Pengaruh Ekstrak Kembang Sepatu (Hibiscus Rosa-SinensisL.) terhadap Jumlah Sel fibroblast dan Angiogenesis  pada Penyembuhan Luka Pencabutan Gigi Tikus Putih (RattusNorvegicus)
The Effect of Kembang Sepatu Extract (Hibiscus Rosa-SinensisL.) To the Quantity of Fibroblast Cell and Angiogenesis On the healing of White Mouse (Rattus Norvegicus) Tooth Extraction
Kusumastuti Endah 1 , Restuti Deno 2 , Kusumawardani Baiq Y. 3
Prodi Profesi FKG,IIK Bhakti Wiyata Kediri
Info Artikel
Sejarah Artikel :
Submitted: 26 November 2019 Accepted : 6 Januari 2020 Publish Online : 24 Januari 2020

## Abstrak
Latar  belakang Proses  proliferasi  ditandai  dengan  terbentuknya fibroblast  dan  angiogenesis.  Salah  satu  tanaman  yang  berkhasiat  untuk mempercepat  penyembuhan  luka  adalah    Kembang  Sepatu. Tujuan penelitian ini  untuk  melihat  jumlah  fibroblast  dan    angiogenesis  pasca  pencabutan  gigi yang  diberi  ekstrak  Kembang  Sepatu  ( Hibiscus  rosa-sinensis L.).  Metode penelitian dilakukan  pada  52  tikus  putih  jantan  yang  dibagi  menjadi  empat kelompok,  yakni  kelompok    kontrol  (CMC)  dan  kelompok  perlakuan  (ekstrak mahkota  Kembang  Sepatu  25%,  50%,100%).  Sebanyak  28  tikus  dikorbankan pada  hari  ketiga,  dan  24  tikus  pada  hari  kelima,  selanjutnya  jaringan  soket diambil dan diproses secara histologis dengan pewarnaan HE untuk mengamati jumlah  fibroblast  dan  angiogenesis.  Hasil  analisis  data  dengan  uji Annova didapatkan pada hari ke-3 p<0.05  dan hari ke-5 p<0,05 artinya ada perbedaan bermakna  antara  kelompok  kontrol  dan  perlakuan Kesimpulan :    jumlah fibroblast  dan  angiogenesis  pada  kelompok  perlakuan  lebih  banyak dibandingkan kelompok kontrol.
Kata Kunci:

## Abstract
Background: The  proliferation  process  is  shown  by  the  development of  fibroblast  and  angiogenesis.  One  of  the  plants  that  have  the  property  to enhance healing process is hibiscus. Objective: This research aimed to observe the  quantity  of  fibroblast  and  angiogenesis  post  tooth  extraction  which  treated with  hibiscus  extract  ( Hibiscus  rosa-sinensis L.).  The  research  methods  were done  to  52  male  white  mouse  that  grouped  into  four,  which  are  one  control group  (CMC)  and  three  intervention  group  (extract  hibiscus  crown  25%,  50%, and 100%). As  much as 28 mice  were sacrificed on the third day and 24  mice were  sacrificed  on  the  fifth  day,  then  socket  tissues  were  extracted  and processed  histologically  with  the  addition  of  HE  colouring  to  observe  the quantity  of  fibroblast  and  angiogenesis.  The  data  results  were  analysed  using Annova  test  which  was  obtained  in  the  third  day  p<0.05  and  the  fifth  day p<0.05  which  means  there  was  a  significant  difference  between  control  group and  the  intervention  group. Conclusion: The  quantity  of  fibroblast  and angiogenesis  in  the  intervention  group  was  higher  compared  to  the  control group.
Keywords: Ekstrak  kembang sepatu, jumlah sel fibroblast, angiogenesis Keywords:
Hibiscus  Extract, Fibroblast Quantity, Angiogenesis
Kusumastuti Endah | Pengaruh Ekstrak Bunga Kemban g ….. Jurnal Wiyata, Vol. 7 No. 1 Tahun 2020

## PENDAHULUAN
Pencabutan  gigi  merupakan  suatu  tindakan  pengambilan  gigi  dari  soketnya  dan  sering dilakukan  pada  gigi  yang  rusak  karena  infeksi  bakteri,  trauma,  penyakit  tertentu  yang  tidak memungkinkan untuk dilakukan perawatan, atau adanya ketidak normalan  posisi tumbuh gigi (impaksi)  sehingga  sering  menimbulkan  gangguan  (Pedlar et  al. ,  2007).  Tubuh  memiliki kemampuan  secara  seluler  dan  biokimia  untuk  memperbaiki  integritas  jaringan  dan  kapasitas fungsional  akibat  adanya  luka,  yang  biasa  disebut  proses  penyembuhan  luka  atau wound healing .  Proses  penyembuhan  luka  terdiri  dari  3  fase.  Tahap  yang  pertama  adalah  fase inflamasi,  tahap  yang  kedua  adalah  fase  proliferasi,  sedangkan  tahap  yang  terakhir  adalah maturasi (Kumar et  al. ,  2007).  Pembentukan  fibroblast  dan  proses  angiogenesis  merupakan bagian proses penyembuhan luka yang berperan pada fase proliferasi (Orsted et.al., 2009) Fibroblas merupakan salah satu komponen penyembuh luka berupa sel yang terdistribusi secara  luas  di  jaringan  ikat,  memproduksi  substansi  precursor  kolagen,  serat  elastis,  dan  serat retikuler.  Pada  saat  jaringan  mengalami  peradangan,  fibroblas  akan  segera  bermigrasi  ke  arah luka, berproliferasi dan memproduksi matriks ekstraseluler kolagen untuk memperbaiki jaringan yang rusak (Gurtner, 2007). Peran fibroblas sangat besar pada proses penyembuhan luka yaitu pada  proses  perbaikan  jaringan,  bertanggung  jawab  pada  persiapan  menghasilkan  produk struktur protein yang akan digunakan selama proses rekonstruksi jaringan. Fibroblas akan aktif bergerak  dari  jaringan  sekitar  luka  ke  dalam  daerah  luka,  kemudian  akan  berkembang (proliferasi)  serta  mengeluarkan  beberapa  substansi  (kolagen,  elastin, hyaluronic  acid , fibronectin  dan  proteoglikan)  yang  berperan  dalam  membangun  (rekonstruksi)  jaringan  baru. Proses  proliferasi  fibroblas  dengan  aktifitas  sintetiknya  disebut  fibroblasia.  Respons  yang dilakukan  fibroblas  terhadap  proses  fibroplasia  adalah  proliferasi,  migrasi,  deposit  jaringan matriks,  dan  kontraksi  luka  (Orsted  et  al.,2009).  Angiogenesis  adalah  proses  pembentukan pembuluh  darah  baru  melalui  tunas  sel  endotel  yang  berasal  dari  pembuluh  darah  yang  sudah ada atau melalui subdivisi intravaskuler (intususepsi) (Ruddy & John., 2011 ; Folkman & Shing ,2008)
Angiognesis merupakan salah satu faktor yang penting dalam proses penyembuhan luka. Proses ini merupakan proliferasi endotel terus menerus membentuk jaringan vaskuler Pembuluh darah  merupakan  suatu  jaringan  yang  dilapisi  oleh  sel  endotel  yang  akan  berinteraksi  dengan faktor  peradangan  dan  angiogenik.  Faktor  angiogenik  berupa  faktor  pertumbuhan  kemudian berikatan  dengan  reseptor  yang  spesifik  terdapat  pada  reseptor  sel  endotel  disekitar  lokasi pembuluh  darah  lama.  Faktor  angiogenik  berikatan  dengan  reseptornya,  sel  endotel  akan teraktivasi  dan  menghasilkan  signal,  yang  kemudian  dikirim  dari  permukaan  sel  ke  nukleus. Organel-organel  sel  endotel  kemudian  mulai  memproduksi  molekul  baru,  antara  lain  adalah enzim  protease  yang  berperan  penting  dalam  degradasi  matriks  ekstraseluler  untuk mengakomodasi  percabangan  pembuluh  darah (Leong  &  Phillips,  2012  ;    Gasparani  ,  2000). Penyembuhan  luka  dipengaruhi  oleh  banyak  faktor  termasuk  jenis  obat-obatan  yang digunakan.Penggunaan obat-obatan untuk penyembuhan luka dapat dilakukan dengan berbagai macam  dan  jenis,  salah  satunya  adalah  penggunaan  obat  herbal.  Penggunaan  atau  pengobatan menggunakan  herbal  semakin  disukai  karena  pada  umumnya  lebih  sedikit  menimbulkan  efek samping  dibandingkan  dengan    obat-obatan  dari  bahan  kimia (Hariana,  2009;  Priosoeryono, 2008).
Kusumastuti Endah | Pengaruh Ekstrak Bunga Kemban g ….. Jurnal Wiyata, Vol. 7 No. 1 Tahun 2020
Kembang  Sepatu  merupakan  tumbuhan  asli  daerah  tropis  di  dataran  Asia.  Senyawa mahkota  bunga  Kembang  Sepatu  yang  berperan  terhadap  penyembuhan  luka  adalah  asam askorbat,  flavonoid  ( quarcetin ),  saponin  dan  tanin.  Flavonoid (quarcetin )  merupakan  senyawa yang  paling  banyak  ditemukan  pada  mahkota  bunga  Kembang  Sepatu  (Dalimartha,  2000) Berdasarkan  latar  belakang  di  atas,  dilakukan  penelitian  tentang  Pengaruh  Ekstrak  mahkota Bunga  Kembang  Sepatu  ( Hibiscus  rossa  sinensis  L )  pada  luka  pencabutan  gigi  terhadap peningkatan  jumlah  sel  fibroblas  dan  jumlah  angiogenesis  dengan  konsentrasi  yang  berbeda, yaitu  25%,  50%  dan  100%.  Penelitian  dilakukan  pada  hari  ke-3  dan  hari  ke  -  5  setelah perlakuan,  karena  pada  hari  tersebut  merupakan  awal    munculnya  fibroblas  dan  proses angiogenesis.

## METODE PENELITIAN
Jenis  penelitian  yang  dilakukan  adalah  penelitian Experimental  Laboratories ,  dengan rancangan  penelitian post  test  only  control  group  design .  Penelitian  ini  dilakukan  di Laboratorium  Biokimia  Fakultas  Kedokteran  Universitas  Airlangga,  Laboratorium  Patologi Anatomi  Fakultas  Kedokteran  Universitas  Airlangga,  Surabaya  dan  Balai  Penelitian  Dan Konsultasi Industri Surabaya.
Sampel dalam penelitian ini adalah tikus putih ( Rattus norvegicus ) jantan dengan berat badan 200-300 gram dan umur 3 bulan. Penelitian ini menggunakan beberapa kelompok sampel antara  lain:  Kelompok  yang  tidak  diberi  ekstrak  mahkota  bunga  Kembang  Sepatu  dan  hanya diberi  larutan  CMC  Na  3%,  kelompok    yang  diberi  ekstrak  mahkota  bunga  Kembang  Sepatu dengan konsentrasi 25%, 50% dan 100%.
Pembuatan  ekstrak  bunga  Kembang  Sepatu  diawali  dengan  identifikasi  tanaman. Metode esktraksi yang digunakan adalah maserasi.Bunga Kembang Sepatu yang dipakai dengan kriteria  masih  segar  belum  berkembang  penuh  dan  langsung  dipergunakan  karena  mahkota Kembang  Sepatu  hanya  bertahan  1–2  hari.  Bunga  Kembang  Sepatu  dikeringkan  (diangin- anginkan)  di  udara  terbuka  sampai  kering  dan  didapatkan  simplisia  kering  bunga  Kembang Sepatu, setelah itu simplisia ditimbang hingga kurang lebih 500 gram. Serbuk simplisia kering direndam  dengan  etanol  96%,    direndam  selama  6  jam  pertama  sambil  sekali-sekali  di  aduk, kemudian  diamkan  selama  18  jam  setelah  itu  disaring  dengan  kapas  dan  kain  kasa  kemudian kertas  saring.  Ampas  yang  didapat  kemudian  diremaserasi  sampai  hasil  filtrat  maserasi mendekati  warna  pelarut  etanol  95%.  Filtrat  yang  diperoleh  kemudian  dipekatkan  dengan menggunakan ratory evaporator pada suhu 50˚C.
Pada  tahap  awal,  tikus  putih  dipelihara  di  dalam  kandang  secara  kelompok  selama  2 minggu untuk adaptasi.Tikus putih dianestesi secara inhalasi dengan eter 10% selama 3 menit. Kemudian  gigi  insisiv  kiri  rahang  bawah  tikus  putih  dicabut  menggunakan  tang  khusus modifikasi  rahang  bawah  anterior.  Setelah  itu  ekstrak  bunga  kembang  sepatu  di  aplikasikan kedalam  soket,  kemudian  soket  dijahit.  Pada  tikus  putih  kelompok  pertama,  tidak  diberikan perlakuan, sebagai kontrol diberikan CMC Na 3%. Pada tikus putih kelompok kedua, dioleskan ekstrak dengan konsentrasi 25%, pada kelompok tikus putih ketiga, dioleskan ektrak Kembang Sepatu  konsentrasi  50%,dan  pada  kelompok  tikus  putih  keempat,  dioleskan  ekstrak  dengan konsentrasi  100%.  Pemberian  ekstrak  dilakukan    1  kali  sehari  sebayak  2  ml.  28  Tikus  putih dikorbankan  pada  hari  ketiga  untuk  mengamati  jumlah  fibroblast,  24  tikus  dikorbankan  pada hari kelima untuk mengamati jumlah angiogenesis.
Kusumastuti Endah | Pengaruh Ekstrak Bunga Kemban g ….. Jurnal Wiyata, Vol. 7 No. 1 Tahun 2020
Pembuatan sediaan histologi diawali dengan pemotongan jaringan dengan ketebalan 2-3 mm, dan difiksasi ke dalam formalin buffer 10% selama 48 jam. Potongan jaringan didehidrasi menggunakan  alkohol,  dalam  tiga  tempat,  masing-masing  2  jam.  Setelah  itu,  dilakukan pembersihan  ( clearing )  dengan  xylol,  dalam  tiga  tempat  masing-masing  1  jam.  Kemudian dilakukan  pembenaman  (embedding/impregnasi),  yaitu  merendam  sampel  ke  dalam  larutan paraffin,  yang  sudah  cair  dengan  suhu  60˚-70˚C,  dalam  tiga  tempat  masing-masing  2  jam. Selanjutnya,  dilakukan blocking atau  pencetakan  (Block-Paraffin),  jaringan  dimasukkan  ke dalam alat pencetak berisi paraffin cair. Setelah mulai membeku, didinginkan pada suhu ± -5˚C. Pemotongan  blok  dilakukan  dengan  microtome  ( 820-Reichtretjung), dengan  ketebalan  3-5  µm dan  panjang  2  cm.  Setelah  itu,  hasil  pemotongan  parafin  yang  berisi  jaringan  dimasukkan  ke dalam water  bath ( Gollenhamp ),  pada  suhu  40˚-45˚C.  Potongan  paraffin  diambil  dengan menggunakan kaca objek, kemudian dipanaskan dalam hot plate ( Heraeus type B5050 ), selama 15 menit.
Kaca objek yang berisikan potongan paraffin dan jaringan yang sudah kering, diwarnai dengan  pewarnaan  rutin  HE.  Proses  pewarnaan  ( staining )  diawali  dengan  perendaman  kaca objek  di  dalam  larutan xylol ,  dalam  tiga  tempat,  masing-  masing  10-15  menit.  Selanjutnya dicuci dengan alkohol, mula-mula 70%, 80% dan 90% agar dehidrasi. Setelah itu, dicuci dengan air  mengalir,  untuk  mengeluarkan  sisa  alkohol.  Kemudian,  dimasukkan  kedalam  larutan Hematoksilin selama  2-3  menit  untuk  mewarnai  inti  sel  dan  didiamkan  dalam  air  mengalir, sampai  terlihat  berwarna  biru/ungu.  Selanjutnya  dilakukan  perendaman  ke  dalam  zat  warna Eosin ,  selama  2-3  menit.  Dilakukan  perendaman  dengan  alkohol  70%,  80%,  dan  90%, kemudian  rendam  dalam  larutan xylol dikeringkan  di  udara.  Kaca  objek  ditutup  dengan cover glass , dan direkatkan dengan Canada Balsam .
Pengamatan  dilakukan  di  bawah  mikroskop  cahaya  dengan  pembesaran  400x menggunakan  pengukur graticule .  Perhitungan  jumlah  angiogenesis  pada  tiap  preparat  secara sistematis  dimulai  dari  pojok  kiri  kemudian  digeser  kekanan  dan  ditarik  ke  atas  demikian seterusnya  sehingga  semua  lapang  pandang  terbaca,  dilanjutkan  pada  potongan  kedua  dan ketiga.Kemudian dihitung jumlah rata-rata makrofag tiap sampel ditentukan dengan menghitung jumlah rata-rata makrofag dari tiga potongan jaringan tersebut.
Data hasil penelitian ini dilakukan uji normalitas dengan menggunakan uji Shapiro Wilk dan  di  uji Levenue untuk  menguji  homogenitasnya.  Data  penelitian  yang  terdistribusi  normal (p>0,05),  dilanjutkan  dengan  uji  parametrik  menggunakan Anova dan  bila  ada  perbedaan dilanjutkan dengan uji LSD ( Least SignificanceDifference ).

## HASIL PENELITIAN

## 1. Jumlah Fibroblast
Berdasarkan penelitian yang dilakukan didapatkan hasil seperti pada tabel dibawah ini.
Tabel 1 . Jumlah sel fibroblast dengan pemberian ekstrak Kembang Sepatu
Kelompok Rerata Standar Deviasi Kontrol 269,29 ± 69,9 25% 334,29 ±107,8 50% 484,71 ± 58,38 100% 541,86 ± 130,67
Kusumastuti Endah | Pengaruh Ekstrak Bunga Kemban g ….. Jurnal Wiyata, Vol. 7 No. 1 Tahun 2020
Kelompok  yang  memiliki  rerata  jumlah  sel  fibroblas  yang  paling  tinggi  adalah kelompok dengan pemberian ekstrak mahkota bunga  Kembang Sepatu 100% dengan jumlah sel fibroblas  541,86.    Kelompok  yang  memiliki  rerata  jumlah  sel  fibroblas  yang  paling  sedikit adalah  pada  kelompok  kontrol  dengan  rerata  jumlah  sel  fibroblas  sebesar  269,29.  Selanjutnya dilakukan  uji  statistika  untuk  mengetahui  pengaruh  pemberian  esktrak  mahkota    bunga Kembang Sepatu terhadap peningkatan jumlah sel fibroblas. Uji statistik yang digunakan adalah uji One  way  anova dimana  asumsi  yang  harus  dipenuhi  data  berdistribusi  normal  (uji normalitas)  dan varian data homogen (uji homogenitas). Hasil  uji  kenormalan  data  dengan menggunakan uji Shapiro Wilk menghasilkan nilai signifikan pada setiap kelompok lebih besar daripada  tingkat  kesalahan  penelitian  yang  digunakan  yaitu  5%  (0.05),  sehingga  kesimpulan yang  dapat  diambil  adalah  data  telah  memenuhi  asumsi  kenormalan  data.  Uji  asumsi  yang kedua  yang  harus  dipenuhi  adalah  varian  data  harus  homogen.  Untuk  melihat  apakah  varian data  homogen,  digunakan  uji levene’s  test .  Nilai  signifikan  uji levene”s test  yang  dihasilkan sebesar  0.089,  nilai  ini  lebih  besar  dari  0.05  sehingga  dapat  ditarik  suatu  kesimpulan  bahwa varian data setelah dilakukan transformasi telah homogen. Hasil uji normalitas dan homogenitas telah memenuhi asumsi uji One Way Anova maka uji One Way Anova bisa dilakukan. Hasil  uji One  Way  Anova menunjukan  Nilai  signifikan  sebesar  0.000,  nilai  ini  lebih kecil dari 0.05 sehingga dapat ditarik suatu kesimpulan bahwa ada pengaruh pemberian esktrak mahkota bunga  Kembang Sepatu terhadap peningkatan jumlah sel fibroblas. Untuk mengetahui kelompok  yang  memberikan  pengaruh,  uji  statistika  dilanjutkan  dengan  uji  Least  Signifikan Different (LSD) dengan hasil disajikan pada tabel di bawah ini.

## Tabel 2 Uji LSD jumlah fibroblast dengan pemberian ekstrak kembang sepatu
Berdasarkan  hasil  uji  LSD  diatas,  dapat  ditarik  suatu  kesimpulan  bahwa  kelompok  ekstrak mahkota  bunga    Kembang  Sepatu  konsentrasi    50%,  secara  statistik  memiliki  jumlah  sel  fibroblas yang sama dengan kelompok ekstrak mahkota bunga Kembang Sepatu konsentrasi 100% karena nilai signifikan  (0.533) lebih besar dari 0.05.
Gb.1 Gambaran Mikroskopik sel fibroblas, kelompok kontrol dg pembesaran 400X Kontrol 25% 50% 100% Kontrol - 0.168 0.00* 0.00* 25% 0.168 - 0.008* 0.002* 50% 0.000* 0.008* - 0.533 100% 0.000* 0.002* 0.533 -
Kusumastuti Endah | Pengaruh Ekstrak Bunga Kemban g ….. Jurnal Wiyata, Vol. 7 No. 1 Tahun 2020
Gb.2 Gambaran Mikroskopik sel fibroblas, kelompok Perlakuan 1 dengan pembesaran 400X
Gb.3 Gambaran Mikroskopik sel fibroblas, kelompok Perlakuan 2dengan pembesaran 400X
Gb.4 Gambaran Mikroskopik sel fibroblas, kelompok perlakuan 3 dengan pembesaran 400X

## 2. Jumlah Angiogenesis
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan, didapatkan hasil seperti pada tabel1.
Tabel 3. Jumlah Rata-rata Angiogenesis dengan pemberian ekstrak kembang sepatu
Rata-rata Kelompok Kontrol 31.11 2.39 25% 42.89 1.66 50% 59.5 3.79 100% 66.83 3.79
Kusumastuti Endah | Pengaruh Ekstrak Bunga Kemban g ….. Jurnal Wiyata, Vol. 7 No. 1 Tahun 2020
Tabel  3  menunjukan  ekstrak  bunga  kembang  sepatu  100%  memiliki  rata-rata  jumlah angiogenesis  yang  paling  besar  yaitu  66.83  dengan  standar  deviasi  3.79.  Pada  penelitian  ini kelompok  kontrol  memiliki  rerata  jumlah  angiogenesis  yang  paling  sedikit  dibandingkan dengan kelompok yang lain. Apabila diperhatikan dari nilai rata-rata jumlah angiogenesis setiap kelompok,  dapat  dilihat  bahwa  ada  kenaikan  rata-rata  jumlah  angiogenesis  ketika  konsentrasi ekstrak bunga kembang sepatu ditingkatkan.
Pada  uji  normalitas Shapiro  Wilk menunjukkan  data  yang  di  uji  terdistribusi  normal karena nilai signifikan yang dihasilkan lebih besar dari 0.05, sehingga dapat disimpulkan bahwa data  tersebut  terdistribusi  normal.Uji  asumsi  yang  kedua  adalah  uji  kehomogenan  varian  data dengan  menggunakan  uji Levene’s  test .  Pada  uji  homogenitas  menunjukkan  nilai  p>0.05 sehingga  dapat  disimpulkan    data  tersebut  memiliki  varian  data  yang  homogen.  Selanjutnya dilakukan  uji  One  Way  Anova  untuk  mengetahui  apakah  terdapat  perbedaan  yang  signifikan jumlah  angiogenesis  dengan  pemberian  ekstrak  kembang  sepatu.  Hasil  uji One  Way  Anova menghasilka  nilai  sig  sebesar  0.000.  Nilai  ini  lebih  kecil  dari  0.05  (P<0,05)  sehingga  dapat disimpulkan  bahwa  ekstrak  bunga  kembang  sepatu  berpengaruh terhadap jumlah  angiogenesis pada  penyembuhan  luka.  Selanjutnya  dilakukan  uji Least  Significant  Difference (LSD)  untuk mengetahui kelompok mana yang mempunyai beda signifikan.
Tabel 4. Uji LSD jumlah angiogenesis dengan pemberian ekstrak kembang sepatu
Kontrol 25% 50% 100% Kontrol - 0.000 0.000* 0.000* 25% 0.000 - 0.001* 0.000* 50% 0.000* 0.000* - 0.00* 100% 0.000* 0.000* 0.000* -
Uji Least Significant Difference (LSD) menunjukkan bahwa semua kelompok memiliki perbedaan jumlah  angiogenesis  karena  nilai  sig.  kurang  dari  0.05  (P<0,05).  Hasil  uji  LSD  ini, diketahui  bahwa  ekstrak  bunga  kembang  sepatu  berpengaruh  terhadap  jumlah  angiogenesis dengan pengaruh paling besar yaitu pada kelompok yang diberi ekstrak 100%.
Gambar  dibawah  menunjukan  adanya  berbedaan  jumlah  angiogenesis,  yakni  pada kelompok  kontrol  terlihat  jumlah  angiogenesis    lebih  sedikit  dibandingkan  dengan  kelompok perlakuan.  Kelompok  perlakuan  100%  terdapat  jumlah  angiogenesis  yang  paling  banyak dibandingkan dengan kelompok perlakuan 25% dan 50%.
Gambaran 5. Mikroskopik  Jumlah Angiogenesis pada Kelompok Kontrol (Pembesaran 400x)
Kusumastuti Endah | Pengaruh Ekstrak Bunga Kemban g ….. Jurnal Wiyata, Vol. 7 No. 1 Tahun 2020
Gambaran 6. Mikroskopik  Jumlah Angiogenesis pada Kelompok 25%
(pembesaran 400x)
Gambaran 7.  Mikroskopik  Jumlah Angiogenesis pada Kelompok 50% (Pembesaran 400x )

## Gambaran 8  Mikroskopik  Jumlah Angiogenesis pada
Kelompok 100% (Pembesaran 400x)

## PEMBAHASAN
Berdasarkan tabel 1. hasil menunjukan  perhitungan jumlah sel fibroblas pada konsentrasi 25%  tidak jauh berbeda dengan kelompok kontrol, pada konsentrasi 50% terlihat lebih banyak dari kelompok kontrol dan konsentrasi 25%, serta pada konsentrasi 100% jumlah sel fibroblas lebih  banyak  dari  kelompok  kontrol,  25%  dan  50%.  Peningkatan jumlah  sel fibroblas tersebut kemungkinan  disebabkan  karena  kandungan  zat  aktif  yang  terdapat  dalam  ekstrak  mahkota bunga Kembang Sepatu seperti, Flavonoid (quarcetin), Saponin, Tanin, Asam askorbat.
Potensi ekstrak mahkota bunga Kembang Sepatu ( Hibiscus Rosa-Sinensis L) disebabkan karena  beberapa  bahan  kimia  alami  yang  terkandung  di  dalamnya  antara  lain,  asam  askorbat, Flavonoid  (quarcetin),  Saponin  dan  Tanin.  Saponin  dapat  meningkatkan  kepadatan  fibroblas dengan adanya sintesis, sekresi, dan aktivasi TGF-β yang berperan dalam proses penyembuhan luka,    saponin  juga  sebagai  antiinflamasi  mampu  menghambat  enzim  siklooksigenase  dan
Kusumastuti Endah | Pengaruh Ekstrak Bunga Kemban g ….. Jurnal Wiyata, Vol. 7 No. 1 Tahun 2020
lipooksigenase,  mengakibatkan  migrasi  sel  radang  ke  area  luka  akan  berkurang  yang  proses penyembuhan  pada  tahap    inflamasi  dipersingkat,  sehingga  dapat  segera  memasuki  fase proliferasi. Tanin berpotensi membantu proses penyembuhan luka melalui beberapa mekanisme seluler,  di  antaranya:  menangkal  radikal  bebas  dan  meningkatkan  oksigenasi,  meningkatkan pembuluh  darah  dan  fibroblas,  deposisi  kolagen,  pembentukan  jaringan  granulasi,    epitelisasi, dan  meningkatkan  kontraksi  luka  melalui  sifat  astringent  yang  dimilikinya.  Secara  tidak langsung berarti tanin mempengaruhi kepadatan kolagen, melalui mekanismenya meningkatkan jumlah fibroblas karena fibroblas bertugas mensintesis kolagen (Nayak and Lexley, 2006).
Asam askorbat dapat mengaktivasi pemberian sinyal intraseluler yang berfungsi untuk regulasi  proliferasi  sel  fibroblast ( MacKay  &  Miller,  2003) .  Jika  jalur  intraseluler  telah  aktif, maka  sensitivitas  sel  tertentu  seperti  sel  radang  dan  endotel  teraktivasi  sehingga  faktor pertumbuhan  akan  meningkat. Platelet-derivedgrowth  factor (PDGF), Transforming  growth factor-beta (TGF-β)  dan Fibroblas  growth  factor (FGF)  merupakan  faktor  pertumbuhan  yang berperan  dalam  proliferasi  sel  fibroblas,  sehingga    dengan  pengaktifan  sinyal  intraseluler  oleh asam  askorbat    akan  merangsang  faktor  pertumbuhan  tersebut  untuk  proliferasi  sel  fibroblas ( Rinastiti, M. 2003) .
Analisa  hasil  penelitian  menunjukan  bahwa  tidak  terdapat  perbedaan  yang  bermakna jumlah sel fibroblas antara kelompok kontrol dengan kelompok perlakuan yuang diberi ekstrak mahkota  bunga  kembang  sepatu  25%,  hal  ini  disebabkan  konsentrasi  yang  diberikan  terlalu rendah sehingga kandungan zat flavonoid tidak terlalu banyak maka peningkatan fibroblas tidak optimal.  Nilai  kelompok  kontrol  dengan  kelompok  perlakuan  yang  diberi  ekstrak  mahkota bunga  Kembang  Sepatu  dengan  konsentrsi  50%  dan  100%  menunjukan  terdapat  perbedaan jumlah sel fibroblas yang bermakna, hal ini disebabkan konsentrasi yang diberikan cukup tinggi sehingga  kandungan  zat  flavonoid  pada  bunga  Kembang  Sepatu  cukup  banyak  dapat meningkatkan  TGF-β  yang  nantinya  akan  menstimulasi  sel    fibroblas,  sehingga  jumlah  sel fibroblas akan bertambah banyak. Senyawa yang terkandung dalam mahkota bunga  Kembang Sepatu  adalah  flavonoid  (quarcetin)  yang  bersifat  antiinflamasi,  mampu  mengatur  fungsi  sel dengan cara merangsang produksi TGF-β yang dapat meningkatkan kemotaksis dan proliferasi fibroblas di daerah luka  dan jumlah sel fibroblas meningkat  ( Iqbal, M, dan Sulistyorini, E., 2009) . Dari  uraian  di  atas  diketahui    bahwa  pemberian  ekstrak  mahkota  bunga  Kembang  Sepatu ( Hibiscus  Rosa-Sinensis L)  pada    luka  pencabutan  gigi  tikus  putih  dengan  konsentrasi  50% sampai dengan 100% lebih meningkat dibandingkan konsentrasi 25%.
Data  pada  tabel  3  menunjukkan  bahwa  hasil  pengujian  statistik  untuk  hari  ke-5 perlakuan  menunjukkan  perbedaan  yang  nyata  (P<0,05)  dari  jumlah  rata-rata  angiogenesis untuk keempat kelompok. Tingginya jumlah angiogenesis secara nyata (P<0,05) pada hari ke-5 pada  kelompok  yang  diberi  ekstrak  bunga  kembang  sepatu  dibandingkan  dengan  kelompok kontrol.
Analisa  hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  tidak  terdapat  perbedaan  yang  bermakna jumlah angiogenesis antara kelompok  kontrol dengan kelompok perlakuan yang diberi ekstrak bunga  kembang  sepatu  25%,  hal  ini  diasumsikan  konsentrasi  yang  diberikan  terlalu  rendah sehingga kandungan ekstrak bunga kembang sepatu  tidak terlalu banyak sehingga peningkatan angiogenesis tidak signifikan. Nilai kelompok kontrol dengan kelompok perlakuan yang diberi ekstrak  bunga  kembang  sepatu  dengan  konsentrasi  50%  dan  100%  menunjukkan  terdapat perbedaan jumlah angiogenesis yang bermakna, hal ini disebabkan konsentrasi yang diberikan lebih  tinggi.  Zat  aktif  yang  terkandung  dalam  ekstrak  bunga  kembang  sepatu  diduga  dapat
Kusumastuti Endah | Pengaruh Ekstrak Bunga Kemban g ….. Jurnal Wiyata, Vol. 7 No. 1 Tahun 2020
mempercepat  proses  pembentukan  pembuluh  darah  terhadap  jaringan  luka  tikus.  Ekstrak  dari tumbuhan  bunga  kembang  sepatu  mengandung  flavonoid,  tanin,  saponin,  asam  askorbat, vitamin  A  dan  vitamin  C.  Komponen  ini  berperan  dalam  penyembuhan  luka.  Penelitian terdahulu  menunjukkan  bahwa  konstituen  fitokimia  seperti  flavanoid  menyebabkan  kontraksi luka dan meningkatkan epitelisasi (Nayak, 2006).
Flavonoid  dan  tanin  memiliki  efek  antiinflamasi  dengan  cara  menghambat  enzim siklooksigenase  dan  lipooksigenase  pada  kaskade  inflamasi,  sehingga  produksi  prostaglandin dan  leukotrien  dapat  berkurang.  Penekanan  prostaglandin  sebagai  mediator  inflamasi  dapat menyebabkan  berkurangnya  nyeri  dan  pembengkakan,  mengurangi  terjadinya  vasodilatasi pembuluh  darah  dalam  aliran  darah  lokal,  sehingga  migrasi  sel  radang  akan  menurun. Kandungan tanin juga berperan pada mekanisme seluler yaitu membersihkan radikal bebas dan oksigen  reaktif,  meningkatkan  penutupan  luka  serta  meningkatkan  pembentukan  pembuluh darah kapiler juga fibroblast ( Iqbal, M, dan Sulistyorini, E., 2009) .
Kandungan  asam  askorbat  menunjang  pembentukan  pembentukan  kolagen,  dimana segera setelah luka, paparan kolagen fibriler ke darah akan menyebabkan agregasi dan aktivasi trombosit  dan  melepaskan  faktor-faktor  kemotaksis  yang  memulai  proses  penyembuhan  luka. Fragmen-fragmen kolagen melepaskan kolagenase leukositik untuk menarik fibroblas ke daerah luka.Selanjutnya  kolagen  menjadi  pondasi  untuk  matrik  ekstraseluler  yang  baru,  sehingga mempercepat pembentukan jaringan granulasi ( MacKay & Miller, 2003; Rinastiti,  2003) .
Saponin  dapat  menstimulasi  angiogenesis  dengan  meningkatkan  produksi Vasculer endothelial  Growth  Factor (VEGF).  VEGF  merupakan  mediator  penting  dalam  pembentukan pembuluh  darah.VEGF  kemudian  meningkatkan  aktivitas  enzim  protease  dan  migrasi  sel endotel.  Enzim  protease  berperan  dalam  degradasi  matriks  ekstraseluler  untuk  percabangan pembuluh  darah,  setelah  itu  sel  endotel  bermigrasi  ke  matriks  ekstraseluler  yang  telah tergradasi. Proses tersebut kemudian diikuti dengan proliferasi sel endotel yang distimulasi oleh faktor angiogenik. Sel-sel endotel kemudian membentuk rangkaian pembuluh darah ( Cotrans dan Kumar, 2005 ).  Berdasarkan  hasil  penelitian,  didapatkan  bahwa  konsentrasi  50%  dan  100% dapat  digunakan  untuk  meningkatkan  jumlah  angiogenesis  yang  kemudian  akan  berpengaruh terhadap  penyembuhan  luka  pencabutan  gigi  tikus  putih  dibandingkan  dengan  penyembuhan secara alami.
Berdasarkan  uraian  di  atas,  ekstrak  bunga  kembang  sepatu( Hibiscus  rosa-sinensis L.) berpengaruh terhadap jumlah angiogenesis pada penyembuhan luka pencabutan gigi tikus putih (Rattus  norvegicus) ditandai  dengan    peningkatam  jumlah  angiogenesis  secara  histologi. Penelitian lebih lanjut diperlukan untuk mengetahui konsentrasi optimal ekstrak bunga kembang sepatu ( Hibiscus rosa-sinensis L.) pada proses penyembuhan luka pencabutan gigi tikus putih.

## SIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan,    maka    dapat  disimpulkan  bahwa ekstrak  mahkota  bunga  Kembang  Sepatu  ( Hibiscus  Rosa-Sinensis L.)    pada  luka  pencabutan gigi tikus putih ( Rattus Norvegicus ) dapat meningkatkan jumlah sel fibroblas dan angiogenesis pada konsentrasi 50% sampai 100%.
Kusumastuti Endah | Pengaruh Ekstrak Bunga Kemban g ….. Jurnal Wiyata, Vol. 7 No. 1 Tahun 2020

## SARAN
Saran pada penelitian ini perlu  dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai  konsentrasi optimal  dari  ekstrak  mahkota  bunga  Kembang  Sepatu  antara  konsentrasi  50%  sampai  100% pada proses penyembuhan luka.

## Referensi
Dalimartha, S. 2000. Atlas Tumbuhan Obat Indonesia jilid 2 . Jakarta: Trubus Agriwidya. Hal 78 – 84.
Cotrans,  R.S,  dan  Kumar  V,.  2005. Pathologic  Basic  of  Disease. 5 th Ed.  Toronto:  W.B. Saunders Company. Hal. 50-87.
Folkman, J., Shing, Y. 2008. Angiogenesis . J Biol Chem: Jakarta  267:10931-4. Gasparani, G,. 2000. Prognostic Value of  Vascular Endothelia Growth Factor In         Breast Cancer . Hal: 37- 44
Gurtner  GC,  2007. Wound  Healing:  Normal  and  Abnormal .  Dalam:  Thorne  CH,  penyunting. Grabb  and  Smith’s    2007  Plastic  Surgery.  Edisi  ke-6.  Philadelphia:  Lippincott Williams & Wilkins; h.       15-22.
Hariana, A. 2009. Tumbuhan Obat dan Khasiatnya Seri I. Jakarta :Swadaya. Hal 30. Iqbal, M, dan Sulistyorini, E., 2009. Kembang Sepatu (Hibiscus rosa-sinensis L). CCRC Farmasi : UGM.
Kumar, V., Cotran, R., S., dan Robbins, S., L. 2007. Buku Ajar Patologi Edisi 7 Volume 1. Leong M, Phillips LG, 2012. Wound Healing. Dalam: Sabiston Textbook of Surgery. Edisi ke- 19. Amsterdam: Elsevier Saunders; h. 984-92
MacKay,D  &  Miller,  AL  2003,  Nutritional  Support  for  Wound  Healing.  Altern  MedRev,
8,4,360.
Nayak,  BS.,  Lexley  MPP.  2006.  “ Catharanthus  Roseus  Flower  Extract  has  Wound  Healing Activity in Sprague Dawley ratts ” . Bio Med Central. Vol. 6. No. 41
Nayak,  B.S.,  Sandiford,  S.,  Maxwell,  A.  2009.  Evaluation  of  the  Wound-healing  Activity  of
Ethanolic Extract of Morinda citrifolia L.Leaf. Evid Based Complement Alternative Medicine ; 6 (3). P. Orsted, Heather L., Keast, David, Forest, Louise. 2009. Basic Principles of Wound Healing.Wound Care Canada vol. 9 Ed.2
Pedlar,  Jonathan,  Frame,  Jhon  W.  2007. Oral  and  Maxillofacial  Surgery:  an  Objective-Based Textbook. New york:Churchill Livingstone. p. 245-255.
Priosoeryono BP, Nalia P, Adinda RL, Vetnizah J, Ietje W, Bayu FR and Risa T. The effect of Ambon  banana  stem  sap  (Musa  paradisiacal  forma  typical)  on  the  acceleration  of wound  healing  process  in  mice  (Mus  musculus  albinus) . Journal  of  Agriculture  and Rural Development in the Tropics and Subtropics 2008: 36-39.
Rinastiti, M. 2003. “Pengaruh Membran Amnion Terhadap Jumlah Sel Fibroblas Pada Proses Penyembuhan Luka”. Majalah Kedokteran Gigi (Dental Journal), Edisi Khusus Oktober 2003. Hal 639-43..
Kusumastuti Endah | Pengaruh Ekstrak Bunga Kemban g ….. Jurnal Wiyata, Vol. 7 No. 1 Tahun 2020
Ruddy,  John.  K.  2011.  “Peran  Integrin  pada  Angiogenesis  Penyembuhan  Luka”. Journal Anatomi-histologi Fakultas Kedokteran Universitas Sam Ratulangi : Manado. Vol. 38 no. 3.