ISSN: 1693-8615 EISSN : 2302-4291 Online : http://farmasiindonesia.setiabudi.ac.id/
Aktivitas Antibakteri Actinomycetes yang Diisolasi dari Rizosfer
Tanaman Solanaceae
Antibacterial Activity of Actinomycetes Isolated from Solanaceae Plants Rhizosphere
UMI FATMAWATI*, SLAMET SANTOSA, YUDI RINANTO, RIEZKY MAYA PROBOSARI
1 Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan, Universitas Sebelas Maret Jl. Ir. Sutami 36 A Kentingan Surakarta 57126, Telp. 0271-668603 * Korespondensi: umifatmawati84@yahoo.com
(Diterima 18 Desember 2013, disetujui 25 Januari 2014)
________________________________________________________________________________________

## ABSTRAK
Actinomycetes  merupakan  salah  satu  jenis  mikroorganisme  yang  telah  banyak  dimanfaatkan untuk  produksi  antibiotik  serta  pengendali  hayati  untuk  hama  dan  penyakit  pada  tanaman.  Pada umumnya, Actinomycetes banyak terdistribusi di tanah, air, jaringan endofit, dan lingkungan alami yang  lain.  Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  distribusi  dan  keanekaragaman Actinomycetes yang  terdapat  pada  daerah  perakaran  pada  tanaman Solanaceae dan mengetahui jenis isolat Actinomycetes yang diisolasi dari daerah perakaran tanaman Soalaneceae yang mampu menghambat  pertumbuhan  bakteri.  Actinomycetes diisolasi  dari  tujuh sampel  tanah  rizosfer tanaman Solanaceae di  wilayah  sekitar Surakarta yaitu Selo Boyolali, dan Colomadu Karanganyar, Gondangrejo  Karanganyar,  Jatipurno  Wonogiri,  Solo.  Isolat Actinomycetes dilakukan  uji  aktivitas antibakteri dengan metode well diffusion pada media Gliserol-Yeast Ekstrak terhadap empat spesies bakteri  patogen Ralstonia  solanacearum,  Staphylococcus  aureus,  Bacillus  subtilis dan  Escherichia coli. Hasil  dari  penelitian  ini  yaitu  diperoleh  54  isolat  Actinomycetes  yang  diisolasi  dari  sampel tanah  rizosfer  tanaman  Solanaceae.  Isolat  yang  mampu  menghambat  pertumbuhan R.  solanacearum (29%),  S.  aureus (24%),  B.  subtillis (14%),  dan  E. coli (7%).  Seluruh  isolat memiliki kemampuan mendegradasi karbohidrat dan protein.
Kata kunci :  Actinomycetes,  antibakteri,  tanaman  Solanaceae ,  R.  solanacearum,  S.  aureus, B. subtillis, E. coli.
______________________________________________________________________________________________________________________________________________

## ABSTRACT
Actinomycetes is one type of microorganism that has been widely used for the production of antibiotics  as  well  as  a  biological  control  for  pests  and  diseases  in  plants.  In  general,  many Actinomycetes  distributed  in  soil,  water,  tissues  endophyte,  and  other  natural  environments.  The study aimed to determine the distribution and diversity of Actinomycetes found in the root zone at Solanaceae plants and to  know the isolates of Actinomycetes isolated from the root zone of plants Soalaneceae  could  inhibiting  the  growth  of  bacteria.  Actinomycetes  isolated  from  seven soil samples  of  Solanaceae  plants  rhizosphere in  Selo  Boyolali,  Colomadu  Karanganyar, Gondangrejo Karanganyar, and Wonogiri Jatipurno. The isolates of Actinomycetes tested the antibacterial activity by  well  diffusion  method  on  media  Glycerol-Yeast  Extract  against  four  species  of  pathogenic bacteria Ralstonia  solanacearum,  Staphylococcus  aureus,  Bacillus  subtilis  and  Escherichia coli. Results showed  that  there  were  54  isolates  of  Actinomycetes  isolated  from  the  soil  samples  of Solanaceae  plants  rhizosphere.  Isolates  could  inhibit  the  growth  of R.  solanacearum (29%), S. aureus (24%), B. subtillis (14%), and E. coli (7%). Isolates had the ability to degrade carbohydrate and protein.
Keywords : Actinomycetes,  antibacterial,  Solanaceae plants, R.  solanacearum,  S.  aureus, B. subtillis, E. coli.
______________________________________________________________________________________________________________________________________________

## PENDAHULUAN
Actinomycetes adalah  organisme prokariotik  yang  termasuk  bakteri  gram positif, hidup bebas, saprofit, terdistribusi secara luas di tanah, air, dan membentuk kolonisasi  pada  jaringan  tanaman  atau endofit, juga penghasil berbagai senyawa aktif  dari  hasil  metabolisme  sekunder. Karakteristik  morfologi  dari  prokaryot  ini menyerupai  fungi  karena  memiliki  hifa atau filamen namun tida bersekat, namun mikroba  ini  termasuk  dalam  golongan bakteri  karena  bersifat  prokariot  dan memiliki  kandungan  peptidoglikan  pada dinding selnya.
Actinomycetes memiliki  distribusi pertumbuhan yang luas serta pertubuhan yang  berupa  filamen  di  dalam    tanah, koloni  di  permukaan  akar  maupun  di rizosfer,  serta  mampu  menghambat pertumbuhan  mikroorganisme  patogen melalui  produksi  senyawa  aktif  yang berupa  metabolit  sekunder  (Bonjar et  al. 2006).    Streptomyces adalah  genus  yang paling terkenal dari famili Actinomycetes yang  biasanya  terdapat  di  dalam  tanah serta dapat berperan dalam
meningkatkan  kesuburan  tanah.  Oleh karena  itu,  banyak  ilmuwan  yang mengembangkan  dan  memanfaatkannya sebagai  agen  biokontrol  untuk  melawan bakteri pathogen pada tanaman.
Dari  22.500  senyawa  aktif  yang diperoleh  dari  mikroba,  sebanyak  45% diproduksi  oleh Actinomycetes,  38% oleh  jamur,  dan  17% oleh  bakteri uniseluler  (Berdy  2005;  Rahman et  al.
2011). Sebagian besar spesies Actinomycetes yaitu  sebanyak  50%  dari total  populasi Actinomycetes tanah  dan terkenal  dalam  memproduksi  berbagai
metabolit  sekunder  termasuk  antibiotik, imunomodulator,  antikanker,  antivirus,
herbisida, dan insektisida yang
bermanfaat  dalam  bidang  kedokteran maupun  bidang  pertanian  (Oskay et  al. 2004; Berdy 2005). Keistimewaan lain dari Actinomycetes adalah  prokariota  ini mampu  menghasilkan plant  growth factor,  antioksidan,  herbisida,  pestisida, antiparasit,  serta  enzim  selulase  dan xilanase (Oskay et al. 2004; Bonjar et al. 2006).    Hampir  80%  antibiotik  di  dunia diketahui  berasal  dari  Actinomycetes.
Sebagian  besar  berasal  dari  genus Streptomyces dan Micromonospora (Pandey et al. 2004; Kumar et al. 2010). Sehingga pada dekade ini,
Actinomycetes telah  banyak  dieksplorasi untuk  penghasil  bahan  baku  obat terutama  untuk  penyakit  akibat  infeksi bakteri  patogen  pada  manusia,  hewan, dan tumbuhan.    Indikasi  perlawanan Actinomycetes terhadap  bakteri  patogen dapat  diukur  dengan  pembentukan  zona hambat  pada  pertumbuhan  bakteri patogen  oleh  senyawa  antibiotik  dari Actinomycetes (Kumar et  al.  2010;
George et al. 2012).
Berdasarkan  uraian  permasalahan  di atas,  maka  dalam  penelitian  ini  akan dilakukan  skrining  Actinomycetes yang diisolasi  dari  tanah  di  daerah  perakaran atau rizosfer tanaman Solanaceae seperti tomat,  cabai,  kentang, dan  terong dan menguji  aktivitas  antibakteri, terutama bakteri  patogen Ralstonia  solanacearum yang    merupakan    bakteri     penyebab
penyakit  layu  pada  tanaman  Solanaceae, serta bakteri patogen  lain  seperti
Staphylococcus  aureus,  Bacillus  subtilis, dan Escherichia coli.

## METODE PENELITIAN

## Pengambilan Sampel Tanah
Sampel  tanah  dikumpulkan  dari berbagai  daerah  perakaran  atau  rizosfer tanaman  Solanaceae,  diantaranya:  tomat, cabai,  kentang  dan  terung.  Tiap  koleksi sampel diambil kedalaman 10-15 cm dari permukaan  tanah.  Tanah  dimasukkan  ke dalam botol plastik dan diberi label lokasi dan  waktu  pengambilan  sampel.  Setelah sampai di laboratorium, tanah dikeringkan selama  1  minggu,  kemudian  dihaluskan dan  disaring.  Tanah  hasil  ayakan  yang akan digunakan
untuk isolasi Actinomycetes (Kumar et al. 2010).

## Analisis Sampel Tanah
Sampel  tanah  yang  dikumpulkan untuk  isolasi Actinomycetes dari  masing- masing jenis tanaman dianalisis parameter fisika-kimia.  pH  tanah  sampel  ditentukan perubahan  potensial  menggunakan  pH meter. Nitrogen total dalam sampel tanah ditentukan  oleh  metode  microkjeldahl, fosfor  tersedia  diperkirakan  oleh  metode Bray  dan  Kurtz  dan  kandungan  karbon organik  ditentukan  oleh  Walkey  dan metode  Hitam  (Maiti  2003).  Kalium tersedia dalam sampel tanah yang diambil menggunakan  amonium  asetat  netral sebagai ekstraktan dan ditentukan dengan menggunakan  fotometer  nyala  (Maiti 2003).
Isolasi dan Maintenance Isolat

## Actinomycetes
Setiap  sampel  tanah sebanyak
1  g  disuspensikan ke  dalam  100  ml  air fisiologis  (NaCl  8,5  g/l)  kemudian diinkubasi dalam shaker inkubator orbital pada suhu 28 °C dengan kecepatan rotasi 200  rpm  selama  30  menit.  Campuran dibiarkan stabil, dan dilakukan
pengenceran  berseri  hingga  10 -5 dengan menggunakan  air  steril  fisiologis  air  dan diaduk dengan menggunakan vortex pada kecepatan  maksimum.  Masing-masing pengenceran dari 10 -2 hingga 10 -5 diambil sebanyak  0,1  ml  dan  disebarkan  secara merata  di  atas  permukaan  media  Starch- casein agar (Pati 10 g, Casein 0,3 g, KNO 3 2 g,  K 2 HPO 4 2  g,  MgSO 4 0,05  g,  CaCO 3 0,02 g, FeSO 4 0,01 g, Agar 18 g, distillled water 1  L,  pH  7±  0,1)  (George et  al. 2012). Pada media ditambahkan tiamfenikol  50  ug/ml  dan  nistatin  100 ug/ml  untuk  menghambat  kontaminasi bakteri  dan  jamur.  Kemudian  agar  plate diinkubasi  pada  suhu  28°C  dan  37°C, dan  dipantau  setelah  5  hari  dan  10  hari masa inkubasi. Setelah inkubasi pada agar plate    selama  1  minggu,  koloni  khas Actinomycetese akan terbentuk dan dapat diamati  secara  morfologi  (Shirling and Gottlieb 1966 dalam George et al. 2012), dan dimurnikan di plate Agar Stach-casein dengan re-streaking dan  menginkubasi pada  suhu  kamar  selama  96  jam.
Karakterisasi Isolat Actinomycetes
Isolat  murni Actinomyctes yang diperoleh kemudian dikarakterisasi secara morfologi  dengan menggunakan Bergey’s Manual of Determination serta
karakterisasi  fisiologi  dengan  mencacu pada Gordon (1966) dalam George et al.
(2012).

## Uji  Aktivitas  Antibakteri  secara In Vitro
Skrining  awal  untuk  kegiatan  uji aktivitas antibiotik  dari  isolat  adalah dengan menggunakan teknik well diffusion pada media agar Gliserol- Yeast- ekstrak  (GYE).  Sebanyak  1  ml    isolat Actinomycetes yang  ditumbuhkan  dalam media GYE cair murni disentrifuse dengan kecepatan  5000  rpm  selama  3  menit, kemudian  diperoleh  supernatan yang kemudian diteteskan dalam sumuran Agar GYE yang sudah dioles dengan 4 macam bakteri  uji  untuk  masing-masing  petri dish.  Media  agar  GYE  kemudian diinkubasi  pada  32  °C  selama  7  hari supaya  memungkinkan  isolat  untuk mengeluarkan antibiotik ke dalam media, dan  mampu  menghambat  pertumbuhan bakteri  uji  ditandai  dengan  terbentuknya zona bening di sekitar sumuran.
Kemampuan  daya  hambat  atau  aktivitas antibakteri  diukur  dengan  mengukur diameter  zona  bening  yang  terbentuk dalam  skala  milimeter  (Kafur &  Khan 2011). Bakteri uji yang digunakan adalah Ralstonia  solanacearum,  Staphylococcus aureus,  Bacillus  subtilis,  dan   Escherichia coli.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Lokasi Pengambilan Sampel
Sampel  tanah  diambil  dari  rizosfer tanaman Solanaceae di beberapa wilayah sekitar  Surakarta,  di antaranya  dari:  Selo
Boyolali, Colomadu Karanganyar, Gondangrejo Karanganyar, Jatipurno Wonogiri dan  Solo.  Masing-masing
daerah  pertanaman  memiliki  karakteristik yang  berbeda,  maka  dari  itu  perlu diketahui  profil  tanah  dan  pemupukan yang diberikan. Karakteristik sampel tanah yang diambil dari beberapa wilayah dapat dilihat pada Tabel 1.
Kondisi  hara  tanah  berbeda-beda tergantung  dari  tempat  dan  sistem pemupukan yang diberikan. Kadar keasaman  tanah  (pH)  masih  dalam rentang  normal  6-7,5. Sampel  tanah dengan  kandungan  nitrogen  dan  karbon organik tertinggi terdapat pada tanah yang berasal dari kawasan Selo Boyolali, hal ini disebabkan  karena  kawasan  tersebut digunakan  untuk  penanaman  sayuran diantaranya  tanaman  Solanaceae  (cabai, tomat,  tembakau, dan  terong)  yang sengaja  diberi  pemupukan  secara  intensif untuk  meningkatkan  produktifitas  hasil pertanian.
Tabel 1. Karakteristik lokasi pengambilan sampel tanah rizosfer tanaman Solanaceae
No Lokasi Pengambilan Tanaman Pemupukan pH N total (%) Bahan organik (%) 1 Selo Boyolali Cabai Pupuk kandang +KCL+urea 6,70 5,03 10,82 2 Selo Boyolali Tembakau  Pupuk kandang +KCL+urea 6,54 5,69 12,83 3 Selo Boyolali Tomat Pupuk kandang 6,50 4,07 9,25 4 Selo Boyolali Terong Pupuk kandang + urea 7,27 2,25 4,21 5 Colomadu Karanganyar Cabai Urea 6,58 0,97 5,04 6 Wonogiri Cabai Pupuk kandang 6,68 1,54 7,41 7 Gondangrejo Karanganyar Cabai Pupuk kandang 6,84 0,86 4,51 Tabel 2. Karakteristik koloni isolat Actinomycetes yang tumbuh pada Media Starch-Casein III No Isolat Karakteristik Koloni Morfologi Koloni Hifa Aerial Hifa Substrat Kelompok Streptomyces Jumlah (%) 1 ToE11 Circular, filamentus, Putih Hitam keunguan Lavendule 4,37 2 ToE12 Circular, entire merah merah Roseosporus 6,67 3 ToE13 Irregular, filamentus Putih Kuning kecoklatan Albosporus 31,25 4 ToE14 Irregular, filamentus Kuning Kuning kecoklatan Albosporus 12,5 5 ToE15 Circular, filamentus Ungu muda Hitam Roseosporus 12,5 6 ToE16 Irregular, lobate Abu-abu putih Griseofucus 20,00 7 ToE21 Circular, filamentus Kuning coklat Flavus 15,00 8 ToE22 Entire, circular Putih Kuning kecoklatan Albosporus 32,20 9 ToE23 Circular, undulate merah Kuning kecoklatan Roseosporus 5,31 10 ToE24 Circular, filamentus Putih Ungu kemerahan Griseorubrovio laceus 4,73 11 ToE25 Circular, filamentus Putih Kuning kecoklatan Albosporus 20,36 12 ToE26 Circular, filamentus Abu-abu Kuning kecoklatan Aureus 30,50 13 ToE27 Circular, filamentus Putih kekuningan Kuning kecoklatan Albosporus 6,35 14 ToE28 Irregular, lobate Abu-abu Abu-abu Griseofucus 8,45
Ket:  CaE = Cabai Selo; TaE = Tembakau Selo; ToE =Tomat Selo; CaO = Cabai Solo CaW = Cabai Wonogiri; KR =Cabai Karanganyar
Lanjutan Tabel 2 No Isolat Karakteristik Koloni Morfologi Koloni Hifa Aerial Hifa Substrat Kelompok Streptomyces Jumlah (%) 15 TaE11 Circular, filamentus Kuning Kuning daya hambat terhadap kapang Flavus 32,20 16 TaE12 Circular, filamentus Putih kuning Albosporus 3,35 17 TaE14 Entire, circular merah Melekat substrat Roseosporus 1,34 18 TaE21 Circular, filamentus Putih kuning Albosporus 74,00 19 TaE22 Circular, filamentus Putih tengah hitam Abu-abu Griseofucus 8,57 20 CaE11 Circular, filamentus Putih Kuning kecoklatan Albosporus 30,43 21 CaE12 Circular, filamentus Putih tengah hitam Abu-abu atau hitam Griseofucus 26,08 22 CaE13 Circular, filamentus merah coklat Aureus 4,34 23 CaE14 Circular, filamentus Putih Abu-abu Griseofucus 39,13 24 CaE21 Circular, entire merah pink Roseosporus 8,30 25 CaE22 Circular, filamentus Putih putih Albosporus 41,67 26 CaE23 Circular, filamentus coklat Coklat Aureus 25,00 27 CaE24 Circular, filamentus Putih tengah hitam Hitam Griseofucus 16,67 28 CaE25 Circular, filamentus Putih Kuning kecoklatan Aureus 6,40 29 CaW11 Circular, filamentus Putih kecoklatan kuning Albosporus 15,38 30 CaW12 Circular, filamentus Putih coklat Flavus 38,46 31 CaW13 Circular, filamentus Putih tengah hitam Kuning kecoklatan Aureus 15,38 32 CaW14 Circular, circle Putih Kuning coklat Aureus 30,76 33 CaW21 Circular, filamentus Putih tengah hitam coklat Aureus 6,25 34 CaW22 Circular, filamentus Putih Kuning kecoklatan Aureus 93,70 35 CaO11 Circular filementus Abu-abu Hitam Griseofucus 43,58
Ket:  CaE = Cabai Selo; TaE = Tembakau Selo; ToE =Tomat Selo; CaO = Cabai Solo CaW = Cabai Wonogiri; KR =Cabai Karanganyar
60 ~ Umi Fatmawati, Slamet Santosa, Yudi Rinanto, Riezky Maya Probosari J. Farmasi Indonesia Lanjutan Tabel 2 No Isolat Karakteristik Koloni Morfologi Koloni Hifa Aerial Hifa Substrat Kelompok Streptomyces Jumlah (%) 34 CaW22 Circular, filamentus Putih Kuning kecoklatan Aureus 93,70 35 CaO11 Circular filementus Abu-abu Hitam Griseofucus 43,58 36 CaO12 Circular, circle Putih berlendir putih Albosporus 10,25 37 CaO13 Circular, filamentus Coklat Coklat Flavus 2,56 38 CaO14 Circular, filamentus kuning kuning Flavus 20,51 39 CaO21 Circular filamentus Hitam hitam Griseofucus 25,00 40 CaO22 Circular, filamentus Putih tengah hitam Kuning kecoklatan Albosporus 10,71 41 CaO23 Circular, filamentus Putih kecoklatan Abu-abu Albosporus 35,71 42 CaO24 Circular, filamentus Putih Abu-abu Albosporus 30,60 43 CaO31 Circular, filamentus Putih coklat Albosporus 50,00 44 GR11 Circular, filamentus Putih tengah hitam Coklat Aureus 30,00 45 GR12 Circular, filamentus Abu-abu putih Griseofucus 25,00 46 GR13 Circular, filamentus Putih kecoklatan coklat daya hambat terhadap kapang Aureus 20,00 47 GR14 Circular, filamentus coklat transparan Flavus 15,78 48 GR15 Circular, filamentus Putih kuning Albosporus 10,00 49 GR16 Circular, filamentus Ungu ungu Roseosporus 5,00 50 GR21 Circular, filamentus Abu-abu coklat Aureus 35,29 51 GR22 Circular, entire Putih merah Roseosporus 8,30 52 GR23 Circular, filamentus Putih kecoklatan coklat Albosporus 33,30 53 GR25 Circular, filamentus Putih tengah hitam coklat Albosporus 17,60 54 GR26 Circular, filamentus coklat coklat Flavus 17,70
Ket:  CaE = Cabai Selo; TaE = Tembakau Selo; ToE =Tomat Selo; CaO = Cabai Solo CaW = Cabai Wonogiri; KR =Cabai Karanganyar

## Morfologi Koloni Actinomycetes
Sebanyak  54 isolat  yang  berhasil diisolasi  pada  media SC-III  dari  7 sampel tanah  rizosfer  tanaman  Solanaceae. Sebagian  besar  merupakan  golongan Streptomyces  spp (Oskay et  al.  2004) dimana  memiliki  variasi  warna  koloni pada  hifa  aerial  dan  substrat.  Beberapa isolat yang terkumpul dari masing-masing sampel  memiliki  kesamaan  morfologi dilihat dari bentuk koloni, margin, warna, struktur  hifa  aerial  dan  hifa yang melekat substrat.  Data  mengenai  morfologi  dan kuatitas  keberdaam  masing-masing  isolat Actinomycetes dapat dilihat pada Tabel 2.
Berdasarkan uraian karakteristik morfologi    Tabel  2,  maka  isolat
Actinomycetes dapat dikelompokkan berdasarkan masing-masing  sampel  tanah rizoid  dan  kelompok  jenis  Streptomyces.
Isolat Actinomycetes yang  memilki kemiripan morfologi dengan Streptomyces aerochoromogenes dimasukkan dalam kelopok Aerus dimana memiliki  warna  hifa  aerial  abu-abu  dan hifa substrat kuning atau oranye (Tan et al.
2006).  Sedangkan  isolat  yang  memiliki
kemiripan dengan Streptomyces roseocasaneus dimasukkan dalam kelompok Roseosporus yang memilki hifa aerial berwarna merah, pink atau oranye, dan    hifa    substrat   berwarna    kuning,
oranye, atau pink. Pembagian lain seperti Albosporus  karena  memiliki  kemiripan dengan morfologi
Streptomyces aburaviensis,  Griseofucus    mirip  dengan Streptomyces  griseus serta  kelompok Flavus.
Adapun  pembagian  persebaran  jenis Streptomyces yang terdapat pada masing- masing  sampel  seperti  tercantum  pada Gambar  2. Berdasarkan  Gambar  2, keaneragaman  isolat  tertinggi  terdapat pada  sampel  rizosfer  tanaman  tomat yang  berasal  dari  daerah  Selo  Boyolali sebanyak
14 isolat, sedangkan keragaman  terendah  terdapat  pada sampel  rizosfer  tanaman  terong  Selo Boyolali, yakni hanya terdapat dua isolat Actinomycetes dimana  sebagian  besar media SC-III  sudah terkontaminasi kapang  pada  saat  masa  inkubasi. Semakin  banyak  jumlah  isolat  yang ditemukan  dari  tiap  sampel  tanah, semakin  besar  kemungkinan  untuk memperoleh  strain  baru Actinomycetes yang  mempunyai  aktivitas antibakteri bagi  bakteri  patogen  seperti Ralstonia solanacearum,  Escherichia  coli,  Bacillus subtillis  dan  Staphylococcus  aureus.
Ket:  CaE  =  Cabai  Selo;  TaE  =  Tembakau  Selo;  ToE  =Tomat  Selo;  CaO  =  Cabai  Solo CaW = Cabai Wonogiri; KR =Cabai Karanganyar
Gambar 2. Tingkat keragaman isolat Actinomycetes pada masing-masing rizosfer tanaman Solanaceae.
Kafur &  Khan (2011)  menyatakan bahwa  seleksi  isolat Actinomycetes dari tanah  maupun  dari  jaringan  tanaman sangat  bermanfaat  untuk  memperoleh strain  baru,  selain  itu  keanekaragaman mikroorganisme merupakan faktor penting  untuk  screening  dan  isolasi senyawa biokatif baru. Sedangkan Taecchowisan et al. (2002) mengemukakan bahwa kelompok Streptomyces  spp merupakan  kelompok yang paling sering ditemui di lingkungan maupun di jaringan tumbuhan monokotil maupun herbaceous. Pencarian senyawa antibiotik  baru  akan  lebih  menjanjikan
jika beragam actinomycetes dikumpulkan  dan  diseleksi.    Maka  dari itu, perlu dilakukan identifikasi karakteristik  tanah  asal.    Hal  ini didasarkan pada hipotesis bahwa keragaman Actinomycetes mungkin
dipengaruhi  oleh keragaman  spesies tanaman  yang  tumbuh.  Actinomycetes mampu    tumbuh  subur    di  sampah humus dan lapisan seresah daun.  Selain itu,  pada  jenis  tanaman  yang  berbeda juga menghasilkan jenis metabolit
sekunder  yang  berbeda  dan    beberapa bahan  kimia  senyawa  beracun  bagi mikroorganisme tanah termasuk Actinomycetes  (Khanna et  al.  2011). Namun, adaptasi lingkungan juga menyebabkan Actinomycetes untuk menghasilkan metabolit sekunder sendiri. 0 2 4 6 8 10 12 14 16 CaE TaE ToE TeE
CaO CaW GR
(a). Isolat warna putih
(b) Isolat warna merah
(c). Isolat warna ungu
(d). Isolat warna kuning
Gambar 3. Isolat warna putih (a), merah (b), ungu (c), dan kuning (d).
Aktivitas Antibakteri dan Kemampuan Hidrolisis Senyawa Polimer Aktivitas antibakteri  dari  kultur  cair GYE  dilakukan  dengan  menggunakan metode agar well diffusion (Kafur & Khan 2011;  Khanna et  al.  2011)  pada  media GYE agar terhadap empat species bakteri: Ralstonia solanacearum, Escherichia coli, Bacillus  subtillis,  dan  Staphylococcus aureus.  Bakteri  uji  ditumbuhkan  pada media  LB  cair  (pH  7)  selama  24  jam, setelah  itu  diinokulasikan  pada  media GYE  dengan  metode swab.  Sumuran dibuat  dengan  menggunakan  cetakan pipa  plastik steril  yang  berdiameter  5 mm.  Sebanyak  50  ul  supernatan dari masing-masing isolat Actinomycetes
ditambahkan pada masing-masing sumuran  dan  diinkubasi  selama  24  jam pada suhu ruang. Pada akhir pertumbuhan  bakteri  dapat  diamati dengan  terbentuknya  zona  hambat berupa  zona  bening  yang  kemudian diukur dengan skala mm.
Berikut  ini  adalah  data  profil
aktivitas antibakteri  dari  54  isolat Actinomycetes serta kemampuannya dalam  menghidrolisis  senyawa  polimer seperti,  casein,  pati,  selulosa,  dan gelatin-pepton.
Tabel 3. Profil aktivitas antibakteri actinomyecets serta kemampuan hidrolisis senyawa No Isolat Daya Hambat (mm) Hidrolisis R. Solana - cearum B.subtillis E.coli S. aureus C asein P ati Selulosa Gelatin -
Pepton 1 ToE11 - - - - + + + + 2 ToE12 - - - - + + + + 3 ToE13 12 - - - + + + + 4 ToE14 - - - 8 + + + + 5 ToE15 - - - 8 + + + + 6 ToE16 - - - - + + + + 7 ToE21 - - - - + + + + 8 ToE22 - - - - + + + + 9 ToE23 9 - - - + + + + 10 ToE24 - - - - + + + + 11 ToE25 - - - - + + + + 12 ToE26 - - - - + + + + 13 ToE27 - - - - + + + + 14 ToE28 - - - - + + + + 15 TaE11 - - - 12 + + + + 16 TaE12 15 - - 12 + + + + 17 TaE14 12 - - 10 + + + + 18 TaE21 - - - - + + + + 19 TaE22 12 - - - + + + + 20 CaE11 8 9 - 8 + + + + 21 CaE12 - - - - + + + + 22 CaE13 - - - - + + + + 23 CaE14 8 10 8 - + + + + 24 CaE21 - - - - + + + + 25 CaE22 - - - - + + + + 26 CaE23 - - - 15 + + + + 27 CaE24 12 12 - - + + + + 28 CaE25 - - - 9 + + + + 29 CaW11 8 - - - + + + + 30 CaW12 16 - - - + + + + 31 CaW13 9 - - - + + + + 32 CaW14 n.a n.a n.a n.a + + + + 33 CaW21 12 - - - + + + + 34 CaW22 14 - - - + + + + 35 CaO11 - - - - + + + + 36 CaO12 - - - - + + + + 37 CaO13 - - - - + + + + 38 CaO14 n.a n.a n.a n.a + + + + 39 CaO21 - 8 - 9 + + + + 40 CaO22 12 12 8 14 + + + +
Ket:  CaE = Cabai Selo; TaE = Tembakau Selo; ToE =Tomat Selo; CaO = Cabai Solo CaW = Cabai Wonogiri; KR =Cabai Karanganyar n.a = not available, dimungkinkan karena isolat tidak tumbuh selama inkubasi
Lanjutan Tabel 3 No Isolat Daya Hambat (mm) Hidrolisis R. Solana - cearum B.subtillis E.coli S. aureus C asei n P ati Selulosa Gelatin -
Pepton 41 CaO23 - - - - + + + + 42 CaO24 - - - - + + + + 43 CaO31 - - - 8 + + + + 44 GR11 n.a n.a n.a n.a + + + + 45 GR12 n.a n.a n.a n.a + + + + 46 GR13 12 12 - - + + + + 47 GR14 8 12 14 9 + + + + 48 GR15 n.a n.a n.a n.a + + + + 49 GR16 n.a n.a n.a n.a + + + + 50 GR21 n.a n.a n.a n.a + + + + 51 GR22 n.a n.a n.a n.a + + + + 52 GR23 - - - - + + + + 53 GR25 - - - - + + + + 54 GR26 - 12 12 9 + + + + Total isolat 16 8 4 13 54 54 54 54
Ket:  CaE = Cabai Selo; TaE = Tembakau Selo; ToE =Tomat Selo; CaO = Cabai Solo CaW = Cabai Wonogiri; KR =Cabai Karanganyar n.a = not available, dimungkinkan karena isolat tidak tumbuh selama inkubasi
Berdasarkan  Tabel  3,  terdapat beberapa  isolat  Actinomycetes  dari rizosfer  beberapa  tanaman  Solanaceae memiliki kemampuan untuk menghambat bakteri uji dengan senyawa antibakteri  ekstraselular.  Sebanyak  16
isolat  (30%)  dari  total  isolat  terkumpul memiliki kemampuan menghambat pertumbuhan  bakteri R. solanacearum, sebanyak  8  isolat  (14%)  menghambat pertumbuhan B.  subtillis,  sebanyak  4 isolat (7%) menghambat pertumbuhan E. coli,  serta  13  isolat  (24%)  mampu menghambat pertumbuhan S.  aureus. Rata-rata  kerentanan  atau susceptibility tertinggi  adalah  pada  bakteri B.  subtillis dengan  luasan  spektrum  rata-rata  11,11 mm.  Sedangkan  tingkat susceptibility
terendah  pada  bakteri  S. aureus,  dengan luasan spectrum rata-rata 9,6 mm.
Spektrum daya hambat isolat Actinomycetes  terhadap  bakteri  uji digolongkan  menjadi  tiga  kelompok, yaitu:  >  10  mm  (spectrum  luas);  2-10
(spectrum  sempit);  0  (tidak  memiliki aktivitas antibakteri). Gambaran
mengenai tingkat spektrum hambat isolat Actinomycetes  terhadap  masing-masing bakteri uji dapat dilihat pada Gambar 4.
Isolat  Actinomycetes  yang  memiliki spektrum    daya  hambat  luas  untuk bakteri R.  solanacearum sebanyak  10 isolat:  ToE13,  TaE12,  TaE14,  TaE22,
CaE24, CaW12, CaW21, CaW22, CaO22, dan GR 13.
R. solanacearum B. Subtilis E. coli S. Aureus 10 5 2 4 6 3 2 8 Jumlah isolat actinomycetes Spektrum Luas Spektrum Sempit
Gambar 4.  Tingkat  spektrum daya hambat actinomycetes terhadap bakteri uji R. solanacearum, B. subtilis, E. coli, dan S. aureus.
Isolat  Actinomycetes  yang  memiliki spektrum  luas  terhadap  bakteri B. subtillis sebanyak  4  isolat:  CaE24,
CaO22,  GR13,  dan  GR26.  Isolat  yang menghambat pertumbuhan E.coli dengan spektrum  luas  sebanyak  2  isolat:  GR14 dan  GR26.  Isolat  Actinomycetes  yang mampu menghambat S. aureus sebanyak 4 isolat TaE11, TaE12, CaE23, CaO22.
Selain  itu,  dapat  juga  dilihat  isolat Actinomycetes yang memiliki kemampuan menghambat lebih dari dua jenis  spesies  bakteri  uji  sekaligus  yaitu:
CaE11,  CaE14,  CaO22,  GR14,  dan
GR26.  Dari  hasil  penelitian  ini,  tidak menutup kemungkinan isolat-isolat tersebut  dikembangkan  sebagai  sumber antibiotik baru di bidang farmasi maupun sebagai  biokontrol  penyakit  tanaman.
Berdasarkan Gambar 4 dapat disimpulkan  bahwa  tingkat  kerentanan bakteri  uji  yang  paling  tinggi  terhadap senyawa antibakteri dari
isolat
Actinomycetes  ada  pada  bakteri R. solanacearum,  dimana  terdapat  10 isolat
yang mampu menghambat pertumbuhan R.  solanacearum dengan  spektrum  luas. Isolat-isolat  tersebut  memiliki  potensi untuk diteliti lebih lanjut dan dikembangkan biokontrol untuk penyakit layu  bakteri  pada  tanaman  Solanaceae.
Manurut  Tan et  al.  (2006), beberapa kelompok Streptomyces memiliki kemampuan untuk mendegradasi
dinding  sel  bakteri R.  solanacearum terutama pada isolat yang diperoleh dari sampel tanah atau jaringan tanaman yang terinfeksi  penyakit  layu  bakteri.  Hal  ini diduga  karena  adanya  kompetisi  antara kenaikan  densitas  patogen  dengan aktivitas degradasi dinding  sel  yang dilakukan  oleh  Actinomycetes  yang terdapat  pada  endofit  maupun  rizosfer tanaman.  Proporsi  penghambatan  dan degradasi  dinding  sel  dipengaruhi  oleh kondisi fisiologis tanaman juga dari mana sampel  diambil.  Tempat  sampling  juga mempengaruhi  jumlah  Actinomycetes penghasil sideropore.
Berdasarkan  Tabel  3,  semua  isolat Actinomycetes yang diisolasi menunjukkan reaksi positif dalam menghidrolisis  senyawa  polimer,  dalam hal ini: pati, casein, celulosa, dan gelatin- pepton.  Hal  ini  ditandai  dengan terbentuknya zona degradasi ( clear zone) disekitar  koloni  Actinomycetes  yang telah  ditumbuhkan  pada  media  Starch casin,  CMC  agar,  dan  Gelatin-Peptone Agar.  Pengamatan  zona  degradasi  pada media Starch Casein dapat dilihat secara langsung  setelah  7  hari  inkubasi, sedangkan  pada  media  CMC  dapat dilihat  dengan  mewarnai  permukaan agar  dengan  larutan  Congo-Red  selama 10  menit,  kemudian  dicuci  dengan larutan NaCl 1 N kemudian diamati zona beningnya (Kanti 2005). Pada pengamatan zona degradasi uji
proteolitik  dapat  dilakukan  pada  media gelatin-pepton  Agar  dengan  meneteskan larutan  HgCl 2 1,5%  kemudian  diamati zona  bening  yang  terbentuk  (Jain et  al.
2009).
Terdapatnya  kemampuan  hidrolisis senyawa  polimer  seperti  selulosa  dan gelatin  oleh  isolat  Actinomycetes,  maka dapat  disimpulkan  bahwa  isolat  tersebut memiliki kemampuan untuk
memproduksi enzim amylase dan protease.  Selain  itu,  Actinomycetes  juga dapat  dimanfaatkan  untuk  degradasi selulosa sehingga dapat membantu siklus karbon pada tanah (Kanti 2005). Berdasar kemampuan  hidrolisis  gelatin,  isolat  ini juga dapat berpotensi untuk dikembangkan sebagai agen bioremidiasi limbah  gelatin,  seperti  pada  industri makanan  maupun  farmasi  (Jain et  al. 2009).

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh dalam penelitian ini didapatkan 54 isolat Actinomycetes  yang  diisolasi  dari  tujuh sampel tanah rizosfer tanaman
Solanaceae.  Isolat  Actinomycetes  yang mampu  menghambat  pertumbuhan  R. Solanacearum (29%), S. aureus (24%), B. subtillis  (14%),  E.  coli  (7%)  dan. Keseluruhan isolat yang tumbuh berekasi positif  dalam  mendegradasi  senyawa: pati, casein, selulosa dan gelatin.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Peneliti  mengucapkan  terima  kasih kepada semua pihak yang telah membantu dalam pelaksanaan penelitian ini.  Publikasi  ini  merupakan  sebagian hasil  penelitian  Hibah  Pemula  Tahun 2013 yang didanai oleh BOPTN DIKTI.

## DAFTAR PUSTAKA
Berdy J. 2005. Bioactive microbial metabolites . J. Antibiot. 58: 1-26. Bonjar SGH, Zamanian S, Aghigi S, Farokkhi R,  Mahdavi  MJ, and  Saadoun  I.  2006. Antibacterial activity of Iranian
Streptomyces  coralus strain  63  against Ralstonia  solanacearum. J.  Biol.  Sci. 6(1): 127-129.
George MA, Anjumol, George  G, and Hatha AAM.  2012.  Distribution  and  bioactive potential  of  soil Actinomycetes from different  ecological  habitats. Afr.  J.
Microbiol. Res. 6(10): 2265-2271.
Gordon        RE.  1966.  Some        strains        in search        of        a        genus Corynebacterium, Mycobacterium,
Nocardia  or  what ?      J.  Gen.  Microbiol. 43: 329-343.
Jain  R,  Agarwal  SC  &  Jaon PC.  2009. Proteolytic Actinomycetes from Indian habitats. J.  Cult.  Collect.    6(1):  28-37.
Kafur  A  &  Khan  AB.  2011.  Isolation  of endophytic Actinomycetes from Catharanthes  roseus (L.)  G.  Don  leaves and  their  antimicrobial  activity .  Iran. J. Biotech . 9(4): 302-306.
Kanti A. 2005. Actinomycetes selulolitik dari tanah  Hutan  Taman  Nasional  Bukit Duabelas,  Jambi. Jurnal  Biodiversitas. 6(2): 85-89.
Khanna M, Solanki  R  &  Lal  R.  2011. Selective isolation of rare Actinomycetes producing novel antimicrobial compund. Intl.  J.  of  Adv.  Biotec.  and Res. 2(3): 357-375.
Kumar  N,  Singh RK,  Mishra  SK,  Singh  AK, Pachouri  UC.  2010.  Isolation  and screening  of  soil Actinomycetes as source  of  antibiotics  active  against bacteria. Int. J. of Micr. Res. 2(2): 12-16.
Martin C and French ER. 1985. Bacterial Wilt of  Potato  Ralstonia  Solanacearum. Technical Information Bulletin 13: 1-6.
Oskay  M,  Tamer  AU and Azeri C.  2004. Antibacterial
activity
of some Actinomycetes  isolated  from  farming soils  of  Turkey. Afr. J. Biotechnol. 3(9): 441-446.
Pandey A, Ali I, Butola KS, Chatterji T, Singh V.  2011.  Isolation  and  characterization of Actinomycetes from  soil  and evaluation  of  antibacterial  activities  of Actinomycetes against  pathogens. Int. J.
Appl. Biol. Pharm. Tech. 2(4): 384-392.
Rahman MA,  Islam MZ, and    Islam MAU. 2011. Antibacterial activities of Actinomycete  isolates  collected  from soils of Rajshahi,
Bangladesh. Biotechnol. Res. Int. 2011: 1-6.
Shirling   EB,   Gottlieb   D. 1966. Methods for      characterization  of Streptomyces species.  Int. J. Syst. Bacteriol. 16(3):
313-340.
Tan HM, Cao LX, He ZF, Su GJ, Lin B & Zou SN.  2006.  Isolation  of  endophytic Actinomycetes from different cultivars of tomato  and  their  activities  against Ralstonia solanacearum in vitro. World J Microbiol  Biotechnol  22:1275–1280.