Produksi dan karakterisasi nano kitosan, Nadia et al.

## PRODUKSI DAN KARAKTERISASI NANO KITOSAN DARI CANGKANG UDANG WINDU DENGAN METODE GELASI IONIK

## Production and Characterization Chitosan Nano from Black Tiger Shrimpwith Ionic Gelation Methods
Laode Muhamad Hazairin Nadia*, Pipih Suptijah, Bustami Ibrahim Departemen Teknologi Hasil Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan IPB Institut Pertanian Bogor, Kampus IPB Darmaga, Jalan Agatis, Bogor 16680 Telepon (0251)8622909-8622906, Faks. (0251)8622915
*Korespodensi : Olopamk@gmail.com
Diterima 22 Juli 2014/ Disetujui 03 Agustus 2014

## Abstrak
Cangkang udang windu ( Penaeus monodon ) berpotensi sebagai bahan baku dalam proses pembuatan nano  kitosan  karena  mengandung  senyawa  kimia  kitin  dan  kitosan.  Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah membuat nano kitosan melalui proses gelasi ionik serta pengecilan ukuran ( sizing ) dengan magnetic stirrer dan menentukan karakteristik nano kitosan berdasarkan morfologi dan ukuran nanopartikel. Nano kitosan dibuat menggunakan metode gelasi ionik, yaitu kompleksasi polilektrolit antara kitosan yang bermuatan positif dengan tripolifosfat yang bermuatan negatif.  Rendemen kitosan dari cangkang udang yaitu sebesar 19,08%, sedangkan rendemen nano kitosan dengan perlakuan pengecilan ukuran menggunakan magnetic stirrer sebesar 80,67%. Nilai derajat deasetilasi dari kitosan yang digunakan untuk membuat nano kitosan yaitu sebesar 98,65%. Nano kitosan yang terbentuk rata-rata berukuran 228,74 nm, cukup seragam, relatif stabil  dan  memiliki  bentuk  partikel  yang  berupa  bulatan  menyerupai  bola.  Pengecilan  ukuran  partikel dengan magnetic  stirrer, dapat  mendistribusikan  ukuran  partikel  yang  lebih  homogen.  Penambahan tripoliphospat (TPP) dan surfaktan (Tween 80) dapat menguatkan sifat mekanik kitosan yang mudah rapuh dan dapat membentuk ikatan silang ionik antara molekul kitosan.
Kata kunci: cangkang udang windu, gelasi ionik, kitosan, magnetic stirrer , nano kitosan
Abstract
Black tiger shrimp shell ( Penaeus monodon ) has a potential as raw materials in the manufacturing process of nano-chitosan that contains chitin. The purposes of this study is to formed nano-chitosan through ionic gelation process and size reduction by magnetic stirrer and determine the characteristic of nano-chitosan based on morphology and size of nanoparticles. Nano-chitosan were formed by ionic gelation method, which is polyelectrolite complexation between the positively charged chitosan and negative charged tripolyphosphate. Yield of chitosan from Black Tiger Shrimp shell are 19,08%, while the yield of nano-chitosan by size reduction treatment using a magnetic stirrer is 80,67%. Value of the deacetylation degree from chitosan which is used to formed nano-chitosan is equal to 98,65%, it indicates the chitosan which is produced is a native chitosan. Nano-chitosan have an average size of 228.74 nm, fairly uniform, relatively stable and has a sphere like particle shape. Particle size reduction with magnetic stirrer, can distribute more homogeneous particle size. Added tripolyphosphate (TPP) and surfactants (Tween 80) can enhance the mechanical properties of chitosan that are naturally fragile and enhanced formation if ionic crosslinking between chitosan molecules.
Keywords: black tiger shrimp, chitosan, chitosan nano, ionic gelation, magnetic stirrer

## PENDAHULUAN
Udang    merupakan  salah  satu  komoditi penting perikanan yang pada saat ini mengalami peningkatan  produksi  terutama  dari  hasil
budidaya dan pada umumnya diekspor dalam bentuk beku. Proses pembekuan udang untuk ekspor,  60-70%  dari  berat  udang  menjadi limbah.  Limbah  tersebut  berupa  cangkang
yang  mudah  sekali  busuk  sehingga  dapat menimbulkan pencemaran lingkungan (Azhar et al. 2010). Kitosan dapat disintesis dari kulit  udang  karena  kulit  udang  mengandung senyawa kimia kitin dan kitosan.
Berger et al. (2004) kitosan dapat diterapkan dalam  berbagai  bidang  industri  modern, misalnya farmasi, biokimia, kosmetika, industri pangan, dan industri tekstil. Pemerintah terus mendorong para peneliti dan praktisi industri untuk  terus  memanfaatkan  produk  kitosan, termasuk  melakukan  modifikasi  kitosan secara  kimia  atau  fisik.  Modifikasi  fisik  pada kitosan mencakup perubahan ukuran partikel menjadi  lebih  kecil  untuk  pemanfaatan  yang lebih  luas.  Perkembangan  modifikasi  fisik mengarah  ke  bentuk  nano-partikel.  Nano- partikel mempunyai keunggulan dibandingkan dengan  material  sejenis  dalam  ukuran  besar ( bulk )  karena  ukuran  nano-partikel  memiliki nilai perbandingan antara luas permukaan dan volume  yang  lebih  besar  jika  dibandingkan dengan  bahan  sejenis  dalam  ukuran  besar, sehingga  nano-partikel  bersifat  lebih  reaktif. Reaktivitas  material  ditentukan  oleh  atom- atom dipermukaan, karena atom-atom tersebut yang  bersentuhan  langsung  dengan  material lain (Suwarda dan Maarif 2012).
Penelitian  nano-kitosan  sampai  saat  ini terus  dikembangkan,  baik  dalam  penentuan komposisi  maupun  pencarian  metode yang  sesuai.  Pembuatan  nano-kitosan  yang berstabilitas  tinggi  memerlukan  metode  yang cukup  sulit,  maka  dilakukan  metode  yang efektif  dan  sederhana  untuk  membuat  nano kitosan  dengan  tingkat  keseragaman  ukuran dan  stabilitas  yang  tinggi.  Pembuatan  nano- kitosan menggunakan metode gelasi ionik dan pengecilan  ukuran  ( sizing )  dalakukan  karena prosesnya yang sederhana dan dapat dikontrol dengan mudah. Penelitian ini bertujuan untuk membuat  nano-kitosan  melalui  proses  gelasi ionik serta pengecilan ukuran ( sizing ) dengan magnetic stirrer dan menentukan karakteristik nano-kitosan  meliputi  morfologi  dan  ukuran nano-partikel.

## BAHAN DAN METODE Bahan dan Alat
Bahan  utama  yang  digunakan  pada penelitian  ini  adalah  limbah  udang  windu ( P. monodon ) diperoleh dari PT. Sultra Tuna, Kendari,  Sulawesi  Tenggara.  Bahan-bahan yang  digunakan  untuk  pembuatan  kitosan dan nano-kitosan terdiri dari NaOH serbuk, asam  asetat  (CH 3 COOH),  akuades,  HCl, Tripoliphospat  (TPP),  dan  surfaktan  (Tween 80). Bahan-bahan lain meliputi bahan untuk analisis  karakteristik  kitosan,  nano-kitosan, dan proksimat terdiri dari gliserol, methanol, asam borat, K 2 SO4, HgO, H 2 SO4, dan HNO 3 . Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  adalah magnetic  stirer , spray  drying (Labconco),  Particle  Size  Analyzer  (PSA) (DelsaTM  Nano,  Cordoun),  Viscometer (Brookfield  LV),  Fourier  Transform  Infrared Spectrophotometer  (FTIR)  (Bruker  Tensor
Tipe MBQ00), Scanning Electron Microscopy
(SEM) (JEOL JSM-6360-LA).
Metode Penelitian Karakterisasi cangkang udang windu  ( P.  monodon )  meliputi  kadar  air,
kadar  abu,  kadar  nitrogen.  Karakterisasi kitosan  meliputi  rendemen,  komposisi proksimat  (AOAC  1995),  derajat  desetilasi (Duarte et  al. 2002),  viskositas  (Zamani  dan Taherzadeh  2010)  dan  logam  berat  (Pb,  Hg, Cd  dan  As)  (BSN  2013).  Penelitian  utama merupakan tahapan pembuatan nano-kitosan menggunakan  metode  gelasi  ionik  serta pengecilan  ukuran  ( sizing )  menggunakan magnetic  stirrer dengan  penambahan emulsifier  (tween  80)  dan  tripolifosfat (Suptijah et al. 2011). Partikel yang terbentuk kemudian  dikarakterisasi,  meliputi  ukuran partikel menggunakan  Particle Size Analyzer (PSA)  (Yang et  al. 2014)  dan  morfologi menggunakan Scanning  Electron  Microscopy (SEM) (Masotti et al. 2007).

## Prosedur Penelitian
Nano-kitosan  dibuat  menggunakan metode  gelasi  ionik,  yaitu  kompleksasi
Produksi dan karakterisasi nano kitosan, Nadia et al.
polilektrolit  antara  kitosan  yang  bermuatan positif  dengan  tripolifosfat  yang  bermuatan negatif.  Larutan  kitosan  konsetrasi  0,2% dibuat  dengan  cara  melarutkan  kitosan kedalam  larutan  asam  asetat  1%,  kemudian dihomogenkan  menggunakan magnetic stirrer pada  suhu  ruang  selama  1  jam. Larutan Tripolyphosphate (TPP) konsentrasi
0,1%  dibuat  dengan  cara  melarutkan  TPP kedalam  akuades,  kemudian  disaring  untuk menghilangkan sisa partikel tidak terlarut.
Nano-kitosan dibuat dengan cara: larutan kitosan sebanyak 50 mL dituangkan ke dalam beaker,    kemudian  diaduk  menggunakan magnetic stirrer. Larutan TPP pada pada rasio volume kitosan TPP 5:1 ditambahkan secara perlahan-lahan  ke  dalam  larutan  kitosan, sehingga  terbentuk  suspensi  nano-partikel. Pengadukan  terus  dilanjutkan  selama  1 jam  agar  proses  ikatan  silang  berlangsung sempurna.  Suspensi  nano-partikel  yang terbentuk kemudian dikarakterisasi. PSA  menggunakan  sinar  tampak  yang ditembakkan  dan  memanfaatkan  prinsip penghamburan  cahaya  tampak  (Yang et  al.
2014).  SEM  menggunakan  elektron  dan cahaya  tampak  sebagai  sumber  cahayanya. Elektron  menghasilkan  gelombang  yang lebih  pendek  dibandingkan  cahaya  foton dengan  ukuran  0,1  nm  dan  menghasilkan gambar  dengan  resolusi  yang  lebih  baik (Grenha et al. 2007). Hasil SEM terlihat jelas karena  dilakukan  pelapisan    dengan  emas yang bersifat konduktor (Elhady 2012).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Karakterisasi Kulit Udang
Berdasarkan  uji  proksimat,  cangkang udang  windu  memiliki  kadar  air  12,09%, kadar abu 24,42%, serta kadar protein 32,03%. Menurut  penelitain  yang  dilakukan  oleh
Sanusi  (2004)  proksimat  cangkang  udang windu  yaitu  kadar  air  13,29%,  kadar  abu 27,09% dan kadar protein 23,94% (Tabel 1). Kadar  abu  bisa  digunakan  sebagai indikasi  kandungan  mineral-mineral  dalam sampel.  Bahan  baku  serbuk  kulit  udang memiliki  kadar  abu  yang  tinggi  disebabkan banyaknya  mineral-mineral  dalam  kutikula kulit udang. Perbedaan nilai kadar abu diduga dapat disebabkan oleh perbedaan hábitat dan lingkungan hidup (Ravichandran et al. 2009).

## Rendemen Kitosan
Prasetyo  (2010)  produksi  kitin  dari limbah  udang  menghasilkan  rendemen  20- 30%  dan  kitosan  dari  kitin  diperoleh  80%. Sebanyak  2000  g  kulit  udang  yang  melalui proses  demineralisasi,  deproteinasi  dan deasetilasi  dihasilkan  kitosan  sebanyak 381,64 g sehingga rendemen kitosan sebesar 19,08%.  Rendemen  yang  dihasilkan  cukup besar  karena  pada  proses  demineralisasi, deproteinasi  dan  deasetilasi  tidak  banyak kitin  dan  kitosan  yang  hilang  oleh  pelarut maupun saat hidrolisis. Proses pencucian dan penetralan  dengan  akuades  juga  dilakukan secara  hati-hati  sehingga  penyusutan  bobot kitin dan kitosan dapat dikurangi.

## Karakteristik Kitosan
Kitosan  yang  dipakai  dalam  penelitian ini  mempunyai  karakteristik  yang  telah memenuhi  standar  internasional  (Tabel  2). Kemurnian kitosan dapat dilihat dari kadar air dan kadar abu yang rendah, namun memiliki derajat  deasetilasi  yang  tinggi.  Semakin tinggi  derajat  deasetilasi,  semakin  banyak gugus  amina  (NH 2 )  pada  rantai  molekul kitosan  sehingga  kitosan  semakin  reaktif (Suptijah  2006).  Ukuran  partikel  pada kitosan  uji  berupa  serpihan  sampai  serbuk, Tabel 1 Hasil pengujian (proksimat) komponen kulit udang windu Komposisi Proksimat Hasil (%) Air 12,09 ± 0,08 Abu 24,42 ± 0,04 Protein 32,03 ± 0,49
sesuai dengan standar mutu kitosan. Ukuran partikel  kitosan  sangat  dipengaruhi  oleh bahan  baku  yang  digunakan.  Bahan  baku yang berasal dari kulit udang memiliki bentuk yang  lebih  halus  dan  mudah  hancur  selama proses pembuatan kitosan (Tabel 2). Ukuran partikel  akan  mempengaruhi  kelarutan kitosan, semakin kecil ukuran partikel maka semakin  mudah  kitosan  larut  dalam  pelarut (Suptijah et al. 1992). Nilai kadar air kitosan diketahui sebesar 9,57%.  Nilai  ini  lebih  rendah  dibandingkan karakteristik  kitosan  komersial  dengan nilai  kadar  air  ≤10%.  Besarnya  nilai  kadar air  dipengaruhi  oleh  proses  pengeringan, lama  pengeringan,  jumlah  kitosan  yang dikeringkan,  luas  tempat  pengeringan  dan sarana pengeringan (Saleh et al. 1994). Kadar  abu  merupakan  parameter  untuk mengetahui  mineral  yang  terkandung  pada kitosan  dan  yang  dapat  mempengaruhi kelarutan,  mengakibatkan  viskositas  rendah atau  dapat  mempengaruhi  karakteristik produk akhir (No dan Meyers 1995). Kadar abu yang diperoleh sebesar 0,27% dan memenuhi
persyaratan mutu yang telah ditetapkan. Kadar abu yang rendah menunjukkan kadar mineral yang  rendah.  Faktor  yang  mempengaruhi nilai  kadar  abu  kitosan  adalah  proses demineralisasi dan air yang digunakan ketika penetralan pH (Angka dan Suhartono 2000). Benjakula  dan  Sophanodora  (1993)  proses pencucian  yang  baik,  berpengaruh  terhadap kadar abu dan mineral yang telah terlepas dari bahan  akan  berikatan  dengan  pelarut  dapat terbuang bersama air.
Kadar nitrogen menentukan sifat kitosan yang berinteraksi dengan gugus gugus amina (NH 2 ).  Keberadaan  NH 2 menyebabkan kitosan  memiliki  reaktivitas  yang  tinggi, sehingga  kitosan  mampu  mengikat  air  dan larut dalam asam asetat (Kim dan Cho 2005). Semakin  tinggi  kandungan  nitrogen  dalam kitosan  maka  akan  menyebabkan  semakin berkurang fungsinya. Kadar nitrogen kitosan uji  yang  dihasilkan  telah  memenuhi  standar mutu  yang  ditetapkan  yaitu  4,03%.  Nilai total  nitrogen  kitosan  uji  dibawah  standar kitosan  yang  telah  ditetapkan.  Silvia    (2005) mengemukakan  bahwa  kadar  nitrogen
Tabel 2 Karakteristik kitosan komersil dan kitosan uji Sifat Parameter Uji Kitosan Komersil* Kitosan Uji Ukuran partikel Serpihan sampai bubuk Serpihan  sampai bubuk Kadar air (% bk) ≤ 10% 9,87% Kadar abu (%bk) ≤ 2% 0,27% Total nitrogen  (%bk) ≤ 5% 4,03% Derajat deasetilasi ≥ 70% 98,65% Warna larutan (1,5%) (b/v) Bening Bening Viskositas (cP) (1%) - Rendah < 200 - Medium 200-799 210 - Tinggi 800-2000 - Ekstrak tinggi > 2000 Kandungan logam (ppm) - Timbal (Pb) ≤ 1,0 0,035 - Merkuri (Hg) ≤ 0,001 0,001 - Arser (As) ≤ 0,2 0,002 - Kadmium (Cd) ≤ 0,002 0,001
Produksi dan karakterisasi nano kitosan, Nadia et al.
dipengaruhi  oleh  konsentrasi  NaOH  yang tinggi  dan  waktu  proses  deproteinase  akan menyebabkan  terjadinya  reaksi  antara protein dengan larutan pembentuk ester (Na- proteinat) akan semakin sempurna, sehingga protein yang dihilangkan semakin banyak . Derajat deasetilasi menentukan banyaknya  gugus  asetil  yang  hilang  selama proses  deasetilasi.  Derajat  deasetilasi  yang tinggi menunjukkan kemurnian kitosan yang dihasilkan. Derajat deasetilasi yang dihasilkan pada  penelitian  ini  sebesar  98,65%.  Derajat deasetilasi  kitosan  uji  memenuhi  standar mutu kitosan yaitu ≥70% (Suptijah et al. 1992). Muzarelli  dan  Peter  (1997)  mengemukakan bahwa semakin besar derajat deasetilasi, maka kitosan akan semakin aktif karena banyaknya gugus amina yang menggantikan gugus asetil. Gugus  amina  lebih  reaktif  dibandingkan gugus asetil karena adanya pasangan elektron bebas  pada  atom  nitrogen  dalam  struktur kitosan. Kitosan  yang  digunakan  memiliki viskositas  sebesar  210  cp.  Viskositas kitosan  uji  memenuhi  standar  mutu kitosan  yaitu  200-700  cp  kategori  medium (Suptijah et  al. 1992).  Tinggi  rendahnya viskositas  dipengaruhi  oleh  tahap  deasetilasi pada  proses  pembuatan  kitosan.  Lamanya proses  deasetilasi  dan  tingginya  konsentrasi NaOH akan menurunkan berat molekul dan viskositas. Kitosan memiliki rantai yang lebih pendek bila dibandingkan kitin. Peningkatan konsentrasi  NaOH  akan  menurunkan  berat molekul, hal ini disebabkan penurunan berat molekul  akibat  adanya  pemecahan  ikatan polimer  (depolimerisasi)  rantai  molekul kitosan (Kolodziejska et al. 2000).
Karakteristik Kitosan Rendemen Nano-Kitosan
Produksi  nano  kitosan  dilakukan berdasarkan  metode  yang  telah  dilakukan Mardliyati et al. (2012). Sebanyak 2 g kitosan dengan  pengecilan  partikel  menggunakan magnetic stirrer sebesar 1,63 g dan rendemen yang dihasilkan 81,50%. Hasil yang didapatkan
tidak  jauh  berbeda  dengan  hasil  penelitian Suptijah et al. (2011), yaitu 81,30%. Kelebihan magnetic  stirrer yaitu  proses  homogenisasi antara  larutan  kitosan  dengan  bahan  gelasi ionik,  dapat  dikendalikan  secara  merata dengan  kecepatan  tinggi  menghasilkan partikel-partikel  yang  homogen,  stabil dan  tidak  terjadi  aglomerasi,  sehingga dalam  proses  pengeringan  yang  terbentuk partikel  nano  hanya  partikel  yang  stabil bukan  yang  aglomerasi.  Proses  pengeringan semprot  ( spray  drying )  juga  mempengaruhi rendemen hasil nano kitosan yang dihasilkan, partikel  yang  mengalami  aglomerasi  lebih banyak  menempel  pada  alat spray  drying (Irianto dan Muljannah 2011).
Uji Particle Size Analyzer (PSA) Perhitungan partikel umumnya menggunakan analisis gambar atau beberapa jenis penghitungan partikel. Nano kitosan yang dihasilkan diuji ukurannya menggunakan alat Particle  Size  Analyzer (PSA).  Berdasarkan hasil uji PSA menunjukkan bahwa nilai rata- rata  ukuran  nano  kitosan  yaitu  228,74  nm. Mohanraj  (2006)  mengemukakan  bahwa nanopartikel  merupakan  partikel  yang berbentuk  padat  dengan  kisaran  ukuran 10-1000  nm.  Metode  preparasi  sangat berpengaruh  dalam  teknologi  pembuatan nanopartikel.  Pengecilan  ukuran  dengan magnetic stirrer dapat menghasilkan partikel yang  lebih  stabil  dengan  ukuran  yang  lebih merata,  dibawah  1000  nm  (Mayyas  dan Al-Remawi  2012).  Nesalin et  al. (2009) mengemukakan  bahwa  pengaruh  pengecilan ukuran partikel dengan magnetic stirrer pada kecepatan  tinggi  dapat  menyamaratakan energy  yang  diterima  oleh  seluruh  bagian larutan,  sehinnga  ukuran  partikel  semakin homogen.  Penambahan  tripolipospat  yang tepat dapat menurunkan ukuran nanopartikel dan meningkatkan kekuatan matriks kitosan sehingga  membuat  nanopartikel  semakin kuat  dan  sulit  terpecah  (Du et  al. 2009). Larutan kitosan yang telah tercampur dengan tripolipospat  ditambah  dengan  Tween  80.
Penambahan  Tween  80  sebagai  surfaktan berfungsi untuk menstabilkan emulsi partikel dalam  larutan  dengan  cara  mencegah timbulnya  penggumpalan  (aglomerasi)  antar partikel  (Keuteur  1996).  Partikel-partikel kitosan  di  dalam  larutan  terselimuti  dan terstabilkan  satu  dengan  yang  lain  karena adanya surfaktan, sehingga proses pemecahan partikel akan semakin efektif dan tidak terjadi aglomerasi (Xu dan Du 2003).
Uji Scanning Electron Microscopy (SEM)
Nano  kitosan  dapat  dibedakan  secara visual  dengan  menggunakan  SEM.  Prinsip kerja SEM adalah sifat gelombang dari elektron berupa difraksi pada sudut yang sangat kecil (Masotti et  al. 2007).  Hasil  pengujian  SEM dapat dilihat pada Gambar 1.
Gambar 1 merupakan SEM dari  sampel nano kitosan dengan perbesaran 1500 dan 5000 kali. Nano kitosan yang dibuat memiliki bentuk partikel  yang  berupa  bulatan  menyerupai bola.  Nano  kitosan  memperlihatkan  ukuran partikel  yang  kurang  homogen.  Hasil dari  SEM  ini  sesuai  dengan  penelitian Wahyono  (2010)  bahwa  nano  kitosan  terisi ketoprofen  memiliki  bentuk  bulat  utuh. Ukuran  partikel  yang  tidak  seragam  diduga karena ketoprofen tidak hanya masuk kedalam matriks  nano  kitosan,  tetapi  menempel  di permukaan.

## KESIMPULAN
Nano  kitosan  dibuat  menggunakan metode  gelasi  ionik,  yaitu  kompleksasi polilektrolit  antara  kitosan  yang  bermuatan
positif  dengan  tripolifosfat  yang  bermuatan negatif.  Rendemen  kitosan  dari  cangkang udang  yaitu  sebesar  19,08%,  sedangkan rendemen  nano  kitosan  dengan  perlakuan pengecilan  ukuran  menggunakan  magnetic stirrer  sebesar  80,67%.  Nilai  derajat deasetilasi  dari  kitosan  yang  digunakan untuk  membuat  nano  kitosan  yaitu  sebesar 98,65%,  menunjukan  bahwa  kitosan  yang dihasilkan  merupakan  kitosan  murni.  Nano kitosan  yang  terbentuk  rata-rata  berukuran 228,74  nm,  cukup  seragam,  relatif  stabil dan  memiliki  bentuk  partikel  yang  berupa bulatan menyerupai bola. Pengecilan ukuran partikel  dengan  magnetic  stirrer,  dapat mendistribusikan ukuran partikel yang lebih homogen. Penambahan tripoliphospat (TPP) dan surfaktan (Tween 80) dapat menguatkan sifat mekanik kitosan yang mudah rapuh dan dapat  membentuk  ikatan  silang  ionik  antara molekul kitosan.

## DAFTAR PUSTAKA
Angka  SI  dan  Suhartono  MT.  2000. Pemanfaatan  Limbah  Hasil  Laut: Bioteknologi  Hasil  Laut.  Bogor:  Pusat
Sumberdaya Pesisir dan Lautan, IPB. Azhar  M,  Efendi  J,  Syofyeni  E,  Lesi  RM, Novalina  S.  2010.  Pengaruh  konsentrasi NaOH  dan  KOH  terhadap  derajat deasetilasi kitin dari kulit udang. Eksakta 1(11):1-8. [AOAC]  Association  of  Official  Analytical Chemist.  1995.  Official  methods  of analysis.  The  Association  of  Official Analytical Chemist.Inc. Washington, DC.
Gambar 1 Morfologi nano kitosan a) pembesaran 1500 kali  b) 5000 kali a b
Produksi dan karakterisasi nano kitosan, Nadia et al.
Benjakula  S,  Sophanodora  P.  1993.  Chitosan production  from  carapace  and  shell  of black  tiger  shrimp  ( Penaeus  monodon ).
Asean Food Jurnal 8(4): 145- 148.
Berger J, Reist M, Mayera JM, Feltb O, Peppas NA,  Gurny  R.    2004.  Structure  and interaction  In  covalently  and  ionocally crosslinked  chitosan  hydragels    for biomedical applications. Europen Journal of Pharm And Biopharm 6(57): 19-34.
[BSN]  Badan  Standarisasi  Nasional.  2006. Metode  uji  kadar  logam  berat  timbal (Pb),  Cadmium  (Cd),  Arser  (As) dan  Merkuri  (Hg)  dalam  produk pertanian dan olahannyadengan metode spektrofotometer  serapan  atom  (SSA). Jakarta: Dewan Standarisasi Nasional.
Du  WL,  Niu  SS,  Xu  YL,  Xu  ZR,  Fan  CL. 2009.  Antibacterial  activity  of  chitosan tripolyphosphate  nanoparticles  loaded with  various  metal  ions. Journal Carbohydrate Polymers 12(75):385-389 Duarte  M.L,  Ferreira  M.C,  Marvao  M.R, Rocha J. 2002. An optimised method to determine  the  degree  of  acetylation  of chitin and chitosan by FTIR spectroscopy. Journal  of  Biological  Macromolecules 31(3):1-8. Elhady MM. 2012.Preparation and characterization  ofchitosan/zinc  oxide nanoparticles for impartingantimicrobial and  UV  protection  to  cotton  fabric.
Jouurnal  of  Carbohydrate  Chemistry 6(12):1-7.
Grenha  A,  Grainger  CI,  D  LA,  Seijo  B, Martin  GP,  Lopez  CR,  Forbes  B.  2007. Chitosan  nanoparticles  are  compatible withrespiratory  epithelial  cells  in  vitro. Journal  of  Pharmaceutical  Sciences 31(4):73-84.
Irianto HE dan  Muljanah I. 2011. Proses dan aplikasi  nanopartikel  kitosan  sebagai penghantar obat. Squalen 6(1):1-8. Keuteur  J.  1996.  Nanoparticles  and microparticles  for  drug  and  vaccine delivery. Europe Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics 189(15):503-505.
Kim  TY,  Cho  SY.  2005.  Adsorpsi  equilibria of  reactifedye  onto  highly  polyaminatid porous  chitosan  bead. Korean  Journal
Chemistry English 22 (5):691- 696. Kolodziejska I, Wojtasz-Pajak A, OgonowskaG,
Sikorski ZE (2000) Deacetylationof chitin in  a  two-stage  chemicaland  enzymatic process. Bul Sea Fisheries Inst 2(150):15- 24.
Masooti  A,  Marino  F,  Ortaggi  G,  Palocci C.  2007.  Fluorescence  and  scanning electron  microscopy  of  chitosan/DNA nanoparticles for biological applications. Journal Nanomedicine 1(4):507-522. Mayas MA dan Al-Remawi. 2012. Properties of  chitosan  nanoparticlesformed  using sulfate  anions  as  crosslinking  bridges. American  Journal  of  Applied  Sciences 9(7):1091-1100.
Mohanraj UJ. 2006. Nanoparticles - A Review. Tropical  Journal  of  Pharmaceutical Research 5(1):561-573. Muzarelli RAA dan Peter MG. 1997. Chitosan Handbook.  New  York:  European  Chitin Society.
No HK dan Meyers SP. 1995. Preparation and characcterization of chitin and chitosan-a review. Journal Aqua Food Prod Technol . 42(2):27-52. Prasetiyo KW. 2010. Pembuatan Kitin, Bisnis Masa  Depan.  http://www.biomaterial. lipi.go.id/p=154. [19 Mei 2014].
Ravichandran  S,  Rameshkumar  G,  Prince AR.  2009.Biochemical  composition  of shell and flesh of theindian white shrimp Penaeus indicus (H.milneEdwards 1837).
Journal  of  Scientific  Research 4(3):191- 194.
Saleh  MR,  Abdillah,  Suerman  E,  Basmal  J, Indriati  N.  1994.  Pengaruh  suhu,  waktu dan  konsentrasi  pelarut  pada  ekstraksi kitosan  dari  limbah  pengolahan  udang beku terhadap beberapa parameter mutu kitosan. Jurnal  Pasca  Panen  Perikanan 81:30-43.
Silvia  SS.  2005.  Physical  propertis  and biocompatibility of chitosan/sury blendet
membrane. Journal  of  Material  Science 16(8): 575-579.
Suptijah  P.  2006.  Deskripsi  karakteristik fungsional  dan  aplikasi  kitin  kitosan.
[Prosiding  Seminar  Nasional  Kitin- Kitosan].  Bogor;  Indonesia.  Bogor.
Institut Pertanian Bogor.
Suptijah  P,  Jacoeb  MA,  Rachmania  D.  2011.
Karakterisasi  nano  kitosan  cangkang udang vannamei ( Litopenaeus vannamei )
dengan  metode  gelasi  ionik. Jurnal Pengolahan  Hasil  Perikanan  Indonesia . 14(2):78-84. Suptijah  P,  Salamah  E,  Sumaryanto  H, Purwaningsih  S,  Santoso  J.  1992. Pengaruh  berbagai  isolasi  khitin  kulit udang  terhadap  mutunya. Jurnal Pengolahan  Hasil  Perikanan  Indonesia 3(1):1-9. Suwarda R, Maarif MS.  2012.  Pengembangan inovasi  teknologi  nanopartikel  berbasis pati  untuk  menciptakan  produk  yang berdaya  saing. Jurnal  Teknik  Industri 13(2):105-122.
Wahyono  D.  2010.Ciri  nanopartikel  kitosan dan  pengaruhnya  pada  ukuran  partikel dan  efisiensi  penyalutan  ketoprofen [Tesis]. Bogor: Institut Pertanian Bogor. Xu  Y,  Du  Y.  2003.  Effect  of  moleculer structureof  chitosan  on  protein  delivery properties  of  chitosan  nanoparticles. International  Journal  of  Pharmaceutics
250(4):215-226.
Yang  MH.Yuan  SS,  Huang  YF,  Lin  PC,  Lu CY,  Chung  TW,  Tyan  YC.  2014.  A proteomic view to characterize the effect of  chitosannanoparticle  to  hepatic  cells.
BioMed  Research  International 137(6): 1-9. Zamani A, Taherzadeh MJ. 2010. Production of low molecular weight chitosan by hot dilute sulfuric acid. Journal Bio Resources
5(3):1554-1564.