## EFEK HIPOGLIKEMIK POLISAKARIDA LARUT AIR GEMBILI ( Dioscorea esculenta ) YANG DIEKSTRAK DENGAN BERBAGAI METODE
[Hypoglycaemic Effect of Water Soluble Polysaccharides Extracted from Gembili ( Dioscorea esculenta ) by Various Methods]
Harijono 1) , Teti Estiasih 1) *, Wenny Bekti Sunarharum 1) , dan I Komang Suwita 2)
1) Program Studi Ilmu dan Teknologi Pangan, Fakultas Teknologi Pertanian, Universitas Brawijaya, Malang
2) Jurusan Gizi, Politeknik Kesehatan, Kementerian Kesehatan, Malang
Diterima 05 November 2010 / Disetujui 22 November  2011

## ABSTRACT
The hypoglycaemic effect of water soluble polysaccharide (WSP) extracted from gembili tuber was studied in this experiment. Extracts from three different methods, an aqueous (water-WSP), papain assisted (papain-WSP), and tempeh inoculum assisted (tempeh-WSP) extractions, were compared. The effects were evaluated by means in vivo test on hyperglycaemic-induced rats by performing the so called blood glucose response, followed  by  in  situ  glucose  absorption  test  and  short  chain  fatty  acids  (SCFA)  analysis.  A  nested  experimental  design  was  employed  in  the experiment. All the three extracts reduced the blood glucose level. The effect of tempeh-WSP extract was comparable to that of the papain-WSP extract, but was not signicantly different from the  water-WSP. However, the water-WSP extract tended to have a weaker effect than that of the other extracts. Similar result was found on the SCFA level. The highest SCFA level was found on the rats treated with tempeh-WSP extracts. It was likely that the hypoglycaemic effect of the tempeh-WSP extract was the best.
Key words : gembili (Dioscorea esculenta), hypoglycaemic, water soluble polysaccharides

## 1 PENDAHULUAN
Gembili  ( Dioscorea  esculenta )  merupakan  umbi  dari keluarga Dioscoreacea .  Kelompok Dioscoreaceae yang  ada  di Indonesia  meliputi Dioscorea  alata,  Dioscorea  hispida, Dioscorea  pentaphylla, dan Dioscorea  bulbilfera (Kasno et  al ., 2006).  Keluarga Dioscoreacea mempunyai  keunggulan  dapat tumbuh  di  bawah  tegakan  hutan  tetapi  sampai  saat  ini  masih merupakan tanaman subsiten, yaitu bukan tanaman pokok yang dibudidayakan,  karena  pemanfaatannya  masih  terbatas.  Hal yang  menarik  dari  kelompok dioscorea adalah  mengandung senyawa  bioaktif  atau  senyawa  fungsional,  selain  komponen yang  berperan  sebagai  bahan  pangan.  Hasil-hasil  penelitian yang telah ada dari keluarga Dioscoreaceae yang lain ( D. alata, D.  batatas,  D.  bulbilfera,  D.  opposita )  menunjukkan  bahwa keluarga Dioscoreaceae mengandung senyawa bioaktif berupa dioscorin (Hou et al ., 2001; Liu et al ., 2007; Chan et al., 2006), diosgenin (Chou et al. , 2006; Braun, 2008; Yang dan Lin, 2008), dan polisakarida larut air (PLA) (Liu dan Lin et al., 2009). Umbi Dioscoreaceae mengandung  lendir  yang  kental berupa  glikoprotein  (Fu et  al., 2006;  Ohizumi et  al., 2009). Lendir  dalam  tanaman  umbi-umbian  biasanya  berasosiasi dengan protein (Myoda et al., 2006). Umbi gembili mengandung bahan  aktif  yaitu  polisakarida  berupa  serat  pangan.  Menurut Schoeninger et al. (2000) terdapat 3 gram serat pangan dalam 100 gram berat kering Dioscorea esculenta. Sampai akhir tahun 1970  diyakini  bahwa  mencerna  serat  tertentu  dapat  mem- perbaiki  toleransi  glukosa  pada  orang  normal  dan  pada
*Korespondensi Penulis : Email : teties@yahoo.co.id
penderita  penyakit  diabetes.  Konsentrat  kaya  glukan  dari oat atau  produk barley, serta  PLA  dari psyllium menyebabkan perbaikan  respon  glikemik.  Menurut  Lunn  dan  Burttiss  (2007), asupan tinggi serat direkomendasikan bagi penderita diabetes. Sifat PLA yang kental dan membentuk gel dapat menghambat penyerapan  makronutrien  dan  menurunkan  respon  glukosa postprandial .  Fermentasi  PLA  di  kolon  menghasilkan  asam lemak  rantai  pendek  (SCFA, short  chain  fatty  acids )  seperti asetat,  propionat,  dan  butirat.  Sebelumnya  Juntunen et  al. (2003) menyatakan bahwa roti tinggi PLA dari rye meningkatkan sekresi insulin.
Dengan  adanya  kandungan  glikoprotein  atau  polisakarida- protein  pada Dioscoreacea yang  sulit  dipisahkan,  maka  dalam penelitian  ini  dilakukan  beberapa  metode  ekstraksi  untuk  me- misahkan ikatan kompleks tersebut agar diperoleh ekstrak PLA yang lebih murni sehingga dapat meningkatkan kemampuannya dalam  menurunkan  kadar  glukosa  darah.  Metode  ekstraksi untuk mendapatkan estrak kasar PLA non-pati dari umbi gembili meliputi  ekstraksi  dengan  menggunakan  air,  ekstraksi  meng- gunakan  papain  sebagai  enzim  protease  untuk  mendegradasi protein  yang  terikat  dengan  polisakarida,  dan  ekstraksi  secara fermentatif  dengan  ragi  tempe  yang  mempunyai  aktivitas amilolitik dan proteolitik.
Aktivitas  amilolitik  kapang  diharapkan  dapat  mendegradasi pati  sehingga  polisakarida  lebih  mudah  terpisah.  Untuk  me- ngetahui  potensi  ekstrak  kasar  PLA  gembili  yang  diekstrak dengan  berbagai  metode  tersebut,  maka  dilakukan  pengujian penurunan  gula  darah  pada  tikus  hiperglikemia,  pengujian respon  glukosa  darah,  pengujian  absorbsi  glukosa  secara in situ, dan analisis asam lemak rantai pendek (SCFA, Short Chain Fatty Acid) .

## METODOLOGI

## Bahan dan alat
Bahan yang digunakan adalah umbi  gembili berumur 8–10 bulan  sejak  penanaman  sampai  panen  yang  diperoleh  dari Kecamatan  Buring-Kota  Malang.  Bahan-bahan  kimia  yang digunakan dalam penelitian adalah etanol teknis 96%, akuades, NaOH, kertas saring, asam pikrat, asam asetat, NaOH, serbuk iod,  KI,  indikator  PP,  K 2 SO 4 ,  H 2 SO 4 ,  H 2 BO 3 ,  indikator  metil merah,  indikator  metil  biru,  dietil  eter,  amilosa  murni,  buffer fosfat,  aloksan  monohidrat,  glukosa, reagen glucose GOD-FS, glucose  anhidrat ,  reagensia  Nelson, reagen arsenomolibdat, Cu 2 O, standar asam asetat, propionat, dan butirat. Bahan untuk analisis  dengan  kromatografi  cair  kinerja  tinggi  (HPLC, high performance  liquid  chromatyography )  meliputi  CH 2 CN,  standar glukosa  dan  manosa  (Sigma  Co.).  Hewan  uji  yang  digunakan adalah  tikus  putih  jantan  galur  wistar,  umur  2-3  bulan  dengan berat badan berkisar 131-239 gram.
Alat-alat  yang  digunakan  adalah  peralatan  gelas,  neraca analitik (Mettler Toledo), vortex, sentrifuse merk Hettich EBA 8, spektrofotometer  UV-VIS  (UV-2100),  pH  meter  (Inolab),  oven, desikator, muffle  furnace ,  soxhlet,  perangkat  Kjeldahl, shaker waterbath ,  sonde,  hematokrit,  tabung vacutainer ,  kromatografi gas  (GC-14B,  Shimadzu),  integrator  (Chromatopac  C-RGA, Shimadzu),  dan  kromatografi  cair  kinerja  tinggi  menggunakan kolom Sugar Pak (Waters, Waters Co., MS).

## Ekstraksi PLA
Ekstraksi polisakarida larut air (PLA) dilakukan dengan tiga cara  berbeda,  yaitu  dengan  air;  air  ditambah  papain,  dan  air ditambah inokulum ragi tempe (Harijono et al. , 2009). Preparasi sampai  penghancuran  bahan  dilakukan  dengan  cara  yang sama. Umbi gembili segar dikupas dan diblansing dengan uap air panas, ditambah air dan dihancurkan dengan blender hingga menjadi  bubur.  Selanjutnya,  bubur  umbi  disaring  dengan  kain kasa  dan  filtratnya  diambil  untuk  percobaan.  Filtrat  ditambah papain  dan  dinkubasikan  untuk  perlakuan  ekstraksi  meng- gunakan papain, sedangkan ekstraksi menggunakan ragi tempe adalah  filtrat  diberi  ragi  tempe  dan  diinkubasikan.  Inkubasi dilakukan  pada  suhu  35°C  selama  12  jam.  Filtrat  tanpa perlakuan  adalah  perlakuan  ekstraksi  dengan  air.  Setelah  itu, dilakukan  pemisahan  pati  dan  penggumpalan  PLA.  Gumpalan PLA  basah  dipisahkan  dan  dikeringkan,  selanjutnya  digiling sehingga diperoleh ekstrak PLA bubuk kering.

## Karakterisasi umbi gembili segar
Umbi  gembili  segar  dianalisis  meliputi  kadar  air,  abu, protein, lemak, kadar karbohidrat by difference , kadar amilosa, dan kadar serat kasar (AOAC, 1990).

## Karakterisasi ekstrak PLA
Karakterisasi  ekstrak  PLA  yang  dilakukan  meliputi  jenis- jenis gula bebas (HPLC, modifikasi Charles et al. , 2008), kadar protein  metode  Kjeldahl,  serat  kasar,  amilosa  (AOAC,  1990), viskositas relatif, dan rendemen.
Pengujian efek hipoglikemik (Ruzaidi et al ., 2008) Bioassay secara in vivo dilakukan untuk mengetahui potensi ekstrak  PLA  gembili  sebagai  penurun  kadar  gula  darah  pada kondisi diabetes. Pengujian untuk ekstrak PLA gembili dilakukan sebagai  berikut:  sebanyak  24  ekor  tikus Wistar dimasukan  ke dalam  kandang  kolektif  dengan  suhu  ruang  20-25°C.  Tikus diberi  pakan  dan  minum  secara ad  libitum .  Semua  tikus  di- adaptasikan  selama  1  minggu  sebelum  diberi  perlakuan.  Per- cobaan dilakukan selama 4 minggu, berat badan tikus ditimbang setiap 3 hari sekali dan kadar gula darah tikus dianalisis setiap minggu. Tikus dibagi kedalam 4 kelompok, 3 kelompok sesuai perlakuan metode ekstraksi PLA dan 1 kelompok kontrol. Setiap kelompok terdiri dari 6 ekor tikus.
Masing-masing  grup  tikus  diberi  ransum  standar  AIN-93M (Reeves et  al., 1993).  Ransum  standar  AIN-93M  terdiri  dari 62,0692%  maizena,  14%  kasein,  10%  sukrosa,  4%  minyak kedelai, 5% carboxy methyl cellulose (CMC), 3,5% AIN mineral mix , 0,18% L-sistin, 1,0% AIN vitamin mix , 0,25% kolin bitartrat, dan  0,0008%  TBHQ.  Pemberian  PLA  gembili  dilakukan  setiap hari  selama  28  hari  secara force  feeding dengan  dosis  400 mg/kg  berat  badan.  Induksi  aloksan  digunakan  untuk  meng- induksi tikus menjadi hiperglikemia. Induksi aloksan dilakukan 3 hari sebelum tikus diberi perlakuan. Setelah dipuasakan 16 jam, tikus  diambil  darahnya  untuk  mengetahui  kadar  glukosa  awal, dan  kemudian  diinjeksi  aloksan  secara intraperitoneal dengan konsentrasi 80 mg/kg berat badan.
Tiga hari setelah injeksi aloksan, darah diambil melalui retro orbital  plexus dengan  menggunakan  hematokrit  untuk  me- mastikan  bahwa  tikus  pada  kondisi  hiperglikemik.  Sebelum diambil  darahnya,  tikus  dipuasakan  terlebih  dahulu  selama  16 jam.  Hanya  tikus  dengan  kadar  glukosa  darah  puasa  >126 mg/dl  yang  digunakan.  Penentuan  kadar  glukosa  serum dilakukan pada minggu penelitian ke 0, 1, 2, 3, dan 4. Sebanyak 5  mL  darah  diambil  dari retro  orbital  plexus ke  dalam  tabung vacutainer .  Sampel  kemudian  disentrifugasi  pada  4000  rpm selama  10  menit  pada  suhu  ruang.  Supernatan  diambil  dan diukur  kadar  serum  glukosa  dengan  menggunakan  metode glukosa oksidase (Zhao et al. , 2007).
Prosedur penelitian yang dilakukan telah mendapat sertifikat laik  etik  dari  Komisi  Etik  –  Program  Kedokteran  Hewan  – Universitas Brawijaya.
Pengujian respon glukosa darah (modifikasi Xie et al ., 2004) Masing-masing kelompok tikus yang terdiri dari 3 ekor tikus normal terlebih dahulu diadaptasikan terhadap pakan selama 3 hari,  dan  dipuasakan  selama  16  jam  kemudian  diberi  PLA sesuai  dengan  kelompok  perlakuan  dan  glukosa  secara  oral ( force  feeding ,  modifikasi  dari  Xie et  al .,  2004  yang  memberi polisakarida  secara intraperitoneal )  dengan  konsentrasi  PLA 400  mg/kg  berat  badan  (modifikasi  Xie et  al .,  2004,  yang memberi  polisakarida  dengan  kadar  50  dan  150  mg/kg  bb secara intraperitoneal ) dan glukosa 2 g/kg berat badan. Kadar glukosa  serum  ditentukan  dengan  mengambil  darah  melalui retro orbital plexus (modifikasi Xie et al ., 2004, yang mengambil darah  dari tail  vein )  pada  menit  ke  0,  30,  60,  90,  dan  120 setelah pemberian PLA dan glukosa secara oral.
Pengujian  absorpsi  glukosa  secara in  situ meng- gunakan kantung usus terbalik
Pada  hari  ke-33,  tikus  dianestesi  kemudian  usus  diambil dan  dibalik.  Uji  absorpsi  glukosa  dilakukan  dengan  meng- gunakan  larutan  PLA  10%  dan  glukosa  20%.  Usus  terbalik dimasukkan  ke  dalam  tabung  yang  sudah  berisi  larutan campuran  PLA  dan  glukosa.  Masukan  larutan  garam  fisiologis 0,9%  ke  bagian  dalam  usus.  Kemudian  dimasukan  ke  dalam water bath shaker pada suhu 36°C. Larutan dari bagian dalam usus  diambil  setiap  10  menit  mulai  dari  menit  ke-  10,  20,  30, dan  40  kemudian  kadar  glukosa  dianalisis  dengan  metode Nelson-Somogyi.
Analisis  kadar  asam  lemak  rantai  pendek  (SCFA, Short  Chain  Fatty  Acids )  (Modifikasi  Henningsson et al. , 2002) Pada  saat  pembedahan  untuk  pengambilan  usus, caecum tikus diambil dan digesta dikeluarkan. Digesta kemudian disen- trifugasi  14000  rpm  selama  15  menit  dan  supernatan  diambil. Kadar SCFA pada supernatan dianalisis dengan menggunakan kromatografi gas.

## Analisis data
Data  yang  diperoleh  dianalisis  dengan  menggunakan analisis  sidik  ragam  (ANOVA)  dengan  rancangan  percobaan Rancangan  Tersarang  ( Nested  Design) .  Jika  perlakuan  ber- pengaruh  nyata,  uji  dilanjutkan  dengan  uji  jarak  berganda Duncan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Karakteristik umbi gembili segar dan PLA gembili Karakteristik  umbi  gembili  segar  dan  PLA  gembili  yang diekstraksi dengan tiga metode dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Karakteristik umbi gembili segar dan ekstrak PLA gembili
Komponen Gembili Segar PLA Ekstraksi Air PLA Ekstraksi Papain PLA Ekstraksi Ragi Tempe Rendemen (% bb) t.a. 4,24 4,86 3,43 Amilosa (% bb) 1,07 16,00 17,20 2,34 Protein (% bb) 2,80 2,52 1,97 3,00 Serat Kasar (% bb) 2,16 0,42 0,40 0,35 Gula Bebas Glukosa (ppm) t.a. 110,68 612,58 833,07 Manosa (ppm) t.a. 178,14 296,83 541,88 Air (% bb) 79,37 t.a. t.a. t.a. Abu (% bb) 2,41 t.a. t.a. t.a. Lemak (%) 0,66 t.a. t.a. t.a. Karbohidrat ( by difference, % bb) 14,76 t.a. t.a. t.a. Viskositas (cps) t.a. 0,109 0,107 0,111
Keterangan : t.a. = tidak dianalisis
Tabel 1 menunjukkan rendemen ekstrak PLA yang tertinggi adalah  ekstraksi  dengan  menggunakan  papain,  dilanjutkan ekstraksi  air,  dan  ekstraksi  dengan  menggunakan  ragi  tempe. Rendahnya  rendemen  hasil  ekstraksi  PLA  menggunakan  ragi
tempe  disebabkan  oleh  aktivitas  kapang  pada  ragi  tempe diduga  mengubah  PLA  menjadi  komponen  lain  seperti oligosakarida.  Pada  ekstraksi  PLA  dengan  papain  didapat rendemen  yang  lebih  tinggi,  karena  pada  proses  ekstraksi menggunakan enzim papain hanya dapat menghidrolisis protein PLA sehingga kemungkinan PLA lebih mudah terekstrak. Kadar amilosa  terendah  terdapat  pada  ekstrak  PLA  yang  meng- gunakan ragi tempe. Kapang tempe mempunyai aktivitas relatif yang dapat menghidrolisis pati (Angulo-Bejarano et al. , 2008). Kadar  protein  ekstrak  PLA  dari  berbagai  metode  ekstraksi rata-rata  masih  tinggi,  yaitu  antara  1,97-3,00%.  Kadar  protein terendah terdapat pada ekstrak PLA yang menggunakan papain yang  disebabkan  protein  terhidrolisis  menjadi  peptida-peptida yang  sebagian  larut  air  dan  terpisah  dari  PLA.  Ekstraksi  PLA dengan  air  tidak  menyebabkan  protein  terhidrolisis  sehingga protein  tetap  terikat  dengan  PLA.  Tingginya  protein  yang  ter- dapat  pada  PLA  yang  diekstrak  dengan  ragi  tempe kemungkinan  disebabkan  oleh biomassa dari  ragi  tempe. Sumangat et  al .  (2003)  menyatakan  bahwa  setelah  proses fermentasi, terjadi pertumbuhan kapang pada substrat sehingga terbentuk biomassa yang  merupakan  sumber protein.  Ekstrak PLA  menggunakan  ragi  tempe  mengandung  serat  kasar  yang paling  rendah  (0,35%),  diikuti  ekstraksi  menggunakan  papain (0,4%),  dan  ekstraksi  air  (0,42%).  Ekstrak  PLA  menggunakan ragi tempe mempunyai serat kasar yang terendah kemungkinan karena serat terhidrolisis oleh enzim selulolitik dari ragi tempe. Menurut  Chiang et  al .  (2010)  fermentasi  menggunakan Rhizopus oligosporus pada bungkil rapeseed menurunkan serat kasar sebesar 25,5% .
Hasil  analisis  jenis  gula  bebas  menunjukkan  bahwa  PLA gembili mengandung glukosa dan manosa. Gula bebas tertinggi terdapat pada ekstrak yang diperoleh menggunakan ragi tempe. Pada  proses  fermentasi  diduga  dihasilkan  enzim  yang  dapat menghidrolisis  PLA  sehingga  terjadi  peningkatan  kadar  gula bebas.  Fu et  al. (2006)  melaporkan  bahwa  lendir Dioscorea jenis Keelung dan Hualien No. 3 mengandung manosa (93,90- 95,40%),  serta  glukosa,  galaktosa,  arabinosa,  dan  xilosa dengan  kadar  kurang  dari  5%.  Kadar  glukosa  dan  manosa bebas  dalam  ekstrak  PLA  bervariasi  bergantung  pada  metode ekstraksi. Pada ekstrak PLA yang diekstraksi dengan air, kadar manosa bebas lebih tinggi daripada glukosa bebas. Sebaliknya untuk  ekstrak  dari  ekstraksi  papain  dan  ragi  tempe.  Kadar glukosa  dan  manosa  bebas  tertinggi  terdapat  pada  ekstraksi dengan  menggunakan  ragi  tempe.  Diduga  pada  proses fermentasi, terjadi proses hidrolisis PLA sehingga kadar glukosa dan  manosa  bebas  meningkat.  Ada  dugaan  kemampuan hidrolisis  glukosa  lebih  tinggi  dari  manosa  sehingga  kadar glukosa  lebih  tinggi  dari  manosa.  Hal  ini  berbeda  dengan ekstraksi dengan air yaitu kadar mansa lebih tinggi dari glukosa.
Tabel  1  menunjukkan  perbedaan  viskositas  PLA  yang  di- ekstrak  dari  berbagai  metode  ekstraksi.  Viskositas  terendah adalah  PLA  yang  diekstrak  dengan  papain  dan  tertinggi  PLA yang  diekstrak  dengan  menggunakan  ragi  tempe.  Papain merupakan enzim proteolitik yang dapat menghidrolisis protein. Lendir  dari  kelompok Dioscoreaceae merupakan  glikoprotein yang  terdiri  dari  polisakarida  dan  protein.  Hidrolisis  protein menyebabkan  kemampuan  penyerapan  air  menurun  sehingga kemampuan meningkatkan viskositas juga menurun.
0 50 100 150 200 250 Minggu 0 Minggu I Minggu II Minggu III Minggu IV Ka da r G lu ko sa D ar ah (m g/ dL ) Waktu (Minggu) Pengambilan Darah Kontrol PLA Air
PLA Papain PLA Ragi Tempe

## Efek hipoglikemik PLA gembili
Perubahan  kadar  glukosa  darah  tikus  yang  diberi  ekstrak PLA dari berbagai metode ekstraksi dibandingkan dengan kadar glukosa  darah  tikus  yang  tidak  diberi  PLA  dapat  dilihat  pada Gambar 1.
Gambar  1.    Perubahan  kadar  glukosa  darah  pada  uji in  vivo akibat perlakuan  ekstrak  PLA  gembili  dari  berbagai  metode ekstraksi
Penurunan  kadar  gula  darah  yang  paling  tajam  terdapat pada  perlakuan  pemberian  ekstrak  PLA  yang  menggunakan ragi tempe, diikuti oleh ekstrak PLA menggunakan papain dan air.  Dari  Gambar  1  terlihat  bahwa  tikus  hiperglikemia  kembali normal (kisaran kadar gula darah 70 – 110 mg/dL) setelah diberi PLA gembili selama 3 minggu untuk ekstrak PLA menggunakan ragi tempe, 4 minggu untuk ekstrak PLA menggunakan papain, dan  untuk  ekstrak  PLA  menggunakan  ekstraksi  air  selama  4 minggu  pemberian  PLA  belum  mencapai  normal  walaupun terjadi penurunan.
Menurut Weickert dan Pfeiffer (2008), serat makanan dapat menurunkan  glukosa postprandial yang  berkaitan  dengan sifatnya yang membentuk gel dan larutan yang kental. Larutan yang kental yang terbentuk karena PLA membentuk viskositas yang tinggi yang menghambat penyerapan gula di pencernaan akibat gula terperangkap dalam  struktur gel yang lemah. Hasil penelitian  Torsdottir et  al .  (1991)  menunjukkan  bahwa  pem- berian  alginat  pada  penderita  diabetes  menyebabkan  pe- nurunan  kecepatan  pengosongan  lambung  dibandingkan asupan  bebas  serat.  Ekstrak  PLA  menggunakan  papain  lebih mampu menurunkan kadar gula darah dibandingkan ekstrak air. Diduga  kemurnian  PLA  berpengaruh  terhadap  kemampuan penurunan kadar gula darah.
Hal  yang  menarik  adalah  ekstrak  PLA  menggunakan  ragi tempe  mempunyai  kemampuan  penurunan  kadar  gula  darah yang  paling  tinggi  dibandingkan  ekstrak  lain.  Hasil  penelitian Shin et  al .  (2006)  menunjukkan  bahwa  fermentasi  tepung Chineseyam ( Dioscoreabatatas Decne)  dengan Lactobacillus acidophilus,  Streptococcus  thermophilus ,  dan Bifidobacterium bifidus menyebabkan  perbaikan  kadar  glukosa postprandial . Kiho et  al. (2001)  menunjukkan  bahwa  hidrolisis  polisakarida larut  air  dari Tremellaaurentia dengan  menggunakan  asam menyebabkan  penurunan  kadar  glukosa  plasma  yang  diduga disebabkan pembentukan senyawa bioaktif.
Bergantung pada substrat, senyawa bioaktif dapat terbentuk selama fermentasi dengan kapang tempe seperti pembentukan isoflavon  aglikon  yang  mempunyai  bioaktivitas  yang  lebih  baik dari isoflavon dalam bentuk glikosida (Mortensen et al ., 2009). Senyawa bioaktif dalam Dioscorea adalah dioscorin (Hou et al ., 2001; Liu et al ., 2007; Chan et al., 2006), diosgenin (Chou et al , 2006; Braun, 2008; Yang dan Lin, 2008), dan polisakarida larut air (PLA) (Liu dan Lin, 2009) . Dioscorin merupakan protein yang mempunyai  aktivitas  antihipertensi.  Hidrolisis dioscorin me- nyebabkan peningkatan aktivitasnya dalam menurunkan tekan- an darah (Hsu et al. , 2002). Diduga pada ekstraksi PLA gembili dengan  menggunakan  kapang  tempe  menghasilkan  senyawa bioaktif  yang  ikut  berperan  dalam  aktivitas  penurunan  kadar glukosa darah. Diosgenin termasuk ke dalam golongan steroidal saponin yang dapat mengalami transformasi menjadi sapogenin ( Niño et  al .,  2007).  Sapogenin  dalam  keluarga Dioscoreaceae disebut diosgenin . Adanya saponin pada fenugreek ( Trigonella foenum )  berperan  terhadap  kemampuan  penurunan  kadar glukosa darah (Al-Habori dan Raman, 1998).
Hasil  penelitian  Lee et  al .  (2007)  menunjukkan  bahwa proses  fermentasi Dioscorea dengan  menggunakan  kapang merah Monascus  purpureus NTU  568  menghasilkan  efek hipokolesterolemik  yang  lebih  tinggi  dibandingkan  tanpa fermentasi  yang  diduga  disebabkan  pembentukan  senyawa bioaktif monacolin K.  Diduga  kuat  pada  proses  ekstraksi  PLA gembili  dengan  menggunakan  kapang  tempe  mengakibatkan pembentukan senyawa bioaktif yang ikut berperan menurunkan kadar glukosa darah.
Penurunan  kadar  glukosa  darah  pada  tikus  yang  diberi ekstrak  yang  menggunakan  papain  lebih  tinggi  dibandingkan ekstrak  air.  Ekstrak  yang  menggunakan  papain  mempunyai kadar protein yang lebih rendah karena kemungkinan sebagian protein yang terikat PLA terhidrolisis. PLA yang lebih murni ini yang menyebabkan efek hipoglikemik yang lebih tinggi.

## Respon glukosa darah
Pengujian respon glukosa darah menunjukkan bahwa peng- hambatan  penyerapan  glukosa  paling  tinggi  terdapat  pada ekstrak  yang  menggunakan  papain  diikuti  oleh  ekstrak  meng- gunakan ragi tempe dan ekstrak dari ekstraksi air (Gambar 2). Tikus yang tidak diberi  ekstrak  PLA menunjukkan peningkatan kadar  glukosa  darah  yang  paling  tinggi.  Pengujian  respon glukosa  darah  menunjukkan  kemampuan  penyerapan  glukosa sesaat setelah glukosa masuk ke dalam pencernaan. Gambar 2 menunjukkan bahwa tanpa adanya PLA dari gembili, penyerap- an glukosa yang diberikan secara oral meningkat dengan tajam. Adanya  PLA  gembili  menyebabkan  perlambatan  peningkatan kadar  glukosa  darah.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  salah  satu mekanisme  penurunan  kadar  gula  darah  adalah  PLA  gembili menghambat penyerapan glukosa oleh pencernaan.
PLA  yang  diekstrak  dengan  bantuan  enzim  papain  me- nunjukkan  penghambatan  yang  paling  tinggi.  Hal  ini  berkaitan dengan  kemurnian  PLA  yang  lebih  tinggi  akibat  protein  yang terikat  PLA  terhidrolisis  oleh  papain.  Peningkatan  kemurnian PLA menyebabkan PLA lebih mampu menghambat penyerapan glukosa. Penghambatan penyerapan lebih baik pada PLA yang diekstrak  dengan  bantuan  ragi  tempe  dibandingkan  ekstraksi air.
a 60 70 80 90 100 110 0 30 60 90 120 Ka da r G lu ko sa D ar ah (m g/ dL ) Menit Pengambilan Darah Tanpa PLA PLA Air PLA Papain PLA Ragi Tempe 2 3 4 5 6 7 10 15 20 25 30 35 40 Ka da r G ula P er ed uk si (m g/ 10 0 m L) Menit Ke
Tanpa PLA PLA AIr PLA Papain PLA Ragi Tempe
Gambar 2.   Peningkatan kadar glukosa darah pada pengujian toleransi terhadap  glukosa  (a)  dan  penyerapan  glukosa  secara in situ dengan kantung usus terbalik (b)
Berdasarkan hasil analisis statistik 5 (Tabel 2), jenis ekstrak PLA  yang  diekstrak  dengan  air,  papain,  dan  ragi  tempe  ber- pengaruh  terhadap  penyerapan  glukosa  ke  dalam  darah, sedangkan  pengujian  dengan  kantung  usus  terbalik  tidak  ber- pengaruh  nyata.  Hal  ini  kemungkinan  viskositas  dari  masing- masing  ekstrak  di  dalam  pencernaan  relatif  berbeda  sehingga perbedaan  penghambatan  penyerapannya  yang  signifikan  jika diuji  dengan  respon  glukosa  darah.  Pengujian  secara in  situ menggunakan  usus  terbalik  kemungkinan  menyebabkan viskositas  antar  jenis  PLA  tidak  berbeda  sehingga  tidak  me- nyebabkan perbedaan penyerapan in situ yang signifikan. Pola penghambatan penyerapan glukosa dengan pengujian respon  glukosa  darah  mempunyai  pola  hampir  sama  dengan penghambatan  penyerapan  glukosa  secara in  situ. Kedua pengujian  ini  menunjukkan  bahwa  kemampuan  penghambatan penyerapan terhadap glukosa dipengaruhi oleh kemurnian PLA. Bila  dihubungkan  dengan  viskositas  pada  Tabel  1,  terlihat
bahwa  viskositas  semua  ekstrak  hampir  sama.  Viskositas tersebut kemungkinan tidak mencerminkan viskositas sebenar- nya dalam pencernaan karena pengukuran dilakukan pada suhu ruang  dan  pH  netral  sehingga  dampaknya  terhadap  respon glukosa darah yang berbeda nyata secara statistik.
Kedua  pengukuran  tersebut  menunjukkan  penghambatan penyerapan  glukosa  oleh  PLA  dalam  pencernaan.  Pengujian respon glukosa darah menunjukkan penghambatan penyerapan glukosa  dalam  sistem  pencernaan  sesaat  setelah  glukosa masuk  ke  dalam  pencernaan.  Hal  ini  tidak  menunjukkan  efek jangka  panjang  asupan  PLA  seperti  pengaruh  pembentukan asam lemak rantai pendek di kolon.
Serat larut merupakan senyawa yang dapat membentuk gel ketika  tersedia  air  dalam  perut  dan  usus  halus.  Gel  yang  ter- bentuk memperlambat pengosongan perut, mempercepat waktu transit  di  usus  halus,  dan  mengendalikan  penyerapan  nutrisi. Hal ini berdampak pada penyerapan glukosa dalam darah dan nilai indeks glikemik bahan pangan (Lunn dan Buttriss, 2007).
Hasil penelitian Madar et al . (1988) menunjukkan bahwa diit yang diberi serat pangan dari biji kapas pada subyek penderita diabetes  menunjukkan  peningkatan  kadar  glukosa  yang  lebih rendah  pada  menit  ke  30,  60,  dan  180  setelah  konsumsi dibandingkan diit tanpa serat. Serat pangan dari biji kapas juga memperpendek  waktu  transit  dan  meningkatkan  berat  feses. Serat  pangan  secara  teoritis  menurunkan  difusi  nutrien  untuk diabsorpsi oleh mukosa usus sehingga menyebabkan penurun- an  kadar  glukosa.  Hal  ini  yang  menyebabkan  ekstrak  PLA gembili mampu menghambat penyerapan glukosa.
Lebih  lanjut  Madar et  al. (1988)  menyatakan  bahwa  efek metabolik serat makanan dibagi menjadi dua kategori yaitu akut dan  kronis.  Perubahan  akut  dapat  terlihat  setelah  serat  di- konsumsi.  Penghambatan  peningkatan  kadar  glukosa  darah berkaitan  dengan  penundaan  absorpsi  nutrisi  atau  penurunan waktu transit. Pada kategori akut, serat makanan memperbaiki toleransi terhadap glukosa dan menurunkan kecepatan absorpsi pada  jejunal.  Bentuk  fisik  serat  juga  berpengaruh  terhadap kemampuan dalam menghambat penyerapan glukosa. Menurut Madar et  al. (1988),  serat  kedelai  dalam  bentuk  bubuk  tidak mampu  menghambat  penyerapan  glukosa,  akan  tetapi  jika diformulasikan  dalam  roti,  serat  tersebut  dapat  menghambat peningkatan kadar gula darah. Ada dugaan bahwa ekstrak PLA menggunakan  ragi  tempe  telah  terhidrolisis  sehingga  secara fisik  berbeda  dengan  ekstrak  PLA  menggunakan  papain  yang lebih utuh, sehingga penghambatan penyerapan ekstrak papain lebih  baik.  Dilihat  dari  kemurnian,  keduanya  lebih  murni  dari ekstrak air karena protein dapat terhidrolisis selama proses baik oleh papain maupun aktivitas ragi tempe.
Tabel 2. Pengaruh metode ekstraksi terhadap respon glukosa darah dan kantung usus terbalik
Keterangan: Huruf yang berbeda dibelakang angka pada kolom yang sama menunjukkan perbedaan nyata (p<0,05)
Metode Ekstraksi
Respon Glukosa Darah (mg/dL), menit ke Kantung Usus Terbalik (mg/100 mL), menit ke 0 30 60 90 120 Rerata 10 20 30 40 Rerata Kontrol, tanpa PLA 72,60 a 73,90 b 84,63 c 93,01 d 102,37 d 85,30 d 2,28 a 3,85 a 4,46 a 6,68 a 4,32 b Air 70,87 a 72,92a b 81,49 b 84,41 c 88,03 c 79,54 c 2,32 a 3,28 a 3,74 a 4,97 a 3,58 a Papain 70,44 a 71,41 a 72,40 a 72,69 a 73,79 a 72,15 a 2,22 a 2,48 a 2,55 a 2,67 a 2,48 a Ragi Tempe 71,30 a 72,38a b 74,14 a 78,39 b 82,42 b 75,73 b 2,44 a 2,55 a 2,60 a 2,68 a
2,57 a
b

## Asam lemak rantai pendek pada Caecum
Tidak semua karbohidrat dalam diit dapat diabsorpsi dalam usus  halus,  dan  sejumlah  tertentu  masuk  ke  dalam  kolon  dan difermentasi oleh bakteri yang ada di kolon (Lunn dan Buttriss, 2007).  Serat  makanan  dapat  mempengaruhi  metabolisme  dan produksi  asam  lemak  rantai  pendek  di  kolon  (Marsman  dan McBurney, 1996). Berbagai penelitian telah mengkaji hubungan antara serat dengan kadar glukosa dan insulin (de Leeuw et al., 2004).  Gambar  3  menunjukkan  pengaruh  pemberian  ekstrak PLA  dari  berbagai  metode  ekstraksi  terhadap  produksi  asam lemak rantai pendek pada caecum tikus.
Secara  umum,  kadar  asam  lemak  rantai  pendek caecum pada  kelompok  tikus  kontrol  yang  tidak  diberi  ekstrak  PLA gembili  lebih  rendah  dibandingkan  kelompok  tikus  yang  diberi perlakuan  ekstrak  PLA  gembili.  Produksi  asam  lemak  rantai pendek tertinggi terdapat pada kelompok tikus yang diberi per- lakuan  ekstraksi  PLA  menggunakan  papain,  diikuti  ekstraksi PLA  menggunakan  ragi  tempe,  dan  ekstraksi  air.  Kemurnian PLA  diduga  berhubungan  dengan  kemampuannya  untuk  di- fermentasi  oleh  mikroflora  dalam  kolon.  Ekstraksi  PLA  meng- gunakan  papain  kemungkinan  menghasilkan  PLA  yang  lebih murni  karena  protein  yang  terikat  PLA  dapat  terhidrolisis  oleh papain.
Oligosakarida  yang  tidak  dapat  dicerna  berperan  bagi kesehatan  pencernaan  melalui  fermentasi  dan  proliferasi spesies  bakteri  yang  menguntungkan  kesehatan.  Jenis  oligo- sakarida berpengaruh terhadap jenis asam lemak rantai pendek yang  dihasilkan  (Campbell et  al .,  1997).  Kemampuan  serat makanan  untuk  difermentasi  dan  menghasilkan  asam  lemak rantai  pendek  bergantung  pada  jenis  serat.  Profil  atau  jenis- jenis  asam  lemak  rantai  pendek  juga  bervariasi  bergantung pada jenis serat. Efek fisiologis serat tersebut bergantung pada beberapa  faktor  termasuk  fermentasi  di  kolon  dan  produk fermentasi  yang  dihasilkan.  Produk  akhir  fermentasi  adalah asam  lemak  rantai  pendek  dan  gas  (CO 2 ,  CH 4 ,  dan  H 2 ) (Henningsson et al., 2002).
Tingginya  asam  lemak  rantai  pendek  yang  dihasilkan  oleh PLA  gembili  yang  diekstrak  dengan  bantuan  papain  hampir sebanding dengan PLA gembili yang diekstrak dengan bantuan ragi tempe. Kedua PLA tersebut lebih murni dibandingkan PLA yang  diekstrak  dengan  air.  Jenis  gula  dalam  struktur  PLA diduga adalah manosa dan glukosa karena analisis gula bebas dari ekstrak PLA menunjukkan bahwa jenis gula yang terdeteksi adalah  glukosa  dan  manosa  (Tabel  1).  Glukomanan  dari  PLA gembili kemungkinan bersifat dapat difermentasi yang ditunjuk- kan  oleh  peningkatan  produksi  asam  lemak  rantai  pendek  jika dibandingkan dengan kontrol.
Dari  Gambar  3  terlihat  bahwa  jenis  asam  lemak  rantai pendek yang dominan dihasilkan dari proses fermentasi di kolon adalah  asam  asetat,  diikuti  asam  butirat,  dan  asam  propionat. Menurut  Lunn  dan  Buttriss  (2007)  ketiga  jenis  asam  lemak rantai  pendek  tersebut  merupakan  jenis  asam  lemak  rantai pendek  dominan  yang  dihasilkan  dalam  pencernaan.  Konsen- trasi asam lemak rantai pendek beragam bergantung pada jenis polisakarida yang difermentasi,  walaupun secara umum asetat merupakan  jenis  asam  lemak  rantai  pendek  terbanyak,  dan butirat paling sedikit.
Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa PLA gembili meng- hasilkan butirat yang lebih tinggi dibandingkan propionat. Hal ini menguntungkan  karena  menurut  Henningsson et  al. (2002), butirat  memacu  apoptosis  sel  kanker  kolon.  Peningkatan produksi  asam  lemak  rantai  pendek  menguntungkan  karena menurunkan produksi glukosa oleh  hati (Weickert dan Pfeiffer, 2008). Peningkatan kadar SCFA dalam vena porta menyebab- kan  aktivasi  AMPK  (AMP activated  protein  kinase )  dalam  hati. AMPK  berfungsi  sebagai  pengatur  produksi  energi  dalam  sel dan regulasi homeostatis metabolik (Hu et al. , 2010).
Lebih  lanjut  Weickert  dan  Pfeiffer  (2008)  menjelaskan bahwa tidak hanya kemampuan polisakarida untuk difermentasi saja  yang  berperan  menurunkan  kadar  gula  darah.  Konsumsi serat makanan berkontribusi terhadap sejumlah efek  metabolik termasuk  sensitivitas  insulin,  modulasi  sekresi  hormon  dalam pencernaan, dan berbagai proses metabolisme yang berkaitan dengan sindrom metabolik.
Gambar  3  menunjukkan  bahwa  komposisi  SCFA caecum baik  pada  tikus  kontrol  maupun  tikus  yang  diberi  perlakuan hampir  sama  yaitu  didominasi  asam  asetat,  dan  kadar  asam butrirat  lebih  tinggi  dari  asam  propionat.  Perbedaan  metode ekstraksi  tampaknya  tidak  berpengaruh  terhadap  komposisi SCFA caecum .
Gambar  3.    Jenis  dan  kadar  asam  lemak  rantai  pendek caecum dari berbagai ekstrak PLA gembili

## KESIMPULAN
Ekstrak  PLA  gembili  merupakan  polisakarida  yang  dapat menurunkan  kadar  glukosa  darah  pada  kondisi  hiperglikemia. Metode  ekstraksi  yang  berbeda  mengakibatkan  kemampuan penurunan kadar glukosa darah yang juga berbeda. Mekanisme penurunan  kadar  glukosa  darah  oleh  PLA  gembli  berkaitan dengan  penghambatan  penyerapan  glukosa  dan  fermentasi PLA  menghasilkan  asam  lemak  rantai  pendek.  Ekstrak  PLA menggunakan ragi tempe mempunyai potensi penurunan kadar glukosa  darah  yang  lebih  tinggi  dibandingkan  ekstrak  PLA menggunakan  papain  atau  air.  Ada  dugaan  terdapat  efek sinergis ragi tempe dalam menurunkan kadar glukosa darah.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Ucapan  terimakasih  disampaikan  kepada  Direktorat Penelitian  dan  Pengabdian  kepada  Masyarakat  –  Direktorat
0 5 10 15 20 25 Kontrol PLA Air PLA Papain PLA Ragi
Tempe
Ko ns en tra si (m M ) S C FA
Perlakuan Dengan Metode Ekstraksi PLA Asam Asetat Asam Butirat Asam Propionat
Jenderal Pendidikan Tinggi – Kementerian Pendidikan Nasional atas dana Hibah Penelitian Kompetitif sesuai Prioritas Nasional Batch I  Tahun  2009  dan  Sdr  Yuliyanto  atas  bantuan  teknis selama pengujian dan analisis in vivo dan in situ .

## DAFTAR PUSTAKA
Al-Habori,  Raman  A.  1998.  Antidiabetic  and  hypocholes- terolaemic effects of fenugreek. Phytother Res 12: 233–242.
Angulo-Bejarano PI, Verdugo-Montoya NM, Cuevas-Rodrı´guez EO, Mila´n-Carrillo J, Mora-Escobedo R, Lopez-Valenzuela JA,  Garzo´n-Tiznado  JA,  Reyes-Moreno  C.  2008.  Tempeh flour  from  chickpea  ( Cicer  arietinum L.)  nutritional  and physicochemical properties. Food Chem 106: 106–112.
AOAC [Association of official Analytical Chemist]. 1990. Official Methods  of  Analysis.  Association  of  Official  Analytical Chemists. AOAC, Washington DC, USA.
Braun  L.  2008.  Wild  yam Dioscorea sp.  Complementary Medicine 7: 40-42.
Campbell  JM,  Fahey  Jr  GC,  Wolf  BR.  1997.  Selected  in digestible  oligosaccharides  affect  large  bowel  mass,  cecal and fecal short-chain fatty acids, pH and microflora in rats. J Nutr 127: 130–136.
Chan YC, Hsu CK, Wang MF, Liao JW, Su TY. 2006. Beneficial effect of yam on the amyloid β -protein, monoamine oxidase B and cognitive deficit in mice with accelerated senescence. J Sci Food Agric 86: 1517–1525.
Chiang  G,  Lu  WQ,  Piao  XS,  Hu  JK,  Gong  LM,  Tracker  PA. 2010.  Beneficial  effects  of Rhizopus  oligosporus fermentation on reduction of glucosinolates, fibre and phytic acid  in  rapeseed  ( Brassica  napus )  Meal.  Asian-Aust  J  of Anim Sci 23: 263-271.
Chou  ST,  Chiang  BH,  Chung  YC,  Chen  PC,  Hsu  CK.  2006. Effects of storage temperatures on the antioxidative activity and composition of yam. Food Chem 98: 618–623.
de  Leeuw  JA,  Jongbloed  AW,  Verstegen  MWA.  2004.  Dietary fiber stabilizes blood glucose and insulin levels and reduces physical  activity  in  sows  ( Sus  scrofa ).  J  Nutr  134:  1481– 1486.
Fu  Y,  Ferng  LA,  Huang  P.  2006.  Quantitative  analysis  of allantoin and allantoic acid in yam tuber, mucilage, skin and bulbil of the Dioscorea species. Food Chem 94: 541–549.
Harijono,  Estiasih  T,  Sunarharum  WB.  2009.  Ekstraksi polisakarida  bioaktif  dari  gadung  dan  gembili  dan  potensi- nya  untuk  terapi  diabetes  dan  penurun  kadar  kolesterol darah. Laporan Hibah Kompetitif Penelitian sesuai Prioritas Nasional  Batch  I  dibiayai  oleh  DIKTI.  LPPM  Universitas Brawijaya, Malang.
Henningsson  AM,  Bjorck  IME,  Nyman  EMGL.  2002. Combinations  of  indigestible  carbohydrates  affect  short- chain fatty acid formation in the hindgut of rats. J Nutr 132: 3098–3104.
Hou  WC,  Lee  MH,  Chen  HJ,  Liang  WL,  Han  CH,  Liu  YW,  Lin YH.  2001.  Antioxidant  activities  of  dioscorin,  the  storage
protein  of  yam  ( Dioscorea  batatas Decne)  tuber.  J  Agric Food Chem 49: 4956-4960.
Hsu  FH,  Lin  YH,  Lee  MH,  Lin  CL,  Hou  WC.  2002.  Both dioscorin,  the  tuber  storage  protein  of  yam  ( Dioscorea alata cv.  Tainong  No.  1),  and  its  peptic  hydrolysates exhibited angiotensin converting enzyme inhibitory activities. J Agric Food Chem 50: 6109-6113.
Hu GX, Chen GR, Xu H, Ge RS, Lin J. 2010. Activation of the AMP  activated  protein  kinase  by  short-chain  fatty  acids  is the  main  mechanism  underlying  the  beneficial  effect  of  a high fiber diet on the metabolic syndrome. Med Hypotheses 74: 123-126.
Juntunen  KS,  Laaksonen  DE,  Poutanen  KS,  Niskanen  LK, Mykkanen  HM.  2003.  High-fiber  rye  bread  and  insulin secretion and sensitivity inhealthy postmenopausal women. Am J Clin Nutr 77: 385–91.
Kasno  A,  Saleh  N,  Ginting  E.  2006.  Pengembangan  pangan berbasis  kacang-kacangan  dan  umbi-umbian  guna  pe- mantapan  ketahanan  pangan  nasional.  Buletin  Palawija 12:43-51 .
Kiho T, Kochi M, Usui S, Hirano K, Aizawa K, Inakum T. 2001.
Antidiabetic  effect  of  an  acidic  polysaccharide  (TAP)  from Tremella aurantia and its degradation product (TAP-H). Biol Pharm Bull 24: 1400-1403.
Lee CL, Hung HK, Wang JJ, Pan TM. 2007. Improving the ratio of monacolin K to citrinin production of Monascus purpureus NTU 568 under Dioscorea medium through the mediation of pH  value  and  ethanol  addition . J  Agric  Food  Chem  16: 6493-6502.
Liu  YW,  Shang  HF,  Wang  CK,  Hsu  FL,  Hou  WC.  2007. Immunomodulatory activity of dioscorin, the storage protein of yam ( Dioscorea alata cv. Tainong no.1) tuber. Food and Chem Toxico 45: 2312-2318.
Liu  YM,  Lin  KW.  2009.  Antioxidative  ability,  dioscorin  stability, and  the  quality  of  yam  chips  from  various  yam  species  as affected by processing method. J Food Sci 74: C118-C125.
Lunn  J,  Buttriss  JL.  2007.  Carbohydrates  and  dietary  fibre. Nutrition Bulletin 32: 21–64.
Madar  M,  Nir  M,  Trostler  N,  Norenberg  C.  1988.  Effects  of cottonseed dietary fiber on metabolic parameters in diabetic rats  and  non-insulin-dependent  diabetic  humans.  J  Nutr 118: 1143 -1148.
Marsman  K,  McBurney  M.  1996.  Dietary  fiber  and  short-chain fatty  acids  affect  cellproliferation  and  protein  synthesis  in isolated rat colonocytes. J Nutr 126: 1429-1437.
Mortensen  A,  Kulling  SE,  Schwartz  H,  Rowland  I,  Ruefer  CE,
Rimbach G, Cassidy A, Magee P, Millar J, Hall WL, Birkved FB,  Sorensen  IK,  Sontag  G.  2009.  Analytical  and compositional  aspects  of  isoflavones  in  food  and  their biological effects. Mol Nutr Food Res 53: S266-S309 .
Myoda  T,  Matsuda  Y,  Suzuki  T,  Nakagawa  T,  Nagai  T, Nagashima  T.  2006.  Identification  of  soluble  proteins  and interaction with mannan in mucilage of Dioscorea opposita Thunb.  (Chinese  yam  tuber).  Food  Sci  Technol  Res  12: 299-302.
Niño  J,  Jiménez  DA,  Mosquera  OM,  Correa  YM.  2007.
Diosgenin  quantification  by  HPLC  in  a Dioscorea polygonoides t uber collection from Colombian flora. J  Braz Chem Soc 18: 1073-1076.
Ohizumi Y, Gaidamashvili M, Ohwada S, Matsuda K, Kominami J,  Sachiko  N,  Hirabayashi  J,  Naganuma  T,  Ogawa  T, Muramoto  K.  2009.  Mannose-binding  lectin  from  yam ( dioscorea  batatas )  tubers  with  insecticidal  properties against Helicoverpa  armigera ( Lepidoptera:  Noctuidae ).  J Agric Food Chem 57: 2896–2902.
Reeves  PG,  Nilson  FH,  Fahey  GC.  1993.  Purified  diet  for laboratory  rodents:  final  report  of  the  American  Institute  of Nutrition  ad  hoc  writing  committee  on  the  reformulation  of AIN-76 a rodent diet. J Nutr 123: 1939-1951.
Ruzaidi A, Maleyki A, Amin I, Nawalyah AG, Muhajir H, Pauliena MBSMJ, Muskinah MS. 2008. Hypoglycaemic properties of Malaysian  cocoa  ( Theobroma  Cacao )  polyphenols-rich extract. IFRJ 15 : 305-312 .
Schoeninger  MJ,  Bunn  HT,  Murray  SS,  Marlett  JA.  2000. Composition of tubers used by hadza foragers of Tanzania. J of Food Compos and Anal 14: 15-25 .
Shin KO, Jeon JR, Lee JS, Kim JY, Lee CH, Kim SD, Yu YS, Nam  DH.  2006.  Lactic  acid  fermentation  of  Chinese  yam ( Dioscorea  batatas Decne)  flour  and  its  pharmacological
effect  on  gastrointestinal  function  in  rat  model. Biotechnol and Bioprocess Eng 11: 240-244.
Sumangat D, Sembiring BS, Winarti C. 2003. Biokonversi buah semu  jambu  mente  menjadi  konsentrat  protein  mikrobial. Buletin TRO 14: 1-8.
Torsdottir  I,  Alpsten  M,  Holm  G,  Sandberg  A,  Tolli  K.  1991.  A small  dose  of  soluble  alginate-fiber  affects  postprandial glycemia  and  gastric  emptying  in  humans  with  diabetes.  J Nutr 121: 795-799.
Weickert  MO,  Pfeiffer  AFH.  2008.  Metabolic  effects  of  dietary fiber  consumptionand  prevention  of  diabetes.  J  Nutr  138: 439–442.
Xie JT, Wu JA, Mehendale S, Aung HH, Yuan CS. 2004. Anti- hyperglycemic  effect  of  the  polysaccharides  fraction  from American  ginseng  berry  extract  in  ob/ob  mice. Phytomedicine 11: 182-187.
Yang DJ, Lin JT. 2008. Effects of different storage conditions on steroidal  saponins  in  yam  ( Dioscorea  pseudojaponica Yamamoto) tubers. Food Chem 110: 670–677.
Zhao Y, Son YO, Kim SS, Jang YS, Lee JC. 2007. Antioxidant and  anti  hyperglycemic  activity  of  polysaccharide  isolated from Dendrobium  chrysotoxum Lindl.  J  of  Biochem  and Molecular Biol 40: 670-677.