## ANALISIS PROPOXUR PADA SAMPEL DARAH POSTMORTEM TIKUS GALUR WISTAR
Azmi Wijayati 1 , Ahmad Basori 2 , Mochammad Yuwono 3
Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga; Kampus B. Jalan Airlangga Nomor 4-6 Surabaya
Jurusan S2 Ilmu Forensik e-mail: azmi.wijayati@gmail.com

## Abstrak
Bunuh  diri  menggunakan  pestisida  merupakan  masalah  utama  di  sebagian  besar negara  di  dunia.  Kasus  fatal  bunuh  diri  akibat  keracunan  pestisida  di  negara  berkembang umumnya berkisar antara 10-20%. Propoxur (2-isopropoxyphenyl N-methylcarbamat) adalah insektisida dari golongan karbamat yang dikembangkan oleh Bayer AG, Jerman. Pada kasus toksikologi,  pemilihan  spesimen  postmortem  yang  cocok  untuk  dilakukan  uji  sangatlah penting, jika dibandingkan dengan cabang-cabang lain dalam toksikologi forensik toksikologi Darah merupakan spesimen yang dipilih untuk menghitung dan menenetukan kadar obat dan metabolitnya.
Penelitian  ini  menggunakan  hewan  coba  tikus  galur  wistar  yang  diberi  perlakuan peroral  propoxur  dosis  letal.  Sampel  diambil  dari  darah  jantung  tikus  dengan  tiga  variasi waktu  yang  berbeda  yaitu  4,  16  dan  32  jam  setelah  perlakuan  peroral  Analisis  propoxur dalam sampel darah menggunakan metode ekstraksi cair-cair. Ekstrak diinjeksikan pada GC- MS. Hasil GC-MS menunjukkan puncak propoxur dengan waktu retensi 4,6 hingga 4,7. Pola kadar  propoxur  dalam  setiap  variabel  waktu  jam  ke  4,  16  dan  32  terdapat  kecenderungan penurunan kadar.
Kata kunci : propoxur, darah, postmortem, gas chromatography-mass spectrometry

## Abstract
Suicide  use  pesticide  was  the  main  problem  in  most  countries  in  the  world.  Fatal cases suicide of poisonous pesticides in developing countries generally ranged from 10-20 % used  propoxur.  Propoxur  (2-isopropoxyphenyl  N-methylcarbamate  )  is  an  insecticide  of  the carbamic  developed  by  Bayer  AG,  German.  In  the  case  of  toxicology  ,  selection  specimens postmortem  suitable  for  undergone  a  is  very  important,  compared  to  other  branches  in toxicology  forensic  toxicology.  Blood  was  specimens  selected  for  calculating  and  determine drug metabolites.
This  research  use  animal,  rats  who  were  given  treatment  peroral  propoxur  letal doses. Blood sample taken from the heart rats with three variation different times that is 4, 16 and  32  hours  after treatment  peroral.  Analysis  propoxur  in  blood sample  used liquid-liquid extraction. Extract analysed by GC-MS.The results show the peak of propoxur  have retention time 4.6 and 4. Pattern of propoxur levels in each variable hours to 4, 16 and 32 there is a trend of decreasing levels.
Keywords: propoxur, blood, postmortem, gas chromatography-mass spectrometry

## 1. PENDAHULUAN
Keracunan  insektisida  dapat  terjadi akibat  kontak  langsung  melalui  inhalasi, parental  dan    etabol  atau  disengaja  seperti bunuh  diri  melalui  minuman  dan  makanan. Bunuh diri menggunakan pestisida merupakan  masalah  utama  secara  klinik  di sebagian besar   etabo di dunia (Jeyaratnam, 1990)  (Eddleston,  2004),  dimana  menelan korban  sampai  300.000  orang  setiap  tahun (Eddleston  &  Phillips,  2004).  Kebanyakan kasus  kematian  yang  terjadi  adalah  di wilayah  pedesaan    etabo  berkembang (Eddleston,  2004),  kasus  kematian  akibat bunuh diri dengan racun merupakan kondisi nyata  yang  terjadi di    etabo  maju (Langley &  Sumner,  2002).  Kasus  fatal  bunuh  diri akibat  keracunan  pestisida  di    etabo berkembang  umumnya  berkisar  antara  10- 20%,  tetapi  untuk  pestisida  tertentu  dapat mencapai 50-70% (Eddleston, 2004).
Penyebab  tingginya  kasus  kematian akibat keracunan pestisida bersifat multifaktoral  seperti  racun  bersifat  toksik, jarak  jauh  menuju  rumah  sakit,  fasilitas medis  yang  kurang  lengkap,  ketersediaan antidots  dan  pengalaman  tenaga  medis dalam  menangani  kasus  keracunan  akut (Eddleston, Patterns and problem of deliberate  self-poisoningin  the  developing world, 2004) (Buckley, Karalliedde, Dawson,  Senanayake,  &  Eddleston,  2004). Dalam  kasus  bunuh  diri  menggunakan pestisida maupun insektisida dapat ditentukan  insektisida  jenis  apa  yang digunakan  dengan  cara    etabol.  Autopsi dilakukan  tidak  hanya  untuk  mengetahui jenis  racun  apa  yang  digunakan,  tetapi  juga dapat  untuk  menentukan  interval  post- mortem (Eddleston & Phillips, 2004).
Keracunan  pada  manusia  di    etabo seluruh dunia yang mengakibatkan keracunan  akut  yang  parah  disebabkan senyawa  antikolinesterase  dan  paraquat.  Di Costa  Rica  pada  tahun  1980-1986,  3330 orang dirawat dikarenakan keracunan pestisida  dan  429  diantaranya  meninggal. Penghambat  kolinesterase  (organofosfat  dan karbamat)  menyebabkan  63%  penderita dirawat  dan  36%  meninggal,  sedangkan paraquat  menyebabkan  24%  dirawat  dan 60%  meninggal.  Penghambat  kolinesterase
juga menyebabkan lebih dari 70% kecelakaan kerja.
World Health Organozation (WHO) mengestimasikan  sekitar  3  juta  rumah  sakit di  dunia  melaporkan  tentang  keracunan pestisida  setiap  tahun,  dengan  hasil  sekitar 220.000  orang  meninggal  (Colosio,  Vellere, &  Moretto,  2010).  Sebagian  besar  terjadi pada    etabo  berkembang,  terutama  di kawasan  Asia  Tenggara,  dan  presentase terbesar  adalah  untuk  tujuan  bunuh  diri lewat  saluran  pencernaan  (Gunnell  &
Eddleston, 2003). Estimasi baru mengindikasikan  ada  sekitar  300.000  orang meninggal  akibat  bunuh  diri  menggunakan pestisida  setiap  tahunnya,  dihitung  dari sepertiga  kejadian  bunuh  diri  secara  global (Bertolote,  Fleischmann,  Eddleston,  &  al, 2006)  (Gunnell,  Eddleston,  Phillips,  & Konrasden,  2007).  Di  beberapa    etabo  di Amerika  tengah  dan  selatan  (El  Salvador, Peru),  atau  di  Asia  (  Korea,  Taiwan)  bunuh diri  menggunakan  pestisida  terhitung  50% hingga 90% (Ajdacic-Gross, Weiss, & Ring, 2008)
Propoxur  sangat  mudah  terabsorbsi pada  usus  mencit  ataupun  tikus  (mendekati 100%),  hamster,  dan  sapi.  Kurang  dai  1% kandungan  propoxur  ditemukan  pada  feses hewan-hewan  tersebut.  Absorpsi  melalui usus pada manusia diperiksa secara laboratorium  mempunyai  hasil  yang    etabo sama  seperti  pada  hewan-hewan  tersebut. Prinsip  dari  jalur  ekskresi  pada  hewan  dan manusia  secara  laboratorium  menggunakan urin, 95% dosis terabsorpsi dalam waktu 48 jam.
Propoxur  tidak  terakumulasi  pada beberapa  jaringan  lunak  hewan,  kecali terdapat  pada  ginjal  selama  proses  ekskresi. Pada  sapi  ditemukan  kurang  dari  0,1  % kandungan  propoxur  pada  susu.  Waktu paruh  propoxur  pada  manusia  melalui intravena  adalah  8  jam.  Akumulasi  absorpsi pada  kulit  hewan  dalam  waktu  24  jam mendekati 16% (DPR, 1995). Selama dalam rapid  phase dengan  waktu  paruh  0,18-0,26 jam,  eliminasi  propoxur  dengan  prosentasi 80-95%  terjadi  dengan  cepat  (Foss  & Krechniak, 1980). Pada tikus dalam 16 jam, 90%  dari  radiolabel  telah  terekskresi  5% pada  feses,  25%  sebagai  senyawa  yang mudah  menguap  dan  60%  pada  urine sebagai  konjugat.  Onset  atau  waktu  paruh efek klinis dari insektisida propoxur
tergantung  pada  dosis,  jalur  paparan, penggunaan  alat  pengaman,  dan  usia  dari korban  (Rosman,  Makarovsky,  Bentur, Dushinitky, & Kriyov, 2009).
Analisis  cairan  biologi  dan  cairan ekskresi,  biasanya  urin,  dalam  bentuk sediaan  atau  metabolitnya,  dapat  dibuktikan dengan  cara  pengukuran  kualitatif  dan kuantitatif pengukuran dosis. Keuntungannya  adalah  menemukan  dosis pasif yang dievaluasi secara nyata, dibandingkan dengan potensial,   etabol dan integrasi    etabol  dari  semua  jalur  paparan (Storm, K.K.Rozman, & Dull, 2000).
Pada  kasus  toksikologi,  pemilihan etaboli  postmortem  yang  cocok  untuk dilakukan  uji  sangatlah  penting,  jika dibandingkan  dengan  cabang-cabang  lain dalam  toksikologi    etaboli  toksikologi (Skopp, 2004). Postmortem adalah meninggal/setelah  kematian  dan  perubahan- perubahan  yang  timbul  setelah  kematian.
Spesimen  yang  diambil  terkadang  kurang dari  ideal  dan  mungkin  sudah  terdegradasi atau kemungkinan tidak mengandung toksikan.  Hasil  dari  prosedur  analisis sangat penting  karena  dapat  digunakan  untuk infestigasi  kasus  sejak  beberapa  kasus diambil  untuk  kepentingan    etaboli  dan dapat mempengaruhi tuntutan   etab.
Tujuan melakukan analisis toksikologi pada orang yang sudah meninggal  dapat  terjadi  dari  beberapa macam kasus dan tergantung pada peraturan perundangan.  Pada  beberapa  konteks  kasus kematian  dimana  tidak  ada  rekam  medis yang  detail  tentang  suatu  perlakuan  onat- obatan  dan  tidak  ada  riwayat  sakit  sebelum orang  itu  meninggal  maka  diperlukan pengujian  toksikologi  yang  komprehensif untuk  mengetahui  penyebab  orang  itu meninggal karena obat atau racun (Drummer, 2007).
Darah  merupakan    etaboli  yang dipilih  untuk  menghitung  dan  menenetukan kadar  obat  dan  metabolitnya.  Konsentrasi toksikan pada darah juga sangat memungkinkan  dapat  dibandingkan  dengan data klinis dan
farmakokinetik.
Perhitungannya biasanya diambil dari etaboli    etabolism,  contohnya  pada  vena femoral  untuk  menghindari  perubahan  yang signifikan  disebabkan  redistribusi  toksikan. Penentuan  konsentrasi  obat  pada  darah
sudah  mencukupi  pada  kasus  dimana konsentrasi  obat  pada  takaran  fatal  dan keracunan.  Darah  merupakan  sampel  yang cocok digunakan untuk kasus keracunan gas atau senyawa yang mudah menguap (Skopp, 2004).
Kasus-kasus  bunuh  diri  dengan propoxur  (baygon)  banyak  terjadi  di Indonesia.  Terkadang  korban  ditemukan sudah  meninggal  dengan  botol  insektisida disampingnya.  Dalam  mengetahui  penyebab korban  meninggal  harus  dilakukan    etabol. Autopsi  dilakukan  untuk  mengetahui  jenis racun apa yang telah digunakan untuk bunuh diri,  tetapi  juga  untuk  mengetahui  kapan korban melakukan bunuh diri.
Sejauh ini penelitian dan pemecahan kasus  keracunan  propoxur  atau  Baygon  di Indonesia  masih  sebatas  uji  kualitatif.  Uji kualitatif  hanya  menentukan  apakah  suatu sampel  positif  mengandung  suatu  senyawa X.  Uji  kualitatif  tidak  memberikan  hasil tentang  kadar  suatu  senyawa  pada  sampel. Ketika  suatu  kasus  keracunan  maka  butuh data  akurat  tentang  suatu  senyawa  tersebut, termasuk  kadar  yang  berada  pada  sampel. Penentuan Limit  of  detection (LOD)  dan limit  of  quantitacy (LOQ)  juga  sangat berpengaruh dalam penentuan kadar insektisida  propoxur.  LOD  dan  LOQ merupakan  jumlah  terkecil  analit  dalam sampel  yang  dapat  dideteksi  dan  masih memberikan respon signifikan dibandingkan dengan  larutan  standar.  Batas  deteksi merupakan uji batas. Batas kuantitasi adalah parameter  pada  analisis  renik  dan  diartikan sebagai  kuantitas  terkecil  analit  dalam sampel  yang  masih  memenuhi    etaboli cermat dan seksama (Harmita, 2004).
Pentingnya  untuk  mengetahui  kadar dari  suatu  zat  dalam  suatu  sampel  barang bukti  adalah  untuk  menguatkan  bukti penyelidikan.  Penelitian  ini  merujuk  pada penentuan kadar propoxur pada hewan coba dengan  dosis  2LD 50 dan  3LD 50 dan  dengan variasi  waktu  pengambilan  sampel.  Variasi waktu  pengambilan  sampel  adalah  waktu paruh  dari  propoxur  dan  lima  kali  waktu paruh dari propoxur, karena ketika pengambilan  sampel  lima  kali  waktu  paruh dimungkinkan  propoxur  sudah  terekskresi sebanyak  95%.  Profil  kandungan  propoxur pada  sampel  post  mortem  pada  penelitian dimungkinkan  dapat  menjadi  acuan  dalam
penentuan  kadar  pada  kasus  keracunan propoxur  yang  berakibat  kematian  yang dipengaruhi  dosis  paparan  dan  waktu pengambilan sampel.
Pengujian sampel menggunakan instrumen  GC-MS.  GC-MS  merupakan metode  yang  efektif  dan  efisien  dalam analisis kadar insektisida khususnya propoxur.  Propoxur  mempunyai  sifat  yang mudah  menguap.  Teknik  analisis  yang menjadi  pilihan  pertama  untuk  memisahkan senyawa-senyawa  yang  mudah  menguap adalah menggunakan GC.

## 2. Tinjauan Pustaka
Pestisida pertama kali diperkenalkan di  Indonesia  pada  tahun  1970-an  bertepatan dengan  pelaksanaan  program  intensifikasi pertanian  padi  dan  tanaman  pangan  lain yang bertujuan untuk meningkatkan produktifitas.    Pestisida  sintetik  menjadi maslah  lingkungan  di  Indonesia  pada  tahun 1970-1980,  karena  saat  itu  pemakaian pestisida  yang  berlebihan  dengan  adanya program  pemerintah  dalam  intensifikasi pertanian yang menyebabkan keracunan akut dan  kronis  pada  hewan  dan  manusia (Resosudarmo, 2001).
Paparan  terhadap  pestisida  dapat masuk ke dalam tubuh manusia melalui tiga cara yaitu dengan absorpsi melalui kulit atau mata  (dermal),  melalui  mulut  (oral)  dan melalui pernapasan menuju paru-paru (inhalasi)  (Larry,  Clyde,  &  Vitzhum,  2001). Paparan melalui kulit menghasilkan   etabol yang  sangat  cepat  setelah  pestisida  kontak dengan kulit atau mata.
Paparan  melalui  kulit  kemungkinan akan  sangat  memberikan  efek  yang  sangat serius.  Dari  perspektif  kuantitatif,  paparan melalui  mulut  berada  pada  dosis  dugaan yang  memiliki  kurva  respon  sangat  ekstrim. Dosis minum yang tinggi, membuat keracunan  yang  parah  dan  kematian,  dapat terjadi sebagai akibat dari menelan pestisida untuk  tujuan  bunuh  diri,  atau  tertelan  tanpa sengaja,  biasanya  disebabkan  penyimpanan dalam wadah yang tidak tepat (Costa, 2008). Paparan melalui pernapasan akan menghasilakn  efek  yang  berbahaya  pula karena pestisida mempunyai partikel-partikel yang  secara  cepat  dapat  terabsorbsi  oleh
paru-paru    menuju    etabo  aliran  darah (Larry, Clyde, & Vitzhum, 2001).
World Health Organozation (WHO) telah  merekomendasikan  klasifikasi  dari pestisida  berdasarkan  tingkat  bahayanya, dimana  toksisitas  akut  dengan  cara  oral maupun paparan melalui kulit telah dilakukan  (IPCS,  2005).  Analisis  dari  data tersebut  mengindikasikan  bahwa  insektisida adalah  toksik  paling  akut.  Sekitar  74 komposisi aktif termasuk dalam kelas sangat beracun  dan  komposisi  aktif  kelas  beracun, 48  diantaranya  adalah  insektisida  (IPCS, 2005).
Di  dunia  penggunaan  pestisida  di dominasi  oleh  herbisida  disusul  oleh insektisida  dan  fungisida.  Sedangkan  di Indonesia,  insektisida  masih  menempati urutan teratas (Djojosumanto, 2000).
Insektisida  merupakan  bahan  yang mengandung  senyawa  kimia  beracun  yang eta  mematikan  semua  jenis  serangga. Kesulitan  dalam  pengendalian  serangga disebabkan sifatnya yang mudah menyesuaikan  diri  dengan  keadaan  sekitar. Untuk  membunuh  serangga,  insektisidan masuk  dalam  tubuh  serangga  melalui lambung, kontak dan pernafasan (Wudianto, 2005).
Insektisida  terdiri  dari  beberapa golongan yaitu golongan benzoiluera, karbamat,  organoklorin,  organofosfat  dan golongan peritroid. Organofosfat dan karbamat adalah insektisida yang menghambat kinerja enzim asetikolinesterase, ditunjukkan dengan sinapsis saraf dan persimpangan neuroefektor.
Organofosfat  dan  karbamat  dapat mengakumulasi asetilkolinesterase pada sinapsi muskarnik dan nikotin dan pada CNS (Fauci  &  Braunwald,  1997).  Golongan karbamat  adalah  salah  satu  jenis  pestisida yang  banyak  digunakan  dalam  bidang pertanian,  sebagai  insektisida,  fungisida, herbisida  dan  nematosida,  selain  itu  juga banyak  digunakan  dalam  bidang  kesehatan sebagai  pembasmi    etabo  penyakit.  Salah satu golongan karbamat yang paling banyak digunakan  dan  mudah  diperoleh  yaitu propoxur (Prasojo, 1993).
Golongan karbamat sangat menghambat  enzim  ini.  Golongan  karbamat terabsorbsi dalam paru-paru, kulit, lambung,
dan sebagian terdistribusi ke jaringan lunak, dan sangat lambat tereliminasi oleh etabolism  hati.  Waktu  paparan  hingga waktu  mencapai  onset  toksisitas  bervariasi dari  menit  hingga  berjam-jam,  biasanya  30 menit  hingga  2  jam  (Fauci  &  Braunwald, 1997).
Toksisitas  karbamat  pada  mamalia cukup  tinggi  bila  dikonsumsi  melalui  oral karena daya toksiknya lebih tinggi dibandingkan  dengan  jenis  karbofuran  lain dan  sifatnya  sama  dengan  insektisida organofosfat  yaitu  menghambat  enzim kolinesterase  (Winarno,  1997).  Beberapa insektisida yang termasuk golongan karbamat adalah adicarb, karbaril,
karbofuran, propoxur, dll.

## 2.1 Propoxur
Propoxur [2(1-metiletoksi)fenol
etab  karbamat]  adalah  insektisida  jenis karbamat  yang  dikembangkan  oleh  Bayer AG,  Jerman  dan  telah  terdaftar  di U.S Environtmental  Protection  Agency dan etabo bagian California sebagai
pemberantas semut, kecoa, jangkerik, ngengat,  nyamuk,  lebah,  kutu.  Propoxur tidak  digunakan  dalam  bidang  pertanian (Cochran, 1997). Propoxur bukan merupakan  pestisida  yang  dilarang,  dan mengandung 148 bahan yang telah teregistrasi  di  California.  Propoxur  dapat digunakan  sebagai  pengemulsi  konsentrasi, bubuk  pembasah,  dan  sebagai  pembersih debu pada eksterior gedung. Propoxur dapat juga  digunakan  sebagai  zat  tunggal  atau dicampur  dengan  insektisida  lain  (Cochran, 1997).
Gambar 1. Struktur Propoxur
Propoxur  sangat  mudah  terabsorbsi pada  usus  mencit  ataupun  tikus  putih (mendekati  100%),  hamster,  dan  sapi. Kurang  dai  1%  kandungan  propoxur
ditemukan pada feses hewan-hewan tersebut. Absorpsi  melalui  usus  pada  manusia diperiksa  secara  laboratorium  mempunyai hasil yang   etabo sama seperti pada hewan- hewan  tersebut.  Prinsip  dari  jalur  ekskresi pada hewan dan manusia secara
laboratorium  menggunakan  urin,  95%  dosis terabsorpsi dalam waktu 48 jam.
Propoxur  tidak  terakumulasi  pada beberapa  jaringan  lunak  hewan,  kecali terdapat  pada  ginjal  selama  proses  ekskresi. Pada  sapi  ditemukan  kurang  dari  0,1  % kandungan  propoxur  pada  susu.  Waktu paruh  propoxur  pada  manusia  melalui intravena  adalah  8  jam.  Akumulasi  absorpsi pada  kulit  hewan  dalam  waktu  24  jam mendekati  16%  (DPR,  1995).  Onset  atau waktu  paruh  efek  klinis  dari  insektisida propoxur  tergantung  pada  dosis,  jalur paparan,  penggunaan  alat  pengaman,  dan usia  dari  korban  (Rosman,  Makarovsky, Bentur, Dushinitky, & Kriyov, 2009).
Aktifitas  biologi  yang  utama  dari propoxur  adalah  karbamilasi  dari  enzim cholinesterase (ChE), mengakibatkaan terjadinya  hambatan  dari  kinerja  enzim tersebut. ChE adalah bagian dari enzim yang ditemukan dalam tubuh untuk menghidrolisis  kolin  ester.  Dalam    etabo saraf acetylcholinesterase (AchE)  terlibat dalam  penghentian  dorongan  di  seluruh persimpangan saraf sinapsis termasuk neuromuskuler  dengan  cepat  hidrolisis  saraf pemancar,  asetilkolin  (Bromijon,  1991).
Kehadiran inhibitor atau penghambat,
asetilkolinesterase  menjadi  terhambat secara cepat  dan  tidak  lama  kemudian  menjadi tidak mampu untuk menghidrolisis asetilkolin  menjadi  kolin  dan  asam  asetat (Jokanovic, 2009). Penghambatan AchE mengarah pada akumulasi  asetilkolin  pada  celah  sinapsis yang  mengakibatkan  kelebihan  stimulasi pada  saraf  diikuti  dengan  depresi  atau kelumpuhan  pada  saraf  kolinergi  sepanjang etabo  saraf  pusat  dan  saraf    etabolism. AchE  sangat  selektif,  meskipun  tidak eksklusif,  dengan  substrat  asetil  ester (Bromijon,  1991).  Penghambatan  enzim dapat  terjadi  reaktivasi  secara  spontan, dengan  terjadinya  pembalikan  hambatan dengan  waktu  paruh  paparan  satu  jam  atau kurang (Jokanovic, 2009). Fakta ini kemungkinan dapat digunakan untuk
© (2017) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
mereduksi periode intoksikasi pada kecelakaan dengan paparan propoxur berlebih  atau  pada  kasus  bunuh  diri. Penghambatan  untuk  esterase  yang  lain dimungkinkan  dapat  terjadi  (Thompson, 1999). Penelitian
tentang
toksisitas subkronis  dan  kronis  dari  insektisida golongan  karbamat  telah  banyak  dilakukan, sebagian  besar  untuk  tujuan  pendataan  dan penemuan  utama  mereka  (penghambatan kinerja  kolinesterase,  efek  pada  berat  organ dan  parameter  hematologi)  telah  dijelaskan (Baron,  1991).  Pengembangan  tentang ambang toleransi pada propoxur dan karbaril telah  diobservasi,  dan  sudah  mencapai pembahasan  enzim  mikrosomal  (Costa, 1981).
Fase toksisitas akut, reseptor muskarinik  dan  nikotin  terstimulasi  oleh asetilkolin  dengan  tanda  karakteristik  dan tanda  mencapai    etabolism  dan    etabo saraf  pusat  (Murphy,  1986).  Stimulasi  pada reseptor muskarinik dan nikotin pada   etabo saraf pusat dapat menyebabkan sakit kepala, gelisah, insomnia, khawatir, berbicara kacau, gemetar, kehilangan keseimbangan, kehilangan  kesadaran,  penurunan  nafas  dan pusat sirkulasi, dan koma (Rosman, Makarovsky, Bentur, Dushinitky, & Kriyov, 2009).
Kematian dapat terjadi pada keadaan yang sangat buruk, biasanya diawali dengan gagal nafas yang berasal dari efek kombinasi etabolism  dan    etabo  saraf.  Pada  kasus propoxur, hidrolisis spontan
dari kolinesterase  karbamat  komplek  terjadi in vivo ,  biasanya  diawali  tanda  klinis  yang mulai menghilang pada 24 jam (Ellenhorn & Barceloux, 1988).
Metabolit  utama  dari  propoxur  pada manusia,  hamster,  dan  tikus  putih  adalah  2- isopropoksifenol, 2-isopropoksifenil-asam karbamat,
1,2-dihidroksibenzena,
2- hidroksifenil  metilkarbamat,  2-isopropoksi- 5-hidroksifenil metilkarbamat, dan 2- isopropoksi-4(5)-metoksi-5(4)-hidroksifenil metilkarbamat.  Metabolit-metabolit  tersebut juga  terkonjugasi  menjadi  bentuk  O- glukoronid  (Eben,  Karl,  &  Machemer, Suplementary  studies  on  biotransformation of propoxur in the rat, 1985a).

## 2.2 Darah
Darah  dalam  sirkulasi  mengandung sekitar  4000  sampai  11.000  sel  darah  putih per  mikroliter.  Sel  darah  putih  bertanggung jawab  terhadap  pertahanan  tubuh  dan diangkut  oleh  darah  ke  berbagai  jaringan tempat  sel-sel  tersebut  melakukan  fungsi fisiologiknya  (Sacher,  2004).    Dalam keadaan  fisiologis,  darah  selalu  berada dalam  pembuluh  darah,  sehingga  dapat dijalankan fungsinya sebagai berikut (Handayani  &  Hariwibowo,  2008)  (1) sebagai  alat  pengangkut  yang  meliputi mengangkut oksigen (O 2 ) dan
karbondioksida (CO 2 ); mengangkut sisa-sisa atau  ampas  dari  hasil    etabolism  jaringan berupa  urea,  kreatinin  dan  asam  urat; mengangkut  sari  makanan  yang  diserap melalui  usus  untuk  disebarkan  ke  seluruh jaringan  tubuh;  mengangkut  hasil-hasil metabolisme jaringan; (2) mengatur keseimbangan  tubuh;  (3)  mengatur  panas tubuh; (4) berperan serta dalam mengatur pH cairan  tubuh;  (5)  mempertahankan  tubuh dari  serangan  penyakit  infeksi,  dan  (6) mencegah perdarahan.
Sampel  darah  banyak  digunakan untuk  studi  tentang  penentuan  (1)  uji langsung tentang efek dari senyawa terhadap darah  atau  sumsum  tulang,  (2)  efek  pada organ lain yang diindikasikan kandungannya pada  darah,  contohnya  adalah  kebocoran enzim,  seperti  aspartate  aminotransferase, dan (3) kandungan senyawa pada darah atau metabolitnya.  Berbagai  macam  metode dikembangkan  dalam  pengambilan  sampel darah  pada  tikus  putih.  Teknik-teknik  yang digunakan tergantung pada (1) volume yang dibutuhkan,  (2)  jika  hewan  yang  digunakan masih bertahan hidup, (3) frekuensi pengambilan  sampel,  (4)  dimungkinkan penggunaan anestesi, (5) seberapa kemungkinn hewan coba bertahan hidup, (6) dampak  pada  organ  yang  dihasilkan  dari prosedur yang digunakan.
Gambar 2. Metabolit Propoxur
2.3 Liquid-liquid Extraction
Prinsip  kerja  ekstraksi  cair-cair adalah pemisahan senyawa yang mempunyai perbedaan  kelarutan  pada  2  pelarut  yang berbeda.  Dalam  hal  ini  ekstraksi  cair-cair digunakan  untuk  memisahan  satu  atau  lebih senyawa  menggunakan  dua  pelarut  yang tidak  saling  bercampur,  dimana  senyawa akan  terdistribusi  di  antara  dua  fase  sesuai dengan  derajat  kelarutannya  yang  kemudian masing-masing jenuh dan terjadi pemisahan Ekstraksi  cair-cair  adalah  proses pemisahan  suatu  komponen  dari  fasa  cair lainnya. Operasi ekstraksi-ekstraksi cair-cair terdiri dari beberapa tahap, yaitu (Laddha & Degaleesan, 1976) : a. Kontak  antara  pelarut  ( solvent )  dengan fasa  cair  yang  mengandung  komponen yang  akan  diambil  ( solute ),  kemudian solute  akan  berpindah  dari  fasa  umpan ( diluent ) ke fasa pelarut ( solvent ).
b. Pemisahan  dua  fasa  yang  tidak  saling melarutkan  yaitu  fasa  yang  banyak mengandung  pelarut  disebut  fasa  ekstrak dan  fasa  yang  banyak  mengandung umpan disebut fasa rafinat.

## 2.4 GC-MS
Prinsip  kromatografi  gas  didasarkan atas partisi zat yang hendak dianalisis antara dua  fasa  yang  saling  kontak  tetapi  tidak bercampur.  Partisi  tercapai  melalui  adsorpsi atau  absorpsi  atau  keduanya.  Sebagai  fase gerak  digunakan  gas  pembawa.  Bagian pokok dari kromatografi gas adalah injektor, kolom  pemisah,  dan  detektor  (Roth  & Blaschke, 1988).
GC-MS  mempunyai  dua  metode analisis yaitu kualitatif dan metode kuantitatif.  Waktu  retensi  tidak  dapat mengkonfirmasi  identitas peak sehingga dibutuhkan spektrometer massa untuk mengidentifikasi  guna  analisis  kualitatif. Waktu  retensi  dapat  digunakan  sebagai identitas  suatu  sampel  apabila  variabel kolom  tetap  konstan,  diantaranya  panjang kolom,  fase  diam  dan  ketebalannya,  suhu kolom,  dan  tekanan  (kecepatan  alir  gas pembawa)  (McNair  &  Miller,  2009). Analisis kuantitatif membutuhkan pemahaman  tentang  detektor  dan  sistem data. Pengambilan sampel, preparasi sampel, validasi  metode  dan  instrumen  merupakan bagian penting dalam proses analisis.
Penggunaan spektrometri massa secara  luas  digunakan  di  bidang  kimia organik  sejak  tahun  1960.  Terdapat  dua alasan utama penggunaan MS, yang pertama karena  mampu  memguapkan  hampir  semua senyawa  organik  dan  mengionkan  uap; kedua,  fragmen  bermuatan  yang  dihasilkan dari  molkeul  ion  dapat  dihibungkan  dengan struktur molekulnya (Sudjadi, 1988).
Prinsip  kerja  MS  adalah  analit diuapkan  dalam  keadaan  vakum  kemudian dialirkan  menuju  ruang  pengion,  analit ditembak  dengan  arus  partikel  berenergi tinggi  menghasilkan  ion  dengan  kelebihan energi (radikal ion) yang bisa memecah dan tidak bisa memecah. Ion yang bisa memecah disebut  ion  induk  ( parent  ion ),  ion  induk akan  memecah  menjadi  ion  positif,  negatif, dan netral. Ion negatif akan tertarik ke anoda untuk  dinetralkan  dan  terhisap  oleh  pompa vakum  bersama-sama  dengan  fragmen netral,  sedangkan  partikel  bermuatan  positif menuju ke tabung analisator dan dibelokkan oleh  medan  magnet  sehingga  lintasannya melengkung  (Fessenden  &  Fessenden, 1989).
Pada  MS,  hanya  ion  positif  yang terdeteksi  dan  disajikan  sebagai  grafik  yang memuat puncak m/z (massa/muatan) ion-ion yang intensitasnya tergantung pada kelimpahan relatif ion. Puncak tertinggi pada spektrum disebut sebagai puncak dasar ( base peak ),  dinyatakan  dengan  nilai  100%  dan molekulnya  dinyatakan  sebagai  presentase puncak  dasar  tersebut.  Puncak  ion  molekul umumnya  merupakan  puncak-punck  dengan bilangan  massa  tertinggi,  kecuali  jika terdapat  puncak  isotop.  Puncak-puncak isotop ada karena sejumlah molekul tertentu mengandung  isotop  lebih  berat  dari  pada isotopnya.  Pecahnya  suatu  ion-ion  atau molekul
menjadi fragmen-fragmen tergantung pada kerangka karbon dan gugus fungsional  yang  ada.  Oleh  karena  itu, struktur  dan  massa  fragmen  memberikan petunjuk mengenai struktur molekul induknya (Fessenden & Fessenden, 1989).

## 3. METODE PENELITIAN
3.1 Bahan
Sampel yang digunakan adalah plasma darah  tikus  galur  wistar.  Bahan  kimia  (pro analisis)  yang  digunakan  acetonitril,  Nacl, metanol, standar propoxur.
3.2 Instrumen Penelitian
Instrumen yang digunakan pada penelitian  ini  adalah  GC  yang  digunakan
Agilent  6890  GC  ( Agilent  Technologies, Shanghai, China ), dilengkapi dengan injektor  otomatis  Agilent  6890  yang dipasangkan  dengan  detektor  selektif  massa Agilent 5975.

## 3.3 Ekstraksi Sampel
Sebanyak  50µl  spesimen  (darah) dicampur  dengan  5  ml  asetonitril  dan larutan  internal  standar,  dihomogenkan dan disentrifuse pada 3000 rpm selama 5 menit  untuk  membersihkan  larutan. Diperoleh  endapan,  ekstraksi  diulangi  2 kali.  Larutan  bening  asetonitril  yang diperoleh  kemudian  dicampur  dengan larutan NaCl 2% sebanyak  40 ml dan n- heksana/etil  asetat  sebanyak  12,5  ml (1:1,  v/v)  pada  corong  pisah  250  ml. Corong  pisah  dikocok  selama  10  menit menggunakan mesing pengaduk. Lapisan n-heksana/atil  asetat  terbentuk.  Lapisan tersebut  dikeringkan  pada  suhu  kamar. Larutan  sisa  dilarutkan  dengan  200  µl metanol.  Sampel  siap  diinjeksikan  ke GC-MS sebanyak 1 µl.

## 3.4 Kondisi GC-MS
GC  yang  digunakan  Agilent  7890A GC ( Agilent Technologies, Shanghai,
China ),  dilengkapi  dengan  injektor  otomatis Agilent  7683  yang  dipasangkan  dengan detektor  selektif  massa  Agilent  5975. Helium  dengan  tekanan  atas  50  kPa digunakan  sebagai  gas  pembawa.  Suhu  dari injektor di atur pada 230 o C. Suhu  kolom  diatur  60 o C  pada  0 menit  25 o C  /  menit  hingga  150 o C  ditahan selama  1  menit,  kemudian  melandai  3 o C/ menit  hingga  mencapai  suhu  240 o C  tahan selama  5  menit;  secara  bertahap  naikkan  10 o C/  menit  hingga  suhu  280 o C  dan  tahan selama  10  menit.  Gas  pembawa  yaitu Helium  mempunyai  kecepatan  arus  1,2 ml/menit, suhu injeksi adalah 230 o C, dengan volume injeksi 1 µL.
4. HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Kadar Sampel Berdasarkan hasil pengamatan menggunakan GC-MS, propoxur dapat
terditeksi  pada  tiga  variasi  waktu  pengambilan sampel. Dalam penelitian kali ini setiap variabel penelitian terdapat tiga kali pengulangan dengan total sampel 9 dan 1 untuk kontrol. Berdasarkan hasil pengujian menggunakan  GC-MS  diperoleh  hasil  kadar rata-rata pada jam ke 4 adalah 57,876 ppm, pada jam ke 16 adalah 37,565 ppm, dan pada jam ke 32 adalah 31,427 ppm. Perolehan kadar ini dengan perhitungan menggunakan kurva linier dengan
membandngkan  area  sampel  dengan  area internal  standar.  Pemilihan  internal  standar dengan  syarat  masih  dalam  satu  golongan dengan senyawa pada sampel, mempunyai sifat yang  hampir  sama  dan  mempunyai  waktu retensi yang berbeda.

## 4.2    Pengaruh  Waktu  Pengambilan  Sampel dengan Kadar
Penelitian  ini  menggunakan  satu variabel  kadar  propoxur  yaitu  LD50. Konsentrasi  suatu  senyawa  pada  fase postmortem dapat dipengaruhi oleh 1) waktu kematian dan posisi kematian; 2) tempat dan waktu  pengambilan  sampel  darah;  3)  difusi dari  beberapa  bagian  tubuh;  4)  redistribusi; 5) metabolisme; 6) sintesis (Kennedy, 2015).
Berdasarkan  data  yang  diperoleh terdapat  kecenderungan  kadar  propoxurnya semakin  berkurang  semakin  lama  waktu pengambilan  sampel.  Pengaruh  perbedaan kadar  awal  pemberian  peroral  propoxur hanya berpengaruh pada jumlah kadar akhir, tetapi  mempunyai  pola  yang  sama.  Pola penurunan kadar sangat terlihat dari jam ke 4 hingga  jam  ke  16,  sedangkan  pada pengambilan  sampel jam  ke  32  tidak  terlalu terlihat  penurunan  kadar  yang  signifikan. Sejauh  ini  belum  ada  penelitian  acuan tentang  kadar  propoxur  pada  sampel  post mortem.  Beberapa  penilitian  sebelumnya menggunakan  dosis  yang  bertingkat  dari kronis  hingga  sub-kronis  pada  tikus  hidup. Terdapat  kecenderungan  pola  grafik  yang menurun  sesuai  waktu  pengambilan  sampel yang  lebih  lama.  Dikarenakan  tikus  hidup mempunyai  sistem  absorbsi,  distribusi  dan metabolisme.
Beberapa literatur ada adalah distribusi    morphin  pada  sampel  post mortem darah jantung  tikus. Beberapa  penelitian  menyebutkan terdapat perbedaan rasio kadar yang dipengaruhi oleh hari setelah waktu
kematian.  Kemungkinan  perbedaan  rasio kadar  tersebut  dipengaruhi  oleh  beberapa faktor terjadinya pembusukan dari dalam
Gambar 3. Pola kromatogram propoxur
Gambar 4. Spektrum Propoxur
Gambar 4. Profil kadar propoxur dengan waktu pengambilan sampel
tubuh dan metabolisme bakteri dan ketidakstabilan  senyawa  kimia  (Kennedy, 2015). Contohnya adalah konsentrasi mawar clozapin  lebih  dari  70%  pada  hari  ke  4  dan promethazine lebih dari 170% pada hari ke 3 dan  semakin  turun  konsentrasinya  pada  hari ke  6  dan  ke  5  secara  berturut-turut, menunjukkan  bahwa  masih  banyak  faktor yang  tidak  diketahui  dan  tidak  dapat diprediksi mengenai konsentrasi suatu senyawa  pada  sampel  postmortem  (Sarr  & Beyer,  2012).  Metabolisme  suatu  senyawa masih dapat terjadi pada post-mortem akibat dari  invasi  bakteri  atau  metabolisme  tetap terjadi  disebabkan  oleh  aktivitas  anzim (Robertson & Drummer, 1995).

## 5. SIMPULAN DAN SARAN
Pola  hubungan  antara  waktu  pengambilan sampel postmortem darah dengan dosis paparan propoxur  dalam  penelitian  ini  adalah  semakin lama  waktu  pengambilan  sampel,  kadar propoxur dalam sampel semakin berkurang.
Perlu penelitian lanjutan dengan sampel postmortem  yang  berbeda  dan  waktu pengambilan sampel yang lebih lama.

## DAFTAR PUSTAKA
Ajdacic-Gross,  V.,  Weiss,  M.,  &  Ring,  M. (2008). Method of suicide: international suicide patterns derived from the WHO mortality  data  base. Bull  World  Health Org , 726-732.
Baron, R. (1991). Carbamate insecticides. In W.  Hayes,  &  E.  Laws, Handbook  of pesticide  toxicology (pp.  1125  -  1189).
San Diego: Academic Press. Bertolote,  J.,  Fleischmann,  A.,  Eddleston, M.,  &  al,  e.  (2006).  Deaths  from pesticide  poisoning:  a  global  response. Br J Psychiatry , 201-203.
Bromijon,  S.  (1991).  Enzymology  and biology  of  cholinesterases. USEPA Workshop on Cholinesterase Methodology (pp. 4-5). U. S.: Environmental Protection Agency. Buckley,  N.,  Karalliedde,  L.,  Dawson,  A.,
Senanayake,  N.,  &  Eddleston,  M. (2004).  Where  is  the  evidence  for  the management  of  pesticide  poisoning  is clinical  toxicology  fiddling  while  the
developing  burns? J.  Toxicology ,  113- 116. Cochran,  R.  (1997). Risk  characterization document : Propxur. California: Calivornia  Environmental  Protection Agency. Colosio,  C.,  Vellere,  F.,  &  Moretto,  A. (2010).  Epidemiological  studies  of anticholinesterase  pesticide  poisoning  : global impact. In T. Satoh, & R. Gupta, Anticholinesterase Pesticides: Metabolism, Neurotoxicity and Epidemiology (pp.  343-355).  New Jersey: Wiley & Sons. Costa, L. (1981). Tolerance to the carbamate insecticide  propoxur  . Toxicology ,  267 - 278. Djojosumanto,  P.  (2000). Teknik  Aplikasi Pestisida Pertanian. Yogyakarta: Kanisius. DPR.  (1995). Pesticides  sold  in  California by  pounds  of  active  ingridients. California: California Protection Agency. Drummer,  O.  (2007).  Requirements  for bioanalytical  procedures  in  postmortem toxicology. Anal  Bioanal  Chem  ;  388 ,
1459-1503.
Eben,  A.,  Karl,  W.,  &  Machemer,  L.
(1985a). Suplementary studies on biotransformation  of  propoxur  in  the rat. California: DPR.
Eddleston,  M.  (2004).  Patterns  and  problem of deliberate self-poisoningin the developing world. J. Med , 42-44.
Eddleston,  M.,  &  Phillips,  M.  (2004).  Self poisodning with pesticides. J. Med , 42- 44.
Ellenhorn,  M.,  &  Barceloux,  D.  (1988).
Medical  Toxicology:  Diagnosis  and Treatment of Human Poisoning.
Elseiver , 1077 - 1080.
Fessenden,  R.,  &  Fessenden,  J.  (1989). Kimia  organik  edisi  ketiga  jilid  dua. Jakarta: Erlangga.
Foss,  W.,  &  Krechniak,  J.  (1980).  The  fate propoxur in rat. Arch. Toxicol, suppl. 4 , 346-349.
Gunnell,  D.,  &  Eddleston,  M.  (2003). Suicide  by  intentional  ingestion  of pesticides:  a  continuing  tragedy  in developing  countries. Int  J  Epidemol ,
902-909.
Gunnell,  D.,  Eddleston,  M.,  Phillips,  M.,  & Konrasden,  F.  (2007).  The  global distribution  of  fatal  pesticide  self- poisoning:  systematic  review. BMC Public Health , 357.
Handayani,  W.,  &  Hariwibowo,  A.  (2008). Asuhan keperawatan pada klien dengan gangguan  sistem  hematologi. Jakarta:
Salemba Medika. Harmita.  (2004).  Petunjuk  Pelaksanaan Validasi Metoda dan Cara Perhitungannya. Majalah  Kefarmasian Vol 1 , pp. 117-135.
Jeyaratnam,  J.  (1990).  Acute  pesticide poisoning. World Health Statistic , 139- 144.
Jokanovic,  M.  (2009).  Medical  treatment  of acute poisoning with organophosphorus and carbamate pesticides. Toxicol Lett ,
107 - 115. Kennedy, M. (2015). Interpreting postmortem drug analysis and redistribution  in  determining  cause  of death: a review. Pathology and laboratory  medicine  international ,  55-
62. Laddha,  G.,  &  Degaleesan,  T.  (1976). Transport  Phenomena  in  Liquid-Liquid Extraction. New  Delhi:  Tata  McGraw- Hill Publishing Co. Ltd. Langley, R., & Sumner, D. (2002). Pesticide mortality  in  the  United  States  1979- 1998. Vet. Hum. Toxicology , 101-105. McNair,  H.  M.,  &  Miller,  J.  (2009).  Basic Gas  Chromatography. 2nd  Ed  A  Wiley interscience , 421-435.
Murphy,  S.  (1986).  Toxic  effects  of pesticides.  In  C.  Klaassen, The  Basic
Science  of  Poisons (pp.  519-581).  New York: Macmillan Publishing Co. Robertson,  M.,  &  Drummer,  O.  (1995). Postmortem drug metabolism by bacteria. J. Forensic Sci , 382-386. Rosman,  Y.,  Makarovsky,  I.,  Bentur,  Y., Dushinitky,  T.,  &  Kriyov,  A.  (2009). Carbamate poisoning: treatment
recommendations  in  the  setting  of  a mass casualties event. Am J Emerg Med
, 1117-1124.
Roth,  H.,  &  Blaschke,  G.  (1988). Analisis Farmasi (terjemahan). Yogyakarta: UGM Press.
Sacher,  R.  (2004). Tinjauan  Klinis  Hasil
Pemeriksaan  Labiratorium. Jakarta: ECG.
Sarr,  E.,  &  Beyer,  J.  (2012).  The  Time- dependant  post-mortem  redistribution of antipsychotic drugs. Forensic Sci Int , 223-227.
Skopp,  G.  (2004).  Preanalytic  aspects  in postmortem toxicology. Forensic Science International , 75-100. Storm,  E.,  K.K.Rozman,  &  Dull,  J.  (2000). Occupational exposure limits for organophosphate  pesticides  based  on inhibition of red blood cell acetylcholinesterase. Toxicology , 1-29. Sudjadi.  (1988). Metode  pemisahan,  Edisi pertama. Yogyakarta: Kanisius.
Thompson,  H.  (1999).  Esterases  as  Markers of  Exposure  to  Organophosphates  and Carbamates. Ecotoxicology , 369-384. Wudianto,  R.  (2005). Petunjuk  Penggunaan Pestisida. Jakarta: Penebar Swadaya.