## Journal of Pharmaceutical and Health Research

## ISSN 2721-0715 (media online)
DOI 10.47065/jharma.v4i1.3297

## Potensi Mikroenkapsulasi Ekstrak Daun  Stevia Rebaudiana Terhadap Kadar Trigliserida Tikus Putih Jantan Galur Wistar Hiperlipidemia
Mutmainah * , I Kadek Bagiana, Ika Puspitaningrum, Lia Kusmita, Yani Kresnawati
Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Yayasan Pharmasi Semarang, Semarang, Indonesia Email: mutmainah.stifar@gmail.com
Abstrak− Penyakit Jantung Koroner merupakan kardiovaskuler yang disebabkan salah satunya karena aterosklerosis. Hiperlipidemia dikenal  sebagai  faktor  resiko  terjadinya  aterosklerosis.  Tanaman  Stevia  rebaudiana  Bertoni  merupakan  tanaman  yang  berkhasiat sebagai  hipolipidemik.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  efek  pemberian  sediaan  mikroenkapsulasi  ekstrak  daun  Stevia rebaudiana Bertoni terhadap kadar trigliserida pada tikus jantan galur Wistar. Salah satu cara untuk memperbaiki formulasi dengan menggunakan proses enkapsulasi. Enkapsulan yang digunakan adalah inulin dan kitosan. Penelitian ini dilakukan dengan tujuan dibuat tikus hiperlipidemia yang diinduksi dengan aloksan dosis 150 mg/KgBB tikus secara intraperitonial. Tikus hiperlipidemia diberikan mikroenkapsulasi ekstrak daun Stevia rebaudiana Bertoni pada tingkat dosis yang berbeda (100, 300, 700 dan 1000 mg/kgBB) selama 8 minggu; tikus kontrol diberi makan diet basal selama periode ini.  Hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa mikroenkapsulasi ektrak daun Stevia rebaudiana Bertoni memiliki potensi menurunkan kadar Trigliserida pada tikus jantan galur wistar yang hiperlipidemia.
Kata Kunci : Ektrak Daun; Stevia Rebaudiana Bertoni; Mikroenkapsulasi; Trigliserida.
Abstract− Coronary heart disease is a cardiovascular disease caused by atherosclerosis. Hyperlipidemia is known as a risk factor for atherosclerosis. The Stevia rebaudiana Bertoni plant is a plant that is efficacious as a hypolipidemic. This study aims to determine the effect of microencapsulated preparations of Stevia rebaudiana Bertoni leaf extract on triglyceride levels in male Wistar rats. One way to improve the formulation is by using the encapsulation process. The encapsulants used are inulin and chitosan. This research was conducted  with  the  aim  of  making  hyperlipidemic  rats  induced  by  alloxan  at  a  dose  of  150  mg/KgBW  rats  intraperitoneally. Hyperlipidemic rats were given microencapsulated Stevia rebaudiana Bertoni leaf extract at different dose levels (100, 300, 700, and 1000  mg/kg  BW)  for  8  weeks;  control  mice  were  fed  a  basal  diet  during  this  period.  The  results  of  the  study  concluded  that microencapsulation of Stevia rebaudiana Bertoni leaf extract had the potential to reduce triglyceride levels in hyperlipidemic male Wistar rats.
Keywords: Leaf Extract; Stevia Rebaudiana Bertoni; Microencapsulation; Triglycerides.

## 1. PENDAHULUAN
Penyebab utama kematian di negara Indonesia adalah penyakit jantung koroner (Dawley, 2014). Penyakit ini merupakan kardiovaskuler  yang  disebabkan  salah  satunya  karena  aterosklerosis.  Berdasarkan  data  diperoleh  bahwa  sekitar  9  juta orang meninggal karena penyakit kardiovaskular setiap tahun dan diperkirakan akan terus bertambah (Hutter et al., 2004). Hiperlipidemia dikenal sebagai  faktor resiko  terjadinya aterosklerosis  (Roy, 2014).  Hiperlipidemia merupakan kondisi yang menggabungkan berbagai kelainan genetik. Hal tersebut terjadi dengan adanya peningkatan kadar lipid dalam tubuh manusia.
Pengertian  yang  lebih  objektif  yaitu  menggambarkan  hiperlipidemia  sebagai  low-density  lipoprotein  (LDL), kolesterol total  maupun kadar trigliserida, atau kadar lipoprotein lebih besar dari persentil  ke-90 dibandingkan dengan populasi umum, atau kadar HDL kurang dari persentil ke-10 bila dibandingkan dengan populasi umum (Hill & Bordoni, 2022). Salah satu gaya hidup merupakan komponen penting dalam peningkatan kolesterol seperti kurangnya olahraga, pola makan yang terlalu banyak lemak, seringnya terpapar tembakau atau  merokok, obesitas (Argani et al., 2016).
Trigliserid  merupakan  salah  satu  lipid  yang  penting.  Apabila  kandungan  Trigliserida  (TG)  tinggi,  maka  dapat meningkatkan  konsentrasi  Lipoprotein  Densitas  Tinggi  (VLDL)  sehingga  mampu  memicu  terjadinya  arterosklerosis (Izar, 2018). Penurunan kadar TG yang tinggi dapat dilakukan dengan cara farmakologis maupun non farmakologis. Salah satu cara yang dilakukan diantaranya pengurangan asupan lemak jenuh serta peningkatan konsumsi sayuran serta buah (Anwar et al., 2016)
Tanaman Stevia rebaudiana Bertoni merupakan bahan alami, tidak beracun, aman digunakan serta nonkalori yang berkhasiat  sebagai  hipolipidemik.  Kandungan  glikosida  termasuk  rebaudiosides  (A,  B,  C,  D,  E),  stevioside, steviolbioside, serta dulcoside A yang mampu memberikan manfaat tersebut (Ahmad et al., 2018). Meskipun merupakan pemanis  rendah  kalori  dan  suplemen  makanan  untuk  makanan  namun  kandungan  stevioside  sering  digunakan  dalam pengobatan   hipertensi dan hiperglikemia (Jeppesen et al., 2000).
Daun  Stevia rebaudiana  Bertoni memiliki beberapa kandungan seperti alkaloid, tanin dan flavonoid. Flavonoid sangat mudah teroksidasi oleh cahaya, udara dan pemanasan sehingga tidak stabil dalam penyimpananya(Mutmainah et al., 2014). Salah satu cara untuk memperbaiki formulasi dengan menggunakan proses enkapsulasi. Proses ini merupakan cara dengan memasukkan zat ke dalam suatu matriks untuk meningkatkan stabilitas dan aplikasinya(Milani et al., 2019). Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  potensi  sediaan  mikroenkapsulasi  ekstrak  daun  Stevia  rebaudiana  Bertoni terhadap Trigliserida pada tikus jantan galur Wistar yang hiperlipidemia.

## Journal of Pharmaceutical and Health Research

## ISSN 2721-0715 (media online)
DOI 10.47065/jharma.v4i1.3297

## 2. METODOLOGI PENELITIAN

## 3.1 Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  adalah  beaker  glass  (pyrex),  vial  coklat,  tabung  reaksi  (pyrex),    rotary  evaporator  (Heidolph), lumpang dan alu, ayakan 24 mesh, corong alir, stopwatch, Moisture Meter (Shimadzu), Scanning Electron Microscope (Jeol  JSM  6510  LA),  pipet  ukur,  alat  sonde  tikus,  rak  tabung  reaksi.  Bahan  yang  digunakan  daun  Stevia  rebaudiana Bertoni, kitosan, inulin, bahan kimia lainnya.

## 3.2 Pembuatan sediaan mikroenkapsulasi
Mikroenkapsulasi ekstrak daun Stevia rebaudiana Bertoni dibuat dengan emulsi menggunakan enkapsulasi inulin: kitosan 25:75  b/b.  Sebelumnya  kitosan  dilarutkan  dalam  1%  asam  asetat,  kemudian  ditambahkan  Tween  80  1%  sebagai pengemulsi.  Inulin dimasukkan ke dalam larutan kitosan dan dihomogenkan menggunakan Homogenizer. Selanjutnya dicampur  dengan  kecepatan  5000  rpm  selama  5  menit.  Selanjutnya  dilakukan  spray drying  dengan  laju  umpan  15 ml/menit dan suhu 120˚C . Selanjutnya dilakukan evaluasi terhadap mikroenkapsulasi (Mutmainah et al., 2014) .

## 3.3 Uji kadar Trigliserida
Hewan uji yang telah diadaptasi dikelompokkan menjadi 6 kelompok perlakuan, diambil darahnya melalui vena mata dan diukur kadar TG awalnya sebagai data normal (hari ke-1). Setelah itu seluruh hewan uji dibuat meningkat kolesterolnya dengan  induksi  aloksan  dosis  150  mg/KgBB  tikus  secara  intraperitonial.  Kemudian  pada  hari  ketiga  setelah  induksi diambil  darahnya  dan  diukur  kadar  TG  (hari  ke-5).  Hewan-  hewan  dipuasakan  semalaman  saat  sebelum  pengambilan darah. Tiap kelompok diberi perlakuan satu kali sehari selama 7 hari. Kemudian diambil darahnya lewat vena mata dan diukur kadar TG pada hari ke 12 setelah perlakuan. Dari 5 kelompok yang diinduksi, ada 1 kelompok hewan uji diberi CMC Na 0,1% secara oral sebagai kontrol negatif. Kelompok lain menerima simvastatin 0,9 mg/kgBB tikus secara oral penurun  kolesterol,  kelompok  tersebut  berperan  sebagai  kontrol  positif.  Empat  kelompok  yang  tersisa  menerima mikroenkapsulasi ekstrak daun Stevia rebaudiana Bertoni dengan dosis oral setiap hari 100, 300, 700 serta 1000  mg/kgBB melalui rute oral. Seluruh kelompok diberikan pakan dan aquadest selama perlakuan.(Yasukawa et al., 2002)

## 3.4 Analisa data
Data Trigliserida yang diperoleh selanjutnya  dihitung besar persen penurunannya. Analisa statistika dilakukan dengan SPSS versi 16.0 dengan taraf kepercayaan sebesar 95 %.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil sediaan mikroenkapsulasi ekstrak daun Stevia rebaudiana Bertoni yang menggunakan enkapsulan inulin dan kitosan adalah  bentuk  serbuk  halus  dengan  warna  putih  kekuningan.  Tujuan  dari  proses  mikroenkapsulasi  adalah  untuk mempertahankan komponen aktif yang ada dalam ekstrak daun stevia tersebut dan untuk menutupi segala kekurangan dari  stevia.  Pemilihan  enkapsulan  sangat  berpengaruh  terhadap  keberhasilan  mikroenkapsulasi.  Karbohidrat  banyak digunakan pada enkapsulasi,  namun  penelitian mengenai  inulin  sebagai  enkapsulan masih  terbatas. Sun-waterhouse  et al., (2013) memperoleh hasil efisiensi enkapsulasi vanilin tertinggi dengan menggunakan enkapsulan inulin dibandingkan dengan alginat dan HPMC (Waterhouse et al., 2017).
Penggunaan  inulin  sebagai  enkapsulan  dalam  mikroenkapsulasi  juga  memiliki  keterbatasan.  Inulin  memiliki ukuran  partikel  yang  besar,  selain  itu  inulin  juga  memiliki  sifat  yang  lengket  dan  higroskopis  sehingga  membatasi penggunaannya sebagai enkapsulan. Oleh karena itu, untuk menghasilkan ukuran partikel skala nano pada enkapsulasi ekstrak daun stevia, keberadaan inulin dapat digantikan sebagian oleh kitosan. Data hasil pengukuran kadar trigliserida dapat dilihat pada tabel 1.
Tabel  1. Rerata Kadar Trigliserida mg/dL pada Semua Kelompok Perlakuan
Kelompok H1 H5 H12 CMC 109.75 ± 42.87 284.75  ± 60.46 402.00  ± 89.51 Simvastatin 71.00 ± 23.53 343.00  ± 95.03 61.40  ± 16.46 Stevia 100 89.25  ± 20.53 303.25  ± 31.98 121.25  ± 68.25 Stevia 300 117.00  ± 38.58 278.25  ± 40.96 107.25  ± 50.96 Stevia 700 72.75  ± 17.15 266.00  ± 68.79 110.25  ± 45.09 Stevia 1000 115.8  ± 52.73 309.00  ± 130.44 170.20  ± 139.12
Keterangan: Hasil berbeda bermakna (p<0,05) terhadap kontrol dengan uji Post Hoc.
Hasil pengukuran kadar trigliserida pad semua perlakuan kelompok menunjukkan bahwa terdapat perbedaan yang signifikan  dari  semua  perlakuan  (p<0.05).  Hal  ini  berarti  mikroenkapsulasi  daun  Stevia  rebaudiana  Bertoni  mampu memberikan aktifitas serta memiliki potensi  sebagai  penurun kadar Trigliserida pada tikus yang dibuat  hiperglikemia. Penurunan yang terbesar terjadi pada kelompok kontrol dengan menggunakan simvastatin yaitu sebesar 79.29  % . Persen penurunan untuk kelompok sediaan kontrol negatif atau CMC tidak mengalami penurunan kadar trigliserida setelah tikus

## Journal of Pharmaceutical and Health Research

## ISSN 2721-0715 (media online)
DOI 10.47065/jharma.v4i1.3297
mengalami hiperlipidemia. Kelompok yang menggunakan sediaan mikroenkapsulasi Stevia rebaudiana Bertoni hamper semua mengalami penurunan kadar trigliserida dengan penurunan terbesar pada dosis 300 mg/KgBB yaitu sebesar 61.12 %.  Namun  demikian  semua  kelompok  masih  di  bawah  kontrol  positif  untuk  persen  penurunannya.  Data  penurunan selengkapnya dapat dilihat pada gambar 1.
Hipertrigliseridemia  merupakan  penurunan  aktivitas  lipoprotein  lipase  yang  bertanggung  jawab  atas  terjadinya katabolisme  VLDL  yang  diproduksi  oleh  hati  dalam  kasus  resistensi  insulin  (Adeli  et  al.,  2001).  Pada  tikus  yang mengalami hiperglikemik terdapat peningkatan yang signifikan dalam TG, kolesterol serum, dan LDL-C dibandingkan dengan tikus yang normoglikemik (Sekiou et al., 2018). Adanya insulin yang terhambat menyebabkan asam lemak dan gliserol  sebagai  hasil  hidrolisa  trigliserida  tidak  seimbang,  sehingga  menimbulkan  kadar  kolesterol  yang  tinggi  pada pasien DM(Lenzen, 2008). Aloksan memiliki pengaruh yang penting dalam menyebabkan ketidakseimbangan metabolik dan patologik perubahan di hati dan salah satu agen penyebab terjadinya proses tersebut (Sekiou et al., 2018).
Gambar 1. Grafik Kenaikan Kadar Trigliserida Setelah Induksi dan  Penurunan Kadar Trigliserida Setelah Perlakuan Senyawa mikroenkapsulasi
Kandungan dalam ekstrak daun Stevia rebaudiana Bertoni salah satunya adalah kandungan steviosida yang diduga mampu  untuk  menurunkan  kadar  kolesterol  dan  trigliserida.  Steviosida  mampu  menurunkan  absorbs  lemak  serta lipogenik  enzim  yang  mengakibatkan  banyak  lemak  dieksresikan.  Adanya  eksresi  asam  empsdu  yang  meningkat mengakibatkan formasi misel di lumen usus terganggu sehingga absorbsi lemak menurun (Assaei et al., 2016). Steviosida juga mampu meningkatkan aktifitas lipase enzim. Hal ini mengakibatkan terjadinya katabolisme lemak dan trigliserida akan menurun sehingga solubilitas kolesterol dalam misel akan menurun dan eksresi lemak mejadi semakin meningkat (Akbarzadeh et al., 2015).
Ekstrak  daun  Stevia  rebaudiana  Bertoni  memiliki  sifat  antihipolipidemia  dikarenakan  interaksi  stevia  dengan aktivasi reseptor yang diaktikan oleh suatu proliferator peroksisom (PPARs). Proliferator peroksisom ini yang berfungsi dalam lipogenesis dalam pengaktifan ekspresi gen lipoprotein lipase (LPL) serta apo C-II dalam proses penyerapan serta esterifikasi  asam  lemak  bebas  hati,  yang  disertai  peningkatan  oksidasi  asam  lemak  bebas  mitokondria(Ahmad  et  al., 2018).  Hal  ini  menyebabkan  esterifikasi  lemak  dalam  hati.    Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  mikroenkapsulasi ekstrak daun Stevia rebaudiana Bertoni memiliki potensi dalam menurunkan kadar trigliserida tikus yang hiperlipidemia.

## 4. KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian yang dilakukan dapat disimpulkan bahwa mikroenkapsulasi ekstrak daun Stevia rebaudiana Bertoni  memiliki  potensi  dalam  menurunkan  kadar  Trigliserida  dengan  dosis  efektifnya  100  mg/kgBB . kandungan steviosida yang terdapat didalam ekstra daun Stevia rebaudiana Bertoni mampu untuk menurunkan kadar kolesterol dan trigliserida.  Steviosida  memiliki  reaksi  kimia  yang  mampu  menurunkan  absorbs  lemak  serta  lipogenik  enzim  yang mengakibatkan banyak lemak dieksresikan.

## REFERENCES
Adeli,  K.,  Taghibiglou,  C.,  Van  Iderstine,  S.  C.,  &  Lewis,  G.  F.  (2001).  Mechanisms  of  Hepatic  Very  Low-Density  Lipoprotein Overproduction  in  Insulin  Resistance.  Trends  in  Cardiovascular  Medicine,  11(5),  170–176.  https://doi.org/10.1016/S1050- 1738(01)00084-6
Ahmad, U., Ahmad, R. S., Arshad, M. S., Mushtaq, Z., Hussain, S. M., & Hameed, A. (2018). Antihyperlipidemic efficacy of aqueous extract of Stevia rebaudiana Bertoni in albino rats. Lipids in Health and Disease, 17(1), 1–8. https://doi.org/10.1186/S12944-018- 0810-9/TABLES/4
Akbarzadeh, S., Eskandari, F., Tangestani, H., Bagherinejad, S. T., Bargahi, A., Bazzi, P., Daneshi, A., Sahrapoor, A., O’Connor, W. J., & Rahbar, A. R. (2015). The Effect of Stevia Rebaudiana on Serum Omentin and Visfatin Level in STZ-Induced Diabetic Rats. Journal of Dietary Supplements, 12(1), 11–22. https://doi.org/10.3109/19390211.2014.901999
Anwar, A., Nugraha, Nasution, A., & Amaranti, R. (2016). Teknologi Penyulingan Minyak Sereh Wangi Skala Kecil Dan Menengah Di Jawa Barat. Teknoin, 22(9), 664–672. https://doi.org/10.20885/teknoin.vol22.iss9.art4
Argani, H., Ghorbanihaghjo, A., Vatankhahan, H., Rashtchizadeh, N., Raeisi, S., & Ilghami, H. (2016). O efeito do extrato de semente
-200,00 0,00 200,00 400,00 600,00 %kenaikan %penurunan CMC
Simvastatin Stevia 100 Stevia 300 Stevia 700 Stevia 1000

## Journal of Pharmaceutical and Health Research

## ISSN 2721-0715 (media online)
DOI 10.47065/jharma.v4i1.3297
de uva vermelha na atividade do soro paraoxonase em doentes com hiperlipidemia leve a moderada. Sao Paulo Medical Journal, 134(3), 234–239. https://doi.org/10.1590/1516-3180.2015.01702312
Assaei,  R.,  Mokarram,  P.,  Dastghaib,  S.,  Darbandi,  S.,  Darbandi,  M.,  Zal,  F.,  Akmali,  M.,  &  Ranjbar  Omrani,  G.  H.  (2016).
Hypoglycemic Effect of Aquatic Extract of Stevia in Pancreas of Diabetic Rats: PPARγ-dependent Regulation or Antioxidant Potential. Avicenna Journal of Medical Biotechnology, 8(2), 65.
Dawley, J. S. (2014). Online di : Journal of Nutrition College, 3(1), 90–97. Hill, M. F., & Bordoni, B. (2022). Hyperlipidemia. StatPearls. Hutter, C. M., Austin, M. A., & Humphries, S. E. (2004). Familial Hypercholesterolemia, Peripheral Arterial Disease, and Stroke: A HuGE Minireview. American Journal of Epidemiology Hopkins Bloomberg School of Public Health All Rights Reserved, 160(5), 430–435. https://doi.org/10.1093/aje/kwh238
Izar, M. C. de O. (2018). Counterpoint: Flexibilization of Fasting for Laboratory Determination of the Lipid Profile in Brazil: Science or Convenience? Arquivos Brasileiros de Cardiologia, 111(5), 750–752. https://doi.org/10.5935/ABC.20180192
Jeppesen, P. B., Gregersen, S., Poulsen, C. R., & Hermansen, K. (2000). Stevioside Acts Directly on Pancreatic 13 Cells to Secrete Insulin: Actions Independent of Cyclic Adenosine Monophosphate and Adenosine Triphosphate-Sensitive K+-Channel Activity. Lenzen,  S.  (2008).  The  mechanisms  of  alloxan-  and  streptozotocin-induced  diabetes.  Diabetologia,  51(2),  216–226. https://doi.org/10.1007/S00125-007-0886-7/FIGURES/4
Milani, P., Rosa, M., Zorzenon, T., Hodas, F., Milani, P. G., Formigoni, M., Dacome, A. S., Monteiro, A. R. G., Mareze-Costa, C. E., &  Costa,  S.  C.  (2019).  Microencapsulation  by  Spray-drying  of  Stevia  Fraction  with  Antidiabetics  Effects. https://doi.org/10.3303/CET1975052
Mutmainah, Susilowati, R., Rahmawati, N., & Nugroho, A. E. (2014). Gastroprotective effects of combination of hot water extracts of turmeric  (Curcuma  domestica  L.),  cardamom  pods  (Ammomum  compactum  S.)  and  sembung  leaf  (Blumea  balsamifera  DC.) against aspirin–induced gastric ulcer model in rats. Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine. https://doi.org/10.12980/apjtb.4.2014c972
Roy, S. (2014). Atherosclerotic Cardiovascular Disease Risk and Evidence-based Management of Cholesterol. North American Journal of Medical Sciences, 6(5), 191. https://doi.org/10.4103/1947-2714.132916
Sekiou, O., Boumendjel, M., & Taibi, F. (2018). Mitigating effects of antioxidant properties of Artemisia herba alba aqueous  extract on hyperlipidemia and oxidative damage in alloxan-induced diabetic rats.  Article in Archives of Physiology and Biochemistry. https://doi.org/10.1080/13813455.2018.1443470
Waterhouse, G. I. N., Sun-Waterhouse, D., Su, G., Zhao, H., & Zhao, M. (2017). Spray-Drying of Antioxidant-Rich Blueberry Waste Extracts; Interplay Between Waste Pretreatments and Spray-Drying Process. Food and Bioprocess Technology, 10(6), 1074–1092. https://doi.org/10.1007/S11947-017-1880-9/METRICS
Yasukawa, K., Kitanaka, S., & Seo, S. (2002). Inhibitory Effect of Stevioside on Tumor Promotion by 12-O-Tetradecanoylphorbol- 13-acetate in Two-Stage Carcinogenesis in Mouse Skin Chart 1. Chemical Structures of Stevioside and Related Compounds. Notes Biol. Pharm. Bull, 25(11), 1488–1490.