## International Standard of Serial Number 2502-1869
Kualitas  Semen  Cair  Selama  Proses  Simpan  Dingin  Menggunakan  Pengencer  BTS,  Tris Aminomethan dan Cep-3 Pada Babi Landrace
Wolfhardus Vinansius Feka a , Trinil Susilawati b , Nurul Isnain b a Fakultas Pertanian, Sains, dan Kesehatan, Universitas Timor, Kefamenanu, TTU – NTT, Indonesia
b Fakultas Perternakan, Universitas Brawijaya, Malang, Jawa Timur, Indonesia *Correspondence Author: wolfhardusfeka@gmail.com
Article Info

## Abstrak
Article history: Received 12 Agustus 2023 Received in revised form 23 September 2023 Accepted 28 Oktober 2023
Penelitian  ini bertujuan  untuk mengetahui kualitas  semen cair Babi Landrace menggunakan  tiga jenis pengencer yang berbeda dan disimpan pada suhu 2-5°C. Penelitian dilakukan di Laboratorium Fakultas Pertanian, Sains, dan Kesehatan, Universitas Timor, Kefamenanu dengan menggunakan bahan penelitian berupa tiga ekor pejantan Babi Landrace.  Metode  penelitian  yang  digunakan  adalah  eksperimen  laboratorium  dengan  tiga  perlakuan,  masing- masing dengan sepuluh ulangan. Perlakuan ini melibatkan pengencer P 0 (BTS), P 1 (CEP-3 + Kuning Telur 10%), dan P 2 (tris aminomethan + 20% kuning telur). Beberapa variabel yang diamati dalam penelitian ini meliputi viabilitas sperma dan abnormalitas sperma. Analisis data dilakukan dengan menggunakan Rancangan Acak Kelompok (RAK), dan jika terdapat perbedaan nyata antara perlakuan, maka dilakukan uji jarak berganda (Duncan). Hasil penelitian menunjukkan bahwa pengencer P 0 (BTS) merupakan pengencer terbaik dibandingkan dengan pengencer P 1 (CEP-3 + Kuning  Telur  10%)  dan  P 2 (tris  aminomethan  +  20%  kuning  telur).  Pengencer  P 0 (BTS)  mampu  mempertahankan kualitas  semen  cair  Babi  Landrace  selama  48  jam  dengan  persentase  di  atas  40%,  sementara  P 1 dan  P 2 hanya mampu mempertahankan kualitas semen hingga lama penyimpanan 24 jam. Hal ini menunjukkan bahwa pengencer BTS adalah pilihan terbaik untuk mempertahankan kualitas semen cair Babi Landrace dalam aplikasi Inseminasi Buatan (IB) pada kondisi penyimpanan suhu 2-5°C
DOI:
https://doi.org/10.32938/ja.v8i4.3901
Keywords: Semen Cair Babi Landrace
BTS CEP-3
Tris Aminomethane Viabilitas

## 1. Pendahuluan
Ternak babi merupakan salah satu komoditas peternakan yang memiliki potensi besar untuk dikembangkan di daerah Timor. Hal ini disebabkan oleh karakteristik dan kemampuan unggul ternak babi, seperti pertumbuhan yang cepat, jumlah anak per kelahiran (litter size) yang tinggi, efisiensi ransum yang baik (75% - 80%), dan persentase karkas yang tinggi (65% - 80%) pada usia pemotongan 12 bulan ( Aberle et al ., 2001 ).
Peningkatan produktivitas ternak di Indonesia dicapai melalui prinsip teknologi reproduksi ternak, terutama teknik Inseminasi Buatan (IB) untuk meningkatkan mutu genetik ( Susilawati, 2013 ). Aplikasi IB memerlukan pengolahan air mani, baik dalam bentuk cair maupun beku ( Rizal et al ., 2015 ). Penggunaan semen beku dalam teknologi IB sering menghadapi kendala, seperti keterbatasan nitrogen cair sebagai media penyimpanan. Selain itu, proses pembekuan air mani juga dapat mempengaruhi kualitas spermatozoa dan perubahan  seluler  dalam  sperma.  Oleh  karena  itu,  diperlukan  zat  dalam  media  pengencer  yang  dapat  menjaga  kualitas  dan memberikan nutrisi bagi spermatozoa selama proses preservasi dan kriopreservasi ( Devita et al ., 2014 ; Firdausi et al ., 2014 ). Hafez (2008) menjelaskan bahwa pengencer air mani harus memenuhi kebutuhan vital spermatozoa seperti nutrisi, penyangga (buffer), krioprotektan, antibiotik, dan berbagai substrat lain dengan kadar yang tepat untuk mendukung kualitas spermatozoa. Nutrisi ini  bisa  berupa  glukosa  atau  sukrosa,  yang  menyediakan  sumber  energi  bagi  spermatozoa.  Pengencer  yang  baik  harus  mampu meminimalkan  penurunan  tingkat  motilitas  spermatozoa  sehingga  memperpanjang  penyimpanan  lama  pasca  pengenceran.  Oleh karena itu, digunakan kombinasi pengencer seperti BTS, tris aminomethane, dan CEP-3 dengan penambahan kuning telur ayam.
Pengencer BTS banyak digunakan untuk semen babi karena harganya terjangkau dan memberikan hasil yang memuaskan. Penelitian sebelumnya ( Roca et al ., 2006 ) menunjukkan bahwa pengencer BTS dengan penambahan kuning telur meningkatkan daya tahan spermatozoa babi selama penyimpanan. Penelitian Kadirvel et al . (2005) menunjukkan bahwa pengencer BTS dapat digunakan untuk semen babi dengan daya simpan hingga 4 hari pada suhu 17°C, dengan motilitas mencapai 64,43% pada hari ke-4. Penelitian lain oleh Kommisrud et al . (2002) menyatakan bahwa pengencer BTS dapat mempertahankan persentase motilitas spermatozoa hingga 79,8% selama 6 jam penyimpanan pada suhu 16 - 18°C.
Tris aminomethane adalah salah satu bahan pengencer semen yang sering digunakan, terutama ketika dikombinasikan dengan kuning telur. Penelitian yang dilakukan oleh Wiratri et al . (2014) menunjukkan bahwa kombinasi tris aminomethane dan kuning telur dapat menjaga kualitas semen sapi, termasuk motilitas, viabilitas, dan abnormalitas spermatozoa, karena mengandung komposisi yang lengkap. Tambing et al. (2009) juga mengungkapkan bahwa campuran tris dan kuning telur sebanyak 20% meningkatkan kualitas semen beku Kambing Saanen termasuk motilitas, persentase hidup spermatozoa, membran plasma yang utuh, dan tudung akrosom yang  utuh.  Komponen-komponen  dalam  tris  aminomethane  meliputi  tris,  asam  sitrat,  laktosa,  fruktosa,  raffinosa,  antibiotik,  dan aquades. Setiap komponen memainkan peran penting, seperti gula (fruktosa, laktosa, rafinosa, trehalosa, sorbitol) sebagai sumber energi untuk spermatozoa, antibiotik untuk mengendalikan pertumbuhan bakteri dalam pengencer, dan tris serta asam sitrat sebagai penyangga atau buffer.
Selain tris aminomethane, pengencer air mani lain yang semakin populer adalah Caudal Epididimis Plasma (CEP). Komposisi ion  dan  osmolaritas  dalam  CEP  hampir  mirip  dengan  cairan  seminalis  di  cauda  epididymis,  sehingga  mendukung  kehidupan spermatozoa.  Penelitian Ducha et  al. (2012) menunjukkan  bahwa  pengencer  CEP-2  dengan  campuran  kuning  telur  10%  dapat mempertahankan kualitas spermatozoa, mengurangi kerusakan membran sel, dan mempertahankan motilitas spermatozoa. CEP-3 adalah modifikasi dari CEP-2 yang mencakup penggunaan 0,4% albumin untuk menggantikan BSA dan penambahan kuning telur sebanyak 10%. Penggunaan 0,4% putih telur terbukti dapat menggantikan BSA dalam pengencer CEP-2 untuk menyimpan air mani cair pada suhu 3-5°C, dengan memperhatikan persentase motilitas, viabilitas, dan abnormalitas spermatozoa.
Namun, dalam konteks Babi Landrace di NTT, penggunaan pengencer BTS, tris aminomethane, dan CEP-3 dengan penambahan kuning telur belum umum dilakukan atau diketahui masyarakat. Oleh karena itu, penelitian kualitas semen cair selama penyimpanan dingin menggunakan pengencer yang berbeda pada Babi Landrace dianggap penting.

## 2.
Metode 2.1      Lokasi
Penelitian  ini  dilaksanakan di  Laboratorium  Fakultas Pertanian,  Sains,  dan  Kesehatan,  Universitas  Timor,  Kecamatan  Kota Kefamenanu, Kabupaten Timor Tengah Utara, Provinsi Nusa Tenggara Timur.

## 2.2      Materi Penelitian 2.2.1   Ternak
Ternak yang digunakan dalam penelitian ini yaitu 3 ekor ternak pejantan Babi Landrace dengan umur 3 tahun (penghasil semen dengan motilitas >70%).

## 2.2.2   Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  tabung  penampung  semen,  kain  kasa  pemisah  gelatin  dengan  fraksi spermatozoa, dummy, timbangan, aluminium foil, tabung erlenmeyer, tabung perlakuan, pipet, tabung ukur, kertas label, gelas piala, gelas ukur, pipet, kertas saring, kapas, mikroskop, obyek glass dan penutup, kertas pH, hemacyometer , hand counter, dan alat tulis. Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah semen Babi Landrace, BTS, kuning telur, CEP-3, tris aminomethan, aquades, eosin- negrosin, alkohol, dan antibiotic ( penisillin dan streptomisin ).

## 2.3      Prosedur Penelitian

## 2.3.1   Tahap Persiapan
Persiapan  awal  yang  dilakukan  adalah  pemilihan  ternak  pejantan  untuk  diambil  spermatozoa,  alat,  dan  bahan  dalam mempermudah proses penelitian.

## 2.3.2   Tahap Pelaksanaan
A.       Proses Persiapan Pengencer
Langkah – langkah persiapan pengencer semen menggunakan BTS, CEP-3, sitrat kuning telur dengan penambahan kuning telur yaitu:
1. Penyediaan Kuning Telur
Telur yang digunakan adalah telur ayam kampung, kemudian telur dibersihkan dan dicuci dengan alkohol, dikupas sedikit kerabang bagian atas kemudian dibuang putihnya. Kuning telur diletakan diatas kertas saring untuk menghilangkan selaput putih sisa, setelah disaring kuning telur diaduk sampai rata kemudian diambil berdasarkan keperluan.

## 2. Penyediaan BTS
Bahan pengencer dasar yang digunakan adalah pengencer siap pakai BTS®. Pembuatan pengencer diawali dengan penimbangan 5 g serbuk BTS dan dimasukan ke dalam gelas erlemeyer, tambahkan aquabides 100 ml kemudian homogenkan campuran tersebut selama 5 menit hingga homogen, dan disimpan pada waterbath suhu 37 o C digunakan setelah semen ditampung.

## 3. Penyediaan Tris Aminomethane
Proses dimulai dengan mencampurkan tris aminomethane, asam sitrat, laktosa, dan fruktosa dalam sebuah tabung erlenmeyer kemudian ditambahkan 80 ml aquades ke dalam campuran ini, dan selanjutnya diaduk menggunakan pengaduk selama 15 menit hingga mencapai homogenitas. Campuran ini kemudian dipindahkan ke dalam panci dan dipanaskan hingga mendidih, lalu suhunya dikurangi hingga mencapai 37ºC. Setelah mencapai suhu yang sesuai, antibiotik berupa penisilin dan streptomisin ditambahkan ke dalam campuran, lalu dihomogenkan selama 15 menit. Campuran ini kemudian ditempatkan dalam lemari pendingin hingga mencapai hari ketiga. Pada hari ke-3, campuran tersebut dipisahkan menjadi dua bagian, yaitu supernatan (bagian cair di atas) dan endapan (bagian padat di bawah). Hasil supernatan ini siap digunakan untuk langkah selanjutnya ( Susilawati, 2011 ).
4. Penyediaan CEP-3
Dilakukan pencampuran bahan-bahan sebagai berikut NaCl 0,887 g, KCl 0,522 g, CaCl 2 (H 2 O) 2 0,441 g, MgCl 2 (H 2 O) 6 0,813 g, NaHCO 3 0,999  g,  NaH 2 PO 4 1,104  g,  KH 2 PO 4 2,722  g,  Fruktosa  9,91  g,  Sorbitol  1  g,  Tris  16,196  g,  gentamicin-S  0,05  g/L,  lalu ditambahkan  kuning  telur  10%,  albumin  0,4%  dan,  asam  sitrat  8,198  g  dan  1.000  ml  aquabidest.  Pengencer  yang  sudah  jadi ditempatkan dalam tabung reaksi sampai mencapai pH 6,6.

## B. Proses Penampungan dan Pemeriksaan Semen
1. Proses Penampungan
Proses penampungan semen babi dalam penelitian ini menggunakan dummy (induk buatan). Ternak pejantan yang digunakan sebagai  penghasil  spermatozoa  merupakan  ternak  pejantan  yang  telah  dilatih.  Proses  penampungan  semen  babi  dilakukan  sesuai dengan teknik yang benar, yaitu memegang penis dengan tiga jari tangan dengan kuat agar tidak terlepas.
Berikut adalah langkah-langkah penampungan semen babi:
1. Ternak jantan diarahkan dari kandang menuju ruang penampung semen.
2. Setelah ternak jantan berada di dalam ruang penampung semen, dia diarahkan menuju dummy (induk buatan), atau ternak jantan secara alami akan menaiki dummy tersebut.
3. Apabila pejantan menaiki dummy, maka dilakukan rangsangan pada tubuhnya, terutama pada daerah skrotum dan penis, dengan menggunakan teknik pijat hingga keluar penis.
4. Penis yang keluar dipegang dan ditarik secara perlahan-lahan.
5. Penis dipegang dengan kuat agar tidak terlepas, sementara itu dilakukan rangsangan pada ujung penis menggunakan jari kelingking.
6. Gelas  tampung  Ditempatkan  dekat  ujung  penis  saat  terjadi  ereksi,  karena  pada  saat  itu  ternak  akan  tegang  dan mengeluarkan spermatozoa.
7. Proses penampungan air mani berlangsung selama 7-10 menit, menghasilkan air mani sebanyak 200-300 cc dalam satu ejakulasi.
8. Setelah  penampungan  semen  selesai,  semen  segera  dibawa  ke  laboratorium  untuk  pemeriksaan  makroskopis  dan mikroskopis, dan hasilnya dicatat dalam buku agenda.
2.        Pemeriksaan Semen
Pemeriksaan  semen  tahap  awal  untuk  melihat  semen  secara  keseluruhan  sebelum  pengenceran  yaitu  evaluasi  secara makroskopik  dan  mikroskopik.  Pemeriksaan  secara  makroskopis  meliputi  volume,  warna,  bau,  konsistensi,  dan  pH.  Pemeriksaan secara mikroskopis meliputi motilitas, viabilitas, total spermatozoa motil, integritas membrane, abnormalitas ( Susilawati, 2013 ). Pemeriksaan secara makroskopis ( Susilawati, 2013 ): a. Volume Volume semen yng trtampung dapat dibaca langsung pada tabung penampung yang berskala.
b. Warna Warna semen dipriksa dengan pengamatan secara langsung sesaat setelah penampungan.
c. Bau
Bau semen diperiksa dengan cara mencium bau khas semen pada tabung penampung setelah penampungan. d. Konsistensi
Konsistensi atau derajat kekentalan diperiksa dengan menggoyangkan tabung yang berisi   semen secara perlahan-lahan dan  hati-hati  sehingga  terlihat  gerakan  permukaan  semen  di  dalam  tabung.  Pemeriksaan  dilakukan  segera  setelah penampungan.
e. pH
pengukuran  pH  semen  dilakukan  dengan  menggunakan  kertas  lakmus  setelah  penampungan  dan  dicocokkan  dengan standar yang ada.
Pemeriksaan secara mikroskopis:
a.   Viabilitas
Pengamatan  viabilitas  spermatozoa  dilakukan  dengan  menggunakan  teknik  pembuatan  preparat  ulas  eosin-negrosin. Prosedur ini melibatkan langkah-langkah berikut:
1. Teteskan satu tetes semen di atas kaca objek.
2. Tambahkan satu tetes pewarna eosin-negrosin ke tetes semen yang telah ditempatkan pada objek kaca.
3. Dengan menggunakan objek kaca lain, tariknya ke arah yang berlawanan, membentuk sudut sekitar 45 derajat.
4. Siapkan ulas yang terbentuk kemudian dikeringkan.
Setelah persiapan ulas dibuat, selanjutnya pengukuran dilakukan menggunakan mikroskop cahaya dengan perbesaran 400 kali.  Penghitungan  viabilitas  dilakukan  dengan  cara  identifikasi  spermatozoa  yang  hidup,  yaitu  spermatozoa  yang  tidak menyerap warna, dan spermatozoa yang mati, yaitu spermatozoa yang menyerap warna ( Shukla, 2011 ; Susilawati, 2011 ).
𝑉𝑖𝑎𝑏𝑖𝑙𝑖𝑡𝑎𝑠 = 𝐽𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝑆𝑝𝑒𝑟𝑚𝑎𝑡𝑜𝑧𝑜𝑎 𝐻𝑖𝑑𝑢𝑝 𝑋 100% 𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑆𝑝𝑒𝑟𝑚𝑎𝑡𝑜𝑧𝑜𝑎
b.   Abnormalitas Spermatozoa
Pengamatan  abnormalitas  dilakukan  dengan  menggunakan  pewarnaan eosin-negrosin dan  diamati  di  bawah  mikroskop dengan perbesaran 400 kali. Pengamatan abnormalitas dilihat dari spermatozoa yang mempunyai bentuk abnormal seperti ekor putus, tidak ada kepala spermatozoa, ekor menggulung dan adanya bentuk kepala yang tidak normal. Penghitungan dilakukan dengan cara mengamati jumlah spermatozoa yang abnormal dari total jumlah spermatozoa yang diamati ( Shukla, 2011 ; Susilawati, 2011 ).
𝐴𝑏𝑛𝑜𝑟𝑚𝑎𝑙𝑖𝑡𝑎𝑠 = 𝐽𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝑆𝑝𝑒𝑟𝑚𝑎𝑡𝑜𝑧𝑜𝑎 𝐴𝑏𝑛𝑜𝑟𝑚𝑎𝑙 𝑋 100%
𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑆𝑝𝑒𝑟𝑚𝑎𝑡𝑜𝑧𝑜𝑎
c.  Proses Pengenceran
Proses pengenceran semen dilakukan setelah memenuhi persyaratan layak diproses lebih lanjut dengan kriteria gerakan massa: (++ dan +++), gerakan individual : ≥ 70%, konsentrasi : ≥ 1,5 x 10 6 /ml spermatozoa, spermatozoa hidup : ≥ 70%, dan spermatozoa  abnormal  ≤  20%  ( Susilawati,  2011 ).  Setelah  pemeriksaan  semen  yang  layak  digunakan  dalam  penelitian, kemudian diberikan perlakuan pengencer yaitu BTS (kontrol), CEP-3, dan tris animomethane ditambah dengan kuning telur. Masing-masing bahan pengencer diisi dalam tabung yang sudah diberi label, dituangkan kedalam tabung yang terisi semen secara perlahan-lahan lewat dinding tabung setelah pencampuran homogen semen segera disimpan pada refrigerator pada suhu 2-5 0 C.
d.  Evaluasi Semen Setelah Penyimpanan Dingin
Evaluasi  semen  setelah  perlakuan  pengenceran  yaitu  melihat  semen  secara  mikroskopis.  Pengamatan  spermatozoa menggunakan mikroskop dengan pembesaran 10 x 40. Semen akan dievaluasi setiap 6 jam per sampel setelah penyimpanan selama 24 jam.
Parameter yang diamati yaitu:
1. Motilitas (Individu)
2. Viabilitas
3. Abnormalitas

## 2.4     Metode Penelitian
Penelitian  ini  menggunakan  metode  eksperimen  laboratorium  menggunakan  Rancangan  Acak  Kelompok  (RAK)  dengan  3 perlakuan dan 10 ulangan sehingga terdapat 30-unit percobaan. Perlakuan yang dilakukan adalah sebagai berikut:
1. BTS (Kontrol)
2. Tris Aminomethan + Kuning Telur 20%
3. CEP-3 + Kuning Telur 10%

## 2.5 Variabel Penelitian
Variabel yang diteliti dalam penelitian ini adalah kualitas spermatozoa. Parameter yang diukur untuk kualitas spermatozoa adalah presentasi motilitas individu, viabilitas, dan abnormalitas.

## 2.6   Analisis Data
S emua  data  dianalisa  menggunakan  Rancangan  Acak  Kelompok  (RAK)  apabila  terdapat  perbedaan  yang  nyata  (P  <0,05) dilanjutkan dengan uji Duncan.
3. Hasil dan Pembahasan
3.1      Kualitas Semen Segar Babi Landrace
Untuk penelitian ini, kualitas semen segar harus memenuhi persyaratan tertentu. Semen babi yang digunakan diambil dari tiga ekor  Babi  Landrace  yang  berumur  3  tahun.  Selanjutnya,  dilakukan  pemeriksaan  secara  makroskopis  dan  mikroskopis  untuk memeriksa kualitas semen.
Pemeriksaan  makroskopis  mencakup  evaluasi  terhadap  volume  semen,  warna,  pH,  dan  konsistensi.  Hasil  yang  memenuhi syarat adalah semen yang memiliki ciri-ciri sebagai berikut:
• Warna berupa putih hitam (awan gelap).
• pH semen sekitar 7,0.
• Konsistensi semen yang sesuai.
Pemeriksaan mikroskopis mencakup evaluasi terhadap motilitas massa (gerakan kolektif sperma), motilitas individu (gerakan sperma perseorangan), abnormalitas sperma, dan konsentrasi spermatozoa. Kualitas semen yang dapat digunakan untuk penelitian adalah yang memenuhi kriteria sebagai berikut:
• Motilitas massa yang baik (ditandai dengan ++).
• Motilitas individu setidaknya sebanyak 74% atau lebih.
• Kurangnya kelainan sperma yang signifikan.
• Konsentrasi spermatozoa yang memadai.
Hasil evaluasi semen segar yang memenuhi kriteria tersebut dapat dilihat pada Tabel 1 . Tabel 1. Karakteristik Semen Segar Babi Landrace
Warna Putih kekuningan Bau Khas Konsistensi Cair pH 7.0 ± 0.0 Volume (ml) 221 ± 25.14 Konsentrasi (10 6 /ml) 188 ± 53.01 Motilitas massa ++ Motilitas Individu (%) 74 ± 2.10
Pemeriksaan kualitas semen segar yang dilakukan segera setelah penampungan adalah tahap penting dalam penelitian. Tabel 1 menunjukkan hasil pemeriksaan makroskopis semen segar dari Babi Landrace dalam penelitian ini. Rata-rata volume semen segar yang dihasilkan adalah 221 ± 25,14 ml per ejakulat, dengan rentang antara 190 hingga 260 ml. Hasil ini berada dalam kisaran normal, sejalan dengan temuan Sumardani at al ., (2008) yang menyatakan bahwa volume air mani segar babi berkisar antara 150-250 ml per ejakulasi. Pengukuran volume air mani segar dilakukan dengan melihat skala pada tabung yang digunakan.
Pengamatan terhadap warna dan bau semen segar babi dilakukan saat penampungan. Hasil pengamatan menunjukkan bahwa semen segar Babi Landrace memiliki warna putih kegelapan (krem) dan memiliki bau yang khas. Warna dan bau semen segar ini menunjukkan bahwa kondisinya baik, tanpa kontaminasi oleh darah, nanah, urin atau zat kontaminan lainnya. Derajat keasaman atau pH semen Babi Landrace selama penelitian adalah rata-rata 7.0 ± 0,0, dengan konsistensi cair. Semen segar dengan pH sekitar 7 dapat dianggap normal, sesuai dengan yang disebutkan oleh Garner dan Hafez (2008) , bahwa rata-rata pH air mani yang normal berada dalam rentang 6,8-7,8.
Hasil pengamatan pada motilitas massa (pergerakan kolektif sperma) menunjukkan tingkat ++. Motilitas massa sperma dibagi menjadi tiga golongan, yaitu pergerakan massa seperti awan tebal dan bergerak cepat (+++), pergerakan massa seperti awan tebal dan bergerak agak lambat (++), dan pergerakan sperma seperti awan tipis dan bergerak lambat (+). Hasil rata-rata motilitas massa dari penelitian menunjukkan tingkat pergerakan spermatozoa yang sedang.
Dalam  uji  mikroskopis,  kualitas  semen  cair  Babi  Landrace  menghasilkan  rata-rata  motilitas  individu  sebesar  74  ±  2,10%. Persentase motilitas individu ini termasuk dalam kategori normal (50-80%) menurut Garner dan Hafez (2000) . Motilitas spermatozoa dapat dipengaruhi oleh berbagai faktor seperti usia, genetika, jenis hewan, lingkungan, dan pakan. Tingkat motilitas yang tinggi pada penelitian ini diharapkan dapat meningkatkan daya tahan spermatozoa selama proses penyimpanan. Rataan konsentrasi spermatozoa segar yang diperoleh adalah 188±53.01 (10^6/ml), yang sesuai dengan temuan sebelumnya seperti Sumardani (2008) , Johnson et al . (2000) , Gadea (2003) , dan Robert (2006) yang menghasilkan konsentrasi yang serupa.
3.2     Kualitas  Spermatozoa  Setelah  Penyimpanan  Dingin  Menggunakan  Pengencer  BTS  (Kontrol),  Tris  Aminomethane, dan CEP-3 Dengan Penambahan Kuning Telur Pada Suhu 2-5 o C

## 3.2.1   Persentase Viabilitas Spermatozoa
Persentase  spermatozoa  hidup  (viabilitas)  diuji  dengan  pewarnaan  eosin  negrosin.  Spermatozoa  yang  mati  ditandai  dengan kepala spermatozoa yang menyerap warna sedangkan spermatozoa yang hidup ditandai dengan kepala spermatozoa transparan yang berarti spermatozoa tidak menyerap warna.
Persentase viabilitas akan mengalami penurunan selama penyimpanan. Pola penurunan persentase viabilitas semen cair Babi Landrace menggunakan pengencer BTS, Tris Aminomethan + KT 20%, dan CEP +KT 10% selama penyimpanan pada suhu 2-5 o C dapat dilihat pada Gambar 1 .
Gambar 1. Rataan Persentase Viabilitas Spermatozoa Selama Penyimpanan Dingin Menggunakan Pengencer yang Berbeda
Gambar di atas memperlihatkan bahwa pengaruh lama simpan terhadap viabilitas spermatozoa pada pengencer BTS (kontrol), Tris  Aminomethane  ditambah  kuning  telur  20%,  dan  CEP-3  ditambah  kuning  telur  10%  akan  mengalami  penurunan  setelah penyimpanan. Untuk lebih jelasnya dapat dilihat pada Tabel 2 .
0 10 20 30 40 50 60 70 80 3 6 9 24 48 72 BTS (kontrol) CEP + KT 10% TRIS + KT 20% Vi ab ilitas Lama Simpan Dingin
Tabel 2.  Rataan Persentase Viabilitas (%) Spermatozoa Setelah Penyimpanan Dingin Menggunakan Pengencer yang Berbeda Pada Suhu 2-5 o C Jam Perlakuan Viabilitas Spermatozoa (%) 3 P 0 P 1 P 2 84.65 ± 2.38 b 83.61 ± 1.8 a
83.59 ±2.05 a
6 P 0 P 1 P 2 78.52 ± 3.24 b 76.03 ± 2.07 a
76.74 ± 2.06 a 9 P 0 P 1 P 2 74.3 ± 3.77 b 66.66 ± 2.32 a 68.45 ± 1.5 a 24 P 0 P 1 P 2 65.28 ± 2.18 c 54.06 ± 2.45 a 58.95 ± 2.72 b 48 P 0 P 1 P 2 53.91 ± 2.97 c 40.97 ± 2.07 a
48.17 ± 2.84 b 72 P 0 P 1 P 2 42.95 ± 2.53 c 29.63 ± 1.7 a
34.87 ± 2.83 b
Keterangan:
1. P 0 : BTS (Kontrol), P 1 : (CEP-3 + KT 10%), P 2 : (Tris Aminomethan + KT 20%)
2. Notasi berbeda pada kolom yang sama menunjukkan berbeda nyata (P<0,05).
Dari Tabel 2 , menunjukkan bahwa jenis pengencer berpengaruh nyata terhadap viabilitas spermatozoa Babi Landrace, baik pada lama simpan dingin jam ke 3, 6, 9, 24, 48 maupun jam ke 72. Hasil uji Duncan menunjukkan bahwa rataan nilai viabilitas spermatozoa pada lama penyimpanan jam ke 3, jam ke 6 dan jam ke 9 perlakuan P 0 (kontrol) masing-masing dengan nilai 84,65%, 78,52%,  74,3%  memberikan  pengaruh  nyata  (P<0,05)  terhadap  P 1 masing-masing  dengan  nilai  83,61%,  76,03%,  66,66%,  dan  P 2 masing-masing sebesar 83,59%, 76,74%, 68,45%. Hal ini menunjukkan bahwa kombinasi pengencer P 1 dan P 2 memiliki kemampuan yang sama dalam mempertahankan viabilitas spermatozoa.
Hasil Uji Duncan menunjukkan bahwa persentase nilai viabilitas pada lama simpan jam ke 24, jam ke 48, dan ke 72 pada perlakuan P 0 (kontrol) masing-masing sebesar 65,28%, 53,91%, dan 42,95% berbeda nyata (P<0,05) terhadap P 1 masing-masing dengan nilai 54,06%, 40,97%, 29,63%, dan P 2 dengan nilai 58,95%, 48,17%, 34,87%. Namun, pada perlakuan P 1 dan P 2 menunjukkan bahwa perlakuan P 2 (Tris Aminomethane + KT 20%) menghasilkan nilai persentase lebih tinggi dibandingkan perlakuan P 1 (CEP-3 + KT 10%). Penurunan viabilitas spermatozoa selama penyimpanan disebabkan oleh meningkatnya jumlah spermatozoa rusak dan mati akibat kekurangan energi ( Solihati et al ., 2008 ). Viabilitas akan menurun akibat suhu dingin selama penyimpanan, ketersediaan energi dalam pengencer semakin berkurang, dan menurunnya pH karena terjadi peningkatan asam laktat hasil metabolisme spermatozoa dan  adanya  kerusakan  membran  plasma.  Penggunaan  kuning  telur  dalam  pengencer  Tris  Aminomethane  dan  CEP-3  mampu melindungi spermatozoa dari cold shock akibat penyimpanan dingin, sehingga pengencer Tris Aminomethane + KT 20%  dan CEP-3 + KT  10%    mempunyai  kemampuan  yang  tidak  jauh  berbeda  untuk  mempertahankan  viabilitas  dalam  penyimpanan  refrigerator. Sedangkan pada lama waktu penyimpanan menunjukkan bahwa semakin lama semen disimpan maka terjadi penurunan viabilitas spermatozoa.
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  semakin  lama  semen  cair  disimpan  pada  suhu  2-5°C,  maka  akan  terjadi  penurunan motilitas  spermatozoa  secara  proporsional.  Temuan  ini  sejalan  dengan  penelitian Solihati et  al .  (2008) ,  yang  menyatakan  bahwa persentase viabilitas spermatozoa akan menurun akibat suhu dingin. Semakin lama penyimpanan berlangsung, maka asam laktat hasil metabolisme spermatozoa akan meningkat, yang dapat menyebabkan penurunan pH air mani. Selain itu, kerusakan membran plasma dan akrosom juga dapat terjadi, dan ketersediaan energi dalam pengencer akan semakin berkurang.
Penelitian Rizal  (2009) juga  mendukung  temuan  ini,  yang  menyatakan  bahwa  semakin  lama  semen  disimpan,  maka ketersediaan  nutrisi  dalam  medium  semen  akan  semakin  berkurang,  sehingga  viabilitas  spermatozoa  akan  menurun.  Viabilitas spermatozoa tergantung pada keutuhan membran spermatozoa. Metabolisme sperma berjalan dengan baik jika membran plasma sel tetap utuh. Penurunan viabilitas selama penyimpanan hingga 72 jam dapat disebabkan oleh berkurangnya energi yang dibutuhkan untuk  kelangsungan  hidup  dan  motilitas  sperma.  Selain  itu, Sumardani et  al .,  (2008 )  menyatakan  bahwa  penurunan  viabilitas spermatozoa  selama  penyimpanan  dapat  dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor,  termasuk  motilitas  dan  konsentrasi  spermatozoa  serta derajat keasaman (pH). Proses pembekuan semen juga dapat menyebabkan stres fisik dan kimia pada membran sel, yang pada akhirnya dapat mengakibatkan penurunan viabilitas spermatozoa ( Susilawati, 2011 ).

## 3.2.2   Persentase Abnormalitas Spermatozoa
Spermatozoa yang memiliki morfologi yang normal merupakan syarat bagi terjadinya fertilisasi. Menurut Rizal dan Herdis (2008) , abnormalitas digolongkan menjadi dua yaitu abnormalitas primer sebagai ketidaknormalan bentuk karena proses spermatogenesis dan abnormalitas  sekunder  sebagai  ketidaknormalan  atau  kerusakan  yang  disebabkan  saat  penampungan  atau  pemeriksaan  semen. Abnormalitas primer biasanya dijumpai bentuk spermatozoa dengan kepala kecil atau besar, kepala lebih dari satu atau ekor lebih dari satu sementara abnormalitas sekunder umumnya dijumpai bentuk spermatozoa tanpa kepala atau ekor.
Pola persentase abnormalitas spermatozoa semen cair pada pengencer yang berbeda yaitu BTS, Tris Aminomethane + KT 20%, dan CEP-3 + KT 10% selama penyimpanan dapat dilihat pada Gambar 2 .
Rataan persentase abnormalitas spermatozoa semen cair Babi Landrace yang diencerkan menggunakan pengencer BTS, Tris Aminomethan + KT 20%, dan CEP-3 + KT 10% yang disimpan pada suhu 2-5 o C dapat dilihat pada Tabel 3 .
Berdasarkan  hasil  Uji  Duncan,  ditemukan  bahwa  persentase  abnormalitas  spermatozoa  pada  Babi  Landrace  pada  lama penyimpanan jam ke 3, 48, dan 72 tidak menunjukkan perbedaan yang signifikan antara perlakuan P 0 (kontrol), P 1 , dan P 2 . Namun pada jam ke 6, 9, dan 24, perlakuan P 0 (kontrol) menunjukkan perbedaan yang signifikan dengan perlakuan P 1 , sedangkan perlakuan P 2 tidak  menunjukkan  perbedaan  yang  signifikan  dengan  P 0 .  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  kehadiran  albumin  putih  telur  yang
menggantikan  BSA  pada  pengencer  CEP-3  +  KT  10%  dan  penghilangan  raffinosa  pada  pengencer  tris  aminomethane  +  KT  20% tampaknya dapat melindungi sperma normal hingga 72 jam penyimpanan.
Pada lama penyimpanan 72 jam, persentase abnormal pada pengencer P 0 (kontrol), P 1 , dan P 2 masing-masing adalah 10,14%, 10,46%, dan 10,58%. Persentase abnormalitas tersebut masih dapat dianggap baik, sejalan dengan pendapat Ax et al ., (2008) yang menyatakan bahwa semen dengan kelainan lebih dari 20% tidak dapat digunakan untuk Inseminasi Buatan (IB). Morfologi spermatozoa memiliki korelasi positif dengan fertilitas, sehingga air mani dengan abnormalitas sperma sekitar 20% atau lebih biasanya  memiliki kualitas yang diragukan ( Susilawati, 2011 ).
Penurunan persentase abnormalitas spermatozoa selama penyimpanan yang semakin lama sejalan dengan temuan Devita et al . (2014) ,  yang  menyatakan  bahwa  lamanya  penyimpanan  juga  berpengaruh  pada  jumlah  spermatozoa  yang  mengalami  kelainan. Penurunan abnormalitas dapat disebabkan oleh proses pendinginan semen, seperti yang dijelaskan oleh Susilawati et al . (2016) , yang menyebutkan bahwa kelainan sekunder bisa terjadi selama pendinginan atau saat pembuatan ulas persiapan.
Gambar 2. Rataan Persentase Abnormalitas Spermatozoa Selama Penyimpanan Dingin Pada Suhu 2-5 o C Menggunakan Pengencer yang Berbeda
Tabel 3. Rataan Persentase Abnormalitas Spermatozoa Babi Landrace Menggunakan Pengencer yang Berbeda pada Suhu 2-5 o C Jam Perlakuan Abnormalitas Spermatozoa (%) 3 P 0 P 1 P 2
5.81 ± 0.5 5.54 ± 0.51 5.35 ± 0.7 6 P 0 P 1 P 2 7.56 ± 0.59 b 6.24 ± 0.25 a 7.61 ± 0.56 b 9 P 0 P 1 P 2 8.04 ± 1.03 b
7.34 ± 0.33 a 8.5 ± 0.38 b 24 P 0 P 1 P 2 9.09 ± 0.49 b 7.96 ± 0.46 a
8.92 ± 0.55 b 48
P 0 P 1 P 2 9.48 ± 0.63 9.58 ± 0.57 9.7 ± 0.66 72 P 0 P 1 P 2
10.14 ± 0.75 10.58 ± 0.55 10.46 ± 0.58 Keterangan: 1. P 0 : BTS (Kontrol), P 1 : CEP-3 + KT 10%, P 2 : Tris Aminomethan + KT 20%
2. Notasi berbeda pada kolom yang sama menunjukkan berbeda nyata (P<0,05).

## 4. Simpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  ini  dapat  disimpulkan  bahwa:  Pengencer  terbaik  dalam  mempertahankan  kualitas  semen  cair  Babi Landrace pada suhu 2-5 o C adalah pengencer BTS (kontrol) yang memiliki persentase motilitas tertinggi dibandingkan pengencer Tris Aminomethan + 20% kuning telur dan CEP-3 + 10% kuning telur. Dari hasil penelitian menunjukkan bahwa pengencer BTS dapat disimpan selama 48 jam sedangkan pengencer Tris Aminomethane + KT 20% dan pengencer CEP-3 + KT 10% dapat disimpan selama 24 jam dengan persentase motilitas spermatozoa minimal 40% sesuai Standar Nasional Indonesi (SNI) tentang penggunaan semen cair Babi Landrace.

## Pustaka
Aberle,  E.D.,  Forrest,  J.C.,  Gerrard,  D.E.,  and  Mills,  E.W.  2001.  Principles  of  Meat  Science.  Iowa  (USA):  Kendall/Hunt  Publishing Company.
Ax, R.L.M., Dally, B.A., Didion, R.W., Lenz, C.C. Loce, D.D. Varner, B. Hafez, and M.E. Bellin, 2008. Semen Evaluation in farm Animal Reproduction ed By Hafez ESE. 7 th . Lea Febiger: 365-375.
Devita,  V.B.,  T.  Susilawati,  dan  S.  Wahyuningsih.  2014.  Kualitas  Semen  Sapi  Limousin  pada  Pengencer  yang  Berbeda  Selama Pendinginan. J. Ternak Tropika. 15(1): 13-20.
Ducha, N., T. Susilawati, and S. Wahyuningsih. 2012. Ultrastructure and Fertilizing Ability of Limousin Bull Sperm after Storage in CEP-2 Extender with and Without Egg Yolk. Pakistan Journal of Biological Sciences . 15: 979-985.
Firdausi, P.A., T. Susilawati, dan S. Wahyuningsih. 2014. Kualitas Semen Sapi Limousin Selama Pendinginan Menggunakan Pengencer CEP-2 Dengan Penambahan Berbagai Konsentrasi Santan. J. Ternak Tropika . 15(1): 21-30.
0 2 4 6 8 10 12 3 6 9 24 48 72 BTS (kontrol) CEP + KT 10% TRIS + KT 20% In te gritas M em b ran ( %) Lama Simpan Dingin (jam)

## International Standard of Serial Number 2502-1869
Gadea, J. 2003. Semen extenders used in the artificial insemination of swine. Spanish J. Of Agric. Research. 1:17-27.
Garner, D.L., and E.S.E. Hafez, 2008. Spermatozoa and Seminal Plasma, in Reproduction in Farm Animal. 7 th eds. Edited by Hafez E.S,E and B Hafez. 2008. Lippincott & Williams. Baltimore, Marryland. USA: 96-109.
Hafez, E.S.E. 2008. Preservation and Cryoprsevation of Gamets and Embryos In B. Hafez and E.S.E Hafez (ed). Reproduction in Farm Animals. 7 th edition. Lippincott Wiliams. Philadelphia. ISBN 0-683-30577-8 : 431-442.
Indriani, T. Susilawati, dan S. Wahyuningsih. 2013. Daya Hidup Spermatozoa Sapi Limousin yang Dipreservasi dengan Metode Water Jacket dan Free Water Jacket. Jurnal Veteriner . 14(3): 379-386.
Johnson, L.A., K.F. Weitze, P. Fiser, and W.M.C. Maxwell. 2000. Storage of boar semen . J Anim Sci. 62: 143-172.
Kadirvel, G., Nasker, S., Das, A., and Hasin, D. 2005. Effect of different extenders on preservation of boar semen at 17°C [abstrack]. In: Gadella B.M & Colenbrander B, editor. Proceedings of the V International Conference on Boar Semen Preservation; 2003 Agt 24- 27; Doorwerth, The Netherlands. Theriogenology . 63: 685-692.
Kommisrud, E., Paulenz, H., Sehested, E., and Grevle, I.S. 2002. Influence of boar and semen parameter on motility and acrosome integrity in liquid boar semen stored for five days. Acta Vet. Scand . 43(1): 49-55.
Rizal, M., dan Herdis. 2008. Inseminasi Buatan Pada Domba. Penerbit Rineka Cipta. Jakarta. ISBN: 978-979-518-952-7. Robert, V.K. 2006. Semen processing. Extending & Storage for Artificial Insemination in Swine. Dept. of Animal Science University of Illinois.
Roca, J., M. Hernadez, G. Carvajal, J.M. Vazquez, and E.A. Martinez. Factors influencing boar sperm cryosurvival . J. Anim. Sci . 84: 2692-2694.
Sholikah, N., N. Isnaini, A.P.A. Yekti, dan T. Susilawati. 2016. Pengaruh Penggantian Bovine Serum Albumin (BSA) Dengan Putih Telur Pada CEP-2 Terhadap Kualitas Semen Sapi Peranakan Ongole Pada Suhu Penyimpanan 3-5 0 C. Jurnal Ilmu-Ilmu Peternakan. 26(1): 7-15.
Shukla, M.K. 2011. Applied Veterinary Andrology and Frozen Semen Technology. New India Publishing Agency. India. ISBN: 978-93- 80235-64-6.
Solihati, N., R. Idi, S.D. Rasad, M. Rizal, dan M. Fitriati. 2008. Kualitas Spermatozoa Cauda Epididimis Sapi Peranakan Ongole (PO) Dalam Pengencer Susu, Tris dan Sitrat Kuning Telur pada Penyimpanan 4-50 o C. Animal Reproduction . 10(1): 22-29.
Sumardani, N.L.G., L.Y. Tuty, dan P.H. Siagian. 2008. Viabilitas spermatozoa babi dalam pengencer BTS (Beltsville Thawing Solution) yang dimodifikasi pada penyimpanan berbeda. Media Petern. 31: 81-86.
Susilawati, T. 2000. Breeding Soundness Evaluation (andrological examination). Evaluation Method of Males for Fertility. Asia Link Training Course. Faculty of Veterinary Medicine. Bogor Agriculture University. Bpgor. Indonesia.
_______ 2002. Sexing Spermatozoa Kambing Peranakan Etawah Menggunakan Gradien Putih Telur. Widya Agrika . 10(2): 97-105.
_______  2011. Spermatozoatology. Universitas Brawijaya Pres. Malang. ISBN: 978-602-8960-04-05.
_______ 2013. Pedoman Inseminasi Buatan Pada Ternak. Universitas Brawijaya Press. Malang. ISBN: 978-602-203-458-2. Susilawati, T., F.E. Wahyudi, I. Anggraini, N. Isnaini, dan M.N. Ihsan. 2016. Penggantian Bovine Serum Albumin Pada Pengencer CEP-
2  Dengan  Serum  Darah  Sapi  dan  Putih  Telur  Terhadap  Kualitas  Semen  Cair  Sapi  Limousin  Selama  Pendinginan. Jurnal Kedokteran Hewan . 10(2): 98-102.
Tambing, S.N., I.K. Sutama, dan M. Sariubang. 2009. Efektivitas konsentrasi kuning telur di dalam pengencer tris dengan dan tanpa plasma semen terhadap kualitas semen beku kambing Saanen. JITV . 13(4): 315-322.
Wiratri,  V.D.B.,  T.  Susilawati,  dan  S.  Wahyuningsih.  2014.  Kualitas  Semen  Sapi  Limousin  Pada  Pengencer  yang  Berbeda  Selama Pendinginan. J. Ternak Tropika . 15(1): 13-20.