Aktivitas Antibakteri Kombinasi Ekstrak Etanol Daun Johar ( Cassia siamea Lamk.) dan Daun Alpukat ( Persea americana Mill.) terhadap

## Salmonella typhi
Antibacterial Activity Combination Of Ethanol Extract Of Johar Leaves ( Cassia siamea Lamk.) And Avocado Leaves ( Persea americana Mill.) Against Salmonella typhi
(tanggal diterima: 24 – 02- 2021 , tanggal disetujui: 30 – 08 - 2021)

## INTISARI
Demam tifoid merupakan penyakit demam akut yang disebabkan bakteri Salmonella typhi, 11-20 juta kasus setiap tahun dari laporan  WHO 2018, 358-810/100.000 penduduk untuk negara Indonesia.  Tujuan  penelitian  ini  untuk  mengetahui  aktivitas  antibakteri  kombinasi  daun  johar ( Cassia  siamea Lamk)  dan  daun  alpukat  ( Persea  americana Mill)  terhadap  pertumbuhan  bakteri salmonella typhi.
Pengujian  aktivitas  antibakteri  kombinasi  1:1  ekstrak  etanol  70%  daun  johar  dan  daun alpukat  dengan  metode  difusi  dan  dilusi,  perlakuan  menggunakan  control  (+)  ciprofloxacin  dan control  (-)  DMSO  2%  dengan  seri  konsentrasi  25,  50,  75  dan  100  %.  Masing-masing  perlakuan dilakukan pengulangan sebanyak 3 kali.
Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  kombinasi  ekstrak  etanol  daun  johar  dan  daun  alpukat memiliki aktivitas terhadap bakteri Salmonella typhi paling besar pada konsentrasi 100% dengan diameter zona bening 9.9 mm sedangkan terkecil rata-rata pada kosentarasi 25% diameter 6 mm, dan siprofloksasin dengan diameter 29,3 mm. Kadar hambat minimum pada konsentrasi 12,5%.
Kata kunci : Antibakteri ; Cassia siamea Lamk; Persea Americana Mill; Salmonella typhi

## ABSTRACT
Typhoid fever is an acute febrile disease caused by Salmonella typhi bacteria, WHO 2018 data  states  that  in  the  world  it  reaches  11-20  million  cases  per  year,  in  Indonesia  it  reaches  a prevalence  rate of 358-810/100,000  population.  The purpose of this study  was to determine the antibacterial activity of the combination of johar leaves ( Cassia siamea Lamk) and avocado leaves ( Persea americana Mill) against the growth of salmonella typhi bacteria. Testing the antibacterial activity of a combination of 1:1 70% ethanol extract of johar leaves and avocado leaves by diffusion and dilution methods, treatment using control (+) ciprofloxacin and control  (-)  DMSO  2%  with  series  concentrations  of  25,  50,  75  and  100%.  Each  treatment  was repeated 3 times.
The results of the antibacterial activity test of the combination of ethanol extract of johar leaves  and  avocado  leaves  had  the  greatest  activity  against  Salmonella  typhi  bacteria  at  a concentration of 100% with a clear zone diameter of 9.9 mm while the smallest average was at a concentration of 25% with a diameter of 6 mm, and ciprofloxacin with a diameter of 29.3 mm. The minimum inhibition level was at a concentration of 12.5%.
Keywords: Antibacterial; Cassia siamea Lamk; Persea Americana Mill; Salmonella typhi
Hanugrah Ardya C risdian * , Kusumaningtyas Siwi A Universitas Kusuma Husada Surakarta email: hanugrahardya8@gmail.com

## 1. PENDAHULUAN
Kuman  patogen  penyebab  demam  tifoid  salah  satunya  ialah  dari  bakteri Salmonella typhi , infeksi sistemik dengan terjadinya demam yang berlangsung lama disertai  dengan  adanya  inflamasi  dan  bakteremia  yang  mengakibatkan  rusaknya organ hati dan usus, bakteri ini adalah penyebab utama demam tifoid. Demam tifoid merupakan infeksi yang mengancam jika tidak cepat ditangani secara baik dan bijak, bahkan dapat  menyebabkan kematian. Infeksi ini mencatat 11-20 juta kasus per tahun  yang  mengakibatkan  sekitar  128.000  -161.000  kematian  setiap  tahun  di dunia dari laporan WHO. [1] Dari laporan surveilans tifoid dan paratifoid nasional di Indonesia sekitar 21,5 juta orang setiap tahun infeksi tifoid masih sering terjadi di negara berkembang.
Jenis tumbuhan yang mempunyai potensi untuk herbal adalah tanaman Johar ( Cassia siamea Lamk). Tumbuhan ini banyak dijumpai di Asia Tenggara, termasuk Indonesia [2].Senyawa pada daun tanaman johar terdiri atas antrakuinon, saponin, ,flavonoid  dan  alkaloid  masuk  dalam  metabolit  sekunder  [3]. Penelitian menunjukkan ekstrak air dan methanol daun tanaman johar memiliki aktivitas anti malaria,  [4]  anti  diabetes,[5]  antioksidan,  [6]  anti  tumor  dan  insektisida  [7] Penelitian menunjukkan ekstrak daun johar memiliki daya penghambat terhadap pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus , Escherichia  coli , Micrococcus  luteus dan Shigella dysentriae . [8] Tanaman  berikutnya  yang  telah  banyak  dilakukan  penelitian  pada  aktivitas bakteri  adalah  daun  alpukat  berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Felina Alpukat  merupakan  tanaman  yang  dapat  di  daerah  tropis  dan  hampir  seluruhh bagian dari tanaman dapat di manfaatkan sumber pengobatan. Bagian daging buah alpukat bisa digunakan untuk melembabkan kulit kering,  sariawan, menurunkan tekanan  darah  dan  antibakteri  ,  data    hasil  perhitungan  rata-rata  diameter  zona hambat ekstrak daun alpukat dalam konsentrasi 25, 50 dan 100% masing-masing sebesar  8,99,  10,73  dan  11,82  mm  terhadap  pertumbuhan  bakteri  S treptococcus mutan,  Penelitian  menyebutkan  ekstrak  etanol  daun  alpukat  memiliki  aktivitas antibakteri terhadap S. typhi dan S. aureus daun alpukat ( Persea americana Mill) memiliki kandungan senyawa aktif berupa alkaloid, flavonoid, tannin dan golongan flavonoid  yang  memiliki  aktivitas  menghambat  pertumbuhan  mikroba  patogen yang paling baik. [9] dari berberapa literatur menunjukan kedua tanaman ini telah diteliti  dan  memiki  aktivitas  terhadapa  mikroorganisme  namun  belum  diketahui jika dalam bentuk kombinasi, dari hal tersebut peneliti tertarik untuk mengetahui aktivitas  antibakteri  daun  johar  dan  daun  alpukat  terhadap  pertumbuhan Salmonella typhi .

## 2. METODE PENELITIAN 2. 1. ALAT DAN BAHAN
Alat-alat  yang  digunakan  untuk  penelitian  antara  lain,  cawan  petri,  tabung reaksi, Bunsen, blender, ayakan mesh 60, Erlenmeyer, rotary evaporator, corong, neraca analitik, laminar air flow , batang pengaduk, gelas kimia, autoclave, alat gelas, penyaring vakum, macam-macam pipet, jarum ose, mikroskop, jangka sorong serta penangas  air.  Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  antara  lain bakteri
Salmonella typhi , media nutrient agar [Merck], MHA ( Muller Hinton Agar ) [Oxoid], etanol [Ecocham], aquades steril, ciprofloxacin [Ogb Dexa], media KIA, LIA, SIM, BHI, EA, Erlich A dan B, Citrat, kristal violet, NaCl, dan safranin.

## 2. 2. CARA KERJA
Pembuatan ekstrak daun johar dan alpukat menggunakan metode maserasi dengan  merendam  1  kg  daun  ditambahkan  etanol  70%  1:10  kemudian  digojok sesekali 6 jam pertama diamkan 18 jam kemudian di saring dan maserasi diulang dengan jumlah pelarut setengahnya dan disaring kembali lalu dipekatkan. [10] Golongan senyawa dilakukan identifikasi dengan menggunakan uji tabung dengan  beberapa  pereaksi,  pengujian  kandungan  diantaranya  senyawa  saponin, flavonoid,  alkaloid,  dan  tannin  uji  ini  dilakukan  untuk  menegaskan  kebenaran bahan ataupun senyawa aktif yang terkandung pada daun johar dan daun alpukat yang memiiki peran untuk aktivitas antibakteri. [11]
Pengujian  antibakteri  dengan  metode  difusi  sumuran,  masing-masing sumuran diisi sebanyak 50µl ekstrak konsentrasi yaitu 100%, 75%, 50%, dan 25%, Ciprofloxsasin  sebagai    kontrol  positif,  dan  DMSO  2%  sebagai  kontrol  negatif diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 o C  dan diukur diameter zona hambat sekitar sumuran yang dinyatakan dalam satuan mm. [12]
Metode  dilusi  menggunakan  beberapa  pengenceran  sebagai  tahap  uji antibakteri yang bertujuan untuk melihat kadar hambat minimum KHM dan kadar bunuh minimum (KBM) terhadap bakteri pengujian dilakukan sebanyak 3 kali. [12]

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Ektraksi daun johar dan alpukat dilakukan dengan maserasi dengan pelarut etanol 70% karena etanol dapat melarutkan senyawa dari polar sampai nonpolar yang  sering digunakan  sehingga  dapat  melarutkan  hampir  semua  senyawa  kimia dalam simplisia. Rendemen ekstrak daun johar 11,2 % b/b dan daun alpukat 9,8% b/b, dimana ekstrak daun johar memiliki randemen yang lebih besar dibandingkan dengan  ekstrak  daun  alpukat,  yang  artinya  hasil  randemen  menunjukkan banyaknya komponen bioaktif yang terkandung didalam ekstrak daun johar
Tabel 1. Hasil pembuatan ekstrak etanol 70% daun johar dan daun alpukat
Nama Sampel Bobot Serbuk (g) Bobot ekstrak (g) Rendemen % Daun Johar 1000 112 11,2 Daun Alpukat 1000 98 9,8
Identifikasi  senyawa  kimia  ditujukan  untuk  menetapkan  pembuktian  senyawa kimia  yang  terdapat  pada  daun  johar dan  daun  alpukat  menggunakan  uji  tabung dengan  mereaksikan  dengan  beberapa  pereaksi.  Pengujian  kandungan  senyawa, flavonoid, alkaloid, saponin dan tannin. Hasil pengujian menunjukkan bahwa untuk daun johar dan daun alpukat mengandung senyawa alkaloid, flavonoid, saponin dan tannin.
Tabel 2. Hasil Identifikasi Kandungan Senyawa Kimia Daun Johar
Uji Senyawa Hasil positif menurut teori Hasil Daun Johar Hasil Daun Alpukat Alkaloid (pereaksi Dragendroff ) warna jingga + + (pereaksi Mayer ) endapan putih + + (pereaksi Wagner )  warna  cokelat kemerahan + + Flavonoid warna jingga + + Saponin Terbentuk busa + + Tanin hijau kehitaman atau warna biru tua + +
Kombinasi uji antibakteri dari Ekstrak Johar Etanol (Cassia Siamea Lamk.) dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri Salmonella  Typhi yang  ditandai  dengan pembentukan area yang bening di sekitar sumuran. Area ernih dari ekstrak etanol etanol daun Johar dan alpukat terhadap bakteri Salmonella Typhi meningkat dengan konsentrasi  dari  25%  hingga  100%.  Pengaruh  ini  terlihat  dari  konsentrasi  yang lebih besar, semakin besar area yang bening terbentuk karena senyawa antibakteri yang terdapat dalam ekstrak etanol Johar menjadi lebih besar.
Ciprofloxacin  digunakan  sebagai  kontrol  positif.  Dari  data  yang  diperoleh bakteri Salmonella  typhi sensitif  terhadap  ciprofloxacin,  hal  ini  dapat  dilihat  dari zona  bening  yang  terbentuk  yaitu  29,3  mm.  Zona  bening  yang  terbentuk membuktikan  bahwa bakteri Salmonella typhi sensitif terhadap ciprofloxacin sesuai dengan ketentuan WHO. Bakteri Salmonella typhi dapat resisten terhadap antibiotik jika  zona  jernih  yang  terbentuk  kurang  dari  10  mm,  intermediet  10-13  mm  dan disebut  sensitif  ( susceptible )  jika  lebih  dari  13  mm  [5].  Merupakan  Golongan flourquinolon  generasi  ke  dua  yang  berspektrum  luas,  bekerja  dengan menghentikan  pertumbuhan  bakteri  maupun  bakteriostatik  yaitu  Ciproflaksasin [6].  Sensitivitas  ciprofloxacin  menunjukkan  lebih  baik  dari  Kombinasi  ekstrak etanol  daun  johar  dan  daun  alpukat  mempunyai  daya  dalam  menghambat pertumbuhan  bakteri Salmonella  typhi .  Namun  kombinasi  daun  johar  dan  daun alpukat bisa dijadikan sebagai pengobatan tradisional digunakan tanaman herbal untuk  pengobatan  infeksi  yang  salahsatunya  disebabkan  oleh  bekteri Salmonella typhi . Pada  penelitian  ini  digunakan  Dimetil  sulfoksida  (DMSO)  2%  sebagai pengencer ekstrak etanol johar karena sifatnya yang polar dan tingkat kelarutannya tinggi  sehingga  ketika  bereaksi  dengan  ekstrak  etanol  johar  akan  larut  dengan sempurna.  Penggunaan  DMSO  sebagai  control  negatif  ditetapkan  untuk  menguji apakah DMSO mempunyai senyawa yang mempengaruhi data hasil penelitian. Hasil yang  diperoleh  dari  uji  kontrol  negatif  bahwa  Dimetil  sulfoksida  (DMSO)  2% tersebut  tidak  terdapat  senyawa  yang  dapat  berpengaruh  terhadap perkembangbiakan bakteri Salmonella typhi ditunjukan dengan tidak terbentuknya zona jernih pada media petumbuhan bakteri. Hal ini sesuai dengan hasil penelitian bahwa  terdapat  hambatan  terhadap  bakteri Salmonella  typhi adalah  asli  dari
senyawa yang didapatkan dari hasil uji antibekteri kombinasi ekstrak etanol daun johar dan daun alpukat.
Ekstrak etanol daun johar dan daun alpukat memiliki aktivitas antibakteri dikarenakan  ekstrak  tersebut  mengandung  senyawa  metabolit  sekunder  berupa alkaloid,  flavonoid,  saponin  dan  tannin.  Hal  ini  didukung  berdasarkan  hasil  uji fitokimia pada penelitian ini yang telah disajikan pada tabel 3 dan gambar 3. Cara kerja  tanin  sebagai  antimikroba  erat  kaitannya  pada  target  invasi  tanin  yaitu rusaknya  polipeptida  yang  ada  pada  dinding  sel  bakteri  mengakibatkan terganggunya inaktivasi sel bakteri pada sel inang [7].
Penelitian Sabir menyebutkan gugus hidroksil yang terdapat pada struktur senyawa flavonoid menyebabkan perubahan komponen organik dan perpindahan nutrisi  yang  akhirnya  akan  mengakibatkan  timbulnya  efek  beracun  terhadap bakteri.  Saponin  sebagai  antibakteri  memiliki  mekanisme  yaitu  mendenaturasi protein  dimana  tegangan  permukaan  pada  dinding  sel  bakteri  dirurunkan  dan permeabilitas membran bakteri akan dirusak sehingka terjadi kematian bekteri.
Hasil rata-rata terbesar diameter zona jernih kombinasi ekstrak etanol daun johar  dan  daun  alpukat  terhadap  pertumbuhan  bakteri Salmonella  typhi pada konsentrasi  100%  sebesar  9,9  mm,  konsentrasi  25%  rata-rata  terkecil  diameter zona jernih 6 mm, seri  konsentrasi 75% didapatkan rata-rata diameter zona jernih yaitu sebesar 8,1 mm, dan konsentrasi 50% yaitu sebesar 6,7 mm.
Tabel  3.  Hasil  pengukuran  diameter  zona  bening  kombinasi  ekstrak  daun  johar  dan  daun alpukat terhadap bakteri Salmonella typhi No Konsentrasi Diameter zona hambat (mm) Rata-rata Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3 1 25% 6 6 6 6 2 50% 7 6 7 6,7 3 75% 8,3 8 8 8,1 4 100% 10 9,8 10 9,9 5 Kontrol positif 29,5 29,5 29 29,3 6 Kontrol negatif 0 0 0 0
Gambar 1. Gambar Hasil Uji Difusi Kombinasi Ekstrak Daun Johar dan daun Alpukat Terhadap Bakteri Salmonella typhi
Hasil  uji  untuk  mengetahui  nilai  Konsentrasi  Hambat  Minimum  kekeruhan  tidak dapat diidentifikasi dengan adanya pertumbuhan bakteri dengan warna hijau tua gelap  (Gambar  2).  Kontrol  positif  sebagai  pertumbuhan  bakteri  yang  berisikan koloni  bakteri,  ekstrak  daun  johar  sebagai  kontrol  negatif  tidak  terlihat pertumbuhan bakteri.
Gambar 2. Gambar Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak daun Johar terhadap bakteri Salmonella Thyphi menggunkan cara dilusi
Keterangan:
A = Kombinasi ekstrak daun Johar dan alpukat 50% + bakteri Salmonella typhi B = Kombinasi ekstrak daun Johar dan alpukat 25% + bakteri Salmonella typhi C = Kombinasi ekstrak daun Johar dan alpukat 12,5% + bakteri Salmonella typhi D = Kombinasi ekstrak daun Johar dan alpukat 6,25% + bakteri Salmonella typhi E = Kombinasi ekstrak daun Johar dan alpukat 3,125% + bakteri Salmonella typhi F = Kombinasi ekstrak daun Johar dan alpukat 1,562% + bakteri Salmonella typhi G = Kombinasi ekstrak daun Johar dan alpukat 0,781% + bakteri Salmonella typhi K+= Suspensi bakteri K-= Kombinasi ekstrak daun Johar dan alpukat johar 50%
Tabel 4. Hasil Uji Penentuan Nilai Kadar Bunuh Minimum
Konsentrasi (%) Hasil Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3 50% - - - 25% - - - 12,5% - - - 6,25% + + + 3,125% + + + 1,562% + + + 0,781%, + + + K+ + + + K- - - -
Penentuan Konsentrasi Bunuh Minimum dilakukan dengan cara dilusi cair dengan media MHA (Mueler Hinton Agar) dimana bakteri digores pada campuran ke masing-masing tabung reaksi.
A B E F G HK + K - C D
Gambar 3. Gambar Hasil Uji Penentuan KBM dengan Penggoresan pada Media MHA
Hasil pertumbuhan bakteri positif ditunjukkan dengan adanya pertumbuhan bakteri di media MHA. Hasil penggoresan dapat dilihat di tabel 4 dan gambar 3. Data yang diperoleh dari hasil penggoresan bakteri dengan metode dilusi cair pada media MHA setiap konsentrasi hasil uji aktivitas antibakteri ditunjukkan pada replikasi 1,2 dan  3  nilai  Konsentrasi  Bunuh  Minimum  (KBM)  kombinasi  ekstrak  daun  johar terhadap bakteri Salmonella typhi sebesar 12,5%. Hal ini ditunjukkan dengan tidak tumbuhnya bakteri pada kosentrasi tersebut.

## 4. KESIMPULAN
Aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri Salmonella  typhi terdapat  pada kombinasi  ekstrak  etanol  daun  johar  ( Cassia  siamea Lamk)  dan  daun  alpukat ( Persea americana Mill.), Konsentrasi kombinasi ekstrak etanol daun johar ( Cassia siamea Lamk.) dan daun alpukat ( Persea americana Mill.) yang memiliki aktivitas paling besar adalah 100 % diikuti dengan 75% dengan diameter zona hambat rata- rata 9.9 mm dan 8,1 mm, Kosentrasi hambat minimum kombinasi ekstrak etanol daun johar ( Cassia siamea Lamk.) Dan daun alpukat ( Persea americana Mill.) tidak dapat dilaporkan karena tidak bisa terlihat sedangkan kadar bunuh minimumnya pada konsentrasi 12,5%.

## 5. UCAPAN TERIMAKASIH
Kepada Universitas Kusuma Husada Surakarta yang memberikan dukungan dalam proses penelitian
6. DAFTAR PUSTAKA
[1].  WHO. 2018. Drug Resistance: Antimicrobial use. World Health  Organization Program and Projects. http://www.who.int/drugresistance/use/en/ (diakses 3 Maret 2020).
[2].   Kemenkes . 2011. Modul Penggunaan Obat Rasional. Jakarta : Direktorat Jendral Bina Kefarmasian dan Alat Kesehatan
K- K+ 5 % 25% 12,5% 6,25% 3,125 % 1,562 % 0,781%
[3].    Hutapea, J.R, dkk. 1994. Inventaris Tanaman Obat I . Jakarta: Depkes. RI Badan Penelitian dan Perkembangan Kesehatan.
[4].  Ajaieoba,  E.O,  J.S.  Ashidi,  L.C,  P.J.  Houghton  and    C.W.Wright.  2008. Antiplasmodial  Compounds  from Cassia  siamea Stem  Bark  Extract. Phytotherapy Research 22 (2): 252-254
[5].   Kumar dan O. Prakash. 2010. Antidiabetic and Aanti-lipemic Effects of Cassia siamea Leaves  Extract  in  Streptozotocin  Induces  Diabetic  rats. Asian  Pasific Journal of Tropical Medicine , 871 – 873.
[6].    Kaur,  G.,  M.S.  Alam,  Z.  Jabbar,  K.  Javed  dan  M.  Athar.  2006.  Evaluation  of Antioxidant Activity of Cassia siamea flowers. Journal of Ethnopharmacology 108 (3): 340 – 348.
[7]. Kardono, L. B. S., et al. 2003. Selected Indonesian Medical Plants : Monographs and Descriptions Volume 1. Jakarta: PT Gramedia Widiasarana Indonesia.
[8].     Fitri, Mapiratu, dan Prismawirayanti. 2017.  Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Tanaman Johar (Cassia Siamea Lamk . ) dari Beberapa Tingkat Kepolaran Pelarut. KOVALEN, 3(3):242-252.
[9].    Azzahra, F., E. A. Almalik., A. A. Sari. 2019. Uji Aktivitas Antibakteri Dari Ekstrak Etanol  Daun  Alpukat  (Persea  Americana  Mill.) Terhadap  Bakteri  Salmonella typhi dan Staphylococcus aureus. Jurnal Kefarmasian Akfarindo. 4 (2): 5-6
[10]. Kemenkes RI. 2017. Edisi II Farmakope Herbal Indonesia . Jakarta: Direktorat Jenderal Bina Kefarmasian dan Alat Kesehatan. Hlm 531.
[11]. Setyo WA, Sri RDA, Ashadi, Bakti Mulyani, Cici PR. 2014. Skrining Fitokimia Dan Identifikasi  Komponen  Utama  Ekstrak  Metanol  Kulit  Kayu  Durian  ( Durio zibethinus Murr .) Varietas Petruk. Seminar Nasional Pendidikan dan Kimia VI. ISBN: 9779373184-0 : 271-279.
[12]. D., Idiawati, N. and Sitorus, B., 2015. Uji Aktivitas Antibakteri Dari Ekstrak Daun Malek  (Litsea  graciae  Vidal)  Terhadap  Bakteri  Stapylococcus  aureus  dan Escherichia coli. Jurnal Kimia Khatulistiwa, 4(1), pp.8–12.