Pengaruh Pemberian +dalethyne Terhadap Jumlah Ekspresi IL-1 β Pada Tikus yang Diinfeksi

## P.aeruginosa
Waode Fifin Ervina* 1 , Agung Dwi Wahyu Widodo 2 , Yoes Prijata Dahlan 3 1 Program Studi S2 Imunologi, Sekolah Pascasarjana, Universitas Airlangga
2 Program Studi S2 Imunologi, Sekolah Pascasarjana, Universitas Airlangga
3 Departemen Parasitologi, Fakultas Kedokteran. Universitas Airlangga e-mail: * 1 vinaervina51@yahoo.com, 2 agung@yahoo.com

## Abstrak
Infeksi nosokomial sampai sekarang masih merupakan masalah perawatan kesehatan di  rumah  sakit  seluruh  dunia. Salah  satu  patogen  nosokomial  yang  dapat  menginfeksi penderita  yang  di  rawat  di  rumah  sakit  adalah  Pseudomonas  aeruginosa.  Saat  ini  infeksi P.aeruginosa pada pasien di rumah sakit mengalami resistensi terhadap berbagai antibiotik. Bakteri P.aeruginosa  merupakan bakteri gram negatif dan intraseluler yang dimana apabila menginfeksi sel  host akan memproduksi sitokin  proinflamasi yang berlebihan  khususnya IL- 1β dengan berbagai pathway. Pemberian +dalethyne diklaim dapat menekan produksi IL-1β dan  mempercepat  penyembuhan  luka.  Jenis  penelitian  ini  adalah  penelitian  eksperimental murni laboratorium (True Ekperimental) menggunakan rancangan penelitian Post Test Only Control  Group  Design.  Hasil  yang  didapatkan  dari  perbandingan  nilai  mean  antara kelompok yang diberi luka vc diberi luka dan bakteri vs diberi luka, bakteri dan +dalethyne yang  diamati  pada  hari  ke4  secara  berturut-turut  adalah  33±16vs42±18vs29±5.  Terlihat bahwa  +dalethyne  dapat  menurunkan  jumlah  IL-1β  karena  memiliki  kandungan  senyawa aldehyde  yang  dapat  menghambat  produksi  NF-Kb  dan  signaling  JAK2/STAT1.  Dengan begitu fase inflamasi pada area luka akan cepat terhenti dan memasuki fase proliferasi dan remodeling  jaringan    Sehingga  pemberian  +dalethyne  merupakan  salah  satu  pengobatan alternatif  yang  bisa  digunakan  pada  pasien  penderita  infeksi  nosokomial  pasca  bedah  atau luka bakar.
Kata kunci : Infeksi Nosokomial, Pseudomonas aeruginosa, Interleukin (IL)-1 β , Aldehid.

## Abstract
Nosocomial infection is still a problem of health care in hospitals worldwide. One nosocomial  pathogen  that  can  infect  patients  treated  in  the  hospital  is  Pseudomonas aeruginos.  Currently  P.aeruginosa  infection  in  patients  in  hospitals  are  resistant  to  various antibiotics.  P.aeruginosa  bacteria  are  gram-negative  bacteria  and  intracellular  wherein when infecting host cells will produce excessive proinflammatory cytokines, especially IL-1β with different pathway. Giving + dalethyne claimed to suppress the production of IL-1β and accelerate wound healing. This research is a purely experimental research laboratory (True experimental)  using  a  study  design  Post  Test  Only  Control  Group  Design.  Results  obtained from the comparison of mean values  between the group  given by injuries and wounds vc vs bacteria by wound, bacteria and + dalethyne observed on the 4th day in a row is 33 ± 16vs42 ±  18vs29  ±  5.  +  Dalethyne  looks  that  can  reduce  the  amount  of  IL-1β  because  it  contains aldehyde compounds that can inhibit the production of NF-Kb and signaling JAK2 / STAT1. Thus  the  inflammatory  phase  in the  wound  area  will quickly stalled  and entered  a  phase of proliferation and tissue remodeling Thus Award + dalethyne is one alternative treatment that can be used in patients with post-surgical nosocomial infections or burns.
Keywords: Nosocomial infection, Pseudomonas aeruginosa, Interleukin (IL)-1 β , Aldehyde.

## 1. PENDAHULUAN
Infeksi  nosokomial  sampai  sekarang masih  merupakan  masalah  perawatan  kesehatan di  rumah  sakit  seluruh  dunia. Menurut  catatan WHO  tahun  2016,  di  negara  maju  tercatat  7 kasus dari 100 penderita yang masuk rumah sakit terkena  nosokomial,  sedangkan  di  negara berkembang  terdapat  10  kasus  dari  100  pasien yang  ada  di  rumah  sakit.  Sementara  di  tahun 2013,  terdapat  penelitian  yang  menunjukkan bahwa  lebih  dari  20%  dari  infeksi  nosokomial terjadi  di  Ruang  ICU  dan  menjadi  penyebab utama  kematian  pada  pasien  khususnya  yang terbaring di ICU (Kemenkes RI, 2014).
Salah  satu  patogen  nosokomial  yang dapat  menginfeksi  penderita  yang  di  rawat  di rumah  sakit  adalah Pseudomonas  aeruginosa. Infeksi  yang  terjadi    berupa    pneumonia,  infeksi pada  mata, infeksi  pada luka  bakar  atau  luka bedah,    infeksi    kulit,    infeksi    saluran    kemih, bakteremia dan septicemia. Target utama bakteri Pseudomonas  aeruginosa adalah  pasien  fibrosis kistik,  jaringan  basah  seperti  membran  mukosa atau area di sekitar kulit yang terjadi injury.
Peningkatan    insiden    infeksi    oleh Pseudomonas  aeruginosa pada  pasien  rumah sakit  ternyata  juga  diikuti  oleh  peningkatan kejadian  resistensi  terhadap  berbagai  antibiotik. Antibiotik  yang  resisten  terhadap  bakteri  ini adalah  β-lactam,  ciprofloxacin,  tobramycin  dan colistin.  Beberapa  faktor  yang  menyebabkan bakteri  ini  resisten  yaitu  antibiotik  memiliki permeabilitas yang rendah dan terjadi mutasi gen kromosomal  pada  bakteri.  Oleh  karena  itu dibutuhkan  senyawa  yang  dapat  meningkatkan system  imun  dan  sel-sel  yang  berpengaruh terhadap  pemusnahan  bakteri  dan  merepair jaringan  kulit  yang  mengalami injury (Rehm, 2008).
Seperti  yang  diketahui  bahwa  bakteri Pseudomonas  aeruginosa merupakan  bakteri intraseluler  yang  memicu  produksi  sitokin proinflamasi  seperti  IL-1β  berlebihan  yang berakibat  perpanjangan  fase  inflamasi  sehingga lukapun  akan  lama  penyembuhannya  sehingga dipelukan  senyawa/zat  yang  dapat  berperan sebagai  imunoregulator  dalam  menyeimbangkan kelebihan  produksi  sitokin  IL-1β  dan  dapat menstimulus  pembentukkan  jaringan  baru  di kulit. +dalethyne merupakan pecahan kandungan minyak  zaitun  menjadi  zat  baru  yaitu  aldehyde. Sehingga  dengan  begitu  perlu  diadakannya penelitian ini untuk menguji pengaruh +dalethyne dalam meregulasi sel-sel imun dalam membantu  proses  penyembuhan  luka  dengan melihat ekspresi IL-1β.
2. TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Infeksi Nosokomial Infeksi nosokomial merupakan infeksi  yang  didapatkan  oleh  seseorang selama dalam masa perawatan atau pemeriksaan  di  rumah  sakit  dalam    waktu 3x24    jam    sejak    mereka    masuk    rumah sakit    tanpa  adanya  tanda  tanda  infeksi sebelumnya (Depkes, 2003).
Pseudomonas aeruginosa merupakan  penyebab  infeksi  nosokomial khususnyapada pasien yang memiliki imunitas  rendah,  pasien  dengan  luka  bakar dan dapat menyebabkan infeksi kronik pada pasien  fibrosis  kistik. P.  aeruginosa dapat resisten terhadap berbagai macam antibiotic. Bakteri  ini  dapat  dijumpai    di    lingkungan, tanah,  air  dan  kotoran, bahkan terdapat di mukosa farings dan kulit yang sehat.  Infeksi pada  manusia    umumnya    terjadi    pada penderita      dengan      keadaan  system  imun menurun.  Bakteri  ini  diketahui  dapat melakukan  kolonisasi  di  unit  operasi, medis, persalinan, dan perawatan luka bakar dalam suatu rumah sakit.

## 2.2 Pseudomonas aeruginosa
P.aerugiinosa merupakan  anggota dari kelas Gamma Proteobacteria. Bakteri ini merupakan  bakteri  gram  negatif  yang berbentuk batang dengan ukuran 0,5-0,8 μm kali 1,5-3,0 μm. Hampir semua strain adalah motil  dengan  satu  flagel  kutub  (single  polar flagellum).
Pada penelitian Freeze-etched dalam Kahlon  menemukan  bahwa P.aeruginosa memiliki  sel  envelope  yang  berbeda-beda dimana  terdiri  dari  9  lapisan,  5  diantaranya yaitu  (L1,  L3,  L5,  L7  dan  L9)  yang merupakan  electron-dense  dan  sisanya merupakan  lapisan  yang  transparan.  L1, merupakan  lapisan  yang  lembut  yang berisikan  lipid  dengan  konsentrasi  yang tinggi,  L1  dan  L3  terdiri  dari  phospholipid dan  lipopolisakarida (LPS).  LPS  merupakan struktur antigenik yang berada di luar sel dan dapat  terdeteksi  apabila  berinteraksi  dengan sel  lain  secara  serologic.  L2  merupakan lapisan  yang  transparan  yang  berisikan protein  seperti  lipoprotein  dan  glikoprotein (Kahlon, et al , 2016).
Lipopolisakarida  (LPS)  merupakan komponen  utama  pada  lapisan  luar  bakteri
gram  negatif  dan  merupakan  carbohydrate- lipid  kompleks  yang  terdiri  dari  3  domain yaitu Lipid A yang merupakan bagian terluar dari  lipopolisakarida;  core  oligosaccharide yang  berada  di  tengah  dan  O-antigen  atau yang  dikenal  juga  dengan  O-polisakarida yang merupalan  rantai  panjang  pada polisakarida.  LPS  menjadi  komponen  pada lapisan  luar  pada  membran  luar  dan memiliki  peran  penting  dalam  merespon organism yang berada di lingkungan sekitar.
LPS  pada P.aeruginosa berperan dalam  virulens  dan  rantai  O-polisakarida merupakan  tempat  melekatnya  antibody. Bakteri  ini  memiliki  2  variabel  dari  LPS yang  dikenal  yaitu  “B-band  LPS”  (dikenal dengan  O-specific  antigen—OSA)  dan  “A- band LPS” (yang dikenal dengan polysaccharide antigen—CPA— atau common  O-polysaccharide  chains).  Selain itu  juga  LPS P.aeruginosa memilki  3 domain yaitu biphosphorylated, D- glucosamine dan disaccharide–lipid A
complex;  core  olisakarida  terdiri  dari  9-10 gugusan gula.
P.aeruginosa dalam proses perlekatan  dengan  sel  host  membutuhkan reseptor yaitu pilus-associated protein PilY1.
Ikatan antara reseptor bakteri ini dan sel host terdapat pada permukaan basolateral (Heiniger, et  al .  2010).  Kemampuan P.aeruginosa untuk  masuk  ke  dalam jaringan  bergantung  pada  produksi  enzim ekstraselular  dan  toksin  yang  menyebabkan pertahanan  physical  barriers  bisa  ditembus, merusak  sel  host,  menyebabkan  resistensi terhadap fagositosis dan menurunkan imunitas  sel  host.  Beberapa  faktor  virulens yang  disekresi  oleh P.aeruginosa yaitu exotoxin  A  (ETA),  dan  empat  type  III  (T3) secreted  effectors  [exoenzyme  S  (ExoS), exoenzyme T (ExoT), exoenzyme U (ExoU), and  exoenzyme  Y  (ExoY)]  (Alouf, et  al , 2015).
Telah  banyak  hewan  uji  yang digunakan untuk mengetahui
pathogenesis  dari P.aeruginosa. model in  dapat  menggambarkan  manifestasi klinik  terhadap  infeksi P.aeruginosa. Sama  seperti  infeksi  pada  manusia, hewan  coba  yang  diinfeksi  oleh  bakteri ini secara umum membutuhkan beberapa faktor  penyebab  terjadinya  infeksi,
seperti  luka  (luka  bakar),  menurunnya system  imun  (neutropenia  atau  usia muda) dan kontaminasi langsung dengan bakteri.  Pada  kasus  luka  bakar  dimana diinokulasikan P.aeruginosa ke  daerah luka sehingga menyebabkan pathogenesis  dari  bakteri  ini  dengan kontribusi  dari  ETA  dan  system  T3. Pasien dengan imunosupresan khususnya pada penderita neutropenia menyebabkan  mudahnya  bakteri  ini untuk  menginfeksi  penderita  dan  terjadi sepsis.
ETA merupakan sitotoksik terhadap sel imun termasuk neutrofil dan makrofag  toksis  ini  dapat  berefek terhadap innate  and  adaptive  immunity dengan  cara  menghambat  presentasi antigen, produksi sitokin dan fagositosis. Sehingga bakteri ini dapat menyebabkan kerusakan  organ  (khususnya  kerusakan hati). ETA disekresi di dalam
extraselular  dan  ditransport  ke  seluruh host  dengan  target  jaringan  dan  organ. ETA  berikatan  sengan  sel  mammalian melalui  reseptor alpha  2-macroglobulin receptor /LRP protein, dimana internalisasi  ETA  melalui  reseptor  yang diperantarai oleh endositosis. Pada saat reseptor telah terdistribusi secara luas sehingga menyebabkan organ dan jaringan menjadi  berbahaya.  ETA  memfasilitasi P. aeruginosa untuk masuk ke dalam sel host.  Produksi  ETA  sebagai  pro-enzim yang diaktifkan pada permukaan sel oleh furin  yang  memfasilitasi  mekanisme untuk memberikan toksin selama transport  ke  seluruh  sel.  Pada  awal penelitian  diindikasikan  bahwa  ETA secara  signifikan  berkontribusi  dalam kematian hewan coba dengan luka bakar. Toksik  ETA  menyebabkan  kerusakan hati  yang  berat  dan  menyebabkan kematian.  Selain  itu  juga  toksin  ETA dapat menghambat sintesis protein aktivasi  sel  T  sehingga  menghasilkan produksi TNF-α. Toksik T3SS pada bakteri P.aeruginosa juga  berkontribusi  dalam
semakin  beratnya  penyakit.  Infeksi ExoU secara khusus berkontribusi dalam luka pada epithelial paru-paru, menyebarkan infeksi sehingga
menyebabkan  kematian  pada  neonatal dan  hewan  coba  dewasa  yang  menderita pneumonia.  ExoS  berkontribusi  dalam kolonisasi  bakteri  pada  paru-paru  dan menyebar  luaskan  infeksi  ke  daerah limfa pada hewan coba dengan promonia akut.  ExoT  memiliki  efek  yang  kurang dibandingkan  ExoS  dan  ExoU  pada penderita  pneumonia,  sehingga  untuk datanya  masih  meragukan  apakah  ExoT dapat  meningkatkan  penyebaran  bakteri pada pneumonia akut. ExoY sama sekali tidak  memberikan  efek  dibandingkan ExoU, ExoS, dan ExoT pada hewan coba dengan  pneumonia  dan  hewan  yang memiliki imunitas rendah. Namun ExoY dapat mencegah pembentukkan endothelial  paru-paru  setelah  infeksi pada  pneumonia  akut.  Hasil  penelitian menunjukkan  ExoS  dan  ExoU  dapat menghambat  produksi  interleukin-1β melalui  in  vivo,  dimana  merupakan komponen  utama  pada  respon  inflamasi dan dapat berkontribusi dalam pemusnahahan  bakteri.  Sel-sel  system imun  seperti  neutrofil,  monosit,  dan makrofag  merupakan  target  utama  pada toksin  T3SS  untuk  mengawali  infeksi (Alouf, et al , 2015).
P. aeruginosa juga memproduksi berbagai  molekul  kecil  yang  secara langsung  dapat  menghambat  sel-sel imun.  Pyocyanin,  sebuah  redox-active phenazine  dapat  memicu  apoptosis neutrofil  baik  secara  in  vitro  maupun  in vivo.  Dimana  cara  kerjanya  yaitu  siklus redok ini akan melibatkan pyocyanin dan NADPH pada sel host sehingga menghasilkan  oksidativ  yang  tinggi (menghasilkan ROS dan H 2 O 2 ) sehingga terjadi nekrosis. Dengan begitu menyebabkan peningkatan sitosolik kalsium,  respirasi  selular  dan  ekspresi ATPase pada membran epithelial sehingga  akan  lebih  mudah  membantu proses  infeksi.  Proses  ini  juga  dapat
menghambat
perkembangan sel epidermal dan proliferasi limfosit. Selain itu juga bakteri ini mensekresi rhamnolipid  yang  dapat  menyebabkan nekrosis  pada  neutrofil.  Rhamnolipid merupakan  molekul  ampifatik  yang memiliki tensioactive dimana  mampu menurunkan  tekanan  pada  permukaan, membentuk  emulsi  dan  menyebabkan pseudosolubilization dari  substrat  yang tidak  dapat  larut  sehingga  menyebabkan P.aeruginosa untuk  dapat  berada  di berbagai niches. Yang  terakhir,  bakteri ini  memproduksi  Type  IV  pili  (TFP) pada P.aeruginosa secara spesifik dilibatkan  dalam  proses  perlekatan bakteri  terhadap  jaringan  host,  virulensi dan pembentukkan biofilm. TFP merupakan polimer yang disusun utamanya  oleh single  repeating subunit yang  disebut  denga  pilin  yang  dikode oleh gen pilA (Kahlon, et al , 2016).
Produksi    Pyocyanin,  rhamnolipid dan  TFP  diregulasi  oleh  signal  yang dikeluarkan oleh bakteri dan mengekspresikan dalam jumlah besar ketika bakteri  berada  pada  fase  yang  tetap  atau pada  kondisi  dengan  densitas  yang  tinggi seperti biofilm ( Lavoie, et al , 2011 ).
2.3 Struktur kulit Kulit merupakan pertanahan pertama  dalam  menghadapi  microorganism di  lingkungan  sekitar,  kulit  terdiri  dari  tiga lapisan  jaringan  yang  mempunyai  fungsi dan  karakteristik  berbeda.  Ketiga  lapisan tersebut  yaitu:  lapisan    epidermis,  lapisan dermis,  dan  lapisan  subkutan  (Andersson dan Nettelblad, 2009). A. Lapisan epidermis
Lapisan    ini    merupakan    lapisan paling    tipis    dan    terluar    dari    kulit. Sangat  penting  dalam  kosmetika  karena lapisan ini memberikan tekstur, kelembaban  serta    warna  kulit.  Sel penyusun  utama  lapisan  epidermis adalah keratinosit. Keratinosit diproduksi  oleh  lapisan  sel  basal. Apabila keratinosit matang akan bergerak  ke  lapisan  di  atasnya  yang disebut  dengan  proses  keratinisasi.
Lapisan epidermis dibagi menjadi empat lapisan yaitu:
-  Lapisan sel basal (stratum basal)
Merupakan  lapisan  paling  bawah dari  epidermis  yang  terletak  di  atas lamina basalis pada perbatasan
epidermis-dermis.  Bentuk  selnya  adalah kuboid.  Lapisan  sel  basal  berfungsi melindungi  epidermis  dengan  selalu memperbarui    selnya.    Lapisan  ini mengandung  banyak  keratinosit.  Selain itu,  juga  terdapat  sel  melanosit  untuk mensintesis  melanin  dan  sel  merkel untuk sensasi.
-  Lapisan sel prickle (stratum spinosum) Merupakan  lapisan  paling  bawah kedua  setelah  lapisan  sel  basal.  Terdiri atas    sel-sel  kuboid,  atau  agak  gepeng dengan  inti  ditengah  dan  sitoplasma dengan cabang-cabang yang terisi berkas filament.  Sel  ini  berbentuk  polihedral dengan  inti  bulat  merupakan  hasil pembelahan dari sel basal yang bergerak ke  atas  dan  saling  dihubungkan  dengan desmosom.
-    Lapisan  sel  granuler  (stratum granulosum)
Merupakan  lapisan  dengan  butiran  / granula keratohialin di dalam sel. terdiri atas 3−5 lapis sel poligonal gepeng yang sitoplasmanya berisikan granul basofilik kasar.  Pada  lapisan    ini,  selnya berbentuk  datar  dan  tidak  ada  intinya.
Granula keratohialin mengandung
profilagrin  dan  akan  berubah  menjadi filagrin  dalam    dua  sampai  tiga  hari. Filagrin  akan  terdegradasi  menjadi molekul  yang  berkontribusi  terhadap hidrasi  pada  stratum  korneum  dan membantu  penyerapan  radiasi  sinar ultraviolet.
-  Lapisan  lusidum,  tampak  lebih  jelas pada  kulit  tebal,  lapisan  ini  bersifat translusens  dan  terdiri  atas  lapisan  tipis sel  epidermis  eosinofilik  yang  sangat gepeng -  Lapisan sel tanduk (stratum korneum) Merupakan lapisan paling superfisial dari  epidermis.  Lapisan  ini  terdiri  atas 15−20 lapis sel  gepeng berkeratin  tanpa inti  dengan  sitoplasma  yang  dipenuhi skleroprotein  filamentosa  birefringen, yakni keratin. Pada lapisan ini,
keratinosit    yang  sudah  matang  akan
mengalami  proses  keratinisasi.  Lapisan ini  memberikan    perlindungan  mekanik pada  kulit  dan  sebagai  barier    untuk mencegah    kehilangan    air    pada    kulit atau untuk mencegah terjadi transepidermal water loss (TEWL). B. Lapisan dermis
Merupakan  lapisan  yang  terletak  di antara  lapisan  epidermis  dan  subkutan. Lapisan  ini  lebih  tebal  daripada  lapisan epidermis.  Ketebalan  lapisan  epidermis bervariasi  tergantung  usia. Semakin  tua, ketebalan  dan  kelembaban  kulit  akan menurun.  Saraf,  pembuluh  darah,  dan kelenjar  keringat  ada  pada  lapisan  ini. Sel  penyusun  utama  lapisan  dermis adalah fibroblas yang mensintesis kolagen, elastin  dan glikosaminoglikan. Lapisan ini berfungsi untuk melekatktan lapisan epidermis dan dermis, mempertahankan  terhadap  kerusakan dari luar, serta mempertahankan integritas kulit. Dermis terdiri atas 2 lapisan dengan batas  yang  tidak  nyata,  stratum  papilare di  sebelah  luar  dan  stratum  retikular yang lebih dalam, yaitu:
a. Stratum  papilar, terdiri atas jaringan ikat  longgar,  fibroblas  dan  sel jaringan  ikat  lainnya  terdapat  di stratum  ini  seperti  sel  mast  dan makrofag.  Dari  lapisan  ini,  serabut lapisan kolagen khusus menyelip ke dalam lamina basalis dan meluas ke dalam  dermis.  Serabut  kolagen tersebut    mengikat  dermis  pada epidermis  dan  disebut    serabut penambat.
b. Stratum retikular, terdiri atas jaringan  ikat  padat  tak  teratur (terutama   kolagen tipe  I), dan oleh karena  itu  memiliki  lebih  banyak serat  dan    lebih  sedikit  sel  daripada stratum papilar. Dermis kaya dengan jaring-jaring    pembuluh  darah  dan limfa. Di daerah kulit tertentu, darah dapat  langsung    mengalir  dari  arteri ke  dalam  vena  melaui  anastomosis atau pirau  arteriovenosa.  Pirau  ini berperan    sangat  penting    pada pengaturan  suhu.  Selain komponen tersebut, dermis mengandung beberapa  turunan  epidermis,    yaitu
folikel  rambut  kelenjar  keringat  dan kelenjar sebasea.
Dermis  kaya  dengan  jaring- jaring pembuluh darah dan limfa. Di daerah  kulit    tertentu,  darah  dapat langsung  mengalir  dari  arteri  ke dalam vena melaui anastomosis atau pirau arteriovenosa. Pirau ini berperan sangat penting pada pengaturan    suhu.  Selain  komponen tersebut, dermis mengandung beberapa  turunan    epidermis,  yaitu folikel  rambut  kelenjar  keringat  dan kelenjar sebasea
C. Lapisan subkutan / hypodermis Lapisan    ini    terletak    di    bawah lapisan    dermis.    Terdiri    dari    jaringan ikat  longgar  dan  lemak.  Sel  utama lapisan subkutan adalah adiposit, merupakan sel mesenkimal khusus yang menjadi  tempat  penyimpanan  lemak, sangat  penting  sebagai  sumber  energi bagi tubuh. Hipodermis sering mengandung  sel-sel  lemak    yang jumlahnya  bervariasi  sesuai  daerah tubuh dan ukuran yang bervariasi sesuai dengan  status  gizi  yang  bersangkutan. Lapisan    ini    juga  disebut  sebagai jaringan  subkutan  dan  jika  cukup  tebal disebut  panikulus  adiposus.  Selain  itu, pada  kulit  juga  terdapat  apendiks  kulit. Yang termasuk di dalam  apendiks kulit, yaitu:  kuku,  rambut,  kelenjar    sebasea, kelenjar  ekrin,  dan  kelenjar  apokrin (Andersson dan Nettelblad, 2009).

## 2.4 Wound Healing
Luka  merupakan  gangguan  atau kerusakan  pada  secara  fungsional    dan anatomi  pada  organ  normal.  Secara  klinik luka  dapat  diklasifikasikan  dalam  2  kriteria, dimana  waktu  merupakan  faktor  yang penting  alam  management  injury  dan perbaikan  luka  yaitu  luka  akut  dan  luka kronik.
A. Luka Akut
Pada  luka  akut  organ/jaringan  dapat me- repair dirinya  sendiri  secara  normal dimana  dapat  menghasilkan  perbaikan pada struktur anatomi dan fungsionalnya.  Waktu  yang  dibutuhkan
pada  luka  akut  yaitu  5  sampai  10  hari atau dalam 30 hari.
B. Luka Kronik Luka  kronik  merupakan  pertanda bahwa dalam proses penyembuhan luka terdapat kesalahan sehingga membutuhkan  waktu  yang  lebih  lama. Beberapa faktor yang mempengaruhinya yaitu adanya infeksi, hipoksia jaringan, nerosis, dan kelebihan  sitokin  inflamatori  yang dihasilkan.  Hal  ini  dapat  terjadi  baik pada  fase  hemostatis,  inflamasi  dan proliferasi atau remodeling. Luka kronik  juga  dapat  disebabkan  oleh naturopathic,  pressure , arterial dan venous insufficiency , burns dan vasculitis (Velnar et al , 2009) .
Penyembuhan luka merupakan rangkaian  proses  yang  sangat  kompleks dimana  melibatkan  interaksi  co-ordinasi antara  berbagai  macam immunological dan system biologi. Dalam tahapannya memerlukan  cascade  secara  hati-hati  dan tepat  dalam  meregulasi  setiap  tahapannya dan  juga  dapat  berkorelasi  dengan  berbagai jenis  sel  yang  ada  pada  daerah  luka  selama dalam  proses  fase  penyembuhan  luka.  Pada luka aut terdapat beberapa fase dalam peoses penyembuha luka yang dipicu oleh kerusakan  jaringan/organ,  yang  dibagai dalam beberapa tahapan yaitu: koagulasi dan hemostasis  merupakan  tahap  awal  setelah terjadinya injury; inflamasi merupakan tahap kedua;  proliferasi  merupakan  tahap  ketiga yang  terjadi  sesaat  setelah  injury  dan merupakan proses utama dalam penyebuhan luka  dan  pembentukkan  granulasi  jaringan; dan remodeling dimana  scar  jaringan  akan menuju  ke  tempat  injury  dan  membentuk jaringan  baru,  pada  tahap  ini  membutuhkan waktu  setahun  atau  lebih  (Velnar et  al , 2009).
Pada  fase  inflamasi  melibatkan  sel- sel  humoral  dan  selular  pada  respon  imun karena  tahap  ini  melibatkan  infeksi  pada mikroorganisme.  Fase  ini  dibagi  menjadi dua  tahapan  yaitu  inflamasi  awal  dan inflamasi akhir.
Inflamasi  awal  dimulai  pada  akhir fase koagulasi dan fase ini memiliki banyak fungsi.  Pada  fase  ini  mengaktifkan  cascade complement dan mengawali tahapan
molecular  yang  menghasilkan  infliltrasi neutrofil pada daerah luka, dimana berfungsi sebagai  fagositosis  dalam  mencegah  infeksi dan membunuh mikroorganisme yang masuk.
Lama  neutrofil  berada  pada  daerah luka  yaitu  24-36  jam  yang  distimulus  oleh berbagai  macam  kemoatraktif  seperti  TGF- β,  komponen  complement  seperti  C3a  dan C5a,  dan formylmethionyl  peptides yang dihasilkan  oleh  bakteri  dan  platelet.  Hal  ini sesuai  dengan  penelitian  Lucas  yang meyatakan  bahwa  neutrofil  bertransmigrasi melalui  dinding  sel  endothelial  pada pembuluh  darah  melalui  adhesi  P-  dan  E- selektin  dan  juga inter-cellular  adhesion molecules 1 dan 2 (ICAM-1 dan  -2). Inflamasi akhir Pada tahap ini waktu yang  dibutuhkan  yaitu  48-72  jam  setelah injury.  Tahap  ini  makrofag  muncul  dan melanjutkan proses fagosit pada daerah luka. Makrofag yang masuk ke daerah luka ditarik oleh beberapa kemoatraktif seperti macrophage inflammatory protein-1α (MIP-1α)    dan    chemokine    (C-C    motif) ligand    2    (CCL2,    yang  dikenal  sebagai monocyte  chemotactic    protein-1,  MCP-1) yang  disekresi  oleh  platelet,  keratinosit, fibroblast dan leukosit (Lucas, Tina. 2011).
Penelitian  saat  ini  menunjukkan bahwa  fibroblast  pada  kulit  disebut  sebagai pertahanan pertama
dan
dapat
mengekspresikan  beberapa  TLR  ( Toll-like receptors ).  Pertahanan  pertama  ini  disebut dengan innate immune system , dimana dapat mengenal PAMPS (Patogen-associated molecular  patterns)  oleh  anggota  TLRs (Toll-like  receptors).  Dari  11  jumlah  TLRs, TLR 4 (Hajjar, et al, 2002), TLR5 (Zhang, et al, 2003), TLR  9  (Greence,  et  al,  2005)  dan NLRP3  yang  berperan  dalam  mengenal bakteri  ini.  Anggota  PAMPs  dari  bakteri P. aeruginosa yang  dikenal  yaitu  (1)  LPS (Lipopolisakarida)  merupakan  komponen terluar  pada  membran  dinding  sel  yang terdiri  dari  O  polysaccharide,  core  dan  lipid A  (2)  flagelin,  dan  (3)  cpG  DNA.  Ikatan antara PAMPs dan TLRs ini akan mengaktifkan MyD88 dan caspase 1 dengan begitu  melepaskan  NF-κB  dan  AP-1. Selanjutnya  masuk  ke  dalam  nucleus  dan mengaktifkan sitokin pro-inflamatori  (TNF- α, IL-1β dan IL-6).
2.5 Patogenesis Infeksi P. aeruginosa
P.aeruginosa memiliki reseptor yang  digunakan  untuk  dapat  berikatan dengan  jaringan  luka  yang  dikenal  dengan pilus-associated  protein  PilY1,  dimana ikatan  ini  diekspresikan  pada  permukaan basolateral sel host (Heiniger, et al , 2010).
Ikatan ini akan menyebakan aktivasi Rac  yang  merupakan  keluarga  dari  GTPase. Fungsi  dari  Rac  yaitu  dapat  meningkatkan perpindahan komponen sitosolik ke membran  sehingga  mengaktifkan  oksidasi NADPH.  Reaksi  oksidasi  NADPH  dapat menyebabkan peningkatan kebutuhan oksigen  oleh  sel  dimana  dikenal  dengan respiratory burst . Sehingga akan menghasilkan anion superoksid yang
terdapat  di  dalam  lumen  fagolisosom  dan dibentuk  oleh superoxide  dismutase (SOD) menjadi  H 2 O 2 .  Melalui  proses  kimia  dan reaksi  enzimatik  H2O2  akan  memproduksi ROS (reactive oxygen species), the hydroxyl radical (*OH), hypochlorite (OCL - )  dan hypobromite (OBR - )  (Akira, et  al ,  2017). Selain  itu  juga  terjadinya  injury  dapat menyebabkan peningkatan Ca 2+ dan pelepasan  ektraselular  ATP  oleh  enzim ectoenzym.  Pelepasan  ATP  dan  ROS  ini dapat  menyebabkan  DAMPs  (Cordeiro, 2013).

## 2.6 Fibroblast
Oksigenasi  jaringan  atau  hipoksia memiliki peran penting selama terjadi injury. Hipoksia  memiliki  faktor  transkripsi  seperti hypoxia  inducible  factor (HIF)-1α  yang dapat  meningkatkan  stimulus  hipoksik (Kendall  dan  Carol,  2014).  Keadaan hipoksia  ini  akan  menstimulus  aktivasi fibroblast, dimana hipoksia akan menginduksi  CCL3  dan  CXCL8  pada dermal  fibroblasts.  Fibroblast  berperan  pada proses  inflamasi  dan  penarikan  sel-sel  imun ketempat  injury  (CCL3  and  CXCL8  in dermal  fibroblasts  (Enzerink  dan  Vaheri, 2011).  Fibroblast  dapat  memproduksi  dan merespon berbagai sitokin inflamatori seperti    TGFβ1,  IL-1β,  interleukin-6  (IL-6), IL-13,  IL-33,  CXC,  kemokin  CC,  ROS  dan leukatrines.  Sitokin  dan  kemokin  tersebut dapat  membantu  aktivasi  dan  migrasi  sel imun  residen  seperti  makrofag.  Juga  dapat membantu  penarikan  sel-sel  imun  yang berada  pada  pembuluh  darah.  Fibroblast
yang  distimulasi  secara  kimiawi  oleh  agen inflamatori  akan  berdiferensiasi  menjadi miofibroblast  yang  dapat  meregulasi  untuk memproduksi matriks.
Fibroblast  juga  mengekspresikan TLR,  terdapat  10  TLR  yang  diekspresikan pada  fibroblast  di  jaringan  kulit.  Stimulasi fibroblast  pada  kulit  dengan  masing-masing ligannya  dapat  meningkatkan  interleukin-6 (IL-6), IL-8 dan matrix metalloproteinase-1 , diindikasikan  bahwa  semua  TLR  pada fibroblast  di  kulit  dapat  berfungsi  dengan baik.  Stimulasi  fibroblast  pada  kulit  dengan ligan  TLR1/2,  3  dan  4  dapat  menginduksi fosforilasi  dari  inhibitor  nuclear  factor  κBα dan mengaktifkan fosforilasi sinyak ekstraseluler  yang  diregulasi  oleh  kinase  ½ (Yao, et al , 2015).
TLR  4,  5  dan  9  akan  mengaktifkan MyD88.  Terdapat  dua  protein  domain MyD88  yang  bertanggung  jawab  atas fungsinya  sebagai  adaptor. Death  domain MyD88  dapat  menarik  dan  mengaktifkan  2 serin  threonin  protein  kinase  IRAK4  ( IL1- receptor  associated  kinase  4 )  dan  IRAK  1 melalui death domainnya. ,  IRAK kompleks merekrut TRAF 6 ( TNF receptor associated factor  6 )  sebuah  E3  ubikuitin  ligase  yang bekerja sama dengan UBC13 yang
merupakan E2 ubiquitin ligase dan cofaktornya  Uve1A  (yang  disebut  juga TRIKA1).  Aktivasi  gabungan  dari  TRAF  6 dan  UBC13  adalah  untuk  melekatkan  satu molekul  ubuquitin  dengan  protein  lainnya atau  dengan  molekul  ubiquitin  lainnya sehingga dapat menghasilkan protein polimer (Akira et al ., 2015).
TRAF 6 mengaktifkan serin threonin  kinase  TAK  1  (Transforming growth  factor  beta-avtivated  kinase  1)  dan MAP  (Mitogen-activated  protein)  kinase, kemudian  mengaktifkan  AP-1.  TAK  1 memforforilasi dan mengaktifkan IκB kinase (IKK) kompleks yang disusun oleh 3 protein : IKKα, IKKβ dan IKKγ atau dikenal dengan NEMO.  Aktivasi  IKK  akan  memfosforilasi IκB  kemudian  akan  mengalami  degradasi dan  melepaskan  NF-κB.  NF-κB  kemudian masuk  ke  dalam  nucleus  dan  aktifasi  AP-1 (fos, jun) mengaktifkan
sitokin proinflamatori    (TNF-α,  IL-1β  dan  IL-6) (Abbas, et al , 2015).
TGFβ,  IL-1β,  dan  IL-6  merupakan sitokin  yang  diproduksi  oleh  fibrobast  dan
dapat  menginduksi  kembali  fibroblast  untuk meningkatkan  inflamasi  dan  respon  fibrotic.
TGFβ merupakan sitokin prototypic profibrotic,  yang  berperan  pada  fibroblast dan  myofibroblasts  untuk  meningkatkan proliferasi,  migrasi,  produksi  matrik  dan produksi  sinyal  kemotaktik  yang  dapat meningkatkan  penarikan  leukosit  ke  tempat injury,  fibrosis  dan  diferensiasi  fibroblast menjadi myofibroblasts. Ekspresi dan pelepasan  sitokin  IL-1β  diinduksi  oleh berbagai  sel  termasuk  fibroblast  selama proses  inflamasi.  IL-1β  merupakan  sitokin pro-inflamatori  poten  yang  juga  dapat menginduksi  produksi  probiotik  sitokin PDGF dan TGFβ.  Faktor autokrin fibroblast yang menyebabkan fibrosis yaitu hepatocyte growth  factor (HGF).  HGF  merupakan protein  yang  diproduksi  oleh  fibroblast  dan dapat  berikatan  dengan  reseptor  tyrosine kinase  c-Met  yang  diekspresikan  pada  sel epithelial  terdekat,  sel  endothelial  dan fibroblast.  HGF  juga  berperan  penting dalam  penyembuhan  luka,  angiogenesis  dan tumorigenesis (Kendall dan Carol, 2014).

## 2.7 Molekul Adhesi
Molekul  adhesi,  integrin,  selektin dan  ligan  kemokin  merupakan  mediator paling  penting  dalam  migrasi  sel  dimana dapat  meningkatkan  interaksi  matrix  sel. Integrin  merupakan  anggota  dari  protein transmembran  yang  disusun  dari  dua  rantai polipeptida,  α  dan  β.  Domain  ektraselular pada  protein  berikan  dengan  berbagai macam ligan seperti molekul yang diekspresikan  pada    endothelium  dan komponen  matrix  ekstraselular  (fibrinektin,
laminine, vitrinectin, fibrinogen dan lainnya). Domain sitoplasmik akan
berinteraksi  dengan  komponen  sitoskeletal. Integrin  yang  banyak  diketahui  yaitu pertama,  antigen very  late  activation-4 (VLA-4) dimana diekspresikan pada leukosit dan  berinteraksi  dengan vascular  cell
adhesion molecule-1 (VCAM-1) yang diproduksi oleh endothelium. Kedua,
© (2017) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
molekul the  leukocyte  function-associated antigen-1 (LFA-1)  yang  diekspresikan  pada leukosit dan berinteraksi dengan
intercellular  adhesion  molecule-1  and  2 (ICAM-1 dan 2) yang diproduksi oleh sel-sel endothelial.  Ikatan  antara  integrin  dan ligannya  memiliki  afinitas  yang  tinggi (Tsirogianni et al , 2006).
Setelah  awal  fase  respon  imun, sitokin  proinflamatori  bekerja  pada  sel endothelial  di postcapillary  venules dan menginduksi  molekul  adhesi  seperti  E- selectin,  ICAM-1  and  VCAM-1.  Leukosit mengekspresikan  ligan  karbohidrat  yang berada  di  tepi  mikrovili  untuk  mengikat selektin  endothelial  E  dan  P,  proses  ini dikenal  dengan  istilah  “ tethering ”.  Interaksi ini  memiliki  afinitas  yang  lemah  dan leukosit mulai untuk bergerak ke permukaan endothelial  dikarenakan  oleh  adanya  aliran darah.  Sementara  kemokin  yang  diproduksi di  bagian  luar  akan  masuk  ke  dalam pembuluh  darah.  Signaling  kemokin  oleh karena  pergerakan  leukosit  menyebabkan perubahan struktur pada integrin LFA-1 dan VLA-4,  dengan  demikian  dapat  mengikat ICAM-1 dan VCAM-1 dengan afinitas yang tinggi. Hal ini akan menyebabkan terjadinya perlekatan  yang  kuat  serta  kemokin  dapat menstimulasi  extravasation  dan  migrasi  sel untuk menuju ke daerah luka (Tsirogianni et al , 2006).

## 2.8 +dalethyne
Salah  satu  kadungan  +dalethyne adalah  aldehid.  Pada  penelitian Wei,et  al tahun  2010,    mengungkapkan  bahwa aldehyde secara kuat dapat berfungsi sebagai anti  inflamatori  dimana  dapat  menekan ekspresi  ICAM-1,  vascular  cell  adhesion molecule  (VCAM)-1,  TNF-α,  IL-6  dan CD40  pada  sel  endothelial.  Selain  itu, aldehyde juga dapat
menghambat
pembentukkan  NFkB  dengan  menghambat protein IkB. Selain itu, penelitian Akram, et al tahun  2016  dengan  menggunakan aldehyde  mendapatkan  hasil  bahwa  aldehyd secara  signifikan  merupakan  anti-inflamasi baik  secara  in  vivo  maupun  in  vitro  yang
dapat  menurunkan  produksi nitric  oxide (NO)  dan inducible  nitric  oxide  synthase (iNOS)  yang  diekspresikan  oleh  makrofag.
Aldehyde  ini  dapat  menurunkan  fosforilasi
Janus kinase 2 (JAK2) dan signal Transducers and Activators of Transcription 1 (STAT1).

## 3. METODE PENELITIAN
Jenis penelitian ini adalah penelitian eksperimental  murni  laboratorium  ( True Ekperimental ) menggunakan rancangan penelitian Post  Test  Only  Control  Group Design (pengambilan data dilakukan setelah dilakukan perlakuan) dan kemudian dibandingkan  dengan  antar  kelompoknya.
Adapun  perbandingan  kelompok  tersebut yatu  kelopok  (1)  luka  +  infeksi  bakteri,  (2) luka, (3) luka+infeksi bakteri dan
+dalethyne .  Objek  penelitian  ini  yaitu  tikus galur  wistar  (Rattus  Novergicus)    dengan jumlah  masing-masing  kelompok  perlakuan 6  ekor.  Sehingga  jumlah  keseluruhan  tikus yang  dikorbankan  yaitu  36  ekor  tikus.  Jenis tikus Rattus norvegicus strain Whistar , jenis kelamin  jantan,  berumur  2-3  bulan.  Bakteri yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah Pseudomonas  aeruginosa dengan  suspensi 1,5x10 8 sel/ml yang didapatkan dari
laboratorium Mikrobiologi RSU. Dr.
Soetomo, Surabaya.
Tikus  yang  diberi  luka  insisi  pada daerah  punggung  sebesar  2  cm  dengan kedalaman  luka  hingga  mencapai  daerah dermis  kulit.  Kemudian  kelompok  3  diberi +dalethyne  dan  pada  hari  ke4  masing- masing  kelompok  tikus  dikorbankan  untuk dilihat  jumlah  ekspresi  IL-1β  pada  jaringan kulit dengan menggunakan metode imunohistokimia.  Antibodi  primer  yang digunakkan  yaitu  bioss  bs  6319  conjugated HRP dan antibodi sekunder Thermo.
3.1 Pemberian +dalethyne dan  Bakteri Pseudomonas  aeruginosa pada  Tikus Uji Kelompok  yang  diberikan  bakteri Pseudomonas  aeruginosa pada  daerah  luka insisi sebanyak 50 microliter. Pada
kelompok  perlakukan  diberikan  bakteri Pseudomonas  aeruginosa sebanyak  50
microliter kemudian diolesi dengan
+dalethyne menggunakan cotton bath sebanyak  10  mg.  Selanjutnya  pada  hari  4 masing-masing kelompok tikus dikorbankan untuk diambil jaringan kulitnya

## 3.2 Pewarnaan Imunohistokimia IL-1β
Cara  untuk  mewarnai  IL-1β  adalah jaringan  kulit  yang  telah  disayat  dengan microtome  yang  sudah  diletakkan  pada objek glass kemudian dilakukan deparafinasi,  yaitu  menghilangkan  paraffin yang ada di dalam jaringan. Adapun caranya dengan memasukkan sayatan jaringan tersebut secara berturut-turut ke dalam xylol sebanyak  3  kali  (masing-masing  2  menit), kemudian  dimasukkan  secara  berturut-turut ke dalam etanol dengan konsentrasi bertahap menurun  yaitu  mulai  dari  etanol  100%  (3 kali) masing-masing 1 menit, kemudian 95% (2  kali)  masing-masing  1  menit,  selanjutnya etanol 90%, 80% dan 70% masing-masing 1 menit.  Setelah  itu  dilakukan  pencucian dengan  air  keran  sekitar  5  menit  kemudian dimasukkan  peroksida  3%  (30  menit)  untuk menghilangkan peroksidase endogenus. Kemudian  dilakukan  pencucian  dengan  air, lalu  dibilas  dengan  aquadesilat,  kemudian ditambahkan  PBS  masing-masing  selama  2 menit.  Selanjutnya  dimasukkan  ke  dalam trypsin  0,025%  dalam  PBS  (pH  7,4)  selama 6  menit  pada  suhu  37 0 C.  Kemudian  cuci dengan PBS sebanyak 3 kali (masing-masing 2  menit).  Lalu  dimasukkan  primer  antibody monoclonal (mouse anti – Rat IL-1β) selama 30  menit,  kemudian  cuci  dengan  PBS sebanyak  3  kali  (masing-masing  2  menit), selanjutnya  dimasukkan  sekunder  antibody monoclonal yaitu Rabit anti mouse biotinaled label selama 30 menit.
Selanjutnya  dicuci  dengan  PBS  2  kali
(masing-masing 2 menit). Selanjutnya
berturut-turut dimasukkan ke dalam streptavidin HRP selama 30 menit selanjutnya  dicuci  dengan  PBS  2  kali (masing-masing  2  menit),  dimasukkan  ke dalam  substrat  kromogen:  5  menit  (DAB solution), dicuci dengan PBS 2 kali (masing- masing  2  menit)  kemudian  dibilas  dengan aquadesilat dan dimasukkan ke dalam Mayer Hematoxylin  :  6  menit,  dicuci  dengan  air mengalir. Kemudian dimounting dan
diamati/dibaca  hasilnya  pada  mikroskop cahaya pembesaran 400x dalam 10 lapangan pandang (Mayer and Walker, 1990; Sudiana, 2005).

## 4. HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasi Penelitian Tabel 4.1 Hasil Pengamatan Nilai Mean IL-1β 1 2 3 Mean ±SD 42±18 33±16 29±5 Median 45 33 31
Gambar  1  :  Perbandingan  nilai  mean  pada masing-masing kelompok. Kelompok  1  merupakan  tikus  yang diberi  luka+infeksi,  kelompok  2 tikus yang diberi luka dan kelompok 3 tikus yang diberi luka+infeksi+ dalethyne
Luka + infeksi pembesaran 400X
Luka pembesaran 400X
42 33 29 0 10 20 30 40 50 1 2 3 1 2 3
Luka + infeksi + dalethyne pembesaran 400X
Pada hasil penelitian didapatkan bahwa jumlah  IL-1- β yang  diekspresikan  pada  sel fibroblast terjadi penurunan dari kelompok yang diberi  luka+infeksi+dalethyne,  diikuti  oleh kelompok  yang  diberi  luka  dan  terakhir kelompok yang diberi luka+infeksi.

## 4.2 Pembahasan
Secara fisiologis  proses inflamasi pada daerah luka terjadi sekitar 3 hari kemudian akan masuk ke fase proinflamasi namun apabila luka diinfeksi  oleh  bakteri  Pseudomonas  aeruginosa maka  proses  inflamasi  ini  akan  bertambah panjang. Diketahui bahwa P.aeruginosa merupakan  bakteri  gram  negatif  dan  memiliki superantigen  seperti  eksotoksin  sehingga  untuk pemusnahaannya diperlukan waktu yang cukup lama. Sel host yang terinfeksi oleh P.aeruginosa akan mengenalnya dengan beberapa ligan yaitu lipopolisakarida (LPS) dan flagel.
Setelah  terjadi  injury  maka  jaringan kulit  akan  memicu  peningkatan  intaseluler Ca 2+ dan pembentukkan H 2 O 2 atau peningkatan  ATP  ekstraseluer.  ATP  yang keluar ini dikenal sebagai DAMPs (Damage- associated  molecular  patterns)  kemudian berikatan  dengan  purin  reseptor  P2Y  pada sel  yang  sehat  kemudian  akan  melepaskan sinyal sitoplasmik yang meyebabkan aktivasi Ca 2+ intraseluler dan
metalloproteinase.  Hal  ini  mengakibatkan pelepasan  ligan  EGFR  yaitu  HB-EGF ( heparin-binding  EGF-like  growth  factor ). pelepasan ATP dan Ca 2+ dapat mengaktifkan sinyal  PI3K-AKT dan ERK-MAPK pada sel epithelial. Selain itu juga daerah injury akan mengalami  hipoksia,  keadaan  hipoksia  ini akan menstimulus aktivasi fibroblast. Setelah  tikus  diberi  luka  insisi  punggung kemudian  diinfeksi  bakteri Pseudomonas aeruginosa dan diberikan +dalathyne sebagai antibiotic. Fibroblast juga mengekspresikan  TLR  maka  ada  beberapa jalur  yang  diaktifkan  yaitu:  (1)  pengenalan
cpG  DNA  dengan  TLR  9,  (2)  Pengenalan ligan  dari  bakteri  yaitu  lipopolisakarida (LPS)  yang  dikenal  oleh  TLR4.  (3)  Flagel oleh TLR 5 (3), dan (4) Flagel oleh NLRP3 di  dalam  sitosol.  Pada  jalur  (1),  (2)  dan  (3) akan  mengaktifkan  MyD88.  TIR  domain MyD88  berinteraksi  dengan  TIR  domain TLR sehingga mengaktifkan 2 serin threonin protein kinase IRAK4 (IL1-receptor
associated  kinase  4)  dan  IRAK  1.  IRAK kompleks  merekrut  TRAF  6  (TNF  receptor associated  factor  6)  sebuah  E3  ubikuitin ligase.  E2 ligase TRICA1  berperan  bersama TRAF  6  menghasilkan  scaffold  rantai poliubiquitin  pada  TRAF  6  itu  sendiri  dan mengaktifkan  serin  threonin  kinase  TAK  1 (Transforming  growth  factor  beta-avtivated kinase  1)  dan  MAP  (Mitogen-activated protein)  kinase.  TAK  1  memforforilasi  dan mengaktifkan  IκB  kinase  (IKK)  kompleks yang  disusun  oleh  3  protein  :  IKKα,  IKKβ dan  IKKγ  atau  dikenal  dengan  NEMO. Aktivasi  IKK  akan  memfosforilasi  IκB kemudian  akan  mengalami  degradasi  dan melepaskan NF-κB. NF-κB  kemudian masuk  ke  dalam  nucleus  dan  mengaktifkan sitokin  proinflamatori  khususnya  IL-1β. Kemudian pada jalur (4) terjadi ikatan antara Flagel  oleh  NLRP3.  Ikatan  ini  akan membentuk  oligomer  dan  mengikat  adaptor protein yang disebut dengan ASC. Kemudian ikatan antara ASC dan sensor dari NLRP3  ini  akan  mengaktifkan  incaspase-1, materi bakteri yang berupa flagel (rod) akan masuk  ke  dalam  sitosol  melalui  T3SS  dan mengaktifkan  pro-IL1β.  Pro-IL1β  akan berinteraksi  dengan  incaspase-1  sehingga mengaktifkan IL-1β.
Selain itu TRAF 6 juga
mengaktifkan MAP kinase yang merangsang aktivasi  JNK  (c-Jun  N-terminal  kinase)  dan fos. JNK dan fos merupakan dua komponen penyusun AP-1 (Activator protein-1). NFkB dan  AP-1  menstimulasi  aktivasi  sitokin
proinflamasi  seperti  IL-12,  IL-1β,  TNF-α, IL-6  juga  meningkatkan  aktivasi  ROS (Reactive  oxygen  species).  Selain  itu  juga, fibroblast  dapat  menstimulasi  IL-1β  yang berefek autokrin.
Dengan  begitu  produksi  IL-1β  akan meningkat dan memperpanjang masa inflamasi.  Dengan  pemberian +dalethyne
pada  kelompok  diberi  luka+infeksi  proses penyembuhan luka akan lebih cepat
dibandingkan kelompok yang diberi
luka+infeksi. Hal ini disebabkan +dalethyne
memiliki  kandungan  aldehyde  serta  asam palmitat,  asam  steorat,  asam  oleat,  asam linoleat dan myristicine. Kandungan senyawa ini diklaim dapat membantu proses bakterisidal bakteri dan mempercepat penyembuhan  luka.  Efek  aldehyde  yaitu sebagai anti-inflamasi dimana dapat menurunkan dan menghambat pembentukkan  NFkB  dengan  cara  menekan menekan ICAM-1, VCAM-1, CD40, TNF-α dan IL-6. Selain itu juga dapat menghambat signaling  JAK2/STAT1  dan  ekspresi  iNOS. Sedangkan  efek  dari  asam  palmitat,  asam steorat,  asam  oleat  dan  asam  linoleat  yaitu dapat  berperan  dalam  proses  membunuh bakteri dengan cara meningkatkan pelepasan Ca 2+ ekstraseluler dan intraseluler serta H 2 O 2 sehingga menginduksi ROS (reactive oxygen species).

## 5. KESIMPULAN DAN SARAN
Penelitian  ini  dapat  disimpulkan  bawa dengan  pemberian +dalethyne efektif  dapat menurunkan  jumlah  IL-1β  yang  diekspresikan oleh  sel  fibroblast  pada  hari  keempat  dimana dalam  waktu  itu  fase  inflamasi  masih meningkat.
Adapun  saran  yaitu  perlu  diadakan peelitian  selanjutnya  tentang  penggunaan +dalethyne  pada  kasus  pasien  penderita infeksi  nosokomial  yang  disebabkan  oleh bakteri gram positif.

## DAFTAR PUSTAKA
Abbas,  Abul  K;  Andrew  H.  Lichtman  dan
Shiv Pilai. 2015. Celullar and Molecular  Immunology,  edisi  8.
Elsevier Saunders. Philadelphia.
Akira, et  al ,  editor  Kenneth  Murtphy  dan Casey  Weaver.  2017. Janeway’s
Immunobiology  edisi  9 .  Garland Science, New York and London.
Akram, et  al .  2016. Selective  inhibition  of
JAK2/STAT1  signaling  and  iNOS expression mediates the anti- inflammatory  effects  of  coniferyl aldehyde. ChemicoBiologicalInteracti ons.http://dx.doi.org/10.1016/j.cbi.20 16.06.029.
Alouf,  Joseph;  Daniel  dan  Michael.  2015. The  Comprehensive    Sourcebook  of Bacterial  Protein Toxins. Elsevier.
Andersson dan Nettelblad, 2009. From Basic Wound  Healing  to  Modern  Skin Engineering . N. Hakim (ed.),Artificial Organs, New Techniques in Surgery Series 4, DOI 10.1007/978-1-84882-283-2_6.
Cordeiro  dan  Antonio.  2013. The  Role  Of Transcription-Independent  Damage Signals In The Initiation Of Epithelial  Wound  Healing .  Nature reviews,  molecular  cell  biology volume 14.
Depkes  RI.  2003. Infeksi  Nosokomial . Jakarta : Depkes RI.
Enzerink  dan  Vaheri,  2011. Fibroblast activation  in  vascular  inflammation.
Journal of Thrombosis and Haemostasis, 9: 619–626.
Greene,  C.  M.,  Carroll,  T.  P.,  Smith,  S.  G., Taggart,  C.  C.,  Devaney,  J.,  Griffin, S.,
Hajjar,  A.  M.,  Ernst,  R.  K.,  Tsai,  J.  H., Wilson,  C.  B.,  and  Miller,  S.  I. (2002). The Functional and Structural Properties of MD-2 Required  for  P.aeruginosa Nat. Immunol.3,354–359.
Heiniger, et  al .  2010. Infection  of  Human Mucosa  Tissue  and  By  Pseudomonas aeruginosa  requires  sequential  and mutually  dependent  virulence  factors and a novel pilus-associated adhesion. Departement of
Microbiology and Immunology. Celullar  Mikrobiology.  12(8),1158- 1173. Kahlon, et al , 2016. Pseudomonas: Molecular  and  Applied  Biology . Springer International Publishing Switzerland. Kendall  dan  Carol.  2015. Fibroblasts  in fibrosis:  novel  roles  and  mediators . Frontiersin, doi:
10.3389/fphar.2014.00123.
Kemenkes  RI,  2014. Profil  Kesehatan Indonesia  Tahun  2014 .  Jakarta  : Kemenkes RI.
Lavoie,  Elise;  Tamding  dan  Barbara.  2011. Innate immune responses to Pseudomonas  aeruginosa  infection. Microbes  Infect.  2011  December  ; 13(14-15): 1133–1145. doi:10.1016/j.micinf.2011.07.011.
Lucas,  Tina.  2011. Dynamics,  regulation and  function  of  macrophages  in  skin repair . J Immunol, 184(7):3964-77.
O’Neill, S. J., and McElvaney, N. G. (2005) Toll  like  receptor  bakcteria .  .J. Immunol.174,1638–1646. Rehm,
2008.
Pseudomonas Model
Organism,  Pathogen,  Cell  Factory. WILEY-VCH  Verlag  GmbH  &  Co. KGaA,Weinheim.
Sudiana,  I  Ketut,  2004. Teknologi  Ilmu Jaringan dan Imunohistokimia . Sagung Seto, Surabaya.
Tsirogianni,  et  al,  2006. Wound  healing:
Immunological aspects.
doi:10.1016/j.injury.2006.02.035.
Velnar,  Bailey  dan  Smrkolj.    2009. The Wound Healing Process: an Overview  of  the  Cellular  and Molecular  Mechanisms .  The  Journal of  International  Medical  Research. 2009;  37:  1528  –  1542  [first published online as 37(5) 12].
Wei ,et al. 2010. Anti-inflammatory Effect of
Protocatechuic
Aldehyde on
Myocardial Ischemia/Reperfusion Injury  In  VivoandIn  Vitro .  DOI:
10.1007/s10753-012-9581-z.
Yao, et  al .  2015. Toll-like  receptor  family members in skin fibroblastsare functional and have a higher expression compared to skin keratinocytes . DOI: 10.3892/ijmm.2015.2146.