## PERAN VITAMIN D
3 TERHADAP EKSPRESI IL-10 DAN IL-12 PADA SEL EPITEL KOLON

## MENCIT MODEL INFLAMMATORY BOWEL DISEASE
Centaura Naila*  , Satrio Wibowo**, Wisnu Barlianto**

## Abstrak
Inflammatory Bowel Disease (IBD) pada anak-anak menyebabkan komplikasi meliputi gagal tumbuh dan pubertas yang terlambat, serta 60% mengalami hipovitaminosis D. Patogenesis IBD melibatkan peran interleukin 10 (IL-10) dan IL-12 dalam meregulasi proses homeostasis sistem imun dan epitel usus. Vitamin D dengan bentuk aktif vitamin D 3 , memiliki sifat antiinflamasi, namun peran suplementasi vitamin D 3 belum diketahui. Penelitian  ini  untuk  mengetahui  peran  vitamin  D3  terhadap  ekspresi  IL-10  dan  IL-12  pada  sel epitel kolon mencit model IBD. Penelitian berdesain eksperimental randomized control trial, 21 sampel ekor mencit, terbagi ke dalam 3 kelompok perlakuan. Penelitian dilakukan di Laboratorium Farmakologi, Labora- torium Biokimia-Biomolekuler, dan Laboratorium Patologi Anatomi Fakultas Kedokteran Universitas Brawija- ya Malang, pada bulan Januari - Maret 2018. Suplementasi vitamin D 3 pada sampel dilakukan setelah di- induksi dekstran 3%. Pengukuran ekspresi IL-10 dan IL-12 menggunakan teknik imunohistokimia, skor DAI (Daily Activity Index) untuk tingkat inflamasi makroskopi, dan skor MCHI (The Mouse Collitis Histology In- dex) untuk inflamasi berdasarkan histopatologi. Data dianalisis dengan uji ANOVA, Mann Whittney, uji beda Kruskal-Wallis dan uji T, diolah menggunakan SPSS-23. Hasil skor DAI tampak pada penurunan berat ba- dan. Skor MCHI tertinggi tampak pada kontrol positif. Terdapat perbedaan signifikan ekspresi IL-10 antar kelompok kontrol negatif dengan kontrol positif (p = 0,038), kontrol negatif dengan perlakuan (p = 0,001), dan kontrol positif dengan perlakuan (p = 0,017). Uji Kruskal-Wallis antar kelompok berbeda signifikan, pem- berian vitamin D 3 meningkatkan ekspresi IL-10 (p = 0,001). Terdapat perbedaan signifikan ekspresi IL-12 antar kelompok (p = 0,000; p = 0,000; p = 0,000). Uji ANOVA antar kelompok berbeda signifikan, pemberian vitamin D3 menurunkan ekspresi IL-12 (p = 0,000). Kesimpulannya, pemberian vitamin D3 dapat meningkat- kan ekspresi IL-10 dan menurunkan ekspresi IL-12 pada sel epitel kolon model mencit IBD.
Kata kunci: IL-10, IL-12, inflammatory bowel disease, vitamin D 3. THE ROLE OF VITAMIN D 3 ON IL-10 AND IL-12 EXPRESSION IN COLON EPITHELIAL CELL

## OF INFLAMMATORY BOWEL DISEASE MICE MODEL

## Abstract
Inflammatory Bowel Disease (IBD) in children can cause failure to grow and puberty delay, which is 60% have hypo-vitamin D. The pathogenesis of IBD involving interleukin 10 (IL-10) and IL-12 homeostatic regulation  of  immune  system  and  intestine  epithelial.  Vitamin  D3  (Vitamin  D  active  form),  has  anti- inflammation  properties,  but  the  role  of  vitamin  D3  supplementation  still  unknown.  This  research  aims  to determine the role of vitamin D3 in IL-10 and IL-12 expression in colon epithelial cells of IBD mice model. This  is  a  randomized  control  trial  experiment  with  21  samples,  define  to  3  groups,  at  pharmacology, biochemistry-biomolecular,  anatomic  pathology  laboratory  of  Faculty  of  Medicine,  Universitas  Brawijaya, January-March  2018.  Vitamin  D3  supplementation  in  sample  after  dextran  3%  induced.  IL-10  and  Il-12 measured  by  immunohistochemistry,  DAI  (Daily  Activity  Index)  and  MCHI  (The  Mouse  Colitis  Histology Index) score for inflammation level. Statistical analysis was done by ANOVA, Mann-Whittney, Kruskal Wallis and T-test utilizing SPSS-23. DAI score found at bodyweight decreasing, the highest MCHI score found at the  positive  control  group.  There  were  significant  IL-10  expression  between  negative  control  and  positive control  group  (p  =  0.038),  negative  control  and  experiment  group  (p  =  0.001),  positive  control  and experiment  group  (p  =  0.017).  Kruskal-Wallis  between  groups  were  significantly  different,  vitamin  D3 increases  IL-10  expression  (p  =  0.001).  There  were  significantly  difference  in  IL-12  expression  between groups  (p  =  0.000;  p  =  0.000;  p  =  0.000).  ANOVA  test  showed  differences  significantly  between  groups, vitamin D3 decrease IL-12 expression (p = 0.000). In c onclusion, v itamin D3 supplementation increase IL- 10 but decrease IL-12 expression in colon epithelial cell of IBD rat model.
Keywords: IL-10, IL-12, inflammatory bowel disease, vitamin D 3. *Program Magister ilmu Biomedik, Fakultas Kedokteran, Universitas Brawijaya.
**Departmen  Ilmu  Kesehatan  Anak,  Fakultas  Kedokteran,  Universitas  Brawijaya-RS.  Dr.  Saiful  Anwar Malang.
E-mail: centa.naila@gmail.com

## Pendahuluan
Inflammatory  Bowel  Disease  (IBD) merupakan sebuah istilah kelompok gangguan  gastrointestinal  yang  meliputi penyakit  Crohn  (Crohn’s  disease/CD)  dan kolitis  ulseratif  (ulcerative  colitis/UC).  Insiden puncak  dari  IBD  terjadi  pada  pasien  antara usia 15 dan 30 tahun. Sekitar 20% pasien CD dan 12% pasien UC mengalami IBD sebelum usia 20 tahun. Anak-anak dengan IBD dapat mengalami komplikasi meliputi gagal tumbuh dan pubertas yang terlambat. Oleh karena itu, klinisi  perlu  memperhatikan  pertumbuhan linear,  perkembangan  tulang,  dan  pubertas pada pasien anak dengan IBD. 1
Sebesar  60%  pasien  IBD  dilaporkan mengalami  hipovitaminosis  D.  Penyebabnya masih belum jelas apakah akibat malabsorbsi karena  kerusakan  mukosa  usus  atau  karena hal  lain.  Kekurangan  vitamin  D  menjadi kontributor  terhadap  onset  penyakit  dan perkembangannya.  Beberapa  studi  telah menunjukkan  kekurangan  vitamin  D  dapat menyebabkan gangguan saluran
gastrointestinal  seperti  penurunan  klirens bakteri,  penurunan  ekspresi  tight  junction pada  epitel  usus,  dan  peningkatan  inflamasi oleh Th1. Vitamin D telah dibuktikan memiliki peran  pada  penyakit  yang  dimediasi  oleh sistem  imun  seperti  IBD  baik  secara  in  vivo maupun in vitro. 2
Vitamin D merupakan prohormon steroid yang  terutama  terdapat  pada  hewan, tanaman,  dan  ragi.  Melalui  berbagai perubahan  metabolik  tubuh,  vitamin  D menghasilkan hormon kalsitriol yang mempunyai peran sentral dalam metabolisme kalsium dan fosfat. Terdapat beberapa bentuk vitamin D, yaitu vitamin D 1 , vitamin D 2 , vitamin D 3 , vitamin D 4 , dan vitamin D 5 . Bentuk utama dari  vitamin  D  adalah  vitamin  D 2 atau ergokalsiferol  dan  vitamin  D 3 atau kolekalsiferol,  yang  merupakan  bentuk  aktif dari vitamin D adalah vitamin D 3 . 3
Interleukin 10 merupakan sitokin pluripo- ten dan dapat dianggap sebagai sitokin anti- inflamasi paling penting yang ditemukan pada respons  imun  manusia.  Produksi  IL-10  di- lakukan oleh banyak jenis sel yaitu limfosit B, limfosit  T,  makrofag,  monosit,  sel  dendritik, dan  sel mast.  Sitokin  IL-10 memiliki  kemam- puan untuk mempengaruhi kelompok sel imun yang  berbeda,  sehingga  mempengaruhi  sis- tem imun innate dan adaptif. Hal ini menjadi- kan IL-10 memiliki efek luas pada imunoregu- lasi  dan  pertahanan  tubuh.  Sitokin  IL-10 secara umum menghambat produksi mediator proinflamasi  namun  meningkatkan  produksi mediator antiinflamasi. 4, 5
Sitokin IL-10 mempunyai  fungsi  penting dalam  meregulasi  proses  homeostasis  dari sistem  imun  dan  epitel  usus.  Sitokin  IL-10 mengatur  fungsi  beberapa  leukosit  terutama dalam  menekan  respons  inflamasi  yang  ber- lebih,  dan  melindungi  kerusakan  epitelial yang  disebabkan  invasi  oleh  berbagai  pato- gen. 6
Selain sitokin  IL-10,  sitokin  proinflamasi seperti IL-12 juga berperan dalam patogene- sis  dari  IBD.  Beberapa  penelitian  menunjuk- kan  bahwa  IL-12  diproduksi  berlebihan  pada mukosa  lambung,  sel  mononuklear  lamina propria,  dan  makrofag  dalam  CD,  dan  ma- krofag  yang  diisolasi  dari  lesi  inflamasi  pada pasien  dengan  CD  menghasilkan  pening- katan jumlah IL-12 ex vivo. 7
Efek  vitamin  D  pada  sel  T  meliputi induksi  dari  sel  T  reg  yang  memproduksi  IL- 10 dan supresi proliferasi sel T dan Th1 serta Th17  yang  memproduksi  IL-12  atau  IFN-γ. Vitamin  D  merupakan  faktor  utama  dalam perkembangan sel iNKT dan sel T CD8αα di dalam  mempertahankan  proses  toleransi pada  saluran  gastrointestinal. 8 Peran ekstraskeletal  dari  vitamin  D  saat  ini  masih terus  diteliti.  Vitamin  D  telah  dibuktikan memiliki  sifat  antiinflamasi,  tetapi  peran suplementasi  vitamin  D 3 dalam  menurunkan inflamasi masih belum banyak diketahui.
Oleh  karena  vitamin  D  memiliki  peran  pada respons  imunologi  dan  IBD  merupakan penyakit  inflamasi  yang  berhubungan  erat dengan  penurunan  kadar  vitamin  D 3. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui peran vitamin D 3 terhadap ekspresi IL-10 dan IL-12 pada sel epitel kolon mencit model IBD.

## Bahan dan Metode
Penelitian  ini  menggunakan  desain eksperimental  randomized  control  trial. Sampel dan perlakuan diharapkan terkendali, terukur  dan  pengaruh  perlakuan  dapat  lebih dipercaya.  Penelitian  ini  dilakukan  untuk memperoleh  informasi  mengenai  mekanisme vitamin  D 3 dalam  regenerasi  mukosa  usus yang  rusak.  Rancangan  penelitian  disusun untuk  membuktikan  bahwa  pemberian Vitamin  D 3 mempercepat  regenerasi mukosa yang  rusak  setelah  pemberian  dekstran  3% dan kaitannya dengan IL-10 dan IL-12.

## Populasi dan Sampel
Sebanyak  21  ekor  mencit  sebagai sampel  untuk  3  kelompok  perlakuan. Pemeliharaan  hewan  coba  dilakukan  di
Laboratorium  Farmakologi,  pemrosesan jaringan  di    Laboratorium  Patologi  Anatomi, dan pemeriksaan imunohistokimia di Laboratorium Biokimia-Biomolekuler, Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya. Pengamatan  slide  menggunakan  mikroskop dilakukan  di  Laboratorium  Patologi  Anatomi FKUB-RS.  Dr.  Saiful  Anwar  Malang.
Penelitian  dilakukan  pada  bulan  Januari– Maret 2018. Fase adaptasi dilakukan selama 7  hari,  sedangkan  fase  perlakuan  dan pengamatan gejala selama 17 hari. Penelitian ini telah dinyatakan laik etik oleh Komisi Etik Penelitian  Kesehatan  Fakultas  Kedokteran Universitas Brawijaya No. 434/EC/ KEPK/12/2017. Subjek  yang  digunakan  berupa  mencit BALB/c  dengan  kriteria  inklusi  sebagai
berikut: berusia 8-10 minggu, berjenis kelamin jantan,  berat  badan  20-25  gram.  Sampel penelitian  dieksklusi  dari  penelitian  bila: dalam  pengamatan  menderita  sakit  yang tampak  dari  perubahan  perilaku  hewan (perubahan  pola  makan/minum,  aktivitas hewan),  dan  tanda–tanda  klinis  lainnya (penurunan  berat  badan,  pola  nafas,  diare,
muntah, dan sebagainya), dalam pengamatan subjek penelitian mati, terjadi kerusakan pada organ  atau  jaringan  pada  saat  pengambilan sampel untuk pemeriksaan imunohistokimia.

## Sampel Penelitian
Sampel penelitian menggunakan mencit BALB/c,  berjenis  kelamin  jantan,  berumur  8- 10  minggu  dengan  berat  badan  20-25  gram yang  dibagi  menjadi  tiga  kelompok  secara acak.  Unit  analisis  yang  diperiksa  dalam penelitian  ini  adalah  kolon  mencit  BALB/c.
Pengelompokan  sampel  ke dalam kelompok–kelompok  uji  dilakukan  dengan randomisasi sederhana menggunakan undian.  Tiap  kelompok  dibedakan  dengan kode  warna  dan  tiap  sampel  mendapatkan kode penomoran.

## Preparasi Dextrans 3 %
Dextran  sodium  sulfat  (DSS)  yang digunakan dibeli dari toko bahan kimia Abcam dengan  berat  molekul  40.000  Da.  Larutan DSS 3% dibuat dengan menggunakan garam DSS  sebesar  3  gram  dilarutkan  dengan  100 ml aquades.

## Deteksi  Ekspresi  IL-10  dan  IL-12  dengan Teknik Imunohistokimia
Ekspresi  sel  penghasil  IL–10  dan  IL-12 yang diukur menggunakan teknik pemeriksaan  imunohistokimia.  Ekpresi  ini dihitung dari jumlah sel yang mengekspresikan  IL-10  dari  spesimen jaringan kolon mencit pasca perlakuan.

## Hasil
Penelitian  ini  mengambil  21  sampel penelitian yang terdiri dari 7 sampel dari tiap kelompok   perlakuan,  yaitu  kelompok  kontrol negatif;  kelompok  kontrol  positif.  Selama masa  pengamatan,  dilakukan  penghitungan skor DAI untuk melihat inflamasi pada setiap
mencit. Dari pengamatan tersebut didapatkan data kualitatif berupa gambaran histopatologi kolon mencit (Gambar 1) dan data kuantitatif berupa  hasil  penghitungan  ekspresi  IL-10 (Gambar  2)  dan  ekspresi  IL-12  (Gambar  3) sel  epitel  kolon  mencit.  Kemudian  dari gambaran  histopatologi  tiap  perlakuan, dilakukan penghitungan skor MCHI (Tabel 1).

## Gambar 1. Histopatologi kolon mencit tiap kelompok dengan pewarnaan HE (400x).
Keterangan:  1.  Kontrol  negatif  (tanpa  pemberian  dekstran  3%  maupun  vitamin  D 3 )  tidak  didapatkan  sel inflamasi  dan  memiliki  struktur  yang  lengkap,  2.  Kontrol  positif  (pemberian  dekstran  3%) didapatkan  gambaran  sel  inflamasi  (kotak  A)  dan  destruksi  kripta  (kotak  B),  3.  Perlakuan (pemberian  dekstran  3%  terlebih  dahulu,  kemudian  diikuti  dengan  pemberian  vitamin  D 3 ) tampak gambaran sel inflamasi (kotak A) dan destruksi kripta (kotak B) yang lebih sedikit.
Tabel 1. Skor MCHI pada tiap kelompok mencit. Mencit Infiltrasi Sel Inflama si Kehila- ngan Sel Goblet Densi- tas Kripte Hiper- plasi Kripte Pene- balan Mukos a Inflamasi Submuko sal Abses Kripte Ulse- rasi Total Skor Kontrol Negatif 0 0 0 0 0 1 0 0 1 Kontrol Positif 2 2 1 2 1 3 - - 11 Perlakuan 2 1 1 1 1 2 - - 8
Keterangan:  Berdasarkan  Skor  MCHI  didapatkan  skor  tertinggi  terjadinya  infamasi  berdasarkan histopatologi  pada kelompok kontrol positif, yaitu sebesar 11.
Gambar 2. Ekspresi IL-10 yang dideteksi dengan metode  imunohistokimia (400x). Keterangan: (1). Kontrol negatif (tanpa pemberian dekstran 3% maupun vitamin D 3 ) tampak ekspresi IL- 10 (kotak merah) dengan (rerata 33,57). (2) Kontrol positif (diberikan dekstran 3%) ekspresi IL-10 yang ditandai dengan warna kecoklatan (kotak merah) lebih banyak (rerata: 178,71). (3). Perlakuan (diberikan dekstran 3% kemudian diberikan vitamin D 3 ) tampak ekspresi IL- 10 lebih banyak (kotak merah) (rerata: 474,29) dibandingkan kontrol positif.

## Gambar 3. Ekspresi IL-12 yang dideteksi dengan metode  imunohistokimia (1000x).
Keterangan: 1. Kontrol negatif (tanpa pemberian dekstran 3% maupun vitamin D 3 ) tampak ekspresi IL-12 (kotak merah) (rerata: 30,71). 2. Kontrol positif (diberikan dekstran 3% saja) ekspresi IL-12 yang ditandai dengan warna kecoklatan (kotak merah) lebih banyak (rerata: 84,29). 3. Per- lakuan (diberikan dekstran 3% kemudian diberikan vitamin D 3 ) tampak ekspresi IL-12 lebih sedikit (rerata: 53,57) dibandingkan kontrol positif.
Tabel 2. Skor DAI pada tiap kelompok mencit. Kelompok Mencit Penurunan Berat Badan Konsistensi Feses Darah Pada Feses Total Skor Kontrol Negatif 1 1 0 0 1 Kontrol Negatif 2 0 0 0 0 Kontrol Negatif 3 1 0 0 1 Kontrol Negatif 4 1 0 0 1 Kontrol Negatif 5 1 0 0 1 Kontrol Negatif 6 1 0 0 1 Kontrol Negatif 7 2 0 0 2 Kontrol Positif 1 2 0 0 2 Kontrol Positif 2 3 0 0 3 Kontrol Positif 3 2 0 0 2 Kontrol Positif 4 3 0 0 3 Kontrol Positif 5 1 0 0 1 Kontrol Positif 6 3 0 0 3 Kontrol Positif 7 2 0 0 2 Perlakuan 1 1 0 0 1 Perlakuan 2 2 0 0 2 Perlakuan 3 2 0 0 2 Perlakuan 4 2 0 0 2 Perlakuan 5 1 0 0 1 Perlakuan 6 1 0 0 1 Perlakuan 7 1 0 0 1
Berdasarkan  skor  DAI  didapatkan  skor tertinggi  yaitu  3  dan  skor  terendah  yaitu  0 (Tabel  2).  Pada penelitian  ini,  DAI  skor  yang tampak  hanya  berdasarkan  penurunan  berat badan.  Dari  penilaian  skor  DAI  dilakukan  uji normalitas  data  yang  menunjukkan  bahwa terdapat  skor  DAI  pada  satu  kelompok  yang tidak terdistribusi normal (p < 0,05). Kemudian dilakukan  uji  beda  pada  tiap  kelompok menggunakan uji Mann-Whitney. Perbandingan  skor  DAI  antar  kelompok  dari uji tersebut menunjukkan perbedaan
bermakna  skor  DAI  antar  kelompok  kontrol negatif  dengan  kelompok  kontrol  positf  (p  = 0,011), namun tidak ada perbedaan bermakna antara  kelompok  kontrol  negatif  dengan perlakuan  (p  =  0,059),  begitu  juga  dengan kelompok kontrol positif dengan perlakuan (p = 0,259).

## Analisis Statistik Ekspresi IL-10
Untuk  mendapatkan  data  kuantitatif dilakukan  penghitungan  jumlah  sel  epitel kolon  mencit  yang  mengekspresikan    IL-10 dengan  menggunakan  mikroskop  cahaya pada  perbesaran  400x  dalam  20  lapang pandang  (Gambar  1).    Berdasarkan  uji normalitas  data,  diperoleh  hasil  bahwa ekspresi  IL-10  pada  semua  kelompok  tidak terdistribusi  normal  (p  <  0,05),  sehingga dilakukan  uji  beda  pada  tiap  kelompok menggunakan  uji  Mann-Whitney.  Dari  uji tersebut  diketahui  ada  perbedaan  bermakna ekspresi IL-10 antara kelompok kontrol negatif dengan  kontrol  positif  (p  =  0,038),  kontrol negatif  dengan  perlakuan  (p  =  0,001),  dan kontrol  positif  dengan  perlakuan   (p  =  0,017) (Tabel 3).
Tabel 3. Perbandingan rerata ekspresi IL-10 antar kelompok perlakuan dengan uji Mann-Whittney.
Kelompok Nilai p Kontrol Negatif-Kontrol Positif 0,038 Kontrol Negatif-Perlakuan 0,001 Kontrol Positif-Perlakuan 0,017
Keterangan : jika nilai p < 0,05 berarti ada perbedaan yang bermakna dan jika nilai p > 0,05 berarti tidak ada perbedaan yang bermakna.Terdapat hasil yang signifikan antar kelompok.
Pada  Gambar  4  tampak  adanya perubahan  ekspresi  IL-10  sel  epitel  kolon mencit  pada  tiap-tiap  kelompok.  Pada kelompok kontrol negatif yang tidak diberikan perlakuan  apapun  menunjukkan    rerata ekspresi  IL-10  sel  epitel  kolon  adalah  33,57. Pada  kelompok  kontrol  positif  yang  hanya diberikan  Dekstran  3%  saja    didapatkan peningkatan  ekspresi  IL-10  sel  epitel  kolon dengan  hasil  rerata  sebesar  178,71. Pada kelompok  perlakuan  (Dekstran  3%  +  Vitamin D 3 )  terjadi  peningkatan  ekspresi  IL-10  sel epitel kolon mencit menjadi 474.29.
Ekspresi  IL-10  juga  diuji  Kruskal-Wallis untuk  melihat  signifikansi  perbedaan  secara keseluruhan yang  didapatkan  signifikansi  p = 0,001.  Dengan  demikian  dapat  diambil kesimpulan  bahwa  vitamin  D 3 dapat meningkatkan ekspresi IL-10.
Analisis Statistik Kadar IL-12 Berdasarkan hasil pengecatan imunohistokimia, ekspresi IL-12 dihitung pada
tiap  sampel  masing-masing  kelompok.  Uji normalitas data menunjukkan bahwa ekspresi IL-12  pada  semua  kelompok  terdistribusi normal  (p  >  0,05),  sehingga  uji  beda  yang digunakan  untuk  tiap  kelompok  penelitian menggunakan  uji  ANOVA.  Perbandingan rerata  ekspresi  IL-12  antar  kelompok  dapat dilihat  pada  Tabel  4,  yang  menunjukkan adanya  perbedaan  bermakna  ekspresi  IL-12 antara  kelompok  kontrol  negatif  dengan kontrol  positif  (p  =  0,000),  kontrol  negatif dengan  perlakuan  (p  =  0,000),  dan  kontrol positif dengan perlakuan (p = 0,000).
Ekspresi IL-12 juga diuji ANOVA untuk melihat  signifikansi  perbedaan  secara  kese- luruhan.  Hasilnya  adalah  didapatkan  signif- ikansi p = 0,000 yang artinya Vitamin D 3 dapat menurunkan  ekspresi  IL-12  pada  penelitian ini.
33.57 178.71 474.29
Gambar 4. Rerata ekspresi IL-10 pada tiap kelompok, tampak peningkatan nilai IL-10 pada tiap-tiap kelompok perlakuan.
Tabel 4. Hasil analisis uji ANOVA perbandingan rerata ekspresi IL-12 antar kelompok.perlakuan.
Kelompok Nilai p Kontrol Negatif-Kontrol Positif 0,000 Kontrol Negatif-Perlakuan 0,000 Kontrol Positif-Perlakuan 0,000
Keterangan : jika nilai p < 0,05 berarti ada perbedaan yang bermakna dan jika nilai p > 0,05 berarti tidak ada perbedaan yang bermakna.Terdapat hasil yang signifikan antar kelompok.
30,71 84,29 53,57
Gambar 5. Rerata ekspresi IL-12 pada sampel tiap kelompok perlakuan. Tampak perbedaan ekspresi IL-12 pada tiap kelompok perlakuan.

## Pembahasan
Ekspresi Sitokin IL-10 Pada penelitian ini, didapatkan ekspresi IL-10 pada kelompok kontrol negatif berbeda secara  signifikan  dengan  kelompok  kontrol positif. Hal ini sejalan dengan penelitian yang dilakukan oleh Cario et al. pada tahun 2007, yang menyatakan bahwa Toll Like Receptor 2 (TLR2)  mengatur  inflamasi  mukosa  dengan meregulasi  fungsi  sawar  epitel. 9 Pemberian DSS  akan  menyebabkan  kerusakan  pada sawar  epitel  sehingga  menyebabkan  reaksi dari  reseptor  TLR2  untuk  menginduksi produksi sitokin IL-10. Hal ini sejalan dengan apa  yang  dikemukakan  oleh  Kiesler  et  al., pada  tahun  2015. 10 Penelitian  tersebut mengungkapkan mekanisme penyakit enterokolitis dimulai dengan adanya
gangguan  pada  barier  epitel  usus  dan dengan  masuknya  bakteri  luminal  atau antigen  bakteri  ke  dalam  mukosa.  Faktor yang terjadi menunjukkan bahwa peradangan pada  usus  mudah  terinduksi  atau  dapat terjadi secara spontan yang ditandai dengan kelainan  molekuler  yang  menyebabkan hilangnya barier epitel yang masif.
Fenomena  serupa  muncul  pada  DSS kolitis, pemberian DSS pada tikus melalui air minum  untuk  waktu  yang  singkat, menunjukkan  inflamasi  akut  pada  kolon dengan  adanya  karakteristik  seperti  erosi/ ulkus,  hilangnya  kripte,  dan  infiltrasi granulosit . Hal ini menunjukkan bahwa sitokin efektor  yang  diproduksi  oleh  sel  innate seperti  makrofag  dan  neutrofil,  cukup  untuk menimbulkan inflamasi.
Keadaan  tersebut  menunjukkan  bahwa makrofag  merupakan  sumber  penting  pada sitokin  proinflamasi  seperti  sitokin  yang meregulasi fungsi barier epitel dan proliferasi, sedangkan  neutrofil  berperan  pada  rusaknya jaringan.
10 Berdasarkan  uji  t  pada  perbandingan ekspresi  IL-10  antar  kelompok,  diketahui adanya perbedaan yang signifikan. Berdasarkan uji Kruskal-Wallis, juga menunjukkan  perbedaan  signifikan    (p  =
0,001;  p  <  0,05).  Hasil  penelitian  ini  juga sejalan penelitian Cantorna et al. (2017) yang menunjukkan  peran  reseptor  vitamin  D terhadap  sel  T  regulator  invariant  NKT  cells dan  CD8αα.  Kedua  sel  ini  telah  diterangkan memiliki  peran  penting  dalam  regulasi  sel  T untuk  memproduksi  sitokin  antiinflamasi  IL- 10. 8 Oleh  karena  itu,  hal  ini  sesuai  dengan hipotesis penelitian bahwa pemberian vitamin D 3 dapat  meningkatkan  ekspresi  IL-10  sel epitel kolon pada model mencit IBD.

## Ekspresi Sitokin IL-12
Pada  penelitian  ini  didapatkan  ekspresi IL-12 berbeda signifikan antar kelompok. Terkait  perbedaan  antara  kontrol negatif dan kontrol  positif,  hasil  penelitian  ini serupa  dengan  hasil  yang  ditunjukkan  oleh
Perse  dan  Cerar  pada  tahun  2012. Pada penelitian  tersebut,  kolitis  yang  dipicu  oleh DSS meningkatkan kadar sitokin proinflamasi, termasuk  IL-12.  Hal  ini  dikarenakan  kolitis yang  dihasilkan  juga  merupakan  keadaan inflamasi  sehingga  sitokin  proinflamasi  juga akan dihasilkan. 12
Serupa juga dengan hasil penelitian yang dilakukan  Jeffery  et  al.  (2012)  meneliti tentang  pengaruh  vitamin  D  terhadap  APC dan  menghasilkan  sekresi  IL-12  yang menurun. 13 Demikian  juga  penelitian  Bartels et al pada tahun 2013 yang meneliti pengaruh vitamin  D  terhadap  sel  dendritik  pada penyakit  Crohn. 14 Namun,  pada  penelitian yang  dilakukan  oleh  Froicu  dan  Cantorna,
vitamin D diketahui memperbaiki gejala kolitis pada  tikus  wild-type,  dan  tidak  memberikan perbedaan  signifikan  pada  kadar  IL-12. 15 Selain itu, Ghaly  et al pada tahun 2018 juga tidak menemukan perbedaan signifikan pada kadar  sitokin  antar  kelompok  perlakuan vitamin D. 16

## Kesimpulan
Pemberian vitamin D 3 dapat
meningkatkan  ekspresi  IL-10  pada  sel  epitel kolon  model  mencit  Inflammatory  Bowel Disease. Pemberian  vitamin  D 3 dapat menurunkan  ekspresi  IL-12  pada  sel  epitel kolon  model  mencit  Inflammatory  Bowel Disease.

## Saran
Terdapat beberapa kelemahan yang ada pada  penelitian  ini,  yaitu  perlakuan  yang independen  dan  konsentrasi  dekstran. Perlakuan yang dependen seperti pemberian dosis  vitamin  D 3 yang  bertingkat  dapat menjelaskan  kekuatan  hubungan  antara ekspresi  IL-10  dan  IL-12  terhadap  perlakuan pemberian  vitamin  D 3 pada  mencit  model IBD.  Pada  penelitian  yang  dilakukan  oleh Perse & Cerar tahun 2012, kolitis akut terjadi pada  induksi  dektran  2-5  %, 12 sehingga diperlukan  penelitian  lebih  lanjut  dengan menggunakan  dosis  dekstran  yang  lebih tinggi  yaitu dekstran 5 % untuk mendapatkan inflamasi  yang  sesuai  dengan  klinis  maupun gambaran histologi.

## Daftar Pustaka
1. Kappelman MD, Moore KR, Allen JK, Cook SF. Recent Trends in The Prevalence of Crohn's Disease and Ulcerative Colitis in A  Commercially  Insured  US  Population. Dig Dis Sci.  2013; 58:519.
2.  Abraham BP, Prasad P, Malaty HM. Vita- min  D  Deficiency  and  Corticosteroid  Use are  Risk  Factors  for  Low  Bone  Mineral Density  in  Inflammatory  Bowel  Disease Patients. Dig Dis Sci. 2014; 59:1878–84.
3.  Bancil AS, Poullis A. The Role of Vitamin D  in  Inflammatory  Bowel  Disease. Healthcare. 2015; 3:338-350.
4.  de  Moreno  dLA,  Del  Carmen  S,  Zurita- Turk  M,  Santos  RC,  van  de  Guchte  M, Azevedo  V,  Miyoshi  A,  Leblanc  JG.  Im- portance of IL-10 Modulation by Probiotic Microorganisms in Gastrointestinal Inflam- matory  Diseases.  ISRN  Gastroenterol. 2011; 11(19):1-11.
5.  Marlow  GJ,  van  Gent  D,  Ferguson  LR. Why  Interleukin-10  Supplementation Does  Not  Work  in  Crohn’s  Disease  Pa- tients.  World  J  Gastroenterol.  2013;  19 (25):3931-3941.
6.  Ouyang  W,  Rutz  S,  Crellin  NK,  Valdez PA, Hymowitz SG. Regulation and Func- tions  of  the  IL-10  Family  of  Cytokines  in Inflammation  and  Disease.  Annu.  Rev. Immunol. 2011; 29:71–109.
7.  Vignali  DA,  Kuchroo  VK.  IL-12  Family Cytokines:  Immunological  Playmakers. Nat Immunol.  2012; 3(8):722-8.
8.  Cantorna  MT,  Bora  S.  The  Role  of  UVR and Vitamin D on T Cells and Inflammato- ry  Bowel  Disease.  Photochem  Photobiol Sci. 2017; 16(3):347-353.
9.  Cario E, Gerken G, Podolsky DK. Toll-like Receptor 2 Controls Mucosa Inflammation by  Regulating  Epithelial  Barrier  Function. Gastroenterology. 2007; 132(4):1359-74.
10. Kiesler  P,  Fuss  IJ,  Strober  W.  Experi-
mental  Models  of  Inflammatory  Bowel Disease.  Cell  Mol  Gastroenterol  Hepatol. 2015; 1(2):154-170.
11. Yang  L,  Weaver  V,  Smith  JP,  Bingaman S, Hartman TJ, Cantorna MT. Therapeutic Effect of Vitamin D Supplementation in A Pilot  Study  of  Crohn’s  Patients.  Clin
Transl Gastroenterol. 2013;  4:e33.
12. Perse  M,  Cerar  A.  Dextran  Sodium  Sul- phate  Collitis  Mouse  Model:  Trap  and Tricks.  J  Biomed  Biotechnol.  2012; 2012:718617. doi: 10.1155/2012/718617.
13. Jeffery  LE,  Wood  AM,  Qureshi  OS,  Hou TZ, Gardner D, Briggs Z, Kaur S, Raza K, Sansom  DM.  Availability  of  25- Hydroxyvitamin D(3) to APCs Controls the Balance  between  Regulatory  and  Inflam- matory  T  Cell  Responses.  J  Immunol. 2012; 189:5155–5164.
14. Bartels  LE,  Jørgensen  SP,  Bendix  M,
Hvas  CL,  Agnholt  J,  Agger  R,  Dahlerup JF.  25-Hydroxy  Vitamin  D3  Modulates Dendritic Cell Phenotype and Function in
Crohn’s  Disease.  Inflammopharmacolo- gy. 2013; 21:177–186.
15. Froicu  M,  Cantorna  MT.  Vitamin  D  and the  Vitamin  D  Receptor  are  Critical  for Control of The Innate Immune Response to Colonic Injury. BMC Immunol. 2007; 8
(5):1-11.
16. Ghaly  S,  Kaakoush  NO,  Lloyd  F,  et  al. High  Dose  Vitamin  D  Supplementation Alters  Faecal  Microbiome  and Predisposes Mice to More Severe Colitis. Scientific Reports. 2018; 8:11511.