Jurnal Teknologi Kesehatan Borneo, Vol. 2, No.1 (2021) 1-5
http://jtk.poltekkes-pontianak.ac.id/index.php/JTKB/

## Potential of Methanol Extract of Bungli Fruit Seed
( Oroxylum Indicum ) in Inhibiting the Growth of Escherichia coli
Ari Nuswantoro 1)* , Natasya Intan Ramadhani 1)
1 Jurusan Analis Kesehatan Politeknik Kesehatan Kemenkes Pontianak
* Correspondence: arinuswantoro82@gmail.com
Abstract. Bungli (Oroxylum indicum) has been used for generations in Asia as a traditional medicine. The seeds of the bungli are commonly used as traditional medicine to treat typhoid, cough, hypertension, internal fever,  fever  and  diarrhea.  The  active  compounds  in  this  plant  are  known  to  have  anti-inflammatory, antirheumatic, antifungal and antibacterial activities. Our research on methanol extract of bungli fruit seeds showed its potential to inhibit the growth of Escherichia coli bacteria that causes diarrhea. Bungli seed extract samples  with  a  concentration  of  25%  showed  an  inhibition  zone  with  a  diameter  of  9.22  mm,  while  at  a concentration of 50% the diameter was 11.16 mm and 75% had a diameter of 12.88 mm. This size is indeed smaller than chloramphenicol (26 mm), but this potential can be greater if the extraction is carried out more intensively to extract the active compound, the sample concentration is increased, and the part or age of the plant with the highest content of the active compound is used; so that the Bungli plant is expected to be an alternative in overcoming Escherichia coli infection.
Keywords : Oroxylum indicum ; Escherichia coli ; Diffusion method .
Abstrak. Bungli ( Oroxylum indicum ) telah digunakan secara turun-temurun di Asia sebagai obat tradisional. Bagian  biji  dari  bungli  biasa  digunakan  sebagai  obat  herbal  untuk  mengatasi  tifus,  batuk,  hipertensi,  panas dalam, demam dan diare. Kandungan senyawa aktif pada tanaman ini dikenal memiliki aktivitas antiinflamasi, antirematik, antijamur dan antibakteri. Penelitian kami terhadap ekstrak metanol biji buah bungli menunjukkan adanya potensi dalam menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli penyebab diare. Sampel ekstrak biji buah bungli konsentrasi 25% menunjukkan zona hambat dengan diamater 9,22 mm, sedangkan pada konsentrasi 50%  diameternya  11,16  mm  dan  75%  diameternya  12,88  mm.  Ukuran  ini  memang  lebih  kecil  dari kloramfenikol  (26  mm),  namun  potensi  ini  dapat  lebih  besar  jika  ekstraksi  dilakukan  lebih  intensif  untuk menarik  senyawa aktif, konsentrasi  sampel dinaikkan, serta menggunakan bagian atau usia tanaman dengan kandungan senyawa aktif paling tinggi; sehingga tanaman bungli diharapkan dapat menjadi alternatif dalam mengatasi infeksi Escherichia coli .
Kata Kunci: Oroxylum indicum ; Escherichia coli ; Metode difusi.

## 1. Latar Belakang
Indonesia  mempunyai  ribuan  jenis  tanaman  yang  harus  dilestarikan  dan dimanfaatkan  dengan  baik.  Sebagian  besar  dari  tanaman  tersebut  dapat  dimanfaatkan sebagai tanaman obat (Anggita, Abdi and Desiani, 2018). Tanaman obat adalah tanaman yang memiliki khasiat obat pada bagian-bagian tertentu baik akar, kulit akar, kulit batang, daun, buah, biji dan hasil ekstraksinya. Salah satunya adalah bungli ( Oroxylum indicum ). Analisis  fitokimia  pada  bagian-bagian  bungli  ( Oroxylum  indicum )  mengungkapkan adanya flavonoid, alkaloid, saponin, dan tanin (Harminder et al., 2011; Samatha & Swamy, 2012). Ekstrak etanol dari buah bungli yang dikumpulkan pada konsentrasi 1000 mg/mL menunjukkan aktivitas antibakteri menengah terhadap Staphylococcus intermedius dengan zona hambat 15,11 mm dan efek penghambatan moderat pada S. suis dengan zona hambat
Jurnal Teknologi Kesehatan Borneo 2020 . Vol. 2 ,No. 1
14,39 mm (Sithisarn et al., 2016). Flavonoid, alkaloid dan saponin pada tanaman dapat juga ditarik oleh metanol. Metanol merupakan pelarut yang bersifat universal sehingga dapat melarutkan analit yang bersifat polar dan nonpolar. Metanol mampu menarik lebih banyak jumlah  metabolit  sekunder  yaitu  senyawa  fenolik  dan  tanin  (Padmasari  et  al.,  2013). Metabolit-metabolit sekunder ini memiliki efek antimikroba terhadap bakteri Gram positif dan  Gram  negatif,  salah  satu  yang  paling  populer  dan  sering  menyebabkan  masalah kesehatan di Indonesia adalah Escherichia coli . Escherichia  coli ( E.  coli )  adalah  bakteri  Gram  negatif  berbentuk  batang  yang  tidak membentuk spora dan merupakan flora normal usus. Meskipun demikian, beberapa jenis Escherichia  coli dapat  bersifat  patogen,  yaitu  serotipe  yang  masuk  dalam  golongan Escherichia coli enterophatogenic (EPEC), Escherichia coli enteroinvasive (EIEC), Escherichia coli enterotoxigenic (ETEC) ,  Escherichia  coli  enteroaggregative (EAEC)  dan Escherichia  coli enterohaemoragic (EHEC).  Berbagai  penelitian  menunjukkan,  beberapa  galur  atau strain bakteri Escherichia  coli dapat  menyebabkan  wabah  diare  atau  muntaber,  terutama  pada anak-anak  (Kuswiyanto,  2017).  Penyakit  diare  ( gastroenteritis )  adalah  penyakit  yang ditandai  dengan  perubahan  konsistensi  tinja  (menjadi  cair)  disertai  dengan  darah  atau lendir dan frekuensi defekasi lebih dari biasanya (>3 kali per hari) (Subakti, 2015). Sifat E. coli yang  oportunis  ini  menyebabkan  infeksinya  sewaktu-waktu  dapat  menimbulkan masalah  kesehatan  bahkan  menjadi  wabah.  Di  sisi  lain  penggunaan  antibiotika  untuk mengeliminasi  infeksi  tidak  selalu  berjalan  baik  karena  berbagai  masalah  dalam  hal ketersediaan, distribusi, harga, alergi maupun resistensi.
Oleh karena itu perlu dicarikan alternatif bahan alami yang mudah didapat, murah, minim  efek  samping  namun  tetap  efektif  untuk  mengurangi  infeksi  bakteri E.  coli .  Data mengenai  potensi  bungli  sebagai  bahan  alami  antibakteri  masih  sedikit  sehingga  perlu dilakukan penelitian menggunakan ekstrak metanol biji buah bungli untuk menghambat pertumbuhan bakteri E. coli .

## 2.  Metode
2.1. Desain Penelitian
Penelitian ini bersifat eksperimental untuk menguji apakah ekstrak metanol biji buah bungli dapat menghambat pertumbuhan E. coli secara in vitro. Untuk itu dibuat tiga kelompok perlakuan masing-masing ekstrak metanol konsentrasi 25% (A), 50% (B)  dan  75%  (C)  dengan  replikasi  sebanyak  sembilan  kali  untuk  tiap  kelompok. Digunakan antibiotik kloramfenikol sebagai kontrol. Uji laboratorium menggunakan metode difusi Kirby-Bauer untuk mendapatkan ukuran diameter zona hambat dan hasilnya dideskripsikan perbandingan sampel dengan kontrol.

## 2.2. Populasi dan Sampel
Biji buah bungli didapat dari Kecamatan Senakin, Kabupaten Landak, Propinsi Kalimantan  Barat  karena  lokasi  ini  memiliki  kondisi  tanaman  yang  subur  dan buahnya  banyak  sehingga  dianggap  layak  dan  cukup  untuk  dijadikan  sampel penelitian.  Biji  buah  bungli  yang  digunakan  masih  dalam  kondisi  segar,  berusia sedang  hingga  matang,  tidak  rusak.  Diperlukan  1-2  kg  biji  buah  bungli  untuk mendapatkan  ekstrak  metanol  yang  cukup  sebagai  sampel.  Ekstrak  metanol diencerkan  menjadi  konsentrasi  25%  (A),  50%  (B)  dan  75%  (C).  Masing-masing konsentrasi direplikasi sebanyak 9 kali dengan teknik pengambilan secara purposif. Sebagai kontrol adalah kloramfenikol yang sudah disiapkan dalam bentuk cakram antibiotik (K).
Jurnal Teknologi Kesehatan Borneo 2020 . Vol. 2 ,No. 1

## 2.3. Preparasi dan Perlakuan Sampel
Buah  bungli  yang  sudah  dicuci  bersih  kemudian  diekstrak  dengan  metode maserasi  sehingga  cukup  untuk  diencerkan  menjadi  konsentrasi  25,  50  dan  75% dengan masing-masing replikasi sebanyak 9 kali. Ekstrak yang didapat ini pertama- tama diuji saring fitokimia untuk membuktikan kandungan senyawa aktif alkaloid, tanin, flavonoid dan saponin. Selain itu, bakteri E. coli yang diuji juga diidentifikasi untuk  memastikan  bahwa  bakteri  tidak  kehilangan  sifat  biokimianya  selama penyimpanan dan persiapan.
Sampel  diuji  dengan  metode  difusi  Kirby-Bauer  yang  terdiri  dari  beberapa tahap,  yaitu:  (1)  persiapan  kertas  cakram,  dengan  cara  meresapkan  ekstrak  dari masing-masing  konsentrasi  dan  replikasi  ke  dalam  kertas  cakram  kosong berdiameter  6  mm,  (2)  pembuatan  media  Mueller-Hinton  agar,  (3)  pembuatan suspensi  bakteri  dengan  kekeruhan  yang  setara  dengan  standar  McFarland  0,5 sehingga  jumlah  bakteri  diestimasi  1,5x10 8 CFU/mL,  (4)  penanaman  bakteri  pada media  menggunakan  swab  steril  dan  diratakan  ke  seluruh  permukaan  media,  (5) penempelan cakram antimikroba, (6) inkubasi pada suhu 37 o C selama 24 jam, dan (7) pembacaan  zona  hambat  pertumbuhan  bakteri  berdasarkan  tabel  interpretasi antibiotik kontrol.
2.4. Analisis Data
Hasil uji Kirby-Bauer didapatkan diameter zona hambat pertumbuhan bakteri dan dilaporkan secara kuantitatif dalam satuan milimeter (mm). Dari 9 kali replikasi pada masing-masing konsentrasi dihitung rata-rata diameter zona hambatnya. Hasil diinterpretasikan sebagai “resisten” jika diameter zona hambat 12 mm, “intermediet” jika 13- 17 mm dan “sensitif” jika 18 mm (CLSI, 2021).

## 3. Hasil
Uji saring fitokimia menemukan senyawa aktif yang terdapat di dalam ekstrak biji buah bungli adalah alkaloid dan tanin, sedangkan senyawa flavonoid dan saponin tidak ditemukan. Dari uji difusi Kirby-Bauer didapatkan diameter zona hambat yang bervariasi. Konsentrasi 25% memiliki zona hambat yang paling rendah (rata-rata 9,2 mm), diikuti 50% (11,16 mm) dan paling besar adalah 75% (12,88 mm), sedangkan diameter zona hambat dari antibiotik kloramfenikol adalah 26 mm (Tabel 1).
Jika diinterpretasikan maka bakteri E. coli yang ditanamkan pada media berisi ekstrak metanol  biji  buah  bungli  konsentrasi  25%  bersifat  resisten,  50%  resisten  dan  75% intermediet, sedangkan terhadap kontrol adalah resisten. Tidak ada satupun sampel yang dapat diinterpretasikan sensitif terhadap sampel.

## 4. Pembahasan
Bahan  aktif  yang  terdapat  pada  ekstrak  metanol  biji  buah  bungli  berdasarkan  uji saring  fitokimia  adalah  alkaloid  dan  tanin.  Kandungan  senyawa  ini  di  dalam  ekstrak sejalan  dengan  konsentrasi  sampel  yang  diperiksa,  terlihat  dari  ukuran  diameter  zona hambat  yang  linier.  Mekanisme  kerja  alkaloid  sebagai  antibakteri  yaitu  dengan  cara mengganggu  komponen  penyusun  peptidoglikan  pada  sel  bakteri,  sehingga  lapisan dinding  sel  tidak  terbentuk  secara  utuh  dan  menyebabkan  kematian  sel  tersebut. Mekanisme  kerja  tanin  sebagai  antibakteri  yaitu  dengan  cara  mempresipitasi  protein (Rijayanti, 2014). Senyawa aktif lain yaitu flavonoid dan saponin tidak ditemukan di dalam sampel  berdasarkan  uji  saring  fitokimia.  Ketiadaan  flavonoid  di  dalam  sampel  dapat
Jurnal Teknologi Kesehatan Borneo 2020 . Vol. 2 ,No. 1
dipengaruhi oleh sifatnya yang kurang polar sehingga tidak dapat ditarik oleh metanol, sedangkan keberadaan saponin dapat berbeda-beda dari tiap individu tanaman tergantung lokasi,  iklim  dan  usia  tanaman.  Tidak  adanya  kedua  senyawa  aktif  ini  menyebabkan potensi  ekstrak  biji  buah  bungli  dalam  menghambat  pertumbuhan E.  coli menjadi  tidak maksimal,  dibuktikan  dengan  adanya  selisih  ukuran  diameter  zona  hambat  dari konsentrasi uji terbesar, dengan kontrol kloramfenikol sebesar 12,5 mm.
Tabel  1.  Diameter  zona  hambat  pertumbuhan E.  coli dengan  ekstrak  metanol  biji  buah bungli
Konsentrasi (%) Replikasi Diameter Zona Hambat (mm) Rata-rata Interpretasi 25 1 2 3 4
5 6
7 8 9 9,5 9 9,5 9,5 10 8,5 9 9 9
9,22 Resisten 50 1 2 3
4 5
6
7 8 9 11 11 10,5 11 12 11,5 11 10,5
12
11,16 Resisten
75
1 2 3 4 5 6 7 8 9 13,5 13 13 12 13,5 13 12 12,5 13,5 12,88 Intermediet K 26 Sensitif
Di  sisi  lain,  bakteri  mengembangkan  suatu  mekanisme  dalam  mengatasi  kinerja antimikroba.  Mekanisme  resistensi  antimikroba  meliputi  sistem  ekspor  aktif  dalam membran  bakteri,  pencegahan  masuknya  antimikroba  ke  dalam  sel  bakteri  patogen, penghancuran  enzimatik  agen  antimikroba,  produksi  biofilm  tebal,  target  antimikroba yang dimodifikasi, dan tempat kerja bakteri yang dilindungi dari antimikroba  (Varela et al., 2021).
Meskipun terdapat selisih diameter zona hambat yang besar dengan kontrol, ekstrak biji  buah  bungli  masih  memiliki  kemampuan  untuk  menghambat  pertumbuhan  bakteri yang  terlihat dari  munculnya  zona  hambat  dalam  penelitian,  bahkan  mencapai kategori
Jurnal Teknologi Kesehatan Borneo 2020 . Vol. 2 ,No. 1
intermediet. Ukuran diameter zona hambat ini diyakini masih dapat dimaksimalkan jika kandungan  bahan  aktifnya  lengkap,  proses  ekstraksi  dilakukan  lebih  intensif  sehingga bahan  aktif  dapat  ditarik  secara  maksimal,  konsentrasi  ekstrak  diperbesar  hingga  100%, menggunakan tanaman dengan usia yang kandungan bahan aktifnya tinggi, juag dengan menggunakan bagian lain dari tanaman bungli secara terpisah maupun Bersama-sama.

## 5. Kesimpulan
Penelitian ini berhasil memberikan data tentang diameter zona hambat ekstrak biji buah  bungli  terhadap  pertumbuhan  bakteri Escherichia  coli dan  menjelaskan  bagaimana kekuatannya  dibandingkan  antibiotik  kloramfenikol.  Meskipun  diameter  zona  hambat ketiga kelompok sampel lebih kecil dibanding kontrol namun munculnya diameter zona hambat  membuktikan  bahwa  senyawa  aktif  di  dalam  sampel,  yaitu  alkaloid  dan  tanin, bekerja dengan baik sehingga ekstrak biji buah bungli dianggap memiliki potensi untuk menjadi alternatif dalam mengatasi infeksi E. coli . Penelitian selanjutnya diharapkan dapat menemukan  potensi  hambatan  yang  lebih  baik  misalnya  dengan  proses  ekstraksi  yang lebih intensif, menaikkan konsentrasi ekstrak dan menggunakan bagian tanaman atau usia tanaman yang memiliki kandungan senyawa aktif lebih tinggi.

## Daftar Pustaka
CLSI. (2021). M100Ed31 | Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing, 31st Edition . https://clsi.org/standards/products/microbiology/documents/m100/
Harminder, Singh, V., & Chaudhary, A. (2011). A Review on the Taxonomy, Ethnobotany, Chemistry  and  Pharmacology  of  Oroxylum  indicum  Vent. Indian  Journal  of Pharmaceutical Sciences , 73 (5), 483. https://doi.org/10.4103/0250-474X.98981
Kuswiyanto. (2017). Bakteriologi 2 . PT Gramedia. Padmasari, P. D., Astuti, K. W., & Warditiani, N. K. (2013). Skrining fitokimia ekstrak etanol 70%  rimpang  bangle  (Zingiber  purpureum  Roxb.) .  Jurnal  Farmasi  Udayana. https://doi.org/https://doi.org/10.24843/JFU.2021.v10.i01
Rijayanti, R. P. (2014). Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Mangga Bacang (Mangifera Foetida  L.)  Terhadap  Staphylococcus  Aureus  Secara  in  Vitro  -  Neliti .  Jurnal  Mahasiswa Fakultas Kedokteran Untan. https://www.neliti.com/publications/194452/uji-aktivitas- antibakteri-ekstrak-etanol-daun-mangga-bacang-mangifera-foetida-l
Samatha, T.,  &  Swamy,  N. R.  (2012).  Quantification  of  total  phenolic  and  total  flavonoid contents in extracts of Oroxylum indicum L.Kurz. Asian Journal of Pharmaceutical and Clinical Research .
Sithisarn,  P.,  Nantateerapong,  P.,  Rojsanga,  P.,  &  Sithisarn,  P.  (2016).  Screening  for Antibacterial  and  Antioxidant  Activities  and  Phytochemical  Analysis  of  Oroxylum indicum Fruit Extracts.
Molecules (Basel, Switzerland) , 21 (4). https://doi.org/10.3390/MOLECULES21040446
Subakti,  F.  A.  (2015).  Pengaruh  Pengetahuan,  Perilaku  Sehat  dan  Sanitasi  Lingkungan Terhadap  Kejadian  Diare  Akut  di  Kelurahan  Tlogopojok  dan  Kelurahan  Sidorukun Kecamatan Gresik
Kabupaten
Gresik. Swara Bhumi , 1 (1).
https://jurnalmahasiswa.unesa.ac.id/index.php/swara-bhumi/article/view/10556
Varela, M. F., Stephen, J., Lekshmi, M., Ojha, M., Wenzel, N., Sanford, L. M., Hernandez, A. J., Parvathi, A., & Kumar, S. H. (2021). Bacterial Resistance to Antimicrobial Agents.
Antibiotics 2021, Vol. 10, Page 593 , 10 (5), 593.
https://doi.org/10.3390/ANTIBIOTICS10050593