VAKSINASI BENIH IKAN KERAPU MACAN ( Epinephelus fuscoguttatus ) DENGAN TIGA BAKTERI PATOGEN YANG SUDAH DIINAKTIVASI

## VACCINATION OF  JUVENILE TIGER GROUPER WITH THREE INACTIVATED BACTERIAL PATHOGENS

## Zafran
Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Budidaya Laut Gondol, Bali E-mail: zafran16@yahoo.com

## ABSTRACT
An experiment to evaluate the efficacy of inactivated polyvalent bacterial vaccines to increase specific immunity  of  tiger  grouper  (Epinephelus  fuscoguttatus)  against  bacterial  infection  was  conducted  in floating net cages located in Sumbawa Island, West Nusa Tenggara. Polyvalent bacterial vaccine was prepared  by  mixing  three  species  of  killed-bacteria  (Vibrio  harveyi,  V.  alginolyticus,  and Photobacterium leiognathi) with ratio of 1:1:1. The density of bacterial vaccine was adjusted at 10 10 CFU/ml.  The  vaccines  were  delivered  by  immersion.  The  control  fish  were  immersed  in  sea  water without  vaccine.  Fish  with  ±  6  cm of  total  length  and ±  7  g of  body  weigth  were  used  in  this experiment. The fishes were reared in concrete tanks in hatchery of Gondol, Bali until they reached ± 9  cm  of  total  length.  Later,  the  fishes  were  reared  for  6  months  in  floating  net  cages  located  in Sumbawa. Re-vaccinations were delivered 60 days and 120 days post initial vaccination. The results showed  that  titer  antibody  and  survival  rate  of  the  vaccinated  fish  were  1/128  and  77.11%,  higher than the control (titer antibody=1/4-1/8, survival=45.56%, respectively). The relative percent survival of  the  vaccinated  fish  was  57.95%.  It  was  suggested  that  the  vaccines  were  immunogenic  and  had protective ability against bacterial infection in tiger groupers.
Keywords: bacterial disease, polyvalent bacterial vaccine, tiger grouper

## ABSTRAK
Ikan  kerapu  budidaya  rentan  terhadap  infeksi  berbagai  jenis  bakteri.  Penelitian  untuk  mengetahui efektivitas  vaksin  yang  terdiri  dari  tiga  spesies  bakteri  patogen  telah  dilakukan  terhadap  benih  ikan kerapu  macan  ( Epinephelus  fuscoguttatus )  di  karamba  jaring  apung  (KJA).  Ketiga  bakteri  patogen telah  diidentifikasi  dengan  metode  sekuensing  sebagai Vibrio  harveyi , Vibrio  alginolyticus ,  dan Photobacterium  leiognathi .  Penelitian  dilakukan  di  Sumbawa  Besar,  Nusa  Tenggara  Barat.  Vaksin bakteri  polivalen  dibuat  dengan  mencampurkan  3  vaksin  dengan  perbandingan  1:1:1  dan  kepadatan 10 10 CFU/ml. Vaksin diberikan pada benih (panjang total ± 6 cm dan berat ± 7 g) di hatcheri melalui perendaman  selama  1  jam  dengan  konsentrasi  1  mL  vaksin/L  air  laut  dan  diikuti  dengan  booster  1 minggu kemudian. Sebagai kontrol adalah perendaman ikan dalam air laut. Vaksinasi ulang diberikan setelah ikan ditebar di KJA 60 hari dan 120 hari pasca vaksinasi awal. Hasil penelitian menunjukkan bahwa  ikan  kerapu  macan  memberikan  respons  positif  terhadap  vaksin  bakteri  polivalen  yang diberikan melalui perendaman. Nilai titer antibodi dan sintasan ikan yang diberi perlakuan vaksinasi lebih  tinggi  dibanding  kontrol.  Nilai  titer  antibodi  ikan  yang  divaksin  mencapai  1/128  pada  akhir penelitian  dibanding  kontrol  yang  hanya  1/4.  Sedangkan  sintasan  pada  kelompok  vaksinasi  adalah 77,11% dibanding kontrol yang hanya 45,56% dengan nilai RPS 57,95%. Hasil tersebut menunjukkan bahwa  vaksin  bakteri  polivalen  bersifat  imunogenik  pada  ikan  kerapu  dan  mampu  memberikan perlindungan terhadap infeksi bakteri.
Kata kunci: ikan kerapu macan, penyakit bakterial, vaksin bakteri polivalen

## I. PENDAHULUAN
Berbagai  spesies  ikan  karang,  terma- suk ikan kerapu, merupakan andalan Indone- sia  sebagai  penghasil  devisa  dari  komoditas perikanan.  Karena  itu  tidak  heran  kalau banyak  pengusaha  yang  berani  menanamkan investasi  dalam  bidang  budidaya  ikan  ini  di berbagai  wilayah  perairan  Indonesia.  Per- kembangan  usaha  budidaya  ikan  karang  ini ternyata  diikuti  pula  oleh  berjangkitnya berbagai  jenis  penyakit,  baik  yang  disebab- kan  oleh  infeksi  virus,  bakteri,  parasit  mau- pun oleh penyakit non-infeksi seperti malnu- trisi dan deformitas. Infeksi virus yang sudah dilaporkan  sangat  mematikan  pada  ikan  laut budi  daya  adalah viral  nervous  necrosis / VNN  (Zafran et  al., 1998a;  2000;  2002; Zafran  dan  Yuasa,  1999)  dan  iridovirus (Owen,  1993;  Rukyani et  al., 1993;  Mahar- dika et  al .,  2001;  2004a;  2004b).  Dari kelompok  bakteri  umumnya  adalah  dari genus Vibrio dan Streptococcus (Zafran et al., 1998b).  Kelompok  parasit  yang  sering jadi  masalah  adalah  Monogenea  Trematoda, antara  lain Haliotrema,  Pseudorhabdosyno- chus , Diplectanum,  Benedenia,  Neobenede- nia,  Lepeophtheirus ,  dan  berbagai  jenis protozoa  seperti Cryptocaryon  irritans dan Trichodina (Zafran et al ., 1997; 1998b).
Penyakit  pada  ikan  dapat  ditanggula- ngi dengan berbagai cara, antara lain dengan perbaikan lingkungan karena penyakit biasa- nya  berkembang  apabila  lingkungan  jelek sehingga  ikan  stres.  Selain  itu  perbaikan nutrisi  juga  memegang  peran  penting  dalam meningkatkan  ketahanan  ikan  terhadap penyakit.  Imunostimulan  juga  dilaporkan efektif meningkatkan kekebalan non-spesifik ikan  terhadap  penyakit  (Santarem et  al.,
1997;  Vadstein,  1997;  Johnny et  al., 2001; 2005;  Johnny  dan  Roza,  2002;  Roza et  al.,
2004;  Zafran et  al .,  2006).  Vaksin  diyakini dapat  memberikan  kekebalan  spesifik  pada ikan  terhadap  penyakit  tertentu.  Beberapa penelitian  pendahuluan  skala  laboratorium telah membuktikan bahwa ikan kerapu mem- berikan respons positif terhadap vaksin inak-
tif anti-VNN (Roza et al., 2002; 2004; Zafran et al ., 2007).
Hasil  penelitian  pada  tahun  2007 sampai  dengan  tahun  2009  membuktikan bahwa pemberian vaksin inaktif (VNN, irido- virus, bakteri maupun parasit) dapat mening- katkan  titer  antibodi  ikan  kerapu  secara signifikan (Zafran et al., 2007; 2008). Namun demikian,  karena  penelitian  tersebut  dilaku- kan  di  laboratorium  dengan  kondisi  ling- kungan  yang  relatif  terkontrol,  maka  perlu diujicobakan pada kondisi lapangan,  yaitu di karamba  jaring  apung  (KJA).  Lokasi  yang dipilih  untuk  uji  coba  vaksin  tersebut  adalah Labuan Jambu, Sumbawa Besar, Nusa Teng- gara Barat. Lokasi ini dipilih karena memiliki potensi budidaya KJA yang besar dan sangat ideal  dengan  suplai  air  yang  bersih  dan  jauh dari  polusi  masyarakat.  Vaksin  polivalen dipilih  karena  ikan  yang  dipelihara  di  KJA dari  pengalaman  selama  ini  sering  terserang oleh  lebih  dari  satu  jenis  patogen.  Kedepan penelitian vaksinasi pada ikan laut diarahkan untuk  mengkombinasikan vaksin  bakteri  dan vaksin  virus  dalam  satu  paket.  Sedangkan metode  perendaman  dipilih  karena  lebih praktis  di  lapangan  dan  efektivitasnya  sama dengan penyuntikan (Xu et al ., 2009).
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  meng- uji  efektivitas  vaksin  bakteri  polivalen  yang diberikan  melalui  perendaman  pada  ikan kerapu  macan  yang  dipelihara  di  KJA  di Labuan Jambu, Sumbawa, NTB.

## II. METODE PENELITIAN

## 2.1. Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilakukan  pada  tahun 2012. Persiapan ikan dan vaksinasi awal dila- kukan di Laboratorium Basah Patologi, Balai Besar  Penelitian  dan  Pengembangan  Budi- daya Laut (BBPPBL), Gondol, Bali. Pemeli- haraan ikan selama enam  bulan dilakukan di Labuan  Jambu,  Sumbawa  Besar,  Nusa Tenggara  Barat.  Lokasi  ini  dipilih  karena memiliki  potensi  budidaya  KJA  yang  besar dan sangat deal dengan suplai air yang bersih dan jauh dari polusi masyarakat.

## 2.2. Identifikasi Bakteri
Tiga isolat  bakteri  digunakan sebagai antigen  dalam  penelitian  ini.  Ketiga  isolat merupakan  koleksi  Laboratorium  Patologi BBPPBL, Gondol, Bali. Bakteri diisolasi dari ikan kerapu sakit dan ketiganya telah terbukti patogen  terhadap  ikan  kerapu.  Ketiga  isolat bakteri  diidentifikasi  dengan  metode direct sequencing di  Laboratorium  Biomedik  dan Biologi  molekuler  Hewan,  Fakultas  Kedok- teran  Hewan,  Universitas  Udayana,  Denpa- sar.  Data  primer  yang  digunakan  untuk sekuensing adalah 16S R DNA.

## 2.3. Pembuatan Vaksin  Bakteri Polivalen
Vaksin  bakteri  polivalen  dibuat dengan mencampurkan 3 isolat bakteri ( Vib- rio  harveyi,  V.  alginolyticus, dan Photobac- terium  leiognathi )  mengikuti  metode  Zafran et al. (1998 c ). Masing-masing isolat  dikultur secara massal pada media TSA mengandung 2% NaCl (TSA-N) selama 48 jam pada suhu 27°C. Bakteri tersebut dipanen dan dimatikan  dengan  formalin  0,01%,  selanjut- nya  dicuci  (menggunakan  PBS)  sebanyak  3 kali  melalui  sentrifugasi  selama  15  menit dengan  kecepatan  3.200  rpm  untuk  menghi- langkan  formalin.  Kepadatan  bakteri  diatur 10 10 CFU/ml.  Vaksin  bakteri  polivalen dibuat  dengan  mencampurkan  ketiga  vaksin bakteri  tersebut  dengan  perbandingan  1:1:1. Konfirmasi  inaktivasi  vaksin  diuji  dengan cara  menginokulasikan  vaksin  yang  sudah diinaktivasi tersebut  pada media TSA-N dan diinkubasi  pada  suhu  27  °C  selama  48  jam. Vaksin  dianggap  inaktif  bila  tidak  terjadi pertumbuhan bakteri. Vaksin dikemas dalam botol  dan  disimpan  dalam  kulkas  sampai digunakan.

## 2.4. Pengemasan Vaksin Dalam Bentuk Cair
Vaksin  dimasukkan  ke  dalam  botol kaca volume  50 dan 100 mL.  Setelah pengi- sian  vaksin  selesai,  selanjutnya  dipasang tutup  botol  dari  bahan  karet  dan  penyegelan dengan  segel  cair.  Segel  cair  ini  segera membeku  begitu  kontak  dengan  udara.  Vak-
sin  dalam  kemasan  botol  disimpan  dalam lemari  pendingin  dengan  suhu  4  -  10  °C sampai digunakan.

## 2.5. Uji Aplikasi di KJA
Aplikasi  vaksin  dimulai  sejak  benih masih  di  hatcheri.  Benih  ikan  kerapu  macan ( Epinephelus  fuscoguttatus )  yang  berukuran panjang  sekitar  6  cm  dan  bobot  sekitar  7  g divaksinasi  melalui  perendaman  selama  1 jam  dengan  dosis  1  ml  vaksin/L  air  laut dengan  vaksin  bakteri  polivalen.  Seratus  L air laut digunakan untuk merendam 300 ekor benih  ikan.  Kelompok  ikan  kontrol  tidak diberi  perlakuan  vaksinasi.  Ikan  selanjutnya dipelihara  dalam  bak  beton  volume  2  M 3 yang  dilengkapi  sistem  air  mengalir  dan aerasi  di  Lab  Basah  BBPPBL  Gondol,  Bali. Booster  diberikan  7  hari  pasca  vaksinasi awal. Masing-masing 900 ekor ikan kelompok perlakuan vaksinasi dan kelompok kontrol  yang  sudah  mencapai  ukuran  8-10 cm  selanjutnya  ditebar  ke  dalam  3  jaring ukuran  2  2  2 m 3 dan dipelihara selama 180 hari  (6  bulan)  di  KJA  yang  berlokasi  di Sumbawa  Besar,  Nusa  Tenggara  Barat. Vaksinasi  ulang  diberikan  pada  hari  ke-60 dan  120  pasca-vaksinasi  awal.  Sampel  darah untuk  analisis  titer  antibodi  diambil  pada umur  0,  60,  120,  dan  180  hari.  Selama pemeliharaan  ikan  diberi  pakan  pelet. Pengamatan  dilakukan  terhadap  tingkat imunitas dan sintasan. Data selanjutnya diuji dengan  uji-t  dan  dalam Relative  Percent Survival /RPS (Amend, 1981).

## 2.6.  Pengukuran Titer Antibodi
Uji  titer  antibodi  dilakukan  dalam wadah micro-well dengan  96  sumur/lubang berpedoman  pada  Tizard  (1988).  Serum darah  ikan  uji  diencerkan  secara  bertingkat sebagai berikut: ke dalam sumur ke-1 dan ke- 2  dimasukkan  masing-masing  50  µl  serum darah ikan. Ke dalam sumur ke-2 selanjutnya ditambahkan  50  µl  PBS  dan  diaduk  merata. Dari  sumur  ke-2,  selanjutnya  diambil  50  µl dan  dimasukkan  ke  dalam  sumur  ke-3.  Ke dalam  sumur  ke-3  selanjutnya  ditambahkan
50  µl  PBS  dan  diaduk  merata.  Proses  yang sama dilakukan pada sumur ke-4 dan seterus- nya  dengan  memasukkan  50  µl  antigen bakteri  polivalen.  Campuran  serum  darah ikan  dan  antigen  diaduk  kemudian  digoyang dengan rotator  plate selama  1-3  menit  dan didiamkan pada suhu kamar selama 4-6 jam. Hemaglutinasi  atau  penggumpalan  antigen oleh serum diamati secara mikroskopis. Pada tingkat  pengenceran  tertinggi  di  mana  masih terjadi  aglutinasi  dinyatakan  sebagai  nilai titer  antibodi  dari  ikan  uji.  Titer  antibodi dianalisis secara deskriptif.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN

## 3.1. Identifikasi Bakteri
Hasil sekuensing ketiga  isolat  bakteri disajikan  dalam  Tabel  1.  Berdasarkan  hasil sekuensing tersebut dan setelah dibandingkan dengan data dari bank  gen,  maka  isolat  1, 2, dan  3  diidentifikasi  sebagai Photobacterium leiognathi, Vibrio harveyi , dan Vibrio algino- lyticus (Tabel 2). Hasil ini tidak mengejutkan karena  vibriosis  memang  sangat  umum  dila- porkan  sebagai  penyakit  pada  berbagai spesies  ikan  laut  (Saeed,  1995;  Koesharyani Zafran, 1997; Lin et al ., 2006).
Tabel 1. Sekuen DNA tiga isolat bakteri uji yang digunakan dalam penelitian ini.
No. isolat Sekuen DNA 1 CGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGGGAAACCCTG ATGCAGCCATGCCGCGTGTATGAAGAAGGCCTTCGGGTTGTAAA
GTACTTTCAGTAGGGAGGAAGGCAGTGTCGTTAATAGCGATTGTT TGACGTTACCTACAGAAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCA GCCGCGGTAATACGGAGGGTGCGAGCGTTAATCGGAATTACTGG GCGTAAAGCGCATGCAGGCGGTTTGTTAAGCAGTGTGAAAGCCC GGGGCTCAACCTCGGAACAGCATTTTGAACTGGCAGACTAGAGT CTTGTAGAGGGGGGTAGAATTTCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGT AGAGATCTGAAGGAATACCGGTGGCGAGCGGCCCCCTGGACAAA GACTGACGCTCAGATGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTA
2 CGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGCAAGCCTG
ATGCAGCCATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGCCTTCGGGTTGTAAA GCACTTTCAGTCGTGAGGAAGGTAGTGTAGTTAATAGCTATTATT TGACGTTAGCGACAGAAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCA GCCGCGGTAATACGGAGGGTGCGAGCGTTAATNGGAATTACTGG GCGTAAAGCGCATGCAGGTGGTTTGTTAAGTCGTGTGAAAGCCC GGGGCTCAACCTCGGAATAGCATTTGAAACTGGCAGACTAGAGT ACTGTAGAGGGGGGTAGAATTTCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGT AGAGATCTGAAGGAATACCGGTGGCGAGCGGCCCCCTGGACAGA TACTGACACTCAAATGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTA
3 CGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGCAAGCCTG ATGCAGCCATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGCCTTCGGGTTGTAAA GCACTTTCAGTCGTGAGGAAGGTGGTGTAGTTAATAGCTATTATT TGACGTTAGCGACAGAANAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCA GCCGCGGTAATACGGAGGGTGCGAGCGTTAATCGGAATTACTGG GCGTAAAGCGCATGCAGGTGGTTTGTTAAGTCATGTGAAAGCCC GGGGCTCAACCTCGGAATAGCATTTGAAACTGGCAGACTAGAGT ACTGTAGAGGGGGGTAGAATTTCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGT AAAGATCTGAAGGAATACCGGTGGCGAGCGGCCCCCTGGACAGA TACTGACACTCAAATGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTA
Tabel 2. Homologi sekuen DNA tiga isolat bakteri uji dengan isolat dari bank gen.
Isolat Bank gen Homologi (%) Identifikasi 1 2 3 Photobacterium leiognathi Vibrio harveyi Vibrio alginolyticus 99 99 99 Photobacterium leiognathi Vibrio harveyi Vibrio alginolyticus

## 3.2. Hasil Uji Lapang
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa titer  antibodi  ikan  yang  divaksin  yang  sudah mencapai  1/64  pada  4  bulan  pemeliharaan, dan naik terus sampai 1/128 pada 6 bulan pe- meliharaan dibandingkan kontrol yang hanyak 1/4 (Gambar 1). Hal ini berarti bahwa ikan  kerapu  macan  memberikan  respons positif terhadap vaksin bakteri polivalen yang diberikan  melalui  perendaman.  Kelihatannya lingkungan  perairan  cukup  baik  untuk  ikan percobaan hidup normal. Di lokasi penelitian ini  hanya  ada  satu  unit  KJA  yang  posisinya langsung  berhadapan  dengan  laut  lepas sehingga mutu air sangat  baik  terlihat  secara visual.  Pada  penelitian  sebelumnya  telah dilaporkan  bahwa  vaksin  Vibrio  terbukti bersifat  imunogenik,  mampu  meningkatkan nilai  titer  antibodi  ikan  kerapu  pasir  (Zafran et  al .,  2008),  kerapu  macan  (Zafran et  al ., 2010), dan kakap putih (Taib et al ., 2002). Di Indonesia  belum  ada  laporan  ilmiah  tentang aplikasi  vaksin  pada  ikan  kerapu  macan  di KJA.  Memang  tidak  bisa  dipungkiri  bahwa vaksin  tidak  berdiri  sendiri,  harus  didukung oleh  faktor-faktor  lain,  termasuk  lingkungan dan nutrisi. Uji aplikasi vaksin  yang sama di Teluk Pegametan, Bali pada tahun yang sama tidak  memberikan hasil  yang  memuaskan karena  tingginya  angka  kematian  ikan.  Hal tersebut  terjadi  karena  di  Teluk  Pegametan sudah  beroperasi  banyak  unit  KJA  sehingga kualitas  lingkungan  sudah  sangat  menurun yang  ditandai  dengan  banyaknya  laporan kasus kematian ikan  yang terjadi di berbagai unit  KJA.  Vaksin  akan memberikan  manfaat dalam  meningkatkan  kekebalan  ikan  terha- dap  penyakit  antara  lain  apabila  ikan dipelihara  dalam  lingkungan  perairan  yang baik.  Pada  lingkungan  yang  baik  ikan  akan
mampu  tumbuh  secara  optimal  dan  antibodi akan terbentuk apabila ikan divaksinasi.
Pada  penelitian  ini  ikan  percobaan terlihat  hidup  normal  yang  dicirikan  dengan nafsu  makan  yang  baik  dan  aktif  berenang. Pada kelompok ikan yang divaksinasi sedikit sekali ikan yang terlihat luka dan mengalami borok.  Sebaliknya  pada  kelompok  ikan  kon- trol  banyak  ditemui  ikan  yang  mati  dengan gejala  klinis  borok  pada  permukaan  tubuh. Hasil  isolasi  dari  organ    dalam  (hati  dan ginjal)  terhadap  ikan  yang  mengalami  borok diperoleh  bakteri Vibrio yang  tumbuh  baik pada media TCBS agar (media selektif untuk bakteri Vibrio ).  Informasi  tersebut  merupa- kan konfirmasi bahwa vaksin  bakteri  poliva- len  yang  diberikan  pada  ikan  kerapu  macan efektif  meningkatkan  imunitas  ikan  terhadap infeksi bakteri.
0 20 40 60 80 100 120 140 D-0 D-60 D-120 D-180 Vaksin Kontrol
Gambar  1.  Nilai  titer  antibodi  ikan  kerapu macan  yang  telah  diberi  vaksin polivalen dan kontrol. Ikan dipelihara  selama  6  bulan  di karamba jaring apung. D-0, D-60, D-120, dan D-180 adalah hari pe- meliharaan  di  KJA,  yaitu  awal penebaran,  hari  ke-60,  hari  ke- 120, dan hari ke-180.
Rata-rata sintasan setelah 6 bulan pe- meliharaan  pada  kelompok  ikan  yang  diberi perlakuan vaksinasi bakteri polivalen jauh le- bih  tinggi  (77,11%)  dibandingkan  kontrol yang  hanya 45,56%  (P<0.05)  dengan  nilai RPS  sebesar  57,95%  (Tabel  3).    Nilai    RPS tersebut  membuktikan  bahwa  vaksin  bakteri polivalen  yang  diberikan  melalui  perendam- an  mampu  meningkatkan  kekebalan  spesifik ikan  kerapu  macan  yang  dipelihara  di  KJA. Lin et  al .  (2006)  juga  membuktikan  bahwa vaksin polivalen yang terdiri atas Vibrio algi- nolyticus,  V.  parahaemolyticus ,  dan Photo- bacterium subsp piscicida yang  diinaktivasi dengan formalin 3% selama semalam mampu meningkatkan  imunitas  ikan  cobia  ( Rachy- centron canadum ), baik  di  hatcheri  maupun di KJA. Nilai rata-rata RPS yang mereka per- oleh  adalah  89,87%  untuk  penelitian  di  hat- cheri  dan  85,5%  untuk  penelitian  di  KJA. Tetapi, nilai RPS tersebut masih lebih rendah jika dibandingkan dengan hasil yang dilapor- kan oleh Lin et al . (2006). Perbedaan tersebut kemungkinan  disebabkan  oleh  cara  aplikasi vaksin  yang  berbeda  di  mana  Lin et  al . (2006) memberikan vaksin melalui penyunti- kan,  sedangkan  dalam  penelitian  ini  vaksin diberikan  melalui  perendaman.  Vaksinasi melalui  penyuntikan  memang  bisa  memberi- kan  imunitas  lebih  tinggi  dibandingkan metode  aplikasi  lainnya  seperti  perendaman dan  oral.  Vaksinasi  melalui  penyuntikan jumlah  vaksin  yang  dibutuhkan  untuk merangsang imunitas bisa terpenuhi (Evelyn, 2002),  Sedangkan  pada  vaksinasi  melalui oral  ada  kemungkinan  antigen  tersebut  akan rusak  pada  saat  melewati  sistem  pencernaan atau  tidak  termakan  oleh  ikan  dalam  jumlah yang cukup sehingga imunitas  yang diharap- kan tidak optimal.
Sintasan  yang  lebih  tinggi  pada  ke- lompok  ikan  yang  divaksinasi  dibandingkan kelompok ikan kontrol sesuai dengan  adanya peningkatan nilai titer antibodi ikan uji (lihat Gambar 1). Tentunya peningkatan kekebalan tersebut  didukung  oleh  kondisi  lingkungan yang  kondusif  bagi  ikan  untuk  hidup  secara baik  pada  lingkungan  perairan  di  Sumbawa,
NTB.  Kelihatannya  ikan  bisa  hidup  secara normal  tanpa  mengalami  stress  terlihat  dari nafsu makan yang baik dan laju pertumbuhan yang  normal  sehingga  energi  yang  diperoleh dari pakan dapat digunakan secara optimal.
Pertumbuhan  bobot  ikan  yang  diberi perlakuan  vaksin  terlihat  juga  lebih  baik  di- bandingkan  ikan  tanpa  vaksinasi  (Tabel  4). Rata-rata  bobot  ikan  yang  divaksin  pada akhir penelitian (6 bulan) berturut-turut untuk kelompok  ukuran  kecil,  sedang,  dan  besar adalah  218,00  ±  17,51g,  218,00  ±  18,73 g,dan  226,00  ±  16,46  g;  sedangkan  pada kontrol  adalah  204,00  ±  14,30  g,  198,00  ± 16.19  g,  dan  207,00  ±  12,52  g.  Terlihat  ada perbedaan  berat  rata-rata  di  akhir  penelitian pada  kelompok  ikan  yang  divaksinasi dibanding  ikan  yang  tidak  divaksinasi, masing-masing 14 g pada kelompok kecil, 20 g  pada  kelompok  sedang,  dan  19  g  pada kelompok  besar.  Pertumbuhan  bobot  yang lebih baik pada kelompok ikan yang divaksin diduga  berkaitan  erat  dengan  pemanfaatan pakan.  Pada  kelompok  vaksinasi  diduga energi  yang  digunakan  untuk  mengatasi infeksi  penyakit  lebih  sedikit  dibandingkan kelompok  kontrol  sehingga  ikan  tumbuh  le- bih  cepat.  Pertumbuhan  panjang  sepertinya tidak  terlihat  adanya  perbedaan  yang  signi- fikan  dengan  ikan  kontrol  (Tabel  5).  Dalam budidaya  ikan  hasil  utama  yang  diharapkan meningkat  dengan  pemakaian  vaksin  adalah sintasan  dan  bobot  tubuh  karena  sangat  erat kaitannya  dengan  nilai  ekonomis.  Dengan peningkatan  sintasan  dan  bobot  tubuh  ikan yang  divaksin  tentu  akan  meningkatkan produksi  dan  akhirnya  akan  meningkatkan pendapatan para pembudidaya ikan laut.

## IV. KESIMPULAN
Vaksin bakteri polivalen yang terbuat dari campuran bakteri Vibrio harveyi , Vibrio alginolyticus ,  dan Photobacterium  leioghna- thi , yang diberikan melalui perendaman efek- tif meningkatkan kekebalan dan sintasan ikan kerapu  macan  ( Epinephelus  fuscoguttatus) yang dipelihara di karamba jaring apung.
Tabel 3.  Sintasan ikan kerapu macan yang telah diberi vaksin bakteri polivalen dan kontrol di KJA Sumbawa selama 6 bulan pemeliharaan.
Bulan Kontrol Vaksin Relative percent survival /RPS (%) 0 2 4 6 100 ± 0 a 88,56 ± 5.85 a 59,56 ± 3.29 a
45,56 ± 10.18 a 100 ± 0 a 97,67 ± 0,67 a
81,78 ± 12,62 b 77,11 ± 10,21 b 57,95
Tabel 4. Rata-rata bobot ikan kerapu macan yang diberi vaksin polivalen dan dipelihara di KJA Sumbawa selama 6 bulan.
Perlakuan Hari ke: Berat ikan (g) Besar Sedang Kecil Vaksin 0 60 120 180 23,50 ± 3,21 45,50 ± 4,38 82,50 ± 20,72 226,00 ± 16,46 20,00 ± 2.47 44,50 ± 4.38 80,00 ± 21.60 218,00 ± 18.73 18,60 ± 4,54 42,50 ± 6,35 77,50 ± 20,45 218,00 ± 17,51 Kontrol 0 60 120 180 21,48 ± 4.55 40,50 ± 6.43 71,00 ± 20.25 207,00 ± 12.52 19,56 ± 3.87 39,00 ± 5.68 70,00 ± 18.26 198,00 ± 16.19 17,74 ± 3,65 42,00 ± 7,15 68,00 ± 20,84 204,00 ± 14,30
Tabel 5. Rata-rata panjang total ikan kerapu macan yang diberi vaksin polivalen dan kontrol di KJA Sumbawa selama 6 bulan pemeliharaan.
Perlakuan Hari ke: Panjang total (cm) Besar Sedang Kecil Vaksin 60 120 180 13,00 ± 1,25 15,80 ± 1,40 22,40 ± 1,64 12,80 ± 1,03 15,80 ± 1,47 21,90 ± 1,66 12,50 ± 1,27 15,70 ± 1,34 21,60 ± 1,89 Kontrol 60 120 180 12,10 ± 0,88 15,20 ± 1,23 20,30 ± 1,49 11,90 ± 0,74 15,20 ± 1,32 20,20 ± 1,47 11,90 ± 0,88 15,10 ± 1,52 20,20 ± 1,32

## DAFTAR PUSTAKA
Amend,  D.F.  1981.  Potency  testing  of  fish vaccines. Dev.  Biol.  Stand .,  49:447- 454.
Evelyn,  T.P.T.  2002.  Finfish  immunology and  its  use  in  preventing  infectious diseases in cultured finfish. In: C.R.
Lavilla-Pitogo  &  E.R.  Cruz-Lacierda  ( eds .). Diseases  in  Asian  aquaculture IV . 303-324).  Fish  health  section,  Asian Fisheries Society, Manila. 303-324pp. Johnny,  F.,  I.  Koesharyani,  D.  Roza,  Trid- joko,  N.A.  Giri,  dan  K.  Suwirya. 2001.    Respon  ikan  kerapu  bebek,
Cromileptes  altivelis terhadap  imu-
nostimulan peptidoglycan melalui pa- kan  pellet. J.  Penelitian  Perikanan Indonesia , 7(4):52-56.
Johnny,  F.,  D.  Roza,  K.  Mahardika,  Zafran, dan  A.  Prijono.    2005.    Penggunaan imunostimulan  untuk  meningkatkan kekebalan non-spesifik benih ikan ke- rapu  Lumpur, Epinephelus  coioides terhadap  infeksi  virus  irido. J.  Pene- litian  Perikanan  Indonesia ,  11(5):75- 83.
Johnny,  F.  dan  D.  Roza.    2002.    Pengaruh penyuntikan  imunostimulan  pepti- doglycan  terhadap  peningkatan  tang- gap  kebal  non-spesifik  ikan  kerapu macan, Epinephelus  fuscoguttatus . Laporan Penelitian Balai  Besar Riset Perikanan  Budidaya  Laut  Gondol. 12hlm.
Koesharyani, I. dan Zafran. 1997.  Studi ten- tang  penyakit  bakterial  pada  ikan kerapu. J. Penelitian Perikanan Indo- nesia , 3(4):35-39.
Lin, J.H., T.Y. Chen, M.S. Chen, H.E. Chen, R.L.  Chou,  T.I.  Chen,  M.S.  Shu,  and H.E.  Yang.    2006.    Vaccination  with three  inactivated  pathogens  of  cobia ( Rachycentron  canadum )  stimulates protective  immunity. Aquaculture , 255:125-132.
Mahardika,  K.,  I.  Koesharyani,  K.  Sugama, A. Prijono, dan K. Yuasa. 2001. Studi histopatologi  iridovirus  pada Epine- phelus  coioides dan E.  Bleekeri . Dalam: teknologi  budidaya  laut  dan pengembangan  sea  farming  di  Indo- nesia. Departemen Kelautan dan Peri- kanan  bekerjasama  dengan  JICA. Hlm.: 334-341.
Mahardika,  K.,  Zafran,  D.  Roza,  dan  F. Johnny.    2004 a .    Uji  kerentanan  ikan kerapu  lumpur, Epinephelus  coioides dan  kerapu  batik, E.  microdon terha- dap  infeksi  iridovirus. J.  Penelitian Perikanan Indonesia , 10(2):83-88. Mahardika, K., Zafran, A. Yamamoto, and T.
Miyazaki.  2004 b .  Susceptibility  of juvenile  humpback  grouper Cromi-
leptes  altivelis to  grouper  sleepy  di- sease iridovirus (GSDIV). Dis. Aquat.
Org ., 59:1-9.
Owen,  L.  1993.  Report  on  sleepy  grouper disease.  Dept.  of  Biomedical  and Tropical  Veterinary  Science,  James Cook  Univ.  of  North  Quinsland, Townville, Australia. 4811p.
Roza,  D.,  K.  Mahardika,  F.  Johnny,  Zafran, dan  Tridjoko.    2002.    Pengaruh  per- bedaan  dosis  vaksin  melalui  peren- daman  terhadap  ketahanan  juvenil kerapu  bebek, Cromileptes  altivelis oleh  infeksi  viral  nervous  necrosis (VNN).  Laporan  hasil  penelitian  DIP 2002.  Balai  Besar  Riset  perikanan Budidaya Laut Gondol. Hlm.:91-101. Roza,  D.,  F.  Johnny,  dan  Tridjoko.    2004.
Peningkatan  imunitas  yuwana  ikan kerapu  bebek, Cromileptes  altivelis terhadap infeksi viral nervous necrosis  (VNN). J.  Penelitian  Peri- kanan Indonesia , 10(1):61-70.
Rukyani,  A.,  Taukhid,  dan  H.  Yuliansyah. 1993.  Laporan survei kasus kematian ikan  kerapu  (grouper)  di  daerah  Su- matera  Utara.  Puslitbang  Perikanan, Jakarta. 11hlm.
Saeed,  O.    1995.    Association  of Vibrio harveyi with mortality in cultured ma- rine  fish  in  Kuwait. Aquaculture , 136:21-29.
Santarem,  M.,  B.  Novoa,  and  A.  Figueras.
1997.  Effect  of  ß-glucan  on  the  non- specific  immune  responses  of  turbot ( Schopthalmus maximus L.). Fish and Shellfish Immunology , 7:429-437. Taib,  A.N.M.,  M.N.  Shamsudin,  and  R.
Rozita.    2002.    Vibriosis  vaccine  de- velopment:  immunological  characte- rization  of Vibrio  alginolyticus . In: Diseases  in  Asian  Aquaculture  IV. C.R.  Lavilla-Pitogo  &  E.R.  Cruz- Lacierda  ( eds. ).  Fish  health  section, asian  fisheries  society,  Manila,  325- 335pp.
Tizard,  I.    1988.    Pengantar  imunologi  vete- riner  (edisi  ke-2).  Airlangga  Uni- versity Press. Surabaya. 497hlm.
Vadstein,  O.    1997.    The  use  of  immuno- stimulation  in  marine  larviculture: possibilities and challenges. Aquacul- ture , 155:401-417.
Xu, Z., C.F. Chen, Z.J. Mao, and W.Y. Zhu.
2009.  Detection  of  serum  and mucosal  antibody  production  and antibody  secreting  cells  (ASCs)  in large  yellow  croaker  ( Pseudosciaena crocea )  following  vaccination  with
Vibrio  harveyi  via  different  routes. Aquaculture , 287(3-4):243-247.
Zafran, I. Koesharyani, dan K. Yuasa.  1997.
Parasit  pada  ikan  kerapu  di  panti  be- nih dan upaya penanggulangannya. J. Penelitian Perikanan Indonesia , 3(4): 16-23.
Zafran, T. Harada,  I. Koesharyani, K. Yuasa, and K. Hatai.  1998 a .  Indonesian hat- chery  reared  sea  bass  larvae, Lates calcarifer associated  with  viral  ner- vous  necrosis  (VNN). J. Indonesian Fisheries Research , 4(1):19-22. Zafran,  D.  Roza,  I.  Koesharyani,  F.  Johnny, and  K.  Yuasa.    1998 b .    Manual  for fish  diseases  diagnosis:  marine  fish and  crustacean  diseases  in  Indonesia. Gondol  Research  Station  for  Coastal Fisheries  and  Japan  International Cooperation Agency. 44p.
Zafran,  F.  Johnny,  D.  Roza,  I.  Koesharyani, and  K.  Hatai.    1998c.    Increased survival  of Penaeus  monodon larvae treated  with Vibrio  harveyi bacteria.
Fish Pathology , 33(4):449-450. Zafran dan K. Yuasa.  1999.  Sejarah penya- kit  VNN  di  Indonesia.  Lolitkanta Newsletter, 15:3-4.
Zafran, I. Koesharyani, F. Johnny, K. Yuasa, T. Harada, and K. Hatai.  2000.  Viral nervous necrosis in humpback grouper Cromileptes  altivelis larvae and  juveniles  in  Indonesia. Fish
Pathol ogy., 35 (2):95-96.
Zafran, I. Koesharyani, and K. Yuasa.  2002. Diseases  of  seabass, Lates  calcarifer , larvae  from  hatchery  in  Indonesia. In Diseases  in  Asian  Aquaculture  IV. Asian  Fisheries  Society,  Manila,  Phi- lippines. 279-284pp.
Zafran,  D.  Roza,  dan  F.  Johnny.    2006. Produksi dan uji efektivitas imunosti- mulan  dari  bakteri  dan  jamur  untuk meningkatkan  imunitas  benih  ikan kerapu.  Laporan  Penelitian  Balai Besar Riset Perikanan Budidaya Pan- tai Gondol TA 2006. 12hlm.
Zafran,  D.  Roza,  and  F.  Johnny.    2007.
Vaccination  against  viral  nervous necrosis (VNN) in juvenile humpback grouper ( Cromileptes altivelis ). 2007. Proceedings  of  International  Seminar on  Advances  in  Biological  Science. UGM,  Jogjakarta  7-8  September 2007. Hlm.: 63-65.
Zafran,  D.  Roza,  and  F.  Johnny.    2008. Peningkatan  imunitas  benih  ikan kerapu  pasir, Epinephelus  corallicola melalui  penggunaan  vaksin  bakteri polivalent.  Prosiding  Seminar  Nasi- onal  Biodiversitas  II,  Unair,  Suraba- ya, 19 Juli 2008. Hlm.:203-206.
Zafran,  D.  Roza,  and  F.  Johnny.    2010.
Immunogenicity  and  protective  ef- fects  of  formalin-killed  polyvalent Vibrio  vaccine  in  tiger  grouper  ( Epi- nephelus  fuscoguttatus ).  Proceeding of  International  Conference  of  Indo- nesian  Aquaculture.  Surabaya.  Hlm.:
1098 – 1101.
Diterima : 10 November 2015 Direview : 23 November 2015 Disetujui : 22 Desember 2015