1300-1000 1246 C-H (alifatik, ulur) 3000-2850 2930 Cincin aromatik tersubstitusi para 850-800 824
Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, Vol.11 No.1 June 2024 Page 12-19 P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048
metoksifenil)propanahidrazida.  Kemungkinan  kedua, sebelum bereaksi dengan hidrazin hidrat, ikatan rangkap (C=C  alifatik)  pada  EPMS  telah  lebih  dulu  mengalami reduksi  menjadi  senyawa  Etil  3-(4-metoksifenil)- propanoat,  barulah  kemudian  bereaksi  dengan  hidrazin hidrat dan menghasilkan
senyawa
3-(4- metoksifenil)propanahidrazida. Mekanisme reaksi
pembentukan senyawa hasil sintesis tersebut dapat dilihat pada Gambar 3 .
Gambar 3. Mekanisme reaksi pembentukan senyawa hasil sintesis

## Persentase Hasil Sintesis
Berdasarkan  persentase  hasil  sintesis  pada Tabel  7 dan Tabel 8 , dapat disimpulkan bahwa baik menggunakan metode  pemanasan  konvensional  (refluks  78-80°C,  6,5 jam)  maupun  iradiasi  gelombang  mikro  (120  W,  25 menit),  reaksi  antara  EPMS  dengan  hidrazin  hidrat  (5 ekuivalen)  tidak  menghasilkan  senyawa  target  yang diinginkan, melainkan
senyawa 3-(4-
metoksifenil)propanahidrazida. Metode pemanasan konvensional memberikan senyawa hasil sintesis sebesar 0,76%,  sedangkan  metode  iradiasi  gelombang  mikro sebesar  7,90%.  Sintesis  menggunakan  metode  iradiasi gelombang mikro juga membutuhkan waktu reaksi yang
lebih singkat (25 menit) jika dibandingkan dengan sintesis menggunakan  metode  pemanasan  konvensional,  yang memerlukan waktu reaksi 6,5 jam. Oleh karena itu, sesuai dengan hipotesis bahwa dalam sintesis senyawa organik, khususnya  senyawa  3-(4-metoksifenil)propanahidrazida penggunaan  metode  iradiasi  gelombang  mikro  lebih efisien dibandingkan dengan pemanasan konvensional.

## KESIMPULAN
Senyawa  p-metoksisinamoilhidrazida  tidak  dapat dihasilkan  dari  reaksi  antara  EPMS  dan  hidrazin  hidrat menggunakan metode konvensional dan iradiasi gelombang mikro. Sintesis menggunakan metode iradiasi gelombang mikro dengan bahan awal EPMS dan hidrazin hidrat memerlukan waktu lebih singkat dan menghasilkan persentase  senyawa  hasil  sintesis  (3-(4-metoksifenil) propanahidrazida) yang lebih besar dibandingkan dengan sintesis menggunakan metode pemanasan konvensional.

## DAFTAR PUSTAKA
Badan  Penelitian  dan  Pengembangan  Pertanian  (2007) 'Varietas unggul kencur', Warta Penelitian dan Pengembangan Pertanian , 29(2), pp. 1-3.
Belwal,  S.  (2013)  'Green  revolution  in  chemistry  by microwave  assisted  synthesis:  A  review', Modern Chemistry , I, pp. 22-25.
Burke,  S.D.  and  Danheiser,  R.L.  (1999)  ‘ Oxidizing  and Reducing  Agents ’  Chincester:  John  Wiley  & Sons Ltd., pp. 5, 170-173.
Deinstrop, E.H. (2007) ‘ Applied Thin-Layer
Chromatography ’ Eckental: Wiley-VCH, p. 2.
Departemen  Kesehatan  RI  (2000) Parameter  Standar Umum  Ekstrak  Tumbuhan  Obat .  Jakarta: Departemen Kesehatan RI, pp. 10-12.
Departemen  Kesehatan  RI  (2008) Farmakope  Herbal Indonesia . Jakarta: Departemen Kesehatan RI, pp. 54-56.
Carvalho, S.A. et al. (2012) 'Design and synthesis of new (E)-cinnamic  N-acylhydrazones  as  potent antitrypanosomal agents', European Journal of Medicinal Chemistry , 54, pp. 512-521.
Clayden,  J.,  Greeves,  N.,  Warren,  S.  and  Wothers,  P.
(2001) Organic  Chemistry .  Oxford:  Oxford University Press, pp. 135-136.
Ekowati, J. (2012) 'Sintesis turunan p- metoksisinamoiltiourea dari etil p- metoksisinamat  isolat  Kaempferia  galanga dalam usaha meningkatkan aktivitas kemopreventif kanker melalui hambatan cyclooxygenase-2'.  Disertasi.  Program  Studi MIPA Universitas Airlangga, Surabaya, pp. 74- 78.
Tabel  6. Interpretasi  Spektrum 1 H-NMR  Senyawa          Hasil
Sintesis Geseran Kimia (ppm) Multiplisitas Tetapan Kopling (Hz) Jumlah Proton 2,35 Triplet 7,9 2 2,84 Triplet 7,9 2 3,70 Singlet - 3 6,75 Doblet 8,4 2 7,03 Doblet 8,4 2 Tabel  7. Persentase  Senyawa  Hasil  Sintesis  menggunakan Metode Pemanasan Konvensional Bahan Awal Senyawa Hasil Sintesis EPMS (g) Hidrazin hidrat (ml) Massa (g) (%) 0,3100 0,36 0,0022 0,76 Tabel  8 .  Persentase  Senyawa  Hasil  Sintesis  menggunakan
Metode Iradiasi Gelombang Mikro Bahan Awal Senyawa Hasil Sintesis EPMS (g) Hidrazin hidrat (ml) Massa (g) (%) 0,3100 0,36 0,0230 7,90
Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, Vol.11 No.1 June 2024 Page 12-19 P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048
Ekowati,  J.  and  Diyah,  N.W.  (2013)  'Aktivitas antinosiseptif  dan  uji  in  silico  terhadap cyclooxigenase  dari  asam  p-metoksisinamat dan  asam  m-metoksisinamat', Berkala  Ilmiah Kimia Farmasi , 2(1), pp. 32-39.
Ekowati,  J.,  Rudyanto,  M.,  Sasaki,  S.,  Budiati,  T., Sukardiman,  Hermawan,  A.,  &  Meiyanto,  E.. (2010)  'Structure  modification  of  ethyl  p- methoxycinnamate  isolated  from  Kaempferia galanga  L.  and  citotoxicity  assay  of  the Products on WiDr cells', Indonesian Journal of Cancer Chemopreventive , 1(1), pp. 12-18.
Ekowati,  J.  (2012)  'Structure  modification  of  ethyl  p- methoxycinnamate  and  their  bioassay  as chemopreventive agent against mice’s fibrosarcoma', International Journal of Pharmacy  and  Pharmaceutical  Sciences , 4(Suppl 3), pp. 528-532.
Fessenden,  R.J.  and  Fessenden,  J.S.  (1997) Kimia Organik , Edisi Ketiga, jilid satu. Diterjemahkan oleh  A.  Handyana  Pudjatmaja.  Jakarta: Erlangga, pp. 175-176.
Fried, B. and Sherma, J. (1999) Thin-Layer Chromatography . 4th edn. New York: Marckel Dekker, Inc., pp. 9-25, 93.
Furniss,  B.S.,  Hannaford,  A.J.,  Smith,  P.W.G.  and Tatchell,  A.R.  (1989) Vogel’s  Texbook  of Practical Organic Chemistry . London: Longman Scientific & Technical, p. 236.
Kappe,  C.O.,  Dallinger,  D.  and  Murphee,  S.S.  (2009) Practical  Microwave  Synthesis  for  Organic Chemists . Weinheim: Wiley-VCH, pp. 1-2, 11- 20.
Katzung,  B.G.,  Trevor,  A.J.  and  Masters,  S.B.  (2009) Basic  and  Clinical  Pharmacology .  11th  edn. New  York:  McGraw-Hill  Medical  Publishing Division, pp. 1218-1220.
Kemp,  W.  (1986) NMR  in  Chemistry:  A  Multinuclear Introduction .  London:  MacMillan  Education, Ltd., p. 75.
LeFevre, J.W. (1997) 'Measuring the melting points of the compounds and mixtures', Chemical Education Resources , 7, pp. 1-12.
Luger,  P.,  Weber,  M.,  Dung,  N.X.  and  Tuyet,  N.T.B.
(1996) 'Ethyl p-methoxycinnamate from Kaempferia  galanga  L.  in  Vietnam', Acta Crystallographica  Section  C ,  52,  pp.  1255- 1257.
Menges,  N.  and  Balci,  M.  (2014)  'Catalyst-Free Hydrogenation  of  Alkenes  and  Alkynes  with Hydrazine in the Presence of Oxygen', Synlett , 25(5), pp. 671-676.
Merck  Research  Laboratories  (2006) The  Merck  Index . 14th edn. Merck Research Laboratories, p. 369, 670, 1065.
Michaux,  C.  (2006)  'Structure-based  pharmacophore  of COX-2 selective inhibitors and identification of original  lead  compounds  from  3D  database searching  method', European  Journal  of Medicinal Chemistry , 41, pp. 1446-1455.
Mulja,  M.  and  Suharman  (1995) Analisis  Instrumental . Surabaya:  Airlangga  University  Press,  pp.  26- 28.
Nurani,  L.,  Asahi,  A.  and  Susanti,  H.  (2020) 'Determination  of  epms  content  and  anti- inflammatory test  rhizome  extract  Kaempferia galanga, L by inhibition of protein denaturation method', Pharmaciana , 10(3), pp. 381-390.
Patrick,  G.L.  (1995) An  Introduction  to  Medicinal Chemistry . New York: Oxford University Press Inc., pp. 82-110.
Pavia, D.L., Lampman, G.M., Kriz, G.S. and Engel, R.G.
(2002) Microscale and Macroscale Techniques in  the  Organic  Laboratory .  1st  edn.  Belmont:
Brooks/Cole, pp. 116-120, 289-290.
Pavia, D.L., Lampman, G.M., Kriz, G.S. and Vyvyan, J.R. (2009) Introduction  to  Spectroscopy .  4th  edn. Belmont: Brooks/Cole, pp. 26-54, 70-72, 388- 389.
Riccioti, E. and FitzGerald, G.A. (2011) 'Prostaglandins and
Inflammation',
Arteriosclerosis, Thrombosis,  and  Vascular  Biology ,  31(5),  pp. 986-1000.
Robert, J.D. and Caserio, M.C. (1977) Basic Principle of Organic Chemistry . 2nd edn. Menlo Park, CA: W.A. Benjamin, Inc., pp. 418-419.
Rouessac, F. and Rouessac, A. (2007) Chemical Analysis: Modern Instrumentation Methods and
Techniques .  2nd  edn.  London:  John  Wiley  & Sons, Ltd., pp. 117-122.
Schoffstall,  A.M.,  Gaddis,  B.A.  and  Druelinger,  M.L. (2000) Microscale  and  Miniscale  Organic Chemistry Laboratory Experiments . The McGraw-Hill Companies, Inc., pp. 37-45.
Silverstein, R.M., Webster, F.X. and Kiemle, D.J. (2005)
Spectroscopy Identification of Organic Compounds . 7th edn. New York: John Wiley &
Sons, Inc., pp. 79-81, 198-200.
Sirisangtragul, W. and Sripanidkulchai, B. (2011) 'Effects of  Kaempferia  galanga  L.  and  ethyl-p- methoxycinnamate (EPMC) on hepatic microsomal cytochrome P450s enzyme activities  in  mice', Songklanakarin  Journal  of
Science and Technology , 33(4), pp. 411-417.
Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, Vol.11 No.1 June 2024 Page 12-19 P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048
Sriarumtias,  F.F.,  Syamsudin,  R.A.M.R.  and  Abdillah, F.F.  (2022)  'Formulasi  dan  Karakterisasi Mikroemulgel  Etil  p-Metoksisinamat  (EPMS) dari  Rimpang  Kencur  (Kaempferia  galanga Linn)', Jurnal Kefarmasian Akfarindo , pp. 8-14.
Stabile,  R.G.  and  Dicks,  A.P.  (2004)  'Two-Step  Semi- Microscale  Preparation  of  Cinnamate  Ester Sunscreen  Analog', Journal  of  Chemical
Education , 81(10), p. 1488.
Tewtrakul,  S.  (2005)  'Chemical  components  and biological  activities  of  volatile  oil  of Kaempferia galanga