Aktivitas Sitotoksik Ekstrak Etanol, Fraksi Etanol-Air, Etil Asetat serta N-Heksana Buah Pare ( Momordica Charantia ) pada Sel MCF-7 secara In-Vitro
Cytotoxic Activity of Ethanol, Ethanol-Water, Ethyl Acetate, and N- Hexane Extracts of Momordica Charantia Against MCF-7 Cells In- Vitro
Adhe Retnantya Pamungkas, Peni Indrayudha* Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiyah Surakarta, Jl A Yani Tromol Pos I, Pabelan, Kartasura, Sukoharjo 57162 *E-mail: peni.indrayudha@ums.ac.id
Received: 16 Oktober 2019; Accepted: 26 Desember 2019; Published: 27 Desember 2019

## Abstrak
Buah pare merupakan salah satu buah mempunyai khasiat salah satunya sebagai antikanker yang aktif pada sel kanker payudara MCF-7. Penelitian ini bertujuan untuk membandingkan potensi aktivitas sitotoksik antara ekstrak etanol buah pare dengan hasil fraksi etanol, etil asetat serta n- heksana terhadap sel kanker payudara MCF-7 serta untuk mengetahui golongan senyawa yang terkandung dalam masing-masing sampel. Serbuk buah  pare  diekstraksi  dengan  metode  maserasi  menggunakan  pelarut  etanol  80%  kemudian  dilanjutkan dengan fraksinasi dengan metode partisi cair- cair menggunakan pelarut n-heksana, etil asetat dan etanol 96%- air.  Hasil  ekstrak dan  fraksi diuji  sitotoksik dengan  metode  MTT  assay.  Hasil  uji  sitotoksik  menunjukkan bahwa bahwa ekstrak etanol 80% buah pare memiliki aktivitas sitotoksik yang tidak poten. Fraksi etil asetat dengan  konsentrasi  tertinggi  16  µg/mL  memiliki  daya  hambat  yang  paling  tinggi  yaitu  sebesar  43,87% populasi  sel  MCF-7.  Ekstrak  dan  fraksi  diuji  skrining  fitokimia  dengan  metode  Kromatografi  Lapis  Tipis (KLT). Hasil deteksi menunjukkan fraksi n-heksana terdapat lebih banyak golongan senyawa daripada ekstrak etanol, fraksi etanol-air dan fraksi etil asetat.
Kata Kunci : MTT assay, MCF-7, Momordica charantia

## Abstract
Bitter melon is one of fruit that have pharmacological effects such as an anticancer which potentially active on breast cancer cell MCF-7. The aim of this study was to compare the potential cytotoxic activity between ethanol extract of pare and the results of ethanol, ethyl acetate and n-hexane fraction on MCF-7 breast cancer cells and to determine the class of compounds contained in each sample. Pare’s powder was extracted with maceration method in 80% ethanol solvent and then continue to fractionated in 96% ethanol, ethyl acetate and  hexane  solvent.  Extract  and  fractions  were  continue  to  cytotoxic  assay  using  the  MTT  assay  method. Cytotoxic  test  results  showed  that  the  ethanolic  extract  had  no  potential  cytotoxic  activity.  Ethyl  acetate fraction with the highest concentration 16 µg/mL has the highest potential inhibition 43,87% on MCF-7 cells population. Extract and fractions than continue to phytochemical screening with Thin Layer Chromatography (TLC) method. TLC detection showed that n-hexane fraction contained more compound groups than ethanolic extract, ethanolic-water fraction and ethyl acetate fraction.
Keywords : MTT assay, MCF-7, Momordica charantia

## PENDAHULUAN
Negara  berkembang  seperti  Indonesia memiliki  persentase  kematian  akibat  kanker yang  cukup  tinggi  yaitu  sekitar  70%. Tingginya  persentase  tersebut  dikarenakan rendahnya  layanan  pengobatan  bagi  pasien kanker.  Layanan  pengobatan  kanker  yang
tersedia di Indonesia hanya sekitar 30%. Fakta ini  didukung  dengan  kecilnya  ketersediaan obat  kanker  di  masyarakat  hanya  sekitar  45 jenis pada tahun 2013 (Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 2013 dan Sudoyo, 2017). Laporan  pengeluaran  biaya  pada  bulan  juni tahun 2017 menunjukkan bahwa BPJS (Badan
Penyelenggara Jaminan
Sosial) telah mengeluarkan  biaya  pengobatan  kanker sebanyak  6,3  triliun  (Kementrian  Kesehatan Republik Indonesia, 2018). Tahun 2018 BPJS telah  memutuskan  untuk  tidak  membiayai terapi bagi pasien kanker yang menggunakan obat Traztuzumab, namun tetap menanggung penuh terapi kanker yang menggunakan obat sesuai dengan yang tercantum dalam formularium  (Arnani,  2018).  Fakta  ini  akan semakin  membebani  pasien,  terutama  pasien kanker  dari  kalangan  masyarakat  kurang mampu  yang  menggunakan  obat  tersebut sebagai  terapi  kanker.  Melihat  kondisi tersebut, saat ini sangat diperlukan pengembangan  suatu  obat  kanker  baru  yang lebih terjangkau sehingga mampu meringankan  beban  masyarakat  meskipun secara  tidak  langsung  masih  diperlukan aplikasi,  contohnya  dengan  memanfaatkan buah pare.
Buah  pare  merupakan  salah  satu  buah yang  memiliki  banyak  manfaat  secara farmakologis (Thomasset et al. , 2007 dan Yin et  al. ,  2008).  Salah  satu  khasiatnya  adalah anti-karsinogenik (Huang et  al. , 2008). Buah ini  mengandung  berbagai  komponen bioaktif yang kaya akan aktivitas farmakologis (Jia et al. ,  2017).  Hasil  penelitian  menunjukkan bahwa aktivitas sitotoksik ekstrak etanol 50% buah pare mampu menghambat pertumbuhan sel kanker payudara MCF-7 dengan IC 50 0,77 μg/mL  (Vishwanath et  al. ,  2015).  Penelitian lain tentang fraksinasi dari ekstrak buah pare kini  telah  dikembangkan,  fraksi crude flavonoid ekstrak  etanol  buah  pare  memiliki aktivitas  sitotoksik  yang  signifikan  dengan LC 50 12,38  μg/mL  terhadap  sel  kanker pankreas  MiaPaCa2  (Barua et  al. ,  2014). Konstituen  bioaktif  yang  terkandung  seperti cucurbitane type terpenoid , glikosida triterpen,  serta  beberapa  komponen  hasil isolasi  seperti  kuguacin  J,  karaviloside  XI, kuguaglikosida C, momordicosid Q-U, charantin,  α-  momorcharin,  dan  MAP30 (Dandawate et  al. ,  2017).  Buah  pare  juga mengandung senyawa yang memiliki aktivitas sitotoksik  seperti  taikuguasin  C,  taikuguasin
D, charantagenin D, goyaglikosid, charantagenin E, momordikosid K, asam 3,7- diokso-23,24,25,26,27-pentanorcucurbit-5- en-22-oat,25,26,27-trinorcucurbit-5-ene- 3,7,23-trione,  cucurbitacin  B  dan stigmasta- 7,25(27)-dien-3β-ol. Taikugausin  C  serta taikugausin  D  yang  diperoleh  dari  ekstrak etanol buah pare memiliki aktivitas sitotoksik terhadap sel kanker payudara MCF-7 masing- masing  memiliki  ED 50 42,60 µM   dan 42,66 µM (Liaw et al. , 2015). Charantagenin D dan goyaglikosid  diperoleh  dari  ekstrak  etanol buah  pare  memiliki  aktivitas  sitotoksik  yang lebih  poten  terhadap sel  kanker  glioblastoma U87 daripada charantagenin E, momordikosid K dan stigmasta-7,25(27)-dien-3β-ol , charantagenin  D  memiliki  IC 50 sebesar  1,08 µmol/L dan goyaglikosid sebesar 0,19 µmol/L (Wang et  al. ,  2012) . Asam  3,7-diokso- 23,24,25,26,27-pentanorcucurbit-5-en-22-oat dan 25,26,27-trinorcucurbit-5-ene-3,7,23- trione  yang  diperoleh  dari  ekstrak  metanol buah  pare  memiliki  aktivitas  sitotoksik terhadap  sel  kanker  hati  HepG2  dengan  IC 50 >100 µM  (Hen et  al. ,  2010). Cucurbitacin  B diperoleh  dari  ekstrak  etanol  buah  pare  dan memiliki  aktivitas  sitotoksik  terhadap  sel kanker  pankreas  HPDE  dan  MiaPaCa2 dengan GI 50 masing- masing 939,1 μg/mL dan 516,5 μg/mL (Richmond et al. , 2017).
Buah  pare  telah  terbukti  secara  ilmiah mengandung  berbagai  macam  isolat  yang memiliki  khasiat  berbeda-beda.  Isolat  yang berhasil  diperoleh  dari  ekstrak  etanol  buah pare  seperti  taikuguasin  C  terbukti  memiliki aktivitas  sitotoksik  yang  aktif  terhadap  sel MCF-7.  Melihat  potensi  aktivitas  sitotoksik ekstrak  etanol  buah  pare  yang  menjanjikan, namun  belum  terdapat  data  yang  memuat aktivitas sitotoksik hasil fraksinasinya seperti fraksi  etanol,  etil  asetat  serta  n-heksana. Sehingga  sangat  diperlukan  suatu  penelitian untuk mengetahui potensi aktivitasnya terutama  pada  sel  kanker  payudara  MCF-7. Hal  ini  di  karenakan  karakteristik  dari  sel MCF-7  yang  kurang  agresif,  tidak  invasif, memiliki potensi metastatis yang rendah serta merupakan  salah  satu  sel  yang  paling  sering
dikembangkan  dalam  sebuah  penelitian (Comşa et al. , 2015).

## METODE PENELITIAN Bahan
Bahan utama yang digunakan pada tahap preparasi  sampel  adalah  buah  pare  yang kulitnya berwarna hijau muda yang diperoleh dari  Pasar  Boloh,  Toroh,  Grobogan,  Jawa Tengah,  selanjutnya  dicuci  dengan  10  L akuades.  Ekstraksi  membutuhkan  bahan seperti  serbuk  pare  yang  telah  halus,  etanol 96% serta akuades. Fraksinasi membutuhkan bahan seperti ekstrak etanol buah pare, etanol 96%, etil asetat, n-heksana serta akuades. Uji sitotoksik  membutuhkan  bahan  seperti  sel kanker payudara MCF-7 koleksi Laboratorium  Kultur  Sel  Mamalia  Fakultas Farmasi  UMS,  SDS  (sodium  dodesil  sulfat), PBS (phosphate buffer saline), akuades, media kultur DMEM, tripsin-EDTA (tripsin 0,025%), DMSO serta larutan MTT. Skrining fitokimia membutuhkan bahan berupa ekstrak etanol,  fraksi  etanol-air,  fraksi  etil  asetat, fraksi n-heksana, fase gerak (etil asetat dan n- heksana), reagen semprot (sitroborat, Liebermann  Burchard,  anisaldehid-H 2 SO 4 , Dragendorff, dan  FeCl 3 ).

## Preparasi sampel
Buah  pare  ditimbang  lalu  dicuci  dengan akuades  sebanyak  10  L  hingga  bersih  dari pengotor  seperti  debu  dan  tanah.  Buah  pare kemudian  dibelah  dan  dihilangkan  bijinya. Buah  pare  selanjutnya  dipotong  menjadi berbentuk  dadu  dengan  ukuran  ±1x1  cm dengan  tujuan  untuk  mempercepat  dan mempermudah proses pengeringan, selanjutnya  dikeringkan  dalam  oven  dengan suhu 40°C selama 6 jam. Potongan buah pare yang  telah  kering  selanjutnya  dibuat  serbuk dengan  menggunakan  blender.  Serbuk  buah pare disimpan dalam plastik kedap udara lalu
diletakkan  pada  kulkas  dengan  suhu  4°C (Budrat and Shotipruk, 2008).

## Ekstraksi
Ekstraksi  dilakukan  dengan  metode maserasi,  menggunakan  pelarut  etanol  80% dengan  perbandingan  pelarut  1:4  dalam volume  2  L.  Proses  ekstraksi  dan  remaserasi masing-masing  berlangsung  selama  4  hari. Evaporasi  dilakukan  dengan  menggunakan rotary  evaporator  pada  suhu  80°C  sampai pelarutnya  menguap  sempurna,  penguapan yang  sempurna  ditandai  dengan  berhentinya tetesan pelarut yang tertampung dalam rotary evaporator.  Penguapan  dilanjutkan  di  atas waterbath selama 9-14 hari untuk mendapatkan  ekstrak  yang  lebih  kental. Kekentalan  tersebut  dapat  dilihat  dari viskositas  ekstrak  saat  cawan  porselin  yang berisi  ekstrak  dibalik  dan  ekstrak  tidak tumpah/mengalir.

## Fraksinasi
Fraksinasi dilakukan
dengan menggunakan metode partisi cair-cair. Sebanyak 10 g ekstrak etanol dilarutkan dalam 25 mL akuades ditambah etanol 96% 10 mL pada  cawan  porselin  di  atas  waterbath. Larutan  ekstrak  dimasukkan  dalam  corong pisah lalu ditambahkan etanol 96% sebanyak 25 mL dan 25 mL akuades sehingga volume akhir  larutan  ekstrak  adalah  85  mL. Pemisahan  yang  pertama  kali  dilakukan dengan  pelarut  n-heksana  sebanyak  50  mL, kemudian  digojok  dan  ditampung  dalam Erlenmeyer  250  mL.  Penambahan  n-heksana dilakukan  sampai  4  kali.  Fraksinasi  yang kedua  menggunakan  pelarut  etil  asetat.  Sisa larutan  ekstrak  etanol  yang  sudah  selesai digojog  dengan  pelarut  n-heksana  kemudian ditambahkan  50  mL  etil  asetat,  dan  diulangi sampai  4  kali.  Etanol  dan  etil  asetat  saat dicampurkan  tidak  menunjukkan  adanya pemisahan,  agar  pemisahan  terlihat  jelas,
ditambahkan 50 mL akuades lalu digojog dan ditampung  dalam  Erlenmeyer  yang  berbeda. Evaporasi  dilakukan  menggunakan  rotary evaporator  pada  suhu  60-80°C.  Fraksi  n- heksana mampu mengental dengan sempurna tanpa  perlu  diuapkan  di  atas  waterbath, sedangkan  fraksi  etil  asetat  dan  etanol-air perlu mendapatkan perlakuan di atas waterbath selama 1-3 jam untuk mendapatkan fraksi  yang  lebih  kental.  Seluruh  fraksi ditampung  dalam  botol  coklat,  ditutup  rapat dan disimpan dalam suhu ruangan.

## Uji Sitotoksik dengan Metode MTT Assay
Uji  sitotoksik  diawali  dengan  proses panen  sel.  Panen  kultur  sel  dilakukan  saat sudah  mencapai  80%  konfluen.  Kultur  sel dikatakan  80%  konfluen  saat  sudah  tumbuh merata pada permukaan plate dan membentuk monolayer. Proses selanjutnya adalah perhitungan sel yang diawali dengan pengambilan  10  μL  sel  lalu  dimasukkan  ke dalam  hemasitometer  kemudian  dilakukan perhitungan  sel  di  bawah  mikroskop.  Sel kemudian dipindahkan ke conical tube sesuai dengan hasil perhitungan selanjutnya ditambahkan  media  DMEM  hingga  10  mL. Sebanyak  100  μL  suspensi  sel  MCF-7 dipindahkan ke dalam plate 96 well (disisakan 4 sumuran kosong sebagai kontrol media) lalu diinkubasi selama 7 hari (Junedi et al., 2009). Kontrol  positif  yang  digunakan  adalah Methothrexat  10  mM  (Fodor  et  al.,  2016). Kontrol  perlakuan  mengandung  5  seri konsentrasi  ekstrak  etanol  80%  buah  pare (15,63; 31,25; 62,5; 125; 250 μg/mL), fraksi etanol-air,  fraksi  etil  asetat,  fraksi  n-heksana (1; 2; 4; 8; 16 μg/mL), media DMEM serta sel MCF-7.  Larutan  kontrol  perlakuan  dibuat dengan melarutkan 10 mg ekstrak etanol dan ketiga  fraksi  dalam  tabung  mikro  1,5  mL, selanjutnya dilarutkan dengan 100 μL larutan DMSO  hingga  larut  sempurna  kemudian
ditambahkan  900  μL  media  DMEM (Dulbecco’s  Modified  Eagle  Medium)  yang mengandung penisilin-streptomisin 1 mL dan 10%  (10  mL)  FBS  (Fetal  Bovine  Serum). Inkubasi  dilakukan  selama  48  jam  dalam inkubator CO 2 pada suhu 37°C.
Uji  sitotoksik  dilakukan  dengan  metode MTT.  Sel  yang  masih  hidup  akan  bereaksi dengan  reagen  MTT  dengan  membentuk warna ungu. Pembacaan absorbansi dilakukan menggunakan  alat  ELISA  reader  dengan  λ 550  nm.  Hasil  absorbansi  yang  diperoleh selanjutnya  digunakan  untuk  menghitung persentase  sel  hidup.  Berdasarkan  data persentase  sel  hidup  dibuat  plot  antara  log konsentrasi  sampel  dengan  persentase  sel hidup  sehingga  diperoleh  parameter  A,  B,  r dari  persamaan  regresi  linier  y=Bx+A.  Nilai IC 50 diperoleh dari antilog x persamaan regresi linier tersebut (Putri, 2013).

## Skrining Fitokimia
Skrining  fitokimia  dilakukan  untuk mendeteksi golongan senyawa yang terkandung  di  dalam  sampel  dengan  metode Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT).  Fase  diam yang digunakan adalah silika F254. Fase gerak yang  digunakan  dalam  ekstrak  etanol,  fraksi etanol-air  serta  fraksi  etil  asetat  adalah  etil asetat:n-heksana  dengan  perbandingan  7:3 sedangkan  fraksi  n-heksana  menggunakan fase  gerak  n-  heksana:etil  asetat  dengan perbandingan  8:2  Golongan  senyawa  yang akan dideteksi antara lain flavonoid (sitroborat)  (Andersen  and  Markham,  2005), steroid  (Lieberman-Burchard)  (Farnsworth, 1966),  fenolik  dan  tannin  (FeCl 3 )  (Wardhani and Sulistyani, 2012), alkaloid (Dragendorff) dan terpenoid (anisaldehid-H 2 SO 4 ) (Saifudin, 2014). Skrining fitokimia yang ideal dilakukan  dalam  kondisi  lempeng  KLT ukurannya  sama  dan mendapatkan  perlakuan yang sama, penotolan sampel dan proses elusi KLT dilaksanakan secara bersamaan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Preparasi Sampel
Bobot  total  buah  pare  segar  yang digunakan  adalah  ±10  kg  dan  setelah  dicuci, dibuang  bijinya  kemudian  dipotong  menjadi potongan yang lebih kecil, bobot daging buah pare sebesar 8,5 kg. Biji pare dibuang karena biji  pare  tidak  termasuk  dalam  sampel penelitian.  Pemotongan  buah  pare  dengan ukuran yang kecil bertujuan untuk memperluas  permukaan  pare  serta  untuk memudahkan saat proses pengeringan. Bobot total simplisia yang diperoleh sebesar 498,57 g.  Simplisia  tersebut  kemudian  dihaluskan menggunakan  blender,  proses  ini  bertujuan agar  senyawa-senyawa  yang  terkandung  di dalam  buah  pare  dapat  terekstraksi  dengan maksimal dengan semakin luasnya permukaan simplisia.  Bobot  serbuk  pare  yang  diperoleh adalah  477,84  g.  Terdapat  perbedaan  jumlah bobot antara simplisia dan serbuk pare, hal ini dikarenakan selama proses pembuatan serbuk terdapat  serbuk  yang    saat  dituangkan  ke dalam wadah.

## Ekstraksi
Serbuk  pare  selanjutnya  diekstraksi  dan diperoleh bobot total ekstrak sebesar 70,80 g dengan  rendemen  ekstrak  sebesar  14,82%. Nilai rendemen ekstrak etanol 80% buah pare 5 kali lebih banyak jika dibandingkan dengan rendemen  ekstrak  etanol  96%  buah  pare (Afifah,  2017).  Perbedaan  nilai  rendemen mungkin  disebabkan  oleh  perbedaan  pelarut, perbedaan  volume  pelarut  serta  perbedaan lamanya  ekstraksi.  Ekstrak  etanol  80% memiliki karakteristik berwarna coklat kehitaman  dan  sangat  lengket.  Ekstrak disimpan  di  dalam  eksikator,  karena  saat disimpan  di  dalam  kulkas  ekstrak  akan mengeras dan sukar untuk dilarutkan.

## Fraksinasi
Ekstrak  etanol  buah  pare  selanjutnya difraksinasi. Total volume fraksi etanol-air 75 mL,  fraksi  etil  asetat  250  mL  serta  fraksi  n- heksana  200  mL.  Volume  fraksi  etanol-air paling  sedikit  karena  pada  fraksi  etanol-air volume  yang  digunakan  hanya  sebanyak  50 mL  dan  tidak  dilakukan  penambahan  secara
berulang.  Meningkatnya  volume  fraksi  etil asetat, hal ini disebabkan karena etil asetat dan etanol  saat  disatukan  bercampur  sempurna karena  keduanya  memiliki  kepolaran  yang mirip, sehingga ada sebagian etanol yang ikut tercampur  bersama  etil  asetat.  Total  bobot fraksi  etanol-air,  etil  asetat  serta  n-  heksana setelah  dievaporasi  adalah  9,8  g;  0,08  g  dan 0,12  g.  Persentase  rendemen  dari  masing- masing fraksi yaitu, fraksi etanol 98%, fraksi etil  asetat  0,8%  dan  fraksi  n-heksana  1,2%. Masing-masing  fraksi  memiliki  karakteristik yang  berbeda.  Fraksi  etanol  memiliki  sifat yang  sedikit  berbeda  dengan  ekstrak  etanol. Fraksi  etanol  kental  namun  tidak  lengket seperti  ekstrak  etanol.  Fraksi  etil  asetat berwarna coklat jingga dengan tekstur encer. Fraksi  n-heksana  berwarna  hijau  dengan tekstur encer.

## Uji Sitotoksik
Sel  yang  telah  mendapatkan  perlakuan ekstrak  serta  fraksi,  diinkubasi,  selanjutnya dilakukan  uji  sitotoksik.  Uji  sitotoksik memiliki  prinsip  reduksi  garam  kuning tetrazolium MTT dengan mekanisme reduktase. Reagen MTT akan bereaksi dengan suksinat  dihidrogenase  yang  berasal  dari mitokondria  sel  hidup  yang  mengakibatkan pecahnya  cincin  suksinat  tetrazolium.  Sel yang  hidup  membentuk  kristal  formazan berwarna  ungu  dan  tidak  larut  air.  Hasil  uji sitotoksik menunjukkan bahwa hanya kontrol media saja yang berwarna kuning, dan sisanya berwarna  ungu  serta  ungu  kekuningan.  Hasil ini menunjukkan bahwa sel yang mendapatkan  perlakuan  dan  hasil  uji  MTT- nya  berwarna  ungu  maka  tidak  terdapat adanya  kematian  sel,  namun  pada  sel  yang mendapatkan  perlakuan  dan  hasil  uji  MTT- nya berwarna ungu kekuningan menunjukkan adanya  kematian sel namun tidak maksimal. Persentase  sel  hidup  dihitung  kemudian dimasukkan  ke  dalam  grafik  dan  dibuat persamaan  regresi  liniernya  (lampiran),  dari seluruh  perlakuan  tidak  ada  yang  memiliki persentase  sel  hidup  dibawah  50%,  sehingga hanya  bisa  ditentukan  persentase  sel  yang mati.
Hasil  perhitungan  persentase  sel  hidup (Tabel  1)  sesuai  dengan  hasil  dokumentasi mikroskopis,  terlihat  bahwa  pada  gambar yang  mendapat  perlakuan  ekstrak  tidak menunjukkan  adanya  kematian  sel,  namun pada  sel  yang  mendapatkan  perlakuan  fraksi etanol,  etil  asetat,  n-heksana  serta  kontrol positif  metotreksat  menunjukkan  adanya kematian  sel.  Rendahnya  aktivitas  sitotoksik ekstrak  etanol  80%  buah  pare  berbanding terbalik  dengan  penelitian  Vishwanath  et  al, yang menunjukkan bahwa ekstrak 50% buah pare memiliki aktivitas sitotoksik yang sangat poten  pada  sel  kanker  payudara  MCF-7 (Vishwanath et al., 2015). Perbedaan ini dapat disebabkan oleh perbedaan  konsentrasi pelarut  yang  digunakan.  Semakin  rendah konsentrasi  etanol  yang  digunakan  maka aktivitas  sitotoksiknya  akan  semakin  baik. Ekstrak etanol 80% pada penelitian sebelumnya  oleh  Raina  et  al  mengandung senyawa  fenolik  yang  cukup  tinggi  sehingga cenderung  lebih  cocok  digunakan  untuk  uji aktivitas  antioksidan  (Raina  et  al.,  2016). Potensi  aktivitas  sitotoksik  fraksi  etil  asetat
berbanding lurus dengan penelitian sebelumnya oleh Zahrah et al yang membahas tentang  aktivitas  sitotoksik  fraksi  etil  asetat ekstrak  etanol  70%  buah  pare  terhadap  sel HeLa dengan nilai LC 50 sebesar 22,19 µg/mL (Zahrah  et  al,  2018).  Fraksi  etil  asetat memiliki  aktivitas  penghambatan  sel  yang paling baik diantara sampel lainnya. Taikuguasin C, taikuguasin D serta charantagenin  D  merupakan  isolat  ekstrak etanol  buah  pare  yang  memiliki  aktivitas sitotoksik  dengan  struktur  senyawa  yang cenderung  bersifat  semi  polar  (Liaw  et  al., 2015  dan  Wang  et  al.,  2012).  Ketiga  isolat tersebut  akan  lebih  tertarik  dalam  fraksi  etil asetat  karena  fraksi  etil  asetat  juga  bersifat semi  polar.  Tingginya  aktivitas  sitotoksik fraksi  etil  asetat  dapat  disebabkan  karena adanya senyawa-senyawa isolat yang memiliki aktivitas sitotoksik.

## Skrining Fitokimia
Hasil  skrining  fitokimia  dapat  dilihat pada  Tabel  2.  Larutan  ekstrak  etanol  dan larutan fraksi n-heksana, etil asetat dan etanol- air  selanjutnya  dilakukan  skrining  fitokimia.
Tabel 1. Persentase sel hidup ekstrak etanol buah pare, fraksi etanol, etil asetat serta n-heksana pada
sel kanker payudara MCF-7 Sampel Konsentrasi tertinggi Persentase sel hidup (%) Persentase penghambatan (%) Ekstrak etanol 80% 250 µg/mL 124,03 - Fraksi etanol 16 µg/mL 77,20 22,80 Fraksi etil astetat 16 µg/mL 56,13 43,87 Fraksi n-heksana 16 µg/mL 77,20 22,80 Kontrol positif metotreksat 10 µM 71,70 28,30
Tabel 2. Hasil skrining fitokimia ekstrak etanol, fraksi etanol, fraksi etil asetat serta fraksi n- heksana
buah pare Pereaksi Warna hasil deteksi sinar tampak Senyawa Ekstrak etanol Fraksi etanol-air Fraksi etil asetat Fraksi n- heksana Sitroborat Kuning Kuning Kuning Hijau Flavonoid Lieberman-burchard Biru Biru Biru Biru Steroid Dragendorff - - - Coklat Alkaloid Anisaldehid-H 2 SO 4 Ungu Ungu Ungu Ungu Terpenoid FeCl 3 - - - Hitam Fenol dan tanin
Berdasarkan  hasil  skrining  fitokimia  (Tabel 2), fraksi n-heksana mengandung 5 golongan senyawa  dan  ekstrak  etanol,  fraksi  etanol-air serta  fraksi  etil  asetat  hanya  mengandung  3 golongan senyawa.
Dokumentasi  skrining  fitokimia  ekstrak etanol,  fraksi  etanol  dan  fraksi  etil  asetat (Gambar  1)  menunjukkan  adanya  spot  yang terdeteksi  pada  pereaksi  sitroborat  (A), Lieberman-burchard  (B)  dan  anisaldehid- H 2 SO 4 (D).  Kesimpulannya  ekstrak  etanol, fraksi etanol dan fraksi etil asetat mengandung golongan  senyawa  flavonoid,  steroid  dan terpenoid.  Hasil  penelitian  ini  kurang  sesuai dengan  penelitian  sebelumnya  (Supraja  and
Usha,  2013  dan  Ainia,  2017),  karena  tidak ditemukan  golongan  senyawa  alkaloid  pada ekstrak  etanol.  Komposisi  fase  gerak  yang digunakan  adalah  etil  asetat  serta  n-heksana dengan perbandingan 7:3, sehingga spot hasil elusi  ekstrak  etanol  dan  fraksi  etanol  sangat tipis  dan  tidak  sejelas  spot  elusi  fraksi  etil asetat.
Dokumentasi skrining fitokimia fraksi n- heksana  (Gambar  2)  menunjukkan  bahwa terdapat  spot  elusi  yang  tampak  saat  plat disemprot  dengan  pereaksi  sitroborat  (A), Lieberman-burchard  (B),  dragendorff  (C), anisaldehid-H 2 SO 4 (D)  dan  FeCl 3 (E). Kesimpulannya fraksi n-heksana mengandung
Gambar 1. Hasil skrining fitokimia ekstrak etanol (1), fraksi etanol (2) dan fraksi etil asetat (3) dengan fase gerak etil-asetat: n-heksana (7:3)
Keterangan: (A) pereaksi sitroborat, (B) pereaksi Lieberman-burchard, A dan B diamati  pada UV 366 nm.
(C) pereaksi  Dragendorff, (D) pereaksi anisaldehid-H 2 SO 4 , (E) pereaksi FeCl 3. C, D, dan E diamati di bawah sinar UV 254 nm
Gambar 2. Hasil skrining fitokimia fraksi n-heksana dengan fase gerak n-heksana:etil-asetat (8:2)
Keterangan : (A) pereaksi sitroborat, (B) pereaksi Lieberman-burchard, (C) pereaksi Dragendorff, (D) pereaksi anisaldehid-H2SO4, (E) pereaksi FeCl3. A,B,C, D dan E diamati di bawah UV 254
5  golongan  senyawa  antara  lain  flavonoid, steroid,  alkaloid,  terpenoid,  fenol  dan  tanin. Fraksi  n-heksana  mengandung  lebih  banyak senyawa karena n-heksana merupakan pelarut yang pertama kali difraksinasi sehingga lebih banyak senyawa yang terlebih dahulu tertarik di  dalamnya  dibandingkan  fraksi  yang  lain. Tingginya aktivitas sitotoksik tidak tergantung pada banyaknya golongan senyawa yang terkandung.

## KESIMPULAN
Penelitian  ini  menunjukkan  bahwa ekstrak  etanol  80%  buah    pare  memiliki aktivitas  sitotoksik  yang  tidak  poten.  Fraksi
etil  asetat  mempunyai  aktivitas  sitotoksik yang paling besar dengan persentase penghambatan  43,87%  sedangkan  fraksi etanol  dan  n-heksana  memiliki  persentase penghambatan  yang  sama  terhadap  populasi sel MCF-7 yaitu 22,80%.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terima  kasih  kepada  laboran Laboratorium  Kultur  Sel  Mamalia,  Bagian Biologi Farmasi, Fakultas Farmasi UMS, Ibu Rela Religia, A.Md, yang telah mendampingi dan  banyak  membantu  selama  jalannya penelitian ini.

## Daftar Pustaka
Afifah  U.N.,  2017,  Uji  Aktivitas  Atidiabetes  Ekstrak  Etanol  96%  Buah  Pare  (Momordica charantia  L.)  terhadap  Tikus  Jantan  Galur  Wistar  yang  Diinduksi  Aloksan, Publikasi Ilmiah, Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta
Ainia N., 2017, Uji Fitokimia Infusa Pekat Buah Pare (Momordica charantia L.) dan Pengaruh Lama  Terapi  dengan  Variasi  Dosis  Terhadap  Penurunan  Kadar  Glukosa  Darah  Tikus (Rattus norvegicus) yang Diinduksi Aloksan, Skripsi , Central Library of Maulana Malik Ibrahim State Islamic University of Malang
Andersen  Ø.M.  and  Markham  K.R.,  2005,  Flavonoids:  Chemistry, Biochemistry  and Applications , CRC Press Taylor & Francis Group, New York.
Arnani  M.,  2018,  Obat  Kanker  Dihentikan  Penjaminannya,  Ini  Jawaban  BPJS  Kesehatan  - Kompas.com, Kompas
Media  Terdapat di:
https://megapolitan.kompas.com/read/2018/07/18/07000081/obat-kanker-dihentikan- penjaminannya-ini-jawaban-bpjs-kesehatan [Diakses pada February 5, 2019].
Budrat  P.  and  Shotipruk  A.,  2008,  Extraction  of  Phenolic  Compounds  from  Fruits  of  Bitter Melon  (Momordica  charantia)  with  Subcritical  Water  Extraction  and  Antioxidant Activities of These Extracts, Chiang Mai Journal of Science , 35 (1), 123–130.
Comşa Ş., Cîmpean A.M. and Raica M., 2015, The Story of MCF-7 Breast Cancer Cell Line: 40 Years of Experience in Research, Anticancer Research , 35 (6), 3147–3154.
Dandawate P.R., Subramaniam D., Padhye S.B., Anant S., Physiology I., City K., City K., City K.  and  Campus  A.,  2017,  Bitter  Melon:  A  Panaceae  for  Inflamation  and  Cancer, HHS Public Access , 14 (2), 913–945.
Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia,  2013, Formularium  Nasional 2013,  Dalam Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, pp. 1689–1699.

## Farnsworth  N.R.,  1966,  Biological  and  Phytochemical  Screening  of  Plants, Journal  of Pharmaceutical Sciences
Fodor,  T.,  Szántó,  M.,  Abdul-Rahman,  O.,  Nagy,  L.,  Dér,  Á.,  Kiss,  B.  and  Bai,  P.,  2016. Combined treatment of MCF-7 cells with AICAR and methotrexate, arrests cell cycle and reverses  Warburg  metabolism  through  AMP-activated  protein  kinase  (AMPK)  and FOXO1. PLoS One , 11 (2), p.e0150232.
Chen, C.R., Liao, Y.W., Wang, L., Kuo, Y.H., Liu, H.J., Shih, W.L., Cheng, H.L. and Chang, C.I., 2010. Cucurbitane triterpenoids from Momordica charantia and their cytoprotective activity in tert-butyl hydroperoxide-induced hepatotoxicity of HepG2 cells. Chemical and Pharmaceutical Bulletin , 58 (12), pp.1639-1642.
Huang H.L., Hong Y.W., Wong Y.H., Chen Y.N., Chyuan J.H., Huang C.J. and min Chao P., 2008, Bitter Melon (Momordica charantia L.) Inhibits Adipocyte Hypertrophy and Down Regulates  Lipogenic  Gene  Expression  in  Adipose  Tissue  of  Diet-Induced  Obese  Rats, British Journal of Nutrition , 99 (2), 230–239.
Jia  S.,  Shen  M.,  Zhang  F.  and  Xie  J.,  2017,  Recent  Advances  in  Momordica  charantia: Functional  Components  and  Biological  Activities, International  Journal  of  Molecular Sciences , 18 (12)
Junedi S., Sarmoko, Ikawati M. and Meiyanto E., 2009, Prosedur Tetap Panen Sel , (CCRC) Cancer Chemoprevention Research Center Farmasi UGM, 1–3.
Kementrian Kesehatan Republik Indonesia, 2018, Panduan Pelaksanaan Hari Kanker Sedunia 2018, Jakarta.
Liaw  C.C.,  Huang  H.C.,  Hsiao  P.C.,  Zhang  L.J.,  Lin  Z.H.,  Hwang  S.Y.,  Hsu  F.L.  and  Kuo Y.H., 2015, 5β,19-Epoxycucurbitane Triterpenoids from Momordica charantia and Their Anti- Inflammatory and Cytotoxic Activity, Planta Medica , 81 (1), 62–70.
Putri  H.,  2013, Protokol  Uji  Sitotoksik  Metode  MTT ,  CCRC  (Cancer  Chemoprevention Research Center) Fakultas Farmasi UGM, 1–8.
Raina  K.,  Kumar  D.  and  Agarwal  R.,  2016,  Seminars  in  Cancer  Biology  Promise  of  Bitter Melon (Momordica charantia) Bioactives in Cancer Prevention and Therapy, Seminars in Cancer Biology , 40–41, 116–129. Terdapat di:
http://dx.doi.org/10.1016/j.semcancer.2016.07.002.
Richmond  R.A.,  Vuong  Q.  V.  and  Scarlett  C.J.,  2017,  Cytotoxic  Effect  of  Bitter  Melon (Momordica charantia L.) Ethanol Extract and Its Fractions on Pancreatic Cancer Cells in vitro,  Exploratory  Research  and  Hypothesis  in  Medicine,  2  (4),  1–11.  Terdapat  di: http://www.xiahepublishing.com/ArticleFullText.aspx?sid=2&jid=2&id=10.14218%2FE RHM.2017.00032.
Saifudin A., 2014, Senyawa Alam Metabolit Sekunder Teori, Konsep, dan Teknik Pemurnian , Deepublish.
Sudoyo A., 2017, Melantun Kebersamaan Berantas Kanker , Yayasan Kanker Indonesia, 69.
Supraja P. and Usha R., 2013, Antibacterial and Phytochemical Screening from Leaf and Fruit Extracts of Momordica charantia, International Journal of Pharma and Bio Sciences
Thomasset S.C., Berry D.P., Garcea G., Marczylo T., Steward W.P. and Gescher A.J., 2007, Dietary  Polyphenolic  Phytochemicals  -  Promising  Cancer  Chemopreventive  Agents  in Humans? A Review of Their Clinical Properties, International Journal of Cancer , 120 (3), 451–458.
Vishwanath,  Shobha  Cr  P.,  Mn  S.,  Prashant  A.  and  Rangaswamy  C.,  2015,  In  Vitro  Anti  ‑ Cancer  Activity  of  Ethanolic  Extract  of  Momordica  charantia  on  Cervical  and  Breast Cancer Cell Lines, International Journal of Health and Allied Sciences , 4, 210–7.
Wang X., Sun W., Cao J., Qu H., Bi X. and Zhao Y., 2012, Structures of New Triterpenoids and Cytotoxicity Activities of the Isolated Major Compounds from the Fruit of Momordica charantia L., Journal of Agricultural and Food Chemistry , 60 (15), 3927–3933.
Wardhani  L.K.  and  Sulistyani  N.,  2012,  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etil  Asetat  Daun Binahong  (Anredera  scandens  (L.)  Moq.)  terhadap  Shigella  flexneri  Beserta  Profil Kromatografi Lapis Tipis, Jurnal Ilmiah Kefarmasian , 2 (1), 1–16.
Yin, J., Zhang, H. and Ye, J., 2008. Traditional Chinese medicine in treatment of metabolic syndrome. Endocrine, Metabolic & Immune Disorders-Drug Targets (Formerly Current Drug Targets-Immune, Endocrine & Metabolic Disorders) , 8 (2), pp.99-111.
Zahrah A., Kusmardi and Sunaryo H., 2018, Uji Sitotoksisitas Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanol 70%  Buah  Pare  ( Momordica  charantia L.)  terhadap  Sel  HeLa, Farmasains ,  Fakultas Farmasi dan Sains Universitas Muhammadiyah Prof. Dr. Hamka