## Pengaruh Bahan Organik Nabati dan Hewani terhadap
Pertumbuhan Protocorm Like Bodies Phalaenopsis amabilis (L.) Blume
The Effect of Plant and Animal Organic Compounds on Protocorm Like Bodies Growth of Phalaenopsis amabilis (L.) Blume
Yustia Yulianti 1 , Syarifah Iis Aisyah 2 , dan Dewi Sukma 2*
Diterima 10 Agustus 2016/Disetujui 9 November 2016

## ABSTRACT
Phalaenopsis orchid is among the popular ornamental plants in Orchidaceae family. Clonal propagation of this orchid is usually performed through protocorm like bodies (plbs) multiplication in  tissue  culture  medium.  The  objective  of  this  experiment  was  to  determine  the  effect  of  the combination  of  phyto-organic  substances  (bananas,  potatoes,  sweet  potatoes  extract)  and  fish emulsion  on  in  vitro  growth,  multiplication  of  plbs  and  plantlet  regeneration  of  Phalaenopsis amabilis. This experiment was arranged in completely randomized design with two factors. The first factor was  phyto-organic  substances which consisted of bananas, potatoes, and sweet potatoes extract (50 g L -1 ) and the second one was fish emulsion with four concentration levels (0 ml L -1 , 2 ml L -1 , 4 ml  L -1 ,  and  6  ml  L -1 ).  Basic  (control)  medium  used  NPK  fertilizer  (2  g  L -1 )  with  addition  of  MS vitamins,  myo-inositol,  1.5%  of  coconut  water,  and  2  g  L -1 of  active  charcoal.  The  results  showed that  the  highest  survival  rate  (>90%)  and  multiplication  (>70%)  of  plbs  was  found  on  control medium with addition of 2 ml L -1 of fish emulsion or banana or potato extract without fish emulsion. The best plantlet morphogenesis as indicated by leaf and root number, was resulted on medium with addition  of  potato  extract  without  fish  emulsion  which  produced  3.2  leaves  and  2.2  roots  per plantlets.  The  best  plantlet  morphogenesis  as  indicated  by  leaf  and  root  number,  was  resulted  on medium  with  addition  of  potato  extract  without  fish  emulsion  which  produced  3.2  leaves  and  2.2 roots per plantlets. The result of this experiment suggested that basic medium with addition of 2 ml L -1 of  fish  emulsion,  banana  or  potato  extract  was  appropriate  for  plbs  growth  and  multiplication while basic medium with addition of potato extract without fish emulsion for plantlet regeneration.
Keywords: bananas, fish emulsion, potatos, protocorm like bodies (plbs), sweet potatoes

## ABSTRAK
Anggrek  Phalaenopsis  merupakan  salah  satu  tanaman  hias  paling  populer  dalam  famili Orchidaceae. Perbanyak klonal anggrek ini biasanya dilakukan melalui  multiplikasi  protocorm like bodies ( plbs ) dalam kultur in vitro . Penelitian ini bertujuan untuk  mengetahui  pengaruh  kombinasi bahan  organik  nabati  (ekstrak  pisang,  kentang,  ubi  jalar)  dan  emulsi  ikan  terhadap  pertumbuhan, multiplikasi plbs dan regenerasi planlet Phalaenopsis amabilis . Percobaan disusun dalam rancangan acak lengkap dengan dua faktor perlakuan. Faktor pertama adalah bahan organik nabati terdiri atas ekstrak pisang, kentang, dan ubi jalar sebanyak 50 g L -1 dan faktor kedua adalah emulsi ikan dengan empat konsentrasi yaitu 0, 2, 4 atau 6 ml L -1 . Media dasar (kontrol) menggunakan pupuk NPK (2 g L -1 ) ditambah dengan vitamin dan myoinositol dari  media Murashige  dan  Skoog (MS), 15% air kelapa dan  2  g  L -1 arang  aktif.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  keberhasilan  hidup  tertinggi  (>90%) dan  multiplikasi plbs tertinggi  (sekitar  70%)  ditemukan  pada  media  kontrol  yang  ditambahkan emulsi ikan 2 ml L -1 atau ditambahkan ekstrak pisang atau kentang tanpa penambahan emulsi ikan. Morfogenesis plbs menjadi planlet yang terbaik sebagaimana ditunjukkan oleh jumlah daun dan akar
1 Mahasiswa Program Sarjana Departemen Agronomi dan Hortikultura, Fakultas Pertanian, Institut Pertanian Bogor
2 Staf  Pengajar Departemen  Agronomi  dan  Hortikultura,  Fakultas  Pertanian,  Institut  Pertanian  Bogor  (Bogor  Agricultural University)
Jl. Meranti, Kampus IPB Darmaga, Bogor 16680, Indonesia Telp.& Faks. 62-251-8629353 Email: dsukma70@gmail.com (*penulis korespondensi)
terbanyak  dihasilkan  pada  perlakuan  ekstrak  kentang  tanpa  emulsi  ikan  dengan  jumlah  daun  dan akar yang dihasilkan adalah sebanyak 3.2 helai daun dan 2.2 akar. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa media dasar yang ditambah dengan 2 ml L -1 emulsi ikan, ekstrak pisang atau kentang adalah sangat  sesuai  untuk  pertumbuhan  dan  multiplikasi plbs sementara  media  dasar  yang  ditambah ekstrak kentang tanpa emulsi ikan terbaik untuk regenerasi planlet.
Kata kunci: emulsi ikan, kentang, pisang, protocorm like bodies ( plbs ), ubi jalar

## PENDAHULUAN
Anggrek  merupakan  salah  satu  jenis tanaman  hias  yang  banyak  diminati  dan memiliki  nilai  ekonomis  tinggi.  Salah  satu anggrek  penting  di  Indonesia  adalah  genus Phalaenopsis. Anggrek  bulan  ( Phalaenopsis amabilis )  merupakan  salah  satu  anggrek kebanggaan  nasional.  Anggrek Phalaenopsis amabilis merupakan salah satu bunga nasional Indonesia  dengan  sebutan Puspa  Pesona . Anggrek  tersebut  memiliki  ciri  khas  bunga berwarna  putih  bersih  dengan  lidah  kuning keemasan  (Rukmana,  2000).  Perbanyakan anggrek  monopodial  seperti Phalaenopsis secara konvensional dapat dilakukan menggunakan  keiki  yang  muncul  dari  tangkai bunga.  Perbanyakan  secara  konvensional sangat lambat prosesnya, sehingga tidak dapat diandalkan  untuk  memproduksi  bibit  secara massal  jika  dibutuhkan  klon  anggrek  tertentu dalam  jumlah  besar  (Yusnita et  al. ,  2007). Salah  satu  teknik  yang  bisa  dilakukan  adalah dengan  teknik  kultur in  vitro .  Kultur in  vitro merupakan salah satu metode untuk melakukan perbanyakan tanaman pada kondisi yang  aseptik.  Induksi  jumlah protocorm  like bodies (plbs) dengan menggunakan protocorm anggrek  hasil  silangan  yang  dikecambahkan merupakan salah satu cara dalam teknik kultur jaringan  tanaman  yang  dilakukan  untuk memperbanyak beberapa jenis anggrek Phalaenopsis (Nazi,  2014). Plbs merupakan pertumbuhan lebih lanjut dari embrio anggrek. Menurut  Yusnita et  al. (2007), plbs yang terbentuk  mula-mula  berukuran  kecil  (1-2 mm)  berbentuk  globular  dan  berwarna  hijau muda.  Pada  tahap  perkembangan  lebih  lanjut, plbs akan tumbuh planlet yang lengkap dengan daun dan akar.
Faktor-faktor yang mempengaruhi pertumbuhan  dan  perkembangan  sel  pada kultur in  vitro diantaranya  sumber  eksplan, media,  hormon,  zat  pengatur  tumbuh  (ZPT), dan  lingkungan  fisik  kultur  (Sandra,  2012).
Media kultur yang baik tidak hanya mendukung  kehidupan  jaringan  tapi  aktif merangsang  pertumbuhan  dan  proliferasi  sel secara in  vitro sehingga  tidak  hanya  dapat menunjang  eksplan  tetapi  juga  meningkatkan pertumbuhannya  secara  optimal  (Semiarti et al., 2010).  Jenis  media  dan  kandungan  unsur hara  yang  digunakan  sangat  berpengaruh terhadap  kecepatan  pertumbuhan  tanaman (Niedz  dan  Evans,  2007).  Salah  satu komponen yang umumnya ditambahkan dalam media kultur yaitu bahan organik. Berdasarkan beberapa  penelitian  sebelumnya  seperti  yang dilakukan  oleh  Agriani  (2010)  dan  Dwiarum (2007),  modifikasi  media  kultur  dengan penambahan bahan organik mampu meningkatkan  viabilitas  anggrek.  Berdasarkan penelitian  Putri  (2015),  selain  penggunaan media  dasar  yang  sesuai,  bahan  organik tertentu  juga  dapat  memacu  pertumbuhan, perkembangan, dan ketahanan tanaman terhadap penyakit.
Menurut  Kasutjianingati  dan  Irawan
(2013), penambahan BAP 2 mg L -1 , air kelapa
150 ml L -1 dan ekstrak pisang ambon 50 g L -1 memberikan pengaruh sama pada penambahan jumlah  tunas,  rata-rata  2  tunas  anggrek  bulan Phalaenopsis  amabilis .  Selain  itu,  menurut Sallolo et  al .  (2012),  penambahan  ekstrak pisang  memberikan  pengaruh  yang  nyata hampir  terhadap  seluruh  peubah  pengamatan planlet  anggrek Dendrobium  Candy  Stripe Lasianthera umur 16 MST yaitu tinggi planlet, luas  daun,  jumlah  akar,  panjang  akar,  jumlah anakan, bobot basah dan bobot kering, kecuali terhadap jumlah daun berpengaruh tidak nyata. Agriani  (2010)  menyatakan  bahwa  perlakuan ekstrak  ubi  jalar  300  g  L -1 memberikan  hasil optimal  terhadap  saat  muncul  akar,  jumlah daun,  dan  jumlah  akar  sedangkan  perlakuan emulsi ikan 2 ml L -1 memberikan hasil optimal terhadap  saat  muncul  akar  serta  perlakuan emulsi ikan 4 ml L -1 memberikan hasil optimal terhadap  tinggi  plantlet,  jumlah  daun,  dan panjang  akar plbs anggrek  persilangan
Phalaenopsis Pinlong  Cinderella x  Vanda tricolor . Raynalta dan Sukma (2013) melaporkan  bahwa  keberhasilan  hidup plbs
Phalaenopsis  amabilis paling  tinggi  diperoleh dalam  media dengan media  dasar  pupuk NPK (20:20:20)  yang  ditambahkan  air  kelapa  15%. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui pengaruh  kombinasi  bahan organik  nabati  dan hewani terhadap pertumbuhan dan multiplikasi plbs serta  regenerasi  planlet Phalaenopsis amabilis.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  dilaksanakan  pada  bulan Maret  sampai  Juli  2016,  bertempat  di Laboratorium  Kultur  Jaringan,  Departemen
Agronomi dan Hortikultura, Fakultas
Pertanian,  Institut  Pertanian  Bogor.  Bahan tanaman  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah clump  plbs anggrek Phalaenopsis amabilis yang diperoleh dari semaian biji yang sebelumnya sudah dikulturkan selama  8 bulan pada  setengah  konsentrasi  media  Murashige dan  Skoog  (1962)  (MS1/2) yang  ditambahkan 15% air kelapa.
Rancangan  percobaan  yang  digunakan pada percobaan  ini adalah  rancangan  faktorial dengan  dua  faktor  yang  disusun  dalam Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL).  Faktor pertama  adalah  perlakuan  bahan  organik tambahan  disamping  air  kelapa  150  ml  L -1 yang  sudah  ada  di  media  dasar  yaitu  tanpa penambahan  bahan  organik,  penambahan ekstrak  pisang  ambon,  ekstrak  kentang  dan ekstrak  ubi  jalar  dengan  konsentrasi  masing- masing  50  g  L -1 . Faktor  kedua  adalah  emulsi ikan  (merk  Liquinox)  dengan  4  taraf konsentrasi  yaitu  tanpa  emulsi  ikan,  emulsi ikan 2, 4 atau 6 ml  L -1 .  Kombinasi dua faktor tersebut menghasilkan 16 kombinasi perlakuan yang  masing-masing  diulang  sebanyak  3  kali, sehingga terdapat  48  satuan percobaan. Setiap satuan percobaan terdiri atas 5 botol dan setiap botol terdiri dari 5 plbs , sehingga total terdapat 1200 plbs yang  digunakan  dalam  percobaan.
Peubah  pertumbuhan  yang  diamati  adalah persentase plbs yang  hidup,  persentase kontaminasi,  persentase plbs bermultiplikasi, jumlah  daun,  dan  jumlah  akar  planlet. Pengamatan  dilakukan  dua  minggu  sekali. Data  yang  diperoleh  dari  hasil  pengamatan dianalisis dengan uji sidik ragam pada taraf α=
5%  menggunakan software STAR  2.0.1  dan SAS  9.1.3  portable.  Jika  hasil  uji  sidik  ragam yang  berpengaruh  nyata,  maka  dilakukan  uji lanjut dengan uji Duncan Multiple Range Test (DMRT).
Pembuatan  media  dasar  dilakukan dengan  melarutkan  2  g  L -1 pupuk  lengkap (N:P:K = 20:20:20) ditambahkan 30 g L -1 gula pasir, 150 ml L -1 air kelapa, dan 2 g L -1 arang aktif.  Ekstrak  bahan  organik  nabati  pisang, kentang dan ubi jalar sebelum ditambahkan ke media  terlebih  dahulu  diblender  sampai  halus dan disaring  lalu  ditambahkan ke media dasar sesuai perlakuan. Emulsi ikan ditambahkan ke dalam  larutan  media  sesuai  perlakuan. Selanjutnya  larutan  media  diletakkan  pada magnetic  stirrer agar  larutan  homogen  dan diukur  pH  hingga  mencapai  5.8,  apabila  pH lebih  kecil  dari  5.8  dilakukan  penambahan KOH  1  N  atau  dilakukan  penambahan  HCl  1 N  jika  pH  diatas  5.8.  Larutan  dimasukkan  ke dalam panci dan ditambahkan agar sebanyak 7 g  L -1 ,  lalu  diaduk  hingga  mendidih,  lalu dituang kedalam botol kultur sebanyak 25 ml. Botol  kultur  ditutup  dengan  plastik  dan  diikat dengan  karet  gelang  serta  diberi  label.  Botol yang  telah  terisi  media  disterilisasi  dengan autoklaf  pada  suhu  121 0 C  dengan  tekanan 17.5  psi  selama  20  menit.  Penanaman dilakukan  di  dalam  laminar  yang  telah disterilkan  dengan  alkohol  70%. Clump  plbs disubkultur  dari  media  sebelumnya  ke  media perlakuan. Kultur plbs diinkubasi di laboratorium  yang  diberi  cahaya  dari  lampu fluorescent dengan  intensitas  cahaya  1000- 2000  lux.  Ruang  kultur  dilengkapi  dengan pendingin  ruangan  yang  suhunya  berkisar  24- 30 0 C.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Media dalam kultur in vitro merupakan salah  satu  faktor  penentu  keberhasilan perbanyakan  dan  perkembangan  tanaman selain  faktor  eksplan  dan  lingkungan  tumbuh (Sallolo et  al .,  2012).  Hal  tersebut  juga didukung  laporan  Semiarti et  al. (2010) dimana  medium  kultur  yang  baik  tidak  hanya mendukung  kehidupan  jaringan  tapi  aktif merangsang  pertumbuhan  dan  proliferasi secara in  vitro sehingga  tidak  hanya  dapat menunjang  eksplan  tetapi  juga  meningkatkan pertumbuhannya  secara  optimal.  Jenis  media
dan  kandungan  unsur  hara  yang  digunakan sangat berpengaruh terhadap kecepatan pertumbuhan tanaman (Niedz dan Evans, 2007).
Perbanyakan anggrek Phalaenopsis umumnya
dilakukan dengan cara
perkecambahan  biji  secara in  vitro ,  dimana benih  anggrek  yang  ditanam  pada  media membentuk plbs, selanjutnya plbs akan beregenerasi membentuk planlet atau kemungkinan  juga  membentuk plbs sekunder. Pertumbuhan plbs menjadi  planlet  atau membentuk plbs sekunder  dipengaruhi  oleh genetik  dan  komposisi  media  (Andini,  2013). Pada  percobaan  ini  perkembangan plbs yang dikulturkan menunjukkan terjadinya multiplikasi pada  semua  media  perlakuan.  Multiplikasi terjadi  selama  6-10  MST  dengan  munculnya bulatan-bulatan  yang  bergerombol  di  sekitar plbs induk.  Perkembangan  selanjutnya  yaitu terbentuknya  daun  pada  saat plbs berumur  4 MST dan terbentuk akar pada umur 8 MST. Berdasarkan  hasil  rekapitulasi  sidik ragam,  faktor  perlakuan  bahan  organik  nabati memiliki pengaruh yang sangat nyata terhadap semua  peubah  yang  diamati  yaitu  persentase hidup, persentase kontaminasi, persentase plbs bermultiplikasi, jumlah daun, dan jumlah akar planlet anggrek Phalaenopsis amabilis . Sementara  itu,  perlakuan  bahan  organik hewani  juga  memiliki  pengaruh  yang  nyata hampir  terhadap  semua  peubah  kecuali persentase plbs bermultipkasi dan jumlah akar pada  saat  8  MST.  Interaksi  kedua  faktor perlakuan  juga  berpengaruh  sangat  nyata hampir  pada  semua  peubah  yang  diamati meliputi persentase plbs hidup¸persentase plbs bermultiplikasi, jumlah daun dan jumlah akar.

## Persentase Hidup
Kategori plbs yang  hidup  teramati  dari plbs yang  masih  berwarna  hijau.  Persentase hidup plbs  Phalaenopsis  amabilis seperti terlihat  pada  Tabel  1.  Persentase  hidup plbs pada beberapa perlakuan mengalami penurunan  pada  setiap  MST.  Persentase plbs hidup pada  4  MST  hampir  mencapai  100% pada semua kombinasi perlakuan, kecuali pada media perlakuan bahan organik ubi jalar. Pada 8  MST,  persentase  hidup plbs paling  tinggi adalah  pada  media  kontrol,  berbeda  nyata persentase  hidup plbs pada  media  dengan bahan  organik  ubi  jalar.  Penambahan  emulsi ikan  pada  media  kontrol  dan  media  dengan
penambahan  bahan  organik  ekstrak  kentang, tidak  meningkatkan  secara  nyata  persentase hidup plbs ,  sebaliknya  pada  media  dengan bahan organik ekstrak pisang, persentase hidup plbs menurun  secara  nyata  pada  penambahan emulsi  ikan  4  dan  6  ml  L -1 ,  dan  pada  media dengan penambahan ekstrak ubi jalar, persentase  hidup plbs menurun  pada  pada penambahan emulsi ikan 2, 4 dan 6 ml L -1 . Hal tersebut menunjukkan bahwa persentase hidup plbs pada  perlakuan  bahan  organik  ekstrak pisang  dan  ubi  jalar  cenderung  menurun  jika konsentrasi  emulsi  ikan  ditingkatkan.  Pola tersebut  terlihat  konsisten  pada  12  dan  16 MST. Persentase hidup plbs paling tinggi pada 18  MST  yaitu  hampir  mencapai  100% diperoleh  pada  kontrol  dengan  penambahan emulsi  ikan  2,  4  ataupun  6  ml  L -1 dan  media perlakuan  ekstrak  kentang  tanpa  emulsi  ikan maupun  dikombinasikan  dengan  emulsi  2  dan 4  ml  L -1 . Pemilihan media  yang sesuai untuk mendapatkan  persentase  hidup plbs yang paling  tinggi  juga  perlu  mempertimbangkan biaya  dan  kepraktisan  dalam  penyediaan media,  sehingga  dalam  percobaan  ini  media paling  sederhana  dan  mudah  dibuat  adalah media  dengan  penambahan  ekstrak  kentang tanpa  emulsi  ikan  atau  media  kontrol  dengan penambahan emulsi ikan 2 ml L -1 . Kematian  pada plbs terjadi  karena adanya  pelukaan  pada plbs yang  terjadi  pada saat  pemisahan plbs ke  media  perlakuan
(subkultur). Hal tersebut sesuai dengan penelitian Murdad et al. (2006) yang menyatakan bahwa plbs yang baru disubkultur ke media baru akan mengalami  pelukaan  yang  disebabkan  oleh proses pemisahan yang memiliki peran penting dalam  pembentukan plbs sekunder  melalui proliferasi.  Pelukaan  tersebut  dapat  mendorong multiplikasi  jumlah  yang  lebih  tinggi  dari jumlah plbs awal,  tetapi  juga  menyebabkan kematian  pada  beberapa plbs yang  terluka.
Gejala kematian plbs ditunjukkan oleh adanya pencoklatan ( browning ). Browning disebabkan adanya  pelukaan  ketika  pemisahan plbs sehingga  menghasilkan  fenol,  lalu  terjadi proses  oksidasi  fenol  membentuk  larutan berwarna  coklat  yang  disebut quinon yang bersifat  toksik,  yang  terakumulasi  dalam media  di  sekitar plbs sehingga  meracuni plbs (Syammiah,  2006).  Menurut  Syabana et  al.
(2015),  akumulasi  senyawa  fenolik  yang terkandung dalam tanaman kemudian teroksidasi akibat stres mekanik atau pelukaan
pada  eksplan.  Senyawa  fenol  dihasilkan  dari aktivitas  enzim  polifenol  eksidase  dan tirosinase.  Dalam  kondisi  oksidatif  akibat pelukaan,  enzim  tersebut  secara  alami  disintesis oleh  eksplan  untuk  mendorong  sintesis  fenol sebagai  bentuk  pertahanan  diri,  namun  jika senyawa  fenol  berlebihan  akan  bersifat  racun dan  dapat  merusak  jaringan  eksplan  dan akhirnya menyebabkan kematian pada eksplan.
Menurut  Murdad et  al .  (2006),  respon awal  pemisahan plbs adalah  produksi  eksudat fenolik  dan browning pada  medium  di  sekitar eksplan selama dua minggu pertama. Pengaruh negatif  senyawa  fenolik  dapat  dikurangi dengan  penambahan  arang  aktif  pada  media, sehingga  tidak  menghambat  pembengkakan bagian basal dari plbs untuk inisiasi plbs baru. Arang  aktif  secara  signifikan  juga  dapat meningkatkan  persen  planlet  hidup  seperti yang  dilaporkan  Oktafiani et  al. (2012), dimana  persentase  planlet  hidup Phalaenopsis bellina pertumbuhan  planlet  terbaik  diperoleh pada media Knudson PA 70% yang ditambahkan arang aktif. Hal ini menunjukkan bahwa  penambahan  arang  aktif  pada  media menyebabkan  planlet Phalaenopsis  bellina
dapat  berkembang  baik  sedangkan  planlet pada  media  yang  tidak  diberi  tambahan  arang aktif  menunjukkan  gejala  fenolik,  kematian jaringan sedikit demi sedikit dan akhirnya mati.

## Persentase Kontaminasi
Salah  satu  kendala yang  terjadi  dalam kultur in  vitro adalah  adanya  kontaminasi. Dalam  penelitian  ini,  rata-rata  persentase kontaminasi  yang  terjadi  dari  4  MST  hingga 16  MST  berkisar  antara  27-47%.  Pada  saat  4 MST  tercatat  kontaminasi  sebesar  27%  pada media perlakuan 50 g L -1 ekstrak ubi jalar yang dikombinasikan  dengan  4  ml  L -1 emulsi  ikan dan  40%  pada  media  perlakuan  50  g  L -1 ubi jalar  yang  dikombinasikan  dengan  6  ml  L -1 emulsi  ikan.  Kontaminasi  pada  saat  bulan pertama  termasuk  tinggi.  Kontaminasi  yang terjadi disebabkan oleh bakteri dan cendawan. Adanya  kontaminasi  tersebut  terjadi  karena beberapa hal seperti kondisi ruang kultur yang kurang  steril,  kesalahan  prosedur  yang dilakukan  pada  saat  penanaman,  dan  proses pencucian  alat  kultur  dan  botol  kultur  yang mungkin kurang bersih.
Tabel  1.  Rata-rata  persentase  hidup plbs anggrek Phalaenopsis  amabilis pada  perlakuan  bahan organik nabati dan hewani.
Perlakuan Emulsi Ikan (ml L -1 ) 0 2 4 6 ………………………….4 MST…………………………. Kontrol 99 a 100 a 100 a 100 a 50 g L -1 pisang 100 a 99 a 99 a 84 ab 50 g L -1 kentang 99 a 100 a 100 a 99 a 50 g L -1 ubi jalar 85 ab 100 a 71 bc 59 c ………………………….8 MST…………………………. Kontrol 95 ab 93 abc 100 a 83 abc 50 g L -1 pisang 91 abc 87 abc 69 cde 51 efg 50 g L -1 kentang 84 abc 91 abc 96 ab 73 bcde 50 g L -1 ubi jalar 77 abcd 56 def 32 g 37 fg ………………………….12 MST…………………………. Kontrol 85 abc 100 a 100 a 99 a 50 g L -1 pisang 100 a 100 a 100 a 37 e 50 g L -1 kentang 100 a 100 a 96 ab 77 c 50 g L -1 ubi jalar 87 abc 81 bc 53 d 59 d ………………………….16 MST…………………………. Kontrol 81 bc 92 ab 100 a 98 a 50 g L -1 pisang 97 ab 93 ab 75 c 32 e 50 g L -1 kentang 100 a 100 a 94 ab 75 c 50 g L -1 ubi jalar 85 abc 70 c 50 d 49 d
Keterangan: Angka-angka yang disertai huruf yang sama pada waktu pengamatan yang sama  pada baris atau kolom tidak berbeda nyata berdasarkan uji Duncan's Multiple Range Test (DMRT) pada taraf α= 5%.
Yusnita  (2007),  menyatakan  bahwa pencucian  botol  yang  kurang  sempurna menyebabkan kontaminasi bakteri atau cendawan  pada  dinding  botol  yang  biasanya terjadi  beberapa  minggu  atau  bulan  setelah media  disterilkan.  Kontaminasi  dapat  berasal dari  mikroba  bakteri  atau  spora  cendawan yang  masih  bertahan  hidup  yang  mungkin terdapat dalam esktrak bahan  organik, meskipun telah di sterilisasi dengan autoklaf.

## Persentase Multiplikasi
Multiplikasi  merupakan  kemampuan eksplan  untuk  memperbanyak  diri  (Nazi, 2014). Plbs Phalaenopsis  amabilis mulai terlihat  bermultiplikasi  pada  saat  6  MST hingga  10  MST.  Hasil  analisis  statistik menunjukkan  bahwa  faktor  bahan  organik nabati  dan  interaksinya  dengan  emulsi  ikan berpengaruh  sangat  nyata  terhadap  persentase plbs
Phalaenopsis
amabilis yang bermultiplikasi seperti disajikan pada Tabel 2.
Persentase plbs Phalaenopsis  amabilis yang  bermultiplikasi  secara  umum  meningkat dengan  bertambahnya  minggu  pengkulturan (6-10  MST),  dengan  persentase plbs yang bermultiplikasi berkisar 16-77%, seperti terlihat  pada  Tabel  2.  Ekstrak  bahan  organik nabati terlihat lebih berpengaruh dibandingkan emulsi ikan terhadap persentase plbs
bermultiplikasi. Persentase plbs yang bermultiplikasi  pada  media  kontrol  hingga  10 MST  hanya  sebesar  41%,  sedangkan  media dengan perlakuan ekstrak kentang atau ekstrak pisang lebih baik (berkisar 60-77%). Sebaliknya  pada  media  dengan  perlakuan ekstrak ubi jalar (berkisar 40-67%).
Penambahan  emulsi  ikan  pada  media  kontrol dan  perlakuan  bahan  organik  ekstrak  kentang sebaiknya tidak lebih dari 4 ml L -1 , pada media dengan  bahan  organik  esktrak  pisang  tidak lebih  dari  2  ml  L -1 ,  karena  pada  konsentrasi emulsi  ikan  yang  lebih  tinggi  persentase plbs bermultiplikasi  akan  menurun.  Sebaliknya, pada  media  perlakuan  ekstrak  ubi  jalar, peningkatan  konsentrasi  emulsi  ikan  hingga  6 ml  L -1 masih  dapat  meningkatkan  persentase plbs bermultiplikasi.  Hal  ini  kemungkinan disebabkan  emulsi  ikan  dapat  menyuplai nutrisi  terutama  yang  tidak  terkandung  dalam esktrak  ubi  jalar  yang  dapat  mendorong multiplikasi plbs .
Perbedaan bahan organik mempengaruhi pertumbuhan  dan  multiplikasi plbs karena perbedaan  kandungan  nutrisi,  gula,  asam amino, vitamin maupun sifat fisik media yang ditimbulkan  oleh  bahan  organik  tertentu. Ekstrak  kentang  dan  pisang  menunjukkan pengaruh  yang  lebih  baik  dibanding  ekstrak ubi jalar.
Tabel  2.  Rata-rata  persentase plbs bermultiplikasi  pada  anggrek Phalaenopsis  amabilis pada perlakuan bahan organik nabati dan hewani.
Perlakuan Emulsi Ikan (ml L -1 ) 0 2 4 6 …………………………….6 MST……………………………. Kontrol 28 cde 48 abc 47 abcd 49 abc 50 g L -1 pisang 55 ab 39 abcd 25 de 15 e 50 g L -1 kentang 61 a 56 ab 59 ab 56 ab 50 g L -1 ubi jalar 36 bcde 51 ab 28 cde 49 abc …………………………….8 MST……………………………. Kontrol 39 ef 67 abc 68 abc 59 abcde 50 g L -1 pisang 71 ab 49 bcdef 41 ef 16 g 50 g L -1 kentang 64 abcd 60 abcde 77 a 57 abcde 50 g L -1 ubi jalar 44 def 47 cdef 35 fg 67 abc …………………………….10 MST……………………………. Kontrol 41 ef 68 abc 73 ab 56 bcdef 50 g L -1 pisang 69 abc 63 abc 39 f 16 g 50 g L -1 kentang 68 abc 61 abcd 77 a 59 abcde 50 g L -1 ubi jalar 43 def 40 ef 53 cdef 67 abc
Keterangan: Angka-angka yang disertai huruf yang sama pada waktu pengamatan yang sama  pada baris atau kolom tidak berbeda nyata berdasarkan uji Duncan's Multiple Range Test (DMRT) pada taraf α= 5%.
Penelitian Chai et al. (2002)
menyatakan  bahwa  jumlah plbs baru  pada anggrek Phalaenopsis terbentuk  lebih  banyak pada  media  dengan  penambahan  100  g  L -1 ekstrak  kentang  dibandingkan  dengan  dua media lain yaitu penambahan 100 g L -1 ekstrak apel  dan  penambahan  50  g  L -1 ekstrak  apel  + 50  g  L -1 ekstrak  kentang.  Bahan  lain  yang berpengaruh  terhadap  multiplikasi plbs adalah arang aktif dan air kelapa pada media. Murdad et  al .  (2006)  menyatakan  bahwa  arang  aktif secara  signifikan  meningkatkan  persentase multiplikasi plbs .  Widiastoety et  al .  (2009) juga  menyatakan  bahwa  air  kelapa  dapat merangsang  pembelahan  sel  dan  menstimulir proses  diferensiasi,  serta  pembentukan plbs . Namun  dalam  penelitian  ini,  penambahan ekstrak kentang atau ubi jalar atau emulsi ikan 2-4  ml  L -1 dalam  media  kontrol  yang  sudah mengandung  air  kelapa  dapat  meningkatkan multiplikasi plbs.

## Jumlah Daun
Plbs akan  tumbuh  menjadi  planlet diawali  dengan  munculnya  daun  dan  diikuti akar.  Rata-rata  pertambahan  jumlah  daun dipengaruhi  oleh  perlakuan  bahan  organik nabati,  hewani,  dan  interaksi  antara  bahan organik  nabati  dan  hewani  (Tabel  3).  Pada  16 MST, perlakuan ekstrak kentang 50 g L -1 tanpa penambahan emulsi ikan menghasilkan jumlah daun  terbanyak  yaitu  3.16  helai,  sebaliknya jumlah daun terendah dihasilkan pada perlakuan  media  50  g  L -1 pisang  +  6  ml  L -1 emulsi ikan yaitu 1.27 daun. Jumlah daun pada media  kontrol  dapat  ditingkatkan  dengan penambahan  2  ml  L -1 emulsi  ikan,  sebaliknya pada media perlakuan ekstrak pisang, penambahan  emulsi  ikan  tidak  berpengaruh nyata  terhadap  jumlah  daun.  Pada  media perlakuan  esktrak  ubi  jalar,  perlakuan  emulsi ikan  cenderung  belum  konsisten  pengaruhnya terhadap jumlah daun planlet. Secara ekonomis,  media  perlakuan  ekstrak  kentang tanpa  emulsi  ikan  sudah  optimum  untuk mendapatkan jumlah daun terbanyak.
Tabel 3. Rata-rata jumlah daun planlet anggrek Phalaenopsis amabilis pada perlakuan bahan organik nabati dan hewani.
Perlakuan Emulsi Ikan (ml L -1 ) 0 2 4 6 ………………….Jumlah Daun (helai) pada 4 MST…………………. Kontrol 0.2 bcde 0.3 bcd 0.4 abc 0.2 bcde 50 g L -1 pisang 0.4 ab 0.5 a 0.2 def 0.0 f 50 g L -1 kentang 0.2 bcde 0.2 cdef 0.0 f 0.0 f 50 g L -1 ubi jalar 0.1 def 0.0 f 0.2 cdef 0.1 ef ………………….Jumlah Daun (helai) pada 8 MST…………………. Kontrol 0.7 cdef 0.9 bcd 0.8 cde 0.8 cdef 50 g L -1 pisang 1.1 b 1.1 bc 0.7 def 0.6 def 50 g L -1 kentang 1.5 a 1.0 bc 0.6 def 0.5 ef 50 g L -1 ubi jalar 0.7 def 0.1 g 0.7 cdef 0.4 fg ………………….Jumlah Daun (helai) pada 12 MST…………………. Kontrol 0.9 gh 1.5 bcd 1.2 cdefg 1.1 efg 50 g L -1 pisang 1.3 cdef 1.4 cde 0.7 h 0.7 h 50 g L -1 kentang 2.1 a 1.8 ab 1.6 bc 1.4 cde 50 g L -1 ubi jalar 1.1 defg 0.9 gh 1.3 cdef 1.0 fgh ………………….Jumlah Daun (helai) pada 16 MST…………………. Kontrol 1.6 fg 2.7 bc 1.9 ef 1.9 ef 50 g L -1 pisang 2.1 de 2.3 cde 1.6 fg 1.3 g 50 g L -1 kentang 3.2 a 2.8 ab 2.6 bcd 2.2 cde 50 g L -1 ubi jalar 2.0 ef 1.9 ef 2.4 bcde 1.9 ef
Keterangan: Angka-angka yang disertai huruf yang sama pada waktu pengamatan yang sama  pada baris atau kolom data interaksi tidak berbeda nyata berdasarkan uji Duncan's Multiple Range Test (DMRT) pada taraf α= 5%.
Perlakuan  media ekstrak kentang 50 g  L -1 tanpa  emulsi  ikan  menunjukkan  jumlah  daun terbanyak,  diduga  karena  peranan  dari  bahan organik  kentang  yang  ditambahkan  sehingga walaupun  tanpa  emulsi  ikan  tetapi  kebutuhan unsur-unsur  kemungkinan  telah  terpenuhi  dari penambahan  bahan  organik  kentang.  Hal tersebut  sesuai  dengan  penelitian  yang dilakukan  oleh  Silviasari  (2010),  rata-rata jumlah daun anggrek Dendrobium alice noda x Dendrobium  tomie terbanyak  dihasilkan  pada media  tanpa  penambahan  emulsi  ikan.  Selain itu,  hasil  penelitian  yang  dilakukan  oleh Syammiah (2006) menunjukkan bahwa penggunaan 15%  jus  kentang  pada  media  Knudson  C merupakan media tercepat untuk pertumbuhan plbs anggrek Dendrobium  Bertacong  Blue  x Dendrobium  undulatum dibandingkan  dengan penambahan 5% jus tomat dan 5% jus lidah buaya. Perlakuan  media  dengan  perlakuan ekstrak  ubi  jalar  memiliki  rata-rata  jumlah daun  terendah.  Hal  yang  serupa  dilaporkan oleh  Widiastoety  dan  Purbadi  (2003)  pada kultur anggrek Oncidium , dimana, penambahan  15.9  g  karbohidrat  yang  berasal dari  bubur  ubi  jalar  baik  varietas  berdaging putih, merah, maupun ungu yang mengandung gula berkisar antara 2.0-6.7% diduga menyebabkan  pertumbuhan  jumlah  dan  luas daun planlet terhambat. Penghambatan tersebut diduga  disebabkan  oleh  pengaruh  tekanan osmotik  akibat  penggunaan  sumber  karbohidrat dengan konsentrasi yang sangat tinggi.
Pada  Tabel  3  terlihat  bahwa  semakin tinggi  konsentrasi  emulsi  ikan  yang  diberikan maka  jumlah  daun  yang  dihasilkan  cenderung semakin  sedikit.  Hal  tersebut  diduga  terjadi karena  emulsi  ikan  menyumbang  unsur nitrogen  dan  thiamin.  Tiamin  selain  diperoleh dari  media  dasar  juga  terdapat  pada  bahan organik  nabati  seperti  pisang,  kentang,  ubi jalar,  emulsi  ikan,  dan  air  kelapa.  Menurut Widiastoety et al. (2009), terjadinya akumulasi thiamin menyebabkan proses proses pertumbuhan  dan  perkembangan  jaringan tanaman mengalami hambatan.

## Jumlah Akar
Akar  merupakan  bagian  terpenting  dari tanaman karena berkaitan dengan kelangsungan  hidup  tanaman.  Jumlah  akar pada  tanaman  mengindikasikan  seberapa  luas jangkauan  tanaman  dalam  menyerap  nutrisi
dan  unsur  hara.  Semakin  banyak  jumlah  akar maka  semakin  luas  jangkauan  tanaman tersebut dan semakin banyak hara yang diserap oleh  tanaman  (Silviasari,  2010).  Dalam penelitian  ini,  sampai  4  MST,  planlet  belum menghasilkan  akar  dan  akar  baru  mulai terbentuk pada saat plbs berumur 8 MST. Perlakuan  50  g  L -1 ekstrak  kentang tanpa  emulsi  ikan  menghasilkan  rata-rata jumlah  akar  terbanyak  dibandingkan  ekstrak pisang  ataupun  ubi  jalar  (Tabel  4).  Rata-rata jumlah  akar  pada  media  perlakuan  ekstrak kentang  tersebut  adalah  2.2  akar.  Rata-rata jumlah  akar  terendah  dihasilkan  pada  media kontrol  sebanyak  0.7  akar.  Perlakuan  ekstrak pisang ditambah 2 ml L -1 emulsi ikan memiliki pengaruh yang nyata lebih tinggi dibandingkan perlakuan  ekstrak  ubi  jalar  ditambah  2  ml  L -1 emulsi  ikan.  Penambahan  emulsi  ikan  hanya dimungkinkan  pada  konsentrasi  2  ml  L -1 , karena  peningkatan  konsentrasi  emulsi  ikan menjadi  4  atau  6  ml  L -1 cenderung  menekan jumlah  akar.  Menurut  Sallolo et  al. (2012), emulsi ikan selain mengandung unsur nitrogen (N)  dan  kalium  (K)  juga  mengandung  unsur fosfor  (P)  yang  penting  untuk  perakaran. Penambahan  arang  aktif  pada  media  juga mempengaruhi  pertumbuhan  akar.  Eymar et  al.
(2000)  mengamati  bahwa  penambahan  arang aktif meningkatkan dan mempertahankan tingkat pH selama kultur, meningkatkan serapan nitrogen, dan meningkatkan pertumbuhan dan aspek visual dari eksplan serta mengurangi efek penghambatan sitokinin eksogen pada pertumbuhan akar.
Berdasarkan  Tabel  4  terlihat  bahwa semakin  tinggi  konsentrasi  emulsi  ikan  yang diberikan  maka  jumlah  akar  yang  dihasilkan juga  cenderung  semakin  sedikit  pada  semua perlakuan  ekstrak  bahan  organik  nabati.  Hal tersebut  sesuai  dengan  penelitian  yang dilakukan  oleh  Silviasari  (2010)  yang  diduga terjadi karena kandungan asam amino triptofan pada  emulsi  ikan.  Asam  amino  ini  dapat membantu tanaman membentuk auksin endogen  sehingga  konsentrasi  auksin  semakin tinggi.  Konsentrasi  auksin  yang  tinggi  dapat menghambat  pembelahan  dan  regenerasi  sel tanaman.  Auksin  yang  terdapat  pada  emulsi ikan  adalah  IAA  ( Indole  acetic  acid ),  IAA terbentuk dari asam amino triptofan.
Konsentrasi IAA yang relatif tinggi pada akar, akan  menyebabkan  terhambatnya  perpanjangan akar (Zainal, 1994).
Tabel 4. Rata-rata jumlah akar planlet anggrek Phalaenopsis amabilis pada perlakuan bahan organik nabati dan hewani.
Perlakuan Emulsi Ikan (ml L -1 ) 0 2 4 6 ………………………Jumlah Akar pada 8 MST……………………… Kontrol 0.0 b 0.1 ab 0.0 b 0.0 b 50 g L -1 pisang 0.1 ab 0.0 b 0.2 a 0.0 b 50 g L -1 kentang 0.0 b 0.0 b 0.0 b 0.0 b 50 g L -1 ubi jalar 0.0 b 0.0 b 0.0 b 0.0 b ………………………Jumlah Akar pada 12 MST……………………… Kontrol 0.3 ef 0.6 bcd 0.4 cdef 0.4 cdef 50 g L -1 pisang 0.6 bcd 0.5 cde 0.2 ef 0.3 cdef 50 g L -1 kentang 1.3 a 1.0 b 0.7 bc 0.5 cde 50 g L -1 ubi jalar 0.3 ef 0.1 f 0.3 def 0.2 ef ………………………Jumlah Akar pada 16 MST……………………… Kontrol 0.7 f 1.4 bc 1.0 def 1.0 def 50 g L -1 pisang 1.4 bc 1.2 cde 0.8 ef 0.7 f 50 g L -1 kentang 2.2 a 1.6 b 1.4 bc 1.2 cd 50 g L -1 ubi jalar 0.9 def 0.8 f 1.0 def 0.8 ef
Keterangan: Angka-angka yang disertai huruf yang sama pada waktu pengamatan yang sama  pada baris atau kolom tidak berbeda nyata berdasarkan uji Duncan's Multiple Range Test (DMRT) pada taraf α= 5%.
Berdasarkan hasil penelitian ini, terlihat bahwa  bahan  organik  ekstrak  kentang  atau pisang  dan  emulsi  ikan  pada  konsentrasi tertentu berpengaruh baik terhadap pertumbuhan  dan  morfogenesis plbs. Bahan organik  tersebut  menyumbang  gula,  asam amino, unsur-unsur hara tanaman seperti N, P dan K dan senyawa organik kompleks lainnya. Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa peubah-peubah  yang  diamati  menunjukkan nilai tertinggi pada perlakuan media yang tidak selalu  sama.  Peubah  persentase  hidup plbs tertinggi  diperoleh  pada  media  dengan penambahan emulsi ikan 2, 4 ataupun 6 ml L -1 dan  media  perlakuan  ekstrak  kentang  atau pisang tanpa emulsi ikan maupun dikombinasikan dengan emulsi 2 atau 4 ml L -1 , dengan  persentase plbs hidup  di  media-media tersebut  di  atas  90%. Plbs yang  mengalami multiplikasi  terbaik  diperoleh  pada  media perlakuan  emulsi  ikan  2  ml  L -1 atau  media perlakuan  ekstrak  pisang  atau  kentang,  untuk esktrak  pisang  dapat  dikombinasikan  dengan emulsi  ikan  2  atau  4  ml  L -1 ,  sedangkan  untuk ekstrak  kentang  dapat  dikombinasikan  dengan 2,  4,  atau  6  ml  L -1 emulsi  ikan,  dengan persentase plbs bermultiplikasi  sekitar  60- 70%. Media perlakuan esktrak ubi jalar kurang sesuai  untuk  multiplikasi plbs .  Sementara  itu, untuk  peubah  jumlah  daun  dan  akar  paling banyak  dihasilkan  pada  media  perlakuan
ekstrak  kentang  tanpa  penambahan  emulsi ikan,  menunjukkan  bahwa  media  tersebut sesuai  untuk  morfogenesis plbs menjadi planlet  dan  perkembangan  organ  daun  dan akar planlet secara maksimal. Jika mempertimbangkan  aspek  kepraktisan  dan ekonomi,  hasil  penelitian  ini  menyarankan bahwa  untuk  tahapan  pertumbuhan  dan multiplikasi plbs, media  yang  paling  sesuai adalah  media  kontrol  dengan  penambahan emulsi  ikan  2  ml  L -1 atau  media  dengan perlakuan  ekstrak pisang atau  ekstrak  kentang tanpa emulsi ikan, selanjutnya untuk morfogenesis  planlet plbs dapat  dipindah  ke media perlakuan ekstrak kentang.

## KESIMPULAN
Media perlakuan terbaik untuk pertumbuhan  dan  multiplikasi plbs adalah media  kontrol  yang  dikombinasikan  dengan emulsi  ikan  2  ml  L -1 atau  media  perlakuan ekstrak  pisang  atau  ekstrak  kentang  tanpa penambahan emulsi ikan, yang dapat menghasilkan  persentase  hidup plbs di  atas 90%  dan  persen plbs bermultiplikasi  sekitar 70%.  Morfogenesis plbs menjadi  planlet  yang sempurna  terlihat  dari  jumlah  daun  dan  akar terbanyak  dihasilkan  pada  perlakuan  ekstrak kentang tanpa emulsi ikan dengan jumlah daun
dan  akar  yang  dihasilkan  adalah  sebanyak  3.2 helai daun dan 2.2 akar.

## SARAN
Kultur plbs pada  tahap  multiplikasi sebaiknya menggunakan media dengan penambahan  emulsi  ikan  2  ml  L -1 dan  untuk pembesaran  planlet  menggunakan  media dengan  penambahan  ekstrak  kentang  tanpa penambahan  emulsi  ikan.  Pertumbuhan  lanjut planlet pada tahap aklimatisasi perlu dievaluasi  untuk  mengetahui  kualitas  planlet dari berbagai asal media perlakuan.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian  ini  didanai  oleh  Direktorat Jenderal Pendidikan Tinggi, Kementrian Riset dan  Teknologi  melalui  skema  Riset  Hibah Kompentensi  tahun  2016  atas  nama  Dr.  Dewi Sukma,  SP.  MSi,  dengan  nomor  kontrak: 079/SP2H/LT/DRPM/II/2016.

## DAFTAR PUSTAKA
Agriani,  S.M.  2010.  Pengaruh  konsentrasi ekstrak  ubi  jalar  dan  emulsi  ikan terhadap  pertumbuhan  plb  anggrek persilangan Phalaenopsis ‘ Pinlong Cinderella’ x  Vanda  tricolor pada  media Knudson  C . [Skripsi].  Universitas Sebelas Maret. Surakarta.
Andini, N. 2013. Pertumbuhan protocorm like bodies ( plbs )  dua  populasi  hasil persilangan  anggrek Phalaenopsis pada beberapa  komposisi  media.  [Skripsi]. Institut Pertanian Bogor. Bogor.
Chai,  M.L.,  C.J.  Xu,  K.K.  Senthil,  J.Y.  Kim, D.H.  Kim.  2002.  Stable  transformation of protocorm like bodies in
Phalaenopsis orchid mediated by
Agrobacterium  tumefaciens .  Sci.  Hort. 96(2002): 213-224.
Dwiarum,  A.C.  2007.  Pengaruh  kombinasi media kultur in vitro dengan
penambahan  bahan  organik  terhadap
pertumbuhan protocorm  like  bodies (plb) anggrek Pharaphalaenopsis serpentilingua .  [Skripsi].  Institut  Pertanian
Bogor. Bogor.
Eymar,  E.,  J.  Alegre,  ,  M. Toribio,  D.  Lopez- vlla.  2000.  Effect  of  activated  charcoal and  6-benzyladenine  on in  vitro nitrogen  uptake  by Lagerstroemia indica .  Plant  Cell  Tissue  Organ  Cult.
63: 57-65.
Kasutjianingati,  R.  Irawan.  2013.  Media alternatif  perbanyakan in  vitro anggrek bulan ( Phalaenopsis amabilis ). J.
Agroteknos. 3(3): 184-189.
Murashige,  T.,  F.  Skoog.1962.  A  revised medium for rapid growth and  bioassays with tobacco tissue cultures. Physiologia Plantarum. 15: 473-497.
Murdad, R., K.S, Hwa, C.K. Seng, M.A. Latip, Z.A.  Aziz,  R.  Ripin.  2006.  High frequency multiplication of Phalaenopsis gigantea using trimmed bases protocorm  technique.  Sci.  Hort.  111:
73-79.
Nazi.  2014.  Kultur protocorm  like  bodies anggrek  hasil  persilangan Phalaenopsis gigantea  x  Phalaenopsis  violacea pada beberapa  kombinasi  media  dan  ZPT. Skripsi. Institut Pertanian Bogor. Bogor.
Niedz R.P., T.J Evens. 2007. Regulating plant in  vitro growth  by  mineral  nutrition. In Vitro Cell.  Dev.  Biol.  Plant . 43:  370-
381.
Oktafiani,  A.,  M.  Puspitasari,  T.  Purbiati, Destiwarni.  2012.  Pengaruh  beberapa media kultur jaringan terhadap pertumbuhan planet anggrek Phalaenopsis bellina .  Balai  Pengkajian  Teknologi Pertanian. Kalimantan Barat.
Putri,  H.A.  2015.  Pengaruh  komposisi  media dasar dan kitosan terhadap pertumbuhan protocorm like bodies (plbs) dan planlet anggrek Phalaenopsis hibrida. [Skripsi].
Institut Pertanian Bogor. Bogor.
Raynalta,  E.,  D.  Sukma.  2013.  Pengaruh
komposisi  media dalam  perbanyakan protocorm  like  bodies ,  pertumbuhan
planlet,  dan  aklimatisasi Phalaenopsis amabilis J.  Hort.  Indonesia.  4(3):  131-
139
Rukmana,  R.  2000.  Anggrek  Bulan.  Kanisius.
Yogyakarta.
Sallolo, S.T., I.G.R. Sadimantara, T. Wijayanto. 2012. Pertumbuhan anggrek
Dendrobium Candy  Stripe  Lasianthera pada  media  sapih  Vacin  dan  Went secara in  vitro dengan  penambahan ekstrak pisang raja dan fish emulsion. J. Penelitian Agronomi. 1(1): 57-62.
Sandra, E.  2012. Cara Mudah Memahami dan
Menguasai Kultur Jaringan Skala
Rumah Tangga. IPB Press. Bogor. Semiarti,  E.,  A.  Indiarto,  E.A.  Suyono,  R.L. Nurwulan, R. Restiani. 2010. Mikropropagasi tanaman anggrek hitam Coelogyne  pandurata Lindl.  dengan penyisipan gen penumbuh tunas melalui Agrobacterium. Seminar Nasional Biologi  UGM;  Yogyakarta,  24-25 September 2010.
Silviasari,  A.D.  2010.  Pengaruh  konsentrasi ekstrak  ubi  jalar  dan  emulsi  ikan terhadap  pertumbuhan  planlet  anggrek Dendrobium  alice  noda  x  Dendrobium tomie dan Phalaenopsis pinlong
Cinderella  x  Vanda  tricolor pada medium  Vacin  dan  Went.  [Skripsi].
Universitas Sebelas Maret. Surakarta.
Syabana,  M.A.,  I.  Rohmawati,  E.P.  Ningsih.. 2015.  Pertumbuhan  tanaman  marasi ( Cuculigo  latifolia )  dengan  perbedaan konsentrasi  NAA  (Naphthalene  Acetic Acid) dan BAP (Benzyl Amino Purine) secara in vitro . Jur. Agroekotek. 7(1): 6- 15.
Syammiah.  2006.  Jenis  senyawa  organik suplemen  pada  medium Knudson  C untuk  pertumbuhan protocorm  like bodies  Dendrobium bertacong blue x Dendrobium  undulatum .  J.  Floratek.  2: 86-92.
Widiastoety,  D.,  Purbadi.  2003.  Pengaruh bubur  ubikayu  dan  ubijalar  terhadap pertumbuhan plantlet anggrek Dendrobium . J. Hort. 13(1): 1-6. Widiastoety, D., N. Solvia, S. Kartikaningrum. 2009. Pengaruh tiamin terhadap pertumbuhan  planlet  anggrek Oncidium
secara in vitro . J. Hort. 19(1): 35-39.
Yusnita,  C.  Kesuma,  D.  Andiviaty,  S. Ramadiana, D. Hapsoro . 2007. Perbanyakan klonal Phalaenopsis sp. in vitro dari  eksplan  daun  dan  eksplan tangkai  bunga.  Hal  119-124.  Prosiding
Seminar Nasional Hasil Penelitian yang
Dibiayai oleh Hibah Kompetitif. Bogor, 1-2 Agustus 2007.
Zainal,  A.  1994.  Dasar-dasar  Pengetahuan tentang Zat Pengatur Tumbuh. Angkasa, Bandung.