## PENENTUAN SUHU DAN pH HIDROLISIS KITOSAN DARI CANGKANG KEONG
SAWAH ( Pila ampullacea ) TERHADAP BERAT MOLEKUL HIDROLISATNYA
[Determination of Chitosan Hydrolysis Temperature and pH from Rice Field Snail Shell ( Pila ampullacea ) to the Molecular Weight of the Hydrolyzate]
Nurhaeni 1 , Angriani Sambali 1* , Pasjan Satrimafitrah 1 , Jusman 1
1) Jurusan Kimia, Fakultas MIPA, Universitas Tadulako, Palu Jl. Soekarno Hatta Km.9, Kampus Bumi Tadulako Tondo Palu, Telp. 0451- 422611
*)Coresponding author: angrianisambali09@gmail.com(082292129005)
Diterima 13 Desember 2018, Disetujui 27 Februari  2019

## ABSTRACT
Research has been carried out on determining the temperature and pH of hydrolysis of chitosan from rice field snail shell ( Pila ampullacea ) to the molecular weight of the hydrolyzate using the α-amylase enzyme.  This  study  aims  to  determine  the  best  hydrolysis  temperature  and  pH  that  can  produce chitosan hydrolyzates  with low molecular  weight. Temperature variations used to hydrolyze chitosan from  rice  field  snail  shell  include  30  ºC,  40  ºC,  50  ºC,  60  ºC  and  70  ºC. Whereas  the  hydrolysis  pH applied  to  hydrolyze  chitosan  were  4.5;  5.0;  5.5;  6.0  and  6.5.  Measurement  of  chitosan  hydrolyzate molecular weight was carried out by applying the Mark-Houwink method and the observed parameter was  the  molecular  weight  of  chitosan  hydrolyzate.  The  results  showed  that  the  chitosan  hydrolysis temperature was 50 ºC and were able to reduce molecular weight to 14.488 g/mol. Whereas the most effective hydrolysis pH was pH 5.5 which decreased the molecular weight to 12.850 g / mol.
Keywords: Chitosan hydrolysate, rice field snail shell, α-amylase enzyme.

## ABSTRAK
Telah  dilakukan  penelitian  tentang  penentuan  suhu  dan  pH  hidrolisis  kitosan  dari  cangkang  keong sawah  ( Pila  ampullacea )  terhadap  berat  molekul  hidrolisatnya  dengan  menggunakan  enzim  α- amilase.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menentukan  suhu  dan  pH  hidrolisis  terbaik  yang  dapat menghasilkan  hidrolisat  kitosan  dengan  berat  molekul  yang  rendah.  Variasi  suhu  yang  digunakan untuk  menghidroisis  kitosan  dari  keong  sawah  antara  lain  30 0 C,  40 0 C,  50 0 C,  60 0 C  dan  70 0 C. Sedangkan  pH  hidrolisis  yang  diterapkan    untuk menghidrolisis  kitosan  dari  cangkang  keong  sawah antara  lain  4,5;  5,0;  5,5;  6,0  dan  6,5.  Pengujian  berat  molekul  hidrolisat  kitosan  dilakukan  dengan menerapkan  metode  Mark-Houwink  dan  parameter  yang  diamati  adalah  berat  molekul  hidrolisat kitosan.  Hasil  penelitian  menunjukan  bahwa  suhu  optimum  hidrolisis  kitosan  yaitu  suhu  50 0 C  dan menurunkan berat molekul menjadi 14.488 g/mol. Sedangkan untuk pH optimum hidrolisis adalah pH 5,5 dan menurunkan berat molekul 12.850 g/mol.
Kata Kunci : hidrolisat kitosan, cangkang keong sawah, enzim α-amilase

## LATAR BELAKANG
Keong  sawah  ( Pila  ampullacea ) merupakan  siput  air  tawar  yang  mudah dijumpai  di  sawah  dan  danau.  Keong sawah  memiliki  warna  cangkang  hijau hingga  hitam  dengan  bentuk  yang  mirip dengan  siput murbai (keong  mas).  Keong sawah  mengandung  protein  yang  cukup tinggi,  tetapi  pemanfaatan  keong  sawah masih sebatas konsumsi oleh masyarakat. Di Indonesia,  khususnya di daerah Sulawesi  Tengah,  keong  sawah  banyak ditemukan  di  sawah  yang  pada  umumnya menjadi  hama  karena  memakan  batang padi yang baru ditanam sehingga mengganggu  pertumbuhan  padi.  Selain menjadi  hama,  keong  sawah  juga  belum dimanfaatkan secara maksimal.
Pemanfaatan  keong  terbatas  pada konsumsi  daging  keong  oleh  sebagian masyarakat yang menyebabkan cangkangnya sangat melimpah dan mudah ditemukan. Hingga saat ini, limbah cangkah keong sawah lebih banyak diolah sebagai  pakan  ternak  (unggas).  Nasution et al. (2013) melaporkan bahwa cangkang keong sawah memiliki kandungan senyawa  kitin  yang  selanjutnya  dapat ditransformasi  menjadi  kitosan.  Hasil penelitian Hendrawan (2011), menyatakan bahwa  kitosan  cangkang  keong  bakau (Telescopiumsp ) sekitar 8,5%.
Kitosan merupakan biopolymer yang memiliki  sumber  kitin  yang  melimpah  di Indonesia.  Kitosan  banyak  dimanfaatkan dalam  berbagai bidang contohnya pangan dan medis. Kitosan memiliki berat molekul
cukup  besar  hingga  mencapai  4  x  10 40 g/mol,  dengan  berat  molekul  yang  besar ini  membuat  kitosan  terkendala  dalam pengaplikasiannya.  Diperlukan  metode hidrolisis untuk menurunkan berat molekul kitosan.  Metode  untuk  menurunkan  berat molekul  meliputi:  depolimerisasi  dengan hidrolisis  asam  atau  oksidatif  -  reduktif menggunakan  O 3 ,  NaNO 2 atau  H 2 O 2 sedangkan  depolimerisasi  fisik  dengan menggunakan ultrasonik dan membutuhkan  peralatan  yang khusus  dan ukuran berat molekul yang dihasilkan tidak bisa  dikontrol  (Lin et  al. .,  2003).  Hidrolisis kimia memiliki banyak kelemahan, diantaranya  menggunakan  larutan  kimia dengan  konsentrasi  tinggi  yang  residunya akan mencemari lingkungan, membutuhkan  reaktor  yang  kompleks, yield yang rendah, ukuran berat molekulnya  sulit  dikontrol  (Tsao et  al. ., 2011).  Metode  enzimatis  menawarkan keuntungan seperti kondisi operasi ringan, reaksi  mudah  dikontrol,  spesifisitas  tinggi, yield  tinggi  serta  ramah  lingkungan (Roncal et al. , 2007).
Senyawa  kitosan  memiliki  kelarutan yang  cukup  tinggi  pada  beberapa  asam organik,  tetapi  tidak  larut  dalam  air  dan pelarut alkali, sehingga pada berat molekul yang  tinggi,  kitosan  lebih  sulit  terserap secara  in  vivo.  Oleh  sebab  itu,  perlu dilakukan  upaya  untuk  meningkatkan kelarutan kitosan.  Kelarutan kitosan  dapat ditingkatkan  dengan  cara  menurunkan berat molekulnya. Salah satu cara menurunkan  berat  molekul  kitosan  adalah
dengan  cara  hidrolisis  baik  menggunakan asam  maupun  enzim.  Metode  ensimatik
adalah langkah yang paling menguntungkan  untuk  dilakukan  karena reaksinya  ringan  (mild)  dan  spesifikasi tinggi  serta  hasil  hidrolisis  dengan  berat molekul rendah dapat diaplikasikan sebagai  sistem  pengantar  DNA  (Li et  al ., 2005).  Hasil  hidrolisis  kitosan  disebut hidrolisat kitosan (Jeon dan Kim., 2000).
Hidrolisis  kitosan  secara  enzimatik dapat menggunakan enzim spesifik (kitosanase),  namun  hingga  saat  ini ketersediaan  enzim  tersebut  di  pasaran masih sulit ditemukan dan harganya cukup mahal.    Kemudian  muncul  penelitian- penelitian  dengan  enzim  lain  diantaranya enzim selulase (Lin, 2003), enzim pektinase (Kittu et al, 2003), enzim pepsin (Roncal et al, 2007), enzim protease (Li et al ,  2005),  dan  enzim  lipase  (Lee et  al ,
2008).  Enzim  yang  sering  dijumpai  di pasar  Indonesia  dan  dipakai  di  Industri adalah enzim α-amilase.
Handayani et al. (2013), melaporkan bahwa enzim  α-Amilase  (perbandingan enzim  :  substrat  terbaik  0,025%)  dapat digunakan  untuk  menghidrolisis  kitosan komersial  dengan  waktu  hidrolisis  2  jam dan  mampu  menurunkan  berat  molekul dari  1680-1750  kDa  menjadi  144,18  kDa. Sedangkan  hasil  penelitian  Rokhati et  al.
(2015), melaporkan bahwa hidrolisis kitosan  menggunakan  kombinasi  enzim endo-glucanase dan cellobiohydrolase dengan  waktu  hidrolisis  1  jam  dapat
menurunkan  berat  molekul  dari  1280  kDa menjadi 435 kDa.
Hingga  saat  ini,  belum  ditemukan publikasi mengenai hidrolisis kitosan menggunakan  enzim  α-amilase  (E-2248). Dengan  pertimbangan  demikian,  maka peneliti  memilih  melakukan  penelitian tentang  hidrolisis  kitosan  dari  cangkang keong  sawah  ( Pila Ampullacea)  untuk menurunkan berat molekul dengan menggunakan enzim α-amilase (E-2248).

## METODE PENELITIAN

## Bahan dan Peralatan
Bahan  dasar  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  kitosan  cangkang keong  sawah  diperoleh  dari  isolasi  kitin yang dilakukan oleh Toman (2018), bahan pembantu  yang  terdiri  dari  enzim  α- amilase,  CH 3 COOH,  NaOH  10  N  dan aquadest.
Peralatan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  mencangkup  neraca  analitik, shaker inkubator, lemari pendingin,
viscometer Ostwald, hotplate, thermometer,  waterbath,  statif  dan  klem, buret,  pipet  tetes  dan  alat-alat  gelas  yang umumnya  digunakan  dalam  laboratorium kimia.

## Prosedur Penelitian
Pembuatan  larutan  kitosan  pH  4,5 (Handayani et al. 2013)
Kitosan  cangkang  keong  sawah dengan  berat molekul  awal  251,432 g/mol (Toman,  2018)  sebanyak  10  g  dilarutkan ke  dalam  larutan  buffer  asetat  pH  4,5 hingga volume mencapai 1000 mL.
Hidrolisis enzimatik kitosan (Handayani et al., 2013).

## 1.  Perlakuan suhu hidrolisis kitosan
Larutan  kitosan  pH  4,5  sebanyak 100  mL  dimasukan  ke  dalam  erlenmeyer 250  mL  kemudian  dilakukan  penambahan enzim  α-amilase  dengan  konsentrasi  0,1 %  b/v.  Selanjutnya  diinkubasi  pada inkubator bergoyang selama 5 jam dengan variasi  suhu  30 º C,  40 º C,  50 º C,  60 º C  dan 70 º C. Hidrolisis dihentikan dengan mendidihkan  larutan  selama  15  menit. Hasil  hidrolisis  kemudian  ditambahkan NaOH  10  N  tetes  demi  tetes  sampai terbentuk  gel  kitosan  hidrolisat.  Gel kemudian  dicuci  dengan  air  sampai  netral dan kemudian disaring. Residu selanjutnya  di  oven  selama  24  jam  pada suhu 40 °C. Kitosan hidrolisat digerus dan diayak dengan ayakan 60 mesh.
Parameter  yang  diukur  adalah  berat molekul hidrolisat cangkang keong sawah. Perlakuan  suhu  terbaik  dilanjutkan  untuk perlakuan pH hidrolisis enzimatik. Masing- masing taraf perlakuan dilakukan sebanyak  3 kali  sehingga  terdapat  15  unit percobaan.

## 2.  Perlakuan pH hidrolisis kitosan
Larutan  kitosan  pH  4,5  sebanyak 100  mL  dimasukan  ke  dalam  erlenmeyer 250  mL,  ditambahkan  enzim  α-amilase dengan konsentrasi 0,1 % b/v. Selanjutnya diinkubasi  pada  inkubator  bergoyang selama  5  jam  dengan  suhu  terbaik  50  °C pada  variasi  pH  4,5;    5,0;    5,5;    6,0  dan 6,5. Hidrolisis dihentikan dengan mendidihkan  larutan  selama  15  menit.
Hasil  hidrolisis  kemudian  ditambahkan NaOH  10  N tetes  demi  tetes  pada  larutan sampai  terbentuk  gel  kitosan  hidrolisat. Gel  kemudian  dicuci  dengan  air  sampai netral dan kemudian disaring dan dikeringkan. Kitosan hidrolisat digerus dan diayak  dengan  ayakan  60  mesh.  Masing- masing taraf perlakuan dilakukan sebanyak  3 kali  sehingga  terdapat  15  unit percobaan.

## Penentuan  nilai  berat  molekul    kitosan
(Rokhati et al., 2015)
Penentuan  berat  molekul  dilakukan dengan  menggunakan  alat  viskometer ostwald.  Dipipet  sebanyak  3  mL  asam asetat lalu dimasukan kedalam Viskometer Ostwald, waktu laju alirnya dicatat. Kemudian  sampel  larutan  kitosan  hasil hidrolisis  dimasukan  ke  dalam  Viskometer Ostwald.  waktu  laju  alir  sampel  diukur. Nilai viskosimeter dihitung dengan persamaan Mark-Houwink:
Viskositas spesifik ηsp =
Keterangan : ηsp = viskositas spesifik t   = waktu laju alir sampel to = waktu laju alir aquadest
Viskositas  intrinsik  dapat  ditentukan dengan mengukur viskositas spesifik pada beberapa  konsentrasi  yaitu  0,02;  0,04; 0,06; 0,08 dan 0,1 (b/v) dan mengekstrapolasi  grafik  ηsp/c  versus  c pada konsentrasi sama dengan nol.
ηsp/c = [η] + K’ [η] 2 C
Setelah mengetahui viskositas intrinsik, maka berat molekul kitosan dapat dihitung menggunakan persamaan:
Bobot molekul viskositas η = K[M] α
dimana:
ηsp = Viskositas Spesifik (detik) η = Viskositas zat M    = Berat molekul zat g/mol t = Waktu laju alir sampel (detik) t 0 = Waktu laju alir solvent (detik)
K = 3,5 x 10 -4 ml/g α = 0,76

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil hidrolisis enzimatik kitosan
Hidrolisis enzimatik kitosan dilakukan  dengan  dua  tahap  perlakuan (perlakuan  suhu  dan  pH  hidrolisis). Kitosan  awal  yang  digunakan  untuk pembuatan hidrolisat memiliki berat molekul  sebesar  251.432  g/mol  diperoleh dari  isolasi  kitin  yang  dilakukan  oleh Toman  (2018).  Enzim  yang  digunakan yaitu enzim α-amilase (E-2248).

## Suhu hidrolisis enzim
Hidrolisis  kitosan  cangkang  keong sawah  dilakukan  dengan  variasi  suhu hidrolisis enzim 30 º C, 40 º C, 50 º C, 60 º C dan 70 º C.  Berat  molekul  hidrolisat  kitosan terhadap  variasi  suhu  enzim  diperoleh masing-masing  secara  berturut-turut  yaitu 18.654;  16.291;  14.488;  14,979  dan 15.257 g/mol.
Pada Gambar 1 menunjukan pengaruh suhu hidrolisis terhadap penurunan berat molekul hidrolisat kitosan,  yang  semakin  tinggi  dengan
bertambahnya suhu hidrolisis yang digunakan,  maka  semakin  kecil  berat molekul  kitooligosakarida  yang  dihasilkan, namun  pada  suhu  50 º C  berat  molekul kitooligosakarida yang dihasilkan mencapai  titik  minimum.  Penurunan  berat molekul kitosan setelah hidrolisis enzimatis terjadi karena adanya pemutusan  ikatan  pada  rantai  polimer kitosan  menjadi  lebih  pendek  dan  berat molekul  kitosan  menjadi  lebih  rendah (Susilowati. et al. ., 2015). Kitooligosakarida dengan  berat  molekul  rendah  dilaporkan memiliki  banyak  aktivitas  biologi  seperti antimikroba,  antikanker,  antioksidan,  dan efek  imunostimulan  yang tergantung  pada sifat fisiko-kimianya (Qin et al , 2002).
Gambar 1  Grafik  hubungan  berat  molekul hidrolisat  kitosan  pada  berbagai suhu
Dari  hasil  penelitian  diperoleh  suhu hidrolisis  terbaik  adalah  50 º C  sebesar
14.488  g/mol  yang  merupakan  variasi suhu  yang  menghasilkan  berat  molekul minimum,  karena  peranan  enzim  dalam mendegradasi  rantai  polisakarida  yang memotong  ikatan  glikosidik  pada  ujung
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 20 30 40 50 60 70 80 Ber at mo lek u l (g /mo l) Suhu hidrolisis α-amilase (ºc)
rantai  sehingga  menghasilkan  penurunan berat  molekul.  Dari  hasil  penelitian  Lee et al (2008),  dengan  menggunakan  enzim lipase dengan suhu hidrolisis 55 º C diperoleh  rendemen kitooligomer sebesar 94%. Sementara itu, Kumar dan Tharanathan  (2004),  menyatakan  bahwa penggunaan  protease  pada  hidrolisis kitosan  pada  suhu  45 º C  selama  1-5  jam mampu menghasilkan berat molekul hidrolisat  kitosan  5-10  kDa  dengan rendemen  78  -  84%.  Penigkatan  suhu dapat  meningkatkan  kecepatan  reaksi arena  molekul  atom  mempunyai  energi yang lebih besar dan mempunyai kecenderungan  untuk  berpindah  (Lee, 1992). Menurut Holum (1968) menyatakan bahwa  peningkatan  suhu  reaksi  sebesar 10 0 C  akan  meningkatkan  aktivitas  enzim
50-100%.  Penggunaan  suhu  lebih  dari 70 0 C  mengakibatkan aktivitas  enzim  α- amilase menurun, karena terjadi denaturasi protein enzim sehingga menjadi  inaktif.  Ketika  reaksi  di  jalankan pada  titik  didih  maka  semua  enzim  akan rusak (Tranggono  dan Setiadji, 1989).
Peranan enzim dalam mendegradasi rantai polisakarida dapat dibedakan berdasarkan cara enzim tersebut mendepolimerisasi rantai polisakarida dengan  memotong  ikatan  glikosidik.  Tipe pertama bersifat endo-aksi dengan memotong  ikatan  glikosidik  secara  acak. Akibatnya  polisakarida  terurai  menjadi bentuk  yang  lebih  kecil  dengan  ukuran acak.  Pada  tipe  ini  berat  molekul  dari polimer  turun  secara  cepat.  Sedangkan
tipe  kedua  adalah  ekso-aksi  yang  lebih suka  memotong  ikatan  glikosidik  pada ujung rantai sehingga menghasilkan bentuk monomer. Umumnya berat molekul polimer  kitosan  turun  secara  konstan  dan lambat pada tipe ekso-aksi (Li et al dalam Nazaruddin, M, 2010). Berdasarkan kedua tipe tersebut dalam mendegradasi polimer, enzim α-amilase dapat digolongkan dalam tipe  endo-aksi.  Hal  tersebut  dapat  dilihat dari  pola  penurunan  nilai  berat  molekul yang secara signifikan.
Berdasarkan  hasil  analisis  statistik menunjukan bahwa perlakuan suhu hidrolisis berpengaruh sangat nyata terhadap penurunan berat molekul hidrolisat  kitosan.  Hasil  analisis  lanjut dengan  uji  Duncan      (α  =  0,05) menunjukan  bahwa  suhu  berat  molekul hidrolisat  berpengaruh  nyata  pada  suhu hidrolisis 30 º C, 40 º C, 50 º C, 60 º C dan 70 º C.
Sehingga  dapat  disimpulkan  bahwa  berat molekul  menurun  secara  signifikan  pada suhu hidrolisis.

## pH hidrolisis
Hidrolisis  kitosan  cangkang  keong sawah  dilakukan  dengan  variasi  pH hidrolisis  enzim  4,5;  5,0;  5,5;  6,0  dan  6,5. Berat  molekul  kitosan  hidrolisat  terhadap variasi  suhu  enzim  diperoleh  masing- masing  secara  berturut-turut  yaitu  16.776; 14.919; 12.850; 12.867 dan 13.014 g/mol.
Pada Gambar 2 menunjukan pengaruh pH hidrolisis terhadap penurunan
berat molekul
kitooligosakarida,  yang  dimana  semakin
tinggi pH hidrolisis hidrolisat yang digunakan  maka  semakin  kecil  berat molekul.

## Gambar 2  Grafik  hubungan  berat  molekul hidrolisat kitosan pada berbagai pH hidrolisis
Dari  hasil  penelitian  diperoleh  pH hidrolisis  terbaik  adalah  5,5  sebesar 12.850  g/mol,  yang  merupakan  variasi  pH yang menghasilkan berat molekul minimum  karena  kitosan  terlarut  dengan baik  dan  enzim  α-amilase  bekerja  secara optimal, dimana semakin banyak pemutusan rantai polimer menjadi molekul yang  sederhana.  Hal  tersebut  ditandai dengan meningkatnya viskositas kelarutan dari hidrolisat kitosan tersebut.   Sehingga pada  penelitian  ini  hidrolisis  pH  optimum terjadi pada pH 5,5 karena pada variasi pH selanjutnya  menghasilkan  berat  molekul yang konstan.
Shengjun  Wu  (2011)  melaporkan bahwa enzim  α-amilase  jenis  mesofilik memiliki  pH  optimum  5.  Pada  penelitian Handayani et  al. (2013),  menyatakan bahwa  hidrolisis  enzimatis  menggunakan α-amilase  termofilik  pada  pH  5  mampu
menurunkan  berat  molekul  dari  1.680- 1.750 kDa menjadi 144,18 kDa. Dan pada hasil  penelitian  Rokhati Et  al. (2015), menyatakan bahwa hidrolisis
menggunakan enzom endo-glucanase pada  pH  5  mengakibatkan  penurunan berat  molekul  yang  besar  yaitu  dari  1.280 kDa  menjadi  392  kDa.  Menurut  Taylor (2004) apabila enzim α-amilase digunakan pH  yang  terlalu  asam  (protonasi)  maka aktivitas enzim akan berkurang, sedangkan pada pH basa terjadi deprotonasi sehingga aktivitasnya
cenderung menurun.
Menurut Lee et al dalam Nazaruddin, M  (2010),  enzim  non-spesifik  dapat mengkatalis  dua  reaksi  yang  berbeda karena memiliki dua sisi aktif pada molekul enzim atau satu sisi aktif yang dwifungsional.  Pada  kitosan  jumlah  dari gugus  N-asetil,  sebaran  gugus  N-asetil dalam  rantai  linear,  serta  berat  molekul atau  sebaran  rantai  panjangnya  akan mempengaruhi kemampuan enzim tersebut dalam mendegradasi kitosan.
Aktivitas suatu enzim dapat mencapai  optimum  pda  pH  lingkungan yang  sesuai.  Saat  pH  enzim  tidak  berada pada  pH  optimumnya,  maka  aktivitas enzim  akan  menurun  akibat  perubahan ionisasi  enzim,  substrat,  atau  kompleks enzim dengan substrat, sehingga. Beberapa jenis enzim yang dapat menghdirolisis kitin memiliki aktivitas optimum  pada  kisaran  pH  asam  hingga netral. Akan tetapi, pada pH netral, kitosan berberat  molekul  tinggi  lebih  sulit  larut
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 4.5 5 5.5 6 6.5 Ber at M o lek u l  (g /mo l) pH
dalam  air  (Ilyina et  al., 1999).  Umumnya kitosan pada pH rendah dapat tersuspensi hingga  terlarut  pada  pelarut  asam  organik (Peniston,  1980),  sehingga  semakin  tinggi keaasaman  pelarut  akan  meningkatkan kelarutan kitosan. Suhartono (1989) menyatakan  bawah α-amilase  umumnya stabil  pada    pH  5,5 –  8,0  dan  aktivitas optimum  pada  pH  4,8 –  6,5.  Pada penelitian  yang  dilakukan  pH  hidrolisis terbaik diperoleh pada pH 5,5.
Mekanisme  kerja α-amilase  dalam menghdirolisis  kitosan  dapat  diduga sama dengan mekanisme hidrolisis amilosa.  Enzim α-amilase  menghidrolsis amilosa melaluii dua tahap, yaitu degradasi  menjadi  dekstrin  yang  terjadi secara  acak  yang  berlangsung  sangat cepat diikuti dengan menurunnya viskositas dengan cepat., sehingga amilosa  terurai  menjadi  bentuk  yang lebih  kecil  dengan  ukuran  acak.  Pada tahap kedua relatif sangat lambat dengan pembentukan glukosa dan maltosa  sebagai  hasil  akhir  (Hom  dan Eijsink, 2003). Pembentukan gula reduksi menunjukan  aktifitas  enzim  yang memotong ikatan glikosida pada kitosan. Semakin  tinggi  aktivitas  enzim  maka semakin  tinggi  pula  gula  reduksi  yang dihasilkan. Penentuan kadar gula reduksi dapat digunakan untuk mengetahui peningkatan  jumlah  rantai  kitosan  yang terputus  dari  waktu  ke  waktu.  Oleh karena itu semakin rendah berat molekul kitosan  maka  semakin  tinggi  kadar  gula reduksi.
Berdasarkan  hasil  analisis  statistik menunjukan bahwa perlakuan pH hidrolisis berpengaruh sangat nyata terhadap penurunan berat molekul hidrolisat  kitosan.  Hasil  analisis  lanjut dengan uj Duncan (α = 0,05) menunjukan bahwa  suhu  berat  molekul  hidrolisat berpengaruh  nyata  pada  pH  hidrolisis  4,5; 5,0;  5,5;  6,0  dan  6,5.  Sehingga  dapat disimpulkan bahwa berat molekul menurun secara signifikan pada pH hidrolisis.

## KESIMPULAN
Suhu hidrolisis kitosan terbaik adalah  50 0 C  dengan  berat  molekul  yang didapatkan sebesar
14,488 g/mol sedangkan pH hidrolisis terbaik adalah 5,5 dengan  jumlah  penurunan  berat  molekul 12,850 g/mol

## DAFTAR PUSTAKA
Handayani, H., Siwi, P., Rokhati, N. 2013. Depolimerisasi kitosan dengan hidrolisa  enzimatik  menggunakan enzim  α-Amilase. Jurnal  Teknologi Kimia dan Industri 2(4): 55-64.
Hendrawan & Rachmawani, D. 2011. Studi kandungan  kitosan  pada  keong (Telescopium sp) di kawasan konservasi  mangrove  kelurahan pamusian  kota  tarakan .  Jurnal Harpodon Borneo 4(2).
Holum,  J.  R  dan  Brendy,  J.E.  1968.
Chemistry .  New  York:  Jhon  Wiley dan Son. pp.681.702
Hom,  S.J.  and  Eijsink,  V.G.H.  2003.  A reliable  reducing  sugar  end  assay for chito- oligosaccharides , Carbohydrate Polymers , 56: 35-39.
Ilyina, A V., Tatarinova, N Y., Varlamov, V P.  1999.  The  Preparation  of  Low- molecular  weight  Chitosan  Using chitinolytic Complex from Streptomyces  kurssanovii . Process Biochemistry 34(9): 875-878.
Jeon  YJ,  Kim  SK.  2000.  Production  of
chitooligosaccharides using an ultrafiltration membrane reactor and  their  antibacterial  activity. J
Carbohydrate Polymer 41:133 – 141.
Kumar,  A.B.V.,  Varadaraj,  M.C.,  Gowda,
L.R.,  and  Tharanathan,  R.N.,  2004.
Low  molecular  weight  chitosans — preparation  with  the  aid  of  pronase, characterization and their bactericidal activity  towards  Bacillus  cereus  and Escherichia coli, Biochimica et Biophysica Acta, 1770: 495-505.
Lee  DX,  Xia  WS,  Zhang  JL.  2008.
Enzymatic
preparation of
chitooligosaccharides  by  commercial lipase. Food chem . 111:291-295
Lee,  M.  Nah,  Kwn  Y,  Koh  JJ,  Ko  KS,  Kim SW. 1992. Purification
and
Charateristic of Chitonase from
Bacillus  sp.  HW-002 Journal  of Microbiology  and  Biotechnology 6: 19-25.
Li J, Du Y, Yang J, Feng T, Li A, Chen P. 2005. Preparation and characterisation  of  low  molecular weight  chitosan  and  chito-oligomers by  a  commercial  enzyme .  Polym Degradation  and  Stability 87:  441- 448.
Lin,  Q.  and  Ma,  K.L.  2003.  Study  of Catalytic  Hydrolysis  of  Chitosan  by Cellulase, China Surfactant Detergent and Cosmetics 33: 22-25. Nasution,  P.,  Sumiati,  S.,  Wardhana,  I
W.  2013.  Studi  penurunan  TSS,
Turbidity dan COD dengan
menggunakan  kitosan  dari  limbah
cangkang keong sawah ( Pila ampullaceal )  sebagai  biokoagulan dalam  pengolahan  limbah  cair  PT. Sido muncul TBK Semarang.
Jurnal  Teknik  Lingkungan 4(1):  1- 10.
Peniston,  Q.  P  &  Jhonson,  E.  1980.
Process  of  the  manufacture  of chitosan . US patent
Qin,  C.  Du,  Y.M  dan  Xiao,  L.  2002 . Effect of  Hydrogen  Peroxide  Treatment  on the  Molecular  Weight  and  Structure of  Chitosan. Polym  Degradation  And Stability 76:211-218.
Rokhati,  N.,  A.  Prasetyaningrum,  D. Ikhsan  dan  T.  D.  Kusworo.  2015. Peningkatan  Mutu  Simpan  Buah dengan Coating Film Komposit Tapioka-Kitosan .  Prosiding  Seminar
Nasional  Teknik  Kimia  “Kejuangan
Pengembangan Teknologi Kimia untuk  Pengolahan  Sumber  Daya Alam  Indonesia, 18  Maret  2015. Yogyakarta, hal. 1-7.
Roncal,  T.,  Oviedo,  A.,  Armentia,  I.l.D.,
Fernandez,  L.,  Villarian,  M.  2007. High Yield Production Of Monomer- Free Chitosan Oligosaccharides By Pepsin  Catalyzed  Hydrolysis  Of  A
High Deacetylation Degree Chitosan .  Carbohydrate  Research 342(18): 2750-2756 .
Suhartono, M.T. 1989. Enzim dan Bioteknologi . Bogor: PAU IPB.
Taylor.  2004.  Electrospinning  of  chitosan solution in acetic acid with poly(ethylene  oxide ) . Journal  of Biomaterials Science 15(6).
Tranggono  dan  Sutardi.  1989. Biokimia dan Teknologi Pasca Panen .
Yogyakarta:  Pusat  Antar  Universitas Pangan  Dan  Gizi,  Gadjah  Mada University Press,  142 hal
Tsao,  C.T.,  Chang,  C.H.,  Lin,  Y.Y.,  Wu, M.F.,Han,  J.L.,  and  Hsieh,  K.H.
2011. Kinetic study of acid
depolymerization  of  chitosan  and effects  of  low  molecular  weight chitosan  on  erythrocyte  rouleaux formation. Carbohydrate  Research , 346(1): 94-102.