Uji Efektivitas Ekstrak Etil Asetat dan Etanol Buah Lerak ( Sapindus rarak ) terhadap Pertumbuhan Enterophatogenic Escherichia coli dan Enterotoxigenic Escherichia coli
Efectivity Test of Lerak Fruit ( Sapindus rarak ) Etil Asetat Extract and Etanol Extract on Enterophatogenic Escherichia coli and Enterotoxigenic Escherichia coli Growth 1 2
Yusianti Silviani , Andriyani Puspitaningrum
1 Akademi Analis Kesehatan Nasional, email: yusianti.silviani@gmail.com
2 Akademi Analis Kesehatan Nasional, email: andriyani.pn@gmail.com

## ABSTRAK

## ABSTRACT

## PENDAHULUAN

## BIOMEDIKA
ISSN : 1979 - 035X (printed edition)
ISSN : 2302 - 1306 (electronic/Portal e-Journal)
Available online at www.biomedika.ac.id
Volume 8, No. 1, Maret 2015
Diare merupakan masalah kesehatan di negara berkembang salah satunya Indonesia. Escherichia coli (ETEC dan EPEC)  merupakan  salah  satu  bakteri  penyebab  diare.  Buah  lerak  memiliki  kandungan  antimikroba  yaitu  saponin, alkaloid, polifenol, flavonoid dan tanin sehingga dimungkinkan dapat berperan sebagai antibakteri untuk Escherichia coli (ETEC dan EPEC). Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui efektivitas ekstrak etil asetat dan etanol buah lerak terhadap EPEC dan ETEC.
Penelitian ini dilakukan dengan desain analitik eksperimental (post test with control). Populasi penelitian ini adalah buah lerak (Sapindus rarak) yang dijual di kota Surakarta dengan teknik sampling kuota sampling.
Hasil penelitian didapatkan bahwa nilai KHM ekstrak etil asetat dan etanol tidak dapat disimpulkan, nilai KBM ekstrak etil  asetat  terhadap  EPEC  adalah  25%,  ekstrak  etil  asetat  terhadap  ETEC  adalah  50%  ekstrak  etanol  terhadap  EPEC dan  ETEC  adalah  100%  terdapat  perbedaan  daya  hambat  ekstrak  etil  asetat  dan  etanol  terhadap  EPEC  dan  ETEC. Hasil uji ANOVA p-value sebesar 0,004. Ada perbedaan daya hambat ekstrak etil asetat dan etanol terhadap EPEC dan ETEC. Daya hambat paling besar didapatkan pada ekstrak etil asetat.
Kata Kunci : buah lerak, ETEC, EPEC, KHM, KBM, disk diffusi
Keyword: Lerak fruit, EPEC, ETEC, MIC, MKC, disk difussion
Diarrhea is still health problems of people in developing countries as in Indonesia. The  directly cause of diarrhea can be  by bacterial infection such as bacteria Escherichia coli (Enterophatogenic Escherichia coli and Enterotoxigenic Escherichia coli). Lerak has antibacterial such as saponin, alkaloid, polifenol, flavonoid dan tanin . The purpose of this study was to determine the antibacterial activities of etil asetat extract and etanol extract of lerak (Sapindus rarak) on Enterophatogenic Escherichia coli and Enterotoxigenic Escherichia coli .
This research was an analytic experimental post test with control design. The population was lerak (Sapindus rarak ) were sold in Surakarta, and sample was taken by quota sampling technique.
The results showed Minimal Killing Concentration of etil asetat extract for EPEC was 25%, ETEC was 50%. Minimal Killing  Concentration  of  etanol  extract  for  EPEC  dan  ETEC  was  100%  Minimal  Inhibitory  Concentration  can  be concluded for EPEC and ETEC. Based on the results of one way ANOVA test showed p value = 0.004. There was differences of lerak etil asetat extract and lerak etanol extract lerak on the growth of EPEC and ETEC.
Diare  merupakan  masalah  kesehatan  yang memiliki  morbiditas  dan  mortalitasnya  tinggi. Menurut  WHO  (2013)  setiap  tahun  ditemukan  2 milyar kasus diare di dunia dan 1,9 juta menyerang anak  berusia  5  tahun  ke  bawah.  Di  Negara berkembang  seperti  Indonesia ,  Enteropathogenic
Escherichia  coli (EPEC)  dan Enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC)   merupakan penyebab diare  yang  paling  sering.    EPEC  merupakan penyebab  diare  pada  bayi  dengan  gejala  klinis diare berair, muntah, dan demam. Diare tersebut dapat  sembuh  dengan  sendirinya,  namun  dapat pula  mengakibatkan  enteritis  kronis  yang
mengganggu pertumbuhan balita (Johannes, 2012), sedangkan  ETEC  merupakan  penyebab  diare pada wisatawan dan anak. Beberapa strain ETEC menghasilkan  enterotoksin  yang  dapat  bersifat termostabil maupun termolabil (Jawetz et al . 2008).
Berdasarkan uraian di atas diharapkan ekstrak etil  asetat  dan  etanol  buah  lerak  dapat  menjadi alternatif antibakteri EPEC dan ETEC.
Penanganan  infeksi Escherichia  coli dilakukan dengan  menggunakan  antimikroba,  namun demikian  banyak  ditemukan  kasus  resistensi terhadap  antimikroba.  Aslani et  al. (2008) melaporkan  bahwa  63% Escherichia  coli resisten terhadap  tetrasiclin,  62%  terhadap  ampicilin,  56% terhadap  streptomycin,  44,5%  terhadap  amoxicilin, 39,5%  terhadap  sulfamethazole,  37%  terhadap cepalothin. Lebih lanjut Roy et al (2013) melaporkan bahwa 96,4% EPEC dan 72,7% ETEC yang diisolasi dari pasien diare, telah mengalami resistensi terhadap Ampicilin. Senada dengan hal tersebut Bolton et al. (2013) melaporkan   EPEC   sudah   bersifat   resisten terhadap antibiotik jenis   nalidixic acid, tetracycline, aminoglycosides,  quinolones,  dan  sulphonamides. Peningkatan  permasalahan  resistensi  bakteri mendorong  meningkatnya  penelitian  tanaman sebagai  alternatif  antimikroba  (Ushimaru,  2007). Salah satu tanaman yang memiliki potensi sebagai antimikroba adalah Lerak ( Sapindus rarak ). Buah tanaman  lerak  memiliki  saponin  yang  tinggi sehingga dimanfaatkan masyarakat sebagai pencuci batik dan logam mulia. Selain saponin, lerak juga mengandung  bahan  antimikroba  seperti:  alkaloid, flavonoid,  polifenol  dan  tanin.  Penelitian  yang dilakukan  oleh  Permatasari  dkk  (2013) menyimpulkan  bahwa  zat  aktif  seperti  alkaloid, saponin,  flavonoid,  dan  tannin  memiliki  aktivitas antibakteri, salah satunya pada Escherichia coli .
Variasi  konsentrasi  yang  digunakan  pada  daya hambat  ekstrak  etil  asetat  dan  etanol  terhadap EPEC dan ETEC adalah  3,125% ; 6,25% ; 12,5% ; 25% ; 50% ; 100%.  Konsentrasi Hambat Minimal dan Konsentrasi Bunuh Minimal dilakukan dengan metode  dilusi  sesuai  dengan  CLSI  (2012)  Metode daya hambat yang digunakan adalah metode Kirby Bauer dengan Standart Mc Farland no 0,5

## METODOLOGI PENELITIAN
Penelitian  ini  merupakan  penelitian  analitik eksperimental dengan desain post test with control . Penelitian ini dilakukan pada Januari – Desember 2014.  Pembuatan  ekstrak  etil  asetat  dan  etanol dilakukan  di  CV  Chemical  Mix  Pratama  bantul, Yogyakarta,  sedangkan  penelitian  dilakukan  di Laboratorium  Mikrobiologi  AAK  Nasional Surakarta.  Sampel  buah  lerak  didapatkan  di
Diinokulasikan suspensi bakteri dengan kepadatan
8 1,0  x  10   CFU/ml  ke  media  Nutrient  Agar  plate
distributor “Sky” Agro Center cabang Solo dengan teknik kuota sampling.
Ekstrak  etil  asetat  dan  etanol  dibuat  dengan metode  maserasi  selama  5  hari.  Hasil  maserasi kemudian  disaring  dan  dievaporasi  sampai didapatkan ekstrak kental. Etanol yang digunakan adalah etanol 70%.

## Pembuatan Ekstrak

## Uji Kadar Hambat Minimal (KHM)
Sebanyak 1 ml Nutrient Broth dimasukkan ke dalam  8  tabung  reaksi  (8  tabung  untuk  ekstrak etil  asetat;  8  tabung  untuk  ekstrak  etanol). Tabung 1  digunakan  untuk  kontrol  positif;  tabung  2 digunakan  untuk  kontrol  negatif,  tabung selanjutnya  digunakan  untuk  masing-masing sampel  ekstrak  dari  konsentrasi  3,125%  sampai 100%.  Kemudian  pada  masing  masing  tabung no 3 sampai 8 ditambahkan 1 ml suspensi bakteri sesuai  dengan  standart  Mc  Farland  no  0,5  yang sudah  diencerkan  100X.  Tabung  sampel  no  3  -  8 diisi  masing-masing  variasi  konsentrasi  ekstrak dan tabung no 2 diisi masing-masing ekstrak lerak dengan konsentrasi 100%. Semua tabung diinkubasi pada  37°C  selama  24  jam  dan  diamati  kekeruhan pada setiap tabung.

## Uji Kadar Bunuh Minimal (KBM)
Inokulasikan sebanyak 36 ose (diameter 1mm) dari  masing-masing  tabung  ke  media  Nutrient Agar plate secara streaking . Inkubasi semua tabung pada 37°C selama 24 jam. Kemudian  pertumbuhan koloni pada tiap plate diamati dan dihitung jumlah koloni yang tumbuh (Cockerill et al, 2012).
Uji Disk Diffusion
Biomedika 2    YUSIANTI SILVIANI, ANDRIYANI PUSPITANINGRUM
secara perataan. Kemudian dilakukan pemasangan disk  blank  yang  sudah  diisi  dengan  variasi konsentrasi tiap ekstrak. Diinkubasi semua tabung pada 37°C selama 24 jam.
Ekstrak etil asetat dan etanol konsentrasi 100% dilakukan  uji  fitokimia  dan  didapatkan  hasil pada Tabel 1.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
1.    Uji Fitokimia Ekstrak Etil Asetat dan Etanol Buah Lerak
Tabel 1. Hasil Uji Fitokimia Ekstrak Etil Asetat dan Etanol Buah Lerak
Bahan Aktif Hasil Ekstrak Etil Asetat Ekstrak Etanol Flavonoid + + Alkaloid + + Saponin + + Tannin + +
Polifenol + +
2.   Hasil Kadar Hambat Minimal Ekstrak Etil Asetat dan Etanol Buah Lerak Terhadap EPEC dan ETEC.
Ekstrak etil asetat dan etanol dilakukan uji kadar hambat minimal dan didapatkan hasil pada Tabel 2.
Tabel 2. Hasil Uji Konsentrasi Hambat Minimal (KHM) Ekstrak Etil Asetat dan Etanol Buah Lerak terhadap Enteropathogenic Escherichia coli dan Enterotoxigenic Escherichia coli
Konsentrasi Ekstrak Etil Asetat Ekstrak Etanol Hasil EPEC Hasil ETEC Hasil EPEC Hasil ETEC 3,125% + + + + 6,25% + + + + 12,5% + + + + 25% + + + + 50% + + + + 100% + + + + Kontrol positif + + + + Kontrol negatif + + + +
Keterangan : (+) = terjadi kekeruhan, (-) = jernih
Semua konsentrasi termasuk kontrol negatif yang  hanya  berisi  ekstrak  didapati  kekeruhan (Tabel 2) sehingga kadar hambat minimal tidak dapat disimpulkan dengan melihat secara visual kekeruhan,  selanjutnya  dilakukan  penggoresan dari masing-masing tabung ke media NA plate.
3.   Kadar  Bunuh  Minimal  Ekstrak  Etil  Asetat dan Etanol Buah Lerak Terhadap EPEC dan ETEC Kadar  Bunuh  Minimal  merupakan  konsentrasi terkecil yang mampu membunuh bakteri uji (Affandi dkk. 2009).
Kadar bunuh minimal ekstrak etil asetat terhadap EPEC  sebesar  25%  sedangkan  kadar  hambat ekstrak  etanol  sebesar  100%.  Dengan  demikian KBM  etil  asetat  terhadap  EPEC  lebih  rendah daripada ekstrak etanol (Gambar 1).
Kadar bunuh minimal ekstrak etil asetat terhadap EPEC  sebesar  50%  sedangkan  kadar  hambat ekstrak  etanol  sebesar  100%.  Dengan  demikian KBM  etil  asetat  terhadap  ETEC  lebih  rendah daripada ekstrak etanol (Gambar 2).
4.  Disk Diffusion Ekstrak Etil Asetat dan Etanol Buah Lerak terhadap EPEC dan ETEC Uji disk diffusion dilakukan untuk mengetahui aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak  etil  asetat  dan etanol lerak dengan metode difusi yaitu meletakkan disc/cakram yang telah berisi ekstrak ke atas media padat  plate  yang  telah  diinokulasikan  bakteri  uji.
Volume 8, No. 1, Maret 2015
Biomedika    3
Gambar 2. Hasil KBM Ekstrak Etil Asetat dan Etanol Lerak terhadap ETEC
Hasil diamati dengan pengukuran diameter zona bening (radikal) disekitar cakram uji.
Gambar 3. Hasil Disk Diffusion Ektrak Etil Asetat dan Etanol Buah Lerak Terhadap EPEC
Daya  hambat  ekstrak  etil  asetat  buah  lerak terhadap EPEC lebih besar daripada ekstrak etanol. Hal ini terlihat dari Gambar 3 grafik zona hambat ekstrak  etil  asetat  lebih  tinggi  daripada  ekstrak etanol.  Kontrol  (+)  yang  dipakai  pada  penelitian ini adalah ciprofloxaxin 5µg.
Gambar 4. Hasil Disk Diffusion Ektrak Etil Asetat dan Etanol Buah Lerak Terhadap ETEC
Daya  hambat  ekstrak  etil  asetat  buah  lerak terhadap ETEC lebih besar daripada ekstrak etanol.
Perbedaan daya hambat ekstrak etil asetat dan etanol  terhadap  EPEC  dan  ETEC  dapat  dilihat pada Tabel 3.
Perbedaan daya hambat ekstrak etil asetat dan etanol  terhadap  EPEC  dan  ETEC  dapat  dilihat pada Tabel 3.
Hal ini terlihat dari Gambar 4 grafik zona hambat ekstrak  etil  asetat  lebih  tinggi  daripada  ekstrak etanol. Kontrol (+) yang dipakai pada penelitian ini adalah ciprofloxaxin 5µg.
Mean Square F Sig. Between Groups 604,605 3 201,535 6,092 0,004 Within Groups 661,602 20 33,080 Total 1266,206
Biomedika 4    YUSIANTI SILVIANI, ANDRIYANI PUSPITANINGRUM
Berdasarkan Tabel 3 diketahui bahwa kemampuan terdapat  perbedaan  kemampuan  ekstrak  dalam menghambat  EPEC  dan  ETEC,  perbedaan  tersebut ditunjukkan pada Tabel 4.
Zona Radikal Etil asetat terhadap EPEC 18,9 a Etil asetat terhadap ETEC 8,2 b Etanol terhadap EPEC 8,2 b Etanol terhadap ETEC
Catatan : Huruf berbeda di belakang angka menunjukkan perbedaan signifikant menurut uji Scheffe dengan á = 0,05
Escherichia  coli merupakan  gram  negatif berbentuk  batang,  memiliki  flagel  peritrik,  tidak membentuk spora serta bersifat fakultatif anaerob. EPEC  merupakan  penyebab  diare  cair  pada balita dengan menggunakan gen EPEC adherence faktor (EAF)  yang  merubah  konsentrasi  kalsium intraseluller  dan  arsitektur  sitoskleton  di  bawah membran  mikrovilus,  sedangkan  ETEC menyebabkan  diare  dengan  cara  memproduksi faktor  kolonisasi  dan  enterotoksin  (Jawetz  et  al, 2008).
Buah  lerak  mengandung  senyawa  antibakteri alkaloid,  tanin,  saponin,  polifenol  dan  flavonoid (Udarno,  2009).  Alkaloid  berperan  dalam mengganggu  komponen  penyusun  peptidoglikan pada  sel  bakteri,  sehingga  lapisan  dinding  sel bakteri  tidak  terbentuk  secara  utuh.  Flavonoid merusak  susunan  dan  merubah  mekanisme permeabilitas dinding sel bakteri (Paju dkk. 2013). Tannin  mengkoagulasi  protoplasma  bakteri (Poeloengan  dan  Praptiwi,  2010).  Polifenol bekerja  sebagai  antibakteri  dengan  cara mendenaturasi  protein  sel  dan  menghambat sintesis asam nukleat (Bachtiar dkk. 2012).
Daya hambat yang dihasilkan ekstrak etil asetat lebih  besar  daripada  ekstrak  etanol.  Daya  hambat ekstrak  etil  asetat  terhadap  EPEC  berbeda signifikan  dengan  daya  hambat  ekstrak  etanol (Tabel  4).  Septiana  (2012)  menyatakan  bahwa senyawa  fenolik  lebih  mudah  diekstrak  oleh pelarut  organik  yang  bersifat  semipolar.  Senyawa fenolik  dapat  berupa  golongan  flavonoid,  turunan asam  sianat,  kumarin,  tokoferol  dan  asam  asam polifungsional.  Hasil  penelitian  ini  sesuai  dengan penelitian  Nurcahyanti  dkk  (2011)  yang menyimpulkan  ekstrak  etil  asetat  memiliki kemampuan  antibakteri  paling  baik  terhadap
Escherichia  coli,  Pseudomonas  aeroginosa, Bacillus subtilis, dan Staphylococcus aureus.
Diameter zona hambat ekstrak etil asetat dan etanol  lebih  besar  pada  EPEC  daripada  ETEC dikarenakan  perbedaan  struktur  sel  keduanya. ETEC  memiliki  faktor  kolonisasi  yaitu  protein fimbrial  yang  lebih  tebal  dan  dikendalikan  oleh CFA  ( colonization  factor  antigen ),  CS  ( coli surface antigen ) atau PCF ( putative colonization factor ).  Protein  fimbrial  ETEC  lebih  panjang dan tebal sehingga memudahkan untuk kolonisasi antar bakteri (Kaper, 2004). Penelitian ini sejalan dengan  Alikhani  et  al  (2013)  yang  menyatakan prosentase  resistensi  EPEC  terhadap  antibiotic ceftriaxone,  cefexime,  tetracycline,  gentamycin, norfofloxacin dan ciprofloxacin lebih rendah bila dibandingkan ETEC.
Interaksi antibakteri dengan bakteri memerlukan keseimbangan  hidrophilik  dan  lipofilik    (HLB  : Hydrophilic  Lipophilic  Balance )  (Naufalin  dkk, 2005).  Polaritas  senyawa  merupakan  sifat  fisik antimikroba  yang  penting.  Sifat  hidrofilik diperlukan  untuk  menjamin  senyawa  larut  dalam fase  air  yang  merupakan  tempat  hidup  mikroba tetapi  senyawa  yang  bekerja  pada  membran  sel hidrofobik  memerlukan  sifat  senyawa  yang lipofilik (Nurcahyanti dkk, 2011).
Nilai KHM ekstrak etil asetat dan etanol tidak dapat disimpulkan, nilai KBM ekstrak etil asetat terhadap  EPEC  adalah  25%,  ekstrak  etil  asetat terhadap  ETEC  adalah  50%  ekstrak  etanol terhadap EPEC dan ETEC adalah 100% terdapat perbedaan  daya  hambat  ekstrak  etil  asetat  dan ekstrak etanol terhadap EPEC dan ETEC. Ekstrak etil  asetat  memiliki  daya  hambat  lebih  besar daripada ekstrak etanol. Daya hambat ekstrak etil asetat  dan  etanol  terhadap  EPEC  lebih  besar daripada terhadap ETEC.
KESIMPULAN
Volume 8, No. 1, Maret 2015
WHO. 2013. Acute Diarrhea in Adults and Children A Global Perspective. Journal Clin Gastroenterol. 47 (1). 12 – 20.

## DAFTAR PUSTAKA
Affandi,  A.,  Andrini,  F.,  Lesmana.  S.D.  2009.  Penentuan Konsentrasi  Hambat  Minimal  dan  Konsentrasi  Bunuh Minimal  Larutan  Povidon  lodium  10%  Terhadap Staphylococcus  Aureus  Resisten  Metisilin  (MRSA)  dan Staphylococcus Aureus Sensitif Metisilin (MSSA). Jurnal Ilmu Kesehatan . 3 (1): 14 – 19.
Alikhani,M.Y.,S.  H.  Hashemi,  M.  M. Aslani,  S.  Farajnia.  2013. Prevalence and antibiotic resistance patterns of diarrheagenic Escherichia  coli isolated  from  adolescents  and  adults  in Hamedan, Western Iran. Iran Journal of Microbiology . 5 (1): 42 – 47.
Asllani, M.M., Ahrabi, S.S., Alikhani, Y. M., Jafari, F., Zali, R.M., Mani.  M.  2008.  Moleculer  detection  and  antimicrobial resistance of diarrheagenicEscherichia coli strains issolation from diarheal cases. Saudi Med Journal. 29 (3): 388-392. Bachtiar,  S.Y.,  Tjahjaningsih,  W.,  Sianita,  N.,  2012.  Pengaruh Ekstrak Alga Cokelat (Sargassum sp.) Terhadap Pertumbuhan Bakteri  Escherichia  coli. Journal  of  Marine  and  Coastal Science 1(1): 53 – 60.
Bolton, D.J., Ennis, C., McDowell, D., Occurrence. 2013. Virulence Genes  and  Antibiotic  Resistance  of  Enteropathogenic Escherichia  coli  (EPEC)  from  Twelve  Bovine  Farms  in  the North-East of Ireland .
Cockerill,  F.R.,  Wikler,  M.A.,  Alder,  J.,  Dudley,  M.N.  2012. Performance Standards for Antimicrobial Disk Susceptibility Tests; Approved Standard—Eleventh Edition . Wayne: Clinical and Laboratory Standards Institute. Jawetz, E., Y. L. Melnick, dan E. A. Adelberg. 2008. Mikrobiologi Kedokteran . Jakarta: EGC.
Johannes,  E.  2012.  Pemanfaatan  Senyawa  Bioaktif  Hasil  Isolasi Hydroid Aglaophenia  cupressina  Lamoureoux  sebagai  Bahan Sanitizer  pada Buah dan Sayuran Segar. Disertasi . Universitas Hasanuddin: Makasar.
Kaper,  J.B.,  Nataro,  J.P.,  Mobley,  H.L.T.  2004.  Phatogenic Escherichia coli. Nature Reviews . Department of Microbiology and Immunology,and the Department of Pediatrics, University of Maryland School of Medicine: Baltimore.
Naufalin.  R.,  Jenie,  B.S.L.,  Kusnandar.  F.,  Sudarwamto.M., Rukmini. H. 2005. Aktivitas Antibakteri Bunga Kecombrang Terhadap  Bakteri  Patogen  dan  Perusak  Pangan. Jurnal Teknologi dan Industri Pangan . 2(15): 119 – 125.
Nurcahyanti. A.D.R., Dewi. L., Timotius. K.H., 2011. Aktivitas Antioksidant dan Antibakteri Ekstrak Polar dan Non Polar Biji  Selasih  (Ocimum  sanctum  Linn). Jurnal  Teknologi Pangan dan Industri . 22 (1): 1 – 6.
Paju,  N.,  P. V.  J. Yamlean,  dan  N.  Kojong.  2013.  Uji  Efektivitas Salep  Ekstrak  Daun  Binahong  ( Anredera  cordifolia    (Ten.) Steenis ) pada Kelinci ( Oryctolagus cuniculus ) yang Terinfeksi Bakteri Staphylococcus  aureus . Jurnal  Ilmiah  Farmasi – UNSRAT 2 (1): 51 – 61.
Permatasari,  G. A. A. A.,  Besung,  I.  N.  K.,  Mahatmi,  H.  2013. Daya  Hambat  Perasan  Daun  Sirsak  Terhadap  Pertumbuhan Bakteri Escherichia coli . Indonesia Medicus Veterinus . 2 (2) : 162 – 169.
Poeloengan, Andriani,  Susan  M.  N.,  I.  Komala  dan  M.  Hasnita. 2007. Uji daya antibakteri ekstrak etanol kulit batang bungur ( Largerstoremia  speciosa  pers )  terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia  coli secara  in  vitro. Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner 2007: 776-782. Roy,  S.  Shamzzusaman,  S.M.  Mamun,  K.Z.  2013. Antimicrobial Resistance Pattern Of Diarrheagenic Escherichia Coli Isolated From  Acute  Diarrhea  Patients.    International  Journal  of Pharmaceutical Science Invention. 2 (6): 43 – 46.
Septiana, A.T, Asnani, A. 2012. Kajian Sifat Fisikokimia Ekstrak Rumput Laut Coklat (Sargassum duplicatum) Menggunakan Berbagai  Pelarut  dan  Metode  Ekstraksi. Jurnal  Argointek 6 (1): 22 – 28.
Udarno, L. 2009.  Lerak  (Sapindus  rarak)  Tanaman  Industri Pengganti  Sabun. Warta Penelitian dan Pengembangan Tanaman  Industri Volume  15,  Nomor  2.  Bogor  :  Badan Penelitian dan Pengembangan Perkebunan Ushimaru, P.I. M. T. Nogueira da Silva, L. C. Di Stasi, L. Barbosa, A.F. Junior. 2007. Antibacterial Activity Of Medicinal Plant Extracts. Brazilian Journal of Microbiology . Vol 38:717-719
Biomedika 6    YUSIANTI SILVIANI, ANDRIYANI PUSPITANINGRUM