## Perbandingan Efek Vitamin E Dan Asam Rosmarinat Terhadap Ekspresi Subunit P65 Nf-Kb
Pada Tikus Diabetes
Comparison Of The Effect Of Vitamin E And Rosmarinic Acid On Expression Of P65 Nf-Kb Subunit In Diabetes Rat
Wahyu Prima 1 , Nur Samsu 2 , Husnul Khotimah 3
1 Program Studi Pendidikan Dokter Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya Malang
2 Departemen Ilmu Penyakit Dalam , Fakultas Kedokteran UB-RSSA Malang
3 Departemen Farmakologi , Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya Malang Email korespondensi: wahyuprimae@gmail.com

## Abstrak
Salah  satu  penyebab  dari  Nefropati  diabetik  (ND)  yang  paling  berperan  adalah  peningkatan  radikal  bebas  akibat tingginya kadar glukosa sehingga menyebabkan stress oksidatif. Stress oksidatif akan mengaktivasi Angiotensin II dan  factor  transkripsi Nuclear  Factor  kappa  B (NFKb).  Pencegahan  dan  perlambatan  progresifitas  ND  adalah dengan  menggunakan  antioksidan.  Salah  satu  contoh  antioksidan  adalah  Vitamin  E  dan  Asam  Rosmarinat  (AR). Vitamin  E  sebagai  antioksidan  konvesional  sedangkan  AR  sebagai  antioksidan  poten  yang  juga  memiliki  efek antiinflamasi. Penelitian eksperimental laboratorik ini bertujuan membandingkan efek Vitamin E dan AR terhadap ekspresi  NFKb  p-65  pada  glomelurus  tikus  diabetes  tipe  2.  Metode  yang  digunakan  adalah randomized  posttest only  controlled  group  design dengan  total  tikus  15  ekor.  Ekspresi  NFKb  p-65  kontrol  positif  meningkat  signifikan dibandingkan kontrol negatif (p< 0,001), Vitamin E dan AR mampu menurunkan ekspresi NFKb dibanding dengan kontrol  positif  (p  =  0,022  dan  p  =  0,001).  Ekspresi  NFKb  pada  kelompok  Vitamin  E  dan  Asam  Rosmarinat  tidak terdapat  perbedaan  signifikan  namun  AR  menurunkan  lebih  baik  dibandingkan  Vitamin  E.  Dapat  disimpulkan bahwa AR memberikan efek lebih baik pada penurunan ekspresi NFKb p-65 pada glomelurus tikus diabetes tipe 2 dibandingkan Vitamin E.
Kata kunci: Nefropatidiabetik, Nuclear Factor kappa B (NF-Kb), AsamRosmarinat, Vitamin E

## Abstract
One of the causes of diabetic nephropathy (ND) that have important role is the increase of free radicals due to high levels of glucose which causes oxidative stress. Oxidative stress activates Angiotensin II and the transcription factor of Nuclear Factor kappa  B (NFKb). Prevention and slowing down of ND progression is by using antioxidants. The example of antioxidants are Vitamin E and Rosmarinic Acid (RA). Vitamin E is a conventional antioxidant while RA is a potent antioxidant that also has anti-inflammatory effects. This laboratory experimental study aimed to compare the  effects  of  Vitamin  E  and  RA  on  the  expression  of  NFKb  p-65  in  glomelurus  of  type  2  diabetes  rats.  NFKb expression of p-65 of positive control increased significantly compared to negative controls (p <0.001), Vitamin E and  RA  were  able  to  reduce  NFKb  expression  compared  to  positive  controls  (p  =  0.022  and  p  =  0.001). respectively  there  was  no significant difference between NFKb expression in the Vitamin E group and Rosmarinic acid but RA decreased better than Vitamin E. It can be concluded that AR had a better effect compared to Vitamin E on the decrease in NFKb p-65 expression in glomelurus type 2 diabetes rats.
Keyword: Diabetic nephropathy, Nuclear Factor kappa B (NF-Kb), Rosmarinic Acid, Vitamin E

## Pendahuluan
Diabetes  melitus  (DM)  merupakan  penyebab utama kematian  di  dunia.  DM  tipe  2  merupakan  suatu kelompok  penyakit  metabolik  dengan  karateristik hiperglikemia  yang  terjadi  karena  kelainan  sekresi insulin,  kerja  insulin  atau  kedua-  duanya.  Di Indonesia  sekitar  75%  penderita  DM  tipe  2  belum terdiagnosis.  Hal  ini  akan  sulit  mendapatkan pengobatan  dan  perawatan  yang  adekuat  sehingga dapat menyebabkan terjadinya komplikasi. Komplikasi DM tipe 2 meliputi gangguan makrovaskuler diantaranya penyakit jantung koroner (PJK),  stroke  dan  mikrovaskuler  seperti  nefropati, retinopati,  nauropati,  dan  ulkus  di  kaki  diabetik. (Schellenberg  et  al,  2013;  PERKENI.  2011;  Fatimah, RN. 2015)
Komplikasi mikrovaskuler yang utama bagi penderita DM tipe 2 adalah nefropati diabetik (ND).  Nefropati diabetik  terjadi  karena  kerusakan  glomerulus sehingga  sejumlah  protein  darah  dieksresikan  ke dalam  urin  secara  abnormal  yang  menyebabkan penyakit ginjal tahap akhir dan penyakit ginjal kronik yang  merupakan  sidroma  nefrotik.  Menurut  data  di Rumah Sakit Ciptomangunkusumo pada tahun 2011, komplikasi yang paling sering ditemukan pada kasus DM  tipe  2  adalah  neuropati,  lalu  diikuti  dengan retinopati  dan nefropati pada urutan  ketiga. (Tavafi M,  2013;  Pusat  Data  dan  Informasi  Kementrian Kesehatan RI, 2014).
Penelitian  yang  dilakukan  di  Inggris  membuktikan bahwa orang Asia memiliki angka penderita ND lebih tinggi  dibandingkan  orang  Barat.  Hal  ini  disebabkan penderita DM di Asia terjadi pada umur yang relatif lebih  muda  sehingga  kemungkinan  terjadinya  ND lebih  besar.  Suatu  studi  ekonomi  kesehatan  yang dilakukan  Goeree  pada  tahun  2007  di  Kanada menunjukkan    biaya  yang  dikeluarkan  untuk membiayai  perawatan  ND  mencapai  $4117,  lebih besar  dibandingkan  dengan  stroke  yang  hanya berkisar  $3965.  Prevalesi  ND  dilaporkan  sebesar 29,4%  di  Thailand,  20,8%  di  Filipina,  13,1%  di Hongkong,    dan  2,0%-39,8%  di  Indonesia.  (Adam JMF, 2005)
Nefropati    diabetik    disebabkan  oleh  radikal  bebas yang  diproduksi secara berlebihan. Selain itu kondisi hiperglikemia  kronik  akan  meningkatkan  jumlah radikal  bebas  di  dalam  sel  dan  akan  bersifat  toksik sehingga  menyebabkan  terjadinya  stres  oksidatif yang  menghasilkan Reactive  Oxygen  Spesies (ROS). Reactive  Oxygen    Spesies yang  berlebihan  akan mengaktivasi  Angiotensin  II  dan  factor  transkripsi
Nuclear  Factor  kappa  B (NF-  Kb).  Pada  sindroma nefrotik  juga  sering  ditemukan  NF-kβ  subunit  p65. Selain  itu  penelitian  yang  dilakukan  Yi  (2014), subunit  p65  NF-kβ  dilaporkan  meningkat  pada pasien  ND.  (Forbes  et  al,  2008;  Desminarti  et  al, 2012; Corebima et al, 2009)
Salah  satu  penatalaksanaan  ND  adalah  penggunaan antioksidan dalam menurunkan produksi ROS. Salah satu  antioksidan  yang  dapat  menurunkan  produksi ROS  antara  lain  adalah  Vitamin  E  dan  Asam Rosmarinat.  Vitamin  E  merupakan  antioksidan  yang berperan  penting  dalam  menonaktifkan  radikal bebas yang menyerang jaringan. Menurut Schlenker 2011  dalam  Mutiarani  2017,  Vitamin  E  berperan sangat  baik  karena  teroksidasi  dangan  lambat sehingga  menonaktifkan  radikal  bebas.Penelitian yang  dilakukan  Suarsana    2011    pada  tikus  ( Rattus norvegicus )  hiperglikemia  yang  diberikan  Vitamin  E menunjukkan  bahwa  vitamin  E  dapat  memutuskan rantai  radikal  bebas  sehingga  mampu  menurunkan radikal bebas di tubuh tikus. Asam Rosmarinat yang cara  kerjanya  sama  dengan  Vitamin  E  namun memiliki kapasitas antioksidan yang lebih  kuat baik tunggal maupun kombinasi, waktu paruh yang lama, mempunyai  permeabilitas  yang  tinggi  terhadap mitokondria  yang  menyebabkan  aktivitas  enzim antioksidan  tubuh  meningkat  dan  memiliki  efek sebagai  anti-inflamasi.  Namun  perbandingan  efek antioksidan  antara  vitamin  E  dengan  Asam Rosmarinat terhadap tikus  ( Rattus norvegicus ) galur Wistar model diabetes mellitus tipe 2 belum pernah diteliti.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  membuktikan pemberian    asam  rosmarinat  mampu  menurunkan ekspresi  subunit  p65  NF-kβ  lebih  baik  daripada pemberian  vitamin  E  pada  tikus  ( Rattus  norvegicus ) galur Wistar model diabetes mellitus tipe 2. (Bender, 2003; Mutiarani, 2017; Suarsana et al, 2010)

## Bahan dan  Metode

## Desain Penelitian
Design  penelitian  adalah  desain true  experimental laboratory dan  metode randomized  posttest  only controlled  group  design dengan  menggunakan  tikus dengan  model  diabetes  melitus  tipe  2  sebanyak  15 ekor.  Sampel  dibagi  ke  dalam  4  kelompok  yaitu kelompok  1.  Kontrol  negatif  (tikus  normal,  tidak didiabeteskan).  Kelompok  2.  kontrol  positif  (tikus diabetes  tanpa  mendapatkan  asam  rosmarinat  atau vitamin E). Kelompok 3. Tikus diabetes mendapatkan perlakuan  Vitamin  E  dan  kelompkok        4.        Tikus
diabetes      yang mendapatkan perlakuan Asam Rosmarinat.

## Bahan Penelitian
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah Streptozotocin  (STZ)  merk  BioWorld,  Vit  E  dalam bentuk
D-α- Tocopherol
dengan dosis
400mg/kgBB/hari.  Dosis  asam  rosmarinat  adalah asam  rosmarinat  dari  ChemCruz  dengan  dosis 75mg/kgBB/hari. Aquades, Formaldehid 10%, larutan  Xytol,  larutan  paraffin,  dan  antibody  NF-κB p65  (A-12)  sc-514451  Santa  Cruz  Biotechnology. (Maslachah et al, 2008; Tavafi et al, 2011)

## Persiapan Hewan Coba
Dilakukan persiapan pemeliharaan hewan coba tikus ( Rattus norvergicus ), dan seleksi tikus (jenis kelamin jantan,  umur  7-9  minggu,  berat  badan  150-170 gram,  belum  mengalami  perlakuan  apapun  atau belum  mendapat  asupan  bahan  kimia  apapun,  dan dalam keadaan sehat dengan ditandai bergerak aktif serta  bulu  tidak  rontok).  Tikus  dikandangkan invidual,  mendapatkan  pakan  dengan  komposisi kalori  60%  lemak,  dan  akses  minum  bebas.  Tikus diadaptasikan  di  Laboratorium  Farmakologi  FKUB selama tujuh hari sebelum eksperimen.

## Pemberian Vitamin E
Vitamin  E  yang  telah  diencerkan  dalam  olive  oil dengan dosis 400mg/kgBB yang telah dihitung sesuai dengan  berat  badan  masing-masing  tikus  diberikan dengan dosis rata-rata 92mg/mL secara oral dengan sonde  selama  7  minggu,  baru  setelah  itu  dilakukan euthanasia  dan  pengorbanan.  (Maslachah  et  al, 2008)

## Pemberian Asam Rosmarinat
Asam  rosmarinat  yang  telah  diencerkan  dalam  air dengan dosis  75mg/kgBB yang telah dihitung sesuai dengan  berat  badan  masing-masing  tikus  diberikan dengan  dosis  rata-rata  21,5mg/mL  secara  oral dengan  sonde  selama  7  minggu,  baru  setelah  itu dilakukan euthanasia dan pengorbanan. (Tavafi et al, 2011)

## Pengamatan Imunohistokimia Ginjal Mencit
Slide  diamati  dengan  mikroskop  perbesaran  400x sebanyak  10  glomelurus.  Setalah  itu  dihitung  rata- rata dari total yang diamati dibagi 10 glomerulus.

## Analisis Data
Seluruh  teknis  pengolahan  data  hasil  penelitian dianalisis decara komputerisasi dengan menggunakan  software  S tatistical  Product  and Service  Solution ,  IBM  SPSS  Statistics  20  dengan tingkat  signifikansi  atau  nilai  probabilitas  0,05 (p=0,05)  dan  taraf  kepercayaan  95%  (α=0,05). Langkah-langkah  uji  hipotesis  komparatif  adalah sebagai berikut: uji normalitas data, uji homogenitas varian,  uji One-way  ANOVA ,  dan Post  hoc  test  (uji Least Significant Difference) .

## Hasil

## Perhitungan NFKb p-65 Glomelurus Ginjal
Setelah  dilakukan  pemberian  diet  tinggi  lemak selama  3  minggu,  dilanjutkan  dengan  pemberian Streptozotocin  (STZ)  untuk  kelompok  kontrol  positif (KP)  dan  kelompok  perlakuan  (KP1  dan  KP2).  Pada hari  ke-3  dilakukan  pengecekan  gula  darah  puasa (GDP) dan jika sudah melebihi 280 mg/dL maka tikus dinyatakan  DM  dengan  kondisi  komplikasi  vaskuler (nefropati).  Pada  tikus  kelompok  perlakuan, dilanjutkan  pemberian  Asam  Rosmarinat  dan Vitamin  E  selama  7  minggu.  Pada  hari  terakhir  di minggu ke-7 dilakukan terminasi keseluruhan sampel untuk  diambil  organ  ginjal.  Organ  ginjal  kemudian dilakukan  fiksasi  dengan netral  buffer  formalin 10% yang  selanjutnya  dibuat  preparat  histologi  dengan pengecatan  imunohistokimia.  Sebelum  dilakukan pengamatan, slide terlebih dahulu diinkubasi dengan monoklonal  anti  NFKb  p-65  kemudian  diamati melalui  mikroskop  cahaya.  Hasil  pemeriksaan  yang diamati berupa ekspresi warna coklat pada preparat yang  menunjukkan  aktivasi  NFKb  p-65  dapat  dilihat pada Gambar 1.
Hasil pemeriksaan selanjutnya dilakukan perhitungan  ekspresi  NFKb  p-65  pada  glomelurus ginjal  tikus.  Data  yang  diperoleh  dianalisis  dengan SPSS  dan  didapatkan  hasil  uji  normaliatas  data p=0,556,  uji  homogenitas  varian  p=0,115,  uji One- way  ANOVA p=  0,000.  Untuk  uji Post  hoc, antara kelompok  kontrol  negatif  dengan  positif  didapat p=0,000, kelompok kontrol positif dengan perlakuan Vitamin E didapat p= 0,022, kelompok kontrol positif dengan  perlakuan  AR  didapat  p=0,001,  dan kelompok  Vitamin  E  dengan  AR  didapat  p=0,061. Hasil analisis dapat dilihat pada Tabel 1. dan Gambar 2. dibawah ini.
a. Kontrol Negatif (KN)
b. Kontrol Positif (KP)
c. Kelompok Perlakuan Vit E
d. Kelompok Perlakuan AR
Gambar 1. Gambaran Imunohistokimia Glomelurus Ginjal (400x)
Tabel 1. Rerata Ekspresi NFKb p-65 Glomerulus Ginjal Tikus
Kelompok Perlakuan Rerata Ekspresi NFKb p-65 Glomerulus Ginjal ± SD Kontrol Negatif 3,933 ± 0,251 a Kontrol Positif 16,15 ± 2,76 b Kelompok Vitamin E 11,6 ± 2,57 c Kelompok AR 8,25 ± 1,52 c
Gambar 2. Grafik Rerata Ekspresi NFKb p-65 Glomerulus Ginjal Tikus
Tanda panah menunjukkan NFKb p-65 di glomelurus. Pengamatan  dilakukan  pada  glomelurus  dengan aplikasi  master  scan  dot  slide  dengan  perbesaran 400x,  pengecatan  Imunohistokimia  (IHK).  (a) Kelompok  Kontrol  Negatif  (KN),  (b)  Kelompok Kontrol Positif (KP), (c) Kelompok Perlakuan Vit E (d) Kelompok Perlakuan AR.
Berdasarkan  grafik  2  dapat  disimpuklan  bahwa kelompok  dengan  jumlah  ekspresi  NFKb  p-65 terendah didapatkan pada kelompok kontrol negatif. Jumlah ekspresi NFKb p-65 tertinggi didapatkan pada kelompok  kontrol  positif.  Pemberian  Vitamin  E  dan Asam  Rosmarinat  menurunkan  ekspresi  NFKb  p-65 dengan  hasil  Kelompok  Asam  Rosmarinat  lebih rendah dari pada Kelompok Vitamin E
Pada  uji Shapiro-Wilk yang  diperoleh  bahwa  data ekspresi  NFKb  p-65  p  =  0,556,  sehingga  dapat dikatakan  data  terdistribusi  normal.  Hasil  uji Levene didapatkan nilai p = 0,115 sehingga dapat dikatakan data homogen. Dengan demikian maka analisis data dapat  dilakukan  dengan  menggunakan  uji  One-way ANOVA. Berdasarkan hasil uji One-way ANOVA , data ekspresi  NFKb  p-65  diperoleh  nilai  Sig  atau  p-value sebesar  p  =  0,00,  sehingga  didapatkan  kesimpulan ada  berbeda  bermakna  dari  ekspresi  NFKb  p-65 glomelurus  ginjal  antara  kelompok  kontrol  dengan kelompok  perlakuan.  Berdasarkan  output  uji  Post Hoc  diperoleh  data  yang  dapat  disimpulkan  bahwa: antara kelompok kontrol negatif dan positif terdapat perbedaan  signifikan  (p=0,000),  kelompok  kontrol postif  dengan  perlakuan  Vitamin  E  terdapat perbedaan  signifikan  (p=0,022),  kelompok  kontrol
positif  dengan  perlakuan  AR  terdapat  perbedaan signifikan  (p=0,001),  dan  kelompok  perlakuan Vitamin  E  dengan  perlakuan  AR  tidak  terdapat perbedaan signifikan (p=0,061).

## Pembahasan
Berdasarkan  Tabel  1.  dan  Gambar  2.  menunjukkan bahwa  rata-  rataekspresi  NFKb  p-65  tikus  wistar pada glomelurus tikus wistar kelompok normal (KN) adalah  3,933  ±  0,251.  Adapun  tikus  kelompok  DM tanpa perlakuan (KP) mengalami peningkatan secara signifikan  dengan  rata-rata  ekspresi  NFKb  p-65 sebesar  16,15  ±  2,76  sehingga  kadar  kelompok  ini menjadi meningkat signifikan dibandingkan kelompok normal (p = 0,000). Hasil ini sesuai dengan penelitian  Iwamoto  (2005)  membuktikan  bahwa terjadi  peningkatan  ekspresi  NFKb  p-65  pada  ginjal tikus  DM  tipe  2.  Hal  ini  disebabkan  oleh  keadaan hiperglikemi  mampu  meningkatkan  kadar  radikal bebas  di  dalam  tubuh  yang  nantinya  mampu menyebabkan terjadinya stress oksidative. Hiperglikemi  menginduksi  jalur  nonenzimatis,  jalur enzimatis  dan  jalur  mitokondria.  Pada  jalur enzimatis  stress  oksidative  berasal  dari  enzimatis glukosa.  Glukosa  mengalami  autoksidasi  dan menghasilkan –OH. Selain itu, glukosa juga bereaksi dengan  protein  nonenzimatik  yang  menghasilkan produk  Amadorin  atau  prekursor  AGEs  ( advance glytation  end-products )  yang  selanjutnya  diikuti pembentukan AGEs. Pada jalur sorbitol hiperglikemi merangksang  pelepasan  superoksida  di  tingkat
E K S
P R
E S I (AU) 20 18 16 14 12 10 8 6 4 2 0 b c c a
Kontrol Negatif Kontrol Positif Kelompok Vitamin E
Kelompok Asam Rosmarinat PERLAKUAN
mitokondria.  Peningkatan  ketiga  jalur  akibat hiperglikemi  tersebut  menyebabkan  umpan  balik positif  sintesis  ROS  (-O2,H2O2,-OH).  Sehingga membuat  kadar  ROS  semakin  tinggi,  hal  ini menyebabkan  terjadinya stress  oxidative.  Stress oxidative ini  memicu  terjadinya  kerusakan  DNA, kerusakan  membran  sel  yang  menjadi  peroksidasi lipid.  Peroksidasi  lipid  akan  mengaktivasi  dari  NFKb. Keadaan  stress  oxidative  akibat  hiperglikemi tersebut,  tidak  diimbangi  dengan  peningkatan  anti oksidan  yang  melindungi  tubuh  dari  radikal  bebas sehingga dalam diabetes mellitus terjadi peningkatan  aktivasi  NFKb  p-65  yang  signifikan. (Iwamoto et al, 2005; Hendromartono, 2001)
Pengukuran    ekspresi    NFKb    p-65  tikus  wistar menunjukkan  bahwa  kelompok  yang  diberikan Vitamin  E  dengan  dosis  400  mg/Kg  BB  per  hari menunjukkan  penurunan  signifikan  aktivasi  NFKb  p- 65  glomelurus  menjadi  11,6  dibandingkan  dengan kelompok  KP.  Dosis  ini  mengacu  pada  penelitian Setiawan et  al .  (2014)  disebutkan  vitamin  E  dengan dosis  400  mg/kgBB  mampu  menurunkan  level kreatinin  sehingga  dapat  menjadi  salah  satu alternatif terapi fibrosis ginjal.Hasil dari penelitian ini sesuai  dengan  penelitan  Palsamy  (2011)  yang  juga mengalami  penurunan  ekspresi  NFKb  p-65  pada pemberian Vitamin E terhadap ginjal tikus DM tipe 2. Hal  ini  disebabkan  karena  Vitamin  E  bertindak sebagai antioksidan dengan memutus rantai oksidan sehingga terbentuknya molekul peroksil radikal, lalu dapat  dihambat  sebagai peroxyl  scavenger dan ikatan  molekul  ROS  dengan  gugus  tocopheroxyl. Dengan demikian kerusakansel membran peroksidase  lipid  dapat  dihambat  yang  akan menurunkan  aktivasi  dari  NFKb  p-65. (Maslachah  et al, 2008; Palsamy et al, 2011)
Hasil  penelitian  pada  kelompok  yang  dilakukan pemberian Asam Rosmarinat dengan dosis 75mg/Kg BB  per  hari  menunjukkan  terjadinya  penurunan signifikan  aktivasi  NFKb  p-65  glomelurus  menjadi 8,25 dibandingkan dengan kelompok  KP. Dosis yang digunakan  pada  penelitian  ini  mengacu  pada penelitian  yang  dilakukan  oleh  Tavafi  tahun  2016 yang  menggunakan  Asam  Rosmarinat  dengan  dosis 50mg/kgBB,  100mg/kgBB,  dan  200mg/kgBB  mampu memberikan  perbaikan  pada  iskemik  renal.  Peneliti memutuskan  untuk  menggunakan  dosis  75mg/kgBB per  hari  karena  letaknya  di  range  penelitian sebelumnya.Hasil  penelitian  ini  sesuai  dengan penelitan Tavafi (2011) yang membuktikan penurunan  NFKb  p-65  pada  tikus  Diabetes  yang diberikan  AR.  Hal  ini  kemungkinan  disebabkan
karena  Asam  Rosmarinat  bertindak  sebagai antioksidan dengan menghambat pelepasan superoksida  di  mitokondria.  Asam  Rosmarinat  juga bertindak  sebagai peroxynitrite  scavenger  (ONOO - ) yang  merupakan  salah  satu  bentuk  ROS  sehingga Stress  oxidative akan  berkurang  dan  menyebabkan kerusakan  peroksidase  lipid  dapat  dihambat  yang akan menurunkan aktivasi dari NFKb p-65. (Tavafi et al, 2011)
Pemberian  Vitamin  E  dan  Asam  Rosmarinat  (AR) mampu  menurunkan  aktivasi  NFKb  p-65  karena keduanya memiliki aktifasi sebagai antioksidan yang bekerja  menghambat  peroksidase lipid  dan bertindak  sebagai peroxyl  radical  scavenger .  Pada hasil penelitian kelompok yang dilakukan pemberian Asam  Rosmarinat  (AR)  75mg/kgBB  per  hari menurunkan  aktivasi  NFKb  p-65  lebih  baik  namun tidak  signifikan  dibandingkan  kelompok  perlakuan yang  diberikan  Vitamin  E  400  mg/KgBB.Asam Rosmarinat di dalam penelitian yang dilakukan oleh Rocha et  al (2015)  mengatakan  bahwa  AR  dapat menghambat efek inflamasi yang terjadi dikarenakan  memiliki  sifat  antioksidan  yang  cukup tinggi.  Asam  Rosmarinat  ternyata  juga  dapat mengahambat  ekspresi  NFkb  secara  langusng sehingga  mencegah  sitokin  pro  inflamasi  sistemik agar  tidak  terjadinya  edema.  Edema  ini  terjadi dikarenakan perubahan pada permeabilitas vaskular dan  akumulasi  dari  polimononuclear  leukosit  dan netrofil. (Maslachah  et  al,  2008;  Tavafi  et  al,  2011; Rocha et al, 2015)
Manfaat  dari  AR  yang  memiliki  sifat  sebagai  anti oksidan  dan  juga  sebagai  anti  inflamasi  ini  yang menyebabkan  AR  memiliki  potensi  menurunkan aktivasi  NFKb  p-65  lebih  baik  (48,9  %)  namun  tidak signifikan  dibandingkan  Vitamin  E  (28,17%). Sehingga  dapat  disimpulkan  bahwa  AR  memiliki potensi yang lebih baik dibandingkan Vitamin E dan dapat menjadi salah satu alternatif antioksidan yang poten  baik  segi  preventif  dan  progresivitas  pasien diabetes mellitus menjadi nefropati diabetik.

## Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat  disimpulkan bahwa  hepotesis  penelitian  terbukti,  yaitu:  adanya perbedaan yang bermakna dari pemberian Vitamin E 400 mg/KgBB per hari terhadap  ekspresi NFKb p-65 glomelurus  ginjal  tikus  Diabetes  Tipe  2.  Adanya perbedaan  yang  bermakna  dari  pemberian  Asam Rosmarinat  75mg/KgBB  per  hari  terhadap  ekspresi
NFKb  p-65  glomelurus  ginjal  tikus  Diabetes  Tipe  2. Asam  Rosmarinat  lebih  baik  dalam  menurunkan aktivasi  NFKb  p-65  pada  glomelurus  ginjal  tikus Diabetes  Tipe  2  dibandingkan  Vitamin  E,  namun tidak berbeda bermakna.

## Daftar Pustaka
Adam,  JMF.  2005. Komplikasi  Kronik  Diabetik Masalah Utama Penderita Diabetes dan Upaya
Pencegahan . Tersedia dari URL: http://www.akademik.unsri.ac.id/download/jo urnal/files/medhas/9- John%20Adam.pdf.
Diakses pada tanggal 3 September 2017.
Bender,  DA.  2003.  Nutritional  Biochemistry  of  The Vitamins,  Second  Edition.  New  York.  Cambrige University Press: 352- 354
Corebima, BIRV., Subandiyah, K., and Fitri, LE. 2009. Expression and Activation of NF-kB p65 Subunit of  Mononuclear  Cell  at  Steroid  Resistance Nephrotic Syndrom in Childhood Patient. Jurnal Kedokteran Brawijaya, Vol. 25(3): 133-137.
Desminarti, Susi., Rimbawan., Faisal, A., dan Adi, W.
2012.  Efek  Bubuk  Tempe  Instan  Terhadap Kadar  Malonaldehid  (MDA)  Serum  Tikus Hiperglikemik.  Jurnal  Kedokteran  Hewan.  Vol. 6(2): 72- 74
Fatimah,  RN.  2015.  Diabetes  Mellitus  Tipe  2. Fakultas  Kedokteran  Universitas  Lampung ,  4, pp.93-101.
Forbes, J.M., Coughan, M.T., and Cooper, M.E. 2008. Oxydative  stress  a  a  major  culprit  in  kidney disease in diabetes. Diabetes , 57; 1446-1454.
Hendromartono.  2001.  Peran  radikal  bebas  dan infeksi  terhadap  komplikasi  vaskuler  diabetes mellitus. Dalam: Indonesian Journal  of Tropical Medicine (Majalah
Kedokteran Tropis Indonesia), 1(12): 41.
Iwamoto,  Masateru.,  Mizuiri,  S.,  Arita,  M.,  and
Hemmi,  H . 2005.  Nuclear  Factor-kB  Activation in Diabetic Rat Kidney:Evidence for Involvement  of  P-  Selectin  in  Diabetc Nephropathy. Tohoku J Exp,Med: 163-171.
Maslachah,  L.,  Sugihartuti,  R.,  dan  Kurniasanti,  R.
2008.  Hambatan  Produksi  Reactive  Oxygen Species Radikal Superoksida (O2) oleh Antioksidan  Vitamin  E  (α-  tocopherol)  pada Tikus Putih ( Rattus norvegicus ) yang Menerima
Stressor  Renjatan  Listrik.  Media  Kedokteran Hewan Vol 24: 21-26.
Mutiarani, AL. 2017. Pengaruh Pemberian Vitamin C,
Vitamin  E,  dan  Kromium  (CR3+)  Terhadap Kadar  Insulin  Tikus  Wistar  yang  Diinduksi Aloksan. Medical  and  Health  Science  Journal, Vol 1:14- 21.
Palsamy,  P.,  and  Subramanian,  S.  2011. Resveratrol Protect Diabetic Kidney by Attenuating
Hyperglycemia-  mediated Oxidative stress and Renal  Inflammatory  Cytokines  via  Nrf2-Keap1
Signaling .  Biochimica  et  Biophyscia  Acta  1812: 719-731.
PERKENI.  2011. Konsensus  pengelolaan  diabetes mellitus tipe 2 di Indonesia 2011. Semarang: PB PERKENI.
Pusat  Data  dan  Informasi  Kementrian  Kesehatan  RI.
2014. Situasi  dan  Analisis  Diabetes. Tersedia dari  URL:  http://www.depkes.go.id  .  Diakses pada tanggal 3 September 2017.
Rocha J., Figueira,M.E., Barateiro, A., Fernandes, A.,
Brites,  D.,  and  Bronze,  R., et  al .  2015. Anti- inflammatory Effect of Rosmarinic Acid and an Extract  of Rosmarinus officinalis in  Rat Models of  Local  and  Systemic  Inflamation .  Basic  & Clinical  Pharmacology&  Toxicology  Vol  116: 398-413.
Schellenberg, ES ., Dryden, DM., Vandermeer, B., Ha, C.,  and  Korownyk,  C. Lifestyle Interventions  for Patients With and at Risk for Type 2 Diabetes: A Systematic  Review  and  Meta-  analysis .  Ann Intern Med. 2013 ;159: 543–551.
Suarsana,  I.N.,  Iwan,  H.U.,  Agung,  I.G.,  dan Suartini,A.  2010.  Sintesis  Glikogen  Hati  dan Otot  pada  Tikus  Diabetes  yang  Diberi  Ekstrak Tempe. Jurnal Veteriner Vol 11(3): 190-195.
Tavafi, M. 2013. Complexity of diabetic nephropathy pathogenesis  and  design  of  invesigations. J Renal Inj Prev ;.2:59-62.
Tavafi,  M.,  Ahmadvand,  H.,  Khalatbari,  A.,  and
Tamjidipoor,  A.  2011. Rosmarinic  Acid Ameliorates Diabetic Nephropathy in Uninephrectomozed  Diabetic  Rats .  Iranian
Journal  of  Basic  Medical  Science  Vol  14  No  3: 275-283.