Vol 2, No 2, Juni 2021, pp. 28-33 ISSN 2721-0715 (media online)

## DOI 10.47065/jharma.v2i2.841

## Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Bandotan (Ageratum Conyzoides L.) Terhadap Bakteri Streptococcus Pyogenes
Jovita Almira, Yusransyah, Banu Kuncoro, Rahmawida Putri * , Nuriyatul Fhatonah
Program Studi Farmasi, Sekolah Tinggi Farmasi Muhammadiyah Tangerang, Banten, Indonesia Email: rahmawidaputri0@gmail.com
Abstrak −Pengobatan penyakit infeksi bakteri menggunakan antibiotik semi sintetik dapat menimbulkan resistensi, sehingga untuk mengatasinya diperlukan pencarian bahan obat alami dari tanaman, salah satunya yaitu ekstrak daun bandotan (Ageratum conyzoides L.) . Penelitian ini bertujuan untuk mengidentifikasi golongan senyawa kimia yang terkandung dalam daun bandotan dan mengetahui aktivitasnya  sebagai  antibakteri  terhadap  Streptococcus  pyogenes  dan  Pseudomonas  aeruginosa.  Daun  bandotan  diekstraksi  secara maserasi menggunakan pelarut etanol 96%. Ekstrak diuji aktivitas antibakteri menggunakan metode sumuran dan diukur zona bening yang  terbentuk  menggunakan  jangka  sorong  dan  dilakukan  triplo.  Hasil  identifikasi  senyawa  metabolit  sekunder  daun  bandotan menunjukkan adanya senyawa golongan alkaloid, saponin, tanin, fenolik, flavonoid, triterpenoid, steroid, glikosida. Berdasarkan uji aktivitas antibakteri terhadap Streptococcus pyogenes dengan konsentrasi 100%, 50%, 25%, 12,5%, 6,25% menunjukkan adanya zona bening pada konsentrasi berturut-turut dengan rata-rata sebesar 14,52 mm; 13,87 mm; 13,38 mm; 12,38 mm; 11,75 mm; 15,33 mm.
Kata Kunci: Daun Bandotan ( Ageratum conyzoides L.); Antibakteri; Streptococcus Pyogenes ; Pseudomonas Aeruginosa
Abstract −The treatment of bacterial infectious diseases using a semi synthetic antibiotic can lead to resistance, so that the search is necessary  to  overcome  it  the  ingredients  of  natural  medicine  from  plants,  one  of  them  namely  bandotan  leaf  extract  (Ageratum conyzoides  l.).  This  research  aims  to  identify  the  chemical  compounds  contained  in  leaf  bandotan  and  knowing  his  activity  as antibacterial against Pseudomonas aeruginosa and s. pyogenes. The leaves are extracted in bandotan maceration using solvent ethanol 96%. The extract was tested using the method of antibacterial activity of sumuran and clear zones are measured that is formed using a caliper and triplo. The results of the identification of a compound leaf bandotan secondary metabolite showed a group of compounds alkaloids, saponins, tannins, flavonoids, phenolic, triterpenoid glycosides, steroids. Based on a test of antibacterial activity against s. pyogenes with the concentration of 100%, 50%, 25%, 12.5%, 6.25% showed a clear zone on the concentration in a row with an average of 14.52 mm; 13.87 mm; 13.38 mm; 12.38 mm; 11.75 mm; 15.33 mm. While testing the antibacterial activity against Pseudomonas aeruginosa with the same concentrations did not show the presence of antibacterial activity of extracts of leaves of bandotan with no clear zone formation.
Keywords : Leaf Bandotan ( Ageratum conyzoides L.); Antibacterial; Streptococcus Pyogenes ; Pseudomonas Aeruginosa .

## 1. PENDAHULUAN
Penyakit infeksi merupakan jenis penyakit yang paling banyak diderita oleh penduduk di negara berkembang, termasuk Indonesia. Salah satu penyebab penyakit infeksi adalah bakteri. Bakteri merupakan mikroorganisme yang hanya dapat dilihat  dengan  bantuan  mikroskop  (Radji  dan  Manurung,  2011).  Beberapa  bakteri  yang  menyebabkan  infeksi  adalah Streptococcus pyogenes yang dapat menginfeksi berbagai bagian tubuh seperti faring dan kulit. Infeksi pada faring dapat menyebabkan terjadinya abses, sedangkan infeksi pada kulit dapat menyebabkan terjadinya impetigo (Brooks et al, 2013). Pseudomonas aeruginosa menyebabkan infeksi yang signifikan secara klinis seperti luka, infeksi luka bakar dan infeksi kuku  (Hingkua,  dkk.  2013).  Pengobatan  yang  tidak  tepat  dengan  obat  sintetik  dapat  menyebabkan  resistensi  bakteri sehingga obat tidak mampu lagi memberikan efek yang seharusnya, dengan demikian dapat menimbulkan masalah baru. Hal ini berbeda jika pengobatan menggunakan obat herbal. Senyawa kimia yang terkandung didalamnya dapat berperan dalam memperbaiki sel-sel tubuh yang rusak. Di samping itu penggunaan obat herbal lebih aman dibanding obat sintetik (Sidoretno & Rz. 2018; Lau, dkk. 2019).
Salah satu tanaman obat yang cukup dikenal di masyarakat adalah bandotan ( Ageratum conyzoides , L.). Bandotan biasa  tumbuh  liar  dan  mudah  didapat  di  Indonesia.  Beberapa  kegunaan  dari  tumbuhan  ini  adalah  sebagai  obat  luka berdarah, bisul, borok dan eksim (Wijaya & Ulfah, 2018; Mulyani, dkk. 2021). Tanaman bandotan mengandung senyawa- senyawa metabolit sekunder seperti asam amino, minyak atsiri, kumarin, β-sitosterol, tanin, dan alkaloid (Munira, dkk. 2020;  Safrida  &  Rahmah,  2021). Tumbuhan  bandotan  merupakan  salah  satu  tumbuhan yang diketahui  secara  empiris mempunyai khasiat sebagai bahan obat dan telah digunakan di beberapa daerah. Tumbuhan bandotan sejak dahulu telah digunakan  secara  luas  dalam pengobatan  tradisional  oleh  masyarakat,  anatara  lain  untuk  pengoabatan  luka,  gangguan pencernaan  dan  diare.  Namun,  selain  itu  juga  digunakan  sebagai  pengobatan  radang  usus,  radang  ginjal  atau  radang saluran kemih dan penyakit yang disebabkan oleh infeksi bakteri contohnya seperti bakteri E.Coli, Sterptococcus. (Yasir & Asnah, 2017).
Berdasarkan penelitian (Mengkido, dkk. 2019) tentang  uji daya hambat ekstrak etanol  daun bandotan terhadap pertumbuhan bakteri Streptococcus aureus mengandung senyawa antibiotik yang dapat mempengaruhi bakteri. Hal ini disebabkan daun bandotan mengandung senyawa yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri yaitu pada   kosentarsi 50% menghasilkan diameter zona hambat 22,0 mm dan pada kosentarsi 7,5% menghasilkan diameter zona hambat 9,0 mm. Sedangkan menurut penelitian (Laoli, 2018) Pada Uji Aktivitas Ekstrak Etanol Daun Bandotan Terahadap Bacteri Bacillus  Substilis dan Proteus  Vulgaris menunjukkan  bahwa  daun  bandotan  memberikan  aktivitas  sebagai  antibakteri yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri yaitu pada ekstrak etanol hasil diameter area jernih sebesar 14,28 mm untuk Bacillus substilis pada kosentrasi 80% dan pada Proteus Vulgaris memberikan diameter 14,41 mm pada kosentrasi 100%.
Vol 2, No 2, Juni 2021, pp. 28-33 ISSN 2721-0715 (media online)

## DOI 10.47065/jharma.v2i2.841
Pengukuran zona hambat adalah penetuan dan pengukuran kepekaan suatu  Safrida, dkk, bakteri terhadap suatu obat dimana kadar konsentrasi rendah masih menunjukkan zona hambat. Untuk pengukuran zona hambatan suatu obat atau  bahan  percobaan  diukur  dengan  menggunakan  mistar  dalam  mm.  Zona  hambatan  yang  terjadi  ditandai  apabila disekitar obat atau bahan percobaan menunjukkan daerah jernih sebagai zona hambat (Sugara,dkk. 2016). Pengamatan dilakukan  dengan  cara  mengukur  zona  bening  yang  terbentuk  menggunakan  jangka  sorong,  sehingga  dapat  disebut dengan zona hambat. Kategori zona hambat dapat diketahui pada tabel 1 dibawah ini
Tabel 1. Kategori Diameter Zona Hambat Diameter Kekuatan Daya Hambat ≤ 5 mm Lemah 6-10 mm Sedang 11-20 mm Kuat ≥ 21 mm Sangat Kuat

## 2. METODOLOGI PENELITIAN

## 2.1 Alat dan Bahan

## 2.1.1 Alat
Botol  kaca  tertutup  dan  rotary  evaporator.  Alat  yang  digunakan  untuk  menganalisis  adalah  tabung  reaksi,  rak  tabung reaksi, penjepit anatomis, pipet tetes, dan kertas pH. Alat untuk uji antibakteri lampu spiritus, LAF ( Laminar Air Flow ), ose, cawan petri, mikropipet, gelas objek, mikroskop dan inkubator.

## 2.1.2 Bahan
Etanol 96% dan daun bandotan. Bahan yang digunakan untuk proses analisis ekstrak adalah ekstrak etanol 96% daun bandotan,  aquadest,  kloroform,  etanol,  FeCl3  1%,  serbuk  Mg,  HCl,  H2SO4  2M,  meyer,  dragendroff,  wagner, Liebermann-Burchard . Bahan yang digunakan untuk uji antibakteri adalah antibiotik pembanding Kloramfenikol, media uji Mueller-Hinton Agar (MHA), NaCl 0,9%, aquadest, bakteri Streptococcus pyogenes .

## 2.2 Prosedur Penelitian

## 2.2.1 Determinasi Tumbuhan
Determinasi  dilakukan  untuk  memastikan  kebenaran  tanaman  yang  dipakai.  Proses  determinasi  ini  dilakukan  di Herbarium Bogoriense, bidang Botani Pusat Penelitian dan Pengembangan Biologi (LIPI Cibinong) Jl. Raya Jakarta  – Bogor KM.46 Cibinong Bogor, 16911 Jawa Barat.

## 2.2.2 Pembuatan Ekstrak
Proses pembuatan ekstrak daun bandotan dilakukan di Balitro-Bogor. Pertama Ditimbang serbuk kering daun bandotan lalu  dimaserasi  dengan  pelarut  etanol  sampai  semua  sampel  terendam  selama  3  hari  sambil  diaduk.  Dilakukan  3  kali pengulangan kemudian saring dengan kertas Whatman, gabungkan filtrat. Selanjutnya ekstrak yang didapat akan di rotary evaporator guna menguapkan pelarutnya.

## 2.2.3 Pengujian Parameter Ekstrak

## a. Kadar Air
Sampel dimasukkan dalam tabung bola (flask), kemudian dipanaskan. Air dan pelarut menguap, diembunkan dan jatuh pada  tabung  Aufhauser  yang  berskala.  Air  yang  mempunyai  berat  jenis  lebih  besar  berada  dibagian  bawah,  sehingga jumlah air yang diuapkan dapat dilihat pada skala tabung Aufhauser .

## b. Kadar Abu
Ekstrak etanol 96% daun bandotan ditimbang sebanyak 1 gram, dimasukkan ke dalam krus silikat yang telah dipijarkan dan ditara, lalu ekstrak diratakan. Pijarkan perlahan-lahan hingga arang habis, dinginkan lalu timbang. Jika arang tidak menghilang, tambahkan air panas, kemudian saring menggunakan kertas saring bebas abu. Dipijarkan sisa kertas saring dalam krus yang sama. Filtrat dimasukkan dalam krus, diuapkan, lalu dipijarkan hingga bobot tetap dan ditimbang. Kadar abu dihitung terhadap berat ekstrak (Depkes RI, 2000 didalam Mentari, dkk. 2020)

## c. Sisa Pelarut
Ekstrak ditimbang 5 gram, dilarutkan sampel 10 ml H2SO4 0,08 N, divotex, disentrifuge 13000 rpm selama 10 menit, diinjek ke HPLC.
2.2.4 Uji Skrining Fitokimia
a. Uji Saponin
Vol 2, No 2, Juni 2021, pp. 28-33

## ISSN 2721-0715 (media online) DOI 10.47065/jharma.v2i2.841
Sebanyak  1  gram  ekstrak  ditambah  dengan  20  mL  aquades,  kemudian  dipanaskan  selama  5  menit.  Larutan  dituang kedalam tabung reaksi dalam keadaan panas. Larutan diambil sebanyak 10 mL, kemudian dikocok kuat secara vertikal selama 10 detik. Adanya saponin ditandai dengan terbentuknya busa yang stabil setinggi 1-10 cm selama 10 menit dan tidak hilang pada saat ditambahkan dengan satu tetes HCl 2M (Arifin, dkk. 2019)
b. Uji Flavonoid
Ekstrak kental ditambah etanol kemudian ditambahkan 0,20 gram serbuk Mg dan 3 tetes HCl. Terbentuknya warna merah atau jingga pada lapisan etanol menunjukkan adanya senyawa flavonoid (Arifin, dkk. 2019).

## c. Uji Tanin
Sebanyak 100 mg ekstrak diencerkan dengan 100 mL air panas, didihkan selama 5 menit dan disaring.  Sebagian filtrat yang diperoleh ditambahkan larutan FeCl3 10%. Terbentuknya warna hitam kehijauan menunjukkan adanya tanin (Arifin, dkk. 2019).

## d. Uji Polifenol
Ekstrak kental ditambahkan aquades, selanjutnya ditambahkan FeCl3 1% sebanyak 5 tetes dan diamati perubahan warna yang  terjadi.  Perubahan  warna  menjadi  hijau  biru hingga  hitam  menunjukkan  adanya  senyawa  polifenol  (Arifin,  dkk. 2019).

## e. Uji Alkaloid
0,5 gram sampel ditambah 1 ml HCl 2N dan ditambah 9 ml aquadest panas goyangkan sampai homogen diamkan selama 2 menit, kemudian saring filtratnya dibagi 2 ke dalam tabung : tabung 1 ditambah pereaksi bauchardat terbentuk endapan coklat-hitam  menunjukkan  adanya  alkaloid.  Tabung  2  ditambah  pereaksi  dragendrauf  membentuk  endapan  coklat menunjukkan adanya alkaloid (Arifin, dkk. 2019).

## f. Uji Triterpenoid dan Steroid
Filtrat yang dihasilkan dipindahkan kedalam pelat tetes dan dibiarkan sampai menguap pelarutnya.  Kemudian kedalamnya ditambahkan pereaksi Liebermann-Burchard  (1  tetes  asam  sulfat  pekat  dan  3  tetes asam asetat anhidrat). Uji positif jika timbul warna merah menandakan adanya triterpenoid, biru atau ungu menandakan adanya senyawa steroid (Arifin, dkk. 2019).

## g. Uji Glikosida
Sampel sebanyak 3 gram dalam labu colf 50 ml dicampur dengan 30 ml (21 ml etanol dan 9 ml air) dipanaskan hingga mendidih selama 10 menit. Sampel kemudian didinginkan dan disaring. Filtrat yang dihasilkan kemudian ditambahkan 2 ml Pb asetat sebesar 5 % dan isopropanol. Lapisan bawah dimasukkan ke dalam cawan pinggan penguap dan dipanaskan hingga 400C. Setelah cairan kental ditambah 2 ml metanol ke dalam tabung reaksi menjadi 5 bagian. Tabung pertama diuapkan hingga kering dan ditambahkan dengan 10 tetes H2SO4 dan 5 ml asam asetat anhidrat. Bila terbentuk warna biru hijau, maka sampel tersebut mengandung glikosida. Tabung kedua diuapkan hingga kering dan ditambahkan 2 ml air dan 5 tetes molish dan 2 ml H2SO4. Bila terbentuk cincin ungu maka sampel positif mengandung glikosida. Tabung ketiga ditambah dengan 2.9 ml metanol dan baljet. Bila terbentuk warna merah jingga, maka sampel positif mengandung glikosida jantung. Tabung keempat ditambah dengan 2 ml KOH 0.1 N dan 2 ml Kadede. Bila terbentuk warna merah ungu, maka sampel positif mengandung glikosida jantung (Arifin, dkk. 2019)

## 2.2.5 Inokulasi Bakteri
Tambahkan 2 ml NaCl fisiologis ke dalam tabung reaksi berisi bakteri goyangkan hingga merata. Buatlah media Nutrien Broth sebanyak 20 ml dan masukan kedalam erlenmeyer. Ambil bakteri menggunakan mikro pipet sebanyak 1 ml dan masukkan  kedalam  erlenmeyer  tersebut.  Shaker  erlenmeyer  dengan  kecepatan  150  rpm  selama  ±  18  jam.  Pipet  1  ml sampel bakteri dan masukkan kedalam tabung reaksi yang telah berisi 9 ml NaCl fisiologis 0,85% goyangkan hingga homogen (Pengenceran 10-1), lakukan pengenceran hingga tingkat 10-7. Pipet masing-masing 1 ml dari pengenceran 10- 5 – 10-7 kedalam cawan petri steril secara duplo. Kedalam cawan petri tuangkan sebanyak 20 ml media Nutrien Agar goyangkan hingga merata. Biarkan hingga campuran dalam cawan membeku, dan inkubasi pada suhu ± 36oC selama 24 jam  dengan  posisi  terbalik.  Hitung  dan  catat  pertumbuhan  koloni  pada  setiap  cawan  petri  yang  mengandung  10-300 koloni.

## 2.2.6 Uji Aktivitas Antibakteri
Mueller-Hinton agar yang telah dicampurkan dengan bakteri uji dibuat lubang sebesar 6 mm dengan metode sumuran (pencetak lubang) kemudian masing-masing lubang diisi ekstrak daun bandotan dengan variasi konsentrasi 100%, 50%, 25%,  12,5%,  6,25%  dengan volume  penetesan  25  µl,  lalu  dibuat  2  buah kontrol  yaitu  DMSO  2%  dan  Kloramfenikol dengan konsentrasi 1000 ppm untuk pengujian Streptococcus pyogenes dan 3000 ppm, lalu dibiarkan selama 15 menit, dan diinkubasi dalam inkubator pada temperature 35 0 C selama 18 jam. Hasil inkubasi kemudian dilihat dan daerah yang jernih diukur (merupakan daerah hambatan pertumbuhan bakteri) (Astuti, 2015; Ahmad, 2015).
2.2.7 Analisis Data
Vol 2, No 2, Juni 2021, pp. 28-33 ISSN 2721-0715 (media online)

## DOI 10.47065/jharma.v2i2.841
Data  yang  diperoleh  dalam  penelitian  ini  dianalisis  dengan  menggunakan  aplikasi  SPSS  One  Way  ANOVA  untuk mengetahui perbedaan masing-masing kelompok perlakuan.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN

## 3.1 Determinasi Tumbuhan
Hasil determinasi menunjukan bahwa tanaman yang digunakan untuk penelitian benar daun bandotan dan memiliki nama ilmiah Ageratum conyzoides L.

## 3.2 Skrining Fitokimia
Skrining fitokimia dilakukan untuk mengetahui kandungan metabolit sekunder dari suatu tumbuhan atau ekstrak. Hasil skrining fitokimia ekstrak etanol 96% daun bandotan ( Ageratum conyzoides L) dapat dilihat pada tabel 1.
Tabel 1. Hasil Skrining Fitokimia No Parameter Uji Hasil Pengujian 1 Alkaloid + 2 Flavonoid + 3 Tanin + 4 saponin + 5 Fenolik + 6 Steroid dan Triterpenoid + 7 Glikosida +
Berdasarkan hasil skrining fitokimia dengan pereaksi warna tampak bahwa terdapat perbedaan kemampuan pelarut dalam menarik senyawa-senyawa metabolit sekunder yang terkandung pada sampel. Hasil menunjukkan bahwa pelarut etanol,  yang  merupakan  pelarut  paling  polar  yang  umum  digunakan  dalam  ekstraksi,  lebih  banyak  menarik  senyawa metabolit  sekunder  yang  terkandung  daun  bandotan  ( Ageratum  conyzoides  L) yang  terdapat  pada  Tabel  1.  Dari  hasil pengamatan  menunjukan  bahwa  ekstrak  etanol  96%  daun  bandotan  mengandung  senyawa  alkaloid,  flavonoid,  tanin, saponin, fenolik, steroid dan triterpenoid, dan glikosa yang berfungsi sebagai zat aktif yang memiliki aktivitas antibakteri (Ismiyati & Mardiyaningsih, 2015).

## 3.2 Ekstraksi
Proses ekstraksi pada penelitian ini menggunakan pelarut polar etanol 96% untuk mengekstrak bahan aktif yang bersifat polar. Hasil maserasi dengan pelarut etanol 96% diperoleh ekstrak kental yang didapat sebanyak 154,6 gram dihitung kadar rendemen ekstrak. Rendemen ekstrak dihitung berdasarkan perbandingan berat akhir (berat ekstrak yang dihasilkan) dengan  berat  awal  (berat  serbuk  simplisia  yang  digunakan)  dikalikan  100%.  Hasil  rendemen  ekstrak  daun  bandotan sebesar 7,73%. Perhitungan rendemen dan hasil ekstraksi dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Hasil presentasi ekstrasi Simplisia Ekstrak Berat Berat Ekstrak Rendemen Simplisia (g) Kental (g) (%) Daun Bandotan  Etanol 96% 500 154,6 7,73
Ekstrak etanol 96% daun bandotan yang diperoleh selanjutnya dilakukan uji bebas etanol. Uji dilakukan untuk mengetahui apakah ekstrak etanol yang diperoleh bebas kontaminasi etanol atau tidak. Hal ini dikarenakan etanol dapat berperan  sebagai  antibakteri,  sehingga  tidak  akan  menimbulkan  positif  palsu  pada  perlakuan  sampel  (Sumiati,  2014; Kurniawati, 2015). Hasil yang diperoleh menunjukkan tidak adanya bau iodoform dan tidak ada endapan kuning dalam waktu 30 menit (Sumiati, 2014). Hal ini membuktikan bahwa ekstrak tersebut bebas dari etanol.

## 3.2 Uji Aktivitas Antibakteri
Prinsip percobaan uji aktivitas antibakteri dilakukan dengan pemberian ekstrak daun bandotan ( Ageratum conyzoides L) terhadap  bakteri Streptococcus  pyogenes pada  media  NA  dengan  konsentrasi  100%,  50%,  25%,  12,5%,  6,25%. Penghambatan pertumbuhan tersebut dapat dilihat dengan adanya zona bening yang terbentuk di sekitar kertas cakram yang menandakan tidak adanya bakteri yang tumbuh. Hal tersebut menunjukkan bahwa sampel ekstrak yang digunakan memiliki aktivitas yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri (Hudzicki, 2016).
Kontrol positif yang digunakan adalah kloramfenikol 1000 pm. kloramfenikol merupakan antibiotik berspektrum luas terhadap bakteri Gram positif dan Gram negatif pada manusia (Pratiwi, 2008). Kontrol positif ini berfungsi sebagai pembanding  diameter  hambat  terhadap  ekstrak  daun  bandotan  ( Ageratum  conyzoides  L) terhadap  bakteri  uji.  Kontrol negatif yang digunakan pada penelitian ini adalah pelarut DMSO 100% yang diteteskan pada kertas cakram steril.
Vol 2, No 2, Juni 2021, pp. 28-33 ISSN 2721-0715 (media online)

## DOI 10.47065/jharma.v2i2.841
Hasil penelitian uji aktivitas antibakteri ekstrak daun bandotan ( Ageratum conyzoides L) terhadap Streptococcus pyogenes tercantum  pada  Tabel  3.  Hasil  menunjukkan  bahwa  kelima  konsentrasi  ekstrak  daun  bandotan  ( Ageratum conyzoides L) yang diujikan memiliki aktivitas penghambatan terhadap Streptococcus pyogenes . Hasil juga menunjukkan bahwa semakin besar konsentrasi ekstrak, maka semakin besar pula diameter daya hambat yang ditunjukkan terhadap bakteri Streptococcus  pyogenes .  Hal  ini  membuktikan  bahwa  semakin  banyak  senyawa  aktif  yang  terkandung  dalam ekstrak tersebut (Lingga, dkk., 2016).
Tabel 3. Rata-Rata Diameter Daya Hambat (DDH) Ekstrak Daun Bandotan ( Ageratum conyzoides L)
Konsentrasi (mm) Kontrol (mm) Zona Bening 100% 50% 25%  12,5% Kloramfenikol DMSO2% 6,5% (+) (-) Perlakuan I 14,87 13,71  13,31  12,71  11,92 15,10 6 Perlakuan II 14,35 13,81  13,81  12,49  11,50 14,95 6 Perlakuan III 14,36 14,10  12,98  11,95  11,82 15,92 6 Rata-Rata 14,52 13,87  13,38  12,38  11,75 15,33 6
Ekstrak etanol 96% daun bandotan pada konsentrasi 100% memiliki zona bening paling besar, berdasarkan hasil tersebut  dapat  disimpulkan  semakin  tinggi  konsentrasi  semakin  besar  aktivitas  antibakteri  dan  zona  bening  yang terbentuk.
Terbentuknya  daya  hambat  diduga  karena  adanya  senyawa  aktif  yang  terkandung  dalam  daun  bandotan.  Daun bandotan mengandung beberapa senyawa yang berfungsi sebagai antibakteri, diantaranya adalah flavonoid, tanin, dan saponin  sehingga  dapat  memberikan  diameter  daya  hambat  sebagai  aktivitas  penghambatan  terhadap  pertumbuhan Streptococcus  pyogenes .  Flavonoid  memiliki  aktivitas  untuk  menghambat  pertumbuhan  bakteri  dengan  merusak membran sel (Gorniak et al., 2019). Tanin merupakan senyawa polifenol yang bekerja dengan mengganggu kerja DNA gyrase (Khameneh et al., 2019). Saponin dapat melarutkan lipid pada membran sel bakteri (lipoprotein), akibatnya dapat menurunkan tegangan permukaan lipid, fungsi sel bakteri menjadi tidak normal dan sel bakteri lisis sehingga bakteri akan mati (Syafriana et al., 2019). Berdasarkan hal-hal tersebut, maka dapat disimpulkan bahwa  Daun Bandotan ( Ageratum conyzoides L) memiliki efek antibakteri terhadap Streptococcus pyogenes .

## 3.2 Analisis Data
Zona  bening  yang  diperoleh  pada  uji  aktivitas  antibakteri  terhadap Streptococcus  pyogenes selanjutnya  diolah  data statistik  menggunakan  Uji  One  Way  ANOVA  ( Analysis  of  Variant )  karena  pada  penelitian  ini  terdapat  lebih  dari  2 perlakuan dengan p > 0,05. Pengujian ini menggunakan program SPSS 24. Sebelum melakukan uji ANOVA, dilakukan uji normalitas untuk mengetahui data tersebut normal atau tidak dengan syarat p > 0,05. Hasil uji normalitas One-Sample Kolmogorov-Smirnov pada data Streptococcus pyogenes adalah p = 0,917 yang berarti data tersebut terdistribusi normal karena p > 0,05.
Selanjutnya  dilakukan  uji  homogenitas  varians  untuk  menentukan  hipotesis  dan  kaidah  penerimaan  atau penolakan. Pada pengujian ini diperoleh data yaitu p = 0,06. Dari hasil tersebut dapat dinyatakan data sudah homogen karena p > 0,05. Kemudian dilanjutkan dengan One Way Anova bertujuan untuk mengetahui ada tidaknya perbedaan rata-rata zona bening pada masing-masing konsentrasi ekstrak etanol 96% daun bandotan. Dari uji ANOVA terlihat nilai signifikan p=0,000 yang berarti <0,05, hal ini menunjukan bahwa ada perbedaan rata-rata pada setiap konsentrasi. Karena terdapat perbedaan rata-rata pada tiap konsentrasi larutan uji.
Selanjutnya dilakukan uji Post-Hoc , yaitu Tukey. Uji ini digunakan untuk mengetahui manakah diantara kelompok yang memiliki nilai signifikan paling berbeda, pada larutan uji kontrol positif baik dibandingkan dengan kontrol negatif, konsentrasi 6,25%, 12,5%, 25%, dan 50% berbeda secara signifikan dengan masing-masing koefisien secara urut yaitu 9,04667; 3,30000; 2,66333; 1,68000; 1,17333. Perbedaan tersebut ditunjukkan oleh bilangan signifikansi yang diperoleh (Sig.) sebesar 0,000; 0,000; 0,000; 0,000 dan 0,002 yang mana jauh lebih kecil dari taraf signifikansi yang ditetapkan, yakni 0,05. Dari data tersebut dapat disimpulkan pada tiap konsentrasi baik pada konsentrasi larutan uji, kontrol positif dan kontrol negatif terlihat adanya perbedaan mean yang signifikan atau bermakna.

## 4. KESIMPULAN
Berdasarkan  uji  aktivitas  antibakteri  terhadap  Streptococcus  pyogenes  dengan  konsentrasi  100%,  50%,  25%,  12,5%, 6,25% menunjukkan adanya zona bening pada konsentrasi berturut-turut dengan rata-rata sebesar 14,52 mm; 13,87 mm; 13,38 mm; 12,38 mm; 11,75 mm; 15,33 mm. Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa berdasarkan hasil penelitian menunjukkan bahwa perbedaan konsentrasi ekstrak etanol 96% daun bandotan ( Ageratum conyzoides L) dalam formula sediaan mempunyai aktivitas antibakteri terhadap bakteri Streptococcus pyogenes .
Vol 2, No 2, Juni 2021, pp. 28-33

## ISSN 2721-0715 (media online) DOI 10.47065/jharma.v2i2.841
Ahmad,  I.  (2015).  Aktivitas  antibakteri  dari  fraksi  daun  bandotan  (Ageratum  conyzoides  L.)  secara  kromatografi  lapis  tipis bioautografi. Journal of Tropical Pharmacy and Chemistry , 3(1), 29-36.
Arifin,  H.,  Oktavia,  S.,  &  Chania,  S.  (2019).  Efek  Toksisitas  Sub  Akut  Fraksinasi  Air  Ekstrak  Etanol  Daun  Bandotan  (Ageratum Conyzoides (L.) L.) Terhadap Beberapa Parameter Darah Mencit Putih Jantan. Jurnal Farmasi Higea , 11(2), 166-174.
Astuti,  H.  (2015).  Uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol  dan  ekstrak  air  daun  bandotan  (Ageratum  conyzoides,  L.)  terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli. Majalah Farmaseutik , 11(1), 290-293. Brooks, G.F., Carrol, C.K., Butel, S.J., Morse, A.M., dan Mietzner, A.T. (2013). Jawetz, Melnick, & Adelberg Medical Microbiology . The McGraw-Hill Companies. hal : 211-216.
Gorniak,  I.,  Bartoszewski,  R.,  &  Kroliczewski,  J.  (2019).  Comprehensive  review  of  antimicrobial  activities  of  plant  flavonoids. Phytochem Rev ., 18, 241-272
Hingkua,  S.  S.,  Julaeha,  E.,  &  Kurnia,  D.  (2013).  Senyawa  triterpenoid  dari  batang  tumbuhan  mangrove  Avicennia  marina  yang beraktivitas antibakteri. In Seminar Nasional Sains dan Teknologi Nuklir (pp. 226-230). Hudzicki, J. (2016). Kirby-Bauer disk diffusion susceptibility test protocol . American Society for Microbiology, 1-23 Ismiyati,  N.,  &  Mardiyaningsing,  A.  (2015).  Aktivitas  Sitotoksik  Ekstrak  Etanolik  dan  Fraksi  dari  Ekstrak  Etanolik  Daun  Pandan
( Pandanus amaryllifolius roxb ) Terhadap Sel Kanker Payudara MCF-7. In Prosiding Seminar Nasional & Internasional . Khameneh,  B.,  Iranshahy,  M.,  Soheili,  V.,  &  Bazzaz,  B.S.F.  (2019).  Review  on  plant  antimicrobials:  A  mechanistic  viewpoint. Antimicrobial Resistance and Infection Control , 8, 1-28. Kurniawati, E. (2015). Daya antibakteri ekstrak etanol tunas bambu apus terhadap bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus secara in vitro. Jurnal Wiyata , 2(2), 193-199.
Laoli,  N.  S.  (2018).  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Daun  Bandotan  ( Ageratum  conyzoides L.)  Terhadap  Bakteri Bacillus substilis dan Proteus vulgaris . SKRIPSI . Universitas Sumatera Utara.
Lau, S. H. A., Herman, H., & Rahmat, M. (2019). Studi Perbandingan Tingkat Pengetahuan Masyarakat Tentang Obat Herbal Dan Obat Sintetik Di Campagayya Kelurahan Panaikang Kota Makassar. Jurnal Farmasi Sandi Karsa , 5(1), 33-37.
Lingga,  A.R.,  Pato,  U.,  &  Rossi,  E.  (2016).  Uji  antibakteri  ekstrak  batang  kecombrang  ( Nicolaia  speciosa  Horan )  terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli . JOM Faperta , 3(1), 1-15. Mengkido,  M.,  Lambui,  O.,  &  Harso,  W.  (2019).  Uji  daya  hambat  ekstrak  daun  bandotan  ( Ageratum  conyzoides L.)  terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus. Biocelebes , 13(2), 121-130.
Mentari, I. A., Wirnawati, W., & Putri, M. R. (2020). Karakterisasi Simplisia dan Ekstrak Daun Bandotan ( Ageratum conyzoides L) sebagai Kandidat Obat Karies Gigi. Jurnal Ilmiah Ibnu Sina , 5(1), 1-9.
Mulyani,  Y.,  Febiani,  L.,  &  Yuniarto,  A.  (2021).  REVIEW  ARTIKEL  TANAMAN  BANDOTAN  ( Ageratum  conyzoides Linn) SEBAGAI ANTIBAKTERI, ANTIOKSIDAN DAN ANTIINFLAMASI. Jurnal Farmasi dan Sains Vol, 5(1).
Munira, M., Rodisa, F., & Nasir, M. (2020). Uji antibakteri kombinasi ekstrak daun Biduri ( Calotropis gigantea L.) dan daun Bandotan ( Ageratum conyzoides L.). Jurnal SAGO Gizi dan Kesehatan , 1(2), 165-171.
Pratiwi, S.T. (2008). Mikrobiologi Farmasi . Penerbit Erlangga. Jakarta, Hal 154-160, 188-190 Radji, Maksum., dan Manurung. (2011). Buku Ajar Mikrobiologi Panduan Mahasiswa Farmasi Kedokteran . Jakarta. Buku Kedokteran EGC. hal : 99
Safrida, Y.D., Rahmah, R. (2021). Uji Hambat Ekstrak Etanol Daun Bandotan ( Ageratum conyzoides Linn) terhadap Pertumbuhan Bakteri Escherichia coli . Jurnal Sains dan Kesehatan Darussalam (Akafarma-Aceh). 1(1), 17-23. Sidoretno, W. M., & Rz, I. O. (2018). Edukasi Bahaya Bahan Kimia Obat yang Terdapat Didalam Obat Tradisional. Jurnal Pengabdian Masyarakat Multidisiplin , 1(2), 177-123.
Sugara, T. H., Irawadi, T. T., Suprapto, I. H., & Hanafi, M. (2016). Uji Aktivitas Antibakteri Fraksi Etil Asetat Daun Tanaman Bandotan (Ageratum conyzoides L). Jurnal Ilmiah Ibnu Sina , 1(1), 88-96. Suhartati, R. (2018). Aktivitas antibakteri ekstrak etanol kulit buah naga merah ( Hylocereus polyrhizus ) terhadap bakteri Streptococcus pyogenes . Jurnal Kesehatan Bakti Tunas Husada: Jurnal Ilmu-ilmu Keperawatan, Analis Kesehatan dan Farmasi , 17(2), 513- 518.
Sumiati, E. (2014). Uji aktivitas antibakteri ekstrak kloroform dan ekstrak etanol biji bidara laut ( Strychnos ligustrina Bl) terhadap Staphylococcus aureus ATCC 25923 dan Salmonella thypi . Biogenesis , 2(1), 1-10.
Syafriana, V., Ningsih, W., & Wahidin. (2019, Juni). Uji aktivitas antibakteri metanol daun hijau tanaman pucuk merah (Syzygium myrtifolium Walp.) terhadap Pseudomonas aeruginosa dan Staphylococcus epidermidis [oral presentation]. Prosiding Seminar Nasional  Pemanfaatan  Bahan  Alam  sebagai  Obat,  Kosmetik  dan  Pangan  Fungsional, Jakarta,  Fakultas  Farmasi  Universitas Pancasila.
Syafriana, V., Hamida, F., Damayanti, R., & Nanda, E. V. (2020). Aktivitas antibakteri ekstrak biji anggur ( Vitis vinifera L.) terhadap
Streptococcus pyogenes . Sainstech Farma , 13(1), 40-44.
Wijaya, I., & Ulpah, S. (2018). PEMANFAATAN BABADOTAN (Ageratum conyzoides L) UNTUK MENGENDALIKAN HAMA KUTU DAUN PADA TANAMAN CABAI RAWIT (Capsicum frustescent L.). DINAMIKA PERTANIAN , 34(2), 151-162. Yassir, M., & Asnah, A. (2017). Pemanfaatan Jenis Tumbuhan Obat Tradisional Di Desa Batu Hamparan Kabupaten Aceh Tenggara . JESBIO: Jurnal Edukasi dan Sains Biologi , 6(2).