Isolasi dan Uji  Biokimia Bakteri Selulolitik Asal Saluran Pencernaan Rayap Pekerja ( Macrotermes spp.)
Gergonius Fallo a Yuni Sine b a Fakultas Ilmu Pendidikan, Universitas Timor, Kefamenanu, TTU – NTT, 85613, Indonesia, email: gergofallo@yahoo.com
b Fakultas Sains dan Teknologi, Program Studi Biologi Universitas Timor, Kefamenanu, TTU- NTT, 85613, Indonesia
Article Info Abstrak Article history: Received 27 Agustus 2015 Received in revised form 12Desember 2015 Accepted 11Januari 2016 Di  alam,  rayap  sangat  berguna  mengubah  kayu  mati  dan  bahan  organik  lainnya  yang  mengandung  selulosa  untuk  dijadikan  humus.
Rayap mampu mendegradasi selulosa karena pada saluran pencernaannya terdapat mikroorganisme simbion seperti bakteri dan protozoa. Penelitian    ini    bertujuan  untuk  mengisolasi  bakteri  yang  bersimbiosis  dengan  rayap,  kemudian  dilakukan  karakterisasi  morfologi, fisiologi dan  biokimia. Penelitian  ini  merupakan penelitian eksploratif.  Rayap  yang digunakan dalam penelitian   ini  merupakan rayap pekerja    ( Macrotermes spp.)   yang  diambil  dari  tanah.    Isolasi    dilakukan  melalui  dua  cara  yaitu  tusuk  dan  gerus.  Isolat  tunggal  yang diperoleh kemudian diinokulasikan pada media agar miring TSA untuk dilakukan uji fisiologis berupa uji indol,  MR-VP, simmon sitrat, urease,  fermentasi.    Hasil  isolasi  diperoleh    satu    isolat  dengan  ciri  koloni  berwarna  putih  dengan  bintik  hitam  di  tengah,  berbentuk sirkular dengan tepi periferal, tepi  luar koloni  undulate bergelombang dengan elevasi cembung . Hasil   uji biokimia dan  fisiologi  isolat diketahui  uji indol  negatif, MR  negatif,  VP  negatif, simmon sitrat negatif,  urease  negatif, fermentasi  positif.
Keywords: Bakteri Saluran Pencernaan
Macrotermes spp.

## 1. Pendahuluan
Fakta yang dapat dijumpai dalam kehidupan sehari-hari, rayap merupakan serangga  hama  yang  merugikan  secara  ekonomi  karena  menimbulkan kerusakan pada bangunan, berbagai jenis kayu, serta tanaman pertanian. Rayap memegang  peranan  penting  dalam  degradasi    tanaman.  Hal  ini  disebakan karena  pada  sel  tanaman  mengandung  serat  atau  lignoselulosa  termasuk selulosa,  hemiselulosa,  dan  lignin.  Rayap  mampu  mendegradasi  tanaman karena  dalam  saluran  pencernaan  terdapat  mikroba  simbion  pencerna  serat. Mikroba  di  dalam  saluran  pencernaan  rayap  terdiri  dari  protozoa,  bakteri, spirochetes , dan fungi (Ramin et al . 2008).
Keberadaan    bakteri  simbiotik  dalam  saluran  pencernaan  memungkinkan rayap  untuk  mencerna  selulosa.  Pada  saluran  pencernaan  rayap Mastotermes darwiniensis dapat ditemukan bakteri Promicromonospora citrea, Promicromonospora sukumoe dan genus Cellulosimicrobium (Bakalidou et al . 2002). Clostridium  cellulovoran bisa  memproduksi  enzim  selulase komplek (Murashima et  al .  2002).  Selain  itu,  saluran  pencernaan  rayap    mengandung beberapa bakteri Gram-positif dari kelompok Actinomycetes ordo Actinomycetales  yang  meliputi  genus Cellulomonas,  Microbacterium , kelompok  ordo  Bacillales  yang  meliputi  genus Bacillus,  Brevibacillus dan Paenibacillus .
Terdapat juga genus Agrobacterium/Rhizobium, Brucella/Ochrobactrum, Pseudomonas (Wenzel et al . 2002). Tujuan penelitian ini  adalah  untuk  menganalisis  keberadaan  bakteri  dalam  saluran  cerna  rayap serta diidentifkasi.
2. Metode 2.1 Waktu dan Tempat Penelitian  ini  dilakukan  di  Laboratorium  Mikrobiologi  FMIPA  IPB  bulan Desember 2014.  Rayap yang digunakan dalam penelitian  ini merupakan rayap pekerja ( Macrotermes spp)  yang diambil dari tanah.
2.2 Isolasi Bakteri
Isolasi  bakteri  dari  usus  rayap  dilakukan  dengan  metode  penusukan  pada bagian  perut  rayap  dengan  ose  dan  metode  penggerusan.  Pada  metode penusukan,  perut  rayap  ditusuk  untuk  mengeluarkan  usus  menggunakan  ose. Kemudian menggunakan pinset untuk menarik usus keluar. Selanjutnya  cairan yang  ada  diperoleh  digores  kuadran  menggunakan  ose  pada  media Eosin Methylene Blue (EMB). Cairan diambil kemudian digores kuadran pada media EMB.  Pada  metode  gerus,  rayap  10  ekor  dimasukan  ke  dalam  tabung  yang berisi 0.5 ml garam fisiologis kemudian ditumbuk sampai hacur menggunakan lup.  Selanjutnya    digores  kuadran  menggunakan  ose  pada  media Eosin Methylene Blue (EMB). Untuk perlakuan gerus  digores kuadran  pada 2 media sedangkan penusukan di satu media. Setelah itu diinkubasi selama 1 hari. 2.3 Uji Fisiologis Uji  fisiologis  dilakukan  untuk  mengetahui  kemampuan  fisiologis  bakteri selulolitik  antara  lain  uji  MR-VP,  TSIA,  Indol,  simmon  sitrat,  urease  dan fermentasi  glukosa,  H 2 O 2, Uji  Oksidase .  Uji  MR-VP  ( Methyl  Red  Voges- Proskauer )  dilakukan  untuk  mengetahui  kemampuan  bakteri  dalam mengoksidasi  glukosa  dengan  menghasilkan  asam  sebagai  produk  akhir  dan berkonsentrasi  tinggi  (Sunatmo  2007).  Satu  lup  biakan  bakteri  diinokulasikan pada  media  cair  MR-VP  2,5  mL  (sebanyak  2  tabung  reaksi)  dan  diinkubasi selama 24 jam. Setelah 24 jam inkubasi, tabung reaksi pertama ditambahkan 3- 4  tetes  Merah  Metil.  Uji  positif  ditandai  dengan  warna  larutan  yang  berubah menjadi warna merah yang menandakan fermentasi asam campuran, sedangkan tabung  reaksi  kedua  ditambahkan  10  tetes  larutan  A  (α-naphtol)  dan ditambahkan  10  tetes  larutan  B  (KOH).  Selanjutnya  tabung  reaksi  dikocok kuat-kuat selama 20-30 detik, dan uji positif ditandai dengan larutan berwarna merah muda yang menandai asam.
Uji  TSIA  dilakukan  dengan  menggoreskan  biakan  dengan  ose  steril  pada media  TSIA  dengan  cara  menusuk  ose  sampai  sepertiga  dasar  tabung. Kemudian diangkat  dan digores  secara  zig  zag pada  permukaannya  setelah itu
diinkubasi  selama  24  jam  pada  suhu  ruang.  Uji  indol  dilakukan  dengan menggunakan  ose  steril,  diambil  sebagian  koloni  dari  NA  miring  lalu diinokulasikan  pada  media  indol dengan  cara diaduk,  kemudian diinkubasikan pada suhu suhu 37 0 C selama 24 jam. Setelah 24 jam ditambahkan reagen kovac sebanyak  1-2  tetes.  Uji  Simmon  sitrat  dilakukan  dengan  menggunakan  ose steril, diambil biakan dari NA miring, lalu ditanam pada media Simmon’s citrat dengan cara digores  secara  zig  zag  pada permukaannya,  setelah  itu diinkubasi selama 24 jam. Uji urease dilakukan dengan cara menusuk ose sampai sepertiga dasar  tabung,  kemudian  diinubasi  selama  24  jam.  Langkah  pertama  pada  uji fermentasi  glukosa  adalah  sebanyak  satu  lup  inokulasi  biakan  bakteri diinokulasikan  pada  media  PRGB  ( Phenol  Red  Glucose  Broth )  85  mL  yang telah diberi tabung Durham sampai tidak ada gelembung. Media PRGB stok 1 liter mengandung trypton 10 g, glukosa 5 g, NaCl 5 g, dan Phenol Red 0,018 g. Setelah  diinkubasi  selama  24  jam,  dilakukan  pengamatan  terhadap  perubahan warna  dan  ada  tidaknya  gelembung.  Warna  merah  menandakan  asam,  dan warna  merah  kuning  menandakan  basa.  Ada  tidaknya  gelembung  menandai CO 2 hasil fermentasi.

## 3. Hasil dan Pembahasan
3.1 Isolasi Bakteri
Isolasi  bakteri  asal  saluran  pencernaan  rayap  (gambar  1.A)  diperoleh  1 (satu) isolat manggunakan media EMB (gambar 1.B). Secara morfologi koloni isolat berwarna putih dengan bintik hitam di tengah, berbentuk sirkular dengan tepi periferal, tepi luar koloni undulate bergelombang dengan elevasi cembung. Media EMB adalah media isolasi untuk membedakan bakteri Enterobacteriaceae. Media  EMB  Agar   digunakan  untuk  mengetahui ada atau tidaknya  bakteri  koliform  di  dalam  usus  rayap.  Koliform  tampak  pada  media EMB dengan warna koloni hijau atau putih metalik.  Hasil isolasi  bakteri pada media  EMB  yang  telah  murni  dan  diinokulasikan  pada  media  TSA  disajikan pada gambar 1.C
3.2 3.3
Gambar  1.  (A)  Rayap  ( Macrotermes spp.),  (B).  Penggoresan  dengan  metode gerus  dan  tusuk  pada  media  EMB,  (C).  Isolat  murni  bakteri  pada  usus rayap Macrotermes spp.
Keberadaan mikroba di dalam usus rayap merupakan suatu bentuk interaksi yang menguntungkan (simbiosis mutualisme). Rayap memberikan perlindungan  berupa  tempat  yang  anaerob  dan makanan bagi  mikroba.  Di  lain pihak  mikroba  menyumbang  enzim  selulase  untuk  membantu  proses pencernaan serat kasar bagi rayap. Di dalam saluran pencernaan rayap terdapat mikroba  selulolitik  yang  berperan  dalam  mendegradasi  partikel-partikel  kayu menjadi senyawa terlarut yang banyak mengandung selulosa (kurang lebih 40- 45% bahan kering). Selain itu, Hyodo et al. (2000) melaporkan bahwa terdapat kontribusi cendawan dalam mendegradasi ligninselulosa pada pencernaan rayap. Berdasarkan tempat dan bahan yang didegradasi, maka mikroba selulolitik yang ada  di  dalam  saluran  pencernaan  rayap,  gajah,  kerbau,  dan  sapi  mempunyai karakteristik  yang  berbeda-beda,  misalnya  ada  yang  mempunyai  aktivitas CMC-ase  tinggi,  tetapi  aktivitas  eksoglukanase  maupun  β-glukosidasenya rendah, demikian pula sebaliknya (Nakashima et al . 2002).
A B B C
3.2 Uji Biokimia bakteri selulolitik yang diperoleh menunjukkan hasil yang beragam. Tabel 1  menunjukkan  hasil  uji  fisiologis  yang  meliputi  uji  katalase,  MR-VP,  dan fermentasi  glukosa  pada  media  PRGB.  Uji  katalase  positif  ditandai  dengan adanya gelembung-gelembung yang terbentuk pada saat bakteri diinokulasikan di  atas  cairan  H 2 O 2 .  Uji  fermentasi  glukosa  positif  ditandai  dengan  adanya perubahan  warna  menjadi  kuning  dan  terbentuk  gelembung  pada  tabung durham,  sedangkan  hasil  uji  MR-VP  positif  ditandai  dengan  MR  berwarna merah dan VP berwarna merah muda.
Tabel 1 Hasil uji fisiologis bakteri selulolitik No Uji Hasil Keterangan MR Negatif Warna merah (+) tidak terbentuk 2 VP Negatif Warna merah muda (+) tidak terbentuk 3 TSIA Negatif Warna kuning (+) tidak terbentuk 4 Produksi indol Negatif Lapisan merah ungu (+) tidak terbentuk 5 Fermentasi glukosa Positif Warna kuning tidak sempurna 6 Simmone Citrate Negatif Warna biru gelap (+) tidak terbentuk 7 Urease Negatif Warna merah muda (+) tidak terbentuk
Gambar 2 Hasil Uji fisioogis isolat  bakteri selulolitik. (A) Uji MR (B) Uji VP (C)  Uji  TSIA  (D)  Uji  produksi  indol  (E)  Uji  fermentasi  glukosa  (F)  Uji Simmone citrate (G) Uji urease
Uji  fisiologis  dilakukan  untuk  mengetahui  kemampuan  fisiologi  bakteri selulolitik yang diperoleh. Hasil uji MR-VP menunjukkan negatif karena warna akhir  yang  ditunjukkan  adalah  kuning  kecokelatan  bukan  merah  atau  merah muda. Hal tersebut mengindikasikan bahwa bakteri selulolitik hasil isolasi tidak mampu  mengoksidasi  glukosa  menjadi  asam  secara  sempurna.  Menurut Sunatmo  (2007),  uji  MR-VP  bertujuan  mengetahui  kemampuan  suatu  bakteri dalam mengoksidasi glukosa dengan menghasilkan asam sebagai produk akhir dan  berkonsentrasi  tinggi.  Uji  Voges  Proskauer  ditujukan  untuk  mengevaluasi kemampuan  organisme  menghasilkan  substansi  non  asam  atau  produk  akhir netral seperti asetilmetil karbonil dari asam organik sebagai hasil metabolisme glukosa.  Uji  berikutnya  yakni  TSIA  yang  bertujuan  untuk  membedakan berbagai  genus  Enterobacteriaceae  yang  kesemuanya  adalah  bakteri  Gram negatif  yang  mampu  memfermentasi  glukosa  dengan  menghasilkan  asam  dan juga  dapat  membedakan  Enterobacteriaceae  dari  Basilus  usus  lain  yang  Gram negatif. Hasil uji menunjukkan bagian agar merah juga bagian bawah atau tidak ada  perubahan  pada  bagian  bawah  (jingga-merah).  Hal  ini  mengindikasikan fermentasi  karbohidrat  tidak  berlangsung  tetapi  kaatabolisme  pepton  terjadi dalam  lingkungan  anaerobik  atau  aerobik  menghasilkan  reaksi  alkalin  akibat produksi  amonia.  Apabila  degradasi  proton  berlangsung  secara  aerobik  maka reaksi  alkalin  tampak  pada  bagian  agar  miring  sedangkan  pada  pemanfaatan aerobik dan anaerobik dari pepton maka reaksi terlihat pada bagian agar miring dan bagian bawah agar.
Uji  keempat  ialah  uji  produksi  indol  yang  ditujukan  untuk  mengetahui kemampuan  mikrob  mendegradasi  asam  amino  triptofan.  Hasil  uji menunjukkan  hasil  yang  negatif  yang  artinya  isolat  yang  diperoleh  tidak memiliki  kemampuan  menghidrolisis  triptofan.  Reaksi  positif  ditandai  dengan terbentuknya  cincin  merah  pada  permukaan  medium,  sedangkan  reaksi negatif ditandai  dengan  terbentuknya  cincin  kuning.  Uji  indol  digunakan  untuk mengetahui adanya  enzim  triptofanase  pada  bakteri  yang dapat  menghidrolisis asam  amino  triptofan  menjadi  indol  dan  asam  piruvat.  Asam  amino  triptofan merupakan asam amino yang lazim terdapat pada protein, sehingga asam amino ini dengan mudah dapat digunakan oleh mikroorganisme sebagai sumber energi. Adanya indol dapat dideteksi dengan menggunakan reagen Kovac’s yang akan membentuk  lapisan  atau  cincin  merah  pada  permukaan  medium.  Warna tersebut terbentuk karena indol yang berada dalam medium diekstrak ke dalam lapisan reagent oleh komponen asam butanol dan membentuk kompleks dengan p-dimethylaminobenzaldehyde  (Cappuccino  dan  Sherman  2005).  Uji  kelima ialah  uji  fermentasi  glukosa.  Selama  proses  inkubasi,  karbohidrat  yang
difermentasi  akan  menghasilkan  asam  yang  menyebabkan  indikator brom cressol  purple (bcp)  berubah  dari  warna  ungu  menjadi  kuning  dan  dapat  pula diikuti  dengan  pembentukan  gas  dalam  tabung  durham  (reaksi  positif),  bila tidak  terjadi  perubahan  warna  medium  maka  reaksi  negatif.  Hasil  praktikum yang  ditunjukkan  sedikit  positif,  dikarenakan  warna  yang  ditunjukkan  tidak kuning  sempurna  melainkan  merah  mendekati  kekuningan  dan  gelembung- gelembung  yang  terbentuk  pada  tabung  Durham  sangat  kecil.  Hal  tersebut mengindikasikan bahwa glukosa tidak dapat terfermentasi secara sempurna.
Uji  Simmone  citrate  merupakan  salah  satu  komponen  utama  dalam  siklus Krebs yang merupakan hasil reaksi antara asetil koenzim A (CoA) dengan asam oksaloasetat  (4C).  Sitrat  dibuat  oleh  enzim  sitrase  yang  menghasilkan  asam oksaloasetat  dan  asetat  kemudian  melalui  proses  enzimatis  diubah  menjadi asam  piruvat  dan  karbon  dioksida.  Selama  reaksi  tersebut  medium  menjadi bersifat alkali (basa) karena karbondioksida yang berikatan dengan sodium (Na) dan air (H 2 O) membentuk sodium carbonat (Na 2 CO 3 ). Adanya sodium karbonat inilah  yang  akan  mengubah  indikator bromthymol  blue pada  medium menyebabkan medium berubah warna dari hijau menjadi biru tua (biru prusia) (Cappuccino  dan  Sherman  2005).  Hasil  uji  menunjukkan  hasil  yang  negatif karena tidak terjadi perubahan warna media setelah inkubasi selama 24 jam. Uji ketujuh  ialah  uji  urease.  Reaksi  positif  ditandai  dengan  perubahan  medium menjadi merah muda (sangat merah muda).  Perubahan warna dapat terjadi saat enzim urease memutus ikatan karbon dan nitrogen untuk membentuk amoniak. Adanya  amoniak  menyebabkan  suasana  medium  menjadi  alkali/basa  sehingga indikator phenol  red akan berubah  menjadi  merah  muda  pada  medium, hal  ini mengindikasikan  terjadinya  reaksi  positif  atau  dihasilkannya  urease (Cappuccino  dan  Sherman  2005).  Hasil  uji  menunjukkan  hasil  yang  negatif karena pada media tidak terbentuk warna merah muda setelah inkubasi selama 24 jam.
Hasil  uji  fisiologis  yang  dilakukan  tidak  cukup  untuk  menduga  jenis bakteri asal  saluran pencernaan  rayap.  Perlu  dilakukan pengamatan  morfologi, atau  analisa  molekuler  untuk  mengetahui  jenis  bakterinya.  Secara  umum, bakteri  asal  saluran  pencernaan  merupakan  mikroorganisme  simbion  beserta fungi  dan  protozoa.  Menurut  Husseneder et.  al. (2005),  bakteri  asal  saluran pencernaan  terdiri  dari  spesies  bakteri  yang  termasuk  ke  dalam  kelompok Enterobacteriacea, Bacteroidales dan Lactobacillales. Rayap yang memperoleh nutrisi  dari  kayu  memiliki  kaitan  erat  dengan  mikroorganisme  simbion  yang hidup  di  saluran  pencernaan  rayap.  Mikroorganisme  simbion  tersebut  berupa protozoa,  fungi,  atau  bakteri.  Mikroorganisme  simbion  ini  berperan  dalam proses  pencernaan  selulosa  dan  hemiselulosa,  asetogenesis,  hidrogenesis, metanogenesis, reduksi sulfat, dan fiksasi nitrogen (Adams dan Boopathy 2005). Salah  satu  protozoa  berflagel  diketahui  memiliki  peran  dalam  memproduksi hydrogen  molecular  (H 2 )  ke  dalam  saluran  pencernaan  rayap  (Inoue et.  al. 2007).
Terdapat  mikroorganisme  saluran  pencernaan  rayap  yang  memiliki kemampuan  dalam  memfiksasi  nitrogen.  Peran  mikroorganisme  ini  adalah menyediakan ammonia bagi rayap karena makanan rayap merupakan jenis diet rendah  nitrogen  (Doolitle et.  al. 2008).  Terkait  dengan  metanogenesis,  rayap merupakan salah satu penyumbang gas rumah kaca metan kurang dari 5% dari total emisi metan global (Velu et. al. 2011). Menurut Radek (1999), degradasi selulosa  kayu  diawali  dengan  enzim rayap  dan  dibantu  oleh  enzim  cendawan. Hasil  degradasi  selanjutnya  diproses  oleh  protozoa  tertentu.  Bakteri  berperan dalam  menjaga  keseimbangan  populasi  dan  metabolism  di  dalam  saluran pencernaan  rayap.  Selain  itu,  beberapa  bakteri  mampu  mendegradasi  selulosa. Dalam melakukan aktivitasnya, bakteri  membutuhkan nitrogen  dan  fosfor  dari lingkungan  saluran  pencernaan. Menurut  Adams  &  Boopathy  (2005),  mikroba simbion  menciptakan  kondisi  yang  cocok  untuk  protozoa  simbion  melalui produksi  nutrisi  dan  penjagaan  kondisi  keasaman  dan  anaerob  di  saluran pencernaan.

## 4. Simpulan
Satu isolat  berhasil diisolasi dengan karakter morfologi koloni   berwarna putih  dengan  bintik  hitam  di  tengah,  berbentuk  sirkular  dengan  tepi  periferal, tepi  luar  koloni    undulate    bergelombang  dengan  elevasi  cembung.  Hasil    uji biokimia  dan  fisiologi  isolat      diketahui    uji  indol    negatif,  MR    negatif,    VP negatif, simmon sitrat negatif,  urease  negatif, fermentasi  positif.

## Pustaka
Adams L, Boopathy R. 2005. Isolation and characterization of enteric bacteria from  the  hindgut  of  Formosan  termite. Bioresource  Technology, vol  96, hal.1592–1598.
Bakalidou    A,  Kampfer    P,  Berchtold    M,  Kuhnigk  T,  Wenzel  M,  Ko  nig  H. 2002. Cellulosimicrobium  variabile sp.  a  cellulolytic  bacterium  from  the hindgut  of  the  termite Mastotermes  darwiniensis . J  Syst  Evol  Microbiol. No 52, hal. 1185–1192.
Cappuccino, JC., Sherman,N. 2005. Microbiology-A laboratory Manual. 6 th Ed. , Pearson Education (Singapore), Indian branch, Dehli, India, pp: 280-285.
Doolittle  M,  Raina  A,  Lax  A,  Boopathy  R.  2008.  Presence  of  nitrogen  fixing Klebsiella  pneumoniae in  the  gut  of  the  Formosan  subterranean  termite
A B C D E F
G
( Coptotermes  formosanus ). Bioresource  Technology vol  99,  hal.  3297– 3300.
Husseneder  C,  Billy  R.  Wise  And  Dennis  T.  Higashiguchi.  2005.  Microbial Diversity  In  The  Termite  Gut:  A  Complementary  Approach  Combining Culture  And  Culture-Independent  Techniques.  Proceedings  Of  The  Fifth International Conference On Urban Pests.
Hyodo et al . 2000. Role  of  the  mutualistic  fungus in  lignin degradation  in the fungus-growing  termite Macrotermes  gilvus (Isoptera;  Macrotermitinae). Soil Biol & Biochem vol 32, hal. 653-658.
Inoue  J,  Saita  K,  Kudo  T,  Ui  S,  Ohkuma  M.  2007.  Hydrogen  Production  By Termite  Gut  Protists:  Characterization  Of  Iron  Hydrogenases  Of Parabasalian  Symbionts  Of  The  Termite Coptotermes  Formosanus . Eukaryotic Cell vol 6 no 10, hal. 1925–1932.
Murashima  KA,  Kosugi,  Doy  RH.  2002.  Synergistic  effects  on  crystalline cellulose  degradation  between  cellulosomal  cellulases  from Clostridium cellulovorans . J. Bacteriol. Vol 184, No 18, hal. 5088-5095.
Nakashima et  al .  2002.  Dual  cellulose-digesting  system  of  the  wood-feeding termite, Coptotermes  formosanus Shiraki. Insect  Biochem  and  Molecul Biol vol 32, hal.  777-784.
Radek  R.  1999.  Flagellates,  Bacteria,  and  Fungi  Associated  with  Termites: Diversity  and  Function  in  Nutrition  -  A  Review. Ecotropica vol  5,  hal. 183-196.
Ramin AG, Shoorojeh Sj, Ashtiani HRA, Naderi MM, Behzadi MA, Tamadon A. 2008. Removal of metallic objects from animal feeds: development and studies on a new machine. J Vetr . Vol 3, no 2, hal. 1-6 Sunatmo  TI.  2007. Eksperimen  Mikrobiologi  dalam  Laboratorium .  Jakarta: Ardy Agency.
Velu G, Ramasamy K,  Kumar K, Nallapeta S, Mula RVR. 2011. Green house gas  emissions  from  termite  ecosystem. African  Journal  of  Environmental Science and Technology Vol 5, No 2, hal. 56-64.
Wenzel  MI,  Schonig  M,  Berchtold  P,  Kampfer,  Konig,  2002.  Aerobic  and facultatively  anaerobic  cellulolytic  bacteria  from  the  gut  of  the  termite Zootermopsis angusticollis . J. Applied Microbiol . Vol 92, hal. 32-40.