Penulis Purwantiningsih Sugita 1 *, Muhamad Rifai 1 , Laksmi Ambarsari 2 , Dyah Utami Cahyaning Rahayu 3 , Hanhan Dianhar 4
Afiliasi 1 Departmen Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, IPB University, Bogor 16680, Indonesia
2 Departmen Biokimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, IPB University, Bogor 16680, Indonesia
3 Departmen Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Indonesia, Depok 16424, Indonesia
4 Program  Studi  Kimia,  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam,  Universitas  Negeri  Jakarta,  Jakarta  13220, Indonesia
Kata Kunci  Gelatin
 Tulang femur sapi
 Gugus fungsi
 Asam amino
Keywords  Gelatine
 Femur bones of bovine
 Functional group
 Amino acid
Diterima 30 Mei 2020 Direvisi 22 November
2020 Disetujui 27 Maret 2021

## *Penulis Koresponding
Purwantiningsih Sugita email: purwantiningsih@apps.i pb.ac.id

## ABSTRAK
Gelatin  telah  banyak  digunakan  sebagai  aditif  dalam  industri  pangan,  obat-obatan  (farmasi) dan  kosmetik.  Penampilan  fisik  yang  serupa  antara  gelatin  sapi  dan  babi  menyebabkan  masalah bagi  sebagian  masyarakat  khususnya  muslim  karena  kesadaran  pentingnya  makanan  halal. Penelitian ini bertujuan untuk  mengkaji proses pembuatan gelatin dari tulang femur  (paha) sapi dengan cara hidrolisis asam dan karakterisasinya dibandingkan terhadap standar gelatin sapi dan babi. Tulang sapi direndam HCl 5% selama 10 hari dan setiap 2 hari dilakukan penggantian larutan HCl untuk mendapatkan ossein. Ossein dihidrolisis dengan pemanasan bertahap pada suhu 65, 75, dan  85 o C.  Gelatin  dikonfirmasi  oleh  karakter  fisiko-kimia,  FT-IR  dan  analisis  asam  amino  dengan KCKT. Hasil penelitian menunjukkan bahwa rendemen gelatin sapi adalah 4,33%. Karakter fisiko- kimia gelatin sapi hasil isolasi dan standar gelatin sapi memiliki kesesuaian dengan standar gelatin babi dan memenuhi persyaratan SNI 06-3735-1995 dan GMIA. Oleh karenanya, gelatin sapi secara spesifik mampu mensubstitusi gelatin babi untuk aplikasi di bidang farmasi. Spektrum FTIR gelatin sapi menunjukkan adanya  gugus amida  A,  amida  I, amida  II dan amida  III. Karakter asam amino dari gelatin diidentifikasi sebagai glisin dan prolin dengan kadar baik glisin maupun prolin gelatin sapi lebih tinggi dibandingkan gelatin babi.

## ABSTRACT
Gelatin  has  been  widely  used  as  an  additive  in  food  industry  pharmaceutical,  and    cosmetic. The  similar  physical  appearance  between  bovine  and  porcine  gelatin  causes  an  issue  for  some communities like a Muslim due to awareness of halal food. This study aims to produce gelatin from femur bones of bovines with acid hydrolysis and their characteristics compared to standard gelatin of bovine and porcine. Bovine and porcine bones were soaked in 5% HCl for 10 days and every 2 days a HCl solution was replaced to get ossein. Ossein is hydrolyzed by gradual heating at 65, 75, and 85 o C. Gelatin   confirmed by  the physico-chemical characters, FT-IR and analysis amino acid with  HPLC.The  results  showed  that  the  yield  of  bovine  gelatin  was  4.33%.  The  physico-chemical characters  of  bovine  gelatin  resulting  from  isolation  and  bovine  gelatin  standards  are  in conformity  with  porcine  gelatin  standards  and  meet  the  requirements  of  SNI  06-3735-1995  and GMIA.  Therefore,  bovine  gelatin  is  specifically  capable  of  substituting  porcine  gelatin  for application in the pharmaceutical field. The FTIR spectrum of bovine gelatin shows the presence of amide  A,  amide  I,  amide  II  and  amide  III  groups.  The  amino  acid  characters  of  gelatin  were identified  as  glycine  (13.57%)  and  proline  (1.62%)  for  bovine  gelatin  and  glycine  (0.51%)  and proline (0.09%) for porcine gelatin.

## Preparasi Gelatin Sapi Berbasis Tulang Femur untuk Aplikasi Cangkang Kapsul Obat Herbal melalui Hidrolisis Asam dan Karakterisasinya
Gelatin Extraction and Characterization from Femur Bones of Bovine and Porcine with Acid Process
Melalui Hidrolisis Asam dan Karakterisasinya

## PENDAHULUAN
Gelatin  merupakan  produk  turunan  protein  yang berasal  dari  hidrolisis  jaringan  kolagen.  Hidrolisis jaringan  kolagen  dapat  dilakukan  dengan  alkali  atau asam. Proses ini akan menyebabkan ikatan silang antar ikatan  rantai  polipeptida  kolagen  pecah  dan menghasilkan  gelatin  (See et  al. 2010).  Sumber,  jenis kolagen dan kondisi reaksi hidrolisis akan mempengaruhi  sifat-sifat  gelatin.  Gelatin,  zat  larut dalam  air  dan  merupakan  polipeptida  dengan  berat molekul  tinggi.  Secara  fisik  gelatin  berbentuk  padat, hambar,  tidak  berwarna  dan  transparan  (Mariod  dan Adam  2013).  Berbagai  jenis  gelatin  memiliki  sifat termal  dan  reologi  yang  bervariasi  seperti bloom strenght ,  titik  leleh  dan  suhu  pembentuk  gel.  Sifat fisikokimianya  bergantung  dari  panjang  rantai  atau distribusi  berat  molekul,  komposisi  asam  amino  dan hidrofobisitasnya  (Shyni et  al. 2014).  Ada  dua  tipe gelatin, gelatin tipe A berasal dari perlakuan asam dan memiliki titik isoionik pH 7,9 hingga 4 dan tipe B berasal dari  perlakuan  alkali  dengan  titik  isoionik  pH  4,8-5,5 (Aisyah et  al. 2014).  Gelatin  tipe  A  umumnya  berasal dari  kulit  babi  yang  memiliki  titik  isoelektrik  (titik pengendapan  protein)  pada  pH  yang  lebih  tinggi  (7,5 – 9,0),  dari  pH  isoelektrik  gelatin  tipe  B  (4,8 – 5,0), sedangkan  gelatin  tipe  B  bersumber  dari  kulit  jangat sapi dan tulang sapi. Gelatin ikan dikategorikan sebagai gelatin tipe A. Produksi gelatin Eropa pada tahun 2011 80%  berasal dari kulit babi, 15%  kulit sapi, 5%  sumber lain  seperti  tulang  sapi,  babi,  unggas,  dan  ikan (Jamaludin et al. 2011).
Menurut  Saputra et  al .  (2015),  sumber  bahan  baku industri  gelatin  biasanya  berasal  dari  tulang  dan  kulit sapi dan babi. Produksi gelatin di dunia sebagian besar menggunakan  bahan  baku  kulit  babi  dengan persentase 45,80%, sedangkan gelatin yang diproduksi dari  kulit  dan  tulang  sapi,  berturut-turut  28,40%  dan 24,20%. Pada tahun 2007, sumber gelatin di dunia yaitu berasal dari kulit babi 46%, kulit sapi 29,4%, tulang sapi dan babi 23,1%,  dan sumber  lain 1,5% (Gomez-Guillen et  al .  2009).  Berbagai  sumber  gelatin  ini  menjadi masalah  penting  untuk  komunitas  Muslim  karena kesadaran  mereka  akan  makanan  halal.  Hukum  Islam mensyaratkan  produk  jenis  apa  pun  (baik  pangan maupun non-pangan) harus bebas dari daging babi dan turunannya  (Amqizal et  al. 2017).  Indonesia mengimpor  sekitar  2.000-3.000  ton  gelatin  per  tahun. Data  Badan  Pusat  Statistik  (BPS)  2007  menyebutkan impor  gelatin  mencapai  2.715.782  kg  dengan  nilai sebesar  9.535.128  dolar  AS  dari  berbagai  negara
(Perancis, Jepang, India, Brazil, Jerman, Cina, Argentina, dan Australia) untuk kebutuhan dalam negeri.
Gelatin  umumnya  digunakan  sebagai  zat  pembuat gel pada produk pangan, industri farmasi, fotografi dan kosmetik.  Pada  produk  pangan  gelatin  dapat dimanfaatkan  sebagai  bahan  penstabil  ( stabilizer ), pembentuk  gel  ( gelling  agent ),  pengikat  ( binder ), pengental ( thickener ), pengemulsi ( emulsifier ), perekat ( adhesive ),  dan  pembungkus  makanan  yang  bersifat dapat  dimakan  ( edible  coating )  (Gomez-Guillen et  al . 2011).  Dalam  industri  farmasi, gelatin digunakan sebagai  bahan  pembuat kapsul.  Cangkang  kapsul berguna  untuk  mewadahi  berbagai  bentuk  obat  mulai tepung  atau  serbuk,  granula,  pasta,  cair,  dan  semi padat.   Kapsul  dapat  melindungi  konsumen  obat  dari rasa  dan  aroma  yang  ekstrim/tak  enak  seperti  pahit, anyir,  manis,  dan  bau.  Kapsul  juga  melindungi  pasien dari  obat  yang  terlalu  asam  sehingga  pasien  dengan gangguan  lambung  akan  aman.  Kapsul  dipakai  karena kepraktisannya untuk kenyamanan konsumen obat.
Penelitian  sebelumnya,  untuk  membedakan  gelatin sapi  dan  babi  berdasarkan  komposisi  asam  aminonya menggunakan  kromatografi  cair  kinerja  tingkat  tinggi (KCKT).  Widyaninggar et  al .  (2012)  melaporkan  bahwa kadar  asam  amino  glisina  pada  cangkang  kapsul  obat berbahan  gelatin  babi  lebih  tinggi  dibandingkan berbasis gelatin sapi. Zihaldia et al . (2012) melaporkan bahwa  cangkang  kapsul  berbasis  gelatin  sapi  memiliki kadar  asam  amino  glisina  dan  prolina  lebih  tinggi dibandingkan  cangkang  kapsul  berbasis  gelatin  babi. Namun  demikian,  kedua  penelitian  tersebut  tidak menyebutkan  sumber  gelatin  yang  digunakan  (tulang atau  kulit).  Hafidz et  al .  (2011)  melaporkan  bahwa komposisi  gelatin  kulit  babi  memiliki  jumlah  asam amino  glisina  dan  prolina  lebih  banyak  dibandingkan dengan  gelatin  kulit  sapi.  Produk  makanan  atau  obat yang  mengandung  gelatin  dalam  komposisinya  perlu diketahui  status  kehalalannya,  berdasarkan  sumber gelatin yang digunakan.
Kulit  dan  tulang  sapi  adalah  produk  sisa  dari pengolahan  daging  sapi  konsumsi  yang  tidak  terpakai sebagai produk pangan. Kulit merupakan organ tunggal tubuh paling berat pada ternak, pada sapi sekitar 6-8%, dan  dapat  dikatakan  merupakan  hasil  ikutan  ternak yang  paling  tinggi  nilai  ekonominya  yaitu  sekitar  59% dari  nilai  keseluruhan by  product yang  dihasilkan  oleh seekor  sapi.  Kulit  banyak  dimanfaatkan  untuk  tujuan lain diantaranya sebagai produk barang gunaan seperti tas,  dompet  dan  ikat  pinggang.  Limbah  tulang  sapi diperkirakan  sekitar  16,6%  (Faried  2016).  Tujuan penelitian  ini  difokuskan  untuk  mengkaji  sifat
fisikokimia  gelatin  sapi  berbasis  tulang  femur  (paha) yang  diproses  secara  asam.  Tahap  pertama  diawali ekstraksi  gelatin,  selanjutnya  karakterisasi  dan identifikasi  sifat  fisik  dan  kimianya.  Sifat  fisik  yang diamati  meliputi  rendemen,  viskositas,  bobot  molekul relatif  ( Mr ),  dan  derajat  keasaman  (pH).  Sementara sifat  kimia  meliputi  analisis  proksimat  (kadar  air,  abu, dan  protein),  kandungan  mineral  Ca  dan  P,  analisis gugus  fungsi  dengan  spektrofotometri  infra  merah transformasi Fourier (FTIR) dan komposisi asam amino penciri gelatin dengan metode KCKT.

## METODE

## Bahan
Tulang  femur  (paha)  sapi  dibeli  dari  pasar  Bogor, akuades,  HCl  0,1  N,  0,01  N,  6  N  dan  5%,  H 3 PO 4 5%, NaOH  0,1  N  dan  40%,  standar  gelatin  sapi  dan  babi diperoleh  dari  LPPOM  MUI,  H 2 SO 4 pekat,  katalis campuran  selenium,  H 3 BO 3 2%,  boraks,  indikator bromokresol  hijau  (BKH)  dan  metil  merah  (MM)  (5:1), HNO 3 pekat,  campuran  HClO 4 dan  HNO 3 (2:1),  HCl pekat,  amonium  molibdat  10%,  FeSO 4 .7H 2 O,  KH 2 PO 4 , serbuk  KBr,  larutan  stok  OPA  ( orto -ftalaldehida)  (OPA, metanol,  merkaptoetanol,  brij-30  (polioksietilen-4- lauril  eter)  30%,  buffer  borat  1  M  (pH  10,4),  standar asam  amino  (asam  glutamat,  asam  aspartat,  serina, histidina,  glisina,  treonina,  arginina,  alanina,  tirosina, metionina,  valina,  fenilalanina,  isoleusina,  leusina, prolina dan lisina).

## Alat
Toples  kaca  besar  (2  L),  saringan  berpori  besar, spray  dryer Buchi-190,  seperangkat  radas  destilasi Kjedahl  otomatis,  viskometer  Brookfield,  viskometer Ostwald,  pH  meter,  spektrofotometer  serapan  atom (AAS)  dengan  lampu  katoda  Ca,  spektrofotometer  UV- Vis, FTIR Spectrum-One, KCKT Shimadzu dengan kolom ODS-2 Hypersil 150×4,6 mm, dan detektor flouresensi. Kondisi alat diatur dengan laju alir 1 mL/menit dengan pemisahan  sistem  gradien.  Fase  gerak  menggunakan eluen  campuran  natrium  asetat  pH  6.5,  NaEDTA (natrium-etilenadiaminatetraasetat), metanol, dan THF (tetrahidrofuran)  dan  eluen  campuran  metanol  95% dan air bebas ion.

## Ekstraksi Gelatin dari Tulang
Ekstraksi gelatin tulang sapi dilakukan menggunakan metode  perendaman  asam  (Yuniarifin et  al 2006). Tulang  dibersihkan  dari  daging  dan  lemak  yang menempel. Tulang yang sudah bersih direndam HCl 5% (demineralisasi)  selama  10  hari  dan  setiap  2  hari
larutan  HCl  diganti  dengan  yang  baru.  Setelah terbentuk  ossein  (tulang  lunak),  ossein  dicuci  dengan air yang mengalir untuk menghilangkan sisa HCl. Ossein yang bersih direndam H 3 PO 4 5% selama 2 hari. Setelah 2  hari,  ossein  dicuci  dari  sisa  asam  dan  dinetralkan dengan  NaOH  5%  sampai  pH-nya  berkisar  antara  5 – 7. Ossein  netral  dihidrolisis  menggunakan  akuades dengan  pemanasan  bertahap  pada  65,  75,  dan  85 o C. Ossein yang belum terhidrolisis pada suhu 65 o C disaring dari  larutan  gelatin  dan  dipisahkan  untuk  kembali dihidrolisis pada suhu 75 o C dan selanjutnya suhu 85 o C. Ossein  terhidrolisis  dan  larut  dalam  air  dikumpulkan dan disaring dengan kertas saring. Larutan gelatin yang diperoleh dikeringkan dengan spray dryer .

## Analisis Proksimat
Kadar  air .  Penentuan  kadar  air  dilakukan berdasarkan  metode  AOAC  (2005).  Cawan  porselin kosong  dan  bersih  dikeringkan  dalam  oven  lalu ditimbang  bobot  kosong.  Gelatin  ditimbang  0,5  g dimasukkan  ke  dalam  oven  selam  5  jam  dengan  suhu 105 o C.  Setelah  5  jam  gelatin  didinginkan  dalam desikator  dan  ditimbang.  Gelatin  kembali  dimasukkan ke  dalam  oven  selama  5  jam  dan  kembali  ditimbang sampai  diperoleh  bobot  yang  konstan.  Penentuan kadar air dilakukan triplo.
Kadar  abu .  Penentuan  kadar  abu  dilakukan berdasarkan  metode  AOAC  (2005).  Cawan  porselin bersih dimasukkan ke dalam tanur dengan suhu 600 o C. Cawan  porselin  didinginkan  dan  ditimbang  untuk mengetahui bobot kosong. Gelatin ditimbang sebanyak 0,5 g lalu dipijarkan di atas nyala api pembakar sampai tidak berasap. Setelah itu gelatin dimasukkan ke dalam tanur selama 5  jam dengan suhu 600 o C. Setelah 5 jam gelatin  didinginkan  dan  dimasukkan  ke  dalam desikator. Gelatin selanjutnya ditimbang bobot abu lalu dimasukkan  kembali  ke  dalam  tanur.  Pengabuan diulang  dan  gelatin  kembali  ditimbang  sampai diperoleh  bobot  yang  konstan.  Penentuan  kadar  abu dilakukan triplo.
Kadar  protein. Penentuan  kadar  protein  dilakukan dengan  metode  Kjedahl  (AOAC  2005).  Gelatin ditimbang sebanyak 0,5 g dan didestruksi dengan H 2 SO 4 pekat  dan  tambahan  katalis  sampai  berwarna  hijau bening.  Gelatin  ditambahkan  40  mL  NaOH  50%  dan didestilasi. Uap amonia hasil destilasi ditampung dalam 20  mL  larutan  H 3 BO 3 2%  yang  ditambahkan  2  tetes indikator  BKH:MM  (5:1).  Selanjutnya,  larutan  H 3 BO 3 dititrasi dengan HCl 0,05 N yang sudah distandardisasi.

## Preparasi Gelatin Sapi Berbasis Tulang Femur untuk Aplikasi Cangkang Kapsul Obat Herbal
Melalui Hidrolisis Asam dan Karakterisasinya
Penentuan  kadar  protein  dilakukan  duplo  dan dilakukan  juga  penetapan blanko  dan  dihitung  dengan Persamaan 1.
Kadar protein = ( ) 14, 007 6, 25 100% S B N W −     ........ (1) Keterangan: S :  volume titran contoh (mL) B :  volume titran blanko (mL)
N :  normalitas HCl (N)
W  :  berat gelatin (mg)

## Analisis Fisiko-Kimia
Viskositas. Penentuan  viskositas  dilakukan terhadap  larutan  gelatin  dengan  konsentrasi  6,67% (b/v),  viskositas  ditentukan  menggunakan  viskometer Brookfield dengan laju putaran 60 rpm.
Bobot  molekul  relatif  ( Mv ). Penentuan Mv dilakukan  dengan  pengukuran  laju  alir  menggunakan viskometer  Ostwald.  Deret  standar  gelatin  dibuat dengan  konsentrasi  0,30;  0,35;  0,40;  0,45;  dan  0,50 g/dL masing-masing sebanyak 10 mL. Dalam penentuan Mr dilakukan  penentuan  viskositas  spesifik,  viskositas tereduksi,  dan  viskositas  interinsik  serta    laju  alir akuades sebagai pelarut.
Derajat  keasaman  (pH). Penentuan  pH  dilakukan terhadap larutan gelatin sapi dan standar  gelatin  sapi dan  babi  dengan  masing-masing    konsentrasi  6,67% (b/v) menggunakan pH meter.
Mineral  kalsium  (Ca). Gelatin  dipreparasi  dengan metode pengabuan basah. Gelatin ditimbang sebanyak 1  g  lalu  ditambahan  5  mL  HNO 3 pekat  dan  didiamkan dalam  ruang  asam  60  menit.  Gelatin  kemudian dipanaskan  selama  4 – 6  jam  dalam  ruang  asam  lalu dibiarkan semalam. Gelatin ditambahkan 0.4 mL H 2 SO 4 pekat  dan  kembali  dipanaskan  selama  60  menit. Setelah  itu  ditambahkan  2 – 3  tetes  HClO 4 :HNO 3 (2:1) (sambil  dipanaskan)  sampai  terjadi  perubahan  warna dari cokelat menjadi kuning muda. Gelatin didinginkan dan  ditambahkan  2  mL  akuades  dan  0.6  mL  HCl  dan kembali  dipanaskan  selama  15  menit.  Larutan selanjutnya  disa-ring  dan  diencerkan  dalam  labu  takar 100  mL.  Selanjut-nya  di  tentukan  kadar  Ca  dengan instrumen AAS.
Mineral  fosfor  (P). Kandungan  P  dalam  gelatin dilakukan  dengan  metode  Taussky  dan  Shorr  (1953). Larutan standar P dibuat dari 4.394 g KH 2 PO 4 dalam 1 L akuades kemudian diencerkan menjadi deret standar P pada konsentrasi 0; 2; 3; 4; dan 5 ppm. Masing-masing standar  ditambahkan  2  mL  larutan  C  dan  akuades sampai  volumenya  5  mL.  Larutan  gelatin  hasil pengabuan  basah  dipipet  dan  ditambahkan  2  mL
larutan  C.  Jumlah  larutan  gelatin  disesuaikan  agar warna  contoh  berada  dalam  kisaran  standar.  Contoh ditentukan  absorbansinya  dengan  spektrofotometer UV-Vis.  Larutan  C  dibuat  dari  campuran    amonium molibdat  10%,  H 2 SO 4 pekat  dan  5  g  FeSO 4 .7H 2 O  yang dilarutkan dalam 100 mL akuades.
Gugus  fungsi. Gelatin  sebanyak  2  mg  dicampur dengan  80 mg serbuk  KBr dan  ditumbuk  hingga  halus. Campuran  tersebut  dimampatkan  dengan  cetakan menggunakan  pompa  hidrolik  sehingga  membentuk kepingan  pelet  tipis.  Karakterisasi  terhadap  kepingan contoh dilakukan dengan menggunakan FTIR Spectrum- One,  dengan  kisaran  bilangan  gelombang  400 – 4.500 cm -1 . Asam  amino. Gelatin  ditimbang  sebanyak  10  mg dan  ditambahkan  1  mL  HCl  6  N.  Gas  nitrogen ditambahkan  ke  dalam  wadah  tabung  ulir.  Gelatin selanjutnya dimasukkan ke dalam oven selama 24 jam pada  suhu  110 o C.  Setelah  itu  gelatin  didinginkan  dan disaring  dengan  kaca  masir.  Larutan  gelatin  ditera dalam  labu  takar 10 mL menggunakan  HCl 0.01  N  dan disaring  menggunakan  saringan  0.45  mikron.  Larutan gelatin  dipipet  sebanyak  10 μL lalu  ditambahkan  10 μL larutan buffer kalium borat pH 10.4 dan larutan stok OPA  sebanyak  25 μL dan  didiamkan  selama  1  menit. Setelah  itu  larutan  gelatin  diinjeksikan  ke  dalam  KCKT sebanyak 5 μL .

## HASIL & PEMBAHASAN Gelatin Sapi
Tulang  paha  sapi  yang  digunakan  untuk  dibuat gelatin  sebanyak  1.404,03  g  dan  hasil  pengeringan gelatin  sapi  menghasilkan  serbuk  gelatin  sebanyak 65,43  g  (4,33%).  Yuniarifin et  al .  (2006)  melaporkan umumnya dengan metode perendaman asam rendemen  gelatin  dari  tulang  sekitar  8,32%.  Tahap demineralisasi  pada  pembuatan  gelatin  bertujuan menghilangkan  materi  non  kolagen  (Ca  dan  P)  dalam tulang  (Karlina  &  Atmaja  2010).  Struktur  tulang tersusun  atas  kolagen  yang  dikelilingi  mineral  yang dalam  bentuk  Ca 3 (PO 4 ) 2 (Yudiono  2003).  Selama demineralisasi  dengan  HCl  struktur  tulang  akan mengalami penggembungan dan kalsium dalam tulang terurai  menjadi  Ca 2+ dan  asam  fosfat.  Demineralisasi dituliskan pada Persamaan 2.
Ca 3 (PO 4 ) 2 + 6HCl → 3CaCl 2 + 2H 3 PO 4 ………………... (2)
Struktur  tulang  menggembung,  struktur  tulang menjadi lebih renggang sehingga tulang menjadi lunak atau  disebut  (ossein).  Tahap  perendaman  asam dilakukan  selama  3  hari  menggunakan  H 3 PO 4 5%.
Proses perendaman ossein dalam asam merusak ikatan silang  pada  struktur  utas  ganda  tiga  tropokolagen sehingga strukturnya menjadi tidak stabil (Kusumawati et  al .  2008).  Ossein  yang  terbentuk  berwarna kemerahan (pH 2) dan dicuci dengan air mengalir untuk membilas  dan  menghilangkan  sisa  asam  dan  dibantu dengan  larutan  NaOH  0.1  N  untuk  mempercepat peningkatan  pH  ossein  menjadi  6  (Sopian  2002). Selanjutnya  ossein  dihidrolisis  dengan  kenaikan  suhu bertahap    dari  65,  75,  dan  85 o C  untuk  mengubah kolagen  dirubah  menjadi  gelatin.  Reaksi  hidrolisis kolagen menjadi gelatin terjadi dalam tiga tahap, yaitu: hidrolisis  lateral,  diikuti  hidolisis  ikatan  peptida terutama  pada  glisin  dan  perusakan  struktur  heliks kolagen  (Johns  dan  Courts,  1977).  Saat  hidrolisis struktur  kolagen  akan  menyusut,  hal  ini  disebabkan perubahan  rantai  utas  ganda  tiga  kolagen  berubah menjadi  utas  tunggal  berbentuk  gulungan  acak  ( coil ) yang  terlarut  dalam  air  (Hasan  2007).    Persamaan rekasi hidrolisis kolagen ditampilkan pada persamaan 3 dan pPerubahan struktur kolagen pada tahap hidrolisis ditunjukkan pada Gambar 1 .
C 102 H 149 N 31 O 38 + H 2 O→ C 102 H 151 N 31 O 39 ………………… (3) Kolagen                            Gelatin
Hasil Analisis Proksimat
Hasil  analisis  proksimat  dapat  dilihat  pada Tabel  1 . Kadar air gelatin sapi sebesar 6,27%,  sedangkan untuk standar  gelatin  sapi  dan  babi  berturut-turut  sebesar 11,13%  dan  11,1%.  Kadar  air  pada  sampel  gelatin tulang  sapi  maupun  standar  gelatin  sapi  dan  babi, ketiganya  berada  di  bawah  batas  ditetapkannya standar  kualitas  gelatin  berdasarkan  kadar  air  yaitu maksimum  16%  (SNI  06-3735-1995)  dan  memenuhi standar  untuk  produk  makanan  karena  berada  pada rentang 8-15%  (GMIA,  2012).  Kadar  abu  gelatin  sapi 3,02%,  sedangkan  standar  gelatin  sapi  dan  babi berturut-turut  sebesar  0,45%  dan  0,05%.  Tingginya kadar  abu  gelatin  sapi  dapat  diakibatkan  proses demineralisasi  tulang  yang  belum  sempurna.  Nilai kadar  abu  pada  gelatin  sapi  maupun  standar  gelatin sapi  dan  babi  telah memenuhi  standar kualitas  gelatin berdasarkan  SNI  06-3735-1995  yaitu  maksimal  3,25%. Menurut  GMIA  (2012),  kadar  abu  gelatin  berkisar antara 0 – 3,2% Kadar abu gelatin bervariasi tergantung jenis  bahan  baku  dan  metode  pengolahannya. Perbedaan  kadar  abu  dihubungkan  adanya  perbedaan kandungan  mineral  pada  bahan  baku  gelatin (Jongjareonrak et al . 2006).  Kadar protein  gelatin sapi hasil  isolasi  sebesar  76,76%,  sedangkan  untuk  standar gelatin  sapi  dan  babi  berturut-turut  87,90%  dan 86,45%.  Kadar  protein  gelatin  menurut  GMIA  (2012) berkisar  antara  85 – 92%,  sementara  Rusli  (2004)
Gambar 1. Perubahan Struktur Kolagen
Tabel 1 . Hasil Analisis Proksimat Gelatin Isolasi dan Standar
Sampel Kadar (%) Air Abu Protein Gelatin tulang sapi 6,27 3,02 76,76 Standar gelatin sapi 11,33 0,45 87,90 Standar gelatin babi 11,11 0,05 86,45 *Literatur 8 – 13 0 – 3.2 85 – 92 *(GMIA 2012)
Preparasi Gelatin Sapi Berbasis Tulang Femur untuk Aplikasi Cangkang Kapsul Obat Herbal Melalui Hidrolisis Asam dan Karakterisasinya
menyatakan bahwa gelatin terdiri dari 98-99 % protein berdasarkan berat keringnya. Rendahnya kadar protein gelatin  sapi  diduga  karena  proses  perendaman  asam yang terlalu lama. Menurut hasil penelitian Jannah dan Fatimah  (2008),  kadar  protein  gelatin  menurun  akibat perendaman  asam  lebih  dari  60  jam.  Tulang  sapi direndam  asam  selama  3  hari  (72  jam),  sehingga sebagian  kolagen  terlarut  dalam  asam  fosfat.  Gelatin sapi hasil isolasi masih menunjukkan mutu yang sesuai dipersyaratkan oleh SNI 06-3735-1995  dan GMIA.

## Hasil Analisis Fisiko-Kimia
Sifat  fisik  viskositas, Mv dan  pH  gelatin  hasil  isolasi dan  standar  ditunjukkan  pada Tabel  2 .  Viskositas gelatin  dipengaruhi  kadar  protein  gelatin,  rendahnya kadar  protein  mengakibatkan  viskositas  gelatin  ikut menurun (Yudiono 2003).
Perhitungan Mv menggunakan  Kurva  hubungan η sp dengan c (g/dL) ( Gambar  2 )  untuk  mendapatkan  nilai  viskositas interinsik  ([ η ])  yang  merupakan  intersep  dari persamaan  garisnya.  Melalui  persamaan  Mark-
Houwing-Sakurada η =  K  ( Mv ) α dengan  nilai  K (konstanta  Mark-Houwing-Sakurada) dan α untuk gelatin  sapi  berturut-turut  1,66  ×  10 -5 dan  0.885, sedangkan untuk gelatin babi berturut-turut 1,00 × 10 -4 dan  0,74  (Karlina  &  Atmaja  2010). Gelatin  tipe  A  (dari sapi)  dan  tipe  B  (dari  babi)  mengandung  berbagai komponen  dengan  berat  molekul  bervariasi  dari  10 hingga  400  kDa  dan  ada  korelasi  kuat  antara  berat molekul  rata-rata  dan  kekuatan  gel.  Profil  berat molekul  gelatin  tergantung  pada  proses  ekstraksinya (Rehman et al. 2016). pH gelatin sapi yang asam (3,42), sementara  standar  gelatin  sapi  dan  babi  berada  pada pH  berturut-turut  5,50  dan  5,42.  Masirah  (2018) melaporkan  nilai  pH  gelatin  komersial  sebesar  6,35, sedang menurut GMIA (2012), nilai pH berkisar 3,8-5,5. Nilai  pH  gelatin  sangat  dipengaruhi  larutan  perendam yang  digunakan  pada  saat  pembuatan  gelatin (Kusumawati et al. 2008).
Gugus Fungsi Gelatin
Tabel 2. Sifat Fisik Viskositas, Mv dan pH Gelatin Isolasi dan Standar Gelatin Sapi dan Babi
Sampel Viskositas (cP) Mv (g/mol) pH Gelatin tulang sapi 19 1,64× 10 6 3,42 Standar gelatin sapi 70 1,84 × 10 6 5,50 Standar gelatin babi 91 2,73 × 10 6 5,42 *Literatur 19 1,64× 10 6 3,42
y = -6,4609x + 5,2637
R² = 0,9723 y = -6,6752x + 5,7106 R² = 0,9768 y = -6,3087x + 5,8113 R² = 0,9605 y = -6,3085x + 5,7884 R² = 0,9873 2 2,2 2,4 2,6 2,8 3 3,2 3,4 3,6 3,8 4 0,2500 0,3000 0,3500 0,4000 0,4500 0,5000 0,5500 η sp /c c (g/dL)
gelatin sapi gelatin babi
Karakteristik  gelatin  diidentifikasi  menggunakan spektroskopi  Fourier  transform  infrared  (FTIR). Karakterisasi  ini  bertujuan  untuk  mengidentifikasi gugus  fungsional  dari  gelatin.  Spektrum  FTIR  dari gelatin sapi hasil isolasi, gelatin sapi standar dan gelatin babi standar ditunjukkan masing-masing pada Gambar 3a , 3b dan 3c .  Ketiga  spektrum  menunjukkan karakteristik hampir serupa. Ada empat puncak utama, yaitu  bilangan  gelombang    3.500-2.300  cm -1 ,  1.656- 1.644  cm -1 ,  1.560-1.335  cm -1 dan  1.240-670  cm -1 yang sesuai dengan daerah berturut-turut amida A, amida I, amida  II,  dan  amida  III.  Hasil  serupa  juga  dilaporkan peneliti sebelumnya (Hashim et al. 2010; Puspawati et al . 2012; Cebi et al. 2016; Pradini et al. 2018). Amida A menunjukkan  vibrasi  regangan  N-H  dengan  adanya kontribusi  ikatan  hidrogen  dan  O-H  bebas,  sementara amida  I  menunjukkan  vibrasi  regangan  C=O  dengan kontribusi  vibrasi  regangan  ikatan  C-N.  Amida  I merupakan serapan yang paling berguna untuk analisis FTIR  dari  struktur  protein  sekunder.  Daerah  serapan 1.660-1.650 cm -1 dikenal sebagai daerah serapan residu imida (struktur random coil ) dan pada 1.635-1.645 cm -1 merupakan residu struktur β -sheet (Pradini et al. 2018). Amida  II  muncul  dari  vibrasi  tekuk  N-H  dan  vibrasi regangan  C-N.  Serapan  gugus  amida  I  dan  II menunjukkan keberadaan struktur  helai β  pada  residu amida dan struktur utas ganda tiga kolagen (Al-Saidi et al .  2012).  Amida  III  menunjukkan  vibrasi  dari  C-N  dan N-H  yang  terikat  pada  amida  atau  merupakan  vibrasi dari  gugus  CH 2 .  Spektrum  FTIR Gambar  3a , 3b dan 3c menunjukkan  bahwa  ketiga  gelatin  uji  menunjukkan
gugus  fungsional  yang  identik.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  ketiga  gelatin  tersebut  tidak  bisa  dibedakan dengan teknik FTIR.

## Identifikasi Asam Amino Pada Gelatin
Gelatin  tersusun  atas  ulangan  deret  asam  amino Gly-X-Y ( Gambar 4 ), glisin dengan jumlah paling banyak sedangkan  X  dan  Y  sebagian  besar  diisi  oleh  asam amino  prolina  dan  hidroksiprolina  (Russel et  al .  2007). Asam  amino  merupakan  unit  terkecil  pembentuk gelatin.  Jenis  dan  komposisi  asam  amino  gelatin  sapi dan babi hasil isolasi dan gelatin sapi dan babi standar disajikan  pada Tabel  3 .  Secara  umum  terdapat perbedaan  komposisi  asam  amino  dari  ketiga  gelatin tersebut.  Proporsi  asam  amino  lebih  dari  5,0% dibandingkan  asam  amino  lainnya  adalah  asam glutamat, glisin, arginin, dan alanin. Asam amino prolin teridentifikasi  rendah,  yaitu  kurang  dari  5,0%  (1,62%). Masirah  (2018)  melaporkan  bahwa  hasil  analisis  asam amino  gelatin  sapi  komersial  didominasi  asam  amino glisin  (21,66%),  prolin  (11,23%),  alanin  (6,25%),  asam glutamat  (6,90%)  dan  arginin  (7,19%).  Hafidz et.al. (2011)  melaporkan  gelatin  bersumber  dari  kulit  sapi mengandung  asam  amino  alanin  (3,3%),  fenilalanin (2,7%), prolin (6,3%), glisin (10,8%), tirosin (2,6%), asam glutamat  (3,4%)  dan  arginin  (4,7%),  sementara  gelatin bersumber  dari  kulit  babi  mengandung  asam  amino alanin  (8%),  prolin  (15,1%),  glisin  (23,9%),  asam glutamat  (8,3%),  arginin  (11,1%),  valin  (2,6%),  leusin (2,9%),  treonin  (3,5%),  lysin  (2,7%)  dan  asam  aspartat (4.1%).
Tabel 3. Komposisi Asam Amino Gelatin (%b/b)
Asam Amino Gelatin Sapi Hasil Isolasi Standar Gelatin Sapi Babi Asam aspartat 4,22 4,77 4,93 Asam gulutamat 7,90 9,29 9,43 Serin 2,59 2,96 3,23 Histidin 0,55 0,47 0,59 Glisin 13,57 15,09 15,37 Treonin 1,27 1,45 1,42 Arginin 5,97 7,12 7,37 Alanin 6,42 8,05 7,73 Tirosin 0,53 0,26 0,47 Metionin 0,62 0,63 0,76 Valin 1,65 2,00 2,02 Prolin 1,62 1,79 1,89 Isoleusin 1,03 1,22 1,06 Leusin 2,67 3,05 2,92 Lisin 2,74 3,18 3,14
Preparasi Gelatin Sapi Berbasis Tulang Femur untuk Aplikasi Cangkang Kapsul Obat Herbal Melalui Hidrolisis Asam dan Karakterisasinya
Perbedaan  komposisi  asam  amino  tersebut disebabkan  karena  gelatin  berasal  dari  bahan  baku yang  berbeda.  Meskipun  komposisi  asam  amino  pasti dari  gelatin  tidak  diketahui  dengan  jelas,  tetapi  asam amino glisin, prolin dan hirdoksiprolin merupakan asam amino yang terbanyak yaitu 60% dari total residu asam amino  pada  kolagen  dan  gelatin.  Komposisi  dan proporsi  asam  amino  keseluruhan  pada  gelatin bervariasi  tergantung  pada  sumber  bahan  baku (Rehman et  al. 2016;  Hafidz et  al .  2011).  Perbedaan komposisi  asam  amino  sangat  berpengaruh  pada  sifat kimia  dan  fisik  gelatin.  Gelatin  sapi  memiliki  titik isoelektrik  antara  pH  4,8-5,  sedangkan  gelatin  babi memiliki  titik  isoelektrik  pada  kisaran  pH  8,5-9.  Hasil pengujian komposisi asam amino menunjukkan bahwa gelatin mengandung  glisin  dan  prolin yang merupakan asam amino penyusun gelatin. Asam amino prolin dan hidroksiprolin dapat meningkatkan sifat reologi gelatin. Asam  imino  penting  untuk  mempertahankan  stabilitas struktur tripel heliks kolagen (Ikoma et al ., 2003; Hwang et al ., 2007; Tong and Tiejin, 2013).
Secara  keseluruhan  hasil  karakterisitik  sifat  fisiko- kimia  gelatin  sapi  hasil  isolasi  dan  standar  gelatin  sapi
memiliki  kesetaraan  dengan  standar  gelatin  babi  dan memenuhi  persyaratan  SNI  06-3735-1995  dan  GMIA. Komposisi asam amino khususnya rasio glisin terhadap prolin  antara  gelatin  sapi  dan  standar  gelatin  babi memiliki  rasio  mirip  sekitar  8,13.  Oleh  karenanya, gelatin  sapi  secara  spesifik  mampu  mensubstitusi gelatin babi untuk aplikasi di bidang farmasi.

## SIMPULAN
Rendemen  gelatin  sapi  dari  tulang  femur  dengan cara  asam  diperoleh 4,33%.  Analisis  fisikokimia  gelatin sapi  memiliki  kesetaraan  dengan  standar  gelatin  babi dan  memenuhi  persyaratan  SNI  06-3735-1995  dan GMIA.  Spektrum  FTIR  membuktikan  adanya  serapan untuk  gugus  amida  A,  amida  I,  amida  II,  dan  amida  III pada  gelatin  sapi.  Komposisi  asam  amino  glisin  pada gelatin  sapi  teridentifikasi  lebih  banyak  dibandingkan gelatin babi, sementara asam amino prolin teridentifikasi sangat rendah untuk keduanya

## DAFTAR PUSTAKA
[GMIA]. 2012. Gelatin Handbook. Gelatin Manufactures
Gambar 3 . Spektrum IR Gelatin Sapi Hasil Isolasi (a), Standar Gelatin Sapi (b) dan Babi (c)
Gambar 4 . Struktur Asam Amino Gelatin
Institute of America.
Aisyah  NNM,  Nurul  H,  Azhar  ME  and  Fazilah  A.  2014, 'Poultry  as  an  Alternative  of  GelatinSource' . Health and the Environment Journal , 5(1): 37-49 37.
Al-Saidi  GS,  Al-Alawi  A,  Rahman  MS,  Guizani  N.  2012. Fourier  transform  infrared  (FTIR)  spectroscopic study  of  extracted  gelatin  from  shaari  ( Lithirinus microdon ) skin: effects of extraction conditions. Internatioal  Food  Research  Journal . 19(3): 1167 – 1173.
Amqizal  A.H.I.,  Al-Kahtani  H.A.,  Ismail  E.A.,  Hayat  K., Jaswir  I.,  2017.  Identification  and  verification  of porcine  DNA  in  commercial  gelatin  and  gelatin containing  processed  foods. Food  Control  78 ,  297 – 303.
AOAC.  2005.  Official  methods  of  analysis  of  the
Association of Official Analytical Chemists International,  18th  ed.  In  Association  of  Official Analytical Chemists, Washington (D.C.)
Badan Pusat Statistik (BPS). 2007, Statistik Perdagangan Luar Negeri Impor, Badan Pusat Statistik, Jakarta Cebi, N., Durak, M. Z., Toker, O. S., Sagdic, O., Arici, M.
2016.  An  evaluation  of  Fourier  transforms  infrared spectroscopy  method  for  the  classification  and discrimination  of  bovine,  porcine  and  fish  gelatins. Food Chem , 190:1109 – 1115.
Faried  SM,  Pemanfaatan  Limbah  Tulang  Sapi  Sebagai Adsorben  Untuk  Menyerap  Logam  Kadmium  (Cd) dengan  Menggunakan  Aktivasi  Na2CO3.  [Laporan Tugas Akhir]. UII Yogjakarta, 2016
Gómez-Guillén M.C., B. Giménez, M.E. López-Caballero, M.P.  Montero.  2011.  Functional  and  bioactive properties  of  collagen  and  gelatin  from  alternative sources:  A  review. Food  Hydrocolloids ,  25:  1813- 1827
Gómez-Guillén  MC,  Pérez-Mateos  M,  Gómez-Estaca  J, López-Caballero  E,  Giménez  B,  &  Montero  P.  2009. Fish  gelatin:  a  renewable  material  for  developing active biodegradable films. Trends in Food Science & Technology , 20(1): 3-16
Hafidz  RMRN,  Yaakob  CM,  Amin  I,  &  Noorfaizan  A. 2011. Chemical and functional properties of bovine and  porcine  skin  gelatin. International  Food Research Journal , 18: 813-817
Hasan.  2007.  Studi  ekstraksi  dari  pembuatan  gelatin tipe  B  dari  kulit  sapi.  [skripsi].  Bogor  (ID):  Institut Pertanian Bogor.
Hashim, D. M., Man, Y. B. C., Norakasha, R., Shuhaimi, M., Salmah, Y. Syahariza, Z. A. 2010. Potential use of Fourier  transform  infrared  spectroscopy  for
differentiation of bovine and porcine gelatins. Food Chem , 118, 856 – 860. Hwang, J-H., Mizuta, S., Yokoyama, Y. and Yoshinaka R. 2007. Purification and Characterization of Molecular Species  of  Collagen  in  the  Skin  of  Skate  (Raja kenojei) . Food Chem , 100: 921-925
Ikoma,  T.,  Kobayashi,  H.,  Tanaka,  J.,  Walsh,  D.  and Mann,  S.  2003.  Physical  Properties  of  Type  I Collagen Extracted from Fish scales of Pagrus major and  Oreochromisniloticus. Int  J  BiolMacromol ,  32: 199-204.
Jamaludin  MK,  Zaki  NM,  Ramli  MA,  Hashim  DM,  Ab Rahman S. 2011. Istihalah: Analysis on the utilization of gelatin in food products.
Jannah  dan  Fatimah.  2008 .  Efektifitas  Penggunaan Asam Sitrat dalam Pembuatan Gelatin Ikan Bandeng (Chanos  chanos  Forskal ).  [Skripsi].  Jurusan  Kimia, Fakultas  Sains  dan  Teknologi,  Universitas  Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim. Malang.
Johns.  P.  dan  A.  Courts.  1977.  Relation  Between Collagen  and  gelatin.  dalam:  Ward.  A.G.  dan  A. Courts  (ed.).  1977.  The  Science  and  Technology  of Gelatin. Acedemic Press. London.
Jongjareonrak,  A.,  Benjakul,  S.,  Visessanguan,  W., Prodpran, T. and Tanaka, M. 2006. Characterization of Edible Films from Skin Gelatin of Brownstripe Red Snapper  and  Bigeye  Snapper. Food  Hydrocolloids, 20: 492-501.
Karlina IR, Atmaja L. 2010. Ekstraksi gelatin dari tulang rawan  ikan  pari  (Himantura  gerrardi)  pada  variasi larutan asam untuk perendaman [skripsi]. Surabaya (ID): Institut Tekhnologi Sepulun November.
Kusumawati  R,  Tazwir,  Wawasto  A.  2008.  Pengaruh perendaman  dalam  asam  klorida  terhadap  kualitas gelatin  ikan  kakap  merah  ( Lutjanus  sp .). Jurnal Pascapanen  dan  Bioteknologi  Perikanan  dan Kelautan. 1(3): 63 – 68.
Mariod A.A, Adam H. F. 2013, 'Review: Gelatin, Source, Extraction and Industrial, Applications', Acta Sci. Pol.
Technol. Aliment . 12(2): 135-147.
Masirah.  2018.  Perbandingan  karakteristik  sifat fisikokimia  gelatin  tulang  ikan  bandeng  dan  gelatin sapi komersial. Prosiding Seminar Nasional Kelautan dan Perikanan IV: 285-292
Pradini  D.,  H.  Juwono,  K.  A.  Madurani,  F.  Kurniawan. 2018. A  preliminary  study  of  identification  halal gelatin  using  quartz  crystal  microbalance  (QCM) sensor. Malaysian  Journal  of  Fundamental  and Applied Sciences. 14(3): 325-330
Puspawati  MN,  Simpen  IN,  Miwada  INS.  2012.  Isolasi gelatin dari kulit kaki ayam broiler dan analisis gugus
Melalui Hidrolisis Asam dan Karakterisasinya 41
fungsinya  menggunakan  spektrofotometri  FTIR. J Chem . 6(1): 79 – 87.
Rehman  W.  Ul,  A.  Majeed,  R.  Mehra,  S.  Bhushan,  P. Rani,  K.  C.  Saini  and  F.  Bast .  Gelatin:  A comprehensive  report  covering  its  indispensable aspects .  In:  Natural  Polymers:  Derivatives,  Blends and  Composites  Vol.  I  ISBN:  978-1  -63485-831-1 Editors:  Saiqa  Ikram  and  Shakeel  Ahmed  ©  2016 Nova Science Publishers, Inc.
Rusli A. 2004. Kajian Proses Ekstraksi Gelatin dari Kulit Ikan  Patin  (Pangasius  hypopthalmus)  Segar [Tesis]. Bogor: Sekolah Pasca Sarjana. IPB.
Russell  JD,  Dolphin  JM,  Koppang  MD.  2007.  Selective analysis  of  secondary  amino  acids  in  gelatinusing pulsed electrochemical detection. Analytical Chemistry. 79: 6615-6621.
Said, M.I., S Triatmojo., Y Erwanto., A. Fudholi. (2011). Karakteristik  gelatin  kulit  kambing  yang  diproduksi melalui proses asam basa . J. Agritech . 31(3).
Saputra,  R.H.,  I.  Widistuti  &  A.Supriadi.  2015. Karakteristik  fisik  dan  kimia  gelatin  kulit  ikan  patin ( Pangasius  pangasius )  dengan  kombinasi  berbagai asam dan suhu. Jurnal Teknologi Hasil Perikanan . 4 (1): 29-36.
See,  S.  F.,  Hong, P. K.,  Ng,  K.  L.,  Wan  Aida, W. M.  and Babji,  A.  S.  2010,  'Physicochemical  properties  of gelatins extracted from skins of different freshwater fish  species’, International  Food  Research  Journal 17: 809-816 .
Shyni  K.,  G.S.  Hema,  G.  Ninan,  S.  Mathew,  C.G.  Joshy, P.T. Lakshmanan 2014,
'Isolation and characterization of gelatin from the skins of skipjack
tuna  (Katsuwonus  pelamis),  dog  shark  (Scoliodon sorrakowah),  and  rohu  (Labeo  rohita)’. Food Hydrocolloids 39: 68-76. SNI  06-3735-1995. Mutu  dan  Cara  Uji  Gelatin .  Badan Standardisasi Nasional, Jakarta. p. 1 – 2.
Sopian I. 2002. Analisis sifat fisik, kimia, dan fungsional gelatin yang diekstrak dari kulit dan tulang ikan pari [Skripsi]. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor. Tong  Y. and Tiejin  Y.  2013.  Gelling  Strenght Improvement and Characterization of a Gelatin from Scales of Bighead Carp (Aristichthysnobilis). Jurnal of Food, Agriculture and Environment , 2 (1), 146-150. Widyaninggar  A,  Triwahyudi,  Triyana  K,  Rohman  A. 2008.  Differentiation  between  porcine  and  bovine gelatin in commercial capsule shells based on amino acid  profiles  and  principal  component  analysis. J Pharm Indonesia. 23(2): 96 – 101.
Yudiono  H.  2003.  Karakteristik  fisikokimia  gelatin  hasil perendaman  tulang  sapi  dalam  campuran  Ca(OH) 2 - CaCl 2 [Skripsi]. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor. Yuiarifin H, Bintoro VP, Suwarasturi A. 2006. Pengaruh berbagai  konsentrasi  asam  fosfat  pada  proses perendaman  tulang  sapi  terhadap  rendemen  kadar abu dan viskositas gelatin. J Indon Trop Anim Agric . 31(1): 55 – 61.
Zilhadia,  Betha  OS,  Bayyinah.  2012.  Analisis  komposisi asam  amino  gelatin  sapi  dan  gelatin  babi  pada produk  kapsul  lunak  simulasi  menggunakan  teknik kombinasi high performance liquid chromatography (HPLC) dan principal component anaysis (PCA).[Slripsi]. Universitas Islam Negeri Hidayatullah.