## EKSTRAKSI SENYAWA BIOAKTIF SEBAGAI ANTIOKSIDAN ALAMI Spirulina platensis SEGAR DENGAN PELARUT YANG BERBEDA

## Extraction of Bioactive Compounds as Natural Antioxidants from Fresh Spirulina platensis using Different Solvents
Fiya Firdiyani*, Tri Winarni Agustini, Widodo Farid Ma’ruf Program Studi Teknologi Hasil Perikanan Jurusan Perikanan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Diponegoro, Jalan Prof. Soedarto SH, Tembalang, Semarang 50275. Telepon/faks: (024)7474698 *Korespodensi: viyavirdiyani@gmail.com; Diterima 10 Februari 2015/Disetujui 25 April 2015

## Abstrak
Spirulina  platensis adalah  mikroalga  yang  dapat  dimanfaatkan  sebagai  suplemen  maupun  sumber obat alami yang berpotensi sebagai antioksidan. Antioksidan alami semakin lama semakin diminati oleh masyarakat, karena dinilai lebih aman dibandingkan antioksidan sintetis. Penelitian ini bertujuan untuk menentukan  pengaruh  pelarut  terhadap  potensi  antioksidan  alami Spirulina  platensis segar.  Metode ekstraksi yang digunakan adalah metode refluks menggunakan pelarut aseton dan etil asetat. Hasil ekstraksi S.  platensis segar  didapatkan  rendemen  sebesar  1,86%  untuk  aseton,  3,07%  untuk  etil  asetat.  Esktrak Spirulina platensis segar yang diperoleh menggunakan pelarut aseton memiliki nilai IC 50 65,89 ppm dan dengan etil asetat memiliki IC 50 sebesar 76,36 ppm. Kedua ekstrak tergolong memiliki aktivitas antioksidan kuat, meskipun masih lebih rendah dibandingan nilai IC 50 kontrol positif kuersetin yaitu sebesar 21,64 ppm. Hasil uji fitokimia (kualitatif) menunjukkan positif adanya senyawa fenolik, triterpenoid, steroid, flavonoid, dan  saponin.  Nilai  a w ekstrak  pelarut  aseton  adalah  0,61  sedangkan  aw  ekstrak  pelarut  etil  asetat  0,81. Hasil  penelitian  dapat  disimpulkan  bahwa  penggunanaan  pelarut  yang  berbeda  menghasilkan  aktivitas antioksidan yang berbeda.
Kata kunci: Antioksidan, aseton, etil asetat, Spirulina platensis segar
Abstract
Spirulina platensis is a bioactive-rich microalga of great potential as a source of natural antioxidant. Natural  antioxidants  are  increasing  in  demand,  because  it  is  considered  as  more  safe  than  synthetic antioxidants. The objective of this study was to determine the effect of solvent on the potential of natural antioxidant from fresh S. platensis . The antioxidant compound was extracted using either acetone or ethyl acetate by reflux method.  The yield of extractions were 1.86% and 3.07% for aceton and ethyl acetate, respectively. Fresh S. platensis extracts were considered as potential antioxidant source with IC 50 values 65.89 ppm, and 76.36 ppm when using acetone and ethyl acetate, respectivetly, even though it were still lower compare to the IC 50 of  positive control quercetin i.e 21.64 ppm. Phytochemical test showed positive results of phenolic compound, triterpenoids, steroid, flavanoid, and saponin. a w value of Spirulina platensis was 0.61 and 0.81 for aceton and ethyl acetate, respectively. It was concluded that different solvent affected the antioxidant activity of S. platensis extract.
Keywords: Antioxidants, aceton, ethyl acetate, fresh Spirulina platensis

## PENDAHULUAN
Spirulina  platensis adalah  mikroalga yang  merupakan  sumber  hayati  yang  dapat memproduksi  berbagai  senyawa  kimia  yang dapat dimanfaatkan sebagai suplemen maupun sumber obat alami. Utomo dan Adhita (2009)
menyatakan  bahwa spirulina selain  digunakan sebagai  pakan  alami  ikan  dan  udang,  juga diketahui  memiliki  pengaruh  yang  baik pada  sistem  kekebalan.  Senyawa  kimia  yang terkandung  dalam S.  platensis diantaranya adalah fikosianin yang telah diketahui mampu
meningkatkan  sistem  kekebalan  tubuh, mengandung  antioksidan,  antiinfamasi,  serta neuroprotective .
Rendemen merupakan suatu nilai penting dalam  pembuatan  produk.  Semakin  besar rendemen  yang  dihasilkan  maka  semakin efisien perlakuan yang diterapkan dengan tidak mengesampingkan  sifat-sifat  lain.  Rendemen merupakan perbandingan berat kering produk yang  dihasilkan  dengan  berat  bahan  baku (Yuniarifin et al. 2006). Senyawa  bioaktif  merupakan  senyawa yang terkandung dalam tubuh hewan maupun tumbuhan.  Senyawa  ini  memiliki  berbagai manfaat  bagi  kehidupan  manusia,  diantaranya dapat  dijadikan  sebagai  sumber  antioksidan, antibakteri,  antiinflamasi,  dan  antikanker. Prabowo et al. (2014) menyatakan bahwa pada berbagai    penelitian  tentang  senyawa  bioaktif telah dilakukan untuk tujuan kesehatan manusia, mulai dari dijadikan suplemen sampai obat bagi manusia. Bintang et al. (2007) menyatakan bahwa senyawa  bioaktif  ini  ada  yang  dapat  berfungsi sebagai  antibakteri,  antikanker,  antiinflamasi dan  antioksidan.  Antioksidan  adalah  zat  yang dapat menunda, memperlambat dan mencegah terjadinya  proses  oksidasi.  Antioksidan  sangat bermanfaat  bagi  kesehatan  dan  berperan penting untuk mempertahankan mutu produk pangan. Manfaat antioksidan bagi kesehatan dan kecantikan, misalnya untuk mencegah penyakit kanker  dan  tumor,  penyempitan  pembuluh darah, penuaan dini, dan lain-lain. Antioksidan dalam produk pangan, dapat digunakan untuk mencegah terjadinya proses oksidasi yang dapat menyebabkan  kerusakan,  misalnya  ketengikan perubahan  warna  dan  aroma,  serta  kerusakan fisik lainnya (Tamat et al. 2007). Senyawa antioksidan dapat berupa senyawa alami  maupun  senyawa  sintetik,  pada  saat ini  senyawa  antioksidan  sintetis  sudah  mulai ditinggalkan karena memiliki sifat karsinogenik dan  antioksidan  yang  berasal  dari  alam mulai  memegang  peranan  penting.  Senyawa bioaktif yang bersifat antioksidan alam banyak ditemukan di dalam kulit buah pada tumbuhan (Lisdawati dan Broto 2006).
Penggunaan  antioksidan  sintetis  yang dapat membahayakan kesehatan tubuh manusia tersebut  mendorong  penelitian  untuk  mencari senyawa  alami  baru  sebagai  antioksidan  alami yang  lebih  aman  bagi  kesehatan  manusia. Salah  satunya  dengan  memanfaatkan  produk alam dari mikroalga yang diduga mengandung senyawa  bioaktif  sebagai  antioksidan  alami. Spirulina  yang  biasa  digunakan  pada  berbagai penelitian  adalah  spirulina  serbuk  sehingga didapatkan  permasalahan Spirulina  platensis segar  berpotensi  sebagai  sumber  antioksidan alami dan perbedaan tingkat kepolaran pelarut dengan menggunakan  metode ekstraksi refluks dibantu  sonikasi  berpengaruh  pada  aktivitas antioksidannya.
Perbedaan  tingkat  kepolaran  dari  pelarut yang  digunakan  diduga  akan  menghasilkan ekstrak  dengan  senyawa  bioaktif  yang berpotensi  sebagai  antioksidan  alami  yang berbeda juga. Sonikasi tersebut bertujuan agar senyawa bioaktif dapat tertarik secara maksimal oleh  pelarut.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk menentukan potensi antioksidan alami Spirulina platensis segar yang diekstraksi dengan pelarut yang berbeda.

## BAHAN DAN METODE Bahan dan Alat
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah mikroalga Spirulina platensis yang diambil dari  kolam  pembudidayaan  di  CV.  Neoalgae, Sukoharjo  serta  pelarut  aseton  ( Brataco )  dan etil asetat ( Brataco ). Proses ekstraksi dilakukan di  Laboratorium  Terpadu  dan  Laboratorium Analisis  Program  studi  Teknologi  Hasil Perikanan,  Universitas  Diponegoro,  Semarang. Alat-alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  adalah  Refluks  (Pyrex  iwaki),  Sonikator (Branson 200), Sentrifuge ( Table Top Centrifuge Plc 03 Series ), Rotary evaporator (Buchi R 210),
Spektrofotometer (Shimadzu).

## Prosedur Penelitian
Proses  ekstraksi  ini  adalah  menggunakan metode  refluks  yang  dikombinasi  dengan sonikasi.
Ekstraksi dilakukan dengan
mempersiapkan  sampel Spirulina  platensis segar sebanyak 300 gram dimasukkan ke dalam 2  tabung  erlenmeyer  masing-masing  150  g, kemudian tabung 1 ditambahkan pelarut aseton dan  tabung  2  ditambahkan  pelarut  etil  asetat sebanyak  50  mL.  Kedua  sampel  dimasukkan ke  dalam  sonikator  untuk  dilakukan  proses sonikasi  selama  1  jam  dengan  gelombang  40 Khz  pada  suhu  ruang  (28 o C).  Sampel  setelah disonikasi  dilanjutkan  dengan  refluks  selama 4  jam  pada  suhu  50-60 o C.  Ekstraksi  selesai, sampel  disentrifugasi  selama  1  jam  dengan kecepatan 2500 rpm kemudian disaring dengan kertas  saring.  Hasil  filtrat  yang  terbentuk dievaporasi  dengan rotary  evaporator pada suhu  37-38 o C.  Hasil  ekstrak  dimasukkan  ke dalam botol vial dan disimpan pada suhu 4 o C. Pengujian  yang  dilakukan  meliputi  pengujian fitokimia  meliputi  alkaloid,  senyawa  fenolik, triterpenoid dan steroid, flavonoid, dan saponin (Mega dan Swastini 2010), antioksidan dengan metode  DPPH  (Hatam et  al. 2013),  dan pengukuran a w (Yatno dan Purwanti 2010).

## Analisa Data
Metode  yang  digunakan  pada  penelitian ini  adalah  metode experimental  laboratories dengan  analisa  data  secara  deskriptif.
Metode  pengolahan  data  yang  dilakukan adalah dengan cara membandingkan hasil  uji  dengan  kontrol  positif,  kemudian dijelaskan  dengan  hasil  kulitatif  sebagai penguat  yang  mendukung  data  kuantitatif.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil Ekstraksi Sampel
Hasil  yang  diperoleh  dari  ekstraksi mikroalga Spirulina  platensis dengan  berat sampel segar 150 g disajikan dalam Tabel 1.
Ekstraksi  sampel  dilakukan  dengan
menggunakan 2 pelarut yang memiliki tingkat kepolaran berbeda yaitu aseton sebagai pelarut polar dan etil asetat sebagai pelarut semipolar. Setiap  tahapan  ekstraksi  yang  dilakukan diharapkan  dapat  mengekstrak  senyawa  yang mempunyai kepolaran sesuai dengan kepolaran pelarut.  Penggunaan  kedua  pelarut  dipilih karena  untuk  mendapatkan  target  senyawa yang  tepat  sebagai  antioksidan,  selain  itu mampu menarik senyawa berdasarkan tingkat kepolaran  dari  non  polar,  semi  polar,  hingga polar dalam ekstrak yang dikehendaki. Aseton yang bersifat polar akan menarik senyawa yang bersifat  polar  sampai  non  polar,  begitu  juga dengan etil asetat akan menarik senyawa semi polar hingga non polar. Sarastani et al. (2002) menyatakan  bahwa  pelarut  dapat  melarutkan ekstrak yang mempunyai sifat kepolaran yang sama.  Sari  (2011)  juga  menyatakan  bahwa pemilihan  berbagai  pelarut  yang  digunakan untuk ekstraksi harus tepat agar dapat menarik senyawa yang dikehendaki.
Proses  ekstraksi  dengan  dua  pelarut menghasilkan  rendemen  yang  berbeda  untuk setiap pelarut yang digunakan. Rendemen dari pelarut etil asetat lebih besar dibanding dengan rendemen dari pelarut aseton. Hasil rendemen etil asetat adalah sebesar 3,07% dalam bentuk pasta,  sedangkan  rendemen  aseton  adalah sebesar 1,86% dalam bentuk kering. Rendemen dari  etil  asetat  lebih  besar  dikarenakan  hasil ekstraksi yang diperoleh masih dalam bentuk pasta,  hal  tersebut  disebabkan  faktor  waktu saat  proses  evaporasi  diduga  kurang  lama. Waktu  evaporasi  yang  terlalu  lama  dapat mengakibatkan  terjadinya  degradasi  senyawa bioaktif  yang  terkandung  dalam  sampel, sehingga dikawatirkan senyawa bioaktif dalam sampel pelarut etil asetat akan rusak jika terlalu lama.  Farida  dan  Fithri  (2014)  menyatakan
Tabel 1 Hasil ekstraksi Spirulina platensis segar Pelarut Volum filtrat (mL) Berat ekstrak (g) Rendemen ekstrak (%) Bentuk Aseton 142,50 2,79 1,86 Kering Etil asetat 93,50 4,60 3,07 Pasta
JPHPI 2015, Volume 18 Nomor 1
bahwa  semakin  lama  waktu  yang  digunakan untuk  evaporasi  dengan rotary  evaporator dapat  mengakibatkan  terjadinya  degradasi antosianin, hal inilah yang menyebabkan lebih rendahnya kadar antosianin yang diperoleh. Pelarut  memiliki  kemampuan  yang berbeda–beda  dalam  mengambil  senyawa bioaktif suatu sampel.  Sari (2011) menyatakan bahwa  rendemen  terbesar  diperoleh  dari ekstrak  polar,  sedangkan  ekstrak  etil  asetat menghasilkan  ekstrak  yang  sangat  kecil. Senyawa  polar  memiliki  kemampuan mengekstrak  senyawa  dari  kisaran  senyawa polar hingga semi polar.
Ekstraksi menggunakan pelarut etilasetat yang  merupakan  pelarut  dengan  kepolaran sedang,  maka  diharapkan  yang  terekstrak senyawa-senyawa  dengan  kepolaran  yang sedang, begitu pula pelarut aseton diharapkan dapat  mengekstrak  senyawa-senyawa  polar. Kedua pelarut memiliki tingkat kepolaran yang berbeda,  sehingga  dapat  melarutkan  senyawa polar,  semi  polar  dan  dapat  pula  melarutkan senyawa yang bersifat non polar.  Setyawan dan Yudha (2013) menyatakan bahwa biomassa sel Spirulina  platensis akan jauh lebih mudah larut dalam  pelarut  polar  dibandingkan  dengan pelarut  kurang  polar.  Pelarut  polar  dapat melarutkan  senyawa  polar  maupun  senyawa non  polar  karena  mempunyai momen  dipole yang besar.

## Uji Skrining Fitokimia
Uji skrining fitokimia ekstrak S. platensis segar dilakukan uji kualitatif. Pengujian secara kualitatif  hanya  untuk  mengetahui  jenis golongan  senyawa  bioaktif  yang  terkandung di dalamnya. Senyawa-senyawa yang memiliki potensi  sebagai  aktivitas  antioksidan  yang
dapat  menangkal  radikal  bebas.  Hasil  uji skrining  fitokimia  secara  kualitatif  disajikan dalam Tabel 2.
Uji skrining fitokimia ini bertujuan untuk menentukan secara kualitatif ada atau tidaknya golongan  senyawa  bioaktif  yang  berpotensi sebagai  antioksidan.  Golongan  senyawa  yang diuji  antara  lain  uji  alkaloid,  uji  fenolik,  uji triterpenoid,  uji  steroid,  uji  fenolik,  dan  uji saponin.  Berdasarkan  uji  skrining  fitokimia dari  ekstrak Spirulina  platensis pelarut aseton  dan  pelarut  etil  asetat  menunjukkan hasil  positif  pada  uji  senyawa  fenolik, triterpenoid,  steroid,  flavonoid,  dan  saponin yang  hanya  terlihat  pada  pelarut  aseton  saja. Sudha et  al. (2011)  hasil  uji  fitokimia  pada S.  platensis menunjukkan  adanya  senyawa terpenoid,  saponin,  protein,  karbohidrat,  dan asam amino.
Senyawa  alkaloid  pada  uji  skrining fitokimia  menunjukkan  hasil  negatif,  yaitu dengan  ditandai  tidak  terbentuk  sama sekali  endapan  berwarna  putih  maupun coklat,  baik  pada  pelarut  aseton  maupun etil  asetat.  Alkaloid  merupakan  senyawa yang  bersifat  semi  polar  namun  pada  sampel ini  tidak  terlihat  adanya  senyawa  tersebut. Senyawa  alkaloid  yang  terkandung  pada Spirulina platensis segar sangat sedikit bahkan tidak  ada.  Uji  alkaloid  akan  menunjukkan hasil positif apabila ditandai dengan timbulnya endapan dan perubahan warna menjadi coklat setelah  direaksikan  dengan  pereaksi  Mayer. Pereaksi  Mayer  mengandung  logam  Hg  dan KI yang akan membentuk kompleks endapan kuning  kecoklatan  dengan  senyawa  alkaloid. Marliana et  al. (2005)  hasil  positif    alkaloid pada    uji Dragendorff juga  ditandai  dengan terbentuknya  endapan  coklat  muda  sampai
Tabel 2 Hasil uji skrining fitokimia Spirulina platensis segar pelarut aseton dan etil asetat Sampel Alkaloid Senyawa fenolik Triterpenoid dan steroid Flavonoid Saponin Aseton - ++ ++ + ++ Asil asetat - ++ ++ ++ -
Keterangan : (-) : Tidak ada dalam ekstrak    (+) : Ada dalam ekstrak  (++) : Ada kuat dalam ekstrak (Mega dan Swastini 2010)
kuning.    Endapan    tersebut    adalah    kalium- alkaloid.  Yudiati et  al. (2009)  menyatakan bahwa  dalam Spirulina sp.  memang  tidak ditemukan  adanya  kandungan  alkaloid,  hal tersebut terlihat pada hasil pengujian skrining fitokimia.  Raharjo  (2013)  menyatakan  bahwa alkaloid  tidak  ditemukan  disemua  jenis tanaman.  Alkaloid  kebanyakan  ditemukan pada  tanaman  tingkat  tinggi  Angiospermae terutama pada tanaman dikotil.
Hasil  pengujian  skrining  fitokimia  pada Spirulina  platensis segar  menunjukkan  positif adanya  senyawa  fenolik,  baik  pada  pelarut aseton  maupun  etil  asetat.  Senyawa  fenolik tidak  hanya  dapat  larut  dalam  pelarut  aseton saja, akan tetapi juga dapat larut dalam pelarut etil asetat. Hasil uji fenolik menunjukkan hasil positif yang ditandai dengan perubahan warna ekstrak  dari  bening  kehijauan  menjadi  biru kehitaman.  Warna  biru  kehitaman  tersebut dihasilkan  dari  reaksi  antara  Fe 3+ dengan senyawa  fenolik  yang  terkandung  di  dalam ekstrak.  Fenolik  termasuk  ke  dalam  senyawa yang bersifat polar, fenolik dengan muda akan larut dalam senyawa polar yaitu aseton. Ekstrak etil  asetat  juga  menunjukkan  hasil  positif karena  pelarut  etil  asetat  bersifat  semi  polar yang  mempunyai  sedikit  kemampuan  untuk menarik  senyawa  polar.  Pratt  dan  Hudson (1990)  menyatakan  bahwa  senyawa  fenolik terdiri  atas  molekul-molekul  besar  dengan beragam  struktur,  karakteristik  utamanya adalah  cincin  aromatik  yang  memiliki  gugus hidroksil.  Fenolik  bersifat  asam  karena  sifat gugus H + yang mudah melepaskan diri. Senyawa triterpenoid dan steroid dari hasil uji skrining fitokimia pada sampel segar juga tampak pada kedua pelarut, baik pada pelarut aseton  maupun  pelarut  etil  asetat.  Senyawa triterpenoid ini bersifat non polar, akan tetapi pada kedua pelarut menunjukkan hasil positif. Riyanto et  al. (2013)  menyatakan  bahwa senyawa triterpenoid yang dapat dijumpai pada tumbuhan berfungsi sebagai pelindung untuk menolak  serangga  dan  serangan  mikroba. Kandungan senyawa triterpenoid pada pelarut etil  asetat  lebih  banyak  dibandingkan  pelarut
metanol.
Hasil uji steroid menunjukkan hasil positif ditandai  dengan  adanya  perubahan  menjadi ungu.  Steroid  merupakan  senyawa  bioaktif yang  tergolong  non  polar,  biasanya  senyawa non  polar  akan  tertarik  oleh  pelarut  non polar ( like dissolved like ), akan tetapi senyawa steroid disini menunjukkan positif pada kedua pelarut  yaitu  etil  asetat  dan  aseton.  Faktor yang mempengarui hal tersebut terjadi adalah adanya momen dipol senyawa polar dan semi polar  yang  akan  menginduksi  molekul  non polar yang tidak memiliki dipol sehingga akan terjadi  gaya  elektrostatik  di  antara  keduanya. Gaya  ini  menyebabkan  senyawa  non  polar dapat  larut  atau  sedikit  larut  dalam  pelarut polar  maupun  non  polar.  Steroid  memiliki kecenderungan  sebagai  sumber  antibakteri. Bangham  dan  Horne  (2006)  menyatakan steroid  dapat  berinteraksi  dengan  membran fosfolipid  sel  yang  bersifat  impermeabel terhadap  senyawa-senyawa  lipofilik  sehingga menyebabkan  integritas  membran  menurun, morfologi membran sel berubah, dan akhirnya dapat  menyebabkan  membran  sel  rapuh  dan lisis. Senyawa saponin bersifat polar menunjukkan  hasil  positif  pada  pelarut aseton  saja.  Saponin  memang  banyak terkandung  di  dalam  tumbuh-tumbuhan.
Shalaby  dan  Sanaa  (2012)  menyatakan bahwa  hasil  skrining  fitokimia S.  platensis menunjukkan  positif  adanya  saponin  hanya pada  pelarut  polar  saja.  Saponin  termasuk dalam  golongan  fenolik  yang  diduga  dapat menghambat radikal bebas.
Hasil uji skrining fitokimia menunjukkan positif  adanya  senyawa  flavonoid  pada  kedua ekstrak Spirulina platensis segar,  baik ekstrak pelarut  aseton  maupun  ekstrak  pelarut  etil asetat.  Hasil  positif  menunjukkan  perubahan warna  orange  kemerahan  pada  pelarut  etil asetat dan orange pada pelarut aseton. Senyawa flavonoid  merupakan  senyawa  yang  bersifat non  polar,  namun  flavonoid  mempunyai gugus  gula  yang  menyebabkan  mudah  larut dalam polar ataupun semi polar. Sesuai dengan
JPHPI 2015, Volume 18 Nomor 1
Kar et al. (2006) menyatakan bahwa senyawa flavonoid  merupakan  senyawa  yang  bersifat non polar dan banyak ditemukan pada batang tumbuhan. Metabolit  sekunder  yang  menunjukkan hasil positif pada uji skrining fitokimia diduga mendukung aktivitas antioksidan dari ekstrak Spirulina  platensis segar  tersebut.  Senyawa- senyawa  tersebut  yang  dapat  memiliki potensi  sebagai  antioksidan  alami  yang  dapat menangkal radikal bebas. Hirata et al. (2000) menyatakan  bahwa  senyawa  yang  memiliki aktivitas  antioksidan  adalah  zeaxanthin, α-tokoferol,  dan  fikosianin  contohnya  asam lenoleat. Hasil  nilai  IC 50 yang  diperoleh  dari penelitian  ini  didukung  oleh  hasil  uji kuantitatif  Agustini et  al. (2014)  menyatakan bahwa profil senyawa bioaktif yang berpotensi sebagai antioksidan yang terkandung di dalam S.  platensis segar  diperoleh  hasil  fenolik  total sebesar  3,47  GAE/gr  ekstrak  untuk  pelarut aseton  dan  etil  asetat  sebesar  2,04  GAE/gr ekstrak. Nilai fenolik total pelarut aseton lebih besar dibandingkan dengan pelarut etil asetat. Nilai  flavonoid  total  pelarut  aseton  sebesar 14,25  QE/gr  ekstrak  dan  pelarut  etil  asetat sebesar 24,65 QE/gr ekstrak.

## Uji  Aktivitas  Antioksidan  dengan  Metode DPPH
Uji aktivitas antioksidan secara kuantitatif dengan  metode  DPPH  dinyatakan  dalam nilai IC 50 (inhibition concentration). Menurut Andayani et  al. (2008),  besarnya  aktivitas antioksidan  ditandai  dengan  nilai  IC 50 ,  yaitu konsentrasi  larutan  sampel  yang  dibutuhkan untuk menghambat 50% radikal bebas DPPH. Berdasarkan pengujian aktivitas antioksidan Spirulina  platensis segar  dengan metode  DPPH  dilakukan  pada  berbagai konsentrasi  yang  berbeda  menunjukkan  nilai presentase  inhibisi  yang  berbeda-beda  juga. Semakin  tinggi  konsentrasi  ekstrak  maka semakin  tinggi  nilai  presentase  inhibisinya. Mardawati et  al. (2008)  menyatakan  bahwa
semakin  tinggi  konsentrasi  pelarut,  maka semakin  tinggi  persentase  inhibisinya,  hal ini  disebabkan  pada  sampel  yang  semakin banyak,  maka  semakin  tinggi  kandungan antioksidannya sehingga berdampak juga pada tingkat  penghambatan  radikal  bebas  yang dilakukan oleh zat antioksidan tersebut. Hasil pembacaan absorbansi ekstrak kasar Spirulina platensis segar aseton dan etil asetat dengan  dengan  berbagai  konsentrasi  ekstrak dan nilai IC 50 menggunakan spektrofotometer pada  panjang  gelombang  517  nm  diperoleh kurva yang tersaji pada Gambar 1.
Ekstrak  kasar Spirulina  platensis segar dengan  pelarut  aseton  mempunyai  aktivitas antioksidan  yang  tergolong  tinggi  atau  kuat. Nilai  IC 50 yang  diperoleh  adalah  65,89  ppm, sedangkan nilai IC 50 pelarut etil asetat adalah 76,36  ppm.  Ekstrak  kasar Spirulina  platensis pelarut  etil  asetat  mempunyai  aktivitas antioksidan  yang  lebih  lemah  dibandingkan dengan ekstrak kasar Spirulina platensis pelarut aseton. Suatu aktivitas dikatakan kuat apabila nilai IC 50 nya antara 50-100 ppm. Agustini (2010) menyatakan  bahwa  pigmen  fikobiliptrotein dari Spirulina  platensis memiliki  IC 50 sebesar 96,57  µg/mL.  Pigmen  fikobiliprotein  dapat dinyatakan  aktif  sebagai  antioksidan  karena mempunyai nilai IC 50 <200 µg/mL. Mardawati et al. (2008) menyatakan bahwa suatu senyawa dikatakan sebagai antioksidan sangat kuat jika nilai  IC 50 <50  ppm,  kuat  untuk  IC 50 bernilai 50-100 ppm, sedang jika IC 50 bernilai 100-150 ppm, lemah jika IC 50 adalah 150-200 ppm, dan sangat lemah jika nilai IC 50 >200 ppm. Aktivitas  antioksidan Spirulina  platensis segar  jauh  lebih  kuat  dibandingkan  dengan yang kering atau bubuk. Penelitian Sari (2011) menyatakan  bahwa  nilai  IC 50 yang  diperoleh ekstrak Spirulina  platensis bubuk  dengan pelarut etil asetat adalah 11,203 ppm. Aktivitas antioksidan  dari  ekstrak  tersebut  tergolong sangat  lemah  karena  nilai  IC 50 nya  lebih  dari 200 ppm.
Nilai  IC 50 ekstrak  dengan  pelarut  etil asetat jelas menunjukkan lebih besar dibanding
dengan  nilai  IC 50 dari  ekstrak  pelarut  aseton. Aktivitas  antioksidan  dari  ekstrak Spirulina platensis segar  pelarut  aseton  lebih  besar dibandingkan  dengan  ekstrak Spirulina platensis segar  pelarut  etil  asetat.  Menurut Yudiati et  al. (2011),  semakin  kecil  nilai  IC 50 semakin  besar  aktivitas  antioksidannya. Pendapat tersebut diperkuat oleh Sari (2011), yang  menyatakan  bahwa  semakin  tinggi  nilai IC 50 maka  aktivitas  antioksidannya  semakin rendah.
Aktivitas antioksidan pelarut aseton lebih kuat  dibandingkan  dengan  pelarut  etil  asetat. Aseton  yang  berperan  sebagai  pelarut  polar mampu menarik senyawa bioaktif yang bersifat non polar hingga polar, sedangkan pelarut etil asetat  yang  merupakan  pelarut  semi  polar hanya mampu menarik senyawa bioaktif mulai dari yang bersifat non polar sampai semi polar saja.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa pelarut sangat berpengaruh terhadap aktivitas antioksidan Spirulina platensis segar. Kedua  nilai  aktivitas  antioksidan  dari kedua  pelarut  tergolong  masih  rendah apabila  dibandingkan  dengan  nilai  aktivitas antioksidan kontrol. Nilai IC 50 kontrol adalah 21,64  ppm,  nilai  IC 50 untuk  pelarut  aseton adalah  65,89  ppm  sedangkan  untuk  pelarut etil  asetat  adalah  76,36  ppm.  Semakin  kecil nilai  IC 50 nya  maka  semakin  besar  nilai aktivitas  antioksidannya.  Kontrol  positif  atau
pembanding yang digunakan adalah kuersetin. Aktivitas  antioksidan Spirulina  platensis yang lebih  rendah  dibandingkan  dengan  kontrol diduga  karena  adanya  pengaruh  komponen lain  dalam  ekstrak.  Menurut  Sari  (2011) menyatakan  bahwa  aktivitas  antioksidan yang  rendah  terjadi  karena  ekstrak Spirulina platensis yang  diekstrak  bukan  merupakan senyawa  murni  antioksidan,  sehingga diduga  masih  mengandung  senyawa  lainnya yang  bertindak  selain  sebagai  antioksidan. Hanani et  al. (2005)  menyatakan  bahwa aktivitas  antioksidan  ekstrak Callyspongia sp. masih lebih rendah.
Aktivitas  antioksidan  kedua  ekstrak Spirulina  platensis segar  meskipun  lebih rendah  daripada  kontrol,  akan  tetapi  masih tetap tergolong memiliki aktivitas antioksidan yang kuat, karena mempunyai nilai IC 50 antara 50-100  ppm.  Penelitian  ini  membuktikan bahwa Spirulina  platensis segar  memang memiliki  kandungan  senyawa  bioaktif  yang berfungsi sebagai antioksidan. Agustini (2010), menyatakan  bahwa  pigmen  fikobiliprotein dari mikroalga Spirulina platensis mempunyai aktivitas  antioksidan  yang  dapat  meredam radikal DPPH (1,1-difenil-2 pikrilhidrazil).
Spirulina  platensis segar  memiliki kandungan  senyawa-senyawa  bioaktif  yang tinggi  dan  masih  bagus,  dikarenakan  sampel masih  dalam  keadaan  segar  dan  belum
Gambar 1 Kurva aktivitas antioksidan ekstrak Spirulina platensis segar dengan pelarut aseton dan etil asetat berbagai konsentrasi pada panjang gelombang 517 nm dengan menggunakan spektrofootometer UV-Vis
mengalami  proses  pengolahan  apapun. Pernyataan  tersebut  juga  merupakan  salah satu  faktor  yang  menyebabkan  kuatnya aktivitas antioksidan yang dihasilkan. Menurut Hikmah et  al. (2009)  dalam  Sari  (2011) hasil  pengujian  menunjukkan  peningkatan lama  dan  suhu  pengeringan  pada Spirulina platensis menyebabkan penurunan konsentrasi fikosianin,  kadar  fenolik  total,  dan  aktivitas antioksidan. Metode  ekstraksi  yang  digunakan juga  diduga  sangat  berpengaruh  terhadap aktivitas  antioksidan.  Metode  ekstraksi refluks  dan  metode  pengujian  DPPH diharapkan  dapat  mengekstraksi  senyawa bioaktif  secara  maksimal  sehingga  dapat menghasilkan aktivitas antioksidan yang kuat. Shalaby  dan  Sanaa  (2012)  metode  pengujian aktivitas  antioksidan  sangat  berpengaruh dalam  menghasilkan  nilai  IC 50 .  Perbedaan nilai aktivitas antioskidan ini disebabkan oleh metode  ekstraksi,  metode  pengujian  serta kondisi  operasi  yang  digunakan  saat  proses ekstraksi juga berbeda (volume pelarut, ukuran serbuk  daun,  waktu  ekstraksi,  suhu,  dan tekanan).  Aktivitas  antioksidan  dipengaruhi oleh metode ekstraksi dan kondisi operasi yang digunakan pada saat ekstraksi. Kuat atau lemahnya aktivitas antioksidan suatu  senyawa  dipengaruhi  oleh  beberapa faktor,  diantaranya  yaitu  komposisi  kimia dari Spirulina platensis itu sendiri. Komposisi kimianya  juga  dipengaruhi  oleh  kondisi habitat yang meliputi cahaya dan temperatur, tempat Spirulina  platensis dibudidayakan. Sari (2011) menyatakan bahwa temperatur dan fase pertumbuhan yang berbeda memberikan pengaruh yang signifikan terhadap kandungan asam  lemak  dan  senyawa  biokimia  yang dimiliki  oleh Spirulina  platensis tersebut. Christiana et  al. (2008)  menyatakan  bahwa perbedaan  kondisi  lingkungan  tempat pembiakan  spirulina,  misalnya  pH  media, cahaya  matahari  serta  kandungan  oksigen dan  nitrogen  mempengaruhi  perbedaan kandungan  bioaktif  khususnya  klorofil  pada spirulina.
Nilai  aktivitas  antioksidan  dari Spirulina platensis memang  tergolong  tinggi  atau kuat,  hal  tersebut  telah  didukung  oleh  hasil screning fitokimia  yang  menunjukkan  adanya senyawa-senyawa  yang  mempunyai  potensi sebagai  antioksidan.  Senyawa-senyawa  yang mempunyai  potensi  sebagai  antioksidan umumnya  adalah  flavonoid,  fenolik,  alkaloid, saponin,  steroid  dan  triterpenoid.  Menurut Waji  dan  Andis  (2009),  senyawa-senyawa yang  mempunyai  potensi  sebagai  antioksidan umumnya  merupakan  senyawa  flavonoid, fenolat,  dan  alkaloid.  Menurut  Lisdawati  dan Broto  (2006),  senyawa  bioaktif  yang  bersifat antioksidan alam banyak ditemukan di dalam kulit buah atau tumbuhan. Senyawa golongan senyawa  metabolit  sekunder  tumbuhan  yang dikenal  sebagai  sumber  radical  scavenger adalah  golongan  senyawa  fenol,  misalnya flavonol,  flavonon,  flavon.  Fenil  propanoid, antakuinon,  atau  lignan;  senyawa-senyawa alkaloid, saponin, dan flavonoid. Senyawa-senyawa tersebut yang menyebabkan  kuatnya  aktivitas  antioksidan pada Spirulina platensis . Senyawa utama paling kuat  yang  berperan  aktif  sebagai  antioksidan yaitu  senyawa  golongan  fenol  misalnya flavonoid. Waji dan Andis (2009), menyatakan bahwa  flavonoid  termasuk  fenolik  alam  yang potensial sebagai antioksidan dan mempunyai bioaktivitas  sebagai  obat.  Senyawa-senyawa ini  ditemukan  pada  batang,  daun,  bunga, dan  buah.  Flavonoid  dalam  tubuh  manusia berfungsi sebagai antioksidan sehingga sangat kuat  untuk  pencegahan  kanker.  Manfaat flavonoid antara lain adalah untuk melindungi struktur sel, meningkatkan efektivitas vitamin C,  anti-inflamasi,  mencegah  keropos  tulang dan  sebagai  antibiotik.  Flavonoid  dapat berperan  langsung  sebagai  antibiotik  dengan mengganggu  fungsi  dari  mikroorganisme misalnya  bakteri  atau  virus.  Fungsi  flavonoid sebagai anti virus telah banyak dipublikasikan termasuk  untuk  virus  HIV/AIDS  dan  virus herpes.
Uji a w Sampel Hasil Ekstraksi Ekstrak Spirulina platensis segar kemudian diuji kadar a w menggunakan a w meter. Tujuan pengujian ini adalah untuk mengetahui kadar a w dari  sampel  yang  berhubungan  dengan kemampuannya  sebagai  antioksidan.  Hasil pengujian  kadar  a w yang  didapat  disajikan dalam Tabel 3.
Kadar  a w juga  sangat  mempengaruhi oksidasi  suatu  bahan  atau  produk.  a w yang optimal adalah 0,8 atau kurang dari 0,8, apabila lebih dari 0,8 maka bahan tersebut akan lebih mudah  mengalami  oksidasi.  Hasil  pengujian kadar  a w pada  kedua  sampel  dengan  3  kali ulangan  pembacaan  menghasilkan  nilai  rata- rata 0,81 untuk sampel dengan pelarut etil asetat dan 0,61 untuk sampel dengan pelarut aseton. Kedua  sampel  menunjukkan  bahwa Spirulina platensis tidak  mudah  mengalami  oksidasi atau  dapat  dikategorikan  mempunyai  potensi sebagai  antioksidan.  Rab  (1997)  menyatakan bahwa  a w dibawah  0,25  menunjukkan  bahwa air  tersebut  terikat  dengan  erat  sekali  dalam bahan  sehingga  tidak  dapat  berfungsi  dalam membantu proses kerusakan. Oksidasi berjalan lambat  pada  a w 0,25-0,75,  sedangkan  pada  a w diatas  0,75  suatu  bahan  akan  dengan  cepat mengalami proses oksidasi.

## KESIMPULAN
Ekstrak senyawa bioaktif Sprulina platensis segar berpotensi sebagai antioksidan.

## DAFTAR PUSTAKA
Agustini,  N.W.S.  2010.  Aktivitas  Antioksidan Toksisitas Hayati Pigmen Fikobiliprotein dari Ekstrak Spirulina platensis : Seminar Nasional IX  Pendidikan  Biologi  FKIP  UNS.  Pusat Penelitian Bioteknologi – LIPI. Bogor. Agustini, T.W, Widodo F. M, Dhani S. Spirulina : Teori dan aplikasinya sebagai bahan pangan. Laporan Penelitian MP3EI Tahun Anggaran 2014/2015. Universitas Diponegoro. Semarang. Andayani  R,  Maimuna,  Y.  Lisawati.  2008. Penentuan  aktivitas  antioksidan,  kadar fenolat  total  dan  likopen  pada  buah  tomat ( Solanum  lycopersicum  L ). Jurnal  Sains  dan Teknologi Farmasi 13 (1) : 31-37.
Bangham AD, Horne RW. 2006. Action of saponins on biological cell membranes. Journal Nature
196: 952-953.
Bintang  I.A.K,  Sinurat  A.P,  Purwadaria  T.  2007. Penambahan  ampas  mengkudu  sebagai senyawa bioaktif terhadap performans ayam broiler. JITV 12(1) :1-5.
Christina  R,  Hari  K,  Leenawaty  L.  2008. Photodegradation and antioxidant activity of chlorophyll  a  from  spirulina  ( Spirulina sp.) powder.  Indo  Journal  Chemistry  8(2):236- 241. Hanani,  E,  A.  Mun’im,  R.  Sekarini.  Identifikasi senyawa antioksidan dalam spons Callyspongia sp.  dari  Kepulauan  Seribu. Majalah Ilmu Kefarmasian 2 (3):127-133.
Hatam FS, Suryanto E, Abidjulu J. 2013.  Aktivitas antioksidan  dari  ekstrak  kulit  nanas ( Ananas  comosus (L)  Merr). Jurnal  Ilmiah Farmasi 2(01) : 8-11.
Hirata  T,  Mikiya  T,  Masaki  O,  Teppei  T, Morihiko  S.  2000.  Antioxidant  activities  of phycocyanobilin  prepared  from Spirulina platensis . Journal of Applied Phycology 12:435- 439.
Kar P, Laight D,  Shaw K. M, Cummings M. H.
2006.  Flavonoid  rich  grapeseed  extracts:  a new  approach  in  high  cardiovascular  risk patients. International  Journal  Clin  Practice 60(11):1484-1492.
Lisdawati V dan Broto. 2006. Aktivitas antioksidan
Tabel 3 Hasil uji kadar a w sampel Spirulina platensis segar Pelarut Nilai a w Aseton 0,61 Etil asetat 0,81
JPHPI 2015, Volume 18 Nomor 1
dari  berbagai  fraksi  ekstrak  daging  buah dan  kulit  biji  mahkota  dewa  ( Phaleria macrocarpa ). Artikel Media Litbang Kesehatan 16 (4).
Mardawati,  F.  Filianty,  H.  Marta.  2008.  Kajian aktivitas  antioksidan  ekstrak  kulit  manggis
( Garcinia  mangostana L)  dalam  rangka pemanfaatan  limbah  kulit  manggis  di Kecamatan Puspahiang Kabupaten Tasikmalaya.  Fakultas  Teknologi  Industri. Universitas Padjadjaran. Marliana  S,  Venty  S,  Suyono.  2005.  Skrining fitokimia  dan  analisis  kromatografi  lapis tipis  komponen  kimia  buah  labu  siam ( Sechium  edule Jacq.  Swartz)  dalam  ekstrak etanol. Jurnal Biofarmasi 3(1):26-31. Mega M, Swastini D. 2010. Screening fitokimia dan aktivitas  antiradikal  bebas  ekstrak  metanol daun  gaharu  ( Gyrinops  versteegii ). Jurnal Kimia 4 (2):187-192. Prabowo,  A.Y,  T.  Estiasih,  I.  Purwatiningrum.
2014. Umbi gembili ( Dioscorea esculenta L.) sebagai bahan pangan mengandung senyawa bioaktif:  kajian  pustaka. Jurnal  Pangan  dan Agroindustri 2 (3):129-135. Pratt, D.E, B.J.F. Hudson. 1990. Natural antioxidants not exploited commercially. Else-vier Applied Science. London.
Rab, T. 1997. Teknologi Hasil Perairan. Pekanbaru : Universitas Islam Riau. Raharjo TJ. 2013. Kimia Hasil Alam . Jogjakarta : Pustaka Pelajar. Riyanto EI, Widowati I, Sabdono A. 2013. Skrining aktivitas  antibakteri  pada  ekstrak  Sargasum polycystum  terhadap  bakteri Vibrio  harveyi dan  Micrococcus  luteus  di  Pulau  Panjang Jepara. Journal of Marine Research 1(1):115- 121.
Sarastani D,  Soekarto ST, Muhchtadi TR, Fardiaz
D, Apriyantono A. 2002. Aktivitas antioksidan ekstrak  dan  fraksi  ekstrak  biji  antung ( Parinarium  glaberrimum ). Jurnal  Teknologi dan Industri Pangan 13(2). Sari, Rizka F. 2011. Kajian Potensi Senyawa Bioaktif Spirulina  platensis sebagai  Antioksidan [Skripsi].  Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu
Kelautan Universitas Diponegoro. Semarang. Setyawan P.E, Yudha S. 2013. Optimalisasi ekstraksi dan uji stabilitas phycocyanin dari mikroalga Spirulina platensis . Jurnal Teknologi Kimia dan Industri 2(2):61-67. Sudha  SS,  Karthic  R,  Naveen,  Rengaramanujam J.  2011.  Anti  hyperlipidemic  activity  of Spirulina  platensis in  triton  x-100  induced hyperlipidemic rats. Hygea Journal for Drugs and Medicines 3(2):32-37. Shalaby  E.A,  Sanaa  M.M.S.  2012.  Comparison of DPPH and ABTS assays for determining antioxidant potential of water and methanol extracts of Spirulina platensis . Indian Journal of Geo-Marine Sciences 42(5):556-564.
Tamat,  S.R,  T.  Wikanta,  L.S,  Maulina.  2007. Aktivitas antioksidan dan toksisitas senyawa bioaktif dari ekstrak rumput laut hijau Ulva reticulata Forsskal. Jurnal  Ilmu  Kefarmasian
Indonesia 5(1):31-36.
Utomo  M.T.S,  Adhita  S.P.  2009.  Formulasi pembuatan  tablet  hisap  berbahan  dasar mikroalga Spirulina platensis sebagai sumber antioksidan  alami. Jurnal  Sains  MIPA 15(3):167-176
Waji, R.A, A. Sugrani. 2009. Flavonoid (Quercetin).
[Skrispsi].  Makasar:  Fakultas  Matematika dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam.  Universitas Hasanuddin.
Wikanta, T., H.I. Januar, M. Nursid. Uji aktivitas antioksidan,  toksisitas  dan  sitotoksisitas ekstrak  alga  merah Rhodymenia  palmata . Jurnal  Penelitian  Perikanan  Indonesia 11(4): 41-50. Yatno,  Purwanti.  2010.  Pengaruh  steaming  dan lama  penyimpanan terhadap sifat fisik pakan burung perkutut. Jurnal ITP 1(1).
Yudiati E, S. Sedjati, Sunarsih, R. Agustian. 2011. Aktivitas Antioksidan dan Toksisitas Ekstrak Metanol  dan  Pigmen  Kasar Spirulina sp. . Jurnal Ilmu Kelautan 16(4):187-192.
Yuniarifin  H,  Bintoro  VP,  Suwarastuti  A.  2006. Pengaruh  berbagai  konsentrasi  asam  fosfat pada proses perendaman tulang sapi terhadap rendemen, kadar abu dan viskositas gelatin. Journal Indon Trop Anim Agric 31(1) : 55-61.