DOI: 10.24198/jit.v18i2.19504 Unpad Press                                                                                                            Available online at http://jurnal.unpad.ac.id/jurnalilmuternak
Kandungan Lignin, Selulosa dan Bahan Ekstrak Tanpa Nitrogen L.Minor
Hasil Fermentasi Menggunakan Trichoderma
harzianum dan
Saccharomyces cerevisiae
H. Setiyatwan 1a , E. Harlia 1 , D. Rusmana 1
1 Fakultas Peternakan, Universitas Padjadjaran, Jl. Raya Bandung-Sumedang KM. 21, 45363, Sumedang, Indonesia, Phone:+6222 7798241, Fax: +6222 7798212 a email: hendisetiyatwan@gmail.com

## Abstrak
Latar  Belakang  dan  Tujuan: L.  minor telah  digunakan  sebagai  pakan  ternak,  mengandung  nutrient sangat lengkap yaitu protein kasar (22,4%), asam amino lisin (6,9%), metionin (1,4%), dan histidin (2,7%) tetapi kandungan serat kasar (10,16%) dan lignin (17,98%) tinggi. Penggunaan L. minor pada unggas dibatasi hingga 5%. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mendapatkan kandungan lignin, selulosa paling rendah  dan bahan ekstrak tanpa nitrogen paling tinggi L. minor hasil fermentasi dengan menggunakan Trichoderma harzianum (Th) dan Saccharomyces cerevisiae (Sc). Bahan dan Metode: Fermentasi L.  minor dibagi  menjadi  dua  tahap:  I.  Th  (3  x  10 7 spora  /  100  gram  substrat)  dengan menambahkan  ZnCO 3 (186  ppm)  dan  dl-methionine  (286  ppm);  II.  Sc  (3  x  10 7 spora  /  100  gram substrat). Rancangan percobaan yang digunakan adalah rancangan acak lengkap (RAL) dengan 20 unit percobaan. Perlakuan terdiri atas P1 (Fermentasi menggunakan Th selama 1 hari dilanjutkan dengan Sc selama  9  hari),  P2  (Th  selama  3  hari  dilanjutkan  dengan  Sc  selama  7  hari),  P3  (Th  selama  5  hari dilanjutkan dengan Sc selama 5 hari), P4 ( Th selama 7 hari dilanjutkan dengan Sc selama 3 hari), P5 (Th  selama  9  hari  dilanjutkan  dengan  Sc  selama  1  hari)  diulang  empat  kali.  Pengaruh  perlakuan dianalisis dengan analisis varian dan dilanjutkan dengan uji Duncan untuk mengetahui perbedaan antara perlakuan. Hasil: Fermentasi menggunakan Th dan Sc memiliki efek yang signifikan (P <0,05) pada kandungan  lignin,  selulosa  dan  bahan  ekstrak  tanpa  nitrogen.  Waktu  fermentasi  paling  baik  adalah fermentasi dengan menggunakan Th selama 3 hari dan Sc selama 7 hari (P2) yang meningkatkan BETN (34,42%), dan menurunkan Lignin(1,25%) dan Selulosa (10,62%). Kesimpulan: Fermentasi L. minor dengan kombinasi Th selama 3 hari dan Sc selama 7 hari dengan menambahkan dl-methionine dan Zn telah menghasilkan BETN tertinggi, kandungan lignin dan selulosa terendah.
Kata kunci: Kualitas nutrien L. minor ,  itik, fermentasi, Trichoderma harzianum , Saccharomyces cerevisiae .

## (Lignin, Selulos and Non Nitrogen Free Extract  L.Minor Fermentation Using Trichoderma harzianum AND Saccharomyces cerevisiae)

## Abstract
Background and Objectives: L. minor has been used as animal feed, which contains high nutrition, i.e. Crude protein (22,4%), amino acids lysin (6,9%), methionin (1,4%), and hystidin (2,7%), but high crude fiber  (10,16%)  dan  lignin  (17,98%).  Provision  L.  minor  in  poultry  is  limited  to  5%.  Therefore,  the objective of the study is to get the best quality of  L. minor nutrient through fermentation process by using Trichoderma harzianum (Th) and Saccharomyces cerevisiae (Sc).  Materials and Methods: L. minor fermentation is divided into two stages: 1.Th (3 x 10 7 spores /100 grams substrate) with added ZnCO 3 (186  ppm)  and  dl-methionine  (286  ppm),  II.  Sc  (3  x  10 7 spores  /100  grams  of  a  substrate). Completed randomized design (CRD) was used in experimental design with 20 experimental units. The treatments consist of P1 (Fermentation using Th for 1 day continued with Sc for 9 days), P2 (Th for 3 days continued with Sc for 7 days), P3 (Th for 5 days continued with Sc for 5 days), P4 (Th for 7 days continued with Sc for 3 days), P5 (Th for 9 days continued with Sc for 1 day) with four replications. Analysis of variance was conducted to know the treatment effect. It was then followed by the Duncan test to know the difference between treatments. Results: Fermentation using Th and Sc has a significant
effect (P<0.05) on lignin,  selulos and non nitrogen free extract. The best duration of fermentation is Th for 3 days and Sc for 7 days (P2) that increasing non nitrogen free extract (34,42%), and decreasing lignin (1,25%) and selulosa (10,62%). Conclusion: L. minor fermentation with the combination of Th for 3 days and Sc for 7 days with added dl-methionine and Zn has yielded the highest non nitrogen free extract, and the lowest lignin and selulosa contents.
Keywords:  Duckweed  nutrient  quality,  fermentation,  Trichoderma  harzianum,  Saccharomyces cerevisiae.

## Pendahuluan
Penyediaan  bahan  pakan  masa  depan akan  tertuju  pada  bahan  pakan  alternatif terbarukan,  ramah  lingkungan,  dan  efisien. Bahan  pakan  demikian  berasal  dari  limbah pertanian,  by  produk,  west  produk  dan  gulma air.  Bahan baku asal gulma air secara kuantitas ketersediannya  melimpah,  mudah  didapat  dan harganya  murah  sehingga  memungkinkan untuk  dikembangkan.  Salah  satu  gulma  yang potensial  untuk  dikembangkan  adalah Lemna minor ( L. minor ) .
L.  minor merupakan  gulma  perairan yang  hidup  dipermukaan  air  dengan  periode pertumbuhan  yang  panjang  (Xu et  al .,  2011). Perkembangannya  sangat  cepat  dan  menutupi seluruhan  permukan  air.  Tumbuh  baik  di pinggir  sawah,  tambak,  dan  selokan. Kandungan  karbohidrat    40-50%,  lipid  3-7% dan abu 24% (Gwaze and Mwale, 2015; Zhao et al ., 2014). L. minor yang dibudidayakan dengan  pemupukan  intensif  menghasilkan produksi  biomassa  sebanyak  1,76-2,34%. Kandungan  nutrient  sangat  lengkap  yaitu protein  kasar  (22,4%),  serat  kasar  (10,16%), asam amino lisin (6,9%), metionin (1,4%), dan histidin (2,7%) (Akter., et.al . 2011), akan tetapi penggunaan  dalam  ransum  unggas  terbatas sampai tingkat 5%.  Hal demikian disebabkan karena  kandungan  lignin  (17,98%),    selulosa (15,79%)  dan  hemiselulosa  (24,65%)  yang sangat  tinggi  (Arif et  al .,  2018).    Fermentasi merupakan  salah  satu  cara  untuk  mengatasi keterbatasan penggunaan.
Fermentasi  adalah  pengolahan  pakan secara  biologi  menggunakan  mikroba  baik bakteri maupun jamur (Parisutham et al. , 2014; Wan and Li.,  2012).  Enzim  yang  dihasilkan mikroba  merupakan  penentu  keberhasilan pengolahan.  Fermentasi  dapat  meningkatkan ketersediaan  nutrien  dan  mengurangi  anti- nutrisi    (Haustetn, et.al. ,  1990).    Pemecahan fraksi  serat  kasar  yaitu  selulosa,  lignin,  dan hemiselulosa menjadi monomer dapat dilakukan dengan menggunakan Trichoderma harzianum .
Trichoderma  harzianum merupakan mikroba yang sangat efektif dalam menurunkan kandungan serat kasar tepung inti sawit
(Ginting dan Krisnan. 2006).   Kandungan serat kasar L. minor menurun sebesar 76,06% setelah difermentasi  dengan Trichoderma  harzianum selama 6 - 9 hari (Setiyatwan.2007).  Penurunan kandungan  serat  kasar  pada  substrat  hasil fermentasi  tidak  diikuti  oleh  peningkatan kandungan  nutrient.  Bahan  pakan  asal  gulma hasil fermentasi memiliki keterbatasan penyediaan  asam  amino  dan  mineral  Zn sehingga  perlu  ditambahkan  dari  luar. Penambahan dalam bentuk anorganik memiliki keterbatasan ketersediaan dibandingkan dengan  bentuk  organik.    Bentuk  organik memiliki  nilai  kecernaan  yang  tinggi. Perubahan  demikian  dapat  dilakukan  dengan fermentasi menggunakan ragi.
Saccharomyces  cerevisiae adalah  ragi yang  dapat  menghasilkan  protein  heterolog, memperkaya  asam  amino  metionin,  dan  Zn dalam  bentuk  organik.    Zn  terlibat  dalam struktur  dan  fungsi  protein  dan  asam  nukleat (Hensing et.al . 1995). Saccharomyces cerevisiae dapat  menggabungkan  ion  Zn dengan  protein.    Proses  fermentasi  oleh Trichoderma  harzianum dan  dilanjutkan Saccharomyces cerevisiae akan meningkatkan kualitas L. minor . Jalur metabolisme sekunder dari kedua mikroba bersifat sinergis.
Trichoderma harzianum dapat memberikan  nitrogen  untuk  pertumbuhan Saccharomyces  cerevisiae dan  kemudian digunakan  sebagai  bahan  baku  untuk pembentukan  ikatan  logam  dan  asam  amino. Aktivitas kedua mikroba ( co-culture ) menghasilkan  enzim  komplementer  sebagai ekspresi  mutual  jalur  metabolik  pemanfaatan substrat.  Penelitian  tentang  peningkatan kualitas L. minor melalui fermentasi demikian belum  dilakukan.  Oleh  karena  itu,  tujuan  dari penelitian  ini  adalah  untuk  menentukan kandungan lignin, selulosa paling rendah  dan bahan  ekstrak  tanpa  nitrogen  paling  tinggi L. minor hasil  fermentasi  berdasarkan  dua  jenis mikroba.
Materi dan Metode Bahan dan Alat Penelitian Bahan penelitian terdiri atas L. minor , potato dextrose, PDA agar, Aquadest, ZnCO 3 , dl-mehionin , beras, tripton, kapas, Trichoderma harzianum ,  dan Saccharomyces  cerevisiae . Peralatan  terdiri  atas  timbangan  analitik, timbangan  teknis,  labu  ukur  1000  ml, erlenmeyer 1000 ml, cangkir pengaduk, tabung reaksi,  jarum  oase,  lampu  spirtus,  gelas erlenmeyer,  sterilisator,  gelas  ukur,  kertas etiket,  oven  listrik,  kulkas,  autoklaf,  dan fermentor.

## Prosedur Penelitian
Substrat terdiri atas campuran L. minor dan  medium  selektif.  Campuran  dikukus selama 60 menit pada suhu 115° C dan tekanan 1,1 atmosfer. Mikroba Trichoderma harzianum diinkubasi dalam setiap perlakuan sebanyak 3 x 10 7 spora/100 gram substrat selama 1, 3, 5, 7, dan 9 hari pada suhu kamar. Setelah fermentasi tahap pertama, ditambahkan ZnCO 3 (186 ppm) dan dl-methionine (286  ppm).  Selanjutnya, masing-masing substrat difermentasi menggunakan
Saccharomyces cerevisiae sebanyak  3  x  10 7 spora/100  gram  substrat selama 9, 7, 5, 3, dan 1 hari. Setelah fermentasi, produk dikeringkan dengan oven.

## Rancangan Percobaan
Rancangan  percobaan  menggunakan rancangan  acak  lengkap  (RAL)  untuk  lima perlakuan  dengan  total  20  unit  percobaan. Perlakuan  terdiri  atas  P1  (Fermentasi menggunakan Trichoderma harzianum selama 1  hari  dilanjutkan  dengan Saccharomyces cerevisiae selama  9  hari),  P2  ( Trichoderma harzianum selama  3  hari  dilanjutkan  dengan Saccharomyces  cerevisiae selama  7  hari),  P3 ( Trichoderma  harzianum selama  5  hari dilanjutkan  dengan Saccharomyces  cerevisiae untuk  5  hari),  P4  ( Trichoderma  harzianum selama 7 hari dilanjutkan dengan Saccharomyces  cerevisiae selama  3  hari),  P5 ( Trichoderma  harzianum selama  9  hari dilanjutkan  dengan Saccharomyces  cerevisiae selama 1 hari) dengan empat ulangan.
Peubah yang diamati (i ) Bahan Ekstrak Tanpa Nitrogen Kandungan BETN ditentukan berdasarkan  perhitungan  :  100–(Abu+Protein Kasar+Serat Kasar+Ekstrak Eter) (ii) Lignin
Analisis  Kandungan  lignin  dengan metode Datta yang dikemukakan oleh Chesson
(1981).    Penetapan  lignin  dengan  metoda analisis asam sulfat 72%
(iii) Selulosa
Analisis  Kandungan  Selulosa  dengan metode Datta yang dikemukakan oleh Chesson (1981).    Penetapan  selulosa  dengan  metoda analisis asam sulfat 72%.

## Analisis Statistik
Data yang diperoleh dianalisis dengan analisis varian satu arah (ANOVA) (Steel dan Torrie, 1991). Perbedaan antar perlakuan di uji dengan  menggunakan  uji  jarak  berganda Duncan dengan tingkat signifikasi 5% .

## Hasil dan Pembahasan
Pengaruh  Perlakuan  terhadap  Kandungan Bahan Ekstrak Tanpa Nitrogen
Bahan ekstrak tanpa nitrogen (BETN) merupakan karbohidrat yang meliputi monosakarida,  disakarida  dan  polisakarida yang mudah larut dalam larutan asam dan basa serta  memiliki  daya  cerna  yang  tinggi (Anggorodi,  1994).    Rataan  kandungan  bahan ekstrak  tanpa  nitrogen L.  minor hasil biofermentasi
dengan mengunakan
Trichoderma  harzianum yang  dilanjutkan Saccharomyces cerevisiae dicantumkan  pada Tabel 1.
Tabel.  1  menunjukkan  bahwa  rataan kandungan  bahan  ekstrak  tanpa  nitrogen L. minor hasil  fermentasi  dengan  menggunakan Trichoderma  harzianum yang  dilanjutkan Saccharomyces cerevisiae yang  paling  tinggi sampai  dengan  yang  paling  rendah  secara berurutan adalah P2 (37,23%), P3 (37,03%), P5 (35,39%), P4 (34,42%) dan P1 (27,92%).
Pengaruh  perlakuan  terhadap  rataan kandungan  bahan  ekstrak  tanpa  nitrogen L. minor hasil  biofermentasi  dapat  diketahui dengan  melakukan  analisis  statistik.    Hasil analisis  sidik  ragam  menunjukkan  bahwa biofermentasi dengan menggunakan Trichoderma  harzianum yang  dilanjutkan Saccharomyces cerevisiae nyata  (P<0,05) meningkatkan kandungan bahan ekstrak tanpa nitrogen L.  minor .  Hasil  uji  jarak  berganda Duncan menunjukkan bahwa rataan kandungan bahan  ekstrak  tanpa  nitrogen L.  minor .  hasil fermentasi dengan menggunakan Trichoderma harzianum selama  satu  hari  yang  dilanjutkan Saccharomyces cerevisiae selama  sembilan hari (P1), berbeda nyata dibandingkan dengan kandungan  BETN L.  minor hasil  fermentasi dengan menggunakan Trichoderma harzianum selama tiga, lima, tujuh dan sembilan  hari yang
dilanjutkan Saccharomyces cerevisiae selama tujuh, lima, tiga, dan satu hari (P2), (P3), (P4) dan(P5).    Peningkatan  kandungan  bahan ekstrak  tanpa  nitrogen duckweed disebabkan karena  kedua  mikroba  yang  digunakan  untuk fermentasi menurunkan kandungan serat kasar dan  abu  sehingga  kandungan  BETN  dalam substrat meningkat.
Fermentasi dengan
menggunakan Trichoderma harzianum selama tiga hari yang dilanjutkan Saccharomyces cerevisiae selama tujuh  hari  (P2)  merupakan  perlakuan  yang paling baik.  Kandungan BETN meningkat  dari 33,61% sebelum dilakukan fermentasi menjadi 37,23%.    Hal  demikian  menunjukkan meningkatnya  kandungan  karbohidrat  yang terdiri  atas  monosakarida,  disakarida  dan polisakarida  mudah  larut  dalam  larutan  asam dan basa.

## Pengaruh  Perlakuan  terhadap  Kandungan Lignin
Rataan  kandungan  lignin L.  minor hasil fermentasi  dengan  mengunakan Trichoderma harzianum yang  dilanjutkan Saccharomyces cerevisiae dicantumkan  pada  Tabel  1.  Rataan kandungan  lignin L.  minor hasil  fermentasi dengan menggunakan Trichoderma harzianum yang  dilanjutkan Saccharomyces cerevisiae yang paling tinggi sampai dengan yang paling rendah  secara  berurutan  adalah  P1(9,78%), P5(8,12  %),  P3(6,08%),  P4(5,08%)  dan  P2 (1,25%).
Hasil  analisis  sidik  ragam  pengaruh perlakuan terhadap rataan kandungan lignin L. minor hasil  fermentasi  dengan  menggunakan Trichoderma  harzianum yang  dilanjutkan Saccharomyces cerevisiae nyata  (P<0,05) mempengaruhi  kandungan  lignin.    Perbedaan antar perlakuan diuji dengan menggunakan uji jarak  berganda  Duncan.    Rataan  kandungan lignin L.  minor hasil  fermentasi  dengan menggunakan Trichoderma harzianum selama satu  hari  yang  dilanjutkan Saccharomyces cerevisiae selama sembilan hari (P1), berbeda nyata  dibandingkan  dengan  kandungan  lignin L. minor hasil fermentasi dengan menggunakan Trichoderma  harzianum selama  tiga,  lima, tujuh  dan  sembilan    hari  yang  dilanjutkan Saccharomyces cerevisiae selama  tujuh,  lima, tiga, dan satu hari (P2), (P3), (P4) dan(P5). Kandungan  lignin L.  minor hasil fermentasi dengan menggunakan Trichoderma
harzianum selama  tiga  hari  yang  dilanjutkan Saccharomyces cerevisiae selama  tujuh  hari (P2) memiliki kandungan lignin paling rendah. Fermentasi dengan menggunakan Trichoderma harzianum selama tiga hari telah cukup untuk mendegradasi  kandungan  lignin  substrat. Apabila  lama  fermentasi  semakin  lama  maka akan terjadi peningkatan kadungan serat kasar yang  berasal  dari  khitin  asal  massa  mikroba. Lama  waktu  fermentasi  selama  tujuh  hari dengan menggunakan Saccharomyces cerevisiae merupakan  waktu  yang  paling  baik untuk  menurunkan  kandungan  lignin.    Waktu fermentasi yang semakin lama akan menyebabkan terjadinya peningkatan kandungan  serat  kasar  pada  substrat.  Hal demikian  disebabkan  oleh  menurunnya kandungan  air  substrat  dan  meningkatnya jumlah dinding sel asal kapang.

## Pengaruh Perlakuan terhadap Kandungan
Selulosa Duckweed Rataan  kandungan  selulosa L.  minor hasil fermentasi dengan menggunakan Trichoderma  harzianum yang  dilanjutkan Saccharomyces cerevisiae dicantumkan  pada Tabel 1.  Rataan kandungan selulosa L. minor hasil fermentasi dengan menggunakan Trichoderma  harzianum yang  dilanjutkan Saccharomyces cerevisiae yang  paling  tinggi sampai  dengan  yang  paling  rendah  secara berurutan  adalah  P1(21,78%),  P5(17,98%), P3(16,19%), P4(14,76%) dan P2 (10,62%)
Hasil  analisis  sidik  ragam  pengaruh perlakuan  terhadap  rataan  kandungan  selulosa L.  minor hasil  fermentasi  menggunakan Trichoderma  harzianum yang  dilanjutkan Saccharomyces cerevisiae nyata  (P<0,05) mempengaruhi kandungan selulosa . Perbedaan antar perlakuan diuji dengan menggunakan uji jarak berganda Duncan.
Rataan kandungan selulosa L. minor hasil fermentasi dengan menggunakan Trichoderma harzianum selama  lima  hari  yang  dilanjutkan Saccharomyces cerevisiae selama  lima  hari (P3), tidak berbeda nyata dibandingkan dengan kandungan selulosa L. minor hasil fermentasi dengan menggunakan Trichoderma harzianum selama tujuh hari yang dilanjutkan Saccharomyces cerevisiae selama  tiga  hari (P4).
Table  1.    Bahan  Ekstrak  Tanpa  Nitrogen ,  Lignin,  dan  Selulosa L.  minor Hasil  Fermentasi  dengan Menggunakan Trichoderma harzianum dan Saccharomyces cerevisia e
Parameter Perlakuan P1 P2 P3 P4 P5 BETN    (%) 27,92± 0,84 a 37,23±0,83 c 37,03±0,80 c 34,42± 0,54 b 35,39±1,55 bc Lignin    (%) 9,78± 0,83 e 1,25± 0,03 a 6,08±0,81 c 5,08±0,82 b 8,12±0,05 d Selulosa (%) 21,78± 1,64 d 10,62± 0,83 a 16,19±0,82 bc 14,76±0,80 b 17,98±0,82 c Huruf yang berbeda pada kolom signifikansi menunjukkan perbedaan  nyata (P<0,05), P1:  Fermentasi  menggunakan Trichoderma  harzianum ( Th )  satu  hari  dan  dilanjutkan  dengan Saccharomyces cerevisiae (Sc) 9 hari, P2: Th 3 hari dilanjutkan Sc 7 hari, P3: Th 5 hari dilanjutkan Sc 5 hari, P4: Th 7 hari dilanjutkan Sc 3 hari, P5: Th 9 hari dilanjutkan Sc 1 hari.
tidak  berbeda  nyata  dibandingkan  dengan kandungan  selulosa L.  minor hasil  fermentasi dengan menggunakan Trichoderma harzianum selama  sembilan  hari  yang  dilanjutkan Saccharomyces cerevisiae selama  satu  hari (P5). Berbeda nyata lebih rendah dibandingkan dengan  kandungan  selulosa L.  minor hasil fermentasi dengan menggunakan Trichoderma harzianum selama  satu  hari  yang  dilanjutkan Saccharomyces cerevisiae selama  sembilan hari  (P1)  dan  nyata  lebih  tinggi  dibandingkan dengan  kandungan  selulosa L.  minor hasil fermentasi dengan menggunakan Trichoderma harzianum tiga  hari  yang  dilanjutkan Saccharomyces cerevisiae selama  tujuh  hari (P2). Rataan  kandungan  selulosa L.  minor hasil fermentasi dengan menggunakan Trichoderma harzianum selama  tiga  hari  yang  dilanjutkan Saccharomyces cerevisiae selama  tujuh  hari (P2),  merupakan  perlakuan  paling  baik  dalam menurunkan  kandungan  selulosa L.  minor . Fardiaz  (1988)  menyatakan  bahwa  selulosa dapat dihidrolisis secara kimia atau enzimatik. Enari  (1983)    menyatakan  bahwa  mekanisme hidrolisis selulosa secara enzimatis dapat dibagi menjadi  dua  tahap    yaitu  tahap  aktivasi  oleh enzim C1 (ekso- β -1.4 glukanase atau selulase) dilanjutkan dengan tahap hidrolisis oleh enzim Cx  (endo- β -1.4  glukanase)  dan β glukosidase selanjutnya  pada  proses  fermentasi  glukosa akan terbentuk asam piruvat  (Fardiaz, 1988).

## Kesimpulan
Fermentasi
dengan kombinasi Trichoderma  harzianum selama  tiga  hari  dan dilanjutkan  dengan Saccharomyces  cerevisiae selama tujuh hari yang dilengkapi dengan asam amino dl-metionin dan  Zn  merupakan perlakuan  paling  baik.    Hal  demikian ditunjukkan  oleh  meningkatnya  kandungan
Bahan  Ekstrak  Tanpa  Nitrogen    (37,23%), menurunnya  kandungan    Lignin  (1,25%)  dan selulosa (10,62%).

## Ucapan Terimakasih
Penulis  mengucapkan  terima  kasih kepada  Rektor  Universitas  Padjadjaran  dan Kementerian Riset, Teknologi, dan Pendidikan Tinggi  Universitas  Padjadjaran  yang  telah mendukung  penelitian  ini.  Penelitian  dapat dilakukan  dengan  dukungan  keuangan  dari DIPA  Fund  Universitas  Padjadjaran  no.  855  / UN6.3.1 / PL / 2017 tertanggal 8 Maret 2017.

## Daftar Pustaka
Akter,  M.,  Chowdhury,  S.D.,  Akter  Y.,  and Khatun M.A., 2011. Effect of duckweed (Lemna  sp.  minor)  meal  in  the  diet  of mial in the diet of laying Hen and their performances.  Banglades  Res,  Pub.  J. 5(3):252-261.
Arif,A.R.,  Andi, E, E., Hasnah, N., Ilham, H.,
Maudy,A,A. 2018. Optimasi Pretreatment melalui Metode Hydrothermal  Pressure  dan  Pelarut
Alkali  pada  Produksi  Bioetanol  dari Lemna  minor. ALCHEMY  Jurnal
Penelitian  Kimia,  Vol.  14(1)  2018,  95- 106.
Anggorodi,  R.  1984.  Ilmu  Makanan  Ternak Umum. PT Gramedia.
Chesson, A. 1981. Effects of sodium hydroxide on  cereal  straws  in  relation  to  the enhanced  degradation  of of  structural polysaccharides by rumen
microorganisms. Journal Of The Science Food  And  Agriculture,  Vol(32),  Issue  8, 745-758.
Enari, T.M. (1983). Microbial Cellulase. New York: Applied Science Publisher.
Fardiaz,  S.  (1992).  Mikrobiologi  Pangan  I. Jakarta: PT. Gramedia Pustaka Utama. Gwaze,  F.  R.  and  M.  Mwale,  2015.  The Prospect of Duckweed in Pig Nutrition:
A  Review.  Journal  of  Agricultural Science., 7: 189. DOI:
http://dx.doi.org/10.5539/jas.v7n11p189
.
Ginting, S. P. and Krisnan, R., 2006. The Effect of  fermentation  using  several  strains  of trichoderma  and  different  incubation period  to  the  chemical  composition  of palm  kernel.  Livestock  research  center Indonesia, 5-6 September 2016. Ministry of Agriculture Indonesia., pp: 944. Haustetn,  A.  T.,  Gilman,  R.  H.,  Skillicorn,  P. W.,  Vergara,  V.,  Guevara,  V.,  and Gastanaduy,  A.,  1990.  Duckweed,  a useful  strategy  for  feeding  chickens: performance of layers fed with sewage- grown  Lemnacea  species.  Poultry
Science.,  69(11):  1835-1844.  DOI: https://doi.org/10.3382/ps.0691835. Hensing, M.C.M., Rouwenhorst, R.J., Heijnen, J.J.,  Van  Dijken,  J.P.  and  Pronk,  J.T., 1995.  Physiological  and  technological aspects  of  large-scale  heterologous- protein  production  with  yeasts.  Antonie van Leeuwenhoek., 67 (3): 261-279. Parisutham, V., Kim, T. H., and Lee, S. K. (2014).
"Feasibilities of consolidated bioprocessing microbes: from
pretreatment  to  biofuel  production," Bioresource  Technology 161,  431-440. DOI: 10.1016/j.biortech.2014.03.114. Setiyatwan, H., 2007. Quality Improvement of
Duckweed Nutrition through Fermentation using Trichoderma harzianum.  Journal  of  Animal  Science Padjadjaran University., 7.
Steel, R.G.D. and Torrie, J.H., 1991. Principles and Procedures of Statistics, A Biometric Approach.  2 nd Ed.  Translation  by  B. Sumantri. Jakarta: PT. Scholastic Press. Wan  C,  Li  Y.,  2012.  Fungal  pretreatment  of lignocellulosic  biomass.  Biotechnol Adv. ;30(6):1447-57.
Xu, J., Cui, W., Cheng, J.J., and Stomp, A.M.,
2011.  Production  of  High-Starch
Duckweed  and  Its  Conversion  to Bioethanol. Biosystems Engineering 110 (2), 67–72.
Zhao X., Moates G. K., Wellner N., Collins S. R  A.,  Coleman  M.  J.,  and  Waldron  K. W., 2014. Chemical Characterisation and Analysis of the Cell Wall
Polysaccharides  of  Duckweed  (Lemna Minor).  Carbohydrate  Polymers  111, 410–18.