© 2021 Penulis. Dibawah lisensi CC BY-SA 4.0. Ini adalah artikel Akses Terbuka yang didistribusikan di bawah ketentuan Creative Commons Attribution (CC BY), yang mengizinkan penggunaan, distribusi, dan  reproduksi tanpa batas dalam media apa pun, selama penulis dan sumber aslinya disebutkan. Tidak diperlukan izin dari penulis atau penerbit.

## Journal of Experimental and Clinical Pharmacy (JECP)
2024, 4(2), 72-81
Research Article
.
Flavonoid  terdiri  dari  15  molekul  yang  tersusun  dalam  susunan  C6-C3-C6  yang merupakan senyawa polifenol. Senyawa ini berbentuk kerangka karbon dan terurai menjadi dua set: C6 dan C3. Daun mimba ( Azadiractha indica A. Juss) mengandung flavonoid yang memiliki sifat antioksidan, antibakteri, dan antikanker. Penelitian ini bertujuan untuk mengidentifikasi kelompok senyawa dalam daun mimba ( Azadirachta indica A.  Juss)  dan  menentukan  kadar  flavonoidnya.  Ekstraksi  dilakukan menggunakan teknik maserasi dengan pelarut etil asetat untuk mendapatkan ekstrak yang  kemudian  diuji  melalui  skrining  fitokimia.  Pengukuran  kadar  flavonoid dilakukan  dengan  metode  spektrofotometri  UV-Vis.  Dari  hasil  ekstraksi,  diperoleh rendemen  ekstrak  sebesar  5,83%.  Hasil  skrining  fitokimia  menunjukkan  adanya kandungan  flavonoid  dan  alkaloid.  Kadar  flavonoid  ditentukan  menggunakan kuersetin sebagai standar pembanding, dengan persamaan garis y = 0,0739x + 0,0776. Kesimpulannya,  ekstrak  etil  asetat  mengandung  flavonoid  dengan  kadar  1,183  ± 0,018%.
Kata kunci : Mimba; identifikasi; spektrofotometri; flavonoid
Flavonoids  consist  of  15  molecules  arranged  in  a  C6-C3-C6  configuration,  which  are polyphenolic compounds. These compounds form a carbon framework and are divided into two sets:  C6  and  C3.  Neem  leaves  (Azadirachta  indica  A.  Juss)  contain  flavonoids  that  have antioxidant, antibacterial, and anticancer properties. This study aims to identify the group of compounds in neem leaves (Azadirachta indica A. Juss) and determine their flavonoid content. Extraction was carried out using the maceration technique with ethyl acetate as a solvent to obtain an extract that was then tested through phytochemical screening. Flavonoid content was measured  using  the  UV-Vis  spectrophotometric  method.  The  extraction  process  yielded  an extract with a percentage of 5.83%. Phytochemical screening results indicated the presence of flavonoids and alkaloids. The flavonoid content was determined using quercetin as a reference standard,  with  the  equation  y  =  0.0739x  +  0.0776.  In  conclusion,  the  ethyl  acetate  extract contains flavonoids with a concentration of 1.183 ± 0.018%.
Key words: Azadiractha indica A. Juss; identification; spectrophotometry; flavonoid

## ABSTRAK
Identifikasi  dan  Penetapan  Kadar  Flavonoid  Ekstrak  Etil Asetat  Daun  Mimba  ( Azadiractha  indica A.  Juss)  Metode Spektrofotometri UV- Vis
Yuri Pratiwi Utami 1* , Imrawati Imrawati 2 , Suwahyuni Mus 3 , Rahmah Mustarin 4 , Ainun Jariah 4
1 Departemen Biologi Farmasi, Program Studi Sarjana Farmasi, Universitas Almarisah Madani, Sulawesi Selatan, Indonesia
2 Departemen Analisis Farmasi Kimia Medisinal, Program Sarjana Farmasi, Universitas Almarisah Madani, Sulawesi Selatan, Indonesia.
3 Departemen Farmakologi dan Farmasi Klinik, Program Sarjana Farmasi, Universitas Almarisah Madani, Indonesia.
4 Program Studi Sarjana Farmasi, Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan, Universitas Muhammadiyah Makassar, Sulawesi Selatan, Indonesia.

## INFO ARTIKEL
Submit : 20.Mar.2024 Revisi : 03.Agu.2024
Diterima : 09.Agu.2024
*Corresponding Author: Yuri Pratiwi Utami, Departemen Biologi Farmasi, Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Almarisah Madani Email: yuriutami88@ gmail.com

## PENDAHULUAN
Daun mimba ( Azadirachta indica A. Juss)  adalah tanaman yang digunakan untuk  pengobatan.  Tanaman  mimba  berasal  dari  India,  tetapi  juga  dapat ditemukan di hutan Asia Tenggara, termasuk di Mauritius, Karibia, Fiji, Amerika dan Asia Selatan, Sri Lanka, Malaysia, Pakistan, Thailand, dan Andhra Pradesh. Di Indonesia, mimba banyak ditanam di pantai utara Lombok, Bali, Subang, dan Jawa Timur. Mimba adalah tanaman yang tumbuh di daerah tropis dan subtropis. Penggunaan  mimba  dalam  pengobatan  tradisional  telah  ada  sejak  zaman prasejarah. Beberapa aktivitas biologis, seperti sifat antibakteri, anti-inflamasi, dan antioksidan, telah ditemukan dalam ekstrak daun mimba (Utami, Wahyuddin, et al ., 2024).
Salah satu senyawa kelompok fenol yang terbesar yang dapat ditemukan di alam yakni flavonoid. Tumbuhan mengandung zat berwarna merah, ungu, biru dan  beberapa zat  kuning.  Lima  belas atom  karbon  membentuk kerangka  dasar karbon flavonoid. Untuk membentuk susunan C6-C3-C6 tersusun dari dua cincin benzene (C6) terikat pada rantai propan (C3), yang menghasilkan  struktur: 1,3- diarilpropan atau neoflavonoid. Tergantung pada tingkat oksidasi rantai propana dalam sistem 1,3-diarilpropana, banyak jenis senyawa flavonoid yang dihasilkan. Sering  disebut  sebagai  flavonoida  utama,  flavonol,  flavon,  dan  antosianidin adalah jenis flavonoid yang sangat umum di alam. Banyak flavonoida ini berasal dari tingkat hidroksilasi, alkoksilasi, atau glikosilasi yang berbeda yang dimiliki struktur.  Flavonoid  merupakan  senyawa  polar  karena  mengandung  gugus hidroksil yang tidak tersubstitusi. Dalam penelitian ini, metode ekstraksi maserasi digunakan (Tehubijuluw et al ., 2019).
Flavonoid  mempunyai  sifat  antioksidan  karena  adanya  gugus  hidroksil yang terikat pada cincin karbon aromatik. Senyawa ini mampu menangkal radikal bebas  yang  dihasilkan  selama  peroksidasi  lemak.  Oleh  karena  itu, mengidentifikasi  dan  mengukur  komponen  ini  sebagai  antioksidan  menjadi sangat  penting.  Mengingat  pentingnya  senyawa  flavonoid,  perlu  dilakukan penelitian untuk menentukan jumLah flavonoid yang terkandung dalam tanaman mimba.  Dengan  demikian,  penggunaan  tanaman  mimba  sebagai  alternatif pengobatan  herbal  dapat  lebih  dipertimbangkan,  dan  masyarakat  dapat  lebih bertanggung jawab dalam penggunaannya (Fadillah et al ., 2017).
Flavonoid  memiliki  berbagai  fungsi  biokimia,  termasuk  melawan  kanker, serta  memiliki  sifat  antioksidan,  antibakteri,  dan  antivirus.  Dalam spektrofotometri,  flavonoid  menunjukkan  penyerapan  kuat  yang  berasal  dari gugus aromatik terkonjugasi. Senyawa ini mampu menangkal radikal bebas yang dihasilkan selama peroksidasi lemak (Maryam et al ., 2023). Penelitian mengenai sifat fisikokimia telah dilakukan oleh Utami et al . (2024), untuk ekstrak n-heksan dan etil asetat. Penelitian ini menunjukkan bahwa variasi pelarut yang digunakan dalam  proses  ekstraksi  dapat  mempengaruhi  sifat  fisikokimia  dari  ekstrak.

## Identifikasi dan Penetapan Kadar Flavonoid Ekstrak Etil Asetat Daun Mimba
Penggunaan  etil  asetat  sebagai  pelarut  menghasilkan  ekstrak  dengan  sifat fisikokimia yang lebih baik, termasuk dalam hal persentase rendemen, kandungan senyawa  larut,  hasil  skrining  fitokimia,  penentuan  susut  pengeringan,  dan penentuan berat jenis, dibandingkan dengan penggunaan n-heksana.
Kandungan  flavonoid  yang  dihasilkan  dari  ekstraksi  sangat  dipengaruhi oleh  jenis  pelarut  yang  digunakan.  Etil  asetat  terbukti  mampu  mengekstraksi jumLah flavonoid yang lebih besar (Kusuma et al ., 2018). JumLah flavonoid yang terkandung  dalam  daun  mimba  berperan  penting  dalam  menentukan  aktivitas biologis yang dihasilkan. Sebagaimana uraian yang dijelaskan, tujuan dilakukan penelitian  untuk  menentukan  komposisi  flavonoid  dan mengidentifikasi  gugus senyawa dalam  ekstrak  etil  asetat  daun mimba  menggunakan  spektrofotometri UV-Vis.

## MATERIAL DAN METODE

## Material
Peralatannya antara lain gelas kimia, gelas ukur, batang pengaduk, kertas saring,  corong,  labu  erlenmeyer,  penangas  air,  timbangan  analitik,  mikropipet, pipet  penetes,  tabung  reaksi,  dan  spektrofotometer  UV-Vis.  Bahan  yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun mimba ( Azadirachta indica A. Juss ), Aluminium  klorida(AlCl 3 ) , amonia  (NH 3 ),  asetat  anhidrat  (C 4 H 6 O 3 ),  asam  sulfat (H 2 SO 4 ) 2N, aquadest (H 2 O), etanol (C 2 H 5 OH), etil asetat (CH 3 COOC 2 H 5 ), Besi (II) klorida (FeCl 2 ) 1%, Asam sulfat (H 2 SO 4 ), kloroform (CHCl 3 ), asam klorida (HCl) pekat,  metanol  (CH 3 OH),  Natrium  hidroksida  (NaOH)  1M,  Natrium  nitrit (NaNO 2 ),  n-heksan  (C 6 H 14 ),  larutan  Besi  (III)  klorida  (FeCl 3 )  1%,  pereaksi Dragendrof, pereaksi Mayer, pereaksi Wagner, pereaksi Dragendrof, serbuk Mg, dan kuersetin.

## Metode

## Penyiapan Sampel
Daun  mimba  yang  digunakan  sebagai  sampel,  diambil  dari  lingkungan sekitar  Masjid  Ikhtiar  di  Jalan  Sunu,  Kompleks  UNHAS,  Makassar,  Sulawesi Selatan. Setelah dipanen, daun mimba dipisahkan menjadi daun kering dan daun segar,  lalu  dicuci  dengan  air  mengalir  untuk  membersihkan  sampel.  Proses pengeringan  dilakukan  dengan  sinar  matahari  secara  tidak  langsung  setelah bahan diperkecil ukurannya. Untuk mempercepat pengeringan dan menghindari pengaruh  cuaca,  pengeringan  dapat  dilanjutkan  di  dalam  lemari  pengering. Setelahnya,  sampel  dapat  digiling  menjadi  serbuk  menggunakan  mesin penggiling.

## Identifikasi dan Penetapan Kadar Flavonoid Ekstrak Etil Asetat Daun Mimba

## Proses Ekstraksi
Sebanyak  250  gram  simplisia  dimasukkan  ke  dalam  wadah,  lalu ditambahkan 3 liter pelarut etil asetat. Proses ekstraksi selama 3 hari dan diaduk tiap  8  jam  sekali.  Setelah  tiga  hari,  disaring  hasil  dari maserasi.  Hasil  ekstraksi berupa residu dimaserasi kembali dengan masing-masing 1 L pelarut yang sama selama  dua  hari.  Kemudian  menggunakan rotary  evaporator ekstrak  cair  yang dihasilkan  dipekatkan  hingga  terbentuk  ekstrak  pekat  (Utami et  al .,  2024). Selanjutnya dilakukan perhitungan %rendemen dengan rumus:
% Rendemen = 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 𝑘𝑒𝑛𝑡𝑎𝑙 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡𝑠𝑖𝑚𝑝𝑙𝑖𝑠𝑖𝑎 x 100%

## Skrining Fitokimia
Analisis kandungan senyawa dalam daun mimba ( Azadirachta indica A. Juss) dilakukan melalui skrining fitokimia.

## Uji Golongan Alkaloid
Dicampurkan 1 mL ekstrak, kemudian 5 mL kloroform dan 5 mL amonia, panaskan, dihomogenkan dan difiltrasi. Lima tetes asam sulfat 2N ditambahkan ke setiap filtrat, dikocok, dan didiamkan. Larutan ini diuji dengan menggunakan pereaksi  Dragendorff,  pereaksi  Mayer,  dan  pereaksi  Wagner.  Adanya  alkaloid terbentuknya  endapan  berwarna  jingga,  coklat,  atau  putih  menunjukkan (Imrawati et al. , 2023).

## Uji Golongan Flavonoid
Dicampurkan  1  mL  ekstrak,  kocok,  panaskan,  kocok  kembali  dan  saring. Sebanyak 0,1 g bubuk Mg dan ditambahkan dua tetes HCl pekat ke filtrat yang dihasilkan.  Menunjukkan  adanya  senyawa  flavonoid  jika  terbentuknya  warna merah pada lapisan etanol (Oktaria, 2023).

## Uji Golongan Tanin
Dicampurkan  1  mL  ekstrak,  didihkan  dengan  20  mL  air,  lalu  dilakukan penyaringan,  ditambahkan  FeCl 1%  tiga  tetes  dan  positif  menunjukkan  adanya tanin  jika  terbentuk  warna  coklat  kehijauan  atau  biru  kehitaman  (Utami et  al ., 2024).

## Uji Golongan Saponin
Dalam tabung reaksi, ekstrak 1 mL ditambahkan 10 mL air panas ke dalam tabung.  Selama  10  detik  dikocok  dengan  kuat  yang  sebelumnya  didinginkan. Apabila terbetuk buih, positif mengandung saponin. Penegasan buih tidak hilang
jika terbentuk dalam waktu 10 menit atau lebih dan ditambahkan 1 tetes HCl 2 N (Utami, Wahyuddin, et al ., 2024).

## Uji Golongan Steroid
Sebanyak 1 mL ekstrak dicampur dengan 3 mL kloroform atau 3 mL etanol 70%, dan ditambahkan asam sulfat pekat 2 mL dan asam asetat anhidrat 2 mL. Jika hasilnya  positif,  akan  muncul  warna  biru  atau  hijau  dari  warna  ungu  yang terbentuk (Imrawati, Utami, & Hardianto, 2023).

## Uji Golongan Terpenoid
Sebanyak 1 mL ekstrak dicampur dengan 3 mL kloroform atau 3 mL etanol 70%, dan ditambahkan asam asetat anhidrat 2 mL dan asam sulfat pekat 2 mL. Adanya  senyawa  terpenoid  ditunjukkan  oleh  perubahan  warna  permukaan menjadi kecoklatan (Imrawati, Utami, & Hardianto, 2023).

## Penetapan Kadar Flavonoid

## Pembuatan Kuersetin
Ditimbang  10  mg  kuersetin,  dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur  dan dicampur 10 mL etanol p.a. untuk menghasilkan konsentrasi 1000 ppm (Utami et al ., 2024).

## Pengukuran Larutan Pembanding
Larutan  standar  kuersetin  dengan  konsentrasi  2,5  ppm  hingga  12,5  ppm dibuat  dengan memipet  larutan  masing-masing  sebanyak  125  µl  hingga  625  µl, lalu ditambahkan AlCl 3 10 % 0,1 mL, natrium asetat 1 M 0,1 mL dan dicukupkan hingga  5  mL  aquadest,  lalu  selama  30  menit  diinkubasi.  Absorbansi  seluruh larutan  diukur  pada  panjang  gelombang  maksimum  menggunakan spektrofotometer  UV-Vis.  Pengukuran  blanko  dengan  cara  yang  sama  tanpa menambahkan AlCl 3 (Utami et al ., 2024).

## Pengukuran Larutan Uji
Sebanyak  0,1  gram  ditimbang  ekstrak  daun  mimba  kemudian  dilarutkan dan dicukupkan hingga 10 mL pada ukur hingga didapatkan konsentrasi larutan (Utami et al ., 2024) .

## Penentuan Kadar Flavonoid
Ditambahkan 0,1 mL AlCl 3 10% ke dalam 1 mL larutan uji untuk etil asetat, kemudian natrium asetat 1 M 0,1 mL, dan ditambahkan etanol p.a. hingga 5 mL. Setelah  itu,  diaduk  hingga  homogen  dan  dinkubasi  selama  30  menit.  Untuk
mengukur  absorbansi  setiap  larutan  menggunakan  spektrofotometer  Uv-Vis dengan panjang gelombang maksimum.

## HASIL
Estrak  cair  dari  proses  maserasi  kemudian  diuapkan  menggunakan peralatan rotary  evaporator .  Tujuannya  untuk  memekatkan  larutan  sehingga diperoleh ekstrak yang pekat. Diperoleh berat basah sebesar 5,83%. (Tabel 1).
Tabel 1. Rendemen Ekstrak Azadirachta indica A. Juss Berat Ekstraksi (g) Berat Ekstrak (g) Rendemen (%) 250 14,567 5,83

## Hasil Skrining Fitokimia
Setelah  ekstraksi  sampel  dilakukan,  pengujian  skrining  fitokimia menunjukkan bahwa ekstrak etil asetat dari daun mimba  mengandung alkaloid dan flavonoid, namun tidak mengandung saponin, tanin, steroid, dan terpenoid.
Tabel 2. Pengujian Kualitatif Ekstrak Azadirachta indica A. Juss Golongan Hasil Ket Alkaloid P. Mayer Endapan putih + P. Dragendrof Endapan jingga + P.Wagner Endapan coklat + Flavonoid Larutan merah + Saponin busa tidak bertahan - Tanin Larutan berwarna hijau kehitaman tidak terbentuk - Terpenoid Tidak terbentuknya Perubahan warna kecoklatan antar permukaan - Steroid Tidak terbentuk warna ungu ke biru atau hijau - Keterangan: (+) = Hasil positif, (-) = Hasil negatif Tabel 3. Pengukuran Absorbansi Kuersetin sebagai Standar Konsentrasi Absorbansi 2,5 0,286 5 0,422 7,5 0,621 10 0,82 12,5 1,011
Dari  pengukuran  larutan  standar  tersebut,  maka  didapatkan  persamaan  garis lurus yaitu y = 0,0739x + 0,0776 dan R 2 =0,9959

## Identifikasi dan Penetapan Kadar Flavonoid Ekstrak Etil Asetat Daun Mimba
Gambar 1. Kurva Baku Kuersetin sebagai Standar
Tabel 4. Kadar Flavonoid Ekstrak Azadirachta indica A. Juss Sampel Absorbansi (mL) Volume (mL) Berat Sampel (mL) Kadar Flavonoid (mL) Rata-rata (%) Ekstrak Etil Asetat 0,253 10 10 1,185 1,183 % ± 0,018. 0,249 10 10 1,16 0,256 10 10 1,205

## PEMBAHASAN
Selama ekstraksi, bahan aktif diperoleh dari bagian tumbuhan obat, hewan, atau mineral. Salah satu metode ekstraksi dingin yakni maserasi yang dilakukan dengan merendam simplisia dalam cairan penyari yang sesuai. Ekstraksi maserasi dengan keuntungan utama metode maserasi adalah kesederhanaan prosedurnya dan peralatannya. Maserasi termasuk metode tanpa pemanasan, oleh karena itu senyawa  tidak mudah  terurai. Ekstraksi dapat mengekstraksi  banyak  senyawa, karena beberapa senyawa memiliki kelarutan pada suhu ruang (Utami et al ., 2024). Penggunaan  pelarut  etil  asetat  sebagai  pelarut  dengan  pertimbangan senyawa dengan rentang polaritas yang luas sehingga dapat menyaring senyawa polar  hingga  nonpolar,  dan  diharapkan  dapat  mengekstraksi  senyawa  target secara optimal. Di antara senyawa semipolar yang dapat diekstraksi dari etil asetat adalah  senyawa  yang  mengandung  flavonoid,  tanin,  dan  alkaloid  tertentu  di daerah  polar  antara.  Etil  asetat  digunakan  sebagai  pelarut  utama  karena  dapat mencampur gugus polar dan nonpolar, yang memungkinkan ekstraksi komponen dari pola dan ekstrak lainnya (Kumalasari et al ., 2021).
Prinsip  dari  ekstraksi  dimulai  dari  proses  penyari  menembus  dinding  sel sehingga masuk ke rongga sel yang berisi bahan aktif. Perbedaan konsentrasi di dalam sel dan cairan filter di luar sel ketika bahan aktif dilarutkan dalam cairan penyari, larutan pekat berdifusi keluar sel, dan proses diulangi hingga keduanya mencapai kesetimbangan. Konsentrasi bahan aktif yang ada di dalam dan di luar
y = 0.0739x + 0.0776 R² = 0.9959 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 0 2 4 6 8 10 12 14 Ab so rb ans i Konsentrasi

## Kurva Baku Kuersetin

## Identifikasi dan Penetapan Kadar Flavonoid Ekstrak Etil Asetat Daun Mimba
sel (Utami et al ., 2023). Ekstraksi dilakukan sebanyak 2 kali (remaserasi) dimana ampas/residu  dari  ekstrak  pertama  dimaserasi  kembali  sehingga  berlangsung secara  optimal.  Ekstrak  cair  yang  diperoleh  diuapkan  menggunakan  alat rotavapor  untuk  mengentalkannya,  sehingga  dihasilkan  ekstrak  kental  dengan rendemen sebesar 5,83% (Tabel 1).
Tabel  2,  ekstrak  daun  mimba  yang  mengandung  alkaloid  dan  flavonoid, tetapi negatif mengandung saponin, tanin, steroid dan terpenoid. Uji flavonoid, menurut  literatur,  menunjukkan  bahwa  warna  merah,  kuning,  dan  jingga menunjukkan  adanya  flavonoid.  Uji  saponin  menunjukkan  busa yang  bertahan setelah pengocokkan. Menurut literatur, warna hijau kehitaman terbentuk karena menunjukkan adanya tanin atau hasil uji tanin yang positif. Pada uji alkaloid pada pereaksi Dragendrof terbentuk endapan jingga, menunjukkan bahwa jika terdapat endapan  jingga  pada  pereaksi  Dragendrof  menunjukkan  adanya  alkaloid. Pereaksi  Mayer  terbentuk  endapan  putih  positif  alkaloid,  sedangkan  pada pereaksi Wagner menunjukkan adanya alkaloid jika endapan coklat.
Untuk mengetahui kadar flavonoid, senyawa flavonoid direaksikan dengan natrium  asetat  dan  aluminium  (III)  klorida.  Panjang  gelombang  pada  daerah visible (tampak) perlu dipertahankan sehingga  dilakukan penambahan natrium asetat.  Pergeseran  panjang  gelombang  ke  arah visible (tampak)  karena penambahan  AlCl 3 pada  larutan  dapat  menyebabkan  pembentukan  kompleks (Chang et  al .,  2020).  Kalium  asetat  ditambahkan  untuk  menunjukkan  adanya gugus  7-hidroksil  sehingga  kadar  flavonoid  bisa  ditentukan.  Sebelum pengukuran,  diperlukan  inkubasi  untuk  reaksi  yang  sempurna  dan  intensitas warna yang optimal. Kuersetin, sebuah flavonol dari kelompok flavonol, memiliki gugus keton pada atom C-4 dan gugus hidroksil pada atom C-3 atau C-5 sama dengan flavon dan flavonol (Azizah et al ., 2014).
Sistem  aromatik  terkonjugasi  ada  pada  flavonoid  yang  menunjukkan kuatnya pita serapan pada daerah spektral UV dan sinar tampak, spektrofotometri UV-Vis  digunakan  untuk  analisis  kuantitatif  flavonoid  (Aminah et  al .,  2016) . Dilakukan  pengukuran  pada  kisaran  sekitar  400  sampai  800  nm.  Dihasilkan panjang gelombang maksimum 435,5 nm. Kurva kalibrasi dan serapan ekstrak etil asetat daun mimba diperoleh dari pengukuran panjang gelombang maksimum. Penelitian  ini  memasukkan  kuersetin  sebagai  larutan  referensi  karena ketersediaannya dan merupakan senyawa yang paling sering digunakan dalam analisis  kuantitatif  kandungan  flavonoid  dalam  daun  mimba.  Kuersetin umumnya merupakan komponen tanaman yang paling melimpah (Koirewoa et al ., 2012). Persamaan regresi linier dapat diperoleh dari kurva kalibrasi. Artinya, y = 0,0739x + 0,0776, koefisien korelasi (r) = 0,9959. Hasil penelitian pada Tabel 4 menunjukkan kadar flavonoid total 1,183% ± 0,018. Flavonon, isoflavon, flavon, dan flavonol diekstraksi menggunakan pelarut semi-polar seperti kloroform dan etil asetat, walaupun pada umumnya larut pada pelarut polar (Ritna et al ., 2016).

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yaitu  dengan  metode  skrining  fitokimia identifikasi  ekstrak  daun Azadirachta  indica A.  Juss  terdapat  flavonoid  dan alkaloid.  Persamaan  linier  yaitu  y  =  0,0739x  +  0,0776  kuersetin  sebagai  baku pembanding maka diperoleh kadar flavonoid ekstrak etil asetat 1,183 ± 0,018%.

## DAFTAR PUSTAKA
Aminah,  Aminah,  A.  Muflihunna,  dan  Zainal  Abidin.  2016.  “Uji  Aktivitas Antioksidan  Fraksi Etil  Asetat  Daun  Wungu  ( Graptophyllum  pictum (Linn) Griff)  dengan  Metode  FRAP  ( Ferric  Reducing  Antioxidant  Power ).” Jurnal Ilmiah As-Syifaa 8(1): 39–44. https://doi.org/10.33096/ja.v8i1.156 .
Azizah,  Dyah  Nur,  Endang  Kumolowati  dan  Fahrauk  Faramayuda.  2014. “Penetapan  Kadar  Flavonoid  Metode  AlCl 3 pada  Ekstrak  Metanol  Kulit Buah Kakao ( Theobroma cacao L.).” Kartika: Jurnal Ilmiah Farmasi 2(2): 33-37. https://doi.org/10.26874/kjif.v2i2.14 .
Chang, C.-C., Yang, M.-H., Wen, H.-M., dan Chern, J.-C. 2020. “Estimation of Total Flavonoid  Content  in  Propolis  by  Two  Complementary  Colometric Methods.” Journal of Food and Drug Analysis 10(3). https://doi.org/10.38212/2224-6614.2748 .
Fadillah, Arief, Agung Rahmadani, dan Laode Rijai. 2017. “Analisis Kadar Total Flavonoid dan Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Daun Kelubut (Passiflora foetida L.) .” Proceeding of the 5th Mulawarman Pharmaceuticals Conferences 21- 28. https://doi.org/10.25026/mpc.v5i1.217 .
Imrawati,  Imrawati,  Yuri  Pratiwi  Utami,  dan  Hardianto.  2023.  “Antioxidant Activity  of  Leilem  Leaf  Extract  Fractions Clerodendrum  minahassae Teijsm. And  Binn.  using  The  DPPH  Method  (2,2-Diphenyl-1-Picrylhydrazil).” International Journal of Health Sciences 1(4): 911-923. https://doi.org/10.59585/ijhs.v1i4.220 .
Imrawati,  Imrawati,  Yuri  Pratiwi  Utami,  dan  Ade  Ainun  Insani.  2023.
“Identification  of  Compound  Content  and  Antioxidant  Activity  Test  of Ethanol Extract of Stachytarpheta jamaicensis (L.) Vahl. Leaf ABTS Method.”
International Jounal  of Research in Pharmacy  and Pharmaceutical Sciences 8(3): 10–15. www.pharmacyjournal.in .
Koirewoa, Yohanes Adithya, Fatimawali, dan Weny Wiyono. 2012. “Isolasi dan Identifikasi  Senyawa Flavonoid  dalam  Daun  Beluntas  ( Pluchea  indica L.).” Pharmacon 1(1): 47-52. https://doi.org/10.35799/pha.1.2012.445 .
Kumalasari, Eka, Nazulla Mudjib Nararia, dan Siska Musiam. 2021. “Penetapan Kadar Fenolik Total Ekstrak Etanol 70% dan Fraksi Etil Asetat Daun Bawang Dayak ( Eleutherine palmifolia (L.) Merr) dengan Metode Spektrofometri Uv- Vis.” Jurnal Insan Farmasi Indonesia 4(1): 74–84. https://doi.org/10.36387/jifi.v4i1.665 .
Kusuma,  A.  Trihadi,  Andi  Adelah,  Zainal  Abidin,  dan  Ahmad  Najib.  2018.
“Penentuan  Kadar  Flavonoid  Ekstrak  Etil  Asetat  Daun  Sukun  ( Artocarpus altilis ).” Ad-Dawaa’  Journal  of  Pharmaceutical  Sciences 1(1):  25-31. https://doi.org/10.24252/djps.v1i1.6427 .
Oktaria,  Devi  dan  Mauritz  Pandapotan  Marpaung.  2023.  “Penetapan  Kadar Flavonoid  Total  dan  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Akar  Nipah  ( Nypa fruticans Wurmb)  dengan  Metode  Spektrofotometri  Uv-Vis.” Lantanida Journal 11(1): 36-50. http://dx.doi.org/10.22373/lj.v11i1.16087 .
Maryam,  Fadillah,  Yuri  Pratiwi  Utami,  Suwahyuni  Mus,  dan  Rohana  Rohana. 2023. “Perbandingan Beberapa Metode Ekstraksi Ekstrak Etanol Daun Sawo Duren  ( Chrysophyllum  cainito L.)  terhadap  Kadar  Flavanoid  Total menggunakan Metode Spektrofotometri UV-Vis.” Jurnal Mandala Pharmacon Indonesia 9(1): 132–138. https://doi.org/10.35311/jmpi.v9i1.336 .
Ritna, Agus, Syaiful Anam, dan Akhmad Khumaidi. 2016. “Identifikasi Senyawa Flavonoid pada Fraksi Etil Asetat Benalu Batu ( Begonia Sp.) Asal Kabupaten Morowali Utara.” Jurnal Farmasi Galenika (Galenika Journal of Pharmacy) 2(2): 83–89. https://doi.org/10.22487/j24428744.2016.v2.i2.5957 .
Tehubijuluw, Harfalien, Theopilus Watuguly, dan Prelly M.J Tuapattinaya. 2019. “Analisis  Kadar  Flavonoid  pada  Teh  Daun  Lamun  ( Enhalus  acoroides ) Berdasarkan Tingkat Ketuaan Daun.” Biopendix: Jurnal Biologi, Pendidikan dan Terapan 5(1): 1–7. https://doi.org/10.30598/biopendixvol5issue1page1-7 .
Utami,  Yuri  Pratiwi,  Ismail  Ismail,  Michrun  Nisa,  dan  Indah  Oktaviani.  2023. “Antibacterial Activity Test  of Etlingera elatior (Jack) R.M. Sm Leaf Extract against Bacteria Staphylococcus aureus and Escherichia coli Diffusion Method.” International Journal of Research in Pharmacy and Pharmaceutical Sciences 8(3): 1–4. www.pharmacyjournal.in .
Utami,  Yuri  Pratiwi,  Herlina  Rante,  Tuti  Handayani,  Ainun  Jariah, dan  Fatricia Erianto. 2024. “Potensi Ekstrak Etanol Daun Murbei ( Morus alba L.) sebagai
Antifungi  Terhadap  Jamur Candida  albicans.” Journal  of  Experimental  and Clinical Pharmacy (JECP) 4(1): 1-12. http://dx.doi.org/10.52365/jecp.v4i1.969 .
Utami,  Yuri  Pratiwi,  Nurzadrina  Wahyuddin,  Ainun  Jariah,  Rahma  Mustari, Imelda Desi. 2024. “Physicochemical Determination of Ethyl Acetate Extract and  N-Hexane  Extract  of Azadiractha  indica A.  Juss  Leaves.” International Journal of Health & Medical Research 03(01): 01-07. https://doi.org/10.58806/ijhmr.2024.v3i1n01 .
Utami,  Yuri  Pratiwi,  Risfah  Yulianty,  Yulia  Y.  Djabir,  dan  Gemini  Alam.  2024.
“Antioxidant  Activity,  Total  Phenolic  and  Total  Flavonoid  Contents  of Etlingera  elatior (Jack)  R.M.  Smith  From  North  Luwu,  Indonesia.” Tropical Journal of Natural Product Research 8(1): 5955-5961. https://doi.org/10.26538/tjnpr/v8i1.34 .