http://ejurnal.umri.ac.id/index.php/photon

## Ekstraksi, Fraksinasi, Dan Uji Antioksidan Daun Pakis Sawit ( Davallia denticulata )
Eti Norhaslinda, Jufrizal Syahri, Fitra Perdana* Program Studi S1 Kimia, Fakultas MIPA dan Kesehatan, Universitas Muhammadiyah Riau Jl. Tuanku Tambusai Pekanbaru 28294, Riau, Indonesia
*Correspondence e-mail: fitra.perdana@umri.ac.id

## Abstract
Antioxidants  are  compounds  that  are  able  to  counteract  the  negative  effects  of  oxidants  by  donating  an  electron  to compounds that are oxidants so that they can be inhibited. Fern leaves contain several secondary metabolites that provide potential as a source of natural antioxidants. In this study, extraction, fractionation, and antioxidant tests were carried out on palm fern (Davallia denticulata) leaves. The palm fern leaf extraction method was carried out by maceration using ethanol as a solvent and fractionation was carried out in three fractions, namely the ethanol, ethyl acetate and n-hexane fractions. Then the phytochemical tests were carried out on the extract and fraction of the palm fern leaves obtained. The ethanol extract indicated the presence of flavonoids, saponins, tannins, triterpenoids and steroids, the n-hexane fraction indicated the presence of flavonoids and phenolic compounds, the ethyl acetate fraction indicated the presence of flavonoids, tannins and phenolic  compounds,  and  the  ethanol  fraction  indicated  the  presence  of  flavonoids,  saponins,  tannins,  triterpenoids  and steroids. Testing the antioxidant activity of the ethanol extract showed an IC50 value of 1.406 μg/mL, the n-hexane fraction showed an IC50 value of 2.91 μg/mL, the ethyl acetate fraction showed an IC50 value of 103 μg/mL, the ethanol fraction showed an IC50 value of 18.99 μg/mL, and vitamin C as a comparison showed an IC50 value of 2.22 μg/mL. Based on a comparison with vitamin C, it can be seen that there is very strong antioxidant activity in the ethanol extract and moderate activity in the ethyl acetate fraction.
Keywords : Antioxidant activity, Palm fern leaves, Davallia denticulatta, Extraction, Fractionation

## Abstrak
Antioksidan merupakan salah satu senyawa yang mampu menangkal dampak negatif oksidan dengan cara mendonorkan satu  elektronnya  kepada  senyawa  yang  bersifat  oksidan  sehingga  dapat  terhambat.  Daun  pakis  mengandung  beberapa senyawa metabolit sekunder sehingga memberikan potensi sebagai sumber antioksidan alami. Pada penelitian ini dilakukan ekstraksi,  fraksinasi,  dan  uji  antioksidan  daun  pakis  sawit  (Davallia  denticulata).  Metode  ekstraksi  daun  pakis  sawit dilakukan secara maserasi menggunakan pelarut etanol dan fraksinasi dilakukan sebanyak tiga fraksi yaitu fraksi etanol, etil asetat dan n-heksan. Kemudian dilakukan uji fitokimia dari ekstrak dan fraksi daun pakis sawit yang didapat. Ekstrak etanol menunjukkan adanya senyawa flavonoid, saponin, tanin, triterpenoid dan steroid, pada fraksi n-heksan menunjukkan adanya senyawa flavonoid dan fenolik, fraksi etil asetat menunjukkan adanya senyawa flavonoid, tanin dan fenolik, dan pada fraksi  etanol  menunjukkan  adanya  senyawa  flavonoid,  saponin,  tanin,  triterpenoid  dan  steroid.  Pengujian  aktivitas antioksidan ekstrak etanol menunjukkan nilai IC50 1,406 μg/mL, fraksi n-heksan menunjukkan nilai IC50 2,91 μg/mL, fraksi etil asetat menunjukkan nilai IC50 103 μg/mL, fraksi etanol menunjukkan nilai IC50 18,99 μg/mL, dan vitamin C sebagai pembanding  menunjukkan  nilai  IC50  2,22  μg/mL.  Berdasarkan  perbandingan  dengan  vitamin  C  dapat  diketahui  bahwa terdapat aktivitas antioksidan yang sangat kuat pada ekstrak etanol dan aktivitas sedang pada fraksi etil asetat.
Kata kunci : Aktivitas antioksidan, Daun pakis sawit, Davallia denticulatta, Ekstraksi, Fraksinasi

## 1. Pendahuluan
Perubahan pola konsumsi makanan hingga dampak dari kemajuan sains dan teknologi menyebabkan semakin meningkatnya  masyarakat  yang  menderita  penyakit  degeneratif  yakni  kanker,  aterosklerosis,  rematik, jantung  koroner,  katarak,  dan  penyakit  degenerasi  saraf  seperti  parkinson  (Ikhrar  et  al.,  2019).  Hal  ini disebabkan  karena  proses  metabolisme  tubuh  yang  menghasilkan  radikal  bebas  berlebihan  sehingga menyebabkan kerusakan  pada fungsi sel-sel  tubuh (Fitriani  et al., 2019). Tubuh  manusia memiliki sistem antioksidan agar dapat mengetahui reaktivitas radikal bebas yang terbentuk dengan sendirinya oleh setiap tubuh.  Tetapi  pada  keadaan  tertentu  tubuh  tidak  dapat  mengatasinya  sendiri  sehingga  memerlukan  zat
http://ejurnal.umri.ac.id/index.php/photon
antioksidan dari luar tubuh untuk mencegah  terjadinya reaksi reaktif radikal bebas tersebut. Antioksidan merupakan salah satu senyawa yang mampu menangkal dampak negatif oksidan dalam tubuh yang bekerja dengan  cara  mendonorkan  satu  elektronnya  kepada  senyawa  yang  bersifat  oksidan  sehingga  aktivitas senyawa  oksidan  tersebut  dapat  terhambat  (Surya,  2019).  Antioksidan  diperlukan  karena  tubuh  manusia tidak  memiliki  sistem  pertahanan  antioksidan  yang  cukup,  sehingga  apabila  terjadi  paparan  radikal berlebihan maka tubuh membutuhkan antioksidan eksogen (Tamunu et al., 2022).
Daun pakis mengandung beberapa komponen non gizi yang penting bagi kesehatan. Komponen non Gizi yang  utama  pada  pakis  adalah  flavonoid  dan  polifenol  (Noprianto,  2018).  Tanaman  pakis  sawit  (Davallia denticulata) adalah salah satu tanaman paku  epifit yang paling banyak tumbuh di Pohon Sawit. Beberapa spesies dari genus Davallia (Davalliaceae) secara luas digunakan dalam pengobatan tradisional karena efek farmakologisnya sebagai antioksidan, antiosteoporosis, dan asam urat. Daun tumbuhan pakis sawit diketahui memiliki senyawa metabolit sekunder golongan flavonoid, terpenoid/steroid, saponin dan fenolik (Hendra et al., 2020). Kandungan senyawa metabolit sekunder ini memberikan potensi daun pakis sawit sebagai sumber antioksidan alami.
Pada penelitian ini dilakukan ekstraksi menggunakan pelarut etanol dengan metode maserasi dan dilanjutkan  dengan  fraksinasi  serta  uji  antioksidan  dengan  sampel  utama  daun  pakis  sawit.  Keuntungan metode maserasi yaitu dapat menghindari resiko rusaknya senyawa-senyawa dalam tanaman yang bersifat tidak tahan panas. Proses fraksinasi dilakukan dengan metode sederhana menggunakan corong pisah dan pengukuran aktvitas antioksidan dilakukan menggunakan spektrofotometer UV-Vis dengan larutan vitamin C sebagai pembanding. Hasil penelitian diharapkan memberikan data kuantitatif terkait potensi daun pakis sawit sebagai antioksidan alami.

## 2. Metodologi

## 2.1.   Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  vakum  rotary,  destilasi,  hot  plate,  timbangan,  kertas whatman, botol gelap, tabung reaksi, rak tabung reaksi, beaker glass, corong pisah, pipet tetes, cawan petri, labu ukur, spatula, kaca arloji, aluminium foil, pipet ukur, kuvet, spektrofotometer UV-Vis Pharo 300 dan alat- alat gelas laboratorium lainnya.
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  daun  pakis  sawit,  etanol,  n-heksan,  metanol,  etil asetat, HCl, eter, aquades, reagen meyer, bubuk Mg, H2SO4 pekat, FeCl3, AgNO3, vitamin C, dan DPPH.

## 2.2.  Persiapan Ekstrak
Daun diambil dari perkebunan sawit di Kota Pekanbaru dan dilakukan uji taksonomi di Laboratorium Biologi Universitas  Riau.  Daun  yang  sudah  terkumpul  kemudian  dicuci  menggunakan  air  mengalir  untuk menghilangkan partikel debu, setelah itu dikeringkan menggunakan suhu ruangan selama 2 minggu untuk menghilangkan kadar air. Setelah kering daun diblender dan ditimbang 250 gram serbuk daun kering untuk dilakukan maserasi menggunakan pelarut etanol. Serbuk daun kering dimasukkan ke dalam botol gelap kemudian ditambahkan pelarut etanol hingga menutupi seluruh serbuk dan dilakukan perendaman selama 3x24 jam. Setelah itu diambil hasil rendaman dan lakukan pengulangan sampai pelarut bening. Setelah bening dilakukan penyaringan menggunakan kertas saring dan hasil yang didapat dipekatkan menggunakan  vakum  rotary  pada  suhu  78°C.  Ekstrak  yang  di  peroleh  disimpan  pada  suhu  4°C  untuk penggunaan selanjutnya.

## 2.3.  Uji Fitokimia
 Uji Alkaloid Sebanyak 0,05 g sampel dimasukkan dalam tabung reaksi dan dilarutkan dengan 10 mL larutan  HCl,  kemudian  lakukan  penyaringan.  Filtrat  selanjutnya  diuji  dengan  pereaksi  meyer, sebanyak 4 mL filtrat dimasukkan dalam tabung reaksi dan ditambahkan pereaksi meyer sebanyak 1 mL. Uji positif bila terbentuk endapan putih kekuningan (Khasanah et al., 2020).
 Uji  Triterpenoid  dan  Steroid  Sebanyak  0,05  g  ekstrak  dimasukkan  dalam  tabung  reaksi  dan diencerkan dengan etanol 70%, kemudian ditambahkan eter sebanyak 5 tetes hingga terbentuk 2 lapisan larutan air dan etanol. Lapisan bagian atas etanol dipisahkan dan diuapkan dalam plat tetes lalu ditambahkan H 2 SO 4 pekat sebanyak 3 tetes. Endapan warna hijau kehitaman menunjukkan hasil
http://ejurnal.umri.ac.id/index.php/photon
yang positif (Khasanah et al., 2020).
 Uji  Flavonoid  Sebanyak  0,05  g  sampel  tumbuhan  yang  telah  diekstrak  dengan  5  mL  etanol  dan dipanaskan selama ± 5 menit didalam tabung reaksi. Selanjutnya ditambah 3 tetes HCl. Kemudian ditambahkan  0,02  g  bubuk  Mg.  Hasil  positif  ditunjukan  dengan  timbulnya  warna  merah  tua (magenta) menunjukkan senyawa flavonol/flavonon, endapan merah menunjukkan senyawa flavon, dan endapan hijau menunjukkan senyawa glikosida/aglikon (Khasanah et al., 2020).
 Uji Saponin Sebanyak 0,05 g sampel tumbuhan yang telah dihaluskan dimasukan ke dalam tabung reaksi, kemudian diencerkan dengan etanol 70%  ditambahkan air hangat lalu  dikocok selama 30 menit. Dilihat busa dan diukur berapa cm busa yang terbentuk. Dibiarkan selama 10 menit dan jika busanya  tidak  hilang  ditambahkan  HCl  pekat.  Apabila  masih  terdapat  busa  yang  konstan  maka menunjukkan hasil positif (Khasanah et al., 2020).
 Uji Tanin Sebanyak 0,05 g sampel tumbuhan yang telah dihaluskan dimasukkan dalam tabung reaksi dan  ditambahkan  10  mL  aquades  yang  mendidih,  kemudian  lakukan  penyaringan.  Filtrat ditambahkan 2-3 tetes larutan FeCl 3 1%. Uji positif ditandai dengan adanya warna hijau kecoklatan atau biru kehitaman (Khasanah et al. , 2020).
 Uji Fenolik. Sebanyak 0,05 gram sampel diekstrak dengan 20 mL etanol 70%. Ekstrak sebanyak 1 mL kemudian  ditambahkan  2  tetes  larutan  FeCl 3 5%.  Pembentukan  warna  hijau  atau  hijau  biru menunjukkan senyawa fenol dalam sampel (Khasanah et al., 2020).

## 2.4.  Fraksi n-Heksan, Etil Asetat dan Etanol
Ekstrak  daun  pakis  kelapa  sawit  yang  diperoleh  dimasukkan  ke  dalam  erlenmeyer  sebanyak  20  gram, kemudian  dilarutkan  dengan  aquadest  200  ml  dan  dilarutkan  dengan  pelarut  nonpolar n -heksan  200  mL dikocok sampai homogen, diamkan selama 30 menit hingga terbentuk dua lapisan. Lapisan bawah etanol-air dan lapisan atas n -heksan. Lapisan etanol-air sisa fraksinasi n -heksan selanjutnya ditambahkan pelarut semi polar etil asetat 200 mL kemudian masukan kedalam corong pisah lalu dikocok dan diamkan hingga terbentuk dua  lapisan.  Lapisan  bawah  etanol-air  dan  lapisan  atas  etil  asetat.  Selanjutnya  ketiga  fraksi  tersebut dievaporasi sehingga diperoleh tiga fraksi yaitu fraksi n -heksan (F1), fraksi etil asetat (F2), dan fraksi etanol- air  (F3)  (Novia et  al., 2019).  Tahap  selanjutnya  dilakukan  uji  fitokimia  meliputi,  alkaloid,  polifenol,  tanin, flavonoid, steroid dan triterpenoid, dan saponin (Herdiana dan Aji 2020).

## 2.5.  Uji Aktivitas Antioksidan 2.5.1. Pembuatan larutan DPPH 0.1 mM
Serbuk DPPH ditimbang 3 mg dimasukkan kedalam labu ukur 100 mL dan dilarutkan dengan metanol sampai tanda batas kemudian dihomogenkan (Maitulung et al., 2022).

## 2.5.2. Optimasi Panjang Gelombang DPPH
Larutan  DPPH  0.1  mM  sebanyak  2  mL  dimasukkan  kedalam  tabung  reaksi,  ditambahkan  metanol  2  mL, divortex hingga homogen, diinkubasi dalam ruangan gelap selama 30 menit, lalu dituang ke dalam kuvet dan diukur  pada  panjang  gelombang  517  nm  dengan  menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis  dan  ditentukan panjang gelombangnya (Maitulung et al., 2022).

## 2.5.3.  Persiapan Larutan Uji
Pembuatan larutan induk (konsentrasi 1000 ppm) Sebanyak 10 mg sampel dilarutkan dengan metanol p.a lalu  dimasukkan  ke  dalam  labu  takar  5  mL,  volume  dicukupkan  dengan  metanol  p.a  sampai  tanda  batas. Kemudian lanjutkan ke pembuatan larutan seri ekstrak daun pakis sawit dibuat dengan variasi konsentrasi 50 ppm, 100 ppm, 150 ppm, 200 ppm dan 250 ppm. Masing-masing dipipet 0,25 Ml, 0,5 mL, 0,75 mL, 1 mL dan 1,25 mL dimasukkan ke dalam labu ukur 5 mL dan dicukupkan volumenya dengan methanol p.a hingga 5 mL.(Maitulung et al. , 2022).

## 2.5.4.  Pembuatan Vitamin C
Pembuatan  Larutan  Induk  (konsentrasi  1000  ppm)  Ditimbang  vitamin  C  p.a  sebanyak  50  mg,  dilarutkan dengan  metanol  p.a  lalu  dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur  50  mL,  volume  dicukupkan  dengan  metanol  p.a sampai tanda batas. Larutan induk vitamin C, masing-masing dipipet 0,25 mL, 0,5 mL, 0,75 mL, 1 mL dan 1,25 mL dimasukkan ke dalam labu ukur masing-masing 5 mL, volume dicukupkan dengan metanol p.a sampai tanda batas.
2.5.5.  Pengukuran Serapan Menggunakan Spektrofotometer UV-Vis Pharo 300
http://ejurnal.umri.ac.id/index.php/photon
Sebanyak 2 mL masing-masing konsentrasi larutan uji dimasukkan ke dalam tabung rekasi, ditambahkan 2 mL larutan DPPH 0.1 mM, divortex hingga homogen, diinkubasi dalam ruang gelap dan pada menit ke 26 dan maksimal pada menit ke 30 diukur serapannya pada panjang gelombang (Maitulung et al ., 2022).

## 2.5.6.  Penentuan Persen Inhibisi
Akitivitas penangkal radikal dinyatakan sebagai persen inhibisi yang dapat dihitung dengan menggunakan rumus sebagai berikut:
%𝑖𝑛ℎ𝑖𝑏𝑖𝑠𝑖 𝐷𝑃𝑃𝐻 = 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 − 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑏𝑎ℎ𝑎𝑛 𝑢𝑗𝑖 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝐼 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 𝑥100%
(Maitulung et al ., 2022).
2.5.7.  Penentuan Nilai IC 50 (Inhibitory Concentration) Dari persen peredaman yang diperoleh  ditentukan IC 50 yaitu konsentrasi yang  mampu  menghambat 50% radikal bebas. Nilai IC 50 ditentukan dengan rumus :
𝐼𝐶 50 = 50 − 𝑎
𝑏 Keterangan: a = nilai x pada kurva linear b = nilai y pada kurva linear Senyawa
yang dikatakan sebagai antioksidan sangat kuat apabila nilai IC 50 kurang dari 50 ppm, kuat apabila nilai IC 50 antara 50-100 ppm, sedang apabila nilai IC 50 berkisar antara 100- 150 ppm, dan lemah apabila nilai IC 50 berkisar antara 150-200 ppm. Semakin kecil nilai IC 50 suatu senyawa maka  semakin  kuat  pula  aktivitas  antioksidan  senyawa  tersebut  karena  dengan  konsentrasi yang kecil mampu menghambat radikal bebas DPPH dengan baik (Maitulung et al ., 2022).

## 3. Hasil dan Pembahasan
3.1. Hasil
3.1.1. Preparasi bahan dan ekstraksi Hasil proses ektraksi daun pakis sawit ( Davallia denticulata) dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1 . Hasil Rendemen (%) Ekstrak Daun Pakis Sawit Sampel Berat ekstrak (g) Rendemen (%) Daun pakis sawit basah 1000 - Daun pakis sawit kering 250 25 Ekstrak 74 29,6

## 3.1.2. Hasil uji fitokimia
Uji fitokimia dilakukan terhadap ekstrak etanol daun pakis sawit ( Davallia denticulata) untuk mengetahui golongan senyawa alkaloid, flavonoid, fenolik, saponin, steroid, tanin dan terpenoid dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Hasil Uji Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Pakis Sawit. Golongan senyawa Pereaksi Hasil Alkaloid HCl dan Meyer - Titerpenoid dan Steroid Etanol 70%, Eter dan H 2 SO 4 + Flavonoid Etanol, HCl dan bubuk Mg + Saponin Etanol 70% dan HCl + Tanin Aquadest dan FeCl 3 1% + Fenolik Etanol 70% dan FeCl 3 5% -
Keterangan: (+) : Mengandung (-) : Tidak mengandung
http://ejurnal.umri.ac.id/index.php/photon

## 3.1.3. Hasil fraksinasi
Fraksinasi  dari  ekstrak  etanol  daun  benalu  pakis  sawit  menggunakan  metode  fraksinasi  cair-cair  yang dipisahkan berdasarkan perbedaan kepolaran dan hasil ekstrak dari fraksinasi ini didapatkan:
Tabel 3 . Hasil Fraksinasi Ekstrak Etanol Daun Pakis Sawit Sampel Warna asal Warna setelah proses rotary evaporator Hasil fraksi (g) Rendemen% Ektrak etanol Hijau Coklat 20 - Fraksi n -heksan Hijau hijau kehitaman 6 30 Fraksi Etil asetat Hijau kecoklatan Hijau kecoklatan 3 15 Fraksi Etanol kuning kecoklatan Kuning kecoklatan 10 50

## 3.1.4. Hasil uji fitokimia fraksinasi
Hasil uji fitokimia daun pakis sawit dari hasil ektraksi dan hasil fraksinasi berikut  hasil uji fitokimia yang didapatkan:
Table 4. Hasil Uji Fitokimia Fraksi Daun Pakis Sawit Golongan senyawa Fraksi n -heksan Etil asetat Etanol Alkaloid - - - Titerpenoid dan Steroid - - + Flavonoid + + + Saponin - - + Tanin - + + Fenolik + + -

## 3.1.5. Hasil uji aktivitas antioksidan
Berikut  data  dari  pengujian  antioksidan  yang  didapatkan  untuk  mengetahui  seberapa  besar  aktivitas antioksidan dalam daun pakis sawit:
Tabel 5. Hasil Uji Antioksidan Ekstrak Etanol Konsentrasi Rata-rata Abs Sampel % Inhibisi IC 50 µg/mL 50 0,355 0,314 64,41 100 0,330 0,289 67,25 1,406 150 0,310 0,269 69,52 200 0,310 0,269 69,52 250 0,320 0,279 68,38 Tabel 6 . Hasil Uji Antioksidan Fraksi n -heksan Konsentrasi Rata-rata Abs Sampel % Inhibisi IC 50 µg/mL 50 0,286 0,245 72,24 100 0,096 0,054 93,87 2,91 150 0,052 0,011 98,80 200 0,034 -0,008 100,90 250 0,031 -0,011 101,19
http://ejurnal.umri.ac.id/index.php/photon
Tabel 7 . Hasil Uji Antioksidan Fraksi Etil Asetat
Tabel 8 . Hasil Uji Antioksidan Fraksi Etanol Konsentrasi Rata-rata Abs Sampel % Inhibisi IC 50 µg/ml 50 0,336 0,295 66,57 100 0,310 0,269 69,52 18,99 150 0,265 0,224 74,63 200 0,205 0,164 81,44 250 0,127 0,085 90,35 Tabel 9 . Hasil Uji Antioksidan Vitamin C Konsentrasi Rata-rata Abs Sampel % Inhibisi IC 50 µg/ml 50 0,243 0,201 77,18502 100 0,205 0,164 81,44154 2,22 150 0,165 0,124 85,98184 200 0,140 0,099 88,81952 250 0,093 0,052 94,15437

## 3.2. Pembahasan
Pada penelitian ini dilakukan beberapa tahap penelitian yang diantaranya yaitu dimulai dari pengambilan simplisia  dan  uji  taksonomi,  pembuatan  ekstrak,  fraksinasi  dan  uji  fitokimia,  pembuatan  larutan  DPPH, pembuatan larutan ekstrak dan pengujian aktivitas antioksidan. Tahapan  pertama  yaitu  pembuatan simplisia. Sampel yang digunakan pada penelitian ini adalah tanaman daun pakis sawit ( Davallia denticulata ). Daun yang telah dipetik, dicuci, dan dikeringkan di udara terbuka dengan suhu ruangan. Setelah kering, daun dihaluskan dengan blender sampai menjadi serbuk dan diayak kemudian hasil ayakan disimpan pada wadah tertutup untuk dipakai pada perlakuan selanjutnya.
Metode  yang  digunakan  untuk  penyarian  simplisia  yakni  metode  maserasi.  Maserasi  merupakan proses  perendaman  sampel  pelarut  organik  yang  digunakan  pada  temperatur  ruangan.  Proses  ini  sangat menguntungkan  dalam  isolasi  senyawa  bahan  alam  karena  dengan  perendaman  sampel  tumbuhan  akan terjadi pemecahan dinding sel akibat perbedaan tekanan antara di dalam dan di luar sel sehingga metabolit sekunder  yang  ada  dalam  sitoplasma  akan  terlarut  dalam  pelarut  organik  dan  ekstrak  senyawa  akan sempurna karena dapat diatur lama perendaman yang dilakukan (Hasrianti, 2017).
Ekstrak daun pakis sawit ( Davallia denticulata ) dibuat dengan mengekstraksi 250 gram serbuk daun pakis sawit secara maserasi dengan pelarut etanol. Simplisia direndam dalam pelarut etanol sebanyak 10 L selama 3 x 24 jam sambil sesekali diaduk. Hasil ekstraksi selanjutnya dipekatkan dengan menggunakan rotary vacuum evaporator hingga  diperoleh  ekstrak kental. Ekstrak  etanol yang  diperoleh  berupa  ekstrak kental sebanyak  74  gram  dari  250  gram  serbuk  daun  pakis  sawit  dan  diperoleh  rendemen  sebanyak  29,6  %. Rendemen merupakan nilai berat ekstrak kental yang diperoleh dibandingkan dengan berat simplisia atau serbuk awal (Fatoni, 2019).
Setelah didapatkan ekstrak kental dilanjutkan proses fraksinasi. Fraksinasi adalah suatu cara untuk memisahkan  senyawa  berdasarkan  sifat  kepolarannya.  Senyawa  polar  akan  masuk  akan  masuk  ke  polar, begitu pula senyawa non polar akan masuk pada pelarut non polar (Lona, 2018).  Fraksinasi diambil dari ekstrak  kental  hasil  ekstraksi  yang  ditimbang  sebanyak  20  gram  kemudian  dilakukan  fraksinasi  cair-cair
Konsentrasi Rata-rata Abs Sampel % Inhibisi IC 50 µg/mL 50 0,595 0,554 37,17 100 0,505 0,464 47,38 150 0,450 0,409 53,63 103 200 0,345 0,304 65,55 250 0,305 0,264 70,09
http://ejurnal.umri.ac.id/index.php/photon
dengan pelarut beda kepolaran yaitu pelarut n -heksan (non-polar), etil asetat (semi polar), dan etanol (polar). Setelah dilakukan fraksinasi lanjutkan ke rotary evaporator untuk pengentalan ekstrak kemudian timbang ekstrak  sesuai  yang  didapatkan  yaitu  n-heksan  mendaptkan  6  gram  ekstrak  dan  30%  rendemen  dengan warna hijau kehitaman, etil asetat mendapatkan 3 gram ekstrak dan 15% rendemen dan warna ekstrak hijau kecoklatan, dan etanol mendapatkan ekstrak 10 gram sedangkan rendemen yang didapatkan 50% dengan warna ekstrak kuning kecoklatan.
Pengujian fitokimia pada  kstrak etanol didapat uji titerpenoid dan steroid menunjukkan hasil positif ditandai  dengan  ada  endapan  hijau  kehitaman,  uji  flavonoid  mendapatkan  hasil  positif  ditandai  dengan timbulnya endapan warna hijau, uji saponin mendapatkan hasil positif ditandai dengan terbentuknya busa konstan,  uji  tanin  mendapatkan  hasil  positif  ditandai  terbentuknya  warna  biru  kehitaman.  Pada  fraksi n - heksan mendapatkan hasil positif pada pengujian flavonoid ditandai adanya warna hijau dan fenolik ditandai adanya warna hijau, sedangkan alkaloid, triterpenoid dan steroid, saponin, tannin tidak terjadi reaksi apapun dan dinyatakan negatif. Pada fraksi etil asetat yang mendapatkan hasil positif yaitu flavonoid terdapat warna hijau,  tanin  terdapat  warna  hijau  kecoklatan  dan  fenolik  terdapat  warna  hijau  dan  yang  negatif  adalah alkaloid, triterpenoid dan steroid, saponin tidak terjadinya reaksi apapun. sedangkan fraksi etanol hasil positif yaitu  triterpenoid  dan  steroid  ditandai  dengan  adanya  endapan  coklat,  flavonoid  adanya  warna  merah, saponin terdapat busa konstan dan tannin terdapat warna hijau kecoklatan sedangkan yang hasil negatif yaitu alkaloid dan fenolik tidak terjadinya reaksi apapun. Berdasarkan hasil uji fitokimia ini terlihat potensi sebagai antioksidan  alami.  Keberadaan  senyawa  flavonoid  memiliki  potensi  sebagai  antioksidan  karena  memiliki gugus  hidroksil  yang  terikat  pada  karbon  cincin  aromatik  sehigga  dapat  menangkap  radikal  bebas  yang dihasilkan dari reaksi peroksidasi lemak. Senyawa.
Flavonoid akan menyumbangkan satu atom hidrogen untuk menstabilkan radikal peroksi lemak (Dewi, 2014).Pengujian antioksidan dilakukan secara kualitatif dan kuantitatif. Secara kualitatif dilihat dari adanya perubahan warna pada larutan ketika ditambahkan sampel yang mengandung antioksidan. Sedangkan secara kuantitatif yang dilakukan dengan mengukur kadar dari hasil absorbansi dan persen inhibisi yang didapat pada  pengujian  menggunakan  spektrofotometer  Uv-Vis  (Hartini,  2020).  Peredaman  radikal  bebas  oleh antioksidan  terjadi  ketika  elektron  tak  berpasangan  menjadi  berpasangan  dengan  adanya  sebuah  donor hidrogen,  sehingga  membentuk  DPPH  yang  lebih  stabil,  reaksi  yang  terjadi  antara  radikal  bebas  dan antioksidan dapat di lihat pada gambar berikut;
Gambar 1 . Reaksi yang terjadi antara radikal bebas dan antioksidan (Wulansari, 2018).
Elektron tak berpasangan pada DPPH memberikan suatu absorbsi yang kuat, maksimum pada λ = 517  nm  dan  berwarna  ungu.  Peredaman  radikal  bebas  oleh  antioksidan  terjadi  ketika  elektron  tak berpasangan menjadi berpasangan dengan adanya sebuah donor hidrogen, sehingga membentuk DPPH yang lebih stabil. Penetapan aktivitas antioksidan dapat dilakukan secara in vitro dengan metode DPPH. DPPH (2,2 difenil-1-  pikrihidrazil)  merupakan  metode  uji  aktivitas  antioksidan  menggunakan  reagen  DPPH  yang berperan sebagai radikal. DPPH digunakan untuk mengetahui aktivitas antioksidan melalui kemampuannya dalam menangkap radikal bebas (Wulansari, 2018). Metode DPPH dipilih karena sederhana, mudah, cepat dan peka serta hanya memerlukan sedikit sampel.
Pengujian  dilakukan  dengan  memipet  2  mL  DPPH  dalam  2  mL  metanol.  Dilakukan  vortex  dan diinkubasi pada suhu 37⁰C dalam ruangan gelap. Pengukuran absorbansi dilakukan pada panjang gelombang 517 nm (Yuliani, 2016). Hasil dari pengukuran absorbansi adalah  0,925 untuk  DPPH. Penetapan aktivitas antioksidan dilakukan dengan mereaksikan 2 mL DPPH dengan 2 mL larutan uji dengan pada konsentrasi 50 ppm,  100  ppm,  150  ppm,  200  ppm,  dan  250  ppm,  kemudian  dilanjutkan  dengan  pengukuran  absorbansi menggunakan instrumen Spektrofotometri UV-Vis sehingga diketahui nilai absorbansinya. Data absorbansi kemudian digunakan untuk  menghitung nilai persen inhibisi dari larutan uji terhadap DPPH. Data inhibisi dengan konsentrasi sampel kemudian digunakan untuk menentukan persamaan regresi linier pada masing- masing larutan uji. Penetapan konsentrasi inhibisi 50 (IC 50 ) dilakukan dengan memasukkan nilai y = 50 pada
http://ejurnal.umri.ac.id/index.php/photon
persamaan regresi linier. Persentase inhibisi menyatakan besarnya kemampuan perendaman radikal bebas oleh suatu sampel. Sementara inhibitor consentration (IC 50 ) merupakan parameter yang digunakan untuk menunjukkan aktivitas antioksidan, merupakan nilai yang menggambarkan konsentrasi sampel paling efektif meredam radikal bebas 50% (Hartini, 2020).
Tabel 10. Tingkat Kekuatan Antioksidan dengan Metode DPPH (Maitulung et al., 2022).
Intensitas Antioksidan Nilai IC 50 Sangat Kuat <50 ppm Kuat 50-100 ppm Sedang 100-250 ppm Lemah 250-500 ppm
Pada  penelitan  uji  aktivitas  daun  pakis  sawit  didapatkan  hasil  perhitungan  IC 50 yang  didapat  dari absorbansi pada hasil ekstraksi etanol yaitu pada 50 ppm mempunyai nilai % inhibisi sebesar 64,2 %, untuk 100 ppm sebesar 66,69 %, untuk 150 ppm sebesar 69,52 %, untuk 200 ppm sebesar 69,52 % dan 250 ppm sebesar  68,39  %.  Data  %  inhibisi  dari  hasil  ekstraksi  awal  etanol  dimasukkan  kedalam  aplikasi  agar didapatkan persamaan regresi linier untuk penentuan IC 50 , dengan cara konsentrasi sampel sebagai sumbu x dan % inhibisi sebagai sumbu y dari persamaan: y = bx + a. Hasil yang didapat yaitu persamaan y = 14,339lnx +  45,113  ,  Untuk  penentuan  nilai  IC 50 dapat  dihitung  dengan  menggunakan  rumus:  IC 50 =  (50-a)/b.  Hasil perhitungan yaitu Nilai IC 50 : 1,406 µg/ml yang termasuk golongan antioksidan sangat kuat. Rentang IC 50 = < 50 µg/ml merupakan aktivitas antioksidan yang sangat kuat. Kemudian dilanjutkan ke hasil perhitungan IC 50 yang  didapat  dari  absorbansi  pada  hasil  fraksinasi  menggunakan  pelarut n -heksan  yaitu  pada  50  ppm mempunyai nilai % inhibisi sebesar 72,25 %, untuk 100 ppm sebesar 93,87 %, untuk 150 ppm sebesar 98,81 %, untuk 200 ppm sebesar 100,91 % dan 250 ppm sebesar 101,19 %. Hasil yang didapat yaitu persamaan y = 85,516lnx-41,349, Untuk penentuan nilai IC 50 dapat dihitung dengan menggunakan rumus: IC 50 = (50-a)/b. Hasil  perhitungan  yaitu  Nilai  IC 50 :  2,91  µg/ml  yang  termasuk  golongan  antioksidan  sangat  kuat.  Hasil perhitungan IC 50 yang didapat dari absorbansi pada hasil fraksinasi menggunakan pelarut etil asetat yaitu pada 50 ppm mempunyai nilai % inhibisi sebesar 37,17 %, untuk 100 ppm sebesar 47,39 %, untuk 150 ppm sebesar 53,63 %, untuk 200 ppm sebesar 65,55 % dan 250 ppm sebesar 70,09 %. Hasil yang didapat yaitu persamaan y = 85,516lnx-41,349, Untuk penentuan nilai IC 50 dapat dihitung dengan menggunakan rumus: IC 50 = (50-a)/b. Hasil perhitungan yaitu Nilai IC 50 : 103 µg/ml yang termasuk golongan antioksidan sedang. Dilanjutkan hasil perhitungan IC 50 yang didapat dari absorbansi pada hasil fraksinasi menggunakan pelarut etanol yaitu pada 50 ppm mempunyai nilai % inhibisi sebesar 66,57 %, untuk 100 ppm sebesar 69,52 %, untuk 150 ppm sebesar 74,63 %, untuk 200 ppm sebesar 81,44 % dan 250 ppm sebesar 90,35 %. Hasil yang didapat  yaitu  persamaan  y  =  13,764x+9,4785,  Untuk  penentuan  nilai  IC 50 dapat  dihitung  dengan menggunakan rumus: IC 50 = (50-a)/b. Hasil perhitungan yaitu Nilai IC 50 : 18,99 µg/ml yang termasuk golongan antioksidan sangat kuat dan hasil nilai larutan vitamin C yaitu IC 50 : 2,22 µg/ml sebagai larutan pembanding. Rentang IC 50 = < 50 µg/ml merupakan aktivitas antioksidan sangat kuat. Aktivitas antioksidan yang diperoleh dari hasil analisa pengujian ekstrak etanol sangat kuat sedangkan fraksi n -heksan dan etanol mendapatkan hasil sangat kuat pada fraksi etil asetat aktivitasnya sedang. Hal ini kemungkinan disebabkan karena beberapa faktor diantaranya adalah sifat yang mudah rusak bila terpapar oksigen,  cahaya,  pengeringan  dan  suhu  yang  terlalu  panas  pada  saat  proses  pengentalan  ekstrak menggunakan rotary evaporator , sehingga membuat kandungan senyawa flavonoid dan fenolik pada ekstrak daun  pakis  sawit  yang  mana  berpotensi  sebagai  antioksidan  menjadi  berkurang.  senyawa  flavonoid  dan fenolik memiliki potensi sebagai antioksidan karena memiliki gugus hidroksil yang terikat pada karbon cincin aromatik sehigga dapat menangkap radikal bebas yang dihasilkan dari reaksi peroksidasi lemak. Senyawa flavonoid akan menyumbangkan satu atom hidrogen untuk menstabilkan radikal peroksi lemak (Haveni et al ., 2019). nilai IC 50 dimana semakin besar aktivitas antioksidannya semakin kecil nilai IC 50 yang diperoleh.

## 4. Kesimpulan
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan, maserasi mengunakan pelarut etanol menghasilkan rendemen sebesar 29,6 %. Metode fraksinasi yang digunakan yaitu metode cair-cair pemisahan berdasarkan perbedaan
http://ejurnal.umri.ac.id/index.php/photon
kepolaran dengan rendemen masing-masing pelarut yang didapatkan yaitu n -heksan 30 %, etil asetat 15 % dan etanol fraksi 50 %. Hasil maserasi dan fraksinasi dilakukan uji fitokimia dengan pelarut etanol didapatkan triterpenoid dan steroin, flavonoid, saponin dan tanin sedangkan pada plarut hasil fraksinasi yaitu n-heksan didapatkan  flavonoid  dan  fenolik.  Etil  asetat  didapatkan  flavonoid,  tannin  dan  fenolik.  Etanol  fraksi didapatkan  triterpenoid  dan  steroin,  flavonoid,  saponin  dan  tannin.  Hasil  pengujian  aktivitas  antioksidan dengan metode DPPH menggunakan pelarut etanol yaitu hasil ekstraksi mendapatkan nilai IC 50 1,406 µg/ml, fraksi n-heksan mendapatkan nilai IC 50 2,91 µg/ml, fraksi etil asetat mendapatkan nilai IC 50 103 µg/ml dan fraksi etanol mendapatkan nilai IC 50 18,99 µg/ml dan vitamin C mendapatkan nilai IC 50 2,22 µg/ml  sebagai pembanding jadi hasil yang didapatkan pada etanol sangat kuat dibandingkan vitamin C, fraksi n-heksan dan fraksi etanol menunjukkan hasil sangat kuat sedangkan yang fraksi etil asetat memiliki hasil sedang.

## Daftar Pustaka
Aji, A., Bahri, S., & Tantalia, T. (2017). Pengaruh Waktu Ekstraksi dan Konsentrasi HCl untuk Pembuatan Pektin dari Kulit Jeruk Bali ( Citrus maxima ). Jurnal Teknologi Kimia Unimal , 6 (1), 33–44. Cahyaningrum, K., Husni, A., & Budhiyanti, S. A. (2016). Aktivitas Antioksidan Ekstrak Rumput Laut Cokelat. Journal of Marine Research , 36 (2), 137–144. Fitriani, N., Herman, & Rijai, L. (2019). Antioksidan Ekstrak Daun Sumpit ( Brucea javanica (L). Merr ) dengan Metode DPPH Nurul. Jurnal Sains Dan Kesehatan , 2 (1), 57–52.
Fatoni,  G.  (2019).  Penetapan  Aktivitas  Antioksidan  Metode  Dpph  Tumbuhan  Paku  ( Pteridophyta )  Di Kabupaten Lumajang. Tugas Akhir . Progam Studi Farmasi Universitas Jember. Hartati, S., Rugayah, & Praptosuwiryo, T. N. (2016). Isolasi Kandungan Senyawa Kimia dari Pakis Simpei ( Cibotium barometz ) serta Uji Bioaktivitas Antioksidan, Uji Toksisitas ( BSLT ) dan Antidiabetes. Jurnal KimiaTerapan Indonesia , 18 (1), 1–10.
Hasrianti. (2017). Data Kandungan Gizi Bahan Pangan Pokok dan Penggantinya. skripsi . Makasar: Universitas Hassanudin.
Haveni, D., Mastura., Sari, R.P. (2019). Ekstrak Etanol Bunga Kertas ( Bougainvillea ) Pink Sebagai Anti Oksidan Dengan Menggunakan Metode DPPH. J urnal  Pendidikan Kimia dan Ilmu Kimia , 2(1), 1-7 Hartini, N. (2020). Aktivitas Antioksidan dari  Ekstrak Metanol Batang dan Akar Gulma Siam ( Chromoleana odorata )  menggunakan  Metode  DPPH  ( 1,1-Difenil-2-pikrilhidrazil ). Skripsi .  Banda  Aceh:  Universitas Islam Negri Ar-Raniry.
Hendra, R., Khodijah, R., Afham, M., Fachira, R., Sofiyanti, N., & Teruna, H. Y. (2020). Tingkat Toksisitas dari Beberapa Ekstrak Tanaman Paku Kaki Tupai ( Davalia denticulate ). Majalah Farmasetika. , 4 (1), 46–49. Herdiana,  I.,  &  Aji,  N.  (2020).  Fraksinasi  Ekstrak  Daun  Sirih  dan  Ekstrak  Gambir  serta  Uji  Antibakteri Streptococcus mutans. Jurnal Ilmiah Kesehatan , 19 (3), 100–106. Ikhrar, M. S., Yudistira, A., & Wewengkang, D. S. (2019). Uji Aktivitas Antioksidan Stylissa sp . Dengan Metode DPPH ( 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil ). Pharmacon , 8 (4), 961.
Khasanah,  N.  W.,  Karyadi,  B.,  &  Sundaryono,  A.  (2020).  Uji  Fitokimia  dan  Toksisitas  Ekstrak  Umbi Hydnophytum sp. terhadap Artemia salina Leach. Journal of Science Education , 4 (1), 47–53.
Kasminah. 2016. Aktivitas Antioksidan Rumput Laut Halymenia Durvillaeni Dengan Pelarut Non Polar, Semi Polar Dan Polar. Skripsi . Surabaya: Universitas Airlangga.
Lona, A.T . (2018). Uji Aktivitas Antibakteri Fraksi N-Heksana, Etil Asetat, Dan Air Dari Ekstrak Daun Hijau Tanaman Pucuk Merah  ( Syzygium Myrtifolium  Walp ) Terhadap Bakteri  Staphylococcus Aureus Atcc 25923. Skripsi . Fakultas Farmasi Universitas Setia Budi, Surakarta.
Maitulung, I., Maarisit, W., Pareta, D. N., & Lengkey, Y. K. (2022). Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Akar Manukan (Rhinacanthus nasutus ( L ) Kurz ) . 5 (2), 127–134. Meliza, R., Chikmawati, T., & Sulistijorini, S. (2019). Morfologi Spora dan Perkembangan Gametofit Davallia denticulata dan Davallia trichomanoides . Jurnal Bioteknologi & Biosains Indonesia (JBBI) , 6 (1), 1. 20-35 Mukhtarini. (2014). Ekstraksi, Pemisahan Senyawa, dan Identifikasi Senyawa Aktif. Jurnal Kesehatan , 7 (2), 361–367.
Mutiara,  R.,  Djangi,  M.  J.,  &  Herawati,  N.  (2016).  Isolasi  dan  Uji  Aktivitas  Antioksidan  Senyawa  Metabolit Sekunder Ekstrak Metanol Kulit Buah Mangrove Pidada ( Sonneratia caseolaris ). Jurnal Chemical , 17 (2), 52–62.
http://ejurnal.umri.ac.id/index.php/photon
Nonci,  F.  Y.,  Pine,  T.  D.,  &  Hasnia.  (2016).  Uji  Aktivitas  Antimikroba  Hasil  Fraksinasi  Ekstrak  Etanol  Daun Patikala ( Etlingera Elatior ) Terhadap Beberapa Mikroba Uji. Jurnal farmasi Uin alauddin makassar , 4 (2), 35–42.
Noprianto. (2018). Pengaruh Penggunaan Ekstrak Pakis ( Diplazium esculentum ) Terhadap Mutu Ikan Patin ( Pangasius hypophthalmus ) Segar. Biomass Chem Eng , 3 (2). 14-16
Novia,  D.,  Noviyanti,  Y.,  &  Anggraini,  Y.  N.  (2019).  Identifikasi  dan  Fraksinasi  Ekstrak  Akar  Tebu  Hitam ( Saccharum officinarum l.) dengan Metode Kromatografi Lapis Tipis. Jurnal Ilmiah Farmacy , 6 (1), 77– 85.
Pratiwi, L., Fudholi, A., Martien, R., & Pramono, S. (2016). Ethanol Extract, Ethyl Acetate Extract, Ethyl Acetate Fraction, and n-Heksan Fraction Mangosteen Peels ( Garcinia mangostana L. ) As Source of Bioactive Substance  Free-Radical  Scavengers. JPSCR :  Journal  of  Pharmaceutical  Science  and  Clinical  Research , 1 (2), 71.
Surya, A. (2019). Aktivitas Antioksidan Ekstrak Metanol The Hijau Kemasan Merek X Terhadap DPPH ( 2,2 diphenyl-1-picrylhydrazyl ). Jurnal Analis Kesehatan , 7 (1), 43–49. Surya, A., & Rahayu, D. P. (2020). Antioksidan Ekstrak Metanol Kulit Petai ( Parkia Speciosa Hassk ) Dengan Metode 2,2-diphenyl-1-picrylhidrazyl. JOPS (Journal Of Pharmacy and Science) , 4 (2), 1–5. Tamunu, M. sarra, Pareta, D. N., Hariyadi, H., & Karauwan, F. A. (2022). Skrining Fitokimia Dan Uji Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Daun  Benalu  Pada  Kersen Dendrophtoe  pentandra  (L. )  Dengan  Metode  2,2- diphenyl -1- Picrylhydrazyl (DPPH). Biofarmasetikal Tropis , 5 (1), 79–82. Wulansari,  A.N.  (2018).  Alternatif  Cantigi  Ungu  ( Vaccinium  varigiaefolium )  Sebagai  Antioksidan. Jurnal Farmaka Suplemen ,16(2), 19-29 Yuliani, N.N., Sambaran, J., & Mau, M.A. (2016). Uji Aktivitas Antioksidan Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanol Rimpang  Jahe  Merah  ( zingiber  officinale  var.  Rubrum )  Dengan  Metode  DPPH  ( 1,1-Diphenyl-2- Picrylhydrazyl ). Jurnal Info Kesehatan , 14(1),1092-1111.