Pengaruh Rasio Rumput dan Konsentrat Terhadap Milk Urea Nitrogen , Progesteron, dan Status Kebuntingan Sapi Friesian Holstein
Efficacy of Grass and Concentrate Ratio on Milk Urea Nitrogen, Progesterone, and Pregnancy Status in Friesian Holstein
Enggar Hardaningtyas 1 , Imam Mustofa 2* , Sri Pantja Madyawati 2 , Rimayanti 2 , Erma Safitri 2 , Herry Agoes Hermadi 2
1 Mahasiswa Magister Biologi Reproduksi, 2 Divisi Reproduksi Veteriner, Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Airlangga . * Corresponding author : imam.mustofa@ymail.com

## Abstrak
Penelitian ini dilaksanakan dengan tujuan mengetahui pengaruh rasio rumput dan konsentrat terhadap nilai milk urea nitrogen (MUN), kadar progesteron dan status kebuntingan pada sapi perah Friesian Holstein. Sebanyak 18 sapi perah dipilih secara acak dari populasi yang kemudian dikelompokkan berdasarkan pakan, MUN  dan  kebuntingan.  Pengambilan  sampel  susu  dilakukan  pada  hari  ke-7  setelah  estrus  lalu  dites menggunakan metode Barthelot untuk mengukur kadar urea nitrogen. Sampel darah diambil tiga kali yaitu pada saat  estrus  (D0),  hari  ke-7  setelah  estrus  (D7)  dan  hari  ke-22  (D22)  setelah  estrus,  kemudian  dilakukan pengujian dengan ELISA. Pemeriksaan kebuntingan dilakukan hari ke-90 setelah inseminasi buatan melalui palpasi  rektal.  Hasil  analisis  dari  rasio  pakan  dan  konsentrat,  kadar  progesteron  dan  nilai  MUN  tidak menunjukkan  perbedaan  yang  signifikan  (p>0.05),  tetapi  pada  produksi  susu  (p<0,05).  Berdasarkan  status kebuntingan, kadar progesteron pada D22 menunjukkan perbedaan yang signifikan sedangkan pada D0 dan D7 tidak  menunjukkan  perbedaan  signifikan.  Dapat  disimpulkan  dalam  penelitian  ini  bahwa  rasio  rumput  dan konsentrat tidak meningkatkan nilai MUN, kadar progesteron dan status kebuntingan pada sapi perah Friesian Holstein.
Kata kunci: rumput, konsentrat, milk urea nitrogen , progesteron, Friesian Holstein

## Abstract
This  study  was  conducted  to  know  the  influence  of  grass  to  concentrate  ratio  to  milk  urea  nitrogen (MUN)  level,  progesterone  level  and  pregnancy  status  in  Friesian  Holstein . A  total  of  18  dairy  cows  were randomly selected from the population. The cows were grouped based on feed and MUN and pregnancy. Milk sample  collection  was  carried  out  once  on  the  seventh  day  after  estrus  (D7)  and  tested  with  the  Barthelot method for measuring urea nitrogen levels. Blood samples were taken three times, on the day of estrus (D0), seven days after estrus (D7), and twenty-two days after estrus (D22), and were tested using Immuno-Sorbent Assay  (ELISA).  Pregnancy  examination  was  carried  out  at  D90  after  artificial  insemination  through  rectal palpation.  Based  on  the  analysis,  grass  to  concentrate  ratio,  progesterone  level  and  MUN  level  showed  no significant difference (p>0.05) but it showed significantly different on milk yield (p<0,05). Based on pregnancy status, progesterone level at D22 showed significantly different whereas at D0 and D7 showed insignificantly different. MUN level and grass to concentrate level also showed significantly different. It can be concluded that the ratio of grass and concentrate did not increase MUN level, progesterone level and pregnancy rate.
Keywords: grass, concentrate, milk urea nitrogen, progesterone, Friesian Holstein
Received: 30 January 2021 Revised: 18 July 2022 Accepted: 19 August 2022

## PENDAHULUAN
Tolak  ukur  dari  keberhasilan  performa produksi  sapi  perah  adalah  adanya  siklus
reproduksi  sapi  perah  dan  produksi  susu  yang baik.  Produksi  susu  pada  sapi  perah  dapat ditingkatkan  dengan  pemberian  pakan  tinggi protein  (Nourozi et  al., 2010)  namun  seringkali
produksi  susu  yang  tinggi  tidak  diikuti  dengan performa  reproduksi  yang  baik  pula.  Gilmore et al .  (2011)  menyatakan  bahwa  sapi  perah  yang memiliki  produksi  susu  tinggi  mengalami penurunan  performa  reproduksi.  Pemberian pakan tinggi protein akan menimbulkan tingginya kadar  urea  sebagai  produk  akhir  metabolisme protein  dalam  tubuh  yang  dapat  dengan  mudah diukur  melalui  kadar  nitrogen  dalam  darah maupun susu.
Kadar  nitrogen  dalam  darah  disebut Blood Urea Nitrogen (BUN) sedangkan kadar nitrogen dalam  susu  disebut  dengan Milk  Urea  Nitrogen (MUN).  Kadar  BUN  yang  tinggi  selalu  diikuti dengan kadar MUN yang tinggi dan begitu pula sebaliknya. Sapi perah dengan kadar MUN antara 12-13,99  mg/dL-1  dan  sapi  perah  dengan  kadar MUN  14-15,99  mg/dL -1 menunjukkan  nilai fertilitas  sebesar  15%  dan  8%  lebih  tinggi daripada sapi perah dengan kadar MUN dibawah 12  mg/dL -1 .  Penurunan  nilai  fertilitas  sebanyak 10% dialami oleh sapi dengan kadar MUN diatas 18  mg/dl -1 ,  sehingga  untuk  mencapai  nilai fertilitas  maksimum  dibutuhkan  kadar  MUN antara 12-16 mg/dL -1 (Nourozi et al ., 2010).
Tingkat fertilitas sapi juga dapat dilihat dari kadar  hormon  progesteron  yang  diukur  selama siklus  estrus.  Kadar  progesteron  yang  dominan dengan eksistensi CL fungsional akan menjamin kehidupan  embrio  dan  mengurangi  kematian embrio dini. Pengukuran kadar progesteron untuk mengetahui keberhasilan IB dapat diketahui lebih dini,  dan  dari  penelitian  ini  kadar  progesteron diatas  15  ng/mL  dapat  dikatakan  positif (Pemayun dan Budiasa, 2014).
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui pengaruh  rasio  rumput  dan  konsentrat  terhadap nilai  MUN,  kadar  progesteron  dan  status kebuntingan pada sapi perah Friesian Holstein.

## METODE PENELITIAN

## Pengambilan Sampel Susu
Sampel susu diambil dari sampel sapi betina Friesian  holstein  sebanyak  18  ekor  yang dikelompokkan menjadi tiga kelompok berdasarkan  pada  kriteria  nilai  rata-rata  standar deviasi  pakan  dan  produksi  susu.  Sampel  susu
segar diperoleh pada H+7 yang diperah pada sore hari  pada  6  ekor  sapi  perah  betina  Friesian Holstein  laktasi  pada  masing-masing  kelompok dengan sampel susu sebanyak 50 ml yang diambil langsung  dari  ambing  dan  kemudian  dikemas dalam  kantong  plastik  ASI  steril  lalu  diletakkan dalam ice box bersama ice pack beku agar suhu susu  turun  dan  mendingin  sebelum  dipindahkan ke dalam freezer.

## Pengambilan Sampel Darah
Sampel  darah  didapat  dari  18  ekor  sapi betina  Friesian  Holstein  yang  dikelompokkan menjadi  tiga  kelompok  berdasarkan  pada  nilai rata-rata standar deviasi pakan dan produksi susu. Sampel  darah  diambil  dari  6  ekor  sapi  perah betina  Friesian  Holstein  saat  laktasi  masing- masing sebanyak 10 ml pada H0, H+7, dan H+22 setelah birahi.
Sapi yang telah direstrain kemudian diambil darahnya  pada  vena coccygealis yang  terletak pada daerah ventral tulang ekor kedua atau ketiga dengan  menggunakan  tabung  venoject  dan needle .  Darah  yang  telah  tertampung  lalu  diberi label dan disentrifuse untuk mendapatkan serum kemudian  didiamkan  selama  beberapa  jam  pada suhu ruang dalam keadaan miring dengan tujuan untuk  mendapatkan  serum  lebih  banyak.  Serum kemudian dipisahkan dari endapannya, disimpan kedalam microtube, diberi  label  lalu  disimpan kedalam freezer .
Serum  yang  masih  beku  terlebih  dahulu  di thawing dalam suhu kamar 27°C untuk kemudian digunakan dalam pemeriksaan ELISA. Pemeriksaan  kadar  progesteron  serum  dari sampel  serum  dilakukan  di  Laboratorium Endokrin,  Departemen  Reproduksi  Veteriner,
Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga Surabaya.

## Pemeriksaan Kadar MUN
Pemeriksaan  kadar  MUN  menggunakan metode  Berthelot.  Metode  ini  digunakan  untuk penetapan kadar urea nitrogen karena metode ini sangat  spesifik,  yaitu  melibatkan  enzim  yaitu urease (enzim umumnya mempunyai satu substrat tertentu).
Pemeriksaan  kadar  MUN  menggunakan pereaksi urease, pereaksi II (NADH), dan standart urea-N.  Standart  urea-N  sebanyak  20  mg/dl terlebih  dahulu  disimpan  pada  suhu  4°C. Selanjutnya urease, standar urea-N dan skim susu, dicampur  dan  diamkan  selama  15  menit  pada suhu 37°C atau pada suhu kamar (27°C) selama 30 menit. Setelah itu campurkan dengan pereaksi I {TRIS pH 7,8; 2- Oxoglutarate; ADP; Urease; GLDH (Glutamate dehydrogenase)} dan pereaksi II (NADH), lalu diamkan pada suhu 37°C selama 20 menit atau pada suhu kamar (27°C) selama 40 menit  atau  pada  suhu  50-60°C  selama  3  menit. Selanjutnya 2 ml aquades ditambahkan kedalam pada  masing-masing  tabung,  dicampur  rata kemudian hasil dibaca menggunakan spektrofotometer dengan panjang gelombang 546 nm.

## Pemeriksaan Kadar Hormon Progesteron
Pemeriksaan  kadar  hormon  progesteron menggunakan  metode  ELISA indirect .  Prosedur ini  melibatkan  dua  proses  pengikatan  antibody primer  dan  antibodi  sekunder  berlabel.  Antibodi primer  diinkubasi  dengan  antigen  yang  diikuti oleh inkubasi antibodi sekunder.

## Pemeriksaan Kebuntingan
Pemeriksaan kebuntingan dilakukan menggunakan teknik palpasi rektal. Pemeriksaan ini dilakukan 90 hari setelah IB oleh dokter hewan penanggungjawab kandang.

## Analisis Data
Data  yang  ada  dianalisis  menggunakan  uji homogenitas Kolmogorof  dan  Smirnov .  Data yang  homogen  akan  dilanjutkan  uji  parametrik dengan uji t.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Kadar MUN yang didapat dari susu sampel penelitian ini berada pada rentang 8-28.5 mg/dL. Kadar progesteron  diukur pada saat  birahi  (H0), pada hari ke-7 setelah birahi (H7) dan pada hari ke-22  setelah  birahi  (H22)  dengan  hasil  dalam rentang  angka  yang  berurutan  sebagai  berikut: 0.44-4.79  ng/dL;  2.82-24.26  ng/dL;  1.33-30.11
ng/dL. Penelitian ini menunjukkan hasil produksi susu  yang  berbanding  terbalik  dengan  rasio rumput dan konsentrat (R/K), dimana R/K rendah berarti  jumlah  konsentrat  yang  diberikan  lebih banyak.  Tabel  2  menunjukkan  bahwa  produksi susu  paling  tinggi  tampak  pada  R/K1  yang memiliki  R/K  paling  rendah  dari  kelompok lainnya.  Ini  berarti  kelompok  tersebut  diberikan konsentrat  dengan  jumlah  paling  tinggi  dari kelompok lain.
Kelompok R/K2 dengan produksi susu lebih rendah dari R/K1 memiliki R/K yang lebih tinggi dari R/K1 dan jumlah pemberian konsentrat yang lebih  rendah  dari  R/K1.  Kelompok  R/K3  yang memproduksi susu paling rendah dari kelompok lainnya  menunjukkan  R/K  paling  tinggi  dengan jumlah  pemberian  konsentrat  paling  rendah,  hal ini  sejalan  dengan  hasil  penelitian  Utomo et  al. (2018)  yang  menunjukkan  bahwa  sapi  yang diberikan konsentrat lebih tinggi akan menghasilkan produksi susu yang lebih tinggi.
Pemberian  pakan  dengan  kadar  protein tinggi  akan  menghasilkan  konsentrasi  urea nitrogen  yang  tinggi  dalam  plasma  dan  susu (Rukkwamsuk,  2011).  Namun  Jannah et  al. (2019)  menyatakan  bahwa  asupan  protein  yang tinggi khususnya konsentrat dalam pakan belum tentu  akan  meningkatkan  kadar  MUN.  Adanya faktor  kesamaan  genetik  dan  bobot  hidup  sapi yang hampir sama menunjukkan adanya kemampuan  yang  hampir  sama  juga  untuk mengonsumsi bahan kering (Rianto et al. , 2007), hal ini sesuai dengan hasil penelitian ini dimana tidak terdapat perbedaan yang signifikan diantara kelompok.
Kadar  MUN  pada  kelompok  R/K1  adalah 12,38  mg/dL.  Kelompok  R/K2  menunjukkan kadar  MUN  sebesar  15,53  mg/dL,  sedangkan pada kelompok R/K3 sebesar 12,43 mg/dL. Dari ketiga  kelompok  ini  didapatkan  rata-rata  kadar MUN sebesar 14,62 mg/dL. Menurut Hammond (2013), kadar MUN yang baik adalah <18 mg/dL, sehingga kadar MUN dalam penelitian ini masih termasuk  dalam  batas  normal.  Kadar  MUN adalah indikator penggunaan nitrogen yang baik. Pemberian  jumlah  protein  yang  terlalu  rendah akan berakibat turunnya kadar MUN, sebaliknya bila terlalu tinggi nilai MUN akan meningkat.
Tabel 1. Evaluasi sapi perah Friesian Holstein yang diteliti (N=24)
Parameter Minimum Maksimum Rerata± SD PS (Liter/hari) 10 35 19.46±6.3 S/C 1 8 4.04±2.24 CI (hari) 338 683 425.21±77.32 DO (hari) 37 98 61.63±16.37 BCS (Skala 1-9) 4 7 5.04±0.69 Parietas 2 5 2.21±0.66 Umur (Tahun) 3 7 4±0.78 Rumput (R, kg) 20 35 33.96±3.29 Konsentrat (K, kg) 5 16 10.42±2.78 R/K 4 2.19 3.53±1.19 MUN (mg/dL) 8 28.5 14.62±4.86 P4 H0 (ng/mL) 0.44 4.79 2.2±1.26 P4 H7 (ng/mL) 2.82 24.26 10.6±7.15 P4 H22 (ng/mL) 1.33 30.11 10.95±9.29 Tabel 2. Evaluasi parameter berdasarkan rasio Rumput/Konsentrat (R/K) Parameter R/K1 R/K2 R/K3 Rumput (R) 30±7.07 34.71±6.52 35±0 Konsentrat (K) 14.25±2.87 10.35±2.83 5.67±0.58 R/K 2.1±0.2 3.39±0.85 6.22±0.67 Produksi susu 25.75±7.89 a 19.18±6.52 b 12.67±0.58 c MUN 12.38±2.93 15.53±5.47 12.43±2.11 P4 H0 2.53±0.69 2.29±1.25 1.29±1.02 P4 H7 8.92±5.6 11.21±6.74 9.35±9.92 P4 H22 14.79±13.61 9.61±9.22 13.43±7.72 Status Kebuntingan 3/4 (75%) 6/17 (35.29%) 1/3 (66.66%)
Superskrip berbeda pada baris yang sama menunjukkan perbedaan nyata (p<0,05).
Tabel 3. Kadar R/K, MUN, dan progesteron berdasarkan status kebuntingan Parameter Bunting (n= 8) Tidak bunting (n= 16) Produksi susu 22.13±7.38 18.13±5.45 Rumput (R) 31.88±5.3 35±0 Konsentrat (K) 11.5±2.98 9.88±2.6 R/K 2.9±0.77 b 3.84±1.27 a MUN 12.13±3.08 b 15.86±5.18 a P4 H0 1.93±1.08 2.34±1.35 P4 H7 8.16±6.14 11.81±7.48 P4 H22 17.25±10.06 b 7.81±7.3 a
Superskrip berbeda pada baris yang sama menunjukkan perbedaan nyata (p<0,05).
Rasio  pemberian  rumput  dan  konsentrat pada penelitian ini tidak menunjukkan perbedaan yang  signifikan  pada  kadar  progesteron  saat birahi (H0). Penelitian ini menunjukkan rata-rata kadar  progesteron  pada  H0  tidak  terlalu  tinggi yaitu  sebesar  2,2  ng/mL  (Tabel  1).  Kadar progesteron  pada  R/K1  adalah  sebesar  2,53 ng/mL, pada R/K2 adalah sebesar 2,29 ng/mL dan pada kelompok R/K3 adalah sebesar 1,29 ng/mL (Tabel 2). Hasil penelitian Arimbawa et al. (2012)
juga  menunjukkan  rata-rata  kadar  progesteron yang  tidak  terlalu  tinggi  saat  H0  yaitu  sebesar 0,52 ng/mL. Sumber utama progesteron pada sapi adalah  korpus  luteum  sehingga  sapi  termasuk sangat tergantung korpus luteum atau keberadaan korpus  luteum  sebagai  sumber  progesteron selama  kebuntingan  sangat  diperlukan  (Hafez, 2000). Kadar progesteron yang tidak terlalu tinggi saat birahi (H0) disebabkan karena belum adanya korpus luteum yang terbentuk di awal birahi.
Kadar progesteron terdeteksi mulai meningkat pada hari ke-4 setelah birahi yaitu 2,4 ng/ml dan terus meningkat menjadi 5,2 ng/ml, 7,7 ng/ml  masing-masing  pada  hari  ke-  6  dan  ke-  8 (Valdez et al ., 2005). Hal ini senada dengan hasil penelitian ini dimana kadar progesteron pada H7 setelah birahi meningkat dengan rata-rata sebesar 10,6  ng/mL.  Kadar  progesteron  secara  berturut- turut  pada  kelompok  R/K1;  R/K2  dan  R/K3 adalah sebesar 8,92 ng/mL, 11,21 ng/mL dan 9,35 ng/mL.  Rata-rata  kadar  progesteron  pada  H22 setelah  birahi  pada  penelitian  ini  adalah  sebesar 10,95 ng/mL. Jumlah ini sesuai dengan penelitian Arimbawa et  al. (2012)  yaitu  telah  terjadi penurunan  yang  disebabkan  karena  puncak produksi progesteron pada H14 setelah birahi.
Penelitian ini menunjukkan secara signifikan bahwa  rasio  rumput  dan  konsentrat  yang  lebih kecil  memiliki  status  kebuntingan  yang  lebih tinggi  (Tabel  3),  yang  mengindikasikan  adanya asupan dan tingkat kecernaan protein yang cukup baik pada kelompok dengan R/K yang lebih kecil. Cheng et al . (2015) menyatakan bahwa indikator urea yang tinggi dalam darah sering terjadi pada sapi  dengan  produksi  susu  tinggi  dan  terbukti mengurangi sekresi progesteron dan perkembangan  fase  luteal  pada  uterus  selama kebuntingan  sehingga  menurunkan conception rates (CR).
Kelompok  sapi  bunting  juga  menunjukkan kadar  MUN  yang  lebih  rendah  daripada kelompok  sapi  yang  tidak  bunting.  Dalam penelitian  ini,  kelompok  sapi  bunting  memiliki kadar  MUN  sebesar  12,13  ng/mL  sedangkan kelompok  sapi  tidak  bunting  memiliki  kadar MUN  sebesar  15,86  ng/mL.  Hasil  ini  sesuai dengan  pernyataan  Nourozi et  al .  (2010)  dalam penelitiannya  bahwa  sapi  dengan  kadar  MUN antara 12-13,99 ng/mL memiliki tingkat fertilitas lebih tinggi daripada sapi dengan kadar MUN 14- 15.99  ng/mL.  Penelitian  Jannah et  al .  (2019) menyebutkan bahwa sapi bunting memiliki kadar MUN<14  mg/dL  dan  pada  sapi  yang  tidak bunting memiliki kadar MUN>14 mg/dL, hal ini sesuai  dengan  pendapat  Biswajit et  al. (2011) yaitu sapi yang memiliki kadar MUN>14 mg/dL mengalami  penurunan  angka  fertilitas.  Menurut Arunvipas  (2004)  dan  Roy et  al .  (2011),
konsentrasi  urea  nitrogen  yang  tinggi  yang tersebar  sebagai  BUN  dan  MUN,  jika  mencapai ≥18 ng/mL akan menurunkan CR.
Pada  H22  setelah  birahi,  kadar  progesteron pada kelompok sapi bunting lebih tinggi daripada kelompok  sapi  tidak  bunting  karena  terjadi ovulasi  yang  dilanjutkan  dengan  kebuntingan. Menurut Romano (2011), saat kebuntingan kadar progesteron  mencapai  13,9  ng/mL  dan  setelah melahirkan  akan  kembali  seperti  dalam  keadaan sebelum bunting yaitu sebesar 0,89±0,24 ng/mL. Kadar  progesteron  kurang  dari  1  ng/mL menandakan  terjadinya  fase  luteal,  sedangkan progesteron  lebih  dari  1  ng/mL  menandakan terjadinya fase folikuler.
Konsentrasi  progesteron  yang  tinggi  terjadi karena  corpus  luteum  dipertahankan  untuk memproduksi hormon progesteron hingga nantinya  akan  dibantu  dengan  keberadaan plasentom  yang  membantu  kerja  corpus  luteum. Kadar  progesteron  sampai  hari  ke-60  setelah  IB masih  sama  dengan  kisaran  kadar  progesteron pada fase luteal menandakan sapi positif bunting.

## KESIMPULAN
Dapat  disimpulkan  dalam  penelitian  ini bahwa  rasio  rumput  dan  konsentrat  tidak meningkatkan nilai MUN, kadar progesteron dan status  kebuntingan  pada  sapi  perah  Friesian Holstein.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  sampaikan  terima  kasih  kepada jajaran  dosen  dan  staf  di  Divisi  Reproduksi Veteriner Fakultas Kedokteran Hewan Universitas  Airlangga  yang  telah  menyediakan fasilitas penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Arimbawa,  I.  W.  P.,  Trilaksana,  I.  G.  N.  B.,  & Pemayun,  T.  G.  O.  (2012).  Gambaran Hormon Progesteron Sapi Bali selama Satu Siklus Estrus. Indonesia Medicus Veterinus , 1(3), 330-336.
Arunvipas, P., Van Leeuwen, J. A., Dohoo, I. R., Keefe, G. P., Burton, S. A., & Lissemore, K. D. (2008). Relationships Among Milk Urea- Nitrogen,  Dietary  Parameters,  and  Fecal Nitrogen  in  Commercial  Dairy  Herds.
Canadian  Journal  of  Veterinary  Research,
72(5), 449-453.
Biswajit, R., Brahma, B., Ghosh, S., Pankaj, P. K.,
&  Mandal,  G.  (2011).  Evaluation  of  Milk
Urea  Concentration  as  Useful  Indicator  for Dairy  Herd Management:  A  Review. Asian
Journal of Animal and Veterinary
Advantage s, 6, 1-19.
Cheng, Z., Chike, F. O., Theerawat, S. U., Susan,
C.,  &  Claire,  W.  (2015).  Relationship Between  Circulating  Urea  Concentrations and  Endometrial  Function  in  Postpartum Dairy Cows. Animals , 5, 748-773.
Gilmore,  H.  S.,  Young,  F.  J.,  Patterson,  D.  C., Wylie, A. R. G.,  Law, R. A.,  Kilpatrick, D. J.,  Elliott, C. T., &  Mayne, C. S. (2011). An Evaluation of the Effect of Altering Nutrition
and Nutritional Strategies in Early Lactation on  Reproductive  Performance  and  Estrous Behavior of High-Yielding Holstein- Friesian  Dairy  Cows. Journal  of  Dairy Science , 94, 3510-3526.
Hafez,  E.  S.  E.  (2000).  Reproduction  in  Farm Animals.  7 th ed.  Lippincott  William  &
Wilkins.  A  Wolter  Kluwer  Company.  Pp:
55-63.
Hammond,  A.  C.  (2013).  Update  on  BUN  and MUN as a Guide for Protein
Supplementation in Cattle. U.S. Department
of Agriculture. Agriculture Research
Service.  Subtropical  Agriculture  Research Station. Brooksville, Florida. Pp: 4601-4672.
Jannah, M., Mustofa, I., Utama, S., & Mulyati, S.
(2019). Identification of Estrogen Levels in Dairy  Cows  Based  on  MUN  Levels  And
Pregnancy  Rates. Indian  Journal  of  Public Health  Research  &  Development ,  10(12),
1834-1838.
Nourozi,  M.,  Alireza,  H.  M.,  Mehran,  A.,  & Mohammad,  R.  Z.  (2010).  Milk  Urea Nitrogen (MUN) and Fertility in Dairy Farm. Iranian  Journal  Animal  and  Veterinary Advance , 9(10), 1519-1525.
Pemayun, T. G. O., & Budiasa, I. G. N. B. D. M. K.  (2014).  Waktu  Inseminasi  Buatan  yang Tepat pada Sapi Bali dan Kadar Progesteron pada Sapi Bunting. Jurnal Veteriner , 15(3), 425-430.
Rianto,  E.,  Wulandari,  M.,  &  Adiwinarti,  R. (2007).  Pemanfaatan  Protein  Pada  Sapi Jantan  Peranakan  Ongole  dan  Peranakan Friesian  Holstein  yang  Mendapat  Pakan Rumput Gajah, Ampas Tahu dan Singkong. Prosiding  Puslitbangnak  Badan  Penelitian dan  Pengembangan  Pertanian  Deptan, Bogor. Hal: 64-70.
Romano,  J.  E.  (2011).  Pregnancy  Diagnosis  in Cattle.  Veterinary  population  medicine. College of Veterinary Medicine, University of Minnesota.
Rukkwamsuk,  T.  (2011).  Effect  of  Nutrition  on Reproductive Performance of Postparturient Dairy Cows in the Tropics: A Review. Thai Journal Veterinary Medical, 41, 103-107.
Utomo,  B.,  &  Miranti,  D.  P.  (2010).  Tampilan
Produksi  Susu  Sapi  Perah  yang  Mendapat Perbaikan Manajemen Pemeliharaan.
Caraka Tani , 25(1), 21-25.
Valdez,  K.  E.,  Cuneot,  S.  P.,  Gorden,  P.  J.,  & Turzillo, A. M. (2005). The Role of Thecal Androgen  Production  in  The  Regulation  of Estradiol Biosynthesis by Dominant Bovine Follicles During The First Follicular Wave.
Journal Animal Science , 83, 597-603 .