Research Article

## UNPAD

## Formulation And Charachterization of Nanoemulsion from Brucea javanica Seed Extract
Wahida Hajrin 1* , Windah A. Subaidah 1 , Yohanes Juliantoni 1
1Program Studi Farmasi, Fakultas Kedokteran, Universitas Mataram, Mataram, Indonesia
Submitted 11 March 2022; Revised 29 December 2022; Accepted 31 December 2022; Published 13 February 2024 *Corresponding author: wahida08farm@gmail.com

## Abstract
The anti-inflammatory of B. javanica needs to be made into a topical preparation. The bioavailability and stability of the active substance is a limitation in its use thus it is necessary to develop an appropriate formula. Nanoemulsion can increase stability and penetration of drugs to pass the skin barrier. This study conducted to determine the formulation of B. javanica seed ethanol extract nanoemulsion and its stability. The formulation was carried out using a pseudoternary phase diagram with 3 variations of components olive oil (EVOO), Smix (tween-propylene glycol 5:1), and water. The charachterization of nanoemulsi were globule size, % transmittant, pH, viscosity, and drug load. The nanoemulsion of B. javanica seed extract was evaluated for stability using the Freeze-thaw method. The characteristics of the nanoemulsion preparations obtained were globule size of 14.4±0.3 nm, zeta potential of 7.7±0.2 mV, %transmittant of 93.05±4.06%, pH of 7.14±0.05, viscosity of 35800±2700 cps, and drug load of 83.81±8.49%. The noverlty of this study that nanoemulsion of B. javanica seed extract has good characteristics, but unstable for transmittant and zeta potensial.
Keywords: Brucea javanica , Brucea javanica seed, Nanoemulsio, Stability
Formulasi dan Karakterisasi Nanoemulsi dari Ekstrak Biji Buah Makasar ( Brucea javanica (L) Merr)

## Abstrak
Potensi antiinflamasi B. javanica perlu dikembangkan menjadi sediaan topikal. Bioavailabilitas dan stabilitas  zat  aktif  menjadi  batasan  dalam  pengunaannya  sehingga  perlu  pengembangan  formula yang sesuai. Nanoemulsi merupakan salah satu alternatif sediaan yang dapat meningkatkan stabilitas maupun penetrasi obat ke dalam kulit. Penelitian ini bertujuan untuk menentukan formula sediaan nanoemulsi ekstrak etanol biji B. javanica serta mengetahui stabilitasnya. Metode formulasi sediaan nanoemulsi  dilakukan  dengan  bantuan pseudoternary phase diagram dengan  3  variasi  komponen, yaitu  minyak  zaitun  (EVOO),  Smix  (tween-propilenglikol  5:1),  dan  air.  Karakterisasi  nanoemulsi yang dilakukan adalah ukuran globul, % transmitan, pH, viskositas, dan drug load . Nanoemulsi biji B. javanica kemudian  diuji  stabilitasnya  menggunakan  metode Freeze-thaw cycle. Karakteristik sediaan nanoemulsi yang dihasilkan adalah ukuran globul 14,4±0,3 nm, zeta potensial sebesar 7,7±0,2 mV, % transmittant sebesar 93,05±4,06%, pH 7,14±0,05, viskositas 35800±2700 cps, dan drug load 83,81±8,49%. Kebaruan dari penelitian ini yaitu nanoemulsi B. javanica memiliki karakteristik yang baik, namun tidak stabil berdasarkan nilai transmitan, dan zeta potensial.
Kata Kunci: Biji buah makasar, Brucea javanica , Nanoemulsi, Stabilitas

## 1.  Pendahuluan
Inflamasi merupakan bentuk perlawanan  yang  diberikan  oleh  tubuh untuk  menginaktivasi  organisme  patogen, menghilangkan  iritan,  dan  meregulasi perbaikan jaringan. Dalam kondisi berlebihan,  inflamasi  dapat  menyebabkan kerusakan  jaringan  dan  menimbulkan penyakit  sehingga  perlu  agen  antiinflamasi untuk mengontrolnya. 1
Salah  satu  tanaman  yang  memiliki aktivitas  antiinflamasi  adalah  biji  makasar ( Brucea javanica ).  Pada  penelitian  Yang dkk,  fraksi  etil  asetat  ekstrak  etanol  biji  B. javanica memiliki efek antiinflamasi in vitro maupun in vivo. 2 Ekstrak air dan etanol biji B. javanica mengurangi inflamasi akut maupun kronis  yang  ditandai  dengan  pengurangan pembengkakan pada telinga tikus yang dibuat kanker. 3 Krim ekstrak etanol biji B. javanica mampu  menghambat  aktivitas  eritema  pada tikus yang disinari UV B. 4
B. javanica banyak  terdapat  di  daerah Sesaot,  Lombok  Barat.  Potensi  biji B.  j avanica yang  tinggi  sebagai  antiinflamasi dibatasi  oleh  rendahnya  kelarutan  dan bioavailabilitas zat aktif melalui rute peroral. Selain  itu,  sifat  senyawa  polifenol  yang tidak stabil dapat menyebabkan senyawa ini mudah terdegradasi dalam sediaan. Menurut penelitian terdahulu, stabilitas zat aktif dapat dipertahankan melalui pembentukan sediaan mikropartikel maupun nanopartikel. 5,6
Salah  satu nanotechnology yang  dapat dikembangkan  adalah  sediaan  nanoemulsi. Nanoemulsi  merupakan  sediaan  cair  untuk aplikasi pada kulit. 7,8 Pengembangan  ananoemulsi  biji B. javanica terkait  dengan  kelebihan-kelebihan sediaan  nanoemulsi,  dibanding  sediaan lainnya, yaitu diantaranya dapat meningkatkan kecepatan      absorpsi,  melindungi  terjadinya oksidasi  dan  hidrolisis  zat  aktif  pada nanoemulsi O/W, sebagai penghantaran obat lipofil yang telah dilarutkan, sediaan cair untuk obat yang tidak larut air, sistem penghantaran obat  yang  dapat  meningkatkan  efikasi  serta mengurangi  dosis  dan  efek  samping  obat, serta  sebagai  pembawa  pada  penghantaran obat secara topikal yang tidak menyebabkan
toksik  maupun  iritasi. 9 Pengembangan nanoemulsi  biji B. javanica diharapkan dapat meningkatkan bioavailabilitas zat aktif sehingga dapat menimbulkan efek yang lebih baik. Penentuan jenis dan jumlah bahan yang digunakan sangat penting dalam pembentukan nanoemulsi. Jenis surfaktan dan co-surfaktan, rasio dari keduanya, dan jenis minyak sangat berpengaruh  terhadap  penetrasi  zat  aktif melalui  kulit. 10,11 Selain  itu,  surfaktan  dan co-surfaktan sangat mempengaruhi stabilitas nanoemulsi  yang  terbentuk, 12 sehingga perlu dilakukan optimasi untuk memperoleh nanoemulsi yang baik. Nanoemulsi yang baik akan  memberikan  efek  farmakologi  yang baik  pula  sehingga  tujuan  penelitian      ini adalah  untuk  menentukan  formula  sediaan nanoemulsi  ekstrak  etanol  biji B. javanica serta mengetahui stabilitasnya.

## 2.  Metode
2.1.  Alat
Alat  yang  digunakan  pada  penelitian ini  adalah rotary evaporator (Heidolph ® , Jerman),  spektrofotometer  UV-Vis  (Specord 200 plus, Jerman), sonikator, vortex (Labnet, USA), magnetic stirrer , mikropipet, pH meter, viskosimeter  Brookfield  (Ametek,  USA), particle size analyzer (Horiba,  Jepang),  alat gelas  (IWAKI-pyrex),  timbangan  analitik (Ohauss ® , Indonesia).
2.2.  Bahan Bahan yang digunakan dalam penelitian ini  adalah  biji B. javanica (diperoleh  dari desa  Sesaot,  Lombok  Barat),  etanol  96% (teknis,  Brataco),  kain  kasa,  kertas  saring Wattmann, asam galat (p.a, Merck), Na2CO3 (p.a, Merck), Follin Ciaocalteu (p.a, Merck), aquadest (teknis,  Waterone), extra virgin olive oil (cosmetical grade), tween 80 (teknis, Himedia),  propilenglikol  (teknis,  DOW), metil paraben (teknis), propil paraben (teknis).
2.3.  Prosedur
2.3.1. Pembuatan Ekstrak Biji B. javanica
Buah B. javanica diambil  di  daerah Narmada,  Lombok  Barat,  NTB.  Metode ekstraksi B. javanica adalah  sonikasi
menggunakan  pelarut  etanol  96%.  Sonikasi selama 15 menit pada 42kH. Filtrat diuapkan menggunakan rotary evaporator pada  suhu 400C hingga diperoleh ekstrak kental.
2.3.2. Penetapan Kadar Fenolik Total Ekstrak
Biji B. javanica
Penetapan kadar fenolik total ekstrak biji B. javanica sesuai dengan metode penetapan kadar fenolik total pada penelitian. 13
2.3.3. Formulasi Nanoemulsi Ekstrak Biji B. javanica
Formulasi  nanoemulsi  ekstrak  biji B. javanica dilakukan dengan metode titrasi air menggunakan pseudoternary phase diagram seperti  pada  optimasi  formula  nanopartikel kitosan ekstrak sari buah juwet. 14
2.3.4. Uji Kelarutan Ekstrak Biji B. javanica Ekstrak  biji B. javanica sebanyak  20 mg dan 40 mg masing-masing ditambahkan 2,0 mL EVOO dalam Eppendorf. Campuran divortex  hingga  homogen  dan  didiamkan selama  24  jam.  Campuran  diamati  terhadap adanya endapan pada dasar Eppendorf. 15
2.3.5. Pseudoternary Phase Diagram Pseudoternary phase diagram digunakan untuk menentukan jumlah masing- masing 3 komponen, yaitu EVOO, surfaktan- cosurfaktan, dan air. Metode yang digunakan adalah dengan titrasi air dan diaduk dengan magnetic stirrer pada 200 rpm. Perbandingan Tween 80 dan propilenglikol yang digunakan adalah  5:1.  Parameter  yang  diamati  sebagai uji  pendahuluan  adalah  kejernihan  dan ada  tidaknya  pemisahan  fase.  Daerah  yang menghasilkan  campuran  yang  jernih  dan tidak ada pemisahan fase dilanjutkan ke tahap karakterisasi.
2.3.6. Pembuatan Nanoemulsi Biji B. javanica Karakterisasi  yang  dilakukan  meliputi uji  %  transmitan,  uji  pH,  uji  viskositas,  uji ukuran  globul  dan  PdI,  zeta  potensial, drug load, dan uji stabilitas.
a. Uji % transmitan
Sediaan  nanoemulsi  dimasukkan  ke dalam kuvet dan dibaca % trasmitannya pada panjang  gelombang  650  nm.  Blanko  yang digunakan adalah aquabidest.
b.  Uji pH Sediaan  nanoemulsi  diukur  nilai  pH menggunakan alat pH meter.
c. Uji viskositas Uji viskositas dilakukan menggunakan viskometer  Brookfield  pada  25ºC  dengan kecepatan shear 6 rpm.
d.  Uji ukuran globul, polydispersity index (PdI), dan zeta potensial Penentuan  ukuran  globul  dan  zeta potensial dilakukan menggunakan alat particle size  analyzer.  Sebanyak  1,0  mL  nanoemulsi ekstrak biji B. javanica dimasukkan ke dalam kuvet  dan  discan  hingga  diperoleh  kurva distribusi ukuran globul serta zeta potensial.

## e. Drug load
Penentuan  drug  load  diukur  terhadap kesetaraan  asam  galat.    Formula  optimum nanoemulsi  ekstrak  biji  B.  javanica disentrifugasi  pada  kecepatan  14.000  rpm selama 30 menit pada 25ºC. Dipipet sebanyak 300  µL  supernatan  kemudian  ditambahkan dengan 1,5 mL Follin-ciocalteau dan digojog. Setelah  didiamkan  selama  8  menit,  larutan ditambah  1,2  mL  larutan  Na2CO3  7,5%, digojog  homogen,  dan  diinkubasi  selama operating  time.  Absorbansi  sampel  dibaca pada  panjang  gelombang  maksimum.  Drug load obat ditentukan berdasarkan persamaan (1).
Keterangan :
DL : Drug Load (%) TPCs   : Total Phenolic Compounds Supernatant (mg EAG/gr ekstrak) TPCe  : Total Phenolic Compounds Ekstrak (mg EAG/gr ekstrak)
f.   Uji stabilitas Uji  stabilitas  fisik  sediaan  dilakukan
dengan  metode freeze-thaw. Sebanyak 5,0  mL  sampel  uji  dimasukkan  dalam vial.  Selanjutnya  vial  disimpan  pada  suhu -4ºC  selama  24  jam  dilanjutkan  dengan penyimpanan pada suhu 40ºC selama 24 jam (1  siklus).  Uji  dilakukan  selama  6  siklus. Setelah  6  siklus,  dilakukan  pemeriksaan sifat  fisik  sediaan  dan  dibandingkan  dengan kondisi awal sebelum dilakukan freeze-thaw. Parameter  yang  dibandingkan  adalah  % transmitan, pH, viskositas, dan drug load . 16,17
3.  Hasil 3.1.  Pembuatan  Ekstrak  dan  Penetapan Kadar  Fenolik  Total  Ekstrak  Biji B. javanica Pembuatan  ekstrak  menggunakan metode  sonikasi  dengan  pelarut  etanol  6%. Rendemen  ekstrak  yang  diperoleh  adalah sebesar  5,99%.  Metode  yang  digunakan untuk menentukan kadar fenolik total adalah metode  kolorimetri  menggunakan  alat spektrofotometer UV-Vis dengan penambahan reagen Follin-Ciocalteau. Panjang gelombang maksimum asam galat yang diperoleh adalah 751  nm. Operating time terjadi  pada  menit ke 85. Hasil penetapan kurva baku diperoleh persamaan  kurva  baku  y=0,1116x  +  0,2002 dengan  nilai  R 2 sebesar  0,9975.  Hasil penetapan kadar fenolik total ekstrak biji B. javanica dapat dilihat pada tabel 2.
3.2.  Formulasi Nanoemulsi Ekstrak Biji B. javanica dengan Pseudoternay Phase

## Diagram
Uji  kelarutan  menunjukkan  ekstrak biji B. javanica dapat  melarut  sempurna  di dalam  EVOO  dengan  konsentrasi  1%  dan 2%.  Ekstrak  tidak  mengalami  pengendapan setelah  dibiarkan  selama  24  jam.  Formulasi dilakukan  dengan  bantuan pseudoternary phase diagram. Komponen utama penyusun emulsi  adalah  minyak,  surfaktan,  dan  air. Penggunaan pseudoternary phase diagram memudahkan  dalam  mencari  komposisi yang  tepat  antara  minyak,  Smix  (surfaktan- cosurfaktan),  dan  air  dalam  pembentukan nanoemulsi. Area 3 (diarsir pada gambar 1) merupakan area yang paling jernih sehingga titik tengah pada area 3 dipilih sebagai formula sediaan nanoemulsi ekstrak biji B. javanica. Campuran area 3 memiliki komposisi EVOO, Smix (Tween-PG 5:1), dan air sebesar 0,667 %; 6,667 %; dan 0,267 %. Sediaan nanoemulsi ekstrak  biji B. javanica dapat  dilihat  pada gambar 2. Sediaan menunjukkan cairan yang transparan, jernih, homogen, dan kental.
3.3.  Karakterisasi Nanoemulsi Ekstrak Biji

## B. javanica
Hasil karakterisasi nanoemulsi ekstrak biji B. javanica terhadap % transmitan, pH, viskositas, ukuran partikel, PdI, zeta potensial, dan  drug  load  dapat  dilihat  pada  Tabel  3, sedangkan  hasil  uji  stabilitas  nanoemulsi ekstrak  biji B. javanica dapat  dilihat  pada Tabel 4.
Gambar 1. Pseuternary phase diagram untuk formulasi  sediaan  nanoemulsi ekstrak biji B. javanica . Ket:  area  yang  diarsir  adalah  area formula terpilih Gambar 2. Sediaan  Nanoemulsi  ekstrak  biji B. javanica

## 4.  Pembahasan
4.1.  Pembuatan  Ekstrak  dan  Penetapan Kadar  Fenolik  Total  Ekstrak  Biji B. javanica Pembuatan  ekstrak  pada  penelitian ini  menggunakan  metode  sonikasi.  Alasan pemilihan  metode  sonikasi  untuk  ekstraksi adalah  metode  sonikasi  tidak  membutuhkan suhu tinggi sehingga tidak merusak senyawa aktif  (flavonoid)  yang  bersifat  termolabil. Metode  sonikasi  mengekstraksi  zat  aktif dengan cara merusak sel pada gelombang 42 kH. Sel yang telah rusak akan dengan mudah mengeluarkan zat aktif yang terdapat di dalam sel menuju pelarut. 18
Ekstrak  biji  B.  javanica  ditetapkan kadar fenolik totalnya dengan menggunakan asam galat sebagai pembanding. Asam galat digunakan  sebagai standar karena asam galat merupakan  fenol  sederhana  yang  memiliki sifat  alami  dan  stabil. 19 Hasil  kadar  fenolik total ekstrak biji B. javanica yang diperoleh pada penelitian ini lebih rendah dari penelitian lainnya yang menggunakan pelarut ekstraksi yang berbeda. Penelitian yang dilakukan oleh Hasni  dkk  (2017),  diperoleh  kadar  fenolik total biji buah B. javanica sebesar 36,9 – 98,5 mg  GAE  (ekivalen  asam  galat)  tiap  gram
ekstrak  dengan  kadar  tertinggi  pada  pelarut etil asetat. 20 Berdasarkan penelitian Ablat dkk (2014), biji buah wali memiliki total fenolik sebesar  169,03  TAE  (ekivalen  asam  tanin) tiap  gram  sampel  pada  fraksi  etil  asetat. 21 Hasil  tersebut  menunjukkan  bahwa  kadar fenolik total yang lebih tinggi dapat diperoleh dengan  ekstraksi  menggunakan  pelarut  etil asetat,  sehingga  perlu  dipertimbangkan penggunaan  etil  asetat  sebagai  pelarut  pada ekstraksi selanjutnya.
4.2.  Formulasi Nanoemulsi Ekstrak Biji B. javanica dengan Pseudoternay Phase Diagram Konsentrasi  ekstrak  biji B. javanica yang  dipilih  sebagai  konsentrasi  dalam sediaan  adalah  1%.  Pemilihan  konsentrasi ini  didasarkan  pada  hasil  uji  kelarutan  dan penelitian  sebelumnya  yang  menunjukkan bahwa  ekstrak  dan  krim  ekstrak  biji B. javanica dengan  konsentrasi  1%  dapat menghambat pembentukan eritema pada kulit mencit. 4 Rancangan  formulasi  nanoemulsi ekstrak  biji B. javanica dilakukan  dengan bantuan pseudoternary phase diagram. Diagram  ini  dapat  memudahkan  dalam
Bahan Komposisi (%) Ekstrak biji B. javanica 1,0 EVOO 1-100 Tween 80 -propilenglikol 1-100 Metil paraben 0,1 Propil paraben 0,1 Aquades ad 100 Tabel 1. Formula  nanoemulsi  ekstrak  biji B. javanica
Sampel Kadar Fenolik Total (mg GAE/g) 1 5,617 2 5,454 3 5,413 Rata-rata ± SD 5,495±0,108 Tabel 2. Hasil  Penetapan  Kadar  Fenolik  Total Ekstrak Biji B. javanica
Parameter Replikasi Rata-rata ± SD 1 2 3 Transmittant (%) 95,26 95,53 88,36 93,05±4,06 pH 7,19 7,11 7,11 7,14±0,04 Viskositas (cPs) 38500 33100 35800 35800±2700 Ukuran Partikel (nm) 14,4 14,1 14,7 14,4 ± 0,3 PdI 0,291 0,252 0,269 0,271 ±0,02 Zeta Potensial (mV) 7,8 7,8 7,5 7,7 ± 0,2 Drug Load (%) 90,776 86,301 74,356 83,81±8,49%

## Tabel 3. Hasil karakterisasi nanoemulsi ekstrak biji B. javanica
menentukan  campuran  3  komponen  utama dalam  formula  nanoemulsi  yaitu  minyak, surfaktan-kosurfaktan,  dan  air  sehingga diperoleh campuran dengan komponen yang jernih,  ditandai  dengan  nilai  %  transmitan yang  tinggi.  Metode  yang  digunakan  dalam pembuatan nanoemulsi ekstrak biji B.javanica adalah  metode  emulsifikasi  spontan.  Prinsip dari  metode  emulsifikasi  spontan  adalah terjadinya  difusi  surfaktan  secara  cepat  dari fase minyak ke antarpermukaan minyak-air. 22
Pembentukan nanoemulsi sangat dipengaruhi oleh jenis minyak, surfaktan, dan kosurfaktan yang  digunakan.  Pemilihan  EVOO  sebagai fase  minyak  selain  karena  sering  digunakan dalam  formula  sediaan  kosmetik,  EVOO mengandung monounsaturated dan polyunsaturated fatty acid . 19 Pemilihan surfaktan  juga  sangat  penting  karena surfaktan dapat mencegah terjadinya koalesen antar  droplet  sehingga  dapat  meningkatkan stabilitas  kinetik  nanoemulsi. 12,23 Tween 80  dapat  menjadi  surfaktan  dan  juga  dapat meningkatkan  stabilitas  kinetik  nanoemulsi karena  memiliki  viskositas  yang  tinggi, sehingga  dapat  mencegah  terjadinya agregasi  dan  meningkatkan  stabilitas  pH. 24 Konsentrasi  Tween  80  yang  tinggi  pada sediaan  nanoemulsi  ekstrak  biji B. javanica inilah  yang  menyebabkan  konsistensi sediaan  yang  kental.  Selain  itu,  menurut penelitian  Sisak  dkk  (2017),  propilenglikol sebagai kosurfaktan juga dapat menyebabkan peningkatan  viskositas  dan  memungkinkan terjadinya  pembentukan  gel  pada  sediaan nanoemulsi. 25

## 4.3.  Karakterisasi Nanoemulsi Ekstrak Biji
B. javanica
a. % transmitan Nilai % transmitan pada penelitian ini termasuk tinggi karena mendekati nilai 100%.
Nilai transmitan berbanding terbalik dengan ukuran  globul.  Semakin  mendekati  nilai 100%, ukuran globul akan berada pada rentang nanometer. 26 Menurut Kaur dkk (2013), nilai transmitan di atas 80% menunjukkan ukuran globul emulsi pada rentang nanometer. 27
b.  pH Berdasarkan  hasil  uji  pH,  nilai  pH sediaan lebih tinggi dari pada nilai pH kulit, yaitu  4,5-6,5  namun  masih  pada  pH  netral yaitu 7. Nilai pH yang tinggi ini dipengaruhi oleh pH twen 80, karena kadar tween 80 pada sediaan  nanoemulsi  ekstrak  biji B. javanica cukup tinggi.
c. Viskositas
Uji  viskositas  rata-rata  sediaan  adalah 35800±2700  cps.  Berdasarkan  persyaratan SNI  untuk  pelembab  kulit,  nilai  viskositas untuk pelembap kulit adalah 2000-50000 cps. Nilai viskositas yang tinggi akan memberikan stabilitas  yang  lebih  baik  karena  dapat mencegah terjadinya agregasi dan koalesen.
d.  Ukuran  partikel, polydispersity index (PdI), dan zeta potensial Hasil pengukuran menunjukkan bahwa sediaan  nanoemulsi  ekstrak  biji B. javanica memiliki  ukuran  partikel  nanometer,  dan nilai  indeks  polidispersitas  yang  baik. Ukuran  partikel  sesuai  dengan  persyaratan ukuran  partikel  untuk  nanoemulsi  yaitu 1-100 nm. Indeks polidispersitas yang rendah menunjukkan deviasi ukuran partikel sempit sehingga  ukuran  globul  seragam.  Nilai  zeta potensial  sediaan  nanoemulsi  ekstrak  biji B. javanica menunjukkan  nilai  yang  cukup rendah  dari  nilai  yang  baik  yaitu  di  atas +30µV  atau  di  bawah  -30µV.  Nilai  zeta potensial  yang  rendah  menyebabkan  gaya tolak  antarpartikel  rendah  sehingga  partikel
Sampel Sebelum Setelah %T pH Viskositas (Cps) %T pH Viskositas (Cps) 1 95,26 7,19 38500 85,29 7,16 37500 2 95,53 7,11 33100 84,22 7,03 32800 3 88,36 7,11 35800 82,61 7,07 34400 Tabel 4. Hasil uji transmittan, pH, dan viskositas nanoemulsi ekstrak biji B. javanica sebelum dan setelah Freeze-Thaw Cycle
lebih mudah mengalami flokulasi. 28 Flokulasi dapat  menyebabkan  pemisahan  antara  fase minyak  dan  fase  air  sehingga  mengganggu stabilitas nanoemulsi.

## e. Drug load
Rata-rata  drug  load  sediaan  nanoemulsi ekstrak biji B. javanica adalah 83,81±8,49%. Nilai  ini  menunjukkan  bahwa  sebanyak 83% ekstrak terlarut sempurna dalam sistem nanoemulsi.  Hasil  drug  load  ekstrak  biji B. javanica menunjukkan  hasil  yang  cukup tinggi karena lebih dari 80% obat terload pada sistem nanoemulsi. Hal ini karena ekstrak biji B. javanica memiliki  kelarutan  yang  baik pada EVOO.
f.   Uji stabilitas
Uji  stabilitas  nanoemulsi  ekstrak biji B. javanica dilakukan  dengan freeze- thaw cycle. Berdasarkan  hasil  uji  stabilitas, setelah  6  siklus freeze-thaw terlihat  terjadi penurunan  %  transmitan  (p-value  =  0,022), pH (p-value = 0,345), dan viskositas (p-value =  0,688).  Kondisi  stress  yang  diberikan pada  sediaan  merupakan  hal  penting  untuk melihat  kestabilan  sediaan.  Uji freeze-thaw masuk  ke  dalam  uji  stabilitas  termodinamik sehingga  sesuai  untuk  mengetahui  stabilitas sediaan  nanoemulsi  yang  tidak  stabil  secara termodinamik. 29 Hasil  uji  menunjukkan bahwa  sediaan  nanoemulsi  ekstrak  biji B. javanica stabil  pada  parameter  pH  dan viskositas, namun tidak stabil pada parameter % transmitan. Nilai % transmitan yang tidak stabil  ini  terkait  dengan  perubahan  ukuran globul  setelah  dilakukan freeze-thaw cycle. Hal ini sejalan dengan hasil uji zeta potensial yang  menunjukkan  nilai  yang  rendah, sehingga memungkinkan terjadinya agregasi yang menyebabkan perubahan ukuran globul. Stabilitas  nanoemulsi  dapat  ditingkatkan dengan  cara  mengontrol  beberapa  hal yaitu  jenis  dan  konsentrasi  surfaktan  dan kosurfatan,  jenis  minyak  yang  digunakan, metode  pembuatan,  variable  proses,  dan penambahan  zat  tambahan. 30 Penggunaan konsentrasi  surfaktan  dan  kosurfaktan  pada metode  ini  menghasilkan  droplet  berukuran nano, sehingga optimasi proses dapat menjadi
pilihan  dalam  meningkatkan  stabilitas nanoemulsi yang terbentuk.

## 5.  Kesimpulan
Ekstrak biji B. javanica dapat dibuat sediaan nanoemulsi dengan ukuran globul nanometer, %  transmitan  yang  tinggi,  dan  pH  yang sesuai.  Nanoemulsi  ekstrak  biji B. javanica stabil berdasarkan pH dan viskositas, namun tidak stabil berdasar  kan nilai % transmitan dan zeta potensial. Perlu dilakukan optimasi proses  untuk  meningkatkan  stabilitas nanoemulsi ekstrak biji B. javanica .
Referensi
1.  Kee  JL,  Hayes  ER.  Farmakologi  Proses Pendekatan Keperawatan. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC; 1996.
2.  Yang J, Li S, Xie C, Ye H, Tang H, Chen L,  et  al.  Anti-inflammatory  activity  of ethyl  acetate  fraction  of  the  seeds  of Brucea  Javanica.  J  Ethnopharmacol. 2013; 147(2): 442–446.
3.  Li-li L. Study on anti-inflammatory effect and  adjoint  toxical  and  side  effects  of different  extract  from  fructus  Bruceae. Chinese  Journal  of  Pharmacovigilance. 2011; 8(6): 336–338.
4.  Amini  A,  Hamdin  CD,  Muliasari  H, Subaidah WA. Efektivitas Formula Krim Tabir  Surya  Berbahan  Aktif  Ekstrak Etanol  Biji  Wali  (Brucea  javanica  L. Merr).  Jurnal  Kefarmasian  Indonesia. 2020;  10(1):  50–58.  doi:10.22435/jki. v10i1.2066.
5.  Hajrin W. Formulasi mikropartikel ekstrak etanol herba meniran (Phyllanthus niruri) menggunakan polimer kitosan dan Na-tpp serta uji aktivitas imunomodulator secara in  vivo  (Tesis).  Yogyakarta:  Universitas Gadjah Mada; 2018.
6.  Pratiwi  G,  Martien  R,  Murwanti  R. Chitosan nanoparticle as a delivery system for  polyphenols  from  meniran  extract (Phyllanthus  niruri  L.):  formulation, optimization,  and  immunomodulatory activity.  Int  J  App  Pharm.  2019;  11(2): 50–58.
7.  Nastiti CMRR, Ponti T, Abd E, Grice JE, Benson HAE, Roberts MS.Topical Nano
and  Microemulsions  for  Skin  Delivery. Pharmaceutics. 2017; 9(4): 37. 8.  Jaiswal  M,  Dudhe  R,  Sharma  PK.
Nanoemulsion:  an  advanced  mode  of drug  delivery  system.  3  Biotech.  2015; 5(2): 123-127.
9.  Gurpreet  K,  Singh  SK.  Review of  nanoemulsion  formulation  and characterization  techniques.  Indian Journal  of  Pharmaceutical  Sciences. 2018; 80(5): 781–789.
10. Yu F, Miao Y, Wang M, Liu Q, Yuan L, Geng R, Qiu Q, Ni C, Kay M. Predicting Nanoemulsion Formulation
And Studying  The  Synergism  Mechanism Between  Surfactant  And  Cosurfactant:
A  Combined  Computational  And Experimental  Approach.  International Journal  of  Pharmaceutics.  2022;  615:
121473. https://doi.org/10.1016/j.
ijpharm.2022.121473 11. Talegaonkar  S,  Tariq  M,  Alabood RM.  Design  and  development  of  o/w nanoemulsion  for  the  transdermal delivery  of  ondansetron.  Bulletin  of Pharmaceutical  Research.  2011;  1(3): 18–30.
12. Aswathanarayan JB,  Vittal RR. Nanoemulsions  and  Their  Potential Applications  in  Food  Industry.  Front. Sustain. Food Syst. 2019; 3: 1-21.
13. Meliandari  BRD.  Optimasi  formula sediaan  nanoemulsi  ekstrak  biji  Wali (Brucea javanica) dengan metode simplex lattice  design  (Skripsi).  Mataram: Universitas Mataram; 2022.
14. Hajrin  W,  Budhastra  W,  Juliantoni  Y, Subaidah WA. Formulasi dan karakterisasi nanopartikel  kitosan  ekstrak  sari  buah juwet  (Syzygium cumini) menggunakan metode  gelasi  ionik.  Jurnal  Sains  dan Kesehatan. 2021; 3(5): 742–749.
15. Jusnita  N,  Nasution  K.  Formulasi Nanoemulsi  Ekstrak  Daun  Kelor (Moringa  oleifera  Lamk)  Nanoemulsion Formulation of Moringa leaves (Moringa oleifera Lamk) Extract. Jurnal Teknologi dan Manajemen Agroindustri. 2019; 8(3): 165–170.
16. Susanti,  Hajrin  W,  Hanifa  NI.  Uji
Stabilitas  Salep  Ekstrak  Daun  Tekelan (Chromolaena odorata L.) dengan Variasi Jenis    Basis.  Jurnal  Kedokteran  Unram. 2021; 10(4): 639–644.
17. Indalifiany, A.,  Malaka,  M.  H.,  Sahidin, Fristiohady, A. & Andriani, R. Formulasi dan  uji  stabilitas  fisik  nanoemulgel ekstrak  etanol  spons  Petrosia  Sp.  Jurnal Farmasi  Sains  dan  Praktis.  2021;  7(3): 321–331.
18. Suryanto  E,  Taroreh  MRI.  Ultrasound- assisted  Extraction  Antioksidan  Serat Pangan Dari Tongkol Jagung (Zea mays L.). Chem. Prog. 2019; 12(2).
19. Ahmad  AR,  Juwita  J,  Ratulangi  SAD, Malik  A.  Penetapan  kadar  fenolik  dan flavonoid total ekstrak metanol buah dan daun  Patikala  (Etlingera  elatior  (Jack) R.M.SM).  Pharmaceutical  Sciences  and Research (PSR). 2017; 2(1): 1–10.
20. Hasni K, Ilham Z, Mohamad J, Varman M.  Brucea  javanica  seeds  as  source  of potential natural antioxidants to improve biodiesel thermal and oxidative stability. Malaysian  Journal  of  Fundamental  and Applied Sciences. 2017; 13(3): 207–212.
21. Ablat  A,  Mohamad  J,  Awang  K, Shilpi  JA,  Arya  A.  Evaluation  of antidiabetic  and  nntioxidant  properties of Brucea javanica seed. Scientific World Journal.  2014:  1–8.  doi:http://dx.doi. org/10.1155/2014/786130.
22. Lefebvre G, Riou J, Bastiat G, Roger E, Frombach K, Gimel JC, et al. Spontaneous nano-emulsification: process optimization and  modeling  for  the  prediction  of  the nanoemulsion’s  size  and  polydispersity. International  Journal  of  Pharmaceutics.
2017. doi:https://doi.org/10.1016/j. ijpharm.2017.10.017.
23. Schreiner  TB,  Santamaria-Echart  A, Ribeiro A,  Peres AM,  Dias  MM,  Pinho AP,  Barreiro  MF.  Formulation  and Optimization  of  Nanoemulsions  Using the  Natural  Surfactant  Saponin  from Quillaja  Bark.  Molecules.  2020;  25(7): 1538.
24. Chuacharoen  T,  Prasongsuk  S,  Sabliov C.  Effect  of  surfactant  concentrations on  physicochemical  properties  and
functionality of curcumin nanoemulsions under conditions relevant to commercial utilization. Molecules. 2019; 24, 2744.
25. Sisak  M,  Daik  R,  Ramli  S.  Study  on the  effect  of  oil  phase  and  co-surfactant on  microemulsion  system.  Malaysian Journal  of  Analytical  Sciences.  2017;
21(6): 1409–1416.
26. Widyaningrum  S.  Formulasi  dan  uji aktivitas antimikroba nanoemulsi
minyak
manis-jangan(Cinnamomum burmanni  Nees  ex.  BI.)  terhadap Pseudomonas  aeruginosa  NCTC  12924 dan Staphylococcus aureus ATCC 29213 (Tesis).  Yogyakarta:  Universitas  Gadjah Mada; 2015.
27. Kaur  G,  Pankaj  C,  Halikumar  S. Formulation  development  of  self nanoemulsifying  drug  delivery  system (SNEDDS)  of celecoxib for improvement of  oral  bioavailability.  Pharmacophore. 2013; 4(4): 120–133.
28. Zanela  da  Silva  Marques  T,  Santos- Oleivera  R,  Betzler  de  Oliveira  de Siqueira  L,  Cardoso V,  de  Freitas  ZMF, Barros  RCSA,  et  al.  Development  and characterization  of  a  nanoemulsion containing  propranolol  for  topical delivery.  Int  J  Nanomedicine.  2018;  13:
2827–2837.
29. Ullah N, Amin A, Alamoudi RA, Rasheed SA, Alamoudi  RA,  Nawaz A,  Raza  M, Nawaz T,Ishtiaq S, Abbas SS. Fabrication and Optimization of Essential-Oil-Loaded Nanoemulsion  Using  Box–Behnken Design against Staphylococos aureus and Staphylococos epidermidis Isolated from Oral Cavity. Pharmaceutics. 2022; 14(8):
1640.
30. Pratiwi L, Fudholi A, Martien R, Pramono S. Uji Stabilitas Fisik dan Kimia Sediaan SNEDDS  (Self  Nano  Emulsifying  Drug
Delivery System) dan Nanoemulsi Fraksi Etil  Asetat  Kulit  Manggis  (Garcinia Mangostana  L.).    Traditional  Medicine Journal. 2018; 23(2): 84-90.