Eksplorasi Metode Sterilisasi dan Macam Media Untuk Perbanyakan Durian ( Durio zibethinus , L.) Secara In Vitro
[Exploration of Sterilization Method and Type of Media For In vitro Propagation of Durian ( Durio zibethinus , L.)]
Lili Sugiyarto* dan Paramita Cahyaningrum Kuswandi**
*Jurdik Biologi, FMIPA UNY/ Telp. 081331946350 dan email: liloels@gmail.com **Jurdik Biologi, FMIPA UNY / Telp. 0274-880929 dan email: paramita_ugm@yahoo.com

## Abstrak
Durian  ( Durio  zibethinus ,  L.) memiliki  nilai  ekonomis  tinggi  baik  sebagai  salah  satu komoditas  hortikultura  yaitu  buah  untuk  konsumsi  di  pasar  lokal  maupun  untuk  ekspor.  Salah satu  hambatan  adalah  persediaan  bibit  yang  tidak  mencukupi  dan  metode  perbanyakan  yang merusak  pohon  induk  dengan  karakter  unggul.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  memperoleh metode  sterilisasi  yang  tepat  dan  media  untuk  perbanyakan  durian  secara in  vitro .  Penelitian dilakukan  di  Laboratorium  Kultur  Jaringan  dan  Kebun  Percobaan  FMIPA,  UNY.  Metode  yang digunakan dalam penelitian ini adalah induksi menggunakan sitokinin BAP (benzyl amino purin) dalam  media  MS.  Eksplan  diperoleh  dari  bibit  durian  yang  sudah  dikecambahkan  di  polibag dengan  media  tanah  dan  kompos . Sterilisasi  untuk  penanaman  dengan  teknik  kultur  jaringan menggunakan  detergen, clorox 20%  dan  10%,  alkohol  70%,  dan  aquades  steril  untuk  nodia, sedangkan  sterilisasi  eksplan  daun  dengan clorox 10%  dan  5%.  Media  yang  digunakan  adalah media MS ( Murashige dan Skoog ) ditambah dengan BAP (konsentrasi 2 dan 4 ppm), serta 2,4-D (0.4,  1.0,  dan  1.5  ppm).  Hasil  penelitian  menunjukkan  penambahan  BAP  dalam  media  MS mampu memicu pertumbuhan tunas pada eksplan nodia durian pada konsentrasi 2 dan 4 ppm. Penambahan 2,4-D mampu menginduksi kalus pada daun durian. Pada konsentrasi 1 ppm kalus yang  dihasilkan  berwarna  putih,  berair  dengan  daun  yang  tidak  terlalu  menggulung  sedangkan konsentrasi  0,4  dan  1,5  ppm  menghasilkan  kalus  hijau  dengan  daun  yang  menggulung.  Perlu perlakuan  media  yang  lebih  bervariasi  baik  pada  eksplan  nodia  maupun  daun  untuk menghasilkan planlet melalui kalus atau pembentukan tunas secara langsung.
Kata kunci: durian, sterilisasi, BAP, 2,4-D, tunas, kalus

## Abstract
One of the problems that can occur in the development of durian ( Durio zibethinus , L.)  is the  availability  of  seedlings  and  the  method  of  propagation  can  cause  over-exploitation  of  the mother  plant.  The  aim  of  this  research  was  to  obtain  the  method  of  sterilization  and  the  right media  for  in  vitro  propagation  of  durian.  The  research  was  carried  out  in  the  Tissue  Culture Laboratory  and  Experimental  Garden  Faculty  of  Mathematics  and  Science,  Yogyakarta  State University. The method used in this research was induction using the cytokinin BAP (benzylamino purine)  in  MS  media.  The  explants  were  obtained  from  durian  seedlings  that  were  grown  in polybags  with  soil  and  compost  media.  Sterilization  for  the  tissue  culture  technique  was  done using  detergent,  alcohol  70%,  and clorox (20%  and  10%),  and  also  sterile  aquadest  for  nodia, while  leaf  exsplant  sterilization  was  done  using clorox 10%  and  5%.  The  media  used  were  MS ( Murashige and Skoog ) with BAP (2 dan 4 ppm) for the nodia and also with 2,4-D (0.4, 1.0, dan 1.5  ppm)  for  the  leaf  explants.  The  result  showed  that  the  BAP  in  the  MS  media  was  able  to induce the growth of shoots from the nodia at concentrations of 2 and 4 ppm. The addition of 2,4- D was able to induce the growth of callus on the leaf explants. Using 1 ppm 2,4-D, the callus was white and transparent and the leaves did not curl so much as in the treatments with 0.4 and 1.5 ppm 2,4-D which caused the leaves to curl. More variation in the treatments or media both for the
nodia and leaves explants can be further investigated to produce plantlets via callus induction or direct organogenesis.
Key words: durian, sterilization, BAP, 2,4-D,  shoot, callus

## PENDAHULUAN
Durian  merupakan  salah  satu  buah yang sangat digemari masyarakat Indonesia sehingga  mempunyai  nilai  ekonomis  yang cukup  tinggi.  Durian  sebagai  salah  satu komoditas  hortikultura  menjadi  salah  satu sasaran  peningkatan  produksi  dan  kualitas karena  peran  komoditas  hortikultura  dalam perekonomian nasional.
Salah satu hambatan  dalam  budidaya  tanaman  durian adalah  penyediaan  bibit  yang  unggul.  Saat ini,  masih  dilakukan  penyediaan  bibit  dari pohon  induk  secara  konvensional.  Teknik kultur  jaringan  merupakan  salah  satu  teknik yang  dapat  digunakan  dalam  perbanyakan tanaman  durian.  Kelebihan  kultur  jaringan antara  lain  siklus  perbanyakan  tanaman menjadi lebih cepat, memungkinkan perbanyakan  vegetatif  bagi  tanaman  yang sulit atau tidak mungkin diperbanyak secara vegetatif, dan bibit yang dihasilkan termasuk bibit  yang  sehat  [4].  Penelitian  ini  bertujuan untuk  menghasilkan  metode  sterilisasi  dan media  yang  tepat  untuk  perbanyakan tanaman  durian  dengan  kultur  jaringan sehingga dapat dimanfaatkan untuk
memperoleh  bibit  yang  seragam  dalam jumlah banyak.
Sebagai  bagian  dari  kawasan  Indo- Malaya,  Indonesia  merupakan  salah  atau dari delapan pusat keanekaragaman genetis tanaman  di  dunia  khususnya  untuk  buah- buahan  tropis  seperti  durian,  mangga  dan rambutan.  Di  Indonesia  terdapat  20  macam jenis  tanaman  dari  genus  Durio  dan Kalimantan  merupakan  pusat  dari  berbagai jenis  Durio  [10]).  Menurut Durian  Research Centre di  Fakultas  Pertanian  Universitas
Brawijaya [2], durian unggul lokal Nusantara (d’kaltara) yang sudah dirilis oleh pemerintah, yaitu oleh Departemen Pertanian  sampai  dengan  Tahun  2008 adalah sebanyak 67 varietas.
Pengembangan  d’kaltara  harus  dimulai  dari perbanyakan pohon  induk  yang  asli  ( true  to type ).  Meskipun  varietas  lokal  yang  ada
sangat beragam,  impor  durian  masih  terjadi dengan  angka  yang  cukup  tinggi  yaitu 21.827  ton pada  Tahun  2007.  Perbanyakan tanaman  durian  bisa  dilakukan  secara generatif maupun vegetatif. Secara generatif biji dipilih untuk bibit dengan syarat asli dari induknya,  segar  dan  sudah  cukup  umur, tidak  kisut,  tidak  terserang  hama  dan penyakit,  sedangkan  secara  vegetatif  dapat dilakukan dengan okulasi, penyusuan (model  tusuk  atau  sayatan),  dan  cangkok [3].
Teknik  mikropropagasi  atau in  vitro sering digunakan untuk menghasilkan tumbuhan  yang true-to-type atau  disebut klon  ( clone )  atau  sama  dengan  tumbuhan asalnya  [7].  Kultur  jaringan  durian  masih jarang  dilakukan.  Dari  beberapa  publikasi, hanya sedikit yang
melakukan mikropropagasi menggunakan bagian vegetatif  seperti  tunas  untuk  perbanyakan durian  dengan  kultur  jaringan.  Hal  tersebut disebabkan oleh sulitnya melakukan mikropropagasi  tanaman  berkayu  [5].  Pada penelitian  yang  dilakukan  oleh  [6],  eksplan kotiledon  durian  yang  ditanam  pada  media dengan  0,1-0,5 ppm  2,4-D dan 0,5-2,0 ppm BAP  menghasilkan  pertumbuhan  kalus, sedangkan  [7]  menggunakan  1mg/liter  BAP untuk  menginduksi  tunas  lateral  durian secara in vitro

## METODE PENELITIAN
Penelitian  telah  dilakukan  di  kebun percobaan  dan  laboratorium  kultur  jaringan,
Fakultas MIPA, Universitas Negeri
Yogyakarta.  Bahan  yang  digunakan  adalah biji durian varietas lokal. Perkecambahan biji dilakukan  di  kebun  percobaan  dengan menanam  biji  di  polibag  berisi  media  tanah dan  kompos..  Untuk  perkecambahan  biji diperlukan  polibag  ukuran  sedang,  media tanam  (kompos  dan  tanah)  serta  peralatan bercocok  tanam.  Setelah  tunas  mulai muncul,  nodia  dan  daun  dipindah  ke  media MS (Murashige dan Skoog) yang mengandung sitokinin BAP. Eksplan diambil
dari  bibit  durian  berumur  3  minggu.  Untuk sterilisasi  digunakan  bahan-bahan  berupa detergen,  aquades  steril,  alkohol  70%, larutan clorox (5%,10%,20%)  dan  tissue. Aluminium  foil  dan  kertas  payung  juga digunakan  dalam  sterilisasi  alat-alat.  Media yang  digunakan  adalah  MS  +  2  ppm  BAP dan  MS  +  4  ppm  BAP  untuk  induksi  tunas dari  nodia,  sedangkan  untuk  induksi  kalus pada  daun  digunakan  media  MS  dengan tambahan  2,4-D  (0,4  ppm,  1ppm,  dan 1,5ppm). Dalam perlakuan in vitro , dibutuhkan  alat-alat  berupa  botol-botol media  dan  tutup  tahan  panas    atau aluminium  foil .    Selain  itu  juga  akan digunakan  pinset,  lampu  Bunsen, scalpel , petridish ,  beaker, magnetic  stirrer ,  autoklaf, timbangan digital, label, dan almari Laminair air flow (LAF).
Metode  sterilisasi  eksplan  nodia durian  berurutan  :  detergen  (10  menit), clorox 20%  (5 menit), clorox 10%  (5 menit), alkohol  70%  (2  menit),  setiap  berganti larutan dibilas dengan aquades steril. Untuk metode  sterilisasi  eksplan  daun  durian berurutan : detergen (10 menit), clorox 10%
(3  menit), clorox 5%  (3  menit)  dan  alkohol 70%  (2  menit)  dan  dibilas  dengan  akuades steril  seperti  pada  nodia.  Setelah  tahap sterilisasi,  eksplan  nodia  dan  daun  ditanam pada  media  MS  +  ZPT  yang  sudah disiapkan. Pengamatan dilakukan seminggu sekali selama 8 minggu.

## HASIL DAN DISKUSI
Perkecambahan  durian  dilakukan  di media tanah karena perkecambahan secara in  vitro sulit  dilakukan.  Dengan  beberapa metode  sterilisasi  pada  biji,  masih  terjadi kontaminasi  saat  ditanam  di  media in  vitro . Oleh  karena  itu  upaya  untuk  mendapatkan sumber eksplan yang sudah steril tidak bisa dilakukan.  Dari  beberapa  metode  sterilisasi yang  dicoba,  hasil  paling  baik  didapatkan dengan  metode  sterilisasi  detergen, clorox 20%    dan  10%  serta  alkohol  70%  untuk eksplan nodia, dengan waktu perendaman 5 menit.  Untuk daun, sterilisasi dengan clorox 10%  dan  5%  serta  alkohol  70%  dengan lama perendaman di masing-masing larutan selama 3 menit. Penambahan BAP di dalam media  MS  mampu  menginduksi  tunas  pada nodia durian dengan konsentrasi BAP 2 dan
4  ppm.  Pada  konsentrasi  2ppm,  BAP menginduksi  pembentukan  tunas  saja  pada nodia sedangkan konsentrasi 4  ppm menginduksi pembentukan nodia dan kalus. Hal tersebut dapat disebabkan oleh sitokinin yang  sudah  ada  di  dalam  eksplan  sejak diambil dari bibit hasil perkecambahan. Asal eksplan,  khususnya  genotipe  dan  posisi eksplan pada tanaman induk akan menentukan  kadar  hormon  endogen  di dalam  eksplan  [9].  Tunas  yang  terbentuk pada media dengan 2 ppm BAP membutuhkan  waktu  yang  lebih  lama  untuk tumbuh,  sedangkan  dengan  4  ppm  BAP tunas  lebih  cepat  muncul  tetapi  dengan pertumbuhan  kalus  pada  bagian  nodia. Kalus yang tumbuh berupa kalus yang padat dengan  permukaan  luar  yang  halus  dan berwarna kuning (Gambar 1).
Media MS yang mengandung auksin 2,4-D  mampu  menginduksi  pertumbuhan kalus pada eksplan daun durian.
Konsentrasi  0,4  ppm  2,4-D  hanya  mampu membuat  daun  menggulung  dan  tampak lekukan-lekukan  seperti  kalus  berukuran besar.  Auksin  2,4-D  dengan  konsentrasi  1 ppm  menghasilkan  kalus  berwarna  putih, padat dan berair, sedangkan konsentrasi 1,5 ppm  menghasilkan  kalus  berukuran  yang lebih  besar  dan  lebih  cepat  tetapi  berwarna hijau (Gambar 2). Perlakuan 1 dan 1,5 ppm 2,4-D tidak menyebabkan daun menggulung seperti dengan perlakuan 0,4 ppm sehingga penyerapan  nutrisi  oleh  permukaan  daun yang masih  menempel pada media menjadi lebih efektif.
Hasil  yang  diperoleh  menunjukkan pengaruh  2,4-D  sebagai  auksin  yang menyebabkan  elongasi  sel,  pembengkakan jaringan,  dan  pembentukan  kalus  [9]. Pembentukan  akar  adventif  tidak  tampak pada penelitian ini meskipun auksin mampu memicu pertumbuhan akar adventif. Potensi terjadinya  embriogenesis  tampak  pada perlakuan dengan konsentrasi 1 ppm 2,4-D. Tipe kalus yang terbentuk menyerupai kalus hasil induksi auksin pada eksplan internodia tanaman  pohon  dalam  genus  Populus  [10]. Kalus  yang  terbentuk  berbentuk  globular dan  padat/tidak  remah.  Tipe  kalus  tersebut mempunyai potensi untuk diinduksi membentuk tunas.
Gambar 1 . Pertumbuhan eksplan nodia durian secara in vitro dengan penggunaan media MS+2 ppm  BAP  pada  8  minggu  setelah  tanam  (kiri)  dan  MS+4  ppm  BAP  (kanan)  pada  4  minggu setelah tanam.
(a) (b)
(c)
Gambar 2 . Perkembangan eksplan daun durian 4 minggu setelah tanam. Perlakuan pada media MS dengan tambahan (a) 0,4ppm 2,4-D, (b) 1,0ppm 2,4-D, dan (c) 1,5 ppm 2,4-D.

## SIMPULAN
Penelitian  menunjukkan  bahwa BAP  dengan  konsentrasi  2  dan  4  ppm pada  media  MS  mampu  menginduksi tunas  dari  nodia  durian  secara in  vitro . Konsentrasi  4  ppm  juga  menginduksi kalus  selain  tunas.  Penambahan  auksin 2,4-D  mampu  menginduksi  kalus  pada eksplan  daun  durian  yang  berasal  dari bibit  umur  1  bulan,  pada  konsentrasi  1 dan 1,5 ppm. Konsentrasi 0,4 ppm 2,4-D menyebabkan eksplan daun
menggulung  tapi  tidak  terbentuk  kalus. Perlu dilakukan eksplorasi dengan konsentrasi  zat  pengatur  tumbuh  yang lebih  bervariasi  dan  dengan  kombinasi tertentu  (misalnya  auksin  dan  sitokinin dalam satu media).

## UCAPAN TERIMAKASIH
Peneliti mengucapakan
terimakasih kepada FMIPA  UNY  yang  telah  membiayai penelitian  ini  melalui  Anggaran  DIPA BLU  Universitas  Negeri  Yogyakarta Tahun 2012.

## PUSTAKA
[1]  Agrawal,  V.,  dan  S.C.Gupta.  Rapid Micropropagation  of  Populus x Euramericana Trees by Callus culture.  In. Trends  in  Plant  Tissue Culture and Biotechnology . L.K.Pareek  (ed).  Agrobios.  Jodphur. 2005. P 262.
[2]    Anonim.  Durian.  Durian  Research Centre. Fakultas
Pertanian. Universitas  Brawijaya  (DRC-FPUB). www.fp.ub.ac.id . 2012. Diakses
tanggal 20 Maret 2012.
[3]  BPP.  Teknologi.  Durian  ( Bombaceae sp.). Menegristek Bidang Pendayagunaan dan Pemasyarakatan  Ilmu  Pengetahuan dan Teknologi. Jakarta. www.ristek.go.id . 2012. Diakses
tanggal 20 Maret 2012.
[4]    George,  E.F. Plant  Propagation  by
Tissue  Culture  :  The  Technology,
Part  1.  2 nd edition. Exegetics Limited. London.1993. p150.
[5]  Giri,  C.C.,  B.Shyamkumar,  dan  C. Anjaneyulu.  Progress  in  Tissue Culture, Genetic Transformation and Applications  of  Biotechnology  To Trees  :  An  Overview. Trees .18 .(2004). 115-135
[6]  Karsinah,  R.Triatminingsih,  dan Sunyoto.  1995.  Kultur  Hipokotil, Kotiledon,  dan  Cincin  Kotil  Pada Tanaman  Durian  Secara In  Vitro . Penelitian  Hortikultura .  Vol  7(2).
(1995). 1-10.
[7] Namhomchan, S. In Vitro Culture of Durian . Thesis. Kasetsart University. Bangkok. 1999.
[8]  Pierik,  R.M.L. In  Vitro  Culture  of Higher  Plants . Martinus Nijhoff Publishers. Dordrecht.The Netherlands. 1987.p71. [9]  Uji,  T.  Review  :  Keanekaragaman Jenis  Buah-Buahan  Asli  Indonesia dan Potensinya. Biodiversitas . Vol 8
(2). (2007).157-167