## UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI KOMBINASI EKSTRAK
ETANOL DAUN BELIMBING WULUH ( Averrhoa blimbi Linn . )
DAN EKSTRAK ETANOL DAUN BLIMBING MANIS
( Averrhoacarambola Linn.) TERHADAP DAYA HAMBAT
Staphylococcus aureus
Wulan Agustin Ningrum 1 , Miftahurohmah Ramadanti 2 , Ainun Muthoharoh 3
Program Studi Sarjana Farmasi Fakultas Ilmu Kesehatan, Universitas Muhammadiyah Pekajangan Pekalongan Email: wulanagustin@umpp.ac.id

## ABSTRAK
Pencernaan  dalam  tubuh  yang  bertugas  memproses  suatu  makanan  maupun  minuman yang  masuk ke dalam tubuh untuk kemudian diolah  menjadi sebuah  energy dibantu oleh bakteri  baik. Staphylococcus  aureus merupakan  salah  satu  flora  normal  dalam  tubuh manusia  bila  dalam  jumlah  yang  berlebih  dapat  mengakibatkan  patogen  terhadap inangnya sehingga dapat membahayakan manusia. Salah satu penyebab bakteri pathogen adalah  inflamasi  lapisan  mukosa  dari  struktur  pada  mulut  seperti  pipi,  gusi,  lidah,  bibir dan atap atau dasar mulut atau dengan nama lain stomatitis . Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui  aktivitas  antibakteri  kombinasi  ekstrak  etanol  daun  belimbing  wuluh ( Averrhoa blimbi Linn . )dan daun belimbing  manis ( Averrhoa carambola Linn.) terhadap pertumbuhan Staphylococcus  aureus .  Metode  penelitian  yang  dilakukan  dengan caraekstraksi  menggunakan  etanol  96%  secara  maserasi.  Skrining  fitokimia  dilakukan dengan  menggunakan  metode  uji  tabung.  Uji  aktivitas  antibakteri  menggunakan  metode difusi  sumuran  dengan  konsentrasi  60%,  75%  dan  90%.  Kontrol  positif  yang  digunakan adalah  disk  ampicilin  10  μg  dan  kontrol  negatif  menggunakan  DMSO.  Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  kombinasi  ekstrak  etanol  daun  belimbing  wuluh  ( Averrhoa  blimbi Linn . )dan  daun  belimbing  manis  ( Averrhoa  carambola Linn.)  dengan  perbandingan  1:3, 2:2  dan  3:1  memiliki  kandungan  fenol,  saponin,  tanin  dan  flavonoid  yang  dapat menghambat  pertumbuhan Staphylococcus  aureus .  Perlu  dilakukan  pengembangan penelitian selanjutnya terhadap aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun belimbing wuluh.
Kata Kunci : Kombinasi  Ekstrak  Daun  Belimbing  Wuluh  Daun  Belimbing  Manis, Staphylococcus aureus , antibakteri.

## ABSTRACT
Digestion in the body in charge of processing food or drink that enters the body and then processed  into  energy  assisted  by  good  bacteria.  Staphylococcus  aureus  is  one  of  the normal flora in the human body if excessive amounts can cause pathogens to its host so that  it  can  be  endanger  for  humans.  One  of  the  causes  of  pathogenic  bacteria  is inflammation  of  the  mucosal  lining  of  structures  in  the  mouth  such  as  cheeks,  gums, tongue, lips, and roof or the floor of the mouth or by other names stomatitis. To find out the  antibacterial  activity of  a  combination  of  ethanol extract  of  Averrhoabilimbi Leaves (Averrhoablimbi  Linn.)  And  starfruit  leaf  (Averrhoacarambola  Linn.)  On  the  growth  of Staphylococcus aureus bacteria.Method of  Research is Extraction using 96% ethanol by maceration.  Phytochemical  screening  is  carried  out  using  a  test  tube  method. Antibacterial  activity  test  uses  diffusion  sumuran  method  with  concentrations  of  60%, 75%,  and  90%.  The  positive  control  that  used  was  a  10  µg  ampicillin  disk  and  the negative control used DMSO. The results of this research showed that the combination of
http://cjp.jurnal.stikescendekiautamakudus.ac.id
ethanol  extract  of  Averrhoabilimbi  Leaf  (Averrhoablimbi  Linn.)  And    starfruit  leaf (Averrhoacarambola  Linn.)  With  a  ratio  of  1:  3,  2:  2  and  3:  1  had  phenols,  saponins, tannins and flavonoids that can inhibit the growth of Staphylococcus aureus bacteria.It is necessary  to  develop  further  research  on  the  antibacterial  activity  of  ethanol  extract  of Averrhoabilimbi Leaf.
Keywords :   Combination  of  Averrhoabilimbi  Leaf  Extracts  of  Starfruit  Leaf, Staphylococcus aureus, Antibacterial.

## LATAR BELAKANG
Pencernaan dalam tubuh yang bertugas memproses suatu makanan maupun minuman  yang  masuk  kedalam  tubuh  untuk  kemudian  diolah  menjadi  sebuah energy  dibantu  oleh  bakteri  baik. Staphylococcus  aureus merupakan  salahsatu flora  normal  dalam  tubuh  manusia  bila  dalam  jumlah  yang  berlebih  dapat mengakibatkan  patogen  terhadap  inangnya  sehingga  dapat  membahayakan manusia.  Salah  satu  bakteri  penyebab  stomatitis  yaitu Staphylococcus  aureus menurut  Megasari  (2012)  dalam  jurnal  Ratih  Pertiwi  (2016)  mengatakan  bahwa bakteri  tersebut  akan  berubah  menjadi  patogen  sehingga  dapat  menyebabkan bekteremia  dan  infeksi    sistemik  pada  rongga  mulut.  Infeksi  bakteri Staphylococcus  aureus dalam  kondisi  patologi  pada  saat  menginfeksi  selaput mukosa di dalam tubuh terlihat adanya keadaan khas seperti nekrosis, peradangan dan pembentukan abses.
Sariawan  menurut medis  yaitu  inflamasi  lapisan  mukosa dari  struktur pada mulut  seperti  pipi,  gusi  (gingivitis),  lidah  (glositis),  bibir,  dan  atap  atau  dasar mulut atau dengan nama  lain Stomatitis. Inflamasi  yang terjadi pada  mulut dapat disebabkan  oleh  kondisi  mulut  itu  sendiri  (seperti  susunan  gigi  yang  buruk), cedera  mulut  akibat  minuman  atau  makanan  yang  panas,  atau  oleh  bakteri  yang terdapat dalam mulut tersebut (Yogasedana, 2014).
Secara  umum  berbagai  infeksi  yang  disebabkan  oleh  bakteri  dapat  diobati dengan  menggunakan  antibiotik.  Tanaman  yang  memiliki  senyawa  aktif  yang dapat digunakan  sebagai antibiotik alami dipilih  karena  lebih aman  untuk tubuh dalam  penggunaan  jangka  panjang.  Tanaman  yang  mengandung  metabolit sekunder    pada  semua  bagian  tanaman  terutama  bagian  daun  belimbing  wuluh ( Averrhoa  blimbii Linn.).    Berdasarkan  latar  belakang  tersebut  diatas  maka peneliti  ingin  melakukan  penelitian  yang  berjudul  uji  aktivitas  antibakteri kombinasi  Ekstrak  Etanol  Daun  Belimbing  Wuluh  ( AverrhoaBlimbi Linn . )  Dan Ekstrak Etanol Daun Blimbing Manis ( AverrhoaCarambola Linn.)Terhadap Daya Hambat Staphylococcus  Aureus yang  bertujuan  untuk  melihat  besarnya  daya hambat dari kombinasi kedua ekstrak terhadap Staphylococcus Aureus.

## BAHAN DAN METODE PENELITIAN Bahan
Daun  belimbing  wuluh  ( Averrhoa  blimbi Linn.),  daun  Belimbing  Manis ( Averrhoa  carambola Linn.),  pelarut  etanol  96%,  media Mueller  Hinton  Agar (MHA),  aquadest  steril, dimethyl  sulfoxide (DMSO),  biakan  bakteri Staphylococcus  aureus ,  disk  ampisilin,  FeCl 3 ,  serbuk  magnesium,  HCl  pekat, NaCl fisiologis, spirtus dan kapas steril.

## Alat
Tabung reaksi, mikro pipet, beker glass, vortex, bunsen, cawan petri, tabung reaksi,  rak  tabung,  timbangan,  penggaris,  spatula,  autoclave,  inkubator,  label, pinset,  bleder,  kain  flanel,  gelas  ukur,  oven,  vacum, rotary  evaporator dan penangas air.
Jalannya Penelitian Pembuatan Simplisia Daun  belimbing  wuluh  ( Averrhoa  blimbi Linn.)  daun  belimbing  manis ( Averrhoa  carambola Linn.)yang  telah  diperoleh  kemudian  dicuci  dan dikeringkan  didalam  oven  dengan  suhu  60 o C  kemudian  dihaluskan  sehingga
didapatkan serbuk daun belimbing wuluh ( Averrhoa blimbi Linn.) dengan derajat kehalusan  40 mesh yang kemudian dilanjutkan dengan proses maserasi. Pembuatan Ekstrak
Daun  belimbing  wuluh  ( Averrhoa  blimbi Linn.)  daun  belimbing  manis ( Averrhoa  carambola Linn.)ditimbangmasing-masingseberat  750  g  yang kemudian  dimaserasi  menggunakan  etanol  96%  selama  24  jam  dan  diulangi proses maserasi menggunakan etanol 96% sampai tersari sempurna.
Penyiapan Bakteri Uji
Peremajaan Bakteri Uji
Proses  peremajaan  bakteri Staphylococcus  aureus menggunakan  media  agar  yang sedang  mencair  pada  temperatur  45-50 o C  dengan  suspensi  mikroba  yang  dituangkan  ke dalam cawan petri steril (Rahmadani, 2015).
Pembuatan Suspensi Bakteri Uji
Bakteri  diambil  dengan  menggunakkan  ose  dan  disuspensikan  dalam  tabung suspensi  bakteri Staphylococcus  aureus dengan  cara  melarutkan  beberapa  ose  bakteri dalam 10  ml  larutan  NaCl  fisiologis  0,9%  hingga kekeruhannya  sesuai  dengan standar 0,5 Mc Farland dimana setara dengan 1,5 x 10 8 CFU/ml (Rahmadani, 2015).

## Uji Aktivitas Antibakteri
Kombinasi  ekstrak  etanol  96%  daun  belimbing  wuluh  ( Averrhora  blimbi Linn.)  dan  daun  belimbing  manis  ( Averrhoa  carambola Linn.)  yang  sudah  disiapkan masing-masing ditimbang dengan perbandingan ekstrak daun belimbing wuluh dan daun belimbing manis 1:3, 2:2 dan 3:1 ekstrak yang diambil sebanyak 3gr : 9gr , 7,5gr : 7,5gr dan  9gr  :  3gr  kemudian  dilarutkan  dengan  10  ml  DMSO.  Kontrol  negatif menggunakan  DMSO  dan  kontrol  positif  yaitu  menggunakan  diskampicilin. Suspensi  bakteri  yang  telah  dibuat  diambil  sebanyak  50 μL  kemudian  diratakan menggunakan cotton  bud diamkan  hingga  kering.  Ekstrak  kombinasi  daun belimbing  wuluh  dan  daun  belimbing  manis  diambil  menggunakan  mikro  pipet sebanyak 50 μL, disk blank berisi DMSO 100%  sebagai kontrol negatif dan disk ampicilin  sebagai  kontrol  positif.  Kemudian  dimasukkan  kedalam  sumuran  yang telah dibuat pada media Mueller Hinton Agar . Diamkan selama 1-5 menit. Media Mueller  Hinton  Agar yang  telah  mengalami  perlakuan  tersebut  kemudian diinkubasi  selama 18-24 jam pada suhu 37 o C tanpa dibalik. Kemudian dilakukan pengamatan  dan  pengukuran  diameter  zona  hambat  yang  terbentuk  disekitar lubang sumuran.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil pengujian antibakteri kombinasi ekstrak etanol daun belimbing wuluh dan  ekstrak  etanol  daun  belimbing  manis  dibuat  perbandingan  1:3,  2:2  dan  3:1 dengan  menggunakan  metode  sumuran.  Kontrol  positif  yang  digunakan  adalah disk  ampisilin  10  μg.  Ampisilin  merupakan  antibiotik  spektrum  luas,  dimana antibiotik  ini  bekerja  menghambat  bakteri  gram  positif  dan  gram  negatif (Farkhanah,  2018).  Bakteri  yang  digunakan  merupakan  bakteri  biakan  murni Staphylococcus aureus yang didapatkan dari Laboratorium Mikrobiologi FKUI Jakarta.
Zona hambat yang terbentuk merupakan suatu tolak ukur kekuatan suatu senyawa antimikroba  yang  dapat  menghambat  atau  membunuh  bakteri.  Setelah  media diinkubasi selama 24 jam dengan suhu 37 o C kemudian akan terlihat bakteri yang terhambat  atau  terbunuh  kemudian  menghasilkan  zona  bening  disekitar  ekstrak yang  telah  ditanam  dalam  sumuran.  Lingkaran  bakteri  yang  dihasilkan  menunjukkan
aktivitas  bakterisidal. Suhu 37 o C digunakan karenamenyesuaikan  suhu tubuh  manusia. Sehingga bakteri akan berkembang dengan baik.
Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3
Gambar 1. Hasil Uji Antibakteri kombinasi Ekstrak Daun Belimbing Wuluh ( Averrhoa blimbii Linn.) dan Daun Belimbing Manis ( Averrhoa carambola Linn.)
Tabel 1.  Hasil uji perbandingan aktivitas antibakteri ekstrak daun belimbing wuluh
( Averrhoa blimbii Linn.) Perbandingan Diameter Zona Hambat (mm) 1:3 10,13 2:2 25,00 3:1 29,33 Kontrol (-) 0 Kontrol (+) 37,56 Keterangan : Kontrol (-) : DMSO, Kontrol (+) : Disk ampicilin
Berdasarkan hasil penelitiandapat diketahui bahwa kombinasi ekstrak etanol daun  belimbing  wuluh  ( Averrhoa  blimbii Linn.)  dan  daun  belimbing  manis ( Averrhoa carambola Linn.) memiliki aktivitas  antibakteri yang ditandai dengan adanya  zona  bening  di  sekitar  ekstrak.  Dari  hasil  yang  tertera  bahwa  kombinasi ekstrak  etanol  daun  belimbing  wuluh  dan  daun  belimbing  manis  menunjukkan adanya  zona  bening  pada  3  kali  replikasi  dengan  perbandingan  konsentrasi  1:3 menghasilkan  rata-rata  diameter  110,13  mm,  perbandingan  2:2  diperoleh  zona hambatan sebesar 25,00 mm dan pada konsentrasi 3:1 diperoleh diameter sebesar 29,33  mm.  Ketiga  konsentrasi  tersebut  masuk  dalam  kategori  daya  hambat sedang.  Kontrol positif menunjukan adanya zona bening yang begitu luas dengan rata-rata diameter zona hambat sebesar 37,55 mm  yang termasuk dalam kategori zona  hambat  yang  sangat  kuat.  Sedangkan  pada  kontrol  negatif    tidak  terlihat adanya  zona  bening  disekitar  disk  yang  berarti  bahwa  DMSO  tidak  memiliki pengaruh terhadap bakteri Staphylococcus aureus .
Besar kecilnya suatu zona hambat menunjukan bahwa sampel ekstrak etanol daun  belimbing  wuluh  ( Averrhoa  blimbii Linn.)  mengandung  senyawa-senyawa yang bersifat antibakteri.

## SIMPULAN DAN SARAN SIMPULAN
Kombinasi  Ekstrak  etanol  daun  belimbing  wuluh  ( Averrhoa  blimbii Linn.) dan  daun  belimbing  manis  ( Averrhoa  carambola Linn.)  dapat  menghambat pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus penyebab  sariawan  dengan menggunakan  perbandingan  konsentrasi  ekstrak  sebesar  1:3,  2:2  dan  3:1 menghasilkan zona hambatan sebesar 10,13 mm, 25,00 mm dan 29,33 mm.

## SARAN
Perlu  dilakukannya  pembuatan  formulasi  kombinasi  ekstrak  etanol  daun belimbing  wuluh  ( Averrhoa  bilimbi Linn.)  dan  ekstrak  etanol  daun  belimbing manis ( Averrhoa carambola Linn.) terhadap bakteri Staphylococcus aureus .

## DAFTAR PUSTAKA
Pertiwi,  Ratih  Dyah.  2016.  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Formulasi  Gel  Untuk Sariawan  Dari  Ekstrak  Daun  Saga  ( Abrus  precatorius Linn.)  Terhadap Bakteri Staphylococcus  aureus.Jurnal  Ilmiah  Manuntung, Vol  2  (2):  239- 247.
Rahmadani,  F.  2015  Uji  Aktivitas  Dari  Ekstrak  Etanol  96%  Kulit  Batang  Kayu Jawa  ( Lannea  coromandelica )  Terhadap  Bakteri Staphylococcus  aureus, Eshcerichia  coli,  Helicobacter  pylori,  Pseudomonas  aerugynosa. Skripsi. Jakarta.
Ummah,  MK.  2010.  Ekstraksi  dan  Pengujian  Aktivitas  Antibakteri  Senyawa Tanin  pada  Daun  Belimbing  Wuluh  (Averrhoa  bilimbi  L.)  (Kajian  Variasi Pelarut). Skripsi . Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim. Malang Yogasedana,  I  Made  A.,  Ni  Wayan  Mriati.,  Michael  A.Leman.  2015.  Angka Kejadian  Stomatitis  Apthosa  Rekumen  (SAR)  Ditinjau  Dari  Faktor  Etiologi  Di RSGMP FK UNSRAT Tahun 2014. Jurnal Gigi . Vol. 3 (2): 278-284 Yonanda,  Rizky  Cici.  Wahyuni,  Dwi.  Murdiyah,  Siti.  2016.  Pengaruh  Ekstrak Etanol  Daun  Belimbing  wuluh  ( Averrhoa blimbi  Linn.)  Terhadap  Daya Hambat Staphylococcus  epideridis . Prosiding  Seminar  Nasional  Biologi  II . Jember: Universitas Jember