PERFORMA PERTUMBUHAN DAN KETAHANAN STRES STADIA AWAL UDANG GALAH Macrobrachium rosenbergii YANG DIBERI Bacillus sp.
GROWTH PERFORMANCE AND STRESS RESISTANCE IN EARLY STAGE OF GIANT PRAWN, Macrobrachium rosenbergii, TREATED WITH Bacillus sp.
Munti Yuhana 1* , Darna Andrian Ramadhan 1 , Hary Krettiawan 2 , Usamah Afiff 3 1 Departemen Budidaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, IPB University 2 Balai Riset Pemuliaan Ikan, Sukamandi, Subang
3 Departemen Ilmu Penyakit Hewan dan Kesehatan Masyarakat Veteriner, Fakultas Kedokteran Hewan, IPB University *Korespondensi: muntiyu@apps.ipb.ac.id

## ABSTRACT
The study aimed to evaluate the effect of  the water application of  probiotic Bacillus sp. DMP13 on the growth and stress response of  giant freshwater prawn larvae Macrobrachium rosenbergii . The larvae used in this experiment were 1-day-old larvae post-hatching with an average body weight of  2.7±0.6 mg and an average length of  2.1±0.1 mm. The larvae were reared in 2 L plastic tanks with a density of  100 L -1 for 21 days. The study was conducted using 4 treatments with three replications of  each, namely A (control without probiotic), B ( Bacillus sp. DMP13 with cell concentration of 10 2 CFU (colony forming unit) mL -1 ), C ( Bacillus sp. DMP13 with 10 4 CFU mL -1 ) and D ( Bacillus sp. DMP13 with 10 6 CFU mL
-1 ). Probiotic was applied in the rearing media on days 9 th up to 18 th with 3 days intervals. The results showed that application of Bacillus sp. DMP13 with a cell density of  10 2 CFU mL -1 was able significantly increased the absolute larvae weight (29.67±1.88 mg), increased larval survival in stress concentrations of  1,250 μL L -1 of  formalin solution (the highest larval survival rate 98.3±2.9%). Treatment with 10 2 CFU mL -1 probiotic cell addition also increasing the total bacterial viable count in the media (the cell density reached 5.99±0.28 log CFU mL -1 ). However, other parameters such as the larvae stage index, survival rate, and absolute length of  the larvae with probiotic treatments were not significantly different from those of control.
Keywords: Bacillus sp. DMP13, giant freshwater prawn, larvae, probiotic, stress response

## ABSTRAK
Penelitian ini bertujuan untuk mengevaluasi efek aplikasi probiotik Bacillus sp. DMP13 melalui air terhadap respons kinerja pertumbuhan dan ketahanan larva udang galah Macrobrachium rosenbergii . Larva yang digunakan dalam penelitian ini berumur 1 hari pasca menetas dengan bobot tubuh rata-rata 2,7±0,6 mg dan panjang rata-rata 2,1±0,1 mm. Larva dipelihara dalam bak plastik bervolume 2 L dengan kepadatan 100 L -1 selama 21 hari. Penelitian dilakukan dengan 4 perlakuan dengan masing-masing tiga ulangan yaitu A (kontrol tanpa probiotik), B ( Bacillus sp. DMP13 dengan konsentrasi sel 10 2 CFU ( Colony Forming Unit ) mL -1 ), C ( Bacillus sp. DMP13 dengan 10 4 CFU mL -1 ) dan D ( Bacillus sp. DMP13 dengan 10 6 CFU mL -1 ). Pemberian probiotik melalui media pemeliharaan dilakukan pada hari ke-9 sampai ke-18 dengan selang waktu setiap 3 hari. Hasil penelitian menunjukkan bahwa aplikasi probiotik Bacillus sp. DMP13 dengan kepadatan sel 10 2 CFU mL -1 secara signifikan mampu meningkatkan bobot mutlak larva (29,67±1,88 mg), meningkatkan daya tahan larva dalam cekaman konsentrasi 1,250 μL L -1 larutan formalin (tingkat kelangsungan hidup larva tertinggi 98,3±2,9 %). Perlakuan dengan penambahan sel probiotik 10 2 CFU mL -1 juga meningkatkan jumlah total bakteri yang hidup dalam media (kepadatan sel mencapai 5,99±0,28 log CFU mL -1 ). Namun parameter lain seperti indeks stadium larva, tingkat kelangsungan hidup, dan panjang absolut larva udang galah pasca pemberian perlakuan probiotik tidak berbeda nyata dengan kontrol.
Kata kunci: Bacillus sp. DMP13, daya tahan stress, larva, probiotik, udang galah

## PENDAHULUAN
Intensifikasi  produksi  benih  udang galah  memperlihatkan  rendahnya  sintasan yang ada di hatchery . Hal ini kemungkinan disebabkan oleh berbagai faktor internal dan eksternal. Faktor internal antara lain adanya perkembangan  kondisi  fisiologis  larva  di fase transisi, adaptasi terhadap lingkungan pada  saat  stadia  larva,  cekaman stress lingkungan,  kanibalisme,  dan  adaptabilitas terhadap  lingkungan  yang  masih  rendah (Rahiman et al . 2010). Dewasa  ini  aplikasi  probiotik dalam  akuakultur  semakin  populer  karena ramah  lingkungan,  mampu  meningkatkan kesehatan  dan  pertumbuhan  organisme budidaya (Seenivasan et al . 2014). Probiotik berperan  penting  untuk  meningkatkan sintasan,
mempercepat pertumbuhan, dapat  menekan  populasi  patogen,  menjaga lingkungan budidaya, dan berdampak pada peningkatan produksi (Yuhana 2010; Vine et al . 2006; Akter et al . 2017). Aplikasi probiotik telah  meningkatkan  perbedaan  signifikan pada  sintasan  udang  vaname  (Hamsah et al . 2017a, b) dan di udang galah (Habib et al . 2014, Seenivasan et al . 2014). Beberapa penelitian  tentang  aplikasi  probiotik  yang dilakukan pada udang vaname menunjukkan hasil  bahwa  pemberian  probiotik  mampu meningkatkan  respon  imun  (Ramezani- Fard et al .  2014),  ketahanan  terhadap serangan penyakit, performa pertumbuhan, sintasan, pemanfaatan pakan serta aktivitas enzim  pencernaan  (Gupta et al . 2016). Ada  banyak  kelompok  genus  bakteri  yang biasa  digunakan  sebagai  probiotik,  seperti Bacillus sp. (Keysami et al . 2007; Rahiman et al . 2010), Lactobacillus (Dash et al . 2014; Seenivasan et al .  2014), Streptococcus , Pseudoalteromonas sp ., Vibrio sp . (Widanarni et al . 2008), Aeromonas dan Saccharomyces (Prasad et al . 2013). Bakteri Gram positif, seperti Bacillus sp.  telah  mampu  berperan  dalam  berbagai aspek  akuakultur  seperti  untuk  perbaikan kualitas air, pengurangan populasi patogen di lingkungan budidaya, peningkatan tingkat kelangsungan  hidup  dan  pertumbuhan, serta  peningkatan  kondisi  kesehatan  inang (Das et al . 2017). Penelitian  ini  dilakukan  dengan tujuan  untuk  mengevaluasi  pengaruh aplikasi probiotik Bacillus sp. DMP 13 dengan konsentrasi  berbeda  dan  pengaruhnya terhadap  sintasan,  pertumbuhan  dan  daya
tahan  larva  udang  galah Macrobrachium rosenbergii .

## METODE PENELITIAN
Penyediaan isolat Bacillus sp. DMP 13
Bacillus sp.  DMP  13  merupakan bakteri  yang  diisolasi  dari  spons  laut dengan teknik dan kriteria seleksi bertahap (Yuhana  2010,  Abubakar et al . 2011). Bacillus sp.  DMP  13  dikultivasi  selama sekitar  20  jam  pada  media Marine Agar (MA,  Difco  Marine  Agar  2216).  Media  MA mengandung peptone , yeast extract , agar bacteriological ,  dan  semua  mineral  yang diperlukan  untuk  menumbuhkan  bakteri asal laut ( marine bacteria ). Biakan Bacillus sp.  DMP  13  kemudian  dikulturkan  selama sekitar  20  jam  dalam  media Marine Broth (MB,  Difco  Marine  Broth  2216).  Kultur  sel Bacillus sp.  DMP  13  diinkubasi  di  media MB pada suhu 30°C selama 24 jam hingga kepadatan  sel  mencapai  10 8 CFU  mL -1 . Selanjutnya,  kultur  yang  tumbuh  dibagi dalam  2  wadah  steril  baru,  sebagai  kultur stok  sel  probiotik  yang  disimpan  di  media agar  miring  MA  yang  disimpan  di  kondisi suhu sekitar 4°C. Bagian kultur sel lainnya adalah biakan yang dipelihara sebagai stok kerja yang dikultur di media MB. Sel bakteri Bacillus sp.  DMP  13  kemudian  dilakukan karakterisasi secara morfologis dan fisiologis serta  konfirmasi  pewarnaan  endospora untuk memastikan bakteri yang digunakan adalah bakteri genus Bacillus sp.
Pengujian patogenisitas Bacillus sp. DMP 13 terhadap larva udang galah
Pengujian  ini  dilakukan  untuk mengkonfirmasi  bahwa Bacillus sp.  DMP 13 yang dijadikan kandidat probiotik tidak bersifat  patogen  (Yuhana  2010).  Galur bakteri Bacillus sp.  DMP  13  ini  diuji  sifat patogenisitasnya  dengan  menambahkan suspensi  selnya  pada  konsentrasi  10 6 CFU  mL -1 pada  media  pemeliharaan  larva udang  galah  stadia  2  dan  3.  Larva  udang galah  dipelihara  dengan  kepadatan  100 ekor  L -1 dan  diberi  pakan  naupli Artemia . Pemeliharaan larva udang galah dilakukan selama 5 hari dan larva yang mati dihitung setiap hari. Pada akhir percobaan dihitung sintasan  larva  dan  dibandingkan  dengan kontrol, yaitu perlakuan tanpa penambahan isolat bakteri (Widanarni et al . 2010).

## Aplikasi probiotik ke dalam media dan pemeliharaan larva udang galah
Wadah  pemeliharaan  larva  yang digunakan  berupa  bak  plastik  berwarna biru  gelap  dengan  volume  2  liter.  Sebelum dipakai,  wadah  didesinfeksi  menggunakan hipoklorit  30  µg  L -1 .  Selanjutnya  wadah diisi  air  payau  (salinitas  12 o / oo ),  tanpa disterilisasi,  sebanyak  2  liter  media  dan diberi  aerasi.  Hewan  uji  yang  digunakan adalah  larva  udang  galah Macrobrachium rosenbergii strain GI Macro II dengan bobot rata-rata  0,0014  ±  0,0001  mg/ekor  dan panjang 2 ± 0,1 mm/ekor. Larva dipelihara dengan kepadatan 100 ekor L -1 selama 21 hari  dan  diberikan  berupa  naupli Artemia sp.  pada  pukul  10.00  dan  16.00  WIB, serta  pakan  tambahan  berupa egg custard sebanyak  12-20  mg/hari/wadah  setelah hari  ke-12  pada  pukul  08.00,  12.00,  dan 14.00. Pada hari ke-9, media pemeliharaan larva ditambahkan kultur cair sel probiotik Bacillus sp.  DMP  13.  Pada  saat  ini  larva mencapai  stadia  post  larva  3-4.  Perlakuan penelitian  adalah  kelimpahan  sel  probiotik Bacillus sp. DMP 13 yang diberikan melalui media  pemeliharaan  dengan  konsentrasi berbeda,  disertai  kontrol  yaitu  tanpa pemberian  probiotik  (perlakuan  A),  lalu perlakuan kepadatan sel sebanyak 10 2 CFU mL -1 (perlakuan B), 10 4 CFU mL -1 (perlakuan C), dan 10 6 CFU mL -1 (perlakuan D). Probiotik yang diperbanyak dalam media kultur cair, diberikan setiap interval 3 hari sekali, dari hari ke-9 hingga hari ke-18 pemeliharaan.

## Parameter pengamatan dan pengolahan data
Parameter  yang  diamati  dalam penelitian  ini  adalah  indeks    stadia perkembangan  larva  (LSI,  mengacu  pada Nhan  2009,  yaitu  indeks  yang  merupakan
refleksi  perkembangan  organ-organ  tubuh larva udang galah). Rumus yang digunakan untuk  menghitung  parameter  LSI  (Nhan 2009) adalah sebagai berikut:
di mana: a,b, ..., k : Stadia larva, yaitu 1-11 n 1 ,  n 2 ,  ...,  n n :  Jumlah  larva  yang  terlihat pada  stadium  yang  sama  N:  Jumlah  total larva  yang  diamati.  Selama  pemeliharaan, diamati perkembangan stadia larva ( Larvae Stage Index )  setiap  tiga  hari  sekali  selama pemeliharaan  menggunakan  mikroskop binokuler  dengan  sampel  yang  diamati sebanyak 20 ekor larva. Selain indeks LSI, dilakukan observasi pula parameter kinerja pertumbuhan  (mengacu  pada  penelitian Hamsah et al .  2017a)  yang  meliputi:  laju pertumbuhan  harian  (LPH),  pertumbuhan bobot mutlak (PBM), pertumbuhan panjang mutlak  (PPM),  sintasan  (SR),  daya  tahan larva,  kelimpahan  total  bakteri/ total bacterial count (TBC) di media pemeliharaan. Kualitas  air  media  diukur  pada  saat  awal tengah  dan  akhir  penelitian  yang  meliputi parameter pH, kandungan oksigen terlarut/ dissolved oxygen (DO) serta suhu. Data yang diperoleh ditabulasi menggunakan Microsoft Excel 2013, kemudian dianalisis ragam dan diuji lanjut menggunakan uji Tukey dengan bantuan software Minitab 17.0.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Karakterisasi isolat bakteri Bacillus sp.
DMP13 Karakterisasi bakteri secara morfologis  dan  fisiologis  serta  pewarnaan spora menunjukkan bahwa bakteri DMP 13 tergolong  genus Bacillus sp.  dan  memiliki endospora (Tabel 1).
Tabel 1. Karakterisasi morfologis dan fisiologis bakteri Bacillus sp. hasil isolasi dari spons laut Isolat Warna koloni Pewarnaan Gram Bentuk Sel SIM Oksidase Katalase O/F Spora DMP13 Putih susu + Batang + + + +/+ + BR2* Putih agak krem + Batang + + + +/+ +
Keterangan:  (+)  =  positif  uji,  (-)  =  negatif  uji,  SIM:  Sulfit,  Indol,  Motilitas,  O/F:  Oksidatif/ Fermentatif *BR2: Bacillus cereus isolat referensi yang sudah disekuens gen 16S rRNAnya
Bakteri Bacillus sp.  DMP  13  yang diisolasi  dari  spons  laut  demospongea (Abubakar et al .  2011)  merupakan  bakteri Gram  positif  berbentuk  batang.  Dari pengamatan  kami  dengan  melakukan preparat ulas dan pewarnaan spora, kultur sel  yang  ditumbuhkan  pada  media  MA dan  diinkubasi  selama  48-72  jam  sudah membentuk  endospora.  Bentuk  endospora memiliki kelebihan dibandingkan sel vegetatif karena  memiliki  struktur  pelindung  untuk mempertahankan  daya  hidup  yang  lebih lama (Gupta et al . 2016). Bacillus sp. adalah bakteri Gram positif yang biasa digunakan sebagai  probiotik  karena    memiliki  spora. Fase  spora  ini  bersifat  lebih  stabil  dan dapat  bertahan  lebih  lama  di  lingkungan yang ekstrim atau kurang menguntungkan (Nicholson et al . 2000).

## Uji patogenisitas bakteri terhadap larva
Hasil uji pendahuluan sifat patogenisitas probiotik Bacillus sp. DMP 13, pada larva yang diberi suspensi sel probiotik tidak  menunjukkan  adanya  kematian  post larva udang galah. Hal ini  berarti Bacillus sp. DMP 13, tidak berbahaya, tidak bersifat patogenik  dan  aman  digunakan  untuk diaplikasikan  dalam  media  pemeliharaan larva  udang  galah.  Dibandingkan  dengan larva  kontrol  yang  tidak  diberi  probiotik Bacillus sp.  DMP  13  (Gambar  1),  larva udang  galah  yang  dipelihara  dalam  media dengan  aplikasi  bakteri Bacillus sp.  DMP 13  dengan  konsentrasi  sel  10 6 CFU  mL -1 memiliki  sintasan  sebesar  75,0±1,2%, sedangkan  nilai  sintasan  pada  perlakuan kontrolnya  bahkan  hanya  57,5±2,6%. Kematian  yang  terjadi  dalam  perlakuan kontrol  kemungkinan  karena  adanya bakteri patogen yang konsentrasinya tinggi dalam  media,  sedangkan  penambahan  sel probiotik  ke  dalam  media  pemeliharaan dapat menekan populasi sel bakteri patogen ini,  sehingga  menimbulkan  kematian  dan
penurunan jumlah larva udang galah pada kontrol. Pengujian in vivo sifat patogenisitas Bacillus sp.  DMP  13  dilakukan  untuk konfirmasi  aspek  keamanan  probiotik terhadap inang. Dari pengujian patogenisitas  ini  hasilnya  menunjukkan bahwa  keberadaan Bacillus sp.  DMP  13 dengan  konsentrasi  sel  yang  tinggi  dalam media tidak berakibat lebih buruk dibanding perlakuan  kontrol  (Gambar  1).  Pengujian ini  menunjukkan  bahwa  isolat Bacillus sp. DMP  13  tersebut  tidak  bersifat  patogen (Widanarni et al . 2010). Bacillus sp. adalah genus bakteri yang sangat luas aplikasinya sebagai  sumber  probiotik  pada  berbagai organisme  (Elshaghabee et al .  2017).  Sifat non patogenik merupakan salah satu kriteria penting yang menentukan organisme dapat digunakan  sebagai  kandidat  probiotik yang  baik  (Yuhana  2010;  Rahiman et al . 2010).  Ada  beberapa  kemungkinan  yang menyebabkan nilai sintasan udang kontrol lebih  rendah,  yaitu  kondisi  fisiologis  larva udang  galah  pada  stadia  awal  larva  ini masih  dalam  perkembangan  kelengkapan organ, selain itu fase transisi atau peralihan sumber  nutrisi  larva  dari  kuning  telur  ke sumber  pakan  alami Artemia sp.,  diduga masih  sangat  berkontribusi  terhadap tingginya mortalitas larva udang.

## Perkembangan dan pertumbuhan larva
udang galah Hasil pengamatan terhadap parameter  indeks  stadia  larva  (LSI),  serta parameter  laju  pertumbuhan  spesifik (LPH)  dan  pertumbuhan  panjang  mutlak (PPM)  pemberian  probiotik Bacillus sp. DMP  13  dengan  kelimpahan  berbeda memperlihatkan  tidak  berbeda  nyata terhadap  kontrol  sedangkan  parameter pertumbuhan  bobot  mutlak  (PBM)  pada perlakuan B 3,09 ± 0,12 mg berbeda nyata terhadap kontrol 2,40 ± 0,1 (Tabel 2).
Gambar  1.  Sintasan  larva  udang  galah  yang  dipelihara  selama  5  hari  dalam  uji patogenisitas isolat Bacillus sp. DMP 13
Indeks LSI adalah parameter untuk menilai  perkembangan  stadia  populasi larva yang dipelihara dalam satu perlakuan (Nhan  2009).  Pengamatan  yang  dilakukan terhadap LSI kontrol dan perlakuan aplikasi probiotik  tidak  memperlihatkan  perbedaan yang  signifikan  berada  di  kisaran  6,7±0,1. Hal  ini  diduga  karena  pada  masa  awal perkembangan  hidupnya  serta  masa transisi dalam memperoleh sumber nutrisi, kecepatan perkembangan larva udang galah relatif sama. Menurut FAO (2002), rata-rata perkembangan  larva  udang  galah  hingga mencapai  juvenil  pada  rentang  waktu 25-35  hari.  Nilai  LSI  pada  udang  galah menunjukkan  perkembangan  larva  yang ditandai  dengan  proses  perubahan  dan perkembangan  bentuk  fisik.  Larva  udang galah akan berganti kulit secara periodik dan akan mengalami 11 kali perubahan bentuk yang berbeda atau penambahan komponen tubuh  hingga  mencapai  fase  juvenil  yang menyerupai  udang  galah  dewasa  (Nhan 2009; Anggraeni dan Krettiawan 2015). Nilai indeks LSI larva yang dipelihara selama 21 hari dalam penelitian ini lebih rendah dari studi  yang  pernah  dilakukan  sebelumnya untuk udang galah domestikasi asal Berau sebesar 8,2±0,1 (Anggraeni dan Krettiawan 2015)  diduga  karena  pengaruh  faktor
intrinsik  yaitu  genetik  udang  galah  yang asalnya berbeda.
Pertumbuhan  bobot  larva  udang galah berbeda nyata terhadap kontrol yaitu pada  perlakuan  B  3,10  ±  0,12  mg  dan  D 2,77 ± 0,22 mg (Tabel 2). Gupta et al . (2016) menyatakan  bahwa  larva  udang  galah yang  diberikan  probiotik Bacillus coagulan memperlihatkan  performa  pertumbuhan yang signifikan dan mampu meningkatkan bobot  tubuh.  Sedangkan  pertumbuhan panjang  mutlak  larva  udang  galah  tidak berbeda  nyata  antar  perlakuan  (Tabel 2).  Dalam  penelitian  ini  nilai  PBM  yang signifikan  berbeda  dari  perlakuan  B  tidak berkorelasi  positif  dengan  parameter  lain seperti parameter sintasan dan LSI.
Nilai  sintasan  udang  uji  pasca perlakuan  pemberian  probiotik  tidak berbeda  secara  signifikan  antar  perlakuan (Tabel  2).  Meskipun  sintasan  yang didapatkan  tidak  berbeda  signifikan, namun perlakuan B memiliki sintasan yang terbaik jika dibandingkan dengan perlakuan lainnya.  Pemberian  probiotik  komersial mampu  memberikan  sintasan  yang  lebih baik  meskipun  tidak  memperlihatkan perbedaan  yang  signifikan  (Ghosh et al . 2016).  Habib et al .  (2014)  melaporkan bahwa  larva  udang  galah  yang  dipelihara
Tabel 2. Kinerja pertumbuhan, sintasan, dan ketahanan larva udang galah yang diberi pro- biotik Bacillus sp. DMP 13 dengan konsentrasi sel berbeda melalui media pemeli- haraan Parameter/Perlakuan (Konsentrasi Sel Probiotik CFU mL-1) A (Kontrol) B (10 2 ) C (10 4 ) D
(10 6 ) LSI d21* 6,6 a 6,6 a 6,8 a 6,6 a LPH (%) 17,63 ± 2,09 a 19,68 ± 2,29 a 18,24 ± 2,62 a 18,76 ± 2,6 a PBM (mg) 2,40 ± 0,1 b 3,09 ± 0,12 a 2,6 ± 0,3 ab 2,77 ± 0,22 ab PPM (mm) 6,25 ± 0,21 a 6,71 ± 0,28 a 6,04 ± 0,46 a 6,21 ± 0,49 a Sintasan SR (%) 53,5 ± 3,6 a 55,3 ± 4,3 a 49,5 ± 7,4 a 49,2± 5,3 a SR tes formalin 750 µL L -1 (%) 100,0± 0,0 a 100,0± 0,0 a 100,0± 0,0 a 100,0± 0,0 a SR tes formalin 1.000 µL L -1 (%) 95,0 ± 0,0 a 100,0± 0,0 a 100,0 ± 0,0 a 100,0 ± 0,0 a SR tes formalin 1.250 µL L -1 (%) 81,7 ± 2,9 b 98,3 ± 2,9 a 95,0 ± 5,0 a 95,0 ± 8,7 ab TBC (log n) 5,22  ± 0,17 b 5,99 ± 0,28 a 5,74 ± 0,31 a 5,73 ± 0,12 a
Keterangan: Nilai yang tertera merupakan nilai rata-rata dan simpangan baku. Huruf yang berbeda  pada  baris  yang  sama  menunjukkan  perbedaan  yang  nyata  (p>0,05).  d21*:  LSI dihitung dengan formula (Nhan 2009; Anggraeni dan Krettiawan 2015)
menggunakan probiotik dengan dosis yang berbeda  memiliki  sintasan  58%  dan  46% pada perlakuan dan kontrol.
Daya  tahan  larva  udang  galah terhadap  cekaman  media  formalin  pada dosis rendah (750 µl L -1 ) dan sedang 1.000 µl  L -1 tidak  berbeda  signifikan  antara kontrol  dan  perlakuan.  Sedangkan  pada konsentrasi  formalin  tinggi  (1.250  µl  L -1 ) ternyata  perlakuan  pemberian  probiotik mampu  meningkatkan  daya  tahan  larva secara  signifikan  dibandingkan  kontrol tanpa  probiotik.  Pemberian  probiotik Bacillus sp.  DMP  13  diduga  mampu menstimulasi daya tahan tubuh larva udang galah.  Menurut  Dash et al .  (2014),  larva udang  galah  yang  diberikan  paraprobiotik
L. plantarum mampu meningkatkan parameter  imun  dan  perlindungan  dari serangan penyakit. Aplikasi Bacillus sp. dari penelitian  sebelumnya  dilaporkan  mampu mengaktifkan sistem imun inang (Rahiman et al .  2010;  Laranja et al .  2017).  Hasil penelitian Khasani et al . (2013) menyatakan bahwa  pasca  larva  udang  galah  terseleksi memiliki  daya  tahan  cekaman  media  yang ditambahkan formalin 500 mg L -1 lebih tinggi dibandingan  pasca  larva  kontrol,  dengan kematian  0,3  ±  0,1%  dan  1,3  ±  0,15%. Berdasarkan  KEPMEN-KP  No.  23  (2014) tentang  Pelepasan  Udang  Galah  GI  Macro II, udang galah strain GI Macro II memiliki toleransi  terhadap  paparan  formalin  750 ppm  dengan  nilai  sintasan  sebesar  98%. Pemberian  probiotik  pada  larva  udang galah  memberikan  pengaruh  yang  lebih baik  hingga  mampu  bertahan  pada  dosis paparan formalin yang lebih tinggi. Dari  hasil  perhitungan  kelimpahan total  bakteri  di  akhir  penelitian  dalam media  pemeliharan  larva  udang  galah memperlihatkan  peningkatan  kepadatan sel  dan  berbeda  secara  signifikan  jika dibandingkan  dengan  kontrol  (Tabel 2).  Kelimpahan  total  bakteri  tertinggi didapatkan pada perlakuan B sebesar 5,99 ± 0,28 CFU mL -1 (log n). Larva udang galah yang  diberikan  penambahan Bacillus sp. dan Vibrio sp. dan dipelihara selama 60 hari memiliki  kelimpahan  total  bakteri  sebesar 10 7 CFU  mL -1 (Rahiman et al .  2010).  Dash et al . (2014) melaporkan bahwa pemberian L. plantarum pada  larva  udang  galah yang  dipelihara  selama  90  hari  memiliki kelimpahan  bakteri  sebesar  10 9 CFU  mL -1
di media air. Namun penambahan probiotik ke  dalam  media  pemeliharaan,  meskipun dilakukan  dengan  kelimpahan  tertinggi, tidak  selalu  diiringi  dengan  peningkatan kepadatan  sel  probiotik    di  dalam  tubuh larva (Widanarni et al . 2010). Peningkatan  jumlah  kepadatan  sel bakteri  total  yg  terlihat  di  akhir  penelitian terjadi baik pada perlakuan kontrol maupun perlakuan aplikasi probiotik. Kemungkinan besar hal ini disebabkan jenis atau kelompok bakteri yang dominan di kelompok perlakuan ini  berbeda.  Air  media  yang  mendapatkan perlakuan  penambahan  probiotik,  diduga populasinya sangat didominasi oleh Bacillus sp.  DMP  13,  sedangkan  perlakuan  kontrol kemungkinan besar didominasi bakteri lain yang  mungkin  bersifat  patogenik.  Hal  ini besar  kemungkinannya  karena  parameter sintasan  larva  pada  perlakuan  kontrol juga  rendah  yaitu  53,5  ±  3,6%.  Sintasan pada  perlakuan  pemberian  probiotik  tidak berbeda  dengan  kontrol,  meskipun  bobot mutlak  pada  perlakuan  B  berbeda.  Jadi korelasi  positif  kedua  parameter  ini  tidak terjadi.  Mortalitas  yang  cukup  tinggi  pada perlakuan  penambahan  probiotik  melalui air untuk stadia awal larva mungkin terjadi akibat  fase  transisi  perkembangan  larva yang sangat cepat dan hal ini memerlukan energi  yang  besar.  Daya  adaptasi  larva terhadap perubahan lingkungan berkurang, sehingga  mortalitas  sering  terjadi.  Untuk peningkatan efektivitas pemberian probiotik pada fase awal larva perlu dipertimbangkan aplikasi  dengan  teknik  bioenkapsulasi yang  terbukti  menghasilkan  performa dan  sintasan  tinggi  dibandingkan  kontrol, seperti  pada  studi  sebelumnya  (Hamsah et al .  2017a).  Peluang  sel  probiotik  untuk dapat  masuk  ke  dalam  tubuh  larva  dan melekat  serta  berproliferasi  dari  aplikasi dengan  bioenkapsulasi  diduga  lebih  baik dibandingkan  dengan  aplikasi  melalui  air, namun  ini  masih  perlu  dibuktikan  dengan penelitian.

## Kualitas air
Hasil  pengukuran  kualitas  air  pada penelitian  ini  ditampilkan  dalam  Tabel  3. Kualitas air pada media pemeliharaan larva udang  galah  masih  berada  dalam  kisaran toleransi untuk pertumbuhannya.

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Aplikasi pemberian probiotik Bacillus sp.  DMP  13  pada  larva  udang  galah dengan  konsentrasi  yang  berbeda  mampu memberikan  kinerja  pertumbuhan  yang lebih  baik  pada  parameter  pertumbuhan bobot  mutlak,  ketahanan stress terhadap konsentrasi  formalin  tinggi  (1.250  µL  L -1 ), dan  kelimpahan  total  bakteri  dalam  media dan  aplikasi  terbaik  adalah  kepadatan  sel probiotik sebesar 10 2 CFU mL -1 .

## Saran
Berdasarkan  penelitian  ini  perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai aplikasi Bacillus sp.  DMP  13  dengan bioenkapsulasi  pakan  alami  larva  berupa
Artemia sp.,  menggunakan  konsentrasi  sel berbeda.

## DAFTAR PUSTAKA
Abubakar H, Wahyudi AT, Yuhana M. 2011.
Skrining  Bakteri  yang  Berasosiasi dengan  Spons Jaspis sp.  sebagai Penghasil  Senyawa  Antimikroba. Jurnal Ilmu Kelautan . 16: 35-40. Anggraeni F, Krettiawan H. 2015. Evaluasi Perkembangan  Larva  Udang  Galah
( Macrobrachium rosenbergii )  Asal Berau  pada  Proses  Domestikasi. Prosiding Forum Inovasi Teknologi Akuakultur . p. 25-30. Akter R, Hossain MR, Rahman MM, Rahman BMS, Ahmed KKU. 2017. The Effect of  Commercial  Probiotics  on  Health and  Production  of  Shrimp  ( Penaeus monodon ). Asian Journal Medical and
Biological Research . 3(1): 88-93. Das S, Mondal K, Haque S. 2017. A Review on Application of Probiotic, Prebiotic, and  Synbiotic  for  Sustainable
Development of Aquaculture. Journal of Entomology and Zoology Studies . 5(2): 422-429. Dash  G,  Raman  RP,  Prasad  KP,  Marappan M,  Pradeep  MA,  Sen  W.  2014. Evaluation of LactoBacillus planarum as  A  Water  Additive  on  Host Associated  Microflora,  Growth,  Feed Efficiency  and  Immune  Response of Giant Freshwater Prawn, Macrobrachium rosenbergii (de  Man, 1979). Aquaculture Research .  47(3):
804-818. Elshaghabee FMF, Rokana N, Gulhane RD,
Sharma C, Panwar H. 2017. Bacillus as  Potential  Probiotics:  Status,
Concerns,  and  Future  Perspectives. Frontiers in Microbiology . 8:1-15.
[FAO]  Food  and  Agriculture  Organization. 2002. Farming Freshwater Prawn: A Manual for The Culture of Giant River Prawn  ( Macrobrachium rosenbergii ). FAO  Fisheries  Technical  Paper  428. Rome (IT) : 1-72. Ghosh  AK,  Bir  J,  Azad  MdAK,  Md
Hasanuzzaman AF, Islam MdS, Huq KA.  2016.  Impact  of  Commercial Probiotics  Application  on  Growth and Production of Giant Fresh Water
Prawn ( Macrobrachium rosenbergii De Man,  1879). Aquaculture Reports .  4: 112-117. Gupta A, Verma G, Gupta P. 2016. Growth Performance, Feed Utilization, Digestive  Enzyme  Activity,  Innate Immunity  and  Protection  Against Vibrio  harveyi  of  Freshwater  Prawn, Macrobrachium rosenbergii fed diets  supplemented  with Bacillus coagulans . Aquaculture International .
24: 1379–1392. Habib A, Das NG, Hossain MB. 2014. Growth Performance  and  Survival  Rate  of
Macrobrachium rosenbergii (de  Man, 1979)  Larvae  Using  Different  Doses of  Probiotics. Pakistan Journal of Biological Science . 17(7): 920-924.
Tabel 3.  Parameter kualitas air pada pemeliharaan larva udang galah yang diberi perlakuan probiotik Bacillus sp. DMP 13 dengan kelimpahan berbeda Parameter Perlakuan Literatur A B C D Suhu (°C) 27,0-30,0 27,0-30,0 27,0-30,0 27,0 -30,0 26-31 (Gupta et al . 2016) DO (mg L-1) 5,6-7,4 5,3-6,5 5,8-6,1 5,6-6,9 >5,0 (Gupta et al . 2016) pH 7,9-8 7,8-8,0 7,9-8,0 7,9-8,0 5,0-9,0 (Gupta et al . 2016)
Hamsah,  Widanarni,  Alimuddin,  Yuhana M,  Zairin  JrM.  2017a.  Bacterial Population,  Activity  of  Enzymes and  Growth  Rate  of  Pacific  White Shrimp Larvae Administered Pseudoalteromonas piscicida and Mannan-oligosaccharides  Through Bioencapsulation  of Artemia sp. Research Journal of Microbiology . 12: 128-136. Hamsah, Widanarni, Alimuddin, Yuhana M, Junior  MZ.  2017b.  The  Nutritional Value  of Artemia sp.  Enriched  with The  Probiotic Pseudoalteromonas
piscicida and The Prebiotic Mannan- oligosaccharide. AACL Bioflux . 10(1):
8-17. Keputusan Menteri Kelautan dan Perikanan Republik  Indonesia  Nomor  23/ KEPMEN-KP/2014 Tentang Pelepasan  Udang  Galah  GI  MACRO II. Keysami MA, Saad CR, Sijam K, Daud HM, Alimon  AR.  2007.  Effect  of Bacillus subtilis on Growth Development and Survival  of  Larvae Macrobrachium rosenbergii (de  Man). Aquaculture Nutrition . 13: 131-136.
Khasani  I,  Sopian  A.  2013.  Pertumbuhan dan  Sintasan  Benih  Udang  Galah
( Macrobrachium rosenbergii de  Man) pada  Pendederan  Berbasis  Sistem Heterotrof  dengan  Padat  Tebar Berbeda. Jurnal Riset Akuakultur .
8(3): 373-382.
Laranja  JLQ,  Amar  EC,  Ludevese-Pascual
GL,  Niu  Y,  Geaga  MJ,  Schryver  PD, Bossier P. 2017. A Probiotic Bacillus Strain Containing Amorphous Poly-beta-hydroxybutyrate (PHB) Stimulates  The  Innate  Response  of Panaeus monodon Postlarvae. Fish and  Shellfish  Immunology .  68:  202- 210.
Nicholson  WL,  Munakata  N,  Horneck  G, Melosh HJ, Setlow P. 2000. Resistance of Bacillus Endospores  to  Extreme Terrestrial and Extraterrestrial Environments. Microbiology and Molecular Biology Reviews ,  p.  548– 572. Nhan  DT.  2009.  Optimization  of  Hatchery Protocols for Macrobrachium rosenbergii Culture in Vietnam. PhD
thesis, Ghent University, Belgium, p.
265.
Prasad K, Nayak BB, Srivastava PP, Reddy
AK, Kohli MPS. 2013. Use of Brewer’s Yeast Saccharomyces cereviciae as Growth Promoter in Giant Freshwater
Prawn ( Macrobrachium rosenbergii de
Man) Post Larvae. Turkish Journal of Fisheries and Aquatic Sciences .  13: 447-452. Rahiman KMM, Jesmi Y, Thomas AP, Hatha AAM. 2010. Probiotic Effect of Bacillus NL110  and Vibrio NE17  on  the Survival,  Growth  Performance  and Immune Response of Macrobrachium rosenbergii (de  Man). Aquaculture Research . 41: 120-134.
Ramezani-Fard E, Zokaeifar H, Ebrahimi M,
Kamarudin MS, Goh YM, Ehteshami F.  2014.  Probiotic  Administration  of
Litopenaeus vannamei :  Is  There  Any
Negative  Effect  on  The  Fatty  Acid Profile  of  Meat?. Iranian Journal of Fisheries Sciences . 13(3): 550-559. Seenivasan C, Radhakrishnan S, Muralisankar  T,  Bhavan  PS.  2014. Effect  of  Probiotics  on  Survival, Growth  and  Digestive  Enzymes Activities  in  Freshwater  Prawn Macrobrachium rosenbergii (de  Man 1979). Zoological Society (IND): Springer. Vine  NG,  Leukes  WD,  Kaiser  H.  2006. Probiotics  in  Marine  Larviculture. Federation of European Microbial
Societies . 30: 404-427.
Widanarni,  Sukenda,  Setawati  M.  2008. Bakteri  probiotik  dalam  budidaya udang:  seleksi,  mekanisme  aksi, karakterisasi dan aplikasinya sebagai agen biokontrol. Jurnal Ilmu Pertanian Indonesia . 13(2): 80-89.
Widanarni,  Rajab  F,  Sukenda,  Setiawati
M.  2010.  Isolasi  dan  Seleksi Probiotik  dari  Lingkungan  Tambak dan Hatchery untuk  Pengendalian Penyakit Vibriosis pada Larva Udang Windu, Panaeus monodon . Jurnal Riset Akuakultur . 5(1): 103-113. Yuhana  M.  2010.  Biocontrol  Agents  in Aquaculture:  Production  and  Their Application. Jurnal Akuakultur Indonesia . 9(1): 16–20.