Journal of Aquaculture and Fish Health Vol. 8 No.2 (2019)

## UJI  PATOGENITAS  BAKTERI
Pseudomonas sp.  PADA  UDANG VANAME ( Litopanaeus vannamei ) SEBAGAI KANDIDAT PROBIOTIK
Pathogenicity  Test  of Pseudomonas sp.  in  White  Shrimp  ( Litopanaeus  vannamei )  as  A Probioitic Candidate
Ismi M. Habib Pahlawi 1* , Woro Hastuti Satyantini 2 dan Sudarno 2
1 Program Studi Budidaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Airlangga, Surabaya
2 Departemen Manajemen Kesehatan Ikan dan Budidaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Airlangga, Surabaya * habib.pahlawi21@gmail.com
Abstrak
Penelitian ini bertujuan mengetahui tingkat kematian udang vaname yang diinfeksi bakteri Pseudomonas sp. Bakteri Pseudomonas sp. diisolasi dari sedimen tambak udang. Uji patogenitas menggunakan udang vaname (7-9 gram) yang diinfeksi bakteri Pseudomonas sp. dengan kepadatan 10 2 , 10 4 , 10 6 , 10 8 sel/ml secara intramuscular sebanyak 0,1 ml/ekor. Perlakuan kontrol diinfeksi menggunakan NaCl fisiologis sebanyak 0,1 ml/ekor. Tingkat mortalitas dan gejala klinis diamati setap 6 jam pada 24 jam pertama dan selanjutnya selama 24 jam hingga 10 hari. Hasil yang diperoleh dari uji patogenitas bakteri Pseudomonas sp. pada udang vaname menunjukkan tingkat kematian sebesar 0% pasca infeksi. Hal ini menunjukkan bahwa bakteri Pseudomonas sp. tidak menyebabkan kematian pada udang vaname. Gambaran gejala klinis yang ditunjukkan berupa hepatopankreas berwarna hijau kehitaman dengan tekstur yang padat dan menunjukkan kenampakan yang sama dengan perlakuan kontrol. Warna tubuh udang vaname setelah diinfeksi bakteri Pseudomonas sp. menunjukkan gambaran yang sama dengan kontrol yaitu berwarna putih transparan. Karapas dan ekor udang vaname setelah diinfeksi menunjukkan tidak adanya kerusakan yang disebabkan oleh infeksi bakteri Pseudomonas sp., gambaran tersebut menunjukkan kenampakan yang sama dengan perlakuan kontrol. Hal ini menunjukkan bahwa bakteri Pseudomonas sp. tidak patogen terhadap udang vaname dan infeksi bakteri Pseudomonas sp. tidak berpengaruh terhadap perubahan morfologi makroskopis dan tingkah laku.
Kata kunci: Patogenitas, Gejala klinis, Pseudomonas sp., Udang vaname, Kematian

## Abstract
This research aims to determine the mortality of vannamei shrimp infected by Pseudomonas sp. bacteria isolated  from  sediment  of  shrimp  pond.  Pathogenicity  test was  by  using  vannamei  shrimp  (7-9  grams)  with  a density of 10 2 , 10 4 , 10 6 , 10 8 cells/ml intramuscularly. The control treatment was infected by using a physiological NaCl of 0.1 ml. The rate of mortality and clinical symptoms were observed for the first of 6 hours for 10 days. The results from the pathogenic test of Pseudomonas sp. in vannamei showed that 0% post infection of mortality rate. This  was  indicating  that  the Pseudomonas sp.  bacteria  did  not  cause  death  in  vannamei  shrimp.  The  clinical symptoms showed in the form of blackish-green hepatopancreas with a dense texture. That clinical symptom had the same appearance as the control treatment. The color of vannamei body showed a white color and so with the control treatment. Carapace and tail showed no damage to treatment and control treatment. This indicated that the bacteria Pseudomonas sp. did not cause death to vannamei shrimp and bacterial infections. Pseudomonas sp. did not affect morphological changes in macroscopic and behavior.
Keywords : Pathogenicity, Clinical symptoms , Pseudomonas sp., White shrimp, Mortality

## PENDAHULUAN
Budidaya  udang  merupakan  sektor perikanan  yang  berperan  sebagai  penyum- bang  devisa  non-migas  yang  besar  bagi negara  (Budiardi et  al .,  2013).  Pada budidaya  udang  vaname,  lingkungan merupakan  faktor  yang  mempengaruhi kelangsungan  hidup  udang.  Pengelolaan lingkungan  merupakan  salah  satu  upaya
untuk  mengatasi  serangan  penyakit  pada budidaya  udang  vaname.  Alternatif  yang yang dapat dilakukan dengan menggunakan bakteri  agen  biokontrol.  Bakteri  ini  bisa didapat  dari  lingkungan  budidaya  udang yang  memiliki  kesesuaian  habitat  dengan udang vaname. Pseudomonas sp ., Pseudomonas  fluoresens, dan Pseudo- alteromonas haloplanktis merupakan
Journal of Aquaculture and Fish Health Vol. 8 No.2 (2019)
mikroorganisme  yang  diketahui  dapat mencegah  penyakit  pada  ikan  dan  udang (Kamei  dan  Isnansetyo,  2003;  Verschuere et al ., 2000). Bakteri Pseudomonas sp. merupakan bakteri  Gram  negatif  yang  mampu menghasilkan  senyawa  bakteriosin  dan senyawa antibiotik untuk menghambat dan menekan  bakteri  patogen  (Spanggaard et al . , 2001;  Kamei  dan  Isnansetyo,  2003). Pseudomonas sp.  juga  mampu  mengha- silkan  enzim  kitinase.  Enzim  kitinase bekerja  sebagai  katalisator  pada  proses penguraian  polimer  kitin  pada  lapisan pelindung  tubuh  ikan  menjadi  unit  mono- mer yang lebih sederhana (Mangunwardoyo et  al .,  2009).  Selain  itu  bakteri Pseudomonas sp.  mampu  mempro-duksi beberapa  enzim  seperti  protease,  amilase, lipase  dan  selulase  yang  dapat  mengurai protein,  karbohidrat  dan  lemak  menjadi senyawa  yang  lebih  sederhana,  sehingga diharapkan bakteri Pseudomonas sp. dapat dikembangkan  sebagai  bakteri  kandidat probiotik.
Menurut penelitian Patria (2015) dan Saputra  (2015),  bakteri Pseudomonas sp. memiliki kemampuan dalam memproduksi enzim  ekstraselular  maupun  kemampuan antagonis  terhadap  bakteri Vibrio  harveyi . Sebelum  bakteri Pseudomonas sp.  ini dikembangkan  sebagai  bakteri  kandidat probiotik,  perlu  dilakukan  pengujian  lan- jutan  untuk  mengetahui  apakah  bakteri Pseudomonas sp.  dapat  menyebabkan kematian  tinggi  atau  tidak  bila  diaplikasi- kan  pada  udang  vaname  melalui  uji patogenitas.

## METODOLOGI Waktu dan Tempat
Penelitian  ini  dilakukan  di  Tropical Disease Center (TDC) Unversitas
Airlangga. Pemeriksaan patogenitas bakteri Pseudomonas sp.  dilakukan  di  Laborato- rium  Fakultas  Perikanan  dan  Kelautan (FPK),  Universitas  Airlangga  Surabaya pada bulan April-Juni 2017.

## Materi Penelitian
Peralatan yang digunakan pada pene- litian ini antara lain 20 akuarium berukuran 50x35x40  cm 3 ,  aerator,  20  batu  aerasi,  20 buah selang aerator, dua bak tandon, cawan petri, tabung reaksi, microtube , micropipet , rak  tabung  reaksi,  erlenmeyer,  rak micro- tube , jarum ose, bunsen, spuit ukuran 1 ml, hand glove , masker, kertas label, pH meter, wadah pakan, baskom, timbangan analitik, refraktometer,  termometer,  DO  meter, inkubator,  spektrofotometer,  vortex, auto- clave ,  kulkas  steril,  kapas,  aluminium  foil dan plastik wrap.
Bahan  yang  digunakan  pada  peneli- tian  ini  yaitu  200  ekor  udang  vaname dengan berat 7 – 9 gram, isolat murni bak- teri Pseudomonas  sp. koleksi  FPK  Unair, TSA ( Tryptone Soy Agar ), TSB ( Tryptone Soy Broth ), larutan NaCl Fisiologis, NaCL, standar Mc Farland, akuades, air laut steril, alkohol,  klorin,  Natrium  Thiosulfat,  pelet udang, dan es batu.

## Rancangan Penelitian
Isolat  bakteri Pseudomonas sp. dengan  kepadatan  10 2 ,  10 4 ,  10 6 ,  dan  10 8 sel/ml  serta  larutan  NaCl  fisiologis  diin- jeksikan  sebanyak  0,1  ml  pada  udang vaname.

## Prosedur Kerja
Kultur Isolat Bakteri Pseudomonas sp. Media  yang  digunakan  untuk  kultur bakteri Pseudomonas sp.  adalah  TSA. Pembuatan media dilakukan dengan mela- rutkan  media  TSA  pada  erlenmeyer  se- banyak 40 g/L akuades sesuai petunjuk dan ditambahkan NaCl 15 g/l. Setelah itu media TSA  disterilisasi  dengan  menggunakan autoclave . Media TSA yang sudah disterili- sasi  dituangkan  pada  cawan  petri  dan ditunggu hingga dingin dan mengeras.
Isolat Pseudomonas sp.  kemudian diinokulasikan  di  media.  Inokulasi  bakteri menggunakan  metode  gores  atau streak . Selanjutnya  inokulum  bakteri  disimpan  di inkubator pada suhu 30 o C selama 24 jam. Bakteri  yang  tumbuh  selanjutnya  diinoku- lasikan pada media TSB sebanyak satu ose.
Journal of Aquaculture and Fish Health Vol. 8 No.2 (2019)
Bakteri  yang  tumbuh  ditandai  dengan perubahan media TSB menjadi lebih keruh, kemudian  di  panen  dengan  cara  di centrifuge pada  kecepatan  5.400  rpm selama 5 menit.
Selanjutnya  supernatan  dibuang  dan ditambahkan larutan NaCl fisiologis kemu- dian  diukur  menggunakan  spektrofoto- meter  pada  panjang  gelombang  550  nm untuk mengetahui pertumbuhan atau kepa- datan  sel  bakteri.  Kepadatan  bakteri  yang diperlukan  sesuai  dengan  perlakuan  diper- oleh dengan cara pengenceran (Chau et al ., 2011)  dari  jumlah  kepadatan  bakteri  yang terukur sebelumnya pada spektrofotometer.

## Persiapan Udang Uji
Udang  vaname  didatangkan  dari tambak semi intensif di Instalasi Budidaya Air  Payau  Lamongan,  Lamongan  yang berukuran rata-rata 7-9 gram, diaklimatisasi selama 5-7 hari. Udang vaname dipelihara di dalam akuarium (50x35x40 cm 3 ) dengan kepadatan  10  ekor/akuarium  dengan  volu- me 35 liter dan setara sekitar 300 ekor/m 3 (Wasielesky et al., 2006). Selama budidaya, udang  diberi  pakan  berupa  pakan  udang komersial.

## Uji Patogenitas Pada Udang Vaname
Udang vaname terlebih dahulu dibius menggunakan  suhu  rendah. Teknik injeksi bakteri  pada  udang  vaname  secara intramuscular pada abdomen segmen ketiga (Chau et al., 2011).
Volume injeksi yang digunakan ada- lah  0,1  ml/ekor  menggunakan  spuit  beru- kuran  1  ml.  Pemeliharaan  udang  vaname dilakukan selama 10 hari dan diberi pakan pelet komersial. Penga-matan kematian dan gejala klinis dicatat setiap enam jam sekali pada 24 jam pertama, selanjutnya setiap 24 jam  sekali  hingga  hari  ke-10  (akhir penelitian).
Perhitungan  Tingkat  Mortalitas  dan LD 50 udang  vaname  dihitung  pada  akhir pemeliharaan.  Menurut  Effendie  (1997) tingkat  mortalitas  udang  vaname  dapat dihitung dengan persamaan berikut :
𝑍 = Mt
Mo 𝑥 100%
Keterangan : Z    : Tingkat Mortalitas (%) Mt  : Jumlah udang vaname yang mati (ekor) Mo : Jumlah udang vaname yang hidup (ekor)
Nilai LD 50 didapat menggunakan me- tode  aritmatik  Reed  dan  Muench  (1938). Metode ini menggunakan nilai-nilai kumu- latif  sebagai  dasar  perhitungan.  Nilai kumulatif  diperoleh  dari  kematian  udang vaname selama rentan waktu pemeliharaan.
Penentuan LD50 didapat berdasarkan persamaan berikut :

## Selang Proporsi
= kematian diatas 50% − 50
kematian diatas 50% − kematian dibawah 50%
Sehingga LD50 didapat dari persamaan berikut:

## LD50 = Log Konsentrasi dibawah 50% + Selang Proporsi

## Analisis Data
Data  hasil  uji  patogenitas  bakteri Pseudomonas sp.  pada  udang  vaname ( Litopanaeus  vannamei) yang  diperoleh pada  penelitian  ini  berupa  data  kuantitatif dan  kualitatif.  Data  tersebut  dianalisis secara  deskriptif  dan  disajikan  secara naratif dengan tabel dan gambar.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Dari  hasil  penelitian  uji  patogenitas didapatkan  data  kematian  udang  vaname yang diinfeksi bakteri Pseudomonas sp. 10 2 –  10 8 sel/ml  sebesar  0%.  Data  kematian dapat dilihat pada Tabel 1. Pada penelitian ini udang yang diinfeksi bakteri Pseudomonas sp.  tidak  menunjukkan  ada- nya  kematian  di  semua  perlakuan  hingga akhir pemeliharaan. Kondisi tersebut didu- ga  karena  produk  ekstraseluler  yang  dike- luarkan oleh bakteri Pseudomonas sp. tidak sampai menyebabkan kematian.
Menurut  Mangunwardoyo et  al . (2009),  bakteri Pseudomonas sp.  mampu menghasilkan enzim kitinase yang merupa-
Journal of Aquaculture and Fish Health Vol. 8 No.2 (2019)
kan  katalisator  pada  proses  penguraian polimer kitin pada lapisan pelindung tubuh ikan nila.
Tabel 1. Data kematian udang vadame ( Litopenaeus vannamei ). Perlakuan Hari ke- Kematian (%) 1 2 3 4  5  6  7  8  9 10 P0 (kontrol Nacl fisiologis) 0 0 0 0  0  0  0  0  0  0 0 P1 (10 2 sel/ml bakteri Pseudomonas sp.) 0 0 0 0  0  0  0  0  0  0 0 P2 (10 4 sel/ml bakteri Pseudomonas sp.) 0 0 0 0  0  0  0  0  0  0 0 P3 (10 6 sel/ml bakteri Pseudomonas sp.) 0 0 0 0  0  0  0  0  0  0 0
P4 (10 8 sel/ml bakteri Pseudomonas sp.) 0 0 0 0  0  0  0  0  0  0 0
Infeksi  bakteri Pseudomonas sp. dengan  kepadatan  mencapai  10 8 sel/ml masih  mendukung  kelangsungan  hidup udang vaname. Hal ini menunjukkan bahwa bakteri Pseudomonas sp.  tidak  termasuk bakteri patogen.  Menurut  Todar  (2002), bakteri patogen adalah bakteri yang mampu menyebabkan  sakit  hingga  kematian  pada hewan uji.
Hasil pengamatan gejala klinis udang vaname yang diinfeksi bakteri
Pseudomonas sp.  dengan  dosis  10 2 ,  10 4 , 10 6 ,  dan  10 8 sel/ml  dan  perlakuan  kontrol menunjukkan bahwa pengamatan dari enam jam  pertama  sampai  hari  ke  10 pemeliharaan  yaitu  kenampakan  tingkah laku dan gambaran morfologi makroskopis yang  diinfeksi  bakteri Pseudomonas sp. dengan  dosis  10 2 ,  10 4 ,  10 6 ,  10 8 sel/ml maupun  kontrol  (NaCl  fisiologis)  pada enam  jam  pertama  sampai  jam  ke  24 menunjukkan  pergerakan  udang  berenang pasif di dasar.
Pengamatan aktifitas berenang udang vaname  Pada  pengamatan  hari  ke  dua sampai  hari  ke  10  udang  vaname  yang diinfeksi  bakteri Pseudomonas sp.  dengan dosis  10 2 -10 8 sel/ml memperlihatkan keaktifan  berenang  di  kolom  air  maupun permukaan  air.  Respon  makan  udang vaname setelah diinfeksi bakteri Pseudomonas sp.  dengan  konsentrasi  10 2 ,
10 4 ,  10 6 ,  dan  10 8 sel/ml  maupun  kontrol (NaCl  fisiologis)  menunjukkan  respon makan  pasif  pada  pengamatan  enam  jam pertama.  Udang  vaname  yang  telah  diin- feksi bakteri Pseudomonas sp. dengan dosis 10 2 -10 8 sel/ml maupun kontrol mengalami peningkatan respon makan selama pemeliharaan pada hari ke dua hingga hari ke-10.
Gambaran  morfologi  makroskopis diamati  melalui  gambaran  dari  hepato- pankreas,  warna  tubuh,  kerusakan  karapas dan  ekor.  Udang  vaname  setelah  diinfeksi bakteri Pseudomonas sp.  tidak  menun- jukkan  adanya perubahan  pada  hepato- pankreas.  Menurut  Soto-Rodriguez et  al.
(2015),  udang  vaname  yang  terinfeksi bakteri  patogen  akan  mengalami  gejala klinis berupa hepatopankreas akan berubah warna pada bagian pangkal menjadi kuning hingga keputihan.
Pada  penelitian  ini  udang  vaname yang  diinfeksi  bakteri Pseudomonas sp. dengan  kepadatan  10 2 -10 8 sel/ml  menun- jukkan  gambaran  hepatopankreas  berben- tuk  utuh  dan  berwarna  hijau  kehitaman. Perlakuan infeksi infeksi bakteri Pseudomonas sp. kepadatan 10 2 -10 8 sel/ml menunjukkan gambaran yang sama dengan perlakuan kontrol. Pada bagian tubuh udang vaname tidak menunjukkan adanya perubahan  warna  tubuh  maupun  rusaknya
Journal of Aquaculture and Fish Health Vol. 8 No.2 (2019)
karapas. Menurut Raja et al. (2015), udang vaname yang terindikasi serangan patogen akan  berubah  warna  antara  putih  pucat
sampai  kemerahan  dan  rusaknya  karapas yang  berfungsi  sebagai  pelindung  tubuh udang vaname.
Udang vaname yang diinfeksi bakteri Pseudomonas sp.  10 2 -10 8 sel/ml  tidak mengalami  perubahan  warna  tubuh  dan menjukkan  gambaran  yang  sama  dengan udang vaname pada perlakuan kontrol yaitu tubuh  berwarna  putih  transparan.  Udang vaname  yang  terinfeksi  bakteri  patogen akan  mengalami  perubahan  warna  dan kerontokan  pada  bagian  ekor  (Pratama et al ., 2014).
Pada  pengamatan  perubahan  warna ekor  dan  kenampakan  ekor  udang  vaname setelah  diinfeksi  bakteri Pseudomonas sp. dengan  dosis  10 2 -10 8 sel/ml  tidak menunjukkan  adanya  gejala  kerontokan maupun perubahan warna pada ekor udang vaname.  Pada  perlakuan  kontrol  menun- jukkan  gambaran  yang  sama  dengan perlakuan  udang  vaname  yang  diinfeksi bakteri Pseudomonas sp.  menunjukkan ekor  berwarna putih  transparan  dan  tidak
Tabel  2.    Gambaran  morfologi  makroskopis  udang  vaname  ( Litopanaeus  vannamei )  setelah diinfeksi bakteri Pseudomonas sp. Perlakuan Hepatopankreas Warna Tubuh dan Karapas Ekor
P0 (Kontrol Nacl fisiologis)
P1 (10 2 sel/ml Bakteri
Pseudomonas sp.)
P2 (10 4 sel/ml Bakteri
Pseudomonas sp.)
P3 (10 6 sel/ml
Bakteri Pseudomonas sp.)
P4 (10 8 sel/ml Bakteri Pseudomonas sp.)
Journal of Aquaculture and Fish Health Vol. 8 No.2 (2019)
adanya kerusakan pada ekor. Sama dengan gambaran  udang  pada  perlakuan  kontrol. Bakteri Pseudomonas sp. memiliki kemam- puan menghasilkan  enzim  kitinase  yang dapat mendegradasi zat kitin.
Kemampuan mendegradasi kitin dari bakteri Pseudomonas sp.  diduga  dapat menyebabkan rusaknya karapas pada tubuh dan  kerusakan  pada  ekor  udang  vaname. Pada  penelitian  ini  pasca  infeksi  bakteri Pseudomonas sp.  tidak  mengakibatkan lepasnya karapas dan kerusakan pada ekor.
Gejala klinis yang diamati pada oleh udang  vaname  yang  diinfeksi  bakteri Pseudomonas sp.  selama  pemeliharaan tidak  menunjukkan  gejala  seperti  yang disampaikan  oleh  Lavilla-Pitogo et  al.
(2000),  bahwa Pseudomonas sp.  merupa- kan  jenis  bakteri  penyebab  karapas,  kaki jalan,  kaki  renang  dan  ekor  udang  windu mengalami kerontokan. Udang yang terse- rang  bakteri  ini  mengalami  kerusakan terutama  pada  bagian  sirip  ekor (uropoda) yang  mengakibatkan  udang  kesulitan berenang.  Selain  itu  bakteri ini  juga  dapat menyebabkan aktivitas udang lemah, nafsu makan hilang dan rentan stres.
Bakteri Pseudomonas sp.  mampu memproduksi  enzim  bakteriolitik  yang dapat menguraikan suatu senyawa menjadi lebih  sederhana.  Mekanisme  yang  mampu menyebabkan kematian pada hewan uji dari bakteri Pseudomonas sp.  dengan  mengha- silkan  ekstraselullar  produk  yaitu  enzim kitinase. Enzim kitinase adalah enzim yang mampu  menghidrolisis  kitin  menjadi  mo- nomer N-asetil-glukosamin (Herdyastuti et al .,  2009).  Enzim  ini  yang  diduga  akan mendegradasi  zat  kitin  yang  ada  pada karapas maupun ekor udang. Menurut Hardi et  al .  (2014),  bakteri Pseudomonas sp. mampu memproduksi ekstraselullar produk dengan  menunjukkan  gejala  seperti  sirip gripis,  pendarahan  kulit  dan  luka  pada permukaan tubuh dan sisik lepas pada ikan.
Hal  ini  menunjukkan  bahwa  sistem petahanan  tubuh  udang  vaname  masih mampu  melawan  zat  asing  yang  masuk kedalam  tubuh.  Sehingga  udang  vaname
yang  diinfeksi  bakteri Pseudomonas sp. tidak menyebabkan kematian tinggi.

## KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpulan
Kesimpulan dari penelitian ini adalah bakteri Pseudomonas sp.  tidak  menga- kibatkan  kematian  pada  udang  vaname ( Liptopenaeus  vannamei ).  Infeksi  bakteri Pseudomonas sp.  melalui  penyuntikan secara  intraperitoneal  hingga  dosis  10 8 sel/ml  tidak  berpengaruh  terhadap  tingkah laku  dan  perubahan  morfologi  udang vaname  ( Liptopenaeus vannamei ),  sehing- ga dapat dikatakan bakteri Pseudomonas sp. tidak patogen.

## Saran
Saran  yang  dapat  diberikan  pada penelitian ini diharapkan adanya penelitian lanjutan  mengenai  pengembangan  bakteri Pseudomonas sp. sebagai agen probiotik.

## DAFTAR PUSTAKA
Budiardi,  T.,  Muzaki  A.  dan  Utomo, N.B.P.,  2013.  Produksi  Udang Vaname  ( Litopenaeus  vannamei) Di Tambak  Biocrete  Dengan  Padat Penebaran Berbeda. Jurnal Akuakultur  Indonesia ,  4  (2)  :109  –
113.
Chau,  N.T.T.,  Hieu,  N.X.,  Thuan,  L.T.N., Matsumoto, M. and Miyajima, 2011. Identification and characterization of Pseudomonas sp.  P9  antagonistic  to pathogenic Vibrio spp. isolated from shrimp  culture  pond  in  Thua  Thien Hue-Viet Nam, J. Fac. Agr., Kyushu Univ , 56 (1) :23-31. Effendie,  M.I.,  1997. Biologi  Perikanan . Yayasan Pustaka Nusatama. Yogyakarta. hal. 130. Hardi, E. H., Catur, A.P. dan Gina, S., 2014.
Toksisitas  Produk  Ekstraseluler  dan Intraseluler Bakteri Pseudomonas sp. pada Ikan Nila ( Oreochromis niloticus ). Jurnal  Veteriner ,  15  (3)  : 312-322.
Herdyastuti, N., Raharjo, J.T., Mudasir dan
Matsjeh,  S.,  2009.  Kitinase  dan
Journal of Aquaculture and Fish Health Vol. 8 No.2 (2019)
Mikroorganisme  Kitinolitik:  Isolasi,
Karakterisasi dan Manfaatnya. Indo J Chem 9 (1):37-38,40. Kamei, Y. and Isnansetyo, A., 2003. Lysis of methicillin resistant Staphylococcus  aureus by  2,4-
diacetylphloroglucinol  produced  by Pseudomonas  sp.  AMSN  isolated from a marine alga. Int. J. Antimicrob. Agents. 21: 71-74.
Lavilla-Pitogo,  C.R.,  Lio  Po,  G.D.,  Cruz- Lacierda,  E.R.,  Alapide-Tendencia, E.V.  and  De  la  Peña,  L.D.,  2000. Diseases  of  penaeid  shrimps  in  the Philippines. Aquaculture  Extension Manual , 16 (2) :19-21.
Mangunwardoyo, W., Ratih, I. dan Etty, R., 2009.  Aktivitas  Kitinase,  Lesitinase dan Hemolisin Isolat dari Bakteri Ikan Nila  ( Oreochromis  niloticus Lin.) Yang  Dikultur  Dalam  Keramba Jaring  Apung  Waduk  Jatiluhur,
Purwakarta. J.  Ris.  Akuakutur ,  4  (2)
:257-265.
Patria,  M.W.,  2015.  Isolasi,  Seleksi  dan Identifikasi Bakteri Penghasil Enzim
Protease,  Lipase  dan  Amilase  Dari Saluran  Pencernaan  Udang  Vaname ( Litopenaeus vannamei) Asal Tambak Tradisional. Skripsi. Universitas Airlangga. Surabaya. hal. 36. Pratama,  N.P.  Slamet,  B.P.  dan  Sarjito,
2014.  Pemanfaatan  Ekstrak  Daun Binahong (Anredera cordifolia) Untuk  Penanggulangan  Penyakit
Bakteri (Vibrio harveyi) Pada Udang Windu. Journal  of  Aquaculture Management  and  Technology ,  3  (4) :281-288.
Raja, K., Gopalakrishnan, A., Singh, R. and Vijayakumar,  R.,  2015.  Loose  Shell Syndrome  (LSS)  in Litopenaeus vannamei grow-out  Ponds  and  its Effect on  Growth  and  Production.
Fish Aquac J . 6 (1):151. Reed, L.J. and Muench, H., 1938. A simple method  of  estimating  fifty  percent endpotants. The American Journal Of Hygiene , 27: 493-497.
Saputra,  S.D.,  2015.  Uji  Antagonis  Isolat Bakteri  Asal  Sedimen  Tambak Intensif  dan  Tradisional  Udang Vaname  ( Litopenaeus  vannamei )
Terhadap Vibrio  harveyi Penyebab Penyakit Vibriosis. Skripsi. Universitas Airlangga. Surabaya. hal. 40.
Spanggaard, B., Huber, I., Nielsen, J., Sick, E.,  Pipper,  C.,  Martinussen,  T., Slierendrecht, W. and Gram, L., 2001. Potential  against  vibriosis  of  the indigenous  microflora  of  rainbow trout. Environ.  Microbiol .  3,  755– 765. Soto-Rodriguez,  S.A.,  Gomez-Gil,  B.,
Lozano-Olivera,  R.,  Betancourt- Lozana, M. and Morales-
Covarrubias,  M.S.,  2015.  Field  and Experimental  Evidence  of Vibrio parahaemolyticus as  The  Causative Agent  of  Acute  Hepatopancreatic
Necrosis  Disease  of  Culture  Shrimp ( Litopenaeus vannamei ) in
Northwestern Mexico. Appl. Environ. Microbiol. 81. pp. 1-11. Todar,  K.,  2002. Mechanisms  of Bacterial Pathogenicity  Endotoxins .  Todar Online  Textbook  of  Bacteriology. University  of  Wisconsin-Madison Departement of Bacteriology. Verschuere, L., Rombout, G., Sorgeloos, P. and  Verstraete,  W.,  2000.  Probiotics Bacteria  As  Biocontrol  Agents  in Aquaculture. App. Environ. Microbiol. 64 (3) :655-671. Wasielesky, W. Jr., Atwood, H., Stokes, A. and  Browdy,  C.L.,  2006.  Effect  of Natural  Production  in  A  Zero
Exchange Suspended  Microbial Floc Based Super-Intensive Culture System for White Shrimp Litopenaeus vannamei . Aquaculture . 258 (4) :396–403.