ISSN: 1693-8615 EISSN : 2302-4291 Online : http://farmasiindonesia.setiabudi.ac.id/

## UJI AKTIVITAS  ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL DAUN SURUHAN
( Peperomia pellucida L. Kunth) TERHADAP BAKTERI Shigella dysentriae

## ANTIMICROBIAL ACTIVITY OF ETANOLIC EXTRACTS SURUHAN
( Peperomia pellucida L. Kunth) LEAVES AGAINST Shigella dysentriae

## BACTERIA
Destik Wulandari dan Desi Purwaningsih Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Setia Budi Email: destikhakim@gmail.com

## ABSTRAK
Shigella  dysentriae merupakan  bakteri  penyebab  penyakit  disentri  basiler.  Penyakit  ini dapat menyebabkan penderita mengalami diare hebat. Upaya yang dilakukan untuk mengatasi penyakit  ini  adalah  dengan  penggunaan  antibiotik,  namun  jika  digunakan  dalam  waktu  lama antibiotik  dapat  pula  memberikan  efek  negatif  bagi  manusia.  Maka  dari  itu  perlu  diupayakan antimikroba  baru  yang  tidak memiliki  efek  negative  bagi  masnusia,  yakni  dengan  penggunaan antimikroba  dengan  menggunakan  bahan  dari  tumbuhan.  Salah  satu  tumbuhan  yang  menjadi kandidat adalah Suruhan  ( Peperomia pellucida L. Kunth)Tujuan dari penelitian ini adalah Untuk mengetahui aktivitas antibakteri dari ekstrak tumbuhan Suruhan ( Peperomia pellucida L. Kunth) terhadap bakteri Shigella dysentriae dengan menggunakan metode dilusi. Metode penelitian ini adalah diawali dengan  pembuatan ektrak etanol dari daun suruhan dengan teknik maserasi. Ekstrak  yang  diperoleh kemudian diujikan dengan konsentrasi 100%, 80%, 60%, 40% dan 20%. Metode uji antibakteri menggunakan metode dilusi untuk mengetahui Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) dan Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM).
Hasil  yang  diperoleh  menunjukkan  nilai  KHM  tidk  dapat  ditentukan  karena  campuran antara  ekstrak  daun  suruhan  dan  bakteri Shigella  dysentriae sangat  keruh.  Nilai  KBM  yang diperoleh  uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak  daun  suruhan  terhadap  bakteri Shigella  dysentriae adalah sebesar 40%.
Kata Kunci : bakteri Shigella dysentriae, Peperomia pellucida L. Kunth, Metode Dilusi

## ABSTRACT
Shigella dysentriae is a bacteria that causes bacillary dysentery. This disease cause the patient  to  experience  severe  diarrhea.  The  efforts    to  overcome  this  disease  is  with  using  of antibiotics,  but  if  the  antibiotic  is  used  for  a  long  time  can  also  to  provide  negative  effects  for humans. Therefore, needs a new antimicrobials that don't have negative effects for human, that is  used  of  antimicrobial  from  plants.  One  of  the  plants  that  become  candidate  is  suruhan ( Peperomia pellucida L. Kunth). The purpose of this research is to know the antibacterial activity from the etanolic extract of the suruhan leaf ( Peperomia pellucida L. Kunth) to  against Shigella dysentriae bacteria by using dilution method.
The method of this research is begins with the making of ethanol extract from  suruhan leaf by maseration technique. The extracts  then tested with concentrations of 100%, 80%, 60%, 40%  and  20%.  The  antibacterial  test  using    dilution  method  to  find  out  Minimum  Inhibition Concentration (MIC) and Minimum Kill Concentration (MKC).
The results is  show that MIC values can’t be determined because the mixture between the leaf extract and the Shigella dysentriae bacteria is very turbid. The value of MKC obtained by antibacterial activity from etanolic  extract of the suruhan leaf on Shigella dysentriae bacteria was 40%.
Keyword: Shigella dysentriae, Peperomia pellucida L. Kunth, Dilution methode
PENDAHULUAN Disentri basiler merupakan
penyakit  diare  akut  yang  ditandai dengan  dengan  tinja  cair  yang  disertai dengan  darah  dan  lendir,  hal  ini dikarenakan  bakteri  penyebab  disentri telah menembus dinding kolon sehingga tinja  yang  melewati  usus  besar  dan berjalan  dengan  cepat  tanpa  adanya proses  absorbsi  air  (Adnyana,  2004). Shigella  dysentriae merupakan  bakteri penyebab  penyakit  disentri  basiler. Penyakit ini dapat menyebabkan penderita mengalami diare hebat hingga
20-30  kali  sehari,  sehingga  jika  tidak segera  diatasi  dapat  menyebabkan dehidrasi dan kematian. Suruhan atau Peperomia pellucida L.  Kunth  merupakan  salah
satu  tumbuhan herbaceous liar  yang termasuk  dalam  suku  Piperaceae. Suruhan  dapat  hidup  tegak  dengan tinggi  mencapai  20-40  cm  (Dalimartha, 2006).  Tanaman  ini  banyak  tumbuh  di daerah  tropis  dan  lembab.  Suruhan dapat  ditemukan  di  selokan,  sela-sela bebatuan  dan  dinding,  serta  ditempat lembab  lainnya..  Tumbuhan  ini  dapat digunakan  untuk  mengobati  beberapa penyakit  seperti  abses,  bisul,  jerawat, radang kulit, penyakit ginjal, sakit perut, asam  urat,  luka  memar  dan  luka  bakar ringan.  Masyarakat  di  Sulawesi  Utara juga  telah  memanfaatkan  tanaman  ini untuk  menurunkan  kolesterol  darah (Tarigan et  al. 2012).  Secara  umum pemanfaatkan tumbuhan
ini dimasyarakat  belum  maksimal  dan hanya dianggap sebagai tumbuhan liar. Salah  satu  potensi  tanaman  suruhan adalah sebagai antimikroba seperti yang telah  dilaporkan  oleh Wei et  al. (2011). Senyawa-senyawa bioaktif sebagai antimikroba  yang  terkandung  dalam
suruhan perlu diuji lebih lanjut. Pengjian dilakukan untuk mengetahui kemampuan  senyawa  tersebut  dalam menghambat  dan  membunuh  bakteri. Salah  satunya  adalah  bakteri Shigella dysentriae yang  merupakan  bakteri penyebab  penyakit  disentri  basiler. Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  Untuk mengetahui  aktivitas  antibakteri  dari ekstrak  tumbuhan suruhan  ( Peperomia pellucida L.  Kunth)  terhadap  bakteri Shigella  dysentriae dengan  metode dilusi.

## METODE PENELITIAN Bahan
Bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  dalah  daun  suruhan, bakteri Shigella  dysentriae, media Muller  Hinton  Agar  ( MHA), Brain  Brain Heart Infusion (BHI), Nutrient agar (NA), etanol 70%, quadest, DMSO, cat Gram A, Gram B, Gram C, dan Gram D.
Alat
Erlenmeyer, lampu spirtus,
timbangan  analitis,  gelas  beker,  gelas ukur, pipet volume, cawan petri, tabung reaksi,  inkas,  jarum  ose,  rak  tabung reaksi, penangas air, ayakan  nomer 60, oven, seperangkat alat Rotary Evaporator, pinset,  gelas  penyimpanan ekstrak, kertas saring, tabung ekstraksi, mikroskop, batang pengaduk, autoklaf

## Jalannya Penelitian
Tahap  penelitian  dimulai  dari identifikasi daun suruhan. Identifikasi ini bertujuan untuk menghindari kesalahan bahan  sampel  yang  akan  digunakan untuk  penelitian.  Tanaman  suruhan diindentifikasi di laboratorium Tumbuhan suruhan yang telah
dideterminasi  di  Laboratoriun  Morfologi dan  Sistematika  Tumbuhan,  fakultas
Farmasi, Universitas Setia Budi.
Pembuatan  ekstrak  daun  Suruhan. Tumbuhan suruhan yang telah dideterminasi  di  Laboratoriun  Morfologi dan  Sistematika  Tumbuhan  diambil daunnya.  Pembuatan  ekstrak  suruhan dilakukan  dengan  mengeringkan  10  kg daun  suruhan  yang  telah  dicuci  bersih. Daun  suruhan  yang  telah  bersih kemudian  dihaluskan  dengan  cara diblender hingga berbentuk serbuk yang biasa disebut  dengan simplisia.  Serbuk yang  diperoleh  kemudian  diekstraksi dengan metode maserasi, pelarut yang digunakan  adalah  etanol  70%  dengan perbandingan antara serbuk dan pelarut adalah  1:5  selama  lima  hari  terlindung cahaya. Selama proses maserasi
sesekali  diaduk.  Endapan  dipisahkan dengan  cara  disaring  dan  dipisahkan dari pelarutnya dengan vaccum evaporator hingga  diperoleh  ekstrak kental. Pembuatan Suspensi Bakteri. Suspensi  bakteri Shigella  dysenteriae yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  bakteri  dengan  kepadatan  10 6 CFU/ml.  Pembuatan  suspensi  bakteri tersebut distandarisasi dengan
menggunakan  standar  McFarland  0,5 yakni  setara  dengan  kepadatan  bakteri 10 6 CFU/ml (Sutton, 2011). Pembuatan suspensi bakteri menggacu pada metode  Assidqi  dkk  (2012).  Bakteri diambil  sebanyak  1  ose  dari  media  NA yang  telah  diinkubasi  selama  24  jam, dimasukkan  ke  dalam  tabung  yang berisi  media  BHI.  Suspensi  bakteri disetarakan kekeruhannya dengan larutan standar McFarland 0,5.
Penentuan KHM dan KBM. Penentuan Konsentrasi  Hambat  Minimum  (KHM) dan Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM) dilakukan  dengan  metode  dilusi  cair (Prihantoro  dkk  2006)  yang  telah
dimodifikasi.  Konsentrasi  larutan  dibuat seri pengenceran dengan menggunakan pengencer larutan dapar fosfat. Volume total setiap seri pengenceran sebaanyak 1 mL. Penelitian ini menggunakan 5 konsentrasi pengenceran ekstrak etanol daun  suruhan,  1  kelompok  kontrol bakteri  dan  1  kelompok  kontrol  bahan. Masing-masing  perlakuan  dilakukan  3 kali  pengulangan.  Ekstrak  etanol  daun suruhan  adalah  larutan  hasil  ekstraksi daun  Suruhan  dengan  penggunakan pelarut etanol 70%, sedangkan konsentrasi ekstrak adalah daun
suruhan yang telah mengalami ekstraksi dan  pengenceran.    Variabel  bebas dalam  penelitian  ini  adalah  konsentrasi larutan uji yang digunakan, yakni 100%, 80%,  60%,  40%,  20%  (Munfaati  dkk, 2015). Variabel terikat  dalam penelitian ini  adalah  tingkat  kekeruhan  tabung  uji dan  jumlah  koloni  bakteri  yang  tumbuh pada media MHA .
Konsentrasi  Hambat  Minimum dari  ekstrak  daun  suruhan  diperoleh dengan  cara  menambahkan  0,5  ml biakan cair bakteri Shigella dysenteriae dengan kerapatan 10 6 CFU/ml ke dalam masing-masing  tabung  reaksi  yang berisi 1  mL larutan uji dengan berbagai seri pengenceran. Tabung reaksi tersebut  diinkubasi  selama  24-48  jam dalam suhu 37 0 C. Pertumbuhan bakteri ditandai  dengan  terjadinya  kekeruhan pada tabung reakasi yang berisi ekstrak etanol daun  suruhan.  Kekeruhan yang terjadi dan dibandingkan dengan kontrol.
Penentuan  Konsentrasi  Bunuh Minimum  dilakukan  dengan  metode streak  plate. Kultur  ulang  ini  dilakukan dengan  menggoreskan  larutan  pada tabung reaksi yang tetap bening  setelah
A B
C
dilakukan  perlakuan  (hasil  KHM)  pada media  MHA  yang  merupakan  media differensial. Kultur diinkubasi selama 24- 48  jam  dalam  suhu  37 0 C.  KBM diperoleh  dengan  cara  melihat  ada tidaknya  koloni  bakteri  yang  tumbuh. Media MHA yang tidak ditumbuhi bakteri ditentukan sebagai Konsentrasi Hambat Minimum.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Determinasi  dan  Pembuatan  Ektrak Daun Suruhan
Tanaman  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalaha tanaman suruhan yang telah diidentifikasi di Laboratorium Morfologi  dan  Sistematika  Tumbuhan, Fakultas  Farmasi,  Universitas  Setia Budi.  Daun  suruhan  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  seberat  60 kg,  dikeringkan  dan  dibuat  serbuk. Serbuk  yang  diperoleh  adalah  sebesar 650  gr.  Serbuk  kemudian  diekstrak menggunakan  pelarut  etanol  70%  dan jumlah  ekstrak  yang  diperoleh  adalah sebesar  114  gr  dengan  rendemen sebesar 17,53%.
Gambar.1. (A) serbuk simplisa daun  suruhan, (B) ekstrak kental daun suruhan, (C) Hasil pengenceran ekstrak daun suruhan

## Uji aktivitas antibakteri ekstrak daun suruhan
Uji  aktivitas  antibakteri  dimulai dengan  pembuatan  suspensi  bakteri Shigella  dysentriae. Kepadatan  bakteri yang digunakan adalah 10 6 CFU/ml dan distandarisasi dengan standar McFarland  0,5.  Bakteri  yang  akan digunakan  untuk  uji  dilusi  dibiakkan dalam  media  cair  BHI  dan  sebelum digunakan bakteri dipastikan kebenarannya  dengan cara  pewarnaan gram. Hasil pewarnaan gram menunjukkan bakteri  bergram  negatif yang ditandai dengan warna sel bakteri merah, berbentuk batang tunggal
(Gambar.2).  Hasil  ini  sesuai  dengan yang ditunjukkan oleh penelitian Prihantoro, dkk (2006).
A B C
A
B Gambar. 2. (A) suspensi bakteri Shigella dysentriae yang distandrisasi dengan Mc farlan 0,5. (B) Hasil pewrnaan gram bakteri Shigella dysentriae
Suspensi  bakteri  yang  dieroleh selanjutnya digunakan untuk uji aktivitas antibakteri dengan
menggunakan
metode dilusi. Tujuan digunakan
metode dilusi ini adalah untuk mengetahui Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) dan Konsentrasi Bunuh
Minimum  (KBM)  dari  ekstrak  daun suruhan  terhadap  bakteri Shigella
dysentriae.
Hasil konsentrasi hambat
minimum pada penelitian ini tidak dapat ditentukan,  hal  ini  disebabkan  oleh warna  ekstrak  daun  suruhan  yang terlalu  keruh  yakni  hijau  tua.  Warna larutan  yang  gelap  mempersulit  dalam mengamati  kejernihan  tabung  yang berisi  campuran  antara  media  BHI, ekstrak  daun  suruhan  dan  bakteri
Shigella dysentriae (Gambar. 3).
Menurut  Dzen  (2003)  salah  satu  cara yang dapat dilakukan untuk menentukan nilai KHM jika hasil ekstrak terlalu keruh adalah dengan cara difusi cakaram atau metode E  test. Pertumbuhan  bakteri terjadi  pada  kontrol  bakteri  dan  kontrol pelarut,  sedangkan  pada kontrol  media tidak terjadi pertumbuhan bakteri. Pada kontrol  pelarut  terjadi  pertumbuhan
bakteri  hal  ini  menandakan  bahwa pelarut tidak mempunyai aktivitas antibakteri.
Gambar 3. Penentuan Konsentrasi Hambat  Minimum  ektrak  daun  suruhan terhadap bakteri Shigella dysentriae
Keterangan:
A  =  ekstrak  daun  suruhan  100%  + bakteri Shigella dysentriae
B = ekstrak daun suruhan 80% + bakteri Shigella dysentriae
C = ekstrak daun suruhan 60% + bakteri

## Shigella dysentriae
D = ekstrak daun suruhan 40% + bakteri

## Shigella dysentriae
E = ekstrak daun suruhan 20% + bakteri
Shigella dysentriae
A B A B C D E
Penentuan  Konsentrasi  Bunuh Minimum (KBM) dilakukan dengan cara menggoreskan  ( streak  plate) masing- masing  tabung  reaksi  hasil  dilusi  cair pada  media  MHA  (Gambar.3).  Hasil yang diperoleh dapat dilihat pada table.1
Tabel 1. Hasil penentuan nilai Konsentrasi  bunuh  Minimum (KBM)  ekstrak  etanolik  daun suruhan terhadap bakteri Shigella dysentriae Ulangan konsentrasi (%) 20 40 60 80 100 1 + - - - - 2 + + + + + 3 + - - - -
Hasil + = terjadi pertumbuhan bakteri
Hasil  -  =  tidak  terjadi  pertumbuhan bakteri
Nilai KBM ditentutan dengan cara melihat  ada  tidaknya  pertumbuhan bakteri  pada  goresan  di  media  MHA. Data yang diperoleh pada ulangan 1 dan 3  menunjukkan  hasil  pada  konsentrasi ekstrak daun suruhan pada konsentrasi 20% terjadi pertumbuhan bakteri, sedangkan  pada  konsentrasi  yang  lain yakni  100%,  80%,  60%,  40%  tidak ditumbuhi  bakteri Shigella  dysentriae.
Namun  pada  ulangan  ke-2  terjadi kontaminasi  pada  semua  kuadran konsentrasi.  Berdasarkan  hasil  yang diperoleh dapat diketahui jika nilai KBM dari  ekstrak  daun  suruhan  terhadap bakteri Shigella dysentriae adalah pada konsentrasi 40 % atau pada konsentrasi 0.4  mg/mL.  hal  ini  ditandai  dengan sudah  tidak  munculnya  pertumbuhan koloni  bakteri Shigella  dysentriae pada konsentrasi  40%  atau  0,4  gr/mL. Aktivitas  antibakteri  daun  suruhan diperkirakan karena
terdapat kandungan  tanin  dan  flavonoid  pada
daun  suruhan  (Majumder  dan  Kumar, 2011).

## Kesimpulan
Piperomia  pellucida  L. Kunt mempunyai aktivitas antibakteri terhadap  bakteri Shigella  dysenteriae
secara in vitro. Nilai konsentrasi hambat minimum  (KHM)  ekstrak  daun  suruhan terhadap  bakteri Shigella  dysenteriae tidak dapat ditentukan , sedangkan nilai Konsentrasi  Bunuh  Minimum  (KMB) ekstrak  daun  suruhan  terhadap  bakteri Shigella  dysenteriae adalah  sebesar 40% atau 0,4g/ mL.

## Daftar Pustaka
Adnyana  IK,  Yulina  E,  Sigit  JI,  Fisheri NK,  dan  Insanu  M.  2004.  Efek Ekstrak  Daun  Jambu  Biji  Daging Buah Putih dan Jambu Biji Daging Buah  Merah  Sebagai  Antidiare. Acta Pharmaceutica Indonesia .  9
(1) : 2-9
Assidqi  K,  Wahyu  T,  dan  Setyawati  S.
2012. Potensi ekstrak daun Patikan  Kebo  ( Euphorbia  hirta ) sebagai antibakteri terhadap Aeromonas  hydrophila Secara In Vitro  .Journal  of  Marine  and
Coastal Science . 1 (2):113-124. Dalimartha,  S.2006.  Atlas  Tumbuhan Obat Indonesia Jilid 4.Puspaswara, Jakarta. Dzen  SJ,  Roekistiningsih,  Santoso  S, Winarsih  S.  Bakteriologi  Medik.
1st Ed. Malang: Bayumedia Publishing; 2003 Majumder P., Kumar, K. V. Arun. 2011. Establishment of Quality Parameters and Pharmacognostic Evaluation of Leaves of
Peperomia  pellucida  (L.)  Hbk.
International Journal of Pharmacy and  Pharmaceutical  Sciences .  3 (5) Munfaati  PN,  Ratnasari  E,  Trimulyono G. 2015. Aktivitas Senyawa Antibakteri Ekstrak Herba Meniran ( Phyllanthus niruri ) terhadap Pertumbuhan Bakteri Shigella dysenteriae Secara in Vitro. LenteraBio 4(1):64-71
Sutton  S,  2011.  Measurement  of Microbial Cells by Optical Density. Journal  of  Validation  Technology 17: 46-49.
Tarigan, I.M. br, S. Bahri dan A. Saragih. 2012.  Aktivitas  Antihiperurisemia Ekstrak  Etanol  Herba  Suruhan
( Peperomia  pellucida (L.)  Kunth) Pada  Mencit  Jantan. Journal  of Pharmaceutics and Pharmacology 1(1):37-43.
Wei, L.S., W. Wee, J.Y.F. Siong, & D.F. Syamsumir. 2011. Characterization of Anticancer, Antimicrobial, Antioxidant Properties andChemical Compositions of Peperomia pellucida Leaf Extract. Acta Medica Iranica 49(10): 670-674