Histopathological Changes of Midgut Epithelial Cells of Aedes aegypti Larvae Exposed to Permot Leaf Extract ( Passiflora foetida )
Perubahan Histopatologis Sel Epitel Midgut Larva Aedes aegypti Yang Terpapar Ekstrak Daun Permot ( Passiflora foetida )
Rina Priastini Susilowati 1 (*), Monica Puspa Sari 2
1 Bagian Biologi, Fakultas Kedokteran Dan Kesehatan Universitas Kristen Krida Wacana
2 Bagian Parasitologi, Fakultas Kedokteran Dan Kesehatan Universitas Kristen Krida Wacana, Jalan Arjuna Utara No 6, Kebon Jeruk Jakarta barat, Coresponding author: rina.priastini@ukrida.ac.id
Diterima 30 Januari 2022 dan disetujui 22 Februari 2022

## Abstrak
Nyamuk Aedes  aegypti merupakan  vektor  utama  penyakit  demam  berdarah  dengue  (DBD). Berbagai upaya pencegahan dilakukan untuk menurunkan populasi nyamuk Ae. aegypti . Salah satu cara  untuk  memutus  mata  rantai  perkembangbiakan  nyamuk Ae.  aegypti adalah  membunuh perkembangan  larvanya,  yaitu  dengan  larvasida  yang  bersifat  sintetik  maupun  nabati.  Permot ( Passiflora foetida ) adalah salah satu jenis tanaman yang dapat digunakan sebagai insektisida nabati karena mengandung senyawa kimia aktif alkaloid dan flavonoid. Larva Ae. aegypti yang digunakan adalah  instar  III  dengan  jumlah  600,  yang  dibagi  dalam  6  kelompok  perlakuan  (1  kelompok kontrol  negatif,  1  kelompok  kontrol  positif  menggunakan  temephos  1%,  ekstrak  daun  permot dengan dosis bertingkat 0,5%, 1%, 2% dan 4%) dan  4 ulangan. Data kematian larva Ae. aegypti dihitung  untuk  mengetahui  dosis  efektif  (LC 50 dan  LC 90 )  dengan  menggunakan  uji  Probit, sedangkan perubahan histopatologis dihitung untuk mengetahui toksisitas ekstrak daun permot dengan  menggunakan  uji one-way Anova.  Hasil  penelitian  memperlihatkan  nilai  LC 50 sebesar 1,32% dan LC 90 sebesar 3,64% yang berarti dosis efektif ekstrak daun permot adalah 3,64%. Pada perlakuan ekstrak daun  permot  4%  memperlihatkan perubahan histopatologis sel epitel midgut larva Ae.  aegypti ,  sel  epitel  midgut  menjadi  lisis,  berubah  bentuk,  vakuolisasi  sitoplasma,  dan terlepas dari membran basal. Membran peritrofik, mikrovili dan brush border mengalami kerusakan parsial maupun total.
Kata Kunci: Aedes aegypti , daun permot, ekstrak, larva, midgut

## Abstract
The  Aedes  aegypti  mosquito  is  the  main  vector  of  dengue  hemorrhagic  fever  (DHF).  Various prevention efforts were carried out to reduce the population of Ae. aegypti. One way to break the chain  of  Ae.  aegypti  is  to  kill  the  development  of  its  larvae,  namely  with  synthetic  or  vegetable larvicides. Permot (Passiflora foetida) is one type of plant that can be used as a vegetable insecticide because  it  contains  active  chemical  compounds  such  as  alkaloids  and  flavonoids.  Larvae  of  Ae. aegypti used was instar III with a total of 600, which was divided into 6 treatment groups (1 negative control group, 1 positive control group using 1% temephos, permot leaf extract with dose levels of 0.5%,  1%,  2%  and  4%  )  and  4  replicates.  Data  on  mortality  of  Ae.  aegypti  was  calculated  to determine the effective dose (LC 50 and LC 90 ) using the Probit test, while histopathological changes were calculated to determine the toxicity of the permot leaf extract using the one-way Anova test. The results showed that the LC 50 value was 1.32% and LC 90 was 3.64%, which means that the effective dose  of  permot  leaf  extract  was  3.64%.  In  the  treatment  of  4%  permot  leaf  extract,  it  showed histopathological changes in the midgut epithelial cells of Aedes aegypti larvae, midgut epithelial
cells  became  lysed,  changed  shape,  cytoplasmic  vacuolization,  and  separated  from  the  basement membrane. Peritrophic membranes, microvilli and brush border were partially or totally damaged. Keywords : Aedes aegypti, extract, midgut, permot leaf
Jurnal Pembelajaran  dan Biologi Nukleus is  Licensed  Under a  CC  BY  SA Creative  Commons  Attribution-Share  a  like  4.0 International License . https://doi.org/10.36987/jpbn.v8i1.2465.

## PENDAHULUAN
Demam  Berdarah  Dengue  (DBD)  menjadi  salah  satu  permasalahan  kesehatan utama  masyarakat.  Hal  ini  berkaitan  dengan  peningkatan  jumlah  kasus,  peningkatan keparahan penyakit dan perluasan distribusi kasus secara geografis. Diperkirakan 390 juta orang menderita infeksi virus dengue dengan 96 juta kasus setiap tahunnya serta kematian sekitar  12.000  jiwa  di  berbagai  negara  tropis  dan  subtropis. World  Health  Organization (WHO)  memperkirakan  bahwa  lebih  dari  50  juta  infeksi dengue dan  20.000  kematian terkait dengue terjadi  setiap  tahun  di  seluruh  dunia (Yue et  al .,  2019) .  Menurut  data Kementerian  Kesehatan  Republik  Indonesia  (Kemenkes  RI)  tahun  2019,  ditemukan prevalensi DBD sebanyak 26,10% pada tahun 2017 dan mengalami peningkatan pada tahun 2018 dan 2019 menjadi 24,75% dan 51,48%. Dengan sedikit penurunan persentase Case  Fatality  Rate (CFR)  dari  0,71%  (2018)  menjadi  0,67%  (2019) (Kementerian Kesehatan Republik Indonesia, 2020) . Tanaman  permot  ( Passiflora  foetida )  adalah  salah  satu  jenis  tanaman  yang mengandung  bahan  kimia  aktif  sebagai  insektisida  nabati.  Tanaman  permot  sangat mudah  dijumpai  karena  hidupnya  yang  liar  di  tanah  lapang,  sawah,  kebun  dan merupakan tanaman merambat di sela tanaman utama yang ditanam di pagar rumah atau halaman kosong. Menurut Antony et al ., (2021) tanaman permot khususnya daun permot mengandung  senyawa  asam  hidrosianat,  flavonoid  (ermanin  dan vitexin ),  alkaloid (harmalin,  harmin,  harmol),  saponin  (saponaretin,  saponarine), passifloracine. Senyawa kimia aktif dari daun permot antara lain alkaloid, flavonoid, saponin yang dapat bekerja sebagai senyawa racun atau toksik (racun kontak/ racun perut) pada larva Ae. aegypti . Hasil  penelitian Susilowati  (2017) menyatakan  dosis efektif  ekstrak  daun permot  yang digunakan untuk membunuh nyamuk Ae. aegypti dengan kematian 100% sebelum 4 jam paparan  adalah  2165  ppm,  dan  menyebabkan  kenaikan  aktivitas  asetilkolinesterase (Susilowati et al ., 2019) .
Senyawa  tersebut  dapat  masuk  melalui  saluran  pencernaan  dan  mengkorosi mukosa  saluran  pencernaan  serangga  dengan  menurunkan  tegangan  permukaannya. Kerusakan saluran pencernaan yang terjadi dapat mengakibatkan penghambatan makan, gangguan metabolisme dan kematian pada serangga (Cania dan Setyaningrum, 2013) . Midgut (usus tengah) larva nyamuk merupakan tempat utama proses pencernaan seperti absorbsi,  transport  ion,  sintesis  enzim  pencernaan  dan  proses  osmoregulasi.  Karena fungsinya, bagian usus terutama midgut larva menjadi target utama insektisida. Menurut (Yue et al ., 2019) , senyawa kimia pada tumbuhan terbukti berdampak serius terhadap sel epitel pencernaan yang kemudian menurunkan laju pertumbuhan serangga. Identifikasi
kerusakan jaringan akibat paparan larvasida dapat menunjukkan mekanisme kerja dan efektivitasnya terhadap  serangga yang  dapat  digunakan  untuk  menilai  metode  kontrol (Senthil-Nathan, 2020) .
Tujuan  penelitian  adalah  untuk  mengetahui  efektivitas  senyawa  kimia  yang terdapat di dalam ekstrak daun permot seperti flavonoid, alkaloid, saponin yang dapat menyebabkan kematian larva melalui perubahan histopatologi midgut larva Ae. aegypti . Tujuan yang lain adalah untuk mengetahui lebih jelas efek toksik ekstrak daun permot pada midgut larva Ae. aegypti melalui gambaran histopatologisnya.

## METODE
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  daun  permot,  biji  bunga krisan, daun serta batang sereh. Daun permot sebanyak 1 kg (tanaman permot diperoleh dari daerah Gading Serpong Tangerang yang tumbuh secara liar). Selain itu disiapkan etanol 96%, fishfood, air bersih atau akuades, larva Ae. aegypti (Linn.) instar III, PEG ( Poly Etilen Glycol ) 0.1%. Kriteria sampel yaitu larva Ae. aegypti sehat yang telah mencapai instar  III,  larva  bergerak  aktif.  Besar  sampel  yaitu  25  ekor  larva  instar  III.  Cara pengambilan sampel dari tempat perkembangbiakan yaitu dengan simple random sampling , kemudian larva diletakkan dalam 6 gelas plastik yang masing-masing gelas plastik berisi 25 ekor larva. Dilakukan replikasi sebanyak 4 kali pada tiap bahan uji jadi jumlah seluruh sampel yang dibutuhkan sebanyak 600 larva Ae. aegypti instar III. Daun Passiflora foetida yang telah dikumpulkan, dikeringkan pada suhu kamar, dihaluskan dan diayak dengan ukuran 28 mesh . Tepung kering daun Passiflora foetida diukur kadar airnya. Untuk proses ekstraksi, 2 g tepung kering daun Passiflora foetida dikemas dalam teh celup dan diekstraksi dengan 100 mL air panas (95°C) merujuk (Tandoro et al., 2020) .
Pembagian kelompok perlakuan pada penelitian sebagai berikut: kontrol negatif (tanpa paparan), kontrol positif (Temephos 1%), perlakuan yang terdiri dari ekstrak daun permot 0,5%, ekstrak daun permot 1%, ekstrak daun permot 2%, dan ekstrak daun permot 4%. Data yang dikumpulkan adalah dengan menghitung jumlah larva yang mati pada setiap gelas plastik. Penghitungan larva yang mati dilakukan setelah direndam selama 24 jam, dicatat dalam bentuk tabel (10 menit, 20 menit, 30 menit, 40 menit, 50 menit, 60 menit  dan  24  jam).  Larva  yang  mati  merupakan  larva  yang  tenggelam  ke  dasar  gelas plastik, tidak bergerak, meninggalkan larva yang lain yang dapat bergerak dengan jelas dan tidak merespon terhadap rangsangan. Larva yang sudah mati dimasukkan ke buffer Bouin untuk dibuatkan preparat dan diwarnai dengan pewarnaan rutin HE. Gambaran histopatologis midgut larva difoto dengan menggunakan mikroskop cahaya pembesaran x450.
Pemeriksaan  histopatologi  midgut  larva Ae.  aegypti yang  terpapar  ekstrak  daun permot  dosis  bertingkat  dilakukan  di  Laboratorium  Biologi  FKIK  Universitas  Kristen Krida Wacana. Pembuatan sediaan jaringan larva Ae. aegypti dilakukan dengan metode parafin. Blok parafin yang berisi larva Ae. aegypti dari 6 kelompok perlakuan dipotong melintang dengan menggunakan mikrotom dengan ketebalan 4-6 µm. Selanjutnya dibuat ppreparat dengan pewarnaan Hematoxylin Eosin. Perubahan histopatologis midgut larva
Ae.  aegypti diamati  dengan  menggunakan  mikroskop  cahaya  binokuler  merk  Olympus dengan pembesaran x450 dan diambil fotonya merujuk ( Madinget al., 2018) . Data hasil penelitian yang diperoleh dianalisis dengan menggunakan uji one-way Anova  dan  dilanjutkan  dengan  uji  LSD  untuk  mengetahui  perbedaan  yang  signifikan antara  kelompok  kontrol dan  kelompok perlakuan.  Untuk menentukan  nilai  LC 50 dan LC 90 digunakan  uji  Probit.  Semua  data  yang  diperoleh  diolah  dengan  menggunakan perangkat SPSS seri 25 .
Gambar 1. Alur Kerja Penelitian

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil Mortalitas Larva Ae. aegypti
Pada Gambar 1 dan Tabel 1 dapat dilihat data rerata kematian larva Ae. aegypti kelompok kontrol dan kelompok perlakuan ekstrak daun permot dosis bertingkat hingga 24  jam.  Kelompok  perlakuan  temephos  1%  dalam  waktu  1  jam  terhitung  100%  larva mengalami  kematian.  Abate (temephos  1%) merupakan  salah  satu  pestisida  golongan senyawa  fosfat  organik.  Temephos  1%  bekerja  dengan  cara  menghambat  enzim asetilkolinesterase,  sehingga  menyebabkan  gangguan  pada  aktivitas  saraf  (bersifat neurotoksin)  dan  menyebabkan  semakin  menumpuknya  asetilkolin  pada  ujung  saraf. Enzim asetilkolinesterase sendiri berfungsi menghidrolisis asetilkolin menjadi kolin dan asam  asetat.  Apabila  enzim  asetilkolinesterase  dihambat  fungsinya  maka  tidak  akan terjadi  hidrolisis  asetilkolin,  yang  selanjutnya  dapat  menyebabkan  otot  akan  terus berkontraksi dalam waktu yang lama dan menyebabkan kejang otot merujuk (Patel et al ., 2018) .
Larvasida sintetik Temephos 1%
Larvasida nabati ekstrak daun permot 0,5%, 1%, 2%, 4%
Larva Ae. aegypti instar III
Dihitung jumlah mortalitas larva
Pembuatan preparat histopatologis midgut larva
Pengamatan dan Analisis data
Gambar  2. Grafik  Rerata  Mortalitas  Larva Ae. aegypti Yang  Terpapar  Larvasida  (huruf  yang berbeda menunjukkan perbedaan yang signifikan p<0,05)
Lebih lanjut Patel et al . (2018) menyatakan bahwa asetilkolin pada ujung saraf serangga  hanya  akan  dihasilkan  apabila  ada  stimulans  atau  rangsangan.  Selain  itu, asetilkolin juga berperan sebagai perantara atau mediator antara saraf dan otot, hasilnya impuls listrik yang dialirkan akan merangsang otot untuk berkontraksi. Setelah kontraksi otot selesai maka asetilkolin akan dipecah oleh asetilkolinesterase menjadi kolin, asam laktat, dan air. Bila aktivitas asetilkolin tidak segera dihidrolisis, maka otot akan terus berkontraksi  yang  akhirnya  menyebabkan  kejang  (konvulsi),  seperti  yang  telah disebutkan sebelumnya. Kejang yang terus menerus akan menyebabkan kematian. Berdasarkan  Tabel  1,  terlihat  tingkat  kematian  larva Ae.  aegypti yang  terpapar ekstrak daun permot hingga 4% selama 24 jam adalah 100%. Hal ini disebabkan oleh karena  adanya  senyawa  kimia  aktif  di  dalam  ekstrak  daun  permot  seperti  alkaloid, flavonoid, dan fenol. Alkaloid di dalam ekstrak daun permot bersifat racun (desiscant) , dapat  menyebabkan  paralisis  dan  kematian,  karena  kehilangan  cairan  secara  terus- menerus sehingga tubuh kekurangan cairan. Vrancheva et al . (2016) menyatakan bahwa mekanisme  kerja  alkaloid  adalah  menghambat asetilkolinesterase dengan  melakukan fosforilasi asam amino serin pada pusat asteratik enzim tersebut. Keracunan disebabkan karena  penimbunan  asetilkolin yang  menyebabkan  gangguan  sistem  saraf  pusat  yang ditandai dengan gejala kejang, kelumpuhan pernafasan, dan kematian.
5 10 17 42 75 100 100 a 0 0 1 6 13 20 43 b 0 2 8 12 21 37 59 b 1 5 11 18 34 60 80 b 2 7 14 26 49 77 100 bc 10 20 30 40 50 60 1440 Mo rta lita s La rv a (% ) Waktu Pengamatan (menit) Permot 4% Permot 2% Permot 1%
Permot 0.5%
Temephos 1%
Kontrol
Tabel 1. Rerata Persentase Mortalitas Larva Ae. aegypti Yang Terpapar Larvasida Kelompok perlakuan n Waktu Pengamatan (menit) 10 20 30 40 50 60 1440 Kontrol negatif 4 0 0 0 0 0 0 0 Kontrol positif, Temephos 1% 4 5 10 17 42 75 100 100 a Ekstrak daun permot 0,5% 4 0 0 1 6 13 20 43 b Ekstrak daun permot 1% 4 0 2 8 12 21 37 59 b Ekstrak daun permot 2% 4 1 5 11 18 34 60 80 b Ekstrak daun permot 4% 4 2 7 14 26 49 77 100 bc
(huruf yang berbeda menunjukkan perbedaan yang signifikan p<0,05)

## Perubahan Histopatologis Midgut Larva Ae. aegypti
Pada kelompok kontrol negatif (tanpa paparan) dan kelompok perlakuan ekstrak daun permot 1% selama 24 jam, tampak nukleolus masih jelas, dengan sitoplasma berisi beberapa vakuol kecil (Gambar 3). Brush border tampak menutupi seluruh apikal midgut dan  membran  peritrofik mengelilingi  isi  usus.  Pada  kelompok  perlakuan  ekstrak  daun permot  2%  selama  24  jam,  sel  epitel midgut tersusun  atas  sel  kubus  yang  mengalami dilatasi  pada  permukaan  apikalnya, brush  border dan  membran  peritrofik  rusak  serta tampak banyak vakuol berukuran besar pada sitoplasma.
Pada  larva  yang  terpapar  Temephos  1%  dan  ekstrak  daun  permot  dosis  4% (Gambar 4), sebagian epitel midgut rusak dan terlepas dari membran basal. Mikrovili pada permukaan  sel  epitel  mengalami  degenerasi  dan  sel  epitel  mengalami  elongasi (pemanjangan). Tampak vesikel dengan berbagai ukuran dan membran yang rusak pada bagian apikal. Pada sitoplasma sel epitel terdapat massa yang tampak seperti gelembung.
Gambar 3. Midgut Larva Ae. aegypti kelompok kontrol (kiri), Yang Terpapar Ekstrak Daun Permot ( Passiflora foetida ) dosis 2% (kanan) (HE, x450). Keterangan Gambar: MP (membrane peritropik, E (sel epitel), MB (membrane basalis), SE (inti sel epitel), BB ( brush border )
Gambar 4. Midgut Larva Ae. aegypti Yang Terpapar Ekstrak Daun Permot ( Passiflora foetida ) dosis 4% (kiri), Temephos 1% (kanan) (HE, x100). Keterangan Gambar: MP (membrane peritropik, E (sel epitel), MB (membrane basalis), SE (inti sel epitel)

## Pembahasan
Larva Ae. aegypti yang terpapar ekstrak daun permot yang mengandung alkaloid seperti ermanin, harmalin, harmin akan memyebabkan perpanjang gangguan saluran ion natrium yang masuk ke dalam membran dengan cara memperlambat atau menghalangi penutupan  saluran (Costa et  al .,  2014) .  Alkaloid  yang  terdapat  di  dalam  ekstrak  daun permot  akan  memperlambat  penutupan  saluran  ion  dan  menyebabkan  saraf  dalam keadaan  depolarisasi  cukup  lama,  sehingga  ion  natrium  banyak  masuk  ke  dalam membran. Hal ini menimbulkan konvulsi (Wahyuni dan Loren, 2015) . Selain itu, alkaloid juga  menghalangi  penutupan  saluran  ion  yang  menyebabkan  membran  kelebihan  ion natrium  yang  menyebabkan  saraf  menjadi  tidak  aktif.  Ketidakaktifan  saraf  ini dikarenakan  saraf  terlalu  positif  dan  sulit  untuk  repolarisasi.  Gejala  yang  akan ditimbulkan  adalah  kelumpuhan  atau  paralisis  dan  selanjutnya  dapat  menyebabkan kematian (Soni dan Anjikar, 2014) .
Insektisida nabati adalah insektisida yang berasal dari tumbuhan yang digunakan sebagai  alternatif  insektisida  sintetik.  Beberapa  senyawa  metabolit  sekunder  dalam tanaman dapat menyerang area target baru maupun menyerang banyak area target secara bersamaan (Perumalsamy et al ., 2013) . Midgut larva Ae. aegypti berstruktur tubular yang terbagi atas area anterior, medial, dan posterior (Pavananundt et al ., 2013) . Midgut larva dilapisi oleh selapis sel epitel silindris yang ditopang oleh membran basal (Dourado et al ., 2015) .  Sel  epitel midgut menjadi  salah  satu  area organ target  utama yang memberikan respon seluler primer dari insektisida nabati. Sel epitel midgut memiliki inti sel berbentuk bulat, terletak di bagian tengah sel dengan kromatin yang jelas. Sitoplasma sel halus dan heterogen dengan daerah basofilik (Sharma et al ., 2018) . Pada permukaan epitel midgut terdapat  mikrovili  yang  berfungsi  untuk  memperluas  permukaan  absorbsi  makanan (Pavananundt et al ., 2013) . Pada bagian terluar epitel terdapat membran peritrofik yang berperan sebagai barrier terhadap patogen dan racun (Sharma et al ., 2018) .
Perubahan histopatologis sel epitel midgut larva Ae. aegypti dapat dipengaruhi oleh berbagai  faktor  secara  kuantitatif  dan  kualitatif.  Secara  kualitatif,  perubahan histopatologis midgut dipengaruhi  oleh  lokalisasi  organ  sepanjang midgut .  Secara kuantitatif, perubahan histopatologis midgut dipengaruhi oleh spesies tumbuhan, bagian tumbuhan  yang  digunakan,  konsentrasi  bahan  uji  dan  lama  perlakuan (Sharma et  al .,
2018) .  Setelah  terpapar  dengan  senyawa  metabolit  sekunder  pada  ekstrak  tumbuhan seperti  halnya  ekstrak  daun  permot,  membran  peritrofik,  mikrovili,  sel  epitel  dan membran  basal midgut larva  mengalami  kerusakan.  Lapisan  epitel  menjadi  lisis  dan menyebabkan bolus makanan menyebar pada lumen. Hal ini didapatkan pada penelitian Hazarika et al . (2018) yang menggunakan minyak atsiri Cymbopogon nardus . Minyak atsiri Cymbopogon  nardus mengandung  berbagai komponen  kimia  seperti  citronellal,  linalool, citronellol, citral, kadinol, limonene, geraniol, kadinen, nerol, dan eugenol. Citronellal merupakan komponen utama minyak atsiri yang bekerja sebagai racun kontak dan racun perut.
Selain itu, sel epitel midgut menjadi tidak teratur dengan inti yang keluar ke arah lumen  disertai  dengan  vakuolisasi  pada  sitoplasmanya.  Seperti  yang  didapatkan  pada penelitian Rohmah et al . (2020) yang menggunakan paparan ekstrak buah Averrhoa bilimbi dan Ustiawaty  &  Zacharia  (2018) yang  menggunakan  ekstrak  etanol  daun  mangrove. Perubahan sel epitel midgut yang terjadi disebabkan terutama oleh kandungan saponin pada ekstrak buah Averrhoa bilimbi (Rohmah et al ., 2020) . Vakuolisasi sitoplasma sel epitel midgut juga didapatkan pada percobaan penelitian Thanigaivel et al . (2017) , kerusakan diduga diakibatkan oleh komponen alkaloid dari ekstrak daun Justicia adhatoda . Penelitian Wikandari  dan  Surati  (2018) menggunakan Citrus  hystrix yang  juga  menyebabkan  sel epitel midgut larva  tampak  terlepas  dari  membran  basal.  Hal  serupa  didapatkan  pada penelitian Pavananundt et al . (2013) yang menggunakan ekstrak daun Cassia siamea . Pada penelitian Pavananundt et al . (2013) juga tampak elongasi sel epitel midgut larva. Perubahan yang terjadi diduga diakibatkan oleh berbagai komponen dari ekstrak daun Cassia  siamea yaitu  flavonoid  glycoside,  chromone  alkaloid,  bianthraquinone, sitosterol dan anthraquinone. Limonene merupakan komponen utama Citrus hystrix yang bekerja sebagai neurotoksin dan racun perut. Komponen ini dapat berdifusi pada matriks peritrofik dan masuk ke sel epitel midgut untuk berikatan dengan reseptor pada mikrovili. Ikatan  tersebut  mengganggu  permeabilitas  sel  dan  mengakibatkan  denaturasi  protein pada membran epitel. Beberapa komponen seperti pellitorine dari Asarum heterotropoides serta honokiol dan magnolol dari Magnolia denudata juga bekerja pada sel yang berfungsi sebagai  transport  ion  pada gastric  caeca (area  anterior)  dan  posterior midgut larva Ae. aegypti .  Kerusakan  tersebut  menyebabkan  gangguan  osmoregulasi  yang  berhubungan dengan  ekspresi  gen V-type  H + -ATPase pada  larva Ae. aegypti (Wikandari  dan  Surati, 2018) . Adanya pellitorine (Perumalsamy et al ., 2013) , honokiol, dan magnolol (Wang et al .,2019) menyebabkan kerusakan membran peritrofik, inti sel dan lapisan epitel midgut yang  tampak  sebagai  debris  luminal.  Pada  paparan  pellitorine  juga  tampak  adanya perbesaran gastric caeca . Selain bekerja sebagai racun perut, honokiol dan magnolol juga bekerja  sebagai  neurotoksin  dengan  menghambat  kerja  enzim  asetilkolinesterase  dan reseptor  oktopaminergik.  Honokiol  dan  magnolol  juga  dapat  merusak  bagian  terluar membran kutikula. Perubahan struktur area anterior dan posterior midgut larva Ae. aegypti juga  didapatkan  pada  penelitian Firmansyah et  al .  (2019) menggunakan  ekstrak  daun Ocimum  sanctum .  Berbagai  komponen  ekstrak  daun Ocimum  sanctum yang  berperan sebagai larvasida seperti tanin, flavonoid, saponin, alkaloid, eugenol, linalool, limonene dan triterpenoid. Insektisida nabati dapat berasal dari berbagai bagian tumbuhan seperti
daun, batang, kulit pohon, biji, cangkang (kulit biji), buah, kulit buah, bunga, dan akar. Berdasarkan beberapa penelitian di atas, daun menjadi bagian terbanyak dipakai sebagai bahan uji. Namun, ekstrak bagian lain tumbuhan memiliki dampak toksisitas yang lebih kuat  terhadap  sel  epitel midgut larva Ae.  aegypti .  Hal  ini  didukung  dengan  penelitian Sharma et  al .  (2018) .  Didapatkan  ekstrak  batang Achyranthes  aspera memiliki  toksisitas yang  lebih  tinggi  daripada  sel  epitel midgut larva Ae.  aegypti daripada  ekstrak  daun Achyranthes  aspera .  Kerusakan  sel  epitel midgut diduga  disebabkan  terutama  oleh kandungan saponin pada ekstrak daun dan batang Achyrathes aspera . A nacardic acid yang korosif memiliki rantai alipatik yang memudahkan penetrasi membran lipoprotein dinding sel larva. Senyawa ini terutama memengaruhi epitel midgut yang  diikuti  oleh gastric  caeca dan malpighian tubules (Dourado  dan  Cesar,  2015) . Pada kedua  penelitian,  komponen  ekstrak  dan  efek  toksisitas  dari  kedua  tanaman  berbeda meskipun kedua tanaman berasal dari famili yang sama, yaitu Anacardiaceae. Anacardic acid dari Anacardium  occidentale memberikan  efek  kerusakan  yang  lebih  berat  terhadap epitel midgut larva Ae.  aegypti daripada  ekstrak Schinus  terebinthifolius .  Hal  ini  dapat disebabkan oleh faktor ekstrinsik dan intrinsik. Faktor ekstrinsik seperti metode ekstraksi, jenis pelarut, jenis atau sumber larva uji, kondisi geografis tanaman tumbuh (curah hujan, jenis tanah, suhu, kelembaban, musim, sinar matahari). Faktor intrinsik meliputi umur, bagian  dan  spesies  tanaman (Astriani  dan  Widawati,  2016) .  Famili  Anacardiaceae merupakan famili yang banyak ditemukan di daerah beriklim tropis dan terdiri dari 800 genus  serta  82  spesies (Chisom et  al .,  2014) .  Senyawa  kimia  yang  terdapat  di  dalam tanaman  famili  ini  banyak  digunakan  sebagai  bahan  makanan,  obat-obatan  dan insektisida.  Tanaman-tanaman  yang  berasal  dari  famili Anacardiaceae mengandung berbagai  komponen  seperti coumarin,  flavonoid,  saponin,  steroid,  triterpenoid,  tanin, anthocyanoside,  phytosterol ,  polifenol  dan  hidrokarbon  yang  bersifat  toksik  terhadap serangga (Yousaf & Zuharah, 2015) .

## KESIMPULAN
Dosis  efektif  ekstrak  daun  permot  ( Passiflora  foetida )  adalah  3,64%  (membunuh 90% larva Ae. aegypti dalam waktu kurang dari 4 jam). Perlakuan ekstrak daun permot dosis 4% dapat menyebabkan perubahan histopatologis midgut larva Ae. aegypti seperti sebagian epitel midgut rusak dan terlepas dari membran basal, mikrovili pada permukaan sel epitel mengalami degenerasi dan sel epitel mengalami elongasi, tampak vesikel dengan berbagai ukuran dan membran yang rusak pada bagian apikal, dan pada sitoplasma sel epitel terdapat massa yang tampak seperti gelembung.

## DAFTAR PUSTAKA
Antony,  N.  M.,  Fernandes,  J.,  &  Mathew,  J.  (2021).  Phytochemical  &  Pharmacological Investigation  of  Stems  of Passiflora  foetida . Journal  of  Pharmaceutical  Research  International , 408–414. https://doi.org/10.9734/jpri/2021/v33i58B34218
Astriani,  Y.,  Widawati,  M.  (2016).  Potensi  Tanaman  Di  Indonesia  Sebagai  Larvasida  Alami Untuk Aedes aegypti. Jurnal Sarana Penyebaran Informasi Hasil Kegiatan Litbang (SPIRAKEL) ,
8 (2), 42.
Cania, E., Setyaningrum, E. (2013). Uji Efektivitas Larvasida Ekstrak Daun Legundi ( Vitex trifolia ) Terhadap Larva Aedes aegypti . Medical Journal of Lampung University , 2 (4), 53–58. Chisom,  I.  F.  (n.d.).  A  comparative  foliar  anatomical  and  morphological  study  on Anacardium occidentale L. and Spondias mombin L. International Journal of Herbal Medicine , 5. Costa, M.S., Cossolin, J.F.S., Pereira, M.J.B., Sant’Ana, A.E.G., Lim,a M.D., Zannuncio, J.C., et al. (2014). Larvicidal and Cytotoxic Potential of Squamocin on the Midgut of Aedes aegypti (Diptera: Culicidae). Toxins: Multidisciplinary Digital Publishing Institute (MDPI) Journal , 6 (4), 1170–1173.
Dourado, G.K.Z.S., Cesar, T.B. (2015). Investigation of Cytokines, Oxidative Stress, Metabolic, and  Inflammatory  Biomarkers  After  Orange  Juice  Consumption  by  Normal  and Overweight Subjects. Food Nutr Res , 59 , 28147. Firmansyah, N.E., Aulung, A., Wibowo, H., Subahar, R. (2019). Activity of Ocimum sanctum Leaf Extract  against Aedes aegypti Larvae:  Midgut  Histopathological  Alteration. ASPIRATOR , 11 (1), 13–18.
Hazarika, H., Tyagi, V., Krishnatreyya, H., Kishor, S., Karmakar, S., Bhattacharyya, D.R., et al. (2018). Toxicity of Essential Oils on Aedes aegypti : A Vector of Chikungunya and Dengue Fever. International Journal of Mosquito Research , 5 (3), 52–53.
Kementerian  Kesehatan  Republik  Indonesia.  (2020). Profil  kesehatan  Indonesia  tahun  2019 . Kementerian Kesehatan Republik Indonesia.
Mading,  M.,  Rohmah,  E.A.,  Utomo,  B.,  Arwati,  H.  (2018).  Perubahan  Histopatologi  Midgut Larva A. vagus (Diptera: Culicidae) Akibat Paparan Ekstrak Biji Pinang. Buletin Penelitian Kesehatan , 46 (4), 269–274.
Patel, S.S., Raghuwanshi, R., Masood, M., Acharya, A., Kumar, S. (2018). Medicinal Plants with Acetylcholinesterase Inhibitory Activity. Reviews in the Neurosciences , 29 (5), 491–529.
Pavananundt,  P.,  Jiraungkoorskul,  K.,  Kosai,  P.,  Jiraungkoorskul,  W.  (2013).  Larvicidal Properties of Cassia siamea leaf Against Aedes aegypti Larvae. International Journal of Modern Agriculture , 2 (1), 2–5.
Perumalsamy,  H.,  Kim,  J.R.,  Oh,  S.M.,  Jung,  J.W.,  Ahn,  Y.J.,  Kwon,  H.W.  (2013).  Novel Histopathological  and  Molecular  Effects  of  Natural  Compound  Pellitorine  on  Larval Midgut Epithelium and Anal Gills of Aedes aegypti . Plos One , 8 (11), 2–5.
Rohmah, E.A., Subekti, S., Rudyanto, M. (2020). Larvicidal Activity and Histopathological Effect of Averrhoa  bilimbi Fruit  Extract  on Aedes  aegypti from  Surabaya,  Indonesia. Journal  of Parasitology Research , 3–4 .
Senthil-Nathan,  S.  (2020).  A  Review  of  Resistance  Mechanisms  of  Synthetic  Insecticides  and Botanicals,  Phytochemicals,  and  Essential  Oils  as  Alternative  Larvicidal  Agents  Against Mosquitoes. Frontiers in Physiology , 10 , 1591. https://doi.org/10.3389/fphys.2019.01591 Sharma, A., Kumar, S., Tripathi, P. (2018). Effects of Achyranthes aspera Extracts on the Survival and Midgut Histo-architecture of Aedes aegypti L. Early IV Instars. The Open Parasitology Journal , 6 , 43–47.
Soni,  V.,  Anjikar,  A.  (2014).  Use  of  Pyrethrin/Pyrethrum  and  Its  Effect  on  Environment  and Human: A Review. PharmaTutor Magazine , 2 (6), 52–60.
Susilowati, R. P. (2017). Efektivitas Daun Permot (P assiflora foetida ) sebagai Obat Nyamuk dan Pengaruhnya pada Sel Darah Mencit. Jurnal Kedokteran Meditek, 23 (62), 10. Susilowati RP, Sari MP, Farfar IO. (2019). Efektivitas ekstrak daun permot dan biji bunga krisan terhadap  kematian Aedes  aegypti dan  aktivitas  asetilkolinesterasenya. Prosiding  Seminar Nasional “TROPICS, Universitas Gajah Mada Yogyakarta .
Tandoro,  Y.,  Widyawati,  P.  S.,  Budianta,  T.  D.  W.,  &  Sumargo,  G.  (2020).  Phytochemical Identification and Antioxidant Activity of Passiflora foetida Fruits and Leaves Extracts: A Comparative  Study. International  Journal  of  Pharmacy  and  Pharmaceutical  Sciences ,  55–58. https://doi.org/10.22159/ijpps.2020v12i6.31505
Thanigaivel,  A.,  Nathan,  S.S.,  Srinivasan,  P.V.,  Edwin,  E.S.,  Ponsankar,  A.,  Rani,  S.S., et  al . (2017). Chemicals isolated from Justicia adhatoda Linn reduce fitness of the mosquito, Aedes aegypti L . NY: John Wiley & Sons. 94(4): 7-8. Ustiawaty, J., Zacharia, E. (2018). Pengaruh Ekstrak Etanol Daun Mangrove Rhizophora stylosa Sebagai  Biolarvasida  Terhadap  Perubahan  Histologi  Sel  Epitel  Midgut  Larva  Nyamuk Aedes aegypti . Jurnal Penelitian Dan Kajian Ilmiah Kesehatan , 4 (2), 134–136.
Vrancheva, R.Z., Ivanov, I.G., Aneva, I.Y., Dincheva, I.N., Badjakov, I.K., Pavlov, A.I. (2016). Alkaloid  Profiles  and  Acetylcholinesterase  Inhibitory  Activities  of  Fumaria  Species  from  Bulgaria . Bulgaria: University of Food Technologies. Wahyuni,  D.,  Loren,  I.  (2015).  Perbedaan  Toksisitas  Ekstrak  Daun  Sirih  ( Piper  betle L.)  dan Ekstrak Biji Srikaya ( Annona squamosa L.) Terhadap Larva Nyamuk Aedes aegypti L. Jurnal Saintifika Universitas Jember , 17 (1), 44–46.
Wang, Z., Perumalsamy, H., Wang, X., Ahn, Y.J. (2019). Toxicity and Possible Mechanisms of Action  of  Honokiol  from  Magnolia  denudata  Seeds  Against  Four  Mosquito  Species. Scientific Reports , 9 (1), 416–418.
Wikandari,  R.J.,  Surati.  (2018).  Efek  Ekstrak  Kulit  Jeruk  Purut  ( Citrus  hystrix DC)  Terhadap Morfologi dan Histologi Larva Aedes aegypti . Jurnal Aspirator , 10 (2), 120–122. Yousaf, A., & Zuharah, W. F. (2015). Lethal response of the dengue vectors to the plant extracts from  family  Anacardiaceae. Asian  Pacific  Journal  of  Tropical  Biomedicine , 5 (10),  812–818. https://doi.org/10.1016/j.apjtb.2015.05.016
Yue, Y., Liu, X., Xu, M., Ren, D., & Liu, Q. (2019). Epidemiological dynamics of dengue fever in  mainland  China,  2014–2018. International  Journal  of  Infectious  Diseases , 86 ,  82–93. https://doi.org/10.1016/j.ijid.2019.06.015

## Sitasi APA style :
Susilowati, R P., Sari M P. (2022). Histopathological Changes of Midgut Epithelial Cells of Aedes aegypti Larvae Exposed to Permot Leaf Extract ( Passiflora foetida ), Jurnal  Pembelajaran  dan  Biologi  Nukleus ,  8(1),  53-63. https://doi.org/10.36987/jpbn.v8i1.2465.