KARTIKA: JURNAL ILMIAH FARMASI , Agustus 2024, 9 (2), 88-104 p-ISSN 2354-6565 / e-ISSN 2502-3438 DOI: 10.26874/kjif.v9i2.721

## STUDI IN SILICO SENYAWA AKTIF PADA DAUN SAMBILOTO (Andrographis paniculata) SEBAGAI INHIBITOR ANDROGEN PADA KANKER PROSTAT
IN SILICO STUDY OF ACTIVE COMPOUNDS IN SAMBILOTO (Andrographis paniculata) LEAVES AS ANDROGEN INHIBITORS IN PROSTATE CANCER
Belva Annora Alfita Davinali 1 , Manuela Joy Stephanie 1 , Hasya Qanita Ali Hanifa 1 , Khanna Ragita Aurelia 1 , Rizky Prasiska 1 , Halwa Aulia Nurdin 1 , Rina Fajri Nuwarda 1*
1 Depatemen Analisis Farmasi dan Kimia Medisinal, Fakultas Farmasi, Universitas Padjadjaran, Sumedang, Indonesia 45363
*Corresponding author email: rina.nuwarda@unpad.ac.id

## Abstrak
Kanker prostat adalah penyakit kanker yang berkembang di sel-sel kelenjar prostat pria, yang  dapat  menyebar  ke  bagian  tubuh  lainnya,  terutama  tulang  dan  nodus  limfa.  Di Indonesia, kanker prostat menjadi kanker kelima yang paling umum terjadi pada pria, dan menempati  urutan  kedua  kanker  paling  umum  terjadi  pada  pria  di  dunia.  Reseptor Androgen  (AR)  adalah  protein  reseptor  yang  berperan  penting  dalam  pertumbuhan  sel kanker prostat dan telah digunakan sebagai sel target untuk pengembangan obat terkait penyembuhan  kanker  prostat.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  studi in  silico aktivitas senyawa  kimia  pada  daun  tanaman  sambiloto  ( Andrographis  paniculata )  untuk menghambat  reseptor  Androgen  (1E3G)  untuk  mengobati  kanker  prostat.  Penelitian dilakukan dengan metode molecular docking menggunakan perangkat lunak Chemdraw, Chem3D,  AutoDockTools  1.5.6.,  BIOVIA  Discovery  Studio  2021,  dan  Ligandscout. Hasil penelitian menunjukkan bahwa senyawa Andrografolid mempunyai energi ikatan bebas  ∆G  terendah  yaitu  -10.73  KKal/mol  serta  interaksi  pada  beberapa  residu  asam amino  yang  sama  dengan  ligan  alami,  yaitu  Metribolon.  Karena  itu  dapat  disimpulkan bahwa  dari  daun  sambiloto  senyawa  andrografolid  merupakan  senyawa  yang  paling berpotensi dalam penghambatan reseptor Andorgen.
Kata kunci : Andrographolide, reseptor androgen, studi in silico

## Abstract
Prostate cancer is a malignancy in men’s prostate gland cells, which can spread to other parts of the body, most commonly bones and lymph nodes. In Indonesia, prostate cancer is  the  third  most  common  type  of  cancer  among  men,  and  is  the  second  most commoncancer in men in the world. Androgen receptor (AR) is a receptor protein that plays an important role in the growth of  prostate cancer cells and has been used as a target cell for developing drugs for prostate cancer treatment. This research aims to study in  silico  the  activity  of  chemical  compounds  in  the  leaves  of  the  sambiloto  plant (Andrographis  paniculata)  to  inhibit  the  Androgen  receptor  (1E3G)  to  treat  prostate cancer.  Tests  were  Carried  out  with  molecular  docking  method  using  the  software Chemdraw 3D, AutoDockTools 1.5.6., BIOVIA Discovery Studio 2021, and Ligandscout.
KARTIKA: JURNAL ILMIAH FARMASI , Agustus 2024, 9 (2), 88-104
DOI: 10.26874/kjif.v9i2.721
The results showed that Andrographolid compounds had the lowest ∆G free bond energy of -10.73 KKal/mol and interactions in several amino acid residues that were the same as  natural  ligands,  namely  Metribolon.  Therefore,  it  can  be  concluded  that  from sambiloto  leaves,  andrographolid  compounds  are  the  most  potential  compounds  in inhibiting Andorgen receptors.
Keywords : Andrographolide, Androgen receptor, in silico study.

## PENDAHULUAN
Sambiloto  memiliki  senyawa metabolit sekunder berupa andrografolid pada  analisis  kuantitatif  menggunakan
HPLC dengan kandungan sebesar 2,208%.  Dalam  pustaka  lain  juga menyatakan  daun  sambiloto  memiliki kandungan alkaloid,  tanin, dan saponin.
Pengujian  pada  ekstrak  etil  asetat  daun sambiloto menggunakan spektrofotometri IR dan UV-Vis menunjukkan kemungkinan adanya
gugus  fungsi  triterpenoid  pada  panjang gelombang  278  nm  dan  202  nm.  Salah satu  senyawa  yang  terkandung  dalam sambiloto  tersebut  dapat  digunakan sebagai anti kanker (Bialangi et al , 2022; Prihatini et al , 2020).
Kanker  adalah  pertumbuhan  sel tubuh  yang  tidak  normal  yang  sering menyerang  organ  lain.  Komponen  aktif dari daun sambiloto berupa andrografolid  dapat  melakukan  fungsi anti-kanker  dengan  menghalangi  jalur TLR4 melalui p50 terhadap sintesis NF- kB.  Pada  akhirnya,  ini  menghentikan sintesis  mediator  target  gen  yang diperlukan sel kanker, yang
menghentikan perkembangan sel kanker (Febyan  dan  Hudiyono,  2016).  Kanker prostat  adalah  jenis  keganasan  paling umum  dan  menjadi  penyebab  utama kematian akibat kanker pada pria.
Menurut  data  yang  dihimpun oleh  Kementerian  Kesehatan  Republik
Indonesia  pada  tahun  2018,  prevalensi kanker  prostat  menduduki  posisi  ketiga sebagai  kanker  terbanyak  pada  pria  di Indonesia  dengan  jumah  kasus  1.102 pasien pada rumah sakit pusat pendidikan  (Jakarta,  Surabaya,  dan Bandung) selama delapan tahun terakhir.
Prostat merupakan kelenjar kecil berukuran seperti kenari yang berada di dasar kandung kemih pada pria. Kelenjar ini  terdiri  dari  dua  lobus  simetris  dan mengelilingi  bagian  awal  uretra  yang membawa  urin  dari  kandung  kemih  ke penis. Uretra juga mengalirkan air mani, yaitu  cairan  yang  mengandung  sperma. Kanker prostat adalah salah satu kondisi kelenjar prostat yang terus berkembang. Pertumbuhan  sel  prostat  ini  biasanya tidak menimbulkan gejala, tetapi karena terus berkemban sehingga dapat menyebabkan  rasa  sakit  dan  kesulitan saat buang air kecil (Parker et al , 2020). Salah  satu  cara  pengobatan kanker prostat adalah dengan menghentikan  aktivitas  androgen  pada reseptor  androgen.  Reseptor  androgen berperan dalam
mengendalikan proliferasi sel kanker prostat, yang dapat dihambat  melalui  pemblokiran  reseptor oleh  senyawa  yang  dapat  bersaing dengan hormon androgen (Ambarsari et al .,  2014).  Operasi,  radioterapi,  dan kemoterapi  adalah  beberapa  metode pengobatan kanker prostat yang memiliki   efek   samping  yang     cukup
KARTIKA: JURNAL ILMIAH FARMASI , Agustus 2024, 9 (2), 88-104
DOI: 10.26874/kjif.v9i2.721
tinggi bagi pasien. Misalnya, radioterapi dapat menyebabkan kerusakan DNA dan kematian  sel,  yang  menyebabkan  sel kanker lebih parah daripada sel normal. Oleh  karena  itu,  metode in  silico digunakan pada tanaman daun sambiloto ( Andrographis paniculata ), yang merupakan  salah  satu  dari  banyak tumbuhan  yang  digunakan  sebagai tanaman  obat  dan  digunakan  sebagai alternatif terapi yang dapat meminimalkan efek sampingnya. Andrografolide telah terbukti menghambat  pertumbuhan  sel  kanker dan 50% penghambatan
pertumbuhannya  berkisar  antara  10 hingga 28 μM, tergantung pada jenis sel kanker yang diuji (Roman, 2019). Proses penemuan  obat  merupakan  sebuah  jalur yang sulit dan penuh tantangan, sehingga hanya sedikit kandidat yang berkembang dari  senyawa  yang  berhasil  menjadi produk  yang  tersedia  secara  komersial. Hal ini disebabkan oleh beberapa faktor, seperti  afinitas  pengikatan  yang  buruk, efek  yang  tidak  tepat  sasaran,  atau  sifat fisikokimia seperti kelarutan atau stabilitas.  Proses  ini  semakin  rumit karena  tingginya  biaya  penelitian  dan pengembangan serta kebutuhan waktu.
Oleh  karena  itu,  penting  untuk mengoptimalkan  setiap  langkah  proses untuk memaksimalkan peluang keberhasilan. Seiring berjalannya waktu,saat  ini  terdapat  perangkat  lunak dan  perangkat  keras  komputasi  telah merevolusi penggunaan metode in silico dalam  perancangan  obat,  dengan  akses ke  komputer  berkinerja  tinggi  yang memungkinkan penghitungan yang lebih kompleks dan kumpulan data yang lebih besar  dapat  diproses  dengan  mudah
seperti pemodelan, simulasi, atau pengurutan gen (Chang et al , 2023). Metode in silico , yang
melibatkan  pemodelan  atau  simulasi komputasi,  dianggap  cukup  efektif dalam  penemuan  obat  baru.  Studi  in silico  juga  dapat  digunakan  untuk menemukan senyawa bahan alam terhadap  protein  target.  Selain  itu,  studi in  silico  membutuhkan  metode  yang divalidasi  untuk  menemukan  interaksi potensial  antara  senyawa  ligan  dan reseptor (Hardianto et al, 2019).

## METODE PENELITIAN
Tahapan Penelitian
a. Persiapan Alat dan Bahan
Penelitian dilakukan dengan perangkat  lunak  berupa  Chemdraw, Chem3D, AutoDockTools 1.5.6., BIOVIA  Discovery  Studio  2021,  dan Ligandscout  serta  laptop  dengan  merk
Lenovo Ideapad 3 14IML05.
b. Prediksi Lipinski Rule of Five Senyawa  metabolit  sekunder
yang  terdapat  pada  daun  sambiloto dilakukan  pengujian  karakteristik  sifat fisikokimia  berdasarkan  aturan Lipinski Rule  of  Five (RO5).  Prediksi  sifat fisikokimia  dilakukan  menggunakan situs SwissADME untuk melihat permeabilitas suatu senyawa dan
memprediksi kemampuan senyawa
dalam pemberian secara oral.
c. Penentuan ADME/Tox
Penentuan  profil ADME/Tox meliputi  penilaian  absorbsi,  distribusi, metabolisme,  ekskresi,  dan  toksisitas dilakukan dengan memasukkan senyawa uji  ke situs PreADMET.  Terdapat  fitur
KARTIKA: JURNAL ILMIAH FARMASI , Agustus 2024, 9 (2), 88-104 DOI: 10.26874/kjif.v9i2.721
prediksi  dari  PreADMET,  yaitu ADME
Prediction dan Toxicity  Prediction . Parameter  yang  didapatkan  berupa  nilai HIA  ( Human  Intestinal  Absorption ) untuk  prediksi  penyerapan  obat  pada usus, permeabilitas sel Caco-2, nilai PPB (Plasma Protein Binding) sebagai prediksi  kemampuan  ikatan  senyawa pada  protein  plasma,  dan  nilai  BBB
( Blood Brain Barrier ). Pada uji toksisitas  yang  akan  didapatkan  adalah sifat mutagen dan karsinogen.

## d. Pemodelan Farmakofor
Pemodelan  farmakofor  terdiri dari 3 (tiga) tahapan antara lain preparasi database,  pemodelan  farmakofor,  dan validasi farmakofor. Pada tahap pertama, database  berupa  active  dan  decoy  yang akan  dipreparasi  diunduh  dengan  situs DUD-E dan disimpan dengan format ldb. Preparasi  database  juga  dilakukan  pada senyawa  uji  dengan  mengatur  ulang ligandscout pada  laman  semua  atau kosong  lalu  menekan ligandbased perspective .  Kemudian,  memasukkan satu  persatu  senyawa  uji  menggunakan fitur Insert ,  mengubah  tipenya  dalam bentuk test dan  disimpan  dengan format.ldb.  Setelah  itu,  pemodelan dilakukan dengan menggunakan
LigandScout  dan  mereset  dengan  cara mengklik ‘ Restore Default ’ pada bagian ‘ File ’.  Kemudian  mengklik  bagian ‘ Ligand  Based ’  serta  membuka file untuk  memilih database  active yang telah  dibuat  sebelumnya.  Berikutnya adalah memastikan semua senyawa telah diminimisasi.  Setelah  dipastikan  maka dapat  dilakukan  pembuatan cluster lalu menyisakan satu senyawa bertipe ‘ Training ’  pada  setiap cluster dan
menjadikan  senyawa  lainnya  ‘ Ignored ’. Selanjutnya  dapat  mengklik  tombol ‘ Create Pharmacophore ’ hingga didapat 1-10 model farmakofor dengan file .pmz.
Setelah mendapat 10 model farmakofor, model-model tersebut dapat ditest satu persatu dengan cara memindahkan  1  model  dengan  klik ‘ Copy to another perspective ’.
Kemudian  mengklik  icon  warna  hijau pada bagian tengahnya, mengklik ‘ Screening  Perspective ’,  memindahkan
model  pada  kolom  ‘ Screening ’.  Lalu, mengklik  ‘ Load  Screening  Database ’ pada kolom screening dan memilih data base active dan decoy yang telah dibuat sebelumnya.  Setelah  itu,  menandai database  active menggunakan  warna hijau  dan decoy warna  merah  untuk melakukan  ‘ Perform  Screening ’.  Pada akhir  proses  akan  didapat  kurva  ROC dan  nilai  AUC  untuk  digunakan  dalam menentukan model terbaik.

## e. Penambatan Molekul
(Molecular Docking) Penambatan  molekuler  meliputi preparasi  reseptor,  preparasi  ligand, penambatan  molekul,  analisa  hasil, visualisasi (pembuatan kompleks, overlay , 2D, dan 3D). Langkah pertama yang  dilakukan  adalah  menggunakan situs Protein Data Bank untuk mengunduh  protein  yang  sesuai  dengan target reseptor. Kemudian menggunakan fitur-fitur yang ada pada Biovia Discovery  Studio untuk  melakukan preparasi  reseptor  dan  preparasi  ligand. Setelah  semua  persiapan  selesai,  maka dapat  dilakukan  penambatan  molekul dengan memanfaatkan aplikasi Autodock untuk mendapatkan  hasil yang  nantinya
KARTIKA: JURNAL ILMIAH FARMASI , Agustus 2024, 9 (2), 88-104 DOI: 10.26874/kjif.v9i2.721
akan dianalisa dengan command prompt . Selanjutnya dilakukan juga empat tahap visualisasi.  Visualisasi  yang  pertama bertujuan  untuk  membuat  kompleks dengan autodock yang disimpan dengan format .pdb agar dapat dibuka menggunakan  Biovia.Visualisasi  yang kedua  bertujuan  membuat overlay dengan Biovia dengan format .pdb pada file kompleks yang telah dibuat sebelumnya.  Visualisasi  yang  ketiga bertujuan  untuk  mendapatkan  struktur dua dimensi dari senyawa yang ada dan hasil  akhirnya  disimpan  dalam  format image . Visualisasi yang terakhir bertujuan  mendapatkan  struktur  tiga dimensi  dengan  memanfaatkan  aplikasi yang  sama  yaitu  Biovia.  Kemudian file yang  didapat  disimpan  dalam  bentu k
image .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Setelah didapatkan sepuluh senyawa  uji  yang  terkandung  dalam daun sambiloto. Senyawa-senyawa tersebut  diuji  menggunakan Lipinski
Rule  of  Five 5  untuk  melihat  aktivitas farmakologis atau biologis yang memadai  untuk  menjadi  kandidat  obat yang  efektif  dan  aman  jika  diberikan secara oral. Tujuan dilakukannya prediksi  ini  untuk  menyeleksi  senyawa- senyawa yang potensial dari awal proses pengembangan obat,
sehingga menghemat  waktu  dan  sumber  daya dengan  memfokuskan  penelitian  pada senyawa  yang  lebih  mungkin  berhasil dalam tahap pengujian klinis.
Persyaratan  Lipinski  meliputi bahwa  berat  molekul  (BM)  tidak  boleh melebihi  500  Da,  nilai  koefisien  partisi (logP)  tidak  boleh  lebih  dari  5,  jumlah
ikatan  donor  dan  akseptor  hidrogen harus kurang dari 5, dan jumlah akseptor ikatan  hidrogen  harus  kurang  dari  10. Senyawa uji dianggap memenuhi persyaratan  RO5  dan  layak  untuk dikembangkan menjadi sediaan oral jika hanya terdapat satu pelanggaran terhadap aturan Lipinski (Lipinski et al,
2004).
Berdasarkan  pengujian Lipinski Rule  of  Five senyawa  yang  tidak memenuhi  persyaratan  karena  memiliki lebih  dari  satu  kriteria  yang  tidak memenuhi aturan RO5 adalah Bisandrografolid A dan 5,2’,3’- Trihydroxy-7,8-dimethoxyflavone-3'-
glucoside menandakan senyawa tersebut sulit  menembus  membran  secara  difusi pasif  dan  tidak  bisa  dibentuk  sediaan oral.  Hasil Lipinski  Rule  of  Five dapat dilihat pada Tabel 1. Langkah selanjutnya dalam proses pemilihan suatu senyawa sebagai calon  obat  potensial  adalah  melakukan analisis  ADMET  untuk  meminimalisir kemungkinan kegagalan pada pengembangan  obat.Validasi  ADME dan sifat toksisitasnya dilakukan dengan menggunakan  program  PreADMET. Analisis  ADMET  mencakup  beberapa parameter,  yaitu  skor  HIA  dan  Caco2 untuk  mengevaluasi  aspek  penyerapan, serta PPB dan BBB untuk menilai aspek distribusi. Ada tiga tingkatan skor HIA. Skor  0-20%  termasuk  rendah,  skor  20- 70%  termasuk  sedang,  dan  skor  70- 100%  termasuk  tinggi.  HIA  yang  baik berada  pada  kisaran  70-100%,  artinya terserap dengan baik di usus.
Berdasarkan data yang diperoleh, senyawa  asam  kuinat  mempunyai  daya serap  rendah, dan  senyawa wogonin-5-
glukosida  serta  5,2',3'-trihidroksi-7,8- dimetoksiflavon-3'-glukosida mempunyai  daya  serap  sedang.  dan senyawa  yang  lainnya  menunjukkan daya  serap  yang  baik.  Lalu  ada  Human colon  adenocarcinoma  (Caco-2),  yang berfungsi sebagai prediktor
permeabilitas  pergerakan  obat  melalui sel  epitel  adenokarsinoma  usus  besar. Berdasarkan data yang diperoleh, hanya senyawa andrografolida yang ditemukan memiliki  permeabilitas  atau  kapasitas penyerapan  yang  tinggi  pada  sel  Caco2 karena berada pada kisaran >70 nm/s.
Tabel 1. Hasil Lipinski rule of five . No Nama Senyawa Berat Molekul (<500Da) g/mol Log P (<5) Ikatan Hidrogen   Keterangan Donor (<5) Akseptor (<10) 1.   Andrographolide 350.4 2.2 3 5 Memenuhi 2. Skullcapflavone 314.29 3 2 6 Memenuhi 3. Asam Kuinat 192.166 - 2.321 5 6 Memenuhi 4. Wogonin-5 glucoside 446.4 0.6 5 10 Memenuhi 5. Andrographidin A 462.4 0.7 4 10 Memenuhi 6. Bisandrographolide A 664.9 6.1 4 8 Tidak memenuhi 7. Apigenin 270.237 2.577 3 5 Memenuhi 8.   Neoandrographolide 480.6 2.6 4 8 Memenuhi 9. 5,2’,3’-Trihydroxy-7,8- dimethoxyflavone-3'-glucoside 492.4 0.8 6 12 Tidak Memenuhi 10.  3,19- isopropylideneandrographolide 390.5 3.2 1 5 Memenuhi Dalam analisis distribusi, dilakukan  evaluasi  terhadap  PPB  dan
BBB.  PPB  (Protein  Plasma  Binding) adalah  tolak  ukur  yang  digunakan sebagai  nilanilai  distribusi  berdasarkan kemampuan obat untuk mengikat protein plasma. Nilai PPB dikategorikan menjadi  dua  kategori:  jika  nilainya melebihi  90%,  maka  ikatan  obat terhadap  protein  plasma  dianggap  kuat, sedangkan nilai di bawah 90% menunjukkan  ikatan  yang  lemah.  Obat dianggap  efektif  jika  dapat  dengan mudah melintasi membran untuk
mencapai targetnya, dibandingkan
dengan  hanya  berikatan  dengan  protein plasma (Andani et al , 2022).
Berdasarkan hasil yang diperoleh, senyawa Andrografolid, Apigenin, Neoandrografolid, Bisandrografolid A, 3,19- isopropylideneandrografolid memiliki ikatan yang kuat karena mempunyai nilai diatas  90%.  BBB,  atau  ( Blood  Brain Barrier )  sawar  darah  otak,  adalah batasan  yang  digunakan  untuk  menilai apakah  suatu  obat  dapat  melewati  area ini.  Sawar  darah  otak  adalah  faktor krusial  karena  senyawa  yang  aktif  pada sistem  saraf  pusat  harus  mampu menembus  area  ini.  Namun,  jika  target obat tidak berhubungan dengan aktivitas sistem  saraf  pusat,  maka  obat  tersebut sebaiknya  tidak   melwati  sawar   darah
KARTIKA: JURNAL ILMIAH FARMASI , Agustus 2024, 9 (2), 88-104
DOI: 10.26874/kjif.v9i2.721
otak  untuk  mneghindari  efek  samping pada  sistem  saraf  pusat.  Kemampuan menembus  otak  yang  tinggi  dapat menyebabkan  masalah.  Jika  nilai  BBB kurang dari 2, ini menunjukkan
kemampuan  sedang  untuk  melewati sawara  darah  otak.  Berdasarkan  data yang diperoleh, semua senyawa menunjukkan  kemampuan  penetrasi sedang  ke  area  sawar  otak  karena  nilai mereka  kurang  dari  dua  (Hameed et  al ,
2020). Terakhir, terdapat aspek toksisitas. Pengujian toksisitas dilakukan dengan  menggunakan  uji  Ames  untuk menentukan apakah senyawa uji memiliki  potensi  mutagenik.  Selain  itu, potensi karsinogenik senyawa obat juga diuji  pada  tikus  dan  mencit  untuk mengevaluasi kemungkinan efek kanker (Hardjono, 2016).
Mutagenisitas dan toksisitas mengindikasikan apakah ligan yang diuji memiliki  sifat  mutagenik  dan/atau karsinogenik  pada  mencit  dan  tikus. Pertama, mari kita lihat sifat mutageniknya.  Data  yang  diperoleh menunjukkan bahwa senyawa andrografin A dan 5,2',3'-trihidroksi-7,8- dimetoksiflavon-3'-glukosida tidak
bersifat  mutagenik.  Enam  senyawa terbukti memiliki sifat mutagenik
berdasarkan pengujian pada tikus menggunakan prediksi ADME/Tox.
Dari segi karsinogenisitas, empat senyawa menunjukkan sifat karsinogenik, sedangkan empat senyawa lainnya  tidak.  Data  uji  pada  tikus menunjukkan  bahwa  lima  senyawa bersifat  karsinogenik,  sementara  lima senyawa lainnya tidak. Dengan
demikian, data karsinogenisitas menunjukkan  bahwa  beberapa  senyawa ligan yang diuji memiliki sifat karsinogenik pada mencit dan/atau tikus. Setelah analisis ADME/Tox selesai,  proses  dilanjutkan  dengan pemodelan  dan  skrining  farmakofor, diawali dengan tahapan validasi. Tujuan dari validasi ini adalah untuk mengukur akurasi  dalam  membedakan  antara senyawa  aktif  dan decoy (inaktif). Pemodelan  farmakofor  yang  efektif dapat  secara  optimal  mengidentifikasi senyawa  aktif  dan  mengurangi  deteksi senyawa yang tidak aktif. Dalam proses validasi,  digunakan  500  senyawa  yang terdiri  dari  100  senyawa  aktif  dan  400 senyawa  decoy.  Hasil  validasi,  seperti yang  ditampilkan  pada  Gambar  1, menunjukkan  adanya  179  senyawa  hit terbaik  dengan  nilai Area  Under  Curve (AUC)  sebesar  78%.  Nilai  AUC  ini menunjukkan  bahwa  metode  yang digunakan  valid  dan  dapat  diterima karena memenuhi syarat nilai AUC yang harus ≥ 70%.
Dilakukan pengujian 10 senyawa pada tanaman Sambiloto dan diperoleh 9 senyawa hit, yaitu Wogonin-5 glucoside,5,2’,3’Trihydroxy7,8dimetho xyflavone-3'-glucoside, Skullcapflavone, Neoandrografolid, Bisandrografolid A, Apigenin, Andrografolide,  Andrografidin  A,  dan 3,19isopropylideneandrografolid. Senyawa  terbaik  dari  hasil  skrining farmakofor adalah Andrografolide dengan  nilai  pharmacophore  fit  score tertinggi, yaitu 36,04.
KARTIKA: JURNAL ILMIAH FARMASI , Agustus 2024, 9 (2), 88-104 DOI: 10.26874/kjif.v9i2.721
Tabel 2. Hasil penentuan ADME/Tox.
N o. Nama Senyawa Absorpsi Distribusi Toksisitas HIA (%) Caco- 2 (nm/s ec) PPB (%) BBB Mutag en Karsinoge n Men cit R at 1. Andrographolide 87.6876 36 19.134 1 94.8734 45 0.17035 9 Mutag en + - 2.   Skullcapflavone 92.5993 86 18.892 2 77.2636 99 0.04264 19 Mutag en - + 3. Asam Kuinat 20.2869 36 8.2724 2 6.59502 2 0.42858 6 Mutag en - + 4. Wogonin-5 glucoside 65.8981 50 4.7001 7 63.8967 6 0.03829 06 Mutag en + - 5.   Andrographidin A 74.8110 15 16.099 4 67.0675 52 0.02714 18 Non Mutag en - - 6.   Bisandrographolide A 91.8327 61 20.876 3 93.9353 86 1.02601 Mutag en - + 7. Apigenin 88.1228 39 10.546 8 97.2534 09 0.56511 3 Mutag en + + 8. Neoandrographolide 81.3301 15 18.118  93.3730 16 0.12553 9 Mutag en + - 9. 5,2’,3’-Trihydroxy-7,8- dimethoxyflavone-3'- glucoside 37.0035 73 10.304 1 54.4132 14 0.03416 79 Non Mutag en + - 10 . 3,19- isopropylideneandrogra pholide 96.1436 21 37.757 4 92.4033 36 0.19523 5 Mutag en + +
.
Gambar 1. Kurva validasi (kurva ROC model 8).
Langkah awal dalam penambatan molekuler adalah validasi metode
dengan  menambatkan  ulang  protein target  terhadap  ligan  alami.  Dalam proses docking ,  pengaturan  kotak  grid
digunakan  untuk  menentukan  ruang  di mana ligan akan terikat. Mengingat ligan yang telah terikat dengan makromolekul protein  saat  mengunduh,  penentuan gridbox dilakukan. Hasil validasi metode
KARTIKA: JURNAL ILMIAH FARMASI , Agustus 2024, 9 (2), 88-104 DOI: 10.26874/kjif.v9i2.721
penambatan  molekul  reseptor  androgen
(1E3G) dengan ligan alami menunjukkan  RMSD  sebesar  0,479  Å, yang  menunjukkan  bahwa  penambatan molekul reseptor androgen dengan ligan asli valid. Metode penambatan molekuler  dianggap  valid  jika  nilai RMSD  <  2  Å  (Yasin  dkk,  2020). Semakin kecil nilai RMSD yang didapat maka semakin kecil pula kesalahan yang terjadi  dalam  proses docking . Gridbox yang  didapatkan  menghasilkan  ukuran kotak  40  x  40  x  40  dengan  grid coordinate  x  =  -0.086;  y  =  30.89;  z  = 4.301.
Gambar 2. Overlay ligan alami sebelum (hijau) dan sesudah (biru) penambatan
molekuler. Penambatan molekuler
dilakukan  pada  10  senyawa  uji  dan metribolon  sebagai  ligan  alami  dengan menggunakan gridbox yang sesuai pada hasil  validasi  metode.  Hasil  dari penambatan  molekul  10  senyawa  uji dapat  dilihat  pada  tabel  5.  Parameter yang  digunakan  pada  pada  penambatan molekuler meliputi energi ikatan, konstanta  inhibisi,  dan  konformasi ikatan  antara  senyawa  uji  dengan reseptor.  Reseptor  yang  digunakan
adalah  1E3G  yang  merupakan  struktur kristal  dari  domain  pengikat  DNA  dari reseptor  androgen  (Tan  et  al,  2015). Ekspresi berlebih dari reseptor androgen, yang  mengontrol  proliferasi  sel  kanker prostat pada kelenjar prostat, merupakan salah  satu  penyebab  kanker  prostat sehingga dibutuhkan ligan yang menggantikan  ligan  asli  pada  reseptor androgen  (Pramesti  dan  Laksmiani, 2022). Tabel 3. Hasil penambatan molekul senyawa uji. Senyawa Binding Energy (KKal/mo l) KI (nm) Interkasi dengan asam amino Ikatan Hidroge n Ikatan Van der Waals Ikatan lainnya Metribolone (Native Ligand) -11.99 1.63 THR A: 877; ASN A: 705 Alkyl & Pi- Alkyl: LEU A: 701; MET A: 780; MET A: 742;
LEU A:
704; MET A: 745; PHE A: 764; PHE A: 876 Andrographolide -10.73 13.72 ASN A:705 LEU A: 701; PHE A: 891; MET A: 895; THR A: 877; MET A: 780;
MET A: 787; VAL A: 746; PHE A: 746; ARG A: 752; MET
Alkyl & Pi- Alkyl: LEU A: 704; PHE A: 876; MET A: 742 LEU A: 873 Skullcapflavone -8.41 682.66 ASN A: 705; THR A: 877 A: 745; MET A: 749; GLN A; 711; LEU A: 707; GLY A: 708 Alkyl & Pi- Alkyl: MET A: 749 Pi-Pi T- shaped: PHE A: 764 Pi- Sigma&Pi- Sulfur: MET A: 745 Asam kuinat -4.39 254130 GLN A:711; ARG A: 752; GLY A: 708; LEU A: 704 MET A:787; MET A:780; MET A: 749: MET A:
745; MET A: 895; TRP
A: 741 Alkyl & Pi- Alkyl: LEU A: 707; PHE A: 764 Wogonin-5 glucoside -6.68 12650 LEU A: 873; ILE A:899; PHE Alkyl & Pi- Alkyl: LEU A:707;
KARTIKA: JURNAL ILMIAH FARMASI , Agustus 2024, 9 (2), 88-104 DOI: 10.26874/kjif.v9i2.721
LEU A: 704 A:891; TRP A:741; ASN A:705 ; GLY A: 708 ; LEU A:880 ; LEU A: 701; MET A:780 ;
PHE
A:876 ;
MET A:
787 ;
GLN
A:783 ;
VAL A:
749 ;
ARG A: 752 ; GLN A: 711
MET A:742; MET A:749; MET A:895 Pi-Pi T- shaped: PHE A:764 Andrographidin A -5.42 65730 LEU A: 701; ASN A: 705 Alkyl & Pi- Alkyl: LEU A:707; MET A: 269; TAP A:741; MET A:895 ; EE A:899 Pi-Pi T- shaped: PHE A: 764 Pi- Sigma&Pi- Sulfur: MET A: 262; MET A:745 Bisandrographolide A 30.17 unavailabl e GLU A:872; MET A:745 VAL A:889; PHE A:878; LEU A:882; ILE A:899; Unfavorable Bump & Unfavorable Donor Donor :
LEU A:873;
PHE A:876; MET
GLN A:783; LEU A:704; TYR A:763; ALA A:748; ALA A:765; ZRP A:741 A:780; MET A:749; ARG A: 752; PHE A:764; GLN A:731; GLY A:708; ASN A:705; PHE A:892; THR A:872 Sulfur-X: MET A:742 Alkyl & Pi- Alkyl: LEU A:701; LEU A:880; MET A:895; LEU A:707 Apigenin -9.42 12380 ASN A:705; GLN A:711; ARG A:752; LEU A:873 LEU A:704; LEU A:707; MET A:749; PHE A:764; MET A:745; MET A:749; MET A:780 Neoandrographolide 16.27 unavailabl e MET A:807; GLY A:708 Unfavorable Bump: ALA A:748; GLN A:711; LEU A:744; LYS A:808; PHE A:747 Alkyl & Pi- Alkyl: MET A:745; VAL A:685; VAL A:715; LEU A:811; 5,2’,3’- Trihydroxy-7,8- dimethoxyflavone-3’- glucoside -6.57 15230 ASN A:705; MET A: 745; PHE A: 764 Alkyl & Pi- Alkyl: PHE A:891; LEU A:880: LEU A: 701; LEU A:704; LEU A:873; MET A:787
KARTIKA: JURNAL ILMIAH FARMASI , Agustus 2024, 9 (2), 88-104 DOI: 10.26874/kjif.v9i2.721
3,19- isopropylidemeandrographol ide -954 10205 ASN A: 705 Alkyl & Pi- Alkyl: TRP A:741; MET A:895; LEU A: 704; LEU A:707; PHE A:764; MET A:745; VAL A: 746; MET A: 749
Parameter yang akan didapatkan dari  penambatan  molekuler  berupa energi  bebas  ikatan  (ΔG),  konstanta inhibisi (KI), dan interaksi ligan dengan residu  protein.  Energi  bebas  yang bernilai  negatif  menunjukkan  bahwa reaksi dapat berlangsung secara spontan (Pratama, 2021). Selain itu, afinitas ligan terhadap reseptor dapat ditunjukkan oleh energi  bebas.  Apabila  nilai  ΔG  rendah maka menghasilkan afinitas ligan terhadap  reseptor  yang  tinggi.  Hasil penambatan  molekuler  menunjukkan bahwa  seluruh  senyawa  uji  tidak
memiliki energi bebas lebih rendah dari ligan  alami.  Pada  Bisandrografolid  dan Neoandrografolid  memiliki  nilai  ΔG positif  maka  reaksi  yang  terjadi  tidak spontan.  Senyawa  uji  dengan  nilai  ΔG terendah  dimiliki  oleh  Andrographolide dengan -10.73 KKal/mol. Namun energi bebas  Andrografolid  masih  lebih  besar dari  energi  bebas  metribolone  sebagai ligan alami. Dapat diartikan afinitas yang dihasilkan
Andrografolid dengan reseptor  lebih  rendah  dibandingkan afinitas yang dihasilkan oleh ligan alami.
Gambar 3. Struktur andrografolid.
Konstanta inhibisi (KI) digunakan untuk mengetahui konsentrasi penghambatan  yang  diperlukan  untuk
mengurangi laju reaksi enzimatik hingga setengah dari laju maksimalnya (Apriali dkk, 2022). Semakin   rendah   nilai  KI,
semakin  kuat  afinitas  inhibitor  terhadap enzim target, yang menunjukkan bahwa konsentrasi  yang  lebih  kecil  dari inhibitor  tersebut  sudah  efektif  untuk menghambat  aktivitas  enzim.  Pada senyawa uji andrografolid, nilai konstanta  inhibisi  (KI)  sebesar  13.72 menunjukkan bahwa senyawa ini memiliki  afinitas  yang  sangat  kuat terhadap enzim target, mengindikasikan bahwa  hanya  konsentrasi  yang  sangat kecil diperlukan untuk efektif menghambat  aktivitas  enzim  tersebut. Sebagai  perbandingan,  ligan  alami dengan  nilai  KI  sebesar  1.63  memiliki afinitas yang jauh lebih rendah terhadap enzim  target,  memerlukan  konsentrasi yang lebih tinggi untuk mencapai tingkat inhibisi yang sama.
Interaksi  antara  reseptor  dengan ligan  akan  menghasilkan  jarak  ikatan dan  residu  asam  amino  yang  berikatan. Maka  dari  itu,  proses  visualisasi dilakukan untuk melihat interaksi tersebut. Tabel 5 menunjukkan interaksi antara  ligan  dengan  asam  amino Diantara ikatan yang dapat terjadi dalam interaksi  ini  adalah  ikatan  hidrogen, ikatan  Van  der  Waals,  dan  ikatan lainnya.  Ikatan  hidrogen  lebih  kuat
daripada  ikatan  Van  der  Waals  karena dapat  terbentuk  meskipun  jarak  antara ligan dan reseptor cukup jauh (Frimayanti et al , 2021).
Untuk mengetahui interaksi yang terjadi  antara  ligan  dan  reseptor  perlu dilakukan  pengamatan  residu  asam amino (Koban et al ., 2022). Ligan alami metribolone memiliki residu asam amino berupa  ikatan  hidrogen  dengan  asam amino THR A: 877 dan ASN A: 705 dan memiliki  ikatan  asam  amino  lainnya seperti  tertera  pada  tabel  5.  Pada senyawa  uji  mengandung  setidaknya satu  asam  amino  yang  sama  dengan residu ligan alami dimiliki oleh senyawa Andrografolid, Skullcapflavone,
Andrografidin  A,  Apigenin,  5,2’,3’- Trihydroxy-7,8-dimethoxyflavone-3’- glucoside, dan 3,19- isopropylidemeandrographolide.  Hasil tersebut  menandakan  senyawa  aktif dalam  daun  sambiloto  memiliki  potensi untuk berikatan dengan reseptor androgen  (1E3G)  karena  memiliki  jenis ikatan  yang  sama  seperti  ikatan  yang terbentuk  antara  ligan  alami  dan reseptor.
Gambar 4. (a) Visualisasi 3D Senyawa Standar Metribolone dengan Reseptor 1E3G ; dan (b) Visualisasi 3D Complex Senyawa Andrografolid dengan Reseptor
1E3G.
(a) (b)
KARTIKA: JURNAL ILMIAH FARMASI , Agustus 2024, 9 (2), 88-104 DOI: 10.26874/kjif.v9i2.721
Berdasarkan parameter hasil penambatan molekuler didapatkan senyawa  uji  dengan  nilai  mendekati ligan alam adalah senyawa andrografolid. Energi ikatan andrografolid  adalah  -10.73  kkal/mol,
sedangkan  ligan  alami  metribolon memiliki energi ikatan yang lebih kecil, yaitu  -11.99  kkal/mol.  Nilai  energi ikatan yang lebih negatif pada metribolon  menunjukkan  bahwa  ia memiliki  interaksi  yang  lebih  stabil dengan reseptor dibandingkan
andrographolide. Namun, konstanta inhibisi  (KI)  dari  andrografolid  adalah 13,72  nM,  yang  jauh  lebih  rendah dibandingkan  dengan  metribolon  yang memiliki  KI  sebesar  1,63  nM.  Ini menunjukkan  bahwa  walaupun  energi ikatan metribolon lebih besar, andrografolid  memiliki  afinitas  yang lebih  tinggi  terhadap  enzim  target, karena  memerlukan  konsentrasi  yang jauh  lebih  rendah  untuk  mencapai penghambatan yang efektif.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil studi  in  silico daun  sambiloto,  meliputi  Lipinski  Rule of  Five,  prediksi  ADME/Tox,  hingga penambatan  molekuler  pada  sepuluh senyawa  aktif  pada  daun  sambiloto didapatkan Andrografolid menjadi senyawa  aktif  yang  paling  berpotensi sebagai  agen  anti-kanker  prostat  karena memiliki interaksi terbaik dengan reseptor 1E3G. Andrografolid menunjukkan  aktivitas  penghambatan reseptor Androgen dengan ΔG terendah -10.73  KKal/mol  mendekati  energi bebas  ligan  alami  dan  nilai  Konstanta Inhibisi  (KI)  sebesar  13,72  nM  yang
menunjukkan  afinitas  tinggi  melebihi senyawa ligan alami. Andrografolid juga memiliki  interaksi  pada  residu  asam amino  yang  sama  dengan  ligan  alami berupa ikatan hidrogen ASN A: 705 dan ikatan asam amino lainnya PHE A: 876; dan MET A: 742.

## KONFLIK KEPENTINGAN
Pada penelitian ini tidak terdapat konflik kepentingan dalam artikel ilmiah yang ditulis.

## DAFTAR PUSTAKA
Ambarsari, L., & Sumaryada, T. I., 2014.
Simulasi Docking Senyawa Kurkumin  dan  Analognya  Sebagai Inhibitor  Reseptor  Androgen  pada
Kanker  Prostat.  In CURRENT BIOCHEMISTRY e-ISSN . Andani, M., Mauri Ramdini Kamaludin,
A.,  Ayu  Sylfia  Stannia  Puspitasari Helmi,  N.,  Keyshia  Mei,  K., Guspira,  Y.,  Sabetta,  O.,  &  Lia Aulifa, D., 2022. In Silico Study of Compounds  in  Bawang  Dayak (Eleutherine  palmifolia  (L)  Merr.) Bulbs on Alpha Estrogen Receptors. Indonesian  Journal  of  Cancer Chemoprevention .
Apriali, K. D., Triana, E., Farhani, M. I., Khoirunnisa, A., & Nur’aini, Y. A., 2022.  Studi  Penambatan  Molekul Dan  Prediksi  Admet  Senyawa
Metabolit Sekunder Tanaman Kelor (Moringa  Oleifera  L.)  Sebagai Inhibitor  Bace1  Pada  Penyakit Alzheimer.
FITOFARMAKA:
Jurnal Ilmiah Farmasi , 12 (1), 58– 67.
Bialangi, N., Rahmatia Idris, R., Kilo, A. la, & Kilo, A. K., 2022. Isolasi  dan
KARTIKA: JURNAL ILMIAH FARMASI , Agustus 2024, 9 (2), 88-104
DOI: 10.26874/kjif.v9i2.721 Identifikasi Senyawa Metabolit Sekunder  Ekstrak  Etil  Asetat  Daun Sambiloto. Jamb.J.Chem , 4 (1), 25– 32.
Chang,  Y.,  Hawkins,  B.  A.,  Du,  J.  J., Groundwater, P. W., Hibbs, D. E., & Lai,  F.,  2023.  A  Guide  to  In SilicoDrug  Design. Pharmaceutics
15 (1). Febyan  dan  Hudyono,  J.,  2016.  Peran Imunoterapi  Komplementer  Daun Sambiloto ( Andrographolide paniculata )  Sebagai  Anti-Kanker Melalui  Penghambatan  Nuclear Factor-Kappab  (Nf-Kb)  Pada  Jalur
Toll-Like Receptor-4. CDK-245 , 43 (10).
Forestier-Román, I. S., López-Rivas, A., Sánchez-Vázquez,
M. M., Rohena,Rivera,  K.,  Nieves-Burgos, G.,Ortiz-Zuazaga, H., Torres- Ramos,  C.  A.,  &  Martínez-Ferrer,
M., 2019. Andrographolide induces
DNA  damage  in  prostate  cancer
cells. Oncotarget 10 (10).
Frimayanti,  N.,  Nasution,  M.  R.,  & Etavianti,  E.,  2021.  Molecular docking  and  molecular  dynamic simulation  of  1,5-benzothiazepine chalcone  derivative  compounds  as potential  inhibitors  for  Zika  virus helicase. Jurnal Riset Kimia , 12 (1),
44–52.
Hameed,  S.,  2020.  In  Silico  Design, Synthesis and In Vitro Antidiabetic Activity  of  Novel  5-Furyl-  1,3,4- Thiadiazolimines.
Hardianto,  A.,  Yusuf,  M.,  Liu,  F.,  & Ranganathan,  S.,  2018.  Structure- based drug design workflow.
Encyclopedia of Bioinformatics and
Computational  Biology:  ABC  of
Bioinformatics , 1–3, 273–282. Hardjono,  S.,  2016. Prediksi  sifat farmakokinetik, toksisitas dan aktivitas sitotoksik turunan Nbenzoil-N’-(4-fluorofenil)tiourea sebagai  calon  obat  antikanker melalui pemodelan molekul . Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia, 14(2),
246–255. Koryakina, Y., Ta, H. Q., & Gioeli, D., 2014. Androgen receptor phosphorylation: Biological context and functional consequences. Endocrine-Related  Cancer, 21  (4) . BioScientifica Ltd.
Lipinski,  C.  A.,  2004.  Lead-  and  drug- like  compounds:  The  rule-of-five revolution. Drug  Discovery  Today:
Technologies 1 (4), 337–341.
Koban,  M.  A.G.,  Lestari,  S.  R.,  & prSetiowati, F. K., 2022. Analisis In Silico  Naringenin  dari  Umbi  Akar Batu  (Gerrardanthus  macrorhizus Harv.ex  Benth.  &  Hook.f.)  sebagai Antitusif  terhadap  Reseptor  N- methyl-D-aspartate. Biota :  Jurnal Ilmiah Ilmu-Ilmu Hayati , 172–182. Pramesti,  N.  L.  P.  C.,  &  Laksmiani,  N.
L.  P.  C.,  2023.  Skrining  Senyawa Aloesin  Pada  Lidah  Buaya  (Aloe vera (L.) Burm.f.) sebagai Antikanker Prostat Secara In Silico. Prosiding  Workshop  Dan  Seminar Nasional Farmasi , 1, 495–506. Parker,  C.,  Castro,  E.,  Fizazi,  K., Heidenreich, A., Ost, P., Procopio,G., Tombal, B., & Gillessen, S., 2020. Prostate cancer: ESMO Clinical Practice  Guidelines for  diagnosis,  treatment  and  follow up. Annals  of  Oncology ,  31  (9),
1119–1134.
KARTIKA: JURNAL ILMIAH FARMASI , Agustus 2024, 9 (2), 88-104 DOI: 10.26874/kjif.v9i2.721
Pratama, A. B., Herowati, R., & Ansory, H.  M.,  2021.  Studi  Docking Molekuler Senyawa Dalam Minyak Atsiri  Pala  (Myristica  fragrans  H.) Dan  Senyawa  Turunan  Miristisin Terhadap  Target  Terapi  Kanker Kulit. Majalah Farmaseutik , 17 (2),
233.
Prihatini, R., Syarif, A., & Bakhtiar, A.,
2020.  Morphology  Character  and Andrographolide Quantifications on Sambiloto (Andrographis paniculata (Burm.F.) Nees) Karakter Morfologi dan Kuantifikasi Andrografolid Pada Sambiloto (Andrographis paniculata (Burm.F.) Nees ). Bioscience , 4 (1), 109.
Tan, M. E., Li, J., Xu, H. E., Melcher, K.,
&  Yong,  E.  L.,  2015.  Androgen receptor:  Structure,  role  in  prostate cancer  and  drug  discovery. Acta Pharmacologica  Sinica, 36  (1),  3–
23). Yasin, S. A., Azzahra, A., Ramadhan, N.E., & Mylanda, V., 2020. Studi Penambatan Molekuler dan Prediksi ADMET Senyawa Bioaktif Beberapa Jamu Indonesia  terhadap  SARS-CoV- 2 Main Protease (Mpro). Berkala Ilmiah Mahasiswa Farmasi Indonesia (BIMFI) , 7 (2), 24–41.