Research Article

## UNPAD

## Antibacterial Activities of Guava Leaves and Klutuk Banana by In Vitro as Antidiarrhea

## Ira Rahmiyani, Anna Yuliana*, Mitha Anggitha, Vera Nurviana
Department of Pharmacy, Faculty of Pharmacy Bakti Tunas Husada University, Tasikmalaya, West Java 46115, Indonesia
Submitted 16 November 2022; Revised 29 November 2022; Accepted 14 December 2022; Published 31 December 2022 *Corresponding author: annayuliana@universitas-bth.ac.id

## Abstract
Klutuk banana fruit and red shoots of guava leave added with salt used by Batra in Jayaratu Singaparna Village to treat diarrhea. The green shoots of guava used by the community in treating diarrhea than klutuk bananas. This study aims to compare the activity of klutuk banana flesh (K) and red shoots of guava leaves (M) with the addition of salt (G), which Batra commonly uses with green shoots of guava leaves (H) used by the general public and their combinations to inhibiting Escherichia coli bacteria. This study was conducted in vitro with Simplicia test samples of guava leaf shoots and banana klutuk characterized. Each sample was crushed, and the extract was taken and tested for antibacterial activity. Data analysis used One Way Analysis of Variant (Anova) and continued with the Least Significant Difference  (LSD)  test.  The  results  showed  that  samples  M,  H,  K,  HG,  MHG,  and  MH  provided resistance to E. coli ATCC 25922 with a significance value of 0.000 (p<0.05), whereas the HG and H groups did not show a significant difference (P >0.05). The red and green shoots of guava leaves, singly or in combination have potent antibacterial activity. The variety of red shoots and green leaves of guava with a mixture of salt (MHG) concentration of 100% (1:1:1) had the highest MIC value compared to the other groups.
Keywords: Batra, E. coli, guava, klutuk banana, shoots leaves.

## Aktivitas Antibakteri Daun Jambu Biji dan Pisang Klutuk Secara In Vitro Sebagai Antidiare

## Abstrak
Buah pisang klutuk dan pucuk merah daun jambu biji ditambah garam digunakan Batra di Desa Jayaratu Singaparna untuk mengobati diare. Pucuk jambu biji hijau digunakan oleh masyarakat dalam mengobati diare dibandingkan dengan pisang klutuk. Penelitian ini bertujuan untuk membandingkan aktivitas daging pisang klutuk (K) dan pucuk merah daun jambu biji (M) dengan penambahan garam (G) yang biasa digunakan Batra dengan pucuk hijau daun jambu biji (H) yang digunakan masyarakat umum. dan kombinasinya untuk menghambat bakteri Escherichia coli. Penelitian ini dilakukan secara in vitro dengan sampel uji simplisia pucuk daun jambu biji dan pisang klutuk yang dikarakterisasi. Masing-masing sampel dihaluskan, diambil ekstraknya dan diuji aktivitas antibakterinya. Analisis data menggunakan One Way Analysis of Variant (Anova) dan dilanjutkan dengan uji Beda Nyata Terkecil (BNT).  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  sampel  M,  H,  K,  HG,  MHG,  dan  MH  memberikan resistensi terhadap E. coli ATCC 25922 dengan nilai signifikansi 0,000 (p<0,05), sedangkan kelompok HG dan H tidak menunjukkan perbedaan yang signifikan ( P>0,05). Tunas merah dan hijau daun jambu biji, tunggal atau kombinasi memiliki aktivitas antibakteri yang kuat. Varietas jambu biji pucuk merah dan daun hijau dengan konsentrasi campuran garam (MHG) 100% (1:1:1) memiliki nilai MIC tertinggi dibandingkan kelompok lainnya.
Kata Kunci: Batra, E. coli, jambu biji, pisang klutuk, pucuk daun.

## 1.  Pendahuluan
Indonesia memiliki keanekaragaman dengan berbagai jenis tumbuhan yang berkhasiat serta manfaat 1 dan salah satunya dapat dijadikan sebagai obat tradisional 2 . Berdasarkan  PMK  (Peraturan  Menteri Kesehatan)  No.61  Tahun  2016,  Batra  atau penyehat tradisional merupakan setiap orang yang melakukan pelayanan kesehatan secara empiris dengan keterampilanya serta pengetahuan yang diperoleh secara turun temurun 3. Batra  mempunyai sistem pengobatan berlandaskan konsep dasar hidup manusia seutuhnya dan memberikan pandangan secara holistik atau keseluruhan. Data pengobatan Batra yang telah dihasilkan tentunya membutuhkan penelitian lanjutan untuk membuktikan secara ilmiah mengenai manfaat, aktivitas, keamanan serta indikasi tertentu. Salah satu indikasi yang diinformasikan oleh batra yaitu mengenai gangguan pencernaan atau diare 4 . Salah satu desa yang masyarakatnya masih melakukan pengobatan tradisional pada batra yaitu Desa Jayaratu Kecamatan Sariwangi-Singaparna.  Menurut  penjelasan batra, obat untuk gangguan pencernaan atau diare biasa menggunakan pucuk merah daun jambu biji yang ditambahkan dengan garam dapur atau menggunakan daging buah pisang klutuk (khusus untuk lansia).
Diare dapat disebabkan oleh mikroorganisme seperti parasit, virus, dan bakteri. Salah satu bakteri yang banyak menyebabkan diare dengan persentase sebesar 51,4%  yaitu Escherichia coli . Jika jumlah bakteri E. coli dalam saluran pencernaan tinggi, pertumbuhanya harus dihambat sehingga tidak menyebabkan patogen dan toksigen 5. Daun jambu biji memiliki kandungan senyawa  tanin  9-12%6 . Tanin mempunyai daya antiseptik yaitu mencegah kerusakan yang disebabkan oleh jamur ataupun bakteri. Daun jambu biji juga mengandung senyawa flavonoid, saponin, terpenoid yang memiliki efek antimikroba 7 dan fenol yang berfungsi menghambat pertumbuhan bakteri dengan cara lisis dan koagulasi membran sel bakteri 8 .
Pisang klutuk memiliki kandungan seyawa  seperti  flavonoid,  polifenol, seskuiterpenoid, triterpenoid, monoterpenoid, dan saponin 9 . Saponin berfungsi sebagai antimikroba  dan  flavonoid  berfungsi mencegah pembentukan energi pada membran plasma sehingga motilitas bakteri yang berperan dalam antimikroba dihambat 10 . Pada pisang klutuk juga memiliki kandungan tanin dikarenakan ciri khas dari adanya senyawa tanin yaitu memiliki rasa pahit dan sepat 11 . Buah pisang klutuk yang masih muda memiliki rasa yang sangat sepat sehingga mengindikasikan bahwa kandungan taninnya lebih banyak dibandingkan dengan jenis pisang yang lain. Tanin memiliki toksisitas dalam merusak membran bakteri, menghambat fungsi dari selaput sel, menghambat sintesis nukleat dan antinutrisi sehingga diduga dapat digunakan sebagai antidiare 12 . Berdasarkan latar belakang yang telah dijabarkan belum ada penelitian yang menyatakan bahwa pucuk jambu yang digunakan sebagai antidiare harus berwarna merah dengan campuran garam dapur atau menggunakan daging buah pisang klutuk, sehingga peneliti tertarik untuk mendapatkan bukti ilmiah mengenai perbandingan aktivitas yang dihasilkan dari pucuk merah yang ditambahkan garam dapur,  daging buah pisang klutuk dan kombinasi dari pucuk merah dan pucuk hijau sebagai antidiare terhadap aktivitas bakteri E. coli .

## 2.  Metode
2.1.  Alat
Alat yang digunakan pada penelitian ini aAlat gelas (Iwaki-Indonesia), timbangan digital (Metler Toledo-Switzerland), mikroskop (Olympus-Jepang), autoklaf (Bio Base-Cina), Laminar Air Flow (Thermo Scientific-Amerika),  Inkubator  (Memmert- Jerman).
2.2.  Bahan
Pucuk merah jambu biji, pucuk hijau jambu biji, buah pisang klutuk, garam dapur halus (NaCl 94%), aquadest, Natrium Klorida (merck),  Etanol  96%  (Smart  Lab),  HCl (Merck), FeCl3 0,1%, kloroform (Smart Lab),
reagen wagner, reagen dragendorft dan H 2 SO 4 (Merck),  aquadest,  kertas  saring  (Whatman No.41), Nutrient Agar (NA) (Oxoid), Mueller Hinton Agar (MHA) (Oxoid), E. Coli ATCC 25922, BaCl 2 (Merck).
2.3.  Prosedur
2.3.1. Skrining Fitokimia
Skrining fotokimia dilakukan untuk mengidentifikasi golongan senyawa metabolit sekunder yang ada pada sampel meliputi alkaloid, flavonoid, tannin, fenolik, saponin, dan terpenoid/steroid 13 .
2.3.2. Penetapan Susut Pengeringan
Botol timbang kosong yang sudah dipanaskan menggunakan oven dengan suhu 105ºC ditambahkan sampel sebanyak 1-2 gram lalu digoyangkan dan diratakan. Kemudian dimasukkan kedalam oven dengan tutup terbuka hingga mendapatkan bobot tetap. Penetapan dilakukkan pengulangan sampai 3 kali dan hitung persentasenya 14 .
2.3.3. Penetapan Kadar Air Toluen  dijenuhkan  sebanyak  200  mL menggunakan corong pisah dan dibiarkan selama 24 jam. Serbuk simplisia sebanyak 5 gram dimasukkan ke labu bulat, ditambahkan toluen yang sudah dijenuhkan dan 3 batu didih. Kemudian dilakukan penyulingan 15 menit, lalu sumber panas dimatikan dan dibiarkan penyulingan terjadi sampai tabung penerima mencapai suhu kamar/dingin. Jika air dan toluen sudah memisah dengan sempurna maka volume air dapat terbaca.
2.3.4. Penetapan Kadar Abu Total Simplisia yang sudah dihaluskan ditimbang sebanyak 2-3 gram lalu dimasukan kedalam krus yang sudah diketahui bobot tetapnya. Kemudian pijarkan krus pada suhu 600ºC secara perlahan sampai didapat abu, selanjutnya dinginkan krus  dalam desikator selama ±15 menit , lalu ditimbang hingga didapat bobot yang tetap/konstan 14 .

## 2.3.5. Penetapan Kadar Abu Tidak Larut Asam
Abu yang didapatkan dari hasil kadar abu total dilarutkan dengan HCl encer sebanyak  25  mL  selama  5  menit,  abu  yang tidak larut kemudian dikumpulkan serta lakukan penyaringan menggunakan kertas saring bebas abu dan dilakukan pencucian menggunakan air panas. Selanjutnya abu dalam kertas saring dipijarkan pada suhu 600ºC 14 .

## 2.3.6. Penetapan Kadar Sari Larut Air
Sebanyak 5 gram serbuk simplisia dimasukkan kedalam labu bersumbat dan ditambahkan kloroform yang sudah dijenuhkan  sebanyak  100  mL.  Kemudian dilakukan  pengocokan  filtrat  6  jam  pertama secara berkali kali dan diamkan selama 18 jam, disaring, dan diambil filtratnya sebanyak 20  mL  lalu  dimasukan  kedalam  cawan, diuapkan hingga filtrat kering. Setelah kering, lalu dimasukan kedalam oven dan dipanaskan pada suhu 105ºC , tara hingga didapat bobot konstan 14 .
2.3.7. Penetapan Susut Pengeringan Botol timbang kosong yang sudah dipanaskan menggunakan oven dengan suhu 105ºC ditambahkan sampel sebanyak 1-2 gram lalu digoyangkan dan diratakan. Kemudian dimasukkan kedalam oven dengan tutup terbuka hingga mendapatkan bobot tetap. Penetapan dilakukkan pengulangan sampai 3 kali dan hitung persentasenya 14 .
2.3.8. Penetapan Kadar Sari Larut Etanol
Sebanyak 5 gram serbuk simplisia ditimbang kemudian dimasukan kedalam labu bersumbat dan ditambahkan etanol P 100 mL. Dikocok pada saat 6 jam pertama berkali- kali dan dibiarkan selama 18 jam. Filtrat disaring dan diambil 20 mL kemudian dimasukkan ke dalam cawan, diuapkan, hingga filtrat kering, lalu dipanaskan pada 105ºC dan ditara hingga didapat bobot tetap 14 .

## 2.3.9. Penyiapan Bahan Uji Antibakteri
Penyiapan bahan uji terdiri dari 8 (delapan)  kelompok  perlakuan,  masing- masing sampel dicuci bersih terlebih dahulu dan ditiriskan hingga kering, selanjutnya masing-masing sampel seperti yang tertera pada tabel 1 digerus dan diambil sarinya dengan konsentrasi yang digunakan yaitu 100% dengan perbanadingan kombinasi 1:1.
2.3.10. Penyiapan Bahan Uji Antibakteri Penyiapan bahan uji terdiri dari 8 kelompok perlakuan, masing-masing sampel dicuci bersih terlebih dahulu dan ditiriskan hingga kering, selanjutnya masing-masing sampel seperti yang tertera pada tabel 1 digerus dan diambil sarinya dengan konsentrasi yang digunakan yaitu 100% dengan perbanadingan kombinasi 1:1.
2.3.11. Peremajaan Kultur Murni Bakteri Bakteri E. coli diambil sebanyak 1 ose kemudian dipindahkan/inokulasikan pada medium NA miring dengan cara digores lalu dilakukan iinkubasi  selama 24 jam dengan suhu inkubator 37ºC 15 .
2.3.12. Persiapan Suspensi Bakteri Sebanyak 1 ose bakteri dari hasil peremajaan dimasukkan kedalam tabung reaksi berisi 10mL NaCl 0,9% steril, dikocok dan dihomogenkan.15 Standar kekeruhan yang  digunakan  adalah  McFarland  dengan mencampurkan  0,05mL  BaCl2  1%  dengan H 2 SO 4  1%  9,95  mL.  Kemudian  kekeruhan suspensi bakteri dibandingkan dengan standar McFarland 16 .
2.3.13. Uji Aktivitas Antibakteri Media dibuat dengan memanaskan 3,8 gram  media  MHA  yang  dilarutkan  dalam aquades  100  mL.  Selanjutnya  disterilkan menggunakan autoklaf pada suhu 121ºC selama 20 menit 17 .  Media  MHA  dimasukan kedalam cawan petri, kemudian ditambahkan bakteri E. coli ATCC 25922 sebanyak 1000 µL  pada  cawan  petri,  digoyangkan  lalu dibiarkan padat. Selanjutnya dibuat sumuran menggunakan ujung pipet steril dan masing- masing sampel uji (M, H, K, MG, HG, MHG,
MH, C) dimasukan pada sumuran yang telah dibuat. Selanjutnya cawan petri dimasukan kedalam inkubator dengan suhu 37ºC selama 1x 24 jam 15 . Pengukuran zona hambat diukur secara horizontal dan vertikal dengan alat jangka sorong  dengan  rumus  ((DV+DH)/2-DS). (DV)  merupakan  diameter  vertikal,  (DH) diameter horizontal, (DS) diameter sumuran 18 . Hasil data zona hambat yang diperoleh kemudian dianalisis menggunakan SPSS One Way Analysis of Varian (Anova)  dan dilanjutkan dengan uji Least  Significant Difference (LSD).
3.  Hasil dan Pembahasan Determinasi suatu tanaman dilakukan untuk mengetahui keaslian dari tanaman yang digunakan. Berdasarkan hasil determinasi No. 53/HB/12/2021 yang dilakukan di Herbarium Jatinangor  FMIPA  UNPAD  menunjukan bahwa sampel pucuk daun jambu biji dan pisang klutuk yang digunakan memiliki nama latin Psidium guajava L dan Musa balbisiana Colla . Skirining  fitokimia  dilakukan  seperti pada tabel 2 untuk mengetahui metabolit sekunder yang terdapat pada simplisia. Pada simplisia pucuk merah positif mengandung alkaloid sedangkan simplisia pisang klutuk negatif alkaloid. Terjadinya reaksi warna pada alkaloid dikarenakan alkaloid berinteraksi dengan  ion  tetraiodobimustat  (III)  sehingga membentuk senyawa kompleks dan endapan. Untuk  mengidientifikasi  keberadaan flavonoid  dilakukan  penambahan  serbuk magnesium dan HCl pekat. Penambahan tersebut mengakibatkan inti benzopiron yang dimiliki  pada  struktur  flavonoid  menjadi tereduksi sehingga terbentuk 2 lapisan dan terjadi perubahan warna menjadi jingga ataupun merah 19 . Simplisia pucuk jambu biji dan pisang klutuk memberikan warna jingga dan kuning sehingga positif mengandung flavonoid.
Uji senyawa tanin memberikan hasil positif pada simplisia pucuk jambu biji dan pisang klutuk yaitu terbentuknya warna hitam setelah ditetesi FeCl 3 dan terbentuk endapan saat ditambahkan gelatin 1%. Tanin memiliki
khasiat sebagai antibakteri, antidiare, antioksidan, dan astringen 20 . Secara keseluruhan pada pengujian parameter mutu di Tabel 3 menunjukkan bahwa dari kedua simplisa tersebut sesuai dengan yang dipersyaratkan kecuali parameter susut pengeringan dan kadar abu tak larut asam simplisia pisang klutuk. Sebagaimana diketahui mutu simplisia yang baik dapat menjamin standar mutu dan keamanan produk untuk dijadikan bahan obat yang berkualitas, aman dan bermanfaat.
Uji aktivitas dilakukan untuk mengetahui kemampuan serta perbandingan aktivitas dari pucuk jambu biji dan pisang klutuk dalam menghambat bakteri yang akan  diujikan.  Metode  yang  digunakan yaitu metode difusi dengan teknik sumuran dengan bakteri uji yaitu E. coli ATCC 25922. Pemilihan bakteri ATCC karena memiliki kelebihan yang tidak mudah terkontaminasi dibandingkan dengan bakteri hasil pasien atau lingkungan dan bakteri tersebut dijadikan sebagai bakteri yang standar dalam penelitian 17 .
Berdasarkan hasil uji antibakteri E. coli ATCC 25922 dilakukan 3 kali pengulangan dengan zona hambat dari masing-masing perlakuan pucuk merah jambu biji dan pisang klutuk berbeda-beda. Secara terperinci hasil dapat dilihat pada tabel 4.
Kontrol positif yang digunakan pada penelitian ini yaitu kotrimoksazol. Kotrimoksazol menghambat enzim metabolisme asam tetrahidfolat pada bakteri penginfeksi. Sedangkan untuk kontrol negatif tidak ada karena dalam penelitin Utomo  (2018)  menyatakan  bahwa  kontrol negatif merupakan pelarut yang dijadikan sebagai pengencer untuk suatu zat yang akan diuji sedangkan pada penelitian ini tidak menggunakan pengencer/pelarut apapun, sehingga kontrol negatif tidak diperlukan. Berdasarkan hasil diameter rata-rata zona hambat pada tabel 4 yang dianalisis secara statistik menggunakan uji One Way Analysis of Varian (Anova)  menghasilkan nilai  signifikansi  0,000  (P<0,05),  sehingga disimpulkan bahwa semua kelompok memberikan pengaruh terhadap diameter
Tabel 1. Perlakuan Sampel terhadap Bakteri E.coli
Jenis Kelompok
Perlakuan Sampel
(1:1) Keterangan M Pucuk merah H Pucuk Hijau K Pisang klutuk MG Pucuk merah+garam HG Pucuk hijau+garam MHG Pucuk merah+hijau+garam MH Pucuk merah+hijau C Kotrimoksazol Tabel 2. Skrining Fitokimia Golongan Senyawa Pucuk Jambu Biji Pisang Klutuk Alkaloid + - Flavonoid + + Fenol + + Tanin + + Saponin + - Steroid + - Trtiterpenoid - - Karakteristik Simplisia pucuk jambu biji (%) Syarat Depkes RI (%) Simplisia pisang klutuk (%) Syarat Depkes RI (%) Susut pengeringan 7,53 ± 0,35 <10 11,9 ± 0,1 <10 Kadar air 4,3 ± 1,15 <10 3,3 ± 1,15 <10 Kadar abu total 3,43± 0,29 <8,4 2,61 ± 0,24 <3,9 Kadar abu tak larut asam 0,79 ± 0,09 <0,8 0,90 ± 0,24 <0,1 Kadar Sari Larut Air 24,34 ± 1,90 >18,2 13,39 ± 0,77 >10,1 Kadar Sari Larut Etanol 16,74 ± 0,25 >15 9,64 ± 0,01 >7,2
Tabel 3. Hasil Parameter Karakterisasi Mutu Simplisia Pucuk Jambu Biji dan Pisang Klutuk
Keterangan:
(+) = teridentifikasi, (-) = tidak teridentifikasi
Keterangan: (±) = Standar deviasi

## zona hambat terhadap pertumbuhan bakteri
E. coli . Pada uji LSD diperoleh hasil bahwa beberapa kelompok menunjukan perbedaan yang signifikan dan tidak signifikan. Adapun kelompok yang tidak memiliki perbedaan signifikan  (P  >  0,05)  yaitu  kelompok  HG (pucuk  hijau  jambu  biji+garam)  dengan  H (pucuk hijau jambu biji).
Perlakuan yang menghasilkan jumlah diameter zona hambat terbesar adalah MHG (kombinasi  antara  pucuk  merah  dan  pucuk hijau jambu biji dengan tambahan garam dapur) dengan perbandingan 1:1:1. Kombinasi ini menghasilkan hambatan yang lebih besar dibandingkan dengan pengujian secara tunggal. Hal tersebut dapat dikaitkan dengan
keberadaan senyawa aktif yang berpontensi memberikan aktivitas antibakteri pada kedua bagian tanaman tersebut, sehingga ketika keduanya digabungkan dengan perbandingan yang sama dan digunakan secara langsung akan menghasilkan aktivitas yang lebih tinggi dan zona hambat yang dihasilkan besar. Dalam penggunaannya secara langsung, maka satu lembar pucuk hijau yang ditambah satu pucuk merah jambu biji lebih efektif dibandingkan dengan 2 pucuk daun hijau atau merah yang tidak dikombinasi.
Selanjutnya  pada  kelompok  MHG dengan MH memberikan hasil rata-rata zona hambat yang tidak terlalu jauh. Hal tersebut dapat disimpulkan bahwa pengunaan garam
Keterangan Pengujian konsentrasi 100% Rata-rata zona hambat (mm) M 18,32 ± 0,16 H 17,26 ± 0,23 K 3,25 ± 0,06 MG 18,28 ± 0,13 HG 17,50 ± 0,09 MHG 19,60 ± 0,06
MH
19,20 ± 0,02
C 30,98±0,00 Tabel 4. Uji Aktivitas Pucuk Jambu Biji dan Pisang Klutuk Segar Konsentrasi 100%
Gambar 1. Zona Hambat Sampel Pucuk Jambu Biji serta Pisang Klutuk Segar Konsentrasi 100% terhadap bakteri E. Coli .  M  (Pucuk  Merah),  H  (Pucuk  Hijau),  K  (Pisang  Klutuk),  MG (Kombinasi Pucuk Merah dan Garam), HG (Kombinasi Pucuk Hijau dan Garam), MHG (Kombinasi Pucuk Merah, Hijau dan Garam), MH (Pucuk Merah dan Hijau), C (kontrol positif Kotrimoksazol), diameter sumuran 4 mm.

## Keterangan:
M  (Pucuk  Merah),  H  (Pucuk  Hijau),  K  (Pisang Klutuk),  MG  (Kombinasi  Pucuk  Merah  dan Garam),  HG  (Kombinasi  Pucuk  Hijau  dan Garam), MHG (Kombinasi Pucuk Merah, Hijau dan  Garam),  MH  (Pucuk  Merah  dan  Hijau), C  (Kontrol  Positif  Kotrimoksazol),  diameter sumuran 4 mm.
dapur dalam kombinasi antara pucuk merah dan pucuk hijau tidak terlalu memberikan aktivitas terhadap bakteri E. coli . Berdasarkan informasi dari Batra, penambahan garam bertujuan untuk mengurangi rasa sepat yang ditimbulkan oleh pucuk daun jambu. Secara ilmiah hal ini dapat dijelaskan bahwa penggunaan garam sebenarnya dapat berfungsi untuk mengembalikan atau mengganti cairan tubuh yang hilang akibat diare. Pada penelitian sebelumnya, Infusa daun jambu biji memberikan hambatan terhadap E.coli sebesar 14,10 mm 21 sedangkan pada ekstrak daun jambu biji muda dan tua memberikan hambatan sebesar 6,43 mm 22 . Pada penelitian ini, kombinasi pucuk daun merah dan pucuk daun hijau tanpa penyarian menggunakan pelarut memberikan hambatan 19,20 ± 0,02 mm. Berdasarkan hasil tersebut, peneliti berkesimpulan bahwa penggunaan daun jambu biji sebagai antidiare lebih efektif digunakan secara langsung dari pada diolah atau dijadikan ekstrak. Hal ini sesuai dengan penggunaan di masyarakat serta telah dipraktekkan oleh batra dimana pengobatan diare secara tradisional dilakukan dengan menumbuk atau dikunyah kemudian ditelan langsung.
Diameter zona hambat terkecil didapatkan oleh kelompok perlakuan K (daging buah pisang klutuk) dengan diameter rata-rata 3,25 mm. Pada hasil skrining fitokimia  daging  pisang  klutuk  hanya mengandung  senyawa  flavonoid,  fenol  dan tanin, berbeda dengan pucuk jambu biji yang mengandung alkaloid, tanin, fenol, flavonoid serta saponin. Perbedaan inilah yang dapat mempengaruhi nilai diameter zona hambat. Pada penelitian lain, dilaporkan bahwa kombinasi daging pisang klutuk dan kulitnya pada  konsentrasi  100%  (b/b)  menghasilkan zona hambat sebesar 11,4 mm 12 . Hal ini dapat menjadi sebuah informasi tambahan untuk hatra dalam memperbaiki metode pengobatannya.
Senyawa tanin memiliki mekanisme kerja untuk mengaktifkan adhesin sel bakteri, menggangu transport protein pada lapisan dalam sel bakteri sedangkan flavonoid dapat menghambat motilitas bakteri, menyebabkan
terjadinya kerusakan permeabilitas dinding sel bakteri 23 . Pada mekanisme kerja saponin dapat terjadinya kebocoran sel serta keluarnya senyawa intraseluler yang diakibatkan dari menurunya tegangan permukaan. Fenol dapat menggangu komponen penyusun peptidoglikan sel bakteri sehingga lapisan sel tidak terbentuk secara utuh. Selain itu untuk senyawa alkaloid dapat menghambat sintesis dinding sel 24 . Hasil uji aktivitas antibakteri pada tabel 4 memiliki nilai diameter antara 11-20 mm, hal tersebut menunjukan bahwa semua kelompok pucuk daun jambu biji mempunyai daya antibakteri dengan kategori kuat, sedangkan kelompok pisang klutuk memberikan zona hambat  <5  mm  sehingga  dikategorikan lemah. Penentuan kriteria ini berdasarkan Davis  dan  Strout  (1971)  yang  menyebutkan bahwa kekuatan daya antibakteri yaitu ≥ 20 mm berarti sangat kuat, 10-20 mm kuat, 5-10 mm sedang, dan ≤ 5 lemah 25 . Kombinasi pucuk merah dan pucuk hijau jambu biji dengan campuran garam  dapur  (MHG)  memiliki  aktivitas antibakteri yang paling baik terhadap E. coli dibandingkan dengan penggunaan pucuk jambu biji saja. Namun penggunaan kombinasi ini sebaiknya perlu diperhatikan pada orang yang mempunyai penyakit hipertensi karena adanya penggunaan garam. Konsumsi garam secara berlebihan dapat meningkatkan jumlah natrium didalam sel serta menggangu keseimbangan cairan. Masuknya cairan tersebut kedalam sel dapat mengecilkan diameter pembuluh darah sehingga jantung harus memompa darahnya lebih kuat daripada biasanya dan berujung meningkatnya tekanan darah, dengan begitu bagi orang yang menderita hipertensi, untuk pengunaan garam tersebut dapat dihilangkan/ tidak digunakan.
Pada kelompok K (daging buah pisang klutuk) memberikan nilai zona hambat yang kecil sehingga dikategorikan lemah. Namun secara empiris penggunaan pisang klutuk ini masih digunakan masyarakat dan batra karena memberikan efek penyembuhan. Sehingga pisang klutuk dimungkinkan memberikan aktivitas antidiare dengan mekanisme
kerja  yang  berbeda.  Maka  perlu  dilakukan pengujian lebih lanjut secara in-vivo.
4.  Kesimpulan Pucuk merah dan hijau daun jambu biji baik tunggal maupun kombinasinya memiliki aktivitas antibakteri kategori kuat terhadap E. coli. Kombinasi pucuk merah dan hijau daun jambu biji dengan campuran garam konsentrasi  100%  (1:1:1)  memiliki  nilai KHM  paling  tinggi  dibandingkan  kelompok lainnya.
Daftar Pustaka 1.  Jefrin Sambara, Ni Nyoman Yuliani
MYE.  Pemanfaatan  Tanaman  Obat Tradisional  Oleh  Masyarakat  kelurahan Merdeka  Kecamatan  Kupang  Timur. 2016;14(No.1):112-1125.
2.  Rosdiyanti VR. Studi Etnobotani Tumbuhan Yang Berpotensi Sebagai Obat Penyakit Dalam Oleh Masyarakat Using Di Kabupaten Banyuwangi.; 2015.
3. Mardiyah S. Penyuluhan, Pendampingan, Dan Pembinaan, Serta Pengawasan Pelayanan Kesehatan Tradisional Di Kabupaten  Situbondo.  ABDI  MASSA: Jurnal  Pengabdian  Nasional  (e-ISSN: 2797-0493), 1(01), 43-49.
4.  Sudirman S, Skripsa TH. Pemanfaatan Pelayanan Pengobatan Tradisional (Batra)  Sebagai  Role  Model  Back  To Nature Medicine di Masa Datang. ARSY: Jurnal Aplikasi Riset kepada Masyarakat, 1(1), 45-50. doi:10.55583/arsy. v1i1.44
5. Nastasha  Mufti,  Elizabeth  Bahar  DA. Uji Daya Hambat Ekstrak Daun Sawo terhadap Bakteri Escherichia coli secara InVitro. Jurnal Kesehatan Andalas. 2017;6(2):289.doi:10.25077/jka.v6i2.693
6.  Siti Nuryani, R.Fx.Saptono Putro D. Pemanfaatan Ekstrak Daun Jambu Biji  (Psidium  guajava  Linn)  Sebagai Antibakteri dan Antifungi. Jurnal Teknologi  Laboratorium.2017;6(2):41. doi:10.29238/teknolabjournal.v6i2.95
7.  Handarni D, Putri SH, Tensiska T. Skrining Kualitatif Fitokimia Senyawa Antibakteri pada Ekstrak Daun Jambu Biji (Psidiium guajava L.). Jurnal Keteknikan Pertanian
Tropis dan Biosistem.2020;8(2):182-188. doi:10.21776/ub.jkptb.2020.008.02.08 8.  Pelu AD, Djarami J. Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Harendong Bulu  (  Clidemia  hirta  )  asal  Maluku terhadap Staphylococcus aureus. Jumantik.2022;7(4):5-10.  doi:10.30829/ jumantik.v7i4.11983
9. Nofianti  T.  Potensi  Sediaan  Kapsul Ekstrak Etanol Kulit Pisang Klutuk Sebagi Antidiabetes. J Farm Udayana. Published online 2020:187.  doi:10.24843/jfu.2020. v09.i03.p07
10. Nomer  NMGR,  Duniaji  AS,  Nocianitri KA. Kandungan Senyawa Flavonoid dan Antosianin Ekstrak Kayu Secang(Caesalpinia  sappan  L.)  Serta Aktivitas Antibakteri Terhadap Vibrio cholerae. Jurnal Ilmu dan Teknologi Pangan.2019;8(2):216. doi:10.24843/
itepa.2019.v08.i02.p12 11. Hidjrawan  Yusi.  Identifikasi  Senyawa Tanin Pada Daun Belimbing Wuluh (Averrhoa  bilimbi  L.).  Jurnal  Teknologi Indonesia.2018;4(2):78-82.
12. Muhammad A. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak  Etanol  Buah  Muda  Dan  Kulit Pisang Kluthuk (Musa balbisiana Colla) Terhadap Pertumbuhan Eschericia coli Secara Invitro. Angew Chemie Int Ed 6(11), 951–952. 2020;(November):1-9.
13. Utami YP, Umar AH, Syahruni R, Kadullah I. Standardisasi Simplisia dan Ekstrak Etanol  Daun  Leilem  (Clerodendrum).  J Pharm Med Sci. 2017;2(1):32-39.
14. Kemenkes RI. Farmakope Herbal Indonesia Edisi 2. Published online 2017:561.
15. Sainal  Edi  Kamal  DLT.  Uji  Aktivitas Anti  Ekstrak  Buah  Pepino  (Solanum Muricatum  Ait)  Terhadap  Pertumbuhan Bakteri Esherichia coli. J Farm Sandi Karsa.2019;5(1):15-18. doi:10.36060/jfs. v5i1.31
16. Hanna Berliana Aviany SP. Analisis Efektivitas Probiotik di Dalam Produk Kecantikan sebagai Antibakteri terhadap Bakteri Staphylococcus epidermidis. Berkala Bioteknologi. 2020;3(2):24-31.
17. Utomo  SB,  Fujiyanti  M,  Lestari  WP,
Mulyani  S.  Antibacterial  Activity  Test of the C-4-methoxyphenylcalix [4] resorcinarene  Compound  Modified by Hexadecyltrimethylammonium- Bromide against Staphylococcus aureus and Escherichia coli Bacteria. JKPK Jurnal Kimia dan Pendidik Kimia. 2018;3(3):201-209.  doi:10.20961/jkpk. v3i3.22742
18. Tiara  Magrivah,  Marwati  FA.  Uji Daya Hambat Bakteri Staphylococcus aureus  Menggunakan  Ekstrak  Daun Tahongai  (Kleinhovia  hospita  L.). Jurnal  Peternakan  Lingkung  Tropis. 2019;2(September):41-50.
19. Lestari  TS,  Hamzah  B.  Analisis  Kadar Senyawa Flavonoid Ekstrak Etanol Buah Pare  (Momordica  Charantia  L.).  Media Eksakta. 2022;18(2):96-101.
20. Malangngi  L,  Sangi  M,  Paendong  J. Penentuan Kandungan Tanin dan Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Biji Buah Alpukat  (Persea  americana  Mill.). Jurnal MIPA. 2012;1(1):5. doi:10.35799/ jm.1.1.2012.423
21. Klaritya Anisya Kurnia, Shafa Qotrunnada Widyatamaka D. Khasiat daun jambu biji sebagai  antidiare.  Heal  Sci  Growth  J. 2020;5(2):43-57.
22. Noer Q. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun  Jambu  Biji  (Psidium  guajava  L.) Terhadap Bakteri Escherichia coli dan Vibrio cholerae. Acta Pharm Indo. 2019;7
No 2:51-57.
23. Egra  S,  Mardhiana  .,  Rofin  M,  et al. Aktivitas Antimikroba Ekstrak Bakau  (Rhizophora  mucronata)  dalam
Menghambat  Pertumbuhan  Ralstonia Solanacearum  Penyebab  Penyakit  Layu. Agrovigor: Jurnal Agroekoteknologi. 2019;  12(1):26.  doi:10.21107/agrovigor. v12i1.5143
24. Anas Y, Hidayati DN, Kurniasih A, Sanjaya  LKD.  Aktivitas  antidiare ekstrak  etanol  daun  nangka  (Artocarpus heterophyllus  Lam.)  dan  daun  angsana (Pterocarpus indicus Wild.) pada mencit jantan galur BALB/C. Jurnal Ilmu Farmasi dan Farmasi Klinis. 2016;13(1):33-41.
25. Willia N. Uji Aktivitas Antibakteri Fraksi
Daun  Sirih  (Piper  betle  L.)  Terhadap Pertumbuhan Bakteri Streptococcus mutans  Secara  InVitro.  Jambi  Medical Jurnal: Jurnal Kesehatan dan Kedokteran. 2016;4(2):140-155.