Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, Vol.7 No.1 Juni 2020 Hal 7 - 13 P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048 DOI http://dx.doi.org/10.20473/bikfar.v7i1.29058
Cite this as: Muslich Validasi Metode Spektrofotometri UV Untuk Penetapan Kadar Kolkisin Dalam Infus Kembang Sungsang, 7(1), 7-13
Validasi Metode Spektrofotometri UV Untuk Penetapan Kadar Kolkisin Dalam Infus Kembang Sungsang
Muhammad Muslich A, Isnaeni, Sudjarwo* 1,2
Departemen Kimia Farmasi Fakultas Farmasi Universitas AirlanggaCampus C Jl. Dr. Ir. H. Soekarno *E - mail: sudjarwo0958@gmail.com
Article History Received: 12 March 2020; Received in Revision: 23 March 2020; Accepted: 1 April 2020

## ABSTRACT
Validation of colchicine analysis methods in herbal infusions has been carried out to facilitate quality control of raw materials or simplicia. The validation parameters of the method set include selectivity, linearity, precision, and accuracy, which are included in category I. In this study, the raw material was prepared from the leaves of Gloriosa superba Linn. infusion made. The results of the selectivity test with colchicine as a standard provide uptake at a chosen wavelength of 340.2 nm. Linearity test results show the equation y = 0.0303x + 0.0131 with r = 0.9998> r Table for n = 6, ie 0.917 for p <0.01 and 0.811 for p = <0.05, the value of Vxo is 1 15%. In the precision test,  the  coefficient  of  variation  is  0.54%  and  the  accuracy  test  gives  an  average  recovery  of 92.81%  ±  4.16%.  Determination  of  colchicine  in  the  infusion  preparation  was  carried  out  as many as three replications. The results showed that the content of colchicine in raw materials was 0.3152% ± 1.99%, while the colchicine content in herbal infusion preparations was 0.483 ± 4.47%.
Keywords:  validation  of  UV  spectrophotometry  method,  colchicine,  Gloriosa  superba,  herbal infusion

## ABSTRAK
Validasi metode analisis kolkisin dalam infus herbal telah dilakukan guna memfasilitasi kontrol kualitas  bahan  baku  atau  simplisia.  Parameter  validasi  metode  yang  ditetapkan  meliputi selektivitas, linieritas, presisi, dan akurasi, yang termasuk kategori I. Dalam penelitian ini, bahan baku disiapkan dari daun Gloriosa superba Linn. yang dibuat sediaan infus. Hasil uji selektivitas dengan  kolkisin  sebagai  standar  memberikan  serapan  pada  panjang  gelombang  terpilih  340,2 nm.  Hasil  uji  linearitas  menunjukkan  persamaan  y  = 0,0303x  +  0,0131  dengan  r  =  0,9998>  r Tabel untuk n = 6, yaitu 0,917 untuk p <0,01 dan 0,811 untuk p = <0,05, nilai Vxo adalah 1,15%. Pada  uji  presisi,  hasil  koefisien  variasi  adalah  0,54%  dan  uji  akurasi  memberikan  perolehan kembali rata-rata 92,81% ± 4,16%. Penentuan kolkisin dalam sediaan infus dilakukan sebanyak tiga  replikasi.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  kandungan  kolkisin  dalam  bahan  baku 0,3152% ± 1,99%, sedangkan kandungan kolkisin dalam sediaan infus herbal 0,483 ± 4,47%.
Kata kunci: validasi metode spektrofotometri UV, kolkisin, Gloriosa superba

## Pendahuluan :
Validasi  metode  merupakan  suatu  tindakan penilaian  terhadap  parameter  tertentu,  berdasarkan percobaan laboratorium, untuk membuktikan bahwa parameter  tersebut  memenuhi  persyaratan  untuk penggunaannya.  Parameter  analitik  yang  diperlukan untuk  validasi  metode  ini  bergantung  pada  tipe
prosedur  analitik  (Harmita,  2004).  Validasi  metode merupakan  hal  yang  penting  untuk  dilakukan dikarenakan  berhubungan  dengan  reprodusibilitas metode  yang  dikembangkan  sehingga  memberikan hasil yang sama meskipun perbedaan pada personil, instrumen, prosedur dan tempat pengerjaan (Gandjar dan  Rohman,  2010).  Metode  dalam  validasi  yang digunakan  untuk  pemeriksaan  produk  farmasetika

## Research Article
Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, Vol.7 No.1 Juni 2020 Hal 7 - 13 P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048
dapat  diklasifikasikan  menjadi  tiga  kategori  yaitu kategori  I  metode  analitikal  untuk  kuantitasi komponen  maupun  substansi  bahan  baku  obat  atau bahan aktif (termasuk pengawet). Kategori II metode analitik untuk menentukan campuran dalam substansi bahan baku atau komponen sisa. Metode ini termasuk perhitungan kembali secara kuantitatif dan batas tes. Pada  kategori  III  untuk  menentukan  performa karakteristik  (contoh:  disolusi,  pelepasan  obat) (Harmita, 2004).
Salah  satu  metode  analisis  yang  bisa digunakan untuk validasi metode adalah spektrofotometri  UV.  Serapan  Spektrofotometri  UV dapat terjadi jika terdapat ikatan rangkap terkonjugasi pada  struktur  (yaitu  dua  ikatan  rangkap  atau  lebih dalam  suatu  seri  yang  dipisahkan  oleh  ikatan tunggal).  Serapan  terjadi  pada  panjang  gelombang yang lebih panjang dan dengan intensitas yang lebih besar.  Sistem  ikatan  rangkap  yang  diperpanjang tersebut dikenal sebagai ‘kromofor’. Kromofor paling umum yang ditentukan di dalam molekul obat adalah cincin  benzena.  Benzena  tersebut  memiliki  pita serapan yang kuat pada 204 nm. Hal ini disebabkan oleh kesimetrisan benzena (Watson,2005). Salah satu bahan  aktif  obat  yang  mempunyai  cincin  benzena adalah  kolkisin.  Kolkisin  merupakan  produk  alami yang dapat diekstraksi dari tanaman dari keluarga lily yaitu  tanaman  Gloriosa  superba  Linn  atau  yang dikenal  dengan  nama  kembang  sungsang  (Cocco  et al.,2010).
Tanaman  kembang  sungsang  merupakan tanaman  herba  dengan  tinggi  1-2.5  meter  dan mempunyai  bunga  (Steenis,1997).  Pada  tanaman Gloriosa  superba  Linn  yang  terdapat  di  Sri  lanka mempunyai  kandungan  kolkisin  tertinggi  ada  pada bagian  perikarp  yaitu  0.1%-0.25%  lalu  yang  kedua dari biji dengan kandungan 0.15%-0.25% sedangkan pada  daun  tua  0.01%-0.05%  dan  pada  daun  muda 0.01%-0.06% (Arambewela et al., 1991). Sedangkan Isnawati  2006  dari  Litbang  Kesehatan  memperoleh kadar  kolkisin  sebesar  0,44%.  Walaupun  bagian perikarp  mempunyai  banyak  kandungan  kolkisin tetapi bagian yang diambil dalam penelitian ini adalah daun, hal ini dikarenakan perikarp Gloriosa superba beracun sedangkan daun tidak (Isnawati, 2006). Aneka  produk  olahan  dari  bahan  baku  tanaman  ini belum  ada  dipasaran  sehingga  dipilih  dalam  bentuk seduhan  dikarenakan  mudah  dalam  penggunaannya. Selain itu, seduhan merupakan suatu cara yang sudah dikenal  oleh  masyarakat  karena  sangat  praktis penangganannya.  Kandungan  senyawa  di  dalam seduhan  sangat  komplek  sehingga  perlu  dilakukan validasi metode spektrofotometri UV untuk penetapan  kadar  kolkisin  dalam  seduhan  herbal kembang sungsang.

## Bahan dan Cara Kerja

## Bahan:
Kolkisin  (Pharmaceutical  grade,  Shaanxi  taiji Huaqing  Technology  Co.  Ltd.),  tanaman  Gloriosa superba  Linn  bagian  daun  dari  Kebun  Raya Purwodadi  Indonesia,  Kloroform  pa.  (BDH), Aquadest.
Cara Kerja :
Pembuatan Seduhan Herbal Kembang Sungsang Pembuatan  seduhan  dimulai  dari  daun  tanaman kembang sungsang (Gloriosa superba) yang dikeringkan di dalam ruangan sampai kering. Setelah kering dicacah kecil-kecil menjadi simplisia serbuk, sebanyak  0,158  gram  kemudian  dimasukkan  wadah sachet.  Simplisia  (0,158  gram)  tersebut  dilarutkan dalam air mendidih 50 ml aduk sampai homogen lalu disaring  menggunakan  kertas  saring  Whatzman  lalu masuk labu ukur 50ml dan ditambah aquadest sampai garis tanda.

## Penetapan Kadar Air Daun Kembang Sungsang
Penetapan  kadar  air  untuk  daun  kembang  sungsang menggunakan  metode  gravimetri.  Timbang  serbuk daun  sebanyak  satu  gram.  Tara  wadah  kering, masukkan  zat  uji  kedalam  wadah  dan  timbang seksama wadah beserta isinya. Keringkan dalam oven pada  suhu  105º  selama  lima  jam,  kemudian  masuk eksikator  selama  satu  jam  dan  timbang.  Lanjutkan pengeringan dan timbang pada jarak satu jam sampai perbedaan antara dua penimbangan berturut-berturut tidak  lebih  dari  0,25%  (Farmakope  Indonesia  IV, 1995).

## Validasi Metode Pemilihan panjang gelombang
Dibuat  larutan  baku  kolkisin  delapan  ppm  (dua  ml standar kolkisin 40 ppm dalam labu ukur 10ml); dua ml  larutan  seduhan  herbal  kembang  sungsang  ;  dua ml  larutan  seduhan  herbal  kembang  sungsang  yang ditambahkan dengan larutan standar kolkisin dua ml 400ppm.  Sebagai  blangko  digunakan  kloroform. Kemudian ketiga larutan tersebut diamati spektranya dengan  menggunakan  Spektrofotometer  UV  pada  λ 240-400  nm.  Selanjutnya  ditentukan  panjang gelombang terpilih dengan cara terpilih.

## Linieritas
Dibuat  Larutan  baku  kerja  dengan  konsentrasi  tiga ppm, enam ppm, sembilan ppm, 12 ppm 15 ppm dan 18 ppm

## Presisi
Dipilih  satu  konsentrasi  dari  larutan  yang  dipakai untuk  akurasi  yaitu  12  ppm.  Sebagai  blangko digunakan kloroform. Larutan diamati absorbansinya sebanyak  sepuluh  kali  pengamatan,  kemudian dihitung  absorban  rata  –  rata,  standar  deviasi  (SD), dan  koefisien  variasi  (KV).  Presisi  dikatakan memenuhi syarat jika KV tidak lebih dari 2%.
Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, Vol.7 No.1 Juni 2020 Hal 7 - 13 P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048

## Akurasi
Ditimbang  dengan  seksama  50mg  standart  kolkisin kemudian dilarutkan dalam beaker glass 50ml dengan aquadest  lalu  masuk  labu  ukur  50ml  didapatkan larutan baku induk 1000ppm. Dipipet 4ml 1000ppm lalu  dilarutkan  dalam  labu  ukur  10ml  didapatkan laarutan  baku  kerja  400ppm.  Selanjutnya  ditimbang 2,5  gram  serbuk  seduhan  herbal  kembang  sungsang kemudian  ditambahkan  100ml  air  mendidih  serta disaring  lalu  dimasukkan  labu  ukur  100ml  sampai garis tanda.
Dibuat  larutan  standar  kolkisin  dengan  konsentrasi 1ml 400ppm, masing masing konsentrasi dari larutan standar  kolkisin  tersebut  ditambah(adisi)  seduhan herbal  dengan  volume  meningkat  (0,5ml;  1,0ml; 2,0ml;  3,0ml;  4,0ml),  selanjutnya  kedua  larutan tersebut  dimasukkan  tabung  reaksi  15ml  dan ditambah  6ml  kloroform.  Kemudian  diekstraksi selama  tiga  menit  dan  dipipet  1,0  ml  ekstrak kloroform lalu ditambah kloroform dilabu ukur 10ml sampai garis tanda. Dibuat larutan yang sama untuk akurasi  80%,  100%,  120%  serta  masing-masing direplikasi 3 kali.
Selanjutnya masing-masing larutan diamati absorbannya  menggunakan  Spektrofotometer  UV pada  panjang  gelombang  terpilih  dan  cara  terpilih. Dihitung  %  Recovery  berdasarkan  kadar  yang didapat  dibagi  dengan  kadar  yang  diketahui  dikali 100%.
Kriteria  yang  diterima  untuk  persen  recovery  dari obat adalah 80 – 120% (APVMA, 2004). e. Penetapan  Kadar  Kolkisin  Dalam  Larutan Serbuk Seduhan Herbal Kembang Sungsang dengan Metode Spektrofotometri UV
Dibuat  larutan  serbuk  seduhan  herbal  kembang sungsang dengan volume 1,0 ml, masing masing dari larutan  serbuk  seduhan  herbal  kembang  sungsang tersebut  ditambah(adisi)  larutan  standar  kolkisin dengan  konsentrasi  meningkat  (0,5ml  400ppm;  1,0 ml  400ppm;  2,0ml  400ppm;  3,0ml  400ppm;  4,0ml 400ppm), selanjutnya kedua larutan tersebut dimasukkan tabung reaksi 15,0 ml  dan  ditambah  6ml  kloroform.  Kemudian diekstraksi  selama  tiga  menit  dan  fase  kloroform dipipet  1,0  ml  lalu  ditambah  kloroform  dilabu  ukur 10,0  ml  sampai  garis  tanda.  Untuk  penetapan  kadar masing-masing adisi diamati absorbannya menggunakan  Spektrofotometer  UV  pada  panjang gelombang terpilih dan cara terpilih. Kadar kolkisin dalam  seduhan  herbal  kembang  sungsang  dapat dihitung  berdasarkan kurva  kalibrasi  larutan  standar kolkisin.
Hasil Penelitian
Tabel 1. : Kadar Air Sampel Serbuk Seduhan herbal
Krus Kadar Air(%) I 16, 56% II 16, 06% III 15, 70% Rata-rata SD KV 16,11% 0,4319 2,68% Pemilihan panjang gelombang
Dari data spektra diatas, diketahui bahwa panjang
gelombang terpilih adalah 340,2 nm. Sehingga untuk pengamatan selanjutnya
Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, Vol.7 No.1 Juni 2020 Hal 7 - 13 P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048
Gambar 1: Pemilihan panjang gelombang : Spektra Adisi StandarKolkisin dengan Seduhan herbal (1), larutan standart kolkisin (2), Seduhan herbal (3).
Tabel 2 : Linieritas larutan kolkisin
Dari hasil penelitian, diperoleh persamaan regresi Y= 0,0303x+0,0131 dengan koefisien korelasi r= 0,9998 dimana  lebih  besar  dari  r  table  untuk  (n=6)  yaitu
0,917 untuk p<0,01 dan 0,811 untuk p<0,05  dengan harga  Vxo  sebesar  1,15%.  Memenuhi  persyaratan untuk Vxo ≤ 5%.
Gambar 2 : Linieritas larutan kolkisin
Tabel 3 : Akurasi
Berdasarkan Perhitungan akurasi 80%, 100%, 120%
4,16%. Kadar (ppm) Absorban Kolkisin Persamaan Regresi 3,078 0,111 Y= 0,0303x+0,0131 r= 0,9998 6,156 0,195 9,234 0,290 12,312 0,388 15,39 0,481 18,468 0,573 Akurasi Replikasi Berat Kolkisin diketahui (mg) Berat Kolkisin yang dihitung (mg) % recovery 80% 1 0,4088 0,3578 87,52 2 0,4120 0,3678 89,27 3 0,4040 0,3990 98,76 100% 1 0,5120 0,4811 93,96 2 0,5220 0,4812 92,18 3 0,5130 0,4965 96,78 120% 1 0,6216 0,5974 96,11 2 0,6084 0,5571 91,57 3 0,6156 0,5487 89,13 Rata-rata 92,81 SD 3,86 KV 4,16%
Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, Vol.7 No.1 Juni 2020 Hal 7 - 13 P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048
Tabel 4 : Penetapan kadar kolkisin di dalam seduhan simplisia daun kembang sungsang
Pada  penetapan  kadar  kolkisin  di  dalam  seduhan simplisia  didapatkan  kadar  rata-rata  0,3152%  ± 1,99%. Dari kadar ini, kemudian dikonversi kedalam
kandungan kolkisin sekali minum yaitu 0,5 mg sehingga didapatkan berat 0,158 gram.
Tabel 5 : Penetapan Kadar Kolkisin di dalam Seduhan herbal 50,0 ml
gelombang maksimum yaitu 350 nm (Arambewela et al., 1991). Selisih panjang gelombang dalam literatur berbeda  dengan  yang  diperoleh,  hal  ini  disebabkan dari  matriks  sampel  yang  berbeda.    Disamping  itu, hasil uji selektivitas pada penelitian ini menunjukkan bahwa  matriks  seduhan  herbal  tidak  memberikan gangguan terhadap spektrum dari standart kolkisin. Hasil ini ditunjukkan dengan spektra seduhan herbal yang  diadisi  kolkisin  standart  menunjukkan  profil yang  sama  dengan  spektrum  standart  kolkisin (Gambar 1).
Sedangkan  pada  uji  Linieritas  bertujuan  untuk menunjukkan  adanya  hubungan  yang  linear  antara konsentrasi  larutan  baku  kerja  kolkisin  dengan absorbannya.  Dari  hasil  penelitian,  diperoleh persamaan  regresi  Y=  0,0303x+0,0131  dengan koefisien korelasi r= 0,9998 dimana lebih besar dari r table untuk (n=6) yaitu 0,917 untuk p<0,01 dan 0,811 untuk  p<0,05  dengan  harga  Vxo  sebesar  1,15%. Memenuhi  persyaratan  untuk  Vxo  ≤  5%.  Hasil  ini tidak jauh berbeda dengan yang dilakukan oleh Patial dan  Verma,  2012  yang  menghasilkan  persamaan regresi y = 0,037x + 0,005. Bahwa hukum Lambert – Beer terpenuhi pada konsentrasi 6 – 22 µg/ml untuk λ 353,8 nm. Linearitas ditentukan pada konsentrasi 6 – 22  µg/ml dengan  koefisien  korelasi  0,  995.  Serapan
antara  0,216  –  0,819  pada  λ    353,8  nm.  Hal  ini, menunjukkan  bahwa  terdapat  hubungan  yang  linier antara kadar kolkisin dengan absorban.
Berdasarkan hasil uji presisi untuk melihat ketelitian alat,  yang  dilakukan  dengan  menggunakan  satu larutan yaitu 12ppm dengan diamati secara berulang. Hasil  pembacaan  absorban  pada  Spektrofotometer (Lambda  EZ  201  Perkin  Elmer)  sangat  baik, ditunjukkan  oleh  nilai  koefisien  variasi  (KV)  yaitu 0,5401%  (persyaratan  KV  ≤  2%).  Hasil  ini  sama dengan yang dilakukan Patial dan Verma 2012 bahwa presisi  yang  mereka  lakukan  memberikan  nilai KV<2%.
Pada  saat  uji  akurasi,  sampel  serbuk  seduhan dipreparasi  dengan  cara  mengekstraksi  hal  ini bermaksud untuk memisahkan antara kolkisin dengan matriks  sampel.  Uji  akurasi  dilakukan  untuk memperoleh  kedekatan hasil  yang diperoleh  dengan hasil  yang  sebenarnya.  Untuk  mendokumentasikan akurasi,  ICH  merekomendasikan  pengumpulan  data dari 9 kali penetapan kadar dengan 3 konsentrasi yang berbeda (misal 3 konsentrasi dengan 3 kali replikasi). Data harus dilaporkan sebagai peresentasi perolehan kembali (%Recovery) (Gandjar dan Rohman, 2007). Pada proses preparasi, standar kolkisin ditambahkan kepada  sampel  dengan  berbagai  konsentrasi.
Replikasi Berat Serbuk Seduhan (mg) % Kadar Air Kadar kolkisin yang diperoleh (mg) % Kadar Kolkisin 1 2501,6 16,11% 7,7052 0,3080 2 2505,5 16,11% 7,9998 0,3193 3 2518,1 16,11% 8,0172 0,3184 Rata-rata 0,3152 SD 6,2804.10 -3 KV 1,99 % Replikasi Berat Sediaan Seduhan (gram) % Kadar Air Kadar Kolkisin yang diperoleh (mg) 1 0,1588 16,11% 0,460 2 0,1586 16,11% 0,485 3 0,1581 16,11% 0,503 Rata-rata 0,483 SD 0,0216 KV 4,47%
Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, Vol.7 No.1 Juni 2020 Hal 7 - 13 P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048
Keakuratan metode harus dinilai dengan menggunakan  minimal  9  penentuan  dilakukan  pada rentang  minimal  tiga  kadar  80%,  100%,  120%  dari konsentrasi target ( Yuwono M, Indrayanto G., 2005). Dari  hasil  uji  akurasi  80%,  100%,  dan  120% diperoleh  %  Recovery  rata-rata  92,81%  ±  4,16%. Sehingga % Recovery tersebut memenuhi persyaratan  yaitu  80-120%  untuk  validasi  metode. Penelitian lain dilaporkan bahwa (%) recovery antara 97,66 – 99,75% (K.V) ≤ 10% (APVMA, 2004; Patial dan Verma., 2012). Perbedaan hasil ini dikarenakan proses metode yang digunakan berbeda dimana Patial dan  Verma  menggunakan  pelarut  buffer  saline sedangkan  penelitian  ini  menggunakan  klorofrom, dan proses ekstraksi yang belum sempurna.
Metode yang telah dioptimasi dan divalidasi tersebut dapat  diaplikasikan  untuk  menganalisis  penetapan kadar kolkisin pada sediaan karena ke tiga parameter validasi metode terpenuhi.
Sebagai aplikasinya terlebih dahulu ditetapkan kadar kolkisin  dalam  serbuk  seduhan  yang  nantinya  akan dibuat  menjadi  seduhan  herbal.  Dari  hasil  yang diperoleh  didapatkan  kadar  kolkisin  dalam  daun Gloriosa  superba  purwodadi  sebesar  0,3152%  ± 1,9923%.  Hal  ini  berbeda  dengan  penelitian Arambewela  tahun  1991  yang  menemukan  kadar kolkisin dalam daun tua sebesar 0,01-0,05% dan pada daun muda sebesar 0,01-0,06%. Selain itu kadar yang didapat oleh peneliti Isnawati dari Litbang Kesehatan 2006  juga  berbeda  yaitu  0,44%.  Hal  ini  disebabkan oleh  perbedaan  tempat  pengambilan  tanaman Gloriosa superba, tanaman Arambewela berasal dari Sri  lanka  sedangkan  peneliti  mengambil  dari Purwodadi  Kabupaten  Pasuruan  Jawa  Timur  sesuai dengan  .  Hal  ini  sesuai  dengan  faktor  yang mempengaruhi  komposisi  kandungan  kimia  yaitu faktor internal dan eksternal. Faktor internal meliputi genetik  dan  variasi  fisiologi,  sedangkan  faktor eksternal meliputi iklim tanah (mencakup suhu, curah hujan,  intensitas  cahaya  matahari),  pH  tanah, pemupukan,  pengairan,  pemberantasan  penyakit (Pereira et al., 2006).
Pada  penentuan  kadar  dalam  seduhan  herbal, dilakukan  konversi  kadar  0,3152%  kedalam  dosis sekali  minum  kolkisin  yaitu  0,5  mg  per  hari (Sweetman,  2009),  sehingga didapatkan berat  0,158 gram.  Pada  penentuan  kadar  kolkisin  di  dalam sediaan  seduhan  (50,0  ml)  daun  kembang  sungsang sekali minum, didapatkan kadar rata-rata 0,483 mg ± 4,47%.

## Kesimpulan Dan Saran

## Kesimpulan
Kesimpulan  yang  didapatkan  bahwa  metode Spektrofotometri  UV  yang  telah  dioptimasi  dan divalidasi  tersebut  memenuhi  persyaratan  yang meliputi:  selektivitas,  linearitas,  presisi  dan  akurasi.
Pada  selektifitas  didapatkan  panjang  gelombang terpilih  340,2  nm,  pada  uji  linieritas  dengan persamaan ini adalah Y= 0,0303x+0,0131. Koefisien korelasi  (r=  0,9998)  lebih  besar  dari  r  table  untuk (n=6)  yaitu  0,917  untuk  p<0,01  dan  0,811  untuk p<0,05  dan  harga  Vxo  sebesar  1,15%.  Pada  uji ketelitian  atau  presisi  dapat  dinyatakan  dengan koefisien variasi sebesar 0,54%, memenuhi persyaratan  KV  <  2%.  Hasil  uji  pada  penelitian  ini memberikan hasil uji akurasi (% Recovery rata-rata) yaitu  92,81%  ±  4,16%.  Memenuhi  persyaratan akurasi untuk validasi metode 80 - 120%.
Pada aplikasi penetapan kadar kolkisin dalam larutan serbuk seduhan didapatkan kadar sebesar 0,3152% ± 1,99%  dan  kadar  kolkisin  dalam  seduhan  herbal kembang sungsang 50ml diperoleh sebesar 0,483 mg ± 4,47%.

## Saran
Diperlukan suatu standar operasional prosedur dalam pembuatan seduhan herbal kembang sungsang. Untuk penetapan kadar kolkisin dalam seduhan herbal dari Gloriosa  superba  dapat  dilakukan  dengan  metode spektrofotometri UV-Vis.

## Daftar Pustaka
Abernethy,  Darrell  R.,  Braden,  Larry  L.,  Brater,  D.
Craig.,  Mars,  Susan  S  de.,  Mauger,  John  W., William,  Roger  L.,  Hickey,  Anthony  J.,  Peter, Ganz.,  Tente,  William.,  Yeoman,  L.,  Garfinkle, Barry  D.,  Foster,  Thomas  S.,  Allen,  Loyd  V., Shefter,  Eli,  and  Popin,  William  F.,2007.The United  States  Pharmacopeia  30  The  National Formulary  25.  .  Rockville  :  The  United  State Pharmacopeial Convention, Inc. p.1826
Arambewela, Lakshmi S.R, Kumundini and Ratunga, J.1991. Studies an Gloriosa superba Grown in Sri Lanka.  Ceylon  Institute  of  Scientific  and Individual Research. p.178.
Australian  Pesticides  &  Veterinary  Medicines Authority  (APVMA).  2004.  Guidelines  For  The Validation  of  Analytical  Methods  for  Active Constituent, Agricultural and Veterinary Chemical Products. http://www.apvma.gov.au British  Standard.2002.  Method  for  Preparation  of  a liquor  of  tea  for  use  in  sensory  tests.  London: British Standards Institution. p.1
Cocco,  Giuseppe,  Chu,  David  C.C.,  and  Pandolfi, Stefano,2010. Colchicine in clinical medicine. A guide for internists. European Journal of Internal Medicine. p.503-504.
Departemen Kesehatan. 1995. Farmakope Indonesia IV.  Jakarta:  Departemen  Kesehatan  Republik Indonesia.
Dewoto,  Hedi  R.  2007.  Pengembangan  Obat Tradisional  Indonesia  Menjadi  Fitofarmaka.
Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, Vol.7 No.1 Juni 2020 Hal 7 - 13 P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048
Majalah  Kedokteran  Indonesia.  Vol.57,  No.7, p.205-206.
Gandjar,  Ibnu  Gholib.,  dan  Rohman,  Abdul,  2010.
Kimia  Farmasi  Analisis.  Yogyakarta:  Pustaka Pelajar. Hal 234-262.
International  Conference  on  Harmonisation  of Technical  Requirements  for  Registration  of Pharmaceutical  for  Human  use.  2005.  ICH Harmonised  Tripartite  Guideline  Validation  of Analytical Procedures: Text and Methodology Q2 (R1). ICH.
Isnawati,  A.,  dan  Arifin,  K.M.,  2006.  Karakteristik Daun Kembang Sungsang (Gloriosa superba) dari aspek  fisiko  kimia.  Media  Litbang  Kesehatan, XVI nomor 4, Hal. 8 – 14.
Jain,  A.P.,  and  Suryavanshi,  S.,  2010.  Gloriosa superba  Linn  –  a  pharmacological  review. IJPRD/PUB/ARTI/VOV-2/ISSUE-8/OCT/004, p. 24 – 28.
Jana, S., and Shekhawat, G.S., 2011. Critical review on  medicinally  potent  plant  species:  Gloriosa superba. Fitoterapia 82, p. 293–301.
KBBI  online.  2013.  Pengertian  Seduh.  Diakses  dari kbbi.web.id/seduh-2, pada tanggal 20 September 2013.
Mulja,  M.  dan  Syahrani,  A.1989.  Aplikasi  Analisis Spektrofotometri  UV-Vis.  Surabaya:  Mephiso Grafika.
Mulja, M., dan Suharman. 1995. Analisis Instrumental.  Surabaya  :  Airlangga  University Press.
Narayana, B., Divya, N S. 2010. A New Method for Spectrophotometric
Determination
of
Cholchicoside. Journal of Scientific & Industrial Research. Vol. 69. p.368.
Patial, A., and Verma, P., 2012. Development of UV
Spectrophotometric  method  for  estimation  of cholcicine  in  phosphate  buffer  saline  pH  6,4. IRJP, 3 (2), p. 87 – 89.
Pawar,  B.M.,  Wayhal,  V.P.,  Pawar,  N.D.,  Agarwal, M.R.,  Shinde,  P.B.,  Kamble,  H.V.,  2010. Anthelmintic  activity  of  Gloriosa  superba  Linn (Liliaceae).  International  Journal  of  Pharm  Tech Research  CODEN  (USA):  IJPRIF  ISSN:  0974- 4304 Vol.2 No.2, p.1483-1487.
Pereira, G.E, Gaudillere, J., Leeuwen, C., Hilbert, G., Maucourt, M, Deborde, C., Woing, A., Rolin, D.
2006. H-NMR metabolic profiling of wines from three  cultivars,  three  soil  types  and  two contrasting  vintages.  Congres  International  des terroirs  viticoles  2006-Vith  International  teiroir congress 2006.
Rajagopal,  C  and  Kandhasamy,  R.,  2009.  Genetic variability  of  kazhappai  kizhangu  (Gloriosa superba  L.)  in  Tamil  Nadu  assesed  using morphological  and  biochemical  traits.  Tropical Agriculture 47 (1-2), p. 77-79.
Rowe,  R.C.,  Sheskey,  P.J.,  Quinn,  M.E.  2009. Handbook  of  Pharmaceutical  Excipient  sixth edition. London: Pharmacutical Press.
Putro  Agus  Harnowo.  Baru  1%  Jenis  Tanaman  di Indonesia  yang  Termanfaatkan.  Diakses  dari http://health.detik.com/ read/2012/06/
12/143207/1939225  /763/baru-1-jenis-tanaman- di-indonesia-yang-termanfaatkan?utm source= topshare Syarif, Amir, dan Ascobat,
Purwantyastuti.,dkk.2007. Farmakologi dan Terapi Edisi 5.Jakarta: Departemen Farmakologi Setiorini,  Santi,  dan  Handoyo.  2010.  Analisa Kadar  Klorida  Pada  Kantong  Seduhan  Herbal Serta Pengaruhnya Terhadap Mutu Teh.Surabaya: Prodi  Kesehatan  Lingkungan  Madiun  Jurusan Kesehatan  Lingkungan  Politeknik  Kesehatan Departemen Kesehatan. Hal.165.
Steenis,van Dr C.G.G.J.1997.FLORA Untuk Sekolah di Indonesia. Jakarta : PT Pradnya Paramita.
Sweetman,  S.C.,  2009.  Martindale.  The  Complete Drug  Reference.  Thirty-sixth  edition.  London: Pharmaceutical Press.
The  United  State  Pharmacopeial  Convention.  2009. The  United  State  Pharmacopeia  Ed  National Formulary  27,  Rockville:  The  United  State Pharmacopeial Convention, p. 733.
Watson,  D.G.,  2005.  Analisis  Farmasi  Buku  Ajar untuk  Mahasiswa  Farmasi  dan  Praktisi  Kimia Farmasi, edisi 2. Diterjemahkan oleh Syarief, W. R.  Jakarta:  Penerbit  Buku  Kedokteran.  dan Terapeutik  Fakultas  Kedokteran  Universitas Indonesia. Hal 243
Yuwono, Mochammad and Gunawan Indrayanto.2009. Validation of Chromatographic
Method of Analysis. Elsevier Inc. Vol. 32. p.251.