Pengaruh Pemberian Minyak Hati Ikan Hiu Botol  ( Centrophorus atromarginatus) Terhadap Kolesterol Total Darah Tikus Hiperkolesterolemia
The Influence of  Bottle Sharks Liver Oil ( Centrophorus atromarginatus ) on the Blood Total Cholesterol of hypercholesterolemic Rats
Siti Fatimah 1 * , Muhammad Radifar 1 , Tiara Madanti 1 1 Prodi D3 Analis  Kesehatan STIKes Guna Bangsa Yogyakarta. *Coresponding Author : siti_fatimah@gunabangsa.ac.id

## Abstrak
Kolesterol merupakan bahan semacam lilin dan seperti lemak yang terdapat di jaringan dan  plasma.  Penumpukan  kolesterol  akan  mengakibatkan  aterosklerosis.  Endapan-endapan kolesterol  yang  mengeras  dalam  pembuluh  darah  tersebut  sangat  rapuh  dan  mudah  pecah. Bekuan  darah  dan  penyumbatan  pembuluh  darah  dapat  berakibat  stroke  atau  serangan jantung . Telah  dilakukan penelitian untuk mengetahui pengaruh pemberian  minyak hati ikan hiu botol ( Centrophorus atromarginatus ) terhadap kadar kolesterol total darah tikus hiperkolesterolemia yang diberi pakan lemak tinggi.
Penelitian ini  dilakukan secara eksperimental dengan menggunakan 25 ekor tikus putih jantan  ( Rattus Novergicus, L .), berumur 2-3 bulan dengan berat 150-200 g, yang dibagi dalam 5 kelompok perlakuan secara acak, yaitu  kelompok K1 (Kontrol normal) diberi  pakan standar, kelompok K2 (kontrol positif) diberi pakan lemak tinggi selama 7 hari, sedangkan kelompok P1, P2  dan  P3  diberi  minyak  hati  ikan  hiu  botol  secara  peroral  dengan  dosis  54mg/200gBB/hari, 108mg/200gBB/hari,  216mg/200g  BB/hari.  Setiap  perlakuan  terdiri  dari  5  ekor  tikus  yang dilakukan 3 kali pemeriksaan kadar kolesterol total  dengan metode CHOD-PAP.
Data  yang  diperoleh  dari  pemeriksaan  dianalisis  menggunakan  ANOVA  satu  arah p<0,005  dilanjutkan post  hoct  test .  Hasil  Penelitian  kelompok  P1,  P2,  dan  P3  berbeda bermakna  dengan  K1  (p=0,000).  Kelompok  P1,  P2,    dan  P3  berbeda  bermakna  dengan  K2 (p=0,000).  Minyak  hati  ikan  hiu  botol  dengan    dosis  54mg/200g  BB/hari,  108mg/200g  BB/hari, 216mg/200g  BB/hari  masing-masing  dapat    menurunkan  kadar  kolesterol  sebesar  23%  atau 43,67 mg/dl,  30% atau 55,72 mg/dl, dan  38% atau 70,94 mg/dl.
Kata kunci : hiperkolesterolemia, kolesteol total, minyak hati ikan hiu botol

## Abstract
Cholesterol  is  a  wax-like  ingredient  and  is  like  fat  found  in  tissues  and  plasma. Cholesterol buildup  will cause atherosclerosis. Cholesterol deposits that harden in these blood vessels are very fragile and easily broken. Blood clots and blockage of blood vessels can result in strokes or heart attacks.Research has been conducted to determine the effect of bottle shark liver  oil  ( Centrophorus  atromarginatus )  on  total  cholesterol  levels  of  hypercholesterolemic bloods rats with high fat feed.
This  research  was  carried  out  experimentally  using  25  male  white  rats  (Rattus Novergicus,  L.),  aged  2-3  months  with  a  weight  of  150-200  g,  which  were  divided  into  5 treatment  groups  randomly,  ie  group  K1  (normal  control)  fed  standard,  K2  group  (positive control) was given high fat feed for 7 days, while group P1, P2,  and P3 were given bottle shark liver  oil  orally  with  a  dose  of  54mg  /  200gBB  /  day,  108mg  /  200gBB  /  day,  216mg  /  200g  BB /day. Each treatment consisted of 5 rats which were examined 3 times the total cholesterol level by the CHOD-PAP method.
Data  obtained  from  examinations  were  analyzed  using  one-way  ANOVA  p  <0.005 followed by post hoct test. The results of the P1, P2, and P3 groups were significantly different from  K1  (p  =  0,000).  Groups  P1,  P2,  and  P3  were  significantly  different  from  K2  (p  =  0,000). Bottle shark liver oil with a dose of 54mg / 200g BB / day, 108mg / 200g BB / day, 216mg / 200g
ISSN: 1693-8615 EISSN : 2302-4291 Online : http://ejurnal.setiabudi.ac.id/ojs/index.php/farmasi-indonesia
BB / day each can reduce cholesterol levels by 23% or 43.67 mg / dl, 30% or 55, 72 mg / dl, and 38% or 70.94 mg /
Key word : bottle shark liver oil, hypercholesterolemia, total cholesterol

## PENDAHULUAN
Menurut pusat data dan informasi  kementrian  kesehatan  RI tahun  2014,  setiap  tahunnya  lebih  dari 36  juta  orang  meninggal  karena penyakit  tidak  menular.  Secara  global penyakit tidak menular
yang menyebabkan  kematian  nomor  satu setiap  tahunnya  yaitu  penyakit  yang disebabkan  oleh  gangguan  fungsi jantung  dan  pembuluh    darah,  seperti penyakit jantung koroner (PJK), penyakit  gagal  jantung,  dan  stroke. Berdasarkan diagnosis dokter
prevalensi PJK di Indonesia tahun 2013 sebesar  0,5%  atau  sekitar  883.447 orang,  sedangkan  diagnosis  dokter prevalensi  gejala  sebesar  1,5%  atau sekitar 2.650.340 orang, dan prevalensi stroke di Indonesia berdasarkan diagnosis  dokter  sebesar  7,0%  sekitar 1.236.825 orang (Kementrian Kesehatan RI, 2014). PJK  adalah  gangguan  fungsi pembuluh darah yang mengalami sumbatan,  yang  menyuplai  makanan dan oksigen untuk otot jantung
(Kurniadi dan Nurrahmani, 2014). Pemasukan  kolesterol  ke  dalam  tubuh yang masih seimbang dengan
kebutuhan  tubuh  maka  tubuh  akan tetap  sehat  dan  tidak  terganggu mekanisme  kerjanya  (Nilawati,  dkk., 2008).
Hiperkolesterolemia
adalah peningkatan  kadar  kolesterol  di  dalam darah.  Kadar  kolesterol  darah  yang tinggi  merupakan  masalah  yang  serius karena  merupakan  salah  satu  faktor
risiko yang paling utama untuk terjadinya  PJK  selain  faktor  lainnya, seperti  tekanan  darah  tinggi  dan merokok.  Kadar  kolesterol  yang  tinggi dapat  mengganggu  kesehatan,  bahkan mengancam kehidupan manusia (Anies, 2015).
Aterosklerosis  ditandai  dengan penebalan  dinding  pembuluh  darah arteri  sehingga  terjadi  penyempitan lumen  pembuluh  darah,  merangsang pembentukan  pembekuan  darah  yang menghambat  aliran  darah  ke  jantung, otak  dan  jaringan  paru-paru  (Linder, 2010).  Peningkatan  kadar  kolesterol  di dalam darah (hiperkolesterolemia) merupakan  salah  satu  faktor  resiko yang  paling  utama  terjadinya  PJK (Anies, 2015). Ikan  hiu  botol  yang  terdapat  di
perairan laut Indonesia memiliki panjang  tubuh  1,5  meter  dengan  berat 50  kilogram  dan  kandungan  minyak  di dalam hatinya mencapai 85%. Hati ikan hiu botol ( Centrophorus atromarginatus )  memiliki  kandungan minyak hampir 80% dari bobot hati ikan hiu  botol,  squalen,  asam  lemak  omega 3, omega 6, omega 9 yang merupakan asam lemak yang esensial dalam tubuh (Insani,  dkk.,  2017).  Squalen  yang terdapat  pada  ikan  mampu  untuk menurunkan  kadar  kolesterol  dalam darah, dengan meningkatkan kapasitas penyaringan hati. Mekanisme ini berasal  dari  kemampuannya  untuk mengatur  HMG  Co-A  reduktase,  yang pada
gilirannya meningkatkan kemampuan  hati  untuk  menyaring
Siti Fatimah, Muhammad Radifar, Tiara Madanti
kolesterol jahat (Kurniawan, dkk.,
2009).

## METODE PENELITIAN
Alat dan Bahan Alat  yang  diperlukan  dalam  penelitian ini adalah kandang hewan uji, timbangan  analitik,  spektrofotometer UV-Vis,  kuvet,  centrifuge,  mikropipet 100  µl  dan  1.000  µl,  tip  warna  kuning dan  biru,  tabung  mikropipet,  kapas alkohol  70%,  kapas  kering,  rak  tabung reaksi,  hand  gloves,  jas  lab,  masker, gelas  kimia,  kulkas.  Bahan  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah reagen  cholesterol  fs,  dan  reagen standar kolesterol, minyak hati ikan hiu botol.

## 1.  Persiapan Hewan percobaan
Tikus putih sebanyak 25 ekor diadaptasi selama 2 hari menggunakan kandang  individu.  Tikus  diberi  pakan standar dan akuades yang cukup. Pada hari terakhir adaptasi dilakukan
pengukuran kadar kolesterol total menggunakan metode CHOD-PAP menggunakan spektrofotometer.

## 2.  Pengujian  Efek  Minyak  Ikan  Hiu Botol
Masing-masing  kelompok  tediri  dari  5 ekor  tikus  putih  wistar.  Berat  badan tikus  putih  ditimbang  kemudian  kadar kolesterol  total  darah  tikus  putih  diukur pada hari ke-3. Tikus putih diberi pakan tinggi lemak sapi 2ml/ekor/hari  selama 7  hari  dengan  cara  sonde  lambung. Berat badan tikus ditimbang dan diukur kadar kolesterol total ( pre-test ).
Pengujian  kadar  kolesterol  total  pada tikus  putih  yang  dibagi  menjadi  2 kelompok  kontrol  (kontrol  normal  dan kontrol positif) dan 3 kelompok
perlakuan  diberi  minyak  hati  ikan  hiu botol yang terdiri dari 3 dosis selama 14 hari.
1)  Kelompok  1  (K1)  sebagai  kontrol normal 2)  Kelompok  2  (K2)  sebagai  kontrol kolesterol total tinggi 3)  Kelompok 3 (P1) sebagai perlakuan  1  (54  mg/200gBB/hari minyak hati ikan hiu botol) 4)  Kelompok 4 (P2) sebagai perlakuan  2  (108  mg/200gBB/hari minyak hati ikan hiu botol) 5)  Kelompok 5 (P3) sebagai perlakuan  3  (216  mg/200gBB/hari minyak hati ikan hiu botol).

## 3.  Persiapan Spesimen
Sampel  darah  diambil  pada  bagian vena  tikus  putih  dengan  meggunakan tabung mikrokapiler malalui sinus orbitalis. Darah yang keluar dari tabung mikrokapiler  langsung  ditampung  pada cup serum sebanyak kira-kira 0,5-1 mL. Darah didiamkan selama 30 menit pada suhu  kamar  agar  darah  membeku. Darah  yang  telah  membeku  disentrifus selama  15-20  menit  dengan kecepatan 4000  rpm.  Serum  yang  telah  terbentuk lalu  dipindahkan  ke  dalam  cup  serum bersih dan diberi label kemudian serum siap untuk diperiksa.
4.  Persiapan  Alat  Spektrofotometer UV-Vis  dan  Pemeriksaan  Kadar

## Kolesterol Total
Alat spektrofotometer siap dioperasikan untuk  pemeriksaan  kadar  kolesterol total  menggunakan  metode  CHOD- PAP.
Reagen dicampur, kemudian diinkubasi selama  20  menit  20-250C  atau  10 menit  pada  37 0 C.  Absorbansi  sampel dan  standar  dibaca  terhadap  blanko
pada  panjang  gelombang  546  nm.
Pembacaan  absorbansi  tidak  lebih  dari 60 menit. Tabel 1. Prosedur Pemeriksaan Kadar Kolesterol Total Darah Metode CHOD-PAP Blanko (µl) Standar (µl) smpel (µl) Serum - - 10 Standar  - 10 - Reagen  1.000 1.000 1.000 5.  Perhitungan kadar kolesterol total dengan metode CHOD-PAP

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian  kadar  kolesterol  total pada  25  ekor  tikus  putih  wistar  yang dibagi  menjadi  5  kelompok,  masing- masing kelompok terdapat 5 ekor tikus. Hewan  uji  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  tikus  putih  ( Rattus novergicus )  jantan,  tikus  putih  yang digunakan dalam penelitian ini berumur 3  bulan  (umur  tikus  dewasa).  K1 sebagai  kelompok  kontrol  normal,  K2 sebagai kelompok positif, dan kelompok  P1,  P2,  dan  P3  sebagai kelompok  perlakuan  minyak  hati  ikan hiu  botol.  Kelompok  kontrol  normal diadaptasi  selama  2  hari  dan  diberi pakan  standar    dan  kelompok  K2,  P1, P2, dan P3 diberi pakan tinggi lemak.
Pemeriksaan  kadar  kolesterol total  pre-test  (setelah  diinduksi  lemak sapi  selama  7  hari)  untuk  mengetahui pemberian  lemak  sapi  pada  kelompok
K2, P1, P2, dan P3 dapat
meningkatkan  kadar  kolesterol  total
tikus  putih  sebanyak  70%  atau  2  kali lipat.  Pemeriksaan  kadar  kolesterol total post-test (setelah  diberi  minyak hati ikan hiu botol selama 14 hari) untuk mengetahui penurunan kadar kolesterol total  pada  tikus  putih  setelah  diberi minyak hati ikan hiu botol dari berbagai dosis  pada  masing-masing  kelompok perlakuan  (P1,  P2,  dan  P3).  Kadar kolesterol total pada kelompok K1 tidak mengalami peningkatan atau penurunan  karena  kelompok  tersebut berfungsi  sebagai  kelompok  kontrol kadar  kolesterol  total  normal  sehingga tidak  diinduksi  lemak  sapi  dan  minyak
hati ikan hiu botol.
Metode pemeriksaan kadar kolesterol  total  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah metode Cholesterol Oxidase Peroxidasae Aminoantipyrine  Phenol  (CHOD-PAP) secara  enzimatis,  dimana  kolesterol oksidase akan menghasilkan peroksida dan  bereaksi  dengan  4-amino  antipirin membentuk
kuinoneimine yang berwarna  merah  muda.  Metode  ini paling banyak digunakan karena hasilnya lebih teliti, tetapi reagen harus disimpan  dengan  baik  karena  enzim mudah  rusak  (Panil,  2008  dalam Purbayanti 2015).
Tikus  putih  dipuasakan  selama
8-12 jam sebelum dilakukan
pemeriksaan  kadar  kolesterol  total,  hal ini  disebabkan  karena  kandungan  gizi dalam  makanan  dan  minuman  yang dikonsumsi  oleh  tikus  putih  akan diserap  ke  dalam  aliran  darah  dan dapat  memberikan  dampak  langsung
Kadar kolesterol total = x  konsentrasi standar (200 mg/dl)
pada kadar lemak. Tikus putih dipuasakan bertujuan untuk mengurangi variabilitas substansi
tersebut  dan  variabilitas  lainnya  dalam darah.  Hal  ini  untuk  memastikan  agar pemeriksaan  tidak  dipengaruhi  oleh makanan  terakhir  yang  dikonsumsi (Anna, 2014).
Hasil yang didapat dari penelitian ini  berupa  kadar  kolesterol  total  pada tikus putih hiperkolesterolemia sebelum dan setelah pemberian minyak hati ikan
hiu  botol.  Sebelum  dianalisis  statistik menggunakan  Uji  Statistik Paired  T- Test terlebih dahulu dilakukan normalitas.  Uji  normalitas  dilakukan dengan  menggunakan Shapiro-Wilk . Hasil  uji  normalitas  didapatkan  semua data  terdistribusi  normal  dimana  ada nilai  p  >  0,05.  Berdasarkan  hasil  uji normalitas  maka  untuk  analisis  data variabel  dalam  penelitian  ini  dianalisis menggunakan paired  t  test yang terdapat pada tabel 2.
Tabel 2. Deskripsi  kolesterol total Sebelum dan Sesudah Pemberian minyak hati ikan hiu botol dengan paired t test Kelompok Pre test mean±SD Post test mean±SD Delta Perubahan p K1 90,41 ± 2.42 90,24 ± 2,48 0.17 0,019 K2 190,68 ± 3,92 192,41 ± 3,95 1.73 0,002 P1 188,36 ± 3,18 144,68 ± 2,80 43.68 0,000 P2 187,40 ± 3,01 131,68 ± 4,40 55.72 0,000 P3 186,85 ± 2,88 115,91 ± 2,63 70.94 0,020 Tabel  2  menyatakan  bahwa rerata  kadar  kolesterol  total  sebelum pemberian  minyak  hati  ikan  hiu  botol P1  (dosis  54mg/200g  BB/hari),  P2 (108mg/200g BB/hari), P3(dosis 216mg/200g BB/hari) berturut-turut
adalah  188,36  mg/dl,  187,40  mg/dl, 186,85mg/dl  dan  sesudah  pemberian minyak hati ikan hiu botol ialah berturut- turut adalah 144,68 mg/dl, 131,68mg/dl, dan  115,91mg/dl.  Rerata  kolesterol total  sesudah  pemberian  minyak  hati ikan hiu botol lebih rendah dibandingkan sebelum pemberian.
Hasil uji statistik paired t test menyatakan  bahwa  ada  beda  rerata kadar  kolesterol  total  antara  sebelum dan  sesudah  pemberian  minyak  hati ikan  hiu  botol  pada  kelompok  P1,  P2 dan P3 (P<0.05)
Hasil analisis data menggunakan ANOVA satu arah p<0,005,  dilanjutkan post  hoct  test pada  kelompok  P1,  P2,  dan  P3 berbeda bermakna dengan K1 (p=0,000).  Kelompok  P1,  P2,    dan  P3 berbeda bermakna dengan K2 (p=0,000).  Minyak  hati  ikan  hiu  botol dengan    dosis  54mg/200g  BB/hari, 108mg/200g BB/hari, 216mg/200g BB/hari masing-masing dapat menurunkan  kadar  kolesterol  sebesar 23%  atau  43,67  mg/dl  ,    30%  atau 55,72  mg/dl  ,  dan    38%  atau  70,94 mg/dl. Hal tersebut menunjukkan semakin  tinggi  dosis  yang  diberikan maka  persentase  penurunan  kadar kolesterol total semakin besar.
Penurunan kadar kolesterol total terbesar terjadi pada kelompok
perlakuan dengan dosis 216 mg/200gBB/ hari yaitu 38%. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa  minyak  hati  ikan  hiu  botol memiliki efek hipokolesterolemia
walaupun  diberikan  makanan  lemak tinggi.  Squalene    yang  terdapat  pada ikan hiu botol mampu untuk menurunkan  kadar  kolesterol  dalam darah, dengan meningkatkan kapasitas penyaringan hati. Mekanisme ini berasal dari kemampuannya  untuk  mengatur  HMG
Co-A  reduktase,  yang  pada  gilirannya meningkatkan  kemampuan  hati  untuk menyaring  kolesterol  jahat.  Minyak hati ikan hiu botol mengandung  90 % squalen,  vitamin  A,  dan  omega  yang sangat  berguna  untuk  tubuh  manusia sebagai  suplemen  penyakit  jantung, tukak  lambung,  menambah  stamina, dan  kecerdasan  otak  (Kurniawan, dkk., 2009).
Minyak  ikan  hiu  merupakan komponen  lemak  yang  terkandung dalam  jaringan  tubuh  ikan  salah satunya  yaitu  hati  ikan  yang  telah diekstraksi dalam bentuk minyak.
Minyak  ikan  mengandung  Squalen sebesar  12,49%,  asam  lemak  jenuh (SFA,  Saturated  Fatty  Acid)  sebesar 17,30%,  asam  lemak  tidak  jenuh banyak  ikatan  rangkap  (PUFA,  Polyun Saturated  Fatty  Acid)  sebesar  9,30%, dan    asam  lemak  tidak  jenuh  dengan satu  ikatan  rangkap  (MUFA,  Monoun Saturated  Fatty  Acid)  sebesar  35,77% (Insani, dkk., 2017).
Asam lemak tidak jenuh diklasifikasi-kan  menjadi  dua  yaitu asam lemak tidak jenuh tungal (MUFA) yang  terdiri  dari  ω-9  (asam  oleat  dan asam  palmitoleat),  asam  lemak  tidak
jenuh ganda (PUFA) yang terdiri dari ω- 3  (asam  linoleat  dan  asam  linolenat) dan  ω-6  (asam  arakhidonat.  Asam lemak  tidak  jenuh  ganda  bermanfaat untuk  menurunkan  kadar  kolesterol darah melalui penurunan sintesis lipoprotein dan meningkatkan katabolisme  lipoprotein  (Zimmerman,
2001 dalam Purnomo, 2014).

## KESIMPULAN
Pemberian  minyak  hati  ikan  hiu botol
54mg/200gBB/hari, 108mg/200gBB/hari  secara  bermakna dapat  menurunkan  kadar  kolesterol total pada tikus hiperkolesterolemia.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Peneliti mengucapkan terima kasih kepada RISTEK DIKTI atas dana yang telah diberikan untuk penelitian ini

## DAFTAR PUSTAKA
Anna  LK.  2014.  Mengapa  Perlu  Puasa Sebelum Cek Kesehatan?. Diunduh dari websitehttp://lifestyle.kompas.co m/read/2014/05/07/1012387/Men gapa.Perlu.Puasa.Sebelum.Perik sa.Kesehatan. diakses pada tanggal 19 Juli 2018. Yogyakarta. Anies.  2015 .  Kolesterol  dan  Penyakit Jantung Koroner: Solusi Pencegahan dari Aspek Kesehatan  Masyaraka t.  Ar-Ruzz Media,  Yogyakarta:  18,  31,  32, 35, 55, 56.
Insani  SA,  Suseno  SH,  Jacoeb  AM.
2017. Karakteristik Squalene Minyak  Hati  Ikan  Hiu  Cucut  Hasil Produksi Industri Rumah Tangga, Pelabuhan  Ratu. Jurnal  Institute Pertanian  Bogor vol  20 (3)  :  494- 504
Kementrian Kesehatan Republik Indonesia, 2014, Situasi Kesehatan  Jantung. Pusat  Data danInformasi, Jakarta Selatan: 2.
Kurniawan,  W.,  Nurfauzi,  Y.,  dan
Khalimi, 2009. Meningkatkan Perolehan  Kadar  Vitamin  A  dan Squalene  pada  Home  Industri Pengolahan Minyak Hati Ikan Hiu di  Masyarakat  Nelayan  Cilacap.
Laporan  Akhir  Program  IbM. STIKES  Al-Irsyad  Al-Islamiyyah Cilacap. Nilawati S., Krisnatuti D., Mahendra.,Djing  OG.  2008. Care Yourself Kolesterol. Penebar Plus, Jakarta:9. Susilani  AT  dan  Wibowo  TA.  2015. Dasar-Dasar Metodologi Penelitian untuk Mahasiswa Kesehatan. Graha Cendikia, Yogyakarta: 102.
Purbayanti  D.,  2015.  Pengaruh  Waktu
Penimpanan Serum Untuk Pemerik-saan  Kolesterol  Total. Jurnal Surya Medika . Vol. 1. 1:12 Purnomo S. 2014. Pengaruh Suplementasi Omega 3 Terhadap Profi  Lipit  Pada  Pasien  Diabetes Melitus  Tipe  2  Obesitas di  RSUD DR.  Moewardi  Surakarta.  [Tesis] Program  Studi  Ilmu  Gizi  Program Pasca Sarjana Universitas Sebelas Maret. Surakarta.