## INTERVENSI ISOFLAVON KEDELAI TIDAK BERPENGARUH TERHADAP STATUS INFLAMASI DAN IMUNITAS PADA REMAJA DENGAN KEGEMUKAN
( Soy Isoflavone Intervention Did Not Affect the Inflammation Status and Immunity of Overweight/Obese Teenagers)
Mira Dewi 1* , Ali Khomsan 1 , dan Dadang Sukandar 1
1* Alamat korespondensi: Departemen Gizi Masyarakat, Fakultas Ekologi Manusia, Institut Pertanian Bogor, Bogor 16680. Telp: 0251-8621258; Fax: 0251-8622276; Email: miradewi2006@yahoo.co.id
1 Departemen Gizi Masyarakat, Fakultas Ekologi Manusia,  Institut Pertanian Bogor, Bogor 16680.

## ABSTRACT
Overweight/obesity is a condition that has been proven to be interrelated with chronic inflammation and compromised immune system due to disregulation of adipocytokine. The aim  of  the  present  study  was  to  evaluate  the  effect  of  soy  isoflavone  on  the  markers  of inflammation  and  immunity  of  overweight  or  obese  teenagers.  Eighteen  overweight  or obese teenagers, 9 boys and 9 girls each sex were randomized to one of three  intervention groups; 0 ml, 150 ml and 300 ml soy milk, equal to 0 g, 25 g and 50 mg isoflavone everyday for 30 days. The data collected were  food consumption,  plasma isoflavone concentration, plasma IL6 as indicator of inflammation, and lymphocyte and NK cell count as indicator of immunity. The study showed that nutrient intake of samples were still relatively low. The soy  milk  intervention  significantly  increased  plasma  isoflavone  concentration,  but  not significantly had contribution to the plasma IL6 concentration and lymphocyte and NK cell count. Several kind of food consumed by samples had contribution to the plasma isoflavone concentration,  and  lymphocyte  count.  Based  on  the  results,  it  was  suggested  that  soy isoflavone  intervention  does  not  affect  the  inflammation  status  and  immunity  of overweight/obese teenagers.
Key words: Overweight/obesity, teenagers, soy isoflavone, inflammation, immunity

## PENDAHULUAN
Prevalensi  kegemukan  pada  remaja dilaporkan  terus  meningkat  pada  seluruh bagian  dunia  (Speiser  2005).    Di  Indonesia, berdasarkan  laporan  Riset  Kesehatan  Dasar 2007,  prevalensi  obesitas  atau  kegemukan dengan indeks massa tubuh (IMT) lebih dari 30 pada  penduduk  usia  >  15 tahun  adalah  18,8  % dan  angka  ini  meningkat  dari  tahun  ke  tahun (Depkes  2008).    Hal  yang  sama  diduga  terjadi pada  penduduk  kelompok  anak  dan  remaja (Dwiriani  2006),  dan  dikhawatirkan  akan berakibat pada meningkatnya berbagai komplikasi  penyakit    seperti  diabetes  melitus tipe 2 dan kardiovaskular pada usia yang lebih lanjut.    Saat  ini  penyakit-penyakit  termasuk penyebab kematian paling banyak di dunia dan memakan  biaya  yang  sangat  besar  untuk penanggulangannya serta secara nyata menurunkan  kualitas  hidup  penderitanya (Satoto  1998).    Komplikasi  pada  masa  dewasa sulit  untuk  disembuhkan  sehingga  pencegahan
sejak  dini  pada  masa  remaja  menjadi  sangat penting  untuk  dilakukan  (Caterina  2006;  Cole 2000; Dietz 1997).
Sel  lemak  atau  adiposit  memproduksi berbagai  macam  adipositokin.  Pada  obesitas, terdapat  penurunan  produksi  beberapa  faktor yang  dalam  keadaan  normal  disintesis  oleh adiposit  seperti  adiponektin  dan  sebaliknya terdapat  peningkatan  pelepasan  adipositokin lain seperti resistin, angiotensinogen, plasminogen  activator  inhibitor-1,  TNF ,  ILs, leptin dan lain-lain (Bays 2002).  Pada keadaan demikian,  sel  lemak  menjadi  ‘disfungsional’ (Kantartzis  2006).  Lemak  disfungsional  ini menghasilkan  antara  lain  mediator  inflamasi yang  akan  mengakibatkan  timbulnya  inflamasi kronis  (Soobratte  2005).  Interleukin-6  (IL6), salah  satu  sitokin  inflamasi,  diekspresikan dalam  jumlah  besar  di  jaringan  adiposit  dan memainkan peran penting dalam inflamasi dan pengaturan fungsi sel T dan sel B.
Berbagai penelitian menunjukkan bahwa isoflavon,  senyawa  antioksidan  turunan  fenol yang  banyak  terdapat  pada  kedelai  dan  jenis polong-polongan  lain  memiliki  manfaat  positif terhadap  kondisi    inflamasi  dan  memperbaiki fungsi  imun  baik in  vitro maupun in  vivo (Borchers 2006). Keadaan-keadaan ini merupa- kan  dasar  kelainan  yang  terjadi  pada  kege- mukan,  namun  sejauh  ini  belum  ditemukan laporan penelitian mengenai manfaat isoflavon maupun  kedelai  terhadap  kondisi  kegemukan, baik  pada  hewan  maupun  manusia.  Kedelai sendiri  merupakan  sumber  makanan  yang banyak  tersedia,  mudah  didapat  dan  terjang- kau  oleh  masyarakat  sehingga  berpotensi untuk membantu mengatasi masalah tersebut.
Tujuan  utama  studi  ini  adalah  untuk mengevaluasi  efek  isoflavon  kedelai  terhadap penanda  inflamasi  dan  imunitas  pada  kelom- pok  remaja  usia  12-16  tahun  dengan  kege- mukan atau Indeks Masa Tubuh  (IMT) menurut umur di atas normal.  Penelitian ini diharapkan akan mempunyai arti penting untuk  perbaikan diet  pada  remaja-remaja  gemuk  sehingga dapat negatip kegemukan dapat diatasi.

## METODE

## Desain, Tempat, dan Waktu
Penelitian dilakukan di sekolah setingkat SMP  di  kota  Bogor  selama  6  bulan,  dari  bulan Juli    –  Desember  2009. Penelitian  dilakukan pada  anak  remaja  berusia  12-16  tahun  yang memiliki  Indeks  Massa  Tubuh  menurut  umur termasuk kategori overweight atau obese.
Penelitian  ini  merupakan  bagian  dari penelitian  mengenai  efektivitas  isoflavon kedelai untuk memperbaiki penanda inflamasi, stres  oksidatif  dan  status  imun  pada  remaja dengan  kegemukan.  Penentuan  banyaknya ulangan  didasarkan  pada  nilai  rata-rata  dan simpangan konsentrasi malondialdehida plasma sebagai  parameter  stres  oksidatif  dengan rumus sebagai berikut
2 2 2 2 ) (     Z Z n  
keterangan:
Z  =  suatu  nilai  sehingga  P(Z>  z  )=1-  ,  Z  adalah peubah acak normal baku Z  =  suatu  nilai  sehingga  P(Z>  z  )=1-  ,  Z  adalah peubah acak normal baku
Dengan  mengambil  =0.05,  power  test 1-  =0.84 lalu disubstitusikan ke dalam formula di atas maka dapat ditentukan jumlah ulangan
n= 3.4596. Banyaknya kelompok adalah 2 (laki- laki dan perempuan) x 3 taraf sehingga jumlah keseluruhan subjek adalah 18 orang.

## Bahan
Bahan  intervensi  yang  digunakan  adalah susu  kedelai  merek  S  yang  setelah  dianalisis diketahui  mengandung  isoflavon  sebanyak 0.17/mL.  Untuk  mencapai  dosis  yang  diingin- kan  yakni  25  g  dan  50  g/hari  isoflavon  serta mempertimbangkan kemudahan teknis pembe- rian,  maka  diberikan  susu  kedelai  sebanyak  0 ml  (kontrol),  150  ml  dan  300ml  setiap  hari selama  30  hari  pada  masing-masing  kelompok perlakuan.

## Jenis dan Cara Pengumpulan Data
Sebelum  intervensi,  pada  sampel  akan dilakukan  wawancara  mengenai  data  riwayat kesehatan  keluarga  dan  konsumsi  serta  peme- riksaan  fisik  dan  analisis  darah.    Pemeriksaan fisik dan analisis darah kembali dilakukan pada akhir intervensi.
Konsentrasi  isoflavon  pada  plasma  di- ukur  dengan  metode High  Performance  Liquid Chromatography . Sampel  plasma  dianalisa untuk  IL6  dengan  metode  ELISA.  Hitung limfosit dan sel NK diukur berdasarkan analisis dual-color flow cytometric .

## Pengolahan dan Analisis Data
Sesuai  dengan  model  matematis  yang telah dirumuskan maka analisis kovarians pada rancangan  acak  kelompok  dapat  dilakukan dengan  prosedur General  Linear  Model (GLM) yang ada pada SAS. Selanjutnya analisis regresi akan dilakukan  untuk memperoleh persamaan matematis  antara  kadar  isoflavon  serum setelah  percobaan,    kadar  IL  6  serum  setelah percobaan,  dan jumlah sel limfosit dan sel NK setelah percobaan dengan volume susu kedelai yang diberikan dan semua peubah pengganggu untuk remaja laki-laki dan remaja perempuan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Konsumsi,  Angka  Kecukupan  Gizi,  dan Tingkat Kecukupan Energi dan Protein
Pada  responden  dengan  perlakuan  susu kedelai  0  ml,  tingkat  kecukupan  energi  dan protein  masing-masing  hanya  mencapai  67% dan  72.6%.  Ini  mengindikasikan  masih  kurang- nya  asupan  gizi  penting  penunjang  pertum- buhan  anak.    Sementara  itu,  pada  responden dengan perlakuan susu kedelai 150 ml, tingkat kecukupan  protein  sudah  melebihi  100%  yakni
119.1%  tetapi  tingkat  kecukupan  energi  masih kurang  dari  100%  yakni  hanya  72%.  Pada responden  dengan  perlakuan  susu  kedelai  300 ml,  keragaannya  hampir  sama  dengan  res- ponden  susu  kedelai  0  ml  (tingkat  kecukupan energi 61%, protein 81.8%).
Rendahnya  asupan  energi  bisa  terjadi karena  mungkin  mereka  sedang  diit.    Sampel dalam  penelitian  ini  semuanya  dalam  kondisi overweight atau  obes.  amun  bisa  juga  terjadi karena sampel suka jajan yang mengenyangkan meski  sebenarnya  asupan  energinya  masih kurang.
Secara keseluruhan hal ini menunjukkan bahwa  asupan  gizi  yang  paling  baik  adalah pada kelompok dengan perlakuan susu kedelai 150 ml.  Ketidakcukupan gizi di kalangan siswa harus mendapat perhatian serius sebab mereka masih dalam tahap pertumbuhan.  Oleh sebab itu,  makan  dengan  jumlah  yang  cukup  ter- utama  makan  di  rumah  dan  tidak  hanya mengandalkan  jajanan  di  sekolah  perlu
ditekankan kepada mereka sebagai hal penting yang harus diperhatikan.

## Konsentrasi Isoflavon Plasma
Konsentrasi  isoflavon  secara  sangat nyata dipengaruhi oleh pemberian susu kedelai sebagai faktor. Hal ini serupa dengan beberapa penelitian  terdahulu  (Borchers et  al 2005). Dari  persaman  regresi  didapatkan  koefisien susu  kedelai  bernilai  positif,  hal  ini menunjukkan  bahwa  semakin  tinggi  konsumsi susu  kedelai  maka  semakin  tinggi  pula konsentrasi  isoflavon  plasma  (tabel  2,3,4). Sebaliknya, koefisien ubi jalar bernilai negatif, hal  ini  berarti  bahwa  semakin  tinggi  frekuensi konsumsi  ubi  jalar  maka  semakin  rendah  nilai konsentrasi isoflavon plasma. Model regresi ini dapat  menjelaskan  63  %  keragaman  isoflavon plasma  dengan  rincian  36  %  dijelaskan  oleh susu kedelai yang diminum dan 27 % dijelaskan oleh frekuensi konsumsi ubi
Tabel 1. Statistik Konsumsi, Angka Kecukupan dan Tingkat Kecukupan Gizi Subyek
Zat Gizi Konsumsi Angka Kecukupan Gizi Tingkat Kecukupan Mean SD Mean SD Mean SD 0 mL Energi (kkal) 1535 689 2250 164 67 27 Protein (g) 45.9 20.2 63.0 1.1 72.6 31.3 150 mL Energi (kkal) 1535 689 2250 164 67 27 Protein (g) 45.9 20.2 63.0 1.1 72.6 31.3 300 mL Energi (kkal) 1535 689 2250 164 67 27 Protein (g) 45.9 20.2 63.0 1.1 72.6 31.3
Tabel  2.    Analisis  Ragam  Model  Regresi  Konsentrasi  Isoflavon  Plasma  Akhir  sebagai  Peubah  Tak Bebas
Sumber keragaman Derajat bebas Jumlah kuadrat Kuadrat tengah F hitung Peluang Regresi 2.00 27.14 13.57 11.16 0.00 Galat 13.00 15.80 1.22 Total 15.00 42.94

## Tabel 3. Persamaan Regresi Konsentrasi Isoflavon Plasma Akhir
Variabel Independen Parameter estimate Standard error F hitung Peluang Intercep 1.69 0.45 14.16 0.00 Susu kedelai 0.01 0.00 18.44 0.00 Ubi -0.89 0.29 9.49 0.01

## Tabel 4. Kontribusi Peubah Bebas terhadap Konsentrasi Isoflavon Plasma Akhir
Variabel Independen R2  Parsial R2 Model F hitung Peluang Susu kedelai 0.36 0.36 7.99 0.01 Ubi 0.27 0.63 9.49 0.01
Pengaruh negatif dari konsumsi ubi jalar terhadap  konsentrasi  isoflavon  plasma  belum dapat  dijelaskan,  apakah  ubi  jalar  mengan- dung  unsur  atau  senyawa  yang  berinteraksi langsung dengan isoflavon atau mempengaruhi penyerapannya perlu diselidiki lebih lanjut.

## Konsentrasi Interleukin 6 Plasma
Pada  penelitian  ini,  pemberian  inter- vensi  susu  kedelai  tidak  mempengaruhi konsentrasi IL6 plasma pada semua kelompok. Studi  oleh  Jenkins  menunjukkan  bahwa  diet mengandung  isoflavon  dosis  tinggi  (73  mg/ hari)  meningkatkan  konsentrasi  IL6  pada subjek  usia  menengah  baik  laki-laki  maupun perempuan,  namun  dosis  rendah  (10  mg/hari) tidak.  Tidak terlihatnya pengaruh susu kedelai terhadap  konsentrasi  IL6  pada  penelitian  ini dapat  disebabkan  beberapa  hal,  yaitu; pertama, subyek merupakan kelompok remaja di mana kegemukan yang dialami kemungkinan besar belum berupa penumpukan adiposit yang disfungsional, sehingga status inflamasi karena ketidak  seimbangan  hormon  yang  dilepaskan oleh  sel-sel  adiposit  belum  terlihat  nyata, begitu  pula  belum  terdapat  gangguan  yang nyata  pada  sistem  imun,  serta  perubahan endotel  yang  berarti.    Kedua,  dosis  isoflavon yang  diberikan  belum  cukup  tinggi  untuk menimbulkan  perubahan.    Ketiga,  terdapat perbedaan  mekanisme  interaksi  estrogen dengan reseptornya atau metabolisme isoflavon dalam tubuh pada subyek remaja dan dewasa, terutama dengan kelompok menopause.    Keempat,  ekspresi  IL6  tidak secara  langsung  dipengaruhi  oleh  isoflavon seperti halnya IFN  .

## Hitung Limfosit dan Sel NK
Hasil  analisis  hitung  limfosit  dan  sel  NK sebelum  intervensi  menunjukkan  tidak  ada perbedaan  signifikan  antar  kelompok  per- lakuan.  Hitung  sel  NK  akhir    secara  sangat nyata dipengaruhi oleh hitung sel NK awal dan frekuensi  konsumsi  pisang.  Dari  persamaan regresi  dapat  dilihat  bahwa  koefisien  hitung sel  NK  akhir  dan  frekuensi  konsumsi  pisang bernilai  positif,  hal  ini  menunjukkan  bahwa semakin  tinggi  hitung  sel  NK  awal  dan frekuensi konsumsi pisang maka semakin tinggi
pula  hitung  sel  NK  akhir.  Model  regresi  ini dapat menjelaskan 87 % keragaman hitung sel NK  akhir  dengan  rincian  70  %  dijelaskan  oleh hitung  sel  NK  awal  dan  27  %  dijelaskan  oleh frekuensi  konsumsi  pisang.    Pisang  diketahui mengandung  beberapa  zat  gizi  yang  berman- faat  untuk  kesehatan,  namun  perannya  yang spesifik  terhadap  sistem  imun  khususnya  pada remaja gemuk sejauh ini belum diteliti.
Secara  keseluruhan,  pada  penelitian  ini pemberian  susu  kedelai  tidak  memberi pengaruh  signifikan  pada  hitung  limfosit  mau pun sel NK. Keragaman parameter sistem imun pada  akhir  perlakuan  lebih  disebabkan  oleh berbagai macam konsumsi pangan.  Lebih jauh lagi, keragaman sangat dipengaruhi oleh faktor lain seperti adanya infeksi sub klinis yang tidak diperhitungkan dalam analisis.
Studi-studi  pada  hewan  percobaan  dan manusia  menunjukkan  bahwa  isoflavon  dapat mempengaruhi  subset  limfosit  (Møller  1998). Pada  mencit  yang  diberi  genistein,  terdapat peningkatan  aktivitas  sel  NK.  Peningkatan aktivitas  sel  NK  juga  terjadi  pada Sprague Dawley betina  yang  diberi  makan  genistein. Begitu  pula  pada  wanita  yang  diberi  daidzein dan  genistein.    Mekanisme  dugaannya  adalah imunoregulasi  melalui  aksi  estrogenik.    Pada penelitian  ini  hal  yang  serupa  tidak  terbukti, dan  diduga  disebabkan  perbedaan  aktivitas estrogen  pada  kelompok  remaja.    Selain  itu, dosis  yang  diberikan  lebih  rendah  dari penelitian sebelumnya di mana aktivitas sel NK meningkat.

## KESIMPULAN
1. Asupan  energi  dan  protein  subyek  secara keseluruhan masih kurang.
2. Pemberian  susu  kedelai  dengan  dosis seperti  dalam  penelitian  ini  secara  nyata meningkatkan kadar isoflavon plasma
3. Susu  kedelai  tidak  berpengaruh  terhadap kadar IL6, hitung limfosit dan sel NK yang merupakan  indikator  status  inflamasi  dan imunitas.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Peneliti  mengucapkan  terimakasih  ke- pada  Dirjen  Dikti  yang  telah  mendanai  pene- litian ini, pihak sekolah SMP Bina Insani  Bogor beserta siswa dan orang tua siswa atas ijin dan bantuannya  dalam  melaksanakan  penelitian, Laboratorium Makmal Terpadu Imunoendokrin- ologi  FKUI  Jakarta,  dan  laboratorium  Biotek- nologi  LIPI  Bogor  atas  bantuannya  dalam  ana- lisis  serta  para  asisten  dan  mahasiswa  atas bantuan teknis di lapangan hingga penyusunan laporan.

## DAFTAR PUSTAKA
Bays.  2002.  Role  of  the  adipocyte,  free  fatty acids, and ectopic fat in pathogenesis of type  2  diabetes  mellitus:  peroxisomal proliferator-activated  receptor  agonists provide a rational therapeutic approach. Journal  of  Endocrinology  &  Metabolism 89(2), 463-478.
Borchers  TA.  2006.    Soy  isoflavones  modulate immune  function  in  healthy  post- menopausal  women.  American  Journal of Clinical Nutrition, 83(2), 421S-426S.
Caterina R. 2006. Nutritional mechanisms that influence
cardiovascular
disease.
American  Journal  of  Clinical  Nutrition, 83(5), 1118-1125.
Cole  TJ.  2000.  Establishing  a  standard definition  of  childhood  overweight  and obesity worldwide. International Survey. Br Med J 320, 1240-1243.
Depkes  2008.  Riset  Kesehatan  Dasar  2007. Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta.
Dietz,  WH.  1997.  Periods  of  risk  in  childhood for  the  development  of  adult  obesity. What  do  we  need  to  learn.  J  Nutr  127, 1884-1886.
Dwiriani  CM.  2006.  Faktor-faktor  yang  Berpe- ngaruh terhadap Kegemukan Pada Anak. Review  Literatur.  Sekolah  Pascasarjana IPB, Bogor.
Kantartzis K. 2006. The relationships of plasma adiponectin  with  a  favorable  lipid profile,  decreased  inflammation,  and less ectopic fat accumulation depend on Adiposity.  Clinical  Chemistry . 52,  1934- 1942.
Satoto  S.  1998.  Kegemukan,  Obesitas  dan Penyakit  Degeneratif:  Epidemiologi  dan Strategi  Penanggulangannya.  Di  dalam Prosiding  Widya  Karya  Nasional  Pangan dan Gizi VII. LIPI, Jakarta.
Soobratte  MA.  2005.  Phenolics  as  potential antioxidant  therapeutic  agents:  mecha- nism  and  actions.  Mutation  Research 579, 200–213.
Speiser  PW et.al. 2005.  Consensus  statement: childhood  obesity.  J  Clinic  Endocrinol  & Metab 90(3), 1871-1881.