Efek Antibakteri Kombinasi Ekstrak Daun Kelor ( Moringa oleifera Lam.)  dan Amoksisilin  terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli secara In Vitro
(Antibacterial Eﬀ ect Combination of Moringa Leaf Extract ( Moringa oleifera Lam.) and Amoxicillin against Staphylococcus aureus and Escherichia coli in Vitro)
SETIADI ABDILLAH PRATAMA 1 *, TRI WIDYAWATI 1 , MUHAMMAD ICHWAN 1 , DIAN DWI WAHYUNI 1
1 Fakultas Kedokteran, Universitas Sumatera Utara, Medan, Indonesia, Jl. Dr. Mansyur No.5, Medan 20155, Indonesia.
Diterima 3 Januari 2022, Disetujui 29 Maret 2022
JURNAL ILMU KEFARMASIAN  INDONESIA, April 2022,  hlm. 23-29 ISSN 1693-1831, E-ISSN 2614-6495
Abstract: Staphylococcus aureus and Escherichia coli often infect humans and risky cause antibiotics resistance  including  amoxicillin. This  encourages  us  ﬁ nding  alternative  active  ingredients: Moringa oleifera leaf. This study evaluated antibacterial activity of combination of Moringa leaf extract (KDK) and amoxicillin (KA) against S. aureus and E. coli in vitro. The research methods with true experimental research  with  post-test  control  group  design.  KDK  obtained  by  maceration.  Four  concentrations  of KDK test materials (20, 30, 40, 50%) and 1 concentration of KA (3 mg/mL). Disc diﬀ usion test method taken and the parameter measured: the diameter of the disc inhibition zone. Data analyzed by One-way ANOVA and further Tukey’s test. KDK+KA against S. aureus (20.77±1.79 – 21.33±1.74 mm)>KDK (11.45±0.21  –  12.45±0.28  mm)  or  KA  (14.50±0.42  mm).  KDK+KA  against E.  coli (15.53±0.71  – 17.87±0.42 mm)>KDK (9.00±0.28 – 10.30±0.42 mm) or KA (13.45±0.35 mm). A signiﬁ cant (p<0.05) was obtained between the combination group (KDK+KA) versus a group (KDK or KA). The combination of Moringa leaf ethanol extract and amoxicillin synergistically eﬀ ected as antibacterial against S. aureus and E. coli in vitro.
Keywords : amoxicillin, antibacterial, Escherichia coli, Moringa oleifera Lam., Staphylococcus aureus.
Abstrak: Staphylococcus aureus dan Escherichia coli adalah bakteri yang sering menginfeksi manusia dan beresiko resistensi terhadap antibiotik termasuk amoksisilin. Hal ini mendorong pentingnya upaya menemukan  alternatif  termasuk  dari  tanaman,  salah  satunya  kelor  ( Moringa  oleifera Lam).  Tujuan untuk mengevaluasi aktivitas antibakteri kombinasi ekstrak etanol daun kelor (KDK) dan amoksisilin (KA) terhadap S. aureus dan E. coli secara in vitro . Metode penelitian true experimental dengan post- test control group design . Uji KDK ada 4 konsentrasi (20, 30, 40, 50%) dan KA 1 konsentrasi (3 mg/ mL). Metode uji dengan difusi cakram agar dan parameter yang diukur diameter zona hambat cakram. Data dianalisis dengan Oneway ANOVA dan uji lanjut Tukey. Kombinasi KDK+KA terhadap S. aureus (20,77±1,79  –  21,33±1,74  mm)>KDK  (11,45±0,21  –  12,45±0,28  mm)  dan  KA  (14,50±0,42  mm). Kombinasi KDK+KA terhadap E. coli (15,53±0,71 – 17,87±0,42 mm)>KDK (9,00±0,28 – 10,30±0,42 mm) dan KA (13,45±0,35 mm). Terdapat perbedaan bermakna (p<0,05) antara kelompok (KDK+KA) dengan kelompok (KDK atau KA). Kombinasi ekstrak daun kelor dan amoksisilin menghasilkan efek sinergisme sebagai antibakteri terhadap S. aureus dan E.coli secara in vitro.
Kata kunci: amoksisislin, antibakteri, Escherichia coli, Moringa oleifera Lam, Staphylococcus aureus.
24  PRATAMA ET AL.
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia
Alat. Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian, yaitu:  vial,  bejana,  pipet  tetes,  gelas  ukur,  spatel, timbangan analitik, wadah (botol), kaca objek, jarum ose, tabung reaksi, TLC-scanner, rotary evaporator, cawan petri, tabung Erlenmeyer
METODE. Penelitian  ini  menggunakan  9 kelompok perlakuan, seperti pada Tabel 1.

## PENDAHULUAN
STAPHYLOCOCCUS  aureus merupakan  penyebab paling umum kedua dari blood stream infections (BSI). Insiden  BSI  berkisar  antara  113-204  per  100.000 penduduk. Staphylococcus aureus menyebabkan BSI dengan  insiden  tahunan  sekitar  30-40  per  100.000 populasi  dan  tingkat  fatalitas  kasus  terkait  sebesar 20% (1, 2) .
Escherichia coli adalah bakteri ﬂ ora normal yang sering  dijumpai  pada  usus  manusia,  bersifat  unik karena  dapat  menyebabkan  infeksi  primer  seperti diare.  Dilaporkan  pada  tahun  1995  sampai  2001 terjadi kecenderungan resistensi antimikroba terhadap isolat E. coli dalam infeksi saluran urin pada pasien wanita  di Amerika  Serikat  terhadap  trimethoprim- sulfametoxazol,  ciproﬂ oxacin,  nitrofurantoin,  dan ampisilin (3) .
Upaya  untuk  menanggulangi  resistensi  bakteri terhadap amoksisislin adalah dengan mengembangkan antibakteri baru dari bahan alam (4) . Kelor ( Moringa oleifera Lam.)  adalah  tanaman  obat. M.  oleifera memiliki margin keamanan yang lebar dan toksisitas yang rendah. M. oleifera dilaporkan memiliki aktivitas antikarsinogenik,  antidiabetik,  anti-inﬂ amasi,  anti- atherosklerotik,  anti-apoptotik,  hepatoprotektif, neuroprotektif,  dan  kardioprotektif (5) . M.  oleifera menghambat  bakteri  Gram-positif  dan  Gram- negatif  termasuk Staphylococcus  aureus,  Bacillus cereus, Escherichia coli, Salmonella enteritidis, dan Pseudomonas aeruginosa . Ekstraknya mengandung alkaloid, steroid, triterpen, ﬂ avinoid, polifenol dengan aktivitas  antibakteri (6) ,  termasuk  terhadap  bakteri Staphylococcus aureus (7) .
Kombinasi  antibiotik  dan  ekstrak  tanaman merupakan konsep baru dan telah digunakan untuk pengobatan  infeksi  bakteri  resisten (8) .  Penelitian  ini dilakukan  untuk  mengkaji  aktivitas  dari  kombinasi ekstrak daun kelor dan amoksisilin dalam menghambat pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli.

## BAHAN DAN METODE
BAHAN. Bahan yang digunakan dalam penelitian , yaitu: daun kelor 3 kg, tablet amoksisilin, aquadest steril,  etanol  96%,  NaCl  0,9%,  toluen  jenuh  air, pereaksi alkaloid, larutan besi klorida, larutan timbal asetat,  larutan  asam  nitrat,  larutan  fehling A  dan fehling B, larutan asam sulfat pekat, larutan tembaga asetat,  bakteri Staphylococcus  aureus dan  bakteri Escherichia coli .
Kelompok Jumlah ekstrak Amoksisilin 3 mg/mL Bakteri KA - + + KDK20 20% - + KDK30 30% - + KDK40 40% - + KDK50 50% - + KDK20+KA 20% + + KDK30+ KA 30% + + KDK40+ KA 40% + + KDK50+ KA 50% + +
Tabel 1. Kelompok perlakuan dalam penelitian.
Ekstraksi  Daun  Kelor. Ekstraksi  daun  kelor dilakukan  dengan  metode  maserasi  dengan  pelarut etanol  96%  dan  pembuatan  larutan  antibiotik amoksisilin. Setiap larutan kemudian diteteskan pada kertas cakram kontrol dan perlakuan. Suspensi bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli dengan standar Mc Farland 0.5 kemudian diusapkan secara rapat  pada  media  Mueller  Hinton Agar.  Kemudian setiap kertas cakram kontrol dan perlakuan diletakkan pada media agar yang telah diusapkan bakteri. Setelah inkubasi selama 18-24 jam pada suhu 34 o C, maka zona hambat bakteri pada media diukur.
Aktivitas Antibakteri. Aktivitas  antibakteri amoksisilin  terhadap Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli dilakukan dengan metode difusi agar. Aktivitas antibakteri ditentukan dengan berdasarkan diameter  zona  hambat,  yang  diukur  dengan  jangka sorong,  yang  dihasilkan  oleh  sediaan  uji  yang berdifusi pada pencadang kertas berdiameter 6 mm yang diletakkan dalam cawan petri yang telah terlebih dahulu dimasukkan inokulum bakteri uji dan media agar.
Analisis Data. Data yang didapat akan dicatat dan dianalisis  menggunakan  program  statistik  SPSS25, meliputi  analisis  deskriptif  dan  analisis  inferensia untuk  tiap  jenis  perlakuan  menggunakan  metode Analysis  of  Variance (ANOVA)  untuk  mengetahui ada tidaknya pengaruh perlakuan dan kelompok serta interaksi  antara  perlakuan  dan  kelompok  terhadap diameter  zona  hambat  bakteri.  Variabel  dikatakan berpengaruh jika memiliki p-value dengan uji lanjut Tukey.
Vol 20, 2022

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Karakterisasi Simplisia Daun Kelor. Karakteristik simplisisa diperlihatkan pada Tabel  2.
Kadar abu simplisia dari hasil penelitian diperoleh sebesar  8,13%  dan  memenuhi  persyaratan  pada Farmakope  Herbal  Indonesia  edisi  II  yaitu  tidak lebih dari 10% (10) . Penetapan kadar abu dimaksudkan untuk mengetahui kandungan mineral internal yang terdapat  di  dalam  simplisia  serta  senyawa  organik setelah  pembakaran.  Kadar  sari  larut  air  simplisia dari hasil penelitian diperoleh 20,27% dan memenuhi persyaratan yaitu tidak kurang dari 4,9% (10) .
Kadar  sari  larut  etanol  simplisia  dari  hasil penelitian sebesar 16,48% dan memenuhi persyaratan yaitu  tidak  kurang  dari  5% (10) .  Kadar  air  simplisia
dari  hasil  penelitian  diperoleh  kadar  air  simplisia 6,65% dan memenuhi persyaratan yaitu tidak lebih dari  9% (10) .  Pengeringan  simplisia  dilakukan  untuk mendapatkan simplisia yang tidak mudah rusak oleh mikroba seperti jamur sehingga dapat disimpan dalam waktu yang lebih lama.
Penelitian  dilaksanakan  pada  bulan  Oktober- November  2021  di Laboratorium  Fakultas  Farmasi Universitas  Sumatera  Utara.  Kadar  abu,  kadar  sari larut air, kadar sari laut etanol, dan kadar air simplisia menunjukkan jumlah tiap zat tersebut yang terkandung dalam  simplisia,  dengan  hasil  darim  penelitian  ini masing-masing sebesar 8,13%, 20,27%, 16,48% dan 6,65% yang memenuhi persyaratan pada Farmakope Herbal Indonesia edisi II (10) .
No Karakteristik Hasil Pemeriksaan Persyaratan dari Farmakope Herbal Indonesia edisi I 1 Kadar abu 8,13% tidak lebih dari10% 2 Kadar sari larut air 20,27% tidak kurang dari 4.9% 3 Kadar sari larut etanol 16,48% tidak kurang dari 5% 4 Kadar air 6,65% tidak lebih dari 9% Tabel 2. Hasil karakterisasi simplisia daun kelor.
Skrining  Fitokimia. Skrining  fitokimia merupakan  langkah  awal  yang  dapat  membantu memberikan  gambaran  tentang  golongan  senyawa yang  terkandung  dalam  tanaman  yang  sedang diteliti (11) .  Pada  penelitian  ini,  skrining  fitokimia dilakukan  untuk  mengetahui  kandungan  metabolit sekunder atau senyawa aktif pada ekstrak etanol daun
No Senyawa metabolit sekunder Pereaksi Hasil 1 Alkaloid Dragendroff, bouchardat, meyer + 2 Flavonoid serbuk Mg + amil alkohol + HCl p + 3 Saponin air panas + 4 Tanin FeCl 3 + 5 Glikosida molish + H 2 SO 4 +
6 Triterpenoid/Steroid liebermen-bourchat +
kelor secara kualitatif.
Berdasarkan  hasil  pemeriksaan  uji  golongan senyawa  kimia  menunjukkan  bahwa  simplisia  dan ekstrak  daun  kelor  mengandung  senyawa  kimia golongan  flavonoida,  saponin,  tanin,  glikosida, dan  triterpenoid/steroid  dan  protein.  hasil  skrining ﬁ tokimia diperlihatkan pada Tabel 3.
Tabel 3. Hasil skrining ﬁ tokimia ekstrak etanol daun kelor.
Hasil  Pemeriksaan  Diameter  Zona  Hambat Amoksisilin  Terhadap Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli Secara In Vitro . Berdasarkan Tabel 4, dapat dilihat  bahwa pengujian amoksisilin terhadap S.  aureus pada  konsentrasi  5  mg/mL menunjukkan zona hambat paling kecil (13,05±0,78 mm).  Selanjutnya  konsentrasi  diatas  15  mg/mL menunjukkan aktivitas zona hambat yang lebih besar dari  17  mm.  Secara  statistik  dijumpai  perbedaan bermakna  antar  kelompok  p<0,05.  Pengujian amoksisilin terhadap E. coli pada konsentrasi 3 mg/mL
menunjukkan zona hambat paling kecil (13,45±0,35 mm).  Selanjutnya  60  konsentrasi  diatas  5  mg/mL menunjukkan aktivitas zona hambat yang lebih besar dari  22  mm.  Secara  statistik  dijumpai  perbedaan bermakna  antar  kelompok  p<0,05.  Oleh  sebab  itu tahap berikutnya konsentrasi yang dikaji yaitu 3 mg/ mL karena pada bakteri S. aureus dan E. coli terdapat pada hasil subset yang sama.
Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  amoksisilin terhadap bakteri S.aureus pada konsentrasi terendah yaitu 3 mg/mL menghasilkan zona hambat diameter
26  PRATAMA ET AL.
sebesar (14,50±0,42), konsentrasi tertinggi yaitu 21 mg/mL menghasilkan zona hambat diameter sebesar (17,65±0,21). Hasil uji aktivitas antibakteri amoksisilin terhadap  bakteri Escherichia  coli pada  konsentrasi terendah yaitu 3 mg/mL menghasilkan zona hambat diameter sebesar (13,45±0,35), konsentrasi tertinggi yaitu 19 mg/mL meghasilkan zona hambat diameter
sebesar (28,78±0,32). Konsentrasi terendah dari uji aktivitas antibakteri dengan amoksisilin diambil oleh peneliti dan diharapkan dengan pengujian kombinasi antara amoksisilin dengan ekstrak daun kelor berbagai konsentrasi, akan menghasilkan diameter zona hambat yang lebih besar atau lebih sensitif dibandingkan uji aktivitas antibakteri secara tunggal
Tabel 4. Hasil pemeriksaan diameter zona hambat amoksisilin terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli secara in vitro .
Hasil  Pemeriksaan  Diameter  Zona  Hambat Ekstrak  Etanol  Daun  Kelor  dan  Kombinasi Ekstrak  Etanol  Daun  Kelor  dan Amoksisilin Terhadap S.  aureus dan E.  coli Secara In  Vitro . Penentuan  aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol  daun kelor  dilakukan  dengan  metode  difusi  agar.  Zona hambat  pertumbuhan  mikroba adalah daerah jernih disekeliling  cakram  kertas (12) ,  seperti  tampak  pada Gambar 1.
Berdasarkan Tabel  5  diketahui  bahwa  hasil  uji aktivitas  antibakteri  menunjukkan  bahwa  ekstrak etanol  daun  kelor  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus terbesar pada KDK30 dengan diameter zona hambat (12,45±0,28 mm) dan bakteri Escherichia  coli pada  konsentrasi  KDK20 dengan diameter zona hambat sebesar (10,30±0,42).
Aktivitas  suatu  zat  antimikroba  dalam menghambat  pertumbuhan  atau  membunuh mikroorganisme  tergantung  pada  konsentrasi antimikroba  tersebut.  Hasil  penelitian  sebelumnya yang dilakukan diketahui bahwa ekstrak daun kelor mempunyai aktivitas antibakteri terhadap Escherichia coli dan Staphylococcus  aureus pada  konsentrasi 5%, 10%, 20%, 40%, dan 80 % dan Kadar Hambat minimum  (KHM)  yang  didapat  yaitu  13  mm  pada bakteri Escherichia  coli dan  12  mm  pada  bakteri
Staphylococcus aureus (13) .
Setelah dilakukan uji aktivitas antibakteri pada masing-masing sampel uji dari amoksisilin dan ekstrak etanol  daun  kelor  terhadap  bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia  coli kemudian  dilakukan kombinasi diantara keduanya dan dilakukan kembali uji aktivitas antibakteri. Kombinasi yang digunakan dalam pengujian ini adalah konsentrasi amoksisilin yang terendah pada penelitian ini yaitu KA dengan zona  hambat  diameter  yang  dihasilkan  sebesar (14,50±0,42)  untuk  bakteri Staphylococcus  aureus dan diameter zona hambat sebesar (13,45±0,35) untuk bakteri Escherichia  coli .,  dimana  pada  penelitian ini  diharapkan  untuk  KDK20+KA,  KDK30+KA, KDK40+KA  dan  KDK50+KA  dapat  meningkatkan diameter  zona  hambat  dan  tingkat  sensitivitasnya terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli . Hasil  pengujian  menggunakaan  uji ANOVA pada bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli secara  statistik  dijumpai  perbedaan  bermakna antar kelompok p<0,05. Hasil pengujian tukey pada Staphylococcus  aureus diketahui  bahwa  terdapat perbedaan rata-rata diameter zona hambat kombinasi ekstrak  etanol  daun  kelor  kelompok  a  (KDK20, KDK30, KDK40, KDK50 dan KA) dengan kelompok
Keterangan: Data dianalisis dengan uji Oneway Anova dengan uji lanjut Tukey, *p<0,05 a/b:berbeda dengan kelompok lainnya
Konsentrasi Amoksisilin
(mg/ml) Rerata Diameter Zona Hambat (mm) (Rerata ± SD) Staphylococcus aureus Escherichia coli 3 14,5 ± 0,42 13,45 ± 0,35 *b 5 13,05 ± 0,78 25,80 ± 0,14 7 14 ± 2,4 22,53 ± 1,1 9 15,4 ± 0,42 23,7 ± 0,99 11 13,95 ± 0,64 26,65 ± 0,92 13 15,95 ± 0,21 26,15 ± 0,49 15 17,5 ± 0,57 *a 25,95 ± 0,07 17 16,5 ± 0,42 26,70 ± 0,42 19 17,05 ± 0,21 *a 28,78 ± 0,32 21 17,65 ± 0,21 *a 24,83 ± 2,51 P 0,003 < 0,001
Tabel  5.  Hasil Pemeriksaan  diameter zona  hambat ekstrak  etanol daun  kelor dan  kombinasi  ekstrak etanol daun kelor ( Moringa oleifera Lam.) dan amoksisilin terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli secara in vitro.
b  (KDK20+KA,  KDK30+KA,  KDK40+KA  dan KDK50+KA) karena berada pada subset yang berbeda. Hasil pengujian Tukey pada Escherichia coli diketahui bahwa  terdapat  perbedaan  rata-rata  diameter  zona hambat kombinasi ekstrak etanol daun kelor kelompok a (KDK20, KDK30, KDK40, KDK50); kelompok b (KA); kelompok c (KDK30+KA, KDK40+KA) dan kelompok  d  (KDK20+KA,  KDK50+KA)  karena berada pada subset yang berbeda.
Berdasarkan hasil Tabel 5, dilakukan pengujian aktivitas  antibakteri  amoksisilin  dikombinasi dengan  ekstrak  etanol  daun  kelor  terhadap  bakteri
Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli KDK20+KA,  KDK30+KA,  KDK40+KA  dan KDK50+KA.  Hasil Tabel  5,  pada  saat  dilakukan kombinasi antara variasi konsentrasi amoksisilin dan ekstrak etanol daun kelor diameter zona hambatnya meningkat  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli dibandingkan  saat  dilakukan uji  aktivitas  antibakteri  secara  tunggal.  Dengan hal  ini  dapat  disimpulkan  bahwa  kombinasi  antara amoksisilin dengan ekstrak etanol daun kelor terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli bersifat sinergisme.
Keterangan: Data dianalisis dengan uji Oneway Anova dengan uji lanjut Tukey, *p<0,05 a/b:berbeda dengan kelompok lainnya
Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun kelor terhadap bakteri Staphylococcus aureus dengan KDK20,  KDK30,  KDK40,  KDK50,  menghasilkan diameter  zona  hambat  masing-masing  sebesar 11,45±0,21  mm,  12,45±0,28  mm,  12,15±0,99  mm, dan  12,40±0,21  mm.  Hasil  uji  aktivitas  antibakteri ekstrak etanol daun kelor terhadap bakteri Escherichia coli dengan  KDK20,  KDK30,  KDK40,  KDK50, menghasilkan diameter zona hambat masing-masing sebesar 10,30±0,42 mm, 9,50±0,28 mm, 9,00±0.28, dan 10,05±0,35 mm.
Uji  aktivitas antibakteri  amoksisilin  kombinasi dengan  ekstrak  etanol  daun  kelor  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli dalam penelitian ini dilakukan pengulangan untuk hasil yang lebih baik. Hasil uji aktivitas anti bakteri amoksisilin kombinasi dengan ekstrak etanol daun kelor yang paling terbesar terhadap bakteri Staphylococcus aureus yaitu KDK40+KA  menghasilkan  zona  hambat  diameter zona hambat sebesar (21,33±1,74). Hasil uji aktivitas anti  bakteri  amoksisilin  kombinasi  dengan  ekstrak etanol daun kelor yang paling terbesar terhadap bakteri
Gambar 1. Hasil uji aktivitas antibakteri kombinasi amoksisilin dengan ekstrak etanol daun kelor terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli.
Kelompok Rerata Diameter Zona Hambat (mm) (Rerata ± SD) Staphylococcus aureus Escherichia coli KA 14,5 ± 0,42 13,45 ± 0,35 *b KDK 20 11,45 ± 0,21 10,30 ± 0,42 KDK 30 12,45 ± 0,28 9,5 ± 0,28 KDK 40 12,15 ± 0,99 9 ± 0,28 KDK 50 12,4 ± 0,21 10,05 ± 0,35 KDK20+KA 20,77 ± 1,79 *a 17,77 ± 0,57 KDK30+KA 20,63 ± 1,23 *a 15,53 ± 0,71 KDK40+KA 21,33 ± 1,74 *a 17,03 ± 0,87 KDK50+KA 20,20 ± 2,49 *a 17,87 ± 0,42 p <0,001 <0,001
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia
28  PRATAMA ET AL.
Escherichia coli yaitu KDK50+KA menghasilkan zona hambat diameter zona hambat sebesar (17,87±0,42). Hasil  ini  menunjukkan  kombinasi  uji  antibakteri antara  amoksisilin  dengan  ekstrak  etanol  daun kelor  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli menunjukkan efek sinergisme yang baik dalam meningkatkan sensitivitas terhadap bakteri tersebut.
Hasil dari penelitian sebelumnya oleh Augustie dkk (14) yaitu rata-rata diameter zona hambat ekstrak daun Kelor terhadap bakteri Staphylococcus aureus adalah  15,5  mm  pada  konsentrasi  25%,  18,5  mm pada  konsentrasi  50%,  23  mm  pada  konsentrasi 75%. Dari hasil tersebut menunjukkan bahwa ekstrak daun kelor mempunyai aktivitas antibakteri terhadap Staphylococcus aureus. Pada konsentrasi ekstrak daun kelor  75%  mempunyai  daya  hambat  paling  besar terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus daripada konsentrasi 25% dan 50% dimana semakin besar konsentrasi ekstrak daun kelor maka bertambah besar pula aktivitas hambatannya (14) . Penelitian Amalia  dkk (15) ,  untuk  uji  aktivitas antibakteri  dilakukan  dengan  metode  sumuran dengan enam konsentrasi ekstrak metanol daun kelor ( Moringa oleifera L.) 5%, 10%, 20%, 40%, 60%, 80%, kontrol  positif  cifroﬂ oxacin  5  μg/disk,  dan  kontrol negatif Na-CMC 0,5%. Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak  metanol  daun  kelor  ( Moringa  oleifera L.) menunjukkan bahwa konsentrasi 5%, 10%, 20% dan 40%  termasuk  zona  hambat  kategori  sedang  yaitu 8,1  mm;  9,32  mm;  9,67  mm;  9,92  mm,  sedangkan konsentrasi 60% dan 80% termasuk zona hambat kuat yaitu  11  mm  dan  12  mm.  Dari  penelitian  tersebut, diketahui  bahwa  ekstrak  daun  kelor  mempunyai aktivitas  antibakteri  terhadap Escherichia  coli dan Stapylococcus  aureus pada  konsentrasi  5%,  10%, 20%, 40%, dan 80 % dan Kadar Hambat minimum (KHM)  yang  didapat  yaitu  13  mm  pada  bakteri Escherichia coli dan 12 mm pada bakteri Stapylococcus aureus.  Perbedaan  konsentrasi  ekstrak  daun  kelor mempengaruhi  penghambatan  pertumbuhan  bakteri Escherichia coli dan Stapylococcus aureus , dimana semakin  tinggi  konsentrasi  yang  diberikan  maka semakin besar pula aktivitas antibakteri penghambatan pertumbuhan bakteri.
Penelitian  Emelia, et  al (16) pengujian  aktivitas antibakteri  diketahui  bahwa  ekstrak  etanol  96% daun  kelor ( Moringa oleifera L.)  dapat  membunuh bakteri  uji  dengan  konsentrasi  10%  memiliki  daya hambat rata-rata 18,83 mm yang termasuk kategori kuat. Konsentrasi 8% memiliki rata-rata daya hambat sebesar 10,33 mm yang termasuk kategori kuat dan untuk konsentrasi 6% memiliki rata-rata zona hambat sebesar 7,83 mm yang termasuk kategori sedang.
Penelitian  Purnasari (17) hasil  uji  aktivitas antimikroba  ekstrak  menunjukkan  aktivitas antimikroba terhadap kedua bakteri uji. Ekstrak daun kelor mulai aktif menghambat pertumbuhan S. aureus pada konsentrasi 100 mg/mL, dengan diameter zona hambat 6,80 mm. Sedangkan untuk E. coli , ekstrak etanol daun kelor aktif pada konsentrasi 50 mg/mL, dengan diameter zona hambat 9,20 mm.
Hasil uji KLT-Bioautograﬁ  dari ektrak etanol daun kelor terhadap E. coli dan S. aureus memperlihatkan adanya  noda  yang  aktif.  Hasil  identiﬁ kasi  dengan KLT menunjukkan ekstrak etanol daun kelor diduga mengandung senyawa aktif golongan alkaloid, steroid, terpen,  fenolik,  dan  ﬂ avanoid,  dan  noda  yang  aktif terhadap  bakteri  uji  diduga  mengandung  senyawa golongan terpenoid.
Penelitian oleh Yunita (18) yang menilai uji aktivitas antibakteri  ekstrak  daun  kelor  terhadap  bakteri P.  aeruginosa menunjukkan  adanya  zona  hambat pada  konsentrasi  ≥4%.  Nilai zona hambat  tertinggi diperoleh  pada  konsentrasi  10%  dengan  rata-rata diameter zona hambat 19,60 ± 0,67 mm. Hasil skrining ﬁ tokimia  menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun  kelor mengandung ﬂ avonoid, saponin, terpenoid dan tanin. Berdasarkan hasil yang diperoleh dapat disimpulkan bahwa ekstrak daun kelor memiliki aktivitas sebagai antibakteri terhadap bakteri P. aeruginosa .
Sebagai  kesimpulan,  dari  hasil  penelitian  ini, aktivitas  antibakteri  amoksisilin  secara in  vitro menunjukkan  respons  resisten  pada  konsentrasi lebih kecil dari 15 mg/mL terhadap Staphylococcus aureus dan konsentrasi 3 mg/mL terhadap Escherichia coli .  Aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol  daun kelor  ( Moringa  oleifera Lam.)  dosis  20,  30,  40 dan  50%  menunjukkan  respons  resisten  terhadap Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli secara in  vitro .  Kombinasi  ekstrak  etanol  daun  kelor ( Moringa oleifera Lam.) dosis 20, 30, 40 dan 50% dan amoksisilin 3 mg/mL menunjukkan efek sinergis terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli ditandai dengan peningkatan diameter zona hambat >17 mm secara in vitro , sehingga dapat disimpulkan bahwa kombinasi ekstrak daun kelor dan amoksisilin menghasilkan  efek  sinergisme  sebagai  antibakteri terhadap S. aureus dan E. coli secara in vitro . Saran penelitian selanjutnya diharapkan mengkaji aktivitas anti bakteri senyawa metabolit yang spesiﬁ k dalam daun kelor.

## SIMPULAN
Kombinasi  ekstrak  etanol  daun  kelor  ( Moringa oleifera Lam.) konsentrasi 20, 30, 40 dan 50% dan amoksisilin  3  mg/mL  menunjukkan  efek  sinergis
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia  29
Vol 20, 2022
terhadap Staphylococcus aureus dan Eschericia coli ditandai dengan peningkatan diameter zona hambat secara in vitro .

## DAFTAR PUSTAKA
1.  Laupland KB, Pasquill K, Steele L, Parﬁ tt EC. Burden of bloodstream infection in older persons: a population‐ based study. BMC geriatrics. 2021 Dec;21(1):1-7.
2.  Kern WV,  Rieg  S.  Burden  of  bacterial  bloodstream infection—a  brief  update  on  epidemiology  and signiﬁ cance of multidrug-resistant pathogens. Clinical Microbiology and Infection. 2020 Feb 1;26(2):151-7.
3.  Karlowsky JA, Kelly LJ, Thornsberry C, Jones ME, Sahm DF. Trends in antimicrobial resistance among urinary tract infection isolates of Escherichia coli from female outpatients in the United States. Antimicrobial agents and chemotherapy. 2002 Aug;46(8):2540-5.
4.  Islam,  M,  et  al. Antibacterial  activity  of  crab  of amoxicillin  against Staphylococcus  aureus and Eschericia  coli. Journal  of Advanced  Scientific Research. 2011; 2(4): 63-6.
5.  Abou-Zeid  SM, Ahmed AI, Awad A,  Mohammed WA,  Metwally  MM, Almeer  R, Abdel-Daim  MM, Khalil  SR. Moringa  oleifera ethanolic  extract attenuates  tilmicosin-induced  renal  damage  in  male rats via suppression of oxidative stress, inﬂ ammatory injury,  and  intermediate  filament  proteins  mRNA expression.  Biomedicine  &  Pharmacotherapy.  2021 Jan 1;133:110997.
6.  Gomes F, Martins N, Barros L, Rodrigues ME, Oliveira MB, Henriques M, Ferreira IC. Plant phenolic extracts as  an  eﬀ ective  strategy  to  control Staphylococcus aureus , the dairy industry pathogen. Industrial Crops and Products. 2018 Feb 1;112:515-20.
7.  Elza, S., Fakhrurrazi., Harris A. Uji antibakteri ekstrak daun kelor ( Moringa oleifera l.) terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus  aureus .  JIMVET.  2018; 2(3):373-9.
8.  Chanda, S., and Rakholiya, K. Combination therapy: synergism  between  natural  plant  Extracts  and Antibiotics Against Infectious Diseases. 2011; 520-9.
9.  Kementerian  Kesehatan  Republik  Indonesia.  Daun kelor  ( Moringa  oleifera folium).  Farmakope  herbal Indonesia 2. 2017; 209.
10.  Dwidjoseputro.  Dasar-Dasar  Mikrobiologi.  Penerbit Djambatan. 1998.
11.  Maida,  S.  and  Lestari,  K.  Aktivitas  antibakteri amoksisilin terhadap bakteri gram positif dan bakteri gram negatif amoxiciillin. Jurnal  Pijar MIPA. 2019; 14(3):189-191.
12.  Agustie, A and Samsumaharto, R. Antibacterial activity test of moringa leaf extract ( Moringa oleifera lam.) against Staphylococcus aureus bacteria. Biomedika 6 (2). 2013; 14-9.
13.  Amalia, M. Uji aktivitas antibakteri ekstrak metanol daun  kelor  ( Moringa  oleifera l.)  terhadap  bakteri
Escherichia coli dengan metode sumuran. 2021; 1-4. 14.  Emelia,  R,  Saﬁ tri  D,  and Andriyani,  H.  Daun  kelor ( Moringa oleifera ) sebagai antibakteri terhadap infeksi bakteri Escherichia  coli .  Jurnal  infokes-politeknik piksi ganesha. 2021; 44-50.
15.  Purnasari, C. Uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun kelor ( Moringa oleifera Lam.) terhadap bakteri patogen resisten antibiotik. 2013; 21-9.
16.  Yunita, E, Permatasari, D, and Lestari D. Antibacterial activity of moringa leaves extract against Pseudomonas aeruginosa .  Jurnal  Ilmiah  Farmako  Bahari.  2020; 189-94.  https://journal.uniga.ac.id/index.php/JFB. Accessed August 21, 2021.