Vol. 10 No. 2
ISSN: 1693-8615   EISSN : 2302-4291
Online : http://farmasiindonesia.setiabudi.ac.id/
Aktivitas Hepatoprotektif Ekstrak Daun Sukun ( Artocarpus altilis (Park.) Fsb.)  pada Mencit Balb/C yang Diinduksi Vaksin Hepatitis B Hepatoprotective Effect of Sukun Leaf Extract ( Artocarpus altilis (Park.) Fsb.) on Balb/C Mice Induced by Hepatitis B Vaccine

## TRI WIJAYANTI*,  VIVIN NOPIYANTI, IKA PURWIDYANINGRUM
Fakultas Farmasi, Universitas Setia Budi Jln. Letjen Sutoyo-Mojosongo Surakarta-57127 Telp. 0271-852518 * Korespondensi: jeng_yantie_apt@yahoo.com
(Diterima 27 Agustus 2013, disetujui 22 Oktober 2013)
________________________________________________________________________________________________________________________________________________

## ABSTRAK
Daun sukun ( Artocarpus altilis (Park.) Fsb.) merupakan salah satu tanaman obat yang diduga memiliki  potensi sebagai hepatoprotektor. Tanaman ini di masyarakat sudah banyak digunakan dan dilaporkan memiliki banyak kegunaan karena kandungan senyawa-senyawa berkhasiat dalam tanaman  tersebut  seperti  saponin,  polifenol,  tanin,  asam  hidrosianat,  asetilkolin,  riboflavin  dan flavonoid.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  efek  hepatoprotektif  ekstrak  daun  sukun pada  mencit  yang  diinduksi  vaksin  hapatitis  B  dengan  parameter  persentase  nekrosis  sel  hati. Ekstrak  daun  sukun  dibuat  dengan  metode  perkolasi  dengan  etanol  70%.  Hewan  uji  mencit diinduksi vaksin hepatitis B, lalu dikelompokkan dalam lima kelompok yang terdiri dari kelompok kontrol  negatif  diberi  CMC  1%,  kelompok  kontrol  positif  diberi  Echinacea  (Imboost®)  dan kelompok  perlakuan  diberi  ekstrak  daun  sukun  dengan  dosis  I  750  mg/kgBB,  dosis  II  1200 mg/kgBB, dosis III 1650 mg/kgBB yang diberikan setip hari per oral. Efek hepatoprotektor diamati dengan perhitungan nekrosis hati pada preparat histopatologis organ hati pada hari ke-35 setelah perlakuan.  Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun  sukun  dapat  memberikan  efek hepatoprotektif dengan cara penurunan jumlah nekrosis hati. Penurunan persentase nekrosis hati perlakuan ekstrak etanol 70% daun sukun dosis 1200 mg/kgBB memberikan efek hepatoprotektif paling efektif terhadap mencit jantan yang diinduksi vaksin hepatitis B.
Kata kunci : Hepatoprotektif, ekstrak daun sukun, hepatitis B.
________________________________________________________________________________________________________________________________________________

## ABSTRACT
Breadfruit leaves ( Artocarpus altilis (Park.) Fsb.) is a  medicinal plant  that is thought to have potential as a hepatoprotective. In the community itself has been widely used and is reported to have many uses since it contains efficacious compounds in plants such as saponins, polyphenols, tannins, hydrocyanic acid, acetylcholine, riboflavin and flavonoids. This study aimed to determine the  hepatoprotective effect of breadfruit leaves extract in mice induced by hepatitis B vaccine with the  percentage  of  liver  cell  necrosis  as  parameter.  Breadfruit  leaves  extract  was  made  by percolation method with ethanol 70% as the solvent. The animal test was induced by hepatitis B vaccine, then they was grouped into 5 groups of negative control group were given CMC 1%, the positive control group were given Echinacea (Imboost®) and the treatment group of test animals were  given  breadfruit  leaf  extract  at  a  dose  750  mg/kgBW,  1200  mg/kgBW,  1650  mg/kgBW. Hepatoprotective  effect  was  observed  by  liver  necrosis  parameter  on  histopathologic  liver  mice preparations  at  day  35  after  treatment.  The  results  showed  that  the  breadfruit  leaf  extract  can provide  hepatoprotective  effect  by  reduction  the  liver  necrosis.  The  percentage  of  reduction
necrosis  of  the  liver  in  the  treatment  of  70%  ethanol  extract  of  breadfruit  leaves  dose  of  1200 mg/kgBW provides the most effective hepatoprotective effect on male mice induced hepatitis B vaccine
Keywords : hepatoprotective, breadfruit leaves extract, hepatitis B ________________________________________________________________________________________________________________________________________________

## PENDAHULUAN
Infeksi  hepatitis  virus  B  (HVB) merupakan  masalah  kesehatan  global termasuk  di  Indonesia.  Saat  ini diperkirakan  350  juta  penduduk  dunia terinfeksi  dengan  HVB,  sekitar  75% berada  di  Asia  dan  24–40%  akan menjadi  hepatitis  virus  B  kronik  (Liu  & Hou  2006).  Diperkirakan  78%  dari seluruh  penderita  hepatitis  virus  B kronik di seluruh dunia terdapat di Asia. Prevalensi hepatitis virus B di Indonesia bervariasi  antara  2,5–36,1%  (rata-rata 20%  atau  sekitar  40  juta)  dan menempati  urutan  ketiga  di  Asia,  yaitu 11,6%  yang  berarti  bahwa  secara epidemiologis  Indonesia  tergolong kelompok  negara  dengan  risiko endemisitas tinggi (Amiruddin 2002).
Hepatitis  adalah  suatu  proses peradangan  di  jaringan  hati  yang memberikan gejala lemah badan, mual, urin seperti air teh disusul dengan mata dan  badan  menjadi  kuning.  Hepatitis dapat  disebabkan  oleh  virus  sebagai penyebab terbanyak, bakteri Salmonella typhi ,  obat  beracun  (hepatotoksik)  dan alkohol  (Hardjoeno  2003).    Dengan kemajuan  ilmu  dan  teknologi,  saat  ini telah  berhasil  diidentifikasi  sejumlah virus  penyebab  hepatitis  yaitu  virus
hepatitis  A  (HVA),  virus  hepatitis  B (HVB),  virus  hepatitis  C  (HVC),  virus hepatitis  D  (HVD),  virus  hepatitis  E (HVE)  dan virus hepatitis  G (HVG).  Dari sejumlah  virus  hepatitis  tersebut  yang menjadi  problem  serius  adalah  virus hepatitis  B  karena  dapat  berkembang menjadi  penyakit  hati  kronik  dengan segala komplikasinya (Amiruddin 1998). Infeksi  dengan  virus  hepatitis  B  (HBV) menunjukkan beberapa macam manifestasi  klinik  : fulminant ,  akut,
kronis  dan  tidak  nyata.  Bentuk fulminant dan akut merupakan penyebab  kematian  yang  tinggi. Hepatitis  kronis  adalah  bentuk  yang bertanggung jawab terhadap
penyebaran  virus  dan  berpotensi berkembang  biak  menjadi  sirosis  dan hepatocellular  carcinoma (Ioshimoto et al. 1999).
Hanya  sebagian  kecil  penderita hepatitis  B  di  Indonesia  yang  bisa menjalani  pengobatan  karena  biaya pengobatan  yang  tidak  terjangkau  dan ketatnya  syarat  pengobatan  (Akbar 2003).  Penatalaksanaan  terapi  hepatitis terutama  yang  kronis,  sampai  saat  ini belum ada pengobatan yang memuaskan.  Penggunaan  interferon sebagai terapi standar untuk hepatitis B pun masih banyak kendala, karena tidak
semua  pasien  dapat  memenuhi  syarat mendapatkan terapi interferon.
Pengobatan  hepatitis  kronis  dengan tanaman obat sangat bermanfaat untuk pasien  yang  tidak  berhasil  diterapi dengan  interferon.  Sebagai  terapi, tanaman  obat  dapat  dikombinasikan dengan  interferon  untuk  pasien  yang menderita efek samping akibat
penggunaan  interferon.  Selain  itu,  bisa dipakai  oleh  pasien  yang  tidak terindikasi  untuk  mendapatkan  terapi interferon  dan  pasien yang tidak  dapat menjangkau  biaya  interferon  (Afifah 2004).
Salah  satu  tanaman  herbal  di Indonesia  adalah  tanaman  sukun ( Artocarpus  altilis (Park)Fsb).  Daun sukun  dapat  dimanfaatkan  untuk keperluan  kehidupan  manusia.  Daun sukun  efektif  mengobati  penyakit seperti  liver,  hepatitis,  pembesaran limpa,  jantung,  ginjal,  tekanan  darah tinggi  dan  kencing  manis,  karena mengandung  fenol,  quercetin,  dan champorol  dan  juga  dapat  digunakan sebagai bahan ramuan obat penyembuh  kulit  yang  bengkak  atau gatal-gatal.  Daun  sukun  terbukti  dapat mengurangi udema karena
mengandung  flavonoid  yang  sangat efektif  sebagai  antiinflamasi.  Hal  ini didukung  dengan  penelitian  yang sudah  dilakukan  sebelumnya  bahwa aktivitas  antiinflamasi  dari  flavonoid yang  berhasil  diisolasi  dari Artocarpus communis dan Artocarpus heterophyllus
secara in  vitro dapat  menghambat pelepasan  mediator-mediator  kimia dari  sel  mast,  neutrofil  dan  makrofag (Wei et al. 2005). Flavonoid sendiri telah diketahui  memiliki  aktivitas  biologis sebagai antiinflamasi, antioksidan,
antivirus,  hepatoprotektor,  antikanker, dan  lain  sebagainya  (Middelton et  al. 2009).  Aktivitas  hepatoprotektif  infus daun sukun telah dibuktikan pada tikus yang  diinduksi  karbon  tetraklorida (Atmaja et al . 2010).

## METODE PENELITIAN

## Bahan
Bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  daun  sukun  yang diperoleh secara acak dari dusun klebet, Gondangrejo,  Wonorejo,  Karanganyar, Jawa  Tengah;  vaksin  hepatitis  B  merk Engerix-B,  etanol  70  %,  akuades,  HCl 2%,  reagen  Dragendrof,  reagen  Mayer, serbuk Mg, HCl 2N, amil alkohol.

## Alat
Alat    yang  digunakan  adalah perkolator, vacuum rotary evaporator, batang  pengaduk,  gelas  ukur,  blender, ayakan  no  40,  penangas  air, Beaker glass ,  pipa  kapiler,  mikrosentrifuge, tabung reaksi dan alat bedah.

## Pembuatan  Ekstrak  Etanol  Daun Sukun
Tahap pertama adalah memastikan kebenaran  sampel  tanaman  sukun berkaitan  dengan  ciri-ciri  morfologi
yang  ada  pada  tanaman  sukun terhadap  kepustakaan  dan  dibuktikan di Laboratorium Morfologi dan Sistematika Tumbuhan, Fakultas Farmasi, Universitas Setia Budi, Surakarta Daun  sukun  dikeringkan  dalam oven  suhu  40 0 C.  Kemudian  diblender dan  diayak  dengan  nomor  ayakan  40, dan disimpan dalam tempat kering dan tertutup rapat
Serbuk  daun  sukun  sebanyak  500 gram  direndam  dengan  pelarut  etanol 70%  selama  3  jam.  Kemudian dimasukkan  ke  dalam  alat  perkolator dan  diatur  dengan  ketentuan    tetesan 1  ml/menit.  Lalu  ditambahkan  etanol 70% sampai perkolatnya jernih. Perkolat diuapkan  dengan  evaporator  sampai diperoleh ekstrak kental.
Identifikasi Kandungan
Senyawa

## Kimia Ekstrak Daun Sukun
Alkaloid  diidentifikasi  dengan  cara sebanyak  20  ml  ekstrak  etanol  daun sukun  diuapkan  dengan  pemanas  air, larutan  disaring  dengan  kertas  saring kemudian filtrat yang diperoleh ditambah 5-10  ml  asam  klorida  10%.  Larutan dibasakan dengan amonia dan
diekstraksi  dengan  20  ml  kloroform. Kloroform  kemudian  diuapkan  dan ditambah 1,5 ml asam klorida 2%. Larutan ditambahkan 2 tetes pereaksi Mayer.
Flavonoid  diidentifikasi  dengan  cara sebanyak 1 ml ekstrak etanol daun sukun ditambah  2ml  etanol  95%,  0,5  gram serbuk seng dan 2 ml asam klorida 2 N.
Didiamkan  larutan  selama  1  menit  dan kemudian  ditambahkan  2  ml  asam klorida  pekat.  Reaksi  positif  ditunjukkan dengan  warna  merah  atau  kuning  atau jingga.
Identifikasi  saponin  dengan  cara sebanyak 2 ml ekstrak etanol daun sukun dalam  tabung  reaksi  dikocok  selama  15 menit.  Uji  positif  ditunjukkan  dengan terbentuknya buih yang stabil.
Tanin  diidentifikasi  dengan  cara sebanyak  1  ml  ekstrak  daun  sukun ditambah  2  ml  air  dan  kemudian ditambahkan besi (III) klorida.

## Pengujian Aktivitas Hepatoprotektif
Lima puluh ekor mencit didaptasikan terlebih  dahulu  selama      satu  minggu. Selama  proses  adaptasi  makanan  dan minuman yang diberikan tidak dilakukan perlakuan  apapun.  Kemudian  mencit dibagi  menjadi  lima  kelompok.  Kelima kelompok  terbagi  dengan  perlakuan kontrol  negatif  dengan  pemberian  CMC 1%,  kelompok  kontrol  positif  dengan pemberian  Echinacea  (Imboost®),  dan tiga  kelompok  perlakuan  ekstrak  daun sukun dengan dosis 750 mg/kgBB, dosis 1200 mg/kgBB, dan dosis 1650 mg/kgBB.
Pembuatan  preparat  histopatologi hati  dilakukan  pada  hari  ke-35. Pengamatan  preparat  jaringan  hepar dengan  perbesaran  100  kali  di  daerah sekitar  vena  sentralis  dan  perifer  lobulus hepar.  Dihitung  jumlah  total  inti  sel  hati yang  tampak  lalu  dihitung  inti  sel  hati yang mengalami piknosis.

## Analisis Statistik
Analisis  statistik  yang  digunakan dalam  pengolahan  data  yaitu  untuk persentase  nekrosis  menggunakan ANOVA satu jalan dilanjutkan uji SNK.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil  Pembuatan  Ekstrak  Daun Sukun
Hasil  perhitungan  rendemen  daun sukun kering terhadap bobot daun sukun basah  adalah  7000  gram  daun  basah didapatkan  2400  gram  daun  kering,  lalu dijadikan serbuk dengan perolehan bobot 1900  gram  serbuk  daun  sukun.  Dengan demikian  rendemen  serbuk  kering terhadap daun basah sebesar 34,28 %.
Ekstrak  daun  sukun  diperoleh  dari ekstraksi  perkolasi  serbuk  daun  sukun dengan  pelarut  etanol  70%.  Ekstrak  yang diperoleh  dipekatkan  selama  dua  hari hingga diperoleh ekstrak kental. Sebanyak 500  gram serbuk daun sukun menghasilkan 164 gram ekstrak, sehingga rendemen ekstrak sebesar 32,9%. Ekstrak  daun  sukun  yang  diperoleh berbentuk kental, berwarna hijau
kehitaman, berbau khas, dan berasa khas. Hasil  identifikasi  kandungan  kimia  yang terdapat  dalam  ekstrak  daun  sukun berdasarkan  reaksi  warna  ditemukan adanya  kandungan  senyawa  flavonoid, saponin, alkaloid dan tanin.
Hasil  Uji  Aktivitas  Hepatoprotektif Ekstrak Daun Sukun
Aktivitas  hepatoprotektif  daun  sukun pada  mencit  yang  diinduksi  vaksin
hepatitis B dinilai dari rata-rata persentase nekrosis  sel  hati.  Vaksin  yang  digunakan dalam penelitian ini adalah vaksin hepatitis B merk Engerix-B karena vaksin ini sudah memenuhi syarat dari WHO untuk vaksin hepatitis rekombinan. Engerix-B diindikasikan  untuk  imunisasi  aktif melawan  infeksi  HBV  yang  disebabkan oleh  semua  subtipe  yang  diketahui  pada subyek dalam semua jangkauan usia yang beresiko terkena HBV.
Pemeriksaan dan perhitungan jumlah sel  hati  yang  mengalami  kerusakan berpusat  di  vena  sentralis.  Menurut  Mills (2007), kerusakan vena sentralis berkaitan dengan  peranannya  pada  sirkulasi  darah sinusoid.
Vena sentralis banyak menampung  nutrien  dan  zat-zat  hasil metabolisme  yang  dapat  bersifat  toksik maupun nontoksik. Banyaknya darah yang ditampung oleh vena sentralis menyebabkan  konsentrasi  zat  yang bersifat  toksik  jauh  lebih  besar  sehingga hal  ini  memperjelas  kerusakan  vena sentralis.
Nekrosis sel hati dapat dilihat dari ada tidaknya  inti  piknotik.  Inti  piknotik  adalah inti  sel  yang  mati  menyusut,  batas  tidak teratur,  dan  berwarna  gelap.  Berdasarkan gambaran  histopatologi  hati,  semua kelompok  memiliki  inti  piknotik  (Gambar 1).  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  induksi vaksin  hepatitis  B  pada  semua  kelompok menyebabkan nekrosis pada hati.
J. Farmasi Indonesia
Vena sentralis Vena sentralis Vena sentralis Vena sentralis Vena sentralis
Sel normal
Sel normal Sel normal Sel normal Sel normal Sel piknotik Sel piknotik Sel piknotik Sel piknotik Sel piknotik
A                                                           B
C                                                              D E
Gambar 1.   Gambaran histopatologi hati mencit jantan yang dinduksi vaksin hepatitis B pada lima kelompok  perlakuan:  kelompok  kontrol  negatif  (A),  kelompok  kontrol  positif Imboost® (B), kelompok perlakuan ekstrak daun sukun dosis: 750 mg/kgBB (C),  1200 mg/kgBB (D), 1650 mg/kgBB (E).
Jumlah  inti  piknotik  dan  jumlah total  inti  masing-masing  kelompok dihitung, kemudian dihitung persentase nekrosisnya.  Semakin  besar  nilai persentase  nekrosis  artinya  semakin parah kondisi kerusakan hatinya.  Tabel 1  menunjukkan  bahwa  rata-rata  total inti pada kelompok ekstrak daun sukun 1650  mg/kgBB  paling  banyak  dari semua  kelompok,  namun  jumlah  total intinya  juga  paling  banyak,  sehingga persentase  nekrosisnya  tidak  paling besar,  sedangkan  pada    kelompok kontrol  negatif  jumlah  rata-rata  total intinya  paling  sedikit,  dengan  rata-rata inti  piknotik  yang  cukup  banyak, sehingga persentase nekrosisnya paling besar.
Perlakuan  kelompok  ekstrak  daun sukun  1200  mg/kgBB  terlihat  bahwa
berbeda secara nyata dengan perlakuan lain sehingga dapat disimpulkan ekstrak daun sukun 1200 mg/kgBB yang terbaik dalam  menimbulkan  respon  imun ditandai  dengan  persentase  nekrosis terkecil.
Kontrol  positif  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  echinaceae yang  sudah  dalam  bentuk  sirup.
digunakan echinaceae karena echinaceae sangat baik untuk memperkuat imunitas tubuh, mencegah penyebaran  infeksi  dan  menghambat replikasi virus.
Setelah  dilakukan  analisis  statistik terlihat bahwa ekstrak etanol 70% daun sukun  dosis  II  1200  mg/KgBB  yang paling efektif dalam menurunkan kadar GPT  yang  ditandai  dengan  paling sedikit inti piknotiknya.
Tabel 1.   Hasil  pengamatan  rata-rata  persentase  nekrosis  sel  hati  mencit  jantan  yang  dinduksi vaksin hepatitis B pada lima kelompok perlakuan Kelompok Rata-Rata Total Inti Piknotik Rata-Rata Total Inti Rata-Rata Persentase Nekrosis (%) Kontrol negatif 24,0 98,4 24,38 Ekstrak daun sukun  750 mg/kgBB 19,4 121,8 15,92 Ekstrak daun sukun  1200 mg/kgBB 16,4 114,4 14,33 Kontrol positif 24,8 131,4 18,87 Ekstrak daun sukun  1650 mg/kgBB 26,6 153,2 17,36

## KESIMPULAN
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan bahwa  ekstrak  daun  sukun  dapat memberikan efek hepatoprotektif
dengan cara penurunan jumlah nekrosis hati. Penurunan persentase nekrosis hati perlakuan  ekstrak  etanol  70%  daun sukun dosis 1200 mg/kgBB memberikan efek  hepatoprotektif  paling  efektif terhadap  mencit  jantan  yang  diinduksi vaksin hepatitis B

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih kepada  DP2M,  Direktorat  Jenderal Pendidikan  Tinggi,    atas  dana  hibah
Penelitian
Dosen Pemula tahun
anggaran 2013.

## DAFTAR PUSTAKA
Afifah  E.  2004. Tanaman  Obat  Untuk Mengatasi Hepatitis . PT Agromedia
Akbar  N.  Hepatitis  B. Dexa  Medika  Jurnal Kedokteran Dan Farmasi . 1992: 83–5.
Akbar  N.  2003.  Hepasil  Menurunkan  Enzim Hati  Dan  Meningkatkan  Respon  Imun Pada  Penderita  Hepatitis  Virus  Kronik. Cermin Dunia Kedokteran No. 140: 55- 56
Amiruddin  R.  Peranan  dan  Pengobatan Interferon  pada  Hepatitis  Virus  Kronik. Acta Medica Indonesiana , 1998; 30: 53– 65.
Amiruddin  R.  Strategi  Penatalaksanaan
Hepatitis  Kronik  Virus  B  dan  C.  Forum Diagnostikum. Prodia Diagnostics Educational Services , 2002; (6): 1–7. Hardjoeno  H,  dkk.  Tes  Serologik  Hepatitis. Interpretasi  Hasil  Tes  Laboratorium Diagnostik, Lembaga Penerbitan Universitas  Hasanuddin,  Makassar, 2003; 289–98 Lu,  F.C.,  1995,  Toksikologi  Dasar  :  Asas,
Organ  Sasaran,  Dan  Penilaian  Resiko, Balai Penerbit FKUI, Jakarta : 206
Middleton  et  al.  2000.  The  effects  of  plant flavonoids  on  mammalian  cells: implications  for  inflammation,  heart disease, and cancer. Pharm Rev 52:673- 751