ISSN 2460-1365
tembaga tersebut melebihi tingkat kebutuhan harian. Akumulasi tembaga di dalam tubuh manusia dapat mengakibatkan berbagai macam penyakit seperti gagal ginjal, kanker, kerusakan liver, kerusakan otak, gangguan saraf, bahkan kematian (Hocheng, Chakankar, & Jadhav, 2018).
Pencemaran tembaga di pantai timur Surabaya merupakan salah satu kasus pencemaran logam berat yang terjadi di Indonesia yang belum dapat ditanggulangi. Pencemaran ini dapat terjadi karena adanya pembuangan limbah cair ke sungai oleh industri yang berada di sekitar pantai timur Surabaya. Akibat yang ditimbulkan dari pencemaran tembaga adalah akumulasi tembaga oleh hewan yang hidup di sungai dan laut di sekitarnya seperti ikan, kerang, dan udang. Hewan-hewan yang mengakumulasi logam berat bila terkonsumsi oleh manusia dalam jangka panjang dapat menimbulkan kerusakan pada beberapa organ tubuh (Irawati, Parhusip, Christian, & Yuwono, 2017).
Data pencemaran logam berat menunjukkan bahwa kadar Cu pada ikan dan kerang dari pantai sekitar muara yang berasal dari Rungkut, yaitu pantai di kelurahan Sukolilo mengandung 2.290,20 ppb dan 5.920,20 ppb. Pencemaran di Rungkut telah melebihi ambang batas yang ditentukan oleh World Health Organization (WHO) yaitu 1.200 ppb sehingga dapat membahayakan kesehatan penduduk yang tinggal di desa tersebut.
Masalah kontaminasi tembaga di lingkungan telah dilakukan di beberapa daerah industri tetapi untuk mendegradasi dan menghilangkan logam berat tidak semudah mendegradasi limbah organik karena limbah logam berat bersifat nonbiodegradable. Degradasi dan reduksi logam berat dari lingkungan untuk skala kecil dapat dilakukan dengan cara fisik dan kimia melalui pertukaran ion (ion exchange), presipitasi, koagulasi, inverse osmosis, dan adsorpsi. Metode-metode tersebut cukup efisien dalam mengurangi kontaminasi logam berat tetapi akan sangat merugikan bila digunakan untuk mengolah limbah industri yang sangat banyak sehingga akan menimbulkan masalah baru, yaitu biaya  pengolahan limbah yang relatif mahal, membutuhkan energi dan bahan kimia cukup banyak (Jianlong, 2002). Pendekatan secara bioteknologi dengan menggunakan khamir merupakan alternatif yang
dapat dilakukan untuk masa yang akan datang dan merupakan langkah yang cukup berpotensi dalam meremediasi limbah cair yang mengandung logam berat. Mikroorganisme dapat mengurangi konsentrasi logam berat di lingkungannya melalui proses adsorpsi, produksi senyawa ekstraseluler, maupun sintesis enzimatis. Berbagai mikroorganisme memiliki toleransi terhadap logam pada konsentrasi yang lebih tinggi setelah ditumbuhkan pada medium yang mengandung logam berat (Irawati, Riak, Sopiah, & Sulistia, 2017). Hasil penelitian menunjukkan bahwa beberapa jenis khamir seperti Saccharomyces pombe strain 972, Saccharomyces cerevisiae, dan Candida tropicalis dapat mengabrsopsi tembaga di dalam medium masing-masing sebesar 70%, 86%, dan 82% (Stephen, 1992; Rahman, 2007). Mekanisme detoksifikasi tembaga pada khamir pada umumnya adalah dengan cara pengikatan ion tembaga pada membran, penyerapan ke dalam sel, dan dilanjutkan dengan pengikatan ion tembaga oleh protein metallothionein (MT) (Ashish, Neeti, & Himanshu, 2013). Eksplorasi khamir resisten tembaga yang dapat mengakumulasi tembaga perlu dilakukan untuk mendukung program bioremediasi limbah tembaga di Indonesia demi terciptanya lingkungan yang terbebas dari kontaminasi logam berat. Tingkat kontaminasi limbah tembaga di banyak daerah industri di Indonesia telah melebihi ambang batas dan perlu ditanggulangi untuk menghentikan pencemaran limbah tembaga ke lingkungan. Khamir resisten tembaga merupakan mikroorganisme yang sangat berpotensi dalam mengakumulasi tembaga dari limbah dalam proses bioremediasi tetapi penelitian mengenai isolasi dan karakterisasi khamir resisten tembaga belum banyak dilakukan di Indonesia (Qayyum, Khan, Maqbool, Zhao, & Peng, 2016) (Jianlong, 2002). Eksplorasi khamir resisten tembaga dari daerah industri Rungkut-Surabaya sangat penting untuk dilakukan sebagai langkah awal dalam rangka mendapatkan solusi dalam meremediasi lingkungan yang telah tercermar logam berat. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan menguji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri Rungkut Surabaya.
Bioeksperimen, Volume 6 No. 2 (September 2020)

## KEMAMPUAN FERMENTASI BAL DENGAN SUBSTRAT SUSU KACANG MERAH
Luthfiana Indah Hastuti, Endah Retnaningrum Fakultas Biologi, Universitas Gadjah Mada Jl. Teknika Selatan, Senolowo, Sinduadi, Kec. Mlati, Kabupaten Sleman, Daerah Istimewa Yogyakarta 55281 *Email : endahr@ugm.ac.id Papar submit: 19 September 2019, Paper publish: September 2020
Abstrak- Kandungan oligosakarida yang terdapat pada kacang merah merupakan komponen makanan yang harus diuraikan. Salah satu mikroorganisme yang dapat menguraikan adalah kelompok Bakteri Asam Laktat. Penguraian oligosakarida dengan bantuan Bakteri Asam Laktat dapat dilakukan di dalam proses fermentasi. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efektivitas BAL Lactococcus lactis subsp. lactis NBRC 12007 dalam proses fermentasi sari kacang merah dan mengamati perbedaan kualitas dengan fermentasi susu sapi UHT dengan bakteri starter yang sama. Starter Lactococcus lactis subsp. lactis NBRC 12007 ditambahkan 3% kedalam substrat sari kacang merah dan susu sapi UHT. Fermentasi dilakukan selaam 24 jam dengan suhu 37 o C. Hasil menunjukkan bahwa nilai total sel, total asam, total protein, pH, antibakteri dan fisikawi jauh lebih baik dan meningkatkan kualitas produk fermentasi substrat sari kacang merah dibandingkan dengan fermentasi dengan substrat susu sapi UHT.
Kata kunci: Lactococcus lactis subsp. lactis , Kacang Merah, Fermentasi, Asam Laktat

## Pendahuluan
Kebutuhan pangan setiap tahun selalu meningkat. Namun, kebutuhan ini tidak diimbangi oleh ketersediaan pangan yang ada. Kualitas pangan terutama kandungan gizi yang masih tersediapun masih dibawah standar. Salah satu penyebab pangan kurang tersedia karena pangan kurang bertahan lama sehingga pangan menjadi mudah busuk.
Kacang merah merupakan salah satu komoditas pangan yang kebutuhan minat konsumen yang cukup tinggi. Kandungan protein yang cukup tinggi ini menjadikan kacang merah sebagai alternatif sumber protein. α -galaktosida dari oligosakarida pada kacang merah menjadi faktor antinutrisi sehingga perlu dilakukan pemasakan, perendaman atau fermentasi untuk menguraikan senyawa tersebut sehingga dapat meningkatkan nutrisi dari kacang merah (Han & Baik, 2006).
Fermentasi merupakan salah satu pengolangan pangan yang dapat mengubah makanan menjadi lebih awet. Citarasa, aroma serta kandungan gizi dalam makanan menjadi meningkat jika melalui proses fermentasi (Famworth, 2008). Fermentasi dalam prosesnya membutuhkan mikroorganisme untuk mengubah senyawa kompleks menjadi lebih sederhana dalam substrat dengan bantuan enzim pada mikroorganisme tersebut (Jay, Loessner, & Golden, 2005). Salah satu kelompok mikroorganisme yang berperan dalam fermentasi adalah Bakteri Asam Laktat. BAL telah diamati pada berbagai jenis makanan tradisional salah satunya adalah fermentasi chao chao, dadih soya ( Nurhikmayani, Daryono, & Retnaningrum,  2019; Retnaningrum, Yossi, Nur’azizah,  Sapalina & Kulla, 2020). Bakteri ini mampu menghasilkan produk utama berupa asam laktat serta produk lainnya sejumlah etanol, asam asetat dan lain-lain.
Bioeksperimen, Volume 5 No.1, (Maret 2019)
Salomon Christian, Wahyu Irawati. (2019). Uji Resistensi Isolat Khamir yang Diisolasi dari Limbah Industri di Rungkut, Surabaya, Indonesia. Jurnal Bioeksperimen . Vol. 5 (1) Pp. 1-10. Doi: 10.23917/bioeksperimen.v5i1.2795

## UJI RESISTENSI ISOLAT KHAMIR YANG DIISOLASI DARI LIMBAH INDUSTRI DI RUNGKUT, SURABAYA, INDONESIA
Salomo Christian 1) ; Wahyu Irawati 2)* 1 Fakultas Ilmu Pendidikan, Program Studi Pendidikan Biologi,
2 Fakultas sains dan Matematika, Program Studi Biologi, Universitas Pelita Harapan Jalan M.H. Thamrin Boulevard 1100, Lippo Karawaci, Tangerang 15811, Indonesia *Email : w.irawati3@gmail.com
Abstrak Pencemaran tembaga di daerah Rungkut-Surabaya telah melebihi ambang batas sehingga dapat mengancam kehidupan organisme di laut. Tembaga tidak dapat didegradasi dan beracun pada konsentrasi tinggi sehingga diperlukan pengolahan limbah yang dapat menurunkan konsentrasi tembaga di lingkungan. Khamir resisten tembaga dapat diisolasi dari daerah tercemar dan dapat dijadikan sebagai agen bioremediasi untuk mengatasi pencemaran tembaga. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan isolasi dan uji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri. Sampel diambil dari lumpur aktif pusat pengolahan limbah PT. SIER Surabaya. Isolasi dilakukan dengan pengenceran sampel limbah kemudian diinokulasikan dengan metode sebar ke dalam medium Yeast Extract Peptone Dextrose Agar yang diperkaya dengan CuSO 4 . Uji resistensi dilakukan dengan menginokulasikan isolat murni dengan metode gores ke dalam medium Agar yang mengandung berbagai konsentrasi CuSO 4 untuk menentukan nilai Minimum Inhibitory Concentration (MIC). Hasil isolasi diperoleh delapan isolat khamir dengan kode ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, dan ES10.4. Nilai MIC isolat khamir tersebut berkisar antara 16-20 Mm CuSO 4 . Isolat yang paling resisten adalah isolat dengan kode ES9.3 dengan nilai MIC= 20 mM CuSO 4 , sehingga isolate ini dipilih sebagai isolate yang paling resisten terhadap polutan di Wilayah Rungkut, Surabaya, Indonesia.
Kata kunci: Isolasi, karakterisasi, khamir, resistensi, tembaga, isolate ES9.3
Abstract Copper pollution in Rungkut-Surabaya area has exceeded the threshold so that it can be threaten the life of organisms in the sea. Copper cannot be degraded and its very toxic at high concentrations. So that, we need to treat the water waste to reduce copper concentrations. Copper yeast can be isolated from polluted areas and can be used as a bioremediation agent to overcome copper pollution. This study aims to conduct copper isolation and yeast resistance testing from industrial waste. Samples taken from the activated sludge of PT. SIER Surabaya. Isolation was carried out by dilution of the waste sample and then inoculated with the scatter method into Yeast Extract medium Peptone Dextrose Agar enriched with CuSO 4 . The resistance test was carried out by inoculating the pure isolate with the scratch method into Agar medium containing various concentrations of CuSO 4 to determine the value of Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The isolation results obtained eight yeast isolates with the code ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, and ES10.4. The MIC value of yeast isolates ranged from 16-20 Mm CuSO4. The most resistant isolates were isolates with code ES9.3 with MIC = 20 mM CuSO 4 , so that this isolate was chosen as the most resistant isolate to pollutants in the Rungkut Region, Surabaya, Indonesia.
Keywords: Isolation, characterization, yeast, resistance, copper, isolate ES9.3

## Pendahuluan
Logam berat merupakan polutan yang tidak dapat didegradasi dan cenderung terakumulasi di dalam tubuh organisme. Logam berat dapat menjadi polutan karena merupakan senyawa sisa yang dihasilkan dari industri (Kobya, Demirbas, Senturk, & Ince, 2005). Tembaga adalah logam
berat yang banyak digunakan di dalam industri terutama industri elektronik dan bersifat toksik bagi organisme (Davis, Volesky, & Vieira, 2000). Tembaga merupakan salah satu logam berat esensial dan diperlukan oleh manusia dalam konsentrasi yang sangat kecil, yaitu tidak lebih dari 0,05 mg/kg berat badan yaitu untuk membentuk hemoglobin dan kolagen, tetapi akan menjadi racun jika konsentrasi
Bioeksperimen, Volume 6 No. 2 (September 2020)
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui efektivitas bakteri asam laktat dalam proses fermentasi sari kacang merah serta mengetahui pengaruh penambahan bakteri asam laktat terhadap nilai gizi produk fermentasi.

## Metode Penelitian
Penelitian dilakukan pada bulan Mei hingga Juli 2019 bertempat di Laboratorium Mikrobiologi, Fakultas Biologi, Universitas Gadjah Mada. Isolat BAL yang digunakan yaitu Lactococcus lactis subsp. lactis NBRC 12007 didapatkan dari Laboratorium Bioteknologi, Pascasarjana UGM. Pada uji total asam, total protein, pH, total sel BAL dan fisikawi dilakukan setiap 6 jam sekali selama 24 jam. Pada uji antibakteri dan organoleptik diambil pada saat fermentasi ke 24 jam. Penelitian dilakukan dengan melalui beberapa tahap :
1.  Persiapan Produk Fermentasi a.  Persiapan Kultur Starter Isolat Lactococcus lactis subsp. lactis NBRC 12007 ditumbuhkan pada medium MRSA selama 48 jam dengan suhu 37 o C. Isolat diinokulasikan ke dalam aquades steril dan digojog hingga homogen. Selanjutnya, dimasukkan kedalam susu sapi UHT yang sudah dipasteurisasi dan diinkubasi selama 48 jam dengan suhu 37 o C. Dilakukan perhitungan jumlah koloni dengan metode total plate count . Jumlah BAL yang sudah mencapai 10 6 ml siap digunakan sebagai starter (Tamime & Robinson, 2000).
b.  Pembuatan Sari Kacang Merah Kacang merah direndam dalam air dengan perbandingan 4:1 selama 8 jam. Lalu direbus selama 10 menit. Kacang merah digiling dengan blender dan ditambahkan air dengan perbandingan 8 : 1. Bubur encer disaring dengan kain tipis dan filtrat nya diambil (Kunaepah, 2008).
c.  Pembuatan Produk Fermentasi Sari kacang merah dan susu sapi yang sudah dipasteurisasi ditambahkan gula 5%, susu skim 5% dan gelatin 1% . Selanjutnya dituangkan starter 3% ke dalam substrat yang akan difermentasi dan diinkubasi selama 24 jam dengan suhu 37 o C.
2.  Uji Kualitatif Produk Fermentasi a.  Uji Organoleptik Produk Fermentasi Uji ini dilakukan oleh 10 orang panelis yang dipilih secara acak dari Mahasiswa Fakultas Biologi UGM. Parameter yang digunakan dari segi rasa, warna, aroma, tekstur, dan keseluruhan sampel dan panelis diminta untuk mengisi lembar kuesioner yang telah disajikan (Chang, Kim, & Han, 2010).

## 3.  Uji Kuantitatif Produk Fermentasi a.  Uji Total Asam
Sampel 10 ml dimasukkan kedalam labu takar 100 mL dan diencerkan dengan akuades. 5 mL sampel yang sudah diencerkan dipindahkan kedalam erlenmeyer 100 mL dan ditambahkan 2 tetes fenolftalein 1%. Titrasi dilakukan dengan menggunakan NaOH 0,1 N. Hasil yang didapat dihitung dengan rumus :
Total asam tertitrasi = ml 0,1 N NaOH x 0,009 x FP ml sampel
b.  Uji Total Protein Sampel diambil sebanyak 8 µL dan dimasukkan ke dalam mikroplate dengan tiga kali ulangan. Kemudian dimasukkan reagen bradford sebanyak 100 µl. Selanjutnya dimasukkan ke ELISA reader dengan panjang gelombang 595 nm (Mufidah, Wibowo, & Subekti, 2015).
c.  Uji pH Uji pH dilakukan dengan menggunakan alat pH meter.
d.  Uji Antibakteri Uji antibekteri dilakukan dengan menggunakan metode difusi agar. Bakteri patogen yang digunakan adalah Escherichia coli . Kultur E. coli diambil sebanyak 1 mL dan dimasukkan ke cawan petri. Selanjutnya dituangkan medium NA ditunggu hingga padat. Kemudian dibuat sumuran dan dimasukkan sampel sebanyak 60 µL. Lalu diinkubasi pada suhu 37 o C selama 24 jam.
ISSN 2460-1365
tembaga tersebut melebihi tingkat kebutuhan harian. Akumulasi tembaga di dalam tubuh manusia dapat mengakibatkan berbagai macam penyakit seperti gagal ginjal, kanker, kerusakan liver, kerusakan otak, gangguan saraf, bahkan kematian (Hocheng, Chakankar, & Jadhav, 2018).
Pencemaran tembaga di pantai timur Surabaya merupakan salah satu kasus pencemaran logam berat yang terjadi di Indonesia yang belum dapat ditanggulangi. Pencemaran ini dapat terjadi karena adanya pembuangan limbah cair ke sungai oleh industri yang berada di sekitar pantai timur Surabaya. Akibat yang ditimbulkan dari pencemaran tembaga adalah akumulasi tembaga oleh hewan yang hidup di sungai dan laut di sekitarnya seperti ikan, kerang, dan udang. Hewan-hewan yang mengakumulasi logam berat bila terkonsumsi oleh manusia dalam jangka panjang dapat menimbulkan kerusakan pada beberapa organ tubuh (Irawati, Parhusip, Christian, & Yuwono, 2017).
Data pencemaran logam berat menunjukkan bahwa kadar Cu pada ikan dan kerang dari pantai sekitar muara yang berasal dari Rungkut, yaitu pantai di kelurahan Sukolilo mengandung 2.290,20 ppb dan 5.920,20 ppb. Pencemaran di Rungkut telah melebihi ambang batas yang ditentukan oleh World Health Organization (WHO) yaitu 1.200 ppb sehingga dapat membahayakan kesehatan penduduk yang tinggal di desa tersebut. Masalah kontaminasi tembaga di lingkungan telah dilakukan di beberapa daerah industri tetapi untuk mendegradasi dan menghilangkan logam berat tidak semudah mendegradasi limbah organik karena limbah logam berat bersifat nonbiodegradable. Degradasi dan reduksi logam berat dari lingkungan untuk skala kecil dapat dilakukan dengan cara fisik dan kimia melalui pertukaran ion (ion exchange), presipitasi, koagulasi, inverse osmosis, dan adsorpsi. Metode-metode tersebut cukup efisien dalam mengurangi kontaminasi logam berat tetapi akan sangat merugikan bila digunakan untuk mengolah limbah industri yang sangat banyak sehingga akan menimbulkan masalah baru, yaitu biaya  pengolahan limbah yang relatif mahal, membutuhkan energi dan bahan kimia cukup banyak (Jianlong, 2002).
Pendekatan secara bioteknologi dengan menggunakan khamir merupakan alternatif yang
dapat dilakukan untuk masa yang akan datang dan merupakan langkah yang cukup berpotensi dalam meremediasi limbah cair yang mengandung logam berat. Mikroorganisme dapat mengurangi konsentrasi logam berat di lingkungannya melalui proses adsorpsi, produksi senyawa ekstraseluler, maupun sintesis enzimatis. Berbagai mikroorganisme memiliki toleransi terhadap logam pada konsentrasi yang lebih tinggi setelah ditumbuhkan pada medium yang mengandung logam berat (Irawati, Riak, Sopiah, & Sulistia, 2017). Hasil penelitian menunjukkan bahwa beberapa jenis khamir seperti Saccharomyces pombe strain 972, Saccharomyces cerevisiae, dan Candida tropicalis dapat mengabrsopsi tembaga di dalam medium masing-masing sebesar 70%, 86%, dan 82% (Stephen, 1992; Rahman, 2007). Mekanisme detoksifikasi tembaga pada khamir pada umumnya adalah dengan cara pengikatan ion tembaga pada membran, penyerapan ke dalam sel, dan dilanjutkan dengan pengikatan ion tembaga oleh protein metallothionein (MT) (Ashish, Neeti, & Himanshu, 2013). Eksplorasi khamir resisten tembaga yang dapat mengakumulasi tembaga perlu dilakukan untuk mendukung program bioremediasi limbah tembaga di Indonesia demi terciptanya lingkungan yang terbebas dari kontaminasi logam berat. Tingkat kontaminasi limbah tembaga di banyak daerah industri di Indonesia telah melebihi ambang batas dan perlu ditanggulangi untuk menghentikan pencemaran limbah tembaga ke lingkungan. Khamir resisten tembaga merupakan mikroorganisme yang sangat berpotensi dalam mengakumulasi tembaga dari limbah dalam proses bioremediasi tetapi penelitian mengenai isolasi dan karakterisasi khamir resisten tembaga belum banyak dilakukan di Indonesia (Qayyum, Khan, Maqbool, Zhao, & Peng, 2016) (Jianlong, 2002). Eksplorasi khamir resisten tembaga dari daerah industri Rungkut-Surabaya sangat penting untuk dilakukan sebagai langkah awal dalam rangka mendapatkan solusi dalam meremediasi lingkungan yang telah tercermar logam berat. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan menguji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri Rungkut Surabaya.
Bioeksperimen, Volume 6 No. 2 (September 2020) ISSN 2460-1365

## e.  Uji Total Sel BAL
Uji ini dilakukan dengan metode Total Plate Count yang ditumbuhkan pada medium MRSA. Sampel diencerkan hingga 10 8 . Pengenceran 10 6 hingga 10 8 masing-masing diambil sebanyak 1ml dan tuangkan kedalam cawan petri. Kemudian ditambahkan medium MRSA dan diinkubasi pada 37 o C selama 48 jam (Fardiaz, 1993). f.  Uji Fisikawi Sampel diambil sebanyak 10gram dan dimasukkan ke dalam oven dengan suhu 105 o C dan ditunggu hingga berat mencapai konstan. Hasil yang didapat dihitung dengan menggunakan rumus :
• Persentase Kadar Air (wt/wt) =
Berat kering – Berat basah x 100% Berat sampel basah
• Persentase total padatan (wt/wt) =
berat kering sampel x 100%
Berat basah sampe
(Nielsen, 2014)
Hasil dan Pembahasan
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan, didapatkan hasil sebagai berikut :
1. Uji Organoleptik
Uji ini dilakukan untuk mengetahui perbedaan kualitas diantara beberapa produk dan memberikan besarnya perbedaan berdasarkan penilaian terhadap sifat tertentu dari suatu produk.
Tabel 1. Uji Organoleptik Produk Fermentasi Sari Kacang Merah dan Kontrol (Susu Sapi UHT)
Parameter Produk Sari kacang merah Kontrol Rasa 3.7 2.8 Aroma 3.2 3.6 Tekstur 2.7 3.2 Warna 3.3 3.4 Keseluruhan 2.9 3.1
Dari hasil yang di dapat produk fermentasi substrat kacang merah memiliki rasa yang lebih asam dibandingkan dengan kontrol. Produk fermentasi sari kacang merah jauh lebih encer, beraroma lebih asam dibandingkan dengan kontrol. Aroma yang terbentuk karena BAL menghasilkan produk gugus karbonil seperti asetaldehit, aston dan diasetil sehingga membentuk rasa/aroma yang khas (Yildiz, 2010). Rasa asam yang terbentuk merupakan hasil produk utama dari fermentasi oleh BAL. Perbedaan warna diakibatkan karena produk asal (substrat) yang berbeda, sehingga menghasilkan warna akhir yang berbeda.

## 2. Uji Total Asam
Fermentasi dengan starter BAL akan menghasilkan produk utama yaitu berupa asam. Uji ini bertujuan untuk menghitung kadar asam yang dihasilkan mikroorganisme pada produk fermentasi dengan substrat yang berbeda.

## Gambar 1. Total Asam Fermentasi Sari Kacang Merah dan Susu Sapi (Kontrol) Selama 24 jam
Total asam dengan substrat sari kacang merah dan susu sapi UHT mengalami peningkatan setelah dilakukan fermentasi selama 24 jam (Gambar 1). Namun Kadar asam pada substrat sari kacang merah jauh lebih tinggi pada jam ke 24. Hal ini membuktikkan bahwa L. lactis menghasilkan asam selama proses fermentasi. Asam piruvat akan terbentuk dari hasil pemecahan dari glukosa melalui jalur EMP (Embden-Meyerhof-Parnas) (Gänzle, 2015). Selanjutnya fermentasi asam piruvat akan diubah menjadi asam laktat (Fardiaz, 1987).

## 3. Uji Total Protein
Metode yang digunakan pada uji adalah metode uji bradford. Metode ini menggunakan
Bioeksperimen, Volume 5 No.1, (Maret 2019)
Salomon Christian, Wahyu Irawati. (2019). Uji Resistensi Isolat Khamir yang Diisolasi dari Limbah Industri di Rungkut, Surabaya, Indonesia. Jurnal Bioeksperimen . Vol. 5 (1) Pp. 1-10. Doi: 10.23917/bioeksperimen.v5i1.2795

## UJI RESISTENSI ISOLAT KHAMIR YANG DIISOLASI DARI LIMBAH INDUSTRI DI RUNGKUT, SURABAYA, INDONESIA
Salomo Christian 1) ; Wahyu Irawati 2)* 1 Fakultas Ilmu Pendidikan, Program Studi Pendidikan Biologi,
2 Fakultas sains dan Matematika, Program Studi Biologi, Universitas Pelita Harapan Jalan M.H. Thamrin Boulevard 1100, Lippo Karawaci, Tangerang 15811, Indonesia *Email : w.irawati3@gmail.com
Abstrak Pencemaran tembaga di daerah Rungkut-Surabaya telah melebihi ambang batas sehingga dapat mengancam kehidupan organisme di laut. Tembaga tidak dapat didegradasi dan beracun pada konsentrasi tinggi sehingga diperlukan pengolahan limbah yang dapat menurunkan konsentrasi tembaga di lingkungan. Khamir resisten tembaga dapat diisolasi dari daerah tercemar dan dapat dijadikan sebagai agen bioremediasi untuk mengatasi pencemaran tembaga. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan isolasi dan uji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri. Sampel diambil dari lumpur aktif pusat pengolahan limbah PT. SIER Surabaya. Isolasi dilakukan dengan pengenceran sampel limbah kemudian diinokulasikan dengan metode sebar ke dalam medium Yeast Extract Peptone Dextrose Agar yang diperkaya dengan CuSO 4 . Uji resistensi dilakukan dengan menginokulasikan isolat murni dengan metode gores ke dalam medium Agar yang mengandung berbagai konsentrasi CuSO 4 untuk menentukan nilai Minimum Inhibitory Concentration (MIC). Hasil isolasi diperoleh delapan isolat khamir dengan kode ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, dan ES10.4. Nilai MIC isolat khamir tersebut berkisar antara 16-20 Mm CuSO 4 . Isolat yang paling resisten adalah isolat dengan kode ES9.3 dengan nilai MIC= 20 mM CuSO 4 , sehingga isolate ini dipilih sebagai isolate yang paling resisten terhadap polutan di Wilayah Rungkut, Surabaya, Indonesia.
Kata kunci: Isolasi, karakterisasi, khamir, resistensi, tembaga, isolate ES9.3

## Abstract
Copper pollution in Rungkut-Surabaya area has exceeded the threshold so that it can be threaten the life of organisms in the sea. Copper cannot be degraded and its very toxic at high concentrations. So that, we need to treat the water waste to reduce copper concentrations. Copper yeast can be isolated from polluted areas and can be used as a bioremediation agent to overcome copper pollution. This study aims to conduct copper isolation and yeast resistance testing from industrial waste. Samples taken from the activated sludge of PT. SIER Surabaya. Isolation was carried out by dilution of the waste sample and then inoculated with the scatter method into Yeast Extract medium Peptone Dextrose Agar enriched with CuSO 4 . The resistance test was carried out by inoculating the pure isolate with the scratch method into Agar medium containing various concentrations of CuSO 4 to determine the value of Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The isolation results obtained eight yeast isolates with the code ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, and ES10.4. The MIC value of yeast isolates ranged from 16-20 Mm CuSO4. The most resistant isolates were isolates with code ES9.3 with MIC = 20 mM CuSO 4 , so that this isolate was chosen as the most resistant isolate to pollutants in the Rungkut Region, Surabaya, Indonesia.
Keywords: Isolation, characterization, yeast, resistance, copper, isolate ES9.3

## Pendahuluan
Logam berat merupakan polutan yang tidak dapat didegradasi dan cenderung terakumulasi di dalam tubuh organisme. Logam berat dapat menjadi polutan karena merupakan senyawa sisa yang dihasilkan dari industri (Kobya, Demirbas, Senturk, & Ince, 2005). Tembaga adalah logam
berat yang banyak digunakan di dalam industri terutama industri elektronik dan bersifat toksik bagi organisme (Davis, Volesky, & Vieira, 2000). Tembaga merupakan salah satu logam berat esensial dan diperlukan oleh manusia dalam konsentrasi yang sangat kecil, yaitu tidak lebih dari 0,05 mg/kg berat badan yaitu untuk membentuk hemoglobin dan kolagen, tetapi akan menjadi racun jika konsentrasi
Bioeksperimen, Volume 6 No. 2 (September 2020)
readgen bradford yang melibatkan warna Coosmassie Brilliant Blue (CBB) yang akan berikatan dengan protein.
Gambar 2. Total Protein Fermentasi Susu Sapi (kontrol) dan Kacang Merah Selama 24 jam
Produk fermentasi substrat sari kacang mengalami kenaikan protein (Gambar 2). Hal ini diduga, mikroorganisme mengalami kenaikan jumlah sehingga enzim protease yang dihasilkan semakin tinggi dan kadar protein mengalami degradasi oleh enzim-enzim protease yang dihasilkan oleh L. lactis (Granito, Michel, Frias, Champ, & Guerra, 2005). Pada produk fermentasi substrat susu UHT mengalami penurunan kadar protein, hal ini mungkin karena protein pada susu digunakan bakteri sebagai nutrisi sehingga produksi protease tidak seimbang dengan protein untuk nutrisi bakteri.
4. Uji pH pH menunjukkan total asam pada suatu sampel. Semakin tinggi total asam makan pH yang didapat semakin rendah <7. Uji pH ini berkaitan dengan uji total asam.
Gambar 3. pH fermentasi sari kacang merah dan susu sapi (Kontrol) Selama 24 jam.
Dapat dilihat pada gambar 3., diketahui bahwa pH pada kedua substrat ini mengalami penurunan. Namun, pada substrat sari kacang merah memiliki pH yang jauh lebih asam dibandingkan dengan kontrol.
Semakin lama fermentasi, maka asam laktat yang dihasilkan semakin banyak. Hal ini karena jumlah mikroorganisme mengalami peningkatan sehingga dapat menghasilkan asam jauh lebih tinggi. Kadar pH mempengaruhi aktivitas metabolisme pada bakteri. L. lactis lebih aktif bermetabolisme pada keadaan lingkungan yang asam.
5. Uji Antibakteri
Produk fermentasi jika ingin dikonsumsi perlu adanya uji antibakteri. Hal ini bertujuan untuk mengetahui kemampuan produk dalam menghambat pertumbuhan bakteri patogen. E. coli dianggap sebagai bakteri patogen karena dalam menyebabkan infeksi pada saluran pencernaan.
Tabel 2. Diameter antibakteri susu sapi dan sari kacang merah
Diameter Zona Bening (mm) Kontrol Kacang merah 16.7 22.5 Berdasakan Indu, Hatha, Abirosh, Harsha,
& Vivekanandan, (2006), aktivitas kriteria zona hambat dapat diukur dengan ukuran diameter yang terbentuk >16 mm maka aktivitas hambatan cukup tinggi, sedangkan pada diameter 12-16 mm aktivitas sedang dan jika berdiameter <12 mm aktivitas rendah. Produk fermentasi sari kacang merah dan susu sapi UHT yang telah diuji dapat dikategorikan sebagai aktivitas zona hambat yang tinggi. Jika dibandingkan kedua substrat ini, sari kacang merah cenderung lebih tinggi daya hambat dibandingkan dengan susu sapi UHT. Hal ini karena kandungan karbohidrat jauh lebih tinggi pada sari kacang merah sehingga hidrolisis karbohidrat jauh lebih tinggi dan menghasilkan asam yang cukup
ISSN 2460-1365
tembaga tersebut melebihi tingkat kebutuhan harian. Akumulasi tembaga di dalam tubuh manusia dapat mengakibatkan berbagai macam penyakit seperti gagal ginjal, kanker, kerusakan liver, kerusakan otak, gangguan saraf, bahkan kematian (Hocheng, Chakankar, & Jadhav, 2018).
Pencemaran tembaga di pantai timur Surabaya merupakan salah satu kasus pencemaran logam berat yang terjadi di Indonesia yang belum dapat ditanggulangi. Pencemaran ini dapat terjadi karena adanya pembuangan limbah cair ke sungai oleh industri yang berada di sekitar pantai timur Surabaya. Akibat yang ditimbulkan dari pencemaran tembaga adalah akumulasi tembaga oleh hewan yang hidup di sungai dan laut di sekitarnya seperti ikan, kerang, dan udang. Hewan-hewan yang mengakumulasi logam berat bila terkonsumsi oleh manusia dalam jangka panjang dapat menimbulkan kerusakan pada beberapa organ tubuh (Irawati, Parhusip, Christian, & Yuwono, 2017).
Data pencemaran logam berat menunjukkan bahwa kadar Cu pada ikan dan kerang dari pantai sekitar muara yang berasal dari Rungkut, yaitu pantai di kelurahan Sukolilo mengandung 2.290,20 ppb dan 5.920,20 ppb. Pencemaran di Rungkut telah melebihi ambang batas yang ditentukan oleh World Health Organization (WHO) yaitu 1.200 ppb sehingga dapat membahayakan kesehatan penduduk yang tinggal di desa tersebut. Masalah kontaminasi tembaga di lingkungan telah dilakukan di beberapa daerah industri tetapi untuk mendegradasi dan menghilangkan logam berat tidak semudah mendegradasi limbah organik karena limbah logam berat bersifat nonbiodegradable. Degradasi dan reduksi logam berat dari lingkungan untuk skala kecil dapat dilakukan dengan cara fisik dan kimia melalui pertukaran ion (ion exchange), presipitasi, koagulasi, inverse osmosis, dan adsorpsi. Metode-metode tersebut cukup efisien dalam mengurangi kontaminasi logam berat tetapi akan sangat merugikan bila digunakan untuk mengolah limbah industri yang sangat banyak sehingga akan menimbulkan masalah baru, yaitu biaya  pengolahan limbah yang relatif mahal, membutuhkan energi dan bahan kimia cukup banyak (Jianlong, 2002). Pendekatan secara bioteknologi dengan menggunakan khamir merupakan alternatif yang
dapat dilakukan untuk masa yang akan datang dan merupakan langkah yang cukup berpotensi dalam meremediasi limbah cair yang mengandung logam berat. Mikroorganisme dapat mengurangi konsentrasi logam berat di lingkungannya melalui proses adsorpsi, produksi senyawa ekstraseluler, maupun sintesis enzimatis. Berbagai mikroorganisme memiliki toleransi terhadap logam pada konsentrasi yang lebih tinggi setelah ditumbuhkan pada medium yang mengandung logam berat (Irawati, Riak, Sopiah, & Sulistia, 2017). Hasil penelitian menunjukkan bahwa beberapa jenis khamir seperti Saccharomyces pombe strain 972, Saccharomyces cerevisiae, dan Candida tropicalis dapat mengabrsopsi tembaga di dalam medium masing-masing sebesar 70%, 86%, dan 82% (Stephen, 1992; Rahman, 2007). Mekanisme detoksifikasi tembaga pada khamir pada umumnya adalah dengan cara pengikatan ion tembaga pada membran, penyerapan ke dalam sel, dan dilanjutkan dengan pengikatan ion tembaga oleh protein metallothionein (MT) (Ashish, Neeti, & Himanshu, 2013). Eksplorasi khamir resisten tembaga yang dapat mengakumulasi tembaga perlu dilakukan untuk mendukung program bioremediasi limbah tembaga di Indonesia demi terciptanya lingkungan yang terbebas dari kontaminasi logam berat. Tingkat kontaminasi limbah tembaga di banyak daerah industri di Indonesia telah melebihi ambang batas dan perlu ditanggulangi untuk menghentikan pencemaran limbah tembaga ke lingkungan. Khamir resisten tembaga merupakan mikroorganisme yang sangat berpotensi dalam mengakumulasi tembaga dari limbah dalam proses bioremediasi tetapi penelitian mengenai isolasi dan karakterisasi khamir resisten tembaga belum banyak dilakukan di Indonesia (Qayyum, Khan, Maqbool, Zhao, & Peng, 2016) (Jianlong, 2002). Eksplorasi khamir resisten tembaga dari daerah industri Rungkut-Surabaya sangat penting untuk dilakukan sebagai langkah awal dalam rangka mendapatkan solusi dalam meremediasi lingkungan yang telah tercermar logam berat. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan menguji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri Rungkut Surabaya.
Bioeksperimen, Volume 6 No. 2 (September 2020) ISSN 2460-1365
tinggi. Asam yang tinggi akan memberikan pH yang rendah sehingga aktivitas antibakteri menjadi jauh lebih tinggi (Wijaningsih, 2008).

## 6.  Uji Total Sel BAL
L. lactis merupakan salah satu kelompok bakteri asam laktat. Bakteri ini merupakan termasuk homofermentatif. L. lactis sendiri dapat hidup pada pH optimum sekitar 6,3-6,9 dan memiliki batas pertumbuhan terendah pH sekitar 4 sampai 5 (Sánchez et al ., 2008). Pada proses fermentasi, bakteri asam laktat pada umunya memanfaatkan karbohidrat seperti glukosa, fruktosa dan sukrosa sebagai sumber nutrisi utama. Kacang merah termasuk kedalam bahan pangan nabati yang umumnya mengandung maltosa dan fruktosa yang disukai oleh bakteri asam laktat yang akan digunakan sebagai nutrisi untuk pertumbuhan (Kurniasih & Rosahdi, 2013).
Gambar 4. Hasil TPC BAL ( Lactococcus lactis ) selama 24 Jam
Sari kacang merah maupun susu sapi (Kontrol) mengalami kenaikan total sel BAL (Gambar 4). Namun, pada sari kacang merah sudah mengalami kenaikan pada jam ke 12 lalu mengalami fase stationer hingga jam ke 24. Sebaliknya, pada kontrol (susu sapi) mengalami kenaikan total sel bal terus menerus dari jam ke 0 hingga ke 24. Hal ini karena bakteri pada fase log.
7.  Uji Fisikawi Uji Fisikawi terdiri dari kadar air dan total padatan. Kadar air dalam bahan pangan sangat
mempengaruhi kualitas dan daya simpan dari bahan pangan tersebut.

## Gambar 5. Hasil Total Kadar Air Produk Fermentasi Susu Sapi (Kontrol) dan Sari Kacang Merah Selama 24 jam
Dari hasil analisis dapat diketahui bahwa kadar air pada sari kacang merah jauh lebih tinggi di banding dengan kontrol. Sari kacang merah dan kontrol dari 6 jam hingga 24 jam terus menurun. Hal ini dikarenakan pada kontrol cenderung jauh lebih kental dibanding dengan sari kacang merah. Pembuatan sari kacang merah dilakukan penambahan air sebanyak 8 kali berat biji kacang merah, sehingga kadar air jauh lebih tinggi di banding kontrol. Zhao, Feng, Ren, & Xueying (2018), yoghurt susu sapi memiliki kandungan air yang jauh lebih rendah karena tidak ada penambahan air pada saat pengolahan.
Gambar 6. Total padatan fermentasi sari kacang merah dan susu sapi (Kontrol) Selama 24 jam
Hasil total padatan pada kontrol maupun sari kacang merah mengalami kenaikan (Gambar
Bioeksperimen, Volume 5 No.1, (Maret 2019)
Salomon Christian, Wahyu Irawati. (2019). Uji Resistensi Isolat Khamir yang Diisolasi dari Limbah Industri di Rungkut, Surabaya, Indonesia. Jurnal Bioeksperimen . Vol. 5 (1) Pp. 1-10. Doi: 10.23917/bioeksperimen.v5i1.2795

## UJI RESISTENSI ISOLAT KHAMIR YANG DIISOLASI DARI LIMBAH INDUSTRI DI RUNGKUT, SURABAYA, INDONESIA
Salomo Christian 1) ; Wahyu Irawati 2)* 1 Fakultas Ilmu Pendidikan, Program Studi Pendidikan Biologi,
2 Fakultas sains dan Matematika, Program Studi Biologi, Universitas Pelita Harapan Jalan M.H. Thamrin Boulevard 1100, Lippo Karawaci, Tangerang 15811, Indonesia *Email : w.irawati3@gmail.com
Abstrak Pencemaran tembaga di daerah Rungkut-Surabaya telah melebihi ambang batas sehingga dapat mengancam kehidupan organisme di laut. Tembaga tidak dapat didegradasi dan beracun pada konsentrasi tinggi sehingga diperlukan pengolahan limbah yang dapat menurunkan konsentrasi tembaga di lingkungan. Khamir resisten tembaga dapat diisolasi dari daerah tercemar dan dapat dijadikan sebagai agen bioremediasi untuk mengatasi pencemaran tembaga. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan isolasi dan uji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri. Sampel diambil dari lumpur aktif pusat pengolahan limbah PT. SIER Surabaya. Isolasi dilakukan dengan pengenceran sampel limbah kemudian diinokulasikan dengan metode sebar ke dalam medium Yeast Extract Peptone Dextrose Agar yang diperkaya dengan CuSO 4 . Uji resistensi dilakukan dengan menginokulasikan isolat murni dengan metode gores ke dalam medium Agar yang mengandung berbagai konsentrasi CuSO 4 untuk menentukan nilai Minimum Inhibitory Concentration (MIC). Hasil isolasi diperoleh delapan isolat khamir dengan kode ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, dan ES10.4. Nilai MIC isolat khamir tersebut berkisar antara 16-20 Mm CuSO 4 . Isolat yang paling resisten adalah isolat dengan kode ES9.3 dengan nilai MIC= 20 mM CuSO 4 , sehingga isolate ini dipilih sebagai isolate yang paling resisten terhadap polutan di Wilayah Rungkut, Surabaya, Indonesia.
Kata kunci: Isolasi, karakterisasi, khamir, resistensi, tembaga, isolate ES9.3

## Abstract
Copper pollution in Rungkut-Surabaya area has exceeded the threshold so that it can be threaten the life of organisms in the sea. Copper cannot be degraded and its very toxic at high concentrations. So that, we need to treat the water waste to reduce copper concentrations. Copper yeast can be isolated from polluted areas and can be used as a bioremediation agent to overcome copper pollution. This study aims to conduct copper isolation and yeast resistance testing from industrial waste. Samples taken from the activated sludge of PT. SIER Surabaya. Isolation was carried out by dilution of the waste sample and then inoculated with the scatter method into Yeast Extract medium Peptone Dextrose Agar enriched with CuSO 4 . The resistance test was carried out by inoculating the pure isolate with the scratch method into Agar medium containing various concentrations of CuSO 4 to determine the value of Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The isolation results obtained eight yeast isolates with the code ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, and ES10.4. The MIC value of yeast isolates ranged from 16-20 Mm CuSO4. The most resistant isolates were isolates with code ES9.3 with MIC = 20 mM CuSO 4 , so that this isolate was chosen as the most resistant isolate to pollutants in the Rungkut Region, Surabaya, Indonesia.
Keywords: Isolation, characterization, yeast, resistance, copper, isolate ES9.3

## Pendahuluan
Logam berat merupakan polutan yang tidak dapat didegradasi dan cenderung terakumulasi di dalam tubuh organisme. Logam berat dapat menjadi polutan karena merupakan senyawa sisa yang dihasilkan dari industri (Kobya, Demirbas, Senturk, & Ince, 2005). Tembaga adalah logam
berat yang banyak digunakan di dalam industri terutama industri elektronik dan bersifat toksik bagi organisme (Davis, Volesky, & Vieira, 2000). Tembaga merupakan salah satu logam berat esensial dan diperlukan oleh manusia dalam konsentrasi yang sangat kecil, yaitu tidak lebih dari 0,05 mg/kg berat badan yaitu untuk membentuk hemoglobin dan kolagen, tetapi akan menjadi racun jika konsentrasi
Bioeksperimen, Volume 6 No. 2 (September 2020)
6). Namun, pada sari kacang merah memiliki total padatan yang jauh lebih rendah dibanding dengan kontrol. Hal ini karena fermentasi pada kedua substrat ini menghasilkan kekentalan yang berbeda-beda. Pada kontrol jauh lebih kental dan sudah terbentuk padatan, sedangkan pada sari kacang merah tidak terbentuk padatan namun semakin kental dari sebelum fermentasi.
Simpulan
Lactococcus lactis subsp. Lactis NBRC 12007 memiliki efektivitas yang baik dalam menghasilkan dan meningkatkan produk fermentasi pada substrat sari kacang merah di banding dengan fermentasi dengan substrat susu sapi UHT. Namun, dari segi kualitas kurang baik dibandingkan dengan susu sapi UHT.

## Daftar Pustaka
Chang, S. Y., Kim, D. H., & Han, M. J. (2010). Physicochemical and sensory characteristics of soy yogurt fermented with Bifidobacterium brewe K-110, Streptococcus thermophils 3781, or Lactobacillus acidophilus Q509011. Food Science and Biotechnology , 19 (1), 107–113.
Famworth, E. R. (2008). Handbook of fermented functional foods 2nd ed . Boca Raton: CRC Press.
Fardiaz, S. (1987). Penuntun Praktek: Mikrobiologi Pangan . Bogor: Institut Pertanian Bogor.
Fardiaz, S. (1993). Mirobiologi Pangan . Jakarta: Raja Grafindo Persada.
Gänzle, M. G. (2015). Lactic metabolism revisited: metabolism of lactic acid bacteria in food fermentations and food spoilage. Current Opinion in Food Science . 2,106-117. https://doi. org/10.1016/j.cofs.2015.03.001
Granito, M., Michel, C., Frias, J., Champ, M., & Guerra, M. (2005). Fermented Phaseolus vulgaris : acceptabilitu and intestinal effects. European Food Research and Technology , 220 , 182–186.
Han, I. H., & Baik, B. K. (2006). Oligosaccharide content and composition of legumes and their reduction by soaking, cooking, ultrasound and high hydrostatic pressure. Cereal Chemistry , 93 (4), 428–433.
Indu, M. N., Hatha, A. A. M., Abirosh, C., Harsha, U., & Vivekanandan, G. (2006). Antimicrobial activity of some of the South-Indian spices against serotypes of Escherichia coli, Salmonella, Listeria Monocytogenes and Aeromonas Hydrophila. Brazilian Journal of Microbiology , 37 (2), 153–158. https://doi.org/10.1590/S1517-83822006000200011
Jay, J. M., Loessner, M. J., & Golden, D. A. (2005). Modern food microbiology 7th ed. New York: Springer science.
Kunaepah, U. (2008). Pengaruh Lama Fermentasi dan Konsentrasi Glukosa Terhadap Aktivitas Antibakteri, Polifenol Total dan Mutu Kimia Kefir Susu Kacang Merah (Universitas Diponegoro). Retrieved from http://eprints.undip.ac.id/17580/
Kurniasih, N., & Rosahdi, T. D. (2013). Perbandingan Efektivitas Sari Kacang Merah dan Kacang Hijau sebagai Media Pertumbuhan Lactobacillus acidophilus. Prosiding Seminar Nasional Sains Dan Teknologi Nuklir , 212–216.
Mufidah, T., Wibowo, H., & Subekti, D. T. (2015). Pengembangan Metode Elisa dan Teknik Deteksi Cepat dengan Imunostik Terhadap Antibodi Anti Aeromonas Hydrophila pada Ikan Mas (Cyprinid carpio). Jurnal Riset Akuakultur , 10 (4), 553. https://doi.org/10.15578/ jra.10.4.2015.553-565
Nielsen, S. (2014). Food Analysis . Berlin: Springer science.
Nurhikmayani, R., Daryono, B.S., Retnaningrum, E. (2019). Isolation and molecular identification
ISSN 2460-1365
tembaga tersebut melebihi tingkat kebutuhan harian. Akumulasi tembaga di dalam tubuh manusia dapat mengakibatkan berbagai macam penyakit seperti gagal ginjal, kanker, kerusakan liver, kerusakan otak, gangguan saraf, bahkan kematian (Hocheng, Chakankar, & Jadhav, 2018).
Pencemaran tembaga di pantai timur Surabaya merupakan salah satu kasus pencemaran logam berat yang terjadi di Indonesia yang belum dapat ditanggulangi. Pencemaran ini dapat terjadi karena adanya pembuangan limbah cair ke sungai oleh industri yang berada di sekitar pantai timur Surabaya. Akibat yang ditimbulkan dari pencemaran tembaga adalah akumulasi tembaga oleh hewan yang hidup di sungai dan laut di sekitarnya seperti ikan, kerang, dan udang. Hewan-hewan yang mengakumulasi logam berat bila terkonsumsi oleh manusia dalam jangka panjang dapat menimbulkan kerusakan pada beberapa organ tubuh (Irawati, Parhusip, Christian, & Yuwono, 2017).
Data pencemaran logam berat menunjukkan bahwa kadar Cu pada ikan dan kerang dari pantai sekitar muara yang berasal dari Rungkut, yaitu pantai di kelurahan Sukolilo mengandung 2.290,20 ppb dan 5.920,20 ppb. Pencemaran di Rungkut telah melebihi ambang batas yang ditentukan oleh World Health Organization (WHO) yaitu 1.200 ppb sehingga dapat membahayakan kesehatan penduduk yang tinggal di desa tersebut. Masalah kontaminasi tembaga di lingkungan telah dilakukan di beberapa daerah industri tetapi untuk mendegradasi dan menghilangkan logam berat tidak semudah mendegradasi limbah organik karena limbah logam berat bersifat nonbiodegradable. Degradasi dan reduksi logam berat dari lingkungan untuk skala kecil dapat dilakukan dengan cara fisik dan kimia melalui pertukaran ion (ion exchange), presipitasi, koagulasi, inverse osmosis, dan adsorpsi. Metode-metode tersebut cukup efisien dalam mengurangi kontaminasi logam berat tetapi akan sangat merugikan bila digunakan untuk mengolah limbah industri yang sangat banyak sehingga akan menimbulkan masalah baru, yaitu biaya  pengolahan limbah yang relatif mahal, membutuhkan energi dan bahan kimia cukup banyak (Jianlong, 2002). Pendekatan secara bioteknologi dengan menggunakan khamir merupakan alternatif yang
dapat dilakukan untuk masa yang akan datang dan merupakan langkah yang cukup berpotensi dalam meremediasi limbah cair yang mengandung logam berat. Mikroorganisme dapat mengurangi konsentrasi logam berat di lingkungannya melalui proses adsorpsi, produksi senyawa ekstraseluler, maupun sintesis enzimatis. Berbagai mikroorganisme memiliki toleransi terhadap logam pada konsentrasi yang lebih tinggi setelah ditumbuhkan pada medium yang mengandung logam berat (Irawati, Riak, Sopiah, & Sulistia, 2017). Hasil penelitian menunjukkan bahwa beberapa jenis khamir seperti Saccharomyces pombe strain 972, Saccharomyces cerevisiae, dan Candida tropicalis dapat mengabrsopsi tembaga di dalam medium masing-masing sebesar 70%, 86%, dan 82% (Stephen, 1992; Rahman, 2007). Mekanisme detoksifikasi tembaga pada khamir pada umumnya adalah dengan cara pengikatan ion tembaga pada membran, penyerapan ke dalam sel, dan dilanjutkan dengan pengikatan ion tembaga oleh protein metallothionein (MT) (Ashish, Neeti, & Himanshu, 2013). Eksplorasi khamir resisten tembaga yang dapat mengakumulasi tembaga perlu dilakukan untuk mendukung program bioremediasi limbah tembaga di Indonesia demi terciptanya lingkungan yang terbebas dari kontaminasi logam berat. Tingkat kontaminasi limbah tembaga di banyak daerah industri di Indonesia telah melebihi ambang batas dan perlu ditanggulangi untuk menghentikan pencemaran limbah tembaga ke lingkungan. Khamir resisten tembaga merupakan mikroorganisme yang sangat berpotensi dalam mengakumulasi tembaga dari limbah dalam proses bioremediasi tetapi penelitian mengenai isolasi dan karakterisasi khamir resisten tembaga belum banyak dilakukan di Indonesia (Qayyum, Khan, Maqbool, Zhao, & Peng, 2016) (Jianlong, 2002). Eksplorasi khamir resisten tembaga dari daerah industri Rungkut-Surabaya sangat penting untuk dilakukan sebagai langkah awal dalam rangka mendapatkan solusi dalam meremediasi lingkungan yang telah tercermar logam berat. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan menguji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri Rungkut Surabaya.
Bioeksperimen, Volume 6 No. 2 (September 2020)
of antimicrobial-producing Lactic Acid Bacteria from chao, South Sulawesi (Indonesia) fermented fish product. Biodiversitas, 20 (4), 1063-1068. https://doi.org/10.13057/biodiv/ d200418
Retnaningrum, E., Yossi, T., Nurazizah, R., Sapalina, F., Kulla, P. D. K. (2020). Characterization of a bacteriocin as biopreservative synthesized by indigenous lactic acid bacteria from dadih soya traditional product used in West Sumatra, Indonesia. Biodiversitas 21 (9), 4192-4198. https://doi.org/10.13057/biodiv/d210933
Sánchez, C., Neves, A. R., Cavalheiro, J., Dos Santos, M. M., García-Quintáns, N., López, P., & Santos, H. (2008). Contribution of citrate metabolism to the growth of Lactococcus lactis CRL264 at low pH. Applied and Environmental Microbiology , 74 (4), 1136–1144. https://doi. org/10.1128/AEM.01061-07
Tamime, A. Y., & Robinson, R. K. (2000). Yoghurt : Science and technology 2nd Ed (2nd ed.). Boston: CRC Press.
Wijaningsih, W. (2008). Aktivitas Antibakteri in Vitro dan Sifat Kimia Kefir Susu Kacang Hijau (Vigna radiata) oleh Pengaruh Jumlah Starter dan Lama Fermentasi Semarang. 1–128.
Yildiz, F. (2010). Development and Manufacture of yogurt and other Functional Dairy Product . New York: CRC Press.
Zhao, L., Feng, R., Ren, F., Xueying, M. (2018). Addition of buttermilk improves the flavor and volatile compound profiles of low-fat yogurt. LWT -Food Science and Technology . 98, 9-17. https://doi.org/10.1016/j.lwt.2018.08.029