PENGARUH Nigella sativa TERHADAP CD4 + IL5, CD8 + IL5, DAN KADAR INTERLEUKIN 5

## SERUM PADA ANAK ASMA RINGAN DAN SEDANG
Tommy Nugroho Wirawan*  , Wisnu Barlianto**, HMS Chandra Kusuma**

## Abstrak
Asma merupakan  penyakit inflamasi kronis pada saluran napas yang  menjadi masalah kesehatan di dunia. Respons inflamasi pada pasien asma melibatkan banyak reaksi yang saling terkait antara epitel organ respirasi,  sistem  imun  alami  dan  adaptif  yang  ditunjukkan  oleh  aktivasi  Th2.  Salah  satu  sel  efektor  yang penting pada eksaserbasi asma eosinofil yang aktivasinya diperantarai sitokin IL-5. IL-5 dihasilkan oleh CD4 + dan  CD8 + .  Nigella  sativa  mengandung  thymoquinone  yang  berfungsi  sebagai  imunomodulator.  Tujuan penelitian adalah m engkaji efek pemberian Nigella sativa terhadap IL-5 serum dan jumlah sel CD4 + IL-5 + dan CD8 + IL-5 + pada  anak  asma  ringan  dan  sedang.    Desain  penelitian  adalah  pre-post  controlled  study. Sebanyak 28 anak dengan rentang usia 5-18 tahun yang dibagi menjadi empat kelompok perlakuan, yaitu kelompok A dan B: asma ringan dan sedang dengan terapi standar; Kelompok C dan D: asma ringan dan sedang  dengan  terapi  standar  +  Nigella  sativa  dengan  dosis  600  mg  per  hari  (15-30  mg/kgBB/hari)  dan diberikan selama 8 minggu. Kadar IL-5 serum tidak berbeda bermakna pada semua kelompok sebelum dan setelah perlakuan (p > 0,05),  serta jumlah sel CD4 + IL-5 + dan CD8 + IL-5 + tidak berbeda antara sebelum dan setelah perlakuan kecuali pada kelompok A (asma ringan + terapi standar). Nigella sativa tidak memberikan perbedaan  signifikan  terhadap  kadar  IL-5  serum,  jumlah  sel  CD4 + IL-5 + dan  CD8 + IL-5 + dibandingkan  terapi standar  baik  pada  asma  ringan  maupun  sedang  (p  >  0,05).  Uji  korelasi  menunjukkan  tidak  ada  korelasi signifikan  antara  kadar  IL-5  serum,  jumlah  sel  CD4 + IL-5 + dan  CD8 + IL-5 + pada  kelompok  asma  ringan  dan sedang. Pemberian Nigella sativa tidak menurunkan kadar IL-5 serum, jumlah sel CD4 + IL-5 + dan CD8 + IL-5 + darah secara signifikan serta tidak didapatkan korelasi antara kadar IL-5 serum, jumlah sel CD4 + IL-5 + dan CD8 + IL-5 + darah pada kelompok asma ringan dan sedang. Kata kunci: asma, interleukin 5, CD4 + , CD8 + .
EFFECT OF Nigella sativa ADMINISTRATION TOWARD SERUM INTERLEUKIN-5 LEVEL, BLOOD CD4 + IL-5 + , AND CD8 + IL-5 + CHILDREN WITH MILD AND MODERATE ASTHMA

## Abstract
Asthma  is  chronic  inflammatory  disease  of  airway  which  had  been  a  serious  health  problem  in  the world. Inflammatory response in asthma is attributed by interaction of epithelial respiratory organs, innate and adaptive immune response and it is characterized mainly by Th2 activation. One of important effector cells involved in asthma excacerbation is eosinophil that is activated by cytokine IL-5. IL-5 is produced by both CD4 + and CD8 + . Nigella sativa contains thymoquinone functioned as immunomodulator. This study aims to investigate the effect of Nigella sativa toward the level of IL-5 and number of  CD4 + IL-5 + cell and CD8 + IL-5 + in children with mild and moderate asthma. This research was designed as pre-post controlled study. Twenty eight  subjects  5-18  years  old  were  divided  into  4  treatment  groups  as  follow,  group  A  and  B:  mild  and moderate  asthma  with  standard  treatment;    group  C  and  D:  mild  and  moderate  asthma  with  standard treatment  +  Nigella  sativa,  dosage  600  mg  per  day  (15-30  mg/kgBB/day)  and  administered  for  8  weeks. Serum IL-5 level was not significantly different among all groups between pre-treatment and post-treatment (p > 0.05). Furthermore, number of CD4 + IL-5 + and CD8 + IL-5 + were not significantly different between pre and post treatment except for group A (mild asthma + standard treatment). Addition of Nigella sativa showed no significant differences on serum IL-5 level, cells count of CD4 + IL-5 + and CD8 + IL-5 + as compared to standard treatment  both  in  mild  or  moderate  asthma  group  (p  >  0.05).  Correlation  study  showed  no  significant association between serum IL-5 level, cell count of CD4 + IL-5 + and CD8 + IL-5 + both in mild or moderate asthma group. Addition of Nigella sativa would not reduce serum IL-5 level, cell count of CD4 + IL-5 + and CD8 + IL-5 + significantly.  There  was  no  significant  association  between  serum  IL-5  level,  cell  count  of  CD4 + IL-5 + and CD8 + IL-5 + both in mild or moderate asthma groups. Keywords: asthma, interleukin-5, CD4, CD8, Nigella sativa *Program Studi Magister (S2) Ilmu Biomedik, Fakultas Kedokteran, Universitas Brawijaya Malang **Departemen Ilmu Kesehatan Anak, Fakultas Kedokteran, Universitas Brawijaya – RSUD. Dr. Saiful Anwar Malang
E-mail: tommynugroho77@gmail.com

## Pendahuluan
Asma  merupakan  penyakit  inflamasi kronis  pada  saluran  napas  yang  saat  ini menjadi  masalah  kesehatan  dunia  yang serius  dan  mempengaruhi  semua  kelompok usia,  dengan  peningkatan  risiko  prevalensi dan  biaya  perawatan  pada  banyak  negara berkembang. 1,2 Berdasarkan National Health Interview Survey (NHIS), sebanyak 39,5 juta penduduk  atau  129,1  per  1000  penduduk Amerika  menderita  asma.  Prevalensi  asma di seluruh dunia meningkat 50% per dekade dalam  dua  dekade  terakhir,  baik  di  negara maju  maupun  di  negara  berkembang. 3 Menurut  ISAAC  III  (Internasional  Study  of Asthma  and  Allergy  in  Childhood)  pasien anak  asma  usia  13  –  14  tahun  dari  tahun 2000  –  2003  di  Indonesia  sebanyak  2,6%, pembagian  berdasar  prevalensi  asma  anak sekitar  10%  ada  pada  anak  usia  sekolah dasar,  dan  sekitar  6,5%  pada  anak  usia sekolah menengah pertama. 2 Patogenesis  utama  pada  asma  adalah respons  inflamasi  yang  melibatkan  reaksi yang  saling  terkait  antara  epitel  organ respirasi,  sistem  imun  alami  dan  adaptif yang mengawali dan menyebabkan terjadinya  respons  proses  inflamasi  kronis.
Penelitian    menunjukkan  respons  Th2 (CD4 + )  memegang  peranan  penting  dalam patogenesis  asma  melalui  sekresi  dari sitokin interleukin-4 (IL-4) dan interleukin-13 (IL-13),  dan  IL-5  yang  akan  menginduksi proses  inflamasi  pada  asma. 4 Selain  sel  T CD4 + (TCD4), sel  T  sitotoksik  2  (Tc2, TCD8 + ) juga memiliki peranan penting pada patogenesis  asma. 5 Interleukin  5  (IL-5) merupakan  sitokin  proinflamasi  yang dihasilkan oleh sel Th2 (CD4 + ) maupun Tc2 (CD8 + ), mast, group 2 innate lymphoid cells (ILC  2),  CD34 + progenitor  cells,  sel  natural killer (NK), maupun eosinofil yang kemudian akan  merangsang  respons  inflamasi  pada kasus asma eosinofilik. 6 Tujuan  jangka  panjang  tatalaksana asma  adalah  pengendalian  gejala  dan mengurangi  risiko. Global  Initiative  for
Asthma ( GINA) mencantumkan peningkatan kualitas  hidup  merupakan  salah  satu  tujuan dari  tatalaksana  asma.  Tujuan  tatalaksana asma  anak  secara  umum  adalah  mencapai kendali asma sehingga menjamin tercapainya  potensi  tumbuh  kembang  anak secara  optimal.  Obat-obatan  asma  tidak menyembuhkan  asma  secara  total  dan penghentian terapi akan menimbulkan gejala kekambuhan. 1 Oleh  karena  itu,  diperlukan studi  untuk  mencari  alternatif  lain  dari pengobatan  dan  pengendalian  asma. Imunomodulator  adalah  berbagai  macam agen  atau intervensi  imunologis yang  dapat merubah  respons  imun  dengan  jalan menekan ekspresi sel leukosit, menginduksi deviasi  respons  imun,  toleransi  atau memodifikasi  jalur  inflamasi.  Aktivasi  Th2 dan  jalur  aktivasi  eosinofil  melalui  IL-5 merupakan  salah  satu  target  terapi  yang penting pada anak dengan asma. Beberapa penelitian  telah  melaporkan  uji  klinis  pada antibodi  monoklonal  maupun  poliklonal terhadap IL-5 memberikan hasil yang positif pada penurunan kadar eosinofil dengan atau tanpa  perbaikan  klinis  (dengan  asthma control questionnaire dan uji fungsi paru). 7 Nigella  sativa  berpotensi  sebagai imunomodulator serta memiliki efek antiinflamasi.  Kandungan  Nigella  sativa berupa  asam  linoleat  dan  thymoquinone memiliki  efek  antiinflamasi  yang  bermanfaat pada  asma.  Pemberian  thymoquinone,  zat aktif  pada  Nigella  sativa  juga  dapat menurunkan  jumlah  ekspresi  eosinofil, neutrofil dan basofil pada hewan coba yang diinduksi  asma. 8 Penelitian  pada  manusia tentang  efek  thymoquinone  sampai  saat  ini masih  sangat  terbatas  dengan  hasil  yang sangat  bervariasi.  Oleh  karena  itu,  pada penelitian  ini  akan  dikaji  efek  pemberian Nigella  sativa  terhadap  kadar  IL-5  serum, jumlah  sel  limfosit  CD4 + IL-5  dan  jumlah  sel limfosit  CD8 + IL-5  pada  darah  anak  asma ringan dan sedang.

## Bahan dan Metode
Penelitian  ini  merupakan  penelitian eksperimental  dengan  desain  randomized clinical  trial.  Subjek  dibagi  menjadi  4 kelompok  yang  masing-masing  kelompok  7 sampel  dan  total  28  sampel.,  dengan perlakuan  pada  kelompok  A  (asma  ringan) dan  B  (asma  sedang)  terapi  standar, kelompok  C  (asma  ringan)  dan  D  (asma sedang) diberikan terapi standar dan Nigella sativa. Seluruh perlakuan diberikan selama 8 minggu.  Penelitian  ini  dilaksanakan  pada bulan  Januari-September  2016  di  Poli Respirologi Anak Rumah Sakit Saiful Anwar (RSSA) Malang dan Laboratorium Biomedik Fakultas  Kedokteran  Brawijaya  Malang. Populasi  penelitian  ini  adalah  semua  anak yang  didiagnosis  asma  serta  memenuhi kriteria  inklusi  dan  eksklusi  di  Poli Respirologi  Anak  RSSA  Malang.  Subjek adalah  pasien  asma  ringan  dan  sedang. Penelitian ini telah disetujui oleh komite etik penelitian  Universitas  Brawijaya  Malang dengan nomor surat 369/EC/KEPK/06/2015.
Teknik  pengambilan  subjek  penelitian dengan  metode  consecutive  sampling kemudian  dilakukan  randomisasi.  Kriteria inklusi  yaitu  anak  yang  didiagnosis  asma ringan  dan  sedang  berdasarkan Global Initiative  for  Asthma ( GINA),  berusia antara  5-14  tahun,  pasien  dan  orang  tua pasien  bersedia  secara  sukarela  mengikuti penelitian  dan  menandatangani  informed consent,  sedangkan  kriteria  eksklusi  yaitu pasien  yang  menderita  imunodefisiensi, penyakit  autoimun  atau  memiliki  kelainan kardiovaskular,  pasien  menderita  komorbid atau penyakit saluran pernafasan lain seperti sinusitis,  pneumonia,  tuberkulosis  dan kelainan  anatomi  seperti  polip  hidung, pasien  memiliki  riwayat  alergi  berat  seperti syok  anafilaksis  dan  asma  serangan  berat yang  mengancam  jiwa  (life-threatening asthma),  memiliki riwayat gagal napas atau
pernah  diintubasi  dalam  6  bulan  terakhir, pasien sedang mengalami serangan asma. Bahan  pemeriksaan  berasal  dari pungsi  vena.  Pengambilan  sampel  darah dilakukan  pada  awal  perlakuan  dan  setelah minggu  ke-8  di  Laboratorium  RSSA  oleh petugas  laboratorium.  Sampel  darah ditampung  dalam  tabung.  Volume  darah yang  diambil  pada  masing-masing  sampel penelitian  adalah  5  ml.  Sebanyak  3  ml sampel darah dipisahkan untuk pemeriksaan flow  cytometry  yang  dilakukan  di Laboratorium Biomedik Fakultas Kedokteran Universitas  Brawijaya  Malang.  Sisanya sebanyak  2  ml  sampel  darah  diambil serumnya  dan  disimpan  pada  suhu  4˚C untuk  dilakukan  pengukuran  kadar  IL-5 serum menggunakan Elisa Kit Cat. No. ELH- IL5.  Hasil  pemeriksaan  ELISA  dibaca menggunakan  Biorad  Microplate  Reader panjang gelombang 550 nm.
Pengukuran  Jumlah  Sel  Limfosit  CD4 + IL-5 + dan Limfosit CD8 + IL-5 + Darah Sampel  darah  yang  diambil  dengan penambahan  heparin  diencerkan  dengan RPMI (BioWhittaker) dan 2% calf serum dan setelah  penambahan  25  µl  (25  ng/ml) phorbol  12-myristate  13-acetate  (PMA; Sigma),  20  µl  (1µg/ml)  ionomycin  (Sigma), dan  10  µl  (2,5  µM)  monensin  (Sigma) kemudian  diinkubasi  pada  water  bath selama  4  jam  pada  suhu  37  ˚C.  Sampel darah  yang  telah  distimulasi  tersebut kemudian didistribusikan pada 100 µl aliquot ke  tabung  yang  mengandung  20  µl antihuman  CD4-FITC  dan  CD8-PerCp (Becton  Dickinson),  divortex, dan  diinkubasi selama  20  menit  pada  suhu  ruang  dan gelap.  Untuk  memfiksasi  sel,  100  µl IntraPrep  Reagent  1  (DAKO)  ditambahkan pada  masing-masing  sampel  diikuti  vortex dan  inkubasi  selama  15  menit  pada  suhu ruang  dan  gelap  kemudian  diikuti  proses washing  dengan  2  ml  cell  wash  solution. Permeabilisasi  simultan  pada  leukosit  dan
lisis  eritrosit  dilakukan  dengan  cara menambahkan  100  µl  IntraPrep  Reagent  2 (DAKO) dan inkubasi. Prosedur pengecatan intraseluler  meliputi  penambahan  20  µl antibodi  monoclonal  anti-IL-5  terkonjugasi dengan  PE  (Coulter  Immunotech).  Analisis hasil flow cytometry dilakukan dengan mesin
FACS Calibur (Becton Dickinson). Hasil scan ini  akan  memperlihatkan  persentase  jumlah sel  CD4 + yang  memproduksi  IL-5  dan  sel CD8 + yang  memproduksi  IL-5.  Aktivasi  sel dikonfirmasi  dengan  melihat  ekspresi  CD69 yang  akan  diekspresikan  95%  pada  semua sampel.  Analisis  hasil  scan  dilakukan dengan  menggunakan  software  Cell  Quest (Becton Dickinson). 9

## Teknik analisis statistik
Analisis  statistik  dilakukan  dengan menggunakan SPSS 16.0 (SPSS Inc, USA). Data  deskriptif  ditampilkan  dalam  bentuk rerata±SD. Analisis uji beda yang digunakan adalah  ANOVA  bila  data  parametrik  dan Kruskal Wallis bila data non parametrik. Nilai p dikatakan signifikan bila < 0,05.

## Hasil
Penelitian ini melibatkan 28 anak asma ringan dan sedang (rentang usia 5-14 tahun) yang  dibagi  menjadi  4  kelompok  yaitu kelompok  A:  asma  ringan  terapi  standar, kelompok  B:  asma  sedang  terapi  standar, kelompok  C:  asma  ringan  terapi  standar  + Nigella  sativa,  dan  kelompok  D:  asma sedang  terapi  standar  +  Nigella  sativa. Pasien merupakan pasien rawat jalan di Poli Alergi  dan  Imunologi  dan  Poli  Respirologi Anak  Rumah  Sakit  Umum  Dr.  Saiful  Anwar Malang.  Tidak  ada  subjek  yang  mengalami drop  out  pada  penelitian  ini.  Tabel  1 menunjukkan bahwa pada keempat kelompok  perlakuan,  jenis  kelamin  laki-laki dan perempuan memiliki jumlah yang hampir sama.  Karakteristik  responden  berdasarkan umur diketahui pada rentang usia 7-9 tahun. Hasil  uji  statistik  menunjukkan  bahwa  tidak ada  perbedaan  usia  di  antara  keempat kelompok (Kruskal Wallis, p > 0,05).  (Tabel 1).
Tabel 1. Karakteristik subjek penelitian.
Perbedaan Persentase Sel CD8 + -IL-5 Darah Sebelum dan Setelah Perlakuan
Analisis  perbandingan  persentase  sel limfosit  CD8 + -IL-5  darah  sebelum  dan setelah  perlakuan  pada  masing-masing kelompok  menggunakan  uji  paired  T-test (kelompok  A,  C,  dan  D)  dan  uji  alternatif
Wilcoxon (kelompok B). Hasil uji (Gambar 2) menunjukkan  adanya  perbedaan  signifikan
antara sebelum dan setelah perlakuan pada kelompok  A  (asma  ringan  +  terapi  standar) (p  =  0,043),  tetapi  tidak  untuk  kelompok  B (asma sedang + terapi standar) (p = 0,072), kelompok C (asma ringan + terapi standar + Nigella sativa) (p = 0,138), dan kelompok D (asma  sedang  +  terapi  standar  +  Nigella sativa) (p = 0,961).
Gambar 2. Perbedaan persentase sel limfosit CD8 + -IL-5 darah sebelum dan setelah perlakuan. Keterangan:  Kelompok  A  (asma  ringan  +  terapi  standar),  kelompok  B  (asma  sedang  +  terapi  standar), kelompok C (asma ringan + terapi standar + Nigella sativa), kelompok D (asma sedang + terapi standar + Nigella sativa), nilai p < 0,05 signifikan (tanda *).
Perbedaan Persentase Sel Limfosit CD4 + -IL- 5 Darah Sebelum dan Setelah Perlakuan
Analisis  perbandingan  persentase  sel limfosit  CD4 + -IL-5  darah  sebelum  dan setelah  perlakuan  pada  masing-masing kelompok  menggunakan  uji  paired  T-test (kelompok  A,  B,  dan  C)  dan  uji  Wilcoxon sebagai uji alternatif (kelompok D) (Gambar 3). Hasil uji menunjukkan adanya perbedaan signifikan  antara  sebelum  dan  setelah perlakuan pada kelompok A (asma ringan + terapi standar) (p = 0,032), tetapi tidak untuk kelompok B (asma sedang + terapi standar)
(p  =  0.061),  kelompok  C  (asma  ringan  + terapi  standar  +  Nigella  sativa)  (p  =  0,157),
dan  kelompok  D  (asma  sedang  +  terapi standar + Nigella sativa) (p = 0,718).
Analisis  perbandingan  kadar  IL-5 serum sebelum dan setelah perlakuan pada masing-masing  kelompok  menggunakan  uji paired  T-test  (Gambar  4).  Hasil  uji menunjukkan tidak ada perbedaan signifikan antara sebelum dan setelah perlakuan pada kelompok  A  (asma  ringan  +  terapi  standar) (p  =  0,433),  kelompok  B  (asma  sedang  + terapi  standar)  (p  =  0,663),  kelompok  C (asma  ringan  +  terapi  standar  +  Nigella sativa)  (p  =  0,881),  dan  kelompok  D  (asma sedang + terapi standar + Nigella sativa) (p = 0,913).
A B C D Sebelum 0.7525 0.8975 0.7 0.46 Setelah 0.205 0.1975 0.24 0.475 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 Pers en ta se Se l CD 8+ -IL5 Kelompok Sebelum Setelah *
Gambar 3. Perbedaan persentase sel limfosit CD4 + -IL-5 darah sebelum dan setelah perlakuan. Keterangan:  Kelompok  A  (asma  ringan  +  terapi  standar),  kelompok  B  (asma  sedang  +  terapi  standar), kelompok C (asma ringan + terapi standar + Nigella sativa), kelompok D (asma sedang + terapi standar + Nigella sativa), nilai p < 0,05 signifikan (tanda *).

## Gambar 4. Perbedaan kadar IL-5 serum sebelum dan setelah perlakuan.
Keterangan:  Kelompok  A  (asma  ringan  +  terapi  standar),  kelompok  B  (asma  sedang  +  terapi  standar), kelompok C (asma ringan + terapi standar + Nigella sativa), kelompok D (asma sedang + terapi standar + Nigella sativa), nilai p < 0,05 signifikan (tanda *).
Perbedaan Persentase Sel Limfosit CD8 + -IL- 5,  Limfosit  CD4 + -IL-5  Darah dan  Kadar  IL-5
Serum Sebelum Perlakuan
Analisis  perbandingan  persentase  sel limfosit CD8 + -IL-5 (Gambar 2), limfosit CD4 + - IL-5  darah  (Gambar  3),  dan  kadar  IL-5 serum (Gambar 4), sebelum perlakuan pada
4  kelompok  menggunakan  uji  T  tidak berpasangan. Perbandingan antar kelompok yang  memiliki  perbedaan  bermakna  secara statistik adalah pada perbandingan persentase sel limfosit CD8 + -IL-5 dan limfosit CD4 + -IL-5  darah  antara  kelompok  B  (asma sedang  dengan  terapi  standar)  dan kelompok  D  (asma  sedang  dengan  terapi standar + terapi Nigella sativa).
A B C D Sebelum 18.0425 19.97 12.5625 9.27 Setelah 4.0325 2.7975 2.8425 6.5525 0 5 10 15 20 25 30 Pers en ta se Se l CD 4+ -IL -5 Kelompok A B C
D Sebelum 7.49 9.34 7.89 9.72 Setelah 7.97 7.96
7.59 10.15 0 2 4 6 8 10 12 14 Kad ar IL -5 (n g/m L) Kelompok *
Perbedaan Persentase Sel Limfosit CD8 + -IL- 5,  Limfosit  CD4 + -IL-5  Darah dan  Kadar  IL-5 Serum Setelah Perlakuan Analisis  perbandingan  persentase  sel limfosit  CD8 + -IL-5  (Gambar  2),,  limfosit CD4 + -IL-5 darah (Gambar 3), dan kadar IL-5 serum (Gambar 4), setelah perlakuan pada 4 kelompok  menggunakan  uji  T  tidak berpasangan.  Hasil  uji  menunjukkan  tidak ada  perbedaan  signifikan  antara  kelompok asma  ringan  maupun  sedang  yang  diterapi
standar  dengan  ditambahkan  terapi  Nigella sativa.
Hubungan  antara  Persentase  Sel  Limfosit CD8 + -IL-5,  Limfosit  CD4 + -IL-5  Darah  dan Kadar IL-5 Serum Hasil uji korelasi Pearson menunjukkan tidak  ada  hubungan  antara  persentase  sel limfosit  CD8 + -IL-5,  limfosit  CD4 + -IL-5  darah dan kadar IL-5 serum baik pada asma ringan maupun sedang (Tabel 2).
Tabel 2. Uji korelasi Pearson hubungan antara persentase sel limfosit CD8 + -IL-5, limfosit CD4 + -IL-5 darah dan kadar IL-5 serum.

## Pembahasan
Berdasarkan  karakteristik  subjek  jenis kelamin,  jumlah  laki-laki  dan  perempuan hampir  sama  dan  tidak  ada  perbedaan signifikan  di  antara  keempat  kelompok perlakuan.  Selain  itu,  berdasarkan  faktor umur didapatkan rentang usia rata-rata 7 - 9 tahun  dan  hasil  uji  statistik  menunjukkan bahwa  tidak  ada  perbedaan  usia  di  antara keempat  kelompok.  Hal  ini  merupakan prasyarat  utama  supaya  tidak  terjadi  bias pada  hasil  penelitian  terutama  yang berkaitan  dengan  faktor  jenis  kelamin  dan usia.
Analisis  perbandingan  persentase  sel limfosit  CD8 + -IL-5  darah  sebelum  dan setelah  perlakuan  pada  masing-masing kelompok  menggunakan  uji  paired  T-test (kelompok  A,  C,  dan  D)  dan  uji  alternatif Wilcoxon (kelompok B). Hasil uji menunjukkan  adanya  perbedaan  signifikan antara sebelum dan setelah perlakuan pada kelompok A (asma ringan + terapi standar), tetapi tidak pada  kelompok B (asma sedang + terapi standar), kelompok C (asma ringan +  terapi  standar  +  Nigella  sativa),  dan kelompok  D  (asma sedang  +  terapi  standar +  Nigella  sativa).  Hal  ini  menunjukkan asumsi bahwa terapi standar pada kelompok
asma ringan mampu menurunkan jumlah sel limfosit  CD8 + -IL-5  darah  dan  penambahan terapi Nigella sativa tidak terlalu berpengaruh  pada  penurunan  sel  limfosit CD8 + -IL-5 darah.
Analisis  perbandingan  persentase  sel limfosit  CD4 + -IL-5  darah  sebelum  dan setelah  perlakuan  pada  masing-masing kelompok  menggunakan  uji  paired  T  test (kelompok  A,  B,  dan  C)  dan  uji  Wilcoxon sebagai  uji  alternatif  (kelompok  D).  Ada perbedaan  signifikan  antara  sebelum  dan setelah  perlakuan  pada  kelompok  A  (asma ringan  +  terapi  standar),  tetapi  tidak  untuk kelompok B (asma sedang + terapi standar), kelompok C (asma ringan + terapi standar + Nigella  sativa),  dan  kelompok  D  (asma sedang  +  terapi  standar  +  Nigella  sativa). Hasil  penelitian  diketahui  bahwa  jumlah  sel limfosit  CD4 + -IL-5  darah  menunjukkan asumsi  yang  sama  bahwa  terapi  standar pada  kelompok  asma  ringan  mampu menurunkan  jumlah  sel  limfosit  CD4 + -IL-5 darah dan penambahan terapi Nigella sativa tidak  terlalu  berpengaruh  pada  penurunan sel limfosit CD4 + -IL-5 darah.
Analisis  perbandingan  kadar  IL-5 serum sebelum dan setelah perlakuan pada masing-masing  kelompok  menggunakan  uji paired  T  test  menunjukkan  tidak  ada perbedaan  signifikan  antara  sebelum  dan setelah  perlakuan  pada  semua  kelompok. Penelitian  mengenai  peran  CD4 + dan  CD8 + penghasil  IL-5  maupun  IL-5  saja  pada patogenesis  asma  telah  banyak  diteliti, terutama  pada  kasus  asma  eosinofilik. 6
Namun demikian, interaksi antara kedua sel tersebut serta implikasinya pada perburukan asma  masih  dalam  proses  investigasi. 6
Peningkatan  sel  limfosit  TCD8 + dalam saluran  napas  pasien  asma  dibuktikan  dari hasil biopsi bronkus dari pasien asma atopik dan  non  atopik  yang  mengandung  sel limfosit  TCD8 + yang  menghasilkan  IL-4  dan IL-5. 12 Machura  et  al.  (2010)  melaporkan bahwa terjadi peningkatan produksi IL-4, IL-
5  dan  IFNγ  oleh  sel  limfosit  T  CD8+  pada pasien  asma. 9 Pada  pasien  asma didapatkan  perbedaan  perilaku  sel  limfosit TCD8 + dari  darah  perifer  dan  sel  limfosit TCD8 + yang  berada  di  saluran  napas. 9 Hal ini  mungkin  mencerminkan  preferential homing  atau  perubahan  aktivasi  yang  yang disebabkan  oleh  faktor  lingkungan  pada saluran napas. 10
Penelitian Lloyd et al. (2009)  baik pada model  manusia  maupun  hewan  coba memberikan  bukti  bahwa  sel  Th2,  melalui produksi  sitokin  seperti  interleukin-4  (IL-4), IL-5  dan  IL-13,  merupakan  kunci  utama patofisiologi  asma.  Bukti  bahwa  IL-5 dihasilkan  oleh  sel  limfosit  T  CD4 + dapat ditunjukkan melalui peningkatan sekresi IL-4 dan  IL-5  pada  sel  limfosit  TCD4 + yang diisolasi  dari  cairan  bronchoalveolar  lavage (BAL)  pasien  asma. 10 Produksi  sitokin  Th2 awalnya  diketahui  berasal  dari  sel  limfosit TCD4 + ,  namun  sel  limfosit  TCD8 + mampu mensekresi  sitokin  Th2  dan  juga  penting dalam  patofisiologi  alergi  dan  sensitivitas saluran napas. 9
Nigella  sativa  telah  banyak  diteliti mengenai  efeknya  sebagai  imunomodulator pada  berbagai  penyakit  termasuk  asma. 8 Thymoquinone sebagai zat aktif utama pada Nigella  sativa  memiliki  efek  antiinflamasi, dengan mekanisme menurunkan sitokin Th2 yaitu  IL-4,  IL-5  dan  IL-13,  IgE  serum, eosinofil  paru,  5-lipooksigenase  dan siklooksigenase  (COX)  dalam  metabolisme asam  arakidonat,    menghambat  influk  Ca 2+ sehingga  dapat  mencegah  degranulasi  sel mast  dan  menurunkan  TNF. 11 Pemberian minyak  biji  Nigella  sativa  mampu menurunkan  tingkat  infiltrasi  sel-sel  radang pada  saluran  pernafasan. 11 Pemberian thymoquinone  pada  mencit  yang  telah disensitisasi  OVA  menunjukkan  penurunan IgE  dan  IgG1  spesifik  OVA,  penurunan hiperplasia  sel  goblet  dan  penurunan produksi  IL-4,  IL-5  dan  IL-13  dalam  cairan bronchoalveolarlavage  (BAL).Selain  itu,
ditunjukkan  juga  terjadinya  perubahan  Th2 ke  Th1  setelah  pemberian  thymoquinon dengan terjadinya peningkatan IFN-γ. 12
Hasil  penelitian  ini  sedikit  berbeda dengan  penelitian  sebelumnya  yaitu  tidak ada perbedaan signifikan antara terapi asma dengan  penurunan  sel  limfosit  CD4 + dan limfosit CD8 + yang memproduksi IL-5. Hal ini dapat disebabkan oleh sumber sampel yang berbeda.  Penelitian  ini  menggunakan sampel  dari  serum  darah  pasien  dan mungkin  kurang  dapat  merepresentasikan patogenesis asma pada pasien. Pengambilan sampel dari cairan bronchoalveolar  lavage  dapat  dijadikan alternatif  untuk  mengukur  parameter  ini tetapi  secara  teknis  hal  ini  sulit  dilakukan pada pasien anak.
Untuk  mengetahui  status  hubungan persentase  sel  limfosit  CD8 + -IL-5,  limfosit CD4 + -IL-5  darah  dan  kadar  IL-5  serum digunakan  uji  korelasi  Pearson.  Hasil  uji menunjukkan  bahwa  tidak  ada  hubungan antara  persentase  sel  limfosit  CD8 + -IL-5, limfosit  CD4 + -IL-5  darah  dan  kadar  IL-5 serum  baik  pada  asma  ringan  maupun sedang.  Interleukin  5  (IL-5)  merupakan sitokin  yang  berperan  penting  dalam patofisiologi  asma.  IL-5  yang  bertindak sebagai pencetus aktivasi eosinofil,
mempengaruhi  adhesi,  ekspresi  reseptor membran, kemotaksis dan sintesis mediator- mediator  inflamasi. 10 Hasil  penelitian menunjukkan  tidak  adanya  korelasi  antara jumlah  sel  limfosit  CD4 + dan  limfosit  CD8 + penghasil IL-5 dengan kadar IL-5 serum. Hal ini  mungkin  disebabkan  oleh  timing pengambilan  sampel  darah  yang  kurang tepat.
Keterbatasan  penelitian  ini  meliputi beberapa  hal  yaitu  timing  pengambilan sampel darah berkaitan dengan eksaserbasi serangan asma, maupun jenis sampel yang dipertimbangkan.  Penelitian  selanjutnya diharapkan  dapat  menutupi  kekurangan pada  penelitian  dengan  menggunakan
subjek  yang  lebih  banyak,  dan  mungkin dengan  desain  yang  lebih  baik  terutama pada  timing  pengambilan  sampel  dan  lama pemberian  Nigella  sativa.  Selain  itu,  karena thymoquinone sebagai zat aktif pada Nigella sativa telah menunjukkan efikasinya sebagai imunomodulator,  mungkin  perlu  dilakukan penelitian mengenai pemberian thymoquinone  pada  jalur  asma  eosinofilik dengan  menganalisis  sitokin  dan  parameter yang  lain  sehingga  didapatkan  gambaran mengenai  titik  tangkap  atau  aktivitas  dari Nigella sativa.

## Kesimpulan
Pemberian  Nigella  sativa  pada  anak asma  ringan  maupun  sedang  yang mendapat  terapi  standar  tidak  menurunkan kadar IL-5 serum secara bermakna terutama pada  kelompok  asma  sedang.  Pemberian Nigella  sativa  pada  anak  asma  ringan maupun  sedang  yang  mendapat  terapi standar  dapat  menurunkan  persentase  sel limfosit CD4 + IL-5 dan CD8 + IL-5 darah namun tidak  bermakna  secara  statistik.  Tidak didapatkan hubungan yang bermakna antara persentase  sel  limfosit  CD8 + IL-5,  CD4 + IL-5, dan  kadar  IL-5  serum  pada  anak  asma ringan dan sedang.

## Saran
Perlu  dilakukan  penelitian  yang  sama dengan  menyertakan  data  persentase  sel limfosit CD8 + -IL-5, CD4 + -IL-5, dan kadar IL-5 serum pada anak sehat, jumlah sampel yang lebih  besar  serta  pemantauan  ketepatan dosis  terapi,  cara  konsumsi  dan  perlakuan Nigella sativa serta plasebo untuk kelompok kontrol.

## Daftar Pustaka
1. Global  Initiative  Study  for  Asthma (GINA).  Global  Asthma  Strategy  of
Management  and  Prevention,  2016. Cape  Town:  National  Heart,  Lung  and Blood Institute. 2016.
2. Abbas  AK,  Litchman  AH.  Cellular  and
Molecular  Immunology.  8 th Edition. Boston: Saunders. 2015. 3. Bergeron  C,  Boulet  LP.  Structural Changes in Airway Disease: Characteristic, Mechanisms, Consequences,  and  Pharmacologic Modulation. Chest. 2006. 129:1068-87.
4. Borees MP  and  Bjorrksten  B.  Peripheral Blood  Eosinophils  and  IL-4  in  Infacy  in Relation  to  the  Appereance  of  Allergic Disease During the First 6 Years of Life. Pediatr  Allergy  Immunol.  2004;    15:216- 220.
5. Lee SY, Kim SJ, Kwon SS, Kim YK, Kim KH,  Moon  HS,  Song  JS,  Park  SH. Distribution  and  Cytokine  Production  of CD4  and  CD8  T-lymphocyte  Subsets  in Patients with Acute Asthma Attacks. Ann Allergy  Asthma  Immunol.    2001; 86(6):659-64.
6. Nussbaum  JC,  Van  Dyken  SJ,  von Moltke J, et al. Type 2 Innate Lymphoid Cells  Control  Eosinophil  Hemostasis. Nature. 2013; 502: 245-248.
7. Nair  P,  Pizzichini  MM,  Kjarsgaard  M,  et al.  Mepolizumab  for  Prednisone-
Dependent  Asthma  with  Sputum Eosinophilia.  New  England  Journal  of Medicine. 2009; 360:985-993.
8. Azimi  E,  Athari  SM,  Afshari  F,  Eftekhari
A,  Athari  SS.  Effects  of  Black  Seed (Nigella  Sativa)  on  Type  2  Cytokines Gene Expression and Mucus Production in  the  Airways  of  Asthmatic  Mice.  Arch Med Lab Sci. 2016; 2(2): 46-53.
9. Machura E, Mazur B, Rusek-Zychma M, Barc-Czarnecka  M.  Cytokine  Production in  Peripheral  Blood  CD4 + and  CD8 + T Cells  in  Atopic  Childhood  Asthma. Clinical and Developmental Immunology. 2010.
10. Lloyd  CM  and  Hawrylowicz  CM. Regulatory T Cells in Asthma. Immunity. 2009; 9.
11. Salem  M.  Immunomodulator  and Therapeutics  Properties  of  The  Nigella sativa  L.  Seed.  Int  Immunopharmacol.
2005; 5:1749-1770.
12. Gazzar  ME,  Mezayen  RE,  Marecki  J, Nicolls  M,  Canastar  A,  Dreskin  S.  Anti- Inflammatory  Effect  of  Thymoquinone  in A  Mouse  Model  of  Allergic  Lung Inflammation.  Int  Immunopharmacol. 2006; 6:1135-42.