Volume 10 Nomor 2. Desember 2020
Halaman : 196 - 208
Efektivitas Ekstrak Daun Ketapang ( Terminalia catappa ) Dalam Menghambat Pertumbuhan Bakteri Edwarsiella tarda Pada Uji In Vitro
(The Effectiveness of Ketapang Leaves Extract (Terminalia catappa) for Inhabiting the Bacterial Growth of Edwardsiella tarda on In Vitro Test)
Maryani * , Shinta Sylvia Monalisa, Rekonsili Soritua Panjaitan
Program Studi Budidaya Perairan, Jurusan Perikanan, Fakultas Pertanian, Universitas Palangka Raya, Kalimantan Tengah, Indonesia * Corresponding author : maryani@fish.upr.ac.id
Diterima : 29  September 2020 / Disetujui : 15 April 2021

## ABSTRAK
Penyakit  bakterial  yang  disebabkan  oleh  bakteri Edwardsiella  tarda sering menimbulkan  masalah  pada  budidaya  ikan  air  tawar.  Penelitian  ini  dilakukan    untuk mengetahui untuk mengetahui efektivitas ekstrak daun ketapang ( Terminalia catappa ), serta mengetahui dosis terbaik ekstrak daun ketapang ( T. catappa ) dalam menghambat pertumbuhan  bakteri E.  tarda .  Metode  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah metode  deskriptif  dengan  6  perlakuan  dan  3  ulangan,  yaitu    pemberian  ekstrak  daun ketapang sebanyak 3  g/60  ml, pemberian ekstak  daun ketapang sebanyak 4,5  g/60  ml, pemberian ekstak daun ketapang sebanyak 6 g/60 ml, pemberian ekstak daun ketapang sebanyak  7,5  g/60  ml,  pemberian    kloramfenikol  500  mg  sebagai  kontrol  positif  dan pemberian  akuades  sebagai  kontrol  negatif.  Penelitian  ini  dilakukan  di  Laboratorium Penguji Stasiun Karantina Ikan, Pengendali Mutu Dan Keamanan Hasil Perikanan Kelas I  Palangka  Raya  selama  3  bulan  dari  bulan  Januari  sampai  bulan  Maret  tahun  2019. Hasil  dari  penelitian  ini  adalah  pada  uji  cakram  daya  hambat  yang  terkandung  dalam ekstrak daun ketapang  ( T. catappa ) pada dosis 3 g/60 ml; 4,5 g/60 ml; 6 g/60 ml dan 7,5  g/60  ml  tergolong  dalam  kategori  kuat  (10-20  mm)  dalam  menghambat  bakteri E. tarda . Ekstrak daun ketapang ( T. catappa ) dengan dosis 6 g/60 ml lebih efektif sebagai bakteriostatik dilihat berdasarkan rata-rata diameter zona hambat yang lebih besar yaitu 15,33 mm dibandingkan dengan perlakuan ekstrak daun ketapang ( T. catappa ) lainnya. Pada  uji  MIC  ( Minimum  Inhibitory  Concentration )  perlakuan  dengan  dosis  3  g/60  ml sudah  dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri E.  tarda .  Uji  cakram  dan  uji  MIC ( Minimum  Inhibitory  Concentration )  menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun  ketapang  ( T. catappa )  efektif  sebagai  bakteriostatik  dilihat  dari  kemampuannya  dalam  menghambat pertumbuhan bakteri E. tarda.
Kata kunci : daun ketapang, Edwardsiella tarda , in vitro, menghambat pertumbuhan.

## ABSTRACT
Bacteriological disease that caused by bacteria Edwardsiella tarda  often lead to any  damage  in  freshwater  cultivation.    This  study  was  conducted  to  find  out  the effectiveness of ketapang (Terminalia catappa)  leaves extracts, as well as determine the best  dose  of  the  extract  of  ketapang  leaves  (T.  catappa)  in  inhibiting  the  growth  of
bacteria  Edwardsiella  tarda.  Method  that  used  in  this  research  is  descriptive  method with 6 treatments and 3 replications, such as giving the extracts of ketapang leaves as much 3 g/60 ml, giving the extracts of ketapang leaves as much 4.5 g/60 ml, giving the extracts of ketapang leaves as much 6 g/60 ml, giving the extracts of ketapang leaves as much 7.5 g/60 ml, giving the chloramphenicol 500 mg as a positive control and giving the  aquades  as  a  negative  control.  This  research  was  conducted  at  the  Testing Laboratory  of  Fish  Quarantine  Station,  Quality Control  and  Safety  of  Fishery  Class  I Palangka Raya for 3 months from January to March 2017. The result of this research is the  inhibition  of  a  test  contained  in  the  extract  of  ketapang  leaves  (T.  catappa)  at  the dose  of  3  g/60  ml;  4.5  g/60  ml;  6  g/60  ml  and  7.5  g/60  ml  classified  in  the  strong category  (10-20  mm)  in  inhibiting  bacteria  E.  tarda.    Extract  of  ketapang  leaves  (T. catappa) at a dose of 6 g/60 ml more effective as bacteriostatic be based on the average of bigger diameter inhibition zone, it is 15.33 mm than the treatment of others ketapang leaves  extracts  (T.  catappa).  In  the  test  MIC  (Minimum  Inhibitory  Concentration) treatment  with  a  dose  of  3  g/60  ml  was  able  to  inhibit  bacterial  growth  E.  tarda.  The disc test and MIC (Minimum Inhibitory Concentration) test showed that the extracts of ketapang  leaves  (T.  catappa)  effective  as  bacteriostatic,  it  has  seen  from  its  ability  to inhibit the growth of bacteria E. tarda.
Keywords : Edwardsiella tarda, inhibiting growth, in vitro, ketapang leaves.

## PENDAHULUAN
Penyakit merupakan salah satu aspek masalah yang sering dihadapi karena dapat mempengaruhi  kelangsungan  dan  keberhasilan  budidaya  perikanan.  Serangan  penyakit dan  gangguan  hama  dapat  menyebabkan  pertumbuhan  ikan  menjadi  lambat (kekerdilan),  padat  tebar  sangat  rendah,  konversi  pakan  menjadi  tinggi,  periode pemeliharaan  lebih  lama,  serangan  penyakit  dan  gangguan  hama  tidak  hanya menyebabkan  menurunnya  hasil  panen  (produksi),  tetapi  pada  tahap  yang  lebih  jauh dapat menyebabkan kegagalan panen (Ghufran et al. 2004).
Penyakit yang sering mempengaruhi budidaya ikan air tawar diantaranya adalah edwardsiellosis  yang  disebabkan  oleh  bakteri  dari  genus Edwardsiella yaitu Edwardsiella  tarda (Prastiti et  al. 2015).    Berdasarkan  data  Peta  Sebar  Hama  dan Penyakit  Ikan  Stasiun  Karantina  di  Provinsi  Kalimantan  Tengah  Tahun  2015,  jenis bakteri E. tarda masih ditemukan di perairan Kalimantan Tengah tepatnya di kabupaten Barito  Selatan  yang    ditemukan  pada  ikan  nila  ( Oreochromis  niloticus) (SKIPM Palangkaraya 2015) . Infeksi E. tarda memperlihatkan gejala eksternal berupa luka-luka kecil  berukuran  3-5  mm,  kulit  terjadi  nekrosis,  kemudian  luka  tersebut  berkembang dalam  daging  dan  dermis,  menyebabkan  kulit  melepuh  dan  kehilangan  pigmen  warna.
Ketika  luka  bertambah  parah,  akan  menimbulkan  bau  busuk  dan  menyebar  ke  seluruh tubuh.  Luka  yang  sudah  parah  tersebut  menyebabkan  ikan  kehilangan  keseimbangan gerak (Austin 1993).
Pengendalian  akibat  serangan E.  tarda sampai  sekarang  masih  banyak menggunakan berbagai antibiotik. Penggunaan antibiotik untuk budidaya ikan konsumsi sangat  berbahaya.  Menurut  Mulyani et  al. (2013),  penggunaan  antibiotik  akan membentuk  residu  di  dalam  tubuh  ikan  maupun  manusia  yang  mengkonsumsinya. Akibatnya juga dapat menimbulkan resistensi bakteri patogen pada manusia serta dapat mencemari  lingkungan.  Berdasarkan hal  tersebut,  dibutuhkan alternatif lain  yang lebih efektif  dan  ramah  lingkungan  untuk  pengendalian  penyakit  akibat  infeksi E.  tarda . Salah  satu  alternatif  tersebut  adalah  dengan  menggunakan  ekstrak  daun  ketapang ( Terminalia catappa ).
Tumbuhan ketapang ( T. catappa ) merupakan tumbuhan asli Asia Tenggara yang banyak  terdapat  di  Indonesia.  Hasil  uji  fitokimia  daun  ketapang  ( T.  catappa ) menunjukkan adanya berbagai senyawa aktif yaitu flavonoid, tannin, alkaloid, saponin, fenol  dan  minyak  atsiri  yang  aktif  sebagai  bahan  antimikroba  (Sine,  2013).  Menurut Dawn et al , (2000), proses ekstraksi menggunakan pelarut air dapat menarik senyawa- senyawa yang bersifat polar seperti flavonoid, alkaloid dan tanin.
Oleh  karena  itu,  sebagai  studi  awal  efektivitas  ekstrak  daun  ketapang  sebagai anti  bakteri Edwardsiella  tarda dilakukan  pengujian  secara in  vitro, sehingga diharapkan  mampu  memberikan  informasi  yang  berguna  untuk  kemajuan  budidaya perikanan yang ramah lingkungan.  Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui efektivitas  ekstrak  daun  ketapang  ( T.  catappa ),  serta  dosis  terbaik  ekstrak  daun ketapang ( T. catappa ) sebagai antibakteri E. tarda.

## METODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan dari bulan Januari sampai bulan Maret tahun 2019. Adapun tempat atau lokasi penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Penguji Stasiun Karantina  Ikan,  Pengendali  Mutu  dan  Keamanan  Hasil  Perikanan  Kelas  I  Palangka Raya.

## Alat dan Bahan Penelitian
Alat  dan  bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  :  Kertas  Saring, Kertas cakram, timbangan digital, gelas ukur, jarum ose, blender, cawan petri, autoklaf, laminary  flow,  lemari  pendingin,  hot  plate,  oven,  Kompor,  tabung  Erlenmeyer, Aluminium  Foil/Kapas  Steril,  batang  penyebar,  Spektrofotometer,  Kertas  Baktidine Oksidase,  Kertas  bersih  (kertas  kopi),  bunsen,  Daun  Ketapang,  Akuades,  TSA  ( Trytic Soy  Agar ),    TSB  ( Trypticase  Soy  Broth ),  Bakteri Edwardsiella  tard ,  Media  Uji Biokimia,  KOH  3%,  H 2 O 2 ,    TSIA  ( Triple  Sugar  Iron  Agar ),    LIA  ( Lysin  Iron  Agar ),
Urease, Sitrat, O/F, MIO, Gelatin, Nitrat, MR-PV, Karbohidat (Gula-gula).

## Rancangan Penelitian
Penelitian  dilakukan  dengan  metode  eksperimental  dengan  Rancangan  Acak Lengkap (RAL) yang terdiri dari enam perlakuan dan tiga kali ulangan. Perlakuan yang diuji adalah efektivitas ekstrak daun ketapang ( Terminalia catappa) sebagai antibakteri Edwardsiella  tarda .    Perlakuan  A:pemberian  ekstrak  daun  ketapang  sebanyak  3  g/60 ml, perlakuan B:Pemberian ekstak daun ketapang sebanyak 4,5 g/60 ml,  perlakuan C: Pemberian ekstak daun ketapang sebanyak 6 g/60 ml,  perlakuan D: Pemberian ekstak daun  ketapang  sebanyak  7,5  g/60  ml,  perlakuan  E:  Pemberian    kloromfenikol  500  mg (Kontrol  positif),    dan  perlakuan  F:  Akuades,  tidak  diberikan  ekstrak  daun  ketapang (Kontrol negative)

## Prosedur Penelitian
Pembuatan Media TSA ( Tryptic Soy Agar )
Media  TSA  ditimbang  sebanyak  4  gr  dan  dimasukkan  kedalam  tabung erlenmayer lalu ditambah akuades sebanyak 100 ml. Media kemudian disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121ºC pada tekanan 15 pm. Media dituang ke dalam cawan petri dan dimasukkan kedalam lemari pendingin.
Pembuatan Media TSB ( Trypticase Soy Broth )
Media  TSB  ditimbang  sebanyak  3  gr  dan  dimasukkan  kedalam  tabung erlenmayer lalu ditambah akuades sebanyak 100 ml. Media kemudian disterilkan dalam
autoklaf  pada  suhu  121ºC  selama  15  menit.  Media  disimpan  di  dalam laminary  flow , media baru bisa digunakan 24 jam setelah pembuatan media TSB.

## Pembuatan Media Uji Biokimia
Media  uji  biokimia  adalah  suatu  zat  yang  digunakan  untuk  menguji  reaksi bakteri. Hal ini dilakukan untuk mengetahui sifat dari suatu bakteri, sifat  bakteri dapat dilihat dari kemampuannya merombak media uji biokimia. Adapun media uji biokimia yang dibuat yaitu TSIA ( Triple Sugar Iron Agar ), LIA ( Lysin Iron Agar ), Sitrat, Nitrat, MIO  ( Motility,Indole,Ornithine ),  MR  ( Methyl  Red )  –VP  ( Voges  Praskuer ),  O/F, Gelatin,  Nitrat,  Glukosa,  Laktosa,  Sucrosa,  Manitol,  Inositol,  Sorbitol,  Arabinosa, Rhamnosa, Trehalosa, Rafinosa, Dulcitol dan Salicin. Syarat dan cara pembuatan media ini  sama  dengan  pembuatan  media  TSA  ( tryptic  solid  agar )  yang  membedakan hanyalah media ini dituang ke dalam tabung reaksi.

## Isolasi Bakteri
Bakteri Edwardsiella  tarda diperoleh  dari  Laboratorium  Penguji  Stasiun Karantina  Ikan  Kelas  I  Palangka  Raya  sebagai  hasil  dari  pemantauan  yang  dilakukan pada Desa/kelurahan Buntok Kota, kecamatan Dusun Selatan, Kabupaten Barito Selatan pada Ikan Nila ( Oreochromis niloticus ). Bakteri kemudian diawetkan pada media semi solid,  dan  dilakukan  peremajaan  bakteri  sebanyak  1x  dalam  setahun  guna  menjaga kualitas bakteri tersebut tetap dalam kondisi yang baik dan menghindari bakteri tersebut terkontaminasi  oleh  mikroorganisme  yang  lain.  Untuk  memastikan  bakteri  yang tersimpan  dalam  semi  semi  solid  adalah E.  tarda maka  dilakukan  identifikasi  yang diawali dengan pemurnian, uji biokimia, pembacaan hasil uji biokimia.

## Penumbuhan dan Pengenceran Bakteri Edwardsiella tarda
Bakteri Edwardsiella  tarda yang  sudah  murni,  kemudian  diinokulasikan  ke dalam  media  TSA  lalu  diinkubasikan  selama  24  jam.  Bakteri E.  tarda yang  tumbuh pada  media  TSA  diambil  dengan  menggunakan  jarum  inokulasi  (jarum  ose)  dan dimasukkan  ke  dalam  media  TSB  25  ml  sebagai  stok.  Sebanyak  6  tabung  reaksi disiapkan  terlebih  dahulu  yang  masing-masing  berisi  9  ml  akuades  steril.  Bakteri diambil  dari  media  TSB  sebanyak  1  ml  dan  disuspensikan  ke  dalam  tabung  1  sebagai pengenceran 10 -1 . Tabung dikocok kuat agar homogen. Suspensi bakteri sebanyak 1 ml dari  tabung  1  dimasukkan  ke  tabung  2  sebagai  pengenceran  10 -2 dan  1  ml  suspensi
bakteri  dari  tabung  2  dimasukkan  ke  tabung  reaksi  berikutnya  sehingga  diperoleh pengenceran 10 -6 (Sarida et al . 2010).

## Pembuatan ekstrak daun ketapang.
Pembuatan  ekstrak  dipilih  daun  ketapang  yang  sudah  gugur  dari  pohonnya, karena  daun  ketapang  yang  gugur  lebih  banyak  mengandung  flavonoid,  tanin  dan saponin  (Hardiko,  2004) . Kemudian  daun  ketapang  tersebut  dicuci  dengan  air  bersih, lalu  ditiriskan  pada  suhu  ruang  dengan  bantuan  cahaya  matahari  sampai  daun  mudah dipatahkan.  Setelah  kering,  dihaluskan  dan  diayak  sampai  didapatkan  bubuk  halus. Hasilnya  disimpan  dalam  tempat  tertutup  pada  suhu  kamar  dan  tidak  terkena  sinar matahari langsung. Proses ekstraksi dilakukan dengan melarutkan beberapa gram bubuk daun  ketapang  dengan  akuades  steril  sesuai  dengan  dosis  yang  diinginkan.  Campuran antara bubuk daun ketapang dengan air  akuades  steril diseduh pada suhu 50 o C selama 15  menit  dan  disaring.  Ekstrak  ditempatkan  dalam  botol  steril  dan  ditutup  dengan aluminium foil.

## Uji Antibakteri

##  Uji Cakram
Sebanyak 0,1 ml suspense bakteri (dari pengenceran 10 -6 ) disebarkan secara merata pada  media  TSA  dengan  menggunakan  batang  penyebar.  Masing-masing  TSA diletakkan kertas cakram yang mengandung ekstrak air daun ketapang sesuai dengan dosis  perlakuan,  kloromfenikol (antibakteri)  500  gr  sebagai  kontrol  positif  dan kertas cakram yang mengandung akuades sebagai kontrol negatif. Kemudian cawan petri  diinkubasi  dengan  posisi  terbalik  pada  suhu  37ºC  selama  24  jam.  Uji  ini dilakukan  dengan  tiga  kali  pengulangan.  Media  diamati  hasil  dan  diukur  diameter zona  bening  yang  terbentuk  di  sekitar  kertas  cakram  dengan  menggunakan penggaris.
 Uji MIC ( Minimum Inhibitory Concentration
Sebanyak  6  tabung  reaksi  yang  sudah  berisi  media  TSB  sebanyak  5  ml  disiapkan terlebih  dahulu.  Inokulasikan  0,1  mL  bakteri Edwardsiella  tarda 10 -6 ke  dalam setiap  tabung.  Lalu  masukkan  ekstrak  daun  ketapang  ( Terminallia  catappa ) sebanyak  5  tetes  ke  setiap  tabung  reaksi  sesuai  dengan    dosis  perlakuan.  Pada  2 tabung  reaksi  sisa  dijadikan  kontrol  positif  diberi  antibakteri  (kloromfenikol)  dan
Kontrol negatif (akuades). Media diinkubasi di inkubator dengan suhu 32ºC selama 24 jam. Kemudian amati kekeruhan pada media.

## Parameter Penelitian
Parameter  yang  diukur  pada  penelitian  uji in  vitro ada  dua  yaitu  parameter utama  dan  parameter  penunjang.  Parameter  utama  dalam  penelitian  ini  adalah  hasil pengamatan  yaitu pada  hasil zona hambat  yang  terlihat  pada uji cakram  merujuk  pada klasifikasi  Suryawiria  (2005)  sedangkan  parameter  penunjang  yaitu  hasil  uji  MIC ( Minimum Inhibitory Concentration ).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Uji In  Vitro Ekstrak  Air  Daun  Ketapang  ( Terminalia  catappa )  Terhadap Edwardsiella tarda

## 1. Metode Cakram
Berdasarkan  hasil  pengujian  secara in  vitro dengan  metode  cakram  bahwa daun ketapang ( Terminalia catappa ) mempunyai sifat antibakteri terhadap Edwardsiella tarda . Hal  ini dapat  dilihat  dari terbentuknya zona bening  yaitu zona tidak tumbuhnya bakteri di sekitar kertas cakram.  Rata-rata diameter zona bening pada setiap perlakuan berbeda-beda  (Tabel  2).  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  setiap  perlakuan    memberikan respon daya hambat yang berbeda terhadap pertumbuhan bakteri.
Tabel  2.   Hasil  Rata-rata  Pengamatan  Zona  Bening  Setelah  Pemberian  Perlakuan terhadap bakteri Edwardsiella tarda .
Perlakuan Zona Bening (mm) Total Rata-rata 1 2 3 A (Ekstrak daun ketapang 3 g/60 mL) 6 12 12 30 10 B (Ekstrak daun ketapang 4,5 g/60 mL) 9 14 14 37 12,33 C (Ekstrak daun ketapang 6 g/60 mL) 12 16 18 23 15,33 D (Ekstrak daun ketapang 7,5 g/60 mL) 10 14 12 36 12 E (Kloromfenikol  500 g – Kontrol Positif) 24 26 25 75 25 F (Akuades– Kontrol Negatif) 0 0 0 0 0
Klasifikasi respon hambatan pertumbuhan jika merujuk pada Suryawiria (2005), menunjukkan bahwa ekstrak air daun ketapang dengan dosis 3 g; 4,5 g; 6 g ; dan 7,5 g memiliki  kemampuan  untuk  menghambat  pertumbuhan E.  tarda dengan  kategori  kuat (10-  20  mm).  Ekstrak  daun  ketapang  pada  dosis  6  g  memiliki  rata-rata  diameter  zona
hambat  lebih  besar  senilai  15,33  mm  dibandingkan  dengan  dosis  3  g;  4,5  g  7,5  g  dan dibanding dengan daya hambat ekstrak sambiloto ( Andrographis paniculata nees ) 5 g/L pada E.  tarda senilai  9,3  mm  (Lukistyowati,  2012)  serta  ekstrak  kunyit  ( Curcuma longa ) yang didekoksi pada E. tarda senilai 7,42 mm (Wahjuningrum et al ., 2014).
Gambar hasil uji daya hambat bakteri E. tarda setelah pemberian pada salah satu perlakuan dapat dilihat pada gambar 1 berikut.
Gambar 1. Hasil Uji Cakram dari Salah Satu Perlakuan
Hasil yang diperoleh pada kontrol negatif menunjukkan tidak terbentuknya zona hambat di sekitar kertas cakram dengan diameter 0 mm. Hal ini disebabkan karena pada kontrol negatif (akuades) tidak mengandung zat  anti bakteri.  Antibiotik Kloramfenikol (kontrol  positif)  mampu  menghambat  pertumbuhan E.  tarda dengan  diameter  zona hambat  sebesar  25  mm.  Menurut  Suryawiria  (2005),  hal  ini  menunjukkan  bahwa antibiotik  tersebut  memiliki  potensi  yang  sangat  kuat  (>21  mm)  dalam  menghambat pertumbuhan E.  tarda .  Menurut  Pelczar  (1988),  kloramfenikol  merupakan  antibiotik berspektrum  luas  yang  aktif  terhadap  banyak  bakteri  gram  positif  dan  gram  negatif. Cara  kerja  kloramfenikol  bergabung  dengan  subunit-subunit  ribosom  sehingga menggangu sintesis protein.
Dosis  perlakuan  C  (Ekstrak  daun  ketapang  6  g/  60  mL)  merupakan  dosis  yang efektif  sebagai  antibakteri  pada E.  tarda dengan  daya  hambat  yang  lebih  besar disbanding  perlakuan  lainnya  yakni  15,33  mm,  namun  berdasarkan  gambar menunjukkan  bahwa  semakin  besar  dosis  yang  digunakan  tidak  menjamin  semakin
efektif  hasil  yang  diberikan,  hal  ini  terlihat  pada    dosis  perlakuan  D  (Ekstrak  daun ketapang  7,5  g/60  mL)  terjadi  penurunan  daya  hambat  terhadap  bakteri E.  tarda .    Hal ini  menunjukkan  bahwa  dosis  berpengaruh  dalam  pemberian  antibakteri.  Dosis  yang tepat  membuat  tanaman  obat  bisa  menjadi  obat,  sedangkan  jika  berlebih  bisa  menjadi racun (Djojoseputro, 2012).
Diameter zona hambat yang dihasilkan akibat pemberian ekstrak daun ketapang dimungkinkan  karena  kandungan  senyawa  metabolit  sekunder  yang  terdapat  pada tumbuhan  ketapang  tersebut.  Zat  kimia  dalam  ekstrak  daun  ketapang  yang  diduga bersifat  antibakteri  adalah  flavonoid,  tanin,  alkaloid,  saponin,  fenol  dan  minyak  atsiri (Sine,  2013)  dan  proses  ekstraksi  menggunakan  pelarut  air  dapat  menarik  senyawa- senyawa yang bersifat polar seperti flavonod, alkaloid dan tanin.
Mekanisme  senyawa  flavonoid  dalam  mengganggu  aktivitas  bakteri  adalah dengan  mendenaturasi  protein  sel  bakteri  dan  merusak  membrane  sitoplasma,  hal tersebut  didukung  dengan  pernyataan  Brooks et  al .,  (2005),  bahwa  flavonoid  efektif bekerja  sebagai  bakteriostatik  karena  diduga  dapat  menghambat  dan  merusak  dinding sel yang terdiri dari lapisan protein, mekanisme kerja senyawa-senyawa fenol termasuk flavonoid  sebagai  antibakteri  adalah  dengan  mendenaturasi  protein  sel  bakteri  bakteri dan  merusak  membrane  sel.  Penghambatan  dan  perusakan  dinding  dan  membrane  sel ini  dapat  dilakukan  dengan  terbentuknya  ikatan-ikatan  hydrogen  dan  kovalen  antara bahan  aktifnya  yang  bersifat  hidrofobik  sehingga  menganggu  integrasi  dinding  dan mermbran sel bakteri.
Volk dan wheeler (1993) menjelaskan bahwa senyawa flavonoid dapat merusak membran  sitoplasma  yang  dapat  menyebabkan  hilangnya  metabolit  penting  dan menginaftifkan  sistem  enzim  bakteri.  Kerusakan  ini  memungkinkan  nukleutida  dan asam  amino  meresap  keluar  dan  mencegah  masuknya  bahan-bahan  aktif  ke  dalam  sel. Pada  perusakan  membrane  sitoplasma,  ion  H + dari  senyawa  fenol  dan  turunannya (flavonoid)  akan  menyerang  gugus  polar  (gugus  posfat)  sehingga  molekul  fosfolipida akan terurai menjadi gliserol, asam karboksilat dan asam fosfat. Hal ini mengakibatkan fosfolipida  tidak  mampu  mempertahankan  bentuk  membran  sitoplasma  akibatnya membran sitoplasma akan bocor dan bakteri akan mengalami hambatan pertumbuhan dan bahkan kematian.
Menurut  Harborne  (1996)  mengatakan  bahwa  tanin  yang  terkandung  dalam tumbuhan akan mengganggu sel bakteri dalam penyerapan protein oleh cairan sel. Hal ini dapat terjadi karena tanin dapat menghambat enzim proteolitik yang berperan dalam menguraikan  protein  menjadi  asam  amino.  Menurut  Cowan  (1999),  tanin  dapat mengerutkan  membran  sel  bakteri  yang  menyebabkan  membran  sitoplasma  mengerut sehingga terjadinya perubahan permeabilitas, sel tidak dapat melakukan aktivitas hidup sehigga pertumbuhan bakteri terhambat atau bahkan mati.
2.    Uji    MIC  ( Minimum  Inhibitory  Concentration ) Ekstrak  Air  Daun  Ketapang ( Terminalia catappa ) Terhadap Edwardsiella tarda
Uji  MIC  ( Minimum  Inhibitory  Concentration )  merupakan  suatu  cara  untuk menentukan  konsentrasi  terendah  dari  bahan-bahan  yang  digunakan  sebagai  obat sehingga dapat menghambat pertumbuhan mikroorganisme secara makroskopis dan bisa dilihat  secara  visual  (Samsundari,  2006).  Adapun  gambar  hasil  uji  MIC  ( Minimum Inhibitory  Concentration )  perlakuan  yang  diberikan  terhadap  bakteri Edwardsiella tarda dapat dilihat pada gambar 3 berikut.
Gambar 3. Hasil Uji MIC ( Minimum Inhibitory Concentration )
Pada uji MIC  hasil pengamatan yang dilihat adalah kekeruhan pada media. Hal tersebut dapat digambarkan pada tabel 3 berikut ini :
Tabel 3. Hasil Pengamatan Uji MIC
Perlakuan  Konsentrasi (g) Kekeruhan 1 (Ekstrak daun ketapang 3 g/60 mL) ++ 2 (Ekstrak daun ketapang 4,5 g/60 mL) ++ 3 (Ekstrak daun ketapang 6 g/60 mL) + 4 (Ekstrak daun ketapang 7,5 g/60 mL) ++
5 (Kloromfenikol  500 g – Kontrol Positif) + 6 (Akuades– Kontrol Negatif) +++
Keterangan. +: Bening; ++: Cukup Bening; +++: Keruh
Berdasarkan data pada tabel 3. Nilai MIC yang didapat adalah pada perlakuan 1 (Ekstrak daun ketapang 3 g/60 mL), dimana perlakuan 1 adalah konsentrasi terendah yang  dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri E.  tarda setelah  dilakukan  inkubasi selama 24 jam. Hal ini dapat dilihat dari parameter kekeruhan yang dihasilkan. Apabila dibandingkan dengan kontrol negatif (akuades), terjadi perbedaan warna pada perlakuan yang  lain.  Kekeruhan  pada  kontrol  negatif  sebagai  akibat  tidak  adanya  senyawa antibakteri  pada  akuades,  sedangkan  pada  perlakuan  yang  lain  terdapat  senyawa antibakteri sehingga dapat menghambat pertumbuhan bakteri E. tarda .

## KESIMPULAN
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan dapat disimpulkan :
1. Pada  uji  cakram  daya  hambat  yang  terkandung  dalam  ekstrak  daun  ketapang ( Terminalia catappa ) pada dosis 3 g/60 ml; 4,5 g/60 ml; 6 g/60 ml dan 7,5 g/60 ml tergolong  dalam  kategori  kuat  (10-20  mm)  dalam  menghambat  bakteri Edwardsiella  tarda dan  bersifat  bakteriostatik  dilihat  dari  diameter  zona  bening yang dihasilkan.
2. Ekstrak daun ketapang ( Terminalia catappa ) dengan dosis 6 g/60 ml memiliki rata- rata  diameter  zona  hambat  lebih  besar  yaitu  15,33  mm  dibandingkan  dengan perlakuan ekstrak daun ketapang ( Terminalia catappa ) lainnya.
3. Pada uji MIC ( Minimum Inhibitory Concentration ) perlakuan dengan dosis 3 g/60 ml sudah dapat menghambat pertumbuhan bakteri Edwardsiella tarda .
4. Uji cakram dan uji MIC ( Minimum Inhibitory Concentration ) menunjukkan bahwa ekstrak  daun  ketapang  ( Terminalia  catappa )  efektif  sebagai  bakteriostatik  dilihat dari kemampuannya dalam menghambat pertumbuhan bakteri Edwardsiella tarda.

## DAFTAR PUSTAKA
Brooks  GF,  Butel JS,  Morse  SA. 2005. Mikrobiologi Kedokteran [Alih  Bahasa]. Eddy Mudihardi (Penerjemah). Jakarta: Salemba Medika. 317 hlm.
Cowan  MM.  1999.    Plant  Products  As  Antimicrobial  Agent. Clinical  Microbiology Rewiews 12(4): 564-582.
Diniarti  E.  2013.  Isolasi  Dan  Karakterisasi  Bakteri  Edwardsiella  tarda  Penyebab Penyakit  Pada  Ikan  Air  Tawar  [Disertasi].  Yogyakarta:  Universitas  Gadjah Mada.
Djojoseputro  S.  2012. Resep    &    Khasiat  Jamu  tradisional  Nusantara .    Surabaya: Penerbit Liris.
Ghufran    M,  Kordi    K.  2004. Penanggulangan    Hama  dan  Penyakit  Ikan .  Jakarta: Rineka Cipta.
Harborne J. 1996. Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan. Cetakan  kedua  [Alih  Bahasa].  Padmawinata  K,  Soediro  I  (Penerjemah). Bandung: Penerbit ITB.
Hardiko  RS.    2004.  Aktivitas  Antimikroba  Ekstrak  Etanol,  Ekstrak  Air  Daun  yang Dipetik  dan  Daun  Gugur  Pohon  Ketapang  (Terminalia  catappa  L.), Acta Pharm.Indon . 22(4): 129-133.
Lukistyowati  I.  2012.    Studi  Efektifitas  sambiloto  ( Andrographis  Paniculata  Nees ) Untuk  Mencegah  Penyakit  Edwardsiellosis  Pada  Ikan  Patin  ( Pangasius hypothalamus ). Berkala Perikanan Terubuk 40(2): 56-74. Marks  DB,  Marks  AD,  Smith  CM.  2000. Biokimia  Kedokteran  Dasar:  Sebuah Pendekatan  Klinis [Alih  Bahasa].  Brahm  Udumbar  Pendit  (Penerjemah). Jakarta: EGC.
Mulyani  Y,  Bachtiar  E,    Kurnia  MU.    2013.    Peranan  Senyawa  Metabolit  Sekunder Tumbuhan Mangrove Terhada Infeksi Bakteri Aeromonas hydrophila pada Ikan Mas ( Cyprinus carpio L .). Jurnal Akuatika . 4(1):1-9.
Pelczar    MJ,  Chan  ES.    2008. Dasar-Dasar  Mikrobiologi .  Jakarta:  Universitas Indonesia Press
Prastiti  LA,  Sarjito,  Prayitno  SB.    2015.    Pengaruh  Penambahan  Ekstrak  Jahe  Merah (Zingiber  Officinale  Var.  Rubrum)  Pada  Media  Pemeliharaan  Terhadap Kelulushidupan Dan Pertumbuhan Ikan Gurami ( Osphronemus Gouramy ) Yang Diinfeksi Bakteri Edwardsiella tarda . Journal of Aquaculture Management and Technology 4 (3): 31-37.
Samsundari  S.  2006.  Penggunaan  bahan  obat  alami  terhadapresistensi  bakteri Aeromonas  hydrophilla  yang  menyerangIkan  Mas  ( Cyprinus  carpio . Jurnal Gamma 2(1): 71-83.
Sarida  M,  Tarsim,  Faizal  I.  2010.      Pengaruh  Ekstrak  Buah  Mengkudu  ( Morinda citrofolia L . ) dalam Menghambat Pertumbuhan Bakteri Vibrio harveyi Secara In Vitro . Jurnal Penelitian Sains 13 (3): 59-61.
Sine  Y.  2013.  Uji  Aktivitas  Antibakter  Ekstrak  Daun  Tanaman  Ketapang  ( Terminalia catappa L.)  dan  Daun  Tanaman  Jambu  Biji  ( Psidium  guajava L.)  terhadap Pertumbuhan  Bakteri Aeromonas  hydrophila [Skripsi].  Kupang:  Universitas Nusa Cendana.
[SKIPM]  Stasiun  Karantina  Ikan,  Pengendalian  Mutu  dan  Keamanan  Hasil  Perikanan Palangka  Raya.  2015.  Laporan  Tahunan  SKIPM  Palangka  Raya  Tahun  2015. Palangka  Raya:  Stasiun  Karantina  Ikan,  Pengendalian  Mutu  dan  Keamanan Hasil Perikanan Palangka Raya.
Suryawiria  U.  2005. Mikrobiologi  Dasar .  Jakarta:  Papas  Sinar  Sinanti.
Volk  WA,  Wheleer  MF.  1993. Mikrobiologi  Dasar .  Edisi  Kelima.  Jilid  1.  Jakarta:
Penerbit Erlangga.
Wahjuningrum  D,  Ikhsan  NM,  Sukenda,  Evan  Y.  2014.  Pengaruh  ekstrak  kunyit sebagai  pengendali  infeksi  bakteri Edwardsiella  tarda pada  ikan  Lele.  Jawa Barat. Jurnal Akuakultur Indonesia 13 (1): 1-10.