## PROBIOTIK MENINGKATKAN KONSENTRASI HEMOGLOBIN PADA TIKUS PUTIH YANG DIINDUKSI LIPOPOLISAKARIDA ESCHERICHIA COLI
Efris Kartika Sari*  , Titin Andri Wihastuti*, Wahyu Ardiansyah*
Abstrak
Infeksi bakteri Escherichia coli ( E. coli ) dapat menyebabkan gangguan sistem hematologi, di antaranya berupa  penurunan  konsentrasi  hemoglobin.  Konsumsi  probiotik  dianggap  sebagai  salah  satu  upaya  untuk meningkatkan  sintesis  hemoglobin.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh Lactobacillus  spp. terhadap konsentrasi hemoglobin pada tikus putih ( Rattus norvegicus ) yang  diinduksi oleh lipopolisakarida (LPS) E. coli . Rancangan penelitian ini adalah true experimental dengan desain randomized post test only control group . Dua puluh satu ekor tikus putih dibagi ke dalam tiga kelompok yaitu: (1) kelompok tikus tanpa perlakuan  sebagai  kontrol  negatif  (n  =  7),  (2)  kelompok  tikus  yang  diinduksi  LPS E.  coli (n  =  7),  dan  (3) kelompok tikus yang dipapar Lactobacillus spp. dan diinduksi LPS E. coli (n = 7). Konsentrasi hemoglobin diukur  dengan  metode  oksihemoglobin.  Hasil  penelitian  menunjukkan  perbedaan    konsentrasi  hemoglobin antara kelompok tikus dengan paparan probiotik dan diinduksi LPS E. coli (8,9±0,3 mmol/L) dibandingkan dengan kelompok kontrol negatif (8,0±0,8 mmol/L), dan kelompok yang hanya diinduksi LPS E. coli (8,4±0,5 mmol/L) ( p < 0,05). Disimpulkan bahwa Lactobacillus spp. dapat meningkatkan konsentrasi hemoglobin pada tikus putih yang diinduksi LPS E. coli .
Kata kunci: hemoglobin, Lactobacillus spp ., lipopolisakarida E. coli

## PROBIOTIC INCREASE HEMOGLOBIN CONCENTRATION IN RATS INDUCED BY LIPOPOLYSACCHARIDE OF ESCHERICHIA C OLI

## Abstract
Infection  caused  by E.  coli may  lead  to  a  hematological  system  disorder , such  as  decreasing  of hemoglobin  concentration.  Consumption  of  probiotic  was  considered  as  an  effort  to  improve  hemoglobin synthesis . This study aimed to assess the effect of Lactobacillus spp. on hemoglobin concentration in rats ( Rattus  norvegicus )  induced  by  lipopolysaccharide  (LPS)  of E.  coli. A  true  experimental  research  with randomized  post  test  only  control  group  design  was  performed.  Twenty  one  rats  were  divided  into  three groups including: (1) a negative control (n = 7), (2) a group was induced with LPS of E. coli (n = 7), and (3) a group  was  exposed  to Lactobacillus  spp. prior  to  induction  by  LPS  of E.  coli (n  =  7).  Hemoglobin concentration was measured by oxyhemoglobin method. The results showed the difference of hemoglobin concentration among groups of rat exposed to Lactobacillus spp prior to induction by LPS of E. coli (8,9±0,3 mmol/L), control negative group (8,0±0,8 mmol/L), and group of rat induced by LPS E. coli (8,4±0,5 mmol/L) ( p < 0,05). It is concluded that Lactobacillus spp . can increase the hemoglobin concentration in rats induced by LPS of E. coli .
Keywords: E. coli lipopolysaccharide, hemoglobin, Lactobacillus spp .
* Jurusan Keperawatan, Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya
 E-mail:  efriskartika@gmail.com atau efriskartika@ub.ac.id

## Pendahuluan
Infeksi  yang  disebabkan  oleh  bakteri Escherichia  coli ( E.  coli )  dapat  berkembang menjadi  sepsis.  Data  menunjukkan  bahwa penyebab  sepsis  didominasi  oleh  bakteri gram  negatif  seperti E.  coli dengan persentase 60-70%. 1 Angka kejadian sepsis meningkat    hingga  13%  per  tahun,  menjadi penyebab utama morbiditas dan mortalitas di negara  maju  dan  negara  berkembang . Diperkirakan 20-30 juta kasus sepsis terjadi terjadi  di  seluruh  dunia,  dengan  lebih  dari enam  juta  kasus  sepsis  neonatal  dan seratus  ribu  kasus  sepsis  maternal.  Angka kematian meningkat ketika pasien mengalami  kondisi  perburukan  dari  sepsis ke sepsis berat kemudian syok septik. 2-4
Produk  yang  memiliki  peranan  penting dalam  terjadinya  sepsis  tersebut  adalah lipopolisakarida  (LPS)  yang  merupakan komponen  penting  pada  membran  luar bakteri  gram  negatif.  Lipopolisakarida mengikat protein spesifik dalam plasma yaitu lipopolysaccharide  binding  protein (LBP). Selanjutnya  kompleks  LPS-LBP  ini  akan berikatan dengan CD14, yaitu reseptor pada membran makrofag. CD14 akan mempresentasikan  LPS  kepada toll-like receptor 4  (TLR4)  yaitu  reseptor  untuk transduksi  sinyal  sehingga  terjadi  aktivasi makrofag. Aktivasi makrofag akan melepaskan  mediator  inflamasi  yang  akan mengaktivasi  sistem  koagulasi  dan  sistem komplemen.  Pada  sistem  koagulasi    terjadi ketidakseimbangan antara sitokin proinflamasi  dengan  sitokin  antiinflamasi yang  merupakan  karakteristik  kondisi sepsis.
5
Kondisi  inflamasi  yang  meluas  akibat infeksi  menyebabkan  abnormalitas  pada berbagai sistem organ, salah satunya adalah sistem hematologi. Fungsi sistem hematologi yaitu  mendistribusikan  nutrisi,  oksigen  serta zat-zat  lain  ke  semua  organ,  sehingga memungkinkan  organ  tubuh  melakukan
fungsinya.  Apabila  fungsi  hematologi terganggu,  maka  akan  terjadi  gangguan pada organ lain. 6 Abnormalitas paling umum terjadi pada sistem hematologi pada kondisi infeksi adalah anemia, leukositosis,
leukopenia,  dan  trombositopenia.  Anemia merupakan  masalah  akut  yang  umum  pada pasien  yang  terinfeksi  bakteri.  Ada  banyak faktor  yang  menyebabkan  anemia  pada pasien  tersebut  yaitu  tindakan  plebotomi rutin,  penurunan  sintesis  sel  darah  merah, peningkatan  destruksi  karena  perubahan morfologi  dan  perubahan  membran  sel darah merah selama proses inflamasi. 7, 8 Kondisi  inflamasi  yang  meluas  akibat infeksi  bakteri  terbukti  meningkatkan  lama perawatan ( length of stay ), biaya perawatan, morbiditas,  dan  mortalitas  pasien. 9 Upaya pencegahan dibutuhkan agar  kondisi infeksi tidak  meluas  dan  berkembang  menjadi sepsis,  serta  menjaga  agar  parameter hematologi  pasien  tetap  normal,  yaitu dengan  meningkatkan  sistem  kekebalan tubuh  atau  imunitas  pasien.  Salah  satu upaya  meningkatkan  imunitas  adalah dengan pemberian bakteri asam laktat (BAL) yang di isolasi menjadi probiotik. 10 Bakteri Lactobacillus spp .  yang termasuk dalam BAL mampu bertahan hidup dan berkembang biak, berkompetisi dengan bakteri  jahat,  serta  mengeluarkan  zat antibakteri  dalam  saluran  pencernaan manusia  (meningkatkan  kekebalan  tubuh) sehingga  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri  jahat.  Probiotik  diketahui  dapat mempengaruhi  imunitas  tubuh  dengan beberapa cara yaitu, merangsang peningkatan produksi antibodi dan meningkatkan  integritas  epitel,  peningkatan signal TLR, interaksi  sel  dendrit  dan  sel  T serta  meningkatkan  asosiasi  sel  T. 11-13
Walaupun target utama bakteri Lactobacillus sebagai probiotik adalah saluran pencernaan,  namun  beberapa  penelitian membuktikan bahwa efek immunomodulator probiotik  terhadap  gambaran  hematologi
dapat dijelaskan secara sistematik. Penelitian  oleh  Astawan et  al. (2011) , pada kelompok tikus yang diinfeksi Enteropathogensis E. coli (EPEC) menunjukan  bahwa  kelompok  tikus  yang diberi diet probiotik memiliki jumlah sel darah merah  yang  lebih  tinggi  dibandingkan dengan  kelompok  tikus  yang  hanya  diberi diet  standar.  Sementara  pada  penelitian Salahuddin et al . (2013), menunjukan bahwa terjadi  perubahan  yang  signifikan  pada parameter  sel  darah  merah  yaitu peningkatan jumlah eritrosit dan konsentrasi hemoglobin  pada  kelompok  tikus  yang diberikan diet probiotik dibandingkan dengan kelompok  yang  tidak  mendapat  diet probiotik.
6,14 Sebagian  besar  penelitian  tentang pengaruh probiotik berfokus pada pencegahan dan terapi penyakit gastrointestinal,  padahal  probiotik  memiliki potensi  dalam  mencegah  perluasan  infeksi dan berpengaruh pada konsentrasi hemoglobin.  Oleh  karena  itu,  penelitian  ini bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh probiotik  ( Lactobacillus  spp. )  terhadap konsentrasi  hemoglobin  pada  tikus  putih ( Rattus  norvegicus )  yang  mengalami inflamasi sistemik akibat  induksi LPS E. coli.

## Bahan dan Metode
Pembuatan kultur Lactobacillus spp. Persiapan kultur probiotik Lactobacillus spp .  dilakukan  dengan  medium  MRS
agar/MRS  broth  yang  dilanjutkan  dengan prosedur kultur Lactobacillus spp . Dilakukan sterilisasi ose lengkung dengan pemanasan di  atas  bunsen  hingga  pijar.  Setelah  ose dipastikan  dingin  bakteri Lactobacillus  spp. diambil dari stok dengan cara menyentuhkan ujung ose pada stok, kemudian menggoreskannya    pada  permukaan  media MRS-Agar,  dengan  metode streaking kuadran untuk mendapatkan koloni terpisah. Dilanjutkan dengan menginkubasikan media 37 o C  selama  24  jam.  Koloni  murni  yang tumbuh diidentifikasi ulang untuk memastikan spesies bakteri. Setelah terbukti spesies Lactobacillus  spp. dilakukan  kultur pengayaan  untuk  memproduksi  dalam jumlah  yang  besar,  dan  melakukan pengenceran  sesuai  dengan  kepadatan bakteri yang diinginkan. 15 Lactobacillus spp . diberikan dengan dosis 10 9 CFU/Kg BB/hari yang  dilarutkan  dalam  media  Dextrose  5% (D5%) sebanyak 0,5 ml.

## Hewan Coba
Hewan  coba  yang  digunakan  adalah tikus  putih  ( Rattus  norvegicus )  galur  Wistar yang  berjumlah  21  ekor,  dengan  kriteria inklusi yaitu tikus sehat, jenis kelamin jantan, usia  10-12  minggu,  berat  badan  150-200 gram, sedangkan kriteria eksklusi yaitu tikus sakit  dan  mati  dalam  masa  penelitian. Sebelum  diberi  perlakuan,  hewan  coba  di aklimatisasi    selama  7  hari  dengan  diberi makan  dan  minum  secara ad-libitum . Penggunaan  hewan  coba  sebagai  subjek penelitian ini telah mendapatkan keterangan laik  etik  dari  Komisi  Etik  Penelitian Kesehatan  Fakultas  Kedokteran  Universitas Brawijaya (No. 362/EC/KEPK/09/2016).
Induksi LPS E. coli Induksi  LPS E.  coli (List  Biological, nomor katalog 201) dilakukan per oral. LPS diencerkan  dengan  larutan  NaCl  0,9% dengan perbandingan NaCl 0,9%:LPS E. coli yaitu  10:1.  Dosis  yang  diberikan  yaitu  1 mg/KgBB yang dilarutkan dalam media NaCl 0.9% sebanyak 0,5 ml. 16,17

## Desain Penelitian
Rancangan  yang  digunakan  pada penelitian  ini  adalah true  experimental dengan  desain randomized  post  test  only control group. Sejumlah 21 ekor tikus dibagi secara  acak  ke  dalam  3  kelompok  sebagai berikut:  kelompok  tikus  tanpa  perlakuan apapun  sebagai  kontrol  negatif    (n  =  7);
kelompok  tikus  yang  diinduksi  LPS E.  coli
(n= 7)  dengan dosis 1 mg/kg BB pada hari ke  15;  dan  kelompok  tikus  yang  diberi probiotik Lactobacillus spp . (10 9
CFU/KgBB/hari  selama  14  hari 18 ,  dan diinduksi LPS E. coli ( n= 7) dengan dosis 1 mg/kg BB pada hari ke-15.

## Pengukuran Konsentrasi Hemoglobin
Pengambilan  sampel  darah  intra cardiac  dilakukan  pada  hari  ke-16  (24  jam setelah  induksi  LPS E.  coli ).  Sampel  darah diambil sebanyak 1 ml, kemudian ditampung dalam  tabung  yang  mengandung  EDTA. Analisis  konsentrasi  hemoglobin  dilakukan segera  setelah  pengumpulan  sampel darah. 19 Konsentrasi hemoglobin dihitung dengan metode oksihemoglobin. Sejumlah 5 ml larutan Na-Karbonat 0,1% dimasukan ke dalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan EDTA  20  µl.  Selanjutnya  tabung  reaksi ditutup  dan  dikocok  selama  10  detik. Serapan  dibaca  dengan  spektrofotometer pada  540  nm.  Pembacaan  konsentrasi hemoglobin  dilakukan  pada  kuvet  kalibrasi yang telah dipersiapkan sebelumnya.

## Analisis Statistik
Data  disajikan  sebagai  nilai  rata- rata±standar  deviasi  (SD).  Analisis  statistik
dilakukan  dengan  menggunakan  program IBM SPSS 2.0 .  Uji one way anova dilakukan untuk  mengetahui  pengaruh  pemberian probiotik  terhadap  konsentrasi  hemoglobin darah  tikus  putih  pada  setiap  kelompok , yang dilanjutkan dengan uji post hoc Tukey.

## Hasil
Hasil  analisis  statistik  nilai  rata-rata konsentrasi hemoglobin pada kelompok tikus normal,  kelompok  tikus  yang  diinduksi  LPS E.  coli ,  dan  kelompok  tikus  yang  diberi probiotik dan diinduksi LPS E. coli tercantum pada Tabel 1. Hasil pengukuran hemoglobin memperlihatkan  bahwa  nilai  rata-rata konsentrasi  hemoglobin  ketiga  kelompok tikus  berbeda  secara  nyata  (p  =  0,025).
Kelompok  tikus  yang  tidak  mendapatkan perlakuan/kontrol negatif memiliki konsentrasi hemoglobin yang terendah (8,0± 0,8  mmol/L),  diikuti  dengan  nilai  rata-rata konsentrasi hemoglobin kelompok tikus yang diinduksi  LPS E.  coli (8,4±0,5  mmol/L), sedangkan  kelompok  tikus  yang  diberi probiotik  dan  diinduksi  LPS E.  coli memiliki konsentrasi  hemoglobin  paling  tinggi (8,9±0,3 mmol/L).
Hasil  uji post  hoc Tukey  tercantum pada Tabel 2.
Tabel 1. Nilai rata-rata konsentrasi hemoglobin pada kelompok hewan coba
Kelompok Rata-rata Konsentrasi Hb±SD (mmol/L) p Kontrol negatif  (n = 7) Induksi LPS E. coli (n = 7) Probiotik dan Induksi LPS E. coli (n = 7) 8,0±0,8 8,4±0,5 8,9±0,3 0,025 Tabel 2. Hasil uji post hoc Tukey konsentrasi hemoglobin pada kelompok hewan coba Faktor (I) Faktor (J) Mean Difference (I-J) p Kontrol negatif Induksi LPS E. coli Probiotik dan Induksi LPS E. coli -0,4 -0,9 0,351 0,020 Induksi LPS E. coli Konrol negatif Probiotik dan Induksi LPS E. coli 0,4 -0,5 0,351 0,275 Probiotik dan Induksi LPS E. coli Kontrol negatif 0,9 0,020
Induksi LPS E. coli 0,5 0,275 Hasil  uji post  hoc Tukey menunjukan terdapat perbedaan nilai rata-rata konsentrasi  hemoglobin  yang  bermakna pada  kelompok  yang  diberi  probiotik  dan diinduksi  LPS E.  coli dibandingkan  dengan kelompok kontrol negatif .

## Pembahasan
Hemoglobin  adalah  komponen  yang berfungsi  sebagai  alat  transportasi  oksigen dan  karbondioksida.  Satu  gram  hemoglobin mengangkut  1,34  ml  oksigen.  Kapasitas angkut  ini  berhubungan  dengan  kadar hemoglobin, bukan jumlah sel darah merah. Penetapan  anemia  didasarkan  pada  nilai hemoglobin  yang  berbeda  secara  individual karena  berbagai  adaptasi  tubuh  (misalnya ketinggian,  penyakit  paru-paru,  olahraga). Secara  umum,  jumlah  hemoglobin  kurang dari 7,4 mmol/L menunjukkan anemia. Pada penentuan  status  anemia,  jumlah  total hemoglobin  lebih  penting  daripada  jumlah eritrosit. 20 Hemoglobin  merupakan  komponen yang  berfungsi  sebagai  alat  transportasi oksigen  dan  karbondioksida.  Pada  kondisi infeksi  sistemik E.  coli yang  berpotensi dilepaskannya  LPS  sehingga  terjadi inflamasi sistemik dan mengalami penurunan konsentrasi hemoglobin. Penelitian ini bertujuan untuk mengobservasi pengaruh  pemberian  probiotik  terhadap konsentrasi  hemoglobin  dalam  kondisi mengalami inflamasi sistemik karena induksi LPS E coli . Untuk itu, dibuat kelompok tikus yang  diinduksi  LPS E.  coli yang menggambarkan keadaan inflamasi sistemik bila individu mengalami infeksi bakteri E.coli . Hasil  pengukuran    konsentrasi hemoglobin  pada  kelompok  tikus  yang diinduksi LPS E. coli adalah 8,4±0,5 mmol/L, lebih  tinggi  daripada  kelompok  tikus  kontrol negatif  (8,0±0,8  mmol/L).  Pemberian  LPS
akan  menyebabkan  peningkatan  respons imun  sitokin  proinflamasi,  dan  menekan respons  antiinflamasi.  Ketika  respons proinflamasi  telah  mencapai  puncak, keseimbangan  akan  bergeser  ke  respons imun  sitokin  antiinflamasi.  Pengaruh pemberian  LPS  terhadap  respons  imun tergantung  pada  dosis  yang  diberikan. Pemberian  dosis  rendah  ±100  µg/ml  akan menyebabkan  respons  imun  proinflamasi yang  mencapai  nilai maksimal  pada  12  jam setelah  pemberian,  sedangkan  LPS  dosis tinggi  ±1000  µg/ml  akan  memberikan  efek maksimal  pada  24  jam  setelah  pemberian LPS. 21 Kondisi  inflamasi  yang  meluas berhubungan  dengan  peningkatan  destruksi karena perubahan pada membran sel darah merah dan interaksi dengan sel darah putih serta  aktifitas  sitokin.  Kondisi  inflamasi dicirikan  dengan  adanya  peningkatan produksi reactive  oxygen  species (ROS) diikuti  dengan  penurunan  pertahanan terhadap antioksidan. ROS yang mengandung  superoksida  anion  O 2- , hydroxyl  radical OH - dan hidrogen  peroxide H 2 O 2, menyebabkan  kerusakan  pada hemoglobin  dan  menginduksi  hemolisis. 7,22 Hal  tersebut  mengakibatkan  penurunan konsentrasi hemoglobin pada kondisi sepsis.
Pada  kelompok  tikus  yang  diberi probiotik  dan  diinduksi  LPS E.  coli ,  dan kelompok  tikus  yang  diinduksi  LPS E.  coli saja,  menunjukkan  tikus  mengalami  kondisi inflamasi  sistemik. Kondisi  inflamasi    luas dapat  menyebabkan  hemolisis  sehingga menyebabkan  hemoglobin  keluar  ke ekstraseluler  sebagai  hemoglobin  bebas yang  bersifat  toksik  dan  penurunan kemampuan transport oksigen. Namun, hasil penelitian  tidak  menunjukkan  penurunan konsentrasi  hemoglobin  (anemia)  pada kelompok  yang  diinduksi E.  coli ,  yang kemungkinan  disebabkan  belum  terjadi hemolisis  pada  saat  pengambilan  sampel
darah,  yaitu  24  jam  setelah  induksi  LPS E. coli .
Hasil  penelitian  ini  berbeda  dengan penelitian  oleh  Jansma et  al. (2013),  yang bertujuan mengobservasi perbedaan konsentrasi hemoglobin pada pasien dengan sepsis  fase  akut  dan  pasien  yang  tidak mengalami  sepsis  di  ruang  rawat  intensif. Jansma mendapatkan konsentrasi hemoglobin  pada  pasien  yang  mengalami infeksi  bakteri  sistemik  (sepsis)  fase  akut lebih  rendah  daripada  pasien  yang  tidak mengalami  sepsis. 23 Perbedaan  tersebut terjadi  kemungkinan  karena  subjek  sepsis mengalami  inflamasi  sistemik  akibat  infeksi bakteri,  tidak  hanya  inflamasi  akibat  induksi LPS.  Selain  itu,  pada  penelitian  tersebut subjek sepsis telah mengalami hemolisis
Dugaan  adanya  pengaruh  pemberian probiotik  sebelum  paparan  LPS E.  coli sebagai upaya preventif terjadinya penurunan  konsentrasi  hemoglobin  akibat infeksi  dapat  dilihat  pada  kelompok  tikus yang  diberi  probiotik  dan  diinduksi  LPS E.
coli . Hasil penelitian menunjukkan nilai rata- rata konsentrasi hemoglobin pada kelompok probiotik adalah 8,9±0,3 mmol/L. Konsentrasi  hemoglobin  kelompok  yang diberi  probiotik  dan  diinduksi  LPS E.  coli memiliki  nilai  lebih  tinggi  secara  bermakna dibandingkan dengan kelompok tikus kontrol negatif,  yang  artinya  terdapat  pengaruh pemberian  probiotik  antara  kelompok  tikus yang  diberi  probiotik  dan  diinduksi  LPS E. coli jika  dibandingkan  dengan  kelompok tikus kontrol negatif.
Tingginya  konsentrasi  hemoglobin pada  kelompok  tikus  yang  diberi  probiotik dan  diinduksi  LPS E.  coli berhubungan dengan mekanisme biosintesis aktif hemoglobin sehingga meningkatkan konsentrasi  hemoglobin  intraselular.  Fungsi probiotik  dalam  pembentukan  sel  darah merah  dan  hemoglobin  berkaitan  dengan pemenuhan  vitamin  B.  Asam  folat  dan vitamin  B12  penting  dalam  pematangan
akhir  sel  darah  merah.  Keduanya  berperan dalam pembentukan timidin trifosfat, yait zat pembangun  essensial  DNA.  Kekurangan asam  folat  dan  vitamin  B12  menyebabkan abnormalitas,  kegagalan  pematangan  inti dan  pembelahan  sel.  Folat  terlibat  penting dalam  metabolisme  sel  seperti  replikasi DNA,  perbaikan  dan  metilasi  serta  sintesis nukleotida,  vitamin  dan  beberapa  asam amino. Kekurangan folat terutama menyebabkan  gangguan  metabolisme  DNA yang  mengakibatkan  perubahan  morfologi sel  terutama  sel-sel  yang  sangat  cepat membelah  seperti  sel  darah  merah,  sel darah  putih,  serta  sel  epitel  lambung  dan usus. Cobalamin atau  vitamin  B12 merupakan  satu-satunya  vitamin  yang disintesis  oleh  mikroorganisme  dan  hanya beberapa bakteri yang memiliki kemampuan untuk  memproduksinya  serta  kebanyakan terdapat  pada  makanan  yang  berasal  dari hewan seperti daging, ikan, dan telur. 24-26
Pemberian  probiotik  menyebabkan terjadinya  biosintesis  aktif  hemoglobin  dan peningkatan hemoglobin intraseluler, sehingga konsentrasi hemoglobin lebih tinggi pada  kelompok  probiotik  dibandingkan dengan  kelompok  normal.  Pemberian probiotik mampu melindungi epitel usus dari kerusakan  akibat  infeksi  mikroba  sehingga mengoptimalkan  penyerapan  zat  besi  (Fe), dan  mengoptimalkan  pemenuhan  vitamin B12  dan  asam  folat  yang  penting  dalam pembentukan  dan  pematangan  sel  darah merah  dan  hemoglobin.  Hasil  ini  didukung oleh hasil penelitian Salahuddin et al . (2013) dan Astawan et al . (2011) yang menunjukan bahwa  terdapat  perbedaan  konsentrasi hemoglobin yang bermakna antara
kelompok  yang  diberi  diet  probiotik dibandingkan  dengan  kelompok  yang  tidak diberi diet probiotik. 6,14
Keterbatasan penelitian ini adalah tidak melakukan  pemberian  probiotik  dengan dosis  yang  berbeda  untuk  melihat perbedaan  respons  imun  dan  perbedaan
respons    pemenuhan  nutrisi  untuk pembentukan  hemoglobin.  Selain  itu, pemeriksaan  konsentrasi hemoglobin  hanya dilakukan 24 jam setelah induksi LPS E.coli, tidak dilakukan pada  waktu  yang  berbeda atau time series mengingat  ekspresi sitokin dan respons imun tertentu dapat dipengaruhi waktu dan berperan besar dalam hemolisis. Saran untuk penelitian selanjutnya, hendaknya  dilakukan  pemberian  probiotik dengan dosis berbeda, dengan pemeriksaan konsentrasi  hemoglobin  dalam  waktu berbeda ( time series ) untuk melihat respons pemberian  probiotik  terhadap  konsentrasi kemoglobin  pada  tikus  putih  yang  diinduksi LPS E. coli .

## Kesimpulan
Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa probiotik  ( Lactobacillus  spp. )  berpengaruh terhadap  tingginya  konsentrasi  hemoglobin pada  tikus  putih  ( Rattus  norvegicus )  yang diinduksi LPS E. coli .

## Ucapan Terima Kasih
Kami  mengucapkan  terima  kasih kepada  Badan  Penelitian  dan  Pengabdian Masyarakat Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya  yang  membantu  pendanaan penelitian ini.

## Daftar Pustaka
1. Guntur H, Sudoyo AW, Setiyohadi B, Alwi
I,  Simadibrata  M,  Setiati  S. Buku  Ajar
Ilmu Penyakit Dalam . Jilid Ke-3. Edisi Ke- 11.  Jakarta:  Pusat  Penerbitan  Ilmu Penyakit  Dalam  Fakultas  Kedokteran Universitas Indonesia. 2010.
2.  Bhagwanjee  S,  Reinhart  K.  How  Do  We Deal  with  Sepsis  in  The  Twenty  First Century?. Clinical  Governance .  2013; 18:58-62.
3. Black RE, Cousens S, Johnson HL, Lawn JE,  Rudan  I,  Bassani  DG.  Global, Regional,  and  National  Causes  of  Child
Mortality in 2008: A Systematic Analysis.
The Lancet . 2010; 375(9730):1969-87. 4.  Kissoon  N,  Carcillo  JA,  Espinosa  V, Argent  A,  Devictor  D,  Madden  M.  World Federation  of  Pediatric  Intensive  Care and  Critical  Care  Societies:  Global Sepsis  Initiative. Pediatric  Critical  Care Medicine . 2011; 12(5):494-503.
5.  Elena  GR,  Alejo  C,  Gema  R,  Mario  D.
Cortistatin,  a  New  Antiinflammatory Peptide with Therapeutic Effect on Lethal Endotoxemia. Journal  of  Experimental Medicine . 2006; 203(3):563–71. 6. Astawan M, Wresdiyati T, Arief I, Suhesti E.  Gambaran  Hematologi  Tikus    Putih ( Rattus    norvegicus )    yang    Diinfeksi Escherichia    coli Enteropatogenik  dan Diberikan  Probiotik. Media  Peternakan. 2011; 34(1):7-13.
7.  Piagnerelli  M,  Boudjeltia  KZ,  Gulbis  B, Vanhaeverbeek M, Vincent JL. Anemia in
Sepsis:  The  Importance  of  Red  Blood Cell  Membrane  Changes. Transfusion Alternatives  in  Transfusion  Medicine . 2007; 9:143-9.
8. Sadaka F. Red Blood Cell Transfusion in Sepsis:  A  Review. Journal  of  Blood Disorders & Transfusion. 2013; 4(4):1-7.
9. Crooks NH, Snaith C, Webster D, Gao F,
Hawkey  P.  Clinical  review:  Probiotics  in critical care. Critical Care . 2012; 16:237.
10. Sarowska J, Choroszy-Król I, Regulska- Ilow B, Frej-Mądrzak M, Jama-Kmiecik A. The  Therapeutic  Effect  of  Probiotic Bacteria  on  Gastrointestinal  Diseases. Advances  in  Clinical  and  Experimental Medicine . 2013; 22(5):759-66. 11.  Barraud  D,  Blard  C,  Hein  F,  Marcon  O,
Cravoisy  Al,  Nace  L,  et  al.  Probiotics  in The Critically Ill Patient: A Double Blind, Randomized,  Placebo-Controlled  Trial.
Intensive Care Med . 2010; 36:1540-7.
12.  Shlomai  NO,  Deshpande  G,  Rao  S, Patole  S.  Probiotics  for  Preterm Neonates:  What  Will  It  Take  to  Change Clinical  Practice?. Neonatology .  2013;
105(1):64-70. 13. Qadis  AQ,  Goya  S,  Yatsu  M,  Yoshida YU,  Ichijo  T,  Sato  S.  Effects  of  a Bacteria-Based Probiotic on Subpopulations of Peripheral Leukocytes and Their Cytokine mRNA Expression in Calves. Journal  of  Veterinary  Medical
Science . 2014; 76(2):189-95. 14.  Salahuddin  M,  Akhter  H,  Akter  S,  Miah MA,  Ahmad  N.  Effects  of  Probiotics  on Haematology and Biochemical Parameters  in  Mice. Bangladesh Veterinarian . 2013; 30(1):20-4.
15.  Goyal  R,  Dhingra  H,  Bajpai  P,  Joshi  N. Characterization  of  the  Lactobacillus Isolated  from  Different  Curd  Samples. African  Journal  of  Biotechnology .  2012;
11(79):14448-52.
16. Couper K, Blount D, Riley E. IL-10: The Master  Regulator  of  Immunity  to Infection. The  Journal  of  Immunology . 2008; 180:5771-7.
17.  Popov  D,  Pavlov  G.  Sepsis  Models  in Experimental  Animals. Trakia  Journal  of Sciences . 2013; 1:13-23.
18. Sarowska J, Choroszy-Król I, Regulska- Ilow B, Frej-Mądrzak M, Jama-Kmiecik A. The    Therapeutic    Effect    of    Probiotic Bacteria  on  Gastrointestinal  Diseases. Advances  in  Clinical  and  Experimental Medicine. 2013; 22(5):759-66.
19. Fahrimal Y, Eliawardani, Rafina A, Azhar A,  Asmilia  N.  Profil  Darah  Tikus  Putih ( Rattus  norvegicus )  yang  Diinfeksikan
Trypanosoma  evansi dan  Diberikan
Ekstrak  Kulit  Batang  Jaloh  ( Salix tetrasperma Roxb). Jurnal  Kedokteran Hewan . 2014; 8(2):164-8. 20.  Herawati  F,  Andrajati  R,  Umar  F.
Pedoman  Interpretasi  Data  Klinik . Indonesia  KKR  (Editor).  Jakarta: Kementerian Kesehatan Republik Indonesia. 2011. 21.  Larsson  R,  Rocksen  D,  Lilliehook  B, Jonsson  A,  Bucht  A.  Dose-dependent
Activation  of  Lymphocytes  in  Endotoxin- induced  Airway  Inflammation. Infection and Immunity. 2000; 68:6962-9.
22.  Adamzik  M,  Hamburger  T,  Petrat  F, Peters  J,  Groot  Hd,  Hartmann  M.  Free Hemoglobin  Concentration  in  Severe Sepsis:  Methods    of  Measurement  and Prediction  of  Outcome. Critical  Care . 2012; 16(4):R125. 23.  Jansma  G,  Buter  H,  Gerritsen  RT, Boerma EC. Is Hemoglobin Concentration Affected by Sepsis in The Acute  Phase?. Critical  Care .  2013;
17(Suppl 2):10.
24.  Muwakdiah.  Efek  Sumpelemntasi  Fe, Asam  Folat  dan  Vitamin  B12  terhadap Peningkatan  Kadar  Hb  pada  Wanita Pekerja  di  Kabupaten  Sukoharjo. Semarang:  Universitas  Diponegoro. 2009.
25. Capozzi V, Russo P, Dueñas MT, López P,  Spano  G.  Lactic  Acid  Bacteria Producing    B-group  Vitamins:  A  Great Potential for Functional Cereals Products. Applied  Microbiology  and Biotechnology. 2012; 96(6):1383–94. 26. Stabler SP. Vitamin B12 Deficiency. New
England  Journal  of  Medicine .  2013;
368(2):149–60.