## Pengaruh Pemaparan Gas Ozon terhadap Kadar Air, Lignin, Selulosa dan Hemiselulosa pada Azolla pinnata
Ari Oscar Moris 1,a , Muhammad Nur 2 , Hendi Setyatwan 1 dan Iwan Setiawan 1
1 Fakultas Peternakan, Universitas Padjadjaran, Sumedang
2 Fakultas Sains dan Matematika, Universitas Diponegoro, Semarang
a email: arioscarmoris@gmail.com

## Abstrak
Azolla  pinnata memiliki  protein  berkisar  antara  25%-30%  sehingga  berpotensi  dijadikan  bahan  pakan  untuk  ruminansia, unggas maupun ikan. Kandungan serat kasar yang cukup tinggi mencapai 20% menjadi penghambat kecernaan nutrien. Gas ozon dikenal sebagai zat oksidatif yang mampu mengurai struktur lignin menjadi asam maleat dan asam oksalat. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemaparan gas ozon terhadap kadar air, lignin, selulosa dan hemiselulosa pada Azolla pinnata . Penelitian dilakukan secara eksperimental menggunakan rancangan acak lengkap dengan 5 perlakuan dan 4 ulangan. Parameter  yang  diukur  adalah  kadar  air,  lignin,  selulosa  dan  hemiselulosa.  Perlakuan  ozon  yang  digunakan  adalah  durasi pemaparan 0 menit (T0), 60 menit (T1), 120 Menit (T2), 180 menit (T3) dan 240 menit (T4).Hasil penelitian menunjukkan perlakuan pemaparan gas ozon tidak berpengaruh nyata terhadap kadar air akan tetapi mampu menurunkan kandungan lignin, selulosa dan hemiselulosa dengan signifikan. Pemaparan selama 180 menit merupakan waktu yang optimal untuk menurunkan kadar lignin, selulosa dan hemiselulosa.
Kata kunci : Azolla pinnata, ozon, lignin, selulosa, hemiselulosa

## Effect of Ozonation on Water Content, Lignin, Cellulose and Hemicellulose of Azolla pinnata

## Abstract
Azolla pinnata has a protein ranging from 25%-30% so it has the potential to be used as feed for ruminants, poultry and fish. Crude fiber content is high enough to reach 20% becomes an inhibitor of nutrient digestibility. Ozone gas is known as an oxidative compound capable of breaking down the lignin structure into maleic acid and oxalic acid. This research aims to determine the effect of ozonation on water content, lignin, cellulose and hemicellulose in Azolla pinnata. This research was conducted  experimentally  using  a  completely  randomized  design  with  5  treatments  and  4  replications.  The  parameters measured were the content of lignin, cellulose and hemicellulose. The ozone treatment used was the duration of exposure 0 minutes (T0), 60 minutes (T1), 120 minutes (T2), 180 minutes (T3) and 240 minutes (T4). The results showed that the treatment of ozone gas exposure had no significant effect on water content altough significantly reduce the content of lignin, cellulose and hemicellulose. Exposure for 180 minutes is the optimal time to reduce the levels of lignin, cellulose and hemicellulose. Keywords: Azolla pinnata, ozone, lignin, celluose, hemicellulose

## Pendahuluan
Azolla  berasal  dari  bahasa  Yunani  yaitu azo yang berarti musim dan ollyo yang berarti mati. Jadi Azolla berarti tanaman ini akan mati pada  lingkungan  yang  kering  (Lumpkin  dan Plucknett,  1980).  Yunus  (1983)  menyebutkan bahwa Azolla  pinnata mudah  dijumpai  di daerah  tropis  dengan  suhu  optimum  20-25 o C. Daunnya bertekstur lunak, berklorofil dan letak daunnya  berselang-seling  ( pinnate ).  Daunnya berbentuk  segitiga  sampai  segi  banyak  dan berwarna  hijau  tua  atau  kemerah-merahan dengan  diameter  sekitar  1-2,5  cm  setiap koloninya (Lumpkin dan Plucknett, 1980).
Daun Azolla  pinnata memiliki  rongga berisikan  koloni annabaena yang  mampu menambat  N 2 dari  udara  (Tjitrosoepomo,
1981).  Menurut  Lawrance  (1968)  Azolla bersimbiosis dengan ganggang hijau-biru yang dapat  menangkap  Nitrogen  dari  udara  bebas dan  menyimpannya  dalam  sel  daun.  Azolla tumbuh di lingkungan dengan tingkat naungan 50%, pH antara 3,5-10, dan untuk pertumbuhan optimalnya  diperlukan  H  4,5-7,  temperatur antara 20 o C hingga 30 o C. Tanaman Azolla akan mati  pada  temperatur  dibawah  5 o C  dan  diatas
45 o C (Tran dan Dao, 1973).
Kandungan  serat  yang  tinggi  (19,52%), terutama selulosa (14,08%)  dan lignin (21,42%)  pada  azolla  merupakan  kendala  jika dimanfaatkan  sebagai  bahan  pakan  unggas karena  tidak  memiliki  enzim  pemecah  serat (Noferdiman  dan  Zubaidah,  2012).  Querubin dkk.,  (1988)  melaporkan  bahwa  azolla
mengandung  NDF  (57,80%),  ADF  (44,5%), selulosa (9,46% dan lignin (27,52%).
Upaya  yang  banyak  dikenal  dan  paling banyak digunakan dalam mereduksi lignin pada hijauan  pakan  adalah  secara  fermentatif. Penggunaan  mikroba  MA-11  dalam  proses fermentasi  jerami  selama  enam  hari  dapat mereduksi  50%  kandungan  lignin  yang  ada (Suryani, 2018).
Fermentasi
yang memanfaatkan pengurai mikroba ( Trichoderma harzianum )  selama  tiga  hari  dan  ragi ( Saccharomyces  cerevisiae )  selama  tujuh  hari mampu  mereduksi  kadar  lignin  pada Lemna minor hingga  mencapai  1,25%  (Setyatwan dkk., 2018)
Penguraian  lignin  dalam  pakan  ternak menggunakan  gas  O 3 (ozon)  belum  dilakukan di  Indonesia,  sedangkan  beberapa  penelitian menunjukkan  bahwa  gas  O 3 (ozon)  efektif dalam  penguraian  struktur  lignin.  Proses ozonasi  dapat  mengubah  struktur  lignin menjadi  asam  maleat  dan  asam  oksalat (Mbachu,  1979).  Pemanfaatan  ozon  untuk mendegradasi  lignin  pertama  kali  dipelajari oleh  Doree  dan  Cunningham  yang  berhasil melakukan  delignifikasi  lignin  pada  kayu Fagus sp . Proses ozonasi terhadap tepung kayu cemara  selama  120  menit  dapat  mereduksi kandungan  lignin  sebanyak  87,7%  (Mbachu, 1979).  Penelitian  yang  dilakukan  oleh  Eqra dkk.,  (2014)  menunjukkan  bahwa  perlakuan ozonolisis yang digunakan sebagai pretreatment ampas  tebu  selama  3,5  jam menghasilkan  hemiselulosa  dapat  dipecah sebanyak 50%.
Ozon  (O 3 )  merupakan  molekul  triatomik karena tersusun atas tiga atom O, bersifat tidak stabil,  berbau  menyengat  dan  mudah  terurai kembali  (Mbachu,  1979).  Metcalf  dan  Eddy (2003)  menyatakan  bahwa  ozon  pada  suhu ruang  berwarna  biru  dan  memiliki  bau  yang tajam.  Ozon  dapat  dideteksi  oleh  hidung manusia pada konsentrasi 0,01 – 0,05 ppm dan akan  meledak  saat  konsentrasinya  mencapai 240  g/m 3 atau  sebanyak  20%  di  udara.  Ozon tidak  bisa  disimpan  ataupun  ditransportasikan secara  khusus  karena  waktu paruh  keberadaan ozon  sangat  singkat,  yaitu  sekitar  4  –  6  menit karena ozon akan dengan cepat terdekomposisi kembali menjadi molekul oksigen. Oleh karena itu  ozon  harus  diproduksi  secara in  situ yaitu dekat dengan instalasi pemanfaatannya (Bismo, 1999).
Ozon  dapat  diproduksi  oleh  sebuah generator ozon menggunakan teknologi
plasma.  Teknologi  lucutan  berpenghalang dielektrik sering digunakan untuk membangkitkan  ozon  (Nur  dkk,  2017). Semakin  tinggi  voltase  yang digunakan, maka jumlah  ozon  yang  terbentuk  akan  semakin banyak (Syarifudin dan Novia, 2013).  Saat ini ozon  banyak  digunakan  untuk  penanganan pasca  panen  produk  hortikultura  dalam  upaya memperpanjang masa simpan produk (Nur dkk, 2021; Susan dkk, 2018).

## Materi dan Metode
Materi  yang  digunakan  dalam  penelitian ini adalah tanaman Azolla pinnata beurumur 14 hari hasil budidaya mandiri dan gas ozon yang dihasilkan  dari  generator  ozon  milik  PT  Dipo Technology  Semarang.  Generator  ozon  yang digunakan  memiliki  kapasitas  150gram/jam dengan flow rate 20 liter/menit pada arus listrik 220  volt.  Tanaman  azolla  disusun  di  atas  rak bertingkat  berbahan stainless  steel kemudian dimasukkan ke dalam boks plastik yang sudah dimodifikasi  untuk  dilakukan  pemaparan  gas ozon dalam keadaan suhu ruang .
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental  menggunakan  rancangan  acak lengkap  dengan  lima  perlakuan  dan  empat pengulangan. Perlakuan yang digunakan adalah perbedaan  durasi  pemaparan  yaitu;  0  menit (T0), 60 menit (T2), 120 menit (T3), 180 menit (T4) dan 240 menit (T5). Seluruh sampel hasil pemaparan  gas  ozon  dianalisis  Van  Soest  di Laboratorium  Nutrisi  Ternak  Ruminansia  dan Kimia Makanan Fakultas Peternakan Universitas  Padjadjaran.  Parameter  yang diamati  adalah  kadar  lignin,  selulosa  dan hemiselulosa.  Data  yang  diperoleh  dianalisis dengan  perangkat  lunak  SPSS  menggunakan analisa  sidik  ragam  ( annova )  dan  dilanjutkan dengan  analisis  DMRT  ( Duncan  Multiple Range Test ).

## Hasil dan Pembahasan
Proses  pemaparan  gas  ozon  terhadap tanaman  azolla  secara  langsung  mengubah warna  yang  awalnya  berwarna  hijau  menjadi kecoklatan.  Perubahan  warna  disebabkan  oleh proses  oksidasi  yang  ditimbulkan  oleh  gas ozon.  Hal  ini  sesuai  dengan  pendapat  Grulke dan Heath (2019) bahwa paparan gas ozon akan mengakibatkan efek terbakar atau oksidasi dari reaksi  gas  O 3 yang  masuk  melalui  stomata ketika proses respirasi.

## Gambar 1. Perubahan warna Azolaa pinnata setelah dipaparkan gas ozon
Tabel 1. Pengaruh perlakuan terhadap rataan kadar air,  lignin, selulosa dan hemislulosa
Perlakuan Air Lignin Selulosa Hemiselulosa -------------------- % -------------------- T0 T1 T2 T3 T4 93,13 a 94,17 a 94,38 a 93,88 a
93,90 a
22,09 a
19,43 b
18,19 bc 16,63 cd
15,31 d
13,23 a
11,81 ab
10,48 bc 9,49 cd
8,53 d
15,17 a 14,76 ab 12,54 bc 11,19 c 12,01 c
Keterangan : Perbedaan superscript pada kolom yang sama menunjukkan perbedaan yang nyata (P<0,05). Durasi pemaparan gas ozon 0 menit (T0), 60 menit (T1), 120 menit (T2), 180 menit (T3) dan 240 menit (T4).
Proses pemaparan gas ozon juga mengakibatkan  perubahan  kimiawi  khususnya komposisi  kandungan  lignin,  selulosa  dan hemiselulosa  yang  dapat  dilihat  pada  Tabel  1. Hasil  analisa  sidik  ragam  menunjukkan pemaparan  gas  ozon  tidak  memberi  pengaruh yang nyata (P>0,05) terhadap kadar  air Azolla pinnata . Menurut Prasetyaningrum dkk (2019) ozon  merupakan  senyawa  oksidatif  yang bersifat  selektif  terhadap  senyawa  tertentu. Reaksi  terjadi  dalam  tiga  tahap,  yaitu  inisiasi, reaksi berantai radikal dan penghentian reaksi. Gas  Ozon  bereaksi  H 2 O  akan  membentuk radikal  OH  yang  bersifat  oskidatif  terhadap senyawa  lain  dan  reaksi  lainnya  akan  terhenti ketika  molekul  O 2 dan  molekul H 2 O  terbentuk kembali.  Jadi  dapat  disimpulkan  bahwa  reaksi berantai  O 3 dengan  H 2 O  akan  membentuk kembali  molekul  H 2 O  yang  menyebabkan kadar  air  pada  tanaman Azolla  pinnata relatif tetap  meskipun  dipaparkan  gas  ozon  selama 240  menit.  Kandungan  air  yang  tinggi  pada Azolla  pinnata tidak  terpengaruh  karena paparan  gas ozon,  akan  tetapi  kondisi  tersebut membuat reaksi ozon terhadap senyawa lainnya menjadi  lebih  efektif  (Doree  dkk,  1913: Mbachu, 1979).
Berdasarkan  Tabel  1,  secara  keseluruhan proses  pemaparan  gas  ozon  (ozonasi)  pada Azolla pinnata menurunkan kadar lignin secara signifikan  (P<0,05).  Penurunan  kadar  lignin terjadi  secara  gradual  sesuai  dengan  lama
proses  ozonasi,  semakin  lama  proses  ozonasi penurunan  kadar  lignin  tanaman  semakin tinggi.  Rataan  kadar  lignin  pada  perlakuan pemaparan gas ozon selama 60 menit (T1) yaitu 19,43%  atau  terjadi  penurunan  kandungan lignin  secara  signifikan  (P<0,05)  sebesar 12,04% apabila dibandingkan dengan kandungan  lignin Azolla  pinnata tanpa dilakukan  pemaparan  gas  ozon  (T0).  Kadar lignin  terendah  terdapat  pada Azolla  pinnata yang diberi paparan gas ozon selama 240 menit (4  jam)  yaitu  15,31%  walaupun  tidak  berbeda nyata (P>0,05) dengan perlakuan T3. Fatriasari dkk (2019) menyebutkan struktur ligniselulosa tersusun  dalam  bentuk  teratur  (kristalin)  dan tidak  teratur  ( amorf ).  Struktur  kristalin berbentuk padat dan teratur sehingga lebih sulit diurai  dibandingkan  dalam  bentuk amorf .
Diduga  pemaparan  ozon  selama  120  menit mampu  mengurai  sebagian  besar  ligniselulosa dalam  bentuk amorf ,  sehingga  penambahan durasi  lebih  dari  120  menit  menunjukan  hasil yang  tidak  berbeda  nyata.  Pada  perlakuan  ini terjadi penurunan kadar lignin secara signifikan (P<0,05)  yaitu  sebesar  30,69%.  Penurunan kadar lignin pada Azolla pinnata hasil ozonasi disebabkan karena adanya proses oksidasi baik secara langsung oleh ozon maupun secara tidak langsung  melalui  radikal  OH  yang  akan mengoksidasi  molekul  organik.  Hal  ini  sesuai dengan  pendapat  Savitri  dan  Purwanto  (2019) yang  menyatakan  bahwa  lamanya  proses
ozonasi  pada  jerami  padi  akan  mengakibatkan oksidator  dari  ozon  maupun  radikal  akan semakin  banyak  yang  kontak  dengan  struktur lignin sehingga struktur lignin akan terdegradasi menjadi molekul yang lebih kecil. Ikatan  lignin  bereaksi  dengan  gas  ozon  dan terdegradsi  menghasilkan  asam  maleat  dan asam  oksalat  (Mbach,  1979).  Menurut  Vidal dan  Molinier  (1988)  degradasi  menggunakan ozon  pada  dasarnya  secara  khusus  berdampak pada lignin. Struktur ikatan lignin yang terurai secara  langsung  memberi  dampak  terhadap hemiselulosa dan selulosa.
Pengaruh  pemaparan  gas  ozon  terhadap kadar  selulosa Azolla  pinnata baru  terlihat secara  signifikan  (P<0,05)  pada  perlakuan  T2 yaitu10,48% atau mengalami penurunan
sebesar 20,78% dibandingkan dengan kandungan  selulosa Azolla  pinnata tanpa pemaparan  gas  ozon  (T0).  Penurunan  kadar selulosa  tertinggi  terdapat  pada  perlakuan pemaparan  gas  ozon  selama  240  menit  (T4) dengan nilai 8,53% atau mengalami penurunan sebesar  35,53%  walaupun  tidak  berbeda nyata (P>0,05) dengan perlakuan T3 (pemaparan gas ozon  180  menit).  Hal  ini  mengindikasikan bahwa pada 60 menit pertama ozonisasi proses degradasi selulosa relatif kecil, setelah 60 menit kemudian  terjadi  proses  degradasi  selulosa secara  signifikan  sampai  dengan  240  menit proses  ozonasi.  Proses  ini  terjadi  karena terdegradasinya  lignin  sebagai  pengikat  dan perekat  struktur  kristalin  yang  dibangun  oleh selulosa dan hemiselulosa. Menurunnya lignin mengakibatkan  struktur  selulosa  semakin terbuka  tidak  terlindung  oleh  lignin  sehingga ozon  maupun  radikal  hidroksi  lebih  mudah mendegradasi  selulosa.  Hal  ini  sejalan  dengan pendapat  Savitri  dan  Purwanto  (2019)  bahwa kadar  selulosa  jerami  padi  mulai  menurun secara  signifikan  pada  periode  setelah  30-60 menit  pertama  proses  ozonasi  sebagai  akibat terdegradasi  menjadi  sukrosa  yang  kemudian terdegradasi  lanjut  menjadi  glukosa  dan fruktosa.  Menurut  Mbachu  (1979)  selulosa dengan kondisi lembab dapat didegradasi oleh ozon,  hal  ini  sesuai  dengan  kondisi  kadar  air Azolla pinnata yang mencapai 93,89%.
Pengaruh  perlakuan  terhadap  kandungan hemiselulosa  mempunyai  fenomena  berbeda dengan  selulosa,  walaupun  penurunan  kadar hemiselulosa  baru  terjadi  pada  perlakuan pemaparan  gas  ozon  120  menit  (T2)  yaitu 12,54%  atau  mengalami  penurunan  sebesar 17,34%, tetapi penambahan waktu ozonasi (T3
dan T4) menghasilkan kadar hemiselulosa yang sama  dengan  T2.  Proses  ini  terjadi  karena terdegradasinya  lignin  sebagai  pengikat  dan perekat  struktur  kristalin  yang  dibangun  oleh selulosa  dan  hemiselulosa.  Ozon  dapat mendegradasi  struktur  lignin  yang  mengikat hemiselulosa  (Vidal  dan  Molinier,  1988). Menurunnya  lignin  mengakibatkan  struktur hemiselulosa semakin terbuka tidak terlindung oleh  lignin  sehingga  ozon  maupun  radikal hidroksi lebih mudah mendegradasi hemiselulosa.  Hal  ini  sejalan  dengan  pendapat Savitri dan Purwanto (2019) yang menyatakan bahwa  kadar  selulosa  jerami  padi  mulai menurun secara signifikan pada periode setelah 30-60  menit  pertama  proses  ozonasi  sebagai akibat terdegradasi menjadi sukrosa.

## Kesimpulan
Pemaparan  gas  ozon  (ozonasi)  tidak mempengaruhi  kadar  air  pada Azolla  pinnata akan  tetapi  mampu  mereduksi  kandungan lignin,  selulosa  dan  hemiselulosa.  Pemaparan gas  ozon  selama  180  menit  merupakan  waktu yang optimal untuk menurunkan kadar  lignin, selulosa dan hemiselulosa pada Azolla pinnata.

## Daftar Pustaka
Bismo,  S.  1999. Teknologi  Ozon  (I)  :  Kajian Prospek Penggunaan Ozon untuk Pengendalian  Limbah  Industri. Jurnal Teknologi, No. 2, XIII, 197-206 Fatriasi, W., Masruchin, N., Hermiati. E., 2019 . Selulosa  karakteristik  dan  peman- faatannya . Lipi Press. Jakarta Grulke,  N.E.  and  Heath.  R.  L.  2019. Ozone effects  on  plant  in  natural  ecosystems . Plant  Biology.  Article  review.  Western
Wildlands Environmental Threats Assessment Center, US Forest Service.
Lawrence,  G.H.W.  1968. Taxonomy  of
Vascular  Plants .  The  Mac.  Millan Company New York
Lumpkin, T.A dan Plucknet, D.L. 1980. Azolla: Botany,  Physiology,  and  Use  a  Green Manure . J. Economic Botany 34(2): 111-
153
Lynd, L. R., Wiemer ,P.J., Van Zyl, W.H., and Pretorius, I.S. 2002. Microbial Sellulose Utilization : Fundamental and
Bioltechnology.  Microbial  mol.  Biol.
Rev 66(3). 506-577
Mbachu,  R.A.D.  1979.  D egradation  of  Lignin by  Ozone .  Thesis.  Departement  of
Chemistry, McGill University.
Metcalf  and  Eddy,  I.  2003. Wastewater Engineering  Treatment  and  Reuse .  4th ed. New York: McGraw Hill
Noferdiman dan Zubaidah. 2012. Penggunaan Azolla  microphylla  fermentasi  dalam ransum ayam broiler . Halaman 792-799 dalam:  Prosiding  Seminar  Nasional  dan Rapat  Tahunan  Bidang  Ilmu  Pertanian BKS-PTN  Wilayah  Barat  tahun  2012.
Fakultas Pertanian Universitas Sumatera Utara. Medan
Nur,  M.,    Al-Baarri,  A.N.,  Sabrina,  T., Kusumiyati, Fauzi, T., 2021, Analysis of Ozone  Technology  Interventions  for
Economic  Recovery  during  the  COVID
19 Pandemic: A Case Study of Batu Bara
District through Chili Production Center , Budapest International Research and  Critics  Institute-Journal  (BIRCI- Journal). 4(4): 12910-12918 Nur, M., Susan, A.I., Muhlisin, Z., Arianto, F.,
Kinandana,  A.W., Nurhasanah, I., Sumariyah,  S.,Wibawa,  P.J.,  Gunawan, G.,  Usman,  A.,  2017, Evaluation  of Novel  Integrated  Dielectric  Barrier Discharge Plasma as Ozone Generator .
Preatyaningrum,  A.,  Ratnawati.,  Jos,  Bakti.,
Dharmawan,  Yudhi.,  Purwati,  Dwi. 2019. Aplikasi Teknologi Ozonasi Untuk Pengolahan Bahan Makanan dan Pembuatan  Obat  Hayati .  FKM  Undip Press. Universitas Diponegoro, Semarang. Querubin, L.J., Alcantara,P.F. and Princessa,A.O. 1986. Chemical Composition  of  three  azolla  species
(Caroliana,  A.  Microphylla  and  A. Pinnata)  and  feeding  value  of  azolla
meal  in  broiler  ration .  Philipines Agriculture. 69 (4a): 479 - 490 Savitri,  Emma  dan  E.  Purwanto.  2019. Degradasi  Lignin  dan  Selulosa  dari Jerami  Padi  dengan  Proses  Ozonasi. Indonesian  PolymerJournal.  22  (2):  21- 25
Setyatwan,  H.,  Harlia,  E.,  Rusmana,  D.  2018. Kandungan  Lignn,  Selulosa  dan  Bahan Ekstrak  Tanpa Nitrogen L.  Minor  Hasil
Fermentasi  menggunakan  Trichoderma harzianum dan Saccharomyces cerevisiae. Jurnal Ilmu Ternak, 18(2) Hal 115-120.
Suryani,  Sri.  2018. Kajian  Kandungan  Lignin dan  Selulosa  Jerami  Padi  Fermentasi . Jurnal  Ilmu  Ilmu  Pertanian  Vol  2(2):
160-164 Syarifudin,  A.,  Novia.  (2013). Produksi  Ozon Dengan Bahan Baku Oksigen Menggunakan  Alat  Generator  Ozon . Jurnal  Teknik  Kimia  Vol.  19  (2):  1-9. Jurusan  Teknik  Kimia,  Fakultas  Teknik Universitas Sriwijaya. Palembang Tjitrosoepomo, G. 1981. Taksonomi
Tumbuhan .  Gadjah  Mada  University Press. Yogyakarta
Tran, Q.T and Dao, T. T. 1973. Azolla: A Green Compost . Vietnamese Studies, Agriculture Problems. 38: 119-127
Van Soest, P.J. 1982. Nutritional ecology of the ruminant .  Cornell  University  Press. Ithaca. New York Vidal, P.F. and Molinier J. 1988. Ozonolysis of lignin  –  Improvement  of  in  vitro digestibilty  of  poplar  sawdust .  Biomass 16(1): 1-17. Ecole Nationale Supriecure de Chime, France.
Yunus,  M.  1987. Hijauan  Makanan  Ternak . Universitas Brawijaya. Malang