EISSN: 2407-7690 https://ejournal3.undip.ac.id/index.php/jmr

## Aktivitas Antibakteri Ekstrak Plasma Belangkas Bulan (Tachypleus gigas) Terhadap Bakteri
Vibrio parahaemolyticus dari Perairan Selat Madura

## Alvin Aulafi Anugrah, Eka Nurrahema Ning Asih*
Program Studi Ilmu Kelautan, Fakultas Pertanian, Universitas Trunojoyo Madura Jl. Raya Telang No. 02, Kamal Kabupaten Bangkalan, Jawa Timur 69162 Indonesia *Corresponding author, e-mail: eka.asih@trunojoyo.ac.id
ABSTRAK: Upaya  penanggulangan  infeksi  vibriosis  menggunakan  antibiotik  secara  insentif menyebabkankan  resistansi  dan  menurunkan  produktifitas  budidaya.  Perlu  dilakukan  eksplorasi upaya  pencarian  bahan  alami  sebagai  anti  bakteri Vibrio  parahaemolyticus salah  satunya menggunakan  plasma  belangkas  yang  mengandung Tachyplesin  Amoebocyt  Lysat .  Tujuan penelitian ini untuk mengetahui konsentrasi terbaik dan perbedaan kemampuan zona hambat dari ekstrak  plasma Tachypleus  gigas terhadap  bakteri Vibrio  parahaemolyticus pada  waktu pengamatan  yang  berbeda.  Penelitian  menggunakan  metode  eksperimental  dengan  Rancangan Acak Lengkap dari dua lokasi pengambilan sampel dan 3 ulangan yaitu perairan Socah-Bangkalan dan  Tambak  Wedhi-Surabaya.  Perlakuan  konsentrasi  ekstrak  0,05%,  20%,  50%,  dan  100%  v/v, dan  kontrol  positif  ( chloramphenicol )  dengan  3  waktu  pengamatan  yaitu  24  jam,  48  jam,  dan  72 jam.  Parameter  yang  diamati  adalah  Konsentrasi  Hambat  Minimum  dianalisis  Uji Kruskal  Walis dan Uji Mann Whitney . Hasil menujukkan ada perbedaan nyata antara konsentrasi plasma dalam menghambat aktivitas bakteri uji pada waktu pengamatan berbeda di 2 lokasi tersebut dengan nilai asymp.  sig  ekstrak  dari  perairan  Socah  antara  0.036  (72  jam)-0.049  (48  jam),  sedangkan  nilai asymp. sig ekstrak dari Tambak Wedi yaitu 0.044 (24 jam). Hasil uji Mann Whitney menunjukkan konsentrasi  ekstrak  plasma  terbaik  untuk  menghambat  bakteri  Vibrio parahaemolyticus dari  2 lokasi penelitian adalah 1:20 ml (0,05%) dengan kisaran zona hambat yang dihasilkan 1,1 ± 0,33 mm  (Socah)  dan  1,47±  0,38  mm  (Tambak  Wedi).  Hasil  penelitian  menjadi  informasi  awal  untuk potensi pemanfaat ekstrak plasma Tachypleus gigas di bidang bioteknologi kelautan kedepannya.
Kata kunci : Vibrio parahaemolyticus ; ekstrak plasma belangkas ; Tachypleus gigas
The Antibacterial Activity of Horseshoe Crab (Tachypleus gigas) Plasma Extract against Vibrio parahaemolyticus Bacteria from the Waters of Madura Strait
ABSTRACT: Efforts to control vibriosis infection using antibiotics intensively cause resistance and reduce cultivation productivity. It is necessary to explore efforts to find natural ingredients as anti- bacterial  Vibrio  parahaemolyticus,  one  of  which  is  rapeseed  plasma  containing  Tachyplesin Amoebocyt  Lysat.  This  study  aimed  to  determine  the  best  concentration  and  differences  in inhibition zone ability of Tachypleus gigas plasma extract against Vibrio parahaemolyticus bacteria at different observation times and study locations. The study used an experimental method with a completely randomized design from two sampling locations and three replications, namely Socah- Bangkalan and Wedhi-Surabaya Ponds. Treatment of extract concentrations of 0.05%, 20%, 50%, and  100%  v/v,  and  positive  control  (chloramphenicol)  with  three  observation  times,  namely  24 hours,  48  hours,  and  72  hours.  The  observed  parameters  were  minimum  inhibitory  concentration and  inhibition  zone  diameter,  which  were  analyzed  using  the  Kruskal  Walis  and  Mann-Whitney Test.  The results  showed  a  significant  difference  between the  plasma  concentrations  in  inhibiting the  activity  of  the  test  bacteria  at  different  observation  times  at  the  2  locations  with  the  asymp value. sig extract from Socah waters ranged from 0.036 (72 hours) to 0.049 (48 hours), while the asymp.  sig  extract  from Tambak Wedi  is  0.044 (24  hours).  The results  of  the  Mann-Whitney  test showed  that  the  best  concentration  of  plasma  extract  to  inhibit  Vibrio  parahaemolyticus  bacteria from 2 study sites was 1:20 ml (0.05%) with a range of inhibition zones resulting from 1.1 ± 0.33 mm  (Socah)  and  1.47  ±  0.38  mm  (Tambak  Wedi).  The  results  of  this  study  provide  initial
information  for  the  potential  use  of  plasma  extract  Tachypleus  gigas  in  the  field  of  marine biotechnology in the future.
Keywords: Vibrio parahaemolyticus ; extract of horshoe crab plasm; Tachypleus gigas

## PENDAHULUAN
Sektor  perekonomian  pada  bidang  perikanan  di  Indonesia  ditunjang  dengan  besarnya keberhasilan  produksi  pada  sektor  tambak  (Soebandriyo,  2015).  Keberadaan  organisme  patogen seperti bakteri menjadi masalah serius untuk dihindari oleh pelaku usaha tambak karena bakteri ini menjadi  sumber  penyakit  yang  menginfeksi  dan  mengakibatkan  kematian  pada  komoditas  hasil tambak  (Saragih et.  al., 2015).  Pertumbuhan  bakteri  patogen  saat  ini  dapat  ditekan  dengan penggunaan antibiotik akan tetapi seiring penggunaan antibiotik yang berlebihan bakteri yang ada pada  tambak  akan  menunjukan  gejala  resistensi  terhadap  bahan  kimia  yang  terkandung  dalam antibiotik  tersebut  (Ayini et.  al., 2014).  Bakteri  patogen  yang  sering  menyerang  komoditas budidaya  tambak  khususnya  udang  dan  ikan  ialah  bakteri  dari  genus Vibrio  sp (Feiatra et.  al. 2014).,  Bakteri Vibrio ini  menyebabkan  penyakit  yang  dinamakan Vibriosis dimana  penyakit tersebut  menyerang  larva  udang  sehingga  menimbulkan  stress  pada  larva  udang  dan menyebabkan  kematian  hingga  100%.  Infeksi  bakteri  ini  juga  dapat  memicu  kegagalan  panen pada  tambak  udang  (Feiatra et.  al. 2014)  memicu  munculnya  indikasi  infeksi Acute hepatopancreatic  necrosis  disease (AHPND)  pada  udang  dengan  tanda  berupa  udang  lesu, hepatopankreas mengalami fenomena nekrosis, atrofi dan terlihat pucat (Suryana et. al., 2023). Semakin  maraknya  kejadian  gagal  panen  tambak  udang  di  Indonesia  mendorong ditemukannya  alternatif  solusi  untuk  menekan  luasnya  prevelensi  infeksi  bakteri Vibrio  sp di perairan.  Salah  satu  solusi  yang  bisa  digunakan  untuk  mengatasi  permasalahan  tersebut  adalah dengan  melakukan  eksplorasi  sumberdaya  hayati  laut  yang  dapat  dimanfaatkan  sebagai antibakteri bakteru tersebut misalnya plasma belangkas bulan ( Tachypleus gigas). Belangkas atau kepiting tapal kuda dari genus Limulus, Tachypleus, dan Carcinoscorpius telah dimanfaatkan pada dunia  farmasi  dan  diyakini  mampu  digunakan  sebagai  bahan  antivirus  dan  antibiotik  dengan memanfaatkan  senyawa  antikoagulan Amoebocyt  Lysat dalam  plasma  darahnya  (Leschen  and Correia,  2010).  Menurut  Suwandi et.  al. (2020)  ekstrak Tachypleus  gigas memiliki  komponen bioaktif seperti alkaloid, saponin,  flavonoid, triterpenoid, phenolic dan steroid sebagai antioksidan dalam  tubuh  belangkas.  Kasturi et.  al. (2021)  mengungkapkan  bahwa  dalam  darah Tachypleus gigas mengandung  Tachystatin-A2  serta  senyawa  peptida  antibakteri  yang  mampu  menghambat pertumbuhan  bakteri Escherichia  coli dan Bacillus  subtilis dengan  konsentrasi  penghambatan minimum  sebesar  0.12  ±  0.09  dan  0.12  ±  0.05  µg/mL  pada  konsentrasi  ekstrak  peptida  dari plasma Tachypleus gigas tertinggi.
Aktivitas antibakteri dari plasma Tachypleus gigas diekstraksi dengan menggunakan pelarut polar  aquades  karena  pelarut  tersebut  dapat  menarik  zat  antibakteri  yang  bersifat  polar.  Pelarut aquades merupakan salah satu pelarut yang dapat mengekstraksi senyawa-senyawa yang bersifat polar  tanpa  menghilangkan  atau  merusak  kandungan  senyawa  ekstrak  dan  memiliki  harga  yang murah  (Muljono et.  al., 2016).  Pentingnya  ekplorasi  secara  rinci  dan  ilmiah  tentang  potensi pemanfaatan  plasma  belangkas Tachypleus  gigas sebagai  agen  penghambat  aktivitas  bakteri Vibrio  parahaemolyticus sebagai  langkah  awal  untuk  mengantisipasi  kasus  prevelensi  bakteri Vibrio  parahaemolyticus inilah  yang  melatarbelakangi  penelitian  ini  dilakukan.  Penelitian  ini bertujuan  untuk  mengetahui  konsentrasi  terbaik  dan  perbedaan  kemampuan  zona  hambat  dari ekstrak  plasma Tachypleus  gigas terhadap  bakteri Vibrio  parahaemolyticus pada  waktu pengamatan dan lokasi pengambilan sampel yang berbeda.

## MATERI DAN METODE
Penelitian  ini  dilaksanakan  di  Laboratorium  Biologi  Laut  Universitas  Trunojoyo  Madura,

## Journal of Marine Research
Vol 13, No. 3 Agustus 2024, pp. 476-484
menggunakan  metode  eksperimental  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  dengan  4  perlakuan konsentrasi serta 3 kali ulangan dari 2 lokasi yang berbeda. Pengambilan sampel dilakukan pada dua titik tepatnya di perairan Desa Junganyar, Kecamatan Socah, Kabupaten Bangkalan Madura dan  Kelurahan  Tambak  Wedi,  Kecamatan  Kenjeran,  Kabupaten  Surabaya  (Gambar  1).  0,05%, 20%,  50%,  dan  100%  v/v  dengan  cara  memasukkan  1  ml  ekstrak  plasma  sampel Tachypleus gigas dan  masing-masing  dilarutkan  dengan  20ml,  5ml,  2ml,  aquades  dan  1  ml  ekstrak  plasma untuk  kadar  100%  (Muljono et.  al., 2016)  dan  kontrol  positif  (chloramphenicol) . Bahan  yang digunakan dalam penelitian diantaranya; ekstrak plasma belangkas Tachypleus gigas , media TSB ( Trypticasein  Soy  Broth ), Nutrien  Agar (NA),  akuades,  Media  Zobell,  alkohol,  dan  antibiotik chloramphenicol .  Alat  yang  digunakan  antara  lain  alat  kaca  (tabung  reaksi,  cawan  petri, erlenmeyer, jarum ose, batang pengaduk dan bunsen), lemari pendingin, sentrifuge , vortex stirer , timbangan analitik, autoklaf dan hot plate , laminary air flow dan incubator .
Pembuatan  media Zobell diawali  dengan  mempersiapakan  bahan  yang  diperlukan  untuk pembuatan  media  padat  Zobell  yaitu  5  gram  pepton,  1  gram yeast  extract ,  0,012  gram  K2HPO4 dan  0,01  gram  FeSO 4 dalam  1000  mL  aquades  steril.  Kemudian  homogenkan  dengan hotplate dan magnetic stirer selama hingga homogen kemudian disterilisasi menggunakan autoclave pada suhu 121 ℃ selama 15 menit (Nurisman et. al. 2020). Pembuatan medium TSB ( Trypticasein Soy Broth )  Sebanyak  1,5  gram  Media  TSB  ( Trypticasein  Soy  Broth )  kemudian  dimasukkan  ke  dalam Erlenmeyer yang sudah berisi aquades steril sebanyak 50 ml. Media tersebut ditutup rapat dengan aluminium  foil dan  kapas  untuk  melindungi  dari  tumpahan  ketika  dihomogenkan  menggunakan magnetic  stirer dan  disterilkan  menggunakan  autoklaf  bersuhu  121 ℃ selama  15  menit  kemudian didinginkan  dengan  suhu  ruangan  (Pertiwi et.  al. 2016).  Setelah  media  dingin,  kemudian dimasukkan ke dalam vial sebanyak 5 mL untuk rekultur Vibrio parahaemolyticus dengan medium TSB.
Uji  aktivitas  antibakteri  dilakukan  dengan  metode  difusi  cakram.  Cakram  dicelupkan  ke dalam  larutan  ekstrak  sampel  sampai  merata  diseluruh  permukaan  cakram  dengan  berbagai macamkonsentrasi  yang  telah  disiapkan.  Kertas  cakram  yang  direndam  selama  15  menit  dalam ekstrak plasma belangkas Tachypleus gigas yang telah dibuat dalam konsentrasi adalah 0,05%,
Gambar 1. Peta lokasi penelitian
20%, 50%, dan 100%, dan kontrol positif (chloramphenicol). Cawan petri  yang telah berisi media zobell agar disiapkan dan disi dengan 1 ml suspensi bakteri Vibrio parahaemolyticus. Cawan petri yang telah berisi suspensi bakteri dan kemudian dimasukkan kertas cakram yang telah direndam dalam  suspensi  ekstrak  daun  mangrove  dan  kontrol  kemudian  diletakan  pada  masing-masing cawan petri. Cawan petri diinkubasi selama 24 jam pada incubator suhu 37 o C. Zona hambat yang terbentuk  diamati  dan  diukur  dengan  jangka  sorong Menurut  Magani et  al., (2020),  kriteria kekuatan daya antibakteri sebagai berikut: diameter zona hambat 5 mm atau kurang dikategorikan lemah, zona hambat 5- 10 mm dikategorikan sedang, zona hambat 10- 20 mm dikategorikan kuat dan  zona  hambat  20  mm  atau  lebih  dikategorikan  sangat  kuat. .  Analisis  data  menggunakan  Uji Kruskal  Walis dan  Uji Mann  Whitney dengan  tujuan  menguji  dua  sampel  bebas  pada  statistik nonparametrik.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Sampel  ekstrak  plasma  belangkas Tachypleus  gigas yang  telah  di- centrifuge memiliki karakter  berwarna  biru  tua  dengan  total  plasma  yang  berhasil  diekstraksi  sebanyak  30ml  dari setiap lokasi penelitian (Gambar 2). Sampel plasma belangkas yang dihasilkan pada penelitian ini memiliki  perbedaan  dengan  yang  ditemukan  pada  penelitian  Asih, et.  al. (2018),  dimana  pada penelitian  tersebut  ekstrak  plasma  yang  dihasilkan  dari  proses  ekstraksi  darah  belangkas Carsinoacorpiua  rotundicauda menghasilkan  35  ml  dengan  25  ml  merupakan  sampel  plasma berwarna biru muda dan 10 ml sisanya berwarna biru tua. Hal ini disebabkan terdapat perbedaan penggunaan  alat  sentrifuse  serta  kecepatan  yang  digunakan  yaitu  pada  penelitian  Asih, et.  al. (2018) menggunakan sentrifuse berkecepatan 24.000 rpm. Ekstrak plasma belangkas Tachypleus gigas yang  dihasilkan  pada  penelitian  ini  dipengaruhi  oleh  kecepatan  putar  sentrifuse  serta  lama waktu  proses  sentrifuse  dimana  semakin  lama  dan  semakin  cepat  kecepatan  sentrifuse  maka pemisahan  supernatan  dan  pelet  akan  semakin  baik  sehingga  pemisahan  senyawa  bioaktif  juga akan semakin baik.
Analisis aktivitas antibakteri dari ekstrak plasma belangkas Tachypleus gigas diamati dengan mengukur  diameter  zona  hambat  atau  zona  bening.  Hasil  pengujian  antibakteri  dari  plasma belangkas Tachypleus  gigas dapat  dilihat  pada Tabel  1  dan  Tabel  2.  Tabel  1  menunjukkan  hasil bahwa  perlakuan  empat  konsentrasi  ekstrak  plasma  belangkas Tachypleus  gigas memiliki pengaruh  antibakteri  terhadap Vibrio  parahaemolyticus .  Aktivitas  ekstrak  plasma  belangkas Tachypleus  gigas dari  perairan  Desa  Junganyar,  Socah  pada  pengukuran  pertama  (1  x  24  jam) memperoleh nilai terendah pada konsentrasi 20% (1:5) sebesar 0.4 ± 0.14 mm dan tertinggi pada konsentrasi 0,05 % (1:20) sebesar 0.83 ± 0.33 mm dengan kontrol positif sebesar 25 ± 0.28 mm. Aktivitas  ekstrak  plasma  belangkas Tachypleus  gigas pada  pengukuran  kedua  (2  x  24  jam) memperoleh nilai terendah pada konsentrasi 100 % (0) sebesar 0.4 ± 0. 11 mm dan tertinggi pada konsentrasi 0,05 % (1:20) sebesar 1.1 ± 0.33 mm dengan kontrol positif sebesar 24.9 ± 0.93mm. Aktivitas  ekstrak  plasma  belangkas Tachypleus  gigas pada  pengukuran  ketiga  (3  x  24  jam) memperoleh nilai terendah pada konsentrasi 20 % (1:5) sebesar 0.47 ± 0.09mm dan tertinggi pada konsentrasi 0,05 % (1:20) sebesar 0.75±0.24 mm dengan kontrol positif sebesar 23.4 ± 0.26 mm.
Tabel  2  menunjukkan  hasil  bahwa  perlakuan  empat  konsentrasi  ekstrak  plasma  belangkas Tachypleus  gigas memiliki  pengaruh  antibakteri  terhadap Vibrio  parahaemolyticus .  kemampuan daya hambat yang dihasilkan oleh ekstrak plasma Tachypleus gigas dari perairan Tambak Wedi, Surabaya  berbeda  pada  setiap  konsentrasi  dalam  3  pengulangan  terhadap  bakteri Vibrio parahaemolyticus .  Aktivitas  ekstrak  plasma  belangkas Tachypleus  gigas dari  perairan  Tambak Wedi,  Surabaya  pada  pengukuran  pertama  (1  x  24  jam)  memperoleh  nilai  terendah  pada konsentrasi  20%  (1  :  5)  sebesar  0.72  ±  0.22  mm  dan  tertinggi  pada  konsentrasi  0,05  %  (1:20) sebesar  1.12  ±  0.18  mm  dengan  kontrol  positif  sebesar  21.67  ±  1.54  mm  .    Aktivitas  ekstrak plasma  belangkas Tachypleus  gigas pada  pengukuran  kedua  (2  x  24  jam)  memperoleh  nilai terendah pada konsentrasi 100 % (0) sebesar 0.92 ± 0.21 mm dan tertinggi pada konsentrasi 50 % (1:2)  sebesar  1.05  ±0.04  mm  dengan  kontrol  positif  sebesar  21.75±1.25  mm.  Aktivitas  ekstrak plasma belangkas Tachypleus gigas pada pengukuran ketiga (3 x 24 jam) memperoleh nilai
Tabel 1. Hasil  Perhitungan  Daya  Hambat  ekstrak  plasma  belangkas Tachypleus  gigas dari  Desa Junganyar, Socah. Selama 3 waktu pengamatan
Tabel 2. Hasil  Perhitungan  Daya  Hambat  ekstrak  plasma  belangkas Tachypleus  gigas dari Tambak Wedi, Surabaya. Selama 3 waktu pengamatan
Perlakuan (%) Diameter Zona Hambat (mm) 24 Jam Kategori 48 Jam Kategori 72 Jam Kategori 100% (0) 0.75 ± 0.17 Lemah 0.92 ± 0.21 Lemah 0.53±0.14 Lemah 50% (1:2) 0.72 ± 0.22 Lemah 1.05±0.04 Lemah 0.65±0.23 Lemah 20% (1:5) 0.83 ± 0.97 Lemah 0.97±0.14 Lemah 0.67±0.22 Lemah 0,05% (1:20) 1.12 ± 0.18 Lemah 1.47 ± 0.38 Lemah 1.03±0.32 Lemah K+ 21.67± 1.54 Sangat Kuat 21.75±1.25 Sangat Kuat 18.68±1.96 Kuat K- 0 ± 0 - 0 ± 0 - 0 ± 0 - K- 0 0 ± 0 - 0 ± 0 - 0 ± 0 -
Gambar 2. Ekstrak Plasma Tachypleus gigas
terendah pada konsentrasi 100 % (0) sebesar 0.53±0.14 mm dan tertinggi pada konsentrasi 0,05 %  (1:20) sebesar 1.03 ± 0.32 mm dengan kontrol positif sebesar 18.68 ± 1.96 mm. Berdasarkan
Perlakuan (%) Diameter Zona Hambat (mm) 24 Jam Kategori 48 Jam Kategori 72 Jam Kategori 100 % (0) 0.63 ± 0.09 Lemah 0.4 ± 0.11 Lemah 0.35±0.11 Lemah 50 % (1:2) 0.55 ± 0.11 Lemah 0.77±0.45 Lemah 0.58±0.08 Lemah 20 % (1:5) 0.4 ± 0.14 Lemah 0.45±0.16 Lemah 0.47±0.09 Lemah 0,05 % (1:20)  0.83 ± 0.33 Lemah 1.1 ± 0.33 Lemah 0.75±0.24 Lemah + 25 ± 0.28 Sangat Kuat 24.9±0.93 Sangat Kuat 23.4±0.26 Sangat Kuat K- 0 ± 0 - 0 ± 0 - 0 ± 0 - K- 0 0 ± 0 - 0 ± 0 - 0 ± 0 -
kategori  hambatan  bakteri  menurut Magani et  al., (2020) apabila  diameter  zona  hambat  yang terbentuk  lebih  besar  dari  20  mm  maka  kategori  daya  antibakteri  adalah  sangat  kuat,  apabila diameter  zona  hambat  yang  terbentuk  sebesar  11-20  mm  termasuk  kategori  daya  antibakterinya adalah kuat, sedangkan jika diameter zona hambat yang terbentuk sekitar 5-10 mm maka kategori daya antibakterinya adalah sedang, dan jika diameter zona hambatnya lebih kecil dari 5 mm maka kategori antibakterinya adalah lemah.
Analisis statistik sebagai pengujian data dilaksanakan dengan uji Kruskal wallis dan Uji Mann Whitney  sebagai  alternatif  dari  Uji  Anova  yang  beberapa  persyaratannya  tidak  terpenuhi  dimana data tidak terdistribusi dengan normal dan nilai signifikansi lebih dari 0.05 (Quraisy dan Setiawan, 2021).  Pengujian  Kruskal  wallis  dan  Uji  Mann  Whitney  ditujukan  untuk  mengetahui  adanya perbedaan  nyata  antara  3  waktu  pengamatan  dengan  perbedaan  zona  hambat  yang  dihasilkan oleh ekstrak plasma belangkas Tachypleus gigas dari dua lokasi yang berbeda yang tertera pada tujuan  ke  2  dalam  penelitian.  Hasil  yang  didapatkan  berdasarkan  3  waktu  pengamatan menunjukkan  adanya  perbedaan  pada  zona  bening  yang  dihasilkan  ekstrak  plasma  belangkas Tachypleus gigas dari dua lokasi yang berbeda. Perbedaan tersebut dapat diamati pada hasil nilai Asymp.sig yang ditampilkan pada Tabel 3.
Berdasarkan  hasil  Uji  Kruskal  Wallis  sampel  ekstrak  plasma  belangkas Tachypleus  gigas dari  perairan  Desa  Junganyar,  Socah  pada  tabel  3  diperoleh  nilai  signifikansi  pada  waktu pengamatan  24  Jam  sebesar  0,05  ≤  0,05  sama  dengan  tolak  H0  yang  menunjukkan  terdapat perbedaan  nyata  diameter  zona  bening  dari  empat  perlakuan  ekstrak  plasma  belangkas Tachypleus  gigas. Pada  waktu  pengamatan  48  jam  menghasilkan  nilai  signifikansi  uji  Kruskal Wallis sebesar 0.049 < 0.05 sama dengan tolak H0 yang menunjukkan terdapat perbedaan nyata diameter  zona  bening  dari  empat  perlakuan  ekstrak  plasma  belangkas Tachypleus  gigas. Pada waktu pengamatan 72 jam menunjukkan nilai signifikansi sebesar 0.036 < 0.05 sama dengan tolak H0  yang  menunjukkan  terdapat  perbedaan  nyata  diameter  zona  bening  dari  empat  perlakuan ekstrak plasma belangkas.
Berdasarkan  hasil  Uji  Kruskal  Wallis  sampel  ekstrak  plasma  belangkas Tachypleus  gigas dari  perairan  Kelurahan  Tambak  Wedi,  Surabaya  pada  tabel  4  diperoleh  nilai  signifikansi  pada waktu  pengamatan  24  Jam  sebesar  0,044  <  0,05  sama  dengan  tolak  H0  yang  menunjukkan terdapat perbedaan nyata diameter zona bening dari empat perlakuan ekstrak plasma belangkas Tachypleus  gigas. Pada  waktu  pengamatan  48  jam  menghasilkan  nilai  signifikansi  uji  Kruskal Wallis sebesar 0.075 > 0.05 sama dengan terima H0 yang menunjukkan tidak terdapat perbedaan nyata  diameter  zona  bening  dari  empat  perlakuan  ekstrak  plasma  belangkas Tachypleus  gigas. Pada  waktu  pengamatan  72  jam  menunjukkan  nilai  signifikansi  sebesar  0.068  >  0.05  sama dengan  terima  H0  yang menunjukkan  tidak terdapat  perbedaan  nyata  diameter  zona  bening  dari empat  perlakuan  ekstrak  plasma  belangkas Tachypleus  gigas .  Hasil  yang  didapatkan  kemudian dianalisa  lebih  lanjut  dengan  uji  Mann-Whitney  untuk  mengetahui  adanya  perbedaan  nyata kemampuan daya hambat ekstrak plasma belangkas dari kedua stasiun yang berbeda.
Berdasarkan hasil pengujian Mann-Whitney yang tertera pada  Tabel 4. pengamatan 2 x 24 jam  menunjukkan  bahwa  pada  konsentrasi  0,05%  (1:20)  dan  kontrol  positif  ekstrak  plasma belangkas  Tachypleus  gigas  dari  perairan  Desa  Junganyar,  Socah  dan  Kelurahan  Tambak Wedi,Surabaya menunjukkan bahwa nilai sig (2- tailed) 0,050 ≤ 0,05 sama dengan Tolak H0, yang artinya terdapat perbedaan diameter zona bening yang dihasilkan pada ekstrak plasma belangkas Tachypleus  gigas.  Berdasarkan  pengujian  Mann-Whitney  diatas  dapat  disimpulkan  bahwa konsentrasi  ekstrak  plasma  belangkas Tachypleus  gigas terbaik  yang  dapat  menghambat pertumbuhan  bakteri  Vibrio  parahaemolyticus  ada  pada  konsentrasi  0,05%  (1  ml  plasma  :  20  ml pelarut) dari perairan Tambak Wedi, Kecamatan Kenjeran, Surabaya (stasiun 2) dikarenakan pada keempat perlakuan dan kontrol positif dari 3 waktu pengamatan menunjukkan hasil zona hambat yang  lebih  besar  dibandingkan  dengan  ekstrak  plasma  belangkas  dari  perairan  Desa  Junganyar, Kecamatan Socah, Bangkalan (stasiun 1).
Menurut Suwandi et al . (2020) ekstrak Tachypleus gigas memiliki komponen bioaktif seperti alkaloid, saponin, flavonoid, triterpenoid, phenolic dan steroid. Senyawa bioaktif tersebut diketahui memiliki  aktivitas  antioksidan  dimana  semakin  kecil  konsentrasi  larutan  sampel  yang  diperlukan

## Journal of Marine Research
Vol 13, No. 3 Agustus 2024, pp. 476-484
untuk menghambat 50% radikal bebas maka antioksidan tersebut semakin kuat dalam menangkal radikal bebas. Berdasarkan penelitian yang dilaksanakan oleh Nadzari (2014) menunjukkan bahwa ekstrak  kasar  plasma  Tachypleus  gigas  mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus dan Eschherichia  coli .  Pengujian  dengan  kedua  isolat  bakteri  tersebut menghasilkan  sedikit  aktivitas  antibakteri  ditandai  dengan  terbentuknya sedikit  zona  bening  pada cakram berisi ekstrak kasar  plasma Tachypleus gigas , hal ini disebabkan oleh adanya hambatan dalam mengontrol pertumbuhan sel bakteri akibat senyawa antibakteri yang diekstrak masih dalam bentuk kasar dan tidak spesifik.
Senyawa  bioaktif  seperti  flavonoid  mengandung  fenol  dimana  fenol  merupakan  salah  satu alkohol  yang  memiliki  sifat  asam  dengan  kemampuan  mendenaturasi  proten,  kemampuan  ini dapat  merusak  membran  sel  khususnya  dalam  aktivitas  antioksidan  Flavonoid  dapat  menjadi antibakteri dengan merusak dinding sel bakteri yang dapat merusak membran sel bakteri sehingga mengganggu transport nutrisi dan dapat menyebabkan kerusakan atau kematian sel (Yulneriwarni et  al .,  2016).  Syeikh  et.  al.  (2021)  mengemukakan  dalam  penelitiannya  belangkas Tachypleus gigas liar yang sehat memiliki densitas sel amebosit berkisar antara 2-6 x 10 7 sel/mL, hal tersebut dapat dipengaruhi oleh ukuran dan usia Tachypleus gigas. Kuantitas sel amebosit dalam plasma Tachypleus gigas juga dipengaruhi oleh produksi hemolimpf dalam sel, produksi hemolimpf dapat terganggu  apabila  terjadi  infeksi  penyakit  akibat Cyanobacteria ,  jamur,  bakteri  gram  positif  & negatif  sehingga  dapat  mempengaruhi  kualitas  sel  amebosit  belangkas  dalam  perannya  sebagai antibodi hewan tersebut.
Tabel 3. Hasil  Uji  Kruskal  Wallis  ekstrak  plasma  belangkas Tachypleus  gigas dari  perairan  Desa Junganyar, Socah
Stasiun Nilai Asymp. sig 24 Jam Kategori 48 Jam Kategori 72 Jam Kategori Stasiun 1 0.050 Berbeda Nyata 0.049 Berbeda Nyata 0.036 Berbeda Nyata Stasiun 2 0.044 Berbeda Nyata 0.075 Tidak berbeda nyata 0.068 Tidak berbeda nyata
Tabel 4. Hasil  Uji  Mann  Whitney  Ekstrak  Plasma  Belangkas Tachypleus  gigas Stasiun  1  dan Stasiun 2
Perlakuan (%) Nilai Sig (2-tailed) Uji Mann-Whitney 24 Jam Kategori 48 Jam Kategori 72 Jam Kategori 100% (0) 0.369 Tidak berbeda nyata 0.077 Tidak berbeda nyata 0.127 Tidak berbeda nyata 50% (1:2) 0.275 Tidak berbeda nyata 0.513 Tidak berbeda nyata 0.658 Tidak berbeda nyata 20% (1:5) 0.121 Tidak berbeda nyata 0.050 Berbeda Nyata 0.246 Tidak berbeda nyata 0,05% (1:20) 0.376 Tidak berbeda nyata 0.275 Tidak berbeda nyata 0.275 Tidak berbeda nyata K+ 0.046 Berbeda Nyata 0.050 Berbeda Nyata 0.050 Berbeda Nyata

## KESIMPULAN
Ekstrak  plasma  belangkas Tachypleus  gigas yang  diperoleh  dari  perairan  Tambak  Wedi, Surabaya  menunjukkan  aktivitas  zona  hambat  terhadap  pertumbuhan  Bakteri Vibrio parahaemolyticus yang lebih efektif dikarenakan pada keempat perlakuan dan kontrol positif pada 3  waktu  pengamatan  menunjukkan  hasil  zona  bening  yang  lebih  besar  dibandingkan  dengan ekstrak  plasma  belangkas Tachypleus  gigas dari  perairan  Desa  Junganyar,  Socah.  Konsentrasi terbaik dari Ekstrak plasma belangkas Tachypleus gigas . untuk menghambat pertumbuhan Bakteri Vibrio  parahaemolyticus adalah  pada  konsentrasi  1  :  20  ml  untuk  ekstrak  belangkas Tachypleus gigas dari perairan Desa Junganyar, Socah dan konsentrasi 1 : 20 ml dari perairan Tambak Wedi, Surabaya  dikarenakan  menghasilkan  zona  hambat  tetapi  masih  dikategorikan  ke  dalam  aktivitas penghambatan lemah. Penelitian lebih lanjut disarankan untuk melakukan proses ekstraksi plasma hingga dalam fase murni agar mendapatkan kisaran zona hambat yang lebih bagus.

## DAFTAR PUSTAKA
Asih,  E.N.N.,  Kawaroe,  M.,  &  Bengen,  D.G.,  2018.  Biomaterial  compounds  and  bioactivity  of horseshoe crab Carsinoscorpius rotundicauda biomass harvested from the Madura Strait. IOP Conference  Series:  Earth  and  Environmental  Science ,  141(1):p.012004.  DOI:  10.1088/1755- 1315/141/1/012004
Ayini, U., Siti, H.B., & Titis, C.D., 2014. Efek Antibakteri Ekstrak Daun Mimba ( Azadirachta indica A. Juss ) terhadap Bakteri Vibrio algynoliticus secara In Vitro. Biosaintifika, 6(1):67-78. Feliatra.,  Zainuri.,  &  Dessy,  Y.,  2014.  Pathogenitas  Bakteri Vibrio  sp terhadap  Udang  Windu ( Penaeus Monodon ). Jurnal Sungkai , 2(1):23-33.
Kasturi, M.M.M., Kamaruding, N.A., & Ismail, N., 2021. Characterization of  Purified Tachystatin- A2  Isolated  From  Amoebocytes  of  Asian  Horseshoe  Crab,  Tachypleus  Gigas  as  Potential Antibacterial Peptide. Applied Biochemistry and Microbiology , 57(3):311-318.  DOI: 10.1134/ S0003683821030054
Leschen,  A.S.,  &  Correia,  S.J.,  2010.  Mortality  in  Female  Horseshoe  Crabs  ( Limulus polyphemus )  from  Biomedical  Bleeding  and  Handling  Implications  for  Fisheries Management. Marine  and  Freshwater  Behaviour  and  Physiology ,  43(2):135-147. DOI:10.1080/10236241003786873
Magani,  S.K.,  Mupparthi,  S.D.,  Gollapalli,  B.P.,  Shukla,  D.,  Tiwari,  A.K.,  Gorantala,  J.,  & Tantravahi,  S.,  2020.  Salidroside-can  it  be  a  multifunctional  drug? Current  Drug Metabolism , 21(7):512-524. DOI:10.2174/1389200221666200610172105
Muljono,  P.,  &  Manampiring,  A.E.,  2016.  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Daun  Mayana  Jantan ( Coleus  atropurpure  Benth )  terhadap  Pertumbuhan  Bakteri Streptococcus Sp.  dan Pseudomonas sp. eBiomedik , 4(1):165- 172. DOI:10.35790/ebm.4.1.2016.10860 Nadzari,  M.F.M.,  2014.  Characterization  of  crude  extracts  from  horseshoe  crabs Tachypleus gigas and Carcinoscorpius  rotundicauda in  Malaysia.  Terengganu:  Universiti  Malaysia Terengganu.
Nurisman,  E.,  Syaiful,  S.,  Faizal,  M.,  &  Estunigsih,  S.P.,  2020.  Studi  eksperimental  uji  potensi isolat  bakteri  petrofilik  dalam  menurunkan  kadar  amoniak  pada  air  limbah. Applicable Innovation of Engineering and Science Research, pp. 511-519.
Pertiwi,  R.D.,  Kristanto, J.,  &  Praptiwi, G.A.,  2016.  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Formulasi Gel  Untuk Sariawan dari Ekstrak Daun Saga ( Abrus precatorius Linn.) terhadap Bakteri Staphylococcus aureus. Jurnal Ilmiah Manuntung , 2(2):239-247. DOI:10.51352/jim.v2i2.72 Quraisy,  A.,  &  Madya,  S.,  2021.  Analisis  Nonparametrik  Mann  Whitney  Terhadap  Perbedaan Kemampuan  Pemecahan  Masalah  Menggunakan  Model  Pembelajaran  Problem  Based Learning. Journal  of  Statistics  and  Its  Application  On  Teaching  And  Research ,  3(1):51 –57. DOI:10.35580/Variansiunm23810 Saragih, N.S., Sukiyono, K., & Cahyadinata, I., 2015. Analisis Resiko Produksi Dan Pendapatan Budidaya  Tambak  Udang  Rakyat  di  Kelurahan  Labuhan  Deli,  Kecamatan  Medan   Marelan,
Kota  Medan. Jurnal  AGRISEP  Kajian  Masalah  Sosial  Ekonomi  Pertanian  dan Agribisnis, 14(1): 39-52. DOI:10.31186/jagrisep.14.1.39-52 Soebandriyo,  S.,  2015.  Analisis  Produksi  Perikanan  Laut,  Budidaya  Laut,  Tambak,  Dan  Kolam, Perikanan  Tangkap  Di  Kabupaten  Rembang. Jurnal  Litbang  Provinsi  Jawa  Tengah , 13(1): 25-43.
Suryana,  A.,  Asih,  E.N.N.,  &  Insafitri,  I.,  2023.  Fenomena  Infeksi  Acute  Hepatopancreatic Necrosis  Disease  pada  Budidaya  Udang  Vaname  di  Kabupaten  Bangkalan. Journal  of Marine Research , 12(2):212-220.
Suwandi,  R.,  Ula,  M.Z.,  &  Pertiwi,  R.M.,  2020.  Characteristics  of  chemical  compounds  of horseshoe  crabs Tachypleus  gigas in  different  body  proportions. IOP  Conference  Series: Earth and Environmental Science , 404(1): p.012029. DOI:10.1088/1755-1315/404/1/012029 Sheikh,  H.I.,  John,  B.A.,  Ichwan,  S.J.,  &  Kamaruzzaaman,  B.Y.  2021.  Effect  of  prolonged captivity  on  the  hemolymph  profile  of  Tachypleus  gigas  using  the  various  anticoagulant formulations. Aquaculture Reports , 20: p.100760.