## ABSTRACT

## ABSTRAK
PENDAHULUAN D
UJI AKTIVITAS MINYAK ATSIRI KULIT BUAH JERUK NIPIS ( Citrus aurantifolia , Swingle) DALAM SEDIAAN LOTION SEBAGAI

## REPELAN TERHADAP NYAMUK Aedes aegypti
1 2 3 Dewi Ekowati , Ahmad Nuzulul Abid , Jason Merari P. 1,3 Fakultas Farmasi, Universitas Setia Budi
2 Fakultas Farmasi, Universitas Gadjah Mada
Kata kunci : Destilasi, minyak atsiri kulit buah jeruk nipis, penolak nyamuk, nyamuk Aedes aegypti
Lime peel is one of Rutaceae families that contains esential oil. This experiment was aimed to study the repellent activity of volatile oil from lime peel as mosquitoes repellent on Aedes aegypti mosquitoes declared as EC  with autan standart. 90
L ime peel volatile oil is produced by water destillation. The volatile oil which produced by water distillation was made lotion products and into concentration of treatment, and than the value of EC  y probit method.
90
T his experiment obtained 67,00% of EC  values. This finding indicates that the concentration of 67,00% of lime peel volatile 90 oil able to repellen 90% of the target insect.
Kulit buah jeruk nipis (Citrus aurantifolia, Swingle) merupakan salah satu familia Rutaceae yang mengandung minyak atsiri. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas minyak atsiri sari kulit buah jeruk nipis sebagai penolak nyamuk (repelan) terhadap nyamuk Aedes aegepti yang dinyatakan denga EC  dengan pembanding autan.
90
Minyak atsiri kulit buah jeruk nipis diperoleh dengan cara destilasi air. Minyak atsiri yang didapat dari destilasi air kemudian dibuat lotion dengan konsentrasi 10%, 20% dan 40%. Pengamatan dilakukan selama 6 jam untuk mengetahui jumlah nyamuk yang hinggap pada ketiga konsentrasi, kemudian dihitung harga EC  dengan menggunakan analisa probit.
90
Pada penelitian ini diperoleh nilai EC  67,00%. Hal ini menunjukkan bahwa pada konsentrasi 67,00% minyak atsiri dari kulit 90 jeruk nipis sudah dapat menolak nyamuk 90% hewan uji.
Key word : Destilation, Lime peel volatil oil, mosquito repellent, Aedes aegypti mosquito
emam dengue dan demam berdarah dengue (DBD) adalah penyakit menular yang disebabkan oleh virus dengue. Virus Dengue menginfeksi tubuh manusia melalui gigitan nyamuk Aedes aegypti dan Aedes albopictu . Hampir setiap tahun, terutama pada musim hujan selalu terjadi “ledakan” penyakit demam berdarah. Berbagai usaha sudah dilakukan untuk menanggulangi penyakit ini, antara lain dengan mengendalikan vektor penyebabnya (nyamuk  demam  berdarah),  tetapi  hasil  yang  dicapai  belum  memuaskan  karena  kasus  serangan  penyakit demam berdarah masih terjadi setiap tahun (Kardinan, 2003).
Masyarakat pada saat ini kebanyakan takut untuk menggunakan penolak nyamuk (repelan) bentuk jadi yang telah  dibuat  dan  dikeluarkan  oleh  pabrik  atau  industri  tertentu.  Kandungan  kimia  yang  terkandung  di  dalam sediaan  tersebut  menjadi  alasan  mengapa  masyarakat  engan  menggunakan  penolak  nyamuk.  Oleh  karena itu  dicari  penolak  nyamuk  dengan  meggunakan  bahan  alami  yang  lebih  aman  untuk  digunakan.

## ARTIKEL PENELITIAN

## ACTIVITY TEST OF ESSENTIAL OILS OF Citrus aurantifolia, Swingle AS Aedes aegypti REPELLENT
Jeruk  nipis  ( Citrus  aurantifolia ,  Swingle)  merupakan tanaman  mengandung  minyak  terbang  limonene  dan linalool,  selain  itu  juga  mengandung  flavanoid  seperti poncirin,  hisperidine,  rhoifolin,  dan  naringin.  Buah masak  mengandung  synephrine  dan  N-methyltryramine. Di  samping  itu,  juga  mengandung  asam  sitrat,  kalsium, fosfor,  besi,  dan  vitamin  A,  vitamin  B,  dan  vitamin  C (Dalimartha,  2000).  Eugenol,  linalool,  dan  geraniol dikenal  sebagai  zat  penolak  serangga  sehingga  zat-zat tersebut  juga  berfungsi  sebagai  pengusir  nyamuk (Kardinan,  2003).  Kulit  buah  jeruk  nipis  mengandung salah satu dari zat penolak nyamuk sehingga dimungkinkan kulit  buah  jeruk  nipis  juga  efektif  sebagai  penolak nyamuk.

## METODE PENELITIAN
Bahan
Peralatan
Kulit buah jeruk nipis ( Citrus aurantifolia , Swingle) yang  diambil  dari  Tawangmangu,  Karanganyar,  Jawa Tengah,  natrium  sulfat  eksikatus,  sorbitol  70%,  Tri etanol amin, gliserin, nipagin, mineral oil, setil alkohol, asam stearat, lanolin, nipasol), nyamuk Aedes aegypti betina yang diperoleh dari Balai Penelitian Vektor dan Reservoir Penyakit (BPVRP), Salatiga, Jawa Tengah.
Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah seperangkat  alat  destilasi  stahl,  sangkar  nyamuk ukuran (50 x 35 x 40) cm, aspirator, alat-alat gelas, refraktometer, stopwatch.

## Prosedur
a.  Destilasi air kulit buah jeruk nipis Kulit buah jeruk nipis 1000 gram dimasukan dalam labu  destilasi  5000  ml,    ditambahkan  air  2500  ml hingga  sampel  terendam  dan  dihubungkan  dengan pendingin  dan disambung dengan buret 0,5 ml berskala 0,01  ml  dari  destilasi  stahl.  Kemudian  dipanaskan sampai  mendidih  sampai  uap  air  naik.  Destilasi berlangsung  selama  3  jam  kemudian  ditambahkan 30  menit  untuk  melihat  bahwa  minyak  atsiri  benar- benar  tidak  menetes  lagi,  kemudian  diamati  volume

## b.  Identifikasi minyak atsiri
Identifikasi  minyak  atsiri  dapat  dilakukan  dengan beberapa  cara,  pertama  dengan  meneteskan  satu tetes  minyak  atsiri  pada  permukaan  air,  minyak  atsiri akan menyebar dan permukaan air tidak keruh. Kedua teteskan  satu  tetes  minyak  atsiri  pada  kertas  saring, bila dibiarkan diudara minyak akan menguap sempurna tanpa meninggalkan noda lemak. Ketiga beberapa tetes minyak atsiri ditambah satu tetes pereaksi Sudan III dan menghasilkan warna merah ( Stahl, 1985 ).
c. Pemeriksaan indeks bias minyak atsiri kulit buah jeruk nipis
Minyak  atsiri  yang  diperoleh  dari  hasil  destilasi ditetapkan indeks biasnya dengan menggunakan alat refraktomoter.

## d. Penetapan bobot jenis minyak atsiri
Menimbang botol timbang kosong terlebih dahulu, kemudian  dimasukkan  1  ml  minyak  atsiri  kedalam botol timbang tersebut. Minyak atsiri dan botol timbang ditimbang  kemudian  dibaca  bobot  jenis  minyak  atsiri tersebut.
Bobot jenis minyak atsiri merupakan perbandingan bobot minyak atsiri dengan bobot air pada suhu dan volume  yang  sama.  Penetapan  bobot  jenis  dilakukan 3 kali replkasi.
e. Pembuatan lotion dari minyak atsiri kulit buah jeruk nipis
Bahan-bahan  yang  termasuk  dalam  fase  air  yaitu sorbitol 70%, Tri etanol amin, gliserin, nipagin dilarutkan dengan  aquades.  Bahan-bahan  yang  termasuk  fase minyak yaitu lanolin (adeps lanae 75% ditambah air 25%), mineral oil, asam stearat, setil alkohol dilebur sampai leleh, kemudian dimasukkan dalam mortir panas, diaduk hingga homogen.  Bahan-bahan  fase  air  dicampur  dengan  fase minyak  dalam  keadaan  panas  aduk  sampai  homogen setelah terbentuk emulsi kemudian ditambahkan minyak
Dewi Ekowati, Ahmad Nuzulul Abid, Jason Merari P.
minyak  atsiri  yang  terdestilasi.  Minyak  yang  diperoleh ditambah Natrium sulfat eksikatus untuk menghilangkan tapak-tapak air. Minyak yang diperoleh disimpan dalam botol coklat tertutup rapat dan terlindung cahaya.
f.  Pengujian aktivitas repelan minyak atsiri kulit buah jeruk nipis
Persiapan  alat  uji,  alat  yang  digunakan  berupa sangkar yang harus dibersihkan telebih dahulu sebelum digunakan  untuk  menghindari  terjadinya  kontaminasi bau lotion minyak atsiri kulit buah jeruk nipis berikutnya dan  untuk  menghilangkan  adanya  sisa-sisa  nyamuk yang masih tertinggal.
Pada  penelitian  ini  digunakan  hewan  uji  nyamuk Aedes aegypti betina dewasa steril yaitu nyamuk yang belum  terinfeksi  oleh  virus dengue yang  sebelumnya telah  dipuasakan  selama  24  jam  dengan  umur  yang sama.  Jumlah  nyamuk Aedes  aegypti tiap  kandang sebanyak 25 ekor, dimana dibagi menjadi 3 kelompok perlakuan,  masing-masing  diuji  selama  6  jam  dan digunakan waktu 5 menit untuk replikasi setiap jamnya. Kelompok  perlakuan  terdiri  dari  efektifitas  penolak nyamuk  minyak  atsiri  kulit  buah  jeruk  nipis  dalam berbagai  konsentrasi  (10%,  20%,  40  %  ),  dan  sebagai pembanding  kontrol  positif  autan  dan  kontrol  negatif basis lotion.
Pengujian aktivitas repelan minyak atsiri kulit buah jeruk  nipis  yaitu  pertama  oleskan  tangan  dan  lengan kiri  dengan  salah  satu  perlakuan  (lotion  minyak  atsiri dengan  berbagai  konsentrasi)  secara  merata,  dari ujung  jari  sampai  siku.  Tangan  kanan  diolesi  kontrol negatif berupa basis lotion, tangan kanan dimasukkan terlebih  dahulu  ke  dalam  sangkar  nyamuk  yang  berisi 25 ekor nyamuk melalui lubang kanan selama 1 menit, kemudian setelah 1 menit tangan kiri mulai dimasukkan melalui  lubang  kiri  selama  5  menit.  Dihitung  jumlah nyamuk  yang  menggigit  atau  hinggap  pada  kedua tangan dilakukan setiap jam mulai dari jam ke-0 (segera setelah  pengolesan)  sampai  ke-6.  Pengolesan  hanya dilakukan sekali yaitu pada jam ke-0 dan jam berikutnya tidak  diolesi  lagi  dengan  kelompok  perlakuan  (lotion minyak  atsiri  dengan  berbagai  konsentrasi)  dilakukan 3 kali replikasi (Anonim, 1995).
Dengan cara yang sama, dioleskan kontrol positif berupa autan yang mengandung DEET 12,5% sebagai pembanding.
Kemudian dihitung persentase daya tolak nyamuk dengan menggunakan rumus :
% Daya Tolak Nyamuk =                X 100 %
K P K -
Keterangan : K = Banyaknya nyamuk yang hinggap pada kontrol negatif P = Banyaknya nyamuk yang hinggap pada kelompok perlakuan
Hasil  olahan  data,  dianalisis  dengan  menggunakan metode analisa probit sehingga diperoleh harga EC 90.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
1. Hasil isolasi minyak atsiri kulit buah jeruk nipis Hasil isolasi minyak atsiri kulit buah jeruk nipis dapat dilihat pada tabel di bawah ini.
Tabel 1. Kadar minyak atsiri kulit buah jeruk nipis
Bobot kulit buah jeruk nipis (gram) Volume minyak atsiri (ml) Kadar (%) 1000 1000 1000 6,1 6,2 6,2 0,61 0,62 0,62 Rata-rata 0,62
Kadar rata-rata minyak atsiri kulit buah jeruk nipis adalah 0,62 % v/b
2. Identifikasi umum terhadap minyak atsiri kulit buah jeruk nipis
Tabel 2. Hasil identifikasi umum minyak atsiri kulit buah jeruk nipis
Senyawa Prosedur Hasil uji Pustaka Minyak atsiri 1 tetes minyak atsiri diteteskan di atas permukaan air Minyak menyebar di permukaan air, air tidak keruh Minyak menyebar di permukaan air, air tidak keruh Diteteskan pada kertas saring Tidak meninggalkan noda (transparan) Tidak meninggalkan noda (transparan) 3 tetes minyak atsiri ditambah sudan III
Warna merah
Warna merah
UJI AKTIVITAS MINYAK ATSIRI KULIT BUAH JERUK NIPIS (Citrus aurantifolia, Swingle) DALAM SEDIAAN LOTION SEBAGAI REPELAN TERHADAP NYAMUK Aedes aegypti
atsiri kulit buah jeruk nipis.
3. Identifikasi khusus terhadap minyak atsiri kulit buah jeruk nipis
3.1. Hasil pemeriksaan indeks bias minyak atsiri kulit buah jeruk nipis
Menurut Anonim (1979), indeks bias minyak atsiri jeruk adalah 1,474 sampai 1,476. Indeks bias minyak
Tabel 3. indeks bias minyak atsiri kulit buah jeruk nipis
Percobaan Indeks bias I II III 1,475 1,474 1,474
Rata-rata 1,474
atsiri  kulit  buah  jeruk  nipis  menurut  praktek  1,474, menurut hasil yang diperoleh berarti indeks bias minyak atsiri kulit buah jeruk nipis sudah sesuai dengan pustaka.

## 3.2. Hasil penetapan bobot jenis minyak atsiri kulit buah jeruk nipis.
Bobot jenis minyak atsiri adalah perbandingan bobot minyak atsiri terhadap bobot air pada suhu dan volume yang sama.
Tabel 4. bobot jenis minyak atsiri kulit buah jeruk nipis
Percobaan Bobot jenis I II III 0,8517 0,8519 0,8516 Rata-rata 0,8517
Menurut Anonim (1979) bobot minyak atsiri jeruk adalah  antara  0,850  g  sampai  0,856  g.  Bobot  jenis minyak atsiri kulit buah jeruk nipis menurut praktek adalah 0,8517, menurut hasil yang diperoleh berarti bobot jenis minyak atsiri kulit buah jeruk nipis sudah sesuai dengan pustaka.

## 4. Hasil uji aktivitas penolak nyamuk (repelan)
Pengujian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  efek repelan minyak atisiri dari kulit buah jeruk nipis terhadap nyamuk  Aedes  aegypti.  Pengujian  daya  repelan  minyak atsiri kulit buah jeruk nipis dilakukan dengan cara dioleskan pada kulit yang sudah diformulasikan dalam sediaan lotion. Data nyamuk yang hinggap disajikan  pada tabel 5 dan data persen daya tolak disajikan pada tabel 6.
Tabel 5. Jumlah rata-rata nyamuk yang hinggap pada perlakuan, kontrol negatif dan kontrol positif dari jam ke-0 sampai jam ke-6
Konsentrasi (%) Jumlah rata-rata nyamuk yang hinggap dari jam ke-0 sampai jam ke-6 Purata + SD 1 2 3 Perlakuan 10 20 40 29,29 15,57 11,14 26,43 12,29 10,57 27,14 12,29 10,00 27,62 + 1,49 13,38 + 1,89 10,57 + 0,57 Kontrol pada perlakuan 10 20 40 82,86 57,86 98,57 70,71 55,71 105,00 70,71 52,86 75,00 74,76 + 7,01 55,48 + 2,51 92,86 + 15,79 Kontrol (+) Autan 8,71 8,86 6,00 7,86 + 1,61 Kontrol  pada Autan 98,57 105,00 75,00 92,86 + 15,79
Pada tabel di atas menunjukkan bahwa konsentrasi semakin  besar  semakin  sedikit  nyamuk  yang  hinggap. Pada uji aktivitas penolak nyamuk (repelan) ini digunakan tiga  seri  konsentrasi  yaitu  10  %,  20  %,  40  %.  Masing- masing  konsentrsi  dibandingkan  dengan  kontrol  negatif dan kontrol positif. Kontrol positif yang digunakan adalah autan yang mengandung DEET dengan konsentrasi 12,5 % sebagai zat aktif. Autan dipilih karena merupakan produk penolak  nyamuk  yang  mengandung  DEET  12,5  %  yang secara klinis sudah terbukti khasiatnya dan sudah umum dikalangan  masyarakat,  kontrol  negatif  yang  digunakan adalah basis lotion .

## Tabel 6. Persentase nyamuk yang menolak
Konsentrasi (%)
% Daya tolak nyamuk
Purata + SD 1 2 3 10 20 40 63,23 69,06 84,44 60,36 74,32 85,49 60,47 73,33 85,89 61,35 + 1,625 72,24 + 2,795 85,27 + 0,749 Kontrol (+) Autan 91,54 92,10 91,51 91,72 + 0,33
Pada tabel di atas menunjukkan bahwa semakin besar konsentrasi minyak atsiri dari kulit buah jeruk nipis akan didapatkan persentase daya tolak nyamuk yang semakin besar dan efektivitas menolak nyamuk semakin lama.
Tabel 7. Persen daya tolak nyamuk Aedes aegypti dikonversikan pada tabel probit hasil perhitungan Ec 90 Konsentrasi (%) Probit I II III 10 20 40 5,33 5,50 5,99 5,25 5,64 6,04 5,25 5,61 6,08 A b r 4,1804 1,0962 0,9629 3,9362 1,3122 0,9999 3,8531 1,3786 0,9971 Y = a + bx Y = 4,1804 + 1,0962 X Y = 3,9362 + 1,3122 X Y = 3,8531 + 1,3786 X EC 90 82,27 % 61,13 % 57,60 % Tabel 8. Hasil perhitungan EC 90 Percobaan EC 90 (%) I II III 82,27 61,13
57,60
Rata-rata + SD 67,00 + 13,3415
Ec yang  diperoleh  dari  hasil  pengujian  ini  adalah 90 67,00 %. Hal ini menunjukkan bahwa pada konsentarsi 67,00 % sudah dapat menolak 90 % hewan uji (nyamuk Aedes egypti ). EC  adalah konsentrasi yang efektif untuk 90 menolak 90% hewan uji yaitu Aedes aegypti .
Pengujian  aktivitas  repelan lotion minyak  atsiri  dari kulit  buah  jeruk  nipis  sebagai  kontrol  negatifnya    basis lotion  dan  kontrol  positifnya  autan.  Dipilih  autan  karena mengandung DEET 12,5 %-13 % (N,N diethyl-m-toluamide atau  N,N-diethyl-3-methylbenzamide)  yang  merupakan anti  serangga  yang  dikembangkan  oleh  Departemen Pertanian  Amerika  Serikat  pada  tahun  1946,  dimana telah  dilakukan  percobaan  terhadap  berbagai  macam serangga dan kemampuan DEET telah teruji pada berbagai kondisi  iklim  dan  lingkungan.  Pengujian  dilakukan  kontrol negatif terlebih dahulu dikarenakan menghindari pencemaran di dalam sangkar nyamuk.
Cara  kerja  DEET  dalam  menangkal  gigitan  nyamuk atau serangga adalah dengan mengacaukan kemampuan serangga  atau  nyamuk  untuk  mendeteksi  sumber  gas karbondioksida yang keluar dari kulit dan nafas manusia
UJI AKTIVITAS MINYAK ATSIRI KULIT BUAH JERUK NIPIS (Citrus aurantifolia, Swingle) DALAM SEDIAAN LOTION SEBAGAI REPELAN TERHADAP NYAMUK Aedes aegypti
dan  asam  laktat  yang  menarik  seranggga/nyamuk  ke arah  kita  sampai  jarak  sekitar  36  meter,  karena  nyamuk mempunyai  kemoreseptor  pada  antenanya  untuk  asam laktat.  Oleh  karena  itu,  DEET  bertugas  untuk  menangkal reseptor  tersebut.  Selain  asam  laktat,  bau  wangi  bunga yang  berasal  dari  sabun,  parfum  dan  minyak  rambut  juga membuat  nyamuk  tertarik  untuk  mendekat.  Jadi,  DEET ini  tidak  bersifat  membunuh,  tetapi  untuk  membuat nyamuk/serangga  tidak  bisa  melokalisir  posisi  kita  selama periode beberapa jam. Beberapa faktor yang mempengaruhi kinerja  dan  efektifitas lotion tersebut  adalah  spesies serangga,  kepadatan  serangga  dalam  lingkungan,  umur, jenis kelamin, tingkat aktifitas, daya tarik biokimia terhadap serangga, suhu lingkungan, kelembaban dan trophozoit dalam sel  darah  merah  yang  bisa  menyebabkan  siklus  penyakit berulang lagi.
Aroma  khas  senyawa  linalool  dari  kulit  buah  jeruk nipis  sangat  dihindari  nyamuk.  Saat  sediaan  lotion kulit buah jeruk nipis dioleskan di kulit, minyak atsirinya meresap  ke  dalam  pori-pori  lalu  menguap  ke  udara. Bau ini akan terdeteksi oleh reseptor kimia yang dimiliki nyamuk sehingga ia akan menghindar dengan sendirinya. Senyawa  linalool,  selain  aromanya  yang  tidak  disukai nyamuk juga bisa membuat iritasi pada kulit nyamuk. Hasil  percobaan  dapat  diketahui  bahwa  semakin tinggi  konsentrasi  semakin  besar  persentase  daya  tolak nyamuk  dan  semakin  lama  pengamatan  semakin  kecil persentase  daya  tolaknya,  ini  berarti  efek  repelan lotion minyak atsiri dari kulit buah jeruk nipis semakin berkurang. Efek  repelan  ini  berkurang  mungkin  disebabkan  sifat minyak atsiri yang mudah menguap. Pada kontrol positif yaitu autan juga mengalami penurunan persentase daya tolaknya dengan semakin lamanya pengamatan mungkin disebabkan  tangan  probandus  yaitu  manusia,  yang mengeluarkan  keringat  sehingga  meluruhkan  jumlah autan atau lotion pada kulit tangan probandus.

## KESIMPULAN
Berdasarkan data yang diperoleh dan dianalisa pada uji  aktivitas  penolak  nyamuk  minyak  atsiri  kulit  buah
jeruk  nipis  ( Citrus  aurantifolia ,  Swingle)  terhadap nyamuk Aedes  aegypti terbukti  bahwa  minyak  atsiri kulit  buah  jeruk  nipis  mempunyai  aktivitas  sebagai penolak nyamuk khususnya nyamuk demam berdarah yaitu Aedes aegypti secara topikal, dan nilai EC adalah 90 67,00 %.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim, 1986, Penanggulangan Penyakit Demam Berdarah , 15, Departemen Kesehatan Republik Indonesia dengan Kwartir Nasional Gerakan Pramuka, Jakarta.
Anonim, 1995, Farmakope Indonesia , Edisi III, Departemen kesehatan RI, Jakarta.
Anonim, 1995, Metode Pengujian Efikasi Pestisida , 4, Komisi Pestisida Pertanian Departemen RI, Jakarta. Anonim, 1995, Materia Medika Indonesia , jilid VI, hal X, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta. Dalimartha, S., 2000, Atlas Tumbuhan Obat Indonesia , jilid II, Cetakan I, 85-86,  Trubus Agriwidya, Jakarta. Kardinan Agus, 2003, Tanaman Pengusir dan Pembasmi Nyamuk , 1-4, Agromedia pustaka, Jakarta. Sarwono , B., 1994, Jeruk Nipis Dan Pemanfaatannya , 10-11, Penebar swadaya, Jakarta.
Stahl,  E.,  1985, Analisis  Obat  Secara  Kromatografi  dan Mikroskopi , diterjemahkan oleh Kosasih Patmawinata dan Sudiro S., ITB, Bandung.
Dewi Ekowati, Ahmad Nuzulul Abid, Jason Merari P.