BERKALA SAINSTEK 2023 11(4): 187-193 doi: 10.19184/bst.v11i4.34514 https://jurnal.unej.ac.id/index.php/BST/article/view/34514

## RESEARCH   ARTICLE
Acute Toxicity Test of Jalembi Probiotic Beverages on Mice ddY
(Uji Toksisitas Akut Minuman Probiotik Jalembi (Jambu Merah, Lemon, Melon, Bit) Pada Mencit ddY )
Reza Anindita 1*) , Afrinia Ekasari 2
1 Prodi S-1 Farmasi, STIKes Mitra Keluarga, Jl. Pengasinan, Rw. Semut, Bekasi, Jawa Barat, Indonesia
2 Prodi S-1 Gizi, STIKes Mitra Keluarga, Jl. Pengasinan, Rw. Semut, Bekasi, Jawa Barat, Indonesia

## ABSTRACT
An acute toxicity test is one of the pre-clinical tests needed to determine the safety of the consumption of a product before clinical trials are carried out on humans. The purpose of this study was to confirm whether or not there was a toxic effect of jalembi juice probiotic  drink  (red  guava,  lemon,  melon,  beetroot)  on  male  and  female  mice  observed  for  14  days.  This  research  design  is experimental. The samples in this study were jalembi probiotic juice drinks with Lactobacillus plantarum starter and 40 male and female ddY mice. This research procedure was carried out by giving jalembi juice as a test preparation with doses of 124, 640, 3200, and 16000 mg/kg BW as much as 0.59 ml in males and females mice. Data analysis was carried out with One-Way ANOVA. This study showed that the administration of probiotic drink jalembi juice with doses of 124, 640, 3200, and 16000 mg/KgBW as much as 0.59 ml did not cause death, changes in body weight, and clinical symptoms in all test animals. It can be concluded that the probiotic drink jalembi juice is categorized as practically non-toxic (> 15 g/KgBW) or passes pre-clinical testing as a safe drink for consumption.
Uji toksisitas akut merupakan salah satu uji pra-klinis yang diperlukan untuk mengetahui keamanan konsumsi suatu produk sebelum dilakukan uji secara klinis ke manusia. Tujuan penelitian ini untuk mengkonfirmasi ada atau tidaknya efek toksik minuman probiotik jus jalembi (jambu merah, lemon, melon, bit) pada mencit jantan dan betina yang diamati selama 14 hari. Desain penelitian ini adalah eksperimental. Sampel pada penelitian ini adalah minuman jus probiotik jalembi dengan starter Lactobacillus plantarum dan mencit jantan dan betina genus ddY berjumlah 40 ekor. Prosedur penelitian ini dilakukan dengan pemberian jus jalembi sebagai sediaan uji dengan dosis 124, 640, 3200, dan 16000 mg/KgBB sebanyak 0,50 ml pada mencit jantan dan betina. Analisis data bobot badan sebelum dan sesudah perlakuan dilakukan dengan One Sample t-test. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa pemberian minuman probiotik jus jalembi dengan dosis 124, 640, 3200, dan 16000 mg/KgBB sebanyak 0.50 ml tidak menyebabkan kematian dan gejala toksisitas pada semua hewan uji. Hal ini dapat disimpulkan bahwa minuman probiotik jus jalembi termasuk kategori praktis tidak toksik (> 15000 mg/KgBB) atau lolos uji pra-klinis sebagai minuman yang aman dikonsumsi.
Keywords: Toxicity, Probiotics, Mice, Clinical.

## PENDAHULUAN
Menurut WHO [1] suatu bahan atau zat yang akan dikonsumsi  sebagai  suplemen  kesehatan  sebelum melalui  tahap  klinik  harus  lolos  tahap  uji  pra-klinik. Salah  satu  uji  pra-klinik  yang  bertujuan  untuk mengetahui  keamanan  suatu  produk  adalah  uji toksisitas. Uji ini digunakan untuk menemukan tingkat ketoksikan suatu bahan yang akan digunakan sebagai suplemen  kesehatan.  Hasil  uji  toksisitas  dapat dijadikan sebagai sumber informasi ilmiah mengenai
keamanan  konsumsi  suatu  bahan  pada  hewan  uji sebelum dilakukan uji klinik pada manusia.
Menurut BPOM [2] uji toksisitas merupakan tahap pra-klinis yang harus dilakukan oleh pengembang atau innovator  produk  minuman  kesehatan.  Hal  ini disebabkan  hasil  uji  toksisitas  suatu  sediaan  pada hewan  uji  dapat  memberikan  bukti  dukung  yang memperkirakan  efek  berbahaya  atau  tidaknya  suatu bahan pada manusia yang meliputi efek kumulatif, efek dosis yang dapat menimbulkan toksik pada manusia, efek karsinogenik, teratogenik, dan mutageni.
*) Corresponding author: Reza Anandita E-mail: rezaaninditaa@gmail.com
Mengacu  pentingnya  melakukan  uji  toksisitas dalam  meminimalisir  efek  toksik  dari  suatu  produk kesehatan  maka  perlu  dilakukan  uji  toksisitas  akut suatu bahan, yaitu minuman probiotik Jalembi (Jambu Merah, Lemon, Melon, Bit). Minuman ini merupakan produk  inovasi  jus  buah  kaya  zat  besi  (Fe)  dengan starter Lacotobacillus  plantarum yang  dibuat  sebagai solusi  alternatif   suplemen  tambah  darah  antianemia bagi  ibu  hamil  berpotensi  stunting.  Komposisi Formula  minuman  probiotik  jus  jalembi  pada penelitian ini terdiri dari Jambu merah, lemon, Melon, dan  bit  dengan  perbedaan  variasi  konsentrasi  pada penambahan gula sebanyak 10%, 20%, dan 30% tanpa menggunakan pengawet.
Beberapa  penelitian  sebelumnya  yang  menjadi rujukan keabsahan dalam melakukan uji toksisitas akut minuman probiotik jalembi pada hewan uji antara lain Sasmito,  dkk  [3]    yang  melakukan  uji  toksisitas  akut obat herbal pada mencit berdasarkan Organization for Economic  Co-operation  and  Development (OECD)  ; Sutjiatmo, dkk [4] yang menguji toksisitas akut ekstrak air herba pecut kuda pada mencit Swiss webster ; Sujana, dkk  [5]    yang  memberikan  perlakuan  mencit Swiss webster dengan pakis tangkur ; Nurfaat dan Indriyati [6] yang memberikan dosis kelipatan dua yaitu  4, 8, 16, 32,  64  g/kg  BB  ekstrak  etanol  benalu  mangga  pada mencit Swiss webster . Penelitian lain dilakukan Sihombing [7] ; Syam [8] yang menguji toksisitas ekstrak etanol daun puguntano dan  kayu  hitam  pada  mencit  menggunakan  metode fixed  doses dengan  pelarut  sediaan  berupa  Na-CMC 0.5% ; mayang dkk [9] yang melakukan uji toksisitas akut  infusa  daun  sirsak  pada  mencit  menggunakan aqua  destilata  sebagai  pelarut  sediaan  uji  dan  rumus Thompson and Weil dihasilkan nilai LD 50 sebesar 49.82 mg/kg  BB  (<  5  -  50  mg/Kg  BB)  atau  memiliki kategori sangat toksik.
Berdasarkan penelitian sebelumnya belum pernah ada penelitian mengenai uji toksisitas akut minuman probiotik  jus  Jalembi  dengan  starter L.  plantarum menggunakan  dosis  kelipatan  lima,  yaitu  128,  640, 3200, 16000 mg/Kg/BB pada mencit galur ddY jantan dan  betina.  Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk mengkonfirmasi  ada  atau  tidaknya  efek  toksik minuman probiotik jus jalembi pada mencit jantan dan betina yang diamati selama 14 hari. Hasil penelitian ini diharapkan  dapat  menjadi  sumber  informasi  yang valid  mengenai  keamanan  atau  toksisitas  dari
minuman jus jalembi sebelum dilakukan uji klinis dan organoleptik pada manusia.

## METODE
Jenis dan Desain Penelitian Jenis  penelitian  ini  adalah  eksperimental  dengan desain  penelitian  menggunakan  Rancangan  Acak lengkap  (RAL).  Penelitian  ini  dilakukan  pada  bulan September 2022 di laboratorium farmakologi STIKes Mitra Keluarga, Bekasi Timur. Adapun penelitian ini telah mendapatkan persetujuan etik dari Komisi Etik Kedokteran dan Kesehatan Universitas Muhammadiyah  Prof.  Dr.  Hamka  (KEPKK- UHAMKA) dengan No. 03/22.07/01763.
Sampel penelitian Populasi  sekaligus  Sampel  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  Mencit  galur ddY dengan  jenis kelamin  jantan  dan  betina  dengan  kriteria  hewan dewasa, sehat, berumur 8 minggu dengan variasi berat badan tidak melebihi 20% rata-rata berat badan. Pada penelitian ini terdapat 5 kelompok mencit (baik jantan maupun betina) yang terdiri dari kelompok 1 (kontrol) diberi  perlakuan  dosis  CMC - Na  1    % , kelompok  2 diberi  perlakuan      128mg/kgBB,  kelompok  3  diberi perlakuan 640mg/kgBB, kelompok 4 diberi perlakuan 1200mg/kgBB,  kelompok  5  diberi  perlakuan 16000mg/kgBB  .  Setiap  kelompok  dilakukan pengulangan  sebanyak  5x,  sehingga  diperoleh  total sampel  untuk  tiap  mencit  sebanyak  5  perlakuan  x  5 ulangan = 25 mencit, karena perlakuan dilakukan pada mencit  jantan  dan  betina  maka  jumlah  keseluruhan mencit  sebanyak  25  x  2  (jantan  dan  betina)  =  50 mencit. Adapun Rancangan kelompok hewan uji dan perlakuan yang diberikan dapat diihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Rancangan uji toksisitas akut
Kelompok Hewan Uji Perlakuan Kelompok 1 (kontrol) CMC-Na 1% Kelompok 2 Diberi suspensi 128 mg/Kg BB Kelompok 3 Diberi suspense 640 mg/Kg BB Kelompok 4 Diberi suspensi 3200 mg/Kg BB Kelompok 5 Diberi suspensi 16000 mg/Kg BB

## Penyiapan sediaan Uji
Prosedur penelitian ini meliputi penyiapan sediaan uji,  pemberian  sediaan  uji,  dan  uji  toksisitas,  analisis data.  Penyiapan  sediaan  uji  dilakukan  dengan membuat  minuman  probiotik  jalembi  menggunakan
formula 200 ml air, 50 gram bit, 20 gram melon, 20 gram jambu biji, 10 gram lemon, gula 30 gram. Semua bahan  diblender  dengan  penambahan  air  200  ml. Selanjutnya  ditambahkan  suspensi Lactobacillus plantarum sebanyak 2% dari sediaan uji dan diinkubasi selama  18  jam.  Adapun  penentuan  dosis  bertingkat minuman  probiotik  jus  jalembi  berdasarkan  metode fixed doses , antara lain : 128 mg/kgBB, 640 mg/kgBB, 3200 mg/kgBB, dan 16000 mg/kgBB.

## Perlakuan Hewan Uji
Sebelum  diberikan  perlakuan,  hewan  uji diaklimatisasi (diadaptasikan) dengan cara dipuasakan setiap  hari  4  jam  selama  7  hari,  namun  air  minum boleh  diberikan.  Setelah  diaklimatisasi  dilakukan pemberian sediaan uji secara oral menggunakan jarum gavage 1 ml . Semua mencit dimasukkan pada kandang individual (satu mencit satu kandang) dengan ukuran 80  cm  x  15  cm  dengan  kondisi  suhu  23-35  ºC, kelembaban 65-70%, dan penerangan 12 jam gelap, 12 jam terang.
Jus probiotik jalembi diberikan dalam dosis tunggal (1x pemberian) dengan menggunakan jarum gavage 1 ml.  Volume  jus  jalembi  yang  dapat  diberikan  pada hewan  uji  sebanyak  0,5  ml.  Hewan  uji  kemudian diamati  secara  individual  pada  30  menit  pertama setelah  pemberian  jus  probiotik  jalembi,  kemudian setiap 4 jam selama 24 jam pertama, setelah itu sehari
sekali selama 14 hari. Selama perlakuan hewan uji tetap diberikan pakan dan minum.
Pengamatan gejala Toksisitas Akut Pengamatan ada/tidaknya gejala toksisitas dilakukan  selama  14  hari.  Adapun  Parameter pengamatan  gejala  toksisitas,  antara  lain  :  perilaku, nafsu makan dan minum, keadaan kulit dan rambut, napas,  mata,  konsistensi  feses,  adanya  tremor, mortalitas, dan bobot organ (hati dan ginjal).

## Analisis Data
Data yang diperoleh pada penelitian diolah dalam bentuk tabel dan dianalisis dengan statistik deskriptif dengan  cara  menginterpretasikan  data  dalam  bentuk tabel  untuk  melihat  gambaran  mengenai  efek pemberian  probiotik  jus  jalembi  terhadap  mencit jantan dan betina

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Beberapa  parameter  yang  diamati  selama  14  hari pada  penelitian  ini  antara  lain  bobot  badan,  jumlah kematian,  dan  gejala  toksisitas  akut.  Adapun  jumlah kematian  pada  mencit  jantan  dan  betina  yang  diberi sediaan larutan probiotik jalembi 0.50 ml/Kg BB yang diamati selama 14 hari dapat ditunjukkan pada Tabel 2.
Tabel 2. Jumlah kematian mencit yang diamati selama 14 hari setelah diberi sediaan larutan probiotik jus jalembi
0.50 ml/gramBB Kelompok Perlakuan Jumlah kematian mencit LD 50 Kriteria Jantan Betina I CMC-Na 1  % (kontrol) 0 0 II Sediaan uji dosis 128 mg/KgBB 0 0 III Sediaan uji dosis 640 mg/KgBB 0 0 > 1500 mg/KgBB Praktis Tidak Toksik IV Sediaan uji dosis 3200 mg/KgBB 0 0 V Sediaan uji dosis 16000 mg/KgBB 0 0
Tabel 2 menunjukkan bahwa pemberian sediaan uji berupa probiotik jus jalembi dengan konsentrasi 128, 640, 3200, dan 16000 mg/Kg BB selama 14 hari tidak menyebabkan  kematian  baik  pada  mencit  jantan maupun  betina.  Hal  ini  mengindikasikan  bahwa produk  probiotik  jus  jalembi  dengan  starter L. plantarum lolos uji keamanan konsumsi pada tahap pra- klinik menggunakan mencit sebagai hewan uji. Sesuai dengan kriteria dosis toksisitas akut dari Casarett and Doul’s  [10]  dalam  penelitian  Ayun  dkk  [11]  yang menyatakan  bahwa  suatu  sediaan  uji  yang  tidak
menimbulkan  kematian  dan  gejala  toksisitas  apabila diintervensikan pada dosis > 15000 mg/Kg BB selama 14  hari  maka  sediaan  tersebut  termasuk  ke  dalam kriteria sediaan praktis tidak toksik.
Mengingat tidak ditemukan adanya kematian pada hewan  uji  maka  nilai  LD 50 sediaan  uji  tidak  bisa dihitung.  Hasil  penelitian  Baroroh  dan  Rachmi  [12] melaporkan  bahwa  pengamatan  selama  24  jam  pada pemberian dosis oral ekstrak etanol daun jarak pagar hingga  dosis  5734  mg/KgBB  tidak  menyebabkan kematian  pada  mencit,  artinya  nilai  LD 50 sediaan  uji
tidak  dapat  dihitung  atau  ditentukan  dengan  pasti. Menurut  Abrori  dkk.  [13]  LD 50 atau  ( lethal  dose 50) merupakan nilai dosis tunggal yang dapat membunuh 50%  dari  hewan  uji.  Nilai  tersebut  umumnya digunakan  untuk  menentukan  dosis  toksisitas  akut yang  dilakukan  dengan  memberikan  sediaan  uji sebanyak  satu  kali  atau  beberapa  kali  dalam  jangka waktu 24 jam, kemudian diamati selama 14 hari [14].
Tujuan uji toksisitas akut adalah untuk melihat efek toksik suatu senyawa dalam durasi waktu yang singkat setelah  pemberian  dengan  dosis  tertentu.  Adapun minimal  terdapat  empat  dosis  bertingkat  yang direkomendasikan  saat  melakukan  uji  toksisitas  akut mulai  dari  dosis  terendah  yang  tidak  atau  hampir membunuh seluruh hewan uji sampai dosis tertinggi yang mampu membunuh seluruh atau hampir seluruh hewan  uji  [15].  Pada  penelitian  ini  dosis  yang digunakan  merupakan  kelipatan  5  yang  dimulai  dari dosis  128,  640,3200,  dan  16000  mg/KgBB.  Semua dosis dipilih sesuai dengan kriteria dosis toksisitas akut sesuai dengan Panduan BPOM [2]
Mutiarahmi dkk.  [16] menambahkan  uji toksisitas akut suatu sediaan juga digunakan untuk menetapkan nilai  LD 50 ,  gejala  toksik,  spektrum  efek  toksik,  dan mekanisme  kematian  hewan  uji.  Mengacu  pada perdana dkk uji toksisitas akut obat tradisional perlu dilakukan  minimal  dengan  satu  spesies  hewan pengerat berupa mencit atau tikus. Pada penelitian ini menggunakan  hewan  uji  berupa  mencit ddY dengan alasan  yang  merujuk  pada  hasil  literature  review Mutiarahmi dkk [16] yang menjelaskan bahwa Mencit ( Mus  musculus )  termasuk  hewan  uji  yang  sering digunakan dalam percobaan desain eksperimen in-vivo pada  berbagai  penelitian  toksisitas  pra-klinis. Kelebihan  menggunakan  mencit  sebagai  hewan  uji antara lain : mudah penanganan, mampu bereproduksi secara  cepat,  aktif   pada  malam  hari  ( nocturnal ),  dan hidup berkelompok.
Adapun hasil pengamatan 14 hari dari bobot badan mencit jantan dan betina sebelum dan sesudah diberi perlakuan  minuman  probiotik  jus  jalembi  pada penelitian ini dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 3. Pengamatan bobot badan mencit jantan dan betina yang diberi probiotik jalembi selama 14 hari dengan 5x pengulangan
Dosis(mg/KgBB) Bobot badan (gram) Jantan Betina Sebelum Sesudah Sebelum Sesudah CMC Na 1 % 25,1 25,2 22,8 23 128 30,3 31 23,3 23.4 640 27.8 28.2 23,2 23.4 3200 25.4 25.8 26 26 16000 25 25.2 25,1 25.2 Tabel 4. Hasil uji one sample t-test bobot badan mencit jantan dan betina Jenis kelamin mencit Rata-rata Standard deviasi Signifikansi Jantan Sebelum 26,72 2,30 0,025 Sesudah 27,08 2,51 Betina Sebelum 24,08 1,39 0,033 Sesudah 24,20 1,31
Berdasarkan Tabel 3 dan Tabel 4 menunjukkan uji one sample t-test untuk bobot badan mencit jantan dan betina  menghasilkan  nilai  signifikansi  (sig.)  masing- masing  sebesar  0,025  (sig.  <  0,05)  dan  0,033  (sig.  < 0,05) atau pemberian minuman probiotik jus jalembi mampu  memberikan  perubahan  terhadap  bobot badan  mencit  dan  betina  secara  signifikan  ,  artinya pemberian  minuman  probiotik  jus  jalembi  dengan dosis  bertingkat  tidak  menyebabkan  gangguan
pertumbuhan  pada  mencit  jantan  dan  betina. Pengambilan data bobot badan pada uji toksisitas akut penelitian  ini  mengacu  pada  penelitian  Sitasiwi  [17] yang  menjelaskan  bahwa  bobot  badan  merupakan salah satu indikator penting yang harus diamati ketika melakuan  eksperimen  mengenai  suatu  sediaan  yang diduga  bersifat  racun  atau  toksik.  Sitasiwi  [17] mengemukakan  bahwa  apabila  bahan  uji  bersifat toksik  maka  dapat  mempengaruhi  nafsu  makan  dan
metabolisme  yang  berdampak  pada  penurunan konsumsi dan bobot badan pada mencit.
Bukti lain ditunjukkan dari hasil pengamatan gejala toksisitas baik pada mencit jantan maupun betina yang tidak memperlihatkan gejala klinis sakit. Baik mencit jantan maupun betina memiliki perilaku yang tenang,
nafsu  makan  dan  minum  normal,  kondisi  kulit  dan rambut  normal,  mata  berwarna  merah  bening, konsistensi feses padat normal, tidak ditemukan gejala tremor,  dan  napas  yang  normal.  Hasil  pengamatan gejala  klinis  selama  14  hari  pada  mencit  jantan  dan betina ditunjukkan pada Tabel 4.
Tabel  5.  Hasil  pengamatan  gejala    toksisitas  selama  14  hari  pada  mencit  jantan  dan  betina  setelah  dilakukan pemberian probiotik jalembi Kelompok Perlakuan (mg/KgBB) Jumlah ulangan mencit Gejala toksisitas Perilaku Nafsu makan dan minum Kulit dan rambut Nafas Mata Tremor Konsistensi feses I CMC-Na 1 % 5 Normal Normal Normal   Normal   Normal   Tidak ada Normal II 128 5 normal Normal Normal   normal  Normal   Tidak ada Normal III 640 5 normal Normal Normal   normal  Normal   Tidak ada normal IV 3200 5 normal Normal Normal   Normal  Normal   Tidak ada normal V 16000 5 normal Normal Normal   Normal  Normal   Tidak ada normal
Hasil pada Tabel 5 sesuai dengan penelitian Ayun dkk  [11]  yang  melaporkan  bahwa  pemberian  infusa benalu  teh  tidak  menyebabkan  kematian  dan timbulnya gejala klinis pada mencit jantan dan betina. Menurut  Jumain  dkk  [18]  pengamatan  gejala  klinis pada uji toksisitas akut merupakan salah satu prinsip untuk  mengevaluasi  efek  klinis  dari  bahan  yang dianggap  toksik  ketika  dikonsumsi  oleh  hewan  uji. Pada penelitian ini pengamatan gejala klinis hewan uji mengacu  pada  BPOM  [2]  yang  menyebutkan  bahwa observasi hewan uji secara individual dilakukan pada 30 menit pertama setelah pemberian sediaan uji  dan dan  sehari  sekali  selama  14  hari.  Namun  menurut Susanti  dan  Aryantini  [18]  durasi  observasi  dapat bervariasi  dan  diperpanjang  tergantung  dari  reaksi toksik.  Waktu  muncul  dan  hilang  dari  gejala  klinis (khususnya gejala toksik yang tertunda) harus dicatat secara sistematis dan jelas.
Kurniawidjaja  dkk.  [19]  mengemukakan  bahwa apabila  hewan  uji  menunjukkan  gejala  toksik berkepanjangan  maka  perlu  dilakukan  pengamatan tambahan yang meliputi : kulit, bulu, mata, membran mukosa,  sistem  pernafasan,  sistem  saraf   otonom, sistem  saraf   pusat,  aktivitas  somatomotor  serta tingkah laku. Selain itu Nugroho [20] menambahkan bahwa pengamatan juga perlu dilakukan pada kondisi: gemetar, kejang, salivasi, diare, lemas, tidur dan koma. Lestari  dan  Andriantoro  [21]  menyebutkan  apabila didapati  hewan  uji  dalam  kondisi  kritis  dan
menunjukkan  gejala  nyeri  yang  berat  atau  terlihat tersiksa  maka  harus  segera  dimatikan  dan  waktu kematiannya harus dicatat.
Witadnyana [22] mengemukakan terdapat beberapa hal yang harus diobservasi selama waktu pengamatan hewan uji antara lain perilaku jalan, berat badan hewan uji  sebelum  diberi  perlakuan  sediaan  uji.  [23] menambahkan  pada  akhir  perlakuan  hewan  uji  yang masih  bertahan  hidup  ditimbang  dan  kemudian dimatikan. Seluruh hewan uji yang menunjukkan gejala klinis  abnormal  dan  mati  selama  penelitian  harus dibedah  dan  dilakukan  pemeriksaan  struktur mikroskopis  pada  organ  hati  dan  ginjal  untuk mendapatkan informasi  ada  atau  tidaknya  kerusakan pada organ tersebut.
Adapun kelebihan penelitian ini adalah penggunaan  dosis  bertingkat  dan  sediaan  uji  yang belum  pernah  diuji  pada  penelitian  sebelumnya. Penelitian  ini  memiliki  keterbatasan  yaitu  belum dilakukan  pengamatan  struktur  mikroskopis  organ ginjal dan hati menggunakan pewarnaan hematoksilin dan eosin.

## KESIMPULAN
Kesimpulan  dari  penelitian  ini  adalah  pemberian minuman  jus  probiotik  dosis  128,  640,  3200,  dan 16000 mg/KgBB tidak menyebabkan kematian pada mencit  ddY  ,  sehingga  minuman  probiotik  dari  jus
jalembi dengan starter L. plantarum termasuk kategori praktis tidak toksik atau aman dan lolos konsumsi dari uji  pra-klinis  serta  dapat  dilanjutkan  pada  tahap  uji klinis ke manusia.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Peneliti  mengucapkan  terima  kasih  kepada Kemendikbud-Ristek,  khususnya  LLDIKTI  Wilayah III  atas  program  hibah  yang  diadakan.  Peneliti  juga mengucapkan terima kasih kepada seluruh pihak yang telah membantu dalam kelancaran penelitian ini yang tidak  dapat  kami  sebutkan  seluruhnya,  kami mengucapkan terima kasih.

## DAFTAR PUSTAKA
[1]  WHO.  "Principles  for  the  testing  of   drugs  for teratogenicity," wld hlth org. techn. rep.ser. , vol. 364. pp. 5-
18,
1967.
http://ovidsp.ovid.com/ovidweb.cgi?t=js&page=refe rence&d=emcl1&news=n&an=0008457477 [2]  Badan  Pengawas  Obat  dan  Makanan.  "Peraturan badan pengawas obat dan makanan tentang pedoman uji  toksisitas  praklinik  secara  in  vivo," J.  Chem.  Inf. Model. , vol. 53, no. 9, pp. 21-25, 2020
[3]  W. A. Ssasmito, A. D. Wijayanti, I. Fitriana, and P. W.
Sari,  "Pengujian  toksisitas  akut  obat  herbal  pada mencit  berdasarkan  organization  for  economic  co- operation and development (oecd)," J. Sain Vet. , vol. 33, no. 2, pp. 182-187, 2017.
[4]  A. B. Sutjiatmo, E. Y. Sukandar, C. Candra, and S. N. Vikasari,  "Uji  toksisitas  akut  ekstrak  cair  air  herba pecut  kuda  ( stachytarpheta  jamaicensis (l)  vahl)  pada mencit swiss webster ," Kartika J. Ilm. Farm. , vol. 3, no. 2, pp. 32-37, 2015.
[5]  D. sujana, S. D. Winda, T. Rusdiani, and A. Subarnas,
"Uji toksisitas akut ekstrak etanol akar pakis tangkur ( polypodium feei ) dari gunung talaga bodas pada mencit s wiss webster, " Jurnal Ilmiah Farmako Bahari, vol 11, no. 2 pp. 167-179, juli 2020.
[6]  D. I. Nurfaat, and W. L. Indriyati, "Uji toksisitas akut ekstrak  etanol  benalu  mangga  ( dendrophthoe  petandra ) terhadap  mencit swiss  webster ," indones  J  Pharm  Sci Technol, vol. 3, no. 2, pp. 53-65. 2016 [7]  S. Sihombing, "Uji toksisitas in vivo akut ekstrak etanol daun  puguntano  (picria  fel-terrae  lour)  pada  mencit jantan,"  in skripsi. Fakultas  Farmasi:  Universitas Sumatera Utara, 2017.
[8]  K.  A.  Syam.  "Uji  toksisitas akut  ekstrak  etanol  daun kayu  hitam (diospyros  celebica b. ) terhadap  mencit (mus
musculus) . in skripsi . Universitas Islam Negeri Alauddin Makassar: Samata-gowa, 2016.
[9]  A. Mayang, A. Abdul, and R. Ariastuti, "Uji toksisitas akut infusa daun sirsak ( Annona muricata l.) pada hewan uji mencit, J. Farmasetis , vol. 10, no. 1, pp. 37-44, 2021.
[10] Casarett  and  Doull’s,  toxicology :  The  Basic  Science Of   Poisons,  New  York:  Seventh  Ed.  Mcgraw-Hill Medical Publishing Division, 2008.
[11] A.  Q.  Ayun,  D.  N.  Faridah,  N.  D.  Yuliana,  and  A. Andriyanto,  “Pengujian  toksisitas  akut  ld50  infusa benalu teh (Scurrula sp.) dengan menggunakan mencit (Mus musculus),” Acta Vet. Indones. , vol. 9, no. 1, pp. 53-63, 2021.
[12] H. N. Baroroh and E. P. Nur Rachmani, “Ketoksikan akut  dari  ekstrak  etanolik  daun  jarak  pagar  (jatropa curcas)  pada  mencit  jantan  galur  balb/c,” j.  natur indones. , vol. 15, no. 1, p. 52, 2014.
[13] C.  Abrori,  K.  Nurfadhila,  and  E.  N.  Sakinah,  “uji toksisitas  akut  ekstrak  etanol  daun  kemangi (ocimumsanctum)  diukur  dari  nilai  LD 50 dan histopatologi ginjal,” J. Agromedicine Med. Sci. , vol. 5, no. 1, pp. 13-19, 2019.
[14] A.  D.  P.  Sri  Oktavia,  and  Ifora,  “uji  toksisitas  akut ekstrak daun waru ( hibiscus tiliaceus l.) pada mencit putih jantan,” j. farm. , vol. 10, no. 1, pp. 41-48, 2018.
[15] M.  Rahayu  and  F.  M.  Solihat, toksikologi  klinik . Kementerian Kesehatan Republik Indonesia, 2018.
[16] C.  N.  Mutiarahmi,  T.  Hartady,  and  R.  Lesmana, “Kajian  pustaka :  penggunaan  mencit  sebagai  hewan coba  di  laboratorium  yang  mengacu  pada  prinsip kesejahteraan hewan,” Veterinus, Indones. Med. , vol. 10, no. 1, pp. 134-145, 2021.
[17] A.  J.  Sitasiwi,  “Bobot  badan  mencit  ( Mus musculus l.) setelah  pemberian  ekstrak  ethanol  daun  nimba ( Azadirachta  indica )  secara  oral  selama  21  hari  ( Mus musculus l .) ,” vol. 3, 2018.
[18] Jumain, Syahruni, and F. T. Farid, “Uji toksisitas akut dan  ld 50 ekstrak  kirinyu (Euphatorium  odoratum linn ) pada mencit (Mus musculus) ,” pp. 65-72, 2017.
[19] l. M. Kurniawidjaja, F. Lestari, M. Tejamaya, and D. H. Ramdhan, Konsep dasar toksikologi industri . 2021.
[20] A. R. Nugroho, mengenal mencit sebagai hewan laboratorium . Samarinda: Mulawarman University Press, 2018.
[21] R.  Puji  Lestari  and  A.  Andriantoro,  “Pengaruh penggunaan hewan uji yang sama secara berulang pada pengujian korosi dermal,” J. Ecolab , vol. 12, no. 1, pp. 42-52, 2018.
[22] W. D. Y. Witadnyana, S. G. Giri, A. M. I. Anata, H. F. M. Salim, W. N. Karmiani, D. P. N. Agustina, W. R. G. P.  Perdana,  and  D.  A.  P.  N.  Wijayanti,  "Uji  aktivitas analgesik  gel  bulung  ( gracilaria sp.)  terhadap  mencit putih jantan ( Mus musculus ),” IPTEKMA  J. Mhs. Univ. Udayana , vol. 8, no. 2, pp. 95-100, 2019.
[23] M. Yusuf,  R.  M.  Al-Gizar,  A.  Y.  Y.  Rorrong,  R.  D.
Badaring,  H.  Aswanti,  M.  S.  Ayu,  Nurazizah, Dzalsabila, A. Ahyar, M. Wulan, W. Putri,  M. Jelita, and F. W. Arisma, Memahami Perawatan Dan Kesejahteraan Hewan  Percobaan (Mu’nisa,  O.  Jumadi,  M.  Junda,  W. Caronge,  &  H.  Hamjaya  (Eds.).  Jurusan  Biologi FMIPA UNM, 2022.