Penulis Zulhan Arif 1* , Aurentinus Zalukhu 1 , Alfi Hudatul Karomah 1 , Mohamad Rafi 1,2 Afiliasi 1 Departemen  Kimia,  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam,  Institut  Pertanian  Bogor, Kampus IPB Dramaga, Jl. Kamper, Babakan, Kec. Dramaga, Kabupaten Bogor, Jawa Barat 16680 2 Pusat  Studi  Biofarmaka  Tropika,  Lembaga  Penelitan  dan  Pengabdia  kepada  Masyarakat.,  Institut Pertanian  Bogor,  Kampus  IPB  Taman  Kencana,  Jl.  Taman  Kencana  No.3,  RT.03/RW.03,  Babakan, Kecamatan Bogor Tengah, Kota Bogor, Jawa Barat 16128
Kata Kunci  antioksidan  fenolik
 flavonoid
 kromatografi lapis tipis
 sinensetin
Keywords  antioxidant
 phenolic
 flavonoid
 thin layer chromatography
 sinensetin
Diterima 20 Juli 2022 Direvisi 29 November 2022 Disetujui 30 November 2022
*Penulis Koresponding
Zulhan Arif email: zulhanarif@apps.ipb.ac.id

## ABSTRAK
Herbal kumis kucing berkhasiat sebagai penyembuh radang, demam, rematik, kencing manis,  dan  batu  ginjal.  Tanaman  ini  diketahui  mengandung  senyawa  kelompok  fenolik dan  flavonoid.  Penelitian  ini  bertujuan  membandingkan  profil  antioksidan  senyawa fenolik dan flavonoid dari batang dan daun kumis kucing yang diekstraksi menggunakan pelarut  air  dan  etanol  secara  maserasi.  Kisaran  rendemen  batang  dan  daun  ekstrak  air adalah  12.98-31.28%  dan  ekstrak  etanol  3.58-9.82%  berdasarkan  bobot  kering.  Batang dan  daun  ekstrak  air  mengandung  fenolik  sebesar  7.82-26.43  (mg  GAE/g)  dan  ekstrak etanol 2.27-7.84 (mg GAE/g).  Kadar  flavonoid  kumis  kucing  ekstrak air  adalah 1.23-2.86 (mg  EK/g)  dan  ekstrak  etanol  1.09-3.95  (mg  EK/g).  Aktivitas  antioksidan  (IC 50 )  ekstrak etanol  dari  daun 123.91  (µg/mL)  dan  dari batang 125.50  (µg/mL)  sedangkan  ekstrak  air untuk daun ialah 114.70 (µg/mL) dan  batang 125.03 (µg/mL). Hasil uji korelasi senyawa aktif  menggunakan regresi  linear  adalah  senyawa  fenolik  dengan  antioksidan  lebih kuat dari  pada  senyawa  flavonoid.  Hasil  analisis  sidik  jari  kromatografi  lapis  tipis  secara kualitatif  menunjukkan  bahwa  baik  ekstrak  etanol  maupun  ekstrak  air  mengandung senyawa sinensetin alami.

## ABSTRACT
Orthosiphon  aristatus,  known  as  kumis  kucing  in  Indonesia,  has  some  biological activity, i.e., as an anti-inflammatory, fever, rheumatism, diabetes, and kidney stone. This plant is also known for being rich in phenolic compounds such as flavonoids. In this study, we would like to compare the antioxidant activity, total phenolics, and flavonoid content from the stems and leaves of Orthosiphon aristatus extracted with water and ethanol by maceration. The yield stem and leaves of the water extract are 12.98-31.28%, and ethanol extract 3.58 - 9.82% (dry basis). The stem and leaves water extract contains a phenolic of 7.82-26.43  (mg  GAE/g)  and  ethanol  extract  of  2.27-7.84  (mg  GAE/g).  Water  extract Orthosiphon  aristatus flavonoid  content  is  1.23-2.86  (mg  EK/g),  and  ethanol  extract  is 1.09-3.95  (mg  EK/g).  The  antioxidant  activity  of  ethanol  (IC 50 ),  extract  from  leaves  was 123.91  (µg/mL)  and  from  stems  was  125.50  (µg/mL),  while  IC 50 of  water  extract  from leaves  was  114.70  (µg/mL)  and  from  stems  was  125.03  (µg/mL).  The  correlation  test result  of  active  compounds  using  linear  regression  is  phenolic  compounds  with antioxidants  stronger  than  flavonoids.  The  qualitative  thin-layer  chromatography fingerprint analysis showed that ethanol and water extract contained natural sinensetin compounds.

## Kapasitas Antioksidan, Kadar Fenolik, dan Flavonoid Total Ekstrak Air dan Etanol Kumis Kucing ( Orthosiphon aristatus)
Antioxidant  Capacity,  Total  Phenolic,  and  Flavonoid  Content  from  Java  Tea  (Orthosiphon  aristatus) Extracts

## PENDAHULUAN
Kumis  kucing  ( Orthosiphon  aristatus )  merupakan salah satu tumbuhan obat yang sudah lama digunakan dalam pengobatan tradisional di Indonesia (Batubara et al .  2020).  Tumbuhan  ini  berkhasiat  sebagai  obat tekanan  darah  tinggi,  sakit  kuning,  diabetes,  penyakit ginjal,  rematik,  dan  mempunyai  efek  antelmintik  (Ulya et  al. 2014;  Juliani et  al. 2016).  Kumis  kucing  memiliki kandungan  senyawa  kimia  yang  termasuk  ke  dalam golongan monoterpena, diterpena, triterpena, saponin, fenolik, seperti flavonoid serta asam fenolat. (Rafi et al. 2021).  Fenolik  dan  flavonoid  merupakan  golongan senyawa  yang  memiliki  aktivitas  antioksidan  dan berkaitan  dengan  kandungan  senyawa  kimia  pada kumis  kucing,  yaitu  sinensetin,  eupatorin,  3’ -hidroksi- 5,6,7,4’  tetrametoksiflavon,  dan  asam  rosmarinat (Abdullah et al. 2020).
Komposisi  senyawa  kimia  terekstrak  dari  suatu tanaman  dapat  dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor, salah  satunya  bagian  tumbuhan  yang  diekstraksi. Perbedaan  bagian  tumbuhan  yang  diekstraksi  akan mempengaruhi  aktivitas  biologis  yang  ditimbulkan, karena  setiap  bagian  tumbuhan  memiliki  kandungan senyawa  kimia  yang  berbeda.  Chua et  al .  (2018)  telah melaporkan  kandungan  senyawa  kimia  dan  aktivitas antioksidan  yang  terkandung  dalam  daun  dan  batang kumis  kucing,  akan  tetapi  penelitian  tersebut  hanya terbatas  pada  satu  jenis  pelarut  pengekstraksi  saja. Parameter  ekstraksi  seperti  polaritas  pelarut  juga berpengaruh  pada  jumlah  senyawa  yang  terekstraksi. Hal ini disebabkan adanya perbedaan karakteristik dan polaritas  dari  setiap  senyawa  kimia  (Kamarudin et  al . 2016).
Pada  penelitian  ini  pengecekan  komposisi  senyawa kimia  pada  bagian  tumbuhan  maupun  pelarut pengekstraksi  yang  berbeda  untuk  mengetahui  profil senyawa  kimia  di  dalam  suatu  tumbuhan.  Pemilihan bagian  daun  batang  didasarkan  pada  fakta  bahwa senyawa  metabolit  sekunder  pada  tanaman  dapat menyebar  dengan  persebaran  yang  berbeda  di  setiap bagian  tanaman.  Ekstrak  yang  dihasilkan  dari  batang dan daun perlu dilakukan penentuan profil kimia secara kualitatif  menggunakan  kromatografi  lapis  tipis. Selanjutnya ekstrak  daun dan batang  dari pelarut yang berbeda  ditentukan  aktivitas  antioksidan  dan  korelasi aktivitas  antioksidan  dari  flavonoid  fenol  dari  ekstrak daun dan batang kumis kucing.

## METODE Alat dan Bahan
Peralatan yang digunakan dalam penelitian ini yaitu peralatan gelas, penguap berputar R-114 (Büchi, Flawil, Swiss), microplate  reader Epoch (Biotek,  Winooski, Amerika  Serikat),  Seperangkat  peralatan  kromatografi lapis  tipis  (KLT)  yang  terdiri  atas automatic  sampler Linomat  5,  Reprostar  3, twin-through  chamber ,  dan peranti lunak WinCATS (CAMAG, Muttez, Swiss).
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  yaitu kumis kucing (bagian batang dan daun) yang diperoleh dari  Kebun  Percobaan  Pusat  Studi  Biofarmaka  Tropika (TropBRC), LPPM IPB, Bogor. Identifikasi tumbuhan dan voucer  spesimen  disimpan  di  TropBRC,  LPPM  IPB, Bogor. Etanol absolut, pereaksi Folin-Ciocalteu , Na 2 CO 3 , AlCl 3 ·H 2 O, FeCl 3 .6H 2 O, kloroform, n -heksana, diklorometana,  etil  asetat,  polietilena  glikol  400 (macrogol),  dan  asam  difenilboronat  amino  etil  ester diperoleh  dari  Merck  (Darmstadt,  Jerman).  Sedangkan untuk  DPPH,  troloks,  dan  asam  galat  (98.7%  dengan KCKT)  berasal  dari  Sigma-Aldrich  (Steinheim,  Jerman). Kalium  asetat  dibeli  dari  Wako  Pure  Chemical Industries (Osaka, Jepang), kuersetin hidrat berasal dari Tokyo  Chemical  Industry  (Tokyo,  Jepang),  dan sinensetin  (98.7%  dengan  KCKT)  diperoleh  dari ChromaDex Inc. (Santa Ana, Amerika Serikat).

## Penyiapan Dan Ekstraksi Sampel
Batang dan daun kumis kucing dikeringkan di dalam oven lampu menggunakan suhu sekitar 50 ⁰ C selama 7 hari.  Sampel  yang  sudah  kering  tersebut  kemudian digiling hingga menjadi serbuk dengan ukuran 40 mesh. Ekstraksi  sampel  dilakukan  menggunakan  pelarut  air dan  etanol  absolut  menggunakan  prosedur  yang dikembangkan  oleh  Roy et  al. (2014)  yang  telah dimodifikasi. Ekstraksi dilakukan menggunakan metode yang diadaptasi dari Lezoul et al . (2020). Sebanyak 30 g serbuk  batang  dan  daun  kumis  kucing  ditambahkan pelarut  dengan  nisbah  1:10.  Cara  maserasi  digunakan dalam  mengekstrak  sampel  dengan  waktu  24  jam  dan diaduk  setiap  6  jam.  Maserat  dipisahkan  dari pelarutnya dengan cara filtrasi. Proses ekstraksi diulang sebanyak 3 kali dengan jumlah pelarut dan waktu yang sama.  Selanjutnya,  filtrat  yang  telah  dikumpulkan dihilangkan pelarutnya menggunakan penguap berputar  pada suhu  60 ⁰C untuk  ekstrak  air  dan 40  ⁰C untuk  ekstrak  etanol  hingga  diperoleh  ekstrak  kasar kering.

## Penentuan Kadar Fenolik Total
Penentuan  kadar  fenolik  total  dilakukan  dengan menggunakan  prosedur  yang  digunakan  oleh  Sanchez- rangel et al. (2013) dengan modifikasi. Sebanyak 10 μ L larutan  ekstrak,  160 μ L  akuades,  10 μ L  pereaksi  Folin- Ciocalteu  10%,  dan  20 μ L  larutan  Na 2 CO 3 7.5% ditambahkan ke dalam pelat tetes 96 sumur. Campuran dihomogenkan  dan  diinkubasi  selama  30  menit. Absorbans  diukur  pada  panjang  gelombang  750  nm menggunakan microplate  reader .  Kadar  fenolik  total dihitung  berdasarkan  kurva  kalibrasi  larutan  standar asam  galat  dan  dinyatakan  sebagai  jumlah  ekuivalen asam  galat  dalam  gram  ekstrak  kering  (mg  GAE/g ekstrak  kering).  Pengukuran  dilakukan  sebanyak  tiga kali pengulangan.

## Penentuan Kadar Flavonoid Total
Penentuan  kadar  flavonoid  total  ditentukan menggunakan  metode  kolorimetrik  aluminium  klorida dengan  kuersetin  sebagai  senyawa  standar  mengikuti prosedur  yang  digunakan  Csepregi et  al. (2013)  dan Shraim et al . (2021) tentang penentuan total flavonoid. Sebanyak  10 μ L  ekstrak  sampel,  60 μ L  etanol,  10 μ L AlCl 3 10%, 10 μ L kalium asetat 1 M dan 120 μ L akuades dipindahkan  kedalam  pelat  tetes 96  sumur.  Campuran dihomogenkan  dan  diinkubasi  selama  30  menit. Absorbans larutan diukur pada panjang gelombang 415 nm  menggunakan microplate  reader .  Kadar  flavonoid total  ditunjukkan  sebagai  jumlah  ekuivalen  kuersetin dalam  gram  ekstrak  kering  (EK/g  ekstrak  kering). Pengukuran dilakukan sebanyak tiga kali ulangan.

## Penentuan Kapasitas Antioksidan
Penentuan  aktivitas  antioksidan  dengan  metode DPPH mengikuti prosedur yang dijelaskan oleh  Farhan et a l (2012) dan Juliani et al (2016) Sampel ekstrak yang diuji  adalah  ekstrak  air  dan  ekstrak  etanol  batang  dan daun kumis kucing. Sebanyak 100 μ L larutan DPPH 125 μ mol/L  dimasukkan  ke  dalam  pelat  96  sumur  yang didalamnya  telah  terdapat  100 μ L  ekstrak  sampel. Larutan  diinkubasi  selama  30  menit  pada  suhu  ruang. Absorbans larutan diukur pada panjang gelombang 517 nm  menggunakan multi-well  plate  reader .  Kontrol positif  yang  digunakan  adalah  troloks  dengan konsentrasi  10,  5,  2.5,  1.25,  dan  0.625  ( μ g/mL). Pengukuran dilakukan sebanyak tiga kali ulangan.

## Sidik Jari Kromatografi Lapis Tipis
Analisis  sidik  jari  kromatografi  dilakukan  melalui  4 tahapan  yaitu  preparasi  sampel,  larutan  standar, larutan  pendekteksi  dan  analisis  KLT  sampel  dan
standar  mengikuti  prosedur  yang  dikembangkan  oleh Septaningsih et  al. (2017).  Untuk  preparasi  sampel, sebanyak  0.5  gram  ekstrak  sampel  yang  ditambahkan 10  mL  metanol  dan  disonikasi  selama  30  menit. Selanjutnya  campuran  disaring  dan  filtrat  digunakan sebagai  larutan  uji.  Larutan  standar  sinensetin  dibuat dengan  konsentrasi  200 μ g/mL  dalam  metanol. Preparasi  larutan  pendeteksi  dilakukan  dengan membuat  larutan  pendeteksi  A  dibuat  dengan melarutkan  0.1  gram  asam  difenilboronat  amino  etil ester  dalam  20  mL  etil  asetat.  Larutan  pendeteksi  B dibuat dengan melarutkan 1 gram Polietilena glikol 400 (macrogol) dengan 20 mL diklorometana.
Uji  KLT  menggunakan  metode  yang  dijelaskan  oleh Septaningsih et  al. (2017).  Pelat  KLT  yang  digunakan yaitu  silika  gel  60  F254.  Ekstrak  air  dan  etanol  kumis kucing  serta  sinensetin  diaplikasikan  pada  pelat  KLT dalam bentuk pita dengan lebar 8 mm, jarak antar pita 4 mm, 10 mm dari sisi bawah, dan 10 mm dari sisi kiri dan  kanan  pelat.  Volume  larutan  standar  sinensetin dan  ekstrak  sampel  yang  diaplikasikan  sebanyak  15 μ L dan  3 μ L.  Bejana  kromatografi  yang  digunakan  yaitu twin-trough  chamber dengan  waktu  penjenuhan  fase gerak  30  menit.  Fase  gerak  yang  digunakan  yaitu kloroform, n -heksana,  dan  etil  asetat  dengan perbandingan  1:2:2  dan  jarak  pengembangan  80  mm dari posisi aplikasi sampel. Setelah elusi, pelat diangkat dari bejana kromatografi dan dipanaskan di dalam oven dengan suhu 105 ⁰C selama 3 menit. Setelah itu, pela t dicelupkan  kedalam  larutan  pendeteksi  A  dan dikeringkan  dalam  suhu  kamar.  Setelah  kering  pelat dicelupkan pada larutan pendeteksi B. Selanjutnya hasil derivatisasi  deteksi  didokumentasikan  dibawah  lampu UV 254 dan 366 nm.

## Analisis Data
Hasil penelitian diolah untuk  melihat korelasi kadar fenol,  flavonoid,  dengan  aktivitas  antioksidan  pada batang  dan  daun  kumis  kucing  menggunakan  analisis regresi.  Data  yang  diperoleh  dinyatakan  sebagai  nilai rerata ± simpangan baku (SD) dari tiga ulangan. Analisis statistik yang digunakan adalah analisis varians (ANOVA one-way ) menggunakan perangkat lunak XL STAT versi versi  2019.4.1  (Addinsoft,  New  York,  Amerika  Serikat) dengan  nilai  beda  nyata  sebesar  0.05.  Untuk  diagram alir penelitian bisa dilihat di Gambar 1 .

## Gambar 1 Diagram Alir Penelitian

## HASIL & PEMBAHASAN

## Ekstraksi dan Rendemen Ekstrak Kumis Kucing
Proses  ekstraksi  senyawa  aktif  bahan  alam menggunakan  pelarut  melalui  tahapan-tahapan    yaitu masuknya  pelarut  masuk  ke  dalam  matriks  sampel padatan,  senyawa  analit  terlarut  ke  dalam  pelarut, analit  keluar  bersama-sama  dengan  pelarut  secara perlahan-lahan, dan  ekstrak analit terkumpul dan siap untuk  diproses  untuk  tahap  selanjutnya  (Zhang et  al. 2018). Proses ekstraksi dilakukan dengan menggunakan pelarut  etanol  dan  air.  Menurut  (Abubakar  &  Haque 2020)  etanol  diketahui  merupakan  pelarut  universal untuk  ekstraksi  senyawa  aktif  bahan  alam,  bersifat polar,  dapat  larut  dengan  air,  merupakan  pengawet alami  bila  konsentrasi>20%,  tidak  beracun  pada konsentrasi rendah, dapat melarutkan dengan baik bila terkena  panas,  dan  perlu  sedikit  panas  untuk menguapkan  pelarut.  Kekurangan  alkohol  adalah  sifat yang  mudah  terbakar,  mudah  menguap,  dan  tidak melarutkan  lemak  serta  gum.  Air  merupakan  pelarut yang  sangat  aman  karena  tidak  beracun,  murah,  tidak terbakar, dan bersifat sangat polar. Kekurangan pelarut air  adalah  berpotensi  meningkatkan  pertumbuhan jamur  dan  bakteri,  menyebabkan  terjadinya  hidrolisis, dan perlu energi yang besar untuk menguapkan. Rafi et al. (2015)  menjelaskan  penggunaan  etanol  sebagai pengesktrak  untuk  kumis  kucing  juga  sesuai  dengan petunjuk  dari  Monografi  Ekstrak  Tumbuhan  Obat
Indonesia  Volume  I  dari  segi  kepolaran  dan  dari  segi kesesuaian kelarutan.
Sebelum  proses  ekstraksi  dilakukan  sampel  diubah menjadi  serbuk  halus  dengan  ukuran  40 mesh . Pengubahan  sampel  menjadi  ukuran  yang  serbuk diharapkan  meningkatkan  kontak  antara  pelarut dengan  bahan  sehingga  akan  meningkatkan  efisiensi ekstraksi. Pengubahan ukuran dilakukan jangan sampai menjadi  partikel  yang  sangat  halus  karena  akan meningkatkan  absopsi  pelarut  ke  dalam  analat  dan akan menyulitkan dalam proses penyaringan (Zhang et al. 2018). Terdapat  beberapa  cara  untuk  proses ekstraksi  senyawa  aktif  seperti  sokletasi,  refluks,  dan maserasi.  Cara  maserasi  dipilih  untuk  mengekstrak senyawa  kimia  batang  dan  daun  kumis  kucing  karena dengan  menggunakan  cara  ekstraksi  ini  akan terhindarkan  dari  rusaknya  senyawa  kimia  yang  tidak tahan panas pada sampel (Puspitasari & Prayogo 2017). Ekstrak  kasar  yang  diperoleh  memiliki  nilai  rendemen yang  berbeda  bila  dibandingkan  berdasarkan  pilihan pelarut  yang  digunakan.  Rendemen  dari  pelarut  air memiliki  nilai  yang  lebih  tinggi  dibandingkan  ekstrak etanol  ( Tabel  1 ).  Air  merupakan  pelarut  yang  lebih polar  dibandingkan  dengan  etanol.  Senyawa-senyawa yang  bersifat  polar  dari  tanaman  akan  terekstraksi  ke dalam  pelarut  air,  sesuai  dengan  penjelasan  Abubakar &  Haque  (2020).  Perbedaan  nilai  rendemen  ini disebabkan  karena  sifat  senyawa  yang  terekstrak berbeda  akibat  perbedaan  kepolaran  pelarut  yang digunakan. Kepolaran pelarut akan sangat menentukan efisiensi, karena prinsip ekstraksi yang digunakan yaitu like  dissolve  like ,  artinya  senyawa  yang  bersifat  polar lebih  banyak  terkandung  dalam  pelarut  yang  lebih polar. Senyawa aktif dalam kumis kucing merupapakan senyawa  yang  bersifat  semi-polar  sampai  polar sehingga  penggunaan  pelarut  etanol  atau  air  sesuai (Faramayuda et  al .  2021).  Kekuatan  dan  kepolaran pelarut  akan  sangat  berpengaruh  terhadap  efisiensi ekstraksi  terutama  terhadap  senyawa  aktif  yang  akan tertransfer  ke  dalam  pelarut.  Air  merupakan  pelarut yang lebih polar dibandingkan dengan etanol. Beberapa keadaan  menjadikan  air  sebagai  pelarut  yang  lebih sesuai dibandingkan dengan etanol (Azwanida 2015).
Tabel 1. Rendemen Batang dan Daun Kumis Kucing
Jenis Sampel Rendemen (%)  ± SD Batang ekstrak air 13.91 ± 0.80 Batang ekstrak etanol 3.60   ± 0.02 Daun ekstrak air 27.76 ± 3.16 Daun ekstrak etanol 9.27   ± 0.57
Kadar  Fenolik  dan  Flavonoid  Total  Ekstrak  Kumis Kucing
Senyawa  fenolik  dalam  bentuk  senyawa  polifenol dapat berupa flavonoid, antosianin, dan tanin. Senyawa ini  merupakan  golongan  metabolit  sekunder  yang bertanggung  jawab  terhadap  antioksidan,  antikanker, antiviral,  dan  antiinflamasi.  Analisis  kadar  total  fenol pada  penelitian  ini  dilakukan  dengan  metode  Folin- Ciocalteu.  Prinsip  metode  ini,  yaitu  terjadinya  reaksi oksidasi  senyawa  fenolik  dalam  suasana  basa  oleh pereaksi Folin-Ciocalteu, sehingga menghasilkan kompleks molibdenum-tungsten berwarna biru dengan intensitas  warna  sebanding  dengan  senyawa  fenolik. Serapan intensitas tersebut dapat diukur pada panjang gelombang 750 nm. Kadar fenol total dihitung sebagai jumlah  ekuivalen  asam  galat.  Asam  galat  digunakan karena  turunan  dari  asam  hidroksibenzoat  yang tergolong  asam  fenol  sederhana,  stabil,  dan  murni (Sanches-Rangel et  al. 2013).  Kadar  flavonoid  total dapat  ditentukan  secara  spektrofotometri  dengan pereaksi AlCl 3 . Prinsip analisis kuantitatif flavonoid total metode AlCl 3 adalah terjadinya pembentukan kompleks antara aluminium klorida dan gugus hidroksi keton dan orto  hidroksi  yang  bertetangga  dari  golongan  flavon dan  flavonol  (Csepregi et  al. 2013).  Kadar  flavonoid dihitung  sebagai  jumlah  ekivalen  kuersetin.  Kuersetin merupakan senyawa flavonoid kelompok flavonol yang memiliki  respon  kedua  terbesar  pada  panjang gelombang 415 nm dengan metode AlCl 3.
Hasil  penentuan  nilai  kadar  fenolik  dan  flavonoid total  pada  batang  dan  daun  kumis  kucing  ditunjukkan pada Tabel 2 . Berdasarkan data yang dihasilkan ekstrak daun  memiliki  kadar  fenol  total  lebih  tinggi  dari  pada batang. Selain itu, pelarut air juga memiliki kadar fenol total  yang  lebih  tinggi  dari  etanol  dikarenakan  etanol bersifat  polar  dan  lebih  mudah  menguap.  Akan  tetapi meskipun  kadar  total  fenol  yang  diperoleh  tinggi tidak selalu  menghasilkan  kadar  total  flavonoid  tinggi  juga. Hal  tersebut  menunjukkan  tingginya  kandungan  fenol
tidak  hanya  dipengaruhi  oleh  flavonoid.  Hal  ini dikarenakan  aluminium  (III)  akan  bereaksi  dengan gugus dihidroksi atau hidroksi keton yang bertetangga, semakin  banyak  gugus  tersebut  dalam  sampel  maka semakin  banyak  kelat  yang  terbentuk,  sehingga absorbans semakin tinggi. Selain itu, dapat disebabkan oleh  kodrat  kimia  dari  metode  yang  digunakan  yaitu flavonoid  dengan  menggunakan  AlCl 3 sebagai  pereaksi pewarna  yang  hanya  bereaksi  dengan  senyawa  flavon dan  flavonol  sedangkan  senyawa  kelas  lain  seperti flavonon  dan  flavononol  tidak  bereaksi.  Penelitian  ini menghasilkan  kadar  fenol  dan  flavonoid  total  yang berbeda  dengan  penelitian  sebelumnya.  Penelitian sebelumnya  menghasilkan  kadar  fenol  total  untuk tanaman kumis  kucing  dalam  bentuk  simplisia  sebesar 18.75  GAE/g  ekstrak  untuk  ekstrak  air  (Halim et  al. 2017) dan 24.53 GAE/g ekstrak untuk ekstrak etanol 70 %  (Rafi et  al .  2012),  sedangkan  untuk  kadar  flavonoid total sebesar 3.36 EK/g ekstrak untuk ekstrak air (Halim et al. 2017) dan 0.66 EK/g ekstrak untuk ekstrak etanol 70  %  (Rafi et  al .  2012).  Farhan  e t  al .  (2012)  meneliti kandungan  fenol  pada  batang  dan  daun  kumis  kucing, hasil  penelitian  disebutkan  bahwa  daun  mempunyai kadar  fenol  lebih  tinggi  dari  bagian  batang  dan  akar menggunakan  bila  diekstraksi  menggunakan  pelarut metanol,  sebesar  230  GAE/g    untuk  daun  dan  130 GAE/g  ekstrak  untuk  batang.  Kamarudin et  al. (2016) mengesktraksi  kumis  kucing  dengan  menggunakan maserasi  pelarut  air,  etanol,  dan  etanol  (50%v/v)  dari daun  kumis  kucing  menunjukkan  nilai  total  fenol  dari pelarut  air,  etanol,  dan  etanol  50%v/v  sebesar  2.52, 2.43, dan 5.15 GAE/g ekstrak.
Hasil analisis dengan menggunakan ANOVA one-way diperoleh bahwa F hitung lebih besar dari F tabel , sedangkan nilai  signifikan  keduanya  kurang  dari  p>0.05.  Hasil tersebut menunjukkan bahwa terdapat perbedaan hasil kadar  fenol  dan  flavonoid  total  setelah  diberi  4 perlakuan  yang  berbeda  ( Ho ditolak  dan Hi diterima). Adanya  senyawa  polifenol  dapat  berpotensi  sebagai
Tabel 2. Kadar Fenolik dan Flavonoid Total Kumis Kucing
Jenis Sampel Kadar Fenolik Total (mg GAE/g) ± SD (*) Kadar Flavonoid Total (mg EK/g) ± SD (*) Batang ekstrak air 7.82   ± 0.14 a 1.23 ± 0.39 a Batang ekstrak etanol 2.27   ± 0.05 b 1.09 ± 0.17 a Daun ekstrak air 26.43 ± 1.46 c 2.86 ± 0.10 b Daun ekstrak etanol 7.84  ± 0.72 a 3.95 ± 0.83 b
Keterangan:
(*) rerata ± standar deviasi dari 3 kali ulangan sampel batang atau daun kumis kucing. Data yang ditandai dengan huruf yang berbeda menandakan perbedaan signifikan pada  p<0.05
antioksidan  karena  mampu  menyumbangkan  ion  H + atau  elektron  pada  senyawa  radikal  bebas.  Tingginya kandungan  polifenol  dalam  suatu  ekstrak  akan berpengaruh  terhadap aktivitas  antioksidan  (Farhan et al. 2012;  Kamarudin et  al .  2016).  Daun  kumis  kucing memiliki  kadar  fenol  dan  flavonoid  total  yang  lebih tinggi  dari  pada  batang,  demikian  juga  untuk  kadar flavonoid  pada  daun  lebih  tinggi  daripada  batang  baik untuk  ekstrak  etanol  ataupun  ekstrak  air.  Oleh  sebab itu, adanya fenol dan flavonoid pada batang atau daun kumis kucing akan berpotensi sebagai antioksidan.

## Kapasitas Antioksidan Ekstrak Kumis Kucing
Metode  yang  digunakan  dalam  pengujian  aktivitas antioksidan adalah metode penangkapan radikal DPPH (1,1-difenil-2-  pikrilhidrazil)  yang  dinyatakan  dalam bentuk  IC 50 .  Penentuan  IC 50 pada  penelitian  ini menggunakan standar troloks karena memiliki aktivitas antioksidan  yang  tinggi  serta  terdapat  gugus  karbonil yang  dapat  memberikan  kelarutan  dalam  air.  Troloks memilki aktivitas antioksidan lebih tinggi dibandingkan dengan  hidroksitoulena  berbutil  (BHT),  hidroksianisola berbutil (BHA), dan α -tokoferol. Konsentrasi IC 50 troloks yang  digunakan  sebagai  kontrol  positif  sebesar  18.98 µg/mL. Hasil nilai IC 50 ekstrak air dan etanol batang dan daun kumis kucing ditunjukkan pada Tabel 3.
Berdasarkan  data  yang  diperoleh  ekstrak  air menghasilkan  IC 50 yang  lebih  rendah  dibandingkan ekstrak  etanol baik  pada daun maupun batang. Hal ini menunjukkan  bahwa  aktivitas  antioksidan  yang terkandung dalam ekstrak air lebih tinggi dibandingkan dengan  ekstrak  etanol.  Perbedaan  polaritas  pelarut ekstraksi  dapat  menjadi  salah  satu  penyebab perbedaan  aktivitas  antioksidan  yang  diperoleh  pada penelitian  ini.  Akan  tetapi,  hasil  uji  ANOVA one-way menunjukkan  bahwa  tidak  ada  perbedaan  signifikan antara perlakuan dan aktivitas antioksidan, karena nilai F hitung lebih  kecil  dari  F tabel dengan  nilai  signifikan  lebih besar dari 0.05, sehingga Ho diterima.
Tabel  3. Aktivitas  Antioksidan  Batang  dan  Daun  Kumis Kucing
Jenis Sampel IC 50 (µg/mL) ± SD (○) Batang ekstrak air 125.03 ± 7.24 Batang ekstrak etanol 125.50 ± 17.30 Daun ekstrak air 114.70 ± 10.96 Daun ekstrak etanol 123.91 ± 13.11

## Korelasi Fitokimia dengan Kapasitas Antioksidan
Aktivitas  antioksidan  kumis  kucing  ditentukan  oleh kadar  senyawa  aktif  yang  terkandung  didalamnya seperti  fenolik.  Semakin  tinggi  kadar  fenolik  dalam kumis  kucing  maka  aktivitas  antioksidan  juga  semakin tinggi.  Penentuan  konstribusi  senyawa  aktif  tersebut dapat dilakukan dengan melihat nilai korelasi (r) antara senyawa aktif dengan aktivitas antioksidan menggunakan  regresi  linier.  Nilai  korelasi  dapat ditentukan  dengan  persamaan  garis  dengan  sumbu  X sebagai  kadar  senyawa  fitokimia  sedangkan  sumbu  Y sebagai  aktivitas  antioksidan.  Senyawa  yang  akan  diuji korelasinya  dengan  aktivitas  antioksidan,  yaitu  fenol dan flavonoid.
Korelasi  kadar  fenol  dan  flavonoid  total  terhadap aktivitas  antioksidan  yang  terukur  memberikan  nilai koefisien korelasi sebesar 0.9841 untuk fenol total dan 0.4  untuk  flavonoid  total  ( Tabel  4 ).  Hasil  tersebut menunjukkan  bahwa  kadar  fenolik  berperan  tinggi dalam  menentukan  aktivitas  antioksidan  dibandingkan dengan kadar flavonoid yang memiliki korelasi rendah. Meskipun  demikian,  aktivitas  antioksidan  juga  tidak hanya  dipengaruhi  oleh  total  fenol  dan  flavonoid. Aktivitas  antioksidan  dapat  juga  dipengaruhi  oleh senyawa  lain  seperti  triterpena  pentasiklik,  vitamin  C, zat  warna  seperti  klorofil,  senyawaan  sulfur,  ataupun nitrogen  (Tung et  al. 2022).  Selain  terkait  dengan kemampuan  antioksidan,  tingginya  kadar  fenol  dan flavonoid  lebih  jauh  bisa  mempengaruhi  kemampuan antimutagenetik  dari  suatu  esktrak.  Ekstrak  dengan
Tabel 4. Korelasi Senyawa Fitokimia dengan Aktivitas Antioksidan
Senyawa Fitokimia Y R 2 r Fenol total - 0.4755x + 125.56 0.9685 0.9841 Flavonoid total -1.4902x + 125.69 0.16 0.4
kadar  fenol  dan  flavonoid  tinggi  mampu  memberikan perlindungan  yang  baik  terhadap  agen  mutagenetik dengan  cara  menangkap  radikal  bebas  dan  hidrogen peroksida  (Al-Dulaimi et  al. 2022;  Samidurai et  al. 2019).

## Sidik Jari KLT Ekstrak Kumis Kucing
Kromatografi  lapis  tipis merupakan  metode  kendali mutu  tanaman  obat  yang  menghasilkan  sidik  jari  khas dari  tanaman.  Metode  ini  memiliki  beberapa keuntungan,  seperti  sederhana,  cepat,  sensitif,  dan preparasi sampel mudah. Metode sidik jari merupakan metode cepat, sehingga penggunaannya terbatas pada analisis  cepat  (Septaningsih et  al. 2017).    Penelitian
Faramayuda et  al. (2022)  KLT  untuk  memantau  kadar sinensetin  dari  kumis  kucing.  Hasil  pemantauan  kadar sinensetin  mampu  membedakan  kadar  sinensetin  dari dua  varian  kumis kucing yang  digunakan.  KLT  sidik jari merupakan  metode  yang  dapat  digunakan  untuk mengidentifikasi  adanya  senyawa  aktif  pada  tanaman kumis  kucing.  Salah  satu  senyawa  aktif  ( marker )  yang terkandung  dalam  kumis  kucing  adalah  sinensetin. Penentuan  senyawa  aktif  ini  dilakukan  menggunakan standar  sinensetin  sebagai  pembanding  yang  akan menghasilkan  warna  biru  di  bawah  UV  254  nm  dan warna biru cerah pada UV 366 nm (Septaningsih et al . 2017).
Gambar 2. Sidik  Jari  KLT  Ekstrak  Air  dan  Etanol  Kumis  Kucing  Pada  Sinar  UV  254  nm  (S=Standar  sinensetin,  BEA  =  Batang ekstrak Air, BEE = Batang ekstrak etanol, DEA = Daun ekstrak air, DEE = Daun ekstrak etanol).
Hasil  analisis  sidik  jari  kromatografi  lapis  tipis menunjukkan  nilai Rf standar  sinensetin  dan  sampel pada  ekstrak  air  dan  ekstrak  etanol  sebesar  0.39 ( Gambar 2 dan Gambar 3 ). Adanya nilai Rf yang sama dengan  standar  sinensetin  dan  pola  pita  yang  sama menunjukkan  bahwa  baik  ekstrak  air  maupun  etanol dari  batang  dan  daun  kumis  kucing  mengandung senyawa  sinensetin  alami.  Pemisahan  kandungan senyawa aktif dalam kumis kucing secara kualitatif juga menunjukkan  hasil  yang  tidak  berbeda  dari  standar sinensetin.  Selain  itu,  pita  dan  warna  standar  yang dihasilkan  juga  menunjukkan  kemiripan  dengan  pita sampel.  Metode  kromatografi  lapis  tipis  sidik  jari merupakan metode yang relatif murah, sederhana, dan mampu  digunakan  untuk  beberapa  sampel  sekaligus untuk  senyawaan  bahan  alam  atau  contoh  makanan. Khartika  dan  Paulsamy  (2015)  mencoba  menggunakan metode sidik jari kromatografi lapis tipis untuk sampel tanaman Solena  amplexicaulis yang  diekstraksi menggunakan metanol dari bagian batang menunjukkan kemampuan teknik sidik jari kromatografi  lapis  tipis  dalam  membedakan  berbagai senyawa  metabolit  sekunder  dari  ekstrak  yang digunakan.  Pemisahan  dapat  membedakan  dengan relatif baik senyawa-senyawa metabolit sekunder yang terkandung dalam batang tanaman contoh. Opsenica et al. (2016)  mencoba  menganalis  senyawa  fenol  dari berbagai sumber bahan propolis dengan menggunakan
kromatografi  lapis  tipis  sidik  jari  dari  berbagai  wilayah Eropa Timur dengan hasil yang cukup menjanjikan dan berpotensi untuk digunakan sebagai analisis pendahuluan.  Kelemahan  dari  sistem  yang  digunakan adalah  adanya  keragaman  hasil  analisis  yang disebabkan  oleh  keragaman  karakter  asal  dan  faktor lingkungan  asal  sampel  yang  digunakan,  seperti  umur, jenis  populasi,  dan  faktor  lingkungan  asal  sampel. Analisis  ini  juga  harus  didukung  dengan  analisis pembanding lain seperti kromatografi cair kinerja tinggi yang di tandem dengan spektrometri massa.
Penelitian  ini  mampu  menunjukkan  nilai  optimal kadar  senyawa  metabolit  sekunder  yang  berperan dalam  kemampuan  antioksidan  yaitu  flavonoid  dan senyawa fenolik berdasarkan bagian asal tanaman dan korelasi  kemampuan  antioksidan  senyawa  yang didapatkan  dari  bagian  tanaman  yaitu  batang  dan daun.  Metabolit  yang  diekstrak  dari  daun  mempunyai aktivitas yang lebih tinggi dari yang berasal dari batang. Potensi  herba  kumis  kucing  yang  luas  dapat dimanfaatkan  baik  dari  batang  atau  dari  daun  atau campurannya.  Faktor  terkait  dengan  asal  usul  atau umur  dari  tanaman  selanjutnya  dapat  digunakan sebagai  faktor  yang  diteliti  untuk  menunjukkan kemampuan  aktioksidan  yang  didapatkan  dari  kumis kucing.
Gambar 3. Sidik  jari  KLT  ekstrak  air  dan  etanol  kumis  kucing  pada  sinar  UV  366  nm  (S=Standar  sinensetin,  BEA  =  Batang ekstrak Air, BEE = Batang ekstrak etanol, DEA = Daun ekstrak air, DEE = Daun ekstrak etanol).

## SIMPULAN
Berdasarkan  data  yang  dihasilkan,  ekstrak  daun kumis  kucing  mengandung  kadar  fenolik,  flavonoid, serta aktivitas antioksidan yang lebih tinggi dibandingkan  ekstrak  batang  baik  menggunakan pelarut  air  maupun  etanol.  Hasil  uji  korelasi menggunakan regresi linear menyatakan bahwa fenolik total  memiliki  korelasi  yang  lebih  tinggi  terhadap antioksidan dibandingkan dengan flavonoid total. Hasil analisis  sidik  jari  kromatografi  lapis  tipis  secara kualitatif  menunjukkan  bahwa  baik  ekstrak  etanol maupun  ekstrak  air  mengandung  senyawa  sinensetin alami.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terima  kasih  diberikan  kepada  Pusat  Studi Biofarmaka Tropika LPPM IPB (TropBRC LPPM IPB) atas sampel  kumis  kucing,  identifikasi  sampel,  dan  fasilitas untuk proses penelitian.

## DAFTAR PUSTAKA
Abdullah  FI,  Chua  LS,  Bohari  SPM,  Sari  E.  2020. Rationale  of Orthosiphon  aristatus for  healing diabetic foot ulcer. Nat. Prod. Commun. 15(9): 1-13. Doi: 10. 1177/ 1934 578X 20953308.
Al-Dulaimi  DW,  Shah  AMA,    Baharetha  MH,  Ahamed MBK, Faisal SF, Al Zarzour RH, Ein OC, Majid AAMS, Hassan  ALE.  2022.  Anticlastogenic,  antimutagenic, and  cytoprotective  properties  of Orthosiphon stamineus ethanolic  leaves  extract. Drug.  Chem.
Toxicol . 45(2):641-650. doi:
10.1080/01480545.2020.1749652.
Abubakar  AR,  Haque,  M.  2020.  Preparation  of medicinal  plants:  Basic  extraction  and  fractionation procedures  for  experimental  purposes. J.  Pharm. Bioall. Sci. 12: 1-10. Doi: 10.4103/jpbs.JPBS_175_19. Azwanida  NN.  2015.  A  Review  on  the  extraction methods use in medicinal plants, principle, strength, and limitation. Med. Aromat. Plants. 4(3): 196. Doi: 10.4172/2167-0412.1000196.
Batubara I, Komariah, Sandrawati A, Nurcholis W. 2020. Genotype  selection  for  phytochemical  content  and pharmacological  activities  in  ethanol  extracts  of fifteen  types  of Orthosiphon  aristatus (Blume)  Miq. leaves  using  chemometric  analysis .  Sci.  Rep. 10: 20945. Doi:  10.1038/s41598-020-77991-2.
Chua LS, Lau CH, Chew CY, Ismail NIM, Soontorngun N.
2018.  Phytochemical  profile  of Orthosiphon aristatus extracts after storage: Rosmarinic acid and other caffeic acid derivatives. Phytomed. 39: 49-55. Doi: 10.1016/j.phymed.2017.12.015.
Csepregi  K,  Kocsis  M,  Hideg  E.  2013.  On  the spectrophotometric determination of total phenolic and  flavonoid  contents. Acta.  Biol.  Hunga .  64(4): 500-509. Doi: 10.1556/ABiol.64.2013.4.10. Faramayuda  F,  Mariani  TS,  Elfahmi,  Sukrasno . 2021. Identification  of  secondary  metabolites  from  callus orthosiphon  aristatus (blume)  miq  by  thin  layer chromatography. Sarhad J. Agric. 37(3): 1081-1088. Doi: 10.17582/journal.sja/2021/37.3.1081.1088. Faramayuda  F,  Mariani  TS,  Elfahmi,  Sukrasno . 2022. Sinensetin  Contents  of  Purple  and  White  Purple Variety  of Orthosiphon  aristatus (Blume)  Miq. Jordan.  J.  Biol.  Sci. 15(1):  127-132.  Doi: 10.54319/jjbs/150117.
Farhan  M,  Razak  SA,  Pin  KY,  Chuah  AL , 2012. Antioxidant  activity  and  phenolic  content  of different  parts  of Orthosiphon  stamineus grown under  different  light  intensities. J.    Trop.  For.  Sci. 24(2): 173-177.
Halim  NH,  Pauzi  N,  Hamil  SHR,  Shafaei  A,  Ismail  Z, Mohd  KS.  2017.  Standardization  of Orthosiphon stamineus raw material and extracts for antiuterine fibroid. Int.  J.  Pharmacogn.  Phytochem. 9(4):  512- 515.
Juliani,  Yuliana  ND,  Budijanto  S,  Wijaya  CH,  Khatib  A. 2016.  Senyawa  inhibitor  α -glukosidase  dan antioksidan  dari  kumis  kucing  dengan  pendekatan metabolomik  berbasis  FTIR. J.  Teknol.  Ind.  Pangan. 27(1): 17-30. Doi: 10.6066/jtip.2016.27.1.17. Kamarudin  NA,    Markom  M,    Latip  J.  2016.    Effects  of Solvents  and  Extraction  Methods  on  Herbal  Plants Phyllanthus  niruri , Orthosiphon  stamineus and Labisia  pumila. Indian.  J.  Sci.    Technol. 9(21):  1-5. Doi:  10.17485/ijst/2016/v9i21/95235.
Khartika  K,  Paulsamy  S.  2015.  TLC  and  HPTLC fingerprints of various secondary metabolites in the stem  of  the  traditional  medicinal  climber, Solena amplexicaulis . Indian J Pharm Sci 77(1):111-116. Lee  SH,  Sancheti  SA,  Bafna,  MR,  Sancheti  SS,  Seo  SY. 2011. Acetylcholinesterase inhibitory and antioxidant  properties  of Rhododendron  yedoense var. Poukhanense bark. J. Med. Plant Res. 5(2): 248- 254.
Lezoul  NEH,  Belkadi  M,  Habibi  F,  Guillén  F.  2020. Extraction  processes  with  several  solvents  on  total bioactive  compounds  in  different  organs  of  three medicinal  plants. Molecules 25:  4672.  Doi: 10.3390/molecules25204672.
Opsenica DM, Ristivojevi ć P, Trifkovi ć J, Vovk I, Lušić D, Tešić Z.  2016.  TLC  fingerprinting  and  pattern recognition  methods  in  the  assessment  of
authenticity  of  poplar-type  propolis. J.  of
Chromatogr. Sci. 54(7): 1077 – 1083. Doi: 10.1093/chromsci/bmw024.
Puspitasari  AD,  Proyogo  LS.  2017.  Perbandingan metode  ekstraksi  maserasi  dan  sokletasi  terhadap kadar  fenolik  total  ekstrak  etanol  daun  kersen ( Muntingia calabura ). J. Ilm. Cendekia. Eksakta. 2(1): 1-8. Doi: 10.3194/ce.v2i1.1791.
Rafi  M, Widyastuti  N,  Suradikusumah  E,  Darusman  LK. 2012.  Aktivitas  antioksidan,  kadar  fenol  dan flavonoid total dari enam tumbuhan obat indonesia. J. Bahan Alam Indonesia. 8(3): 159-165.
Rafi M, Purwakusumah ED, Ridwan T, Barus B, Sutandi A, Darusman LK. 2015. Geographical classification of Java  tes  (Orthosiphon  stamineus)  from  Java  Island by  FTIR  spectroscopy  combined  with  canonical variate analysis. J. Sains Matematika. 23(1): 25-31. Rafi  M,  Sakinah  NW,  Wahyuni  WT,  Arif  Z,  Heryanto R. 2021.    Autentikasi  kumis  kucing  ( Orthosiphon aristatus ) menggunakan kombinasi  spektrum ultraviolet-tampak dan partial least square regression . Indonesian.  J.  Chemom.  Pharm.  Anal . 1(2): 93-101.
Roy JD, Handique AK, Barua CC, Talukdar A, Ahmed FA, Barua IC. 2014. Evaluation of phytoconstituents and assessment of adaptogenic activity in vivo in various extracts of Rhododendron arboreum (leaves). Indian J. Pharm. Biol. Res. 2(2): 49-56.
Samidurai D, Pandurangan AK, KumarKrishnamoorthi S,
Perumal  MK,  Nanjian  R.  2019.    Sinensetin  isolated from Orthosiphon aristatus inhibits cell proliferation
and  induces  apoptosis  in  hepatocellular  carcinoma cells. Process Biochem. 88:213-221. Doi:
10.1016/j.procbio.2019.09.031.
Sanchez-rangel  JC,  Benavides  J,  Heredia  JB,  Cisneros- Zevallosc L, Jacobo-Vel´azquez DA. 2013. The Folin – Ciocalteu  assay  revisited:  improvement  of  its specificity for total phenolic content determination. Anal. Methods. 5: 5990. Doi: 10.1039/c3ay41125g. Shraim  AM,  Ahmed  TA,  Rahman  MM,  Hijji  YM.    2021.
Determination  of  total  flavonoid  content  by aluminum chloride assay: A critical evaluation. LWT 150: 111932. Doi:  10.1016/j.lwt.2021.111932.
Septaningsih  DA,  Purwakusumah  ED,  Rafi  M.  2017.
Atlas  Kromatografi  Lapis  Tipis  Tumbuhan  Obat Indonesia. Bogor: IPB Press.
Tung NN, Tam LT, Anh DH, Hanh TTH, Cuong NX, Cuong NT,  Quang  TH.  2022.    Antimicrobial  phenolic metabolites  from  the  aerial  parts  of Orthosiphon aristatus.  Phytochem.  Lett. 52:  49-53.  Doi:
10.1016/j.phytol.2022.09.004.
Ulya  N,    Endharti  AT,  Setyohadi  R.  2014.    Uji  daya anthelmintik  ekstrak  etanol  daun  kumis  kucing ( Orthosiphon aristatus ) sebagai anthelmintik terhadap A scaris suum secara in vitro. Maj.Kesehat. FKUB . 1(3): 130-136.
Zhang  Q,  Lin  L,  Ye  W.  2018.  Techniques  for  extraction and  isolation of  natural  products: a  comprehensive review. Chin. Med. 13 (20): 1-26. Doi:
10.1186/s13020-018-0177-x.