## Tidak ada perbedaan respon imun perokok berat dan perokok ringan karena asupan mikronutrien
Mohammad Zen Rahfiludin 1 , Praba Ginandjar 2

## ABSTRACT
Background: Smoking may affect cytokine levels, including IFN-γ, IL-6, and IL-10. Objectives: This study aimed to analyze the difference in levels of cytokines (IFN-γ, IL-6 and IL-10) based on the degree of smoking, and how the daily intake of nutrient influence the relationship of smoking with cytokines level.
Method: This  was a cross sectional study. Study subject consisted of  23 adult, healthy, smoker men. Ethical clearance was  issued  by  Commission  of  Ethics  of  Medical  and  Public  Health  Research,  Faculty  of  Public  Health  Diponegoro University. Smoking variabel was obtained from questions. Level of cytokines examined consists of IFN-γ, IL-6 and IL-10 was  measured  using  ELISA  (pg/dl).  Nutritional  intake  was  measured  by  method  of  2x24-hour  recall.  The  difference  of level of IFN-γ, IL-6, IL-10 and daily nutrient intake based on smoking degree was analyzed with Mann Whitney (α 0,05). Result: The  result  showed  no  difference  in  level  of  IFN-γ,  IL-6  and  IL-10  found  between  group  of  light  and  heavy smokers.  In  the  group  of  heavy  smokers,  daily  nutrient  intake  was  higher  compare  to  light  smokers.  However,  the significant difference only found in vitamin C (p = 0.042).
Conclusion: Immune response, as measured by level of interferon gamma, interleukin 6 and interleukin 10, do not differ betwen light and heavy smokers due to micronutrient intake
Keywords : heavy smoker, light smoker, interferon gamma, interleukin 6, interleukin 10

## PENDAHULUAN
Indonesia  adalah  salah  satu  negara  dengan  perokok aktif  terbanyak  di  dunia.  Lebih  dari  sepertiga  populasi (34,7  %)  dengan  usia  15  tahun  ke  atas  adalah  perokok (Kemenkes,  2010).  Merokok  merupakan  faktor  risiko kematian  bagi  penderita  penyakit  jantung,  kanker  dan COPD  (Ezzati  dan  Lopez,  2003).  Komponen  dalam rokok  seperti  nikotin,  memiliki  efek  immunosupresif dengan  cara  menghambat  respon  imun innate dan adaptive (Sopori,  2002),  sehingga  merokok  dapat mempengaruhi  kadar  sitokin  seperti  interferon  gamma (IFN- γ ),  interleukin-6  (IL-6),  dan  interleukin-10  (IL-10). IFN- γ adalah  sitokin  yang  berfungsi  mengaktifasi makrofag  baik  pada  respon  imun innate maupun adaptive .  IL-6  adalah  sitokin  yang  menstimulasi pertumbuhan  antibodi  yang  dihasilkan  dari    limfosit  B, sedangkan IL-10 berfungsi memeliharan homeostatik dan kontrol  dari innate and  reaksi cell-mediated  immune (Abbas dan Lichtman, 2011).
Penelitian sebelumnya sudah banyak membandingkan status  imun  antara  perokok  dan  bukan  perokok,  tetapi masih sedikit yang membandingkan antara perokok berat dan perokok ringan. Penelitian yang menghubungkan zat gizi  dengan  perokok  juga  masih  jarang,  tetapi  beberapa penelitian  menunjukkan  bahwa  kadar  vitamin  A  dan vitamin  C    perokok  lebih  rendah  dibandingkan  yang bukan  perokok  (Preston,  1991;  Yilmaz et  al. ,  2009).
Kadar  seng  serum  perokok  juga  lebih  rendah dibandingkan  yang  tidak  merokok  (Bashar  dan  Mitra, 2004).  Pada  penelitian  ini,  kami  ini  membandingkan kadar sitokin berdasarkan tingkat keparahan merokok dan bagaimana  hubungan  asupan  zat  gizi  terhadap  kadar sitokin pada perokok tersebut.

## METODE DAN BAHAN
Penelitian  ini  adalah  penelitian cross  sectional yang melibatkan  23  orang  dewasa  sehat  yang  merokok. Penelitian  ini  telah  mendapat  ijin  dari  Komisi  Etik Fakultas Kesehatan Masyarakat, Universitas Diponegoro, Semarang.
Skor  derajat  keparahan  merokok  diperoleh  dengan menanyakan:  (1)  Berapa  batang  rokok  per  hari  yang dikonsumsi (skor 2 jika ≥ 20 batang/hari, skor 1 jika 10- 19  batang/hari  dan  skor  0  jika  kurang  dari  10 batang/hari); (2) Sudah berapa lama merokok (skor 2 jika ≥  20  tahun,  skor  1  jika  10-20  tahun,  dan  skor  0  jika kurang  dari  10  tahun);  (3)  Jenis  rokok  yang  dikonsumsi (skor  1  jika  rokok  kretek  atau non-filtered ,  dan  score  0 jika rokok filtered / mild cigarettes );  (4) Apakah di dalam
1 Bagian Gizi Masyarakat, Fakultas Kesehatan Masyarakat, Universitas Diponegoro (UNDIP), Semarang, Jawa Tengah.
2 Bagian Epidemiologi, Fakultas Kesehatan Masayarakat, Universitas Diponegoro (UNDIP), Semarang, Jawa Tengah.

## JURNAL  GIZI  INDONESIA Vol. 2, No. 1, Desember 2013: 12-14
satu  rumah,  ada  anggota  keluarga  yang  juga  merokok (skor 2 jika ada lebih dari 1 orang, skor 1 jika ada 1 orang dan skor 0 jika tidak ada). Rentang skor derjat keparahan merokok adalah dari 0 sampai 7. Skor 0-3 dikategorikan sebagai  perokok  ringan  dan  skor  4-7  dikategorikan perokok berat.
Sitokin  yang  diukur  adalah  IFN- γ eBioscience  CAT: BMS228HS), IL-6 (R&D System (CAT: HS600B), IL-10 (R&D  System  CAT:  HS100C).  Pengukuran  sitokin dengan  menggunakan  metode  ELISA  dan  dilakukan  di Laboratorium Prodia. Asupan gizi diukur dengan metode recal 2 X 24 jam.
Uji  normalitas  data  dengan  Shapiro  Wilks  test. Perbedaan  kadar  IFN- γ ,  IL-6,  IL-10  dan  asupan  gizi antara  perokok  berat  dan  perokok  ringan  diuji menggunakan  Mann  Whitney  test  dengan  tingkat kepercayaan 95%.

## HASIL
Rerata  umur  subyek  adalah  35  tahun  (±12).  Sepuluh subyek  dikategorikan  perokok  ringan  dan  13  orang dikategorikan  perokok  berat. Tidak  ada  perbedaan  kadar IFN- γ ,  IL-6  dan  IL-10  diantara  perokok  ringan  dan perokok  berat    (Tabel  1).  Pada  perokok  berat,  asupan mikronutrien  lebih  tinggi  dibandingkan  kelompok perokok  ringan  (Tabel  2).  Hanya  asupan  vitamin  C  saja yang  berbeda  bermakna  diantara  ke  dua  kelompok  (p  = 0.042).

## PEMBAHASAN
Beberapa penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa merokok  dapat  menurunkan  kadar  IFN- γ ,  baik  pada perokok aktif maupun pasif.
Kadar IFN- γ paling rendah pada perokok berat (Hagiwara et al. , 2001). Orang tua perokok menyebabkan penurunan ekspresi  dan  produksi  IFN- γ pada  anak-anak  mereka (Tebow et  al. ,  2008;  Kohli et  al. ,  2012).  Merokok  juga menurunkan  ekspresi  gen  dan  sekresi  sitokin  pro- inflamasi  seperti  IL-6,  sementara  ekspresi  sitokin  anti- inflamasi (contohnya IL-10) tidak terpengaruh (Mortaz et al. ,  2009;  Chen et  al. ,  2007).  Penelitian  kami menunjukkan  tidak  ada  perbedaan  kadar  sitokin  pro- inflamasi  dan  anti-inflamasi  diantara  perokok  berat  dan perokok  ringan.  Hasil  ini  bertentangan  dengan  beberapa penelitian  terdahulu  yang  dilakukan  oleh  Tebow,  Kohli, Hagiwara  dan  Mortaz.  Hal  ini  kemungkinan  karena perbedaan  kriteria  derajat  keparahan  merokok  serta perbedaan  metode  pengukuran  kadar  sitokin.  Tebow mengukur  produksi  IFN- γ dengan peripheral  blood mononuclear  cell yang  distimulasi  mitogen.  Kohli mengukur  ekspresi  IFN- γ Hagiwara  mengukur  sekresi IFN- γ dari cairan bronchoalveolar dan Mortaz mengukur IL-6 dari plasmacytoid sel dendrit manusia. Kadar IFN- γ , IL-6 dan IL-10 pada penelitian kami langsung diukur dari serum  perokok.  Metode  pengukuran  kadar  sitokin  yang dilakukan  pada  penelitian  kami  juga  merupakan keterbatasan penelitian ini, meskipun kami telah berusaha untuk  memilih  subyek  laki-laki  dewasa  yang  sehat melalui  kuesioner  skrining.  Kemungkinan  lain  tidak  ada perbedaan  kadar  sitokin  antara  perokok  berat  dan perokok  ringan  pada  penelitian  kami  karena  asupan  gizi mikro  pada  kedua  kelompok  perokok  tersebut.  Pada perokok  berat,  asupan  vitamin  A,  vitamin  C  dan  seng lebih tinggi dibandingkan perokok ringan.
Tabel 1. Perbedaan kadar IFN- γ , IL-6 and IL-10 antara perokok berat dan perokok ringan
Variabel Perokok berat (n = 13) Perokok ringan (n =10) p a IFN- γ (pg/mL) 0.080 ± 0.078 0.085 ± 0.158 0.453 IL-6 (pg/mL) 1.029 ± 1.082 1.190 ± 1.304 0.620 IL-10 (pg/mL) 0.345 ± 0.417 0.345 ± 0.286 0.532 Keterangan: Median ± Standart deviasi; a = Mann Whitney test
Tabel 2. Perbedaan asupan zat gizi mikro antara perokok berat dan perokok ringan
Zat gizi mikro Perokok berat (n=13) Perokok ringan (n=10) p a Vitamin A (µg) 501 ± 295 140 ± 323 0.145 Vitamin C (mg) 36.1 ± 30.5 8.4 ± 15.9 0.040 Zinc (mg) 3.2 ± 1.5 2.7 ± 1.8 0.153 Keterangan: Median ± Standart deviasi; a = Mann Whitney test
Vitamin  C  melindungi  DNA  sel  dari  kerusakan  yang disebabkan  radikal  bebas  dan  mutagen  (Iqbal et  al. , 2004).  Vitamin  C  merupakan  stimulan  berfungsinya lekosit,  terutama  netrofil  dan  monosit.    Seng  merupakan mikromineral  yang  juga  bersifat  sebagai  anti  oksidan. Dismutasi dari O 2 ke H2O2 dikatalisasi oleh enzim Super Oxide  Dismutase (SOD),  yang  mengandung  seng  dan tembaga.
Seng juga menginduksi produksi metallothionein , yang merupakan pembersih OH (Prasad, 2008).  Vitamin  C  dan  seng  meningkatkan  beberapa parameter  komponen  pertahan  tubuh  seperti  aktifitas  sel natural killer dan  proliferasi limfosit (Wintergerst et al. , 2006).

## KESIMPULAN
Tidak  ada  perbedaan  kadar  IFN- γ ,  IL-6  dan  IL-10 diantara perokok berat dan perokok ringan, kemungkinan karena  disebabkan  asupan  mikronutrin  yang  lebih  baik pada perokok berat.

## DAFTAR PUSTAKA
Abbas  AK,  Lichtman  AH.  2011.  Basic  immunology functions  and  disorders  of  the  immune  system,  third edition. Philadelphia: Saunders Elsevier,
Bashar  SK,  Mitra  AK.  2004.  Effect  of  smoking  on vitamin  A,  vitamin  E  and  other  trace  elements  in patients with cardiovascular diseases in Bangladesh: a cross-sectional study. Nutrition Journal.  3(1): 18. Chen  H,  Cowan  MJ,  Hasday  JD,  Vogel  SN,  Medvedev AE.  2007.  Tobacco  smoking  inhibits  expression  of proinflammatory  cytokines  and  activation  of  IL-1R- associated kinase, p38, NFκB in alveolar macrophages stimulated  with  TLR2  and  TLR4  agonists.  The Journal of Immunology. 179(9): 6097-106.
Ezzati  M,  Lopez  AD.  2003.  Estimates  of  global mortality    attributable     to smoking in 2000. Lancet.
362(9378): 847-52.
Hagiwara E, Takahashi KI, Okubo T,  Ohno S, Ueda A,
Aoki  A,  et  al.  2001.  Cigarette  smoking  depletes cells spontaneously  secreting  th 1 cytokines  in  the  human airway. Cytokine. 14(2): 121-6.
Iqbal  K,  Khan  A,  Khattak  MMAK.  2004.  Biological significance  of  ascorbic  acid  (vitamin  C)  in  human health-a  review.  The  Pakistan  Journal  of  Nutrition.
3(1): 5-13.
Kementerian  Kesehatan  Republik  Indonesia,  2010.  Riset Kesehatan Dasar,
Kohli  A,  Garcia  MA,  Miller  RL,  Maher  C,  Humblet  O, Hammond  SK,  et  al.  2012.  Secondhand  smoke  in combination  with  ambient  air  pollution  exposure  is associated  with  increasedx  CpG  methylation  and decreased expression of IFN  γ in T effector cells and Foxp3  in  T  regulatory  cells  in  children.  Clinical Epigenetics. 4(1): 17.
Mortaz  E,  Lazar  Z,  Koenderman  L,  Kraneveld  AD,
Nijkamp  FP,  Folkerts  G.  2009.  Cigarette  smoke attenuates  the  production  of  cytokines  by  human plasmacytoid dendritic  cells  and enhances  the  release of IL-8 in response to TLR-6 stimulation. Respiratory Research. 10: 47.
Prasad  AS.  2008.  Clinical,  immunological,  anti  – inflammatory and antioxidant roles of zinc. Experimental Gerontology. 43(5): 370-7.
Preston  AM.  1991.  Cigarette  smoking-nutritional implications.  Progress  in  Food  &  Nutrition  Science. 15(4): 183-217.
Sopori  M.  2002.  Effects  of  cigarette  smoke  on  the immune  system.  Nature  Review  Immunology.  2(5): 372-7.
Tebow G, Sherrill DL, Lohman C, Stern DA, Wright AL, Martinez FD et al. 2008. Effects of parental smoking on interferon γ production in children. Pediatrics. 121: e1563-e1569.
Wintergerst  ES,  Maggini  S,  Hornig  DH.  2006.  Immune- enhancing  role  of  vitamin  C  and  zinc  and  effect  on clinical  conditions.  Annal  Nutrition  Metabolism. 50(2): 85-94.
Yilmaz  G,  Agras  PI,  Hizli  S,  Karacan  C,  Besler  HT,
Yurdakok  K,  et  al.  2009.  The  effect  of  passive smoking  and  breast  feeding  on  serum  antioxidant vitamin  (A,  C,  E)  levels  in  infants.  Acta  Pediatrica. 98(3): 531-6.