## UJI AKTIVITAS EKSTRAK ETANOL BIJI PINANG ( Areca catechu L.) TERHADAP PENYEMBUHAN LUKA BAKAR PADA KULIT
PUNGGUNG MENCIT PUTIH JANTAN ( Mus musculus)
Submitted : 14 Oktober 2016 Edited : 18 November 2016
Accepted : 30 November 2016
Fitri Handayani, Reksi Sundu, Henriko Nober Karapa
Akademi Farmasi Samarinda Email : sausanrukan@yahoo.co.id

## ABSTRACT
Areca seeds contain flavonoid, tannin, and alkaloid which can help the healing process of burn  wounds  on  the  back  skin  of  mice.  Areca  seeds  are  used  for treatment  because it  has antimicrobial activity. Areca Seeds are one of Indonesian plants which the fruit in tranditional way  is  used  as  burn  medicine.  The  objective  of  this  study  was  to  know the effect  of ethanol extract of areca seeds against burn wound healing on the back skin of mice. Fifteen mices were used in this experiment and were divided into 5 groups : vaseline flavum as a control negative, branded ointment as a control positive , ethanol extract of areca seeds in vaseline flavum with consentration 20%, 40 % and 60 %. Each group consisted of 3 mices. The back skin of mice was induced using hot iron size 1x1 cm for 2 seconds then given a treatment for 14 days. The percentage  of  healing  of  burns    by  calculating  the  surface area of  wound. The  results  of  its preliminary phytochemical analysis showed the presence of alkaloids, flavonoids, tannins and saponins. The percentage of burn wound healing of ethanol extract in concentration 20 % was 84,33 %, 40 % was 87,67%; and 60% was 89,67%. Data was analyzed using one-way Analysis of Variance (ANOVA) which showed that data has significant differences (P < 0,05) was 0,000. LSD test showed that each treatment group had siginicant differences with significant value < 0,05.
Keywords : Areca catechu, burn wound, wound surface area.

## PENDAHULUAN
Luka  bakar  merupakan  salah  satu trauma yang sering terjadi dalam kehidupan sehari-hari,  bahkan  sering  kali  merupakan kecelakaan massal. 70% kejadian luka bakar terjadi di lingkungan rumah tangga, 25% di tempat  industri  dan  kira-kira  5%  akibat kecelakaan  lalu  lintas.  Kebanyakan  luka bakar terjadi di rumah ketika memasak atau penggunaan  alat  elektronik  tidak  sesuai, anak-anak  dan  lanjut  usia  memiliki  resiko tinggi  terhadap  cedera  luka  bakar.  Kedua kelompok ini memiliki kulit tipis dan rapuh, sehingga kontak dalam waktu yang sebentar
dengan  sumber  panas  dapat  mengakibatkan luka bakar ketebalan penuh (1) .
Pinang  merupakan  salah  satu tumbuhan  di  Indonesia  yang  bijinya  secara tradisional  digunakan  sebagai  obat  luka bakar.  Pinang  mudah  tumbuh  di  daerah tropis  dan  biasa  ditanam  di  pekarangan, taman,  atau  di  budidayakan.  Pinang memiliki  banyak  kegunaan  dari  biji,  daun, hingga  pelepah.  Biji  pinang  sebagai  obat tradisional  diantaranya  sebagai  obat cacingan,  obat  luka  bakar,  dan  kudis. Masyarakat  biasanya  menggunakan  biji pinang muda sebagai obat luka bakar dengan cara ditumbuk secukupnya dan di tempelkan
langsung ke daerah luka bakar atau dengan cara merebus biji pinang dan air rebusannya di gunakan untuk membersihkan bagian luka dan infeksi kulit lainnya (2) .
Biji  pinang mengandung  alkaloid, saponin,  flavonoid,  dan  tanin.  Saponin  ini mempunyai  kemampuan  sebagai  pembersih sehingga efektif untuk menyembuhkan luka terbuka,  sedangkan  tanin  dapat  digunakan sebagai  pencegahan  terhadap  infeksi  luka karena mempunyai daya antiseptik dan obat luka  bakar.  Flavonoid  mempunyai  aktivitas sebagai  antiseptik  dan  alkaoloid  memiliki kemapuan  sebagai  antibakteri (3) .  Tanin dalam  biji  pinang  berkhasiat  dalam meningkatkan  kekuatan  renggangan  pada luka  bakar dan  penciutan  pori-pori  kulit (4) . Penelitian  sebelumnya  yang  dilakukan  oleh Lee dan Choi (1999) (5) menyebutkan bahwa ekstrak  etanol  biji  pinang  memperlihatkan aktivitas  antioksidan  dengan  IC50  sebesar 45,4  μ  mg/ml.  Aktivitas  antioksidan  yang terdapat dalam ekstrak etanol biji pinang ini berkolerasi  positif  dengan  pencegahan kanker (6) .
Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui  aktivitas optimum dari  ekstrak etanol biji pinang ( Areca catechu . L ) dalam sediaan  salep  yang  berkhasiat  untuk mempercepat penyembuhan luka bakar pada kulit  punggung  mencit  yang  diinduksi solder.

## BAHAN DAN METODE Bahan
Biji  pinang,  etanol,  vaselin  flavum, aquades,  ammonia  (10%,  25%),  etil  asetat, HCl  (1%  1:10),  pereksi  Dragendorff, pereaksi  Mayer, pereaksi  Bourchard, lempeng  magnesium,  HCl  pekat,  butanol, larutan besi (III) klorida (FeCl3), 1% NaOH 1 N, eter, asam asetat anhidrat, amil alkohol, H2SO4 pekat, salep bermerek.

## Metode Proses Ekstraki
Buah pinang yang  muda dikupas dan diambil  bijinya.  Biji  tersebut  dibersihkan dan dipotong-potong, kemudian dimasukkan ke dalam  oven  dengan  suhu  30 0 C -50 0 C untuk  meghilangkan  kadar  airnya.  Biji pinang  dihaluskan  dan  diayak  dengan ukuran 40 mesh, serbuk simplisia yang telah dihaluskan  ditimbang  sebanyak  1:10, kemudian diekstraksi dengan cara maserasi, yaitu  serbuk  yang  telah  ditimbang dimasukkan  kedalam  wadah  kaca  lalu ditambahkan  pelarut  etanol  70%  sebanyak 500 mL dan ditutup dengan alumunium foil dengan  rapat  serta  disimpan  pada  tempat yang tidak terkena sinar matahari langsung. Didiamkan selama 24 jam, tetapi pada 6 jam pertama  sesekali  dilakukan  pengadukan. Setelah  24  jam  disaring,  ampasnya  diambil kembali  dan  ditambahkan  dengan  cairan penyari  yang  sama  dan  jumlah  yang  sama, lalu  didiamkan  selama  12  jam  kemudian disaring  kembali,  hal  tersebut  dilakukan pengulangan  sebanyak  2  kali.  Hasil penyaringan  digabungkan,  lalu  diuapkan dengan  penangas  air  hingga  diperoleh ekstraksi kental biji pinang (9) .
Skrining Fitokimia Skrining  fitokimia  dilakukan  dengan mengidentifikasi kandungan alkoloid, flavonoid, saponin dan tanin (7) .

## Penyiapan Hewan Uji
Mencit  putih  putih  yang  akan digunakan  pada  pengujian  terlebih  dahulu disiapkan dan dikondisikan selama 1 minggu dengan dilakukan penimbangan berat badan mencit sekali setiap hari sebelum pengujian. Penyiapan  hewan  uji  ini  dilakukan  agar hewan  uji  dapat  beradaptasi  dengan lingkungan baru, mengontrol kesehatan dan menyeragamkannya.

## Pembuatan Salep Ekstrak Biji Pinang
Ekstrak  biji  pinang  dibuat  masing- masing sebanyak 1g untuk dua hari. Vaselin flavum ditambah dengan ekstrak etanol biji pinang  dan  diaduk  dengan  mengunakan mortir  dan  stamper  yang  panas  disesuaikan dengan masing-masing konsentrasi.

## Pembuatan Luka Bakar
Solder  panas  dimodifikasi  dengan lempeng stainless yang  berukuran  1x1  cm. Rambut  pada  daerah  punggung  mencit dicukur, kemudian ditempel solder panas ke punggung  mencit  selama  2  detik,  sampai bagian  dermis  beserta  jaringan  yang  terikat dibawahnya, sehingga terjadi pelepuhan dan kulit terkelupas pada bagian tertentu (11) .
Perlakuan Penyembuhan Luka Bakar Disiapkan 5 kelompok hewan uji yang tediri  dari  3  ekor  mencit  untuk  masing- masing  kelompok.  Kelompok  pertama dengan  pemberian  kontrol  negatif  (vaselin flavum), kelompok kedua dengan pemberian kontrol  positif  (salep  bermerek),  kelompok ketiga dengan pemberian ekstrak biji pinang. Disiapkan  sediaan  uji  yaitu  ekstrak  biji pinang  dan  salep  bermerek. Pengujian penyembuhan luka dengan : Kontrol I dengan pemberian kontrol negatif, basis salep.
Kontrol  II  dengan  pemerian  kontrol  positif (salep bermerek) pada luka bakar. Kontrol  III dengan  pemberian  ekstrak  biji pinang pada luka bakar konsentrasi (20%). Kontrol  IV  dengan  pemberian  ekstrak  biji pinang pada luka bakar konsentrasi (40%). Kontrol  V  dengan  pemberian  ekstrak  biji pinang pada luka bakar konsentrasi (60%) . Pengolesan  semua  kelompok  perlakuan dilakukan  secara  merata  1  kali  setiap  hari sebanyak 0,1 g untuk sekali oles.
Pengamatan Luka Bakar Selama 14 Hari Pengamatan  proses  penyembuhan luka  bakar  dilakukan  sehari  setelah  hewan
uji  diberi  perlakuan,  pengamatan  dilakukan selama  14  hari  berturut-turut  dengan mengamati secara makroskopik perkembangan  penyembuhan  luka  pada punggung  mencit  dan  pengukuran  luas permukaan  luka  dengan  menggunakan jangka sorong berskala 0.01 cm. Luka bakar dirawat  hingga  sembuh  yang  ditandai dengan merapat dan tertutupnya luka (11) . Perhitungan  persentase  penyembuhan luka bakar dilakukan dengan rumus sebagai berikut :
Keterangan : L 1 = Luas luka bakar hari pertama L 2 = Luas luka bakar hari ke-n

## Analisis Data
Hasil  data  yang  diperoleh dianalisis dengan  menggunakan  uji  statistik  dengan metode  ANOVA  untuk  mengetahui  ada tidaknya  efek  penyembuhan  luka  dengan nilai  p  0,05.  Jika  terdapat  perbedaan  yang signifikan maka dilanjutkan dengan Uji LSD untuk  melihat  perlakuan  yang  memberikan efek yang berbeda.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  penelitian didapatkan  melalui metode  yang  telah  dilakukan  mulai  dari pembuatan  ekstrak,  skrining  fitokimia, pembuatan  sediaan  salep, pembuatan  luka bakar,  perlakuan  penyembuhan  luka  bakar, pengamatan luka bakar sampai analisis hasil.
Skrining  Fitokimia  Ekstrak  Etanol  Biji Pinang
Pengujian golongan metabolit sekunder  dilakukan  untuk  mengetahui adanya kandungan  metabolit sekunder pada sampel  bahan  alam.  Metabolit sekunder adalah  senyawa  metabolit  yang  tidak esensial bagi  pertumbuhan organisme  dan ditemukan dalam bentuk yang berbeda-beda
dan  unik  antara spesies  satu  dan  lainnya. Hasil  skrining  fitokimia  dapat  dilihat pada tabel 1.
Hasil  yang  diperoleh  dari  pengujian senyawa  kimia  dapat  diketahui  bahwa ekstrak  etanol  biji  pinang  mengandung senyawa  alkaloid,  tannin,  saponin,  dan flavonoid.  Uji  kandungan  senyawa  kimia ekstrak  etanol  biji  pinang  ini  dilakukan untuk  mengetahui  senyawa-senyawa  yang terlarut  setelah  proses  ekstraksi  simplisia dengan  pelarut  etanol,  dengan  diketahuinya kandungan  senyawa  dalam  ekstrak  etanol
biji  pinang  maka  dapat  diperkirakan mekanisme  kerja  dari  ekstrak  etanol  biji pinang  terhadap  penyembuhan  luka  bakar. Senyawa  yang  terkandung  dalam  ekstrak etanol  biji  pinang  adalah  senyawa-senyawa yang  larut  dalam  pelarut  semipolar  seperti etanol.

## Hasil Penyembuhan Luka Bakar
Hasil  penyembuhan  luka  bakar  pada punggung mencit dapat dilihat pada Gambar 1.

## Tabel 1. Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol Biji pinang
Identifikasi Senyawa Metabolit Sekunder Pustaka Hasil Hasil 1. Alkaloid a. Dragendorf b. Mayer c. Bourchard Endapan jingga Endapan jingga sampe merah coklat Endapan merah Endapan jingga Endapan jingga + + - 2. Flavonoid Lapisan kuning orange atau merah amil alkohol Lapisan jingga pada amil alkohol + 3. Saponin Berbusa Jingga berbusa + 4. Tanin Warna tua atau hijau kehitaman Jingga kehitaman +
Gambar 1. Grafik Persentase Penyembuhan Luka Bakar
0 0 0 0 1.674 5.678.33 10.67 14.67 18.67 23.67 27.67 32.67 0 0 4.67 11.33 31.33 45.33 60.33 77 87.33 98 100 100 100 100 0 0 0 4 7 10.6713.67 18 26.33 45 53 64 75.33 84.33 0 0 0 1.333.67 8.33 13 19.33 34.67 46 55 66.67 79 87.67 0 0 0 3 6 13.33 19.67 36.33 45.67 55 67.33 75.67 83 89.67 0 20 40 60 80 100 120 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 Pers enta se Peny em buha n kontrol negatif kontrol positif konsentrasi 20%
konsentrasi 40% konsentrasi 60%
Hasil  dari  persentase  penyembuhan luka  bakar  data  persentase  kesembuhan yang  paling  tinggi  adalah  kontrol  positif (salep  bermerek)  dimana  persentase kesembuhannya  mencapai  100%  pada  hari kesebelas.  Salep  bermerek  (X)  yang mengandung bahan aktif, Radix Scutellarie yang  memiliki  khasiat  untuk  mengatasi peradangan,  demam,  kejang-kejang  dan meningkatkan  daya  tahan  tubuh; Cortex Phellodendri yang  berkhasiat  untuk membunuh  kuman,  bakteri,  jamur,  dan dapat  mengurangi  kulit  merah  dan peradanga; Rhizoma  Coptidis yang berkhasiat  sebagai  anti-bakteri,  anti peradangan, antioksidan, dan mengeluarkan panas  tubuh.  Kontrol  positif  digunakan untuk  mengetahui  perbandingan  pengaruh penyembuhan luka dari penggunaan ekstrak etanol biji pinang.
Kontrol  negatif  yang  digunakan adalah  vaselin  flavum,  fungsi  kontrol negatif  adalah  mengetahui  apakah  basis yang  digunakan  mempunyai  efek  terhadap hewan  uji.  Kontrol  negatif  memiliki persentase  penyembuhan  luka  yang  tidak terlalu  besar  tapi  menunjukkan  adanya proses  penyembuhan.  Hal  ini  disebabkan vaselin flavum dapat menghambat hilangnya  kandungan  air  dari  sel-sel  kulit dengan  membentuk  lapisan  film  yang waterproff. Vaselin  flavum  juga  mampu meningkatkan hidrasi pada kulit. Sifat-sifat tersebut  sangat  menguntungkan  karena mampu  mempertahankan  kelembaban  kulit sehingga  vaselin  flavum  disebut  juga memiliki sifat moisturizer dan emollient . Persentase  penyembuhan  luka  bakar pada  hari  ke-14  untuk  ekstrak  etanol  biji pinang  konsentrasi  20%  sebesar  84,33%, ekstrak  etanol  biji  pinang konsentrasi  40% sebesar  87,67%,  dan  ekstrak  etanol  biji pinang  konsentrasi  60%  sebesar  89,67% memiliki aktivitas penyembuhan luka bakar pada  kulit  punggung  mencit  putih  jantan karena  didalam  ekstrak  etanol  biji  pinang
terkandung  senyawa  kimia  yang  dapat membantu proses penyembuhan luka bakar.
Mekanisme penyembuhan luka bakar ekstrak  etanol  biji  pinang  terjadi  karena didalam  ekstrak  etanol  biji  pinang terkandung  senyawa  kimia  yang  dapat membantu  proses  penyembuhan  luka  yaitu tanin yang berfungsi sebagai antibakteri dan antifungi  serta  sebagai  adstringen  yang menyembabkan  penciutan  pori-pori  kulit, memperkeras  kulit,  dan  menghetikan pendarahan  yang  ringan (8) .  Tanin  juga mempunyai  daya  antibakteri  dengan  cara mempresipitasi protein, karena diduga tanin mempunyai  efek  yang  sama  dengan senyawa  fenolik (9) .  Efek  antibakteri  tanin antara lain melalui reaksi dengan membrane sel,  inaktivasi  enzim,  dan  destruksi  atau inaktivasi fungsi materi genetik.
Flavonoid berfungsi sebagai antibakteri  dengan  cara  membentuk senyawa  kompleks  terhadap  protein extraseluler  yang  mengganggu  integritas membrane sel bakteri (10) . Adapun mekanisme dari flavonoid yaitu melancarkan  peredaran  darah  ke  seluruh tubuh dan mencegah terjadinya penyumbatan pembuluh darah, mengandung  antiinflamasi  juga  berfungsi sebagai  antioksidan,  dan  membantu mengurangi  rasa  sakit  jika  terjadi pendarahan atau pembengkakan (11) . Selain  flavonoid,  alkaloid  juga mempunyai kemampuan sebagai antibakteri. Mekanisme yang diduga adalah dengan  cara  menggangu  komponen penyusun  peptidoglikan  pada  sel  bakteri, sehingga  lapisan  sel  tidak terbentuk  secara utuh  dan  meyembabkan  kematian  sel tersebut (12) .  Saponin  memiliki  kemampuan sebagai  pembersih  dan  antiseptik  yang berfungsi membunuh kuman atau mencegah pertumbuhan  mikroorganisme  yang  biasa timbul  pada  luka  sehingga  luka  tidak mengalami  infeksi  yang  berat (12) .  Biji pinang dapat membantu proses
penyembuhan  luka  bakar  disebabkan adanya zat antibakteri, dimana zat tersebut berperan  sebagai  anti  mikroba  dan  anti jamur,  dengan  adanya  zat  tersebut sebagai antibakteri  dapat  menekan  pertumbuhan bakteri  pantogen  dan  mencegah  terjadinya infeksi  pada  luka  sehingga  kesembuhan luka dapat dipercepat.
Data yang diperoleh dianalisi dengan program  SPSS  dengan  menggunakan one- sample  kolmogrov-Sminorv  Test untuk mengetahui  data  berdistribusi  normal setelah data dianalisis didapatkan kesimpulan  data  berdistribusi  normal karena  nilai p-value >  0,05  yaitu  0,609. Data kemudian dianalisis dengan menggunakan  Uji  ANOVA  kemudian didapatkan nilai p-value < 0,05 yaitu 0,000 yang  berarti  data  memiliki  perbedaan bermakna.  Data  kemudain  dilanjutkan dengan  Uji  LSD  untuk  mengetahui perbedaan bermakna masing-masing perlakuan,  sehingga  diperoleh  kesimpulan hasil  uji  LSD  menunjukkan  bahwa  ekstrak etanol  biji  pinang  konsentrasi  20%, 40%, dan  60%  memiliki  perbedaan  bermakna dengan  kontrol  positif  dan  kontrol  negatif. Ekstrak etanol biji pinang konsentrasi 20%, 40%,  dan  60%  masing-masing  memiliki perbedaan bermakna yang signifikan.
a b c

## d                                                           e
Gambar 2 . Hasil penyembuhan luka bakar pada hari ke-14
Keterangan : a = kontrol negatif b = kontrol positif c = konsentrasi 20% d = konsentrasi 40% e = konsentrasi 60%

## SIMPULAN
Ekstrak etanol biji pinang konsentrasi 20%, 40% dan 60% memiliki efek sebagai obat  luka  bakar. Ekstrak
etanol  20% dengan  persentase  penyembuhan  luka sebesar  (84,33%),  konsentrasi  40% (87,67%),  dan  konsentrasi  60%  (89,67%). Konsentrasi  kelompok  ekstrak  etanol  biji pinang  yang  memiliki  aktivitas  optimum terhadap  penyembuhan  luka  bakar  adalah konsentrasi 60%.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Kristanto  H. Perbedaan  Efektifitas Perawatan  Luka  Bakar  Derajat  II Dengan  Lendir  Lidah  Buaya  ( Aloe Vera )  Dibandingkan  Dengan  Cairan
Fisiologis ( Normal Saline 0,9%) Dalam
Mempercepat  Proses  Penyembuhan [Skripsi]. Malang: Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya; 2005.
2. Sudarsono,  Pudjoarinto  A,  Gunawan D,Wahyuonos,  Donatus  IA,  Drajad  M. Tumbuhan  Obat.  Yogyakarta  :  Pusat Penelitian Obat Tradisional Universitas Gajah Mada; 1996.
3. Harbone  JB.  Metode  fitokimia: penuntun cara modern menganalisis tumbuhan. Bandung : Penerbit ITB ; 1987.
4. Verma  DK,  Bharat  M,  Nayak  D, Shanbhag  T,  Shanbhag  V,  Rajput  RS. Areca  catechu:  Effect  of  topical ethanolic  extract  on  burn  wound healing  in  albino  rats.  Int  J  Pharmacol and Clin Sci. 2012;1:74- 8.
5. Lee    KK, Choi  JD. The  Effects  of Areca  catechu  L.  Extract  on  Anti Inflammation  and  Anti-Melanogenesis, International Journal  of.  Cosmetic Science 21. 1999. 6. Meiyanto,  Edy . Ekstrak  Etanol  Biji Buah  Pinang (Areca  cathecu  Linn)
Mampu Menghambat  Proliferasi  dan Memacu  Apoptosis  Sel  MCF-7.
Majalah Farmasi Indonesia. 2008.
7. Depkes RI. Materia Medika Indonesia.
Jilid  V.  Jakarta:  Direktorat  Jenderal Pengawasan Obat Dan Makanan ; 1998. 8. Anief,  M. Formulasi  Obat  Topikal Dengan Dasar Penyakit Kulit . Yogyakarta:  Gajah  Mada  University Press; 1997. 9. Masduki,  I . Efek  Antibakteri  Ekstrak Biji Pinang (Areca catechu L. ) terhadap S.aureus dan E.  coli .  Cermin  Dunia Kedokteran. 1996. 10. Dwijoseputro,  A. Pengantar  Fisiologi Tumbuhan . Jakarta  :  PT.  Gramedia
Pustaka Mulia; 1994.
11. Wahyuningsih,  S.  Soemardji,  AA,
Febiyanti,  D . Efek  Gel  Lidah  Buaya (Aloe  barbadensis Mill ) Terhadap Penyembuhan  Luka  Bakar  Eksperimen
Pada  Tikus  Wistar  Betina . Prosiding Seminar  Nasional  Tumbuhan  Obat Indonesia XXIX. 2006.
12. Robinson,  T. Kandungan  Organik Tumbuhan Tingkat  Tinggi. Bandung : Penerbit ITB ; 1995.