## EFEKTIVITAS JENIS ADSORBEN PADA PEMURNIAN BERTINGKAT MINYAK MATA TUNA KAYA DHA

## Silva Fauziah, Wini Trilaksani*, Tati Nurhayati
Departemen Teknologi Hasil Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, IPB University Jalan Agatis, Kampus IPB Dramaga Bogor, Indonesia 16680
Diterima: 18 Juli 2023/Disetujui: 15 Januari 2024 *Korespondensi: wtrilaksani@apps.ipb.ac.id
Cara sitasi (APA Style 7 th ) : Fauziah, S., Trilaksani, W., & Nurhayati, T. (2024). Efektivitas jenis adsorben pada pemurnian bertingkat minyak mata tuna kaya DHA. Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia, 27(1), 75-88. http://dx.doi.org/10.17844/jphpi.v27i1.48865

## Abstrak
Docosahexaenoic acid (DHA), merupakan asam lemak omega-3 pada minyak ikan yang berperan penting dalam perkembangan otak dan retina. Minyak ikan kaya DHA belum diproduksi secara massal di Indonesia. Mata tuna yang menjadi hasil samping industri perikanan dapat menjadi sumber potensial DHA dan eicosapentaenoic acid (EPA). Minyak mata tuna dengan karakteristik tinggi DHA dan polyunsaturated fatty acid (PUFA) rentan mengalami oksidasi, sehingga proses pemurnian perlu dilakukan untuk menghilangkan pengotor penyebab oksidasi. Penelitian ini bertujuan untuk menentukan perlakuan pemurnian terbaik melalui parameter mutu minyak ikan guna menghasilkan minyak mata tuna dengan penurunan pengotor yang maksimal. Minyak mata tuna diperoleh melalui ekstraksi secara sentrifugasi. Minyak yang dihasilkan selanjutnya dimurnikan dengan beberapa tingkatan perlakuan permurnian, yaitu netralisasi (N1), netralisasi bleaching (N1B1), netralisasi bleaching netralisasi (N1B1N2), dan netralisasi bleaching netralisasi bleaching (N1B1N2B2). Pemurnian menggunakan jenis adsorben yang berbeda, yakni alumina aktif 8%, arang aktif 10%, dan magnesol XL 5%. Parameter yang dianalisis meliputi asam lemak bebas (FFA), bilangan asam, bilangan peroksida, anisidin, dan total oksidasi (TOTOX). Hasil penelitian menunjukkan bahwa perbedaan jenis adsorben dan perbedaan tingkat ekstraksi berpengaruh secara nyata ( p <0,05) terhadap bilangan peroksida, bilangan anisidin, total oksidasi, asam lemak bebas dan bilangan asam. Perlakuan dengan tingkat pemurnian N1B1N2B2 dengan adsorben magnesol XL 5% merupakan perlakuan terbaik. Proses pemurnian menghasilkan penurunan paramater oksidasi mencapai 50-80% meskipun minyak yang dihasilkan masih belum sesuai standar.
Kata kunci: bleaching , netralisasi, pengotor, total oksidasi

## Effectiveness of Adsorbent Type on Graded Purification of DHA-Rich Tuna Eye Oil
Abstract
Docosahexaenoic acid (DHA), an omega-3 fatty acid in fish oil, plays a crucial role in brain and retina development. Despite the importance of DHA-rich fish oil, mass production remains limited in Indonesia. However, tuna eye, an industrial by-product, shows promise as a potential source of eicosapentaenoic acid (EPA) and DHA. Notably, high DHA and polyunsaturated fatty acid PUFA in tuna eye oil are prone to oxidation. To address this, double purification (neutralization, bleaching) using different adsorbents (activated alumina, activated charcoal, magnesol XL) reduces oxidation, meeting oil standards. This research aims to determine the best purification treatment through the quality parameters of fish oil to produce tuna eye oil with maximum impurity reduction. The fish oil was obtained by centrifugation process, then it was purified with several treatment level namely, neutralization (N1), neutralization, bleaching (N1B1), neutralization, bleaching, neutralization (N1B1N2), and neutralization, bleaching, neutralization, bleaching (N1B1N2B2). Several types for adsorbent was used for purification process namely 8% activated alumina, 10% activated charcoal, and 5% magnesol XL. Parameters examined include free fatty acids (FFA), acid number, peroxide value, anisidin, and total oxidation (TOTOX). The best treatment resulted was the purification level of N1B1N2B2 with 5% magnesol XL adsorbent. The results indicate significant effects
Available online: journal.ipb.ac.id/index.php/jphpi
Efektivitas jenis adsorben pada pemurnian bertingkat, Fauziah et al.
(p<0.05) of adsorbents and extraction levels on oxidation numbers (peroxide, anisidine, free fatty acid and acid value. The refining process yields oil with reduced oxidation parameters, though exceeding the standard, it lowers impurities by 50-80% of initial values.
Keywords: bleaching, impurity, neutralization, total oxidation PENDAHULUAN
Minyak ikan telah lama digunakan sebagai suplemen makanan karena kandungan omega-3, terutama eicosapentaenoic acid
(EPA) dan docosahexaenoic acid (DHA).
Docosahexaenoic acid (DHA) merupakan asam lemak yang berperan penting dalam perkembangan otak dan retina janin (Lauritzen et al ., 2016). Aplikasi DHA pada berbagai produk telah dilakukan, yaitu pada kukis (Riyanto et al ., 2021), bubur (Riyanto et al ., 2020), biskuit (Ilza & Karnila 2021) dan menjadi solusi dalam penerapan diet sehat ibu hamil. Minyak ikan kaya DHA di Indonesia saat ini belum diproduksi secara massal. Indonesia mengimpor minyak ikan pada tahun 2021 mencapai 9.124.579 kg (KKP, 2021). Mata tuna berpotensi menjadi minyak ikan karena mengandung EPA 7,07% dan DHA 36,72% (Renuka et al. , 2016), serta EPA 6,19% dan DHA 34,96% (Trilaksani et al. , 2020). Hal tersebut menjadi peluang dalam membantu pemerintah memenuhi kebutuhan DHA secara domestik dan mengurangi ketergantungan impor. Minyak mata tuna maupun minyak ikan pada umumnya mengandung komponen pengotor nonlipid, yaitu asam amino, asam lemak bebas (FFA), dan air yang dapat menurunkan kualitasnya. Minyak mata tuna yang mengandung PUFA, salah satunya DHA lebih rentan mengalami oksidasi (Damodaran & Parkin, 2017). Trilaksani et al . (2021) melaporkan ekstraksi minyak mata tuna menghasilkan nilai oksidasi tinggi yang melebihi standar, bilangan peroksida 121,43±0,62 meq/kg (standar maksimum 5 meq/kg), bilangan anisidin 104,55±1,41 meq/kg (standar maksimum 20 meq/kg), dan total oksidasi (TOTOX) 516,45±0,31 meq/ kg (standar maksimum 26 meq/kg). Upaya peningkatan mutu minyak mata tuna perlu dilakukan, dan pemurnian menjadi solusi dalam mengatasi hal tersebut.
Proses pemurnian minyak ikan umumnya melibatkan degumming , netralisasi,
bleaching , dan deodorisasi (Jacobsen et al. , 2013). Pemurnian secara bertahap dapat digunakan untuk minyak ikan dengan tingkat oksidasi tinggi yang tidak dapat dimurnikan dalam satu proses, misalnya minyak mata tuna. Netralisasi digunakan untuk menghilangkan asam lemak bebas (FFA) dan fosfolipid, sedangkan bleaching digunakan untuk menghilangkan komponen pengotor, misalnya protein, air, materi berwarna, dan pigmen (García-Moreno et al. , 2013; Monte et al. , 2015). Adsorben alumina aktif, arang aktif,
dan magnesol XL telah banyak digunakan dalam industri untuk memurnikan minyak nabati karena harganya yang terjangkau dan efektivitasnya dalam menghilangkan komponen warna (Icyer & Durak, 2018; Wang et al ., 2021). Wang et al . (2021) dalam penelitiannya menunjukkan kondisi bleaching optimum adalah minyak ikan dengan alumina aktif 8% pada suhu 80°C selama 40 menit dengan hasil terjadi peningkatan kandungan PUFA sebesar 5,64%. Riset terkait aplikasi adsorben karbon aktif pada proses bleaching sampel limbah minyak ikan dengan perbedaan konsentrasi arang aktif menunjukkan pengaruh yang berbeda nyata (p<0,05) terhadap kadar asam lemak bebas dan bilangan peroksida, dengan perlakuan terbaiknya 2% arang aktif (Nadia et al ., 2020).
Suseno e t al. (2016) dalam risetnya tentang pemurnian minyak ikan hasil penepungan menggunakan magnesol 5% suhu 50°C, dilanjutkan dengan penyaringan filtrasi ( passive filter ) berbagai ukuran (5 µm, 3 µm, dan 1 µm), menunjukkan kadar oksidasi primer dan sekunder cenderung menurun seiring tingkat pemurnian dengan kualitas akhir asam lemak bebas sebesar 0,67%, bilangan peroksida 0,87 meq/kg, bilangan p-anisidin 3,66 meq/kg, dan TOTOX 5,48 meq/kg.
Riset pemurnian minyak telah banyak dilakukan dengan perbedaan model pemurnian, jenis adsorben hingga konsentrasi
dan suhu, namun untuk pemurnian mata tuna belum dilaporkan. Hasil penelitian Salsabila (2023) menunjukkan bahwa pemurnian bertingkat netralisasi- bleaching -netralisasi- bleaching (NBNB) dengan magnesol 5% mampu mengeliminasi pengotor (peroksida) hingga 44,10%. Berdasarkan hal tersebut penelitian ini bertujuan untuk menentukan perlakuan pemurnian terbaik melalui parameter mutu minyak ikan guna menghasilkan minyak mata tuna dengan penurunan pengotor yang maksimal.
BAHAN DAN METODE Preparasi dan Ekstraksi Minyak Mata Tuna (Fernández-Lucas et al .,  2017; Trilaksani et al ., 2021; Wang et al. , 2021) Mata tuna ( Thunnus sp.) by-product industri tuna Bitung, Sulawesi Utara dan telah disimpan selama 2 tahun di suhu beku. Thawing mata tuna dilakukan dengan menaruh mata di suhu chilling (4 o C) selama 12 jam. Mata tuna dipreparasi dan diambil bagian daging/otot-nya kemudian dilumatkan menjadi bubur dengan blender selama 3 menit. Bubur yang dihasilkan kemudian diekstraksi secara sentrifugasi (11.200 g, 30 menit, suhu 4 o C). Minyak yang dihasilkan dipisahkan dari komponen lainnya yang berupa cairan dan padatan.  Cairan dan padatan dicampur kembali lalu diekstraksi enzimatik menggunakan enzim papain komersil (200.000 U/g, Rainwood, China) konsentrasi 1% (b/b). Campuran diinkubasi dalam waterbath shaker (150 rpm, 60 o C, 1 jam), kemudian disentrifugasi kembali.
Minyak hasil ekstraksi diambil dan disatukan dengan rendemen hasil sentrifugasi pertama. Analisis yang dilakukan meliputi kenampakan visual dengan kamera (Iphone 6), proporsi mata (ukuran dan bobot mata), analisis kesegaran mengacu SNI 2729:2013 tentang spesifikasi kenampakan mata ikan segar. Analisis proksimat, mengacu metode
AOAC 2005. Determinasi profil minyak mata ikan tuna melibatkan penilaian visual minyak ikan menggunakan kamera telpon seluler pintar (Iphone 6, Apple inc.).
Pemurnian Minyak Mata Tuna (Suseno et al ., 2016)
Minyak hasil ekstraksi kemudian dimurnikan mengacu metode Suseno et al . (2016) dengan perbedaan pada tingkatan pemurniannya. Pemurnian dilakukan dengan 4 tingkat, yakni netralisasi (N1); netralisasi, bleaching (N1B1); netralisasi, bleaching , netralisasi (N1B1N2); dan netralisasi, bleaching , netralisasi, bleaching (N1B1N2B2). Setiap tingkatan pemurnian bleaching menggunakan jenis adosorben yang berbeda, yakni alumina aktif 8%, arang aktif 10%, dan magnesol XL 5%.
Pemurnian minyak mata tuna diawali dengan tahap netralisasi (N1). Minyak ikan dipanaskan pada suhu 60 o C. NaOH 16 o Be kemudian ditambahkan ke dalam minyak dan diaduk selama 10 menit dengan magnetic stirrer , minyak disaring dengan sentrifugasi (10 menit, 16.800 g, suhu 10 o C). Tahap selanjutnya proses bleaching (N1B1) menggunakan tiga jenis adsorben, yakni alumina aktif 8% (b/v)
(Wang et al. , 2021) disimbolkan dengan huruf “a”; arang aktif 10% (b/v) (García-Moreno et al ., 2013) disimbolkan dengan huruf “b”, dan magnesol XL 5% (b/v) (Suseno et al. ,
2016) disimbolkan dengan huruf “c”. Minyak dan adsorben dicampur secara kontinyu menggunakan magnetic stirrer (10 menit,
60 o C) kemudian disentrifugasi (10 menit, 16.800 g, 10 o C). Proses pemurnian berlanjut dengan tahap netralisasi 2 (N1B1N2) dan bleaching 2 (N1B1N2B2) yang sama seperti sebelumnya. Minyak kemudian diuji kualitasnya di setiap tahapan pemurnian (N1, N1B1, N1B1N2, N1B1N2B2) meliputi bilangan peroksida (AOAC, 2005 No. Ca 5a- 40), asam lemak bebas (AOCS, 1998), bilangan anisidin (IUPAC 1987 No.2504), dan total oksidasi (TOTOX) (AOCS, 1997) pada setiap tahapan pemurniannya. Prosedur penelitian dapat dilihat pada Figure 1.
Asam Lemak Bebas (FFA) dan Bilangan Asam (AOCS 1998) Sampel minyak 10 g dicampur dengan 25 mL alkohol 95% netral dalam labu Erlenmeyer 250 mL, dipanaskan hingga mendidih, ditetesi dengan 2 mL indikator
Efektivitas jenis adsorben pada pemurnian bertingkat, Fauziah et al.
Tuna eye Preparation & centrifugation (30 minutes, 4oC, 10.000 rpm) Sludge protein Tuna eye oil Enzymatic extraction (1% papain b/v) Tuna eye oil Netralization I (NaOH 16°Be, 60°C, 10 minutes)
Netralization I (NaOH 16°Be, 60°C, 10 minutes) Netralization I (NaOH 16°Be, 60°C, 10 minutes) Bleaching I (Activated alumina 8%, 60°C, 10 minutes) Bleaching I (Activated charcoal 10% 60°C, 10 minutes) Bleaching I (Magnesol XL5%, 60°C, 10 minutes) Netralization II (NaOH 16°Be, 60°C, 10 minutes) Netralization II (NaOH 16°Be, 60°C, 10 minutes) Bleaching I (Magnesol XL5%, 60°C, 10 minutes) Bleaching II (Activated alumina 8%, 60°C, 10  minutes) Bleaching II (Activated charcoal 10% 60°C, 10 minutes) Bleaching II (Magnesol XL5%, 60°C, 10 minutes) Refine fish oil Figure 1 Tuna eye oil refining flow chart Gambar 1 Diagram alir pemurnian minyak mata tuna
PP, lalu dititrasi dengan KOH 0,1 N sampai muncul warna merah muda stabil (10 detik), rumus perhitungan:
Bilangan Peroksida (AOAC 2005 No. Metode Ca 5a-40) Sampel 2 g ditimbang dalam labu Erlenmeyer 250 mL, dicampur 30 mL larutan asam asetat (CH 3 COOH) dan kloroform
(CHCl 3 ) (3:2). Potassium iodida (KI) sebanyak 0,5 mL ditambah, kocok, lalu ditambah 30 mL akuades dan 0,5 mL larutan indikator kanji 1% hingga terbentuk warna awal biru kehitaman. Larutan tersebut dititrasi dengan 0,01 N sodium thiosulfat (Na 2 S 2 O 3 ) hingga warna putih. Rumus perhitungan:
Bilangan Anisidin (IUPAC 1987 No. 2.504)
Dua jenis larutan uji: 1) 0,5 g sampel dalam 25 mL isooktan, dan 2) campuran 1 mL larutan anisidin (2,5 g/L) ke dalam 5 mL larutan uji 1. Setelah diaduk dan dihindarkan dari cahaya, ukur absorbansi. Larutan uji 1 diukur pada 350 nm dengan isooktan sebagai kompensasi, dan larutan uji 2 diukur pada 350 nm setelah 10 menit, menggunakan larutan uji 2 sebagai kompensasi. Rumus perhitungan:
Total Oksidasi (TOTOX) (AOCS 1997) Analisis total oksidasi dilakukan dua kali dengan menambahkan nilai bilangan peroksida dan nilai anisidin dengan perhitungan sebagai berikut:
Analisis Data
Rancangan percobaan yang digunakan adalah rancangan acak lengkap (RAL) dengan faktor perlakuan metode pemurnian minyak (N1, N1B1a, N1B1b, N1B1c, N1B1N2a, N1B1N2b, N1B1N2c, N1B1N2B2a, N1B1N2B2b, N1B1N2B2c). Data diolah menggunakan Microsoft Excel dan Statistical Product and Service Solution (SPSS) versi 25. Analisis keragaman data menggunakan uji ANOVA single factor . Jika terdapat pengaruh yang signifikan ( p <0,05), dilakukan uji lanjut Duncan untuk melihat perbedaan yang signifikan antara perlakuan yang diberikan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Karakteristik Minyak Mata Tuna Rerata bobot mata tuna 85,24±4,27 g dan diameternya 5,65±0,49 cm. Bagian-bagian lain dari mata tuna memiliki rata-rata berikut: sklera 5,20±0,68 g; vitreous humor 23,73±5,48 g; dan lensa 2,73±0,53 g. Trilaksani et al . (2023) menggunakan mata tuna dengan spesifikasi bobot mata 126,25 g dan diameter 6,56 cm.
Organoleptik mata tuna dilakukan dengan mengamati ketampakan mata menggunakan panelis sebanyak 30 orang mengacu SNI 2729:2013 tentang ikan segar. Nilai yang diperoleh 4,23±1,57 dengan spesifikasi bentuk bola mata yang agak cekung, kornea yang keruh, pupil yang agak keabu-abuan, dan tidak mengilap.
Hasil proksimat menunjukkan bahwa kadar air merupakan komponen tertinggi dengan nilai 60,49±0,36%; abu 0,41±0,01%;
Nilai Peroksida (meq/kg) = S × M × 1.000 berat sampel (g)
Keterangan: S = jumlah sodium thiosulfat (mL) M = konsentrasi sodium thiosulfat (0,01)
Nilai FFA (%) = A × N × M
10 G
Bilangan asam = 2,19 × Nilai FFA
G
Keterangan: A = jumlah titrasi KOH (mL) B = normalitas KOH (0,1 N) G = gram contoh (g) M = bobot molekul asam lemak dominan
A2 = absorbansi larutan uji 2 m = massa sampel yang digunakan pada larutan uji 1
Nilai total oksidasi (meq/kg) = (2PV + anisidin)
Keterangan: PV = nilai bilangan peroksida anisidin = nilai anisidin
Nilai anisidin (meq/kg) =
25 × (1,2A1-A2) m
Keterangan: A1 = absorbansi larutan uji 1
Efektivitas jenis adsorben pada pemurnian bertingkat, Fauziah et al.
protein 13,32±0,33%; lemak 10,27±0,25%; dan karbohidrat 15,53±0,23%. Kadar lemak sangat penting, hal ini berkaitan dengan rendemen minyak yang dihasilkan. Semakin tinggi kadar lemak, maka minyak yang dihasilkan akan semakin banyak (Šimat et al ., 2019).
Trilaksani et al. (2021) melaporkan bahwa persentase kadar lemak mata tuna mencapai 18,44±0,39%. Trilaksani et al. (2019)and avoid deterioration and loss of EVFO functionality during extraction, formulation and storage of EVFO emulsion supplement. Research comprised extraction, characterization, and formulation of emulsions with addition of mangrove (Rhizophora mucronata menyatakan kadar lemak yang terdeteksi sebesar 18,04±0,58% serta Renuka et al . (2016) sebesar 12,04%. Kadar lemak yang terdeteksi pada penelitian ini lebih rendah dibandingkan penelitian sebelumnya. Perbedaan tersebut dikarenakan bobot daging mata yang dihasilkan sedikit yakni 85,24±4,27 g dan berbeda dengan penelitian Trilaksani et al . (2021) yang mencapai 90,63±5,02 g. Tingkat kehalusan bubur daging mata tuna ( extraocular muscle ) merupakan bagian yang krusial, semakin banyak bubur dan semakin halus tekstur maka rendemen minyak mata tuna akan semakin meningkat. Kadar lemak daging mata tuna tergolong ke dalam high fat fish karena persentase lemaknya yang lebih dari 8% (Mohanty et al ., 2016). Adapun kenampakan mata tuna secara visual dapat dilihat Figure 2 . Bagian otot/daging mata tuna yang telah diekstraksi secara enzimatis selanjutnya disentrifugasi untuk dipisahkan minyak dengan komponen lain. Hasilnya terdapat beberapa bagian yang dapat dilihat pada Figure
3 . Ghaly (2013) melaporkan bahwa minyak hasil ekstraksi enzimatis menghasilkan empat lapisan, yaitu lapisan pertama adalah minyak, diikuti oleh lapisan light lipid-protein , aqueous protein hydrolysate , dan sludge and heavy lipid protein . Pemisahan lapisan-lapisan tersebut terjadi karena perbedaan massa jenis pada masing-masing komponen. Minyak dengan bobot jenis paling rendah akan terpisah dan berada di bagian atas, sementara heavy lipid protein akan terdapat di bagian paling bawah. Ketampakan visual dari minyak mata tuna hasil pemisahan sentrifugal dapat dilihat pada
Figure 3 .

## Mutu Minyak Mata Tuna Hasil Pemurnian
Asam lemak bebas Asam lemak bebas (FFA) adalah asam karboksilat yang dilepaskan dari triasilgliserol akibat pemutusan ikatan ester oleh enzim lipase, suhu tinggi, dan kelembapan. Asam lemak bebas (FFA) terbentuk karena beberapa faktor, yakni kelembapan, suhu tinggi, dan terjadinya hidrolisis pada lipid. Asam lemak bebas (FFA) merupakan pro-oksidan minyak yang dapat mempercepat terjadinya dekomposisi hidroperoksida (oksidasi primer). Kandungan asam lemak bebas (FFA) yang tinggi dalam minyak dapat menyebabkan oksidasi lebih lanjut dan terbentuknya senyawa volatil yang mudah menguap serta menghasilkan rasa dan aroma tengik (Chew & Nyam, 2019). Adapun persentase asam lemak bebas minyak hasil pemurnian dapat dilihat pada Figure 4.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa terdapat perbedaan yang signifikan (p<0,05) antara netralisasi (N1) dengan
a                                                           b
humor); b.3 (extraocular muscles); b.4 (lens); b.5 (cornea)
Figure 2 Visual appearance of tuna eye; 1 (appearance of the tuna eye); b.1 (sclera); b.2 (vitreous
Gambar 2 Ketampakan mata tuna; 1 (mata tuna utuh); b.1 (sklera); b.2 ( vitreous humor ); b.3
(otot ekstraokuler); b.4 (lensa); b.5 (kornea) 1 2 1 3 5

## Bilangan asam
Bilangan asam adalah jumlah miligram kalium hidroksida yang diperlukan untuk menetralkan asam lemak bebas (FFA) dalam minyak atau lemak. Bilangan asam dan asam lemak bebas merupakan dua hal yang saling terkait (García-Moreno et al. , 2013). Bilangan asam yang tinggi mengindikasikan kualitas minyak yang rendah. Bilangan asam minyak mata tuna hasil pemurnian dapat dilihat pada Figure 5 . Hasil penelitian menunjukkan bilangan asam sebelum pemurnian telah memenuhi
N1B1N2B2 dalam nilai asam lemak bebas (FFA) ( Figure 4 ).  Perlakuan pemurnian N1B1N2B2 menggunakan adsorben magnesol XL menghasilkan penurunan tertinggi mencapai 83% dengan nilai asam lemak bebas (FFA) sebesar 0,34±0,07%.. Hal ini sesuai dengan penelitian Suseno et al . (2016)
yang memurnikan minyak hasil samping penepungan sardine dengan netralisasi dan bleaching , hasilnya menunjukkan bahwa netralisasi sekali sudah dapat menurunkan asam lemak bebas (FFA) secara signifikan sebesar 69,02%.
A B C D C: aqueous protein hydrolysate; D: sludge and heavy lipid protein
Figure 3 Visual appearance of centrifuged tuna eye oil; A: oil layer; B: light lipid-protein
Gambar 3 Ketampakan minyak mata tuna hasil sentrifugasi; A: lapisan minyak; B: light lipid- protein; C: aqueous protein hydrolysate ; D: sludge and heavy lipid protein
1+bleaching 1); N1B1N2 (neutralization 1+bleaching 1+neutralization 2); N1B1N2B2 (neutralization 1+bleaching 1+neutralization 2+bleaching 2); ( ) activated alumina adsorbent); ( ) activated charcoal adsorbent; ( ) magnesol XL adsorbent; Different superscript letters are significantly different ( p <0,05)
Figure 4 Free fatty acids of refined tuna eye oil; N1 (neutralization 1); N1B1 (neutralization
Gambar 4 Asam lemak bebas minyak mata tuna hasil pemurnian. N1 (netralisasi 1); N1B1 (netralisasi 1+ bleaching 1); N1B1N2 (netralisasi 1+ bleaching 1+ netralisasi 2);
N1B1N2B2 (netralisasi 1+ bleaching 1+ netralisasi 2+ bleaching 2); ( ) adsorben alumina aktif; ( ) adsorben karbon aktif; ( ) adsorben magnesol XL; Huruf superskrip yang berbeda menandakan nilai yang berbeda nyata ( p <0,05)
Efektivitas jenis adsorben pada pemurnian bertingkat, Fauziah et al.
standar Codex 329-2017 tentang fish oil standard (<3 KOH/g). Figure 4 menunjukkan penurunan bilangan asam tertinggi tercatat pada perlakuan N1B1N2B2 menggunakan adsorben magnesol sebesar 82,77% dan bilangan asam 0,36±0,08 KOH/g. Perbedaan tingkatan pemurnian menghasilkan perbedaan yang signifikan (p<0,05) antara netralisasi (N1) dengan N1B1N2B2 terhadap bilangan asam. Bilangan asam merupakan ukuran jumlah asam lemak bebas dan dihitung berdasarkan berat molekul asam lemak atau campuran asam lemak. Nilai asam tersebut sejalan dengan kandungan asam lemak bebas. Nilai asam akan lebih tinggi seiring dengan persentase asam lemak bebas dalam minyak (Suseno et al ., 2017).
Bilangan peroksida Bilangan peroksida adalah indikator primer oksidasi pada minyak. Tingkat oksidasi merupakan parameter kualitas minyak ikan. Semakin tinggi tingkat oksidasi maka kualitas minyak ikan semakin rendah. Bilangan peroksida minyak hasil pemurnian dapat dilihat pada Figure 6 .
Figure 6 menunjukkan bahwa perbedaan tingkat ekstraksi, perbedaan jenis adsorben, dan interaksi faktor tingkat ekstraksi dengan jenis adsorben berpengaruh signifikan terhadap bilangan peroksida (p<0,05). Bilangan peroksida minyak pada netralisasi 1 (N1) sebesar 68,23±1,47 meq/ kg. Bilangan peroksida terendah dicapai pada perlakuan N1B1N2B2 menggunakan adsorben magnesol, yakni 27,98±1,74 meq/ kg dengan penurunannya sebesar 67,93%.
Hasil pemurnian meskipun terjadi penurunan bilangan peroksida yang signifikan, namun belum mencapai standar Codex 329- 2017 tentang fish oil standard (<5,0 meq/ kg). Kombinasi pemurnian netralisasi dan bleaching menggunakan magnesol juga menghasilkan bilangan peroksida terendah, yakni 1,08±0,08 meq/kg (Bija et al . 2017).  Hal ini kemungkinan disebabkan oleh kualitas awal minyak mata tuna yang sudah mengalami penurunan mutu akibat penyimpanan yang lama dan oksidasi berulang. Karakteristik minyak mata tuna yang didominasi oleh asam lemak tak jenuh majemuk (PUFA) dapat memengaruhi hasil pemurnian (Mazrouh, 1+bleaching 1); N1B1N2 (neutralization 1+bleaching 1+neutralization 2); N1B1N2B2 (neutralization 1+bleaching 1+neutralization 2+bleaching 2); ( ) activated alumina adsorbent); ( ) activated charcoal adsorbent; ( ) magnesol XL adsorbent; Different superscript letters are significantly different ( p <0,05)
Figure 5 Acid value of refined tuna eye oil; N1 (neutralization 1); N1B1 (neutralization
Gambar 5 Bilangan asam minyak mata tuna hasil pemurnian. N1 (netralisasi 1); N1B1 (netralisasi 1+ bleaching 1); N1B1N2 (netralisasi 1+ bleaching 1+ netralisasi 2);
N1B1N2B2 (netralisasi 1+ bleaching 1+ netralisasi 2+ bleaching 2); ( ) adsorben alumina aktif; ( ) adsorben karbon aktif; ( ) adsorben magnesol XL; Huruf superskrip yang berbeda menandakan nilai yang berbeda nyata ( p <0,05)
2015). Simat et al . (2019) menjelaskan bahwa faktor utama kemunduran mutu minyak ikan adalah persentase Omega-3 sehingga mempercepat proses lipolisis dan oksidasi pada minyak ikan.
Bilangan anisidin Bilangan anisidin adalah indikator oksidasi sekunder minyak. Anisidin akan bereaksi dengan aldehida menghasilkan warna kuning sehingga dapat membentuk kromogen yang dapat diukur nilai absorbansinya pada spektrofotometer dengan panjang gelombang 350 nm (Viau et al ., 2016). Adapun bilangan anisidin minyak mata tuna hasil pemurnian dapat dilihat pada Figure 7 . Bilangan anisidin minyak mata tuna pada perlakuan N1 50,11±2,13 meq/kg, terjadi penurunan sebesar 50,06% menjadi 32,01±0,77 meq/kg pada perlakuan N1B1N2 b. Penurunan bilangan anisidin berlanjut secara bertahap hingga mencapai nilai terendah sebesar 21,27±0,03 meq/kg pada perlakuan N1B1N2B2 menggunakan adsorben magnesol dengan penurunan total 66,81%, sedangkan untuk adsorben alumina aktif dan arang aktif masing-masing sebesar 56,85% dan 53,79%. Adsorben merupakan material atau zat kimia yang mampu menarik dan mengikat molekul atau partikel lain melalui proses yang disebut adsorpsi (Sun et al . 2019). Alumina aktif merupakan bentuk alumunium oksida berpori dengan afinitas kuat untuk menjerap molekul pengotor yang bersifat polar (air, bilangan peroksida) (Wang et al ., 2021). Arang aktif adalah bentuk karbon yang telah diproses untuk menghasilkan luas permukaan tinggi dan memiliki pori yang banyak dan berguna dalam menjerap komponen pewarna, bau, dan senyawa organik minyak ikan (Suseno et al ., 2016). Magnesol XL merupakan magnesium silikat yang biasanya diaplikasikan dalam industri makanan untuk menghilangkan asam lemak bebas (FFA), sabun dan kotoran polar (air, bilangan peroksida) minyak (Sun et al ., 2019). Hasil penelitian menunjukkan bahwa pemurnian minyak mata tuna menggunakan kombinasi tingkat ekstraksi dan jenis adsorben yang tepat mampu mengurangi kandungan bilangan anisidin secara signifikan. Hasil uji signifikansi (p<0,05) menunjukkan bahwa faktor perbedaan tingkat ekstraksi, perbedaan jenis adsorben, 1+bleaching 1); N1B1N2 (neutralization 1+bleaching 1+neutralization 2); N1B1N2B2 (neutralization 1+bleaching 1+neutralization 2+bleaching 2); ( ) activated alumina adsorbent); ( ) activated charcoal adsorbent; ( ) magnesol XL adsorbent; Different superscript letters are significantly different ( p <0,05)
Figure 6 Peroxide value of refined tuna eye oil; N1 (neutralization 1); N1B1 (neutralization
Gambar 6 Bilangan peroksida minyak mata tuna hasil pemurnian. N1 (netralisasi 1); N1B1 (netralisasi 1+ bleaching 1); N1B1N2 (netralisasi 1+ bleaching 1+ netralisasi 2);
N1B1N2B2 (netralisasi 1+ bleaching 1+ netralisasi 2+ bleaching 2); ( ) adsorben alumina aktif; ( ) adsorben karbon aktif; ( ) adsorben magnesol XL; Huruf superskrip yang berbeda menandakan nilai yang berbeda nyata ( p <0,05)
Efektivitas jenis adsorben pada pemurnian bertingkat, Fauziah et al.
dan interaksi antara kedua faktor tersebut berpengaruh secara signifikan terhadap bilangan anisidin. Tandewi & Hambali (2022) menyatakan bahwa pemurnian minyak hasil penepungan dengan perbedaan konsentrasi dan jenis adsorben berpengaruh secara nyata (p<0,05) terhadap nilai anisidin yang dihasilkan. Suseno et al . (2017) melaporkan bahwa pemurnian minyak sardine dengan perlakuan perbedaan konsentrasi magnesol menghasilkan perlakuan terbaik pada konsentrasi 5%, serta mampu mengelimisasi bilangan anisidin mencapai 77% dari nilai awal. Simat et al . (2019) menyatakan bahwa terdapat perbedaan yang signifikan antar tingkatan pemurnian by product dan hati minyak tuna. Kandungan asam lemak tak jenuh yang tinggi memengaruhi peningkatan nilai anisidin dalam minyak ikan yang bereaksi terhadap oksigen, cahaya dan panas selama proses pemurnian, penyimpanan dan pengujian, serta membentuk aldehida, keton dan turunannya (Tandewi & Hambali 2022). Nilai anisidin tidak selalu berbanding lurus dengan tingginya bilangan peroksida yang diperoleh. Jumlah peroksida yang tinggi akan menyebabkan jumlah anisidin yang tinggi
jika proses yang diberikan memungkinkan degradasi lebih lanjut (Viau et al ., 2016).
Total oksidasi (TOTOX) Total oksidasi (TOTOX) merupakan gabungan oksidasi primer dan sekunder pada minyak. Nilai TOTOX didapatkan dari penjumlahan dua kali nilai peroksida dengan bilangan peroksida (Bekdes et al ., 2022). Total oksidasi hasil pemurnian minyak mata tuna dapat dilihat pada Figure 8 .
Berdasarkan Figure 8 nilai TOTOX minyak mata tuna pada N1 adalah 186±4,80 meq/kg kemudian menurun dan terendah 79,60±1,70 meq/kg pada perlakuan N1B1N2B2 dengan adsorben magnesol dan alumina aktif. Simat et al . (2019) menyatakan bahwa pemurnian minyak dari by-product dan hati tuna menggunakan berbagai metode ( degumming , netralisasi, kemudian bleaching ) terjadi penurunan TOTOX yang signifikan (p<0,05) pada setiap tahapan pemurniannya. Wang et al . (2021) menyatakan bahwa perbedaan jenis adsorben memengaruhi kualitas minyak yang dihasilkan. Magnesol XL merupakan salah satu adsorben yang telah terbukti efektif di antara adsorben lain
1+bleaching 1); N1B1N2 (neutralization 1+bleaching 1+neutralization 2); N1B1N2B2 (neutralization 1+bleaching 1+neutralization 2+bleaching 2); ( ) activated alumina adsorbent); ( ) activated charcoal adsorbent; ( ) magnesol XL adsorbent; Different superscript letters are significantly different ( p <0,05)
Figure 7 Anisidin value of refined tuna eye oil; N1 (neutralization 1); N1B1 (neutralization
Gambar 7 Bilangan anisidin minyak mata tuna hasil pemurnian. N1 (netralisasi 1); N1B1 (netralisasi 1+ bleaching 1); N1B1N2 (netralisasi 1+ bleaching 1+ netralisasi 2); N1B1N2B2 (netralisasi 1+ bleaching 1+ netralisasi 2+ bleaching 2); ( ) adsorben alumina aktif; ( ) adsorben karbon aktif; ( ) adsorben magnesol XL; Huruf superskrip yang berbeda menandakan nilai yang berbeda nyata ( p <0,05)
dalam menghilangkan senyawa oksidatif dan komponen organik lainnya. Magnesol memiliki kemampuan yang baik dalam mengadsorpsi air limbah tercemar dan pigmen warna melalui mekanisme ikatan ion pada permukaan adsorben dan gaya van der Waals (Chew & Nyam, 2019). Magnesol juga memliki keunggulan mudah dalam pengaplikasian, harga yang terjangkau, serta ketersediaannya yang melimpah (Suseno et al. , 2016). Magnesol XL konsentrasi 5% mampu mengeliminasi TOTOX mencapai 73% (Suseno et al ., 2017).
KESIMPULAN Perlakuan pemurnian terbaik yaitu proses dengan tahapan netralisasi, bleaching , netralisasi, bleaching menggunakan magnesol
XL 5%. Proses ini berhasil secara signifikan mengeliminasi komponen pengotor (asam lemak bebas-FFA, bilangan asam, bilangan peroksida, bilangan anisidin, dan total oksidasi-TOTOX) mencapai 50-80% dari nilai awal.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan terima kasih kepada Kementerian Keuangan melalui program LPDP Riset Inovatif Produktif (RISPRO) yang diketuai oleh Dr. Ir. Wini Trilaksani, M.Sc dengan judul riset “Vita Virgin DHA: Produk Virgin Fish Oil Kaya DHA untuk Pangan Kesehatan dan Kecerdasan” sehingga penelitian ini dapat terlaksana. Adapun nomor kontrak hibah riset ini adalah “LPDP: 14/PRJ/2020”.

## DAFTAR PUSTAKA
American Oil Chemists Society. (1998). Free Fatty Acids. In: Official Methods and Recommended Practices of the American Oil Chemists Society. Association of Official Analytical Chemist. (2005). Official Methods of Analysis of the Association of Official Analytical of Chemist. American Oil Chemists Society. (1997). Official Methods and Recommended Practices of AOCS International. Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan. (2018). Riset Kesehatan 1+bleaching 1); N1B1N2 (neutralization 1+bleaching 1+neutralization 2); N1B1N2B2 (neutralization 1+bleaching 1+neutralization 2+bleaching 2); ( ) activated alumina adsorbent); ( ) activated charcoal adsorbent; ( ) magnesol XL adsorbent; Different superscript letters are significantly different ( p <0,05)
Figure 8 Total oxidation value of refined tuna eye oil; N1 (neutralization 1); N1B1 (neutralization
Gambar 8 Total oksidasi minyak mata tuna hasil pemurnian. N1 (netralisasi 1); N1B1 (netralisasi 1+ bleaching 1); N1B1N2 (netralisasi 1+ bleaching 1+ netralisasi 2);
N1B1N2B2 (netralisasi 1+ bleaching 1+ netralisasi 2+ bleaching 2); ( ) adsorben alumina aktif; ( ) adsorben karbon aktif; ( ) adsorben magnesol XL; Huruf superskrip yang berbeda menandakan nilai yang berbeda nyata ( p <0,05)
Efektivitas jenis adsorben pada pemurnian bertingkat, Fauziah et al.
Dasar (Riskesdas). Bekdes, B., Bener, M., & Yavuz, E. N.
(2022). Determination of primary and secondary oxidation products in vegetable oils with gold nanoparticle based fluorometric turn-on nanosensor : a new total oxidation value. Journal Food Chemistry . 434.  https://doi. org/10.1016/j.foodchem.2023.137426 Bija, S., Suseno, S. H., & Uju. (2017). Pemurnian minyak ikan sardine dengan tahapan degumming dan netralisasi. Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia , 20(1), 143–152. https://doi. org/10.17844/jphpi.v23i1.30888 Badan Standardisasi Nasional. (2013). Ikan Segar. SNI 2729:2013. Chew S. C., & Nyam, K. L. (2019). Refining of edible oils. Elsevier Inc. Damodaran, S., & Parkin, K. L. (2017). Fennema’s Food Chemistry (5 th ed., pp.
171-234). CRC Press. European Food Safety Authority (EFSA). (2016). Scientific opinion on dietary reference values for fats, including saturated fatty acids, polyunsaturated fatty acids, monounsaturated fatty acids, trans fatty acids, and cholesterol. EFSA Journal , 8(3), 1–107. https://doi. org/10.2903/j.efsa.2010.1461 Fernández-Lucas, J., Castañeda, D., Hormigo, D.  (2017). New trends for a classical enzyme: Papain, a biotechnological success story in the food industry. Trends Food Scientific Technology . 68(2017), 91–101. https://doi.org/10.1016/j. tifs.2017.08.017 García-Moreno, P. J., Guadix, A., Gomez- Robledo, L., Melgosa, M., & Guadix, E.M. (2013). Optimization of bleaching conditions for sardine oil. Journal of Food Engineeing , 116(2), 606–612. https://doi. org/10.1016/j.jfoodeng.2012.12.040 Ghaly, A. E., & Ramakhrisman, V. (2013). Extraction of Oil from mackerel fish processing waste using alcalase enzyme. Enzyme Engineering , 2(2), 1-10.  https:// doi.org/10.4172/2329-6674.1000115 Icyer, N. C., & Durak, M. Z. (2018). Ultrasound-assisted bleaching of canola oil: Improve the bleaching process by
central composite design. LWT , 97(7),
640–647. https://doi.org/10.1016/j. lwt.2018.07.030 Ilza M, Karnila R. (2021, September 10- 11). Evaluation of nutritional value and quality of toddler biscuits during storage [Conference session]. The 9th International and National Seminar on Fisheries and Marine Science, Pekanbaru, Indonesia. IOP Conference Series. Earth Environmental Science. https:// doi:10.1088/1755-1315/695/1/012049 International Union of Pure and Applied Chemistry. (1987). Standard methods for the analysis of oils arld fats and derivatives. (6 th . ed.). Blackwell Scientific. Jacobsen, C., Nielsen, N. S., Horn, F. F., & Sørensen, A. D. M. (2013). Food enrichment with omega-3 fatty acids.
(3 rd ed., pp. 415-426). Woodhead Publishing. Kementerian Kelautan dan Perikanan. (2021). Data Impor Minyak Ikan. Lauritzen, L., Brambilla, P., Mazzocchi, A., Harsløf, L.B.S., Ciappolino, V., Agostoni, C. (2016). DHA effects in brain development and function. Nutrients . 8(1), 1–17. https://doi.org/10.3390/ nu8010006 Mazrouh, M. (2015). Effects of freezing storage on the biochemical composition in muscles of Saurida undosquamis (Richardson, 1848) comparing with imported frozen. International Journal of Fisheries and Aquatic Studies , 3(2), 295–299. Mohanty, B. P., Ganguly, S., Mahanty, A., Sankar, T. V., Anandan, R., Mohanty, B. P., Ganguly, S., Mahanty, A., Sankar, T. V., Anandan, R., Chakraborty, K., Paul, B. N., Sarma, D., Syama, D. J., & Venkateshwarlu, G., et al. (2016). DHA and EPA content and fatty acid profile of 39 food fishes from India. Biomed Research International , 2016, 1-14 . https://doi.org/10.1155/2016/4027437 Monte, M. L., Monte M. L., Pohndorf, R.S., Crexi, V.T., & Pinto, L.A.A. (2015). Bleaching with blends of bleaching earth and activated carbon reduces color and oxidation products of carp oil.
European Journal of Lipid Science and Technology , 117(6), 829–836. https:// doi.org/10.1002/ejlt.201400223 Nadia A, Subekti S, Manan A, Wahyudin P. (2020, September 26). The effectiveness of activated carbon as adsorbent in the oil purification process fish by-product of the fish canning industry [Conference session]. 2nd International Conference on Fisheries and Marine, Surabaya, Indonesia. IOP Conference Series: Earth Environmental Science. https:// doi:10.1088/1755-1315/441/1/012151 Renuka, V., Anandan, R., Suseela, M., Ravishankar, C. N., & Sivaraman, G. K. (2016). Fatty acid profile of yellowfin tuna eye ( Thunnus albacares ) and oil sardine muscle ( Sardinella longiceps ). Fisheries Technology , 53(2), 151–154. Riyanto, B., Trilaksani, W., & Azzahra, V. A. (2020). Desain pangan instan gizi khusus lansia berbasis binte biluhuta diperkaya nanomineral tulang ikan. Jurnal Fishtech , 9(2), 65-77. Riyanto, B., Sinulingga, F., Trilaksani, W., Fauziah, S., Krisnawan, W. V., Fitradiansyah, L. O., & Rahmat, M. Z. (2021). Formulasi pangan darurat cookies dengan pengkayaan tepung ikan lele dan minyak ikan mata tuna. Jurnal Teknologi Perikanan dan Kelautan , 12(2), 175-181. Šimat, V., Vlahovic, J., Soldo, B., Skroza, D., Ljubenkov, I., & Mekinic, I.G. (2019). Production and refinement of omega-3 rich oils from processing by-products of farmed fish species. Foods , 8(4), 125-139.
Sun, Z., Srinivasakannan, C., Liang, J.,
& Duan, X. (2019). Preparation of hierarchical magnesium silicate with excellent adsorption capacity. Ceramics International , 45(4), 4590–4595. https:// doi.org/10.1016/j.ceramint.2018.11.146 Suseno, S. H., Jacoeb, A. M., Bija, S., Hulu, D. P. C., & Fitriana, N. (2016). Active and passive filter combination in scale up purification of sardine fishmeal oil by-product. Oriental Journal of Chemistry , 32(4), 2125–2130. https:// doi.org/10.13005/ojc/320441 Suseno, S. H., Sintoko, E. D. P., Jacoeb, A. M., & Fitriana, N. (2017). Sardine oil purification with winterization. Oriental
Journal of Chemistry , 33(6), 3150–3159.
Tandewi, S. A. M. S., & Hambali, E. (2021, Agustus 10-11). Refining of Fish oil from fish meal processing by-product using zeolite and bleaching earth [Conference session].  International Conference of Biomass and Bioenergy 2020, Bogor, Indonesia. IOP Conference Series: Earth and Environmental Science. https://doi. org/10.1088/1755-1315/1034/1/012050 Trilaksani, W., Riyanto, B., Azzahra, F., Santoso, J., & Tarman, K. (2020, September 09-11). Recovery of tuna virgin fish oil and formulation as a product model of emulsion food supplement [Conference session]. The World Seafood Congress 2019; Seafood Supply Chains of the Future: Innovation, Responsibility, Sustainability, Penang, Malaysia. IOP Conference Series: Earth Environmental Science . https:// doi:10.1088/1755-1315/414/1/012027 Trilaksani, W., Riyanto, B., Nurhayati, T., Santoso, J., Abi, I., & Kurniawan, H. (2021). Integrasi sentrifugasi suhu rendah dengan optimasi ekstraksi enzimatis minyak mata tuna menggunakan response surface methodology. Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia , 24(3), 395- 406. https://doi.org/10.17844/jphpi. v24i3.36652 Trilaksani, W., Riyanto, B., Ramadhan, W., Sinulingga, F., & Fauziah, S. (2023). The characteristics of PUFAs-rich virgin fish oil as affected by size of tuna eye. Biodiversitas Journal of Biological Diversity . 24(12), 6545-6556. https://doi. org/10.13057/biodiv/d241216 Viau, M., Genot, C., Ribourg, L., Meynier, A. (2016). Amounts of the reactive aldehydes, malonaldehyde, 4-hydroxy- 2-hexenal, and 4-hydroxy-2-nonenal in fresh and oxidized edible oils do not necessary reflect their peroxide and anisidine values. European Journal of Lipid Science and Technology . 118(3),
435–444. https://doi.org/10.1002/ ejlt.201500103
Efektivitas jenis adsorben pada pemurnian bertingkat, Fauziah et al.
Wang, X., Wen, Y., Bi, S., Li, Z., Xue, Y., Xue, C., & Jiang, X. (2021). Bleaching with the mixed adsorbents of activated earth and activated alumina to reduce color and oxidation products of anchovy oil. Jurnal Ocean University China , 20(5), 1167–1174. https://doi.org/10.1007/
s11802-021-4732-1