Aktivitas Antibakteri dari Ekstrak Etanolik Daun Kumis Kucing ( Orthosiphon stamineus ) pada Bakteri Streptococcus pyogenes dan Salmonella thypi
Antibacterial Activity of
Salmonella thypi Orthosiphon stamineus Ethanol Leaf Extracts on Streptococcus pyogenes and

## ABSTRAK
ABSTRACT PENDAHULUAN

## BIOMEDIKA
Rizal Maarif Rukmana dan Tri Mulyowati
Dosen D-IV Analis Kesehatan, Fakultas Ilmu Kesehatan, Universitas Setia Budi
Tumbuhan Kumis Kucing didominasi senyawa fenolik yang banyak dimanfaatkan sebagai antibakteri. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui daya hambat paling efektif dari ekstrak daun kumis kucing terhadap bakteri Streptococcus pyogenes dan Salmonella thypi.Penelitian ini menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL). Bakteri uji  terdiri  dari  2  jenis  yaitu:  Streptococcus  pyogenes  dan  Salmonella  thypi.  Perlakuan  dengan  pemberian  ekstrak etanol  daun  Kumis  Kucing,  kontrol  positif  menggunakan  kloramfenikol  dan  kontrol  negatif  dengan  menggunakan larutan DMSO 2%.Pembuatan ekstrak daun kumis kucing dengan metode maserasi. Uji antibakteri dilakukan dengan metode difusi agar. Hasil aktivitas antibakteri dari ekstrak etanolik daun kumis kucing kosentrasi 10%, 20%, dan 25% dapat menghambat bakteri Salmonella thypi.  Ekstrak etanolik daun kumis kucing tidak mampu menghambat bakteri Streptococcus pyogenes. Rata-rata zona hambat paling tinggi dari ekstrak etanolik daun kumis kucing pada bakteri Salmonella thypi adalah 1,67 mm. Ekstrak etanolik daun kumis kucing kosentrasi 10% merupakan kosentrasi ekstrak paling rendah yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri Salmonella thypi.
Kata kunci: antibakteri, Orthosiphon stamineus, Salmonella thypi dan Streptococcus pyogenes.
Orthosiphon stamineus plant dominated phenolic compounds widely used as an antibacterial. The aim of this study was to determine the most effective inhibition of leaves extracts Orthosiphon stamineus against bacterium Streptococcus pyogenes and Salmonella thypi. This study uses a completely randomized design (CRD). Bacteria test consists of two types,  namely:  Streptococcus  pyogenes  and  Salmonella  thypi.  Treatment  with  ethanol  leaves  extract  of Orthosiphonstamineus, positive control using chloramphenicol and negative control by using a solution of 2% DMSO. Making  the  leaf  extract  of  Orthosiphonstamineus  by  maceration  method.  Antibacterial  test  conducted  by  the  agar diffusion method. Results on the antibacterial activity of ethanolicleaves extract Orthosiphon stamineus concentration of 10%, 20%, and 25% can inhibit the bacteria Salmonella thypi. Ethanolic leaf extract of Orthosiphon stamineus are not  able  to  inhibit  the  bacterium  Streptococcus  pyogenes.  On  average  the  highest  inhibition  zone  of  ethanolic  leaves extract  of  Orthosiphon  stamineus  on  Salmonella  bacteria  thypi  is  1.67  mm.  Ethanolic  leaves  extracts  of Orthosiphon  stamineus  concentration  of  10%  is  the  lowest  concentration  of  extract  that  can  inhibit  the  growth  of bacteria Salmonella thypi.
Key word: antibacteria, Orthosiphon stamineus, Salmonella thypi and Streptococcus pyogenes.
Indonesia  merupakan  negara  yang  berada  di daerah tropis dengan keanekaragaman yang tinggi. Keanekaragaman  itu  meliputi  flora,  fauna,  fungi serta mikrobiologi. Berbagai jenis flora yang ada di  Indonesia  telah  banyak  di  manfaatkan  oleh masyarakat.  Akan  tetapi  masih  harus  di  dukung dengan  data  ilmiah,  berupa  hasil  penelitian  yang dapat  mendukung  kemanfaatan  flora  tersebut. Salah  satu  jenis  flora  yang  dimanfaatkan  oleh
masyarakat Indonesia adalah kumis kucing ( Orthosiphon stamineus ).
Tanaman  kumis  kucing  sudah  digunakan sebagai  obat  tradisional  oleh  masyarakat Indonesia.  Beberapa  manfaatnya  diantaranya sebagai obat: rematik, diabet, hipertensi, amandel, epilepsi,  haid  tidak  lancar,  gonorhea,  sipilis  dan kencing batu (Mohamed et al ., 2011). Kemampuan kumis  kucing  sebagai  obat  adalah  karena  adanya senyawa  bioaktif  yang  terdapat  pada  daun.
Beberapa  senyawa  bioaktif  yang  terdapat  pada daun  kumis  kucing  adalah:  20  senyawa  fenolik, termasuk sembilan turunan asam caffeinc, seperti asam  rosmarinik,  asam  2,3-  dikaffeoiltartarik, dua  glikosida  flavonol,  sembilan  flavon  lipofilik, polifenol  (turunan  asam  kaffeik  dan  flavonoid polymethoxylated)  (Alshawsh et  al .,  2011), monoterpen,  triterpen,  saponin,  heksosa,  asam organik,  khromene  dan  myo-inositol  (Mohamed et al ., 2011). Senyawa bioaktif daun kumis kucing diharapkan  mampu  untuk  menghambat  bakteri Streptococcus pyogenes dan Salmonella thypi .
Bakteri Streptococcus  pyogenes merupakan bakteri  gram  positif,  berbentuk  bulat  dan organisme  anaerob  fakultatif.  Bakteri  tersebut juga  dapat  menyebabkan  beberapa  penyakit diantaranya  adalah:penyakit  tenggorokan, faringitis  dan  juga  impertigo  (Rahman et  al ., 2014).  Bakteri Salmonella  thypi merupakan bakteri  gram  negatif,  berbentuk  batang  dan tumbuh pada suasana aerob dan anaerob fakultatif. Salmonella  thypi  merupakan  bakteri  yang menyebabkan penyakit demam tipoid (Rostinawati, 2009).  Dari  uraian  ini  maka  perlu  dilakukan penelitian  tentang  kemampuan  antibakteri  dari ekstrak etanolik daun kumis kucing terhadap pada bakteri Streptococcus  pyogenes dan Salmonella thypi .
Bakteri  uji  masing-masing  diambil  1  ose  dan dibiakkan  pada  media  penyubur  BHI.  Hasil biakan distandarisasi dengan standar Mc Farland -2 0,5.  Hasil  standarisasi  di  encerkan  sampai  10 , kemudian  di  ambil  media  MHA  15ml  dan
o dimasukkan pada cawan petri pada suhu 50-60 C, lalu  ditambahkan  200µl  suspensi  bakteri  uji. Kemudian  dicampur  dan  didiamkan  sampai media  memadat.  Setelah  itu  dibuat  sumur  yang berdiameter  ±  6  mm  dengan  menggunakan prevorator. Kemudian dimasukkan 50 µl masing- masing  ekstrak  uji  kedalam  sumur.  Pengujian antibakteri  dengan  ekstrak  daun  kumis  kucing dengan  kosentrasi  yang  sudah  ditentukan.  Hasil diperoleh  dengan  mengukur  zona  hambat  yang dihasilkan oleh bakteri di sekitar sumuran.

## MATERI DAN METODE Rancangan Penelitian
Rancangan penelitian yang digunakan adalah Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL).  Bakteri  uji terdiri dari 2 jenis yaitu: Streptococcus pyogenes dan Salmonella  thypi .  Perlakuan  dengan pemberian  ekstrak  etanol  daun Orthosiphon stamineus dengan  variasi  5  konsentrasi  yaitu; 5%,  10%,  15%,  20%  dan  25%.  Setiap  variasi perlakuan  dilakukan  3  kali  ulangan.  Kontrol negatif pada penelitian ini dengan menggunakan larutan  DMSO  2  %,  sedangkan  kontrol  positif dengan menggunakan kloramfenikol.

## Ekstraksi Daun Kumis Kucing
Daun  kering  kumis  kucing  ( Orthosiphon stamineus ) diperoleh dari Balai Materia Medika Malang.  Daun  kering  kumis  kucing  dibuat
menjadi serbuk dengan cara di blender, kemudian diayak.  Serbuk  kemudian  dimaserasi  dengan menggunakan  etanol  96%  selama  3  hari  sambil diaduk. Hasilnya disaring dengan corong Buchner untuk  mendapatkan  filtratnya  dan  dipekatkan dengan  menggunakan  Rotari  Evaporator  sampai pelarut  menguap,  sehingga  pada  akhirnya diperoleh ekstrak yang kental kemudian hasilnya ditimbang.  Ekstrak  di  encerkan  dan  dibuat  seri kosentrasi sesuai uji yang dilakukan.

## Sterilisasi Alat dan Media
Alat-alat gelas disterilisasi dengan menggunakan
o oven  pada  suhu  160-180 C  selama  dua  jam. Media  yang  digunakan  adalah  BHI  ( brain  heart infusion )  yang  digunakan  sebagai  penyubur bakteri,  MHA  ( muller  hilton  agar )  yang digunakan  sebagai  media  uji.  Media  BHI  dan MHA  di  sterilisasi  pada  autoklaf  dengan  suhu o 121 C, selama 15 menit dan tekanan 1 atm.

## Uji Antibakteri
Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanolik daun Kumis Kucing terhadap bakteri Streptococcus pyogenes dan Salmonella thypi dapat dilihat pada Tabel 1.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Menurut  hasil  penelitian  Koay  dan  Amir (2012) menyatakan bahwa daun Kumis Kucing banyak mengandung senyawa asam rosmarinik.
Tabel 1. Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanolik daun Kumis Kucing berbagai kosentrasi pada bakteri Streptococcus pyogenes dan Salmonella thypi No Nama Bakteri Rata-rata zona hambat bakteri dalam milimeter pada kosentrasi ekstrak yang berbeda-beda 5% 10% 15% 20% 25% K.+ K.- 1 Streptococcus pyogenes 0 0 0 0 0 14 0 2 Salmonella thypi 0 0,16 0 1,67 0,67 13 0
Ekstrak  etanolik  daun  kumis  kucing mengandung  senyawa  fenolik  dan  flavonoid. Senyawa  fenol  dan  turunannya  diduga  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri Salmonella thypi . S enyawa tersebut berikatan dengan protein pada  bakteri  melalui  ikatan  non  spesifik
Senyawa tersebut banyak digunakan sebagai agen antibakteri.  Menurut  Adnyana et  al .,  (2013) beberapa  bakteri  yang  dapat  dihambat pertumbuhannya dengan senyawa asam rosmarinik yang  diperoleh  dari  ekstrak  daun  Kumis  Kucing adalah  bekteri: Bacillus  subtilis,  Bacillus  cereus, Staphylococcus  aureus,  Litseria  monocytogenes, Escherichia  coli,  Vibrio  parahaemolyticus, Salmonella  enteritidis,  Salmonella  typhimurium, dan Klebsiella pneumoniae.
Dzidic et  al .,  (2008)  menyatakan  senyawa aktif  bahan  alam  yang  berupa  ekstrak  tidak  dapat menghambat  dan  membunuh  bakteri  Streptococcus karena  bakteri  resisten  terhadap  senyawa  ekstrak. Mekanisme  resistensi  bakteri  Streptococcus  yaitu dengan  inaktifasi  antibiotek  dengan  menggunakan enzim. Salah satu enzim yang dapat menginaktifasi antibiotik  adalah â -glukoronidase.  Aktivitas â -glukoronidase  merupakan  proses  detoksifikasi utama dan mengkonversi sejumlah besar xenobiotik dan  zat-zat  endogen  menjadi  lebih  hidrofilik. Streptococcus  pyogenes dapat  menghasilkan  enzim â -glukoronidase.  Menurut  Austin  dan  Austin (1999)  bahan  aktif  dalam  ekstrak  etanolik  daun Kumis Kucing diuraikan oleh enzim â -glukoronidase menjadi  senyawa  lain  sehingga  tidak  bersifat toksik pada bakteri.
Ekstrak  etanolik  daun  kumis  kucing  mampu menghambat pertumbuhan dan mampu membunuh bakteri Salmonella  thypi .  Hal  ini  sesuai  dengan penelitian  yang  dilakukan  oleh  Mamman et  al ., (2013) Salmonella spp dapat dihambat oleh ekstrak Azadirachta  indica .  Semakin  besar  kosentrasi ekstrak  maka  semakin  besar  pula  zona  bening pada sumuran uji.
membentuk  kompleks  protein-fenol.  Pada konsentrasi  rendah,  terbentuk  kompleks  protein- fenol  dengan  ikatan  yang  lemah  dan  segera mengalami  peruraian,  kemudian  merusak membran sitoplasma dan menyebabkan kebocoran isi  sel,  sehingga  pertumbuhan  bakteri  terhambat. Sedangkan  pada  konsentrasi  tinggi,  zat  tersebut berkoagulasi dengan protein seluler dan membran sitoplasma mengalami lisis. Senyawa fenol masuk ke dalam sel bakteri melewati dinding sel bakteri dan  membran  sitoplasma,  di  dalam  sel  bakteri senyawa  fenol  menyebabkan  penggumpalan (denaturasi)  protein  penyusun  protoplasma sehingga  dalam  keadaan  demikian  metabolisme menjadi inaktif, dan pertumbuhan bakteri menjadi terhambat (Ariyantiet et al. , 2012).
Pada penelitian ini ekstrak etanolik daun Kumis Kucing  dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri Salmonella  thypi pada  kosentrasi  10%  dan  25%. Ekstrak  etanolik  daun  kumis  kucing  tidak  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri Streptococcus pyogenes .

## KESIMPULAN

## DAFTAR PUSTAKA
Adnyana,  I-Ketut.,  Finna,  Setiawan.,  Muhamad,  Insanu.  2013. From Ethnopharmacology To Clinical Study Of Orthosiphon Stamineus Benth. International  Journal  of  Pharmacy  and Pharmaceutical Sciences . ISSN- 0975-1491.
Alshawsh, M.A., M.A. Abdulla., S.Ismail., Z.A. Amin., Suhailah W.  Qoder.,  H.A.  Hadi.,  N.S.  Harmal.  2012.  Free  Radical Seavenging Antimicrobial and Immunomodulatory Activities of Orthosiphon stamineus . Molecules . ISSN 1420-3049. Ariyanti, N.K. Darmayasa, I.B.G. Dan Sudirga, S.K. 2012. Daya Hambat Ekstrak Kulit Daun Lidah Buaya (Aloe barbadensis Miller) Terhadap Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aureus ATCC  25923  dan  Escherichia  coli  ATCC  25922. Jurnal Biologi: Universitas Udayana.
Austin, B. and D. A. Austin. 1999. Bacterials Fish Pathogens: rd Disease  of  Farmed  and  Wild  Fish.  3 rev.  ed. Praxis Publishing , Chichester, UK.
Dzidic, S., J. Suskovic, and B. Kos. 2008. Antibiotic Resistance Mechanisms in Bacteria: Biochemical and Genetic Aspects.
Food Technol. Biotechnol . 46(1): 11-221.
Koay,  Yen.  Chin  and  Faheem, Amir.  2012. A  Survey  of  the Chemical  Constituents  and  Biological  Activities  of Orthosiphon stamineus. Sci..Int.(Lahore) 24(2),133-138. ISSN 1013-5316.
Rostnawati,  Tina.  2009.  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol Bunga Rosella ( Hibiscus subdariffa L) Terhadap Escherichia coli , Salmonella  typhi dan Staphylococcus  aureus Dengan Metode Difusi Agar. Penelitian Mandiri. Unpad: Bandung.
Mamman.,  Paul,  Habila.,  Mshelia.,  Wayuta,  Philip.,  Susbatrus., Sosthenes, Chidama., and Sambo, Kankani, Wonder., 2013. Antibacterial effects of crude extract of Azadirachta indica against Escherichia coli, Salmonella spp and Staphylococcus aureus.  International  Journal  of  Medicine  and  Medical Sciences . ISSN 2006-9723.
Mohamed, E.A.H., A.J. Mohamed., M. Z. Asmawi., A. Sodikun., O.S.  Ebrika.,  M.E.  Yam.  2011.  Antihyperglycemic  Effect of Orthosiphon  stamineus Benth  Leaves  Extract  and  Its Bioassay-Guided Fractions. Molecules . ISSN 1420-3049.
Rahman, Nurul. Adhwa. Abdul., Siti. Hanna. Muharram., Oduola. Abiola.  2014. Antibacterial  activity  of  NESCAFÉ  instant coffee  beverages  and  pharyngitis-causing  Streptococcus species. Brunei Darussalam Journal of Health , 5: 70-79.