## SINTESIS DAN UJI TOKSISITAS SENYAWA ANALOG KALKON TURUNAN 2’-HIDROKSIASETOFENON DAN HALOBENZALDEHID

## Ihsan Ikhtiarudin, Lelani, Adel Zamri, Hilwan Yuda Teruna, Yuharmen
Grup Riset Sintesis Organik, Jurusan Kimia, FMIPA, Unversitas Riau
Email: ihsan_ikhtiarudin@yahoo.com

## ABSTRAK
Kalkon  merupakan  senyawa  metabolit  sekunder  golongan  flavonoid  yang  terdapat  pada  beberapa jenis  tumbuhan. Senyawa  ini  dikenal  memiliki  berbagai  bioaktivitas  yang  menarik.  Dalam  bidang  sintesis,  senyawa  ini  digunakan untuk  mensintesis  berbagai  macam  senyawa  heterosiklik  seperti  benzodiazepin,  pirazolin,  flavanon,  flavonol,  dan senyawa  turunan  kalkon  lainnya  yang  juga  memiliki  bioaktivitas    yang  menarik.  Oleh  karena  itu,  senyawa  ini banyak dijadikan sebagai  molekul target  untuk  keperluan pencarian  senyawa-senyawa aktif  sebagai  kandidat obat, salah satunya adalah sebagai obat antikanker. Pada penelitian ini, tiga analog kalkon turunan 2’-hidroksiasetofenon dan halobenzaldehid telah disintesis menggunakan metode stirer dengan katalis KOH dan pelarut PEG-400. Struktur setiap  produk  dikarakterisasi  dengan  spektroskopi  UV-Vis,  FTIR, 1 H  NMR, 13 C  NMR,  dan  HRMS.  Uji  toksisitas dilakukan menggunakan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Berdasarkan hasil uji BSLT, ketiga senyawa tersebut berpotensi sebagai senyawa antikanker dengan nilai LC 50 <200 µg/mL.
Kata Kunci : kalkon, uji toksisitas, Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)

## 1. PENDAHULUAN
Kanker  merupakan  penyakit  yang  ditandai dengan  pertumbuhan  yang  tidak  terkontrol  dari sel-sel  abnormal  dan  menjadi  masalah  utama  di seluruh dunia. Penyakit ini adalah penyakit fatal dan  diprediksikan  sebagai  salah  satu  penyakit penyebab  utama  kematian  di  masa  depan. Meskipun  penelitian  tentang  kanker  telah menghasilkan  sejumlah  solusi  baru,  obat-obatan yang digunakan dalam pengobatan kanker masih memiliki  banyak  keterbatasan.  Oleh  karena  itu, hingga  saat  ini  penelitian  yang  berhubungan dengan  penemuan  obat  antikanker  baru  yang ampuh, aman dan selektif masih terus dilakukan oleh para peneliti.
Kalkon  merupakan  senyawa  metabolit sekunder  golongan  flavonoid  yang  dapat ditemukan  pada  beberapa  jenis  tumbuhan. Senyawa  kalkon  dan  turunannya  dikenal memiliki  beragam  aktivitas  biologi  yang menarik,  seperti  antimikroba  (Tiwari et  al .,
2010), antimalaria, antioksidan, antitumor (Prasad  et  al.,  2006),  anti-inflamasi  (Yadav  et al.,  2011),  antikanker  (Syam  et  al.,  2012)  dan lain sebagainya. Dalam bidang sintesis, senyawa kalkon  telah  banyak  digunakan  untuk  membuat berbagai macam senyawa heterosiklik (Tiwari et al ., 2010) seperti isoksazol, quinolinon, tiadiazin,  benzodiazepin,  flavon  (Jayapal et  al. , 2010b),  ketimin  ,  tak  jenuh  (Lonkar et  al., 2011),  pirazolin  dan  turunannya  (Sharshira  & Hamada,  2011;  Sing et  al., 2009),  flavonol (Britton et  al .,  2012;  Jadhav et  al., 2008), flavanonol  (Patil,  2012)  flavanon  (Kulkarni, 2012) dan senyawa turunan lainnya (Gambar 9) yang  juga  memiliki  aktivitas  biologi    yang menarik.  Oleh  karena  itu,  senyawa-senyawa analog kalkon dan turunannya banyak dijadikan sebagai molekul target untuk keperluan pencarian senyawa-senyawa aktif sebagai kandidat obat, salah satunya adalah sebagai obat antikanker.
Gambar 4. Berbagai senyawa turunan 2’-hidroksikalkon
Aktivitas biologis kalkon, selain disebabkan oleh  gugus  karbonil  α,β  tak  jenuh,  juga dipengaruhi  oleh  subtituen  yang  terikat  pada kedua  cincin  aromatik  (Kamble et  al., 2011). Oleh  karena  itu,  variasi  subtituen  pada  cincin aromatik  akan  menghasilkan  kalkon  dengan struktur  yang  beragam.  Kalkon  dengan  variasi struktur yang luas hanya dapat diperoleh melalui sintesis  secara  kombinatorial.  Untuk  maksud tersebut,  penulis  telah  mencanangkan  program sintesis  100  molekul  kalkon  untuk  dipelajari sifat  fisiko-kimia  dan  bioaktivitasnya.  Pada penelitian  ini  hanya  dillaporkan  sintesis  tiga analog  kalkon  menggunakan  senyawa  awal  2’- hidroksiasetofenon dan halobenzaldehid.
Salah satu metode baru untuk sintesis analog 2’-hidroksikalkon  adalah  dengan  penggunaan PEG-400  (polietilenglikol–400)  sebagai  pelarut alternatif.  Penggunaan  PEG-400  ini  bertujuan untuk  mengurangi  penggunaan  pelarut  organik volatil  (Jayapal et  al., 2010b),  sehingga  dapat dikatakan  lebih  ramah  lingkungan.  Sintesis dilakukan  melalui  reaksi  kondensasi  Claisen- Schmidt menggunakan bahan baku yang tersedia di pasaran. Reaksi ini juga telah dikenal sebagai
reaksi yang ramah lingkungan. Sintesis menggunakan pendekatan metode ramah lingkungan  yang  dibantu  dengan  penggunaan pelarut  non  volatil  ini  dilakukan  untuk meningkatkan  efisiensi  dalam  produksi  dan mengurangi dampak negatif terhadap lingkungan.
Ada  dua  masalah  utama  dalam  mensintesis analog  2’-hidroksikalkon.  Pertama,  rendemen yang  dihasilkan  sedikit.  Hal  ini  dikarenakan terjadinya  reaksi  pembentukan  produk  samping berupa senyawa flavanon akibat siklisasi produk 2’-hidroksikalkon (Patil et al., 2009; Stoyanov et al.,  2002 ).  Kedua,  adanya  substituen  hidroksi pada cincin aromatik reaktan dapat menurunkan efektifitas  dari  katalis  basa  yang  digunakan (Patil et al., 2009). Selain menyerang hidrogen  yang  bersifat  asam,  katalis  basa  juga  dapat menyerang  hidrogen  fenolik  pada  reaktan  yang juga  bersifat asam,  sehingga  dapat  menghambat proses pembentukan ion enolat. Oleh karena itu, untuk  mensintesis  analog  kalkon  dengan substituen hidroksi diperlukan konsentrasi katalis  basa  yang  lebih  tinggi  dibandingkan dengan konsentrasi reaktannya.
Senyawa hasil sintesis dikarakterisasi berdasarkan  interpretasi  data  spektroskopi  UV- Vis,  FTIR, 1 H  NMR, 13 C  NMR,  dan  HRMS kemudian  diuji  sifat  toksiknya  dengan  metode Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT).  Uji  BSLT merupakan salah satu teknik pendahuluan untuk menentukan  letalitas  atau  toksisitas  suatu senyawa.  Uji  ini  merupakan  uji  pendahuluan untuk  menentukan  aktivitas  antikanker  dari suatu  senyawa.  Hal  ini  didasarkan  pada pemikiran  bahwa  sebagian  besar  senyawa antikanker  adalah  bersifat  toksik.  Pengujian letalitas  sederhana  ini  tidak  spesifik  untuk antikanker, tetapi merupakan indikator sitotoksik yang  baik  (Meyer et  al., 1982).  Berdasarkan metode  BSLT,  suatu  tanaman  atau  hasil  isolasi dianggap  menunjukkan  aktivitas  sitotoksik  bila mempunyai  nilai  LC 50 kecil  dari  1000  ppm, sedangkan  untuk  senyawa  murni  dianggap menunjukkan aktivitas sitotoksik bila mempunyai  nilai  LC 50 kecil  dari  200  ppm (Anderson et al., 1991)

## 2. METODOLOGI PENELITIAN Bahan dan Peralatan
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  2’-hidroksi  asetofenon (Merck), 2-klorobenzaldehid (Merck), 3- bromobenzaldehid  (Merck),  4-klorobenzaldehid (Merck),
polietilenglikol-400 (Merck),
dimetilsulfoksida  (Merck),  kalium  hidroksida (Merck), asam klorida 1 N, telur udang ( Artemia salina Leach), air laut dan pelarut-pelarut organik yang umum digunakan.
Alat-alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini adalah alat pengukur titik leleh (Fisher John), HPLC (Shimadzu LCsolution, jenis kolom Shim- Pack VP-ODS  dengan  panjang  dan  diameternya 150  x  4,6  mm),  spektrofotometer  UV-Vis (Genesys  10S  UV-V IS v4.002  2L9N175013), spektrofotometer  FTIR  (Shimadzu,  IR  Prestige- 21),  spektroskopi 1 H  NMR  dan 13 C  NMR (Agilent  500  MHz)  di  Institut  Teknologi Bandung,  spektroskopi  massa  (MS  water  LCT premier  XE  positive  mode)  di  Institut  Teknologi Bandung, alat-alat untuk sintesis dan uji toksisitas yang umum digunakan di laboratorium.

## Prosedur Kerja Sintesis
2’-hidroksiasetofenon (5 mmol) dan masing- masing  halobenzaldehid  (5  mmol)  dilarutkan dengan dalam 5 mL PEG-400 di dalam labu bulat yang  telah  dilengkapi  magnet stirrer, kemudian distirer  selama  2  menit.  Setelah  itu,  sebanyak  15 mmol  KOH  padat  ditambahkan  ke  dalam  labu yang berisi campuran reaktan tersebut, kemudian distirer selama 8-12 jam. Tahapan reaksi dipantau melalui uji KLT. Setelah reaksi selesai, ke dalam campuran  reaksi  ditambahkan  HCl  1N  dingin sebanyak  10  mL  atau  hingga  pH  netral  dan terbentuk  endapan.  Endapan  disaring  dengan corong bunchner ,  kemudian  dicuci  dengan akuades dan n-heksan dingin. Selanjutnya Crude product diuji  KLT,  jika  terdapat  lebih  dari  satu noda,  maka  dilakukan  rekristalisasi  dengan EtOAc  panas  dan  n-heksan  untuk  mendapatkan senyawa murni.
Uji  Toksisitas  dengan  Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) Uji toksisitas dengan metode BSLT dilakukan  berdasarkan  metode  yang  telah dilakukan  oleh  Meyer et  al. (1982).  Kista  udang A.  salina ditetaskan  dalam  wadah  pembiakan yang berisi air laut, dan digunakan setelah aerasi selama  48  jam  (setelah  terbentuk  larva).  Vial  uji dikalibrasi  dengan  5  mL  aquades.  Pengujian dilakukan  dengan  konsentrasi  100,  10  dan  1 μg/mL  masing-masing  dengan  tiga  kali pengulangan. Sampel sebanyak 20 mg dilarutkan dalam  2  mL  metanol  (larutan  induk,  konsentrasi 10000  μg/mL),  kemudian  dari  larutan  induk dibuat  konsentrasi  larutan  uji  100  μg/mL,  10 μg/mL,  dan  1  μg/mL  dengan  cara  pengenceran bertingkat.  Sampel  dipipet  kedalam  masing- masing  vial  sebanyak  0,5  mL,  lalu  pelarut diuapkan hingga mengering. Selanjutnya, ditambahkan  50  μL  DMSO,  10  ekor  larva Artemia  salina Leach  dan  air  laut  sampai  batas kalibrasi  5  mL.  Kematian  larva  dihitung  dalam selang  waktu  24  jam.  Pengujian  dilakukan sebanyak tiga kali pengulangan dengan perlakuan yang  sama  untuk  masing-masing  konsentrasi. Data yang diperoleh dianalisis untuk menentukan nilai  LC 50 dengan  metode  kurva  menggunakan tabel analisis probit (Harefa, 1997).

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Sintesis  dilakukan  menggunakan  metode stirer  dengan  katalis  KOH  padat  dan  pelarut PEG-400  pada  suhu  ruangan.  Skema  reaksi sintesis senyawa kalkon tersebut dapat dilihat pada Gambar 10 .
Rendemen  yang  dihasilkan  cukup  baik (56-80%).  Kemurnian  senyawa  kalkon  hasil sintesis  ditentukan  melalui  uji  KLT,  uji  titik leleh, dan analisis HPLC. Uji KLT dilakukan menggunakan  eluen  n-heksana:etil  asetat
(9:1)  menunjukkan  satu  noda.  Uji  titik  leleh menunjukkan  kisaran  titik  leleh  2 o C. Analisis kemurnian dengan HPLC manghasilkan  kromatogram  dengan  satu puncak  dominan  pada  t R =  16  menit  untuk senyawa (1), t R = 17 menit untuk senyawa (2), dan t R = 16,20 menit untuk senyawa (3).  Sifat Fisik  senyawa  (1)-(3)  dapat  dilihat  pada Tabel 1 .
(1) R 1 = Cl, R 2 = H, R 3 = H
(2) R 1 = H, R 2 = Br, R 3 = H (3) R 1 = H, R 2 = H, R 3 = Cl Gambar 1. Reaksi sintesis senyawa kalkon turunan 2’-hidroksiasetofenon
Tabel 1. Sifat fisik senyawa analog kalkon (1)–(3) Senyawa Rumus Molekul Berat Molekul Rendemen (%) Warna Titik leleh ( o C) R f (n-heksan:EtOAc) (1) C 15 H 11 ClO 2 258,0515 56 Kuning 84-85 0,51 (9:1) (2) C 15 H 11 BrO 2 302,0030 62 Kuning 82-83 0,61 (9:1) (3) C 15 H 11 ClO 2 258,0537 80 Orange 80-81 0,64 (9:1)
Spektrum UV senyawa (1)-(3) dalam pelarut methanol  (MeOH)  sebagaimana  dapat  dilihat pada Gambar  2 berturut-turut  memperlihatkan adanya  serapan  maksimum  pada  λ  208  nm  dan 309 nm dan puncak bahu pada 232 nm dan 366 nm untuk senyawa (1),  serapan maksimum pada λ 205 nm dan 319 nm dan puncak bahu pada 225 nm  dan  364  nm  untuk  senyawa  (2),  serapan maksimum  pada  λ  204  nm  dan  319  nm  dan puncak  bahu  pada  223  nm  dan  365  nm  untuk senyawa  (3)  menunjukkan  adanya  ikatan rangkap  terkonjugasi  yang  merupakan  ciri  khas dari senyawa kalkon.
Spektrum FTIR senyawa (1)-(3) memperlihatkan  adanya  serapan  pada  bilangan gelombang  (cm -1 ) 1640-1644  mengindikasikan adanya  gugus  C=O  terkonjugasi  dengan  ikatan
rangkap  α,β  tak  jenuh.  Serapan  pada  bilangan gelombang  1578-1583  mengindikasikan  adanya ikatan  C=C  alkena  yang  terkonjugasi  dengan karbonil  dan  cincin  aromatik.  Serapan  pada bilangan gelombang 3067-3086 mengindikasikan  adanya  ikatan  C-H  aromatik. Serapan  pada  bilangan  gelombang  2937-2958 mengindikasikan  adanya  ikatan  C–H  alifatik. Serapan  pada  bilangan  gelombang  1204-1206 mengindikasikan  adanya  ikatan  C–O  alkohol. Vibrasi  ikatan  C–X  pada  senyawa  (1)-(3) masing-masing  ditunjukkan  pada  bilangan gelombang  (cm -1 )  751  (C-Cl)  673  (C-Br),  dan 761  (C-Cl).  Serapan  pada  daerah  bilangan gelombang tersebut sangat sesuai untuk mendeskripsikan  gugus  fungsi  yang  terdapat pada ketiga senyawa kalkon.
Gambar 2. Spektrum UV Senyawa (1)-(3) dalam pelarut MeOH
Spektrum 1 H NMR senyawa (1) menunjukkan  pergeseran  kimia  yang  khas  pada  7,82-  8,32 ppm (d, 1H, J = 15-15,5 Hz) dan  7,62-7,66 ppm (d, 1H, J = 15-15,5 Hz) berturut- turut  menunjukkan  adanya  proton  pada  C  dan C  . Berdasarkan harga tetapan kopling ( J ) dapat ditentukan  bahwa  senyawa  kalkon  tersebut
memiliki  konfigurasi  trans  ( E ).  Adanya  proton pada  12,7-12,74  ppm  menunjukkan  bahwa pada ketiga senyawa kalkon terdapat proton dari substituen  hidroksi  (-OH)  yang  terikat  pada cincin  aromatik.  Interpretasi  spektrum 1 H  NMR senyawa analog kalkon (1)-(3) dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Interpretasi data 1 H NMR senyawa analog kalkon (1), (2), dan (3) Nomor Atom Senyawa (1) Senyawa (2) Senyawa (3)  H (ppm)  H (ppm)  H (ppm) 1 - - - 2 - 7,81 (t, 1H, J = 2  Hz) 7,59 (d, 1H) J = 9 Hz 3 7,47 (dd, 1H) - 7,41 (d, 1H) J= 8,5 Hz 4 7,36 (m, 1H) 7,55 (td, 1H) J = 8; 1,5 Hz - 5 7,36 (m, 1H) 7,31 (t, 1H) J = 7,5 Hz 7,41 (d, 1H) J = 8,5 Hz 6 7,78 (dd, 1H) 7,55 (td, 1H) J = 8; 1,5 Hz 7,59 (d, 1H) J = 9 Hz C  7,66 (d, 1H, J = 15 Hz) 7,63 (d, 1H, J = 15,5 Hz) 7,62 (d, 1H, J = 15,5 Hz) C  8,32 (d, 1H, J = 15 Hz) 7,82 (d, 1H, J = 15,5 Hz) 7,86 (d, 1H, J = 15,5 Hz) 1’ - - - 2’ 12,73 (s, 1H, -OH) 12,7 (s, 1H, -OH) 12,74 (s, 1H, -OH) 3’ 7,05 (dd, 1H) 7,04 (dd, 1H) J = 8,5; 0,5 Hz 7,03 (d, 1H) J = 8,5 Hz 4’ 7,52 (t, 1H) 7,51 (t, 1H) J = 7,5 Hz 7,51 (t, 1H) J = 7,75 Hz 5’ 6,96 (t, 1H) 6,96 (t, 1H) J = 8 Hz 6,95 (t, 1H) J = 7,5 Hz 6’ 7,92 (dd, 1H) 7,91 (dd, 1H) J = 8; 1,5 Hz 7,90 (dd, 1H) J = 8; 1,5 Hz Spektrum 13 C  NMR  senyawa  (1)-(3) menunjukkan  pergeseran  kimia  pada  193,3- 193,49 ppm yang menunjukkan adanya atom C karbonil pada ketiga senyawa kalkon.
Pergeseran  kimia  karbon  pada  163,6-163,62 ppm  menunjukkan  adanya  substituen  hidroksi (OH) yang  terikat pada cincin aromatik.
Interpretasi  data  spektrum 1 H  NMR  dan 13 C NMR  senyawa  (1)  telah  dikonfirmasi  dengan spektrum  HMQC  dan  HMBC  yang  secara keseluruhan  menunjukkan  korelasi  ikatan  yang sesuai untuk struktur senyawa tersebut sebagaimana  ditunjukkan  masing-masing  pada Gambar 3.
OH O Cl 129,70 118,90 136,57 118,68 163,62 119,89 193,49 122,77 130,41 131,49 127,11 132,94 127,92 135,7 141,13 O O Cl H H H H H H H H H H H (a) (b)
Gambar 3. Korelasi ikatan pada senyawa (1): Korelasi ikatan pada spektrum HMQC (a), dan HMBC
(b) .
Berat  molekul  senyawa-senyawa  hasil sintesis  dikonfirmasi  melalui  spektroskopi massa  (HRMS).  Berat  molekul  senyawa  (1) ditunjukkan oleh spektrum massa yang dihitung sebagai C 15 H 12 O 2 Cl [M+H] + dengan puncak ion molekul  259,0526  m/z  dan  ditemukan  pada spektrum  massa  dengan  puncak  ion  molekul 259,0515  m/z,  selisih  massa  molekul  tersebut 0,0011. Berat molekul senyawa (2) ditunjukkan oleh  spektrum  massa  yang  dihitung  sebagai C 15 H 12 O 2 Br  [M+H] + dengan  puncak  ion molekul  303,0021  m/z  dan  ditemukan  pada spektrum  massa  dengan  puncak  ion  molekul 303,0030  m/z,  selisih  massa  molekul  tersebut 0,0009. Berat molekul senyawa (3) ditunjukkan oleh  spektrum  massa  yang  dihitung  sebagai C 15 H 12 O 2 Cl  [M+H] + dengan  puncak  ion molekul  259,0526  m/z  dan  ditemukan  pada spektrum  massa  dengan  puncak  ion  molekul 259,0537  m/z,  selisih  massa  0,0011.  Selisih massa  berdasarkan  spektrum  massa  dengan massa  perhitungan  menunjukkan  perbedaan yang  sangat  kecil  antara  senyawa  yang diharapkan  dengan  senyawa  kalkon  yang diperoleh  dan  dapat  dikatakan  bahwa  senyawa kalkon  tersebut  sangat  murni.    Dengan demikian  dapat  dikatakan  bahwa  senyawa kalkon  tersebut  mempunyai  struktur  sesuai dengan yang diharapkan .
Uji  toksisitas  terhadap  senyawa-senyawa kalkon turunan 2’-hidroksi asetofenon dilakukan  menggunakan  metode  BSLT.  Hasil uji toksisitas terhadap senyawa  kalkon  tersebut dapat dilihat pada Tabel 3 .
Tabel 3. Hasil uji toksisitas
Senyawa Nilai LC 50 (µg/mL) (1) 2,839 (2) 1,495 (3) 3,328
Berdasarkan  uji  BSLT  yang  telah dilakukan,  dapat  dikatakan  bahwa  senyawa- senyawa  kalkon  turunan  2’-hidroksiasetofenon tersebut  berpotensi  aktif  sebagai  senyawa antikanker  yang  dibuktikan  dengan  nilai LC 50 <200 µg/mL.

## 4. KESIMPULAN
Melalui  penelitian  ini  telah  dihasilkan  tiga analog  kalkon  turunan  2’hidroksi  asetofenon  dengan rendemen  yang  cukup  baik  (56-80  %).  Sintesis dilakukan melalui reaksi kondensasi Claisen-Schmidt menggunakan  metode  stirer  dengan  katalis  KOH padat  dan  menggunakan  PEG-400  sebagai  pelarut yang bersifat non volatil dan lebih ramah lingkungan, sehingga dapat meminimalisir polusi. Hasil karakterisasi melalui spektroskopi UV-Vis, FTIR, 1 H NMR, 13 C  NMR,  dan  HRMS  menunjukkan  bahwa ketiga senyawa hasil sintesis memiliki struktur sesuai dengan  yang  diharapkan.  Berdasarkan  hasil  uji pendahuluan  menggunakan  metode  BSLT  dapat disimpulkan  bahwa  ketiga  senyawa  hasil  sintesis berpotensi  aktif  sebagai  senyawa  antikanker  yang dibuktikan dengan nilai LC 50 <200 µg/Mo.

## 5. DAFTAR PUSTAKA
Anderson,  J.E.  Goetz,  C.M.,  dan  Mclaughlin, J.L.  1991.  A  Blind  Comparison  of  Simple Bench  Top  Bioassay  and  Human  Tumor Cell  Cytotoxicity  as  Antitumor  Prescreens. Pytochemical Analysis . 2(3): 107-111.
Britton,  R.G.,  Horner-Glister,  E.,  Pomenya,
O.A.,  Smith,  E.E.,  Denton,  R.,  Jenkins, P.R.,  Steward,  W.P.,  Brown,  K.,  Gescher, A.,  dan  Sale,  S.  2012.  Synthesis  and Biological  Evaluation  of  Novel  Flavonols as  Potential  Anti-Prostate  Cancer  Agent.
European  Journal  of  Medicinal  Chemistry.
54: 952-958.
Harefa, F. 1997. Pembudidayaan Artemia salina untuk  Pakan  Udang  dan  Ikan. Swadaya, Jakarta.
Jadhav,  S.B.,  Bagul,  K.R.,  Bagul,  P.R.,  dan Gaikwad,  K.V.  2008.  Synthesis  of  Some Novel Flavonol Derivatives and Its Antimicrobial Activity. Oriental Journal of Chemistry. 24(2): 583-588.
Jayapal, M.R., Prasad, K.S., dan Sreedhar, N.Y.
2010.  Synthesis  and  Characterization  of
2,6-dihydroxy Substituted Chalcones Using PEG-400  as  a  Recyclable  Solvent.  J. Pharm. Sci & Res. 2(8):450-458
Kamble,  V.M.,  Hatnapure,  G.D.,  Keche,  A.P., Birajdar, S., Patil, S.G., Tale, R.H., Rodge, A.H.,  Turkar,  S.S.,  dan  Gour,  K.  2011. Sintesis  and  Biological  Evaluation  of  a Novel Series of Methoxylated Chalcones as
Antioxidant  and  Anti-microbial  agents. J.
Chem. Pharm. Res . 3(6):639-648.
Kulkarni,  P.,  Wagh,  P.,  dan  Zubaidha,  P.  2012. An Improved and Eco-Friendly Method for The  Synthesis  of  Flavanone  by  The Cyclization  of  2’-Hydroxy  Chalcone  using Methane  Sulphonic  Acid  as  Catalyst.
Chemistry Journal . 2(3): 106-110.
Lonkar,  S.M.,  Mokle,  S.S.,  Vibhute,  A.Y.,  dan Vibhute,  Y.B. 2011.  Green  Approach  for The  Synthesis  of  Some  New  α,β- Unsaturated Ketimines under Water Suspension. Orbital Elec. J. Chem . 3(4):197-203.
Meyer,  B.N.,  Ferrigni,  N.R.,  Putnam,  J.E.,
Jacosen, L.B., Nichols D.E., dan
McLaughin,  J.L.  1982.  Brine  Shrimp:  A Convenient  General  Bioassay  for  Active Plant  Constituens. Journal  of  Medicinal Plant Research Planta Medica . 45: 31-34.
Patil, C.B., Mahajan, S.K., dan Katti, S.A. 2009.
Chalcone: a Versatile Molecule. Journal of Pharmaceutical  Science  and  Research . 1(3): 11-12.
Patil,  V.J.  2012.  Synthesis  and  In  Vitro Antiplaque  Activity  of  Chalcone,  Flavonol and  Flavanol  Derivatives. IJPSR. 3(12): 5006-5014.
Prasad,  Y.R.,  Kumar,  P.R.,  Deepti,  C.H.A.,  dan Ramana,  M.V.  2006.  Synthesis  and antimicrobial  activity  of  some  novel chalcones  of  2-hydroxy-1-acetonapthone and  3-acetyl  coumarin. E-Journal  of Chemistry . 3(4): 236-241.
Sharshira,  E.M.  dan  Hamada,  N.M.M.  2011.
Synthesis  and  In  Vitro  Antimicrobial Activity  of  Some  Pyrazolyl-1-carboxamide Derivatives. Molecules . 16: 7736-7745.
Sing, P., Negi, J.S., Pant, G.J.N., Rawat, M.S.M. &  Budakoti,  A.  2009.  Synthesis  and Characterization  of  a  Novel  2-Pyrazoline. Molbank , 613: 1-4.
Syam,  S.,  Abdelwahab,  S.I.,  Al-Mamary,  M.A., dan  Mohan,  S.  2012.  Synthesis  of chalcones with anticancer activities. Molecules . 17: 6179-6195.
Tiwari, B., Pratapwar, A.S., Tapas, A.R., Butle, S.R., dan Vatkar, B.S. 2010. Synthesis and Antimicrobial  Activity  of  some  chalcone derivatives. International Journal of ChemTech Research. 2(1): 499-503.
Yadav,  H.L.,  Gupta,  P.,  Pawar,  R.S.,  Singour, P.K.,  dan  Patil,  U.K.  2011.  Synthesis  and biological  evaluation  of  anti-inflammatory activity of 1,3 diphenyl propenone derivatives. Medicinal Chemistry Research . 20: 461-465.