Pengaruh gel ekstrak daun kerehau ( Callicarpa longifolia Lam.) terhadap penyembuhan luka pada model tikus diabetes
Sansan Candra 1 , Elis Susilawati 1 , I Ketut Adnyana 2
1 Sekolah Tinggi Farmasi Bandung, Jl Soekarno Hatta No. 754 Cibiru, Bandung
2 Sekolah Farmasi, ITB, Jl. Ganesha No. 10 Bandung Corresponding author email: sancandra3@gmail.com

## Abstrak
Luka  diabetes  adalah  infeksi,  luka  dan  destruksi  pada  penderita  diabetes  melitus.  Daun kerehau secara empiris digunakan oleh suku Dayak Tunjung sebagai obat luka dan bengkak. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh  gel  ekstrak  daun  kerehau  terhadap penyembuhan  luka  pada  model  tikus  diabetes.  Induksi  diabetes  dilakukan  menggunakan aloksan dosis 75 mg/kg BB intravena. Model hewan diabetes dibuat luka dengan kedalaman 0,3  cm  menggunakan  scalpel  steril  pada  bagian  punggung.  Hewan  uji  dibagi  menjadi  lima kelompok  dan  mendapatkan  sediaan  basis  gel,  Prontosan ® gel,  sediaan  gel  ekstrak  daun kerehau konsentrasi 2,5%, 5%, dan 10%. Pengolesan gel dilakukan dua kali sehari selama 13 hari. Parameter penyembuhan luka dilakukan dengan mengukur panjang luka dan dinyatakan dengan  persentase  penyembuhan  luka.  Hasil  pengujian  menunjukkan  bahwa  dengan pemberian gel ekstrak daun kerehau dapat mempercepat penyembuhan luka pada model tikus diabetes  dimana  sediaan  gel  ekstrak  daun  kerehau  konsentrasi  2,5%  memberikan kesembuhan  pada  hari  ke-13,  sediaan  gel  konsentrasi  5%  pada  hari  ke-12,  dan  sediaan  gel konsentrasi 10% pada hari ke-9. Hasil juga menunjukkan rata-rata persentase penyembuhan luka  pada  kelompok  konsentrasi  10%  lebih  tinggi  dibandingkan  konsentrasi  2,5%  dan  5%. Dapat  disimpulkan  bahwa  pemberian  gel  ekstrak  daun  kerehau  dapat  menyembuhkan  luka pada model tikus diabetes.
Kata kunci: Luka diabetes, daun kerehau, penyembuhan luka
Effect of Kerehau Leaves Extract Gel to Wound Healing Process in Diabet Rats Model

## Abstract
Diabetic  wounds  are  infection,  injury  and  destruction  in  people  with  diabetes  mellitus. Kauhau  leaves  are  empirically  used  by  the  Tunjung  Dayak  tribe  as  a  medicine  for  wounds and swelling. The aim of this study was to determine the effect of Kerehau leaf extract gel on wound healing in diabetic mouse models. Induction of diabetes is done using alloxan dose of 75  mg  /  kg  BW  intravenously.  The  diabetic  animal  model  was  made  with  a  0.3  cm  depth wound using a sterile scalpel on the back. The test animals were divided into five groups and obtained  base  gel  preparations,  Prontosan®  gel,  preparations  of  Kerehau  leaf  extract  gel concentrations  of  2.5%,  5%,  and  10%.  Gel  application  is  done  twice  a  day  for  13  days. Wound  healing  parameters  were  performed  by  measuring  the  length  of  the  wound  and expressed by the percentage of wound healing. The test results showed that administration of Kerehau leaf extract gel could accelerate wound healing in diabetic mouse models where the preparations  of  Kerehau  leaf  extract  gel  with  a  concentration  of  2.5%  gave  healing  on  the 13th day, preparations for 5% gel on 12th day, and preparations gel concentration of 10% on  day  9.  The  results  also  showed  that  the  average  percentage  of  wound  healing  in  the concentration  group  was  10%  higher  than  the  concentration  of  2.5%  and  5%.  It  can  be
concluded that administration of Kerehau leaf extract gel can heal wounds in diabetic mouse models.
Keywords :   Diabetic ulcer, kerehau leaf, wound healing

## Pendahuluan
Diabetes  melitus  (DM)  merupakan  suatu kelompok penyakit metabolik dengan karakteristik  hiperglikemia  yang  terjadi karena kelainan sekresi insulin, kerja insulin atau  kedua-duanya  (ADA,  2017).  Prevalensi DM di dunia pada tahun 2014 adalah sekitar 387 juta, dan diperkirakan akan menjadi 592 juta  pada  tahun  2035.  Di  Indonesia  juga diprediksi adanya kenaikan jumlah penyandang  DM  dari  9,1  juta  pada  tahun 2014  menjadi  14,1  juta  pada  tahun  2035 (IDF, 2015).
Diabetes  melitus  disebut the  silent  killer karena  dapat  menyerang  semua  organ  tubuh dan  menimbulkan  komplikasi.  Komplikasi pada penderita DM terjadi apabila mengalami hiperglikemi dalam jangka waktu lama.  Salah  satu  keluhan  yang  terjadi  pada pasien  DM  ialah  timbul  luka  yang  sulit disembuhkan  yang  disebut  dengan  ulkus diabetik.  Sekitar  15%  dari  keseluruhan jumlah  penderita  diabetes  di  Indonesia mengalami ulkus diabetik yang menyebabkan  23,5%  dari  seluruh  penderita ulkus diabetik mengalami amputasi (Santosa dan Nikmah, 2014).
Ulkus  diabetik  merupakan  salah  satu komplikasi  diabetes  yang  berasal  dari komplikasi neuropati dan/atau penyakit arteri perifer (ADA, 2017). Sekitar 20-40% pasien diabetes  menderita  neuropati  diabetes  dan hampir  50%  berkembang  menjadi  penyakit pembuluh  darah  perifer  yang  berujung  pada amputasi  (Jan  dkk . ,  2016).  Biaya  yang diperlukan  untuk  pengobatan  ulkus  diabetik diperkirakan  sekitar  3.096-107.900  dolar Amerika.  Besar  biaya  yang  diperlukan tergantung  pada  tingkat  keparahan  ulkus (Hunt dkk . , 2011).
Saat  ini  penggunaan  tumbuhan  sebagai obat  diminati  masyarakat  karena  efek samping yang rendah dibanding penggunaan obat kimia dan merupakan alternatif menurunkan  tingginya  biaya  pengobatan.
Salah  satu  tumbuhan  yang  biasa  digunakan sebagai  obat  luka  dan  bengkak  oleh  suku Dayak  Tunjung  adalah  kerehau  ( Callicarpa longifolia Lam.).  Secara  empiris,  daun kerehau  memiliki  khasiat  sebagai  obat masuk angin, malaria, ulkus, diare, pengobatan  setelah  persalinan,  dan  demam. Sebagai  obat  bengkak,  daun  ditumbuk  dan ditempelkan pada bengkak kemudian dibalut dan  ditutup  kain  penutup.(Semiawan  dkk., 2015).
Penelitian gel ekstrak etanol daun kerehau terhadap  penyembuhan  luka  pada  punggung kelinci terbukti berefek. Ekstrak etanol daun kerehau  juga  diketahui  memiliki  aktivitas antiinflamasi (Semiawan et  al. , 2015). Daun kerehau mengandung flavonoid, tanin, saponin, dan terpenoid (Supomo dkk . , 2016). Metabolit  sekunder  seperti  flavonoid,  tanin, saponin, dan triterpenoid/steroid dapat digunakan  untuk  mempercepat  penutupan luka pada mencit model diabet (Malini dkk . , 2017).
Penggunaan  daun  kerehau  untuk  luka pada  diabetes  dapat  diformulasikan  dengan tujuan mempermudah dalam penggunaannya salah  satunya  dalam  bentuk  sediaan  gel. Bentuk sediaan gel dipilih karena mempunyai  beberapa  keunggulan  dibanding jenis  sediaan  topikal  lain,  yaitu  memiliki kemampuan  pelepasan  obat  yang  baik, mudah  dibersihkan  dengan  air,  memberikan efek dingin akibat penguapan lambat di kulit, mempunyai  kemampuan  penyebaran  yang baik  di  kulit  serta  tidak  memiliki  hambatan fungsi  rambut secara fisiologis.  Berdasarkan latar  belakang  tersebut,  maka  dilakukan penelitian  mengenai  pengaruh  gel  ekstrak daun  kerehau  ( C.  longifolia Lam.)  terhadap penyembuhan  luka  pada  model  tikus diabetes.
Metode Alat. Kandang tikus, tempat minum tikus, timbangan  analitik,  blender,  alat-alat  gelas ( pyrex), rotary  vaporator ,  baki  plastik, wadah  gel,  wadah  kaca,  batang  pengaduk, pipet  tetes,  spatel, spuit  injeksi,  glukometer Easy  Touch ,  lanset,  alat  pencukur  bulu, scalpel steril, dan jangka sorong.
Bahan. Daun kerehau, alkohol 96%, strip pengukur  gula darah, aquades,  amonia 25%, kloroform,  HCl,  pereaksi Meyer ,  pereaksi Dragendroff ,  serbuk  Mg,  amil  alkohol, FeCl31%, gelatin, eter, asam asetat anhidrat, asam  sulfat,  kertas  saring,  kertas  label, karbopol,  TEA,  propilenglikol,  gliserin, DMDM  Hydantoin,  n-heksan,  makanan tikus,  tisu, cotton  bud ,  kasa  steril,  alkohol 70%, kapas, aloksan, lidokain 2% injeksi dan Prontosan ® gel.
Hewan  Uji. Hewan  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  tikus  Wistar jantan  dengan  bobot  180-250  gram  berumur 2-3  bulan,  sehat  dan  memiliki  aktivitas normal yang diperoleh dari Fakultas
Peternakan,
Universitas
Padjajaran.
Penelitian  ini  telah  mendapatkan  keterangan lolos kaji etik ( ethical approval ) dari Komisi Etik Penelitian Universitas Padjajaran Bandung dengan nomor 148/UN6.KEP/EC/2018.
Prosedur Penelitian Pengambilan  Simplisia. Simplisia  yang digunakan  untuk  penelitian  ini  adalah  daun kerehau  yang  diperoleh  dari  daerah  Muara Muntai,  Kabupaten  Kutai  Kartanegera, Kalimantan Timur. Determinasi dilakukan di Laboratorium  Anatomi  dan  Sistematika FMIPA Universitas Mulawarman Samarinda
Pembuatan  Ekstrak  Daun  Kerehau. Pembuatan  ekstrak  dilakukan  dengan  cara maserasi menggunakan etanol 96%. Simplisia dimasukkan ke dalam wadah kaca, setelah  itu  ditambahkan  etanol  96%  dengan perbandingan  1:10  dan  direndam  selama  24 jam.  Setelah  itu  filtrat  dikumpulkan  dan dipekatkan  menggunakan rotary  vaporator hingga diperoleh ekstrak kental.
Purifikasi  Ekstrak. Ekstrak  kental  daun kerehau  ditimbang  kemudian  dilarutkan dengan  air  panas  perbandingan  1:10  dan
disaring panas-panas. Klorofil akan menggumpal  dan  ekstrak  air  ditampung selanjutnya dipekatkan di penangas air.
Pembuatan Gel
Ekstrak Daun Kerehau. Pembuatan  gel  diawali  dengan mencampurkan  karbopol  dalam  aquades hingga  homogen.  Setelah  itu  ditambahkan propilenglikol,  gliserin  dan  trietanolamin (TEA) hingga terbentuk gel yang mengembang dan jernih. Kemudian campuran  tersebut  ditambahkan  DMDM Hydantoin.  Setelah  terbentuk  gel  kemudian ditambahkan  ekstrak  daun  kerehau,  diaduk hingga  homogen.  Setelah  itu  gel  disimpan dalam  wadah  tertutup.  Formula  gel  ekstrak daun  kerehau  disajikan  pada  Tabel  1 (Dewantari dan Nining, 2015).

## Tabel 1. Formula Gel Ekstrak Daun Kerehau
Bahan Konsentrasi (%) b/v Basis gel GEDK 2,5% GEDK 5% GEDK 10% Ekstrak daun kerehau - 2,5 5 10 Karbopol 2 2 2 2 TEA 1 1 1 1 Propilenglikol 10 10 10 10 Gliserin 2 2 2 2 DMDM Hyadantoin 0,6 0,6 0,6 0,6 Aquades ad 100 100 100 100 Keterangan:
GEDK  2,5%:  Gel  ekstrak  daun  kerehau,  konsentrasi 2,5%,  GEDK  5%:  Gel  ekstrak  daun  kerehau konsentrasi  5%,  GEDK  10%:  Gel  ekstrak  daun kerehau konsentrasi 10%

## Pengujian Sediaan Gel a. Uji Organoleptik
Uji organoleptik dilakukan untuk melihat tampilan  fisik  sediaan  dengan  cara melakukan  pengamatan  bentuk,  warna, dan bau dari gel ekstrak daun kerehau.
b. Uji Homogenitas Dioleskan pada sekeping kaca transparan dimana  sediaan  diambil  bagian  atas, tengah, dan bawah. Homogenitas ditunjukan  dengan  tidak  adanya  butiran kasar pada sediaan.
c. Uji pH Pengujian pH dilakukan dengan menggunakan  pH  meter  yang  telah dikalibrasi.  Elektroda  dicelupkan  dalam
DOI: 10.26874/kjif.v6i2.154
sediaan dan dicatat nilai pH yang muncul konstan di layar.
d. Uji Daya Sebar
Sebanyak 0,5 g gel diletakan dalam kaca arloji,  kaca  arloji  lainnya  diletakan  di atasnya  dan  didiamkan  selama  1  menit.
Setelah  itu,  ditambahkan  150  g  beban didiamkan  1  menit  dan  diukur  diameter konstan (Mappa dkk., 2013).
Pemodelan Tikus Diabetes. Semua tikus diinduksi aloksan dengan dosis 75 mg/kg BB secara  intravena.  Hari  ke-4  pasca  induksi aloksan, tikus diukur kadar glukosa darahnya.  Pengukuran  kadar  glukosa  darah dilakukan dengan menggunakan glukometer. Tikus dinyatakan diabetes jika kadar glukosa darah  ≥  200  mg/dL  (ADA,  2017).  Tikus yang telah diabetes kemudian dikelompokkan menjadi 5 kelompok, masing-masing  kelompok  terdiri  dari  5  ekor tikus.
Pembuatan  Luka  Diabetes. Masing- masing tikus  yang telah diabetes dibuat luka sayat pada bagian punggung. Cara pembuatan  luka  mula-mula  tikus  dicukur rambut  di  daerah  punggung  bagian  atas. Pada  saat  akan  dibuat  luka,  tikus  dianestesi menggunakan  lidokain  2%  dengan  dosis  0,2 mL  lidokain  dalam  1  mL  NaCl  0,9%  secara subkutan  (Pazry  dkk.,  2017).  Setelah  itu mengoleskan  alkohol  70%  pada  daerah punggung  yang  telah  dicukur  bulunya, kemudian  dilukai  dengan  menggunakan scalpel steril dengan kedalaman luka 0,3 cm atau  mencapai  dermis,  ditandai  dengan keluarnya  darah  (Eriadi  dkk.,  2015).  Pada setiap kelompok diberi perlakuan yakni tikus yang  diberi  basis  gel,  Prontosan ® gel,  gel ekstrak daun kerehau konsentrasi  2,5%, 5%, dan 10%.
Pemberian  gel  dilakukan  secara  topikal dengan cara mengoleskan gel di bagian luka pada  tikus  dengan  menggunakan cotton  bud setiap  hari  sebanyak  2  kali  sehari.  Untuk mencegah  terjadinya  infeksi  pada  luka dilakukan dengan menjaga kebersihan kandang baik sebelum dan selama perlakuan. Parameter  yang  diamati  pada  penelitian
meliputi  tampilan  morfologis  pada  luka, panjang luka, dan lama penyembuhan luka.
Persentase
Penyembuhan
Luka.
Persentase  penyembuhan  luka  dihitung dengan rumus:
(  )             (  )
(  )
Analisis Data. Hasil pengamatan persentase  penyembuhan  luka  diuji  secara statistik  menggunakan  uji  analisis  varian (ANAVA)  dengan  taraf  kepercayaan  95%. Jika  terdapat  perbedaan  antar  perlakuan, maka dilanjutkan dengan uji Post Hoct LSD.

## Hasil dan Pembahasan
Purifikasi Ekstrak. Ekstrak yang diperoleh dari proses ekstraksi menggunakan pelarut  organik  atau  air,  sering  mengandung senyawa  yang  tidak  diinginkan  seperti  zat warna  (klorofil),  lilin,  resin,  dan  sejenisnya. Keberadaan  zat-zat  tersebut  ditinjau  dari aktifitas, jarang diperlukan bahkan menjadikan ketidakstabilan sifat fisika ekstrak  ketika  akan  diformulasi  (Suryani dkk.,
2017).
Penggunaan ekstrak terpurifikasi  dapat  meminimalkan  masa suatu ekstrak dalam tujuan praktis pembuatan  sediaan  secara  farmasetis  karena beberapa  komponen  yang  terkandung  dapat direduksi  dengan  proses  tersebut  (Malik dkk., 2017). Ekstrak kental awalnya berwarna  hijau  tua  setelah  disaring  menjadi berwarna  coklat  kemerahan.  Ekstrak  cair yang diperoleh kemudian dipekatkan menggunakan water  bath menjadi  60  mL, sehingga  diperoleh  konsentrasi  ekstrak kental hasil purifikasi adalah 63,33 %.
Hasil  Skrining  Fitokimia. Skrining fitokimia  terhadap  simplsia  dan  ekstrak terpurifikasi  dilakukan  untuk  mengetahui senyawa metabolit sekunder yang terdapat di dalamnya. Hasil pemeriksaan skrining fitokimia dapat dilihat pada Tabel 2.

## Tabel 2. Hasil Skrining Fitokimia Simplisia dan Ekstrak Terpurifikasi Daun Kerehau
Golongan Senyawa Pereaksi Hasil Skrining Simplisia Ekstrak Terpurifikasi Alkaloid Mayer (-) tidak ada endapan (-) tidak ada endapan Bouchardat (-) tidak ada endapan (-) tidak ada endapan Dragendorf (-) tidak ada endapan (-) tidak ada endapan Flavonoid Serbuk Mg + HCl pekat + (+) warna jingga pada (+) warna jingga pada Amil alkohol lapisan amil alkohol lapisan amil alkohol Saponin Air panas, dikocok + HCl 2N (+) busa stabil (+) busa stabil Polifenol FeCl3 1% (+) warna ungu (+) warna ungu kehitaman kehitaman Tanin Gelatin (-) tidak ada endapan (-) tidak ada endapan Kuinon NaOH 1 N (+) warna merah (+) warna merah Steroid Lieberman-Bouchard (+)  warna hijau (+)  warna hijau
Keterangan:(+) = Mengandung senyawa kimia; ( - ) = Tidak mengandung senyawa kimia
Dari hasil yang diperoleh, ekstrak terpurifikasi mengandung metabolit sekunder  yang  sama  seperti  pada  skrining simplisia.  Hal  ini  membuktikan  proses purifikasi  ekstrak  yang  dilakukan  tidak menghilangkan kandungan metabolit sekunder,  melainkan  hanya  mengurangi kandungan  klorofil  yang  terdapat  pada ekstrak.

## Evaluasi Gel
Uji  Organoleptik. Uji  organoleptik dilakukan  sebagai  uji  pendahuluan  gel  yang meliputi bau, warna dan konsistensi dari tiap formula.  Hasil  uji  organoleptik  dapat  dilihat pada Tabel 3.

## Tabel 3. Hasil Uji Organoleptik Sediaan Gel
Jenis Gel Bentuk Warna Bau Basis gel Setengah padat Bening Hampir tidak berbau GEDK 2,5% Setengah padat Merah Kecoklatan Bau khas daun kerehau GEDK 5% Setengah padat Merah kecoklatan pekat Bau khas daun kerehau GEDK 5% Setengah padat Merah kecoklatan pekat Bau khas daun kerehau
Keterangan: GEDK 2,5%: Gel ekstrak daun kerehau konsentrasi  2,5%;  GEDK  5%:  Gel  ekstrak  daun kerehau  konsentrasi  5%;  GEDK  10%:  Gel  ekstrak daun kerehau konsentrasi 10%
Dari hasil pemeriksaan warna menunjukkan  perbedaan.  Hal  ini  karena perbedaan  konsentrasi  dari  ekstrak  daun kerehau  pada  masing-masing  gel  tersebut.
Semakin  banyak  kandungan  ekstrak  daun kerehau dalam sediaan, maka warna gel akan semakin  mirip  dengan  warna  dari  ekstrak. Pengamatan  dari  segi  bau  menunjukkan basis  gel  hampir  tidak  berbau.  Sedangkan sediaan  gel  ekstrak  daun  kerehau  dengan variasi  konsentrasi  2,5%  dan  5%  memiliki bau  khas  yaitu  bau  khas  daun  kerehau. Semakin tinggi konsentrasi ekstrak, semakin kuat bau khas ekstrak daun kerehau.
Uji  Homogenitas. Hasil  uji  homogenitas menunjukkan  bahwa  gel  ekstrak  daun kerehau  pada  berbagai  variasi  konsentrasi ekstrak homogen yang ditandai dengan tidak adanya gumpalan maupun butiran kasar pada gel. Hal ini menunjukkan bahwa konsentrasi ekstrak  tidak  mempengaruhi  homogenitas gel.
Uji  Daya  Sebar. Pada  pengujian  daya sebar dilakukan untuk mengetahui penyebaran  sediaan  gel.  Semakin  mudah diratakan  pada  kulit  maka  akan  semakin memperluas  area  kulit  dan  absorbsi  zat aktifnya  semakin  besar.  Daya  sebar  yang baik  membentuk  lingkaran  dan  tersebar secara merata akan menjamin pelepasan obat yang  merata  pada  bagian  kulit  yang  akan dioleskan  sediaan  gel.  Menurut  Mappa  dkk (2013)  daya  sebar  sediaan  gel  yang  baik antara  5-7  cm.  Berdasarkan  hasil  tersebut sediaan  gel  yang  dibuat  masuk  dalam  daya sebar yang baik untuk sediaan gel.
DOI: 10.26874/kjif.v6i2.154

## Tabel 4. Hasil Uji Daya Sebar Sediaan Gel
Jenis Gel Diameter Daya Sebar Basis Gel 5,72 cm Gel Ekstrak Daun Kerehau Konsentrasi 2,5% 5,50 cm Gel Ekstrak Daun Kerehau Kosentrasi 5% 5,27 cm Gel Ekstrak Daun Kerehau Konsentrasi 10% 5,10 cm
Uji  pH. Hasil  uji  pH  diperoleh  semua sediaan  memiliki  pH  5.  Pengujian  pH dilakukan  untuk  memastikan  sediaan  gel yang dibuat memiliki pH yang sesuai dengan pH  fisiologis  kulit.  Nilai  pH  yang  terlalu rendah  atau  asam  dapat  menyebabkan  iritasi pada  kulit,  sedangkan  pH  terlalu  tinggi  atau basa  dapat  menyebabkan  kulit  bersisik  dan dapat  menyebabkan  kulit  menjadi  kering (Eriadi  dkk.,  2015).  Hasil  menunjukkan bahwa  nilai  pH  sediaan  gel  masih  berada pada  rentang  yang  diperbolehkan  untuk digunakan secara topikal.
Pemodelan  Tikus  Diabetes. Pemodelan tikus  diabetes  dilakukan  dengan  induksi aloksan  75  mg/kg  BB  secara  intravena. Aloksan  dilarutkan  dalam  larutan  isotonis NaCl  0,9%  dan  segera  disuntikkan  setelah aloksan  larut.  Pada  hari  ke-4  pasca penyuntikan  aloksan  tikus  menunjukkan kadar glukosa darah >200 mg/dL yang dapat dilihat pada Tabel 5.

## Tabel 5. Kadar Glukosa Darah Rata-rata
Kelompok Kadar Glukosa Darah (mg/dL) (mean ± SD) KGD0 KGD1 KGD2 Prontosan® gel  101,67 ± 8,98 210,5 ± 8,71 203,67 ± 4,93 Basis gel 108,67 ± 8,26 217,16 ± 4,66 216,00 ± 3,10 GEDK 2,5% 83,50 ± 11,98 211,67 ± 10,91 215,67 ± 11,06 GEDK 5% 80,33 ± 11,25 213,00 ± 6,75 229,67 ± 8,11 GEDK 10% 93,33 ± 10,54 220,73 ± 8,60 225,11 ± 6,32 Keterangan: KGD0= Kadar glukosa darah sebelum induksi,
KGD1= Kadar glukosa darah pasca induksi, KGD2= Kadar glukosa darah hari ke-8 pengamatan luka
Pada  hari  ke-8  pengamatan  luka,  kadar glukosa darah kembali diukur untuk mengetahui  apakah  tikus  masih  dalam kondisi  hiperglikemia  atau tidak. Dari Tabel 5  menunjukkan  tikus  masih  mengalami hiperglikemia, namun pada kelompok Prontosan ® gel  dan  basis  gel  mengalami penurunan  jika  dibandingkan  kadar  glukosa pasca  induksi.  Hal  ini  disebabkan  aloksan merusak  sel  β  pankreas  dengan  kerusakan yang berbeda-beda sehingga tidak semua sel β pankreas mengalami kerusakan dan adanya kemampuan  sel  β  melakukan  regenerasi. Akibatnya,  sel  β  masih  dapat  menghasilkan insulin  sehingga  glukosa  darah  menurun (Kurnawan dkk., 2014).
Pengujian  Efek  Gel  Daun  Kerehau Pada  Luka  Model  Tikus  Diabetes. Semua tikus yang telah diabetes dicukur bulu bagian punggungnya  sehari  sebelum  dilukai.  Luka sayat  dibuat  menggunakan scalpel steril dengan  kedalaman  0,3  cm  atau  mencapai dermis,  ditandai  dengan  keluarnya  darah (Eriadi  dkk.,  2015).  Luka  yang  dibuat merupakan  luka  derajat  1  (luka  superficial) menurut klasifikasi Wagner-Meggit.
Penyembuhan  luka  pada  kondisi  diabetes sedikit  berbeda  pada  kondisi  normal. Terdapat  beberapa  faktor  fisiologis  yang berperan dalam defisiensi penyembuhan luka pada individu dengan diabetes. Faktor-faktor ini  meliputi  gangguan  aliran  darah  dan oksigenasi akibat meningkatnya kadar glukosa  darah,  menurunnya  sintesis  kolagen dan  fibronektin,  dan  menurunnya  kadar insulin,  fungsi  makrofag  dan  hormon pertumbuhan.  Tujuan  penyembuhan  luka pada  kondisi  diabetes  adalah  mempercepat proses  penutupan  luka  dengan  menstimulasi faktor-faktor  pertumbuhan  sehingga  mampu berfungsi normal (Kurnawan dkk., 2014).
Penyembuhan  luka  merupakan  proses yang  kompleks  dikarakteristik  oleh  4  fase, yaitu  fase  koagulasi  atau  hemostatis,  fase inflamasi, fase proliferasi dan fase remodeling . Fase hemostatis merupakan fase yang  menekan  pendarahan  awal  saat terjadinya  luka  yang  dapat  terlihat  pada  10- 30  menit  setelah  terjadinya  luka.  Pada  fase ini  teramati  luka  masih  tampak  merah,
terjadi pendarahan, serta belum ada penutupan  luka.  Selanjutnya  fase  inflamasi ditandai  dengan  reaksi  kemerahan,  sensasi hangat,  dan  nyeri.  Fase  ini  berlangsung  1-6 hari  setelah  terjadinya  luka  dan  berfungsi untuk  pembersihan  luka  yang  ditandai banyaknya neutrofil dan makrofag pada luka yang  membantu  fagositosis  bakteri  dan benda  asing  (Baranoski  dan  Ayello,  2008). Fase  proliferasi  yaitu  fase  pembentukan jaringan baru berupa re-epitelisasi, neovaskularisasi,  dan  pembentukan  kolagen yang  dapat  berlangsung  pada  hari  ke  5-21 setelah terjadi luka (Bryant dan Nix, 2007).
Luka  pada  hewan  uji  dinyatakan  sembuh ditandai dengan adanya pembentukan keropeng,  penutupan  luka,  dan  tumbuhnya kulit  baru  serta  bulu  di  sekitar  luka. Parameter  penyembuhan  luka  dapat  diamati dengan  mengukur  panjang  luka  setiap  hari, mengamati  tampilan  morfologis  luka,  dan lama  penutupan  luka.  Hal  ini  dilakukan untuk membandingkan kemampuan penyembuhan dari setiap kelompok perlakuan. Hasil pengamatan tampilan morfologis luka dapat dilihat pada Tabel 6.
Selanjutnya  untuk  pengukuran  terhadap panjang luka dilakukan dengan menggunakan jangka sorong. Pengukuran ini dilakukan  setiap  hari  mulai  dari  hari  ke-0 yakni hari dibuatnya luka sampai hari ke-13. Hasil pengukuran dapat dilihat pada Tabel 7.
Pada  Tabel  7  menunjukkan  bahwa pemberian  gel  eksrak  daun  kerehau  dengan konsentrasi  2,5%,  5%,  dan  10%  dapat menyembuhan  luka  pada  model  tikus diabetes  masing-masing  pada  waktu  13,  12, dan 10 hari. Pada kelompok perlakuan basis gel menunjukkan efek berkurangnya panjang luka  paling  lama,  sedangkan  kelompok perlakuan Prontosan ® Gel paling cepat yakni 9 hari. Namun panjang luka awal (hari ke-0) tiap kelompok berbeda, sehingga untuk lebih memastikan  hasil  yang  diperoleh  dilakukan dengan
perhitungan persentase penyembuhan luka. Hasil perhitungan persentase penyembuhan luka tiap kelompok dapat dilihat pada Tabel 8.
Berdasarkan  data  pengamatan,  diketahui bahwa  proses  penyembuhan  luka  mulai
terjadi  pada  hari  ke-1  dengan  kecepatan penyembuhan  yang  berbeda  tiap  kelompok. Semakin  besar  persen  penyembuhan  luka maka  semakin  kecil  panjang  luka.  Pada Tabel 8 menunjukkan bahwa mulai hari ke-1 hingga  hari  ke-13  peningkatan  persentase penyembuhan  luka  pada  kelompok  yang diberi gel uji dan Prontosan ® gel lebih besar daripada  kelompok  yang  hanya  diberi  basis gel. Pemberian Prontosan ® gel menunjukkan rata-rata  persentase  penyembuhan  luka  yang paling  tinggi  bila  dibandingkan  dengan kelompok  perlakuan  lainnya  yang  telah mencapai  100%  pada  hari  ke-9.  Hal  ini dikarenakan Prontosan ® gel mengandung zat aktif  0,1%  undecylenamidopropyl  betaine dan 0,1% polyaminopropyl biguanide (Polihexanide). Betaine mengurangi tegangan  permukaan  dari  biofilm  yang mengakibatkan  maserasi  dari  biofilm  yang memungkinkan terjadi proses penetrasi  yang lebih  baik  ke  dalam.  Setelah  itu,  biofilm dengan  mudah  dihilangkan.  Polyhexanide memiliki  efek  antiseptik  yang  mencegah kontaminasi dan meningkatkan proses granulasi  dan  epitelisasi.  Tidak  toksik,  tidak menyebabkan iritasi jaringan atau penyerapan jaringan (Horrocks, 2006).
Tabel 6. Pengamatan Penyembuhan Luka Tiap Kelompok
Hari ke- Kelompok Prontosan ® Gel Basis Gel GEDK 2,5% GEDK 5% GEDK 10%
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13

## Tabel 7. Panjang Luka Rata-rata Pada Punggung Tikus
Hari ke- Rata-rata panjang luka (cm) (mean ± SD) Prontosan® Gel Basis Gel GEDK 2,5% GEDK 5% GEDK 10% 0 1,68 ± 0,20 1,56 ± 0,04 1,51 ± 0,02 1,54 ± 0,03 1,73 ± 0,08 1 1,42 ± 0,18 1,52 ± 0,03 1,48 ± 0,03 1,50 ± 0,04 1,69 ± 0,08 2 1,28 ± 0,18 1,46 ± 0,04 1,44 ± 0,05 1,45 ± 0,03 1,58 ± 0,11 3 1,18 ± 0,18 1,39 ± 0,07 1,32 ± 0,02 1,36 ± 0,06 1,42 ± 0,08 4 1,03 ± 0,23 1,32 ± 0,08 1,22 ± 0,08 1,20 ± 0,05 1,22 ± 0,12 5 0,73 ± 0,06 1,21 ± 0,13 1,08 ± 0,11 1,08 ± 0,11 1,03 ± 0,07 6 0,46 ± 0,05 1,12 ± 0,12 1,03 ± 0,11 0,86 ± 0,07 0,83 ± 0,07 7 0,37 ± 0,08 0,94 ± 0,08 0,85 ± 0,08 0,68 ± 0,05 0,63 ± 0,11 8 0,23 ± 0,03 0,70 ± 0,07 0,67 ± 0,10 0,46 ± 0,08 0,33 ± 0,10 9 0 0,52 ± 0,11 0,46 ± 0,09 0,33 ± 0,11 0,13 ± 0,15 10 0 0,49 ± 0,10 0,39 ± 0,06 0,30 ± 0,06 0 11 0 0,40 ± 0,05 0,32 ± 0,05 0,02 ± 0,04 0 12 0 0,29 ± 0,06 0,22 ± 0,06 0 0 13 0 0,20 ± 0,04 0 0 0
Keterangan: GEDK 2,5%: Gel ekstrak daun kerehau konsentrasi 2,5%; GEDK 5%: Gel ekstrak daun kerehau konsentrasi 5%; GEDK 10%: Gel ekstrak daun kerehau konsentrasi 10%
Tabel 8. Persentase Penyembuhan Luka Rata-rata Tiap Kelompok Hari ke- Persentase Penyembuhan Luka (%) (mean ± SD) Prontosan® Gel Basis Gel GEDK 2,5% GEDK 5% GEDK 10% 1 15,56 ± 3,37 2,66 ± 1,60 1,85 ± 1,72 2,15 ± 0,97 2,08 ± 0,32 2 23,81 ± 5,07 6,38 ± 2,76 4,39 ± 2,66 5,93 ± 3,04 8,45 ± 4,40 3 29,69 ± 3,12 9,85 ± 2,58 12,20 ± 1,19 11,43 ± 3,82 18,37 ± 6,12* 4 39,03 ± 6,17 15,21 ± 4,76 19,05 ± 6,08 21,80 ± 4,26 29,52 ± 8,45* 5 56,23 ± 2,51 23,33 ± 8,20 28,19 ± 7,98 29,50 ± 4,04 40,15 ± 4,78* 6 71,97 ± 3,17 28,03 ± 7,69 31,91 ± 7,93 44,27 ± 5,43* 51,74 ± 4,17* 7 78,68 ± 4,51 40,10 ± 4,60 43,85 ± 5,93 55,91 ± 3,01* 64,83 ± 3,42* 8 86,51 ± 1,26 55,03 ± 4,57 55,68 ± 6,48 69,77 ± 5,64* 80,20 ± 4,40* 9 100 65,99 ± 7,79 69,50 ± 6,09 76,92 ± 6,18* 92,78 ± 8,51* 10 100 68,36 ± 7,43 73,90 ± 4,05 83,25 ± 2,54* 100* 11 100 74,45 ± 3,74 78,66 ± 3,10 98,70 ± 2,90* 100* 12 100 81,56 ± 3,64 85,37 ± 4,08* 100* 100* 13 100 87,34 ± 2,85 100* 100* 100* *= berbeda bermakna dengan basis gel
Data  yang  diperoleh  dianalisa  secara statistik metode One Way Anova menggunakan  program  SPSS  20  dengan taraf  kepercayaan  95%.  Analisa  dilakukan terhadap hasil persentase penyembuhan luka dimulai  dari  hari  ke-1  sampai  hari  ke-13. Mula-mula dilakkan uji normalitas menggunakan  metode  Shapiro-Wilk  yang menunjukkan  data  terdistribusi  normal. Kemudian dilanjutkan uji homogenitas, hasil menunjukkan semua kelompok data homogen.  Karena  uji  normalitas  dan homogenitas telah terpenuhi maka selanjutnya  dilakukan  uji  ANOVA.  Uji ANOVA tiap hari pengamatan menunjukkan bahwa  seluruh  kelompok  berbeda  bermakna sehingga  dilanjutkan  uji post  hoct untuk melihat  kelompok  mana  saja  yang  berbeda bermakna.
Berdasarkan  hasil  uji post  hock dimulai hari  ke-3  pemberian  gel  ekstrak  daun kerehau  konsentrasi  10%  menunjukkan perbedaan bermakna (p<0,05) jika dibandingkan  pemberian  basis  gel.  Hal  ini dapat diartikan bahwa pemberian gel ekstrak daun kerehau konsentrasi 10% memiliki efek penyembuhan  luka  dengan  persentase  rata- rata  penyembuhan  luka  masing-masing sebesar  18,37%.  Jika  dibandingkan  dengan pemberian  Prontosan ® gel  yang  memiliki persentase  rata-rata  penyembuhan  luka 29,69%  menunjukkan  berbeda  bermakna (p<0,05)  yang  berarti  pemberian  gel  ekstrak daun kerehau konsentrasi 10% pada hari ke-
3  belum  sebanding  dengan  pemberian Prontosan ® gel.  Pemberian  gel  ekstrak  daun kerehau  konsentrasi  10%  dengan  persentase rata-rata  penyembuhan  luka  80,20%  baru menunjukkan  perbedaan  tidak  bermakna dengan  Prontosan ® gel  (p>0,05)  dengan persentase  rata-rata  penyembuhan  luka sebesar 86,51% pada hari ke-8, yang artinya pemberian gel ekstrak daun kerehau konsentrasi 10% sebanding dengan pemberian Prontosan ® gel pada hari ke-8.
Dimulai  dari  hari  ke-6  pemberian  gel ekstrak  daun  kerehau  konsentrasi  5% menunjukkan  berbeda  bermakna  (p<0,05) dengan  pemberian  basis  gel.  Dimana  pada konsentrasi 5% persentase rata-rata penyembuhan luka adalah 44,27%, sedangkan basis gel sebesar 28,03%. Hal ini menunjukkan  pemberian  gel  ekstrak  daun kerehau  konsentrasi  5%  dapat  memberikan efek  penyembuhan  luka  dibanding  dengan pemberian  basis  gel,  meskipun  belum sebanding dengan pemberian Prontosan ® gel. Pemberian gel ekstrak daun kerehau konsentrasi 5% baru menunjukkan perbedaan tidak bermakna dengan Prontosan ® gel (p>0,05) pada hari ke-11.
Pemberian  gel  ekstrak  daun  kerehau konsentrasi  2,5%  dimulai  hari  ke-12  mulai menunjukkan  berbeda  bermakna  (p<0,05) dibanding  pemberian  basis  gel.  Persentase rata-rata  penyembuhan  luka  pemberian  gel ekstrak  daun  kerehau  konsentrasi  2,5% adalah 85,37%, sedangkan pemberian
pemberian  basis  gel  adalah  81,56%.  Dari hasil  penelitian  efek  gel  ekstrak  daun kerehau  untuk  menyembuhkan  luka  pada model  tikus  diabetes  menunjukkan  bahwa semakin  besar  konsentrasi  gel  ekstrak  daun kerehau  maka  semakin  besar  juga  efek penyembuhan  luka.  Hal  ini  disebabkan  oleh semakin  tingginya  jumlah  zat  aktif  yang terkandung  di  dalamnya  mengakibatkan semakin tinggi kemampuan dalam menyembuhkan  luka.  Kandungan  senyawa di  antaranya  flavonoid,  saponin,  dan  steroid yang  terkandung  mempunyai  efek  terhadap penyembuhan  luka  melalui  mekanisme berbeda-beda.
Kandungan  flavonoid  pada  daun  kerehau mempunyai aktivitas antiinflamasi. Aktivitas antiinflamasi  ini  terjadi  karena  cincin benzopiron yang ada pada struktur flavonoid dapat berikatan dengan enzim siklooksigenase dan lipooksigenase (Wijonarko dkk., 2016). Pada fase proliferasi senyawa flavonoid berperan sebagai antioksidan,  sehingga  dapat  menghambat pelepasan  senyawa  oksigen  reaktif  pada jaringan  luka  yang  dapat  merusak  sel-sel pada  jaringan  luka.  Zat  yang  bersifat antioksidan mampu meningkatkan kelangsungan kolagen fibril dengan peningkatan kekuatan serat kolagen, meningkatkan sirkulasi, mencegah kerusakan sel dan merangsang sintesis DNA (Kurnawan dkk., 2014). Selain itu, flavonoid merupakan vascular protector  agent yang merupakan agen untuk memperbaiki peredaran  darah  dengan meningkatkan pembentukan kapiler darah atau neovaskularisasi  (Soni  dan  Singhai,  2012). Neovaskularisasi  sangat  diperlukan  dalam proses  penyembuhan  luka  untuk  membawa oksigen  dan  nutrisi  yang  sangat  diperlukan untuk  metabolisme  sel  dan  regenerasi jaringan. Hambatan sirkulasi darah mengakibatkan  sel-sel  yang  bekerja  pada fase inflamasi, seperti neutrofil dan makrofag  berkurang  pada  daerah  luka, sehingga  proses  fagositosis  mikroba  dan jaringan mati terhambat (Malini dkk., 2017).
Saponin  mempunyai  kemampuan  sebagai pembersih  dan  antiseptik  yang  berfungsi
membunuh atau mencegah pertumbuhan dari mikroorganisme  yang  timbul  pada  luka sehingga tidak mengalami infeksi yang berat (Robinson,  1995).  Sedangkan  kandungan steroid memiliki kemampuan untuk meningkatkan  sintesis  kolagen.  Kolagen memegang peranan penting dalam penyembuhan luka dan merupakan komponen utama jaringan ikat yang menyediakan  komponen  struktural  untuk regenerasi jaringan (Kurnawan dkk., 2014).

## Kesimpulan
Kesimpulan  dari  penelitian  ini  adalah  gel ekstrak daun kerehau mempunyai efek dalam menyembuhkan  luka  pada  model  tikus diabetes.

## Daftar Pustaka
American  Diabetes  Association.  (2017)  : Diagnosis  and  Classification  of  Diabetes Mellitus, Diabetes Care 40 (Suplemen 1), S75.
Baranoski,  S.,  dan  Ayello,  E.A.  (2008)  :
Wound Care Essential Practice Principle .
New York:Lippincott Williams & Wilkins.
Bryant,  R.A.,  Nix,  D.  (2007)  : Acute  and Chronic  Wounds.  Current  Management Concepts .Elsevier, Missouri.
Dewantari,  D.R.,  dan  Nining,  S.  (2015)  : Formulasi  dan  Uji  Aktivitas  Gel  Ekstrak Daun  Petai  Cina  ( Leucaena  glauca Benth.)  sebagai  Sediaan  Obat  Luka Bakar, Jurnal  Ilmiah  Farma Sains, 2(5), 217-222.
Eriadi,  A.,  Arifin,  H.,  Rizal,  Z.,  dan Barmitoni.  (2015)  :  Pengaruh  Ekstrak Etanol Daun Binahong ( Anredera cordifolia (Tenore)  Steen)  Terhadap Penyembuhan  Luka  Sayat  Pada  Tikus Putih Jantan, Jurnal Farmasi Higea, 7(2), 162-172.
Horrocks,  A.  (2006)  :  Prontosan  Wound Irrigation  and  Gel:  Management  of Chronic  Wounds, British  Journal  of Nourshing , 15(22), 1222-1228.
Hunt,  N.A.,  Lin,  G.T.,  dan  Lavery,  L.A.
(2011) : The Economics of Limb Salvage
In  Diabetes, Plast.  Reconstr.  Surg , 127(1), 289S-295S.
International  Diabetes  Federation.  (2015)  : IDF  Diabetes  Atlas, Brussels,  Diabetes Federation.  Jan  AW,  Khan  H,  Ahmad  I, Khan M. 2016. Diabetic Foot Ulcer; Risk Factors Stratification In
Patients.
A study of 150
patients. Professional  Med  J 23(6):  693-
698.
Kurnawan, W., Nurbaeti, S.D., dan Novianry,  V.  (2014)  :  Efek  Salep Kombinasi Ekstrak Daun Bangun-bangun dan  Ekstrak  Herba  Pegagan  Terhadap Penyembuhan  Luka  Eksisi  Pada  Tikus Hiperglikemia  yang  Diinduksi  Aloksan, Naskah  Publikasi,  Pontianak, Universitas Tanjungpura.
Malini,  D.K.,  Madihah.,  dan  Kamilawati,  F.
(2017)  :  Uji  Potensi  Sediaan  Salep Ekstrak Etanol Kulit Buah Jengkol Untuk Mempercepat  Penyembuhan  Luka  Pada Kulit  Mencit  Model  Diabet, Pros  Sem Nas Masy Biodiv Indon, 3(2), 205-210.
Mappa, T., Hosea, J.E., dan Novel, K. (2013)
: Formulasi Gel Ekstrak Daun Sasaladahan  ( Peperomia  pellucida L.) dan  Uji  Efektivitasnya  Terhadap  Luka Bakar  Pada  Kelinci, Jurnal Ilmiah
Farmasi, 2(3), 49-55.
Pazry,  M.,  Busman,  H.,  Nurcahayani,  N., dan  Sutyarso.  (2017)  :  Potensi  Ekstrak Etanol  Daun  Pare  ( Momordica  charantia
L.)  sebagai  Alternatif  Obat  Penyembuh Luka Pada Punggung Mencit Jantan ( Mus musculus L), Jurnal Penelitian Pertanian Terapan, 17(1), 109-116.
Santosa,  A.,  dan  Nikmah,  I.M.N.  (2014)  : Hubungan Pengetahuan tentang
Pengendalian  Kadar  Gula  Darah  dengan Kejadian  Ulkus  Diabetik  pada  Pasien Diabetes Melitus, Medisains, 18(3), 1-11. Semiawan,  F.,  Ahmad,  I.,  dan  Masruhim, M.A.  (2015)  :  Aktivitas  Antiinflamasi Ekstrak Daun Kerehau ( Callicarpa longifolia L. ), Jurnal Sains dan Kesehatan, 1(1), 1-4.
Soni,   H.,  dan  Singhai,  AK.  (2012)  :   A Recent    Update    of    Botanicals    for Wound    HealingActivity. Intl  Res  J Pharmac, 3(7): 1-7.
Supomo.,  Supriningrum,  R.,  dan  Junaid,  S. (2016)  :  Karakteristik  dan  Skrining Fitokimia  Daun  Kerehau  ( Calicarpa longifolia Lamk.), Jurnal Kimia
Mulawarman, 12(2), 89-96.
Suryani.,  Putri,  A.E.P.,  dan  Agustyiani,  P.
(2017)  :  Formulasi  dan  Uji  Stabilitas Sediaan  Gel  Ekstrak  Terpurifikasi  Daun
Paliasa, Pharmacon Jurnal Ilmiah Farmasi , 6(3),157-168.