## SINTESIS DAN UJI TOKSISITAS SENYAWA ANALOG KALKON DARI 4’- HIDROKSIASETOFENON DENGAN DIMETOKSIBENZALDEHID
Lusrianti 1 , Nur Balatif 2 dan Adel Zamri 3
1. Mahasiswa Program S1 Kimia FMIPA Universitas Riau 2,3. Dosen Jurusan Kimia FMIPA Universitas Riau e-mail: adel.zamri@lecturer.unri.ac.id

## ABSTRAK
Senyawa kalkon terdiri dari dua cincin aromatik yang dihubungkan oleh tiga atom karbon dengan sistem karbonil α, β  tak  jenuh.  Senyawa  kalkon  dilaporkan  memiliki  bioaktivitas  yang  beragam  dan  menarik,  diantaranya  sebagai antioksidan,  antikanker,  anti-inflamasi,  antialzheimer  dan  antimikroba.  Senyawa  (E)-3-(2,3-dimetoksifenil)-1-(4’- hidroksifenil)prop-2-en-1-on  disintesis  melalui  iradiasi  gelombang  mikro  dengan  katalis  KOH  dan  pelarut  etanol absolut.  Analisis  struktur  senyawa  ini  dilakukan  menggunakan  spektroskopi  UV,  FTIR,  HRMS  dan 1 H-NMR. Rendemen  yang  diperoleh  yaitu  74,6%.  Berdasarkan  uji  toksisitasnya,  senyawa  ini  tidak  berpotensi  sebagai antikanker karena memiliki nilai LC 50 = 291,789 µg/mL.
Kata Kunci : kalkon, gelombang mikro, sintesis dan toksisitas

## 1. PENDAHULUAN
Senyawa  kalkon  adalah  salah  satu  metabolit sekunder  termasuk  golongan  flavonoid  yang memiliki dua cincin aromatik dihubungkan oleh tiga  karbon  α,  β  tak  jenuh  dalam  struktur senyawa  karbonil  tak  jenuh  (Choudhary et  al ., 2011). Berdasarkan struktur umumnya, senyawa kalkon (1) memiliki ikatan rangkap terkonjugasi dan sistem elektron π terdelokalisasi pada kedua sistem cincin aromatik.
O
A B 1' 2' 3' 4' 5' 6' b a 1 2 3 4 5 6

## (1)
Secara  alami,  senyawa  kalkon  menjadi senyawa  prekursor  untuk  biosintesis  flavonoid dan  senyawa  heterosiklik  lainnya.  Senyawa kalkon  merupakan  senyawa  flavonoid  yang paling  sederhana  yang  dapat  ditemukan  pada berbagai  jenis  sayuran,  teh,  kedelai,  buah- buahan  dan  pigmen  bunga  berwarna  kuning pada tumbuhan Heliantheaetribe,
Coreopsidinae,  Subtribe dan  famili  Compositae (Dyrager, 2012).
Senyawa kalkon dilaporkan memiliki bioaktivitas  yang  menarik  sebagai  antioksidan (Oktavani et al., 2014), antikanker (Brahmana et
al., 2013),  anti-inflamasi  (Chen et  al., 2013), antialzheimer (Pan et al., 2012) dan antimikroba (Eryanti et al., 2010). Bioaktivitas yang terdapat pada  senyawa  kalkon  selain  disebabkan  oleh adanya gugus α, β tak jenuh yang terdapat pada senyawa kalkon juga dipengaruhi oleh substituen  yang  terikat  pada  kedua  cincin aromatiknya (Kamble, 2011).
Senyawa  kalkon  baik  yang  diperoleh melalui  sintesis  maupun  dari  bahan  alam dianggap sebagai molekul  yang sangat berharga dalam bidang farmasi, namun untuk mengetahui potensi  aktivitas  senyawa  kalkon,  dibutuhkan senyawa  kalkon  dalam  jumlah  yang  cukup dengan  variasi  struktur  yang  beragam.  Oleh karena  itu,  sintesis  di  laboratorium  merupakan solusi terbaik untuk mendapatkan dan mengetahui potensi aktivitas senyawa kalkon.
Sintesis  senyawa  kalkon  dapat  dilakukan dengan  beberapa  metode,  diantaranya  metode konvensional  dan  metode  nonkonvensional. Metode  konvensional  dapat  dilakukan  dengan berbagai  cara  seperti  pengadukan,  refluks  dan gerus,  namun  membutuhkan  waktu  yang  lama dalam  proses  sintesisnya.  Selain  itu,  juga memiliki  selektivitas  yang  rendah.  Dewasa  ini telah  berkembang  sintesis  senyawa  kalkon melalui  metode  iradiasi  gelombang  mikro
O O HO H O OMe OMe HO KOH 6N etanol absolut -H 2 O OMe OMe
( microwave ),  yang  dapat  meningkatkan  produk sintesis  senyawa  kalkon  dalam  waktu  yang singkat.  Gelombang  mikro  dapat  menurunkan energi aktivasi dalam proses reaksi kimia, hal ini menyebabkan  reaksi  dapat  berlangsung  dengan cepat  sehingga  waktu  reaksi  secara  signifikan menurun dibandingkan dengan sistem pemanasan  konvensional.  Oleh  karena  itu,  pada penelitian ini disintesis senyawa kalkon dari 4’- hidroksiasetofenon  dengan  2,3-dimetoksibenzal dehid  melalui  iradiasi  gelombang  mikro, kemudian  diuji  potensi  antikankernya  melalui toksisitas dengan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT).

## 2. METODOLOGI PENELITIAN Bahan dan Peralatan
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  4’-hidroksiasetofenon  (Aldrich),  2,3- dimetoksibenzaldehid  (Aldrich),  etanol  absolut, KOH  6N  (Merck),  HCl  3N  (Merck),  indikator universal (Merck), n-heksana, metanol, etil asetat,
kloroform,  diklorometana,  akuades,  air  laut  dan dimetil sulfoksida.
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah microwave (Samsung  ME  109  F  500 MHz),  alat  pengukur  titik  leleh Fisher  John, lampu  Ultra  Violet  (254  nm  dan  366  nm),  plat KLT  GF 254 ,  HPLC  (Shimadzu  LC  20  AD), spektrofotometer  FTIR  (Shimadzu,  IR  Prestige- 21), spektroskopi NMR (Agilent 500 MHz DD2), spektroskopi  massa  (water  LCT  Premier  XE Mode Positif), spektrofotometer UV-Vis (Genesys 10 S UV-Vis v4.002 2L9N175013) dan peralatan  gelas  yang  biasa  digunakan  di laboratorium.

## Rancangan Penelitian
Sintesis  senyawa  kalkon  dilakukan  dalam satu  tahap  reaksi  melalui  kondensasi Claisen- Schimdt antara  senyawa  4’-hidroksi  asetofenon dengan  2,3-dimetoksibenzaldehid  menggunakan iradiasi  gelombang  mikro  dengan  katalis  KOH dan  pelarut  etanol  absolut  seperti  terlihat  pada Gambar 1 .
Gambar 1 . Sintesis senyawa kalkon

## Prosedur Kerja Sintesis
Senyawa  4’-hidroksiasetofenon  (5  mmol) dimasukkan  ke  dalam  Erlenmeyer  250  mL, ditambahkan  etanol  absolut  (7,5  mL),  kemudian KOH  6N  (12,5  mL)  secara  tetes  demi  tetes. Setelah itu, diamkan selama ± 2 menit kemudian ditambahkan  senyawa  2,3-dimetoksibenzaldehid (5  mmol).  Campuran  ini  diiradiasi  gelombang mikro selama 9 menit dengan diuji KLT setiap 1 menit.  Campuran  didiamkan  selama  ±  24  jam. Setelah  itu,  15  mL  akuades  dingin  ditambahkan ke dalam campuran dan tetes demi tetes HCl 3N sampai pH campuran netral. Kemudian dibiarkan dalam lemari pendingin ± satu hari agar terbentuk endapan yang maksimal.
Endapan  yang  terbentuk  disaring  dengan menggunakan  corong buchner ,  dicuci  dengan akuades dan n-heksan dingin, kemudian divakum hingga kering. Produk yang diperoleh direkristalisasi  dengan  etil  asetat  lalu  diuji
kemurniannya  dengan  uji  KLT,  titik  leleh,  dan analisis HPLC.
Uji  Toksisitas  dengan  Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
Sampel  sebanyak  20  mg  dilarutkan  dalam  2 mL  metanol  (larutan  induk,  konsentrasi  10000 µg/mL),  kemudian  dari  larutan  induk  dibuat konsentrasi  yang  berbeda  1000  µg/mL,  100 µg/mL  dan  10  µg/mL  dengan  cara  pengenceran bertingkat.  Kemudian  disiapkan  vial  5  mL  yang sudah dikalibrasi untuk masing-masing konsentrasi.  Sampel  dipipet  kedalam  masing- masing  vial  sebanyak  0,5  mL,  lalu  pelarut diuapkan hingga mengering. Selanjutnya, kedalam masing-masing vial ditambahkan 50 µL DMSO dan sedikit air laut. Setelah itu, sebanyak 10  ekor  larva  udang  dimasukkan  kedalam  vial tersebut  dan  ditambah  air  laut  hingga  batas kalibrasi 5 mL.
Tingkat  toksisitas  diukur  dengan  cara menghitung jumlah larva udang yang mati dalam selang  waktu  24  jam.  Pengujian  dilakukan sebanyak tiga kali pengulangan dengan perlakuan yang  sama  untuk  masing-masing  konsentrasi. Data yang diperoleh dianalisis untuk menentukan nilai  LC 50 dengan  metode  kurva  menggunakan tabel analisis probit.
Kontrol  negatif  dalam  uji  BSLT  disiapkan, sebanyak  50  µL  DMSO  dipipet  dengan  pipet mikro dimasukkan kedalam vial dan ditambahkan air  laut  sedikit.  Kemudian  dimasukkan  10  ekor larva Artemia salina Leach dan ditambah air laut hingga batas kalibrasi 5 mL.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Sintesis Senyawa Kalkon
Penelitian ini mensintesis senyawa senyawa
( E )-3-(2, 3-
dimetoksifenil)-1-(4’
-
hidroksifenil)  prop-2-en-1-on  (CL1).  Senyawa murni  yang  diperoleh  berupa  kristal  tak beraturan berwarna kuning dengan berat 1,0599 gram dan  rendemen  74,6%.  Kemurnian senyawa  yang  diperoleh  ditunjukan  dengan hasil  KLT  satu  noda  pada  perbandingan  eluen n-heksana:  etil  asetat:  kloroform  (6:  2:  2) dengan  Harga  R f =  0,60.  Selain  itu,  didukung oleh  hasil  kromatogram  HPLC  yang  satu puncak pada λ 240 nm, t R : 11 menit dan λ 360 nm,  t R :  11  menit  dan  titik  leleh  149-150°C. Lebih jelasnya dapat dilihat pada Tabel 1 .
Tabel 1. Sifat fisik senyawa kalkon Struktur Rumus Molekul Rendemen (%) Titik Leleh (°C) Warna Kristal
O HO OMe OMe
C 17 H 16 O 4 74,6 149-150 Kuning Senyawa  CL1  yang  telah  murni  kemudian dianalisis
strukturnya menggunakan
spektroskopi  UV,  FTIR, 1 H-NMR  dan  HRMS. Serapan  maksimum  pada  spektrum  UV  untuk senyawa CL1 terlihat pada λ 213, 229 dan 325 nm.  Hal  ini  menunjukkan  terjadinya  eksitasi elektron  dari  n–  *  untuk  karbonil  dan  –  * untuk kedua gugus aromatik pada senyawa
kalkon. Selain itu, hal ini juga menunjukkan  bahwa  pada  senyawa  CL1  ada ikatan  rangkap  terkonjugasi.  Semakin  banyak ikatan  rangkap  terkonjugasi  terdapat  pada senyawa kalkon maka energi ikatannya menjadi semakin  lemah  sehingga  panjang  gelombang
yang dihasilkan semakin besar. Spektrum FTIR senyawa  CL1  memperlihatkan  adanya  vibrasi pada bilangan gelombang 3106 cm -1 menunjukkan  adanya  gugus  O-H,  vibrasi  pada bilangan  gelombang  3089  cm -1 menunjukkan adanya  gugus  C-H  aromatik,  vibrasi  pada bilangan  gelombang  2906  cm -1 menunjukkan adanya  gugus  C-H  alifatik,  vibrasi  pada bilangan  gelombang  1646  cm -1 menunjukkan adanya  gugus  C=O,  vibrasi  pada  bilangan gelombang  1090  cm -1 menunjukkan  adanya gugus  C-O  metoksi  dan  vibrasi  pada  bilangan gelombang  1031  cm -1 menunjukkan  adanya gugus C-O alkohol. Lebih jelasnya dapat dilihat pada Tabel 2 .
Tabel 2. Data spektrum FTIR, HRMS dan 1 H-NMR senyawa kalkon
Data Spektrum 1 H-NMR
(300 MHz, Dimetilsulfoksida, δ ( ppm))
Data Spektrum IR (KBr, cm -1 ) Data Spektrum MS ( m/z ) 8,04 (d, 1H, Ar-6’-H); 8,04 (d, 1H, Ar-2’-H); 7,92 (d, 1H  , J β = 15,7 Hz); 7,84 (d, 1H α , J α = 15,75 Hz); 7,58 (t, 1H, Ar-5-H); 7,13 (m, 1H, Ar-4-H); 7,13 (m, 1H, Ar-6-
H); 6,89 (d, 1H, Ar-5’-H); 6,89 (d, 1H, Ar-3’-H); 3,83 (s, 3106 (O-H); 3089 (C-H aromatik); 2906 (C-H alifatik); 1646 (C=O); 1570 (C=C); 1090 (C-O metoksi) 285,1127
Data Spektrum 1 H-NMR (300 MHz, Dimetilsulfoksida, δ ( ppm)) Data Spektrum IR (KBr, cm -1 ) Data Spektrum MS ( m/z ) 3H, Ar-2-OCH 3 ) dan 3,78 (s, 3H, Ar-3-OCH 3 ) dan 1031 (C-O alkohol) Spektrum 1 H-NMR senyawa CL1
memperlihatkan  adanya  pergeseran  kimia  pada δ  8,04  ppm  (d,  2H),  hal  ini  menunjukkan adanya  proton  H  yang  simetris  pada  gugus aromatik  posisi  C-2’  danC-6’  dengan  puncak doublet . Pergeseran kimia pada δ 6,89 ppm (d, 2H)  juga  menunjukkan  adanya  proton  H  yang simetris  pada  gugus  aromatik  posisi  C-3’  dan C-5’  dengan  puncak  juga doublet .  Pergeseran kimia  pada  δ  7,84  ppm  (d,  IH, J =  15,75  Hz) dan 7,92 ppm (d, IH, J = 15,7 Hz) berturut-turut memperlihatkan  adanya  proton  H  pada  C α dan C β, harga  kopling  ( J )  menunjukkan  bahwa ikatan  rangkap  pada  C α dan  C β mempunyai konfigurasi trans. Pergeseran kimia pada δ 7,13 ppm  (m,  1H)  menunjukkan  proton  H  pada gugus  aromatik  posisi  C-4  dengan  puncak multiplet . Pergeseran kimia pada δ 7,58 ppm (t, 1H)  menunjukkan  proton  H  pada  gugus aromatik  posisi  C-5  dengan  puncak triplet . Pergeseran  kimia  pada  δ  7,13  ppm  (m,  1H) menunjukkan  proton  H  pada  gugus  aromatik posisi C-6 dengan puncak multiplet . Pergeseran kimia  pada  δ  3,83  ppm  (s,  3H)  menunjukkan proton  H  pada  metoksi (OCH 3 )  posisi  C-2  dari gugus  aromatiknya,  sedangkan  pergereseran kimia δ 3,78 ppm (s, 3H) menunjukkan proton H pada
Spektrum HRMS
senyawa
CL1
menunjukkan adanya puncak ion molekul yang dihitung  sebagai  C 17 H 16 O 4 (M+H) + pada 285,1127  m/z  dan  yang  ditemukan  pada spektrum  massa  285,1132  m/z,  lihat Tabel  2 . Selisih massa molekul tersebut 0,0005.
Berdasarkan puncak ion molekul yang dihitung dan  yang  ditemukan  dalam  spektrum  MS tersebut,  didapatkan  selisih  massa  antara keduanya  sangat  kecil.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  senyawa  kalkon  yang  telah  disintesis telah  murni  dan  mempunyai  struktur  sesuai dengan yang diharapkan.

## Uji Toksisitas
Aktivitas  toksisitas  senyawa  kalkon  yang
telah  disintesis  diuji  dengan  metode Brine Shrimp  Lethality  Test (BSLT).  Pengujian aktivitas  toksisitas  suatu  senyawa  dengan metode  ini  menggunakan  larva Artemia  salina Leach sebagai hewan ujinya. Hal ini dikarenakan  pertumbuhan  larva Artemia  salina Leach dapat dikorelasikan dengan pertumbuhan suatu sel kanker. Pergerakan zat-zat menembus membran sel sangat penting bagi kehidupan sel.
Zat-zat  tertentu  jika  dapat  menembus membran  sel,  maka  akan  masuk  kedalam  sel dan  dapat  merusak  sel,  sehingga  hal  ini  dapat menyebabkan kematian sel.
Senyawa  CL1  diuji  pada  konsentrasi  1000, 100  dan  10  µg/mL.  Perbedaan  konsentrasi  ini dimaksudkan untuk mengetahui tingkat aktivitas  toksisitas  masing-masing  senyawa terhadap  kematian  larva Artemia  salina Leach. Data  hasil  uji  toksisitas  dari  tiga  senyawa kalkon  terhadap  larva Artemia  salina Leach dianalisis  untuk  menentukan  nilai  LC 50 dengan metode  analisis  probit.  Pada  metode  BSLT, senyawa murni dianggap menunjukkan aktivitas  toksisitas  bila  mempunyai  nilai  LC 50 kecil dari 200 µg/mL (Anderson and
Mclaugnlin, 1991).
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan, dapat diketahui bahwa senyawa CL1 tidak memiliki aktivitas toksisitas, hal ini dapat dilihat dari nilai LC 50 = 291,789 µg/mL (> 200 µg/mL).

## 4. KESIMPULAN
Senyawa ( E )-3-(2,3-dimetoksifenil)-1-(4’- hidroksifenil)prop-2-en-1-on disintesis menghasilkan  rendemen  74,6%.  Berdasarkan hasil  analisis  struktur  mengunakan  spektoskopi UV,  FTIR, 1 H-NMR  dan  HRMS,  senyawa kalkon  yang  diperoleh  dari  hasil  penelitian sesuai  dengan  senyawa  target  yang  diharapkan. Senyawa  CL1  memiliki  nilai  LC 50 =  291,789 µg/mL.  Berdasarkan  nilai  LC 50 tersebut  dapat
diketahui  bahwa  senyawa  CL1  tidak  berpotensi sebagai antikanker.

## 5. DAFTAR PUSTAKA
Anderson,  J.E  and  Mclaugnlin  J.L.  1991.  A Blind  Comparison  of  Simple  Bench  Top
Bioassay and Human Tumor Cell Cytotoxicity  as  Antitumor  Prescreens. Pytochem An . 2 (3): 107-111.
Brahmana,  E.M.,  Teruna,  H.Y  dan  Zamri,  A.
2013.  Sintesis  dan  Uji  Toksisitas  Senyawa ( E )-1-(3-Bromofenil)-3-(4-Klorofenil)prop- 2-en-1-on. Jurnal Indonesian Chemia Acta .
4 (1):21-25.
Chen,  Y.H.,  Wang,  W.H.,  Wang,  Y.H.,  Lin, Z.Y.,  Wen,  C.C  and  Chern,  C.Y.  2013. Evaluation of the Anti-Inflammatory Effect of  Chalcone  and  Chalcone  Analogues  in  a Zebrafish  Model .  Molecules. 18 (1):  2052-
2060.
Choudhary,  A.N  and  Juyal,  V.  2011.  Synthesis of  Chalcone  and  Their  Derivates  as
Antimicrobial Agents. International
Journal  of  Pharmacy  and  Pharmaceutical Sciences . 3 (3): 125-128.
Dyrager,C.  2012.  Design  and  Synthesis  of
Chalcone  and  Chromone  Derivatives  as Novel Anticancer Agents. Tesis . University
opf Gothenburg, Swiss.
Eryanti, Y., Zamri, A., Jasril dan Rahmita. 2010. Sintesis  Turunan  2’-hidroksi  Kalkon melalui  Kondensasi  Claisen-Schmidt  dan Uji  Aktivitasnya  sebagai  Antimikroba.
Jurnal Natur Indonesia . 12 (2): 223-227.
Kamble,  V.M.,  Hatnapure,  G.D.,  Keche,  A.P., Biradjar, S., Patil, S.G., Tale, R.H., Rodge, A.H.,  Turkar,  S.S  and  Gour,  K.  2011. Synthesis  and  Biological  Evaluation  of  a Novel  Series  of  Methoxylatedchalcone  as Antioxidant  and  Antimicrobial  Agents. Journal  of  Chemical  and  Pharmaceutical Research . 3 (6): 639-648.
Oktavani,  J.,  Teruna,  H.Y  dan  Jasril.  2014. Sintesis  Kalkon  Piridin  dan  Turunannya dari  Asetilpiridin  dan  Indol-3-Karbaldehid serta Uji Aktivitasnya sebagai Antioksidan.
Jurnal Online Mahasiswa FMIPA .
1 (2):100-104.
Pan, Y., Chen, Y., Yu, X., Wang, J., Zhang, L., He,  Y.,  Zheng,  Y  and  Zheng,  J.  2012.  The Synthesis  of  a  Novel  Chalcone  and Evaluation  for  Antifree  Radical  Activity and
Antagonizing the Learning
Impairments  in  Alzheimer’s  Model.
Cellular  Phsiology  and  Biochemistry.
29 (3):949-958.