## Komunitas Makrozoobentos pada Kondisi Mangrove Berbeda: Hubungannya dengan Karakteristik Kimia-Fisika Sedimen
Macrozoobenthic Community in Different Mangrove Condition: Relation with Chemical-Physical Sediment Characteristics
Muhammad Isman, Supriadi Mashoreng  , Shinta Werorilangi, Rantih Isyrini, Rastina, Ahmad Faizal, Akbar Tahir, dan Andi Iqbal Burhanuddin
1 Departemen Ilmu Kelautan, Fakultas Ilmu Kelautan dan Perikanan, Universitas Hasanuddin, Jln. Perintis Kemerdekaan Km 10, Makassar, 90245
 corresponding author: smashoreng@unhas.ac.id

## Abstrak
Keberadaan  mangrove  di  pesisir  berperan  secara  ekologis  maupun  secara  fisik.  Mangrove  merupakan ekosistem yang mempunyai produktifitas tinggi. Serasah dari daun dan ranting yang jatuh menjadi salah satu sumber  bahan  organik  untuk  kehidupan  makrozoobentos.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengatahui  respon makrozoobentos  terhadap  kandungan  bahan  organik  total  dan  karakteristik  kimia-fisika  sedimen  lainnya, sebagai akibat perbedaan kondisi mangrove. Penelitian dilaksanakan pada bulan Mei sampai September 2016, di Kelurahan Ampalas, Kecamatan Mamuju Kabupaten Mamuju Sulawesi Barat.  Sampling makrozoobentos dilakukan dengan mengambil sedimen menggunakan skop kecil pada luas area 20 cm x 20 cm. Sedimen yang berisi  makrozoobentos  disaring  menggunakan  ayakan  dengan  mesh  size  1  mm.  Sampling  dilakukan  pada  4 stasiun  dengan  kondisi  kerapatan  mangrove  berbeda,  yaitu  tanpa  mangrove,  kerapatan  jarang,  sedang,  dan tinggi.  Sampling  bahan  organik  total  sedimen  dengan  mengambil  sedimen  menggunakan  core  pipa  paralon berdiamater 2 inci. Analisis bahan organik dilakukan menggunakan metode pembakaran dengan suhu tinggi (loss by ignition). Selain bahan organik total, parameter lingkungan yang lain juga diamati meliputi potensi redoks (Eh), keasaman tanah (pH), salinitas, suhu dan oksigen terlarut. Hasil penelitian menunjukkan bahwa kelompok  gastropoda  mendominasi  makrozoobentos.  Kelompok  gastropoda  dan  cacing  oligochaeta  lebih menyukai bahan organik yang tinggi dan substrat halus yang ditemukan pada kerapatan mangrove yang tinggi.
Kata kunci: mangrove, makrozoobentos, bahan organik, Kabupaten Mamuju

## Abstract
The existence of mangrove in coast areas have both ecologic and physical important functions.  Mangrove is a high productive ecosystem. Litters from fallen leaves and twigs are organic sources for macrozoobenthic life. The aim of this research was to determine the response of macrozoobenthics on total organic matter content and other chemical-physico characters of sediments due to differences in mangrove conditions. This research was conducted from May to September 2016 in Sub-district of Ampallas, Distric of Mamuju, Province of West Sulawesi,  Indonesia.  Sediments  in  20  cm2  transects  were  collected  using  small  shovel  to  obtain  the macrozoobenthic samples. The sediments contained macrozoobenthics were sieved using a 1 mm mesh size sieve net. Four sampling sites were chosen, each to represent areas with no mangroves, low, medium, and high densities.  The total of organic matter samples were collected using 2 inch diameter of PVC pipe cores, which were analyzed further using Loss by Ignition method.  Besides total of organic matter, several parameters (i.e. redox potential, sediment pH, salinity, temperature, and dissolved oxygen) were measured.  The results showed that gastropods dominated the existed macrozoobenthics.  Gastropods and oligochaete lived in greater amounts in high mangrove density site with higher organic matter content and fine substrate.
Keywords: mangroves, macrozoobenthics, organic matter, Distric of Mamuju

## Pendahuluan
Mangrove merupakan salah satu ekosistem di wilayah pesisir yang mempunyai peran cukup penting, baik sebagai pelindung pantai dari aksi gelombang dan arus, maupun sebagai tempat  berbagai  organisme  laut  dan  darat  untuk  berkembang  biak,  mencari  makan,
Volume 1 (2) June 2018: 40-47
memelihara anak dan sebagainya. Dalam konteks sebagai tempat tinggal berbagai organisme laut, struktur perakaran mangrove yang khas, dan tingginya bahan organik menjadi faktor yang banyak memberikan kontribusi terhadap kepadatan organisme. Bahan organik  dapat berasal dari luar, misalnya run off dari daratan yang terperangkap di ekosistem mangrove. Selain itu, bahan organik juga bisa berasal dari dalam ekosistem mangrove, misalnya dari hasil  dekomposisi  serasah-serasah  yang  jatuh  dari  pohon  mangrove.  Laju  dekomposisi serasah di kawasan mangrove cukup tinggi (Dharmawan et al. 2016), sehingga menjadi salah satu  daerah  yang  sangat  penting  bagi  organisme,  terutama  yang  bersifat  deposit  feeder seperti berbagai jenis makrozoobentos. Menurut Nordhaus et al . (2012), hewan bentos erat kaitannya  dengan  tersedianya  bahan  organik  yang  terkandung  dalam  substrat  karena merupakan sumber makanan utama.
Banyaknya  serasah  diduga  terkait  erat  dengan  kerapatan  dan  komposisi  jenis mangrove ada suatu daaerah. Kerapatan yang tinggi kemungkinan besar mempunyai jumlah serasah yang tinggi pula. Sementara komposisi jenis terkait dengan jenis mangrove dominan dengan  ukuran  secara  morfologi  yang  kemungkinan  berbeda  dengan  jenis  yang  lain, sehingga  potensi  serasah  juga  bisa  berbeda.  Dengan  demikian,  secara  tidak  langsung kerapatan  dan  komposisi  jenis  mangrove  mempengaruhi  kandungan  bahan  organik  pada sedimen. Selanjutnya, ketersediaan bahan organik total dapat memberikan variasi yang besar terhadap  kepadatan  organisme  yang  ada  (Amin et  al., 2012),  karena  bahan  organik merupakan sumber makanan utama hewan bentos (Nordhaus et al ., 2012).
Beberapa  penelitian  telah  dilakukan  mengenai  keterkaitan  antara  organisme  bentik dengan  parameter-parameter  substrat  atau  mangrove  antara  lain  Somerfield et  al .  (2018) yang melihat kerekaitan antara ukuran sedimen dengan bentos; Qiu et al . (2014) mengamati pengaruh  mangrove  terhadap  keanekaragaman  makrozoobentos  pada  kondisi  perairan tercemar;  Leung  &  Cheung  (2017)  mengamati  perubahan  diversitas  fungsional makrozoobentos akibat penanaman mangrove.
Salah  satu  lokasi  yang  mempunyai  distribusi  mangrove  di  Sulawesi  Barat  adalah Kabupaten Mamuju. Sebaran mangrove yang bervariasi, baik dari segi kerapatan dan jenis mangrove  maupun  variasi  karakteristik  sedimen  di  Kabupaten  Mamuju,  khususnya  di Kelurahan Ampallas Kecamatan Mamuju sangat potensial untuk melihat keterkaitan antara makrozoobentos dengan faktor fisika kimia sedimen.

## Bahan dan Metode
Penelitian  dilaksanakan  pada  bulan  Mei-September  2016  di  area  pengembangan ekowisata  mangrove  Kelurahan  Ampallas  Kabupaten  Mamuju  Propinsi  Sulawesi  Barat (Gambar  1).  Penentuan  stasiun  didasarkan  pada  kondisi  mangrove  berdasarkan kerapatannya, masing-masing kategori jarang (Stasiun 1), sedang (Stasiun 2), padat (Stasiun
4) dan satu  stasiun  kontrol  yang tidak memiliki vegetasi mangrove (Stasiun 4) (Tabel  1). Kategori kondisi mangrove didasarkan pada Kepmen Lingkungan Hidup nomor 201 tahun 2004. Penentuan kerapatan mengrove dilakukan berdasakan Dharmawan dan Pamuji (2014).
Gambar 1. Lokasi pengamatan makrozoobentos di Kelurahan Ampallas Kabupaten Mamuju Sulawesi Barat. Titik-titik kuning merupakan lokasi penempatan plot 10 m x 10 m
Tabel 1. Karakteristik mangrove stasiun penelitian Stasiun Kerapatan (pohon/ha) Jenis Komposisi (%) 1 583 ± 133 Rhizpohora apiculata Avicennia alba Sonneratia alba 51,7 8,6 39,7 2 1100 ± 261 Rhizophora mucronata Sonneratia alba 88,2 11,8 3 1750 ± 207 Rhizophora mucronata Avicennia marina Bruguiera gymnorrhiza Sonneratia alba 80,7 1,1 1,1 17,0 4 tm* -
Keterangan: * tanpa mangrove (kontrol)
Sampling  makrozoobentos  dilakukan  pada  masing-masing  stasiun  dengan  6  kali ulangan.  Sampling  dilakukan  dengan  mengambil  sedimen  menggunakan  skop  pada  area seluas  20  cm  x  20  cm  dengan  kedalaman  20  cm.  Sampel  yang  telah  diambil  kemudian disaring menggunakan ayakan dengan mesh size 1 mm. Organisme makrozoobentos yang tersaring diambil dan dimasukkan ke dalam kantong sampel diberi pengawet alkohol ± 20 ml  dengan  konsentrasi  70%,  selanjutnya  dibawa  ke  laboratorium  untuk  diidentifikasi. Kelimpahan  makrozoobentos  dihitung  berdasarkan  formula  yang  diberikan  oleh  Odum (1993).
Pengambilan  sampel  sedimen  untuk  analisis  bahan  organik  total  (BOT)  dilakukan dengan menggunakan core yang terbuat dari pipa paralon berukuran diameter 2 inci dengan panjang  20  cm.  Sedimen  yang  telah  diambil  dimasukkan  ke  dalam  kantong  sampel  dan disimpan di cool box yang berisi es batu sebagai pendingin agar tidak terjadi penguraian oleh bakteri.  Sampel  dibawa  ke  laboratorium  untuk  analisis  BOT.  Analisis  BOT  dilakukan dengan menggunakan metode pembakaran dengan suhu tinggi ( loss on ignition , LOI) (Heiri et  al .,  2001).    Selain  BOT,  beberapa  parameter  fisika  kimia  lainnya  seperti  Eh  dan  pH sedimen dan porewater ; serta oksigen terlarut, suhu dan salinitas air dan porewater dirujuk pada penelitian yang dilakukan pada lokasi dan waktu yang sama oleh Isyrini et al. (2017). Penentuan ukuran butiran sedimen dilakukan dengan metode pengayakan kering ( dry sieving ).  Sekitar  100  gr  sedimen  diayak  selama  10  menit  dengan  menggunakan  sieve  net yang tersusun secara berurutan dengan ukuran ( mesh size ) 2 mm, 1 mm, 0,5 mm, 0,25 mm, 0,125  mm  dan  0,063  mm.  Sedimen  yang  tertahan  pada  setiap  ayakan  ditimbang  dan diklasifikasikan menurut ukuran butirannya.

## Analisis data
Hubungan antara kerapatan mangrove dan konsentrasi bahan organik total, serta antara konsentrasi  bahan organik total  dan kelimpahan  makrozoobentos  dianalisis menggunakan regresi polinomial. Preferensi makrozoobentos terhadap karakteristik kimia-fisika sedimen dianalisis menggunakan analisis komponen utama ( Principal Componenet Analysis , PCA). Karakteristik  kimia-fisika  sebagai  variabel  aktif,  sedangkan  kondisi  mangrove  dan kelimpahan makrozoobentos sebagai variabel suplemen.

## Hasil dan Pembahasan

## Komposisi jenis dan kelimpahan makrozoobentos
Jumlah jenis makrozoobentos yang ditemukan pada seluruh stasiun sebanyak 15 jenis, masing-masing  dari  kelas  gastropoda  sebanyak  8  jenis,  kelas  pelecypoda  3  jenis,  kelas krustase  3  jenis  dan  kelas  oligochaeta  1  jenis.  Berdasarkan  stasiun,  jumlah  terbanyak ditemukan pada Stasiun 3 dengan 11 jenis, dan terendah pada Stasiun sedang dengan 4 jenis (Tabel  2).    Masing-masing  stasiun  didominasi  oleh  jenis  makrozoobentos  yang  berbeda. Pada Stasiun 1 jenis didominasi oleh Tellina sp. dan Nerita sp.; Stasiun 2 didominasi oleh Tracycardium sp.  dan Cerithium  coralium ;  Stasiun  3  didominasi  oleh Nassarius sp.  dan Cerithium  coralium ;  sedangkan  Stasiun  4  didominasi  oleh Pagurus sp  dan Cerithium rosratum (Tabel  2).  Secara  umum  terlihat  bahwa  kelas  gastropoda  dan  pelecypoda  lebih dominan dibanding tiga kelas lainnya.

## Tabel 2. Komposisi jenis makrozoobentos
Jenis Stasiun / Komposisi Jenis (%) 1 2 3 4 Gastropoda: Nassarius sp. 10,7 23,3 33,1 2,1 Ceritium rostratum 7,1 20,0 19,0 23,4 Ceritium coralium - 26,7 30,6 4,3 Canarium sp. - - 1,7 12,8 Littoraria lutea - - 1,7 4,3 Nerita sp. 17,9 - 0,8 - Polineces sp. - - 1,7 - Oliva sp. 7,1 - - - Pelecypoda : Trachyacardium sp. 3,6 30,0 1,7 14,9 Tortania - - - - Tellina 39,3 - - - Krustase: Pagurus sp. 10,7 - 1,7 27,7 Krustase-1( unidentified ) 3,6 - - 10,6 Krustese-2 ( unidentified ) - - 0,8 - Oligochaeta Unididentified - - 0,8 -
Selain  mempunyai  jumlah  jenis  terbanyak,  Stasiun  3  juga  mempunyai  kelimpahan makrozoobentos  tertinggi  yaitu  504  individu/m 2 .   Kelimpahan  pada  stasiun  ini  jauh  lebih tinggi dibanding 3 stasiun lainnya. Diduga salah satu penyebab kelimpahan makrozoobentos yang tinggi pada Stasiun 3 berkaitan dengan kandungan bahan organik total pada sedimen. Bahan organik ini merupakan salah satu bahan makanan untuk makrozoobentos (Nordhaus et  al. 2012).  Dugaan  ini  diperkuat  oleh  kenyataan  bahwa  pada  pada  stasiun  lainnya  yang mempunyai kandungan bahan organik sedimen yang kecil, kelimpahan makrozoobentosnya juga rendah.
Rata-rata kandungan bahan organik  total  pada Stasiun  1 dan Stasiun 2 relatif sama, masing-masing  3,23%  dan  3,06%,  lebih  tinggi  dibanding  Stasiun  4  yang  hanya  sebesar 1,41%, namun lebih rendah dibanding Stasiun 3 sebesar 12,97% (Tabel 3). Rendahnya bahan organik  pada  Stasiun  4  disebabkan  karena  stasiun  ini  tidak  ditumbuhi  oleh  vegetasi mangrove, sebaliknya tingginya bahan organik pada Stasiun 3 karena mempunyai kerapatan mangrove  yang  tinggi.  Mangrove  merupakan  sumber  bahan  organik  karena  luruhan  daun dan dan rantingnya menjadi  penyumbang bahan  organik  terbesar di  ekosistem mangrove. Struktur akar mangrove yang khas juga turut membantu memerangkap bahan organik pada
sedimen  sehingga  tidak  mudah  untuk  keluar  dari  ekosistem  mangrove.  Namun  demikian, kandungan bahan organik pada Stasiun 1 dan Stasiun 2 yang relatif sama, walaupun keratan mangrovenya  berbeda,  menunjukkan  bahwa  kontribusi  kerapatan  mangrove  terhadap peningkatan  bahan  organik  juga  bisa  disebabkan  oleh  komposisi  jenis  mangrove  yang berbeda. Hal ini bisa terjadi karena beberapa jenis mangrove mempunyai kanopi yang lebih tebal dibanding mangrove lainnya.

## Tabel 3. Kandungan bahan organik total pada sedimen
Stasiun Bahan Organik Total (%) Jumlah Data (n) Kisaran Rata-rata 1 2 3 4 0,46-7,58 1,85-5,76 4,13-21,66 0,57-2,58 3,23 3,06 12,97
1,41
6 6 6 6
Walaupun keberadaan bahan organik sebagai sumber makanan bagi makrozoobentos sangat penting, namun bukan menjadi faktor satu-satunya yang mempengaruhi keberadaan makrozoobentos.  Kontribusi bahan organik  terhadap kelimpahan makrozoobentos  sebesar 44,62% (r 2 = 0,4462) (Gambar 2). Hal ini menunjukkan bahwa terdapat faktor lain yang juga berkontribusi  terhadap  variasi  kelimpahan  makrozoobentos.  Faktor-faktor  tersebut  diduga berkaitan dengan karakteristik kimia-fisika sedimen lainnya
y = 2.943x 2 - 24.705x + 214.66 R² = 0.4462 0 200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 K ep ada ta n Be nt os (i nd/ m 2 ) Kandungan Bahan Organik Total (%)

## Gambar 2. Hubungan antara kandungan bahan organik total pada sedimen dengan kelimpahan makrozoobentos

## Preferensi makrozoobentos terhadap karakteristik kimia-fisika sedimen
Analisis PCA menunjukkan adanya 2 kelompok yang terbentuk pada 3 sumbu utama. Kelompok  pertama  mengindikasikan  bahwa  makrozoobentos  dari  kelas  oligochaeta  dan gastropoda mempunyai preferensi habitat yang bersubstrat halus, kandungan bahan organik yang tinggi pada sedimen dan salinitas perairan yang relatif lebih tinggi. Habitat seperti ini ditemukan pada kondisi mangrove yang padat. Mangrove yang padat berpotensi mempunyai
serasah  yang  tinggi  dari  guguran  daun  dan  ranting.  Serasah  tersebut  kemudian terdekomposisi dan berkontribusi pada peningkatan bahan organik pada sedimen. Menurut Sanusi et  al .  (2005),  sedimen  berlumpur  lebih  mampu  mengikat  bahan  organik  dengan teksturnya yang padat dan cenderung halus. Penelitian yang dilakukan oleh Tomassetti et al . (2016)  menunjukkan  adanya  pengaruh  bahan  organik  yang  berasal  dari  budidaya  ikan terhadap peningkatan kelimpahan makrozoobentos.
Kelompok  kedua  mengindikasikan  bahwa  makrozoobentos  dari  kelas  krustasea mempunyai  preferensi  habitat  yang  bersubstrat  kasar,  pH  dan  salinitas  porewater  yang tinggi. Kondisi habitat ini ditemukan pada mangrove yang mempunyai kerapatan sedang dan stasiun yang tidak bervegetasi.
Jarang  1 Jarang  2 Jarang  3 Jarang  4 Jarang  5 Jarang  6 Sedang  1 Sedang  2 Sedang  3 Sedang  4 Sedang  5 Sedang  6 Padat  1 Padat  2 Padat  3 Padat  4 Padat  5 Padat  6 Kontrol 1 Kontrol 2 Kontrol 3 Kontrol 4 Kontrol 5 Kontrol 6 Eh  (s) Ph (s) Salinitas  (a) Suhu (a) DO (pw) Ph (pw) Salinitas  (pw) Suhu (pw) BOT Gastropoda Bivalvia Oligochaeta kerikil pasir  sangat  kasar pasir  kasar pasir  sedang pasir  halus pasir  sangat  halus lanau Crustacea -8 -6 -4 -2 0 2 4 6 8 -10 -8 -6 -4 -2 0 2 4 6 8 10 12 F2 (1 6. 23 % ) F1 (30.16 %) Biplot (axes F1 and F2: 46.38 %) Active Active variables Supplementary variables a Jarang  1 Jarang  2 Jarang  3 Jarang  4 Jarang  5 Jarang  6 Sedang  1 Sedang  2 Sedang  3 Sedang  4 Sedang  5 Sedang  6 Padat  1 Padat  3 Padat  5 Kontrol 1 Kontrol 2 Kontrol 3 Kontrol 4 Kontrol 5 Kontrol 6 Eh  (s) Ph (s) Salinitas  (a) Suhu (a) DO (pw) Ph (pw) Salinitas  (pw) Suhu (pw) Bivalvia Polychaeta Crustacea kerikil pasir  sangat  kasar pasir  kasar pasir  sedang pasir  halus pasir  sangat  halus lanau Gastropoda Bivalvia Oligochaeta -8 -6 -4 -2 0 2 4 6 8 -10 -8 -6 -4 -2 0 2 4 6 8 10 12 F3 (1 3. 51 % ) F1 (30.16 %) Biplot (axes F1 and F3: 43.67 %) Active Active variables Supplementary variables b
Gambar 3. Hasil analisis komponen utama. a. sumbu 1 dan sumbu 2, b. sumbu 1 dan sumbu 3

## Simpulan
Makrozoobentos  mempunyai  kelimpahan  yang  tinggi  pada  kondisi  mangrove  yang padat.  Kepadatan  mangrove  yang  tinggi  menyebabkan  bahan  organik  pada  sedimen  yang tinggi. Bahan organik yang tinggi pada kondisi mangrove padat ditunjang pula oleh substrat yang  halus  sebagai  penyimpan  bahan  organik  yang  baik.  Selain  mempunyai  kelimpahan yang tinggi, keanekaragaman makrozoobentos pada mangrove yang padat juga lebih tinggi dibanding pada kondisi mangrove jarang atau tanpa vegetasi.

## Daftar Pustaka
Dharmawan IWE, Pramudji. 2014. Panduan Monitoring Status Ekosistem Mangrove. Coral Reef Rehabilitation and Management Program CTI. Jakarta.
Dharmawan  IWE,  Zamani  NP,  Madduppa  HH.  2016.  Laju  dekomposisi  serasah  daun  di ekosistem  bakau  Pulau  Kelong  Kabupaten  Bintan. Oseanologi  dan  Limnologi Indonesia 1 (1): 1-10.
Heiri O, Lotter AF, Lemcke G. 2001. Loss on ignition as a method for estimating organic and carbonate content in sediment: reproducibility and comparability of result. Journal of Paleolimnology . 25: 101-110.
Isyrini R, Werorilangi S, Mashoreng S, Faizal A, Tahir A, Rachim R. 2017. Karakterisasi kondisi  kimia-fisika  lingkungan  pada  tingkatan  densitas  mangrove  yang  berbeda  di Ampallas, Kabupaten Mamuju, Sulawesi Barat. Spermonde. 2 (3): 43-49.
Leung JYS, Cheung NKM. 2017. The structure and organisation of integral marine benthic communities in relation to sieve mesh size. Marine Pollution Bulletin. 116 (1-2): 454- 461.
Amin B, Nurrachmi I, Marwan. 2012. Kandungan Bahan Organik Sedimen Dan Kelimpahan Makrozoobentos  Sebagai  Indikator  Pencemaran  Perairan  Pantai  Tanjung  Uban Kepulauan Riau. http://repository.unri.ac.id:80/handle/123456789/1466.
Nordhaus I, Salewski T, Jennerjahn TC. 2012. Food preferences of mangrove crabs related to leaf nitrogen compounds in the Sagara Anakan Lagoon, Java, Indonesia. J. Sea Res . 65: 414-426.
Odum EP. 1993. Dasar-dasar Ekologi. Gajah Mada University Press. Jogjakarta.
Qiu  GY,  Zhou  F,  Shi  X.  2014.  Effects  of  mangrove  forest  on  the  biodiversity  of macrobenthos  under  the  condition  of  severe  water  pollution. Ecohydrology .  8  (7): 1262-1271.
Sanusi  HS,  Kaswadji  RF,  Nurjaya  IW,  Rafni  R.  2005.  Kajian  kapasitas  asimilasi  beban pencemaran organik dan anorganik di Perairan Teluk Jobokuto Kabupaten Jepara Jawa Tengah. Jurnal Ilmu-Ilmu Perairan dan Perikanan Indonesia . 12 (1): 9-16.
Somerfield PJ, Dashfield SL, Warwick RM. 2018. The structure and organisation of integral marine benthic communities in relation to sieve mesh size. J. Exp. Mar. Biol. Ecol. 502: 164-173.
Tomassetti P, Gennaro P, Lattanzi L, Mercatali I, Persia E, Vani D, Porrello S. 2016. Benthic community  response  to  sediment  organic  enrichment  by  Mediterranean  fish  farms: Case studies. Aquaculture . 450: 262-272.