Volume 1, Nomor 10, Oktober 2021 p-ISSN 2774-7018 ; e-ISSN 2774-700X
TINJAUAN PROSES PENENTUAN PROSEDUR KADAR VITAMIN C SECARA KIMIA DI PT. TEKAD MANDIRI CITRA
Hadi Pranoto dan Meiti Rosmiati Politeknik Piksi Ganesha Bandung
E-mail: hadipranoto182@gmail.com dan maytearose@gmail.com Diterima: 25 September 2021 Direvisi: Disetujui:

## Abstrak
Asam askorbat adalah senyawa kimia yang disebut juga vitamin
C dengan rumus molekul C6H8O6 larut dalam air dan memiliki sifat  antioksidan.  Karena  sifatnya  yang  menguntungkan  bagi kesehatan,  maka  kebutuhan  manusia  akan  vitamin  C  semakin meningkat.  Semakin  berkembangnya  produk-produk  makanan, minuman, obat- obatan dsb, yang mengandung  vitamin C maka diperlukan pengawasan terhadap kadar vitamin C dalam produk obat  jadi  tersebut.  Dalam  penelitian  ini  dilakukannya  validasi metode  analisis  vitamin  C  dengan  spektrofotometri  UV-Visibel yang  selanjutnya  digunakan  untuk  analisis  vitamin  C  pada  obat jadi. Parameter metode validasi dalam penelitian ini meliputi uji presisi,  uji  linearitas,  uji  selektifitas,  batas  deteksi,  batas kuantifikasi, dan uji akurasi. Akurasi dari metode ini ditentukan berdasarkan  hasil  perolehan  kembali  menggunakan  metode spike  standar,  sedangkan  presisi  diukur  dengan  menghitung simpangan  baku  relative.  Dari  hasil  penelitian  disimpulkan bahwa  metode  analisis  dalam  penetapan  kadar  asam  askorbat dengan  spektrofotometri  UV-Visible  merupakan  metode  yang baik  digunakan,  relative  murah  dan  mudah  yang  dapat menghasilkan ketelitian dan ketepatan yang tinggi.
Kata kunci: Asam askorbat, validasi metode analisis dan spektrofotometri UV-Visibel

## Abstract
Ascorbic acid is a chemical compound also known as vitamin C with  molecular  formula  C6H8O6  dissolve  in  water  and  has antioxidant  properties.  Because  it  is  beneficial  to  health,  the human need for vitamin C increases. The continued development of  food  products,  beverages,  medicines,  etc.,  which  contain vitamin  C  it  is  necessary  to  supervise  the  levels  of  vitamin  C  in the  product.  In  this  study  does  validate  methods  of  analysis  of vitamin  C  with  UV-visible  spectrophotometry  was  then  used  for analysis  of  vitamin  C  in  the  finished  drug  product.  Parameter validation  methods  in  the  study  include  a  test  of  precision, linearity  test,  test  of  selectivity,  detection  limit,  quantification limit,  the  test  sample,  and  test  accuracy.  The  accuracy  of  this method  is  determined  based  on  the  results  of  spike  recoveries using  standard  methods,  while  the  precision  is  measured  by calculating  the  relative  standard  deviation  of  repeated measurements  by  ten  times.  From  the  results  of  the  study concluded  that  the  method  of  analysis  in  the  determination  of ascorbic  acid  levels  by  UV-Visible  spectrophotometry  is  an excellent  method  to  use,  relatively  inexpensive  and  easy  to
produce high precision and accuracy.
Keywords: Ascorbic acid, validation of analytical methods and UV-visible spectrophotometry

## Pendahuluan
Vitamin C adalah salah satu zat gizi yang berperan sebagai antioksidan efektif atau mengatasi radikal bebas yang dapat merusak sel atau jaringan, termasuk melindungi lensa dari  kerusakan  oksidatif  yang  ditimbulkan  oleh  radiasi (Tambunan,  Ningsih,  Ayu,  & Nanda,  2018) .  Vitamin  C  merupakan  vitamin  yang  termasuk  dalam  kelompok  vitamin larut  dalam  air  dan  dikenal  sebagai  vitamin  anti  askorbut  karena  berkhasiat menyembuhkan  penyakit  skorbut.  Vitamin  C  dikonsumsi  untuk  melengkapi  kebutuhan tubuh  akan  vitamin  C,  terutama  ketika  asupan  vitamin  C  dari  makanan  tidak  bisa memenuhi kebutuhan tubuh (Niryani, 2018) . Namun, vitamin C hanya digunakan sebagai pelengkap  kebutuhan  nutrisi  tubuh,  bukan  sebagai  pengganti  nutrisi  dari  makanan (Kurniawan & Amirah, 2019) .
Kebutuhan  vitamin  C  yang  dianjurkan  Angka  Kecukupan  Gizi  (AKG  )  bagi  laki- laki dan perempuan berusia  lebih dari 13 tahun  sebesar 60 mg/hari (Suria & Puspowati, 2017) . Keadaan stress metabolic seperti tindakan operatif, trauma, kanker, dan luka bakar meningkatkan  kebutuhan  vitamin  C.  Penggunaan  pil  anti  hamil  dan  kebiasaan  merokok menurunkan kadar vitamin C plasma (Halimah & Satria, 2015) . Dosis 60 mg/hari tersebut dibuat  berdasarkan  kebutuhan  rata  -  rata  untuk  mencegah  penyakit  skorbut (Tiowati, 2020) .  Namun  beberapa  bukti  ilmiah  perlunya  meningkatkan  asupan  vitamin  C  karena dihubungkan  dengan  upaya  untuk  menurunkan  penyakit  kronis  seperti  penyakit kardiovaskuler,  kanker,  dan  katarak.  Vitamin  C  diberikan  100-200  mg/hari  dan  tidak melebihi 1000 mg/hari, hal ini dianggap cukup untuk melindungi tubuh dari penyakit dan pemberian dosis melebihi 1000 mg/hari dapat memberikan efek samping (Islamy, 2020) . Defisiensi vitamin C dapat menimbulkan beberapa gejala, dari yang ringan sampai berat.  Defisiensi  ringan  ditandai  dengan  timbulnya  kelelahan,  anoreksia,  nyeri  otot  dan lebih  mudah  stress  dan  infeksi,  sedangkan  defisiensi  berat  menimbulkan  penyakit skorbut.  Bila  pengobatan  yang  yang  diberikan  terlambat  dapat  menyebabkan  kematian (Ningsih, 2017).
Vitamin  C  sebenarnya  merupakan  vitamin  yang  relatif  tidak  toksik,  tetapi  pernah dilaporkan  asupan  1gram/hari  dapat  menimbulkan  mual  dan  diare,  tes  glukosa  darah kurang  akurat  dan  terbentuknya  batu  ginjal (Tandra,  2017) .  Konsumsi  vitamin  C berlebihan  dapat  menyebabkan rebound  scurvy ,  sehingga  individu  yang  telah  terbiasa mengkonsumsi dalam jumlah yang banyak, bila hendak menghentikan kebiasaan tersebut harus secara bertahap (Wardaya, Sumego, & Utami, 2019) .

## Metode Penelitian
Dalam penelitian ini, vitamin C diukur dengan menggunakan spektrofotometri UV- Visibel.  Contoh  uji  yang  digunakan  adalah  berasal  dari  obat  jadi  yang  sering  beredar dipasaran. Obat jadi ditimbang selanjutnya diencerkan sepuluh kali dengan menggunakan aquabides.  Alat  dan  Bahan  Alat  yang  digunakan  :  spektrofotometri  UV-Vis  dengan sistem  optik  radiasi  berkas  ganda  ( double  beam ).  Alat  alat  gelas  seperti: beaker gelas, pipet ukur, pipet gondok, labu ukur, pipet tetes, cuvet, neraca analitik, botol semprot. Dan bahan penilitian ini meliputi : Asam askorbat (vitamin C) (s), Aquabidest (aq), Obat jadi
yang  beredar  di  pasaran.  Prosedur  Percobaan  metode  ini  menggunakan  metode spektrofotometri dengan menggunakan spektrofotometri uv-vis.

## Hasil dan Pembahasan
Penentuan  panjang  gelombang  maksimum  dari  vitamin  C  dilakukan  dengan menggunakan  larutan  standar  vitamin  C  pada  konsentrasi  6  ppm  dan  diukur absorbansinya  pada  rentang  panjang  gelombang  160-800  nm.  diperoleh  nilai  panjang gelombang  maksimum  terjadi  pada  daerah  panjang  gelombang  266  nm  dengan  nilai absorbansi  sebesar  0,788.  Linieritas  adalah  kemampuan  metode  analisis  untuk menghasilkan  respon  yang  sesuai  terhadap  konsentrasi  analit  yang  terdapat  didalam sampel, kemudian diperoleh data konsentrasi versus absorbansi seperti pada tabel 1.

## Tabel 1. Data Absorbansi Larutan Standar Vitamin C
No Konsentrasi larutan standar vitamin C (mg/L) Absorbansi 1 0 0,26 2 1 0,259 3 2 0,246 4 3 0,26 5 4 0,26 6 5 0,26 7 6 0,247 8 7 0,246 9 8 0,259 10 9 0,249 11 10 0,246
Diperoleh nilai koefesien determinasi (R2) pada penentuan kadar vitamin C dalam obat  jadi  sebesar  0,9956.  Nilai  koefesien  determinasi  yang  didapat  mendekati  satu  dan sesuai  dengan  syarat  keberterimaan  yaitu  nilai  koefesien  determinasi  hasil  uji  linieritas adalah > 0,9970 (Chan, 2004).
Limit  Of  Detection (LOD)  dan Limit  Of  Quantitation (LOQ)  merupakan  nilai konsentrasi  analit  terkecil  yang  mampu  menghasilkan  signal  cukup  besar  sehingga mampu  terdeteksi.  LOQ  adalah  konsentrasi  analit  yang  menghasilkan  signal  lebih  besar dari blanko atau konsentrasi terkecil analit dalam sampel yang masih bisa diukur dengan menggunakan presisi dan akurasi yang baik, sesuai kondisi prosedur yang telah disepakati (Riyanto,  2014). Nilai  LOD  dan  LOQ  penelitian  yang  menggunakan  metode  kurva kalibrasi  merupakan  nilai  konsentrasi  terkecil  analit  yang  dapat  diukur  oleh  instrument. Penentuan  LOD  dan  LOQ  dengan  blanko  pada  analisis  kadar  vitamin  C  dalam  sampel obat jadi dengan spektrofotometri UV-Vis double beam  didapatkan data sebagai berikut:
Tabel 2. Data hasil uji LOD dan LOQ larutan standar vitamin C dengan spektrofotometri UV-Vis. Konsentrasi standar Absorbansi (Y) 0 0 1 0,26 2 0,259 3 0,246 4 0,26 5 0,26 6 0,247 7 0,246 8 0,259 9 0,249 10 0,246 Sy/x 0,0225 LOD 0,83077 LOQ 2,76923
Besarnya standar deviasi residual dapat dihitung dengan persamaan :
S (y/x) = √∑( 𝑦 − 𝑦 i)²
Berdasarkan hasil perhitungan diperoleh nilai limit deteksi pada penentuan larutan standar vitamin C dengan spektrofotometri UV-Vis adalah sebesar 3,1781 mg/L. Nilai ini menunjukkan jumlah analit terkecil yang masih dapat terukur oleh spektrofotometri UV- Vis.  Jadi,  untuk  analisis  kadar  vitamin  C  dengan  spektrofotometri  masih  dapat  terbaca serapannya dengan batas limit 3,1781 mg/L. Hasil limit kuantitasi yang diperoleh sebesar 0,9521  mg/L  nilai  ini  menunjukkan  kuantitas  terkecil  dari  analit  yang  masih  dapat memenuhi kriteria cermat dan seksama.
Presisi adalah suatu nilai yang menunjukkan kedekatan antara hasil uji satu dengan hasil  uji  lainnya  dalam  satu  rangkaian  pengujian (Aprilia,  2018) .  Presisi  diukur  sebagai simpangan baku atau  simpangan baku relatif  dan dapat dinyatakan  sebagai keterulangan (repeatability)  atau  ketertiruan  ( reproducibilily ).  Kriteria  umum  keberterimaan  nilai presisi  yaitu  dengan  memberikan  nilai  simpangan  baku  relatif  (RSD)  sesuai  persyaratan yaitu  apabila  %RSD  ≤  2%  atau  %RSD  <  %CV  Horwitz.  Namun  kriteria  ini  fleksibel tergantung  konsentrasi  analit  yang  dianalisis,  jumlah  sampel  dan  kondisi  laboratorium (Setyawan,  2018) .  Presisi  penentuan  kadar  vitamin  C  dengan  spektrofotometer  UV-Vis ditunjukkan pada tabel  3.
Tabel 3. Data hasil pengujian kadar vitamin C dalam obat jadi dengan spektrofotometri
UV-Vis. Konsentrasi contoh (x) x-ẋ (x-ẋ)2 1,5389 -0,0333 0,0011 1,6387 0,0665 0,0044 1,5389 Ẍ=1,5722 -0,0333 0,0011 ∑=0,0066
Hasil  uji  presisi  pada  validasi  metode  penentuan  kadar  vitamin  C  dalam  obat  jadi ini adalah sebesar 3,66% sedangkan nilai %CV Horwitz diperoleh sebesar 14,94%. Suatu metode  pengujian  dikatakan  selektif  jika  metode  memberikan  nilai  simpangan  baku relatif  (%RSD)  atau  presisi  sebesar  ≤  2% (Pratama,  Pirdaus,  Rinawati,  Sagala,  & Suhelmi,  2016) .  Sedangkan  menurut  Kantasubrata  (2011),  syarat  keberterimaan penentuan presisi dalam bentuk keterulangan ( repeatability ) yaitu, jika nilai %RSD lebih kecil  atau  sama  dengan  %CV  Horwitz,  sehingga  bisa  dikatakan  bahwa  metode  uji  yang digunakan  ini  memiliki  ketelitian  yang  tinggi  dan  bisa  digunakan  sebagai  metode  uji penentuan kadar vitamin C dalam obat jadi.
Akurasi  adalah  ukuran  yang  menunjukkan  nilai  kedekatan  hasil  uji  dengan  kadar sebenarnya  atau  nilai  acuan  yang  telah  ditentukan (Iskandar,  Panggabean,  &  Kartika, 2017) . Akurasi dapat ditentukan melalui dua cara, yaitu metode simulasi ( spiked-placebo recovery )  atau  metode  penambahan  baku  ( standard  addition  method ).  Metode  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  metode  adisi  yaitu  dengan  menambahkan  larutan standar  ke  dalam  sampel  dengan  konsentrasi  tertentu  atau  biasa  disebut  larutan  spike. Konsentrasi yang ditambahkan adalah 100 mg/L sebanyak 0,4 mL ke dalam sampel 0,15 mL kemudian ditambah dengan akuades 9 mL.
Tabel 4. Data absorbansi dan konsentrasi contoh serta contoh spike pada pengujian vitamin C
secara spektrofotometri UV-Vis. Data Absorbansi Rata-rata Konsentrasi (mg/L) Contoh Spike 0,333 0,332 0,332 0,332 6,4491 Contoh 0,086 0,091 0,086 0,088 1,5788 % Recovery 116,51%
Hasil  uji  akurasi  (% Recovery )  penentuan  kadar  vitamin  C  dalam  obat  jadi  yaitu sebesar 116,51%. Menurut Harmita (2004) nilai recovery yang diterima pada konsentrasi ppm yaitu 110-120%. Ketidakpastian Pengukuran Ketidakpastian pengukuran merupakan tingkat  kesalahan  yang  tidak  diketahui  yang  tersisa  dalam  pengukuran.  Terdapat  tiga tahapan  menentukan  ketidakpastian  yaitu  ketidakpastian  baku,  ketidakpastian  gabungan dan ketidakpastian diperluas. Rumus untuk  menentukan  kadar Vitamin C pada obat  jadi untuk  penelitian  ini  adalah  rumus  penetapan  kadar  selanjutnya  nilai  ketidakpastian pengukuran pada pengujian vitamin C dipengaruhi oleh  konsentrasi dari kurva kalibrasi, massa  sampel  obat  jadi,  volume  pengambilan  sampel  yang  terdiri  dari  pipet  ukur  1  mL, pipet  ukur  10  mL,  volume  total  larutan  yang  terdiri  dari  labu  ukur  10  mL,  keterulangan ( repeatability ),  berat  molekul  vitamin  (C6H8O6),  dan  kemurnian  bahan.  Hasil  validasi Setelah  pengujian  dilakukan  validasi  terhadap  proses  pengujian  vit  c  secara spektrofotometri  dengan  mengevaluasi  kesesuaiannya  dengan  parameter  parameter  yang sesuai dengan tabel berikut ini.
Tabel 5. Hasil Validasi menggunakan spektrofotometri uv-vis. Parameter Dalam Prosedur Validasi Parameter Identiti Impurities Potensi Komposisi Quantiti Limits Akurasi √ √ √ Presisi √ √ √ Spesifisitas √ √ √ √ √ Robustness √ √ √ √ √ Linearitas dan Range √ √ √ LOD √ √ LOQ √
Dari  hasil  evaluasi  tersebut  pengujian  vitamin  C  dengan  cara  spektrofotometri telah  memenuhi  parameter  akurasi  dimana  hasilnya  menunjukan  angka  yang  memenuhi standar  yang  ditetapkan,  parameter  presisi  menunjukan  hasil  angka  yang  tidak memberikan  deviasi  terlalu  besar,  parameter  spesifitas  menunjukan  evaluasi  tersebut memberikan hasil spesifitas kepada zat aktif vitamin C, berdasarkan parameter robustness menunjukan  bahwa  metode  spektrofotometri  tidak  terpengaruh  oleh  perubahan  kondisi biarpun  dalam  setiap  kondisi  pengujian  dikondisikan  agar  terdapat  lingkungan  yang seperti suhu, kelembaban, perubahan ph, reagennya, dan berdasarkan parameter linearitas dan  range  metode  tersebut  memberi  respon  profesional  dan  dalam  rentang  atau  range dengan hasil deviasi yang kecil.

## Kesimpulan
Berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa  hasil validasi metode penentuan kadar vitamin C obat jadi adalah akurasi metode bagus dilihat dari  %recovery  yaitu  sebesar  116,51%  yang  masuk  dalam  nilai  rata-rata.  Presisi menunjukan  hasil  angka  yang  tidak  memberikan  deviasi  terlalu  besar.  Spesifitas menunjukan  evaluasi  tersebut  memberikan  hasil  spesifitas  kepada  zat  aktif  vitamin  C. Nilai  linieritas  yang  didapat  dari  koefesien  determinasi  (R2)  yaitu  sebesar  0,9956  dan telah memenuhi persyaratan yang baik. Nilai LOD dan LOQ dari pengujian yang didapat adalah  0,83077  mg/L  dan  2,7692  mg/L.  Kadar  vitamin  C  pada  Obat  jadi  didapat  nilai sebesar 3,1781.
Bibliografi . Aprilia,  Anisa  Cahyani.  (2018). Validasi  Metode  Penentuan  Nilai  Kalori  Batu  Bara Menggunakan Bom Kalorimeter Di Balai Pengujian Dan Identifikasi Barang Tipe A Jakarta .
Halimah, Nuur, & Satria, Andry Praja. (2015). Analisis Praktik Klinik Keperawatan pada Pasien  Diabetes  Melitus  Tipe  II,  Hepatitis  B,  dan  Dekubitus  Grade  2  Terhadap Pemberian Posisi Miring 30 Derajat di Ruang High Care Unit RSUD Abdul Wahab Syahranie Samarinda Tahun 2015 .
Iskandar,  Bayu,  Panggabean,  Aman  Sentosa,  &  Kartika,  Rudi.  (2017).  Validasi  metode penentuan  arsenik  pada  sampel  air  sumur  bor  dengan  menggunakan spektrofotometer  serapan  atom  di  PT.  Geoservices  Balikpapan.  Prosiding  Seminar Kimia, 34–39.
Volume 1, Nomor 10, Oktober 2021 p-ISSN 2774-7018 ; e-ISSN 2774-700X
Islamy, Rithio Chandraca. (2020). Pengaruh pemberian ekstrak daun kemangi (Ocimum Citriodorum)  terhadap  jumlah  neutrofil  tikus  jantan  yang  dipapar  asap  rokok . Malang: Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim.
Kurniawan,  Yusup  Adi,  &  Amirah,  Zahrotul.  (2019). Inovasi  Pengolahan  Singkong Dengan  Standart  Menu  Chinese  Food  Sebagai  Makanan  Pokok  Pengganti  Nasi . Surabaya: Politeknik NSC Surabaya.
Ningsih, Ulfa Dwi. (2017). Perbedaan Kadar Vitamin C Pada Buah Kersen (Muntingia calabura  L.)  Berwarna  Merah  dan  Hijau  Muda .  Semarang:  Universitas Muhammadiyah Semarang.
Niryani,  Puput.  (2018). Faktor  Risiko  Gizi  dan  Antioksidan  terhadap  Kejadian  Anemia pada  Remaja  Putri  di  MTs  Nurul  Ulum  Karangsawah  Kecamatan  Tonjong Kabupaten Brebes . Semarang: Muhammadiyah University Semarang. Pratama,  Dian  Septiani,  Pirdaus,  Purna,  Rinawati,  Rinawati,  Sagala,  Sophia  L.,  & Suhelmi, Ifan Suhelmi R. (2016). Validasi metode analisis logam Na, K, Mg dan Ca pada  air  tua  (bittern)  menggunakan  Microwave  Plasma-Atomic  Emission Spectrometer (MP-AES). Jurnal Standardisasi , 17 (3), 187–198.
Riyanto,  H.  Yatim.  (2014). Paradigma  Baru  pembelajaran:  Sebagai  referensi  bagi pendidik  dalam  Implementasi  Pembelajaran  yang  Efektif  dan  berkualitas .  Jakarta: Prenada Media.
Setyawan, Ajrieh. (2018). Validasi Metode Analisis Logam Pada Limbah Radioaktif Cair Menggunakan  Spektrofotometer  Serapan  Atom. Buletin  Limbah  Vol.  15  No.  1 Tahun 2018 , 15 .
Suria,  Rafirana  Narawesti,  &  Puspowati,  Susi  Dyah.  (2017). Hubungan  Antara Pengetahuan Tentang Anemia, Tingkat Konsumsi Protein, Zat Besi, Dan Vitamin C Dengan  Kadar  Hemoglobin  Pada  Siswa  Sekolah  Menengah  Atas  Di  Sman  3 Ponorogo . Surakarta: Universitas Muhammadiyah Surakarta.
Tambunan,  Lilis  Rosmainar,  Ningsih,  Widia,  Ayu,  Ni  Putu,  &  Nanda,  Haula.  (2018). Penentuan  Kadar  Vitamin  C  Beberapa  Jenis  Cabai  (Capsicum  sp.)  dengan Spektrofotometri Uv-Vis. Jurnal Kimia Riset , 3 (1), 1–5.
Tandra, Hans. (2017). Segala sesuatu yang harus anda ketahui tentang diabetes . Jakarta: Gramedia Pustaka Utama.
Tiowati,  Sulis.  (2020). Pengaruh  Pemberian  Tablet  Fe  Dan  Vitamin  C  Terhadap Peningkatan Kadar  Hemoglobin  Pada  Ibu  Hamil  Trimester  Iii  Dengan  Anemia  Di Pmb  Nurhasanah  Bandar  Lampung  Tahun  2020 .  Lampung:  Poltekkes Tanjungkarang.
Wardaya,  Wardaya,  Sumego,  Mintoro,  &  Utami,  Desi  Sundari.  (2019).  Pengaruh Pemberian  Vitamin  C  Terhadap  Kadar  Asam  Urat  Dan  Superoxide  Dismutase  Di Ketinggian 25.000 Kaki Pada Siswa Susjursartakes. Jurnal Kesehatan Aeromedika ,
5 (2), 48–53.
This work is licensed under a Creative Commons Attribution-ShareAlike 4.0 International License.