Identifikasi Kandungan Babi dalam Bahan Perekat Gigi Tiruan dan Soft Denture Lining yang Digunakan di Bidang Prostodontik
Identification of Porcine in Denture Adhesive and Soft Denture Lining Used in Prosthodontics
Ika Andryas, Hubban Nasution
Staf pengajar Departemen Prostodonsia, Fakultas Kedokteran Gigi, Universitas Sumatera Utara Corresponding email to: andryas_doc@yahoo.co.id
Received: 8 Mei 2024; Revised: 3 June 2024; Accepted: 24 June 2024; Published: 29 June 2024

## Abstrak
Penggunaan bahan kedokteran gigi merupakan salah satu hal penting dalam perawatan gigi. Sejumlah besar bahan kedokteran gigi yang tersedia di pasar merupakan hasil impor dari luar negeri. Berkaitan dengan  hal  ini,  terdapat  ketidakpastian  mengenai  status  kehalalan  dari  bahan  kedokteran  gigi  yang digunakan untuk perawatan gigi. Hal ini telah menimbulkan kekhawatiran di kalangan Muslim yang ingin mencari perawatan gigi dengan zat yang telah terbukti valid status kehalalannya. Penelitian ini bertujuan untuk mengidentifikasi dan menguji kemungkinan keberadaan kandungan babi dalam bahan kedokteran  gigi  yang  digunakan  di  bidang  prostodontik  terutama  pada  perekat  gigi  tiruan  dan soft denture lining (n=4). Penelitian ini dilakukan dengan menggunakan dua pendekatan metodologi, yaitu ektraksi  DNA  dan  analisis  PCR Real-Time. Preparasi  sampel  dilakukan  dengan  melisiskan  20  mg sampel  dengan lysis  buffer ,  divorteks,  inkubasi,  dan  disentrifugasi.  Kemudian  sampel  disimpan dibawah  suhu  4˚C  sampai  sampel  siap  untuk  digunakan.  Analisis  dilakukan  berdasarkan  kurva amplifikasi  dan  nilai  Ct  pada yellow  channel dan green  channel menggunakan EASYFAST™ PIG/Suidae  detection  &  Quantification  kit  (Progenus  s.a,  Gembloux,  Belgium) .  Penelitian menunjukkan  bahwa  tiga  dari  empat  sampel  (IPG-01,  PG-02,  dan  IPG-03)  mengandung  DNA vertebrata.  Kemudian  sampel  dianalisis  berdasarkan green  channel (FAM).  Hasil  penelitian menunjukkan bahwa tidak ada bahan perekat gigi tiruan yang teridenfikasi kandungan babi.
Kata  kunci :  Identifikasi porcine ,  ikatan  rantai  polimer,  bahan  kedokteran  gigi,  t issue  conditioning , bahan perekat gigi tiruan.

## Abstract
The  utilisation  of  dental  materials  represents  as  one  of  the  fundamental  requirements  of  dental treatment. A considerable number of dental products available on the market have been imported from abroad. Despite this, there remains a lack of clarity surrounding the halal status of the materials used for  dental  care.  This  has  caused  concern  amongst  Muslims  who  wish  to  seek  dental  care  with  a substance that has been proven to be valid for its halal status. This study identified and examined any potential  for  porcine  contamination  in  prosthodontic dental  materials,  mainly  in  tissue  conditioning and  dental  adhesives  (n=4).  This  research  was  conducted  using  two  distinct  methodological approaches, namely DNA  extraction from dental materials and polymerase chain reaction (PCR) in real-time. The sample preparation process involved lysing 20 milligrams of tested materials in lysis buffer, vortexing, incubating, and centrifuging. Once the samples were prepared, they were kept at a temperature of 4°C until ready to be used. The analysis was based on the amplification curve and Ct score in yellow and green channels using EASYFAST™ PIG/Suidae detection & Quantification kit (Progenus s.a, Gembloux, Belgium). This research found that three out of four samples (IPG-01, IPG- 02,  and  IPG-03)  contain  vertebrae  DNA.  Afterward,  the  samples  were  analyzed  based  on  green channel (FAM). This research showed that all denture adhesives did not contain porcine.
Keywords: Porcine  identification,  polymerase  chain  reaction,  dental  materials,  tissue  conditioning, denture adhesives
PENDAHULUAN
Pada  bidang  perawatan  kesehatan  gigi, penggunaan  bahan  kedokteran  gigi (dental material) merupakan komponen tidak terpisahkan  dari  setiap  perawatan  gigi. 1–3 Komposisi  bahan,  sifat  dan  cara  manipulasi bahan  perekat  gigi  tiruan (denture  adhesive) dan soft  denture  lining telah  dibahas  secara khusus  di  bidang  Prostodonsia.  Terdapat peningkatan  permintaan  akan  produk  halal dalam skala global. Permintaan ini tidak hanya terbatas  pada  makanan  dan  minuman,  tetapi juga  obat-obatan,  termasuk  vaksin,  obat- obatan, dan bahan gigi. 4,5
Pemerintah
Indonesia telah menunjukkan pendekatan konstruktif terhadap isu  halal,  termasuk  yang  berkaitan  dengan makanan,  farmasi  dan  kosmetik.  Hal  ini dibuktikan  dengan  disahkannya  beberapa peraturan  per  undang-undangan,  termasuk Undang-Undang  No.  33  tahun  2014  tentang Jaminan Produk Halal. (UUJPH). 6–8 Namun  demikian,  peraturan-peraturan yang  disebutkan  di  atas  tidak  memiliki keseragaman,  redundansi,  dan  pendekatan yang  sistematis.  Dengan  demikian,  peraturan- peraturan  tersebut  tidak  mampu  menjadi landasan  hukum  yang  kuat  dan  tidak  dapat secara  spesifik  mengikat  produsen  (pelaku usaha)  dan  jaminan  terhadap  masalah  produk halal.  Kurangnya  kepastian  hukum  yang mengatur produk halal ini merupakan masalah yang signifikan, terutama mengingat kebutuhan  dan  urgensi  jaminan  untuk  produk ini,  terutama  dalam  kaitannya  dengan perlindungan  konsumen  dan  perdagangan global. 8,9
Perlu  menjadi  perhatian  bahwa beberapa  produk  mungkin  mengandung bahan-bahan  yang  tidak  Halal,  yang  tidak secara eksplisit dinyatakan pada label produk. Selain  itu,  tidak  ada  sertifikasi  Halal  dan bahan-bahan  produk  tidak  jelas.  Status kehalalan  bahan  untuk  kedokteran  gigi  yang beredar  di  Indonesia  masih  diragukan  jika tidak ada mencantumkan logo halal dikemasannya. 10–12
memungkinkan untuk megidentifikasi berbagai  jenis  kandungan porcine dalam
produk  adalah  melalui  biomarker  spesifik seperti identifikasi terhadap protein, lemak dan DNA (Deoxyribo  Nucleic  Acid). Analisis berdasarkan DNA dapat menggunakan Polymerase Chain Reaction (PCR)
konvensional dan PCR real-time . 13–15 DNA  adalah  polimer  asam  nukleat yang  yang  terstruktur  secara  sistematis.  DNA merupakan molekul yang stabil selama proses ekstraksi  dan  ditemukan  di  semua  jenis  sel pada  hewan  dengan  informasi  genetik  yang identik.  Analisis  DNA  dalam  suatu  produk dapat  dicapai  melalui  proses  amplifikasi. Analisis DNA dilakukan dengan menggunakan alat PCR real-time . Tujuan dari alat ini adalah untuk mendeteksi ampikon dan untuk mengukur peningkatan fluoresensi yang dihasilkan dari sintesis DNA sampel. 16–18 Salah satu  keuntungan  dari  PCR  real-time  adalah bahwa  sampel  dapat  dianalisis  dalam  jumlah kecil,  dan  data  diproduksi  dengan  cepat  dan akurat. 19,20
Penelitian  tentang  uji  kehalalan terhadap  bahan-bahan  kedokteran  gigi  sudah pernah  dilakukan. 21,22 Pada  tahun  2017,  telah dilakukan  penelitian  uji  kehalalan  terhadap bahan-bahan  kedokteran  gigi  pada  bidang ortodonsia  dengan  jumlah  21  sampel.  Hasil pengujian  didapatkan  tidak  ada  bahan-bahan kedokteran gigi di ortodontik yang menunjuk- kan  kesamaan  100%  dengan  spektrum  dari gelatin babi yang diuji. Namun, tes lebih lanjut perlu  dilakukan  untuk  uji  kehalalan  dari bahan-bahan ini. 23
Pada  tahun  2020,  telah  dilakukan penelitian  tentang  identifikasi  gelatin porcine pada bahan kedokteran gigi dengan menggunakan kombinasi alat Attenuated Total Reflection-Fourier Transform
Infrared Spectroscopy  (ATR-FTIR) dan Chemometrics . Hasil  identifikasi  didapatkan  empat  dari  49 bahan  kedokteran  gigi  mengandung  gelatin. Salah satunya cenderung mirip dengan gelatin babi.  Pada  tiga  sampel  lainnya  tidak  dapat diidentifikasi gelatin pada produk tersebut dan diperkirakan  gelatin  yang  ada  pada  sampel hanya  berfungsi  sebagai  pengemulsi  dan terdeteksi dalam jumlah yang sedikit. 1,23
Penelitian  tentang  bahan  kedokteran gigi terutama pada bidang  prostodontik sudah banyak  dilakukan. 24–26 Hingga  saat  ini  masih sedikit  dilakukan  identifikasi  komposisi  yang terdapat  pada dental  material, khususnya
Bidang analisis halal terus berkembang secara teknologi
untuk memudahkan pendeteksian kontaminasi bahan-bahan  halal  ketika  tercampur  dengan yang  haram.  Beberapa  pengujian  yang  paling
bidang  prostodontik,  sehingga  peneliti  merasa perlu  untuk  mengidentifikasi  komposisi  DNA yang digunakan di bidang prostodontik. 27–29

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  menggunakan  metode penelitian  eksperimental.  Penelitian  dilakukan di  Pusat  Kajian  Sains  Halal  Institut  Pertanian Bogor. Tiga perekat gigi tiruan dan satu bahan soft  denture  lining (n=4)  dianalisis  dan  diberi kode sampel (Tabel 1).
Tabel 1. Sampel Penelitian
Setiap sampel terdiri dari 20 miligram/ bahan.  Pada  penelitian  ini  digunakan purposive  sampling yang  disesuaikan  dengan kriteria  inklusi  dan  eksklusi.  Semua  sampel dianalisis menggunakan PCR real-time ( Rotor- Gene  Q  D-40724,  Qiagene,  Hilden ,  Jerman). Penelitian  ini  dilakukan  dalam  dua  tahap, dimana  ekstraksi  DNA  sampel  sebagai  tahap pertama,  dilanjutkan  analisis  PCR real-time berdasarkan  kurva  amplifikasi  dan  skor  Ct pada yellow  channel dan green  channel sebagai tahap lanjutan. 20 Tahapan pre-running dilakukan sebelum tahap awal. Semua sampel diekstraksi menggunakan  EasyFastTM  Extra  Pharma  I (Ph.Ext1,  Progenus  s.a.,  Gembloux,  Belgia). Produk ekstraksi DNA dideteksi menggunakan Kit Progenus EasyFastTM Pharma Pig/Suidae Detection  &  Quantification  kit ( EFPig50, Progenus  s.a.,  Gembloux ,  Belgia)  untuk kemudian  dilanjutkan  analisis  PCR real- time . 30
Tahap  awal  ekstraksi  DNA  bertujuan untuk  mendapatkan  larutan  DNA.  Setelah larutan  DNA  sampel  didapatkan,  kemudian sampel  dimasukkan  kedalam  PCR tube dan ditambahkan lysis  buffer dengan  suhu  65°C selama  10  menit,  kemudian  ditambahkan
kecepatan  12.000  rpm,  kemudian  hangatkan elution  buffer pada  suhu  65°C,  selanjutnya sampel  diinkubasi  pada  suhu  65°C  dengan kecepatan 12.000 rpm.
Pada tahap kedua, selanjutnya dilakukan  40  siklus  pengulangan  analisis setelah  didapatkan  larutan  DNA.  Tahap  ini dilakukan  dengan  menggunakan  larutan MIX ( EFPig50,  Progenus  sa,  Gembloux ,  Belgia),
DNAse free  water ( EFPig50,  Progenus  sa, Gembloux ,  Belgia)  sebagai  kontrol  negatif, External  Positive  Control /EPC  ( EFPig50, Progenus  sa,  Gembloux ,  Belgia)  sebagai kontrol positif dengan suhu awal 95°C, diikuti proses  denaturasi  dengan  suhu  95°C, annealing dengan  suhu  60°C  dan extension 72°C (Tabel 2).
Tabel 2. Program PCR real-time Prosedur Waktu Suhu Keterangan Langkah pertama aktivasi PCR 5 menit 95°C HolStar Taq Plus DNA polymerase diaktivasi
Tiga putaran : Denaturasi Annealing Extension 15 s 15 s 10 s 95°C 60°C 72°C Kumpulan data pada suhu 60°C Jumlah putaran 40 Deteksi Reporter Eksitasi/ Emisi Channel Target FAM 495/ 520 nm Green Kontrol internal MAX 524/ 557 nm Yellow *FAM ( fluorescein amidets ); MAX ( Master Mix )
Kemudian sampel diberi label dengan kode  sampel,  kemudian  sampel  dan  kontrol dimasukkan  kedalam  mesin  PCR real-time. Program PCR real-time diatur dan dioperasikan  sesuai  dengan  program  PCR real-time .  Analisis  data  kemudian  dilakukan berdasarkan reporterVIC ( yellow channel ) dan FAM  ( green  channel ).  Keberadaan  DNA vertebrata dalam  sampel  dideteksi  dengan Yellow  channel sedangkan  deteksi porcine di dalam  sampel  dapat  diketahui  dengan keberadaan green  channel . 27–29 Jika  terdapat nilai  Ct,  maka  sampel  dinyatakan  positif mengandung  DNA porcine ;  yaitu  garis  kurva sampel  berada  di  atas  garis threshold pada grafik  amplifikasi green  channel dan
Kode Kategori Negara Produsen IPG-01 Perekat gigi tiruan Inggris IPG-02 Perekat gigi tiruan Austria IPG-03 Perekat gigi tiruan Singapura ISD-01 Soft denture lining Jepang
precipitation  buffe r  dalam  es  selama  5  menit, sentrifugasi selama 2 menit dengan kecepatan 12.000  rpm,  ditambah binding  buffer lalu sentrifugasi selama 1 menit dengan kecepatan 12.000 rpm, ditambah washing buffer I dengan
mengikuti  garis  kontrol  positif  pada  kurva amplifikasi. 30

## HASIL PENELITIAN
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan bahwa  hasil  amplifikasi  DNA  berdasarkan reporter FAM ( green channel )  tidak melaporkan  kenaikan  kurva  pada  semua sampel  yang  diuji,  sehingga  tidak  ada  DNA porcine yang teridentifikasi pada sampel, juga tidak  ditemukan  nilai  Ct  dengan  primer porcine pada setiap sampel (Tabel 3).
Tabel 3. Nilai Ct sampel pada yellow channel (identifikasi DNA vertebrata)
Channel Target Sampel Nilai Ct VIC Vertebrata Kontrol Negatif 32,88 VIC Vertebrata Kontrol Positif 30,08 VIC Vertebrata IPG-01 39,53 VIC Vertebrata IPG-02 32,41 VIC Vertebrata IPG-03 35,17 VIC Vertebrata ISD-01 -
*VIC (victoria) FAM (fluorescein amidets)
Penelitian  ini  menunjukkan  bahwa tiga dari empat sampel (IPG-01, IPG-02, dan IPG-03) mengandung DNA vertebrata (Tabel 4).  Hasil  deteksi  berdasarkan  reporter  VIC ( yellow channel ) menunjukkan bahwa IPG-01
(Ct  39,53),  IPG-02  (Ct  32,41),  IPG-03  (Ct 35,17),  memiliki  kurva  yang  meningkat secara  signifikan  di  atas threshold (Gambar 1).
Tabel 4. DNA vertebrata pada sampel

## PEMBAHASAN
Status kehalalan bahan perawatan gigi penting  bagi  pasien  muslim.  Penelitian  ini menunjukkan  DNA porcine tidak  terdeteksi pada semua sampel. Pemeriksaan menunjukkan  dimana  amplifikasi  DNA berdasarkan  reporter  FAM  ( green  channel ) tidak  ditemukan  adanya  kenaikan  kurva  dan nilai  Ct  dengan  primer porcine pada  setiap sampel.  Tiga  sampel  memiliki  DNA vertebrata.
Amplifikasi  menggunakan  PCR real- time dilakukan  selama  40  siklus  untuk mendapatkan  hasil  yang  akurat.  Selama amplifikasi, sinyal fluoresensi probe meningkat  secara  signifikan  di  atas  garis threshold .  Nilai  ini  dicatat  sebagai  Ct  ( cycle threshold ), dimana semakin besar jumlah awal DNA  target,  semakin  rendah  nilai  Ct,  dan sebaliknya.  Nilai  Ct  bertujuan  untuk mengetahui  validitas  PCR real-rime sesuai parameter  deteksi  dan  mengetahui  apakah sampel penelitian mengandung DNA
vertebrata atau porcine . 30
Kontrol positif dan negatif menunjukkan  hasil  yang  valid  sesuai  dengan kit,  di  mana  Cq  FAM  dan  VIC  +  30  untuk kontrol  positif  dan  Cq  FAM  dan  VIC  >38 untuk kontrol negatif.
Gambar 1. Amplifikasi sampel berdasarkan eporter VIC (identifikasi DNA vertebrata)
Hasil  serupa  juga  diperoleh  pada penelitian  tahun  2017  untuk  mendeteksi
keberadaan  gelatin  pada  bahan  ortodontik sebagai  autentikasi  halal.  Deteksi  gelatin
Kode Target Kategori VIC IPG-01 Vertebrata  Perekat gigi tiruan + IPG-02 Vertebrata  Perekat gigi tiruan + IPG-03 Vertebrata  Perekat gigi tiruan + ISD-01 Vertebrata Soft denture lining -
dilakukan  menggunakan Fourier  Transform Infrared  Spectroscopy  with  Attenuated  Total Reflectance (FTIR-ATR). Sejumlah 21 sampel diidentifikasi  dan  spektrum  dihasilkan  oleh perangkat  lunak  OMNIC  dari  Nicolet  iS50 FTIR. Semua data mengalami similarity match (SM)  menggunakan  perangkat  lunak TQ Analyst .  Hasil  penelitian  ini  menunjukkan bahwa  tidak  terdapat  sampel  yang  memiliki spektra  yang  sama  dengan  gelatin  yang  diuji dan  SM  tidak  menemukan  sampel  dengan kemiripan 100% dengan gelatin porcine . 24 Berbeda  dengan  hasil  penelitian  yang dilakukan  pada  tahun  2020  dimana  pengujian gelatin porcine dilakukan  menggunakan Atenuated Total Reflection-Fourier Transform Infrared  Spectroscopy (ATR-FTIR)  dan
Ada banyak metode analisis yang saat ini digunakan untuk menentukan DNA porcine di  dalam  suatu  bahan;  antara  lain Enzym Linked  Immunosorbent  Assay (ELISA), Gas Chromatography (GC), Gas Chromatography- Mass  Spectrophotometry (GC-MS), Fourier Transform-Infrared  Spectroscopy (FTIR). 31 Beberapa metode telah dikembangkan dengan metode  menggunakan  protein,  lemak  dan DNA. Analisis berdasarkan kandungan protein pada porcine dapat  menggunakan  alat pendeteksi dengan metode imunokromatografi yaitu  kombinasi  ELISA  dan  kromatografi, namun metode ini memiliki kelemahan karena protein  akan  kehilangan  aktivitas  biologisnya setelah hewan tersebut mati. 31 Selain itu, sifat protein  yang  tidak  efektif  setelah  mengalami pengolahan  yang  tinggi  disebabkan  oleh denaturasi pada suhu tinggi dan tekanan tinggi menghambat proses analisis.
Pada  PCR real-time ,  jumlah  produk DNA  yang  terbentuk  dapat  dipantau  secara real  time ,  yaitu  selama  reaksi  berlangsung, dengan  akurasi  dan  sensitivitas  tinggi  pada rentang  waktu  yang  singkat.  Pemantauan  ini dapat  dibantu  dengan  penggunaan  pewarna fluoresen  atau probe yang  diaplikasikan  ke dalam sampel. Intensitas fluoresensi probe ini akan  sebanding  dengan  jumlah  produk  DNA yang terbentuk.
PCR real-time mencatat jumlah siklus amplifikasi yang diperlukan untuk mendapatkan sejumlah molekul DNA tertentu. Efisiensi  amplifikasi  sampel  tertentu  biasanya mendekati  dua  kali  lipat  jumlah  molekul  per siklus amplifikasi, jumlah molekul DNA yang membawa  urutan  target  yang  awalnya  ada dalam  sampel  dapat  dihitung.  Pengujian  yang optimal  memungkinkan  kuantifikasi  jumlah molekul  DNA  dari  urutan  tertentu  dalam sampel  kompleks  dengan  akurasi  dan sensitivitas yang tinggi dapat mendeteksi suatu DNA target. 18
Perlu menjadi catatan bahwa penelitian  ini  hanya  menguji  empat  bahan prostodontik  yang  beredar  di  pasaran  tanpa replikasi,  sehingga  hasil  penelitian  ini  tidak dapat secara akurat mewakili bahan prostodontik  secara  yang  tersedia  secara umum. Lebih lanjut lagi, DNA vertebrata yang ditemukan tidak diketahui Penelitian lebih lanjut sangat diperlukan untuk memeriksa  status  kehalalan  bahan  kedokteran gigi yang banyak beredar di pasaran.
Spektroskopi  inframerah, differential scanning calorimetric , kromatografi gas, high- performance  liquid  chromatography (HPLC), dan electronic  odor  detector dapat  digunakan untuk  analisis  berdasarkan  kandungan  lemak.

## SIMPULAN
Sedangkan metode PCR memiliki target yaitu DNA,  metode  inilah  yang  dianggap  paling valid  saat  ini. 31 PCR  adalah  salah  satu  teknik amplifikasi  asam  nukleat in  vitro yang  paling banyak  dipelajari  dan  digunakan.  PCR digunakan  untuk  memperbanyak  jumlah molekul  DNA  pada  target  tertentu  dengan menganalisis  molekul  DNA  baru  yang melengkapi  molekul  DNA  target  melalui enzim  dan  oligonukleotida  sebagai  primer dalam thermocycle . Analisis biologi molekuler khususnya DNA menggunakan PCR, keunggulannya  dibandingkan  menggunakan protein  atau  molekul  lain,  karena  DNA  lebih stabil. 13,14,31
spesiesnya.
Chemometrics .  Hasil  yang  diperoleh  dari penelitian tersebut adalah empat dari 49 bahan kedokteran gigi yang digunakan di rumah sakit dan  klinik  mengandung  gelatin,  salah  satunya termasuk gelatin porcine sedangkan tiga tidak dapat diidentifikasi. Penelitian ini tidak sejalan karena  alat  dan  metode  yang  digunakan berbeda  dan  hasil  yang  diperoleh  juga berbeda. 1
Hasil  penelitian  ini  menyimpulkan bahwa  tidak  ada  kandungan  babi  yang
terdeteksi  dalam  sampel.  Namun,  tiga  dari empat  sampel  mengandung  DNA  vertebrata (bukan porcine ). PCR real-time (qPCR) dapat digunakan  untuk  mengidentifikasi  kandungan porcine dalam suatu sampel.

## SARAN
Disarankan  penelitian  lebih  lanjut untuk  memastikan  DNA  vertebrata  pada sampel.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Peneliti  mengucapkan  terima  kasih kepada  Universitas  Sumatera  Utara  atas bantuan  penelitian  Talenta  USU  tahun  2020 Nomor:  289/UN5.2.3.1/PPM/SPP-TALENTA USU/2020 tanggal 28 April 2020.

## DAFTAR PUSTAKA
1.   Mustaqimah DN, Roswiem AP. Identification  of  Gelatin  in  Dental
Materials  using  the  Combination  of Attenuated Total Reflection-Fourier Transform  Infrared  Spectroscopy  (ATR- FTIR)  and  Chemometrics. Int  J  Halal Res . 2020;2(1):1–15.
2.   Rahadian  B,  Hakim  N,  Kurniawan  A, Putri AR, Adienda C. Implementation of Halal Product Guarantee in Dental Health Services in Islamic Hospital. Int J Human and Health Sci . 2019 Jan 22;3(2):54.
3.   Anusavice.  Philips’s  science  of  dental materials. 13th ed. 2019. 5–6 p.
4.   Sultan  Z,  Sheikh  Z,  Zafar  M,  Sauro  S. Application  of  metals  and  alloys  in dentistry.  In:  Khurshid  Z,  Sheikh  Z, editors.  Dental  Materials  (Principles  and Applications. Pakistan: Paramount Books Ltd; 2018. p. 41.
5.   Chalifoux  P.  Acrylic  and  other  resin:
thayyib  and  its  implementation  in Indonesia. J  Halal  Prod  Res .  2019  Jun 2;2(1):1.
7.   Khan  M,  Haleem  A.  Understanding “halal”  and  “halal  certification  & accreditation system”-brief review. Saudi J Bus Manag Stud . 2016;1(1):32–42.
8.   Salim  M.  Contemporary  Islamic  law  in Indonesia-sharia  and  legal  pluralism. Edinburgh:  Edinburgh  University  Press; 2015. 23–27 p.
9.   Muslimin  J.  Halal  Product  Guarantee  in
Indonesia: Regulation and Social Inclusion. J Econ and Bus . 2019;4(1):1-5 10.   Ali  E,  Sultana  S,  Hamid  SBA,  Hossain M,  Yehya  WA,  Kader  A,  et  al.  Gelatin controversies  in  food,  pharmaceuticals,
and personal care products:
Authentication  methods,  current  status, and future challenges. Crit Rev Food Sci Nutr. 2018; 58(9):1495–511.
11.   Ali ME, Kashif M, Uddin K, Hashim U, Mustafa  S,  Che  Man  Y  Bin.  Species Authentication  Methods  in  Foods  and Feeds:  the  Present,  Past,  and  Future  of Halal  Forensics. Food  Anal  Methods . 2012;5(5):935–55.
12.   Roswiem
A, Mustaqimah D.
Identification  of  gelatin  source  in toothpaste products using combination of attenuated total reflection-fourier transform infrared (ATR-FTIR) spectroscopy  and  chemometrics.  Int J Halal Res . 2020;2(1):30–7.
13.   Hermanto  S,  Sumartin  L,  Fatimah  W. Differentiation  of  bovine  and  porcine gelatin  based  on  spectroscopic  and electrophoretic  analysis. J  Food  Pharm Sci . 2013;1:68–73.
14.   Lee  JH,  Yi  GS,  Lee  JW,  Kim  DJ.
Physicochemical characterization of porcine  bone-derived  grafting  material and  comparison  with  bovine  xenografts for  dental  applications. J  Periodontal Implant Sci . 2017;47(6):388–401.
15.   Sudjadi,  Wardani  HS,  Sepminarti  T, Rohman  A.  Analysis  of  Porcine  Gelatin DNA  in  a  Commercial  Capsule  Shell Using  Real-Time  Polymerase  Chain Reaction  for  Halal  Authentication. Int  J Food Prop . 2016;19(9):2127–34.
16.   Rocha  AJ,  Monteiro-Júnior  JE,  Freire JEC,  Sousa  AJS,  Fonteles  CSR.  Real Time  PCR:  the  Use  of  Reference  Genes and  Essential  Rules  Required  to  Obtain Normalisation
Data Reliable to Quantitative Gene Expression. J Mol Biol Res . 2015; 5(1):45-50.
17.   Corona B, Lleonard R, Carpio Y, Uffo O, Martínez  S.  Short  communication.  PCR
provisional restorations. In: Aschheim K, editor.  EstEsthetic  dentistry:  a  clinical approach to techniques and materials. 3rd ed. St. Louis Mosby; 2015. p. 197–203.
6.  Nafis  MC.  The  concept  of  halal  and
detection  of  DNA  of  bovine,  ovine- caprine and porcine origin in feed as part of  a  bovine  spongiform  encephalopathy control  program. Span  J  Agric  Res . 2013;5(3):312–7.
18.   Erwanto  Y,  Rohman  A,  Arsyanti  L, Pranoto  Y.  Identification  of  pig  DNA  in food  products  using  polymerase  chain reaction (PCR) for halal authentication-a review  Abstract. Int  Food  Res  J . 2018;25(4):1322–31.
19.   Loftis  A,  Reeves  W.  Principles  of  PCR real-time. In: Wang C, Kaltenboeck B, D. Freeman  M,  editors.  Veterinary  PCR Diagnostics.  Basseterre:  Bentham  E Books; 2012. p. 3–6.
20.   Salamah  N,  Erwanto  Y,  Martono  S, Rohman  A.  Real-Time  PCR-based detection  of  bovine  DNA  by  specific targeting on cytochrome-B.
Pharmaciana . 2019;9(2):201.
21.   Halib  N,  Salida  N,  Nik  Salleh  S,  Fattah
Dental  Materials  Using  Rapid  Fourier Transform Infrared (FTIR) Spectroscopy. Adv Sci Lett . 2017;23(5):4750–2.
24.   Craig’s,  Power  J,  Sakaguchi  R. Restorative  dental  materials.  14th  ed. India: Mosby Elsevier; 2018. 150–204 p. 25.   Gounder R, Sathasivam P. Importance of denture  adhesive  in  complete  denture patiens-a  review. Int  J  Adv  Multidiscip Res . 2016;3(6):35–7.
26.   Manar  J,  Jarkas  Manar  C.  Alginate  as impression material. Int J Appl Dent Sci . 2018;300(3):300–3.
27.   Hatrick  C,  Eakle  S,  Bird  W.  Dental materials- clinical applications for dental assitants  and  dental  hygienist.  St.  Louis: Saunders Elsevier; 2015. 106–107 p.
28.   Zarb  B.  Prosthodontic  treatment  for edentulous  patient  complete  denture  and implant-suported  prosthesis.  5th  ed. Amsterdam: Elsevier; 2011. 442–448 p.
29.   Dorocka-Bobkowska  B,  Medynski  D,
Prylinski  M.  Recent  Advances  in  Tissue Conditioners for Prosthetic Treatment. A review.
Adv Clin Exp Med . 2017;26(4):723–8.
30.   Widayat  W, Winarni  Agustini T,  Suzery M, Ni’matullah Al-Baarri A, Rahmi Putri S. Real Time-Polymerase Chain Reaction (RT-PCR)  sebagai  Alat  Deteksi  DNA Babi  dalam  Beberapa  Produk  Non- Pangan . IJH . 2019;2(1):26-31
31.   Cebi N, Durak MZ, Toker OS, Sagdic O, Arici  M.  An  evaluation  of  Fourier transforms  infrared  spectroscopy  method for  the  classification  and  discrimination of bovine, porcine and fish gelatins. Food Chem . 2016;190:1109–15.
WA, Ismail W, Ramli H, et al. Islam and technological development in Malaysia’s health  care:  An  Islamic  legal  basis analysis  of  dental  materials  used  in periodontal therapy.
TM Malay J Soc Space. 2016;
22.  Irfanita  N,  Jaswir  I,  Mirghani  MES,
Octavianti F, et al. The Authentication of    halal
Sukmasari  S,  Ardini  YD,  Lestari  W. Rapid  detection  of  gelatin  in  dental materials using attenuated total reflection fourier  transform  infrared  spectroscopy (ATR-FTIR).  Inter  J  Phys:  Conference Series. 2017 Aug;884:012090.
23.  Aziz  AHA,  Mutalib  NAA,  Rahman  RA, Jaswir I, Mirghani MES,