## EKSTRAK DAUN Nicotiana tabacum MENURUNKAN BERAT LEMAK VISCERAL PADA TIKUS DIABETES MELLITUS TIPE DUA
Ratih Paramita Suprapto*  , Andrew Jonathan**, Shelby A Ernanda**, Budi Wicaksono*

## Abstrak
Diabetes mellitus merupakan masalah utama kesehatan di dunia dan prevalensinya selalu meningkat. Pada dosis yang tepat kandungan nikotin dari ekstrak etanol daun tembakau ( Nicotiana tabacum ) memiliki efek  hipoglikemik  sehingga  berpeluang  sebagai  terapi  alternatif  untuk  diabetes  mellitus.  Namun,  efeknya pada jaringan adipose penderita diabetes mellitus belum banyak diketahui. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk  mengetahui  pengaruh  ekstrak  etanol  daun  tembakau  terhadap  berat  lemak  visceral  tikus  model diabetes mellitus. Pada penelitian ini tikus galur Wistar dibagi menjadi 5 kelompok yaitu kontrol negatif (K-), kelompok tikus model diabetes  mellitus (K+), dan tiga kelompok tikus diabetes melitus yang diberi ekstrak etanol daun tembakau 90 (P1), 180 (P2) dan 270 (P3) mg/kgBB/hari per oral selama 28 hari. Hasil penelitian menunjukkan bahwa terdapat penurunan bermakna berat lemak pada semua kelompok tikus DM yang diberi ekstrak  daun  tembakau  dibandingkan  dengan  tikus  DM  tanpa  terapi  maupun  tikus  normal  (p  <  0,05). Kesimpulan  penelitian  adalah  pemberian  ekstrak  etanol  daun  tembakau  menurunkan  berat  lemak  visceral pada  tikus  model  DM.  Penurunan  berat  lemak  visceral  kemungkinan  disebabkan  oleh  kandungan  nikotin dalam  ekstrak  yang  dapat  mengaktivasi  lipolisis,  menghambat  lipogenesis,  aktivasi  thermogenesis,  dan penurunan intake makan.
Kata kunci: berat lemak visceral, diabetes mellitus, daun tembakau ( Nicotiana tabacum ).
ETHANOL EXTRACT OF Nicotiana tabacum REDUCES  THE VISCERAL WEIGHT

## OF TYPE TWO DIABETIC RATS

## Abstract
Diabetes melllitusis the main health problem in the world and its prevalence is increasing dramatically. Tobacco leaf ( Nicotiana tabacum ) containing nicotine could be used as an alternative treatment for diabetes mellitus  at  the  right  dose.  However,  its  effect  on  adipose  tissue  of  diabetes  mellitus  model  has  not established  well.  This  study  aim  is  to  observe  the  effect  of  ethanol  extract  of  tobacco  leaf  to  the  visceral weight of diabetic rats. Rats were divided into five group normal rats (K-), diabetic rats (K+) and diabetic rats receiving ethanol extract of tobacco leaf at dose 90 (P1), 80 (P2), and 270 (P3) mg/kgBW/day orally for 28 days. Rats were sacrificed and visceral fat was weighed afterward. As the result, visceral fat of diabetic rats was less than the normal rats and diabetic rats treated with ethanol extract of tobacco leaf shown to reduce visceral  weight  significantly  compared  to  normal  rats  (p  <  0.05).  Visceral  weight  decrement  was  due  to nicotine  effect  that  could  induce  lipolysis,  inhibit  lipogenesis,  thermogenesis  activation,  and  reduce  food intake.  Further  research  is  needed  to  explore Nicotiana  tabacum as  an  alternative  treatment  for  diabetes mellitus.
Keywords: diabetes mellitus, tobacco leaf ( Nicotiana tabacum ), visceral weight.
* Laboratorium Fisiologi, FK UB
**Program Studi Pendidikan Dokter, FK UB
 E-mail: ratih.paramitasuprapto@gmail.com

## Pendahuluan
Diabetes  mellitus  (DM)  merupakan masalah  utama  kesehatan  di  dunia. Terdapat 415 juta orang yang menderita DM di  dunia  dan  diperkirakan  pada  tahun  2040 akan meningkat tajam menjadi 2.152 juta. Di Indonesia  pada tahun 2015 terdapat 10 juta penderita  DM.  Dengan  penderita  terbanyak pada usia di bawah 60 tahun. 1 Penderita DM di  Indonesia  diperkirakan  akan  terus meningkat  menjadi  8,2  juta  pada  tahun 2020. 2 DM adalah penyakit metabolik akibat tubuh gagal meregulasi kondisi hiperglikemia akibat  gangguan  sekresi  insulin  dan  atau resistensi  terhadap  insulin.  Karakteristik  DM yang  lain  adalah  hambatan  lipogenesis  dan lipolisis  yang  berlebihan  akibat  defisiensi atau resistensi terhadap insulin. 3 Berbagai macam terapi telah ditemukan  untuk  mengontrol  kadar  gula darah  pada  pasien  DM.  Kontrol  gula  darah dengan  baik  akan  mencegah  kejadian komplikasi  penyakit  DM.  Pemberian  obat pengontrol  gula  darah  sering  kali  harus diberikan  seumur  hidup  akibat  kegagalan tubuh  menormalkan  kondisi  hipergliklemia. Namun,  konsumsi  obat  diabetes  dalam jangka  waktu  lama  juga  dapat  berakibat adanya efek samping pada beberapa organ seperti saluran pencernaan, hati dan ginjal. 4,5
Oleh  karena  itu,  diperlukan  penemuan  obat alternatif, di antaranya dari tanaman.
Pada  penelitian  terbaru,  dengan  dosis dan penggunaannya yang tepat, kandungan nikotin  dan  flavonoid  dalam  tanaman tembakau  dapat  digunakan  sebagai  terapi pencegahan  komplikasi  diabetes  mellitus dengan  cara  menghambat  perubahan karbohidrat menjadi glukosa dan meningkatkan  sekresi  insulin. 6,7 Pada penelitian ini dilihat pengaruh ekstrak etanol daun  tembakau  terhadap  berat  lemak  tikus yang diinduksi DM tipe 2.

## Bahan dan Metode
Material dan Ekstraksi Tanaman Daun  tembakau  ( Nicotiana  tabacum ) didapatkan  dari  Bondowoso,  Jawa  Timur. Tembakau  yang  segar  dipotong  tipis-tipis dan digiling. Sebanyak 120 g daun tembakau dilarutkan  dengan  aquades.  Setelah  itu, dimaserasi dengan etanol 90% selama satu hari.  Saring  bahan  baku  yang  telah dimaserasi  menggunakan  kertas  saring Whatman .  Ambil  filtrat  kemudian  diuapkan (dipanaskan) di atas magnetic stirer dengan kecepatan agitator sedang hingga tercapai ¾ volume  mula-mula.  Ekstrak  etanol  hasil penguapan filtrat dicampur dengan aquades dan n-hexane didalam  corong  pemisah dengan  perbandingan  2:1:2.  Kocok  ketiga campuran  tersebut  selama  10  menit  hingga terbentuk  dua  lapisan  tidak  saling  larut ( immiscible )  yaitu  lapisan n-hexane dan lapisan  campuran  etanol-air.  Lalu,  ekstrak etanol diasamkan dengan asam sitrat 0,2 N sampai  pH  3.  Larutan  dipisahkan  dengan diuapkan  dengan  dengan  rotary  evaporator sehingga  didapat  ekstrak  etanol  kemudian ekstrak dikeringkan.

## Subjek Penelitian
Subjek  penelitian  adalah  model  tikus Wistar ( Rattus novergicus ) jantan berusia 8- 10 minggu. Tikus Wistar dipilih berdasarkan kriteria  inklusi  sebanyak  24  ekor,  umur  2 bulan  (150-200  g r ).  Kemudian  dikondisikan di  kandang  pemeliharaan  selama  2  minggu dengan  diberikan  diet chow  standart pada kelompok  kontrol  negatif.  Pada  kelompok kontrol  positif  diberi  diet  tinggi  lemak  dan disuntik  STZ.  Jumlah  konsumsi  makanan harian  maksimum  sebanyak  40  g/tikus/hari. Pemberian  diet  tinggi  lemak  dilakukan selama 16 hari. Kemudian tikus dipuasakan selama  16  jam  lalu  diinjeksi  dengan  STZ 22,5  mg/kgBB  intraperitonial. Setelah  3  hari pasca  induksi  STZ  dilakukan  pemeriksaan gula darah (sebelumnya dipuasakan selama
6  jam).  Bila    kadar  gula  darah  mencapai >140 mg/dl menggunakan glukometer, maka dikategorikan hiperglikemia 8 dan selanjutnya tikus  diberi  perlakuan  dengan  ekstrak  daun tembakau.
Pembagian  kelompok  pada  tikus adalah sebagai berikut:
1. Kontrol negative (K-) (n = 5): Tikus sehat tanpa diberikan perlakuan apapun.
2. Kontrol  positif  (K+)  (n  =  5):  Tikus diinduksi  menjadi  DM  tipe  2  tanpa pemberian ekstrak etanol tembakau.
3. Perlakuan 1 (P1) (n = 5): Tikus diinduksi menjadi  DM  tipe  2  dan  diberikan pemberian  ekstrak  etanol  tembakau  90 mg/kgBB/hari.
4. Perlakuan 2 (P2) (n = 5): Tikus diinduksi menjadi  DM  tipe  2  dan  diberikan pemberian  ekstrak  etanol  tembakau180 mg/kgBB/hari.
5. Perlakuan 3 (P3) (n = 5): Tikus diinduksi menjadi  DM  tipe  2  dan  diberikan pemberian  ekstrak  etanol  tembakau  270 mg/kgBB/hari.
Setelah  28  hari  perlakuan,  tikus  kemudian dibedah dan diambil jaringan adiposa di area
peritoneum  dan  ditimbang  menggunakan timbangan digital.
Analisis  secara  statistik  menggunakan one  way  ANOVA pada  α  =  0.05. Penelitian dilakukan setelah mendapat surat
persetujuan etik penelitian.

## Hasil
Berat  lemak  visceral  yang  diperoleh dari area peritoneum tikus coba diperlihatkan pada  Tabel  1  dan  diagram  batang  pada Gambar  1.  Hasil  memperlihatkan  adanya penurunan  lemak  visceral  pada  tikus  DM, meskipun  secara  statistik  tidak  bermakna antara kontrol negatif dengan kontrol positif. Pemberian  ekstrak  etanol  daun  tembakau semakin menurunkan  lemak visceral  secara signifikan dibanding kontrol positif. Penurunan  berat  lemak  visceral  semakin besar  seiring  dengan  peningkatan  dosis.
Penurunan yang bermakna dan paling besar adalah pada pemberian ekstrak sebesar 270 mg/kgBB bila dibandingkan dengan tikus DM tanpa terapi.
Tabel 1. Berat lemak peritoneum tikus Wistar model DM tipe 2 yang diberi ekstrak daun tembakau
No Kelompok Perlakuan Berat Lemak Visceral Rata – rata (g) ± SD 1 Kontrol negatif (K-) 3,672 a 1,019 2 Kontrol positif (K+) 2,562 a 1,571 3 Ekstrak daun tembakau 90 mg/kgBB (P1) 1,576 b 0,606 4 Ekstrak daun tembakau180 mg/kgBB (P2) 1,404 b 0,537 5 Ekstrak daun tembakau270 mg/kgBB (P3) 0,218 ab 0,245
Keterangan: nilai p = 0,001
Gambar  1.  Efek  ekstrak  etanol  daun  tembakau  terhadap  lemak  visceral  tikus  model  diabetes mellitus (DM). Keterangan: A. Kontrol negatif (K-), B. Kontrol positif (DM) (K+), C. DM +  ekstrak  daun  tembakau  90mg/kgBB/hari  (P1),  D.  DM  +  ekstrak  daun tembakau180mg/kgBB/hari (P2), E : DM + ekstrak daun tembakau 270mg/kgBB/hari (P3).

## Pembahasan
Tikus  yang  diinduksi  diabetes  mellitus menunjukkan  penurunan  berat  lemak visceral  meskipun  tidak  signifikan.  Hal  ini telah  sesuai  dengan  patofisiologi  diabetes mellitus yaitu terjadi lipolisis yang berlebihan. Lipolisis pada diabetes mellitus adalah akibat defisiensi  insulin  sehingga  tidak  adanya hambatan terhadap enzim hormone sensitive lipase (HSL)  di  jaringan  adiposa  dan  hati. Aktivasi HSL selanjutnya akan mengaktifkan lipolisis  yang  mengubah  trigliserida  menjadi asam lemak dan gliserol. 8 Selain  itu,  defisiensi  insulin  juga berakibat pada penurunan aktivitas lipoprotein  lipase (LPL). 9 Enzim  LPL ditemukan  terutama  di  lapisan  pembuluh darah  kapiler  di  otot  skeletal  dan  jaringan adiposa. LPL berperan memecah trigliserida yang berada di liporotein (trigliserida tersebut dibawa  dari  organ  lain  dan  berada  di peredaran  darah).  LPL  menguraikan trigliserida menjadi asam lemak dan gliserol sehingga  dapat  masuk  ke  dalam  jaringan otot  skeletal  atau  adiposa  kemudian
digunakan  sebagai  bahan  bakar  atau disimpan. 10
Ekstrak  daun  tembakau  mengandung bahan  utama  yaitu  nikotin. 11 Dalam  hal nikotin  yang  terhirup,  akan  mencapai  otak dan  mengaktivasi  reseptor  asetilkolin nikotinik (nAChR) yang tersebar pada sistem saraf pusat dan perifer serta jaringan perifer lainya.
12 Efek pada otak adalah meningkatkan  neurotransmiter  terutama dopamin  yang  mengakibatkan  efek  adiksi terhadap nikotin. 13 Efek pada jaringan perifer dan sistem saraf perifer adalah kontraksi otot skeletal.  Namun  pada  medulla  adrenal adalah  meningkatkan  katekolamin,  efek  ini merupakan  efek  dominan  yang  terjadi  pada manusia akibat nikotin. 14 Penelitian  ini  menunjukkan  bahwa pemberian ekstrak daun tembakau
( Nicotiana  tabacum )  semakin  menurunkan berat  lemak  visceral,  semakin  besar  dosis ekstrak yang diberikan maka semakin besar pula  penurunan  berat  lemak  viseral. Penelitian  oleh  Anderson  dan  Arner  (2001) telah menunjukkan bahwa nikotin menginduksi  lipolisis  sebagian  dengan  cara menginduksi pelepasan katekolamin.
Katekolamin  akan  mengaktivasi  reseptor beta  adrenergik  di  sel  adiposa  kemudian menginduksi jaras untuk lipolisis. 15 Peningkatan lipolisis akan meningkatkan  konsentrasi  asam  lemak. Peningkatan turn  over asam  lemak berhubungan  dengan  overproduksi  VLDL, trigliserida,  LDLc,  dan  HDLc  yang  lebih rendah. Pemberian tembakau pada manusia meningkatkan  kadar  trigliserida  dan  VLDL serta  menurunkan  kadar  HDLc.  Efek  ini diakibatkan  oleh  nikotin,  sebagaimana dikonfirmasi  oleh  peningkatan  kadar nikotin. 16
Selain  itu,  nikotin  juga  diduga  secara langsung  mengaktivasi  reseptor  kolinergik nikotinik di jaringan adiposa. Pada akhirnya, terjadi peningkatan gliserol dan asam lemak bebas  di  darah  akibat  pemberian  nikotin secara  sistemik.  Meskipun    demikian, keberadaan  reseptor  kolinergik  nikotinik pada  sel  adiposit  masih  memerlukan penelitian lebih lanjut. 17
Penelitian  lainnya  yang  membuktikan mekanisme  penyebab  penurunan  berat lemak  yaitu  penurunan  aktivitas  LPL  pada tikus  yang  diberi  nikotin  jangka  lama  tetapi tanpa disertai penurunan jumlah protein atau mRNA  LPL. 18 Nikotin  juga  diketahui menghambat lipogenesis dengan mekanisme  perantara  yaitu  peningkatan aktivitas  AMP- activated Protein  Kinase (AMPK) 19 .
Selain  aktivasi  lipolisis,  inhibisi
lipogenesis  dan  penurunan  penyimpanan lemak  oleh  sel,  penurunan  berat  lemak visceral  pada  pemberian  ekstrak  tembakau juga  dapat  disebabkan  oleh  peningkatan aktivitas  thermogenesis  pada  jaringan adiposa  coklat  melalui  aktivasi  sistem  saraf simpatis dan peningkatan uncoupling protein 1. 20-22 Nikotin dapat meningkatkan pengeluaran katekolamin dan asetilkolin oleh sel  adrenal.
23 Epinefrin  dan  norepinefrin selanjutnya  mengaktivasi  thermogenesis  di jaringan lemak coklat. 24
Penurunan  berat  lemak  juga  dapat disebabkan  oleh  penurunan intake makan pada  tikus  yang  diberikan  esktrak  etanol tembakau. 25 Pemberian  nikotin  pada  tikus diketahui  menurunkan  nafsu  makan  melalui aktivasi  reseptor  melanocortin-4  (MC4R) yang  terekspresi  pada  neuron  hipothalamus pro-opiomelanocortin (POMC) yang menimbulkan  rasa  kenyang. 26,27 Meskipun demikian,  aktivasi  neuropeptida  Y  (NPY) pada  hipothalamus  dan  orexin  juga  diamati setelah pemberian nikotin selama 7 minggu. NPY  dan  orexin  dapat  meningkatkan  nafsu makan. 27 Nikotin  ikut  terhirup  pada  saat seseorang  merokok  atau  terpapar  asap rokok. Nikotin yang menyebabkan penurunan berat badan juga sejalan dengan hasil  beragam  studi  observasi  bahwa berhenti  merokok  dapat  menimbulkan kegemukan. 28 Selain  itu,  berhenti  merokok menormalkan  nafsu  makan,  thermogenesis, dan mobilisasi lipid melalui aktivitas AMPK. 22 Pada  penelitian  yang  dilakukan  oleh Hosseini et  al. (2011)  bahwa  pemberian nikotin  secara  intraperiotenial  dengan  dosis kecil  (0,5;  1;  1,5  mg/kgBB)  menunjukkan efek peningkatan sekresi insulin. 8 Selain itu, penelitian  oleh  Kazeem et  al .  (2014)  yang memperlihatkan  pemberian  efek  ekstrak etanol  daun  tembakau  diduga  dapat menurunkan  kadar  glukosa  darah  melalui hambatan  terhadap  α-amylase  dan  α- glucosidase.  Hambatan  terhadap  kedua hormon  tersebut  menyebabkan  karbohidrat tidak diubah menjadi monosakarida sehingga mencegah hiperglikemi. 7
Kemungkinan  dosis  yang  dipakai  dalam penelitian ini terlampau besar sehingga efek nikotin  untuk  sekresi  insulin  dan  hambatan terhadap  enzim  pemecah  karbohidrat  tidak terjadi. Untuk itu, diperlukan penelitian lebih lanjut  untuk  mengetahui  dosis  nikotin  yang tepat  sebagai  terapi  alternatif  diabetes mellitus (DM).

## Kesimpulan
Ekstrak  etanol  daun  tembakau ( Nicotana tabacum ) menyebabkan penurunan  berat  lemak  visceral  pada  tikus model  diabetes  mellitus,  diduga  melalui beberapa  mekanisme  yaitu  peningkatan lipolisis, penurunan lipogenesis, peningkatan aktivasi thermogenesis dan penurunan nafsu makan. Diperlukan penelitian lebih lanjut dan dengan  dosis  yang  lebih  tepat  untuk membuktikan bahwa ekstrak daun tembakau dapat  bermanfaat  sebagai  terapi  alternatif diabetes mellitus.

## Daftar Pustaka
1. International Diabetes Federation. (Online). 2015. http://www.idf.org.
Diakses 20 Maret  2017.
2. Tendra,  H. Segala  Sesuatu  yang  Harus Anda Ketahui Tentang Diabetes . Jakarta: PT Gramedia Pustaka Utama. 2008.
3. Choi SM, Tucker DF,  Gross DN,  Easton RM, DiPilato  LM,   Dean  AS,   Monks BR, and  Birnbaum MJ. Insulin Regulates Adipocyte  Lipolysis  via  An  Akt- Independent Signaling Pathway. Mol Cell Biol. 2010; 30(21): 5009–5020.
4. Andayani  TM,  Ibrahim  MIM,  dan  Asdie AH.  The  Effect  of  Combination  Therapy of Sulfonylurea, Metformin, and Acarbose in  Type  2  Diabetes  Mellitus  Patients. Majalah  Farmasi  Indonesia. 2009;
20(4):224 – 230.
5. Diabetes  Medication  Side  Effects. (Online).
2017. http://www.diabetes.co.uk.  Diakses  13 Mei 2017. 6. Kazeem  MI,  Ogungbe  SM,  Saibu  GM, Aboyade  OM.  In  vitro  Study  on  the Hypoglicemic  Potential  of Nicotiana
tabacum Leaf  Extracts. Bangladesh  J
Pharmacol . 2014; 9:140-145.
7. Hosseini E. The Effect of Nicotine on the Serum  Level  of  Insulin  in  Adult  Male Wistar  Rats. Journal  of  Cell  and  Animal Biology . 2011; 5(10):215-218. 8. Donnelly  KL,  Smith  CI,  Schwarzenberg SJ, et al . Sources of Fatty Acids Stored in Liver  and  Secreted  Via  Lipoproteins  in Patients  with  Nonalcoholic  Fatty  Liver Disease. J  Clin  Invest . 2005; 115:1343– 1351.
9. Guyton  and  Hall. Textbook  of  Medical
Physiology . 12 th Edition.Singapore: Elsevier. 2014. P 1027.
10. Taskinen  MR.  Lipoprotein  Lipase  in Diabetes. Diabetes  Metab  Rev . 1987; 3(2):551-70. 11. Doolittle DJ, Winegar R, Lee CK, Caldwell WS, Hayes AW, de Bethizy JD.  The  Genotoxic  Potential  of  Nicotine and  Its  Major  Metabolites. Mutat
Res . 1995; 344:95–102.
12. Run-Hua  Liu,  Masanari  M.,  and Matsukura  S.  The  Expression  and Functional Role of Nicotinic Acetylcholine Receptors in Rat Adipocytes. J Pharmacol Exp Ther . 2004; 310:52–58. 13. Dani  JA,  De  Biasi  M.  Cellular Mechanisms  of  Nicotine  Addiction. Pharmacol Biochem Behav . 2001; 70:439–446. 14. Tweed  JO, Hsia  SH,  Lutfy  K, and Friedman  TC.The  Endocrine  Effects  of Nicotine  and  Cigarette  Smoke. Trends Endocrinol Metab . 2012; 23(7): 334–342 . 15. Genetic  Home  Reference.  LPL  Gene. (Online).    2017.  http://ghr.nlm.nih.gov. Diakses 22 Maret  2017.
16. Thorat  JS,  Joshi  AG,  Wingkar  KC,  and Sontakke  AV.  Effect  of  Smokeless Tobacco  Consumption  on  Lipid  Profile. RJPBCS. 2014; 5(6):1260-1266.
17. Andersson  K,  Arner  P. Cholinoceptor- Mediated Effects on Glycerol Output from Human  Adipose  Tissue  using  In  Situ Microdialysis. Br  J  Pharmac .   1995;
115:1155-1162.
18. Andersson  K  and  Arner  P.  Systemic Nicotine  Stimulates  Human  Adipose
19. Tissue Lipolysis Through Local Cholinergic and Catecholaminergic Receptors. Int J Obes 2001;  25(8):1225- 1232.
20. Sztalryd  C,   Hamilton  J,   Horwitz  BA, Johnson  P, Kraemer  FB.  Alterations  of
Lipolysis  and  Lipoprotein  Lipase  in Chronically  Nicotine-Treated  Rats. Am  J Physiol . 1996; 270(2 Pt 1):E215-23. 21. An  Z, Wang  H, Song  P, Zhang  M, Geng
X, Zou  MH.  Nicotine-Induced  Activation of AMP-Activated Protein Kinase Inhibits
Fatty  Acid  Synthase  in  3T3L1 Adipocytes: a  Role for Oxidant Stress. J
Biol Chem . 2007; 282(37):26793-801.
22. Martínez  de  Morentin  PB,  Whittle  AJ,  et al.  Nicotine  Induces  Negative  Energy Balance  Through  Hypothalamic  AMP- Activated Protein Kinase. Diabetes . 2012; 61:807– 817.
23. Yoshida T, Sakane N, Umekawa T, et al. Nicotine Induces Uncoupling Protein 1 in White Adipose Tissue of Obese Mice. Int
J Obes Relat Metab Disord . 1999; 23:570 –575. 24. Arai K, Kim K, Kaneko K, et al. Nicotine Infusion  Alters  Leptin  and  Uncoupling Protein  1  mRNA  Expression  in  Adipose
Tissues of Rats. Am J Physiol Endocrinol
Metab . 2001; 280:E867–E876. 25. Mizobe F, Livett BG. Nicotine Stimulates Secretion  of  Both  Catecholamines  and Acetylcholinesterase from Cultured Adrenal Chromaffin Cells. J Neurosci . 1983; 3(4):871-6. 26. Harms M and Seale P. Brown and Beige Fat: Development, Function and Therapeutic Potential. Nature Medicine 2013; 19: 1253-1262.
27. Mineur  YS, Abizaid  A, Rao  Y, Salas
R, DiLeone RJ, Gündisch D, Diano S, De Biasi  M, Horvath  TL, Gao  XB, Picciotto MR.  Nicotine  Decreases  Food  Intake Through  Activation  of  POMC  Neurons. Science . 2011; 332:1330–1332. 28. Huang H, Xu Y, van den Pol AN.Nicotine Excites Hypothalamic Arcuate Anorexigenic Propiomelanocortin Neurons and Orexigenic Neuropeptide Y Neurons:  Similarities  and  Differences. J
Neurophysiol . 2011; 106:1191–1202. 29. Lisa  AP  and  Johnsen  S.  Smoking Cessation, Obesity and Weight Concerns in  Back  Women:  A  Call  Culturally Competent Interventions. Original Communication. Journal  of  National Medical  Association .  2005;  97(12):1630-
30. 1638.