## UJI SITOTOKSIK KOMBINASI CISPLATIN DENGAN EKSTRAK ETANOL BENALU ALPUKAT
( Dendrophthoe pentandra (L) Miq.) PADA SEL HELA
Roihatul Mutiah*  , Arief Suryadinata*, Prasasti Swara Nurani*

## Abstrak
Benalu  alpukat  ( Dendrophthoe  pentandra (L)  Miq.)  secara  empiris  telah  digunakan  sebagai  obat antikanker  oleh  masyarakat  Indonesia.  Pada  penelitian  sebelumnya  dilaporkan  bahwa  tanaman  tersebut mengandung senyawa kuersetin.  Penelitian ini  bertujuan  untuk  mengetahui kadar  kuersetin dalam  ekstrak etanol 96% benalu alpukat dengan menggunakan HPLC ( high performance liquid chomatography ) dan untuk rnengetahui aktivitas sitotoksik kombinasi cisplatin dengan ekstrak etanol 96% benalu alpukat terhadap sel HeLa.  Pengukuran  kadar  kuersetin  dengan  HPLC  menggunakan  kolom  C-18  dan  fase  gerak  metanol:  air (59:41). Metode yang digunakan untuk uji sitotoksik adalah metode MTT assay . Hasil menunjukkan bahwa kadar kuersetin dalam ektsrak etanol 96% benalu alpukat adalah 0,116% b/v atau 0,029 mg/g bahan dengan waktu  retensi  6,98  menit.  Ekstrak  benalu  alpukat  menunjukkan  aktivitas  yang  lemah  terhadap  sel  HeLa dengan  nilai  IC 50 1.000±124,68  ppm,  namun  tidak  menutup  kemungkinan  digunakan  sebagai  agen  ko- kemoterapi  dengan  cisplatin.  Hasil  dari kombinasi  yang  menghasilkan  efek  sinergis  dalam  menghambat pertumbuhan sel kanker serviks HeLa adalah kombinasi 125 ppm EBA + 2,974 nM Cis, 125 ppm EBA + 5,95 nM Cis, 125 ppm EBA + 8,925 Cis nM, 250 ppm EBA + 2,97 Cis nM, 250 ppm EBA + 5,95 nM Cis, dan 375 ppm EBA + 11,90 Cis nM.
Kata kunci: benalu alpukat, cisplatin, kanker seviks, sel HeLa, sitotoksik.

## CYTOTOXIC EVALUATION OF CISPLATIN IN COMBINATION WITH ETHANOLIC EXTRACT
OF AVOCADO PARASITE ( Dendrophthoe pentandra ( L) Miq.) AGAINST HELA CELLS

## Abstract
Avocado  parasite  ( Dendrophthoe  pentandra (L)  Miq.)  empirically  have  been  used  as  anticancer medicine  by  Indonesian  people.  The  previous  studies  had  reported  that  the  plant  contains  quercetin compound. This  study  aims  to  determine  the  quercetin level  in  96%  ethanolic  extract  of  avocado  parasite using  HPLC  ( high  performance  liquid  chomatography )  and  to  examine  the  cytotoxic  activity  of  the combination of cisplatin and 96% ethanolic extract of avocado parasite on HeLa cells. The measurement of quercertin level by using HPLC C-18 column and methanol moving phase: water (59:41). The methods used for cytotoxicity test is MTT assay . The result showed that the quercetin level in avocado parasite was 0.116% b/v or 0.029 mg/g material by 6.98 minutes retention time. Avocado parasite extract shows weak activity on HeLa cell as it has IC 50 1.000 ± 124.68 ppm. However, it is possible to be used as co-agent of chemotherapy with cisplatin. This combination results on synergistic effect in the inhibiting the growth of  HeLa cells by CI 0.31 ( combination index) are 125 ppm EBA + 2,974 nM Cis, 125 ppm EBA + 5,95 nM Cis, 125 ppm EBA + 8,925 Cis nM, 250 ppm EBA + 2,97 Cis nM, 250 ppm EBA + 5,95 nM Cis, dan 375 ppm EBA + 11,90 Cis nM.
Keywords: avocado parasite, cervical cancer, cisplatin, cytotoxic, HeLa cells.
* Departemen Farmasi, Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan, UIN Maulana Malik Ibrahim, Malang.
 E-mail: roihatulmutiah@gmail.com

## Pendahuluan
Pada beberapa dasawarsa terakhir,    angka  kejadian  akibat  penyakit kanker  mengalami  peningkatan  yang drastis.  Data  WHO  tahun  2008  mencatat 12  juta  kasus  baru  setiap  tahunnya dengan  jumlah  angka  kematian  7,6  juta jiwa.  Pada  data  kesehatan  tahun  2013 dilaporkan bahwa penyakit kanker serviks memiliki prevalensi tertinggi kedua  setelah  kanker  payudara  yaitu 0,5%  dari  220  juta  penduduk  Indonesia dengan  jumlah  angka  kejadian  61.682 jiwa. 1 Beberapa usaha pengobatan terhadap  kanker  telah  dilakukan  secara intensif yaitu dengan pembedahan, kemoterapi dan radioterapi, namun belum mampu secara efektif menanggulangi kanker. Kegagalan terapi  tersebut  disebabkan  oleh  target obat yang tidak spesifik dan meningkatkan multi  drug resistance (MDR). Hal tersebut menimbulkan kerusakan  jaringan  sel  normal  dan menimbulkan  efek  samping  yang  serius pada pasien. 2 Ko-kemoterapi merupakan salah satu  solusi  terhadap  fenomena  MDR tersebut. Ko-kemoterapi merupakan terapi yang mengkombinasikan senyawa  fitokimia  dari  bahan  alam dengan agen kemoterapi, sehingga akan meningkatkan efikasi dan menurunkan toksisitas kemoterapi terhadap jaringan normal. 3 Benalu merupakan  salah  satu  tanaman  yang banyak  digunakan  oleh masyarakat Indonesia  sebagai  obat  kanker  secara empiris.  Benalu  mengandung  flavonoid, tanin,  asam  amino,  karbohidrat,  dan saponin.  Salah  satu  senyawa  flavonoid yang berperan penting dalam
menghambat  proliferasi  sel  kanker  dari tanaman benalu adalah kuersetin. Senyawa  kuersetin  dapat  menghambat terbentuknya  enzim  DNA  topoisomerase pada  sel  kanker.  Pada  penelitian sebelumnya  dilaporkan  bahwa  ekstrak etanol  benalu  memiliki  potensi  sebagai antikanker karena pada pengujian sitotoksik  dengan  metode  MTT  (3-[4,5- dimethylthiazol-2-yl]-2,5 diphenyl tetrazolium bromide) assay menghasilkan  nilai  IC 50 sebesar  <50 µg/ml. 4
Pada  penelitian  ini  akan  ditentukan kandungan kuersetin pada ekstrak benalu alpukat, serta pengaruh kombinasi  antara  ekstrak  benalu  alpukat dengan cisplatin. Obat ini telah digunakan  dalam  pengobatan  kanker kandung  kemih,  kepala  dan  leher,  paru- paru,  ovarium,  dan  kanker  testis. 5
Kombinasi  tersebut  diharapkan  dapat memberikan efek sinergis serta mengurangi  efek  samping  dari  cisplatin karena  dosis  yang  digunakan  adalah dosis di bawah IC 50 , sehingga diharapkan  dengan  penurunan  dosis juga  akan  menurunkan  toksisitas  obat kemoterapi terhadap sel normal.

## Bahan dan Metode
Benalu  alpukat  dikumpulkan  dari Kecamatan  Bantur,  Kabupaten  Malang. Jawa  Timur,  Indonesia.  Determinasi tanaman  dilakukan  di  UPT  Materia Medika,  Kota  Batu,  Jawa  Timur.  Fase gerak  berupa  etanol  p.a.  99%  (Merck ) , aqua  pro  injeksi.  Agen  kemoterapi berupa  cisplatin  iv  50mg/50  ml  (PT. Dankos  Farma)  yang  diperoleh  dari apotek  Anisa  Farma.  Sel  kanker  serviks Hela  diperoleh  dari  CCRC  ( Cancer Chemoprevention Research Center ) UGM,  sel  dikultur  menggunakan  media MK  RPMI  yang  mengandung  10%  FBS
( fetal  bovine  serum) ,  1-2% penisilin streptomisin ,  dan  0,5% ampotericin  B. DMSO untuk melarutkan ekstrak. Reagen  MTT  [3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2, 5-difeniltetrazoliumbromida]. Reagen stopper  yang  digunakan  adalah  SDS
10% dalam 0,1N HCl.

## Persiapan Sampel
Sebanyak  2  kg  daun  benalu alpukat  segar  disortasi  berdasarkan kualitas  lalu  dikeringkan  dalam  oven bersuhu 50 o C selama 5 hari, selanjutnya dilakukan grinding simplisia . Analisis kadar air Analisis kadar air dilakukan dengan  cara  menimbang  0,5  g  simplisia kemudian diukur kadar airnya menggunakan moisture content analyzer .  Prinsip  kerja  alat  ini  yaitu dengan  cara  menguapkan  air  yang terkandung dalam sampel. Hasil penguapan  air  tersebut  diukur  sebagai persentase kadar air.
Ekstraksi  Simplisia  Daun  Benalu  Alpukat Menggunakan  Metode  Ekstraksi  UAE (Ultrasound Assisted Extraction) Ekstraksi  simplisia  daun  benalu alpukat  dilakukan  menggunakan  metode UAE  dan  menggunakan  pelarut  etanol 96%  dengan  perbandingan  pelarut  1:20. Perbandingan ini didapat untuk meningkatkan  efektifitas  dan  efisiensi pelarut.  25  g  simplisia  dilarutkan  dalam
500  ml  yang  terbagi  dalam  3  kali maserasi.  Maserasi  pertama  yaitu  25  g simplisia  dilarutkan  dalam  200  ml  etanol 96%  di  UAE  selama  3x2  menit  lalu disaring.  Filtrat  ditampung  dan  residu diremaserasi menggunakan 150 ml etanol  96%  di  UAE  selama  3x2  menit lalu  disaring  dan  filtrat  ditampung,  lalu diremaserasi  kembali  residunya  dengan 150  ml  etanol  96%  dan  diekstraksi
dengan  UAE  selama  3x2  menit.  Lalu filtrat  ditampung  dan  residu  dibuang.
Setelah filtrat ditampung, dilakukan penguapan filtrat oleh rotary evaporator . Identifikasi dan Pengukuran Kadar Senyawa Kuersetin dalam Ekstrak Etanol  96%  Daun  Benalu  Alpukat dengan  HPLC  (High  Performance  Liquid Chromatography) Pengukuran persentase kadar kuersetin  dalam  ekstrak  benalu  alpukat dengan  menggunakan  instrumen  HPLC. Fase  diam  yang  digunakan  adalah kolom  C-18  dengan  fase  gerak  berupa metanol:air (59:41). Langkah yang pertama adalah larutan standar kuersetin dibuat dengan cara menimbang  10  mg  standar  kuersetin lalu  dilarutkan  dalam  labu  ukur  10  ml sehingga  kadar  kuersetin  menjadi  1000 µg/ml.  Diambil  1  ml  dan  dilarutkan  10  ml etanol  ke  dalam  labu  ukur,  sehingga konsentrasinya menjadi 100 µg/ml. Dibuat  larutan  standar  dengan  cara memipet  10,  30,  60,  120,  240,  dan  480 µL  dan  dilarutkan  sampai  tanda  batas 10  ml  dengan  metanol  ke  dalam  labu ukur, dan didapatkan konsentrasi
larutan  standar  0,1;  0,3;  0,6;  1,2;  2,4; dan  4,8  ppm.  Disaring  larutan  ke  dalam membran  filter  0,22  µm  dan  diinjeksikan pada  HPLC  dengan  sebanyak  20  µL. Preparasi  sampel  dilakukan  dengan cara  menimbang  25  mg  ekstrak  etanol benalu  alpukat  (EBA)  lalu  dilarutkan  ke dalam  10  ml  metanol  dalam  labu  ukur, disaring  dengan  membran  filter  0,22  µm dan  diinjeksikan  pada  HPLC  dengan sebanyak 10 µL.

## Uji Sitotoksik
Sel  HeLa  dikultur  dalam plate  96- well dalam  media  MK  RPMI,  lalu diinkubasi  dalam  suhu  37 0 C  selama  24 jam  setiap well berisi  5x10 3 sel. Kemudian  ditambahkan  EBA  dalam
DMSO  baik  tunggal  maupun  kombinasi dengan  konsentrasi  1000;  500;  250; 125;  62,5;  32,75;  16,375;  dan  8,1875 ppm  untuk  dosis  tunggal  dan  dosis kombinasi ⁄ ; ⁄ ; ⁄ ⁄ lalu dilanjutkan  diinkubasi  selama  24  jam.
Langkah  selanjutnya  diberikan  reagen
MTT  0,5  mg/ml  setiap well selama 3-4  jam  untuk  membentuk  serabut formazan.  Setelah  4  jam  diberikan reagen  SDS  stop  dalam  0,01  N  HCl untuk  melarutkan  serabut  formazan  dan diinkubasi  kembali  selama  24  jam  tanpa cahaya, selanjutnya dilakukan pengukuran dengan ELISA Reader panjang gelombang 595 nm.

## Analisis Kadar Air
Data yang diperoleh berupa persentase kadar  air  simplisia  kemudian  dirata-rata  dan dihitung standar deviasi.

## Analisis Kadar Kuersetin dengan HPLC
Data  yang  diperoleh  berupa  waktu retensi  dan  kadar  kuersetin  dalam  sampel EBA  dalam  bentuk  ppm  yang  kemudian dikonversikan  menjadi  persentase  dan  mg kadar dalam ekstrak. Uji linearitas dilakukan pada larutan standar kuersetin 0,1: 0,3: 0,6: 1,2; 2,4; dan 4,8 ppm.

## Uji Sitotoksik
Data yang diperoleh berupa absorbansi masing-masing  sumuran  dikonversikan dalam  persen  viabilitas  sel  hidup.  Persen viabilitas  sel  hidup  dihitung  dengan persamaan:

## Uji Kombinasi
Sitotoksisitas  sinergistik  ditetapkan dengan  menghitung  indeks  interaksi  antara agen  kemoterapi  EBA  (ekstrak  benalu alpukat)  dengan  Cis  (cisplatin)  dengan mengunakan persamaan:
Pengertian  (D) 1 dan  (D) 2 adalah  besarnya konsentrasi kedua senyawa untuk memberikan  efek  yang  sama  (D X ) konsentrasi tunggal senyawa untuk memberikan  efek.  Interpretasi  indeks kombinasi  CI  ( combination  index) disajikan pada Tabel 1.
Persen  viabilitas  yang  didapatkan  dari persamaan di atas selanjutnya dihitung nilai IC 50 ( Inhibition  concentration 50%) yaitu konsentrasi  yang  dapat  menghambat pertumbuhan  sel  kanker  sebesar  50%  atau menyatakan  potensi  ketoksikan  suatu senyawa  terhadap  sel.  Semakin  kecil  nilai IC 50 maka  toksisitas  semakin  tinggi  dan sebaliknya. 6

## Persetujuan Etik
Penelitian  ini  telah  mendapatkan persetujuan  etik  dari  Komisi  Etik  Penelitian Kesehatan  Fakultas  Kedokteran  Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim Malang dengan  nomer  sertifikat  005/EC/KEPK- FKIK/2018.
Tabel 1. Interpretasi CI ( combination index)
Hasil
Analisi s Kadar Air CI Interpretasi CI Interpretasi < 0.1 Strong synergist 0.9 – 1.1 Additives 0.1 – 0.3 Powerful synergist 1.1 – 1.45 Light antagonist 0.3 – 0.7 Synergist 1.45 – 3.3 Antagonist 0.7 – 0.9 Light synergist > 3.3 Powerful antagonist
CI=(D) 1 /(D x ) 1 +(D) 2 /(D x ) 2
Kadar air dalam parameter pengukuran kualitas  simplisia  merupakan  hal  yang penting.  Pengukuran  kadar  air  ini  untuk mengurangi  kontaminasi  mikroorganisme, yaitu  sampai  batas  mana  mikroorganisme dan  kegiatan  enzim  dapat  menyebabkan pembusukan  bisa  terhenti  sehingga  waktu simpan simplisia lebih lama. 7 Pada penelitian ini  menggunakan  alat moisture  content analyzer ,  alat  ini  berprinsip  termografi dengan  menguapkan  air  dalam  serbuk hingga  konstan.  Penggunaan  alat  ini  untuk menghindari  senyawa  antioksidan  yang mudah rusak pada suhu tinggi, lebih mudah dalam  operasional  alat,  serta  harga  lebih murah. Pada analisis kadar air ini, diperoleh kadar  air  dalam  simplisia  yaitu  9,07%,
9,23%, dan 8,70% dengan rata-rata kadar air 9%±0,271846. Hasil ini menunjukkan bahwa
simplisia  telah  sesuai  dengan  standart Materia  Medika  Indonesia  (1978)  yaitu standar kadar air simplisia <10%.

## Analisis Kadar Kuersetin dengan HPLC
Kromatografi merupakan teknik pemisahan yang paling umum digunakan di bidang analisis farmasetik karena
menawarkan  tiga  fungsi  sekaligus  yaitu analisis kualitatif, kuantitatif, dan preparatif. 8 Prinsip  pemisahan  HPLC  yaitu  adanya distribusi  komponen-komponen  dalam  fase diam dan fase gerak berdasarkan perbedaan sifat fisik komponen yang akan dipisahkan. 9 Uji  linearitas  standar  kuersetin  memberikan persamaan garis y = 0,470x + 0,201 dengan koefisien relasi (R 2 ) 0,934. Hasil kromatogram  kandungan  kuersetin  dalam ekstrak disajikan pada Gambar 1.
Gambar  1.  Hasil  kromatogram  HPLC  kuersetin  pada  ekstrak  benalu  alpukat  ( Dendropthoe petandra (L) Miq.)
Uji Sitotoksik Tunggal
Uji  sitotoksik  adalah  langkah  awal upaya  pendeteksian  adanya  senyawa  yang bekerja  sebagai  antineoplastik  pada  obat- obatan  yang  bekerja  dengan  mekanisme sitotoksik.  Parameter  yang  dihasilkan  pada uji ini yaitu nilai IC 50 . IC 50 menunjukkan nilai konsentrasi  yang  menghasilkan  hambatan proliferasi  sebesar  50%  atau  menyatakan potensi ketoksikan. 6
Perlakuan  ekstrak  benalu  alpukat (EBA)  dan  cisplatin  (Cis)  pada  uji  tunggal masing-masing senyawa terhadap sel HeLa menunjukkan  pertumbuhan  sel  mengalami penurunan  dengan  adanya  pertambahan konsentrasi. Nilai IC 50 tunggal ekstrak benalu alpukat  1000±124,6812  ppm.  Suatu senyawa  dikatakan  toksik  jika  mempunyai nilai  IC 50 kurang  dari  1.000  ppm. 10 Hasil pengujian  EBA  dan  Cis  tunggal  disajikan dalam Gambar 2.
Uji Kombinasi Ekstrak Benalu Alpukat (EBA) dengan  Cisplatin  terhadap  Viabilitas  dan Morfologi Sel HeLa
Konsentrasi  yang  digunakan  pada  uji kombinasi  adalah  16  dosis  kombinasi dengan  konsentrasi  di  bawah  IC 50 . Persentase  sel  viabel  ditentukan  dengan
menggunakan  uji  MTT.  Hasil  uji  efektifitas bentuk  kombinasi  dibandingkan  dengan terapi tunggalnya, sehingga bisa membandingkan  efikasi  sediaan  kombinasi terhadap sediaan tunggalnya. Pada  perlakuan  EBA  dengan  cisplatin baik tunggal maupun kombinasi menyebabkan perubahan morfologi pada sel HeLa  yang  linier  dengan  peningkatan konsentrasi  uji.  Sel  HeLa  pada  kontrol tampak berbentuk oval dengan sitosol jernih dan  melekat  pada  dasar tissue  culture  dish (TCD).  Setelah  perlakuan,  sebagian  sel tampak  membulat  dan  terlepas  dari  TCD. Sel  terlihat  keruh  dan  kompak,  tampak seperti mengalami kondensasi dan pengkerutan inti serta granulasi pada sitosol. Perubahan morfologi tersebut semakin nyata seiring  dengan  peningkatan  konsentrasi  uji.
Perlakuan  bahan  uji  tunggal  dan  kombinasi juga  menurunkan  viabilitas  sel  Hela  yang linier  dengan  peningkatan  konsentrasi  uji. Penampakan  morfologi  sel  HeLa  setelah perlakuan  dan  setelah  diberi  reagen  MTT untuk  membentuk formazan ditunjukkan pada Gambar 3.
Gambar  2.  (A).  Persentase  viabilitas  sel  HeLa  setelah  pemberian  EBA  (ekstrak  benalu  alpukat) dengan  konsentrasi  1000-15,675  ppm.  (B).  Persentase  viabilitas  sel  HeLa  setelah pemberian Cisplatin dengan konsentrasi log 2-log 0,495 nM.

## A                                                                                   B
Gambar  3.  Morfologi  sel  HeLa  setelah  diperlakukan  dengan  ekstrak  benalu  alpukat  (EBA)  dan cisplatin dengan metode uji MTT (100x). Sel mati berbentuk bulat dan membran licin (a).  Sel  hidup  membentuk  Kristal  formazan  dan  tampak  terlihat  berserabut  (b).

## Analisis Hasil Combination Index
Metode yang digunakan untuk mengevaluasi  kombinasi  EBA  dengan cisplatin adalah sobologram dan combination index (CI).  Analisis  CI  kuantitatif  yang menggambarkan efikasi kombinasi menggunakan persamaan  CI = (D)1/(Dx)1+ (D)2/(Dx)2. CI digunakan untuk menentukan efek  aditif  yang  diberikan  dua  kombinasi senyawa, apakah berupa efek sinergis, aditif atau antagonis.
Dari  hasil  analisis combination  index EBA dengan cisplatin menunjukkan bahwa dari 16 dosis kombinasi  terdapat  5  kombinasi  dosis yang memberikan efek sinergis, satu sinergis ringan,  7  antagonis,  3 antagonis kuat.  Hasil analisis combination  index EBA  dengan cisplatin  ditampilkan  pada  Tabel  2  dan Gambar 5.
Tabel 2. Nilai CI ekstrak etanol benalu alpukat dengan cisplatin pada sel HeLa Doses combination Cell viability (%) Mean ± SD CI Therapy effects EBA (ppm) Cis (nM) 125 2.97 93.62 ± 5.52 0.46 Synergist 125 5.95 92.85 ± 2.15 0.77 Light synergist 125 8.93 97.70 ± 1.45 0.70 Synergist 125 11.90 89.86 ± 5.12 1.92 Antagonist 250 2.97 94.63 ± 3.21 0.62 Synergist 250 5.95 104.85 ± 18.07 0.47 Synergist 250 8.93 88.16 ± 1.12 2.38 Antagonist 250 11.90 89.66 ± 3.49 2.27 Antagonist 375 2.97 84.53 ± 2.03 5.45 Powerful antagonist 375 5.95 83.96 ± 1.40 72.20 Powerful antagonist 375 8.93 92.36 ± 4.73 1.55 Antagonist 375 11.90 84.61 ± 2.54 0.31 Synergist 500 2.97 78.87 ± 2.07 49.78 Powerful antagonist 500 5.95 83.03 ± 0.73 2.87 Antagonist 500 8.93 71.76 ± 15.26 2.43 Antagonist 500 11.90 82.22 ± 4.64 2.18 Antagonist
Gambar 5. Grafik indeks kombinasi cisplatin (Cis) dengan ekstrak benalu alpukat (EBA)
125 250 375 500 -20.00 0.00 20.00 40.00 60.00 80.00 2.974 5.950 8.925 11.900 125 250 375 500 C om bin at io n In dex E B A (p p m)

## Pembahasan
Sel Hela merupakan continuous cell line yang diturunkan dari epitel kanker leher rahim (cervix)  seorang  wanita  penederita  kanker leher Rahim. Kultur ini mempunyai sifat semi melekat  dan  digunakan  sebagai  model  sel kanker  dan  untuk  mempelajari  sinyal tranduksi  seluler. 11 Sel  Hela  ini  cukup  aman dan  merupakan  sel  manusia  yang  umum digunakan  pada  kultur  sel. 12 Selain mengetahui  efikasi  kombinasi  EBA  dan cisplatin  penelitian  ini  juga  bertujuan  untuk menentukan  kadar  senyawa  aktif  quersetin pada  ekstrak  benalu  alpukat dengan  metode HPLC.  Hal  ini  penting  untuk  dilakukan sebagai  langkah  awal  standarisasi  ekstrak untuk menjaga kestabilan efek farmakologi.
Hasil  analisis  pengukuran  kadar kuersetin dengan metode HPLC menunjukkan bahwa  larutan  baku  yang  dibuat  memiliki linieritas  yang  tinggi  (R 2 =  0,934)  sehingga validitasnya  juga  tinggi.  Berdasarkan  hasil analisis  didapatkan  kadar  kuersetin  dalam EBA adalah 1,1625 ppm atau  setara dengan 0,116%  b/v.    Jika  dikonversikan  dalam  mg adalah  0,029  mg/g  bahan.  Kadar  ini  sangat kecil  jika  dibandingkan  dengan  penelitian Dewata dkk (2017), yang dilakukan pada teh daun bersuhu 70 0 C menggunakan instrumen spektrofotometri  UV-Vis  dengan  kadar  2,72 mg/g. 13 Perbedaan  ini  dimungkinkan  karena berbagai faktor seperti ukuran simplisia, jenis pelarut,  tingkat  kepolaran  pelarut,  serta metode ekstraksi yang menentukan jenis dan jumlah  senyawa  yang  dapat  terekstrak  dari bahan. 14
Berdasarkan  Gambar  2,  diketahui  nilai IC 50 yang  tinggi  yaitu  1000±124,6812  ppm. Suatu  senyawa  dikatakan  toksik  jika mempunyai  harga  IC 50 kurang  dari  1.000 ppm.  Oleh  karena  potensi  yang  didapatkan tergolong potensi lemah maka perlu dilakukan pengembangan  untuk  meningkatkan  potensi dari  tanaman  benalu  alpukat  dengan mengembangkan  menjadi  fraksi  atau
dikembangkan  melalui  uji  kombinasi  agar potensinya  meningkat.  Hasil  uji  sitotoksisitas dari  cisplatin  menunjukkan  nilai  IC 50 23,8165965±1,46363  nM,  berdasarkan  data NCI  ( National  Cancer  Institute )  tahun  2012 senyawa  tersebut  memiliki  potensi  sebagai obat antikanker terutama pada kanker serviks karena memliki IC 50 kurang dari 30 mg/µl. 15 Kombinasi terapi (ko-kemoterapi) bertujuan  untuk  meningkatkan  efektifitas pengobatan  dan  menurunkan  efek  samping dari  agen  kemoterapi.  Idealnya  obat  yang dikombinasikan  mempunyai  efek  yang sinergis  melawan  sel  kanker.  Namun toksisitasnya  dapat  ditoleransi  sehingga secara  klinik  lebih  efisien  dibandingkan dengan  agen  tunggal. 16 Perlakuan  EBA  dan cisplatin  pada  sel  kanker  HeLa  dengan konsentrasi  di  bawah  dosis  IC 50 bertujuan untuk  memperoleh  kombinasi  dosis  yang mempunyai  efek  antikanker  yang  tinggi dengan  dosis  yang  rendah  sehingga diharapkan  dapat  mengurangi  efek  samping penggunaan  kemoterapi. 14 Penelitian  ini menunjukkan  bahwa  pada  konsentrasi kombinasi  EBA  dan  cisplatin  yang  rendah maka  viabilitas  sel  Hela  juga  lebih  rendah. Hal  ini  kemungkinan  sel  Hela  mengalami resistensi  pada  konsentrasi  tinggi.  Pada  sel yang  resisten,  cisplatin  tidak  berhasil menyebabkan kerusakan  DNA sehingga  p53 tidak  dapat  diaktifkan.  Protein  p53  sangat penting  untuk  proses  pemacuan  apoptosis. Sel  kanker  yang  tumbuh  sebagai  parasit dianggap  oleh  tubuh  sebagai  sel  sehat sehingga  tubuh  berkompensasi  untuk melindungi  sel  kanker  dari  proses  apoptosis dengan  meningkatkan  produksi  protein  Bcl-2 dan dampaknya adalah tidak terjadi apoptosis dan sel menjadi immortal. 17
Beberapa kombinasi menghasilkan efek yang sinergis yaitu kombinasi 125 ppm EBA + 2,974 nM Cis, 125 ppm EBA + 5,95 nM Cis, 125 ppm EBA + 8,925 Cis nM, 250 ppm EBA + 2,97 Cis nM, 250 ppm EBA + 5,95 nM Cis, 375  ppm  EBA  +  11.90  Cis  nM  (Tabel  2  dan
Gambar  5).  Mekanisme  kuersetin dalam  menghasilkan  efek  yang  sinergis diduga  melalui  penghambatan  proses karsinogenesis  yaitu  dengan  menghambat pembentukan enzim tirosin kinase sehingga proliferasi  dapat  dikendalikan.  Pada  obat antikanker  dengan  target  enzim  tirosin kinase memiliki efek selektif jika dibandingkan dengan mekanisme yang lain.
4
Kuersetin  memiliki  efek  yang  sinergis dengan  cisplatin  baik  secara  uji in  vitro maupun in  vivo jika  dibandingan  pada pemberian cisplatin dalam terapi tunggal. 4

## Kesimpulan
Berdasarkan hasil analisis menggunakan HPLC kadar kuersetin dalam EBA adalah 0,029 mg/g ekstrak kental atau 0,116%. Kombinasi yang menghasilkan efek sinergis  adalah  kombinasi  125  ppm  EBA  + 2,974 nM Cis, 125 ppm EBA + 5,95 nM Cis, 125 ppm EBA + 8,925 Cis nM, 250 ppm EBA
+ 2,97 Cis nM, 250 ppm EBA + 5,95 nM Cis, dan 375 ppm EBA + 11,90 Cis nM.

## Daftar Pustaka
1. Kemenkes RI. Data Riset Kesehatan  Dasar Jakarta:  Pusdatin Kemenkes RI. 2013.
2. Mardiyaningsih  A  dan  Ismiyati  N. Cytotoxic  Activity  of  Ethanolic  of Parsea  americana  Mill. Leaves  on Hela  Cervical  Cancer  Cell. Trad
Med J . 2014; 19(1):24. 3. Nurulita  NA,  Meiyanto  E,  Sugiyanto
S,  Matsuda  E,  Kawaichi  M.  The Ethyl  Acetate  Fraction  of Gynura procumbens Sensitizes  WiDr  Colon Cancer Cell Line Against 5- Fluorouracil  but  Shows  Antagonism with  Cisplatin. International  Journal of  Phytomedicine .  2011;  3(3):392- 405. 4. Ikawati  M,  Wibowo  AE,  Navista  S, dan  Rosa  A. Pemanfaatan  Benalu sebagai  Anti  Kanker. Yogyakarta:
Universitas Gadjah Mada. 2008. 5. Dasari  S  and  Tchounwou  PB. Cisplatin in Cancer Therapy: Molecular  Mechanisms  of  Action. Eur  J  Pharmacol .  2014;  0:364-378. doi:  10.1016/j.ejphar.2014.07.025. 6. Mayer  BN,  Ferrigini  NR,  Putman  JE, Jacobsen LB, Nichols DE, Mclaughin  JL.  Brine  Srimp:  A Cowenient  General  Bioassay  for Active  Plant  Constituelns. Planta Medica. 1982; 45:31-34. 7. Riansyah  A,  Supriadi  A,  dan Nopianti  R.  Pengaruh  Perbedaan Suhu dan Waktu Pengeringan terhadap  Karakteristik  Ikan  Asin Sepat Salam (Trichogasterpecotoralis) dengan Menggunakan Oven . Fishtech . 2013; 2(1): 53-54. 8. Muti’ah R. Pengembangan Fitofarmaka Antikanker Panduan Teknik  Pengembangan  Obat  Herbal Indonesia Menjadi Fitofarmaka. Malang: UIN Maliki Press. 2014. 9. Ardianingsih  R.  Penggunaan  High
Perfomance  Liquid  Chromatograpy (HPLC)  dalam  Proses  Deteksi  Ion .
LAPAN. 2009; 10(4):102-104.
10. Haryoto  M,  Indrayudha  P,  Azizah  T, dan  Suhendi  A.  Aktivitas  Sitotoksik
Ekstrak  Etanol  Tumbuhan  Sala (Cynometraramiflora L ) terhadap Sel Hela, T47D, dan WiDR. Surakarta: Universitas Muhammadiyah Surakarta. 2013; 18(2):23. 11. Wikipedia.  Hela  is  Also  The  German Name  for  Hel,  Poland  and  The Cruiser  SMS  Hela,  Wikipedia  the Free Encyclopedia, Wikimedia Foundation. 2006. (Online).
12. http://en.wikipedia.org/wiki/HeLa. Diakses 20 Januari 2018.
13. Labwork  Study  Guideand  Lecture Notes.  Henrietta  Lacks.  2000.  (Online). www.micro.msb.le.ac.uk/Labwork/Lack
1.html, Diakses tanggal? 14. Dewata  I,  Sandhi  P,  dan  Widarta,  I. Pengaruh Suhu dan Lama Penyeduhan    Terhadap  Aktivitas Sensoris  TehHerbal  Daun  Alpukat ( Parsea  americana Mill.). Jurnal ITEPA . 2017; 6(2):30-39. 15. Hidayati  F,  YS  Darmanto,  dan Romadhon. Pengaruh Perbedaan Konsentrasi  Ekstrak Sargasum  sp. dan  Lama  Penyimpanan  terhadap Oksidasi  Lemak  pada  Fillet  Ikan Patin (Pangasius  sp.). Jurnal  Ilmu
Lingkungan. 2017. 15: 66.
16. NCI. Cancer Treatment. 2012. (Online). http://www.cancer.gov/cancertopics/trea t ment. Html. Diakses 11 Februari 2018. 17. Mutiah R, Listiyana A, dan Suryadinata  A.  Aktivitas  Antikanker Kombinasi Ekstrak Benalu Belimbing (Macrosolen  cochinensis) dan  Bawang  Sabrang (Eleutherine palmifolia (L)  Merr.) pada  Sel Kanker  Serviks (Sel  HeLa). Trad Med J . 2017. 22(3):151. 18. Pemaron,  I.  Peran  Protein  Bcl-2 pada Resistensi Kemoterapi Golongan  Cisplatin  pada  Kanker Ovarium. UNU .2012.