Evaluasi Aktivitas Antioksidan dan Perubahan Metabolit Sekunder Mayor Temulawak ( Curcuma xanthorriza ) Pada Umur Rimpang Yang Berbeda
Edy Djauhari Purwakusumah 1,2 , Lusi Royani 1 , Mohamad Rafi 2,3*
1 Departemen Biokimia, Institut Pertanian Bogor, Indonesia
2 Pusat Studi Biofarmaka, LPPM Institut Pertanian Bogor, Indonesia
3 Departemen Kimia, Institut Pertanian Bogor, Indonesia

## Abstrak
Penelitian  ini  dilakukan  untuk  mengevaluasi  aktivitas  antioksidan  dan  perubahan metabolit  sekunder  mayor  temulawak  ( C.  xanthorrhiza )  pada  umur  rimpang  yang berbeda.  Aktivitas  antioksidan  ditentukan  menggunakan  tiga  metode  yaitu  DPPH (1,1-difenil-1-pikrilhidrazil),  FRAP  ( ferric  reducing  antioxidant  power ),  dan  CUPRAC ( cupric  ion  reducing  antioxidant  capacity ),  sedangkan  kadar  kurkuminoid  dan xantorizol ditentukan dengan metode  KCKT. Hasil  pengukuran aktivitas antioksidan, kadar  kurkuminoid  dan  xantorizol  menunjukkan  semakin  meningkat  dengan bertambahnya  umur  rimpang  temulawak.  Analisis  korelasi  antara  aktivitas antioksidan  dan  kadar  kurkuminoid  serta  xantorizoldiperoleh  bahwa  kapasitas antioksidan yang diukur dengan metode DPPH dan FRAP mempunyai korelasi positif dengan  nilai  sebesar  0.757    r    0.996  dan  0.522    r    0.976  berturut-turut, sedangkan metode CUPRAC berkorelasi tinggi dengan jumlah rendemen (r = 0.986). Analisis  spektrum  IR  pada  sampel  rimpang  temulawak  memberikan  profil  yang identik  dengan  perbedaan  hanya  pada  nilai  absorbansnya.  Rimpang  temulawak dengan umur 9 bulan memiliki detail spektrum IR yang lebih jelas dan nilai absorbans yang  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  umur  rimpang  7  dan  8  bulan.  Evaluasi  yang dilakukan  dapat  memberikan  informasi  mengenai  mutu  rimpang  temulawak berdasarkan masa tanamnya.

## Pendahuluan
Temulawak  ( Curcuma  xanthorrhiza Roxb) merupakan  tanaman  asli  Indonesia yang  mempunyai  spektrum  aktivitas  biologis  yang  luas  seperti  antibakteri, antiinflamasi, antioksidan, antitumor, dan hepatoprotektif (Itokawa et al . 1985; Ozaki 1990;  Masuda et  al .  1992;  Lin et  al .  1996;  Hwang et  al .  2000).  Metabolit  sekunder mayor  yang  berperan  dalam  berbagai  efek  farmakologi  yang  ditimbulkan  oleh temulawak  yaitu  kurkuminoid  dan  xantorizol  (Itokawa et  al. 2002).  Kurkuminoid merupakan    kelompok    senyawa    diarilheptanoid    yang    bertanggung    jawab
Penulis
Afiliasi

## Kata Kunci
 Temulawak
 C. xanthorriza
 Aktivitas antioksidan
 Kurkuminoid
 Xanthorizol
 Spektrum IR
Diterima 25 Juni 2015
Direvisi 18 Agustus 2015
Disetujui 22 Februari 2016

## *Penulis korespondensi
Mohamad Rafi Pusat Studi Biofarmaka LPPM Institut Pertanian Bogor Jl. Taman Kencana No. 3 Bogor, Indonesia 16128 Tel. +62-251 8373561 mra@ipb.ac.id
menimbulkan  warna  kuning  hingga  jingga  pada rimpang  temulawak  (Rafi et  al .  2011)  sedangkan xantorizol  termasuk  ke  dalam  kelas  senyawa seskuiterpenoid.  Fitur  komposisi  senyawa  dapat berbeda  pada  spesies  yang  sama  bergantung  pada umur  tumbuhan,  cara  budidaya,  kondisi  lingkungan tempat  tumbuh  (asal  geografis),  waktu  panen,  dan proses  pasca  panen  maupun  penyimpanannya (Alaerts et  al .  2010;  Sahoo et  al .  2010).  Varisasi  ini dapat  menyebabkan  inkonsistensi  dalam  hal keamanan,  efikasi,  dan  stabilitas  produk  obat herbal.Hal  ini  dibuktikan  oleh  Adzkiya  (2006)  dan Nurcholis  (2006)  yang  menyatakan  bahwa  umur tanaman  berpengaruh  secara  signifikan  terhadap kandungan kurkuminoid maupun xantorizol temulawak.  Secara  umum  temulawak  dipanen setelah  mencapai  umur  7  –  8  bulan  atau  setelah daunnya menguning dan kering.
Untuk  mengetahui  perubahan  komposisi senyawa  maupun  aktivitas  biologis  akibat  umur tumbuhan yang berbeda memerlukan suatu evaluasi terhadap  kadar  senyawa  metabolit  sekunder  mayor yang  aktif  dan  aktivitas  biologisnya.  Pemrofilan komposisi senyawa  metabolit sekunder dan korelasinya dengan suatu aktivitas biologis memungkinkan  secara  nyata  penyediaan  informasi fungsional dengan memberikan gambaran mengenai keadaan  biokimia  suatu  tumbuhan  sehingga  dapat digunakan  untuk  pemantauan  kualitas  bahan  baku obat  herbal. Aktivitas  yang  akan  dikorelasikan dengan kurkuminoid dan xantorizol temulawak yaitu antioksidan  karena  aktivitas  biologis  ini  memiliki spektrum  aktivitas  yang  luas  karena  umumnya penyakit  bersumber  pada  radikal  bebas  yang terbentuk  pada  tubuh  makhluk  hidup. Pada penelitian  ini,  penulis  telah  melakukan  evaluasi aktivitas  antioksidan  menggunakan  metode  DPPH, FRAP,  dan  CUPRAC,  pengukuran  kadar  kurkuminoid dan  xantorizol  serta  korelasi  antara  aktivitas antioksidan dengan kadar kurkuminoid dan xantorizol.  Sebagai  tambahan  informasi,  evaluasi juga  dilakukan  dengan  pemrofilan  keseluruhan senyawa yang dikandung oleh temulawak menggunakan  spektrum  inframerah  (IR).  Melalui hasil  penelitian  ini  diharapkan  menjadi  inisiasi pengembangan  metode  standardisasi  bahan  baku obat  menggunakan  konsep  menyeluruh  yaitu
mengevaluasi  komposisi  senyawa  bioaktif  dan aktivitas biologisnya.

## Metode Penelitian

## Alat dan Bahan
Peralatan  yang  digunakan  untuk  penelitian  ini yaitu  kromatografi  cair  kinerja  tinggi  LaChrom  Elite dengan  detektor  UV-Vis  L-2420  (Hitachi,  Jepang), spektrofotometer  UV-Vis  U-2800  yang  dilengkapi dengan  kuvet  kuarsa  10  mm  dan  dioperasikan dengan  peranti  lunak  UV  solution  versi  2.0  (Hitachi, Jepang), spektrofotometer inframerah tertransformasi  Fourier  Tensor  37  dengan  detektor triglisina  sulfat  terdeuterasi  yang  dikontrol  dengan peranti  lunak  Opus  versi  4.2  (Bruker,  Jerman),  dan evaporator putar R-114 (Buchi, Swiss).
Bahan  yang  digunakan  adalah  rimpang temulawak umur 7, 8 dan 9 bulan yang diperoleh dari Tembalang,  Semarang,  Jawa  Tengah.  Vucher spesimen  didepositkan  di  Pusat  Studi  Biofarmaka LPPM  IPB.  Pelarut  pengekstrak  menggunakan  etanol teknis sedangkan untuk fase gerak KCKT menggunakan  pelarut  dengan  tingkat  HPLC  (Merck, Darmstadt, Jerman). Bahan lain yang digunakan yaitu etanol  p.a,  metanol  p.a  yang  dibeli  dari  Merck (Darmstadt,  Jerman),  kupri  klorida  dua  hidrat, neokuproin,  ammonium  asetat,  feri  klorida  enam hidrat,  2,4,6-tripiridil-s-triazina  (TPTZ),  asam  klorida, asam  asetat,  difenilpikrilhidrazina,  troloks,  asam asetat  yang  dibeli  dari  Sigma-Aldrich  (Palo  Alto, Amerika  Serikat),  senyawa  standar  kurkumin, demetoksi  kurkumin,  dan  bisdemetoksi  kurkumin diperoleh  dari  Chromadex  (Santa  Ana,  Amerika Serikat) sedangkan untuk xantorizol didonasikan oleh Prof J.K. Hwang (Yonsei University, Korea Selatan).

## Preparasi dan ekstraksi sampel
Rimpang  temulawak  segar  dicuci  bersih, kemudian  diiris  tipis  dengan  ketebalan  ±  5  mm. Setelah  itu  sampel  dikeringkan  dalam  oven  hingga kering dengan suhu oven yang digunakan sebesar 40 °C.  Setelah  kering,  sampel  dibuat  menjadi  serbuk dengan ukuran 100 mesh. Ekstraksi sampel dilakukan menggunakan  cara  maserasi  selama  24  jam  dengan sesekali diaduk. Rasio perbandingan bobot sampel
Djauhari et al. dan  pelarut  pengekstrak  sebesar  1:10.  Ekstrak dipekatkan  dengan  penguap  vakum  putar  yang kemudian  dikeringkan  menggunakan  pengering bekuan.

## Aktivitas antioksidan dengan metode DPPH
Metode  DPPH  yang  digunakan  mengacu kepada Blois (1958) yang telah dimodifikasi oleh Aqil et al . (2006). Larutan DPPH disiapkan dalam metanol dengan  konsentrasi  0.1  mM.  Sebanyak  100  µL larutan  ekstrak  dengan  konsentrasi  100  g/mL ditambahkan  ke  dalam  2  mL  larutan  DPPH  0.1  mM dalam metanol.Semua larutan dihomogenkan dengan vortex  yang  kemudian  didiamkan  selama  30  menit pada  suhu  ruang  yang  terlindung  dari  cahaya. Selanjutnya  absorbans  larutan  tersebut  diukur  pada panjang gelombang 517 nm. Blangko yang digunakan adalah  pereaksi  tanpa  penambahan  ekstrak.  Troloks dengan  rentang  nilai  konsentrasi  antara  20-400  M digunakan  dalam  membuat  kurva  kalibrasi  dalam menentukan  kapasitas  antioksidan  yang  dinyatakan dalam µmol ekuivalen troloks/g ekstrak. Pengukurannya dilakukan tiga kali ulangan.

## Aktivitas antioksidan dengan metode FRAP
Metode  FRAP  yang  digunakan  mengacu kepada Benzie & Strain (1996). Pereaksi FRAP dibuat dengan  mencampurkan  bufer  asetat  300  mM  (pH 3.6), TPTZ 10 mM dalam 40 ml dan 20 mM feri klorida enam  hidrat  dengan  rasio  10:1:1.  Sebanyak  3  mL reagen  FRAP  disiapkan  dalam  tabung  reaksi, kemudian ditambahkan 100 µL sampel yang memiliki konsentrasi  250  g/mL  dan  300  µL  akuades. Selanjutnya  campuran  tersebut  dihomogenkan dengan vorteks dan didiamkan selama 30 menit pada suhu  37  °C  selama  30  menit.Setelah  itu,  semua larutan  uji  dibaca  absorbansnya  pada  panjang gelombang  593  nm.  Blangko  yang  digunakan  adalah pereaksi tanpa penambahan ekstrak. Troloks dengan rentang  nilai  konsentrasi  antara  100-600  M digunakan  dalam  membuat  kurva  kalibrasi  dalam menentukan  kapasitas  antioksidan  yang  dinyatakan dalam µmol ekuivalen troloks/g ekstrak. Pengukurannya dilakukan tiga kali ulangan.

## Aktivitas antioksidan dengan metode CUPRAC
Prosedur  pengukuran  aktivitas  antioksidan dengan metode CUPRAC mengacu kepada Apak et al.
(2004). Sebanyak 1 mL larutan kupriklorida 0.001 M, 1  mL  larutan  neokuproin  (dalam  etanol)  0.0075  M, dan  1  mL  larutan  buffer  ammonium  asetat  pH  7 ditambahkan  ke  dalam  0.1  mL  akuades  dan  1  mL larutan ekstrak yang memiliki konsentrasi 100  g/mL. Campuran kemudian di homogenkan dengan vorteks dan  di  diamkan  selama  1  jam  tanpa  terkena  cahaya pada  suhu  kamar.  Selanjutnya  larutan  diukur absorbansnya  pada  panjang  gelombang  457  nm. Blangko  yang  digunakan  adalah  pereaksi  tanpa penambahan  ekstrak.  Troloks  dengan  rentang  nilai konsentrasi  antara  10-90  M  digunakan  dalam membuat  kurva  kalibrasi  dalam  menentukan kapasitas  antioksidan  yang  dinyatakan  dalam  µmol ekuivalen troloks/g ekstrak. Pengukurannya dilakukan tiga kali ulangan.

## Penentuan kadar kurkuminoid
Metode  penentuan  kadar  kurkuminoid  yang digunakan  mengacu  kepada  metode  yang  telah dijabarkan  oleh  Jayaprakasha et  al .  (2002) menggunakan  KCKT.  Sistem  KCKT  yang  digunakan yaitu: Kolom C18 (300 x 4.6 mm id) sebagai fase diam dan  campuran  asetonitril,  asam  asetat  2%  dan metanol dengan elusi gradien sebagai fase gerak. Laju alir  fase  gerak  yang  digunakan  sebesar  1  mL/menit, volume  injeksi  sampel  sebanyak  20  µL,  dan  deteksi menggunakan  detektor  UV-Vis  pada  panjang gelombang  425  nm.  Kurva  kalibrasi  untuk  analisis kuantitatif  kurkuminoid  dibuat  dengan  kisaran konsentrasi sebesar 0.25-1.00  g/mL. Larutan ekstrak dan  standar  disaring  menggunakan  filter  0.2  µm sebelum  diinjeksikan  ke  dalam  KCKT.  Pengukuran kadar dilakukan tiga kali ulangan.

## Penentuan kadar xantorizol
Metode  penentuan  kadar  xantorizol  yang digunakan mengacu kepada metode yang dikembangkan oleh LG Company menggunakan KCKT. Metode  ini  termasuk  ke  dalam  paten  yang  dimiliki oleh  LG  Company  sehingga  tidak  dapat  dituliskan detailnya  dalam  tulisan  ini.  Sistem  KCKT  yang digunakan  yaitu:  Kolom  C18  sebagai  fase  diam  dan campuran  larutan  asam  fosfat  dan  metanol  dengan elusi gradien sebagai fase gerak. Laju alir fase gerak yang  digunakan  sebesar  1  mL/menit  dan  deteksi menggunakan detektor  UV-Vis.  Kurva kalibrasi untuk analisis  kuantitatif  xantorizol  dibuat  dengan  kisaran
konsentrasi  sebesar  50-400  g/mL.  Larutan  ekstrak dan  standar  disaring  menggunakan  filter  0.2  µm sebelum  diinjeksikan  ke  dalam  KCKT.  Pengukuran kadar dilakukan tiga kali ulangan.

## Pembuatan spektrum IR
Sebanyak  ±20mg  ekstrak  rimpang  temulawak dicampurkan  dengan  180  mg  KBr  untuk  dijadikan pelet. Pelet dibuat dengan menggunakan hand press Shimadzu  dengan  tekanan  8  kN  selama  15  menit. Tablet  sampel  kemudian  ditempatkan  dalam kompartemen  sample  pada  spektrofotometer  FTIR. Spektrum  IR  dibuat  pada  daerah  4000-400  cm -1 dengan jumlah payar 32 menit dan resolusi 4 cm -1 .
Hasil dan Pembahasan
Rendemen, aktivitas antioksidan, kadar kurkuminoid, dan xantorizol
Ektraksi  metabolit  sekunder  dalam  rimpang temulawak dalam penelitian ini menggunakan etanol sebagai  pelarut  dengan  teknik  maserasi.Rendemen ekstrak  temulawak  yang  diperoleh  berkisar  antara 9.09-10.605%  (Tabel  1).  Nilai  rendemen  ini menunjukkan  banyaknya  komponen  yang  terekstrak selama proses ekstraksi.
Rimpang  yang  berumur  8  bulan  berdasarkan nilai  rendemennya  mengandung  senyawa  metabolit dengan jumlah lebih besar dibanding umur rimpang 7 dan  9  bulan.  Tiga  metode  digunakan  dalam pengukuran  aktivitas  antioksidan  temulawak  yang berbeda  umur  tanamnya  yaitu  DPPH,  FRAP,  dan CUPRAC.  Ketiga  metode  ini  mempunyai  karakteristik masing-masing  dan  telah  umum  digunakan  dalam pengukuran  aktivitas  antioksidan  tumbuhan  dengan mekanisme  reaksi  kimia  yang  mendasarinya  yaitu melalui  transfer  elektron.Metode  DPPH  digunakan
dalam penelitian ini karena merupakan metode yang paling  banyak  digunakan  dalam  mengukur  aktivitas antioksidan  secara in  vitro pada  tumbuhan  obat (Zhou et  al .  2004).  Metode  FRAP  juga  dipilih  untuk digunakan  karena  uji  ini  dapat  digunakan  untuk kuantifikasi  kapasitas  antioksidan  pada  bermacam sistem  biologis  mulai  dari  ekstrak  hingga  senyawa murni  (Katalinic et  al . 2006). Metode CUPRAC  dipilih untuk digunakan karena memiliki beberapa keuntungan  seperti  selektif,  pereaksinya  yang  lebih stabil  dibandingkan  pereaksi  kromogenik  pada metode  pengukuran  aktivitas  antioksidan  lainnya serta  dapat  mengukur  secara  simultan  antioksidan hidrofilik dan lipofilik (Apak et al . 2007). Pengukuran aktivitas  antioksidan  suatu  sampel  dengan  metode yang  berbeda  mungkin  akan  memberikan  hasil  yang acak  sehingga  menjadi  sulit  untuk  dibandingkan  dan dapat  pula  menimbulkan  ketidak  cocokan.  Oleh karena itu, kapasitas antioksidan ketiga metode yang digunakan dinyatakan sebagai ekivalen troloks dalam satuan  milimolar  troloks  per  gram  ekstrak  sampel. Troloks  merupakan  senyawa  analog  vitamin  E  yang larut  dalam  air.  Kapasitas  antioksidan  yang dinyatakan  dalam  ekivalen  troloks  akan  lebih bermakna  dan  terdeskripsikan  dibanding  yang dinyatakan  dalam  persen  inhibisi.  Nilai  aktivitas antioksidan yang dinyatakan sebagai ekivalen troloks akan dibandingkan meskipun metode yang digunakan berbeda,  sedangkan  pada  persen  inhibisi  aktivitas antioksidan  hanya  melihat  persen  hambatan minimum oleh senyawa antioksidan terhadap radikal atau logam radikal.
Aktivitas  antioksidan  dari  temulawak  dengan umur 7, 8, dan 9 bulan menggunakan tiga metode di atas  menghasilkan  nilai  yang  bervariasi  (Tabel  1). Variasi  nilai  antioksidan  ini  disebabkan  oleh berbedanya konsentrasi  senyawa-senyawa metabolit
Tabel  1. Rerata  nilai  aktivitas  antioksidan,  kadar  kurkuminoid  dan  xantorizol  temulawak  pada  umur rimpang berbeda
Umur rimpang (bulan)  Rendemen (%) Metode (µmol troloks/g ekstrak) Kurkumin (%b/b)* Demetoksi kurkumin (%b/b)* Xantorizol (%b/b)* DPPH FRAP  CUPRAC 7 9.12 11.143  5.660 42.794 11.711 7.613 8.232 8 10.61 13.815  6.776 57.746 15.980 10.031 8.945 9 9.09 14.105  6.521 45.225 18.103 10.025 10.990
Keterangan: * berdasarkan bobot kering sampel
sekunder  yang  ada  dalam  temulawak  pada  umur rimpang  yang  berbeda.  Aktivitas  antioksidan cenderung  meningkat  dengan  bertambahnya  umur temulawak  kecuali  saat  menggunakan  metode CUPRAC  dimana  sampel  dengan  umur  8  bulan memiliki  aktivitas  antioksidan  tertinggi.  senyawa bioaktif  mayor  yang  terdapat  dalam  temulawak. Kurkuminoid  suatu  senyawa  diaril  heptanoid  dan xantorizol suatu senyawa seskuiterpenoid merupakan senyawa kurkuminoid yang paling umum terkandung dalam  temulawak  dengan  konsentrasi  yang  besar yaitu  kurkumin  dan  demetoksi  kurkumin  sedangkan untuk  bisdemetoksi  kurkumin  umumnya  terdeteksi dalam  jumlah  yang  kecil.  Untuk  sampel  temulawak yang  digunakan  dalam  penelitian  ini,  puncak bisdemetoksi  kurkumin  tidak  terdeteksi  sehingga kadar kurkuminoid yang dihitung hanya diwakili oleh kurkumin dan demetoksi kurkumin. Kadar kurkuminoid  dan  xantorizol  tertinggi  diperoleh  dari sampel  dengan  umur  rimpang  9  bulan.  Kadar kurkuminoid  dan  xantorizol  menunjukkan  kenaikkan seiring  dengan  bertambahnya  umur  tanaman  (Tabel 1).  Perbedaan  ini  disebabkan  oleh  umur  rimpang yang  berbeda  akan  mempengaruhi  kuantitas kurkuminoid dan xantorizol karena adanya  pengaruh pada  penerimaan  unsur  hara  yang  digunakan  dalam proses biosintesis metabolit sekunder tersebut.

## Korelasi  Antara  Metabolit  Terhadap  Aktivitas Antioksidan
Aktivitas  antioksidan  suatu  sampel  ditentukan oleh  keberadaan  senyawa  oksidan  di  dalamnya.
Untuk  melihatnya  diperlukan  suatu  korelasi  antara jumlah  metabolit  bioaktifnya  dengan  nilai  aktivitas antioksidan  yang  dihasilkan.  Korelasi  antara  kadar kurkuminoid  dan  xantorizol  dengan  metode  DPPH memiliki hubungan korelasi yang tinggi yaitu berkisar antara  0.757 r 0.996.  Nilai  ini  menunjukkan hubungan yang kuat antara jumlah  kurkuminoid dan xantorizol  dengan  aktivitas  antioksidan  sampel.  Hal ini  sesuai  dengan  yang  telah  diketahui  secara  luas bahwa  kurkuminoid  mempunyai  aktivitas  dalam menangkal suatu radikal akibat adanya gugus metoksi yang  telah  tersubstitusi  oleh  hidrogen  pada strukturnya. Gugus inilah yang akan menyumbangkan atom hidrogen saat pengukuran aktivitas antioksidan menggunakan  metode  DPPH.  Korelasi  antara  kadar kurkuminoid  dan  xantorizol  dengan  metode  FRAP nilainya  lebih  rendah  dibanding  metode  DPPH.  Nilai korelasinyaberkisar  antara  0.522    r    0.976.  Pada metode  FRAP,  oksidan  kurkuminoid  lebih  mampu menangkal radikal dalam reaksi redoks dibandingkan xantorizol.  Hal  ini  ditunjukkan  dengan  adanya perbedaan nilai korelasi antara keduanya. Kurkuminoid  lebih  berperan  sebagai  donor  elektron dibandingkan  xantorizol  yang  ditandai  dengan  nilai korelasi yang lebih besar dari 0.9. Nilai korelasi antara kadar kurkuminoid dengan aktivitas antioksidan hasil pengukuran  dengan  metode  DPPH  lebih  besar dibandingkan pengukuran  dengan metode  FRAP. Hal ini  disebabkan  karena  kurkuminoid  lebih  mampu menjerap  radikal  dibandingkan  sebagai  donor elektron  sehingga  nilai  aktivitas  antioksidan  dengan metode DPPH lebih besar dibanding  dengan metode
Tabel 2 .  Hasil korelasi metabolit dengan aktivitas antioksidan ketiga metode
Faktor
pengamatan Rendemen Metabolit Aktivitas Antioksidan Kurkumin Demetoksi kurkumin Xantorizol DPPH FRAP CUPRAC Rendemen 1.000 0.177 0.489 -0.287 0.409 0.665 0.986 Kurkumin 0.177 1.000 0.945 0.892 0.971 0.852 0.337 Demetoksi kurkumin 0.489 0.945 1.000 0.694 0.996 0.976 0.627 Xantorizol -0.287 0.892 0.694 1.000 0.757 0.522 0.125
FRAP.  Korelasi  antara  kadar  kurkuminoid  dan xantorizol  dengan  aktivitas  antioksidan  yang  diukur menggunakan metode CUPRAC menunjukkan hubungan  korelasi  yang  lebih  rendah  dibanding  dua metode sebelumnya yaitu sebesar 0.125   r   0.627. Meskipun  nilai  korelasinya  positif,  nilai  ini  belum mampu  menjelaskan  hubungan  antara  mekanisme reaksi  redoks  pada  metode  CUPRAC  dengan kurkuminoid  maupun  xantorizol.  Metode  CUPRAC menunjukkan hubungan yang sangat erat (r = 0.986) dengan  jumlah  rendemen  pada  taraf  nyata  95% dengan  kata  lain  semakin  tinggi  jumlah  rendeman
semakin  tinggi  pula  aktivitas  antioksidan  pada metode  CUPRAC.  Hal  ini  sesuai  dengan  penelitian Apak  (2004)  yang  mennyatakan  bahwa  metode CUPRAC  mampu  mengukur  semua  komponen antioksidan dalam matriks contoh.

## Analisis spektrum IR
Spektrofotometri  infra  merah  merupakan suatu teknik yang sering digunakan dalam identifikasi golongan  senyawa  kimia.  akan  memberikan  banyak informasi  yang  berguna  untuk  menggambarkan  ciri khas  pada  suatu  sampel.Selain  itu  pula  spektrum  IR
Gambar 1. Spektrum FTIR pada ekstrak rimpang temulawak umur 7 bulan (a), 8 bulan (b) dan 9 bulan (c).
Tabel  3. Dugaan  gugus  fungsi  dan  nilai  absorbans  dari  spektrum  ekstrak  rimpang  temulawak  pada  umur rimpang yang berbeda
Bilangan gelombang (cm -1 ) Dugaan gugus fungsi Absorban 7 bulan 8 bulan 9 bulan 3389-3369 (s) OH 1.02 1.094 1.998 2962-2855 (k) C-H (-CH 2 dan –CH 3 ) 1.922 1.057 2.203 1628 (k) C=C alkena 1.391 1.231 1.425 1602 (k) C=C (aromatik) 1.454 1.274 1.423 1300-1000 (k) C-O 0.772 0.929 1.636 1513-1511 (k-s) N-H 1.411 1.292 1.405
Keterangan: k = kuat; s= sedang; l= lemah.
Djauhari et al. dapat  pula  digunakan  untuk  melihat  perubahan konsentrasi  maupun  profil  metabolit  dari  suatu sampel  tumbuhan.  Spektrum  IR  rimpang  temulawak dengan  umur  yang  berbeda  menunjukkan  profil spektrum  yang  identik  dengan  perbedaan  hanya terlihat  pada  nilai  serapannya  (Gambar  1). Interpretasi  terhadap  spektrum  IR  ekstrak  rimpang temulawak  menunjukkan  adanya  vibrasi  dari beberapa  gugus  fungsi  diantaranya  -OH,  -CH 2 dan  - CH 3 ,  C=C,  C-O,  serta  N-H  (Tabel  3).  Hasil  interpretasi dari  semua  spektrum  memperlihatkan  adanya perubahan metabolit dari ekstrak rimpang temulawak  pada  waktu  tanam  berbeda.  Perbedaan terlihat jelas dari banyaknya puncak yang muncul dan ketajaman  puncak  dari  setiap  ekstrak  yang menunjukkan  gugus  fungsi  dari  suatu  senyawa metabolit.  Puncak  yang  khas  terlihat  dari  ekstrak rimpang umur 9 bulan.

## Kesimpulan
Ekstrak  rimpang  temulawak  dengan  umur rimpang yang berbeda mempunyai aktivitas antioksidan  yang  relatif  meningkat  seiring  umur rimpang yang bertambah kecuali saat diukur dengan menggunakan  metode  CUPRAC.  Hal  yang  sama  juga berlaku pada kadar kurkuminoid dan xantorizol yang kadarnya  semakin  meningkat  dengan  bertambahnya umur  rimpang  temulawak.  Terdapat  korelasi  antara kadar  kurkuminoid  dan  xantorizol  dengan  metode DPPH  maupun  FRAP,  sedangkan  untuk  metode CUPRAC  berkorelasi  dengan  rendemen.  Analisis spektrum IR ekstrak rimpang temulawak memberikan profil  yang  identik  hanya  berbeda  pada  nilai absorbansnya.  Rimpang  temulawak  dengan  umur  9 bulan memiliki detail spektrum IR yang lebih jelas dan nilai  absorbans  yang  lebih  tinggi  dibandingkan dengan umur rimpang 7 dan 8 bulan. Hasil ini dapat memberikan informasi mengenai kualitas bahan baku temulawak  dengan  umur  rimpang  yang  berbeda terhadap  aktivitas  antioksidan  maupun  kadar metabolit mayor bioaktifnya.

## Daftar Pustaka
Adzkiya  MAZ.  2006.  Pola  akumulasi  kurkuminoid rimpang  temulawak  ( Curcuma  xanthorriza Roxb)  pada  berbagai  masa  tanam  dan perlakuan budidaya tanam [skripsi]. Bogor (ID) : Institut Pertanian Bogor.
Alaerts  G,  Dejaegher  B,  Smeyers-Verbeke  J,  Vander Heyden  Y.  2010.  Recent  developments  in chromatographic  fingerprints  from  herbal products:  set-up  and  data  analysis. Comb Chemistry High Throughput Screening . 13: 900- 922.
Apak  R,  Kubilai  GI,  Zyrek  M,  Karademir  SE.  2004.
Novel  total  antioxidant  capacity  index  for dietary poliphenols and vitamin C ang E, using their  cupric  ion  reducing  in  the  presence neocuproine: cuprac method. Journal Agriculture Food Chemistry. 52:7970-7981. Apak  R,  Guclu  K,  Demirata  B,  Ozyurek  M,  Celik  SE,
Bektasoglu B, Berker KI, Ozyurt D.
2007.Comparative  evaluation  of  various  total antioxidant capacity assays applied to phenolic compounds with the CUPRAC assay. Molecules. 12: 1496-1547.
Aqil  F,  Ahmad  I,  Mehmod  Z.  2006.  Antioxodant  and free  radical  scavenging  propreties  of  twelve traditionally  used  Indian medical  plant. Turkey Journal Biology. 30: 177-183
Benzie IFF, Strain JJ. 1996. The ferric reducing ability of plasma (FRAP) as a measure of ”Antioxidant Power”: the FRAP assay. Analytical Biochemistry. 239: 70-76.
Hwang  JK,  Shim  JS,  Pyun  YR.  2000.  Antibacterial activity  of  xanthorrhizol  from  Curcuma xanthorrhiza against oral pathogens.
Fitoterapia . 71: 321-323.
Itokawa H, Shi Q, Akiyama T, Morris-Natschke SL, Lee KH. 2008. Recent advances in the investigations of curcuminoids. Chinese Medicine. 3: 11-23.
Jayaprakasha  GK,  Rao  LMJ  dan  Sakarinah  KK.  2002.
Improved  HPLC  method  for  the  determination of  curcumin,  demethoxy  curcumin  and bisdemethoxy  curcumin. Journal  Agriculture Food Chemistry. 50: 3668-3672
Katalinic  V,  Milos  M,  Kulisic  T,  Jukic  M.  2006.
Screening  of  70  medicinal  plants  extracts  for antioxidant  capacity  and  total  phenolics. Food Chemistry. 94: 550–557.
Lin  SC,  Lin  YH,  Supriyatna  S.  1996.Protective  and Therapeutic Effect of the Indonesian Medicinal Herb Curcuma xanthorrhiza on β-D- Galactosamine induced Liver Damage.
Phytotheraphy Research. 10: 131-135.
Masuda  T,  Isobe  J,  Jitoe  A,  Nakatani  M.  1992. Antioxidative  curcuminoids  from  rhizomes  of Curcuma  xanthorrhiza. Phytochemistry .  31: 3645-3647.
Nurcholis W. 2006. Kandungan xanthorrizol temulawak  ( Curcuma  xanthorriza Roxb)  pada berbagai  cara  budidaya  dan  masa  tanam [skripsi]. Bogor (ID) : Institut Pertanian Bogor. Ozaki  Y. 1990.  Anti-inflammatory effects of Curcuma xanthorrhiza  Roxb,  and  its  active  principle. Chemical Pharmacy Bull , 38: 1045-1048.
Rafi M, Rohaeti E, Miftahudin A, Darusman LK. 2011. Differentiation  of Curcuma  Longa , Curcuma Xanthorrhiza and Zingiber  Cassumunar by  thin layer  chromatography  fingerprint  analysis. Indonesia Journal Chemistry . 11: 71-74.
Sahoo  N,  Manchikanti  P,  Dey  S.  2010.  Herbal  drugs: Standards and regulation. Fitoterapia . 81 : 462- 471.
Zhou  K,  Yu  L.  2004.  Effects  of  extraction  solvent  on the wheat bran antioxidant activity estimation. LWT-Food Science Technology. 37: 717–721.