Efek Penghambatan Enzim Xantin Oxidase Kombinasi Ekstrak Kumis Kucing ( Orthosiphon aristatus L.) dan Sidaguri Extract ( Sida rhombifolia L.)
Xanthine Oxidase Enzyme Inhibitory Effects of Combination Kumis Kucing (Orthosiphon aristatus L.) and Sidaguri Extract (Sida rhombifolia L.)
Nitya Nurul Fadilah
Fakultas Ilmu Kesehatan Program Studi Farmasi, Universitas Perjuangan Tasikmalaya, Indonesia email: nityanurul@gmail.com
(tanggal diterima: 03-12-2020, tanggal disetujui: 28-10-2021)

## INTISARI
Hiperurisemia  memiliki  makna  kadar  asam  urat  yang  tinggi  pada  darah  dan  dapat menimbulkan  penyakit gout .  Obat  yang  dapat  digunakan  untuk  mengatasi  hiperurisemia  yakni allopurinol dengan mekanisme menghambat aktivitas xanthine oxidase (XO). Selain itu digunakan probenesid yang meningkatkan pengeluaran asam urat melalui urine. Pemakaian obat allopurinol bisa menimbulkan berbagai jenis efek samping apabila dipakai dalam jangka waktu yang cukup lama. Tanaman sidaguri dan kumis kucing mengandung flavonoid dan telah terbukti  mengobati asam urat dengan masing-masing tanaman dapat menurunkan kadar asam urat dalam darah dan meningkatkan eksresinya dalam urine. Untuk menentukan mekanisme suatu obat bisa dilakukan denga uji in vitro menggunakan enzim.  Selain itu, uji in  vitro bisa menuntun dalam uji in vivo salah  satunya dalam menentukan  perbandingan  dosis.  Studi  ini  dilakukan  untuk  menentukan  aktivitas  penghambatan enzim xanthine  oxidase dari  kombinasi  ekstrak  kumis  kucing  dan  sidaguri  dengan  rasio  tertentu sehingga berpotensi sebagai obat asam urat .
Pada  studi  ini,  kombinasi  ekstrak  dibuat  dengan  menggunakan  metode  maserasi. Penghambatan  aktivitas  enzim xanthine  oxidase dengan  ekstrak  etanol  secara in  vitro ditentukan melalui asam urat yang menurun produksinya kemudian di monitor dengan alat spektrofotometer UV pada (λ) 292nm dengan xanthine berperan sebagai substrat. Kemudian dihitung nilai IC 50 terbaik. Sebagai pembanding digunakan obat allopurinol. Berdasarkan hasil uji in vitro, perbandingan terbaik kombinasi ekstrak kumis kucing dan ekstrak sidaguri dapat menghambat aktivitas enzim XO dengan IC 50 terbaik berturut-turut adalah kombinasi  ekstrak  kumis  kucing  dan  sidaguri  1:1  (20,99ppm),  1:2  (39,64ppm),  dan  1:0,5 (52,28ppm). Nilai IC50 terbaik didapatkan pada perbandingan ekstrak kumis kucing dan sidaguri 1:1 dengan nilai 20,99ppm. Sehingga perbandingan ekstrak kumis kucing dan sidaguri pada penelitian selanjutnya secara in vivo bisa menggunakan perbandingan tersebut.
Kata kunci : Hiperurisemia; gout ; xanthine oxidase ; sidaguri; kumis kucing

## ABSTRACT
Hyperuricemia means high blood uric acid levels and can cause gout. The drug that can be used to treat hyperuricemia is allopurinol with the mechanism of inhibiting the activity of xanthine oxidase (XO). The use of allopurinol drugs can cause various types of side effects if used for a long period of time. Sidaguri and cat's whiskers contain flavonoids and have been shown to treat gout with each plant being able to lower uric acid levels in the blood and increase its excretion in urine. To determine the mechanism of a drug can be done premises in vitro test using enzymes.
In  this  study,  a  combination  of  extracts  was  made  using  maceration  method.  In  vitro inhibition of xanthine oxidase activity with ethanolic extract was determined by reducing uric acid
production which was monitored by UV spectrophotometer at (λ) 292nm with xanthine acting as a substrate. Then the best IC50 value is calculated. As a comparison, the drug allopurinol was used. Based on the results of in vitro tests, the best comparison of the combination of kumis kucing extract and sidaguri extract can inhibit the activity of XO enzymes with the best IC 50 in a row is the combination  of  kumis  kucing  and  sidaguri  extracts  1:1  (20.99ppm),  1:2  (39.64ppm),  and  1:0.5 (52.28ppm).
Keyword : Hyperuricemia; gout ; xanthine oxidase ; sidaguri; kumis kucing

## 1. PENDAHULUAN
Hiperurisemia  merupakan  kenaikan  kadar  asam  urat  yang  diukur  dalam darah.  Kadar asam urat  untuk  laki-laki,  normalnya  adalah 7,0  mg/dL.  Sedangkan pada  perempuan  ambang  normalnya  adalah  5,7  mg/dL.  Asam  urat  berasal  dari metabolisme purin,  yang merupakan hasil pemecahan dari dinukleotida. Terdapat beberapa penelitian menunjukkan bahwa konsentrasi asam urat dapat menentukan progresivitas penyakit gangguan ginjal, stroke, dan asam urat berhubungan dengan adanya hipertensi, diabetes, dan sindrom metabolik (1).
Hasil  Riskesdas  (riset  kesehatan  dasar)  2012  (2),  mengungkapkan  bahwa prevalensi  penyakit  hiperurisemia  di  Indonesia  adalah  11,9%.  Berdasarkan  data dinas kesehatan, penyakit hiperurisemia menduduki peringkat ke 6 dari 10 besar penyakit  tidak  menular  serta  jumlah  penderita  penyakit  hiperurisemia  memiliki prevelensi sebesar 13,2% (3).
Saat  ini,  obat  yang  digunakan  untuk  antihiperurisemia  pada  umumnya menggunakan obat sintetik. Obat sintetik yang digunakan untuk mwnurunkan kadat asam  urat  di  darah  yakni  allopurinol  dengan  mekanisme  menghambat  aktivitas enzim  xantin  oksidase  (XO).    Xantin  oksidase    mengkatalisis  oksidasi  xantin sehingga berubah menjadi asam urat. Penggunaan allopurinol cukup efektif untuk menurunkan  kadar  asam  urat  dalam  darah,  tetapi  jika  kadarnya  berlebih  dapat menimbulkan  efek  samping,  diantaranya  gangguan  hati  (hepatitis),  gangguan saluran  cerna,  munculnya  ruam pada  kulit,  dan  berkurangnya  jumlah  sel  darah putih, (4). Oleh sebab itu, perlu dipilih obat yang lebih aman dan efektif. Produk alam yang berasal dari tumbuhan, telah lama digunakan secara empiris untuk mengobati penyakit asam urat (5). Efek gabungan dari xanthine oxidase inhibitor akan menjadi pendekatan yang menjanjikan untuk pengobatan hiperurisemia (6).
Salah satu tanaman yang digunakan secara empiris untuk mengontrol kadar asam  urat  adalah Sidaguri  ( Sida  rhombifolia L.)  (7).  Daun  sidaguri  terbukti mengandung flavonoid yang dapat menghambat aktivitas xantin oksidase dengan daya inhibisi paling kuat jika dilakukan perbandingan dengan produk jamu anti gout lainnya (8). Data ini didukung pula oleh penelitian Syafrullah (9), yang menyatakan flavonoid dari daun sidaguri dapat menghambat enzim xantin oxidase.  Hal ini telah dibuktikan  dari  beberapa  hasil  penelitian  tentang  potensi  tanaman  sidaguri  baik dari bagian batang, akar, ataupun daun serta telah dilakukan uji toksisitas akutnya. Penelitian  yang  dilakukan  Hendriani  (10),  menunjukkan  bahwa  ekstrak  tanaman sidaguri  dapat  menghambat  enzim  xantin  oxidase  dengan  persentase
penghambatan mencapai 93,52% dan nilai Inhibitory Concentration of 50% (IC 50 ) 21,43ppm.
Tanaman lain yang berkhasiat dalam menurunkan kadar asam urat terbukti secara  ilmiah  adalah  kumis  kucing  ( Orthosiphon  aristatus  L .).  Pengujian in  vitro ekstrak  kumis  kucing  dapat  menghambat  enzim  xantin  oxidase  dengan  nilai  IC 50 sebesar 92,14 ppm (10). Laporan mengenai manfaat tanaman kumis kucing yang dibuat  oleh European  Medicines  Agency (11),  menyatakan  bahwa  ekstrak  etanol kumis kucing dapat mencegah pembentukan kristal asam urat dengan pengeluaran asam urat melalui urine sehingga kadar asam urat dapat menurun secara signifikan. Kombinasi ekstrak dapat meningkatkan efek antihiperurisemia, karena kombinasi ekstrak yang  mengandung  beberapa senyawa  juga  dapat  memiliki beberapa efek yang  menurunkan  asam  urat  di  darah.  Beberapa  ekstrak  tumbuhan  memiliki aktivitas diuretik yang dapat berkontribusi untuk meningkatkan ekskresi asam urat. Efek ini akan menyebabkan penurunan kadar asam urat plasma. Selain itu ekstrak dapat bekerja pada jalur metabolisme biogenerasi endogen., Di sisi lain, asam urat dapat  melalui  proses  reabsorpsi-eliminasi  ganda  di  tubulus  ginjal.  Kandungan flavonoid  dari  kombinasi  ekstrak  dapat  menghambat  proses  resorpsi  ginjal  dan meningkatkan eliminasi urin, selain meningkatkan pH urin (lebih tinggi dari pH 5,8), yang mendukung pembentukan batu urat. Ekstrak menghambat jalur pembentukan asam urat dari purin, yang akan bertindak secara sinergis (12).
Berdasarkan beberapa penelitian tersebut, kombinasi ekstrak daun sidaguri dan ekstrak daun kumis kucing pada perbandingan tertentu kemungkinan memiliki aktivitas  sinergis  sebagai  antihiperurisemia.  Sehingga  penting  untuk  melakukan pengujian in  vitro melalui  pengukuran  aktivitas  penghambatan  xantin  oxidase terhadap  kombinasi  ekstrak  sidaguri  dan  kumis  kucing  dalam  menentukan kemampuan menurunkan asam urat.

## 2. METODE PENELITIAN

## 2. 1. ALAT DAN BAHAN
Alat yang digunakan pada penelitian adalah spektrofotometer UV (Analitik Jena AG ® ). Bahan Kimia yang digunakan adalah Allopurinol standar (Sigma Aldrich), amil  alkohol  (Merck®),  ammonia  (Merck®),  anisaldehid  (Merck®),  asam  asetat anhidrat  (Merck®),  asam  klorida  (Merck®),  asam  sulfat  pekat  (Merck®),  buffer kalium fosfat (DPH), Dragendorf (DPH), DMSO (DPH), etanol PA 70% (DPH), isoamil alkohol  (DPH),  kalium  oksonat  (Sigma  Aldrich),  kloroform  (DPH),  Liebermann bouchard (DPH), probenesid tablet (Dexa), vanillin, xantin (Sigma Aldrich), xantin oxidase (Sigma Aldrich).

## 2. 2. CARA KERJA Ekstraksi
Metode  ekstraksi  dilakukan  dengan  cara  maserasi  dengan  menggunakan  pelarut etanol 70%. Serbuk kering simplisia daun sidaguri ( Sida rhombifolia L.) dan daun kumis kucing ( Orthosiphon aristatus L.)  masing-masing simplisia dimasukkan  ke dalam maserator lalu ditambahkan pelarut etanol dengan konsentrasi 70% hingga
seluruh  simplisia  basah  dan  dibiarkan  selama  kira-kira  15  menit  agar  proses pembasahan  simplisia berlangsung  baik.  Selanjutnya  pelarut  etanol ditambahkan sampai serbuk simplisia terendam. Proses ini dilakukan selama 3 x 24 jam dalam maserator  dengan  penggantian  pelarut  dilakukan  setiap  24  jam.  Maserat selanjutnya  ditampung,  kemudian  dievaporasi  menggunakan rotary  evaporator hingga diperoleh ekstrak kental dan dihitung persentasi rendemennya.
Skrining fitokimia
Skrining  fitokimia  simplisia  dilakukan  terhadap  senyawa  tanin,  alkaloid, flavonoid, polifenol, saponin, monoterpenoid dan sesquiterpenoid, serta senyawa kuinon. Skrining fitokimia ini dilakukan berdasarkan metode Farnsworth.

## Uji Aktivitas Penghambatan Xantin Oksidase secara In Vitro
Uji  aktivitas  Penghambatan  XO  secara in  vitro melalui  tahapan  penentuan panjang  gelombang  optimum,  penentuan  persentase  penghambatan  XO,  dan penentuan nilai IC 50.
Penentuan panjang gelombang optimum
Sebanyak 1,9 mL larutan dapar fosfat ditambahkan 1 mL larutan xantin 0,15 mM. Campuran kemudian diinkubasi selama 10 menit pada suhu 25 0 C. Kemudian diukur  absorbansinya  sampai  stabil  pada  rentang  nilai  250-300  nm.  Setelah  itu ditambahkan 0,1 ml enzim xantin oksidase dan dilakukan pengukuran kembali pada panjang gelombang 250-300 nm.

## Penentuan Persentase Penghambatan XO dan Nilai IC
50
Penentuan  Persentase  Penghambatan  aktivitas  xantin  oksidase  yaitu mengukur  sejumlah  kadar  asam  urat  yang  terbentuk  dari  reaksi  yang  dikatalisis oleh xantin oksidase, dilakukan in vitro dengan reaksi enzimatis dan pengukuran menggunakan spektrofotometer (13).
Uji inhibisi xantin oxidase kombinasi ekstrak daun sidaguri dan kumis kucing dilakukan dengan perbandingan (1:0,5), (1:1), dan (1:2), dan konsentrasi masing- masing pengujian 12,5; 25; 50; 100; 200 μg/mL.
Pada pengujian sampel ekstrak, larutan ekstrak sebanyak 1 mL ditambahkan dengan  dapar  fosfat  dengan  pH  7,8  sebanyak  2,9mL  lalu  ditambahkan  substrat xantin  1mM.  Kemudian  campuran  larutan  diinkubasi  pada  suhu  30 ◦ C  selama  10 menit.  Campuran  ditambahkan  larutan  xantin  oksidase  sebanyak  0,1mL.  Setelah tercampur, larutan kembali diinkubasi pada suhu 25 ◦ C selama 30 menit. Setelah di inkubasi  ditambahkan  HCl  1mL.  Pengukuran  dilakukan  dengan  menggunakan spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang  gelombang  maksimum.  Pengujian  juga dilakukan  terhadap  kontrol  sampel,  standar  obat  allopurinol  generik,  kontrol allopurinol, larutan blanko, dan kontrol blanko.
Adanya  penghambatan  aktivitas  xantin  oksidase  oleh  ekstrak  dapat diketahui dari nilai % penghambatan yang dihitung menggunakan persamaan 1:
% 𝑝𝑒𝑛𝑔ℎ𝑎𝑚𝑏𝑎𝑡𝑎𝑛 = 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑏𝑙𝑎𝑛𝑘𝑜−𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑏𝑙𝑎𝑛𝑘𝑜
𝑥 100% ……. (1)
Nilai IC 50 menunjukkan jumlah penghambat yang dibutuhkan untuk mencapai penghambatan 50% enzim. IC 50 ditentukan melalui regresi linier, dimana sumbu x menunjukkan  konsentrasi  sampel  dan  sumbu  y  menunjukkan  %  penghambatan. Dari persamaan y = a + bx dapat dihitung nilai IC 50 menggunakan persamaan 2:
IC50 = 50−a b ………  (2)

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Ekstrak  yang  cukup  kental  yang  diperoleh  dari  proses  rotary  vaporator dikisatkan pada cawan penguap yang terdapat pada penangas air bertujuan untuk memperkentalkan kembali ekstrak dan bertujuan untuk menguapkan air dan sisa etanol  yang  berkemungkinan  masih  terdapat  didalam  ekstrak.  Persen  rendemen ekstrak kumis kucing yang didapatkan dari 750g simplisia yakni 11,30%. Sementara persentase rendemen ekstrak sidaguri yang didapatkan dari 750g simplisia yakni 13,1%.  Persentase  ini  tergolong rentang rendemen  yang  baik  yakni masih  dalam rentang 10-15% sehingga proses ekstraksi berlangsung baik (14). Hasil uji skrining fitokimia dapat dilihat pada Tabel 1:
Tabel 1. Hasil penapisan fitokimia simplisia dan ekstrak kumis kucing dan sidaguri No. Metabolit sekunder Simplisia Kumis kucing Ekstrak kumis kucing Simplisia Sidaguri Ekstrak Sidaguri 1 Alkaloid + + + + 2 Fenolik + + + - 3 Flavonoid + + + + 4 Kuinon + + + - 5 Saponin + + + + 6 Tannin + + + + 7 Triterpenoid dan steroid + + + +
Tabel 1 menunjukkan bahwa simplisia kumis kucing, sidaguri dan ekstrak kumis  kucing terkandung metabolit sekunder  flavonoid, alkaloid, fenolik, kuinon, saponin,  steroid,  tannin,  dan  triterpenoid.  Sementara  ekstrak  sidaguri  hanya mengandung metabolit sekunder triterpenoid, alkaloid, flavonoid, steroid,saponin, dan tannin. Hal ini sesuai dengan hasil penapisan fitokimia terhadap ekstrak etanol kumis  kucing  oleh  Andriany  (15),  dan  hasil  penapisan  fitokimia  ekstrak  etanol sidaguri oleh (16).
Larutan  uji  yang  digunakan  yaitu  kombinasi  ekstrak  kumis  kucing  dan sidaguri dengan 3 perbandingan yakni (1:1), (1:2), dan (1:0,5). Uji penghambatan dilakukan  dengan  menggunakan  5  variasi  konsentrasi.  Dalam  penelitian sebelumnya  telah  diperoleh  nilai  IC 50 penghambatan  enzim  xantin  oksidase  oleh ekstrak  etanol  sidaguri  yaitu  sebesar  21.43ppm  dan  kumis  kucing  sebesar
92.14ppm (10) sehingga dalam penelitian ini digunakan variasi konsentrasi mulai dari  12,5  –  200ppm  yang  ditujukan  untuk  melihat  pengaruh  peningkatan konsentrasi terhadap peningkatan daya hambat pembentukan xantin oxidase (17).
Pengujian  dilakukan  terhadap  larutan  blanko,  kontrol  blanko,  sampel, kontrol sampel dan allopurinol sebagai kontrol positif. Pengujian larutan blanko dan kontrol  blanko  dilakukan  untuk  mengetahui  aktivitas  enzim  apabila  tanpa penambahan  ekstrak  uji.  Sementara  kontrol  positif  yakni  allopurinol  digunakan sebagai pembanding dengan konsentrasi 0.05, 0.1, 0.2, 0.4, dan 0,8ppm.
Hasil  optimasi  penentuan  panjang  gelombang  maksimum  diperoleh  nilai absorbansi  maksimum  asam urat  dalam pelarut  dapar fosfat  yaitu  292  nm.  Hasil pengukuran  menunjukkan  adanya  ketidaksesuaian  dengan  panjang  gelombang yang  tertera  dalam  lab  kit  Sigma.  Nilai  panjang  gelombang  maksimum  yang seharusnya  yaitu  290  nm  (18).  Pada  pengukuran  ini  terjadi  pergeseran  panjang gelombang  karena  proses  pengerjaan  dilakukan  dalam  kondisi  lingkungan  yang berbeda. Namun pergesaran panjang gelombang yang diberikan masih dalam batas yang  disyaratkan  dalam  Farmakope  IV  yaitu  toleransi  pergeseran  berada  dalam batas 2 nm dari panjang gelombang yang ditentukan (19).
Pengamatan  laju  penghambatan  xantin  oxidase  dilakukan  dengan memasukkan data hasil absorbansi ke dalam rumus persen penghambatan sampel terhadap kontrol negatif. Kemudian dilakukan graf linier lima konsentrasi ekstrak terhadap persen penghambatan xantin oxidase dapat dilihat dari Gambar 1, Gambar 2, Gambar 3, dan Gambar 4.
Gambar 1. Aktivitas penghambatan XO ekstrak kumis kucing dan sidaguri 1:1
Gambar 2. Aktivitas penghambatan XO ekstrak kumis kucing dan sidaguri 1:0,5
y = 0,2241x + 45,296 R² = 0,9703 0 20 40 60 80 100 0 50 100 150 200 250 P en g h am b atan ( % ) Konsentrasi (ppm) Aktivitas XO Ekstrak Kumis kucing dan Sidaguri 1:1 y = 0,2334x + 40,748 R² = 0,9711 0 20 40 60 80 100 0 50 100 150 200
250 P en g h am b atan ( % ) Konsentrasi (ppm) Aktivitas XO Kumis kucing dan Sidaguri 1:2
Gambar 3. Aktivitas penghambatan xo ekstrak kumis kucing dan sidaguri 1:2
Gambar 4. Aktivitas penghambatan XO Allopurinol Hasil  pengamatan  persentase  penghambatan  XO  tiap  konsentrasi  yang dilakukan ditampilkan dalam grafik sebagai berikut:
Gambar 5. Persentase penghambatan XO tiap konsentrasi
y = 0,643x + 16,382 R² = 0,9931 0 20 40 60 80 100 0 20 40 60 80 100 120 P en g h am b atan ( % ) Konsentrasi (ppm) Aktivitas XO Ekstrak Kumis kucing dan Sidaguri 1:0,5 y = 14,891x + 78,545 R² = 0,9508 75 80 85 90 95 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 P en g h am b atan ( % ) Konsentrasi (ppm) Aktivitas XO Allopurinol 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 12,5 25 50 100 200 Pe rs en ta se p en gha m b at an (% ) Konsentrasi (ppm) Persentase penghambatan XO tiap konsentrasi Ekstrak 1:1 Ekstrak 1:2 Ekstrak 1:0,5
Gambar  5  Menunjukkan  daya  inhibisi  ekstrak  etanol  sidaguri  dan  kumis kucing  perbandingan  1:1;  1:2;  dan  1:0,5  dengan  berbagai  konsentrasi.  Hasil menunjukkan  bahwa  ekstrak  dengan  perbandingan  1:1  konsentrasi  200ppm memiliki aktivitas inhibisi XO terbesar yakni 88.43%. Sementara aktivitas inhibisi terbesar  kedua  yakni  kombinasi  ekstrak  kumis  kucing  dengan  sidaguri  dengan perbandingan  1:2  yakni  85,88%  dibandingkan  dengan  Allopurinol.  Aktivitas penghambatan  XO  terkecil  dihasilkan  kombinasi  ekstrak  1:0,5  di  berbagai konsentrasi.
Aktivitas penghambatan semakin meningkat  dengan kenaikan konsentrasi ekstrak. Hasil ini sesuai dengan penelitian Hendriani (10), yakni persen inhibisi XO akan semakin meningkat dengan peningkatan konsentrasi ekstrak. Secara teoritis substrat  akan  berikatan  dengan  enzim  membentuk  ikatan  yang reversible membetuk komplek enzim-substrat dan pada waktu tertentu ikatan tersebut akan terurai kembali membentuk enzim dan suatu metabolit (20). Substrat atau zat asing dapat berikatan dengan sisi aktif enzim melalui berbagai macam cara, salah satunya berikatan secara kompetitif dengan substrat alami yang berada dalam tubuh (20).
Pada  kondisi  pengujian  ini, kombinasi  ekstrak sidaguri  dan  ekstrak kumis kucing  bersaing  secara  kompetitif  dengan  substrat  xantin  untuk  dapat  berikatan dengan  enzim  xantin  oksidase  sehingga  proses  pembentukan  asam  urat  dapat terhambat.  Semakin  tinggi  konsentrasi  kombinasi  ekstrak  yang  diberikan  maka kemampuan ekstrak untuk menggeser posisi substrat xantin akan semakin besar sehingga memiliki peluang lebih besar pula untuk berikatan dengan enzim xantin oksidase.
Pada  penelitian  yang  telah  dilakukan  sebelumnya,  senyawa  metabolit sekunder yang terkandung dalam ekstrak etanol kumis kucing dan sidaguri yaitu flavonoid,  alkaloid,  tanin,  polifenol  dan  terpenoid  (21).  Metabolit  sekunder  yang terkandung  dalam  ekstrak  sidaguri  yang  memiliki  kemiripan  struktur  dengan xantin  yaitu  senyawa  flavonoid  golongan  rhombifolin.  Sementara  metabolit sekunder yang terkandung dalam ekstrak kumis kucing yang memiliki kemiripan struktur  dengan  xantin  yaitu  senyawa  flavonoid  golongan  orthosiphon.  Senyawa flavonoid ini, berperan sebagai akseptor elektron dari xantin oksidase (22). Gugus hidroksi pada C5 dan C7 dan ikatan rangkap antara C2 dan C3 memiliki aktivitas tinggi  sebagai  xantin  oxidase  (22).  Hal  ini  didukung  oleh  hasil  penelitian sebelumnya yang menyatakan flavonoid pada dosis tertentu mampu menurunkan kadar  asam  urat  yang  setara  dengan  allopurinol  pada  dosis  tertentu  sebagai antihiperurisemia (8)(23). Pada penelitian lain senyawa lain yang dapat memiliki aktivitas  antihiperurisemia  selain  flavonoids  yakni  alkaloid,  saponin,  tannin,  and terpenoid (24).
Nilai  IC 50 Berbagai  Perbandingan  Ekstrak.  Persentase  inhibisi  yang  di  dapat kemudian  dilakukan  perhitungan  IC 50 pada  berbagai  perbandingan  ekstrak  dan ditampilkan hasilnya dalam grafik di Gambar 6.

## Gambar 6. IC
50 Kombinasi ekstrak dengan berbagai perbandingan
Konsentrasi ekstrak etanol kombinasi dengan persen inhibisi terbesar dan IC 50 terkecil, yaitu perbandingan 1:1 dengan nilai IC 50 20.99ppm. Untuk kombinasi ekstrak  perbandingan  1:2  memiliki  nilai  IC 50 sebesar  39.64ppm  dan  kombinasi ekstrak  perbandingan  1:0,5  memiliki  nilai  IC 50 52.28ppm.  Sementara  Allopurinol memiliki nilai IC 50 terkecil dibanding ekstrak. Hal ini disebabkan karena Allopurinol merupakan  senyawa  pembanding  murni  dengan  konsentrasi  kecil  saja menghasilkan  IC 50 mencapai  1.92ppm.  Nilai  IC 50 besar  disebabkan  karena persentase hambatan yang lebih kecil dari variasi konsentrasi ekstrak, sedangkan kecilnya nilai IC 50 disebabkan persen hambatan yang besar oleh kandungan kimia yang  menghambat  aktivitas  xantin  oxidase  (25)(26).    Perbandingan  kombinasi ekstrak dengan IC 50 terkecil yakni ekstrak sidaguri dan kumis kucing 1:1 kemudian perbandingan  tersebut  dapat  dilanjutkan  untuk  pengujian  aktivitas antihiperurisemia secara in vivo pada tikus. Dengan adanya hasil tersebut, dalam pengujian  aktivitas in  vivo di  penelitian  selanjutnya  dapat  mengacu  pada  hasil penelitian  ini.  Perbandingan  ini  juga  dapat  membuktikan  mekanisme penghambatan dari kombinasi ekstrak kumis kucing dan sidaguri (27).

## 4. KESIMPULAN
Berdasarkan hasil uji in vitro perbandingan terbaik kombinasi ekstrak kumis kucing  dan  ekstrak  sidaguri  dapat  menghambat  aktivitas  enzim  XO  dengan  IC 50 terbaik berturut-turut adalah Allopurinol 100mg (1.916 ppm), kombinasi ekstrak kumis kucing dan sidaguri 1:1 (20.99 ppm), kombinasi ekstrak kumis kucing dan sidaguri 1:2 (39.64 ppm), dan kombinasi ekstrak kumis kucing dan sidaguri 1:0,5 (52.28 ppm).
1,917 20,99 39,640 52,283 0 10 20 30 40 50 60 IC50 Kombinasi Ekstrak dengan Berbagai Perbandingan Allopurinol KK:S (1 :1) KK:S  (1:2)
KK:S (1:0,5)

## 5. UCAPAN TERIMAKASIH
Tim  peneliti  mengucapkan  terima  kasih  kepada  segala  pihak  yang  telah mendukung berjalannya penelitian ini dengan baik sehingga dapat bermanfaat bagi ilmu pengetahuan dan masyarakat.

## 6. DAFTAR PUSTAKA
(1) Cerezo, Cesar. And Ruilope, Luis. (2012). Uric Acid and Cardiovascular Risk
Considered: an Update , http://www.escardio.org/Guidelines-&- Education/Journals-and-publications/ESC-journals-family/E-journal-of Cardiology-Practice/Volume-10/Uric-Acid-and-Cardiovascular-Risk
Considered-an-Update, diunduh pada 28 Mei 2017
(2) Riset Kesehatan Dasar. (2012). Jakarta: Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan, Departemen Kesehatan, Republik Indonesia.
(3) Kemenkes RI. (2013). Riset Kesehatan Dasar. Jakarta: Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Kementrian Kesehatan RI.
(4) Tcheghebe,  O.  T.,  Timoléon,  M.,  Seukep,  A.  J.,  &  Tatong,  F.  N.  (2016). Ethnobotanical  uses,  phytochemical  and  pharmacological  profiles,  and cultural value of Momordica chlarantia Linn. : An overview. Global Journal of Medicinal Plant Research Glob. J. Med. Plant Res , 4 (44), 23–39.
(5) Chen,  Y.  C.,  Chi,  C.  H.,  Keng,  C.  T.,  Wei,  J.H.,  Wen,  C.H.,  Yu,  C.H,.  (2014). Evaluation  of  the  Antihyperuricemic  Activity  of  Phytochemicals  from Davallia  formosana  by  Enzyme  Assay  and  Hyperuricemic  Mice  Model. Hindawi  Publishing  Corporation.;  Volume  14,  Article  ID  873607,  8. https://doi.org/10.1155/2014/873607
(6) Shukor,  N.  A.  A.,  Ablat, A., Muhamad,  N.  A.,  & Mohamad,  J.  (2018).  In  vitro antioxidant  and  in  vivo  xanthine  oxidase  inhibitory  activities  of  Pandanus amaryllifolius  in  potassium  oxonate-induced  hyperuricemic  rats. International  Journal  of  Food  Science  and  Technology,  53(6),  1476–1485. https://doi.org/10.1111/ijfs.13728
(7) Fadilah,  N.  N.  (2017).  AKTIVITAS,  MEKANISME  AKSI,  DAN  TOKSISITAS SIDAGURI  (Sida  Rhombifolia  L.)  SEBAGAI  ANTIHIPERURISEMIA.  Farmaka, 15(2), 23–32. Retrieved from http://jurnal.unpad.ac.id/farmaka/article/view/12414 (8) Juwita, R.; Saleh, C.; Sitorus, S. (2017).  Uji Aktivitas Antihiperurisemia Dari Daun Hijau Tanaman Pucuk Merah ( Syzygium Myrtifolium Walp.) Terhadap Tikus Jantan ( Mus Musculus ). Samarinda : Jurnal Atomik 02 (2), 162-168.
(9) Syafrullah, Sarah Carolin. (2015). Indonesian Sidaguri (Sida Rhombifolia L.) as Antigout and Inhibition Kinetics of Flavonoids . J.Majority Volume 4 No.1. Fakultas Kedokteran, Universitas Lampung. https://doi.org/10.3923/jbs.2009.504.508 (10) Hendriani, R., Sukandar, E.Y., dan Anggadireja, K. (2016). In Vitro Evaluation of  Xanthine  Oxidase  Inhibitory  Activity  of  Selected  Medicinal  Plants. International  Journal  of  Pharmaceutical  and  Clinical  Research  2016;  8(4): 235-238
(11) European  Medicines  Agency.  (2010)  .  Assessment  Report  on  Orthosiphon stamineus Benth., folium. Committee on Medicinal Products.
(12) Case Medical Research .(2019). Effect of the Consumption of a Combination of Plant Extracts (BSL_EP026) on Serum Uric Acid. Case Medical Research. https://doi.org/10.31525/ct1-nct04165499
(13) Umamaheswari,  M.,  Asok,  K.,  Somasundaran,  A.,  Sivashanmugam,  T., Subhadradevi,  V.,  &  Ravi,  T.  (2007). Xanthine Oxidase  Inhibitory  Activity  of Some Indian Medical Plant . Journal of Ethnopharmacology, 109, 547-551
(14) Nasution,  M.  R.,  Permata  Sari,  A.  R.,  Utami,  I.  P.,  &  Halianti,  T.  (2020). Penentuan  Aktivitas  Tabir  Surya  Ekstrak  Etanol  Daun  Marpuyan (Rhodamnia cinerea Jack.) secara In Vitro. Jurnal Dunia Farmasi, 4(2), 59–67. https://doi.org/10.33085/jdf.v4i2.4599
(15) Surahmaida, S., Umarudin, U., & Junairiah, J. (2019). Senyawa Bioaktif Daun Kumis  Kucing  (Orthosiphon  stamineus).  Jurnal  Kimia  Riset,  4(1),  81. https://doi.org/10.20473/jkr.v4i1.13176
(16) Oktari,  T.,  Fitmawati,  F.,  &  Sofiyanti,  N.  (2014).  IDENTIFIKASI  DAN  UJI FITOKIMIA  EKSTRAK  ALAMI  TANAMAN  ANTIUROLITHIASIS.  JOM  FMIPA, 1(2), 1. Retrieved from https://www.neliti.com/publications/187667/
(17) Hafez, R. M., Abdel-Rahman, T. M., & Naguib, R. M. (2017, September 1). Uric acid in plants and microorganisms: Biological applications and genetics - A review. Journal of Advanced Research. Elsevier B.V. https://doi.org/10.1016/j.jare.2017.05.003
(18) Nurhidayati,  L.,  Laksmitawati,  D.  R.,  &  Putri,  R.  E.  (2015).  PRESISI  UJI ANTIHIPERURISEMIA  IN  VITRO  BERDASARKAN  PENGUKURAN  SERAPAN PADA  DUA  PANJANG  GELOMBANG.  Kartika  Jurnal  Ilmiah  Farmasi,  3(2). https://doi.org/10.26874/kjif.v3i2.102
(19) Departemen  Kesehatan  RI.  (2020).  Farmakope  Indonesia  edisi  VI. Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
(20) Patrick, G.L. (2005): An introduction to Medical Chemistry, New York: Oxford Universuty Press.
(21) Susilawati,  Y.,  Sumiwi,  S.A.,  Puri,  W.P.  (2006):    Aktivitas  Penghambatan Ekstrak  Etanol,  Fraksi  n-Heksana,  Fraksi  Etil  Asetat  dan  Fraksi  Air  Herba Putri malu ( Mimosa pudica L. ) terhadap Pembentukan Asam Urat Secara In Vitro. Jurnal Farmaka, 4 , Fakultas Farmasi Universitas Padjajaran
(22) Coss,  P.,  Ying,  L.,  Calomme,  M.,  J.P.  Cimanga,  K.,  Van  Poel,  B.,  Pieters,L.,
Vlietinck., A.J., and Vanden Berghe, D. (1998): Structure-Activity Relationship and  Classification  of  Flavonoids  as  Inhibitors  of  Xanthine  Oxidase  and Superoxide Scavengers, J.Nat. Prod, 61, 71-76. https://doi.org/10.1021/np970237h (23) Jiang, L. L., Gong, X., Ji, M. Y., Wang, C. C., Wang, J. H., & Li, M. H. (2020), August 1).  Bioactive  compounds  from  plant-based  functional  foods:  A  promising choice for the prevention and management of hyperuricemia. Foods. MDPI Multidisciplinary Digital Publishing Institute. https://doi.org/10.3390/foods9080973
Baker J.F., Schumacher H.R. (2010). Update on Gout and Hyperuricemia . Int J Clin Pract ;64 (3):371-7. https://doi.org/10.1111/j.1742-1241.2009.02188.
(24) Rizki,  K.  P.,  Muslichah,  S.,  &  Ningsih,  I.  Y.  (2018).  Pengaruh  Pemberian Kombinasi Ekstrak Etanol Daun Sidaguri (Sida rhombifolia L.) dan Rimpang Jahe  Merah  (Zingiber  officinale  Rosc.)  pada  Mencit  Jantan  Hiperurisemia. Pustaka Kesehatan, 6(2), 205. https://doi.org/10.19184/pk.v6i2.7566.
(25) Kuzmič, P. (2020). A two-point IC50 method for evaluating the biochemical potency of irreversible enzyme inhibitors. BioRxiv. https://doi.org/10.1101/2020.06.25.171207
(26) Januarti, I. B., (2020). Stimulantia Effect of Single Bulb Garlic Extract (Allium Sativum Var.Solo Garlic) in Swiss Webster Mice. Jurnal farmasi Indonesia, 17 (2). DOI: https://doi.org/10.31001/jfi.v17i2.762.
(27) Pujiastuti,  A.,  (2019).  Formulation  and  Mechanical  Stability  Test  for  Hand and  Body  Lotionfrom  Tomato  Juice  (Licopersicon  esculentum  Mill.)  as Antioxidants. Jurnal farmasi Indonesia. 16(1). DOI: https://doi.org/10.31001/jfi.v16i1.468.