## EFEK KOMBINASI SPIRULINA KITOSAN UNTUK PRESERVASI SOKET TERHADAP  OSTEOBLAS, OSTEOKLAS DAN KEPADATAN KOLAGEN
(EFFECT SPIRULINA CHITOSAN COMBINATION AS A SOCKET PRESERVATION TOOSTEBLAST, OSTEOCLAST, AND COLLAGEN DENSITY)
Sherman Salim, Rostiny, Mefina Kuntjoro
Departemen Prostodonsia Fakultas Kedokteran Gigi, Universitas Airlangga Surabaya Jl. Prof Dr Moestopo 47 Surabaya E-mail: sherman.salim@yahoo.com

## Abstract
Socket preservation is needed to support prosthodontic treatment as prominent alveolar bone is very important due to denture retention and stability. Material that able to prevent excessive bone resorption and improve bone remodelling is necessary to apply into socketpost extraction. Spirulina has antiinflamation and antioxidant properties meanwhile chitosan has mucoadhesive activity. Combination of both material can give sinergic reaction. This research can get appropriate socket preservation material. Twenty eight cavia cobayas divided into 4 groups. After extraction, socket post extraction control group was filled with CMC Na 3%, group I spirulina 12%, group II chitosan 20%, group III combination spirulina 12% chitosan 20%. On day 14 th , Cavia cobayas was terminated and mandible was taken. Histopathology examination on the amount of osteoblast, osteoclast ,collagen, and statistic analysis was done.Data was statistically analise using Kruskal Wallis test. There is significant different between control group and group I, II and III. The highest amount of osteoblast, collagen  and  the  lowest  amount  of  osteoclast  was  calculated  in  group  III.  In  conclusion,  combination  spirulina  12% chitosan 20% can increase the amount of osteoblas and collagen and reduce the amount of osteoclast on day 14 th .
Key word: Spirulina, chitosan, socket preservation

## Abstrak
Soket  preservasi  merupakan  tindakan  penting  dilakukan  sehubungan  dengan  perawatan  di  bidang  prostodonsia  yang memerlukan bentukan tulang yang prominen sebagai retensi dan stabilitas untuk pemakaian gigi tiruan. Bahan yang dapat mencegah inflamasi berlebihan dan meningkatkan remodeling tulang perlu diaplikasikan pada soket pasca pencabutan. Biomaterial spirulina memiliki sifat antiinflamasi dan antioksidan serta kitosan yang memiliki sifat mucoadhesive akan dikombinasikan  karena  memiliki  efek  sinergis  apabila  digabungkan.  Tujuan  penelitian  ini  adalah  untukmendapatkan biomaterial yang memberikan efek untuk preservasi soket. Sebanyak 28 ekor Cavia cobaya (marmot) dibagi menjadi 4 kelompok perlakuan. Setelah dilakukan pencabutan, pada soket kelompok  kontrol  diinduksi gel CMC Na 3%, kelompok I diinduksi gel spirulina 12%, kelompok II diinduksi gel kitosan 20%, kelompok III diinudksi gel kombinasi spirulina 12% kitosan 20%. Pada hari ke 14, hewan coba dieksekusi dan diambil mandibulanya. Kemudian dilakukan pemeriksaan histopatologi  jumlah  osteoblas,  osteoklas  dan  kolagen  pada  daerah  1/3  soket.  Data  hasil  pemeriksaan  dianalisis menggunakan Kruskal Wallis test. Pada pemeriksaan hari ke 14 terdapat perbedaan signifikan antara kelompok kontrol dan kelompok perlakuan. Jumlah osteoblas dan kolagen paling  tinggi pada kelompok III dan jumlah osteoklas paling rendah  pada  kelompok  III.  Sebagai  kesimpulan,  kombinasi  spirulina  12%  dan  kitosan  20%  meningkatkan  jumlah osteoblas dan kolagen dan menurunkan jumlah osteoklas pada hari ke 14.
Kata kunci: Spirulina, kitosan, preservasi soket

## PENDAHULUAN
Gigi merupakan organ keras yang memiliki fungsi utama  pengunyahan  dan  memiliki peranan penting terhadap tampilan dari wajah. Jika kerusakan gigi ti- dak dapat dirawat dan dipertahankan maka harus di- lakukan  pencabutan  gigi.  Pencabutan  gigi  adalah tindakan pengeluaran gigi dari soketnya. Ada bebe- rapa  contoh  indikasi  dalam  pencabutan  gigi,  yaitu karena penyakit periodontal, karies yang parah, dan infeksi periapikal. 1 Riset kesehatan dasar (RISKESDAS) departemen kesehatan  republik  Indonesia  tahun  2007  melapor- kan bahwa kehilangan gigi kelompok usia 45-54 th terdapat 1,8%, kelompok usia 55-64 th terdapat 5,9% dan kelompok usia 65 keatas terdapat 17,6%. 2 Bidang  prostodonsia  merupakan  ilmu  kedokteran gigi yang mampu merehabilitasi fungsi oral dengan cara menggantikan gigi yang hilang tersebut beserta jaringan lunak rongga mulut dengan pembuatan res- torasi  gigi  pengganti.  Perawatan  di  bidang  prosto- donsia memerlukan bentukan tulang yang prominen sebagai retensi dan stabilitas untuk pemakaian  gigi tiruan.
Terapi yang digunakan selama ini untuk mengha- silkan regenerasi tulang adalah bone graft . Bone graft merupakan bahan yang dapat merangsang penyembuh- an tulang melalui proses osteogenesis , os-teoinduc- tion dan osteoconduction. Bahan yang digunakan da- lam bone graft dapat dibagi menjadi beberapa kate- gori  utama,  yaitu autografts,  allografts ,  dan xeno- grafts . Masing-masing pilihan ini memiliki kelebih- an dan kekurangan. Kelemahan dari autograft yaitu tulang  harus  diambil  dari  bagian  tubuh  lain  pasien yang  sama  sehingga  dapat  menimbulkan  masalah- masalah klinis, terbatasnya tulang yang ada, dan da- pat menimbulkan resiko kematian. Sedangkan allo- graft dan xenograft dapat menimbulkan reaksi auto- imun serta kemungkinan terjadinya transfer penyakit. Selain itu, biaya bone graft tergolong cukup mahal bagi para pasien yang kurang mampu. 3 Pada saat ini banyak penelitian obat alternatif yang mengarah pada bahan-bahan yang berasal dari alam karena dianggap lebih sederhana, murah, dan kurang memberikan  efek  samping  yang  berbahaya. Spirulina adalah  ganggang  renik  (mikroalga)  yang  multise- lular berbentuk filamen (benang) yang tersusun atas sel-sel  berbentuk  silindris  dan  berwarna  hijau  ke- biruan  karena  adanya  klorofil  (hijau)  dan  pigmen phycocyanin (biru). 4 Spirulina  mengandung  nutrisi yang sangat bermanfaat bagi tubuh, seperti C–phy- cocyanin, beta-carotenoids, vitamin e, zinc, dan  ba- nyak trace element alami lainnya. 5 Biomassa Spirulina merangsang  proses  biologis  penting  dan  berperan sebagai anti-alergenik, anti-bakteri, anti-jamur, anti-
inflamasi, sifat anti-oksidan, dan imuno-modulasi, se- hingga  Spirulina  termasuk scaffold yang  merangsang pertumbuhan sel dan regenerasi jaringan. 6
Kitosan adalah  polisakarida yang  terdiri  dari glu- kosamin dan unit N–acetyllglucosamine. Kitosan me- rupakan kitin yang berasal dari polimer yang diha- silkan oleh deasetilasi kitin. Banyak aplikasi biome- dis dilakukan dengan bahan kitosan, yaitu seperti pe- nyembuhan luka, pencangkokan kulit, homeostatis, hemodialysis,  pencegahan  plak  gigi,  kontrol  hiper- tensi, dan kontrol kolesterol. Kitosan mempunyai si- fat  osteokonduktifitas  tinggi , pengaplikasian  yang mudah dan biodegradasi bertahap yang membuat bi- bit yang bagus untuk regenerasi tulang. Kitosan te- lah  terbukti  dapat  meningkatkan  regenerasi  tulang pada dental  bone  loss, oleh  karena  itu,  kitosan  di- anggap  sebagai  alternatif  yang  cocok  untuk bone graft . 7 Kombinasi kitosan dengan biomaterial lain dapat memiliki efek sinergis pada adhesi sel, diferensiasi sel dan pembentukan matriks ekstraseluler. 8
Penelitian sebelumnya tentang efek kombinasi spiru- lina kitosan dengan berbagai macam konsentrasi te- lah  dilakukan  dan  didapatkan  hasil  bahwa  induksi kombinasi spirulina 12% dan kitosan 20% dapat me- ningkatkan jumlah osteoblas dan kolagen namun ti- dak  berbeda  secara  bermakna  pada  jumlah  osteo- klas  pada  hari  ke  30. 9 Untuk  membuktikan  bahwa kombinasi  kedua  bahan  bersifat  sinergis  maka  di- lakukan penelitian lanjutan menggunakan dosis tunggal spirulina 12%, kitosan 20% dan kombinasi spirulina 12%  kitosan  20%.  Berdasarkan  penelitian  tersebut dilakukan  penelitian  dengan  menggunakan  kombi- nasi spirulina 12% kitosan 20%, serta menunjukkan bahwa  gel  spirulina  dengan  konsentrasi  12%  me- rupakan dosis paling efektif dalam membantu pem- bentukan  sel  osteoblast  dan  proses  remodeling  tu- lang. Pada penelitian ini  pemeriksaan histopatologi pada  hari  ke 14,  karenamerupakan  awal  mulai  ter- bentuknya tulang baru pasca ekstraksi gigi. 10 Pene- litian ini bertujuan untuk mendapatkan bahan yang efektif untuk preservasi soket pasca pencabutan gigi sehingga  dapat  menunjang  keberhasilan  perawatan di bidang Prostodonsia.

## BAHAN METODE
Jenis  penelitian  ini  adalah  eksperimental  labora- toris dengan menggunakan rancangan post test only control  group  design .  Penelitian  dilakukan  di  La- boratorium  Biokimia  Fakultas  Kedokteran  Universitas Airlangga, pembuatan preparat dilakukan di Labora- torium  Patologi  Anatomi  RSUD  Dr  Soetomo  dan pemeriksaan histopatologi dilakukan di Laboratorim Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Airlangga. Penelitian telah lolos uji laik etik No: 84/
KKEPK.FKG/VIII/2015.Hewan coba yang diguna- kan dalam penelitian ini adalah cavia cobaya jantan berumur 2-3 bulan dengan berat badan rata-rata 300 gram. Jumlah cavia cobaya yang digunakan 28 ekor yang dibagi menjadi 4 kelompok perlakuan masing- masing 7 ekor. Hewan coba dipelihara selama 3 hari untuk beradaptasi dengan kandang berukuran 60 cm x 65 cm x 80 cm (tiap kandang berisi 7 ekor) dan di- tempatkan dalam ruangan yang cukup cahaya agar tidak lembab, jauh dari kebisingan dan tidak terpa- par sinar matahari langsung. Makanan yang diberi- kan adalah jagung dan wortel segar.
Spirulina  yang  dipakai  merupakan  sediaan  siap jadi dalam bentuk bubuk yang diproduksi oleh Wellness USA . Kitosan berupa sediaan jadi dalam bentuk bu- buk  berasal  dari  cangkang  udang  yang  diproduksi oleh Bank Jaringan RSUD Dr. Soetomo. Gel spiru- lina  dan  kitosan  merupakan  hasil  pencampuran  bu- buk  spirulina  dan  kitosan  yang  dicampur  lagi  de- ngan  basis  gel  CMC  Na  3%  untuk  menghasilkan konsistensi gel yang stabil. Basis gel CMC Na 3% ini  tidak  mempengaruhi  fungsi  dari  zat  yang  di- kentalkan  dan  tidak  berpengaruh  pada  hasil  pene- litian karena itu digunakan sebagai perlakuan kepa- da kelompok kontrol.
Pada kelompok kontrol soket diinduksi CMC Ba 3%. Kelompok I diinduksi spirulina 12% dengan ca- ra mencampur 1,2 gram spirulina dan 8,8 gram CMC Na3%. Kelompok II diinduksi kitosan 20% dengan cara mencampur 2 gram kitosan dan 8 gram CMC Na3%Kelompok  III  diinduksi  kombinasi  spirulina 12% kitosan 20% dengan cara mencampur 1,2 gram spirulina, 2 gram kitosan, dan 6,8  gram CMC Na3%. Perlakuan  pada cavia  cobaya dilakukan  dengan pencabutan gigi incisivus kiri rahang bawah dengan menggunakan  modifikasi  dari needle  holder di- bawah efek anestesi ketamin 22-44 mg/ kg BB dan diazepam 3-5 mg/kg BB dengan injeksi intra mus- cular. 11 Setelah dilakukan pencabutan, luka yang be- rupa  soket  diinduksi  dengan  gel  yang  telah  disiap- kan dengan menggunakan syringe sebanyak 0,1 cc , kemudian  soket  bekas  pencabutan  ditutup  dengan dijahit  menggunakan  benang  silk  3/0.Hewan  coba dipelihara kembali dengan pemberian makanan dan memperhatikan kesehatannya. Pada hari ke 14, he- wan  coba  dieksekusi  dengan  pemberian  anestesi- ketamin 22-44 mg/ kg BB dan diazepam 3-5 mg/kg BB  dengan  injeksi  intra  muscularuntuk  melepas mandibula kemudian dilakukan dekalsifikasi dengan EDTA  10%   selama  30  hari  agar  jaringan  tulang mandibula menjadi lunak sehingga dapat dilakukan pemotongan pada daerah soket incisivus. Pemotong- an  berbentuk  persegi  panjang  dalam  arah  sagital. Hasil  potongan  dimasukkan  dalam formalin buffer
10%   selama  24  jam. Selanjutnya  diproses   untuk pembuatan preparat histopatologi anatomi(HPA) de- ngan pengecatan haematocylin eosin (HE).
Pengamatan  dilakukan  pada  preparat  HPA  yang dibagi  menjadi  5  lapang  pandang  secara  acak  de- ngan tekhnik counting menggunakan beta counter . Regio  yang  akan  dihitung  yaitu  regio  yang  diberi perlakuan, dalam hal ini soket yang diisi dengan gel. Penghitungan  jumlah  sel  osteoklas,osteoblas  dan  ko- lagen dilakukan dengan mikroskop lensa binokuler dengan pembesaran 400 x yang dihubungkan lang- sung dengan komputer.
Kolagen yang diamati secara mikroskopis berbentuk tebal, berliku-liku, tidak elastis yang terdiri dari pro- tein kolagen (white fibers) . Pada pewarnaan dengan pengecatan  HE  (Hematoksilin  Eosin)  didapatkan warna merah muda. Pengamatan dengan pengamat- an foto dari soket pasca ekstraksi kemudian dilaku- kan  penghitungan  jumlah  kolagen.  Area  yang  dinilai kepadatannya  pada  pemeriksaan  ini  adalah  daerah healing centre (HC) yaitu pada daerah di sekeliling tepi soket. Data pada sampel ini merupakan data se- mikuantitatif,  dimana sabut  kolagen dinyatakan da- lam  persen,  yang  ditentukan  dengan  cara  membagi luas area (  m 2 ) sabut kolagen yang teramati dengan luas  total  area  pengukuran.  Pengukuran  dilakukan dengan  menggunakan software pengolah  gambar Nikon  Image  System yang  telah  terkalibrasi,  pada gambar dengan pembesaran 400x. Mikroskop yang digunakan pada pemeriksaan ini adalah mikroskop ca- haya  biasa  merk NikonH600L yang  dilengkapi  de- ngan digitalcameraDSFi2 300 megapixel dan soft- ware pengolah gambar. 12 Sel  osteoblas  apabila  diamati  secara  mikroskopis berbentuk  kuboid  atau  silindris  pendek,  memiliki satu inti sel, dan sitoplasma berwarna merah kebiru- an. Sel osteoklas adalah sel yang diamati secara mi- kroskopis  berupa  sel  raksasa  multinukleus  berben- tuk bulat atau lonjong,  sitoplasma  berwarna  merah kebiruan dan permukaan  yang berada  pada  sisi tu- lang yang diresorpsi sedikit kasar. 13
Data yang diperoleh diuji normalitas data dengan One-simple Kolmogorov Smirnov Test kemudian di- lakukan  uji  homogenitas  dengan  Levene  Statistic.  Se- telah diperoleh data yang homogen kemudian dianalisis dengan uji statistik one way ANOVA dan dilanjut- kan dengan Tukey HSD untuk melihat secara signi- fikan perbedaan bermakna dari hasil 4 kelompok.

## HASIL
Hasil penelitian tentang jumlah kepadatan kolagen, jumlah osteoblas dan osteoklas dapat dilihat pada gam- bar 1.
Gambar 1. Diagram batang rata-rata dari hasil pemeriksa- an  histopatologi  kepadatan  kolagen,  osteo- blast,  dan  osteoklas  pada  kelompok  kontrol, kelompok I (Spirulina 12%), kelompok II (Ki- tosan 20%), dan kelompok III (Spirulina 12% + Kitosan 20%)
Gambar 1 menunjukkan jumlah rerata (dalam pre- sentase) tampak kepadatan kolagen pada kelompok I sebesar 22,57, kelompok II sebesar 26,57, dan ke- lompok III sebesar 26,71 lebih banyak daripada jum- lah rerata kepadatan kolagen pada kelompok kontrol yaitu sebesar 14,71. Hasil menunjukkan bahwa ke- lompok III dengan aplikasi kombinasi spirulina 12% dan  kitosan  20%  merupakan rata-rata dengan hasil tertinggi, yaitu 26,71. Hasil terendah ditunjukkan pada kelompok  I  dengan  aplikasi  spirulina  12%,  yaitu 22,57.
Jumlah rerata sel  osteoblast pada  kelompok  I se- besar 125,85 mengalami peningkatan dibandingkan kelompok kontrol yaitu sebesar 78,14. Pada jumlah rerata kelompok II yaitu sebesar 117,85 mengalami penurunan  dibandingkan  kelompok  I.  Pada  kelom- pok III yaitu sebesar 136,57 mengalami peningkatan dibandingkan kelompok II. Hasil menunjukkan jumlah rerata sel osteoblast tertinggi pada kelompok III de- ngan  pemberian  gel  kombinasi  spirulina  12%  dan kitosan  20%  (136,57)  dan  jumlah  rerata  sel  osteo- blast terendah pada kelompok kontrol dengan pem- berian gel CMC-Na 3% (78,14).
Jumlah  rerata  sel  osteoklas  pada  kelompok  I  se- besar 25,00 mengalami penurunan dibandingkan ke- lompok  kontrol  yaitu sebesar 29,57. Rerata jumlah sel osteoklas pada kelompok II yaitu sebesar 27,00 mengalami  peningkatan  dibandingkan  kelompok  I, namun mengalami penurunan dibandingkan kelom- pok kontrol. Pada kelompok III pengisian kombinasi spirulina  12%  kitosan  20%  mengalami  penurunan dibandingkan kelompok I (29,57), kelompok II (25,00), dan kelompok III (27,00).
Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh,  dilakukan  uji analisis One Way Anova untuk mengetahui perbeda- an jumlah kepadatan kolagen dan jumlah osteoblast diantara 4 kelompok. Untuk melakukan uji One Way
Anova  terdapat  dua  syarat  yang  harus  dipenuhi, yaitu distribusi data normal dan mempunyai variasi data sama (homogen). Untuk menguji distribusi data tiap  kelompok  menggunakan One-Sample  Kolmo- grov  Smirnov  Test ,  sedangkan  untuk  menguji  data variasi homogenitas menggunakan Levene Statistic .
Tabel 1. Uji One – Sample Kolmogorov Signifikansi (p) Kolagen ,752* ,764* ,991* ,978* Osteoblas ,992* ,468* ,974* ,936* Osteoklas , 959* ,905* ,996* ,916
*Signifikansi
Pada ketiga variable diperoleh distribusi data nor- mal karena p> 0,05. Kemudian dilanjutkan dengan uji Levene statistic untuk melihat homogenitas keempat kelompok tersebut.
Tabel 2. Uji Levene statistic
Signifikansi (p) Kolagen ,366* Osteoblas ,121* Osteoklas ,030
Hasil  uji Levene  statistic ini  menunjukkan  bahwa osteoklas  memiliki  nilai  signifikansi,  030  (<0,05), sehingga  dapat  disimpulkan  bahwa  varians  jumlah sel osteoklas pada penelitian ini tidak homogen se- hingga tidak dapat dilakukan uji Oneway Anova. Uji  analisis  dilanjutkan  dengan  menggunakan Kruskal–Wallis test . Selanjutnya melakukan uji ana- lisis  statistik  untuk  membandingkan  data  antar  ke- lompok  dengan  uji Post  hoe  test-tukey  HSD yang hasilnya dapat dilihat pada tabel 5.2. Dari analisis ini dapat diketahui kelompok-kelompok mana yang me- miliki perbedaan signifikan atau bermakna. Hasil uji analisis Tukey HSD menunjukan bahwa perbedaan kepadatan kolagen antara kelompok kon- trol  dengan  kelompok  perlakuan  II  dan  III  signi- fikan. Terdapat perbedaan jumlah osteoblas yang signi- fikan  antara  kelompok  kontrol  dengan  kelompok perlakuan I, II, dan III. Perbedaan jumlah osteoklas yang signifikan didapatkan antara kelompok kontrol dengan kelompok perlakuan III.
Hasil  pembacaan  HPA  setelah  induksi  spirulina 12%, kitosan 20% dan kombinasi spirulina 12% ki- tosan 20% pada hari ke 14 menunjukkan peningkat- an  kepadatan  kolagen,  jumlah  osteoblas  dan  pe- nurunan jumlah osteoklas seperti yang terlihat pada gambar dibawah ini.
Tabel 3. Tes Tukey HSD kolagen, osteoblas, osteoklas
Kontrol Kelompok I Kelompok II Kelompok III Kolagen Kontrol - - * * Kelompok I - - - - Kelompok II * - - - Kelompok III * - - - Osteoblas Kontrol - * * * Kelompok I * - - - Kelompok II * - - - Kelompok III * - - - Osteoklas Kontrol - - - * Kelompok I - - - - Kelompok II - - - - Kelompok III * - - - Keterangan : * signifikan Kelompok I   : diinduksi Spirulina 12%
Kelompok II : diinduksi Kitosan 20% Kelompok III : diinduksi kombinasi Spirulina 12% Kitosan 20%
Gambar 2.  Tanda panah menunjukkan kepadatan kolagen (warna biru) pada soket gigi marmot: A. Kelom- pok  Kontrol  (CMCNa  3%);  B.  Kelompok  I (Spirulina  12%);  C.  Kelompok  II  (Kitosan 20%); D. Kelompok III (Spirulina 12% + Ki- tosan 20%)
Gambar 3. Pemeriksaan HPA menunjukkan sel osteoblast pada  soket  gigi  marmot:  A.  Kelompok  Kon- trol (CMCNa 3%); B. Kelompok I (Spirulina 12%);  C.  Kelompok  II  (Kitosan  20%);  D. Kelompok III (Spirulina 12% + Kitosan 20%)
Gambar 4. Pemeriksaan HPA menunjukkan sel osteoklas pada  soket  gigi  marmot:  A.  Kelompok  Kon- trol (CMCNa 3%); B. Kelompok I (Spirulina 12%);  C.  Kelompok  II  (Kitosan  20%);  D. Kelompok III (Spirulina 12% + Kitosan 20%)

## PEMBAHASAN
Hasil  analisis  statistik  pada  penelitian  menunjuk- kan adanya peningkatan persentase kepadatan kola- gen dan jumlah sel osteoblast serta  mengalami pe- nurunan jumlah sel osteoklas pada kelompok I yang diinduksi spirulina 12% dibandingkan dengan kelom- pok kontrol. Hal ini disebabkan karena spirulina me- ngandung Phycocyanin dan  β-karoten  yang  memi- liki  aktifitas  sebagai  antiinflamasi  dan  antioksidan.
Penelitian  secara  in  vitro  dan  di  vivo  model  eks- perimental  menggunakan  tikus  menunjukkan  hasil bahwa phycyocyanin memberikan efek penghambatan TNF-α  dan  berperan  sebagai  antioksidan . 10 Sitokin TNF-α  menstimulus  inflamasi  dengan  merangsang fagosit  mononuklear  untuk  mensekresi  sitokin  IL- 1β.  Sitokin  IL-1β  bersama  dengan  TNF-α  meng- gerakkan neutrofil dan monosit ke tempat inflamasi untuk menyingkirkan antigen atau stimulus terjadi- nya inflamasi, merangsang fagosit mononuklear un- tuk  mensekresi  IL-1β. 11 Penurunan  mediator  pro- inflamasi mengakibatkan pembentukan dan aktivitas osteoklast terhambat sehingga osteoblast melakukan proliferasi dan diferensiasi untuk menjadi osteoblast yang  matur  sehingga  jumlah  osteoblast  meningkat dan kepadatan tulang akan meningkat pula. 12 Kelom- pok I (spirulina 12%) terbukti efektif pada variabel kolagen dilihat dari hasil yang menunjukkan persen- tase kepadatan kolagen yang lebih tinggi dibanding- kan dengan kelompok control (Gambar 2). Kelom- pok I pada penelitian ini dapat membuktikan bahwa spirulina  efektif  dalam  mengurangi  inflamasi  yang terjadi pada luka pasca ekstraksi gigi yang ditunjuk- kan dengan adanya perbedaan signifikan data jum- lah rerata sel osteoblast  yang lebih tinggi  pada  ke- lompok I dibandingkan kelompok kontrol (Gambar 3). Sitokin proinflamatori yang melibatkan sekresi TNF- α  dan  IL-1β    dapat  berperan  langsung  dalam  me- nurunkan  tingkat  RUNX2  pada  diferensiasi  osteo- blas  yang dihasilkan stem cell mesenchymal  multi- potent sehingga  produksi  kolagen  bisa  menurun. Dengan adanya aktifitas antiinflamasi dari spirulina maka sekresi TNF-α dan IL-1β akan menurun dan ti- dak menghambat RUNX2 dalam memproduksi mat- riks protein tulang sehingga dapat mensintesa kola- gen  lebih  banyak. 13,14 Antioksidan  yang  dikandung spirulina  mampu  menekan  efek  destruktif  oksidan radikal pada sistem seluruh tubuh dan meningkatkan penyembuhan kerusakan tulang karena ketika terjadi
kerusakan tulang, radikal bebas yang dihasilkan oleh jaringan  rusak  akan  menimbulkan  kerusakan  kola- gen tulang lebih lanjut. 15
Kandungan spirulina bermanfaat lainnya dalam akti- vitas inflamasi adalah flavonoid. Senyawa aktif yang dapat menurunkan kadar NF – kB adalah flavonoid. 16 Flavonoid  juga  akan  menghambat  lipopolisakarida (LPS)  yang  menstimulasi  NF-kB  dengan  induksi fosforilasi IkB pada makrofag. Setelah penghambat- an Nf – kB maka mediator proinflamasi seperti IL – 6 juga ikut menurun. 17 IL–6 berpotensi sebagai stimulator diferensiasi  osteoklas,  resorpsi  tulang  dan  meng- hambat  osteogenesis  yang  menyebabkan  penurun- an  jumlah  osteoblas. 18 Pada  penelitian  ini  ter-bukti bahwa kelompok I (spirulina 12%) dapat me-nurun- kan jumlah osteoklas dilihat dari hasil jumlah rerata sel osteoklas yang lebih rendah dibandingkan dengan kelompok kontrol.
Hasil analisis statistik pada penelitian kelompok II dengan diisi kitosan 20% dibandingkan dengan kelom- pok  kontrol  menunjukkan  adanya  peningkatan  ke- padatan kolagen, peningkatan jumlah osteoblast ser- ta penurunan jumlah sel osteoklas. Hasil tersebut me- nunjukkan bahwa kitosan 20% lebih efektif dibanding- kan dengan kelompok kontrol. Hidaka et al.  melapor- kan bahwa kitosan dengan derajat deasetilasi antara 65 dan 80% dapat meredakan reaksi inflamasi dengan cara  pembentukan  jaringan  granulasi  dan  osteoge- nesis. 19 Howling et al. juga melaporkan bahwa ada hubungan  antara  derajat  deasetilasi  kitosan  dengan proliferasi  fibroblas  yaitu  kitosan  dengan  derajat deasetilasi yang tinggi (sekitar 89%) dapat merang- sang aktivitas proliferasi fibroblas dan menurun aktivi- tasnya  jika  derajat  deasetilasi  lebih  rendah. 16,20 Pe- nelitian  ini  menggunakan  kitosan  dengan  derajat asetilasi 75%-85% yang cukup mampu meningkat- kan aktivitas proliferasi fibroblast yang bertanggung jawab dalam memproduksi kolagen sehingga dapat meningkatkan  persentase  kepadatan  kolagen.  Kito- san terbukti mampu merangsang perakitan serat ko- lagen pada matriks ekstraseluler di daerah luka 21 se- hingga  kelompok  II  (kitosan  20%)  terbukti  efektif pada  variabel  kolagen  dilihat  dari  hasil  yang  me- nunjukkan persentase kepadatan kolagen yang lebih tinggi dibandingkan dengan kelompok kontrol. (Gam- bar 2)
Kitosan mengandung gugus N–acetylglucosamine yang dapat mengikat fibroblast growth factor-2 (FGF2) yang dihasilkan oleh makrofag. FGF2 akan merang- sang  proses  proliferasi  osteoblas  dan  sintesis  tu- lang. 16 Menurut Aranaz derajat deasetilasi (DD) yang cukup untuk dapat meredakan inflamasi adalah an- tara  75%-85%. 22 Kitosan  dengan  DD  yang  rendah cenderung  terdegradasi  lebih  cepat.  Hal  ini  mem- buktikan bahwa kitosan yang digunakan dalam pe-
nelitian ini menunjukkan biokompatibilitas yang baik dan efek positif meredakan inflamasi dan dapat me- ningkatkan jumlah osteoblast pada soket pasca eks- traksi gigi marmot Cavia cobaya hari ke-14.
Kitosan  merupakan  polisakarida  yang  terdiri  atas glukosamin yang mempunyai sifat osteokonduktif se- hingga  dapat  merangsang  pembentukan  osteoblast dan menurunkan aktifitas osteoklas dengan cara meng- hambat aktifitas  IL-6. 18 Pada penelitian ini terbukti bahwa kelompok II (kitosan 20%) efektif dilihat dari jumlah osteoklas yang menurun.
Hasil analisis statistik pada penelitian kelompok III dengan diisi spirulina 12% kitosan 20% menunjuk- kan adanya perbedaan yang signifikan terhadap per- sentase  kepadatan  kolagen,  jumlah  osteoblast,  dan jumlah osteoklas dibndingkan dengan seluruh kelom- pok. Kelompok III paling efektif dibandingkan kelom- pok  lain  dalam  mempercepat  penyembuhan  luka. Hal ini dikarenakan kandungan spirulina yang kom- pleks sehingga dapat mempercepat proses pengurang- an  respon  inflamasi  dan  proses  penyembuhan  luka kemudian dikombinasikan dengan kitosan yang me- miliki biokompatibilitas yang baik serta efek positif untuk meningkatkan jumlah sel osteoblast serta ko- lagen pada soket pasca ekstraksi gigi marmot Cavia cobaya hari  ke-14.Dosis  tunggal  kitosan  memiliki kerugian  jika  digunakan  sebagai pendukung  dalam tissue  engineering karena  membran  kitosan  sangat kaku dan rapuh sehingga kitosan memiliki ketahan- an mekanik yang rendah. Kitosan membutuhkan cross- linking  agents sebagai  kelompok  reaktif  fungsional yang memungkinkan untuk membuat jembatan ran- tai polimerik sehingga dapat mengoptimalkan ketahan- an  dan  elastisitas  kitosan  agar  mendapatkan  bio- kompatibilias yang baik 23 Kombinasi kitosan dengan biomaterial  lain  juga  dapat  memiliki  efek  sinergis pada  adhesi  sel,  diferensiasi  sel  dan  pembentukan matriks  ekstraseluler. 8 Pada  penelitian  ini  terbukti bahwa kelompok III paling efektif pada semua va- riabel  yaitu  dilihat  dari  hasil  variabel  kolagen  dan osteoblast yang jumlahnya meningkat serta variabel osteoklas yang jumlahnya menurun (Gambar 4). Dari  hasil  keempat  kelompok  yang  telah  diteliti biomaterial yang paling efektif dan berpotensi pada soket  pasca  ekstraksi  gigi  hari  ke-14  terhadap  per- sentase kepadatan kolagen, jumlah osteoblast dan jum- lah osteoklas adalah kelompok III dengan pemberi- an  gel  kombinasi  spirulina  12%  dan  kitosan  20%. Dosis gel kombinasi spirulina 12% dan kitosan 20% lebih  efektif  mempercepat  penyembuhan  luka  jika dibandingkan dengan kelompok yang lainnya.
Hasil penelitian  yang telah dilakukan induksi de- ngan  spirulina  12%,  kitosan  20%  dan  kombinasi spirulina  12%  kitosan  20%  didapatkan  hasil  pem- berian biomaterial kombinasi spirulina 12% kitosan
Salim: Efek kombinasi spirulina kitosan untuk preservasisoket terhadap  osteoblas, osteoklas dan kepadatan kolagen
20%  yang  diisikan  pada  soket  gigi Cavia  cobaya merupakan yang paling efektif sebagai bahan antiin- flamasi  untuk  mempercepat  proses  penyembuhan tulang alveolar, sedangkan pada pemberian kitosan 20%  kurang  efektif untuk mempercepat proses pe- nyembuhan tulang alveolar.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian ini dapat terlaksana dengan dana hibah Kolaborasi Dosen Mahasiswa Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Airlangga Surabaya

## Daftar Pustaka
1. Loekman  M. Teknik dasar pencabutan  gigi. Jurnal Ilmiah  dan  Teknologi  Kedokteran  Gigi  2006;  3: 82-84.
2. RISKESDAS  Riset  Kesehatan  Dasar.  Jakarta: Badan  Penelitian  dan  Pengembangan  Kesehatan, Departemen Kesehatan, Republik Indonesia 2007.
3. Brian Krans. Bone Graft. Healthline: Medically Re- viewed.  2012.  Available  at  http://www.  Health- line.com/health/  bone-graft#Risks3.  Accessed  on  6 April 2015.
4. Kabinawa  INK.  Spirulina:  Ganggang  penggempur aneka penyakit. Jakarta: Agro Media. 2006; 6-23.
5. Spirel. Benefits – Why Take Spirulina?. Available at http: //www.spirel.co.uk/benefits.asp.2012.Accessed on 6 April 2015.
6. Morais, de MG, Vaz B da S, Morais EG de, Costa JAV.  Biological  effects  of  spirulina  (arthrospira) biopolymers  and  biomass  in  the  development  of nanostructured  scaffolds.  Hindawi  Publishing  Cor- poration. BioMed Research International. 2014; 4-5.
7. Ardakani FE, Azam AN, Yassael S, Fatehi F, Rouhi G. Effects of chitosan on dental bone repair. SciRes. 2011; (4): 200-205.
8. Griffon  DJ,  Abulencia  J,  Ragetly  GR,  Fredericks LP, Chaieb SA Comparative study of seeding tech- niques  and  three-dimensional  matrices  for  me- senchymal  cells  attachment.  J  Tissue  Eng  Regen Med in Press. 2010; 169-179.
9. Rostiny,  Kuntjoro  M,  Sitalaksmi  MR,  Salim  S. Spirulina chitosan grl induction on healing process of cavia cobaya post extraction socket. Dent J. 2014; 47(1): 19-24.
10. Steiner, Gene G. The healing socket and socket re- generation.  Compend  Contin  Educ  Dent.  2008; 29(2): 114-6.
11. Sirois M. Principle  and  practice of veterinary  tech-
nology. St. Louis, Mo.: Mosby. 2004; 120.
12. Klopfleisch  R.  Multiparametric  and  semiquantita- tive  scoring  systems  for  the  evaluation  of  mouse model.  Histopathology  -  a  systematic  review.  Ve- terinary Research. 2013; 9: 123.
13. Ding J, Ghail O, Lencel P, Broux O, Chauveau C, Devedjian JC, et al. TNF-α and IL-1β inhibit RUNX2 and collagen expression but increase alkaline phos- phatase  activity  and  mineralization  in  human  me- senchymal stem cells. Life Sciences.2009; 84: 499– 504.
14. Neve A, Corrado A, Cantatore FP. Osteoblast phy- siology in normal and pathological conditions. Cell Tissue Res. Springer-Verlag. 2010; 1.
15. Sheweita,  Khoskhal  SAKI.  Calcium  metabolism and  oxidative  stress  in  bone  fractures:  Role  of antioxidants.  Current  Drug  Metabolism.  2007;  8: 519-25.
16. Howling GI, Dettmar PW, Goddard PA, Hampson F,  Dornish  M,  Wood  EJ.  The  effect  of  chitin  and chitosan on theproliferation of human skin fibroblast and  keratinocytes  in  vitro  biomaterials.  2001;  22: 2959-66.
17. Rizeki MF, Fatmawati H, Wulandari P. Efek pem- berian  ekstrak  buah  pare  (momordica  charantia) terhadap kadar NF – kB (nuclear factor kappa beta) pada tikus wistar (rattus norvegicus) yang diberi diet aterogenik.  Jember:  Artikel Ilmiah  Hasil Penelitian Mahasiswa. 2012; 1- 4
18. Triskayanti W. Peranan sitokin pada proses destruk- si jaringan periodonsium. Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Sumatera Utara. 2010; 1- 20.
19. Hidaka  Y,  Ito  M,  Mori  K,  Yagasaki  H,  Kafrawy AH.  Histopathological  and  immunohistochemical studied  of  membranes  of  deacetylated  chitin  deri- vatives  implanted  over  rat  calvaria.  J.  Biomed. Mater. Res. 1999; 46: 418-423.
20. Azuma  K, Izumi R, Osaki T, Ifuku, Morimoto M, Saimoto H, et al. Chitin, chitosan, and its derivatives for  wound  healing:  Old  and  New  Materials.  J. Funct. Biomater. 2015; 6: 108.
21. El  SAO,  El  GTA,  Abd  EGTI.  The  effect  of  me- senchymal  stem  cells  and  chitosan  gel  on  full thickness  skin  wound  healing  in  albino  rats: Histo- logical, Immunohistochemical and Fluorescent Study. PLoS ONE. 2015: 10(9), 2.
22. Aranaz I, Mengíbar M, Harris R, Paños I, Miralles B,  Acosta  N,  et  al.  Characterization  of  chitin  and chitosan. Curr. Chem. Biol.2009; 3: 203-230.
23. Vazquez MR, Ruiz VB, Zuniga RR, Koppel DAS, Olvera  LFQ.  Chitosan  and  Its  potential  use  as  a scaffold  for  tissue  engineering  in  regenerative  me- dicine. Hindawi Publishing Corporation. 2015: 5.