## ABSTRAK
Eksoprotease  merupakan  enzim  yang  dihasilkan  Pseudomonas  aeruginosa,  yang  produksinya  berhu- bungan dengan sistem quorum sensing, yaitu proses yang terjadi pada bakteri dalam mengekpresikan molekul sinyal untuk menjadi patogen. Perilaku bakteri yang diatur sistem quorum sensing antara lain bioluminescen, sekresi virulensi, sporulasi, konjugasi, produksi enzim ekstraseluler, pembentukan bio- Þ lm dan produksi pigmen. Pseudomonas aeruginosa merupakan patogen opportunistik penyebab utama infeksi  nosokomial.  Penelitian  bertujuan  untuk  mengetahui  kemampuan  ekstrak Apium  graveolens  L dalam  menghambat  quorum  sensing  Pseudomonas  aeruginosa,  berdasarkan  besarnya  penghambatan enzim eksoprotease dan produksi bio Þ lmnya. Pseudomonas aeruginosa diisolasi dari Rumah Sakit Dr. Moewardi  Surakarta;  dikarakterisasi  sifat  sensitivitas  terhadap  beberapa  antibiotik;  ekstraksi Apium grabeolens L menggunakan pelarut etanol; uji kemampuan ekstrak Apium graveolens L dalam peng- hambatan quorum sensing bakteri berdasarkan produksi enzim eksoprotease Pseudomonas aeruginosa dengan  metode  kemampuan  menghidrolisis  azocasein  yang  ada  di  dalam  media  dan  diukur  dengan spektofotometer, dilanjutkan uji pembentukan bio Þ lm pada microtiter plate PVC, dengan metode Opti- cal density. Semua eksperimen dilakukan ulangan tiga kali, analisis data menggunakan satu arah analisis varians (ANOVA) dengan P-nilai 0,05 menggunakan perangkat lunak statistik SPSS. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak Apium graveolens L mempunyai kemampuan menghambat produksi enz- im eksoprotease Pseudomonas aeruginosa pada konsentrasi 20% b/v, dan mampu menghambat produksi bio Þ lm Pseudomonas aeruginosa pada konsentrasi 15%.
Kata kunci: eksoprotease, biofi lm, Pseudomonas aeruginosa, Apium graveolens L.

## ABSTRACT
Eksoprotease is an enzyme produced by Pseudomonas aeruginosa, whose production is associated with quorum sensing system, which is a process that occurs in bacteria in the express signaling molecules to become pathogenic. Behavior bacterial quorum sensing system arranged bioluminescen among other things,  the  secretion  of  virulence,  sporulation,  conjugation,  the  production  of  extracellular  enzymes, biofi lm  formation  and  the  production  of  pigments.  Pseudomonas  aeruginosa  is  an  opportunistic pathogenic  major  cause  of  nosocomial  infection.  The  study  aims  to  determine  the  ability  of  Apium graveolens L extract in inhibiting Pseudomonas aeruginosa quorum sensing, based on the amount of enzyme inhibition eksoprotease and production biofi lmnya. Pseudomonas aeruginosa was isolated from Hospital Dr. Moewardi Surakarta; characterized the nature of sensitivity to multiple antibiotics; Apium grabeolens L extraction using ethanol; test the ability of Apium graveolens extract L in quorum sensing inhibition  of  bacterial  enzyme  production  by  Pseudomonas  aeruginosa  eksoprotease  by  hydrolyzing

## PENGHAMBATAN PRODUKSI EKSOPROTEASE
DAN BIOFILM PADA Pseudomonas aeruginosa OLEH EKSTRAK Apium graveolens L
Didik Wahyudi 1) , Yusianti Silviani 2)
1, 2 Akademi Analis Kesehatan Nasional Surakarta
didikww@gmail.com yusianti.silviani@gmail.com

## Jurnal KesMaDaSka - Juli 2015
ability azocasein method that is in the media and are measured with a spectrophotometer, followed by a test on a microtiter plate biofi lm formation of PVC, with Optical density method. All experiments were performed  three  times  replay,  analysis  of  data  using  one-way  analysis  of  variance  (ANOVA)  with  a P-value of 0.05 using SPSS statistical software. The results showed that the extract of Apium graveolens L  has  the  ability  to  inhibit  the  production  of  enzymes  eksoprotease  Pseudomonas  aeruginosa  at  a concentration of 20% w / v, and is able to inhibit the production of biofi lms of Pseudomonas aeruginosa at a concentration of 15%.
Keywords : eksoprotease, biofi lm, Pseudomonas aeruginosa, Apium graveolens

## 1.  PENDAHULUAN
Eksoprotease  merupakan  enzim  yang  di- hasilkan  oleh Pseudomonas  aeruginosa yang berhubungan  dengan  sistem quorum  sensing. Quorum  sensing merupakan  suatu  proses  yang memungkinkan bakteri dapat berkomunikasi de- ngan mensekresikan molekul sinyal yang disebut autoinducer atau molekul sinyal sebagai bahasa. Proses ini memungkinkan suatu populasi bakteri dapat mengatur ekspresi gen tertentu. Konsentra- si autoinducer di  lingkungan  sebanding  de ngan jumlah  bakteri  yang  ada.  Dengan  mendeteksi autoinducer ,  suatu  bakteri  mampu  mengetahui keberadaan  bakteri  lain  di  lingkungannya  (Taga et al ., 2001). Pada Pseudomonas aeruginosa au- toinducer tersebut adalah golongan enzim ekso- protease (Rukayadi, 2006).
Sistem quorum sensing mengontrol perilaku bakteri  melalui  pengubahan  ekspresi  gen  oleh molekul  sinyal.  Perilaku  bakteri  yang  diatur sistem quorum  sensing antara  lain:  biolumi- nescen, sekresi faktor virulensi, sporulasi, konju- gasi, pembentukan bio Þ lm dan produksi pigmen (Taga et al ., 2001).
Pengunaan  senyawa  antibiotik  secara  terus menerus  dapat  meningkatkan  frekuensi  mutasi, sehingga melahirkan generasi bakteri baru yang resisten  (Lewis,  2001),  dengan  pengetahuan mengenai  sistem quorum  sensing ,  dapat  dikem- bangkan  suatu  cara  pengendalian  bakteri  yang tidak  terbatas  pada  pemberantasan  bakteri  atau antibiosis. Pengendalian infeksi dapat dilakukan dengan  mencegah  pengumpulan  massa  bakteri atau dengan merusak sistem komunikasi interse- luler bakteri, bakteri tetap hidup selama perilaku- nya tidak destruktif (Suwanto, 2005).
Pseudomonas  aeruginosa merupakan  pato- gen oportunistik, yaitu memanfaatkan kerusakan
pada mekanisme pertahanan inang untuk memu- lai suatu infeksi. Angka fatalitas kasus ( case fa- tality  rate )  pasien-pasien  tersebut  adalah  50%, P.  aeruginosa merupakan  penyebab  sepsis  yang umum  dijumpai  pada  pasein  di  unit  perawatan intensif (Mayasari, 2006).
Penyakit  infeksi P.  aeruginosa dimulai  de- ngan penempelan dan kolonisasi bakteri ini pada jaringan  inang,  dengan  menggunakan Þ li  untuk penempelan  sel  pada  permukaan  inang,  dapat membentuk bio Þ lm untuk mengurangi keefektif- an  mekanisme  sistem  imun  inang  (Zhang et  al , 1998). P.  aeruginosa memiliki  molekul  sinyal utama  yaitu  komponen homoserin  lakton yang berfungsi sebagai agen kemostatik untuk meng- umpulkan sel-sel P. aeruginosa yang berdekatan melalui  mekanisme quorum  sensing dan  mem- bentuk bio Þ lm (Madigan et al ., 2006).
Beberapa  penelitian  telah  dilakukan  untuk mengetahui  kemampuan  penghambatan  sistem quorum sensing pada ekstrak beberapa jenis ba- han  alam  yang  lain  terhadap  beberapa  bakteri, antara  lain  Fuqua et  al .,  (1997)  yang  meneliti tentang sistem pengaturan ekspresi gen pada mi- kroorganisme  melalui  sistem quorum  sensing . Rukayadi et  al .,  (2006)  meneliti  tentang  peng- hambatan produksi faktor virulensi P. aerugino- sa oleh  tanaman  vanili.  Magdalena  dan Yogiara (2006)  yang  meneliti  tentang  kemampuan  leng- kuas  dalam  menghambat  produksi  bio Þ lm  pada Streptococcus  mutan penyebab  plaq  pada  gigi. Wahyudi  (2011)  menyebutkan  bahwa  Esktrak Apium graveolens L mampu menghambat sistem quorum  sensing  Pseudomonas  aeruginosa ,  dan Wahyudi (2014) menyebutkan bahwa Apium gra- veolens mampu  menghambat  produksi  bio Þ lm pada Salmonella typhi .
Tujuan penelitian untuk mengetahui apakah ekstrak Apium  graveolens L  mampu  mengham-
bat  produksi  enzim  eksoprotease  dan  produksi bio Þ lm  pada Pseudomonas  aeruginosa  dan berapakah  konsentrasi  ekstrak Apium  graveo- lens L  yang  paling  efektif  dalam  menghambat produksi eksoprotease dan produksi bio Þ lm pada Pseudomonas aeruginosa ?

## 2.  METODE PENELITIAN
a.  Alat dan bahan
Alat  meliputi rotary  evaporator  au- toclave ,  kuvet, shaker ,  inkubator, laminar air fl ow , waterbacth ,  petridish,  jarum  ohse, bunsen,  lemari  es,  ph  meter,  spektrofotom- eter, sentrifuge ,  mikropipet,  jangka  sorong, timbangan  elektrik,  elenmeyer, bekerglass , aluminium  foil,.  tabung  biakan  kuman,  rak tabung reaksi, vortek, kertas saring.
Bahan  yang  digunakan Apium  gra- veolens L,  isolat Pseudomonas  aeruginosa, m edium Luria-Bertani (LB), etanol, akuades steril,  crystal  violet,  glukosa  5%.  media
Brain  Heart  Infusion  ( BHI), MacConkey (MC). Media uji biokimia: Kliger Iron Agar (KIA), Sulfi de  Indol  Motility (SIM),  Urea,
Citrat, Methyl  Red (MR), Voges  Proskauer (VP), Phenyl  Alanine  Deaminase (PAD). Media Gula-Gula (Glukosa, Laktosa, Mani- tol,  Maltosa,  Sukrosa); Azocasein  (Sigma), trichloroacetic  acid  (TCA),  NaOH  0,5  M, buffer  fosfat  pH  8.  Media  Trypticase  soy broth–0.6%  yeast  extract  (TSBYE),  5% glycerol,  Trypticase  soy  agar  (TSA), mi- crotiter plate PVC,. NaCl 0,9 % steril. Rea- gen Erlich, Methyl Red (MR), Ferri Klorida (FeCl 3 ) 10 %, Kalium Hidroksida (KOH) 40
%, Barried , Cat Gram A, B, C, dan D. disk Antibiotik Lengkap.
b.  Karakterisasi  dan  Ekstraksi Apium  graveo- lens L
Apium graveolen L (Seledri) yang digu- nakan dalam penelitian ini akar, batang, dan daunnya, diambil dari perkebunan di daerah Tawangmanggu  Kabupaten  Karanganyar Jawa Tengah berumur 3 bulan,
Pembuatan  Fraksi  Etanol  70%  Seledri dibuat  dengan  cara  sebagai  berikut:  Herbal Tanaman  Seledri  yang  telah  dikeringkan pada  suhu  50°C  selama  5  hari  diambil  se-
banyak  2  kg.  Setelah  kering  dilakukan ekstraksi  dengan  metode  maserasi,  herbal Seledri  dimasukkan  ke  dalam  bejana,  ke- mudian ditambahkan dengan 10 liter etanol 70%  ditutup  dan  dibiarkan  selama  5  hari. Diserkai, dan diperas ampasnya. Sari etanol yang  diperoleh  kemudian  dilakukan  peme- katan  sampai  dihasilkan  ekstrak  etanolik seledri.
c.  Isolasi Bakteri Uji dan Persiapan Media
Bakteri P. aeruginosa diperoleh dari iso- lasi  dari  Rumah  Sakit  Umum  Dr.Moewardi Surakarta  Isolasi  dilakukan  dengan  metode uji biokimia, uji fermentasi karbohidrat dan uji  sensitivitas  antibiotik  dilakukan  dengan metode  difusi  agar  (Bauer,  1966).  Media yang digunakan dalam penelitian ini adalah media Luria-Bertani (LB) dilengkapi dengan 0,5% glukosa dan 2% susu skim (media LB, mengandung  2,5  mg  tiamin/liter),  semua strain yang diinkubasi pada 37 °C.
d.  Pengujian  Kuantitatif  aktivitas  enzim  ekso- protease P. aeruginosa
Pen  gujian  ini  dilakukan  untuk  menge- tahui  aktivitas  enzim  eksoprotease P.  aeru- ginosa secara  kuantitatif  pada  perlakuan ekstrak Apium  graveolens L.  Prinsip  peng- ujian aktivitas enzim eksoprotease berdasar- kan metode Hanlon dan Hodges (1981) yaitu kemampuan  enzim  protease  untuk  menghi- drolisis Azocasein. Residu azocasein yang tidak dapat terhidrolisis oleh enzim eksopro- tease  akan  diendapkan  oleh tricloro  acetic acid (TCA).  Endapan  dipisahkan  dengan Þ ltrat, Þ ltrat  akan  membentuk  warna  bila direaksikan dengan NaOH. Intensitas warna yang  terbentuk  diukur  dengan  spektrofoto- meter pada panjang gelombang 440 nm.
Sepuluh ml suspensi bakteri yang telah diukur pertumbuhannya di sentrifuge de ngan kecepatan 10.000 g selama 10 menit, Þ ltrat- nya diambil sebanyak 1 ml. lalu di masukkan dalam  tabung  reaksi  yang  telah  berisi  3  ml larutan  buffer  fosfat  (pH  8).  campuran  ini kemudian  diletakkan  di  atas  penanggas  air hingga  suhunya  mencapai  37 o C.  Setelah itu  ditambahkan  2  ml Azocasein yang  se- belumnya telah dipanaskan pada penanggas

## Jurnal KesMaDaSka - Juli 2015
air hingga suhunya mencapai 37 o C. Selanjut- nya ditambahkan 4 ml trichkloro acetic acid (TCA)  10%  sehingga  terbentuk  endapan kuning  yang  dipisahkan  dengan  sentrifuge. Filtrat sebanyak 5 ml diambil lalu ditambah- kan  dengan  5  ml  larutan  NaOH  0,5  M,  ke- mudian  diukur  absorbansinya  pada  panjang gelombang 440nm.
Pengukuran  aktivitas  enzim  dilakukan setiap  2  jam  selam  24  jam  sebanyak  3  kali ulangan satu unit, aktivitas enzim eksoprote- ase dide Þ nisikan sebagai jumlah enzim yang dapat  menghasilkan  kenaikan  pengukuran absorbansi sebesar 0,01 setiap jam pada kon- disi pengukuran. Unit aktivitas enzim ekso- protease  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  dinyatakan  dalam  U/ml  dengan  rumus Hanlon dan Hodges (1981) sebagai berikut:
Unit aktivitas / ml sampel (U/ml) = (ab- sorbansi; 0,01) x 2
e.  Uji Pembentukan Bio Þ lm dengan Microtiter Plate  Polivinil  Klorida .  (Djordjevic  et  al, 2002; Rukayadi dan Hwang, 2006)
Pseudomonas  aeruginosa pada  media  LB segar  yang  mengandung  ekstrak Apium  graveo- lens pada  konsentrasi  0%  (sebagai  kontrol)  5%, 10%, 15%, 20% dan 25%, kemudian diinkubasi dalam 10 ml media diperkaya TSBYE, pada suhu 32 0 C  semalam.  Tes  produksi  bio Þ lm  dilakukan dengan  media  Luria  Bertani.  Kultur  semalam di TSBYE dipindahkan (0,1 ml) ke 10 ml Luria Bertani dan divortex. Kemudian 100  l dialihkan ke  dalam  delapan  pelat  PVC  microtiter  (Becton Dickinson Labware, Franklin Lakes, NJ), sebel- umnya dibilas dengan 70% etanol dan udara ker- ing.
Plate tersebut dibuat dalam rangkap dua, di- inkubasi, dan ditutup pada 32°C selama 40 jam. Setiap plate termasuk delapan sumur MWB tanpa P. aeruginosa sebagai kontrol. Kekeruhan sel di- pantau  menggunakan  pembaca  piring  microtiter (Bio-Rad,  Richmond,  Calif),  dengan  densitas optik 595 nm (OD595), dan dicatat pada interval waktu yang berbeda.
Set plate pertama  digunakan  untuk  pem- bentukan  bio Þ lm  pengukuran  setelah  40  jam pembentukan  bio Þ lm.  OD  rata-rata  dari  sumur
kontrol  itu  dikurangkan  dari  OD  dari  semua  tes sumur.  Setelah  40  jam  periode  inkubasi,  media telah  dihilangkan  dari  sumuran,  dan  sumur mi- crotiter  plate dicuci  lima  kali  dengan  air  suling steril  untuk  menghilangkan  bakteri  yang  tidak terikat kuat.
Plate dikeringkan  udara  selama  45  menit dan  masing-masing  dilakukuan  pewarnaan  de- ngan 150  l dari kristal violet 1% larutan dalam air  selama  45  menit.  Setelah  pewarnaan,  plate yang  dicuci  dengan  air  suling  steril  lima  kali. Pada  kondisi  ini,  bio Þ lm  yang  terlihat  sebagai cincin ungu yang terbentuk di sisi masing-masing de ngan  baik.  Analisis  kuantitatif  produksi  bio- Þ lm dilakukan dengan menambahkan 200  l dari 95% etanol ke dalam sumur. Seratus microliters dari  masing-masing  dipindahkan  ke  microtiter plate baru dan OD ungu kristal yang ada diukur pada 595 nm. Uji bio Þ lm dengan microtiter plate dilakukan tiga kali ulangan.

## 4.  HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil Isolasi, Karakterisasi dan Uji Sensitivitas Antibiotik.
Karakteristik P. aeruginosa hasil isolasi dari Rumah  Sakit  Dr.  Moewardi  Surakarta  sebagai berikut:  pada  media  TSIA  tidak  memfermenta- sikan  media  glukosa,  manitol,  sakarosa,  malt- ose, dan laktosa, hal ini terlihat dari media yang berwarna  merah  baik  pada  dasar  maupun  pada lereng  permukaan  media  agarnya.  Bakteri  ini menghasilkan hasil negatif pada uji indol, Merah Metil, dan Voges-Proskauer .  Bakteri  tersebut mampu  memproduksi  katalase,  oksidase,  dan amonia  dari  arginin,  dapat  menggunakan  sitrat sebagai sumber karbonnya. Koloni yang dibentuk halus, bulat dengan warna ß uoresensi ke hijauan. Strain P. aeruginosa menghasilkan pigmen yang ber ß uoresensi  antara  lain:  pioverdin  (warna  hi- jau),  piorubin  (warna  merah  gelap),  piomelanin (hitam). Pseudomonas  aeruginosa yang  berasal dari  koloni  yang  berbeda  mempunyai  aktivitas biokimia,  enzimatik  dan  kepekaan  antimikroba yang  berbeda  pula. P.  aeruginosa yang  diguna- kan dalam penelitian ini memiliki sifat-sifat ter- hadap antibiotik (Tabel 1).
Hasil isolasi P. aeruginosa hasil isolasi dari Rumah Sakit Dr. Moewardi Surakarta sudah re-
sisten  berbagai  antibiotik,  hal  ini  menyebabkan sulit  diobati  jika  bakteri  tersebut  menimbulkan infeksi.  Adanya  resistensi  tersebut  dikarenakan beberapa  hal  antara  lain  adanya  mutasi  ataupun rekombinasi struktur gen yang terjadi di dalam sel bakteri. Namun mengingat P. aeruginosa adalah patogen  oportunistik  maka  untuk  me nyebabkan infeksi  perlu  adanya  faktor  predisposisi,  salah satunya adalah harus memenuhi jumlah tertentu terlebih  dahulu  (10 7  – 10 8 sel),  yang  merupakan syarat sistem quorum sensing bisa berjalan.
Tabel 1 Hasil Uji Sensitivitas Antibiotik terhadap P. aeruginosa hasil isolasi dari RSU Dr. Moewardi Surakarta, Jawa Tengah.

## RESISTEN TERHADAP
SENSITIF TERHADAP Nama Obat (  gram ) Nama Obat (  gram ) Amoxycillin 10 Cefriaxone 30 Amoxycillin Clav.Acid 30 Fosfomycin 50 Ceffazidime 2 Meropenem 30 Clindamisin 5 Imipenem 30 Cipro ß oxacine 5 Gentamycin 10 Penicillin G 30 Netilmycin 15 Sulfamethaxazole 100 Cefepime 30 Trimetrhoprim 5 Coumpounds 300 Streptomycin 10 Piperacillin 100 Nalidic Acid 30 Amikacin 300 Cloramphenicol 30 Novobiocin 5 Cephalothin 20 Cefuroxime 30 Kanamycin 15 Cefoxitin 30 O ß oxacin 30

## Penghambatan Produksi enzim Eksoprotease
P.  aeruginosa oleh  ekstrak Apium  graveolens L.
Hasil  penghambatan  produksi  Enzim  ekso- protease Pseudomonas  aeruginosa oleh  ekstrak Apium  graveolens L  di  dapatkan  hasil  aktivitas enzim berdasarkan optical densitynya didapatkan hasil seperti pada Tabel 2.
Gambar  1  menunjukkan  bahwa  pada  kon- sentrasi  0  –  15  %  produksi  eksoprotease Pseu- domonas  aeruginosa cenderung  tidak  berbeda, namun  pada  konsentrasi  20%  dan  25%  terlihat adanya  penurunan  yang  cukup  drastis,  besarnya
aktivitas enzim pada gra Þ k mengikuti kurva per- tumbuhannya  (kurva  sigmoid);  terlihat  bahwa enzim  eksoprotease  ini  diproduksi  pada  fase eksponensial akhir.
Tabel 2. Unit aktivitas enzim eksoprotease pada P. aenginosa yang dihambat dengan beberapa konsentrasi aviumgroviolens L
Ket:  Huruf  yang  sama  menunjukkan  tidak  berbeda  signi Þ kan secara statistik pada taraf kepercayaan 5%

## Gambar 1. Kurva produksi enzim eksoprotease P. aeruginosa yang dihambat dengan beberapa konsentrasi Apium graveolens L
Hasil penelitian diatas, sejalan dengan bebe- rapa  penelitian  sebelumnya  (Smith  dan  Iglews- ki,  2003;  Hentzer et  al .,  2003;  Rukayadi  dan Hwang,  2006;  Adonizio,  2008;  Mustika,  2009) Hasil  penelitian  beberapa  peneliti  tersebut  me- nyatakan  bahwa  sistem quorum  sensing bakteri bisa dihambat oleh ekstrak tanaman obat tertentu pada konsentrasi rendah dengan indikator adalah produksi enzim protease yang terhambat, namun pada  konsentrasi  tersebut  beberapa  dari  ekstrak tanaman obat tersebut belum tentu menghambat pertumbuhan selnya.

## Jurnal KesMaDaSka - Juli 2015
Hal tersebut juga sejalan dengan dua pene- litian  sebelumnya  yaitu  Lestari  (2005)  dan Aini (2006)  yang  meneliti  tentang  penghambatan eksoprotease pada Aeromonas hidrophyla dengan ekstrak rimpang temulawak dan tomat ditemukan bahwa ekstrak rimpang temulawak dan tomat ter- sebut  menghambat  produksi  eksoprotease  pada konsentrasi  4%,  dan  pada  konsentrasi  tersebut tidak mempengaruhi pertumbuhan selnya.
Hasil Uji Pembentukan Biofi lm Pseudomonas aeruginosa dengan Microtiter  Plate  Polivinil Klorida .
Bakteri yang berada di sebuah bio Þ lm dapat memiliki  sifat  sangat  berbeda  dari  bakteri  yang hidup bebas. Sebagai lingkungan yang padat dan dilindungi  dalam  lapisan Þ lm  memungkinkan mereka untuk bekerja sama dan berinteraksi de- ngan  berbagai  cara. Apabila  suatu  bakteri  telah membentuk  bio Þ lm  dan  berkolonisasi  dalam suatu jaringan atau organ biasanya sudah resisten terhadap  beberapa  jenis  antibiotik  (Adonizio, 2008) hal ini sejalan dengan hasil penelitian ini, yang  dapat  dilihat  pada Tabel  3  bahwa Pseudo- monas  aeruginosa yang  diisolasi  dari  sampel pasien resisten terhadap beberapa antibiotik.
Tabel 3. Hasil Optical density pada Uji daya hambat Biofi lm Pseudomonas aeruginosa oleh ekstrak Apium graveolens L dengan pelarut atanol dan etil asetat
Pada  hasil  pengujian  bio Þ lm  pada Pseudo- monas aeruginosa terlihat bahwa semakin besar konsentrasi  ekstrak Apium  graveolens L  maka semakin besar pula penghambatan produksi bio- Þ lm  pada Pseudomonas  aeruginosa ,  Pada  hasil penghambatan bio Þ lm Pseudomonas aeruginosa terlihat bahwa pada konsentrasi ekstrak 15 % su- dah terlihat berbeda nyata secara signi Þ can ber- dasarkan  perhitungan  statistiknya,  pada  konsen- trasi 15 % dan 20% terlihat tidak ada perbedaan kemampuan  penghambatan  bio Þ lm Pseudomo-
nas  aeruginosa oleh  ekstrak Apium  graveolens L,  namun  pada  konsentrasi  25%  terlihat  bahwa kemampuan  penghambatannya  berbeda  secara signi Þ kan dengan pada konsentrai 25%.
Hasil penelitian ini sejalan penelitian sebe- lumnya,  (Wahyudi,  2011)  bahwa  ekstrak  sele- dri  ( Alpinia  galanga L)  mampu  menghambat produksi bio Þ lm pada Pseudomonas aeruginosa pada  konsentrasi  8%,  sedangkan Salmonella typhi terhambat  produksi  bio Þ lmya  pada  kon- sentrasi  ekstrak Alpinia  galanga 6%  (Wahyudi, 2014).
Gambar 2. Nilai Optical Density penghambatan biofi lm Pseudomonas aeruginosa oleh ekstrak

## Apium graveolens L dengan pelarut Etanol
Hasil  beberapa  penelitian  tersebut  me- nyatakan  bahwa  untuk  penghambatan  produksi bio Þ lm  bakteri,  dalam  hal  ini Pseudomonas  ae- ruginosa dan Salmonella  typhi membutuhkan konsentrasi  ekstrak  bahan  alam  yang  rendah kurang dari 20 %, namun pada konsentrasi terse- but belum mampu mengambat pertumbuhan bak- teri. Sehingga untuk mencegah bakteri memben- tuk  bio Þ lm  hanya  membutuhkan  sejumlah  kecil bahan  aktif  yang  ada  di  dalam  ekstrak Apium graveolens L,  hal  ini  disebabkan  karena  untuk menghambat  produksi  bio Þ lm  suatu  bakteri,  se- benarnya  yang  dibutuhkan  adalah  menghambat enzim  ataupun  molekul  protein  yang  menjadi sinyal  (autoindcer)  unutk  bakteri  berkolonisasi, kemudian mengekspresikan faktor virulensi dan akhirnya membentuk bio Þ lm yang dapat menye- babkan  bakteri  menjadi  resisten  terhadap  ber- bagai jenis antibiotik. Mekanisme penghambatan produksi bio Þ lm ini bisa digunakan untuk acuan pembuatan  bahan  pengawet,  salep,  dan  produk- produk  lain  yang  bertujuan  untuk  mencegah
bakteri  menjadi  patogen,  sehingga  bisa  menye- babkan  penyakit,  atau  menhasilkan  racun  pada beberapa produk makanan.

## 5.  KESIMPULAN
Ekstrak Apium  graveolens L  mempunyai kemampuan untuk menghambat produksi enzim eksoprotease P. aeruginosa pada konsentrasi 20% berat/vol, dan mampu menghambat produksi bio- Þ lm Pseudomonas  aeruginosa pada  konsentrasi 15%.

## 6.  REFERENSI
Adonizio  Allison  L.,  2008., Anti-quorum  sens- ing  Agents  From  South  Florida  Medicinal Plants and Their Attenuation of Pseudomo- nas  aeruginosa  Pathogenicity .,  FIU  Elec- tronic Theses  and  Dissertations,  Florida  In- ternational University.
Allison,  D.  (2000). Community  Structure  and Co-Operation in Biofi lms. Cambridge: Cam- bridge University Press.
Aini N, 2006., Penurunan produksi enzim ekso- protease aeromonas hydrophila oleh ekstrak buah  tomat  (lycopersicon  esculentum  mill.) UNS-Solo Indonesia.
Aree  JO.,  T  Suzuki,  P.  Gasaluck,  G.  Eumkeb., 2006., Antimicrobial  properties  and  action of  galangal  (Apium  graveolens  Linn.)  on Staphylococcus aureus., LWT Food Science and  Technology  Volume  39,  Issue  10,  De- cember 2006, page 1214-1220
Bauman,  2009. Biofi lm,  Pseudomonas  putida, Streptococcus  mutans., http://biobakteri.
wordpress.com/2009/06/07/8-bio Þ lm/. (1
Februari  2010).  Boel,  Trelia,  2004, Pse- domonas  aeruginosa ,  http://  library.usu. ac.id;
Catherine Y(2002). Hoodoo Herb and Root Mag- ic:  A  Materia  Magica  of  African-American Conjure, and Traditional Formulary. Lucky Mojo Curio.
Choo JH, Rukayadi Y, Hwang JK. 2006, Inhibi- tion of bacterial quorum sensing by vanilla extract. Lett Appl Microbiol ; (42):637-41
De  Kievit  TR,  Iglewski  BH.  2000, Bacterium quorum sensing in pathogenic relationships. Infect Immun; 68(9):4839–49
Djordjevic D, Wiedmann M, McLands borouggh L A.,  2002., Microtiter  Plate  assay  for  As- sessment of Listeria monocytogenes Biofi lm Formation ., Applied  and  Enviromental  Mi- crobiology., America Society For Micribiol- ogy.
Fuqua  WC,  Winans  SC,  Greenberg  EP.  1994., Quorum  sensing  in  bacteria-the  LuxRLuxI family  of  cell  density-responsive  tran- scriptional  regulators. J  Bacteriol 1994;
176(2):269-75
Fuqua, C. & Greenberg, E. P. (1999). Self percep- tion  in  bacteria:  quorum  sensing  with  acyl- ated homoserine lactones. Curr Opin Micro- biol 1, 183-189.
Fuqua,  C.,  Winans,  S.  C.  &  Greenberg,  E.  P. (1997).  Quorum  sensing  in  bacteria:  the LuxR–LuxI  family  of  cell  density-respon- sive  transcriptional  regulators. J  Bacteriol 176, 269-275
Hentzer M, Wu H, Andersen JB, Riedel K, Ras- mussen  TB,  Bagge  N,  et  al.,  2003, Attenu- ation of Pseudomonas aeruginosa virulence by quorum sensing inhibitors. The EMBO J 2003; 22 (15):3803-15
Hentzer, M and M. Givskov, 2003, Pharmalogi- cal  Inhibitor,  of  Quorum  Sensing  For  The Treatment Of Chronic Bacterial Infection, J Clint Invest
Lewis,  K,  2001., Riddle  of  Biofi lm  Resistance,
Antimicrob Agent Chemotherapy.
Madigan  MT,  Martinko  JM,  Brock  TD.  2006.
Brock  Biology  of  Microorganisms .  11 th Ed.
New  Jersey: Pearson  Prentice  Hall. Hal: 617-619.
Magdalena,  dan  Yogiara,  2006., Screening  of Bioactive Compound from Plant Extract In- hibiting Biofi lm Formation . Proseding PER-
MI tahun 2006.
Mayasari,  E,  2006, Pseudomonas  aeruginosa; Karakteristik, Infeksi, dan Penanganan , De- partemen Mikrobiologi FK-USU.
Miller MB, Bassler BL., 2001, Quorum sensing in  bacteria. Annual  Review  Microbiology 2001;55:165-99
Murray.  R.K.,  D.K  Granner.,  P.A  Mayes,  V.  W Rodwell,  1997. Biokimia  Harper (diter-

## Jurnal KesMaDaSka - Juli 2015
jemahkan  oleh A.  Hartono).  Penerbit  Buku Kedokteran EGC, Jakarta.
Mustika  F.,  2009., Isolation  and  screening  of Biofi lm  forming  bacteria  for  optimation  of biofi lm production by addition of sugar and antibiotics  variation  and  its  concentration in  Nile  tilapia  oral  vaccines  development ( Oreochromis niloticus Lac), School of Life
Sciences andTechnology- ITB
Nealson KH, Platt T, Hasting JW., 1970 Cellular control  of  the  synthesis  and  activity  of  the bacterial  luminescent  system. J  Bacteriol 1970; 104(1):313-22
Ni N, Li M, Wang J, Wang B., 2009, Inhibitors and antagonists of bacterial quorum sensing. Med Res Rev 2009; 29(1):65-124
Parsek,  M.R,  D,  L.  Val.,  B.  L.  Hanzeika.,  J.  E Cronan  Jr.,  and  E.P.  Greenberg,  1999, Acyl Homoserin  Lactone  Quorum  Sensing  Sig- nal Generation. Proc. Natl . Acad, Sci. U S A
(96): 4360-4365.
Raffa  RB,  Iannuzzo  JR,  Leine  DR,  Saeid  KK,
Schwartz RC, Sucic NT, et al, 2005, Bacte- rial communicarion (“quorum sensing”) via ligands and receptors: a novel pharmacolog- ic target for the design of antibiotic drugs. J Pharmacol Exp Ther 2005; 312(2):417-423 Rahayu  DE.,  1999. Kandungan  Kimiawi  Tana- man Obat Indonesia., Penerbit Pelita Karya Pustaka., Surabaya – Indonesia.
Rasmussen TB, Thomas Bjarnsholt, Mette Elena Skindersoe,  Morten  Hentzer,Peter  Krist- offersen,  Manuela  Ko¨te,  John  Nielsen, Leo  Eberl,  and  Michael  Givskov1,  2005., Screening  for  Quorum-Sensing  Inhibitors (QSI)  by  Use  of  a  Novel.,  Genetic  Sys- tem,  the  QSI  Selector. Journal  of  Bacteri- ology ,  Mar.  2005,  p.  1799–1814  Vol.  187, No.  5  0021 9193/05/$08.00_0  doi:10.1128/
JB.187.5.1799–1814.2005., American  Soci- ety for Microbiology.
Rukayadi Y,  Choo  JH,  Hwang  JK.  2006, Vanil- lin inhibits quorum sensing – regulated viru- lence  factors  production  of  Pseudomonas aeruginosa . Curr Microbiol (In press)
Rukayadi Y, Hwang JK. 2006. Effect of xanthor- rhizol  on  Streptococcus  mutans  bio Þ lm  in vitro. J Mikrobiol Indones (11):40-43.
Rukayadi  Yaya  dan  Hwang  Jae  Kwan,  2009.,
Pencegahan Quorum Sensing: Suatu pendekatan  baru  untuk  mengatasi  infeksi bakteri., Cermin Dunia Kedokteran Vol. 22, No.1, Edisi Maret - Mei 2009
Smith  KM,  Bu  Y,  Suga  H.,  2003, Induction and  inhibition  of  Pseudomonas  aeruginosa quroum  sensing  by  synthetic  autoinducer analogs. Chem Biol 2003; 10:81-9
Smith Roger S, Barbara H Iglewski, 2003., Pseu- domonas  aeruginosa quorum  sensing  as  a potential  antimicrobial  target, Journal  of Clinical  Investigation; Nov  2003;  112,  10;
ProQuest Biology Journals pg. 1460
Sinaga  E.,  2004., Apium  graveolensl  L .,  Pusat Penelitian  dan  pengembangan  Tumbuhan Obat UNAS/P3TO UNAS .
Suwanto, A., 2005 Strategi Baru Mengendalikan Penyakit  Infeksi, http:/www.kompas.com/ kompas-cetak/ 0211/081/iptek/mema36. htm(20Mei 2010).
Taga  ME,  Semmelhack  JL,  Bassler  BL,  2001,. The LuxS-dependent autoinducer AI-2 con- trols  the  expression  of  an  ABC  transforter that functions in AI-2 uptake in Salmonella typhimurium . Mol Microbiol 2001 ; (42):77-
93.
Wahyudi, 2011, Penghambatan Quorum Sensing Pada Pseudomonas aeruginosa oleh Ekstrak Alpinia  galangal  L. Prosiding  Perhipba  ta- hun 2011, UNS press.
Wahyudi,  2014,  Uji  Efekti Þ tas  Ekstrak  Seledri (Alpinia  galangal  L)  sebagai  penghambat Produksi Bio Þ lm pada Pseudomonas aerugi- nosa, Jurnal Biomedika Volume 7 Universi- tas Setia Budi, Surakarta.
Zhang XQ, Bishop PL, Kupferle MJ. 1998. Mea- surement  of  polysaccharides  and  proteins in bio Þ lm extracellular polymers. Water Sci Technol 37, 345-348.