Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, Vol.8 No.1 Juni 2021 Hal 1 - 6 P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048 DOI: http://dx.doi.org/10.20473/bikfar.v8i1.31202
Cite this as: Alicia Sada, Noor Erma Sugijanto. Achmad Toto Poernomo (2021),  Produksi Enzim Fibrinolitik Tempe oleh Rhizopus oryzae FNCC 6078, 8 (1), 1-6
Produksi Enzim Fibrinolitik Tempe oleh Rhizopus oryzae FNCC 6078

## Production of fibrinolytic enzyme Tempeh by Rhizopus oryzae FNCC 6078
Alicia Sada 1 N oor Erma Sugijanto 1 . Achmad Toto Poernomo*
1 Department of Pharmaceutical Chemistry, Faculty of Pharmacy, Universitas Airlangga, Surabaya, East Java, Indonesia
*Corresponding author E - mail: achmad-t-p@ff.unair.ac.id
Article History
Received: 28 December 2020; Received in Revision: 18 January 2021; Accepted: 8 February 2021

## ABSTRACT
Background Rhizopus oryzae FNCC 6078 had been evaluated producing fibrinolytic enzyme under solid state fermentation. Soybean had been used to produce fibrinolytic enzyme  through fermentation in tempeh. The main purpose of this study was to reveal optimum condition for fermentation. The parameters of the condition were inoculum volume, incubation period and temperature. Optimum condition was defined by maximum fibrinolytic activity. Methode Fibrinolytic activity was measured using spectrophotometry at 274 nm . Result optimum condition for producing fibrinolytic enzyme  was 1,5 mL volume of  inoculum of Rhizopus oryzae suspension in 25%T, 42 hours for incubation period and 35 o C temperature incubation.
Keyword : Rhizopus oryzae, tempeh, fibrinolytic enzyme,  fermentation condition

## ABSTRAK
Latar  Belakang  Rhizopus  oryzae  FNCC  6078  telah  dievaluasi  menghasilkan  enzim  fibrinolitik menggunakan  fermentasi  solid  state.  Kedelai  telah  digunakan  untuk  menghasilkan  enzim  fibrinolitik melalui  fermentasi  pada  tempe.  Tujuan  utama  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  mengungkapkan  kondisi optimum untuk fermentasi. Parameter kondisi adalah volume inokulum, masa inkubasi dan suhu. Kondisi optimal  ditentukan  oleh  aktivitas  fibrinolitik  maksimum.  Aktivitas  fibrinolitik  diukur  menggunakan spektrofotometer pada 274 nm. Hasil untuk setiap kondisi optimum untuk menghasilkan enzim fibrinolitik adalah volume inokulum 1,5 mL suspensi Rhizopus oryzae dalam 25% T, 42 jam untuk masa inkubasi dan 35 o C untuk suhu inkubasi.
Kata kunci : Rhizopus oryzae, tempe, enzim fibrinolytic,  kondisi fermentasi

## Pendahuluan
Di  Indonesia,  trombosis  dapat  berupa  penyakit jantung  koroner  atau  stroke  yang  merupakan penyebab  kematian  nomor  satu,  lebih  sering  dari penyakit infeksi (Bakta, 2007). Trombus merupakan bekuan  darah  yang  komponen    utamanya  adalah fibrin.  Sampai  saat  ini  plasminogen  aktivator  dan urokinase  masih  banyak  digunakan  dalam  terapi trombolisis,  meskipun  memiliki  harga  yang  mahal dan  efek  samping  yang  tidak  diinginkan,  seperti perdarahan internal dalam saluran usus saat diberikan secara oral (Kotb, 2012).
Enzim  fibrinolitik  merupakan  golongan  protease dapat mendegradasi bekuan fibrin. Obat-obatan yang mengandung enzim  fibrinolitik paling efektif  untuk pengobatan  trombus  (Arunachalam  et  al.,  2011). Enzim  fibrinolitik  dapat  dihasilkan  dari  berbagai
sumber,  antara  lain  hewan,  tumbuhan,  bakteri  dan jamur  (Kotb,  2012).    Beberapa  protease  telah ditemukan dalam makanan fermentasi  dan berfungsi untuk  mendegradasi  trombus.  Salah  satunya  adalah Natto, makanan fermentasi dari kedelai  asal Jepang, yang  difermentasi    oleh  bakteri  Bacillus  natto. Nattokinase adalah protease yang terkandung dalam Natto  yang  mempunyai  aktivitas  trombolitik (Sugimoto  et  al.,  2007).  Terdapat  juga  produk makanan  yang difermentasi oleh Bacillus lain yang menghasilkan  enzim  fibrinolitik  yang  berasal  dari Korea  yaitu,  Chungkook-jang,  Doen-jang,  Kamahi dan produk fermentasi ikan (Yoon et al., 2002). Analog dengan fermentasi kedelai, Tempe merupakan  makanan  fermentasi  berbahan  baku kedelai  dari  Indonesia  difermentasi  oleh  jamur berfilamen  seperti  Rhizopus  sp.,  Sumi  et  al.  juga melaporkan bahwa ekstrak air dari tempe

## Research Article
Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, Vol.8 No.1 Juni 2021 Hal 1 - 6 P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048
menunjukkan adanya aktivitas trombolitik (Sugimoto et al., 2007).
Produksi  enzim  fibrinolitik  dipengaruhi  oleh beberapa  faktor,  antara  lain  volume  inokulum, kondisi  fermentasi  (suhu  dan  waktu  inkubasi)  (Sher et al., 2011). Optimasi dan kontrol kondisi fermentasi merupakan  salah  satu  tahap  penting  dalam memproduksi metabolit (Han and Nout, 2001). Sher et  al.,  2011  menyatakan  bahwa  waktu  inkubasi mempengaruhi pertumbuhan miselia jamur Rhizopus oligosporus, optimasi  dilakukan untuk  mendapatkan waktu  maksimum  pertumbuhan  jamur  dan  juga mencegah tahap sporulasi pada tempe gandum. Enzim fibrinolitik  yang  dihasilkan  oleh  jamur  dapat diketahui  melalui  uji  aktivitas  menggunakan  media fibrin  plate.  Adanya  enzim  fibrinolitik  maka  akan menghidrolisis    sehingga  media  yang  awalnya berwarna  putih  keruh  akan  berubah  menjadi  jernih (Suri  et  al.,  2013).  Uji  aktivitas  fibrinolitik  juga dilakukan  dengan  menggunakan  spektrofotometer seperti metode Liu et al., 2006.
Mengacu dari  latar belakang permasalahan tersebut, pada  penelitian  ini  akan  dilakukan  fermentasi  padat pada  kacang  kedelai  (Glycine  max)  oleh  Rhizopus oryzae    FNCC  6078  dan  dengan  memperhatikan faktor-faktor  di  atas  maka  dilakukan  optimasi produksi enzim fibrinolitik. Tujuannya adalah untuk mengetahui  bahwa  melalui  fermentasi  padat  dengan kedelai,  Rhizopus  oryzae  FNCC  6078  dapat menghasilkan  enzim  fibrinolitik  dan  mendapatkan kondisi fermentasi yang optimum dalam memproduksi enzim fibrinolitik.

## Bahan dan Cara kerja
Bahan .  Kacang  kedelai  (Glycine  max  (L)  Merr.) varietas Wilis yang didapatkan dari  Balai Penelitian Kacang  –  Kacangan  dan  Umbi  –  Umbian  Malang. Rhizopus  oryzae  FNCC  6078  yang  didapatkan  dari Laboratorium  Mikrobiologi  Pusat  Antar  Universitas Pangan Gizi Universitas Gajah Mada. Fibrin Bovine Blood  dari  SIMAGCHEN,  kaplet  salut  NATTO-10 NSK II 100 mg Co Q-10 30 mg, akuades, dapar Tris – HCl  (Molecular Biology Grade) 0,05 M pH 5,00; NaCl 0,9%, TCA (Tri Chloro Acetic) for analysis dari Merck, HCl 0,1 M, KH2PO4 0,1 M, Na2B4O7  0,05 M,  Metilen blue  1000 ppm, tirosin 100 ppm, alkohol 70%, Potato Dextrose Agar (PDA) CM0139, agarosa.
Alat. autoclave HL – 340 Series Vertical Type Steam sterilisizer,  incubator  Memmert,  spektrofotometer Genesys-20,  timbangan  digital  Sartorius  Type  BP 221S,  laminar  air  flow  cabinet,  magnetic  stirrer, lemari pendingin, ultra sentrifuge, sentrifuge Hettich Zentrifugen EBA 20, vortex Thermolyne Maxi Mix, spektrofotometer  hp.  8452  a,  pH  meter  Fisher Versamix, jangka sorong.

## Kultur Rhizopus oryzae FNCC 6078
Kultur dilakukan di dalam Laminar Air Flow dengan teknis  aseptis.  Menginokulasikan  satu  ose  isolat murni  Rhizopus  oryzae  FNCC  6078    pada  media PDA. Inokulum disimpan dalam inkubator pada suhu 37oC  selama  3  hari,  lalu  disimpan  dalam  lemari pendingin bersuhu 4oC.

## Penyiapan  suspensi  inokulum  dan  pembuatan tempe secara aseptis
Pembuatan  suspensi  spora  jamur  Rhizopus  oryzae adalah dengan cara menambahkan 10 mL NaCl 0,9% steril  ke  dalam  tabung  inokulum  yang  telah diinkubasi selama 3 hari, kemudian divortex sampai spora  jamur  terlepas  dari  medianya  (±  15  menit), supernatan  dipindahkan  dalam  Erlenmeyer  steril. Suspensi  spora  diukur  persen  transmitan  dengan menggunakan spektrofotomoter pada panjang gelombang  580  nm.  Penambahan  NaCl  0,9% dilakukan hingga didapat transmitan 25%.
Kacang  kedelai  200  gram  di  sortir  terlebih  dahulu, dicuci  dengan  akuades,  kemudian  direbus  hingga mendidih (15 menit) untuk memudahkan pengelupasan  kulit.  Dilakukan  pengelupasan  kulit kacang.  Setelah  itu  direndam  semalam  dengan akuades    600  mL  selama  16  jam  untuk  membuat suasana asam. Setelah dicuci kacang kedelai direbus kembali  dengan  air  600  mL    selama  10  menit. Selanjutnya  dikeringkan  dan  didinginkan  pada  suhu kamar. Kacang kedelai kering ditimbang sebanyak 50 gram  per  satu  cawan  petri,  kemudian  ditambahkan suspensi  dari  inokulasi  jamur  tempe  (Rhizopus oryzae)  25%T  sebanyak  1,0  mL  dengan  cara disemprotkan  ke  dalam  cawan  petri.  Goyang- goyangkan hingga suspensi spora dan kacang kedelai tercampur  homogen.  Inkubasi  dalam    inkubator bersuhu 300C selama 42 jam.

## Optimasi produksi enzim fibrinolitik

## Optimasi volume inokulum
Optimasi  volume  inokulum  dilakukan  dengan mengubah volume inokulum 25%T  yaitu 0,5 mL; 1,0 mL; 1,5 mL dan 2,0 mL. Waktu inkubasi 42 jam dan suhu inkubasi 30oC.

## Optimasi suhu inkubasi
Optimasi suhu inkubasi dilakukan dengan mengubah suhu  yaitu,  30,  35,  40,  45oC.  Volume  inokulum 25%T  1,0 mL dan waktu inkubasi 42 jam.
Optimasi waktu inkubasi
Optimasi  waktu  inkubasi  dilakukan  pada  beberapa waktu yaitu 30, 36, 42, dan 48 jam. Volume inokulum 25%T 1,0 mL dan suhu inkubasi 30oC.
Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, Vol.8 No.1 Juni 2021 Hal 1 - 6 P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048
Isolasi enzim kasar (crude enzyme )
50  g  tempe  ditimbang  dengan  menggunakan timbangan analitik dan diekstraksi dengan dapar tris HCl  0,05  M  pH  5,0  menggunakan  blender.  Untuk berat  tempe  sebesar  50,0  g  membutuhkan  larutan dapar  sebanyak  125  mL  dapar  tris  HCl  pH  5,00. Dilakukan dengan penambahan volume dapar sedikit demi  sedikit  agar  dicapai  hasil  yang  optimal (ekstraksi 3x 10 detik). Setelah itu, masukkan ekstrak ke  dalam  tabung  sentrifugasi  plastik.  Lakukan sentrifuge  9000  rpm  selama  10  menit  dengan  suhu 40C. Supernatan dipisahkan dan disimpan pada suhu -20oC.

## Uji aktivitas fibrinolitik dengan fibrin plate
Media  fibrin  plate  dibuat  dengan  menambahkan fibrin 0,3% dan agarosa 1,7% dalam dapar asam borat (pH  7,8).  Sebanyak  20  mL  dari  campuran  tersebut dituangkan  dalam  petri  yang  sudah  ditambahkan metilen  blue  400µL  sebagai  pewarna  untuk memperjelas  zona  jernihyang  terbentuk  sebanyak. Fibrin  plate  didiamkan  pada  suhu  kamar  selama  30 menit  agar  memadat  dan  membentuk  lapisan  fibrin. Pada  media  dibuat  7  lubang  dengan  menggunakan pelubang steril berdiameter 7mm. Sebanyak 100 µL sampel  ditempatkan  pada  masing-masing  lubang. Fibrin  plate  diinkubasi  pada  suhu  37oC  selama  18 jam.  Akan  terbentuk  zona  jernih,  lalu  diamati  dan diukur dengan menggunakan jangka sorong.
Uji aktivitas fibrinolitik dengan spektrofotometer .
Aktivitas  fibrinolitik  diukur  dengan  menggunakan spektrofotometer.  Dibuat  dua  tabung  dalam  uji  ini, yaitu sampel dan blanko. Tabung  blanko berisi 1000 µL dapar Tris HCl pH 5,00 dan 500 µL larutan fibrin 3  %  (pH  7,80),  tabung  sampel  berisi  950  µL  dapar Tris HCl pH 5,00; 50 µL crude enzyme dan 500 µL larutan fibrin 3% (pH 7,80) kemudian kedua tabung diinkubasi  selama 10 menit  pada suhu 37 o C. Reaksi dalam  tabung  dihentikan  dengan  penambahan  TCA 5%  sebanyak  1,0  mL,  kemudian  disentrifugasi dengan  kecepatan  2500  rpm  selama  10  menit. Supernatan yang didapat  diukur absorbansinya pada panjang  gelombang  274  nm.  Satu  unit  aktivitas fibrinolitik adalah jumlah enzim yang dapat melepas 1 µmol tirosin per menit dalam tiap ml (Unit/mL) di bawah kondisi uji.
Aktivitas  fibrinolitik  dihitung  dengan  menggunakan rumus :
Ae=  (x.V)/(a.b) x 1/BM
Keterangan :
Ae
= Aktivitas enzim (Unit/mL)
x
=  Kadar tirosin (µg/mL)
V = Volume total sampel tiap tabung (mL)
a =  Volume crude enzyme (mL) b =  Waktu reaksi (menit)
BM =  Berat Molekul tirosin (181,19)Linieritas Untuk menentukan linieritas, dibuat kurva hubungan antara  konsentrasi  dan  area  EGCG  pada  berbagai macam  konsentrasi.  Ditimbang  teliti  5,000  mg dengan  neraca  mikro  analitik  kemudian  dibuat  5 macam  konsentrasi  50-150%  dari  kadar  analit  yang diperkirakan  (Indrayanto  &  Yuwono,  2002). Konsentrasi yang akan dibuat yaitu 50 ppm, 100 ppm, 150 ppm, 200 ppm dan 250 ppm. Konsentrasi tersebut dibuat  dengan  cara  melarutkan  5,000  mg  EGCG standar  dengan  metanol  sampai  volume  ad  10,0  ml dalam  labu  ukur  sehingga  didapatkan  larutan  baku induk  500 ppm. Dari larutan induk 500 ppm dipipet 0,5  ml;  1,0  ml;  2,0  ml  masing-masing  diencerkan dengan  metanol  sampai  volume  ad  5,0  ml  sehingga didapatkan  konsentrasi  50  ppm;  100  ppm  dan  200 ppm.  Untuk  konsentrasi  250  ppm  dibuat  dengan memipet  5,0  ml  baku  induk,  diencerkan  dengan metanol sampai volume ad 10,0 ml. Dari konsentrasi 250 ppm dipipet 3,0 ml, kemudian diencerkan dengan metanol  sampai  volume  ad  5,0  ml  sehingga  didapat konsentrasi 150 ppm.

## Hasil Dan Pembahasan
Zona  jernih  hasil  uji  aktivitas  fibrinolitik menggunakan fibrin plate ditunjukkan pada gambar 1.
Gambar  1.  Hasil  uji  aktivitas  fibrinolitik  dengan fibrin  plate  (A)  replikasi  1,  (B)  replikasi  2,  (C) replikasi  3.  Terbentuk  zona  jernih  pada  sampel,  (1) crude  enzyme  1;  (2)  crude  enzyme  2;  (3)  crude enzyme 3; (4) kontrol negatif; (5) dapar tris HCl 0,05 M pH 5,00; (6) suspensi jamur R. oryzae; (7) kontrol positif (nattokinase)
Hasil  pengkuruan  diameter  zona  jernih sampel  crude  enzyme,  kontrol  negatif  dan  positif, suspensi jamur R.oryzae dan dapar tris HCl pH 5,00 ditabelkan pada tabel 1.
Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, Vol.8 No.1 Juni 2021 Hal 1 - 6 P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048
Tabel  1.  Diameter  zona  jernih  enzim  fibrinolitik tempe
Keterangan : K (+)    = Kontrol positif nattokinase, K (-) = Kontrol negatif ekstrak kedelai tanpa penambahan jamur (-) : Tidak menghasilkan zona jernih Zona jernih pada uji fibrinolitik dengan sampel crude enzyme  ataupun  pada  nattokinase  merupakan  hasil pemecahan  fibrin  menjadi  asam  amino  yang  larut. Pembuatan  tempe  dilakukan  replikasi  tiga  kali, masing-masing  dianalisis  aktivitas  fibrinolitiknya dengan mengamati zona jernih sampel crude enzyme. Hasilnya didapatkan berdiameter 13,16 ± 0,08; 12,96 ± 0,62;  13,08 ± 0,08 mm. Suspensi  jamur Rhizopus oryzae  25%T  juga  memberikan  zona  jernih berdiameter 7,54 ± 0,40 mm. Dalam hal ini suspensi R.  oryzae    saja  dapat  menghasilkan  zona  jernih, karena  jamur  mampu  memproduksi  protease walaupun  produksinya  relatif  sedikit  dibandingkan produksi enzim protease hasil fermentasi tempe (Rauf et al., 2010). Ekstrak kacang kedelai sebagai kontrol negatif  juga  menghasilkan  zona  jernih  pada  uji dengan  fibrin  plate.  Zona  jernih  yang  didapatkan berdiameter  8,47  ±  0,50  mm.  Mekanisme  mengapa kacang  kedelai  dapat  memecah  fibrin  belum diketahui  secara  jelas,  akan  tetapi  kandungan isoflavon dalam kacang kedelai telah diteliti mampu menghambat  oksidasi  LDL  dan  meningkatkan  HDL sehingga  dapat  mencegah  aterosklerosis  yang merupakan  penyebab  trombus  (Yang  et  al.,  2011). Dapar tris HCl yang digunakan sebagai pembanding atau  konrol  pelarut  yang  diuji  dengan  fibrin  plate tidak  terbentuk  zona  jernih,  berarti  bahwa  tidak memberikan  pengaruh  pada  hidrolisis  fibrin. Terbentuknya zona jernih dari proses hidrolisis fibrin pada uji fibrin plate.
Hasil optimasi kondisi fermentasi untuk memproduksi  enzim  fibrinolitik  dengan  perbedaan volume inokulum seperti ditunjukkan pada gambar 2.
Gambar  2.  Pengaruh  volume  inokulum  terhadap produksi enzim fibrinolitik (U/ml)
Optimasi  produksi  enzim  fibrinolitik  dilakukan dengan  volume  inokulum  (suspensi  jamur  25%T) yaitu 0,5 mL; 1,0 mL; 1,5 mL; 2,0 mL, dan diinkubasi pada  suhu  30oC  selama  42  jam.  Diperoleh  aktivitas fibrinolitik  berturut-turut  1,7  ±  0,1;  1,6  ±  0,5;  1,9  ± 0,2; 1,3 ± 0,1 U/ml. Aktivitas maksimum dicapai saat volume inokulum 1,5 mL dengan aktivitas 1,9 U/mL. Pengaruh  volume  inokulum  dalam  fermentasi  untuk memproduksi  enzim  fibrinolitik,  apabila  volume inokulum  yang  ditambahkan  semakin  meningkat maka  terjadi  pertumbuhan  spora  yang  terlalu  padat sehingga  menyebabkan  penurunan  aktivitas  enzim karena penurunan nutrisi (Rauf et al., 2010). Pada sisi lain,  volume inokulum yang rendah maka biomassa tidak  akan  mencukupi  dalam  memberikan  aktivitas enzim (Sher et al., 2011).
Pengaruh waktu inkubasi terhadap produksi enzim fibrinolitik ditunjukkan pada gambar 3.
Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, Vol.8 No.1 Juni 2021 Hal 1 - 6 P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048
Gambar  3.  Pengaruh  waktu  inkubasi  terhadap produksi enzim fibrinolitik
Variasi  waktu  inkubasi  dilakukan  dengan rentang  6  jam,  yaitu  30,  36,  42  dan  48  jam,  dengan volume  inokulum  (suspensi  jamur  25%T)  yang digunakan 1,0 mL dan suhu inkubasi 30oC. Diperoleh aktivitas  fibrinolitik  untuk  masing  –  masing  waktu inkubasi adalah 1,1 ± 0,1; 1,2 ± 0,4; 1,3 ± 0,2; dan 1,2 ± 0,1 U/mL. Aktivitas maksimum dicapai pada waktu inkubasi  42  jam  yaitu  1,3  U/mL.  Waktu  inkubasi penting untuk pertumbuhan miselia yang maksimum dan  untuk  menghindari  terjadinya  sporulasi  pada tempe  (Sher  et  al.,  2011).  Rauf  et  al.,  2010 menyatakan  bahwa  semakin  meningkat  waktu inkubasi  menyebabkan  terjadinya  penurunan  unit enzim karena terjadinya inaktivasi oleh protease lain. Pada  waktu  inkubasi  30  hingga  42  jam  terjadi peningkatan aktivitas enzim, hal tersebut menunjukkan  jamur  ada  pada  fase  logaritmik (pertumbuhan). Pada fase logaritmik jamur membutuhkan  energi  untuk  tumbuh  sehingga diperlukan enzim untuk memecah substrat protein di media sebagai sumber nutrisi karena tidak semuanya dapat  digunakan  secara  langsung  oleh  jamur.  Pada waktu  inkubasi  48  jam  terjadi  penurunan  aktivitas fibrinolitik,  menunjukkan  jamur  ada  pada  fase stasioner  hingga  fase  kematian.  pada  fase  tersebut terjadi  penurunan  nutrisi  sehingga  produksi  enzim oleh  jamur  juga  menurun.  Jumlah  jamur  yang  mati meningkat  pada fase stasioner hingga fase kematian juga mempengaruhi jumlah biomassa yang menghasilkan  enzim.  Pada  fase  kematian  terjadi pemecahan  protease  oleh  protease  lain  (autolisis) karena adanya usaha mempertahankan diri oleh jamur yang  masih  hidup  sehingga  memecah  protease  lain untuk dijadikan sebagai sumber nutrisi.
Pengaruh suhu inkubasi terhadap fermentasi untuk  produksi  enzim  fibrinolitik  ditunjukkan  pada gambar 4.
Gambar  4.  Pengaruh  Suhu  Inkubasi  terhadap produksi enzim fibrinolitik
Optimasi  produksi  dilakukan  pada  suhu  25,  30,  35 dan  40oC  dengan  volume  inokulum  1,0  mL  dan waktu  inkubasi  42  jam.  Diperoleh  aktivitas fibrinolitik berturut-turut adalah 1,0 ± 0,1; 1,1 ± 0,2; 1,3 ± 0,1 dan 0,9 ± 0,1 U/mL. Aktivitas maksimum dicapai  pada  suhu  35oC  yaitu  1,3  U/mL.  Pengaruh suhu  terhadap  produksi  enzim  adalah  pada pertumbuhan  miselia  jamur.  Suhu  yang  lebih  tinggi dari  suhu  optimum  memberikan  pengaruh  pada aktivitas metabolisme jamur yang akan menghambat pertumbuhan  miselia  (Rauf  et  al.,2010;  Sher  et  al., 2011). Jamur Rhizopus sp. merupakan mikroorganisme mesofilik yang memiliki pertumbuhan optimum pada suhu 25-37oC. Di bawah suhu  optimum  jamur  akan  memiliki  pertumbuhan yang  lambat  sehingga  produksi  enzim  juga  turun. Suhu  diatas  suhu  optimum  selain  memberikan pertumbuhan  jamur  yang  lambat  juga  dapat menyebabkan denaturasi enzim yang dihasilkan. Hasil  optimasi  kondisi  fermentasi  untuk  produksi protease dengan menggunakan Rhizopus oryzae (RO IIT  RB-13,  NRRL-21498)  pada  kulit  gandum didapatkan jumlah spora optimum adalah 2 x 105/ g kulit  gandum  dan  suhu  optimum  inkubasi  adalah 32 o C (Tunga et al., 1998).

## Kesimpulan
Tempe hasil fermentasi Rhizopus oryzae FNCC 6078 mengandung enzim fibrinolitik.
Volume  inokulum  optimum  dalam  memproduksi enzim  fibrinolitik  adalah  1,5  mL  suspensi  jamur Rhizopus oryzae FNCC 6078  (25% T) dalam 50,0 g kacang kedelai.
Suhu  inkubasi  optimum  dalam  produksi  enzim fibrinolitik adalah 35oC Waktu  inkubasi  optimum  dalam  produksi  enzim fibrimolitik adalah 42 jam

## Daftar Pustaka
Arunachalam, C., and Aiswarya, M.,2011. Microbial fibrinolytic enzyme – a deity for thrombolysis. Advanced Biotech, Vol. 10, Issue. 9, pp. 8  – 11.
Bakta,  I.M.,  2007.  Thrombosis  dan  usia  lanjut.  J.
Peny. Dalam, Vol. 8, No.2, hal. 148-160. Han,  B.Z.,  and  Nout,  M.J.R.,  2001,  Effect  of temperature, watter activity, and gas atmosphere on mycelia growth of tempe fungi Rhizopus  microsporus  var.  microsporus  and R.  microsporus  var.  oligosporus.  World Journal  of  Microbiology  and  Biotechnology, 16, pp. 853- 858.
Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, Vol.8 No.1 Juni 2021 Hal 1 - 6 P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048
Kotb, E., 2012. Fibrinolytic Bacterial Enzymes with Thrombolytic Activity. Heidelberg: Springer. Liu,  J.G.,  Xing,  J.M.,  Chang,  T.S.,  Liu,  H.Z.,  2006.
Purification of nattokinase by reverse micelles extraction  from  fermentation  broth:  effect  of temperature and phase volume ratio. Bioprocess Biosyst Eng, pp. 267-273
Rauf,  A.,  Irfan,  M.,  Nadeem,  M.,  Ahmed,  I.,  Iqbal, H.M.N.,  2010.  Optimization  of  growth conditions from Rhizopus oligosporus through solid  state  fermentation  of  sunflower  meal. International  Journal  of  Agricultural  and Biological Sciences, 1:1, pp. 40-43
Sher,  M.G.,  Nadeem,  M.,  Syed,  Q.,  Abass,  S.,  and Hassan,  A.,  2011.  Study  on  protease  from barley tempeh and in vitro protein digestibility.  Jordan  Journal  of  Biological Sciences, vol. 4, no. 4, pp. 257-264.
Sugimoto, S., Fuji, T., Morimiya, T., Johdo, O., and Nakamura, T., 2007. The Fibrinolytic Activity of  a  Novel  Protease  Derived  from  a Tempeh Producing Fungus Fusarium sp. BLB. Biosci, Botechnol, Biochem, 71, 70153-1-6.
Suri,  W.L.,  Syukur,  S.,  and  Jamsari,  2013.
Optimization of protease activity from Lactic Acid Bacteria (LAB) Pediococcus pentosaceus isolated from soursop fermentation  (Annona  muricata  L.).  Jurnal Kimia Unand, vol.2, no.1, pp. 18-25.
Tunga, R., Banerjee, R., Bhattacharyya, B.C., 1998. Optimizing  some  factors  affecting  protease production  under  solid  state  fermentation. Bioprocess Enginering, 19, pp. 187-190.
Yang, H. J., Park, S., Pak, V., Chung, K. R., Kwon, D. Y., 2011. Fermented soybean products and their bioactive compounds. In:  H. El-Shemy. Soybean  and  Health,  Egypt:  InTech,  pp.  22- 53.
Yoon, Seon-Joo, Yu, M., Sim, G., Kwon, S., Hwang, J.,  Shin,  J.,  Yeo,  I.,  and  Pyun,  Y.,  2002.
Screening and characterization of microorganism with fibrinolytic activity from fermented  foods.  J.  Microbiol  Biotechnol, 12(4), pp. 649-656.