Correlation between Time Variation of Steam Distillation of Temu Hitam’s Rhizomes ( Curcuma aeruginosa ) and Antibacterial Activity of Essential Oil
Hubungan Variasi Waktu Distilasi Kukus Rimpang Temu Hitam ( Curcuma aeruginosa ) dan Aktivitas Antibakteri Minyak Atsiri
Fauziyatul Munawaroh 1 , Widya Luthfiana 2 , Irma Herawati Suparto 2,4 , Yessie Widya Sari 3,4 , Wulan Tri Wahyuni 2,4 , Irmanida Batubara 2,4 *
1 Faculty of Medicine, IPB University, Bogor, Indonesia
2 Department of Chemistry, Faculty of Mathematics and Natural Sciences, IPB University, Bogor, Indonesia 3 Department of Physic, Faculty of Mathematics and Natural Sciences, IPB University, Bogor, Indonesia 3 Tropical Biopharmaca Research Center, IPB University, Bogor, Indonesia
*Corresponding author: ime@apps.ipb.ac.id; (+62)8121105101
Received June 26, 2023; Accepted Oktober 30, 2023; Available online December 22, 2023

## ABSTRACT
Distillation time can affect the extraction of essential oils such as the rhizome of temu hitam ( Curcuma aeruginosa ) which has been shown to have antibacterial activity. Therefore, this study aims to determine the optimum distillation time to produce temu  hitam  rhizome  oil with  the  strongest  antibacterial  activity.  The  rhizomes  of  temu hitam  were  steam  distilled with different length of time every 30 minutes for 4 hours to obtain essential oil and determined the compounds contained in them using gas chromatography-mass spectrometry. Antibacterial activity was determined by disc diffusion against Streptococcus mutans , Escherichia coli , and Staphylococcus aureus . The most dominant compounds present in essential oils are eucalyptol (34.89%), epicurzerenone (20.58%), and camphor (16.90%) based on the average peak of the total distillation time. The strongest antibacterial potency was obtained in the first 30 minutes of distillation for S. mutans and E. coli , and in the seventh 30 minutes of distillation for S. aureus .
Keywords : antibacterial, essential oil, GC-MS, steam distillation

## ABSTRAK
Waktu distilasi dapat mempengaruhi ekstraksi minyak atsiri seperti pada rimpang temu hitam ( Curcuma aeruginosa ) yang telah dibuktikan memiliki aktivitas antibakteri. Oleh karena itu, penelitian ini bertujuan menentukan waktu distilasi yang optimum  dalam  menghasilkan  minyak  rimpang  temu  hitam  dengan  aktivitas  antibakteri  terkuat.  Rimpang  temu  hitam didistilasi  kukus  dengan  perbedaan  lama  waktu  setiap  30  menit  selama  4  jam  untuk  mendapatkan  minyak  atsiri  dan ditentukan senyawa yang terdapat di dalamnya menggunakan gas chromatography-mass spectrometry . Aktivitas antibakteri ditentukan dengan difusi cakram terhadap bakteri Streptococcus mutans , Escherichia coli , dan Staphylococcus aureus . Senyawa yang terdapat pada minyak atsiri yang paling dominan adalah eukaliptol (34.89%), epikurzerenon (20.58%), dan kamfor (16.90%)  berdasarkan  rerata  luas  puncak  pada  total  waktu  distilasi.  Potensi  antibakteri  terkuat  didapatkan  pada  waktu distilasi 30 menit pertama untuk bakteri S. mutans dan E. coli , serta waktu distilasi 30 menit ketujuh untuk bakteri S. aureus .
Kata Kunci : antibakteri, distilasi kukus, GC-MS, minyak atsiri

## PENDAHULUAN
Curcuma  aeruginosa merupakan  tanaman  dari keluarga Zingiberaceae yang berbentuk rimpang dan termasuk  jenis  tanaman  obat  di  Indonesia  yang dikenal sebagai temu hitam dan berpotensi sebagai penghasil  minyak  atsiri.  Minyak  atsiri  merupakan minyak berwujud cairan kental pada suhu ruang dan mudah  menguap  tanpa  mengalami  dekomposisi, mempunyai rasa getir, dan mempunyai aroma yang khas  (Hanief  et  al.,  2013).  Temu  hitam  memiliki kandungan  minyak  atsiri  di  dalamnya  yang  dapat digunakan  sebagai  antibakteri  (Handayani  et  al., 2020).
Minyak atsiri temu hitam dapat diambil dengan menggunakan  metode  distilasi.  Metode  distilasi dipilih  karena  prosesnya  mudah  dan  sederhana. Distilasi yang digunakan pada penelitian ini adalah distilasi  kukus  atau  distilasi  uap-air.  Metode  ini merupakan metode penyulingan dengan bahan baku dan air tidak bersinggungan langsung karena dibatasi dengan  saringan  di  atas  air.  Distilasi  kukus  ini biasanya dilengkapi dengan sistem kohobasi yaitu air kondensat yang keluar dari separator masuk kembali secara otomatis ke dalam ketel agar meminimalkan kehilangan air (Fitri et al., 2019). Keuntungan dari metode ini adalah rendemen yang dihasilkan tinggi, melindungi bahan yang diekstraksi dari oksidasi, dan mengonsumsi  lebih  sedikit  air  dibandingkan menggunakan  metode  distilasi  air  (Yani  &  Yani, 2021). Penelitian ini bertujuan menentukan  jangka waktu distilasi optimum untuk menghasilkan minyak rimpang  temu  hitam  dengan  aktivitas  antibakteri terkuat.

## METODE
Rimpang temu hitam yang diperoleh dari Solo, Jawa  Tengah  dicuci  bersih  dengan  air  kemudian dihancurkan.  Sebagian  rimpang  yang  telah dihancurkan  kemudian  dianalisis  kadar  airnya menggunakan  metode  AOAC    930.15  (2012)  dan kadar  abunya  menggunakan  metode  AOAC  942.05 (2012).  Rimpang  temu  hitam  sebanyak  30  kg dimasukkan  ke  dalam  wadah  distilasi  kukus  dan dilakukan  proses  distilasi  kohobasi  selama  4  jam dengan  suhu  100–105  °C.  Minyak  atsiri  diambil setiap 30 menit setelah minyak mulai menetes, yaitu distilat 0–30 menit, 30–60 menit, 60–90 menit, dan seterusnya sehingga didapatkan sebanyak 8 distilat. Distilat yang diperoleh dimasukkan ke dalam botol vial,  kemudian  dilakukan  penemtuam  warna,
densitas,  serta  indeks  bias  minyak  atsiri.  Minyak atsiri yang diperoleh ditambahkan Na 2 SO 4 anhidrat untuk  memisahkan  minyak  atsiri  yang  masih bercampur dengan fase air. Minyak yang dihasilkan setiap  30  menit  ditentukan  bobotnya  kemudian disimpan pada suhu 4 °C untuk dianalisis pada tahap selanjutnya.
Uji antibakteri dilakukan dengan metode difusi cakram.  Media  yang  digunakan  untuk  bakteri Escherichia  coli adalah  NA.  Bakteri Staphylococcus aureus dan Streptococcus mutans menggunakan media TSA.  Suspensi  bakteri  dengan  kekeruhan berdasarkan Mc Farland 0.5 (0.05 mL BaCl 2 1% dan 9.95 mL H 2 SO 4 1%) sebanyak 250 μL dimasukkan ke dalam  botol  yang  berisi  media  agar  yang  masih mencair  sebanyak  250  mL.  Media  dituangkan  ke dalam  cawan  petri  steril  dan  ditunggu  hingga memadat.  Kertas  cakram  steril  (diameter  6  mm) diletakkan di atas media dan minyak atsiri diteteskan sebanyak 10 μL. Plat agar diinkubasi pada suhu 37 °C selama  24  jam.  Aktivitas  antibakteri  ditentukan dengan  mengukur  diameter  zona  penghambatan yang  dihasilkan  terhadap  bakteri  yang  diuji menggunakan  jangka  sorong.  Pengujian  ini dilakukan dengan lima kali ulangan. Pengerjaan uji antibakteri  dilakukan  dalam  laminar  air  flow  dan dalam keadaan steril.
Analisis  senyawa  minyak  atsiri  rimpang  temu hitam dilakukan menggunakan Shimadzu GCMS-QP 2010  (Shimadzu,  Kyoto,  Jepang).  Identifikasi komponen  dilakukan  dengan  membandingkan retensi  indeks  kovat  yang  diperoleh  dari  waktu retensi  sampel  dengan  waktu  retensi  standar hidrokarbon.  Indeks  kovat  (I)  yang  didapatkan dicocokkan  dengan  nilai  I  pada  database  yang dimiliki  oleh  national  institute  of  standar  and technology  (NIST).  Indeks  kovat  dihitung menggunakan persamaan Hübschmann (2009).

## HASIL & PEMBAHASAN

## 1. Rendemen  Minyak  Atsiri  Rimpang  Temu Hitam
Rimpang  temu  hitam  yang  digunakan  dalam penelitian berumur 6 bulan, hasil penentuan kadar air rimpang temu hitam adalah 91.54%. Berdasarkan penelitian  yang  dilakukan  oleh  Wahyuni  et  al. (2017),  besar  kadar  air  rimpang  segar  temu  hitam yaitu sebesar 95.04%. Nilai kadar air yang diperoleh lebih  kecil  dari  penelitian  sebelumnya  karena perbedaan  metode  yang  digunakan.  Kadar  air
digunakan  untuk  mengetahui  batas  maksimal kandungan air dalam suatu bahan. Kadar air dapat memengaruhi  kualitas  sampel  seperti  mudah terkontaminasi  dan  kondisi  fisik  sampel  menjadi rusak (Wijaya & Noviana, 2022). Kadar air rimpang temu hitam yang cukup tinggi memiliki arti bahwa rimpang  ini  memiliki  waktu  simpan  yang  relatif singkat.  Analisis  kadar  air  ini  dapat  digunakan sebagai faktor koreksi dalam perhitungan rendemen minyak atsiri.
Selain  penentuan  kadar  air,  dilakukan  juga penentuan  kadar  abu  rimpang  temu  hitam.  Kadar abu  yang  diperoleh  pada  penelitian  sebesar  0.5%. Menurut Departemen Kesehatan Republik Indonesia (2017), kadar abu rimpang temu hitam tidak lebih dari 7.0%. Kadar  abu dilakukan untuk mengetahui jumlah  komponen  anorganik  atau  mineral  yang tersisa  setelah  proses  pengabuan.  Semakin  tinggi kadar  abu  yang  didapatkan,  semakin  tinggi  pula
kandungan mineral dalam sampel. Kadar abu yang tinggi  disebabkan  oleh  proses  pengeringan  yang mengakibatkan  jumlah  air  yang  teruapkan  dari dalam sampel semakin tinggi sehingga bahan-bahan yang  tertinggal dalam sampel seperti mineral akan meningkat (Lisa et al., 2015).
Rimpang  temu  hitam  didistilasi  menggunakan distilasi kukus kohobasi selama 4 jam dan didapatkan rendemen  sebesar  1.3%.  Bobot  total  minyak  atsiri yang  diperoleh  dari  distilasi  kukus  rimpang  temu hitam sebanyak 30 kg selama 4 jam adalah 32.88 g. Pengambilan  minyak  pada  waktu  30  menit  kedua memiliki  bobot  paling  tinggi  yaitu  sebesar  9  g ( Gambar  1 ).  Semakin  lama  waktu  distilasi,  bobot minyak  yang  diperoleh  semakin  menurun.  Hal  ini disebabkan  oleh  sebagian  senyawa  minyak  atsiri terdekomposisi  dan  menguap  karena  pemanasan yang terlalu lama (Nurnasari & Prabowo, 2020).
Gambar 1 . Bobot minyak atsiri rimpang temu hitam pada perbedaan rentang waktu distilasi Minyak atsiri yang diperoleh pada penelitian ini berwarna  coklat  terang  hingga  gelap  ( Gambar  2 ). Semakin  lama  waktu  pengambilan  distilat,  warna yang  dihasilkan  semakin  gelap.  Intensitas  warna ditentukan  dari  banyaknya  kandungan  pigmen warna tertentu yang ada di dalam minyak. Senyawa yang berpotensi menghasilkan warna kuning dalam minyak atsiri rimpang temu hitam adalah senyawa 4- terpineol. Senyawa linderazulena merupakan pigmen warna  ungu  yang  ditemukan  dalam  rimpang  temu hitam  (Boutsada  et  al.,  2018).  Menurut  Hidayati (2012), minyak atsiri yang lebih lama di udara akan
mengabsorbsi oksigen sehingga berwarna gelap dan menjadi lebih kental.
Densitas  yang  diperoleh  sebesar  0.929‒1.029 g/mL  ( Gambar  3 ).  Densitas  merupakan perbandingan antara berat minyak dengan berat air pada  volume  air  yang  sama.  Semakin  tinggi  kadar fraksi berat yang terkandung di dalam minyak, maka densitas minyak  atsiri  semakin tinggi  (Qorriaina et al.,  2015).  Densitas  paling  tinggi  diperoleh  pada waktu  distilasi  30  menit  keenam.  Lama  waktu distilasi tidak memberikan pengaruh terhadap nilai densitas minyak atsiri yang dihasilkan.
6.19 9 5.38 5.05 3.26 2.38 1.62 0 2 4 6 8 10 0 2 4 6 8 Bo bot m inya k (g) Waktu distilasi (30 menit ke-)
Gambar 2 . Minyak atsiri rimpang temu hitam pada waktu distilasi setiap 30 menit (a) pertama, (b) kedua, (c) ketiga, (d) keempat, (e) kelima, (f) keenam, (g) ketujuh
Gambar 3 . Densitas minyak atsiri rimpang temu hitam pada perbedaan waktu distilasi
0.929 0.955 0.990 0.990 0.989 1.029 0.943 0.000 0.200 0.400 0.600 0.800 1.000 1.200 0 2 4 6 8 De nsit as (g/ m L) Waktu distilasi (30 menit ke-) 1.4853 1.4889 1.4965 1.5017 1.506 1.5073 1.5099 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.6 0 2 4 6 8 Inde ks bia s Waktu distilasi (30 menit ke-)
Uji fisik selanjutnya adalah indeks bias. Indeks bias  minyak  atsiri  rimpang  temu  hitam  pada penelitian  diperoleh  sebesar  1.4853‒1.5099. Semakin lama waktu distilasi, nilai indeks bias yang diperoleh  semakin  meningkat  ( Gambar  4 ).  Indeks bias  yang  dihasilkan  merupakan  perbandingan kecepatan  cahaya  dalam  udara  dengan  kecepatan cahaya  dalam  suatu  zat.  Semakin  lama  proses distilasi,  semakin  banyak  komponen  fraksi  berat yang  terdistilasi  sehingga  indeks  bias  semakin meningkat (Mulia et al., 2020). Nilai indeks bias yang meningkat  dipengaruhi  oleh  peningkatan  jumlah karbon  dalam  minyak  sehingga  medium  semakin rapat dan cahaya akan semakin sulit untuk dibiaskan (Damayanti et al., 2020).

## 2. Aktivitas  Antibakteri  Minyak  Atsiri  Rimpang Temu Hitam
Bakteri  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  bakteri  Gram  negatif  ( E.  coli )  dan  bakteri Gram positif ( S. mutans dan S. aureus ). Uji antibakteri dengan  menggunakan  metode  difusi  cakram terhadap  bakteri S.  mutans , E.  coli ,  dan S.  aureus menunjukkan  hasil  positif  ( Gambar  5 ).  Diameter zona  hambat  ditunjukkan  dengan  adanya  zona
bening  yang  tidak  ditumbuhi  bakteri  pada  media agar.  Besar  diameter  dari  zona  hambat  yang terbentuk  menunjukkan  kekuatan  antibakteri  dari minyak  atsiri  rimpang  temu  hitam.  Aktivitas antibakteri minyak atsiri rimpang temu hitam dapat dilihat  pada Tabel  1 .  Hasil  penghambatan  bakteri Gram  negatif  pada  penelitian  lebih  besar dibandingkan bakteri Gram positif.
Kontrol  positif  yang  digunakan  adalah klorheksidina  dengan  konsentrasi  2000  ppm  dan kontrol  negatif  adalah  DMSO  20%.  Zona  hambat kontrol  positif  yang  dihasilkan  lebih  besar dibandingkan  ketujuh  minyak  atsiri  rimpang  temu hitam. Zona hambat minyak atsiri konsentrasi 70% (v/v) pada bakteri S. mutans dan E. coli paling besar adalah saat pengambilan minyak 30 menit pertama. Zona  hambat  pada  bakteri S.  aureus terbesar  pada pengambilan  minyak  30  menit  ketujuh.  Menurut Susanto  &  Ruga  (2012),  zona  hambat  antibakteri dikelompokkan  menjadi  empat  kategori,  yaitu aktivitas lemah (≤5 mm), sedang (6‒10 mm), kuat (11‒20  mm),  dan  sangat  kuat  (≥21  mm).  Minyak atsiri  rimpang  temu  hitam  pada  penelitian  ini memiliki  aktivitas  antibakteri  yang  sedang  hingga kuat terhadap ketiga bakteri.
Gambar 5 . A: S. mutans , B: E. coli , C: S. aureus ; K1 (distilasi 30 menit pertama), K2 (distilasi 30 menit kedua), K3 (distilasi 30 menit ketiga), K4 (distilasi 30 menit keempat), K5 (distilasi 30 menit kelima), K6 (distilasi 30 menit keenam), K7 (distilasi 30 menit ketujuh), + (kontrol positif), ‒ (kontrol negatif)
Proses penghambatan bakteri oleh minyak atsiri terjadi  karena  kemampuannya  untuk  berikatan dengan protein ekstraseluler dan dinding sel bakteri. Mekanisme  penghambatannya  diduga  melalui
perusakan  lipid  bilayer  membran  sel  akibat  gugus hidrofobik  yang  dimilikinya.  Minyak  atsiri  bersifat lipofilik  yang  dapat  melewati  dinding  bakteri sehingga mengakibatkan kerusakan dinding sel dan
dapat membunuh bakteri (Hanifah & Yulianti, 2018). Bakteri Gram positif memiliki lapisan peptidoglikan yang  tebal  tetapi  tidak  memiliki  membran  luar. Dinding  sel  bakteri  Gram  negatif  memiliki  lapisan peptidoglikan yang lebih tipis dari dinding sel bakteri
Gram positif dengan beberapa ikatan silang peptida (Hamidah  et  al.,  2019).  Bakteri  Gram  negatif memiliki  membran  luar  yang  tersusun  atas lipopolisakarida dan protein.
Tabel 1 . Diameter zona hambat aktivitas antibakteri minyak atsiri rimpang temu hitam Waktu distilasi 30 menit ke- Zona hambat minyak atsiri rimpang temu hitam (mm) (rerata ± standar deviasi) S. mutans E. coli S. aureus 1 12 . 00±1 . 70 c
13 . 87±1 . 01 d
11 . 27±0 . 70 bc 2 11 . 24±1 . 33 bc
12 . 00±0 . 63 c
10 . 76±1 . 41 abc 3 10 . 50±0 . 98 abc
11 . 20±1 . 42 bc
9 . 69±1 . 02 a 4 9 . 30±0 . 68 a 10 . 45±0 . 66 ab
10 . 10±0 . 80 ab 5 9 . 67±1 . 74 ab
10 . 19±0 . 92 ab
11 . 06±0 . 72 bc 6 9 . 67±0 . 52 ab
9 . 57±0 . 53 a
10 . 97±1 . 03 abc 7 10 . 15±1 . 33 ab
9 . 43±1 . 66 a
11 . 55±0 . 80 c
Kontrol positif 13 . 06±1 . 49
15 . 26±0 . 58
12 . 41±1 . 05 Kontrol negatif - - - Keterangan: Angka yang diikuti huruf yang berbeda pada tiap kolom menunjukkan hasil yang berbeda nyata (p<0,05) 3. Kandungan  Senyawa  Minyak  Atsiri  Rimpang Temu Hitam
Kromatogram GC-MS ( Gambar 6 ) menunjukkan bahwa  setiap  perbedaan  lama  waktu  distilasi memiliki  perbedaan  senyawa  yang  terkandung  di dalamnya.  Minyak  atsiri  rimpang  temu  hitam mengandung 19 senyawa. Senyawa kamfor memiliki intensitas tertinggi pada waktu pengambilan minyak 30  menit  kedua  sedangkan  senyawa  epikurzerenon pada waktu distilasi 30 menit kelima. Pengambilan minyak  30  menit  ketujuh  memiliki  senyawa  yang paling sedikit dibandingkan dengan waktu yang lain. Senyawa  yang  paling  banyak  diperoleh  pada pengambilan  minyak  pertama  yaitu  sebanyak  17 senyawa. Senyawa epikurzerenon yang muncul pada waktu  distilasi  30  menit  pertama  sangat  sedikit karena senyawa ini memiliki titik didih yang tinggi. Titik  didih  senyawa  eukaliptol,  kamfor,  dan epikurzerenon secara berturut-turut  adalah 176 ° C, 209 ° C,  dan  320  °C.  Senyawa  yang  memiliki  titik didih  lebih  rendah  pada  proses  distilasi  akan menguap terlebih dahulu. Oleh karena itu, senyawa epikurzerenon  dengan  titik  didih  yang  tinggi memiliki intensitas yang sangat rendah pada waktu distilasi 30 menit pertama.
Identifikasi  komponen  kimia  didasarkan  pada spektrum  massa  dan  indeks  kovat.  Indeks  kovat merupakan  nilai  relatif  waktu  retensi  senyawa terhadap  dua  standar  alkana  yang  dianalisis  pada kondisi yang sama. Indeks kovat (I) dihitung secara manual  menggunakan  deret  homolog  alkana  dan konfirmasi komponen dilakukan dengan mencocokkan nilai I komponen yang teridentifikasi
dengan nilai I pada database yang dimiliki oleh NIST. Nilai  indeks  kovat  setiap  perbedaan  lama  waktu distilasi  tidak  menunjukkan  perbedaan.  Semakin lama waktu distilasi, nilai I pada beberapa senyawa meningkat.  Nilai  indeks  kovat  hitung  memiliki perbedaan dengan nilai indeks kovat yang ada pada database.
Senyawa volatil yang terkandung dalam minyak atsiri  adalah  senyawa  metabolit  sekunder  dan memiliki  sifat  antibakteri,  antioksidan,  dan  anti penuaan (Xu et al., 2016). Komponen utama minyak atsiri  adalah  terpena  dan  turunannya  yang mengandung  atom  oksigen.  Senyawa  terpena merupakan hasil metabolit sekunder pada tanaman yang  berfungsi  untuk  pertahanan  dari  mikroba (Bobbarala,  2012).  Terpena  minyak  atsiri digolongkan menjadi monoterpena dan seskuiterpena.  Terpenoid  yang  terkandung  dalam minyak  atsiri  menimbulkan  bau  yang  khas  dari tanaman  (Sastrohamidjojo,  2017).  Senyawa  yang paling dominan pada penelitian ini adalah eukaliptol (34.89%),  epikurzerenon  (20.58%),  dan  kamfor (16.90%).  Berdasarkan  rerata  luas  area  pada  total waktu distilasi. Berdasarkan penelitian Akarchariya et al. (2017), senyawa dominan yang terdapat pada rimpang  temu  hitam  adalah  kamfor  (29.39%)  dan germakron (21.21%). Perbedaan hasil penelitian ini dengan  penelitian  Akarchariya  et  al.  (2017) disebabkan oleh perbedaan daerah asal sampel yang digunakan.  Wilayah  tempat  tumbuh  tanaman  akan mengakibatkan perbedaan komposisi metabolit yang terkandung di dalamnya. Minyak atsiri yang diambil pada  waktu  yang  berbeda  menghasilkan  senyawa yang terkandung di dalamnya juga berbeda.
Gambar 6 . Kromatogram minyak atsiri rimpang temu hitam hasil analisis GC-MS dari berbagai variasi waktu distilasi
Gambar 7 . Heatmap senyawa minyak atsiri rimpang temu hitam. K1 (distilasi 30 menit pertama), K2 (distilasi 30 menit kedua), K3 (distilasi 30 menit ketiga), K4 (distilasi 30 menit keempat), K5 (distilasi 30 menit kelima), K6 (distilasi 30 menit keenam), K7 (distilasi 30 menit ketujuh)
0 10 20 30 40 50 Intensitas Waktu retensi (menit)
30 menit ketujuh 30 menit keenam
30 menit kelima
30 menit keempat 30 menit ketiga 30 menit kedua 30 menit pertama
Senyawa  aktif  yang  berperan  dalam penghambatan  bakteri  dapat  dilihat  dengan menggunakan heatmap ( Gambar  7 ). Heatmap merupakan  salah  satu  teknik  visualisasi  data  yang menampilkan  data  seperti  matriks  dengan menggunakan  warna  sebagai  elemen  estetika  (Gu, 2022). Heatmap berfungsi untuk memudahkan dalam identifikasi  kelompok  tertentu  yang  memiliki konsentrasi  suatu  aktivitas  yang  tinggi.  Intensitas warna  merah  menunjukkan  kandungan  senyawa yang  tinggi,  sedangkan  intensitas  warna  biru menunjukkan  kandungan  senyawa  yang  rendah. Senyawa  yang  berperan  dalam  penghambatan bakteri untuk bakteri S. mutans dan E. coli adalah α- kadinol;  2,2,4-trimetil-1,3-pentanadiol  diisobutirat; dan  δ-kadinol.  Senyawa-senyawa  tersebut  memiliki intensitas tertinggi pada pengambilan minyak menit ke-30. Senyawa yang berperan dalam penghambatan bakteri S. aureus adalah 4-pentil-1-(4- propilsikloheksil)-1-sikloheksena.

## KESIMPULAN
Distilasi  kukus  rimpang  temu  hitam menghasilkan minyak atsiri yang berpotensi sebagai antibakteri.  Minyak  atsiri  dengan  konsentrasi  70% dapat menghambat bakteri S. mutans, E. coli , dan S. aureus .  Waktu  distilasi  yang  optimum  untuk menghasilkan  aktivitas  antibakteri  terbaik  adalah waktu pengambilan minyak 30 menit pertama untuk bakteri S. mutans dan E. coli serta waktu pengambilan minyak  30  menit  ketujuh  untuk  bakteri S.  aureus . Perbedaan  lama  waktu  distilasi  menghasilkan senyawa  yang  terkandung  di  dalam  minyak  atsiri berbeda-beda  sehingga  dapat  mempengaruhi aktivitas antibakteri yang dihasilkan.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis mengucapkan terimakasih kepada LPDP atas dana penelitian LPDP Invitasi kepada Dr. Yessie Widya Sari dengan No PRJ-31/LPDP/2019.

## DAFTAR PUSTAKA
Akarchariya, N., Sirilun, S., Julsrigival, J., & Chansakaowa, S. (2017).  Chemical  profiling  and  antimicrobial  activity  of essential  oil  from  Curcuma  aeruginosa  Roxb.,  Curcuma glans K. Larsen & J. Mood and Curcuma cf. xanthorrhiza Roxb.  collected  in  Thailand. Asian  Pacific  Journal  of Tropical
Biomedicine , 7 (10), 881–885. https://doi.org/10.1016/J.APJTB.2017.09.009
Bobbarala, V. (2012). A Search for Antibacterial Agents. In A Search for Antibacterial Agents . InTech. https://doi.org/10.5772/1085
Boutsada, P., Giang, V. H., Linh, T. M., Mai, N. C., Cham, P. T., Hanh, T. T. H., Phonenavong, K., Sengchanh, S., Cuong, N. X., Lien, L. Q., & Ban, N. K. (2018). Sesquiterpenoids from the rhizomes of Curcuma aeruginosa. Vietnam Journal of Chemistry , 56 (6), 721–725. https://doi.org/10.1002/vjch.201800077
Damayanti,  M.,  Nurjanah,  S.,  Bunyamin,  A.,  &  Pujianto,  T. (2020). Ekstraksi Minyak Atsiri Pandan Wangi (Pandanus amaryllifolius  Roxb.)  dengan  Lama  Waktu  Penyulingan yang Berbeda. Jurnal Ilmu Pertanian Indonesia , 25 (4), 653– 656. https://doi.org/10.18343/jipi.25.4.653
Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia.  (2017).
Farmakope  Herbal.  In Departemen  Kesehatan  Republik Indonesia (Vol.  2).  Departemen  Kesehatan  Republik Indonesia.
https://zlibrary-
id.se/s/?q=Traditional+Medicine+Strategy+2002– 2005
Fitri, N., Safitri, I., & Merdekawati, K. (2019). Produksi minyak atsiri  untuk  mengembangkan  Desa  Pelutan,  Kecamatan Gebang, Purworejo, Jawa Tengah sebagai sentra minyak atsiri. Jurnal Abdimas Madani Dan Lestari (JAMALI) , 1 (2), 79–96. https://doi.org/10.20885/jamali.vol1.iss2.art4 Gu,  Z.  (2022).  Complex  heatmap  visualization. IMeta , 1 (3), e43. https://doi.org/10.1002/imt2.43
Hamidah,  M.  N.,  Rianingsih,  L.,  &  Romadhon,  R.  (2019). Aktivitas antibakteri isolate bakteri asam laktat dari peda dengan jenis ikan berbeda terhadap E. coli dan S. aureus. Jurnal  Ilmu  Dan  Teknologi  Perikanan , 1 (2),  11–21. https://doi.org/10.14710/jitpi.2019.6742
Handayani, S. N., Purwanti, A., Windasari, W., & Ardian, M. N. (2020). Uji Fitokimia dan Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol  Daun  Kencana  Ungu  (Ruellia  tuberosa  L.). Walisongo
Journal of Chemistry , 3 (2), 66. https://doi.org/10.21580/wjc.v3i2.6119
Hanief, M. M. A., W, H. A. M., & Mahfud. (2013). Ekstraksi minyak atsiri dan akar wangi menggunakan metode steam- hydro  destillation  dan  hydo  destilation  dengan  pemanas microwave. Jurnal  Teknik  Pomits , 2 (2),  219–223. https://doi.org/10.12962/j23373539.v2i2.3518
Hanifah, A., & Yulianti, E. (2018). Potensi minyak atsiri dalam menghambat pertumbuhan isolate bakteri yang ditemukan di  Candi  Borobudur. Kingdom  (The  Journal  of  Biological
Studies) , 7 (3), 196–203. https://doi.org/10.21831/kingdom.v7i3.12447
Hidayati.  (2012).  Distilasi  minyak  atsiri  dari  kulit  jeruk pontianak dan pemanfaatannya dalam pembuatan sabun aromaterapi. Biopropal Industri , 3 (2), 39–49. Hübschmann, H.-J. (2009). Handbook of GC-MS: Fundamentals and Applications . WILEY-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA.
Lisa,  M.,  Lutfi,  M.,  &  Susilo,  B.  (2015).  Pengaruh  suhu  dan lama  pengeringan  terhadap  mutu  tepung  jamur  tiram putih  (Plaerotus  ostreatus). Jurnal  Keteknikan  Pertanian
Tropis
Dan
Biosistem , 3 (3), 270–279.
https://doi.org/10.21776/JKPTB.V3I3.293
Mulia, S. S., Ayu, D. F., & Zalfiatri, Y. (2020). Lama distilasi air  terhadap  sifat  fisiko-kimia  minyak  atsiri  bunga
kecombrang (Nicolaia speciosa Horan). Jurnal Sagu , 19 (1), 40. https://doi.org/10.31258/sagu.v19i1.7877
Nurnasari, E., & Prabowo, H. (2020). Pengaruh Ukuran Sampel dan  Lama  Waktu  Destilasi  terhadap  Rendemen  Minyak Atsiri  Tembakau  Lokal  Indonesia. Buletin  Tanaman Tembakau,  Serat  &  Minyak  Industri , 11 (2),  47. https://doi.org/10.21082/btsm.v11n2.2019.47-57 Qorriaina, R., Hawa, L. C., & Yulianingsih, R. (2015). Aplikasi pra-perlakuan microwave assisted extraction (MAE) pada ekstrak  daun  kemangi  (Ocimum  sanctum)  menggunakan rotary  evaporator  (studi  pada  variasi  suhu  dan  waktu ekstraksi). Jurnal Bioproses Komoditas Tropis , 3 (1), 32–38. https://jbkt.ub.ac.id/index.php/jbkt/article/view/172 Sastrohamidjojo, H. (2017). Kimia Minyak Atsiri . Gadjah Mada University Press.
Susanto, D. S., & Ruga, R. (2012). Studi kandungan bahan aktif tumbuhan meranti merah (Shorea leprosula Miq) sebagai sumber senyawa antibakteri. Mulawarman Scientifie , 11 (2), 181–190.
The  Association  of  Official  Analytical  Chemist  [AOAC]. (2012). No  TiOfficial  Methods  of  Analysis  Ed  ke-19tle . Association of Official Analytical Chemist.
Wahyuni,  W.  T.,  Batubara,  I.,  &  Tambunan,  D.  Y.  (2017).
Antibacterial  and  teeth  biofilm  degradation  activity  of Curcuma  aeruginosa  essential  oil. Journal  of  Biological
Sciences , 17 (2), 84–90. https://doi.org/10.3923/jbs.2017.84.90
Wijaya, A., & Noviana. (2022). Penetapan Kadar Air Simplisia Daun  Kemangi  (  Ocimum  basilicum  L  .)  Berdasarkan Perbedaan Metode Determination Of The Water Content Of Basil Leaves Simplicia ( Ocimum basilicum L .) Based On Different  Drying  Methods. Jurnal  Riset  Kefarmasian
Indonesia , 4 (2), 185–199. https://doi.org/10.33759/JRKI.V4I2.246 Xu,  C.,  Zhao,  S.,  Li,  M.,  Dai,  Y.,  Tan,  L.,  &  Liu,  Y.  (2016).
Chemical  composition,  antimicrobial  and  antioxidant activities  of  essential  oil  from  flue-cured  tobacco  flower bud. Biotechnology  and  Biotechnological  Equipment , 30 (5), 1026–1030.
https://doi.org/10.1080/13102818.2016.1195240 Yani,  S.,  &  Yani,  S.  (2021).  Alteration  of  The  Properties  of Spent Eucalyptus Biomass from Steam Distillation. World Chemical Engineering Journal , 5 (2), 50. https://doi.org/10.48181/wcej.v5i2.12615
Citation  Format :  Munawaroh,  F.,  Luthfiana,  W.,  Suparto,  I.  H.,  Sari,  Y.  W.,  Wahyuni,  W.  T.,  & Batubara, I. (2023). Correlation between Time Variation of Steam Distillation of Temu Hitam’s Rhizomes ( Curcuma aeruginosa )  and  Antibacterial  Activity  of  Essential  Oil. Jurnal  Jamu  Indonesia,  8 (3),  97–105. https://doi.org/10.29244/jji.v8i3.345