Khofiya, et al . Hidrolisis Kulit Buah Kopi oleh Kapang Pestalotiopsis sp...
Hidrolis Kulit Buah Kopi Oleh Kapang Pestalotiopsis sp. VM 9 Serta Pemanfaatan Hidrolisatnya Sebagai Medium Produksi Protein Sel Tunggal Saccharomyces cerevisiae (Hydrolysis Coffea Pulp Using Extracelluler Enzymes of Pestalotiopsis sp. VM 9 and Utilization of Protein Hydrolysis For Medium Production Single Cell Saccharomyces cerevisiae)
Zunairoh Nidaan Khofiya, Rudju Winarsa, Kahar Muzakhar Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Jember (UNEJ) Jln. Kalimantan 37, Jember 68121 E-mail : kaharmzk@unej.ac.id

## Abstrak
Hidrolisis   limbah   kulit   buah   kopi   oleh   enzim   ekstraseluler Pestalotiopsis sp.   VM   9   telah   dilakukan.   Hasil   hidrolisis menunjukkan   bahwa   dalam   hidrolisat   mengandung   gula   reduksi   392,35µg/ml   setelah   masa   inkubasi   hari   ke-6.   Analisis lanjutan   menunjukkan   bahwa   hidrolisat   dapat   digunakan   sebagai   medium   pertumbuhan   Protein   Sel   Tunggal   (PST) S . cerevisiae dengan   tingkat   pertumbuhan   hingga   mencapai   kepadatan   sel   8,5x10 6 sel/ml   selama   72   jam   kultivasi.   Selama pertumbuhannya S . cerevisiae terbukti mengkonsumsi sumber karbon dari gula reduksi sebanyak 211,91 µg/ml.
Kata Kunci : Kulit buah kopi, hidrolisis, produksi PST, Pestalotiopsis sp.

## Abstract
Hydrolysis of coffee pulp waste by extracellular enzyme of Pestalotiopsis sp. VM 9 has been done. The results showed that in coffee  pulp hydrolyzate containing reducing sugar 392,35μg/ml after in sixth day incubation. Further analysis showed that hydrolyzate can be used as a growth medium of Saccharomyces cerevisiae single cell protein (SCP) with density up to 8.5x10 6 cell/ml in 72 hours of cultivation. During the growth of S. cerevisiae proven to consume carbon source from sugar reduction as much as 211,91 μg/ml.
Keywords: Coffea pulp , hydrolysis , SCP Production , Pestalotiopsis sp.

## PENDAHULUAN
Kopi   adalah   salah   satu   tanaman   yang   dibudidayakan sebagai ladang penghasilan masyarakat Indonesia. Selain itu, kopi   berperan   sebagai   sumber   pendapatan   devisa   negara. Produksi kopi yang tinggi menjadi penyebab meningkatnya limbah   kulit   kopi.   Pada   banyak   penelitian   yang   telah dilakukan   bahwa   limbah   kulit   kopi   dapat   dimanfaatkan sebagai bioethanol [5], bahan bakar pengganti dalam bentuk briket [9], dimanfaatkan sebagai amelioran tanah alam [15].
Senyawa yang terkandung dalam kulit buah kopi yaitu 0,98%   hemiselulosa,   18,65%   selulosa,   dan   12,25%   lignin [13]. Senyawa tersebut dapat didekomposisi mikroorganisme baik   bakteri   maupun   kapang   karena   limbah   kulit   kopi merupakan  bahan organik. Agen  dekomposisi yang paling efektif adalah dari golongan kapang [11]. Golongan kapang dapat   mendekomposisi   kandungan   selulosa,   hemiselulosa dan lignin pada limbah organik [16].
S alah  satu  jenis kapang   yang  dapat   merombak  limbah organik   yang   mengandung   lignoselulosa   adalah Pestalotiopsis sp. Karakteristik morfologi dari Pestalotiopsis sp.   yang   diinokulasikan   pada   media   PDA   akan   terlihat seperti kapas warna putih pada awalnya dan kemudian akan muncul bintik-bintik warna hitam pada permukaan dan akan semakin   gelap   [6].   Pestalotiopsis   sp.   dapat   menghasilkan enzim   seperti   laccase,   selulase   [21],   dan   tannase   [17]. Selulase merupakan enzim yang sangat penting peranannya dalam proses biokonversi limbah-limbah organik berselulosa menjadi glukosa, makanan ternak dan etanol [10].
Hasil   hidrolisis   dari   kulit   buah   kopi   dapat   digunakan sebagi   medium   pertumbuhan   protein   sel   tunggal . Saccharomyces cerevisiae adalah golongan yeast dan salah satu   Protein   Sel   Tunggal   (PST)   yang   telah   lama dikembangkan.   Banyak   penelitian   tentang   yeast   yang sedang dikembangkan. Golongan yeast termasuk mikrobia yang memiliki pertumbuhan cepat dan dapat tumbuh pada berbagai  substrat atau dengan kata lain memiliki cakupan yang luas dan dari segi nilai gizi meliputi energi, protein dan dari kesetimbangan asam amino [1].

## METODE PENELITIAN

## Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian dilaksanakan  di Laboratorium  Mikrobiologi, Fakultas   Matematika   dan   Ilmu   Pengetahuan   Alam Universitas Jember. Waktu pelaksanaan penelitian dimulai pada bulan Januari 2018 sampai Mei 2018.

## Alat dan Bahan
Alat- alat yang digunakan dalam pelaksanaan penelitian ini terdiri dari alat pembuatan media, alat standart sterilisasi, colony   counter , haemocytometer tipe neubauer   improve , inkubator, laminar   air   flow (LAF),  mikroskop,   mesin pencacah, pipet ukur, pipet mikro, pH meter, sentrifugator, spektofotometer, vortex.
Bahan yang digunakan adalah kulit buah kopi Robusta, stok kapang biakan Pestalotiopsis sp. VM 9 yang diperoleh dari  hasil   penelitian   Yuniar   (2013),   stok   isolat   biakan Saccharomyces   cerevisiae dari   Balai   Pengkajian   dan
Khofiya, et al . Hidrolisis Kulit Buah Kopi oleh Kapang Pestalotiopsis sp...
Penerapan   Teknologi   (BPPT)   Tanggerang   Selatan,   media PDA ( Potato Dextrose Agar ), media YEPD ( Yeast Extract Peptone Dextrose ) agar dan broth, NaCl 1%, subtrat alkali ekstrak kulit lunak buah kopi, buffer phosphat, buffer asetat, akuades, alkohol 70%, akuades 90%,   reagen Somogyi dan Nelson dan larutan NaOH 2 M.

## Persiapan Penelitian
Pertama   yaitu  persiapan   sampel   kulit   lunak   buah   kopi dengan cara    mengeringkan sampel pada kondisi kadar air kurang   dari   1%,   kemudian   dihaluskan   dengan   mesin penggiling dan disimpan.
Kedua  Peremajaan   isolat Pestalotiopsis sp. VM9 yaitu menginokulasikan   1   ose   biakan Pestalotiopsis sp.   pada median PDA miring dan diinkubasi pada suhu 30 0 C selama 3 hari. Selanjutnya pembuatan subkultur S . cerevisisae dengan menginokulasikan   1   ose   biakan S.   cerevisiae pada   media YEPD  miring dan diinkubasi pada suhu 30 0 C selama 3 hari. Ketiga, pembuatan alkali ekstrak kulit lunak buah kopi adalah   mencampurkan   200   gram   bubuk   kulit   lunak   buah kopi   dalam   160   gram   NaOH   2   M   dan   dilarutkan   dalam akuades   1000   ml.   Campuran   tersebut   dihomogenkan menggunakan magnetic   stir selama   24   jam.   Setelah   itu dilakukan   pengecekan   pH   dengan   tujuan   didapatkan   pH netral atau 7 yaitu dengan penambahan asam asetat sedikit demi sedikit. Hasil hidrolisis difiltrasi menggunakan kertas saring   sehingga   didapatkan   filtrat.   Selanjutnya,   filtrat diekstraksi menggunakan etanol dengan perbandingan etanol dan   filtrat   adalah   6   :   4.   Hasil   dari   campuran   tersebut disentrifugasi   sehingga   didapatkan   pellet   dan   supernatant. Supernatant  dibuang dan diambil pelletnya saja, kemudian dioven pada suhu 50 0 C selama 24 jam. Ekstrak alkali masih dalam bentuk padatan keras setelah dioven sehingga harus dihaluskan   terlebih   dahulu   agar   dapat   digunakan   dalam penelitian.
Keempat,  pembuatan   medium   protein   sel   tunggal berbasis kulit buah kopi, ditentukan terlebih dahulu kadar air kulit   buah   kopi.   Kulit   buah   kopi   sebanyak   5   gram dimasukkan   kedalam   kantong   teh   dan   direndam   dalam akuades   selama   30   menit.   Kantong   tersebut   digantung hingga   air   tidak   menetes,   kemudian   ditimbang   untuk mengetahui berat  basahnya. Selanjutnya dioven pada suhu 50 o C   selama   6   jam     dan   ditimbang,   dilanjutkan   dengan dioven kembali pada suhu 50 o C selama 6 jam dan ditimbang kembali,   sampai   hasil   yang   didapatkan   konstan   untuk mengetahui   berat     kering.   Hasil   selisih   dari   berat   basah dikurangi berat kering merupakan kadar air kulit buah kopi.
Tahap selanjutnya, hasil dari penentuan kadar air tersebut digunakan untuk membuat substrat kulit buah kopi jenuh air. Subtrat   kulit   buah   kopi   sebanyak   50   gram   dimasukkan kedalam   Erlenmeyer   500   ml   kemudian   ditambahkan   air sesuai kadar air yang telah dihitung. Kemudian disterilisasi pada   substrat   tersebut   menggunakan   autoklaf   pada   suhu 121 o C selama 20 menit.
Optimasi   Hidrolisis   Kulit   Buah   Kopi   oleh   Kapang Pestalotiopsis sp. VM 9
Optimasi   hidrolisis   dengan   cara   menginokulasi   1   ml suspensi   isolat Pestalotiopsis sp.   VM   9   yang   telah diencerkam dalam 10 ml akuades steril yang telah diinkubasi sesuai   waktu   inkubasi   kepadatan   spora   pada   medium   10 gram subtrat kulit buah kopi.   Selanjutnya diinkubasi pada suhu   30 o C   selama   7   hari   dan   dilakukan   pemanenan   gula
reduksi setiap harinya dimulai hari ke- 1 hingga hari ke- 7. Hasil   hidrolisis   dianalisis   gula   reduksi   menggunakan Somogyi-Nelson .   Hasil   analisis   yang   diperoleh dibandingkan   dengan   kurva   standart   glukosa   yang   telah dibuat sebelumnya.
Hidrolisis Kulit Buah  Kopi  oleh  Kapang Pestalotiopsis sp. VM 9
Kapang Pestalotiopsis sp. VM 9 diinokulasi pada media substrat kulit buah kopi jenuh air steril sebanyak 50 gram diinokulasikan   dengan   kapang Pestalotiopsis sp.   VM   9. Selanjutnya diinkubasi pada suhu 37 o C sesuai dengan waktu inkubasi   terbaik   yang   telah   dilakukan   pada   optimasi hidrolisis   kulit   buah   kopi   sebelumnya,   selanjutnya disterilkan   menggunakan autoclave dan   dilakukan pemanenan hidrolisat.
Pemanenan hidrolisat  dilakukan dengan menambahkan akuades kedalam hidrolisat dengan perbandingan hidrolisat dan akuades adalah 1:4, kemudian ditambah NaCl 1% dan NaAcide   0,01%   dan   di shaker selama   12   jam   pada   suhu ruang.   Selanjutnya   dilakukan   filtrasi   menggunakan   kaca Buchner   filter   corong   sehingga   diperoleh   hidrolisat. Hidrolisat disentrifugasi dengan kecepatan 4000 rpm selama 10   menit   untuk   memisahkan   filtrat   dari   pelletnya,   dan difilter   kembali   menggunakan   minipore   filter.  Setelah pemanenan kembali dilakukan uji dengan metode Somogyi - Nelson untuk mengetahui total gula reduksi pada produksi 50 gram kulit buah kopi.
Produksi S . cereviceae Pada   Media  Hidrolisat   Kulit Buah Kopi
Isolat S. cerevisiae sebanyak 1 ose diinokulasikan pada 20 ml media YEPD cair dan kemudian dishaker 120 rpm, selama   3   hari.   Sebanyak   100   µl   dari   kultur   tersebut diinokulasikan   pada   hidrolisat   kulit   buah   kopi  dengan variasi konsentrasi yaitu 0x, 2x, 3x, 4x, dan 5x pengenceran dengan   2   kali   ulangan  dan   sudah   disterilisasi.   Kultur S. cerevisiae pada hidrolisat kulit buah kopi diinkubasi shaker 120 rmp,  72  jam.  Setiap interval 6 jam diambil sebanyak 500   µl   yang   digunakan   untuk   mengukur   jumlah   sel   dan konsumsi gula reduksi dari hidrolisat.  Pengukuran jumlah sel menggunakan analisis spektrofotometer dengan panjang gelombang   600nm.  Jumlah   populasi   PST   dihitung menggunakan persamaan yang didapatkan pada pembuatan kurva standart hubungan S . cereviceae .
Perhitungan   sisa   gula   reduksi   dilakuakn   dengan   cara kultur S. cerevisiae pada variasi konsentrasi dan interval jam disentrifugasi   10.000   rpm   selama   5   menit   sehingga didapatkan filtrat. Kemudian dari 50 µl filtrat tersebut diuji mengguanakn   metode   Somogyi-   Nelson   dan   diukur   nilai absorbansinya menggunakan spektrofotometer pada panjang gelombang 500 nm. Data absorbansi diplot pada persamaan regresi   linear   yang   diperoleh   dari   kurva   standart   glukosa yang   nantinya   dibandingkan   dengan   larutan   standart glukosa.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Optimasi Produksi Enzim
Hasil  optimasi produksi enzim pada  metode Somogyi- Nelson menunjukkan bahwa produksi gula reduksi terbesar pada hari ke-6 inkubasi dengan angka 88,33µg/ ml. Gula reduksi yang tinggi pada inkubasi hari ke- 6  menunjukkan bahwa   aktivitas   enzim   esktraseluler   yang   dihasilkan   oleh
Khofiya, et al . Hidrolisis Kulit Buah Kopi oleh Kapang Pestalotiopsis sp...
Pestalotiopsis sp. VM 9 paling tinggi terjadi pada inkubasi hari tersebut. Aktivitas enzim  mengalami kenaikan seiring bertambahnya waktu inkubasi dari hari ke-1 hingga paling tinggi   pada   hari   ke-6   dan   mengalami   penurunan   aktivitas setelahnya.   Hal   ini   dikarenakan   produk   enzim   telah menumpuk   sedangkan   jumlah   substrat   telah   semakin berkurang sehingga laju reaksi  enzim menurun  [12].  Pada penelitian  sebelumnya [18], bahwa   enzim diperoleh secara optimum oleh Pestalotiopsis sp. VM 9 pada media CMC 1% adalah inkubasi hari ke-5. Perbedaan waktu optimum enzim dikarenakan   perbedaan   substrat   yang   harus   dipecah   oleh fungi. Kondisi yang mempengaruhi aktivitas enzim adalah konsentrasi substrat, konsentrasi enzim, pH dan suhu [12].
Hasil Hidrolisis Kulit Buah Kopi oleh Pestalotiopsis sp.

## VM 9
Berdasarkan  jumlah   gula   reduksi   yang   diperoleh   pada hari ke- 6 adalah  392,35  µg/ml.  Gula reduksi mengandung monosakarida, beberapa oligosakarida dan beberapa polimer glukosa   lainnya  [4].  Pada   tahap   hidrolisis   peran   mikroba selulolitik adalah menghasilkan enzim untuk merombak atau menghidrolisis   selulosa.   Hidrolisis   selulosa   melibatkan   3 enzim   selulase,   yaitu   (1)   endo-1,4-β-D-glukanase   yang bekerja secara acak sepanjang rantai selulosa menghasilkan situs baru untuk selobiohidrolase, (2) ekso-1,4-β-D-glukan
yang   bekerja   sebagai   eksoglukanase   melepas   selobiosa sebagai   produk   utama,   dan   (3)   1,4-β-D-glukosidase   yang menghidrolisis selobiosa menjadi glukosa [8].
Produksi S . cerevisiae Pada   Medium  Hidrolisat  Kulit Buah Kopi
S. cerevisiae ditumbuhan   pada   media   hidrolisat   kulit buah kopi yang telah dihidrolisis oleh Pestalotiopsis sp. VM 9.  Hasil dari optimasi waktu inkubasi selama 72 jam dan konsentrasi   pada   medium   hidrolisat   kulit   buah   kopi   dan diuji menggunakan spektrofotometer menunjukkan jumlah sel   paling   tinggi   pada   waktu   inkubasi   jam   ke-54 (Gambar.1).
Pada penelitian ini terlihat bahwa S . cerevisiae memiliki 4   tahap   fase   pertumbuhan   yaitu   fase   lag,   fase   log,   fase stationer dan   terakhir adalah fase kematian sel. Keempat fase   tersebut   dapat   dilihat   pada   konsentrasi   tanpa pengenceran, konsentrasi 2x pengenceran, dan konsentrasi 3x   pengenceran.   Sedangkan   pada   konsentrasi   4x pengenceran   dan konsentrasi 5x pengenceran tidak sesuai dengan   keempat   fase   tersebut   dikarenakan   konsentrasi hidrolisat   lebih   sedikit   sehingga   mempengaruhi pertumbuhan S . cerevisiae dimana hidrolisat adalah sumber nutrisi untuk pertumbuhan.
0 6 12 18 24 30 36 42 48 54 60 66 72 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Inkubasi (Jam ke-) Ju m la h x 1 06 ( se l/ m l)
Gambar 1. Kurva Optimasi Waktu dan Konsentrasi Pertumbuhan PST S . cerevisiae Pada Hidrolisat Kulit Buah Kopi. Keterangan:              tanpa pengenceran;      pengenceran 2x;      pengenceran 3x;      pengenceran 4x pengenceran 5x.
Pada konsentrasi tanpa pengenceran, konsentrasi 2x pengenceran  dan konsentrasi  3x pengenceran  diketahui fase log pada jam ke-0 hingga jam ke-12 dimana pada fase tersebut tidak ada pertumbuhan sel secara signifikan dikarenakan sel tersebut sedang dalam fase penyesuaian diri   terhadap   lingkungan   (substrat)   [7].   Fase   lag ditunjukkan   pada   pertumbuhan   sel   pada   jam   ke-18 hingga   jam     ke-   42.   Pada   fase   ini   sel   mengalami pertumbuhan  secara signifikan karena sel telah mampu beradaptasi dengan medium (hidrolisat kulit buah kopi) dan mampu memanfaatkan gula reduksi. Pertumbuhan S . ceresvisiae pada fase stationer ditunjukkan pada jam ke-
48 hingga jam ke-60 . Pada fase stationer S . cerevisiae menunjukkan   tidak   ada   lagi   pertumbuhan   sel   secara signifikan   karena  konsumsi   gula   reduksi  pada  medium hidrolisat kulit buah kopi telah optimum [7]. Pada jam ke-66 hingga jam ke-72 sel mulai mengalami penurunan jumlah dan disebut fase kematian sel. Hal ini dikarenakan kandungan   gula   reduksi   sudah   mulai   habis   sehingga sudah tidak ada lagi gula reduksi yang dapat dipecah oleh sel dan dimanfaatkan untuk pertumbuhan sel. Selain gula reduksi, unsur lain yang diperlukan dalam pertumbuhan S . cerevisiae adalah   magnesium,   phosfor,   nitrogen, karbon, hidrogen, oksigen[2]
Khofiya, et al . Hidrolisis Kulit Buah Kopi oleh Kapang Pestalotiopsis sp...
Pertumbuhan   optimum S . cerevisiae pada   medium hidolisat   kulit   buah   kopi   diikuti   oleh   penurunan   gula reduksi   (Gambar.2).  Gula   reduksi   semakin   menurun hingga   jam   terkahir   inkubasi   meskipun   pada   kurva pertumbuhan S . cerevisiae telah melewati fase stasioner yaitu fase kematian sel. Hal  ini dikarenakan pada fase tersebut sel tetap hidup meski tidak menunjukkan tanda pertumbuhan, akan tetapi sel tetap membutuhkan nutrisi untuk   hidup.   Sehingga   gula   reduksi   tetap   mengalami penurunan.   Selain   itu   dimungkinkan   bahwa   pada   awal pertumbuhan   hingga   memasuki   fase   stasioner S . cerevisiae cenderung   memanfaatkan   gula   sederhana seperti   glukosa   dan   fruktosa  [3].  Karena   jumlah   gula sederhana   menurun   dimungkinkan   yang   tersisa   adalah gula   jenis   polisakarida   dan   sulit   dipecah   oleh S . cerevisiae sehingga mempengaruhi metabolisme sel. Hal tersebut   memunginkan   dapat   memperlambat   laju
pertumbuhan S . cerevisiae dan akhirnya masuk pada fase kematian sel.
Pada perlakuan tanpa pengenceran sisa gula reduksi pada   jam   inkubasi   ke-72   adalah   180,44   µg/ml   dengan jumlah sel 8,5 x 10 6 sel/ml . Sedangkan pada perlakuan 2x   pengenceran   sisa   gula   reduksi   pada   jam   ke-72 mencapai 164, 4 µg/ ml dengan jumlah sel 7,6 x 10 6 sel/ ml. Gula reduksi yang dimanfaatkan S. cerevisiae untuk tumbuh kurang  lebih 54% dari  total  gula reduksi  awal yaitu  392,35   µg/   ml.  Penurunan   gula   reduksi   ini menunjukkan bahwa kandungan dalam gula reduksi telah mampu   mencukupi   kebutuhan S . cerevisiae untuk tumbuh. Pertumbuhan yeast dipengaruhi oleh kandungan glukosa   dalam   substrat   [19].   Penurunan   kadar   glukosa dalam   substrat   mempengaruhi   metabolisme   dalam   sel sehingga menyebabkan kematian sel [14].
24 5.95
4.78 211.8 190.94 18 5.85 4.74 213.04 195.26 12 5.3 4.5 217.73 201.8 6 4.97 4.4 220.69 203.04 4 6 8 160 180 200 220 240 Inkubasi (Jam ke-) Ju m la h s el x 1 06 ( se l/ m l) S is a G u la R ed u k si ( µ g/ m l)
Gambar 2. Kurva Hubungan Populasi S . cerevisiae dan Konsumsi Gula Reduksi Keterangan:      tanpa pengenceran (sel/ml);      pengenceran 2x (sel/ml); tanpa pengenceran (sisa gula);     pengenceran 2x (sisa gula).

## KESIMPULAN
Pertumbuhan S.   cerevisiae mencapai   8,5   x   10 6 sel/ml   pada   waktu   inkubasi  jam   ke-   54   dan   pada konsentrasi tanpa penegenceran.  Seiring pertumbuhan S.   cerevisiae ,   gula   reduksi   mengalami   penurunan hingga jam terkahir inkubasi yaitu 180,44 µg/ml. Gula reduksi yang dimanfaatkan S. cerevisiae untuk tumbuh kurang  lebih  54%  dari   total   gula  reduksi  awal   yaitu 392,35 µg/ ml.
Saran   dari   hasil   penelitian   ini   adalah   untuk dilakukan analisis hidrolisat setelah dilakukan produksi enzim . Sehingga saat produksi enzim skala besar dapat dilakukan tahapan tertentu untuk menyesuaikan kondisi lingkungan optimum untuk pertumbuhan S . cerevisiae . Selain   itu,   dapat   dilakukan   penambahan   senyawa tertentu   yang   dapat   mendukung   pertumbuhan S . cerevisiae seperti nitrogen, fosfor, dan lain- lain.

## DAFTAR PUSTAKA
[1]  Amini,   Rasoul   S.   2011.   Single   Cell   Protein : Production
and Process,(May2014). https://doi.org/10.3923/ajft.2011.103.116. [2]  Anjarsari,   B.,   &   Effendi,   S.   2005.   Pembuatan Protein Sel Tunggal dari Limbah Cair Pulp Kakao Oleh Saccharomyces   cerevisiae . Jurnal Infomatek , 7(2), 93-105.
[3]  Arroyo López F. N, Sandi Orlić, Amparo Querol, Eladio Barrio. 2009. Effects of temperature, pH and sugar concentration on the growth parameters of Saccharomyces cerevisiae , S. kudriavzevii and their interspecific hybrid. International Journal of Food Microbiology . 131, 120–127.
[4]        Chubey   B.B   and   Dorrell   D.   C.   1977.   Total Reducing   Sugar,   Fructose   And   Glucose Concentrations And Root Yield Of Two Chicory Cultivars   As   Affected   By   Irrigation,   Fertilizer And Harvest Dates. can. J. plant Sci . 5g: 7g9-793.
[5]  Ernawati,   &   Raudah.   2012.   Pemanfaatan   Kulit Kopi   Arabika   dari   Proses   Pulping   untuk Pembuatan   Bioetanol. Journal   of   Science   and Technology , 10 (21), 12–21.
[6]  Guava, O. F., Canker, S., & Governorate, I. N. E. 2015. Available Online at ESci Journals , 04 (03), 121–136.
[7]  Held P.Monitoring growth of beer brewing strains of   Saccharomyces   cerevisiae.   Applicatio
BERKALA SAINSTEK 2019, VII (1): 19-23 ISSN : 2339-0069
Khofiya, et al . Hidrolisis Kulit Buah Kopi oleh Kapang Pestalotiopsis sp...
Note,Monitoring of Cell Suspensions by Kinetic Absorbance Measurements, 2010.
[8]     Hermiati, E., Mangunwidjaja, D., Sunarti, T.C., Suparno,   O.,   &   Prasetyo,   B.   2010.   Pemanfaatn Biomassa   Lignusellulosa   Ampas   Tebu   untuk Produksi   Bioetanol.   Jurnal   Litbang   Pertanian, 29(4), 121 – 130
[9]       Khusna, D. ’ J. S. 2015. Pemanfaatan Limbah Padat   Kopi   Sebagai   Bahan   Bakar   Alternatif Dalam   Bentuk   Bricket   Berbasis   Biomass. Seminar  Nasional Sains Dan Teknologi Terapan III , 247–260.
[10] Mandels   M,   Andreotti   R   &   Roche   C. Measurement   ofsaccharifying   cellulase. Biotechnol. Bioeng. Symp . 6:21-33. 1976.
[11] Miranti, A. K., Rukmi, I., & Suprihadi, A. 2009. Keanekaragaman   Kapang   Aspergillus   pada Serasah Daun Talok ( Muntingia calabura L .) di Kawasan   Desa   Sukolilo   Barat   ,   Kecamatan Labang   ,   Kabupaten   Bangkalan   ,   Madura   The Diversity   of   Aspergillus   Mold   in   Talok   Leaf Litter ( Muntingia calabura L .) in West S, 98–
104
[12]  Pelczar,   Michael   J.   ECS.   Chan.   2008. Dasar- Dasar Mikrobiologi . Jakarta. UI Press.
[13]  Penaloza WM, Molina MR, Brenes RG,  Bressani R.   1985.   Solid   Substrate   Fermentation:   an Alternative   to   Improve   the   Nutritive   Value   of Coffee   Pulp. Applied   and   Environmental
Microbiology 49 : 388-393.
[14]  Petrik   M,   Kappeli   O,   Fiechter   A.   1982.   An expanded   concept   for   the   glucose   effect   in   the yeast   Saccharomyces   uvarum:   Involvement   of short   and   long-term   regulation. Journal   of
General Microbiology. 129: 43-49.
[15]  Pujiyanto.   2007.   Pemanfaatan   Kulit   Buah   Kopi dan   Bahan   Mineral   Sebagai   Amelioran   Tanah Alami. Pelita Perkebunan , 23(2) (90), 159–172.
[16]  Saraswati,   R.,   &   Sumarno.   2008.   Pemanfaatan Mikroba   Penyubur   Tanah   sebagai   Komponen Teknologi Pertanian. Iptek Tanaman Pangan , 3 ,
41–58. Retrievedfrom.
[17] Sena,   A.   R.   De,   Rodrigues,   M.,   Mello,   F.   De, Cley, T., Leite, C., Moreira, K. A., & Assis, S. A. De.   2014.   Production   ,   Characterization   and Application   of   a   Thermostable   Tannase   from Pestalotiopsis guepinii URM 7114, 52 (4), 459– 467.
[18]  Solehah,   S.H.   2017.   Hidrolisis   Tandan   Kosong Kelapa   Sawit   Oleh Trichoderma   viridae dan Pestalotiopsis sp.   (VM   9)   Sebagai   Media Pertumbuhan Protein Sel Tunggal Saccharomyces cerevisiae . Jurnal Skripsi . Vol (1)
[19]   Vieira, É. D., Stupiello, G., & Andrietta, S. R. 2013. Yeast biomass production : a new approach in   glucose-limited   feeding   strategy, 558 ,   551– 558.
[20] Yuniar,   W.   2013. Skrining   dan   Identifikasi Kapang Selulolitik pada Proses Vermikomposting Tandan   Kosong   Kelapa   Sawit   (TKKS) . Jurnal skripsi (Vol. 1).
[21] Zhang, P. 2006. Involvement of Lignocellulolytic Enzymes in the Decomposition of Leaf Litter in a Subtropical   Forest, 53 (3),   193–198. https://doi.org/10.1111/j.1550-7408.2006.00093.x