## AKTIVITAS ANTIBAKTERI FRAKSI-FRAKSI DAUN MANGGA
( Mangifera indica L.) HARUM MANIS TERHADAP BAKTERI Bacillus subtilis
Masduki Faqih 1 , Dewi Andini Kunti Mulangsri 2*)
1 Fakultas Farmasi, Universitas Wahid Hasyim Semarang
2 Bagian Biologi Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Wahid Hasyim, Semarang *Email: andini@unwahas.ac.id

## INTISARI
Daun  mangga  memiliki  kandungan  senyawa  fenol,  alkaloid,  saponin,  kumarin,  tanin,  flavonoid, triterpenoid, dan steroid yang berpotensi sebagai antibakteri. Senyawa tersebut memiliki kelarutan yang  berbeda  sehingga  diperlukan  proses  fraksinasi.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui aktivitas  antibakteri  fraksi-fraksi  daun  mangga  harum  manis  terhadap Bacillus  subtilis dan kandungan  senyawa  aktif  yang  ada  di  dalamnya.  Daun  mangga  diekstraksi  dengan  cara  maserasi menggunakan etanol 96% dan dilanjutkan purifikasi dan fraksinasi menggunakan metode ekstraksi cair-cair.  Fraksinasi  dilakukan  menggunakan  etanol-air,  n-heksan,  dan  dietil  eter.  Fraksi  n-heksan (FNH) dan fraksi dietil eter (FDE) dilakukan uji skrining fitokimia. Hasil FNH dan FDE dilanjutkan uji  aktivitas  antibakteri  terhadap Bacillus  subtilis menggunakan  metode  difusi  agar  dengan konsentrasi  1%,  5%,  10%,  15%,  dan  20%.  Kloramfenikol  digunakan  sebagai  kontrol  positif  dan DMSO  sebagai  kontrol  negatif.  Analisis  data  dilakukan  secara  deskriptif  yaitu terbentuknya  zona hambat disekitar kertas cakram. Hasil uji menunjukkan ada aktivitas antibakteri pada FNH dan FDE terhadap Bacillus subtilis pada semua konsentrasi. Hasil uji skrining fitokimia menunjukkan FDE mengandung senyawa flavonoid, fenolik dan tanin sedangkan FNH mengandung senyawa flavonoid dan fenolik.
Kata kunci : antibakteri, Bacillus subtilis, fraksi, daun mangga harum manis

## ABSTRACT
Mango leaves have phenolic, alkaloids, saponins, coumarins, tannins, flavonoids, triterpenoids, and steroids  compounds  which  have  potential  as  antibacterial  agents.  These  compounds  have differentially  polarity  so  they  need  fractionation.  This  study  aims  to  determine  the  antibacterial activity of fragrant mango leaf fractions against Bacillus subtilis and the content of active compounds in it. Mango leaves were extracted by maceration using 96% ethanol and followed by purification and  fractionation  using  the  liquid-liquid  extraction  method.  Fractionation  was  carried  out  using ethanol-water,  n-hexane,  and  diethyl  ether.  N-hexane  fraction  (NHF)  and  diethyl  ether  fraction (DEF) results were subjected to a phytochemical screening test. The results of FNH and FDE were continued with antibacterial activity tests against Bacillus subtilis using the agar diffusion method with concentrations of 1%, 5%, 10%, 15%, and 20%. Chloramphenicol was used as a positive control and DMSO as a negative control. Data analysis was carried out descriptively, namely the formation of  an  inhibition  zone  around  the  disc  paper.  The  test  results  showed  that  there was  antibacterial activity  on  NHF  and  DEF  against  Bacillus  subtilis  at  all  concentrations.  The  results  of  the phytochemical screening test showed that DEF contained flavonoids, phenolic and tannins, while NHF contained flavonoids and phenolic compounds.
Keywords : antibacterial, Bacillus subtilis, fraction, harum manis mango leaves
Nama : Dewi Andini Kunti Mulangsri Institusi : Universitas Wahid Hasyim Alamat institusi  : Jl. Raya Manyaran-Gunungpati E-mail
: andini@unwahas.ac.id

## PENDAHULUAN
Daun  mangga  sering  menjadi  limbah  pada  saat  pemanenan  buah  mangga.  Daun  selain sebagai tempat produksi sumber energi juga memproduksi prekursor metabolit sekunder. Metabolit sekunder  inilah  yang  masih  dapat  dieksplorasi  untuk  mengetahui  aktivitas  farmakologi  dan kandungan  kimianya.  Mangga  harum  manis  merupakan  salah  satu  tanaman  yang  telah  terbukti memiliki  aktivitas  sebagai  antibakteri.  Ekstrak  etanol  daun  mangga  harum  manis  telah  diketahui memiliki  kandungan  senyawa  flavonoid,  alkaloid,  saponin,  dan  tanin  dan  ekstrak  tersebut mempunyai  aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri Bacillus  subtilis dan Providencia (Rosalina  & Erikania, 2019). Isolat flavonoid daun mangga telah diketahui memiliki aktivitas antibakteri terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli (Nugraha dkk., 2017) . Fraksinasi dilakukan untuk memisahkan suatu golongan senyawa menjadi senyawa yang lebih sederhana berdasarkan tingkat kepolarannya (Mukhriani, 2014). Senyawa polar akan larut ke dalam pelarut polar dan senyawa non polar akan larut ke dalam pelarut non polar (Harborne, 1987). Fraksi  kloroform  dan  fraksi  dietil  eter  ekstrak  etanol  daun  sirih  terbukti  mengandung  senyawa terpenoid, fenol inti katekol dan fenol sederhana berdasarkan warna bercak yang lebih intens dari hasil uji KLT dibandingkan dengan fraksi lainnya (Wijaya dkk., 1907). Pada penelitian tersebut, hasil uji aktivitas antibakteri hanya ditunjukkan pada fraksi n-heksan  dan fraksi dietil eter ekstrak etanol daun sirih terhadap P. acnes . Hasil uji skrining fitokimia ekstrak n-heksan daun Mangifera indica L. dari Mauritius mengandung senyawa glikosida dan diterpen (Jhaumeer Laulloo dkk., 2018). Fraksi diklorometana  daun  mangga  ( Mangifera  indica L.)  memiliki  kandungan  senyawa  berikut  dengan kadar masing-masing asam ferulat (48,3 ± 0,02 µg/g), asam kafeat (159,8 ± 0,04 µg/g), asam galat (142,5 ± 0,05 µg/g), apigenin (11,0 ± 0,02 µg/g) dan kuersetin (203,3 ± 0,03 µg/g) (Ronchi  dkk., 2015).  Indeks  polaritas  dietil  eter  dan  diklorometan  masing-masing  adalah  2,8  dan  3,1  (Wypych, 2001). Nilai indeks polaritas yang tidak terlalu jauh perbedaannya sehingga dapat menyari senyawa- senyawa  yang  mirip.  Senyawa-senyawa  yang  bertanggungjawab  sebagai  antimikroba  pada  daun mangga  adalah  fenolik,  alkaloid,  saponin,  glikosida,  terpen  dan  tanin  (Kumar  dkk.,  2021). Berdasarkan  studi  literatur  tersebut,  fraksinasi  ekstrak  etanol  daun  mangga  harum  manis menggunakan n-heksana dan dietil eter memiliki potensi sebagai antibakteri.
Daun mangga telah diketahui memiliki kandungan senyawa polifenol yang berfungsi sebagai antibakteri terhadap bakteri Bacillus cereus (Masibo & He, 2009). Fraksi n-heksan dan fraksi etil asetat  daun  mangga  dilaporkan  mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri  terhadap  bakteri Escherichia coli dan Salmonella typhi (Sari, 2017). Bacillus subtilis merupakan bakteri non patogen namun jika jumlahnya banyak di dalam usus  mampu  menyebabkan diare yang ditularkan  melalui kontaminasi  makanan  (Rahmaningsih  dkk.,  2012).  Bakteri  yang  mengkontaminasi  makanan sehingga dapat menyebabkan keracunan makanan salah satunya adalah Bacillus subtilis (Apetroaie- Constantin dkk., 2009)(Sarker dkk., 2006).

## METODE PENELITIAN Bahan
Daun mangga harum manis yang memiliki karakteristik berupa daun yang berwarna hijau tua dan diperoleh dari hasil budidaya tanaman mangga di daerah Kendal Jawa Tengah, etanol 96 %, air, dietil eter,  n-heksan,  media  Mueller  Hinton  Agar  (MHA)  (Merck),  media  Brain  Heart  Infusion  (BHI) (Merck),  bakteri Bacillus  subtilis (Biakan  dari  Laboratorium  Mikrobiologi  Fakultas  Farmasi UNWAHAS), kloramfenikol disk 30 μg (Oxoid), Dimetil Sulfoksida (DMSO).

## Alat
Alat-alat gelas, autoklaf (All American), pinset, mikropipet (Socorex), jarum ose, Laminar Air Flow (LAF) (Airtech), inkubator (Binder), dan jangka sorong (Mitutoyo).

## Metode Pembuatan ekstrak etanol daun mangga harum manis (EEDMHM)
Daun  mangga  harum  manis  telah  dilakukan  determinasi  sebelum  digunakan  sebagai  bahan dalam penelitian ini. Determinasi dilakukan di Laboratorium Ekologi dan Biosistematika Jurusan Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Diponegoro Semarang. Daun mangga yang telah dikumpulkan dari hasil sortasi, pencucian dan perajangan dilanjutkan dikeringkan dalam almari pengering pada suhu 50℃. Daun yang telah kering kemudian diserbuk menggunakan alat penyerbuk.  Serbuk  simplisia  daun  mangga  ditimbang  sebanyak  1400  gram  diekstraksi  secara maserasi menggunakan pelarut etanol 96 %. Pelarut yang digunakan dalam proses maserasi adalah 75 bagian etanol (10500 mL) dan direndam selama 3 hari terlindung dari sinar matahari langsung, berada  pada  suhu  ruang,  dengan  beberapa  kali  pengadukan.  Campuran  tersebut disaring  sehingga diperoleh maserat (1). Ampas direndam kembali dengan 25 bagian etanol (3500 mL) selama 2 hari, kemudian diaduk dan disaring kembali sehingga diperoleh maserat (2) (Indonesia, 1986). Maserat (1) dan (2) dicampurkan. Filtrat yang diperoleh disimpan dalam wadah tertutup, di tempat sejuk dan terlindung cahaya selama 24 jam. Filtrat kemudian dipekatkan menggunakan penguap vakum putar pada suhu 55°C dengan kecepatan 60 rpm hingga diperoleh ekstrak kental daun mangga.

## Pembuatan fraksi-fraksi ekstrak etanol daun mangga harum manis
Ekstrak etanol daun mangga harum manis ditimbang sebanyak 20 gram, dimasukkan ke dalam cawan porselen kemudian dilarutkan dengan etanol sebanyak 10 mL diaduk sampai larut dan ditambah air sebanyak  190  mL  diaduk  lagi  sampai  larut.  Suspensi  dimasukkan  ke  dalam  corong  pisah  dan ditambah n-heksan sebanyak 200 mL (perbandingan 1:1). Kemudian digojog selama 10 menit, dan didiamkan  sampai  memisah  dengan  sempurna.  Lapisan  etanol-air  (bagian  bawah)  dipisahkan  dari lapisan  n-heksan  (bagian  atas),  kemudian  etanol-air  dimasukkan  lagi  ke  dalam  corong  pisah  dan ditambahkan  n-heksan,  diulang  sampai  n-heksan  bening.  Fraksi  etanol-air  dipisahkan  lagi  dengan menambahkan  dietil  eter  sebanyak  200  mL,  digojog  dan  didiamkan  sampai  memisah  dengan sempurna.  Lapisan  etanol-air  (bagian  bawah)  dipisahkan  dengan  lapisan  dietil  eter  (bagian  atas), kemudian etanol-air dimasukkan lagi ke dalam corong pisah dan ditambah dietil eter, diulangi sampai lapisan dietil eter bening (Abubakar & Haque, 2020). Bagian yang larut etanol-air tidak digunakan, bagian yang larut n-heksan atau fraksi n-heksan dan bagian yang larut dietil eter atau fraksi dietil eter adalah fraksi yang digunakan. Fraksi dietil eter (FED) dan fraksi n-heksan (FNH) yang diperoleh dipekatkan  menggunakan  penguap  vakum  putar  pada  suhu  55°C  dengan  kecepatan  60  rpm. Fraksinasi  dilakukan  lagi  sebanyak  20  gram  ekstrak  etanol  daun  mangga  harum  manis  untuk memperoleh fraksi n-heksan sehingga total ekstrak etanol yang dibutuhkan untuk memperoleh fraksi n-heksan sebanyak 40 gram.

## Skrining fitokimia fraksi-fraksi EEDMHM

## Identifikasi Flavonoid
Fraksi dietil eter dan fraksi n-heksan ekstrak etanol daun mangga sebanyak 50 mg dilarutkan dalam 10 ml etanol pa dan disaring. Larutan ditambah serbuk Mg dan t-butil alkohol. Kemudian ditambah beberapa tetes larutan HCl pekat melalui dinding tabung. Terbentuknya warna merah kuning, atau jingga pada lapisan t-butil alkohol menunjukkan adanya senyawa golongan flavonoid (Sarker dkk., 2006).

## Identifikasi Fenol
Fraksi dietil eter dan fraksi n-heksan ekstrak etanol daun mangga dilarutkan terlebih dahulu dengan etanol pa dimasukkan sedikit ke dalam  tabung reaksi, lalu ditambahkan 3 tetes pereaksi FeCl 3 5%. Perubahan warna larutan menjadi hijau, biru, atau ungu menunjukkan adanya senyawa fenol (Sarker dkk., 2006).

## Identifikasi Tanin
Fraksi dietil eter dan fraksi n-heksan ekstrak etanol daun mangga dipanaskan dengan air selama ± 30 menit diatas penangas air mendidih. Filtrat disaring, kemudian ditambahkan larutan NaCl 1% 3 tetes. Apabila terjadi endapan disaring menggunakan kertas saring, kemudian filtrat ditambah larutan gelatin 3 tetes. Terbentuknya endapan menunjukkan adanya senyawa tanin (Sarker dkk., 2006). Identifikasi Saponin
Fraksi dietil eter dan fraksi n-heksan ekstrak etanol daun mangga ditambahkan aquades 10 mL, tutup dan  kocok  kuat-kuat  selama  30  menit.  Apabila  terbentuk  buih  pada  permukaan  cairan  maka menunjukkan adanya saponin (Sarker dkk., 2006).

## Identifikasi Terpenoid
Ekstrak ditambahkan dengan Liebermann-Buchard. Uji positif terpenoid menghasilkan warna merah atau violet dan steroid menghasilkan warna hijau atau biru (Jaafar dkk., 2007).

## Identifikasi Alkaloid
Fraksi dietil eter dan fraksi n-heksan ekstrak etanol daun mangga dipanaskan dalam tabung reaksi dengan asam klorida 1% sebanyak 10 ml selama 30 menit dalam penangas air mendidih. Kemudian disaring menggunakan kapas kemudian dibagi menjadi dua tabung A dan B sama rata. Tabung A ditambahkan pereaksi Dragendorf 3 tetes, daan tabung B ditambahkan pereaksi Mayer 3 tetes. Hasil positif alkaloid ditandai dengan terbentuknya endapan pada dua pereaksi (Sarker dkk., 2006).

## Uji aktivitas antibakteri fraksi-fraksi EEDMHM
Alat-alat  gelas  yang  digunakan  telah  disterilisasi  dalam  autoklaf  dengan  pengaturan  suhu  121°C selama  15  menit.  Larutan  uji  berupa  fraksi  dietil  eter    dan  fraksi  n-heksan  dibuat  larutan  dengan konsentrasi 1%, 5%, 10%, 15%, dan 20% b/v yang dilarutkan dalam DMSO. Uji aktivitas antibakteri dengan metode difusi Kirby Bauer. Suspensi bakteri uji sebanyak 1500 μl dicampur 10 mL NaCl 0,9% dalam tabung reaksi kemudian diambil 2,5 mL dicampur ke dalam 22,5 mL media MHA dalam keadaan hangat, kemudian dituang dalam cawan petri kemudian ditunggu hingga media memadat. Kertas cakram diletakkan diatas media yang telah mengandung bakteri uji, kemudian diteteskan 10 μl larutan uji (1%, 5%, 10, 15%, dan 20%), inkubasi pada suhu 37℃ selama 24 jam. Kontrol positif kloramfenikol 30 μg/disk dan kontrol negatif (kertas cakram yang ditetesi pelarut DMSO). pengujian ini dilakukan replikasi sebanyak tiga kali.

## Analisis Data
Analisis data dilakukan secara deskriptif pada hasil uji skrining fitokimia yang ditunjukkan dengan adanya  perubahan  warna  maupun  terbentuknya  buih.  Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  berupa  zona hambat yang terbentuk di sekeliling kertas cakram yang menunjukkan adanya aktivitas antibakteri kemudian  zona  tersebut  diukur  Diameter  Daerah  Hambat  (DDH).  Data  DDH  tiap  konsentrasi dihitung rata-rata dan standar deviasinya.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Daun mangga segar yang digunakan dalam penelitian sebanyak 2740 gram dan hasil pengeringan didapatkan simplisia sebanyak 1505 gram dengan kadar air 6%. Hasil ekstrak etanol daun mangga sebanyak  273,5  gram  dengan  rendemen  19,54%.  Ekstrak  etanol  daun  mangga  berbentuk  kental, berwarna hijau pekat dengan bau khas daun mangga, serta memiliki rasa agak pahit. Ekstrak etanol yang  digunakan  pada  proses  fraksinasi  fraksi  n-heksan  sebanyak  40  gram  dan  fraksi  dietil  eter sebanyak 20 gram. Hasil berat dan rendemen dari fraksi-fraksi EEDMHM dapat dilihat pada Tabel I.
Tabel I. Bobot dan rendemen fraksi EEDMHM Jenis Fraksi Bobot Fraksi (gram) Rendemen (%) FDE 4,1 20,5 FNH 2,5 6,25
Hasil skrining fitokimia fraksi dietil eter daun mangga harum manis mengandung senyawa flavonoid, fenolik dan tanin sedangkan fraksi n-heksan mengandung senyawa flavonoid dan fenolik (Tabel II). Pengujian  adanya  senyawa  flavonoid  dalam  FDE  menunjukkan  warna  jingga  sedangkan  FNH menunjukkan warna hijau biru. Adanya reaksi reduksi oleh Mg yang dilakukan dalam suasana asam dengan penambahan HCl, reduksi dengan magnesium dan asam klorida pekat memberi warna kuning kemerahan atau jingga (Robinson, 1995). Warna merah sampai jingga diberikan oleh senyawa flavon sedangkan  hijau  sampai  biru  diberikan  oleh  aglikon  (Marliana  &  Suryanti,  2005).  Maka kemungkinan FDE menunjukkan adanya kandungan flavonoid jenis flavon dan FNH mengandung flavonoid  aglikon.  Pengujian  adanya  senyawa  fenolik  dengan  mengamati  terjadinya  perubahan warna menjadi hijau hingga hijau kehitaman pada sampel setelah penambahan FeCl 3 5%.
Senyawa fenol memiliki gugus hidroksil yang dapat bereaksi dengan ion besi pada larutan FeCl 3 5% sehingga terjadinya pembentukan senyawa kompleks berwarna hijau kehitaman (Harborne, 1987). Pengujian  adanya  senyawa  tanin  terjadi  setelah  penambahan  gelatin  dan  NaCl.  Adanya  endapan menunjukkan tanin yang menggumpalkan protein dari gelatin, karena tanin dapat bereaksi dengan protein  membentuk  kopolimer  yang  tak  larut  dalam  air  (Harborne,  1987).  Pada  pengujian menunjukkan adanya endapan di dasar tabung pada FDE namun tidak menunjukkan adanya endapan pada FNH, hal ini menandakan FDE mengandung senyawa tanin sedangkan FNH tidak mengandung senyawa tanin. Pengujian adanya senyawa saponin setelah penambahan aquadest dan digojok maka akan  timbul  buih  pada  permukaan,  namun  pada  FDE  dan  FNH  tidak  terbentuk  buih,  hal  ini menandakan FNH dan FDE negatif mengandung saponin (Marlinda dkk., 2012). Saponin merupakan senyawa yang mengandung gugus glikosil yang berperan sebagai gugus polar serta gugus steroid dan terpenoid  yang  berfungsi  sebagai  gugus  non  polar.  Senyawa  yang  memiliki  gugus  polar  dan  non polar akan bersifat aktif di permukaan sehingga saat dikocok menggunakan aquadest saponin dapat membentuk misel, dimana struktur polar akan menghadap keluar sedangkan gugus non polar akan menghadap ke dalam sehingga pada kondisi seperti inilah akan terbentuk busa (Marlinda dkk., 2012). Pengujian adanya terpenoid jika terdapat perubahan warna merah atau  violet dan steroid jika terdapat perubahan warna hijau atau biru setelah penambahan Liebermann-Buchard (Jaafar dkk., 2007). Pada FNH  dan  FDE  tidak  menunjukkan  adanya  perubahan  warna.  Hal  ini  menandakan  FNH  dan  FDE negatif terpenoid. Hasil pengujian skrining fitokimia ditunjukkan pada tabel II.
Tabel II. Hasil Uji Skrining Fitokimia Fraksi-Fraksi EEDMHM
Senyawa yang Diujikan Hasil Uji Skrining Fitokimia FDE FNH Flavonoid + + Fenolik - - Tanin + + Saponin + - Terpenoid - - Alkaloid - - Keterangan: (+) = positif (mengandung senyawa uji) (-)  = negatif (tidak mengandung senyawa uji)
A
B Keterangan: (1) = Konsentrasi 100 μg/disk setara dengan konsentrasi 1%
(5) = Konsentrasi 500 μg/disk setara dengan konsentrasi 5%
(10) = Konsentrasi 1000 μg/disk setara dengan konsentrasi 10%
(15) = Konsentrasi 1500 μg/disk setara dengan konsentrasi 15%
(20) = Konsentrasi 2000 μg/disk setara dengan konsentrasi 20%
(+) = Kontol positif kloramfenikol 30 μg/disk
(-) = Kontrol negatif DMSO
Gambar 1. Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Fraksi-Fraksi EEDHM Terhadap Bacillus subtilis Menggunakan Metode Difusi Kirby Bauer, Fraksi Dietil Eter (A) dan Fraksi n-Heksan (B)
1 5 10 15 20 - + 1 5 10 15 20 - +
Hasil  DDH  menunjukkan  FDE  memiliki  zona  hambat  irradikal  pada  konsentrasi  1%  dan radikal pada konsentrasi lainnya. FNH memiliki zona hambat irradikal pada konsentrasi 1% dan 5% serta  radikal  pada  konsentrasi  lainnya  (Gambar  1).  Hal  ini  menunjukkan  PEA  dan  FDE  mampu membunuh bakteri (bakterisida) mulai dari konsentrasi 5% ke atas dan pada konsentrasi 1% hanya mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri  (bakteriostatik).  FNH  mampu  membunuh  bakteri (bakterisida)  mulai  dari  konsentrasi 10%  ke  atas dan pada  konsentrasi  1%  dan  5%  hanya  mampu menghambat pertumbuhan bakteri (bakteriostatik). Nilai DDH pada FDE berkisar antara 8,60-16,13 mm (tabel III) dan nilai DDH pada FNH berkisar antara 7,25-9,32 mm (tabel IV). (Pelczar & Chan, 1988)  menyatakan  bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi  ekstrak  maka  semakin  besar  aktivitas antibakteri yang dihasilkan. Tabel III dan IV menunjukkan bahwa semakin tinggi konsentrasi ekstrak terlihat adanya peningkatan nilai DDH. Hal ini diduga karena bertambahnya konsentrasi senyawa antibakteri yang dilepaskan sehingga mempermudah penetrasi senyawa-senyawa tersebut ke dalam sel  bakteri  dengan  mekanisme  masing-masing.  Hasil  penelitian  sebelumnya  oleh  (Rosalina  & Erikania,  2019),  menjelaskan  bahwa  ekstrak  etanol  daun  mangga  pada  konsentrasi  30% menghasilkan nilai DDH sebesar 10,10 mm terhadap pertumbuhan Bacillus subtilis. Hasil FDE pada konsentrasi 5% menghasilkan nilai DDH sebesar 12,22 mm. Penelitian ini menghasilkan nilai DDH yang  lebih  besar  pada  konsentrasi  yang  lebih  kecil  dibandingkan  dengan  ekstrak  etanol  pada penelitian sebelumnya, hal ini menunjukkan bahwa dilakukannya fraksinasi dari ekstrak etanol daun mangga menggunakan pelarut semi polar mampu memberikan aktivitas antibakteri yang lebih besar.
Kandungan  senyawa  yang  terdapat  di  dalamnya  juga  berbeda.  FDE  daun  mangga  harum manis  mengandung  senyawa  flavonoid, fenolik,  dan tanin.  Namun  pada penelitian  ini,  FNH  pada konsentrasi  20%  menghasilkan  nilai  DDH  yang  mendekati  dengan  ekstrak  etanol  pada  penelitian sebelumnya, hal ini menunjukkan bahwa dilakukannya fraksinasi dari ekstrak etanol daun mangga menggunakan  pelarut  non  polar  belum  bisa  memberikan  aktivitas  antibakteri  yang  lebih  besar. Penelitian  sebelumnya  oleh  (Sari,  2017),  menjelaskan  bahwa  fraksi  n-heksan  daun  mangga  pada konsentrasi 4000 μg/disk menghasilkan nilai DDH sebesar 9,40 mm dan fraksi etil asetat sebesar 15,20 mm terhadap bakteri Escherichia coli dan Salmonella typhi .
Tabel III. Hasil  Uji Aktivitas Antibakteri Fraksi EEDHM Terhadap Bacillus subtilis , Ø kertas cakram 6 mm Fraksi Perlakuan DDH (mm) Rata- rata±SD Tipe Zona R1 R2 R3 FDE Konsentrasi 100 µg/disk 8,75 8,40 8,65 8,60±018 Iradikal Konsentrasi 500 µg/disk 12,4 12.05 12,2 12,22±0,18 Radikal Konsentrasi 1000 µg/disk 13,0 14,0 13,7 13,57±0,51 Radikal Konsentrasi 1500 µg/disk 14,6 15,15 15,0 14,92±0,28 Radikal Konsentrasi 2000 µg/disk 16,0 16,15 16,25 16,13±0,13 Radikal Kloramfenikol 30 µg/disk 20,0 20,5 21,0 20,5±0,5 Radikal DMSO - - - - -
Tabel IV. Hasil  Uji Aktivitas Antibakteri Fraksi EEDHM Terhadap Bacillus subtilis , Ø kertas cakram 6 mm
FNH Konsentrasi 100 µg/disk 7,0 7,25 7,5 7,25±0,25 Iradikal Konsentrasi 500 µg/disk 7,75 7,7 8,2 7,88±0,28 Iradikal Konsentrasi 1000 µg/disk 8,4 8,2 8,6 8,4±0,2 Radikal Konsentrasi 1500 µg/disk 8,8 8,5 9,2 8,83±0,35 Radikal Konsentrasi 2000 µg/disk 9,0 9,15 9,8 9,32±0,43 Radikal Kloramfenikol 30 µg/disk 20,0 19,0 21,0 20,0±1,0 Radikal DMSO - - - - -
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  FNH  dan  FDE  memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri Bacillus subtilis . Hal ini menunjukkan dilakukannya fraksinasi dengan pelarut polar dan non polar pada daun mangga dapat memberikan aktivitas antibakteri baik Gram positif maupun Gram negatif. Flavonoid  glikosida  umumnya  larut  dalam  pelarut  yang  lebih  polar  sebaliknya  flavonoid  aglikon lebih  mudah  larut  dalam  pelarut  non  polar  (Markham,  1998).  Flavonoid  aglikon  memiliki  daya hambat  yang  lebih  kecil  dibandingkan  bentuk  glikosidanya  terhadap  bakteri Bacillus  subtilis, Escherichia coli, dan Staphylococcus cerevisiae (Soeka dkk., 2007). Hal ini sesuai dengan penelitian ini karena FDE lebih polar dibanding n-heksan sehingga FDE  memiliki aktivitas antibakteri yang lebih  besar  dari  FNH.  Fraksi  n-heksan  memiliki  nilai  DDH  yang  lebih  kecil  daripada  FDE dikarenakan  tidak  mengandung  saponin,  diketahui  senyawa  ini  juga  bertanggung  jawab  sebagai antimikroba (Kumar dkk., 2021).

## KESIMPULAN
Seluruh  konsentrasi  dari  fraksi  n-heksan  (FNH),  dan fraksi  dietil  eter  (FDE)  daun  mangga  harum manis memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri Bacillus subtilis . Fraksi dietil eter daun mangga harum  manis  mengandung  senyawa  flavonoid,  fenolik,  dan  tanin  sedangkan  fraksi  n-heksan mengandung senyawa flavonoid dan fenolik.

## DAFTAR PUSTAKA
Abubakar,  A.  R.,  &  Haque,  M.  (2020) ‘ Preparation  of  Medicinal  Plants:  Basic  Extraction  and Fractionation  Procedures  for  Experimental  Purposes’. Journal  of  Pharmacy  &  Bioallied Sciences , 12 (1), 7. https://doi.org/10.4103/jpbs.JPBS
Apetroaie-Constantin,  C.,  R.  Mikkola,  M.  A.,  Andersson,  V.  T.,  Suominen,  I.,  Johansson,  T.,  & Salkinoja-Salonen, M. (2009) ‘ Bacillus subtilis and B. mojavensis strains connected to food poisoning produce the heat stable toxin amylosin’. Journal of Applied Microbiology , 106 (6). https://ami-journals.onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/j.1365-2672.2009.04167.x
Harborne, J. (1987) ‘ Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan (2nd ed.)’. ITB. Indonesia, D. K. R. (1986) ‘ Sediaan Galenika’ . Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan. Jaafar, F. M., Osman, C. P., Ismail, N. H., & Awang, K. (2007) ‘ Analysis of essential oils of leaves , stems , flowers and rhizomes of Etlingera Elatior ( Jack ) R . M . Smith.’. Malaysian Journal of Analytical Science , 11 (1), 269–273.
Jhaumeer Laulloo, S., Bhowon, M. G., Soyfoo, S., & Chua, L. S. (2018) ‘ Nutritional and Biological Evaluation  of  Leaves  of  Mangifera  indica  from  Mauritius’. Journal  of  Chemistry , 2018 . https://doi.org/10.1155/2018/6869294
Kumar, M., Saurabh, V., Tomar, M., Hasan, M., Changan, S., Sasi, M., Maheshwari, C., Prajapati, U., Singh, S., Prajapat, R. K., Dhumal, S., Punia, S., Amarowicz, R., & Mekhemar, M. (2021). ‘ Mango  ( Mangifera  indica l.)  leaves:  Nutritional  composition,  phytochemical  profile,  and health-promoting bioactivities’. Antioxidants , 10 (2), 1–23. Markham, K. . (1998). ‘ Cara Mengidentifikasi Flavonoid’ . Bandung: ITB. Marliana, S. D., & Suryanti, V. (2005). Skrining Fitokimia dan Analisis Kromatografi Lapis Tipis Komponen Kimia Buah Labu Siam ( Sechium edule Jacq . Swartz .) dalam Ekstrak Etanol The phytochemical screenings and thin layer chromatography analysis of . 3 (1), 26–31.
Marlinda, M., Sangi, M. S., & Wuntu, A. D. (2012) ‘ Analisis Senyawa Metabolit Sekunder dan Uji Toksisitas Ekstrak Etanol Biji Buah Alpukat ( Persea americana Mill)’. Jurnal MIPA 1 (1), 24– 28.
Masibo, M., & He, Q. (2009) ‘ In vitro antimicrobial activity and the major polyphenol in leaf extract of Mangifera’. Malaysian Journal Of Microbiology 5 (2), 73–80. Mukhriani,  M.  (2014). ‘ Ekstraksi,  Pemisahan  Senyawa,  dan  Identifikasi  Senyawa  Aktif’. Jurnal Kesehatan , 7 (2), 361–367.
Nugraha,  A.  C.,  Prasetya,  A.  T.,  &  Mursiti,  S.  (2017) ‘ Isolasi,  identifikasi,  uji  aktivitas  senyawa flavonoid  sebagai  antibakteri  dari  daun  mangga’. Indonesian  Journal  of  Chemical  Science , 6 (2), 91–96.
Pelczar, M. J., & Chan, E. C. . (1988) ‘ Dasar-Dasar Mikrobiologi ’. Universitas Indonesia Press. Rahmaningsih,  S.,  Wilis,  S.,  &  Mulyana,  A.  (2012). ‘ Bakteri  Patogen  Dari  Perairan  Pantai  Dan Kawasan Tambak Di Kecamatan Jenu Kabupaten Tuban’. Ekologia , 12 (1), 1–5. Ronchi, S. N., Brasil, G. A., Nascimento, A. M., Lima, E. M., Scherer, R., Boëchat, G. A. P., Lenz, D., Fronza, M., Costa, H. B., Romão, W., Bissoli, N. S., Endringer, D. C., & Andrade, T. U. (2015) ‘ Phytochemical and in vitro and in vivo biological investigation on the antihypertensive activity  of  mango  leaves  ( Mangifera  indica L.)’. Therapeutic  Advances  in  Cardiovascular Disease , 9 (5), 244–256. https://doi.org/10.1177/1753944715572958 Rosalina, V., & Erikania, S. (2019) ‘ Perbandingan Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Pada 5 Spesies Daun Mangga Harum Manis ( Mangifera indica ) Terhadap Bakteri Bacillus subtilis dan Providencia ’. Prosiding 1 St Seminar Nasional Dan Call for Paper . Sari, S. M. (2017) ‘ Efektivitas Antibakteri Fraksi Aktif Daun Mangga ( Mangifera indica L) Terhadap Escherichia  coli ATCC  25922  dan Salmonella  typhi ’. Seminar  Dan  Workshop  Nasional Keperawatan “Implikasi Perawatan Paliatif Pada Bidang Kesehatan,” 73–84. Sarker, S. D., Latif, Z., & Gray, A. I. (2006). Natural Products Isolation (2nd ed.)’. Humana Press. Soeka, S. Y., Naiola, E., & Sulistyo, J. (2007) ‘ Aktivitas Antimikroba Flavonoid - Glikosida Hasil Sintesis Secara Transglikosilasi Enzimatik’. Berita Biologi , 8 (6), 455–464.
Wijaya, W. A., Paramita, N. L. P. V., & Susanti, N. M. P. (2018) ‘ Optimasi Metode Purifikasi Ekstrak Daun  Sirih  Hijau  (Piper  betle  Linn)  yang  Memiliki  Aktivitas  Antibakteri Terhadap  Bakteri Propionibacterium acnes ’. Jurnal Kimia , 12 (1), 39–40. Wypych, G. (Ed.). (2001) ‘ Handbook of Solvents ‘ . US: ChemTec Publishing.