Basil  leaves  are  widely  used  as  herbal  remedies  and  have  proven  many  benefits  because  the  content  of phytonutrients includes antioxidants, but at certain doses a compound retains a probability of causing toxicity in the body. This study aims to determine the acute toxicity of ethanolic extract of basil leaves seen from the value of LD 50 range and renal histopathology which is the vital organ of the target of toxicity in the body. The method of acute oral toxicity test was OECD 420 fix dose procedure method with a group of 5 Balb/c female mice given a multilevel dosage. The initial dose is 2000 mg/Kg.b.w selected on a sighting study as a dose that may cause mild toxicity symptoms but does not cause death. There are 2 groups consist of treatment with dose at  LD 50 value  and  control.  The  result  of  this  research  showed  that  LD 50 value  of  ethanol  extract  of  Ocimum sanctum  >  2000  mg/Kg.b.w.  The  mean  renal  histopathologyc  scores  between  the  control  and  the  treatment were  significantly  different  by  The  Mann-Whitney  test  with  significance  value  of  p=0.018.  Ocimum  sanctum ethanolic extract is classified as non-toxic compounds but there was a change in renal histopathology of mice in the form of focal lesions after acute exposure at highest dose of OECD 420 method.
Keywords : acute toxicity test, renal histopathology, basil leaves
Daun  kemangi  banyak  digunakan  sebagai  obat  herbal  dan  telah  terbukti  memiliki  banyak  manfaat  karena kandungan  fitonutrien  termasuk  antioksidan,  namun  pada  dosis  tertentu  suatu  senyawa  tetap  memiliki probabilitas dalam menyebabkan toksisitas dalam tubuh. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui toksisitas akut  ekstrak  etanol  daun  kemangi  dilihat  dari  nilai  kisaran  LD 50 dan  gambaran  histopatologi  ginjal  yang merupakan organ vital target toksisitas dalam tubuh. Uji toksisitas akut oral dilakukan dengan metode OECD 420 fix  dose  procedure dengan  sekelompok  mencit  Balb/c  betina  5  ekor  diberikan  dosis  bertingkat menggunakan  metode fix  doses .  Dosis  awal  2000  mg/KgBB  dipilih  dari  uji  pendahuluan  sebagai  dosis  yang dapat  menimbulkan  gejala  toksisitas  ringan  tetapi  tidak  menimbulkan  kematian.  Terdapat  2  kelompok  pada penelitian  yakni  perlakuan  dengan  dosis  pada  nilai  LD 50 dan  kontrol.  Hasilpenelitian  didapatkan  kisaran  nilai LD 50 ekstrak etanol daun kemangi ( Ocimumsanctum ) > 2000 mg/KgBB. Rerata skor histopatologi ginjal antara kelompok  kontrol  dan  perlakuan  berbeda  bermakna  dengan  uji Mann-Whitney didapatkan  p=0,018.  Ekstrak etanol daun kemangi ( Ocimum sanctum ) termasuk kategori senyawa tidak toksik namun terdapat perubahan gambaran histopatologi ginjal mencit berupa lesi fokal setelah pajanan akut pada dosis tertinggi pada metode OECD 420.
Kata kunci : uji toksisitas akut, histopatologi ginjal, daun kemangi
Uji Toksisitas Akut Ekstrak Etanol Daun Kemangi ( Ocimumsanctum ) Diukur dari Nilai LD 50 dan Histopatologi Ginjal
Acute Toxicity Tests of Basil Leaves ( Ocimumsanctum ) Ethanolic Extract Determined By LD 50 and Renal Histopathology
Cholis Abrori 1 , Khana Nurfadhila 2 , Elly Nurus Sakinah 1
1 Laboratorium Farmakologi, Fakultas Kedokteran Universitas Jember
2 Program Studi Pendidikan Dokter, Fakultas Kedokteran Universitas Jember Jalan Kalimantan No.37, Jember, Indonesia, 68121 e-mail korespondensi: cholisabrori.fk@unej.ac.id
Abstrak
Abstract

## Pendahuluan
Penggunaan  tanaman  sebagai  obat  diyakini  oleh banyak  masyarakat  di  Indonesia,  salah  satunya adalah  daun  kemangi  ( Ocimum  sanctum ).  Kemangi termasuk  dalam  famili Lamiaceae yang  populer sebagai  tanaman  obat  dan  memiliki  banyak kandungan  antioksidan  dan  fitonutrien.  Ekstrak etanol  daun  kemangi  ( Ocimum  sanctum )  terbukti sebagai hepatoprotektor pada mencit yang diinduksi isoniazid  (Safitri,  2016),  ekstrak aqueous  Ocimum sanctum berfungsi menurunkan serum glukosa, total kolesterol,  trigliserida,  kreatinin,  SGOT,  SGPT,  ALP, dan  kadar  bilirubin  pada  tikus  diabetik  (Jayant and Srivastava,  2016)  dan  potensi  antioksidan  daun kemangi  ( Ocimum  sanctum )  bermanfaat  pada kerusakan  jaringan  saraf  (Mundey et  al. ,  2013). Ketiga  penelitian  ini  menunjukkan  manfaat  dari ekstrak  daun  kemangi  karena  kandungan  flavonoid, fenolik, dan eugenolnya sebagai antioksidan.
Pada  dosis  tertentu  suatu  senyawa  tetap  memiliki probabilitas  toksisitas  dalam  tubuh.  Uji  toksisitas akut  merupakan  salah  satu  evaluasi  toksikologi  dari ekstrak obat herbal yang dilakukan sebelum uji klinis (Sharwan et  al .,  2015).  Nilai  potensi  toksisitas  akut yang  diukur  dari  besaran lethal  dose 50  (LD 50 ) merupakan  parameter  yang  digunakan  pada  uji toksisitas  akut  oral.  Selain  itu,    uji  toksisitas  dapat dilihat dari perubahan struktur maupun fungsi organ vital  seperti  ginjal  yang  merupakan  tempat  ekskresi senyawa  asing  seperti  obat  atau  senyawa  toksin yang  masuk  dalam  tubuh.  Ginjal  merupakan  salah satu  organ  yang  rentan  terhadap  senyawa  yang melewatinya karena nefron berfungsi mengonsentrasikan  bahan  toksik  sehingga  terjadi peningkatan  kadar  paparan  bahan  toksik  di  dalam tubulus (Hodgson, 2004).
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui toksisitas akut  ekstrak  etanol  daun  kemangi  ( Ocimum sanctum )  yang  diukur  dari  kisaran  nilai  LD 50 dan perubahan  gambaran  histopatologi  ginjal  mencit. Dengan  uji  toksisitas  ini  diharapkan  dapat  diketahui keamanan  suatu  senyawa  dan  selanjutnya  apabila diperoleh hasil yang aman dapat dilanjutkan dengan uji  klinis,  sehingga  ekstrak  daun  kemangi  dapat dijadikan  obat  yang  digunakan  masyarakat  secara luas.

## Metode Penelitian
Jenis  penelitian  yang  digunakan  adalah quasi experimental dengan rancangan  penelitian post test non-equivalent  control  group  design, bertujuan
untuk  mengetahui  toksisitas  akut  ekstrak  etanol daun  kemangi  dengan  mengukur  kisaran  LD 50 dan gambaran  histopatologi  ginjal  pada  mencit. Penelitian  ini  telah  mendapatkan  persetujuan  dari Komisi Etik Fakultas Kedokteran Universitas Jember. Penelitian ini  dilaksanakan  di  Laboratorium
Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Jember,  Laboratorium  Patologi  Anatomi  Fakultas Kedokteran  Universitas  Jember,  dan  Laboratorium Patologi  Anatomi  RSD  dr.  Soebandi.  Jumlah  sampel yang  digunakan  sebanyak  12  mencit  strain  Balb/c dengan usia 8-12 minggu dengan variasi berat badan 16-26 gram dan diadaptasi selama 5 hari.
Pembuatan ekstrak daun kemangi dilakukan dengan metode  maserasi.  Daun  kemangi  dicuci  bersih dengan  air,  kemudian  dikeringkan  dan  dijadikan serbuk.  Serbuk  kering  daun  kemangi  sebanyak  400 gram  dimasukkan  ke  dalam  toples  kaca,  setelah  itu ditambahkan pelarut etanol 70% dengan perbandingan 1:7,5 yang didiamkan selama 72 jam. Pembuatan ekstrak daun kemangi dilakukan dengan metode  maserasi.  Daun  kemangi  dicuci  bersih dengan  air,  kemudian  dikeringkan  dan  dijadikan serbuk sebanyak ± 400 gram, kemudian ditambahkan pelarut etanol 70% dengan perbandingan  1:7,5  dan  didiamkan  selama  72  jam. Filtrat  disaring  dan  dilakukan  evaporasi  dengan menggunakan rotatory evaporator dengan suhu 50 0 C  hingga  pelarut  etanol  70%  menguap  dan didapatkan  hasil  ekstrak  semi  kental  etanol  daun kemangi. Sebelum diberikan kepada mencit, ekstrak etanol  daun  kemangi  dilarutkan  terlebih  dahulu  ke dalam tween 80 sebanyak 0,01 mL/20 gram mencit, kemudian  diencerkan  dengan  akuades  hingga volume menjadi 0,5 mL.
Uji  toksisitas  akut  oral  pada  penelitian  ini menggunakan metode OECD 420 fix dose procedure yang  memiliki  3  jenis  perlakuan  yaitu  uji pendahuluan, limit  test (uji  pembatasan),  dan main test (uji utama). Tujuan dari uji pendahuluan adalah mencari  dosis  awal  yang  sesuai  untuk  uji  utama dengan 1 ekor mencit. Berdasarkan OECD 420, dosis awal  pada  uji  pendahuluan  dapat  dipilih  dari tingkatan fix  dose yaitu  5,  50,  300,  dan  2000 mg/KgBB  sebagai  dosis  yang  diharapkan  dapat menimbulkan efek toksik. Sampai saat ini belum ada penelitian  yang  menunjukkan  LD 50 dari  ekstrak etanol  70%  daun  kemangi,  sehingga  untuk  tahap awal  dalam  rangka  mencari  kisaran  LD 50 dianjurkan dimulai  pada  dosis  300  mg/KgBB.  Dosis  tersebut dapat  diturunkan  apabila  terdapat  kematian  dan dinaikkan apabila tidak terdapat bukti toksisitas atau
kematian.  Uji  pendahuluan  dihentikan  apabila terbukti  adanya  bukti  toksisitas  berupa  perubahan aktivitas  otonom  hewan  uji  seperti  berjalan menggunakan  perut,  diare, discharge dari  hidung, menyiksa  diri  sendiri,  perdarahan  di  orifisium,  atau tidak  terdapat  bukti  toksisitas  pada  dosis  2000 mg/KgBB,  sehingga  dapat  ditentukan  dosis  yang digunakan  pada  uji  utama  sesuai  dengan  prosedur OECD (OECD, 2001).
Limit  test atau  uji  pembatasan  digunakan  apabila peneliti  telah  memiliki  informasi  yang  menunjukkan bahwa  bahan  uji  cenderung  tidak  toksik  atau memiliki  toksisitas  hanya  melebihi  batas  dosis  yang telah  ditentukan.  Uji  pembatasan  dilakukan  apabila nilai  LD 50 senyawa  yang  diharapkan  melebihi  2000 mg/KgBB  atau  dalam  kisaran  2000-5000  mg/KgBB. Kriteria  tersebut  yakni,  senyawa  yang  dimaksud merupakan  senyawa  uji  termasuk  klasifikasi  GHS  5 yang mempunyai bahaya toksisitas akut yang relatif rendah  namun  dalam  keadaan  tertentu  dapat menimbulkan  bahaya  bagi  populasi  yang  rentan. Adanya  kebutuhan  untuk  melindungi  kesejahteraan hewan,  pengujian  pada  5000  mg/KgBB  hanya  boleh dipertimbangkan  bila  ada  kemungkinan  kuat  bahwa hasil  uji  akan  memiliki  relevansi  langsung  untuk melindungi  kesehatan  hewan  atau  manusia  (OECD, 2001).
Uji  utama  digunakan  untuk  melakukan  uji  yang sebenarnya, bertujuan mengetahui kisaran nilai LD 50 suatu  senyawa  dengan  5  mencit  pada  setiap tingkatan dosis yaitu 5, 50,  300, dan 2000 mg/KgBB ekstrak  etanol  daun  kemangi.  Dosis  awal  yang digunakan  telah  ditentukan  pada  uji  pendahuluan, kemudian  dilakukan  pengamatan  secara  intensif setiap 30 menit selama 4 jam pertama, setiap 4 jam selama  24  jam  dan  sehari  sekali  selama  14  hari. Apabila  tidak  terdapat  kematian  maka  diberikan dosis satu tingkat lebih tinggi dari dosis awal. Apabila d idapatkan  ≥  2  hewan  uji  mati  maka  dosis diturunkan satu tingkat lebih rendah dari dosis awal. Apabila  terdapat  ≥    1  bukti  toksisitas  dan/atau  ≤  1 kematian hewan uji maka dapat langsung ditentukan kisaran  nilai  LD 50 (OECD,  2001).  Pemberian  ekstrak etanol  daun  kemangi  pada  uji  utama  ini  dilakukan bersama  dengan  kelompok  kontrol  masing-masing terdiri dari 5 ekor mencit selama 14 hari.
Mencit  diterminasi  pada  hari  ke-14  dan  diambil organ  ginjal  untuk  diproses  menjadi  preparat histopatologi  yang  dilakukan  di  Laboratorium Patologi  Anatomi  RSD  dr.  Soebandi.  Proses pembuatan  preparat  histopatologi  meliputi  proses
dehidrasi, clearing , embedding , pemotongan jaringan,  dan  pewarnaan  hematoksilin  eosin  (H&E). Pengamatan  dilakukan  dengan  metode double blinding .  Preparat  histopatologi  ginjal  diamati  di bawah  mikroskop  cahaya  dengan  perbesaran  100 kali  untuk  melihat  dilatasi  tubulus  proksimal kemudian 400 kali untuk melihat degenerasi tubulus dan  nekrosis  sel  pada  5  lapang  pandang  yang diambil  dari  keempat  sudut  dan  bagian  tengah preparat  (Satyatami,  2014).  Skoring  gambaran histopatologi  ginjal  dilakukan  dengan  menilai nekrosis  inti,  degenerasi  tubulus,  dilatasi  tubulus proksimal  dengan  skor  0  untuk  histologi  ginjal normal,  1  untuk  lesi  fokal,  dan  2  untuk  lesi  difus (Suhita et  al .,  2013).  Hasil  skoring  dibandingkan antara kedua kelompok kontrol dan perlakuan.

## Hasil Penelitian
Hasil  uji  pendahuluan  pada  dosis  300  dan  2000 mg/KgBB  tidak  ditemukan  adanya  bukti  toksisitas maupun  kematian  mencit,  sehingga  dosis  awal untuk  dilakukan  uji  utama  adalah  2000  mg/KgBB. Pada  uji  utama  didapatkan  mencit  bertahan  hidup dan  tidak  terdapat  bukti  toksisitas  pada  dosis  2000 mg/KgBB yang diberikan selama 14 hari. Kisaran nilai LD 50 ekstrak etanol daun kemangi dapat diperkirakan pada dosis > 2000mg/KgBB.
Gambar  histopatologi  ginjal  secara  umum  dapat dilihat  pada  Gambar  1.  Tampak  gambaran  sel normal  pada  panah  hijau,  nekrosis  inti  pada  panah hitam,  degenerasi  tubulus  pada  panah  kuning,  dan dilatasi  tubulus  proksimal  pada  panah  merah. Gambaran  histopatologi  ginjal  pada  kelompok kontrol  tidak  ditemukan  kelainan  dengan  skor 0,00+0,  sedangkan  pada  kelompok  perlakuan didapatkan perubahan patologis dengan rerata skor 0,74±0,42.  Hasil  uji Mann-Whitney rerata  skor histopatologi  ginjal  antara  dua  kelompok  berbeda bermakna dengan nilai p=0,018.

## Pembahasan
Penggunaan obat herbal yang aman perlu dilengkapi dengan data dosis standar serta bukti ilmiah bahwa status tokisisitas bahan tersebut tidak menimbulkan kekhawatiran.  Oleh  karena  itu,  penilaian  keamanan dan toksisitas obat herbal sebelum dikonsumsi oleh manusia  adalah  hal  yang  sangat  dibutuhkan  (Raina et  al .,  2015).    Penelitian  ini  dilakukan  untuk mengetahui  kisaran  nilai  LD 50 ekstrak  etanol  daun kemangi ( Ocimum sanctum ) yakni > 2000 mg/KgBB, yang  termasuk  dalam  kategori  5  GHS  dengan
pernyataan  ketoksikan  bahwa  senyawa  tidak  toksik dan  mungkin  berbahaya  bila  tertelan.  Hal  tersebut dibuktikan  dengan tidak adanya kematian dan bukti toksik hewan uji pada dosis 2000 mg/KgBB. Sadashiv (2010)  membuktikan  bahwa  bubuk  daun Ocimum sanctum pada  dosis  tertinggi  yakni  7  g/KgBB  tidak memiliki efek toksik yang signifikan pada mencit.
(K) (A) (B)

## (C)
Gambar 1. Gambaran histopatologi ginjal pada pewarnaan H&E. Kelompok  kontrol dan perlakuan dengan perbesaran  100  kali  (K)  dan  (A),  kelompok perlakuan perbesaran 400 kali (B) dan (C).
Pada penelitian yang dilakukan oleh Rahman (2011), pemberian ekstrak aqueous daun kemangi ( Ocimum sanctum )  tidak  menimbulkan  gejala  toksisitas  akut pada  dosis  5  g/KgBB  maupun  ekstrak  alkohol  pada dosis  4  g/KgBB.  Selain  itu,  penelitian  Gautam and Goel  (2014)  yang  melakukan  uji  toksisitas  akut selama  periode  14  hari,  menunjukkan  mencit bertahan  hidup  pada  dosis  2000  mg/KgBB.  Pada penelitian  tersebut  juga  dilakukan  uji  toksisitas subakut  selama  28  hari,  ekstrak  etanol  50%  dari Ocimum  sanctum pada  dosis  200,  400,  dan  800 mg/KgBB tidak menimbulkan kematian pada mencit jantan  dan  betina.  Dari  ketiga  penelitian  tersebut diketahui  bahwa  baik  dalam  bentuk  bubuk,  ekstrak aqueous ,  ekstrak  alkohol,  maupun  ekstrak  etanol 50% daun kemangi tidak menunjukkan toksisitas.
Penelitian  ini  menggunakan  ekstrak  etanol  70% daun  kemangi  yang  diketahui  merupakan  pelarut ekstrak  yang  menghasilkan  senyawa  antioksidan dalam  tanaman  yang  lebih  baik  dibandingkan dengan  bubuk,  ekstrak aqueous ,  ekstrak  alkohol maupun ekstrak etanol 50% (Fathurrachman, 2014). Jadi pada penelitian ini diketahui keamanan ekstrak etanol  daun  kemangi  dengan  aktivitas  antioksidan tertinggi
dibandingkan penelitian-penelitian sebelumnya.
Masyarakat  mengonsumsi  kemangi  sebagai  lalap sehari-hari  kurang  lebih  25  gram  (Syamsuhidayat and Hutapea,  1991).  Daun  kemangi  sebanyak  25 gram  bila  dibuat  ekstrak  dengan  pelarut  etanol sesuai  yang  dilakukan  pada  penelitian  ini  akan menghasilkan  3,163  gram  ekstrak  semikental.  Jika rata-rata  berat  badan  manusia  adalah  70  Kg,  maka penggunaan  daun  kemangi  setara  dengan  45,18 mg/KgBB  ekstrak  etanol  dan  penggunaan  tersebut aman  karena  kisaran  LD 50 ekstrak  etanol  daun kemangi > 2000 mg/KgBB.
Pada  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Safitri  (2016), didapatkan  dosis  efektif  dari  ekstrak  etanol  daun kemangi ( Ocimum sanctum ) sebagai
hepatoprotektor  pada  kadar  MDA  hati  mencit  yang diinduksi  isoniazid  adalah  14,568  mg/20grBB  atau setara dengan 728,4 mg/KgBB.  Penggunaan ekstrak daun  kemangi  juga  memberikan  proteksi  terhadap cedera  oksidatif  pada  tikus  yang  diberi  racun  arsen sampai kadar antioksidan normal yaitu dengan dosis 100 mg/kgBB (Mundey et al ., 2013). Pada penelitian Shetty (2008), ekstrak etanol daun kemangi memiliki senyawa  antioksidan  yang  dapat  mempercepat penyembuhan luka efektif pada dosis 800 mg/KgBB. Dari  tiga  penelitian  tersebut  menunjukkan  manfaat
ekstrak  daun  kemangi  dengan  aktivitas  antioksidan memiliki  dosis  di  bawah  kisaran  nilai  LD 50 yang didapatkan pada penelitian ini. Rentang dosis efektif dan dosis  letal ekstrak daun kemangi yang besar ini menunjukkan  indeks  terapi  dari  ekstrak  daun kemangi  yang  lebar,  sehingga  bahan  ini  aman digunakan.
Hasil  gambaran  hitopatologi  pada  penelitian  ini berbeda  antara  kelompok  kontrol  dan  perlakuan. Perbedaan ini terletak pada kelompok kontrol semua sampel  tidak  terdapat  perubahan  histopatologi ginjal, sedangkan pada kelompok perlakuan terdapat perubahan  histopatologi  ginjal  pada  beberapa sampel  meskipun  dengan  skor  yang  rendah. Penelitian Gautam and Goel (2014) juga menunjukkan  terdapat  perubahan  pada  histologi ginjal serta kadar serum kreatinin pada mencit yang diberi  ekstrak  etanol  50%  daun  kemangi  pada  dosis 200, 600, dan  2000 mg/KgBB. Perubahan gambaran histopatologi  ginjal  pada  paparan  ekstrak  etanol daun  kemangi  dapat  disebabkan  oleh  senyawa fitokimia  antara  lain  flavonoid.  Meskipun  flavonoid mempunyai  aktivitas  antioksidan  dan  efek  yang bermanfaat  karena  mekanisme  antioksidan,  pada keadaan  tertentu  flavonoid  juga  dapat  menjadi prooksidan (Shirzad etal ., 2011). Flavonoid
merupakan  salah  satu  polifenol  yang  terdapat  pada tanaman obat dalam konsentrasi tinggi dimetabolisme  pada  fase  1  (sitokrom  P450)  dan enzim  fase  2  (sulfonil  transferase, glucuronyl transferase dan glutathione transferase ) menghasilkan baik metabolit akhir maupun sekunder serta reactive  oxygen  species (ROS)  sebagai prooksidan (Kopaei and Baradaran, 2013).
Antioksidan  yang  terdapat  pada  ekstrak  dengan konsentrasi tinggi telah ditemukan dapat menyebabkan  sitotoksik  dengan  cara  menginduksi stres  oksidatif  yang  parah  (Kopaei,  2012).  Selain mekanisme perubahan antioksidan flavonoid menjadi  prooksidan  disebabkan  oleh  konsentrasi yang tinggi, ion logam di dalam tubuh seperti Fe juga berperan dalam proses tersebut. Ekstrak bubuk daun kemangi  memiliki  kandungan  kuersetin  sebanyak 0,85  mg/g,  dan  telah  dibuktikan  bahwa  kuersetin yang merupakan salah satu dari ortho di/trihidroksifenolik menunjukkan aktivitas prooksidan  yang  poten  dibandingkan  fenolik  lain. Perubahan  ini  disebabkan  oleh  adanya  transisi  ion logam  terutama  Fe(III)  dan  Cu(II)  dalam  tubuh (Rameshthangam and Chitra,  2016;  Eghbaliferiz, 2016). Hal ini juga terjadi pada penelitian in vitro dan in  vivo dari  polifenol  yang  didapatkan  dari  anggur,
bahwa  polifenol  dari  anggur  mempunyai  aktivitas prooksidan selain aktivitas antioksidan (Cotoras etal , 2014).  Prooksidan  menyebabkan  terjadinya  stres oksidatif  dan  dapat  berlanjut  menyebabkan disfungsi  mitokondria  sehingga  terjadi  nekrosis  sel tubulus  ginjal  (Small et  al .,  2012).  Di  sisi  lain peningkatan  radikal  bebas  dapat  menyebabkan disfungsi endotel yang akan menyebabkan degenerasi epitel tubulus dan dilatasi tubulus (Putri and Thaha,  2014).  Hasil-hasil  penelitian  tersebut mendukung  terjadinya  perubahan  struktur  histologi ginjal  mencit  setelah  diberikan  paparan  ekstrak etanol daun kemangi pada dosis 2000 mg/KgBB.
Pada  penelitian  ini  tidak  dilakukan  uji  pembatasan dengan dosis 5000 mg/KgBB karena pada dosis 2000 mg/KgBB telah didapatkan  perubahan histopatologi ginjal.  Dalam  rangka  melindungi  kesejahteraan hewan ( animal welfare) , pengujian pada dosis 5000 mg/KgBB hanya dipertimbangkan bila ada kemungkinan  kuat  bahwa  hasil  uji  akan  memiliki relevansi  langsung  untuk  melindungi  kesehatan hewan  atau  manusia.  Selain  itu,  sampai  saat  ini belum  terdapat  dosis  terapi  ekstrak  etanol  daun kemangi  yang  mendekati  2000  mg/KgBB  dalam pemanfaatan  sebagai  antioksidan  atau  obat  herbal (Jamshidi and Cohen,  2017).  Pengujian  ekstrak dengan  dosis  yang  lebih  tinggi  dikhawatirkan  dapat menimbulkan  kerusakan  lebih  lanjut,  seperti  pada penelitian  yang  dilakukan  oleh  Beke  (2015), menunjukkan  bahwa  peningkatan  dosis  pemberian ekstrak etanol putri malu ( Mimosa pudica L .) dapat meningkatkan  jumlah  sel  yang  mengalami  nekrosis pada  tubulus  proksimal  mencit Swiss  Webster jantan.  Meskipun  ekstrak  daun  kemangi  ini  tidak toksik dan aman, penggunaan ekstrak daun kemangi harus  tetap  berhati-hati  pada  penggunaan  dosis tinggi,  karena  pada  dosis  2000  mg/KgBB  telah memperlihatkan  perubahan  struktur  histologi  dari ginjal.

## Kesimpulan
Ekstrak  etanol  daun  kemangi  ( Ocimum  sanctum ) mempunyai kisaran LD 50 > 2000 mg/KgBB, sehingga termasuk dalam kategori senyawa yang tidak toksik. Pada  dosis  2000  mg/KgBB  yang  merupakan  dosis tertinggi  pada  metode  OECD  420  sudah  terdapat perubahan  gambaran  histopatologi  ginjal  mencit berupa lesi fokal setelah pajanan akut ekstrak etanol daun  kemangi  ( Ocimum  sanctum ).  Penelitian  lebih lanjut  mengenai  uji  toksisitas  subakut  oral,  uji toksisitas subkronis oral, dan uji toksisitas kronis oral
ekstrak  etanol  daun  kemangi  ( Ocimum  sanctum ) diperlukan agar dapat dilanjutkan ke uji klinis.

## Daftar Pustaka
Beke  BMA.  2015. Uji  Toksisitas  Subkronik  Ekstrak Etanol Mimosa pudica L. pada Histologi Organ Hati dan Ginjal Mencit Swiss Webster Jantan. [Thesis].  Widya  Mandala Catholic  University , Surabaya.
Cotoras  M, et  al .  2014.  In  Vitro  and  In  Vivo Evaluation Of The Antioxidant and Prooxidant Activity  of  Phenolic  Compounds  Obtained
From Grape (Vitis Vinifera) Pomace. Molecules. 19: 21154 – 21167.
Eghbaliferiz  S and Iranshahi  M.  2016.  Prooxidant
Activity of Polyphenols, Flavonoids, Anthocyanins  and  Carotenoids:  Updated Review of Mechanisms and Catalyzing Metals. Phytother. Res.

## Fathurrachman  DA.  2014.  Pengaruh  Konsentrasi
Pelarut terhadap Aktivitas Antioksidan  Ektrak Etanol  Daun  Sirsak  ( Annona  muricata  Linn ) dengan  Metode  Peredaman  Radikal  Bebas DPPH . [Skripsi].  UIN  Syarif  Hidayatullah,
Jakarta.
Gautam  MK and Goel  RK.  2014.  Toxicological  Study
Of Ocimum Sanctum Linn Leaves: Hematological, Biochemical, And Histopathological Studies. Journal of Toxicology . 2014: 1-9.
Hodgson E. 2004. A Textbook of Modern Toxicology . Canada: John Wiley & Sons, Inc. Publication
Jamshid N and Cohen MM. 2017. Review Article The Clinical Efficacy and Safety of Tulsi In Humans: A  Systematic  Review  of  The  Literature.
Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2017:1-13.
Jayant SK and Srivastava N. 2016. Effect  of Ocimum Sanctum  Against  Alloxan  Induced  Diabetes and Biochemical Alterations In Rats. Integrative  Obesity  and  Diabetes  Journal. 2(5): 1-49.
Kopaei  RM.  2012. Medicinal  Plants  and  The  Human Needs. J Herbmed Pharmacol . 1(1): 1 – 2.
Kopaie  RM  and  Baradaran  A.  2013 . Plants Antioxidants:  From  Laboratory  to  Clinic . J
Nephropathol. 2(2): 152 – 153.
Mundey  MK, et  al .  2013.  Antioxidant  Potential  of Ocimum sanctum in Arsenic Induced Nervous Tissue Damage. Brazilian Journal of Veterinary Pathology. 6(3): 95 – 101.
OECD.  2001.  OECD  Guideline  For  Testing  Of
Chemicals  Acute  Oral  Toxicity – Fixed  Dose Procedure. Paris: OECD.
Rahman  A, et  al .  2011.  Ocimum  sanctum  L.:  A
Review of Phytochemical and Pharmacological  Profile. American  Journal  of
Drug Discovery And Development.
Raina P, et al . 2015. Evaluation of Subacute Toxicity of Methanolic/Aqueous Preparation of Aerial Parts  ofO.  Sanctum  In  Wistar  Rats:  Clinical,
Hematological, Biochemical and Histopathological Studies. Journal of Ethnopharmacology . 175: 509-517.
Rameshthangam  P and Chitra  JP.  2016.  Synergistic Anticancer Effect Of Green Synthesized Nickel Nanoparticles And Quercetin  Extracted From Ocimum  Sanctum  Leaf  Extract. Journal  of Materials Science and Technology.
Sadashiv  PS.  2010.  Acute  Toxicity  Study  of  Ocimum Sanctum. International  Research  Journal  of Pharmacy. 1(1): 403-409.
Safitri  EE.  2016.  Pengaruh  Ekstrak  Etanol  Daun
Kemangi (Ocimum sanctum) Sebagai Hepatoprotektor  terhadap  Kadar  MDA  Hati Hewan  uji  yang  Diinduksi  Isoniazid.  [Skripsi]. Universitas Jember.
Satyatami  M.  2014.  Pengaruh  Paparan  Per  Oral Fluorida  dalam  Pasta  Gigi  Dengan  Dosis Bertingkat  terhadap  Gambaran  Mikroskopis Ginjal  Mencit  Balb/C  Usia  3-4  Minggu.
[Skripsi] . Universitas Diponegoro, Semarang.
Sharwan  GP, et  al .  2015.  Toxicity  Profile  of Traditional  Herbal  Medicine. Journal  of Ayurvedic and Herbal Medicine . 1(3): 81-90.
Shetty  S, et  al .  2008.  Evaluation  of  Antioxidant  and Wound  Healing  Effects  of  Alcoholic  and
Aqueous  Extract  Of Ocimum  sanctum  Linn In Rats. Evidence-Based  Complementary  and Alternative Medicine. 5(1): 95-101.
Shirzad  H, et  al .  2011. Correlation  Between Antioxidant  Activity  of  Garlic  Extracts  and WEHI-164  Fibrosarcoma  Tumor  Growth  In Balb/C Mice . J Med Food , 14(9): 969 – 974.
Small  D, et  al .  2012.  Oxidative  Stress,  Anti-Oxidant Therapies  And  Chronic  Kidney  Disease.
Nephrology Asian Pacific Society of
Nephrology. 17(4): 311 – 321.
Suhita  LPR, et  al .  2013. Histopatologi Ginjal  Tikus Putih  Akibat  Pemberian  Ekstrak  Pegagan (Centella  asiatica) Peroral .  Buletin  Veteriner Udayana. 5(1): 63-69.
Syamsuhidayat SS and Hutapea JR. 1991. Inventaris Tanaman  Obat  Indonesia.  Jilid  I.  Jakarta: Balitbangkes Depkes RI.