## ISSN: 0215-7950
*Alamat penulis korespondensi: Departemen Proteksi Tanaman, Fakultas Pertanian, IPB University. Jalan Kamper, Kampus IPB Darmaga, Bogor 16680. Tel: 0251-8629364, Faks: 0251-8629362, Surel: srihendrastuti@apps.ipb.ac.id
Volume 16, Nomor 4, Juli 2020 Halaman 157–165 DOI: 10.14692/jfi.16.4. 157–165
Identifikasi Fitoplasma pada Wortel ( Daucus carota L.) dan Wereng yang Berasosiasi dengan Penyakit Kuning di Bogor dan Bandung, Jawa Barat
Identification of Phytoplasmas on Carrot ( Daucus carota L.) and Leafhopper Associated with Yellow Disease in

## Bogor and Bandung, West Java
Isti Wulandari, Kikin Hamzah Mutaqin,

## Giyanto, Sri Hendrastuti Hidayat
Institut Pertanian Bogor, Bogor 16680

## ABSTRAK
Gejala kuning mirip seperti infeksi fitoplasma ditemukan pada pertanaman wortel di Jawa Barat. Penelitian  bertujuan  mengidentifikasi  fitoplasma  pada  tanaman  wortel  dan  serangga  wereng  yang berasosiasi dengan gejala kuning di Bogor dan Bandung. Wereng yang ditemukan pada pertanaman wortel di Bogor terdiri atas 5 spesies wereng daun, yaitu Balclutha incisa , Orosius argentatus , Cicadulina bipunctata , Empoascanara indica , Exitianus indicus (Hemiptera: Cicadellidae); dan 1 spesies wereng batang, yaitu Sogatella furcifera (Hemiptera:  Delphacidae).  Deteksi  fitoplasma  pada  tanaman  dan wereng  dilakukan  dengan nested -PCR,  sikuensing,  dan  analisis  DNA  sikuen. Nested -PCR  berhasil mengamplifikasi  DNA  target,  yaitu  gen  16S  rRNA  fitoplasma  dari  tanaman  dan  wereng.  Analisis identitas  matriks  sikuen  fitoplasma  asal  tanaman  wortel  di  Bogor  menunjukkan  homologi  tertinggi dengan fitoplasma dari grup 16SrII, yaitu Peanut witches’-broom phytoplasma ; sedangkan sampel asal Bandung menunjukkan homologi tertinggi dengan fitoplasma dari grup 16SrI, yaitu Ca . Phytoplasma asteris dan Tomato big bud phytoplasma . Analisis identitas matriks sikuen fitoplasma asal wereng di Bogor ( B. incisa , S. furcifera ) menunjukkan homologi tertinggi dengan fitoplasma dari grup 16SrII, yaitu Cactus witches’-broom phytoplasma ; sedangkan fitoplasma asal C. bipunctata dari Bogor menunjukkan homologi tertinggi dengan fitoplasma grup 16SrI, yaitu Ca . Phytoplasma asteris. Tulisan ini merupakan laporan pertama fitoplasma yang menginfeksi tanaman wortel di Bogor dan Bandung.
Kata kunci: nested -PCR, penyakit kuning, wereng batang, wereng daun, wortel

## ABSTRACT
Yellow symptoms similar to phytoplasma infection were found in carrot fields in West Java. This study aims to identify phytoplasma from carrot and leafhoppers associated with yellow symptoms in Bogor and Bandung, West Java. Five species of leafhoppers, i.e. Balclutha incisa , Orosius argentatus , Cicadulina bipunctata , Empoascanara indica , Exitianus indicus ,  and  1  species  of  planthopper,  i.e. Sogatella  furcifera were found in carrot plants in Bogor. Phytoplasma detection in plants and insects was carried out by nested -PCR, sequencing, and DNA sequencing analysis. Nested -PCR successfully amplified target DNA, i.e. 16S rRNA phytoplasma gene from plants and insects. Sequence analysis based on identity matrix showed the highest homology of samples from Bogor with the phytoplasma from the

## PENDAHULUAN
Infeksi  fitoplasma  pada  tanaman  wortel telah banyak dilaporkan di beberapa negara dan menyebabkan kehilangan hasil yang besar. Gejala daun keriting, kuning, dan tanaman kerdil  dilaporkan  pada  tanaman  wortel  di Israel dengan insidensi penyakit 20%–80%. Penyebab penyakit tersebut ialah 16SrI- Aster yellow phytoplasma dan ditularkan oleh serangga vektor Macrosteles quadrilineatus (Orenstein et al .  1999;  Gera et al . 2011).
Insidensi penyakit kuning pada tanaman wortel di Arab Saudi sebesar 3%–100% ber- asosiasi  dengan  fitoplasma  kelompok  16SrII grup  D  (Omar  2017).  Infeksi  fitoplasma Peanut witches’-broom (PnWB)  dilaporkan berasosiasi dengan gejala kuning pada tanaman wortel  di  Iran  dan  ditularkan  oleh Orosius albicinctus (Salehi et al . 2016). Gejala kuning pada tanaman wortel di Jawa Barat, termasuk di Bogor dan Bandung di- temukan pada survei penyakit pada tahun 2017. Penelitian ini dilakukan untuk mengonfirmasi identitas  fitoplasma  yang  berasosiasi  dengan penyakit kuning tersebut. Mengingat peran penting serangga vektor sebagai agens penyebar penyakit, maka pada penelitian ini dilakukan penangkapan serangga wereng pada pertanaman wortel  di  Bogor  serta  dilakukan  identifikasi spesies serangga wereng dan fitoplasma yang berasosiasi  dengan  serangga  wereng  yang ditemukan pada pertanaman wortel tersebut.

## BAHAN DAN METODE
Pengamatan gejala dan insidensi penyakit Survei penyakit dan pengambilan sampel dilakukan pada bulan Juni 2017 di pertanaman
wortel  petani  yang  berada  di  Kabupaten Bogor (Desa Cibeureum, Kecamatan Cisarua) dan  Kabupaten  Bandung  (Desa  Panundaan, Kecamatan Ciwidey). Petani di Bogor menanam varietas  wortel  lokal  secara  tumpang  sari dengan  tanaman  cabai;  sedangkan  petani  di Bandung menanam varietas wortel lokal secara monokultur dan pada saat survei dilakukan umur tanaman wortel berkisar 1.5–2 bulan. Penentuan sampel tanaman pada masing- masing lokasi pengamatan menggunakan metode diagonal, dengan jumlah sampel sebanyak 20 sampel tanaman bergejala. Insidensi penyakit (IP) dihitung menggunakan rumus:
IP =       nN × 100%, dengan n, jumlah tanaman yang sakit, dan N, jumlah seluruh tanaman yang diamati.
Pengamatan dinamika populasi wereng di lapangan Pengamatan  populasi  wereng  dilakukan pada pertanaman wortel di Kabupaten Bogor (Desa  Cibeureum,  Kecamatan  Cisarua).  Pe- nangkapan serangga dilakukan pada pukul 06.00–08.00 WIB setiap 4 hari selama bulan Juni–Juli 2019, menggunakan jaring serangga sebanyak 5 kali ayunan sejauh 2.5 m atau meliputi 20 tanaman. Serangga yang tertangkap dalam  jaring  hanya  dipilih  jenis  wereng, kemudian  wereng  dimasukkan  dalam  wadah sampel.  Identifikasi  wereng  didasarkan karakter morfologi mengikuti kunci dikotomus Wilson dan Claridge (1991). Populasi wereng untuk masing-masing spesies dihitung, selanjutnya dilakukan analisis area di bawah kurva perkembangan populasi (ABKPP).
16SrII group, i.e. Peanut witches’-broom phytoplasma ; while the sample from Bandung showed the highest homology with the phytoplasma of the 16SrI group, i.e. Ca . Phytoplasma asteris and Tomato big bud phytoplasma . Sequence analysis of phytoplasma from B. incisa and S. furcifera showed the highest homology with phytoplasma from the 16SrII group, i.e. Cactus witches’-broom phytoplasma ; while the phytoplasma from C. bipunctata showed the highest homology with the 16SrI group of phytoplasma, i.e. Ca . Phytoplasma asteris. This paper is the first report of phytoplasma infecting carrots in Bogor and Bandung, West Java.
Keywords: carrot, leafhopper, nested -PCR, planthopper, yellow disease
Jurnal Fitopatologi Indonesia
Wulandari et al.
Ekstraksi DNA dari Tanaman dan Wereng Isolasi  DNA  total  sampel  daun  wortel bergejala dilakukan menggunakan kit ekstraksi DNeasy  Plant  Mini  Kit  (Qiagen,  Jerman) mengikuti protokol yang disediakan dengan modifikasi  minor,  yaitu  penambahan  bufer CTAB 2%. Isolasi DNA total individu wereng dilakukan menggunakan kit ekstraksi DNeasy Blood & Tissue Kits dengan mengikuti protokol yang direkomendasikan produsen kit (Qiagen, Jerman).
Amplifikasi DNA Deteksi  fitoplasma  dari  tanaman  dan wereng dilakukan dengan PCR standar meng- gunakan pasangan primer P1/P7, dilanjutkan dengan nested -PCR  menggunakan  pasangan primer  spesifik  R16F2n/R16R2  (Tabel  1). DNA hasil  PCR standar diencerkan  dengan rasio 1:30 (v/v) dan digunakan sebagai templat pada tahap nested -PCR. Amplifikasi  DNA  dilakukan  mengguna- kan MyTaq TM HS Red Mix (Bioline, London) pada mesin Veriti TM 96-Well Thermal Cycler (Thermo Fisher Scientific, USA). Amplifikasi DNA fitoplasma menggunakan program PCR standar sesuai yang digunakan oleh Deng dan Hiruki  (1991)  dan  Schneider et al .  (1995). Nested -PCR  dilakukan  dengan  program amplifikasi  menurut  Gundersen  dan  Lee (1996). Tanaman kaktus terinfeksi fitoplasma koleksi Laboratorium Pendidikan, Departemen Proteksi Tanaman IPB digunakan sebagai kontrol  positif.  DNA  hasil  amplifikasi  di- visualisasi  secara  elektroforesis  mengguna- kan gel agarosa 1% (TAE) pada 70 Volt DC selama 45 menit. Pita DNA diamati pada Gel Logic Carestream 212 Pro (Carestream, USA).
Perunutan dan Analisis DNA Fragmen DNA hasil nested -PCR dikirim- kan ke First Base Malaysia untuk perunutan nukleotida.  Runutan  nukleotida  dianalisis dengan BLAST ( Basic Local Alignment Search Tool ) pada National Center for Biotechnology Information (NCBI) (www.ncbi.nlm.nih.gov ) untuk mengetahui identitas fitoplasma. Matriks identitas fitoplasma dianalisis dengan perangkat lunak BioEdit versi 7.1.7. Analisis kekerabatan fitoplasma dan konstruksi pohon filogenetika menggunakan perangkat lunak Clustal W dan Molecular Evolutionery Genetic Analysis (MEGA v6.0) dengan metode Neighbor-Joining algorithm dengan bootstrap 1000 ulangan. Spiroplasma citri (M62054) digunakan sebagai pembanding di luar grup ( out grup ).

## HASIL
Gejala dan Insidensi Penyakit Kuning pada Tanaman Wortel Tanaman wortel di lokasi survei menunjuk- kan gejala kuning yang beragam, di antaranya daun berwarna kuning, kuning kemerahan, umbi berubah bentuk, dan tumbuh akar berambut (Gambar  1  dan  Tabel  2).  Insidensi  penyakit kuning yang diamati berturut-turut 7.87% dan 5.97% pada pertanaman wortel di Bogor dan Bandung. Petani memberi nama penyakit ini dengan sebutan penyakit daun kuning dan menurut petani hingga saat ini penyakit tersebut tidak berpengaruh terhadap hasil panen.
Jenis  dan  Dinamika  Populasi  Wereng  di Pertanaman Wortel Berdasarkan hasil pengamatan selama 2  bulan  pada  lokasi  pertanaman  wortel  di
Tabel 1  Sikuen primer pada amplifikasi DNA fitoplasma dari tanaman wortel dan serangga wereng
Primer Runutan Ukuran DNA target (pb) Rujukan P1 5’-AAG AGT TTG ATC CTG GCT CAG GATT -3’ 1800 Deng dan Hiruki (1991) P7 5’-CGT CCT TCA TCG GCT CTT -3’ Schneider et al. (1995) R16F2n 5’-GAA ACG ACT GCT AAG ACT GG-3’ 1250 Gundersen dan Lee (1996) R16R2 5’-TGA CGG GCG GTG TGT ACA AAC CCC -3’
Gambar 1  Gejala penyakit kuning pada wortel di Bogor (a, b, dan c) dan Bandung (d, e, dan f). Daun  kuning  kemerahan  (a);  daun  kuning  (b,  d,  dan  e);  umbi  abnormal  dan  tumbuh  akar berambut (c dan f).

## Tabel 2  Kode dan gejala sampel tanaman wortel yang digunakan untuk deteksi fitoplasma
Asal sampel Umur tanaman (bulan) Kode sampel Jenis gejala Bogor 1.5–2 BG1, BG2, BG5 daun kuning kemerahan BG3, BG4, BG6 daun kuning, umbi abnormal Bandung 2 BD1, BD2, BD3, BD4, BD5 daun kuning, umbi abnormal
Bogor ditemukan 5 spesies wereng daun, yaitu Balclutha incisa , Orosius argentatus, Cicadulina bipunctata, Empoascanara indica, Exitianus indicus (Hemiptera: Cicadellidae); dan 1 spesies wereng  batang,  yaitu Sogatella furcifera (Hemiptera: Delphacidae) (Gambar 2). Populasi B. incisa di lokasi tersebut menunjukkan rata-rata populasi dan nilai ABKPP tertinggi dibandingkan populasi 5 spesies wereng yang lain  (Tabel  3  dan  Gambar  3).  Hal  tersebut menunjukkan  bahwa  kondisi  lingkungan  di pertanaman  wortel  mendukung  keberadaan B. incisa , di antaranya kondisi suhu lapangan berkisar  28  ºC,  umur  tanaman  pada  fase vegetatif,  serta  kepadatan  populasi  tanaman yang tinggi.
Populasi B. incisa di Bogor cenderung meningkat  selama  periode  awal  pengamatan
dan menurun menjelang akhir pengamatan, namun populasinya kembali meningkat pada akhir pengamatan. Dinamika populasi wereng tersebut  berkaitan  dengan  sifatnya  sebagai serangga polifagus yang dapat mencari sumber makanan pada beberapa jenis tanaman, sehingga serangga  aktif  berpindah  dari  satu  tanaman inang ke tanaman inang lainnya.
Identitas Fitoplasma Asal Tanaman Wortel dan Wereng DNA fitoplasma yang diamplifikasi dengan metode PCR standar tidak tervisualisasi, kecuali untuk  sampel  BG3,  BG5,  dan  BG6;  tetapi semua dapat tervisualisasi setelah amplifikasi dengan nested -PCR,  kecuali  untuk  sampel BD1 dan BD5 (Gambar 4). Hasil yang sama juga  ditunjukkan  pada  sampel  asal  wereng.
Jurnal Fitopatologi Indonesia
Target  DNA  fitoplasma  berukuran  1250  pb berhasil  diamplifikasi  dengan nested -PCR dari serangga S. furcifera , C. bipunctata , dan B. incisa (Gambar 5: Lajur 3, 7, dan 8). Target DNA fitoplasma dari serangga O. argentatus , E. indicus, dan E. indica tidak berhasil diamplifikasi dengan nested -PCR (Gambar 5: Lajur  4, 5, dan 6).
Analisis identitas matriks sikuen fitoplasma asal  tanaman  wortel  di  Bogor  menunjukkan homologi tertinggi (96.1%) dengan fitoplasma dari grup 16SrII, yaitu Peanut witches’-broom phytoplasma (Tabel  4);  sedangkan  analisis identitas matriks untuk sampel asal Bandung menunjukkan  homologi  tertinggi  (81.8%) dengan  fitoplasma  dari  grup  16SrI,  yaitu Ca . Phytoplasma asteris dan Tomato big bud phytoplasma (Tabel  5).  Lebih  lanjut  hasil analisis  filogenetika  menunjukkan  bahwa fitoplasma asal tanaman wortel dari Bogor dan Bandung memiliki hubungan kekerabatan dengan grup referensi fitoplasma yang berbeda, yaitu berturut-turut grup 16SrII- Peanut witches’-broom phytoplasma , dan grup 16SrI-
Ca . Phytoplasma asteris (Gambar 6). Analisis identitas matriks sikuen fitoplasma asal  wereng  di  Bogor  ( S. furcifera dan B. incisa ) menunjukkan homologi tertinggi (79.6%–84.1%)  dengan  fitoplasma  dari grup 16SrII, yaitu Cactus witches’-broom phytoplasma (Tabel 6); sedangkan fitoplasma
Tabel 3  Populasi  beberapa  spesies  wereng  pada pertanaman wortel di Bogor Spesies wereng Populasi wereng (ekor) Rataan ABKPP* S. furcifera 35.87 1060 O. argentatus 20.80 756 E. indicus 19.53 644 E. indica 21.73 752 C. bipunctata 34.27 988 B. incisa 58.00 1910 * ABKPP, Area dibawah kurva perkembangan populasi wereng
Gambar  2    Morfologi  wereng  yang  ditemukan  di  pertanaman  wortel.  a, Balclutha incisa ; b, Orosius argentatus ; c, Cicadulina bipunctata ; d, Empoascanara indica ; e, Exitianus indicus ; dan f, Sogatella furciferra .
Gambar 3  Pola perkembangan populasi wereng pada  pertanaman  wortel  bergejala  penyakit kuning di Bogor berdasarkan analisis area di bawah kurva perkembangan populasi. Spesies wereng terdiri atas: , Sogatella furcifera (SF); , Orosius argentatus (OA); ,
Exitianus indicus (EX);
, Empoascanara indica (EM); , Cicadulina bipunctata (CB); dan , Balclutha incisa (BI). Umur Tanaman (hari) Populasi W ereng (ekor)
asal  wereng C. bipunctata menunjukkan homologi tertinggi (76.0%) dengan fitoplasma grup 16SrI, yaitu Ca . Phytoplasma asteris (Tabel  7).  Lebih  lanjut  hasil  analisis filogenetika  menunjukkan  bahwa  fitoplasma asal  wereng  dari  Bogor  memiliki  hubungan kekerabatan dengan grup referensi fitoplasma yang berbeda, yaitu berturut-turut grup 16SrII- Cactus witches’-broom phytoplasma dan grup 16SrI- Ca . Phytoplasma asteris (Gambar 7).

## PEMBAHASAN
Insidensi penyakit kuning pada pertanaman wortel  relatif  rendah  baik  di  Bogor  maupun Bandung. Walaupun demikian, tanaman wortel yang  terinfeksi  berpotensi  menjadi  sumber inokulum penyakit bagi penularan fitoplasma melalui serangga vektornya. Fitoplasma ber- hasil diamplifikasi dari serangga wereng yang ditemukan di lokasi pengamatan sehingga terbukti  bahwa  wereng  berpotensi  menjadi serangga vektor fitoplasma. Fakta ini menunjuk- kan perlunya dilakukan pemantauan serangga vektor untuk mencegah terjadinya penularan fitoplasma  dan  menekan  terjadinya  insidensi penyakit kuning di lapangan. Peran serangga wereng  sebagai  vektor  dalam  penularan fitoplasma  telah  banyak  dilaporkan.  Duduk et al . (2008) menjelaskan bahwa Macrosteles quadripunctulatus dan M. sexnotatus merupakan vektor Aster yellows phytoplasma yang menginfeksi tanaman wortel di Serbia. Hosseini et al .  (2015)  menyatakan  bahwa Orosius albicinctus diketahui berperan dalam penularan
Tabel 5  Homologi fitoplasma asal tanaman wortel di Bandung (Wortel_BD) dengan strain referensi grup 16Srl berdasarkan gen 16S rRNA
No Strain fitoplasma Similaritas 16S rRNA (%) 1 2 3 4 1 Wortel_BD ID 2 AY
81.8 ID 3 TBG 79.6 96.3 ID 4 TBB 81.8 99.0 96.0 ID Strain  fitoplasma  referensi  dari  GenBank:  AY, Ca . Phytoplasma asteris (M30790);  TBG, Ca . Phytoplasma lycopersici/’Brote  grande’  tomato  (EF19959);  TBB, Tomato big bud phytoplasma (L33760).
Tabel 4  Homologi fitoplasma asal tanaman wortel di  Bogor  (Wortel_BG)  dengan  strain  referensi grup 16SrII berdasarkan gen 16S rRNA
No
Strain fitoplasma Similaritas 16S rRNA (%) 1 2 3 4 1 Wortel_BG ID 2 PnWB 96.1 ID 3 CaWB 94.9 98.1 ID 4 WBDL 94.9 98.0 99.0 ID Strain  fitoplasma  referensi  dari  GenBank:  PnWB, Peanut witches’broom (L33765);  CaWB, Cactus witches’broom ( EU099568); WBDL, Ca . Phytoplasma aurantifolia/ witches’ broom disease of lime (U15442).
Gambar  4    a,  Fragmen  DNA  fitoplasma hasil  amplifikasi  dari  daun  tanaman  wortel menggunakan  metode  PCR  standar  dan  b, nested -PCR. K(+), kontrol positif; K(-), kontrol negatif ( nuclease free water ), dan M,  penanda DNA 1 kb (Thermo Scientific, USA). a b 1800 pb 1250 pb
Gambar  5    Fragmen  DNA  fitoplasma  hasil amplifikasi menggunakan metode nested -PCR dari serangga wereng asal Bogor. Sampel terdiri atas: Sogatella furcifera (SF), Orosius argentatus (OA), Exitianus indicus (EX), Empoascanara indica (EM), Cicadulina bipunctata (CB), dan Balclutha incisa (BI).  K(+),  kontrol  positif; K(-), kontrol negatif; dan M, penanda DNA 1 kb  Ladder (Thermo Scientific).
1250 pb
Jurnal Fitopatologi Indonesia
Gambar 6  Pohon filogenetik fitoplasma asal tanaman wortel (●) dari Bogor dan Bandung terhadap beberapa grup fitoplasma berdasarkan gen 16S  rRNA.
Tabel 7 Homologi fitoplasma asal wereng ( Cicadulina bipunctata _BG) dengan strain referensi grup 16SrI berdasarkan gen 16S rRNA
No Strain fitoplasma Similaritas 16S rRNA (%) 1 2 3 4 1 C. bipunctata _BG ID 2 AY 76.0 ID 3 TBG 75.0 96.6 ID 4 TBB 75.8 99.1 96.3 ID Strain  fitoplasma  referensi  dari  GenBank:  AY,  Ca.  Phytoplasma  asteris  (M30790);    TBG, Ca . Phytoplasma lycopersici/’Brote grande’ tomato (EF19959); TBB, Tomato big bud phytoplasma (L33760).
Tabel 6 Homologi fitoplasma asal wereng ( Balclutha incisa_BG dan Sogatella furcifera _BG) dengan strain referensi grup 16SrII berdasarkan gen 16S rRNA
No Strain fitoplasma Similaritas 16S rRNA (%) 1 2 3 4 5 1 B. incisa _BG
ID 2 S. furcifera _BG 84.4 ID 3 PnWB 83.0 78.8 ID 4 CaWB 84.1 79.6 98.1 ID 5 WBDL 83.5 79.3 98.0 99.0 ID Strain fitoplasma referensi dari GenBank  PnWB, Peanut witches’ broom (L33765); CaWB, Cactus witches’broom (EU099568); WBDL, Ca. Phytoplasma aurantifolia/ witches’ broom disease of lime (U15442).
Gambar 7  Pohon filogenetik fitoplasma asal wereng (●) dari Bogor terhadap beberapa grup fitoplasma berdasarkan gen 16S  rRNA.
fitoplasma penyebab penyakit witches’ broom pada  Alfalfa  di  Iran.  Di  Indonesia,  wereng O. argentatus juga pernah dilaporkan sebagai vektor fitoplasma pada penyakit sapu kacang tanah (Sastrini dan Mutaqin 2013).
Lebih kurang 1500 strain fitoplasma telah berhasil diidentifikasi dan dikarakterisasi ber- dasarkan  urutan  nukleotida  gen  16S  rRNA pada kurun waktu dekade terakhir (Wei et al . 2007).  Infeksi  fitoplasma  dari  grup  16SrII- Peanut witches’-broom phytoplasma dan grup 16SrI- Ca . Phytoplasma asteris pada tanaman wortel bergejala penyakit kuning sebelumnya pernah dilaporkan berturut-turut di Iran (Salehi et al .  2016)  dan  di  Israel  (Orenstein et al . 1999). Fitoplasma dari grup 16SrI dan 16SrII berhasil dideteksi dari sampel tanaman wortel yang berasal dari lokasi pengamatan di Bogor dan  Bandung  serta  sampel  wereng  yang berasal dari lokasi pengamatan di Bogor. Infeksi fitoplasma pada tanaman wortel belum
pernah dilaporkan sebelumnya di Indonesia, tetapi  beberapa  fitoplasma  dari  grup  16SrI dan  16SrII  sudah  dilaporkan  menginfeksi beberapa tanaman di Indonesia. Fitoplasma grup 16SrI- Lethal wilt oil palm phytoplasma ( Ca . Phytoplasma asteris) sebelumnya pernah dilaporkan  menginfeksi  tanaman  pisang cv. manggala di Tasikmalaya dan tanaman pisang cv. raja nangka di Banjar (Sibarani et al . 2019). Lebih lanjut fitoplasma grup 16SrII, yaitu Witches’-broom phytoplasma dilaporkan menginfeksi tanaman kelapa di pulau Derawan (Prasetyo et al .  2017);  grup  16SrII- Peanut witches’-broom phytoplasma menginfeksi tanaman kacang tanah, kedelai, kacang panjang dan 16SrII- Cactus witches’-broom phytoplasma menginfeksi  tanaman  kaktus (Prasetya et al . 2017). Semakin banyak penyakit tanaman yang diketahui berasosiasi dengan infeksi fitoplasma karena ketersediaan metode deteksi dan diagnosis yang akurat dan dapat
Jurnal Fitopatologi Indonesia
Wulandari et al.
dipercaya. Penelitian mengenai daerah sebar dan jenis fitoplasma yang menginfeksi tanaman wortel  perlu  dilanjutkan  mengingat  potensi kerugian yang ditimbulkannya cukup besar.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan terima kasih disampaikan kepada Badan Karantina Pertanian, Kementerian Pertanian Republik Indonesia yang mendanai penelitian ini melalui Beasiswa Program Studi Doktor Badan Karantina Pertanian dan Balai Besar Uji Standar Karantina Pertanian atas fasilitas  laboratorium  yang  telah  diberikan selama penelitian.

## DAFTAR PUSTAKA
Deng  S,  Hiruki  C.  1991.  Amplification  of 16S  rRNA  genes  from  culturable  and nonculturable mollicutes. J Microbiol Methods. 14:53–61. DOI: https://doi.org/ 10.1016/0167-7012(91)90007-D.
Duduk B, Peric P, Marcic D, Drobnjakovic T, Picciau L, Alma A, Bertaccini A. 2008. Phytoplasmas in carrots: Disease and potential vectors in Serbia. Bull Insectology. 61(2):327–331.
Gera  A,  Mawassi  M,  Weintraub  PG.  2011.
Phytoplasma and spiroplasma diseases in open   field-crops in Israel. Bull Insectol. 64:53–54.
Gundersen DE, Lee IM. 1996. Ultrasensitive detection of phytoplasmas by nested-PCR assays  using  two  universal  primer  pairs. Phytopathol Mediterr. 35:144–151.
Hosseini  SAE,  Salehi  M,  Khodakaramian
G, Mirchenari SM, Bertaccini A. 2015. An  up  to  date  status  of  Alfalfa  witches’ broom disease in Iran. Phytopathogenic Mollicutes.  5(1):9–18.  DOI:  https://doi. org/10.5958/2249-4677.2015.00057.2. Omar AF. 2017. Detection and molecular characterization of phytoplasmas associated with vegetable and alfalfa crops in Qassim region. J Plant interact. 12(1):58–66. DOI: https://doi.org/10.1080/17429145.2017.12 79357.

## Orenstein S, Franck A, Kuznetzova L,
Sela  I,  Tanne  E.  1999.  Association  of phytoplasmas  with  a  yellows  disease  of carrot in Israel. J Plant Pathol. 81:193–199.
Prasetya  A,  Giyanto,  Mutaqin  KH,  Sinaga MS. 2017. Fitoplasma patogen tumbuhan legum, kaktus, bambu, dan rumput: Pengembangan teknik deteksi dan keragaman molekuler [disertasi]. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor.
Prasetyo  AE,  Mutaqin  KH,  Giyanto.  2017. Deteksi  dan  identifikasi  fitoplasma  yang berasosiasi dengan penyakit layu kelapa di  Pulau  Derawan,  Kalimantan  Timur. J  Fitopatol  Indones.  13(3):89–97.  DOI: https://doi.org/10.14692/jfi.13.3.89.
Salehi M, Hosseini SAE, Salehi E, Bertaccini A. 2016. Molecular and biological characterization  of  a  16SrII  phytoplasma associated  with  carrot  witches’  broom  in Iran. J Plant Pathol. 98(1):83–90.
Sastrini  T,  Mutaqin  KH.  2013.  Penularan fitoplasma sapu pada tanaman kacang tanah oleh serangga vektor Orosius argentatus dan deteksi molekuler dengan teknik PCR. J  Fitopatol  Indones.  9(1):21–28.  DOI: https://doi.org/10.14692/jfi.9.1.21.
Schneider B, Seemuller E, Smart CD, Kirkpatrick BC.  1995.  Phylogenetic  classification  of plant pathogenic mycoplasma-like organisms or phytoplasmas. Di dalam:
Razin S, Tully JG, editor. Molecular and Diagnostic Procedures in Mycoplasmology . London (GB): Academic Press. hlm 369–380. Sibarani SMA, Joko T, Subandiyah S. 2019. Detection  and  identification  of    banana- associated phytoplasma using nested- PCR method. JPTI. 23(1):148–155. DOI: https://doi.org/10.22146/jpti.38320.
Wei  W,  Davis  RE,  Lee  IM,  Zhao  Y.  2007. Computer-simulated  RFLP  analysis  of 16S  rRNA  genes,  identification  of  ten new phytoplasma groups. Int J Syst Evol Microbiol. 57(8):1855–1867. DOI: https:// doi.org/10.1099/ijs.0.65000-0. Wilson  MR,  Claridge  MF.  1991.  Handbook for  the  identification  of  leafhoppers  and planthoppers  of  rice.  Wallingford  (GB): CAB International.