UJI EFEKTIVITAS MINYAK ATSIRI DAUN JERUK PURUT ( Citrus hystrix D.C.) SEBAGAI ANTIBAKTERI TERHADAP Staphylococcus epidermidis SECARA IN VITRO
Tiara Afia Rosmalawati 1  , Noorhamdani AS 2 , Arif Widiatmoko 3

## Abstrak
Staphylococcus epidermidis merupakan flora normal manusia yang banyak ditemukan di bagian kulit, membran mukosa, saluran pernapasan, serta pencernaan. Bakteri ini dapat menyebabkan infeksi oportunis- tik yang menyerang individu dengan imunitas rendah atau rentan, seperti penderita Acquired Immune Defi- ciency Syndrome (AIDS), pengguna narkotika, neonatus dan pasien rawat inap dalam waktu lama di rumah sakit. Staphylococcus  epidermidis memiliki  kemampuan  untuk  menempati  permukaan  tubuh  dan  alat-alat medis,  yang  dapat  menyebabkan  infeksi  nosokomial,  dengan  membentuk  biofilm  yang  sangat  resisten. Daun  jeruk  purut  ( Citrus  hystrix  D.C .)  merupakan  komoditas  yang  banyak  ditemukan  di  Indonesia,  yang memiliki  aktivitas  antibakteri,  serta  memiliki  nilai  yang  ekonomis  dan  mudah  didapatkan.  Tujuan  dari penelitian ini ialah untuk membuktikan efektivitas dari minyak atsiri daun jeruk purut dalam menghambat dan membunuh pertumbuhan Staphylococcus epidermidis secara in vitro. Penelitian ini menggunakan metode dilusi  tabung  yang  terdiri  dari  12  perlakuan  konsentrasi  minyak  atsiri  yaitu  0,24%;  0,22%;  0,20%;  0,18%; 0,16%; 0,14%; 0,12%; 0,10%; 0,08%; 0,06%, 0,04%; dan 0% sebagai kontrol negatif. Hasil penelitian ini membuktikan bahwa minyak atsiri daun jeruk purut pada konsentrasi 0,18% dan 0,20% dapat menghambat dan membunuh pertumbuhan Staphylococcus epidermidis (ANOVA, p = 0,000 < 0,05; uji korelasi Pearson = -0,701). Kesimpulan penelitian ini  adalah minyak atsiri daun jeruk purut dapat menghambat pertumbuhan Staphylococcus epidermidis pada Kadar Hambat Minimum (KHM) 0,18% dan membunuh Staphylococcus epidermidis pada Kadar Bunuh Minimum (KBM) 0,20%, secara in vitro.
Kata kunci: Staphylococcus epidermidis , minyak atsiri daun jeruk purut, antibakteri
EFFECTIVENESS TEST OF KAFFIR LIME LEAVES ( Citrus hystrix D.C.) ESSENTIAL OILS AS ANTIBACTERIAL AGAINST Staphylococcus epidermidis IN VITRO

## Abstract
Staphylococcus epidermidis is a normal human flora that is mostly located in the skin, mucous mem- branes,  respiratory  tract,  and  digestion.  These  bacteria  can  cause  opportunistic  infections,  which  attack vulnerable people or poor immunity, such as Acquired Immune Deficiency Syndrome (AIDS) sufferers, drug abusers, neonates, and hospital patients who are treated for a long time. Staphylococcus epidermidis can occupy the surface of the body and medical devices, which causes nosocomial infections, by forming highly resistant biofilms.  Kaffir lime leaves ( Citrus hystrix D.C .) is a commodity that is often found in Indonesia, which has antibacterial activity and has economic value and is easy to get. The goal of this study is to prove the  effectiveness  of  kaffir  lime  leaves  essential  oils  in  inhibiting  and  killing  the  growth  of Staphylococcus epidermidis in vitro. The research used the tube dilution method which consist of 12 treatments with 0.24%; 0.22%; 0.20%; 0.18%; 0.16%; 0.14%; 0.12%; 0.10%; 0.08%; 0.06%, 0.04%; and 0% as a negative control of essential oil concentration. The results of this study found that at concentrations of 0,18% and 0,20% of kaffir  lime  leaves  essential  oils  can  inhibit  and  kill  the  growth  of Staphylococcus  epidermidis bacteria (ANOVA  p  =  0.000  <  0.05;  Pearson correlation  test  =  -0.701).  This  study  concludes  that  the  kaffir  lime leaves essential oils can inhibit the growth of Staphylococcus epidermidis at Minimum Inhibitory Concentra- tion (MIC) of 0.18% and kill Staphylococcus epidermidis at Minimum Bactericidal Concentration (MBC)  of 0.20%, in vitro.
Keywords: antibacterial, kaffir lime leaves essential oil, Staphylococcus epidermidis
1 Program Studi Pendidikan Dokter, Fakultas Kedokteran, Universitas Brawijaya 2 Departemen Mikrobiologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Brawijaya
3 Departemen Ilmu Kesehatan Kulit dan Kelamin, Fakultas Kedokteran, Universitas Brawijaya

## Pendahuluan
Staphylococcus  epidermidis merupakan flora normal manusia yang ditemukan di kulit, membran  mukosa,  saluran  pernapasan  dan pencernaan. 1 Staphylococcus  epidermidis dapat menyebabkan infeksi oportunistik, yaitu bakteri  yang  menyerang  individu  dengan imunitas  rendah  atau  rentan,  yang  dapat ditemukan  pada  penderita Acquired  Immune Deficiency  Syndrome (AIDS),  pengguna narkotika,  neonatus,  dan  pasien  rawat  inap dalam waktu lama di rumah sakit. Pasien yang dirawat  lama  di  rumah  sakit  rentan  terkena bakteri ini akibat penggunaan alat-alat medis, salah  satu  contoh  adalah  akibat  penggunaan kateter  di  rumah  sakit.  Hal  ini  disebabkan adanya  pembentukan  biofilm  pada  alat-alat medis.  Bakteri  yang  menyebar  secara hematogen  dapat  berbahaya  dan  menyebab- kan sepsis pada neonates. 2 Morbiditas neona- tus akibat bakteri Staphylococcus epidermidis dapat berupa Necrotizing Enteroco-litis (NEC), Retinopathy  of  Prematurity (ROP), Bron- chopulmonary  Dysplasia (BPD),  dan White Matter Injury (WMI). 3 Mortalitas akibat Staphy- lococcus  epidermidis secara  global  berkisar 1,9%  hingga  4,8%  pada  populasi  neonatus dan dapat meningkat hingga 9,4% pada neo- natus dengan berat badan lahir kurang (<1500 gram). 3 Staphylococcus  epidermidis banyak menyebabkan  Infeksi  Luka  Operasi  (ILO), salah satu jenis dari infeksi nosokomial, selain akibat dari penggunaan alat-alat medis. Seki- tar  21,95% Staphylococcus  epidermidis di ruang kebidanan dan rawat inap bedah RSUD Dr. H. Abdul Moeloek Bandar Lampung. 4 Staphylococcus  epidermidis umumnya telah  resisten  terhadap  beberapa  jenis  anti- biotik,  seperti  metisilin  dan  penisilin. Sementara  penggunaan  metisilin  dapat menyebabkan  resistensi  terhadap  antibiotik lain, seperti rifampisin, gentamisin, tetrasiklin, kloramfenikol,  eritromisin,  klindamisin,  dan sulfonamid.  Peningkatan  resistensi  dise- babkan  oleh  kesalahan  dan  ketidakpatuhan
individu  dalam  menggunakan  antibiotik. Pemberian  antibiotik  yang  berlebihan  akan menyebabkan  bakteri  patogen  menjadi resisten.  Oleh  karena  itu,  perlu  diketahui adanya  alternatif  lain  yang  memiliki  potensi sebagai  antibakteri  yang  diharapkan  lebih efektif, efisien, dan aman dalam menghambat dan membunuh pertumbuhan Staphylococcus epidermidis.
Salah  satu  pemanfaatan  keragaman hayati  di  Indonesia  yaitu  dengan  meng- gunakan  tanaman  jeruk  purut  ( Citrus  hystrix D.C.) yang dinilai lebih ekonomis dan memiliki fungsi  sebagai  antibakteri,  sehingga  dapat menjadi  alternatif  mengatasi    resistensi antibiotik . Tanaman  jeruk  purut  dapat dimanfaatkan  kulit  buah,  daun,  buah  hingga rantingnya.  Hasil  penelitian  menyebutkan bahwa  kandungan  minyak  atsiri  daun  jeruk purut berupa sitronelal, merupakan komponen monoterpen  yang  mengandung  oksigen sebesar  85,07%  dan  memiliki  kemampuan untuk  menghambat  bakteri E.  coli dua  kali lebih  baik  dibandingkan  dengan  kandungan sitronelal  ranting  jeruk  purut  dengan  kon- sentrasi  46,40%. 5 Minyak  atsiri  bersifat sebagai  antibakteri  dan  antijamur,  serta memiliki  aktivitas  antioksidan,  antiinflamasi, dan mampu mencegah radikal bebas. 6
Pada  penelitian  ini  dilakukan  uji antibakteri  daun  jeruk  purut  ( Citrus  hystrix D.C .) yang disuling menjadi minyak atsiri pada beberapa  konsentrasi  terhadap Staphylo- coccus epidermidis secara in vitro .

## Bahan dan Metode

## Desain Penelitian
Desain  penelitian  adalah true  experi- mental-posttest  control  group secara in  vitro untuk  mengetahui  efektivitas  minyak  atsiri daun  jeruk  purut  terhadap Staphylococcus epidermidis menggunakan  metode  dilusi  ta- bung  untuk  mendapatkan  Kadar  Hambat Minimum  (KHM)  dan  Kadar  Bunuh  Minimum (KBM).
Variabel  bebas  penelitian  ini  adalah  konsen- trasi minyak atsiri daun jeruk purut dan varia- bel  tergantungnya  adalah  pertumbuhan Staphylococcus  epidermidis yang  dilakukan dengan metode dilusi tabung.

## Sampel Penelitian
Penelitian ini menggunakan sampel bak- teri Staphylococcus  epidermidis yang  di- peroleh dari Laboratorium Mikrobiologi RSUD Dr.  Saiful  Anwar  Malang  berupa  isolat
Staphylococcus  epidermidis .  Media  isolasi dan  identifikasi  bakteri Staphylococcus epidermidis menggunakan Blood  Agar Plate
(BA).

## Pembuatan Minyak Atsiri Daun Jeruk Purut
Minyak  atsiri  yang  digunakan  terbuat dari daun jeruk purut yang berasal dari Mate- ria Medica Kota Batu sebanyak satu kilogram. Daun  jeruk  purut  dibersihkan,  kemudian dibiarkan di ruang terbuka semalaman, pasti- kan  tidak  sampai  kering.  Hal  ini  bertujuan agar  kandungan  minyak  pada  daun  jeruk purut  tidak  berkurang  karena  menguap. Setelah  itu,  daun  jeruk  purut  dimasukkan  ke dalam  ketel  yang  bagian  dalamnya  dibatasi oleh  penyaring  sehingga  terbagi  menjadi bagian  atas  dan  bagian  bawah.  Bagian  atas penyaring  gunakan  untuk  meletakkan  daun jeruk  purut,  sedangkan  bagian  bawah  berisi air  yang  mendidih  dengan  suhu  100  °C. Kemudian  uap  air  yang  bercampur  minyak yang  berasal  dari  ketel  disalurkan  menuju separator.  Ketika  akan  memasuki  separator, kondensor  akan  menyalurkan  udara  dingin, sehingga  mengubah  fase  uap  menjadi  cair. Minyak  akan  terpisah  dari  air  karena  minyak memiliki  berat  jenis  lebih  kecil  dibandingkan air. 7

## Identifikasi Staphylococcus epidermidis
Beberapa  identifikasi  yang  dilakukan adalah  pewarnaan  Gram,  uji  katalase,  uji koagulase  dan  uji  fermentasi  pada Mannitol Salt Agar (MSA). Tujuan identifikasi ini untuk
mengkonfirmasi sampel bakteri tersebut ada- lah Staphylococcus epidermidis .
Pembuatan Suspensi Bakteri Staphylococcus epidermidis
Staphylococcus  epidermidis di-
inokulasikan  pada  media Nutrient  Broth, kemudian  diinkubasi  selama  24  jam  pada suhu  37 o C.  Konsentrasi  bakteri  kemudian diukur  menggunakan  spektrofotometer  pada panjang  gelombang  625  nm.  Konsentrasi bakteri Staphylococcus  epidermidis yag digunakan adalah 10 6 CFU/mL.

## Uji Daya Antibakteri Minyak Atsiri Daun Jeruk Purut
Pada  uji  ini  digunakan  11  konsentrasi minyak  atsiri  daun  jeruk  purut  yang  berbeda yaitu  0,24%;  0,22%;  0,20%;  0,18%;  0,16%; 0,14;  0,12%;  0,10%;  0,08%;  0,06%;  0,04%; kontrol  negatif  mengandung Staphylococcus epidermidis 10 6 CFU/mL (minyak atsiri 0%), dan  kontrol  positif  (minyak  atsiri  daun  jeruk purut). Seluruh tabung diinkubasi selama 18- 24  jam  pada  suhu  37 o C.  Kemudian,  tabung dibandingkan  kekeruhannya  untuk  menen- tukan  Kadar  Hambat  Minimum  (KHM). Kekeruhan  tabung  dilihat  dengan  mem- bandingkan  semua  tabung  di  atas  kertas putih  dengan  garis  hitam.  Apabila  seluruh garis  terlihat,  berarti  tabung  sudah  jernih. Larutan  dalam  tabung  yang  tidak  menunjuk- kan  kekeruhan  diambil  1  ose  kemudian  di- lakukan  penggoresan  pada Nutrient  Agar Plate ( NAP ) dan diinkubasi selama 18-24 jam pada  suhu  37 o C.  Kadar  Bunuh  Minimal (KBM)  bakteri  pada  NAP  ditentukan  pada konsentrasi  minyak  atsiri  daun  jeruk  purut terkecil yang tidak menunjukkan adanya per- tumbuhan  atau  pertumbuhan  bakteri  kurang dari 0,1% dari jumlah koloni inokulum awal. 8

## Analisis Data
Data  penelitian  ini  dianalisis  secara statistik menggunakan uji normalitas,
uji Kolmogorov-Smirnov, uji oneway ANOVA , dan uji korelasi Pearson.

## Hasil

## Hasil Identifikasi Bakteri
Hasil  pewarnaan  Gram  dapat  dilihat pada  Gambar  1.  Pada  pewarnaan  Gram didapatkan  bakteri  berbentuk  kokus  gram positif  berwarna  merah,  serta  bergerombol yang membuktikan bakteri Staphylococcus.
Gambar 1. Pewarnaan Gram bakteri Staphy- lococcus epidermidis
Keterangan:  Hasil  bakteri  berbentuk  kokus berwarna  violet,  serta  bergerombol (panah hitam)
Pada uji katalase didapatkan gelembung udara,  ketika  satu  tetes  H 2 O 2 3%  diteteskan pada Staphylococcus  epidermidis .  Hal  ini menjelaskan  bahwa  bakteri  positif  pada  tes katalase  (Gambar  2).  Uji  ini  juga  mem- bedakan bakteri Staphylococcus dari Strepto- coccus , sehingga membuktikan bahwa bakteri tersebut adalah golongan Staphylococcus .
Gambar 2. Uji katalase positif (+) pada bakteri

## Staphylococcus epidermidis
Keterangan:  katalase  positif  (+)  ditandai  dengan adanya  gelembung  udara  (panah hitam)  dan  katalase  negatif  (-) ditandai dengan tidak adanya gelem- bung  udara  pada object  glass (panah biru)
Pada uji koagulase serum mamalia yang telah diteteskan di atas alas berwarna hitam,
tidak terjadi penggumpalan ketika digoreskan dengan Staphylococcus  epidermidis menggunakan ose. Hal ini menunjukkan bak- teri  merupakan Staphylococcus dengan koagulase negatif (Gambar 3).
Gambar 3. Uji koagulase bakteri Staphy- lococcus aureus dan Staphylococcus epider- midis
Keterangan: Koagulase positif (+) ditandai dengan
adanya  gumpalan  pada  bakteri Staphylococcus  aureus (panah
kuning)  dan  koagulase  negatif  (-) ditandai  dengan  tidak  adanya gumpalan pada bakteri Staphylococ- cus epidermidis (panah biru)
Uji  fermentasi Staphylococcus  epider- midis pada Mannitol  Salt  Agar (MSA)  tidak mengubah  warna  pada  MSA  dan  tetap berwarna merah muda. Hal ini karena Staphy- lococcs  epidermidis tidak  memfermentasikan manitol.
Gambar 4. Uji fermentasi Staphylococcs epi- dermidis pada mannitol salt agar (MSA) Keterangan: Staphylococcus  aureus memfermen- tasikan  mannitol,  sehingga  berubah warna  menjadi  kuning  (panah hitam),  sedangkan Staphylococcus epidermidis tidak memfermentasikan mannitol,  sehingga  tidak  terjadi  pe- rubahan warna pada media Mannitol Salt Agar (MSA) (panah biru)
Uji Daya Antibakteri Minyak Atsiri Daun Jeruk Purut  terhadap  Bakteri  Staphylococcus  epi- dermidis
Pada  penelitian  ini  diperoleh  sebanyak
11  ml  minyak  atsiri  daun  jeruk  purut  melalui proses  destilasi  yang  memerlukan  waktu  5 jam  33  menit.  Uji  daya  antibakteri  minyak atsiri daun jeruk purut terhadap bakteri Staph- ylococcus epidermidis diketahui berdasar nilai KHM  dan  KBM  yang  diperoleh.  Nilai  KHM diperoleh dari tingkat kekeruhan dilusi tabung (Tabel  1).  Berdasarkan  hasil  pengamatan dilusi  tabung,  diperoleh  konsentrasi  0,18% merupakan  KHM  karena  pada  konsentrasi tersebut  campuran  antara  minyak  atsiri  daun jeruk  purut  dan  bakteri Staphylococcus  epi- dermidis sudah terlihat mulai jernih dibanding- kan  dengan  konsentrasi  0,16%.  Kejernihan menunjukkan  bahwa  pertumbuhan Staphylo- coccus  epidermidis terhambat  pada  konsen- trasi 0,18%.
Setelah  itu,  dilakukan  uji  KBM.  Kadar Bunuh  Minimum  (KBM)  minyak  atsiri  daun jeruk  purut  terhadap Staphylococcus  epider-
midis dapat  ditentukan  melalui  perhitungan dari jumlah koloni Staphylococcus epidermidis yang tumbuh pada media NAP (Tabel 2). Dari hasil  pengamatan  konsentrasi  0%  hingga 0,24%  dapat  diketahui  bahwa  pada  konsen- trasi  0,20%  dengan  dua  kali  pengulangan, terdapat rata-rata koloni yang tumbuh < Origi- nal  Inoculum ( OI ) ,  yaitu  <  1621,5  CFU/mL pada NAP. Hasil ini membuktikan bahwa min- yak  atsiri  daun  jeruk  purut  pada  konsentrasi 0,20% dapat membunuh bakteri Staphylococ- cus epidermidis secara in vitro.

## Analisis Data
Hasil uji normalitas Kolmogorov-Smirnov menunjukkan  nilai  signifikansi  sebesar  0,000 (p  <  0,05),  sehingga  dalam  penelitian  ini menggunakan  analisis  parametrik.  Selanjut- nya dilakukan uji oneway ANOVA dengan nilai signifikansi  sebesar  0,000  (p  <  0,05).  Hal  ini menunjukkan  bahwa  pemberian  minyak  atsiri daun  jeruk  purut  setiap  variasi  konsentrasi mempunyai  pengaruh  berbeda  terhadap  per- tumbuhan koloni Staphylococcus epidermidis .
Tabel 1. Hasil dilusi tabung Konsentrasi Minyak Atsiri daun Jeruk Purut (%) Tingkat Kekeruhan 0,00 ++++ 0,04 ++++ 0,06 +++ 0,08 +++ 0,10 +++ 0,12 +++ 0,14 ++ 0,16 + 0,18 - 0,20 - 0,22 - 0,24 -
Keterangan: ++++: sangat keruh, maka tiga garis hitam hampir tidak terlihat, skor 4; +++: lebih keruh, maka garis  hitam  tipis  paling  atas  mulai  tidak  terlihat,  skor  3;  ++:  keruh,  maka  tiga  garis  hitam telihat lebih samar dibandingkan (+), skor 2; +: kurang keruh, maka tiga garis hitam terlihat mulai samar, skor 1; -: tidak keruh, skor 0
Tabel 2. Pertumbuhan koloni staphylococcus epidermidis setelah diberi minyak atsiri daun jeruk purut Konsentrasi Minyak Atsiri Daun Jeruk Purut (%) Jumlah Koloni Staphylococcus epidermidis pada Media NAP (CFU/mL) I II Rata-Rata 0,24 0 0 0 0,22 38 34 36 0,20 52 46 49 0,18 27.100 31.900 29.500 0,16 28.300 36.700 32.500 0,14 42.400 49.500 45.950 0,12 66.900 72.000 69.450 0,10 126.000 132.500 129.250 0,08 260.000 265.000 262.500 0,06 325.000 315.000 320.000 0,04 425.500 417.000 421.250 0,00 (Original Inoculum) 1.625.000 1.618.000 1.621.500 Uji oneway ANOVA dilanjutkan menggunakan post hoc dengan Tukey HSD , hasil menunjuk- kan  bahwa  konsentrasi  0,20%,  0,22%  dan 0,24%  berpengaruh  pada  perlakuan  yang sama  terhadap  pertumbuhan  bakteri  dan memiliki perbedaan jika dibandingkan dengan konsentrasi  di  bawahnya.  Kemudian  pada konsentrasi  0,18%;  0,16%  dan  0,14%  ber- pengaruh  pada  perlakuan  yang  sama  ter- hadap  pertumbuhan  bakteri  dan  memiliki perbedaan jika dibandingkan dengan konsen- trasi di bawahnya. Serta mulai pada konsen- trasi  0,14%  terdapat  perbedaan  yang  sig- nifikan  terhadap  enam  konsentrasi  terendah di  bawahnya.  Berdasarkan  hasil  uji  korelasi dan  regresi,  diperoleh  nilai  koefisien  korelasi dari  minyak  atsiri  daun  jeruk purut  sebesar  - 0,701. Korelasi negatif menunjukkan semakin tinggi  konsentrasi  minyak  atsiri  daun  jeruk purut,  maka  semakin  sedikit  jumlah  pertum- buhan  koloni  bakteri Staphylococcus  epider- midis.

## Pembahasan
Penelitian ini merupakan penelitian eks- perimental  untuk  mengetahui  kemampuan
hambat  dan  bunuh  minyak  atsiri  daun  jeruk purut  terhadap Staphylococcus  epidermidis secara in vitro. Minyak atsiri daun jeruk purut dapat  menghambat  pertumbuhan  dinding  sel dari  bakteri.  Kandungan  minyak  atsiri  daun jeruk purut adalah citronella (87,91%), linalool (3,96%), trans-caryophylen (2,17%), citronellil asetat (1,79%), sabinen (1,78%).  Di  dalam minyak atsiri, kandungan terbesarnya adalah citronella atau  sitronelal  dengan  persentase 87,91% yang termasuk dalam senyawa mon- oterpena.  Pada  konsentrasi  tinggi  senyawa monoterpena  dapat  melisiskan  membran  sel bakteri. 9,10 Penelitian  oleh  Yanti et  al. (2017) membuktikan  bahwa citronella sebagai  kom- ponen  utama  penyusun  minyak  atsiri  daun jeruk purut sangat efektif dalam menghambat jenis Aspergillus, terutama Aspergillus  can- didus , Aspergillus  tamari dan Aspergillus  ni- ger yang bersifat patogen pada manusia. 9
Pada penelitian ini, Kadar Hambat Mini- mum  (KHM)  terlihat  pada  konsentrasi  0,18% yang  mampu  menghambat  pertumbuhan Staphylococcus  epidermidis ,  yang  dilihat melalui  tingkat  kejernihan  pertama  setelah adanya  kekeruhan  pada  konsentrasi  sebe- lumnya.
Penelitian  yang  dilakukan  oleh  Vika
(2014)  membuktikan  bahwa  Konsentrasi
Hambat Minimum (KHM) dari ekstrak metanol daun  jeruk  purut  ( Citrus  hystrix  D.C .)  untuk bakteri Staphylococcus  epidermidis adalah
7,5%,  sedangkan  penelitian  Yuliani et  al.
(2011)  menunjukkan  bahwa  minyak  atsiri
daun jeruk purut mempunyai aktivitas antibak-
teri  terhadap Staphylococcus  aureus dengan nilai  Konsentrasi  Hambat  Minimum  (KHM), serta  Konsentrasi  Bunuh  Minimum  (KBM) berturut-turut  sebesar  1%  dan  2%.  Namun, kemampuan  minyak  atsiri  daun  jeruk  purut untuk  menghambat  serta  membunuh Esche- richia  coli pada  nilai  KHM  dan  KBM
 0,0625% secara in vitro. 11,12
Selanjutnya,  Kadar  Bunuh  Minimal (KBM)  minyak  atsiri  daun  jeruk  purut  yang mampu  membunuh Staphylococcus  epider- midis , pada penelitian ini diketahui pada kon- sentrasi  0,20%  karena  masih  ditemukan adanya koloni yang tumbuh ≤ Original Inocu- lum  (OI) ,  yaitu  ≤  1621,5  CFU/ml  pada NAP. Beberapa  keterbatasan  pada  penelitian adalah  belum  diketahui  jumlah  pasti  kan- dungan  masing-masing  bahan  aktif  antibak- teri  pada  hasil  destilasi  minyak  atsiri  daun jeruk  purut,  sehingga  belum  dapat  diketahui senyawa  bioaktif  dominan  yang  menyebab- kan  efek  terhadap  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus epidermidis. Selain itu, belum diketahui  pengaruh  lama  penyimpanan  mi- nyak  atsiri  daun  jeruk  purut  terhadap  kan- dungan dan efektivitas senyawa bioaktif pada minyak atsiri daun jeruk purut.

## Kesimpulan
Minyak  atsiri  daun  jeruk  purut  ( Citrus hystrix  D.C )  memiliki  efek  antibakteri  pada Staphylococcus  epidermidis secara in  vitro . Minyak  atsiri  daun  jeruk  purut  ( Citrus  hystrix D.C )  dapat  menghambat  dan  membunuh pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  epider- midis secara in  vitro yang  dapat  meningkat seiring peningkatan konsentrasi minyak atsiri
daun  jeruk  purut  yang  diberikan.  Pada penelitian ini didapatkan Kadar Hambat Mini- mum  (KHM)  minyak  atsiri  daun  jeruk  purut sebesar  0,18%  dan  Kadar  Bunuh  Minimum (KBM) minyak atsiri daun jeruk purut sebesar 0,20% terhadap Staphylococcus epidermidis.

## Saran
Penelitian  lebih  lanjut  perlu  dilakukan dalam pengaplikasian minyak atsiri daun jeruk purut  ( Citrus  hystrix  D.C )  sebagai  antiseptik dalam  upaya  pencegahan  infeksi  dan  perlu dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  pada  hewan coba secara in vivo untuk mengetahui secara pasti  dosis  efektif,  dosis  letal  dan  efek samping  yang  ditimbulkan  oleh  minyak  atsiri daun jeruk purut.

## Daftar Pustaka
1.  Brooks GF, Carroll KC, Butel JS, Morse, et  al. Mikrobiologi  Kedokteran  Jawetz,
Melnick, & Adelberg . Edisi ke-25. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC. 2013.
2.  Nguyen  TH,  Park  MD,  Otto  M.  Host  Re- sponse  to Staphylococcus  epidermidis
Colonization  and  Infections.  Frontiers  in Cellular and Infection Microbiology. Front Cell  Infect  Microbiol. 2017;  7:  90. doi: 10.3389/fcimb.2017.00090.
3.  Dong  Y,  Speer  CP,  Glaser  K.  Beyond Sepsis: Staphylococcus Epidermidis is an Underestimated  but  Significant  Contribu- tor  to  Neonatal  Morbidity. Virulence .
2 0 1 8 ;   9 ( 1 ) : 6 2 1 - 6 3 3 .   d o i : 10.1080/21505594.2017.1419117. 4.  Warganegara E, Apriliana E,  Ardiansyah
R.  Identifikasi  Bakteri  Penyebab  Infeksi Luka  Operasi  (ILO)  Nosokomial  pada Ruang Rawat Inap Bedah dan Kebidanan RSAM di Bandar Lampung.Prosiding SN- SMIAP III 2012.  2012; 3(3): 344-348.
5.  Nurcahyo  H.  Formulasi  Minyak  Atsiri Daun  Jeruk  Purut  ( Citrus  hystrix  D.C .) sebagai Sediaan Aromaterapi. Pancasakti
Science Education Journal . 2016; 1(1):7-
6.  Warsito,  Noorhamdani,  Sukardi,    Su- ratmo.  Aktivitas  Antioksidan  dan  Anti- mikroba  Minyak  Jeruk  Purut  (Citrus  hys- trix DC.) dan Komponen Utamanya. Jour- nal of Environmental Engineering & Sus- tainable Technology . 2017; 4(1):13-18. 7.  Uzwatania  F.  Analisis  Kinerja  dan Efisiensi  Energi  Prototipe  Alat  Penyulin- gan  untuk  Industri  Kecil  Minyak  Nilam. Skripsi.  Bogor:  Fakultas  Teknologi  Per- tanian Institut Pertanian Bogor. 2009.
8.  CLSI. Performance Standards for Antimi- crobial  Susceptibility  Testing;  Twenty- Fourth  Informational  Supplement .  CLSI Document  M100-S24.  Wayne,  PA:  Clini- cal  and  Laboratory  Standards  Institute. 2014.
9.  Yanti  R,  Wulandari  P,  Pranoto  Y,    Ca- hyanto MN. Karakterisasi, Identifikasi dan
Uji  Aktivitas  Anti  Jamur  Minyak  Atsiri
Daun  Jeruk  Purut  ( Citrus  hystrix D.C.) terhadap  Aspergillus. Jurnal  Teknologi Pertanian . 2017; 8(2):8-15.
10.  Nazzaro F, Fratianni F, Martino LD, Cop- pola  R,  Feo  VD.  Effect  of  Essential  Oils on Pathogenic Bacteria. Pharmaceuticals . 2013; 6:1451-7.
11.  Vika  D.  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak Daun  Jeruk  Purut  ( Citrus  hystrix  D.C. ) terhadap Pseudomonas  aeruginosa dan Staphylococcus  epidermidis. Skripsi. Yogyakarta:  Fakultas  Teknobiologi  Uni- versitas Atma Jaya. 2017.
12.  Yuliani  R,  Indrayudha  P,  Rahmi  SS.  Ak- tivitas  Antibakteri  Minyak  Atsiri  Daun  Je- ruk  Purut  ( Citrus  hystix  D.C. )  terhadap Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli . Jurnal PHARMACON. 2011;12(2):50 -54.