## AKTIVITAS ANTIBAKTERI DARI BAKTERI ENDOFIT ASAL AKAR
CIPLUKAN ( Physalis angulata L.) TERHADAP Staphylococcus aureus

## DAN Escherichia coli

## ANTIBACTERIAL ACTIVITIES OF ENDOPHYTIC BACTERIA FROM CIPLUKAN ROOT
(Physalis angulata L.) FOR Staphylococcus aureus AND Escherichia coli
Ika Afifah Nugraheni, Heni Setianah, Doddy Sulistiawan Wibowo Program Studi Bioteknologi, Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas ‘Aisyiyah Yogyakarta Korespondensi: Ika Afifah Nugraheni. Alamat email: ikaafifah@unisayogya.ac.id

## ABSTRAK
Ciplukan (Physalis angulata L.) merupakan tanaman herbal yang mengandung berbagai manfaat bagi kesehatan  manusia,  termasuk  bagian  akar.  Manfaat  lain  yang  dimiliki  akar  tanaman  ciplukan  masih  perlu dieksplorasi,  termasuk  dengan  kemampuan  bakteri  endofit  yang  hidup  di  dalam  jaringan  tanaman.  Hubungan simbiosis  mutualisme  antara  bakteri  endofit  dengan  tanaman  memungkinkan  bakteri  dapat  menghasilkan senyawa bioaktif yang sama dengan tanaman inangnya. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan menguji potensi  aktivitas  antibakteri  dari  bakteri  endofit  asal  akar  tanaman  ciplukan  terhadap  bakteri  patogen,  yaitu Staphylococcus aureus dan Escherichia coli. Total enam isolat bakteri endofit yang digunakan merupakan hasil isolasi  dari  akar  tanaman  ciplukan  pada  penelitian  sebelumnya.  Uji  aktivitas  antibakteri  dilakukan menggunakan metode difusi cakram atau Kirby Bauer, yaitu dengan menghitung diameter zona hambat koloni terhadap  bakteri  patogen.  Sebanyak  empat  isolat  menunjukkan  aktivitas  penghambatan  terhadap  S.  aureus. Nilai  hambat  terbesar  dimiliki  oleh  isolat  AR21  yaitu  sebesar  1,6±0,5  mm.  Meskipun  demikian,  semua  isolat tidak  membentuk  zona  penghambatan  terhadap  E.  coli.  Hasil  ini  mengindikasikan  bahwa  bakteri  endofit  dari akar tanaman ciplukan memiliki potensi dalam menghasilkan senyawa antibakteri terhadap bakteri patogen dari kelompok  gram  positif,  yang  diwakili  oleh  S.  aureus.  Bakteri  endofit  tidak  menunjukkan  aktivitas  antibakteri terhadap bakteri patogen gram negatif, E. coli.
Kata Kunci: Akar Ciplukan; Bakteri Endofit; Aktivitas Antibakteri; Staphylococcus aureus; Escherichia coli

## ABSTRACT
Ciplukan  (Physalis  angulata  L.)  is  herbal  plant  that  contains  various  benefits  for  human  health, including  the  roots.  The  other  benefits  of  ciplukan  roots  still  need  to  be  explored,  including  the  ability  of endophytic  bacteria  that  live  in  plant  tissues.  The  symbiotic  relationship  of  mutualism  between  endophytic bacteria  and  plants  allows  bacteria  to  produce  the  same  bioactive  compounds  as  their  host  plants.  This  study aims  to  isolate  and  test  the  potential  antibacterial  activity  of  endophytic  bacteria  from  ciplukan  roots  against pathogenic bacteria, i.e. Staphylococcus aureus and Escherichia coli. Total of six endophytic bacterial isolates used  were  the  result  of  ciplukan  roots  isolation  in  the  previous  studies.  Antibacterial  activity  was  carried  out using  the  disc  diffusion  or  Kirby  Bauer  method,  by  calculating  the  diameter  of  inhibitory  zone  against pathogenic bacteria. A total of four isolates showed inhibitory activity against S. aureus. The largest inhibitory zone  was  AR21  isolate  with  value  1.6  ±  0.5  mm.  However,  all  isolates  did  not  form  inhibition  zone  against  E. coli. These results indicated that endophytic bacteria from ciplukan roots have potential to produce antibacterial compounds  against  pathogenic  bacteria  from  gram-positive  group,  represented  by  S.  aureus.  Endophytic bacteria did not show antibacterial activity against gram-negative pathogenic bacteria, E. coli.
Keywords: Ciplukan  Roots,  Endophytic  Bacteria,  Antibacterial  Activity,  Staphylococcus  aureus;  Escherichia coli
How  To  Cite : Nugraheni,  I.,  Setianah,  H.,  &  Wibowo,  D.  (2021).  AKTIVITAS  ANTIBAKTERI  DARI BAKTERI  ENDOFIT  ASAL  AKAR  CIPLUKAN  ( Physalis  angulata  L .)  TERHADAP Staphylococcus  aureus DAN Escherichia coli . Biomedika, 13(1), 48-55. doi:https://doi.org/10.23917/biomedika.v13i1.11009
DOI : https://doi.org/10.23917/ biomedika.v13i1.11009

## PENDAHULUAN
Indonesia  sebagai  negara  tropis  telah dianugerahi  beragam  komoditas  tanaman  yang berpotensi  sebagai  obat  tradisional,  salah satunya  yaitu  tanaman  ciplukan  ( Physalis angulata L.).  Berdasarkan  berbagai  penelitian ilmiah,  ekstrak  tanaman  ciplukan  mempunyai aktivitas sebagai antihiperglikemi, antimikrobia, antivirus,  imunostimulan  dan  imunosupresan (imunomodulator),  antiinflamasi,  antioksidan, dan  sitotoksik  (Latifah et  al. ,  2014).  Eksplorasi untuk  menemukan  aktivitas  lainnya  perlu dilakukan  salah  satunya  dengan  mengisolasi bakteri endofit dari tanaman ciplukan.
Bakteri  endofit  merupakan  bakteri yang  hidup  di  dalam  jaringan  tanaman  tanpa menimbulkan  gejala  penyakit  bagi  tanaman tersebut  (Hardoim et  al .,  2008).  Suatu  bakteri disebut  sebagai  bakteri  endofit  apabila  minimal salah satu fase dari siklus hidupnya berkembang biak  di  dalam  jaringan  tanaman.  Proses kolonisasi  bakteri  endofit  berawal  dari  bagian perakaran,  selanjutnya  menyebar  ke  seluruh bagian  tanaman  seperti  batang,  daun,  buah maupun  biji  (Kandel et  al. ,  2017).  Simbiosis yang  terbentuk  antara  bakteri  endofit  dengan tanaman  inang  berupa  hubungan  mutualisme. Bentuk  simbiosis  ini  antara  lain  menyediakan
nutrisi yang dibutuhkan tanaman, meningkatkan pertumbuhan tanaman melalui modulasi hormon pertumbuhan maupun menghambat pertumbuhan  fitopatogen  melalui  mekanisme kompetisi nutrisi, mekanimse pertahanan tanaman  maupun  produksi  senyawa  enzim  dan antibiotik (Ma et al. , 2016; Miliute et al. , 2015).
Bakteri endofit umumnya menghasilkan senyawa metabolit sekunder yang sama  dengan  tanaman  inang.  Salah  satu  teori yang  mendukung  hal  tersebut  yaitu  adanya transfer  material  genetik  atau horizontal  gene transfer dari  tanaman  inang  ke  bakteri  endofit (Ludwig-Müller,  2015).  Jenis  transfer  genetik inilah yang memungkinkan terjadinya perpindahan  gen  penyandi  metabolit  tertentu dalam  proses  evolusinya.  Oleh  karena  itu, bakteri  endofit  berpotensi  untuk  dikembangkan dalam  rangka  menggali  kemampuan  dan aktivitasnya.
Beberapa  studi  mengenai  kemampuan bakteri endofit yang diisolasi dari tanaman obat telah  dilakukan.  Bakteri  endofit  yang  diisolasi dari  bagian  umbi  tanaman  herbal  sambung nyawa ( Gynura procumbens ) diketahui mempunyai  kemampuan  sebagai  antimikrobia terhadap Candida  albicans,  Escherichia  coli, Pseudomonas sp. dan Bacillus subtilis
(Simarmata et al ., 2007). Selain itu, sebanyak 14 isolat  bakteri  endofit  berhasil  diisolasi  dari tanaman  sirih  hijau  ( Piper  betle L.)  dan  3  di antaranya  mempunyai  aktivitas  antibakteri terhadap Staphylococcus aureus (Magharaniq et al. , 2014).
Sejauh ini, penelitian mengenai kemampuan  aktivitas  antibakteri  yang  dimiliki oleh  bakteri  endofit  dari  tanaman  ciplukan belum pernah ada. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui  potensi  bakteri  endofit  dari  akar tanaman  ciplukan  sebagai  antibakteri  terhadap bakteri  patogen S.  aureus dan E.  coli .  Hal  ini perlu  dilakukan  untuk  mengeksplorasi  dan melakukan penapisan awal kemampuan antibakteri baru dari sumberdaya lokal Indonesia.

## METODE
Penelitian  dilakukan  di  Laboratorium
Mikrobiologi dan Imunologi, Universitas ‘Aisyiyah  Yogyakarta  selama  bulan  Agustus- November  2019.  Rancangan  penelitian  berupa eksperimental laboratorium. Variabel bebas dari penelitian  ini  yaitu  bakteri  endofit  dari  akar ciplukan,  sedangkan  variabel  terikat  berupa diameter  zona  hambat  terhadap  bakteri  patogen S. aureus dan E. coli .
Alat dan Bahan
Sebanyak  enam  isolat  bakteri  endofit dari akar tanaman  ciplukan yang diperoleh dari hasil  penelitian  pendahuluan  sebelumnya  telah disiapkan sebagai isolat uji. Kode isolat tersebut yaitu AR11, AR12, AR21, AR31, AR33, AR34. Peremajaan bakteri endofit dilakukan menggunakan  media Tryptic  Soy  Agar (TSA).
Bahan  lain  yang  digunakan  antara  lain  medium Tryptic  Soy  Broth (TSB),  kandistatin,  alkohol 70%,  aquades,  kloramfenikol  serta  bakteri patogen S.  aureus dan E.  coli (kultur  koleksi dari Laboratorium Mikrobiologi dan Imunologi, Universitas ‘Aisyiyah Yogyakarta).
Alat-alat  yang  digunakan  selama penelitian antara lain cawan petri, tabung reaksi, batang  L,  autoklaf, biological  safety  cabinet , oven, inkubator, dan kertas saring yang dibentuk bulat (kertas cakram).

## Uji Aktivitas Antibakteri
Uji  aktivitas  antibakteri  dilakukan dengan  menuangkan  suspensi  bakteri S.  aureus dan E.  coli sebanyak  100  µl  ke  dalam  cawan petri yang berisi media TSA dengan penambahan  larutan  kandistatin  0,02%  b/v  dan diratakan  menggunakan  batang  L.  Cawan  petri yang  sudah  dituangi  bakteri  patogen  tersebut selanjutnya  dibagi  menjadi  beberapa  bidang untuk pengujian, meliputi uji untuk isolat bakteri
endofit,  kontrol  positif,  dan  kontrol  negatif. Kontrol  positif  menggunakan  kloramfenikol, sedangkan kontrol negatif menggunakan aquades steril dengan volume masing-masing 20 µl.  Kertas  saring  steril  berbentuk  cakram diletakkan  di  tengah  bidang  pembagian.  Isolat bakteri  endofit  diinokulasikan  ke  kertas  saring steril  sebanyak  20  µl.  Cawan  petri  yang  telah dinokulasi  selanjutnya  diinkubasi  pada  suhu 37°C selama 24 jam. Zona hambat yang diamati setelah inkubasi 1-2 hari (Simarmata,
Lekatompessy  and  Sukiman,  2007).  Zona hambat  ditandai  dengan  terbentuknya  zona bening  di  sekitar  kertas  cakram    (Oktavia  dan Pujiyanto, 2018).

## Teknik Pengumpulan Data
Data  yang  diperoleh  berupa  diameter zona hambat terhadap bakteri patogen S. aureus dan E.  coli. Diameter  daerah  zona  bening  yang terbentuk  diukur  menggunakan  jangka  sorong ataupun  penggaris  dan  dihitung  menggunakan rumus  Konsentrasi  Hambat  Minimal  (KHM). KHM  adalah  diameter  zona  bening  (mm) dikurangi diameter kertas cakram (mm).

## Analisis dan Interpretasi Data
Analisis kriteria kekuatan daya antibakteri  dikelompokkan  menjadi  4  kategori yaitu:  diameter  zona  hambat  kurang  dari  5  mm
yang  dikategorikan  lemah,  diameter  zona hambat  sebesar  5-10  mm  dikategorikan  sedang, diameter  zona  hambat  10-20  mm  dikategorikan kuat  dan  diameter  lebih  dari  20  mm dikategorikan sangat kuat (Isniyetty, 2010).
Data hasil pengujian aktivitas antibakteri  yang  diperoleh  dianalisis  dengan mencari  nilai  rerata  ( mean )  dari  setiap  ulangan.
Kemudian,  nilai  standar  deviasi  (SD)  dihitung dari rerata masing-masing isolat.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Bakteri endofit yang digunakan merupakan  hasil  isolasi  penelitian  sebelumnya dari  akar  ciplukan.  Bagian  akar  umumnya mengandung bakteri endofit dalam jumlah yang lebih  besar  dibandingkan  dengan  bagian  tajuk tanaman  (Afzal et  al. ,  2019).    Hal  ini berhubungan  dengan  proses  kolonisasi  bakteri endofit  yang  dimulai  dari  bagian  perakaran  dan menyebar  ke  seluruh  bagian  tanaman.  Selain dari ciplukan, bakteri endofit dapat diisolasi dari berbagai  jenis  tanaman  inang  dan  berbagai bagian  tanaman,  seperti  bagian  akar,  batang, daun,  biji,  buah,  maupun  umbi  akar.  Bakteri endofit  hidup  dan  berkembang  di  dalam pembuluh vaskular maupun ruang antar sel dari bagian-bagian tanaman tersebut.
Sebanyak  empat  isolat  bakteri  endofit dari  akar  ciplukan  menunjukkan  aktivitas antibakteri  terhadap S.  aureus (tabel  1).  Zona hambat  terbesar  dimiliki  oleh  kode  isolat  AR21 dengan  nilai  rerata  1,6±0,5  mm.  Dua  isolat bakteri  endofit  tidak  membentuk  zona  hambat terhadap S.  aureus ,  yaitu  dengan  kode  isolat AR11 dan AR34.
Tabel 1. Diameter Zona Hambat Bakteri Endofit
Terhadap S. aureus Kode isolat Ulangan (mm) Rerata ± SD (mm) 1 2 3 AR11 0 0 0 0 AR12 1 1 0 0,7±0,5 AR21 2 2 1 1,6±0,5 AR31 1 1 0,5 0,8±0,2 AR33 1 1 0,5 0,8±0,2 AR34 0 0 0 0 Kontrol positif 30 Kontrol negatif 0 Ket: SD=standar deviasi
Semua  isolat  uji  mempunyai  nilai standar  deviasi  yang  lebih  kecil  dibandingkan nilai  rerata  ulangannya.  Nilai  standar  deviasi berfungsi  untuk  mengetahui  sebaran  data  dari setiap  ulangan  yang  dilakukan.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  data  antar  ulangan  uji aktivitas antibakteri mempunyai nilai kesenjangan yang kecil, sehingga data dianggap representatif.
Berdasarkan pengujian antibakteri terhadap E.  coli ,  semua  isolat  menunjukkan hasil  yang  negatif  atau  tidak  terbentuk  zona hambat  (tabel  2).  Zona  hambat  hanya  terbentuk
pada kontrol positif, yaitu kloramfenikol sebesar 22 mm.
Tabel 2. Diameter Zona Hambat Bakteri Endofit Terhadap E. coli Kode isolat Ulangan (mm) Rerata dengan nilai SD (mm) 1 2 3 AR11 0 0 0 - AR12 0 0 0 - AR21 0 0 0 - AR31 0 0 0 - AR33 0 0 0 - AR34 0 0 0 - Kontrol positif 22 Kontrol negatif 0 Ket: SD=standar deviasi Kontrol  positif  pada  kedua  uji  bakteri patogen
menggunakan kloramfenikol.
Kloramfenikol  merupakan  salah  satu  jenis antibiotik  berspektrum  luas  yang  mampu menghambat  pertumbuhan  bakteri  gram  positif maupun  gram  negatif.  Pada  kedua  pengujian bakteri  patogen,  kontrol  positif  kloramfenikol memberikan hasil zona penghambatan lebih dari 20 mm.
Aktivitas  antibakteri  bakteri  endofit dari  akar  ciplukan  diujikan  pada  2  jenis  bakteri patogen yang mewakili kelompok gram bakteri. Kelompok  bakteri  gram  positif  diwakili S. aureus ,  sedangkan  kelompok  gram  negatif diwakili  oleh  bakteri E.  coli .  Kedua  bakteri patogen  tersebut  bersifat  merugikan  bagi manusia,  bahkan  tanpa  disadari  terdapat  dalam berbagai  produk  makanan  maupun  jamu  yang dianggap sebagai produk kesehatan (Nugraheni,
2019).  Perbedaan  keduanya  antara  lain  terletak pada komposisi struktur dinding selnya.
Pada  penelitian  ini,  bakteri  endofit hanya  memberikan  hasil  positif  penghambatan terhadap  bakteri  patogen  pada  kelompok  gram positif, S.  aureus .  Hal  yang  sama  dilaporkan pada penelitian lain di mana bakteri endofit dari tanaman  tapak  dara  ( Catharanthus  roseus L.) memiliki  aktivitas  penghambatan  lebih  tinggi terhadap  bakteri  gram  positif, S.  aureus , dibandingkan  dengan E.  coli (Oktavia  dan Pujiyanto, 2018). Selain itu, aktivitas antibakteri yang  dimiliki  senyawa  flavonoid  dari  tanaman ciplukan memberikan penghambatan yang lebih efektif  terhadap  bakteri  patogen S.  aureus dibandingkan E.  coli ,  dengan  menunjukkan aktivitas penghambatan tergolong  kuat terhadap S. aureus (Isniyetty, 2010). Aktivitas antibakteri senyawa  flavonoid  ciplukan  menghasilkan diameter  zona  hambat  sebesar  13  mm  terhadap S.  aureus (Isniyetty,  2010).  Oleh  karena  itu, dimungkinkan  bakteri  endofit  juga  memiliki aktivitas  antibakteri  yang  hampir  sama  dengan senyawa flavonoid dari tanaman ciplukan.
Ditinjau  dari  struktur  dinding  selnya, kelompok gram positif hanya memiliki 1 lapisan dinding  sel  yang  tersusun  dari  peptidoglikan saja. Lain halnya dengan kelompok gram negatif
di  mana  dinding  sel  terdiri  dari  2  lapisan,  yaitu lapisan  membran  luar  yang  tersusun  dari lipopolisakarida dan  lapisan  lain berupa peptidoglikan.  Beberapa  senyawa  antibakteri mempunyai  mode  aksi  berupa  penghambatan sintesis  lapisan  peptidoglikan,  menghambat sintesis  protein,  maupun  menghambat  lintasan metabolisme  (Allison and Lambert,  2014).
Meskipun  demikian,  mode  aksi  dari  senyawa yang  diekskresikan  oleh  bakteri  endofit  belum diketahui  dan  masih  perlu  dilakukan  penelitian lanjut.
Hasil positif pada pengujian antibakteri  ditandai  dengan  terbentuknya  zona bening  atau  zona  hambat  di  sekitar  kertas cakram  (gambar  1).  Zona  hambat  tersebut mengindikasikan bahwa bakteri endofit menghasilkan  senyawa aktif yang dapat menekan pertumbuhan bakteri patogen.
Diameter zona bening yang terbentuk bervariasi tergantung  pada  jenis  isolat  bakteri  endofit  dan bakteri patogennya.
Gambar  1. Visualisasi  pembentukan  zona  hambat terhadap S.  aureus .  a)  bakteri  endofit  kode  isolat AR21,  b)  kontrol  negatif,  c)  kontrol  positif.  Tanda panah menunjukkan zona hambat.
Kekuatan  daya  hambat  keempat  isolat bakteri  endofit  terhadap S.  aureus termasuk rendah,  karena  diameter  zona  hambat  kurang dari 5 mm. Hasil uji kontrol positif kloramfenikol memberikan zona hambat sebesar 30  mm.  Begitu  pula  kontrol  positif  terhadap E. coli juga memberikan zona hambat 22 mm. Hal ini  mengindikasikan  bahwa  kloramfenikol memiliki  zona  penghambatan  yang  sangat  kuat. Pembentukan  zona  hambat  pada  pengujian aktivitas  antibakteri  dapat  dipengaruhi  oleh beberapa  faktor  antara  lain  kandungan  senyawa antibakteri  dan  jenis  bakteri  patogen  (Isniyetty, 2010).
Isolat bakteri endofit tidak membentuk zona  hambat  terhadap  patogen  bukan  berarti tidak  memiliki  aktivitas  antibakteri.  Hal  ini kemungkinan dikarenakan isolat tersebut mempunyai kandungan senyawa aktif antibakteri  dalam  jumlah  yang  sangat  rendah, atau mungkin  juga  memiliki kandungan senyawa  potensial  lainnya  (Simarmata et  al. ,
2007).  Oleh  karena  itu,  eksplorasi  senyawa antibakteri tetap perlu dilakukan.
Zona  bening  yang  terbentuk  di  sekitar koloni  mengindikasikan  adanya  kemampuan aktivitas  antibakteri  yang  dimiliki  oleh  bakteri endofit dari akar tanaman ciplukan. Aktivitas ini
kemungkinan berupa kemampuan mensekresikan  senyawa  antibiotik  yang  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri  patogen E. coli maupun S.  aureus .  Meskipun  demikian, optimasi produksi senyawa bioaktif oleh bakteri endofit masih diperlukan untuk memaksimalkan aktivitasnya sebagai antibakteri.

## SIMPULAN DAN SARAN
Sebanyak  empat  isolat  bakteri  endofit dari tanaman ciplukan dengan kode isolat AR12, AR21,  AR31,  dan  AR33,  memberikan  hasil positif  yang  ditandai  dengan  terbentuknya  zona hambat  terhadap  bakteri S.  aureus .  Meskipun demikian, semua isolat bakteri endofit memberikan  hasil  uji  negatif,  atau  tidak terbentuk  zona  hambat  terhadap E.  coli .
Penelitian  lanjutan  perlu  dilakukan  untuk mengidentifikasi  spesies  isolat,  karakterisasi senyawa  yang  dihasilkan,  dan  optimalisasi aktivitas  antibakteri  dari  bakteri  endofit  yang diisolasi dari akar ciplukan.

## PERSANTUNAN
Kami  mengucapkan  terima  kasih kepada  LPPM  Universitas  ‘Aisyah  Yogyakarta, serta  Direktorat  Riset  dan  Pengabdian  kepada Masyarakat, Direktorat Jenderal Penguatan Riset dan Pengembangan Kementerian Riset,
Teknologi,  dan  Pendidikan  Tinggi  atas  Dana Riset Hibah Bersaing DIKTI Tahun 2018.

## DAFTAR PUSTAKA
Afzal,  I.  Shinwari,  Z.K.,  Sikandar,  S.  and
Shahzad,  S.  2019.  Plant  beneficial endophytic bacteria: Mechanisms, diversity, host range and genetic
determinants. Microbiol  Res .  221(April 2018). Pp: 36–49. doi: 10.1016/j.micres.2019.02.001.
Allison, D. G. and Lambert, P. A. 2014. Modes of  Action  of  Antibacterial  Agents , Molecular Medical Microbiology: Second Edition . Elsevier Ltd. doi: 10.1016/B978- 0-12-397169-2.00032-9.
Hardoim,  P.  R.,  van  Overbeek,  L.  S. and  Elsas,
J.  D.  van.  2008.  Properties  of  bacterial endophytes  and  their  proposed  role  .in plant  growth. Trends  Microbiol .  16(10). Pp: 463–471.
doi: 10.1016/j.tim.2008.07.008.
Isniyetty.  2010.  Isolasi  dan  Uji  Antibakteri Flavonoid  Dari  Daun  Ciplukan  (Physalis minima Linn. Eksakta . 2(11). Pp: 95–102.
Kandel,  S.,  Joubert,  P.  and  Doty,  S.  2017. Bacterial  Endophyte  Colonization  and
Distribution within Plants. Microorganisms .    5(4),  P:  77.  doi: 10.3390/microorganisms5040077.
Latifah,  N.,  Hidayati,  A.A.,  Yunas,  S.R.,  dan Sulistyorini,  E.  2014.  Ciplukan  (Physalis angulata  L.). Encyclopedia  of  Anticancer Plant. P: 193. Available at:
http://ccrc.farmasi.ugm.ac.id/en/?page_id =193.
Ludwig-Müller, J. 2015. Plants and endophytes:
equal  partners  in  secondary  metabolite production?. Biotech  Lett .  37(7).  Pp: 1325–1334.  doi:  10.1007/s10529-015- 1814-4.
Ma, Y. Rajkumar M, Zhang C, Freitas H. 2016. Beneficial role  of  bacterial  endophytes  in heavy  metal  phytoremediation. J  Environ Manag . Elsevier Ltd. 174. Pp: 14–25. doi: 10.1016/j.jenvman.2016.02.047.
Purwanto,  U.M.S.,  Pasaribu,  F,H.,  dan  Bintang M.  2014.  Isolasi  Bakteri  Endofit  dari Tanaman  Sirih  Hijau  (Piper  betle  L.)  dan Potensinya  sebagai  Penghasil  Senyawa Antibakteri. Curr. Biochem . 1(1). Pp: 45– 50. doi: 10.29244/51-57.
Miliute, I., Buzaite, O., Baniulis, D., and Stanys, V. 2015. Bacterial endophytes in agricultural  crops  and  their  role  in  stress tolerance:  a  review. Zemdirbyste .  102(4).
Pp: 465–478. doi: 10.13080/z-
a.2015.102.060.
Nugraheni,  I.  A.  2019.  Deteksi  Escherichia  coli
Dan  Salmonella  Pada  Jamu  Kunir  Asem Di Daerah Gamping, Sleman,
Yogyakarta. Journal  Health  of  Studies . 3(2). Pp: 40–50.
Oktavia,  N.  and  Pujiyanto,  S.  2018.  Isolasi  dan Uji  Antagonisme  Bakteri  Endofit  Tapak Dara  (  Catharanthus  Roseus  ,  L  .) terhadap  Bakteri  Escherichia  coli  dan Staphylococcus aureus. Berkala
Bioteknologi . 1(1). Pp: 6–12.
Simarmata,  R.,  Lekatompessy,  S.  and  Sukiman,
H.  2007.  Isolasi  mikroba  endofitik  dari tanaman  obat  sambung  nyawa  (Gynura procumbens)  dan  analisis  potensinya sebagai  antimikroba. Berk.  Penel.Hayati. 13(1). Pp: 85–90.