## EVALUASI IN VITRO AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL
DAUN SELADA AIR ( Nasturtium officinale ) TERHADAP BAKTERI METHICILLIN-RESISTANT Staphylococcus aureus
Aleyda Zahratunany Insanitaqwa *  , Noorhamdani AS**, Nugrahanti Prasetyorini***

## Abstrak
Methicillin-resistant  Staphylococcus  aureus (MRSA)  adalah  bakteri  patogen  penyebab  infeksi nosokomial  yang  dapat  menyerang  beberapa  sistem  organ  dan  bersifat  resisten  terhadap  beberapa antibiotik beta laktam seperti penisilin, sepalosporin, dan karbapenem. Prevalensi infeksi Staphylococcus aureus terus meningkat seiring dengan banyaknya prevalensi infeksi nosokomial dan meningkatnya tingkat resistensi Staphylococcus  aureus terhadap  beberapa  antimikroba  sehingga  dibutuhkan  suatu  alternatif terapi yang dapat menggantikan atau meningkatkan efektivitas kerja antibakteri yang sudah ada. Ekstrak etanol daun selada air mengandung flavonoid, tannin, saponin, dan steroid yang dapat berperan sebagai antibakteri. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antibakteri pada ekstrak etanol daun selada air  ( Nasturtium  officinale) terhadap  MRSA  secara in  vitro. Rancangan  penelitian  yang  digunakan  adalah experimental  post  test  only  control  group  design dengan  metode  uji  aktivitas  antibakteri  difusi  sumuran. Ekstrak etanol daun selada air yang digunakan yaitu ekstrak dengan konsentrasi 30%, 60%, 75%, 90%, 100%,  dan  0%  sebagai  kontrol  negatif  dengan  pengulangan  sebanyak  empat  kali.  Hasil  penelitian menunjukkan perbedaan yang signifikan (p = 0,000) dengan diameter zona hambat terbesar dicapai pada aplikasi  konsentrasi  ekstrak  100%  yaitu  9,88±0,27  mm,  diikuti  dengan  konsentrasi  ekstrak  90%  sebesar 8,97±0,21  mm,  konsentrasi  ekstrak  75%  sebesar  7,90±0,61  mm,  konsentrasi  ekstrak  60%  sebesar 7,19±0,13 mm, dan konsentrasi ekstrak 30% sebesar 6,16±0,12 mm. Oleh karena itu, dapat disimpulkan bahwa ekstrak etanol daun selada air memiliki aktivitas antibakteri terhadap MRSA secara in vitro .
Kata kunci: antibakteri, daun selada air ( Nasturtium officinale ), methicillin-resistant Staphylococcus aureus
IN VITRO EVALUATION OF ANTIBACTERIAL ACTIVITY OF WATERCRESS LEAF ( Nasturtium officinale ) ETHANOL EXTRACT AGAINST METHICILLIN-RESISTANT
Staphylococcus aureus

## Abstract
Methicillin-resistant Staphylococcus  aureus (MRSA)  is  pathogenic  bacteria  that  cause  nosocomial infections in multiple organs and is resistant to beta-lactam antibiotics including penicillins, cephalosporins, and carbapenems. The high prevalence of Staphylococcus aureus infection is associated with a high rate of nosocomial infection and resistance of S. aureus to several antimicrobial agents. Therefore, an alternative therapy  that  could  substitute  or  enhance  the  effectiveness  of  remaining  antimicrobial  agents  is  needed. Watercress  leaves  contain  flavonoids,  tannins,  saponins,  and  steroids  which  are  proven  to  have antibacterial activity. This in vitro study aims to determine the antibacterial activity of watercress ( Nasturtium officinale )  leaves  ethanol  extract  against  MRSA.  The  design  study  used  was  experimental  post-test  only control group design and the method used was well diffusion. This study evaluated an ethanol extract of watercress  leaves  in  six  different  concentrations,  which  are  30%,  60%,  75%,  90%,  100%,  and  0%  as  a negative control group in four times of repetition. The result showed a significant difference (p = 0.000) with the largest diameter of inhibition zone was observed at a concentration of 100% extract in 9.88±0.27 mm, followed by 90% extract in 8.97±0.21 mm, 75% extract in 7.90±0.61 mm, 60% extract in 7.19±0.13 mm, and 30% extract in 6.16±0.12 mm. It can be concluded that watercress leaves ethanol extract has in vitro antibacterial activity against MRSA.
Keywords: antibacterial agent, methicillin-resistant Staphylococcus aureus , watercress’ leaves ( Nasturtium officinale )
* Program Studi Pendidikan Dokter, Fakultas Kedokteran, Universitas Brawijaya
** Departemen Mikrobiologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Brawijaya *** Departemen Obstetri dan Ginekologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Brawijaya  E-mail: aleydazahra@gmail.com
Insanitaqwa Z et al. Evaluasi In Vitro Aktivitas Antibakteri .......

## Pendahuluan
Staphylococcus  aureus didefinisikan sebagai  bakteri  kokus  Gram  positif  yang membentuk  koloni  seperti  anggur  dan  dapat bersifat  patogen  pada  individu  yang  rentan. Bakteri  ini  mampu  menghasilkan  toksin  dan enzim  ekstraseluler,  menghancurkan  sel darah,  dan  menggumpalkan  plasma. 1
Prevalensi infeksi S. aureus meningkat seiring dengan  banyaknya  prevalensi  infeksi nosokomial  dan  meningkatnya  tingkat resistensi S.  aureus terhadap  beberapa antimikroba. 2 Salah satu galur S. aureus yang sudah  mengalami  resistensi  yaitu methicillin- resistant Staphyloccus aureus (MRSA). Pada tahun  2010,  Asia  merupakan  benua  dengan prevalensi  tertinggi  infeksi  nosokomial  akibat MRSA. 3 Penelitian  lain  menunjukkan  bahwa pada  tahun  2012,  45,3%  dari  total  isolat  di RSUD  dr.  Saiful  Anwar  Malang  merupakan MRSA. 4 Hal ini berkaitan dengan peningkatan prevalensi  infeksi  nosokomial  atau hospital- associated infections (HAIs) dan penggunaan antimikroba yang tidak rasional. 4
Mekanisme  resistensi  bakteri  MRSA diperankan  oleh  gen mecA yang  mengkode penicillin-binding  protein 2a  (PBP  2a) sehingga  bakteri  memiliki  afinitas  rendah terhadap  antimikroba  betalaktam,  seperti golongan  penisilin,  sepalosporin,  dan karbapenem. 1 Selama ini, terapi farmakologis infeksi  MRSA  dapat  menggunakan  antibiotik vankomisin  atau  kombinasi  kuinupristin- dalfopristin. 5 Namun  mengingat  seringnya penggunaan antimikroba yang tidak rasional, tidak  menutup  kemungkinan  dapat  terjadi resistensi terhadap antibiotik tersebut di masa mendatang. 1 Bakteri S.  aureus dapat  menimbulkan manifestasi  klinis  yang  bervariasi.  Infeksi bakteri  ini  dapat  menyebabkan  endokarditis, osteomyelitis  akut,  meningitis,  hingga  infeksi paru-paru.  Toksin  pada  bakteri  ini  juga  bisa menyebabkan  sindrom  yang  disebut toxin shock  syndrome ,  yang  ditandai  dengan
demam tinggi, diare, muntah, myalgia, hingga gagal jantung dan gagal ginjal. 1
Melihat  kejadian  resistensi  yang semakin  meningkat  dan  bahaya  infeksi MRSA,  perlu  adanya  alternatif  pengobatan untuk  menggantikan  atau  meningkatkan efektifitas  kerja  antimikroba  dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri S. aureus . 6 Selada  air  ( Nasturtium  officinale ) dilaporkan  memiliki  potensi  antibakteri  yang dapat digunakan sebagai solusi dari masalah tersebut. 7,8
Beberapa  penelitian  sebelumnya  telah melakukan  uji  fitokimia  untuk  mengetahui kandungan ekstrak selada air. Ekstrak etanol daun  selada  air  mengandung  steroid  atau triterpenoid,  fenol  hidrokuinon,  alkaloid, ninhidrin, 7 tannin,  flavonoid,  polifenolat,  dan kuinon  yang  berperan  dalam  aktivitas antibakteri. 8 Kandungan fitokimia pada bagian daun  ini  lebih  banyak  dibandingkan  pada bagian  batang  yang  hanya  mengandung alkaloid,  steroid,  dan  ninhidrin. 7 Senyawa steroid  dilaporkan  mampu  menghambat enzim  gyrase  dan  topoisomerase  IV  yang berperan  dalam  sintesis  DNA  bakteri. 9
Flavonoid  bekerja  dengan  cara  mengganggu proses  sintesis  asam  nukleat,  merusak membran  sitoplasma  dan  mengganggu proses  metabolisme  bakteri. 10 Tannin  dapat berikatan  dengan  besi  dan  kalsium  serta menghambat  kerja  enzim  dan  proses koagulasi  plasma. 11 Saponin  dapat menyebabkan  peningkatan  permeabilitas  sel dan  kematian  sel. 12 Kandungan  zat  aktif dalam  selada  air  juga  dipengaruhi  oleh  jenis pelarut  yang  digunakan.  Penelitian membuktikan bahwa ekstrak etanol selada air memiliki  lebih  banyak  kandungan  flavonoid, tannin,  dan  steroid  dibandingkan  selada  air dalam bentuk serbuk maupun ekstrak air. 13 Berdasarkan  uraian  di  atas,  ekstrak etanol daun selada air memiliki potensi untuk dimanfaatkan  sebagai  antibakteri,  sehingga perlu  diteliti  aktivitasnya  terhadap pertumbuhan MRSA secara in vitro .

## Bahan dan Metode

## Desain Penelitian
Penelitian  ini  merupakan  penelitian eksperimental  laboratoris.  Rancangan  pene- litian yang digunakan yaitu experimental post test only control group design dengan metode uji aktivitas antibakteri difusi sumuran.

## Sampel dan Kelompok Penelitian
Bakteri MRSA didapat dari Laboratorium Mikrobiologi,  Fakultas  Kedokteran, Universitas Brawijaya adalah isolat klinik yang memiliki ciri-ciri Gram positif berbentuk kokus, tes  katalase  positif,  tes  koagulase  positif, berwarna kuning pada mannitol salt agar , dan resisten  terhadap  sefoksitin  pada  metode difusi  cakram  (diameter  zona  hambat  ≤21 mm). 14 Adapun  daun  selada  air  didapat  dari UPT  Laboratorium  Herbal  Materia  Medica, Batu  dan  telah  mendapatkan  surat determinasi  tanaman  yang  menyatakan bahwa  sampel  tersebut  adalah  daun  selada air.

## Variabel Penelitian
Variabel  dependen  yang  digunakan yaitu  diameter  zona  hambat  yang  diukur dengan  penggaris  dalam  skala  milimeter. Variabel  independen  yang  digunakan  adalah ekstrak  etanol  daun  selada  air  ( Nasturtium officinale )  dengan  enam  konsentrasi  yang berbeda,  yaitu  0%  sebagai  kontrol  negatif, 30%, 60%, 75%, 90%, dan 100%.
Ekstraksi  Daun  Selada  Air  (Nasturtium officinale)
Daun  selada  air  yang  sudah  dicuci bersih  dan  dipotong  kecil-kecil  dikeringkan pada  suhu  40 o C  selama  3  hari  kemudian dihaluskan  hingga  mendapatkan  simplisia. Ekstraksi simplisia dilakukan dengan metode maserasi  dan  evaporasi.  Simplisia  direndam di  dalam  etanol  96%  dengan  perbandingan 1:4 (1 kg bahan dalam 4 liter pelarut etanol) kemudian  didiamkan  pada  suhu  kamar
selama  2x24  jam  sambil  sesekali  diaduk hingga mengendap. Dari endapan ini, bagian filtrat yang terletak di bagian atas disaring lalu dimasukkan  ke  dalam  erlenmeyer  kemudian dilakukan  remaserasi  dengan  cara  direndam kembali  pada  larutan  etanol  96%  dan dibiarkan  hingga  mengendap.  Hasil  filtrat pertama  sampai  terakhir  kemudian  diuapkan dengan  evaporator selama  2  jam  untuk menghilangkan etanol. 15

## Identifikasi  Bakteri  Methicillin-Resistant Staphyloccus aureus (MRSA)
Identifikasi  bakteri  yang  dilakukan berupa  pewarnaan  Gram,  tes  katalase,  tes koagulase,  tes  fermentasi  mannitol  pada media mannitol salt agar , dan tes sensitifitas sefoksitin. 1 Bakteri  dikatakan  resisten terhadap  sefoksitin  apabila  terbentuk  zona hambat kurang atau sama dengan 21 mm. 14

## Uji Efektivitas Antibakteri
Uji  aktivitas  antibakteri  pada  penelitian ini dilakukan dengan metode difusi sumuran. Peneliti menguji ektrak etanol daun selada air dengan  enam  konsentrasi  yang  berbeda, yaitu 30%, 60%, 75%, 90%, dan 100% serta 0%  sebagai  kontrol  negatif.  Pengulangan setiap konsentrasi dilakukan sebanyak empat kali. Larutan Mueller-Hinton dan isolat bakteri MRSA dicampur pada cawan petri lalu tunggu hingga memadat. Kemudian media yang telah memadat  dilubangi  untuk  membentuk  sumur berdiameter 5 mm dan selanjutnya sumur diisi dengan  ekstrak  etanol  daun  selada  air sebanyak  40  µl  dengan  konsentrasi  yang berbeda  pada  setiap  sumuran.  Selanjutnya, bakteri  diinkubasi  selama  18  hingga  24  jam pada  suhu  37 o C.  Setelah  proses  inkubasi akan  terbentuk  zona  hambat  di  sekitar sumuran.  Zona  hambat  tersebut  diukur menggunakan  penggaris  dalam  skala millimeter  (mm)  sebanyak  4  kali  (secara horizontal,  vertikal,  dan  2  arah  diagonal) kemudian  diambil  nilai  rata-rata  dari  empat nilai hasil pengukuran. 16
Semakin  lebar  diameter  zona  hambat,  maka potensi  antibakteri  yang  dimiliki  ekstrak tersebut semakin besar. Hasil diameter zona hambat  dapat  dibagi  dalam  empat  kategori aktivitas  antibakteri,  yaitu  aktivitas  lemah (diameter  <5  mm),  sedang  (diameter  5-10 mm),  kuat  (diameter  11-20  mm),  dan  sangat kuat (diameter >20 mm). 17

## Analisis Data
Analisis  data  secara  statistik menggunakan  uji  normalitas  dengan  metode Saphiro  Wilk untuk  mengetahui  distribusi data;  uji  homogenitas  menggunakan  metode Levene  test untuk  mengetahui  homogenitas data;  uji  komparasi Kruskal  Wallis untuk mengetahui  adanya  perbedaan  yang signifikan antara diameter zona hambat pada beberapa  kelompok  konsentrasi  ekstrak;  uji post  hoc  Mann  Whitney untuk  mengetahui perbandingan  data  dari  dua  kelompok konsentrasi  ekstrak;  uji  korelasi Spearmann untuk mengetahui kekuatan hubungan antara konsentrasi  ekstrak  dengan  pertumbuhan bakteri  MRSA;  dan  uji  regresi  untuk mengetahui besar pengaruh ekstrak terhadap zona hambat dan memprediksi nilai diameter
zona  hambat  dari  sebuah  persamaan khusus. 18

## Hasil
Hasil ekstraksi dengan metode maserasi dan  evaporasi  didapatkan  ekstrak  berwarna hijau  pekat  dengan  konsistensi  cair. Identifikasi  bakteri  didapatkan  bakteri  kokus Gram  positif  yang  membentuk  koloni  seperti anggur,  uji  katalase  dan  koagulase  positif, kemampuan  fermentasi  mannitol  positif,  dan bersifat  resisten  terhadap  sefoksitin  (zona hambat  di  sekitar  cakram  sefoksitin  30  µg sebesar 11 mm). Pada Gambar 1 ditampilkan aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol  daun selada  air  terhadap  bakteri  MRSA  dengan berbagai konsentrasi.
Uji  aktivitas  antibakteri  dilakukan menggunakan metode difusi sumuran dengan konsentrasi  ekstrak  etanol  daun  selada  air 30%,  60%,  75%,  90%,  100%,  dan  0% sebagai  kontrol  negatif.  Hasil  menunjukkan adanya  perbedaan  lebar  diameter  zona hambat  pertumbuhan  bakteri  MRSA  pada setiap konsentrasi (Gambar 1).
Gambar 1. Aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun selada air ( Nasturtium officinale) terhadap bakteri MRSA dengan metode difusi sumuran yang ditunjukkan dengan garis merah (  )
Keterangan: a) pengulangan ke-1, b) pengulangan ke-2, c) pengulangan ke-3, d) pengulangan ke-4
0% 30% 60% 75%
90%
100%
Selain  itu,  diketahui  bahwa  semakin tinggi konsentrasi ekstrak etanol daun selada air,  maka  diameter  zona  hambat  yang terbentuk  semakin  lebar  (Tabel  1). Berdasarkan  Tabel  1,  zona  hambat  mulai terlihat  pada  konsentrasi  30%  dengan  rata- rata  6,16  mm  (aktivitas  antibakteri  sedang). Zona hambat terbesar terlihat pada kelompok konsentrasi  100%  dengan  diameter  rata-rata 9,88 mm (aktivitas antibakteri sedang). Pada kontrol  negatif  (konsentrasi  ekstrak  0%) berupa  pemberian  akuades  tidak  didapatkan zona  hambat  di  sekitar  lubang  sumuran. Maka, dapat disimpulkan adanya peningkatan lebar  diameter  zona  hambat  seiring  dengan peningkatan  konsentrasi  ekstrak  etanol  daun selada air.

## Analisis Data
Uji  normalitas  dengan  metode  Shapiro Wilk  menunjukkan  bahwa  seluruh  kelompok memiliki  distribusi  normal  (p  >  0,05),  kecuali kelompok  konsentrasi  ekstrak  60%  (p  = 0,001).  Uji  homogenitas  dengan  uji  Levene didapatkan  variasi  data  diameter  zona hambat  pertumbuhan  bakteri  MRSA  dari setiap konsentrasi tidak homogen (p < 0,05). Data  pada  penelitian  ini  tidak  homogen sehingga  analisis  statistik  dilakukan menggunakan  uji  nonparametrik  berupa  uji komparasi  Kruskal  Wallis , uji post  hoc Mann Whitney , uji  korelasi  Spearmann , dan  uji regresi. 18
Hasil  uji  komparasi  Kruskal  Wallis menunjukkan  perbedaan  yang  signifikan antara  diameter  zona  hambat  pertumbuhan bakteri  MRSA  pada  beberapa  kelompok konsentrasi  ekstrak  (p  <  0,05).  Uji post  hoc Mann  Whitney menunjukkan  adanya perbedaan  data  antar  kelompok  yang signifikan  (p  <  0,05),  kecuali  kelompok  60% dan  70%  (p  =  0,20).  Uji  korelasi  Spearman menunjukkan  adanya  hubungan  yang signifikan  antara  perbedaan  konsentrasi ekstrak dan diameter zona hambat (p < 0,05) dengan  arah  korelasi  positif  dan  kekuatan korelasi yang sangat kuat (r = 0,979). Dengan kata lain, pemberian konsentrasi ekstrak yang tinggi  akan  memberikan  hasil  diameter  zona hambat  yang  lebar.  Sebaliknya,  pemberian konsentrasi  ekstrak  yang  rendah  akan memberikan  hasil  diameter  zona  hambat yang  sempit.  Hasil  uji  regresi  menunjukkan nilai R  square sebesar  0,945  dengan  nilai signifikansi 0,00 (p < 0,05).
Dengan  kata  lain,  terdapat  94,5% kemungkinan  bahwa  zona  hambat  yang terbentuk  di-pengaruhi  oleh  pemberian ekstrak  etanol  daun  selada  air  dan  5,5% kemungkinan  bahwa  zona  hambat  dapat disebabkan  oleh  variabel  yang  tidak  diukur dalam penelitian ini dan mem-pengaruhi hasil penelitian.  Hubungan  antara  peningkatan konsentrasi  ekstrak  etanol  daun  selada  air terhadap besar  diameter zona  hambat  dapat dinyatakan dengan rumus Y = 4,766 + 0,46X dengan Y merupakan besar diameter zona
Tabel 1.  Diameter  zona  hambat  pertumbuhan  bakteri  MRSA  pada  konsentrasi  ekstrak  etanol daun selada air yang berbeda
Konsentrasi Ekstrak (%) Diameter Zona Hambat pada Pengulangan ke- (mm) Rata-rata (mm)±SD p 1 2 3 4 0 - - - - - 30 6,25 6 6,125 6,25 6,16±0,12 0,013* 60 7,25 7,25 7 7,25 7,19±0,13 0,011* 75 8,5 7,125 7,75 8,25 7,90±0,61 0,014* 90 9,25 8,875 8,75 9 8,97±0,21 0,014* 100 9,875 10,25 9,625 9,75 9,88±0,21 0,014* Keterangan: (*) signifikan p < 0,05
hambat  dan  X  merupakan  nilai  konsentrasi ekstrak etanol daun selada air. 18

## Pembahasan
Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui  aktivitas  antibakteri  ekstrak etanol daun selada air ( Nasturtium officinale ) terhadap  bakteri methicillin-resistant Staphylococcus  aureus (MRSA)  secara in vitro .  Penelitian  pendahuluan  dilakukan menggunakan  konsentrasi  ekstrak  0%,  5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%,  95%  dan  100%.  Berdasarkan  hasil penelitian  pendahuluan,  konsentrasi  ekstrak yang  digunakan  pada  penelitian  inti  yaitu 100%,  90%,  75%,  60%,  dan  30%  serta kontrol  negatif  berupa  pemberian  akuades (konsentrasi  ekstrak  0%)  dengan pengulangan  masing-masing  konsentrasi sebanyak empat kali. Diameter zona hambat sebagai hasil penelitian diukur menggunakan penggaris  dalam  skala  millimeter.  Diameter zona  hambat  yang  lebar  menunjukkan aktivitas  antibakteri  ekstrak  yang  tinggi. Sebaliknya, diameter zona hambat yang kecil menunjukkan  aktivitas  antibakteri  ekstrak yang rendah. 17
Ekstraksi  daun  selada  air  dilakukan dengan  metode  maserasi  dan  evaporasi. Peneliti  menggunakan  pelarut  etanol  96% karena  aktivitas  antibakteri  pada  ekstrak etanol  lebih  tinggi  daripada  ekstrak  dengan pelarut  air.  Selain  itu,  etanol  memiliki kelarutan yang lebih tinggi sehingga zat aktif di dalam daun selada air lebih mudah larut di dalam  cairan  etanol. 19 Namun,  aktivitas antibakteri  tidak  dipengaruhi  oleh  pelarut etanol  karena  dilakukan  evaporasi  yang bertujuan  untuk  menghilangkan  pelarut sehingga  dapat  dikatakan  bahwa  pada ekstrak  ini  seluruh  pelarut  etanol  sudah menguap. 12
Pada  hasil  penelitian,  didapatkan  hasil rata-rata  besar  diameter  zona  hambat  pada
konsentrasi  30%  sebesar  6,16  mm, konsentrasi  60%  sebesar  7,19  mm, konsentrasi  75%  sebesar  7,90  mm, konsentrasi  90%  sebesar  8,97  mm,  dan konsentrasi 100% sebesar 9,88 mm. Hasil ini menunjukkan  bahwa  semakin  tinggi konsentrasi  ekstrak  yang  diberikan,  maka semakin  besar  diameter  zona  hambat pertumbuhan bakteri MRSA yang terbentuk (p < 0,05).
Hambatan  pada  pertumbuhan  MRSA disebabkan  oleh  beberapa  senyawa  aktif yang ada di dalam ekstrak etanol daun selada air  yaitu  flavonoid,  tannin,  saponin,  dan steroid  yang  dilaporkan  berperan  sebagai antibakteri. 20 Flavonoid  bekerja  dengan  cara mengganggu  proses  metabolisme  bakteri, menurunkan fungsi membran sitoplasma, dan menghambat sintesis asam nukleat bakteri. 10 Tannin  dapat  menginaktivasi  enzim  intrasel, menghambat koagulasi plasma, dan mengikat besi  dan  kalsium  yang  diperlukan  tubuh. 11 Saponin  dapat  meningkatkan  permeabilitas sel  sehingga  menyebabkan  terjadinya kematian sel. 12 Mekanisme kerja steroid yaitu dengan cara menghambat enzim DNA gyrase dan  topoisomerase  IV  yang  berperan  dalam sintesis DNA bakteri. 9
Penelitian mengenai aktivitas antibakteri daun  selada  air  terhadap  beberapa  bakteri lain  sudah  pernah  dilakukan.  Bakteri  Gram positif  ( Staphylococcus  aureus dan Listeria monocytogenes ) lebih sensitif terhadap pem- berian ekstrak etanol selada air dibandingkan bakteri  Gram  negatif  ( Escherichia  coli dan Salmonella Typhimurium ). Hal ini disebabkan zat aktif steroid, flavonoid, dan saponin pada selada  air  bersifat  hidrofobik  sedangkan bakteri  Gram  negatif  memiliki  membran  luar yang  terdiri  atas  lipopolisakarida  yang berfungsi  sebagai  barier  terhadap  molekul hidrofobik  sehingga  zat  aktif  tersebut  sulit masuk  ke  dalam  sel  bakteri. 19 Pemberian ekstrak  metanol  daun  selada  air dikombinasikan  dengan  antibiotik  gentamisin memberikan pengaruh yang signifikan
terhadap diameter zona hambat dan mampu membentuk diameter zona hambat yang lebih besar  (20,3  mm)  dibandingkan  pemberian antibiotik  saja  (17,7  mm). 21 Hal  ini menunjukkan bahwa ekstrak daun selada air memberikan efek sinergis terhadap antibiotik. Ekstrak  etanol  selada  air  juga  memiliki a k t i v i t a s   a n t i b a k t e r i   t e r h a d a p Propionibacterium  acnes dengan  diameter zona  hambat  mulai  13,25  mm  hingga  16 mm. 8 Dari  ketiga  studi  ini,  dapat  dinyatakan bahwa  ekstrak  etanol  daun  selada  air memiliki  aktivitas  antibakteri  yang  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri  Gram positif. 8,19,21
Penelitian  lain  telah  dilakukan  untuk menguji  potensi  ekstrak  etanol  buah belimbing wuluh ( Averrhoa bilimbi Linn) yang dapat    menghambat  pertumbuhan  MRSA pada  konsentrasi  50%  dengan  rata-rata diameter zona hambat sebesar 24,375 mm. 22
Hasil ini menunjukkan diameter zona hambat yang lebih besar karena sumuran yang dibuat berdiameter  6  mm.  Ekstrak  etanol  bunga cengkeh  ( Syzygium  aromaticum )  memiliki aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri  MRSA dengan  Kadar  Bunuh  Minimal  (KBM)  pada konsentrasi  0,39%  dan  Kadar  Hambat Minimal  (KHM)  yang  tidak  dapat  dianalisis karena  kekeruhan  warna  ekstrak. 23 Dari kedua  studi  ini  diketahui  bahwa  ekstrak etanol  daun  selada  air  memiliki  potensi antibakteri  yang  lebih  lemah  dibandingkan ekstrak  etanol  buah  belimbing  wuluh  dan bunga  cengkeh  terhadap bakteri  MRSA.  Hal ini  disebabkan  oleh  perbedaan  kadar  dan kandungan  senyawa  aktif  pada  ketiga tanaman  serta  perbedaan  metode  dan prosedur  uji  aktivitas  antibakteri  yang dilakukan. 22,23
Pada  studi  ini,  uji  aktivitas  antibakteri dilakukan  dengan  metode  difusi  sumuran. Metode  ini  hanya  mengukur  besar  diameter zona hambat pertumbuhan bakteri pada nilai konsentrasi  ekstrak  yang  berbeda. Kekurangan  metode  ini  yaitu  tidak  dapat
mengukur Kadar Hambat Minimal (KHM) dan Kadar  Bunuh  Minimal  (KBM). 14 Oleh  karena itu,  perlu  dilakukan  studi  lanjutan  dengan metode dilusi tabung yang dapat menentukan KHM  dan  KBM  atau  metode in  vivo yang dapat  menentukan  dosis  efektif,  efek samping, serta dosis dan efek toksik ekstrak etanol  daun  selada  air. 14 Penelitian  ini diharapkan  dapat  menjadi  dasar  bagi penelitian  selanjutnya  mengenai  ekstrak etanol daun selada air sebelum dimanfaatkan secara  klinis  sebagai  salah  satu  terapi alternatif  penyakit  infeksi  yang  disebabkan oleh  MRSA  sehingga  dapat  mencegah kejadian  resistensi  terhadap  antibiotik  dan menurunkan  morbiditas  penyakit  infeksi akibat MRSA.
Pada  penelitian  ini,  penulis  tidak melakukan pengukuran kadar masing-masing senyawa aktif yang terkandung pada ekstrak etanol  daun  selada  air  yang  berperan sebagai antibakteri. Selain itu, hasil penelitian tidak  dibandingkan  dengan  antibiotik  lini pertama  pada  infeksi  MRSA  yaitu vankomisin. Peneliti juga tidak mengukur dan menganalisis  faktor-faktor  yang  dapat menurunkan  aktivitas  antibakteri  pada ekstrak seperti lama dan suhu penyimpanan ekstrak.  Oleh  karena  itu,  diperlukan  studi lanjutan  yang  dapat  membandingkan  hasil penelitian dengan antibiotik lini pertama pada pengobatan infeksi MRSA, mengetahui kadar kandungan  zat  aktif  pada  daun  selada  air, dan  mengetahui  pengaruh  suhu  dan  lama waktu  penyimpanan  ekstrak  terhadap diameter zona hambat.

## Kesimpulan
Kesimpulan penelitian ini adalah ekstrak etanol daun selada air ( Nasturtium officinale ) memiliki  aktivitas  antibakteri  yang  mampu menghambat  pertumbuhan  MRSA  secara in vitro dengan  metode  difusi  sumuran  pada konsentrasi  ekstrak  30%,  60%,  75%,  90% dan 100%.
Selain itu, semakin tinggi konsentrasi ekstrak etanol daun selada air  yang diberikan maka semakin  lebar  diameter  zona  hambat pertumbuhan bakteri MRSA.

## Daftar Pustaka
1.  Caroll  KC,  Morse  SA,  Mietzner  T,  dan Miller  S. Jawetz,  Melnick  &  Adelberg’s Medical  Microbiology .  27 th edition.  New
York: McGraw-Hill Education. 2016. 2.  Nismawati, Sjahril R, dan Agus R. Deteksi
Methicillin-Resistant  Staphylococcus aureus pada  Pasien  Rumah  Sakit Universitas  Hasanuddin  dengan  Metode
Kultur. Prosiding Seminar Nasional Mega- biodiversitas Indonesia. 2018; 3(7):15-21.
3.  Chen CJ & Huang YC. New Epidemiology of Staphyloccus  aureus infection  in  Asia. Clinical  Microbiology  and  Infection .  2014;
(20)7:605-623.
4.  Erikawati  D,  Santosaningsih  D,  dan Santoso  S.  Tingginya  Prevalensi  MRSA pada  Isolat  Klinik  Periode  2010-2014  di RSUD  Dr.  Saiful  Anwar  Malang, Indonesia. Jurnal  Kedokteran  Brawijaya.
2016; 29(2):149-156.
5.  Katzung  BG,  Masters  SB,  dan  Trevor  AJ (Editor). Farmakologi Dasar & Klinik Edisi ke-12. New York: Mc Graw-Hill Education.
2012.
6.  Nursidika  P,  Saptarini  O,  Rafiqua  N. Aktivitas  Antimikroba  Fraksi  Ekstrak Etanol  Buah  Pinang  ( Areca  catechu L) pada  Bakteri Methicillin  Resistant
Staphylococcus  aureus .  Majalah
Kedokteran Bandung. 2014; 46(2):94-99.
7.  Salamah  E,  Purwaningsih  S,  dan Permatasari  E.  Aktivitas  Antioksidan  dan Komponen  Bioaktif  pada  Selada  Air ( Nasturtium  officinale L.  R.  Br). Jurnal
Pengolahan  Hasil  Perikanan  Indonesia. 2011; 15(2);85-91.
8.  Yuliawati  K,  Rismawati  E,  dan  Dasuki  U. Pengujian  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak Etanol Selada Air dan Pohpohan terhadap
Propionibacterium  acnes .  Prosiding
Seminar Nasional Nasional Penelitian dan
PKM Kesehatan. 2016;  6:244-233.
9.  Nadaraia NS. Amiranashvili LS, Merlain M,
Karkhabrishvili  ML,  Barbakadze  NN, Geronikaki  A,  Petrou  A , Poroikov V, Ciric A ,  Glamoclija  J,  Sokovic  M.  Novel Antimicrobial  Agents;  Discovery  Among the  Steroid  Derivatives. Steroids. 2019; 144:1-37.
10. Cushnie  T  &  Lamb  A.  Antimicrobial Activity  of  Flavonoids. International Journal of Antimicrobial Agents. 2005;  26 (5):343-356.
11. Akiyama  H,  Kazuyasu  F,  Yamasaki  O,
Oono  T,  dan  Iwatsuki  K.  Antibacterial Action  of  Several  Tannins  Against
Staphylococcus aureus . J of Antimicrobial Chemotherapy . 2001; 48(1):487-491. 12. Hossain MT, Asadujjaman, Imran N, Matin
A,  Chowdhury  R,  dan  Rashid  H.  A  Study on  the  Pharmacological  Effects  and Mechanism  of  Action  of  Alkaloids, Glycosides,  and  Saponins. The Pharmaceutical  and  Chemical  Journal. 2019; 6(2):112-122.
13. Rahman  DR,  Rimbawan,  Madanijah  S, Purwaningsih  S.  Potensi  Selada  Air
( Nasturtium  Officinale R.  Br)  Sebagai Antioksidan  dan  Agen  Antiproliferasi terhadap  Sel  MCF-7  secara In  Vitro . J. Gizi Pangan . 2017; 12(3):217-224. 14. CLSI. M100S  Perfomance  Standards  for Antimicrobial  Susceptibility  Testing  26 th edition .  Pennsylvania:  Clinical  and Laboratory Standards Institute. 2016.
Majalah Kesehatan                                                                                   Volume 8, Nomor 3, September 2021
15.  Nugroho  A. Buku  Ajar  Teknologi  Bahan Alam .  Banjarmasin:  Lambung  Mangkurat
University Press. 2017.
16.  Balouiri  M,  Sadiki  M,  &  Ibnsouda  SK.
Methods  for  In  Vitro  Evaluating Antimicrobial  Activity:  A  Review. Journal of  Pharmaceutical  Analysis. 2016;    6
(2):71-79.
17.  Davis WW & Stout TR. Disc Plate Method of  Microbiological  Antibiotic  Assay. Applied  and  Enviromental  Microbiology. 1971; 22(4):666-670.
18.  Sugiyono. Statistika  untuk  Penelitian . Bandung: Alfabeta. 2013.
19.  Derhami  SF,  Rad  MG,  Mahmoudi  R. Evaluation  of  Antibacterial  Effects  of Aqueous  and  Alcoholic  Extracts  of Nasturtium  officinale on  Some
Pathogenic. Medical  Laboratory  Journal. 2016; 10(6):49-53. 20.  Harmita dan Radji M . Kepekaan terhadap
Antibiotik. Dalam:  Buku  Ajar  Analisis Hayati. Edisi ke-3. Jakarta: EGC. 2008.
21.  Freitas  E,  Aires  A,  Rosa  EA,  Saavedra MJ.  Antibacterial  Activity  and  Synergistic Effect  between  Watercress  Extracts,  2- Phenylethyl  Isothiocyanate  and  Antibiotic Against  11  Isolates  of Escherichia  coli from  Clinical  and  Animal  Source. Letters in Applied Microbiology. 2013; 57(4):266- 273.
22.  Chandra  RA,  Yunita  R,  Wahyuni  DD, Anggraini  DR.  Daya  Antibakteri  Ekstrak Buah  Belimbing  Wuluh  ( Averrhoa  bilimbi
Linn)  terhadap Methicillin-resistant
Staphylococcus  aureus . Essence  of
Scientific Medical Journal. 2018;  16(1):43
-47
23.  Azizah  A,  Suswati  I,  Agustin  SM.  Efek Antimikroba  Ekstrak  Bunga  Cengkeh ( Syzygium  aromaticum )  terhadap Methicillin-resistant  Staphylococcus aureus (MRSA)  Secara In  Vitro . Saintika Medika:  Jurnal  Ilmu  Kesehatan  dan Kedokteran Keluarga . 2017; 13(1):31-35.