Penulis Waras Nurcholis 1,2* , Fachrur Rizal Mahendra 1 , Milanda Fiorella Gultom 1 , Safira Khoirunnisa 1 , Mayang Anggita Cahya Kurnia 1 , Hamdan Hafizh Harahap 1
Afiliasi 1 Departemen Biokimia, Fakultas Matematika dan  Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor, Kampus IPB Dramaga, Jl. Kamper, Babakan, Kec. Dramaga, Kabupaten Bogor, Jawa Barat 16680 2 Pusat  Studi  Biofarmaka  Tropika,  Lembaga  Penelitan  dan  Pengabdia  kepada  Masyarakat.,  Institut Pertanian  Bogor,  Kampus  IPB  Taman  Kencana,  Jl.  Taman  Kencana  No.3,  RT.03/RW.03,  Babakan, Kecamatan Bogor Tengah, Kota Bogor, Jawa Barat 16128
Kata Kunci
 fenotipe ungu
 fenotipe putih
 kumis kucing
 tanaman obat
 senyawa bioaktif
Keywords  purple phenotype
 white phenotype
 cat's whiskers
 medical plants
 bioactive compounds
Diterima 21 Desember 2022 Direvisi 29 Desember 2022
Disetujui 30 Desember 2022
*Penulis Koresponding Waras Nurcholi s email: wnurcholis@apps.ipb.ac.id

## ABSTRAK
Kumis kucing ( Orthosiphon stamineus ) merupakan salah satu tanaman obat yang dapat mengobati berbagai penyakit. Tanaman ini telah diketahui memiliki beberapa kandungan zat aktif seperti polifenol, alkaloid, dan terpenoid yang memiliki aktivitas antioksidan,  antibakteri,  antivirus,  anti  radang,  anti  alergi,  dan  anti  kanker. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  kandungan  fitokimia,  aktivitas antioksidan, serta aktivitas antibakteri pada ekstrak daun kumis kucing. Ekstrak daun kumis  kucing  diperoleh  dengan  metode  sonikasi-maserasi.  Uji  aktivitas  antioksidan ekstrak  daun  kumis  kucing  dilakukan  dengan  metode  CUPRAC  dan  ABTS.  Hasil penelitian  menunjukkan  ekstrak  daun  kumis  kucing  mengandung  senyawa  bioaktif flavonoid,  fenol  hidrokuinon,  saponin,  tanin,  serta  triterpenoid.  Rata-rata  aktivitas antioksidan  tertinggi  dihasilkan  oleh  ekstrak  daun  kumis  kucing  fenotipe  ungu dengan metode ABTS yaitu senilai 151,23 µmol TE/g bobot kering. Rata-rata aktivitas antibakteri  strain Escherichia  coli tertinggi  diperoleh  ekstrak  daun  kumis  kucing fenotipe ungu dengan diameter zona hambat 2.3 mm

## ABSTRACT
Cat’s  whiskers (Orthosiphon  stamineus)  are  a  medicinal  plant  that  can  treat various  diseases. Cat’s  whiskers have  been  known  to  contain  bioactive  compounds, namely  polyphenol,  alkaloid,  and  terpenoid  which  have  antioxidant,  antibacterial, antiviral, anti-inflammatory, anti-allergic,  and anti-cancer  activities. This study aims to  determine  the  phytochemical  content,  antioxidant  activity,  and  antibacterial activity of the cat's whiskers leaf extract. Cat’s whiskers leaf extract was obtained by the  sonication-maceration  method.  Antioxidant  activity  test  of cat’s  whiskers leaf extract was tested using the CUPRAC and ABTS methods. The results showed that the cat’s whiskers leaf extract contains bioactive compounds of polyphenol, alkaloid, and terpenoid.  The  highest  average  antioxidant  activity  was  produced  by  the  purple phenotype cat’s whiskers leaf extract using the ABTS method, which was 168.68 µg TE/g  dry weight. The highest average antibacterial  activity in  Escherichia coli  strain was  obtained  from  leaf  extract  of  purple  phenotype cat’s  whiskers (U2)  with  an inhibition zone diameter of 3.2 mm.

## Skrining Fitokimia, Antioksidan, dan Antibakteri Ekstrak Daun Orthosiphon stamineus

## Dua Fenotipe
Phytochemical, Antioxidant and Antibacterial Screening of Orthosiphon stamineus Leaf Extract Two Phenotypes

## PENDAHULUAN
Tanaman  obat  sudah  dikenal  sejak  dimulainya peradaban  dan  digunakan  sebagai  pengobatan tradisional (Sudrajat 2016). Indonesia sendiri merupakan  negara  yang  kaya  akan  sumber  daya alamnya,  khususnya  memiliki  varietas  tanaman  obat yang  sangat  berlimpah.  Hal  ini  tentunya  sangat berpotensi  dalam  penemuan  kandidat  obat  baru  yang bersumber  dari  tanaman  obat  (Listyana et  al. 2022). Tanaman  obat  dapat  diartikan  sebagai  jenis  tanaman yang  berfungsi  ataupun  berkhasiat  sebagai  obat  dan digunakan  untuk  penyembuhan  ataupun  pencegahan berbagai  macam  penyakit  (Sarno  2019).  Khasiat  pada tanaman  obat  disebabkan  oleh  adanya  kandungan senyawa  aktif  berupa  metabolit  sekunder,  seperti senyawa  alkaloid,  terpenoid,  flavonoid,  tanin,  dan steroid  (Dacosta et  al. 2017).  Tanaman  menggunakan senyawa  metabolit  sekunder  sebagai  pertahanan  diri terhadap lingkungan, hama, maupun penyakit (Julianto 2019).
Salah  satu  tanaman  di  Indonesia  yang  dapat dimanfaatkan  sebagai  tanaman  obat  adalah  kumis kucing  ( Orthosiphon  stamineus ).  Kumis  kucing  dapat dimanfaatkan  untuk  mengobati  penyakit  TBC,  maag, sakit kuning, dan susah buang air kecil (Syamsiah et al. 2016). Tanaman yang masuk ke dalam famili Lamiaceae atau  Labiatae  ini    memiliki  tinggi  mencapai  dua  meter dengan  daun  yang  berbentuk  bulat  telur  lonjong ataupun  belah  ketupat  (Rizal  dan  Sustriana  2019). Berdasarkan  dari  fenotipe  warna  bunga Orthosiphon stamineus diklasifikasikan  menjadi  dua  varietas:  yaitu bunga  berwarna  putih  (varietas  putih)  dan  bunga berwarna ungu (varietas ungu). Varietas ungu memiliki lebih  banyak  senyawa  bioaktif  daripada  varietas  putih (Ameer et  al. 2012).  Tanaman  ini  telah  diketahui memiliki beberapa kandungan zat  aktif yaitu  polifenol, saponin,  hingga  terpenoid  yang  memiliki  efek nefroprotektif  (Tandi et  al. 2017).  Menurut  beberapa penelitian,  kandungan  flavonoid  dalam  bahan  alam memiliki  aktivitas  antioksidan,  antibakteri,  antivirus, anti  radang,  anti  alergi,  dan  anti  kanker  (Sari  dan Hastuti 2020).
Penelitian  ini  meliputi  uji  aktivitas  antioksidan,  uji fitokimia,  dan  uji  antibakteri  pada  ekstrak  daun  kumis kucing  dengan  fenotipe  putih  dan  ungu.  Uji  aktivitas antioksidan yang dilakukan meliputi uji ABTS yaitu 2,2- azinobis-3-Ethylbenzothiazoline-6-Sulfonic  Acid dan Cupric  Ion  Reducing  Antioxidant (CUPRAC).  Uji kelompok  senyawa  fitokimia  dilakukan  dengan menggunakan  metode  kualitatif  dalam  skrining metabolit  golongan  polifenol  (fenolik,  flavonoid,  dan
tanin),  alkaloid,  dan  terpenoid  (steroid).  Selain  itu,  uji antibakteri menggunakan strain bakteri negatif seperti E.  Coli untuk  menentukan  potensi  ekstrak  daun  kumis kucing dalam aktivitas antibakteri.

## METODE

## Alat dan Bahan
Daun  kumis  kucing  diperoleh  dari  Koleksi  Kebun Pusat Penelitian Biofarmaka Tropika, Institut Pertanian Bogor,  Jawa  Barat,  Indonesia  (6°32′25.47″  LU, 106°42′53.22″ BT,  142,60  meter  di  atas  permukaan laut. Daun kumis kucing dideterminasi di Laboratorium Biokimia  Fakultas  Ilmu  Pengetahuan  Alam  Institut Pertanian Bogor.  Alat-alat yang digunakan berupa alat- alat  gelas  dan  kaca,  vakum,  sonikator,  penangas  air, waterbath  shaker, oven , penyaring  serbuk  80  Mesh , neraca analitik , rotary evaporator , kertas saring, pipet, mikropipet, microplate  96  well (Biologix),  dan spektrofotometer  nano  (SPECTROstarNano  BMG LABTECH).
Adapun  bahan  yang  dibutuhkan  yaitu  daun  kumis kucing  dua  fenotipe  (ungu  dan  putih),  etanol  96%, kloroform  (Merck),    NH 4 OH  (Merck),  H 2 SO 4 (Merck), reagen Mayer (HgCl 2 Fisher, KI Merck), reagen Wagner (KI Merck, Iodin), reagen Dragendorff (fisher), FeCl 3 5%, serbuk  Mg  (SRL),  HCN  2N  (SRL),  amilalkohol  (Merck), FeCl 3 (SRL),  reagen  Liebermann-Burchard  (H2SO4 Merck,  Asam  Asetat  anhidrat  Merck),  reagen  ABTS (SRL),  akuabides,  kalium  persulfat  (SRL),  CuCl 2 (SRL), neukoprin (SRL), buffer amonium asetat pH 7 (Merck), dan media TSA (Merck).

## Ekstraksi Daun Kumis Kucing (Sonikasi-Maserasi)
Sebanyak  5  gram  simplisia  daun Orthosiphon aristatus (fenotipe ungu dan putih) dilarutkan dalam 50 mL  pelarut  etanol  96%  (1:10).  Setelah  larut,  sampel dihomogenisasi  menggunakan  sonikator  selama  30 menit  yang  dilanjutkan  dengan  maserasi  pada  suhu 30°C  selama  24  jam  menggunakan waterbath  shaker . Maserat  disaring  menggunakan  vakum  dan  digunakan dalam pengujian fitokimia. Hasil penyaringan dipekatkan  kembali  menggunakan rotary  evaporator untuk pengujian aktivitas antibakteri.

## Uji Alkaloid
Sebanyak 1  mL  filtrat  ditambahkan  5 mL  kloroform dan  2  tetes  amonium  hidroksida  (NH 4 OH)  kemudian dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi  bertutup.  Ekstrak kloroform  dalam  tabung  reaksi  dikocok  dengan  6  mL H 2 SO 4 (2  M)  dan lapisan asamnya dipisahkan ke dalam tabung reaksi yang lain. Lapisan asam diteteskan pada
plat  porselen  dan  ditambahkan  pereaksi  Mayer, Wagner,  dan  Dragendorf  yang  akan  menimbulkan endapan warna berturut-turut putih, coklat, dan merah jingga.

## Uji Fenol Hidrokuinon
Sebanyak  1  mL  filtrat  cair  masing-masing ditambahkan  dengan  3  tetes  larutan  FeCl 3 5%.  Adanya perubahan warna menjadi ungu kehitaman menunjukkan adanya senyawa fenol.
Uji Flavonoid (Permadi et al. 2015)
Sebanyak  1  mL  filtrat  cair  masing-masing ditambahkan  dengan  serbuk  magnesium  dan  asam klorida  (2  N)  kemudian  dipanaskan,  ditambahkan  amil alkohol,  dan  dihomogenkan.  Hasil  positifnya  adalah tertariknya warna kuning-merah pada lapisan alkohol.
Uji Saponin (Permadi et al. 2015)
Sebanyak  1  mL  filtrat  cair  dimasukkan  ke  dalam tabung  reaksi,  ditambahkan  10  mL  air  panas, didinginkan,  dan  dihomogenkan  selama  10  detik. Kemudian  sebanyak  1  mL  sediaan  awal  ditambah dengan 10 mL air dan dihomogenkan selama 10 menit. Reaksi  positif  jika  terbentuk  buih  yang  stabil  selama tidak kurang dari 10 menit, setinggi 1 cm sampai 10 cm serta pada penambahan 1 tetes asam klorida 2 N buih tidak hilang.
Uji Tanin (Permadi et al. 2015)
Sebanyak  2  mL  filtrat  cair  dimasukkan  ke  dalam tabung  reaksi  kemudian  ditambahkan 3  tetes  pereaksi besi  (III)  klorida  (FeCl 3 ).  Reaksi  positif  ditunjukkan  jika larutan  berwarna  biru  atau  hitam  serta  ditambahkan gelatin  hingga  terbentuk  endapan  putih  untuk memastikan keberadaan tannin.
Uji Terpenoid dan Steroid (Fernandes et al . 2018) Identifikasi dilakukan dengan menggunakan campuran asam asetat  anhidrid dan asam sulfat pekat yang  biasa  dikenal  dengan  pereaksi  Liebermann- Burchard. Pengujian ini dilakukan dengan menambahkan sebanyak 10 tetes asam asetat anhidrid dan 2 tetes asam sulfat pekat ke dalam 1 ml sampel uji yang  telah  dilarutkan  dalam  aseton.  Selanjutnya sampel  uji  dikocok  dan  dibiarkan  beberapa  menit. Reaksi  yang  terjadi  diikuti  dengan  perubahan  warna, apabila  terlihat  warna  merah  dan  ungu  maka  uji dinyatakan  positif  untuk  triterpenoid  dan  apabila terlihat  warna  hijau  dan  biru  maka  uji  dinyatakan positif adanya steroid.

## Uji Aktivitas Antioksidan Metode ABTS
Uji  aktivitas  antioksidan  metode  ABTS  dimulai dengan  pembuatan  larutan  ABTS  yang  terdiri  dari  90 mg  ABTS  dan  akuabides  yang  ditakar  hingga  25  mL. Larutan  ABTS  kemudian  ditampung  di  botol  gelap, dibungkus aluminum foil, dan dimasukkan pada lemari pendingin.  Pembuatan  kalium  persulfat  dilakukan dengan  melarutkan  66,289  mg  K 2 S 2 O 8 pada  akuabides hingga  100  mL  (K 2 S 2 O 8 2,4  mM).  Larutan  ABTS  dan kalium  persulfat  kemudian  ditampung  di  botol  gelap, dibungkus aluminum foil, dan dimasukkan pada lemari pendingin.  Langkah  selanjutnya  yaitu  pembuatan reagen  ABTS  dengan  mencampurkan  ABTS  7  mM  dan K 2 S 2 O 8 2,4  mM  dengan  perbandingan  2:1,  setelah  itu dilakukan variasi  penambahan akuabides agar mencapai  absorbansi  sebesar  0,7 ±  0,02  pada  panjang gelombang 734 nm.
Pengujian  sampel  dengan  metode  ABTS  dilakukan dengan menambahkan sebanyak 20 μL sampel dengan 280 μL reagen ABTS, kemudian diinkubasi 6 menit pada ruang  gelap  dan  suhu  ruang.  Hasil  inkubasi  kemudian diukur  dengan  panjang  gelombang  734  nm  dan dinyatakan  dalam  μmol  TE/g  bobot kering.  Standar yang  digunakan  adalah  Trolox  dengan  rentang konsentrasi  0- 350 μM .

## Uji Aktivitas Antioksidan Metode CUPRAC
Uji  aktivitas  antioksidan  metode  CUPRAC  dimulai dengan  menambahkan 50  μL sampel  dengan 50  μL CuCl 2 0,01  M,  50  μL  neokuproin  0.0075  M ,  dan 50  μL larutan buffer amonium asetat pH 7. Larutan kemudian diinkubasi 30 menit pada suhu ruang dan ruang gelap. Pengukuran  absorbansi  dilakukan  pada  panjang gelombang 450  nm  dan  dinyatakan  dalam  μmol  TE/g bobot  kering.  Standar  yang  digunakan  yaitu  Trolox dengan rentang konsentrasi 0- 800 μmol .

## Pengujian  Aktivitas  Antibakteri  Metode  Cakram Kertas
Sebanyak  12  gram  media  TSA  dilarutkan  ke  dalam 300 ml akuades dan dipanaskan, setelah larut dilakukan proses  autoklaf  selama  15  menit  pada  suhu  121 0 C, setelah itu dituang ke cawan petri sebanyak 15 ml lalu ditunggu hingga memadat dan bisa digunakan untuk uji selanjutnya.
Pengujian  aktivitas  antibakteri  dilakukan  dengan menggunakan  cakram  kertas  diameter  5,32  cm  yang berfungsi untuk menampung zat antimikroba. Sebanyak  50  µL  suspensi Escherichia  coli ditambahkan pada  media  TSA  yang  telah  memadat  dalam  cawan petri.  Kertas  cakram  ditambahkan  10  µL  larutan
berbagai  perlakuan,  yaitu  sampel  ekstrak  daun  kumis kucing  yang  telah  dilarutkan  dengan  aquades  hingga didapatkan  konsentrasi  10  ppm,  Ampicillin  1%  sebagai kontrol  positif,  dan  pelarut  aquades  sebagai  kontrol negatif.    Kemudian  kertas  cakram  diletakkan  pada media  pertumbuhan  yang  telah  diinokulasi  bakteri  uji. Media  pertumbuhan  bakteri  kemudian  diinkubasi selama  24  jam  pa da  suhu  37⁰C.  Uji  aktivitas  terhadap masing-masing  sampel  dilakukan  sebanyak  3  kali ulangan  (triplo). Kemudian diamati hasil inkubasi, area jernih  yang  terbentuk  di  sekeliling  cakram  diukur menggunakan  jangka  sorong  pengukuran  dilakukan secara  2  kali  ulangan.  Area  jernih  tersebut menunjukkan  daya  hambat  senyawa  yang  terkandung pada  sampel  ekstrak  terhadap  pertumbuhan  bakteri. Pengujian ini dilakukan di dalam laminar air flow pada kondisi steril.

## Analisis Data
Analisis  data  aktivitas  antioksidan  metode  CUPRAC dan ABTS dinyatakan sebagai nilai rata-rata dan standar error  (SE).  Hasilnya  dianalisis  dengan  menggunakan one-way  analysis  of  variance (ANOVA)  dengan menggunakan  software  SPSS.  Perbandingan  dilakukan untuk mendeteksi perbedaan yang signifikan (p <0,05) antara  nilai  rata-rata  yang  memiliki  lebih  dari  dua kelompok.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Analisis Fitokimia
Senyawa  fenolik  adalah  salah  satu  kelompok senyawa  terbesar  yang  memiliki  peran  sebagai antioksidan  alami  pada  tumbuhan  (Dhurhania  dan Novianto  2018).  Senyawa  ini  termasuk  ke  dalam golongan  metabolit  sekunder  polifenol  yang  berperan sebagai  antioksidan,  antikanker,  antiinflamasi,  dan sebagainya (Mahardani dan Yuanita 2021). Berdasarkan hasil  uji  terhadap  ekstrak  daun  kumis  kucing  fenotipe ungu  didapatkan  perubahan  warna  sampel  yang semula  hijau  muda  berubah  menjadi  hijau  kehitaman setelah  direaksikan  dengan  pereaksi  FeCl 3 .  Hal  ini disebabkan  karena  senyawa  fenolik  bereaksi  dengan FeCl 3 1%  dan  membentuk  warna  merah,  ungu,  biru, atau  hitam  yang  pekat  karena  FeCl 3 bereaksi  dengan gugus – OH  aromatis  (Haryati et  al. 2015).  Kompleks berwarna  yang  terbentuk  diduga  sebagai  besi  (III) heksafenolat.  Ion  Fe 3+ mengalami  hibridisasi  pada orbital d 2 sp 3 sehingga ion Fe 3+ memiliki 6 orbital kosong yang diisi oleh pendonor pasangan elektron, yaitu atom oksigen  pada  senyawa  fenolik  yang  memiliki  pasangan elektron bebas (Marliana dan Saleh 2011).
Flavonoid  merupakan  senyawa  yang  memiliki banyak  gugus – OH  dengan  adanya  perbedaan keelektronegatifan  yang  tinggi  sehingga  bersifat  polar (Ikalinus et  al. 2015).  Flavonoid  termasuk  salah  satu kelompok  senyawa  fenolik  yang  banyak  ditemukan  di dalam  jaringan  tanaman  dan  memiliki  peran  sebagai antioksidan.  Aktivitas  antioksidan  ini  berasal  dari kemampuan  flavonoid  dalam  mendonasikan  atom hidrogennya  atau  melalui  kemampuannya  mengkelat logam  (Marsella et  al. 2016).  Hasil  uji  fitokimia  yang telah  dilakukan  terhadap  ekstrak  daun  kumis  kucing fenotipe ungu dan putih menunjukkan hasil yang positif dengan munculnya warna kuning pada lapisan alkohol.
Saponin  merupakan  senyawa  glikosida  steroid  atau triterpenoid  ditemukan  dalam  berbagai  tanaman. Senyawa saponin banyak dimanfaatkan untuk kepentingan manusia karena saponin memiliki cakupan peran  yang  besar  seperti  antibakteri,  antifungi, kemampuan menurunkan kolesterol  dalam  darah,  dan menghambat  pertumbuhan  sel  tumor  (Yanuartono et al. 2017). Ekstrak daun kumis kucing fenotipe ungu dan putih  ketika  dilakukan  uji  saponin  menunjukkan  hasil positif  dengan  terbentuknya  busa  stabil  setelah didiamkan  10  menit  dan  direaksikan  dengan  HCl  2N. Saponin  merupakan  senyawa  bersifat  kompleks  dan memiliki  karakteristik  berupa  buih,  sehingga  ketika direaksikan  dengan  air  dan  dikocok  maka  akan terbentuk  buih  (Gunawan  2018).  Senyawa  saponin memiliki  glikosil  sebagai  gugus  polar  serta  gugus steroid  atau  triterpenoid  sebagai  gugus  nonpolar sehingga  saat  dikocok  dengan  air  permukaannya bersifat  aktif  dan  membentuk  misel.  Struktur  misel gugus nonpolar menghadap ke dalam sedangkan gugus polar  menghadap  ke  luar  dan  keadaan  inilah  yang tampak seperti buih atau busa (Habibi et al. 2018). Senyawa tanin merupakan salah satu senyawa aktif metabolit  sekunder  yang  memiliki  beberapa  khasiat, yaitu  sebagai  astringen,  antidiare,  antibakteri,  dan antioksidan  (Makatamba et  al. 2022).  Hasil  uji  tanin pada  ekstrak  daun  kumis  kucing  fenotipe  ungu  dan putih  menunjukkan  adanya  endapan  putih  setelah direaksikan  dengan  gelatin.  Endapan  yang  terbentuk disebabkan  karena  gelatin  merupakan  salah  satu  jenis protein  yang  mampu  diendapkan  oleh  tanin.  Endapan tersebut  terbentuk  karena  adanya  ikatan  hidrogen antara tanin dan protein pada gelatin. Ikatan hidrogen yang  terbentuk  disebabkan  oleh  atom  H  yang  terikat dengan 2 atom O ataupun terikat dengan atom O dan N  dari  struktur  tanin  dan gelatin  (Ikalinus et  al. 2015). Adanya  endapan  yang  terbentuk  menandakan  bahwa
terdapat kandungan senyawa tanin pada kedua sampel tanaman kumis kucing (Sari et al. 2015).
Alkaloid  merupakan  senyawa  fitokimia  yang jumlahnya  paling  banyak  dijumpai  pada  semua  bagian tumbuhan  dan  memiliki  cincin  heterosiklik    (Minarno 2015).    Alkaloid  berperan  sebagai  zat antispasmodic (meredakan kejang otot dengan menurunkan tegangan tinggi  jaringan  otot  polos  pada  saluran  pencernaan), antiinflamasi  serta  sebagai  antimikroba  (Surahmaida dan  Umarudin  2019).  Terdapat  3  pereaksi  yang digunakan  pada  uji  alkaloid,  yaitu  reagen  dragendorff, wagner,  dan  mayer.  Ekstrak  daun  kumis  kucing  baik fenotipe ungu maupun putih menunjukkan hasil positif pada tiap reagen.
Steroid  memiliki  peran  penting  dalam  fisiologi  dan biokimia  makhluk  hidup.  Steroid  memiliki  aktivitas farmakologis  seperti  merangsang  pertumbuhan  otot dan  mengurangi  massa  lemak,  obat  kontrasepsi, antikanker,  obat  penenang,  dan  anti-inflamasi  (Sultan dan  Raza  2015).  Hasil  positif  pada  uji  steroid  ditandai dengan terbentuknya warna hijau-biru ketika direaksikan  dengan  asetat-anhidrit  karena  adanya pembentukan  ikatan  rangkap  terkonjugasi  yang menyebabkan  reaksi  oksidasi  pada  golongan  steroid (Fajriaty et  al. 2018).  Berdasarkan  penelitian,  sampel ekstrak  daun  kumis  kucing  fenotipe  ungu  dan  putih
menunjukkan  hasil  negatif  dengan  tidak  terbentuk warna hijau-biru.
Triterpenoid merupakan senyawa metabolit sekunder turunan  terpenoid  yang  kerangka  karbonnya berasal  dari  enam  satuan  isoprena  (2-metilbuta-1,3- diene) yaitu kerangka karbon yang dibangun oleh enam satuan C5 dan diturunkan dari hidrokarbon C30 asiklik, yaitu  skualena  (Balafif et  al. 2013).  Triterpenoid memiliki  manfaat  dalam  meningkatkan  fungsi  mental dan  memberi  efek  menenangkan.  Senyawa  ini  juga berperan  dalam  merevitalisasi  pembuluh  darah sehingga memperlancar peredaran darah menuju otak (Sutardi  2016).  Uji  triterpenoid  ekstrak  daun  kumis kucing  menunjukkan  positif  terpenoid  dengan  adanya cincin  kecoklatan  pada  sampel  uji  baik  fenotipe  ungu maupun putih ( Tabel 1 ).

## Uji Aktivitas Antioksidan
Aktivitas antioksidan ekstrak daun kumis kucing diuji dengan metode ABTS 2,2-azinobis-3-
ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid dan cupric reducing antioxidant  capacity (CUPRAC).  Metode  ABTS  dipilih karena  waktu  yang  dibutuhkan  untuk  reaksi antioksidan  lebih  cepat  serta  dapat  mendeteksi senyawa  hipofilik  dan  lipofilik  (Jatmiko  dan  Mursiti 2021). Adapun metode CUPRAC dipilih pada penelitian

## Tabel 1. Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak Daun Kumis Kucing
No Skrining Fitokimia Pereaksi Perubahan Warna Hasil Uji Fenotipe Ungu Fenotipe Putih Fenotipe Ungu Fenotipe Putih 1. Fenol Hidrokuino n FeCl3 Hijau menjadi hijau kehitaman Hijau menjadi hijau kehitaman + + 2. Flavonoid HCl Hijau menjadi hijau kekuningan Hijau menjadi hijau kekuningan + + 3. Saponin Akuades, dipanaskan, dikocok, ditambah HCl 2N Timbul busa yang stabil Timbul busa yang stabil + + 4. Tanin FeCl3 Hijau menjadi hijau kehitaman Hijau menjadi hijau kehitaman + + 5. Alkaloid Meyer Hijau menjadi putih Hijau menjadi putih + + Wagner Hijau menjadi coklat Hijau menjadi coklat + + Dragendorf Hijau menjadi merah jingga Hijau menjadi merah jingga + + 6. Steroid Liebermann-Burchard (asam asetat anhidrat-H 2 SO 4 ) Hijau menjadi kecoklatan Hijau menjadi kecoklatan - - 7. Triterpenoi d Liebermann-Burchard (asam asetat anhidrat-H 2 SO 4 ) Terbentuk cincin kecoklatan Terbentuk cincin kecoklatan + +
ini  karena  reagen  CUPRAC  termasuk  dalam  reagen selektif  dengan  nilai  potensial  reduksi  rendah  serta lebih  stabil  (Maryam et  al. 2019).  Uji  aktivitas antioksidan  metode  ABTS  memiliki  mekanisme penangkapan  radikal  bebas  dengan  pemutusan  rantai reaksi  radikal  dengan  donor  radikal  hidrogen  secara cepat  (Azizah et  al. 2019).  Berdasarkan Gambar  1 . aktivitas  antioksidan  metode  ABTS  daun  kumis  kucing fenotipe  ungu  lebih  tinggi  dibandingkan  daun  kumis kucing  fenotipe  putih.  Hal  ini  menunjukkan  fenotipe ungu  dominan  dalam  transfer  atom  hidrogen.  Selain itu,  daun  kumis  kucing  fenotipe  ungu  juga  memiliki kandungan senyawa bioaktif lebih banyak (Ameer et al. 2012).
Uji aktivitas antioksidan CUPRAC bertujuan menguji daya reduksi oleh senyawa antioksidan melalui transfer elektron.  Reagen  yang  digunakan  adalah  bis (neokuproin) tembaga (II) (Cu(Nc) 2 2+ ) dengan kapasitas antioksidan  senilai  dengan  jumlah  total  tembaga  yang direduksi oleh antioksidan melalui mekanisme transfer elektron  (Awaluddin  dan  Wahyuningsih  2019). Berdasarkan Gambar  1 .  aktivitas  antioksidan  metode CUPRAC  pada  daun  kumis  kucing  fenotipe  putih  lebih tinggi  dibandingkan  pada  daun  kumis  kucing  fenotipe ungu.  Hal  ini  menunjukkan  fenotipe  putih  dominan dalam  transfer  elektron.  Hasil  pengujian  CUPRAC  juga dapat  digunakan  untuk  menguji  kapasitas  antioksidan senyawa  fenolik  (Awaluddin  dan  Wahyuningsih  2019). Dengan  demikian,  daun  kumis  kucing  fenotipe  putih memiliki kandungan senyawa fenolik lebih banyak.
Aktivitas  antioksidan  metode  ABTS  menunjukkan hasil lebih tinggi dibandingkan dengan metode CUPRAC ( Gambar  1 ).  Hal  ini  karena  sifat  hidrofilik  daun  kumis kucing  menghasilkan  kemampuan  perendaman  lebih baik terhadap metode ABTS (Istikharah 2015). Metode ABTS  juga  memberikan  absorbansi  yang  lebih  spesifik pada  panjang  gelombang  visible  (Jatmiko  dan  Mursiti 2021). Berdasarkan penelitian, terdapat pengaruh yang signifikan  antara  aktivitas  antioksidan  fenotipe  ungu dengan  fenotipe  putih.  Perolehan  rata-rata  aktivitas antioksidan  metode  ABTS  pada  fenotipe  putih  yaitu sebesar  127,89  (µmol  TE/g  DW),  sedangkan  pada fenotipe  ungu  yaitu  sebesar  151,23  (µmol  TE/g  DW). Perolehan  rata-rata  aktivitas  antioksidan  metode CUPRAC pada fenotipe putih yaitu sebesar 87,67 (µmol TE/g  DW),  sedangkan  pada  fenotipe  ungu  sebesar 82,89  (µmol  TE/g  DW).  Faktor  dari  perbedaan  hasil aktivitas  antioksidan  kedua  fenotipe  ini  dipengaruhi oleh sifat  dan  senyawa  bioaktif  yang  terkandung  serta mekanisme  transfer  atom  yang  dimiliki  oleh  setiap fenotipe.

## Aktivitas Antibakteri
Aktivitas  antibakteri  ekstrak  kumis  kucing  terhadap bakteri Escherichia  coli dilakukan  menggunakan  3 perlakuan  yang  terdiri  dari  konsentrasi  10.000  ppm untuk  masing-masing  ekstrak  daun  fenotipe  ungu  dan putih.  Kontrol  positif  yang  digunakan  yaitu  Ampicillin 1%  dan  kontrol  negatif  menggunakan  aquades. Pengujian  menggunakan  metode  cakram  kertas  untuk
Fe no tip e un gu Fe no tip e pu tih 0 50 100 150 200 Kapasitas antioksidan ABTS K a p a s it a s A n ti o k s id a n (µ m o l T E /g D W ) ns (a) Fe no tip e un gu Fe no tip e pu tih 0 20 40 60 80 100 Kapasitas antioksidan CUPRAC K a p a s it a s A n ti o k s id a n (µ m o l T E /g D W ) ns (b)
Gambar 1 .  Hasil Pengukuran Kapasitas Antioksidan Fenotipe Bunga Kumis Kucing dengan Metode  (a) ABTS dan (b) CUPRAC
melihat  zona  hambat  yang  terbentuk  dari  diameter zona  bening  sebagai  indikator  proses  penghambatan pertumbuhan bakteri.
Hasil  penelitian  pada Gambar  2 .  menunjukkan diameter  zona  hambat  bakteri Escherichia  coli paling besar terdapat pada kontrol positif dengan rerata 26.74 mm dan diikuti oleh ekstrak sampel daun kumis kucing fenotipe  ungu  (2.3  mm)  lalu  yang  terkecil  fenotipe putih  (1.4  mm).  Pengukuran  diameter  zona  hambat dapat  digolongkan  sesuai  klasifikasi  zona  hambat menurut  Davis  dan  Stout.  Kriteria  kekuatan  daya antibakteri,  yaitu  diameter  zona  hambat  5  mm  atau kurang  dikategorikan  lemah,  zona  hambat  5-10  mm dikategorikan  sedang,  zona  hambat  10-20  mm dikategorikan kuat dan zona hambat 20 mm atau lebih dikatakan  sangat  kuat  (Ariyani et  al. 2018).  Hal  ini menunjukkan bahwa sampel ekstrak daun kumis kucing fenotipe  ungu  dan  putih  berada  dalam  kategori  zona hambat  lemah  dalam  menghambat  pertumbuhan bakteri Escherichia coli.
A m pi si lin (1 % ) A ku ad es U ng u (1 0 pp m ) P ut ih (1 0 pp m ) 0 5 10 15 20 25 Uji antibakteri strain E. coli Z o n a h a m b a t (m m ) Gambar 2 .  Hasil  Rata-Rata  Diameter  Zona  Hambat Ekstrak  Daun  Kumis  Kucing  terhadap Pertumbuhan Escherichia coli
Berdasarkan  penelitian  Pangow et  al. (2020), ekstrak  daun  kumis  kucing  cukup  efektif  sebagai antibakteri  dengan  daya  hambat  sedang  terhadap strain Escherichia  coli .  Senyawa  antibakteri  yang terdapat pada kumis kucing meliputi polifenol, alkaloid, dan  terpenoid.  Penelitian  Nisak  dan  Rini  (2021) menunjukkan  bahwa  senyawa  ini  dapat  menghambat pertumbuhan  bakteri  Gram  positif  seperti Proteus mirabilis dan Staphylococcus  saprophyticus .  Adapun
bakteri  gram  negatif  seperti Escherichia  coli memiliki struktur dinding sel relatif kompleks sehingga senyawa antibakteri  sukar  masuk  ke  dalam  sel  untuk  dapat bekerja dalam menghambat aktivitas bakteri tersebut.
Resistensi Escherichia  coli terhadap  antibiotik ampicillin  ditunjukkan  dengan  diameter  zona  hambat 12  mm,  intermediet  dengan  diameter  12-14  mm,  dan sensitif  dengan  diameter  17  mm  (Walewangko et  al. 2015).  Strain Escherichia  coli sensitif  terhadap Ampicillin  dengan  ditunjukkan  pada  diameter  zona daya  hambat  sebesar  26.74  mm.  Adapun  kontrol negatif yang menggunakan akuades tidak menunjukkan adanya  zona  hambat.  Hasil  zona  hambat  lemah  pada sampel  ekstrak  daun  kumis  kucing  disebabkan kandungan  senyawa  antibakteri  yang  tidak  bekerja secara  optimum.  Faktor  yang  dapat  mempengaruhi efektivitas  senyawa  bioaktif  sampel  yang  diteliti meliputi  metode  maserasi  maupun  pelarut  organik yang digunakan (Pangow et al. 2020).

## SIMPULAN
Ekstrak  daun  kumis  kucing  baik  fenotipe  ungu maupun  putih  keduanya  menunjukkan  hasil  uji  positif pada uji senyawa bioaktif flavonoid, fenol hidrokuinon, saponin,  tanin,  serta  triterpenoid  namun  memberikan hasil  negatif  pada  uji  steroid.  Rata-rata  aktivitas antioksidan  tertinggi  dihasilkan  oleh  ekstrak  daun kumis kucing fenotipe ungu dengan metode ABTS yaitu senilai  151,23  µmol  TE/g  DW.  Sedangkan  aktivitas antibakteri tertinggi diperoleh dari ekstrak daun kumis kucing  fenotipe  ungu  dengan  diameter  zona  hambat 2.3  mm  dan  termasuk  dalam  klasifikasi  zona  hambat bakteri Eschericia coli yang lemah.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima kasih kami ucapkan pada Martini Hudayanti selaku  laboran  dalam  membantu  bahan  dan  teknis pelaksanaan  penelitian  di  Laboratorium  Biokimia Departemen Biokimia, FMIPA, IPB.

## DAFTAR PUSTAKA
Ameer OZ, Salman IM, Asmawi MZ, Ibraheem ZO, Yam MF.  2012. Orthosiphon  stamineus :  traditional  uses, phytochemistry,  pharmacology,  and  toxicology .  J Med Food . 15(8):678-690.
Ariyani  H,  Nazemi  M,  Hamidah,  Kumiati  M.  2018.  Uji aktivitas  antibakteri  kulit  limau  ( Cytrus  hystrix DC) terhadap  beberapa  bakteri. Journal  of  Current Pharmaceutical Sciences . 2(1):136-141.
Awaluddin  N,  Wahyuningsih  S.  2019.  Uji  aktivitas antioksidan  ekstrak  methanol  klika  anak  dara
( Croton  oblongus Burm)  menggunakan  metode DPPH. Jurnal Farmasi FKIK UINAM. 2:38-45.
Azizah  S,  Nursamsiar,  Nur  S.  2019.  Uji  aktivitas antioksidan  ekstrak  etanol  daun  kedondong  hutan ( Spondias  pinnata (L.F.)  Kurz.)  dengan  berbagai metode uji. Jurnal Ilmiah Manuntung . 5(1):91-96. Balafif  RAR,  Andayani  Y,  Gunawan  ER.  2013.  Analisis senyawa triterpenoid dari hasil fraksinasi ekstrak air buah buncis ( Phaseolus  vulgaris  Linn ). Chem. Prog. . 6(2): 56-61.
Dacosta M, Sudirga SK, Muksin IK. 2017. Perbandingan kandungan  minyak  atsiri  tanaman  sereh  wangi ( Cymbopogon  nardus L.  Rendle)  yang  ditanam  di lokasi berbeda. Simbiosis . 1:25-31.
Dhurhania CE, Novianto A. 2018. Uji kandungan fenolik total dan pengaruhnya terhadap aktivitas antioksidan  dari  berbagai  sentuk  sediaan  sarang semut  ( Myrmecodia  pendens ). Jurnal  Farmasi  dan Ilmu Kefarmasian Indonesia . 5(2):62-68.
Fajriaty  I,  Hariyanto  IH,  Andres,  Setyaningrum  Risky. 2018.  Skrining  fitokimia  dan  analisis  kromatografi lapis  tipis  dari  ekstrak  etanol  daun  bintangur ( Calophyllum  soulattri Burm. F). Jurnal  Pendidikan Informatika dan Sains. 7(1):54-67.
Gunawan DH. 2018. Penurunan senyawa saponin pada gel lidah buaya dengan perebusan dan pengukusan. Jurnal Teknologi Pangan . 9(1):41-44.
Habibi AI, Firmansyah RA, Setyawati SM. 2018. Skrining fitokimia  ekstrak  n-heksan  korteks  batang  salam ( Syzygium  polyanthum ). Indonesian  Journal  Of Chemical Science . 7(1):1-4.
Haryati  NA, Erwin CS. 2015. Uji toksisitas dan aktivitas antibakteri ekstrak daun merah ( Syzygium myrtifolium  Walp )  terhadap  bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia  coli . J.  Kimia  Mulawarman . 13(1):35-39.
Ikalinus  R,  Widyastuti  SK,  Setiasih  NLE.  2015.  Skrining fitokimia ekstrak etanol kulit batang kelor ( Moringa oleifera ). Indonesia Medicus Veterinus . 4(1):71-79. Istikharah R. 2015. Aktivitas antioksidan ekstrak etanol daun Sonchus  arvensis L. Jurnal  Ilmiah  Farmasi .
11(2):30-65.
Jatmiko  MP,  Mursiti  S.  2021.  Isolation,  Identification, and  activity  test  of  flavonoid  compounds  in jamblang  leaves  ( Syzygium  cumini L.)  skeel  as antioxidants. Indonesian  Journal  of  Chemical Science. 10(2):129-138.
Julianto  TS.  2019. Fitokimia:  Tinjauan  Metabolit Sekunder  dan  Skrining  Fitokimia .  Yogyakarta: Universitas Islam Indonesia.
Listyana  NH,  Darsono,  Sutrisno  J.  2022.  Potensi pengembangan tanaman obat di wilayah aglomerasi Solo Raya. Jurnal Tumbuhan Obat Indonesia . 15(1): 17-30.
Mahardani  OT,  Yuanita  L.  2021.  Efek  metode pengolahan  dan  penyimpanan  terhadap  kadar senyawa  fenolik  dan  aktivitas  antioksidan. UNESA Journal of Chemistry. 10(1):64-78.
Makatamba V, Fatimawali, Rundengan G. 2022. Analisis senyawa  tanin  dan  aktifitas  antibakteri  fraksi  buah sirih ( Piper betle L) terhadap Streptococcus mutans ). Jurnal MIPA . 9(2):75-80.
Marliana  SD,  Saleh  C.  2011.  Uji  fitokimia  dan  aktivitas antibakteri  ekstrak  kasar  etanol,  fraksi  n-heksana, etil asetat, dan metanol dari buah labu air ( Lagenari Siceraria ( Morliana ). J. Kimia Mulawarman . 8(2):39- 63.
Marsella R, Thohari I, Radiati LE. 2016.  Pengaruh daun salam  ( Syzygium  polyanthum )  terhadap  protein kuning  telur,  total  fenol  dan  flavonoid  pada  telur asin. Jurnal  Ilmu  dan  Teknologi  Hasil  Ternak. 11(2):23-27.
Maryam St, Pratam R, Effendi N, Naid T. 2019. Analisis aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanolik  daun  yodium ( Jatropha  multifida l.)  dengan  metode  cupric  ion reducing  antioxidant  capacity  (CUPRAC). Jurnal Fitofarmaka Indonesia. 2(1):90-93.
Minarno  EB.  2015.  Skrining  fitokimia  dan  kandungan total  flavonoid  pada  buah Carica  pubescens & K. Koch di kawasan Bromo, Cangar, dan Dataran Tinggi Dieng. El-Hayah. 3(2):73-82.
Nisak  K,  Rini  CS.  2021.  Uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak daun  kumis  kucin  ( Orthosiphon  aristatus )  terhadap Proteus mirabilis dan Staphylococcus saprophyticus . Journal  of  Medical  Laboratory  Science  Technology. 4(2):72-77.
Pangow  E,  Posangi  J,  Lolo  WA,  Bara  RA.  2020.  Uji aktivitas  antibakteri  jamur  endofit  pada  daun  dan batang  kumis  kucing  ( Orthosiphon  aristatus ) terhadap bakteri Escherichia coli dan staphylococcus aureus . Pharmacon . 9(2):211-218.
Rizal,  Sustriana.  2019.  Inventarisasi  dan  identifikasi tanaman  bekhasiat  obat  di  Kabupaten  Musi Banyuasin  Sumatera  Selatan. Jurnal  Indobiosains . 1(2):50-62.
Sari DK, Hastuti S. 2020. Analisis flavonoid total ekstrak etanol daun seligi ( Phyllanthus Buxifolius Muell. Arg) dengan metode spektrofotometri UV-Vis.
Indonesian Journal On Medical Science . 7(1):55-62. Sari PP, Rira WS, Puspawati NM. 2015. Identifikasi dan uji  aktivitas  senyawa  tanin  dari  ekstrak  daun
trembesi  ( Samanea  saman (Jacq.)  Merr)  sebagai antibakteri Escherichia  coli ( E.  coli ). Jurnal  Kimia . 9(1):27-34.
Sarno. 2019.  Pemanfaatan  tanaman obat  (biofarmaka) sebagai  produk  unggulan  masyarakat  Desa  Depok Banjarnegara. Abdimas Unwahas . 4(2):73-78.
Sudrajat SE. 2016. Mengenal berbagai obat herbal dan penggunaannya. Jurnal Kedokteran Mditek .
22(60):62-71.
Sultan  A,  Raza  AR.  2015.  Steroids:  a  diverse  class  of secondary metabolites. Medicinal Chemistry . 5(7):310-317.
Surahmaida,  Umarudin.  2019.  Studi  fitokimia  ekstrak daun kemangi dan daun kumis kucing menggunakan pelarut  metanol. Indonesian  Chemistry  and Application Journal . 3(1):1-6.
Sutardi.  2016.  Kandungan  bahan  aktif  tanaman pegagan dan khasiatnya untuk meningkatkan sistem
imun  tubuh. Jurnal  Litbang  Pertanian .  35(3):121- 130.
Syamsiah,  Hiola  SF,  Jumadi  O,  Mu’nisa  A.  2016. Tumbuhan  Obat  Tradisional  Etnis  Lokal  Sulawesi Barat . Makassar: Alaudin University Press.
Tandi  J,  Roem  M,  Yuliet.  2017.  Efek  nefroprotektif kombinasi ekstrak daun gedi merah dan daun kumis kucing  pada  tikus  induksi  etilen  glikol. J.  Trop. Pharm. Chem . 4(1):27-34.
Walewangko  GVCh,  Bodhi  W,  Kepel  BJ.  2015.  Uji resistensi Escherichia coli yang diisolasi dari plak gigi menggunakan  merkuri  dan  ampisilin. Jurnal  e- Biomedik . 3(1):118-124. Yanuartino, Purnamaningsih H, Nururrozi A,
Indarjulianto  S.  2017.  Saponin:  dampak  terhadap ternak. Jurnal Peternakan Sriwijaya . 6(2):79-90.