J. Teknol. dan Industri Pangan Vol. 34(1): 13-24 Th. 2023 ISSN: 1979-7788 Terakreditasi Ristekdikti: 164/E/KPT/2021
Versi Online: http://journal.ipb.ac.id/index.php/jtip https://doi.org/10.6066/jtip.2023.34.1.13 Hasil Penelitian
Copyright © 2023 by Authors, published by Journal of Food Technology and Industry This is an open-access article distributed under the CC BY-SA 4.0 License https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/

## Bekatul Beras Hitam Terfermentasi Memperbaiki Kondisi Kolon Mencit yang Diinduksi Senyawa Karsinogen Azoxymethane
[Fermented Black Rice Bran Improves Colon Conditions of Azoxymethane-induced Mice]
Nouverra Nadya Putri 1) , Slamet Budijanto 1) , Endang Prangdimurti 1) *, dan Bambang Pontjo 2)
1) Departemen Ilmu dan Teknologi Pangan, Fakultas Teknologi Pertanian, IPB University, Bogor, Indonesia
2) Departemen Patologi, Fakultas Kedokteran Hewan, IPB University, Bogor, Indonesia
Diterima 8 Juli 2022 / Disetujui 27 Desember 2022

## ABSTRACT
Worldwide, colon cancer has become the fourth cause of death in terms of cancer. A high fiber and antioxidants diet help promote a healthy diet and prevent colon cancer. Black rice bran has high  content both in fiber and phenolic. The aim of this research was to observe the potential of fermented black rice bran in improving colon conditions profiles of azoxymethane (AOM)-induced mice, comprising lactic acid bacteria (LAB) colony count, short-chain fatty acids (SCFAs) concentration, and malondialdehyde (MDA). Rhizopus oligosporus was used for fermenting the black rice bran. Five weeks old male Balb/c mice were divided into four groups (n=6) based on their diets. AOM was injected intraperitoneally and Dextran Sodium Sulphate was added to their drinking water, thus initiating inflammation in the colon. The number of LAB in faeces at the  end  of  intervention  in  the  groups  of  fermented  rice  bran  group  (FRB)  (9.04±0.04  log  CFU)  and  non- fermented rice bran group (NRB) (8.99±0.04 log CFU) were higher than that of the positive control group (8.33±0.06  log  CFU/g)  but  fewer  as  compared  to  the  negative  control  (9.63±0.05  log  CFU).  The concentrations  of  SCFAs  (acetic  acid,  propionic  acid  and  butyric  acid)  of  the  cecum  content  in  the  NRB group (11.92±0.00, 2.31±0.01 and 3.41±0.01 mM) were higher than the positive control group (8.90±1.30, 1.60±0.16 and 2.27±0.31 mM).  As compared to the positive control group, the concentration of propionic acid of cecum content in the FRB group was higher (2.09±0.32 mM), but the concentrations of acetic acid and butyric acid were indifferent. The MDA level of the FRB group (1.41±0.03 µmol) was lower than that of the NRB group (1.88±0.05 µmol), and the MDA level of NRB was lower than that of the positive control group (2.03±0.09 µmol). The results showed that both FRB and NRB had a positive role in increasing the number of LAB, ALRP concentrations, and decreasing MDA levels in AOM-induced mice colons.
Keywords: black rice bran, colon cancer, LAB, MDA, SCFA

## ABSTRAK
1
Kanker kolon menempati urutan keempat penyebab kematian akibat kanker di dunia. Pangan  tinggi serat  dan  antioksidan  dapat  mencegah  kanker  kolon.  Bekatul  beras  hitam  (BBH)  memiliki  komponen antioksidan  fenolik  dan  serat  yang  tinggi.  Tujuan  penelitian  ini  adalah  menguji  potensi  BBH  fermentasi (BBHF) dalam memperbaiki kondisi kolon mencit yang diinduksi karsinogen azoxymethane (AOM), meliputi jumlah  koloni  bakteri  asam  laktat  (BAL),  konsentrasi  asam  lemak  rantai  pendek  (ALRP),  dan  kadar malondialdehida  (MDA).  BBH  difermentasi  menggunakan Rhizopus  oligosporus .  Mencit  jantan  usia  lima minggu  galur  Balb/c  dibagi  menjadi  empat  kelompok  berdasarkan  ransum  yang  diberikan  (n=6).  AOM diinjeksikan  intraperitoneal  dan dextran  sodium  sulphate ditambahkan  pada  minuman  mencit  untuk menginisiasi inflamasi pada kolon. Pengujian jumlah koloni BAL pada feses di akhir intervensi menunjukkan bahwa  kelompok  BBHF  (9,04±0,04  log  CFU/g)  dan  BBH  nonfermentasi  (BBHNF)  (8,99±0,04  log  CFU/g) lebih tinggi dibandingkan kelompok kontrol positif (KP) (8,33±0,06 log CFU/g), meskipun lebih rendah dari kelompok  kontrol  negatif  (KN)  (9,63±0,01  log  CFU/g).  Konsentrasi  ketiga  ALRP  (asam  asetat,  asam propionat dan asam butirat) isi sekum kelompok BBHNF (11,92±0,00; 2,31±0,01; dan 3,41±0,01 mM) lebih tinggi  daripada  kelompok  KP  (8,90±1,30;  1,60±0,16;  dan  2,27±0,31  mM).  Dibandingkan  dengan  KP, konsentrasi asam propionat kelompok BBHF lebih tinggi (2,09+0,32 mM), namun konsentrasi asam asetat dan asam butirat tidak berbeda. Kadar MDA kelompok BBHF (1,41±0,03 µ mol) lebih rendah dibandingkan kelompok  BBHNF  (1,88±0,05 µ mol),  dan  kadar  MDA  BBHNF  lebih  rendah  dibandingkan  KP  (2,03±0,09 µ mol). Hasil menunjukkan bahwa baik BBHF maupun BBHNF memiliki peran positif dalam meningkatkan koloni BAL, konsentrasi ALRP, dan menurunkan kadar MDA pada kolon mencit yang diinduksi AOM.
Kata kunci: ALRP, BAL, bekatul beras hitam, kanker kolon, MDA
*Penulis Korespondensi: E-mail: prangdimurti@apps.ipb.ac.id

## PENDAHULUAN
Kanker adalah tumor ganas yang menyerang sel dan jaringan sehat. Tumor ganas bersifat sulit diken- dalikan,  terus  tumbuh,  dan  tidak  dapat  dihilangkan dari tubuh. Prevalensi kanker di Indonesia mengalami peningkatan  dari  1,4%  pada  tahun  2013  menjadi 1,8% pada tahun 2018 (Kemenkes RI, 2014; 2019). Kanker kolon berada pada posisi keempat penyebab kematian karena kanker di dunia dan prevalensinya terus meningkat (Arnold et al., 2017). Kelompok yang mengonsumsi  banyak  serat,  memiliki  risiko  lebih rendah  terkena  kanker  kolon  dibandingkan  dengan kelompok  yang  mengonsumsi  produk  hewani  dan tidak mengonsumsi sayur. Pada kasus kanker kolon, kebanyakan pasien mengonsumsi serat lebih rendah dibandingkan dengan kelompok yang sehat (Louis et al., 2014).  Hasil  Riskesdas  2013  menunjukkan  kon- sumsi serat pada 95,5% individu usia di atas 10 tahun lebih  rendah  dibandingkan  dengan  anjuran  yang  di- berikan (Kemenkes RI, 2014). Kebutuhan serat yang dianjurkan oleh dietisien adalah 25-30 g dalam sehari (Slavin, 2008).
Bekatul  beras  hitam  (BBH)  memiliki  komponen bioaktif  yang  paling  tinggi  dibandingkan  dengan bekatul  beras  merah  dan  putih  (Moongngarm et  al., 2012). Fermentasi bekatul menunjukkan potensi pre- biotik dan fungsional yang lebih baik. Bekatul fermen- tasi memiliki kemampuan  dalam  menangkap radikal bebas  dibandingkan  dengan bekatul non fermentasi (Sivamaruthi et  al., 2018). Solid  state  fermentation (SSF) dipilih menjadi metode fermentasi yang seder- hana, praktis, dan produktifitasnya tinggi (Yang et al., 2021). Fermentasi bekatul  dengan Rhizopus oryzae meningkatkan  asam  ferulat  dan  asam  galat.  Peru- bahan struktural pada serat larut air  juga terjadi saat fermentasi dilakukan, sehingga dapat meningkatkan luas permukaan dan berongga (Schmidt dan Furlong, 2012; Chu et al., 2019; Jia et al., 2019).
Kanker  kolon  diinisiasi  dengan  menggunakan karsinogen  dan  dibantu  dengan  agen  pembentuk inflamasi dalam pembentukannya. Penggunaan azo- xymethane  (AOM)  dan  dextran  sodium  sulfat  (DSS) pada hewan uji dilakukan untuk menyesuaikan pem- bentukan  kanker  kolon  yang  diawali  oleh  inflamasi pada kolon. AOM bertindak sebagai karsinogen yang menginduksi  pertumbuhan  kanker  kolon  dengan mengganggu  keseimbangan  kapasitas  antioksidan dalam sel kolon dan DSS diberikan untuk membantu efek  displasia  pada  sel  kolon  (El  Waly et  al., 2014; Suzuki et al., 2006). AOM dipilih untuk menginduksi kanker kolon dengan mekanisme deplesi glutathione (GSH),  merusak  DNA,  dan  menginduksi  perubahan morfologi pada sel kolon (El Waly et al., 2014). Galur Balb/c  dipilih  karena  dengan  pemberian  AOM  dan DSS  menghasilkan  adenokarsinoma  100%  (Suzuki et al., 2006).
Penelitian ini bertujuan untuk menguji secara in vivo terkait  potensi  BBH  yang  telah  difermentasi R. oligosporus terhadap  kondisi  kolon  mencit  yang diinduksi  karsinogen  AOM,  meliputi  jumlah  koloni bakteri  asam  laktat,  konsentrasi  asam  lemak  rantai pendek  (ALRP),  dan  kadar  malondialdehida  (MDA). untuk menghambat pertumbuhan kanker kolon.

## BAHAN DAN METODE

## Bahan
Bahan  yang  digunakan  adalah  gabah  beras hitam varietas Cempo Ireng yang dibeli dari petani di Cigudeg, Bogor, media Potato Dextrose Agar (Oxoid, Inggris), kapang R. oligosporus , media Mann Rogosa Sharpe  Agar,  CaCO 3 (Merck,  Jerman), termamyl (Sigma Aldrich, Jerman), standar campuran ALRP (4- 7056 Supelco, Amerika  Serikat), thiobarbituric acids (Merck,  Jerman),  Trichloroacetic  Acid  (Merck, Jerman),  mencit  ( Mus  musculus )  BALB/c  jantan berusia 5-8 minggu dengan berat rata-rata 20 g yang diperoleh dari Bogor Life Science Technology (BLST) IPB,  azoxymethane/AOM  (Sigma  Aldrich,  Jerman) dengan  kemurnian  98%  dan  Dextran  Sodium Sulfat/DSS (Sigma Aldrich, Jerman) dengan MW 40 000. Bahan ransum mencit meliputi kaseinat (Tatua, Selandia  Baru),  minyak  kedelai,  tepung  selulosa, tepung  maizena,  sukrosa,  multivitamin  tablet,  dan mineral mix (Chemie Lab, Indonesia).

## Pembuatan  dan  fermentasi  bekatul  beras  hitam (BBH)
Pembuatan dan fermentasi BBH mengacu pada Safrida  (2020).  Gabah  beras  hitam  digiling  dengan rice  huller (HW-60A  Yanmar,  Jepang)  untuk  men- dapatkan beras hitam.  Beras hitam disosoh dengan rice polisher (Yanmar N-70F, Jepang), untuk menda- patkan  BBH.  BBH  distabilisasi  dengan  sterilisasi autoklaf (Hirayama, Jepang) suhu 121 o C selama 15 menit.  Pada  BBH  nonfermentasi  (BBHNF)  proses dilanjutkan  dengan  pengukusan selama  2  menit untuk  menyamakan  perlakuan.  Proses  fermentasi untuk  BBH  fermentasi  (BBHF)  dilakukan  dengan menggunakan R. oligosporus dengan 10 6 spora  per g.  Proses  inkubasi  dilakukan  selama  72  jam  dalam inkubator  (Heraeus,  Jerman)  pada  suhu  30°C.  Pro- duk  fermentasi  dikukus  selama  2  menit  dengan steamer ,  kemudian  dipotong  dalam  kondisi  aseptis agar luas permukaannya meningkat. BBH kemudian dipindahkan  ke  kotak  kecil,  dibekukan  24  jam  dan dikeringkan dengan freeze drier (Labconco, Amerika Serikat)  selama  24  jam.  Fermentasi  72  jam  menun- jukkan hasil terbaik dalam menekan pertumbuhan sel kanker kolon WiDr (Safrida, 2020)

## Penanganan mencit
Mencit dengan berat rata-rata 20 g, dipilih untuk intervensi.  Mencit  dibagi  menjadi  empat  kelompok
A B C D 9 Minggu 1 Minggu
(n=6), yaitu kelompok BBHF, BBHNF, kontrol positif (KP),  dan  kontrol  negatif  (KN).  Masa  pemeliharaan mencit (Gambar 1) diawali dengan adaptasi kandang selama  1  minggu  dan  diadaptasi  ransum  selama  4 minggu berikutnya. Selanjutnya, penanganan mencit mengikuti Suzuki et al. (2006), kelompok BBH dan KP mendapatkan  injeksi  intraperitoneal  1  mL  AOM (Sigma  Aldrich,  Jerman)  menggunakan  Syringe (Terumo,  Jepang)  dan  diberikan  air  minum  yang ditambahkan  DSS  1%  (Sigma  Aldrich,  Jerman), sedangkan  KN  diberikan  injeksi  NaCl  0,9%  (Braun, Jerman)  untuk  menyamakan  tingkat  stress.  Setiap ekor  mencit  mendapat  6  g  ransum.  Ransum  yang diberikan  pada  masa  adaptasi  kandang  adalah  ran- sum standar AIN 93M. Pada masa adaptasi ransum, dilakukan  penyesuaian ransum dari  ransum standar menjadi ransum uji BBH fermentasi dan nonfermen- tasi pada kelompok uji. BBHF dan BBHNF diberikan dengan mengganti sumber serat pada ransum kelom- pok  uji,  yaitu  sebesar  5%  dari  total  ransum.  Kebu- tuhan zat gizi  makro  dan  mikro disesuaikan  dengan AIN 93M.
Penelitian  ini  bersifat  preventif  dan  dilakukan selama 25 minggu pasca kedatangan mencit. Induksi AOM (Sigma Aldrich, Jerman) diberikan pada mencit setelah adaptasi ransum dilakukan selama 8 minggu. AOM diinjeksikan pada rongga intraperitoneal mencit dengan dosis 10 mg/kg BB pada awal minggu ke-9. Setelah injeksi AOM dilakukan, seminggu kemudian diberikan DSS 1% selama 4 hari yang ditambahkan pada  minuman  mencit.  Terminasi  dilakukan  pada minggu  ke-25  dengan  menggunakan  bius  ketamin dan  xylazine  lalu  dilanjutkan  dengan  dekapitasi. Perlakuan yang diberikan telah disetujui oleh Komisi Etik  IPB  dengan  nomor  surat  009/KEH/SKE/VIII/ 2020.

## Pengambilan feses dan isi sekum mencit
Pengambilan  feses  dan  isi  sekum  mencit mengikuti Nurtiana (2018). Feses diambil pada awal intervensi  (titik  A),  sehari sebelum  injeksi  AOM  (titik B),  dan  akhir  intervensi  (titik  D).  Pengujian  ALRP menggunakan feses yang dikumpulkan selama 3 hari
di bedding . Feses bedding kemudian dimasukkan ke dalam tempat steril tertutup. Pengujian BAL menggu- nakan feses segar yang diambil langsung dari rektum mencit  dengan  memijat  abdomen  mencit.  Isi  sekum diambil  pasca  terminasi  dengan  membelah  sekum dan  mengeruk  isinya  lalu  disimpan  dalam  wadah steril tertutup.
Analisis  jumlah  bakteri  asam  laktat  (BAL)  pada feses dan sekum
Prosedur analisis mengacu Xiao et al. (2015). Isi sekum  dan  feses  yang  telah  disiapkan  diencerkan hingga  konsentrasi  10 -9 .  Sebanyak  1  mL  larutan pengenceran dituangkan ke dalam cawan petri mulai dari  konsentrasi  10 -5 hingga  10 -9 .  Media  MRSA (Oxoid,  Inggris)  yang  telah  dicampurkan  CaCO 3 (Merck,  Jerman),  dituangkan  ke  dalam  cawan  petri. Cawan  kemudian  diinkubasi  dalam  inkubator  (Leec, Inggris) pada suhu 37°C selama 48 jam. Hasil kemu- dian diukur dengan menghitung koloni yang terbentuk pada  media.  Pengujian  dilakukan  dalam  kondisi aseptis  untuk  menghindari  adanya  kontaminasi  dari luar.

## Analisis konsentrasi ALRP feses dan sekum
Prosedur  analisis  mengacu  pada Ribeiro et  al. (2018). Sampel dari sekum (bagian awal kolon) dan feses  ditimbang  sebanyak  20  mg  dalam  tabung  vial ukuran 1,5 mL dan ditambahkan 200 µ L air destilasi, kemudian  dihomogenisasi  dengan  menggunakan spatula  besi.  Mikrotube  disiapkan  untuk  memasuk- kan  sampel  200 µ L  ke  dalam  200 µ L  campuran pelarut  organik  (N-butanol,  tetrahidrofuran  dan asetonitril  dengan  perbandingan  50:30:20,  100:60: 40 µ L), 40 µ L HCl 0,1 M, 20 mg asam sitrat anhidrat, dan 40 mg NaCl. Analat kemudian divortex selama 1 menit, selanjutnya  dilakukan sentrifugasi  14.870 x g selama 10 menit pada suhu ruang (25°C). Superna- tan kemudian dimasukkan ke dalam tabung vial untuk diuji  dengan Gas  Chromatography (GC)  (Agilent, Amerika  Serikat) dengan kolom DB-23  dengan fase gerak  nitrogen  dan  detector Flame  Ionization Detector (FID).
Keterangan: A= Awal intervensi; B= Injeksi AOM 10 mg/kg BB; C= Pemberian DSS 1%; D= Akhir intervensi Note:  A=  The  beginning  of  intervention;  B=  AOM  Injection  10  mg/kg  BW;  C=  DSS  1%  administration;  D=  The  end  of intervention
Gambar 1. Timeline intervensi mencit Figure 1. Mice intervention timeline
J. Teknol. dan Industri Pangan Vol. 34(1): 13-24 Th. 2023

## Analisis kadar MDA pada kolon
Analisis  MDA  mengikuti  Eze et  al. (2008). Sebanyak  1  g  jaringan  ditambahkan  19  mL  NaCl 0,9% dan dihomogenasi dengan centrifuge (Thermo Fisher, Amerika Serikat) 400 x g. Supernatan homo- genate  jaringan  sebanyak  0,5  mL  ditambahkan  0,5 mL  larutan  fisiologis,  dan  0,5  mL  TCA  (Merck, Jerman)  25%.  Larutan  disentrifugasi  2.000  rpm selama 20 menit. Supernatan yang dihasilkan diambil sebanyak 1 mL dan ditambahkan 0,5% TBA (Merck, Jerman).  Analat  kemudian  dipanaskan  pada  suhu 95°C selama 1 jam. Analat menunjukkan perubahan warna merah jambu dan dibaca intensitasnya dengan spektrofotometer (Hitachi U-2900, Jepang) pada pan- jang gelombang 532 nm.

## Analisis serat
Analisis serat pangan mengikuti prosedur AOAC (2000). BBHF dan BBHNF ditimbang sebanyak 0,5 g. sampel  kemudian  ditambahkan  25  mL  buffer  fosfat 0,08  M  dan  50 µ L  enzim  amilase  tahan  panas, termamyl. Sampel diinkubasi pada suhu 95°C selama 15 menit dan didinginkan hingga suhu ruang (25°C). Sebanyak  5  mL  NaOH  0,275  N  dan  50 µ L  enzim protease  ditambahkan  ke  dalam  larutan  sampel. Sampel  diinkubasi  kembali  dalam waterbath  shaker (Aarson  Scientific  Works,  India) pada  suhu  60°C selama  30  menit.  Sebanyak  5  mL  HCl  0.325  N  dan 150  µl AMG  ditambahkan  ke  dalam  larutan  sampel, dan  diinkubasi  60°C  selama  30  menit.  Etanol  95% suhu  60 ° C  sebanyak  140  mL  ditambahkan,  dan didiamkan 1 jam untuk mengendapkan serat larut air. Sampel disaring dengan filtering crucible yang sudah disiapkan.  Residu  dari  penyaringan  dibilas  dengan etanol 78% sebanyak tiga kali masing-masing 20 mL, lalu etanol 95% dua kali masing-masing 10 mL, dan aseton dua kali masing-masing 10 mL. Penyaring dan residu  sisa  kemudian  diangkat  dan  dioven  105°C semalaman. Perhitungan dilakukan dengan menggu- nakan selisih bobot awal dan akhir serta mempertim- bangkan kadar protein dan kadar abu residu.

## Analisis data
Penelitian ini  menggunakan metode rancangan acak lengkap (RAL). Data ditunjukkan dengan meng- gunakan  rataan  dan  standar  eror.  Data  kemudian ditampilkan  dengan  menggunakan  histogram  untuk selanjutnya dilihat error bar yang bersinggungan. Uji
lanjut dilakukan jika hasil berbeda nyata ditunjukkan dengan menggunakan SPSS versi 21.0.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Kadar serat pangan pada BBH
Serat pangan pada BBH diuji untuk menentukan jumlah  BBH  yang  ditambahkan  pada  ransum.  BBH menggantikan  sumber  serat  pada  kelompok  uji. Pengujian  serat  pangan  bertujuan  untuk  menyama- kan  kandungan  serat  yang  ada  pada  ransum  antar kelompok. Pengujian serat pangan mengikuti prose- dur  AOAC  991.43.  Serat  pangan  yang  diuji  adalah serat larut air dan serat tidak larut air.
Kadar  serat  tidak  larut  air  pada  bekatul  lebih tinggi dibandingkan serat larut (Tabel 1), seperti yang dikemukakan  oleh  Daou  dan  Zhang  (2014).  Hasil fraksinasi  serat  pangan  tidak  larut  pada  bekatul adalah hemiselulosa, selulosa, dan lignin. Jenis serat yang  ada  pada  bekatul  berpengaruh  pada  pertum- buhan  BAL  dan  jenis  ALRP  yang  dihasilkan  dari fermentasi. Hasil pengujian serat larut air atau solu- ble dietary fiber (SDF) pada BBHF lebih tinggi diban- dingkan BBHNF (Tabel 1).  Fermentasi meningkatkan jumlah serat larut air pada pangan (Chu et al., 2019; Zhao et  al., 2018).  Fermentasi  BBH  menggunakan kapang R.  oligosporus. Kapang  ini  menghasilkan enzim selulase, β -glukosidase, β -glukuronidase, dan xylanase  yang  dapat  mengurai  dinding  sel  dari tumbuhan (Sandhu et al., 2017). Peningkatan jumlah serat  larut  disebabkan  karena  adanya  penguraian sebagian  serat  tidak  larut  yang  menghasilkan  serat larut air dan monosakarida (Li et al., 2022).

## Jumlah BAL pada feses dan isi sekum mencit
BAL pada kolon memiliki manfaat dalam mence- gah kanker kolon dan menjaga kesehatan kolon. BAL menunjukkan efek positif dalam menghambat kanker kolon  dengan  membantu  dalam  mekanisme  apop- tosis dan menekan proliferasi sel kanker pada kolon (Zhong et  al., 2014)  Pengujian  jumlah  koloni  BAL dilakukan  pada  feses  awal  intervensi,  feses  H-1 injeksi  AOM,  feses  akhir  intervensi,  dan  isi  sekum akhir  intervensi  (Gambar  2).  Ransum  yang  dikon- sumsi  oleh  mencit  tidak  berbeda  nyata  (data  tidak ditampilkan).  Rataan  konsumsi  ransum  pada  KP adalah (5,55 g/ekor), KN (5,66  g/ekor),  BBHNF (5,9 g/ekor), dan BBHF (5,73 g/ekor).
Tabel 1. Kadar serat pangan pada BBH Table 1. Dietary fiber contents
Sampel ( Sample ) Serat Larut % ( Soluble Dietary Fiber %) Serat Tidak Larut % ( Insoluble Dietary Fiber %) Total Serat % ( Total Dietary Fiber %) BBH fermentasi ( Fermented black rice bran ) 2.09±0.11 17.71±0.11 19.80 BBH non fermentasi ( None fermented black rice bran ) 0.08±0.001 16.06±0.03 16.14
0 2 4 6 8 10 12 KP KN BBHNF BBHF J u m la h Ko lo n i BAL (l o g CFU/g ) L AB Co lo n y Cou n t (l o g CFU/g ) Awal Intervensi H-1 Injeksi
Akhir Intervensi
Isi Sekum
Secara umum, jumlah koloni BAL pada seluruh kelompok  mengalami  peningkatan  sejak  awal  inter- vensi  hingga  H-1  injeksi  AOM.  Jumlah  koloni  BAL pada  kelompok  BBHF  dan  BBHNF  menunjukkan hasil  yang  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  kelom- pok KP dan KN yang diberi ransum standar. Jumlah koloni  BAL  pada  kelompok  BBHF  (9,96  log  CFU/g) tidak  berbeda  dengan  kelompok  BBHNF  (9,92  log CFU/g), tetapi kedua kelompok menunjukkan perbe- daan  yang  signifikan  dibandingkan  dengan  KP  (8,7 log CFU/g). Peningkatan jumlah BAL ini disebabkan adanya  perbedaan  jenis  ransum  yang  diberikan sebelum  injeksi  AOM.  Penambahan  bekatul  pada ransum meningkatkan jumlah koloni BAL pada feses (Henderson et  al., 2012).  Komposisi  serat  pada ransum  berdampak  pada  jumlah  BAL.  Kandungan utama  serat  pada  ransum  standar  yang  diberikan kepada KP dan KN adalah berupa selulosa yang sulit difermentasi,  sedangkan  komposisi  serat  pada  ran- sum  BBHNF  dan  BBHF  lebih  bervariasi  yang  terdiri dari serat larut dan serat tidak larut.
Injeksi  AOM  dan  pemberian  DSS  dalam  air minum dilakukan pada 3 kelompok yaitu KP, BBHNF dan BBHF. Pada akhir intervensi, jumlah koloni BAL pada  feses  maupun  isi  sekum  kelompok  KP,  BBHF dan BBHNF mengalami penurunan, meskipun jumlah BAL  pada  kelompok  BBHF  dan  BBHNF  lebih  tinggi dibandingkan KP. Penurunan ini disebabkan karena terjadinya  inflamasi  yang  diinduksi  oleh  karsinogen AOM  dan  DSS  yang  bertindak  sebagai  agen  infla- masi.  Inflamasi  akan  menyebabkan  disbiosis  kolon, sehingga  jumlah  BAL  akan  mengalami  penurunan akibat lingkungan kolon yang tidak sesuai untuk per- tumbuhannya
(Schippa dan Conte, 2014;
Sivaprakasam et al., 2016).
Pada  akhir  intervensi,  jumlah  koloni  BAL  pada feses maupun isi sekum kelompok BBHF dan BBHNF lebih tinggi daripada KP. Hal ini diperkirakan karena
inflamasi akibat karsinogen  lebih dapat ditekan oleh komponen bioaktif  bekatul, seperti  senyawa- senyawa  antioksidan  pada  bekatul  dan  ALRP  yang dihasilkan  dari  fermentasi  bekatul  oleh  BAL (Komiyama et al., 2011). Secara umum, jumlah BAL pada isi sekum lebih tinggi dibandingkan pada feses akhir intervensi (Tabel 2). Hal ini karena sekum meru- pakan  bagian  awal  kolon  yang  menjadi  tempat  fer- mentasi serat oleh mikroba (Uysal et al., 2017). BBHF menunjukkan hasil jumlah BAL yang lebih tinggi dibandingkan dengan BBHNF pada feses dan sekum  (Gambar  2).  Bekatul  membantu  dalam  men- cegah dysbiosis. Fermentasi serat bekatul oleh BAL menghasilkan  ALRP  yang  membantu  mencegah inflamasi (Komiyama et al. , 2011).  Kenaikan kompo- nen  fenolik  disebabkan  ikatan  dengan  dinding  sel lepas  akibat  fermentasi  yang  dilakukan.  Fermentasi kapang akan mengurai dinding sel, sehingga kompo- nen fenolik akan terlepas menjadi fenolik bebas dan konsentrasi  fenolik  terukur  mengalami  peningkatan (Kurniati et al., 2017). Komponen fenolik juga mem- bantu  dalam  meningkatkan  BAL  dengan  mengham- bat pertumbuhan patogen. Komponen fenolik memili- ki  karakteristik  sebagai  prebiotik  dan  kemampuan antimikroba dalam melawan bakteri patogen (Kasprzak-Drozd et al., 2021).
Struktur  serat  pangan  pada  perlakuan  fermen- tasi, memiliki molekul yang lebih berongga dan tidak beraturan. Perubahan ini juga memberikan sifat fung- sional yang berbeda pada serat (Schmidt et al., 2014) Jenis  serat  pangan  yang  lebih  pendek  dan  tidak memiliki  percabangan  pada  rantainya  akan  lebih cepat dan mudah difermentasi. Keadaan ini menjadi- kan  serat  larut  air  lebih  mudah  digunakan  sebagai sumber energi bagi BAL, sehingga membantu dalam meningkatkan jumlah BAL dalam kolon atau bersifat sebagai prebiotik (Sivaprakasam et al., 2016).
Gambar 2. Jumlah koloni BAL pada feses dan isi sekum Figure 2. LAB colony count in feces and caecum content
Beginning of Intervention
Prior to AOM Injection End of Intervention
Caecum Content
0 2 4 6 8 10 12 14 KP KN BBHNF BBHF Ko n s e n tra s i(m M ) Con c e n tra ti o n (m M ) Feses Awal Intervensi
Feses H-1 injeksi
Feses Akhir Intervensi
isi sekum
Konsentrasi  ALRP  pada  feses  dan  isi  sekum mencit
Uji  ALRP  menggunakan  GC  FID  dilakukan  ter- hadap: (1) feses pada awal intervensi, (2) feses pada H-1 injeksi AOM, (3) feses pada akhir intervensi, dan (4)  isi  sekum  pada  akhir  intervensi.  Asam  Lemak Rantai  Pendek  (ALRP)  dihasilkan  dari  metabolisme mikroba  kolon  adalah  asam  asetat,  asam  propionat dan asam butirat.
Konsentrasi  asam  asetat  pada  feses  akhir intervensi berkisar antara 6 –11 mM (Gambar 3) lebih tinggi dibandingkan dengan asam propionat (1,3 –2,1 mM)  dan  asam  butirat  (0,5 –1,6  mM).  Asam  asetat adalah ALRP yang paling banyak ditemukan di kolon yang kemudian diikuti oleh asam propionat dan asam butirat (Sheflin et al . , 2015). Perbedaan jenis ransum sebelum  injeksi  AOM  menghasilkan  peningkatan konsentrasi  asam  asetat  kelompok  BBHF  dan BBHNF  pada  feses  H-1  injeksi  AOM  (Gambar  3),
sedangkan  pada  kelompok  KN  dan  KP  tidak  ada peningkatan. Hal ini diduga karena komponen utama serat  pada  ransum  standar  adalah  selulosa  yang tidak  difermentasi  oleh  mikroba  kolon,  sedangkan sebagian dari serat bekatul dapat difermentasi.  Pada H-1  injeksi  AOM,  kelompok  BBHF  menunjukkan kenaikan  konsentrasi  asam  asetat  (Tabel  3)  yang lebih  tinggi  (2,47  mM)  dibandingkan  dengan  kelom- pok lainnya. Pada akhir fermentasi, konsentrasi asam asetat  pada  feses  BBHF  menunjukkan  hasil  yang lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  feses  kelompok BBHNF  dan  KP.  Konsentrasi  asam  asetat  pada  isi sekum  kelompok  BBHNF  (11,92±0,00  mM)  lebih tinggi  dibandingkan  dengan  KP  (9,69±0,06  mM). Secara  fungsional,  asam  asetat  membantu  dalam menstimulasi  proliferasi  sel  normal  pada  kolon, meningkatkan  motilitas  kolon,  dan  meningkatkan aliran darah di kolon (Zhao et al., 2013).

## Tabel 2. Perubahan jumlah BAL pada feses dan isi sekum
Table 2. Changes of LAB colonies formed in feces and caecum content
Kelompok ( Groups ) Perubahan Jumlah Koloni BAL (H-1 Injeksi AOM-Awal Intervensi) (log CFU/g) ( Changes in LAB Colonies Count (H-1 AOM Injection – Beginning of Intervention) ( log CFU/g )) Perubahan Jumlah Koloni BAL (Isi Sekum-Feses Akhir) (log CFU/g)
Changes in LAB Colonies Count (Caecum Content - End
Intervention Feces) ( log CFU/g )) Kontrol + ( Positive control) 1.39 0.11 Kontrol – ( Negative control ) 0.79 0.13 BBH non fermentasi ( None fermented black rice bran 1.74 0.16 BBH fermentasi ( Fermented black rice bran ) 1.73 0.18
Gambar 3. Konsentrasi asam asetat pada feses dan isi sekum Figure 3. Acetate acid concentration in feces and caecum content
Beginning of Intervention Prior to AOM Injection End of Intervention Caecum Content Isi Sekum
0 1 2 3 4 5 6 KP KN BBHNF BBHF Ko n s e n tra s i (m M ) Con c e n tra ti o n (m M ) Feses Awal Intervensi
Feses H-1 Injeksi
Feses Akhir Intervensi isi sekum
Konsentrasi  asam  butirat  (Gambar  4)  menun- jukkan  hasil  yang  paling  rendah  dibandingkan  de- ngan jenis ALRP lainnya. Asam butirat menjadi salah satu  komponen  penting  dalam  pencegahan  kanker kolon.  Asam  butirat  memiliki  kemampuan  dalam melindungi  sel  kolon  dari  kanker  yang  diinduksi kerusakan  kromosom,  menghambat  perpindahan dan penempelan sel yang berpotensi tumor, memper- baiki gen yang mengatur proliferasi, diferensiasi, dan apoptosis  sel  kolon  (Macfarlane  dan  Macfarlane, 2012; Zhao et al., 2013).
Konsentrasi  asam  butirat  pada  isi  sekum kelompok  BBHNF  adalah  yang  tertinggi  (3,41±0,01 mM).  Meskipun  tidak  berbeda  dengan  kelompok BBHF  (2,86±0,78  mM),  namun  konsentrasi  asam butirat  BBHNF  lebih  tinggi  daripada  KP  (2,27±0,31 mM). Penurunan konsentrasi asam butirat pada feses dibandingkan isi sekum disebabkan oleh penyerapan ALRP sepanjang kolon. Kolon menjadi tempat penye- rapan  ALRP  bersama  dengan  air,  natrium,  dan  ka- lium. Penurunan asam butirat pada feses terjadi kare- na  adanya  penurunan  pH  pada  kolon  bagian  distal, sehingga meningkatkan penyerapan asam butirat.
Konsentrasi  asam  propionat  pada  feses  H-1 injeksi  AOM  dan  feses  akhir  masa  intervensi  tidak
ada perbedaan antar kelompok (Gambar 5). Konsen- trasi  asam  propionat  pada  isi  sekum  kelompok BBHNF  (2,31±0,01  mM)  menunjukkan  hasil  lebih tinggi  dibandingkan  dengan  KP  (1,69±0,16  mM), akan  tetapi  tidak  berbeda  dengan  BBHF  (2,09±0,32 mM)  dan  KN  (1,79±0,74  mM).  Konsentrasi  asam propionat  menunjukkan  hasil  yang  lebih  sedikit dibandingkan  dengan  asam  asetat,  namun  lebih banyak  dibandingkan  asam  butirat.  Asam  propionat menjadi  ALRP  tertinggi  kedua  dalam  fermentasi karbohidrat dalam kolon yang  dilakukan oleh  mikro- biota pada kolon. Asam asetat merupakan ALRP ter- tinggi  yang  dihasilkan  dalam  fermentasi  karbohidrat tersebut (Komiyama et al., 2011; Sheflin et al., 2015). Asam propionat memiliki kontribusi dalam mengham- bat inflamasi yang terjadi. Propionat bersama dengan butirat mengatur sel T-regulatory melalui mekanisme histon deasetilasi (Louis et al., 2014).
BBH digunakan oleh mikrobiota kolon baik sebe- lum injeksi AOM maupun setelah injeksi AOM. Hal ini ditunjukkan  dari  perbedaan  konsentrasi  ALRP  yang bernilai  positif  antara  sebelum  injeksi  AOM  diban- dingkan awal intervensi (Tabel 2, 3, 4, dan 5).

## Tabel 3. Perubahan konsentrasi asam asetat pada feses dan isi sekum
Table 3. Change of acetate acid concentration in feces and caecum content
Kelompok ( Groups ) Perubahan Konsentrasi Asam Asetat (H-1 Injeksi AOM-Awal Intervensi) (mM) (( Changes Acetate Acid Concentration (H-1 AOM Injection –Beginning of Intervention) (mM) ) Perubahan Konsentrasi Asam Asetat (Isi Sekum- Feses Akhir) (mM) ( Changes Acetate Acid
Concentration (Caecum Content –End Intervention Feces) (mM) ) Kontrol + ( Positive control ) 1.58 1.41 Kontrol – ( Negative control ) -2.27 -1.22 BBH non fermentasi ( None fermented black rice bran ) 1.2 5.77 BBH fermentasi ( Fermented black rice bran ) 2.47 1.31
Gambar 4. Konsentrasi asam butirat pada feses dan isi sekum
Figure 4.  Butyrate acid concentration in feces and caecum content Beginning of Intervention Prior to AOM Injection End of Intervention Caecum Content Isi Sekum
Gambar 5.  Konsentrasi asam propionat pada feses dan isi sekum Figure 5.  Propionate acid concentration in feces and caecum content
Tabel 4. Perubahan konsentrasi asam butirat pada feses dan isi sekum Table 4. Change of acetate acid concentration in feces and caecum content
Kelompok ( Groups ) Perubahan Konsentrasi Asam Butirat (H-1 Injeksi AOM-Awal Intervensi) (mM) ( Changes Butyrate Acid Concentration (H-1 AOM Injection –Beginning of Intervention) (mM) Perubahan Konsentrasi Asam Butirat (Isi Sekum- Feses Akhir) (mM) ( Changes Butyrate Acid
Concentration (Caecum Content-End Intervention Feces) (mM)) Kontrol + ( Positive control ) -0.19 1.45 Kontrol – ( Negative control ) -1.84 1.03 BBH non fermentasi ( None fermented black rice bran ) 0.07 2.4 BBH fermentasi ( Fermented black rice bran ) 0.45 2.02

## Tabel 5. Perubahan konsentrasi asam propionat pada feses dan isi sekum
Table 5. Change of acetate acid concentration in feces and caecum content
Kelompok ( Groups ) Perubahan Konsentrasi Asam Propionat (H-1 Injeksi AOM- Awal Intervensi) (mM) ( Changes Propionate Acid Concentration (H-1 AOM Injection –Beginning of Intervention) (mM)) Perubahan Konsentrasi Asam Propionat (Isi Sekum-Feses Akhir) (mM) ( Changes Propionate Acid
Concentration (Caecum Content-End Intervention Feces) (mM)) Kontrol + ( Positive control) -0.41 0.16 Kontrol – ( Negative control ) -1.99 -0.35 BBH non fermentasi ( None fermented black rice bran ) 0.2 0.84 BBH fermentasi ( Fermented black rice bran ) -0.09 0.78
Setelah  injeksi  AOM,  konsentrasi  ketiga  ALRP sekum pada kelompok BBH (terutama BBHNF) lebih tinggi  dibandingkan  kelompok  kontrol.  Jika  diban- dingkan dengan konsentrasi ALRP pada sekum, kon- sentrasi  ALRP pada  feses  lebih rendah (Tabel  2, 3, 4, dan 5).
Penelitian  Ohigashi et  al. (2013),  menunjukkan adanya  perubahan  pada  ALRP  yang  terjadi  karena adanya  perubahan  mikrobiota  yang  memengaruhi fermentasi di kolon akibat adanya inflamasi, sehingga terjadi dysbiosis. Konsentrasi pada feses yang lebih
rendah dibandingkan  isi sekum dapat terjadi karena adanya  penyerapan  ALRP  sepanjang  kolon  (Hamer et  al., 2008).  ALRP  diserap  dengan  cepat  hampir 95% dari ALRP yang tersedia (Islam et al., 2017).
Perbedaan  ALRP  disebabkan  oleh  jenis  serat dan  BAL  yang  melakukan  fermentasi  pada  kolon. Jenis serat dan pengolahan yang dipilih akan mengu- bah struktur serat yang akan memengaruhi BAL yang tumbuh  dan  jenis  ALRP  yang  dihasilkan  (Hamaker dan  Tuncil, 2014).  Perbedaan  jenis  serat  akan menghasilkan  jenis soluble  sugar yang  berbeda.
Beginning of Intervention Prior to AOM Injection End of Intervention Caecum Content 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 4,5 5,0 KP KN BBHNF BBHF Ko n s e n tra s i (m M ) Con c e n tra ti o n (m M ) Feses Awal Intervensi Feses H-1 injeksi Feses Akhir Intervensi isi sekum 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0 Beginning of Intervention Prior to AOM Injection End of Intervention
Caecum Content Isi Sekum
J. Teknol. dan Industri Pangan Vol. 34(1): 13-24 Th. 2023
Perbedaan  ini  akan  memengaruhi  fermentasi,  hasil ALRP yang dihasilkan dan BAL yang tumbuh (Wang et al., 2019).
ALRP menurunkan pH kolon, sehingga mening- katkan jumlah BAL yang selanjutnya dapat memban- tu dalam mengurangi karsinogen pada kolon (Tang et al., 2011). BAL memiliki aktivitas yang rendah terkait enzim  yang  berperan  dalam  mengubah  prokarsino- gen menjadi komponen karsinogen. AOM yang dibe- rikan  akan  dihidrolisis  di  hati  dan  dikembalikan  ke kolon bersama dengan empedu dalam bentuk metal azoksimetanol  yang  akan  berikatan  dengan  enzim betaglukuronidase.  Enzim  betaglukuronidase  akan mengikat  ion  metilkarbonium  yang  bersifat  karsino- genik.  Aktivitas  enzim  betaglukuronidase  pada  BAL lebih  rendah  dibandingkan  dengan  bakteri  patogen, sehingga  tingginya  BAL  akan  menurunkan  jumlah bakteri  patogen  penghasil  enzim  betaglukuronidase dan menghambat pertumbuhan kanker kolon (Hijová et al., 2017).

## Kadar MDA kolon
Pemberian BBH dapat menurunkan kadar MDA pada  kolon,  yang  ditunjukkan  dengan  kadar  MDA BBHF  dan  BBHNF  lebih  rendah  dibandingkan  KP. Kadar  MDA  BBHF  (1,41±0,02 µ mol)  lebih  rendah dibandingkan dengan kadar MDA BBHNF (1,88±0,05 µ mol) dan kelompok kontrol positif (2,03±0,09 µ mol) (Gambar 6). MDA juga bisa menjadi indikator tingkat keparahan  dari  kanker  kolon.  Peningkatan  konsen- trasi MDA pada serum terjadi selaras dengan meta- stasis  dan  tingkatan  kanker  kolon  yang  terjadi. Peningkatan  kadar  MDA  yang  diuji  secara  kualitatif dapat  menjadi  salah  satu  indikator  untuk  efek  uji pengobatan dari kanker (Zińczuk et al., 2019; Rašić et al., 2018).
Gambar 6.  Kadar MDA pada kolon mencit Figure 6.  Malondialdehyde in mice colon
MDA  pada  penderita  kanker  kolon  mengalami kenaikan  karena  adanya  oksidasi  lipid  yang  tinggi. Peroksidasi  lemak  terjadi  karena  oksidasi  lipid  oleh radikal  bebas  (Yoshida et  al., 2013). Thiobarbituric acid (TBA)  digunakan  untuk  mengukur  MDA.  Kadar MDA  menunjukkan  produk  hasil  peroksidasi  lemak yang  direaksikan  menggunakan  TBA.  Reaksi  ini menghasilkan  warna  merah  muda  yang  kemudian dibaca dengan spektrofotometer UV-VIS (Mitra et al., 2016).
Hasil  pengujian  MDA  tertinggi  terjadi  pada kelompok  KP. Hasil kelompok  KP jika dibandingkan dengan kelompok BBH menunjukkan hasil yang lebih tinggi.  Hasil  pengujian  statistik  menunjukkan  perbe- daan yang signifikan pada setiap perlakuan.  Pengu- kuran total fenolik, total flavonoid, dan aktivitas anti- oksidan pada penelitian Safrida (2020) menunjukkan fermentasi  BBH  dengan Rhizopus  oligosporus sela- ma 72 jam menghasilkan total fenolik 7,96 mg EAG/g ekstrak,  total  flavonoid  1,54  mgEQ/g  ekstrak,  dan aktivitas  antioksidan  72%.  Antioksidan pada bekatul mampu  menghambat  peroksidasi  lemak  dan  pro- duksi radikal bebas. Antioksidan pada bekatul salah satunya  adalah γ -oryzanol  yang  disusun  oleh  asam ferulat dan sterol. Asam ferulat memiliki kemampuan untuk menangkap radikal bebas dan mencegah oksi- dasi lemak (Islam et al., 2014).

## KESIMPULAN
Hasil  pengujian  menunjukkan  pemberian  ran- sum BBHF maupun BBHNF dapat memperbaiki kon- disi kolon pasca injeksi AOM, yang ditunjukkan oleh adanya  peningkatan  jumlah  BAL  kolon,  konsentrasi ALRP,  serta  penurunan  MDA  kolon  dibandingkan kelompok kontrol positif (KP). Penurunan kadar MDA pada  kelompok  BBHF  lebih  besar  dibandingkan kelompok BBHNF. Konsentrasi ALRP (asetat, propio- nat  dan  butirat)  lebih  tinggi  pada  kelompok  BBHNF dibandingkan kelompok BBHF.

## DAFTAR PUSTAKA
[AOAC]  Association  of  Official  Analytical  Chemists. Official  Method  Analysis.  2000.  Total,  Soluble, dan Insoluble Dietary Fiber Enzymatic- gravimetric  Method. https://acnfp.food.gov.uk [15 Juni 2022].
0 0,5 1 1,5 2 2,5 KP KN BBHNF BBHF
Ka d a r M DA ( µ m o l) M a lo n d ia ld e h y d e (µ m o l) 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0
Arnold M, Sierra MS, Laversanne M, Soerjomataram
I,  Jemal  A,  Bray  F.  2017.  Global  patterns  and trends  in  colorectal  cancer  incidence  and  mor- tality.  Gut  66:  683 –691. https://doi.org/10.1136/ gutjnl-2015-310912
Canani  RB,  Di  Costanzo  M,  Leone  L.  2012.  The Epigenetic  effects  of  butyrate:  Potential  thera- peutic  implications  for  clinical  practice.  Clin Epigenetics  4:  4(2012). https://doi.org/10.1186/ 1868-7083-4-4
Chu  J,  Zhao  H,  Lu  Z,  Lu  Z,  Bie  X,  Zhang  C.  2019. Improved  physicochemical  and  functional  pro- perties of dietary fiber from millet bran fermented by Bacillus  natto .  Food  Chem  294:  79 –86. https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2019.05.035
Daou C, Zhang H. 2014. Functional and physiological properties of total, soluble, and insoluble dietary fibres derived from defatted rice bran. J Food Sci Technol 51: 3878-3885. https://doi.org/10.1007/ s13197-013-0925-y
El  Waly  B,  Macchi  M,  Cayre  M,  Durbec  P.  2014. Oligodendrogenesis in the normal and pathologi- cal  central  nervous  system.  Front  Neurosci  8: 145. https://doi.org/10.3389/fnins.2014.00145
Eze JI, Anene BM, Chukwu CC. 2008. Determination of  serum  and  organ  malondialdehyde  (MDA) concentration,  a  lipid  peroxidation  index,  in Trypanosoma brucei -infected rats. Compar Clin Pathway 17: 67 –72. https://doi.org/10.1007/s00 580-008-0722-6
Gu S, Chen D, Zhang J-N, Lv X, Wang K, Duan L-P, Nie  Y,  Wu  X-L.  2013.  Bacterial  community mapping  of  the  mouse  gastrointestinal  tract. PLoS  ONE  8:  e74957. https://doi.org/10.1371/ journal.pone.0074957
Hamaker BR, Tuncil YE. 2014. A perspective on the complexity  of  dietary  fiber  structures  and  their potential effect on the gut microbiota. J Mol Biol 426:  3838-3850. https://doi.org/10.1016/j.jmb. 2014.07.028
Hamer  HM,  Jonkers  D,  Venema  K,  Vanhoutvin  S, Troost  FJ,  Brummer  R-J.  2008.  Review  article: the role of butyrate on colonic function.  Aliment Pharmacol Ther 27: 104-109. https://doi.org/10. 1111/j.1365-2036.2007.03562.x
Henderson AJ, Kumar A, Barnett B, Dow SW, Ryan EP.  2012.  Consumption  of  rice  bran  increases mucosal  immunoglobulin  a  concentrations  and numbers  of  intestinal Lactobacillu s  spp.  J  Med Food  15:  469 –475. https://doi.org/10.1089/jmf.
2011.0213
Hijová E, Kuzma J, Strojný L, Bomba A,  Bertková I, Chmelárová  A,  Hertelyová  Z,  Benetinová  V, Stofilová  J,  Ambro  L.  2017.  Ability  of Lactoba- cillus plantarum LS/07 to modify intestinal enzy- mes activity in chronic diseases prevention. Acta Biochimica Polonica 64: 113-116. https://doi.org/
10.18388/abp.2016_1308
Islam  J,  Koseki  T,  Watanabe  K,  Ardiansyah, Budijanto S, Oikawa A, Alauddin M, Goto T, Aso H, Komai M, Shirakawa H. 2017. Dietary supple- mentation  of  fermented  rice  bran  effectively alleviates dextran sodium sulfate-induced colitis in mice. Nutrients 9: 747. https://doi.org/10.3390/ nu9070747
Islam MS, Matsuki N, Nagasaka R, Ohara K, Hosoya T, Ozaki H, Ushio H, Hori M. 2014. Chapter 34- rice  bran  antioxidants  in  health  and  wellness. wheat and rice in disease prevention and health. 443 –451.  Elsevier  Inc,  UK. https://doi.org/10. 1016/B978-0-12-401716-0.00034-9
Jia  Q,  Chen  X,  Köllner  G,  Rinkel  J,  Fu  J,  Labbé  J, Xiong W, Dickschat JS, Gershenzon J, Chen F. 2019.  Terpene  synthase  genes  originated  from bacteria through horizontal gene transfer contri- bute  to  terpene  diversity  in  fungi.  Scientific Reports  9:  9223. https://doi.org/10.1038/s4159 8-019-45532-1
[Kemenkes  RI]  Kementrian  Kesehatan  Republik Indonesia. 2014. Hasil Riskesdas 2013.
[Kemenkes  RI]  Kementrian  Kesehatan  Republik Indonesia. 2019. Hasil Utama Riskesdas 2018.
Kasprzak-Drozd  K,  Oniszczuk  T,  Stasiak  M,
Oniszczuk A. 2021. Beneficial effects of phenolic compounds  on  gut  microbiota  and  metabolic syndrome. Int J Mol Sci 22: 3715. https://doi.org/ 10.3390/ijms22073715
Law  BMH,  Waye  MMY,  So  WKW,  Chair  SY  2017. Hypotheses  on  the  potential  of rice  bran  intake to  prevent  gastrointestinal  cancer  through  the modulation of oxidative stress. Int J Mol Sci 18: 1352. https://doi.org/10.3390/ijms18071352
Li Y, Niu L, Guo Q, Shi L, Deng X, Liu X, Xiao C. 2022. Effects of fermentation with lactic bacteria on the structural  characteristics  and  physicochemical and functional properties of soluble dietary fiber from  prosomillet  bran.  LWT  154:  112609. https://doi.org/10.1016/j.lwt.2021.112609
Komiyama Y, Andoh A, Fujiwara D, Ohmae H, Araki Y, Fujiyama Y, Mitsuyama K, Kanauchi O. 2011. New prebiotics from rice bran ameliorate inflam- mation  in  murine  colitis  models  through  the modulation  of  intestinal  homeostasis  and  the mucosal immune system. Scand J Gastroenterol 46:  40 –52. https://doi.org/10.3109/00365521.
2010.513062
Kurniati Y, Budijanto S, Nuraida L, Dewi FNA. 2017. Peningkatan  senyawa  fenolik  bekatul  dengan SSF  (solid  state  fermentation)  sebagai  pence- gah kanker. Buletin Iptek Tanaman Pangan 12:
97-104.
https://doi.org/10.6066/jtip.2023.34.1.13
Louis P, Hold GL, Flint HJ. 2014. The Gut microbiota, bacterial metabolites and colorectal cancer. Nat Rev  Microbiol  12:  661-672. https://doi.org/10. 1038/nrmicro3344
Macfarlane GT, Macfarlane S. 2012. Bacteria, colonic fermentation,  and  gastrointestinal  health.  J AOAC  Int  95:  50-60. https://doi.org/10.5740/ jaoacint.SGE_Macfarlane
Mitra P, Mandal NC, Acharya K. 2016. Polyphenolic extract of Termitomyces heimii : Antioxidant acti- vity and phytochemical constituents. Journal Fur Verbraucherschutz  Und  Lebensmittelsicherheit 11:  25 –31. https://doi.org/10.1007/s00003-015- 0976-2
Moongngarm  A,  Daomukda  N,  Khumpika  S.  2012. Chemical  compositions,  phytochemicals,  and antioxidant capacity of rice bran, rice bran layer, and  rice  germ.  APCBEE  Proc  2:  73-79. https://doi.org/10.1016/j.apcbee.2012.06.014
Nurtiana W. 2018. Potensi Bekatul Beras Hitam untuk Mengubah  Konsentrasi  Asam  Lemak  Rantai Pendek  dan  Aktivitas  Enzim  β-Glucuronidase sebagai  Penghambat  Perkembangan  Kanker Kolon  secara In  Vivo .    [Tesis].  Bogor:  Fakultas Teknologi Pertanian, Institut Pertanian Bogor.
Ohigashi  S,  Sudo  K,  Kobayashi  D,  Takahashi  O, Takahashi T, Asahara T, Nomoto K, Onodera H. 2013. Changes of the intestinal microbiota, short chain  fatty  acids,  and  fecal  pH  in  patients  with colorectal  cancer.  Digestive  Dis  Sci  58:  1717 – 1726. https://doi.org/10.1007/s10620-012-2526-
4
Rašić I, Rašić A, Akšamija G, Radović S. 2018. The relationship  between  serum  level  of  malondial- dehyde  and  progression  of  colorectal  cancer. Acta  Clin  Croat  57:  411-416. https://doi.org/10. 20471/acc.2018.57.03.02
Ribeiro  WR,  Vinolo  MAR,  Calixto  LA,  Ferreira  CM. 2018.  Use  of  gas  chromatography  to  quantify short  chain  fatty  acids  in  the  serum,  colonic luminal content and feces of mice. Bio-Protocol 8:  e3089. https://doi.org/10.21769/bioprotoc.30
89
Safrida. 2020. Penghambatan Proliferasi Sel Kanker Kolon WiDr in Vitro Oleh Ekstrak Bekatul Beras Hitam  Fermentasi.  [Tesis].  Bogor:  Fakultas Teknologi Pertanian, Institut Pertanian Bogor.
Sandhu KS, Punia S, Kaur M. 2017. Fermentation of cereals: A tool to enhance bioactive compounds. Plant Biotechnology: Recent Advancements and Developments.  157 –170.  Springer,  Singapore. https://doi.org/10.1007/978-981-10-4732-9_8
Schippa S, Conte MP. 2014. Dysbiotic events in gut microbiota: Impact on human health. Nutrients 6: 5786-5805. https://doi.org/10.3390/ nu6125786
Schmidt CG, Furlong EB. 2012. Effect of particle size and  ammonium  sulfate  concentration  on  rice bran  fermentation  with  the  fungus Rhizopus oryzae .  Bioresour  Technol  123:  36 –41. https:// doi.org/10.1016/j.biortech.2012.07.081
Sheflin MA, Borresen EC, Wdowik MJ, Rao S, Brown RJ,  Heuberger  AL,  Broeckling  CD,  Weir  TL, Ryan  EP.  2015.  Pilot  dietary  intervention  with heat-stabilized rice bran modulates stool micro- biota and metabolites in healthy adults. Nutrients 7:  1282 –1300. https://doi.org/10.3390/nu70212 82
Sivamaruthi  BS,  Kesika  P,  Chaiyasut  C.  2018.  A comprehensive  review  on  functional  properties of fermented rice bran. Pharmacog Rev 2: 218- 224. https://doi.org/10.4103/phrev.phrev_11_18 Sivaprakasam S, Prasad PD, Singh N. 2016. Benefits of  short-chain  fatty  acids  and  their  receptors  in inflammation  and  carcinogenesis.  Pharmacol Ther  164:  144-151. https://doi.org/10.1016/j. pharmthera.2016.04.007
Slavin  JL.  2008.  Position  of  the  american  dietetic association: Health  implications of dietary fiber. J  Am  Diet  Assoc  108:  1716-1731. https://doi. org/10.1016/j.jada.2008.08.007
Suzuki R, Kohno H, Sugie S, Nakagama H, Tanaka T. 2006. Strain differences in the susceptibility to azoxymethane  and  dextran  sodium  sulfate- induced colon carcinogenesis in mice. Carcinog 27: 162 –169. https://doi.org/10.1093/carcin/bgi2 05
Tang  Y,  Chen  Y,  Jiang  H,  Nie  D.  2011.  The  role  of short-chain fatty acids in orchestrating two types of  programmed  cell  death  in  colon  cancer. Autophagy  7:  235-237. https://doi.org/10.4161/ auto.7.2.14277
Uysal  M,  Gül  SS,  Karaman  S,  Tas  U,  Sapmaz  HI, Uysal  F,  Aytekin  K,  Tümer  MK.  2017.  Caecum location  in  laboratory  rats  and  mice:  An  anato- mical and radiological study. Laboratory Animals 51: 245 –255. https://doi.org/10.1177/002367721 6658916
Wang M, Wichienchot S, He X, Fu X, Huang Q, Zhang B.  2019. In  vitro colonic  fermentation  of dietary fibers:  fermentation  rate,  short-chain  fatty  acid production and changes in microbiota. Trends in Food  Sci  Technol  88:  1-9. https://doi.org/10. 1016/j.tifs.2019.03.005
Yang  M,  Ashraf  J,  Tong  L,  Wang  L,  Zhang  X,  Li  N, Zhou S, Liu L. 2021. Effects of Rhizopus oryzae and Aspergillus oryzae on prebiotic potentials of rice  bran  pretreated  with  superheated  steam  in an in  vitro fermentation  system.  LWT  139: 110482. https://doi.org/10.1016/j.lwt.2020.1104
82
Yoshida  Y,  Umeno  A,  Shichiri  M.  2013.  Lipid peroxidation biomarkers for evaluating oxidative stress  and  assessing  antioxidant  capacity in vivo .  J  Clin  Biochem  Nutr  52:  9-16. https://doi. org/10.3164/jcbn.122112
Zeng  H,  Lazarova  DL,  Bordonaro  M.  2014.  Mecha- nisms  linking  dietary  fiber,  gut  microbiota  and colon  cancer  prevention.  World  J  Gastrointest Oncol 6: 41 –51. https://doi.org/10.4251/wjgo.v6. i2.41
Zhao G, Zhang R, Dong L, Huang F, Tang X, Wei Z, Zhang M. 2018. Particle size of insoluble dietary fiber  from  rice  bran  affects  its  phenolic  profile, bioaccessibility  and  functional  properties.  LWT 87:  450-456. https://doi.org/10.1016/j.lwt.2017.
09.016
Zhao  Y,  Wu  J,  Li  JV,  Zhou  N-Y,  Tang  H,  Wang  Y. 2013. Gut microbiota composition modifies fecal metabolic  profiles  in  mice.  J  Proteome  Res  12:
2987 –2999. https://doi.org/10.1021/pr400263n Zhong L, Zhang X, Covasa M. 2014. Emerging roles of  lactic  acid  bacteria  in  protection  against colorectal  cancer.  World  J  Gastroenterol  20: 7878-7886. https://doi.org/10.3748/wjg.v20.i24. 7878
Zińczuk  J,  Maciejczyk  M,  Zaręba  K,  Romaniuk  W, Markowski A , Kędra B, Zalewska A, Pryczynicz A, Matowicka-Karna J , Guzińska-Ustymowicz K. 2019.  Antioxidant  barrier,  redox  status,  and oxidative  damage  to  biomolecules  in  patients with  colorectal  cancer.  Can  malondialdehyde and  catalase  be  markers  of  colorectal  cancer advancement?.  Biomolecules  9:  637. https:// doi.org/10.3390/biom9100637