## KARAKTERISASI SIFAT BIOKIMIA ISOLAT BAKTERI KITINOLITIK ASAL TAMBAK UDANG
BIOCHEMICAL CHARACTERIZATION OF CHITINOLITIC BACTERIA FROM  SHRIMP FARMS
Sri Wahyuni 1 , Mery Wahyuni Kirami 2 , Andi Khaeruni 3
1 Jurusan Teknologi Pangan Fakultas Pertanian Universitas Halu Oleo
2 Jurusan Pendidikan MIPA Universitas Halu Oleo
3 Jurusan Agroteknologi Fakultas Pertanian Universitas Halu Oleo E-mail : sriwahyuni_aan@yahoo.com
Fakultas Pertanian Universitas Halu Oleo Jl.  HEA Mokodompit Anduonohu, Kendari

## Abstrak
Informasi  tentang  sifat-sifat  biokimia  yang  dimiliki  oleh  suatu  isolat  bakteri  memberi  peluang  dalam mengungkap  potensi  isolat  untuk  pemanfaatan  pada  berbagai  bidang.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui sifat-sifat biokimia dari bakteri kitinolitik isolat SSA2.B4.1 dan SSD2A7.1 yang berasal dari tambak udang di Kabupaten Pinrang dan Maros, Sulawesi Selatan. Penelitian dilakukan dengan uji-uji biokimia  terhadap  kedua  isolat  tersebut.  Hasil  penelitian    menunjukkan  isolat  bakteri  SSA2B4.1 berjenis  gram  positif  dan  mampu  menggunakan  berbagai  senyawa  karbohidrat  sebagai  sumber karbon,  sedangkan  SSD2A7.1  berjenis  gram  negatif  dan  tidak  mampu  menggunakan  berbagai senyawa  karbohidrat  sebagai  sumber  karbon.  Isolat  bakteri  SSA2.B4.1  selain  mampu  mensekresi enzim  kitinase,  juga  mampu  mensekresi  enzim  selulase  dan  protease,  sehingga  berpotensi  untuk diaplikasikan pada bidang industri deterjen, proses deproteinasi dalam pembuatan kitin serta sebagai agen hayati patogen tanaman.
Kata kunci : bakteri kitinolitik, limbah kulit udang, sifat biokimia

## Abstract
The  biochemistry  characteristics  information  possessed  by  a  bacterial  isolate  offered  the  chance  to reveal  their  potentials  to  usage  in  multiple  fields.  The  purpose  of  this  research  was  to  find  the characteristics  of  biochemical  properties  from  isolate  chitinolitic  bacterial  SSA2.B4.1  and  SSD2A7.1 isolated from shrimp farms in Pinrang and Maros, South Sulawesi. The research was conducted with biochemical  test  for  both  of  the  isolates.  The  results  showed  that  bacterial  isolate  SSA2B4.1  was categorized as positive Gram bacteria and was able to use multiple types of carbohydrates compound as carbon source, while SSD2A7.1 was categorized as negative Gram bacteria and couldn’t use any kind of carbohydrate compound as carbon source. The SSA2.B4.1 isolate, other than able to excrete chitinase  enzyme,  was  also  able  to  excrete  cellulose  and  protease    enzymes  that  was  potentially applied  in  the  detergent industries,  deproteination  process in  chitin  creation  as  well  as in agriculture field as biological agent to control plant pathogens.
Keyword : Biochemical characters,  chitinolitic bacteria, shrimp shell waste ,

## PENDAHULUAN
Sebagai negara dengan biodiversitas tinggi, In- donesia  memiliki  sumber  isolat  mikroba  yang bernilai ekonomis karena berpotensi digunakan dalam  industri,  khususnya  industri  yang  ber- basis  enzim  (Suryanto et  al .,  2006).  Mikroba penghasil  kitinase  merupakan  salah  satu  ke- lompok mikroba yang bernilai ekonomis karena kemampuannya  menghidrolisis  kitin  menjadi derivat  kitin  yang  banyak  dimanfaatkan  di  bi- dang  pertanian,  kesehatan,  pengelolaan  lim- bah,  dan  teknologi  pangan  (Sudhakar  dan  Na-
garajan,  2010;  Eurich et.  al., 2009).  Diyakini mikroba  penghasil  kitinase  tersebar  di  alam  In- donesia  karena  sebagai  negara  maritim  keter- sediaan  substrat  kitin  dari  limbah  hasil  peri- kanan,  seperti  kepiting  dan  udang  cukup  me- limpah.
Bakteri kitinolitik merupakan salah satu mikroba penghasil  kitinase  yang  mengkonversi  kitin menjadi monomer atau oligomernya. Bakteri ki- tinolitik  memanfaatkan  kitinase  untuk  asimilasi kitin  sebagai  sumber  karbon  dan  nitrogen (Gohel et. al ., 2006; Kamil et. al ., 2007). Bakteri
Vol. 2 No. 2 November 2014 : hal. 50-55 ISSN : 2338-4344
penghasil  kitinase  yang  telah  dilaporkan  dian- taranya Bacillus spp. (Bal et. al .,2009), Bacillus subtilis (Senol et.  al, 2014), B.  Licheniformis (Abirami et.  al, 2012), Pseudomonas  fluores- cens (Nandakumar,  2007), Sanguibacter sp. (Yoong et.  al., 2005), Aeromonas  punctata (Saima et.  al., 2013) dan Sterptomyces sp. (Kim et. al., 2003).
Wahyuni et al., (2008) telah melaporkan 28 iso- lat bakteri penghasil kitinase yang diisolasi dari tam-bak  udang,  penampungan  udang,  limbah pengo-lahan  udang,  dan  tempat  pembuangan limbah pa-dat udang di beberapa lokasi industri perikanan  di  Sulawesi  Selatan  dan  Sulawesi Tenggara.  Hasil  skrining  lebih  lanjut  diperoleh dua isolat yaitu SSA2.B4.1 dan SSD2A7.1 yang berasal  dari  tambak  udang  mampu  tumbuh pada suhu 37 o C dengan aktivitas  enzim kitina- se  yang  tinggi  masing-masing  sebesar  0,452 Unit/ml  enzim  dan  0,449  Unit/ml  enzim.  Enzim tersebut  memiliki  pH  optimum  4-6  dan  suhu optimum    70 o C,  sehingga    berpotensi  dikem- bangkan sebagai enzim termostabil.
Identifikasi  bakteri  berdasarkan  sifat-sifat  bio- kimia  penting  untuk  mendapatkan  informasi yang lebih banyak tentang peluang kedua isolat tersebut  untuk  dikembangkan  sebagai  sumber enzim  termostabil  khususnya  untuk  keperluan aplikasi  di  bidang  pangan,  industri,  dan  perta- nian.  Berdasarkan  hal  tersebut,  maka  sebagai langkah awal perlu dilakukan karakterisasi sifat biokimia  dari  bakteri  kitinolitik  isolat  SSA2.B4.1 dan SSD2A7.1.

## BAHAN dan METODE
Bahan  utama  yang  digunakan  pada  penelitian ini  adalah  bakteri  kitinolitik  isolat  SSA2.B4.1 dan  SSD2A7.1  (Gambar  1,  Wahyuni et.  al . 2008,),  medium trypticase  soy  agar (TSA), medium Luria  Agar (LA),  medium  Nutrien  Agar (NA),  etanol , karboksimetilselulosa  (CMC), brom  timol  biru  (BTB),  akuades    dan  berbagai bahan  kimia  lainnya  yang  digunakan  dalam pengujian karakterisasi sifat bio-kimia.

## A B
Gambar 1. Isolat bakteri kitinoloitik
(A) SSD2A7.1 dan (B) SSA2.B4.1

## Penyegaran  dan  Pemurnian  Isolat  Bakteri Uji.
Isolat  SSA2.B4.1  dan  SSD2A7.1  digoreskan secara  terpisah  pada  médium  TSA  dan  diin- kubasi  selama  2  hari  pada  suhu  kamar  dalam inkubator.  Kultur  murni  dari  kedua  isolat  ter- sebut  dibiakkan  secara  terpisah  pada  médium yang  sama  untuk  digunakan  sebagai  inokulum uji  dalam  tahap  karakterisasi  biokimia  yang meliputi :

## 1.  Pengujian Gram
Reaksi  Gram  ditentukan  berdasarkan  metode pewarnaan  Gram  seperti  yang  dikemukakan oleh  Lay  (1994).  Setelah  dilakukan  pewarnaan Gram,  preparat  diamati  dengan  mikroskop, untuk melihat bentuk sel dan reaksi Gram. Bak- teri  Gram  positif  tampak  berwarna  biru  keu- nguan sedangkan Gram negatif  berwarna me- rah muda.
2.  Uji  Pembentukan  Asam  (Karbohidrat sebagai Sumber karbon) .
Pengujian  ini  dilakukan  berdasarkan  metode yang  dikemukakan  oleh  Lay  (1994).  Senyawa karbohidrat  10%  berupa  glukosa,  sukrosa,  lak- tosa,  maltosa,  dan  manitol,  disterilisasi  secara terpisah  dari  medium.  Medium  dalam  tabung reaksi  masing-masing  ditambahkan  senyawa karbohidrat  1%,  se-bagai  indikator  diberi  brom timol  biru  (BTB).  Satu  ose  biakan  murni  isolat bakteri  secara  terpisah  diinokulasi  ke  dalam biakan  kaldu  karbohidrat,  lalu  diinkubasi  dalam inkubator  pada  suhu  30 o C  selama  beberapa  7 hari.  Pemanfaatan  karbohidrat  sebagai  sumber karbon  ditandai  dengan  pembentukan  asam yang  ditunjukkan  dengan  perubahan  warna medium dari hijau menjadi kuning.
3. Uji Methyl Red .
Sebanyak  5  mL  kaldu  MR-VP  dimasukkan dalam  tabung  reaksi,  lalu  diinokulasikan  satu ose  inoku-lum  isolat  bakteri  uji  (umur  2  hari). Tabung diinkubasi pada suhu 37 o C selama  48 jam . Setelah  itu  ditambahkan  5  tetes  reagen methyl red . Jika kaldu berwarna merah menun- jukan  hasil  uji  positif,  jika  kaldu  berwarna  ku- ning  maka  hasil  uji  negatif  (Lay,  1994).

## 4. Uji Voges Proskauer
Kaldu  MR-VP  sebanyak  5  mL  dimasukkan  ke dalam  tabung  reaksi,  diinokulasi  bakteri  pada kaldu  MR-VP,  kemudian  diinkubasi  pada  suhu 37 o C  selama  24  jam.  Setelah  itu  ditambahkan 10 tetes larutan KOH 40% dan 15 tetes larutan α-naftol,  di-kocok  dan  dibiarkan  30  menit.  Uji positif jika kaldu berwarna merah dan uji negatif jika  kaldu  tidak  me-ngalami  perubahan  warna setelah penambahan reagen (Lay, 1994).

## 5. Uji Oksidase
Isolat  bakteri  uji  ditumbuhkan  pada  media Nutrien  Agar  (NA),  diinkubasi  pada  suhu  30 o C selama  24  jam,  kemudian ditambahkan  reagen uji  oksidase (campuran  1:1 larutan  -naftol  1% dan 1% larutan  dimetil-p-fenilendiamin oksalat) pada  koloni  bakteri  dan  didiamkan  selama  30 menit.  Uji  positif  jika  warna  koloni  berubah menjadi hitam (Lay, 1994).

## 6. Uji Katalase
Isolat  bakteri  uji  ditumbuhkan  pada  media  NA dan    diinkubasi  selama  24    jam  pada  suhu 30 o C,    kemudian  ditambahkan  reagen  H 2 O 2 3%.  Terjadinya  gelembung  udara  pada  biakan menunjukkan  bahwa  isolate  baktei  uji  mere- duksi H 2 O 2 (Lay, 1994).

## 7. Uji Indol
Medium  tripton  cair  dimasukkan  ke  dalam tabung reaksi sebanyak 5 ml, diinkubasi selama 24  jam  pada  suhu  35 o C,  kemudian  ditambah- kan  beberapa  tetes  reagen  Kovacs.  Jika  ter- bentuk warna merah dipermukaan medium me- nunjukkan hasil uji positif (Waluyo, 2008).

## 8. Uji Sitrat
Isolat  bakteri  uji  diinokulasi  pada  media  Sim- mon  sitrat  agar  dengan  inokulum  yang  tipis, kemudian  diinkubasi  pada  suhu  35 0 C  selama 48 jam. Jika terjadi perubahan warna dari hijau menjadi biru menunjukan uji positif (Lay, 1994).

## 9. Uji Pencairan Gelatin
Isolat bakteri uji diinokulasi pada media dengan cara  menusukkan  mikroba  yang  akan  diujikan se-dalam  ¾  bagian  dari  lapisan  permukaan, kemudian  diinkubasi  pada  suhu  35 0 C  selama 24 jam. Jika media gelatin mencair, maka lang- kah  selanjutnya  dimasukkan  dalam  lemari  es selama 30 menit. Diamati pencairan gelatin, jika terdapat  gelatin  yang  mencair  menunjukkan  uji positif.  Namun  jika  tidak  mencair  maka  diinku- basi kembali selama 1 minggu pada suhu 35 0 C. Uji  dianggap  negatif  jika  setelah  satu  minggu gelatin tidak mencair sedikitpun (Lay, 1994).
10. Uji Hidrogen Sulfida ( H 2 S)
Isolat  bakteri  uji  dibiakkan  pada  tabung  reaksi yang telah berisi media TSIA 7 mL dengan cara menusukkan  jarum ose ke dalam  media kemu- dian  baru  diinokulasi  pada  bagian slant TSIA. Inkubasi  pada  suhu  37 o C  selama  24  jam. Diamati pertumbuhannya pada bagian Butt dan Slant (Lay, 1994).

## 11. Uji Urease
Biakan  bakteri  uji  diinokulasi  pada  media  urea agar  miring,  kemudian  diinkubasi  pad  suhu 35 0 C  selama  24    jam.  Jika  terjadi  perubahan warna  dari  kuning    menjadi  merah  keunguan
maka  menunjukkan  uji  positif    (Hadioetomo, 1985).

## 12. Uji Reduksi Nitrat
Uji nitrat dilakukan dengan menumbuhkan  bak- teri uji pada medium nitrat  dalam tabung reaksi yang  telah  dilengkapi  dengan  tabung  Durham, kemudian  diinkubasi  pada  suhu  35 o C  selama 74 jam, kemudian ditambahkan 1 ml reagen ni- trat  dan  diinkubasi  selama  24  jam  pada  suhu ruangan.  Terjadinya  perubahan  warna  media menjadi merah atau merah muda menunjukkan bahwa  bakteri  uji  dapat  mereduksi  nitrat  (Lay, 1994).

## 13. Uji Selulase
Sebanyak  100  L  Suspensi bakteri  uji  diino- kulasikan  dalam  lubang  yang  dibuat  di  media LA  yang  mengandung  CMC  pada  cawan  Petri, kemudian  diinkubasi  dalam  incubator  selama 24  jam  pada  suhu  37 o C.  Uji  positif  ditunjukkan dengan  terbentuknya  zona  bening  di  sekitar daerah inokulasi (Meryandini et al ., 2009).

## 14. Uji Protease
Biakan  bakteri  uji  diinokulasi  pada  media  LA yang mengandung susu skim pada cawan petri ke-mudian  diinkubasi  selama  24  jam  dalam inkubator  pada  suhu  37 o C.  Uji  positif  ditun- jukkan dengan terbentuknya zona bening di se- kitar daerah goresan (Akhdiya, 2003).

## 15. Uji Hidrolisis Pati
Sebanyak 100  l suspensi bakteri uji diinokulasi pada  lubang  di  media  NA  yang  mengandung pati, kemudian diinkubasi selama 24 jam dalam inkubator  pada  suhu  37 o C.  Uji  positif  ditunjuk- kan  dengan  terbentukknya  zona  bening  di sekitar daerah inokulasi (Hastuti et al ., 2012).

## HASIL dan PEMBAHASAN
Hasil  uji  sifat  biokimia  menunjukkan  bahwa bakteri kitinolitik isolat SSA2.B4.1 dan SSD2A7.1 memiliki sifat-sifat biokimia yang be- rbeda  dalam  reaksi  Gram,  kemampuan  me- manfaatkaan  karbohidrat  sebagai  sumber  kar- bon,  uji  oksidase,  uji  indol,  uji  sitrat,  dan  ke- mampuan menghidrolisis selulosa (Tabel 1)
Isolat  SSA2.B4.1  merupakan  bakteri  Gram positif,  sedangkan  isolat  SSD2A7.1    adalah bakteri  Gram  negatif.  Penyebab  perbedaan  re- aksi  Gram  disebabkan  adanya  perbedaan struktur dan komposisi dinding sel bakteri Gram positif  dan  Gram  negatif.  Bakteri  Gram  negatif mengandung lipid dalam persentase lebih tinggi dibanding yang dikandung bakteri Gram positif. Dinding  sel  bakteri  Gram  negatif  mempunyai dinding  sel  yang  lebih  tipis  dan  kandungan peptidoglikan  jauh  lebih  sedikit  dibanding  din-
ding  sel  bakteri  Gram  positif.  Tipisnya  lapisan peptodoglikan  pada  Gram  negatif  memung- kinkan  terjadinya  ekstraksi  kompleks  kristal violet-iodium.  Sedangkan  lapisan  peptidoglikan yang  lebih  tebal  pada  Gram  positif  menyebab- kan  pemberian  larutan  pemucat  (alkohol)  akan mengurangi  diameter  pori-pori  pada  lapisan peptidoglikan dan menyebabkan kompleks kris- tal  violet-iodin  terperangkap  di  dalam  dinding sel bakteri.
Tabel 1. Sifat sifat biokimia isolat SSA2B4.1
dan SSD2A7.1. Sifat-sifat yang diuji Isolat SSA2B4.1 Isolat SSD2A7.1 Reaksi Gram + - Pemanfaatan Sumber Karbon Glukosa + - Manitol + - Sukrosa + - Laktosa + - Maltosa + - Metyl Red - - V oges Proskauer - - Katalase + + Oksidase + - Indol + - Sitrat - + Pencairan Gelatin - - Hidrogen Sulfida - - Urease - - Reduksi Nitrat + + Selulase + - Protease + + Hidrolisis pati - - Keterangan = +, bereaksi positif;  -, bereaksi negatif
Isolat  SSA2.B4.1  mampu  membentuk  asam pada  médium  yang  mengandung  senyawa  glu- kosa,  manitol,  sukrosa,  laktosa,  dan  maltosa, berarti isolat tersebut mampu menggunakannya sebagai  sumber  karbon,  sebaliknya  isolat SSD2A7.1    tidak  mampu  menggunakan  kelima senyawa  karbohidrat  tersebut  sebagai  sumber karbon, sehingga sumber karbon isolat SSA2.B4.1 lebih luas dibanding isolat SSD2.A7.1.  Pada  Pengujian Metyl  Red dan Voges  Proskauer ,  pencairan  gelatin,  hidrogen sulfida,  urase,  dan  hidrolisis  pati  kedua  isolat bakteri yang diuji bereaksi negatif.
Kedua isolat yang diuji bereaksi positif pada uji katalase yang dibuktikan dengan timbulnya ge- lembung-gelembung  udara  dari  campuran  ko- loni bakteri dengan H 2 O 2 3%. Timbulnya gelem- bung-gelembung udara pada uji katalase mem- buktikan  bahwa  bakteri  menghasilkan  enzim katalase  sehingga  mampu  mengubah  hidrogen peroksida menjadi air dan oksigen (Lay, 1994). Uji  oksidase  pada  isolat  bakteri  SSD2A7.1, memberikan  hasil  uji  negatif  karena  tidak  ter- bentuk  warna  hitam  pada  koloni  bakteri,  se- dangkan  uji  oksidase  pada  isolat  bakteri SSA2B4.1  memberikan hasil uji positif yang di- tandai  dengan  terbentuknya  warna  hitam  pada
koloni  bakteri.  Perubahan  warna  ini  mengin- dikasikan  adanya  enzim  sitokrom  oksidase yang dimiliki oleh isolat bakteri SSA2B4.1 yang dapat  mengoksidasikan  larutan  reagen  uji  ok- sidase.
Reaksi  positif  ditunjukkan  isolat  SSA2B4.1  pa- da  uji  indol,  sedangkan  isolat  SSD2A7.1  be- reaksi  negatif.  Reaksi  postif  pada  uji  indol  di- tandai  dengan  terbentuknya  lapisan  merah  pa- da  permukaan  media  setelah  ditetesi  reagen kovacs.  Reaksi  positif  pada  isolat  SSA2B4.1 membuktikan  bahwa  isolat  tersebut  mampu menghasilkan  enzim  triptofan  untuk  memecah asam amino triptofan menjadi indol serta  asam piruvat dan NH4 + (Lay, 1994).
Pada  uji  sitrat,  isolat  bakteri  SSD2A7.1  tidak menggunakan  karbohidarat  sebagai  sumber karbon  dan  energi  tetapi  menggunakan  sitrat. Penggunaan sitrat oleh isolat bakteri SSD2A7.1 sebagai  sumber  karbon dan energi  ditunjukkan dengan  perubahan  warna  media  biakan  SCA menjadi  biru  yang  dise-babkan  penggunaan sitrat  oleh  bakteri  sehingga  asam  hilang  dari media  biakan  dan  bila  sitrat  dapat  digunakan oleh  bakteri  maka  amonium  dihidrogen  fosfat turut  teruraikan  dan  akan  melepaskan  ion  a- monium  (NH 4 + )  sehingga  menyebabkan  medi- um  menjadi  alkalis,  dan  indikator  brom  timol biru  berubah  dari  hijau  menjadi  biru  (Gupte, 1990).  Wa-laupun  sitrat  dapat  digunakan  oleh bakteri  sebagai  sumber  karbon  dan  energinya, namun  berdasar-kan  hasil  uji  sitrat  terhadap isolat bakteri SSA2B4.1 yang memberikan hasil uji  negatif,  menunjukkan  isolat  bakteri  SSA- 2B4.1  tidak  menggunakan  sitrat  sebagai sumber  karbon  dan  energinya,  tetapi  cende- rung menggunakan karbohidrat seperti glukosa, sukrosa, laktosa, maltosa, manitol dan selulosa.
Selain  dapat  memanfaatkan  karbohidrat  jenis glukosa, sukrosa, laktosa, maltosa dan manitol, isolat  bakteri  SSA2B4.1  juga  dapat  mengha- silkan enzim selulase dan protease, yang ditan- dai  dengan  dengan  terbentuknya  zona  bening di  sekitar    daerah  pertumbuhan  bakteri.  Enzim selulase  dapat  menguraikan  polisakarida  jenis selulosa  menjadi  unit-unit  glukosa,  sedangkan pada  uji  protease,  protein  diurai  menjadi  pep- tida  dan  asam-asam  amino  penyusun  protein dengan  bantuan  enzim  protease  atau  pepti- dase.  Berdasarkan  cara  pemotongan  ikatan peptida,  enzim  peptidase  dapat  dibagi  menjadi eksopeptidase dan endopeptidase yang bekerja secara bersama-sama dalam  memotong ikatan peptida pada suatu molekul protein (Mubarik et al .,  2000).  Eksopeptidase  bekerja  pada  kedua ujung molekul protein, yang terdiri dari dua jenis enzim  yaitu  karboksipeptidase  dan  amino  pep- tidase (Naiola et al., 2007).
Kedua  isolat  bakteri  memberikan  hasil  uji  ne- gatif  pada  uji  hidrolisis  pati.  Keberadaan  pa- ti/amilum  yang  belum  terhidrolisis  dalam  media biakan  ditunjukkan  dengan  tidak  terbentuknya zona  bening  di  sekitar  daerah  pertumbuhan bakteri dan terbentuknya warna biru kehitaman di  sekitar  pertumbuhan  bakteri  setelah  diberi beberapa  tetes  larutan  iodium.  Hal  ini  membe- rikan  informasi  bahwa  kedua  isolat  bakteri  ter- sebut  tidak  dapat  menghasilkan  enzim α- amilase  yang  dapat  menghidrolisis  pati/amilum menjadi  sakarida  yang  lebih  sederhana  lagi seperti maltosa dan glukosa.
Berdasarkan  hasil  uji  sifat  biokimia  dari  isolat bakteri  SSD2A7.1  memberikan  informasi  bah- wa  dalam  pengaplikasian  isolat  bakteri  SSD- 2A7.1 tidak perlu menggunakan karbohidrat (je- nis glukosa, sukrosa, laktosa, maltosa dan ma- nitol),  selulosa,  pati/amilum,  gelatin,  triptofan, sistein,  metionin  dan  urea  pada  medium  yang digunakan  karena  substrat-substrat  tersebut  ti- dak digunakan oleh isolat bakteri SSD2A7.1 se- bagai  sumber  energi  dalam  proses  metabolis- menya.  Namun  dalam  pengaplikasian  isolat bakteri  SSD2A7.1  dapat  digunakan  sitrat,  dan protein pada medium yang digunakan.
Pada  penelitian  ini  belum  dapat  diketahui secara  pasti  genus dari  kedua isolat bakteri ki- tinolitik yang diuji   karena masih  membutuhkan uji-uji  karakterisasi  genus.  Menurut  Holt et  al. (1994)  ciri-ciri  isolat  bakteri  SSA2B4.1  cende- rung  mengarah  pada  ciri-ciri  grup  15  (bakteri Gram  positif,  pembentuk  endo-spora)  yaitu Bacillus ,  sedangkan  isolat  SSD2A7.1  tersebut, cenderung mengarah pada ciri-ciri bakteri yang tergolong famili Pseudomonas .
Isolat  bakteri  SSD2A7.1  dan  SSA2B4.1  berpo- tensi  untuk  diaplikasikan  pada  bidang  industri deterjen atau sejenis bahan pembersih lainnya. Deterjen  dapat  menghilangkan  noda  atau  pe- ngotor yang berupa bahan yang larut dalam mi- nyak atau lemak serta noda atau pengotor yang larut  dalam  air,  namun  sulit  untuk  menghilang- kan noda atau pengotor yang tergolong protein sehingga dengan penambahan enzim protease pada  deterjen  akan  menambah  daya  kerja pembersih dari deterjen tersebut. Enzim protea- se  yang  dapat  dihasilkan  oleh  kedua  isolat bakteri  tersebut  juga  berpotensi  untuk  diapli- kasikan  pada  proses  deproteinasi  dalam  pem- buatan  kitin,  selain  dapat  menghemat  biaya produksi, juga relatif lebih ramah lingkungan. Di bidang  pertanian  isolat  SSA2B4.1  berpotensi digunakan  untuk  mengendalikan  cendawan patogen  tanaman  secara  hayati,  karena  ke- mampuannya  dalam  menghasilkan  enzim  kiti- nase,  sellulase,  dan  proteinase.  Enzim  kitinase yang disekresikan oleh bakteri kitinolitik mampu mendegradasi  dinding  sel  cendawan  patogen
yang  menginfeksi  pada  daerah  akar  tanaman sehingga  perkembangan  patogen  terganggu (Suryanto et.  al ,  2006,  2011;  Gohel et.  al ., 2006; Khaeruni et al., 2010, 2012; Senol et. al., 2014).  Pada  penelitian  lain  dijelaskan  bahwa isolat bakteri penghasil selulosa mampu  meng- hambat  perkembangan  cendawan Phytoph- thora  capsici secara in-vitro ,  sehingga  berpo- tensi  sebagai agen pengendali hayati penyakit busuk  batang  pada  tanaman  lada  (Khaeruni et al., 2011).

## SIMPULAN
Isolat  SSA2B4.1  merupakan  bakteri  gram  po- sitif yang berbentuk batang, mampu mengguna- kan  senyawa  karbohidrat  glukosa,  manito,  su- krosa,  laktosa,  dan  maltose  sebagai  sumber karbon,  bereaksi  positif  terhadap  uji  katalase, oksidase,  indol,  mampu  mereduksi  nitrat, menghasilkan enzim selulase dan protease se- hingga  memiliki  sifat-sifat  seperti  bakteri  genus Bacillus sp., sedangkan isolat SSD2A7.1 meru- pakan  bakteri  gram  negatif  berbentuk  batang, tidak  mampu  menggunakan  glukosa,  manito, sukrosa,  laktosa,  dan  maltose  sebagai  sumber karbon,  namun  menggunakan  sitrat,  mampu mereduksi  nitrat,  sehingga  memiliki  sifat-sifat seperti genus Pseudomonas sp.

## DAFTAR PUSTAKA
Abirami,  S.,  Ronald,  J.,  Kannan  M.,  and    AJA,
R.S. 2012 . Bioconversion  of  Shrimp  Shell Waste  by Bacillus  Licheniformis for  the Production of Antifungal Chitinase Enzyme. Research  J.  of  Pharmaceutical,
Biological  and  Chemical  Sciences. 3(4): 789-796.
Akhdiya,  A.,  2003.  Isolasi  Bakteri  Penghasil
Enzim Protease Alkalin Termostabil. Buletin Plasma Nutfah . 9(2): 38-44 Bal, S., Mishra, R.R., Rath, B., Sahu, H.K., and
Thatoi,  H.N.  2009.  Characterization  and extracellular enzyme activity of predominant  marine Bacillus spp.  isolated from  sea  water  of  Orissa  Coast,  India. Malaysian J. of Microbiology , Vol 5(2) : 87- 93
Eurich,  K.,  Segawa,  M.,  Toei-Shimizu,  S., Mizoguchi,  E.  2009.  Potential  role  of chitinase 3-like-1 in inflammation associated carcino-genic changes of epithelial  cells. World  J.  Gastroenterol. 15 (42) : 5249 –5259. Gupte,  S.  1990. Mikrobiologi  Dasar .  Binarupa
Ak-sara. Jakarta.
Gohel, V., Singh, A., Vimal, M., Ashwini, P., and
Chhatpar, H.S. 2006. Review.
Bioprospecting  and  antifungal  potential
Chitinolytic  micro-organisms. African  J . of Biotechnology 5(2) : 54-72.
Hadioetomo,  R.S.  1985.    Mikrobiologi  Dasar dalam Praktek Teknik dan Prosedur Dasar Labo-ratorium. Gramedia. Jakarta.
Hastuti, W.,  Agustien, A.,  dan Nurmiati. 2012. Penapisan dan Karakterisasi Bakteri
Amilo-Termofilik  dari  Sumber  Air  Panas Semurup,  Kerinci,  Jambi. Jurnal  Biologi Universitas Andalas. 1(2) : 150-155. Holt, J.G., Kriegm N.R., Sneath, P.H.A., Staley, J.T., Williams, S.T. 1994. Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology .Edisi kesembilan. Williams & Wilkins.  Baltimore,
Maryland.
Kamil, Z., Rizk, M., Saleh, M. and Moustafa, S . 2007 . Isolation  and  identification of rhizosphere  soil  chitinolytic  bacteria  and their  potential  in  antifungal  biocontrol.
Global  J.  Of  Molecular  Sciences 2(2): 57- 66.
Kim,  K.J,  Yang,  Y.J.,  and  Kim,  J.G.  2003.
Purification and Characterization of Chitinase  from Streptomyces sp.  M-20. J. of  Biochemistry  and  Molecular  Biology ,  36
(2): 185-189.
Khaeruni, A., Sutariati, G.A.K, dan Wahyuni, S. 2010.  Karakterisasi  Dan  Uji  Aktivitas Bakteri  Rizosfer  Lahan  Ultisol  Sebagai
Pemacu Pertumbuhan Dan Agensia Hayati Cendawan  Pathogen  Tular  Tanah  Secara In-Vitro . J.  Hama  dan  Penyakit  Tumbuhan Tropika. 10(2):123-130. Khaeruni, A., Satrah, V.N., dan Mariadi. 2011 Isolasi, karakterisasi dan uji  antagonis bakteri  selulolitik terhadap Phytophthora capsici asal tanaman lada ( Piper nigrum L.) secara in-vitro. Jurnal Agroteknos . 1(3):156-162
Khaeruni, A. dan Rahman, A. 2012.
Penggunaan  Bakteri  Kitinolitik  sebagai Agens  Biokontrol  Penyakit  Busuk  Batang oleh  Rhizoctonia  solani  pada  Tanaman
Kedelai. J. Fitopatologi Indonesia . 8(2):37- 43
Lay, B.W. 1994. Analisis Mikroba di
Laboratorium .  Rajawali Press. Jakarta.
Mubarik,  N.R.,  Suwanto,  A.,  dan  Suhartono, M.T.  2000.  Isolasi  dan  Karakterisasi
Protease  Ektraseluler  dari  Isolat  Bakteri Termofilik  Ekstrim. Prosiding  Seminar Nasional  Industri  Enzim  dan  Bioteknologi II .  Mikrobiologi,  Enzim  dan  Bioteknologi dalam  Perspektif  Ekonomi  dan  Industri.
Badan Pengkajian dan Penerapan Teknologi, Jakarta. www.iptek.net.id. (Diakses tanggal 24 Januari 2009).
Meryandini,  A.,  Widosari,  W.,  Maranatha,  B., Sunarti,  T.C.,  Rachmania,  N.,  dan  Satria, H.  2009.  Isolasi    Bakteri  Selulolitik  dan
Karakterisasi  Enzimnya. Makara  Sains , 13(1): 33-38 Naiola, E., dan Nunuk, W. 2007. Semipurifikasi dan Karakterisasi Enzim Protease Bacillus
sp. Jurnal Hayati . 13:51-56.
Nandakumar  R.,  Babu,  S.,  Raguchander,  T,, and    Samiyappan,  R..  2007.  Chitinolytic Activity of Native Pseudomonas fluorescens Strains. J. Agric. Sci. Technol .
9: 61-68
Saima,  Kuddus  M.,  Roohi,  Ahmad,  I.Z.  2013. Isolation  of  novel  chitinolytic  bacteria  and production  optimization  of  extracellular chitinase. J.  of  Genetic  Engineering  and Biotechnology. 11 : 39 –46. Senol, M.,  Nadaroglu,  H.,  Dikbas,  N.,  and Kotan,  R.  2014. Purification  of  Chitinase enzymes from Bacillus subtilis bacteria TV- 125, investigation of kinetic properties and antifungal activity against Fusarium culmorum . Annals  of  Clinical  Microbiology and Antimicrobials 13:35. Sudhakar, P., and.Nagarajan, P. 2010. Production of Chitinase by Solid State Fermentation from Rice Bran. International J. of Environmental Science and Development .  1 (5): 435-440.
Suryanto,  D  dan  Munir  E.  2006.  Potensi Pemanfaatan Isolat Bakteri Kitinolitik Lokal untuk Pengendalian Hayati Jamur. Prosiding  Seminar  Hasil-Hasil  Penelitian Universitas Sumatra Utara . www.usu.ac.id.
(Diakses tanggal 23 Januari 2009).
Suryanto,  D.,  Irawati,  N.,  and  Munir,  E.  2011.
Isolation and Characterization of Chitinolytic  Bacteria  and  Their  Potential  to Inhibit Plant Pathogenic Fungi. Microbiology Indonesia , 5 (3): 144-148
Wahyuni, S.,  Maggy, T.S., dan Bambang, P.P.
2008.  Skrining  Bakteri  Penghasil  Kitinase dari  Limbah  Udang  dan  Karakterisasi Enzim  Kitinase  untuk  Produksi  dan Aplikasi Oligomer Kitin sebagai Imunostimulan  dan  Anti  Kanker. Laporan Hasil  Penelitian  Program  Intensif  Riset
Dasar .  Lembaga  Penelitian  Universitas
Haluoleo. Kendari.
Waluyo,  L.  2008. Teknik  dan  Metode  Dasar dalam Mikrobiologi . Universitas Muhammadiyah Malang Press. Malang. Yurnaliza, S, Margino., dan Sembiring, L . 2011. Kemampuan  Kitinase Streptomyces RKt5 sebagai Antijamur terhadap Patogen Fusarium oxysporum. Jurnal Natur
Indonesia 14(1),: 42-46. Yoong,  T.,  Hong,  J.,  Zhangfu,  L.,  Li,  Z., Xiuqiong, D., Ke, T., Shaorong, G., Shigui, L.  2005.  Purification  and  characterization of  an  extracellular  chitinase  produced  by bacterium  C4. Annals  of  Microbiology 55(3): 213-218.