Efek Ekstrak Etanol Herba Bandotan ( Ageratum conyzoides , L.) terhadap Waktu Perdarahan dan Pembekuan Darah pada Tikus Putih Jantan ( Rattus norvegicus )
Effect of The Ethanolic Extract of Bandotan ( Ageratum conyzoides , L.) Herbs on Bleeding and Blood Coagulation Time in White Male Rats ( Rattus norvegicus )
SANTIE APRIYANI, TITIK SUNARNI * , DWI NINGSIH
Fakultas Farmasi, Universitas Setia Budi Jln. Letjen Sutoyo-Mojosongo Surakarta-57127 Telp. 0271-852518
* Korespondensi: titiksunarni@yahoo.co.id
(Diterima 16 Desember 2010, disetujui 27 Januari 2011)

## Abstrak
Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui efek ekstrak etanol herba bandotan ( Ageratum conyzoides, L) yang diberikan secara oral terhadap penurunan waktu perdarahan dan pembekuan darah pada tikus putih jantan ( Rattus norvegicus ) galur Wistar.
Herba  bandotan  diekstraksi  menggunakan  alat  Soxhlet  dengan  etanol  70%.  Hewan  uji dibagi  dalam  lima  kelompok,  masing-masing  kelompok  terdiri  dari  lima  ekor  tikus.  Kelompok I  diberikan  dosis  69,58  mg/200  g  BB,  kelompok  II  diberikan  dosis  104,37  mg/200  g  BB,  dan kelompok III diberikan dosis 139,16 mg/200 g BB. Kelompok IV sebagai kontrol positif diberikan asan traneksamat 4,5 mg/200 g BB dan kelompok V sebagai kontrol negatif diberikan CMC 1%. Hewan uji diberi injeksi heparin secara sub kutan selama 5 hari untuk menginduksi perdarahan dan menghambat pembekuan darah, kemudian diberi sediaan uji selama 6 hari yang dicatat waktu penghentian perdarahan dan pembekuan darah tiap 2 hari sekali selama pemberian sediaan uji.
Hasil statistik menunjukkan ekstrak etanol herba bandotan yang diberikan secara oral dapat menurunkan waktu perdarahan dan pembekuan darah pada tikus putih jantan. Berdasarkan hasil uji statistik anova dua jalan menunjukkan bahwa ekstrak etanol herba bandotan dengan dosis 104,37 mg/200 g BB merupakan dosis yang paling efektif menurunkan waktu perdarahan dan pembekuan darah dengan kemampuan menurunkan waktu perdarahan sebesar 85,45% dan pembekuan darah sebesar 70%.
Kata  kunci: ekstrak  etanol,  herba  bandotan  ( Ageratum  conyzoides ,  L.),  waktu  perdarahan, pembekuan darah, tikus putih jantan

## Abstract
The aim of this experiment was to find out the effect of Bandotan ( Ageratum conyzoides, L) herbs ethanol extract that given orally on decreasing bleeding and blood coagulation time in white male rats ( Rattus norvegicus ) wistar strain.
Bandotan herbs were extracted by soxhlet using 70% ethanol as solvent. The animals test were divided in five groups, each group consist of 5 mice. Group I was given dose 69,58 mg, group II was given dose 104,37 mg, and group III was given dose 139,16 mg/200 g BW. Group IV as positive control was given tranexamic acid 4,5 mg/200 g BW. Group V as negative control was given CMC 1%. The animals test were given sub cutaneous heparin injection for 5 days to induce bleeding and inhibit blood coagulation, and then were given test preparation for 6 days and the time  of  bleeding  ceasing  and  blood  coagulation  were  recorded  once  every  2  days  during  test preparation was given.
The statistic results of the study showed that ethanol extract of goat weed herbs given orally could decrease bleeding time and blood coagulation in white male rats. According to the result of two ways anova statistical test, ethanol extract of goat weed herbs with dose of 104,37 mg/200 g BW is effectivest in decreased bleeding and blood coagulation time with ability to stop bleeding time 85,45% and blood coagulation time 70%.
Keywords: ethanol  extract,  bandotan  ( Ageratum  conyzoides ,  L.)  herbs,  bleeding  time,  blood coagulation time, white male rats

## Pendahuluan
Sistem  penghentian  darah  yang  berfungsi normal,  penting  bagi  kehidupan  organisme, karena  jika  sistem  penghentian  darah terganggu, maka luka yang kecil sekalipun akan menyebabkan perdarahan yang membahayakan jiwa.  Apabila  terjadi  perdarahan  hebat  dapat diberikan inhibitor fibrinolisis (antifibrinolitika) seperti  asam  aminokaproat  dan  asam traneksamat  dengan  pemantauan  yang  ketat terhadap status pembekuan (Mutschler 1991).
Herba  bandotan  ( Ageratum  conyzoides , L.)  telah  dikenal  di  Indonesia  sebagai  obat untuk menghentikan perdarahan. Tanaman ini mengandung asam amino, tanin, stigmasterol,
friedelin ,  sulfur,  potassium  klorida, pectic substance , ageratochromene , dan β -sitosterol. Sedangkan  daun  dan  bunga  mengandung flavonoid  dan  polifenol  (Dalimartha  2000; Anonim  2001).  Flavonoid  yang  dinyatakan sebagai quersetin dapat meningkatkan jumlah trombosit yang fungsinya sangat penting dalam tubuh  yaitu  menghentikan  perdarahan  akibat pecahnya pembuluh darah (Soegijanto 2006). Tanin  mampu  mengendapkan  protein-protein darah  sekaligus  mengerutkan  jaringan  pada perdarahan  yang  sempit  sehingga  berguna sebagai  hemostatik  dan  pembekuan  darah (Rosmiati & Vincent 1995).
Menurut  Ita  (2007),  ekstrak  etanol  daun Bandotan  ( Ageratum  conyzoides ,  L.)  dosis 200, 400, dan 500 mg/kg yang diberikan pada tikus putih dapat meningkatkan kadar Packed Cell Volume (PCV), Haemoglobin (Hb), White Blood  Concentration (WBC),  dan Red  blood Concentration (RBC).  Pada  dosis  400  dan 500  mg/kg  dapat  meningkatkan  kadar Mean Corpuscular  Hemoglobin (MCH)  dan Mean Corpuscular  Volume (MCV).  Tetapi  kadar Mean Corpuscular Hemoglobin Concentration (MCHC)  tidak  berubah  secara  signifikan. Berdasarkan penelitian itu disimpulkan bahwa ekstrak  etanol  daun  bandotan  mempunyai potensi  sebagai  hematopoetik  (pembentukan sel  darah  merah)  dan  dapat  digunakan  untuk obat penyakit anemia.
Ekstraksi herba bandotan dengan menggunakan  alat  Soxhlet.  Keuntungan  cara ini  adalah  cairan  penyari  yang  diperlukan lebih  sedikit  dan  secara  langsung  diperoleh hasil  yang  lebih  pekat.  Pengujian  diawali dengan  pemberian  injeksi  heparin  secara sub  kutan  pada  hewan  uji  tikus  putih  jantan dengan tujuan untuk menginduksi perdarahan dan  menghambat  terjadinya  pembekuan darah  (Rosmiati  &  Vincent  1995).  Metode yang digunakan adalah metode Duke. Prinsip kerja  metode  ini  adalah  menghitung  waktu perdarahan  sejak  darah  mulai  keluar  sampai darah  tidak  dapat  diisap  lagi  dengan  kertas saring.  Sedangkan  waktu  pembekuan  adalah waktu saat darah mulai keluar dari vena mata sampai  terlihatnya  benang  fibrin  dalam  pipa kapiler yang dipatahkan pada 30 detik pertama
selanjutnya  setiap  15  detik  (Gandasoebrata 1968).

## Metode Penelitian

## Bahan
Herba bandotan dikumpulkan dan diidentifikasi  dari  Balai  Besar  Penelitian dan  Pengembangan  Tanaman  Obat  dan Obat  Tradisional  (B 2 P 2 TO 2 T)  Tawangmangu, Kabupaten  Karanganyar,  Jawa  Tengah.  Herba dipanen  saat  tanaman  sedang  berbunga  pada bulan  Desember  2009.  Setelah  dicuci,  herba dikeringkan dan diserbuk kemudian disimpan di tempat kering.

## Pembuatan Ekstrak Etanol
Serbuk  herba  bandotan  ditimbang  50 gram  dimasukkan  ke  dalam  kertas  saring yang  berbentuk  silinder  dan  diikat  dengan tali pada kedua ujungnya, lalu dimasukkan ke dalam  alat  soxhlet  yang  diisi  dengan  etanol 70%  sebanyak  satu  setengah  sirkulasi  (275 ml). Ekstraksi dilakukan sampai larutan etanol dalam tabung soxhlet tidak berwarna. Ekstrak yang ditampung di dalam lalu dipindahkan ke wadah  lain  dan  diuapkan  pada  penangas  air hingga  didapatkan  ekstrak  kental  selanjutnya disebut ekstrak etanol.

## Uji Efek Ekstrak Etanol terhadap Penurunan Waktu Perdarahan dan Pembekuan Darah
Pengujian  dilakukan  dengan  metode Duke  dengan  sedikit  modifikasi.  Hewan  uji
dibagi  menjadi  5  kelompok  masing-masing 5  ekor  tikus  putih  jantan.  Tikus  dipuasakan makan  selama  16  jam  tetapi  tetap  diberi minum,  kemudian  dilakukan  pengukuran waktu  perdarahan  dan  pembekuan  darah pada waktu ke-0 (T0) sebelum tikus diberikan injeksi heparin secara sub kutan. Pengukuran waktu  perdarahan  dilakukan  dengan  cara tikus  dipotong  ujung  ekornya  sepanjang  2 cm,  pada  saat  darah  pertama  keluar  jalankan stopwatch,  tiap  30  detik  darah  yang  keluar diserap dengan kertas saring tanpa menyentuh luka. Amati hingga darah yang keluar berhenti, yang ditandai dengan tidak adanya darah yang terserap  pada  kertas  saring  kemudian  catat waktunya.  Pengukuran  waktu  pembekuan darah  dilakukan  dengan  tabung  kapiler  non heparin, yang sebelumnya telah digores-gores dengan  kikir  ampul  agar  mudah  dipatahkan. Tusukkan  kapiler  pada  vena  mata  dan  segera jalankan  stopwatch  pada  saat  darah  mulai keluar, pada 30 detik pertama patahkan kapiler pada goresan kemudian pematahan berikutnya setiap 15 detik. Stopwatch dihentikan apabila pada saat kapiler dipatahkan sudah terbentuk benang  fibrin  dan  catat  waktunya.  Setelah diukur  waktu  ke-0,  kelompok-kelompok perlakuan diberi injeksi heparin sebanyak 0,09 ml/200 g BB secara sub kutan selama 5 hari. Hari  pertama  setelah  penyuntikan  heparin diukur  waktu  perdarahan  dan  pembekuan darahnya  (Th)  dengan  hanya  membuka  luka pada ekor yang telah dipotong dan pembekuan dengan cara yang sama.
Tikus diistirahatkan selama 1 hari kemudian kelompok  I  diberikan  ekstrak  etanol  herba
bandotan  dengan  dosis  69,58  mg/200  g  BB, kelompok  II  dosis  104,37  mg/200  g  BB,  dan kelompok  III  dosis  139,16  mg/200  g  BB. Kelompok  IV  sebagai  kontrol  positif  dengan pemberian  asam  traneksamat.  Kelompok  V sebagai  kontrol  negatif  dengan  pemberian CMC 1%. Masing-masing kelompok diberikan sebanyak 0,5 ml pagi dan sore selama 6 hari secara oral. Tiap 2 hari sekali selama perlakuan catat  waktu  perdarahan  dan  pembekuannya (T1, T2, dan T3).
Data  waktu  penghentian  perdarahan dan  pembekuan  darah  yang  diperoleh  lalu dievaluasi  dengan  ANOVA  dua  jalan  dan dilanjutkan dengan uji Student-Newman-Keuls (SNK).

## Hasil dan Pembahasan
Data  waktu  perdarahan  dan  pembekuan darah  dirata-rata  pada  tiap  kelompok  uji  dan waktu  pengamatan  bertujuan  untuk  melihat hubungan  antara  waktu  perdarahan  dan pembekuan  darah  pada  tikus  putih  jantan terhadap waktu pengamatan.
Kelompok kontrol positif dengan pemberian asam traneksamat sudah mengalami penurunan waktu  perdarahan  dan  pembekuan  darah sangat  tajam  pada  T1  (hari  ke-2  perlakuan) semakin  besar  pada  T2  (hari  ke-4  perlakuan) dan  T3  (hari  ke-3  perlakuan).  Dengan pemberian asam traneksamat memberikan efek penurunan waktu perdarahan dan pembekuan darah  paling  besar  dibandingkan  dengan kelompok lain. Ekstrak etanol herba bandotan
dosis 139,16 mg/200 g BB terjadi penurunan waktu  pembekuan  darah  yang  lebih  besar dibanding  dengan  kelompok  kontrol  negatif dan  kelompok  dosis  yang  lain,  dimana  pada dosis 139,16 mg/200 g BB penurunan terjadi bertahap.  Tetapi  yang  mengalami  penurunan waktu  perdarahan  paling  besar  berdasarkan data  rata-rata  terlihat  pada  kelompok  ekstrak etanol herba bandotan dosis 104,37 mg/200 g BB.
Dihitung  selisih  waktu  perdarahan  dan pembekuan  darah  pada  tiap  kelompok pengamatan  terhadap  waktu  setelah  diinjeksi heparin  kemudian  dianalisis  dengan  anova 2  jalan.  Hasil  analisis  statistik  penurunan waktu  perdarahan  dan  pembekuan  darah menunjukkan  bahwa  kontrol  negatif,  ekstrak etanol  dosis  69,58  mg/200  g  BB  ada  beda signifikan dengan ekstrak etanol dosis 104,37 mg/200  g  BB,  ekstrak  etanol  dosis  139,16 mg/200  g  BB,  dan  kontrol  positifnya.  Dosis 104,37  mg/200  g  BB,  139,16  mg/200  g  BB,
dan  kontrol  positif  tidak  ada  beda  signifikan berarti  kemampuanya  menurunkan  waktu perdarahan dan pembekuan darah mendekati kontrol  positif.  Sehingga  dosis yang dianggap paling  efektif  menurunkan  waktu  perdarahan dan pembekuan darah pada tikus putih jantan adalah  ekstrak  etanol  herba  bandotan  dosis 104,37 mg/200 g BB karena dosis yang paling rendah  dari  dua  dosis  yang  kemampuannya mendekati kontrol positif dianggap mempunyai efek  samping  yang  lebih  rendah  pula.  Dari waktu  pengamatan  terlihat  bahwa  waktu perdarahan pada Th-T0, Th-T1. Th-T2, dan Th- T3  berbeda  secara  nyata  satu  sama  lain.  Hal ini  mengindikasikan  bahwa  efek  penurunan waktu  perdarahan  mulai  nampak  setelah  T1 (hari  kedua  perlakuan).  Tabel  penurununan waktu perdarahan dan pembekuan darah dapat dilihat pada tabel 1 dan tabel 2.
Grafik  hubungan  penurunan  waktu  per- darahan dan pembekuan darah terhadap waktu pengamatan dapat dilihat pada Gambar 1.
Gambar 1. Grafik hubungan penurunan waktu perdarahan dan pembekuan darah pada tikus putih jantan terhadap waktu pengamatan.

## Tabel 1. Hasil statistik penurunan watu perdarahan pada tikus putih jantan terhadap waktu pengamatan
Descriptive Statistics
Dependent Variable:Penurunan waktu perdarahan Kelompok Waktu pengamatan Mean Std. Deviation N Ekstrak etanol dosis 69,58 mg/200 g BB Th-T0 2.1000 .89443 5 Th-T1 1.9000 .41833 5 Th-T2 3.3000 .57009 5 Th-T3 3.7000 .44721 5 Total 2.7500 .96655 20 Ekstrak etanol dosis 104,37 mg/200 g BB Th-T0 3.2000 .90830 5 Th-T1 2.5000 .35355 5 Th-T2 3.7000 .57009 5 Th-T3 4.7000 .90830 5 Total 3.5250 1.05724 20 Ekstrak etanol dosis 139,16 mg/200 g BB Th-T0 3.5000 .93541 5 Th-T1 2.8000 .44721 5 Th-T2 4.0000 .70711 5 Th-T3 5.0000 .79057 5 Total 3.8250 1.06715 20 Kontrol Positif Th-T0 2.7000 1.09545 5 Th-T1 2.9000 .41833 5 Th-T2 4.9000 1.19373 5 Th-T3 5.6000 1.43178 5 Total 4.0250 1.63413 20 Kontrol Negatif Th-T0 2.5000 .50000 5 Th-T1 .7000 .57009 5 Th-T2 1.3000 .44721 5 Th-T3 1.8000 1.03682 5 Total 1.5750 .92160 20 Total Th-T0 2.8000 .95743 25 Th-T1 2.1600 .92105 25 Th-T2 3.4400 1.39433 25 Th-T3 4.1600 1.62481 25 Total 3.1400 1.44788 100
Tabel 2. Hasil statistik penurunan watu pembekuan darah pada tikus putih jantan terhadap waktu pengamatan Descriptive Statistics Dependent Variable:Penurunan waktu pembekuan Kelompok Waktu pengamatan Mean Std. Deviation N Ekstrak etanol dosis 69,58 mg/200 g BB Th-T0 63.00 16.432 5 Th-T1 33.00 12.550 5 Th-T2 51.00 17.103 5 Th-T3 63.00 16.432 5 Total 52.50 19.160 20 Ekstrak etanol dosis 104,37 mg/200 g BB Th-T0 90.00 23.717 5 Th-T1 57.00 24.648 5 Th-T2 90.00 30.000 5 Th-T3 84.00 36.125 5 Total 80.25 30.108 20 Ekstrak etanol dosis 139,16 mg/200 g BB Th-T0 93.00 16.432 5 Th-T1 60.00 23.717 5 Th-T2 78.00 19.558 5 Th-T3 96.00 17.103 5 Total 81.75 23.072 20 Kontrol Positif Th-T0 96.00 22.749 5 Th-T1 72.00 28.853 5 Th-T2 102.00 28.853 5 Th-T3 117.00 28.853 5 Total 96.75 30.187 20 Kontrol Negatif Th-T0 87.00 16.432 5 Th-T1 21.00 8.216 5 Th-T2 34.00 13.874 5 Th-T3 48.00 19.558 5 Total 47.50 28.905 20 Total Th-T0 85.80 21.442 25 Th-T1 48.60 27.139 25 Th-T2 71.00 32.977 25 Th-T3 81.60 33.563 25 Total 71.75 32.196 100
Dari  data  yang  telah  diperoleh  dihitung persentase  penurunan  waktu  perdarahan  dan pembekuan  darah  menurut  masing-masing
waktu  pengamatan.  Sehingga  akan  terlihat berapa  besar  daya  penurunan  (%)  waktu perdarahan  dan  pembekuan  darah  setelah perlakuan.  Data  hasil  persentase  penurunan waktu perdarahan dan pembekuan darah dapat dilihat pada tabel 3 dan 4.
Tabel 3. Daya penurunan (%) waktu perdarahan setelah perlakuan terhadap waktu perdarahan setelah injeksi heparin (Th) Kelompok Daya penurunan waktu perdarahan (%) T1 T2 T3 I . Ekstrak etanol 69,58 mg/200 g BB II. Ekstrak etanol 104,37
mg/200 g BB
III. Ekatrak etanol 139,16 mg/200 g BB IV. Asam traneksamat V. CMC 1% 35,19 45,75 43,08 46,77 8,93 61,11 70,91 64,62 79,03 23,21 70,37 85,45 80,00 90,32 39,29 Tabel 4. Daya penurunan (%) waktu pembekuan darah setelah perlakuan terhadap waktu pembekuan darah setelah injeksi heparin (Th) Kelompok Daya penurunan waktu pembekuan (%) T1 T2 T3 I . Ekstrak etanol 69,58 mg/200 g BB
II. Ekstrak etanol 104,37 mg/200 g BB
III. Ekatrak etanol
139,16 mg/200 g BB IV. Asam traneksamat V. CMC 1% 23,91 38,00 39,13 48,00 15,22 36,96 60,00 50,00 64,56 26,09 47,83 70,00 69,57 78,00
34,78
Kelompok  kontrol  positif  pada  masing- masing waktu pengamatan yaitu T1 (hari kedua perlakuan),  T2  (hari  keempat  perlakuan),  dan T3  (hari  keenam  perlakuan)  diperoleh  hasil yang  semakin  meningkat  dimana  dengan pemberian  asam  traneksamat  pada  T1  sudah dapat  menurunkan  waktu  perdarahan  yang besar dan terus meningkat hingga 90,32% pada T3 dan dapat menurunkan waktu pembekuan darah  hingga  78%.  Pemberian  ekstrak  etanol herba bandotan dengan dosis 104,37 mg/200 g  BB  dapat  menurunkan  waktu  perdarahan dan  pembekuan  darah  dengan  persentase terbesar bila dibandingkan dengan dosis 69,58 mg/200g  BB  dan  139,16  mg/200g  BB.  Dosis 104,37 mg/200 g BB dapat menurunkan waktu perdarahan yang bertahap hingga 85,45% dan pembekuan  darah  hingga  70%  pada  T3  (hari keenam perlakuan).

## Kesimpulan
•  Ekstrak  etanol  herba  bandotan  ( Ageratum conyzoides , L.) dosis 69,58 mg/200 g BB,
104,37 mg/200 g BB, dan 139,16 mg/200 g BB secara oral memberikan efek penurunan waktu  perdarahan  dan  pembekuan  darah pada tikus putih jantan ( Rattus norvegicus ).
•   Ekstrak etanol herba bandotan dosis 104,37 mg/200 g BB mempunyai efek penurunan waktu  perdarahan  dan  pembekuan  darah paling  efektif  dibanding  dosis  69,58 mg/200  g  BB  dan  139,16  mg/200  g  BB yaitu dengan kemampuannya menurunkan waktu  perdarahan  sebesar  85,45%  dan
pembekuan  darah  sebesar  70%  pada  T3 (hari keenam perlakuan).

## Daftar Pustaka
Anonim.  2001. Inventaris  Tanaman  Obat Indonesia Jilid  II.  Jakarta:  Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
Dalimartha  S.  2000. Atlas  Tumbuhan  Obat Indonesia .  Jilid  II.  Jakarta:  Trubus Agriwidya.
Gandasoebrata R. 1968 . Penuntun
Laboratorium  Klinik .  Jakarta:  Dian
Rakyat.
Hariana A. 2007. 812 Resep untuk Mengobati 236 Penyakit . Jakarta: Penebar Swadaya.
Ita SO, Etim OE, Ekpo OF. 2007. Haemopoietic properties  of  ethanolic  leaf  extract  of Ageratum  conyzoides (Goat  Weed) in  albino  rats. Nigerian  Journal  of Physiological Sciences 22(1-2): 83-87.
Mutschler E. 1991. Dinamika Obat . Bandung: ITB.
Rosmiati H & Gan VS. 1995. Farmakologi dan Terapi. Jakarta: Bagian Farmakologi dan
Terapi FKUI.
Soegijanto.  2006. Demam  Berdarah  Dengue . Edisi 2. Surabaya: Airlangga Univercity Press