Online: https://jurnal.fk.uisu.ac.id/index.php/ibnusina
Ibnu Sina: Jurnal Kedokteran dan Kesehatan-Fakultas Kedokteran Universitas Islam Sumatera Utara
ISSN 1411-9986 (Print) | ISSN 2614-2996 (Online)

## Artikel Penelitian

## PERBANDINGAN EFEK LARVASIDA DAUN KEMANGI DENGAN PENGENCER TWEEN 80 DAN PEG 400 TERHADAP LARVA AEDES AEGYPTI

## COMPARISON OF LARVICIDAL EFFECT OF BASIL LEAVES IN ADDITION OF TWEEN 80 AND PEG 400 AGAINST AEDES AEGYPTI LARVAE
Listiana Masyita Dewi a , Devan Adil Syah b , Rohmadina Suci Bestari a , Devi Usdiana Rosyidah a
a Dosen Fakultas Kedokteran Universitas Muhammadiyah Surakarata, Jl A. Yani Tromol Pos I, Surakarta, 57169, Indonesia b Mahasiswa Fakultas Kedokteran Universitas Muhammadiyah Surakarata, Jl A. Yani Tromol Pos I, Surakarta, 57169,
Indonesia Histori Artikel A B S T R A K Diterima: 7 Juni 2024 Revisi: 29 Juni 2024 Terbit: 6 Juli 2024 Pengendalian  populasi Aedes  aegypti sebagai  vektor  DBD  merupakan  upaya  utama memutus  rantai  penularannya.  Namun,  resistensi Aedes  aegypti terhadap  larvasida temephos  mulai  banyak  terjadi.  Diperlukan  alternatif  larvasida  berbasis  bahan  alam sebagai larvasida, yaitu dari daun kemangi. Penambahan pengencer seperti Tween 80 dan PEG 400 diharapkan dapat meningkatkan efektivitasnya. Penelitian ini bertujuan membandingkan efektivitas ekstrak daun kemangi dengan penambahan Tween 80 dan PEG 400 terhadap larva Aedes aegypti . Metode penelitian yang digunakan adalah post- test only crontrolled group design . Larva Aedes aegypti yang digunakan sebanyak 700 ekor,  terbagi  dalam  7  kelompok  perlakuan,  dan  4  kali  pengulangan.  Konsentrasi ekstrak  daun  kemangi  yang  digunakan  adalah  0.5%  dan  1%.  Analisa  data menggunakan uji Kruskal Wallis dan uji post-hoc Mann Whitney. Hasil uji Kruskal Wallis didapatkan nilai p<0.05. Hasil uji post-hoc Mann Whitney, perbandingan antara kelompok  dengan  penambahan  Tween  80  dan  PEG  400  didapatkan  nilai  p<0.05, sedangkan perbandingan kelompok dengan penambahan Tween 80 dan kontrol positif didapatkan  nilai  p>0.05.  Sebagai  kesimpulan,  ekstrak  daun  kemangi  dengan penambahan Tween 80 sama efektifnya dengan temephos sebagai larvasida terhadap Aedes  aegypti ,  dan  lebih  superior  dibandingkan  ekstrak  daun  kemangi  dengan penambahan PEG 400.
Kata Kunci

## A B S T R A C T
Larvasida, Kemangi, Tween 80, PEG 400, Aedes aegypti Controlling Aedes aegypti population, as Dengue  fever vector, is the main effort to break  the  chain  of  transmission.  However,  Aedes  aegypti  has  begun  to  develop resistance  to  temephos.  Alternative  of  natural  larvicides,  such  as  basil  leaves,  are needed. The addition of Tween 80 or PEG 400 diluents is expected to increase their efficacy. This study aims to compare the efficacy of basil leaf extract with the addition of  Tween  80  and  PEG  400  against  Aedes  aegypti  larvae.  This  is  a  post-test  only controlled  group  study.  There  were  700  Aedes  aegypti  larvae  used,  divided  into  7 treatment groups and 4 replicates. Basil leaf extract’s concentration was 0.5% and 1%. Data analysis was performed using Kruskal-Wallis test and Mann-Whitney post- hoc test. The p-value from Kruskal-Wallis test was <0.05. The results of Mann Whitney post-hoc test, the comparison between the groups with the addition of Tween 80 and PEG 400 obtained a value of p<0.05, while the comparison between the groups with the  addition  of  Tween  80  and  positive  control  obtained  a  value  of  p>0.05.  In conclusion, basil leaf extract with the addition of Tween 80 is as effective as temephos as a larvicide against Aedes aegypti and superior to basil leaf extract with the addition of PEG 400.
Korespondensi Tel.
082225583689
Email: lmd123@ums.ac.id

## PENDAHULUAN
Demam  Dengue  atau  Demam  Berdarah Dengue  (DBD)  merupakan  salah  satu  penyakit menular yang secara alamiah dapat ditemukan di daerah beriklim tropis dan subtropis, namun kini juga  dapat  ditemukan  di  daerah  lain  sebagai penyakit  yang  berhubungan  dengan  perjalanan ( travel  related  disease ).  Risiko  penyebaran penyakit ini lebih tinggi di daerah perkotaan dan pemukiman. 1 Hingga  Agustus  2023,  telah dilaporkan bahwa  infeksi Dengue telah mencapai  lebih  dari  3,7  juta  kasus  dan bertanggung  jawab  atas  lebih  dari  2.000 kematian  di  seluruh  dunia  pada  tahun  2023.
Selain itu, wabah Dengue juga telah dilaporkan terjadi  di  India,  Bangladesh,  Afganistan,
Kamboja, Cina, Laos, Malaysia, Nepal, Filipina,
Singapura,  Sri  Lanka,  Thailand,  dan  Vietnam. 2
Di Indonesia, jumlah kasus dan kematian akibat infeksi  Dengue  selama  satu  dekade  terakhir berfluktuasi. Jumlah kasus DBD yang dilaporkan  pada  tahun  2023,  hingga  Agustus, telah mencapai 57.884 kasus, atau incidence rate
(IR)  21,06  per  100.000  penduduk,  sementara kematian  akibat  infeksi  DBD  dilaporkan sebanyak  422  kasus,  atau case  fatality  rate
(CFR) 0,73%. 3
Seperti  diketahui,  sebagai  penyakit  yang ditularkan melalui vektor, DBD disebarkan oleh nyamuk,  terutama Aedes  aegypti .  Oleh  karena itu,  pengendalian  populasi Aedes  aegypti menjadi  fokus  utama  untuk  memutus  rantai penularan DBD. Penggunaan larvasida dianggap sebagai metode yang cukup efektif untuk tujuan ini. 4 Namun, adanya resistensi atau pencemaran lingkungan  sebagai  efek  samping  negatif  dari penggunaan  larvasida  menjadi  tantangan  baru. 5
Kejadian  resistensi Aedes  aegypti terhadap temephos telah dilaporkan di beberapa wilayah, seperti Pakistan 6 , Ekuador 7 , dan Peru 8 .
Resistensi  ini  diduga  terjadi  karena  adanya keterlibatan  polimorfisme  pada  gen  GSTE2. 9,10
Pencemaran  lingkungan  akibat  penggunaan temephos  dalam  jangka  panjang  juga  telah dilaporkan  sebelumnya.  Hal  ini  diduga  karena temephos  rentan  terhadap  fotooksidasi,  yang menyebabkan  kerusakan  DNA  dan  dapat berdampak pada kelainan tubuh, terutama pada perkembangan  neurologis,  atau  bahkan  dapat menyebabkan efek genotoksik. 11,12 Oleh karena itu, modifikasi vektor DBD, seperti nyamuk ber- Wolbachia 13 , atau penggunaan larvasida berbasis  bahan  alam,  perlu  dieksplorasi  lebih jauh lagi.
Hal  ini  merupakan  peluang  besar  bagi Indonesia untuk dapat mengembangkan tanaman obat herbal sebagai biolarvasida potensial dalam mengatasi  tingginya  angka  infeksi  DBD  di Indonesia.  Indonesia  merupakan  salah  satu negara  terbesar  di  Asia  Tenggara  yang  juga merupakan  negara  tropis  yang  kaya  akan keanekaragaman hayati, termasuk tanaman obat herbal. 14 Di sisi lain, World Health Organization
(WHO)  juga  mendukung  tanaman  obat  herbal, sebagai  bagian  dari  pengobatan  tradisional, untuk  digunakan  sebagai  terapi  standar  dalam sistem  kesehatan  nasional,  jika  telah  terbukti aman  dan  efektif. 15 Salah  satu  tanaman  obat herbal  Indonesia  yang  diduga  memiliki  efek larvasida  adalah  daun  kemangi  ( Ocimum basilicum L). Selain jumlahnya yang melimpah, bahan ini juga diketahui mengandung sejumlah zat  aktif  seperti  flavonoid,  alkaloid,  tanin,  atau saponin yang bersifat larvasida. 16 Studi
terdahulu menunjukkan bahwa ekstrak dikloromethan  daun  kemangi  pada  konsentrasi 150-500mg/ml memiliki efek larvasida tertinggi terhadap larva Aedes aegypti setelah pemaparan dalam 24 jam, serta pada sediaan krim dari daun kemangi  berbasi  dikloromethan  menunjukkan adanya efek repellant pada konsentrasi 84.5%. 17
Berdasarkan WHO Guidelines for
Laboratory  and  Field  Testing  of  Mosquito Larvicides ,  uji  larvasida  dapat  dilakukan  di laboratorium,  sebagai  uji  tahap  pertama  untuk mengetahui biopotensi yang melekat pada bahan yang diformulasikan sebagai larvasida. 18
Dengan  cara  ini,  penambahan  pengencer mungkin diperlukan untuk meningkatkan kelarutan bahan aktif dalam air yang merupakan media  yang  digunakan  untuk  pengujian.  Oleh karena itu, dalam penelitian ini, akan dilakukan perbandingan efek larvasida ekstrak etanol daun kemangi dengan penambahan pengencer Tween 80 dan PEG 400 terhadap larva Aedes aegypti .

## METODE
Penelitian  ini  bersifat  eksperimental laboratoris  dengan  metode post-test  only controlled  group  design .  Tahapan  penelitian dimulai dari proses ekstraksi, persiapan larva, uji larvasida,  dan  analisa  statistik.  Proses ekstraksi dilakukan di Laboratorium Farmakologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Muhammadiyah Surakarta, sedangkan persiapan
larva dan uji larvasida dilakukan di Laboratorium Parasitologi, Fakultas
Kedokteran, Universitas Muhammadiyah
Surakarta. Proses ekstraksi  menggunakan metode maserasi, dan dihasilkan ekstrak dengan konsentrasi  0.5%  dan  1%.  Persiapan  larva diawali dengan menetaskan telur nyamuk Aedes aegypti , kemudian ditunggu hingga 3 hari sambil diberi  makan,  hingga  menjadi  larva  instar  III, dan disiapkan 25 ekor larva untuk tiap kelompok penelitian. Uji larvasida menggunakan penambahan pengencer Tween 80 2% dan PEG 400 1%. Larva yang sudah siap dibagi dalam 7 kelompok, yaitu 1) kontrol positif (temephos), 2) kontrol  negatif  Tween  80,  3)  kontrol  negatif PEG  400,  4)  Tween  80  +  ekstrak  etanol  daun kemangi pada konsentrasi 0.5%, 5) Tween 80 + ekstrak  etanol  daun  kemangi  pada  konsentrasi 1%, 6) PEG 400 + ekstrak etanol daun kemangi pada  konsentrasi  0.5%,  dan  7)  PEG  400  + ekstrak  etanol  daun  kemangi  pada  konsentrasi 1%.  Perlakuan  pada  tiap  kelompok  dilakukan pengulangan  sebanyak  4  kali.  Pengamatan dilakukan pada jam ke 6, 12, 18, dan 24. Analisis statistik menggunakan uji Kruskal Wallis dan uji post-hoc  Mann  Whitney.  Penelitian  ini  telah memenuhi  uji  kelaikan  etik  dari  Komisi  Etik Fakultas Kedokteran, Universitas
Muhammadiyah Surakarta, melalui surat nomor 4660/B.1/KEPK-FKUMS/XI/2023.

## HASIL
Data jumlah kematian larva dari hasil uji larvasida, pada tiap interval 6 jam, ditabulasi dan disajikan dalam tabel 1.
Tabel 1. Uji Larvasida Kelompok Perlakuan Jumlah kematian larva (dalam jam) Persentase kematian larva dalam 24 jam 6 12 18 24 1 Kontrol positif (temephos) 25±0 25±0 25±0 25±0 100% 2 Kontrol negatif (Tween 80) 0±0 0±0 0±0 0±0 0% 3 Kontrol negatif (PEG 400) 0±0 0±0 0±0 0±0 0% 4 Tween 80 + ekstrak etanol daun kemangi konsentrasi 0.5% 7±1 12±1.155 19±0.975 25±0 100% 5 Tween 80 + ekstrak etanol daun kemangi konsentrasi 1% 24±1 25±0 25±0 25±0 100% 6 PEG 400 + ekstrak etanol daun kemangi konsentrasi 0.5% 4±0.577 7±0.957 10±0.577 11±0 44% 7 PEG 400 + ekstrak etanol daun kemangi konsentrasi 0.5% 5±0.577 8±0.500 11±0.577 13±0 52%

## Tabel 2. Uji Post-hoc Mann Whitney
Kelompok 1 2 3 4 5 6 7 1 0,008* 0,008* 1,000 1,000 0,013* 0,013* 2 0,008* 1,000 0,008* 0,008* 0,013* 0,013* 3 0,008* 1,000 0,008* 0,008* 0,013* 0,013* 4 1,000 0,008* 0,008* 1,000 0,013* 0,013* 5 1,000 0,008* 0,008* 1,000 0,013* 0,013* 6 0,013* 0,013* 0,013* 0,013* 0,013* 0,037 7 0,013* 0,013* 0,013* 0,013* 0,013* 0,037
Keterangan : 1 : Kontrol positif (temephos) 2 : Kontrol negatif (Tween 80) 3 : Kontrol negatif (PEG 400) 4 : Tween 80 + ekstrak etanol daun kemangi konsentrasi 0.5% 5 : Tween 80 + ekstrak etanol daun kemangi konsentrasi 1% 6 : PEG 400 + ekstrak etanol daun kemangi konsentrasi 0.5% 7 : PEG 400 + ekstrak etanol daun kemangi konsentrasi 0.5% * : berbeda signifikan
Dalam 24 jam pengamatan, terlihat bahwa kelompok  perlakuan  dengan  penambahan pengencer Tween 80 memiliki tingkat kematian larva hingga 100%, sebagaimana pada kelompok kontrol  positif.  Meskipun  demikian,  kematian seluruh  larva  pada  kelompok  kontrol  positif telah terlihat sejak 6 jam pengamatan, sedangkan pada  kelompok  perlakuan  dengan  penambahan pengencer  Tween  80,  hasil  tersebut  baru diperoleh  setelah  24  jam  pengamatan.  Di  sisi lain, pada kelompok perlakuan dengan penambahan  pengencer  PEG  400,  tingkat kematian  larva  tertinggi  setelah  24  jam pengamatan hanya mencapai 52%. Data tersebut
kemudian  dianalisis  dengan  uji  Kruskal  Wallis dan diperoleh nilai p<0.05. Dengan demikian uji statistik  perlu  dilanjutkan  dengan  uji  post-hoc Mann  Whitney.  Hasil  uji  post-hoc  Mann Whitney disajikan pada tabel 2.

## DISKUSI
Data  pada  tabel  1  menunjukkan  bahwa pada kelompok kontrol positif yang menggunakan  temephos  1%  sebagai  larvasida, didapatkan  hasil  persentase  kematian  larva sebesar 100%. Semua larva Aedes aegypti pada kelompok ini bahkan mengalami kematian sejak 6  jam  pertama  pengamatan.  Ini  membuktikan bahwa  temephos  memiliki  efek  larvasida  yang
kuat.  Temephos  bersifat  toksik  terhadap  larva, melalui  proses  akumulasi  asetilkolin  pada
jaringan larva akibat penghambatan kolinesterase. Hal ini mengakibatkan hipereksitasi, tremor, dan kejang pada larva dan berdampak  pada  terjadinya  kelelahan  yang berujung  pada  kematian.  Mekanisme  tersebut telah dibuktikan dengan ditetapkannya temephos sebagai  bagian  dari  program  pemberantasan
Aedes  aegypti di  Indonesia. 19 Oleh  karena  itu, penetapan  temephos  sebagai  kontrol  positif dalam penelitian ini sudah tepat.
Data  pada  tabel  1  juga  menunjukkan bahwa pada kelompok kontrol negatif, baik yang menggunakan  Tween  80  maupun  PEG  400, didapatkan  hasil  persentase  kematian  larva sebesar 0%. Ini menandakan bahwa kedua bahan tersebut tidak memiliki efek larvasida. Tween 80 adalah  produk  surfaktan  yang  memiliki  berat molekul  rendah,  disintesis  secara  kimiawi  dan dapat  dengan  cepat  terserap  ke  permukaan tetesan  dan  mengurangi  tegangan  antarmuka. 20
Bahan  ini  terdiri  dari  cincin  sorbat  yang menghubungkan  empat  rantai  etilen  oksida dengan  panjang  bervariasi,  satu  atau  lebih  di antaranya  diesterifikasi  dengan  asam  lemak dengan  panjang  dan  derajat  kejenuhan  yang bervariasi  pula.  Aplikasi  farmasi  meliputi stabilisasi  bahan  biologis  dalam  larutan  dan pelarutan bahan aktif yang sulit larut dalam air. 21
Bahan ini juga telah terbukti ramah lingkungan dan  memiliki  performa  kimia  yang  tinggi, sehingga sudah banyak dimanfaatkan di bidang industry. 22 PEG  400  adalah  sejenis  polimer hidrofilik  yang  murah,  non-toksik,  non- imunogenik, dan non -antigenik. PEG 400 juga memiliki  kelarutan  yang  tinggi  dalam  air  dan
pelarut lainnya, seperti alkohol dan aseton. Oleh karena  sifat-sifat  tersebut,  PEG  400  telah diterima  oleh Food  and  Drug  Administration
(FDA). 23 Penambahan  PEG,  atau  disebut  juga dengan PEGilasi, bertujuan untuk meningkatkan kelarutan bahan dalam air. 24 PEGilasi dianggap sebagai terobosan dalam distribusi obat di dalam tubuh.  PEGilasi  meningkatkan  waktu  paruh biologis  biofarmasi  sekaligus  mengurangi toksisitas  dan  meningkatkan  stabilitas  obat. 25
Dengan  demikian,  penambahan  ko-solven seperti Tween 80 dan PEG 400 diharapkan dapat meningkatkan  kelarutan  bahan  aktif  dalam  air, sehingga  zat  aktif  akan  terdistribusi  secara merata,  dan  dapat  meningkatkan  paparan terhadap larva.
Data kematian larva pada kelompok 4 dan 5,  yaitu  kelompok  yang  diberikan  penambahan Tween  80  dan  ekstrak  etanol  daun  kemangi dengan  konsentrasi  0.5%  dan  1%,  yang ditunjukkan dalam tabel 1, didapatkan kematian larva Aedes aegypti selama 24 jam pengamatan adalah  sebesar  100%,  sebagaimana  hasil  pada kelompok  kontrol  positif.  Ini  juga  diperkuat dengan data pada tabel 2, dari hasil uji post-hoc Mann Whitney, yang menunjukkan nilai p>0.05 pada  perbandingan  antara  kelompok  4  dan  5 terhadap  kelompok  kontrol  positif.  Dengan demikian  dapat  disimpulkan  bahwa  esktrak etanol  daun  kemangi  dengan  penambahan Tween  80  memiliki  efek  larvasida  yang  sama baiknya dengan temephos terhadap larva Aedes aegypti . Berbeda hal nya dengan data kematian larva  pada  kelompok  6  dan  7,  yaitu  kelompok yang  diberikan  penambahan  PEG  400  dan ekstrak etanol daun kemangi dengan konsentrasi 0.5% dan 1%, yang ditunjukkan dalam tabel 1,
didapatkan kematian larva Aedes aegypti selama
24  jam  pengamatan  adalah  sebesar  44%  dan 52%,  pada  masing-masing  kelompok.  Hal  ini dikonfirmasi  melalui  hasil  uji  post-hoc  Mann Whitney,  yang  menunjukkan  nilai  p<0.05  pada perbandingan antara kelompok 6 dan 7 terhadap kelompok  kontrol  positif.  Dengan  demikian dapat  disimpulkan  bahwa  esktrak  etanol  daun kemangi dengan penambahan PEG 400 memiliki efek  larvasida  berbeda  secara  signifikan  (lebih lemah)  dibandingkan  temephos  terhadap  larva
Aedes aegypti . Hasil ini sedikit berbeda dengan studi lain sebelumnya yang juga menambahkan PEG  400  pada  ekstrak  etanol  daun  jeruk  dan daun  sirih  dalam  uji  larvasida  pada Aedes aegypti , dimana diperoleh tingkat kematian larva yang setara dengan temephos. Hal tersebut dapat dipengaruhi beberapa faktor lain, seperti jumlah dan  jenis  kandungan  metabolit  sekunder  yang terdapat dalam tiap jenis bahan alam. 5,26
Berbagai  literatur  menyatakan  bahwa daun  kemangi  mengandung  sejumlah  metabolit sekunder  yang  bersifat  larvasida,  seperti alkaloid,  flavonoid,  saponin,  tanin,  minyak atsiri,  dan  masih  banyak  lagi.  Sebagian  besar dari  mereka  bekerja  dengan  cara  mengganggu sistem saraf pusat melalui penyerapan kulit atau pernapasan.  Pada  jenis  keracunan  ini,  terjadi penghambatan asetilkolinesterase  (AChE)  yang dapat menyebabkan kematian. Dan seperti yang kita  ketahui,  mekanisme  ini  mirip  dengan  cara kerja  temephos.  Beberapa  mekanisme  kerja lainnya melibatkan sistem
Gamma- Aminobutyric Acid (GABA), yang menyebabkan
kejang dan penghambatan aktivitas mitokondria. 27,28 Kandungan  utama  dari  daun kemangi, yaitu komponen minyak atsiri, dengan
beberapa  senyawa  utama  seperti  eugenol, linalool, dan citral. Linalool menghambat empat jenis  enzim  pada  larva Aedes  aegypti ,  yaitu asetilkolinesterase  (AChE),  monooksigenase (MO), α-esterase, dan β-esterase. 29 Citral adalah inhibitor kompetitif reversibel asetilkolinesterase  (AChE),  yang  memengaruhi transmisi impuls saraf. Citral memiliki aktivitas penghambatan  terhadap  tirosinase,  enzim  yang bertanggung  jawab  atas  berbagai  proses biologis,  termasuk  konsolidasi  eksoskeleton pada  artropoda  selama  molting.  target  utama citral adalah mikrotubulus, yang secara langsung berinteraksi  dengan  tubulin  dan  menyebabkan kelainan  pada  membran  sel  baik  pada  hewan maupun tumbuhan. 30

## KESIMPULAN
Ekstrak  etanol  daun  kemangi  memiliki efek  larvasida  terhadap  larva Aedes  aegypti .
Ekstrak etanol daun kemangi dengan penambahan  pengencer  Tween  80  lebih  efektif sebagai laravasida pada Aedes aegypti dibandingkan  dengan  penambahan  pengencer PEG 400.

## DAFTAR REFERENSI
1. CDC. Dengue _ CDC Yellow Book 2024. Published 2023. Accessed September 19, 2023.
https://wwwnc.cdc.gov/travel/yellowboo k/2024/infections-diseases/dengue
2. ECDC.  Dengue  Worldwide  Overview. Published 2023. Accessed September 19, 2023. https://www.ecdc.europa.eu/en/dengue- monthly
3. Kementerian  Kesehatan  RI.  Informasi Dengue  2023.  Published  2023.  Accessed September 19, 2023. https://p2pm.kemkes.go.id/publikasi/info grafis/info-dbd-minggu-ke-33-tahun-
4. Wilson  AL,  Courtenay  O,  Kelly-Hope LA,  et  al.  The  importance  of  vector control for the control and elimination of vector-borne  diseases. PLoS  Negl  Trop
Dis . 2020;14(1):1-31. doi:10.1371/journal.pntd.0007831
5. Dewi  LM,  Ariffah  HZ,  Aisyah  R, Nurhayani  N.  Bio-larvicidal  Potential  of Betel  Leaves  (Piper  betle  L)  Ethanolic Extract  in  Addition  of  PEG  400  Diluent on  Aedes  aegypti  Larvae. Biology, Medicine, & Natural Product Chemistry . 2023;12(2):451-455.
doi:10.14421/biomedich.2023.122.451- 455 6. Khan HAA, Akram W. Resistance Status to Deltamethrin, Permethrin, and Temephos  Along  With  Preliminary Resistance  Mechanism  in  Aedes  aegypti (Diptera: Culicidae) From Punjab, Pakistan. J Med Entomol . 2019;56(5):1304-1311.
doi:10.1093/jme/tjz057
7. Morales D, Ponce P, Cevallos V, Espinosa P, Vaca D, Quezada W. Resistance Status of  Aedes  aegypti  to  Deltamethrin, Malathion,  and  Temephos  in  Ecuador. J Am Mosq Control Assoc . 2019;35(2):113- 122. doi:10.2987/19-6831.1
8. Palomino M, Pinto J, Yañez P, et al. First national-scale  evaluation  of  temephos resistance  in  Aedes  aegypti  in  Peru.
Parasit Vectors . 2022;15(1).
doi:10.1186/s13071-022-05310-x
9. Helvecio  E,  Romão  TP,  de  Carvalho- Leandro  D,  et  al.  Polymorphisms  in
GSTE2  is  associated  with  temephos resistance  in  Aedes  aegypti. Pestic Biochem Physiol . 2020;165. doi:10.1016/j.pestbp.2019.10.002
10.  Shettima A, Ishak IH, Lau B, Abu Hasan
H,  Miswan  N,  Othman  N.  Quantitative
Proteomics  Analysis  of  Permethrin  and
Temephos-Resistant Ae. Aegypti Revealed Diverse Differentially Expressed  Proteins  Associated  with Insecticide  Resistance  from  Penang
Island,  Malaysia. PLoS  Negl  Trop  Dis . 2023;17(9):e0011604. doi:10.1371/journal.pntd.0011604
11.  Satriawan  DA,  Sindjaja  W,  Richardo  T. Toxicity of the Organophosphorus
Pesticide  Temephos. Indonesian  Journal of  Life  Sciences  |  ISSN:  2656-0682 (online) .
2019;1(2):62-76. doi:10.54250/ijls.v1i2.26
12.  Serrano-Lázaro  A,  Verdín-Betancourt FA,  Jayaraman  VK,  et  al.  Tracing  The Degradation  Pathway  of  Temephos Pesticide  Achieved  with  Photocatalytic ZnO  Nanostructured  Films. Environ  Sci Nano . 2022;9(9):3538-3550. doi:10.1039/D2EN00384H 13.  Firdausi RI, Bestari RS, Dewi LM. Peran Bakteri Wolbachia Terhadap Pengendalian  Vektor  Demam  Berdarah Dengue  (DBD)  Aedes  aegypti.  In: The 13th  University  Research  Colloqium 2021 .  ;  2021.  Accessed  June  7,  2024. https://repository.urecol.org/index.php/pr oceeding/article/view/1440/1407 14.  Elfahmi,  Woerdenbag  HJ,  Kayser  O.
Jamu:  Indonesian  traditional  herbal medicine towards rational phytopharmacological  use. Journal  of Herbal Medicine . 2014;4(2):51-73.
15.  Dewi LM, Nafi’ah MQ. Effectiveness of 96%  Ethanol  Extract  of  Clove  Leaves (Syzygium  aromaticum  (L.)  Merr  & Perry) as an Antibacterial Agent Against Staphylococcus epidermidis
And Providencia  stuartii. MAGNA  MEDICA Berkala Ilmiah Kedokteran dan Kesehatan . 2022;9(2):139. doi:10.26714/magnamed.9.2.2022.139-
146
16.  Chan  CA,  Ho  LY,  Sit  NW.  Larvicidal Activity  and  Phytochemical  Profiling  of Sweet Basil (Ocimum basilicum L.) Leaf Extract  against  Asian  Tiger  Mosquito (Aedes albopictus).
Horticulturae .
2022;8(5):443. doi:10.3390/horticulturae8050443 17.  Alievi  K,  Capoani  GT,  Buzatto M,  et al.
Ateleia glazioveana and Ocimum basilicum: Plants with Potential
Larvicidal  and  Repellent  Against  Aedes aegypti  (Diptera,  Culicidae). Research, Society and Development . 2021;10(17):e228101724733.
doi:10.33448/rsd-v10i17.24733
18.  World  Health  Organization. Guidelines for  Laboratory  and  Fields  Testing  of
Mosquito  Larvicides .;  2005.  Accessed June 4, 2023. https://www.who.int/publications/i/item/ WHO-CDS-WHOPES-GCDPP-2005.13 19.  Pambudi  BC,  Martini,  Tarwotjo  U,
Hestiningsih  R.  Efektivitas  Temephos
Sebagai  Larvasida  Pada  Stadium  Pupa Aedes aegypti. JKM e-journal .
2018;6:2356-3346.
http://ejournal3.undip.ac.id/index.php/jk m
20.  Gomes  A,  Costa  ALR,  Cardoso  DD, Náthia-Neves  G,  Meireles  MAA,  Cunha RL.  Interactions  of  β-carotene  with
WPI/Tween  80  mixture  and  oil  phase: Effect on the behavior of O/W emulsions during  in  vitro  digestion. Food  Chem . 2021;341:128155. doi:10.1016/j.foodchem.2020.128155
21.  Knoch H, Ulbrich MH, Mittag JJ, Buske
J,  Garidel  P,  Heerklotz  H.  Complex
Micellization Behavior of the Polysorbates  Tween  20  and  Tween  80. Mol Pharm . 2021;18(8):3147-3157.
doi:10.1021/acs.molpharmaceut.1c00406
22.  Aftab  A,  Ali  M,  Sahito  MF,  et  al. Environmental  Friendliness  and  High Performance  of  Multifunctional  Tween
80/ZnO-Nanoparticles-Added
Water-
Based  Drilling  Fluid:  An  Experimental
Approach. ACS  Sustain  Chem  Eng .
2020;8(30):11224-11243. doi:10.1021/acssuschemeng.0c02661 23.  Yadav D, Dewangan HK. PEGYLATION:  an  important  approach for  novel  drug  delivery  system. J
Biomater Sci Polym Ed . 2021;32(2):266- 280. doi:10.1080/09205063.2020.1825304
24.  Zhong X, Dou G, Wang D. Polyethylene Glycol  (PEG-400):  An  Efficient  and
Recyclable  Reaction  Medium  for  the
Synthesis of Pyrazolo[3,4-b]pyridin-
6(7H)-one Derivatives. Molecules .
2013;18(11):13139-13147.
doi:10.3390/molecules181113139
25.  Ibrahim M, Ramadan E, Elsadek NE, et al. Polyethylene  glycol  (PEG):  The  nature, immunogenicity, and role in the hypersensitivity  of  PEGylated  products.
Journal of Controlled
Release . 2022;351:215-230.
doi:10.1016/j.jconrel.2022.09.031
26.  Dewi  LM,  Mufidah  F,  Sutrisna  E, Nurhayani.  Larvicidal  Effect  of  96% Ethanol Extract of Lime (Citrus aurantifolia)  Leaves  with  PEG  400
Diluent on Aedes aegypti Larvae. J Trop Pharm Chem . 2024;8(1):70-76.
doi:10.25026/jtpc.v8i1.574
27.  de  Souza Wuillda  ACJ,  Campos  Martins RC, Costa F das N. Larvicidal Activity of Secondary  Plant  Metabolites  in Aedes aegypti Control:  An  Overview  of  the Previous  6  Years. Nat  Prod  Commun . 2019;14(7):1934578X1986289. doi:10.1177/1934578X19862893
28.  Kumara  CJ,  Bestari  RS,  Dewi  LM.
Efektivitas Flavonoid, Tanin, Saponin dan Alkaloid terhadap Mortalitas Larva Aedes aegypty.  In: The  13  Th   University
Research  Colloqium  2021 .  ;  2021. Accessed June 6, 2023. http://repository.urecol.org/index.php/pro ceeding/article/view/1311
29.  Huang  Y,  Lin  M,  Jia  M,  Hu  J,  Zhu  L. Chemical  composition  and  larvicidal activity  against  Aedes  mosquitoes  of essential oils from Arisaema fargesii. Pest
Manag Sci . 2020;76(2):534-542. doi:10.1002/ps.5542 30.  Castillo-Morales RM, Serrano SO, Villamizar  ALR,  Mendez-Sanchez  SC, Duque  JE.  Impact  of  Cymbopogon flexuosus  (Poaceae)  essential  oil  and primary  components  on  the  eclosion  and larval development of Aedes aegypti. Sci Rep . 2021;11(1):24291. doi:10.1038/s41598-021-03819-2