## Kata Kunci
 Biji jarak pagar
 Pare
 Kualitas spermatozoa
 Testis
Diterima 20 Desember 2017
Direvisi 2 Februari 2018
Disetujui 9 Maret 2018

## * Penulis Koresponding
Lilis Nurhadijah
Kampus IPB Dramaga lilis@apps.ipb.ac.id
Penulis Lilis Nurhadijah 1* , Alfa A Perdana 1 , Widyawati 1 , Ferian A Setiyoko 2 , Baiq NM Utami 3 , Tri Isyani Tungga Dewi 4 , Irma H Suparto 1,5
Afiliasi 1 Departemen Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor 2 Departemen Biokimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor
3 Departemen Budidaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor
4 Rumah Sakit Hewan, Institut Pertanian Bogor
5 Pusat Studi Satwa Primata, Institut Pertanian Bogor

## ABSTRAK
Bahan alam yang dapat menghambat spermatogenesis merupakan suatu  alternatif untuk  kontrasepsi  pria.  Penelitian  ini  bertujuan  mengevaluasi  formulasi  optimum berbasis  biji  jarak  pagar  dan  buah  pare  yang  dapat  menginhibisi  spermatogenesis. Bahan  sampel  dimaserasi  alkohol  70%  untuk  memperoleh  ekstrak  kasar.  Ekstrak diujikan  pada  tikus  Wistar  jantan  dewasa  sebanyak  30  ekor  dan  dibagi  menjadi  enam kelompok  secara  acak  (n=5  ekor).  Kelompok  I  sebagai  kontrol  memperoleh  pelarut akuades; kelompok  II dan III secara berurutan memperoleh ekstrak  biji jarak  dan pare dengan  dosis  50  mg/kgBB.  Tiga  kelompok  lainnya,  yaitu  IV,  V,  dan  VI  memperoleh formulasi  gabungan  dengan  rasio  ekstrak  biji  jarak  pagar  dan  pare  1:3,  3:1  serta  1:1, secara  berurutan.  Perlakuan  diberikan  per  oral  satu  hari  sekali  selama  48  hari  sesuai dengan  siklus  spermatogenesis.  Pada  akhir  perlakuan,  pemeriksaan  sperma  untuk konsentrasi  dan  kualitasnya  serta  bobot  testis.  Hasil  uji  rendemen  ekstrak  biji  jarak pagar  dan  buah  pare  secara  berurutan  sebesar  6.11  %  dan  3.32  %.  Senyawa  fitokimia yang  terdapat  pada  ekstrak  pare  dan  biji  jarak  pagar  antara  lain,  alkaloid,  fenol, flavonoid, tanin, saponin, triterpenoid, dan steroid. Efek ekstrak terhadap bobot testis dan  konsentrasi  sperma  tidak  ada  perbedaan  yang  nyata  antar  kelompok  (ANOVA  P >0.05)  sedangkan  untuk  kualitas  motilitas  sperma  ada  kecenderungan  menurun  pada formulasi ekstrak biji jarak dan buah pare (1:3).

## PENDAHULUAN
Program  keluarga  berencana  (KB)  diselenggarakan  pemeintah  bertujuan mengendalikan  laju  pertumbuhan  penduduk,  yang  nantinya  diharapkan  dapat berkontribusi dalam peningkatan sumber daya manusia. Berdasarkan sensus penduduk pada  30  Juni  2016,  penduduk  Indonesia  berjumlah  257.912.349  jiwa  dengan  rata-rata pertumbuhan 1.38 persen maka diprediksikan jumlah penduduk Indonesia pada tahun 2045  mendatang  menjadi  450  juta,  jika  pelaksanaan  program  KB  kurang  memberikan hasil  yang  optimal. Keberhasilan  program  ini  tergantung  pada  partisipasi  kedua  pihak,

## Aktivitas Formulasi Biji Jarak Pagar dan Pare terhadap Spermatogenesis pada Tikus Wistar
baik  laki-laki  maupun  perempuan.  Tetapi,  selama  ini partisipasi  laki-laki  dalam  program  ini  masih  relatif rendah  bila  dibandingkan  dengan  perempuan. Berdasarkan  data  BKKBN  menunjukkan  peningkatan partisipasi  pada  tahun  2005  dari  2.7%  menjadi  6.5% pada tahun 2015. Rendahnya partisipasi ini disebabkan keterbatasan metode kontrasepsi yang dapat digunakan laki-laki. Sampai saat ini metode yang dapat digunakan hanyalah vasektomi, kondom, dan penyuntikan hormon. Namun hasilnya belum sepenuhnya  diterima  masyarakat  dan  belum  100% dapat mencegah kehamilan.
Salah  satu  upaya  yang  dapat  digunakan  dalam meningkatkan  partisipasi  laki-laki  dalam  mengikuti program  KB  adalah  dengan  meningkatkan  sarana  dan metode kontrasepsi. Alat kontrasepsi yang ideal dapat mencegah  fertilisasi,  aman,  reversibel,  bekerja  cepat, toksisitas  rendah,  tanpa  efek  samping,  tidak mempengaruhi  potensi  seks,  dan  libido.  Inovasi  yang sedang  dikembangkan  adalah  penggunaan  tanaman obat alami Indonesia. Saat ini 75% masyarakat di dunia sangat  mengandalkan  tanaman  obat  (Jamal et  al. 2011).  Menurut  Tadjuddin  (1984),  keuntungan memanfaatkan tanaman antara lain, toksisitas rendah, mudah  diperoleh,  murah,  dan  sedikit  menimbulkan efek samping.
Buah  pare  dan  biji  jarak  pagar  mempunyai  potensi sebagai  herbal  antifertilitas.  Potensi  ini  disebabkan terdapat  senyawa  yang  bersifat  antifertilitas  pada kedua tanaman tersebut, yaitu cucurbitacin (kurkubitasin)  pada  tanaman  pare  dan jatrophine (jatrofin) pada biji jarak pagar.. Menurut  Ekwere et al. (2011),  biji  jarak  merupakan  obat  tradisional  yang sering  digunakan  untuk  kontrasepsi  wanita  di  Rukuba, Nigeria  Tengah.  Di  samping  itu,  buah  dari  tanaman jarak  pagar  juga  mampu  menurunkan  motilitas  dan jumlah  sperma  serta  memiliki  aktivitas  sebagai abortivum  (Shweta et  al. 2011).  Kukurbitasin (momordikosida K dan L) dilaporkan dapat menghambat  pertumbuhan  dan  perkembangan  sel (West et  al. 1971).  Aktivitas  antifertilitas  dibuktikan Dixit et  al. (1978)  bahwa  efek  ekstrak  buah  pare menekan  fungsi  testis  anjing  percobaan  dalam memproduksi  spermatozoa.  Pemberian  ekstrak  buah pare  selama  60  hari  menyebabkan  tidak  ada spermatozoa  pada  tubulus  seminiferus  dan  pada  75% tubulus seminiferus tidak dijumpai adanya spermatid.
Berdasarkan  latar  belakang  di  atas  maka  pada penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengevaluasi  dan memperoleh  formulasi  optimum  kombinasi  ekstrak ampas  biji  jarak  pagar  dan  ekstrak  pare  sebagai antispermatogenesis  pada  tikus Wistar  norvegicus jantan  dewasa.    Hasil  penelitian  ini  diharapkan memberi  informasi  potensi  formulasi  bahan  alam sebagai sediaan alternatif kontrasepsi pria.

## METODE

## Pembuatan Ekstrak Biji Jarak Pagar dan Buah Pare
Biji jarak pagar (Nganjuk, Jawa Timur) dan buah pare (Bogor,  Jawa  Barat)  dikeringkan,  dirajang  dan  diayak dengan  ayakan  mesh  40  sehingga  diperoleh  serbuk simplisia. Ekstraksi  kedua  simplisia  masing-masing dengan  metode  maserasi  menggunakan  etanol  70% dengan  perbandingan  1:3.  Pelarut  diganti  setiap  hari sekali sebanyak 3 kali. Hasil maserasi disaring sehingga diperoleh filtrat dan dipekatkan menggunakan penguap putar  hingga  ekstrak  kental.  Ekstrak  yang  diperoleh kemudian dilakukan uji fitokimia dan uji organoleptik.

## Pengujian Ekstrak pada Hewan Coba Tikus
Penelitian  ini  menggunakan  30  ekor  tikus  putih ( Wistar  norvegicus )  jantan  dewasa  berumur  9  minggu dengan  kisaran  bobot  badan  200  g.  Penelitian merupakan  penelitian  eksperimen  dengan  Rancangan Acak  Lengkap  (RAL).    Tikus  dibagi  secara  acak berdasarkan  bobot  badannya  ke  dalam  6  kelompok perlakuan  (n  =  5  ekor).  Kelompok  perlakuan,  yaitu kelompok  kontrol  (akuades),  kelompok  ekstrak  biji jarak  pagar  50  mg/KgBB,  kelompok  ekstrak  pare  50 mg/KgBB, Kelompok kombinasi ekstrak biji jarak pagar : pare  (3:1),  Kelompok  ekstrak  biji  jarak  pagar  :  pare (1:3), dan kelompok ekstrak biji jarak pagar : pare (1:1). Setiap  pagi  hewan  diberi  sediaan  secara  oral  (sonde) selama  48  hari  dengan  dosis  sesuai  perkembangan bobot badan tikus setiap minggunya.
Seluruh prosedur pada hewan telah disetujui Komisi Etik  Hewan  Fakultas  Kedokteran  Hewan  IPB (059/KEH/SKE/IV/2017).  Sebelum  penelitian  dilakukan, hewan diadaptasikan selama 2 minggu dan memperoleh  minum  secara ad  libitum serta  pakan komersial  standar  ( Turbo  Feed T.79-4)  sebanyak  5-10 g/kg/ekor.  Akhir  perlakuan  setelah  48  hari,  kemudian hewan dibius menggunakan ketamin HCl (40 mg/kg BB) dan xylazine (5 mg/kgBB).
Koleksi  Sperma  dan  Penghitungan  Konsentrasi Sperma (Solihati et al. 2013)
Hewan  setelah  dibius  dan  dietanasia  diambil testisnya.  Testis  digunakan    untuk  dilakukan  uji hispatologi.  Bagian  kauda  epididimis  (kanan)  dipotong 1  cm  untuk  dikeluarkan  cairannya  sebanyak  20  µl  dan dimasukkan  ke  dalam  tabung  mikro  eppendorf  yang berisi  NaCl  fisiologis  980  µl  dan  dibiarkan  1-2  menit. Selanjutnya  campuran  dihomogenkan  lalu  diteteskan pada  kamar  hitung  Neubauer  dan  dilakukan penghitungan di bawah mikroskop dengan pembesaran 40 Penghitungan spermatozoa dilakukan terhadap lima kamar dari sebanyak 25 kamar hitung yang ada dengan arah diagonal (sudut kanan atas dan bawah, sudut kiri atas dan bawah, serta tengah).
Konsentrasi Spermatozoa = n x 10.000 x fp x x v NaCl
Evaluasi Spermatozoa Hidup (WHO 1999)
Evaluasi  spermatozoa  yang hidup dilakukan berdasarkan  Manual  Laboratorium  WHO  (1999).  Satu tetes  eosin  2%  diteteskan  pada  ujung  gelas  obyek emudian ditambah an 10 μl semen ti us, dihomogenkan  dan  selanjutnya  dibuat  preparat  ulas. Preparat  ulas  lalu  difiksasi  di  atas  nyala  api. Spermatozoa  yang  hidup  dievaluasi  di  bawah mikroskop dengan pembesaran 40x dalam 10 lapangan pandang untuk memperoleh 200 spermatozoa. Jumlah spermatozoa  yang  hidup  dinyatakan  dalam  persen. Untuk  penentuan  persentase  spermatozoa yang  hidup digunakan rumus:
e sentase s e mat   a umlah   e mat   a  idu umlah t tal s e mat   a 100

## Analisis Statistik
Data  bobot  badan,  bobot  testis,  dan  konsentrasi sperma dianalisis secara statistik dengan menggunakan program  pengolah  data  Minitab  16  yang  meliputi  uji normalitas,  uji  homogenitas,  dan    uji  parametrik  ( one way - ANOVA).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Organoleptik dan Fitokimia Ekstrak
Serbuk  simplisa  sebanyak 395.88g  biji  jarak  pagar dan  105.85g  pare  menghasilkan  rendemen  6.11%  dan 3.32%, secara berurutan. Hasil organoleptik ekstrak biji jarak  pagar  dan  buah  pare  ditampilkan  pada  Tabel  1. Hasil analisis fitokimia kedua ekstrak sampel dilakukan
secara kualitatif (Harborne 2006). Fitokimia dari kedua sampel  ekstrak  menunjukkan  semua  positif  terhadap saponin,  tanin,  alkaloid,  flavonoid,  steroid,  dan triterpenoid.

## Tabel 1 Hasil  uji  organoleptik  ekstrak  biji  jarak  pagar dan buah pare
Ekstrak Uji organoleptik Bentuk Warna Bau Biji jarak pagar Kental Coklat Khas Buah pare Serbuk Hijau Khas
Ekstrak  yang  diperoleh  menggunakan  ethanol  70% menunjukkan  semua  golongan  metabolit  sekunder dapat  terekstrak.  Hal  ini  dikarenakan  etanol  memiliki dua  gugus  yang  berbeda  sifat  kepolarannya,  yaitu gugus hidroksil yang bersifat polar dan gugus alkil yang bersifat nonpolar. Kedua gugus ini akan menyebabkan senyawa-senyawa  dengan  tingkat  kepolaran  yang berbeda  dapat  terekstrak  dalam  etanol  (Agustina 2014).  Hasil  yang  diperoleh  sesuai  hasil  Arininggar (2008)  dan  Arini  (2012) terhadap  ekstrak  pare  dan  biji jarak  pagar.    Perbedaan  metabolit  sekunder  yang terekstrak  (Pratama et  al. 2015;  Hartini  2011)  dapat disebabkan  faktor  intrinsik  dan  ekstrinsik.    Faktor intrinsik  merupakan  faktor  yang  berasal  dari  proses fisiologis  yang  berlangsung  di  dalam  tubuh  tumbuhan yang  meliputi  sifat  genetiknya,  sedangkan  faktor ekstrinsik  berasal  dari  pengaruh  lingkungan  seperti faktor tanah serta faktor iklim (Agustina 2014).

## Bobot Badan Tikus
Akhir  perlakuan  terdapat  jumlah  hewan  26  ekor, empat  ekor  mati  disebabkan  bukan  karena  pemberian sampel  ekstrak.    Selama  pemberian  ekstrak,  dilakukan pengamatan  kondisi  umum  dan  penimbangan  bobot badan setiap minggu. Rerata bobot badan sebelum dan sesudah  perlakuan  selama  48  hari  ditampilkan  pada Tabel 2.
Bobot  badan  sebelum  dan  sesudah  akhir  perlakuan berbeda  nyata  (P<0.05)  menunjukkan  peningkatan yang  nyata  pada  akhir  perlakuan.  Akan  tetapi  tidak berbeda  nyata  antar  kelompok  (P>0.05).  Berdasarkan data  yang  diperoleh,  pemberian  ekstrak  secara  oral selama satu siklus spermatogenesis tidak mempengaruhi nafsu makan dan pertumbuhan normal dari  seluruh  hewan  coba  yang  ditandai  dengan peningkatan  bobot  secara  stabil.    Hal  ini  juga
dilaporkan  oleh  Wina et  al. (2008)  yang  menyatakan bahwa  tikus  yang  diberi  pakan  jarak  pagar  akan mengalami  pertambahan  bobot  hidup  yang  lebih rendah apabila dibandingkan dengan tikus kontrol yang tidak mengkonsumsi jarak pagar.

## Bobot Testis dan Rasio Bobot Badan/Bobot Testis
Setelah perlakuan selama 48 hari, dikoleksi testis kiri dan  kanan  serta  dihitung  rerata  dari  bobot  testis  dan rasio dari bobot badan per bobot testis (Tabel 3). Bobot testis  pada  seluruh  kelompok  tidak  menunjukkan perbedaan yang nyata (P>0.05). Demikian pula setelah diperhitungkan  rasio  bobot  badan  terhadap  bobot testis  juga  tidak  menunjukkan  perbedaan  yang  nyata (P>0.05).  Efek  pemberian  kedua  ekstrak  dievaluasi berdasarkan  respon  dari  bobot  testis  yang  bila  ada gangguan  dapat  hiperproliferasi  (membesar)  ataupun atrofi.  Pengurangan  jumlah  sel  menyebabkan  atrofi dapat  diakibatkan  ketidakseimbangan  proliferasi  dan kematian sel dalam jangka waktu tertentu. Pada hewan jantan, Gonadotrophin  Releasing  Hormone (GnRH) disekresikan  dari  hipothalamus  untuk  menstimulasi pelepasan lutenising  hormone (LH)  dan Follicle Stimulating  Hormone (FSH)  dari  pituitari  anterior.  LH and  FSH  mengatur  aktivitas  testis.  LH merangsang  sel- sel  Leydig  untuk memproduksi  testosterone.  FSH  akan
menstimulasi sel-sel Sertoli untuk proses pembentukan sel-sel germinal pada spermatogenesis. Penurunan FSH dan  kadar  testosteron  inilah  yang  juga  diduga menurunkan berat testis. Sehingga dengan berkurangnya  bobot  testis  dapat  menyebabkan gangguan  dalam  proses  spermatogenesis  dan  kualitas sperma yang dihasilkan (Cholifah et al. 2014).

## Pengukuran Konsentrasi Spermtozoa
Konsentrasi  dan  kualitas  spermatozoa  dinilai  pada akhir  perlakuan.    Kualitas  spermatozoa  dinilai berdasarkan pergerakannya dari diam tak bergerak (-), ada pergerakan (+1), bergerak cepat (+2), dan bergerak sangat  cepat  (+3)  (Tabel  4).  Berdasarkan  Tabel  4, masing  masing  kelompok  yang  diberi  perlakuan menghasilkan  motilitas  sperma  yang  berbeda,  proses ini  dilihat  dengan  menggunakan  mikroskop  40x. Sperma dikatakan motil apabila dapat bergerak dengan progresif  dan  sedangkan  sperma  yang  tidak  bergerak atau  hanya  bergerak  berputar  ditempat  dihitung sebagai  sperma  yang  mati  (Rough  2003).  Hasil menujukkan  bahwa  rerata  motilitas  paling  rendah terjadi pada kelompok 2 dan 4 dengan pergerakan yang paling  lemah.  Hasil  tersebut  berkorelasi  dengan  hasil pada  Tabel  4  bahwa  ekstrak  pada  hewan  yang memperoleh  formulasi  ekstrak  1:3  menghasilkan
Tabel 2 Rerata bobot badan tikus awal dan akhir perlakuan
Kelompok Bobot badan (g) Awal perlakuan Akhir perlakuan Kontrol 68.93 ± 19.89 140.40 ± 20.75 Ekstrak biji jarak pagar 88.06 ± 14.60 175.75 ± 32.44 Ekstrak buah pare 92.84 ± 13.20 155.00 ± 21.44 Ekstrak jarak pagar:pare = 3:1 97.76 ±16.75 167.40 ± 26.78 Ekstrak jarak pagar:pare = 1:3 95.62 ± 17.66 164.60 ± 29.11 Ekstrak jarak pagar:pare = 1:1 103.93 ± 25.06 203.00 ± 35.88 Tabel 3 Rerata bobot testis dan rasio bobot badan/bobot testis tikus Kelompok Bobot Testis (g) ±SD (P>0.05) Rasio Bobot Badan:Bobot Testis (P>0.05) Kontrol 1.17 ± 0.24 0.0701 Ekstrak biji jarak pagar 1.48 ± 0.33 0.0097 Ekstrak buah pare 1.09 ± 0.13 0.0079 Ekstrak jarak pagar:pare = 3:1 0.93 ± 0.36 0.0066 Ekstrak jarak pagar:pare = 1:3 1.16 ± 0.24 0.0081 Ekstrak jarak pagar:pare = 1:1 1.29 ± 0.11 0.0077 SD: Standar deviasi
Aktivitas Formulasi Biji Jarak Pagar dan Pare terhadap Spermatogenesis pada Tikus Wistar
konsentrasi  spermatozoa  yang  paling  rendah  diantara kelompok lainnya.
Jumlah  spermatozoa  yang  dihasilkan  tergantung pada proses yang terjadi selama proses spermatogenesis  dalam  tubulus  seminiferus.  Bila spermatogenesis  berlangsung  normal  maka  akan menghasilkan  jumlah  sperma  yang  normal  juga. Sebaliknya  jika  selama  proses  spermatogenesis terdapat gangguan, maka perkembangan sel spermatogonium akan mempengaruhi jumlah spermatozoa yang terbentuk.
Uji  hispatologi  dilakukan  pada  testis  tikus  yang mendapat  perlakuan  biji  jarak  pagar:pare  (1:3) (Gambar  1).  Karena  pada  perlakuan  tersebut,  tikus menghasilkan  sperma  yang  cenderung  sedikit  dan menghasilkan  motilitas  yang  rendah.  Gerak  sperma pada  perlakuan  tersebut  tergolong  rendah  diantara perlakuan yang lain. Hasil Uji hispatologi menunjukkan bahwa  tidak  ada  kelainan  pada  sel  testis  tikus  yang mendapat  perlakuan  biji  jarak  pagar:pare  (1:3)  dan tidak  ada  pengaruh  nyata  permberian  perlakuan terhadap sel-sel pada testis.
Gambar 1 Hasil  uji  hispatologi  testis  hewan  perlakuan biji  jarak  pagar:  pare  (1:3)  perbesaran  100× (a) dan 400× (b)

## SIMPULAN
Formulasi  ekstrak  biji  jarak  pagar  dan  buah  pare pada  konsentrasi  50  mg/KgBB  belum  menunjukkan efek  antifertilitas  terhadap  jumlah  atau  konsentrasi sperma,  akan  tetapi  ada  kecenderungan  menurunkan motilitas atau pergerakan sperma. Hal ini menunjukkan suatu  potensi  sebagai  antifertilitas  dengan  melakukan ekplorasi konsentrasi ekstrak yang digunakan.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terima  kasih  diberikan  Penulis  kepada Kementerian  Riset,  Teknologi,  dan  Pendidikan  Tinggi (Kemenristekdikti)  atas  hibah  penelitiannya.  Ucapan
terima  kasih  kepada  Yuri  Bambang,  Amd    yang  telah membantu  dalam  perawatan  dan  perlakuan  pada hewan coba.

## DAFTAR PUSTAKA
Agustina  A.  2014.  Konservasi  tabat  barito  di  taman nasional gunung gede pangrango ditinjau  dari karakteristik habitat mikro dan kandungan bioaktif daunnya  [Skripsi].  Bogor  (ID):  Institut  Pertanian Bogor.
Arini  WD.  2012.    Uji  Antifertilitas  Etkstrak  Etanol  70% Biji  Jarak  Pagar  ( Jatropha  curcas L.)  Pada  Tikus Jantan  Galur Sprague  Dawley Secara IN  VIVO [Skripsi].  Jakarta  (ID):  UIN  Syarif  Hidayatullah Jakarta.
Arininggar  AG.  2008.    Uji  aktivitas  ovisidal  terhadap telur ascaris  suum dan  penentuan  parameter standar  ekstrak etanol  daun  pare  ( momordica charantia l).  [Skripsi].  Jember  (ID):  Universitas Jember.
Cholifah  S,  Arsyad,  Salni.  2014.  Pengaruh      Pemberian Ekstrak  Pare( Momordica  charantia, L)  Terhadap Struktur  Histologi  Testis  dan  Epididimis  Tikus Jantan  ( Rattus  norvegicus )  Spraque  Dawley. Majalah Kedokteran Sriwijaya . 46(2):149-157 Christijanti  W.  2009.  Penurunan  jumlah  dan  motilitas spermatozoa setelah pemberian ekstrak biji pepaya (Kajian  Potensi  Biji  Papaya  sebagai  bahan kontrasepsi Alternatif). Biosaintifika :19-26. Dixit  VP,  Kimnna  P,  Bhargava  SK.  1978.  Effects  of Momordica charantia L .  Fruit extract on the Testicular  Function  of  Dog. Journal  of  Medicinal Plants Research . 34:280. Harborne  JB.  2006. Metode  Fitokimia:  Penuntun  Cara Modern  Menganalisis  Tumbuhan  (alih  bahasa: Kosasih  Padmawinata  &  Iwang  Soediro) .  Bandung (ID): ITB Press.
Hartini. 2011. Pengaruh Dekok Daun Jambu Biji Merah ( Psidium  guajava .L)  Terhadap  Jumlah  Kecepatan dan  Morfologi  Spermatozoa  Tikus  Putih  Jantan ( Rattus norvegicus ). [Tesis]. Padang (ID):
Universitas Andalas.
Kime  DE,  Van  Look  KJM,  Mc  Allister  BG,  Huykens  G, Rurangwa  E,  Ollevier  F.  2001.  Computer-assisted sperm  analysis  (CASA)  as  a  tool  for  monitoring sperm  quality  in  fish. Comparative  Biochemistry and Physiology. Part C : 425-433.
Jamal P, Karim IA, Erlina A, Raus RA, Hashim YZ. 2011.
Phytochemical screening for   antibacterial  activity
a
b
Nurhadijah et al.
of  potential  malaysian  medicinal  plants. African Journal of  Biotechnology. 10(81):18795-18799.
Pratama  RD,  Yuliani,  Trimulyono  G.2015.  Efektivitas ekstrak daun dan biji jarak pagar  ( jatropha curcas ) sebagai  antibakteri xanthomonas  campestris penyebab  penyakit  busuk  hitam  pada  tanaman kubis. Lentera Bio  4 (1): 112–118. ISSN: 2252-3979. Soehadi  K  dan  Arsyad  KM.  1983. Analisis  Sperma. Surabaya (ID): Airlangga University Press.
Subahar TSS. 2004. Khasiat dan Manfaat Pare: Si Pahit Pembasmi  Penyakit. Jakarta  (ID):  Agromedia Pustaka.
Shweta  Y,  Sinha    RP,  Tyagi  MB,  Ashok  K.  2011.
Cyanobacterial secondary
metabolites.
International  Journal  of  Pharma  and  Bio  Sciences. 2(1): (b) 144-167.
Tadjuddin  MK.  1984.  Tujuan  kontrasepsi  pada  pria; oligozoospennia,  azoospermia,  astenozoospeni.
MKI . 15:693.
West  ME,  Sidrak  GH,  Street  SPW.  1971.  The  Anti-
Growth Properties of Extracts
from Momordica  charantia L. The  West  Indian Medical Journal. 20: 25.
Wina  E,  Susana  IWR,  Pasaribu  T.  2008.  Pemanfaatan Bungkil  Jarak  Pagar  ( Jatropha  curcas )  dan Kendalanya Sebagai Bahan Pakan Ternak.
Wartazoa. 18(1): 1-8. World  Health  Organization.  1999. Laboratory  Manual for  the  Examination  of  Human  Semen  and  Sperm- cervical  Mucus  Interaction.  4th  ed .  England  (UK):
Cambridge University Press.