## SINTESIS DAN UJI TOKSISITAS SENYAWA ANALOG KALKON TERSUBSTITUSI METOKSI

## Rahma Dona*, Adel Zamri, Jasril
Bidang Kimia Organik, Jurusan Kimia, FMIPA, Unversitas Riau
Email : rdona1985@yahoo.com

## ABSTRAK
Kalkon  merupakan  salah  satu  senyawa  metabolit  sekunder  golongan  flavonoid  yang  terdapat  pada  beberapa  jenis tumbuhan  dalam  jumlah  yang  relatif  sedikit.  Senyawa  ini  merupakan  prekursor  untuk  biosintesis  flavonoid  dan isoflavonoid.  Senyawa  kalkon  telah  dilaporkan  memiliki  berbagai  aktivitas  biologis  yang  menarik  seperti antimikrob,  antitumor,  antioksidan,  antiinflamasi,  antimalaria,  dan  antikanker.  Aktivitas  senyawa  kalkon dipengaruhi oleh gugus α,β-tak jenuh dan substituen yang terdapat pada cincin aromatiknya. Pada penelitian ini, tiga analog  kalkon  tersubstitusi  mono-metoksi  pada  cincin  A  aromatik  dan  cincin  B  aromatiknya  telah  disintesis menggunakan  metode  iradiasi microwave dengan  katalis  KOH  dan  pelarut  etanol.  Struktur  setiap  produk dikarakterisasi  dengan  spektroskopi  UV-Vis,  FTIR, 1 H  NMR, 13 C  NMR,  dan  HRMS.  Uji  toksisitas  dilakukan menggunakan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Berdasarkan hasil uji BSLT, ketiga senyawa tersebut berpotensi sebagai senyawa antikanker dengan nilai LC 50 <200 µg/mL.
Kata kunci: kalkon, uji toksisitas, Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)

## 1. PENDAHULUAN
Kanker  merupakan  penyebab  kematian kedua  terbesar  di  dunia  setelah  penyakit  jantung (Safavi et al., 2012).  Berbagai  macam  senyawa telah  dikembangkan  untuk  mengatasi  kanker, akan  tetapi  tidak  satupun  jenis  senyawa-senyawa tersebut menghasilkan efek yang memuaskan dan tanpa  efek  samping  yang  merugikan.  Obat antikanker yang telah ada selain memiliki khasiat sebagai  antikanker  juga  dapat  merusak  sel-sel normal. Oleh karena itu, hingga saat ini penelitian yang  berhubungan  dengan  penemuan  obat antikanker  baru  yang  ampuh,  aman  dan  selektif masih terus dilakukan oleh para peneliti. Kalkon  merupakan  senyawa  metabolit sekunder  golongan  flavonoid  yang  dapat ditemukan  pada  beberapa  jenis  tumbuhan. Senyawa kalkon dan turunannya dikenal memiliki beragam  aktivitas  biologis  yang  menarik,  seperti antiviral,  anti-inflamasi,  antimikroba,  antitumor, sitotoksik,  analgesik,  antijamur,  antioksidan, antikanker  dan  antimalaria  (Sarda et al ,  2009). Koketsu et al .  (2010),  berhasil  mensintesis senyawa  1,3-bis  (4-klorofenil)  –  3  -fenilsulfonil) propan-1-on  yang  berpotensi  sebagai  antibakteri. Selain  itu,  Yan-Fang et al .  (2012),  telah  berhasil
mengisolasi senyawa 3-hidroksi-4- metoksilonkorkarpin  yang  berkhasiat  sebagai antitumor dari tumbuhan Millettia pachycarpa. Senyawa kalkon merupakan prekursor untuk biosintesis  flavonoid  dan  isoflavonoid.  Dalam bidang  sintesis,  senyawa  kalkon  telah  banyak digunakan  untuk  membuat  berbagai  macam senyawa heterosiklik (Tiwari et al ., 2010) seperti isoksazol,  quinolinon,  tiadiazin,  benzodiazepin, flavon  (Jayapal et al. ,  2010),  ketimin  ,  tak jenuh  (Lonkar et al., 2011),  pirazolin  dan turunannya  (Sharshira  &  Hamada,  2011;  Sing et al., 2009), flavonol (Britton et al ., 2012; Jadhav et al., 2008),  flavanonol  (Patil,  2012)  flavanon (Kulkarni,  2012)  dan  senyawa  turunan  lainnya yang  juga  memiliki  aktivitas  biologis  yang menarik.  Oleh  karena  itu,  senyawa-senyawa analog  kalkon  dan  turunannya  banyak  dijadikan sebagai molekul target untuk keperluan pencarian senyawa-senyawa  aktif  sebagai  kandidat  obat, salah satunya adalah sebagai obat antikanker.
Aktivitas biologis kalkon, selain disebabkan oleh  gugus  karbonil  α,β  tak  jenuh,  juga dipengaruhi  oleh  subtituen  yang  terikat  pada kedua  cincin  aromatik  (Kamble et al., 2011). Oleh  karena  itu,  variasi  subtituen  pada  cincin
aromatik  akan  menghasilkan  kalkon  dengan struktur aktivitas yang beragam.
Pada  umumnya,  sintesis  senyawa  kalkon dilakukan  melalui  reaksi  kondensasi  Claisen Schmidt  menggunakan  turunan  benzaldehid  dan asetofenon. Reaksi pembentukan senyawa kalkon dapat  dipercepat  dengan  penambahan  katalis asam  atau  basa.  Sintesis  dapat  dilakukan  dengan metode  pengadukan,  pemanasan,  refluks,  dan iradiasi microwave .  Namun  beberapa  tahun terakhir  ini  penggunaan  energi microwave dalam reaksi organik sangat populer karena lebih aman, ramah  lingkungan  (green  chemistry),  cepat  dan menghasilkan  produk  yang  lebih  banyak dibandingkan metode konvensional.
Senyawa  hasil  sintesis  dikarakterisasi berdasarkan  interpretasi  data  spektroskopi  UV- Vis,  FTIR, 1 H  NMR, 13 C  NMR,  dan  HRMS kemudian  diuji  sifat  toksiknya  dengan  metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT).  Uji  BSLT merupakan  salah  satu  teknik  pendahuluan  untuk menentukan  letalitas  atau  toksisitas  suatu senyawa.  Uji  ini  merupakan  uji  pendahuluan untuk menentukan aktivitas antikanker dari suatu senyawa.  Hal  ini  didasarkan  pada  pemikiran bahwa sebagian besar senyawa antikanker adalah bersifat  toksik.  Pengujian  letalitas  sederhana  ini tidak spesifik untuk antikanker, tetapi merupakan indikator  sitotoksik  yang  baik  (Meyer et al., 1982). Berdasarkan metode BSLT, suatu tanaman atau hasil isolasi dianggap menunjukkan aktivitas sitotoksik  bila  mempunyai  nilai  LC 50 kecil  dari 1000  ppm,  sedangkan  untuk  senyawa  murni dianggap  menunjukkan  aktivitas  sitotoksik  bila mempunyai  nilai  LC 50 kecil  dari  200  ppm (Anderson et al., 1991).

## 2. METODOLOGI PENELITIAN

## Bahan dan Peralatan
Bahan-bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  2’-metoksi  asetofenon (Merck),  3’-metoksi  asetofenon  (Merck),  4’- metoksi asetofenon (Merck), -metoksibenzaldehid (Merck),  3-metoksibenzaldehid  (Merck),  4- metoksibenzaldehid  (Merck),  etanol  (Merck), dimetilsulfoksida  (Merck),  kalium  hidroksida (Merck), asam klorida 1 N, telur udang ( Artemia
salina Leach), air laut dan pelarut-pelarut organik yang umum digunakan.
Alat-alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini adalah alat pengukur titik leleh (Fisher John), HPLC (Shimadzu LCsolution, jenis kolom Shim- Pack VP-ODS  dengan  panjang  dan  diameternya 150  x  4,6  mm),  spektrofotometer  UV-Vis (Genesys  10S  UV-V IS v4.002  2L9N175013), spektrofotometer  FTIR  (Shimadzu,  IR  Prestige- 21), spektroskopi 1 H NMR dan 13 C NMR (Agilent 500  MHz)  di  Institut  Teknologi  Bandung, spektroskopi  massa  (MS  water  LCT  premier  XE positive  mode)  di  Institut  Teknologi  Bandung, alat-alat  untuk  sintesis  dan  uji  toksisitas  yang umum digunakan di laboratorium.

## Prosedur Kerja Sintesis
Turunan  asetofenon  (5  mmol)  dan  turunan benzaldehid  (5  mmol)  dilarutkan  dalam  5  mL etanol  dan  ditambahkan  15  mmol  KOH. Kemudian  campuran  diiradiasi  menggunakan microwave dengan  daya  180  Watt  selama  8-15 menit.  Tahapan  reaksi  diamati  dengan  KLT. Setelah  proses  reaksi  selesai, campuran ditambahkan asam klorida 1N dan akuades dingin hingga pH menjadi netral yang ditentukan dengan pH indikator. Endapan yang dihasilkan selanjutnya  disaring  dengan  corong Buchner , dicuci  dengan n -heksana  dan  akuades  dingin, kemudian  divakum  hingga  kering.  Senyawa kalkon  yang  tidak  murni  direkristalisasi menggunakan etilasetat panas. Analisis kemurnian dilakukan melalui KLT, uji titik leleh, dan HPLC.
Uji  Toksisitas  dengan  Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
Uji toksisitas dengan metode BSLT dilakukan berdasarkan  metode  yang  telah  dilakukan  oleh Meyer et al. (1982).  Kista  udang A. salina ditetaskan  dalam  wadah  pembiakan  yang  berisi air  laut,  dan  digunakan  setelah  aerasi  selama  48 jam  (setelah  terbentuk  larva).  Vial  uji  dikalibrasi dengan  5  mL  aquades.  Uji  aktivitas  toksisitas senyawa analog kalkon dilakukan pada konsentrasi  10,  1  dan  0,1  μg/mL.  Sampel sebanyak  20  mg  dilarutkan  dalam  2  mL  metanol (larutan  induk  konsentrasi  1000  µg/mL),
kemudian  dari  larutan  induk  dibuat  larutan dengan  konsentrasi  berbeda  yaitu  10  µg/mL,  1 µg/mL, dan 0,1 µg/mL dengan cara pengenceran bertingkat.  Disiapkan vial  yang  sudah dikalibrasi 5  mL  untuk  masing-masing  konsentrasi.  Sampel dipipet  ke  dalam  masing-masing  vial,  lalu diuapkan hingga mengering. Selanjutnya, kedalam  masing-masing vial ditambahkan  50  µL DMSO  dan  sedikit  air  laut.  Sebanyak  10  ekor larva  udang  yang  sudah  disiapkan  dimasukkan kedalam  vial  tersebut  dan  ditambahkan  air  laut hingga  batas  kalibrasi  5  mL.  Tingkat  toksisitas senyawa  analog  kalkon  diukur  dengan  cara menghitung jumlah larva udang yang mati dalam selang waktu 24 jam. Pengujian dilakukan dengan 3  kali  pengulangan  dan  data  dianalisis  untuk menentukan  nilai  LC 50 dengan  metode  kurva menggunakan tabel analisis probit.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Senyawa  analog  kalkon  (RD 1 )-(RD 3 ) diperoleh  melalui  reaksi  kondensasi  keton aromatik  dan  aldehid  aromatik  tersubstitusi mono-metoksi.  Proses  sintesis  dipercepat  dengan penambahan  larutan  KOH 3 N  sebagai  katalis dibawah kondisi iradiasi microwave dengan daya
180  Watt  selama  8-15  menit.  Skema  reaksi sintesis  senyawa  analog  kalkon  (RD 1 )-(RD 3 ) tersebut dapat dilihat pada Gambar 7 . Senyawa  analog  kalkon  (RD 1 )-(RD 3 )  hasil sintesis  berupa  serbuk  berwarna  kuning. Rendemen senyawa murni yang dihasilkan cukup baik  (51-63%).  Analisis  kemurnian  senyawa analog  kalkon  hasil  sintesis  ditentukan  melalui KLT,  titik  leleh,  dan  HPLC.  Analisis  kemurnian dengan  KLT  dilakukan  menggunakan  eluen n - heksana:  etil  asetat  (7:3)  dan  menunjukkan  satu noda. Hasil analisis kemurnian dengan titik leleh diketahui  bahwa  jarak  leleh  senyawa  analog kalkon  secara  teori  dan  hasil  penelitian  2 o C. Analisis  kemurnian  dengan  HPLC  menghasilkan kromatogram  dengan  satu  puncak  dominan  pada t R = 10,8 menit untuk senyawa (1), t R = 11,2 menit untuk  senyawa  (2),  dan  t R =  10,6  menit  untuk senyawa  (3).  Data  tersebut  menunjukkan  bahwa senyawa  analog  kalkon  (RD 1 )-(RD 3 )  yang dihasilkan  telah  murni.  Senyawa  analog  kalkon (RD 1 )-(RD 3 ) dikarakterirasi menggunakan spektroskopi UV, IR, 1 H-NMR dan HRMS. Sifat Fisik  senyawa  (RD 1 )-(RD 3 )  dapat  dilihat  pada Tabel 2.
O H O + O 15 mmol KOH 3N 5 mL Etanol PA
5 mmol 5 mmol R'
R R' R (RD 1 ) R = 4-OMe, R’ = 2-OMe (RD 2 ) R = 4-OMe, R’ = 3-OMe
(RD 4 ) R = 4-OMe, R’ = 2-OMe Gambar. 7 . Reaksi sintesis senyawa analog kalkon RD 1 -RD 3
Tabel. 2 . Sifat fisik senyawa analog kalkon RD 1 -RD 3 Senyawa Rumus Molekul Berat Molekul Rendemen (%) Warna Titik leleh ( o C) R f (n-heksan:EtOAc) (1) C 17 H 16 O 3 269,1173 51,14 Kuning 96-98 0,78 (7:3) (2) C 17 H 16 O 3 269,1180 62,07 Kuning 46-48 0,82 (7:3) (3) C 17 H 16 O 3 269,1176 63,91 Kuning 62-64 0,74 (7:3)
Spektrum  UV  senyawa  RD 1 -RD 3 dalam  pelarut  metanol  (MeOH)  berturut-turut memperlihatkan  adanya  serapan  maksimum pada  λ  205  nm,  236  nm,  dan  346  nm  untuk senyawa  (1),    serapan  maksimum  pada  λ  207 nm,  223  nm,  dan  343  nm  untuk  senyawa  (2), serapan  maksimum  pada  λ  206  nm,  221  nm, dan  334  nm  untuk  senyawa  (3)  menunjukkan adanya  ikatan  rangkap  terkonjugasi  yang merupakan ciri khas dari senyawa kalkon.
Spektrum  FTIR  senyawa  RD 1 -RD 3 memperlihatkan adanya serapan pada bilangan gelombang (cm -1 ) 1660-1667 mengindikasikan adanya gugus C=O terkonjugasi dengan ikatan rangkap  α,β  tak  jenuh.  Serapan  pada  bilangan gelombang 1564-1606 mengindikasikan
adanya  ikatan  C=C  alkena  yang  terkonjugasi dengan  karbonil  dan  cincin  aromatik.  Serapan pada bilangan gelombang 3070-3080
mengindikasikan adanya ikatan C-H aromatik. Serapan  pada  bilangan  gelombang  1166-1178 mengindikasikan adanya ikatan C-OMe.
Spektrum 1 H-NMR  senyawa  analog kalkon  RD 1 -RD 9 menunjukkan  pergeseran yang  khas  pada  proton  gugus  metoksi.  Proton tersebut terdapat pada pergeseran kimia δ 3,00- 4,00 ppm dengan puncak singlet dan integritas 3H.  Proton  yang  terdapat  pada  C α dan  C β memiliki  nilai  tetapan  kopling  ( J )  15-16  Hz dengan  puncak doublet .  Nilai  tetapan  kopling tersebut  menunjukkan  bahwa  ikatan  rangkap pada C α dan C β mempunyai konfigurasi trans.
Tabel. 3. Interpretasi data 1 H NMR senyawa analog kalkon RD 1 , RD 2 , dan RD 3 Nomor Atom Senyawa RD 1 Senyawa RD 2 Senyawa RD 3  H (ppm)  H (ppm)  H (ppm) 1 - - - 2 7,60 (d; 2H; J =8,5 Hz) 7,60 (d; 2H; J =8,5 Hz) 7,53 (d; 2H; J =8,5 Hz) 3 6,94 (d; 2H; J =9 Hz) 6,93 (d; 2H; J =9 Hz) 6,91 (d; 2H; J =9 Hz) 4 3,85 (s, 3H, -OCH 3 ) 3,85 (s, 3H, -OCH 3 ) 3,84 (s, 3H, -OCH 3 ) Nomor Atom Senyawa RD1 Senyawa RD2 Senyawa RD3  H (ppm)  H (ppm)  H (ppm) 5 6,94 (d; 2H; J =9 Hz) 6,93 (d; 2H; J =9 Hz) 6,91 (d; 2H; J =9 Hz) 6 7,60 (d; 2H; J =8,5 Hz) 7,60 (d; 2H; J =8,5 Hz) 7,53 (d; 2H; J =8,5 Hz) C  7,43 (d; 1H α ; J =15,5 Hz) 7,39 (d; 1H α ; J =15,5 Hz) 7,23 (d; 1H α ; J =16 Hz)
C 
7,78 (d; 1H β ; J =15,5 Hz) 7,78 (d; 1H β ; J =16 Hz)
7,54 (d; 1H β ; J =15,5 Hz) 1’ - - - 2’ 8,03 (d; 2H; J =8,5 H) 7,53 (t; 1H; J =2 Hz) 3,89 (s, 3H, -OCH 3 ) 3’ 6,98 (d; 2H; J =9 Hz) 3,88 (s, 3H, -OCH 3 ) 6,99 (d; 2H; J =8,5 Hz) 4’ 3,89 (s, 3H, -OCH 3 ) 7,11 (dd; 1H; J a =2,5 Hz dan
J b =10,5 Hz) 7,46 (t; 1H, J =7,5 Hz) 5’ 6,98 (d; 2H; J =9 Hz) 7,40 (t; 1H; J =8 Hz) 7,03 (d; 1H; J =7,5 Hz) 6’ 8,03 (d; 2H; J =8,5 H) 7,59 (d; 1H; J =6 Hz) 7,59 (dd; 1H; J a =3 Hz dan
J b =4,5 Hz)
Berat  molekul  senyawa-senyawa  hasil sintesis  dikonfirmasi  melalui  spektroskopi  massa (HRMS). Berat molekul senyawa RD 1 ditunjukkan  oleh  spektrum  massa  yang  dihitung sebagai  C 17 H 16 O 3 [M+H] + dengan  puncak  ion molekul  m/z  269,1178  dan  ditemukan  pada spektrum  massa dengan puncak ion  molekul  m/z 269,1173, selisih massa molekul tersebut 0,0005. Berat  molekul  senyawa  RD 2 ditunjukkan  oleh spektrum  massa  yang  dihitung  sebagai  C 17 H 16 O 3 [M+H] + dengan  puncak  ion  molekul  m/z 269,1178  dan  ditemukan  pada  spektrum  massa dengan puncak ion molekul m/z 269,1180, selisih massa  molekul  tersebut  0,0002.  Berat  molekul senyawa  RD 3 ditunjukkan  oleh  spektrum  massa yang  dihitung  sebagai  C 17 H 16 O 3 [M+H] + dengan puncak ion molekul m/z 269,1178 dan ditemukan pada spektrum massa dengan puncak ion molekul m/z  269,1176,  selisih  massa  molekul  tersebut 0,0002..  Selisih  massa  berdasarkan  spektrum massa  dengan  massa  perhitungan  menunjukkan perbedaan yang sangat kecil antara senyawa yang diharapkan  dengan  senyawa  kalkon  yang diperoleh  dan  dapat  dikatakan  bahwa  senyawa kalkon  tersebut  sangat  murni.  Dengan  demikian dapat  dikatakan  bahwa  senyawa  kalkon  tersebut mempunyai  struktur  sesuai  dengan  yang diharapkan .
Uji  toksisitas  terhadap  senyawa  kalkon RD 1 -RD 3 dilakukan menggunakan metode BSLT. Hasil  uji  toksisitas  terhadap  senyawa  kalkon tersebut dapat dilihat pada Tabel 4 .
Tabel. 4 . Hasil uji toksisitas Senyawa Nilai LC 50 (µg/mL) RD 1 1,045 RD 2 2,008 RD 3 0,617
Berdasarkan  uji  BSLT  yang  telah  dilakukan, dapat  dikatakan  bahwa  senyawa-senyawa  kalkon turunan 2’-hidroksiasetofenon tersebut berpotensi aktif sebagai senyawa antikanker yang dibuktikan dengan nilai LC 50 <200 µg/mL.
4. KESIMPULAN DAN SARAN
Melalui  penelitian  ini  telah  dihasilkan  tiga analog kalkon tersubstitusi mono-metoksi
dikedua  cincin  aromatik  dengan  rendemen  yang cukup  baik  (51-63%).  Sintesis  dilakukan  melalui reaksi kondensasi Claisen-Schmidt menggunakan metode  iradiasi microwave dengan  katalis  KOH dan  menggunakan  etanol  sebagai  pelarut.  Hasil karakterisasi melalui spektroskopi UV-Vis, FTIR, 1 H  NMR, 13 C  NMR,  dan  HRMS  menunjukkan bahwa  ketiga  senyawa  hasil  sintesis  memiliki struktur  sesuai  dengan  yang  diharapkan. Berdasarkan  hasil  uji  pendahuluan  menggunakan metode  BSLT  dapat  disimpulkan  bahwa  ketiga senyawa  hasil  sintesis  berpotensi  aktif  sebagai senyawa antikanker yang dibuktikan dengan nilai LC 50 <200 µg/mL.

## DAFTAR PUSTAKA
Anderson, J.E. Goetz, C.M., dan Mclaughlin, J.L. 1991.  A  Blind  Comparison  of  Simple Bench  Top  Bioassay  and  Human  Tumor Cell Cytotoxicity as Antitumor Prescreens.
Pytochemical Analysis . 2(3): 107-111. Britton, R.G., Horner-Glister, E., Pomenya, O.A., Smith,  E.E.,  Denton,  R.,  Jenkins,  P.R., Steward,  W.P.,  Brown,  K.,  Gescher,  A., dan Sale, S. 2012. Synthesis and Biological Evaluation of Novel Flavonols as Potential Anti-Prostate  Cancer  Agent. European Journal of Medicinal Chemistry. 54:  952- 958.
Jadhav,  S.B.,  Bagul,  K.R.,  Bagul,  P.R.,  dan Gaikwad,  K.V.  2008.  Synthesis  of  Some Novel  Flavonol  Derivatives  and  Its Antimicrobial Activity. Oriental Journal of Chemistry. 24(2): 583-588.
Jayapal,  M.R.,  Prasad,  K.S.,  dan  Sreedhar,  N.Y.
2010.  Synthesis  and  Characterization  of 2,6-dihydroxy Substituted Chalcones Using PEG-400  as  a  Recyclable  Solvent.  J. Pharm. Sci & Res. 2(8):450-458.
Kamble,  V.M.,  Hatnapure,  G.D.,  Keche,  A.P.,
Birajdar, S., Patil, S.G., Tale, R.H., Rodge, A.H.,  Turkar,  S.S.,  dan  Gour,  K.  2011. Sintesis  and  Biological  Evaluation  of  a Novel Series of Methoxylated Chalcones as Antioxidant  and  Anti-microbial  agents. J.
Chem. Pharm. Res . 3(6):639-648.
Kulkarni,  P.,  Wagh,  P.,  dan  Zubaidha,  P.  2012.
An Improved and Eco-Friendly Method for
The  Synthesis  of  Flavanone  by  The
Cyclization  of  2’-Hydroxy  Chalcone  using Methane  Sulphonic  Acid  as  Catalyst.
Chemistry Journal . 2(3): 106-110.
Lonkar,  S.M.,  Mokle,  S.S.,  Vibhute,  A.Y.,  dan Vibhute,  Y.B. 2011.  Green  Approach  for The  Synthesis  of  Some  New  α,β- Unsaturated  Ketimines  under  Water Suspension. Orbital Elec. J. Chem . 3(4):197-203.
Meyer,  B.N.,  Ferrigni,  N.R.,  Putnam,  J.E., Jacosen,  L.B.,    Nichols  D.E.,  dan McLaughin,  J.L.  1982.  Brine  Shrimp:  A Convenient  General  Bioassay  for  Active Plant  Constituens. Journal of Medicinal Plant Research Planta Medica . 45: 31-34.
Patil,  V.J.  2012.  Synthesis  and  In  Vitro Antiplaque Activity  of Chalcone, Flavonol and  Flavanol  Derivatives. IJPSR. 3(12): 5006-5014.
Safavi, M., Esmati, N., Ardestani, S. K., Emami, S.,  Ajdari,  S.,  Davoodi,  J.,  Shafiee,  B.,  &
Foroumadi, A. 2012. Halogenated flavanones as potensial apoptosis-including agent:  Synthesis  and  biological  activity evaluation.  European  Journal  of  Medicinal Chemistry. 58:573-580.
Sarda,  S.R.,  Bhusare,  S.R.,  Dake,  S.A.,  Jadhav,
W.N.,  dan  Pawar,  R.P.  2009.  Solvent-free
NaOH-Al2O3  supported  synthesis  of  1,3- diaryl-2-propene-1-ones. International
Journal of ChemTech Research. 1(2): 265- 269.
Sharshira,  E.M.  dan  Hamada,  N.M.M.  2011. Synthesis  and  In  Vitro  Antimicrobial Activity of Some Pyrazolyl-1-carboxamide Derivatives. Molecules . 16: 7736-7745. Sing, P., Negi, J.S., Pant, G.J.N., Rawat, M.S.M. &  Budakoti,  A.  2009.  Synthesis  and Characterization  of  a  Novel  2-Pyrazoline.
Molbank , 613: 1-4.
Tiwari,  B.,  Pratapwar,  A.S.,  Tapas,  A.R.,  Butle, S.R., dan Vatkar, B.S. 2010. Synthesis and Antimicrobial  Activity  of  some  chalcone derivatives. International Journal of ChemTech Research. 2(1): 499-503.
Yang-Fang,  L.,  Bing,  L.,  Cong-Ying,  L.,  Xue- Hui,  S.,  Yu-Jiao,  Z.,  dan  Zhi-Peng,  Y. 2012.  A  new  prenylated  chalcone  from the  seeds  of  Millettia  pachycarpa. Chinese  Journal  of  Natural  Medicines. 10(3):  222-225 dan Beberapa Kriteria Kualitas Sayuran Daun Spinasia , Universitas Padjajaran, Bandung.
I.  Kohar,  P.  H.  Hardjo,  L.  Wijaya,  2005. Jurnal Ilmiah Sains & Teknologi I. Vol.2.
Rumajar, A.T.B. 2010. Skripsi “Penjajakan Kadar Logam  Berat  Pb  Pada  Tanaman Kangkung  Darat  (Ipomoea  reptans  Poir) Asal  Kecamatan  Medan  Deli  Dan Kangkung  Air  (Ipomoea  aquatica  Forsk) Asal  Kecamatan  Sunggal  Kota  Medan ” , USU, Medan Sunarjono.  H,  2013, Bertanam 36 Jenis Sayur , Jakarta, Penebar Swadaya.
Suparwoko,  2008, Puring paling Top Serap Timbal ,  artikel  majalah  Trubus  Online, http://www.trubus- nline.co.id/mod.php?mod=publisher&op = viewarticle & cid =1&artid=1414 edisi Jumat,  Agustus  2008,  diakses  Februari 2013.
Suharto , 2005, Dampak Pencemaran Logam Timbal (Pb) terhadap tubuh . Efek Toksik Logam . Yogyakarta.
Tafajani.  H,  2011, Panduan Komplit Bertanam Sayur dan Buah-buahan ,  Yogyakarata,
Cahaya Atma.
Widiningrum,  Miskiyah  dan  Suismono,  2007, Jurnal pertanian .  Ahaya  Kontaminasi Logam  Berat  Dalam  Sayuran  dan
Alternatif Pencegahan Cemarannya,
Vol.3,  Balai  Besar  Penelitian  dan Pengembangan  Pasca  Panen  Pertanian,
Jakarta.
Widowati,  2008.  Pencemaran  Logam  Berat Terhadap Sayuran . Jurnal Sains. Jakarta.
Widowati.  H.  2011.  Pengaruh  Logam  Berat  Cd,
Pb  Terhadap  Perubahan  Warna  Batang dan  Daun  Sayuran. Jurnal Sains .  Vol.  1, No. 4.