Total Phenol and Total Flavonoid of Graded Fractination Fresh and Dried Muntingia calabura Extract: A Sustainable Immunomodulator Bioagent for Functional Health Drink
Total Fenol dan Total Flavonoid Ekstrak Maserasi Bertingkat Daun Kersen ( Muntingia calabura ) Segar Dan Kering : Suatu bioagen immunomodulator untuk bahan minuman fungsional yang berkelanjutan
Mufti Hatur Rahmah(*), Nurfila, Arlinda Puspita Sari Prodi Pendidikan Biologi, FKIP, Universitas Sulawesi Barat,
Jl. Prof. Dr. Baharuddin Lopa, SH, Talumung, Majene, Sulawesi Barat 91412, Indonesia *Corresponding author: muftihaturrahmah@unsulbar.ac.id
Diterima 30 September 2022 dan disetujui 31 Oktober 2022

## Abstrak
Tujuan dari penelitian * ini adalah untuk menguji kandungan total fenol dan flavonoid dari ekstrak daun kersen segar dan ekstrak daun kersen kering dengan menggunakan metode ekstraksi maserasi bertingkat. Pendekatan yang digunakan pada penelitian ini adalah kuantitatif. Sampel pada penelitian ini adalah daun kersen segar dan daun kersen kering yang diperoleh dari Somba, Kecamatan  Sendana,  Kabupaten  Majene,  Sulawesi  Barat.  Data  penelitian  dianalisis  dengan menggunakan  rumus  perhitungan  kadar  senyawa  total.  Hasil  penetapan  kandungan  total  fenol ekstrak daun kersen * segar dan ekstrak * daun kersen kering diperoleh panjang gelombang 600 nm dengan kadar untuk daun kersen segar sebesar 303,2 mg * GAE/g sampel sedangkan untuk daun kersen kering sebesar 320,5 mg GAE/g sampel sedangkan kandungan total flavonoid ektrak daun kersen segar dan ekstrak daun kersen kering diperoleh panjang gelombang 415 dengan kadar untuk daun kersen segar sebesar 940,6 mg QE/g sampel sedangkan untuk daun kersen kering sebesar 987,7 mg QE/g sampel. Kandungan total fenol dan flavonoiod menggunakan metode maserasi bertingkat pada daun kersen kering yang diperoleh lebih besar daripada daun kersen segar.
Kata Kunci: Ekstrak daun., Fenol, Flavonooid, Maserasi bertingkat, Muntinga calabura.

## Abstract
This study aims to determine the total phenol and flavonoid content of fresh cherry leaf extract and dried cherry leaf extract using the stratified maceration extraction method.  The approach used in this research  is  quantitative.  The  samples  in  this  study  were  fresh  cherry  leaves  and  dried  cherry  leaves obtained  from  Somba,  Sendana  District,  Majene  Regency,  West  Sulawesi.  The  research  data  were analyzed using the formula for calculating the total compound content. The results of determining the total phenol content of fresh cherry leaf extract and dried cherry leaf extract obtained a wavelength of 600 nm with levels for fresh cherry leaf extract of 303.2 mg GAE/g sample and for dry cherry leaf extract of 320.5 mg GAE/g sample while the content of The total flavonoids of fresh cherry leaf extract and dried cherry leaf extract obtained a wavelength of 415 with levels for fresh cherry leaf extract of 940.6 mg QE/g sample  and  for  dry  cherry  leaf * extract  of  987.7  mg  QE/g  sample.  The  total  content  of  phenol  and flavonoid using the multilevel maceration method in dried cherry leaves was greater than that of fresh cherry leaves.
Keywords : Flavonoids, Graded fractionation, Leaves extract, Muntinga calabura, Phenol
Jurnal Pembelajaran dan Biologi Nukleus is Licensed Under a CC BY SA Creative Commons Attribution-Share a like 4.0 International License . https://doi.org/10.36987/jpbn.v8i3.3375

## PENDAHULUAN
Tanaman kersen ( Muntingia calabura ) termasuk ke dalam jenis tanaman neotropik yaitu tanaman  yang  hidup  dengan  baik  pada  iklim  tropis  seperti  Indonesia.  Daun  kersen berkhasiat  dalam  pengobatan  berbagai  penyakit  seperti  mengurangi  pembengkakan kelenjar prostat, sebagai obat untuk menurunkan panas, menghilangkan sakit kepala, flu dan mengobati penyakit asam urat, selain itu juga dapat dimanfaatkan sebagai antiseptik, antioksidan, antimikroba, antiinflamasi, antidiabetes dan antitumor (Sukmawati et al., 2020) .  Menurut Suryadinata  (2018) ,  daun  kersen  ( Muntingia  calabura )  mengandung senyawa  flavonoid,  tanin,  triterpenoid,  saponin,  dan  polifenol.  Menurut (Lestari  & Mahmudati 2018) , flavonoid merupakan salah satu dari kelompok metabolit sekunder fenolik.
Senyawa  fenolik  merupakan  senyawa  kimia  yang  memiliki  gugus  hidroksil  dan paling  banyak  terdapat  dalam  tanaman.  Senyawa fenolik  menunjukkan  banyak  fungsi biologis seperti perlindungan terhadap stress lingkungan dan penyakit degeneratif secara signifikan (Nuruddiniyah,  2020). Menurut (Nawir  et  al.,  2021) ,  flavonoid  adalah golongan metabolit sekunder yang dapat ditemukan pada kelompok besar tanaman yang mengandung  polifenol.  Senyawa  flavonoid  berfungsi  sebagai  antimikroba,  antivirus, antioksidan, antihipertensi, merangsang pembentukan estrogen dan mengobati gangguan fungsi hati (Laswati et al., 2020). Namun, konsentrasi kandungan flavonoid pada tiap organ  tanaman  tersebut  berbeda-beda  dan  belum  dapat  diketahui  dengan  jelas  tanpa melalui penelitian.
Daun Kersen sering dijadikan obat oleh masyarakat yang ada di Somba, Majene, Sulawesi Barat karena daun tersebut dipercaya oleh penduduk lokal setempat berkhasiat mampu  mengurangi  kadar  gula  darah  pada  penderita  diabetes,  dapat  mengantisipasi kolesterol,  asam  urat,  hipertensi,  kanker,  flu,  dan  batuk.  Selain  itu,  daun  Kersen  juga dapat  meningkatkan  sistem  kekebalan  tubuh  sehingga  mencegah  penyakit  tertentu, pemulihan dari suatu penyakit tertentu dan memperlambat penuaan sehingga berpotensi menjadi  agen  imunomodulator  yang  secara  praktis  dapat  diramu  dalam  bentuk  teh kesehatan (Laswati  et  al.,  2020). Namun  berdasarkan  observasi  yang  telah  dilakukan, diperolh data bahwa banyak masyarakat yang memanfaatkan daun kersen sebagai obat tapi belum mengetahui mengenai kandungan yang ada pada daun tersebut.
Hasil  Penelitian Ilkafah  (2018) yang  menemukan  bahwa  terdapat  kandungan flavonoid pada daun tanaman kersen. Daun kersen yang digunakan pada penelitian ini merupakan daun yang sudah tua. Penelitian juga dilakukan oleh Senet et al., (2017) yang menemukan  bahwa  kandungan  polifenol  dan  flavonoid  daun  kersen  lebih  banyak didapatkan pada ekstrak daun kering daripada ekstrak daun segar dengan menggunakan metode  ekstraksi  infundasi.  Namun,  perolehan  ekstrak  daun  dengan  metode  ekstraksi tersebut tidak menghasilkan hasil ekstrak yang spesifik dan murni karena teknik maserasi yang digunakan adalah teknik maserasi sederhana dengan menggunakan pelarut berupa
air.  Pada  penelitian Asmorowati  &  Lindawati  (2019) menggunakan  daun  tanaman Muharang Bawine dihasilkan kandungan total fenolik tertinggi sebanyak 135, 04 mg/g. Oleh  karena  itu,  pada  penelitian  ini  dilakukan  ekstraksi  dan  maserasi  dengan  metode bertingkat pada dua jenis daun yaitu pada daun yang segar dan pada daun yang sudah kering. Diperolehnya data jumlah kandungan total fenol dan flavonoid pada kedua jenis daun tanaman Kersen ( Muntingia calabura ) ini, maka akan diketahui potensi kandungan bioaktif dari tanaman tersebut untuk meningkatkan kualitas kesehatan masyarakat.

## METODE
Penelitian  ini  menggunakan  metode  eksperimen  yang  dilakukan  di  Laboratorium Mikrobiologi dan Laboratorium Peternakan Universitas Sulawesi Barat. Alat dan bahan yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  meliputi  blender,  neraca  analitik,  gelas  beker, erlenmeyer, batang pengaduk, labu ukur, pipet volume, pipet tetes, pipet mikro, kertas saring, aluminium foil, tabung reaksi, corong gelas, vortex ,  penguap putar vakum ( rotary vacuum  evaporator ),  daun  segar  dan  daun  kering  tanaman  kersen  ( Muntingia  calabura ), etanol, metanol, natrium hidroksida (Na 2 CO 3 ), serbuk magnesium (Mg), asam klorida (HCl), aluminium klorida (AlCl 3 ), ferri klorida (FeCl 3 ), asam asetat, n-heksan, etil asetat, aquades, reagen Folin-Ciocalteu, asam galat, dan kuersetin.
Instrumen penelitian yang digunakan meliputi spektrofotometer UV-Vis dan lembar pengamatan  yang  terdiri dari  pengamatan  jumlah kandungan total  senyawa  fenol  dan flavonoid  dengan  mengukur  nilai  absorbansi  pada  kedua  senyawa  tersebut.  Tahapan penelitian ini dilakukan melalui beberapa langkah sebagai berikut,

## Tahap Persiapan
Sampel daun kersen segar dan kering dikumpulkan dalam satu wadah kemudian dicuci  hingga  bersih.  Selanjutnya  sampel  di  angin-anginkan  di  udara  terbuka  yang terlindung  dari  sinar  matahari  langsung.  Sampel  daun  kersen  segar  dan  daun  kersen kering kemudian dihaluskan dengan menggunakan blender.

## Tahap Ekstraksi
Sebanyak 50 g daun kersen segar dan daun kersen kering yang telah dihaluskan selanjutnya  diekstraksi  dengan  menggunakan  metode  maserasi  bertingkat  dengan menggunakan  tiga  pelarut  berbeda  mulai  dari  n-heksan,  etil  asetat  dan  etanol  dengan perbandingan 1:10. Maserasi masing-masing tiga pelarut dilakukan selama 3 hari dengan penggantian pelarut sebanyak 500 mL setiap 1 hari. Filtrat yang dihasilkan dikumpulkan dan  dievaporasi  menggunakan  dandanan  (panci  kukusan)  sehingga  diperoleh  ekstrak pekat  n-heksan.  Residu  yang  sudah  dikeringkan  dari  hasil  maserasi  dengan  pelarut  n- heksan, kemudian dimaserasi berturut-turut dengan pelarut etil asetat dan pelarut etanol sehingga diperoleh ekstrak pekat etil asetat dan ekstrak pekat etanol (Senet et al., 2017).

## Tahap Skrining Metabolit Sekunder
1) Skrining Fenol
Sebanyak 1 gram ekstrak kental dilarutkan dengan 20 mL etanol 70%. Ekstrak sebanyak 1 mL dimasukkan ke dalam tabung reaksi lalu ditambahkan sebanyak 2 tetes
larutan FeCl 3 5%. Pembentukan warna biru atau hijau menunjukkan adanya senyawa fenol dalam sampel (Ikalinus et al., 2015).
2) Skrining Flavonoid
Ekstrak daun sebanyak 1 mL ditambahkan serbuk Mg dan 5 tetes HCl 2N pada larutan  ekstrak  yang  berada  pada  tabung  reaksi.  Hasil  yang  didapatkan  apabila teridentifikasi akan terbentuk warna jingga sampai merah (Zuraida et al., 2017).

## Tahap Pengujian
1) Uji Kandungan Total Fenol
a) Penentuan Panjang Gelombang Asam Galat Larutan induk asam galat 1000 ppm dibuat dengan melarutkan 0,01 gr asam galat  dalam  labu  ukur  10  ml,  tambahkan  1  ml  etanol  kemudian  ditambahkan aquades sampai tanda batas 10 ml. Larutan induk 1000 ppm kemudian sebanyak 0,5 ml diambil dan kemudian dimasukkan ke dalam gelas ukur 10 ml, ditambahkan 0,4 ml reagen folin lalu dihomogenkan menggunakan vortex. Didiamkan selama 8 menit,  lalu  ditambahkan  4  ml  Na2CO3  7%  dan  dihomogenkan  kembali  dan didiamkan  kembali  selam  30  menit.  Selanjutnya  penentuan  panjang  gelombang maksimum  menggunakan  spektofotometer  UV-VIS  pada  range  400-800  nm (Khadijah et al., 2017).
b) Pembuatan Kurva Baku Asam Galat dengan Reagen Folin-Ciocalteu Pembuatan  seri  konsentrasi  asam  galat  dibuat  dengan  mengambil  masing- masing larutan induk asam galat 1000 ppm sebanyak 0,5 ml, 0,75 ml, 1 ml, 1,25 ml.  Kemudian  ditambahkan  aquades  sampai  volume  5  ml  sehingga  diperoleh konsentrasi  100  ppm,  150  ppm,  200  ppm,  dan  250  ppm.  Dari  masing-masing konsentrasi  dipipet  sebanyak  0,5  ml  lalu  dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi. Kemudian  ditambahkan  0,4  ml  reagen  folin  lalu  dihomogenkan  menggunakan vortex dan didiamkan selam 8 menit. Setelah itu, ditambahkan 4 ml Na 2 CO 3 7% dan aquades 3,6 ml lalu dihomogenkan kembali dan didiamkan selam 30 menit. Serapan larutan diukur menggunakan spektrofotometer UV-VIS (Linnarto et al., 2019).
c) Pembuatan Larutan Induk Ekstrak Daun Kersen Segar dan Ekstrak Daun Kersen Kering
Ekstrak  kental  sebanyak  0,025  gr  dimasukkan  ke  dalam  masing-masing erlenmeyer 50 ml, kemudian dilarutkan dengan etanol sampai volume 10 ml diaduk hingga homogen lalu disaring menggunakan kertas saring (Puspitasari et al, 2019).
d) Penentuan Total Fenol
Ekstrak etanol daun kersen segar dan kering diambil masing-masing 0,5 ml dimasukkan ke dalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan 0,4 ml reagen folin lalu dihomogenkan menggunakan vortex dan didiamkan selama 8 menit. Setelah didiamkan, masing-masing larutan ditambahkan 4 ml Na2CO3 7% dan aquades 3,6 ml dan dihomogenkan kembali lalu didiamkan selam 30 menit. Serapan larutan diukur  menggunakan  spektrofotometer  UV-VIS.  Dilakukan  3  kali  pengulangan pada  masing-masing  ekstrak  sehingga  kadar  total  fenol  yang  diperoleh  hasilnya dinyatakan  sebagai  mg  asam  galat  ekuivalen/g  sampel (Puspitasari  &  Proyogo 2013)
2) Uji Kandungan Total Flavonoid
a) Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Kuersetin Larutan induk kuersetin 400 ppm dibuat dengan melarutkan 0,01 gr kuersetin dalam labu ukur 25 ml, tambahkan 1 ml etanol kemudian ditambahkan aquades sampai tanda batas 25 ml. Larutan induk 400 ppm kemudian di ambil sebanyak 0,5 ml dan dimasukkan ke dalam gelas ukur 10 ml, ditambahkan * 0,1 ml AlCl3 10% dihomogenkan  menggunakan  vortex.  Didiamkan  selama  8  menit,  lalu ditambahkan 0,1 ml asam asetat 5% dan dihomogenkan kembali dan didiamkan kembali  selam  30  menit.  Selanjutnya  penentuan  panjang gelombang  maksimum menggunakan  spektofotometer  UV-VIS  pada  range  375-500  nm (Asmorowati  & Lindawati 2019).
b) Pembuatan Kurva Baku Kuersetin dengan Pereaksi AlCl 3
Pembuatan  seri  konsentrasi  kuersetin  dibuat  dengan  mengambil  masing- masing larutan induk kuersetin 400 ppm sebanyak 0,25 ml, 0,5 ml, 0,75 ml, 1 ml. Kemudian  ditambahkan  aquades  sampai  volume  5  ml  sehingga  diperoleh konsentrasi 20 ppm, 40 ppm, 60 ppm, dan 80 ppm. Dari masing-masing konsentrasi dipipet  sebanyak  0,5  ml  lalu  dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi.  Kemudian ditambahkan  0,1  ml  AlCl 3 10%  lalu  dihomogenkan  menggunakan  vortex  dan didiamkan  selam  8  menit.  Setelah  itu,  ditambahkan  0,1  ml  asam  asetat  5%  dan aquades  2,8  ml  lalu  dihomogenkan  kembali  dan  didiamkan  selam  30  menit. Serapan  larutan  diukur  menggunakan  spektrofotometer  UV-VIS (Arum  & Supartono, 2013; Hilma et al., 2021).
c) Pembuatan Larutan Induk Ekstrak Daun Kersen Segar dan Kering Ekstrak  kental  sebanyak  0,025  gr  dimasukkan  ke  dalam  masing-masing erlenmeyer 50 ml, kemudian dilarutkan dengan etanol sampai volume 10 ml diaduk hingga homogen lalu disaring menggunakan kertas saring (Puspitasari & Proyogo 2013)
d) Penentuan Total Flavonoid Ekstrak etanol daun kersen segar dan kering diambil masing-masing 0,5 ml dimasukkan ke dalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan 0,1 ml AlCl3 10% lalu dihomogenkan  menggunakan  vortex  dan  didiamkan  selama  8  menit.  Setelah didiamkan,  masing-masing  larutan  ditambahkan  0,1  ml  asam  asetat  5%  dan aquades  2,8  ml  dan  dihomogenkan  kembali  lalu  didiamkan  selam  30  menit. Serapan larutan diukur menggunakan spektrofotometer UV-VIS. Dilakukan 3 kali pengulangan pada masing-masing ekstrak sehingga kadar total fenol yang diperoleh hasilnya dinyatakan sebagai mg kuersetin ekuivalen/g sampel (Sulistyarini, 2020).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil Ekstraksi Daun Kersen Segar dan Daun Kersen Kering
Filtrat yang dihasilkan pada maserasi I dari 500 ml pelarut N-heksan, masing- masing untuk daun kersen segar adalah sebanyak 200 ml dengan berat residu 46 gr dan daun kersen kering sebanyak 300 ml dengan berat residu 46 gr. Filtrat yang dihasilkan pada maserasi II dari 460 ml pelarut etil asetat, masing-masing untuk daun kersen segar sebanyak  300  ml  dengan  berat  residu  39  gr  dan  daun  kersen  kering  sebanyak  300  ml
dengan berat residu 44 gr. Filtrat yang dihasilkan pada maserasi III dari 390 ml (daun kersen segar) dan 440 ml (daun kersen kering) pelarut etanol 96%, diperoleh sebanyak 300 ml dan pada daun kersen kering sebanyak 300 ml. Filtrat daun kersen segar dan daun kersen kering pada maserasi pelarut etanol 96% kemudian dievaporasi menggunakan alat evaporasi  sederhana  (panci  kukusan)  dan  dihasilkan  ekstrak  untuk  daun  kersen  segar sebanyak 3,4 gr dan untuk daun kersen kering sebanyak 4,1 gr.

## Hasil Skrining Senyawa Metabolit Sekunder
Skrining  fitokimia  terhadap  ekstrak  daun  kersen  segar  dan  daun    kersen  kering dilakukan untuk mendapatkan golongan senyawa metabolit sekunder berupa fenol dan flavonoid  yang  terdapat  di  dalamnya.  Hasil  skrining  senyawa  fenol  dan  senyawa flavonoid  dari  ekstrak  daun  kersen  segar  dan  daun  kersen  kering  dapat  dilihat pada tabel 1.
Tabel  1. Hasil  Skrining  Senyawa  Fenol  Dan  Senyawa  Flavonoid  Dari  Ekstrak  Daun Kersen Segar Dan Daun Kersen Kering
Sampel Ekstrak Fenol Flavonoid Daun Kersen Segar Kontrol negatif + - N-heksan - - Etil asetat - - Etanol 96% + + Daun Kersen Kering Kontrol negatif + - N-heksan - - Etil asetat - - Etanol 96% + +
Keterangan : (+) positif mengandung senyawa fenol dan flavonoid
( - ) negatif mengandung senyawa fenol dan flavonoid
Gambar 1. Kurva Panjang gelombang maksimum Asam galat

## Hasil Penetapan Kandungan Total Fenol Hasil Penetapan Panjang Gelombang Maksimum Asam Galat
Panjang gelombang maksimum yang diperoleh pada penelitian ini adalah  sebesar 600  nm  yang  diukur  menggunakan  spektrofotometer  UV-VIS  yang  disajikan  pada Gambar 1 dengan puncak maksimum berada pada nomor 1.

## Hasil Penetapan Kurva Baku Asam Galat
Penetapan  kurva  baku  asam  galat  menggunakan  persamaan  regresi  linear, dimana  menyatakan  hubungan  antara  konsentrasi  asam  galat  sebagai  sumbu  x  dan absorbansi asam galat sebagai sumbu y. Nilai absorbansi setiap konsentrasi dan gambar kurva kalibrasi asam galat dapat dilihat pada Tabel 2 dan Gambar 2.
Gambar 2 . Kurva Baku Asam Galat
Tabel 2. Nilai absorbansi seri konsentrasi Asam Galat
Sampel Konsentrasi (ppm) Absorbansi (y) Persamaan  Regresi Linear Asam Galat 100 0,2665 Y= 0,0046x – 0,1595 r = 0,9700 150 0,5582 200 0,8788 250 0,9414
Hasil  Penetapan  Kandungan  Total  Fenol  dalam  Ekstrak  Daun  Kersen  Segar  dan Ektrak Daun Kersen Kering
Penetapan kandungan total fenol ekstrak daun kersen segar dan ekstrak daun kersen kering  dilakukan  masing-masing  tiga  kali  pengulangan,  bertujuan  untuk  memperoleh data yang lebih akurat pada saat perhitungan nilai kandungan totalnya. Hasil penentuan kandungan total fenol ekstrak daun kersen segar dan ekstrak daun kersen kering dapat dilihat pada tabel 3.
Tabel 3. Kandungan Total Fenol Ekstrak Daun Kersen Segar dan Ekstrak Daun Kersen Kering
No Nama Sampel Kandungan Total Fenol (mg GAE/g) 1.      Ekstrak Daun Kersen Segar 303,2 mg GAE/g 2.      Ekstrak Daun Kersen Kering  320,5 mg GAE/g

## Hasil Penetapan Kandungan Total Flavonoid
a. Hasil Penetapan Panjang Gelombang Maksimum Kuersetin
Panjang gelombang maksimum yang diperoleh pada penelitian ini sebesar 415 nm yang diukur menggunakan spektrofotometer UV-VIS seperti yang terlihat pada Gambar 3 dengan puncak maksimum berada pada nomor 4.
Gambar 3. Kurva Panjang gelombang maksimum Kuersetin

## Hasil Penetapan Kurva Baku Kuersetin
Penetapan kurva baku kuersetin menggunakan persamaan regresi linear, dimana menyatakan hubungan antara konsentrasi asam galat sebagai sumbu x dan absorbansi asam  galat  sebagai  sumbu  y.  Nilai  absorbansi  setiap  konsentrasi  dan  gambar  kurva kalibrasi asam galat dapat dilihat pada Tabel 4. dan Gambar 4.
Tabel 4. Nilai absorbansi seri konsentrasi Kuersetin
Sampel Konsentrasi (ppm) Absorbansi (y) Persamaan Regresi Linear Kuersetin 20 0,0560 Y= 0,0012x + 0,0158 r = 0,9916 40 0,0907 60 0,1452 80 0,1712
Gambar 4. Kurva Baku Kuersetin

## Hasil Penetapan Kandungan Total Flavonoid dalam Ekstrak Daun Kersen Segar dan Ektrak Daun Kersen Kering
Penetapan kandungan total flavonoid ekstrak daun kersen segar dan ekstrak daun kersen  kering  dilakukan  masing-masing  tiga  kali  pengulangan,  bertujuan  untuk memperoleh  data  yang  lebih  akurat  pada  saat  perhitungan  nilai  kandungan  totalnya. Hasil penentuan kandungan total flavonoid ekstrak daun kersen segar dan ekstrak daun kersen kering dapat dilihat pada tabel 5.
Tabel 5. Kandungan Total Flavonoid Ekstrak Daun Kersen Segar dan Ekstrak   Daun Kersen Kering
No Nama Sampel Kandungan  Total  Flavonoid (mg QE/g) 1. Ekstrak Daun Kersen Segar 940,6 mg QAE/g 2. Ekstrak Daun Kersen Kering  987,7 mg QAE/g

## Infografis Sebagai Sumber Belajar Biologi
Hasil dari penelitian ini disajikan dalam bentuk infografis yang akan digunakan sebagai  sumber  belajar  Biologi  pada  materi  Metabolisme  kelas  XII.  Penyusunan infografis berpatokan pada kompetensi dasar 3.5 yakni menjelaskan proses metabolisme sebagai reaksi enzimatis dalam makhluk hidup. Desain infografis menggunakan aplikasi canva , infografis disusun secara menarik dengan memperhatikan aspek-aspek penyusunan di dalamnya. Infografis ini dibuat dalam bentuk digital atau disebut juga infografis statis yang disajikan dalam bentuk gambar yang tidak bergerak seperti yang ada pada media cetak ataupun website .

## PEMBAHASAN
Proses ekstraksi dilakukan bertujuan untuk mengambil senyawa kimia yang terkandung dalam sampel (Mondong et al., 2015). Proses ekstraksi menggunakan maserasi bertingkat dengan tiga pelarut berbeda dipilih karena metode tersebut dapat memperoleh hasil yang lebih  signifikan  mengingat  senyawa  yang  ingin  ditarik  adalah  senyawa  fenol  dan flavonoid  yang  bersifat  polar,  sehingga  harus  menggunakan  sampai  tiga  pelarut  yang berbeda  agar  hasil  yang  dihasilkan  hanya  senyawa  yang  diinginkan  dan  senyawa  lain yang  bersifat  semi  polar  maupun  non  polar  tidak  ikut  saat  proses  skrining  senyawa metabolit sekunder. Hal ini sejalan dengan penelitian yang dilakukan oleh Permatasari (2019) yang  juga  menggunakan  teknik  maserasi  bertingkat  dengan  tiga  pelarut  yang berbeda  menghasilkan  senyawa  fenolik  tertinggi  sebanyak  574,34  mg  GAE/g  sampel pada  daun  tanaman  Petai  ( Parkia  speciosa Hassk . ).  Berdasarkan  hal  tersebut  dapat dikatakan bahwa dengan menggunakan teknik maserasi bertingkat mampu mengekstrak senyawa fenol dan flavonoid yang lebih besar dibandingkan dengan menggunakan teknik maserasi biasa. Pada sampel daun kersen segar dan daun kersen kering yang dimaserasi berturut-turut menggunakan tiga pelarut berbeda (N-heksan, etil asetat, dan etanol 96%) menunjukkan hasil yang berbeda pada filtrat yang dihasilkan untuk setiap pelarut. Hal ini disebabkan  karena  pelarut  yang  digunakan  menguap  pada  saat  proses  maserasi berlangsung.
Skrining senyawa fenol dan senyawa flavonoid untuk ekstrak daun kersen segar dan ekstrak daun kersen kering dilakukan pada ketiga hasil ekstrak dari tiga pelarut yang digunakan yaitu ekstrak N-heksan, etil asetat, dan etanol 96% dan kontrol negatif yaitu sampel daun kersen segar dan kering yang direndam menggunakan aquades lalu masing- masing disaring hingga dihasilkan ekstraknya. Analisis kandungan senyawa fenol pada ekstrak daun kersen segar dan daun kersen menghasilkan warna hijau hingga biru pekat padda  kontrol  negatif  dan  ekstrak  etanol  96%.  Hal  ini  disebabkan  karena  pada  saat dilakukan penambahan FeCl 3 5% terjadi reaksi antara ion Fe 3+ yang mengalami hibridasi dengan  sampel  yang  menyababkan  pembentukan  warna  biru  pekat  pada  sampel  uji (Latupeirissa, 2013). Terbentuknya warna biru pada sampel daun kersen segar dan daun kersen  kering  menunjukkan  adanya  kandungan  senyawa  fenol  yang  terdapat  dalam kedua sampel tersebut. Hal ini sesuai  dengan yang dikemukakan oleh (Mondong et al., 2015) yang mengatakan bahwa semakin pekat warna biru yang dihasilkan dalam suatu sampel  maka  kandungan  senyawa  fenol  akan  semakin  tinggi  Analisis  kandungan senyawa flavonoid pada ekstrak daun kersen segar dan daun kersen kering menghasilkan warna merah hingga jingga pekat yang menunjukkan bahwa terdapat senyawa flavonoid pada ekstrak etanol 96%. Hal ini disebabkan karena pada saat penambahan serbuk Mg dan  HCl  2N,  senyawa  flavonoid  akan  tereduksi  dengan  Mg  dan  HCl  2N  sehingga menghasilkan warna merah hingga jingga (Setyorini & Yusnawan, 2016). Pada skrining senyawa fenol dan flavonoid untuk esktrak daun kersen segar dan ekstrak daun kersen kering  didapatkan  hasil  bahwa  pada  ekstrak  etanol  96%  positif  mengandung  senyawa fenol dan flavonoid,  sedangkan untuk  ekstrak  N-heksan  dan  etil  asetat  diperoleh  hasil yang negatif mengandung senyawa fenol dan flavonoid.
Hal ini disebabkan karena pelarut N-heksan bersifat non polar dan pelarut etil asetat bersifat semi polar sehingga senyawa fenol dan flavonoid yang bersifat polar tidak dapat
terekstrak dari kedua pelarut tersebut dan hanya dapat terekstrak dari pelarut etanol 96% yang  sifatnya  sama  yaitu  bersifat  polar.  Sedangkan  untuk  kontrol  negatif  daun  kersen segar dan daun kersen kering yang positif mengandung senyawa fenol, disebabkan karena air  dapat  membentuk  ikatan  hidrogen  yang  sangat  kuat  dengan  senyawa fenol  karena senyawa tersebut memiliki atom nitrogen yang merupakan salah satu atom pembentuk ikatan  hidrogen  ( Ikalinus  et  al.,  2015) .  Berbeda  dengan  flavonoid  yang  memiliki kemampuan  metilasi  melalui  kelompok  hidroksil  bebasnya  sehingga  senyawa  tersebut tidak mampu berikatan kuat dengan air (Perangin-angin et al., 2019).
Penetapan  kandungan  total  fenol  dilakukan  dengan  menggunakan  reagen  folin Ciocalteu dengan  asam  galat  sebagai  larutan  pembanding.  Reagen  folin Ciocalteu merupakan pereaksi yang tidak stabil pada kondisi basa,  sedangkan ion fenolat hanya terdapat pada larutan asam, sehingga diperlukan penambahan Na 2 CO 3 yang bertujuan untuk membuat suasana basa pada sampel sehingga reagen folin Ciocalteu akan tereduksi oleh  gugus  hidroksil  dari  fenolik  yang  terdapat  dalam  sampel (Werdhasari  2014; Mondong  et  al.,  2015) .  Asam  galat  digunakan  sebagai  larutan  pembanding  karena senyawa  ini  sangat  efektif  untuk  membentuk  senyawa kompleks dengan  reaksi  reagen folin Ciocalteu, hal tersebut dikarenakan asam galat memiliki gugus hidroksil dan ikatan rangkap  terkonjugasi  pada  masing-masing  cincin  benzene (Nuruddiniyah  2020). Penetapan  kurva  baku  asam  galat  menggunakan  persamaan  regresi  linear,  dimana menyatakan hubungan antara konsentrasi asam galat sebagai sumbu x dan absorbansi asam galat dengan reagen folin Ciocalteu sebagai sumbu y (Puspitasari & Proyogo 2013) . Pengukuran  absorbansi  yang  diperoleh  pada  penelitian  ini  adalah  persamaan  regresi (Mondong et al., 2015) linear asam galat y = 0,0046x – 0,1595. Nilai koefisien korelasi (r) yang  diperoleh  sebesar  0,9700  mendekati  1,  hal  ini  menunjukkan  bahwa  persamaan regresi  tersebut  linear  sehingga  dapat  dikatakan  bahwa  absorbansi  dan  konsentrasi memiliki korelasi yang sangat kuat. Dari kedua sampel ekstrak daun kersen segar dan ekstrak daun kersen kering diperoleh bahwa kandungan total fenol yang terdapat pada ekstrak daun kersen kering lebih besar dibandingkan dengan yang terdapat pada ekstrak daun  kersen  segar.  Penetapan  kandungan  total  flavonoid  dilakukan  dengan menggunakan  pereaksi  AlCl 3 dengan  larutan  pembanding  kuersetin.  AlCl 3 digunakan agar  terjadinya  pembentukan  kompleks  antara  aluminium  klorida  dengan  gugus  keto pada  atom  C-4  dan  gugus  hidroksi  pada  atom  C-3  atau  C-5  yang  berdampingan  dari golongan flavon dan flavonol (Asmorowati & Lindawati, 2019).
Kuersetin digunakan karena senyawa ini merupakan flavonoid golongan flavonol. Dari kurva kalibrasi didapatkan persamaan regresi linear y = 0,0012x + 0,0158 dengan nilai  koefisien  korelasi  (r)  yang  diperoleh  sebesar  0,9916  mendekati  1,  hal  ini menunjukkan bahwa persamaan regresi tersebut linear sehingga dapat dikatakan bahwa absorbansi  dan  konsentrasi  memiliki  korelasi  yang  sangat  kuat.  Dari  kedua  sampel ekstrak daun kersen segar dan ekstrak daun kersen kering diperoleh bahwa kandungan total flavonoid yang terdapat pada ekstrak daun kersen kering lebih besar dibandingkan dengan  yang  terdapat  pada  ekstrak  daun  kersen  segar.  Menurut Werdhasari  (2014), tingginya  kandungan  fenolik  dalam  suatu  bahan  menunjukkan  tingginya  kandungan senyawa  flavonoid  dalam  bahan  tersebut.  Tingginya  kandungan  senyawa  fenol  dan flavonoid pada ekstrak daun kersen kering disebabkan karena proses pengeringan pada daun kersen kering dapat membuka dinding sel sampel yang diekstrak sehingga semakin
banyak kandungan fenol dan flavonoid yang terekstrak pada sampel tersebut. Selain itu, pada daun kersen segar yang masih melekat pada pohon cenderung masih dalam proses pertumbuhan  sehingga  proses  metabolisme  yang  dihasilkan  adalah  senyawa  metabolit primer. Seperti pendapat Saleh (2019) bahwa metabolit primer merupakan faktor penting bagi  pertumbuhan  dan  kehidupan  makhluk  hidup  yang  digunakan  saat  proses pertumbuhan berlangsung, sedangkan metabolit sekunder tidak digunakan oleh tanaman untuk pertumbuhan dan lebih banyak diproduksi saat tanaman tersebut dalam keadaan cekaman.

## KESIMPULAN
Kandungan senyawa fenol pada daun kersen kering diperoleh sebesar 320,5 mg GAE/g sampel sedangkan pada ekstrak daun kersen segar sebesar 303,2 mg GAE/g, dan kandungan senyawa flavonoid pada daun kersen kering sebesar 987,7 mg QE/g sampel sedangkan pada ekstrak daun kersen segar sebesar 940,6 mg QE/g sampel. Kandungan total  fenol  dan  flavonoid menggunakan  metode  maserasi  bertingkat  pada  daun  kersen kering lebih besar daripada daun kersen segar.

## DAFTAR PUSTAKA
Asmorowati,  Hani,  and  Novena  Yety  Lindawati.  (2019).  Determination  of  Total Flavonoid Content in Avocado ( Persea Americana Mill.) Using Spectrofotometry Method Penetapan Kadar Flavonoid Total Alpukat ( Persea Americana Mill .) Dengan Metode Spektrofotometri. Jurnla Ilmiah Farmasi 15(2), 51–63.
Ikalinus, Robertino et al.  (2015). Phytochemical Screening Ethanol Extract Skin Stem Moringa ( Moringa oleifera ). Jurnal Indonesia Medicus Veterinus 4(1), 71–79.
Ilkafah. (2018). Daun Kersen ( Muntingia Calabura L.) Sebagai Alternatif Terapi. Jurnal Pharmacy Medical Journal 1(1), 33–41.
Khadijah, Ahmad Muchsin Jayali, Sudir Umar, Iin Sasmita. (2017). Determination Of Total Phenolic Content And Total Antioxidant Activitiy In Ethanol Extract Of Samama  Leaf  (Anthocephalus  Macrophylus)  From  Ternate  Island,  North Maluku. Jurnal Kimia Mulawarman , 15(1), 11–18.
Laswati,  Dyah  Titin,  Natalia  Retno,  Ika  Sundari,  and  Oktiva  Anggraini.  (2020).
Utilization of Cherry ( Muntingia Calabura L .) as a Alternative Food Processed Products : Chemical and Sensory Propertie S. Jurnal JITIPARI, 4(20), 127–34.
Latupeirissa, Christoffol Leiwakabessy dan Yunita.  (2013). Exploration of Endophytic Bacteria as Agents of Biological Control in Muntingia Calabura L. Jurnal Budidaya Pertanian, 9 (1), 16–21.
Lestari, Dwi Marga, and Nurul Mahmudati. (2018). Aktivitas Antioksidan Ekstrak Fenol Daun Gayam ( Inocarpus Fagiferus Fosb). Jurnal Biosfera, 35 (1), 37–43.
Linnarto, Filia P et al. (2019). Teh Putih Sebagai Alternatif Minuman Fungsional Untuk
Gaya  Hidup  Sehat :  Peluang  Komersialisasi  Di  Indonesia. Jurnal  Indonesia Business Review, 2 (1), 139–59.
Mondong,  Fendy  R,  Meiske  S  Sangi,  and  Maureen  Kumaunang.  (2015).  Skrining Fitokimia Dan Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Patikan Emas ( Euprorbia Prunifolia Jacq .) Dan Bawang Laut (Proiphys Amboinensis L.) Herb ). Jurnal MIPA Unsrat Online , 4 (1), 81–87.
Nawir,  Irmansyah  et  al.  (2021).  Pemanfaatan  Daun  Kersen  ( Muntingia Calabura L  .  ) Menjadi Teh Herbal. Jurnal TB Unesa, 10 (1), 1–11.
Nuruddiniyah, Sang-Han Lee. (2020). Phenolic Composition and Antioxidant Potential of Legumes – A Review. Jurnal Agroteknologi, 14(01), 91–102.
Perangin-angin,  Yusfachri,  Yayuk  Purwaningrum,  Yenni  Asbur,  and  Sari  Rahayu. (2019). Utilization of Secondary Metabolite Content Produced by Plants in Biotic Stress. Jurnal Agroland, 7(1), 39–47.
Permatasari, Kuncoro Hadi dan Intan. (2019). Uji Fitokimia Kersen ( Muntingia Calabura .L)  Dan  Pemanfaatanya  Sebagai  Alternatif  Penyembuhan  Luka. Prosiding SainsTekes Semnas MIPAKes UMRi 2019 , 22–31.
Puspitasari,  Anita  Dwi,  and  Lean  Syam  Proyogo.  (2013).  Perbandingan  Metode Ekstraksi  Maserasi  Dan  Sokletasi  Terhadap  Kadar  Flavonoid  Total  Ekstrak Etanol Daun Kersen ( Muntingia Calabura ). Jurnal Agrotek Indonesia, 4 (3), 16–23.
Puspitasari A D., Feristasari Fatmawati Anwar., Nouvia Gusty Auliyatul Faizah. (2019). Aktivitas  Antioksidan,  Penetapan  Kadar  Fenolik  Total  Dan  Flavonoid  Total Ekstrak Etanol, Etil Asetat, Dan n-Heksan Daun Petai ( Parkia Speciosa Hassk.). Jurnal Ilmiah Teknosains, 5 (1), 1–8.
Saleh,  Nurholis.,  &  Ismail.  (2019).  Relationship  Morphophysiology  of Muntingia Calabura . Jurnal Agrovigor, 12 (2), 47–52.
Senet M R M., I Made Oka Adi Parwata, I Wayan Sudiarta. (2017). Muntingia Calabura , Flavonoid, Fenol, Antioksidan. Jurnal Kimia, 2 (11), 187–93.
Setyorini,  Sulistiyo  Dwi  &  Eriyanto  Yusnawan.  (2016).  The  Increase  of  Secondary Metabolite in Legumes as a Response of Biotic Stress. Jurnal Farma, 8 (2), 167–74.
Sukmawati1,  Nurnaningsih,  &  Mamat  Pratama.  (2020).  Uji  Aktivitas  Ekstrak  Etanol Daun Kersen (Muntingia Calabura L.) Sebagai Inhibitor Enzim α -Glukosidase Dengan Menggunakan Elisa Reader. Jurnal Fitofarmaka Indonesia, 7 (2), 1–5.
Sulistyarini I., Diah Arum Sari & Tony Ardian Wicaksono. (2020). Skrining Fitokimia Senyawa Metabolit Sekunder Batang Buah Naga (Hylocereus Polyrhizus). Jurnal Ilmiah Cendekia Eksakta, 4 (3), 56–62.
Suryadinata, Rivan Virlando. (2018). Effect of Free Radicals on Inflammatory Process in Chronic  Obstructive Pulmonary  Disease  (COPD). Jurnal  Ilmu  Kedokteran, 5 (2), 317–24.
Werdhasari,  Asri.  (2014).  Peran  Antioksidan  Bagi  Kesehatan. Jurnal  Biotek  Medisiana Indonesia, 3 (2), 59–68.
YP Arum., Supartono., & Sudarmin. (2013). Isolasi Dan Uji Daya Antimikroba Ekstrak Daun Kersen (Muntingia Calabura). Jurnal MIPA Unnes, 35 (2), 165–74.
Zuraida,  Sulistiyani.,  Dondin  Sajuthi.,  &Irma  Herawati  Suparto.  (2017).  Fenol, Flavonoid, Dan Aktivitas Antioksidan Pada Alstonia Scholaris R . Br Stem Bark Extract ). Jurnal Penelitian Hasil Hutan, 35 (3), 211–19.
How To Cite This Article, with APA style :
Rahmah, M.H., Nurfila., & Sari, A.R.  (2022). Total Phenol and Total Flavonoid of Graded Fractination  Fresh  and  Dried Muntingia  calabura Extract:  a  Sustainable Immunomodulator Bioagent for Functional Health Drink. Jurnal Pembelajaran dan Biologi Nukleus , 8(3), 767-780. https://doi.org/10.36987/jpbn.v8i3.3375.