Accredited by Ministry of Research, Technology                                DOI: https://doi.org/10.35799/jis.v22i2.43913 and Higher Education No: 105/E/KPT/2022                Available online at https://ejournal.unsrat.ac.id/index.php/jis
Antioxidant Activity of Dewandaru Leaf (Eugenia Uniflora L.) Ethanol Extract and Determination of Total Flavonoid and Phenolic Content
Khoirul Anwar 1*) , Faridha Maera Lokana 2) , Aqnes Budiarti 1)
1) Departemen Kimia Analisis dan Kimia Farmasi, Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim, Semarang, Indonesia
2) Program Studi Farmasi, Universitas Wahid Hasyim, Semarang, Indonesia
*) Corresponding author: anwarkhoirul174@gmail.com

## ABSTRACT
Dewandaru  ( Eugenia  uniflora L. )  is  a  plant  that  has  antioxidant  activities.  The  compounds contained phenolic compounds and flavonoids.  This study aimed to test the antioxidant activity of the ethanol extract of Dewandaru leaves (Eugenia uniflora L. ) with ABTS method and determine the content of flavonoid and total phenolic compounds. Ethanol extract of Dewandaru leaves was obtained  by  maceration  using  96%  ethanol.  The ethanol extract of Dewandaru leaves identified the active compounds by FTIR (Fourier Transform Infra Red) and phytochemical screening. Ethanol extract of Dewandaru leaves was tested for its antioxidant activity using the ABTS method to obtaine the IC 50 value and determined total flavonoid and phenolic content using UV/Vis spectrophotometry to obtain  the  levels  (mg/g  sample).  The  identification  results  show  that  the  ethanol  extract  of Dewandaru  leaves  is  a  flavonoid  compound of  the  dihydroflavonol  type  which  has  a  bound OH functional  group,  aliphatic  CH,  C  =  O,  C  =  C  aromatic,  C  -  O  and  aliphatic  CH,  and  there  are hydroxy groups on the C-3, C atoms. -5, and C-7. The results of phytochemical screening showed that the ethanol extract of Dewandaru leaves contains saponins, tannins, phenolics, and flavonoids. The ethanol extract of Dewandaru leaves has antioxidant activity with an IC 50 value of 33.92 ppm and  trolox with  an  IC 50 value  of  19.24 ppm. Based  on  the  IC 50 value,  both  are  categorized  very strong antioxidant activity. The total phenolic and total flavonoid levels were 327.52 mgGAE/g and 35.65 mgQE/g.
Keywords: Antioxidant; Eugenia uniflora L.; flavonoid; phenolic
Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Dewandaru (Eugenia Uniflora L.) serta Penetapan Flavonoid dan Fenolik Total

## ABSTRAK
Dewandaru  ( Eugenia  uniflora L.)  termasuk  salah  satu  tanaman  yang  mempunyai  khasiat antioksidan.  Senyawa  yang  terkandung  didalamnya  antara  lain  senyawa  fenolik  dan  flavonoid. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan uji aktivitas antioksidan ekstrak etanol daun dewandaru ( Eugenia uniflora L. ) menggunakan metode ABTS dan menetapkan kandungan senyawa flavonoid dan  fenolik  total.  Ekstrak  etanol  daun  dewandaru  diperoleh  dengan  cara  maserasi  menggunakan etanol  96  %.  Ekstrak  etanol  daun  dewandaru  diidentifikasi  senyawa  aktif  dengan  FTIR  (Fourier Transform  Infra  Red)  dan  skrinning  fitokimia.  Ekstrak  etanol  daun  dewandaru  diuji  aktivitas antioksidan menggunakan metode ABTS sehingga diperoleh nilai IC 50 . Selanjutnya ekstrak etanol daun  dewandaru  ditetapkan  kandungan  flavonoid  dan  fenolik  totalnya  secara  spektrofometri UV/Vis hingga diperoleh kadarnya (mg/g sampel). Hasil identifikasi menunjukkan ekstrak etanol daun dewandaru mengandung senyawa golongan flavonoid jenis dihidroflavonol yang mempunyai gugus fungsi OH terikat, CH alifatik, C = O, C = C aromatik, C – O dan CH alifatik, serta terdapat gugus hidroksi pada atom C-3, C-5, dan C-7. Hasil skrining fitokimia  menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun dewandaru mengandung senyawa saponin, tanin, fenolik, dan flavonoid. Ekstrak etanol daun  dewandaru  memiliki  aktivitas  antioksidan  dengan  nilai  IC 50 sebesar  33,92  ppm  dan  trolox dengan  nilai  IC 50 sebesar  19,24  ppm.  Berdasarkan  nilai  IC 50 keduanya  dikategorikan  memiliki aktivitas antioksidan yang sangat kuat. Sedangkan kadar fenolik total serta flavonoid total sebesar 327,52 mgGAE/g dan 35,65 mgQE/g.
Kata kunci: antioksidan; Eugenia uniflora L.; fenolik; flavonoid
(Article History: Received 23-10-2022; Accepted 29-10-2022: Published 31-10-2022

## PENDAHULUAN
Pola hidup masyarakat yang tidak baik diantaranya konsumsi makanan dengan nutrisi yang tidak seimbang dan mengandung bahan
kimia  berbahaya  seperti  pemanis,  pengawet, pewarna sintetis, kebiasaan merokok, minum- minuman  beralkohol,  olahraga  yang  kurang maupun  berlebihan  dan  istirahat  yang  tidak
cukup  dapat  berpengaruh  buruk  terhadap kesehatan.  Disamping  itu  juga  kondisi lingkungan yang tidak baik seperti polusi dari asap  rokok  maupun  kendaraan  bermotor, paparan  radiasi  matahari  secara  berlebihan, serta  penggunaan  pestisida  yang  tidak  benar juga  berdampak  negatif  bagi  kesehatan.  Hal tersebut  menyebabkan  produksi  senyawa antioksidan  alami  yang  dihasilkan  tubuh mengalami  penurunan  (Yuslianti,  2018). Bahkan  yang  terjadi  sebaliknya,  jumlah senyawa radikal bebas yang masuk ke dalam tubuh  terus  meningkat.  Kondisi  ini  disebut stres  oksidatif yang  dapat  memicu  berbagai penyakit  kronis  dan  degeneratif  seperti kanker,  penyakit  autoimun,  penuaan  dini, katarak,  rheumatoid  arthritis,  kardiovaskuler dan neurodegenaratif.
BHA ( Butil Hidroksi Anisol ) dan BHT ( Butil Hidroksil Toluen ) merupakan antioksidan  sintesis  yang  sering  digunakan oleh masyarakat. Selain itu penelitian  terbaru melaporkan  bahwa  vitamin  E  sangat  penting untuk  mencegah  penyakit  degeneratif  seperti penyakit  kardiovaskuler.  Vitamin  C  juga dikenal  sebagai  antioksidan  yang  berperan dalam menangkal berbagai penyakit degeneratif  maupun  kronik  (Safnowandi, 2022).  Namun  penggunaan  zat-zat  tersebut harus dibatasi karena dapat menimbulkan efek samping  yaitu  kerusakan  paru-paru  dan  hati serta bersifat karsinogenik (Yuslianti, 2018).
Salah  satu  tanaman  di  Indonesia  yang diketahui  berpotensi  sebagai  antioksidan alami  adalah    Dewandaru  ( Eugenia  uniflora L.)  (Santoso et  al., 2020).  Bagian  tanaman yang  dapat  dimanfaatkan  umumnya  bagian daun  dan  buah  (Fidelis et  al., 2022).
Berdasarkan beberapa hasil penelitian diantaranya  penelitian  Suhendi et  al .  (2011) daun  dewandaru  ( Eugenia  uniflora L) mengandung  senyawa 5,7  3’,4’-tetrahidroksi flavonol atau  kuersetin.    Asam  elagat,  asam galat,  rutin  terkandung  dalam  ekstrak  air, etanol  dan  metanol-aseton  daun  dewandaru (Schumacher et al., 2015) Sedangkan ekstrak metanol,  etil  asetat  dan  n-butanol  daun dewandaru positif mengandung tanin, flavonoid  dan  quinon  sedangkan  ekstrak kloroform mengandung flavonoid (Santoso et al., 2020). Selain itu penelitian (Utami et al., 2018) juga menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun dewandaru mempunyai aktivitas antiradikal  DPPH  yang  sangat  kuat  dengan nilai  IC 50 sebesar  4,63  μg/ml  sedangkan
vitamin E sebesar 8,90 μg/ml. Profil fitokimia senyawa  yang  terkandung  dalam  daun dewandaru  bervariasi  tergantung  pada  iklim, penyimpanan dan persiapan ekstrak (Fidelis et al., 2022).
Penentuan  aktivitas  antioksidan  pada penelitian  ini  menggunakan  metode  ABTS ( 2,2’-Azinobis [3-ethylbenzothiazoline-6- sulfonic  acid]-diammonium  salt ).  Kelebihan metode ABTS dapat dilarutkan dalam pelarut organik  maupun  air,  sehingga  mampu mendeteksi  senyawa  yang  bersifat  lipofilik maupun  hidrofilik.  Selain  itu  ABTS    dapat memberikan absorbansi spesifik pada panjang gelombang visible dan  waktu  reaksi  yang cepat.  Hasil  penelitian  Djide et  al. (2022) bahwa hasil uji aktivitas antioksidan rimpang bangle  dalam  pelarut  etanol  96%  memiliki nilai IC 50 sebesar 25,320 ppm yang tergolong antioksidan  sangat  kuat  dalam  meredam radikal  bebas  ABTS.  Hasil  penelitian  Poli (2022) bahwa pengujian aktivitas antioksidan dengan  metode  ABTS  menunjukan  ekstrak metanol kulit biji matoa sebesar 93,91%.
Berdasarkan latar belakang maka perlu dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  terhadap aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol  daun dewandaru  ( Eugenia uniflora L.)  serta penetapan  kandungan  flavonoid  dan  fenolik totalnya  untuk  melengkapi  data  penelitian sebelumnya.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menguji aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol  daun dewandaru  dengan  metode  ABTS  dan menetapkan  kandungan  senyawa  flavonoid dan  fenolik  total  ekstrak  etanol  daun dewandaru.

## METODE PENELITIAN
Bahan uji yang digunakan adalah daun dewandaru  ( Eugenia  uniflora L.)  segar. Pelarut dan bahan yang digunakan etanol 96 % teknis  (Merck),  aquadest,  asam  galat, kuersetin  (Sigma),  Na 2 CO 3 ,  Folin-Ciocalteu, etanol  p.a  (Merck),  FeCl 3 ,    AlCl 3 (Merck), natrium asetat, serbuk magnesium (Mg), asam klorida (HCl) pekat, ABTS ( 2,2- Azinobis (3- Ethylbenzothaizoline)-6-  Sulfonic  Acid) p.a (Merck ), trolox (Sigma), dan kalium persulfat (K 2 S 2 O 8 ).
Seperangkat  alat  ekstraksi  dan  uji kualitatif  yang  terdiri  dari  alat  gelas  (Iwaki Pyrex),  seperangkat  alat  maserasi,  mesin penyerbuk,  timbangan  elektrik  (Henherr Scale), moisture balance (Ohaus), seperangkat
vakum,  corong  buchner,  almari  pengering, penguap  vakum  putar  (Heidolph),  desikator. Seperangkat  alat  gelas  (Iwaki  Pyrex), Spektrofotometer  UV-Vis  1800  (Shimadzu), dan mikropipet.
Jalannya penelitian a. Determinasi Tanaman Determinasi tanaman dewandaru ( Eugenia uniflora L.) dilakukan di
Laboratorim  Ekologi  dan  Biosistematika, Jurusan  Biologi  Fakultas  MIPA,  Universitas Diponegoro  Semarang.  Proses  identifikasi dilakukan  mencocokkan  bagian  tanaman seperti akar, batang, daun, bunga dan biji dari tanaman peppermint dengan kunci determinasi tanaman dalam buku Flora of Java karangan.
b. Pembuatan  Simplisia  Daun  Dewadaru (Eugenia uniflora L.)
Daun dewandaru ( Eugenia uniflora L.) segar  berasal  dari  Kelurahan  Susukan, Kecamatan  Ungaran  Timur,  Kabupaten Semarang.  Daun  dewandaru  disortir,  dicuci kemudian  dikeringkan  dengan  menggunakan lemari  pengering  pada  suhu  50 o C  sampai kering.  Daun  yang  telah  kering  diserbuk dengan  mesin  penyerbuk  yang    dilengkapi dengan  ayakan  60  mesh  sehingga  diperoleh serbuk daun dewandaru. Kemudian ditimbang bobot simplisia yang dihasilkan.
c. Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Dewandaru
Ekstraksi  dilakukan  dengan  metode maserasi  menggunakan  pelarut  etanol  96%. Sebanyak  285  gram serbuk  daun  dewandaru dimasukkan ke dalam toples lalu ditambahkan 2138  ml  pelarut  etanol  96%.  Toples  dilapisi kertas  coklat  agar  terhindar  dari  cahaya matahari langsung dan ditutup aluminium foil. Proses  perendaman  selama  3  hari  dan dilakukan pengadukan selama 15 menit tiap 8 jam  sekali.  Setelah  3  hari,  dilakukan penyaringan  sehingga  didapat  maserat  1. Ampas dari penyaringan ditambahkan 712 ml pelarut etanol 96% dan dilakukan perendaman ulang  (remaserasi)  selama  2  hari  dan dilakukan  penyaringan  kembali  sehingga didapat  maserat  2.  Maserat  1  dan  maserat  2 dienapkan  semalam  kemudian  dipekatkan menggunakan rotary  evaporator pada  suhu 50 o C  sehingga  diperoleh  ekstrak  etanol.
Setelah  itu  dilakukan  penimbangan  ekstrak kental dan dihitung persentase rendemen yang dihasilkan.  Perhitungan  rendemen  ekstrak
dapat  dihitung  menggunakan  rumus  sebagai berikut (Puspitasari et al., 2019) :
Rendemen = Berat ekstrak kental yang diperoleh (g) Berat serbuk daun mint (g) x 100%
d. Organoleptik
Parameter  organoleptik  ekstrak  adalah mendeskripsikan bentuk, warna, rasa dan bau (Depkes RI, 2000).
e. Uji Fitokimia
1) Senyawa Fenolik
Sampel ekstrak etanol daun dewandaru sebanyak  50  mg dilarutkan  dengan  etanol  96 %.  Kemudian  ditambahkan  2  tetes  larutan FeCl 3 5%  b/v  dalam  etanol.  Sampel  positif mengandung  fenolik  ditunjukkan  dengan terbentuknya warna biru, biru kehitaman, biru kehijauan atau menghasilkan intensitas warna yang lebih gelap (Harborne, 1996).

## 2) Senyawa Flavonoid
Sampel ekstrak etanol daun dewandaru sebanyak 50 mg kemudian dilarutkan dengan etanol kemudian disaring menggunakan kertas saring.  Larutan  dimasukkan  ke dalam  tabung reaksi ditambahkan 0,1 mg serbuk magnesium dan 0,4 mL amil alkohol. Kemudian ditambah HCl  pekat  tetes  demi  tetes  melalui  dinding tabung (Harborne, 1996). Sampel
mengandung  flavonoid  ditunjukkan  dengan terbentuknya  warna  merah  intensif.  Jika berwarna kuning jingga menunjukkan adanya flavon, kalkon dan auron.
3) Senyawa Alkaloid
Sampel ekstrak etanol daun dewandaru sebanyak 50 mg kemudian dilarutkan dengan pelarut HCl 2 N kemudian dibagi ke dalam 4 tabung reaksi. Masing-masing tabung dilakukan  penambahan  pereaksi.  Tabung pertama  larutan  sampel  sebagai  blangko. Tabung  kedua  ditambahkan  3  tetes  pereaksi dragendroff,  tabung  kedua  ditambahkan pereaksi  mayer  sebanyak  3  tetes  dan  tabung keempat  ditambah  3  tetes  pereaksi  wagner. Perubahan warna yang terjadi diamati. Reaksi positif  akan  menghasilkan  endapan berwarna jingga (Harborne, 1996).
4) Senyawa Saponin Ekstrak etanol daun dewandaru sebanyak 1 ml yang sudah dilarutkan dengan etanol  96  %  kemudian  ditambahkan  aquades dalam tabung reaksi. Selanjutnya digojog kuat selama  beberapa  waktu.  Reaksi  positif  akan terbentuk buih/busa yang stabil dalam waktu ± 15 menit (Harborne, 1996).

## 5) Senyawa Tanin
Sampel ekstrak etanol daun dewandaru sebanyak  50  mg  ditambah  10  ml  aquadest panas  dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi. Kemudian  ditambahkan  2  tetes  larutan  NaCl 1%  dan  1  tetes  Gelatin  5%.  Sampel mengandung  tanin ditunjukkan  dengan terbentuknya endapan (Harborne, 1996).
6) Identifikasi Triterpenoid/steroid Sampel ekstrak etanol daun dewandaru sebanyak  50  mg  dilarutkan  dengan  pelarut yang  sesuai  yaitu  etanol  96  %  kemudian ditambah 5 tetes pereaksi Lieberman bouchardat. Perubahan warna diamati. Reaksi positif akan terbentuk warna biru, hijau merah, jingga seiring bertambahnya waktu (Harborne, 1996).
f. Uji Aktivitas Antioksidan
1) Pembuatan Larutan ABTS Pembuatan larutan stok ABTS,
dilakukan  dengan  cara  menimbang  serbuk ABTS  sebanyak  100  mg  dan  serbuk  kalium persulfat K 2 S 2 O 8 sebanyak 165,6 mg dilarutkan  menggunakan  etanol  p.a.  kedua larutan  tersebut  diambil  masing  masing  dan dicampur  dengan  perbandingan  volume  1:1, kemudian diselubungi dengan aluminium foil agar  tidak  terkena  cahaya,  selanjutnya diinkubasi  selama  12-16  jam  di  tempat  yang terhindar dari cahaya hingga larutan homogen dan  reaksi  yang  terjadi  sempurna  (Lee et  al. , 2004)
2) Penyiapan larutan stok dan pembuatan seri konsentrasi Trolox Trolox ditimbang sebanyak 10 mg lalu dimasukkan  dalam  labu  takar  10  mL. Trolox dilarutkan dengan etanol p.a hingga larut, dan dicukupkan  volumenya  dengan  etanol  p.a sampai  tanda  batas.  Seri  konsentrasi  dibuat pada konsentrasi 5 ppm, 10 ppm, 15 ppm, 20 ppm  dan  25  ppm,  dicukupkan  volumenya dalam  labu  takar  5  mL  dengan  etanol  p.a (Ardiyansah, 2021).
3) Penentuan panjang gelombang
maksimal Penentuan  λ  maksimal  dilakukan dengan  cara  mencampur  1  ml  larutan  trolox konsentrasi  15  ppm,  dengan  1  ml  ABTS, diukur absorbansi
larutan pada spektrofotometer  UV-Vis  dengan  rentang panjang gelombang 600- 800 nm (Ardiyansah,
2021).

## 4) Penenetuan operating time
Penentuan operating  time dilakukan dengan  cara  mencampur  1  ml  larutan  trolox konsentrasi  15  ppm,  dengan  1  ml  ABTS, diukur pada menit ke 0, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40,  45, 50,  55, dan  60  pada  λ  maksimal. Waktu  peredaman  radikal  ABTS  yang menghasilkan  absorbansi  paling  stabil  dan memberikan serapan paling tinggi merupakan operating time. Serapan yang tinggi menunjukkan  sampel  sudah  bereaksi  dengan sempurna (Ardiyansah, 2021).
5) Pembuatan larutan uji
Dibuat  larutan  induk  sampel  ekstrak etanol  daun  daun  dewandaru  10.000  ppm. Larutan  induk  dipipet  1  ml  dicukupkan volumenya  dalam  labu  takar  10  ml  hingga tanda  batas  dengan  etanol  p.a  sehingga konsentrasinya  menjadi  1000  ppm.  Seri konsentrasi  dibuat  pada  konsentrasi  30  ppm, 60  ppm,  90  ppm,  120  ppm  dan  150  ppm, dicukupkan volumenya dalam labu takar 5 mL dengan etanol p.a. (Puspitasari et al., 2019)
6) Uji Aktivitas Antioksidan
Larutan  trolox  konsentrasi  5  ppm,  10 ppm, 15 ppm, 20 ppm dan 25 ppm, dan larutan stok  sampel  ekstrak  etanol  daun  dewandaru dengan  seri  konsentrasi  10  ppm,  20  ppm,  30 ppm,  40  ppm,  dan  50  ppm,  dipipet  masing- masing  1,5  mL  dan  ditambahkan  1,5  mL larutan  ABTS,  kemudian  diamkan  di  tempat yang terhidar dari cahaya selama 25 - 35 menit ( operating  time), lalu  diukur  serapannya dengan spektrofotometri UV-Vis pada panjang  gelombang  maksimal.  Besarnya aktivitas  antioksidan  dihitung  dengan  rumus (Ardiyansah, 2021).
g. Penetapan Kandungan Flavonoid Total
1) Pembuatan larutan AlCl3 10%
AlCl 3 (alumunium  klorida)  ditimbang sebanyak  500  mg,  kemudian  dilarutkan dengan  etanol  p.a,  kemudian  dicukupkan volumenya  pada  labu  takar  5  ml  (Puspitasari et al., 2019).
2) Pembuatan larutan natrium asetat 1 M
Natrium asetat ditimbang sebanyak 500 mg  dilarutkan  dengan  etanol  p.a,  kemudian dicukupkan volumenya pada  labu  takar  5  ml (Puspitasari et al., 2019)
3) Penyiapan larutan kuersetin
Kuersetin  ditimbang  20  mg  dan dilarutkan  dengan  5  mL  etanol  p.a  hingga larut.  Larutan  tersebut  dimasukkan  ke  dalam labu takar 50 mL dan ditambahkan etanol p.a hingga  tanda  batas  sehingga  diperoleh
konsentrasi larutan kuersetin sebesar 400 ppm. Seri konsentrasi dibuat pada konsentrasi 2, 4, 6,  8, 10, dan  12  ppm  dalam  5  mL  etanol  p.a (Puspitasari et al., 2017).
4) Penyiapan larutan sampel
Ekstrak etanol daun dewandaru ditimbang 500 mg dimasukkan ke dalam gelas beker  50  mL  kemudian  dilarutkan  dengan etanol  p.a  hingga  larut  dengan  bantuan magnetic  stirrer hingga  larut.  Kemudian larutan  disaring  ke  dalam  labu  takar  10  mL ditambahkan  etanol  p.a  hingga  tanda  batas sehingga  diperoleh  konsentrasi  masing- masing sebesar 50000 ppm (Puspitasari et al.,
2017).
5) Penetapan kadar flavonoid total
Sampel  ekstrak  etanol  diencerkan  250 kali kemudian dipipet 2 mL, ditambahkan 200 μL  AlCl 3 10%  dan  200  μL  natrium  asetat. Dibaca dengan spektrofotometer UV-Vis pada λ  maks  pada  menit  ke  25-35  setelah pencampuran.  Replikasi  dilakukan  3  kali. Sebagai  pembanding  digunakan  larutan kuersetin dengan konsentrasi 2, 4, 6, 8, 10, dan 12 ppm.
h. Penetapan Kandungan Fenolik Total
1) Pembuatan larutan Na 2 CO 3 7%
Natrium  karbonat  ditimbang  7  gram dilarutkan dalam 100 mL aquadest pada labu takar hingga tanda batas bawah (Puspitasari et al., 2019).
2) Penyiapan larutan asam galat
Asam galat ditimbang 10 mg dilarutkan dalam  etanol  p.a  hingga  10  mL  sehingga diperoleh  larutan  dengan  konsentrasi  1000 ppm  dan  seri  konsentrasi  dibuat  pada konsentrasi  50,  100,  150,  200,  250,  dan  300 ppm dalam 5 mL etanol p.a (Puspitasari et al., 2019).
3) Penyiapan larutan sampel
Ekstrak etanol daun dewandaru ditimbang 500 mg dimasukkan ke dalam gelas beker  50  mL  kemudian  dilarutkan  dengan etanol  p.a  hingga  larut  dengan  bantuan magnetic  stirrer hingga  larut.  Kemudian larutan  disaring  ke  dalam  labu  takar  10  mL ditambahkan  etanol  p.a  hingga  tanda  batas sehingga  diperoleh  konsentrasi  masing- masing sebesar 50000 ppm (Puspitasari et al,
2017).
4) Penetapan kadar flavonoid total
Sampel ekstrak etanol diencerkan 2 kali kemudian  dipipet  200  μL,  ditambahkan  400 μL Folin Ciocalteu didiamkan selama 8 menit,
ditambahkan  4  mL  Na 2 CO 3 7%.  Dibaca dengan spektrofotometer UV-Vis pada λ maks pada menit ke 100-110 setelah pencampuran. Replikasi dilakukan 3 kali. Sebagai pembanding  digunakan  larutan  asam  galat dengan  konsentrasi  50,  100,  150,  200,  250, dan 300 ppm.
i. Analisis data
1) Penentuan Aktivitas Antioksidan
a. % inhibisi Aktivitas antioksidan sampel
ditentukan dengan besarnya hambatan serapan ABTS (% inhibisi) dihitung dengan rumus:
% Inhibisi =
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝐾𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙− 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑆𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝐾𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 𝑥 100%
Keterangan:
Absorbansi  kontrol  =  serapan  radikal  ABTS  0,1 mM
Absorbansi sampel = serapan sampel dalam radikal ABTS 0,1 mM
b. Nilai IC 50 (Inhibitor Concentration) Dari  hasil  perhitungan    didapatkan  % inhibisi.  Dibuat  kurva  konsentrasi  (ppm) terhadap  %  inhibisi,  kemudian  didapat persamaan  regresi  y  =  bx  +  a  dimana  x konsentrasi  IC 50 (ppm)  dan  y  persentase inhibisi . Nilai IC 50 dihitung untuk menentukan berapa  konsentrasi  sampel  yang  dibutuhkan untuk  memiliki  kemampuan  50%  inhibisi (Santoso et  al., 2020).  Kategori  aktivitas antioksidan  berdasarkan  nilai  IC 50 dapat dilihat pada Tabel  1.
Tabel 1. Kategori Aktivitas Antioksidan berdasarkan nilai IC 50 (Molyneux, 2004)
Nilai IC50 Aktivitas Antioksidan ˂ 50ppm Sangat Kuat 50-100 ppm Kuat 100-150 ppm Sedang 150-200 ppm Lemah

## 2) Penentuan Kadar Fenolik Total
Kadar  fenolik  total  diperoleh dari  nilai absorbansi  masing-masing  sampel  kemudian diplotkan  kedalam  persamaan  kurva  baku asam  galat.  Nilai  yang  didapat  dikalikan volume total sampel dan dibandingkan dengan bobot penimbangan dengan rumus:
Kadar Fenolik Total = 𝑋 𝑥 𝐹𝑝 𝑥 𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒 𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙 𝐸𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑝𝑒𝑛𝑖𝑚𝑏𝑎𝑛𝑔𝑎𝑛 (𝑔𝑟𝑎𝑚) 𝑥 1000 (𝑚𝑔/𝑔𝑟𝑎𝑚 )
Keterangan:
Fp = Faktor pengenceran (Puspitasari et al., 2017) .
3) Penentuan kadar flavonoid Kadar  flavonoid  total  diperoleh  dari nilai  absorbansi  masing-masing sampel kemudian diplotkan kedalam persamaan kurva baku  kuersetin.  Nilai  yang  didapat  dikalikan volume total sampel dan dibandingkan dengan bobot penimbangan dengan rumus:
Kadar Flavonoid Total = 𝑋 𝑥 𝐹𝑝 𝑥 𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒 𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙 𝐸𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑝𝑒𝑛𝑖𝑚𝑏𝑎𝑛𝑔𝑎𝑛 (𝑔𝑟𝑎𝑚) 𝑥 1000 (𝑚𝑔/𝑔𝑟𝑎𝑚 )
Keterangan:
Fp = Faktor pengenceran  (Puspitasari et al., 2017)

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Determinasi tanaman merupakan tahapan awal yang dilakukan untuk memastikan kebenaran tanaman yang digunakan dalam penelitian, sehingga kesalahan  dalam  pemilihan  tanaman  dapat dihindari.  Hasil  determinasi  menyatakan bahwa bahan yang digunakan dalam penelitian  adalah  benar  tanaman  dewandaru ( Eugenia uniflora L.).
Pemanenan daun dewandaru dilakukan pada  pagi  hari  agar  senyawa  kimia  yang terkandung  pada  tanaman  dalam  jumlah maksimal. Kemudian dilakukan sortasi basah untuk memisahkan daun dari tangkainya  serta memilih daun berwarna hijau, tidak berlubang,  tidak  berpenyakit  dan  sehat.
Pencucian  dilakukan  dengan  air  mengalir untuk memudahkan pembersihan. Pengeringan  tahap  pertama  dengan  cara meniriskan  pada  tampah  besar  yang  di  alasi kertas coklat untuk menghilangkan kandungan airnya.    Cara  ini  mudah  dilakukan  serta ekonomis dan senyawa  metabolit pada bahan tidak  rusak.
Daun dewandaru ditimbang dan diperoleh  berat  daun  dewandaru  segar sebanyak 680 gram. Pengeringan tahap kedua dilakukan  menggunakan  almari  pengering pada suhu 50 o C untuk menghindari kerusakan zat  aktif.  Kemudian  dilakukan  sortasi  kering untuk memisahkan benda-benda asing seperti bagian  tanaman  yang  tidak  diinginkan  atau kotoran  lain  (Depkes  RI,  2000).  Pembuatan serbuk  dengan  mesin  penyerbuk  dengan derajat  kehalusan  60  mesh.  Semakin  halus serbuk  simplisia  maka  proses  ekstraksi semakin efektif dan efisien (Depkes RI, 2000). Serbuk  simplisia  daun  dewandaru  diperoleh berat sebesar 285 gram.
Serbuk  dewandaru  dicek  kadar  airnya dan  hasil  pengukuran  yaitu  7.4  %  dan  telah memenuhi  syarat  mutu  yaitu  < 10%  (Depkes RI, 2000). Kadar air yang tinggi atau lebih dari 10%  dapat  memungkinkan  serbuk  ditumbuhi oleh  jamur  yang  dapat  merusak  dan mempengaruhi kualitas serbuk. Serbuk kemudian  disimpan  di  tempat  yang  tertutup rapat  sehingga  tidak  terjadi  dekomposisi kandungan  senyawa  pada  serbuk  daun dewandaru.
Serbuk  simplisia  sebanyak  285  gram diekstraksi  menggunakan  metode  maserasi karena metode ini dapat menarik zat-zat yang berkhasiat baik yang tahan terhadap pemanasan  maupun  tidak  tahan  pemanasan (Depkes  RI,  2000).    Kelebihan  metode  ini yaitu  cara  pengerjaan  dan  peralatan  yang digunakan  sederhana dan  mudah  diusahakan. Kerugian  cara  maserasi  adalah  pengerjaan lama  dan  penyariannya  kurang  sempurna. Pelarut  yang  digunakan  yaitu  etanol  96% karena merupakan pelarut semi polar sehingga memudahkan  penarikan  senyawa  yang  polar dan  non  polar.  Semakin  besar  nilai  tetapan dielektrikum,  maka  semakin  polar  suatu pelarut.  Nilai  tetapan  dielektrikum  pada pelarut  etanol  yaitu  24.30  (Yulianthi et  al., 2017).  Berat  ekstrak  yang  diperoleh  sebesar 90.2 gram.
Hasil ekstraksi simplisia daun Dewandaru  yang  berupa  ekstrak  kental dilakukan  penentuan  nilai  rendemen  ekstrak. Rendemen  merupakan  rasio  berat  ekstrak yang dihasilkan dengan berat serbuk simplisia yang diekstraksi. Nilai rendemen menunjukkan banyaknya kandungan senyawa aktif  yang  tersari  di  dalam  pelarut.  Semakin besar  nilai  rendemen,  maka  senyawa  aktif yang  tersari  dalam  pelarut  semakin  banyak (Depkes RI, 2000). Pada penelitian didapatkan rendemen ekstrak sebesar 31. 65%.
Uji  organoleptik  dilakukan  dengan tujuan untuk mengetahui kekhususan bentuk, warna,  bau  dan  rasa  dari  sampel  yang  diuji. Hasil  uji  organoleptik  ekstrak  etanol  daun dewandaru terdapat Tabel 2.
Tabel 2. Hasil Uji Organoleptik
Organoleptik Hasil Bentuk Ekstrak kental Bau Khas Warna Hijau Tua Rasa Tidak dilakukan
Identifikasi ekstrak etanol daun dewandaru menggunakan spektrofotometer IR menghasilkan  spektra  yang  disajikan  pada Gambar 1, sedangkan data bilangan
gelombang,  bentuk  pita,  intensitas,  dan penempatan  gugus  terkait  dipaparkan  pada Tabel 3.
Gambar 1. Spektra ekstrak etanol daun dewandaru menggunakan spektrofotometer IR
Tabel 3. Hasil spektra ekstrak etanol daun dewandaru menggunakan spektrofotometer IR
Bilangan Gelombang (cm -1 ) Bentuk pita Intensitas Gugus Fungsi Spektra Pustaka 3274,09 3450-3200 Lebar Kuat -OH terikat (stretching) 2936,46 2960-2870 Lebar Kuat -CH alifatik (-CH3 stretching) 1696,15 1820-1600 Lebar Kuat -C=O karbonil 1611,81 1650-1450 Tajam Kuat -C=C aromatik 1449,44 1500-1400 Tajam Kuat -CH alifatik (-CH2 bending ) 1342,31 1475-1300 Tajam Kuat -CH alifatik (-CH3 bending ) 1021,37 1300-1000 Tajam Kuat -C-O alcohol C-C
Pada  spektrum  inframerah  terjadi serapan  melebar  pada  daerah  bilangan gelombang 3274,09 cm -1 diduga adalah vibrasi ulur gugus OH yang berikatan hidrogen yang berasal  dari  alkohol  yang  diperkuat  dengan adanya  serapan  pada  daerah  1021,37  cm -1 karena vibrasi tekuk dari C-O alcohol. Serapan pada  daerah  2936,46  cm -1 diduga  adalah  ciri khas untuk ikatan C-H alifatik (CH3 dan CH2 stretching ), yang diperkuat dengan munculnya serapan pada daerah 1449,44 cm -1 dan 1342,31 cm -1 yang  sama-sama  memberikan  serapan dengan  bentuk  pita  tajam  yang  merupakan
serapan  CH2 bending dan  CH3 bending. Gugus  dari  ikatan  C=C  aromatik  ditunjukkan dengan  munculnya  serapan  pada  daerah bilangan gelombang 1611,81 cm -1 , serta gugus C=O  karbonil  dengan  serapan  tajam  pada daerah bilangan gelombang 1696,15 cm -1 .
Skrining  fitokimia  pada  penelitian  ini bertujuan  sebagai  uji  pendahuluan  untuk mengetahui  kandungan  metabolit  sekunder yang  terdapat  dalam  ekstrak  etanol  daun dewandaru.  Skrining  fitokimia  terhadap ekstrak  etanol  daun  dewandaru  belum  pernah dilakukan.  Pada  penelitian  ini  dilakukan  uji
metabolit sekunder terhadap senyawa saponin, tanin,  flavonoid,  fenolik,  alkaloid  dan triterpenoid/steroid.
Berdasarkan  hasil  skrining  fitokimia menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  daun dewandaru  dalam  pelarut  etanol  mengandung senyawa  saponin,  tanin,  flavonoid,  dan fenolik.  Pada  penelitian  sebelumnya  belum pernah dilakukan skrinning fitokimia terhadap ekstrak etanol daun dewandaru. Namun sudah dilakukan  skrining  terhadap  ekstrak  daun dewandaru dalam pelarut methanol, n butanol, etil  asetat  mengandung  senyawa  metabolit sekunder  berupa  flavonoid,  tanin  dan  quinon sedangkan  pada  pelarut  n  heksan  dan kloroform  positif    mengandung  flavonoid (Santoso et al., 2020). Etanol yang merupakan pelarut  organik  dapat  menarik  senyawa- senyawa  aktif  yang  semi  hingga polar  seperti alkaloid, tanin, saponin, steroid, glikosida dan flavonoid  (Sa’adah et  al., 2015).  Skrining fitokimia senyawa fenolik ekstrak etanol daun dewandaru  menggunakan  pereaksi  FeCl 3 5%. Adanya gugus fenol ditandai dengan terbentuknya warna hijau atau biru kehitaman setelah  larutan  sampel  ditambahkan  dengan pereaksi FeCl 3 . Terbentuknya warna hijau atau biru  kehitaman  disebabkan  karena  senyawa fenol  yang  terkandung  dalam  sampel  ekstrak membentuk  kompleks  dengan  ion  Fe 3+ (Harbone,  1996).  Skrining  fitokimia  adanya senyawa  flavonoid  pada  ekstrak  etanol  daun dewandaru menggunakan uji shinoda.
Identifikasi  flavonoid  dengan  menggunakan serbuk  mg,  amil  alkohol  dan  HCl  pekat menunjukan hasil positif dengan terbentuknya warna merah jingga pada lapisan amil alkohol (fase  atas) . Jika  terjadi  warna  merah  sampai ungu  menunjukkan  adanya  flavonoid.  Jika terbentuk  warna  kuning  jingga  menunjukkan adanya flavonoid golongan flavon, kalkon dan auron (Depkes RI, 2000).
Uji  aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol daun dewandaru menggunakan metode ABTS. Prinsip dari metode ABTS adalah penstabilan radikal bebas melalui donor proton, pengukuran  aktivitas  antioksidan  dilakukan berdasarkan  penghilangan  warna  ABTS  yang semula  berwarna  biru  hijau  akan  berubah menjadi tidak berwarna apabila tereduksi oleh radikal bebas. Intensitas warna yang terbentuk kemudian
diukur menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang maksimal.  Reaksi senyawa ABTS
dengan  zat  yang  mempunyai  aktivitas antioksidan  dapat dilihat pada Gambar 2.
Gambar  2. Reaksi  ABTS  dan  senyawa antioksidan.
Hasil  penetapan  panjang  gelombang maksimal yang diperoleh yaitu 745.50 nm dan hasil  penetapan operating  time didapatkan pada  menit  ke-30.  Penentuan operating  time dilakukan untuk mengetahui waktu stabil yang dibutuhkan  oleh  suatu  larutan  untuk  bereaksi (Gandjar, 2015).
Senyawa  trolox  digunakan  sebagai kontrol positif. Fungsi trolox pada uji aktivitas antioksidan  metode  ABTS  adalah  sebagai pembanding apakah zat uji bisa menghasilkan efek  yang  sama  dengan  sumber  antioksidan standar  yang  digunakan  sebagai  kontrol positif.  Trolox  merupakan  antioksidan  yang dapat  larut  dalam  air  yang  merupakan  hasil sintesis  derivat  vitamin  E  trolox  banyak digunakan sebagai standar pembanding dalam berbagai  pengujian  antioksidan  (Setiawan et al., 2018).
Aktivitas  penangkalan  radikal  bebas ABTS dinyatakan dengan nilai IC 50 . Nilai IC 50 merupakan  konsentrasi  larutan  atau  sampel yang mampu mereduksi radikal ABTS sebesar 50% (Fitriana et all ., 2015).  Nilai IC 50 dapat ditetapkan  dengan  persamaan  regresi  linier, menggunakan microsoft  excel .  Hasil  yang diperoleh  dari  persamaan  regresi  linier  y  = bx+a. Dimana y = 50 dan x = IC 50 (Santoso et al., 2020).  Semakin  kecil  nilai  IC 50 maka semakin  besar  aktivitas  penangkapan  radikal ABTS, sebaliknya nilai IC 50 yang tinggi maka aktivitas penangkapan radikal ABTS semakin kecil.  Nilai  IC 50 pembanding  trolox  dan ekstrak etanol daun dewandaru yang diperoleh yaitu  sebesar  19.24  ppm      dan    33,92    ppm. Keduanya memiliki aktivitas antioksidan yang sangat  kuat  (<  50  ppm).  Hasil  perbandingan nilai  IC 50 trolox  dan  ekstrak  etanol  daun dewandaru dapat dilihat pada Tabel 4.
Tabel 4. Hasil perbandingan nilai IC 50 trolox dan ekstrak etanol daun dewandaru
Sampel IC 50 (ppm) Kategori Trolox 19,24 Sangat kuat Sampel 33,92 Penetapan  kadar  flavonoid  total  pada penelitian ini menggunakan pereaksi aluminium klorida (AlCl 3 ) dan natrium asetat. Penambahan  aluminium  klorida  bertujuan untuk  membentuk  kompleks  antara  senyawa aluminium klorida dengan gugus keto pada C- 4 dan gugus hidroksi pada atom C-3 atau C-5 dari golongan flavon dan flavonol (Heliawati, 2018). Sedangkan penambahan natrium asetat bertujuan untuk menstabilkan kompleks antara AlCl 3 dengan kuersetin. Pembentukan kompleks kuersetin dengan aluminium klorida dapat dilihat pada Gambar 3.
Gambar  3.  Reaksi  pembentukan  komples kuersetin dan AlCl 3
Hasil  pengukuran  panjang  gelombang dari  larutan  standar  kuersetin  diperoleh panjang  gelombang  maksimal  yaitu  428  nm dan operating  time pada  menit  ke-25.  Pada penelitian ini menggunakan kurva baku untuk menghitung  kadar  flavonoid  total  ekstrak etanol daun dewandaru yaitu kurva baku yang memiliki  nilai  koefisien  korelasi  (r)  yang mendekati  1.  Nilai  koefisien  korelasi  yang mendekati  1  menunjukkan  bahwa  kurva tersebut  linier  sehingga  menunjukan  bahwa hukum  Lambert-Beer  terpenuhi  (Gandjar, 2015).  Berdasarkan  data  kurva  baku  maka diperoleh  persamaan  regresi  linier  y  = 0,04930x  +  0,13373  (x=  konsentrasi  sampel dalam  ppm  dan  y=  absorbansi)  dan  nilai koefisien  korelasi  r  =  0,996.  Hasil  penetapan kadar flavonoid total pada ekstrak etanol daun dewandaru yaitu 35.65 mgQE/g sampel. Hasil penetapan kadar flavonoid total ekstrak etanol daun dewandaru dapat dilihat pada Tabel 5.
Tabel 5. Hasil penetapan kadar flavonoid total ekstrak etanol daun dewandaru
Repli kasi Abs Fp Kadar   Rata-rata Kadar 1 0.486 250 35.73 35.65 2 0.484 250 35.52 3 0.486 250 35.71
Penetapan  kadar  fenolik  total  ekstrak etanol  daun  dewandaru  dilakukan  secara kuantitatif  menggunakan  spektrofotometer UV/Vis. Larutan standar yang digunakan yaitu asam  galat,  asam  galat  merupakan  senyawa fenolik  turunan  asam  hidroksibenzoat  yang tergolong asam fenolik sederhana. Asam galat akan direaksikan dengan reagen folin ciocalteu dan  akan  menghasilkan  warna  kuning  yang menandakan  bahwa  mengandung  senyawa fenolik.  Setelah  itu  ditambahkan  larutan Na 2 CO 3 sebagai pemberi suasana basa karena reagen folin  ciocalteu hanya  dapat  bereaksi pada suasana basa. Selama reaksi berlangsung, gugus hidroksil pada senyawa fenolik bereaksi dengan folin  ciocalteu membentuk  kompleks molibdenum-tungsten  yang  berwarna  biru yang dapat dideteksi dengan spektrofotometer. Semakin  besar  konsentrasi  senyawa  fenolik, semakin banyak fenolat yang akan mereduksi asam heteropoli (fosfomolibdat-fosfotungstat) menghasilkan kompleks molibdenum-tungstat sehingga warna yang dihasilkan semakin pekat (Alfian et al., 2012). Hasil penetapan panjang gelombang  maksimal  asam  galat  diperoleh panjang  gelombang  sebesar  757,5  nm  dan operating  time 105  menit. Berdasarkan  kurva baku diperoleh  dengan nilai koefisien korelasi r  =  0,  999  dan  persamaan  regresi  linier    y  = 0,0212x + 0,10412 adalah konsentrasi sampel dan y adalah absorbansi.
Hasil  penetapan  kadar  fenolik  total ekstrak  etanol  daun  dewandaru  yaitu  327.52 mgGAE/gram  sampel.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  setiap  gram  ekstrak  etanol  daun dewandaru terdapat fenolik yang setara dengan 327.52 mg asam galat. Hasil penetapan kadar fenolik  ekstrak  etanol  daun  dewandaru  dapat dilihat pada Tabel 6.
Tabel 6. Hasil penetapan kadar fenolik
Repl ikasi Abs Fp Kadar (mgGAE/ g sampel) Rata-rata Kadar (mgGAE/ g sampel) 1 0,456 100 331,96 327,52 2 0,446 100 322,53 3 0,452 100 328,06

## KESIMPULAN
Ekstrak etanol daun dewandaru ( Eugenia  uniflora L.)  memiliki  aktivitas antioksidan  dengan  nilai  IC 50 sebesar  33,92 ppm  termasuk  kategori  sangat  kuatyang ditetapkan  dengan  metode  ABTS  serta mengandung  senyawa  fenolik  dan  flavonoid dengan  kadar  masing  masing  yaitu  327,52 mgGAE/g dan 35,65 mgQE/g.

## DAFTAR PUSTAKA
Alfian,  R.,  &  Susanti,  H.  2012.    Penetapan Kadar  Fenolik  Total  Ekstrak  Metanol Kelopak Bunga Rosella Merah (Hibiscus sabdariffa L. ) dengan Variasi Tempat Tumbuh Secara Spektrofotometri. Jurnal Ilmiah Kefarmasian , 2(1): 73-80.
Ardiyansah,  A.  2021  Aktivitas  Antioksidan Ekstrak  Etanol  Daun  Eceng  Gondok ( Eichhornia  crassipes )  dengan  Metode ABTS  Serta  Penetapan  Kadar  Fenolik Total  dan  Flavonoid  Total.  Universitas Wahid Hasyim, Semarang.
Depkes  RI.    2000.  Parameter  Standar  Umum Ekstrak  Tumbuhan  Obat.  Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan, Jakarta.
Djide, M.N., Mubarak, F. & Natasya, R.  2022. Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak Etanol  Rimpang  Bangle  ( Zingiber cassumunar Roxb.)  dengan  Metode ABTS [2,2 azinobis (3- ethylbenzothiazoline)-6-sulfonic  acid].
Jurnal  Inovasi  Pendidikan  dan  Sains , 3(1): 28–32.
Fidelis  E.M.,  Savall,  A.S.P.,  Pereira,  F.O., Quines,  C.B.,  &  Ávila,  D.S.    2022. Pitanga  ( Eugenia  uniflora L. )  as  a source  of  bioactive  compounds  for health  benefits:  A  Review. Arabian Journal of Chemistry , 15(4): 1-22.
Fitriana,  W.D.,  Fatmawati,  S.,  &  Ersam,  T.
2015. Uji Aktivitas Antioksidan terhadap DPPH dan ABTS dari Fraksi- fraksi. Simposium Nasional Inovasi dan Pembelajaran Sains, Bandung , 8-9 Juni 2015,  657-660.
Gandjar, I G.,  &  R.A.   2015.  Kimia Farmasi Analisis. Pelajar, Yogyakarta.
Harborne,  J.B.  1996.  Metode  Fitokimia
Penentuan  Cara  Modern  Menganalisis Tumbuhan.  ITB Press, Bandung.
Lee, J., Koo, N., & Min, D.B.  2004.  Reactive
Oxygen Species, Aging, and Antioxidative Nutraceuticals. Comprehensive Reviews in Food Science  and  Food  Safety , 3(1): 21–33. https://doi.org/10.1111/j.1541- 4337.2004.tb00058.x.
Molyneux,  P.    2004.    The  Use  of  The  Stable Free  Radical  Diphenylpicryl-Hydrazyl (DPPH)  for  Estimating  Anti-Oxidant Activity. Songklanakarin  Journal  of Science  and  Technology , 26(2): 211– 219.
Poli,  A.R.,  Katja,  D.G.,  &  Aritonang,  H.F. 2022.  Potensi Antioksidan Ekstrak dari Kulit  Biji  Matoa  ( Pometia  pinnata J.R &  G.  Forst ). Chemistry  Progress , 15(1): 25–30.
Puspitasari,  A.D.,  Anwar,  F.F.,  &  Faizah, N.G.A.  2019.    Aktivitas  Antioksidan, Penetapan  Kadar  Fenolik  Total  dan Flavonoid  Total  Ekstrak  Etanol,  Etil Asetat dan n-Heksan Daun Petai ( Parkia speciosa Hassk. ). Jurnal Ilmiah Teknosains ,  5(1):  1–8.      DOI:
10.26877/jitek.v5i1.3490.
Puspitasari,  A.D.,  &  Wulandari,  R.L.    2017.
Aktivitas  Antioksidan  dan  Penetapan Kadar  Flavonoid  Total  Ekstrak  Etil Asetat Daun Kersen ( Muntingia calabura ). Jurnal Pharmascience , 4(2): 167–175. https://doi.org/10.20527/jps.v4i2.5770. Sa’adah,  H.,  &  Nurhasnawati,  H.  2015.
Perbandingan  pelarut  etanol  dan  air pada  pembuatan  ekstrak  umbi  bawang tiwai  ( Eleutherine  americana Merr ) menggunakan metode maserasi. Jurnal Ilmiah Manuntung , 1(2): 141–153.
Safnowandi.    2022.    Pemanfaatan  Vitamin  C Alami sebagai Antioksidan pada Tubuh Manusia. Biocaster:  Jurnal  Kajian Biologi. , 2(1): 6-13.
Santoso, P., Dewi, N.L.K.A.A. & Adrianta, A. 2020.    Antioxidant  capacity  profile  of dewandaru leaf ( extract eugenia
uniflora L. ):  part  of  usadha  Bali.
International  journal  of  life  sciences , 4(1): 87–98. DOI: 10.29332/ijls.v4n1.407. Schumacher, N.S.G., Colomeu, T.C., Figueiredo,  D.D.,  Carvalho,  V.D.C., Cazarin,  C.B.B.,  Prado,  M.A.,  Meletti, L.M.M.,    &  Z.R.D.L.    2015.  Anti- Inflammatory  Properties  of  Aqueous Extract  on  Diabetes  Expression  in  an Experimental  Model  of  Spontaneous Type 1 Diabetes (NOD Mice).
Antioxidant Journal MDPI , 4: 662–680. Setiawan,  F.,  Yunita,  O.,  &  Kurniawan,  A. 2018.  Uji aktivitas antioksidan ekstrak etanol  kayu  secang  dan  FRAP. Media Pharmaceutica Indonesiana , 2(2): 82– 89. Sri Yulianthi, N.N., Suhendra, L., & Wrasiati,
L.P.  2017.    Pengaruh  Perbandingan Jenis  Pelarut  Terhadap  Kandungan
Senyawa  Total  Fenol  ,  α  -Tokoferol  ,
dan Total Karotenoid Ekstrak Sargassum polycystum. Jurnal Rekayasa dan Manajemen Agroindustri , 5(4): 1–10. Suhendi, A. Sjahid, L.R., & Hanwar, D.  2011. Isolasi  dan  Identifikasi  Flavonoid  dari Daun Dewandaru ( Eugenia uniflora L .).
Jurnal  Farmasi  Indonesia Pharmacon,
12(2): 73–81. Utami,  W.,  Da’i,  M.,  Rahayu,  V.,  Sari,  P.K., Kusumanegara,  D.W.,   &  Rohayati,  A. 2018.  Aktivitas  Antiradikal  Berbagai Fraksi  dari  Ekstrak  Etanol  dan  Ekstrak Etil  Asetat  Daun Eugenia  uniflora L. TM  Conference  Series, 1(2018): 128-
133.
Yuslianti,  E.R.  2018.    Pengantar  Radikal Bebas  dan  Antioksidan.  Deepublish, Yogyakarta.