PHYTOCHEMICAL AND TOXICITY ASSAY EXTRACT CHLOROFORM OF STEM BARK OF MELOCHIA UMBELLATA (HOUTT.) STAPF VAR. VISENIA BY USING BHRINE SHRIMP LETHALITY TEST METHOD
Uji Fitokimia dan Toksisitas Ekstrak Kloroform Kulit Batang Melochia umbellata (Houtt.) Stapf var. Visenia dengan Metode Bhrine Shrimp Lethality Test (BSLT)
Nur Aeni HM * , Nunuk Hariani Soekamto, Firdaus
Department of Chemistry, Faculty of Science, University of Hasanuddin Jl. Perintis Kemerdekaan 90245, Makassar-Indonesia
*Corresponding author, email: hmnuraeni@gmail.com
Received: Dec. 2016 Published: Jan. 2017

## ABSTRACT
Paliasa  plants Melochia  umbellata (Houtt.)  Stapf  var.  Visenia  is  classified  into  species M.umbellata (Houtt.) Stapf which was potent to heal various of illness. The aim of this research to know secondary metabolites and its toxicity from extract chloroform stem bark of M. umbellata (Houtt.) Stapf var. Visenia. The step in this research were:  maceration  to  obtain  extract  chloroform,  phitotochemical  assay  to  identify  the  group  of  secondary metabolites,  and  toxicity  assay  by  using Bhrine  Shrimp  Lethality  Test method.  It  was  obtained  46  g  of  green concentrated exctract of chloroform. The result of phytochemical assay show that the extract contain steroid and alkaloid groups. The crude extract chloroform is toxic against Artemia salina with LC 50 value is 53,57 µg/ml.
Keywords : Melochia umbellata, BSLT , steroid, alkaloid, Artemia salina .

## PENDAHULUAN
Berawal dari penggunaan bahan alam secara tradisional yang dipercaya dapat menyembuhkan berbagai  macam  penyakit  sehingga  menjadi kebiasaan  masyarakat    memanfaatkannya  untuk pengobatan. Sampai saat ini, eksplorasi tumbuhan untuk  pengobatan  masih terus dilakukan  (Rahmaniar,  1996).  Salah  satu tumbuhan  yang  dimanfaatkan  secara  etnobotani yaitu tumbuhan dari famili Malvaceae . Malvaceae adalah  suatu  famili  tumbuhan tropis  Indonesia    yang  cukup  besar  dan  banyak digunakan  oleh  masyarakat.  Beberapa  spesies dari  tumbuhan  ini  telah  diteliti  dan  diketahui mengandung  banyak  senyawa  kimia  dari berbagai  golongan,  antara  lain  minyak  atsiri, fenilpropanoid, flavonoid, alkaloid, saponin,  dan antrakuinon (Lalo dan Tayeb, 2003).
Paliasa  adalah  salah  satu  tumbuhan  yang termasuk  dalam  famili Malvaceae .  Tumbuhan paliasa  terbagi  menjadi  dua  spesies.  Kedua spesies  yang  termasuk  dalam  famili Malvaceae yaitu K.  hospita Linn  dan M.  umbellata (Houtt) Stapf. Spesies M. umbellata (Houtt.) Stapf terdiri atas dua varitas yaitu M. umbellata (Houtt.) Stapf
var.  Degrabrata  K  dan M.  umbellata (Houtt.) Stapf var. Visenia (Nuvita, 2006).
Menurut  Erwin,  dkk.,  (2014)  ekstrak metanol  dari  kayu  batang M.  umbellata (Houtt.) Stapf  var.  Degrabrata  K  menghasilkan  senyawa dari  golongan  alkaloid  yang  bersifat  toksik terhadap A.salina dengan nilai LC 50 sebesar 1,80 µg/ml.  Ekstrak  metanol  pada  bagian  jaringan kulit  akar,  kayu  akar,  kulit  batang,  kayu  batang, dan  daun  dari M.  umbellata (Houtt)  stapf var.degrabrata  memperlihatkan  LC 50 masing- masing  sebagai  berikut:  66,22;  37,343;  30,27; 1,80 dan 84,26 µL/mL (Usman dkk., 2015).
Berdasarkan  uraian  tersebut,  dilakukan penelitian  terhadap  tumbuhan  visenia. M. umbellata (Houtt) Stapf var. Visenia adalah salah satu  varitas  dari M.  umbellata (Houtt)  Stapf. Penelitian ini tentang uji fitokimia dan toksisitas ekstrak kloroform kulit batang melochia umbellata (houtt.)  stapf  var.  visenia  dengan metode Bhrine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT). Uji toksisitas ini dilakukan terhadap larva udang A.  salina (Mayer  dkk.,  1982).  Metode  ini digunakan  untuk skrining awal senyawa bioaktif bahan alam karena menunjukkan adanya kolerasi dengan  metode  sitotoksik  in vitro lainnya (Carballo dkk., 2002).

## METODOLOGI
Alat dan Bahan Penelitian Alat-alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  adalah  corong,  corong Buchner , rotary evaporator ,  timbangan  digital,  mikropipet, mikroplate, wadah penetesan, alat KLT (chambers,  pipa  kapiler,  pensil, cutter ,  dan mistar), lampu UV.
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  5  kg  serbuk  kulit  batang  tumbuhan M. umbellata (Houtt)  Stapf  var.  Visenia,  beberapa pelarut organik seperti metanol teknis, n -heksana teknis,  kloroform  p.a,  etil  asetat  teknis,  aseton teknis, pereaksi Liebermann-Buchard, Dragendorff,  Wagner,  besi  (III)  klorida,  Cerium sulfat  2%,  plat  KLT  (Merk  Kieselgel  60  F254 0,25  mm),  NaCl  laut  (Sigma,  no.  katalog  S- 9883), DMSO (Merck, no. katalog 802912), telur udang A. salina Leach.

## Prosedur Kerja
Preparasi Sampel Kulit  Batang M.  umbellata (Houtt.)  Stapf var.  Visenia  diperoleh  dari  desa  Baring, Kecamatan Sigeri, kabupaten Pangkep, Sulawesi Selatan.  Sampel  dipotong  kecil-kecil  kemudian diangin-anginkan pada tempat yang tidak terkena sinar  matahari.  Sampel  yang  kering  digiling hingga halus.

## Ekstraksi
Serbuk  kering  Kulit  Batang M.  umbellata (Houtt.)  Stapf  var.  Visenia  sebanyak  5  Kg dimaserasi  dengan n -heksana selama 1 x 24 jam beberapa kali. Kumpulan maserat yang diperoleh selanjutnya dipekatkan, sedangkan residu dimaserasi lebih lanjut dengan pelarut kloroform sehingga  diperoleh  ekstrak  kloroform.  Ekstrak kasar selanjutnya dilakukan uji fitokimia.

## Uji Toksisitas
Ekstrak  kloroform  yang  diperoleh  diuji aktivitasnya  terhadap  larva  udang A.  salina dengan metode BSLT.
a. Penyemaian Benur Udang A. salina Sebanyak  15  mg  telur  udang A.salina dimasukkan ke dalam wadah yang berisi air laut dan  diaerasi  dibawah  cahaya  lampu  pijar  40-60
watt.  Lampu  dinyalakan  selama  48  jam  hingga telur A.salina menetas menjadi larva.

## b. Penyiapan sampel
Sebanyak 1,0 mg  sampel dilarutkan dengan 100 µL DMSO kemudian diencerkan dengan 150 µL  aquades  sehingga  volume  total  menjadi  250 µL.  Pengenceran  dan  pengukuran  dilakukan triplo dalam mikroplate dengan deret konsentrasi 500 µg/mL; 125 µg/mL; 31,25 µg/mL; dan 7,81 µg/mL.

## c. Pelaksanaan Uji Toksisitas
Larva A.salina sebanyak  7-15  ekor  yang sudah  menetas  dimasukkan    kedalam  lubang baris  mikroplate  dengan  konsentrasi  yang berbeda  dan  diinkubasikan  selama  24  jam. Setelah  24  jam,  jumlah A.salina yang  mati  dan hidup pada mikroplate dihitung untuk memperoleh data LC 50 .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Tumbuhan M. umbellata (Houtt.) Stapf var. Visenia    merupakan  tumbuhan  yang  memiliki bentuk  daun  berlekuk,  daun  berwarna  hijau  tua, berbulu  halus  rapat,  dan  warna  bunga  merah kecubung.  Tumbuhan  Visenia  adalah  salah  satu varitas  dari M.  umbellata (Houtt)  Stapf  yang termasuk  famili  Malvaceae.  Tumbuhan  ini memiliki  nama  daerah  yang  berbeda  beda  yakni masyarakat  Sulawesi  Selatan  dengan  sebutan daun  Pali.  Umumnya  digunakan  sebagai  obat penyakit dalam, hipertensi, diabetes dan penyakit liver.
Berdasarkan  hasil  pengujian  beberapa perekasi,  maka  diperoleh  beberapa  pengujian yang positif. Ekstrak kental diuji dengan pereaksi Lieberman-Burchard  menunjukkan  hasil  yang positif  yang  memberikan  hasil  berwarna  hijau. Hal  ini  menunjukkan  bahwa  dalam  ekstrak kental  ini  terdapat  senyawa  golongan  steroid yang  memberikan  perubahan  menjadi  hijau, pereaksi Wagner untuk menguji adanya senyawa golongan alkaloid yang memberikan hasil positif dengan  terbentuknya  endapan  coklat,  dan pereaksi Wagner untuk mengidentifikasi alkaloid juga memberikan hasil positif dengan terbentuknya endapan putih. Sedangkan pereaksi FeCl 3 1% menunjukkan hasil yang negatif karena tidak terjadinya perubahan warna pada sampel.
Gambar 1. Uji Fitokimia Ekstrak Kloroform; (a). Liebermann-Burchard, (b). FeCl 3 ,
(c). Wagner, (d). Meyer.
Tabel 1. Hasil Uji Fitokimia Ekstrak Klorofom Kulit Batang M. umbellata (Houtt.) Stapf var. Visenia
Berdasarkan pengujian yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa ekstrak kloroform kulit batang M.  umbellata (Houtt.)  Stapf  var.  Visenia positif  mengandung  beberapa  jenis  senyawa metabolit sekunder diantaranya, golongan steroid dan alkaloid yang dapat dilihat dalam Tabel 1.
Tabel 2. Hasil Uji Toksisitas Ekstrak Klorofom Kulit Batang M. umbellata (Houtt.) Stapf var. Visenia
Ekstrak  kloroform  yang  diuji  terhadap A. salina dilakukan  dengan  tiga  kali  pengulangan pada  masing-masing  konsentrasi  yang  berbeda. Hasil  pengujian  menunjukkan    efek  kematian sebesar 100 % pada konsentrasi 500 µg/mL, 91% pada  konsentrasi  250  µg/mL,  81%,  dan  59% pada  konsentrasi  125  µg/mL  dan  62,5  µg/mL,
serta efek kematian sebesar 32% pada konsentrasi 31,25 µg/mL. Ekstrak kloroform selanjutnya diuji
toksisitas dengan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT).  Metode  ini  digunakan  sebagai skrining  awal  terhadap  senyawa  bioaktif  yang terdapat  dalam  ekstrak  tumbuhan.  Pengujian  ini dilakukan  terhadap  larva A.  salina. Hasil  uji toksisitas  ekstrak  klorofrom  kulit  batang M. umbellata (Houtt.)  Stapf  var.  Visenia  dapat dilihat pada tabel 2.
Hasil  analisa  probit  menunjukkan  ekstrak kloroform  bersifat  toksik  dengan  nilai  LC 50 sebesar  53,57  µg/mL.  Menurut  Anderson,  dkk., (1990) ekstrak atau senyawa yang tergolong aktif (toksik)  terbagi  menjadi  dua  kategori,  yaitu toksisitas  tinggi  dengan  nilai  LC 50 <  100  µg/mL dan  toksisitas  rendah  dengan  nilai  LC 50 >100 µg/mL. Hal ini membuktikan adanya kandungan metabolit  sekunder  pada  ekstrak  kloroform  kulit batang M.  umbellata (Houtt.)  Stapf  var.  Visenia yang  aktif terhadap A. salina .

## KESIMPULAN
Ekstrak kloroform kulit batang M. umbellata (Houtt.) Stapf var. Visenia
mengandung  senyawa  steroid  dan  alkaloid  serta bersifat  toksik  terhadap A.  salina dengan  nilai LC 50 sebesar 53,57 µg/mL.

## DAFTAR PUSTAKA
Anderson,  J.E.,  Goetz,  C.M.,  McLaughlin,  J.L., 1990, A Blind Comparison of Simple Bench- top  Biossays  and  Human  Tumour  Cell Cytotoxicities as Antitumor Prescreen,
Phytochemical Analysis 6, 107-111.
Carballo,  J.L.,  Hernandes-Inda,  Z.L.,  Perez,  P.,
Garcia-Gravalos,  M.D.,  2002,  A  Comparison Between Two Brine Shrimp Assays to Detect in  Vitro  Cytotoxicity  in  Marine  Natural Products, BMC Biotech-nology , 2(17), 1-5.
Erwin, Alfian, N., Soekamto, N.H., Altena. I.V., and  Syah,  Y.N.,  2014,  Waltherione  C  and Cleomiscosin  From Melochia umbellata  var Degrabrata  K.  ( Malvaceae ),  Biosynhetic  and Chemotaxonomic,  Significance, Biochemical Systematic and Ecology, 55, 358-361.
Lalo  dan  Tayeb,  2003.,  Efek  Ekstrak  Methanol Paliasa  Jenis Kleinhovia  hospita , Melochia umbellata var.  Degrabrata  dan Melochia umbellata  var.  Visenia terhadap  Fungsi  Hati
a b c d
Nur Aeni HM. , dkk / Ind. J. Chem. Res. , 2017, 4(2), 382-385
Mencit  yang  Diinduksi  dengan  Karbon Tetraklorida, Majalah Farmasi dan Framakologi , 8(2), 25-32.
Mayer,  B.N.,  Ferrigny,  N.R.,  and  Putnam,  J.L.,
1982,  Brine  Shrimp,  A  Covennient  Generan Bioassay  for  Actpive  Plant  Constituent,
Journal  of  Medical  Plant  Research, 45,  31- 34. Nuvita,  T.,  2006, Uji  Aktivitas  Antioksidan Ekstrak  Daun  Paliasa  Terhadap  Radikal Bebas  Penyebab  Penyakit  Degeneratif ,  Tesis tidak diterbitkan, Program Studi Biomedik/farmakologi PPS UNHAS, Makassar, Rahmaniar,  1996. Produk    Alam  Laut  Sebagai Lead Compound untuk Farmasi dan Pertanian .  Makalah  pada  Seminar  Perspektif Baru  dalam  Drug  Discovery.  Ujung  Pandang 26 Oktober 1996.
Usman, Soekamto, N.H., Usman, H., Ahmad, A., 2015,  Senyawa  Turunan  Oleanan  dan  Kulit Batang Melochia  umbellata (Houut)  Stapf var.  Degrabrata  K.  dan  Bioaktivitasnya. Seminar  Nasional  Kimia  Dan  Pendidikan Kimia VII , Surakarta 18 April.