## Isolasi dan Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Metanol Buah
Senduduk Bulu ( Clidemia hirta (L.) D. Don)
Isolation and Antioxidant Activity of Methanol Extract of Senduduk Bulu ( Clidemia hirta (L.) D. Don) Fruit
Haiyul Fadhli * , Ihsan Ikhtiarudin, Putri Lestari Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Riau, Jalan Kamboaja, Simpang Baru, Tampan, Simpang Baru, Kec. Tampan, Kota Pekanbaru, Riau 28289, Indonesia
*E-mail: haiyulfadhli@stifar-riau.ac.id
Received: 10 Januari 2020; Accepted: 14 Desember 2020; Published: 31 Desember 2020

## Abstrak
Telah dilakukan penelitian tentang isolasi dan  uji aktivitas antioksidan senyawa metabolit sekunder dari ekstrak metanol buah senduduk bulu ( Clidemia hirta (L.) D. Don) . Secara tradisional Senduduk bulu telah digunakan  sebagai  obat-obatan  untuk  menyembuhkan  berbagai  penyakit.  Tumbuhan  ini  mengandung senyawa flavonoid, fenolik dan terpenoid . Senyawa flavonoid dan fenolik dilaporkan mempunyai aktivitas sebagai  antioksidan.  Tujuan  penelitian  ini  untuk  mengisolasi  kandungan  kimia  dan  menguji  aktivitas antioksidan dari buah Senduduk bulu. Isolasi dilakukan dengan menggunakan metode Kromatografi Cair Vakum  dan  kromatografi  kolom.  Aktivitas  antioksidan  dilakukan  dengan  metode  metode  DPPH.  Hasil isolasi menghasilkan 10 mg senyawa isolat CHP1 berbentuk kristal putih, dengan titik leleh 165–167 o C, larut dalam kloroform dan agak sukar larut dalam metanol. Senyawa ini memberikan reaksi positif dengan pereaksi Liebermann-Burchard (LB), sehingga disimpulkan senyawa ini merupakan golongan terpenoid. Hasil spektrum UV, menunjukkan λ maks senyawa tersebut adalah 316 nm. Spektrum FT-IR menunjukkan adanya beberapa gugus fungsi OH , C-H alifatis, C=O ester, C=C alkena, CH bending dan C-O. Spektrum 1 H NMR menunjukkan adanya proton alkena dan gugus proton metil yang merupakan ciri khas senyawa terpenoid.  Senyawa  murni  (CHP1)  memberikan  aktivitas  antioksidan  yang  lemah  dengan  IC 50 sebesar 327,01 μg/ mL.
Kata kunci : Antioksidan, Buah Senduduk Bulu ( Clidemia hirta (L.) D. Don), DPPH, Isolasi

## Abstract
A  study  on  isolation  and  antioxidant  activity  of  secondary  metabolit  of  methanol  extract  of  fruit  of Senduduk Bulu (Clidemia hirta (L.) D. Don) has been carried out. Senduduk bulu is used for folk medicine to many diseases. Flavonoid and phenolic has been reported to its activity as antioxidant. The aim of this research  was  to  find  antioxidant  compound  and  antioxidant  activity  of  this  fruit.  Isolation  works  were conducted  using  Vacuum  Liquid  Chromatography  and  Column  Chromatography  method.  Antioxidant activity was determined using DPPH free radical scavenging methods. The isolation works afforded 10 mg of pure compound CHP1 which was obtained as white crystal, with its melting point of 165–167 º C, soluble  in  chloroform  and  slightly  soluble  in  methanol.  This  compound  gave  positive  reaction  with Liebermann-Burchard (LB) reagent and concluded as terpenoid. Based on it UV spectrum, this compound showed a λ max of 316 nm. Its FT-IR spectrum showed appearence of some functional groups of OH, C-H aliphatic, C=O ester,C=C alkene, CH bending and C-O. The 1 H-NMR spectrum showed the alkene protons and methyl  protons  which  is  a  characteristic  of  terpenoid  compounds.  The  pure  compound  (CHP1) provided a weak antioxidant activity with the IC 50 of 327,01µg/mL. Keywords : Antioxidant, DPPH, Isolation, Senduduk Bulu (Clidemia hirta (L.) D. Don) fruit

## PENDAHULUAN
Setiap  tumbuhan  memiliki  beragam kandungan  senyawa  kimia  serta  memiliki khasiat  dan  manfaat.  Upaya  pencarian
tumbuhan  berkhasiat  obat  telah  lama dilakukan, baik  untuk  mencari  senyawa baru ataupun menambah keanekaragaman senyawa yang telah ada. Pencarian tersebut dilakukan
dengan  berbagai  pendekatan  seperti  cara empiris,  etnobotani  dan  etnofarmakologi (Djauhariya,2004).
Salah satu spesies tumbuhan yang dapat digunakan  dalam  pengobatan  dan  memiliki aktivitas sebagai antioksidan adalah tumbuhan  dari  famili Melastomataceae. Tumbuhan  dengan  famili Melastomataceae sebagian besar merupakan tumbuhan pantropis  yang  terdiri  dari  163  marga  dan 4300 spesies. Famili Melastomataceae dilaporkan  merupakan  tanaman  yang  kaya akan  senyawa  fenolik  dan  flavonoid. Kandungan fitokimia dari tumbuhan Melastomataceae diantaranya adalah senyawa fenolik, flavonoid, tannin, terpenoid, saponin,  steroid,  glikosida,  dan  alkaloid. Diketahui  beberapa  spesies  dari  famili  ini memiliki beberapa aktivitas seperti antioksidan, antihipertensi, antihiperglikemik, homeo-statis, antihepatitis dan antidiare (Tjitraresmi et al., 2018). Beberapa spesies Melastomataceae yang diketahui mengandung senyawa fenolik yang cukup besar yaitu Melastoma malabathricum sebesar  384,33  mg  AG/g,  pada Meriania hernandoi sebesar  240  mg  AG/g  dan  pada Miconia  albicans sebesar  70,04  mg  AG/g. Selain  itu  ekstrak  metanol  daun Melastoma malabathricum berpotensi sebagai antikanker payudara pada sel kanker MCF-7 dengan nilai IC 50 sebesar  7,14  μg/mL  dan  ekstrak  etanol daun Clidemia  hirta berpotensi  sebagai antiproliferasi  terhadap  sel  kanker Dalton’s Lymphoma  Ascites (DLA)  dengan  nilai  IC 50 sebesar 68 μg/mL (Tjitraresmi et al., 2018). Beberapa  penelitian  terkait  Senduduk Bulu  ( Clidemia  hirta (L.)  D.  Don)  telah dilakukan. Perdede (2018) dalam penelitiannya  menyatakan  bahwa  hasil pengujian  aktivitas  antioksidan  dari  ekstrak etanol  buah  senduduk  bulu  dengan  metode DPPH  memiliki  nilai  IC 50 sebesar  12,568 μg/mL.  Hasil  Penelitian  Narasimham et  al (2017),  menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol daun  Senduduk  bulu  memiliki  aktivitas antioksidan dengan metode DPPH nilai IC 50 sebesar  5  μg/mL.  Pada  penelitian  tersebut
digunakan kontrol positif asam askorbat yang memiliki nilai IC 50 sebesar 3,7 μg/mL. Berdasarkan uraian diatas, maka dilakukan  penelitian  tentang  isolasi  senyawa metabolit  sekunder  yang  terkandung  dalam buah  senduduk  Bulu  ( Clidemia  hirta (L.) D.Don) serta menguji aktivitasnya antioksidannya.    Isolasi  metabolit  sekunder buah  senduduk  bulu  menggunakan  VLC ( Vacuum  Liquid  Chromatography )  dan kromatografi  kolom,  sedangkan  uji  aktivitas antioksidan, dilakukan dengan menggunakan metode  DPPH,  sedangkan  penelitian  ini diharapkan  dapat  memberikan  informasi tentang  kandungan  metabolit  sekunder  dari ekstrak  total  metanol  buah  Senduduk  Bulu ( Clidemiahirta (L.)  D.  Don)  serta  dapat digunakan sebagai panduan tambahan sumber alami  tumbuhan  yang  berpotensi  sebagai antioksidan.

## METODE PENELITIAN Alat Penelitian
Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah  seperangkat  alat  destilasi  (Gopal ® ), satu  unit rotary evaporator (Buchi ® ), neraca analitik,  seperangkat  alat Vacuum  Liquid Chromatography (VLC), kolom kromatografi (Pyrex ® ),  plat  KLT  GF 254 (Merck ® ),  lampu UV 254 dan 366 nm (Camag, ® ) melting point apparatus (SMP11),  spektrofotometer  UV- Vis (Shimadzu ® UV-1800), spektrofotometer FT-IR (Shimadzu ® IR Prestige-21), Spektroskopi  NMR  (Agilent,  500  MHz), microplate reader (Tristar LB 941 Berthold ® ) dan pipet mikro (Nesco ® ) dan peralatan gelas yang umum digunakan (Pyrex ® )

## Bahan Penelitian
Bahan  yang  digunakan  adalah  pelarut organik  kualitas  teknis  dan  telah  didestilasi (n-heksana, etil asetat, metanol), silika gel 60 (70-230 mesh), kloroform, kloroform amoniak  0,05  N,  asam  sulfat  2N,  pereaksi Meyer,  logam  magnesium,  asam  klorida pekat,  besi  (III)  klorida  1%,  asam  asetat anhidrat, asam sulfat pekat, norit, reagen (1,1- difenil-2-pikrilhidrazil (DPPH) (Sigma- aldrich ® ) dan asam askorbat (Merck ® )

## Pengambilan Sampel Tumbuhan
Sampel yang digunakan untuk penelitian ini  adalah  buah  senduduk  bulu  ( Clidemia hirta (L.)  D.  Don).  sebanyak  4,5  kg  yang diambil  dari  Kecamatan  Kandis,  Kabupaten Siak.
Identifikasi Tumbuhan Senduduk Bulu Identifikasi  tumbuhan  senduduk  bulu dilakukan  di  Laboratorium  Botani  Jurusan Biologi  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan  Alam  (FMIPA)  Universitas Riau, Pekanbaru.
Pembuatan Ekstrak Metanol Buah

## Senduduk Bulu
Ekstraksi  dilakukan  dengan  metode maserasi,  serbuk kering buah senduduk bulu ( Clidemia  hirta (L.)  D.Don)  sebanyak  950 gram  direndam  dalam  wadah  yang  tertutup baik dan terlindung dari cahaya denganpelarut metanol  selama  5  hari  pada  suhu  kamar sambil  diaduk  satu  kali  sehari,  lalu  disaring. Proses ekstraksi ini dilakukan sebanyak 3 kali pengulangan  sampai  diperoleh  filtrat  yang cukup bening. Maserat yang didapat diuapkan dari  pelarutnya  dan  dipekatkan  dengan menggunakan alat rotary evaporator sehingga  didapatkan  ekstrak  kental  metanol sebanyak 112,057 gram.
Skrining Fitokimia Ekstrak
Pemeriksaan  fitokimia  yang  dilakukan meliputi  pemeriksaan  alkaloid,  terpenoid, steroid, flavonoid, fenolik dan saponin.
Fraksinasi ekstrak dengan Vacuum Liquid Chromatography (VLC)
Untuk memisahkan senyawa-senyawa yang  ada  di  dalam  ekstrak  dilakukan pemisahan  dengan  VLC.  Sebanyak  25  gram ekstrak  dimasukkan  pada  kolom  VLC  lalu dielusi  dengan  campuran  beberapa  eluen n - heksana  dengan  etil  asetat  dan  etil  asetat dengan metanol yang dibuat dalam 17 macam perbandingan  eluen,  yaitu n- heksana  100%, n -heksana:etil asetat (9:1), (8:2), (7:3), (6:4),
(5:5),  (4:6),  (3:7),  (2:8),  (1:9),  etil  asetat 100%,  etil  asetat:metanol  (9:1),  (8:2),  (7:3), (6:4), (5:5) dan (4:6)
Uji  Pendahuluan  Aktivitas  Antioksidan Terhadap Fraksi Hasil VLC
Uji  pendahuluan  aktivitas  antioksidan terhadap  fraksi  hasil  VLC  dilakukan  dengan menyemprot  KLT  fraksi  dengan  larutan DPPH  0,2%  dalam  metanol.  Kromatogram diperiksa  30  menit  setelah  penyemprotan (Demirezer et  al. 2001).  Senyawa  aktif penangkap  radikal  bebas  akan  menunjukkan bercak  berwarna  kuning  pucat  dengan  latar belakang  ungu.  Fraksi  yang  aktif  (F12) kemudian dilanjutkan uji aktivitas antioksidan dengan menggunakan microplate reader.

## Isolasi  dengan  Metode  Kromatografi Kolom
Untuk  memisahkan  senyawa-senyawa yang  ada  di  dalam  fraksi  (F12)  hasil  VLC tersebut,  selanjutnya  dilakukan  pemisahan dengan  metode  kromatografi  kolom  dengan fase  diam  silika  gel  60  (70-230  mesh). Kemudian dielusi secara bergradien menggunakan  pelarut n -heksana  100%, kombinasi  campuran pelarut n -heksana :  etil asetat (9:1), perbandingan etil asetat: metanol, sampai  metanol  100%.  Hasil  pemisahan ditampung  dalam  wadah  vial  dan  diperoleh hasil pemisahan kromatografi kolomsebanyak  135  vial.  Hasil  pemisahan menunjukan adanya pola noda yang baik pada vial 41-51 dan terdapat kristal yang warnanya lebih homogen dibandingkan kristal pada vial lainnya. vial 41–51 ini digabung (CHP1) dan dicuci ( washing ) dan rekristalisasi. Selanjutnya  kristal  CHP1  yang  didapat dimonitor  kembali  pada  plat  KLT  di  bawah lampu UV 254 nm dan 366 nm untuk melihat kemurnian  dari  senyawa  tersebut  dan menunjukkan  satu  noda  tanpa  adanya  noda lain yang mengganggu.

## Identifikasi Senyawa Isolat
Senyawa  CHP1,  diidentifikasi  lebih lanjut  meliputi  pemeriksaan  organoleptis, sifat  fisika  dan  sifat  kimia  serta  analisis senyawa  secara  spektroskopi  menggunakan spektrofotometer  UV-Vis,  spektrofotometer FT-IR  (Lab.  Kimia  Fisika  FMIPA  UR)  dan spektroskopi  H-NMR  (Lab.  Kimia  FMIPA ITB).
Pengujian Aktivitas Antioksidan
a. Persiapan  Larutan  Uji  Fraksi  F12  dan senyawa CHP1
Fraksi 12 dan senyawa isolat CHP1 masing- masing  ditimbang  sebanyak  10  mg  dan dilarutkan  dalam  10  mL  metanol  sehingga didapatkan larutan induk dengan konsentrasi 1000 µg/mL.
b. Pembuatan Larutan Vitamin C Vitamin  C  sebagai  antioksidan  pembanding ditimbang  sebanyak  10  mg  dan  dilarutkan dalam  10  mL  metanol  sehingga  didapatkan konsentrasi  larutan  induk  1000  µg/mL kemudian diencerkan menjadi 100 µg/mL. c. Pembuatan Larutan DPPH Sebanyak  10  mg  DPPH  ditimbang  dan dilarutkan dalam 10 mL larutan metanol lalu disimpan  di  dalam  vial  gelap  sehingga didapatkan larutan DPPH dengan konsentrasi 1000  µg/mL.  Larutan  tersebut  kemudian diencerkan menjadi 80 µg/mL. d. Pengujian  Aktivitas  Antioksidan  dengan Metode DPPH
Uji  aktivitas  antioksidan  dilakukan  dengan metode  DPPH  menggunakan microplate reader mengikuti metode yang telah dilakukan  Kedare  dan  Singh  (2011)  yang telah  dimodifikasi  (Fadhli,  et.  al.,  2019). Microplate yang digunakan terdiri  dari  baris A-H  dan  masing-masing  baris  memiliki  12 sumur.  Masin-masing  larutan  induk  sampel) Pada  baris  A  dimasukan  masing-masing larutan  sampel  (F12  dan  senyawa  CHP1) sebanyak 100 µL. Tambahkan metanol 50 µL pada  masing-masing  baris  B-H.  Baris  A dipipet  sebanyak  50µL  lalu  dimasukan  ke baris  B,  dari  baris  B  dipipet  50  µL  dan dimasukan ke baris C, dan begitu seterusnya sampai pada baris F. pada baris F dipipet 50 μL  dan  dibuang.  Maka  dengan  demikian diperoleh konsentrasi A-F secara urut adalah 1000; 500; 250; 125; 62,5 dan 31,25 μg/mL. Baris G dan H diisi dengan pelarut metanol 50 µL, kemudian baris A-G ditambahkan DPPH konsentrasi 80 μg/mL sebanyak 80 μL. Lalu larutan  uji  dibiarkan  selama  30  menit  pada suhu  ruangan  dan  terhindar  dari  cahaya. Selanjutnya,  absorbansi  larutan  uji  diukur pada  panjang  gelombang  517  nm  dengan
microplate  reader .  Aktivitas  penangkapan radikal  bebas  ditandai  dengan  terjadinya penurunan  absorbansi.  Kontrol  positif  yang digunakan  sebagai  antioksidan  pembanding adalah asam askorbat dengan konsentrasi 100; 50; 25; 12,5; 6,25 dan 3,125 µg/mL.

## Analisis data
Persentase  inhibisi  terhadap  radikal bebas DPPH dapat dihitung dengan menggunakan persamaan 1.
% Inhibisi = Abs DPPH – Abs sampel x 100% ……(1) Abs DPPH
Untuk  menentukan  nilai  IC 50 dari masing-masing sampel diplot masing-masing konsentrasi  sampel  dan  persen  inhibisinya pada sumbu x dan  y pada persamaan regresi linear.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Sebanyak 2,5 kg simplisia buah senduduk  bulu  ( Clidemia  hirta (L.)  D.  Don) diekstraksi dengan metode maserasi menggunakan pelarut metanol.  Hasil ekstrak metanol  buah  senduduk  bulu  dilakukan pemeriksaan  kandungan  metabolit  sekunder. Buah  senduduk  bulu  positif  mengandung senyawa  golongan  flavonoid,  fenolik  dan terpenoid.  Hasil  positif  flavonoid  ditandai dengan  terbentuknya  warna  merah  muda setelah  ditambahkan  HCl  pekat  dan  logam Mg.  Pembentukan  warna  merah  muda tersebut  disebabkan  oleh  tereduksinya  inti benzopiron  yang  terdapat  dalam  struktur flavonoid sehingga terbentuk garam flavilium berwarna yang merah, lembayung merah atau jingga (Ergina dan Indarini, 2014).
Adanya  kandungan  senyawa  terpenoid pada sampel segar ditandai dengan timbulnya warna merah setelah penambahan asam asetat anhidrat dan asam sulfat pekat, warna tersebut dihasilkan  oleh  hasil  reaksi  antara  pereaksi dengan  senyawa  terpenoid  yang  terdapat  di dalam  sampel  (Agustina et  al., 2017). Sedangkan adanya senyawa golongan fenolik ditandai  dengan  terbentuknya  warna  hijau kehitaman.  Penambahan  reagen  FeCl 3 akan
bereaksi  dengan  gugus  hidroksil  yang terdapat  pada  senyawa  fenolik  dan  akan menghasilkan senyawa kompleks yang berwarna  hijau  atau  biru  kehitaman  (Wijaya et al., 2015).
Selanjutnya ekstrak metanol buah senduduk bulu yang telah diuji dengan metode KLT,  dilakukan  pemisahan  dengan  metode VLC. VLC merupakan salah satu metode fase diam  yang  digunakan  berupa  silika  gel  60 (230-400  mesh)  dengan  fase  gerak  sistem gradien  yang  kepolarannya  ditingkatkan dimulai dari pelarut n -heksana, etil asetat dan metanol. Urutan eluen yang digunakan dalam kromatografi vakum diawali mulai dari eluen yang  mempunyai  tingkat  kepolaran  rendah kemudian  kepolarannya  ditingkatkan  secara perlahan-lahan (Hostettmann et al. ,1995). Berdasarkan  hasil  VLC  didapatkan  17 fraksi.  Fraksi  ke-17  merupakan  fraksi  etil asetat  :  metanol  (40:60).  Pemisahan  dengan VLC  ini  terhenti  pada  fraksi  17  disebabkan silika  yang  terlalu  padat  sehingga  vakum tidak mampu untuk memompa lagi. Kemudian  fraksi  17  tersebut  dengan rotary evaporator dan  dikumpulkan  dalam  17  vial yang  diberi  label  F1  sampai  dengan  F17. Masing-masing  fraksi  F1-F17  tersebut  diuji KLT dengan menggunakan eluen n - heksana : etil asetat (5:5) dan etil asetat : metanol (8:2) untuk  mendapatkan profil  KLT dari masing- masing  fraksi.  Berdasarkan  hasil  KLT,  F12 menunjukkan pola noda yang lebih sederhana dibandingkan dengan fraksi lainnya.
Selanjutnya  dilakukan  uji  pendahuluan aktivitas antioksidan menggunakan KLT dari fraksi hasil VLC. Uji pendahuluan antioksidan  ini  dilakukan  untuk  mengetahui ada  atau  tidaknya  aktivitas  antoksidan  dari ekstrak  metanol  buah  senduduk  bulu. Kromatogram  disemprot  dengan  pereaksi spesifik  yaitu  larutan 1,1-  diphenyl-2- picrylhydrazyl (DPPH) 0,2% dalam metanol. Bercak  yang dapat menangkap radikal  bebas akan  menghasilkan  warna  kuning  dalam waktu  tidak  lebih  dari  30  menit  terindikasi sebagai antioksidan (Chowdhury et al. , 2015). Pada pengujian ini ekstrak metanol simplisia
buah senduduk bulu memberikan hasil positif pada  fraksi  F1-F17,  yang  ditandai  dengan adanya noda kuning. Hasil pengujian tersebut menunjukkan bahwa sampel mampu meredam  radikal  bebas DPPH atau memiliki aktivitasantioksidan.

## Gambar 1. Profil Komatografi Lapis Tipis Hasil Uji Pendahuluan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Metanol Buah Senduduk Bulu
Sebanyak  0,218  gram  F12  dimurnikan menggunakan kromatografi kolom diameter 1 cm menggunakan silika gel 60 (70-230mesh). Setelah  itu  pengelusian  dilakukan  dengan menggunakan  pelarut  berdasarkan  metode SGP  ( Step  Gradient  Polarity). Setelah dilakukan pengelusian, hasil elusi ditampung didalam  vial  dan  didapatkan  sebanyak  135 vial,  lalu  di  uji  KLT  dan  uji  pendahuluan antioksidan.
Setelah  dilakukan  uji  pendahuluan aktivitas  antioksidan,  selanjutnya  dilakukan pemurnian  terhadap  fraksi  yang  potensial sebagai antioksidan. Sehingga dipilihlah F12. Hasil pemisahan fraksi 12 dengan kromatografi kolom menunjukan adanya pola noda  yang  baik  pada  vial  41-vial  51  dan terdapat kristal yang warnanya lebih homogen dibandingkan kristal pada vial lainnya. Kristal yang  diperoleh  pada  vial  41–51  ini dimurnikan dengan cara washing (pencucian) dan  rekristalisasi.  Pemurnian  ini  dilakukan berulang  hingga  didapat  senyawa  berbentuk kristal.  Selanjutnya  kristal  yang  didapat dimonitor  kembali  pada  plat  KLT  di  bawah lampu UV 254 nm dan 366 nm untuk melihat kemurnian  dari  senyawa  tersebut,  yang  akan menunjukkan  satu  noda  tanpa  adanya  noda lain  yang  mengganggu.  Berdasarkan  hasil
profil KLT senyawa CHP1 dengan tiga eluen berbeda  yaitu  etil  asetat  :  metanol  (8:2), n - heksana : etil asetat (5:5) dan n -heksana : etil asetat  (7:3)  diperoleh  nilai  R f berturut-turut yaitu 0,8; 0,4 dan 0,1.
Senyawa  murni  yang  didapat  sebanyak 10 mg dan diberi label CHP1 dan dilanjutkan identifikasi  senyawa  secara  organoleptis, pemeriksaan  kimia,  pemeriksaan  fisika  dan analisis  spektroskopi  UV-Vis,  FT-IR  dan NMR serta uji aktivitas antioksidan.
Pemeriksaan organoleptis diketahui bahwa  senyawa  murni  CHP1  yang  didapat berbentuk kristal, berwarna putih, larut dalam kloroform  dan  agak  sukar  larut  dalam metanol.  Pengukuran  titik  leleh  senyawa murni  CHP1  menggunakan Stuart  Melting Point  Apparatus (SMP-11)  diperoleh  titik leleh  165-167ºC.  Jarak  titik  leleh  dari senyawa murni CHP1 tidak lebih dari 2ºC ini menunjukan  bahwa  senyawa  yang  sudah didapat  telah  murni.  Senyawa  murni  CHP1 dilakukan  pengujian  penampak  noda  dengan menggunakan pereaksi Liebermann-Burchard dan terbentuk warna merah yang mengindikasikan senyawa golongan terpenoid.
Hasil  yang  diperoleh  setelah  dilakukan identifikasi  dengan  spektrofotometer  UV
terhadap  senyawa  CHP1  pada  panjang gelombang  200-400  nm,  hasil  pengukuran menunjukan adanya gugus kromofor (Gambar  2).  Kromofor  adalah  molekul  atau bagian  molekul  yang  mengabsorbsi  sinar dengan  kuat  di  daerah  UV-Vis  (Suhartati, 2017). Dari hasil pengukuran spektrofotometer  UV,  senyawa  murni  CHP1 menunjukkan  tiga  nilai  serapan  yaitu  0,080 pada  panjang  gelombang  316  nm.  Nilai absorbansi  UV-Vis  senyawa  CHP1  dengan konsentrasi  senyawa  CHP1  menunjukkan hubungan yang tidak linear yang disebabkan konsentrasi senyawa CHP1 terlalu kecil.
Hasil  identifikasi  spektrofotometer  FT- IR  (Gambar  3)  diperoleh  hasil  bahwa senyawa  isolat  CHP1  mempunyai  gugus fungsi  OH  pada  daerah  bilangan  gelombang 3360 cm -1 . Adanya bilangan gelombang pada daerah  2956  cm -1 ,  2929  cm -1 dan  2852  cm -1 menunjukkan  adanya  gugus  fungsi  C-H alifatis.  Adanya  bilangan  gelombang  pada daerah  1745  dan  1651  cm -1 menunjukkan adanya  gugus  fungsi  C=O  ester  dan  serapan pada bilangan gelombang pada 1651,14 cm -1 menunjukkan  adanya  ikatan  C=C  alkena. Adanya  bilangan  gelombang  pada  daerah 1458  cm -1 dan  1380  cm -1 menunjukkan adanya  gugus  fungsi  CH Bending (CH2 dan
Gambar 2. Spektrum UV Senyawa Isolat CHP1
CH3)  dimana  vibrasi  ini  mengindikasikan adanya  gugus  gem  dimetil  yang  khas  untuk triterpenoid  (Astuti et  al .  2017).  Adanya bilangan  gelombang  pada  daerah  1074  cm -1 menunjukkan adanya gugus fungsi C-O.
Untuk  mengidentifikasi  lebih  lanjut mengenai  struktur  senyawa,  maka  dilakukan pengukuran spektrum 1H-NMR (Gambar 4). Analisis 1 H-NMR dilakukan dengan spektrometer  NMR  500  MHz  dalam  pelarut metanol terdeuterasi (CD 3 OD) hanya menunjukkan  sinyal-sinyal  proton  alifatik
yang  merupakan  ciri  khas  dari  kebanyakan senyawa terpenoid. Pergeseran kimia pada δ H 4.75  ppm  (15H,  m)  dihasilkan  oleh  proton alkena,  yang  menunjukkan  bahwa  senyawa tersebut terdapat ikatan C=C alkena. Sedangkan  pergeseran  kimia  pada  δ H 3.58 ppm  (9H,  m)  menunjukkan  tipe  proton CH 2 OH.
Selanjutnya  pada  pergeseran  kimia  δ H 2.33 ppm  (12H, d, J=2,75 Hz),  δ H 1.15 ppm (7H,s),δ H 0.87 ppm (2H, s), δ H 0.84 ppm (5H, m), δ H 0.81 ppm (1H, s), dan δ H 0.11 ppm (8H,
Gambar 3. Spektrum FT-IR Senyawa Isolat CHP1
Gambar 4. Spektrum 1 H NMR senyawa Isolat CHP1
s)  dihasilkan  oleh  proton-proton  pada  gugus metil  dari  senyawa  terpenoid.  Namun,  dari hasil 1 H  NMR  tersebut,  belum  dapat ditentukan bentuk strukturnya karena kurangnya karakterisasi senyawa yang dilakukan.
Tabel 1. Hasil Uji Aktivitas Antioksidan F12,
Senyawa CHP1 dan Vitamin C Sampel IC 50 (µg/mL) Daya Antioksidan F12 26,39 Sangat Kuat Senyawa CHP1 327,01 Lemah Vitamin C 8,76 Sangat Kuat
Hasil  uji  aktivitas  antioksidan  dapat dilihat  pada  Tabel  1.  Hasil  pengujian menunjukkan  Fraksi  12  memiliki  nilai  IC 50 yang  paling  kecil  yang  berarti  memiliki aktivitas antioksidan sangat  kuat  yaitu  26,39 µg/mL  sedangkan  senyawa  CHP1  memiliki aktivitas antioksidan yang lemah dengan nilai IC 50 327,01  µg/mL.  Hal  ini  dapat  dapat disebabkan  karena  senyawa  isolat  CHP1 merupakan  senyawa  golongan  terpenoid dimana  senyawa  terpenoid  ini  tidak  bisa dengan  mudah  memberikan  salah  satu elektronnya  kepada  DPPH  sehingga  ketika salah  satu  elektronnya  diberikan  kepada DPPH,  maka  akan  mengakibatkan  resonansi yang  ada  didalam  molekul  senyawa  CHP1 kurang  mampu  menstabilkan  radikal  pada senyawa CHP1 tersebut (Yuhernita & Juniarti, 2011; Mustarichie et al, 2017)
Sedangkan  hasil  pengujian  aktivitas antioksidan  vitamin  C  diperoleh  nilai  IC 50 sebesar sebesar 8,766 µg/mL. Jika dibandingkan  dengan  nilai  IC 50 yang
didapatkan dari pengujian aktivitas antioksidan  F12,  senyawa  CHP1  dari  buah senduduk bulu dengan vitamin C menunjukkan bahwa vitamin C menunjukkan aktivitas  antioksidan  yang  sangat  kuat daripada sampel. Nilai IC 50 dianggap sebagai ukuran  yang  baik  dari  efisiensi  antioksidan senyawa-senyawa  isolat  ataupun  ekstrak (Yuhernita  &  Juniarti,  2011).  Menurut Mustarichie et  al (2017)  suatu  senyawa dikatakan  sebagai  antioksidan  sangat  kuat apabila nilai IC 50 kurang dari 50 µg/mL, kuat apabila  nilai  IC 50 antara  50-100  µg/mL, sedang apabila nilai IC 50 berkisar antara 101- 250 µg/mL, lemah apabila nilai IC 50 berkisar antara 250-500 µg/mL dan tidak aktif apabila nilai  IC 50 >500.  Semakin  kecil  nilai  IC 50 berarti  semakin  aktif  senyawa  isolat  sebagai senyawa  penangkap  radikal  DPPH  atau sebagai antioksidan.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilakukan didapatkan senyawa isolat CHP1 sebanyak 10 mg berbentuk kristal, berwarna putih dengan titik leleh 165-167 o C. Berdasarkan identifikasi  penampak  noda  menggunakan pereaksi Liebermann-Bourchard menunjukkan  senyawa  CHP1  merupakan golongan terpenoid  yang diperkuat oleh data spektrum  UV,  FT-  IR  dan 1 H  NMR.  Selain itu, hasil uji aktivitas antioksidan menunjukkan bahwa senyawa CHP1 memiliki aktivitas antioksidan dengan kategori  lemah  yang  ditunjukkan  oleh  nilai IC 50 sebesar 327,01 µg/mL.

## Daftar Pustaka
Agustina, W., Nurhamidah., Dewi, H. 2017. Skirining Fitokimia Dan Aktivitas Antioksidan Beberapa Fraksi Dari Kulit Batang Jarak (Ricinus Communis L.). Jurnal Pendidikan dan IlmuKimia. 1(2),117–22.
Djauhariya, E., Hernani. 2004. GulmaBerkhasiat Obat. Jakarta, PenebarSwadaya.
Gandjar, G., Rohman A. 2007. KimiaFarmasi Analisis. Yogyakarta, PustakaPelajar.
Hostettmann,  K.,  Hostettmann,  M.,  Marston,  A.  1995.  Cara  Kromatografi  Preparatif. Terjemahan Padmawinata K. Bandung, Institut Teknologi Bandung.
Ergina,  S.  N  dan  Indarini,  D.  2014.  Uji  Kualitatif  Senyawa  Metabolit  Sekunder  Pada  Daun Palado (Agave Angustifolia) yang Diekstraksi Dengan Pelarut Air Dan Etanol. J. Akad. Kim. 3(3),165– 172.
Fadhli, H., Soeharto, A. B. R., & Windarti, T. (2018). Uji Aktivitas Antioksidan Kulit Buah Pulasan (Nephelium mutabile Blume) dan Bunga Turi Putih (Sesbania grandiflora) dengan Metoda DPPH. Jurnal Katalisator, 3(2), 114–124.
Mustarichie, R., Runadi, D., Ramdhani, D. 2017. The Antioxidant Activity And Phytochemical Screening  of  Ethanol  Extract,  Fractions  of  Water,  Ethyl  Acetate,  and  N-Hexane  From MistletoeTea (Scurrula atropurpurea BL. dans ). Asian J Pharm Clin Res. 10(2),2–6.
Najiah, M., Wan, N., Nadirah, M. 2011. Methanolic Activities of Selected Weeds on Bacteria Isolated from Macrobrachium rosenbergii Larvae. Thai J Vet Med. 41(4), 535-539.
Narasimham, D., Yeduguri, H.B., Sanith, C., Rahul, R., Meruva, K.., Thummala, C., Joseph M. 2017. Evaluation of in Vitro Anticancer and Antioxidant Activities From Leaf Extracts of Medicinal Plant Clidemia hirta. International Journalof Pharmacy and Pharmaceutical Sciences. 9(4),149-153.
Pardede,  A.  2018.  Uji  Aktivitas  Antioksidan  Dari  Ekstrak  Etanol  Buah  Senduduk  Bulu (Clidemia  hirta  (L.)  D.  Don)  dengan  Metode  Pemerangkapan  DPPH  (1,1-diphenyl-2- picrylhidrazil). Skripsi. Fakultas Farmasi, Universitas Sumatera Utara
Suhartati, T. 2017. Dasar-dasar Spektrofotometri UV- Vis dan Spektrofotometri massa Untuk Penentuan Struktur Senyawa Organik. Penerbit AURA , BandarLampung.
Tjitraresmi,  R.A.  2018.  Review,  Potensi  Tanaman  Melastomataceae  Sebagai  Antioksidan. Farmaka Suplemen. 6(1), 26–28.
Wijaya. D., Putri, P.Y., Raffty, S., Muhammad, R. 2015. Screening Fitokimia Dan Aktivitas Antioksidan Daun Eceng Gondok (Eichhornia Crassipes). Jurnal Kimia Valensi. 1(1),65– 69.
Yuhernita  dan  Juniarti.  2014.  Analisis  Senyawa  Metabolit  Sekunder  Dari  Ekstrak  Metanol Daun Surian yang Berpotensi Sebagai Antioksidan. Makara Sains. 15 (1), 48-52