ISSN 2085-2916  e-ISSN 2337-3652 Tersedia daring http://jai.ipb.ac.id J. Agron. Indonesia, Agustus 2019, 47(2):203-209 DOI: https://dx.doi.org/10.24831/jai.v47i2.25115
Perbanyakan Pepaya ( Carica papaya L.) ‘Sukma’ In Vitro dari Eksplan Tunas Pucuk sebagai Respon terhadap BA dan NAA
In Vitro Propagation of Papaya (Carica papaya L. ) ‘Sukma’ from Shoot Tip Explants as Influenced by BA and NAA
Fitri Fatma Wardani 1,3 , Darda Efendi 2* , Diny Dinarti 2 , dan Joko Ridho Witono 3
1 Program Studi Pemuliaan dan Bioteknologi Tanaman, Sekolah Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor 2 Departemen Agronomi dan Hortikultura, Fakultas Pertanian, Institut Pertanian Bogor (Bogor Agricultural University), Jl. Meranti, Kampus IPB Darmaga, Bogor, 16680, Indonesia
3 Pusat Penelitian Konservasi Tumbuhan dan Kebun Raya-Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia Jl. Ir. H. Juanda 13 Bogor, 16003, Indonesia
Diterima 7 Februari 2019/Disetujui 31 Juli 2019

## ABSTRACT
Papaya is one of tropical fruits native to Southern Mexico and which have been cultivated in Indonesia for a long time. Papaya is usually propagated by seeds. Therefore, the offsprings are not true-to-type. This study was conducted to develop a protocol of in vitro propagation of papaya ‘Sukma’ from shoot tips of in vitro germinated seeds as explants. Seeds were extracted from fruit that physiologically ripe and it germinated on MS basal medium. The experiment was set up in a randomized block design with culturing day as blocks (four blocks) and various concentrations of BA (0.0, 0.5, 1.0, 1.5, and 2.0 mg L -1 ) in MS medium enriched with NAA 0.5 mg L -1 as treatment. Shoot tips in the MS medium without plant growth regulator as control so there was six treatments and 24 observation units. Each observation units contained five culture vessels and each culture vessels contained four explants. The results showed that the highest number of shoots, number of leaves, number of nodes, and percentage of explant forming callus were obtained by BA 1.0-1.5, 1.0-2.0, 0.5-2.0, and 1.0- 1.5 mg L -1 , respectively. The highest percentage of explant forming roots were obtained in medium without BA. Analysis of regression showed that the optimum concentration to get the highest number of shoots and leaves were BA 1.31 and 1.35 mg L -1 , while explants will be rooted in medium without BA. Thus, in vitro propagation for papaya ‘Sukma’ should be conducted in two steps, i.e. for shooting and rooting growth.
Keywords: callus, clonal propagation, seed, true to type

## ABSTRAK
Pepaya merupakan salah satu buah tropis yang berasal dari Meksiko bagian selatan dan telah banyak dikembangkan di  Indonesia.  Perbanyakan  pepaya  biasanya  menggunakan  benih,  sehingga  turunannya  tidak  sama  dengan  tetua.  Studi ini dilaksanakan dengan tujuan mengembangkan protokol perbanyakan in vitro dengan eksplan tunas pucuk dari benih yang dikecambahkan secara in vitro. Benih diekstraksi langsung dari buah yang telah masak fisiologis di lapangan dan dikecambahkan pada media dasar MS. Rancangan percobaan yang digunakan adalah rancangan acak kelompok dengan hari penanaman eksplan sebagai kelompok (empat kelompok) dan perlakuan berbagai konsentrasi BA (0.0, 0.5, 1.0, 1.5, dan 2.0 mg L -1 ) dalam media MS yang sudah diberi 0.5 mg L -1 NAA sebagai faktor tunggal dalam percobaan. Tunas pucuk pepaya yang ditanam di media MS tanpa ZPT digunakan sebagai kontrol, sehingga terdapat enam perlakuan dan 24 unit amatan. Setiap unit amatan terdiri dari lima botol kultur yang masing-masing berisi empat eksplan tunas pucuk. Hasil penelitian menunjukkan bahwa jumlah tunas, jumlah daun, jumlah buku, dan persentase eksplan berkalus tertinggi diperoleh oleh tunas pada media dengan konsentrasi BA secara berturut-turut adalah 1.0-1.5, 1.0-2.0, 0.5-2.0, dan 1.0-1.5 mg L -1 . Eksplan berakar pada media tanpa tambahan BA. Analisis regresi non-linier menunjukkan bahwa konsentrasi optimum BA untuk mendapatkan jumlah tunas dan jumlah daun tertinggi adalah 1.31 dan 1.35 mg L -1 , sedangkan eksplan akan berakar pada media tanpa tambahan BA. Jadi, perbanyakan pepaya ‘Sukma’ secara in vitro perlu dilakukan dua tahap yakni untuk pertunasan dan pengakaran secara berurutan.
Kata kunci: benih, kalus, perbanyakan klonal, true-to-type

## PENDAHULUAN
Pepaya  merupakan  buah  tropika  yang  berasal  dari Amerika  bagian  selatan  dan  telah  banyak  dibudidayakan di  Indonesia.  Perbanyakan  pepaya  umumnya  dilakukan dengan  cara  generatif  menggunakan  benih  karena  lebih mudah dibandingkan dengan metode perbanyakan lainnya. Namun demikian, perbanyakan generatif ini menyebabkan terjadinya  segregasi  sehingga  sifat  yang  diwariskan  ke generasi berikutnya menjadi berbeda dengan tetuanya (Al- Shara et al. , 2018). Selain itu, pepaya merupakan tanaman trioecious  yang  memiliki  tiga  variasi  tipe  bunga,  yaitu jantan,  betina,  dan  hermafrodit.  Tipe  bunga  pepaya  yang ditumbuhkan melalui benih, baru dapat ditentukan setelah berumur  6  bulan  (Roy et  al .,  2012),  sehingga  peluang didapatkannya tanaman hermafrodit belum dapat diketahui. Oleh karena itu, diperlukan metode perbanyakan klonal yang dapat mempertahankan genetik dan tipe bunga pepaya.
Metode  perbanyakan  klonal  efisien  yang  dapat digunakan sebagai alternatif adalah melalui kultur in vitro . Metode  ini  merupakan  satu-satunya  cara  ekonomis  yang dapat  digunakan  untuk  memproduksi  tanaman  pepaya seragam  secara  masal  dengan  tipe  bunga  yang  sudah diketahui  (Bindu  dan  Podikunju,  2017).  Kultur in  vitro pepaya telah berhasil dilakukan dengan menggunakan proses organogenesis,  embriogenesis  somatik,  dan  percabangan tunas  aksilar.  Eksplan  yang  biasa  digunakan  adalah  tunas pucuk,  tunas  lateral,  dan  epikotil  (Al-Shara et  al .,  2018), tetapi eksplan tunas pucuk merupakan eksplan yang paling baik karena memiliki tingkat kestabilan genetik yang tinggi, memiliki daya tumbuh kembali lebih tinggi dibandingkan dengan  eksplan  lainnya,  dan  memiliki  jaringan  meristem yang merupakan jaringan yang belum terdiferensiasi (Wang et al ., 2008). Ketiga eksplan tersebut dapat menghasilkan planlet - planlet yang baik pada media dasar MS (Murashige dan Skoog, 1962) yang telah diperkaya dengan zat pengatur tumbuh (ZPT).
Studi  perbanyakan  pepaya  secara in  vitro melalui perbanyakan  tunas  aksilar  telah  dilaporkan  oleh  Wu et al . (2012), Mumo et al . (2013), dan Setargi et al . (2015). Ketiga peneliti tersebut menggunakan ZPT yang sama yaitu BA  dan  NAA  dengan  kombinasi  konsentrasi  tertentu  dan dihasilkan kombinasi terbaik yang berbeda-beda. Perbedaan tersebut terjadi karena genotipe dan eksplan yang digunakan dalam setiap percobaan juga berbeda. Konsentrasi BA yang digunakan oleh para peneliti tersebut yaitu 0.25-2.00 mg L -1 dan konsentrasi NAA yaitu 0.10-0.50 mg L -1 . Salah satu pepaya yang memiliki sifat unggul adalah Pepaya  ‘Sukma’.  Pepaya  ini  merupakan  varietas  yang berasal  dari  seleksi  pohon    induk    pilihan    yang    telah dibudidayakan  oleh  petani  sejak  lama  di  Desa  Cibodas, Kecamatan  Parung  Kuda,  Sukabumi.  Pepaya  ‘Sukma’ merupakan  salah  satu  pepaya  berukuran  besar  dengan bobot  mencapai  2.4-3.0  kg,  panjang  buah  30-35  cm,  dan diameter  buah  12.1-12.8  cm  (Kementan  2009).  Metode kultur in  vitro perlu  dikembangkan  untuk  mendapatkan bibit pepaya ‘Sukma’ yang sama dengan tetuanya ( true-to- type ) . Salah satu cara yang dapat digunakan adalah dengan
mengaplikasikan  NAA  dan  BA  di  dalam  media  kultur in vitro .  Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  mengembangkan protokol perbanyakan in vitro pepaya ‘Sukma’ dari eksplan tunas  pucuk seedling dari  benih  yang  dikecambahkan secara in vitro. Protokol ini nantinya diharapkan akan dapat digunakan  untuk  perbanyakan in vitro tunas  aksilar  yang berasal dari pepaya dewasa di lapangan.

## BAHAN DAN METODE
Percobaan  dilaksanakan  di  Laboratorium  Kultur Jaringan  Pusat  Kajian  Hortikultura  Tropika  (PKHT)  IPB pada  bulan  Juli  sampai  dengan  November  2018.  Pepaya yang  digunakan  merupakan  pepaya  ‘Sukma’  dan  diambil dari  pertanaman  pepaya  di  kebun  percobaan  IPB  Pasir Kuda,  Babakan  Pasir  Mas,  Ciomas,  Bogor.  Buah  pepaya yang  diambil  merupakan  buah  yang  telah  masak  secara fisiologis dengan tanda adanya semburat warna kuning pada kulit buahnya sebesar 25-49% (Suketi et al., 2010). Benih  pepaya  disterilisasi  secara  berseri  dengan merendamnya  di  dalam  alkohol  70%  selama  10  menit. Setelah itu benih dibilas dengan air steril. Benih direndam dengan larutan NaOCl 1.05% selama 20 menit, kemudian direndam kembali dalam larutan NaOCl 0.525% selama 30 menit.  Benih  kemudian  dibilas  tiga  kali  dengan  air  steril sebelum dikecambahkan pada media dasar MS. Media dasar MS adalah media yang mengandung garam-garam mineral makro  dan  mikro  dari  formulasi  Murashige  dan  Skoog (1962),  yang  diperkaya  dengan  tiamin  HCl  0.1  mg  L -1 , piridoksin HCl 0.5 mg L -1 , asam nikotinat 0.5 mg L -1 , glisin 2  mg  L -1 ,  mio-inositol  100  mg  L -1 ,  dan  sukrosa  30  g  L -1 . Semua media diatur pH-nya menjadi 5.8, sebelum ditambah dengan bubuk agar 7 g L -1 sebagai pemadat media. Media yang sudah diberi bubuk agar dididihkan, lalu dimasukkan ke dalam botol kultur berkapasitas 350 mL, masing-masing botol berisi  20 mL. Botol yang telah berisi media ditutup dengan plastik dan disterilkan menggunakan autoklaf pada tekanan 15 Psi dan suhu 121 o C selama 15 menit. Semua botol  kultur  diletakkan  di  rak-rak  di  dalam  ruang  kultur dengan  penerangan  lampu  flouresens  putih  berintensitas cahaya 1000±100 lux, dengan fotoperiodisitas 16 jam terang dan 8 jam gelap setiap hari, dan suhu 22±2 o C. Setelah  berumur  6-8  minggu,  tunas  pucuk  yang berukuran kurang lebih 1 cm dengan jumlah daun 4 diambil dari  hasil  perkecambahan  secara in  vitro dan  digunakan sebagai eksplan. Tunas pucuk hasil perkecambahan kemudian ditanam di media dasar MS yang diperkaya dengan BA dan NAA sesuai dengan perlakuan yang dicobakan.
Rancangan  percobaan  yang  digunakan  dalam percobaan  adalah  rancangan  acak  kelompok  dengan  hari penanaman eksplan digunakan sebagai kelompok sehingga terdapat  empat  kelompok.  Perlakuan  yang  diuji  adalah berbagai  konsentrasi  6- benzyladenin (BA)  sebagai  faktor tunggal,  yang  ditambahkan  ke  dalam  media  dasar  MS yang sudah diberi NAA 0.5 mg L -1 . Konsentrasi BA yang digunakan terdiri dari lima taraf yaitu 0.0, 0.5, 1.0, 1.5, dan 2.0 mg L -1 . Kontrol merupakan tunas pucuk pepaya yang ditanam di media dasar MS tanpa ZPT. Jumlah perlakuan
pada percobaan adalah 6 sehingga terdapat 24 unit amatan. Setiap unit amatan terdiri dari 5 botol kultur yang masing- masing  berisi  empat  eksplan  tunas  pucuk,  sehingga seluruhnya terdapat 480 eksplan di dalam 120 botol kultur.
Pengamatan dilakukan setiap minggu sekali selama 8 minggu dengan variabel yang diamati adalah tinggi tunas, jumlah buku, jumlah tunas, jumlah daun, persentase tunas berakar, dan persentase eksplan berkalus. Persentase tunas berakar dihitung dengan cara membagi eksplan yang berakar dengan eksplan yang ditanam dikalikan 100%. Persentase eksplan  berkalus  dihitung  dengan  cara  membagi  eksplan yang  berkalus  dengan  eksplan  yang  ditanam  dikalikan 100%.  Data  yang  diperoleh  dalam  pengamatan  kemudian diolah dengan menggunakan program Microsoft Excel 2016 dan  dianalisis  keragamannya  (ANOVA)  dengan  program Statistical Analysis Software (SAS) versi 9.1. Hasil ANOVA yang berbeda nyata kemudian diuji lanjut Duncan Multiple Range Test (DMRT).
Variabel  yang  berbeda  nyata  kemudian  dianalisis kembali  dengan  analisis  regresi  non-linier  menggunakan software Minitab16. Pada setiap variabel, akan didapatkan model  regresi  non-linier  yang  dapat  digunakan  untuk menduga  variabel  berdasarkan  konsentrasi  BA  yang diberikan.  Hasil  dugaan  dan  hasil  dalam  percobaan kemudian di uji t untuk melihat kesesuaian model regresi non-linier dengan hasil yang didapatkan dalam percobaan. Apabila nilai p pada uji t lebih dari 0.05 maka model sesuai, sedangkan apabila nilai p pada uji t kurang dari 0.05 maka model tidak sesuai.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengaruh  Konsentrasi  BA  terhadap  Perbanyakan  Tunas Pepaya ‘Sukma’
Eksplan  pada  media  dasar  MS  tanpa  ZPT  dapat tumbuh dengan baik tapi tidak disertai dengan munculnya tunas baru pada buku (Gambar 1A). Tunas hanya tumbuh memanjang  dengan  pertambahan  buku  yang  lebih  sedikit dibandingkan dengan eksplan pada media dasar MS dengan ZPT. Selain itu, pada beberapa pangkal tunas muncul akar pada minggu ke-4. Hal ini sama dengan pernyataan Wu et al . (2012) bahwa eksplan pada media dasar MS tanpa ZPT akan tetap tumbuh tanpa adanya pertumbuhan tunas baru.
Konsentrasi  BA  pada  media  dasar  MS  yang  telah ditambahkan NAA 0.5 mg L -1 memberikan pengaruh yang berbeda-beda pada variabel yang diamati pada minggu ke- 2  hingga  minggu  ke-8  (Tabel  1).  Pada  minggu  ke-2,  BA berpengaruh  nyata  terhadap  jumlah  tunas.  Pada  minggu ke-3,  BA  berpengaruh  nyata  terhadap  jumlah  tunas  dan jumlah daun. Pada minggu ke-4 dan ke-5, BA berpengaruh nyata  kepada  kepada  jumlah  tunas,  jumlah  daun,  dan persentase  eksplan  berkalus.  Pada  minggu  ke-6  dan  ke- 7,  BA  berpengaruh  nyata  terhadap  jumlah  tunas,  jumlah daun,  persentase  eksplan  berakar,  dan  persentase  eksplan berkalus.  Pada  minggu  ke-8,  BA  berpengaruh  nyata  pada semua  variabel  yang  diamati  kecuali  pada  variabel  tinggi tunas.
Tunas  yang  memiliki  tinggi  yang  paling  baik  (1.46 cm) yaitu eksplan yang pada media dasar MS dengan NAA 0.5  mg  L -1 tanpa  tambahan  BA,  meskipun  tidak  berbeda nyata dengan tinggi tunas pada media dengan tambahan BA 0.5, 1.0, dan 1.5 mg L -1 BA (Tabel 2). Hasil menunjukkan pula  bahwa  konsentrasi  BA  yang  lebih  dari  1.0  mg  L -1 menyebabkan tunas semakin pendek. Mumo et al . (2013) menyatakan  hal  yang  serupa  bahwa  konsentrasi  BA  yang lebih besar dari 1.0 mg L -1 dapat menghambat pertumbuhan tunas sehingga menjadi lebih pendek.
Pembentukan  tunas  pada  eksplan  dimulai  pada  hari ke-7  setelah  tanam.  Jumlah  tunas  terbanyak  yaitu  3.3, didapatkan  pada  eksplan  yang  ditanam  pada  media  MS dengan NAA 0.5 mg L -1 dan BA 1.5 mg L -1 (Gambar 1D) tetapi tidak berbeda nyata dengan eksplan pada media dengan BA  1.0  mg  L -1 (Gambar  1C).  Oleh  karena  itu,  kombinasi yang terbaik dalam variabel jumlah tunas adalah BA 1.0- 1.5  mg  L -1 dan  NAA  0.5  mg  L -1 .  Hasil  ini  sesuai  dengan Setargi et al . (2015) yang menyatakan bahwa kombinasi BA 1.0 mg L -1 dan NAA 0.5 mg L -1 dapat menghasilkan jumlah tunas yang terbanyak. Akan tetapi, berbeda halnya dengan Wu et al . (2012) dan Mumo et al . (2013) yang melaporkan bahwa  kombinasi  konsentrasi  yang  lebih  rendah  dari hasil percobaan merupakan kombinasi yang terbaik untuk proliferasi  tunas  pepaya.  Wu et  al .  (2012)  melaporkan bahwa pada tahap inisiasi dan proliferasi tunas, perlakuan terbaik adalah 0.25-0.50 mg L -1 BA pada media MS dengan sukrosa 40 g L -1 . Mumo et al . (2013) menyatakan bahwa pada tahap inisiasi dan proliferasi tunas, perlakuan terbaik adalah  menggunakan  media  MS  dengan  BA  0.5  mg  L -1 , NAA 0.1 mg L -1 , dan sukrosa 30 g L -1 . Pertambahan  daun  pada  eksplan  dimulai  pada  hari ke-7 dan berbeda nyata pada minggu ke-3 hingga minggu ke-8 (Tabel 1). Sama halnya dengan jumlah tunas, jumlah daun per eksplan terbanyak yaitu 9.3 didapatkan pada media dengan NAA 0.5 mg L -1 dan BA 1.5 mg L -1 (Gambar 1D), tetapi tidak berbeda nyata dengan eksplan pada media yang diperkaya  BA  1.0  mg  L -1 (Gambar  1C)  maupun  2.0  mg L -1 (Gambar  1f).  Oleh  karena  itu,  kombinasi  yang  terbaik untuk  jumlah  daun  adalah  BA  1.0-2.0  mg  L -1 dan  NAA 0.5 mg L -1 . Hal ini sedikit berbeda dengan hasil yang telah dilaporkan  oleh  Setargi et  al .  (2015)  yang  menyatakan bahwa  kombinasi  terbaik  untuk  jumlah  daun  adalah  BA 1.0 mg L -1 dan NAA 0.5 mg L -1 . Konsentrasi BA 2 mg L -1 menyebabkan  perubahan  bentuk daun akibat efek toksik dari BA (Setargi et al ., 2015).
Gaba  (2005)  menyatakan  bahwa  rasio  auksin dan  sitokinin  dalam  media  kultur  jaringan  menentukan pertumbuhan  dan  perkembangan  eksplan.  Media  dengan rasio auksin-sitokinin yang lebih tinggi akan menginisiasi tunas  membentuk  akar,  menginduksi  kalus  pada  tanaman monokotil, dan menginisiasi embriogenesis somatik. Media dengan rasio auksin-sitokinin yang sama akan menginduksi pembentukan  akar  adventif  dari  kalus  dan  menginisiasi pembentukan  kalus  pada  tanaman  dikotil.  Media  dengan rasio auksin-sitokinin yang lebih rendah akan menginduksi tunas adventif dan pembentukan tunas aksilar pada eksplan tunas.  Berdasarkan  berat  molekulnya,  hasil  menunjukkan
bahwa rasio NAA dan BA yang memberikan jumlah tunas dan jumlah daun tertinggi dalam percobaan adalah 1:4.4.
Beberapa  laporan  mengenai  proliferasi  tunas menggunakan  auksin  dan  sitokinin  menghasilkan konsentrasi  yang  berbeda-beda.  Konsentrasi  tersebut  juga berbeda  dengan  hasil  yang  didapatkan  dalam  percobaan ini.  Anandan et  al .  (2011)  melaporkan  bahwa  proliferasi tunas pepaya ‘Co7’ terbaik dengan menggunakan eksplan epikotil didapatkan pada media MS dengan BA 1.13 mg L -1 dan NAA 0.01 mg L -1 . Efendi dan Putra (2017) melaporkan bahwa konsentrasi kombinasi NAA dan BA terbaik untuk pembentukan tunas pepaya ‘Callina’ dengan eksplan tunas pucuk dari seedling adalah masing-masing 0.1 dan 0.5 mg L -1 .  Bindu  dan  Podikunju  (2017)  melaporkan  pula  bahwa aplikasi BA 0.5 mg L -1 dan NAA 0.1 mg L -1 pada eksplan
tunas pucuk dan tunas samping dapat menghasilkan jumlah tunas  yang  paling  banyak  pada  tahap  poliferasi  tunas pepaya ‘Pusa Nanha’ secara in vitro .  Perbedaan kombinasi konsentrasi antara NAA dan BA ini terjadi karena genotipe dan  jenis  eksplan  yang  digunakan  pada  setiap  percobaan berbeda-beda  sehingga  memberikan  respon  yang  berbeda pula.  Selain  itu,  perbedaan  hasil  percobaan  ini  dengan percobaan  terdahulu  disebabkan  karena  konsentrasi  NAA yang ditambahkan pada percobaan terdahulu lebih rendah, sehingga rasio sitokinin dan auksin di media tersebut lebih tinggi untuk konsentrasi BA yang sama pada percobaan ini.
Pada variabel jumlah buku, eksplan pada media MS dengan tambahan NAA 0.5 mg L -1 dan BA dalam berbagai konsentrasi  memberikan  hasil  yang  sama  tetapi  berbeda nyata dengan eksplan pada media tanpa ZPT (Tabel 2). Hal ini  menandakan  bahwa  variabel  jumlah  buku  tidak  dapat digunakan  untuk  mendeteksi  mana  perlakuan  konsentrasi BA  terbaik  untuk  perbanyakan in vitro pepaya.  Hasil menunjukkan  pula  bahwa  perbedaan  jumlah  tunas  per eksplan tidak diikuti dengan jumlah buku yang meningkat, padahal jumlah daunnya secara signifikan bertambah. Hal ini  terjadi  karena  tunas-tunas  yang  terbentuk  gagal  untuk memanjang  atau  sangat  pendek  dengan  jumlah  buku  dan jumlah daun yang banyak. Wu et al . (2012) juga menyatakan hal yang serupa bahwa konsentrasi BA 0.5-1.0 mg L -1 dapat menyebabkan  terbentuknya  kalus  pada  pangkal  eksplan yang membuat ruas semakin pendek dengan jumlah daun atau  buku  yang  semakin  banyak.  Konsentrasi  BA  yang terlalu tinggi dapat menyebabkan terbentuknya kalus yang semakin banyak (Wu et al . 2012). Kalus terbentuk pada setiap perlakuan yang diujikan dengan  persentase  yang  berbeda-beda.  Pembentukan kalus  dimulai  pada  pengamatan  minggu  ke-3.  Kombinasi NAA 0.5 mg L -1 dan BA 1.5 mg L -1 merupakan kombinasi dengan persentase yang paling tinggi tetapi tidak berbeda nyata dengan kombinasi NAA 0.5 mg L -1 dan BA 1.0 mg L -1 ,  dengan  persentase  65.00%  dan  64.58%  (Tabel  2). Kalus  yang  terbentuk  dapat  berupa  kalus  yang  kompak ( hard callus ) (Gambar 2A, 2B) dan kalus yang remah ( soft friable callus ) (Gambar 2C, 2D). Terbentuknya kalus pada perlakuan ini merupakan hal yang tidak diinginkan karena Variabel yang diamati Nilai P pada pengamatan minggu ke- 2 3 4 5 6 7 8 Tinggi tunas (cm) 0.17tn 0.36tn 0.09tn 0.08tn 0.07tn 0.05tn 0.08tn Jumlah tunas 0.00* 0.00* 0.00* 0.00* 0.00* 0.00* 0.00* Jumlah buku 0.02* 0.07tn 0.12tn 0.20tn 0.13tn 0.08tn 0.00* Jumlah daun 0.17tn 0.00* 0.01* 0.00* 0.00* 0.00* 0.00* Eksplan berakar (%) 0.45tn 0.12tn 0.00* 0.00* 0.00* 0.00* 0.00* Eksplan berkalus (%) 0.21tn 0.67tn 0.74tn 0.54tn 0.02* 0.01* 0.01*
Tabel 1. Rekapitulasi hasil uji F (nilai P) tinggi tunas, jumlah tunas, jumlah buku, jumlah daun, persentase eksplan berakar, dan persentase eksplan berkalus terhadap konsentrasi BA pada pengamatan minggu ke-2 sampai minggu ke-8
Keterangan: tn = konsentasi BA tidak berpengaruh nyata terhadap variabel yang diamati, * = konsentrasi BA berpengaruh nyata terhadap variabel yang diamati pada α 5%
A B C D E F Gambar 1. Kondisi eksplan 8 minggu setelah tanam pada media A) MS, B) MS + NAA 0.5 mg L -1, C) MS + NAA 0.5 mg L -1 + BA 1.0 mg L -1 , D) MS + NAA 0.5 mg L
-1 + BA 1.5 mg L -1 , E) MS + NAA 0.5 mg L -1 + BA 0.5 mg L -1 , F) MS + NAA 0.5 mg L -1 + BA 2.0 mg L -1 (Garis skala = 5 mm)
pada  perbanyakan in vitro melalui  pola  regenerasi  tunas samping, eksplan yang memiliki pre - existing buds didorong atau dirangsang pecah sehingga tunas akan tumbuh melalui buku-buku. Tunas aksilar yang normal ini kemudian akan disubkulturkan pada media baru untuk tahapan selanjutnya.
Selain  kalus,  akar  juga  terbentuk  pada  salah  satu perlakuan yang diujikan. Akar terbentuk dengan persentase paling  tinggi  (40.46%)  pada  eksplan  dengan  media  dasar MS  dengan  tambahan  NAA  0.5  mg  L -1 (Tabel  2).  Sama halnya  dengan  kalus,  terbentuknya  akar  dalam  percobaan ini  merupakan  hal  yang  tidak  diinginkan,  karena  tujuan utamanya  adalah  memperbanyak  tunas.  NAA  merupakan salah satu ZPT yang dapat menginduksi pembentukan akar. Oleh  karena  itu,  pemberian  NAA  0.5  mg  L -1 pada  media MS menyebabkan eksplan terkonsentrasi untuk membentuk akar tanpa pertambahan tunas.
Analisis  Regresi  Non-linier  pada  Jumlah  Daun,  Jumlah Tunas, dan Persentase Eksplan Berakar
Analisis regresi hanya dilakukan pada variabel jumlah daun, jumlah tunas dan persentase eksplan berakar karena ketiga variabel tersebut berbeda sangat nyata pada tingkat kepercayaan  95%  maupun  99%  dibandingkan  dengan variabel-variabel  lainnya.  Regresi  non-linier  jumlah  tunas dan  jumlah  daun  terhadap  konsentrasi  BA  tersaji  pada Gambar 3. Konsentrasi BA optimal dalam menginduksi tunas adalah 1.31 mg L -1 pada media MS dengan NAA 0.5 mg L -1 . Konsentrasi BA optimal  dalam menginduksi daun adalah 1.35 mg L -1 pada media MS dengan NAA 0.5 mg L -1 . Jumlah tunas  dan  daun  akan  menurun  seiring  dengan  penurunan
dan penambahan konsentrasi BA optimal. Berdasarkan uji t, jumlah tunas dan jumlah daun dugaan hasil dari regresi tidak  berbeda  nyata  dengan  jumlah  tunas  pada  percobaan dengan  nilai  p  yang  sama  0.98  (α  =  5%)  (Tabel  3).  Hal ini  menunjukkan  bahwa  model  regresi  non-linier  tersebut dapat digunakan untuk memprediksi konsentrasi BA dalam memproduksi tunas dan daun secara optimal.
Pada perbanyakan tunas aksilar dengan menggunakan tunas pucuk dari seedling , peran sitokinin dan auksin adalah untuk  meningkatkan  ketahanan  dan  perkembangan  tunas serta mendorong pecahnya mata tunas dan menumbuhkan mata  tunas  menjadi  tunas  (Kane,  2011).  Proliferasi  tunas akan meningkat bila konsentrasi sitokinin juga meningkat tetapi  tunas  yang  terbentuk  menjadi  lebih  kecil  dan memperlihatkan  adanya  gejala hyperhydricity .  Pernyataan ini sesuai dengan hasil dalam percobaan yaitu tunas aksilar yang  didapatkan  kecil  dan  kompak  dengan  pangkal  yang menggelembung.  Penambahan  auksin  mungkin  dapat meningkatkan  proliferasi  tunas  aksilar  dan  mencegah efek  penghambatan  pemanjangan  tunas  oleh  sitokinin (Kane, 2011). Rasio konsentrasi auksin dan sitokinin yang dibutuhkan  dalam  kultur  jaringan  tergantung  pada  jenis
D
A B
C Gambar  2.  Tipe-tipe  kalus  yang  ditemukan,  A,  B)  Kalus  yang
kompak ( hard callus ), C, D) Kalus yang remah ( soft friable callus ) (Garis skala = 5 mm)
Media Tinggi tunas (cm) Jumlah tunas (buah) Jumlah daun (helai) Jumlah buku (buah) Eksplan berakar (%) Eksplan berkalus (%) MS (kontrol) 1.02b 1.2d 3.2d 3.84b 3.75b 3.13c MS + NAA 0.5 mg L -1 1.46a 1.5cd 4.0cd 4.99a 40.46a 58.69ab MS + NAA 0.5 mg L -1 + BA 0.5 mg L -1 1.14ab 2.2bc 6.2bc 4.52a 0.00b 22.08bc MS + NAA 0.5 mg L -1 + BA 1.0 mg L -1 1.23ab 2.9ab 8.5ab 4.91a 2.50b 64.58a MS + NAA 0.5 mg L -1 + BA 1.5 mg L -1 1.32ab 3.3a 9.3a 5.00a 1.25b 65.00a MS+ NAA 0.5 mg L -1 + BA 2.0 mg L -1 1.06b 2.3bc 7.1ab 4.64a 0.00b 47.50ab Tabel 2. Pengaruh konsentrasi BA pada media MS dengan NAA 0.5 mg L -1 terhadap tinggi tunas, jumlah tunas, jumlah buku, jumlah daun, persentase eksplan berakar, dan persentase eksplan berkalus pada minggu ke-8
Gambar 3. Regresi non-linier konsentrasi BA pada jumlah tunas dan jumlah daun pada pengamatan minggu ke-8 0 2 4 6 8 10 12 14 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 Ju ml ah tu na s d an ju ml ah d au n [BA] (mg L -1 ) Jumlah tunas Jumlah daun Jumlah tunas = 1/(0.31+0.22*(BA-1.31) 2
Jumlah daun = 1/(0.11+0.08*(BA-1.35) 2
tanaman  yang  dikultur,  kondisi  kultur,  dan  bentuk  zat pengatur tumbuh yang digunakan (Gaspar et al ., 1996). Regresi non-linier persentase eksplan berakar terhadap konsentrasi  BA  tersaji  pada  Gambar  4.  Eksplan  yang membentuk  akar  tertinggi  (40.46%)  ditemui  pada  media MS dengan NAA 0.5 mg L -1 tanpa penambahan BA. Selain itu,  akar  juga  terbentuk  pada  eksplan  yang  dikulturkan pada media MS dengan NAA 0.5 mg L -1 dan BA 0.1 mg L -1 . Penambahan BA dengan konsentrasi yang lebih tinggi menyebabkan eksplan tidak membentuk akar. Hal ini terjadi karena  adanya  dominansi  sitokinin  yang  menyebabkan eksplan akan membentuk tunas. Berdasarkan uji t, persentase eksplan  berakar  dugaan  dari  regresi  tidak  berbeda  nyata dengan persentase eksplan berakar pada percobaan dengan nilai p 0.21 (α = 5%) (Tabel 3). Hal ini menunjukkan bahwa model  regresi  non-linier  tersebut  dapat  digunakan  untuk memprediksi  konsentrasi  BA  sehingga  terbentuknya  akar dalam perbanyakan tunas aksilar dapat dihindari.
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 Ek sp la n be ra ka r ( %) [BA] mg L -1 % eksplan berakar = 40.4585 * exp(-30.7401 * BA)
Gambar  4.  Regresi  non-linier  konsentrasi  BA  pada  persentase eksplan berakar pada pengamatan minggu ke-8
[BA] (mg L -1 ) Jumlah tunas dugaan Jumlah tunas dalam percobaan Jumlah daun dugaan Jumlah daun dalam Percobaan Eksplan berakar dugaan (%) Eksplan berakar dalam percobaan (%) 0.0 1.45 1.49 4.03 3.99 40.46 40.46 0.5 2.20 2.24 6.13 6.23 0.00 0.00 1.0 3.03 2.92 8.58 8.47 0.00 2.50 1.5 3.16 3.27 9.21 9.30 0.00 1.25 2.0 2.41 2.33 7.18 7.14 0.00 0.00 Nilai p pada uji t 0.98 0.98 0.21
Tabel 3. Perbandingan jumlah tunas, jumlah daun, dan persentase eksplan berakar dugaan dengan hasil dalam percobaan pada pengamatan minggu ke-8 dengan menggunakan uji t (α = 5%)

## KESIMPULAN
Pada  kultur in  vitro pepaya  ‘Sukma’  dari  eksplan seedling berumur 8 minggu setelah tanam, konsentrasi BA dengan kombinasi NAA 0.5 mg L -1 , memberikan pengaruh yang berbeda nyata terhadap variabel jumlah tunas aksilar, jumlah daun, jumlah buku, persentase eksplan berakar, dan persentase  eksplan  berkalus.  Media  kultur  terbaik  untuk menghasilkan jumlah tunas terbanyak adalah media MS yang diperkaya NAA 0.5 mg L -1 dan BA 1.0-1.5 mg L -1 . Analisis regresi  menunjukkan  bahwa  konsentrasi  optimum  BA untuk mendapatkan jumlah tunas dan jumlah daun tertinggi adalah 1.31 dan 1.35 mg L -1 sedangkan presentase eksplan berakar  tertinggi  didapatkan  pada  media  tanpa  tambahan BA.  Dengan  demikian,  perbanyakan  pepaya  ‘Sukma’ perlu dilakukan pada media terpisah untuk pertunasan dan pengakaran.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  penulis  ucapkan  kepada  Lembaga Pengelola  Dana  Pendidikan  Kementerian  Keuangan  RI yang telah membiayai percobaan ini dan penulis ucapkan
pula  kepada  Pusat  Kajian  Hortikultura  Tropika  IPB  yang telah memberikan izin kepada penulis untuk menggunakan bahan dan alat percobaan dalam laboratorium.

## DAFTAR PUSTAKA
Al-Shara, B., R.M. Taha, K. Rashid. 2018. Biotechnological methods  and  limitations  of  micropropagation  in papaya  ( Carica  papaya L.)  production  [Review]. The J. Anim. Plant Sci. 28:1208-1226.
Anandan,  R.,  Thirugnanakumar,  D.  Sudhakar,  P. Balasubramanian. 2011. In vitro organogenesis and plantlet regeneration of ( Carica papaya L.). J. Agric. Tech. 7:1339-1348.
Bindu, B. Podikunju. 2017. Tissue culture protocol for in- vitro propagation of papaya ( Carica papaya L.). J. Krishi Vigyan 6:205-212.
Bottcher, C., C.A. Burbidge, C. Davies. 2013. Interaction between ethylene and auxin are crucial to the control of  grape  ( Vitis  vinifera L.)  berry  repening.  BMC Plant. Biol. 13:1-14 .
Efendi, D., M.R. Putra. 2017. Optimation of in vitro lateral shoots multiplication of papaya ( Carica papaya L.) “Callina” with BAP and NAA. J. Trop. Crops. 4:102- 107.
Gaba,  V.P.  2005.  Plant  growth  regulators  in  plant  tissue culture and development. In R.N. Trigiano, D.J. Gray ( Eds .). Plant Development and Biotechnology. CRC Press, London, UK.
Gaspar,  T.,  C.  Keveers,  C.  Penel,  H.  Grepin,  D.M.  Reid, T.A. Thorpe. 1996. Plant hormones and plant growth regulation in plant tissue culture. In Vitro Cell Dev. Biol. Plant 32:272-289.
Kane, M. 2011. Propagation by Shoot Culture. Di dalam: Trigiano, R.N., D.J. Gray, editor. Plant Tissue Culture, Development and Biotechnology. CRC Press, Boca Raton, FL.
[Kementan] Kementerian Pertanian. 2009. Deskripsi Pepaya Sukma.  http://varitas.net/dbkultivar/deskripsi/3397. pdf [23 Desember 2017].
Mumo, N.N., F.K. Rimberia, G.E. Mamati, A.W. Kihurani. 2013. In vitro regeneration of selected Kenyan papaya
( Carica papaya L.) lines through shoot tip culture. Afr. J. Biotechnol. 12:6826-6832.
Murashige, T., F. Skoog. 1962. A revised medium for rapid growth  and  bio  assays  with  tobacco  tissue  culture. Physiol. Plant. 15:473-497.
Robles,  L.,  A.  Stepanova,  J.  Alonso.  2013.  Molecular mechanisms  of  ethylene-auxin  interaction.  Molec. Plant 6:1734-1737.
Roy, P.K., S.K. Roy, Md.L. Hakim. 2012. Propagation of papaya ( Carica papaya L.) cv. Shahi through in vitro culture. Bangladesh J. Bot. 41:191-195.
Setargi, A., F. Mekbib, E. Abraha. 2015. In vitro propagation of papaya ( Carica papaya L.). World J. Agric. Sci. 11:84-88.
Strader, L.C., G.L. Chen, B. Bartel. 2010. Ethylene directs auxin to control root cell expansion. Plant J. 64:874- 884.
Suketi, K., R. Poerwanto, S. Sujiprihati, W.D. Widodo. 2010.
Karakter  fisik  dan  kimia  buah  pepaya  pada  stadia kematangan berbeda. J. Agron. Indonesia 38:60-66.
Wang,  Q.C.,  B.  Panis,  F.  Engelman,  M.  Ambardi,  J.P.T. Valkonen. 2008. Cryotherapy of shoot tips: a technique for pathogen eradication to produce healthy planting materials and prepare healthy plant genetic resources for cryopreservation. Ann. Appl. Biol. 154:351-363.
Wu,  K.,  S.  Zeng,  Z.  Chen,  J.  Duan.  2012.  In  vitro  mass propagation  of  hermaphroditic Carica papaya cv. Meizhonghong. Pak. J. Bot. 44:1669-1676.