ejournal2.undip.ac.id/index.php/baf/index
Efek Antifertilitas Ekstrak Air dari Biji Carica papaya terhadap Keteraturan Siklus Estrus Mencit ( Mus musculus L.)
Anti-Fertility Effects Of Carica papaya Water Seed Extract on Mice ( Mus musculus ) Oestrous Cycle
Agung Janika Sitasiwi*,  Siti Muflikhatun Mardiati Departemen Biologi, Fakultas Sains dan Matematika, Universitas Diponegoro Jl. Prof. Soedarto, SH, Tembalang, Semarang
*Email : agssiwi@yahoo.co.id
Diterima 4 Juli 2016 / Disetujui 18 Agustus 2016

## ABSTRAK
Penellitian ini bertujuan untuk mengevaluasi  efek antifertilitas ekstrak air biji pepaya dalam  mempengaruhi keteraturan  siklus  estrus  mencit.  Mencit  strain  Swiss  Webster  betina  dara  digunakan  sebagai  hewan  uji. Hewan  uji  dibagi  dalam  5  kelompok  perlakuan,  yaitu  K(-),  bahan  perlakuan  berupa  akuades;  K(+),  bahan perlakuan sediaan pil kontrasepsi merk X dengan dosis ; P1, bahan perlakuan ekstrak air biji pepaya dengan dosis 1,4 mg/ekor/hari; P2, bahan perlakuan ekstrak air biji pepaya dengan dosis 3,5 mg/ekor/hari; P3, bahan perlakuan ekstrak air biji pepaya dengan dosis 1,4 mg/ekor/hari. Masing-masing kelompok perlakuan diulang 7 kali. Perlakuan diberikan selama 21 hari. Pengamatan siklus estrus dilakukan dengan membuat sediaan apus vagina  dengan  pewarnaan  Giemsa,  setiap  5  hari.  Persentase  keteraturan  siklus  estrus  ditentukan  dengan menghitung jumah hewan yang mengalami siklus estrus teratur dibandingkan jumlah seluruh hewan uji pada kelompok  perlakuan  yang  sama.  Efek  penghambatan  siklus  estrus  esktrak  air  dari  biji  pepaya  ditunjukkan pada  P2  dan  P3  yang  memiliki  keteraturan siklus  estrus  57.1  dan  42.8%.  Hasil  penelitian ini  membuktikan bahwa paparan esktrak air dari biji pepaya menunjukkan efek antifertilitas dengan mempengaruhi siklus estrus hewan uji.
Kata kunci : C. papaya, antifertilitas, siklus estrus

## ABTRACT
The aim of this experiment was to evaluate the effect of Carica papaya seeds water extract on mice oestrous cycle. Swiss Webster female mice ( Mus musculus L.) were used as animal  model. The animal model were divided into five treatment groups. K- group, control group were administered aquadest; K+ group, positive control group were administered contraceptive pills; P1 to P3 were administered orally with C. papaya seeds extract water at doses of 1.4, 3.5, 7 mg/animal/day, respectively. Each treatment group were repeated 7 times. Treatment was given during 21 days. The oestrous cycle determined by vaginal smears that were taken every 5  days  with  Giemsa  staining.  The  oestrous  cycle  percentage  was  calculated  by  comparing  the  sum  of  the animal  model  that  had an irregular  oestrous cycle to the sum  of  all  animal  models in the same  group. The disturbances effect of Carica papaya seeds water extract on oestrous cycle were showed on P2 and P3 group which had 57.1% and 42.8% respectivetly. This experiment showed that Carica papaya L. seeds water extract showed an antifertility effect by disturbing estrous cycle of mice.
Keywords : Carica papaya, antifertility, oestrous cycle

## PENDAHULUAN
Antifertilitas  merupakan  istilah  yang digunakan  untuk  senyawa  atau  bahan  yang  dapat mengganggu sistem reproduksi (Dabhadkhar et al ., 2015),  dengan  cara  menghambat  proses  pra- ovulasi  dan  atau  pra-implantasi  embrio  (Brewis and Combie, 1999). Joshi et al . (2011) menyatakan bahwa  paparan  senyawa  antifertilitas  dapat menyebabkan destruksi zigot, pencegahan ovulasi, fertilisasi atau implantasi.
Salah  satu  sumber  senyawa  antifertilitas adalah  senyawa  aktif  yang  terkandung  dalam tanaman.  Joshi et  al .  (2011)  menyatakan  bahwa senyawa  aktif  dalam  tumbuhan  secara  alami memiliki  sifat  estrogenik  yang  ringan  serta  sifat anti-estrogenik  yang  cukup  kuat  sehingga berpeluang  digunakan  sebagai  bahan  pengatur fertilitas.  Bala et  al .  (2014)  menyatakan  bahwa ekstrak  tanaman  obat  mengandung  senyawa  aktif yang  berperan  sebagai  antifertilitas  dengan  efek antiovulasi dan atau antiimplantasi sehingga dapat digunakan sebagai bahan kontrasepsi herbal.
Studi  fitokimia  telah  membuktikan C. papaya mengandung  alkaloid,  carpain,  nikotin, flavonol,  tanin,  dan  terpene  serta  enzim  seperti papain dan chymopapain (Adeneye and Olagunju, 2009).  Naggayi et  al .  (2015)  menyatakan  bahwa senyawa  yang  terkandung  dalam  ekstrak  air  biji pepaya  adalah  saponin,  tanin,  flavonol,  glikosida, terpeoid,  alkaloid,  pereduksi  gula,  asam  amino, lemak,  protein,  fenol,  vitamin,  sterol  dan triterpene.  Senyawa  golongan  saponin,  tanin, flavonoid,  terpenoid,  alkaloid,  sterol  serta triterpene dapat menekan tingkat fertilitas  dengan cara  mengganggufungsi  ovarium,  uterus  atau vagina (Setyowati dkk., 2015).
Raji et  al .  (2005)  menyatakan  bahwa semua  bagian  buah C.  papaya (epicarpium, endocarpium  serta  biji)  memiliki  kemampuan antifertilitas.  Efek antifertilitas biji pepaya diduga bekerja  dengan  cara  mempengaruhi  sekresi hormon reproduksi (Raji et al ., 2005; Udoh et al ., 2005). Khrisna (2008) menyatakan bahawa esktrak biji  pepaya  bersfat  anti-zigotik,  anti-implantation, abortifacient  awal  atau  aktivitas  antifertilitas.
Penelitian Siburian dkk. (2008) membuktikan sifat antifertilitas biji pepaya mempengaruhi reproduksi tikus  Wistar.  Walansendow et  al .  (2016) menyatakan bahwa pemberian ekstrak biji pepaya pada tikus Wistar menurunkan kualitas spermatozoa sehingga menurunkan rasio kebuntingan.
Salah  satu  proses  reproduksi  yang  dapat diamati  dengan  mudah  akibat  paparan  senyawa antifertilitas pada hewan betina adalah keteraturan siklus  estrus  hewan  uji.  Ganong  (2003) menyatakan  bahwa  siklus  estrus  merupakan ekspresi  perubahan  fluktuasi  hormon  reproduksi dalam tubuh hewan. Schatten dan Constantinenchu (2007) menyatakan bahwa siklus estrus merupakan suatu  fase  reproduksi  pada  hewan  betina  non primata  yang  terjadi  secara  berulang,  ditandai dengan  perubahan  fisiologi  dan  tingkah  laku. Siklus estrus pada rodensia berlangsung 4 sampai 5  hari,  terdiri  dari  4  fase,  yaitu  proestrus,  estrus, metestrus  dan  diestrus.  Penentuan  fase  penyusun siklus  estrus  dapat  dilakukan  dengan  membuat apus  vagina/ vaginal  smears / vaginal  swap secara berkal (Bertholin and Murph, 2014).
Kokote et  al .  (2008)  menyatakan  bahwa efek  paparan  senyawa  antifertilitas  dapat dievaluasi  pada  proses  reproduksi,  yaitu  dalam proses  pembentukan  gamet,  regulasi  sintesis  atau sekresi hormon reproduksi pada organ reproduksi, proses  pertemuan  gamet  jantan  dan  betina (fertilisasi)  serta  perkembangan  awal  individu baru.  Pengujian  senyawa  antifertilitas  dapat dilakukan  dengan  menggunakan  beberapa  hewan coba,  diantaranya  mencit  ( Mus  musculus L.). Bertholin  and  Murph  (2014)  menyatakan  bahwa mencit ( M. musculus L.) memiliki laju reproduksi yang  cukup  tinggi  serta  mudah  dalam pemeliharaan  sehingga  tepat  digunakan  sebagai hewan coba dalam penelitian reproduksi.
Berlatar  belakang  masalah  di  atas, dilakukan  penelitian  untuk  mengevaluasi  paparan kronis senyawa antifertilitas dalam ekstrak air biji pepaya  dalam  mempengaruhi  keteraturan  siklus estrus  mencit.  Hasil  penelitian  diharapkan  dapat digunakan sebagai bahan rujukan dalam
penggunaan  esktrak  biji  pepaya  sebagai  bahan antifertilitas untuk meregulasi reproduksi mamalia.

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini dilakukan dengan Rancangan  Acak  Lengkap,  dengan  5  perlakuan dan  7  ulangan.  Paparan  hewan  uji  diberikan selama  21  hari.  Kelompok  perlakuan  terdiri  dari Kontrol  Negatif  (K-)  berupa  perlakuan  dengan pelarut bahan uji (air), Kontrol Positif (K+) berupa perlakuan  dengan  sediaan  kontrasepsi sintetis  (pil  kontrasepsi  merk  “X”),  P1  adalah kelompok  perlakuan  dengan  dosis  bahan  uji  1.4 mg/ekor/hari,  P2  yaitu  kelompok  perlakuan dengan  dosis  bahan  uji  3,5  mg/ekor/hari,  dan  P3 yaitu kelompok perlakuan dengan  dosis  bahan uji konsentrasi 7 mg/KgBB/hari.
Hewan  uji  yang  digunakan  adalah  mencit galur  Swiss  Webster,  jantan  dan  betina  dara berumur  2.5–3  bulan  dengan  rataan  bobot  badan 25-30  gram,  tanpa  cacat  anatomis,  diperoleh  dari Laboratorium  Pemeliharaan  Hewan  Jurusan Biologi  FMIPA  Universitas  Negeri  Semarang. Hewan  uji  dipelihara  dalam  dipelihara  dengan kepadatan  3  ekor  hewan  per  kandang,  setelah diaklimasikan  dalam  kondisi  laboratorium  selama 1 minggu.
Pemberian  pakan  dan  minum  dilakukan secara ad  libitum .  Pakan  yang  diberikan  adalah pakan  standard  dengan  kode  594.  Pemeliharaan dilakukan  sesuai  metode  Sitasiwi  dan  Djaelani (2011).  Mencit  betina  dewasa  yang  terpilih  untuk digunakan adalah yang memiliki siklus estrus tetap selama  minimal  3  siklus  (Nivsarkar et  al .,  2001; Hayashi et al ., 2009; Sitasiwi dan Djaelani, 2011).

## Persiapan Bahan Uji
Bahan  uji  yang  diberikan  adalah  serbuk biji  pepaya.  Serbuk  biji  pepaya  diperoleh  dari beberapa  pohon  pepaya  dengan  jenis  yang  sama, ditanam  di  daerah  Gedawang,  Banyumanik Semarang.  Ekstrak  biji C.  papaya yang  diperoleh dengan  cara  mencuci  biji  pepaya  dengan  air mengalir,  kemudian  dikeringkan  menggunakan oven  pada  suhu  40 o C  selama  10  hari.  Biji C.
papaya yang  telah  kering,  dibuat  tepung  dengan cara  dihancurkan  dengan  blender,  kemudian diayak. Tepung biji C. papaya disiapakan sebagai bahan  uji  sesuai  dengan  dosis  yang  diberikan, dilarutkan  dengan  cara  melarutkan  tepung  biji pepaya  menggunakan  air  mendidih.  Pemberian bahan  uji  dilakukan  saat  air  seduhan  biji  pepaya telah mencapai suhu ruang.
Kelompok perlakuan kontrol positif diberi sediaan kontrasepsi sintetis berupa pil kontrasepsi merk  “X”  (mengandung ethinylestradiol 0.03  mg dan levonorgestrel 0.15  mg),  dengan  dosis  harian sesuai  dosis  harian  pada  manusia.  Pil  KB dihancurkan  menggunakan  grinder  dan  dilarutkan menggunakan air hangat.

## Perlakuan dan Pengambilan Data
Pemberian  bahan  perlakuan  diberikan secara  oral  menggunakan  jarum  “ gavage ” dengan volume  0,5  mL/hewan  uji,  pada  sore  hari  (15.00- 16.00  WIB),  selama  21  hari  berturut-turut. Pengamatan  siklus  estrus  dilakukan  dengan  cara apus vagina dengan pewarnaan Giemsa 5%, sesuai metode  Nivsarkar et  al .  (2001),  Hayashi et  al . (2009),  Sitasiwi  dan  Djaelani  (2011).  Keteraturan siklus  estrus  hewan  uji  ditentukan  dengan mengamati  fase  penyusun  siklus  estrus  setiap  5 hari sekali, selama perlakuan berlangsung. Hewan uji yang menunjukkan minimal tiga fase penyusun siklus  estrus  yang  sama  secara  berturut-turut selama  lima  kali  pengamatan,  maka  hewan  uji tersebut  dianggap  mengalami  siklus  estrus  yang teratur.  Siklus  estrus  hewan  uji  dikatakan  tidak teratur apabila hewan uji menunjukkan fase estrus yang  berbeda  selama  lima  kali  pengamatan. Penentuan  persentase  keteraturan  siklus  estrus hewan  uji  selama  paparan  dilakukan  dengan menghitung  jumlah  hewan  uji  yang  mengalami siklus  estrus  teratur  dibandingkan  total  jumlah hewan uji pada kelompok perlakuan yang sama.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian mengenai senyawa antifertilitas ekstrak C.  papaya sampai  saat  ini  masih terkonsentrasi  pada  hewan  jantan  (Raji et  al .,
2005).  Penelitian  ini  dilakukan  dengan  tujuan mengevaluasi  efek  paparan  senyawa  antifertilitas dalam ekstrak air biji pepaya terhadap keteraturan siklus  estrus.  Penentuan  siklus  estrus  pada penelitian  ini  dilakukan  dengan  menggunakan apus vagina/ vaginal smear , sesuai metode Hayashi et al . (2009) disajikan pada Gambar 1. Hasil apus vagina  dengan  sel-sel  yang  memiliki  morfologi yang  berbeda,  yaitu  sel  yang  berinti  (A)  dan  sel yang  telah  mengalami  kornifikasi  berbentuk lempeng tanpa inti (B).
Siklus  estrus  merupakan  siklus  yang terutama diregulasi oleh hormon estrogen. Hormon estrogen  mempengaruhi  struktur  histologi  lapisan
epitel penyusun dinding vagina, sehingga sel epitel vagina  mengalami perubahan selama siklus estrus (Schatten dan Constantinenchu, 2007). Hayashi et al .  (2009)  menyatakan  bahwa  hasil  apus  vagina pada  fase  proestrus  sel  epitel  masih  berbentuk bulat.  Fase  estrus  memperlihatkan  sel-sel  epitel yang  sudah  mengalami  kornifikasi,  tanpa  inti  dan dengan  pewarnaan  Giemsa  berwarna  biru  pucat. Hewan  coba  yang  berada  pada  fase  metestrus ditandai  dengan  epitel  kornifikasi  dengan  jumlah yang  sedikit  dengan  jumlah  leukosit  yang  cukup tinggi. Hasil apus vagina hewan coba yang berada pada  fase  diestrus  menunjukkan  sel-sel  yang berbentuk kolumnar dengan inti sel yang jelas.
Gambar 1. Hasil Apus Vagina Mencit
Keterangan :
A. Epitel berinti
B. Epitel kornifikasi
Siklus estrus pada hewan dipengaruhi oleh faktor  intrinsik  dan  esktrinsik.  Faktor  intrinsik utama  yang  mempengaruhi  siklus  estrus  adalah umur  dan  genetik  (Schatten  and  Constantinescu, 2007).  Faktor  ekstrinsik  diantaranya  adalah fotoperiodisme,  suhu  dan  suplai  makanan. Penelitian  ini  dilakukan  dengan  menggunakan hewan  uji  berupa  mencit  ( M.  musculus L.)  strain Swiss  Webster  dengan  umur  yang  seragam  yaitu 2,5 bulan. Hal tersebut menunjukkan bahwa faktor intrinsik,  berupa  umur  dan  genetik,  tidak
mempengaruhi  hasil  penelitian  ini.  Pemeliharan hewan  uji  dalam  penelitian  ini  dilakukan  dalam kondisi  laboratorium  yang  terkontrol,  sehingga dapat  dipastikan  hasil  ini  disebabkan  oleh perlakuan  bahan  uji  yang  diberikan,  yaitu  esktrak air dari biji pepaya.
Hasil  penghitungan  persentase  hewan  uji yang  mengalami  siklus  estrus  selama  penelitian disajikan pada Gambar 2. Gambar 2 menunjukkan bahwa  paparan  senyawa  antifertilitas  dalam  biji pepaya  terbukti  mempengaruhi  keteraturan  siklus
estrus. Hal tersebut ditunjukkan dengan persentase hewan  uji  yang  mengalami  gangguan  keteraturan siklus estrus meningkat seiring dengan peningkatan  dosis  paparan  senyawa  antifertilitas dalam bahan uji. Persentase hewan uji yang diberi paparan  senyawa  antifertilitas  dengan  dosis  P1 menunjukkan keteraturan siklus estrus yang relatif sama dengan K- dan kelompok kontrol positif K+, yaitu  berkisar  83%.  Hal  tersebut  dapat  diartikan hewan uji yang memiliki siklus estrus tidak teratur berkisar 15-17% dari keseluruhan hewan uji.
Hewan uji pada kelompok kontrol negatif (K-)  hanya  mendapatkan  paparan  akuades
sehingga jumlah hewan uji yang mengalami siklus estrus  teratur  menunjukkan  rerata  83,3  %. Bertholin  dan  Murph  (2014)  menyatakan  bahwa siklus  estrus  mencit  dalam  populasi  yang dipelihara dalam kondisi laboratorium menunjukkan keteraturan yang cukup tinggi, yaitu >80%. Hasil penelitian pada kelompok K+ dan P1 juga  menunjukkan  rerata  keteraturan  siklus  estrus diatas  80%.  Hal  tersebut  menggambarkan  bahwa perlakuan  dengan  akuades,  pil  kontrasepsi  serta ekstrak  air  biji  pepaya  dengan  dosis  1,4 mg/ekor/hari  memiliki  potensi  yang  sama  dalam mempengaruhi siklus estrus hewan uji.
Gambar 2.  Efek paparan esktrak air biji pepaya ( C. papaya ) terhadap keteraturan siklus estrus dan frekuensi kebuntingan mencit ( M. Musculus )
Pil  konrasepsi  yang  diberikan  dalam hewan  uji  kelompok  K+  mengandung ethynil estradiol dan levonorgestrel .  Ganong  (2003) menyatakan  bahwa ethynil  estradiol merupakan estrogen sintetik yang memiliki potensi yang sama dengan  estrogen.  Hormon  ini  relatif  aktif  jika diberikan  per  oral  karena  resistan  terhadap metabolisme  hepatik.  Aktivitas  alami  hormon  ini relatif  rendah  dalam  tubuh  ketika  diberikan  lewat jalur  digesti  karena  vena  porta    intestinum  akan membawa  ke  hepar,  dimana  hormon  tersebut diinaktivasi sebelum  masuk sistem sirkulasi. Efek selektif  estrogen  sintetis  ditentukan  oleh selective estrogen  receptor  modification (SERMs)  dan
berkaitan  dengan  perbedaan  cara  kompleks reseptor-ligan  untuk  berikatan  pada  DNA. Levonorgestrel merupakan  progesteron  sintetik, memiliki  efektivitas  yang  tinggi  dan  dapat diteloransi  dengan  baik  oleh  tubuh.  Hewan  uji yang  menunjukkan  hasil  keteraturan  siklus  estrus yang relatif sama dengan kelompok kontrol negatif (K-)  dan  P1  diduga  disebabkan  oleh  paparan dengan  dosis  tersebut  belum  mempengaruhi regulasi sistem hormon reproduksi dalam tubuh.
Hasil penelitian juga menunjukkan bahwa semakin  tinggi  dosis  bahan  uji  yang  diberikan semakin  menurunkan  jumlah  hewan  yang mengalami  siklus  estrus  teratur.  Hewan  uji  pada
83.30% 83.30% 85.60% 57.10% 42.80% 0.00% 10.00% 20.00% 30.00% 40.00% 50.00% 60.00% 70.00% 80.00% 90.00% K(-) K(+) P1 P2
P3
kelompok  kontrol  memiliki  siklus  estrus  yang lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  hewan  uji  pada kelompok  perlakuan  dengan  paparan  bahan  yang mengandung  senyawa  antifertilitas.  Hewan  uji pada  kelompok  perlakuan  P1  menunjukkan keteraturan siklus estrus yang relatif sama dengan K- dan K+. Hewan uji kelompok perlakuan P2 dan P3  menunjukkan  keteraturan  siklus  estrus  yang rendah, yaitu 57,1 % (P2) dan 42,8 % (P3).
Mekanisme  gangguan  siklus  estrus  yang terjadi karena paparan esktrak air biji pepaya dapat terjadi melalui beberapa cara. Cara pertama adalah gangguan  pada  sekresi  hormon  reproduksi.  Udoh (2005)  menyatakan  bahwa  bahan  antifertilitas triterpenoid  dan  saponin  bekerja  pada  aksis hipotalamus-hipofisis-gonad, sehingga mempengaruhi  sekresi  hormone  gonadotropin.  . Francis et  al .  (2002)  menyatakan  bahwa  saponin secara  langsung  menghambat  kerja  gen  yang berperan  dalamsteroidogenesis  dan  menekan perkembangan sel dalam ovarium yang diatur oleh FSH. Raji et al . (2005) menyatakan ekstrak air biji pepaya  memiliki  kemampuan  antifertilitas dengan cara  mempengaruhi  sekresi  hormon  estrogen sehingga  menyebabkan  gangguan  siklus  estrus pada tikus Wistar.
Mekanisme  gangguan  siklus  estrus  yang kedua  adalah  sifat  sitotoksik  dan  sitostatik senyawa  yang  terdapat  dalam  esktrak  air  biji pepaya. Setyowati dkk. (2015) menyatakan bahwa tanin merupakan senyawa yang bersifat sitotoksik. Efek  sitotoksik  dapat  terjadi  pada  ovarium sehingga  mempengaruhi  pembelahan  sel  dalam proses oogenesis atau terjadi pada  uterus sehingga proses perkembangan awal embrio terganggu.

## SIMPULAN
Hasil  penelitian  membuktikan  bahwa senyawa antiferilitas dalam esktrak air biji pepaya ( C.  papaya L.)  mampu  mempengaruhi  siklus estrus Mus musculus L. sehingga dapat digunakan sebagai  salah  satu  bahan  untuk  meregulasi reproduksi mamalia.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis mengucapkan terima kasih kepada Dekan Fakultas Sains dan Matematika Universitas Diponegoro yang telah memberi biaya pelaksanaan  penelitian  melalui  dana  DIPA Fakultas  Sain  dan  Matematika  Universitas Diponegoro  sesuai  dengan  Perjanjian  Tugas Pelaksanaan Penelitian Para Dosen di Departemen Biologi Fakultas Sain dan Matematika Universitas Diponegoro No.1110Ep/UN.7.3.8/PG/2016 Tanggal 1 Maret 2016.

## DAFTAR PUSTAKA
Adeneye,  A.A.  and  J.A.  Olagunju,  2009.
Preliminary Hypoglycemic and
Hypolypidemic  Activities  of  the  Aqueous Seeds  Extract  of Carica  papaya Linn,  in Wistar Rat. Biology and Medicine 1(1): 1- 10.
Bala,  K.,  M.  Arya,  D.P.  Katare,  2014.  Herbal Contraceptive:  An  Overview. World Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Science. 3(8): 1309-1326.
Bertholin  and  Murph,  2014.  Reproductive  Tract Changes during the Mouse Estrous Cycle. Academic  Press,http://bit.ly/1v3LeqB. Thu,
07/03/2014 - 4:24pm.
Brewis, A.A., and R.C. Combie, 1999. Antifertility Plant  of  The  Pacific.  CSIRO  Publisher. Australia.
Dabhadkhar, D.K., V.G. Thakare, V.S. Zade, A.P. Charjan,  M.M.  Dhore,  S.M.  Deosthale, 2015.  Review  on  Some  Ethnobotanical Plants  Having  Antifertility  Activity  in Female Albino Rats. Int. Res. J. of Science and Engineering . 3(2): 43-46.
Francis,  G.,  Z.  Kerem,  H.P.S.  Makkar  and  K.
Becker,  2002.  The  biological  action  of saponins  in  anymal  system:  Review. British Journal of Nutrition. 88: 587-605.
Ganong,  W.F.,  2003.  Review  of  Medical Physiology.  International  Ed.  Boston.  Pp. 443- 446.
Hardy, C.M., G. Clysdale, dan K.J. Mobbs., 2004. Development  of  the  Mouse-Specific Contaceptive Vaccines: Infertility in Mice Imunized  with  Peptide  and  Polyepitope Antigens. Reprod . 128: 395-407.
Hayashi,  K.,  D.W.  Erikson,  S.A.  Tilford,  B.M. Bany,  J.A.  Maclean,E.B.  Rucker,  G.A. Johnson,  and  T.E.  Spencer,  2009. Wnt Genes  in  the  Mouse  Uterus:  Potential Regulation  of  Implantation. Biol.Reprod .
88:989–1000.
Joshi,  M.,  K.  Gaonkar,  S.  Mangoankar,  and  S.
Satarkar, 2011. Pharmacological
Investigation  of Areca  catechu Extracts for  Evaluation  of  Learning,  Memory,  and Behaviour  in  rats. International  Current
Pharmaceutical Journal . 1(6): 128-132.
Khrisna, K.L., M. Paridhavi, and J.A. Patel, 2008. Review  on  Nutritional,  Medicinal,  and Pharmacological  Properties  of  Papaya ( Carica  papaya L.). Natural  Product Radiance . 7(4): 364-73.
Kokote,  C.K.,  A.P.  Purohit,  S.B.  Gokhale,  2008.
Pharmacognosy. 42 th Edition.Nirali
Prakashan. Pp. 37-39.
Naggayi,  Madinah,  M.  Nozmo,  I.  Ezekiel,  2015. The Protective Effects of Aqueous Extract on Carica  papaya seeds  in  Paracetamol Induced  Nephrotoxicity  in  Male  Wistar Rats. African  Health  Sciences .  Vol.  15 Issue 2.
Nivsarkar, M., A. Sethi, C. Bapu, M. Patel, and H. Padh,  2001.  Involvement  of  endometrial; membrane sulphydryl groups in blastocyst implantation:  sulphydryl  groups  as  a potential target for contraceptive research. Contraception. 64:255–259
Raji,  Y.,  A.O.  Morakinyo,  A.K.  Oloyo,
O.S.Akinsomisoye, Olufadekemi, T.
Kunle-Alabi,  P.R.C.  Esegbue-Peters,  F.O Awobajo, 2005. Impact of the Chloroform
Extract  of Carica  papaya Seed  on Oestrous  cycle  and  Fertility  in  Female Albino Rats. J.Med. Sci . 5(4): 337-343.
Schatten,  H.  and  G.M.  Constantinescu,  2007. Comparative  Reproductive  Biology.  First Edition. Blackwell Publishing. Iowa.
Setyowati,  E.  A.  W.,  A.D.  R.  Sri,  Ashadi,  M.
Bakti, H. Arif, 2015. Aktivitas
antifertilitas  kontrasepsi  kulit  durian (Durio  zibethinus  Murr.)  varietas  Petruk. PS  Pendidikan  Kimia.  Jurusan  PMIPA FKIP UNS. Surakarta.
Siburian, J., J.Marlina,  A.  Johari,  2008.  Pengaruh Ekstrak  Bii  Pepaya  ( Carica  papaya L.) pada  Tahap  Prakopulasi  Terhadap  Fungsi Reproduksi  Mencit  (Mus  musculus L.)Swiss Webster Betina. Laporan
Penelitian.PS  Pendidikan  Biologi  Jurusan Pendidikan MPA FKIP Universitas Jambi.
Sitasiwi, A.J. dan M.A. Djaelani, 2011. Studi awal upaya eksplorasi agensia imunokontrasepsi  untuk  regulasi  fertilitas hewan  liar:  Profil  protein  selama  proses implantasi  embrio  mencit  ( Mus  musculus L.) BALB/c. BIOMA.13(1): 39 – 45.
Udoh,  P.,  I.  Essien,  F.  Udoh,  2005.  Effects  of Carica papaya (paw paw) seeds extract on the  morphology  of  pituitary–gonadal  axis of  male  Wistar  rats.  Phytotherapy Research. 19(12):1065–1068.
Walansendow,  R.,  M.R.  Janette,  dan  T.  Lydia, 2016.  Pengaruh  Pemberian  Ekstrak  Biji Pepaya  ( Carica  papaya L.)  terhadap Kualitas  Sperma  Tikus  Wistar  ( Rattus norvegicus ).  Jurnal  e-Biomedik  (eBm). 4(1): 1-4.