Journal of Aquaculture and Fish Health Vol. 9(2) - June 2020 DOI : 10.20473/jafh.v9i2.16126

## Karakteristik Pepton dari Limbah Ikan Kurisi ( Nemipterus sp.) sebagai Media Pertumbuhan Bakteri yang Terjamin Halal
Characteristics of Peptone from Threadfin Bream ( Nemipterus sp.) Waste as a Halal Bacterial Growth Medium
Moh. Dwi Pratomo 1 , Dian W. Wardanidan 1 , Nur A. Revonagara 1 , Dinda Ersyah 1 , Dwi Setijawati 1,2 , Hefti Salis Yufidasari 1,2 dan A. Aziz Jaziri 1,2,3*
1 Program Studi Teknologi Hasil Perikanan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Brawijaya, Jalan Veteran, Malang 65149, Indonesia
2 Kelompok Kajian Bioseafood, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Brawijaya, Jalan Veteran, Malang 65149, Indonesia
3 Halal Thoyib Science Center, Universitas Brawijaya, Jalan Veteran No 16 Ketawanggede, Lowokwaru Malang 65145, Indonesia

## Abstrak
Pepton  merupakan  sumber  nitrogen  sebagai  media pertumbuhan  mikroorganisme.  Umumnya,  pepton  di Indonesia yang berasal dari hewan darat yaitu sapi dan babi serta  turunannya  masih  impor  dengan  harga  yang  tinggi. Penggunaan pepton yang berasal dari babi jelas diharamkan, sedangkan  dari  sapi  dikhawatirkan  terdapat  penyakit  BSE ( bovine  spongiform  encephalopathy) dan  TSE (transmissible spongiform encephalopathy) yang dapat menular ke manusia. Sebagai alternatif, pepton dari limbah pengolahan ikan yang sudah  terjamin  halal,  salah  satunya  limbah  ikan  kurisi ( Nemipterus sp.). Tujuan penelitian ini mendapatkan pepton dengan  tiga  perlakuan  asam  berbeda  (asam  sitrat,  asam format,  dan  asam  propionat)  menggunakan  metode eksperimen  dengan  rancangan  acak  lengkap  (RAL).  Hasil penelitian  menunjukkan  bahwa  perlakuan  tiga  jenis  asam berpengaruh nyata terhadap nilai rendemen, total N, protein, protein  terlarut,  pertumbuhan  bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus serta  biomassanya.  Rata-rata  tertinggi rendemen  basah  didapatkan  66,17%  sedangkan  rendemen kering 3,87% pada perlakuan asam format. Nilai pH tertinggi 5,3  pada  asam  sitrat.  Uji  karakteristik  pepton  limbah  ikan kurisi  menunjukkan  bahwa  kandungan  protein  terlarut berkisar 2-4 g/L, total N 1-1,3 %, dan total protein 6.8-12 %. Asam amino yang terkandung terdiri dari asam amino esensial dan  non-esensial.  Nilai optical  density dan  biomassa  bakteri ditumbuhkan pada media yang menggunakan pepton limbah ikan kurisi lebih tinggi dibandingkan pertumbuhan bakteri E. coli dan S.  aureus pada  media  yang  menggunakan  pepton komersial.  Temuan  ini  mengungkapkan  bahwa  pepton  dari limbah ikan kurisi fisibel dikembangkan sebagai produk halal secara komersial untuk media pertumbuhan mikroba.
*Correspondence : azizjaziri@ub.ac.id
Received : 2019-11-24 Accepted : 2020-01-02
Kata Kunci : Jenis asam, Hidrolisis, Limbah kurisi, Mikroba, Pepton
Keywords : Fish waste, Hydrolysis, Type of acids, Peptone, Bacterial culture

## Abstract
Peptone  is  one  of  the  ingredients  needed  as  a  source  of nitrogen on the growth of microorganisms. Peptone generally comes from land animals namely pigs and cows, it shows the pigs  are  obviously  banned,  in  addition  cows  have  health problems such as BSE ( bovine spongiform encephalopathy ) and TSE ( transmissible spongiform encephalopathy) . Halal Peptone alternatives  derived  from  the  waste  of Nemipterus sp. potentially  to  be  explored  the  value  of  production  and characteristics of peptone as a side result of surimi production. The purpose of this research is to know the results of Peptone production using three different acids (citric acid, formic acid and  propionic  acid)  on  the  yield  value,  physicochemical characteristics  and  analysis  of  the  growth  of E.  coli and S. aureus bacteria.  The  highest  average  wet  yield  was  66.17% while a dry bath was 3.87% in acid format. The highest pH value is 5.3 on citric acid. The characteristic of peptone from Nemipterus sp.  by  product  such  as  soluble  protein  content ranged  2-4  g/L,  total  nitrogen  content  1-1.3%,  and  crude protein content  6.8-12%.  Amino  acids  contained in  peptone consist of essential amino acids and non-essential amino acids. Biomass  production  and  growth  culture  from E.  coli and S. aureus from  peptone  of Nemipterus sp.  waste  were  higher compared to commercial peptone. The findings revealed that it is feasible for peptone of fish processing by-product as future commercial halal product for microbial culture.

## PENDAHULUAN
Salah  satu  isu  utama  dan  menjadi perhatian  masyarakat  adalah  kehalalan suatu produk. Menurut UU No. 33 Tahun 2014  tentang  Jaminan  Produk  Halal, produk  yang  beredar  di  pasaran diantaranya  makanan,  minuman,  obat- obatan,  kosmetik,  produk  kimia,  biologi dan rekayasa genetik serta peralatan yang digunakan  pada  proses  produksi  wajib bersertifikasi  halal.  Salah  satu  produk mikrobiologi  adalah  media  pertumbuhan mikroba yaitu pepton.
Pepton merupakan salah satu bahan yang digunakan sebagai sumber nitrogen pada  media  pertumbuhan  mikroba (Saputra  dan  Nurhayati,  2013).  Pepton diekstraksi  dengan  hidrolisis  protein  dari bahan  pangan.  Kebutuhan  pepton  di Indonesia  rata-rata  5  juta  kg  per  tahun, dengan  nilai  USD  20  juta.  Pepton digunakan  di  laboratorium  dan  industri bioteknologi,  seperti  pangan,  farmasi, maupun  obat-obatan.  Kebutuhan  pepton dipenuhi  melalui  impor  dengan  harga
sangat  mahal  dan  cenderung  meningkat setiap tahun (Atma et al. , 2018). Namun, isu  kehalalan  suatu  produk  menjadi perhatian  khusus,  salah  satunya  pada produk  mikrobial.  Titik  kritis  produk mikrobial terdapat di media pertumbuhannya sebagaimana yang tertulis  pada Halal  Assurance  System (HAS) Majelis Ulama Indonesia (MUI) dan UU Jaminan Produk Halal (JPH).
Umumnya,  sumber  utama  pepton berasal  dari  hewan  darat,  seperti  babi, sapi.  Babi  diharamkan  menurut  Islam, sementara  sapi  memiliki  masalah  seperti bovine  spongiform  encephalopathy (BSE), dan transmissible  spongiform  encephalo- pathy (TSE)  (Trivedi et  al .,  2015)  dan beberapa  agama  tidak  membolehkan menggunakan  sapi.  Oleh  karena  itu, dibutuhkan  pepton  dari  bahan  baku lainnya, yang tidak berisiko penyakit dan jelas  kehalalannya,  seperti  limbah pengolahan  hasil  perikanan.  Limbah perikanan sangat potensial sebagai pepton
halal, dimana jumlah limbah pengolahan hasil  perikanan  sebesar  40%.  Produksi perikanan  nasional  mencapai  23,26  juta ton  pada  2017.  Apabila  dihitung limbahnya didapatkan sebanyak 6,97 juta ton,  dan  apabila  termanfaatkan  menjadi pepton maka menghasilkan 24,9 ribu ton, dimana 1 kg pepton membutuhkan 280 kg ikan.
Produksi  pepton  halal  secara kimiawi  menggunakan  pelarut  asam, seperti asam format, sitrat, dan propionat (Shirahigue et al ., 2018). Pelarut tersebut termasuk  halal positive  list ,  melaporkan bahwa  pepton  dari  limbah  ikan  nila  dan cobia  dengan  kombinasi  asam  sitrat, propionat  dan  format  mempunyai kesamaan  dengan  pepton  komersial (Shirahigue et  al .,  2018).  Hal  ini memberikan peluang pemanfaatan limbah ikan lainnya sebagai sumber pepton halal, salah  satunya  limbah  pengolahan  ikan surimi.
Pengolahan surimi umumnya menggunakan ikan kurisi ( Nemipterus sp.) sebagai  bahan  baku  utama.  Limbah pengolahan  surimi  dari  ikan  kurisi  salah satunya kepala ikan kurisi yang mencapai 30%  yang  tidak  banyak  dimanfaatkan, bahkan ketersediaannya mampu menyebabkan pencemaran di lingkungan. Oleh  karena  itu,  pemanfaatan  limbah surimi menjadi produk yang memiliki nilai jual dan nilai tambah sangat diharapkan, seperti  sebagai  bahan  produksi  pepton halal untuk pertumbuhan mikro- organisme.  Selain  itu,  tidak  ditemukan penelitian yang mengeksplorasi
pemanfaatan  limbah  surimi  dari  ikan kurisi  sebagai  produksi  pepton,  sehingga penelitian ini untuk memproduksi inovasi media ready to use terjamin halal sebagai sumber  nitrogen  pada  pertumbuhan mikroorganisme  dari  limbah  pengolahan surimi ikan kurisi.

## METODOLOGI Waktu dan Tempat
Penelitian ini dilakukan di Universitas Brawijaya.

## Materi Penelitian
Bahan  yang  digunakan  untuk pembuatan  pepton  halal  meliputi  limbah kepala  ikan  kurisi  ( Nemipterus sp.)  yang diperoleh  dari  PT.  Kelola  Mina  Laut Tuban,  asam  sitrat,  asam  format,  asam propionat,  aluminium  foil,  kertas  label, dan  akuades.  Adapun  bahan  yang digunakan untuk analisa meliputi larutan H 2 SO 4 pekat, NaOH 45%, tablet Kjeldahl, 4M asam metanesulfonat yang mengandung  0,2%  (v/v)  3-2  (2- aminoetil),  3M  NaOH, 0,2M  buffer  sitrat (pH  2,2),  Alikuot  0,04  mL,  pepton komersial  (merek  Difco),  1M  HCl,  dan Yeast extract.
Alat  yang  digunakan  dalam  proses pembuatan  pepton  halal  yaitu  baskom, blender, coolbox , stopwatch ,  termometer, oven  vakum, hot  plate , beaker  glass 500 ml,  nampan  aluminium,  spatula,  gelas ukur 100 ml, timbangan digital, sentrifuge , waterbath , dan spektrofotometer . Alat yang digunakan untuk analisa adalah pH meter, beaker  glass ,  timbangan  analitik,  kuvet, oven,  cawan  porselen,  tanur,  desikator, dan soxhlet.

## Rancangan Penelitian
Metode  yang  digunakan  adalah metode eksperimen. Metode ini bertujuan untuk  mengetahui  ada  atau  tidaknya pengaruh  penambahan  pelarut  asam kualitas produksi pepton halal.

## Prosedur Kerja
Prosedur penelitian produksi pepton halal dari limbah ikan kurisi ( Nemipterus sp.)  seperti  yang  dijelaskan  oleh Shirahigue et  al. (2018)  dengan  sedikit modifikasi.  Tahapan  pertama  yang dilakukan  adalah  analisis  dan  produksi pepton dari limbah surimi kurisi. Limbah kepala ikan kurisi dihaluskan dan diukur pH  awal,  kemudian  ditambahkan  10% akuades  diikuti  dengan  penambahan  5% asam  format,  propionat  dan  sitrat  pada masing-masing perlakuan. Setelah penambahan  asam,  dilakukan  perlakuan pH  terukur  pada  nilai  pH  4.  Dilakukan pengadukan  sampai  homogen  kemudian
ditutup  menggunakan  aluminium  foil hingga  separuh  bagian  daripada beaker glass tertutup. Perlakuan selanjutnya yaitu inkubasi  pada  suhu  40 o C  menggunakan waterbath selama 120 jam (5 hari) dengan pengecekan dilakukan setiap 24 jam sekali dengan  cara  menggojok  larutan  pada beaker  glass .  Selama  inkubasi  terjadi pembusukan  yang  merupakan  proses hidrolisis  yakni  perombakan  enzim endogen dalam memecah protein menjadi peptida.  Setelah  masa  inkubasi  selesai, pindahkan 12 mL larutan ke dalam kuvet berukuran  15  mL,  kemudian  sentrifuge menggunakan  kecepatan  5000  rpm selama 20 menit.
Hasil  sentrifuge  didapatkan  3  fase sampel  yaitu solid  phase,  aquoeous  phase dan oil  phase. Sampel  yang  diambil  dan dilakukan  uji  lanjutan  adalah aqueous phase, sehingga  pengambilan aqueous phase dilakukan  menggunakan  mikro pipet  dan  dipindahkan  ke  dalam  tabung vial  kaca.  Rendemen  yang  didapatkan diukur pH akhir menggunakan pH meter dan  dihitung  berat  rendemen  yang didapatkan  menggunakan  timbangan digital. Setelah didapatkan data rendemen,  perlakuan  selanjutnya  adalah spray dry yang bertujuan untuk mengubah sampel  pada  fase  cair  menjadi  fase padatan atau bubuk,
kemudian dilanjutkan ke tahap kedua.

## Rendemen
Rendemen pepton diperoleh dengan menghitung  perbandingan  antara  berat akhir  yang  dihasilkan  dengan  berat  awal (limbah ikan kurisi). Besarnya rendemen dapat dihitung menggunakan rumus:
Rendemen = Berat akhir Berat awal x 100%

## Nilai pH Pepton
Sebanya  15  mL  sampel  dituang  ke dalam  beaker  glass  50  mL  kemudian diukur  derajat  keasamannya  (pH)  pada suhu kamar menggunakan alat pH meter.

## Analisis Proksimat
Tahap  kedua  yang  dilakukan  yaitu analisis dan karakterisasi kimiawi pepton halal berupa komposisi proksimat bahan, N total, total protein dan protein terlarut pepton (AOAC, 2005).
Penentuan  kadar  air  dilakukan dengan  metode  gravimetri  (pengeringan dengan oven). Kadar air dapat ditimbang dengan rumus :
Kadar Air= W1-W2 Berat Sampel x 100 % Keterangan : W 1 =  Berat  (sampel  +  cawan)  sebelum dikeringkan
W 2 =  Berat  (sampel  +  cawan)  setelah dikeringkan
Penentuan  kadar  protein  dilakukan dengan  metode  Kjeldahl.  Perhitungan kadar protein menggunakan rumus :
% N= ( ml HCl-ml blangko ) x 14.007 x N HCl mg Sampel x 100 %
% Protein = % N x 6,25
Kadar  lemak  dapat  ditentukan menggunakan metode Soxhlet. Penentuan kadar lemak menggunakan rumus:
Kadar Lemak= (berat labu akhir-berat labu awal) Berat Sampel x 100 %

## Asam Amino
Komposisi asam amino dari sampel pepton  dianalisis  sesuai  dengan  metode Nagarajan et  al .  (2012)  dengan  sedikit modifikasi.  Sampel  dihidrolisis  di  bawah tekanan yang dikurangi dalam 4 M asam metanesulfonat  yang  mengandung  0,2% (v/v) 3-2 (2-aminoetil) indole pada 115 o C selama  24  jam.  Hidrolisat  dinetralkan dengan  3,5  M  NaOH  dan  diencerkan dengan  0,2  M  buffer  sitrat  (pH  2,2). Alikuot  0,04  ml  diaplikasikan  pada penganalisis  asam  amino  (MLC-703; Jepang).

## Persiapan Media Kultur
Media  cair  untuk  kultur  mikroba menggunakan  dekstrosa  0,1%  (v/v)  dan pepton  0,5%  (w/v)  dalam  air  destilat. Pepton  komersial  (Difco,  Pittsburgh,  PA,
USA) digunakan sebagai pembanding. pH dikondisikan  7,0  menggunakan  1  M  HCl atau 1 M NaOH. Media kultur disterilisasi dengan autoklaf pada suhu 121 o C selama 15 menit (Poernomo dan Buckle, 2002). Pertumbuhan Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus juga dapat dikultur pada  media Luria  Bertani  Broth seperti penelitian yang dilakukan oleh Gildberg et al. (2010),  komposisi LB  Broth yang digunakan  yaitu  1%  (b/v)  NaCl,  0,5%
(b/v) yeast extract dan 1% (b/v) pepton. Disterilisasi  dan  hasil  kultur  diinkubasi pada suhu 37 O C selama 24 jam.

## Deteksi  Pertumbuhan  Mikroba  dari Nilai Optical Density (OD)
Setelah dilakukan regenerasi bakteri, satu koloni bakteri dimasukkan di dalam  larutan  steril  yang  terdiri  dari 0,89% NaCl. Volume larutan 100 µ L dari setiap  suspensi  (mengandung  1-2 × 10 8 CFU mL -1 ) yang diinokulasi di dalam 100 mL  media  cair  yang  telah  disterilisasi. Kultur diinkubasi pada suhu 37 o C selama 24 jam. Pertumbuhan bakteri diukur pada 600 nm secara periodik sampai 36 jam.

## Biomassa
Produksi  biomassa  diukur  menurut Poernomo dan Buckle (2002). Sampel 25
mL pepton (komersial dan uji) dipindahkan  ke falcon  tube steril  dan disentrifugasi 5000 rpm selama 20 menit. Endapan  diambil  dan  ditambahkan  2  ml larutan  NaCl  0,85%  (w/v)  kemudian disentrifugasi lagi di 5.000 rpm selama 20 menit.  Endapan  dipindahkan  ke  cawan petri  untuk  merekam  berat  segar, kemudian  dioven  pada  suhu  105  °C selama  24  Jam,  dan  ditimbang  untuk mencatat berat kering. Nilainya dinyatakan sebagai biomassa 100 ml/g.

## Analisis Data
Analisis data dilakukan menggunakan one  way ANOVA  RAL sederhana  dengan  tiga  kali  ulangan  dan uji  Tukey  dengan software SPSS  20.0. Setelah data dianalisis kemudian diinterpretasikan  untuk  menentukan signifikansi  setiap  perlakukan  yang  diuji cobakan pada penelitian ini.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Komposisi Proksimat
Hasil proksimat bahan baku limbah kepala ikan kurisi ( Nemipterus sp.) berupa kadar  air,  protein  dan  lemak  terdapat pada Tabel 1. Tabel 1. Hasil proksimat (%) kepala ikan kurisi. Parameter % Proksimat Protein 16,52 ± 0,22 Lemak 0,53 ± 0,03 Kadar Air 79,26 ± 0,19
Berdasarkan  analisis  proksimat limbah ikan kurisi didapatkan kandungan protein  sebesar  16,52%,  lemak  0,53%, dan  kadar  air  79,26%.  Saputra  dan Nurhayati  (2013)  menyatakan  bahwa kandungan  protein  bahan  baku  pepton ikan  lebih  tinggi  dari  pada  bahan  selain ikan,  dan  sangat  bagus  digunakan produksi  pepton  dikarenakan  semakin tinggi  proteinnya,  maka  total  nitrogen yang  terkandung  pada  pepton  akan
semakin  tinggi,  dimana  nitrogen  adalah salah  satu  unsur  yang  digunakan  untuk pertumbuhan  mikroorganisme  (Najim et al. , 2015).
Rendemen Rendemen  merupakan  salah  satu parameter  yang  penting  dalam  proses pembuatan  pepton.  Semakin  tinggi rendemen  yang  dihasilkan  dalam  proses pembuatan pepton menandakan semakin
efisien  perlakuan  yang  diterapkan  serta tingginya  kandungan  pepton  dalam limbah  ikan  kurisi  dengan  catatan  tidak mengesampingkan  sifat  fisika  maupun kimia yang lainnya. Nilai rendemen basah pepton  yang  berasal  dari  limbah  kurisi yang  diekstrak  dengan  perlakuan  asam berbeda  (asam  sitrat,  asam  format  dan asam  propionat)  dan  nilai  rendemen pepton  setelah  mengalami  pengeringan menggunakan spray  dryer dapat  dilihat pada Gambar 1.
Hasil analisis ANOVA menunjukkan perbedaan  jenis  asam  menghasilkan perbedaan  nyata  terhadap  rendemen basah  dan  kering  ( p <0,05).  Hal  ini menunjukkan  bahwa  terdapat  pengaruh nyata  antara  perbedaan  asam  dengan
hasil rendemen yang didapatkan.
Persentase rata-rata rendemen basah dan kering tertinggi didapatkan oleh
perlakuan  asam  format  dengan  nilai 66,17%  dan  3,87%.  Hasil  tertinggi  dari rendemen  kering  pepton  kepala  ikan kurisi  sebesar  3,87%.  Rendemen  yang dihasilkan dalam penelitian ini lebih tinggi jika  dibandingkan  dengan  pepton  yang berasal  dari  ikan  selar  yaitu  3,54% (Wijayanti, 2009). Asam format mempunyai  kemampuan  autolisis  pada bahan  baku  lebih  maksimal  dan  dapat memisahkan  fase  cair  ( crude  peptone ) dengan fase minyak lebih baik dibandingkan  kedua  asam  lainnya (Gildberg et al ., 2010). (a)
(b)
Gambar 1.  (a)  Rendemen  basah  (b)  rendemen  kering  pepton  ikan  kurisi.  AP:  asam propionat, AF: asam fosfat, AS: asam sitrat.
Nilai pH Derajat  keasaman  (pH)  pada produksi  pepton  menjadi  salah  satu parameter penting dalam produksi pepton dari limbah ikan kurisi. Pengukuran nilai
pH  larutan  dilakukan  untuk  mengetahui sifat  pepton  yang  terhidrolisis  oleh  tiga perlakuan asam berbeda. Nilai rerata pH pepton  dari  limbah  ikan  kurisi  dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2.   Nilai rerata pH.
Perlakuan pH Awal Sampel pH Awal Inkubasi pH Akhir Inkubasi Asam Propionat 6,9 4,1 3,6 Asam Format 4,1 4,5 Asam Sitrat 4,1 5,3 Nilai pH yang rendah menunjukkan terdenaturasinya  protein  dalam  daging ikan  kurisi  sehingga  mengakibatkan pemecahan  ikatan  asam  amino.  Nilai  pH yang didapatkan menunjukkan
konsentrasi  ion  H-  yang  dilepas  selama masa  hidrolisis  (Saputra  dan  Nurhayati, 2013).  Hasil  penelitian  Yin et  al. (2008) menyebutkan  bahwa  selama  hidrolisis, kisaran  pH  berada  pada  4,0-6,0  lalu
mengalami  perubahan  pada  kisaran  3,0- 7,0.

## Total  Protein,  N  Total  dan  Protein Terlarut
Nilai  total  protein,  N  total,  dan protein terlarut masing-masing perlakuan dapat dilihat pada Tabel 3. Hasil analisis ANOVA  menunjukkan  perbedaan  jenis asam  menghasilkan  perbedaan  nyata terhadap  total  protein,  protein  terlarut dan  total  Nitrogen  (p<0,05).  Perlakuan terbaik  yang  menghasilkan  protein terlarut,  total  protein  dan  total  nitrogen dengan membandingkan pepton komersial dan pepton hasil hidrolisis asam propionat,  format,  dan  sitrat  adalah
pepton dengan perlakuan asam propionat yang  mendapatkan  nilai  3,68  g/l,  8,12% dan  1,30%.  Hasil  ini  menujukan  bahwa pepton  dari  limbah  ikan  kurisi  memiliki nilai total protein dan total nitrogen lebih tinggi  daripada  pepton  komersial  yaitu 3,13% dan 0,50%.
Pepton yang mempunyai kandungan nitrogen yang tinggi merupakan  pepton  dengan  mutu  tinggi. Uji total nitrogen merupakan analisis yang dilakukan untuk mengetahui kemampuan pepton  dalam  memenuhi  kebutuhan nitrogen bagi mikroorganisme (Wijayanti, 2009). Semakin tinggi total nitrogen yang didapatkan,  maka  semakin  tinggi  nutrisi yang  tersedia  untuk  digunakan  pada pertumbuhan mikroba.
Tabel 3. Total protein, N total, dan protein terlarut. Perlakuan Total Protein N Total Protein Terlarut Asam Propionat 8,12±0,05 c 1,3±0,01 c 3,69±0,06 c Asam Format 7,14±0,04 b 1,15±0,01 b 2,79±0,03 b Asam Sitrat 6,27±0,03 a 1,01±0,01 a 2,89±0,05 a
Keterangan: Superskrip berbeda pada kolom yang sama menunjukkan perbedaan nyata (p<0,05).
Komposisi Asam Amino Nilai  asam  amino  yang  didapatkan dari hasil hidrolisis tiga asam dapat dilihat pada  Tabel  4.  Nilai  asam  amino  semua perlakuan  sedikit  lebih  rendah  apabila dibandingkan  dengan  pepton  komersial, tetapi  apabila  dibandingkan  dari  ketiga perlakuan  asam,  perlakuan  terbaik  pada perlakuan  asam  propionat.  Nilai  asam
amino  tertinggi  pada  limbah  kepala  ikan kurisi  dengan  hidrolisis  asam  berbeda didapatkan  oleh  asam  glutamat  dengan nilai  4,92  sedangkan  untuk  pepton komersial didapatkan nilai tertinggi pada glisin sebanyak 16,4. Pepton yang berasal dari  hewan  seperti  sapi,  babi  dan sebagainya  memiliki  nilai  glisin  yang tinggi (Wijayanti, 2009).
Tabel 4. Hasil asam amino fraksi cair. Asam Amino Difco* AP AF AS Alanin 7,7 2,17 0,32 0,11 Arginine 8,6 2,90 0,39 0,05 Aspartic acid 7,7 2,85 0,44 0,18 Glycine 16,4 3,85 0,56 0,24 Isoleucine 1,8 1,41 0,19 0,08 Leucine 4,4 2,67 0,36 0,13 Glutamic acid 12,1 4,92 0,72 0,09 Lysne 4,7 2,59 0,37 0,04 Cystine 0,2 n.d n.d n.d Methionine 0,8 n.d n.d n.d Phenylalanine 2,6 1,91 0,24 0,09 Tyrosine 0,9 1,32 0,17 0,02
Threonine 2,5 1,77 0,24 0,03 Asam Amino Esensial Proline n.d 1,93 0,29 0,10 Valine 2,8 1,69 0,23 0,09 Histidin 0,8 0,97 0,12 0,02 Serin 3,9 1,59 0,23 0,08 Taurin n.d n.d n.d n.d *Shirahigue et al . (2018); n. d = not determined.
Optical Density Pengukuran  OD  menggunakan spektrofotometer  dengan  pengukuran pada waktu inkubasi E. coli dan S. aureus dengan membandingkan pepton komersial  dan  pepton  hasil  ekstraksi limbah  kurisi  pada  jam  ke-0  hingga  jam ke-36. Performa pertumbuhan E. coli dan pertumbuhan S. aureus dapat dilihat pada Gambar 2.
(a)
(b)
Gambar 2.  Pertumbuhan mikroba berdasarkan OD 600nm (a) E. coli dan(b) S. aureus .
Pertumbuhan tertinggi E.coli dan S. aureus didapatkan  pada  pertumbuhan dengan pepton yang berasal dari hidrolisis asam propionat. Pertumbuhan eksponensial tidak dapat diukur berdasarkan  lama  waktu,  pertambahan jumlah  sel  bakteri  pada  media  biakan berdasarkan  penggunaan  nutrien  dan produksi hasil sampingan yang dihasilkan (Ingraham et  al. ,  2001).  Pepton  yang berasal  dari  hidrolisis  limbah  ikan mendukung pertumbuhan berbagai mikroorganisme,  salah  satunya S.aureus berkisar  pada  7,00-10,16  log  CFU/ml.
Perbedaan  kecepatan  maksimum  pada media  dengan  beberapa  macam  pepton hasil  hidrolisis  menggunakan  asam berbeda diduga disebabkan oleh perbedaan  ukuran  peptida  (Saputra  dan Nurhayati, 2013).

## Biomassa
Hasil  produksi  biomassa  bakteri E. coli dan S. aureus pada pepton komersial dan  non  komersial  hasil  ekstraksi menggunakan tiga asam berbeda dengan ditampilkan pada Gambar 3.
Gambar 3.  Produksi biomassa (a) E. coli dan (b) S. aureus . KT: Perlakukan kontrol (pepton komersial),  AP:  perlakukan  asam  propionat,  AF:  perlakuan  asam  fosfat,  AS: perlakuan asam sitrat.
Hasil analisis ANOVA menunjukkan perbedaan  jenis  asam  menghasilkan perbedaan nyata terhadap nilai biomassa ( p <0,05).  Biomassa  tertinggi  pada pertumbuhan E.  coli  dan  S.  aureus didapatkan  pada  pepton  hasil  hidrolisis menggunakan asam propionat yaitu 62,40 mg  dan  54,26  mg.  Hasil  produksi biomassa pada pepton hasil hidrolisis ikan kurisi  mendapat  hasil  lebih  tinggi dibandingkan  pepton  komersial  yaitu 24,96 mg dan 17,33 mg.
Hal ini menandakan bahwa pepton yang  berasal  dari  hidrolisis  ikan  kurisi efektif  dalam  menumbuhkan  media berdasarkan  hasil  pengujian  biomassa yang menandakan bahwa sumber Nitrogen  dan  Karbon  pada  pepton  untuk pertumbuhan  bakteri  lebih  banyak  dan lebih maksimal. Semakin tinggi biomassa yang didapatkan, maka efisiensi penggunaan pepton sebagai substrat pada pertumbuhan  mikroba  semakin  tinggi (Poernomo dan Buckle, 2002).

## UCAPAN TERIMA KASIH
Kami  mengucapkan  terima kasih  kepada  semua  pihak  yang membantu dalam penyelesaian penelitian ini.

## KESIMPULAN
Produksi  pepton  halal  terbaik didapat  pada  perlakuan  asam  propionat dengan  pH  3.6  rendemen  kering  1.7%
nilai total protein 8.12% Nilai N total 1.3% dan protein terlarut 3.68 g/L, biomassa E. coli 62,40 mg dan S. aureus 54,26 mg dan hasil performa pertumbuhan bakteri E.coli dan S.aureus dengan  OD  tertinggi  dari semua perlukan termasuk pepton komersial.  Temuan  ini  mengungkapkan bahwa  pepton  dari  limbah  ikan  kurisi fisibel  dikembangkan  sebagai  produk halal  secara  komersial  untuk  media pertumbuhan mikroba.
Untuk
memproduksi  1  kg  pepton  hanya dibutuhkan  70  kg  limbah  kepala  ikan kurisi  yang  dihidrolisis  menggunakan asam propionat.

## DAFTAR PUSTAKA
Association of Official Analytical Chemists and Association of Official
Agricultural  Chemists  (US),  2005. Official  methods  of  analysis  of  the Association  of  Official  Analytical Chemists (Vol.  2).  Association  of Official Analytical Chemists..
Atma,  Y.,  Taufik,  M.  dan  Seftiono,  H.,
2018. Identifikasi Resiko Titik Kritis Kehalalan  Produk  Pangan:  Studi Produk Bioteknologi. Jurnal Teknologi , 10 (1), pp.59-66. 10.24853/jurtek.10.1.59-66
Gildberg, A., Dahl, R., Mikkelsen, H. dan Nilsen,  K.,  2010.  Peptones  from Atlantic  cod  Stomach  as  nitrogen sources in growth media to marine bacteria. Journal  of  Aquatic  Food Product  Technology , 19 (2),  pp.75-
83. https://doi.org/10.1080/ 10498850.2010.486523 Ingraham,  J.L.,  Ingraham,  C.A.  and
Prentiss,  H.,  2001.  Introduction  to microbiology:  a  case-history  study approach, 3 ed.,São Paulo: Cengage Learning. Pp. 199. Nagarajan, M., Benjakul, S., Prodpran, T., Songtipya,  P.  dan  Kishimura,  H., 2012. Characteristics and functional properties  of  gelatin  from  splendid squid  (Loligo  formosana)  skin  as affected by extraction temperatures. Food  Hydrocolloids , 29 (2),  pp.389- 397.  10.1016/j.foodhyd.2012.04. 001.
Najim, S.M., Al-Noor, J.M. dan Al-Waely, W.A.,  2015.  Extraction  of  crude peptone from fish wastes for use as a nitrogen source in microbiological media. Global  Journal  of  Fisheries and  Aquaculture  Researches , 2 ,
pp.29-37. https://www.
researchgate.net/publication/3092 41783_Extraction_of_crude_pepton
e_from_fish_wastes_for_use_as_a_n itrogen_source_in_microbiological_ media.
Poernomo,  A.  dan  Buckle,  K.A.,  2002. Crude  peptones  from  cowtail  ray (Trygon sephen) viscera as microbial  growth  media. World Journal of Microbiology and Biotechnology , 18 (4), p.337.
https://doi.org/10.1023/A:101520 8519709 Saputra,  D.  dan  Nurhayati,  T.,  2013. Produksi  dan  aplikasi  pepton  ikan selar  untuk  media  pertumbuhan bakteri. Jurnal  Pengolahan  Hasil Perikanan Indonesia , 16 (3), pp.215-
223. https://doi.org/10.17844/ jphpi.v16i3.8059. Shirahigue,  L.D.,  Ribeiro,  I.S.,  Sucasas, L.F.D.A., Anbe, L., Vaz-Pires, P. dan Oetterer,  M.,  2018.  Peptones  in Silage  from  Tilapia  (Oreochromis niloticus) and Cobia (Rachycentron canadum)  Waste  as  a  Culture Medium for Bioprocesses. Journal of aquatic  food  product  technology ,
27 (6), pp.712-721. https://doi.org/ 10.1080/10498850.2018.1484830. Trivedi,  M.K.,  Branton,  A.,  Trivedi,  D.,
Nayak,  G.,  Singh,  R.  dan  Jana,  S., 2015.  Physical,  spectroscopic  and thermal characterization of biofield treated  fish  peptone. European Journal  of  Biophysics , 3 (6),  pp.51- 58. 10.11648/j.ejb.20150306.12. Wijayanti, A.T., 2009. Kajian Penyaringan dan  Lama  Penyimpanan  dalam Pembuatan  Fish  Peptone  dari  Ikan Selar Kuning (Caranx leptolepis)[skripsi]. Program  Studi
Teknologi  Hasil  Perikanan,  Fakultas Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan, Institut  Pertanian  Bogor.  Bogor , 88 . https://repository.ipb.ac.id/handle /123456789/11463.
Yin, S.W., Tang, C.H., Cao, J.S., Hu, E.K., Wen,  Q.B.  dan  Yang,  X.Q.,  2008.
Effects of limited enzymatic hydrolysis  with  trypsin  on  the functional  properties  of  hemp (Cannabis sativa L.) protein isolate. Food  chemistry , 106 (3),  pp.1004-
1013. 10.1016/j.foodchem.2007. 07.030.