Jurnal Farmasi Indonesia, November 2014, hal 181-187
ISSN: 1693-8615 EISSN : 2302-4291 Online : http://farmasiindonesia.setiabudi.ac.id/
Uji Aktivitas Ekstrak Herba Meniran ( Phyllanthus niruri L.) dan Biji Jinten Hitam ( Nigella sativa L.) terhadap Reaksi Anafilaksis Kutaneus Aktif pada Tikus Wistar Jantan yang Diinduksi Ovalbumin Activity Test of Extracts of Phyllantus Herbs ( Phyllantus niruri L.) and Black Seeds ( Nigella sativa L.) to The Active Cutaneous Anaphylactic Reaction in Male Wistar Rats in The Induction of Ovalbumin
ARISMA NURI PEBRYANA 1 , GUNAWAN PAMUDJI WIDODO* ,1 , YUL MARIYAH 2
1 Fakultas Farmasi, Universitas Setia Budi Jln. Letjen Sutoyo-Mojosongo Surakarta-57127 Telp. 0271-852518
2 Fakultas Kedokteran, Universitas Sebelas Maret Jln. Ir Sutami No 36-A Kentingan Surakarta 57126 Telp 0271-646994 * Korespondensi: gunawanpamudji@yahoo.com
(Diterima 11 Agustus 2014, disetujui 22 Oktober 2014)
________________________________________________________________________________________________________________________________________________

## ABSTRAK
Reaksi  anafilaksis  terjadi  akibat  pajanan  ulang  alergen  yang  sama  yang  dimediasi  oleh  IgE spesifik  yang  melekat  pada  dinding  mastosit  dan  basofil.  Pemberian  herba  meniran  dan  biji  jinten hitam  bermanfaat  sebagai  antiinflamasi  dan  immunomodulator.  Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah membuktikan efek ekstrak etanol herba meniran dan biji jinten hitam sebagai penghambat anafilaksis kutaneus  aktif.  Penelitian ini menggunakan  25  ekor tikus.  Tikus diinduksi alergi  dengan pemberian ovalbumin  (OVA)  0,1%  dan    0,52%  dalam  Al(OH) 3 1%  secara  subkutan.  Tikus  dibagi  menjadi  5 kelompok yaitu CMC-Na 0,5% (kontrol negatif), natrium kromolin 2 mg/kg BB (kontrol positif), dosis tunggal ekstrak herba meniran 81 mg/kg BB, dosis tunggal ekstrak biji jinten hitam 30 mg/kg BB, dan dosis kombinasi herba meniran dan biji jinten hitam (40,5:15 mg/kg BB). Pada hari ke-21, punggung tikus  dicukur  2,5 x  4 cm, diinjeksi evans  blue  1,5%. Data yang diperoleh  berasal  dari pengukuran diameter area pigmentasi berwarna biru. Hasil penelitian menunjukkan bahwa kelompok perlakuan berbeda signifikan dengan kontrol negatif dan kelompok kontrol positif (p<0,05). Kombinasi ekstrak etanol  herba  meniran  dan  biji  jinten  hitam  memberikan  hambatan  anafilaksis  paling  efektif  karena kemampuannya menghambat aktivasi sel mast secara adekuat.
Kata kunci : Phyllanthus niruri L., Nigella sativa L., anafilaksis kutaneus aktif, ovalbumin. ________________________________________________________________________________________________________________________________________________

## ABSTRACT
Anaphylactic reactions is caused by repeated exposure to the same allergen mediated by specific IgE attached to mast cell and basophils wall.  The administration  of Phyllantus  niruri L. and Nigella sativa L. have function as antiinflamation and immunomodulator. The study was purposed to prove the  effect  of  ethanol  extract  of  Phyllantus  herbs  and  black  seeds  as  inhibitors  of  active  cutaneous anaphylactic. This  study  used  25  rats.  Allergic  rats  was  induced  by  ovalbumin  (OVA)  0,1%  and 0,25%  in  Al(OH) 3 1%  subcutaneously.  Rats  were  divided  into  5  groups  :  CMCNa 0,5%  (negative control), sodium cromolyn 2 mg/kg BB (positive control), a single dose of Phyllantus herbs 81 mg/kg BB, a single dose of black seeds 30 mg/kg BB, the combination dose of Phyllantus herbs and black seeds (40,5:15 mg/kg BB). On the days 21 th , backs rats were shaved 2,5 x 4 cm, and it were injected by  evans  blue  1,5%.  The  analyzed  data  was  the  blue  pigmented  areas. The  result  showed  that treatment  groups  was  differed  significantly  the  negative and  positive  control  group  (p<0,05).  The combination  of  ethanol  extract  phyllantus  herbs  and  black  seeds  provide  the  most  effective  barrier anaphylaxis because it’s ability to inhibit the activation of mast cell adequately.
Keywords : Phyllanthus niruri L., Nigella sativa L., active  cutaneous anaphylactic, ovalbumin. ________________________________________________________________________________________________________________________________________________

## PENDAHULUAN
Alergi merupakan reaksi imunologik terhadap  antigen  secara  tidak  wajar  atau tidak  tepat  pada  seseorang  yang sebelumnya  pernah  tersensitisasi  dengan antigen  bersangkutan  (Kresno  2001). Reaksi  hipersensitivitas  segera  (tipe  I) yang sangat parah terjadi pada anafilaksis.  Reaksi  alergi  akut  yang mengenai  beberapa  organ  tubuh  secara simultan  seperti  sistem  kardiovaskular, respirasi, kulit dan gastrointestinal
disebut  sebagai  reaksi  anafilaktik  ( ana yaitu  balik,  sedangkan phylaxis yaitu perlindungan) (Suryono 2001).
Reaksi  anafilaksis  terjadi  akibat pajanan  ulang  alergen  yang  sama  yang dimediasi oleh IgE spesifik yang melekat pada  dinding  mastosit  dan  basofil. Berbagai  manifestasi  klinik  yang  muncul dalam  reaksi  anafilaksis  pada  umumnya disebabkan  oleh  pelepasan  mediator oleh  mastosit  atau  basofil  balik  yang timbul  segera  (dalam  beberapa  menit) maupun yang timbul belakangan (sesudah beberapa jam) (Suryono 2001).
Antihistamin  H1  dan  H2  dapat digunakan  untuk  terapi  alergi.  Contoh dari  antihistamin  H1  dan  H2  seperti ranitidin, difenhidramin, hidrosizin, siproheptadin  (Sukandar et  al. 2011). Penggunaan  obat  modern  memiliki  efek samping  lebih  besar  dibandingkan  obat tradisional.  Penggunaan  obat  tradisional mengalami perkembangan yang semakin meningkat,  terlebih  dengan  munculnya isu kembali ke alam ( back to nature) serta krisis  ekonomi  berkepanjangan  yang menurunkan  daya  beli  masyarakat. (Katno  &  Pramono  2006).  Indonesia
memiliki berbagai macam tanaman yang berpotensi menyembuhkan penyakit alergi contohnya herba meniran ( Phyllanthus  niruri L.) dan  biji  jinten hitam ( Nigella sativa L.). Meniran dan jinten hitam dilaporkan mempunyai  aktivitas  imunostimulan.  Uji aktivitas imunostimulan kombinasi ekstrak  etanol  meniran  dan  jinten  hitam pada  tikus  putih  jantan dengan  dosis kombinasi ekstrak jinten hitam 7,5 mg/200 g BB dengan ekstrak meniran 6,75 mg/200 g BB menghasilkan aktivitas imunostimulasi yang lebih besar dibandingkan  kombinasi  dengan  dosis yang lain, dan juga menunjukkan respon inflamasi pada pengukuran 4 jam setelah pemberian antigen. Hal ini menunjukkan bahwa  pemberian  kombinasi  ekstrak etanol  meniran  dan  jinten hitam memiliki  pengaruh  yang  lebih  besar terhadap  reaksi  hipersensitif  tipe  cepat (anafilaksis)  daripada  tipe  lambat  (Raissa 2011).
Penelitian  ini  bertujuan  mengetahui efek  kombinasi  ekstrak  etanol  herba meniran  dan  biji  jinten hitam  sebagai penghambat anafilaksis kutaneus aktif.

## METODE PENELITIAN

## Bahan
Bahan  uji  yang  digunakan  adalah serbuk  kering  herba  meniran  dan  biji jinten  hitam.  Hewan  uji yang  digunakan adalah  tikus  putih  jantan  galur  Wistar, usia  2  – 3  bulan  dengan  berat  badan  ± 200  g. Pelarut  yang  digunakan  yaitu etanol  96% (PT.  Brataco).  Kontrol  positif adalah  natrium  kromolin  (Convers®/ Cendo Pharmaceuticals
Industries).
Kontrol  negatif  adalah  CMC-Na 0,5%
(E.  Merck)  dalam  phosphate-Buffered Saline  (PBS)  pH  7,4. Penginduksi ovalbumin  (OVA)  0,1%  dan  0,52% (Sigma  Chemical).  Al(OH) 3 1%  sebagai adjuvan.  Bahan  anastesi  kloroform (Sigma).  NaCl  fisiologis  (PT.  Otsuka Pharmaceutical  Indonesia,  Surabaya). Evans blue 1,5% sebagai indikator warna untuk  menunjukkan  adanya  anafilaksis kutaneus lokal.

## Alat
Alat-alat  yang  digunakan  adalah rotary  vacuum  evaporator (Buchi  R205), lemari  pendingin,  oven,  termometer, timbangan gram, timbangan analitik, alat KLT (Camag ®), plat KLT silica gel GF 254 , lampu UV ( λ 254 dan 366 nm), kandang tikus,  spuit  injeksi  volume  1  dan  3 ml (Terumo),  kanula  oral  tikus,  jangka sorong skala 0,01 cm.
Pembuatan Ekstrak Etanol 96%
Pembuatan ekstrak dilakukan dengan  cara  maserasi  menggunakan larutan  penyari  etanol  96%.  Masing- masing serbuk simplisia biji jinten hitam dan herba meniran dengan berat 300 mg dimasukkan  ke  dalam  botol  kaca berwarna coklat dan ditambahkan larutan penyari etanol 96% sebanyak 3 L (perbandingan  antara  serbuk  simplisia kering  dan  pelarut  adalah  1:10), kemudian didiamkan  selama  5  hari dengan  melakukan  pengadukan  setiap hari  secara  berulang-ulang.  Setelah  hari ke-5, disaring, kemudian  dipekatkan menggunakan rotary  vaccum  evaporator suhu  50 0 C  dengan  kecepatan  30  rpm, dilanjutkan diuapkan menggunakan cawan  penguap  di waterbath pada  suhu
50 0 C  hingga  diperoleh  ekstrak  dengan konsistensi kental.
Pengujian Aktivitas In Vivo
Duapuluh  lima  ekor  tikus  jantan galur wistar diadaptasi, kemudian dilakukan sensitisasi. Sensitisasi dilakukan  pada  hari  ke-7  dan  hari  ke-14 setelah masa adaptasi. Sensitisasi pertama  pada  hari  ke-7  pada  punggung tikus disuntikkan ovalbumin 0,1% dalam suspensi  Al(OH) 3 1%  secara  subkutan dengan  volume  pemberian  1  mL/200  g
BB tikus. Pada hari ke-14 atau tujuh hari setelah sensitisasi pertama, tikus
disuntikkan  kembali  dengan  ovalbumin 0,1% dalam suspensi Al(OH) 3 1% secara subkutan  dengan  volume  pemberian  1 ml/200 g BB tikus.
Tujuh hari setelah sensitisasi pertama,  tikus  dicukur  punggungnya dengan  ukuran  2,5  x  4  cm.  Kemudian disuntikkan Evans  blue secara  intravena sebagai indikator warna untuk menunjukkan  adanya  pembengkakan lokal  dan  kemerahan  pada  daerah tersensitisasi. Lima belas menit kemudian diberi  perlakuan  menurut  kelompok masing-masing.  Kelompok  1  diberi larutan  natrium  CMC  (kontrol  negatif). Kelompok  2 diberi  larutan  natrium kromolin  2  mg/kg  BB dengan  volume pemberian  5  ml/kg  bb  tikus  secara subkutan  (kontrol  positif).  Kelompok  3 diberi ekstrak  herba  meniran  dosis  81 mg/kg BB (100%:0%). Kelompok 4 diberi ekstrak  biji  jinten  hitam  dosis  30  mg/kg BB (0%:100%).  Kelompok  5 diberi ekstrak  herba  meniran  40,5  mg/kg  BB : biji  jinten  hitam  15  mg/kg  BB (50%:50%).
Lima  belas  menit  setelah  pemberian larutan  uji,  dilakukan  pembangkitan reaksi  anafilaksis  kutan  aktif  pada  tikus dengan menyuntikkan 0,52% ovalbumin dalam  suspensi  Al(OH) 3 1%  secara subkutan  dengan  volume  pemberian  5 ml/kg bb tikus. Pengukuran diameter area
pigmentasi  (area  yang  berwarna  biru) dilakukan  setiap  jam  selama  8  jam, dimulai  satu  jam  setelah  pembangkitan reaksi  anfilaksis  kutan  aktif.  Diameter diukur  dari  4  sisi  yang  berbeda  lalu dihitung puratanya.

## Analisis Data
Data  percobaan  berupa  diameter area pigmentasi daerah terinflamasi yang kemudian diubah menjadi data luas area pigmentasi,  untuk  selanjutnya  dibuat kurva  hubungan  antara  area  pigmentasi terhadap  waktu  pengamatan  (8  jam). Dari  kurva  tersebut  kemudian  dihitung luas area pigmentasi dari jam ke-0 hingga ke-8  (luas  di  bawah  kurva  individu subjek  atau  AUC),  selanjutnya  dibuat rata-rata hasilnya tiap kelompok.
Perbedaan  hasil  AUC antar  kelompok dianalisa  menggunakan  statistika analisa varian  (ANOVA)  satu  jalan  dilanjutkan dengan uji LSD.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Ekstrak  etanol  96%  herba  meniran dan  biji  jinten  hitam  diperoleh  dengan metode  maserasi.  Dengan  alat rotary vaccum  evaporator  didapatkan  ekstrak kental  herba  meniran  berwana  coklat dengan  rendemen  11,36%, sedangkan ekstrak  kental  biji  jinten  hitam  berwarna hitam dengan rendemen 37,05%.
Metode  anafilaksis  kutaneus  aktif dapat  digunakan  untuk  mengamati aktivitas penghambatan reaksi anafilaksis.
Dapat dikatakan sebagai reaksi
hipersensitifitas  tipe  1  karena  pada  kulit punggung tikus terbentuk inflamasi lokal yang  terjadi  pada  onset  cepat  selama beberapa  jam,  puncaknya  terjadi  pada jam  ke  5-7,  ciri  khasnya  terdapat lingkaran berwarna biru oleh evans blue. Evans  blue yang  disuntikkan  secara intravena  pada  ekor  tikus  mengandung albumin  telur  dapat  mengikat  protein plasma  sehingga  tetap  berada  dalam pembuluh  darah,  tetapi  jika  terjadi peradangan, evans blue juga akan keluar menuju  jaringan  radang  (Emanueli et  al. 1998).  Sensitisasi  dilakukan  dua  kali karena  pada  kasus  alergi,  sensitisasi menstimulasi pembentukan limfosit pengingat  yang  menyebar  ke  seluruh tubuh,  sehingga  sel  tersebut  mempunyai ingatan  terhadap  ovalbumin  (OVA) sehingga apabila ovalbumin diinduksikan lagi, maka akan terjadi pembentukan IgE secara lebih cepat (Kresno 2001).
Ovalbumin  (OVA)  sebagai  alergen dapat  memicu Antigen  Presenting  Cells (APC)  yang  akan  didegradasi  menjadi peptida. Al(OH) 3 sebagai adjuvan
bertujuan untuk memperkuat efek alergen  ovalbumin  (Subiyanto  &  Diding 2008). Natrium kromolin digunakan sebagai  kontrol  positif karena memiliki aktivitas menghambat
pelepasan histamin dan mediator kimia lain pemicu anafilaksis  dari  sel  mast,  neutrofil,  dan basofil dengan  menstabilkan  membran sel  dalam  mengurangi  respon  alergi  dan
reaksi  inflamasi (Nugroho  &  Maeyama 2011).
Hasil  uji  aktivitas  penghambatan anafilaksis ekstrak herba meniran dan biji jinten  hitam  dapat  dilihat  pada  Gambar 1. Luas area pigmentasi yang mengalami anafilaksis pada kurva  kelompok  kontrol negatif  terlihat  lebih  tinggi  dibandingkan dengan  kurva  kelompok  yang  lain. Sedangkan  kurva  kelompok  kontrol positif tampak lebih rendah dibandingkan  kurva  kelompok  kontrol negatif.  Terbukti  bahwa  Na-kromolin  2 mg/kg BB
mampu menghambat pigmentasi  inflamasi  yang  ditimbulkan ovalbumin  sebagai  antigen  dengan memblok  influks  kalsium  sehingga
menghambat  degranulasi  sel  mast. Perlakuan  senyawa  ekstrak  etanol  96%, baik dosis tunggal meniran 81 mg/kg BB dan dosis tunggal jinten hitam 30 mg/kg BB serta  dosis  kombinasi  keduanya meniran 40,5 mg/kg BB : jinten hitam 15 mg/kg  BB tampak  berada  di  atas  kurva kelompok  kontrol  positif  (Na-kromolin), tetapi  tetap  berada  di  bawah  kurva kelompok  kontrol  negatif  (Na-CMC). Dapat disimpulkan  bahwa  kelompok perlakuan  dosis  tunggal  dan  dosis kombinasi  herba  meniran  dan  biji  jinten hitam  mampu  menghambat  anafilaksis lokal yang ditimbulkan oleh ovalbumin.
Gambar  1.  Kurva  rata-rata  luas  area  pigmentasi  (cm2)  vs  waktu  (jam) perlakuan  dosis  tunggal  dan kombinasi ekstrak herba meniran dan biji jinten hitam.
Tabel 1. Potensi  penghambatan  ekstrak herba  meniran  dan  biji  jinten  hitam  terhadap  aktivitas  anafilaksis terinduksi ovalbumin sebagai antigen
*Berbeda signifikan dengan kontrol negatif dan kontrol positif (p < 0,05).
Gambar 2.Persen daya anti-anafilaksis kutan aktif ekstrak herba meniran dan biji jinten hitam dosis tunggal dan kombinasi.
Selanjutnya  untuk  melihat  potensi penghambatan
reaksi anafilaksis kutaneus  aktif  maka  dihitung  presentase penghambatan  reaksi  anafilaksis  seperti Tabel  1.  Semakin  kecil  nilai  rata-rata AUC 0-8 , maka  dosis  ekstrak yang digunakan  semakin  tinggi  efektifitasnya.
Dengan menghitung
presentase penghambatan  aktivitas  anafilaksis  yang terinduksi  ovalbumin  sebagai  antigen dapat mengetahui potensi penghambatan aktivitas  anafilaksis. Berdasarkan  hasil statistik  ANOVA  satu  jalan  yang dilanjutkan  dengan uji Post  Hoc  test metode  LSD  dengan  menggunakan
program  SPSS  17, hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  kemampuan  daya anti-anafilaksis  kutan  aktif  dari  ekstrak etanol  herba  meniran  dan  biji  jinten hitam,  baik  dosis  tunggal  dan  dosis kombinasi  berbeda  signifikan  terhadap kelompok  kontrol  negatif  (p  <0,05), meski  kemampuannya  masih  di  bawah kemampuan  daya  anti-anafilaksis  kutan aktif  kelompok  kontrol  positif  Na- kromolin 2 mg/kg BB. Kontrol positif Na- kromolin  2  mg/kg  BB yang  digunakan mampu  menghambat  anafilaksis  kutan aktif  lebih  baik  dibandingkan  dengan kelompok  perlakuan ekstrak  herba
Kelompok perlakuan AUC 0-8 (cm 2 .jam) Penghambatan anafilaksis kutan aktif (%) Na-CMC 0,5% (kontrol negatif) 105,78±2,88 0,00±2,72 Na-Kromolin 2 mg/kg BB (kontrol positif) 43,94±3,23 58,46±3,05 Meniran 81 mg/kg BB (dosis 100%) 93,50±2,33* 11,60±2,21* Jinten hitam 30 mg/kg BB (dosis 100%) 90,43±4,83* 14,50±4,57* Meniran 40,5 mg/kg BB : jinten hitam 15 mg/kg BB (dosis50 %:50 %) 83,70±3,07* 20,87±1,29*
meniran dan biji jinten hitam, baik dosis tunggal maupun kombinasi. Kemampuan ekstrak  herba  meniran  dan  biji  jinten hitam,  baik  dosis  tunggal  maupun  dosis kombinasi, dalam
menghambat anafilaksis  kutan  aktif  belum  sebanding dengan  natrium  kromolin  sebagai  obat antialergi.
Hasil uji statistik menunjukkan dosis tunggal  herba  meniran  81  mg/kg  BB tidak  berbeda  signifikan  (p  >0,05) dengan dosis tunggal biji jinten hitam 30 mg/kg BB. Namun, pemberian kombinasi herba  meniran  dan  biji  jinten  hitam mampu  meningkatkan  penghambatan reaksi anafilaksis secara signifikan dibandingkan dosis tunggalnya.

## KESIMPULAN
Ekstrak  herba  meniran  (81  mg/kg BB), biji jinten hitam (30 mg/kg BB) dan kombinasi  ekstrak  herba  meniran  (40,5 mg/kg  BB)  dengan  biji  jinten  hitam  (15 mg/kg  BB)  mampu  menghambat  reaksi anafilaksis  kutaneus  aktif  dan  dapat digunakan  sebagai  antialergi .Kombinasi ekstrak herba meniran ( Phyllanthus niruri L.) dan biji jinten hitam ( Nigella sativa L.) memberikan  hambatan  anafilaksis  yang paling efektif.

## DAFTAR PUSTAKA
Emanueli C, Grady EF, Madeddu P, Figini M, Bunnett  NW et  al.1998.  Acute  ACE inhibition  causes  plasma  extravasation in  mice  that  is  mediated  by  bradykinin and  substance  P. American  Heart Association 31:1299-1304.
Katno dan Pramono S. 2006. Tingkat Manfaat dan  Keamanan  Tumbuhan  Obat  dan Obat  Tradisional.  [Publikasi  Penelitian]
http://cintaialam.tripod.com/keamanan_ obat%20tradisional.pdf.
Kresno  SB.  2001. Imunologi:  Diagnosis  dan Prosedur  Laboratorium. Edisi  keempat. Jakarta: Balai Penerbit Fakultas Kedokteran  Universitas  Indonesia.  hlm 315. Nugroho  AE,  Maeyama  K.  2011.  Evaluasi pewarnaan  alician  blue  terhadap  sel mast  jaringan  ikat  dari  preparat  beku jaringan kulit kaki tikus. Pharmacy 6:10- 22.
Raissa  N.  2011.  Uji aktivitas imunostimulan kombinasi ekstrak  etanol  meniran ( Phyllantus niruri L.)  dan  jinten hitam ( Nigella sativa L.) pada tikus putih jantan [Skripsi].  Depok:  Fakultas Matematika dan  Ilmu Pengetahuan Alam,  Program Studi Farmasi, Universitas Indonesia.
Subiyanto  AA,  Diding.  2008.  Pengaruh minyak  jinten  hitam  ( Nigella  sativa L.) terhadap derajat inflamasi saluran nafas. Majalah  Kedokteran  Indonesia.  58(6): 200-204.
Sukandar EY, Andrajati R, Sigit J, Adnyana IK, et  al.  2011.  Iso  Farmakoterapi. Jakarta: PT. ISFI Penerbitan. Hlm 125.
Suryono  S.  2001. Buku  Ajar: Ilmu  Penyakit Dalam. Jilid II. Edisi ketiga. Jakarta: Balai Penerbit Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. hlm43-48S.