## ALCHEMY Journal of Chemistry

## Artikel Penelitian
Efektivitas antibakteri senyawa katekin dari ekstrak daun teh ( Camelia sinensis L. var assamica ) terhadap  bakteri Pseudomonas fluorescens Elly Rustanti
Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Husada, Jombang, Indonesia
INFO ARTIKEL ABSTRAK Sejarah arikel: Submisi Revisi Diterima Tersedia online: 4 Oktober 2016 Tea  leaves  is  one  of  natural  product  that  used  as  antibacterial. Antibacterial  compound  can  be  used  as  natural  preservative.  The  aim was  to  determine  effectiveness  of  tea  leaves  as  natural  antibacterial  to inhibit Pseudomans  fluorescens .  Tea  leaves  was  extracted  by maceration.  Separation  the  extract  (catechin)  conducted  by  analytical TLC  (chromatography  thin  layer)  using  various  eluent  such  as  ethyl acetate : aquadest : formic acid (18:1:1), toluene : acetone : formic acid (3:3:1) and  chloroform : methanol : aquadest (6.5:3.5:1). Analytical TLC analysis  showed  the  best  eluent,  ethyl  acetate : aquadest  : formic  acid. The  best  eluent  was  used  for  preparation  using  preparative  TLC. Antibacterial  test  showed  that  isolate  no.2  was  given  the  highest effectiveness to bacterium P. fluorescens with inhibition zone 23.3 mm.
Keywords: tea leaves, catechin, antibacteri, Pseudomans fluorescens Daun teh adalah salah satu bahan alam yang dapat digunakan sebagai antibakteri.  Zat tersebut  dapat  juga  digunakan  sebagai  pengawet  alami. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  keefektifan  daun  teh  sebagai antibakteri alami dalam menghambat bakteri Pseudomonas fluorescens .
Proses  ekstraksi  dauh  teh  yang  dilakukan  dengan  metode  maserasi. Pemisahan  ekstrak  daun  teh  (katekin)  dilakukan  dengan  Kromatografi Lapis Tipis (KLT) analitik  dengan variasi eluen yaitu etil asetat:air:asam format (18:1:1), toluena:aseton:asam format (3:3:1) dan kloroform:metanol:air  (6,5:3,5:1).  Hasil  KLT  analitik menunjukkan  bahwa eluen  terbaik  adalah  etil  asetat:air:asam  format.  Eluen  tersebut digunakan  untuk  pemisahan  menggunakan  KLT  preparatif.  Hasil  uji antibakteri  menunjukkan  bahwa  isolat  2  dari  ekstrak  daun  teh memberikan  efektivitas  terbaik  sebagai  antibakteri P.  Fluorescens dengan zona hambat  23,3 mm.
Kata Kunci: daun teh, katekin, antibakteri, Pseudomonas fluorescens
Penulis korespondensi:
Email: eilrose1211.er@gmail.com

## 1. Pendahuluan
Bahan  pangan  merupakan  jenis  bahan  yang mudah  mengalami  kerusakan  atau  penurunan mutu.  Salah  satu  cara  pencegahannya  adalah dengan  penambahan  bahan  pengawet.  Bahan  ini
dapat  mencegah  kerusakan  biologi  yang disebabkan oleh mikroorganisme.  Oleh karena itu, bahan  pengawet  dapat  berfungsi  sebagai antibakteri. Pengunaan  bahan  pengawet  atau senyawa  antibakteri  telah  digunakan  sejak  lama (Ardiansyah,  2007).  Saat  ini,  banyak  industri
pangan  yang  menggunakan  pengawet  sintesis dalam  setiap  produksinya.  Fakta  tersebut  cukup meresahkan masyarakat karena dapat mengganggu kesehatan.
Pseudomonas  fluorescens adalah  salah  satu bakteri  yang  dapat  penyebab  berbagai  jenis kerusakan bahan pangan. Bakteri dengan spesies ini  dapat  memproduksi  enzim  yang  dapat memecah  baik  komponen  lemak  maupun  protein dari  bahan  pangan  (Buckle  dkk.,  2007).  Bakteri golongan Pseudomonas dapat memecah rangkaian  karbohidrat  dengan  enzim-enzim oksidase  yang  dihasilkan  sehingga  menimbulkan pewarnaan  pada  ikan. P.  flourescens dapat menimbulkan  noda-noda  berwarna  kuning  atau kuning  kehijauan  sebelum  ikan  menjadi  busuk (Hadiwiyoto, 1993).
Indonesia  merupakan  salah  satu  negara dengan perkebunan teh yang cukup luas. Tanaman teh  yang  tumbuh  di  Indonesia  mayoritas merupakan  varietas Assamica .  Teh  varietas  ini memiliki  kandungan  katekin  (zat  bioaktif  utama dalam teh) yang tinggi. Katekin termasuk senyawa golongan polifenol.  Oleh karena itu, teh varietas ini berpotensi  untuk  dikembangkan  menjadi  produk olahan pangan. Selain itu, teh juga bisa digunakan sebagai  bahan  aditif  berupa  zat  pengawet  pada ikan,  produk  kosmetik  dan  makanan  (Hartoyo, 2003).
Penelitian  tentang  efisiensi  polifenol  daun  teh melawan  pemudaran  warna  oleh  sinar  UV  pada ikan  salmon  telah  dilakukan.  Salmon  merupakan ikan  dengan  kulit  berwarna  merah  karena  adanya kandungan  karoteinoid.  Karotenoid  tersebut  akan memudar  warnanya  seiring  dengan  matinya  ikan. Namun,  dengan  penambahan  polifenol  teh, pemudaran  warna  merah  daging  ikan  dapat dicegah lebih lama (Syah, 2006).
Berdasarkan  uraian  di  atas,  perlu  dilakukan penelitian  tentang  uji  aktivitas  antibakteri  senyawa katekin  dari  daun  teh  ( Camellia sinensis ,  L. var. Assamica )  yang  efektif  sebagai  antibakteri  alami dalam  bentuk  ekstrak  antibakteri.  Penelitian  ini merupakan salah satu upaya untuk mengoptimalkan  pemanfaatan  bahan  alam  hayati Indonesia.  Pencarian  eluen  terbaik  juga  perlu dalam  pemisahan  senyawa  aktif  khususnya senyawa  katekin  sehingga  diketahui  fraksi  aktif yang mempunyai potensi sebagai antibakteri.

## 2. Bahan dan metode

## 2.1. Bahan
Pucuk daun teh segar diambil dari perkebunan teh Wonosari, Lawang, Malang. Bahan kimia yang digunakan  antara  lain  kloroform,  metanol,  etil asetat,  asam  format,  aseton,  dan  toluena.  Bahan untuk uji antibakteri antara lain etanol 90%, kertas cakram,  nutrien  agar  (NA),  nutrien  borth  (NB), streptomicin,  biakan  murni P.  fluorescens. Bahan kimia  yang  lain  adalah  plat  silika  gel  GF 254 , akuades, amoniak dan larutan FeCl 3 .

## 2.2. Preparasi sampel
Daun  teh  sebanyak  350  g  dicuci,  dipotong kecil-kecil  dan  dikeringkan  dalam  oven  pada  suhu 30-37 ° C sampai diperoleh berat konstan. Kemudian dihaluskan  menjadi  serbuk,  hasil  yang  diperoleh berupa serbuk daun teh.

## 2.3. Ekstraksi senyawa katekin
Ekstraksi  senyawa  dilakukan  dengan  metode maserasi.  Lima  puluh  gram  serbuk  daun  teh direndam dalam  200 mL aquades selama 2,5 jam sambil  sesekali  dikocok  (Hukmah,  2007).  Ekstrak daun  teh  dipartisi  dengan  100  mL  kloroform  dan diulang  sebanyak  3  kali.  Fase  air  yang  diperoleh dimasukkan dalam corong pisah dan ditambahkan 100 mL  etil asetat. Proses tersebut diulang 3 kali. Fase etil asetat yang diperoleh dipekatkan dengan rotary  evaporator.  Ekstrak  pekat  yang  diperoleh digunakan untuk uji selanjutnya.

## 2.4. Pemisahan ekstrak  dengan KLTA
Pemisahan  dengan  KLTA  menggunakan  plat silika  gel  GF 254 2x10  cm 2 yang  sudah  diaktifkan dengan pemanasan pada suhu 30-40 ° C selama 10 menit.  Ekstrak  pekat  ditotolkan  pada  jarak  1  cm dari  tepi  bawah  plat  dan  dielusi  dengan  berbagai eluen. Eluen yang digunakan adalah etil asetat : air :  asam  format  (18:1:1),  toluena  :  aseton  :  asam format  (3:3:1),  dan  kloroform  :  methanol  :  air (6,5:3,5:1)  (Amarowicz  dkk.,  2005) . Noda-noda pada  permukaan  plat  diuapi  dengan  amoniak  dan diperiksa  di  bawah  sinar  UV  pada  panjang gelombang  254  nm.  Warna  biru  pucat  yang terbentuk  menunjukkan  adanya  katekin.  Noda berwarna  hitam  kebiruan  setelah  disemprot  FeCl 3 menunjukkan adanya katekin (Robinson, 1995)

## 2.5. Pemisahan ekstrak  dengan KLTP
Pemisahan  dengan  KLTP  plat  silika  gel  GF 254 berukuran 5x20 cm 2 . Ekstrak pekat hasil ekstraksi ditotolkan  di  sepanjang  plat  dan  dielusi  dengan menggunakan  eluen  terbaik  pada  KLTA.  Noda- noda  pada  permukaan  plat  diuapi  dengan  uap amoniak.  Adanya  katekin  ditunjukkan  dengan warna biru pucat di bawar sinar UV pada panjang gelombang  245  nm. Noda  yang  telah  disemprot larutan  FeCl 3 akan  membentuk  warna  hitam kebiruan  apabila  mengandung  katekin  (Robinson, 1995). Noda yang diperoleh dikerok dan dilarutkan dalam  air  untuk  uji  antibakteri.  Selain  itu,  noda dilarutkan dalam metanol untuk identifikasi dengan spektrofotometer FTIR.
2.6. Uji antibakteri
2.6.1. Peremajaan bakteri P. fluorocens
Biakan murni P. fluorescens diremajakan pada media padat. Proses peremajaan bakteri dilakukan secara  aseptik.  Selanjutnya  biakan  bakteri P. fluorescens diinkubasi pada suhu 25 ° C .
2.6.2.  Pembuatan  kurva  pertumbuhan  bakteri  P. fluorescens
Satu tabung kultur bakteri  ditumbuhkan dalam 100 mL NB dan diinkubasi pada suhu 25 ° C. Setiap selang  waktu  2  jam,  kultur  diambil  1  mL  dan diencerkan sampai volume  10 mL sampai tumbuh optimum.  Setelah  itu,  dilakukan  pengukuran densitas  optik  pertumbuhan  sel  pada  panjang gelombang  620  nm  menggunakan  spektronik. Kurva  pertumbuhan  bakteri  dibuat  dengan menghubungkan  waktu  inkubasi  dengan  densitas optik.

## 2.6.3. Pembuatan larutan bakteri P. fluorocens
Satu ose dari hasil peremajaan biakan murni P. fluorescens dilarutkan dalam 10 mL akuades steril.
2.6.4. Uji efektivitas antibakteri
Larutan nutrien agar dituang dalam cawan petri dan ditambahkan dengan 0,1 mL larutan bakteri P. fluorescens ,  kemudian  dihomogenkan  dan dibiarkan  memadat.  Kertas  cakram  yang  telah dipreparasi  diletakkan  di  atas  permukaan  media bakteri  dan  diinkubasi  pada  suhu  25 ° C  selama masa  pertumbuhan  optimum  bakteri.  Selanjutnya, diukur  diameter  zona  hambatnya.  Diameter  zona hambat  adalah  diameter  yang  tidak  ditumbuhi
bakteri di sekitar kertas cakram dikurangi diameter kertas cakram
Preparasi  kertas  cakram  yaitu  merendam kertas  cakram  dalam  isolat-isolat  hasil  KLTP dengan  variasi  sampel.  Kontrol  positif  dibuat dengan  merendam  kertas  cakram  dalam streptomisin  6,25  mg/mL,  sedangkan  kontrol negatif  dibuat  dengan  merendam  kertas  cakram dalam akuades steril.

## 3. Hasil dan pembahasan

## 3.1. Preparasi sampel
Pengeringan  dilakukan  agar  sampel  mudah untuk  dihaluskan  hingga  menjadi  serbuk  daun  teh dan  memudahkan  dalam  pengekstraksian.  Proses memberikan  nilai  rendemen  sebesar  17,24%. Sampel yang digunakan berupa serbuk daun teh.

## 3.2. Ekstraksi senyawa katekin
Proses  ekstraksi  merupakan  penarikan komponen  aktif  menggunakan  pelarut  tertentu (Harbone, 1987). Komponen aktif daun teh  adalah senyawa  katekin  menggunakan  metode  maserasi. Pemilihan  metode  maserasi  pada  penelitian  ini dikarenakan  senyawa  katekin  rentan  terhadap panas. Proses ekstraksi akan berlangsung optimal dengan  tersedianya  waktu  kontak  yang  cukup antara  pelarut  dan  sampel.  Selama  proses perendaman  dilakukan  beberapa  kali  pengocokan untuk menyempurnakan kontak antara pelarut dan sampel. Ekstrak daun teh yang diperoleh berwarna hijau.
Ekstrak  daun  teh  dipartisi  dengan  kloroform untuk  mengambil  senyawa-senyawa  yang  bersifat nonpolar,  seperti  lemak,  klorofil,  dan  kafein. Penambahan kloroform diulang untuk memaksimalkan  proses  pengambilan  senyawa yang  bersifat  non  polar.  Penambahan  kloroform menyebabkan terbentuknya dua fase yaitu fase air dan  fase  kloroform.  Fase  kloroform  dibuang  dan fase  air  diambil  untuk  dilakukan  tahap  partisi  ke dua.
Fase  air  dipartisi  dengan  etil  asetat. Penambahan etil asetat berfungsi untuk mengambil senyawa  katekin.  Penambahan  etil  asetat  diulang untuk  memaksimalkan  pengambilan  senyawa katekin.  Pada  tahap  ini  terbentuk  dua  fase  yaitu fase air dan etil asetat. Fase air dibuang dan fase etil asetat diambil. Fase etil asetat berwarna kuning dengan  berat  3,52  g.  Fase  ini  dipekatkan  dengan rotary evaporator sehingga diperoleh ekstrak pekat.
Proses evaporasi ini dilakukan untuk menghilangkan sisa etil asetat.

## 3.3. Pemisahan ekstrak katekin dengan KLTA
KLT  merupakan  metode  pemisahan  senyawa kimia  dengan  menggunakan  fase  diam  dan  fase gerak.  Pemisahan  katekin  dari  ekstrak  daun  teh dilakukan menggunakan 3 jenis eluen. Penggunaan berbagai jenis eluen pada pemisahan ini  bertujuan  untuk  mencari  eluen  terbaik  yang dapat  memisahkan  senyawa  katekin  yang terkandung dalam daun teh.  Hasil elusi ekstrak ini dengan  variasi  bentuk  sampel  dapat  ditunjukkan pada Tabel 1.
Tabel 1. Nilai retention factor (Rf) ekstrak daun teh dengan variasi eluen Noda Eluen A B C 1 0,19 0,44 0,87 2 0,37 0,56 3 0,58 0,60 4 0,66 5 0,79 6 0,92
Eluen A = etil asetat:air: asam format (18:1:1), eluen B = toluena:  aseton:asam  format  (3:3:1),  eluen  C  = kloroform:metanol:air (6,5:3,5:1)
Berdasarkan  Tabel  1,  eluen  terbaik  untuk memisahkan  ekstrak  katekin  adalah  etil asetat:air:asam  format  (18:1:1).  Eluen  ini  mampu memisahkan  ekstrak  dengan  menghasilkan  noda terbanyak  yaitu  6  noda.  Banyaknya  noda  yang terbentuk  bergantung  pada  interaksi  antara molekul-molekul  senyawa  dengan  pelarut  dan interaksi antara senyawa dengan fase diam. Eluen etil  asetat:air:asam  format  (18:1:1)  bersifat  agak polar  dan  kepolarannya  hampir  sama  dengan ekstrak  katekin  yang  dipisahkan  sehingga  noda yang  diperoleh  lebih  banyak.  Menurut  Robinson (1995),  etil  asetat  merupakan  pelarut  yang  baik untuk memisahkan katekin.
Jenis  fase  diam  juga  dapat  mempengaruhi proses  pemisahan  katekin.  Fase  diam  yang digunakan  adalah  silika  gel.  Silika  gel  adalah bentuk  dari  silikon  dioksida  (silika).  Pada permukaan silika gel terdapat ikatan Si-O-H selain Si-O-Si.  Permukaan  silika  gel  sangat  polar  dan karenanya  gugus  -OH  dapat  membentuk  ikatan
hidrogen  dengan  senyawa-senyawa  yang  sesuai disekitarnya (Sastrohamidjojo, 2005).
Adanya  senyawa  katekin  pada  sampel  noda diidentifikasi  dengan  pereaksi  FeCl 3 .  Pereaksi  ini banyak digunakan untuk mengidentifikasi senyawa fenol  terutama  katekin  dan  akan  menghasilkan warna  hitam  kebiruan  (Robinson,  2005).  Hasil identifikasi  tersebut  menunjukkan  adanya  katekin pada  sampel  noda.  Identifikasi  plat  diperkuat dengan  penyinaran  di  bawah  lampu  UV  pada panjang  gelombang  254  nm.  Warna  biru  pucat yang terbentuk menunjukkan adanya katekin pada noda.

## 3.4. Pemisahan ekstrak katekin dengan KLTP
Pemisahan  KLTP  menggunakan  eluen  etil asetat:air:asam  format  (18:1:1).  Eluen  ini  adalah eluen  terbaik  hasil  KLTA  karena  mampu memisahkan  ekstrak  daun  teh  dengan  baik.  Noda hasil elusi diidentifikasi menggunakan uap amoniak dan FeCl 3 . Pemisahan ekstrak katekin dapat dilihat pada Tabel 2.

## Tabel 2.
Nilai  Rf  dan  warna  noda  pada  kromatogram  hasil KLTP ekstrak daun teh
Noda Rf Warna Noda Tanpa UV  Amoniak FeCl 3 1 0,19 Kuning Biru pucat  Hitam biru 2 0,37 Kuning Biru pucat  Hitam biru 3 0,58 Ungu Biru pucat  Hitam biru 4 0,66 Kuning Biru pucat  Hitam biru 5 0,79 Ungu Biru pucat  Hitam biru 6 0,92 Orange Biru pucat  Hitam biru
Ke-enam  noda  akan  membentuk  warna  biru pucat  ketika  diuapi  dan  disinari  lampu  UV. Berdasarkan  perubahan  warna,  noda-noda tersebut  diduga  merupakan  senyawa  katekin. Menurut  Robinson,  (1995),  noda  pada  plat  akan berubah  menjadi  warna  biru  pucat  selelah  diuapi dengan  amoniak  dan  diperiksa  dibawah  sinar ultraviolet (UV). Selain itu, adanya senyawa katekin juga  ditunjukkan  terbentuknya  warna  hitam kebiruan  setelah  disemprot  dengan  larutan  FeCl 3 . Suatu senyawa yang direaksikan dengan FeCl 3 jika terjadi  warna  hitam  kebiruan,  merupakan  bukti adanya 3,4,5-trihidroksi fenol (seperti galokatekin). Noda  yang  dihasilkan  pada  KLT  preparatif kemudian dikerok dan dilarutkan dalam air untuk uji antibakteri.

## 3.5. Uji antibakteri

## 3.5.1. Peremajaan bakteri P. fluorescens
Peremajaan  bakteri  dilakukan  untuk  menjaga ketersediaan  nutrisi,  regenerasi  bakteri  dan menghindari  terjadinya  perubahan  karakter  dari biakan  murni  bakteri.  Media  pertumbuhan mengandung  nutrisi  dan  zat-zat  yang  diperlukan oleh  bakteri  untuk  tumbuh.  Media  cair  digunakan untuk produksi dan pembuatan kurva pertumbuhan, sedangkan  media  padat  digunakan  untuk peremajaan biakan murni bakteri.

## 3.5.2.  Pembuatan  kurva  pertumbuhan  P. fluorescens
Kurva pertumbuhan menggambarkan fase-fase yang  ada  dalam  siklus  hidup P.  fluorescens yang meliputi  fase  adaptasi,  fase  logaritmik,  fase stasioner,  dan  fase  kematian.  Kurva  pertumbuhan dapat  digunakan  untuk  menentukan  waktu  panen yang ideal yaitu pada fase stasioner. Pada saat ini, jumlah  sel  bakteri  mendekati  maksimum  seiring dengan kematian bakteri.
Pembuatan kurva pertumbuhan diawali dengan penumbuhan  biakan  murni  bakteri  yang  telah diremajakan pada medium cair dan diinkubasi pada inkubator  dengan  suhu  25 ° C.  Pada  tahap  inil dilakukan  pengaturan  aerasi  dan  agitasi  untuk menjaga  kondisi  fisika  dan  kimia  media pertumbuhan  serta  memperlancar  transfer  nutrisi ke dalam sel.
Pertumbuhan bakteri diamati dengan mengukur densitas optik (DO) media pada panjang gelombang  620  nm  setiap  selang  waktu  2  jam. Tahap  ini  dilakukan  hingga  diperoleh  nilai  DO media konstan dan akhirnya mengalami penurunan. Nilai  DO  sebanding  dengan  massa  sel  yang terdapat  dalam  media,  makin  banyak  massa  sel makin  besar  DO.  Kurva  pertumbuhan  dibuat dengan  menghubungkan  waktu  inkubasi  dengan nilai DO.
Berdasarkan  Gambar  1.  diketahui  bahwa pertumbuhan P. fluorescens melewati 4 fase. Fase pertama  adalah  adaptasi  yang  terjadi  pada  waktu inkubasi  0-6  jam.  Pada  fase  ini,  pertumbuhan P. fluorescens sangat  lamban  karena  masih beradaptasi  dengan  media.  Fase  kedua  adalah logaritmik pada waktu inkubasi 6-36 jam. Pada fase ini, P.  fluorescens mengalami  pembelahan  sel secara terus menerus yang ditandai meningkatnya jumlah  sel  sampai  mencapai  jumlah  maksimum. Fase stasioner merupakan fase ketiga yang dicapai
waktu  inkubasi  36  jam.  Fase  stationer  ditandai dengan  pembelahan  sel P.  fluorescens yang sebanding dengan jumlah kematian sehingga tidak terjadi  peningkatan  jumlah  sel.  Fase  terakhir adalah  fase  kematian  yang  terjadi  setelah diinkubasi  selama  48  jam.  Fase  ini  ditandai dengan  penurunan  jumlah  sel P.  fluorescens karena kematian sel akibat habisnya nutrisi penting dalam media.
0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 56 60 Waktu Inkubasi (Jam) D e n s ita s O p ti k (A )
Gambar  1. Kurva  pertumbuhan P.  fluorescens. Kurva ini menunjukkan 4 fase yaitu fase adapatasi pada 0-6 jam, logaritmik 6-36 jam, stationer pada 36 jam, dan kematian pada 48 jam.
Berdasarkan  data  pada  kurva  pertumbuhan dapat  ditentukan  lama  waktu  inkubasi  inokulum dan  waktu  pengukuran  zona  hambat.  Inkubasi inokulum  dilakukan  selama  16  jam.  Lama  waktu tersebut merupakan tengah-tengah fase logaritmik. Penentuan  zona  hambat  bakteri P.  fluorescens dapat diukur setelah diinkubasi selama 36 jam.

## 3.5.3. Efektivitas antibakteri P. fluorescens
Uji  efektivitas  senyawa  katekin  ekstrak  daun teh  dilakukan  dengan  mengukur  zona  hambatan yang  terbentuk  di  sekitar  cakram.  Kontrol  positif digunakan  adalah  streptomicin  6,25  mg/mL  dan kontrol  negatif  yang  digunakan  adalah  akuades. Hasil  uji  efektivitas  6  isolat  hasil  KLTP  dengan konsentrasi 15 mg/mL  dan 3 kali ulangan terhadap bakteri P. fluorescens ditunjukkan pada Tabel 3. Tabel 3. menunjukkan adanya perbedaan zona hambat  bakteri P.  fluorescens terhadap beberapa isolat.  Pada  isolat  1,  efektivitas  antibakteri  mulai tampak  dengan  zona  hambat  yang  terbentuk sebesar  21,0  mm  yang  menunjukkan  respon hambatan pertumbuhannya kuat, dan pada isolat 2 efektivitas  antibakteri  juga  menunjukkan  respon hambatan  pertumbuhan  yang  sangat  kuat  dengan zona hambat sebesar 23,3 mm. Pada isolat 3, 4, 5, dan  6  kurang  memberikan  efektivitas  antibakteri. Hal  tersebut  ditunjukkan  rendahnya  respon
hambatan  pertumbuhan  bakteri.  Berdasar  data Tabel 3 diketahui bahwa isolat yang efektif sebagai antibakteri P. fluorescens adalah isolat 2 (Gambar 2).
Tabel 3 .
Data  zona  hambat  senyawa  katekin  ekstrak  daun teh sebagai antibakteri P. fluorescens
No. Cakram Diameter zona hambat (mm) 1 2 3 Rerata 1. Isolat 1 22,0 21,0  20,0 21,0 2. Isolat 2 23,0 23,0  24,0 23,3 3. Isolat 3 2,00 1,00  1,00 1,30 4. Isolat 4 3,00 2,00  2,00 2,33 5. Isolat 5 2,00 2,00  1,00 1,70 6. Isolat 6 5,00 5,00  5,00 5,00 7. Kontrol + 43,0 38,0  35,0 38,7 8. Kontrol  - 0,00 0,00  0,00 0,00
Gambar  2. Zona  hambat  pada  Isolat  2  sebesar 23,3 mm. Isolat 2 menunjukkan respon hambatan terbesar.

## 3.6.  Identifikasi  katekin  dengan  spekrofotometer FTIR
Isolat yang terbaik sebagai antibakteri terhadap bakteri P. fluorescens adalah isolat 2 dengan nilai Rf  0,37.  Isolat  2  kemungkinan  mengandung senyawa  EpiCatechin  (EC)  karena  jumlah  gugus OH  dan  nilai  Rf-nya  lebih  kecil  dari  EGCG sehingga  kurang  polar.  Berdasarkan  penelitian (Cheong  ddk.,  2005)  menyatakan  bahwa  kadar epicatechin  (EC)  dalam  ekstrak  serbuk  daun  teh lebih  besar  daripada  ekstrak  daun  teh.  Analisa hasil  KLT  tersebut  kemudian  didukung  dengan identifikasi menggunakan  spektrofotometer FTIR.
Berdasarkan  hasil  pengamatan  spektra  FTIR dapat diketahui bahwa gugus fungsi yang terdapat pada  isolat  2  dari  ekstrak  daun  teh  adalah  gugus O-H  dari  ikatan  hidrogen  intermolekuler,  C-H  dari aromatik  CH 3 ,  CH  simetris  dari  CH 2 ,  CH 2 ,  C=C
alkena,  dan  C-O  dari  alcohol  (Socrates,  1980). Hasil  spektra  IR  tidak  memperlihatkan  serapan gugus  karbonil  di  daerah  1650-1700  cm -1 (Corpriady  dkk.,  2001).  Data  speltrum  IR menunjukkan adanya serapan gugus hidroksi pada bilangan  gelombang  3200-3400  cm -1 ,  dan  cincin benzen  pada  1626,  1520,  1462  cm -1 ,  sedangkan vibrasi ulur C-H alifatik ditandai dengan munculnya puncak serapan didaerah 2923 dan 2852 cm -1.

## 4. Kesimpulan
Ekstrak  daun  teh  efektif  sebagai  antibakteri terhadap  bakteri P.  fluorescens adalah  isolat  2. Isolat  ini  memiliki zona  hambat  sebesar  23,3  mm. Ekstrak  daun  teh  diduga  mengandung  senyawa EpiCatechin (EC).

## 6. Daftar pustaka
Amarowicz, R., Maryniak, A., & Shahid, F. (2005). TLC  separation  of  methylated  (-)- epigallocatechin-3-gallate. Czech  J.  Food Sci., 23 (1), 36-39. Ardiansyah.  (2007,  Juni  3). Antimikroba  dari tumbuhan  (bagian  pertama) .  Retrieved 2009, from www.beritaiptek.com: http://www.beritaiptek.com/zberita-berita- iptek-2007-06-03-antimikroba-dari- tumbuhan-(bagian-pertama).shtml.htm
Buckle, K.A., Edwards, R.A., Fleet, G.H., & Wotton, M. (2007). Ilmu pangan. Jakarta: UI Press. Cheong, W.J., Park, M.H., Kang, G.W., Ko, J.H., &
Seo, Y.J. (2005). Determination of catechin compounds  in  korean  green  tea  infusions under various extraction conditions by high performance  liquid  chromatography. Bull. Korean Chem. Soc., 26 (5), 747-754. Corpriady,  J.,  Miharty,  &  Herdini.  (2001).
Gallokatekin:  senyawa  flavonoid  lainnya dari  kulit  batang  tengas  (Gluta  renghas Linn.). Jurnal Natur Indonesia, 4 (1). Hadiwiyoto, S. (1993). Teknologi pengolahan hasil perikanan. Yogyakarta: Liberty.
Harbone,  J.  (1987). Metode  fitokimia,  penuntun cara  modern  menganalisis  tumbuhan. Bandung: ITB Press. Hartoyo,  A.  (2003). Teh  dan  khasiatnya  bagi kesehatan. Yogyakarta: Kanisius.
Zona hambat
Hukmah,  S.  (2007). Aktivitas  antioksidan  katekin dari  teh  hijau  (Camellia  sinesis  O.K.  Var. Assamica  (mast))  hasil  ekstraksi  dengan variasi  pelarut  dan  suhu. Skripsi, Universitas  Islam  Negeri  Maulana  Malik Ibrahim, Kimia, Malang. Robinson, T. (1995). Kandungan senyawa organik tumbuhan tinggi. (K. Padmawinata, Trans.)
Bandung: ITB Press.
Sastrohamidjojo, H. (2005). Kromatografi. Yogyakarta: UGM Press.
Socrates,  G.  (1980). Infrared  characteristic  group frequencies. England.
Syah, A. N. (2006). Taklukkan penyakit dengan teh hijau. Jakarta: PT. Agromedia Pustaka.