Produksi Bioetanol Oleh Saccharomyces cerevisiae FNCC 3210 … Jurnal Agroteknologi Vol. 10 No. 02 (2016)
PRODUKSI BIOETANOL OLEH Saccharomyces cerevisiae FNCC 3210

## PADA MEDIA MOLASES DENGAN KECEPATAN AGITASI DAN AERASI YANG BERBEDA
Bioethanol Production by Saccharomyces cerevisiae FNCC 3210 in Molasses Media Under Different Agitation Speed and Aeration Rate
Jay Jayus 1) , Iga Vivin Noorvita 1) , Nurhayati Nurhayati 1) *
1) Jurusan Teknologi Hasil Pertanian Fakultas Teknologi Pertanian Universitas Jember Jl. Kalimantan 37, Kampus Tegal Boto Jember 68121
* E-mail: nurhayati.ftp@unej.ac.id

## ABSTRACT
One  alternative  way  to  increase  the  production  of  bioethanol  in  molasses  is  by  varying  the agitation speed and aeration rate during the fermentation process. The aims of this research were to evaluate  the  productivity  of  bioethanol  fermentation  of  S.  cerevisiae  FNCC  3210 under  different agitation speed and aeration rate. The research was carried out under aeration rate of 0.1; 0.3; and 0.6 vvm; as well as agitation speed of 100, 200 and 300 rpm. Microbial concentration, reduction sugar content and ethanol production were observed every 4-hour interval during 24 hours fermentation time. The results showed that the aeration rate treatment was significantly affecting the ethanol production, while  the  agitation  speed  was  not.  Fermentation  condition  of  100  rpm  agitation  speed  and  0.3  vvm aeration rate released the highest ethanol production (5.43%), and microbial concentration of 4.07 g/L.
Keywords : Saccharomyces cerevisiae, bioethanol, agitation speed, aeration rate

## PENDAHULUAN
Bioetanol  merupakan  hasil  dari proses fermentasi biomassa dengan bantuan  mikroorganisme  (Firdausi et  al. , 2013). Pada umumnya jenis
mikroorganisme  yang  digunakan  dalam produksi  bioetanol  adalah Saccharomyces cerevisiae .  Hal  tersebut  dikarenakan S. cerevisiae banyak  ditemukan  dialam, memiliki ketahanan hidup yang tinggi serta mampu  menghasilkan  alkohol  dalam jumlah yang cukup tinggi (Jeffries dan Jin, 2000). Upaya optimasi lingkungan tumbuh mikroba selama fermentasi dapat dilakukan  dengan  cara  mengkondisikan kultur pada kondisi optimum pertumbuhan mikroba  dengan  menggunaan  bioreaktor selama  proses  fermentasi.  Faktor  yang mempengaruhi fermentasi bioetanol menggunakan  bioreaktor  yaitu  agitasi  dan aerasi.  Pada  kondisi  mikroaerob  (0,1;  0,2 dan  0,4  vvm)  produksi  etanol  oleh Fusarium  oxysporum terjadi  lebih  cepat
(72  jam)  dibandingkan  pada  kondisi anaerob yang membutuhkan waktu fermentasi 120 jam (Xiros dan Christakopoulos, 2009). Yan et al. (2009), melaporkan bahwa produksi etanol menggunakan S.  cerevisiae pada  kondisi fermentasi  dengan  perlakuan  agitasi  200 rpm dan aerasi 4 mg/L dapat menghasilkan etanol  yang  lebih  tinggi  yaitu  143,8  g/L dibandingkan  dengan  kondisi  fermentasi tanpa agitasi dan aerasi yaitu 75,8 g/L.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui produksi etanol tertinggi yang dihasilkan  oleh S.  cerevisiae FNCC  3210 pada  media  molasses.  Perlakuan  yang digunakan  selama  proses  produksi  etanol adalah pemberian aerasi dan agitasi selama fermentasi dengan menggunakan fermentor.
Produksi Bioetanol Oleh Saccharomyces cerevisiae FNCC 3210 … Jurnal Agroteknologi Vol. 10 No. 02 (2016)

## METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini meliputi fermentor
Applikon Biotechnology  volume  1  L, laminar  air flow (LAF) Microtech Model V3, autoclave  Study  SA-300VL,  inkubator (scientific  series  2000),  oven  Scientific series  2000, hand  refractometer ATAGO, digital pH meter, spektrofotometer Genesys  10  UV  dan  alat  gelas.  Bahan penelitian yang digunakan meliputi molasses  yang  diperoleh  dari  PTPN  XI pabrik  pengolahan  gula  Djatiroto,  pupuk urea, Larutan NaOH (PA), Larutan H 2 SO 4 pekat,  asam  fosfat  10%,  K 2 Cr 2 O 7 ,  larutan Na 2 CO 3 ,  dan  reagen  dinitrosalisilic  acid (DNS),  kultur  khamir Saccharomyces serevisiae strain FNCC 3210.

## Tahapan Penelitian

## Preparasi media
Proses  preparasi  media  dimulai  dari pengenceran  molases  yang  diperoleh  dari PTPN XI pabrik pengolahan gula Djatiroto.  Pengaturan  pH  molases  dengan menggunakan  H 2 SO 4 pekat  hingga  pH molases  menjadi  2-3.  Kemudian  molases dipanaskan  hingga  mencapai  suhu  90ºC yang bertujuan untuk mempercepat pengendapan  padatan  yang  tidak  terlarut. Larutan  molases  kemudian  disaring  untuk memisahkan  padatan  tidak  terlarut  pada molases. Molases hasil saringan ditambahkan dengan NaOH 0,5 M hingga pH  molases  mencapai  pH  4,5  yang merupakan pH optimum untuk pertumbuhan  khamir.  Nutrisi  medium fermentasi diperkaya
dengan menambahkan  urea  sebanyak  0,4285  g/L dan asam fosfat 10% sebanyak 0,07 ml/L. Molases  yang  telah  dipreparasi  sejumlah 800  ml  dimasukkan  bioreaktor  dan disterilisasi dengan menggunakan autoklaf pada suhu 121ºC selama 15 menit.
.

## Pembuatan starter
Pembuatan  starter  dilakukan  dengan meremajakan  kultur  stok S.  cerevisiae strain FNCC 3210 pada media agar miring MEA  selama  48  jam  pada  suhu  30ºC. Kultur pada media miring sebanyak 1 ose diinokulasikan  dalam  10  ml  media  MEB yang  kemudian  diinkubasi  selama  15  jam pada suhu 30ºC sebagai kultur kerja. Kultur kerja sebanyak 10 ml diinokulasikan pada 100 ml molases (kadar brix 14º) yang telah disterilkan.  Molases  kemudian  diinkubasi selama 12 jam pada suhu 30ºC.

## Produksi bioetanol
Proses
produksi bioetanol menggunakan media molases 800 ml yang telah dipreparasi dalam bioreaktor. Starter S.  cerevisiae strain  FNCC  3210  sebanyak 10% v/v ditambahkan ke dalam bioreaktor dan  diinkubasi  selama  24  jam  pada  suhu 30ºC.  Produksi  bioetanol  tahap  pertama menggunakan perlakuan  kecepatan agitasi 100 rpm dan laju aerasi A1 (0,1 vvm), A2 (0,3  vvm)  dan  A3  (0,6  vvm).  Pada  tahap selanjutnya perlakuan laju aerasi terbaik di tahap pertama divariasikan dengan kecepatan  agitasi  200  rpm  (B1)  dan  300 rpm  (B2).  Parameter  yang  diamati  dalam penelitian  ini  pada  selang  waktu  4  jam adalah  kadar  sel  mikroba,  kadar  gula reduksi, dan kadar etanol.

## Parameter Pengamatan
Parameter yang diamati dalam penelitian ini meliputi paremeter mikrobiologi dan kimia. Parameter mikrobiologi  yaitu  konsentrasi  mikroba dengan  menggunakan  metode  gravimetri (Choiron et  al. ,  2013).  Parameter  kimia yaitu kadar gula reduksi dengan menggunakan metode DNS (Miller, 1959) dan  parameter  kadar  etanol  dengan menggunakan  metode  cawan  conway (Kartika et al. , 1992).
Produksi Bioetanol Oleh Saccharomyces cerevisiae FNCC 3210 … Jurnal Agroteknologi Vol. 10 No. 02 (2016)

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Profil Produksi Bioetanol Pada Kondisi Fermentasi Tahap Pertama
Hasil  pengamatan  proses  fermentasi tahap pertama dengan perlakuan kecepatan agitasi  100  rpm  dan  laju  aerasi  0,1 vvm(A1); 0,3 vvm(A2); dan 0,6 vvm(A3) ( Gambar 1) . Gambar 1 menunjukkan konsentrasi yeast  pada  perlakuan  A2  dan  A3 mengalami  kenaikan  hingga  akhir  proses fermentasi.  Konsentrasi  yeast  perlakuan A2  dan  A3  pada  jam  ke  24  berturut-turut sebesar 4,07±0,23  g/L dan 4,26±0,70 g/L. Peningkatan konsentrasi yeast dipengaruhi oleh  ketersediaan  substrat  dan  oksigen dalam  media  fermentasi.  Ketersediaan substrat  yang  masih  cukup  banyak  pada media  fermentasi  akan  digunakan  oleh yeast  untuk  pertumbuhan,  sehingga  yeast cenderung mengalami peningkatan konsentrasi.  Konsentrasi  yeast  perlakuan A1 mengalami kenaikan hingga fermentasi jam ke 20 dengan konsentrasi yeast sebesar
3,41±0,13  g/L  dan  mengalami  penurunan hingga  fermentasi  jam  ke  24.  Penurunan konsentrasi  sel  diduga  akibat  terjadinya lisis  pada  sel.  Autolisis  pada  sel  akan menyebabkan  mitokondria  mengeluarkan enzim yang dapat menghancurkan membran  sel  sehingga  sel  mengalami kerusakan  dan  konponen  sel  akan  hilang serta terdispersi kedalam media (Choiron et al. , 2013).
Pada  perlakuan  A2  jumlah  etanol tertinggi dihasilkan pada fermentasi jam ke 24.  Hal  tersebut  disebabkan  oleh  adanya suplai  oksigen  sebesar  0,3  vvm  yang mendukung peningkatan konsentrasi mikroba  hingga  akhir  proses  fermentasi. Perlakuan A1 dan A3 menghasilkan etanol tertinggi  pada  jam  ke  20  dan  mengalami penurunan  pada  fermentasi  jam  ke  24. Penurunan  etanol  yang  dihasilkan  diduga akibat  terbentuknya  alkohol  yang  bersifat toksik  bagi  mikroba  serta  adanya  suplai oksigen  sebesar  0,6  vvm  yang  cenderung mendorong sel mikroba untuk tumbuh dan mempertahankan keberadaan sel. Produksi
Gambar 1 . Peningkatan konsentrasi yeast (         ), peningkatan etanol (           ), dan penurunan gula reduksi (       ) selama fermentasi bioetanol pada tahap pertama dengan perlakuan A1 (■ ), A2 (●) dan A3 (▲)
Produksi Bioetanol Oleh Saccharomyces cerevisiae FNCC 3210 … Jurnal Agroteknologi Vol. 10 No. 02 (2016)
etanol  dengan  laju  aerasi  0,1  vvm menghasilkan  etanol  yang  lebih  tinggi dibandingkan  dengan  laju  aerasi  0,2  dan 0,4  vvm  (Xiros  dan  Christakopoulos, 2009).

## Profil Produksi Bioetanol pada Kondisi Fermentasi Tahap Kedua
Berdasarkan perlakuan
tahap pertama, kondisi fermentasi A2 merupakan kondisi fermentasi dengan perlakuan aerasi terbaik  yang  mendorong  yeast  untuk menghasilkan  etanol  dalam  jumlah  yang lebih tinggi dibandingkan dengan perlakuan  yang  lainnya.  Pada  fermentasi tahap  ini  dilakukan  upaya  optimalisasi jumlah etanol yang dihasilkan dengan cara melakukan  proses  fermentasi  dengan perlakuan aerasi 0,3 vvm yang divariasikan dengan perlakuan agitasi 200 rpm (B1) dan 300 rpm (B2). Perlakuan agitasi bertujuan
untuk menghomogenkan media fermentasi (Stanburry dan Whitaker, 1990).
Konsentrasi  tertinggi  yeast  pada perlakuan  B1  dan  B2  dicapai  selama  24 jam  fermentasi.  Peningkatan  konsentrasi mikroba  berkaitan  dengan  peningkatan jumlah etanol serta penurunan jumlah gula reduksi.  Jumlah  gula  reduksi  pada  kedua sampel mengalami penurunan hingga akhir fermentasi.  Laju  konsumsi  gula  reduksi pada perlakuan B1 dan B2 tidak memiliki perbedaan yang signifikan.
Jumlah  etanol  yang  dihasilkan  pada sampel  B1  dan  B2  tidak  memiliki perbedaan  yang  signifikan.  Hal  tersebut diduga akibat perlakuan agitasi sebesar 200 dan  300  rpm  tidak  terlalu  berpengaruh terhadap  kadar  etanol  yang  dihasilkan, namun  terbentuknya  buih  selama  proses fermentasi akan mengakibatkan terhambatnya pertumbuhan yeast sehingga produksi etanol tidak optimal ( Gambar 2 ).
Gambar 1 . Peningkatan konsentrasi yeast (         ), peningkatan etanol (           ), dan penurunan gula reduksi (       ) selama fermentasi bioetanol pada tahap pertama dengan perlakuan A1 (■ ), A2 (●) dan A3
(▲)
0,00 0,50 1,00 1,50 2,00 2,50 3,00 3,50 4,00 0 20 40 60 80 100 120 140 160 0 4 8 12 16 20 24 K o n se n tr a si y ea st (g /L ) G u la r ed u k si (g /L) Eta n o l (g /L)
Lama fermentasi (Jam)
Produksi Bioetanol Oleh Saccharomyces cerevisiae FNCC 3210 … Jurnal Agroteknologi Vol. 10 No. 02 (2016)
Kinetika Produksi Bioetanol oleh S. cerevisiae Strain FNCC 3210 Konsentrasi yeast Konsentrasi  tertinggi S.  cerevisisae FNCC 3210 pada tahap pertama diperoleh pada perlakuan A3 dengan konsentrasi sel sebesar  4,26  ±  0,70  g/L.  Peningkatan pemberian aerasi pada media selama proses fermentasi  akan  meningkatkan  jumlah populasi yeast. Hal tersebut sesuai dengan Tabel  1, pada  perlakuan  A3  dengan pemberian aerasi 0,6 vvm konsentrasi yeast yang  cenderung  mengalami  kenaikan hingga akhir proses fermentasi.
Tabel 1. Konsentrasi yeast selama fermentasi tahap pertama Lama fermentasi (Jam) Populasi Yeast (g/L) A1 A2 A3 0 0,05 ± 0,07 0,10 ± 0,14 0,10 ± 0,14 4 0,80 ± 0,01 0,70 ± 0,06 0,72 ± 0,21 8 1,43 ± 0,04 2,11 ± 0,15 1,52 ± 0,10 12 2,21 ± 0,11 3,00 ± 0,82 2,82 ± 0,02 16 3,22 ± 0,37 3,75 ± 0,06 3,56 ± 0,27 20 3,41 ± 0,13 4,04 ± 0,04 4,16 ± 0,20 24 2,99 ± 0,08 4,07 ± 0,23 4,26 ± 0,70
Perlakuan  tahap  kedua  dilakukan dengan menggunakan aerasi 0,3 vvm yang merupakan perlakuan aerasi terbaik berdasarkan  fermentasi  tahap  pertama. Berdasarkan  perlakuan  aerasi  terbaik tersebut,  kemudian  dilakukan  produksi bioetanol  tahap  kedua  dengan  variasi peningkatan  perlakuan  agitasi  yaitu  200 rpm  (B1)  dan  300  rpm  (B2).  Konsentrasi yeast pada  kedua  perlakuan  tersebut mengalami  kenaikan  hingga  akhir  proses fermentasi. Berdasarkan
Tabel 2
konsentrasi  tertinggi  yeast  pada  tahap  2 diperoleh  dengan  perlakuan  B1  sebesar 3,75 ± 0,03 g/L.
Tabel 2. Konsentrasi yeast selama fermentasi tahap kedua Lama fermentasi (Jam) Populasi Yeast (g/L) B1 B2 0 0,00 ± 0,00 0,05 ± 0,07 4 0,61 ± 0,20 0,53 ± 0,13 8 1,36 ± 0,19 1,30 ± 0,20 12 2,32 ± 0,30 2,22 ± 0,01 16 2,74 ± 0,16 2,72 ± 0,09 20 3,70 ± 0,60 3,24 ± 0,20 24 3,75 ± 0,03 3,44 ± 0,29

## Konsumsi gula reduksi
Jumlah  gula  reduksi  pada  masing- masing  perlakuan  fermentasi  mengalami penurunan seiring dengan lama fermentasi ( Tabel  3 ).  Konsumsi  gula  reduksi  pada perlakuan  A3  merupakan  konsumsi  gula reduksi  yang  paling  tinggi.  Hal  tersebut dikarenakan  pada  perlakuan  A3  dialirkan serasi  sebesar  0,6  vvm  yang  akan cenderung mendukung pertumbuhan yeast. Laju konsumsi gula reduksi pada perlakuan A1,  A2  dan  A3  hingga  akhir  fermentasi berturut-turut sebesar 5,01 ± 0,04 g/L/jam; 4,96  ±  0,02  g/L/jam  dan  5,46  ±  0,19 g/L/jam.  Laju  konsumsi  gula  reduksi hingga  mencapai  populasi  yeast  tertinggi pada kondisi A3 lebih tinggi dibandingkan kondisi A2 dan A3.
Tabel 3 . Konsumsi gula reduksi selama fermentasi tahap pertama Lama fermentasi (Jam) ΔS (g/L) A1 A2 A3 0 0,00 ± 0,00 0,00 ± 0,00 0,00 ± 0,00 4 29,04 ± 0,04 24,44 ± 0,01 28,12 ± 0,01 8 45,73 ± 0,12 58,61 ± 0,08 54,01 ± 0,05 12 62,81 ± 0,16 82,79 ± 0,13 79,63 ± 0,08 16 88,17 ± 0,12 97,24 ± 0,02 99,212 ± 0,04 20 107,75 ± 0,00 105,91 ± 0,01 114,85 ± 0,04 24 120,24 ± 0,01 118,92 ± 0,01 131,01 ± 0,05
Konsumsi gula reduksi pada fermentasi  tahap  kedua  tidak  berbeda signifikan yaitu sebesar 119,84 ± 0,00 g/L pada  perlakuan  B1  dan  sebesar  118,40  ± 0,01 g/L pada perlakuan B2 ( Tabel 4 ). Laju konsumsi  gula reduksi pada perlakuan B1 dan B2 cenderung lebih rendah dibandingkan  dengan  laju  konsumsi  gula reduksi  pada  perlakuan  A2.  Hal  tersebut dikarenakan  pada  kondisi  fermentasi  B1 dan B2 dihasilkan foam yang lebih banyak dibandingkan  dengan  kondisi  fermentasi A2,  sehingga  diduga  menghambat  proses pertumbuhan yeast .
Tabel 4. Konsumsi gula reduksi selama fermentasi tahap kedua Lama fermentasi (Jam) ΔS (g/L) B1 B2 0 0,00 ± 0,00 0,00 ± 0,00 4 26,41 ± 0,02 23,00 ± 0,02 8 50,99 ± 0,04 49,15 ± 0,03 12 81,73 ± 0,01 71,88 ± 0,04 16 93,96 ± 0,01 90,80 ± 0,01 20 104,86 ± 0,01 102,76 ± 0,01 24 119,84 ± 0,00 118,40 ± 0,01

## Growth yield
Nilai growth  yield pada  proses fermentasi tahap pertama dengan perlakuan A1, A2 dan A3 hingga mencapai konsentrasi  yeast  tertinggi  berturut-turut sebesar 0,031 ± 0,002 ; 0,033 ± 0,003 dan 0,032  ±  0,005.  Kondisi  fermentasi  A2 memiliki  nilai growth  yield yang  paling tinggi  dibandingkan  kondisi  A1  dan  A3. Nilai growth yield tertinggi masing-masing perlakuan  diperoleh  pada  fermentasi  jam ke 16-20. Hal tersebut dikarenakan jumlah substrat pada media masih melimpah yang mendukung  peningkatan  pertumbuhan yeast  menjadi  lebih  pesat  dibandingkan dengan fermentasi jam ke 24. S. cerevisiae dapat  memfermentasi  molases  dengan kadar gula 170 g/L sehingga menghasilkan nilai growth  yield sebesar 0,24  yang akan terus  mengalami  penurunan  hingga  0,019
di  akhir  proses  fermentasi  akibat  adanya reaksi  inhibisi  oleh  produk  (Echegaray et al., 2000).
Proses fermentasi tahap  kedua dilakukan  berdasarkan  perlakuan  terbaik dari tahap pertama (A2). Nilai growth yield dengan  kondisi  fermentasi  B1  dan  B2 hingga  mencapai  konsentrasi  sel  tertinggi berturut-turut  sebesar  0,031  ±  0,000  dan 0,029  ±  0,003.  Proses  fermentasi  dengan perlakuan  B2  tidak  memiliki  perbedaan nilai growth  yield yang  signifikan  dengan proses  fermentasi  perlakuan  B1.  Hal tersebut  diduga  karena  pada  perlakuan agitasi sebesar 200 dan 300 rpm terbentuk buih selama proses fermentasi berlangsung,  sehingga  pertumbuhan  yeast tidak optimal.

## Jumlah Etanol dan Produktivitas Etanol
Fermentasi bioetanol tergolong dalam tipe fermentasi pertumbuhan terpadu yaitu peningkatan jumlah populasi berjalan  seiring  dengan  peningkatan jumlah  produk  ( Tabel  5 dan 6 ).  Pada perlakuan  A1  dan  A3  etanol  mengalami kenaikan hingga hingga fermentasi jam ke 20 sebesar 4,18 ± 0,47% dan 4,52 ± 0,45%, kemudian  menurun  hingga  akhir  proses fermentasi. Penurunan tersebut dikarenakan  ketersediaan  substrat  yang semakin  menipis  serta  keberadaan  etanol yang  bersifat  toksik  yang  menyebabkan kerja  yeast  tidak  optimal.  Pada  perlakuan A2  etanol  yang  dihasilkan  sebesar  5,43  ± 0,37%. Perlakuan A2 merupakan perlakuan terbaik pada tahap pertama yang mampu mendorong yeast untuk memproduksi  etanol.  Produktivitas  etanol tertinggi yang dihasilkan oleh S. cerevisisae strain  FNCC  3210  dengan kondisi A1, A2 dan A3 berturut-turut yaitu 2,39 ± 0,57  g/L/jam; 2,83 ± 0,05  g/L/jam dan 2,18 ± 0,20 g/L/jam.
Produksi Bioetanol Oleh Saccharomyces cerevisiae FNCC 3210 … Jurnal Agroteknologi Vol. 10 No. 02 (2016)
Tabel  5 .  Produksi  etanol  selama  fermentasi  tahap pertama Lama fermentasi (Jam) Etanol (%) A1 A2 A3 0 2,23 ± 0,06 3,01 ± 0,05 0,15  ± 0,05 4 0,69 ± 0,05 0,76 ± 0,07 0,50 ± 0,13 8 1,50 ± 0,09 2,02 ± 0,52 1,37 ± 0,39 12 2,73 ± 0,27 3,70 ± 0,11 2,48 ± 0,30 16 4,06 ± 0,85 4,38 ± 0,34 3,34 ± 0,44 20 4,18 ± 0,47 5,10 ± 0,35 4,52 ± 0,45 24 3,92 ± 0,40 5,43 ± 0,37 4,29 ± 0,53
Pada  fermentasi  bioetanol  tahap kedua  dengan  kondisi  B1  dan  B2  mampu dihasilkan  etanol  hingga  sebesar  4,62  ± 0,15  %  dan  4,55  ±  0,25  %.  Etanol  yang dihasilkan pada perlakuan B1 dan B2 tidak memiliki  perbedaan  yang  signifikan.  Hal tersebut  diduga  karena  adanya  perlakuan agitasi  yang  tinggi  sebesar  200  dan  300 rpm selama proses fermentasi pada media molases  dapat  menghambat  pertumbuhan yeast  sehingga  produksi  metabolit  berupa etanol juga menurun.
Tabel  6. Produksi  etanol  selama  fermentasi  tahap kedua Lama fermentasi (Jam) Etanol (%)
B1 B2 0 0,31  ± 0,09 0,29  ± 0,01 4 0,72  ± 0,12 0,66  ± 0,01 8 1,88  ± 0,61 1,78  ± 0,73 12 3,29  ± 0,42 3,12  ± 0,11 16 4,01  ± 0,44 3,71  ± 0,35 20 4,62  ± 0,15 4,41  ± 0,34 24 4,54  ± 0,06 4,55  ± 0,25

## KESIMPULAN
Etanol  tertinggi  dihasilkan  oleh S. cerevisiae FNCC  3210  selama  fermentasi pada  tahap  pertama  dengan  variasi perlakuan  aerasi  A2  (0,3  vvm)  yaitu sebesar 5,43 %. Etanol tertinggi pada tahap
kedua dihasilkan oleh S. cerevisiae FNCC 3210  dengan  variasi  perlakuan  agitasi  B1 yaitu sebesar 4,62 ± 0,15 %.

## DAFTAR PUSTAKA
Agustin,  K.W.,dan  Fenty,  N.E.P.  2013. Produksi  etanol  dari  tetes  tebu  oleh Saccharomyces  cerevisiae pembentuk flok (NRRL-Y 265). Jurnal Agritech , 33 (2).
Alfenore,  S.,  Cameleyre,  X.,  Benbadis,  L.,
Bideaux, C., Uribelarrea, J.L., Goma, C., Molina-Jouve,  C.,  dan  Guillouet,  S.E. 2004. Aeration strategy: A Need for very high ethanol performance in Saccharomyces  cerevisiae fed-batch process. Applied Microbiology Biotechnology , 63: 537–542.
Bailey.,  James,  E.,  dan  David,  F.O.  1986. Biochemical Engineering Fundamentals ,2nd  ed .  McGraw-Hill  Book  Co., Singapura.
Christakopoulos, P., Xiros, C. 2009. Enhanced ethanol  production  from  brewer's  spent grain  by  a Fusarium  oxysporum consolidated  system. Biotechnology  for Biofuels , 2 (4).
Choiron,  M.,  Jayus.,  dan  Sony.  S.  2013. Pengaruh  ketersediaan  oksigen  pada produksi  epiglukan  oleh Epicoccum nigrum menggunakan  media  molases  .
Jurnal Agrointek , 7 (1).
Desrosier.  1989. Teknologi  Pengawetan Pangan .  Penerjemah  M.  Muljohardjo.
UI-Press, Jakarta.
Fardiaz,  S.  1992. Mikrobiologi  Pangan  I .
Gramedia Pustaka Utama, Jakarta.
Firdausi,  Z.N.,  Samodra,  B.N.,  dan  Hargono. 2013.  “Pemanfaatan  Pati  Singkong
Karet ( Manihot glaziovii ) Untuk Produksi  Bioetanol  Fuel  Grade  Melalui Proses Disrilasi Dehifrasi Menggunakan Zerolit  Alam”.  Skripsi.  (http://www.e- jurnal.com./2013/10/pemanfaatan-pati- singkong-karet-manihot.html)  (Diakses tanggal 25 September 2014).
Echegaray, O.E.,Carvalho, J.C.M., Fernandes, A.N.R.,  Sato,  S.,  Aquarone,  E.,  and Vitolo, M. (2000). Fed-batch culture of Saccharomyces cerevisiae in sugar-cane blackstrap  molasses:  Invertase  activity of  intact  cells  in  ethanol  fermentation.
Journal  of  Biomass  and  Bioenergy ,  19 (1): 39-50.
Gross,  T.,  Faul,  J.,  Ketteridge,  S.,  and Springham,  D.  1995. Introductory Microbiology  I .  Champman  and  Hill Boundry Row, London.
Hemamalini,  V.,  Saraswathy,  S.G.E.,  Hema, C.,  dan  Geetha,  S.  2012.  Comparative study of continous ethanol fermentation from molasses by using Saccharomyces cerevisiae and  Schizosaccharomyces pombe . Research  Article .  ISSN  2250- 1770.
Hidayat, N.M. dan Suhartini .2006.
Mikrobiologi  Industri .  Penerbit  Andi, Jakarta.
Jeffries, T.W. and Jin, Y.S. 2000. Ethanol and thermotolerance in the bioconversion of xylose by yeasts. Adv. Appl. Microbiology , 47: 221-268.
Judoamidjojo,  M.,  Darwis,  A.A.,  dan  Sa’id,
E.G.  1992. Teknologi  Fermentasi . Rajawali Press, Jakarta.
Juwita, Ratna. 2012. “Studi Produksi Alkohol Dari Tetes Tebu ( Saccharum officinarum L.) selama Proses Fermentasi”. Skripsi. (http://www.repository.unhas.ac.id/bitst ream/handle/…/1563/skripsiiiiiiiiiiiii.P
DF)  [Diakses  tanggal  26  September 2014].
Kartika,  B.,  Guritno,  A.D.,  Purwadi,  D.,  dan Ismoyowati.  1992. Petunjuk  Evaluasi Produk  Industri  Hasil  Pertanian .  PAU Pangan dan Gizi UGM, Yogyakarta.
Khongsay, Laopaiboon, Jaisil, dan Laopiboon, P.  2012.  Optimization  of  agitation  and aeration  for  very  high  gravity  ethanol fermentation  from  sweet sorghum  juice by Sacchamyces  cerevisiae using  an orthogonal  array  design. Journal  of Energies , 5: 561-576.
Kurniawan, Juhanda, Syamsudin dan Lukman. 2011.  “Pengaruh  Jenis  Pengaduk  pada Fermentasi  Etanol  SEcara  Sinambung dalam  Bioreaktor  Tangki  Berpengaduk Sel  Tertambat”.  Fakultas  Teknologi Itenas Bandung, Bandung.
Liu,  R.,  Mei.  X.,  Shen  F  dan  Wu.  H.  2009. Optimization of fermentation conditions for the production of ethanol from stalk juice  of  sweet  sorgum  by  immobilized yeast using reponse surface
methodology. Energy and Fuels , 23(1): 487-491.
Miller,  G.L.  1959.  “Use  of  Dinitrosalycilic Acid  Reagent  For  Determination  of
Reducing Sugar”. Dalam Mayzuhroh, A. 2015. “Produksi Bioetanol Mengggunakan Starter Komersial dengan dan Tanpa Pemberian Aerasi dan Agitasi  Pada  Media  Molases”.  Tidak Diterbitkan. Skripsi. Fakultas Teknologi Pertanian Universitas Jember, Jember.
Patrascu,  E.,  Rapeanu,  G.,  Bonciu,  C  dan
Hopulele, T. 2009. bioethanol
production  from  molasses  by  different strains  of Saccharomyces  cerevisiae . Ovidius University Annals of Chemistry , 20(2): 199-204.
Savitri,  D.  A.  2010.  “Pemanfaatan  Limbah Cair  Pulp  Buah  Kakao  Sebagai  Bahan Baku Produksi Bioetanol”. Skripsi. THP FTP Universitas Jember, Jember.
Schlegel,  H.G.  1994. Mikrobiologi  Umum . UGM Press, Yogyakarta.
Sener,  A.,  Chambas.  A.,  and  Onal,  O.  2007.
Effect of Ferementation Temperature of Kinetic Growth Sacchoromycess
cerevisiae.  University  of  Cukurova Faculty  of  Agriculture,  Department  of
Food  Engineering,  Balcali,  Adana-
Turkey.
Siregar,  Slamet,  Riyadi,  dan  Laeli.  1992. Pengolahan  dan  Pemasaran  Cokelat .
Penebar Swadaya, Jakarta.
Stanburry,  P.  F.  and  Whitaker,  A.  1990. Principles of Fermentation Technology . Pergamon Press, Oxford.
Produksi Bioetanol Oleh Saccharomyces cerevisiae FNCC 3210 … Jurnal Agroteknologi Vol. 10 No. 02 (2016)
Suliantari  dan  Rahayu,  W.P.  1990. Teknologi Fermentasi  Umbi-  Umbian  dan  Biji- Bijian .  Departemen  Pendidikan  dan Kebudayaan Direktorat Jenderal Pendidikan Tinggi Pusat Antar Universitas Pangan dan Gizi IPB, Bogor. Suwasono,  S.,  Fauzi,  M.,  Lindriati,  T.  2002. Teknologi Fermentasi . Fakultas Teknologi  Pertanian  Jurusan  Teknologi Hasil  Pertanian  Universitas  Jember,
Jember.
Walker,  G.  M.  1998. Yeast  Physiology  and Biotechnology .  John  Willey  &  Son. Chicester  NY  Weinheim  Brisbane Toronto.
Wasito.  2005.  Proses  pembuatan  etanol. (http://www.suaramerdeka.co.id) [Diakses tanggal 25 September 2014].
Winarno,  F.G.  dan  Fardiaz,  S.  1984.
Biofermentasi  dan  Biosintesa  Protein . Angkasa, Bandung.
Xin,  Yongfei,  Zouying  dan  Zouygui.  2003. The  Effect  of  Effect  of  Different Substrate  Concentration  on  Ethanol Fermentation.  Fd  Fermen  Indus,29:21- 23.
Yan, L., Tiansheng, Q., Naikun, S., Mingzhe, G.,  Yanling,  G.,  dan  Hai,  Z.  2009. Improvement  of  ethanol  concentration and yield by initial aeration and agitation culture in very high gravity fermentation. Chin J Appl Environ Biol. , 15 (4): 563-567.
Yingling, B., Zongcheng, Y., Honglin, W., dan Li, C. 2011. Optimization of bioethanol production
during
simultaneous
saccharification  and  fermentation  in very  high  gravity  cassava  mash.
Springer Science+Business
Media
Antonie Van Leeuwenhoek , 99: 329-339. Zayet,  G.Z.A.  dan  Foley,  J.  1987.  The
Influence of fermentation conditions on ethanol yields from sugar beet molasses and fodder beet juice using Saccharomyces  cerevisiae strains. Irish Journal  Food  Science  and  Technology , 11: 119-133.