## Medika Kartika : Jurnal Kedokteran dan Kesehatan

## ANALISIS HISTOPATOLOGI KETEBALAN EPIDERMIS SETELAH PENGOLESAN GEL EKSTRAK CURCUMIN PADA MENCIT ALBINO YANG DIINDUKSI  2,4 DINITROCHLOROBENZE
(HISTOPATHOLOGICAL ANALYSIS OF EPIDERMAL THICKNESS AFTER APLICATION OF CURCUMIN EXTRACT GEL IN INDUCED ALBINO MICE BY 2,4 DINITROCHLOROBENZE)
Rina Munirah Bulqini, Lina Damayanti
Departemen Ilmu Kesehatan Kulit dan Kelamin Fakultas Kedokteran Universitas Jenderal Achmad Yani, Cimahi, Jawa Barat, Indonesia
Email Korespondensi: rinamunirah@gmail.com

## ABSTRAK
Agen  antiinflamasi  topikal  dari  bahan  alami  dengan  efikasi  yang  baik  dan  efek  samping minimal  sangat  diperlukan.  Curcumin  termasuk  bahan  alami  yang  berefek  anti  inflamasi. Namun  penelitian  dalam  bentuk  topikal  masih  sangat  jarang.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk menilai efek  topikal gel ekstrak Curcumin terhadap inflamasi kulit mencit yang diinduksi 2,4 dinitrochlorobenzen (DNCB).  Studi  menggunakan randomized  posttest  –only  control  group design dengan sampel 30 ekor mencit albino dalam 6 kelompok. Ketebalan epidermis diukur dari lapisan sel basal hingga stratum korneum menggunakan ImageJ software. Tidak terdapat perbedaan  signifikan  rerata  ketebalan  epidermis  antara  kelompok  mencit  yang  diberikan aplikasi gel ekstrak Curcumin dengan kelompok yang tidak diberikan gel ekstrak Curcumin. Penebalan epidermis terjadi jika dermatitis kontak iritan berupa dermatitis kontak iritan kronis. Diperlukan penelitian lebih lanjut untuk menilai efek anti inflamasi ini pada inflamasi kronik.
Kata kunci : curcumin, DNCB, gel, stratum korneum

## ABSTRACT
Topical anti-inflammatory agents from natural remedies with good efficacy and minimal side effects are needed. Curcumin is a natural remedy that has anti-inflammatory effects. However, research  in  topical  form  is  still  very  rare.  This  study  aims  to  assess  the  effect  of  topical Curcumin extract gel on  2,4 dinitrochlorobenzen DNCB-induced skin inflammation in mice. The study used a randomized posttest –only control group design with a sample of 30 albino mice in 6 groups. Epidermis thickness was measured from the basal cell layer to the stratum corneum using ImageJ software. There was no significant difference in the mean thickness of the epidermis between the group of mice that were given Curcumin extract gel application and the group that was not given Curcumin extract gel. Thickening of the epidermis occurs if irritant
DOI:
DOI

## ARTIKEL PENELITIAN
10.35990/mk.v7n0.p60-69
contact  dermatitis  takes  the  form  of  chronic  irritant  contact  dermatitis.  Further  research  is needed to assess this anti-inflammatory effect on chronic inflammation.
Keyword: curcumin, DNCB, gel, stratum korneum

## PENDAHULUAN
Kulit   berperan  sebagai pelindung fisik  terhadap  berbagai    faktor  penyebab kerusakan    termasuk  paparan  zat  kimia. Paparan  berulang  akan  menyebabkan timbulnya  respon  fisiologis  yang  berperan melindungi  tubuh  dari  cedera  jaringan, berupa inflamasi pada kulit. 1,2 Namun jika inflamasi  terjadi  tidak  adekuat,  akan menimbulkan  infeksi patogen yang menetap. 2,3,4,5 Sehingga sangat diperlukan agen  antiinflamasi  topikal  yang  aman, efektif dengan efek samping minimal. 6 Komponen  organik  seperti 1-
chloro-2,4-dinitrochlorobenzen (DNCB) cycloheximide  benzene sering  digunakan
sebagai sensitizer timbulnya  gejala  yang menyerupai dermatitis kontak pada mencit.
7 .Salahsatu  penanda  histologis  adanya dermatitis kontak adalah penebalan lapisan epidermis  dan  lapisan  luar  dermis  oleh karena infiltrasi sel imun. 8
Natural  remedies dapat  digunakan sebagai  pengobatan  komplementer  untuk inflamasi pada kulit. 9 Curcumin termasuk
natural remedies yang berefek
antiinflamasi  serta  mengandung  lipofilik polifenol 10 yang merupakan agen  terapetik potensial 11 dan  paling  banyak  diteliti. 12
Bentuk  gel  lebih  dipilih  karena  karakter control release baik , memiliki kemampuan mencapai  target  epidermis  yang viable, mudah dimanipulasi swelling levelnya dan memiliki kompatibilitas jaringan yang baik.
13 Curcumin dalam topical  base  gel juga memberikan  perbaikan  cepat  pada  luka bakar tanpa timbulnya skar dan menghilangkan pembengkakan akibat
crush injury . Selain itu, Curcumin gel 0,1% solid  lipid  nanoparticle diketahui  tidak bersifat  iritatif,  dan  mampu  menekan pembengkakan telinga mencit dan mengurangi  kandungan  air  dalam  model mencit yang diinduksi dermatitis. 13
Namun demikian, penelitian- penilitian topikal Curcumin masih terbatas. Sehingga  penelitian  ini  bertujuan  untuk menilai efek  topikal gel ekstrak Curcumin terhadap  inflamasi  kulit  mencit  yang diinduksi DNCB agar dapat menjadi usulan inovasi obat anti inflamasi alami.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental  menggunakan  hewan  coba dengan rancangan randomized  posttest  – only  control  group  design. Penelitian  ini dilakukan  pada  bulan  Desember  2020 selama  3  hari  di  Laboratorium  Animal
Fakultas Kedokteran Universitas Hasanudin  (FK  UNHAS).  Pemeriksaan Histopatologi  dilakukan  di  Laboratorium
Patologi Anatomi  FK  UNHAS  dan  Sentra Diagnostik  Patologia  Makassar.  Besar sampel  yang  digunakan  mengacu  pada rumus    Federer,  yaitu  sebanyak  30  ekor mencit  albino  yang  dibagi  dalam  6 kelompok perlakuan..
Prosedur  penelitian  diawali  dengan pembuatan gel ekstrak curcumin, pengenceran zat DNCB, pembuatan model binatang, induksi Inflamasi, biopsi kulit dan pemeriksaan  histopatologi,  analisi  statistik menggunakan software statistik versi 25.
DNCB  yang  digunakan  adalah buatan  Sigma  Aldrich,  USA.  Kemasan botol  kaca  berisi  10gram  DNCB.  DNCB 0,5gram dilarutkan dalam 50ml aseton dan olive oil dengan perbandingan 4:1 sehingga menjadi  homogen.  Dosis  DNCB  yang dibutuhkan  pada  penelitian  ini  adalah  1% sehingga  setiap  mencit  diinduksi  dengan DNCB sebanyak 10  L.
Prosedur  induksi  inflamasi  diawali dengan mencukur rambut punggung mencit menggunakan hair  removal  cream secara hati-hati,  kemudian  area  punggung  mencit ditandai seluas 1 cm 2 yang akan dioleskan DNCB, base gel dan gel ekstrak Curcumin.
Sebanyak  10  mikroliter  DNCB  1% diaplikasikan  secara  topikal  pada  area punggung mencit.  Segera setelah dioleskan DNCB,  sebanyak  0,5  gram  gel  curcumin
diaplikasikan  secara  merata  pada  daerah punggung  seluas  1  cm 2 sesuai  kelompok. Kemudian  semua  kelompok  dilakukan biopsi untuk pemeriksaan histopatologi dan dilakukan perawatan mencit pasca biopsi.
Penelitian  ini  telah  mendapatkan persetujuan etik dengan nomor 534/UN4.6.4.5.31/PP36/2020.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Telah dilakukan
penelitian eksperimental murni untuk mengetahui efek gel ekstrak Curcumin pada 30 ekor mencit yang  di  bagi  menjadi  6  kelompok. Kelompok  pertama  (A)  adalah  kelompok kontrol yaitu 5 ekor mencit  tanpa perlakuan yang di eliminasi setelah 3 hari. Kelompok kedua  (B)  adalah  5  ekor  mencit  yang diinduksi  DNCB.  Kelompok  ketiga  (C) adalah 5 ekor mencit yang diinduksi DNCB dan diberi base gel segera setelah induksi,
12  jam  dan  24  jam,  36  dan  48  jam  dan 60jam  serta  72jam  pasca  induksi  DNCB. Kelompok  keempat  (D)  adalah  5  ekor mencit  yang  diinduksi  DNCB  dan  diberi gel  ekstrak  Curcumin  2%  secara    topikal segera  setelah  induksi  DNCB,  12  jam  dan 24  jam,  36  dan  48  jam  dan  60jam  serta 72jam  pasca  induksi  DNCB.  Kelompok kelima  (E)  adalah  5  ekor  mencit  yang diinduksi  DNCB  dan  diberi    gel  ekstrak Curcumin 4% secara  topikal segera setelah induksi DNCB, 12 jam dan 24 jam, 36 dan 48 jam dan 60jam serta 72jam pasca induksi
DNCB.    Kelompok  keenam  (F)  adalah  5 ekor  mencit  yang  diinduksi  diinduksi DNCB dan diberi  gel ekstrak Curcumin 8% secara    topikal  segera  setelah  induksi DNCB, 12 jam dan 24 jam, 36 dan 48 jam dan  60jam  serta  72jam  pasca  induksi DNCB.
Hasil  analisis  data  pemeriksaan ketebalan  epidermis  diperoleh  bahwa bahwa  sebaran  data  ketebalan  epidermis berdistribusi  normal  pada  masing-masing kelompok. Pada kelompok kontrol, didapatkan  tebal  epidermis  antara  0,114  – 0,174  dengan  nilai mean (rerata) 0,140±0,026. Pada kelompok yang diinduksi DNCB, didapatkan tebal
epidermis antara 0,039 – 0,185 dengan nilai
mean (rerata) 0,125±0,077.  Pada kelompok yang diinduksi DNCB dan diberi base gel , didapatkan  tebal  epidermis  antara  0,051  –
0,228  dengan  nilai mean (rerata) 0,110±0,102. Pada kelompok yang diinduksi  DNCB  dan  diberi  gel  Curcumin 2%,  tebal  epidermis  antara  0,145  –  0,320 dengan  nilai mean (rerata)  0,206±0,071. Pada kelompok yang diinduksi DNCB dan diberi  gel  Curcumin  4%,  didapatkan  tebal epidermis antara 0,133 – 0,261 dengan nilai mean (rerata) 0,179±0,050. Pada kelompok yang  diinduksi  DNCB  dan  diberi  gel Curcumin  8%,  didapatkan  tebal  epidermis antara  0,177  –  0,292  dengan  nilai mean (rerata) 0,223±0,044.  Hal ini seperti terlihat pada gambar 1 dan tabel 1.
Gambar 1 Rerata ketebalan epidermis pada tiap kelompok perlakuan.
Penelitian  ini  juga  menunjukkan bahwa  pada  uji  Anova  (tabel  2)  tidak didapatkan    perbedaan  signifikan  rerata tebal epidermis antara 6 (enam)  kelompok (p=0,081).
Salah satu peran utama kulit adalah melindungi  dari  faktor  eksternal  seperti suhu  ataupun  bahan  kimia.  Kulit  mampu memproses dan merespon berbagai macam paparan  bahan  kimia.  Tubuh  berespon terhadap  trauma  atupun  patogen  dengan Inflamasi. 2,3,4,6
Kerusakan  epidermis  merupakan tanda utama gejala dermatitis kontak iritan yang  berbeda  dengan  gejala  dermatitis kontak alergi. Pada dermatitis kontak iritan umumnya  lebih  menunjukkan  inflamasi epidermis  dibandingkan  inflamasi  dermis. Dermatitis  kontak  iritan  ditandai  dengan kemerahan, fissure, oozing dan nyeri. 16
Secara  makroskopik,  munculnya tanda-tanda  inflamasi  pada  penelitian  ini tidak  begitu  terlihat  jelas.  Hal  ini dimungkinkan  karena  pada  penelitian  ini terdapat  penurunan  konsentrasi  zat 1- chloro-2,4-dinitrochlorobenzen (DNCB)
yang  digunakan,  yaitu  menggunakan konsentrasi 1% yang diperoleh berdasarkan hasil preliminary yang  peneliti  lakukan.
Namun  demikian,  secara  histopatologi  zat
1-chloro-2,4-dinitrochlorobenzen  (DNCB) terbukti menimbulkan tanda-tanda
inflamasi yang lebih terlihat jelas.
Penebalan  epidermis  merupakan penanda  histologis  adanya  dermatitis kontak 8 dan 1-chloro-2,4- dinitrochlorobenzen  (DNCB) merupakan sensitizer munculnya gejala mirip
dermatitis kontak pada mencit. 7
Tabel 1 Analisis deskriptif tebal Epidermis pada berbagai kelompok
Kelompok n Minimum Maximum Mean Std. Deviation  Distribusi Data* Kontrol (A) 5 0,114 0,174 0,140 0,026
Normal (p=0,200) DNCB (B) 3 0,039 0,185 0,125 0,077 DNCB+ base gel (C) 3 0,051 0,228 0,110 0,102 DNCB+ gel Curcumin 2% (D) 5 0,145 0,320 0,206 0,071 DNCB+ gel Curcumin 4% (E) 5 0,133 0,261 0,179 0,050 DNCB+ gel Curcumin 8% (F) 5 0,177 0,292 0,223 0,044
Tabel 2 Perbandingan rerata tebal epidermis pada berbagai kelompok Variabel Kelompok n Mean Std. Deviation p Rerata Tebal Epidermis Kontrol (A) 5 0,140 0,026 DNCB (B) 3 0,125 0,077 DNCB+ base gel (C) 3 0,110 0,102 0,081 DNCB+ gel Curcumin 2% (D) 5 0,206 0,071 DNCB+ gel Curcumin 4% (E) 5 0,179 0,050 DNCB+ gel Curcumin 8% (F) 5 0,223 0,044 Anova-Test
Dari  penelitian  ini  pula  didapatkan bahwa  tidak  terdapat  perbedaan  signifikan tebal  epidermis  antara  kelompok  mencit yang  diberikan  topikal  gel  ekstrak Curcumin  dengan  kelompok  mencit  yang tidak  diberikan  topikal  gek  ekstrak Curcumin.  Hal  ini  berbeda  dengan penelitian Heo J.H., et al pada tahun 2018 dan Chen C.C., et al pada tahun 2017 yang menunjukkan  bahwa  pada  pemeriksaan histopatologik dengan pewarnaan Hematoksilin  dan  Eosin,  DNCB  dapat menginduksi  penebalan  epidermis  dan lapisan  luar  dermis  dengan  memberikan gambaran hiperplasia epidermis, keratinisasi  berat  termasuk  hiperkeratosis dan parakeratosis serta vasodilatasi signifikan  dan  meningkatnya  inflitrasi  sel imun  di  dermis.  Hal  ini  kemungkinan karena  terdapat  perbedaan  dalam  cara pengolesan.  Selain  itu,  adanya  perbedaan
hasil  penelitian  ini  dimungkinkan  karena penebalan epidermis terjadi jika dermatitis kontak iritan berupa dermatitis kontak iritan berulang dan terus menerus. 16
Namun, menariknya pada penelitian ini  didapatkan  rerata  ketebalan  epidermis pada kelompok yang  diberikan gel ekstrak Curcumin  baik  2%,  4%  ataupun  8% (kelompok  D,  E,  F)  sedikit  lebih  tinggi dibandingkan kelompok induksi (kelompok  B)  dan  kelompok  kontrol (kelompok  A).  Hal  ini  dikarenakan curcumin  merupakan  antioksidan  poten, anti  inflamasi,  dan  anti  infeksi  yang berperan  dalam  proses  resolusi  luka. 17,18
Curcumin yang  diberikan  secara  topikal efektif untuk berbagai keadaan dengan jejas pada  kulit  dan  inflamasi.  Mekanisme utamanya  berupa  penghambatan  enzim Fosforilase Kinase. 14
Selain  itu, Curcumin merupakan selective inhibitor enzim Fosforilase
Kinase. Enzim ini penting dalam glikogenolisis yang berperan untuk pembentukan  ATP  dan  berperan  penting dalam reaksi fosforilase. 15 Enzim Fosforilase  akan  keluar  dalam  waktu  5 menit  setelah injury dan  memiliki  efek penting  dalam  aktivasi  sel-sel  inflamasi, penyembuhan  luka  dan  pembentukan scar jaringan. 15,19
Curcumin merupakan selective non- competitive  phosphorylase  inhibitor yang dengan  cara  ini  fosforilase  kinase injury pathway akan terhambat sehingga molekul utama tissue  injury  pathway  tidak keluar , yaitu NF-KB  sebuah  aktivator  transkripsi yang umumnya akan keluar dalam 30 menit setelah terjadinya injury . Sehingga curcumin  akan  menghambat  NF-KB.  NF- KB  diketahui  bertanggung  jawab  dalam proliferasi  200  gen    dari  sel-sel  inflamasi (sel T dan makrofag), migrasi sel, siklus sel termasuk  Cyclin  D,  proliferasi  epidermis dan proliferasi fibroblast. 14
Aplikasi  topikal  Curcumin  dapat meningkatkan reepitelisasi dan meningkatkan rata-rata penyembuhan luka. 20 Beberapa  uji  klinis  juga  menunjukkan adanya  peningkatan  rata-rata  pertumbuhan epidermis,  peningkatan  ketebalan  lapisan kutikula  dan  perbaikan  luka  secara signifikan pada subjek yang diterapi dengan
Curcumin  dibandingkan  subjek  yang  tidak mendapatkan terapi Curcumin. 17,20
Partoazer  et  al  dalam  penelitiannya mengemukakan  bahwa  dengan  pemberian topikal curcumin terdapat  perbaikan  pada derajat  luka  bakar  tikus.  Kant  et  al  dalam penelitiannya menemukan bahwa pemberian  topikal curcumin mempercepat perbaikan luka pada tikus diabet. Lopez et al  dalam  penelitiannya  mengemukakan bahwa curcumin yang  diberikan  secara topikal  memberikan  perbaikan  kerusakan akibat  laser  CO2.  Sementara  itu  sebuah randomized  double  blind-placebo  controll trial yang  dilakukan  Afshariani  et  al menemukan bahwa topikal curcumin dalam rentang pemberian 72 jam efektif menurunkan inflamasi akibat mastitis pada kelompok ibu menyusui. 14
Dari  penelitian  ini  juga  didapatkan bahwa  terdapat  perbedaan mean rerata ketebalan  epidermis  antara  kelompok mencit yang diberikan berbagai konsentrasi Curcumin  yaitu  kelompok  induksi  DNCB dan diberikan gel Curcumin 2% (kelompok D)  (0,206±0,071),  kelompok  E  atau kelompok induksi DNCB dan diberikan gel Curcumin  4%  (0,179±0,050)  kelompok  F atau  kelompok  induksi  DNCB  dan diberikan gel Curcumin 8%  (0,223±0,044) meskipun  tidak  signifikan  secara  statistik. Hal  ini  dimungkinkan  karena  adanya perbedaan  gizi  antara  setiap  mencit  yang memengaruhi ketebalan epidermis.
Evidence pada  model  tikus  ataupun  model manusia  menunjukkan  bahwa  terdapat interaksi  yang  jelas  antara intake nutrisi dengan  struktur  kulit  baik  pada  lapisan epidermis, dermis maupun lemak subcutan. 21 Penelitian  Hew  J,  et  al  (2016)  pada  25 mencit menunjukkan bahwa status makronutrien berpengaruh terhadap struktur kulit dan efek tersebut bersifat age- spesific . Pada mencit jantan, intake protein tinggi  berhubungan  dengan  ketebalan epidermis dan dermis (p= 0,006).
Sementara  pada  mencit  betina,  ketebalan dermis  sangat  berhubungan  dengan intake karbohidrat.

## KESIMPULAN
Tidak terdapat perbedaan signifikan rerata ketebalan epidermis antara kelompok mencit  yang  diberikan aplikasi  gel  ekstrak Curcumin  dengan  kelompok  yang  tidak diberikan gel ekstrak Curcumin. Diperlukan penelitian  lanjutan  efek  antiinflamasi  ini pada  keadaan  inflamasi  kronis  dan  dalam jangka waktu lebih lama.

## KONFLIK KEPENTINGAN
Penulis tidak ada konflik kepentingan dengan pihak manapun

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  penulis  haturkan kepada  berbagai  pihak  yang  turut membantu  terlaksananya  penelitian  dan penyusunan laporannya. Terima kasih pula
kepada LPPM FK Unjani atas bantuan yang telah diberikan.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Leung  DYM,  Berdyshev  E,  Goleva E.  Cutaneus  Barrier  Disfunction  in Allergic Diseases. 2020; 145: 1485- 1497
2. Wufuer, M, Lee, G, Hur W, Jeon, B,
Kim, BJ, Choi, T.H, Lee, S. Skin-on- a-chip model simulating inflammation,edema and drug-based treatment.  Scientific  reports.  2016; 6,37471
3. Guo  H,  Callaway  JB,  Ting  J.
Inflammasomes: mechanism of
action, Role  in Desease  and theurapeutics.  Nat  Med.  2016;  July; 21(7): 677-687
4. Pasparakis,  M,  et  al.,  Mechanisms regulating skin immunity and inflammation. 2014; 14(5): 289.
5. Paramita, S, Kosala, K, Dzulkifli, D,
Saputra,  DI,  Wijayanti,  E.  Anti- inflammatory activities of
ethnomedicinal  plants  from  Dayak Abai in North Kalimantan, Indonesia. Biodiversitas  Journal  of Biological Diversity. 2017; 18 , 1556- 1561
6. Abbas, AK, Litchman, AH, Pillai, S. Cellular and molecular immunology 8 th ed.  Philadelpia:Elsevier  Health Sciences. 2015: 40-45
7. Chen CC, Liu X, Li Y, Liang H, Li K, Li J, Cheng C, Liu X, Zhong S, Li L, Wang Y. Effect of Acupunture on 1-Chloro-2,4-dinitrochlorobenzene- induced Allergic Contact Dermatitis in  Mice.J.  Acupunct  Meridian  Stud. 2017; 10(4):252-260
8. Heo  JH,  Heo  Y,  Lee  HJ,  Kim  M,
Shin HY. Topical anti-inflammatory and  anti-oxidative  effect  of  porcin placenta extract on 2,,4- dinitrochlorobenze-induced  contact dermatitis.  BMC  Complementary and Alternative Medicine. 2018; 18: 331
9. Fadus M, lau C, Bichandani J, Lynch
H.  Curcumin:  An  age-old  anti inflammatory  and  anti-neoplastic agent.  Journal  of  Traditional  and Complementary  Medicine.  2017;  7-
339-346
10. Kocaadam B, Sanlier N.
Curcumin,an  Active  Component  of Turmeric  (Curcuma  Longa),  and  Its Effects  on  Health.  Critical  Reviews in Food Science and Nutrition. 2017; 57 (13): 2889-2895
11. Agrawal  R,  sandhu  SK,  Sharma  I,
Kaur
IP. Development and Evaluation  of  Curcumin-Loaded Elastic  Vesicle  as  an  Effective Topical anti-inflammatory
Formulation.  AAPS  PharmSciTech.
12. Kunnumakkar  AB,  Bordoloi  D, Padmavathi G, Monisha J. Curcumin, the golden nutraceutical:multitargeting for multiple  chornic  deseases.  British
Journal  of  Pharmacology.  2017; 174:1325-1348
13. Shotriya  S,  Ranpise  N,  Satpute  P, Vidhate  B.  Skin  Targetting  of Curcumin Solid Lipid nanoparticles- engrossed  Topical  Gel  for  The Treatment  of  Pigmentation  and
Irritant Contact Dermatitis. Artificial,  Cells,  nanomedicine  and Biotechnology.  2018;  46(7):  1471-
1482
14. Heng  MCY.  Topical  Curcumin:  A Review  of  Mechanisms  and  uses  in Dematology.  Int  J.Dermatol  Clin Res. 2017; 3 (1): 010-017
15. Spriggs S, Sheffield D, Olayanju A,
Kitteringham  NR,  Naisbitt  DJ, Aleksic  M.  Effect  of  repeated  daily dosing with 2,4- DinitroChlorobenzene on
Glutathione  Bioynthesis  and  Nrf activation  in  reconstructed  human epidermis.  Toxicological  sciences. 2017; 154(1); 5 – 15
16. Nedorost,  ST.  Iritant  Dermatitis.  In: Kang  S,  Amagai  M,  Bruckner  AL, Enk  AH,  Morgolis  DJ,  McMichael AJ,  et  al.,  editors.  Fitzpatrick's
Dermatology  9th  Ed:  McGraw-Hill Education; 2019. p. 418 17. Panahi  Y,  Fazlolahzadeh  O,  Atkin S.L. Majeed M., Butler A.E, Johnson T.P,  Sahebkar  A.  Evidence  of curcumin  and  curcumin  analogue effects  in  skindiseases:  A  narrative review. J.Cell Physiol. 2018; 1 – 14
18. Mohanty, C, & Sahoo, SK. Curcumin and its topical
formulations  for  wound  healing applications. Drug Discovery Today.
2017; 22(10), 1582–1592.
19. He  Y,  Yue  Y,  Zheng  X,  Zhang  K, Chen S, Du Z. Curcumin,
Inflammation, and Chronic Disease:
How  are  They  Linked?Molecules.
2015; 20: 9183-9213
20. Kulac,  M,  Aktas,  C,  Tulubas,  F, Uygur,  R.,  Kanter,  M.,  Erboga,  M, Ozen,  OA.  The  effects  of  topical treatment  with  curcumin  on  burn wound  healing  in  rats.  Journal  of Molecular  Histology.  2013;  44(1), 83–90.
21. Hew,  J,  Solon-Biet  SM,  McMahon, AC, Ruohenen K, Raubenheimer D, Ballard JW, Le Couter DG, Nicholis C, Li Z, Maitz PK, Wang Y, Simpson
S. The effcets of dietaray macronutrient  balance  on  skin structure  in  afing  male  and  female mice.  PloS  ONE.  2016;  11(11): e0166175.