## JURNAL BIOSAINS
(Journal of Biosciences) http://jurnal.unimed.ac.id/2012/index.php/biosains email : jbiosains

## KAPANG DENGAN AKTIVITAS FIBRINOLITIK YANG DIISOLASI DARI TANAH RUMAH POTONG HEWAN
Nur Khikmah*, Nunung Sulistyani Akademi Analis Kesehatan Manggala Yogyakarta *email : khikmahnr@gmail.com

## ABSTRAK
Tujuan penelitian ini  untuk mendapatkan kapang  yang mempunyai aktivitas fibrinolitik  dari tanah rumah  potong  hewan.    Isolasi  kapang  dilakukan  dengan  metode spread  plate pada Potato  Dextrose  Agar . Seleksi aktivitas proteolitik dan fibrinolitik dilakukan pada Skim Milk Agar dan fibrin plate agar berdasarkan indeks aktivitas enzim. Hasil penelitian memperoleh empat puluh satu isolat kapang fibrinolitik.  Lima dari isolat tersebut mempunyai indeks aktivitas enzim fibrinolitik ≥ 10.  Isolat teridentifikasi sebagai anggota dari Aspergillus (isolat S3, S4 dan R5) dan Penicillium (isolat G1 dan G2).
Kata kunci: kapang fibrinolitik, fibrin, proteolitik, trombosis

## FUNGI WITH FIBRINOLYTIC ACTIVITY ISOLATED FROM SLAUGHTERHOUSE SOIL

## ABSTRACT
The  aim  of  the  research  was  to  obtain  fungi with  fibrinolytic  activity  in  slaughterhouse  soil.    The isolation of fungi was done by using a spread plate method on Potato Dextrose Agar .    Selection of proteolytic and fibrinolytic activity   was done through Skim Milk Agar and fibrin plate agar media, based on enzymes activity index.  The result showed that there were forty-one isolates of fibrinolytic fungi.  Five of them had fibrinolytic enzymes activity index ≥ 10.  Those isolates were identified as Aspergillus (S3, S4 and R5 isolates) and Penicillium (G1 and G2 isolates).
Key words : fibrinolytic fungi, fibrin, proteolytic, thrombosis

## Pendahuluan
Kapang  yang  mempunyai  aktivitas  fibrinolitik dapat dimanfaatkan pada bidang kesehatan.  Kapang akan  menghancurkan  fibrin,  suatu  bekuan  darah yang  terbentuk  dari  fibrinogen  melalui  proses penghancuran  protein  oleh  trombin.    Fibrin dihancurkan oleh enzim fibrinolitik yang dihasilkan oleh  kapang  (Muisristanto et  al .,  2015).    Pada kondisi  hemostatis  di  dalam  tubuh  terjadi keseimbangan antara proses pembekuan darah dan fibrinolisis (Bakta, 2007).
Akumulasi  fibrin  yang  berlebihan  di  dalam pembuluh  darah  tanpa  adanya  keseimbangan hemostatis akan menyebabkan terjadinya trombosis.    Trombosis  sering  kali  mengarah  pada
kelainan  serebrovaskular  dan  kardiovaskular, seperti    infark  miokard,  stroke  dan  gagal  jantung yang  dapat  menyebabkan  kematian  (Kim  and  Choi, 2000).  Hasil  Rikesda  tahun  2013  berdasarkan diagnosis  gejalanya,  prevalensi  infark  miokard  di Indonesia  sebesar  1,5%  (Kemenkes  RI,  2013). Kelainan  yang  disebabkan  oleh  trombosis  dapat ditangani  dengan  pemberian  terapi  obat  trombosis (trombolitik).
Terapi  obat  trombolitik  utama  yang  telah dilakukan  saat  ini  adalah  dengan  pemberian tissue plasminogen activator (tPA), streptokinase (SK) dan urokinase  (UK).    Penggunaan  obat  tersebut mempunyai  beberapa  kekurangan  diantaranya harga relatif mahal,  waktu paruh pendek dan reaksi di dalam tubuh relatif lama.   Hanya dapat diberikan melalui  injeksi  dan  menimbulkan  efek  samping
seperti  pendarahan  pada  usus  apabila  diberikan secara oral (Peng et al ., 2005). Saat ini streptokinase kurang  diminati  sebagai  trombolitik  dibandingkan tPA  karena  menyebabkan  banyak  fibrinogenolisis (Klabunde,  2015).  Oleh  karena  itu,  perlu  dilakukan pencarian  tipe  baru  enzim  fibrinolitik  yang bersumber dari bakteri, kapang  dan streptomyces.
Isolasi kapang fibrinolitik dapat dilakukan dari habitat  yang  banyak  mengandung  protein,  salah satunya  tanah  pada  Rumah  Potong  Hewan  (RPH). Kegiatan pada RPH menghasilkan limbah padat dan cair.  Limbah cair dari RPH umumnya dibuang begitu saja  dan  mengendap  di  dalam  tanah  (Padmono, 2005).  Limbah  cair  RPH  yang  mengendap  pada tanah  memiliki  kandungan  protein  tinggi  yaitu 52,5%. Adanya protein  dalam tanah memungkinkan sebagai  sumber  kehidupan  bagi  kapang  fibrinolitik (Risris et al ., 2011).
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mendapatkan isolat kapang  yang mempunyai aktivitas  fibrinolitik dari tanah RPH.

## Bahan dan Metode
Isolasi Kapang Isolasi  kapang  dari  tanah  Rumah  Potong Hewan  (RPH)  dilakukan  dengan  metode surface plating .  Sampel  tanah  diencerkan  dari  10 -1 sampai 10 -6, kemudian sebanyak 0,1 ml sampel dari masing- masing  pengenceran  diinokulasikan  ke  dalam medium Potato  Dextrose  Agar (PDA),  diinkubasi pada 30°C selama 5 x 24 jam .
Seleksi Isolat Proteolitik Seleksi dilakukan dengan inokulasi kapang ke dalam  medium Skim  Milk  Agar (SMA),  diinkubasi pada  30°C  selama  2  x  24  jam.  Aktivitas  proteolitik ditunjukkan  dengan  terbentuknya  zona  jernih  di sekitar koloni.  Perhitungan  Indeks Aktivitas Enzim (IAE)  proteolitik  kapang  adalah  membandingkan diameter  zona  jernih  dengan  diameter  koloni. Kapang yang mempunyai indeks proteolitik diseleksi aktivitasnya dalam menghasilkan fibrinolitik.

## Seleksi Isolat Fibrinolitik
Seleksi  kapang  fibrinolitik  dilakukan  pada medium fibrin plate agar .  Sebanyak 0,3 gram fibrin dan  1,7  gram  agarosa  dilarutkan  dalam  100  mL buffer  asam  borat  pH  7,8.    Setelah  agarosa  larut dengan pemanasan, medium disterilisasi menggunakan  autoklaf  pada  121 0 C,  20  menit. Ditambahkan 200 µL metilen blue pada cawan petri steril  kemudian  ditambahkan  medium fibrin  agar (Muisristanto et  al .,  2015). Isolat  kapang  yang mempunyai  aktivitas  fibrinolitik  ditunjukkan dengan  terbentuknya  zona  jernih  di  sekitar  koloni. Perhitungan  IAE  fibrinolitik  kapang  adalah membandingkan  diameter  zona  jernih  dengan diameter koloni.

## Identifikasi Kapang Fibrinolitik
Isolat  genus  kapang  terpilih  diidentifikasi berdasarkan  pengamatan  secara  makroskopis  dan mikroskopis mengacu pada Introduction to Food and Airborne Fungi (Samson et al. , 2004) dan Compedium of Soil Fungi (Domsch et al ., 1980).

## Hasil dan Pembahasan
Isolasi  dari  tanah  RPH  menggunakan  PDA memperoleh  43  isolat  kapang.    Menurut  Saha et  al . (2008), Potato  Dextrose  Agar (PDA)  merupakan salah  satu  medium  umum  yang  digunakan  untuk isolasi  kapang.    Komposisi  nutrien  dalam  PDA sederhana,  sehingga  merupakan  medium  yang  baik untuk  mendukung  pertumbuhan  berbagai  jenis kapang.
Kapang  hasil  isolasi  pada  PDA  selanjutnya diseleksi kemampuan proteolitik pada medium Skim Milk  Agar (SMA).    Empat  puluh  tiga  isolat  kapang yang diseleksi menunjukkan semua isolat mempunyai aktivitas proteolitik.
Muisristanto et  al .  (2015),  menyatakan medium yang digunakan untuk mendeteksi aktivitas proteolitik menggunakan medium yang mengandung  kasein  yaitu Skim  Milk  Agar (SMA). Menurut Poernomo et al. (2015), kasein merupakan protein yang terdiri dari fosfoprotein yang berikatan dengan  kalsium  membentuk  garam  kasein  yang tidak larut dalam air. Larutan kasein berwarna putih sehingga  dapat  diamati  secara  langsung  pada  saat dicampur  dengan agar.  Kasein  dalam  medium  akan terhidrolisis  menjadi  peptida  dan  asam  amino. Hidrolisis  kasein  menyebabkan  terbentuknya  zona jernih pada media SMA 1%.
Kapang  yang  memiliki  aktivitas  proteolitik juga  berpotensi  memiliki  aktivitas  fibrinolitik (Muisristanto et  al. ,  2015).    Sebanyak  43  isolat kapang  yang  mempunyai  aktivitas  proteolitik selanjutnya  diseleksi  aktivitas  fibrinolitiknya  pada medium fibrin  agar .  Hasil  seleksi  menghasilkan  41 isolat  kapang  mempunyai  aktivitas  fibrinolitik. Adanya  aktivitas  fibrinolitik  ditandai  dengan terbentuknya zona jernih  pada medium fibrin agar . (Gambar 1).
Gambar 1. Pembentukan zona jernih pada medium fibrin  agar oleh  kapang.  Zona  jernih  ditunjukkan dengan tanda panah (      )
Zona  jernih  yang  terbentuk  sangat  tipis sehingga  sulit  terlihat.    Poernomo et  al. (2015), menyatakan  bahwa  dengan  penambahan methylen blue 0,02%  pada  medium fibrin  agar ,  memperjelas zona  jernih  yang  terbentuk.  Semakin  besar  zona jernih  yang  terbentuk,  maka  aktivitas  fibrinolitik juga semakin besar.
Isolat  kapang  yang  mempunyai  aktivitas fibrinolitik,  akan  memecah  fibrin  pada  medium fibrin  agar menjadi  protein  dengan  bentuk  yang lebih  sederhana  sehingga  terbentuk  zona  jernih pada  medium fibrin  agar .  Dalam  keadaan  normal jumlah  enzim  yang  dihasilkan  hanya  sedikit,  tetapi akan  meningkat  jika  substrat  fibrin  tersebut  hanya satu-satunya sumber nutrien bagi kapang (Setiawan et al., 2016). Zona jernih yang terbentuk selanjutnya dihitung  IAE  fibrinolitik.    Lima  isolat  kapang mempunyai IAE fibrinolitik  ≥ 10 (Tabel 1).
Tabel  1. Indeks  Aktivitas  Enzim  (IAE)  fibrinolitik dari 5 (lima) isolat kapang
Asal Isolat No Kode Isolat IAE Fibrinolitik Tanah RPH Segoroyoso 1 S3 10 2 S4 10 Tanah RPH Srandakan 3 R5 10 Tanah RPH Godean 4 G1 10 5 G2 10
Karakteristik koloni isolat S3, S4 dan S5 adalah bertekstur granular, berwarna hijau, warna medium dan  sebalik  koloni  ( reverse  side )  tidak  berwarna. Hasil pengamatan  morfologi mikroskopis  isolat S3, S4 dan S5 ditunjukkan pada Gambar 2.
Gambar 2 . Morfologi mikroskopis isolat S3, S4 dan S5
Karakteristik  mikroskopis  isolat  S3,  S4  dan  S5 adalah  hifa  bersekat,  hialin  dan  konidiofor  tunggal. Ujung konidiofor membengkak membentuk struktur yang disebut vesikel.  Konidia bulat, berwarna hijau, tersusun  pada  ujung  fialid  yang  terdapat  di  atas vesikel.
Karakteristik  koloni  isolat  G1  dan  G2  adalah bertekstur velvety ,  berwarna  hijau  kebiruan  dan sebalik  koloni  ( reverse  side )  tidak  berwarna.  Hasil pengamatan  morfologi  mikroskopis    isolat  G1  dan G2 ditunjukkan pada Gambar 3.
Gambar 3 . Morfologi mikroskopis isolat G1 dan G2
Karakteristik  mikroskopis  isolat  G1  dan  G2 adalah  hifa  bersekat,  hialin    dan  fialid    membentuk struktur  seperti  sapu  terbalik.    Konidia  bulat, berwarna  hijau,  tersusun  pada  ujung  fialid.  Bentuk percabangan  konidiofor  termasuk  dalam  kategori sederhana.
Identifikasi isolat kapang dilakukan berdasarkan karakterisasi makroskopis dan mikroskopis isolat dengan mengacu pada Introduction to Food and Airborne Fungi (Samson et al. ,  2004)  dan Compedium  of  Soil  Fungi (Domsch et al ., 1980).  Berdasarkan karakterisasi tersebut, maka isolat S3, S4 dan R5 teriidentifikasi sebagai anggota Aspergillus dengan  ciri  spesifik  adanya  vesikel. Isolat  G1  dan  G2  teridentifikasi  sebagai  anggota Penicillium dengan  ciri  adanya  percabangan  pada konidiofor.

## Kesimpulan
Isolasi  dari  tanah  RPH  memperoleh  empat puluh satu isolat kapang  yang mempunyai aktivitas fibrinolitik.    Lima  isolat  kapang  dengan  IAE fibrinolitik  ≥10  teridentifikasi  sebagai  anggota Aspergillus (isolat  S3,  S4  dan  R5)  dan Penicillium (isolat G1 dan G2).

## Ucapan Terima Kasih
Ucapan  terima  kasih  disampaikan  kepada Direktorat Riset dan Pengabdian Masyarakat, Dirjen Penguatan  Riset  dan  Pengembangan  KEMRISTEK DIKTI melalui Hibah Penelitian Dosen Pemula Tahun Anggaran 2018.

## Daftar Pustaka
Bakta,  I.M.    2007. Hematologi  Klinik  Ringkas .    EGC,
Jakarta.
Domsch,  K.H.,  W.  Gams  and  T.H.  Anderson.    1980. Compendium  of  Soil  Fungi .    Academic  Press,
London. Kementrian Kesehatan Republik Indonesia [Kemenkes RI].  2013.  Riset Kesehatan Dasar S3 S4 R5
G1
G2
2013.    Badan  Penelitian  dan  Pengembangan Kesehatan.
Kim,  S.H  and  Choi,  N.S.    2000.    Purification  and Characterization of Subtilisin DJ-4 Secreted by Bacillus sp.  Strain  DJ-4  Screened  from  Doen- Jong. Biosci. Biotechnol.  Biochem .  64: 1722- 1725.
Klabunde,  R.E.    2015.    Thrombolytic  (Fibrinolytic) Drugs. https://www.cvpharmacology.com/thrombol ytic/thrombolytic .    (Diunduh  6  Desember 2018).
Muisristanto,  D.,  A.  Poernomo,  and  T.  Sugijangto. 20015.  Isolasi  dan  Penapisan  Fibrinolitik Jamur  Tanah  Hutan  Mangrove  Wonorejo Surabaya. Berkala Ilmiah Kimia Farmasi. 4 (2)
: 11-17. Padmono,  D.  2005.  Alternatif  Pengolahan  Limbah Rumah Potong Hewan- Cakung. Jurnal Teknik Lingkungan .  6 (1): 303-310. Peng,  Y.,  X.  Yang  and  Y.  Zhang.    2005.    Microbial Fibrinolytic Enzymes : An Overview of Source, Production,  Properties,  and  Thrombolytic Activity In Vivo . Appl.  Microb.  Biotechnol .  69:
126-132. Poernomo, A., Isnaeni and Purwanto. 2015. Aktivitas Invitro  Enzim  Fibrinolitik  Ekstrak  Tempe Hasil  Fermentasi Rhizopus  oligosporus ATCC 6010  pada  Substrat  Kedelai  Hitam. Berkala Ilmiah Kimia Farmasi. 4 (2): 18-24. Risris,  N.,  Y.  Sastro  and  B.  Bakrie.    2011. Karakteristik  Fisik,  Kimia  dan  Biologi  dari Tepung Limbah Rumah Potong Ayam sebagai Bahan  Baku  untuk  Pakan  Ternak.  Di  dalam: Seminar  Nasional  Teknologi  Peternakan  dan Veteriner ; Jakarta. Balai Pengkajian Teknologi Pertanian, Jakarta. 651-659.
Saha, A., P. Mandal, S.  Dasgupta and D.  Saha.  2008. Influence of Culture Media and Environmental Factors  on  Mycelial  Growth  and  Sporulation of Lasiodiplodia theobromae (Pat) Griffon and Maub. Journal  of  Environmental  Biology .    29 (3): 407-410.
Samson, R.A., E. S., Hoekstra, and J.C., Frisvad.  2004. Introduction  to  Food  and  Air  Borne  Fungi. Seventh  Edition.    Centraalbureau  Voor Schimmelcultures, The Netherlands.
Setiawan,  A.,  Arimurti,  S.,  Senjarini,  K.,  and  Sutoyo. (2016).  Aktivitas  Proteolitik  dan  Fibrinolitik Isolat  Bakteri  dari  Perairan  Pantai  Papuma Kabupaten  Jember. Berkala  Sainstek ,  4(1):  1- 4.