Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Suruhan  ( Peperomia pellucida L. Kunth) Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus
Antimicrobial Activity of Ethanolic Extracts Suruhan ( Peperomia pellucida L. Kunth) Leaves Against Staphylococcus aureus
Isna Jati Asiyah, Destik Wulandari Fakultas Farmasi, Universitas Setia Budi Surakarta email: Isna_jati@yahoo.co.id
(Diterima :  2019-04-20, disetujui : 2019-10-15)

## ABSTRAK
Bakteri Staphylococcus aureus adalah bakteri penyebab penyakit infeksi. Penyakit yang disebabkan oleh infeksi bakteri ini antara lain inflamasi payudara (mastitis), endocarditis, infeksi saluran  pernafasan,  serta  infeksi  pada  kulit.  Bakteri S.  aureus dilaporkan  mengalami  resitensi terhadap  aktivitas  antibiotik  golongan  β-laktam,  sehingga  perlu  alternatif  penggunaan  bahan alami  berbahan  dasar  tumbuhan. Tumbuhan  suruhan  ( Peperomia  pellucida L.  Kunth)  memiliki kandungan  senyawa  aktif  tanin  dan  flavonoid  yang  dapat  berperan  sebagai  antimikroba. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak daun suruhan ( Peperomia pellucida L. Kunth) terhadap bakteri S. aureus.
Daun  suruhan  diekstraksi  dengan  cara  maserasi  menggunakan  larutan  etanol  70%, selanjutnya dilakukan uji antibakteri dengan metode dilusi untuk mengetahui Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) dan konsentrasi Bunuh Minimum (KBM). Ekstrak suruhan dibuat dalam 5 seri konsentrasi yaitu 100%, 80%, 60%, 40%, dan 20%.
Hasil  yang  diperoleh  menunjukkan  nilai  KHM  tidak  dapat  ditentukan  karena campuran antara ekstrak daun suruhan dan bakteri S. aureus sangat keruh. KBM yang diperoleh pada uji aktivitas  antibakteri  ekstrak  daun  suruhan  terhadap  bakteri S.  aureus adalah  40%.  Aktivitas antibakteri pada daun suruhan dikarenakan adanya kandungan senyawa kimia berupa tanin dan flavonoid.
Kata Kunci : Antibakteri, Peperomia pellucida L. Kunth, Staphylococcus aureus, dilusi

## ABSTRACT
Staphylococcus  aureus causes  infectious  diseases  include  breast  inflammation (mastitis), endocarditis, respiratory tract infections, and infections of the skin. Drug from natural resources needs because β-lactam group antibiotic activity had been resistance to S. aureus . The herb  plants  ( Peperomia  pellucida L.  Kunth)  has  active  tannins  and  flavonoids  act  as antimicrobials. This research aims to determine antibacterial activity of leaf extract ( Peperomia pellucida L. Kunth) against S. aureus .
The  leaf  leaves  were  extracted  by  maceration  using  70%  ethanol  solution,  then  an antibacterial test was carried out using the dilution method to determine the Minimum Inhibitory Concentration  (MIC)  and  Minimum  Bactericidal  Concentration  (MBC).  Extracts  was  made  in  5 series concentration: 100%, 80%, 60%, 40%, and 20%.
The results showed MIC value could not be determined because the mixture between the leaf extract and S. aureus bacteria was very cloudy. MBC obtained from the antibacterial activity test of leaf extract on S. aureus bacteria was 40%. Antibacterial activity of suruhan leaves caused by tannin and flavonoid compound.
Keyword : Antibacterial, Peperomia pellucida L. Kunth, Staphylococcus aureus , dilution

## PENDAHULUAN
Bakteri Staphylococcus  aureus adalah  bakteri  penyebab  penyakit infeksi.  Infeksi  serius S.  aureus dapat terjadi  ketika  sistem  imun  melemah yang  disebabkan  oleh  perubahan hormon,  penyakit,  luka,  penggunaan steroid atau obat lain yang mempengaruhi imunitas. Penyakit yang disebabkan  oleh  infeksi  bakteri S .aureus adalah  inflamasi  payudara (mastitis),  endocarditis,  infeksi  saluran pernafasan  seperti  pneumonia,  serta infeksi  pada  kulit  berupa  impetigo, folikulitis,  dan  abses  (Conrad,  2010). Selain  itu, S.  aureus juga  dapat menyebabkan terjadinya sindroma
syok  toksik  dan  keracunan  makanan dengan  gejala  mual,  muntah,  diare (Conrad, 2010; Afifurrahman, 2014).
Pada umumnya, penderita infeksi  bakteri S.  aureus diberikan terapi  berupa  antibiotik.  Era  antibiotik ditandai  dengan  pemakaian  penicillin pada  tahun  1944  dan  metisilin  pada tahun  1950-an  yang  sangat  manjur untuk  mengobati  infeksi S.  aureus . Namun,  keberhasilan  terapi  ini  tidak dapat berlangsung lama karena kemudian  muncul  galur S.  aureus resisten  metisilin  yang  disebut  MRSA (Yuwono,  2010).  Methicillin-resistant Staphylococcus  aureus merupakan strain S.  aureus yang  telah  resisten terhadap aktivita s antibiotik golongan β- laktam (Afifurrahman, 2014).
Resistensi bakteri terhadap antibiotik dapat mengakibatkan lamanya waktu penyembuhan, meningkatkan resiko kematian, memperbanyak carrier di  masyarakat, memperbanyak  bakteri  yang  resisten,
dan  memperpanjang  masa  rawat  inap di rumah sakit (Utami, 2012).
Dewasa ini perkembangan pengobatan telah mengarah kembali ke alam  ( back  to  nature )  karena  obat tradisional telah terbukti lebih aman dan tidak menimbulkan efek samping seperti halnya obat-obat kimia. Pemanfaatan tumbuh-tumbuhan
sebagai  obat  tradisional  berkembang pesat  dan  banyak  dijadikan  obat alternatif  oleh  sebagian  masyarakat. Salah  satu  tumbuhan  yang  berpotensi sebagai obat tradisional adalah suruhan ( Peperomia pellucida L. Kunth). Berbagai penelitian sudah dilakukan  dan  menunjukkan  bahwa tumbuhan ini memiliki aktivitas
analgesik, antipiretik, antiinflamasi, hipoglikemik  (Sheikh et  al .,  2012), antibakteri  (Xu et  al .,  2006),  antijamur (Majumunder et al ., 2011), antimikroba dan  antikanker  (Wei et  al .,  2011). Nwokocha et  al .  (2012)  menyebutkan bahwa senyawa yang terkandung pada tanaman suruhan ( Peperomia pellucida L.  Kunth)  yaitu  alkaloid  dan  flavonoid seperti  acacetin,  apigenin,  isovitexin dan pellucidatin, pitosterol.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun suruhan ( Peperomia pellucida L. Kunth) terhadap bakteri S. aureus . Penelitian ini diharapkan dapat dijadikan  sebagai  solusi  peningkatan kasus  resistensi  bakteri  dan  sebagai pengobatan  alternatif  penyakit  infeksi kulit  dan  keracunan  makanan  yang disebabkan oleh bakteri S. aureus .

## METODE PENELITIAN Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  oven,  ayakan nomor  60,  bejana  maserasi,  corong pisah,  kertas  saring,  seperangkat  alat Rotary Evaporator, gelas penyimpanan ekstrak,  timbangan  analitis,  cawan petri,  tabung  reaksi,  inkas,  jarum  ose, lampu  spirtus,  rak  tabung  reaksi, mikroskop, inkubator, dan autoklaf.
Bahan  utama  yang  digunakan adalah  daun  suruhan  yang  diperoleh dari daerah Malang, bakteri S. aureus, etanol  70%,  aquadest, Brain  Heart Infusion (BHI),  Nutrient  agar  (NA), media Muller  Hinton  Agar  ( MHA), DMSO 2%,  larutan kristal violet  (Gram A),  larutan  mordant  (Gram  B),  alkohol (Gram C), dan safranin (Gram D), HCL 2N, FeCL 3 , serbuk Mg, NaCl, pereaksi
Mayer, Wagner, dan Dragendroff. Jalannya Penelitian Pembuatan Ekstrak Pembuatan ekstrak daun
suruhan  dimulai  dengan  melakukan determinasi  tumbuhan  suruhan  untuk mengetahui  kebenaran  dari  tumbuhan yang  akan  digunakan.  Tumbuhan suruhan  yang  sudah  dideterminasi kemudian diambil daunnya, dibersihkan dari  kotoran  dan  dipilih  daun  yang mempunyai kondisi yang baik. Selanjutnya  daun  suruhan  seberat  10 kg  dikeringkan  dengan  menggunakan oven  dan  ditimbang  bobot  keringnya.
Daun suruhan yang sudah dikeringkan kemudian dihaluskan hingga membentuk  serbuk.  Serbuk  simplisia kemudian diekstraksi menggunkan metode maserasi dengan
menggunakan  pelarut  etanol  70%, perbandingan  sampel  dan  pelarut
adalah 1:5. Maserasi dilakukan selama 5  hari  dalam  kondisi  terlindung  dari cahaya  dan  dilakukan  pengadukkan sesekali.  Endapan  dipisahkan  dari pelarutnya dengan cara disaring. Filtrat yang  diperoleh  dipekatkan  dengan rotary  evaporator pada  suhu  40 o C sehingga  menjadi  ekstrak  etanol  daun suruhan  yang  pekat.  Ekstrak  etanol daun  suruhan  dibuat  menjadi  5  seri konsentrasi  yaitu  100%  b/v,  80%  b/v, 60% b/v, 40% b/v dan 20% b/v. Larutan pengencer  yang  digunakan  adalah DMSO 2%.

## Pembuatan Suspensi Bakteri
Biakan  murni S.  aureus dicat Gram  terlebih  dahulu  dan  dilihat  di bawah  mikroskop  untuk  memastikan sifat  Gram  dari S. aureus .  Pembuatan suspensi  bakteri  menggacu  pada metode  Assidqi  dkk  (2012)  yaitu, bakteri  sebanyak  1  ose  diambil  dari media NA yang telah diinkubasi selama 24  jam  pada  suhu  37°C,  kemudian dimasukkan  ke  dalam  tabung  yang berisi  media  BHI,  lalu  diencerkan dengan  NaCl  0,9%  sampai  kerapatan bakteri  sama  dengan  standar  Mc. Farland 0,5 (10 8 CFU/ml).

## Uji Antibakteri
Uji  aktivitas  antibakteri  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah metode  dilusi.  Metode  dilusi  dilakukan untuk  menentukan  nilai  Konsentrasi
Hambat Minimum (KHM) dan
Konsentrasi  Bunuh  Minimum  (KBM). Penelitian  ini  menggunakan  5  seri konsentarsi  pengenceran  yakni  100%, 80%,  60%,  40%,  dan  20%,  kontrol negatif  (sisa  pengenceran  ekstrak), serta kontrol positif (suspensi bakteri).
Konsentrasi  Hambat  Minimum dari  ekstrak  daun  suruhan  diperoleh
dengan  cara  menambahkan  0.5  ml biakan  cair  bakteri S.  aureus dengan kerapatan  10 8 CFU/ml  ke  dalam masing-masing  tabung  reaksi  yang berisi 1 mL larutan uji dengan berbagai seri konsentrasi. Tabung reaksi tersebut  diinkubasi  selama  24-48  jam dalam suhu 37°C. Pertumbuhan bakteri ditandai  dengan  terjadinya  kekeruhan pada tabung reaksi yang berisi ekstrak etanol  daun  suruhan.  Kekeruhan  yang terjadi diamati dan dibandingkan dengan kontrol secara kasat mata.
Penentuan  Konsentrasi  Bunuh Minimum  dilakukan  dengan  metode streak  plate. Kultur  ulang  ini  dilakukan dengan  menggoreskan  larutan  pada tabung reaksi yang tetap bening setelah dilakukan  perlakuan  (hasil  KHM)  pada media  MHA.  Kultur  diinkubasi  selama
24-48 jam dalam suhu 37°C.
Konsentrasi  paling  rendah  yang  tidak menunjukkan  adanya  pertumbuhan koloni bakteri pada media MHA adalah KBM.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Determinasi  dan  Pembuatan  Ektrak Daun Suruhan
Bahan utama yang digunakan dalam  penelitian  ini  berupa  daun suruhan  yang  diperoleh  dari Malang. Determinasi terhadap sampel dilakukan di Laboratorium Morfologi dan Sistematika Tumbuhan, Fakultas Farmasi, Universitas Setia Budi.  Daun suruhan  seberat  10  kg  dikeringkan kemudian  dibuat  serbuk.  Serbuk  yang diperoleh  pada  penelitian  ini  seberat 650  gr.  Ekstraksi  terhadap  serbuk simplisia  daun  suruhan  menggunakan metode  maserasi.  Serbuk  kemudian diekstrak  menggunakan  pelarut  etanol
70% dan jumlah ekstrak yang diperoleh adalah sebesar 114 gr dengan rendemen sebesar 17,53%. Ekstrak  etanol  daun  suruhan kemudian dilakukan identifikasi kandungan senyawa. Identifikasi kandungan senyawa kimia dimasudkan untuk menetapkan kebenaran kandungan  kimia  yang  terdapat  pada daun  suruhan.  Pengujian  meliputi kandungan senyawa alkaloid, flavonoid,  saponin,  dan  tanin.  Berikut hasil uji identifikasi kandungan senyawa  pada  ekstrak  etanol  daun suruhan (Tabel 1, Gambar 1).
Tabel  1.  Hasil  identifikasi  kandungan senyawa kimia daun suruhan Uji fitokimia Hasil positif menurut pustaka Hasil Alkaloid Terbentuk  warna jingga (pereaksi Dragendroff) + Terbentuk endapan putih (pereaksi Mayer) _ Terbentuk  warna cokelat kemerahan (pereaksi Wagner) + Flavonoid Terbentuk  warna jingga + Saponin Terbentuk busa + Tanin Terbentuk  warna biru  tua  atau  hijau kehitaman +
Gambar 1. Hasil identifikasi kandungan senyawa kimia daun suruhan
Uji aktivitas antibakteri ekstrak daun suruhan
Bakteri S.  aureus yang  akan digunakan untuk uji dipastikan
kebenarannya dengan cara pewarnaan Gram.  Hasil  pewarnaan  menunjukkan bakteri  bersifat  Gram  positif  yang ditandai dengan warna sel bakteri ungu, berbentuk  bulat  bergerombol  (Gambar 2).

## Gambar 2. Hasil pewarnaan
Gram bakteri S. aureus
Uji aktivitas antibakteri ekstrak daun  suruhan  terhadap  bakteri S. aureus dilakukan dengan menggunakan  metode  dilusi.  Pada metode  dilusi  cair  digunakan  kontrol negatif  yang  berisi  sisa  pengenceran ekstrak, sedangkan kontrol positif berisi suspensi bakteri. Parameter Konsentrasi  Hambat  Minimum  (KHM) dengan  metode  dilusi  cair  dapat diketahui  dengan  melihat  adanya kekeruhan (adanya
pertumbuhan bakteri)  dan  kejernihan  (tidak  adanya pertumbuhan  bakteri)  yang  terlihat setelah inkubasi selama 24 jam.
Nilai  KHM  dapat  ditentukan dengan cara melihat konsentrasi terkecil  ekstrak  daun  suruhan  yang masih  jernih  yang  menunjukkan  tidak adanya  pertumbuhan  bakteri.  Hasil penelitian  menunjukkan  tabung  reaksi
pada  semua  seri  konsentrasi  tidak dapat  diamati  karena  ekstrak  terlalu pekat  dan  kental,  sehingga  diperlukan metode dilusi padat dengan menggunakan media MHA. Penentuan nilai KBM dilakukan dengan penggoresan  larutan  uji  KHM  pada media  MHA,  kemudian  diinkubasi selama  24  jam  untuk  dilihat  ada tidaknya  pertumbuhan  bakteri.  Berikut ini tabel hasil penelitian uji KHM.
Tabel 2. Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) ekstrak daun suruhan terhadap bakteri S. aureus Konsentra si (%) Hasil Replik asi 1 Replik asi 2 Replik asi 3 100% TT TT TT 80% TT TT TT 60% TT TT TT 40% TT TT TT 20% TT TT TT K+ + + + K- - - - Keterangan: (+) = Terdapat pertumbuhan bakteri (-)    =  Tidak  terdapat  pertumbuhan bakteri
TT = Tidak terlihat
Pada  Tabel  2.  menunjukkan bahwa  ekstrak  daun  suruhan  pada konsentrasi    100%,  80%,  60%,  40%, dan  20%  tidak  dapat  diamati  dengan jelas karena warna ekstrak yang terlalu pekat  yaitu  hijau  tua.  Warna  larutan yang gelap mempersulit dalam mengamati  kejernihan  tabung  yang berisi  campuran  antara  media  BHI, ekstrak  daun  suruhan  dan  bakteri S. aureus, sehingga  nilai  Konsentrasi
Hambat Minimum (KHM) pada
penelitian  ini  tidak  dapat  ditentukan. Dzen  (2003)  menyebutkan  salah  satu cara  yang  dapat  dilakukan  untuk menentukan  nilai  KHM  apabila  hasil ekstrak terlalu keruh yaitu dengan cara difusi  cakram.  Pertumbuhan  bakteri terjadi pada kontrol positif yaitu tabung yang berisi suspensi bakteri, sedangkan  pada  kontrol  negatif  tidak terjadi pertumbuhan bakteri.
Larutan uji KHM ekstrak daun suruhan  pada  semua  konsentrasi dilakukan  penggoresan  pada  media MHA,  kemudian  diinkubasi  selama  24 jam pada suhu 37°C. Nilai Konsentrasi
Bunuh Minimum (KBM) dapat ditentukan dengan melihat ada tidaknya  pertumbuhan  bakteri  pada media MHA. Tabel 3. Konsentrasi Bunuh Minimum  (KBM)  ekstrak daun  suruhan  terhadap bakteri S. aureus Konsentrasi (%) Hasil Replik asi 1 Replik asi 2 Replik asi 3 100% - - - 80% - - - 60% - - - 40% - - - 20% + + + K+ + + + K- - - - Keterangan: (+) = terdapat pertumbuhan bakteri (-)    =  tidak  terdapat  pertumbuhan bakteri Hasil pengamatan menunjukkan bahwa pada konsentrasi 20% terdapat pertumbuhan bakteri S. aureus , sedangkan  pada  konsentrasi  100%, 80%, 60%, dan 40% menunjukkan tidak
terlihat  adanya  pertumbuhan  bakteri. Nilai  KBM  ekstrak  daun  suruhan terhadap  bakteri S.  aureus yang didapat adalah konsentrasi 40%.
Berikut hasil uji KBM (Tabel 3, Gambar 3).
Gambar 3. Hasil uji KBM ekstrak daun suruhan terhadap bakteri S.
aureus
Penghambatan pertumbuhan bakteri  terjadi  akibat  adanya  suatu  zat yang berdampak pada fungsi membran, sintesis dinding sel, sintesis protein,  dan  sintesis  asam  nukleat bakteri (Jawetz, 2005). Aktivitas
antibakteri  daun  suruhan  diperkirakan karena  terdapat  kandungan  tanin  dan flavonoid pada daun suruhan (Tabel 1, Majumder  dan  Kumar,  2011).  Tanin memiliki aktifitas antibakteri yang
berhubungan  dengan  kemampuannya untuk  menonaktifkan  adhesin  dan enzim  sel  mikroba,  serta  mengganggu transport  protein  pada  lapisan  dalam sel (Ngajow et al. , 2013). Monalisa et al.
(2011) menyatakan
flavonoid mempunyai  kemampuan  antibakteri yang  merusak  dinding  sel  bakteri karena  berikatan  dengan  protein  yang mengakibatkan sel bakteri lisis
sehingga  bakteri  mati.  Flavonoid  juga dapat menggumpalkan protein, bersifat lipofilik, sehingga lapisan lipid membran sel bakteri akan rusak.

## KESIMPULAN
Ekstrak  etanol  daun  suruhan ( Piperomia  pellucida  L. Kunt)  memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri S. aureus secara in vitro. Nilai konsentrasi hambat  minimum  (KHM)  ekstrak  daun suruhan  terhadap  bakteri S.  aureus tidak dapat ditentukan, sedangkan nilai Konsentrasi  Bunuh  Minimum  (KMB) ekstrak daun suruhan terhadap bakteri S. aureus adalah sebesar 40%.

## DAFTAR PUSTAKA
Afifurrahman, K. 2014. Pola Kepekaan Bakteri Staphylococcus  aureus terhadap Antibiotik Vancomycin di RSUP Dr. Mohammad Hoesin Palembang. http://ejournal.unsri.ac.id/index. php/mks/article/viewFile/2716/p df.
Assidqi K., Wahyu T., dan Setyawati S.
2012.  Potensi  Ekstrak  Daun
Patikan  Kebo  ( Euphorbia  hirta ) sebagai  Antibakteri  terhadap Aeromonas  hydrophila Secara In  Vitro . Journal  of  Marine  and Coastal Science . 1 (2):113-124. Conrad,  M.  2010. Staph  Infection (Staphylococcus aureus) . Tersedia di MedicineNet: https://www.medicinenet.com/st aph_infection/article.htm
Dzen S.J., Roekistiningsih, Santoso S.,
Winarsih  S. Bakteriologi  Medik .
1st  Ed.  Malang:  Bayumedia Publishing; 2003. Jawetz, E., J.L. Melnick., E.A. Adelberg.,  G.F.  Brooks.,  J.S. Butel., dan L.N. Ornston. 2005. Mikrobiologi  Kedokteran .  Edisi
ke-20 (Alihbahasa:Nugroho&R.F.Maul any).Jakarta  :  Penerbit  Buku Kedokteran EGC. Hal 211,213,215. Majumder P., Kumar, K. V. Arun. 2011. Establishment of Quality Parameters and Pharmacognostic  Evaluation  of Leaves  of Peperomia  pellucida (L.) Hbk. International Journal of Pharmacy  and  Pharmaceutical Sciences . 3 (5).
Monalisa,  D.,  Handayani,  T.  dan Sukmawati,  D.  2011.  Uji  Daya Antibakteri Ekstrak daun Tapak
Liman ( Elephantopus sacber L.) Terhadap Staphlococcus aureus dan Salmonella  typhi . Jurnal Bioma , 9(2), 13-20. Ngajow  M,  Abidjulu  J,  Kamu  V.S.
Pengaruh  Antibakteri  Ekstrak Kulit  Batang  Matoa  ( Pometia pinnata ) terhadap Bakteri Staphylococcus  aureus secara
In  vitro. Jurnal  MIPA  UNSRAT Online . 2013;2(2):182-132.
Nwokocha,  C.R.,  Owu  D.U.,  Kinlocke K., Murray J., Delgoda J. 2012. Possible  Mechanism  of  Action of  the  Hypotensive  Effect  of Peperomia pellucida and
Interactions  Between  Human Cytochrome  P450  Enzymes. Medicinal  and  Aromatic  Plants 1:1-5.
Sheikh  H,  Sikder  S,  Paul  S.K.,  Hasan R.A.M., Rahaman M.M., Kundu
S.P.  2013.  Hipoglikemik,  Anti- inflamasi dan Aktivitas Analgesik  Tumpangan  air  (L.) HBK  ( Piperaceae ). Int  J  Pharm Sci Res 4: 458-63.
Utami  ER.  Antibiotika,  Resistensi,  dan
Rasionalitas Terapi. 2012. Saintis 1 (1): 124-38. Wei, L.S., W. Wee, J.Y.F. Siong, & D.F. Syamsumir. 2011. Characterization  of  Anticancer, Antimicrobial, Antioxidant Properties and Chemical Compositions  of Peperomia pellucida Leaf  Extract. Acta
Medica Iranica 49(10): 670-674.
Xu,  S.,  Li,  N.,  Ning,  M.M.,  Zhou,  C.H., Yang, Q.R., Wang, M.W. 2006. Bioaktif Senyawa dari Tumpangan Air. J Nat Prod . 69:
247-5. Yuwono.  2010.  Pandemi  Resistensi Antimikroba:
Belajar dari
MRSA. Jurnal  Kedokteran  dan
Kesehatan , 1 (42), 2837-2850.