## ISSN: 0215-7950
*Alamat penulis korespondensi: Fakultas Pertanian, Universitas Jenderal Soedirman. Jalan Dr. Soeparno No.63, Purwokerto Utara, Kabupaten Banyumas, Jawa Tengah 53122. Tel: (0281) 638791, Surel: lukassusanto26@gmail.com
Volume 18, Nomor 4, Juli 2022 Halaman 177–186 DOI: 10.14692/jfi.18.4. 177–186
Aplikasi Metabolit Sekunder Trichoderma harzianum T10 dalam Formula Tablet Larut-air terhadap Penyakit Rebah Semai Mentimun
Aplication of Trichoderma harzianum T10 Secondary Metabolites in Effervescent Tablets Formula towards Cucumber Damping-off
Sinta Fajriatul Ismi, Loekas Soesanto * , Endang Mugiastuti Universitas Jenderal Soedirman, Purwokerto 53123

## ABSTRAK
Pembuatan formula metabolit sekunder cendawan antagonis dalam tablet larut-air (TLA) merupakan hal baru. Penelitian ini bertujuan meramu metabolit sekunder Trichoderma harzianum T10 sebagai TLA untuk menekan pertumbuhan Pythium sp. secara in vitro dan pengendalian penyakit rebah semai mentimun  di  lapangan  terbatas.  Penelitian  menggunakan  kontrol  dan  1–3  tablet  per  15  mL,  serta metabolit sekunder Trichoderma harzianum T10  per  15  mL  dengan  frekuensi  penyiraman  dari  satu sampai empat kali. Variabel yang diamati ialah penghambatan pertumbuhan, masa inkubasi, insidensi penyakit, area under the disease progress curve (AUDPC), tinggi tanaman, jumlah daun, bobot segar dan kering tanaman, serta senyawa fenol. Hasil penelitian menunjukkan bahwa metabolit sekunder T. harzianum T10 dalam formula TLA dapat menghambat pertumbuhan Pythium sp. secara in vitro . Aplikasi metabolit sekunder T. harzianum T10 dalam formula TLA satu kali mampu mengendalikan penyakit rebah semai dengan menunda masa inkubasi sebesar 76.9%, mengurangi insidensi penyakit sebesar 85%, dan menurunkan AUDPC sebesar 85.35%-hari; meningkatkan pertumbuhan dari tinggi tanaman hingga 54.53%, jumlah daun sebesar 51.04%, bobot kering tanaman sebesar 49.46%, serta meningkatkan senyawa metabolit sekunder tanaman (saponin, tanin, dan hidrokuinon).
Kata kunci: AUDPC, insidensi penyakit, masa inkubasi, Pythium sp., senyawa fenol

## ABSTRACT
Formulation of secondary metabolites of antagonistic fungi in effervescent tablets (water-soluble tablets, TLA) is a novelty. This research aimed to determine the effect of application of Trichoderma harzianum T10 secondary metabolites in effervescent tablets formulas on the in vitro growth of Pythium sp and on controlling damping-off in field pot testing. In vitro test consisted of four treatments, i.e. control and 1–3 tablets per 15 mL; while field pot testing consisted of five treatments, i.e. control and watering frequency from one up to four times with five replicates for each treatment. Variables observed were growth inhibition, incubation period, disease incidence, area under the disease progress curve (AUDPC),  plant  height,  number  of  leaves,  weight  of  fresh  and  dry  plants,  weight  of  fresh  and  dry roots, and phenolic compound. Data analysis indicated that T. harzianum T10 secondary metabolites in effervescent tablets formulas could inhibit the in vitro growth of Pythium sp.. One time application of T. harzianum T10 secondary metabolites in effervescent tablets formulas was able to control damping-off which is shown by delaying incubation period by 76.9%, reduce disease incidence by 85% and AUDPC

## PENDAHULUAN
Mentimun ( Cucumis sativus ) merupakan salah satu komoditas hortikultura yang disukai masyarakat dan memiliki banyak manfaat dalam  kehidupan  sehari-hari  (Kumar et al . 2020). Tanaman ini banyak dibudidayakan di Indonesia karena memiliki daya adaptasi yang cukup luas terhadap lingkungan tumbuhnya dan tidak perlu perawatan khusus. Produksi mentimun di Indonesia sejak tahun 2018 menurun dari 4 539 887 ton menjadi 4 412 858 ton (BPS 2020). Kendala yang dihadapi dalam budi daya mentimun ialah pupuk dan masalah hama penyakit. Salah satu penyakit penting ialah penyakit rebah semai yang disebabkan oleh Pythium spp. (Al-Ameiri 2014; Khabbaz dan Abbasi 2014). Rebah semai merupakan penyakit utama tanaman mentimun yang terjadi selama perkecambahan benih hingga bibit muda (Ningtias et al . 2020). Pestisida  kimia  sintetis  banyak  di- aplikasikan untuk mengendalikan penyakit rebah semai, tetapi memiliki dampak negatif terhadap lingkungan dan kesehatan manusia.  Pengendalian  patogen  tular-tanah dengan penambahan mikrob antagonis pada tanah merupakan cara efektif. Trichoderma merupakan  antagonis  yang  efisien  memarasit cendawan patogen dan mengendalikan patogen tular-tanah  ( Mudyiwa et al .  2016;  Adnan et al . 2019). Namun aplikasi antagonis di alam berbasis spora menemui beberapa kendala seperti faktor abiotik (Bardin et al .  2015; Abd-Elgawad  dan  Askary  2020)  sehingga dikembangkan pemanfaatan metabolit sekundernya. Pemformulaan Trichoderma dan aplikasinya dalam mengendalikan penyakit telah dikembangkan seperti bentuk pelet dan formula cair (Fazil et al . 2018), tepung atau debu, biomassa ( pyrex) , pellet alginate , kaolin/pati/ selulosa, dan butiran (Balakrishnan et al . 2017).
Pemformulaan biopestisida dengan bahan pembantu dapat meningkatkan aktivitas kemempanannya dan pemilihan formula yang tepat dapat meningkatkan kestabilan produk, memperluas aktivitas, dan mengurangi ketidakkonsistenan kinerja lapang agens hayati  (Gašić  dan  Tanović  2013).  Formula tablet diterapkan secara individu dan langsung di lapangan dengan air dan tanpa persiapan larutan semprot, salah satunya ialah tablet larut-air (TLA). Tablet ini memiliki kelebihan mampu larut sempurna dan merata, serta konsentrasi bahan aktif yang terkandung juga dapat terdispersi lebih merata (Patel and Siddaiah 2018). Pemformulaan metabolit sekunder Trichoderma harzianum dalam TLA belum pernah dilakukan. Penelitian bertujuan menentukan pengaruh aplikasi metabolit sekunder T. harzianum T10 dalam formula TLA  terhadap Pythium sp. in vitro dan mendapatkan frekuensi penyiraman terbaik dalam pengendalian penyakit rebah semai di lapang terbatas.

## BAHAN DAN METODE
Cendawan Penyebab Rebah Semai dan Trichoderma harzianum T10 Cendawan  penyebab  rebah  semai diisolasi dari tanaman mentimum yang sakit menggunakan  medium  agar-agar  dekstrosa kentang  (ADK).  Biakan  murni  diidentifikasi menggunakan Patil dan Rathore (2018) dan galur ini digunakan sebagai patogen pada penelitian ini. Tanaman mentimun yang memiliki ciri-ciri terkena rebah semai, dicabut dari pertanaman kemudian dibersihkan. Bagian  tanaman  bergejala  dipotong  meng- gunakan pisau dan disterilkan dengan cara dimasukkan ke dalam alkohol 70% selama 3 menit, lalu dibilas menggunakan air steril sebanyak  dua  kali  masing-masing  3  menit,
by 85.35%-day; to increase plant growth by increasing plant height by 54.53%, number of leaves by 51.04%, weight of dry plants by 49.46%; and increase secondary metabolites (saponins, tannins, and hydroquinone) compound of plants.
Keywords: AUDPC, disease incidence, incubation period, phenolic compound, Pythium sp.
Jurnal Fitopatologi Indonesia
Ismi et al.
lalu dikeringanginkan. Setelah itu potongan bagian tanaman dibiakkan pada medium ADK dan diinkubasi selama 5–7 hari (Papias et al . 2016). Isolat T. harzianum T10 yang digunakan merupakan isolat dari perakaran tanaman jahe yang berasal dari koleksi penelitian dalam tanah steril (Soesanto et al . 2005). Cendawan T. harzianum T10 diperbanyak dalam medium jagung pecah. Jagung pecah dicuci hingga bersih, ditiriskan, dimasukkan ke dalam plastik dan disterilkan dengan autoklaf pada suhu  121  ℃  selama  30  menit.  Jagung  steril yang sudah dingin diinokulasi dengan dua bor gabus T. harzianum T10 (diameter 1 cm) pada suhu kamar selama 7 hari (Panahian et al .  2012).    Cendawan  ini  diremajakan  pada medium ADK pada suhu ruang dan diinkubasi selama 7 hari.
Produksi Metabolit Sekunder Sebanyak 50 g medium jagung yang telah diinokulasi T . harzianum T10 umur 7 hari  ditambahi  100  mL  dekstrosa  kentang cair, diaduk supaya massa T . harzianum T10 tercuci, selanjutnya disaring ke dalam labu Erlenmeyer, dan kemudian dikocok menggunakan alat kocok edar ( orbital shaker ) dengan kecepatan 150 rpm pada suhu ruang selama 7 hari (Soesanto et al . 2020). Selanjutnya sentrifugasi dilakukan dengan kecepatan 3000 rpm selama 5 menit untuk memisahkan massa T . harzianum T10 dan metabolit sekundernya. Filtratnya disaring dua kali lagi dengan kertas saring Wattman No. 1 (Rauf et al . 2018). Supernatan yang diperoleh merupakan metabolit sekunder T . harzianum T10 dan siap digunakan.
Pembuatan Tablet Larut-Air yang mengandung Metabolit Sekunder Trichoderma harzianum T10 Tablet larut-air yang mengandung metabolit sekunder T. harzianum T10 disiapkan dengan membuat serbuk bahan aktif terlebih dahulu. Sebanyak  100  mL  supernatan  metabolit sekunder T . harzianum T10 dicampur dengan 50 g gom xantan hingga adonan metabolit sekunder T . harzianum T10 menjadi kental.
Adonan ini ditambahi bedak talk steril sedikit demi sedikit hingga kalis, lalu adonan diratakan tipis pada permukaan loyang dan dikeringkan dalam oven pada suhu 50–60 ℃, setelah itu adonan dihaluskan menggunakan blender. Serbuk halus ini merupakan bahan aktif metabolit sekunder T . harzianum T10. Pembuatan  TLA  yang  mengandung metabolit sekunder T . harzianum T10 dilakukan dengan membuat massa asam dan massa basa dahulu. Sebanyak 210 g serbuk halus yang mengandung metabolit sekunder T . harzianum T10 ditambahi massa asam 7.2% asam sitrat dan 11.2% g asam tartrat. Selanjutnya massa basa disiapkan dengan mencampurkan 210 g serbuk halus yang mengandung metabolit sekunder T . harzianum T10 dan 25.6 % natrium bikarbonat. Dua macam massa bahan asam dan basa tersebut dikeringkan dalam oven pada suhu 50–60 ℃ selama 24 jam, kemudian diayak dan dikempa dengan mesin kempa tablet pada kelembapan relatif 40% (Tanjung dan Puspitasari 2019).
Uji in vitro Uji in vitro dilakukan mengikuti metode Passera et al . (2019). Percobaan disusun dalam rancangan acak lengkap dengan empat perlakuan  TLA:  0,  1,  3,  dan  5  TLA  dalam 15 mL air steril, (bobot 1 TLA = 1.5 g). Empat perlakuan ini dilawankan dengan patogen rebah semai dan diulang enam kali.
Uji di Lapangan Terbatas Pengujian dilakukan pada bibit mentimun yang disiapkan pada pot plastik berisi 3 kg medium tanam berupa campuran tanah dan pupuk kandang matang (1:1). Inokulasi patogen dilakukan dengan meletakkan 2 bor gabus biakan Pythium sp. ke dalam lubang tanam, kemudian setiap pot plastik ditanami 3 benih mentimun pada kedalaman 1.5 cm dan ditutup dengan selapis medium tanam. Benih mentimun direndam dalam air steril untuk kontrol, sedangkan benih untuk semua perlakuan direndam dalam larutan TLA  konsentrasi  3  TLA  per  liter  air  selama 30 menit. Perlakuan berupa frekuensi penyiraman  dengan  TLA  disiapkan  dari
3 TLA 100 mL -1 dan air untuk kontrol, yang dilakukan sesuai perlakuan.
Penelitian ini disusun dalam rancangan acak kelompok lengkap dengan 5 perlakuan masing-masing sebanyak 5 ulangan.  Perlakuan terdiri atas perlakuan kontrol (penyiraman benih di medium pot plastik menggunakan air steril), dan frekuensi penyiraman sebanyak 1, 2, 3, dan 4 kali.
Pengamatan Komponen Patosistem . Peubah yang diamati pada uji in vitro ialah daya hambat terhadap patogen, insidensi penyakit, dan AUDPC.  D aya hambat dihitung dengan rumus:
DH = R1 – R2

## R1
× 100%, dengan
R1,  jari-jari  koloni  patogen  menuju  kontrol; dan  R2,  jari-jari  koloni  patogen  menuju perlakuan.
Pada uji lapangan terbatas, masa inkubasi dihitung sejak hari inokulasi patogen sampai waktu pertama kali munculnya gejala awal penyakit, dengan satuan hari setelah inokulasi (HSI). Insidensi penyakit (IP) dihitung dengan rumus:
IP = nN × 100%, dengan n,  jumlah  tanaman  terserang;  dan  N,  jumlah tanaman yang diamati. Kurva perkembangan penyakit atau area of under the disease progress curve (AUDPC) dihitung dengan rumus:
2 AUDPC = × (t i-1 –t i ) (Y i +Y i+1 ) ∑ N i-1 i [ , dengan [ Y i , data pengamatan ke-i; Y i+1 , data pengamatan pada i + 1; t i , waktu (hari) pengamatan ke-i; dan N, jumlah total pengamatan. Komponen Pertumbuhan . Tinggi tanaman  diukur  mulai  hari  ke-3  setelah penanaman benih. Jumlah daun diamati setiap 3 hari sekali setelah penanaman benih. Bobot tanaman dan akar dikeringkan dalam oven pada suhu 70 ℃ selama 48 jam. Analisis Jaringan Tanaman . Senyawa fenol berupa saponin, tanin, dan hidrokuinon tanaman dianalisis secara kualitatif. Analisis kandungan saponin mengikuti Fahrunnida dan Pratiwi (2015), tanin dan hidrokuinon (Syafitri et al . 2014).
Analisis Data Data  dianalisis  dengan  uji  F  pada  α  5%. Hasil analisis yang nyata dilanjutkan dengan Duncan’s Multiple Range Test pada α 5%.

## HASIL
Patogen Tanaman Mentimun Biakan murni hasil isolasi tanaman mentimun yang terserang penyakit rebah semai secara makroskopis dan mikroskopis diidentifikasi  sebagai Pythium sp. (Gambar 1). Cendawan yang didapat sesuai dengan ciri Pythium sp. yang diuraikan oleh Paul et al . (2008) dan Ashwathi et al. (2017), yaitu hifa berwarna putih dan tumbuh merata di cawan, hifa tidak bersekat, bercabang, dan oospora berbentuk bulat.
Gambar 1  Morfologi Pythium sp. a, koloni pada medium agar-agar dekstrosa kentang; b, hifa; c, oospora; dan d, sporangium.
a b c d
Jurnal Fitopatologi Indonesia
Uji in Vitro Perlakuan  TLA  yang  mengandung metabolit sekunder T. harzianum T10 mampu menghambat pertumbuhan Pythium sp. dengan daya hambat antara 20.60% dan 31.88% (Tabel 1). Hal ini ditunjukkan dari pertumbuhan Pythium sp. yang tidak melewati  kertas  yang  diberi  perlakuan TLA, tetapi tumbuh menjauhi perlakuan dan menuju bagian medium yang kosong.
Uji di Lapangan Terbatas Komponen patosistem, baik masa inkubasi, maupun insidensi penyakit dan AUDPC berbeda nyata terhadap kontrol, tetapi antarperlakuan frekuensi penyiraman tidak berbeda (Tabel 2). Hasil pengamatan pada masa inkubasi secara keseluruhan paling cepat ialah pada perlakuan kontrol (Tabel 2). Hal ini disebabkan oleh infeksi Pythium sp. pada benih mentimun. Jumlah benih yang gagal berkecambah pada kontrol lebih banyak dibandingkan dengan perlakuan frekuensi penyiraman yang diberikan.
Insidensi penyakit rebah semai pada kontrol paling tinggi dan dapat dibedakan dengan perlakuan penyiraman metabolit
sekunder T . harzianum T10. Frekuensi penyiraman mampu menurunkan insidensi penyakit (Tabel 2).
Nilai AUDPC pada kontrol berbeda dengan semua perlakuan frekuensi penyiraman serta memiliki luas paling tinggi (Tabel 2). Hal ini selaras dengan masa inkubasi dan insidensi penyakitnya. Pythium sp. menginfeksi benih tanaman lebih cepat pada perlakuan kontrol daripada  penyiraman  dengan  larutan  TLA. Akan tetapi, empat perlakuan frekuensi penyiraman larutan TLA tidak berbeda nyata. Secara keseluruhan frekuensi penyiraman dengan  larutan  TLA  meningkatkan  tinggi tanaman, jumlah daun, bobot kering tanaman dan akar dibandingkan dengan kontrol (Tabel 3). Kandungan senyawa fenol tanaman, yaitu saponin dan tanin, secara kualitatif umumnya meningkat pada perlakuan penyiraman dengan larutan TLA dan lebih tinggi daripada kontrol. Kandungan  hidrokuinon tidak berbeda pada kontrol dan penyiraman dengan larutan TLA (Tabel 4). Pengamatan uji saponin secara kualitatif menunjukkan hasil yang berbeda antara kontrol dan perlakuan. Hal ini ditunjukkan dengan adanya busa yang dihasilkan pada frekuensi penyiraman tiga kali. Hasil uji tanin secara kualitatif menunjukkan bahwa hasil yang berbeda antara kontrol dan perlakuan. Perlakuan kontrol dan frekuensi penyiraman empat kali menunjukkan hasil yang cenderung sama atau paling sedikit mengandung tanin. Perlakuan frekuensi satu dan tiga kali penyiraman menunjukkan hasil tertinggi, dikelompokkan dengan kandungan tanin banyak. Hasil uji hidrokuinon secara kualitatif menunjukkan bahwa hasil yang cenderung
Tabel 1  Daya hambat Pythium sp. pada perlakuan tablet  larut-air yang mengandung metabolit sekunder Trichoderma harzianum T10 Jumlah tablet larut-air Daya hambat (%) 1 20.60 a 3 24.95 a 5 31.88 a
Keterangan: Angka yang diikuti oleh huruf yang sama tidak  berbeda nyata berdasarkan uji Duncan pada α 5%.
Tabel 2  Komponen patosistem tanaman mentimun pada uji frekuensi penyiraman menggunakan tablet larut-air yang mengandung metabolit sekunder Trichoderma harzianum T10 Frekuensi penyiraman (kali) Masa inkubasi (hsi) Insidensi penyakit (%) AUDPC (% hari) Kontrol 8.14 a 57.14 b 224.28 b 1 14.40 b 8.57 a 32.86 a 2 13.37 b 17.14 a 58.57 a 3 13.03 b 17.14 a 68.57 a 4 12.09 b 25.71 a 98.57 a
Keterangan: Angka yang diikuti oleh huruf yang sama tidak ada berbeda nyata berdasarkan uji Duncan pada α 5%.
sama, baik kontrol maupun perlakuan. Perlakuan frekuensi penyiraman dua dan empat kali menunjukkan hasil yang cenderung sama dan dikelompokkan kandungan tanin cukup banyak.

## PEMBAHASAN
Pemberian metabolit sekunder T. harzianum T10 pada uji in vitro menunjukkan penghambatan terhadap Pythium sp. Sesuai dengan penelitian Ningtias et al. (2020) bahwa Pythium sp. pada kontrol memiliki masa inkubasi lebih cepat, yaitu 15 dan 43 hari, setelah inokulasi dibandingkan dengan perlakuan uji. Metabolit sekunder T. harzianum T10 dapat memperpanjang masa inkubasi selama 15 hari dibandingkan dengan kontrol (Soesanto et al . 2019). Hal ini menunjukkan bahwa T. harzianum menghasilkan senyawa penghambat pertumbuhan patogen. Trichoderma sp. mempunyai mekanisme antagonisme terhadap cendawan patogen, yaitu kompetisi, mikoparasit, dan antibiosis. Mekanisme antibiosis ditunjukkan dengan dihasilkannya senyawa metabolit sekunder, seperti peptiabol, piron, viridian, koningin,
gliotoksin, gliovirin, dan viriodol (Singh et al. 2018). Kondisi ini mendukung aplikasi T. harzianum T10 pada bibit mentimun, yang ditunjukkan dengan penundaan masa inkubasi. Senyawa tidak menguap dari T. harzianum— asam harzianat dan harzianolid—juga mampu menghambat bermacam cendawan patogen tanaman, seperti P. irregulare , Sclerotina sclerotium , dan Rhizoctonia solani (Alfiky dan Weiskopf 2021).
Meskipun demikian, tampak fenomena menarik bahwa semakin banyak aplikasi penyiraman metabolit sekunder T. harzianum T10, tampak semakin mengecil angka penundaan masa inkubasi. Hal ini kemungkinan diduga pada penyiraman pertama, metabolit sekunder sudah mampu menghambat perkembangan Pythium sp. Selang waktu antara penyiraman metabolit sekunder dipergunakan oleh Pythium sp. untuk tumbuh kembali, yang didukung oleh tersedianya nutrisi di dalam medium tanam. Hal ini didukung hasil penelitian Manici et al . (2004), bahwa adanya pupuk kandang di dalam medium tanam akan meningkatkan populasi Pythium sp. bersamaan dengan peningkatan populasi mikrob tanah, dan tidak
Tabel 4  Komponen metabolit sekunder jaringan tanaman mentimun secara kualitatif
Frekuensi penyiraman (kali) Saponin Tanin Hidrokuinon Kontrol + + +
1 ++ +++ + 2 ++ ++ ++ 3 +++ +++ + 4 ++
+ ++
Keterangan: −, tidak ada; +, sedikit; ++, sedang; dan +++, banyak.
Tabel 3  Komponen pertumbuhan tanaman mentimun pada uji frekuensi penyiraman perlakuan tablet larut-air yang mengandung metabolit sekunder Trichoderma harzianum T10 Frekuensi penyiraman (kali) Tinggi tanaman (cm) Jumlah daun Bobot tanaman kering (g) Bobot akar kering (g) Kontrol 3.68 a 1.34 a 0.19 a 0.02 a 1 8.09 b 2.74 b 0.37 b 0.03 ab 2 7.39 b 2.40 b 0.33 b 0.04 b 3 8.05 b 2.46 b 0.35 b 0.03 ab 4 6.40 b 2.20 b 0.29 ab 0.03 ab
Keterangan: Angka yang diikuti oleh huruf yang sama tidak ada berbeda nyata berdasarkan uji Duncan pada α 5%.
Jurnal Fitopatologi Indonesia
Ismi et al.
mengakibatkan penekanan patogen. Kondisi ini akan selaras dan berdampak pada intensitas penyakit dan nilai AUDPC.
Penekanan insidensi penyakit dan nilai AUDPC  diduga  disebabkan  oleh  peran metabolit sekunder T. harzianum T10. Hal ini didukung hasil penelitian Amaria et al . (2018), bahwa biofungisida T. virens dan T. amazonicum cukup efektif memperpanjang masa inkubasi dan menekan laju keparahan penyakit oleh Rigidiporus microporus dalam satu kali aplikasi (dosis 50 g per tanaman). Biofungisida T. harzianum memengaruhi perkembangan patogen, yang ditunjukkan dengan penghambatan pertumbuhan miselium Septobasidium spp. dan mengelupasnya miselium cendawan di ranting dan cabang tanaman lada (Suswanto 2015). Selain itu, aplikasi metabolit sekunder T. harzianum T10 mampu meningkatkan kandungan senyawa fenol di dalam jaringan tanaman. Kandungan fenol yang tinggi menunjukkan tanaman tahan, serta adanya peningkatan sintesis fenol setelah infeksi dapat mencegah perkembangan penyakit (Gogoi et al .  2001;  Wallis  dan Galarneau 2020).
Masa inkubasi yang cepat dan insidensi penyakit yang tinggi menyebabkan pesatnya laju perkembangan penyakit sehingga berpengaruh  pada  besarnya  nilai  AUDPC. Trichoderma spp.  dapat  mengurangi  ke- parahan layu Fusarium pada buncis dengan aktivitas anticendawan yang dimilikinya (Moutassem et al . 2020). Hal ini ditunjukkan dengan pengurangan populasi cendawan tanah dan mengimbas pada ketahanan tanaman inang. Metabolit sekunder Trichoderma spp. menyebabkan pengaruh antimikrob baik langsung maupun tidak langsung dengan merangsang tanaman inang. Metabolit sekunder Trichoderma berupa 6PP dan asam harzianat dapat mengendalikan penyakit embun tepung pada tanaman anggur yang ditunjukkan dengan berkurangnya penyakit di sepanjang daun dan gejala yang ada (Pascale et al . 2017). Ketidakberhasilan penetrasi Pythium sp. pada jaringan tanaman terhambat oleh kandungan metabolit sekunder T. harzianum
T10 sehingga berpengaruh terhadap jumlah tanaman sehat dan frekuensi penyiraman juga memengaruhi pertumbuhan tanaman. Metabolit sekunder T. harzianum T10 meningkatkan tinggi tanaman, jumlah daun, bobot akar kering, dan panjang akar pada tanaman kakao (Soesanto et al . 2019). Metabolit sekunder T. harzianum juga berperan memacu pertumbuhan dan perkembangan tanaman, seperti merangsang pembuahan tanaman karena adanya interaksi dengan tanaman dalam memacu hormon pertumbuhan (Kalay et al . 2019) dan menghasilkan enzim pemacu pertumbuhan tanaman dan akar (Taribuka et al . 2017).
Vipul et al . (2014) menyatakan bahwa pengimbasan pada tanaman dengan merangsang tanaman untuk menghasilkan beberapa senyawa metabolit sekunder. Hal ini menyebabkan tanaman memiliki ketahanan terhadap mikrob patogen, hama, dan cekaman abiotik. Soesanto et al . (2019) menyatakan bahwa penambahan metabolit sekunder T. harzianum pada bibit kakao dapat meningkatkan kandungan fenol tanaman yang berimbas pada ketahanan tanaman. Uji saponin pada daun, buah, dan tangkai daun belimbing wuluh menunjukkan terbentuknya busa stabil selama 30 detik setinggi 1–3 cm (Fahrunnida dan Pratiwi 2015). Hasil positif pada uji tanin ditandai dengan perubahan hijau kehitaman saat  penambahan  FeCl 3 1% (Manongkoa et al . 2020). Warna hijau atau kebiruan yang dihasilkan dari uji tanin karena reaksi dengan garam besi (Wirdayanti dan Sofyanti 2019).
Berdasarkan hasil penelitian ini dapat disimpulkan  bahwa  TLA  dapat  menghambat pertumbuhan Pythium sp. secara in vitro , yaitu dengan menunda masa inkubasi, menurunkan insidensi penyakit, dan menurunkan AUPDC, serta meningkatkan pertumbuhan tinggi tanaman, jumlah daun, bobot tanaman kering, dan meningkatkan kandungan fenol tanaman, yaitu saponin, tanin, dan hidrokuinon secara kualitatif.  Tablet  larut-air  merupakan  bentuk formula untuk metabolit sekunder agens hayati yang tepat dan dapat mengatasi hambatan transportasi.

## DAFTAR PUSTAKA
Abd-Elgawad  MMM,  Askary  TH.  2020. Factors  affecting  success  of  biological agents used in controlling the plant-parasitic nematodes. Egyptian Journal of Biological Pest Control. 30(1):1–11. DOI: https://doi. org/10.1186/s41938-020-00215-2 . Adnan M, Islam W, Shabbir A, Khang KA, Ghramh  HA,  Huang  Z,  Chen  HYH, Lu  G.  2019.  Plant  defense  against fungal pathogens by antagonistic fungi with Trichoderma in focus. Microbial Pathogenesis. 129:7–18. DOI: https://doi. org/10.1016/j.micpath.2019.01.042.
Alfiky  A,  Weisskopf  L.  2021.  Review:
deciphering Trichoderma -plant-pathogent interactions for better development of biocontrol apllications. Journal of Fungi. 7(61):1–18. DOI: https://doi.org/10.3390/ jof7010061.
Al-Ameiri  NS.  2014.  Control  of  cucumber damping-off in the field by the bio-agent Trichoderma harzianum . International Journal of Agriculture and Forestry. 4(2):112–117.
Amaria W, Harni R, Wardiana E. 2018.
Pengaruh dosis dan frekuensi aplikasi biofungisida Trichoderma terhadap infeksi Rigidiporus microporus pada benih karet. Jurnal Tanaman Industri dan Penyegar. 5(2):49–58. DOI: https://doi.org/10.21082/ jtidp.v5n2.2018.p49-58.
Ashwathi  S,  Ushamalini  C,  Parthasarathy S, Nakkeeran S. 2017. Morphological, pathogenic and molecular characterisation of Pythium aphanidermatum : a causal pathogen of coriander damping-off in India. The Pharma Innovation. 6(11):44–48.
Balakrishnan S, Parthasarathy S, Kamalakannan A, Kuppusamy KS, Gopalakrishnan C. 2017. A novel method to develop paste formulation of Trichoderma harzianum .  International Journal of Current  Microbiology  and  Applied Science. 6(11):3286–3293. DOI: https:// doi.org/10.20546/ijcmas.2017.611.385.
Bardin M, Ajouz S, Comby M, Lopez-Ferber M, Graillot B, Siegwart M, Nicot PC. 2015.
Is the efficacy of biological control against plant diseases likely to be more durable than that of chemical pesticides? Frontiers in Plant Science. 27(6):566. DOI: https:// doi.org/10.3389/fpls.2015.00566.
[BPS] Badan Pusat Statistik. 2020. Statistik Hortikultura 2020. Jakarta: Badan Pusat Statistik.
Fahrunnida, Pratiwi. 2015. Kandungan saponin buah, daun dan tangkai daun belimbing wuluh. Prosiding Seminar Nasional Konservasi dan Pemanfaatan Sumber Daya Alam ; 2015 Jan 13; Surakarta (ID): UNS Surakarta. hlm 220–224. https:// jurnal.fkip.uns.ac.id/index.php/kpsda/ article/view/5378.
Fazil  M,  Sriwati  R,  Chamzurni  T.  2018. Aplikasi beberapa bentuk formulasi Trichoderma spp. dalam mengendalikan penyakit layu fusarium pada tanaman tomat. Jurnal Ilmiah Mahasiswa Pertanian. 2(3):20–30. DOI: https://doi.org/10.17969/ jimfp.v3i2.7478.
Gašić, S. and Tanović, B., 2013. Biopesticide formulations, possibility of application and future trends. Pesticidi i Fitomedicina. 28(2):97–102. DOI: https://doi. org/10.2298/PIF1302097G.
Gogoi R, Singh DV, Srivastava KD. 2001. Phenols as a biochemical basis of resistance in wheat against Karnal bunt.  Plant  Pathology  50(4):  470-476. DOI:  https://doi.org/10.1046/j.1365- 3059.2001.00583.x.
Kalay  AM,  Tuhumury  GNC,  Pesireron  N, Talaharuruson A. 2019. Control of damping off and increased growth of tomato seeds by utilizing trichoderma harzianum based on solid organic materials. 8(1):12–20. DOI: https://doi.org/10.30598/a.v8i1.873.
Khabbaz  SE,  Abbasi  PA.  2014.  Isolation, characterization,  and  formulation  of antagonistic bacteria for the management of  seedlings  damping-off  and  root  rot disease of cucumber. Canadian Journal of Microbiology. 60(1):25–33. DOI: https:// doi.org/10.1139/cjm-2013-0675 . Kumar H, Bhardwaj K, Sharma R, Nepovimova  E,  Kuča  K,  Dhanjal  DS,
Jurnal Fitopatologi Indonesia
Verma R, Bhardwaj P, Sharma S, Kumar D. 2020. Fruit and vegetable peels: utilization  of  high  value  horticultural waste in novel industrial applications. Molecules. 25(12):2812. DOI: https://doi. org/10.3390/molecules25122812.
Manici LM, Caputo F, Babini V. 2004. Effect of green manure on Pythium spp. population and microbial communities in intensive cropping systems. Plant and Soil 263(1): 133–142. DOI: https://doi.org/10.1023/ B:PLSO.0000047720.40918.29.
Manongkoa PS, Sangia MS, Momuata LI.  2020.  Uji  senyawa  fitokimia  dan aktivitas antioksidan tanaman patah tulang ( Euphorbia tirucalli L. ). Jurnal Mipa. 9(2):64–69. DOI: https://doi.org/10.35799/ jmuo.9.2.2020.28725.
Moutassem  D,  Belabid  L,  Bellik  Y.  2020. Efficiency  of  secondary  metabolites produced by Trichoderma spp. in the biological control of Fusarium wilt in chickpea.  Journal  of  Crop  Protection. 9(2):217–231.
Mudyiwa  RM,  Chaibva  P,  Takawira  M, Njeni P. 2016. Evaluation of Trichoderma harzianum in  controlling  damping-off
( Pythium spp.) on tomato ( Solanum lycopersicum ) seedling varieties. Annals of Biological Research. 7(6):6–11. Ningtias W, Mugiastuti E, Rahayuniati RF, Soesanto  L.  2020.  Penggunaan  formula cair Trichoderma harzianum T10 berbahan tepung jagung terhadap rebah semai ( Pythium sp.) bibit mentimun. Jurnal Agronida. 6(2):73–82. DOI: https://doi. org/10.30997/jag.v6i2.2823.
Panahian GH, Rahnama K, Jafari M. 2012. Mass production of Trichoderma spp. and application. International Research Journal of Applied and Basic Sciences 3:292–298. Papias  HB,  Conrad  KB,  Susan  NM,  Inocent IR. 2016. Morphological and molecular identification  of Pythium spp. isolated from common beans ( Phaseolus vulgaris ) infected with root rot disease. African Journal of Plant Science. 10(1):1–9. DOI: https://doi.org/10.5897/AJPS2015.1359.
Pascale A, Vinale F, Manganiello G, Nigro M,  Lanzuise  S,  Ruocco  M,  Marra  R, Lombardi  N,  Woo  SL,  Lorito  M.  2017. Trichoderma and its secondary metabolites improve yield and quality of grapes. Crop Protection. 92:176–181. DOI: https://doi. org/10.1016/j.cropro.2016.11.010.
Passera  A,  Compant  S,  Casati  P,  Maturo MG, Battelli G, Quaglino F, Antonielli L,  Salerno  D,  Brasca  M,  Toffolatti  SL, Mantegazza F. 2019. Not just a pathogen? Description of a plant-beneficial Pseudomonas syringae strain. Frontiers in microbiology. 2019:1409. DOI: https:// doi.org/10.3389/fmicb.2019.01409.
Patel SG, Siddaiah M. 2018. Formulation and  evaluation  of  effervescent  tablets: a review. Journal of Drug Delivery and Therapeutics. 8(6):296–303. DOI: https:// doi.org/10.22270/jddt.v8i6.2021.
Patil AD, Rathore MS. 2018. Isolation of pythium species from damping off affected onion  rhizospheric  soil,  using  baiting technique. Journal of Pharmacognosy and Phytochemistry. 7(4):12–3.
Paul B, Mathew R, Kanak B, Paul A, Henry M, Lefort  F,  Belbahri  L.  2008.  Morphology, taxonomy, and phylogenetic analysis of a new species of Pythium isolated from France. Fungal Diversity. 28:55–63. Rauf S, Ali Y, Hussain S, Ullah F, Hayat A. 2018. Design of a novel filter paper based construct for rapid analysis of acetone. Plos One. 13(7):e0199978. DOI: https:// doi.org/10.1371/journal.pone.0199978.
Singh  A,  Shukla  N,  Kabadwal  BC,  Tewari AK,  Kumar  J.  2018.  Review  on  Plant- Trichoderma -pathogen  interaction. International  Journal  of  Current Microbiology and Applied Sciences. 7(2):2382–2397. DOI: https://doi. org/10.20546/ijcmas.2018.702.291.
Soesanto  L,  Soedharmono,  Prihatiningsih N, Manan A, Iriani E, Pramono J. 2005. Potensi agensia hayati dan nabati dalam mengendalikan penyakit busuk rimpang jahe. Jurnal Hama dan Penyakit Tumbuhan Tropika. 5(1):50–57. DOI: https://doi. org/10.23960/j.hptt.1550-57.
Soesanto  L,  Mugiastuti  E,  Manan  A.  2019. Raw secondary metabolites application of two Trichoderma harzianum isolates towards vascular streak dieback on cocoa seedlings. Pelita Perkebunan. 35(1):22– 32. DOI: https://doi.org/10.22302/iccri.jur. pelitaperkebunan.v35i1.346.
Soesanto  L,  Solikhah  AN,  Mugiastuti E, Suharti WS. 2020. Application of Trichoderma harzianum T10 liquid formula  based  on  soybean  flour  against cucumber seedlings damping-off ( Pythium sp.). Akta Agrosia. 23(1):11–18. DOI: https://doi.org/10.31186/aa.23.1.11-18 . Suswanto I. 2015. Kajian formulasi mutan Trichoderma sebagai kandidat agens pengendali hayati hawar beludru Septobasidium pada lada. Perkebunan dan Lahan Tropika.  4(2):22–29.  DOI:  https:// doi.org/10.26418/plt.v4i2.9373.
Syafitri  NE,  Bintang  M,  Falah  S.  2014. Kandungan  fitokimia,  total  fenol,  dan total  flavonoid  ekstrak  buah  harendong ( Melastoma  affine D.  Don).  Current Biochemical. 1(3):105–115.
Tanjung YP, Puspitasari I. 2019. Formulasi dan evaluasi  fisik  tablet effervescent ekstrak
buah mengkudu ( Morinda citrifolia L.). Farmaka. 17(1):1–14. DOI: https://doi. org/10.35814/jifi.v17i2.564.
Taribuka J, Wibowo A, Widyastuti SM, Sumardiyono  C.  2017.  Potency  of  six isolates of biocontrol agents endophytic Trichoderma against fusarium wilt on banana. Journal of Degraded and Mining  Lands  Management. 4(2):723– 731. DOI: https://doi.org/10.15243/ jdmlm.2017.042.723.
Vipul K, Mohammad S, Muksesh S, Sonika P, Anuradha S, Sharma A. Role of secondary metabolites produced by commercial Trichoderma  species  and  their  effect against soil borne pathogens. Biosensors Journal. 3(1):1–5.
Wallis  CM,  Galarneau  ERA.  2020.  Phenolic compound induction in plant-microbe and plant-insect  interactions:  a  meta-analysis. Frontiers in Plant Science 11. DOI: https:// doi.org/10.3389/fpls.2020.580753.
Wirdayanti,  Sofiyanti  N.  2019.  Skrining fitokimia  lima  jenis  tumbuhan  paku Polypodiaceae dari Provinsi Riau. Jurnal Ilmiah Ilmu-Ilmu Hayati. 4(2):40–49. DOI: https://doi.org/10.24002/biota.v4i2.2470.