## PENERAPAN METODE EKSTRAKSI PELARUT DALAM PEMISAHAN MINYAK ATSIRI
JAHE MERAH ( Zingiber officinale Var.Rubrum )
[The Application of Solvent Extraction Method in The Separation of Red Ginger A Volatile Oil ( Zingiber  officinale Var. rubrum)]
Nina Rahmadani 1* , Ruslan 1 , Pasjan Satrimafitrah 1
1 Jurusan Kimia Fakultas MIPA, Universitas Tadulako Jl. Soekarno Hatta Km.9, Kampus Bumi Tadulako Tondo Palu, Telp. 0451- 422611
*)Coresponding author: ninarahmadani92@gmail.com
Diterima 26 Februari 2018, Disetujui 27 Maret 2018

## ABSTRACT
A research on the application of solvent extraction method in the separation of red ginger, a volatile oil ( Zingiber officinale Var.rubrum) has been conducted. The purpose of this research is to determine the ratio  of  n-hexane  solvent  to  red  ginger  powder  which  produce  red  ginger  volatile  extract  with  high yield and red ginger volatile oil compound components. This research used Completely Randomized Design (RAL). The applied treatment was the influence of the n-hexane solvent ratio to the red ginger powder  comprising  five  ratios  of  1:  7,  1:  8,  1:  9,  1:10,  and  1:11  (w/v)  with  two  repetitions.  The parameters observed were yield of red ginger volatile oil extract. The results showed that the highest yield of red ginger oil extract was 6.695% at ratio of 1:11.  Analysis of GC-MS of red ginger volatile oil show that there are 6 components of the compound produced.
Keywords :  Ginger volatile Oil, Extraction, Gas Chromatography-Mass Spectrophotometry (GC-MS)

## ABSTRAK
Telah  dilakukan  penelitian  tentang  penerapan  metode  ekstraksi  pelarut  dalam  pemisahan  minyak atsiri jahe merah (Z ingiber officinale Var.rubrum). Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui rasio pelarut n- heksan  terhadap  serbuk  jahe  merah  yang  menghasilkan  ekstrak  minyak  atsiri  jahe  merah dengan  rendemen  yang  tinggi  dan  komponen  senyawa  minyak  atsiri  jahe  merah.    Penelitian  ini menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL).  Perlakuan  yang  diterapkan  adalah  pengaruh  rasio pelarut n- heksan terhadap serbuk jahe merah yang terdiri atas lima perbandingan rasio yaitu 1:7, 1:8, 1:9,  1:10,  dan  1:11  (b/v)  dengan  dua  kali  pengulangan.  Parameter  yang  diamati  adalah  rendemen ekstrak  minyak  atsiri  jahe  merah.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  rendemen  ekstrak  minyak atsiri  jahe  merah  yang  tertinggi  tardapat  pada  rasio  1:11  sebesar  6,695%.  Analisis  GC-MS  minyak atsiri jahe merah menunjukkan bahwa terdapat 6 komponen senyawa yang dihasilkan.
Kata Kunci : Minyak Atsiri Jahe, Ekstraksi, Gas Cromatography-Mass Spektrofotometri (GC-MS)

## LATAR BELAKANG
Kemajuan  ilmu  pengetahuan  dan teknologi menyebabkan semakin meningkatnya  usaha  untuk  mengetahui cara  memperoleh  minyak  atsiri  dan pendayagunaannya dalam kehidupan manusia.  Minyak  atsiri  dapat  diisolasi  dari berbagai  jenis  tanaman,  salah  satunya dengan  cara  penyulingan  (Rumondang, 2004).  Salah  satu  tanaman  penghasil minyak atsiri tersebut adalah  rimpang jahe merah.  Jahe  merah  ( Zinggiber  officinale var. rubrum )  merupakan  salah  satu tanaman  khas  di  Indonesia.  Kandungan oleoresin  pada  rimpang  jahe  merah  akan memberikan rasa pedas, sedangkan minyak atsiri di dalamnya akan menghasilkan  aroma  yang  khas.  Minyak atsiri  jahe  dimanfaatkan  sebagai  bahan kosmetik,  parfum,  dan  aroma  terapi  pada industri  farmasi,  pada  industri  makanan digunakan sebagai bahan penyedap (Wulandari, 2010).
Minyak  atsiri  jahe  merah  dapat diperoleh  dengan  cara  ekstraksi  ataupun penyulingan. Metode penyulingan merupakan  metode  yang  paling  umum digunakan  oleh  para  petani  di  Indonesia karena  tidak  menggunakan  pelarut  kimia dan  lebih  mudah  untuk  dilakukan  (Budi, 2009).  Namun  pada  kali  ini  metode  yang digunakan  untuk  mengambil  minyak  atsiri jahe  merah  adalah  metode  ekstraksi, karena  metode  ekstraksi  juga  dapat menghasilkan  produk-produk  olahan  jahe seperti minyak atsiri jahe.
Beberapa  peneliti  telah  melakukan metode ekstraksi minyak atsiri jahe dengan menggunakan teknik-teknik baru, diantaranya  menggunakan  karbondioksida (CO 2 )  dan  etanol  sebagai  pelarut  untuk mengekstrak  jahe  Australia  (Badalyan et al ., 1998 dalam Djafar 2010), , menggunakan metode Microwave Assisted
Extraction (MAE)  (Kurniasari,  2008  dan Purwanto, 2010). Purwanto (2010)
melaporkan  bahwa  salah    rasio  pelarut terhadap  bahan  baku  sangat  berpengaruh terhadap rendemen minyak atsiri.
Penggunaan metode ekstraksi melalui teknik-teknik baru tersebut, tentunya membutuhkan biaya  yang  sangat mahal  untuk  melakukannya.  Akan  tetapi untuk  memudahkan  penelitian  dengan metode ekstraksi, maka salah satu alternatif yang diambil adalah menggunakan  metode  ekstraksi  pelarut secara  maserasi.  Hal  ini  dikarenakan teknik pengerjaan dan alat yang digunakan sederhana dan  sesuai untuk mengekstrak senyawa  yang  bersifat  tidak  tahan  panas, seperti minyak atsiri jahe. Dengan demikian, perlu dilakukan penelitian mengenai  penerapan  metode  ekstraksi pelarut  dalam  pemisahan  minyak  atsiri jahe merah ( Zingiber officinale var. rubrum).

## METODE PENELITIAN

## Bahan dan Peralatan
Bahan  dasar  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  rimpang  jahe  merah,
bahan  lainnya  adalah n- heksan,  etanol 96%, kertas saring dan aluminium foil.
Peralatan  yang  digunakan  dalam penelitian ini meliputi neraca analitik, rotari vakum evaporator, GCMS- QP2010S Shimadzu ,  blender,  ayakan  40  mesh    dan alat-alat  gelas  yang  umum  digunakan dalam Laboratorium Kimia.

## Prosedur Kerja

## Persiapan Sampel Jahe merah
Rimpang jahe merah dibersihkan dan diiris  tipis kemudian  dikeringanginkan,  lalu diblender untuk mendapatkan serbuk kasar jahe  merah.  Setelah  itu,  serbuk  jahe tersebut  diayak  dengan  menggunakan ayakan  40  mesh,  sehingga  diperoleh serbuk halus rimpang jahe merah.

## Ekstraksi Minyak Atsiri Jahe Merah
Serbuk  halus  rimpang  jahe  merah diekstrak  secara  maserasi  menggunakan pelarut n -heksan (modifikasi metode Damayanti dan Fitriana,
2012).
Perbandingan  antara  serbuk  jahe  merah dengan pelarut n -heksan dijadikan sebagai perlakuan  dengan  lima  tingkatan  rasio, masing-masing  1:7,  1:8,  1:9,  1:10  dan 1:11.  Dimana 1 adalah bagian serbuk jahe merah,  7,  8,  9,  10  dan  11  adalah  bagian pelarut n -heksan  atas  dasar  berat/volum (b/v). Serbuk rimpang jahe merah dimasukkan  ke  dalam  wadah  ekstraksi sebanyak  100  g,  kemudian  ditambahkan pelarut n -heksan sesuai perlakuan.
Campuran didiamkan selama 6 jam sambil sekali-kali  diaduk,  selanjutnya  didiamkan hingga  24  jam.  Campuran  disaring  untuk
memisahkan  ekstrak  dari  residu  jahe merah. Ekstrak yang dihasilkan dipekatkan secara  vakum  menggunakan  rotari  vakum evaporator  hingga  diperoleh  ekstrak  pekat kemudian  ditimbang  untuk  mengetahui rendemennya.  Ekstrak  pekat  tersebut diekstraksi  kembali  dengan  etanol  96% sebanyak  tiga  kali.  Perbandingan  ekstrak dengan  etanol  adalah  1:2  (v/v).  Ekstrak etanol  diuapkan  pelarutnya  secara  vakum menggunakan  rotari  vakum  evaporator hingga  diperoleh  ekstrak  pekat  minyak atsiri  jahe  merah  kemudian  ekstrak  pekat dianalisis komponen senyawanya menggunakan metode GC-MS.

## Penentuan Rendemen Minyak Atsiri
Rendemen  minyak  atsiri  jehe  merah yang  dihasilkan  ditentukan  menggunakan persamaan sebagai berikut:
Rendemen (%) = 100%
Analisis  Senyawa  Dalam  Minyak  Atsiri Jahe Merah Menggunakan GC-MS (Hustany, 1999).
Minyak jahe merah ( Zingiber officinale var. rubrum ) dianalisis komponen senyawanya dengan menggunakan metode  GC-MS  ( Gas  Chromatography- Mass
Spectrometry ).
Cara
pelaksanaannya sebagai berikut, peralatan GC-MS  yang  akan  digunakan  untuk  GC diprogram  pada  suhu  60 o C  selama  4 menit, kemudian dinaikkan suhunya menjadi 120 o C dengan kenaikan suhu 2 o C per menit. Pada suhu 120 o C dipertahankan selama  5  menit,  kemudian  dinaikkan  lagi
suhunya  dengan  kenaikan  suhu  50 o C  per menit  sampai  suhu  akhir  290 o C  dan dipertahankan selama 10 menit. Laju aliran gas total yang digunakan adalah 50 ml per menit  dengan  slit  ratio  1:3  suhu  injector 300 o C  dan  jumlah  sampel  disuntikkan  ke injektor  sebanyak  0,1 l.  MS  yang digunakan memiliki energi elektron sebesar  70  eV  dengan  accelerating voltage sebesar 1,30 kV. Mass range yang dideteksi  berkisar  antara  40-400  dengan interval  scanning  1  detik  dan  resolusi sebesar 1.000.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Rendemen  Ekstrak  Minyak  Jahe  Merah Pada berbagai Rasio Pelarut n-Heksan
Rendemen  minyak  atsiri  jahe  merah merupakan  salah  satu  bagian  yang berpengaruh pada kadar minyak atsiri jahe merah.  Hasil  rata-rata  rendemen    minyak atsiri  jahe  merah  yang  dihasilkan  dari proses  ekstraksi  secara  maserasi  dengan pelarut n -heksan  dapat  dilihat  pada Gambar  1.  Hasil  pengamatan  rendemen minyak  atsiri  jahe  merah  pada  berbagai rasio  pelarut n- heksan  terhadap  serbuk jahe  merah  (Gambar  1)  menunjukkan makin  tinggi  penggunaan n- heksan,  makin tinggi  pula  rendemen  minyak  atsiri  jahe merah yang dihasilkan.
Hasil rendemen tertinggi yang diperoleh terdapat pada rasio 1:11 sebesar 6,695% dan yang terendah adalah 4,775% pada  rasio  1:7.  Perolehan  rendemen meningkat  dengan  meningkatnya  rasio pelarut n- heksan  terhadap  serbuk  jahe merah.  Hal  tersebut  disebabkan  karena
faktor  kelarutan  minyak  atsiri  jahe  dalam serbuk  jahe  merah  terhadap  pelarut n- heksan.  Makin  banyak  pelarut  yang digunakan  makin  tinggi  pula  minyak  atsiri jahe yang terlarut atau yang terekstrak.
Gambar 1 Grafik  Hubungan  Rasio  Pelarut n - Heksan  Terhadap  Serbuk  Jahe Merah  Dengan    Rendemen  Ekstrak Minyak Atsiri Jahe Merah
Rendemen minyak atsiri yang dihasilkan  dalam  penelitian  ini  lebih  baik jika dibandingkan dengan rendemen minyak  atsiri  jahe  merah  yang  dihasilkan menggunakan  metode  penyulingan  uap dan  air  sebesar  0,284  %  yang  dilakukan oleh  Fatriani  (2007)    dengan  jumlah sampel  jahe  adalah  60  kg,  setiap  sekali penyulingan  digunakan  sampel  seberat  4 kg selama 6 jam. Pada penelitian ini hanya menggunakan  jumlah sampel jahe  seberat 1  Kg,  dan  setiap  kali  ekstraksi  digunakan sampel seberat 100 g selama 24 jam yang tentunya  menghasilkan  rendemen  yang lebih tinggi dibandingkan rendemen minyak  atsiri  yang  diperoleh  Fatriani (2007).
Lain halnya pada penelitian Purwanto  (2010),  yang  melakukan  proses
0 1 2 3 4 5 6 7 1:7 1:8 1:9 1:10 1:11 Rend emen (% ) Rasio pelarut n-heksan terhadap serbuk jahe merah (b/v)
produksi minyak jahe menggunakan teknologi Microwave  Assisted  Extraction (MAE), dari  penelitiannya  menunjukkan bahwa  hasil  rendemen  tertinggi  dicapai pada ekstraksi dengan rasio pelarut-bahan baku  8:1.  Ekstraksi  dengan  rasio  pelarut- bahan baku lebih besar dari 8:1 menghasilkan  perolehan  ekstrak  yang lebih  rendah.  Menurut  Purwanto  (2010), hal  itu  mungkin  disebabkan  pada  rasio pelarut-bahan  baku  yang  lebih  tinggi, volume pelarut jauh lebih banyak, demikian juga  dengan  volume  air  yang  terdapat didalam campuran pelarut.
Hasil  analisis  sidik  ragam  yang diplakukan  menunjukkan  bahwa  rasio pelarut n- heksan  terhadap  serbuk  jahe merah  berpengaruh  terhadap  rendemen minyak  atsiri  jahe  merah  yang  ditandai dengan  nilai  signifikan  0,042  < α  (0,05).
Analisis lanjut dengan uji Duncan memberikan keterangan rendemen minyak atsiri jahe pada rasio 1:11 berbeda dengan rasio 1:8 dan 1:7, sedangkan 1:10 dan 1:9 tidak berbeda.
Komponen Senyawa Kimia Minyak Atsiri Jahe Merah
Analisis  komponen  senyawa  minyak atsiri  merupakan  bagian  yang  penting dalam industri minyak atsiri untuk menentukan  nilai  mutu  dan  tingkat  harga suatu  minyak.  Komponen  kimia  minyak atsiri  jahe  merah  dianalisis  menggunakan metode Gas Chromatography-Mas Spectrometry (GC-MS)  atau  Kromatografi Gas  Spektrofotometer  Massa  (KG-SM)
(Winarsi,  2014).  Analisis  profil  aroma minyak  atsiri  dengan  KG-SM  lebih  tepat karena untuk menganalisis minyak diperlukan dua tahapan pemisahan komponen  campuran  dalam  sampel  yaitu melalui  kromatografi  gas  (KG)  sedangkan tahap  selanjutnya  yaitu  analisis  dengan spektrofotometer massa (SM) yang berfungsi untuk mendeteksi masing- masing molekul komponen yang dipisahkan  pada  sistem  krometografi  gas (Wulandari,  2010).  Adapun  hasil  analisis GC-MS  yang  diperoleh  pada  minyak  atsiri jahe  merah  dalam  penelitian  ini  dapat ditunjukkan pada Gambar 2.
Pada Gambar 2 menunjukkan bahwa hasil  analisis  GC-MS  minyak  atsiri  jahe merah  yang  diperoleh  melalui  ekstraksi pelarut  secara  maserasi  terlihat  6  puncak yang  menunjukkan  bahwa  terdapat  6 komponen  senyawa  kimia  yang  ada  pada minyak  atsiri  jahe  merah  yang  dihasilkan. Luas  area  puncak  yang  ada  relatif berbeda, demikian pula dengan komponen senyawa kimia yang dihasilkan (Tabel 1).
Berdasarkan analisis GC-MS, minyak atsiri  jahe  merah  mengandung  komponen senyawa  kimia  yang  tertinggi  terdapat pada  puncak  ke  3  yaitu  zingiberene (31,47%),  lalu  diikuti  oleh  1-metil-4-(5- metilheksan-2  il)Benzen  (22,46%),  ß- Sesquiphellandren (21,51%), ß-Bisabolene (14,62%),  Fernesene  (7,70%)  dan  yang paling  rendah  adalah  Geranyl  Acetate (2,24%).  Komponen  senyawa  kimia  yang dihasilkan  dalam  penelitian  ini  memiliki jumlah  yang  lebih  banyak  dibandingkan
dengan  hasil  penelitian  Djafar  (2010), namun  terdapat  3  senyawa  yang  sama yang  dihasilkan  dengan  jumlah  %  yang
berbeda di antaranya zingiberene, fernesene dan ß-Sesquiphellandrene.
Gambar 2 Spektrum GC-MS minyak atsiri jahe merah
Tabel 1 Komponen  Senyawa  Hasil  analisis  GC- MS minyak atsiri jahe merah
Penelitian Djafar (2010), yang
menggunakan  metode  hidrodistilasi  sistem kohobasi terdapat 5 komponen kimia minyak jahe hasil analisa GC-MS yaitu ar- Curcumene (19,72%), Zingiberene (14,13%),
ß-Sesquiphellandrene  (13,49%),  Farnesene (10,65%), dan Germacrene D (4,03%). Hasil penelitian Yu et al. (2007), yang menggunakan metode microwave  distillation and solid-phase microextraction (MD-SPME) terdapat  5  pula komponen kimia  yang  sama seperti  halnya  yang  dihasilkan  oleh  Djafar (2010),  namun  jumlahnya  berbeda  pada setiap  senyawa  yang  dihasilkan,  seperti pada    ar-Curcumene  (3,59%),  Zingiberene (15,48%),  ß-Sesquiphellandrene  (5,54%), Farnesene  (2,51%),  dan  Germacrene  D (0,64%).
Komposisi  kimia  minyak  atsiri  jahe merah  dapat  dipengaruhi  oleh  berbagai faktor,  antara  lain  waktu  panen,  lingkungan
No. Nama Senyawa Waktu Retensi Area % Area 1. Geranyl Acetate 20,485 2245990 2,24 2. 1-metil-4-(5- metilheksan- 2 il)Benzen 23,237 22536257 22,46 3. Zingiberene 23,570 31581228 31,47 4. Fernesene 23,833 7732041 7,70 5. β-Bisabolene 23,902 14669894 14,62 6. β-Sesqui phellandren 24,321 21591670 21,51
tumbuh  (ketinggian  tempat,  curah  hujan, jenis  tanah),  dan  keadaan  rimpang  (segar atau kering) (Mustafa & Srivastava, 1990; Ali et  al ., 2008). Komponen kimia tertinggi hasil penelitian  Djafar  (2010),  didominasi  oleh senyawa ar-Curcumene, sedangkan komponen kimia  tertinggi  hasil  penelitian  Yu et  al. (2007),  didominasi  oleh  senyawa
Zingieberene.  Pada  hasil  penelitian  ini, komponen senyawa kimia yang mendominasi  adalah  Zingiberene  dengan jumlah    lebih  tinggi  dibandingkan  dengan Zingiberene  yang  dihasilkan  Djafar  (2010) dan  Yu  (2007).  Tingginya  kandungan zingiberene  dalam  minyak  atsiri  jahe  yang dihasilkan  pada  penelitian  ini  disebabkan karena  minyak  atsiri  jahe  merah  yang dihasilkan  memberikan  aroma  harum  khas jahe  yang  sangat  kuat.  Komponen  utama minyak  atsiri  jahe  yang  menyebabkan  bau harum  adalah  zingiberen  dan  zingiberol (Koswara,  1995).  Minyak  atsiri  jahe  merah mengandung  zingiberene  berkisar  antara 19,61% - 21,38 %   (Wulandari, 2010). Pada proses ekstraksi, faktor yang paling berpengaruh  adalah  rasio solute : solvent , dan waktu ekstraksi dimana semakin banyak pelarutnya dan semakin lama waktu ekstraksi akan semakin banyak camfen yang terekstrak  sehingga  semakin  besar  kadar zingiberennya (Handayani, 2015).

## KESIMPULAN
Rasio  pelarut  heksan  terhadap  serbuk jahe  merah  yang  menghasilkan  rendemen tertinggi  terdapat  pada  penggunaan  rasio 1:11 (b/v) dengan rendemen ekstrak minyak
atsiri jahe merah sebesar 6,695%. Komponen  kimia  minyak  atsiri  jahe  merah hasil analisis GC-MS terdiri atas zingiberene (31,47%), 1-metil-4-(5-metilheksan-2-il)
Benzen (22,46%), ß-Sesquiphellandren (21,51%), ß-Bisabolene (14,62%), fernesene (7,70%) dan Geranyl Acetate (2,24%).

## DAFTAR PUSTAKA
Ali,  B.  H.,  G.  Blunden,  M.  O.  Tanira,  A.
Nemmar. (2008). Some Phytochemical,  Pharmacological  and
Toxicological  Properties  of  Ginger (Zingiber  officinale Roscoe ): A  review of recent research. Food and Chemical Toxicology. 46 : 409-420.
Budi,  F.S.  (2009).  Pengambilan  Oleoresin Dari  ampas  Jahe  (Hasil  Samping Penyulingan  Minyak  jahe)  Dengan Proses Ekstraksi . Jurnal Teknik . 30(3).
Damayanti,  A.,  &  Fitriana,  E.  A.  (2012). Pemungutan minyak atsiri mawar ( rose oil )  dengan  metode  maserasi. Jurnal Bahan Alam Terbarukan , 1(2).
Djafar, F. (2010). Pengaruh Ukuran Partikel,
SF Rasio dan Waktu Proses Terhadap Rendemen pada Hidrodistilasi Minyak Jahe . Jurnal Hasil Penelitian Industri. 23(2).
Fatriani.  (2007).  Rendemen  dan  Kualitas Minyak  atsiri  Jahe  ( Zingiber  officinale Rose). Jurnal  Hutan  Tropis  Borneo . 8(20) : 8 -  16.
Handayani,  D.  (2015).  Peningkatan  Kadar
Zingiberen Dalam Minyak Jahe Dengan  Ekstraksi  Cair-Cair . Prosiding SNST  ke-6  Tahun  2015 Semarang: Fakultas  Teknik  Universitas  Wahid Hasyim.
Koswara,  S.  (1995) .  ” Jahe  dan  Hasil Olahannya ”.  Jakarta  :  Pustaka  Sinar harapan.
Kurniasari,  L.  (2008) . Kajian  Ekstraksi Minyak Jahe Menggunakan Microwave Assisted Ekstraction (MAE). Momentum. 4(2): 47-52.
Mustafa,  T.,  K.C.  Srivastava.  (1990).  Ginger
(Zingiber officinale) in Migraine Headache . J.  Ethnopharmacol .  29: 267-273.
Purwanto, H. (2010). Pengembangan Microwave  Assisted  Extractor  (MAE) Pada  Produksi  Minyak  Jahe  Dengan
Kadar Zingeberene Tinggi . Momentum. 6(2): 9-16.
Rumondang, B. (2004). Esterifikasi Patchouli Alkohol Hasil Isolasi Dari Minyak Daun
Nilam (Patchouli Oil). library.usu.ac.id/download/fmipa/kimia- rumondang2.pdf , diunduh pada tanggal 5 Januari 2018.
Winarsi,  D.  (2014).  Isolasi  dan  Identifikasi Komponen  Kimia  Minyak  Atsiri  Dari Daun,  Batang  dan  Bunga  Tumbuhan Salembangu (Melissa  Sp.) . Skripsi . Palu:  Program  Studi  Kimia  Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan Alam Universitas Tadulako.
Wulandari, Y.W. (2010). Karakteristik Minyak
Atsiri Beberapa
Varietas
Jahe
(Zingiber  officinale) . Jurnal  Kimia  dan Teknologi. 43-50.
Yu, Y., T. Huang, B. Yang, X. Liu, G. Duan.
(2007). Development of Gas Chromatography-Mas Spectrometry with Microwave Distillation and
Simultaneous  Solid  -  Phase  Micro
Extraction  for  Rapid  Determination  of
Volatile Constituents in Ginger. Journal of  Pharmaceutical  and  Biomedical Analysis. 43: 24-31.