Journal of Mandalika Literature, Vol. 5, No. 3, 2024, e-ISSN: 2745-5963 Accredited Sinta 5, https://sinta.kemdikbud.go.id/journals/profile/12219
Available online at: http://ojs.cahayamandalika.com/index.php/jml

## Kesesuaian Uji Imunokromatografi dengan Enzyme Linked Fluorescent Assay untuk Deteksi Hepatitis B Surface Antigen
Nomira Putri 1 , Dianni Arma Wahyu Setia Ningsih 2 , Bella Lucintarillova Arif Lubis 3 1,2,3 Fakultas Kedokteran Universitas Negeri Padang Corresponding Author: nomi1311@fk.unp.ac.id

## Article History
Received: 8-8-2024 Revised: 19-8-2024
Published: 21-8-2024 Keywords :
Hepatitis B, HBsAg, immunochromatographic assay, ELFA Abstract:  Hepatitis  B  virus  (VHB)  infection  is  a  global  health  problem. Hepatitis  B  surface  antigen  (HBsAg)  as  a  serologic  marker  of  hepaitis  B virus  infection  can  be  detected  by  immunochromatography  and  Enzyme Linked  Fluorescent  Assay  (ELFA).  The  aim  of  this  study  is  to  prove  the agreement of immunochromatographic test with ELFA to detect HBsAg. This study  used  a  cross-sectional  analytic  method  on  30  patients  for  HBsAg examination  at  the  Central  Laboratory  of  Clinical  Pathology.  HBsAg  was tested in patient's serum using immunochromatography and ELFA test. The agreement between the two methods was analyzed using the Kappa test. The Kappa  coefficient  between  the  two  tests  was  0.69  with  good  strength.  The concordance of immunochromatographic assay with ELFA to detect HBsAg in this study gave good results. KataKunci : Hepatitis  B,  HBsAg,  uji imunokromatografi, ELFA
Abstrak: infeksi  virus  hepatitis  b  (VHB)  merupakan  maslah  kesehatan global. Hepatitis  B  surface  antigen (HBsAg)  sebagai  penanda  serologi infeksi  virus  hepaitis  B  dapat  dideteksi  dengan  uji  imunokromatografi  dan Enzyme  Linked  Fluorescent  Assay  (ELFA).  Penelitian  ini  bertujuan  untuk membuktikan  kesesuaian  uji  imunokromatografi  dengan  ELFA  untuk mendeteksi  HBsAg.  Penelitian  ini  menggunakan  metode  analitik  potong lintang  terhadap  30  pasien  untuk  pemeriksaan  HBsAg  di  Laboratorium Sentral  Patologi  Klinik.  Pemeriksaan  HBsAg  terhadap  serum  pasien menggunakan  uji  imunokromatografi  dan  ELFA.  Kesesuaian  antara  kedua metode  dianalisis  menggunakan  uji  Kappa.  Koefisien  Kappa  antara  kedua pemeriksaan  ini  adalah  0,69  dengan  kekuatan  yang  baik.  Kesesuaian  uji imunokromatografi dengan ELFA untuk mendeteksi HBsAg pada penelitian ini memberikan hasil yang baik.

## PENDAHULUAN
Infeksi  virus  hepatitis  B  (VHB)  adalah  peradangan  hati  yang  disebabkan  oleh VHB yaitu suatu virus deoxyribonucleic acid (DNA) untai ganda, genus orthohepadna dan famili hepadnaviridae . Virus ini berdiameter 42 nm yang terdiri dari selubung luar atau hepatitis B surface antigen (HBsAg).
Infeksi  VHB  masih  menjadi  masalah  kesehatan  global  terutama  di  negara berkembang. World  Health  Organization (WHO)  mengelompokkan  prevalensi  infeksi VHB  atas  daerah  dengan  endemisitas  tinggi  (>  8%),  endemisitas  menengah  (2%-8%) dan endemisitas rendah (<2%). Negara dengan endemisitas tinggi adalah Afrika, Cina, Korea  dan  beberapa  negara  di  Asia  Tenggara  sedangkan  negara  dengan  endemisitas sedang  adalah  Jepang,  Amerika  Latin  dan  Selatan  serta  negara  dengan  endemisitas rendah adalah Amerika Utara, Australia dan Selandia Baru. Hasil Riset Kesehatan Dasar (RISKESDAS)  tahun  2007  ditemukan  HBsAg  positif  sebanyak  9,4%.  Jumlah  kasus hepatitis B di Jawa Tengah pada tahun 2012 adalah 98 kasus yaitu terbanyak di Tegal. Jumlah ini menurun drastis dibandingkan tahun 2011 yaitu 170 kasus. Kasus hepatitis B di Sumatera Barat tahun 2012 adalah 452 kasus yang terdiri dari 213 kasus pada laki- laki dan 239 kasus pada perempuan.
Deteksi  VHB  dilakukan  dengan  beberapa  penanda  serologi  hepatitis  B  dan HBsAg  merupakan  penanda  serologi  pertama  yang  dapat  dideteksi  setelah  seseorang terinfeksi VHB. Penanda ini muncul pada masa inkubasi infeksi hepatitis akut yaitu 4- 12  minggu.  Hasil  positif  pada  pemeriksaan  HBsAg  menunjukkan  bahwa  seseorang sedang terinfeksi hepatitis B dan apabila menetap lebih dari 6 bulan dalam sirkulasi hal ini menunjukkan seseorang terinfeksi hepatitis B kronis.
Pemeriksaan  HBsAg  dapat  dilakukan  dengan  metode enzyme  linked immunosorbent  assay (ELISA), enzyme  linked  fluorescent  assay (ELFA), imunokromatografi  dan latex  agglutination (LAT).  Metode  yang  banyak  digunakan  di negara berkembang  adalah imunokromatografi karena biayanya  murah, pengerjaannya cepat  dan  tidak  membutuhkan  ketrampilan  khusus.  Metode  imunokromatografi  dan ELFA memiliki sensitivitas dan spesifisitas yang sama yaitu > 99%. Metode ELFA pada alat  Vidas  memiliki  sensitivitas  dan  spesifisitas  100%.  Penelitian  Ali et  al .,  (2009) membandingkan  antara  metode  imunokromatografi  dan  ELFA  dan  didapatkan sensitifitas  untuk  metode  imunokromatografi  sebesar  98,5%  dan  spesifisitas  98%. Penelitian  oleh  Hayder et  al .,  (2012)  terhadap  beberapa  alat  dengan  metode imunokromatografi  dengan  sebuah  alat  dengan  metode  ELISA  didapatkan  sensitivitas metode imunokromatografi sebesar 95%-98% dan spesifisitas 100%.
Pemeriksaan  HBsAg  yang  murah  dan  cepat  diperlukan  di  RSUP  Dr.M.Djamil Padang  karena  adanya  perubahan  pola  jaminan  kesehatan  yaitu  Jaminan  Kesehatan Nasional  (JKN).  Penelitian  tentang  pemeriksaan  HBsAg  dengan  menggunakan  kedua metode  ini  belum  pernah  dilakukan  di  RSUP  Dr.M.Djamil  Padang  sehingga  peneliti tertarik untuk mengetahi kesesuaia kedua metode ini.

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini adalah suatu penelitian analitik dengan rancangan potong lintang yang dilakukan di laboratorium Patologi Klinik RSUP Dr.M.Djamil Padang mulai Juli- Desember 2013. Sampel penelitian adalah bagian dari populasi yang memenuhi kriteria inklusi yaitu bersedia ikut penelitian dan diambil secara consecutive sampling.
Sebanyak  30  spesimen  darah  pasien  yang  datang  ke  labortorium  sentral  untuk pemeriksaan  HBsAg  diambil  sebanyak  3  mL  ditampung  dalam  vacutainer  tanpa antikoagulan. Spesimen darah vena disentrifus selama 15 menit dengan kecepatan 3000 rpm  untuk  mendapatkan  serum  yang  digunakan  untuk  pemeriksaan  HBsAg  dengan metode imunokromatografi dan ELFA.
Uji  imunokromatografi  HBsAg  merupakan  pemeriksaan  kualitatif  yang  berisi strip  membran  yang  dilapisi  dengan mouse  monoclonal  anti-HBs  capture  antibody. Mouse  monoclonal  anti-HBs-colloid  gold  conjugate dan  serum  bergerak  sepanjang membran  secara  kromatografi  menuju  area  tes  (T)  dan  membentuk  garis  sebagai kompleks antibody-antigen-antibody  old  particle .  Hasil  positif  jika  terlihat  2  garis berwarna pada area T dan kontrol (C), negatif jika terlihat 1 garis berwarna pada area C dan  invalid  jika  tidak  terdapat  garis  berwarna  pada  kedua  area  atau  hanya  terdapat  1 garis berwarna pada area T.
Pemeriksaan  HBsAg  dengan  uji  ELFA  merupakan  pemeriksaan  kualitatif otomatis  dengan  prinsip  antigen  dalam  sampel  berikatan  dengan  antibodi  monoklonal yang dilapiskan pada solid phase receptacle (SPR) dan ke antibodi yang dilabel dengan biotin  setelah  tahap  pencucian.  Komponen  sampel  yang  tidak  terikat  akan  dibuang. Streptavidin yang  berkonjugasi dengan alkalin fosfatase berikatan dengan biotin pada kompleks  antigen  antibodi.  Komponen  yang  tidak  berikatan  akan  hilang  dengan
pencucian.  Selanjutnya  ditambahkan  substrat  ( 4-Methyl-umbelliferylphosphate ) sehingga menghasilkan produk yang berfluoresen ( 4-Methyl-umbelliferone ) dan diukur pada  panjang  gelombang  450  nm.  Intensitas  fluoresen  sebanding  dengan  konsentrasi antigen  yang  terdapat  dalam  sampel.  Hasil  diperoleh  secara  otomatis  dan  dinyatakan positif  jika  hasil  ≥  0,13  dan  negatif  jika  ≤  0,13.  Data  dikumpulkan  dan  ditampilkan dalam bentuk tabel.

## HASIL PENELITIAN
Penelitian  dilakukan  pada  30  spesimen  serum  pasien  yang  datan  ke Laboratorium Sentral Patologi Klinik RSUP Dr. M. Djamil Padang untuk pemerksaan HBsAg  mulai  Juli-Desember  2013.  Karakteristik  subjek  penelitian  berdasarkan  jenis kelamin dan umur terlihat pada tabel 1. Jenis kelamin pasien terbanyak adalah laki-laki yaitu 21 orang (70%) dan umur rerata pasien adalah 62 tahun.

## Tabel 1. Karakteristik Subjek Penelitian
No Variabel n (%) Rerata (SD) 1.
2.
Jenis kelamin:
Laki-laki
Perempuan Umur (tahun) 21 (70%) 9 (30%) 62,23 (10,69) Tabel 2. Pemeriksaan HBsAg dengan Metode ELFA HBsAg n (%) Positif Negatif 5 (17%) 25 (83%) Tabel 3. Pemeriksaan HBsAg dengan Metode Imunokromatografi HBsAg n (%) Positif Negatif 3 (10%) 27 (90 %)
Analisis  statistikdilakukan  menggunakan  uji  Kappa  dari  tabel  2x2.  Kesesuaian uji imunokromatografi dan ELFA didapatkan dengan hasil kategori baik (Kappa = 0,69).

## PEMBAHASAN
Penelitian  oleh  Ali et  al., (2009)  mendapatkan  sensitivitas  metode imunokromatografi adalah 98,5% dan spesifisitas 98%. Penelitian ini juga menyatakan bahwa hasil pemeriksan HBsAg dengan uji imunokromatografi memiliki kessuaian yag tinggi  terhadap  ELFA.  Uji  imunokromatografi  tidak  membutuhkan  waktu  yang  lama dalam pengerjaannya yaitu 10-20 menit, biayanya lebih murah dan tidak membutuhkan ketrampilan khusus. Uji ELFA membutuhkan waktu pengerjaan  yang lebih lama  yaitu 60-90 menit, biayanya mahal dan membutuhkan ketrampilan khusus. Oleh sebab itu uji imunokromatografi  lebih  dianjurkan  pada  sarana  laboratorium  yang  terbatas.  Peneliti
belum  menemukan  penelitian  yang  menilai  kesesuaian  uji  imunokromatografi  dengan ELFA untuk deteksi HBsAg sampai saat ini.
Hasil  pemeriksaan  HBsAg  yang  positif  menggunakan  uji  ELFA  adalah  17% sedangkan  dengan  uji  imunokromatografi  adalah  10%.  Perbedaan  hasil  pemeriksaan pada kedua uji dalam penelitian ini disebabkan oleh kadar HBsAg terendah yang dapat dideteksi oleh uji kromatografi adalah 1 ng/mL sedangkan dengan uji ELFA adalah 0,2 ng/mL.

## KESIMPULAN
1. Uji  kromatografi  dapat  digunakan  pada  sarana  laboratorium  yang  terbatas  karena biayanya  lebih  murah,  wktu  pengerjaannya  lebih  singkat  dan  tidak  membutuhkan ketrampilan khusus.
2. Kesesuaian  uji  imunokromatografi  dengan  ELFA  untuk  mendeteksi  HBsAg didapatkan  dengan  nilai  Kappa  0,69.  Kesesuaian  dengan  nilai  Kappa  0,69 menunjukkan hasil yang baik.

## REFERENSI
Ali SHM, Al-Khalidi SJ, and Kasim WN. “Evaluation of performance Characteristics of Commercially Available Test for Diagnostic Hepatitis B Surface Antigenemia”. The Iraqi Postgraduate Medical Journal. 2009
Ansari  MHK,  Omrani  MD,  and  Movahed  V.  “Comparative  Evaluation  of Immunochromatographic  Rapid  Dianostic  Test  (Strip  and  Device)  and  PCR Methods  for  Detection  of  Human  Hepatitis  B  Surface  Antigens”.    Hepatitis Monthly. 2007
Caspari G, Gerlich WH. “The Serologic Markers of Hepatitis B Virus Infection Proper Selection and Standardized Interpretation”. Clinical Laboratory Journal. 2007 Chameera  EWS,  Noordeen  F,  Pandithasundara  H,  and Abeykoon AMSB.  “Diagnostic Efficacy of Rapid Assays Used for the Detection of Hepatitis B Virus Surface Antigen”. Sri Lankan Journal of Infection Diseases. 2013
Hayder I, Ahmed W, and Alam SE. “Comparison of Different ICT Kits for HBsAg and Anti HCV Using Gold Standard ELISA. Pakistan Journal of Medical Research. 2012
Hepatitis B. “World Health Organization”. 2002
Lucifora J and Zoulim F. “The Life Cycle of Hepatitis B Virus and Antiviral Targets”. 2011 One Step HBsAg Rapid test. SD BIOLINE. 2012 Profil Kesehatan Provinsi Jawa Tengah 2012. Semarang:Dinas Kesehatan Provinsi Jawa Tengah. 2013
Profil  Kesehatan  Provinsi  Sumatera  Barat  tahun  2012.  Padang:  Dinas  Kesehatan Provinsi Sumatera Barat. 2013
Riset  Kesehatan  Dasar  (RISKESDAS)  2007.  Jakarta:  Balai  Penelitian  dan Pengembangan Kesehatan Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 2008 Shorts T. “Hepatitis B Virus”. USA. 2009 VIDAS HBsAg Rapid Test. SD BIOLINE. 2012