## AKTIVITAS MUKOLITIK IN VITRO EKSTRAK ETANOL DAUN SIRIH
MERAH ( Piper crocotum Ruiz dan Pav.) PADA MUKOSA USUS SAPI DAN IDENTIFIKASI KANDUNGAN KIMIANYA
Yulias Ninik Windriyati, Aqnes Budiarti, Igustin Azmi Syahida Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim Semarang

## ABSTRAK
Daun  sirih  merah  ( Piper  crocotum Ruiz  and  Pav.)  merupakan  salah  satu  obat tradisional  yang  digunakan  sebagai  obat  batuk.  Dasar  penggunaan  tanaman  tersebut sebagai mukolitik (pengencer dahak) belum banyak diteliti. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui  aktivitas  mukolitik  ekstrak  etanol  daun  sirih  merah  terhadap  mukosa  usus sapi secara in vitro dan mengidentifikasi golongan senyawa aktifnya.
Ekstrak etanol daun sirih merah diperoleh dengan metode maserasi menggunakan penyari etanol 70%. Ektrak etanol yang diperoleh kemudian dibuat berbagai konsentrasi larutan uji yaitu 0,1%; 0,3%;  0,5%;  0,7% dan 0,9% dalam 80% mukus sapi. Viskositas larutan uji diukur dengan viskosimeter rion. Aktivitas mukolitik in vitro ditunjukkan oleh kadar  ekstrak  yang  mampu  menurunkan  viskositas  larutan  mukus  dan  sebagai  kontrol positif  digunakan  larutan  0,1%  asetilsistein.  Identifikasi  golongan  senyawa  aktif dilakukan dengan kromatografi lapis tipis.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa aktivitas mukolitik ekstrak etanol daun sirih merah pada konsentrasi 0,3% setara dengan asetilsistein 0,1%. Ekstrak etanol daun sirih merah mengandung senyawa golongan alkaloid, saponin, flavonoid dan polifenol.
Kata kunci  :  Daun sirih merah, mukolitik, mukosa usus sapi

## PENDAHULUAN
Batuk  merupakan  suatu  mekanisme  fisiologi  yang  bermanfaat  untuk mengeluarkan  dan  membersihkan  saluran  pernapasan  dari  dahak,  zat-zat  perangsang asing,  dan  unsur  infeksi.  Dengan  demikian  batuk  merupakan  suatu  mekanisme perlindungan.  Batuk  terutama  disebabkan  oleh  infeksi  virus,  misalnya  virus  selesma ( common  cold ),  influenza,  cacar  air,  dan  juga  oleh  radang  pada  cabang  dan  hulu tenggorokan  ( bronchitis, pharingitis ).  Virus-virus  ini  dapat  merusak  mukosa  saluran pernapasan, sehingga menciptakan “pintu masuk” bagi infeksi kuman dan virus, misalnya Pneumococci dan Haemophillus (Tjay  dan  Rahardja,  2007).  Untuk  meringankan  dan mengurangi frekuensi batuk diberikan terapi simptomatik dengan obat-obat pereda batuk. Salah  satunya  adalah  mukolitik  yang  dapat  membantu  mengurangi  kekentalan  dahak sehingga mudah dikeluarkan.
Mukus  diproduksi  saluran  pernapasan  yang  merupakan  cairan  kompleks  berupa selaput gel mukoprotein dan mukopolisakarida. Komposisi mukus adalah 95% air dan 5% glikoprotein. Komposisi mukus intestinal mamalia adalah 97,5% air, 0,8% protein, 0,73% substansi organik lain, dan 0,88% garam organik (Frandson, 1986).
Banyak tanaman obat yang tumbuh di Indonesia telah digunakan oleh masyarakat secara  tradisional  untuk  meredakan  batuk  diantaranya  daun  sirih  merah.  Senyawa fitokimia  yang  terkandung  dalam  daun  sirih  merah  yakni  alkaloid,  saponin,  tanin  dan flavonoid (Pkimunlam, 2008), sedangkan Sudewo (2005) menyebutkan bahwa daun sirih merah mengandung senyawa golongan flavonoid, alkaloid, polifenol, tannin.
Penelitian  yang  dilakukan  oleh  Maretta  pada  tahun  2006  menunjukkan  bahwa terdapat  aktivitas  mukolitik  pada  ekstrak  n-heksan  dan  etanol  herba  sirih  merah  ( Piper miniatum Bl) terhadap mukosa usus sapi secara in vitro dan golongan senyawa aktif yang terdapat dalam ekstrak etanol tersebut adalah senyawa golongan flavonoid, terpenoid dan saponin.  Terdapat  pula  penelitian  lain  yang  menyimpulkan  bahwa  minyak  atsiri  daun sirih  ( Piper  betle L.)  memiliki  aktivitas  mukolitik  (Sulistiawati,  2003),  dan  ekstrak  air daun  sirih  dapat  mengencerkan  dahak  sehingga  mudah  dikeluarkan  dari  tenggorokan (Arifin,  2004).  Penelitian  ini  membuktikan  adanya    aktivitas  mukolitik  ekstrak  etanol daun sirih merah  pada mukosa usus sapi secara in vitro.

## METODOLOGI

## Bahan Penelitian
Daun sirih merah diperoleh dari daerah Kopeng, Salatiga, Jawa Tengah, dipanen pada  bulan  Juni  2010.  Sebagai  cairan  penyari  etanol  70% pharmaceutical  grade (Brataco).  Bahan  untuk  uji  mukolitik  adalah  mukus  usus  sapi,  aquadestilata,  kalium dihidrogen  fosfat  p.a  (Merck),  NaOH  p.a  (Merck),  dan  asetilsistein  (kapsul  fluimucyl yang mengandung 200 mg asetilsistein). Bahan untuk identifikasi golongan senyawa aktif adalah  asam  formiat  (p.a),  asam  asetat  (p.a),  aseton  (p.a),  aquadest,  kloroform  (p.a), metanol  (p.a),  amoniak  (p.a),  anisaldehid  asam  sulfat  (p.a),  ferri  chloride  (p.a), dragendroff,  rhodamine  B,  rutin,  quillaja  bark,  quinine,  tannin,  metil  stearat,  lempeng KLT (sellulosa dan silika gel F254).

## Alat Penelitian
Alat  yang  digunakan    ayakan  mesh  40,  timbangan  elektrik  (Ohaus  AR  3130),  alat-alat gelas,  kertas  saring, thermostatic  waterbath (Memmert),  kompor  listrik,  kipas  angin, thermometer,  pH  meter  (Hanna  HI  8014),  viskosimeter  (Rion  VT-04F).  Alat  untuk identifikasi  golongan  senyawa  aktif  adalah  bejana  kromatografi,  pipa  kapiler,  kertas penjenuh, penyemprot bercak, lampu UV 254 nm dan lampu UV 365 nm.

## Cara Penelitian
Larutan  mukus  yang  telah  diencerkan  dalam  larutan  dapar  fosfat  pH  7 sebanyak  80%,  diinkubasi  pada  suhu  37 o C  selama  30  menit.  Pengadukan dilakukan  sebanyak  5  kali,  lalu  dilakukan  pengujian  dengan  menggunakan viskometer Rion. Larutan uji berupa ekstrak etanol daun sirih merah dibuat dalam berbagai konsentrasi, yaitu 0.1, 0.3, 0.5, 0.7, dan 0.9%. dalam larutan mukus 80% serta  larutan  asetilsistein  0.1  %  sebagai  kontrol  positif.  Setelah  diinkubasi  pada suhu  37 o C  selama  30  menit,  dilakukan  pengujian  dengan  menggunakan viskometer  Rion.  Data  viskositas  yang  diperoleh  kemudian  dianalisis  secara statistik  dengan  menggunakan  uji  Kruskal  Wallis  dan  dilanjutkan  dengan  uji Mann Whitney.
Identifikasi  golongan  senyawa  aktif  dilakukan  dengan  kromatografi  lapis  tipis untuk  alkaloid,  flavonoid,  saponin,  senyawa  polifenolat  dan  tanin.  Pengamatan kromatogram  dilakukan  di  bawah  sinar  UV  254  nm,  UV  256  nm  dan  visible.  Analisis dilakukan dengan membandingkan bercak ekstrak etanol daun sirih merah dengan bercak senyawa  pembanding  untuk  masing-masing  golongan,  kemudian  dilakukan  perhitungan Rf masing-masing bercak .
0 1 2 3 4 0,10 0,30 0,50 0,70 0,90 Asetil Sistein Mukus 80% 1,16 0,93 0,73 0,6 0,47 0,9 3,66 Viscositas

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Larutan mukus 80% dibuat dengan melarutkannya dalam larutan dapar fosfat pH 7  dengan  maksud  untuk  menjaga  agar  komposisi  dari  mukus  tidak  berubah.  Proses inkubasi dan pengujian dilakukan pada suhu 37 o C agar didapat suatu kondisi reaksi antara larutan  uji  dengan  mukus  sesuai  dengan  kondisi  fisiologis  manusia.  Saat  pengujian berlangsung  suhu  dijaga  agar  tetap  37°C  karena  kekentalan  akan  menurun  dengan naiknya  suhu  atau  sebaliknya,  sehingga  pengukuran  menjadi  kurang  tepat.  Viskositas larutan uji dan larutan kontrol dapat dilihat pada gambar 1 di bawah ini.
Gambar 1.  Viskositas larutan uji ekstrak etanol daun sirih merah, kontrol positif (asetilsistein 0,1%), kontrol negatif (larutan mukus 80%).
Gambar  1  menunjukkan  bahwa  viskositas  semua  larutan  uji  lebih  kecil dibandingkan kontrol negatif. Secara teoritis, larutan uji mempunyai efek mukolitik jika viskositasnya  lebih  kecil  dari  kontrol  negatif,  sehingga  larutan  uji  ekstrak  etanol  daun sirih  merah  pada  konsentrasi  0,1%;  0,3%;  0,5%;  0,7%  dan  0,9%  mempunyai  aktivitas mukolitik.  Data  tersebut  juga  menunjukkan  semakin  besar  konsentrasi  ekstrak  etanol daun  sirih  merah  dalam  larutan  uji,  semakin  kecil  viskositasnya.  Hasil  pengukuran viskositas  juga  menunjukkan  bahwa  viskositas  larutan  uji  pada  konsentrasi  0,3% sebanding dengan viskositas kontrol positif.
Hasil analisis statistik dengan uji Mann Whitney menunjukkan adanya perbedaan yang  bermakna  antar  kelompok  larutan  uji  sehingga  perbedaan  kadar  larutan  uji berpengaruh  terhadap  aktivitasnya  sebagai  mukolitik.  Larutan  uji  dengan  kadar  ekstrak 0,3%  setara  dengan  kontrol  positif,  yang  ditunjukkan  adanya  hasil  berbeda  tidak bermakna,  sehingga  aktivitas  mukolitik  ekstrak  etanol  daun  sirih  merah  yang  setara dengan kontrol positif adalah kadar 0,3%.
Identifikasi  kandungan  kimia  ekstrak  etanol  daun  sirih  merah  dilakukan  secara kualitatif  terhadap  alkaloid,  saponin,  flavonoid,  polifenolat  dan  tanin  karena  diduga senyawa-senyawa tersebut terdapat dalam ekstrak etanol daun sirih merah.
Identifikasi  alkaloid  dilakukan  dengan  pembanding  quinine  karena  senyawa  ini merupakan senyawa golongan alkaloid. Sampel positif mengandung alkaloid jika bercak berwarna jingga  sampai  merah  coklat  pada  pengamatan  sinar  tampak.  Pengamatan  pada UV254 dan UV365 menghasilkan bercak berwarna biru dan meredam (Robinson, 1995). Pengamatan  secara  visibel  terhadap  bercak  sampel  maupun  pembanding  menghasilkan warna kuning. Nilai Rf quinine sebesar 0,50 dan Rf sampel sebesar 0,73 (Gambar 2). Hal ini berarti sampel ekstrak etanol daun sirih merah mengandung alkaloid dengan polaritas lebih rendah dibandingkan dengan quinine.
Visk ositas (d P a’s) Kadar (%)
Gambar  2. Kromatogram identifikasi alkaloid ekstrak etanol daun sirih   merah Fase Diam : Silika gel F254, Fase Gerak : Metanol : Amoniak (100 : 1,5) P = Pembanding quinin, S = Ekstrak Etanol Daun Sirih Merah
Kandungan  saponin  ditunjukkan  dengan  pengamatan  secara  visibel  bercak sampel maupun pembanding  yang berwarna biru. Robinson (1995) menyebutkan bahwa warna biru tersebut diakibatkan oleh adanya reaksi Liebermann-Burchard yaitu salah satu warna  yang  paling  umum  terjadi  pada  senyawa  terpenoid  tinggi  dan  steroid.  Bila  sterol beserta triterpena alkohol dicampur dengan anhidrat asetat dan setetes asam sulfat pekat akan dihasilkan warna biru.
Gambar  3.  Kromatogram identifikasi saponin pada ekstrak etanol daun sirih merah Fase Diam : Silika Gel F254, Fase Gerak : Kloroform : Metanol (95 : 5) P = Saponin dari quillaja bark, S = Ekstrak Etanol Daun Sirih Merah
Gambar  3.  Menunjukkan  bercak  sampel  terlihat  sangat  jelas  dan  agak  besar dibandingkan  dengan  senyawa  pembandingnya  sehingga    hal  ini  berarti  kadar  senyawa aktif  saponin  dalam  sampel  cukup  tinggi.  Nilai Rf bercak  dari  ekstrak  etanol  daun  sirih merah sebesar 0,65 sedangkan Rf senyawa pembanding sebesar 0,48; 0,61; 0,83. Identifikasi flavonoid dilakukan dengan senyawa pembanding rutin (kuersetin-3- rutinosida)  yang  merupakan  glikosida  flavonol  karena  merupakan  jenis  flavonoid  yang paling sering dijumpai pada pemeriksaan flavonoid, banyak terdapat dalam tumbuhan dan
P            S
P            S P            S UV 254 nm UV 365 nm Visible P            S P            S P            S UV 254 nm
UV 365 nm Visibel
tersebar luas dalam pigmen tanaman (Harborne, 1987). Sellulosa digunakan sebagai fase diam  karena  sangat  cocok  untuk  isolasi  flavonoid  dan  bersifat  non  polar.  Penampak bercak yang digunakan adalah uap ammonia untuk memberikan suasana basa pada bercak agar dapat terdeteksi secara visible maupun di bawah sinar ultraviolet. Pada pengamatan secara  visibel,  bercak  sampel  maupun  pembanding  berwarna  kuning.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  sampel  mengandung  flavonoid.  Robinson  (1995)  menyebutkan beberapa  glikosida  salah  satunya  flavonoid  dalam  larutan  netral  atau  asam  tidak berwarna, akan tetapi berwarna terang atau jingga dalam larutan atau suasana basa. Pada pengamatan di bawah sinar UV 254 bercak terlihat berwarna kuning sedangkan pada UV 365  nm  bercak  berwarna  biru  akibat  adanya  pemadaman.  Wagner  and  Bladt  (2001) menyebutkan bahwa flavonoid dapat berfluoresensi dan memberikan warna kuning, hijau, maupun  biru.  Nilai  Rf  bercak  sampel  ekstrak  etanol  daun  sirih  merah  sebesar  0,94 sedangkan Rf pembanding rutin sebesar 0,44 (Gambar 4).
Gambar 4. Kromatogram identifikasi flavonoid pada ekstrak etanol daun sirih merah Fase Diam : Selullosa, Fase Gerak :etil asetat-asam formiat-asam asetat-air
(100:11:11:27), P = Pembanding rutin, S = Ekstrak Etanol Daun Sirih Merah
Gambar 5. Kromatogram identifikasi polifenol pada ekstrak etanol daun sirih merah
Fase Diam : Selullosa, Fase Gerak :asam asetat : aseton : air (40 :20 : 4)
P = Pembanding metil stearat, S = Ekstrak Etanol Daun Sirih Merah
Kandungan polifenol ditunjukkan dengan bercak sampel pada kromatogram yang berwarna  pink  di  atas  latar  belakang  kemerahan.  Nilai Rf bercak  sampel  sebesar  0,81 sedangkan Rf pembanding metil stearat sebesar 0,50, sebagaimana terlihat pada Gambar 5. Nilai Rf tersebut menunjukkan bahwa polaritas senyawa aktif polifenol yang terdeteksi menyerupai fase gerak yaitu semi polar.
UV 254 nm
UV 365 nm Visibel P            S P            S P            S UV 254 nm P            S P            S P            S UV 365 nm Visibel
Kromatogram  identifikasi senyawa  tanin  menunjukkan  warna  hijau  kelabu  yang diakibatkan oleh reaksi antara larutan besi III klorida (FeCl3) dengan tanin. Menurut
Robinson  (1995)  ciri  khas  sebagian  besar  senyawa  fenol  adalah  terbentuknya warna hijau kelabu ketika direaksikan dengan larutan FeCl3. Pada kromatogram (Gambar 6) terlihat bahwa tidak ada warna hijau kelabu dari bercak sampel. Hal ini menunjukkan bahwa dalam ekstrak etanol daun sirih merah tidak mengandung senyawa tannin.
Gambar 6.   Kromatogram identifikasi tanin pada ekstrak etanol daun sirih   merah Fase Diam : Silika Gel F254 , Fase Gerak :etil asetat-asam formiat-asam asetat-air (100:11:11:27), P = Pembanding tanin, S = Ekstrak Etanol Daun Sirih Merah
Hasil    uji  kualitatif  dengan  KLT  menunjukkan  bahwa  golongan  senyawa  aktif yang terdapat dalam ekstrak etanol daun sirih merah adalah alkaloid, saponin, flavonoid, dan  polifenol.  Dengan  demikian  aktivitas  mukolitik  ekstrak  etanol  daun  sirih  merah diduga diakibatkan oleh kandungan keempat senyawa tersebut.

## KESIMPULAN
1. Ekstrak etanol daun sirih merah pada konsentrasi 0,1%; 0,3%; 0,5%; 0,7% dan 0,9% dalam larutan mukus 80% mempunyai aktivitas mukolitik dengan cara menurunkan viskositas  mukus.  Ekstrak  etanol  daun  sirih  merah  konsentrasi  0,3%  mempunyai aktivitas mukolitik yang setara dengan asetilsistein 0,1%.
2. Kandungan  senyawa  aktif  dalam  ekstrak  etanol  daun  sirih  merah  adalah  alkaloid, saponin, flavonoid dan polifenolat.

## DAFTAR PUSTAKA
Arifin, H., 2004, Evaluasi Aktivitas Anti Batuk Ekstrak Air Daun Sirih, Tesis , ITB, Bandung. Frandson, R. D., 1986, Anatomy and Phisiology of Farm Animal , 4 th Edition, 560-562, Colorado State University Fort, Philadelphia Pennsylvania, United  State Of America.
Harborne,  J.B.,  1987,  Metode  Fitokimia  Penuntun  Cara  Modern  Menganalisis  Tumbuhan, diterjemahkan oleh Kosasih Padmawinata dan Soediro, 9, Penerbit ITB, Bandung.
Maretta, A.P., 2006, Aktifitas Mukolitik Ekstrak n-Heksan Dan Etanol Herba Piper Miniatum , Bl Terhadap  Mukosa  Usus  Sapi  Secara In  Vitro Dan  Deteksi  Golongan  Senyawa  Aktif Dengan Metode KLT , Skripsi , Universitas Islam Indonesia, Yogyakarta.
Pkimunlam,  2008,  Senyawa  aktif  Daun  Sirih  Merah, http://www.pkimunlam.wordpress.com
P            S P            S
P            S
UV 254 nm UV 365 nm
Visibel
diakses April 2010. Robinson, T., 1995, Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi ,  hal. 191-196, 209, ITB, Bandung. Sudewo, B., 2005, Basmi Penyakit dengan Sirih Merah , 35-45, Agro Media, Jakarta. Sulistiawati, 2003, Uji Aktivitas Mukolitik Minyak Atsiri Daun Sirih ( Piper betle L.) Dan Deteksi Kandungan  Kimianya  Secara  KLT  Dan  Kromatografi  Gas-Spektrofotometri  Massa, Skripsi, Universitas Islam Indonesia, Yogyakarta. Tjay, T.H., dan Raharja, K., 2007, Obat-obat Penting, Khasiat, Penggunaan dan Efek-efek sampingnya , Edisi V, 659-664, PT. Elex Media Komputindo Kelompok Gramedia, Jakarta.