## Original Research
EFEK SAMPING EKSTRAK ETANOL DAUN Moringa oleifera LAM.

## TERHADAP HEWAN UJI Rattus norvegicus
Rudi Saputra a , Muhammad Aminuddin b , Naila Cantika Salsabila a , Nabiela An’nisa Putri a ,
Dading Satrio Setiawan a , Abdillah Iskandar c , Iskandar Muda b
a Program Studi Kedokteran, Fakultas Kedokteran, Universitas Mulawarman, Samarinda, Indonesia
b Laboratorium Biomedik, Program Studi D3 Keperawatan, Fakultas Kedokteran, Universitas Mulawarman, Samarinda, Indonesia c Laboratorium Mikrobiologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Mulawarman, Samarinda, Indonesia
Korespondensi: iskandar@fk.unmul.ac.id

## Abstrak
Moringa oleifera Lam. (MoL) telah dikenal luas penggunaannya dalam dunia medis. Tanaman ini dapat digunakan sebagai analgesik, antiinflamasi, antipiretik, antikanker, dan lain sebagainya. Efek samping obat adalah setiap efek yang timbul pada tubuh yang kemunculannya tidak diinginkan atau diharapkan. Pada efek  samping  obat  dapat  muncul  berbagai  macam  manifestasi  klinis,  hingga  kematian  dan  dianggap sebagai bentuk toksisitas. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui tanda dan gejala efek samping pemberian ekstrak etanol daun MoL. Daun MoL diperoleh dari pasar tradisional Sungai Dama, Samarinda. Daun ini dimaserasi dengan pelarut etanol 96% selama 24 jam. Sebanyak 12 tikus Wistar albino jantan digunakan  sebagai  subjek  penelitian.  Tikus  ini  dibagi  ke  dalam  4  kelompok,  yaitu  kelompok  kontrol (diberikan akuades) dan tiga kelompok perlakuan yang masing-masing diberi ekstrak etanol MoL 5%, 10%, dan 15%. Setiap tikus diberi satu dosis sediaan uji per oral. Analisis statistik menggunakan uji One Way ANOVA (p<0,05). Pada subjek penelitian tidak terjadi perubahan tanda klinis yang signifikan. Secara rata- rata, tidak ditemukan adanya penurunan berat badan pada subjek penelitian. Pada hasil analisis statistik menunjukkan tidak adanya perbedaan yang signifikan perubahan berat badan antarkelompok (p=0,980). Uji yang dilakukan pada kelompok perlakuan MoL 5%, 10%, dan 15% tidak menunjukkan efek samping.
Kata kunci: efek samping, Moringa oleifera Lam.

## Abstract
Moringa oleifera Lam. (MoL) has been widely known for its use in the medical world. This plant can be an analgesic, anti-inflammatory, antipyretic, anticancer, and so on. An adverse effect is any effect that occurs in the body that is not desired or expected. The adverse effects of drugs can appear in various kinds of clinical manifestations, up to death, and are considered a form of toxicity. This study aims to know the sign and symptoms of adverse effects after MoL extract treatment. MoL leaves were obtained from the Sungai Dama traditional market, Samarinda. The leaves were macerated with 96% ethanol solvent for 24 hours. A total of male albino Wistar rats were used as research subjects. The rats were divided into four groups, namely the control group (giving aquades), and the three treatment groups were given 5%, 10%, and 15% extract ethanol of MoL. Each rat was given a single dose test orally. Statistical analysis using One
Way ANOVA with significance p<0.05. On the research subject were no significant changes in clinical signs. On average, there no weight loss was found. There was no significant difference between groups in body weight change (p=0.980). The test  conducted in the 5%, 10%, and 15% MoL treatment  groups did not show adverse effects.
Key words: adverse effects, Moringa oleifera Lam.

## PENDAHULUAN
Moringa  oleifera Lam.  (MoL)  merupakan tanaman dari  famili Moringaceae yang berasal dari India.  Tumbuhan  ini  sangat  berkhasiat  sehingga biasa  digunakan  sebagai  makanan,  baik  oleh manusia maupun hewan. Tanaman ini tersebar luas di daerah tropis dan subtropis. 1,2 MoL memiliki sifat tumbuh  yang  cepat  dan  toleran  terhadap kekeringan. Selain itu, MoL juga termasuk tanaman yang  memiliki  nilai  ekonomi  yang  tinggi.  Bahkan, MoL mendapat julukan “The Magic Tree” dari World Health  Organization (WHO),  karena  memiliki kandungan dan khasiat yang luar biasa. 3,4
MoL  telah  dikenal  luas  penggunaannya  dalam dunia medis. Tanaman ini dapat digunakan sebagai analgesik, antiinflamasi, antipiretik, antikanker, dan lain sebagainya. Tanaman ini mengandung metabolit sekunder  yang  dapat  menyembuhkan  berbagai penyakit,  seperti:  flavonoid,  polifenol,  alkaloid, triterpenoid,  isotiosianat,  tanin,  saponin,  dan  lain- lain. 2,5,6 Namun,  MoL  yang  merupakan  sumber nutrisi  yang  baik  juga  memiliki  beberapa  efek samping yang merugikan, baik sebagai bahan pangan maupun obat herbal. 7
Efek  samping  obat  adalah  setiap  efek  yang timbul  pada  tubuh  yang  kemunculannya  tidak diinginkan  atau  diharapkan.  Efek  ini  umumnya melibatkan  sistem  pencernaan. 8 Biasanya  efek samping  obat  terjadi  setelah  beberapa  saat konsumsi obat. 9 Efek samping obat sangat berkaitan erat  dengan  besarnya  dosis  yang  digunakan. 10
Semakin tinggi dosis yang digunakan, maka semakin tinggi efek samping obat yang muncul.
Efek  samping  obat  dapat  dikelompokkan menjadi  2  kategori,  yaitu  efek  samping  yang  dapat diperkirakan  dan  efek  samping  yang  tidak  dapat diperkirakan.  Efek  samping  yang  tidak  diperkirakan sulit  diperkirakan  sebelumnya,  karena  sering  tidak tergantung  dosis  dan  terjadi  pada  sebagian  kecil populasi. 11 Pada  efek  samping  obat  dapat  muncul berbagai macam manifestasi klinis, hingga kematian. 9,12 Gejala  yang  muncul  dapat  berupa gejala minor, seperti mengantuk hingga efek serius, seperti  kerusakan  hati. 13 Efek  samping  obat  dapat dianggap sebagai bentuk toksisitas. 14,15
Beberapa penelitian menunjukkan adanya efek samping  dari  penggunaan/konsumsi  MoL.  MoL dapat menyebabkan kerusakan hati dan ginjal dalam penggunaan  yang  lama. 16 Laporan  kasus  oleh Witharana, et  al. 17 menunjukkan  adanya  kelainan kulit  yang  serius,  yaitu Stevens-Johnson  Syndrome (SJS)  setelah  mengonsumsi  daun  MoL.  Selain  itu, Ebhohon, et  al. 18 menemukan  adanya  embolisme paru akibat mengonsumsi daun MoL. Daun MoL juga dapat menyebabkan distensi gas dan diare. 7
Berdasarkan  pernyataan  di  atas,  tujuan  dari penelitian kami adalah untuk mengetahui tanda dan gejala efek samping pemberian ekstrak etanol daun Moringa oleifera Lam.

## METODE PENELITIAN
Persiapan Daun Moringa oleifera Lam.
Daun  MoL  diperoleh  dari  pasar  tradisional Sungai  Dama,  Samarinda,  Kalimantan  Timur, Indonesia.  Daun  MoL  dikumpulkan  dalam  plastik bening dan diberi label. Kemudian, sampel tersebut
diserahkan  ke  Laboratorium  Sentral  Universitas Padjadjaran untuk dilakukan ekstraksi.
Pembuatan Ekstrak Moringa oleifera Lam.
Daun  MoL  yang  diperoleh  dicuci  bersih  dan dikeringkan dalam lemari pengering. Setelah kering, daun diblender hingga halus dan dimaserasi dengan pelarut  etanol  96%  selama  24  jam  dan  sesekali diaduk.  Kemudian,  disaring  menggunakan  corong B ü cnher.  Filtrat  yang  dihasilkan  dari  proses  filtrasi dipekatkan  menggunakan rotary  evaporator pada suhu  40 ℃ sampai  diperoleh  ekstrak  pekat.  Ekstrak ini  disuspensikan  menggunakan  akuades  sesuai kebutuhan. Ekstrak daun Moringa oleifera Lam. yang dihasilkan disimpan pada suhu 4 ℃ untuk digunakan pada proses penelitian selanjutnya.

## Hewan Percobaan
Sebanyak  12  hewan  uji  digunakan  sebagai subjek penelitian. Tikus Wistar albino jantan ( Rattus norvegicus )  berumur  8-12  minggu  dengan  berat badan  150-250  g,  tampak  aktif  dan  sehat  dengan bulu  bersih  dan  mata  jernih  dipilih  sebagai  subjek. Hewan  uji  diperoleh  dari Malang  Murine  Farm , Malang, Indonesia. Setiap tikus ditempatkan dalam kandangnya  masing-masing  dengan  pengaturan suhu (22 ± 3 ℃ ). Prosedur penelitian yang dilakukan ini  telah  mendapat  persetujuan  kelaikan  etik  dari Komisi Etik Penelitian
Kesehatan
Fakultas Kedokteran  Universitas  Mulawarman  (No.75/KEPK- FK/IX/2021).
Uji Efek Samping Ekstrak Moringa oleifera Lam.
Hewan uji yang ada dibagi menjadi 4 kelompok yaitu kelompok kontrol (3), kelompok perlakuan 5% MoL  (3),  kelompok  perlakuan  10%  MoL  (3),  dan kelompok perlakuan 15% MoL (3). Pengelompokkan tikus dilakukan secara acak. Setiap tikus ditempatkan dalam  kandang  masing-masing  dan  diberi  makan secara ad  libitum .  Setiap  tikus  diamati  tanda-tanda toksisitas  (meliputi  sianosis,  tremor,  salivasi,
piloereksi,  feses,  muntah,  lakrimasi, straub  tail ), berat  badan,  dan  mortalitas  selama  14  hari  untuk data kualitatif.
Pada  kelompok  kontrol  diberikan  akuades, sedangkan  ketiga  kelompok  perlakuan  masing- masing diberi ekstrak etanol MoL 5%, 10%, dan 15%. Setiap  tikus  diberi  2  mL  sediaan  uji  secara  oral. Pemberian  akuades  dan  ekstrak  etanol  MoL dilakukan menggunakan sonde tikus agar sediaan uji dapat langsung mencapai lambung.
Setelah itu, setiap subjek penelitian diobservasi selama  1  jam  pertama  dan  dilanjutkan  secara periodik  setiap  4  jam  selama  24  jam  pertama. Kemudian, observasi dilakukan sehari sekali selama 14 hari. Setiap timbul dan hilangnya gejala toksisitas dicatat  secara  sistematis  dalam  catatan  individual. Bila subjek penelitian menunjukkan kondisi sekarat, distres, atau gejala nyeri yang berat, maka dilakukan sacrificed lebih dini dan dihitung sebagai hewan mati akibat pemberian sediaan uji.  Sebaliknya, jika tidak, maka  observasi  dilanjutkan  selama  14  hari.  Setiap subjek penelitian yang mati, baik karena efek toksik yang berat maupun sakit dimusnahkan dengan cara penguburan.
Pada  hari  ke-14,  semua  subjek  penelitian dilakukan sacrificed .  Pada  hari  sebelumnya,  setiap tikus  dipuasakan  (tidak  makan  dan  minum)  untuk menghindari aspirasi pada saat dibius. Setiap subjek penelitian  dibius  menggunakan  ketamine  dengan sebanyak  0,3  ml.  Kemudian,  hati  dan  ginjal  setiap tikus diambil dengan cara pembedahan. Teknik yang digunakan  untuk  melakukan sacrificed adalah dengan cervical dislocation .
Perhitungan Hepatosomatic  Index dan Kidney Somatic Index
Perhitungan Hepatosomatic  Index dan Kidney Somatic Index dilakukan menggunakan rumus 19 :
a. Hepatosomatic Index (HIS)= fresh weight of liver
(g) × 100/ fresh body weight (g) .
b. Kidney-somatic  Index (KIS)= fresh  weight  of kidney (g) × 100/ fresh body weight (g) .

## Analisis Statistik
Data  kuantitatif  pada  penelitian  ini,  yaitu berupa berat hati dan ginjal, serta berat badan dari setiap  kelompok  uji  diolah  menggunakan  uji normalitas Shapiro-Wilk .  Jika  data  berdistribusi normal,  maka  analisis  dilanjutkan  menggunakan uji One  Way  ANOVA .  Namun  jika  tidak  berdistribusi normal, maka digunakan uji alternatif nonparametrik,  uji Kruskal-Wallis .  Signifikansi statistik  diterima  jika  p<0,05.  Selain  itu,  data kuantitatif juga dinyatakan sebagai mean ± SD.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil
Pengamatan  terhadap  hewan  uji  dilakukan setiap  hari  dan  dicatat  jika  terdapat  indikasi toksisitas  melalui  perubahan  perilaku  atau  tanda fisik  yang  tidak  normal.  Pengamatan  ini  dilakukan mulai  dari  pemberian  dosis  pertama  sampai  hari terakhir penelitian.
Berat  badan  tikus  dari  masing-masing kelompok diamati dari sebelum perlakuan sampai 14 hari.  Dari  grafik,  secara  rata-rata  ditemukan peningkatan  berat  badan  pada  tikus,  baik  pada kelompok  kontrol  maupun  perlakuan,  kecuali  pada hari ke-14 (Gambar 1).
Pada  perubahan  berat  badan  tikus,  kami mendapatkan  perubahan  yang  bersifat  fluktuatif setiap  hari  pada  setiap  kelompok.  Puncak pertambahan  berat  badan  kelompok  perlakuan terjadi pada hari ke-4 setelah pemberian sediaan uji, sedangkan pada kelompok kontrol terjadi pada hari ke-5 (Gambar 2).
Gambar 1. Berat Badan Subjek Penelitian Selama 14 Hari
0 50 100 150 200 250 300 350 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2 1 3 1 4 RAT A -RAT A BE RAT BAD AN HARI Kontrol (SEM = 2,00)
Kelompok Perlakuan 5% (SEM = 2,68) Kelompok Perlakuan 10% (SEM = 2,98) Kelompok Perlakuan 15% (SEM = 3,12)
Gambar 2. Perubahan Berat Badan Subjek Penelitian Selama 14 Hari
Uji normalitas dilakukan pada data HIS, KIS, dan  perubahan  berat  badan  subjek  penelitian. Hasilnya  menunjukkan  data  berdistribusi  normal pada HIS (p>0,05) dan tidak berdistribusi normal pada KIS dan perubahan berat badan (p<0,05).
Pada  HIS,  kami  tidak  mendapatkan perbedaan yang signifikan antarkelompok (p=0,915). Begitu pula  yang kami dapatkan pada KIS (p=0,457). Hasil ini dapat terlihat pada Tabel 1 dan Tabel 2.
Selain  itu,  kami  juga  mendapatkan  tidak adanya  perbedaan  signifikan  perubahan  berat badan subjek penelitian antara kelompok kontrol dan  perlakuan  (p=0,980).  Pada  kelompok perlakuan  ekstrak  MoL  15%, mengalami pertambahan  berat  badan  yang  paling  tinggi secara  rata-rata  dibandingkan  kelompok  lainnya (Tabel 3).
Tabel 1. Nilai Hepatosomatic Index
Kelompok n = 12 Mean ± SD p value Kontrol 2,87 ± 0,35 5% MoL 2,93 ± 0,74 0,915 10% MoL 3,10 ± 0,20 15% MoL 3,03 ± 0,25
Keterangan: 5%, 10%, dan 15% MoL = Kelompok perlakuan menggunakan 5%, 10%, dan 15% ekstrak daun Moringa oleifera Lam. Uji statistik menggunakan One Way ANOVA , signifikansi 5%.
Tabel 2. Nilai Kidneysomatic Index Kelompok n = 12 Mean ± SD p value Kontrol 0,90 ± 0,17 5% MoL 1,20 ± 0,30 0,457 10% MoL 0,90 ± 0,10 15% MoL 0,97 ± 0,06
-40 -20 0 20 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2 1 3 1 4 PE RU BAHAN BE RAT BAD AN HARI Kontrol (SEM = 1,75)
Kelompok Perlakuan 5% (SEM = 1,94)
Kelompok Perlakuan 10% (SEM = 1,68) Kelompok Perlakuan 15% (SEM = 2,15)
Keterangan: 5%, 10%, dan 15% MoL = Kelompok perlakuan menggunakan 5%, 10%, dan 15% ekstrak daun Moringa oleifera Lam. Uji statistik menggunakan Kruskal-Wallis , signifikansi 5%.
Tabel 3. Analisis Statistik Perubahan Berat Badan Tikus
Kelompok n = 12 Mean ± SD p value Kontrol 0,55 ± 6,56 5% MoL 0,44 ± 7,27 0,980 10% MoL 0,83 ± 6,29 15% MoL 1,02 ± 8,04
Keterangan: 5%, 10%, dan 15% MoL = Kelompok perlakuan menggunakan 5%, 10%, dan 15% ekstrak daun Moringa oleifera Lam. Uji statistik menggunakan Kruskal-Wallis , signifikansi 5%.

## Pembahasan
Pengamatan  tanda-tanda  klinis  dilakukan secara kualitatif dengan melihat adanya perbedaan  tingkah  laku  pada  kelompok  kontrol
dan kelompok perlakuan. Berdasarkan pengamatan tanda-tanda klinis, kami menemukan bahwa  tidak  ada  perubahan  tanda  klinis  yang signifikan  pada  semua  tikus  dari  perlakuan  yang berbeda. Semua tikus ditemukan hidup dari awal pemberian dosis hingga akhir penelitian.
Hati  dan  ginjal  adalah  organ penting  dalam proses  detoksifikasi.  Adanya  perubahan  ukuran pada  kedua  organ  ini  menunjukkan  sifat  toksik dari suatu zat. Hal ini dapat dilihat pada HIS dan KIS yang diuji secara statistik. 19 Pada penelitian ini tidak terdapat perbedaan yang signifikan pada HIS (p=0,915) dan KIS (p=0,457). Hasil ini menunjukkan  tidak  adanya  perubahan  ukuran yang mengindikasikan bahwa ekstrak etanol daun
M. oleifera Lam . bersifat nontoksik.
Lebih lanjut, penelitian kami juga menunjukkan bahwa terdapat peningkatan berat badan pada tikus dari kelompok perlakuan dalam waktu 4 jam, 48 jam, 7 hari, dan 14 hari setelah perlakuan  ekstrak  MoL.  Kami  tidak  menemukan adanya  penurunan  berat  badan  yang  signifikan pada  subjek  penelitian.  Penurunan  berat  badan sering  digunakan  sebagai  indikator  pertama  dari
efek  samping  obat. 20 Dosis  dianggap  toksik  jika obat menyebabkan penurunan berat  badan 10% atau  lebih.  Kondisi  ini  dapat  dianggap  sebagai tanda  toksisitas  meskipun  tidak  ada  perubahan lain yang terjadi. 21
Kami  menemukan  tidak  adanya  perbedaan yang  signifikan  pada  perubahan  berat  badan antarkelompok (p=0,980). Hal ini juga mengindikasikan bahwa ekstrak etanol daun MoL 5%,  10%,  dan  15%  menunjukkan  efek  samping nontoksik.  Penelitian  lain  yang  dilakukan  oleh Osman, et al. 22 menunjukkan bahwa LD 50 ekstrak etanol  daun  MoL  lebih  dari  6616,7  dosis/mg. Selain itu, ekstrak MoL juga tidak berbahaya pada hewan  uji.  Hasil  senada  juga  didapatkan  oleh Awodele, et  al. 23 Penelitian  yang  dilakukan  oleh Adeyemi, et  al. 24 mendapatkan  LD 50 ekstrak etanol MoL sebesar 800 mg/kg. Meski pun begitu, di  antara  semua  kelompok  uji,  kelompok perlakuan ekstrak MoL 15% mengalami pertambahan  berat  badan  paling  tinggi.  Apakah hal  ini  terjadi  karena  kandungan  nutrisi  yang terdapat  di  dalam  daun Moringa  oleifera  Lam. , atau ada alasan lain?
Pada  hari  ke-14,  terjadi  penurunan  berat badan pada semua tikus. Kemungkinan besar hal ini terjadi akibat puasa yang dilakukan. Puasa ini
dilakukan  untuk  menghindari  aspirasi  saat pemberian obat bius pada sacrificed .

## SIMPULAN
Uji yang dilakukan pada kelompok perlakuan MoL  5%,  10%,  dan  15%  tidak  menunjukkan  efek samping.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Kami  mengucapkan  terima  kasih  kepada Fakultas  Kedokteran  Universitas  Mulawarman yang  telah  bersedia  mendukung  kami  dalam melaksanakan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Gandji K, Chadare FJ, Idohou R, et al. Status and  utilisasion  of Moringa  oleifera Lam.:  A review. African  Crop  Science  Journal .  2018; 26 (1) : 138-42.
2. Bhattacharya  A,  Tiwari  P,  Sahu  PK,  et  al.  A review of the phytochemical and
pharmacological  characteristics  of Moringa oleifera . Journal  of  Pharmacy  BioAllied
Sciences . 2018; 10 (4) : 181-6.
3. Heuzé  V, Tran  G, Hassoun  P, et  al. Moringa
(Moringa oleifera) .
https://www.feedipedia.org/node/124 (2019).
4. Lembaga  Ilmu  Pengetahuan  Indonesia. Kelor,  Tanaman  ajaib  dengan  beragam manfaat . http://www.biologi.lipi.go.id/index.php/9- yt-sample-data/category1/1003-kelor- tanaman-ajaib-dengan-beragam-manfaat (2020).
5. Devi  TG,  Revathi  A,  Gopinath  LR,  et  al. Qualitative  and  quantitative  analysis  of secondary  metabolites  of Moringa  oleifera and  its  anticancer  activity. International Journal  of  Advances  in  Interdisciplinary Research . 2017; 4 (3) : 3-4.
6. Berawi KN, Wahyudo R, Pratama AA. Potensi terapi Moringa oleifera (kelor) pada penyakit
degeneratif. Jurnal  Kedokteran  Universitas Lampung . 2019; 3 (1) : 211-3. 7. Majumdar M. Side effect of Moringa/drumstick . https://www.medindia.net/patients/lifestyl eandwellness/side-effects-of-moringa.htm (2018).
8. Healthdirect. Medicine  and  side  effects . https://www.healthdirect.gov.au/medicine- and-side-effects (2020).
9. Rusli. Bahan  ajar  farmasi:  Farmasi  klinik . Jakarta. 2018.
10. NPS  Medicine  Wise. Medicine  and  side effects . https://www.nps.org.au/consumers/medici ne-and-side-effects#what-does-common- side-effect-mean? (2021).
11. Widyaningsih  W. Waspada  efek  samping obat . https://uad.ac.id/id/waspada-efek- samping-obat/ (2013).
12. Badan  Pengawas  Obat  dan  Makanan Republik  Indonesia. Modul  farmakovigilans untuk tenaga profesional kesehatan: Proyek
“ ensuring  drug  and  food  s afety” .  Jakarta.
2020.
13. Campbell  R.  Drug  toxicity. Journal  of Pharmaceutical Sciences and Drug Development . 2020; S2 : 8.
14. Badan  Pengawas  Obat  dan  Makanan Republik  Indonesia. Pedoman  uji  toksisitas praklinik secara in vivo . Jakarta. 2020.
15. Organisation for Economic Co-operation and Development  (OECD). Test  no.  425:  acute oral  toxicity:  up-and-down  procedure . https://www.oecd.org/env/test-no-425- acute-oral-toxicity-up-and-down-procedure- 9789264071049-en.htm (2022).
16. Oyagbemi AA, Omobowale TO, Azeez IO, et al.  Toxicological  evaluations  of  methanolic extract of Moringa oleifera leaves in liver and kidney  of  male  wistar  rats. Journal  of  Basic and  Clinical  Physiology  and  Pharmacology . 2013; 24 (4) : 309-10.
17. Witharana  EWRA,  Wijetunga  WMGASTB, Wijesinghe  SKJ.  Stevens-johnson  syndrome
(SJS)  following  murunga  leaf  ( Moringa
oleifera ) consumption. Ceylon Medical Journal . 2018; 63 (4) : 188-9.
18. Ebhohon  E,  Miller  D. Moringa  oleifera leaf extract induced pulmonary embolism-a case report. International  Journal  of  Emergency Medicine . 2022; 15 (16) : 1-3.
19. Muda  I,  Atik  N.  Organosomatic  indices  of acute  oral  toxicity  study-up  and  down procedure on extract Psidium guajava Linn. fruit in mice. Research Journal of Chemistry and Environment . 2020; 24 (3) : 20-2.
20. Atik  N,  Muda  I,  Rahmadi  AR,  Achadiyani, Djunaedy DD.  Phytochemical  screening and histology  appearance  of  acute  oral  toxicity study on ethanol extract of Psidium guajava Linn.  fruit  in  mice. Asian  Journal  of
Pharmaceutical and Clinical Research . 2019; 12 (1) : 352.
21. Lobo VC, Phatak A, Chandra N. Acute toxicity studies  of  some  Indian  medicinal  plants . Pharmacognosy Journal . 2010; 2 (8) : 207-10.
22. Osman  HM,  Shayoub  M,  Babiker  EM,  et  al. Assessment  of  acute  toxicity  and  LD 50 of Moringa  oleifera ethanolic  leave  extract  in albino  rats  and  rabbits. Journal  of  Medical and Biological Science Research . 2015; 1 (4) : 40-3.
23. Awodele  O,  Oreagba  IA,  Odoma  S,  et  al. Toxicological evaluation of the aqueous leaf extract of Moringa oleifera Lam. ( Moringaceae ). Journal of Ethnopharmacology . 2012; 139 (2) : 330-6. 24. Adeyemi  S,  Larayetan  R,  Onoja  AD,  et  al. Anti-hemorrhagic activity of ethanol extract of Moringa  oleifera leaf  on  envenomed albino rats. Scientific African . 2021; 12 : 5-9.