https://doi.org/10.22487/kovalen.2022.v8.i3.16046
Penambatan Molekuler Penghambatan Aktivitas Enzim α -Amilase dan α -Glukosidase oleh Senyawa Aktif Daun Kirinyuh
( Chromolaena odorata L.)
[Molecular Docking for Inhibition of α -Amylase and α -Glucosidase Enzyme Activities by Active Compounds of Kirinyuh Leaves ( Chromolaena odorata L.)]
Nelson Gaspersz 1  , Matthew Adi H. Amos 1 , Sitti Hardiyanti Kalauw 2 , Indrid Harjuni 1 , Mario R. Sohilait 1
1 Jurusan Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam,  Universitas Pattimura
2 Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Pattimura
Abstract. An in silico study was conducted to inhibit the active compound in Kirinyuh leaves ( Chromolaena odorata L.) against α -amylase and α -glucosidase enzymes using a molecular docking approach. The docking was carried out on 19 active compounds that had been identified in Kirinyuh leaves and were optimized using the PM3 method. The  best  results  in  inhibit  on  of  the α -amylase  enzyme  were  shown  by  compounds  from  the  flavanone  group, namely genkwanin and sakuranetin with binding affinities of -8.3 kcal/mol and -8.1 kcal/mol, respectively, while the best results in inhibiting on of the α -glucosidase enzyme were shown by two compounds from the hydroxybenzoic acid  group,  namely  p-coumaric  acid  and  p-hydroxybenzoic  acid  with  bond  affinities  of  -5.7  kcal.mol  and  -5.5 kcal.mol,  respectively.  The  interaction  between α -amylase  with  genkwanin  and  sakuranetin  produces  one conventional hydrogen bond GLU 233 and GLN 63 respectively. The interaction between α -glucosidase with p- coumaric acid and p-hydroxybenzoic acid produces three conventional hydrogen bonds, HIS 112; GLN 182; ASP 352 and GU 277; GLN 279; ASP 352.
Keywords: Molecular docking, Chromolaena odorata L. , α -amylase, α -glucoidase
Abstrak. Studi in silico penghambatan enzim α- amilase dan α -glukosidase oleh senyawa aktif dalam daun Kirinyuh ( Chromolaena  odorata L.)  dengan  menggunakan  pendekatan  penambatan  molekuler.  Penambatan  dilakukan terhadap 19 senyawa aktif yang telah teridentifikasi dalam daun  Kirinyuh dan dioptimasi menggunakan metode PM3.  Hasil  terbaik  dalam  penghambatan  enzim α -amilase  ditunjukkan  oleh  senyawa  golongan  flavanon  yaitu genkwanin  dan  sakuranetin  dengan  afinitas  ikatan  masing-masing  sebesar  -8,3  kkal/mol  dan  -8,1  kkal/mol. Sementara hasil terbaik dalam penghambatan enzim α -glukosidase ditunjukkan oleh dua senyawa dari kelompok asam hidroksibenzoat yaitu asam p-kumarat dan asam p-hidroksibenzoat dengan afinitas ikatan masing-masing sebesar -5,7 kkal.mol dan -5,5 kkal.mol. Interaksi antara α -amilase terhadap genkwanin dan sakuranetin masing- masing menghasilkan  satu  ikatan  hidrogen konvensional  GLU 233 dan  GLN 63.  Interaksi  antara α -glukosidase terhadap  asam  p-kumarat  dan  asam  p-hidroksibenzoat  masing-masing  menghasilkan  tiga  ikatan  hidrogen konvensional HIS 112; GLN 182; ASP 352 dan GU 277; GLN 279; ASP 352.
Kata kunci : Penambatan molekuler, Chromolaena odorata L. , α -amilase, α -glukosidase
Diterima:  28 September 2022, Disetujui: 23 November 2022
Sitasi:   Gaspersz, N., Amos, M.A.H., Kalauw, S.H., Harjuni, I., dan Sohilait, M.R. (2022). Penambatan Molekuler Penghambatan Aktivitas Enzim α-Amilase dan α-Glukosidase oleh Senyawa Aktif Daun Kirinyuh ( Chromolaena odorata L.). KOVALEN: Jurnal Riset Kimia , 8(3): 230-237.
https://bestjournal.untad.ac.id/index.php/kovalen
 Corresponding author E-mail: nelson@fmipa.unpatti.ac.id

## Gaspersz et al.

## LATAR BELAKANG
Diabetes  melitus  merupakan  penyakit kronis yang terjadi ketika pankreas tidak dapat memproduksi  cukup  insulin  atau  tubuh  tidak dapat  menggunakan  insulin  yang  dihasilkan secara efektif. Terdapat dua tipe diabetes yang ditemui  yakni,  diabetes  melitus  tipe  1  yang disebabkan oleh faktor genetik seperti rusaknya  sel- β  pankreas  yang  menghasilkan insulin  dan diabetes melitus tipe  2 merupakan disfungsi  sel  pankreas  yang  disebabkan  oleh gaya  hidup  yang  salah  (Oyedemi et al .,  2017;
Putri & Fatmawati, 2019).
Hasil Riset Kesehatan  Dasar (Riskesdas) pada  tahun  2018  menunujukkan  prevalensi diabetes  di  Indonesia  pada  umur  ≥  15  tahun sebesar  2%.  Hasil  tersebut  menunjukkan terjadinya kenaikan angka prevalensi diabetes di  Indonesia,  dibandingkan  dengan  hasil Riskesdas tahun 2013 sebesar 1,5%
(Supriyono, 2020).
Pada  penderita  diabetes,  tubuh  tidak dapat  memproduksi  cukup  insulin  atau  tidak dapat menggunakan insulin tersebut sehingga terjadi  kenaikan  kadar  glukosa  dalam  darah.
Dalam  menjaga  kadar  glukosa  dalam  darah agar  dapat  turun  dan  stabil  maka  penyerapan glukosa  harus  ditunda  melalui  penghambatan enzim  penghidrolisis  karbohidrat  seperti  α- amilase  dan  α-glukosidase  yang  berada  di saluran pencernaan (Khadayat et al. , 2020) . α- amilase  adalah  hasil  sekretorik  dari  pankreas dan  kelenjar  saliva  yang  bertanggung  jawab untuk  hidrolisis  awal  karbohidrat  kompleks menjadi  campuran  oligosakarida  dan  sakarida di  mukosa  usus,  selanjutnya  dipecah  lebih lanjut menjadi glukosa secara langsung di usus kecil (Oyedemi et al ., 2017; Quan et al. , 2019).
Penghambatan  aktivitas α-glukosidase  dapat memperlambat proses pencernaan dan
penyerapan  karbohidrat  dengan  menghambat aktivitas glukosidase secara kompetitif, sehingga  konsentrasi  glukosa  dalam  darah dapat terkendali (Yin et al ., 2014).
Daun  kirinyuh  ( Chromolaena  odorata L.) telah diidentifikasi terkandung beberapa senyawa  dari  golongan  alkaloid,  flavonoid, saponin,  tanin,  terpenoid,  fenol,  dan  steroid (Hadiroseyani et  al .,  2007;  Salsabila et  al .,
2021).  Kelompok  senyawa  yang  mendominan dalam  ekstrak  metanol  daun  kirinyuh  ialah alkoloida, steroida dan saponin (Munte & Lubis, 2016). Komponen aktif daun kirinyuh yang telah berhasil  diisolasi  antara  lain  Genkwanin  dan sakuranetin  (Hung et  al .,  2011).  Tamarixetin,
eupatlin, asam-p-kumarat dan asam-p-
hidroksibenzoat  (Phan et  al .,  2001).  Senyawa α-pinene , β-pinene ,  dan germacrene-D dalam daun Chromolaena odorata L. dapat berfungsi
sebagai  antioksidan  (Owolabi et  al. ,  2010).
Aktivitas  antioksidan  daun  kirinyuh  linier dengan aktivitas antidiabetes khususnya dalam penghambatan α -glukosidase (Putri &
Fatmawati,  2019).  Telah  dilakukan  secara in vitro melalui  penghambatan  aktivitas  enzim α - amilase  dan  glukoamilase  menggunakan ekstrak  etanol  daun  kirinyuh  masing-masing menunjukan nilai IC 50 sebesar 3730,15 ± 28,91 ppm dan  2510,78 ±  383,37 ppm (Gaspersz et al ., 2022).
Studi in  silico pada  senyawa  yang terkandung  dalam  daun  kirinyuh  sebagai  anti- malaria,  penyembuh  luka  pada  jaringan  kulit, dan  pengobatan  asam  urat  telah  dilakukan menggunakan pendekatan penambatan molekular.  Akan  tetapi  hingga  saat  ini, penelitian  penambatan  molekuler  terhadap senyawa yang terkandung dalam daun kirinyuh untuk penghambatan aktivitas enzim α-amilase dan  α-glukosidase  belum  pernah  dilakukan.
Gaspersz et al.
Penelitian  secara in  silico menggunakan pendekatan  penambatan  molekuler  untuk inhibisi  enzim α -amilase  sebelumnya  telah dilakukan  dengan  menggunakan  ligan  uji berupa α, β,  dan  γ-mangostin  (Gaspersz  &
Sohilait, 2019).

## METODE PENELITIAN
Perangkat keras ( hardware )
Seperangkat  komputer  pribadi  dengan spesifikasi prosesor Intel Core i3-6006U, 4 GB DDR3L Memory dan hardisk 1 TB HDD.
Perangkat lunak ( software )
Perangkat lunak komputasi yang digunakan  adalah  AutoDock-Vina  1.1.2  ( The
Scripps  Research  Institute ),  Hyperchem  8.0,
dan Discovery Studio 2021 Client.

## Prosedur Penelitian

## Preparasi reseptor dan ligan uji
Makromolekul α-amilase dan α- glukosidase  diunduh  dari  situs  Protein  Data Bank  (PDB)  yaitu  http://www.rcsb.org.  Untuk penelitian ini data makromolekul yang diunduh adalah 4GQR untuk Pancreatic alpha-amylase
(Williams  et  al.,  2012)  dan  3A4A  untuk Oligo-
1,6-glucosidase (Yamamoto et al ., 2010) dalam bentuk  PDB  file  (.pdb).  Ligan  uji  yang digunakan  adalah  19  komponen  utama  yang telah  teridentifikasi  dalam  daun  kirinyuh  yang diunduh melalui situs pubchem yaitu https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov  yang  dapat terlihat  pada  Tabel  1.  19  komponen  utama tersebut  dioptimasi  geometri  menggunakan metode PM3.

## Penambatan ligan uji pada reseptor
Ligan uji ditambatkan pada kedua reseptor yang  telah  tersedia  ruang  ( pocket/cavity ).
Penambatan  dilakukan  dengan  AutodockVina dengan ukuran grid untuk α -amilase ialah x, y,
z  berturut-turut adalah 13,101, 14,828, 39,831 dengan dimensi gridbox -nya adalah 25 × 25 ×
25 dan ukuran grid untuk α -glukosidase ialah x,
y,  z  berturut-turut  adalah  21,243,  -7,756,
24,341 dengan dimensi gridbox -nya adalah 10
×  10  ×  10.  Hasil  penambatan  akan  dianalisis dimana  senyawa  dengan  energi  terendah merupakan konformasi yang baik.

## Evaluasi hasil penambatan
Hasil penambatan divisualisasikan melalui Discovery Studio 2021 Client. Parameter hasil penambatan  yang  dianalisis  ialah  afinitas ikatan  reseptor  dan  ligan,  residu  asam  amino yang berikatan dengan ligan uji dan jenis ikatan yang terjadi.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penambatan α -amilase
Afinitas ikatan hasil penambatan molekuler diperoleh dua senyawa dari golongan flavonoid dengan nilai afinitas ikatan yang  lebih  kecil  dibandingkan  ligan  standar (miresetin) sesuai Tabel 2 yaitu genkwanin dan sakuranetin  dengan  afinitas  ikatan  masing- masing sebesar -8,3 kkal/mol dan -8,1 kkal/mol. Selain  nilai  afinitas  ikatan  yang  rendah, keduanya juga memiliki nilai konstanta inhibisi yang  kecil  yaitu  sebesar  8,24165×10 -7 µM untuk  genkwanin  dan  1,15509×10 -6 µM  untuk sakuranetin. Nilai afinitas ikatan yang diperoleh divalidasi  oleh  nilai RMSD  dari kedua  ligan uji tersebut  masing-masing  adalah  1,061  Å  dan
1,072 Å. Dimana nilai RMSD yang baik adalah
≤  2,0  Å  Nilai  RMSD  hasil  penambatan menunjukan bahwa posisi ligan yang diperkirakan  semakin  baik  karena  semakin mendekati posisi ligan standar.
Hasil  penambatan  terlihat  bahwa  selain genkwanin dan sakuranetin terdapat subscandenin dan isosakuranetin yang

## Gaspersz et al.
memiliki nilai afinitas yang cukup tinggi. Hal ini menunjukkan bahwa senyawa golongan flavonoid  memiliki  kemampuan  yang  baik dalam menghambat aktivitas α -amilase.
Golongan  flavonoid  sendiri  memiliki  jenis penghambatan yang kompetitif (Proença et al. ,
2019).
Tabel 1. Ligan-ligan uji Nama Senyawa Struktur 2D Nama
Senyawa Struktur 2D Genkwanin O O OH O OH C H 3 Geijerene Sakuranetin O O OH O OH C H 3 α-pinene H
4,6’-dihidroksi- 2’,3’,4’- trimetoksi- chalcone OH O OH O O O C H 3 C H 3 CH 3 H H β-pinene H H Subskandenin O O OH O O C H 3 O H CH 3 Pregeijerene CH 3 Isosakuranetin O O OH O H O CH 3 asam p- hidroksibenzoat O H
O
OH 5,7,2’- trihidroksi-6- metoksi- flavanon O O OH O H O H O H (+)(-)-(E)-beta- kariofilen Eupatilin O O OH O O O CH 3 O C H 3 CH 3 CH 3 β-copaen-4-α- ol O H Kuersetin O O OH O H OH OH OH Asam p- kumarat O H OH O H H Tamarixetin O O OH O H OH O OH CH 3 (2S)- 5,6,7,3’,4’- Pentametoksi- flavanon O O O O O O CH3 O C H3 CH3 CH3 C H3 Germacrene D C H 2 H CH 3 CH 3 C H 3 H H
Interaksi  antara  ligan  uji  dan  reseptor dianalisis  dengan  menggunakan  Discovery studio 2021 Client. Interaksi yang terjadi antara
setiap ligan uji dan residu asam amino terdapat pada  Tabel  4.  Interaksi  yang  terjadi  antara genkwanin dan residu asam amino terdapat lima

## Gaspersz et al.
ikatan  hidrogen  dan  tiga  ikatan  van  der  waals yaitu  GLU  233  (Ikatan  hidrogen  konvensional),
TRP  59;  TYR  62;  ASP  300;  HIS  305  (karbon hidrogen)  dan  LEU  165;  ASP  197;  ALA  198 (Ikatan  van  der  waals)  (Gambar  1).  Interaksi yang terjadi antara sakuranetin dan residu asam amino  terdapat  lima  ikatan  hidrogen  dan  tujuh ikatan  van  der  waals  yaitu  GLN  63  (Ikatan hidrogen konvensional), TRP 59; TYR 62; ASP 300;  HIS  305  (Karbon  Hidrogen)  dan  TRP  58;
LEU  162;  LEU  165;  ARG  195;  ASP  197;  GLU 233; HIS 299 (Ikatan van der waals) (Gambar 1).
Terikatnya  ligan  pada  sisi  aktif  khususnya dengan  residu  katalitik  yaitu  Asp197,  Glu233, dan Asp300 dapat mencegah proses pengikatan substrat  sehingga  reaksi  katalisis  pemutusan ikatan glikosida oleh enzim terhambat (Williams et  al. ,  2012).  Pada  penambatan α -amilase dengan α, β,  γ-mangostin  menunjukan  jumlah
gugus  hidroksil  dan  gugus  karbonil  memiliki peranan  penting  dalam  pembentukan  ikatan hidrogen,  sehingga  dapat  berdampak  pada afinitas  pengikatan  ligan  terhadap  reseptor (Gaspersz & Sohilait, 2019).
(a) (b)
Gambar 1. Residu asam amino dari (a) genkwanin dan (b) sakuranetin
Tabel 2. Hasil penambatan molekuler ligan standar dan ligan uji dengan reseptor α-amilase
No Ligan Afinitas ikatan (kkal/mol) rmsd l.b. (Å) rmsd u.b. (Å) Ki (µM) 1 Genkwanin -8,3 0,074 1,061 8,24165×10 -7 2 Sakuranetin -8,1 0,206 1,072 1,15509×10 -6 3 Miresetin (ligan standar) -7,8 0,061 1,727 1,91655×10 -6 4 Subscandenin -7,7 0,148 1,021 2,26893×10 -6 5 Isosakuranetin -7,6 0,184 1,073 2,6861×10 -6
Tabel 3. Hasil penambatan molekuler ligan standar dan ligan uji dengan reseptor α-glukosidase
No Ligan Afinitas ikatan (kkal/mol) rmsd l.b. (Å) rmsd u.b. (Å) Ki (µM) 1 Asam p-kumarat -5,7 0,156 1,412 6,635×10 -5 2 Asam p- hidroksibenzoat -5,5 1,271 1,495 9,29915×10 -5 3 α-D-glucopyranose (ligan standar) -4,6 1,198 1,316 4,24769×10 -4 4 Geijerene -3,8 1,034 3,38 1638931×10 -3 5 β-pinene -3,2 1,105 2,665 4511977×10 -3
Gaspersz et al.
Tabel 4. Perbandingan interaksi hasil penambatan antara ligan standar dan ligan uji
Protein Senyawa Interaksi dengan residu asam amino Ikatan hidrogen Van der Waals α-amilase Myricetin (Ligan standar) Ikatan hidrogen: tidak ada; Karbon Hidrogen: TRP 59; TRP 58; TYR 62; GLN 63; HIS 101; LEU 162; LEU 165; ARG 195; ASP 197; ALA 198; HIS 201; GLU 233; ILE 235; HIS 299; HIS 305 Genkwanin Ikatan hidrogen: GLU 233; Karbon Hidrogen: TRP 59; TYR 62; ASP 300; HIS 305 LEU 165; ASP 197; ALA 198 Sakuranetin Ikatan hidrogen : GLN 63; Karbon Hidrogen: TRP 59; TYR 62;ASP 300; HIS 305 TRP 58; LEU 162; LEU 165; ARG 195; ASP 197 GLU 233; HIS 299 α-glukosidase α-D- glucopyranose (ligan standar) Ikatan hidrogen: ARG 213; GLU 277; HIS 351; ASP 352; Karbon Hidrogen: Tidak ada ASP 69; TYR 72; HIS 112; PHE 178; GLN 182; PHE 159; ASP 215; VAL 216; ARG 442; ARG 446 p-coumaric acid Ikatan hidrogen: HIS 112; GLN 182; ASP 352; Karbon Hidrogen: PHE 178; ASP 215; VAL 216 ASP 69; TYR 72; PHE 159; GLU 277; GLN 279; PHE 303; ARG 442 p- Hydroxybenzoic acid Ikatan hidrogen: GLU 277; GLN 279; ASP 352; Karbon Hidrogen: PHE 178; VAL 216 ASP 69; TYR 72; HIS 112; PHE 159; GLN 182; ARG 213; ASP 215; PHE 303; ARG 442 Penambatan α -glukosidase
Afinitas
ikatan hasil penambatan molekuler diperoleh dua senyawa dari kelompok  fenolik  dengan  nilai  afinitas  ikatan yang lebih kecil dibandingkan ligan standar ( α-
D- glucopyranose )  sesuai  Tabel  3,  yaitu  asam p-kumarat dan asam p-hidroksibenzoat dengan afinitas ikatan masing-masing -5,7 kkal/mol dan
-5,5  kkal/mol.  Selain  nilai  afinitas  ikatan  yang rendah, keduanya juga memiliki nilai konstanta inhibisi  yang  kecil,  yaitu  6,635×10 -5 µM  untuk asam  p-kumarat  dan  9,29915×10 -5 µM  untuk asam  p-hidroksibenzoat.  Nilai  afinitas  ikatan yang diperoleh divalidasi oleh nilai RMSD dari kedua ligan uji tersebut masing-masing 1,412 Å dan 1,495 Å.
Interaksi  yang  terjadi  antara  asam  p- kumarat dan residu asam amino terdapat enam ikatan hidrogen dan tujuh ikatan van der waals, yaitu  HIS  112;  GLN  182;  ASP  352  (Ikatan hidrogen  konvensional),  PHE  178;  ASP  215; VAL 216 (Karbon Hidrogen) dan ASP 69; TYR 72;  PHE  159;  GLU  277;  GLN  279;  PHE  303; ARG  442  (Ikatan  van  der  waals)  (Tabel  4, Gambar 2). Interaksi yang terjadi antara asam p-hidroksibenzoat  dan  residu  asam  amino terdapat  lima  ikatan  hidrogen  dan  sembilan ikatan van der waals yaitu GLU 277; GLN 279; ASP 352 (Ikatan hidrogen konvensional), PHE
178; VAL 216 (Karbon Hidrogen) dan ASP 69;
TYR  72;  HIS  112;  PHE  159;  GLN  182;  ARG
213; ASP 215; PHE 303; ARG 442 (Ikatan van
Gaspersz et al.
der  waals)  (Gambar  2).  Terdapat  tiga  residu asam kataitik yaitu Asp69, Gu277, dan Asp352
yang  secara  umum  dapat  membentu  ikatan hidrogen dengan ligan (Yamamoto et al ., 2010).
(a) (b)
Gambar 2. Residu asam amino dari (a) asam p-kumarat dan (b) asam p-hidroksibenzoat

## KESIMPULAN
Studi in silico menggunakan pendekatan penambatan molekuler terdapat senyawa yaitu genkwanin dan sakuranetin yang memiliki nilai afinitas  yang  tinggi  dalam  menghambat aktivitas  enzim α- amilase  dan  terdapat  dua senyawa  yaitu  asam  p-kumarat  dan  asam  p- hidroksibenzoat  yang  memiliki  nilai  afinitas yang tinggi dalam menghambat aktivitas enzim α- glukosidase. Akan
tetapi
masih
diperlukannya  pengujian  lebih  lanjut  baik secara in  vitro maupun in  vivo untuk melengkapi penelitian yang telah dilakukan.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Terima  kasih  kepada  pihak  Diktiristek yang  telah  menjadi  penyalur  dana  sehingga penelitian ini dapat dilaksanakan.

## DAFTAR PUSTAKA
Gaspersz,  N.,  Fransina,  E.  G.,  &  Ngarbingan,
A.  R.  (2022).  Uji  Aktivitas  Penghambatan Enzim  α-Amilase  dan  Glukoamilase  dari
Ekstrak Etanol Daun Kirinyuh ( Chromolaena  odorata L.). Jurnal  Kimia Mulawarman , 19 (2), 51-57.
https://doi.org/10.30872/jkm.v19i2.1120
Gaspersz,  N.,  &  Sohilait,  M.  R.  (2019).
Penambatan  Moleku ler  α,  β,  dan  γ- mangostin  sebagai  Inhibitor  α-  amylase Pankreas  Manusia. Indo.  J.  Chem.  Res. , 6(2), 59-66.
Hadiroseyani, Y., Hafifuddin, ., Alifuddin, M., & Supriyadi, H. (2007). Potential of
Chromolaena  odorata  Leaf  as  A  Cure  of Aeromonas hydrophila on Giant Gouramy ( Osphronemus gouramy ). Jurnal Akuakultur Indonesia , 4 (2), 139. https://doi.org/10.19027/jai.4.139-144
Hung, T. M., Cuong, T. D., Dang, N. H., Zhu, S.,
Long,  P.  Q.,  Komatsu,  K.,  &  Min,  B.  S. (2011). Flavonoid Glycosides from
Chromolaena odorata Leaves and Their in
Vitro  Cytotoxic  Activity. Chemical  and Pharmaceutical  Bulletin , 59 (1),  129 –131. https://doi.org/10.1248/cpb.59.129
Khadayat,  K.,  Marasini,  B.  P.,  Gautam,  H., Ghaju, S., & Parajuli, N. (2020). Evaluation of  the  alpha-amylase  inhibitory  activity  of Nepalese  medicinal  plants  used  in  the treatment  of  diabetes  mellitus. Clinical Phytoscience , 6 , 34. https://doi.org/10.1186/s40816-020-00179-8
Munte,  N.,  Sartini.,  dan  Lubis,  R.  (2016).
Skrining Fitokimia dan Antimikroba
Ekstrak  Daun  Kirinyuh  terhadap  Bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli . Jurnal  Biologi  Lingkungan,  Industri, Kesehatan , 2 (2), 132-140. https://doi.org/10.31289/biolink.v2i2.803

## Gaspersz et al.
Owolabi,  M.  S.,  Ogundajo,  A.,  Yusuf,  K.  O.,
Villanueva,  H.  E.,  Tuten,  J.  A.,  &  Setzer, W.  N.  (2010).  Chemical  Composition  and Bioactivity  of  the  Essential  Oil  of Chromolaena  odorata  from  Nigeria. Rec. Nat. Prod. , 4(1),72-78.
Oyedemi,  S.  O.,  Oyedemi,  B.  O.,  Ijeh,  I.  I., Ohanyerem, P. E., Coopoosamy, R. M., & Aiyegoro,  O.  A.  (2017).  Alpha-Amylase Inhibition  and  Antioxidative  Capacity  of Some  Antidiabetic  Plants  Used  by  the Traditional Healers in Southeastern Nigeria. The  Scientific  World  Journal , 2017 ,
1 –11. https://doi.org/10.1155/2017/3592491
Phan,  T.-T., Wang,  L.,  See,  P.,  Grayer,  R.  J.,
Chan, S.-Y., & Lee, S. T. (2001). Phenolic Compounds  of  Chromolaena  odorata Protect Cultured Skin Cells from Oxidative Damage: Implication for Cutaneous Wound Healing. Biological and Pharmaceutical  Bulletin , 24 (12),  1373 – 1379. https://doi.org/10.1248/bpb.24.1373
Proença, C., Freitas, M., Ribeiro, D., Tomé, S. M., Oliveira, E. F. T., Viegas, M. F., Araújo, A.  N.,  Ramos,  M.  J.,  Silva,  A.  M.  S., Fernandes, P. A., & Fernandes, E. (2019). Evaluation  of  a  flavonoids  library  for inhibition of pancreatic α-amylase towards a structure –activity relationship. Journal of Enzyme Inhibition and Medicinal Chemistry , 34 (1), 577 –588.
https://doi.org/10.1080/14756366.2018.15
58221
Putri, D.  A.,  and Fatmawati, S. (2019).  A New Flavanone  as  a  Potent  Antioxidant Isolated  from Chromolaena  odorata L. Leaves. Evidence-Based  Complementary and  Alternative  Medicine , 2019 ,  1 –12. https://doi.org/10.1155/2019/1453612
Quan,  N.,  Xuan,  T.,  Tran,  H.-D.,  Thuy,  N., Trang,  L.,  Huong,  C.,  Andriana,  Y.,  & Tuyen, P. (2019). Antioxidant, α-Amylase and α-Glucosidase Inhibitory Activities and Potential Constituents of Canarium tramdenum Bark. Molecules , 24 (3),  605. https://doi.org/10.3390/molecules2403060 5
Salsabila,  A.,  Harfiani,  E.,  &  Nugraha,  Y. (2021). The effectivities of anti-diabetic of
Chromolaena odorata L. in lowering blood sugar  level:  A  systematic  review. IOP Conference Series: Earth and Environmental  Science , 913 (1),  012092. https://doi.org/10.1088/1755-
1315/913/1/012092
Supriyono  Pangribowo.  (2020). InfoDATIN. Pusat  Data  Dan  Informasi  Kementerian Kesehatan RI, Jakarta.
Williams, L. K., Li, C., Withers, S. G., & Brayer, G.  D.  (2012).  Order  and  Disorder:  The Differential Structural Impacts of Myricetin and Ethyl Caffeate on Human Amylase, an Anti-Diabetic  Target. Journal  of  Medicinal
Chemistry , 55 , 10177 –10186. http://dx.doi.org/10.1021/jm301273u
Yamamoto,  K.,  Miyake,  H.,  Kusunoki,  M.,  & Osaki,  S.  (2010).  Crystal  structures  of isomaltase from Saccharomyces cerevisiae  and  in  complex  with  its competitive  inhibitor  maltose:  Crystal structure  of  isomaltase. FEBS  Journal , 277 (20),
4205 –4214.
https://doi.org/10.1111/j.1742-
4658.2010.07810.x
Yin, Z., Zhang, W., Feng, F., Zhang, Y., & Kang, W.  (2014).  α-Glucosidase  inhibitors isolated  from  medicinal  plants. Food Science  and  Human  Wellness , 3 (3 –4),
136 –174.
https://doi.org/10.1016/j.fshw.2014.11.003