Efek Ekstrak Etanol Daun Kelor ( Moringa oleifera , Lamk.) Pada Mencit Model Demensia: Kajian Memori Spasial, Kadar Malondialdehid Dan
Jumlah Sel Piramidal Hipokampus Area CA1 Dan CA2-CA3
Effect Of Kelor ( Moringa oleifera , Lamk.) Leaf Ethanol Extract  On Demensia Mice Model: Spatial Memory Study, Malondialdehyde Levels And Pyramidal Cell  Hippocampus  CA1 And CA2-CA3 Area
Arikha Ayu Susilowati, Gunawan Pamudji Widodo, Jason Merari Program Studi Pasca Sarjana Jurusan Sains Fakultas Farmasi Universitas Setia Budi Jl. Letjen Sutoyo No.6, Mojosongo, Jebres, Kota Surakarta, Jawa Tengah
Email: arikhasains2017@gmail.com
(Diterima :  2019-08-23, disetujui : 2019-11-27)

## ABSTRAK
Demensia  adalah  penyakit  sel-sel  saraf  di  otak,  akibat  hipokampus  yang  rusak  oleh radikal  bebas.  EEDK  (Ekstrak  etanol  daun  kelor)  ( Moringa  oleifera, Lamk . )  mengandung phytochemicals ,  karoten,  vitamin,  mineral,  asam  amino,  flavonoid  dan phenolic ,  terbukti mengurangi  kerusakan  oksidatif  dan  defisit  memori.  Penelitian  ini  bertujuan  mengetahui  efek EEDK terhadap memori spasial, kadar MDA, jumlah sel piramidal hipokampus yang rusak area CA1,CA2-CA3 dan gambaran histopatologi mencit.
Rancangan  penelitian  ini pre  test  and  post  test  control  group  design untuk  uji  memori spasial dan post test control group design untuk uji kadar MDA, jumlah sel piramidal hipokampus dan gambaran histopatologi. Menggunakan 30 ekor mencit terdiri dari 6 kelompok, per kelompok ada 5 ekor mencit, yaitu kelompok kontrol normal, kontrol positif, kontrol negatif, kelompok EEDK 100,  200,  dan  400  mg/kgBB,  semua  diinduksi  Pb  asetat  50  mg/KgBB  kecuali  pada  kelompok normal. Kontrol positif diobati kuersetin 50 mg/kgBB, sedangkan kontrol negatif tidak diobati. Data uji memori diperoleh dari uji Morris water maze pra dan paska perlakuan, data status antioksidan diperoleh dari uji kadar MDA dan data gambaran histopatologi diperoleh dari perhitungan jumlah sel pyramidal. Analisis data menggunakan repeated measures ANOVA dan ANOVA dengan Post Hoc LSD.
Hasil penelitian menunjukkan waktu latensi, uji kadar MDA dan pemeriksaan histopatologi otak  terdapat  perbedaan  bermakna  antara  kelompok  kontrol  negatif  dengan  kelompok  EEDK. Pemberian EEDK 400 mg/kgBB paling efektif memperbaiki memori spasial, menurunkan kadar MDA, dan mencegah kerusakan sel piramidal hipokampus area CA1, CA2-CA3.
Kata kunci : Moringa  oleifera, Lamk.,  memori,  antioksidan,  hipokampus,  dan Morris  water maze

## ABSTRACT
Dementia is a disease of nerve cells in the brain, due to the hippocampus damaged by free radicals.  EEKL  (Ethanol  extract  of  kelor  leaves)( Moringa  oleifera, Lamk . )  contains phytochemicals , carotene, vitamins, minerals, amino acids, flavonoids and phenolics , proven to reduce oxidative damage and memory deficits. This study aims to determine the effect of EEKL on spatial memory, MDA levels, the number of hippocampal pyramidal cells damaged in the CA1, CA2-CA3 area and histopathological features of mice.
The design of this study was pre-test and post-test control group design for spatial memory test and post test control group design for MDA levels, hippocampal pyramidal cell counts and histopathological  features.  This  Reseach  using  30  mice  divided  into  of  6  groups,  each  group consist of 5 mice, namely the normal control group, positive control, negative control, EEKL group 100, 200, and 400 mg/kg body weight, all groups induced by Pb acetate 50 mg / KgBW except the  normal  group.  Positive  control  was  treated  with  quercetin  50  mg/kgBW,  while  negative controls were not treated. Memory test data obtained from the Morris water maze pre and post-
test, antioxidant status data obtained from MDA levels and histopathological data obtained from the  calculation  of  pyramidal  cell  counts.  Data  analysis  used repeated  measures ANOVA  and ANOVA with Post Hoc LSD.
The results showed that latency time, MDA level test and brain histopathology examination had significant differences between the negative control group and the EEKL group. EEKL 400 mg/kgBW  was  most  effective  in  improving  spatial  memory,  decreasing  MDA  levels,  and preventing damage to the hippocampal pyramidal cell CA1, CA2-CA3 area.
Key word : Moringa oleifera, Lamk., memory, antioxidant, hippocampus, Morris water maze

## PENDAHULUAN
Demensia adalah suatu kemunduran intelektual (fungsi kognitif)
berat  dan  progresif  yang  mengganggu fungsi  sosial,  pekerjaan,  dan  aktivitas harian seseorang (Assosiasi Alzheimer Indonesia,  2003).  Gangguan  fungsi kognitif  dapat  disebabkan  oleh  radikal bebas,  yang  memicu  stres  oksidatif yang  merupakan  patogenesis  penting dalam perkembangan demensia
(Butterfield et al , 2002).  Stres oksidatif adalah ketidakseimbangan antara oksidan dan antioksidan dengan kadar oksidan  yang  lebih  dominan.  Oksidan adalah  senyawa  reaktif  yang  dapat memindahkan elektron dari molekul lain dan menghasilkan oksidasi pada molekul tersebut (Ayala A et al , 2014).
Radikal  bebas  dapat  ditangkal  atau diredam dengan pemberian antioksidan
atau
dengan
mengkonsumsi antioksidan (Halliwel, 2007). Salah satu tanaman  yang  berpotensi  sebagai antioksidan  eksogen  di  Indonesia adalah  kelor  ( Moringa  oleifera ,  Lamk) (Erika et al , 2014). Penelitian
sebelumnya  terhadap  ekstraksi  daun kelor  menunjukkan  adanya  aktivitas antioksidan yang tinggi dalam proses in vivo dan in vitro , dalam daun kelor kaya akan phytochemicals , karoten, vitamin, mineral, asam amino, senyawa
flavonoid  dan phenolic (Anwar et  al ,
2007).  Hasil  penelitian  sebelumnya membuktikan  pengaruh  daun Moringa oleifera dosis  180  mg  terhadap perbaikan memori dengan menggunakan  metode Morris  water maze (Illiandri et al , 2010). Oleh karena itu, ingin diteliti pengaruh ekstrak etanol daun  kelor  ( Moringa  oleifera )  sebagai terapi alternatif perbaikan fungsi
memori.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk membuktikan  efek  pemberian  ekstrak etanol  daun  kelor  ( Moringa  oleifera ) dalam  memperbaiki  memori  spasial, penurunan kadar malondialdehid, penghambatan sel piramidal
hipokampus  yang  rusak  area  CA1, CA2-CA3  dan  gambaran  histopatologi hipokampus  mencit  model  demensia yang diinduksi Pb asetat.

## METODE PENELITIAN Alat dan Bahan
Uji memori, yang digunakan adalah  alat  tes Morris  water  maze , kamera  video, stopwatch .  Alat  yang digunakan  dalam  pengukuran  MDA adalah tabung reaksi, timbangan analitik merek sartorius, cawan
porselen, gelas ukur, pengaduk elektrik,  batang  pengaduk  dari  kaca, sentrifuge,  pHmeter  merek  Hanna, homogenizer (Potter- Elvehjem  Tissue Grinders ), vortex merek Genie,
spektrofotometer UV-visibel merek
Shimadzu.  Dan  pada  pemeriksaan histopatologi  alat  yang  digunakan adalah  perlengkapan  bedah,  alat-alat gelas,  dan  Optilab  untuk  pemeriksaan preparat  histopatologi  dan  perhitungan area CA1, CA2-CA3.
Bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  ekstrak  etanol daun kelor (EEDK) dengan variasi dosis EEDK 100, 200 dan 400 mg/KgBB, dan sebagai pembanding adalah kuersetin, Pb asetat serta CMC Na 0,5%.
Pembuatan  suspensi  ekstrak  etanol daun kelor
Larutan pensuspensi adalah CMC- Na 0,5%. Larutan CMC-Na 0,5% dibuat dengan  menimbang  500  mg  CMC-Na, digerus dalam mortir dengan sebagian air  panas  sedikit  demi  sedikit  sampai larut,  kemudian  dimasukkan  ke  dalam labu  takar  sampai  100  ml.  Sediaan  uji dibuat dengan mensuspensikan ekstrak etanol daun kelor dalam larutan CMC-Na  0,5%.  Dibuat  dengan  tiga tingkatan  dosis  yaitu  pada  dosis  100, 200, dan 400 mg/KgBB.

## Pengelompokan Hewan Uji
Kelompok  I  Kelompok  normal diberikan  CMC  Na  0,5%,  kelompok  II kontrol  positif  diberikan  secara peroral kuersetin  dengan  dosis  50  mg/KgBB, kelompok  III  kontrol  negatif  diberikan Pb  asetat  dosis  50  mg/KgBB  secara intraperitoneal , kelompok IV EEDK 100 mg/KgBB p.o ,  kelompok  V  EEDK  200 mg/KgBB p.o ,  kelompok  VI  EEDK  400 mg/KgBB p.o .

## Pengujian memori spasial dengan uji

## Morris water maze
Hewan  uji  dilatih  selama  3  hari, mencit  dilatih  berenang  untuk  mencari platform  dan  naik  ke  atas  platform. Waktu  yang  dibutuhkan  mencit  untuk
mencapai  platform  (waktu  latensi). Setelah  3  hari  latihan  kemudian dilakukan uji Morris water maze selama 3  hari  untuk  menghitung  nilai  T0
(latihan). Pada hari ke 1 tes acquasition trial , hari ke 2 tes probe trial dan hari ke 3  uji  sensoris  motoris,  hal  ini  untuk mengetahui  kondisi  awal  (latihan)  dari kemampuan kognitif mencit. Kemudian pada  hari  ke  4  mencit  dimasukkan  ke dalam Morris water maze kembali untuk menghitung  nilai  T1  (pra  perlakuan) untuk  di  tes acquasition  trial ,  hari  ke  5 tes probe  trial dan  hari  ke  6  dilakukan uji  sensoris  motoris,  kemudian  pada hari  ke  7  semua  kelompok  mencit diinduksi  dengan  Pb  asetat,  kecuali pada  kelompok  normal,  selain  Pb asetat yang diinduksikan untuk kelompok positif diinduksi kuersetin p.o , kelompok  perlakuan  EEDK  dosis  100, 200  dan  400  mg/KgBB,  sedangkan untuk kelompok negatif hanya diinduksi Pb  asetat i.p .  Perlakuan  dilakukan selama 5 hari, selanjutnya dilakukan uji morris  water  maze untuk  menghitung nilai T2 (pasca perlakuan), pada hari ke 12 tes uji acquasition trial , pada hari ke 13  tahap  uji probe  trial dan  hari  ke  14 tes  uji  sensoris  motoris.  Setelah perhitungan  waktu  T2  selesai  maka mencit  segera  dikorbankan  untuk diambil  otaknya.  Otak serebrum diiris menjadi dua, kemudian difiksasi
dengan formalin 10%.

## Uji Kadar  Malondialdehid
Untuk pengukukuran
kadar
malondialdehid  cerebrum  kiri  difiksasi dengan formalin 10% untuk selanjutnya ditetapkan  kadar  malondialdehid  di Laboratorium Pangan dan Gizi Universitas Gajah Mada, Jogjakarta. Uji
kadar  malondialdehid  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  metode Thiobarbituric Acid Reactive Substance (TBARS)  (Gupta et  al ,  2003).  Nilai TBARS  dinyatakan  dalam  satuan nmol/ml MDA jaringan otak.
Perhitungan sel piramidal hipokampus yang rusak di area CA1 dan  CA2-CA3  serta  pengamatan histopatologi hipokampus
Cerebrum kanan  difiksasi  dengan formalin 10% kemudian dibuat preparat histopatologi dengan pengecatan hematoksilin  eos in  di  Laboratorium Bagian  Histologi  Fakultas  Kedokteran Universitas  Sebelas  Maret,  Surakarta. Preparat  yang  sudah  jadi  kemudian diamati  dibawah  mikroskop  dengan bantuan alat Optilab dengan perbesaran  400x,  yang  dihubungkan dengan komputer. Setelah mendapatkan  sel  piramidal  area  CA1 dan CA2-CA3, tampilan pada mikroskop difoto. Hasil foto digabungkan  menggunakan  program Adobe Photoshop CS4 sampai
didapatkan tampilan sel piramidal area CA1  dan  CA2-CA3  secara  utuh kemudian dihitung jumlah sel piramidal area CA1 dan CA2-CA3.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Tahap Acquasition trial
Acquasition  trial sebagai  tahap penggambaran  proses  pembelajaran (proses mengingat) mencit, didapatkan data  waktu  latensi,  penurunan  waktu latensi  dan  persentase  penurunan waktu latensi mencit mencapai platform,  yang  selengkapnya  tersaji dalam tabel 1.

## Tabel  1.  Waktu  Latensi,  Penurunan  Waktu  Latensi  dan  Persentase  Penurunan
Waktu Latensi pada Acquasition Trial Kelompok T0 (detik) T1 (detik) T2 (detik) Penurunan Waktu Latensi  (T2- T1) (detik) Persentase Penurunan Waktu Latensi (%) Kontrol normal 27,17 26,47 25,67 0,80±0,05 c 1,23±0,33 c Kontrol positif 25,54 22,90 22,64 0,26±0,04 c 3,44±1,38 c Kontrol negatif 26,39 24,69 28,92 -4,23±0,31 a,b -35,04±9,13 a,b EEDK100 mg/KgBB 30,00 23,84 22,69 1,15±0,25 c 3,16±2,28 c EEDK200 mg/KgBB 28,90 24,67 24,33 0,37±0,04 c 2,76±1,86 c EEDK400 mg/KgBB 27,12 25,30 24,35 0,95±0,03 c 1,18±0,43 c
Keterangan:  a=berbeda  bermakna  terhadap  kontrol  normal,  b=berbeda  bermakna terhadap kontrol positif, c=berbeda bermakna terhadap kontrol negatif.
Berdasarkan  analisisis  statistika
repeated measured ANOVA data penurunan waktu latensi tahap acquisition trial (p=0,367)>0,05, sedangkan uji levene menunjukkan nilai signifikasi (p=0,07)>0,05), menunjukkan keenam kelompok berbeda tidak bermakna.  Pada repeated  measured
ANOVA untuk data persentase penurunan waktu latensi (p=0,447)>0,05, menunjukkan data terdistribusi  normal,  uji Levene nilai signifikasinya (p=0,00)<0,05, menunjukkan  data  tidak  homogen sehingga  dilanjutkan  ke  uji Tamhane.
Untuk  data  penurunan  waktu  latensi karena homogen maka dilanjutkan ke uji LSD.  Pada  uji Tamhane dan  LSD terdapat  perbedaan  bermakna  antara kelompok kontrol negatif dengan kelompok  kontrol  normal  menunjukkan pemberian Pb asetat 50 mg/KgBB dapat menurunkan fungsi belajar pada mencit. Sesuai  dengan  beberapa  penelitian yang  telah  menunjukkan  bahwa  Pb disimpan  dalam  tubuh  terutama  oleh kompartemen  seperti  darah,  jaringan lunak  dan  tulang.  Jaringan  lain  yang menyimpan  Pb  termasuk  otak,  hati, limpa,  ginjal,  dan  paru-paru  (Owolabi, 2014).  Pada  penelitian  Meng et  al
(2016) paparan Pb ini dapat menyebabkan kematian sel-sel di hippocampus dan
mengakibatkan gangguan pada memori spasial.
Pada kelompok kontrol negatif dan kelompok  kontrol  positif  menunjukkan perbedaan  bermakna.  Hal  ini  sesuai dengan  penelitian  Kale et  al (2018) bahwa kuersetin menunjukkan perlindungan  saraf  yang  signifikan setelah  cedera  otak  akibat  radiasi. Kuersetin  diketahui  dapat  menghambat radikal oksigen dengan cara mendonorkan  atom  hidrogen  atau elektron kepada radikal bebas. Kuersetin berperan sebagai antioksidan dengan cara mendonasikan atom hidrogennya atau melalui kemampuannya mengkelat logam beracun, berada dalam bentuk glukosida (mengandung rantai samping glukosa) atau dalam bentuk bebas yang disebut aglikon (Bhagwat et al , 2014).
Profil  persentase  daya  perbaikan waktu  latensi  pada acquisition  trial gambar  1,  menunjukkan  peningkatan dosis  ekstrak  etanol  daun  kelor  searah dengan  daya  perbaikan  waktu  latensi pada tahap acquisition trial . Semakin
Gambar 1. Profil persentase daya perbaikan waktu latensi pada acquisition trial
tinggi  dosis  ekstrak  etanol  daun  kelor maka  persentase  daya  perbaikan waktu  latensi  semakin  besar  sehingga mengakibatkan  waktu  latensi  mencit
untuk  mencapai  platform  lebih  cepat. Hasil ini sesuai dengan Kirisattayakul et al (2013) menunjukkan ekstrak
hidroalkohol  dari  daun  kelor  dengan
96,49 90,18  90,98 92,12 96,63 85,00 90,00 95,00 100,00 Wa ktu Latens i (Detik ) Kelompok Perlakuan % Daya perbaikan
dosis  oral  100-400mg/kg  selama  3 minggu,  diyakini  menurunkan  stres oksidatif dan peroksidasi lipid otak pada kerusakan  otak  yang  disebabkan  oleh iskemia  serebral.  Ekstrak  etanol  daun kelor menambah potensial kognitif dan sebagai neuroprotektan
terhadap model  hewan  tikus  yang  diinduksi demensia ( cholinotoxin secara i ntracerebroventricular )  (Sutalangka et al , 2013).
Tahap Probe trial
Uji  yang  dilakukan  untuk  melihat fungsi  memori  hewan  uji  terutama kemampuan penyimpanan memori spasial mencit setelah fase pembelajaran  pada acquisition  trial . Data waktu latensi, peningkatan waktu latensi  dan  persentase  peningkatan waktu  latensi  pada  tahap probe  trial dapat dilihat pada tabel 2.
Data  peningkatan  waktu  latensi  dan persentase  peningkatan  waktu  latensi terdistribusi  normal  dan  homogen, dengan nilai signifikasi data peningkatan waktu latensi (p=0,242)>0,05 dan uji levene menunjukkan nilai signifikasi (p=0,450)>0,05, untuk data persentase peningkatan waktu latensi (p=0,292)>0,05 dan uji Levene dengan nilai signifikasinya (p=0,152)>0,05,
Kemudian  masing-masing  dilanjutkan uji  LSD,  dengan  hasil  ada  perbedaan bermakna  pada  data  peningkatan waktu  latensi  dan  persentase  waktu latensi  antara  kelompok  normal  dan kelompok kontrol negatif yang
menunjukkan  bahwa  pemberian  Pb asetat  dapat  menyebabkan  terjadinya gangguan pada fungsi memori.

## Tabel 2. Waktu Latensi, Peningkatan Waktu Latensi  dan Persentase Peningkatan
Waktu Latensi pada Probe Trial Kelompok T0 (detik) T1 (detik) T2 (detik) Peningkatan waktu latensi (detik) Persentase Peningkatan Waktu Latensi (%) Kontrol normal 5,86 6,39 7,17 0,79± 0,03 c 11,36±2,83 c Kontrol positif 3,88 4,18 5,63 0,75 ± 0,02 c 25,97±10,87 c Kontrol negatif 5,04 6,96 4,07 -3,53 ± 0,98 a,b 71,15±7,19 a,b EEDK 100 mg/KgBB 3,40 6,48 6,19 0,33± 0,04 c 32,07±10,37 c EEDK 200 mg/KgBB 3,58 5,37 6,18 0,90± 0,01 c 27,52±1,15 c EEDK 400 mg/KgBB 4,08 4,31 6,34 1,95 ± 0,04 c 24,90±3,92 c
Keterangan: :[-]=ada peningkatan waktu latensi, a=berbeda bermakna terhadap kontrol normal, b=berbeda bermakna terhadap kontrol positif, c=berbeda bermakna terhadap kontrol negatif
Paparan  Pb  sebelum  dan  sesudah kelahiran  pada  tikus  bisa  merusak kemampuan  memori  jangka  pendek dan  jangka  panjang  serta ultrastruktur
hippocampal (Xu et al , 2009). Penelitian Liu et  al (2015)  menunjukkan  bahwa paparan Pb dapat memicu microgliosis abnormal dan astrogliosis pada
hipokampus tikus muda, yang kemudian dapat mengganggu neurogenesis  hipokampus.  Lemaire et al (2000) menyebutkan bahwa neurogenesis  berhubungan  dengan kemampuan belajar.
Dari  uji  LSD  masing-masing  data  juga didapatkan perbedaan bermakna antara kelompok kontrol negatif dengan kelompok  kontrol  positif.  Pemberian kuersetin 50 mg/kgBB dapat meningkatkan  fungsi  memori  mencit yang    diinduksi  Pb  asetat.  Kuersetin merupakan golongan flavonoid, dilaporkan mempunyai aktivitas antioksidan karena kemampuan menangkap radikal bebas dan Reactive Oxygene  Species (ROS)  seperti anion superoksida dan radikal hidroksil
(Morikawa et  al ,  2003;  Schmalhausen et  al ,  2007).  Kuersetin  akan  mengikat spesies  radikal  bebas  sehingga  dapat mengurangi  reaktivitas  radikal  bebas tersebut.  Pada  gambar  2  peningkatan dosis  ekstrak  etanol  daun  kelor berpengaruh  terhadap  daya  perbaikan waktu latensi. Sesuai dengan penelitian Hannan et  al (2014)  menunjukkan
dalam penelitiannya tentang sifat pelindung  saraf  dari  ekstrak  etanol daun  kelor  saat  diinkubasi  pada  kultur utama neuron hippocampal .
Hippocampus dorsal memainkan peran  penting  dalam  pengambilan, pemrosesan  memori  jangka  pendek dan  mentransfer  memori  ke  memori jangka  panjang  (Bannerman et  al ,
2002; Moser and Moser, 1998; Lee and Kesner, 2003). Radikal bebas menyebabkan terjadinya lesi di area ini sehingga menyebabkan masalah tentang  navigasi  yang  diarahkan  pada tujuan dan merusak kemampuan untuk mengingat  lokasi  yang  tepat  (Hebert and Dash, 2004).
Tahap Sensoris-motoris uji  sensori-motorik  untuk  melihat kemampuan  mencit  dalam  berenang atau  kemampuan  motoris  mencit, kemampuan indra penglihatannya
sebagai  kemampuan  sensorik,  dan motivasi  mencit  untuk  keluar  dari  air sebagai faktor yang akan mempengaruhi  kecepatan  berenang mencit.
Gambar 2. Profil persentase daya perbaikan waktu latensi pada probe trial Tabel 3.  Waktu  Latensi,  Penurunan  Waktu  Latensi  dan  Persentase  Penurunan Waktu Latensi pada Uji Sensoris Motoris
84,03 63,50  54,93  61,32  65,00 - 20,00 40,00 60,00 80,00 100,00 Wa ktu Latens i (Detik ) Kelompok Perlakuan % Daya Perbaikan
Kelompok T0 (detik) T1 (detik ) T2 (detik ) Penurunan waktu latensi (detik) Persentase Penurunan Waktu Latensi (%) Kontrol normal 18,85 17,01  14,59 2,42± 1,45 c 14,32±4,37 c Kontrol positif 19,07 17,36  14,59 2,77±1,56 c 16,67±9,23 c Kontrol negatif 19,24 17,54  21,58 -4,04± 0,55 a,b -23,11±4,35 a,b EEDK 100 mg/kgbb  19,29 18,59  16,16 3,43± 0,95 c 18,39±4,35 c EEDK 200 mg/kgbb  18,92 18,06  16,00 3,07± 0,48 c 17,02±2,79 c EEDK 400 mg/kgbb  19,49 17,05  15,15 2,87±0,94 c 16,73±5,13 c
Keterangan:[-]=ada penurunan waktu latensi, a=berbeda bermakna terhadap kontrol normal, b=berbeda bermakna terhadap kontrol positif, c=berbeda bermakna terhadap kontrol negatif.
Pada  penelitian  (Mello et  al, 1998) menunjukkan  bahwa  intoksikasi  Pb asetat  dapat  menyebabkan  perubahan yang menyimpang terhadap perkembangan perilaku hewan uji. Data waktu  latensi,  penurunan  waktu  latensi dan persentase penurunan waktu latensi  tahap  uji  sensori  motoris  dapat dilihat  pada  tabel  3.  Berdasarkan analisisis  statistika repeated  measured ANOVA data uji sensoris-motoris penurunan waktu latensi (p=0.244)>0,05,  sedangkan  uji levene menunjukkan nilai signifikasi (p=0,251)>0,05  menunjukkan  keenam kelompok  berbeda  tidak  bermakna  dan terdapat perbedaan waktu latensi antar
kelompok  perlakuan  tetapi  semua mencit  pada  masing –masing  kelompok dapat  menemukan  platform.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  semua  mencit  di semua  kelompok  menunjukkan  tidak ada  gangguan  sensori-motorik  dan kondisi fisik mencit yang baik.
Pada  gambar  3,  menunjukkan peningkatan  dosis  ekstrak  etanol  daun kelor berpengaruh terhadap persentase daya  perbaikan  waktu  latensi  mencit untuk  menemukan  tanda  di  area platform.  Bakre et  al (2013)  pada penelitiannya telah menunjukkan
ekstrak  etanol  daun  kelor  memiliki aktivitas  depresan  dan  antikonvulsan pada sistem saraf pusat
Gambar 3. Profil persentase daya perbaikan waktu latensi pada uji sensori- motoris
tikus  melalui  peningkatan  mekanisme penghambatan yang
melibatkan pelepasan γ-amino butyric acid . Ekstrak etanol daun kelor 38,04 27,87 20,42 26,35 27,61 - 20,00 40,00 60,00 kontrol normal kontrol positif EEDK 100 mg/KgBB EEDK 200 mg/KgBB EEDK 400 mg/KgBB Wa ktu Latens i (Detik) Kelompok Perlakuan % Daya Perbaikan
meningkatkan pertumbuhan neurit yang  signifikan  dalam  jumlah  dan panjang dendrit dan cabang akson. Hal ini  menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol daun kelor memberikan manfaat sebagai neuroprotektif melalui
pengurangan  stres  oksidatif  sehingga kemampuan  sensori-motoris  mencit dalam kondisi yang baik.

## Uji Kadar Malondialdehid (MDA)
Berdasarkan tabel 4 menunjukkan  bahwa  perlakuan  kontrol negatif  mempunyai  rerata  konsentrasi tertinggi (1,82±0,09) dibandingkan dengan kelompok kontrol posistif (0,318±0,56)  dan  kelompok  kontrol normal  (0,58±  0,08),  selanjutnya  pada kelompok  EEDK  100,  200,  serta  400 mg/KgBB mengalami penurunan secara berurutan. Hal ini sesuai dengan
Fauzi (2008) menyatakan bahwa logam berat atau Pb asetat dapat menginduksi terjadinya peroksoidasi lipid. Peroksidasi lipid menghasilkan berbagai  produk  akhir  yang  bersifat radikal dan juga merusak
makromolekul  lain,  salah  satunya adalah malondialdehyde (MDA)
(Winarsi, 2007).
Hasil  gambar  4  menunjukkan penelitian  tentang  efek  ekstrak  daun kelor terhadap kadar MDA otak mencit yang  dipapar  Pb  asetat  menunjukkan adanya  perbedaan  rerata  kadar  MDA yang  dihasilkan.  Untuk  mengetahui adanya  pengaruh  perlakuan,  rerata kadar  MDA  dianalisa  statistik  dengan one way ANOVA satu jalur, dapat dilihat pada tabel 4.
Data  kadar  MDA  otak  mencit terdistribusi  normal  p=0,242  (p>0,05) dan  homogen  p=0,338  (p>0,05).  Hasil uji  ANOVA  menunjukkan  berbeda bermakna  p=0,000  (p<0,05).  Hal  ini menunjukkan bahwa perbedaan
perlakuan  menyebabkan  perbedaan kadar MDA otak mencit pada masing – masing  kelompok  perlakuan.  uji  LSD didapatkan hasil bahwa terdapat perbedaan bermakna antara kelompok kontrol negatif dengan kelompok

## Tabel 4.  Rerata  ±  SD  Uji  Kadar  MDA  dan  Persentase  Kemampuan  Menurunkan Kadar MDA
Kelompok Kadar MDA (nmol/ml) Persentase Kemampuan Menurunkan Kadar MDA (%) Kontrol normal 0,58 ± 0,08 b,c 67,88 Kontrol positif 0,318 ±0,56 a,c 82,51 Kontrol negatif 1,82 ±0,09 a,b 0 EEDK 100 mg/kgbb 1,52 ±0,06 a,b,c 19,61 EEDK 200 mg/kgbb 0,50 ±0,22 a,b,c 72,72 EEDK 400 mg/kgbb 0,23 ±0,07 a,c 87,13
Keterangan:[-]=ada  penurunan  waktu  latensi,  a=berbeda  bermakna  terhadap  kontrol normal,  b=berbeda  bermakna  terhadap  kontrol  positif,  c=berbeda  bermakna  terhadap kontrol negatif.
kontrol  normal  yang  menunjukkan pemberian Pb asetat 50 mg/kgBB dapat menaikkan  kadar  MDA  otak  mencit. Berdasarkan hasil uji LSD juga didapatkan perbedaan bermakna antara kelompok kontrol negatif dengan kelompok kontrol positif yang menunjukkan  pemberian  kuersetin  50 mg/kgBB  dapat  menurunkan  kadar MDA.  Sedangkan  antara  kelompok
kontrol negatif dengan kelompok EEDK 100,  200  dan  400  mg/kgBB  yang menunjukkan perbedaan signifikan artinya  bahwa  pemberian  ekstrak etanol daun kelor pada dosis 100, 200 dan  400  mg/kgBB  dapat  menurunkan kadar MDA. Profil persentase kemampuan  menurunkan  kadar  MDA pada EEDK dapat dilihat pada gambar 5.
Gambar 5. Profil persentase kemampuan menurunkan kadar MDA
Persentase kemampuan menurunkan  kadar  MDA  pada  mencit yang  diinduksi  Pb  asetat,  EEDK  100 mg/kgBB mempunyai
persentase kemampuan  19,61%  sedangkan  pada EEDK 200 mg/KgBB mempunyai kemampuan  72,72%  dan  EEDK  400
mg/KgBB mempunyai kemampuan 87,13%.  Hasil  penelitian  ini  sesuai dengan  penelitian  Hacock  (1999)  dan Wresdiyati et  al (2002)  menunjukkan bahwa sifat antioksidan senyawa flavonoid  dalam  ekstrak  etanol  daun kelor bertanggung jawab untuk perlindungan  terhadap  stres  oksidatif yang disebabkan Pb asetat. Pemberian
EEDK  sebagai  antioksidan  ternyata dapat berpengaruh
terhadap
penurunan  kadar  MDA  yang  tinggi.
EEDK mengandung senyawa antioksidan  yang  berpotensi  mengikat radikal bebas yang berlebihan. Menurut Halliwel dan Gutteridge (2000) senyawa  antioksidan  memiliki  struktur molekul yang dapat memberikan elektronnya  kepada  molekul  radikal bebas  tanpa  terganggu  sama  sekali fungsinya  dan  dapat  memutus  reaksi berantai.  Ekstrak  asetat  (polifenolik) daun kelor dosis 100 mg/KgBB selama 14  hari  pada  tikus  stres  oksidatif  yang diinduksi dengan CCl 4 dan suplementasi  dengan  ekstrak  daun kelor  mencegah  peningkatan  kadar oksidasi peroksida lipid
atau
malondialdehid (MDA),
67,88 82,51 19,61 72,72 87,13 - 20,00 40,00 60,00 80,00 100,00 kontrol normal kontrol positif EEDK 100 mg/KgBB EEDK 200 mg/KgBB EEDK 400 mg/KgBB Ka dar MDA (nmo l/ml) Kelompok Perlakuan % kemampuan menurunkan kadar MDA
Tabel  51.  Rerata±SD  dan  Persentase  Daya  Penghambatan  Jumlah  Sel  Piramidal hipokampus yang mengalami kerusakan di area CA1 dan CA2-CA3 otak mencit
Kelompok ∑ sel piramidal Area CA1 ∑ sel piramidal Area CA2- CA3 Persentase Daya Hambat kerusakan sel piramidal area CA1 Persentase Daya Hambat kerusakan sel piramidal area CA2-CA3 Kontrol normal 2,00 ± 0,71 c 2,20 ± 0,76 c 90.00 87.36 Kontrol positif 2,20 ± 1,09 c 2,50 ± 0,87 c 89.00 85.63 Kontrol negatif 20,00 ±2,74 a,b 17,40 ± 1,67 a,b 0 - EEDK 100 mg/kgbb 11,80 ±2,86 a,b,c 12,60 ± 1,47 a,b,c 41.00 27.59 EEDK 200 mg/kgbb 7,60 ± 1,95 a,b,c 7,20 ± 1,15 a,b,c 62.00 58.62 EEDK 400 mg/kgbb 2,40 ±0,89 c 3,60 ± 1,59 c 88.00 79.31
Keterangan  :  a=berbeda  bermakna  terhadap  kontrol  normal,  b=berbeda  bermakna terhadap kontrol positif, c=berbeda bermakna terhadap kontrol negatif.
penurunan pada konsentrasi glutathione (GSH), aktivitas
superoksida  dismutase (SOD)  dan enzim  antioksidan  katalase  (CAT)  di hati dan ginjal (Leon et al , 2015).
Perhitungan  Jumlah  Sel  Piramidal
Hipokampus yang Mengalami Kerusakan di Area CA1 dan CA2-CA3 Pengumpulan data dilakukan dengan menghitung struktur sel piramidal yang rusak pada hipokampus.  Tabel  5  di  bawah  ini menunjukkan rerata jumlah sel piramidal  hipokampus  yang  rusak  di area CA1 dan CA2-CA3.
Data jumlah sel piramidal di area CA1  terdistribusi  normal  dengan  nilai signifikasinya  0,217  (p>0,05)  dan  uji homogenitasnya  menunjukkan  hasil signifikasinya  0,043  (p<0,05)  Analisis dilanjutkan  dengan  one-way  ANOVA. diperoleh  perbedaan  yang  bermakna
yaitu p=0,000 (p<0,05). Dilajutkan ke uji post  hoc  tamhane dengan  hasil p=0,00< 0,05 yang menunjukkan bahwa  adanya  perbedaan  perlakuan menyebabkan perbedaan jumlah sel di area  CA1  otak  mencit  pada  masing- masing
kelompok perlakuan.
Sedangkan data jumlah sel piramidal di area CA2-CA3 terdistribusi normal dan homogen  dengan  nilai  signifikasinya 0,196  (p>0,05).  Analisis  dilanjutkan dengan one-way ANOVA,  diperoleh perbedaan yang bermakna yaitu p=0,000 (p<0,05). Hal ini menunjukkan bahwa perbedaan perlakuan
menyebabkan perbedaan jumlah sel di area  CA2-CA3  otak  mencit  pada masing-masing  kelompok  perlakuan. Berdasarkan  uji  Tamhane  dan  LSD terdapat  perbedaan  bermakna  jumlah sel piramidal di area CA1 dan CA2-CA3 antara kelompok normal dengan
kelompok  kontrol  negatif.  Berdasarkan uji tamhane dan  LSD  data  jumlah  sel area  CA1  dan  CA2-CA3  terdapat perbedaan bermakna antara kelompok kontrol negatif dengan kelompok EEDK 100, 200 dan 400 mg/kgBB. Pada tabel 5  menunjukkan  pemberian  ekstrak etanol  daun  kelor  ( Moringa  oleifera , Lamk)  menurunkan  jumlah  kerusakan sel piramidal yang rusak pada kelompok  EEDK  100,  200  dan  400 mg/KgBB,  hal  ini  sesuai  dengan penelitian  Gajawat et  al (2006)  Pb mampu  menginduksi  radikal  bebas pada  mencit.  Sedangkan  kandungan ekstrak  etanol  daun  kelor  mampu mereda radikal bebas yang diakibatkan Pb asetat.
Penelitian  ini  juga  menunjukkan
persentase kemampuan
penghambatan  jumlah  sel  piramidal yang  rusak  pada  area  CA1  dan  CA2- CA3  otak  mencit  yang  dapat  dilihat pada gambar 6 dan 7. Bahwa kelompok EEDK 400
mg/KgBB mampu
menghambat  kerusakan  sel  piramidal hipokampus  di  area  CA1  dengan persentase  88,00%  dan  CA2-CA3 dengan persentase 79,31% lebih besar dibandingkan dengan kemampuan penghambatan  sel  piramidal  yang rusak  pada  kelompok  EEDK  100  dan 200  mg/KgBB.  Sutalangka  (2013) mengemukakan  ekstrak  daun  kelor menunjukkan  hasil  yang  signifikan dalam  meningkatkan  memori  dan penurunan neurodegenerasi pada CA1, CA2,  CA3,  dan dentate  gyrus dari hippocampus bersama dengan menurunkan level MDA, meningkatkan SOD, CAT, dan aktivitas asetilkolinesterase . Hannan et al (2014) dalam penelitiannya menggunakan
neuron hippocampal , melaporkan bahwa  penambahan  ekstrak  etanol daun kelor secara signifikan meningkatkan  jumlah  dan  panjang neurit  dan  percabangannya,  secara tergantung pada dosis, dengan konsentrasi optimal dicapai pada 30 μg /  ml.  Ekstrak  daun  kelor  memiliki  efek positif dalam bentuk penyembuhan dan profilaksis pada toksisitas timbal (Owolabi et al, 2012).

## KESIMPULAN
Ekstrak etanol daun kelor ( Moringa oleifera , Lamk) dosis 100, 200 dan  400  mg/KgBB  dimana  dosis  400 mg/KgBB merupakan dosis yang paling efektif dalam dapat memperbaiki memori  spasial,  menurunkan  kadar malondialdehid  (MDA),  mengurangi jumlah  sel  piramidal  hipokampus  yang rusak  di  area  CA1  dan  CA2-CA3  otak mencit.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Ucapan  terimakasih  kepada  Dr. Gunawan Pamudji W, M.Si, Apt, selaku pembimbing  utama    dan  Dr.  Jason Merari  P.,  M.M,  M.Si,  Apt  selaku pembimbing  pendamping,  yang  telah bersedia meluangkan waktu, memberikan  bimbingan,  nasehat,  ilmu dan motivasi selama penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Anwar,  F.,  Latif,  S.,  Ashraf,  M.,  Gilani, A.H.,  2007,  Moringa  oleifera Lam.: a food plant with multiple medicinal  uses. Phytother  Res .
21:17-25 Assosiasi  Alzheimer  Indonesia.  2003. Konsensus Nasional Pengenalan dan Penatalaksanaan Demensia
Alzheimer dan Demensia Lainnya. ed. 1, Asosiasi Alzheimer Indonesia , Jakarta Ayala A, Munoz MF, Arguelles S. 2014. Lipid  peroxidation:  production, metabolism and signaling mechanism of malondialdehyde and 4- hydroxy-2-nonenal. Oxid Med Cell Longev ; 112: 21-8 Bakre A.G., Aderibigbe A.O., Ademowo O.G. (2013). Studies on neuropharmacological  profile  of ethanol  extract  of  Moringa oleifera  leaves  in  mice. J
Ethnopharmacol , 149: 783 –789.
Bannerman  DM,  Yee  BK,  Good  MA,
Heupel MJ, Iversen SD, Rawlins JN. 1999.Double dissociation of function within the hippocampus:  a  comparison  of dorsal,  ventral,  and  complete hippocampal  cytotoxic  lesions.
Behavioral  Neuroscience 113 (6), 1170 –1188.
Bhagwat S, Haytowitz DB, Holden JM. 2014.  USDA  database  for  the
flavonoid  content  of  selected foods. USA:Department of Agriculture; Butterfield,  D.A.,  Drake,  J.,  Pocernich, C., Castegna, A., 2001, Evidence of oxidative damage in Alzheimer's disease brain: central  role  for  amyloid  beta-
peptide, Trends.  Mol.  Med .,  7,
548 –554.
Erika  BR,  Dellima  M,  Sulistyawati  R.
2014  Aktivitas  Penangkapan Radikal  Dpph  Oleh  Fraksi  N- Heksan  Dan  Fraksi  Etil  Asetat Daun  Kelor  ( Moringa  Oleifera , Lamk) Media  Farmasi ,  Vol.  11 No.1 :1-6 Fauzi, T. M., 2008, Pengaruh Pemberian  Timbal  Asetat  dan Vitamin  C  Terhadap  Kadar
Malondialdehyde  dan  Kualitas Spermatozoa  Di  dalam  Sekresi Epididimis  Mencit  Albino  (Mus Muculus  L)  Strain  BALB/C,
Tesis,  Program  Studi  Biomedik Pascasarjana Universitas Sumatra Utara, Medan.
Gajawat,  S.,  Sancheti,  G.,  Goyal,  P.K.
2006.  Protection  against  lead- induced hepaticlesions in Swiss albino  mice  by  ascorbic  acid.
Pharmacologyonline .1: 140- 149. Gutteridge  J.M.C.,  And  Halliwell  B. 2000. Free Radicals and Antioxidants in the Year 2000 A Historical  Look  to  the  Future Annals  New  York  Academy  Of Sciences Halliwel, B. (2007). Dietary polyphenols:  Good,  bad,  or indifferent for your health. Journal Cardiovascular Research , 73, 341-347. Hancock. 1999. Lipid peroxidation-DNA
Damage  by  Malondialdehyde. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ent rez/query.fcgi?cmd=Retrieve&d b=PubMed&list_uids=1006485 2&dopt=Abstract
Hannan  A.,  Kang  J.,  Mohibbullah M.,Hong  Y.,  Lee  H.,  Choi  J., Choi  I.and  Moon  S.  2014. Moringa  oleifera  with  promising neuronal  survival  and  neurite out growth promoting potentials. Journal  of  Ethnopharmacology ,
152:142 –150 Hebert April E., Dash Pramod K. 2004. Nonredundant roles for
hippocampal and entorhinal cortical  plasticity  in  spatial memory storage. Pharmacology, Biochemistry and Behavior 79 (143 – 153 Illiandri O, Widjajanto E, dan Mintaroem
K. 2010. Moringa oleifera Meningkatkan  Fungsi  Memori pada Tikus Model Kurang Energi Protein. Jurnal Kedokteran  Brawijaya. Vol.  26 No. 1 Kale  Aydemir,  Pi şkin  Özcan,  Baş
Y ılmaz,  Aydın  Bengü  Gülhan,
Can  Murat,  Elmas  Özlem  and Büyükuysal Ça ğatay.  2018. Neuroprotective effects of Quercetin  on  radiationinduced brain  injury  in  rats.  Journal  of Radiation Research. pp. 1 –7 Kirisattayakul W, Wattanathorn J, Tong- Un T, Muchimapura S, Wannanon  P,  and  Jittiwat  J. 2013.  Cerebroprotective  Effect of  Moringa  oleifera  against Focal  Ischemic  Stroke  Induced by Middle Cerebral Artery Occlusion Hindawi  Publishing Corporation. Oxidative Medicine
and  Cellular  Longevity ,  Article
ID 951415. Lemaire V, Koehl M, LeMoal M, Abrous DN.  2000.  Prenatal  stress produces learning deficits associated  with  an  inhibition  of neurogenesis in the hippocampus. Proc  Natl  Acad
Sci USA 97:11032 – 11037.
Leone  A,  Spada  A,  Battezzati  A,
Schiraldi A, Aristil  J and Bertoli
S.  2015.  Cultivation,  Genetic, Ethnopharmacology, Phytochemistry and
Pharmacology of Moringa oleifera Leaves: An Overview Int.  J.  Mol.  Sci. , 16 , 12791-12835;
doi:10.3390/ijms160612791 Liu JT, Chen BY, Zhang JQ, Kuang F, Chen LW. 2015. Lead Exposure Induced Microgliosis And Astrogliosis  In  Hippocampus  of Young  Mice  Potentially  By Triggering  TLR4-MyD88- NFκB Signaling  Cascades. Elsevier .
239(2):97 –107.
Mello  CF,  Kraemer  CK,  Filippin  A, Morsch  VM,  Rodrigues  ALS, Martins AF, et al. 1998. Effect of lead acetate on neurobehavioral development of rats. Braz J Med Biol Res. 31(7):943 –50.
Meng H , Wang L, He J, Wang Z. 2016. The Protective Effect of Gangliosides  on  Lead  (Pb)- Induced Neurotoxicity Is Mediated by Autophagic Pathways. Int  J Environ  Res Public Health . 13(4): 365. Tersedia pada: http://www.mdpi.com/1660- 4601/13/4/365 . Owolabi JO, Opoola E, Caxton-Martins EA. 2012. Healing and Prophylactic  Effects  of  Moringa oleifera  Leaf  Extract  on  Lead Induced Damage to Haematological and Bone Marrow Elements in Adult Wistar Rat Models. Open Access Scientific Reports 1;(8).
Owolabi  J,  Williams  Felicia,  Fabiyi
Oluseyi. 2014. Moringa’s Effects Against Lead-Induced Disruption of the Hippocampus.
World  J  Life  Sci.  and  Medical
Research 3(2):39 Sutalangka Chatchada, WattanathornJintanaporn, Muchimapura Supaporn andThukham-mee Wipawee. 2013. Moringa oleifera Mitigates Memory Impairment and Neurodegeneration  in  Animal Model of Age-Related Dementia. Hindawi  Publishing
Corporation Oxidative Medicine and  Cellular  Longevity. Volume 2013,  Article  ID  695936.  9
pages
Winarsi H. 2007. Antioksidan Alami dan
Radikal Bebas. Kanisius: Yogyakarta Wresdiyati, Tutik. 2004. Imunohistokimia Antioksidan Superoksida  Dismutase  pada Hati Tikus Prenatal dan Postnatal. Hayati, Jurnal Biosains , (11) 3: 83-87. Xu  J,  HC  Yan,  B  Yang,  LS  Tong,  YX
Zou and Y Tian. 2009. Effects of lead  exposure  on  hippocampal metabotropic glutamate
receptor  subtype  3  and  7  in developmental  rats. Journal  of Negative Results in BioMedicine 2009;(8)5.