Efek Ekstrak Alga Coklat ( Sargassum sp.) sebagai Supresor Protein Bcl-2 in vitro pada Sel HeLa
Neshya Ruriana Putri*, Diana Lyrawati**, M. Rasjad Indra*

## ABSTRAK
Prevalensi kanker rahim di Indonesia masih tinggi. Protein Bcl-2 salah satu protein yang menghambat apoptosis  melalui  jalur  mitokondria.  Pada  kanker  serviks  terjadi  mutasi  p53  sehingga  Bcl-2  mengalami ekspresi  berlebihan.Terapi  kanker  serviks  menggunakan  bahan  kimia  dapat  menimbulkan  banyak  efek samping. Senyawa anti kanker dari bahan alam yang  sedikit menimbulkan efek samping diharapkan mampu mempengaruhi  ekspresi  protein  Bcl-2.  Pada  semua  jenis Sargassum sp.  mengandung  fukosantin dengan kadar  tinggi.  Fukosantin dapat  menurunkan  ekspresi  protein  Bcl-2  pada  sel  kanker.  Tujuan  penelitian  ini adalah  membuktikan  bahwa  pemberian  ekstrak  alga  coklat  ( Sargassum sp . )  dapat  menghambat  ekspresi Bcl-2 pada kanker serviks (sel HeLa). Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental laboratorik dengan rancangan true experimental . Sampel yang digunakan adalah sel HeLa yang terbagi atas  1 kontrol dan 3 perlakuan. Kelompok I adalah kontrol sel HeLa. Kelompok II-IV diberi perlakuan ekstrak alga coklat dengan kadar yang berbeda-beda (31,25 µg/ml, 62,5 µg/ml, dan 125 µg/ml). Semua kelompok diinkubasi selama 24 jam.  Parameter  yang  diukur  adalah  ekspresi  Bcl-2  pada  sel  HeLa  yang  dideteksi  secara  imunohistokimia. Hasil  analisis  statistika  menunjukkan  bahwa  ekstrak  alga  coklat  menurunkan  eskspresi  Bcl-2  sel  HeLa secara signifikan (ANOVA, p = 0,000; R² = 0,947). Penurunan ekspresi Bcl-2 mulai terlihat sejak pemberian ekstrak  Sargassum  dengan  kadar  31,25  µg/ml.  Pemberian  ekstrak  alga  coklat  kadar  31,25  µg/ml,  62,5 µg/ml, dan 125 µg/ml menurunkan ekspresi Bcl-2 sebesar 21 %, 44 %, dan 68 %. Kesimpulan penelitian ini adalah  ekstrak  alga  coklat  ( Sargassum sp . )  mampu  menurunkan  ekspresi  Bcl-2  sel  HeLa  dengan  kadar efektif terendah 31,25 µg/ml.
Kata kunci: Bcl-2, Ekstrak alga coklat ( Sargassum sp), Sel HeLa.
Effect of Extract Brown Algae ( Sargassum sp.) as Bcl-2 Protein Suppressor on HeLa Cell

## ABSTRACT
The  prevalence  of  cervical  cancer  in  Indonesia  is  still  high.  Bcl-2  is  protein  that  prevents    apoptosis through  mitochondrial  pathway.  Cervical  cancer  caused  by  a  mutation  of  p53  thus  Bcl-2  are    excessive expressed. Cervical cancer therapy using chemicals can cause many side effect. Anticancer compunds from natural materials that cause less side effect expected to affect the expression of Bcl-2 protein group. In all types  of Sargassum sp.  contains  of  high  fukoxanthin.  Fukoxanthin  can  reduce  Bcl-2  expression  in  cancer cell. The purpose of this study is to find out that the exctract of brown algae ( Sargassum sp.) can inhibit the expression  of  Bcl-2  in  cervical  cancer  (HeLa  cell).  This  study  is  experimental  laboratory  with  a  true experimental design. The samples used were HeLa cells that assigned into control and 3 treatment groups. Group I is control group. Groups II-IV were treated with brown algae ( Sargassum sp.) extract with different levels (31.25 µg/ml; 62.5 µg/ml; and 125 µg/ml). All groups are incubated for 24 hours. Measured parameter is Bcl-2 expression on HeLa cell by immunohistochemistry.  Results of analysis  showed that the extract of brown  algae  reduced  expression  of  Bcl-2  of  HeLa  cells  significantly  (ANOVA,  p  =  0.000;  R²  =  0.947). Decreased  expression  of  Bcl-2  already  observed  since  extract  of  Sargassum  added  at  31.25  µg/ml. Administration  of  brown  algae  extract  at  31.25  µg/ml,  62.5  µg/ml,  and  125  µg/ml  can  decreased  the expression  of  Bcl-2  by  21  %,  44  %,  and  68  %,  respectively.  It  is  concluded  that  extract  of  brown  algae ( Sargassum sp.) reduce the expression of Bcl-2 of HeLa cells with lowest effective concentration of 31.25 µg/ml.
Keywords : Bcl-2, Extract brown algae ( Sargassum sp.), HeLa cells.
*   Program Studi Pendidikan Dokter, FKUB
** Program Studi Farmasi, FKUB
***Lab Ilmu Faal, FKUB

## PENDAHULUAN
Kanker leher rahim atau kanker serviks merupakan  kanker  kedua  terbanyak  dite- mukan pada wanita setelah kanker payudara dan  merupakan  penyebab  kematian  utama pada  wanita.  Diperkirakan  500.000  kasus baru  kanker  leher  rahim  terjadi  setiap tahunnya  di  dunia, 80% dari kasus  tersebut terdapat  di  negara-negara  yang  sedang berkembang. 1 Data  kanker  serviks  dari  11 pusat  di  Indonesia  pada  tahun  2002 menunjukkan  kanker  serviks  menempati urutan  pertama  dari  10  tumor  tersering. 2 Di
Indonesia sendiri diperkirakan ada sekitar 41 kasus  baru  setiap  harinya  yang  berujung dengan  kematian  rata-rata  20  orang  per hari. 3 Insidensi  kanker  serviks  terbanyak pada  usia  45-54  tahun  baik  berdasarkan lokal maupun tumor primer. 4 Perkembangan  sel  normal  menjadi kanker  merupakan  proses  yang  kompleks dan  bertahap  ( multistep  process ).  Tahap perkembangan  sel  kanker  tersebut  antara lain inisiasi, promosi dan progresi. Sel  – sel kanker yang tumbuh berlebihan terjadi akibat proses  aktivitas  proliferasi  sel  yang berlebihan.  Apoptosis  adalah  kematian  sel yang  dipicu  oleh  sel  itu  sendiri.  Apotosis dikendalikan  oleh  2  perangkat  protein dengan  fungsi  yang  antagonistik  yaitu memicu  dan  menghambat.  protein  tersebut adalah  p53  (memicu  apoptosis)  dan  protein Bcl-2  salah  satu  gen  yang  menghambat apoptosis.  Pada  banyak  jenis  kanker diketahui  bahwa  terjadi  mutasi  homozigot dari gen p53 sehingga apoptosis tidak terjadi dan  protein  Bcl-2,  mengalami  ekspresi berlebihan,  sehingga  sel  yang  seharusnya apoptosis  tetap  hidup  dan  menimbulkan kanker. 5 Kanker  serviks  secara  medis  diobati dengan  berbagai  metode  pengobatan, seperti  bedah  laser,  ionisasi, cryosurgery , histoerektomi  total  dan  radikal,  radiasi, kemoterapi  menggunakan  sisplatin  dan
pengobatan  kombinasi. 6 Efek  samping  dari kemoterapi  dan  radiasi  diantaranya  adalah terjadi  penurunan  jumlah  sel-sel  darah, infeksi,  anemia,  pendarahan  seperti  mimis- an, rambut rontok. 7
Mekanisme  aksi  beberapa  obat  anti- kanker  telah  diketahui  cara  kerjanya  yaitu dengan  menghambat  jalannya  metabolisme asam  folat  dan  menghambat  proses proliferasi  sel.  Obat-obat  ini  dapat  bekerja sebagai  antiproliferatif.  Penelusuran  meka- nisme  yang  lain  yang  diharapkan  dapat memperbaiki sistem sel kanker yakni dengan pemacuan  apoptosis.  Senyawa  anti  kanker dari  bahan  alam  diharapkan  mampu mempengaruhi  ekspresi  protein  kelompok Bcl-2  yang  merupakan  protein  dalam pengaturan apoptosis. 8
Kekayaan  alam  biota  laut  Indonesia terkenal  sebagai  salah  satu megacenter utama  keanekaragaman  hayati  dunia dengan  sekitar  40.000  jenis  tumbuhan sebagai  unsur  floranya.  Salah  satu  potensi biota  laut  perairan  Indonesia  adalah  alga makro  atau  dikenal  dalam  perdagangan sebagai rumput laut ( seaweed ). Empat kelas cukup  besar  dalam  divisio    ini  adalah Chlorophyceae  (alga hijau),  Phaehphyceae (alga  coklat),    Rhodophyceae  (alga  merah), dan  Cyanophyceae  (alga  biru-hijau). 9 Di Indonesia diperkirakan terdapat lebih dari 15 jenis alga sargassum yang merupakan salah satu  alga  coklat.  Alga  sargassum  tumbuh sepanjang tahun dan bersifat parenial. 10 Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah membuktikan bahwa pemberian ekstrak alga coklat  ( Sargassum sp.)  dapat  menghambat ekspresi protein Bcl-2 pada  sel HeLa. Hasil penelitian  ini  diharapkan  dapat  menambah alternatif  pengobatan  kanker  serviks  yang lebih  efektif,  efisien,  dan  mempunyai  efek samping  yang  minim  sehingga  mampu meningkatkan taraf kesehatan masyarakat.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  ini  merupakan  penelitian eksperimental laboratorik dengan rancangan true  experimental  post  test  group  only design. Populasi  penelitian  ini  adalah  sel HeLa  yang  memenuhi  kriteria  inklusi  dan eksklusi. Kriteria inklusi penelitian ini adalah sel  HeLa  yang  yang  hidup  dan immortal .
Kriteria  eksklusi  penelitian  ini  adalah  sel HeLa  yang  mati  sebelum  dilakukan perlakuan.  Perlakuan  dalam  penelitian  ini dibagi  menjadi  empat  kelompok  yaitu: Kelompok I (kontrol negatif) adalah sel HeLa tanpa  perlakuan  ekstrak  alga  coklat; perlakuan  II  adalah  sel  HeLa  diberi  ekstrak alga  coklat  dengan  konsentrasi  31,2  µg/ml; perlakuan III adalah sel HeLa diberi ekstrak alga  coklat  dengan  konsentrasi  62,5  µg/ml; dan  perlakuan  IV  dan    sel  HeLa  diberi ekstrak  alga  coklat  dengan  konsentrasi  125 µg/ml.
Alat-alat ekstraksi alga coklat: 1 set alat evaporasi  terdiri  dari;  labu  penampung, pendingin  spiral,  labu  rotasi  ekstraksi, waterbath,  dan  vakum,  klem  statis,  selang plastik, waterpump ,  bak  penampungan aquades, tabung penampung hasil ekstraksi, cowan penguap.
Alat-alat  untuk  kultur  sel  HeLa:  LAF, blue  tip steril,  tabung sentrifus  15  ml,  pipet, mikropipet, inkubator CO 2 .
Alat-alat  untuk  uji  imunositokimia  Bcl-2: miropipet,  tabung  reaksi,  rak  tabung  kecil, vortex, cover slip, object glass, 24-well plate . Bahan–bahan  untuk  ekstraksi  alga coklat yaitu 496,16 g alga coklat ( Sargassum binderi) atau (Sargassum sp. ), metanol 95%, aseton, dietil eter, CaCO 3 0,5 g, aquades. Bahan-bahan  untuk  kultur  sel  HeLa: PBS  1x,  media  RPMI-1640  (1-glutamin), foetalbovin  serum  (FBS),  fungison  0,5  %, penisilin  streptomisin  2  %  (Gibco),  Tripsin-
EDTA 1x (tripsin 0,25%).
Bahan-bahan  untuk  uji  ekstrak  alga coklat  terhadap sel  HeLa yaitu  media kultur DMSO, ekstrak alga coklat.
Bahan-bahan untuk imunositokimia Bcl- 2 yaitu antibodi Bcl-2, biotinilate, kit universal streptavidin-biotin,  DMSO,  larutan  hidrogen peroksida,  xylol,  PBS  1x,  serum  albumin, methanol.

## Pembuatan Ekstrak Alga Coklat
Ekstraksi  dan  evaporasi  alga  coklat dilakukan  dengan  cara  alga  coklat  segar dicuci    dengan  air  untuk  menghilangkan kotoran  yang  menempel,  sampel  dipotong- potong  sebesar  1  cm,  ditimbang  496  g, sampel  dihaluskan  dengan  mortar  dan ditambahkan  CaCO 3 0,5  g,  dan  dimaserasi dalam aseton:methanol (7:3)  sebanyak 750 ml  selama  60  menit,  diulang  4  kali perendaman,  lalu  disaring  dengan  kertas saring.  Filtrat  dipartisi  dalam  dietil  eter kemudian  ditambah  garam  grosok  dan  air ledeng.  Kemudian  terbentuk  2  fase,  fase atas  dibuang  dan  fase  bawah  digunakan. Sampel  diuapkan  dengan rotary  vacum evaporator pada suhu 30 ºC pada 100 rpm, Sampel  dikeringkan  dengan  gas  nitrogen dan siap diencerkan.

## Kultur Sel HeLa
Kabinet  kultur  dibersihkan  dengan menggunakan alkohol 70 %. Siapkan media kultur  yang  sesuai  untuk  sel,  yaitu  3  ml media  kultur  dalam conical  tube baru, masukkan dish untuk subkultur baru dan beri penandaan,  tuang  supernatan  media  kultur ke  dalam  pembuangan.  Tambahkan  4  ml media  kultur  baru,  resuspensi  sel  hingga homogen.  Transfer  masing-masing  2  ml suspensi  ke  dalam  2  dish  dengan  menggu- nakan  mikropipet  dan  teteskan  sejajar. Tambahkan  masing-masing  5  ml  media kultur  ke  dalam  dish,  homogenkan.  Amati kondisi sel dengan mikroskop. Simpan sel ke dalam  inkubator  CO 2. Penentuan  dosis ekstrak Sargassum sp.  pada  penelitian
sebelumnya  diketahui  bahwa    LC  50  =  250 µg/ml.  Selanjutnya,  pada  penelitian  ini digunakan  3  konsentrasi  di  bawah  LC  50 yaitu  125  µg/ml,  62,5  µg/ml,  dan  31,25 µg/ml.

## HASIL
Pada penelitian ini didapatkan data hasil untuk  masing-masing  kelompok  perlakuan. Penelitian  ini    terdiri  dari  empat  macam perlakuan, yaitu kelompok I adalah sel HeLa tanpa  diberi  perlakuan  ekstrak  alga  coklat (kontrol).  Kelompok  II,  III  dan  IV  adalah  sel
HeLa diberi ekstrak alga coklat dengan dosis berbeda  (125,  62,5,  dan  31,25  µg/ml)  dan diinkubasi selama 24 jam.
Deteksi  ekspresi  Bcl-2  dilakukan terhadap seluruh kelompok dengan menggu- nakan  metode  imunositokimia.  Gambaran hasil  pewarnaan  ekspresi  Bcl-2  pada  sel HeLa ditampilkan pada Gambar 1. dan hasil pengukuran  rata-rata  persentase  ekspresi Bcl-2  sel  HeLa  pada  masing–masing kelompok perlakuan ditampilkan pada Tabel 1. Rata-rata  persentase ekspresi Bcl-2 pada masing-masing  perlakuan  dihitung  dengan cara  menjumlahkan  semua  sel  HeLa  yang mengekspresikan Bcl-2 pada masing-masing kelompok  perlakuan  dibagi  dengan  jumlah sel  pada  masing-masing  kelompok  perlaku- an  dan  dikalikan  seratus  persen.  Hasilnya kemudian  dijumlahkan  atau  dikurangkan dengan standar deviasi.
Tabel 1.  Rata-rata persentase ekspresi Bcl-2 pada sel HeLa
Dosis (µg/ml) Rata-rata (%) SD kontrol 88,63 a 1,50 31,25 70,03 b 1,14 62,5 44,27 c 2,05 125 26,00 d 0,68
Keterangan : rata-rata dari persentase ekspresi Bcl-2 dengan 3 kali pengulangan, SD : standard deviasi
Gambar 1. Rata-rata persentase ekspresi Bcl-2 pada sel HeLa 0,00 20,00 40,00 60,00 80,00 100,00 kontrol 31,25 62,5 125 Ekspres i Bc l2 (% ) Dosis ekstrak alga coklat ( m g/ml)
Gambar 2. Ekspresi Bcl-2 pada sel HeLa yang berwarna coklat (lingkaran merah) yang dideteksi dengan metode imunohistokimia (1000x). Keterangan: (I)  Kontrol; (II)  Perlakuan dengan ekstrak alga coklat 31,25 µg/ml; (III) Perlakuan dengan ekstrak alga coklat 62,5 µg/ml; (IV) Perlakuan dengan  ekstrak alga coklat 125 µg/ml
Gambar 3 Hubungan dosis eksrak alga coklat dengan ekspresi Bcl-2 pada sel HeLa
Analisis one  way ANOVA  terhdap ekspresi  Bcl-2    pada  sel  HeLa  berdasarkan
Gambar  1  menunjukkan  bahwa  pada kelompok  II,  III,  dan  IV  yang  diberikan ekstrak  alga  coklat    menunjukkan  ekspresi Bcl-2  yang  lebih  rendah  dibandingkan dengan ekspresi Bcl-2 kelompok kontrol (p =
0,000).
Hasil  uji  Tukey  HSD  menunjukkan perbedaan  persentase  ekspresi  Bcl-2  sel
HeLa  secara  nyata  antara  kelompok  I (kontrol)  dengan  kelompok  II  (ekstrak  alga coklat 31,25 µg/ml) (p = 0,000), kelompok III (ekstrak alga coklat 62,5 µg/ml) (p = 0,000), dan  kelompok  IV  (ekstrak  alga  coklat  125 µg/ml) (p = 0,000).
y = -0,5049x + 84,846 R² = 0,9476 0,00 20,00 40,00 60,00 80,00 100,00 0 31,25 62,5 93,75 125 Ekspres i Bcl -2 (% ) Dosis ekstrak alga coklat ( m g/ml) III I II IV
Hasil  observasi  dan  analisis  statistik menunjukan bahwa persentase ekspresi Bcl- 2 sel HeLa pada kelompok perlakuan (II - IV) cenderung  lebih  rendah  bila  dibandingkan dengan  ekspresi  Bcl-2  pada  kelompok  I. Oleh karena itu dapat dikatakan bahwa alga coklat  memiliki  efek  menurunkan  ekspresi Bcl-2 pada sel HeLa.

## PEMBAHASAN
Hasil  penelitian  menunjukkan  adanya potensi  alga  coklat  sebagai  substansi  yang dapat  menghambat  dan  mengatasi  terjadi- nya kanker lebih lanjut. Hal ini dimungkinkan karena  adanya  efek  antikanker  (proapop- tosis)  dari  alga  coklat  melalui  salah  satu kandungannya yaitu fukosantin.
Pada  penelitian  yang  telah  dilaporkan oleh  Dedi et  al (2011)  dengan  metode ekstraksi  modifikasi  menggunakan  aseton dan methanol pada Sargassum binderi dapat menghasilkan  fukosantin  murni  sebanyak  ± 0,73 mg/g berat kering. 11 Pada penelitian ini dilakukan  metode  ekstraksi  modifikasi  yang sama  pada  496  g  alga  coklat  segar  dan menghasilkan  2,28  g  ekstrak  kasar  alga coklat,  sehingga  diperoleh  kandungan fukosantin dalam  ekstrak  kasar  alga  coklat tersebut  adalah  ±  0,477  g.  Ekstrak  alga coklat  dengan  konsentrasi  31,25  µg/ml mengandung  6,5  µg/ml  fukosantin,  pada konsentrasi  62,5  µg/ml  mengandung  13 µg/ml fukosantin, dan pada konsentrasi 125 µg/ml mengandung 26,1 µg/ml fukosantin.
Fukosantin  yang  ditemukan  dalam  alga coklat  termasuk  ke  dalam  golongan karotenoid,  yang  biasa  dikonsumsi  sebagai sayur  dan  telah  difokuskan  pada  aktivitas antikanker.  Apoptosis  yang  diinduksi  oleh fukosantin  pada  sel  leukemia  (HL-60) dihubungkan dengan hilangnya kemampuan mitokondria  dalam  mengekspresikan  Bcl-Xl yang  diikuti  oleh  aktivasi  caspase-9  dan 3. 12,13 Kemampuan  menginduksi  apoptosis berhubungan  dengan  peningkatan  induksi
terhadap  protein  proapotosis  Bax  dan  Bak serta  regulasi  dalam  menurunan  jumlah protein  antiapoptosis  Bcl-2  dan  Bcl-xL. 14,15 Fragmentasi  DNA  pada  sel  kanker  kolon (CaCo-2) yang diberi fukosantin, menghilang secara  signifikan  oleh caspase-inhibitor Z-
VAD-fmedia  kultur.  Namun,  kemampuan  Z-
VAD-f  media  kultur  untuk  menghilangkan fragmentasi  DNA  hanya  sebesar  40  %.  Hal ini  menunjukkan  bahwa  sinyal  apoptosis pada  sel  CaCo-2  yang  diinduksi  oleh fukosantin  dimediasi  oleh  jalur caspase- independent yang  diinisiasi  oleh  kematian reseptor  dan caspase-dependent (mitokon- dria). Paparan  dari fukosantin secara in vitro menurunkan level apoptosis-supressing protein Bcl-2  pada  sel  CaCo-2  (kanker kolon).  Hal  ini  mengindikasikan  bahwa penurunan  regulasi    dari  protein  Bcl-2 berkontribusi  pada  apoptosis  yang  diinduksi oleh  fukosantin  pada  kanker  kolon  (CaCo- 2). 16 Fukosantin  memiliki  struktur  yang  unik termasuk di dalamnya ikatan allenic dan 5,6- monoepoxide di dalam molekulnya. Epoxy-β carotene, neoxanthine, halocynthian- xanthine,  dan  fukosantin  termasuk  dalam molekul  epoxide  yang  dapat  menginduksi tanda-tanda  penurunan  dalam  pertumbuhan leukimia  dan  kanker  prostat. 17 Pada penelitian  sebelumnya  telah  dilaporkan aktivitas  antioksidan  pada  fukosantin. 18 Namun,  pro-oksidant  dari  karoten  memper- lihatkan  induksi  apoptosis  melalui  produksi reactive  oxygen  species. 18 Hal  ini menjelaskan bahwa karoten dapat berperan sebagai  antioksidan  dan  prooksidan  yang tergantung pada lingkungan sekitarnya.
Pada  penelitian  sebelumnya,  untuk melihat  efek geometrical  isomer fukosantin terhadap regulasi protein apoptosis menunjukkan  adanya  penurunan  dari ekspresi Bcl-2 dengan pemberian fukosantin dalam bentuk all-trans dan campuran 13- cis dan  13’- cis selama  24  jam  pada  HL-60  (sel leukimia).  Perlakuan  dengan  isomer  fuko-
santin  tersebut  dapat  menurunkan  ekspresi protein Bcl-2. Efek menurunkan ekspresi Bcl- 2  terlihat  lebih  kuat  pada  pemberian campuran 13- cis dan 13’- cis . Hal ini terbukti dengan  pemberian  isomer  fukosantin all trans dengan  kadar  20  µM  selama  24  jam
pada  sel  HL-60  (sel  leukimia),  sel  yang masih  mengekspresikan  Bcl-2  sebanyak  60 sel. Sementara isomer fukosantin campuran 13- cis dan  13’- cis dengan  kadar  20  µM selama  24  jam,  menginduksi  ekspresi  Bcl-2 hanya  pada  40  sel. 19 Hal  ini  disebabkan karena  ikatan cis lebih  polar  dan  lebih mudah  bergabung  dengan  lipoprotein maupun struktur lipid seluler, sehingga lebih mudah  masuk  ke  dalam  sel.  Fukosantin merupakan golongan karoten yang mempunyai  interaksi  langsung  terhadap faktor    trankripsi  yaitu  melalui  reseptor ligand-activity nuclear .
Pada  hasil    penelitian  ini,  pemberian ekstrak alga coklat 31,25 µg/ml, 62,5 µg/ml, 125  µg/ml  dapat  berpotensi  menurunkan ekspresi Bcl-2 sebesar 21 %, 44 %, dan 68 %    pada  sel  HeLa.  Berdasar-kan  hasil regresi didapatkan bahwa setiap penambahan  1  µg/ml  dosis  ekstrak  alga coklat    dapat  menurunkan  ekspresi  Bcl-2
sebesar 0,5 %.
Kanker  serviks  adalah  tumor  yang aktivitas  vaskulernya  cukup  tinggi  sehingga memungkinkan  pembuluh  darah  sebagai penyalur nutrisi. Strategi untuk mengganggu pembuluh darah sel kanker hingga mati akan membuat sel kanker tidak mendapat asupan nutrisi.  Dengan  demikian,  aksi  antitumor yang  berasal  dari fucoidan dikarenakan adanya  potensi  anti- angiogenic. 20 Polisa- karida  yang  berasal  dari  alga  coklat (S argassum  stenophyllum) menunjukkan antivasculogenic yang mungkin mengganggu selama  formasi  mikrovasculer  terjadi. 21
Bagaimanapun,  kanker  merupakan  penyakit mulltifaktorial  yang  membutuhkan  terapan terapi  multimodal.  Invasi  sel  kanker  dan adhesi pada matriks protein adalah langkah
penting dalam  pembentukan  metastasis. Maka  dari  itu,  aktivitas  alga  coklat ( Spatoglossum schroederi) dalam mengham- bat  adhesi  sel  terhadap  beberapa  ekstra- seluler  matriks  protein  sehingga  dapat mencegah metastasis. 22
Hal  yang  menarik  dari  alga  coklat adalah variasi aktivitas biologinya khususnya pada  potensinya  sebagai  antikanker. Namun,  hal  ini  perlu  diteliti  lebih  lanjut apakah  induksi  apoptosis  oleh  ekstrak  alga coklat    dikarenakan  hanya  oleh  fukosantin atau  merupakan  efek  gabungan  senyawa atau multiple  agent yang  terkandung  dida- lamnya. Ekstrak Sargassum binderi menunjukkan  efek  anti  proliferasi  pada  sel HeLa  secara in  vitro melalui  perubahan morfologi  di  dalam  sel,  seperti  membran plasma blebbing ,  kondensasi  kromatin,  dan fragmentasi DNA. 23
Ekstrak  alga  coklat  ( Sargasum  binderi ) lebih  sedikit  toksik  daripada  kemoterapi (doxorubicin)  yang  digunakan  untuk  mela- wan kanker, pada dosis 200 µg/ml  ekstrak Sargassum  binderi dapat  menurunkan viabilitas  sel  HeLa  sebanyak  20  %, sedangkan  doxorubicin  dengan  dosis  6 µg/ml  menurunkan  jumlah  sel  HeLa  kurang dari  10  %. 27 Hal  ini  dapat  menjadi  potensi obat-obatan  alami  yang  dikombinasikan dengan  senyawa  kemoterapi  yang  mungkin dapat  meningkatkan  kemanjuran  dan menurunkan  efek  samping. 24,25 Fakta  ini dapat  meningkatkan  kemungkinan  bahwa alga  coklat  memiliki  potensi  sebagai antikanker.
Dalam  penelitian  ini  dapat  diketahui bahwa ekspresi Bcl-2 mulai terlihat menurun sejak  pemberian  ekstrak  alga  coklat ( Sargassum sp.) kadar 31,25 µg/ml pada sel HeLa.  Namun  demikian,  masih  belum diperoleh  dosis  optimal  yang  bila  ditingkat- kan tidak memberi efek yang lebih baik dan memiliki efek samping minimal.

## KESIMPULAN
Ekstrak  alga  coklat  ( Sargassum sp.) secara  signifikan  dapat  menurunkan persentase  ekspresi  Bcl-2  pada  sel  HeLa sebanyak  62  %.  Dosis  paling  rendah  dari ekstrak  alga  coklat  ( Sargassum sp.)  yang dapat  menurunkan  ekspresi  Bcl-2  pada  sel HeLa adalah 31,25 µg/ml.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Melva. Faktor-Faktor yang Mempengaruhi  Kejadian  Kanker  Leher Rahim  pada  Penderita  yang  Datang Berobat di RSUP H. Adam Malik Medan
Tahun  2008.  Tesis.  Medan:  Program Pasca  Sarjana  Universitas  Sumatera Utara. 2008.
2. [PDS  PATKLIN]  Perhimpunan  Dokter Spesialis  Patologi  Indonesia. Kanker  di Indonesia Tahun 2002 Data Histopatologi .  Jakarta:  Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 2002. 3. Maulanusantara. Cegah Kanker Serviks Sekarang. 2009. (online). http://maulanusantara.wordpress.com/2 009/08/19/mari-peduli-dengan-bahaya- kanker-serviks/.
4. Clarisa  A.  Respon  Limfosit  Lokal  pada Kejadian  Rekurensi  Kanker  serviks  di Rumah  Sakit  Dr.  Kariadi  Semarang. Skripsi  tidak  diterbitkan.  Semarang: Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro. 2009. 5. Asri  A.  Pengaruh  Pemberian  Perasan Seledri  Terhadap  Aktivitas  Proliferasi Sel,  Indeks  Apoptosis  dan  Perubahan Histopatologi  Mukosa  Kolon  Tikus Wistar. Tesis tidak diterbitkan.. Semarang:  Universitas  Diponegoro. 2004.
6. Radji  M,  Aldrat  H.  Penggunaan  Obat Herbal  pada  Pasien  Kanker  Serviks.
Jurnal  Ilmu  Kefarmasian  Indonesia. 2010 ; 8(1):33-39. 7. Rita.  Khasiat  Ekstrak  Daun  Pepaya ( Carica papaya Linn.) sebagai Antikanker.  Skripsi.Pontianak:  Program Studi Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Tanjungpura. 2010. 8. Rumiyanti.  Protein  Kelompok  Bcl-2 sebagai  Target  Senyawa  Antikanker. Jurnal Kedokteran Yarsi . 2006; 14(3):238-242. 9. Waryono  T.  Biogeografi  Alga  Makro (Rumput  Laut)  di  Kawasan  Pesisir Indonesia. Kumpulan  Makalah  Periode 1987-2008 . 2008.
10. Fahri  M.  Kajian  Kandungan  Metabolit Sekunder  dari  Alga  Coklat Sargassum cristaefolium .  Tesis.  Malang:  Program Pasca  Sarjana  Universitas  Brawijaya.
2009.
11. Dedi  N,  Jaswir  I,  Salleh  HM,  Taher  M, Miyashita  K,  Ramli  N.  Fucoxanthin Extraction  and  Fatty  Acid  Analysis  of Sargassum  binderi and S.  Duplicatum. Journal  of  Medicinal  Plants  Research . 2011; 5(11): 2405-2412.
12. Hosokawa M, Wanezaki S, Miyauchi K, Kurihara  H,  Kohno  H,  Kawabata  J, Odashima  S,  Takahashi  K.  Apoptosis- Inducing  Effect  of  Fucoxanthin  on Human  Leukemia  Cell  HL-60 . Food Science  and  Technology  Research.
1999; 5:243-46.
13. Kotake-Nara  E,  Terasaki  M,  Nagao  A. Characterization  of  Apoptosis  Induced by Fucoxanthin in Human Promyelocytic Leukemia Cells. Bioscience Biotechnology  and  Biochemistry. 2005; 69:224-27.
14. Zhang.  Benzyl  Isothiocyanate  Induces DNA-Damage  Causes  G2/M  Cycle Arrest  and  Apoptosis  in  Human Pancreatic  Cancer  Cells  (Abstract). 2006 . 15. Xiao  D.  Benzyl  Isothiocyanate–Induced Apoptosis  in  Human  Breast  Cancer Cells  is  Initiated  by  Reactive  Oxygen
Species and Regulated by Bax and Bak.
2006. 16. Ketoke-Nara  E,  Kushito  M,  Zhang  H, Sugawara  T,  Miyashita  K,  Nagao  A. Carotenoids  Affect  Proliferation  of Human  Prostate  Cancer  Cells. J  Nutr .
2001; 131 :3303-3306.
17. Satomi H, Tokuda H, Fujii N, Shimizu Y, Tanaka H, Nishino. Antitumor-Promoting Activity  of  Fucoxanthine,  A  Natural Carotenoid. J  Kyoto  Prefect  Univ  Med . 1997; 105:739-743.
18. Palozza  S,  Serini  A,  Torsello  FD, Nicuolo  E, Piccioni V, Ubaldi C, Pioli F, Wolf  I,    Calvieollo  G.  β  Carotene Regulates  NF-Kb  DNA-Binding  Activity by  A  Redox  Mechanism  in  Human Leukemia  and  Colon  Adenocarcinoma Cells. J Nutr . 2003; 133:381-388.
19. Nakazawa  Y,  Sashima,  Hosokowa  M, Miyashita.  Comperative  Evaluation Stereoisomer of Fucoxanthine in Human Line  Cancer. Journal  of  foods . 2009;1(1): 89-97.
20. Koyanagi S, Tanigawa N, Nakagawa H, Soeda  S,  Himeno  H.  Oversulfation  of Fucoidan  Enhances  Its  Anti-Angiogenic and  Antitumor    Activities. Biochem Pharma. 2003; 65:173-79. 21. Dias  PF,  Siqueira  JM,  Maraschin  M,
Ferreira AG, Gagliardi AR, Ribeirodoalle RM. A Polysaccharide Isolated from The Brown Seaweed Sargassum stenophyllum Exerts  Antivasculogenic Effects Evidenced by Modified Morphogenesis. Microvascular Research. 2008; 75:34-44.
22. Rocha HAO, Franco CRC, Trindade ES, Carvalho  CM,  Veiga  SS,  Leite  EL,
Dietrich  CP,    Nader  HB.  A  Fucan  from
The  Brown  Seaweed Patoglossum schroederi Inhibits  Chinese  Hamster
Ovary  Cell  Adhesion  to  Several
Extracellular  Matrix  Proteins. Brazilian
Journal  of  Medical  and  Biological
Research. 2001; 34:621-26.
23. Saengkhae  C,  Jongaramruong  J,
Noiraksar  T,  Piekpia  J.  Antiproliferative and  Apoptosis-Inducing  Activities  of Extracts from Sargassum binderi Sonder on  Human  Cervical  Cancer  Cells . Burapha Sci J . 2010; 1(15):3-12.
24. Philchenkov  A,  Zavelevich  M,  Imbs  T, Zvyagintseva  T,  Zaporozhets    T. Sensitization    of    Human  Malignant Lymphoid  Cells  to  Etoposide  of Fucoxanthin  on  Human  Leukemia  Cell HL-60  by  Fucoidan,  A  Brown  Seaweed Polysaccharide. Food    Experimental Oncology . 2007; 29(3):181-5.
25. Hur  S,  Lee  H,  Kim  Y,  Lee  BH,  Shin  J, Kim  TY.  Sargaquinoic  Acid  & Sargachromeno, Extracts Of Sargassum Sagamianum,  Induce  Apoptosis  in HacaT  Cells  and  Mice    Skin:  Its Potentiation    of    UVB-Induced Apoptosis. Journal  of    Pharmacology . 2008; 582:1-11.