## PENELUSURAN POTENSI AKTIVITAS SITOTOKSIK FRAKSI KULIT
BATANG TUMBUHAN FALOAK ( Sterculia quadrifida R.Br)
Rollando 1) , Siswadi 2)
1) Program Studi Farmasi, Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Ma Chung
2) Balai Penelitian Lingkungan Hidup dan Kehutanan Kupang

## INTISARI
Penduduk  Nusa  Tenggara  Timur  memanfaatkan  kulit  batang  tumbuhan  Faloak (Sterculia quadrifida R.Br.)  sebagai  tumbuhan  obat  untuk  mengobati  penyakit  liver,  gastroentritis,  dan penambah  stamina.  Penelitian  ini  bertujuan  menganalisis  daya  antikanker  fraksi  hasil  pemisahan ekstrak etanol kulit Faloak.
Kulit  batang  tumbuhan  faloak  yang  telah  dihaluskan  diekstraksi  dengan  metode  maserasi menggunakan  pelarut  etanol.  Ekstrak  etanol  yang  diperoleh  kemudian  difraksinasi  menggunakan metode  kromatografi  lapis  tipis  preparatif  dengan  fase  gerak  campuran  yaitu,  kloroform,    n- butanol,  etil  asetat  dengan  perbandingan  (3:4:1,5).  Kromatogram  dideteksi  dengan  sinar  tampak, sinar UV 254 , UV 366 ,dan pereaksi serium sulfat, kemudian ditandai. Fraksi yang diperoleh sebanyak lima  fraksi.  Uji  sitotosik  fraksi  terhadap  sel  T47D  dan  sel  Vero  dilakukan  dengan  metode  MTT, sIC 50 dan Selectivity Index (SI) digunakan sebagai parameter efektivitas antikanker. Hasil penelitian menunjukan fraksi 4 sebagai antikanker dengan kategori sedang dengan IC 50 sebesar 21,89 μg/mL pada sel kanker T47D.
Kata kunci: Kulit batang faloak, aktivitas antikanker, sel T47D

## ABSTRACT
People on Timor island use Faloak (Sterculia quadrifida R.Br.) bark as herbal remedy to cure  diseases  such  as  liver  diseases,  gastroenteritis  and  as  stamina  booster.  This  study  aims  to analyze the ability of anticancer fraction of faloak bark ethanol extract.
The  mashed  bark  of  faloak  plants  extracted  by  maceration  method  using  ethanol.  The ethanol  extract  fractionated  using  preparative  thin  layer  chromatography  with  mixture  mobile phase which, chloroform, n-butanol, ethyl acetate with ratio (3: 4: 1,5). Chromatogram detected with  visible  light,  UV 254 ,  UV 366 ,  and  cerium  sulfate  reagent,  then  marked.  Fraction  obtained  five fractions.  Cytotoxic  test  against  T47D  cell  and  Vero  cell  conducted  using  MTT,  IC 50 and selectivity sndex (SI) used as an anticancer efficacy parameter.
Fraction  4  showed  moderate  anticancer  activity  with  IC 50 of  21.89  μg/mL  in  T47D  cell line.
Keywords: Faloak bark, anticancer activiy, T47D cell line

## PENDAHULUAN
Masyarakat Indonesia sejak zaman dahulu  telah  mengenal  tumbuhan  yang mempunyai khasiat obat atau menyembuhkan  berbagai  macam  penyakit yang  disebut  tanaman  obat  tradisional (Thomas, 1993). Pemanfaatan jenis tumbuhan  untuk  obat  tersebut  didominasi oleh famili Fabaceae sebanyak 110 spesies, Euphorbiaceae 94 spesies dan Lauraceae 77 spesies.  Spesies  dari  famili Sterculiaceae juga  dikenal  memiliki  banyak  manfaat,  di mana  yang  telah  dilaporkan  mencapai sebanyak 21 species. Jika dilihat dari bagian yang  digunakan,  pemanfaatan  tumbuhan terbesar  adalah  dari  daun  33,50%,  diikuti akar  14,89%  dan  kulit  batang  10,47% (Zuhud, 2008).
Faloak ( Sterculia quadrifida R.Br) merupakan tumbuhan dari famili
Sterculiaceae ,  dan  dapat  tumbuh  hingga tinggi  pohon  >20  meter.  Secara  empiris, masyarakat  didaerah  Nusa  Tenggara  Timur (NTT)  menggunakan  tumbuhan  faloak sebagai tanaman
obat tradisional. Masyarakat  Pulau  Timor  menggunakan  air rebusan  bagian  kulit  dari  batang  tumbuhan faloak untuk menyembuhkan penyakit hepatitis, gastroentritis, diabetes dan rheumatoid arthritis (Siswadi et al , 2013). Siswadi, et  al (2013),  melalui  uji golongan senyawa kimia menyatakan bahwa ekstrak  aseton,  etil  asetat,  metanol,  dan  n- heksana  dari  kulit  batang  tumbuhan  faloak memiliki  senyawa  flavonoid,  fenolik  dan terpenoid.  Guna  mengetahui  potensi  lain dari tumbuhan faloak ini, maka dilakukanlah penelitian  ini  yang  bertujuan  memberikan informasi  ilmiah  tentang  pengaruh  ekstrak kulit  batang  faloak  dengan  melihat  efek sitotoksik secara in vitro.

## METODE PENELITIAN Bahan Penelitian
Kulit batang faloak, Silica gel 60 PF 254 untuk  digunakan  dalam  KLT  Preparatif. Pelarut  ekstraksi  (etanol),  dan  fase  gerak untuk  pemisahan  dan  pemurnian  aquadest, metanol,  n-heksana,  kloroform  dan  etil asetat  (E.  Merck).  Hidrogen  peroksida, buffer  fosfat,  potasium  ferrisianida,  FeCl 3 . Kultur  sel  T47D,  kultur  sel  Vero,  media kultur  RPMI  (Sigma),  FBS  10%  (Gibco), penisilin-streptomisin  1%  (Gibco),  fungizon 0,5%  (Gibco),  natrium  bikarbonat  (sigma),
herpes (Sigma), tripsin-EDTA 0,25%
(Gibco),  media  M119,  reagen  MTT  [3-(4,5- dimetil thiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolium bromide], phosphate  buffer  saline (PBS), reagen  stopper  (10%  (w/v)  sodium  dodesil sulfat  (SDS)  dalam  0,1  N  HCL, Phosphate Buffer Saline (PBS) PH 7,4,

## Alat Penelitian
Plat  kromatografi  lapis  tipis  (KLT) preparatif,  chamber  (sigma),  neraca  analitik (Sartorius), vacuum rotary evaporator
( Junke  &  Kunkel ), sentrifug e, inverted microscope , elisa  reader ,  vortex  ( junke  & kunkel ), waterbath (labo-tech,  Heraceus), lemari  es,  penangas  air,  hemositometer, cell counter , filter polietilesulfon, tabung ependorf, tissue  culture  flask , tissue  culture dish diameter  6  cm  dan  10  cm  (Iwaki), cawan porselen, corong pisah, gelas ukur 10 mL,  gelas  ukur  100  mL,  labu  erlenmeyer, kertas  saring,  botol  flakon,  mikropipet ukuran  5µL-20µL,  20µL-200µL,  200µL- 1000µL, white  tip , yellow  tip ,  dan blue  tip (Brand),  lampu  UV  254  dan  366  nm, Hirayama Manufacturing Co., Japan), Laminar Air flow (LAF) (FARRco), autoklaf (AC-300AE,  Tiyoda  Manufacturing  Co. Ltd.),

## Jalan Penelitian Ekstraksi
Kulit  batang  faloak  sebanyak  3  Kg  yang telah kering kemudian diserbuk mengunakan grinder dan diayak menggunakan ayakan 40 mesh  dan  diperoleh  serbuk    kulit  batang faloak    sebanyak  1,70  kg.  Langkah  kedua adalah  melakukan  maserasi  selama  48  jam dengan  menggunakan  pelarut  etanol  96% (perbandingan serbuk dan etanol 96% (1:6)). Dilakukan  pergantian  pelarut  etanol  96% sebanyak  3  kali.  Filtrat  diperoleh  dengan cara  disaring  dengan  corong  Buchner. Seluruh  filtrat  yang  diperoleh  diuapkan penyarinya hingga kental dengan evaporator. Bobot  ekstrak  yang  diperoleh  adalah  72,6  g atau  rendemen  yang  diperoleh  sebesar 3,74%.

## Fraksinasi  Ekstrak  Etanol  secara  KLT Preparatif
Fase  gerak  yang  digunakan  adalah kloroform:  n-butanol:  etil  asetat  dengan perbandingan  (3:4:1,5)  dalam  memisahkan senyawa aktif ekstrak etanol 96%. Fase diam yang  digunakan  adalah  silika  gel  60  PF 254 khusus  preparatif.  Selanjutnya  dilakukan
pemisahan  senyawa  aktif  ekstrak  etil  asetat menggunakan KLT Preparatif. Kromatogram  yang  dihasilkan  dideteksi dengan  sinar  tampak,  sinar  UV 254 ,  UV 366 ,dan pereaksi semprot serium sulfat, kemudian  ditandai.  Bercak  yang  sudah ditandai masing-masing dikerok dan dikumpulkan,  kemudian  dilarutkan  dengan larutan  klorofom:metanol  (1:1),  disaring, dan dikeringkan.
Uji Sitotoksik Uji  sitotoksisitas  menggunakan  metode MTT. Sel kanker payudara T47D ditumbuhkan  dengan  media  kultur  RPMI, sel  normal  Vero  dalam  media  kultur  M199, masing-masing  berisi  FBS  10%,  penisilin- streptomisin  1%,  dan  fungizon  0,5%. Konsentrasi  larutan    uji  yang  digunakan adalah 7,81 ; 15,62 ; 31,25 ; 62,5 ; 125 ; 250 ;  500  µg/ml. Viabilitas  sel  ditentukan dengan  absorbansi  pada  λ  595  nm menggunakan plate reader. Data absorbansi perlakuan  dikonversi  ke  dalam  persen viabilitas  dan  digunakan  untuk  menghitung IC 50 . Selectivity  Index (SI)  merupakan  hasil
bagi  antara  IC 50 sel  Vero  dan  IC 50 sel T47D.
HASIL DAN PEMBAHASAN PENELITIAN Fraksinasi Fraksinasi ekstrak etanol 96%
menggunakan  metode  kromatografi  lapis tipis  preparatif  (KLTP),  Kromatogram  yang terdeteksi dibawah sinar UV254 nm, UV366 nm  dan  deteksi  dengan  pereaksi  serium sulfat  kemudian  dikelompokan  menjadi  5 fraksi  seperti  yang  terlihat  pada  Gambar  1. Penomoran fraksi dilakukan menurut bercak kemudian  dipisahkan  dengan  cara  dikerok dan serbuk silika disimpan sesuai
penggolongan fraksi. Serbuk silika dilarutkan dengan kloroform : metanol (1:1) kemudian  disaring  dengan  milipore  dan diuapkan  hingga  kering.  Fraksi  ditimbang sehingga  diperoleh  rendemen  fraksi  dengan cara  membandingkan  bobot  fraksi  terhadap ekstrak  etil  asetat  seperti  pada  Tabel  I. Fraksi  yang  diperoleh  kemudian  diuji aktivitasnya
terhadap bakeri uji
Gambar 1.Profil Kromatogram KLT Preparatif
Keterangan gambar: Fase diam silica gel 60 PF254 dan fase gerak kloroform : n-butanol : etil asetat (3:4:1,5). Visualisasi pemisahan fraksi secara KLT preparatif, yakni (A) kromatogram di bawah UV 366 , (B) UV 254 nm. (1) fraksi 1, (2) fraksi 2, (3)fraksi 3, (4) fraksi 4, dan (5) fraksi 5.

## Uji Sitotoksik
Data pada tabel II menunjukan parameter nilai  IC 50 ,  bahwa  fraksi  4  mempunyai aktivitas  sitotoksik  lebih  besar  dari  pada fraksi  1,2,3,  dan  5  terhadap  sel  T47D.  Nilai IC 50 yang  didapatkan  pada  perlakuan  fraksi 2,  3,  dan  4  menunjukan  bahwa  dapat dikembangkan sebagai sebagai agen
kemopreventif  karena  didapatkan  nilai  IC 50 yang lebih  kecil dari 100 µg/mL (Tanaka et al , 1999).
Nilai selektivitas suatu senyawa bertujuan untuk mengetahui tingkat keamanan suatu senyawa antikanker terhadap  sel  normal.  Nilai selectivity  index yang  disyaratkan  adalah  >  3,  yang
A
B
0 50 100 0 1 2 3 Vi ab ili tas sel (% )
Log konsentrasi Fraksi 4
menandakan  bahwa  ekstrak  atau  fraksi mempunyai  aktivitas  sitotoksik  terhadap  sel kanker  tapi  dengan  pengaruh  minimal  pada sel  normal,  dan  dapat  dikembangkan  lebih lanjut  sebagai  agen  kemopreventif  (Prayong et al , 2008). Fraksi 2, 3, dan 4 lebih selektif membunuh  sel  kanker  payudara  T47D
dibandingkan  fraksi  1  dan  5.  Hal  tersebut terlihat dari nilai Selectivity index fraksi 2, 3, dan  4  dengan  nilai  >  3.  Kuatnya  aktivitas antikanker  dikatagorikan  sebagai  berikut: IC 50 =  5  µg/mL  (sangat  aktif);  IC 50 =  5-10 µg/mL (aktif); IC 50 = 11-30 (sedang); IC 50 = 30  µg/mL  (tidak  aktif)  (Chou et  al ,  1998).
Tabel I. Rendemen dan hRf Fraksi Fraksi hRf UV 254 UV 366 Serium Sulfat Rendemen (% b/b)* 1 0 Meredam Berpendar biru Coklat 5,76 2 45 - Berpendar biru Coklat 15,60 3 74 Meredam Berpendar biru Coklat 20,57 4 80 - Berpendar biru Coklat 19,09 5 100 Meredam Berpendar hijau Coklat 10,53
Keterangan: *Dihitung terhadap berat ekstrak etanol 96% = 20,1123
Tabel II. Hasil Uji Sitotoksik Fraksi Fraksi IC 50 T47D (µg/ml) IC 50 Vero (µg/ml) Selectivity index (SI) 1 121,76 313,45 2,57 2 78,98 291,87 3,69 3 53,34 278,65 5,22 4 21,89 213,12 9,73 5 132,67 366,67 2,76
(a) (b)
Gambar  2.  Efek  perlakuan  fraksi  dietil  eter  terhadap  sel  T47D. Pengamatan  dilakukan  di bawah  mikroskop inverted dengan  pembesaran  100x.  (a)  sel  tanpa  pelakuan;  (b) Fraksi 4 dengan  konsentrasi  25 µg/mL; Morfologi sel T47D  yang  hidup ditunjukkan dengan gambar panah            (           ) dan sel yang  mengalami perubahan morfologi ditunjukkan dengan tanda panah putus     (           ).
y = -37,97x + 110,6
r = 0,926
0 50 100 0 1 2 3 Vi abil itas sel (% ) Log konsentrasi Fraksi 4
Fraksi  4  memiliki  nilai  IC 50 yang  paling kecil  daripada  fraksi  lain,  yang  menunjukan bahwa fraksi 4  merupakan  fraksi  yang lebih poten daripada fraksi lain terhadap sel T47D dan  termasuk  dalam  fraksi  dengan  aktivitas antikanker kategori sedang. Profil morfologi sel  akibat  perlakukan  fraksi  4  diamati. Perlakuan  fraksi  4  menyebabkan  sel  T47D mengalami  perubahan  morfologi  yaitu  inti sel  tampak mengerut,  terlihat  sel  yang mengalami  kematian,  dan  jumlah  sel berkurang,  sedangkan  sel  tanpa  perlakuan menunjukkan morfologi yang normal (Gambar 2b).
Efek sitotoksis fraksi 4 terhadap sel Vero berdasarkan  nilai  IC 50 dan  profil  morfologi sel menunjukkan efek yang lebih rendah jika dibandingkan  dengan  efeknya  terhadap  sel T47D. Perlakuan fraksi 4 juga menyebabkan sel Vero mengalami
perubahan morfologi, yaitu sel mengecil dan membulat  namun  diperlukan  konsentrasi yang  lebih  tinggi  untuk  menghasilkan  efek yang sama terhadap sel T47D, sedangkan sel tanpa  perlakuan  menunjukkan  morfologi yang normal (Gambar 3b).
(a)                                             (b)
Gambar  3.  Efek  perlakuan  fraksi  4  terhadap  sel  Vero. Pengamatan  dilakukan  di  bawah mikroskop inverted dengan  pembesaran  100x.  (a)  sel  tanpa  pelakuan;  (b)  Fraksi  4 dengan  konsentrasi  250  µg/mL.  Perubahan  morfologi  sel  Vero  ditunjukkan  dengan gambar  panah  (                )  dan  sel  yang    mengalami  perubahan  morfologi  ditunjukkan dengan tanda panah putus  (             ).

## KESIMPULAN
Hasil  penelitian  menunjukan  bahwa  fraksi  4  sebagai  antikanker  dengan  kategori  sedang  dengan IC 50 21,89 µg/ml.

## DAFTAR PUSTAKA
Chou,  S.  G.,  Valerie,  H.L.,  Wu,  X.H. Keng.Y.S.,Tan,  B.H.K.,  Pereira
J.T.,  Goh  S.H., Novel  Cytotoxic Polyprenylated  Xanthones  from Garcinia gaudichaudii . Tetrahedron 1998;54:10915-24 . Prayong, P., Barusrux, S., and
Weerapreeyakul, N., 2008.
Cytotoxic  Activity  Screening  of Some  Indigenous  Thai  Plants.
Fitoterapia , 79 , 598-601.
Siswadi.,  Rianawati,H.,  Saragih,G.,  dan Hadi,  D.,  2013. The  Potency  of Faloak's  ( Sterculia  quadrifida
y = - 34,04x+122,8
r = 0,957
R.Br)  Active  Compunds  As Natural Remedy, Prosiding Seminar International, Kementrian  Kehutanan  bagian Penelitian  dan  Pengembangan Hutan, Bogor.
Tanaka,  M.,  Sukiman,  H.,  Saito,  M.,  Suto, K.,  Prana,  M.,  dan  Tomita,  F.,
1999,  Isolation,  Screening  and Phylogene-tic  Identification  of Endophytes  from  Plants  in Hokaido Japan and Java Indonesia. Microbes and Environment , 14 : 237–241. Thomas, 1993, Tanaman Obat Tradisional I, Penerbit Kanisius, Yogyakarta.
Zuhud,  E.  A.  M.,  2008, Potensi  Hutan Tropika Indonesia Sebagai Penyangga  Bahan  Obat  Alam Untuk Kesehatan Bangsa , Fakultas Kehutanan Institut Pertanian Bogor, Bogor.
.