## PENGEMBANGAN SPEKTROFOTOMETER DERIVATIF DAN KEMOMETRIK MULTIVARIAT PADA SEDIAAN KOSMETIK YANG MENGANDUNG NIACINAMIDE DAN VITAMIN C PADA KOSMETIKA PENCERAH

## DEVELOPMENT OF VALIDATION OF MULTIVARIATE DERIVATIVE AND CHEMOMETRIC SPECTROPHOTOMETER METHODS IN COSMETIC PREPARATIONS CONTAINING NIACINAMIDE AND VITAMIN C IN BRIGHTENING COSMETICS
1 Rollando Rollando*, 1 Maria Claudya, 1 Chresiani Destianita Yoedistira, 1 Eva
Monica,
1 Program Studi Farmasi, Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Ma Chung
Info Artikel Abstrak Sejarah Artikel : Submitted:2023-03-29 Accepted : 2023-12-08 Publish Online : 2023- 12-23
Penelitian  ini  menggunakan  metode  spektrofotometer  derivatif  dan  kemometrik multivariat  untuk  menganalisis  senyawa  niacinamide  dan  vitamin  C  dalam kosmetika  pencerah.  Tujuannya  adalah  untuk  mengevaluasi  validitas  metode analisis dan kadar kedua senyawa tersebut sesuai dengan batas penggunaan yang ditetapkan. Metode kemometrik menggunakan model Partial Least Square (PLS) dengan  25  set  kalibrasi  pada  raw  spektra  dan  derivatif  1  sampai  4.  Hasil menunjukkan  bahwa  validasi  metode  analisis  memenuhi  persyaratan  ketika menggunakan  data  raw  spektra,  tetapi  tidak  memenuhi  persyaratan  ketika menggunakan data derivatif. Parameter linieritas  untuk niacinamide dan  vitamin C  masing-masing  adalah  0,9976  dan  0,9993.  Nilai Limit  of  Detection (LOD) untuk  niacinamide  dan  vitamin  C  adalah  0,6674  dan  0,1716,  sedangkan  nilai Limit  of  Quantification (LOQ)  untuk  niacinamide  dan  vitamin  C  adalah  2,2247 dan 0,5720. Dalam hal akurasi, niacinamide dan vitamin C menunjukkan rentang nilai  antara  96,9045%-102,6530%  dan  101,2216%-104,3396%.  Sementara  itu, nilai  presisi  niacinamide  dan  vitamin  C  berkisar  antara  0,6281%-3,8099%  dan 0,2649%-2,5829%.  Kadar  niacinamide  dalam  produk  kosmetik  berada  dalam rentang 1,1275%-1,7441%, memenuhi batas penggunaan yang diizinkan. Namun, kadar  vitamin  C  (1,5075%-1,8203%)  melebihi  batas  penggunaan  yang diperbolehkan,  kemungkinan  karena  sifatnya  yang  sensitif  terhadap  cahaya  dan cenderung teroksidasi dengan cepat dalam larutan.
Kata Kunci: niacinamide, vitamin C, spektrofotometer derivatif, kemometrik, partial least square .
Keywords: niacinamide, vitamin
C, derivative spectrophotometer, chemometrics, partial least square

## Abstract
The study assessed niacinamide and vitamin C in brightening cosmetics using derivative  spectrophotometry  and  multivariate  chemometric  analysis.  Its  goal was  to  verify  the  analytical  method's  validity  and  adherence  to  established usage  limits.  Employing  the  Partial  Least  Square  (PLS)  model  with  25 calibration sets, the research found that the method validation was satisfactory for raw spectral data but not for derivative data. The linearity parameters for niacinamide and vitamin C were 0.9976 and 0.9993, respectively. Notably, the Limit  of  Detection  (LOD)  for  niacinamide  and  vitamin  C  was  0.6674  and 0.1716,  while  the  Limit  of  Quantification  (LOQ)  was  2.2247  and  0.5720, respectively.  Niacinamide's  content  complied  with  usage  limits  at  1.1275%  to 1.7441%, whereas vitamin C exceeded limits at 1.5075% to 1.8203%, possibly due  to  its  light  sensitivity  and  rapid  oxidation  in  solution.  Accuracy  values ranged  from  96.9045%  to  102.6530%  for  niacinamide  and  101.2216%  to 104.3396%  for  vitamin  C,  while  precision  values  were  between  0.6281%  to 3.8099% for niacinamide and 0.2649% to 2.5829% for vitamin C.

## PENDAHULUAN
Rangsangan radiasi oleh papran sinar ultra violet dapat mempengaruhi warna kulit, dimana jika  berlebih  dapat  menimbulkan  bercak-bercak  hitam,  kulit  menjadi  kering,  dan  membuat warna kulit tidak merata. Banyak orang  menginginkan  kulit  yang lebih cerah dan bersih.  Oleh karena  itu,  digunakan  produk  kosmetik  pencerah  kulit  (Kembuan  dkk.,  2012).  Kosmetik  pada dasarnya adalah sediaan yang diaplikasikan pada tubuh dengan tujuan untuk membersihkan dan memperbaiki penampilan. Pada umumnya kosmetik digunakan pada bagian luar tubuh manusia seperti  epidermis,  rambut,  kuku,  bibir,  dan  organ  genital  bagian  luar,  serta  pada  gigi  dan membran mukosa mulut. Adanya keinginan untuk membuat kulit tampak lebih cerah, sehingga digunakan kosmetika pencerah untuk mengatasi hal tersebut (Retno dkk., 2018).
Senyawa  yang  banyak  terkandung  dalam  kosmetika  pencerah  yaitu  niacinamide  dan vitamin  C.  Kedua  senyawa  tersebut  dapat  memberikan  efek  yang  baik  bagi  kulit,  diantaranya yaitu  dapat  mencerahkan  dan  meratakan  warna  kulit,  mengurangi  tanda-tanda  penuaan,  dan memudarkan  flek  hitam  pada  kulit.  Niacinamide  atau  vitamin  B3  merupakan  bentuk    amida asam karboksilat piridin 3 dari niasin.  Niacinamide dikenal efektif menghilangkan kerutan dan bintik-bintik hiperpigmentasi pada penuaan kulit. Penggunaan niacinamide yang direkomendasikan  yaitu  antara  1%  hingga  20%  (Herlambang,  2021).  Vitamin  C  adalah antioksidan  non-enzimatik  yang  larut  dalam  air  yang  dapat  mencerahkan  kulit.  Fungsi  utama vitamin  C  pada  kulit  adalah  sebagai  antioksidan  yang  melindungi  kulit  dari  pengaruh  negatif faktor  luar  (polusi,  sinar  matahari,  iklim,  dan  asap  rokok),  merangsang  pembentukan  dan meningkatkan  produksi  kolagen  kulit,  menjaga  elastisitas  dan  kehalusan  kulit,  serta mencerahkan  kulit  (Kembuan  dkk.,  2012).  Vitamin  C  ditemukan  dalam  kosmetik  dengan konsentrasi mulai dari 4% hingga 20% (Couteau and Coiffard, 2016).
Pada  penelitian  ini  dilakukan  validasi  metode  spektrofotometri  derivatif  dan  kemometrik multivariat.  Spektrofotometri  derivatif  merupakan  salah  satu  metode  spektrofotometri  yang dapat  digunakan  untuk  menganalisis  secara  langsung  campuran  beberapa  zat  tanpa  harus memisahkannya  terlebih  dahulu.  Sedangkan  kemometrik  multivariat  merupakan  ilmu pengetahuan yang berhubungan dengan pengukuran yang dilakukan dengan proses atau  sistem kimiawi  melalui  penggunaan  ilmu  matematika  dan  statistik  (Nurhidayati,  2007).  Penggunaan metode  kemometrik  multivariat  menjadi  solusi  yang  baik  untuk  menganalisis  senyawa multikomponen  yang  memiliki  gambaran  spektra  berpotongan.  Digunakan  metode  analisis kuantitatif  kemometrik  karena  senyawa  campuran  dapat  dianalisis  tanpa  prosedur  pemisahan, tekniknya  sangat  mudah  diterapkan,  dan  sangat  murah  jika  dibandingkan  dengan  analisis lainnya.  Beberapa  peneliti  mengatakan  bahwa  spektrofotometer  derivatif  dan  kemometrik multivariat dapat digunakan untuk menentukan kadar zat aktif secara simultan tanpa melakukan tahap pemisahan sebelumnya.

## METODE PENELITIAN
1. Jenis Penelitian
Jenis  penelitian  yang  akan  dilakukan  merupakan  penelitian  eksperimental  yaitu mengembangkan  dan  melakukan  validasi  metode  spektrofotometer  derivatif  dan kemometrik multivariat yang digunakan untuk mendeteksi kadar niacinamide dan vitamin C dalam kosmetika pencerah.

## 2. Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  yaitu  neraca  analitik  (Ohaus),  gelas  beker (Schott),  labu  ukur  100  ml  (Iwaki),  labu  ukur  10  ml  (Iwaki),  pipet  tetes,  mikropipet  100- 1000  l  (Dragon  Lab),  makropipet  0,5-5  ml  (Socorex),  gelas  ukur,  dan  spektrofotometer UV-Vis  (Jasco  V-760).  Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  yaitu  niacinamide (Merck), vitamin C (Merck), aquadest, HCl 0,1 M dan sampel kosmetika pencerah A, B, C, D, dan E.
3. Prosedur Kerja
a. Pengumpulan Sampel
Pada  penelitian  ini,  sampel  didapatkan  dari  toko  kosmetik  di  daerah  Surabaya. Sampel yang digunakan sebanyak 5 macam sampel kosmetika pencerah.

## b. Optimasi Pelarut
Pemilihan pelarut dilakukan dengan cara membuat larutan standar niacinamide dan vitamin  C  masing-masing  10  mg/L  dengan  pelarut  yang  digunakan  adalah  aquadest dan  HCl  0,1M.  Semua  larutan  yang  disiapkan  akan  dibaca  menggunakan spektrofotometri UV-Vis dan dipilih pelarut yang cocok untuk digunakan.

## c. Preparasi Larutan Standar
Ditimbang  masing-masing  20  mg  standart  niacinamide  dan  vitamin  C.  Kemudian dilarutkan  niacinamide  dan  vitamin  C  dengan  pelarut  hingga  100  ml,  sehingga didapatkan konsentrasi akhir masing-masing 200 mg/L.

## d. Penetapan Panjang Gelombang
Diambil sebanyak 0,5 ml masing-masing larutan standar niacinamide dan vitamin C. Kemudian dilarutkan dengan  pelarut hingga 10 ml, sehingga diperoleh konsentrasi akhir  dari  masing-masing  larutan  standar  niacinamide  dan  vitamin  C  yaitu  10  mg/l. Setelah  itu  diambil  0,5  ml  larutan  standar  niacinamide  dan  0,5  ml  larutan  standart vitamin  C,  larutan  ini  menjadi  larutan  campuran.  Setelah  itu  masing-masing  dari larutan  tersebut  diukur  pada  panjang  gelombang  200-400  nm  dengan  menggunakan spektrofotometer UV-Vis. Diukur panjang  gelombang spektrum normal dan derivatif. Rentang  panjang  gelombang  dipilih  pada  saat  senyawa  memberikan  serapan  hingga senyawa  memberikan  serapan  yang  mendekati  nol.  Senyawa  ditransformasikan menjadi derivatif dengan menggunakan software spectra analysis - insert spektra yang akan ditransformasikan - pilih derivatives - transformasikan derivatif 1 hingga 4.

## e. Metode Kemometrik-Pembuatan Model Kalibrasi
Dibuat  larutan  model  kalibrasi  sebanyak  25  dengan  cara  mengambil  sejumlah tertentu  pada  masing-masing  larutan  standar  200mg/L  niacinamide  dan  vitamin  C. Setelah  itu  dimasukkan  kedalam  labu  ukur  10  ml  dan  ditambahkan  aquadest  hingga diperoleh  kadar  sesuai  pada  Tabel  3.1  untuk  set  kalibrasi.  Diukur  absorbansi  untuk masing-masing  larutan  pada  panjang  gelombang  200-400  nm  dengan  interval  2  nm. Data  absorbansi  dan  konsentrasi  yang  diperoleh  digunakan  untuk  membuat  model kalibrasi dengan metode Partial Least Squares Regression (PLS).
Tabel 1. Komposisi Campuran Niacinamide dan Vitamin C untuk Model Kalibrasi
No. Niacinamide (mg/L) Vitamin C (mg/L) No. Niacinamide (mg/L) Vitamin C (mg/L) 1 2 2 14 10 16 2 2 6 15 10 20 3 2 10 16 16 2 4 2 16 17 16 6 5 2 20 18 16 10 6 6 2 19 16 16 7 6 6 20 16 20 8 6 10 21 20 2 9 6 16 22 20 6 10 6 20 23 20 10 11 10 2 24 20 16 12 10 6 25 20 20 13 10 10

## f. Validasi Metode Analisis
 Linieritas
Linieritas  dilakukan  dengan  mengambil  0,1-1  ml  dari  masing-masing  larutan standart niacinamide dan vitamin C. Kemudian dilarutkan dengan pelarut hingga 10 ml,  sehingga  konsentrasi  akhir  yang  didapatkan  yaitu  2-20  mg/L  pada  masing- masing larutan standart niacinamide dan vitamin C. Linieritas dilakukan sebanyak 3 kali  replikasi.  Analisis  larutan  tersebut  pada  panjang  gelombang  200-400  nm dengan metode derivatif.
 Limit Of Detection (LOD) dan Limit Of Quantitation (LOQ)
Batas  deteksi  dan  batas  kuantitasi  untuk  niacinamide  dan  vitamin  C  dihitung  dari data linieritas.
 Akurasi
Akurasi  dilakukan  pada  3  konsentrasi  standar  yang  berbeda  yaitu  0,4  mg/L,  0,5 mg/L, dan 0,6 mg/L untuk masing-masing  80%, 100%, dan 120% dan konsentrasi sampel 10 mg/L. Akurasi dilakukan sebanyak 3 kali replikasi pada tiga konsentrasi yang berbeda.
 Presisi
Presisi dilakukan sebanyak 6 kali dari tiga konsentrasi yang berbeda yaitu 0,4 mg/L,
0,5  mg/L,  dan  0,6  mg/L.  Presisi  dilakukan  secara intraday (dilakukan  pada  hari yang sama) dan interday (dilakukan pada 3 hari berturut-turut).

## g. Penetapan Kadar
Penetapan  kadar  dilakukan  dengan  mengambil  0,5  ml  dari  masing-masing  larutan sampel 200 mg/L kemudian ditambahkan aquadest hingga 10 ml. setelah itu dilakukan replikasi  sebanyak  3  kali  untuk  masing-masing  sampel.  Lakukan  pengukuran absorbansi dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis metode derivatif.

## 4. Analisis Data
Pada  metode  kemometrik,  dilakukan  pengumpulan  data  spektra  dan  absorbansi  yang didapatkan  dengan  excel,  kemudian  dilakukan  perhitungan  dengan  menggunakan kemometrik model Partial Least Squares (PLS) pada software Unscrambler.

## HASIL PENELITIAN

## 1. Optimasi Pelarut
Optimasi  pelarut  dilakukan  untuk  mendapatkan  pelarut  yang  tepat.  Dilakukan  optimasi pelarut  dengan  menggunakan  standar  niacinamide  dan  vitamin  C  yang  masing-masing dilarutkan dengan pelarut aquadest dan HCl 0,1M.
Gambar 1. Niacinamide dan Vitamin C dengan pelarut Aquadest (kiri) dan HCl 0,1 M (kanan)
Gambar 2. Pelarut Aquadest (kiri) dan Pelarut Niacinamide (kanan)
2. Model Kalibrasi
Hasil 25 model set kalibrasi dengan model raw spektra, derivatif 1, derivatif 2, dervatif 3, dan derivatif 4 pada niacinamide dan vitamin C .
Gambar 2. Model Kalibrasi Niacinamide Raw Spektra
Gambar 3. Model Kalibrasi Vitamin C Raw Spektra
Gambar 4. Model Kalibrasi Niacinamide Derivatif 1
Gambar 5. Model Kalibrasi Vitamin C Derivatif 1
Gambar 6. Model Kalibrasi Niacinamide Derivatif 2
Gambar 7. Model Kalibrasi Vitamin C Derivatif 2
Gambar 8. Model Kalibrasi Niacinamide Derivatif 3
Gambar 9. Model Kalibrasi Vitamin C Derivatif 3
Gambar 10. Model Kalibrasi Niacinamide Derivatif 4

## Gambar 11. Model Kalibrasi Vitamin C Derivatif 4
3. Validasi Metode Analisis
a. Linieritas
Tabel 1. Hasil Linieritas Niacinamide Raw Spektra Derivatif 1 Derivatif 2 Derivatif 3 Derivatif 4 Niacinamide r 0,9976 0,9992 0,9993 0,9994 0,9992 a 0,0516 0,0153 0,0144 0,0113 0,0166 b 0,9952 0,9985 0,9986 0,9989 0,9984 Persamaan Regresi y= 0,0516 + 0,9952x y= 0,0153 + 0,9985x y= 0,0144 + 0,9986x y= 0,0113 + 0,9989x y= 0,0166 + 0,9984x Tabel 2. Hasil Linieritas Vitamin C Raw Spektra Derivatif 1 Derivatif 2 Derivatif 3 Derivatif 4 Vitamin C r 0,9993 0,9994 0,9984 0,9885 0,8926 a 0,0133 0,0108 0,0329 0,2453 2,1938 b 0,9987 0,9989 0,9969 0,9772 0,7968 Persamaa n Regresi y= 0,0133 + 0,9987x y= 0,0108 + 0,9989x y= 0,0329 + 0,9969x y= 0,2453 + 0,9772x y= 2,1938  + 0,7968x

## b. LOD dan LOQ
Tabel 3. Hasil LOD dan LOQ Niacinamide Vitamin C LOD (mg/L) LOQ (mg/L) LOD (mg/L) LOQ (mg/L) Raw Spectra 0,6674 2,2247 0,1716 0,5720 Derivatif 1 0,1977 0,6592 0,1394 0,4648 Derivatif 2 0,1859 0,6199 0,4248 1,4161 Derivatif 3 0,1457 0,4858 3,2267 10,7558 Derivatif 4 0,2143 0,7144 35,3787 117,9291
c. Akurasi
Tabel 4. Hasil Akurasi Konsentrasi Niacinamide Vitamin C Rata-rata % Recovery SD %CV Rata-rata % Recovery SD %CV Raw Spektra 80% 102,6530 2,5117 2,4468 101,2216 1,2351 1,2202 100% 99,6805 3,7977 3,8099 103,1217 0,5592 0,5422 120% 96,9045 0,6087 0,6281 104,3396 0,2764 0,2649 Derivatif 1 80% -12,7385 0,1240 -0,9736 -13,3966 0,0351 -0,2620 100% -9,6752 0,1513 -1,5647 -12,0576 0,2892 -2,3990 120% -7,2999 0,1483 -2,0328 -10,9542 0,0707 -0,6457 Derivatif 2 80% -65,0126 1,6529 -0,0254 -55,5889 12,5113 -0,2250 100% -61,978 2,2890 -0,0369 -40,4751 6,7758 -0,1674 120% -60,1991 2,0018 -0,0332 -37,4124 6,4589 -0,1726 Derivatif 3 80% 4,8108 0,8327 0,1730 331,2716 46,2617 0,1396 100% 4,1584 2,7676 0,6655 331,9827 73,6838 0,2219 120% 3,6793 1,3798 0,3750 309,6599 42,8048 0,1382 Derivatif 4 80% 52,1329 1,1690 0,0224 70,8530 15,5719 0,2197 100% 53,1288 1,4548 0,0273 80,4365 25,0020 0,3108 120% 53,7296 1,1553 0,0215 57,6591 24,0345 0,4168 d. Presisi
Tabel 5. Hasil Presisi Niacinamide Perlakuan 80% 100% 120% Rata-rata % Recovery SD %RSD Rata-rata % Recovery SD %RSD Rata-rata % Recovery SD %RSD Raw Spektra Intraday 102,653 2,511 2,446 99,680 3,797 3,809 96,904 0,608 0,628 Interday Hari 1 101,273 1,242 1,227  100,930 0,871 0,863 102,039 0,673 0,660 Interday Hari 2 101,457 2,489 2,454  103,536 3,554 3,432 102,526 3,613 3,528 Interday Hari 3 99,369 2,701 2,718 101,812 2,037 2,001 101,989 1,452 1,424 Derivatif 1 Intraday -12,738 0,124 -0,973 -9,675 0,151 -1,564 -7,299 0,148 -2,032 Interday Hari 1 -13,045 0,122 -0,937 -9,806 0,108 -1,102 -7,702 0,096 -1,255 Interday Hari 2 -12,835 0,454 -3,541 -9,981 0,155 -1,562 -7,870 0,197 -2,514 Interday Hari 3 -16,531 4,642  -28,080  -20,180 0,089 -0,442 -16,788 0,100 -0,599 Derivatif 2 Intraday -65,012 1,652 -0,025 -61,978 2,289 -0,036 -60,199 2,001 -0,033 Interday Hari 1 -59,670 1,838 -0,030 -59,143 1,008 -0,017 -58,198 2,170 -0,037 Interday Hari 2 -73,616 3,345 -0,045 -69,750 3,900 -0,055 -65,746 2,116 -0,032 Interday Hari 3 -64,778 6,081 -0,093 -75,323 2,530 -0,033 -72,652 3,137 -0,043
Tabel 5. (Lanjutan) Tabel 6. Hasil Presisi Vitamn C
Perlakuan 80% 100% 120% Rata-rata % Recovery SD %RSD Rata-rata % Recovery SD %RSD Rata-rata % Recovery SD %RSD Derivatif 3 Intraday 4,810 0,832 0,173 4,158 2,767 0,665 3,679 1,379 0,375 Interday Hari 1 3,445 1,825 0,529 4,076 1,878 0,460 2,982 1,209 0,405 Interday Hari 2 9,817 3,549 0,361 8,075 2,533 0,313 7,368 3,434 0,466 Interday Hari 3 4,312 1,303 0,302 1,927 4,100 2,127 2,663 3,279 1,231 Derivatif 4 Intraday 52,132 1,169 0,022 53,128 1,454 0,027 53,729 1,155 0,021 Interday Hari 1 58,456 2,735 4,678 68,944 5,225 7,579 69,780 3,813 5,465 Interday Hari 2 71,350 11,447 0,160 72,701 8,435 0,116 69,056 10,106 0,146 Interday Hari 3 63,380 8,778 0,138 72,217 2,632 0,036 71,819 1,994 0,027
Perlakuan 80% 100% 120% Rata-rata % Recovery SD %RSD Rata-rata % Recovery SD %RSD Rata-rata % Recovery SD %RSD Raw Spektra Intraday 101,221 1,235 1,220 103,121 0,559 0,542 104,339 0,276  0,264 Interday Hari 1 98,971 0,532 0,538 98,741 0,991 1,004 101,765 0,455  0,447 Interday Hari 2 101,996 1,638 1,606 102,404 2,542 2,482 103,457 2,634  2,546 Interday Hari 3 98,871 2,579 2,582 104,109 0,985 0,946 103,986 0,549  0,528 Derivatif 1 Intraday -13,396 0,035 -0,262 -12,057 0,289 -2,399 -10,954 0,070  -0,645 Interday Hari 1 -13,535 0.041 -0,307 -12,093 0,050 -0,415 -11,299 0,036  -0,325 Interday Hari 2 -13,395 0,341 -2,551 -12,283 0,320 -2,606 -11,246 0,097  -0,863 Interday Hari 3 -11,808 2,083 -17,644 -7,737 0,028 -0,366 -6,44 0,029  -0,465 Derivatif 2 Intraday -65,012 1,652 -0,025 -61,978 2,289 -0,036 -60,199 2,001  -0,033 Interday Hari 1 -21,643 16,643 -0,768 -31,126 8,553 -0,274 -24,951 5,044  -0,202 Interday Hari 2 -21,7737 23,607 -1,086 -13,224 14,536 -1,099 -17,175 15,341  -0,893 Interday Hari 3 -20,138 7,144 -0,354 -19,230 25,281 -1,314 -18,772 22,865  -1,218 Derivatif 3 Intraday 331,271 46,261 0,139 331,982 73,683 0,221 309,659 42,804  0,138 Interday Hari 1 302,774 46,700 0,154 297,517 16,767 0,056 298,831 37,519  0,125 Interday Hari 2 572,439 36,863 0,064 507,240 75,179 0,148 466,260 117,353  0,251 Interday Hari 3 385,458 69,858 0,181 416,070 65,490 0,157 415,295 109,267  0,263 Derivatif 4 Intraday 70,853 15,57 0,219 80,436 25,002 0,310 57,659 24,034  0,416 Interday Hari 1 -254,892 316,062 -1,239 27,066 195,843 7,236 -152,388  111,672  -0,737 Interday Hari 2 -659,54 427,174 -0,647 -921,754 286,417 -0,310 -740,799  295,925  -0,399 Interday Hari 3 -215,335 252,802 -1,174 -7,324 66,256 -9,046 22,335 87,953  3,937
4. Penetapan Kadar Sampel
Tabel 7. Penetapan Kadar Niacinamide
Sampel Predicted (mg/L) Reference (mg/L) %Kadar Rata-rata %Kadar A 56,3800 5000 1,1276 1,1275 56,3312 5000 1,1266 56,4139 5000 1,1282 B 87,0573 5000 1,7411 1,7426 87,2042 5000 1,7440 87,1300 5000 1,7426 C 87,0573 5000 1,7411 1,7441 87,1949 5000 1,7438 87,3641 5000 1,7472 D 77,8439 5000 1,5568 1,5659 78,1291 5000 1,5625 78,9265 5000 1,5785 E 68,4414 5000 1,3688 1,3723 68,5943 5000 1,3718 68,8118 5000 1,3762

## Tabel 8. Penetapan Kadar Vitamin C
Sampel Predicted (mg/L) Reference (mg/L) %Kadar Rata-rata %Kadar A 83,0440 5000 1,6608 1,6608 82,9803 5000 1,6596 83,1026 5000 1,6620 B 75,2708 5000 1,5054 1,5075 75,4143 5000 1,5082 75,4540 5000 1,5090 C 75,2708 5000 1,5054 1,5090 75,3857 5000 1,5077 75,6994 5000 1,5139 D 75,4735 5000 1,5094 1,5136 75,7739 5000 1,5154 75,7977 5000 1,5159 E 90,9285 5000 1,8185 1,8203 91,0037 5000 1,8200 91,1222 5000 1,8224

## PEMBAHASAN
1. Optimasi Pelarut
Penggunaan aquadest dan HCl 0,1M dikarenakan vitamin C memiliki kelarutan yang sukar  larut  dengan  etanol,  selain  itu  juga  dikarenakan  menurut  Moffat  (2011)  niacinamide dan  vitamin  C  dapat  larut  dalam  HCl.  Berdasarkan  data  yang  diperoleh  pada  Gambar  1, pelarut  yang  optimum  untuk  digunakan  yaitu  HCl  0,1M.  Hal  ini  dikarenakan  HCl  0,1M memiliki spektrum serapan yang hampir sama dengan panjang gelombang teoritis. Menurut Moffat  (2011),  niacinamide  memiliki  panjang  gelombang  261  nm  dalam  pelarut aqueous acid dan vitamin C memiliki panjang gelombang 243 nm dalam pelarut aqeous acid . Selain itu  juga,  pelarut  HCl  0,1M  dipilih  karena  spektrumnya  memisah  dengan  sempurna  antara
spektrum  niacinamide  dan  vitamin  C  yang  menggunakan  pelarut  HCl  0,1M.  Pada penggunaan pelarut aquades, spektrumnya saling tumpang tindih.

## 2. Pembuatan Model
Penentuan  panjang  gelombang  dilakukan  sebagai  dasar  untuk  pemilihan  rentang panjang gelombang yang dipakai dalam kemometrik. Dalam penetapan panjang gelombang, diambil semua panjang gelombang dari 200-400 nm yang nantinya digunakan sebagai data dalam pembuatan model kalibrasi.

## 3. Model Kalibrasi
Model  kalibrasi  dilakukan  dengan  menggunakan  metode Partial  Least  Square (PLS). Pembuatan model dilakukan pada 25 set kalibrasi dengan 5 konsentrasi berbeda dan menggunakan rancangan faktorial design dalam software minitab. Pada set kalibrasi, faktor yang  digunakan  yaitu  2  senyawa  (niacinamide  dan  vitamin  C)  dan  level  yang  digunakan yaitu 5 konsentrasi berbeda. 5 konsentrasi yang berbeda ini yaitu 2 mg/L, 6 mg/L, 10 mg/L, 16  mg/L,  dan  20  mg/L.  Dilakukan  pembacaan  pada  25  model  set  kalibrasi  dengan menggunakan  spektrofotometri  UV-Vis,  kemudian  data  yang  diperoleh  diubah  ke  dalam bentuk  excel  dan  didapatkan  sebanyak  201  data  absorbansi  pada  masing-masing  titik kalibrasi.  Setelah data di ubah ke dalam bentuk  excel, data dimasukkan  ke dalam  aplikasi atau software Unscrambler untuk dilakukan pengolahan absorbansi. Setelah data di ubah ke dalam  bentuk  excel,  data  dimasukkan  ke  dalam  aplikasi  atau  software  Unscrambler  untuk dilakukan pengolahan absorbansi.
Dalam menentukan model yang baik digunakan beberapa parameter yaitu R-Square , Root Mean  Square  Error  of  Calibration (RMSEC)  dan Root  Mean  Square  Error  of  Cross Validation (RMSECV).  Persyaratan  untuk  nilai R-square yaitu  mendekati  1,0  atau  >0,99. Berdasarkan  data  yang  diperoleh  nilai R-square kalibrasi  pada  niacinamide  mendekati  1,0 yaitu  0,995  dan  pada  vitamin  C  mendekati1,0  yaitu  0,998.  Nilai R-square validasi  pada niacinamide  mendekati  1,0  yaitu  0,994  dan  pada  vitamin  C  mendekati  1,0  yaitu  0,998. Persyaratan  untuk  RMSEC  dan  RMSECV  yaitu  mendekati  0,00  lebih  bagus.  Berdasarkan data yang diperoleh nilai RMSEC pada niacinamide mendekati 0,00 yaitu 0,4513 dan pada vitamin C mendekati 0,00 yaitu 0,0229. Nilai RMSECV pada niacinamide mendekati 0,00 yaitu  0,5095  dan  pada  vitamin  C  mendekati  0,00  yaitu  0,2618.  Model  kemometrik dilakukan dengan menggunkan spektrum raw spektra dan spektrum derivatif.
4. Validasi Metode Analisis
a. Linieritas
Persyaratan linieritas yaitu nilai koefisien korelasi (r) yaitu tidak kurang dari 0,99 atau  mendekati  1.  Berdasarkan  hasil  yang  didapat,  nilai  r  niacinamide  semuanya memenuhi  persyaratan,  sedangkan  nilai  r  vitamin  C  yang  memenuhi  persyaratan  yaitu raw spektra, derivatif 1, dan derivatif 2.
b. Limit of Detection (LOD) dan Limit of Quantitation (LOQ)
Batas  deteksi  (LOD)  adalah  jumlah  analit  terkecil  dalam  sampel  yang  dapat dideteksi  dan  masih  memberikan  respon  yang  signifikan  jika  dibandingkan  dengan blanko.  Batas  kuantitas  (LOQ)  adalah  parameter  pada  analisis  renik  yang  diartikan sebagai  kuantitas  analit  terkecil  dalam  sampel  yang  masih  dapat  memenuhi  kriteria cermat dan seksama. Konsentrasi seri kalibrasi terprediksi dan konsentrasi set kalibrasi terukur digunakan sebagai nilai simpangan baku  yang dipakai  untuk menghitung  LOD dan LOQ.
c. Akurasi
Akurasi dinyatakan dengan persen perolehan kembali atau % Recovery analit yang ditambahkan dan %CV ( Coefficient of Variation ). Syarat dari akurasi yaitu % Recovery 90-107%  dan  %CV  <3,9%.  Akurasi  dilakukan  pada  3  konsentrasi  yang  berbeda  dan direplikasi sebanyak 6 kali. Berdasarkan data pada Tabel 4.6 dapat dilihat bahwa hasil yang didapatkan pada derivatif 1 tidak sesuai dengan persyaratan, sedangkan pada raw spektra  didapatkan  hasil  yang  sesuai.  Hasil  rata-rata  %recovery  pada  data raw sepktra untuk  niacinamide  yaitu  102,6530%,  99,6805%,  dan  96,9045%,  sedangkan  untuk vitamin  C  yaitu  101,2216%,  103,1217%,  dan  104,3396%.  Hasil  %CV  pada  data  raw spektra  untuk  niacinamide  yaitu  2,4468%;  3,8099%;  dan  0,6281%,  sedangkan  untuk vitamin C yaitu 1,2202%; 0,5422%; dan 0,2649%.

## d. Presisi
Presisi  diukur  sebagai  simpangan  baku  atau  simpangan  baku  relatif  (koefisien variasi). Syarat dari presisi yaitu nilai %RSD <3,9%. Presisi dilakukan secara intraday (dilakukan  pada  hari  yang  sama)  dan interday (dilakukan  pada  3  hari  berturut-turut) dengan 3 konsnetrasi berbeda serta direplikasi sebanyak 6  kali.  Berdasarkan data pada Tabel 4.7 dan Tabel 4.8 dapat dilihat bahwa hasil yang didapatkan pada derivatif 1 tidak sesuai  dengan  persyaratan,  sedangkan  pada raw spektra  didapatkan  hasil  yang  sesuai. Hasil  presisi  dengan  menggunakan  data raw spektra  untuk  niacinamide  yaitu  niali %RSD presisi yang dilakukan secara intraday yaitu 2,4468%; 3,8099%; dan 0,6281%, sedangkan vitamin C yaitu 1,2202%; 0,5422%; dan 0,2649%. Niali %RSD presisi yang dilakukan  secara interday hari  ke-1  untuk  niacinamide  yaitu  1,2273%;  0,8634%;  dan 0,6604%  ,  sedangkan  pada  vitamin  C  yaitu  0,5382%;  1,0040%;  dan  0,4476%.  Nilai %RSD  presisi  yang  dilakukan  secara interday hari  ke-2  untuk  niacinamide  yaitu 2,4540%;  3,4329%;  dan  3,5248%,  sedangkan  untuk  vitamin  C  yaitu  1,6065%; 2,4826%;  dan  2,5468%. Nilai  %RSD  yang  dilakukan  secara  presisi interday hari  ke-3 untuk niacinamide yaitu 2,7187%; 2,0014%; dan 1,4240%, sedangkan untuk vitamin C yaitu 2,5829%; 0,9463%; dan 0,5284%.

## 5. Penetapan Kadar
Setelah  semua  validasi  metode  tervalidasi,  dilakukan  penetapan  kadar.  Penetapan  kadar naicinamide  dan  vitamin  C  dilakukan  dengan  menggunakan  model  PLS  data raw spektra.  Hal dikarenakan  hasil  validasi  metode  analisis  yang  memenuhi  persyarat  yaitu  dengan mengggunakan data raw spektra. Sampel yang digunakan sebanyak 5 merek sampel kosmetika pencerah  yang  memiliki  kandungan  niacinamide  dan  vitamin  C,  namun  pada  sediaan  tidak dituliskan  berapa  persen  kadar  pada  setiap  senyawanya.  Penetapan  kadar  ini  dilakukan  untuk mengetahui  kadar  niacinamide  dan  vitamin  C  yang  terkandung  dalam  sampel  kosmetika pencerah apakah masih dalam batas penggunaanya. Pada masing-masing sampel dibuat sebesar 5.000  mg/L  dan  dilakukan  replikasi  sebanyak  3  kali.  Berdasarkan  data  yang  diperoleh  dapat dilihat  bahwa  kadar  niacinamide  yang  diperoleh  yaitu  1,1275%-1,7441%  telah  sesuai  dengan batas penggunaannya yaitu 1-20% dan kadar vitamin C yang diperoleh yaitu 1,5075%-1,8203% kurang  dari  batas  penggunaannya  yaitu  4-20%.  Menurut  Farmakope  edisi  VI  vitamin  C memiliki sifat sensitif terhadap cahaya dan dalam larutan akan cepat teroksidasi. Oleh karena ini pada tabel diatas diperoleh kadar vitamin C yang kurang dari batas penggunaannya.

## SIMPULAN
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa pada validasi metode analisis  menggunakan  spektrofotometer  derivatif  dan  kemometrik  multivariat  telah  memenuhi International  Council  for  Harmonisation  of  Technical  Requirements  for  Registration  of Pharmaceuticals  for  Human  Use  (ICH) .  Dimana  validasi  metode  analisis  untuk  niacinamide dan  vitamin  C  yang  dilakukan  dengan  menggunakan  data raw spektra  telah  memenuhi persyaratan,  jika  menggunakan  data  derivatif  1  hingga  4  akan  menghasilkan  data  yang  tidak terdeteksi.  Diman  pada  semua  parameter  validasi  metode  analisis  semuanya  memenuhi persyaratan.  Pada  penetapan  kadar,  diperoleh  kadar  niacinamide  sebesar  1.1275%-1.74411% dimana kadar tersbut telah sesuai dnegan batas penggunannya. Sedangkan kadar vitamin C yang diperoleh  yaitu  sebesar  1.5075%-1.8203%  dimana  kadar  tersebut  kurang  dari  batas penggunaannya.

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  dengan  menggunakan  instrument  yang  lebih spesifik seperti High Performance Liquide Chromatography (HPLC).

## REFERENSI
Couteau,  C.,  &  Coiffard,  L.  2016. Overview  of  Skin  Whitening  Agents:  Drugs  and  Cosmetic Products. Cosmetics , 3 (3), 6. https://doi.org/10.3390/cosmetics3030027
Harmita. 2004. Petunjuk Pelaksanaan Validasi Metode Dan Cara Perhitungannya. Majalah Ilmu Kefarmasian, 1 (3). https://doi.org/10.7454/psr.v1i3.3375
Herlambang,  C.  N.  2021. Development  Body  Scrub  With  Niacinamide  and  Jojoba  Beads  As Exfoliator. World  Journal  Of  Pharmaceutical  Research , 10 (10),  1367–1377. https://doi.org/10.20959/wjpr202110-21313
Kembuan,  M.  V.,  Wangko,  S.,  &  Tanudjaja,  G.  N.  2012.  Peran  Vitamin  C  Terhadap Pigmentasi Kulit. Biomedik, 4 , 1–2.
Nurhidayati,  L.  2007.  Spektrofotometri  Derivatif  dan  Aplikasinya  dalam  Bidang Farmasi. Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia, 5.
Retno,  H.,  Auliya,  S.,  &  Abdassah,  M.  2018.  Tinjauan  Bahan  Berbahaya  dalam  Krim Pencerah Kulit. Farmaka, 16 (2), 214–224.
Rohman,  A.,  &  Che  Man,  Y.  B.  2011.  An alysis  of  Lard  in  Cream  Cosmetics Formulations  Using  FT-IR  Spectroscopy  and  Chemometrics. Middle-East Journal of Scientific Research , 7 (5), 726–727.
https://pdfs.semanticscholar.org/fe0d/16489d5f0612e177a1dc94e6ebdffffc2 01d.pdf