http://ejurnal.umri.ac.id/index.php/photon

## Bioetanol Limbah Ampas Nipah ( Nypa fruticans ) Menggunakan Variasi Metode Hidrolisis Enzimatik
Reni Yuliandani, Sofia Anita* Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Riau Jl. HR. Soebrantas, Simpang Baru, Kota Pekanbaru, Riau 28293 Indonesia
*Correspondence e-mail: sofia.anita@lecturer.unri.ac.id

## Abstract
Nipa waste from the nira harvest is a fibrous waste that no further processed by the people of Sabak Auh Village, Siak. Even though it has the potential to use as spent-resources product. It has high economic value. The nipa waste content was lignin which can be processed to produce second generation of bioethanol. It is an alternative material to substitute or mixture of petroleum. Bioethanol made in several stages, sample preparation, pretreatment, hydrolysis, fermentation and purification using distillation process. The purpose of this study was to compare the enzymatic hydrolysis process and acid in producing high-purity bioethanol.  Hydrolysis process using white rot fungus extract  as an enzyme and 1.5 N HCl solution (acid) as a hydrolyzing agent. The fermentation stage was used Saccharomyces cerevisiae yeast to convert glucose into bioethanol. Based on the results of the research, the hydrolysis process using enzymes was better of hydrolysis in producing bioethanol rather than acid. The highest purity was 11.78%, while bioethanol produced from the acid hydrolysis process had a purity level of 3.4%. Key words: Bioethanol, Enzyme, Hydrolysis, Purity

## Abstrak
Ampas nipah yang dihasilkan dari pamanenan nira merupakan limbah berserat yang dibuang dan tidak di olah lebih lanjut oleh masyarakat Desa Sabak Auh, Siak padahal ampas nipah ini memiliki potensi yang mampu di olah menjadi produk yang memiliki  nilai  ekonomi  yang  tinggi.  Adapun  kandungan  yang  berpotensi  tersebut  adalah  kandungan  lignin  yang  ada didalamnya,  lignin  ini  jika  diproses  menggunakan  metode  yang  tepat  mampu  menghasilkan  bioetanol  yang  merupakan bahan alternatif sebagai pengganti ataupun campuran dari bahan bakar yang berasal dari minyak bumi (biofuel). Bioetanol ini  dibuat  dengan  beberapa  tahapan  yaitu  preparasi  sampel,  pretreatment,  hidrolisis,  fermentasi  dan  pemurnian menggunakan  destilasi.  Tujuan  dilakukannya  penelitian  ini  ialah  untuk  membandingkan  variasi  yang  digunakan  pada proses hidrolisis (enzimatik & asam) dalam menghasilkan bioetanol dengan tingkat kemurnian yang tinggi. Pada proses hidrolisis menggunakan ekstrak jamur pelapuk putih (enzimatik) dan larutan HCl 1,5 N (asam) sebagai agen penghidrolisis dan pada tahapan fermentasi digunakan yeast Saccharomyces cerevisiae untuk mengkonversikan glukosa menjadi bioetanol. Berdasarkan  dari  hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan  maka  proses  hidrolisis  menggunakan  enzim  merupakan  variasi hidrolisis  terbaik  dalam  menghasilkan  bioetanol  dengan  kemurnian  tertinggi  yaitu  11,87%  sedangkan  bioetanol  yang dihasilkan dari proses hidrolisis asam memiliki tingkat kemurnian sebesar 3,4%.
Kata kunci : Bioetanol, Enzim, Hidrolisis, Kemurnian

## 1. Pendahuluan
Pohon nipah merupakan tanaman sejenis palem (palma) yang tumbuh di lingkungan hutan bakau atau daerah pasang-surut air laut. Nama ilmiah tumbuhan nipah adalah Nypa fruticans wurmb yang banyak tumbuh dan tersebar  dipulau Sumatera, Kalimantan, Sulawesi, Maluku dan Irian Jaya yang meliputi daerah pesisir pantai dan memiliki perkiraan luas sebesar 700.000 ha di seluruh Indonesia dan di Provinsi Riau memiliki luas ±100 ha (Astuti et al ., 2016). Tanaman nipah dapat yang mengandung glukosa dengan tujuan pembuatan bioetanol ini adalah dimanfaatkan menjadi suatu produk yang sangat berguna bagi dunia yaitu dijadikan sebagai bahan dasar dalam pembuatan bioetanol yang merupakan sumber energi terbarukan terbuat dari bahan baku yang berasal dari berbagai jenis tumbuh-tumbuhan sebagai energi alternatif yang termasuk kedalam kelompok energi  terbarukan  yaitu  yaitu  sebagai  pengganti  bahan  bakar  fosil  yang  ketersediaannya  semakin  hari
http://ejurnal.umri.ac.id/index.php/photon

## semakin menipis.
Ampas nipah yang dihasilkan dalam proses pemanenan nira nipah sering kali dibuang dan  tidak diolah sehingga  menjadi  limbah,  seperti  yang  diketahui  ampas  nipah  ini  mengandung  lignin/lignoselulosa  yang merupakan  senyawa  makromolekul  yang  tersusun  dari  hemiselulosa.  Luthfi  &  Hendrawan,  (2014) mengatakan lignin atau lignoselulosa merupakan bahan alam non-pangan yang sangat melimpah dan dapat digunakan  sebagai  bahan  baku  pembuatan  bioetanol.  Lignoselulosa  merupakan  komponen  organik  yang tersusun dari selulosa hemiselulosa dan lignin. Komponen penyusun ini mampu dikonversi menjadi glukosa dengan cara dihidrolisis (menggunakan enzim atau asam) yang selanjutnya akan di fermentasi menggunakan bantuan yeast Saccharomyces cerevisiae untuk mengahasilkan bioetanol.
Saccharomyces  cerevisiae  merupakan  mikroorganisme  yang  banyak  digunakan  untuk  dijadikan sebagai  ragi  yang  berperan  penting  dalam  proses  fermentasi.  Ragi  ini  dipilih  dalam  pembuatan  bioetanol karena  memiiki  daya  konversi  gula  menjadi  etanol  yang  tinggi  (Sassner  et.  al.,  2008).  Saccharomyces cerevisiae bersifat fermentif kuat dan dapat hidup dalam kondisi aerob maupun anaerob, selain itu ragi ini juga  memiliki  sifat  yang  stabil  dan  seragam,  memiliki  pertumbuhan  yang  cepat  dalam  proses  fermentasi sehingga mempercepat terbentuknya etanol dalam jumlah yang banyak (Muin et al., 2015). Kelebihan lain yang dimiliki ragi ini ialah mampu menghasilkan enzim invertase (sebagai agen pemecah sukrosa menjadi glukosa dan fruktosa) dan zymase (sebagai agen pemecah glukosa menjadi etanol dan CO2) yang berperan dalam pembentukan etanol (Wusnah et al., 2011).
(a)
(b) Gambar 1. Proses mekanisme reaksi hidrolisis asam (Rohpanae & Hadi, 2020) (a)  dan hidrolisis enzimatik (Osvaldo et al., 2012) (b) dalam pembuatan bioetanol.
Pada pembuatan bioetanol berbahan serat, dalam proses hidrolisisnya terdapat dua jenis hidrolisis yang  biasa  digunakan  yaitu  hidrolisis  dengan  menggunakan  enzim  (hidrolisis  enzimatik)  dan  hidrolisis dengan  menggunakan  asam  (hidrolisis  asam).  Perbedaan  dari  kedua  hidrolisis  ini  ialah  komponen  yang
http://ejurnal.umri.ac.id/index.php/photon
digunakan untuk menghidrolisis lignin, pada hidrolisis enzimatik menggunakan enzim lignolitik yang berasal dari ekstrak jamur pelapuk putih sedangkan hidrolisis asam menggunakan larutan asam encer. Penggunaan jamur  pelapuk  putih  ini  bertujuan  untuk  memecah  lignin  dengan  cara  mendegredasi  lignin  dengan menggunakan  enzim  lignolitik  yang  menghasilkan  enzim  peroksidase  (lignin  peroksidase  dan  mangan peroksidase) sedangkan pada hidrolisis asam menggunakan larutan asam encer bertujuan untuk merusak ikatan  yang  pada  lignin  sehingga  menjadi  monomernya.  Adapun  mekanisme  hidrolisis  dalam  pembuatan bioetanol  ditunjukan pada Gambar 1.
Pada penelitian ini akan dilakukan pembuatan bioetanol berbahan dasar serat yang berasal dari limbah ampas nipah dengan menggunakan dua metode hidrolisis yaitu metode hidrolisis enzimatik dan hidrolisis asam. Tujuian digunakan dua metode hidrolisis ini ialah untuk membandingkan bioetanol yang dihasilkan dari  masing-masing  metode  hidrolisis  yang  digunakan  sehingga  didapatkan  metode  hidrolisis  yang  tepat dalam menghasilkan tingkat kemurnian bioetanol yang tinggi. Agen penghidrolisis yang akan digunakan pada penelitian  ini  ialah  ekstrak  jamur  pelapuk  putih  (hidrolisis  enzimatik)  dan  larutan  HCl  encer.  Setelah didapatkannya produk berupa bioetanol akan dilanjutkan dengan penentuan kadar/tingkat kemurniannya menggunakan analisis Gas Chromatoghraphy (GC).
Ekstrak  jamur  pelapuk  putih  berasal  dari  jamur  pelapuk  putih  yang  dihaluskan  kemudian  diambil ekstraknya.  Jamur  pelapuk  putih  berfungsi  sebagai  pendegredasi  lignin,  hal  ini  disebabkan  oleh  jamur pelapuk  putih  ini  memiliki  kandungan  ekstra  seluler  lignolitik  (Dayatmo  &  Hartini,  2015).  Dua  kelompok enzim yang terlibat dalam proses lignolisis adalah enzim peroksidase dan lakase. Enzim peroksidase terdiri dari dua jenis yaitu lignin peroksidase (LiP) dan mangan peroksidase (MnP) (Bagas , 2011). Jamur pelapuk putih  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  berjenis Schizophyllum  commune yang didapat  dari  pohon  yang sudah mati.
Gambar 2 . Jamur pelapuk putih yang tumbuh dibatang pohon yang sudah mati.

## 2. Metodologi
Alat yang digunakan pada penelitian ini adalah ayakan 100 dan 200 mesh , autoclave , Erlenmeyer, magnetic stirrer, hotplate stirrer, shaker inkubator,autoclave, fermentor , labu ukur 100 dan 250 mL, gelas beaker, batang pengaduk, spatula, pipet volume, pipet ukur, kaca arloji, neraca analitik, test tube, kaca arloji, oven (Heraeus Instrument D-63450), pH meter ( Pen PH-009), neraca analitik, Gas Chromatography (GC-210AF Shimadzu). Bahan-bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah, limbah ampas nipah untuk masing-masing metode yaitu 8,0016 gram, yeast (Saccharomyces cerevisiae) , enzim lignolitik pada jamur pelapuk putih, aqua-DM, H 2 SO 4 (asam sulfat) 1 M, HCl (asam klorida) 1,5 M, NaOH (natrium hidroksida) 0,5 M dan (NH 4 ) 2 SO 4 (amonium sulfat) 0,1 M.
Sampel yang digunakan pada penelitian ini adalah limbah ampas nipah yang diambil di muara sungai Desa Selat Guntung, Kecamatan Sabak Auh, Kabupaten Siak, Provinsi Riau. Limbah ampas nipah dibersihkan dan dicuci menggunakan air kran dan dibilas dengan aqua-DM kemudian diurai hingga berbentuk serabbut lalu dijemur dibawah matahari ±7 hari. Sampel yang sudah kering lalu dikeringkan lagi menggunakan oven pada suhu 100 o C selama 24 jam, setelah itu sampel dihaluskan lalu diayak dengan ayakan lolos 100 mesh dan tertahan di ayakan 200 mesh.
http://ejurnal.umri.ac.id/index.php/photon
Proses  pembuatan  bioetanol  pada  penelitian  ini  menggunakan  limbah  ampas  nipah  sebagai  bahan baku.  Pada  limbah  ampas  nipah  mengandung  serat  (lignin)  sehingga  tidak  bisa  langsung  difermentasi melainkan  harus  di  olah  terlebih  dahulu  agar  lignin  dapat  dipecah  menjadi  monomernya,  maka  dari  itu diperlukan  sebuah  proses  tambahan  yaitu pretreatment dan  proses  hidrolisis.  Adapun  proses  pembuatan bioetanol adalah sebagai berikut:

## 2.1. Metode hidrolisis enzimatik
Ekstrak jamur pelapuk putih  dibuat dengan cara menambahkan aqua-DM 1:1  kemudian diblender hingga menjadi  bubur  lalu  disaring  untuk  diambil  filtratnya.  Ampas  nipah  sebanyak  8  gram  dilarutkan  ke  dalam larutan  H 2 SO 4 1  M  sebanyak  25  mL  kemudian  diautoklaf    selama  20  menit  pada  suhu  121 o C  kemudian dipisahkan menggunakan  corong Buchner untuk di ambil filtratnya (Dayatmo & Hartini, 2015). Filtrat yang didapat  pada  proses pretreatment di  tambah  ekstrak  jamur  pelapuk  putih  sebanyak  25  mL  kemudian dihidrolisis dengan cara di inkubasi pada suhu 50 o C selama 1 jam pada pH 3. Selanjutnya larutan glukosa yang dihasilkan dipisah dari padatannya (Dayatmo & Hartini, 2015). Larutan glukosa yang dihasilkan pada proses hidrolisis diatur pH nya sebesar 4,5 dengana menggunakan larutan (NH 4 ) 2 SO 4 secukupnya. Setelah itu larutan glukosa  ditambah yeast  Saccharomyces  cerevisiae sebanyak  20%  dari  larutan  glukosa  yang  didapat  lalu difermentasi selama 10 hari. Sampel yang telah siap difermentasi kemudian di sentrifuse dan padatan yang terbentuk di pisahkan lalu filtrat yang didapat kemudian didestilasi pada suhu ±78 o C setelah itu dilakukan analisis  menggunakan  instrumen Gas  Chromatography (GC)  untuk  mengukur  kadar  bioetanol    yang dihasilkan.

## 2.2. Metode Hidrolisis Asam
Ampas  nipah  dilarutkan  dengan  larutan  NaOH  0,5  M  sebanyak  50  mL  kemudian  dimasukkan  kedalam autoclave pada suhu 121 o C selama 20 menit, kemudian dilanjutkan dengan menghomogenkan larutan yang telah dicampurkan tadi menggunakan shaker inkubator selama 24 jam dengan kecepatan 30 rpm dalam suhu 30 o C (Khairiah & Ridwan, 2021). Pada tahap hidrolisis asam menggunakan larutan asam encer, filtrat yang didapat  pada  tahap Pretreatment ditambah  larutan  HCl  1,5  N  sebanyak  25  mL  kemudian  laruitan  ini  di panaskan  menggunakan hotplate pada  suhu  100 o C  selama  60  menit  setelah  itu  filtrat  dipisahkan  dengan meenggunakan corong buchner (Khairiah & Ridwan, 2021). Filtrat berupa larutan glukosa yang dihasilkan pada proses hidrolisis diatur pH nya hingga 4,5. Setelah itu larutan glukosa ditambahkan yeast Saccharomyces cerevisiae sebanyak 20% dari larutan glukosa yang didapat lalu difermentasi selama 10 hari. Sampel yang telah  siap  difermentasi  kemudian  disentrifuse  dan  padatan  yang  terbentuk  dipisahkan  lalu  filtrat  yang didapat kemudian didestilasi pada suhu ±78 o C setelah  itu dilakukan analisis menggunakan instrumen Gas Chromatography (GC).

## 3. Hasil dan Pembahasan
3.1 Hasil Analisis Gas Chromatography
Hasil analisis sampel ampas nira nipah menggunakan Gas Chromatography (GC) dapat dilihat dari Tabel 1. Uji kualitatif dilakukan dengan cara membandingkan waktu retensi dari larutan etanol murni sebagai larutan standar  dan  larutan  bioetanol  yang  didapat  dari  sampel  ampas  nira  nipah.  Hal  ini  dilakukan  untuk membuktikan kandungan dari sampel tersebut merupakan bioetanol.
Untuk menghitung kadar bioetanol yang didapat menggunakan perbandingan luas area dari etanol standar  dan  bioetanol  (sampel).  Gambar  3  membuktikan  waktu  retensi  pada  bioetanol  (sampel)  yang dihasilkan sama denga waktu retensi yang dihasilkan pada larutan standar etanol 20%.
http://ejurnal.umri.ac.id/index.php/photon
Tabel 1. Hasil Analisis Bioetanol Menggunakan Instrumen Gas Chromatography (GC).
No. Nama Sampel Waktu Retensi (menit) Luas Area (10 -7 ) Konsentrasi (%) Konsentrasi bioetanol pada penelitian terdahulu (%) 1 Bioetanol hasil Hidrolisis Enzimatik 1,840 18201217,9 11,78 1,17* 2 Bioetanol hasil Hidrolisis Asam 1,841 5725166,6 3,4 0,875**
Keterangan: * penelitian yang dilakukan oleh Dayatmo dan Hartini pada Tahun 2015 ** penelitian yang dilakukan oleh Khairiah dan Ridwan pada Tahun 2021
(a)
(b)
(c)
Gambar 3. Hasil kromatogram bioetanol hasil hidrolisis enzimatik (a) Hasil kromatogram bioetanol hasil hidrolisis  asam (b) dan larutan standar etanol 20% (c) analisis menggunakan Gas Chromatography (GC- 210AF Shimadzu)

## 3.2. Hasil Analisis FTIR
Analisis  FTIR  merupakan  analisis  tambahan  yang  dilakukan  pada  penelitian  ini  yang  bertujuan  untuk membuktikan  bahwa  sampel  yang  didapat  dari  penelitian  ini  mengandung  gugus  alkohol  (OH).  Hasil
http://ejurnal.umri.ac.id/index.php/photon
spektrum untuk bioetanol yang dihasilkan dapat dilihat pada Gambar 4.
Tabel 2. data hasil analisis FTIR dari bioetanol yang dihasilkan
Vibrasi ikatan Bilangan Gelombang (cm -1 ) C-O 1049 dan 1089 C-H 2906 dan 2983 O-H 3323
Gambar 4. Spektrum hasil analisis FTIR dari bioetanol yang dihasilkan.
Spektrum diatas menunjukkan bahwa pada sampel yang dihasilkan pada penelitian ini mengandung gugus  fungsi  yang  dapat  dilihat  pada  Tabel  2.  Yang  merupakan    menandakan  bahwa  sampel  tersebut mengandung etanol.  Dapat  disimpulkan  bahwa metode hidrolisis  enzimatik  merupakan metode hidrolisis terbaik  dalam  menghasilkan  kadar  bioetanol  yang  tinggi  dengan  hasil  yang  didapat  berupa  kemurnian bioetanol sebesar 11,78%.

## 3.3. Pembahasan
Pembuatan  bioetanol  berbahan  dasar  serat  (ligniselulosa)  memiliki  beberapa  tahap  sebelum  fermentasi menggunakan bantuan yeast Saccharomyces cerevisiae yaitu tahap preparasi bahan, pretreatment , hidrolisis dan  fermentasi  (Khairiah  &  Ridwan,  2020).  Adapun  tujuan  dilakukan pretreatment ini  adalah  untuk memecahkan ikatan kovalen antara lignin dan hemiselulosa dalam melindungi selulosa sehingga sangat sulit dihidrolisis (Awatshi et al., 2013). Moiser et al., (2005) mengatakan bahwa tujuan pretreatment adalah untuk membuka struktur lignoselulosa agar selulosa menjadi lebih mudah diakses oleh agen penghidrolisis yang akan memecahkan selulosa/polimer sakarida menjadi glukosa. Proses hidrolisis untuk mengubah selulosa menjadi  glukosa yang  nantinya glukosa ini dikonversi  menjadi  etanol oleh yeast  Saccharomyes cerevisisae (Putra,  2011).  Pemilihan yeast  Saccharomyes  cerevisisae sebagai  agen  fermentor  ialah Saccharomyces cerevisiae ini bersifat fermentif kuat dan dapat hidup dalam kondisi aerob maupun anaerob, selain itu ragi ini juga  memiliki  sifat  yang  stabil  dan  seragam,  memiliki  pertumbuhan  yang  cepat  dalam  proses  fermentasi sehingga mempercepat terbentuknya etanol dalam jumlah yang banyak (Muin et al., 2015). Kelebihan lain yang dimiliki ragi ini ialah mampu menghasilkan enzim invertase (sebagai agen pemecah sukrosa menjadi glukosa dan fruktosa) dan zymase (sebagai agen pemecah glukosa menjadi etanol dan CO 2 ) yang berperan dalam pembentukan etanol (Wusnah et al., 2017).
Pada proses pembuatan bioetanol menggunakan metode hidrolisis enzimatik maupun menggunakan
C-O
C-H alifatik
O-H
http://ejurnal.umri.ac.id/index.php/photon
metode hidrolisis asam memiliki proses pengerjaan yang sama namun terdapat perbedaan dari bahan-bahan yang  digunakan  dan  hasil  yang  didapat  juga  berbeda.  Pada  proses  pembuatan  bioetanol  menggunaklan hidrolisis  enzimatik  menggunakan  larutan  H 2 SO 4 1  M  sebanyak  25  mL  untuk  direaksikan  dengan  sampel ampas nipah  (yang sudah  dipreparasi)  sebagai proses pretreatment. Tujuan penggunaan larutan asam ini ialah untuk memecahkan kandungan lignin  sehingga lignoselulosa akan mudah  diubah menjadi selulosa. Setelah itu dilanjutkan dengan proses hidrolisis yang menggunakan ekstrak jamur pelapuk putih. Pemilihan ekstrak jamur pelapuk putih ini karena jamur ini mampu mendegredasi lignin dan selulosa dengan sangat baik hal ini karena  enzim lignolitik ini menghasilkan Lignin Peroksidase Mangane Peroksidase dan lakase yang akan mengurai selulosa menjadi monomernya (glukosa). Lignin Peroksidase merupakan katalis utama dalam  proses  ligninolisis yang  mampu  memecah  unit  non  fenolik  yang  menyusun  90%  struktur  lignin. Sedangkan  Mangan  Peroksidase  berperan  dalam  memecah  unit  fenolik  lignin  (Ikhsan,  2015).  Setelah  di hidrolisis dilanjutkan dengan fermentasi menggunakan yeast Saccharomyces cerevisiae selama 10 hari dan didapat hasil berupa larutan bioetanol yang berwarna kecoklatan dengan bau seperti roti yang terpanggang (diduga  bau  ini  berasal  dari  ragi  yang  digunakan  yaitu  ragi  roti).  Pemurnian  bioetanol  yang    didapat menggunakan destilasi pada suhu  78 o C sehingga  didapatkan bioetanol murni (larutan  bening) . Kemudian bioetanol ini diuji kadar nya menggunakan instrumen Gas Crhomatography (GC-210AF Shimadzu) didapat hasil sebanyak 11,78% sebanyak 2,5 mL.
Pada pembuatan bioetanol yang menggunakan metode hidrolisis asam pada tahap pretreatment nya menggunakan larutan NaOH 0,5 M sebanyak 50 mLyang  berguna untuk memutuskan ikatan dasar antara lignin dan hemiselulosa, kemudian kation Na + akan berikatan dengan lignin membentuk natrium fenolat yang memiliki sifat mudah larut dalam pelarut polar.
Gambar 5. Proses pemutusan ikatan kovalen antara lignin dan hemiselulosa  (sumber: Baharuddin et al., 2016).
Menurut    Khairiah    & Ridwan, (2021) pada jurnalnya  mengatakan bahwa  penggunaan NaOH dapat menyebabkan merekahnya selulosa yang mengakibatkan luas permukaan lignoselulosa semakin meningkat kemudian terjadi pemecahan dan pemisahan antara lignin dengan selulosa sehingga menurunkan kandungan lignin. Kemudian dilanjutkan dengan tahap hidrolisis yang menggunakan larutan HCl 1,5 N sebanyak 25 mL yang berfungsi sebagai pemutus ikatan antara selulosa sehingga membentuk monomernya (glukosa). Tahap selanjutnya  ialah  fermentasi  yang  dibantu  oleh yeast  Saccharomyces  cerevisiae selama  sepuluh  hari  dan didapat hasil berupa kadar bioetanol sebesar 3,4% sebanyak 1,5 mL.
Hasil bioetanol yang didapat pada penelitian ini jika dibandingkan dengan penelitian terdahulu maka pada  penelitian  ini  menghasilkan  bioetanol  dengan  tingkat  kemurnian  yang  tinggi  yaitu  11,78%  untuk pembuatan bioetanol yang menggunakan enzim sebagai penghidrolisisnya sedangkan pada penelitian yang dilakukan Dayatmo & Hartini, (2015) membuat bioetanol dari pati aren yang menggunakan enzim sebagai penghidrolisisnya  menghasilkan  bioetanol  dengan  tingkat  kemurnian  sebesar  1,17%.  Bioetanol  yang menggunakan  metode  hidrolisis  asam  menghasilkan  tingkat  kemurnian  sebesar  3,4%,  kemurnian  yang didapat juga tinggi jika dibandingkan dengan penelitian yang dilakukan oleh Khairiah & Ridwan,  (2021) yang melakukan  penelitian  dalam  pembuatan  bioetanol  berbahan  dasar  Tandan  Kosong  Kelapa  Sawit  (TKKS) menggunakan  metode  hidrolisis  asam  (asam  sulfat  encer)  mendapatkan  kemurnian  bioetanolnya  sebesar
http://ejurnal.umri.ac.id/index.php/photon

## 0,875%.
Terdapat  beberapa  perbedaan  dari  proses  dan  hasil  yang  didapat  pada  penelitian  ini  dalam menghasilkan bioetanol  murni. Dari pembahasan yang sudah dipaparkan, maka dapat disimpulkan bahwa hidrolisis  enzimatik  merupakan  proses  hidrolisis  yang  baik  dalam  menghasilkan  bioetanol  murni,  hal  ini dibuktikan dengan kadar bioetanol yang didapat lebih tinggi dibanding dengan kadar bioetanol yang didapat menggunakan  proses  hidrolisis  asam.    Selain  itu,    keunggulan  menggunakan  enzim  sebagai  agen penghidrolisis ialah  mampu mengurangi  efek negatif berupa limbah  sisa hasil penelitian yang dibuang ke lingkungan sehingga merusak ekosistem yang ada (Samsuri et al., 2007). Taherzadeh & Karimi, (2007) dalam jurnalnya mengatakan bahwa proses hidrolisis menggunakan enzim memiliki keuntungan dibanding dengan menggunakan asam karena  pada proses hidrolisis menggunakan  enzim tidak terjadi pendegredasian gula hasil hidrolisis, bekerja di suhu rendah dan mampu memberikan hasil yang tinggi.
Namun  demikian,  perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  mengenai  penelitian  ini  karena  kadar bioetanol yang dihasilkan dari penelitian ini masih jauh dari target  yang diinginkan untuk menjadi bahan alternatif  pengganti biofuel ataupun  sebagai  campuran biofuel untuk  meningkatkan  angka  oktan.  Sebagai contoh pada penelitian yang dilakukan oleh Arnata & Yoga, (2015) yaitu dilakukan  analisis mengenai metode yang  tepat  untuk  meningkatkan  tingkat  kemurnian  bioetanol  yang  dihasilkan,  hasil  dari  penelitian  ini didapatkan  metode  adsorpsi  yang  menggunakan  silika  gel  yang  sudah  diaktivasi  (T=200 o C,  t=120  menit) sebagai  adsorbennya  merupakan  metode  yang  tepat  untuk  meningkatkan  kemurnian  bioetanol  yaitu bioetanol dengan kemurnian 40,5% di adsorpsi menggunakan silika gel tingkat kemurniannya menjadi 82,5% dengan persentasi kehilangan bioetanol sebanyak 35,83%.

## 4. Kesimpulan
Pembuatan  bioetanol menggunakan bahan  dasar lignin tidak  bisa langsung difermentasi  melainkan harus dihidrolisis terlebih dahulu untuk mengonversi lignin menjadi glukosa. Hasil yang didapat pada penelitian ini ialah  bioetanol  dengan  kadar  11,78%  untuk  pembuatan  bioetanol  menggunakan  enzim  sebagai penghidrolisisnya  sedangkan  pada  pembuatan  bioetanol  yang  menggunakan  enzim  sebagai penghidrolisisnya  mendapatkan  bioetanol  dengan  kadar  3,4%.  Dari  hasil  tersebut  maka  proses  hidrolisis yang terbaik dalam menghasilkan bioetanol ialah menggunakan enzim sebagai penghidrolisisnya.

## 5. Ucapan Terimakasih
Ucapan terimakasih penulis berikan kepada Universitas Riau melalui proyek AKSI ADB UNRI 2022 penulis mendapatkan Bantuan Hibah Penelitian Tugas Akhir ( Student Research Grant ) (nomor Hibah: 778.21/UN19/KM.05.01/2022) .

## Daftar Pustaka
Arnata, I. W., & Yoga, I. W. G. S. (2015). Pengaruh jenis adsorben dan waktu perendaman pada proses pemurnian bioetanol.
Astuti, J., Yoza, D., & Sulaeman, R. 2016. Potensi biomassa nipah (nypa fruticans wurmb.) Di Desa Lubuk Muda Kecamatan Siak Kecil Kabupaten Bengkalis. Doctoral dissertation , Universitas Riau.
Awatshi, M., Kaur, J., & Rana, S. (2013). Bioetanol production through water hiyacint Eichornia crassipes via optimization of the preteratment condition. International Journal of Emerging Technology and Advanced Engineering . 3(3), 42- 46.
Bagas, D. S. (2011). Pengaruh perlakuan pendahuluan dengan kultur campuran jamur pelapuk putih phanerochaete crysosporium, pleurotus ostreatus dan trametes versicolor terhadap kadar lignin. Jurnal Selulosa , 1(2), 81-88.
http://ejurnal.umri.ac.id/index.php/photon
Baharuddin, M., Sappewali, S., Karisma, K., & Fitriyani, J. (2016). Produksi bioetanol dari jerami padi (Oryza sativa L.) dan kulit pohon dao (Dracontamelon) melalui proses Sakarifikasi dan Fermentasi Serentak (SFS). Chimica et Natura Acta , 4(1), 1-6.
Dayatmo, D., & Hartini, S. H. (2015). Pembuatan bioethanol dari limbah ampas pati aren dengan metode hidrolisis enzimatis menggunakan enzim ligninolitik dari jamur pelapuk putih. Jurnal Konversi , 4(2), 43-52.
Ikhsan, A. (2015). Delignifikasi serbuk kayu jati putih ( Gmelina Arborea Roxb. ) menggunakan fungi phanerochaete chrysosporium yang diiradiasi Gamma. Thesis, Fakultas Sains dan Teknologi UIN Syarif Hidayatullah.
Khairiah, H., & Ridwan, M. (2021). Pengembangan proses pembuatan bioetanol generasi ii dari limbah tandan kosong kelapa sawit. Jurnal Pangan dan Agroindustri , 9(4), 234-240.
Lutfi, M., & Hendrawan, Y. (2014). Analisis pengaruh waktu pretreatment dan konsentrasi naoh terhadap kandungan selulosa, lignin dan hemiselulosa eceng gondok pada proses pretreatment pembuatan bioetanol. Jurnal Keteknikan Pertanian Tropis dan Biosistem , 2(2).
Mosier, N., Wyman, C., Dale, B., Elander, R., M., Holtzapple, Y. L. & Ladish, M. (2005). Features of promisisng technologies for pre-treatment of lignosellulosic biomass, bioresour. Technology , 673-686.
Muin, R., Lestari, D., & Sari, T. W. (2015). Pengaruh konsentrasi asam sulfat dan waktu fermentasi terhadap kadar bioetanol yang dihasilkan dari biji alpukat. Jurnal Teknik Kimia , 20 (4).
Osvaldo, Z. S., Putra, P., & Faizal, M. (2012). Pengaruh konsentrasi asam dan waktu pada proses hidrolisis dan fermentasi pembuatan bioetanol dari alang-alang. Jurnal Teknik Kimia , 18 (2).
Putra I.N.W., Kusuma, I.G.B.W., & Winaya, I.N.S. (2011). Proses treatment dengan menggunakan NaOCl dan H2SO4 untuk mempercepat pembuatan etanol dari limbah rumput laut Eucheuma Cottonii. Jurnal Energi dan Manufaktur . 3(1), 64-68.
Rohpanae, G., & Hadi, V. (2020). Pembuatan bioetanol dari kulit petai (parkia speciosa hassk) menggunakan metode hidrolisis asam dan fermentasi saccharomyces cerevisiae. TEKNOSAINS: Jurnal Sains, Teknologi dan Informatika , 7(2), 119-128.
Samsuri, M., Gozan, M., Mardias, R., Baiquni, M., Hermansyah, H., Wijanarko, A & Nasikin, M. (2009).
Pemanfaatan sellulosa bagas untuk produksi ethanol melalui sakarifikasi dan fermentasi serentak dengan enzim xylanase. Makara , 11(1), 17-24.
Samsuri, M., Gozan, M., Mardias, R., Baiquni, M., Hermansyah, H., Wijanarko, A & Nasikin, M. (2009).
Pemanfaatan sellulosa bagas untuk produksi ethanol melalui sakarifikasi dan fermentasi serentak dengan enzim xylanase. Makara , 11(1), 17-24. Sassner, P., Martensson,M., Galbe,G. & Zacchi. (2008). Steam pretreatment of H 2 SO 4 impregnated salix for production of bioetanol. J, Bioresource Technol . 99(1):137-45.
Taherzadeh, M.J. & Karimi, K. 2007. Acidbased hydrolysis processes for ethanol from lignocellulosic materials. Bioresources . 2(3), 472-499.
Wusnah, W., Bahri, S., & Hartono, D. 2017. Proses pembuatan bioetanol dari kulit pisang kepok ( Musa acuminata BC) secara fermentasi. Jurnal Teknologi Kimia Unimal , 5 (1), 57-65.