Available online at http://ejurnal.setiabudi.ac.id/ojs/index.php/biomedika P-ISSN : 1979 - 035X & E-ISSN : 2302 - 1306
Aktivitas Antibakteri Kombinasi Minyak Atsiri Daun Kemangi (Ocimum Basilicum L.) dan Daun Jeruk Purut (Citrus Hystrix D.C.) terhadap Escherichia Coli ATCC 25922
Antibacterial Activity of Essential Oil of Basil Leaves (Ocimum Basilicum L.) And Kaffir Lime Leaves (Citrus Hystrix D.C) Combination Against Escherichia Coli ATCC 25922
Fitri Jati Rukmana 1 , Reslely Harjanti 1 *, D. Andang Arif Wibawa 2
1 Fakultas Farmasi, Universitas Setia Budi Surakarta
2 Fakultas Ilmu Kesehatan, Universitas Setia Budi Surakarta Jl. Let. Jend. Sutoyo, Mojosongo, Surakarta, 57127, Jawa Tengah, Indonesia *Corresponding Author: reslely.nindy@gmail.com
Received: Agustus 23, 2019; Revise: October 21., 2019;  Accepted: December 20, 2019 DOI : https://doi.org/10.31001/biomedika.v12i2.611

## ABSTRAK
Minyak atsiri kemangi mengandung komponen senyawa linalool yang tergolong turunan terpenoid yang  mempunyai  efek  antibakteri  dan  minyak  atsiri  jeruk  purut  mengandung  senyawa  citronella  yang dapat  menghambat  pertumbuhan  berbagai  jenis  bakteri.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui aktivitas antibakteri minyak atsiri daun kemangi, daun jeruk purut dan kombinasi dari keduanya terhadap Escherichia  coli ATCC  25922.  Metode  uji  aktivitas  antibakteri  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah metode difusi. Konsentrasi sampel uji adalah 2% dan 4% dengan perbandingan kombinasi minyak atsiri  yaitu  1:1;1:2;2:1.  Data  hasil  penelitian  kemudian  dianalisis  secara Analisis  of  Varians (ANOVA) dua arah. Hasil penelitian menunjukkan minyak atsiri kombinasi dari daun kemangi ( Ocimum basilicum L.)  dan  daun  jeruk  purut  ( Citrus  hystrix D.C)  memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap Escherichia  coli ATCC  25922  dengan  konsentrasi  2%  dan  4%  dan  variasi  kombinasi  minyak  atsiri  dari  daun  kemangi ( Ocimum  basilicum L.)  dan  minyak  atsiri  daun  jeruk  purut  ( Citrus  hystrix D.C)  yang  memiliki  daya hambat paling besar terhadap Escherichia coli ATCC 25922 adalah pada kombinasi 1:2 dengan diameter hambat 15,5 mm pada konsentrasi 4%.
Kata  kunci:  antibakteri ;  Citrus  hystrix D.C ;  Escherichia  coli ATCC  25922;  minyak  atsiri ;  Ocimum basilicum L.

## ABSTRACT
Basil  essential  oil  has  a  component  of  linalool  compounds  belonging  to  terpenoid  derivatives which have an antibacterial effect and essential oils of kaffir lime have citronella compounds which can inhibit the growth of various types of bacteria. This study aims to determine the  antibacterial activity of essential  oils  of  basil  leaves,  kaffir  lime  leaves  and  the  combination  of  both  against  Escherichia  coli bacteria  ATCC  25922.  This  study  has  used  diffusion  methods  to  test  antibacterial  activity.  The concentration  of  the  sample  was  2%  and  4%  with  a  ratio  combination of  essential  oils  were  1:1;  1:  2; 2:1.  Then  the  research  data  were  analyzed  with  two  way  Analysis  of  Variance  (ANOVA).  The  results showed that essential oils in the combination of basil leaves (Ocimum basilicum L.) and kaffir lime leaves (Citrus hystrix D.C) had antibacterial activity against Escherichia coli ATCC 25922 with concentrations of  2%  and  4%.  Variations  of  essential  oils  from  basil  (Ocimum  basilicum  L.)  leaves  and  kaffir  lime (Citrus  hystrix  D.C)  leaves  with  a  ratio  of  1:2  at  a  concentration  of  4%  has  the  greatest  inhibitory potential against Escherichia coli ATCC 25922 with inhibition diameters of 15.5 mm.
Key  word: antibacterial;  Citrus  hystrix  D.C  .;  Escherichia  coli  ATCC  25922,  Essential  Oils,  Ocimum basilicum L.

## PENDAHULUAN
Diare merupakan penyakit
endemis  di  Indonesia  dan  salah  satu penyakit  potensional  Kejadian  Luar Biasa (KLB) yang sering disertai dengan kematian.  Pada  tahun  2017  penyakit diare  terjadi  di  34  provinsi  dengan jumlah  penderita  di  fasilitas  kesehatan sebesar 7.077.299 (Kemenkes RI, 2018).
Diare  adalah  suatu  keadaan  di mana frekuensi buang air besar melebihi frekuensi  normal  dengan  konsistensi feses  yang  encer.  Diare  ada  dua  macam yaitu  diare  spesifik  dan  non  spesifik. Diare spesifik adalah diare yang disebabkan  karena  bakteri,  diare  non spesifik disebabkan karena faktor makanan.  Diare  yang  berkepanjangan dapat  melemahkan  penderitanya  karena kehilangan  banyak  energi  dan  cairan. Penyebab paling besar pada diare adalah bakteri,  salah  satu  bakteri  penyebab diare  Salah  satunya  adalah Escherichia coli . Bakteri  tersebut  merupakan  bagian terbesar  flora  normal  usus  besar  kuman manusia (Broto, 2006).
Escherichia  coli merupakan bakteri  Gram  negatif  berbentuk  batang, bersifat anaerob fakultatif (Jawetz et al ., 2007).  Pada  bakteri Escherichia  coli terdapat  beberapa  galur  yang  patogen dan tidak patogen. Escherichia coli yang tidak  patogen  dalam  jumlah  normal ditemukan  dalam  usus  besar  manusia. Escherichia  coli yang  patogen  dapat menyebabkan  diare  yang  berat  pada semua  usia  melalui  endotoksin  yang dihasilkan (BSN, 2009).
Tanaman kemangi ( Ocimum basilicum L.)  adalah  tanaman  obat  yang memiliki  banyak  manfaat.  Kemangi memiliki  senyawa  aktif  seperti  minyak
atsiri,  alkaloid,  saponin,  flavonoid, triterpenoid,  steroid,  tanin  dan  fenol. Beberapa  kandungan  kimia  tersebut dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri Escherichia coli seperti senyawa alkaloid,  minyak  atsiri  dan  fenol.  Sifat dari  penghambatan  ini  disebut  sebagai bakteriostatik atau
bakteriosida (Hadipoentyanti  dan  Wahyuni,  2008; Oktalia, 2009).
Jeruk  purut (Citrus  hystrix D.C ) adalah  tanaman  yang  banyak  dijumpai dan  mudah  dijangkau  oleh  masyarakat. Tanaman  ini  berasal  dari  genus  Citrus merupakan  tanaman  penghasil  minyak atsiri. Tumbuhan ini merupakan tumbuhan perdu yang biasanya dimanfaatkan buah dan daunnya sebagai bumbu  penyedap  masakan.  Jeruk  purut di  dalam  perdagangan  internasional dikenal sebagai kaffir lime (Miftahendrawati, 2014)
Minyak  atsiri  adalah  minyak eteris yang merupakan ekstrak alami dari berbagai  jenis  tumbuhan  (Gunawan, 2009).  Minyak  atsiri  dalam  genus Ocimum L. mengandung senyawa eugenol,  osimen,  pinen,  linalool,  sineol, geraniol,  metil  kavikol,  metil  sinamat, sitral,  kamfor,  timol,  benzyl,  sitronella, lineon,  dan  lain  sebagainya  (Martono et al .,  2004).  Telah  banyak  dilakukan penelitian  tentang  potensi  minyak  atsiri tumbuhan  sebagai  antibakteri  (Ramesh & Satakopan 2010).
Pada penelitian sebelumnya dilaporkan  bahwa  jeruk  purut  memiliki efek  farmakologis  sebagai  antibakteri, antiseptik  dan  antioksidan.  Senyawa yang  yang  berperan  sebagai  antibakteri adalah minyak atsiri, alkaloid, flavonoid,
160 | Rukmana, F.J. et al
Jurnal Biomedika 12 (2): 158-166, September 2019
dan tanin  (Yuliani et al. , 2011). Minyak atsiri dalam daun jeruk purut mempunyai potensi sebagai antibakteri pada Klebsiella  pneumonia (Jamaludin et  al ., 2017).  Hasil  uji  dari  minyak  atsiri  daun jeruk purut untuk uji aktivitas antibakteri terhadap Escherichia  coli dengan  nilai Konsentrasi  Bunuh  Minimun  (KBM) yaitu pada konsentrasi 0,25% (Maryati et al. 2007).
Minyak atsiri daun kemangi juga dilaporkan  mempunyai  potensi  sebagai antibakteri terhadap Staphylococcus
aureus dan Pseudomonas  aeruginosa (Silva et  al .,  2015).  Taechowisan et  al .
(2018)  melaporkan  bahwa  minyak  atsiri linalool dan cineole dalam daun kemangi mempunyai  potensi  antibakteri  terhadap Staphylococcus aureus.
Pada penelitian ini
memanfaatkan  kombinasi  penggunaan minyak  atsiri  daun  jeruk  purut  dan kemangi.  Penggunaan  kombinasi  dapat mengatasi  toleransi  bakteri,  mencegah resistensi,  mengurangi  toksisitas,  dan dapat  mencegah  inaktivasi  oleh  enzim (Jawetz et  al .,  2007).  Penelitian  terkait penggunaan minyak atsiri daun kemangi (Ocimum  basilicum L .) dan  daun  jeruk purut (Citrus  hystrix D.C ) secara kombinasi diharapkan dapat memberikan manfaat  sebagai  efek  antibakteri  yang lebih  optimal  dari  pada  bentuk  tunggal minyak  atsiri  masing-masing  tersebut khususnya terhadap Escherichia coli .

## METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan:  jarum  ose  tangkai panjang,  cawan  petri  steril,  inkubator, cakram ukuran 6 mm, autovortex mixer,
inkas,  autoklaf,  oven,  neraca  analitik, refraktometer abbe 2WAJ dan Shimadzu GCMS-QP2010S (Shimadzu Corporation,  Kyoto,  Japan)  dengan Capillary  Column  Model  Number: Agilent  19091S-433  HP-5MS  5  % Phenyl Methyl Siloxane (diameter dalam 250  μm,  panjang  30  m,  dan  ketebalan ﬁlm  0.25  μm)  dan  detektor  yang digunakan FID.
Bahan  yang  digunakan:  Na  sulfat anhidrat,  Tween  80  1%,  cakram  disk antibiotik, Mueler Hilnton Agar (MHA), Endo  Agar (EA), Brain  Heart  Infusion (BHI),  bakteri Escherichia  coli ATCC 25922.

## Prosedur Penelitian
Tahap  pertama  penelitian  adalah determinasi  terhadap  tanaman  yang diteliti untuk memastikan bahwa tanaman yang digunakan benar kemangi dan  jeruk  purut.  Selanjutnya  diambil bagian  tanaman  yaitu  daun  kemudian dicuci  bersih  dan  dipotong-potong. Setelah  itu  dilakukan  proses  ekstraksi minyak  atsiri  dengan  cara  distilasi  uap dan  air.  Potongan-potongan  kecil  daun tersebut  dimasukkan  ke  atas  angsang dandang  destilasi  yang  sudah  berisi  air yang  dihubungkan  dengan  kondensor yang  berlubang  dengan  penampung destilat.  Distilat  yang  diperoleh  dihitung rendemennya  terhadap  bahan  baku  awal dan  diperiksa  berat  jenis  dan  indeks biasnya.  Selain  itu  diidentifikasi  sebagai golongan  senyawa  minyak  atsiri  dengan GC-MS .
Selanjutnya sampel minyak atsiri yang diperoleh siap untuk  diuji  aktivitas antibakterinya.  Pembuatan  sampel  uji antibakteri  dilakukan  dengan  membuat
seri  konsentrasi  minyak  atsiri  2%  dan 4%.  Sampel minyak atsiri daun kemangi dan  daun  jeruk  purut  dibuat  suspensi dengan penambahan tween 80
konsentrasi  1%.  Sampel  tunggal  minyak atsiri  daun  kemangi  dan  minyak  atsiri daun  jeruk  purut  kemudian  kombinasi dengan  perbandingan  1:1,  1:2,  2:1. Dilanjutkan  dengan  pengujian  aktivitas antibakteri dengan metode difusi.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  determinasi  menunjukkan bahwa  tanaman  yang  digunakan  untuk penelitian  adalah  benar-benar  kemangi ( Ocimum  basilicum L . )  dan  jeruk  purut ( Citrus  hystrix D.C).  Hasil  distilasi minyak atsiri diperoleh rendemen minyak  atsiri  daun  kemangi  adalah 0,125% v/b dan daun jeruk purut 0,633% v/b.
Berat jenis minyak atsiri kemangi adalah  0,9198  dan  jeruk  purut  0,8643. Hasil  tersebut  sudah  sesuai  dengan pustaka di mana berat jenis minyak atsiri kemangi  pada  suhu  20 o C  adalah  0,910- 0,950  dan  jeruk  purut  0,8223-0,8699. Indeks  bias  minyak  atsiri  daun  kemangi yang diperoleh sebesar 1,484
menunjukan  hasil  indeks  bias  yang diteliti  sesuai  dengan  pustaka  pada minyak  atsiri  kemangi  yaitu  1,426  - 1,506.  Indeks  bias  minyak  atsiri  daun jeruk  purut  diperoleh  1,455  yang menunjukkan  hasil  indeks  bias  yang
diteliti  mendekati  dengan  pustaka  pada minyak  daun  jeruk  purut  yaitu  1,466- 1,516  di  mana  pengujian  indeks  bias  ini menggunkan alat refraktometer .
Identifikasi  yang  lain  terhadap minyak  atsiri  dilakukan  secara  visual yaitu  uji  noda  di  kertas  saring  sampel minyak atsiri daun kemangi  dan minyak atsiri  daun  jeruk  purut  masing-masing menunjukkan  hasil  tidak  meninggalkan noda  sesuai  dengan  pustaka  (Gunawan dan  Mulyani,  2004).  Uji  penyebaran minyak  atsiri  di  atas  permukaan  air menunjukkan  hasil  minyak  atsiri  daun kemangi  dan  minyak  atsiri  daun  jeruk purut  yang  sudah  ditambahkan  lake ponceau  4R  dapat  menyebar  pada permukaan air.
Karakterisasi  komponen  senyawa penyusun minyak atsiri dilakukan dengan  Gas  Chromatography  yang ditandem  dengan  Mass  Spectrometry (GC-MS). Kondisi GC: suhu awal 60 °C dinaikkan  sampai  250  °C  (4  °C/menit) kemudian pada suhu 250 °C
dipertahankan  selama  20  menit,  gas pembawa  Helium  dengan  kecepatan aliran 20 ml/min. Senyawa diidentiﬁkasi dengan  membandingkan  retention  index dan membandingkan mass spectra dengan  yang  ada  di  database wiley library dan NIST  library. Hasil  analisis masing-masing  komponen    senyawa utama  minyak  atsiri  daun  kemangi  dan daun jeruk purut dapat dilihat pada Tabel 1 dan Tabel 2.
162 | Rukmana, F.J. et al
Jurnal Biomedika 12 (2): 158-166, September 2019
Tabel 1. Hasil identifikasi komponen senyawa minyak atsiri daun kemangi
No Waktu retensi (menit) % Luas area BM Nama senyawa % Similarity 1 7.338 35.71 154 Linalool 96 2 8.067 7.37 152 TRANS-CARAN, 4,5- EPOXI- 88 3 8.284 10.63 152 TRANS-CARAN, 4,5- EPOXI- 90 4 10.321 1.49 172 CIS 3 HEXENYL LACTATE 93 5 10.545 1.59 150 3,5-Heptadienal,n2- ethylidene-6-methyl-(cas) 85 6 10.827 12.24 204 Trans-Caryophyllene 95 7 10.893 5.43 204 .alpha.-Bergamotene 95 8 11.068 3.75 204 .alpha.-Humulene 90 9 11.260 9.20 204 GERMACRENE-D 95 10 11.619 12.59 204 .alpha.-Humulene 91 Tabel 2. Hasil identifikasi komponen senyawa minyak atsiri daun jeruk purut No  Waktu retensi (menit) % Luas area BM Nama senyawa % Similarity 1 7.953 34.23 154 CITRONELLA 95 2 8.080 9.86 154 CITRONELLA 97 3 8.974 21.95 156 .beta.-Citronellol 97 4 10.081 17.59 198 Citronellyl acetate 94 5 10.280 4.37 196 NERYL ACETATE 96 6 11.650 2.10 222 Elemol 93 7 11.696 1.64 222 Nerolidol 96 8 12.476 2.15 218 LONGIVERBENON (VULGARON B) 84 9 12.555 0.89 218 LONGIVERBENON (VULGARON B) 85 10 12.629 5.22 218 2(3H)-NAPHTHALENONE, 4,4A,5,6,7,8-HEXAHYDRO- 4A,5-DIME 86 Hasil  analisis  minyak  atsiri  daun kemangi  dan  jeruk  purut  menggunakan GC menunjukkan
masing-masing mengandung  10  senyawa.  Identifikasi komponen kimia hasil kromatogram GC-
MS  dilakukan  dengan  membandingkan
pola  fragmentasi  spektrum  massa  yang ada  pada  pustaka.  Komponen  senyawa utama yang terdeteksi pada kromatogram minyak atsiri daun
kemangi adalah linalool dengan
persentase  35,71%  dan  pada  minyak
atsiri  daun  jeruk  purut  yaitu  citronella dengan  persentase  34,23%.  Berdasarkan data  persen  kemiripan  senyawa  dengan pustaka dapat diketahui bahwa senyawa- senyawa  yang  mempunyai  kemiripan terbesar  yang  terkandung  dalam  minyak atsiri daun kemangi  adalah  Linalool dan minyak  atsiri  daun  jeruk  purut  adalah Citronella.
Metode pengujian aktivitas
antibakteri  minyak  atsiri  daun  kemangi
dan  daun  jeruk  purut  dilakukan  secara difusi. Metode difusi dilakukan terhadap kombinasi  minyak  atsiri  daun  kemangi dan daun jeruk purut dengan konsentrasi 2% dan 4%, pada perbandingan 1:1, 1:2, 2:1  dan  tunggal  minyak  atsiri  daun kemangi dan daun jeruk purut menggunakan  cakram  disk,  dengan kontrol  positif  ciprofloxacin  digunakan untuk  daya  antibakteri.  Hasil  dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 3. Hasil uji difusi pada Escherichia coli ATCC 25922 Sampel (minyak atsiri) Konsentrasi Diameter hambat (mm) Rata-rata (mm) ±SD Replikasi 1 2 3 Daun kemangi 2% 11,5 8,4 12,6 10,83 ±1,778264 Daun jeruk purut tunggal 2% 6 7 7,5 6,83 ± 0,62361 1:1 2% 15,25 11 8,75 11,67 ± 2,69516 1:2 2% 15 10,75 9,5 11,75 ± 2,354074 2:1 2% 16 8,25 9,75 11,33 ± 3,356172 Kontrol + 23,75 27,5 26,5 25,92 ± 1,585525 Kontrol - 0 0 0 0 Daun kemangi 4% 11,5 15,25 13 13,25 ±1,541104 Daun jeruk purut 4% 7 12 6,75 8,58 ± 2,418103 1:1 4% 19,5 12 12 14,5 ± 3,535534 1:2 4% 20 12,25 14,25 15,5 ± 2,875 2 :1 4% 17 12,5 13,25 14,25 ± 1,968502 Kontrol + 26 26,5 29 27,167 ± 1,312335 Kontrol - 0 0 0 0
164 | Rukmana, F.J. et al
Jurnal Biomedika 12 (2): 158-166, September 2019

## Keterangan :
1:1 :  1 bagian minyak atsiri daun jeruk purut dan 1 bagian minyak atsiri daun kemangi 1:2 : 1 bagian minyak atsiri daun jeruk purut dan 2 bagian minyak atsiri daun kemangi 2:1 : 2 bagian minyak atsiri daun jeruk purut dan 1 bagian minyak atsiri daun kemangi kontrol + : ciprofloxacin kontrol - : cakram yang berisi aquadest steril.
Hasil  uji  difusi  menunjukkan bahwa  pada  konsentrasi  2%  dan  4% tunggal  maupun  kombinasi  (1:1;1:2;2:1) masing-masing  memiliki  potensi  daya hambat  terhadap  bakteri Escherichia  coli ATCC  25922  jika  dibandingkan  dengan control positif ciprofloxacin. Daya hambat  paling  besar  adalah  pada  minyak atsiri kombinasi dengan perbandingan 1:2 dengan  konsentrasi  4%  yang  diameter daya  hambatnya  adalah  15,5  mm.  Daya hambat minyak atsiri kombinasi mempunyai  perbedaan  yang  signifikan dari  minyak  atsiri  tunggal  daun  kemangi, tunggal  daun  jeruk  purut,  kontrol  positif, dan  kombinasi  (1:1;1:2;2:1).  Hal  ini menunjukkan bahwa penggunaan kombinasi minyak atsiri dapat
meningkatkan  potensi  antibakteri  jika dibandingkan  dengan  sediaan  tunggal masing-masing.  Penggunaan  kombinasi senyawa  tersebut  dapat  menghasilkan efek sinergisme yang memperkuat potensi masing-masing sebagai antibakteri
Analisis  data  menunjukkan  hasil  uji homogenitas  dengan  diameter  hambat minyak  atsiri  signifikan  0,138  yang berarti 0,138 > 0,05 hasil test
homogenitas signifikan.
Pada  uji  ANOVA  dua  jalan dengan  demikian  dapat  disimpulkan bahwa  adanya  perbedaan  daya  hambat yang  nyata  pada    sampel  tunggal  minyak
atsiri  kemangi  dengan  hasil  tunggal minyak  atsiri  daun  jeruk  purut.  Daya hambat kontrol positif mempunyai perbedaan  yang  signifikan  dari  minyak atsiri tunggal daun kemangi, tunggal daun jeruk dan kombinasi (1:1,1:2,2:1) pada uji
Two Way Anova. Berdasarkan hasil rata- rata diameter daya hambat pada kombinasi  yang  lebih  besar  yaitu  pada kombinasi  dengan  perbandingan  1:2 dibandingkan  dengan  kombinasi  1:1;  1:2. Daya  hambat  kombinasi  minyak  atsiri daun  kemangi  dan  minyak  atsiri  daun jeruk  purut  terhadap Escherichia  coli ATCC  25922  pada  konsentrasi  2  %  dan 4%  masing-masing  dilakukan  3  kali replikasi ditunjukkan pada Gambar 1.
Minyak atsiri mempengaruhi langsung  selaput  sel  mikroorganisme patogen dengan menyebabkan
peningkatan  permeabilitas  dan  kebocoran konstituen  intraseluler  vital,  dan  akhirnya mengganggu  respirasi  sel  dan  mikroba sistem  enzim  (Akhtar et  al .,  2014). Berdasarkan penelitian ini dapat dijadikan acuan  bahwa  minyak  atsiri  yang  juga disebut  minyak  esensial  dari  kombinasi tanaman obat khususnya daun jeruk purut dan  daun  kemangi  dapat  digunakan sebagai  zat  alami  antimikroba  alternatif dan  juga  diharapkan  akan  memainkan peran besar dalam penemuan obat baru di masa mendatang.
Gambar 1. Daya hambat sampel terhadap Escherichia coli ATCC 25922 (a) konsentrasi 2% replikasi 1; (b) konsentrasi 2% replikasi 2; (c) konsentrasi 2% replikasi 3; (d) konsentrasi 4% replikasi 1; (e) konsentrasi 4% replikasi 1;
(f) konsentrasi 4% replikasi 3

## KESIMPULAN
Minyak atsiri kombinasi dari daun kemangi ( Ocimum basilicum L.) dan daun jeruk purut  ( Citrus  hystrix D.C) memiliki aktivitas  antibakteri  terhadap Escherichia coli ATCC 25922 dengan konsentrasi 2% dan  4%.  Variasi  kombinasi  minyak  atsiri dari daun kemangi ( Ocimum basilicum L.) dan daun jeruk purut ( Citrus hystrix D.C) yang  memiliki  daya  hambat  paling  besar terhadap Escherichia  coli ATCC  25922 adalah  pada  kombinasi  1:2  dengan diameter hambat 15,5 mm pada konsentrasi 4%.

## DAFTAR PUSTAKA
Adeola SA, Folorunso, OS, & Amisu KO. (2012).
Antimicrobial Activity of Ocimum basilicum and  its  Inhibition  on  the Characterized  and  Partially  Purified Extracelullar  Protease  of Salmonella Typhimurium . Research Journal of Biology 2 (5): 138-144.
Akthar  MS,  Degaga  B,  Azam  T.  2014. Antimicrobial  activity  of  essential  oils extracted  from  medicinal  plants  against the pathogenic microorganisms: A
review. Biological Sciences and Pharmaceutical Research . Vol.2 (1), 001- 007.
Badan  Standarisasi  Nasional.  (2009). Batas
Maksimum  Cemaran  Mikroba  dalam pangan . SNI:7388.
Bilal A, Jahan N, Ahmed A, Bilal SN, Habib S &
Hajra  S.  (2012).  Phytochemical  and pharmacoloigical  Studies  on Ocimum
166 | Rukmana, F.J. et al
Jurnal Biomedika 12 (2): 158-166, September 2019 basilicum Linn- A Review. IJCRR 4 (23): 73-83. Bonang G, Koeswardono ES. (2004). Mikrobiologi Kedokteran untuk Laboratorium dan Klinik. Jakarta: Bagian Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia Dhulgande, G., A.R.Birari & D.A. Dhale.  (2010). Preliminary  Screening  ofAntibacterial and  Phytochemical  Studies  of Ocimum americanum Linn. Journal of Ecobiotechnology, 2 (8) : 11-13. Gunawan Hadipoenyanti E & Wahyuni. S. (2008).
Keragaman Selasih (Ocimum Spp.) Berdasarkan Karakter Morfologi , Produksi dan Mutu Herba. Bandung: ITB. Hal 141-148.
Gunawan  D,  Mulyani  S.  (2004). Ilmu  Obat  Alam (Farmakognosi) . Jilid 1. Jakarta: Penebar Swadaya.
Hadipoentyanti,  Endang.,&  Wahyuni,  Sri.  (2008). Keragaman Selasih ( Ocimum spp.) Berdasarkan  Karakter  Morfologi  roduksi dan Mutu Herbal, Jurnal Litri , Vol(4)
Jamaluddin N, Pulungan MH, Warsito. (2017). Uji Aktivitas Antibakteri Minyak Atsiri Jeruk
Purut  (Citrus  hystrix  DC)  terhadap Klebsiella  pneumoniae  ATCC. Industria: Jurnal Teknologi dan Manajemen Agroindustri Vol 6 No 2: 61-66 Jawetz, Melnick, J.L., and Adelberg, E.A. (2007). Medical Microbiologi 24 th edition . USA: Mc-Graw Hill companies.
[Kemenkes  RI]  Kementerian  Kesehatan  Republik Indonesia.  (2017). Profil  Kesehatan Indonesia Tahun 2017 . Jakarta: Kementerian Kesehatan Re publik Indonesia. Mariyati,  Ratna  SF  dan  Triastuti R.  (2007).  Uji aktivitas  Antibakteri  Minyak Atsiri  Daun Kemangi ( Ocimum basilicum L.)
Terhadap Staphylococcus  aureus Dan
Escherichia Coli. Jurnal Penelitian Sains & Teknologi 8. Martono  BE,  Hadipoentyanti  dan  L  Udarno. (2004). Plasma Nuftah Insektisida
Nabati .  Perkembangan.  Teknologi  TRO
XVI.
Maruti J, Dhanavade, Chidamber B, Jalkute, Jai S, Ghosh and Kailash D, Sonawane. (2011). Study  Antimicrobial  Activity  of  Lemon ( Citrus  lemon L.)  Peel  Extract. British Journal of Pharmacology and Toxicology 2(3): 119-122. Oktalia.  (2009). Kapita  Selekta  Dispending I.
Yogyakarta: UGM Press. Halaman 27.
Ramesh  B  &  Satakopan  V  N.  2010.  In  Vitro
Antioxidant  Activities  Ocimum  Species: Ocimum basilicum and Ocimum Sanctum ,  Journal  Of  Cell  and  Tissue
Research 10. 1: 2145-2150.
Silva  VA,  Sousa,  JP,  Guerra  FQS  ,  Pessôa  HLF, Freitas  AFR,  Alves  LBN,  Lima  EO. (2015). Antibacterial Activity of Ocimum basilicum  Essential  Oil  and  Linalool  on Bacterial  Isolates  of  Clinical  Importance. International  Journal  of  Pharmacognosy and Phytochemical Research; 7(6); 1066- 1071.
Taechowisan  T,  Jantiya  J,  Mungchukeatsakul  N,
and  Phutdhawong  WS.  (2018).  Major
Compounds  from  Ocimum  basilicum  L. and  their  Antimicrobial  Activity  against Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus.  Biomed  J  Sci  &  Tech  Res  3(3). BJSTR.MS.ID.000910. Yuliani,  R.,  Peni,  I.,  dan  Septi,  S.  R.  (2011).
Aktivitas Antibakteri Minyak Atsiri Daun Jeruk  Purut  (Citrus  hystrix)  terhadap Staphylococcus  aureus  dan  Escherichia coli. Journal  Pharmacon 12(2):  50  –  4.