Pengaruh Pemberian Bubuk Kakao ( Theobroma cacao L) Fermentasi Terhadap Profil Lipid Tikus Putih ( Rattus norvegicus Berkenhout, 1769) Hiperlipidemia
The Effect of Fermented Cocoa Powder ( Theobroma cacao L) on Lipids Profile of Hyperlipidemic Rats ( Rattus norvegicus Berkenhout, 1769) 1 2 Rinda Binugraheni , Nastiti Wijayanti
1)Jurusan D-III Analis Kesehatan, Fakultas Ilmu Kesehatan, Universitas Setia Budi
2) Jurusan S2 Biologi, Fakultas Biologi,Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta

## ABSTRAK
ABSTRACT

## PENDAHULUAN

## BIOMEDIKA
ISSN : 1979 - 035X (printed edition)
ISSN : 2302 - 1306 (electronic/Portal e-Journal)
Available online at www.biomedika.ac.id
Volume 8, No. 1, Maret 2015
Kakao  (Theobroma  cacao  L)  merupakan  salah  satu  komoditas  perkebunan  yang  besar  di  Indonesia.  Penelitian- penelitian yang telah dilakukan menunjukan bahwa kakao (Theobroma cacao L) mengandung senyawa polifenol antara lain  katekin,  epikatekin,  proantosianidin,  dan  antosianin  yang  berpotensi  sebagai  senyawa  antioksidan.  Penelitian  ini bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh  pemberian  bubuk  kakao  (Theobroma  cacao  L)  fermentasi  terhadap  profil  lipid tikus  hiperlipidemia.  Penelitian  menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap  dengan  lima  perlakuan  dan  tiga  ulangan. Perlakuan terdiri dari kelompok normal, kontrol positif, 3 kelompok uji bubuk kakao fermentasi masing-masing dengan dosis 0,2, 0,4, dan 0,8 gram /200 gram BB. Tikus diberi diet tinggi lemak selama 8 minggu, dan larutan bubuk kakao diberikan 4 minggu terakhir masa penelitian. Pengukuran uji profil lipid darah dilakukan pada minggu ke-0, 4 dan 8. Hasil penelitian menunjukan bahwa pemberian bubuk kakao fermentasi secara oral mampu menurunkan kadar kolesterol total, trigliserida, LDL, serta meningkatkan kadar HDL.
Kata kunci: bubuk  kakao  fermentasi, profil lipid, hiperlipidemia
Cocoa (Theobroma cacao L ) is one of the large commodities in Indonesia. Based on the researchs, cocoa contain polyphenols (catechin, epicathecin, proantosianidin, and antisoanin), that potentially became antioxidant. The research aim to study was to study the effect of cocoa powder on lipids profile of hyperlipidemic rats. Research design using  RCD  (Randomized  Complete Design)  with five treatment and  three replication.  Experimental rats divided  into 5 groups (normal group, high lipid diet group, 3 cocoa group dose 0,2, 0,4, and 0,8 g /200 g BB). Rats were fed with high lipid diet for 8 weeks and cocoa powder was given orally for 4 weeks from 4 weeks later in experimental days.  The    level  of    lipid  profile  was  measure  at 0, 4  and  8  weeks. The  results showed the  fermented  cocoa  powder decreased serum total cholesterol, LDL, triglicerides, and increased HDL levels.
fermented
fermented
Keywords : fermented cocoa powder, lipip profile, hyperlipidemic
Penyakit  degeneratif  menjadi  penyakit pembunuh  manusia  terbesar  di  dunia.  Penyakit degeneratif antara lain penyakit jantung koroner, diabetes  melitus,  kanker,  obesitas,  dislipidemia, dan stroke. Faktor yang menyebabkannya adalah pola  makan  yang  menyukai  masakan  cepat  saji ( fast  food )  dan  mengkonsumsinya  secara berlebihan sehingga terjadi hiperlipidemia.
Wilson,  2006).  Faktor-faktor  yang  menyebabkan hiperlipidemia  adalah  obesitas,  usia,  kurang  olah raga,  stres,  gangguan  metabolisme,  gangguan genetik,  dan  pola  konsumsi  makanan  sehari-hari yang  dapat  meningkatkan  konsentrasi  lipid. Adanya  dampak  negatif  dari  hiperlipidemia, maka  perlu  adanya  upaya  untuk  mengatasinya, salah  satunya  yaitu  dengan  pengaturan  pola makan  dan  minum  antara  lain  dengan mengkonsumsi  makanan  atau  minuman  yang kaya akan antioksidan sehingga dapat menetralkan radikal bebas.
Hiperlipidemia  merupakan  gangguan metabolisme  lipid  yang  ditandai  dengan peningkatan kadar kolesterol total, Low Density Lipoprotein (LDL),  trigliserida  dan  penurunan kadar High Density Lipoprotein (HDL) (Price & Kakao ( Theobroma cacao L) merupakan salah satu komoditas perkebunan yang besar di Indonesia
(Mulato  &  Suharyanto,  2011).  Biji  kakao  kaya akan senyawa fenolik antara lain katekin, epikatekin, proantosianidin, asam fenolat, tannin, dan flavonoid lainnya  (Othman et  al. 2007).  Laboratorium Brunswick  di Amerika  Serikat  melaporkan  bahwa bubuk  kakao  mempunyai  nilai  ORAC  ( Oxygen Radical  Absorbance  Capacity )  paling  tinggi  di antara berbagai jenis makanan dan minuman seperti sayuran, buah-buahan, sereal gandum, telur, daging, kacang dan jus buah (Mulato & Suharyanto, 2011). Lecumberri et  al. (2007)  menyatakan  bahwa konsumsi kakao fiber pada tikus hiperkolesterolemia dapat  memperbaiki  profil  lipid  dan  mengurangi peroksida lipid.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui pengaruh  pemberian  bubuk  kakao  ( Theobroma cacao L) fermentasi terhadap profil lipid antara lain kadar kolesterol total, trigliserida, LDL, dan HDL  pada tikus putih hiperlipidemia.
Alat  yang  digunakan  adalah  kandang  hewan uji  beserta  perlengkapannya  (penutup  kandang dan botol minum), jarum kanul, timbangan Ohaus, kapiler  hematokrit,  tabung  mikro,  mikropipet  10, 100  µl  dan  1000  µl,  sentrifuse,  vorteks,  ice  box, kuvet mikro, spektrofotometer UV Vis Shimadzu.

## BAHAN DAN METODE PENELITIAN Bahan
Bahan  yang  digunakan  adalah  20  ekor  tikus putih ( Rattus norvegicus Berkenhout, 1769) jantan galur  Spargue  Dawley,  umur  3  -  4  bulan  dengan berat  badan  200-300  gram  yang  dibeli  dari  Unit Pra  klinik  LPPT  UGM.  Bubuk    kakao    Varietas Forastero  bebas    lemak  fermentasi    diperoleh dari Pusat  Penelitian  Kopi  dan  Kakao  Indonesia di  Jember.  Akuades  untuk  melarutkan  bubuk kakao. Pakan AD II, minyak babi dan kuning telur puyuh  yang  diperoleh  dari  Pasar  Kranggan, Yogyakarta.  Bahan  kimia  yang  digunakan  untuk menganalisis profil lipid meliputi reagen kolesterol total, presipitan HDL, dan trigliserida dari DyaSis.
Alat
diet tinggi lemak, persiapan larutan bubuk kakao fermentasi  dengan  berbagai  dosis  perlakuan. Penelitian  ini  menggunakan  Rancangan  Acak Lengkap (RAL) dengan lima perlakuan dan tiga ulangan. Perlakuan terdiri dari kelompok kontrol, kontrol positif, perlakuan bubuk kakao fermentasi (0,2,  0,4  dan  0,8  gram/200  gram  BB/hari). Pemberian  diet  tinggi  lemak  dilakukan  selama 8  minggu,  dan  larutan  bubuk  kakao  diberikan 4  minggu  terakhir  masa  penelitian.  Pengukuran uji  profil  lipid  darah  dilakukan  setelah  masa aklimasi,  setelah  4  minggu  diet  tinggi  lemak, dan  diakhir  masa  penelitian  setelah  perlakuan dengan bubuk kakao

## Metode Penelitian
Penelitian  dilakukan  dalam  beberapa  tahap yang dimulai dari persiapan hewan uji, persiapan
Kadar kolesterol total diukur secara enzimatis dengan metode CHOD-PAP ( Cholesterol Oxidase Para  Aminophenazon )  yang  dihitung  dengan menggunakan rumus sebagai berikut:
Kadar Kolesterol Total
Kolesterol total (mg/dl) = x konsentrasi standar (mg/dl)
x konsentrasi standar (mg/dl) x konsentrasi standar (mg/dl) ?  a sampel
?  a sampel
?  a sampel ?  a standar ?  a standar
?  a standar
Pengukuran  kadar  trigliserida  dengan menggunakan metode GPO-PAP. Kadar trigliserida dihitung dengan rumus:
Kadar Trigliserida
Trigliserida (mg/dL) =
Pengukuran  kadar  HDL  dilakukan  dengan metode CHOP-PAP. Prinsip dari metode ini adalah pengendapan  lipoprotein  densitas  rendah  (LDL dan VLDL) dengan penambahan reagen presipitan yang  tersusun  oleh  asam  fosfotungstat  dan magnesium klorida (MgCl ). Kadar HDL dihitung 2 dengan rumus sebagai berikut:
Kadar HDL
HDL (mg/dl) =
Kadar  LDL  diperoleh  dari  perhitungan  dengan persamaan Friedewald sebagai berikut (Lee et al . 2011) :
Kadar LDL
LDL (mg/dL)=
Kolesterol Total - HDL - Trigliserida 5

## HASIL DAN PEMBAHASAN Kadar Kolesterol Total
Berdasarkan hasil penelitian, Kadar kolesterol ata-rata  sebelum  perlakuan  (kecuali  kontrol) adalah  77,70  mg/dl,  setelah  diberi  pakan  tinggi lemak  selama  4  minggu  kadar  kolesterol  total tikus  menjadi  101,38  mg/dl.  Dengan  demikian terjadi peningkatan kadar kolesterol total sebesar 30,47%  akibat  induksi  pakan  tinggi  lemak  yang berupa  minyak  babi  dan  kuning  telur  puyuh. Pada  penelitian  ini  terjadi  penurunan  kadar kolesterol total kelompok perlakuan bubuk kakao pada  tingkat  yang  bervariasi.  Penurunan  paling tinggi terjadi pada kelompok bubuk kakao dengan dosis  0,8  g.  Hasil  ini  menunjukkan  bahwa pemberian  bubuk  kakao  fermentasi  selama  4 minggu  berpotensi  menurunkan  kadar  kolesterol total  pada  tikus  hiperlipidemia.  Penurunan  ini diduga disebabkan adanya senyawa fenolik yang terdapat pada bubuk kakao. Othman et al. (2007) menyatakan  bahwa  pada  bubuk  kakao  terdapat senyawa  fenolik  antara  lain  katekin,  epikatekin, proantosianidin,  asam  fenolat,  tannin,  dan flavonoid lainnya.
berpotensi dalam mencegah atherosklerosis (Bravo et  al .  2008).  Baba et  al. (2000)  juga  menyatakan bahwa  epikatekin  dalam  bubuk  kakao  dapat meningkatkan  aktivitas  antioksidan  plasma. Penelitian  yang  dilakukan  oleh  Suzuki et  al. (2005), menyatakan bahwa senyawa katekin dalam teh  ( Camelia  sinensis ),  dapat  menurunkan kolesterol  total  yaitu  dengan  cara  meningkatkan ekskresi  kolesterol  feses.  Menurut  Aremu et  al. (1995),  selain  polifenol  bubuk  kakao  juga mengandung serat, mineral dan theobromin. Serat yang  terdapat  pada  bubuk  kakao  juga  berpotensi sebagai  penghambat  penyerapan  kolesterol  oleh vili  intestinum  sehingga  kadar  kolesterol  total darah menurun.
Tabel 1. Kadar Kolesterol Total Tikus Putih
Kelompok KOLESTEROL TOTAL (mg/dl) Peningkatan(+) atau Penurunan(-) (%) Awal Minggu ke-0 Hiperlipid Minggu ke-4 Akhir Minggu ke-8 Kontrol 72,00±2,20 a 83,47±6,73 b 85,33±1,69 a +2,24±11,17 a Kontrol positif 83,47±2,27 a 114,13±2,88 a 124,67±2,76 b +9,29±3,05 a Bubuk 0,2 g 77,60±6,00 a 90,67±9,61 a 86,67±24,11 a -4,56±10,87 a Bubuk 0,4 g 72,53±9,05 a 106,67±9,61 a 95,475±5,33 a -10,50±5,25 a Bubuk 0,8 g 82,93±2,37 a 112,00±4,62 a 98,67±3,13 a -11,90±11,31 a
Kadar  trigliserida  rata-rata  sebelum  perlakuan (kecuali  kontrol)  adalah  63,53  mg/dl,  setelah diberi pakan tinggi lemak selama 4 minggu kadar trigliserida menjadi 90,26 mg/dl. Dengan demikian terjadi  peningkatan  kadar  trigliserida  sebesar 42,07%.
Tabel 2. Kadar Trigliserida Tikus Putih
Kelompok TRIGLISERIDA (mg/dl) Peningkatan(+) atau Penurunan(-) (%) Awal Minggu ke-0 Hiperlipid Minggu ke-4 Akhir Minggu ke-8 Kontrol 61,33±8,83 a 68,33±4,60 a 65,00±1,83 a, b -4,26±0,46 a Kontrol positif 69,67±3,83 a 89,00±9,52 b 115,67±5,49 d +29,03±11,40 c Bubuk 0,2 g 68,67±9,62 a 97,67±6,36 b 72,00±1,16 b, c -25,50±6,01 a,b Bubuk 0,4 g 60,00±25,27 a 103,00±6,25 b 68,33±2,03 a ,b,c -33,35±2,92 a,b Bubuk 0,8 g 58,00±4,04 a 93,33±8,82 b 55,33±4,91 a -40,39±,35 b
Kandungan epikatekin yang tinggi pada biji kakao  memiliki  aktivitas  antioksidan  dan

## Kadar Trigliserida
Berdasarkan  penelitian  ini,  pada  minggu  ke-8 penurunan  kadar  trigliserida  paling  besar  terjadi pada kelompok bubuk kakao dosis 0,8 g/200 g BB, sedangkan penurunan yang paling kecil terjadi pada kelompok bubuk kakao fermentasi 0,2 g/200 g BB.
Kadar  trigliserida  setelah  pemberian  bubuk kakao  selama  4  minggu  mengalami  penurunan yang  signifikan.  Menurut  Zern  &  Fernandez (2005), polifenol  merupakan sebuah  antioksidan yang   dapat  menyebabkan  peningkatan aktivitas enzim  lipoprotein  lipase dan juga  berpengaruh terhadap  penurunan aktivitas  MTP  ( Microsomal triglyceride-Transfer    Protein ).  Trigliserida  yang terdapat  pada  kilomikron  dan  VLDL  akan dihidrolisis   menjadi asam   lemak   dan   gliserol oleh  enzim  lipoprotein  lipase.  Kerja  enzim lipoprotein  lipase  tersebut  menyebabkan hilangnya  trigliserida  lipoprotein  dari  sirkulasi sekitar 90% trigliserida yang ada pada kilomikron dan  menghasilkan  sisa  kilomikron  yang  kaya kolesterol dan ester  kolesteril. Dengan demikian peningkatan  aktivitas  lipoprotein  lipase  dapat menurunkan kadar trigliserida darah (Roach et al. 2003).
Pemberian  diet  tinggi  lemak  berpengaruh terhadap kadar HDL tikus putih. Kadar HDL tikus putih cenderung mengalami peningkatan walaupun secara  tidak  signifikan.  Kadar  HDL  tikus  setelah pemberian  bubuk  kakao  juga  mengalami peningkatan  pada  beberapa  tingkat  dosis  yang bervariasi (Tabel 3).
Kadar  HDL Tabel 3. Kadar HDL Tikus Putih Kelompok HDL (mg/dl) Peningkatan (+)
atau Penurunan(-) (%) Awal Minggu ke-0
hiperlipid
Minggu ke-4 Akhir Minggu ke-8 Kontrol 28,00±2,92 a 31,38±4,29 a 30,22±1,22 a -3,68±16,73 a Kontrol positif 27,11±2,71 a 33,33±1,75 a 30,22±2,93 a
-9,89±11,86 a Bubuk 0,2 g 28,40±1,27 a 30,58±2,00 a 31,11±1,94 a +1,66±12,74 a Bubuk 0,4 g 29,24±3,94 a 37,07±4,44 a 37,78±2,35 a +1,90±19,93 a Bubuk 0,8 g 31,11±3,20 a 37,78±4,51 a 39,11±1,94 a
+3,46±7,34 a
Senyawa  polifenol  yang  terdapat  pada  bubuk kakao  berfungsi  menurunkan  kadar  LDL  dan meningkatkan  kadar  HDL,  yang  pada  akhirnya akan  menyebabkan  peningkatan  metabolisme kolesterol  empedu  untuk  dikeluarkan.  Kandungan flavonoid  dapat  meningkatkan  kadar  HDL  melalui mekanisme  peningkatan  kadar  Apolipoprotein  A yang  merupakan  apolipoprotein  utama  dalam pembetukan  HDL  oleh  hati.  Baba et  al. (2007), berpendapat  bahwa dark  chocolate dan  bubuk kakao yang kaya akan polifenol dapat meningkatkan kadar HDL-kolesterol plasma.
beberapa  tingkat  variasi  dosis  dapat  meningkatkan kadar HDL secara tidak signifikan. Kelompok bubuk kakao fermentasi dengan dosis 0,8 g/200 g BB dapat meningkatkan  kadar  HDL  paling  besar  apabila dibandingkan  dengan  kelompok  yang  lain.  Hal  ini menunjukan  bahwa  semakin  besar  dosis  yang diberikan  semakin  baik  dalam  meningkatkan  kadar HDL.
Masa  induksi  4  minggu  dengan  pemberian pakan  tinggi  lemak  pada  penelitian  ini  dapat meningkatkan rerata kadar LDL tikus penelitian dari 36,91 mg/dl menjadi 49,09 mg/dl. Dengan demikian pemberian pakan tinggi lemak secara umum mengakibatkan peningkatan rerata kadar LDL tikus penelitian sebesar 32,99% (Tabel 4).
Kadar LDL
Tabel 4. Kadar LDL Tikus Putih
Kelompok LDL (mg/dl) Peningkatan(+) atau Penurunan (-) (%) Awal Minggu ke-0 hiperlipid Minggu ke-4 Akhir Minggu ke-8 Kontrol 35,20±3,48 a 37,36±5,79 a 44,44±4,36 a +18,68±13,90 a Kontrol positif 42,42±0,43 a 63,00±3,75 a 71,11±4,34 b +12,62±10,67 a Bubuk 0,2 g 35,46±7,02 a 40,56±10,65 a 41,22±12,59 a +1,43±11,53 a Bubuk 0,4 g 31,29±7,97 a 49,00±15,02 a 44,02±5,08 a -10,46±28,83 a Bubuk 0,8 g 40,22±4,06 a 55,55±8,22 a 48,49±8,33 a
-12,67±25,44 a
Pada tabel 3, diketahui bahwa perlakuan pemberian  bubuk  kakao  fermentasi  dengan
Secara  umum  rata-rata  kadar  kolesterol  LDL tikus  penelitian  mengalami  penurunan.  Hal  ini diduga karena kandungan katekin dan epikatekin dalam bubuk kakao mampu mencegah percepatan oksidasi  kolesterol  LDL.  Penghambatan  oksidasi kolesterol  LDL  dapat  mencegah  penyumbatan pembuluh  darah  (Osakabe et  al. 2000;  Baba et al., 2001). Biji kakao tergolong bahan pangan yang mempunyai senyawa polifenol yang tinggi. Flavonoid  dalam  biji  kakao  merupakan  senyawa polifenol  yang  termasuk  dalam  kategori antioksidan  yang  sangat  aktif  dalam  melindungi sel-sel tubuh dari serangan radikal bebas (Mulato &  Suharyanto,  2011). Aktivitas  flavonoid  dalam bubuk kakao mampu menghambat reaksi oksidasi LDL juga dikemukan oleh Wan et al. (2001).
Pemberian pakan tinggi lemak  selama 4 minggu pada  tikus  penelitian  dapat  meningkatkan  kadar LDL  karena  terjadi  akumulasi  kolesterol  yang berlebih  dalam  tubuh.  Setelah  pemberian  bubuk kakao  fermentasi  selama  4  minggu  pada  tikus penelitian  dapat  terjadi  penurunan  kadar  LDL pada  dosis  0,4  dan  0,8  g/200  g  BB  sebesar  12,72 dan 10,16 %, sedangkan pada dosis 0,2 g/200 g BB terjadi peningkatan sebesar 3,84%.
Kesimpulan yang dapat diperoleh dari penelitian ini adalah:

## DAFTAR PUSTAKA

## KESIMPULAN
Pemberian  bubuk  kakao  fermentasi  dapat menurunkan  kadar  kolesterol  total,  trigliserida, LDL serta mampu meningkatkan kadar HDL tikus putih  hiperlipidemia.Pemberian  bubuk  kakao fermentasi  dapat  menurunkan  kadar  kolesterol total, trigliserida, LDL serta mampu meningkatkan kadar HDL tikus putih hiperlipidemia.
Zern, T.L., & Fernandez, M.L. 2005. Cardioprotective Effects of  Dietary Polyphenols.  Recent Advances  in  Nutritional Sciences. Journal Nutrition . 135: 2291–229.
Aremu,  C.Y., Agiang,  M.A.,  & Ayatse,  J.O.  1995.  Nutrient  & Antinutrient Profiles of Raw and Fermented Cocoa Beans.
Plants Foods Human Nutrition. 48: 217223. Baba, S., Osakabe, N., Natsume, M., Yasuda, A., Takizawa, T., Nakamura, T., & Terao, J. 2000. Cocoa Powder Enhance The Level of Antioxidative Activity in Rat Plasma. British Journal of Nutrition . 84: 673680.
Baba, S., Osakabe, N., Natsume, M., Muto, Y., Takizawa T., & terao,  J.  2001.  Absorbtion  and  Uninary  Excretion  of  () Epicatechin  after  Administration  of  Different  Levels  of Cocoa Powder or ()Epicatechin in Rats. Journal Agriculture Food Chemistry .49:60506056.
Baba,  S.,  Natsume,  M.,  Yasuda,  A.,  Nakamura,  Y.,  Tamura,  T., Osakabe,  N.,  Kanegae,  M.,  &  Kondo,  K.  2007.  Plasma LDL and HDl Cholesterol and Oxidized LDL Concentrations are Alterd  in  Normoand  Hypercholesteromic  Humans  after intake  of  Different  Levels  of  Cocoa  Powder .  The  Journal of Nutrition. 137:14361441.
Bravo,  L.,  Lecumberri,  E.,  Mateos,  R.,  Ramos,  S.,  Izquierdo Pulido, M., & Goya, L. 2008. A Diet Rich in Dietary Fibre from Cocoa Improves Lipid Profile. AgroFOOD industry hi-tech . 19:1012. Mulato, S., & Suharyanto, E. 2011. Kakao, Cokelat & Kesehatan. Pusat Penelitian Kopi dan Kakao Indonesia. Jember. Lecumberri,  E.,  Goya,  L.,  Mateos,  R.,  Alfa,  M.,  Ramos,  S., Izquierdo  Pulido,  M.,  &  Bravo,  L.  2007. A  Diet  Rich  in Dietary  Fiber  from  Cocoa  Improves  Lipid  Profile  and Reduces Malondialdehyde in Hypercholesterolemic Rats.
Journal nutrition . 23: 332341.
Lee, S.J., Kim, C.W., Jang, H.J.,Cho, S.Y., Choi, J.W. 2011. AntiHyperlipidemia  and Antiarteriosclerosis  Efeect  of Laminaria japonica in Sprague Dawley Rats. Fisheries and Aquatiq Sciences .14(4):235241.
Osakabe, N., Natsume, M., Adachi, T., Yamagishi, M., Hirano, R., Takizawa T., Itakura, H., & Kondo, K. 2000. Effect of Cacao  Liquor  Polyphenols  on  the  Susceptibility  of  Low Density Lipoprotein to Oxidation in Hypercholesteromic Rabbits. Journal Atherosclerosis Thrombrosis . 7:164168. Othman,  A.,  Ismail,  A.,  ghani,  N.A.,  &  Adenan,  I.  2007.
Antioxidant Capacity and Phenolic Content of Cacao Bean : Food Chemistry . 15231530.
Price, S.A. & Wilson, L.M. 2006. Patofisiologi, Konsep Klinis, ProsesProses Penyakit . Edisi 6. EGC. Jakarta. Roach. 2003. Metabolism an Nutrition, Elsevier , Philadelpia. Suzuki,  Y.,  Kobayashi,  M.,  Unno,  T.,  Nozawa, A.,  Sagesaka, Y.M.  &  Kakuda,  T.  2005.  Hypolipidemic  Effect  of  Tea Catechin with a Galloy Moiety in Hamster Fed a High Fat Diet. Nippon Shokuhin Kagaku Kaishi . 52:167171. Wan, Y., Vinson, J.A., Etherton, T.D., Proch, J., Lazarus, S.A., & Kriseetherton, P.M. 2001. Effect of Cocoa Powder and Dark  Chocolate  on  LDL  Oxidative  Susceptibility  and Prostaglandin  Concentrations  in  Human. The  American Journal of Clinical Nutrition . 74:596 – 602.