## PERBANDINGAN UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN FRAKSI N- HEKSAN, ETIL ASETAT DAN AIR EKSTRAK ETANOL KULIT BUAH SALAK MENGGUNAKAN METODE PEREDAMAN RADIKAL BEBAS DPPH
Ricka Islamiyati 1 , Endra Pujiastuti 2 1,2 Program Studi Farmasi STIKES Cendekia Utama Kudus Jl. Lingkar Raya Kudus-Pati Km.5 Jepang Kec.Mejobo, Kab.Kudus Email: islamiyatirika@gmail.com; endra.pujiastuti@gmail.com

## ABSTRAK
Tanaman salak merupakan salah satu buah khas dari Indonesia yang dapat ditemukan hampir di setiap daerah. Kulit dan daging buah salak secara hasil fitokimia mengandung golongan senyawa alkaloid, flavonoid, hidrokuinon, steroid dan tanin serta beberapa jenis salak tertentu mengandung senyawa  saponin.  Senyawa-senyawa  tersebut  dapat  berkhasiat  dalam  pengobatan,  diantaranya sebagai antioksidan, antidiabetes, mencegah sembelit dan sebagainya. Setiap orang memerlukan suatu senyawa yang bersifat antioksidan untuk melindungi sel-sel tubuh dari efek negatif radikal bebas. Radikal bebas adalah suatu atom, gugus atom yang memiliki satu atau lebih elektron tidak berpasangan pada orbital paling luar sehingga sifatnya seacar kimiawi sangat reaktif. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antioksidan fraksi N-Heksan, etil asetat dan air ekstrak etanol  kulit  buah  salak.  Hasil  dari  regresi  linier  fraksi  n-heksan  diperoleh  IC 50 388,82  ppm menunjukan bahwa fraksi n-heksan kulit buah salak memiliki sifat antioksidan lemah. Hasil dari fraksi etil asetat diperoleh IC 50 229,88 ppm yang menunjukan bahwa fraksi etil asetat kulit buah salak  memiliki  sifat  antioksidan  sedang.  Hasil  dari  fraksi  air  diperoleh  IC 50 60,19  ppm  yang menunjukkan bahwa fraksi air kulit buah salak memiliki sifat antioksidan kuat. Hasil dari analisis statistika varian satu arah (ANOVA one-way ) menunjukkan bahwa semua kelompok antioksidan memberikan nilai signifikan p<0,05 dapat disimpulkan bahwa terdapat perbedaan yang signifikan antara antioksidan fraksi air, etil asetat dan n heksan kulit buah salak.
Kata Kunci : Kulit Buah Salak; DPPH; Antioksidan; Fraksi

## ABSTRACT
Zalacca  plant is  one  of the  typical  fruits from Indonesia which can  be found in  almost  every region.  The  peel  and  flesh  of  zalacca,  according  to  phytochemical  results,  contain  alkaloid, flavonoid,  hydroquinone,  steroid  and  tannin  compounds,  as  well  as  certain  types  of  zalacca containing saponin compounds. These compounds can be efficacious in medicine, including as antioxidants, anti-diabetes, preventing constipation and so on. Everyone needs a compound that is antioxidant to protect body cells from the negative effects of free radicals. A free radical is an atom, a group of atoms that has one or more unpaired electrons in the outermost orbital so that it is chemically very reactive. This study aims to determine antioxidant activity of the N-hexane, ethyl acetate and water fractions of the ethanol extract of the peel of the zalacca. The results of the linear regression of the n-hexane fraction get IC 50 388,82 ppm, indicating that the n-hexane fraction  of  the  zalacca  peel  has  weak  antioxidant  properties.  The  results  of  the  ethyl  acetate fraction get IC 50 229,88 ppm which indicated that the ethyl acetate fraction of the zalacca peel had moderate antioxidant properties. The results of the water fraction find IC 50 60,19 ppm which indicated that the water fraction of the zalacca peel had strong antioxidant properties. The results of the  statistical  analysis  of  one-way variance  (one-way  ANOVA)  showed that  all  antioxidant

## Cendekia Journal of Pharmacy
STIKES Cendekia Utama Kudus
groups  gave  a  significant  value  of  p  <0,05.  It  can  be  concluded  that  there  is  a  significant difference between the antioxidant fraction of water, ethyl acetate and n hexane of zalacca peel.
Keywords : Zalacca peel ; DPPH; Antioxidants; Fraction

## LATAR BELAKANG
Penyakit degeneratif, kanker, dan penuaan dini menjadi masalah baru dalam dunia kesehatan.  Salah  satu  penyebabnya  akibat  proses  peroksidasi  lipid  sel  tubuh  akibat senyawa radikal bebas (Falahudin, 2010). Radikal   bebas   merupakan   molekul   atau fragmen  molekul  yang  mengandung  satu  atau  lebih  elektron  tidak  berpasangan  pada orbital atomnya. Radikal bebas dianggap berbahaya karena menjadi sangat reaktif dalam upaya  mendapatkan  pasangan  elektronnya  yang  dapat  menimbulkan  kerusakan diberbagai  bagian  sel,  protein,  DNA,  dan  lipid  (Puryono et  al .,  2015).  Penggunaan antioksidan dapat sebagai alternatif dalam mencegah radikal bebas dalam tubuh.
Salak (Salacca zalacca) merupakan tanaman asli  Indonesia  yang termasuk  dalam famili  Arecaceae, serumpun  dengan  kelapa,  kelapa sawit, aren (enau), palem, pakis yang bercabang rendah. Batang  berduri  pada tanaman  ini  menyebabkan  tumbuhnya tunas  baru  yang  dapat menjadi  tunas  bunga  buah  salak dalam  jumlah  yang  banyak (Rahmah, 2016). Buah salak  memiliki kandungan  karbohidrat  yang  tinggi,  vitamin C, kalsium,  fosfor,  zat  besi,  serta antioksidan (Dhyanaputri, Karta, & Krisna 2016). Selain itu kulit buah salak juga berkhasiat sebagai obat. Hasil  uji fitokimia  menunjukkan  kulit buah    salak  mengandung    senyawa    flavonoid    dan  tannin,    serta    sedikit    alkaloid. Kandungan  flavonoid  yang  terkandung  dalam  kulit  buah  salak  memiliki    efek  pada penurunan  kadar  gula  darah  tikus putih  jantan  galur  wistar  yang  diinduksi sukrosa (Kanon, Fatimawali & Bodhi, 2012).
Tujuan dilakukannya penelitian ini adalah untuk mengetahui aktivitas antioksidan masing-masing fraksi N-Heksan, etil asetat dan air ekstrak etanol kulit buah salak. Serta mengetahui perbedaan aktivitas antioksidan pada masing-masing fraksi N-Heksan, etil asetat dan air ekstrak etanol kulit buah salak.

## BAHAN DAN METODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian dilaksanakan pada bulan Agustus-Oktober 2020 di Laboratorium Teknologi Farmasi, Mikrobiologi dan Farmakognosi STIKES Cendekia Utama kudus.

## Alat dan Bahan
Alat:  Spektrofotometer  UV-Visibel,  kuvet  kuarsa,  labu  ukur,  timbangan  analitik, waterbath dan rotary evaporator .
Bahan: Kulit buah salak, etanol 96 %, etil asetat, n-heksan, aquadest, etanol p.a, AlCl 3 , natrium asetat, kuersetin dan DPPH.

## Prosedur Penelitian
Pembuatan Serbuk Simplisia
Kulit  buah  salak  dibersihkan  dengan  air  mengalir  kemudian  dipotong  dan dikeringkan dengan cara diangin-anginkan dalam ruangan. Sampel diserbuk dan diayak dengan ayakan mesh no.40.

## Pembuatan Ekstrak Etanolik Kulit Buah Salak
Serbuk  kulit  buah  salak  dimaseri  dengan  etanol  96%  selama  2x24  jam  sambil sesekali diaduk, kemudian disaring dan diremaserasi sampai jernih. Maserat yang didapat dipekatkan dengan rotary evaporator hingga diperoleh ekstrak kental.

## Pembuatan Fraksi N-Heksan, Etil Asetat dan Air Kulit Buah Salak
Ekstrak  kental  kulit  buah  salak  dimasukkan  dalam  corong  pisah,  ditambahkan aquadest 25 mL dan pelarut n-heksan 25 mL. Dikocok sampai larut dan didiamkan sampai memisah.  Fraksi  tidak  larut  n-heksan  difraksinasi  menggunakan  etil  asetat  25  mL kemudian dikocok sampai larut, didiamkan dan dipisahkan antara fraksi etil asetat dan fraksi  air.  Direplikasi  sebanyak  3  kali.  Hasil  fraksi  diupkan  menggunakan rotary evaporator .

## Pengujian Antioksidan dengan Metode DPPH
Penentuan λ Maksimum
Larutan DPPH 0,2 mM diambil 2,0 mL, kemudian dimasukkan dalam labu ukur 10 mL ditambah etanol p.a hingga tanda batas diukur pada panjang gelombang 500-600 nm.

## Penentuan Operating Time
Larutan pembanding kuersetin 50 ppm  sebanyak  2 mL ditambah 2 mL larutan DPPH 0,2 mM dan etanol p.a ad 10 mL. Dibaca absorbansinya pada λ maksimum 516 nm.

## Larutan Uji Kuersetin
Larutan induk kuersetin 1000 ppm dibuat deret konsentrasi 2, 3, 4, 5 dan 6 ppm. Masing-masing konsentrasi diambil 2,0 mL ditambahkan 2,0 mL larutan DPPH 0,2 mM ditambahakan etanol  p.a ad 10 mL, kemudian didiamkan selama 30 menit dan diukur serapannya pada spektrofotometer dengan panjang gelombang 516 nm.

## Larutan Uji Fraksi
Larutan induk fraksi konsentrasi 1000 ppm dibuat deret konsentrasi 100, 150, 200, 250  dan  300  ppm.  Masing-masing  konsentrasi  diambil  2,0  mL  ditambahkan  2,0  mL larutan DPPH 0,2 mM ditambahakan etanol p.a ad 10 mL, kemudian didiamkan selama 30 menit dan diukur serapannya pada spektrofotometer dengan panjang gelombang 516 nm.

## Analisis Data
Data hasil pengukuran antioksidan dianalisis menggunkan regresi linier dan spss. Nilai P<0.05 menunjukkan  hubungan  yang  signifikan  yang  akan  mengetahui  ada tidaknya  perbedaan  antara  fraksi  n-heksan,  fraksi  etil  asetat  dan  fraksi  air  terhadap aktivitas antioksidan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil Pengujian Antioksidan
Pengujian Antioksidan menggunakan metode DPPH yang dinyatakan dalam IC 50 yaitu konsentasi senyawa uji yang dibutuhkan untuk mengurangi radikal DPPH sebesar 50%. Nilai IC 50 ditentukan dari kurva hubungan antara % inhibisi terhadap larutan uji. Semakin kecil nilai IC 50 maka aktivitas antioksidan akan semakin baik.
Tabel 1. Aktivitas antioksidan ekstrak kulit buah salak fraksi N-heksan Konsentrasi (ppm) Absorbansi % Inhibisi x̄ % Inhibisi Persamaan regresi IC 50 (ppm) 0,700 11,61 y = 0,14176x - 5,12
R = 0,999 388,82 100 0,697 11,99 8,83 0,769 2,90 0,659 16,79 150 0,654 17,42 16,53 0,670 15,40 0,621 21,59 200 0,619 21,84 23,18 0,585 26,13 0,584 26,26 250 0,579 26,89 30,17 0,496 37,37 0,546 31,06 300 0,539 31,94 37,45 0,401 49,36 Tabel 2. Aktivitas antioksidan ekstrak kulit buah salak fraksi etil asetat Konsentrasi (ppm) Absorbansi % Inhibisi x̄ % Inhibisi Persamaan regresi IC 50 (ppm) 0,461 41,79 y= 0,16618x
+ 11,798 R = 0,999 229,88 100 0,548 30,80 28,44 0,691 12,75 0,430 45,70 150 0,485 38,76 36,82 0,586 26,01 0,400 49,49 200 0,415 47,60 44,77 0,497 37,24 0,364 54,04 250 0,350 55,80 53,49 0,391 50,63 0,333 57,95 300 0,289 63,51 61,65 0,289 63,51
Tabel 3. Aktivitas antioksidan ekstrak kulit buah salak fraksi air Konsentrasi (ppm) Absorbansi % Inhibisi x̄ % Inhibisi Persamaan regresi IC 50 (ppm) 0,442 44,19 y = 0,07442x + 45,52
R = 0,999 60,19 100 0,290 63,38 52,98 0,385 51,38 0,414 47,72 150 0,270 65,90 56,68 0,345 56,43 0,392 50,50 200 0,252 68,18 60,35 0,298 62,37 0,366 53,78 250 0,231 70,83 64,17 0,254 67,92 0,340 57,07 300 0,210 73,48 67,84 0,214 72,97 Tabel 4. Aktivitas antioksidan darikuersetin Konsentrasi (ppm) Absorbansi % Inhibisi x̄ % Inhibisi Persamaan regresi IC 50 (ppm) 0,513 35,22 y= 10,608x + 3,226
R = 0,999 4,40 2 0,643 18,81 24,44 0,639 19,31 0,436 44,94 3 0,565 28,66 35,01 0,543 31,43 0,372 53,03 4 0,470 40,65 45,66 0,449 43,30 0,299 62,24 5 0,385 51,38 56,39 0,352 55,55 0,233 70,58 6 0,290 63,38 66,79 0,266 66,41
Penentuan  nilai  IC 50 dilakukan  dengan  memasukkan  nilai  hasil  perhitungan  ke  dalam persamaan regresi linier dengan konsentrasi (ppm) sebagai absis (X) dan nilai % inhibisi sebagai ordinat (Y), nilai IC 50 dari perhitungan pada saat % inhibisi sebesar 50 dengan persamaan Y= bx + a.
Hasil dari ketiga replikasi uji aktivitas antioksidan kulit salak fraksi n-heksan, fraksi etil asetat, fraksi air dan pembanding (kuersetin) dengan metode DPPH didapatkan IC 50 pada tabel 1,2,3  dan  4.  Hasil  dari  regresi  linier  fraksi  n-heksan  diperoleh  IC 50 388,82  ppm  menunjukan bahwa fraksi n-heksan kulit buah salak memiliki sifat antioksidan lemah. Hasil dari fraksi etil asetat  diperoleh  IC 50 229,88  ppm  yang  menunjukan  bahwa  fraksi  etil  asetat  kulit  buah  salak memiliki  sifat  antioksidan  sedang.  Hasil  dari  fraksi  air  diperoleh  IC 50 60,19  ppm  yang menunjukkan  bahwa  fraksi  air  kulit  buah  salak  memiliki  sifat  antioksidan  kuat.  Sedangkan
aktivitas antioksidan dari pembanding (kuersetin) diperoleh IC 50 4,40 ppm yang menunjukkan bahwa kuersetin memiliki sifat antioksidan sangat kuat.  Hasil  perhitungan  IC 50 ekstrak  kulit buah salak dari ketiga fraksi, fraksi air memiliki aktivitas antioksidan terbaik dengan nilai IC 50 yang lebih rendah dibandingkan fraksi etil asetat dan fraksi n heksan.
Hasil dari analisis statistika varian satu arah (ANOVA one-way ) menunjukkan bahwa semua  kelompok  antioksidan  memberikan  nilai  signifikan  p<0,05  dapat  disimpulkan  bahwa terdapat perbedaan yang signifikan antara antioksidan fraksi air, etil asetat dan n heksan kulit buah salak.

## SIMPULAN DAN SARAN

## Simpulan
Berdasarkan penelitian yang sudah dilakukan dapat disimpulkan bahwa pengujian aktivitas  antioksidan  kulit  buah  salak  fraksi  n-heksan,  fraksi  etil  asetat  dan  fraksi  air memiliki  aktivitas  antioksidan.  Nilai  IC 50 memiliki  perbedaan  yang  signifikan berdasarkan uji statistika dari fraksi n-heksan, fraksi etil asetat, fraksi air kulit buah salak dengan nilai berturut-turut sebesar 388,82 ppm, 229,88 ppm dan 60,19 ppm. Intensitas aktivitas antioksidan berturut-turut dari yang tertinggi adalah fraksi air, fraksi etil asetat dan fraksi n-heksan.
Saran
Peneliti selanjutnya perlu melakukan penelitian lebih lanjut mengenai aktivitas antioksidan dari kulit buah salak menggunakan metode lain seperti metode ABTS, FRAP dan  TRAP.  Melakukan  isolasi  lebih  lanjut  untuk  mengetahui  senyawa  yang  memiliki aktivitas antioksidan.

## DAFTAR PUSTAKA
Dhyanaputri, I Gusti Ayu Sri, I Wayan Karta, & Luh Ade Wilan Krisna. (2016). Analisis Kandungan Gizi Ekstrak Kulit Salak Produksi Kelompok Tani Abian Salak Desa Sibetan Sebagai Upaya Pengembangan Potensi Produk Pangan Lokal. Meditory , vol.4.
Falahudin,  Dede.  (2010).  Bioassay  antioksidasi  ekstrak  daging  buah  salak  bongkok (salaccaedulis  reinw.)  dengan  khamir  Candida  sp.  Y390. Puslit  Oseanografi– LIPI .
Kanon, Muharli Qadri, Fatimawali, & Widdhi Bodhi. (2012). Uji efektivitas ekstrak kulit buah salak (Salacca zalacca (Gaertn.) Voss) terhadap penurunan kadar gula darah tikus  putih  jantan  galur  wistar  (Rattus  norvegicusL.)  yang  diinduksi  sukrosa. Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado .
Puryono,  Rahayenda  Ivory,  Endah  Puspitasari,  &  Indah  Yulia  Ningsih.  (2015).  Uji aktivitas antioksidan dari berbagai varietas ekstrak buah salak (Salacca zalacca (Gaertn.) Voss) dengan metode DPPH (1,1-Difenil-2-Pikrilhidrazil) (antioxidant assay of some salacca zalacca (Gaertn.) Voss varieties using DPPH (1,1-diphenyl- 2-picrylhydrazyl) method). Artikel Ilmiah Hasil Penelitian Mahasiswa . Rahmah, Umi. (2016). Pengaruh ekstrak kulit buah salak (Salacca zalacca (Gaertn.) Voss) terhadap  pertumbuhan    Escherichia  coli. Pendidikan  Biologi  FKIP  Universitas Jambi .