Cite this Nofianti, K.A., Hakim, L., Suzana, S. and Ifadotunnikmah, F. (2024) 'Prediction of The Potential of Benzoxazinone, 2-phenyl- 4H-benzo[1,3]oxazin-4-one, and 2-[2-(4-methoxyphenyl)vinyl]-3,1-benzoxazin-4-one as New Anti-Tuberculosis', Berkala Ilmiah Kimia Farmasi , 11(1), pp. 26-32. DOI: 10.20473/bikfar.v11i1.56056
Copyright: ©2024 by the authors. Submitted for possible open-access publication under the terms and conditions of the Creative Commons Attribution-ShareAlike 4.0 International (CC BY-SA) license
Prediction of the Potential of Benzoxazinone, 2-phenyl-4H-benzo[1,3]oxazin-4-one, and 2-[2-(4-methoxyphenyl)vinyl]-3,1-benzoxazin-4-one as New Anti-Tuberculosis
Prediksi Potensi Benzoksazinon, 2-fenyl-4H-benzo[1,3]oksazin-4-on, dan 2-[2-(4- metoksifenil)vinil]-3,1-benzoksazin-4-on sebagai Anti Tubercolosis Baru
Kholis Amalia Nofianti 1) * , Luqmanul Hakim 2) , Suzana Suzana 1) , Farida Ifadotunnikmah 1)
1 Department of Pharmaceutical Sciences, Faculty of Pharmacy, Universitas Airlangga, Surabaya, Indonesia
2 Faculty of Teacher Training, Universitas PGRI Adibuana, Surabaya, Indonesia
*Corresponding author E-mail: kholis-a-n@ff.unair.ac.id
Article History:
Received: March 16, 2024; Revised: June 3, 2024; Accepted: June 28, 2024; Online: June 30, 2024

## ABSTRACT
Even though it had been almost five decades, the decline in the prevalence of tuberculosis had still been low due to the rise of drug resistance. Recently, benzoxazinone compounds had begun to gain potential as anti-tuberculosis agents because of their interesting structure and similarity to isoniazid, the most widely used TB drug, which had reportedly experienced many cases of resistance. This research tested the ability of the core compound benzoxazinone and its two derivatives to bind to the enoyl ACP-CoA receptor, which was responsible for the formation of mycobacterial walls. In silico tests were carried out using pkcsm to determine the pharmacokinetic profile, and molecular docking tests using Molegro Virtual Docker were conducted to determine the pharmacodynamic profile through binding to the enoyl ACP-CoA receptor. The selected receptors were downloaded from the protein data bank with the code 2IDZ. The research results showed that the three test compounds had good intestinal and skin absorption profiles, indicating that they could be administered orally or transdermally. The docking results, expressed by moldock score and rerank score,  showed  that  the  three  test  compounds  had  better  potential  compared  to  isoniazid.  Thus,  the  test compounds could be developed as new anti-tuberculosis agents.
Keywords: Tubercolosis, Benzoxazinone, Mycobacterium Tuberculosis , Pkcsm, Molegro Virtual Docker

## ABSTRAK
Meski  sudah  hampir  5  dekade,  penurunan  prevalensi  tuberkulosis  masih  rendah  akibat  meningkatnya resistensi  obat.  Saat  ini  potensi  senyawa  benzoksazinon  sebagai  anti  tuberculosis  mulai  digali,  karena kemiripan strukturnya dengan isoniazid sebagai obat TBC yang paling banyak digunakan, dan dilaporkan telah  mengalami  resistensi.  Penelitian  ini  menguji  kemampuan  senyawa  inti  benzoksazinon  dan  2 turunannya dalam berikatan dengan reseptor enoil ACP-CoA yang bertanggung jawab dalam pembentukan dinding  Mycobacterium.  Dilakukan  uji  in  silico  menggunakan  pkcsm  untuk  mengetahui  profil farmakokinetik, dan juga dilakukan uji molekuler docking menggunakan Molegro Virtual Docker untuk mengetahui  profil  farmakodinamik,  melalui  pengikatan  pada  reseptor  enoil  ACP-CoA.  Reseptor  yang dipilih  diunduh  dari  bank  data  protein  dengan  kode  2IDZ.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  ketiga senyawa uji diprediksi memiliki profil penyerapan usus dan kulit yang baik, sehingga dapat diberikan secara oral  maupun  transdermal.  Hasil  docking  yang  dinyatakan  dengan  skor  moldock  dan  skor  rerank menunjukkan  bahwa  ketiga  senyawa  uji  mempunyai  potensi  yang  lebih  baik  dibandingkan  dengan isoniazid. Dengan cara ini, senyawa uji dapat dikembangkan sebagai obat anti tuberkulosis baru.
Kata kunci: Tuberkolosis, Benzoksazinone, Mycobacterium Tuberculosis, Pkcsm, Molegro Virtual Docker

## PENDAHULUAN
Penyakit tuberkolosis (TB) masih menjadi isu yang meresahkan.  Data  menunjukkan  bahwa  di  tahun  2017 sebanyak  10,4  juta  orang  menderita  TB  pada  2019 menjadi  10  juta  orang,  dan  1,4  juta  di  antaranya meninggal  (WHO,  2019).  Meski  sudah  lebih  dari  dua dekade,  laju  penurunan  TB  ini  masih  rendah.  Hal  ini
ditunjukkan dengan adanya peningkatan kasus pada tahun 2021, menjadi 10,6 juta (WHO, 2022).  Kasus TB banyak terjadi di negara berkembang (Mohajan, 2015), termasuk Indonesia, di mana ditemukan 969 ribu kasus pada tahun 2020 (Mulyawan, 2023).
Hingga saat ini, pencegahan dan penangan TB masih sulit, salah satunya disebabkan maraknya resistensi obat (Jang & Chung, 2020), akibat durasi terapi yang panjang (Mpagama et al ., 2020; Oga-Omenka et al ., 2020). Data
penelitian menunjukkan bahwa lebih dari 180.000 kasus multi drug resistensi telah ditemukan. Selain itu lebih dari 150.000 kasus resistensi rifampisin juga telah dijumpai di lapangan.
Beberapa mekanisme resistensi  yang sudah diungkapkan  oleh  para  peneliti  di  antaranya  adalah gangguan aktivasi obat, aktivasi pompa untuk mengeluarkan obat pada permukaan sel bakteri, produksi enzim untuk inaktivasi obat, serta perubahan target terapi obat  (Kim,  2005;  Bastos et  al .,  2014).  Ini  semua  dapat disebabkan karena rendahnya kepatuhan pasien di dalam terapi TB, sehingga memungkinkan terjadinya mutasi gen pada  kromosom  bakteri  (David,  1970).  Sebenarnya, perubahan  genetik  pada Mycobacterium  tuberculosis ini dianggap  sebagai  penyebab  sekunder,  di  mana kejadiannya  tidak  dominan.  Namun, Mycobacterium tubercolosis yang  sudah  mengalami  resistensi  ini kemudian dengan mudah dapat menular dari satu pasien ke pasien yang lain. Dengan demikian, penyebaran Multi Drug  Resistance-Tubercolosis (MDR-TB)  ini  menjadi tinggi  (Kendall et  al .,  2015).  Banyaknya  kasus  (MDR- TB),  semakin  memperburuk  eradikasi  tuberkolosis.  Hal ini karena durasi terapi lebih panjang dari 6 bulan menjadi dua  tahun,  selain  menambah  biaya,  probabilitas kesuksesan  terapi  juga  rendah  hanya.  Oleh  karena  itu penemuan obat TB baru menjadi sangat  mendesakuntuk dilaksanakan.
Anti tuberculosis umumnya bekerja pada permukaan dinding  sel,  melalui  hambatan  pada isocitrate  lyase (Krátký et al ., 2012), 2-trans-enoyl-ACP (CoA) reductase (InhA)  (Vilchèze et  al .,  2000),  menaquinone-B  (MenB) serta  protein  yang  lain  (Li et  al .,  2010;  Zampieri et al ., 2019). Turunan  benzoksazinone  menjadi  senyawa  yang menarik  untuk  dikembangkan  sebagai  anti  tuberkulosis baru. Hal ini karena, benzoxazinone merupakan senyawa yang sudah lama dikenal di bidang sintesis organik baik sebagai  senyawa  antaramaupun  sebagai  senyawa  target, sehingga metode sintesis untuk berbagai variasi turunan benzoksazinon telah banyak dieksplorasi. Selain itu, inti strukturnya  yang  terdiri  dari  inti  aromatis  serta  cincin heterosiklik  dengan  atom  O  dan  N,  menjadikan benzoxazinone  memiliki  kemampuan  untuk  berikatan dengan  banyak  reseptor  protein,  sehingga  senyawa  ini dikenal memiliki beberapa aktivitas seperti anti inflamasi, anti jamur, anti bakteri serta anti mycobacterium (Nofianti et  al .,  2009;  Zampieri et  al .,  2019).  Penelitian  ini bertujuan  untuk  menguji  prospek  dari  senyawa benzoksazinone  dan  2  turunannya  yaitu  yang  memiliki subsistem 2-fenil, dan 2-2-(4-metoksi)fenil)vinil, menggunakan  pkcsm  dan Molegro  Virtual  Docker ,  di mana metode sintesisnya telah dilaporkan pada penelitian sebelumnya (Nofianti et al ., 2009).

## METODOLOGI PENELITIAN
Penelitian  dilakukan  sepenuhnya  menggunakan perangkat  komputer  laptop  Lenovo  thinkpad,  dengan spesifikasi intel® core i7-4710MQ cpu@2.50 GHz 2.49 GHz  RAM    8.00  GB,  HDD  1  TB.  Aplikasi  yang digunakan  yaitu ChemDraw 15.0  professional  version untuk  menggambar  struktur  kimia. Chembiodraw  3D game  draw version  15  untuk  menggambar  struktur  3 dimensi.  Aplikasi  pkcsm  online  serta Molegro  virtual docker versi 6.0.
Prediksi ADMET Prediksi profil ADMET dimulai dengan menggambar  senyawa  1,  senyawa  2,  dan  senyawa  3 menggunakan  aplikasi Chemdraw 2  dimensi.  Setelah dilakukan  clean  up  structure,  struktur  disalin  dalam bentuk SMILE (Ekowati et al ., 2018; Nofianti & Ekowati, 2020).  Struktur  ini  kemudian  disalin  pada  aplikasi  web pkcsm
pada laman https://biosig.lab.uq.edu.au/pkcsm/prediction . Setelah ditekan tombol predict maka akan dilakukan perhitungan jarak atau gugus farmakofor melalui 28 persamaan regresi dari berbagai parameter ADMET yang saling melengkapi (Pires et al ., 2015). Hasil perhitungan dari masing-masing senyawa kemudian disalin ke dalam Microsoft Excel dan dilakukan interpretasi.

## Molecular Docking
Reseptor  yang  digunakan  yaitu  protein  enoil ACP- CoA dari Mycobacterium tuberculosis yang diunduh dari protein  tetapi  dengan  kode  2ZID  yang  sudah  memiliki reference  ligand (Dias et  al .,  2007).  Protein  yang diperoleh  kemudian  dibuka  menggunakan  aplikasi molekul virtual docker 6.0 dan dicari sisi aktifnya, melalui algoritma  deteksi cavity (Rosita,  2019).  Persiapan molekul ligand dimulai  dengan  menggambar  struktur kimia  dari  masing-masing  senyawa  uji  pada  3D chembiodraw versi  15.0.  Aplikasi  ini  kemudian digunakan mencari konfirmasi yang paling stabil melalui kalkulasi minimal energi melalui fitur MMFF94 (Ekowati et  al .,  2018;  Nofianti  &  Ekowati,  2020).  Molekul  yang diperoleh  kemudian  disimpan  dalam  format  Sybil  2. Molekul  senyawa  uji  ini  kemudian  diekspor  kepada aplikasi molekul  virtual  docker yang  sudah  dibuka  dan sudah  berisi  protein  uji. Docking kemudian  dilakukan untuk senyawa 1, 2, 3 dan isoniazid pada rongga terpilih dengan create resolusi  0,30,  ukuran  populasi  maksimal 50,  evolusi  simpleks  300, distance  factor 1,00,  energi pada  fase  generation  100,0  serta  parameter  literasi maksimal 1500 (Rosita, 2019; Nofianti & Ekowati, 2020).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Kalkulasi profil ADMET
Hasil  uji  absorpsi  intestinal  i  menunjukkan  bahwa senyawa  2  dan  senyawa  3 (Gambar  1) memiliki  persen absorpsi  di  atas  97%  sedangkan  senyawa  1  memiliki persen  absorpsi  83%  ( Gambar  2 ).  Proses intestinal absorption atau  penyerapan  di  dalam  usus  akan menentukan level kadalrobat di dalam darah (Dahlgren & Lennernäs, 2019), dengan demikian akan mempengaruhi efektivitasnya  (Kanfer  &  Shargel,  2020).  Sehingga parameter  absorpsi  menjadi  pertimbangan  utama  obat dapat  diberikan  per  oral.  Suatu  senyawa  obat  dikatakan memiliki  absorpsi  intestinal  yang  baik  jika  presenr absorpsinya  di  atas  30  (Pires et  al .,  2015).  Nilai  Caco 2 permeability untuk semua senyawa uji juga di atas 0,90 menunjukkan  bahwa  secara  in  silico  senyawa  dapat menembus sel epitel kolorektal. Dengan demikian secara in  silico ketiga  senyawa  uji  memiliki  potensi  untuk diberikan secara oral.
Rute  pemberian  obat  lain  yang  dipertimbangkan dalam penelitian ini yaitu rute melalui kulit. Hal ini karena salah satu permasalahan dari resistensi obat tuberkolosis adalah  ketidakpatuhan  pasien  yang  menyebabkan rendahnya  kadar  obat  di  dalam  darah  (Kendall et  al .,
2015) sehingga memungkinkan terjadinya mutasi genetik pada  kromosom Mycobacterium (David,  1970;  Jang  &
Chung,  2020).  Jika  obat  dapat  diberikan  melalui  kulit dalam bentuk sediaan patch atau semacamnya, maka level obat  di  dalam  darah  akan  dapat  lebih  konstan  (Tekade, 2018)  sehingga  meminimalisir  terjadinya  resistensi. Program  pkcsm  yang  digunakan  di  dalam  penelitian  ini membuat  model skin  permeability dari  211  senyawa
terhadap hasil uji in vitro (Pires et al ., 2015).  Dalam hal ini,  senyawa  uji  memiliki  nilai skin  permeability lebih besar  daripada  -2,5  yang  menunjukkan  bahwa  senyawa dapat diberikan secara transdermal (Tekade, 2018).
Volume distribusi sangat penting dalam pengaturan dosis  obat,  sebab  menunjukkan  volume  cairan  yang dibutuhkan  agar  obat  dapat  terlarut  secara  homogen  di dalam darah (Shargel et al , 2012). Semakin tinggi volume distribusi menunjukkan bahwa obat banyak tersimpan di jaringan (Shargel et al ., 2012; Pires et al ., 2015; Kanfer & Shargel, 2020). Volume distribusi dikatakan rendah jika pdss kurang dari -0,15 dan dikatakan tinggi jika lebih dari 0,45.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  senyawa  1 memiliki  volume  distribusi  -0,2,  menunjukkan  volume distribusinya rendah. Sedangkan senyawa 2 dan senyawa 3 memiliki volume distribusi yang dianggap ideal (Pires et al ., 2015). Obat  dianggap  lebih  efektif  jika  dalam  keadaan bebas di dalam plasma (Shargel, 2012). Dalam penelitian ini  ditentukan  dengan  fraksi  obat  tidak  terikat  atau unbound  fraction pada Gambar  3 .  Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  senyawa  1  memiliki unbound fraction yang  tertinggi  dibandingkan  dengan  senyawa yang lain. Fraksi obat tidak terikat sangat penting dalam menentukan efikasi obat, sebab umumnya obat yang tidak terikat yang dapat berinteraksi dengan reseptor (Watanabe et al ., 2018). Parameter  distribusi  lain  yang  diteliti  yaitu ketersediaan  obat  di  dalam  sistem  saraf  pusat  dan  juga kemampuan  untuk  menembus Blood  Brain  Barrier (BBB). Pkcsm membangun model BBB permeability dari 320  senyawa  terhadap  profil  BBB permeability  in  vivo (Pires et al ., 2015). Hasil penelitian menunjukkan bahwa senyawa 1 tidak dapat menembus BBB, senyawa 3 cukup dapat menembus, sedangkan senyawa 2 dapat menembus dengan  sangat  baik  ( Gambar  3 ).  Hal  ini  akan  berguna karena beberapa tahun terakhir ini ditemukan juga infeksi mycobacterium di dalam cairan otak (Begley et al ., 2015).
Parameter lain yang diuji yaitu CNS permeability . Model ini dibangun dari 153 senyawa terhadap perfusi darah ke otak  (Pires et  al .,  2015).  Hasilnya  menunjukkan  bahwa semua senyawa uji memiliki nilai CNS permeability yang baik karena di atas -2.
Profil  metabolisme  ditunjukkan  oleh Gambar  4 , tampak jelas bahwa senyawa 2 dan senyawa 3 memiliki profil yang sama persis. Sedangkan senyawa 1, memiliki satu  perbedaan  yaitu  pada  sitokrom  1A2.  Metabolisme obat akan menentukan interaksi obat yang satu terhadap
Gambar  2 .  Profil  Absorbsi  Senyawa  Uji  Dikalkulasi Menggunakan Webtool pkcsm 83,937 97,11 98,33 Senyawa 1 Senyawa 2 Senyawa 3 1,243 1,315 1,375 -2,337 -2,395 -2,368 -2,4 -2,38 -2,36 -2,34 -2,32 -2,3 Skin P ermeability (log KP) CaCo 2 permeabilit y (log P app; log cm/ s) In tes tinal ab sirp tion (l%)
Gambar 1 . Struktur Senyawa Uji
obat  yang  lain  (Shargel et  al .,  2012).  Hasil  perhitungan ekskresi menunjukkan bahwa senyawa 1 dan 2 memiliki total clearance 0,869 log ml/min/kg ( Gambar 5 ). Hasil uji toksisitas  menunjukkan  bahwa  senyawa  1  dan  2  tidak
bersifat  toksik,  yang bermakna  kedua senyawa ini  tidak bersifat  mutagenik.  Selain  itu  senyawa  1  dan  2  juga diprediksi tidak bersifat hepatotoksik (Gambar 6).

## Hasil Uji Molecular Docking
Penelitian  ini  menggunakan  reseptor  dengan  kode PDB ID 2IDZ yang di download dari protein data bank https://www.rcsb.org/structure/2IDZ . Reseptor ini merupakan  kelompok  oksireduktase  yang  berasal  dari
organisme Mycobacterium  tuberculosis .  Reseptor  ini dipilih  karena  dari  struktur  kristal  yang  diperoleh memiliki  resolusi  2 A⁰ dan  berasal  dari M.tubercolisis . Reseptor  ini  merupakan  tipe  enoil-ACP-CoA  yang membentuk  kompleks  dengan  NADH-INH  (Dias et  al ., 2007). Isoniazid atau INH merupakan pro-drug di mana setelah  diaktivasi  akan  menghambat  produk  adisi  dari INH-NAD  (Khan et  al .,  2019).  Berikutnya,  menjadi penyedia  asam  mikolat  yang  merupakan  penyusun  dari dinding sel mycobacterium (Dias et al ., 2007; Khan et al ., 2019).
Reseptor  ini  terdiri  dari  satu  untai  protein  dan memiliki dua cavity dengan volume 396,88 ( cavity 1) dan 76,88 ( cavity 2). Docking dilakukan pada cavity 1 tempat di mana native ligand berada. Native ligand yaitu senyawa 4-((R)-(5-(amino(hidroksi)metanidil)-1- (Bitencourt-
Ferreira  &  de  Azevedo,  2019;  Rosita,  2019). ((2R,3R,4S,5R)-5-((((((((2R,3S,4R,5R)-5-(6- aminopurin-9-ium-7-id-9-il)-3,4- dihidroxytetrahidrofuran-2- il)metoksi)oksidofosforil)oksi)oksidofosforil)oksi)metil) -3,4-dihidroksitetrahidrofuran-2-yl)pyidin-1-ium-3,4- diid-4(3H)-yl)(hidroksi)metil)-2,5-dihidropiridine-2,5- diida  dengan  kode  ZID_300.  Dalam  sisi  aktif  reseptor, ligand akan berinteraksi kimia, sesuai dengan konformasinya.  Interaksi  kimia  yang  dianalisis  oleh Molegro ini  dapat  berupa  ikatan  hidrogen,  ikatan hidrofobik ataupun sterik. Ikatan hidrogen terjadi antara molekul reseptor dengan ligan melalui atom hidrogen dan atom yang bersifat elektronegatif seperti O dan N, atom yang terdapat di dalam senyawa benzoksazinon. Adapun ikatan  hidrofobik  dapat  terbentuk  dari  ikatan  Vander Walls  (Rosita,  2019)  antara  ligan  dengan  reseptor. Misalnya  cincin  aromatis  yang  juga  menjadi  inti  dari turunan  benzoksazinone.  Setiap  hubungan  kimia  antara ligan dengan reseptor membutuhkan energi tertentu sesuai dengan  struktur  dan  posenya.  Energi  yang  paling  kecil akan memberikan konfirmasi yang paling stabil, sehingga dapat  diprediksi  akan  menghasilkan  efek  biologis  yang paling  potensial  (Bitencourt-Ferreira  &  de  Azevedo, 2019).
Pada penelitian ini selain tiga senyawa uji dilakukan juga  uji  terhadap  isoniazid,  sebab,  selain  sudah mengalami  banyak  resistensi,  isoniazid  merupakan  obat
Gambar  4 .  Profil  Metabolisme  Senyawa  1,  2,  dan  3. Categorical yes or no, yes = 1, no = 0
Gambar  5 .  Profil  Metabolisme  Senyawa  1,  2,  dan  3. Categorical yes or no, yes = 1, no = 0
TB  yang  paling  banyak digunakan  (Bastos et  al .,  2014; Kendall et  al .,  2015).  Hasil  uji molecular  docking ditampilkan  pada Gambar  7 .  Menggunakan Molegro Virtual  Docker diperoleh  nilai moldock  score dan  juga rerank score . Dari Gambar 7 tampak jelas bahwa senyawa 2  dan  senyawa  3  memiliki moldock  score dan rerank score yang  lebih  rendah  dibandingkan  isoniazid. Sehingga  dapat  diprediksi  bahwa  senyawa  ini  memiliki potensi  yang  lebih  tinggi.  Di  antara  ketiga  senyawa  uji, senyawa  3  diperkirakan  memiliki  aktivitas  yang  paling tinggi  sebab  memiliki rerank  score dan moldock  score yang  paling  rendah.  Hal  ini  dapat  disebabkan  karena senyawa 3 memiliki interaksi kimia yang paling banyak dibandingkan  dengan  senyawa  uji  yang  lain.  Jenis interaksi ini ditunjukkan oleh peta ligan pada Gambar 8 , yang menunjukkan adanya ikatan hidrogen dari senyawa 3  terhadap  residu  nomor  325,  345,  dan  393.  Adapun ikatan  hidrofobik  tampak  lebih  banyak  dibandingkan dengan  ikatan  hidrogen,  yang  diperoleh  dari  cincin aromatis  pada  inti  benzoksazinone  dan  juga  ikatan hidrofobik dari inti aromatis pada cincin benzoxazinone dan  juga substituen  pada  atom  karbon  nomor  2.   Untuk ikatan  hidrofobik  pada  inti  benzoxazinone  terjadi  pada residu asp 148, phe 149, dan ala 191, baik pada senyawa 1,  2  dan  3.  Sedangkan  untuk  subsituan  2-fenil  pada senyawa 2, memberikan 1 tambahan ikatan hidrofobik ya itu  thr  196.  Substituen  2-[2-(4-metoksifenil)vinil]  pada senyawa 3 memberikan tambahan ikatan yang jauh lebih banyak  yaitu  ile  16  dan  ile  21,  ser  20,  serta  thr  196. Dengan  demikian  atom  karbon  nomor  2  dari  cincin benzoxazinone  menjadikan  tempat  yang  menarik  untuk dilakukan  modifikasi  struktur  guna  meningkatkan
aktivitasnya  sebagai  anti  tuberkulosis  melalui  ikatan dengan enzim enoil ACP-CoA.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  kalkulasi  pkcsm,  senyawa  1,2,3 diprediksi  memiliki  profil  absorpsi  yang  baik  dan skin permeability yang  baik  sehingga  dapat  diberikan  secara per oral maupun transdermal. Senyawa uji juga diketahui mampu menembus BBB sehingga dapat digunakan untuk menangani mikobakteria. Secara in silico senyawa 2 dan 3 diperkirakan memiliki potensi aktivitas anti tuberkolosis yang lebih baik  dibandingkan dengan isoniazid yang saat ini  banyak  digunakan  melalui  ikatan  dengan  reseptor enoil  ACP-CoA.  Atom  karbon  nomor  2  dari  cincin benzoksazinone  menjadi  titik  modifikasi  yang  potensial untuk rancang struktur obat guna menghasilkan aktivitas yang lebih kuat.

## DAFTAR PUSTAKA
Bastos, M. L., Hussain, H.,Weyer, K., Garcia-Garcia, L., Leimane,  V.,  Leung,  C.  C. et  al .  (2014) ‘Treatment outcomes of patients with multidrug- resistant and extensively drug-resistant tuberculosis  according  to  drug  susceptibility testing  to  first-  and  second-line  drugs:  An individual  patient  data  meta-analysis’, Clinical
Infectious Diseases , 59(10). doi: 10.1093/cid/ciu619.
Begley,  C.,  Amaraneni,  A.  and  Lutwick,  L.  (2015) ‘Mycobacterium avium-intracellulare brain abscesses  in  an  HIV-infected  patient’, IDCases , 2(1). doi: 10.1016/j.idcr.2014.11.002.
Bitencourt-Ferreira,  G.  and  de  Azevedo,  W.  F.  (2019) ‘Molegro virtual docker for docking’, in Methods in  Molecular Biology . doi:  10.1007/978-1-4939- 9752-7_10.
Dahlgren,  D.  and  Lennernäs,  H.  (2019)  ‘Intestinal permeability  and  drug  absorption:  predictive experimental, computational and  in  vivo approaches’, Pharmaceutics , 11(8), pp. 411–420. doi: 10.3390/pharmaceutics11080411.
Gambar  7 .  Grafik  Nilai Rerank  Score dan Moldock
Score
Gambar 8 . Peta Interaksi Ligand terhadap Reseptor dalam Cavity 1. A = Senyawa 1, B = Senyawa 2, C= Senyawa 3. Warna Biru menunjukkan Ikatan Hidrogen, Warna Merah menunjukkan Ikatan Hidrofobik
David,  H.  L.  (1970)  ‘Probability  distribution  of  drug-
resistant  mutants  in  unselected  populations  of
Mycobacterium
tuberculosis.’,
Applied microbiology , 20(5). doi: 10.1128/aem.20.5.810- 814.1970.
Dias, M. V. B., Vasconcelos, I. B., Prado, A.M.X., Fadel, V., Basso, L. A., de Azevedo, W. F., et al . (2007)
‘Crystallographic  studies  on  the  binding  of isonicotinyl-NAD  adduct  to  wild-type  and isoniazid  resistant  2-trans-enoyl-ACP  (CoA) reductase  from  Mycobacterium  tuberculosis’, Journal  of  Structural  Biology ,  159(3),  pp.  369– 380. doi: 10.1016/j.jsb.2007.04.009.
Ekowati,  J.,  Diyah,  N.W.,  Nofianti,  K.A.,  Hamid,  I.S., Siswandono.  (2018)  ‘Molecular  docking  of ferulic  acid  derivatives  on  P2Y12  receptor  and their ADMET prediction’, Journal of Mathematical and Fundamental Sciences , 50(2). doi: 10.5614/j.math.fund.sci.2018.50.2.8.
Jang,  G.  J.  and  Chung,  J.  H.  (2020)  ‘Diagnosis  and treatment  of  multidrug-resistant  tuberculosis’,
Yeungnam Univ J Med , 37(4), pp. 277–285. doi: 10.12701/yujm.2020.00626.
Kanfer,  I.  and  Shargel,  L.  (2020)  ‘Approved  Drug
Products with Therapeutic Equivalence Evaluations  (The  Orange  Book)’,  in Generic Drug Product Development . doi:
10.3109/9781420020014-4.
Kendall, E. A., Fofana, M. O. and Dowdy, D. W. (2015) ‘Burden  of  transmitted  multidrug  resistance  in epidemics  of  tuberculosis:  A  transmission modelling  analysis’, The  Lancet  Respiratory Medicine , 3(12), pp. 963–972. doi: 10.1016/S2213-2600(15)00458-0.
Khan,  S.  R.,  Manialawy,  Y.  and  Siraki,  A.  G.  (2019) ‘Isoniazid and host immune system interactions: A  proposal  for  a  novel  comprehensive  mode  of action’, British  Journal  of  Pharmacology , 176(24). doi: 10.1111/bph.14867.
Kim,  S.  J.  (2005)  ‘Drug-susceptibility  testing  in tuberculosis: Methods and reliability of results’, European  Respiratory  Journal ,  25(3).  doi: 10.1183/09031936.05.00111304.
Krátký, M., Vinová, J., Novotná, E., Mandíková, J., Wsól, V.,  Trejtnar,  F., et  al .  (2012)  ‘Salicylanilide derivatives  block  Mycobacterium  tuberculosis through  inhibition  of  isocitrate  lyase  and methionine aminopeptidase’, Tuberculosis , 92(5), pp. 434–439. doi: 10.1016/j.tube.2012.06.001.
Li, X.,  Liu, N.,  Zhang, H., Knudson, E., Slayden, R.A. Tonge,  P.  J. et  al .  (2010)  ‘Synthesis  and  SAR studies  of  1,4-benzoxazine  MenB  inhibitors: Novel antibacterial agents against Mycobacterium  tuberculosis’, Bioorganic  and Medicinal  Chemistry  Letters ,  20(21),  pp.  6306–
09. doi: 10.1016/j.bmcl.2010.08.076.
Mohajan, H. K. (2015) ‘Tuberculosis is a Fatal Disease among  Some  Developing  Countries  of  the World’, American Journal of Infectious Diseases and Microbiology , 3(1), pp. 18–31.
Mpagama,  S.  G.,  Ezekiel,  M.  J.,  Mbelele,  P.  M., Chongolo, A.M., Kibiki, G. S., de Guex, K.P., et al . (2020) ‘Gridlock from diagnosis to treatment of multidrug resistant tuberculosis (MDR-TB) in Tanzania:  patients’  perspectives  from  a  focus group  discussion’, BMC  Public  Health ,  20(1). doi: 10.1186/s12889-020-09774-3.
Mulyawan,  I.  K.  (2023) Ayo  Bersama  Akhiri  TBC, Indonesia Bisa, Dinas Kesehatan NTB . Available at: https://dinkes.ntbprov.go.id/artikel/ayo- bersama-akhiri-tbc-indonesia-bisa/ (Accessed: 28 February 2024).
Nofianti,  K.  A.  and  Ekowati,  J.  (2020)  ‘O- Hydroxycinnamic derivatives as prospective anti- platelet  candidates:  In  silico  pharmacokinetic screening and evaluation of their binding sites on COX-1  and  P2Y12  receptors’, Journal  of  Basic and  Clinical  Physiology  and  Pharmacology , 30(6). doi: 10.1515/jbcpp-2019-0327.
Nofianti, K. A., Ekowati, J. and Astika, I. G. N. (2009) ‘Pengaruh lama pemanasan pada sintesis 2-[2-(4- metoksi-fenil)-vinil]-benzo[1.3]oxazin-4-on’, Majalah  Farmasi  Airlangga ,  7(2),  pp.  25–30.
Available at:
https://journal.unair.ac.id/MFA@pengaruh-lama- pemanasan-pada-sintesis-2-[2-(4-metoksi-fenil)- vinil]-benzo[1.3]oxazin-4-on-article-3658- media-13-category-15.html.
Oga-Omenka, C., Tseja-Akinrin, A., Sen, P., Mac-Seing, M., Agbaje, A., Menzies, D., Zarowsky, C. et al . (2020)  ‘Factors  influencing  diagnosis  and treatment initiation for multidrug- resistant/rifampicin-resistant  tuberculosis  in  six sub-Saharan African countries: A mixed-methods systematic review’, BMJ Global Health , 5(7). doi: 10.1136/bmjgh-2019-002280.
Pires, D. E. V., Blundell, T. L. and Ascher, D. B. (2015) ‘pkCSM: Predicting
small-molecule
pharmacokinetic  and  toxicity  properties  using graph-based  signatures’, Journal  of  Medicinal Chemistry , 58(9), pp. 4066–4072. doi: 10.1021/acs.jmedchem.5b00104.
Rosita, A. P. (2019) ‘Molekular Docking Dengan Metode Molegro Virtual Docker Turunan Kalkon Sebagai Antimikroba’,
STOMATOGNATIC-Jurnal
Kedokteran Gigi , 9(1), pp. 39–47.
Shargel, L., Wu-Pong, S. and Yu, A. B. C. (2012) Applied Biopharmaceutics  &  Pharmacokinetics,  Applied Biopharmaceutics &amp; Pharmacokinetics, 6e .
Tekade,  R.  K.  (2018) Basic  fundamentals  of  drug delivery,  Basic Fundamentals  of  Drug  Delivery . doi: 10.1016/C2018-0-03215-6.
Vilchèze, C., Morbidoni, H.R., Weisbrod, T.R., Iwamoto, H.,Kuo,  M.,  Sacchettini,  J.C. et  al .  (2000)
‘Inactivation  of  the  inhA-encoded  fatty  acid synthase  II  (FASII)  enoyl-  acyl  carrier  protein reductase induces accumulation of the FASI end products  and  cell  lysis  of  Mycobacterium smegmatis’, Journal of Bacteriology , 182(14), pp. 4059–67. doi: 10.1128/JB.182.14.4059- 4067.2000.
Watanabe,  R.,  Esaki,  T.,  Kawashima,  H.,  Natsume- Kitatani, Y., Nagao, C., Ohashi, R. et al . (2018) ‘Predicting Fraction Unbound in Human Plasma from Chemical Structure: Improved Accuracy in the Low
Value
Ranges’, Molecular
Pharmaceutics ,  15(11),  pp.  5302–5311.  doi: 10.1021/acs.molpharmaceut.8b00785.
WHO  (2019) WHO  consolidated  guidelines  on  drug- resistant  tuberculosis  treatment.  Geneva:  World Health Organization;  Geneva .
Zampieri, D., Mamolo, M.G.,Filingeri, J., Fortuna, S., De Logu,  A.,  Sanna,  A.,  Zanon,  D. et  al .  (2019)
‘Design, synthesis and antimycobacterial activity of  benzoxazinone  derivatives  and  open-ring analogues:  Preliminary  data  and  computational analysis’, Bioorganic  &  Medicinal  Chemistry Letters , 29(17), pp. 2468–2474. doi:
https://doi.org/10.1016/j.bmcl.2019.07.025.