© (2018) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
Ekspresi TGFΒ1 Setelah Pemberian Ekstrak Gel Aloe Vera Pada Soket Pencabutan Gigi Tikus
Wistar
Niswatun Chasanah 1 , Achmad Bashori 2 ,Agung Krismariono 3
1 Mahasiswa Ilmu Kedokteran Dasar Jenjang Magister Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga Surabaya
2 Departemen Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga Surabaya
3 Departemen Periodonsia Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Airlangga  Surabaya email : niswa.drg@gmail.com

## ABSTRAK
Pencabutan  gigi  merupakan  tindakan  bedah  minor  dan  proses  penyembuhan  membutuhkan waktu  yang  lama  untuk  dapat  dilakukan  perawatan  rehabilitatif,  yaitu  perawatan  gigi  tiruan. Aloe vera dikenal sebagai  healing plant untuk mengobati luka dan luka bakar. Komponen Aloe vera  berperan untuk  merangsang  produksi  sitokin.  TGFβ1      merupakan  sitokin  yang multifungsi  oleh  karena    aktivitasnya    yang    luas    termasuk    terhadap    regulasi    dari    sintesa dan  degradasi      komponen      ECM      yang      merupakan      hal      penting      untuk      proses penyembuhan  luka. Membuktikan   peningkatan ekspresi  TGFβ1  setelah pemberian   ekstrak gel Aloe vera dengan konsentrasi 45%,60%,90%   pada soket pencabutan gigi tikus wistar. Populasi sampel  adalah  28  tikus  wistar  dengan  syarat  inklusi  dan  terbagi  menjadi  4  kelompok.  Metode pengekstrakan dengan  cara  freeze  drying  (liofilisasi).  Satu  kelompok  kontrol  (P1)  dan  3 kelompok  perlakuan  dengan  pemberian  ekstrak  gel  Aloevera  konsentrasi  45%  (P2), konsentrasi    60%    (P3),    konsentrasi    90%    (P4).    Pencabutan    gigi    incisivus  lateral  kanan kemudian diaplikasikan ekstrak gel Aloevera kedalam soket pencabutan dan dilakukan suturing. Terminasi  dilakukan  pada  hari  ke  7  pasca  pencabutan  gigi.  Pembuatan  preparat  melalui pengecatan Imunohistokimia (IHC). Uji hipotesis dengan Kruskal Wallis. Terdapat peningkatan yang  bermakna  pada  setiap  kelompok  perlakuan  (p≤0,05).  Terdapat  peningkatan ekspresi TGFβ1    setelah    pemberian    ekstrak    gel    Aloe    vera    konsentrasi 45%,60%,90%  pada soket pencabutan gigi tikus wistar.
Key word : Ekspresi TGFβ1, Ekstrak Aloevera gel, Freeze drying, Penyembuhan soket alveolar

## ABSTRACT
Tooth  extraction  is  a  minor  surgical  procedure  and  the  healing process  takes  a  long  time to  be  able  to  do  rehabilitative  treatments,  namely denture  treatment.  Aloe  vera  is  known as  a  healing  plant  to  treat  wounds  and  burns.    Aloe    vera    components    play  a    role    in stimulating    cytokine    production.  TGFβ1  is  a  multifunctional  cytokine  due  to  its  extensive activities  including  regulation  of  synthesis  and  degradation  of  ECM  components  which  are important for wound healing. To prove the increase in TGFβ1 expression after administration of Aloe vera gel extract with a concentration of 45%, 60%, 90% in the wistar rat tooth extraction socket.  The  sample  population  was  28  wistar  rats  with  inclusion conditions  and  divided  into  4 groups.  Extraction method by freeze  drying  (lyophilization).  One control  group  (P1)  and  three treatment  groups    with  45%  (P2)    Aloevera    gel    extract  concentration,  60%  concentration (P3),  90%  concentration  (P4).  Extraction  of  the  right  lateral  incisor  was  then  applied  to Aloevera  gel  extract  into  the  extraction  socket  and  carried  out  by suturing. Termination is done  on  the  7th  day  after  tooth  extraction.  Preparation  of  preparations    through Immunohistochemical    staining    (IHC).    Hypothesis    testing  with    Kruskal    Wallis    test.    there was  a  significant  increase  in  each treatment group (p≤0.05) except in group P2 against P4 had  no  significant  difference.  There  was  an  increase  in  the  expression  of  TGFβ1  after  the administration  of  Aloe  vera  gel  extract  concentration  of  45%,60%,90%  in  wistar  rat  tooth extraction socket.
Key  words :  TGFβ1  expression,  Aloevera  gel  extract,  freeze  drying,  Alveolar  sockethealing

## 1.   PENDAHULUAN
Masalah  utama  kesehatan  gigi  dan  mulut menurut survei riset kesehatan dasar (RISKESDAS) tahun 2013 menyebutkan bahwa indeks Decay Missing Filled Teeth (DMF-T)  di Indonesia    cukup    tinggi,  dimana  indeks  M-T ( Missing Teeth ) adalah
2,9  (rata-rata  290  gigi  telah  dicabut  per  100 orang) dan rasio tambal  dan  cabut masih tinggi rata-rata adalah 1:4 yaitu satu tambal dan empat gigi  yang  dicabut  serta  hasil  monitoring  dan evaluasi tahun 2011 dibeberapa daerah rasionya  bisa  mencapai 1:10  (Kementrian  Kesehatan  RI,2012  cit Sari,2018).  Data  tersebut  menunjukkan  bahwa angka  pencabutan  gigi  di  Indonesia  masih tinggi.
Pencabutan  gigi  merupakan  salah  satu tindakan  bedah  minor  yang  dilakukan  dokter gigi  untuk  menghilangkan  gigi  dari  soket  gigi dan  menimbulkan  luka  (Permatasari,2012). Luka  pencabutan  gigi  dapat  menyebabkan terjadinya  komplikasi  dengan  jangka  waktu penyembuhan  yang  berbeda.  Perdarahan  pasca pencabutan,  pembengkakan, dry  socket ,  serta infeksi, merupakan  beberapa  komplikasi  yang terjadi pasca pencabutan gigi (Wray et al ,2003).
Pada  pasien  yang  telah  dilakukan  pencabutan gigi,  akan  dilakukan  perawatan  rehabilitasi dengan gigi tiruan, baik lepasan
maupun  cekat.  Pada  pembuatan  gigi  tiruan lepasan  maupun  cekat  seperti implant  denture , diperlukan  waktu  beberapa  bulan  untuk  dapat direhabilitasi  dengan  baik.  Hal  ini  merupakan waktu  yang  panjang  bagi  seorang  pasien  untuk mendapatkan  fungsi  estetik  dan  fungsi  kunyah kembali  dan  selama    beberapa    waktu    akan terjadi  resorpsi    signifikan    dari    ridge    tulang alveolar  yang  sangat  berpengaruh  terhadap kualitas rehabilitasi  yang dilakukan (Schropp et al, 2003;Jung et al, 2013 cit Khoswanto 2016).
Aloe      vera      dikenal      sebagai healing plant. Tanaman ini secara tradisional digunakan untuk  mengobati  luka  dan  luka  bakar  (Choi et al ,2001).  Aloe  vera  mengandung acemannan , phytosterol, beserta  komponen  aktifnya  yang mengakibatkan  penyembuhan  luka  lebih  cepat melalui  stimulasi  produksi  faktor  pertumbuhan, angiogenesis,  proliferasi  dari  deposisi  fibroblas dan  kolagen  ( M.D.  Boudreau,2006) . TGFβ1 merupakan sitokin yang multifungsi oleh karena aktivitasnya  yang  luas  termasuk  terhadap regulasi  dari  sintesa  dan  degradasi  komponen ECM yang merupakan hal penting untuk proses penyembuhan luka.
Berdasarkan uraian diatas, Aloevera bermanfaat  dalam  proses  pasca  pencabutan
© (2018) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
gigi  yang  ditandai  oleh  adanya  biomarker TGFβ .  Namun,  pengaruh  Aloe  vera terhadap biomarker  tersebut    masih    belum  jelas sehingga      penelitian      ini      dirancang  untuk membuktikan  peran  ekstrak  gel  Aloevera  pada soket  pencabutan  gigi  tikus  wistar  terhadap ekspresi TGFβ1.

## 2.   MATERI DAN METODE A.

## Ekstrak gel Aloevera
Daun  Aloe  vera  dicuci  bersih  dengan aquadest  kemudian  dikupas  kulitnya  untuk mendapatkan  gel  (daging).  Kemudian  gel  Aloe vera  dicuci  bersih  dengan  aquadest  sampai lendirnya  hilang,  selanjutnya  ditimbang  dan didapatkan  gel.  Metode  pengekstrakan    dengan freeze    drying.  Freeze    drying adalah    metode pengekstrakan    yang    mempunyai  keunggulan dalam mempertahankan mutu hasil pengeringan. Prinsip dasar freeze drying adalah menghilangkan    kandungan  air  dalam  suatu bahan  atau  produk.  Liofilisasi  adalah  solusi farmasi  untuk  menghasilkan  sebuah  produk bubuk  yang  stabil  (Arifin,2015).  Aloevera mengandung air sebanyak 95%. Sisanya berupa bahan  aktif  (active  ingredients)  antara  lain minyak esensial, asam amino, mineral, vitamin, enzim, dan glikoprotein (Jatnika and Saptoningsih,2009).    Aloevera    ditimbang 1000g  dan  diambil  bagian  gel  kemudian didapatkan  fase  cair  sebanyak  400ml  (setelah diblender).    Dari    fase    cair  didapatkan 2,5gram     Aloevera    sediaan
bubuk  (hasil freeze  drying ).  Jika  100%  ≈
100ml  maka  terdapat  0,625gram  sediaan powder  kering.  Dari  hasil  tersebut,  dibuat sediaan  ekstrak  gel  Aloevera  konsentrasi 90%,  60%,  45%  dengan  masing-masing konsentrasi  tersebut  ditambahkan  CMC  Na 3% sebagai basis gel.

## B.  Unit Penelitian
Penelitian     ini     adalah     penelitian experimental  laboratoris  dengan  rancangan randomized   post test control group desain Sampel    penelitian    adalah    tikus    wistar ( Rattus  norvegicus )  jenis  kelamin  jantan.
Besar    sampel   adalah    28    yang   terbagi menjadi  4  kelompok.  Sebelum  penelitian, kelompok       sampel       melalui       proses aklimatisasi    untuk    penyesuaian    dengan lingkungan. Kelompok sampel terdiri atas : Kelompok  P1  :  kelompok  kontrol  dengan pencabutan    gigi    (incisive    lateral)    dan diaplikasikan  bahan  basis  gel  (CMC  3%) untuk  memastikan  bahwa  basis  gel  yang digunakan   untuk    membuat   ekstrak    gel Aloevera    tidak     mempunyai     pengaruh. Kelompok    P2    :    kelompok    perlakuan dengan   pencabutan   gigi   (incisive  lateral) dan diaplikasikan   ekstrak   gel   Aloevera konsentrasi  konsentrasi  45%  hingga  soket penuh (0,01ml)
Kelompok    P3   :   kelompok   perlakuan dengan pencabutan    gigi    (incisive    lateral)  dan diaplikasikan  ekstrak  gel  Aloevera  konsentrasi konsentrasi  60%  hingga  soket  penuh(0,01ml)
Kelompok    P4    :    kelompok    perlakuan  dengan pencabutan    gigi    (incisive    lateral)  dan diaplikasikan  ekstrak  gel  Aloevera  konsentrasi konsentrasi  60%  hingga  soket  penuh    (0,01ml). Setelah  tindakan perlakuan,  dilakukan  suturing, dan  terminasi  pada  hari  ke-7.  Fiksasi  sampel (mandibula)  dengan  menggunakan  formalin buffer 10% dan proses dekalsifikasi menggunakan    EDTA    10%    selama    ± 3bulan.  Semua  prosedur  pada  penelitian  ini telah  mendapat  ethical  clearance  oleh  Komisi Etik  Fakultas  Kedokteran  Gigi  Universitas Airlangga, Surabaya.

## C.  Pemeriksaan IHC
Proses  pembuatan  sediaan  histologi  yaitu fiksasi, dehidrasi, clearing, embedding,
blocking,  sectioning,  staining,  mounting,  dan labelling (Jusuf,2009).  Untuk  mengetahui jumlah  sel  yang  mengekspresikan TGFβ1 dilakukan  pemeriksaan  Histologi  dengan prosedur pengecatan imunohistokimia.
Sediaan imunohistokimia  yang  telah  dilabel diamati    dibawah    mikroskop    cahaya  dengan pembesaran  hingga  400x  untuk  melihat distribusi  ekspresi  dari TGFβ1, dalam  10 lapang  pandang  agar  memudahkan  membaca dan  mencegah  duplikasi  sel.  Data  diperoleh dari  hitungan  rata-rata  dalam  10  lapang pandang.  Hasil  perhitungan  ditulis  pada lembar  kerja  dan  diambil    nilai            rata-rata per  lapang pandang.  Analisis  data  dengan  uji statistik
Shapiro    Wilk untuk    mengetahui  normalitas data  selanjutnya  dilakukan  uji Kruskal  Wallis untuk  mengetahui  komparasi  yang  bermakna terhadap peningkatan data yang terjadi.

## 3.   HASIL DAN DISKUSI
Pada gambar 1 adalah gambaran mikroskopik  jumlah  sel  yang  mengekspresikan TGFβ1 diseluruh  penampang  soket  pada kelompok kontrol soket gigi.
Gambar 1. Kelompok kontrol
Pada gambar 2 nampak adanya jumlah sel yang mengekspresikan TGFβ1 meningkat dibandingkan dengan kelompok kontrol.
Gambar 2.Kelompok P2 (45%)
Pada  gambar  3  nampak  adanya  peningkatan yang  cukup  tajam  terhadap     jumlah  sel yang mengekspresikan TGFβ1 pada penampang soket gigi.
© (2018) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
Jumlah TGFβ1 Hari ke 7 K (P1) P2 (45%) P3 (60%) P4 (90%) X±SD 9 ±0,98 13 ± 1,07 19 ± 3,02 14 ± 1,73 Gambar 3. Kelompok P3 (60%) Pada  gambar  4  terjadi  penurunan  terhadap jumlah  sel  yang  mengekspresikan TGFβ1 dibandingkan pada kelompok P3(60%).
Gambar  5.  Diagram  batang  terhadap  rerata jumlah  sel  yang  mengekspresi  TGFβ1  pada kelompok perlakuan
Tabel  1.  Data  deskripsi  terhadap  jumlah  sel yang  mengekspresi  TGFβ1  pada  kelompok perlakuan
Gambar 4. Kelompok P4 (90%)
Gambar  5  menunjukkan  rerata  dari  jumlah  sel yang  mengekspresikan TGFβ1. Peningkatan tertinggi    terjadi    pada  kelompok  P3  yaitu kelompok  perlakuan  dengan  pemberian  ekstrak gel  Aloevera  konsentrasi  60%.  Selanjutnya diikuti oleh kelompok P4, P2, dan P1 (kontrol).
Data penelitian yang ada dilakukan uji Shapiro Wilk untuk    mengetahui  normalitas  data. Berdasarkan  hasil  perhitungan  menunjukkan bahwa  masing-  masing  data  mempunyai distribusi normal dengan    nilai p berturut- turut    adalah
0,609*,  0,294*,  0,747*,  0,240*  (p≥0,05). Selanjutnya    dilakukan    uji    hipotesis  dengan Kruskal Wallis yang disebutkan pada tabel 2.
Variabel n P (p value ≤ 0,05) Jumlah TGFβ1 28 0,000*
Tabel 2. Uji komparasi
*signifikan
Data    diatas    menunjukkan    hipotesis  menolak H0  dan  menerima  H1  bahwa  Ekstrak  gel Aloevera  meningkatkan  jumlah  sel  yang mengekspresikan TGFβ1 dibandingkan  dengan kelompok    kontrol.  Hal    ini    membuktikan bahwa ekstrak gel
Aloevera  konsentrasi  45%.60%.90%  dapat meningkatkan jumlah sel yang mengekspresikan TGFβ1.
TGFβ1  adalah  polipeptida  yang  terdapat dalam  jumlah  besar  dan  berpengaruh  pada diferensiasi  serta  perkembangan    jaringan, mengontrol  respons    imunologi,    dan    proses penyembuhan luka. Peningkatan TGFβ1 mempengaruhi  proliferasi  dan  diferensiasi  sel mesenkim,      dan  peningkatan  produksi ekstraseluler matriks  pada proses penyembuhan luka    (Poniatawski et  al ,2015).  TGFβ1  secara langsung merangsang fibroblas untuk mensintesa  kolagen    dan    fibronektin,    serta menghasilkan matriks guna perbaikan jaringan.
Aloe  vera  merupakan  salah  satu tanaman yang berperan dalam proses penyembuhan  dengan  fungsi  utama  sebagai antiinflamasi  dan  immunomodulator  (Jia,2008). Komponen    aktif    Aloe    vera  (lidah  buaya) secara  farmakologis  terletak  pada  jaringan parenkim,  yang  disebut  gel  (Sharma et  al, 2014).  Komponen  Aloe  vera  berperan untuk merangsang  makrofag  dan  produksi  sitokin.
TGFβ1 merupakan salah satu sitokin yang yang terlibat  dalam  proses  penyembuhan  luka (Vijayalakshmia  D  dalam  A.Penn et  al ,,2012).
Mannose-6-  fosfat yang  terdapat  dalam  Aloe vera mempunyai peranan utama terhadap proses penyembuhan   dan   mempunyai   pengaruh
terhadap  komposisi  kolagen  dan  meningkatkan cross  linking untuk  kontraksi  luka  dan meningkatkan tensile strength (T. Reynolds and A. C. Dweck, 1999).
Proses  penyembuhan  luka  pasca  pencabutan gigi  bersifat  progresif  hingga  berlanjut  pada proses  osifikasi  sehingga  soket  alveolar  yang terbentuk  tidak  mengalami  fibrosis.  Peneliti berasumsi bahwa j umlah sel yang mengekspresi TGFβ1 pada  kelompok  P4  (90%) mengalami penurunan  jika  dibandingkan  kelompok    P3 oleh  karena akselerasi terhadap proses osifikasi telah terjadi. Hal ini   seperti   yang   disebutkan Penn et al .(2012) bahwa ekspresi TGFβ1 akan menurun saat memasuki fase remodelling.

## 4.   SIMPULAN DAN SARAN
Ekspresi TGFβ1 meningkat setelah pemberian ekstrak gel Aloevera konsentrasi 45%,60%,90%  pada  soket  alveolar  pasca pencabutan gigi tikus wistar.
Diperlukan  penelitian  lebih  lanjut  terhadap peranan ekstrak gel Aloevera pada proses pasca pencabutan  gigi  dengan  biomarker  terhadap proses osifikasi.

## UCAPAN TERIMA KASIH
1. Prof.Dr.Achmad        Bashori,Drs.,MS.,Apt selaku  guru  besar  departemen  Farmakologi Fakultas  Kedokteran  Universitas  Airlangga Surabaya dan sekaligus menjadi pembimbing 1.
© (2018) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
2. Dr.Agung  Krismariono,drg.,Sp.Perio(K) selaku pembimbing 2.
3. Prof.Dr.,I   Ketut   Sudiana,Drs.,M.Si dan Dr.Sulistiawati,dr.,M.Kes selaku pengajar program  magister  Fakultas  Kedokteran Universitas  Airlangga  Surabaya  dan sekaligus menjadi konsultan dalam proses penelitian ini.

## Rujukan Jurnal
1.   Arijani E, Khoswanto C. The Use of
90%  Aloe      vera  Freeze  Drying  as  The Modulator  of  Collagen  Density  On Extraction  Socket  of  Incicivus  Cavia cobaya.Dental  Journal.  2008; 41(2): 74-6
2.   Yuza  F,  Wahyudi  A.I,  Larnani  S.
2014.    Efek    Pemberian    Ekstrak  Lidah Buaya  (Aloe  Barbadensis  Miller)  pada Soket  Gigi  terhadap  Kepadatan  Serabut Kolagen  Pasca  Ekstraksi  Gigi  Marmut (Cavia  Porcellus). Maj Ked Gi. Desember
2014; 21(2): 127 – 135

## DAFTAR PUSTAKA
Choi,  B.W.  Son,  Y.S.  Son,  Y.I.  Park,  S.K.
Lee,  M.H.  Chung.2001 .  The  wound- healing  effect  of  a  glycoprotein  fraction isolated from aloe vera , Br.  J.
Dermatol. 145 (4).535–5545.
Jatnika,  A.  dan  Saptoningsih.  2009. Meraup Laba  dari  Lidah  Buaya .  Jakarta:  Agro
Media Pustaka.Hal 1-26.
Jusuf  AA.2009.  Histoteknik  Dasar.  Bagan Histologi Fakultas Kedokteran
Universitas  Indonesia.  [Tesis].  Jakarta, Universitas Indonesia.
Khoswanto.2016.  Mekanisme  Penyembuhan Luka    Pencabutan    Gigi    Setelah Pemberian    Ekstrak    Etanol    Daun Binahong  (Andrera  cordifolia  (Ten) Steenis)    Melalui    Ekspresi    HIF    1a,
VEGF-A, dan BMP-2[Disertasi]. Surabaya : Fakultas Kedokteran
Universitas Airlangga
M.D.  Boudreau,  F.a.  a  Beland,  2006.An evaluation of the biological and toxicological properties of Aloe barbadensis  (miller),  Aloe  vera,  J. Environ .  Sci. Health. C. Environ. Carcinog.  Ecotoxicol. Rev.  24  (1).103– 154.
Permatasari  K;  Andari  W;  Merina  D.E.N.
2012. Efek  Ekstra  Ginseng  Asia  (Panax Ginseng) Pada Jumlah Sel Epitel Mukosa Soket  Pasca  Pencabutan  Gigi  Pada Rattus  Norvegicus .  Malang  :  Majalah
FKUB
Poniatowski,L.A.,Wodjasiewicz,P.Gasik,Sz zukiewicz,D.2015. ”Review Article:
Transforming Growth Factor Beta Family:Insight  Into  The  Role  of  Growth
Factor in Regulation of Fracture Healing Biology and Potential Clinical
Applications ”. Mediators of Inflamation.
Penn,J.W,Grobbelaar,A.O.,Rolfe,K.J. 2012.
”Review    Article:The    Role    of    The
TGF      β      Family      in      The      Wound Healing,
Burns, and Scarring”.
International  Jornal  of  Burns  and Trauma.Vol 2/No 1
RISKESDAS.  2013. Laporan  Hasil  Riset
Kesehatan Dasar. Jakarta: Badan Penelitian dan Pengembangan
Kesehatan. Kementerian Kesehatan RI
Sari PR.2018.Mekanisme Kerja Bone Graft dari Kombinasi Cangkang Anadara granosa dan Stichopus  hermanni  pada  Penyembuhan Tulang  Alveolar  Pasca  Pencabutan  Gigi [Disertasi].  Surabaya:  Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga
Sharma      Priyanka,      Amit      C      Kharkwal,
Harsha  Kharkwal,  M  Z  Abdin,  Ajit  Varm. A  Review  on  Pharmacological  Properties of Aloe vera. Int. J. Pharm. Sci. Rev. Res., 29(2),  November  –  December  2014; Article No. 07, Pages:
31-37
T. Reynolds and A. C. Dweck, “Aloe vera Leaf
Gel:  A  Review  Update,”  Journal  of Ethnopharmacology,  Vol.  68,  No.  1-3,
1999,  pp.  3-37.     http:  //dx.doi.org/10.
1016/S0378-8741(99)00085-9
Wray,  D. et  al. 2003. Textbook of  General and
Oral  Surgery.  Churchill  Livingstone,
Toronto