## Skrining dan Identifikasi Kapang Selulolitik Alkalin pada Jerami Padi  Asal Sawah  Pantai Watu Ulo Jember
Screening and Identification Alkaly-Cellulolytic Molds from Rice Straw on Coastal-field of Watu Ulo Jember
Esti Utarti *) , Su’udah Hasanah dan Siswanto Jurusan Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Jember
*) Email: adiest.95@gmail.com

## ABSTRACT
About  28  molds  were  obtained  from  rice  straw  on  coastal-field  of  Watu  Ulo  Jember,  were screened  for  their  cellulolytic  activities  at  pH  alkaline.  In  semiquantitatively  screening  on  CMC and  Avicel  plate  at  pH  8  showed  that  27  isolates  have  cellulolytic  activities.  Based  on  clearing zone in CMC plate, isolates 7, 9, 14, 19 and 24 have higher cellulase (CMC-ase) activities index at pH  alkaline.  Further,  in  quantitatively  examination  using  rice  straw  in  Basic  Salt  Mandel’s modification  medium  showed  isolate  19  (0,60  U/ml)  that  identified  as Aspergillus  terreus have higher  FP-ase  activity  than  isolate  7    (0,56  U/ml),  9    (0,55  U/ml),  14  (0,53  U/ml)  and  24  (0,56 U/ml).
Keywords: Screening, alkaly-cellulolytic molds, rice straw, coastal-field, A. terreus.

## PENDAHULUAN
Selulosa merupakan polimer linier glukosa yang membentuk  struktur  dasar  dinding  sel  dan bagian-bagian  berkayu  dari  tanaman.  Struktur polisakarida  selulosa  bersama-sama  dengan hemiselulosa  mencapai  50%  dari  biomassa tanaman      Banyaknya  selulosa  dalam  biosfer menyebabkan  enzim  selulase,  enzim  yang mampu  mendegradasi  polimer  linier  glukosa dari  selulosa,  sangat  penting  dalam  proses biokonversi  selulosa  menjadi  produk  yang bermanfaat (Gupta et al. 2012).
Selulase  dapat  dihasilkan  oleh  kapang, bakteri  dan  aktinomicetes.  Kapang  dianggap sebagai  dekomposer  selulosa  yang  lebih  aktif dan merupakan mikrob penghasil selulase utama (Gautam et  al., 2010). Trichoderma  viride misalnya,  dapat  mengubah  selulosa  alami menjadi  glukosa    (Li et  al., 2010)  karena mempunyai  kompleks  selulase  yang  lengkap, sedangkan Bacillus tidak  mampu  menghasilkan komplek selulosa yang lengkap (Sreenath et al., 1996). Selanjutnya, meskipun produksi selulase oleh  bakteri  memerlukan  waktu  yang  lebih singkat,  dibandingkan  dengan Trichoderma , aktivitas  enzimnya  lebih  kecil  (Gilbert  dan Hazlewood, 1993).
Selulase  berperan  penting  dalam  proses pembuatan  pulp,  kertas,  serta  serat  daur  ulang. Salah  satu  cara  untuk  mendapatkan  enzim  ini adalah  dengan  memanfaatkan  kapang  sebagai produsen  selulase  utama.  Pada  umumnya selulase  kapang  aktif  pada  kondisi  asam, padahal selulase yang mempunyai aktivitas pada pH  alkalin  sangat  penting  dalam  industri- industri  tersebut  (Maki et  al., 2009).  Pada proses pulping, pemasakan menggunakan bahan kimia  seperti  NaOH  dan  NaS,  menghasilkan serat  yang  masih  berwarna  cokelat  dan mengandung  sisa  cairan  pemasak  aktif (Gullichsen dan Fogelholm, 2000). Oleh karena itu,  proses  pulping  menyebabkan  pH  serat menjadi  alkali.  Selain  itu,  dalam  industri tersebut    seringkali  menggunakan  kalsium karbonat, yang menyebabkan pH menjadi alkali (Bajpai, 2012).
Salah satu cara yang dapat digunakan untuk mengatasi hal tersebut adalah dengan memanfaatkan  kapang  selulolitik  yang  dapat menghasilkan  selulase  yang  aktif  pada  pH alkali.  Isolasi  dan  identifikasi  kapang  dari sumber-sumber  selulosa  di  daerah  alkalin merupakan  suatu  cara  untuk  memilih  kapang penghasil selulase alkalin yang berpotensi tinggi dalam mendegradasi selulosa (Bajpai, 2012).
18 Skrining dan Identifikasi Kapang … ( Utarti, dkk)
Jerami  padi  merupakan  produk  samping tanaman padi yang mengandung selulosa hingga 43,8%. Hal ini dapat memberikan asumsi bahwa jerami  merupakan  habitat  yang  baik  untuk mikrob  selulolitik.  Tanah  pantai  dapat mempunyai  pH  hingga  lebih  dari  8,5 (Kuswandi,  2002).  Oleh  karena  itu  dari  jerami padi  sawah  pantai  diduga  terdapat  kapang sebagai  dekomposer  selulosa  utama  yang bersifat alkalin.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mendapatkan kapang  penghasil  selulase  alkalin  ekstraseluler, dengan  sampel  jerami  padi  sawah  pantai  dan mengidentifikasi  kapang  dengan  aktivitas selulolitik  terbaik  pada  pH  alkali.  Dari penelitian  ini  diharapkan  akan  diperoleh  satu spesies kapang terpilih yang
dapat menghasilkan  enzim  selulase  ekstraseluler dengan  aktivitas  terbaik  pada  pH  alkali.
Kemampuan  selulolitik  dan  identifikasi  kapang tersebut  dapat  digunakan  sebagai  langkah  awal untuk produksi enzim selulase yang mempunyai aktivitas tinggi pada pH alkali.

## METODE

## Pengambilan sampel
Sampel jerami beserta tanah diambil dari sawah pasca  tanam  padi  di  pantai  Watu  Ulo  Jember Jawa Timur. Sampel diambil secara acak dari 5 petak sawah yang berbeda.

## Pengukuran pH dan Salinitas
Pengukuran  pH  dan  salinitas  bertujuan  untuk mengetahui  kondisi  habitat  alami  kapang  yang akan digunakan dalam proses penapisan kapang selulolitik.
Pengukuran  pH  tanah  berdasarkan  metode Kuswandi  (2002)  dengan  menggunakan  pH meter  3320  JENWAY.  Sedangkan  pengukuran salinitas tanah berdasarkan cara Notohadiprawiro (1985) menggunakan refraktometer. Isolasi kapang Media yang digunakan untuk isolasi kapang ini adalah  PDA  yang  sebelumnya  ditambahkan streptomisin
0,01% untuk mencegah pertumbuhan  bakteri.  Pengenceran  terhadap sampel  jerami  beserta  tanah  sawah  dilakukan
10 -1 - 10 -3 .  Dari setiap pengenceran diambil 300 µl  dan  diinokulasi  secara spread  plate pada media  PDA  dalam  cawan  petri  yang  berbeda serta  diinkubasi  pada  suhu  kamar    selama  96 jam.

## Seleksi  Kapang  Selulolitik  Alkalin  Secara Semikuantitatif
Seleksi  kapang  selulolitik  secara  semi kuantitatif  dilakukan  pada  media  CMC ( Carboxymethyl  Cellulose)  plate dan  avisel (Sigmacell-20) plate dalam  basal  mineral  PM pada  pH  8  yang  dibuat  dengan  dua  lapis  ( two layer ).  Pada  setiap plate (cawan  petri) diinokulasi 3 isolat kapang dan diinkubasi pada suhu 30°C selama 72 jam.
Penentuan  indeks  aktivitas  selulase  secara semi kuantitatif dilakukan dengan metode congo red . Congo  red akan  berikatan  dengan polisakarida  yang  mengandung  ikatan β -(1-4)- D-Glukopriranosil  (Theather  dan  Wood,  1981). Selulosa  yang  sudah  terhidrolisis  akan  terlihat jernih  pada  pewarnaan congo  red (terbentuk zona bening) sedangkan yang belum terhidrolisis  berwarna  ungu.  Indeks  aktivitas selulase  dihitung  berdasarkan  perbandingan diameter zona bening dan diameter koloni.

## Seleksi  Kapang  Selulolitik  Alkalin  Secara
Kuantitatif
Persiapan inokulum . Sebanyak 5 isolat kapang terbaik  hasil  skrining  secara  semi  kuantitatif ditumbuhkan  secara  merata  ke  permukaan media PDA dan diinkubasi selama 96 jam pada suhu 30°C.
Produksi  selulase .  Sebanyak  2,5  ml  inokulum ditumbuhkan  pada  22,5  ml  media  jerami  2% dalam  basal  mineral  modifikasi  Mandel (Mandel et  al., 1976)  dan  diinkubasi  pada inkubator bergoyang 90 U/min pada suhu 30°C selama 96 jam. Terhadap jerami yang digunakan sebagai  substrat  produksi  selulase  terlebih dahulu  dilakukan pre-treatment ,  menggunakan NaOH 0,5% yang berfungsi untuk mendegradasi  ikatan  lignoselulosa  sehingga lignin  terpisah  dari  selulosa  (Fengel  dan Wegener, 1995).
Pemanenan  kultur  dan  uji  aktivitas  selulase (FP-ase). Pemanenan  kultur  dilakukan  dengan sentrifugasi  10.000  rpm  pada  suhu  4°C  selama 10  menit.  Substrat  yang  digunakan  untuk  uji aktivitas  FP-ase  adalah  kertas  saring  tipe Whatman  no.1  (Mandels et  al, 1976), selanjutnya  produksi  gula  (gula  reduksi) dideteksi  dengan  metode  DNS  berdasarkan Miller (1956).
Pengukuran  aktivitas  FP-ase  dilakukan dengan  menginkubasikan    enzim  dalam  tabung
reaksi  yang  berisi  buffer  fosfat  pH  8  dan    satu strip  kertas  saring  pada  suhu  50°C  selama  60 menit.  Pembacaan  absorbansinya  dilakukan dengan  spektrofotometer  SPECTRONIC  21 pada panjang gelombang 550 nm.
Penentuan  Standar  Glukosa. Pembuatan larutan  standar  glukosa  menggunakan  larutan glukosa  1%.  Kadar  standar  glukosa  disiapkan 0,25 – 1,5 mg. Standar dan blanko diperlakukan sama  dengan  sampel,  kemudian  dibuat  kurva standar antara OD dan mg glukosa.
Penentuan  aktivitas  FP-ase  dilakukan dengan nilai:
Satu  unit  =  pelepasan  1  µmol  glukosa  dalam  1 menit.
FPU/ml  =  0,185  x  (mg  glukosa  sampel  –  mg glukosa kontrol) 2 x ml enzim yang dipipet

## Identifikasi kapang selulolitik.
Satu  isolat  kapang  dengan  aktivitas  FP-ase terbaik  diidentifikasi  baik  secara  makroskopis maupun mikroskopis untuk ditentukan spesiesnya.  Identifikasi  makroskopis  meliputi diameter  koloni,  warna  pigmentasi,  warna koloni,  ada  tidaknya  eksudat  dan  warnanya, garis  radial,  ada  tidaknya  zonasi,  ada  tidaknya bau  yang  khas.  Pengamatan  mikroskopis meliputi  bentuk  dan  ukuran  seluruh  organ. Identifikasi  dilakukan  berdasarkan  Samson  dan Hoekstra (1995) dalam bukunya Introduction to Food-Borne  Fungi serta  Klich  dan  Pitt  (1988) dalam A  Laboratory  Guide  To  Common Aspergillus  Species  And  Their  Telemorphs. Medium  yang  digunakan  untuk  identifikasi kapang  adalah  CYA  ( Czapek  Yeast  Extract Agar ),  Sukrosa, MEA ( Malt Extract Agar ), dan Czapek konsentrat.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Seleksi  Kapang  Selulolitik  secara  Semi Kuantitatif.
Sejumlah 28  kapang telah berhasil diisolasi dari 5 lokasi tanah sawah pasca tanam padi di pantai Watu Ulo Jember. Selanjutnya dari hasil seleksi
aktivitas  selulolitiknya  secara  semi  kuantitatif pada  CMC  dan  Sigmacell-20  dengan  pH  8, terdapat  27  isolat  yang  mempunyai  aktivitas selulolitik  (CMC-ase  dan  aviselase)  (Tabel  1). CMC merupakan substrat yang digunakan untuk menguji  aktivitas  CMC-ase  yang  merombak selulosa  amorf,  (Ponambalam et  al., 2011). Sedangkan  Sigmacell-20  merupakan  substrat untuk  menguji  aktivitas  aviselase  yang merombak  selulosa  kristal  (Fikrinda et  al ., 2001).
Seleksi  kapang  selulolitik  secara  semi kuantitatif  dapat  ditentukan  dengan  mengamati besarnya  indeks  aktivitas  selulase  kapang tersebut pada media yang mengandung selulosa. Indeks aktivitas selulase ditentukan berdasarkan perbandingan  diameter  zona  bening  terhadap diameter koloni. Pengamatan terhadap terbentuknya  zona  bening  dilakukan  dengan metode congo  red .  Beguin  (1983)  menyatakan bahwa congo  red berikatan  kuat  dengan polisakarida  yang  mengandung  ikatan β (1  -    4) D-glukopiranosil.
Pengamatan  zona  bening  terhadap  CMC lebih  mudah  dilakukan  dibandingkan  dengan Sigmacell-20.  Pembentukan  zona  bening  yang menunjukkan aktivitas
aviselase pada Sigmacell-20 tidak tampak jelas. Hal ini diduga karena  CMC  merupakan  selulosa  amorf  yang mudah  untuk  dihidrolisis,  sedangkan  substrat Sigmacell-20  diduga  tidak  terhidrolisis  dengan sempurna.  (Enari  dalam  Fikrinda et  al .,  2001) menyatakan  bahwa  Sigmacell-20  merupakan salah satu bentuk dari selulosa kristal yang sulit dihidrolisis.  Kim et  al .,  1995  mengindikasikan bahwa  bagian  amorf  dari  selulosa  terhidrolisis sekitar  dua  kali  lebih  cepat  dari  pada  bagian kristalin.
Kemampuan kapang yang bersifat selulolitik tersebut  diduga  dipengaruhi  oleh  kondisi lingkungan pertumbuhannya. Lingkungan tumbuh  berupa  tanah  sawah  pasca  tanam  padi yang  banyak  mengandung  limbah  jerami menstimulasi  kapang  untuk  memproduksi selulase.  Jerami  padi  mengandung  selulosa 43,8%  (Mohan et  al., 1998)  sehingga merupakan  habitat  yang  baik  untuk  kapang selulolitik.
20 Skrining dan Identifikasi Kapang … ( Utarti, dkk)
Tabel 1. Hasil Pengukuran Indeks Aktivitas CMC-ase 28 Isolat
No Kode Isolat CMC-ase Aviselase Diameter koloni (cm) Diameter Zona Bening (cm) Indeks 1 1 2.00 3.36 1.69 + 2 2 1.26 1.26 1.00 + 3 3 - - - - 4 4 1.93 1.93 1.00 + 5 5 1.35 1.66 1.22 + 6 6 1.87 2.05 1.10 + 7 7 0.42 2.75 6.74 + 8 8 6.13 6.19 1.02 + 9 9 0.19 1.69 9.20 + 10 10 6.53 6.53 1.00 + 11 11 1.39 2.66 1.91 - 12 12 0.47 0.71 1.53 + 13 13 1.27 2.38 1.88 - 14 14 0.43 1.88 4.45 + 15 15 1.63 2.11 1.30 + 16 16 1.68 2.17 1.30 + 17 17 1.37 1.77 1.30 + 18 18 1.60 1.70 1.06 + 19 19 1.21 3.03 2.51 + 20 20 0.91 1.61 1.77 + 21 21 2.19 3.29 1.50 + 22 22 1.60 2.48 1.55 + 23 23 3.01 3.20 1.07 + 24 24 0.39 1.99 5.14 + 25 25 1.53 1.72 1.12 + 26 26 3.20 3.48 1.09 + 27 27 1.92 3.32 1.72 + 28 28 2.73 2.86 1.05 +
Ket: (+) = Kapang tumbuh ; (-)  = Kapang tidak tumbuh
Hasil pengujian di atas menunjukkan bahwa ke-27  isolat  bersifat  selulolitik  yang  aktif  pada pH alkali karena dapat tumbuh dan mempunyai aktivitas  selulolitik  pada  media  alkali  (pH  8). Pemilihan pH 8 ini berdasarkan pengukuran pH sampel (jerami dan tanah sawah) di pantai Watu Ulo yang digunakan sebagai sumber isolat. Dari pengukuran  ini  diketahui  bahwa  pH  sampel berkisar  7.23  –  8.08.  Tanah  alkali  merupakan tanah  yang  mempunyai  pH  di  atas  7  (Waterer, 2002) sehingga tanah sawah di pantai Watu Ulo merupakan  tanah  alkali  karena  mempunyai  pH lebih dari 7.
Meskipun  sampel  diambil  di  sawah  pantai, ternyata  salinitasnya  tidak  terlalu  tinggi,  yaitu kurang  dari  1 0 / 00  . Oleh  karena  itu  dalam penelitian  ini  tidak  ada  perlakuan  penambahan
garam  sebab  kadar  garam  di  habitat  alami kapang relatif rendah.
Berdasarkan  hasil  pengukuran  indeks aktivitas  CMC-ase  tersebut  juga  didapatkan  5 isolat  kapang  yang  mempunyai  aktivitas selulolitik  lebih  baik          daripada  isolat  yang lain. Isolat-isolat tersebut adalah isolat 7, 9, 14, 19,  dan  24  dengan  indeks  CMC-ase  masing- masing sebesar 6,74; 9,20; 4,45; 2,51 dan 5,14.

## Seleksi Kapang Selulolitik secara Kuantitatif.
Seleksi  kapang  selulolitik  secara  kuantitatif dengan  menguji  aktivitas          FP-ase  dilakukan terhadap  5  isolat  yang  mempunyai  indeks aktivitas  CMC-ase  terbaik  yaitu  isolat  7,  9,  14, 19,  dan  24.  Sreenath et  al .,  (1996)  menyatakan
bahwa  selulase  yang  paling  efektif  adalah selulase  yang  dapat  menunjukkan  aktivitasnya terhadap kertas saring  (FP-ase) pada pH netral atau alkali.
Hasil  uji  aktivitas  FP-ase  (Gambar  1) menunjukkan bahwa isolat 19 mempunyai nilai aktivitas  FP-ase  lebih  baik  (0,60  U/ml) dibandingkan  4  isolat  lainnya  yaitu  isolat  24 (0,56 U/ml), isolat 7 (0,56 U/ml), isolat 9 (0,55 U/ml), dan isolat 14 (0,53 U/ml). Aktivitas FP- ase  dari  isolat  19  tersebut  relatif  tinggi meskipun tidak jauh berbeda dengan isolat yang lain.  Hal  ini  diduga  karena  isolat  19  mampu mendegradasi  selulosa  kristalin  lebih  tinggi dibandingkan  isolat  lainnya. Aktivitas  FP-ase
ini  relatif  lebih  kecil  jika  dibandingkan  dengan aktivitas  FP-ase  kapang  lain  yang  diinkubasi pada  pH  lebih  rendah.  Miyamoto  (1997) menyebutkan  bahwa  aktivitas  FP-ase  dari mutan-mutan T.  reesei yang  diinkubasi  pada Batch  Culture pH  4  berkisar  2,61  –  22,4  U/ml. Dalam Sreenath et al., (1996) disebutkan bahwa 2 isolat yang telah berhasil diisolasi dari Gurun Sonoron  menunjukkan  aktivitas  FP-ase  sebesar 0,39 – 0,70 U/ml (inkubasi pH 7) dan     0,38 – 0,95  U/ml  (inkubasi  pH  8,5).  Pada  umumnya selulase  kapang  aktif  kondisi  asam,  namun selulase yang aktif  pada pH alkali (terutama pH 8,5)  sangat  berguna  dalam  industri  pulp,  serat dan kertas daur ulang.
Gambar 1. Aktivitas FP-ase 5 isolat kapang terpilih

## Identifikasi Kapang Selulolitik Terbaik
Identifikasi  kapang  isolat  19  dilakukan  secara makroskopis maupun mikroskopis. menunjukkan  bahwa  genus  kapang  isolat  19 adalah Aspergillus .  Kapang  isolat  19  tersebut kemudian diinokulasikan ke media CYA, MEA dan CY20S dan diinkubasi selama 7 hari pada suhu  30°C.  Selain  diinkubasi  pada  suhu  30°C, kapang  isolat  19  yang  diinokulasi  pada medium CYA juga diinkubasi pada suhu 37°C.
Berdasarkan metode Identifikasi genus
Aspergillus (Samson dan Hoekstra, 1995), hasil pengamatan  makroskopis  dan  mikroskopis (Gambar 2, Gambar 3, Gambar 4 dan Tabel 4 ) menunjukkan  bahwa  spesies  isolat  19  diduga adalah A. terreus . Gambar 2. Slide culture isolat 19 0.48 0.5 0.52 0.54 0.56 0.58 0.6 0.62 7 9 14 19 24 Isolat Ak tiv ita s F P- as e (U/ m l) 0.56 0.53 0.55 0.56 0.60 .600
22 Skrining dan Identifikasi Kapang … ( Utarti, dkk) Gambar  3.  Pigmentasi  isolat  19  umur  7  Hari pada media CYA, MEA dan CY20S Gambar 4. Warna koloni isolat 19 umur 7 hari pada media CYA, MEA dan CY20S Tabel  2. Karakteristik makroskopis dan mikroskopis  isolat 19 No Media Makroskopis Mikroskopis Diameter (cm) Warna Konidia Soluble pigmen Reverse Miselium Karakter Bentuk Panjang ( µ m) Lebar ( µ m) Warna 1 CYA 3,37 Cokelat muda Kuning- keputihan Kuning Putih Stipe - 112,5 - 175 5 – 7,5 Tidak berwarna Vesikel Sperikal 15 - 17,5 - - Metulae - 10 -12,5 2,5 - Phialide - 5 -7,5 2,5 - Konidia Bulat - 2,5 Cokelat 2 CYA 37°C 2,05 Cokelat muda Kuning- keputihan Kuning Putih Stipe - 200 - 250 5 – 7,5 - Vesikel Sperikal 15 - - Metulae - 10 - 12,5 2,5 - Phialide - 5 - 7,5 2,5 - Konidia Bulat - 2,5 Cokelat 3 MEA 3 Cokelat pucat Kuning muda Kecokelatan Putih Stipe - 125 - 175 5 – 7,5 - Vesikel Sperikal 10 - 12,5 - - Metulae - 10 2,5 - Phialide - 5 - 7,5 2,5 - Konidia Bulat - 2,5 Cokelat 4 CY20S 5,52 Cokelat Kuning    tua Kuning pekat, hitam ditengah Putih Stipe - 145 - 250 5 – 7,5 - Vesikel Sperikal 7,5 - 15 - - Metulae - 10 - 12,5 2,5 - Phialide - 5 - 7,5 2,5 - Konidia Bulat - 2,5 Cokelat
Ket. Aspergilla: Kolumnar dan Biseriate; Mikotoksin: Patulin, Citrioviridin dan Gliotoksin

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  seleksi  secara  semi kuantitatif  terhadap  28  isolat  kapang  yang berhasil  diisolasi  dari  jerami  pasca  tanam  padi sawah  pantai  Watu  Ulo  Jember,  terdapat  27 isolat  kapang  yang  bersifat  selulolitik  alkalin, dimana  5  isolat  kapang  mempunyai  indeks
aktivitas  CMC  terbaik,  yaitu  isolat  7  (6.74),  9 (9.20),  14  (4.45),  19  (2.51)  dan  24  (5.14). Selanjutnya seleksi secara kuantitatif (aktivitas FP-ase) terhadap 5 isolat tersebut menunjukkan bahwa  kapang  isolat  19  mempunyai  aktivitas FP-ase  lebih  baik  (0,60  U/ml)  dibandingkan  4 isolat lainnya yaitu isolat 24 (0,56 U/ml), isolat 7  (0,56  U/ml),  isolat  9  (0,55  U/ml),  dan  isolat
14  (0,53  U/ml).  Identifikasi  terhadap  isolat  19 menunjukkan  bahwa  spesies  kapang  tersebut diduga adalah A. Terreus.

## DAFTAR PUSTAKA
Bajpai,  P.  2010.  Biotechnology  for  Pulp  and  Paper Processing. Springer  Science  and  Business Media. DOI 10.1007/978-1-4614-1409-4_2
Beguin,  P.  1983.  Detection  of  cellulase  activity  in polyacrylamide  gels  using  congo  red-stained agar replicas. Analytical Biochemestry. 131: 333 - 336. Bennett,  JW  dan  MA.  Klich.  1992. Aspergillus: Biology  and  Industrial  Aplication .  Butterworth- Heinemann. Stoneham
Bilgrami,  S  dan  R.N.  Verma.  1994. Physiology  of Fungi . Vikas Publishing House. New Delhi. Fengel,  D  dan  G.  Wegener.  1995. Kayu  :  Kimia,
Ultrastruktur, reaksi-reaksi . Terjemahan Sastrohamidjojo. Gadjah Mada University Press. Yogyakarta.
Fikrinda,  I.  Anas,  T.  Purwadaria,  dan  DA.  Santosa. 2001.  Identifikasi  Ekstremozim  Selulase  Isolat Bakteri  dari  Ekosistem  Air  Hitam. Hayati. 8: 5 - 10.
Gautam,  SP.,  PS.  Bundela,  AK.  Pandey,  MK. Awasthi  &  S.  Sarsaiya.  2010.  Screening  of Cellulolytic  Fungi  For  Management  of Municipal  Solid  Waste. Journal  of  Applied Sciences  in  Environmental  Sanitation, (5):4, 391-395.
Gilbert,  HJ.  dan  GP.  Hazlewood.  1993.  Bacterial Cellulases  and  Xylanases. Journal  of  Microbiol. 139 : 187-194.
Gullichsen,  J  dan  CJ  Fogelholm  2000.  Chemical pulping-papermaking  science  and  technology. Helsinky: Fapet Oy Inc.
Gupta,  P.,  K.  Samant  &  A.  Sahu.2012.  Isolation  of Cellulose-Degrading Bacteria and Determination of  Their  Cellulolytic  Potential. Hindawi  Int.  J. Microbiol.
Hertamarwati,  R.T.  1998. Peningkatan  Kualitas Jerami Padi Teramoniasi sebagai Pakan Ternak dengan  Penambahan  Starbio .  Lemlit  UNEJ. Jember.
Ilhan,  S.,  R.  Denrel  ,  A.  Asan  ,  C.  Baycu,  &  E. Kinaci.  2006.  Colonial  and  Morphological Characteristics  of  Some  Microfungal  Species Isolated  from  Agricultural  Soils  in  Eskiflehir Province (Turkey). Turk J Bot. (30): 95-104 Kim,  D.W.,  K.J.  Young,  H.J.  Jae,  K.L.  Ki,  &  S.K Hai.  1995.  Kinetic   Mechanism   of  Cellulose
Hydrolysis by Endoglucanase I and
Exoglucanase  II  purified  from Trichoderma viridae . Bull.  Korean.  Chem.  Soc .  Available  at: www.Scirus.com. Accessed Mar. 14, 2003. Klich, MA. dan JI. Pitt. 1988. A Laboratory Guide to Common  Aspergillus  Species  And  Their Telemorphs. Commonwealth  Scientific  and Industrial  Research  Organization.  North  Ryde, New South Wales. Kuswandi.  2002. Pengapuran  Tanah  Pertanian . Kanisius. Yogyakarta. Maki M., KT. Leung, W. Qin. 2009. The Prospects Of  Cellulase-Producing  Bacteria  For  The Bioconversion Of Lignocellulosic Biomass. Int J Biol Sci. Vol: 5;5 Hal. :500-16.
Mandel,  M.    R.  Adreotti.  dan  C.  Roche.  1976. Measurement  of  Saccharifying  Cellulase. Biotechnol Bioeng. Symp . 6:21-33. Michael,  AM.  1997. Irrigation:  Theory  and Practice . Vikas Publishing House. New Delhi Miller,  GL.  1959.  Use  of  dinitrosalicylic  acid reagent  for  determination  of  reducing  sugar. Anal. Chem . 31 : 426-428.
Miyamoto,  K  (Ed).  1997.  Cellulose  production.
Available at: www.fao.org/docrep/w7241e/w7241e08.htm-
25k. [Accessed Apr. 6, 2003].
Mohan  PR.,  B.  Ramesh  &  O.V.S.  Reddy,  2012. Biological  Pretreatment  of  Rice  Straw  by Phenarocheate chrysosporium for the Production of  Cellulases  and  Xylanases  using Asperigillus niger Isolate. Research Journal of Microbiology (7): 1-12. Notohadiprawiro, T. 1985. Selidik Cepat Ciri Tanah di  Lapangan .  Cetakan  I.  Ghalia  Indonesia. Jakarta. Samson, RA dan ES. Hoekstra. 1995. Introduction to Food-Borne Fungi . Ponsen and Looyen.
Wageningen, Netherlands.
Sreenath,  H.K.,  V.W.  Yang,  H.H.  Burdsall  Jr.  dan T.W.  Jeffries.  1996.  Toner  removal  by  alkaline- active  cellulases  from  desert  Basidiomycetes, p.267-279.  dalam  Thomas  W.  Jeffries  dan  Liisa Viikari  (ed.). Enzymes  for  pulp  and  paper processing . American Chemical Society. Denver. Theather,  RM.  Dan    PJ.  Wood.  1981.  Use  Congo Red-polysaccharide Interactions in Enumeration and  Characterization  of  Cellulolytic  Bacteria from  the  Bovine  Rumen. Appl.  Environ. Microbiol . (43):777-780. Worthington  Biochemical  Corporation.  1998. Cellulase ..  Available  at:  www.wothington- biochem.com. Accessed Apr. 5, 2003.