Pemisahan Senyawa 1,4-terpineol dan Safrol dari Minyak Atsiri Biji Pala ( Myristica Fragrans Houtt) dan Uji Aktivitas Antibakteri Terhadap Shigella dysenteriae
Sparation of 1,4-Terpineol and Safrol from Nutmeg Seed Essential Oil ( Myristica Fragrans Houtt) And Shigella dysenteriae Bacteria Activity Test
Tiara Dwi Ayunani 1* , Ines Tri Hastuti 1 , Hery Muhamad Ansory 2 , Anita Nilawati 2 1 Jurusan D III Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Setia Budi Surakarta
2 Fakultas Farmasi, Universitas Setia Budi Surakarta
* e-mail : tiara.ayunani@gmail.com

## Abstrak
Pala merupakan tanaman yang digunakan dalam industri makanan, obat-obatan, parfum dan  kosmetik.  Minyak  atsiri  biji  pala  diketahui  memiliki  kandungan  senyawa  1,4-terpineol  dan safrol yang diduga memiliki aktivitas sebagai antibakteri.
Pemisahan senyawa 1,4-terpineol dan safrol dari minyak atsiri biji pala dilakukan dengan metode distilasi fraksinasi pengurangan tekanan dengan tekanan 95 mmHg pada suhu 200-225 ֯C.  Analisis  kandungan  senyawa  pada  minyak  atsiri  biji  pala  dan  hasil  pemisahan  dilakukan dengan GC-MS dan uji aktivitas antibakteri dengan metode difusi dan dilusi.
Hasil  analisis  menunjukkan  bahwa  minyak  atsiri  biji  pala  mengandung  5  senyawa dominan  yaitu  α-pinene,  sabinene,  2-β-pinen,  terpineol  dan  miristisin,  hasil  pemisahan mengandung 49,05% 1-4 terpineol dan 20,34% safrol. Hasil uji difusi menunjukkan bahwa minyak atsiri biji pala dengan konsentrasi 1,25% memiliki zona hambat sebesar 12,11 mm yang tergolong kuat, sedangkan hasil pemisahan dengan konsentrasi sama memiliki zona hambat 9,66 mm yang tergolong sedang. Hasil dilusi minyak atsiri pala dan hasil pemisahan memiliki zona bunuh yang sama pada konsentrasi 1,25%.
Kata kunci : minyak atsiri biji pala, fraksinasi, GC-MS, Shigella dysenteriae

## ABSTRACT
Nutmeg  were  plants  that  used  as  material  in  food,  medicine,  perfume  and  cosmetics industries. Nutmeg essential oil contain 1,4-terpineol and safrol compounds that predected have antibacterial activity.
Sparation of 1,4-terpineol and safrol compound from nutmeg essential oil was carried out by fractional distillation method at 95 mmHg and 200- 225 ֯C. Analysis of nutmeg essential oil and sparation carried out by GC-MS and antibacterial activity tests with diffusion and dilution methods.
The Analysis results showed that nutmeg seed essential oil contain 5 mayor compounds, α-pinena, sabinen, 2-β-pinen, terpineol and miristisin, the sparation result contain 40.05%1-4 and 20.34% safrol. The diffusion test showed that 1.25% nutmeg seed essential oil  have 12,11mm inhibition zone that classified as strong inhibition, and the sparation result have 9,66mm inhibitor zone that classified as moderately inhibition. The dilution test result of nutmeg essential oil and the separation result have activity for bactericidal has the same at consentration 1.25%.
Keywords: nutmeg essential oil, fractionation, GC-MS, Shigella dysenteriae

## PENDAHULUAN
Salah satu tumbuhan yang dikenal sebagai  tumbuhan  obat  tradisional adalah  pala  ( Myristica   fragrans Houtt), tanaman  ini  memiliki  banyak  manfaat
dan  harga  yang  cukup  tinggi.  Seluruh bagian  tanaman  ini  memiliki  khasiat yang  luar  biasa  bagi  manusia.  Biji,  fuli dan  minyak  atsiri  dari  pala  merupakan yang  paling  banyak  diekspor,  serta
digunakan dalam industri makanan dan minuman. Minyak yang berasal dari biji, fuli  dan  daun  digunakan  dalam  industri obat-obatan,  parfum  dan  kosmetik (Agoes, 2010).
Nilai ekonomis dari tanaman pala terletak pada bagian fuli dan bijinya. Biji pala  segar  terdapat  sekitar  2,16% minyak atsiri dengan komposisi senyawa  antara  lain  β-Pinena,  α- Pinena,  Safrol,  Miristisin,  α-Terpineol asetat, Eugenol, Limonena dan lain-lain
Agusta (2000). Penelitian tentang minyak  atsiri  saat  ini  banyak  diarahkan untuk memanfaatkannya
sebagai antimikroba  penyakit  yang  disebabkan oleh bakteri atau jamur (Rastuti 2013).
Shigella  dysenteriae merupakan bakteri  yang  menyebabkan  penyakit disentri basiler ( Shigellosis ). Shigellosis timbul  dengan  gejala  adanya  nyeri abdomen,  demam,  buang  air  besar berdarah,  dan  feses  berlendir.  Infeksi juga ditandai dengan diare kurang lebih 20 kali selama sehari (Iskamto, 2009).
Umumnya masyarakat dalam mengobati  penyakit  yang  disebabkan oleh  infeksi  terhadap  bakteri  sering menggunakan  antibiotik.  Pemakaian obat sintetis seperti antibiotik ini memiliki efek  samping  seperti  menimbulkan reaksi alergi, serta harganya yang mahal dan sukar didapat. Selain itu penggunaan antibiotik secara berlebihan  dan  kurang  terarah  dapat menyebabkan terjadinya resistensi terhadap mikroorganisme. Salah satu alternatif untuk mengurangi konsumsi terhadap antibiotik sintetis adalah dengan mengonsumsi  antibiotik  alami  yang bersumber  dari  tumbuhan.  Salah  satu tanaman yang potenssial sebagai antibiotik  alami  adalah  biji  pala  karena memiliki beberapa kandungan senyawaseperti 1,4 terpineol dan safrol yang dapat digunakan sebagai antibakeri.  Salah  satu  cara  untuk mendapatkan  senyawa  tertentu  dalam
minyak atsiri biji pala dengan melakukan destilasi fraksinasi
pengurangan tekanan.  Analisis  kandungan  minyak atsiri  biji  pala  dan  hasil  pemisahan dilakukan  dengan  GC-MS  dan  uji aktivitas  antibakteri  fraksi  minyak  atsiri biji  pala  terhadap  bakteri Shigella dysenteriae dengan  metode  difusi  dan dilusi.

## METODOLOGI PENELITIAN

## Alat
Seperangkat  alat  fraksinasi.  Alat GC-MS  (Shimadzu  (QP2010)),  vial penginjek  dan  mikropipet.  Seperangkat alat kaca mikrobiologi, autoclaf,
inkubator, inkas, disk blank. Bahan
Bahan yang digunakan pada penelitian ini yaitu minyak atsiri biji pala, etanol  96%,  aquadestila ,  tween  80 , heksan p.a ( Merck ), Aseton p.a ( Merck ), MHA  p.a,  SSA  p.a,  BHI  p.a,  media  uji biokimia  (  SIM,  KIA,  LIA,  CITRAT  )  , Gentamisin  10µg,  Standar  Mc  Farlan, biakan murni bakteri Shigella dysentriae koleksi Universitas Setia Budi.

## Cara kerja
1.  Fraksinasi minyak atsiri pala
Minyak  biji  pala  di  fraksinasi  suhu 200  C  tekanan  95  mmHg  Sampel kemudian residu di fraksinasi kembali  pada  suhu 225⁰C dengan metode destilasi pengurangan tekanan pada tekanan 95 mmHg.
2.  Identifikasi  fraksi  minyak  atsiri  biji pala dan fraksi minyak atsiri biji pala Minyak  atsiri  biji  pala  dan  hasil dianalisi menggunakan GC-MS (Shimadzu (QP2010) dengan metode / kondisi yang sama. 3.  Pengujian aktivitas antibakteri Memulai pengujian antibakteri melalui  sterilisasi  alat,  menyiapkan media  pertumbuhan  bakteri  dan mengembangbiakkan bakteri.
Uji difusi Dilakukan dengan metode
metode kertas cakram ( disk blank ). Cakram  yang  sudah  direndam
selama 5 menit dalam fraksi minyak atsiri  biji  pala  dalam  beberapa konsentrasi kemudian di tanam dan diinkubasi  pada  suhu  37 ˚C  selama 24  jam.  Pengamatan  dilakukan dengan  mengukur  diameter  zona hambat yang terbentuk, yang ditandai  dengan  adanya  zona bening bada daerah sekitar cakram uji. Uji Dilusi Fraksi  minyak  atsiri  pala  diuji aktivitas bakteri Shigella dysenteriae dengan  metode  dilusi dengan  konsentrasi  20;  10;  5;  2,5; dan 1,25% dengan pelarut aquadestilata  dan  penambahan tween 80 sebanyak 100µl. Pengamatan dilakukan dengan mengamati kekeruhan pada tabung, kemudian untuk menentukan  KHM  dan  KBM  dari bakteri, perlu
dilakukan
penggoresan  pada  media  padat. Tabung ke-1 sampai ke-5 dan ke-7 digores  pada  media  padat.  Media yang  digunakan  yaitu  media  SSA. Media yang sudah digores, diinkubasi  pada  suhu  37 ˚C  selama 24  jam.  Kemudian  melakukan pengamatan dan menentukan KHM dan KBM.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Minyak  biji pala  sebanyak  500 ml berwarna  jernih  sampai  kuning  muda dengan  berat  jenis  0,903,  indeks  bias 1,481,  dan  kelarutan  dengan  ethanol 96%  1:1    sesuai  dengan  standart. Setelah itu dilakukan analisis uji GC-MS pada minyak atsiri biji pala menghasilkan 5 senyawa utama yaitu α- pinene,  sabinene,  2- β-pinen,  terpineol dan miristisin.
Tabel 1 SNI minyak pala  ( BSN, 2006 )
Komponen Mutu Standar Mutu Warna Jernih - kuning muda Berat Jenis, 20⁰C/ 20⁰C 0,885 - 0,907 Indeks, 20⁰C 1,475 -  1,485 Putaran Optik, 20⁰C (+6⁰) - (+18⁰) Kelarutan dalam etanol 90% 1:1 – 1:3 Sisa Penguapan ( %) Maks.2
Gambar 1 GC-MS 5 senyawa dominan minyak atsiri biji pala
Tabel 2 waktu retensi senyawa dominan dalam minyak atsiri pala Waktu Retensi % area Nama senyawa 3,690 17,61 α-Pinene 4,453 16,39 Sabinene 4,473 11,89 2-Beta-pinene 8,191 6,16 Terpineol 11,435 16,34 Miristisin Gambar 2 MS senyawa  α-pinen
Senyawa α-pinen  waktu  retensi  3,  690 menit . Dari MS yang dihasilkan, terlihat massa  molekul  senyawa  adalah  136 dan  dapat  diprediksi  bahwa  senyawa tersebut  mempunyai  rumus  molekul C10H16  dan  berdasarkan  pustaka  MS senyawa  tersebut  mempunyai  fragmen mirip  dengan  senyawa  α-pinene. Prediksi  rumus molekul senyawa  dapat
digunakan  untuk  mengetahui  rumus DBE  dari  suatu  senyawa.  Senyawa C10H16  mempunyai  nilai  DBE  =  3, diprediksi senyawa tersebut terdiri dari 2 siklik yang mempunyai 1 ikatan rangkap 2.Berdasarkan  data  dan  analisis  yang telah dilakukan diusulkan pola fragmentasi  dari  senyawa α -pinene adalah seperti pada gambar 3.
Gambar 3 fragmentasi senyawa α-pinene (Hidayah, 2018)
Senyawa  sabinen  waktu  retensi 4,453 menit, berdasarkan data dan hasil analisis  yang  telah  dilakukan  diusulkan pola fragmentasi dari senyawa sabinene seperti pada gambar 5.
Dari MS yang dihasilkan, terlihat massa  molekul  senyawa  adalah  136 dan  dapat  diprediksi  bahwa  senyawa tersebut  mempunyai  rumus  molekul C10H16  dan  berdasarkan  pustaka  MS senyawa  tersebut  mempunyai  fragmen
mirip dengan senyawa sabinene.
Perbedaan  senyawa  pertama  dengan kedua  yaitu  pada  pola  pemecahan molekul atau pola fragmentasi senyawa. Prediksi  rumus molekul senyawa  dapat digunakan  untuk  mengetahui  rumus DBE  dari  suatu  senyawa.  Senyawa C10H16  mempunyai  nilai  DBE  =  3, diprediksi senyawa tersebut terdiri dari 1 siklik yang mempunyai 2 ikatan rangkap 2.
Gambar 4 MS senyawa sabinen
Gambar 5 fragmentasi senyawa sabinen (Hidayah, 2018)
Gambar 6 MS senyawa β-pinene
Berdasarkan  data  dan  analisis yang  telah  dilakukan  diusulkan  pola fragmentasi dari senyawa 2-beta-pinene seperti pada gambar 7.
Dari MS yang dihasilkan, terlihat massa  molekul  senyawa  adalah  136 dan  dapat  diprediksi  bahwa  senyawa tersebut  mempunyai  rumus  molekul C10H16  dan  berdasarkan  pustaka  MS senyawa  tersebut  mempunyai  fragmen
mirip  dengan  senyawa  2- β -pinene. Senyawa C10H16 mempunyai nilai DBE =  3,  diprediksi  senyawa  tersebut  terdiri dari  2  siklik  dan  mempunyai  1  ikatan rangkap 2.
Senyawa terpineol waktu retensi 8,191  menit.  Berdasarkan  data  dan analisis  yang  telah  dilakukan  diusulkan pola  fragmentasi  dari  senyawa  2-beta- pinene seperti pada gambar 9.
.
Gambar 7 fragmentasi senyawa 2- β pinene (Hidayah, 2018)
Gambar 8 MS senyawa terpineol
Gambar 9 Fragmentasi senyawa terpineol (Sinambela, 2012)
Dari MS yang dihasilkan, terlihat massa  molekul  senyawa  adalah  154 dan  dapat  diprediksi  bahwa  senyawa tersebut  mempunyai  rumus  molekul C10H18O dan berdasarkan pustaka MS senyawa  tersebut  mempunyai  fragmen mirip dengan senyawa terpineol. Prediksi  rumus molekul senyawa  dapat digunakan  untuk  mengetahui  rumus DBE  dari  suatu  senyawa.  Senyawa C10H18O  mempunyai  nilai  DBE  =  2 diprediksi senyawa tersebut terdiri dari 1 ikatan rangkap 2.
Senyawa miristisin waktu retensi 11,435  menit.  Berdasarkan  data  dan analisis  yang  telah  dilakukan  diusulkan
pola fragmentasi dari senyawa miristisin seperti pada gambar 11.
Dari MS yang dihasilkan, terlihat massa  molekul  senyawa  adalah  192 dan  dapat  diprediksi  bahwa  senyawa tersebut  mempunyai  rumus  molekul C11H12O3  dan  berdasarkan  pustaka MS  senyawa  tersebut  mempunyai fragmen mirip dengan senyawa
myristisin.  Atom  O  pada  senyawa  ini, diprediksi  berdasarkan  pola  fragmen khas  dari  atom  O  yaitu  C=O  yang mempunyai  nomor  atom  18.  Prediksi rumus molekul senyawa dapat
digunakan  untuk  mengetahui  rumus DBE  dari  suatu  senyawa.  Senyawa
C11H12O3  mempunyai  nilai  DBE  =  6, diprediksi senyawa tersebut terdiri dari 1
cincin aromatik, 1 siklik dan mempunyai 1 ikatan rangkap 2.
Gambar 10 MS senyawa miristisin
Gambar 11 fragmentasi senyawa miristisin (Ansory, 2014)
Fraksinasi  dilakukan  pada  suhu 200°C  pada  tekan  95mmHg  kemudian hasil residu di fraksinasi kembali dengan suhu  225° C  pada  tekanan  95mmHg. Hasil  fraksi  memiliki  warna  jernih, dengan  berat  jenis    1,220,  indeks  bias 1,492,  dan  kelarutan  dengan  ethanol 96%  1:1,  setelah  dilakukan  analisis  uji GC-MS  didapat  3  senyawa  dominan yaitu : 1,4-terpineol, safrol, dan miristisin. Hasil GC-MS dan fragmentasi 1,4-terpineol dapat dilihat pada gambar 8 dan gambar 9, untuk hasil GC-MS dan fragmentasi miristisin dapat dilihat pada gambar 10 dan gambar 11.
Senyawa  safrol  pada  waktu retensi  9.  463 menit.  Berdasarkan  data dan  analisis  yang  telah  dilakukan diusulkan pola fragmentasi dari
senyawa  safrol seperti  pada  gambar 13. Dari  MS  yang  dihasilkan,  terlihat massa  molekul  senyawa  adalah  162 dan  dapat  diprediksi  bahwa  senyawa tersebut  mempunyai  rumus  molekul C10H10O 2 dan  berdasarkan  pustaka MS  senyawa  tersebut  mempunyai fragmen  mirip  dengan  senyawa  safrol. Perbedaan  senyawa  pertama  dengan kedua  yaitu  pada  pola  pemecahan molekul atau pola fragmentasi senyawa. Prediksi  rumus molekul senyawa  dapat digunakan  untuk  mengetahui  rumus DBE  dari  suatu  senyawa.  Senyawa C 10 H 10 O 2 mempunyai  nilai  DBE  =  6, diprediksi senyawa tersebut terdiri dari 1 cincin aromatik, 1 siklik dan mempunyai 1 ikatan rangkap 2.
Gambar 12 MS senyawa safrol
Gambar 13 Fragmentasi senyawa safrol (Ansory,2018).
Tabel 3 Hasil Dilusi pada bakteri Shigella dysenteriae Konsentrasi Hasil Minyak atsiri biji pala Fraksi target Kontrol positif + + Kontrol negatif - - 10% - - 5% - - 2,5% - - 1,25% - - Ket :   +    : di tumbuhi bakteri - : tidak ditumbuhi bakteri Tabel 4 Hasil Difusi pada bakteri Shigella dysenteriae Konsentrasi Hasil (mm) Minyak atsiri biji pala Fraksi target Kontrol positif 16,444 15.222 20% 10,111 9,889 10% 11 9,889 5% 12,222 7,889 2,5% 11 8,556 1,25% 12,111 9, 667
Uji  efektifitas  pada  minyak  atsiri pala  dan  fraksi  target  terhadap  bakteri
Shigella dysenteriae peneliti  melakukan uji  dilusi  dan  difusi  dimana  masing – masing  pengujian  dilakukan  3  kali replikasi  dengan  menggunakan  media SSA ( Salmonella & Shigella Agar ) untuk dilusi  dan  MHA  ( Muller  Hinton  Agar ) untuk dufusi. Setelah melakukan pengujian  dilusi  dan  difusi  didapatkan bahwa minyak atsiri pala memiliki daya hambat  yang  kuat  >  10  mm,  yaitu dengan diameter 12,11 mm sedangkan fraksi  target  konsentrasi  sama  dapat menghambat dengan rata-rata diameter zona hambat sedang yaitu sebesar 9,66 mm  dan  hasil  dilusi  minyak  atsiri  pala maupun  fraksi  target  memiliki  zona bunuh  yang  sama  pada  konsentrasi 1,25%. Hasil minyak atsiri pala pada uji aktifitas
antibakteri lebih baik dikarenakan  kandungan  minyak  atsiri pala lebih kompleks dan dapat bersinergis  dalam  melawan  bakteri dibanding  dengan  fraksi  target  yang memiliki  senyawa  yang  lebih  sedikit
sehingga  efektifitas  sebagai  antibakteri jauh lebih kecil.
Senyawa yang berkhasiat sebagai  antibakteri  dalam  minyak  atsiri pala  dan  fraksi  salah  satunya  adalah safrol  dan  terpineol.  Senyawa  terpineol merupakan  salah  satu  turunan  fenol yang memiliki mekanisme kerja sebagai antibakteri,  berinteraksi  dengan  sel bakteri  melalui  proses  adsorpsi  yang melibatkan ikatan hidrogen. Pada kadar rendah terbentuk kompleks protein fenol dengan  ikatan  yang  lemah  dan  segera mengalami  peruraian,  diikuti  penetrasi fenol ke dalam sel sehingga menyebabkan presipitasi serta
denaturasi  protein.  Pada  kadar  tinggi fenol  menyebabkan  koagulasi  protein dan  melisiskan  sel  membran  (Parwata dan Dewi, 2008).

## KESIMPULAN
Berdasarkan  penelitian  dapat  ditarik kesimpulan  fraksi  minyak  atsiri  pala mengandung  5  ssenyawa  komponen utama  yaitu α-pinene,  sabinene,  2-β-
pinen,  terpineol  dan  miristisin,  serta kandungan senyawa fraksi target dominan  mengandung  senyawa  1-4
terpineol  dan  safrol  Minyak  atsiri  pala memiliki aktivitas antibakteri pada bakteri Shigella  dysenteriae lebih  baik dibanding fraksi target karena senyawa minyak  atsiri  jauh  lebih  kompleks sehingga jauh lebih baik dalam melawan bakteri.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Puji  syukur  kepada    Allah    SWT  yang telah  meberikan  berkat,  rahmat,  dan kelancaran  selama  proses  penelitiian. Penulis  mengucapkan  banyak  terima kasih kepada DPRM Kemenristek DIKTI melalui  LPPM  Universitas  Setia  Budi Surakarta yang telah membiayai penelitian  ini  pada  skema  PDP  dengan
Nomor: 004/LPPM-USB/PDP/III/2018

## DAFTAR PUSTAKA
Agoes,  A.  2010. Tanaman  Obat Indonesia .  Jakarta:  Salemba  Medika. Halaman 85. Agusta A. 2000. Minyak Atsiri Tumbuhan Tropika Indonesia . Bandung: ITB . Amelia N, Siadi, Latifah. 2015. Pengaruh Temperatur pada Reaksi  Hidrasi  alpha  pinene menjadi  alpha  terpineol  terkatalis Ziolid alam teraktifasi. Universitas Negeri Semarng. Ansory HM, Sastrohamidjojo H, Purwono  B.  2015.  Perbandingan Kualitas  Minyak  Atsiri  Pala  Hasil Isolasi  dari  Bagian-Bagian  Buah Pala Berdasarkan Kadar Miristisin .
Jurnal  Farmasi  Indonesia .  Vol.14
No.02 hal127 – 136, hal 127 – 136
Ansory,  Hery  Muhamad.  2014. Sintesis Turunan  Kalkon  Dari  Miristisin Minyak  Pala  Dan  Uji  Potensi Sebagai Penghambat UV-A. Thesis. Yogyakarta: UGM Press. Ansory,  Hery  Muhamad.  2018.  Analisis Senyawa  Minyak  Atsiri  Fuli  Pala
Secara  GC-MS  dan  Uji  Aktivitas Antibakteri  Terhadap Ecschericia coli dan Staphylococcus  aureus.
Majalah Farmasi vol. 13 (2) Davis WW, Stout TR. Disc Plate Method of Microbiological Antibiotic Assy. Appl Micobiol.1997;22(4):659-65 Iskamto, G. 2009. Bakteriologi Kesehatan. Cetakan 1. Surakarta : UNS Press. Halaman115. Hidayah, Nur’aini. 2018. Analisis Minyak
Atsiri  Fuli  Pala  Dengan  Gc-Ms Serta  Uji  Aktivitas  Terhadap Bakteri Ecschericia  coli ATCC 25922 dan Staphylococcus aureus ATCC 25923. Surakarta: Universitas Setia Budi Kitson, Fulton G. 1996. Gas Chromatography and Mass Spectrometry : A Practical Guide . USA: Academic Press. San Diego.
Medeiros AL, Lima EO, Souza EL, Diniz M, Trajano VN, Medeiros IA. 2007. Inhibitory  effect  of  β-pinene,  α- pinene and eugenol on the growth of potential infectious endocarditis causing  Gram-positive  bacteria. Brazilian Journal of Pharmaceutical Sciences . vol. 43 Nurdjannah, N. and Mulyono,  E., 2007. Teknologi Pengolahan Pala. Badan Penelitian Dan Pengembangan  Pertanian.  Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Pascapanen Pertanian. Bogor Nurdjannah,  Nanan.  2007. Teknologi
Pengolahan Pala. Balai Penelitian dan  Pengembangan  Pertanian . Jakarta Parwata, I. M. O. A. dan P. F. S. Dewi. 2008.  Isolasi  dan  Uji  Aktivitas Antibakteri  Atsiri  dari  Rimpang Lengkuas  ( Alpinia  Galanga L), Jurnal, 2 (2), pp 4-10. Rastuti  U,  Widyaningsi  S,  Kartika  D, Ningsi D. 2012. Aktivitas antibakteri minyak atsiri daun pala
dari Banyumas terhadap Streptococcus Aureus dan Escherichia  coli serta  identifikasi senyawa penyusunnya. Purwokerto:  Universitas  Jenderal Soedirman; p. 197-203. Sastrohamidjojo  H.  2013. Dasar-Dasar Spektrokopis. Gajah Mada University Press . Yogyakarta
Siti, N., Mardawati, E., dan Herudiyanto, M. 2010. Pemisahan Eugenol Dari Minyak  Cengkeh  Dengan  Cara Distilasi Fraksinasi. Teknologi
Industri Pangan. Vol. 4. No. 2, Hal. 2.
Sinambela, Srivita Efi. 2012. Isolasi dan analisi  kimia  minyak  atsiri  dsri temulwak  ( Curcuma  xanthoriza Roxb)  dengan  Gas  Kromatografi- Spektrometer  Massa  (GC-MS) dan uji aktifitas antibakteri. Universitas Sumatra Utara.