Pertumbuhan Tunas Ubi Kayu ( Manihot esculenta Crantz.) Genotipe Jame-jame secara In Vitro In Vitro Shoots Growth of Cassava (Manihot esculenta Crantz.) Jame-jame Genotype
Candra Catur Nugroho 1 , Nurul Khumaida 2* , dan Sintho Wahyuning Ardie 2
1 Program Studi Bioteknologi dan Pemuliaan Tanaman, Sekolah Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor 2 Departemen Agronomi dan Hortikultura, Fakultas Pertanian, Institut Pertanian Bogor (Bogor Agricultural University), Jl. Meranti, Kampus IPB Darmaga, Bogor 16680, Indonesia
Diterima 16 Juli 2015/Disetujui 22 Januari 2016

## ABSTRACT
The  continuous  supply  of  true-to-type  seedling  through  in  vitro  technique  is  very  important  for  cassava  (Manihot esculenta Crantz.) as the demand for seedlings is increasing. The research consisted of two experiments and they were conducted from February 2013 to February 2014. The first experiment was in vitro shoot multiplication to evaluate the effect of culture medium and single node position on growth and shoot multiplication of cassava Jame-jame genotype. This experiment was arranged in a randomized complete block design with two factors and four replications. The first factor was culture medium (MS0 and MSB3) and the second factor was single node positions used as explant (basal, middle, and top section of the stem). The result showed that middle section of the stem cultured on MS0 medium had the highest shoot height, number of leaves, and number of nodes. The second experiment was the acclimatization to evaluate the effect of culture period on the success of the acclimatization. This experiment was arranged in a completely randomized design with culture period prior to acclimatization as treatment. The results showed that seedlings from period of 12 and 24 weeks after culture showed higher survival rates (80%) than seedling from period of 36 and 48 weeks after culture (50 and 40%). Culture period prior to acclimatization had no significant effect on plant height and number of leaves.
Keywords: BAP, culture period, single node position, shoot multiplication

## ABSTRAK
Penyediaan bibit ubi kayu (Manihot esculenta Crantz.) true-to-type melalui kultur jaringan sangat penting mengingat permintaan  yang  semakin  tinggi  terhadap  ubi  kayu.  Penelitian  ini  terdiri  atas  dua  percobaan  yang  dilaksanakan  dari Februari 2013 hingga Februari 2014. Percobaan pertama adalah multiplikasi tunas yang bertujuan untuk mempelajari pengaruh penggunaan media kultur dan posisi buku tunggal terhadap pertumbuhan dan multiplikasi tunas ubi kayu genotipe Jame-jame  secara  in  vitro.  Percobaan  ini  disusun  berdasarkan  rancangan  kelompok  lengkap  teracak  faktorial  dengan dua faktor dan empat ulangan. Faktor pertama yaitu media kultur (MS0 dan MSB3) dan faktor kedua yaitu posisi buku tunggal sebagai eksplan (pangkal, tengah, dan ujung). Hasil penelitian menunjukkan bahwa buku tunggal bagian tengah yang dikulturkan dalam media MS0 menghasilkan tinggi tunas, jumlah daun, dan jumlah buku tertinggi. Percobaan kedua adalah aklimatisasi bibit yang bertujuan untuk mempelajari pengaruh periode kultur terhadap keberhasilan aklimatisasi. Percobaan ini disusun berdasarkan rancangan acak lengkap dengan periode kultur sebelum aklimatisasi sebagai perlakuan. Hasil pengamatan menunjukkan bahwa bibit dari periode 12 dan 24 MSK memiliki persentase hidup saat aklimatisasi lebih tinggi (80%) dibandingkan dengan bibit dari periode 36 dan 48 MSK (50 dan 40%). Periode kultur sebelum aklimatisasi tidak memberikan pengaruh nyata terhadap tinggi tanaman dan jumlah daun.
Kata kunci: BAP, multiplikasi tunas, periode kultur, posisi buku tunggal

## PENDAHULUAN
Sampai  saat  ini  Indonesia  masih  mengimpor  tepung terigu  dan  produk  gandum  untuk  memenuhi  kebutuhan tepung  terigu  di  dalam  negeri  dengan  nilai  impor  yang menempati  urutan  pertama  untuk  produk  pertanian  dan
pangan.  Nilai impor terigu dan produk gandum pada tahun 2009 sampai dengan 2012, berturut-turut mencapai 1,316.1 juta US$; 1,424.3 juta US$; 2,193.9 juta US$; dan 2,253.9 juta  US$.  Bahkan  devisa  negara  yang  dikeluarkan  untuk mengimpor tepung terigu dan produk gandum pada tahun 2013 mencapai  2,433.9 juta US$ (FAO, 2014).
Indonesia  terkenal  sebagai  negara  yang  memiliki keanekaragaman  hayati  sangat  besar,  yang  memberikan peluang besar untuk menggali potensi sumber daya pangan
* Penulis untuk korespondensi. e-mail: nkhumaida@yahoo.com
lokal dan memanfaatkannya sebagai bahan baku substitusi tepung terigu. Kelompok tanaman umbi-umbian memiliki potensi  besar  untuk  dikembangkan  sebagai  sumber karbohidrat, seperti ubi kayu, ubi jalar, talas-talasan, iles-iles, gadung, garut, dan ganyong. Ubi kayu ( Manihot esculenta Crantz.) memiliki prospek pemanfaatan dan pengembangan sebagai  bahan  makanan,  bahan  baku  industri  terutama industri pellet atau  pakan  ternak  dan  industri  pengolahan tepung. Ubi kayu juga dapat dimanfaatkan untuk dijadikan bahan baku pembuatan bioetanol (Sriroth et al ., 2010). Peningkatan  produksi  ubi  kayu  nasional  diarahkan untuk  diversifikasi  pangan,  pemanfaatan  sebagai  bahan baku  pembuatan  bioetanol,  pakan  ternak,  dan  industri tepung.  Hal  ini  menuntut  tersedianya  bahan  tanam  (bibit) ubi  kayu  bermutu  dalam  jumlah  banyak  dan  memiliki kejelasan varietas, serta dihasilkan dalam waktu yang relatif cepat.  Salah  satu  alternatif  yang  dapat  diterapkan  adalah dengan teknik kultur jaringan ( in vitro ). Teknik perbanyakan bibit ubi kayu secara in vitro perlu dilakukan karena belum banyak lembaga atau perusahaan penghasil stek (bibit) asal in vitro dalam jumlah besar dan memiliki kejelasan varietas. Sejauh  ini  hanya  beberapa  lembaga  penelitian  yang  telah mengerjakan  perbanyakan  bibit  ubi  kayu  secara in  vitro , satu di antaranya yaitu pusat penelitian bioteknologi LIPI Cibinong-Bogor. Adanya  perluasan  areal  tanam  ubi  kayu menuntut  adanya  penyediaan  bibit  unggul  dan  bermutu dalam jumlah besar. Bibit unggul yang dihasilkan dari kultur jaringan biasanya bebas dari patogen (apabila eksplan yang digunakan  berasal  dari  jaringan  tanaman  yang  sehat  atau berasal dari jaringan meristem) dan dapat dijadikan sebagai mother stock . Penelitian  perbanyakan  dan  perbaikan  tanaman ubi  kayu  melalui  teknik  kultur  jaringan  telah  banyak dilakukan. Penelitian yang dilakukan mencakup penelitian pembentukan  tunas  baru  (multiplikasi  tunas)  dan pembentukan  kalus  embriogenik  (Hankoua et  al .,  2006; Onuoch dan Onwubiku, 2007; Feitosa et al ., 2007; Rossin dan Rey, 2011; Wongtiem et al ., 2011; Mapayi et al. , 2013; Hartati et al ., 2013). Penelitian perbaikan tanaman ubi kayu di Afrika  dan  negara Amerika  Latin  difokuskan  terhadap perbaikan  genotipe  atau  varietas  yang  tahan  terhadap hama dan penyakit (Mushiyimana et al ., 2011; Cacai et al ., 2013a).  Perbaikan  sifat  ubi  kayu  yang  telah  dilakukan  di Indonesia yaitu peningkatan kandungan nutrisi pada umbi seperti jenis protein tertentu, komponen lain seperti fosfor dan rasio antara amilosa dan amilopektin (Sudarmonowati et al ., 2002). Pemilihan  jenis  media  dan  eksplan  dalam  teknik in  vitro sangat  mempengaruhi  respon  pertumbuhan planlet.  Penggunaan  jenis  media  dan  eksplan  yang  tepat akan  menghasilkan  pertumbuhan  planlet  yang  optimum. Perbanyakan in  vitro ubi  kayu  umumnya  menggunakan eksplan berupa buku tunggal ( single node ). Posisi single node diduga sangat mempengaruhi daya regenerasi membentuk planlet  ubi  kayu  varietas  Adira  2  (Khumaida  dan  Fauzi, 2013).  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mempelajari  jenis media kultur dan posisi single node (pangkal, tengah, dan ujung) terhadap pertumbuhan dan multiplikasi planlet ubi
kayu genotipe Jame-jame secara in vitro serta mempelajari pengaruh periode kultur terhadap keberhasilan aklimatisasi bibit ubi kayu genotipe Jame-jame.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  dilaksanakan  di  Laboratorium  Kultur Jaringan  3  Departemen  Agronomi  dan  Hortikultura (AGH)  Fakultas  Pertanian,  Institut  Pertanian  Bogor. Analisis anatomi jaringan buku dilakukan di Laboratorium Mikroteknik  AGH  IPB.  Penelitian  dilaksanakan  pada bulan  Februari  2013  hingga  Februari  2014.  Bahan  tanam (eksplan)  yang  digunakan  adalah  buku  tunggal  ( single node ) dari planlet ubi kayu genotipe Jame-jame (genotipe unggul lokal yang berasal dari Halmahera, Maluku Utara), yang  dikulturkan  dalam  media  MS0  dan  MS  +  3  mg  L -1 BAP    (MSB3).  Penelitian   terdiri atas dua  sub  percobaan terpisah, yaitu  multiplikasi  tunas  ubi  kayu  secara in  vitro dan aklimatisasi bibit ubi kayu hasil perbanyakan in vitro .

## Multiplikasi Tunas Ubi Kayu secara In Vitro
Penelitian  disusun  berdasarkan  rancangan  kelompok lengkap teracak (RKLT) faktorial dengan dua faktor. Faktor pertama  adalah  komposisi  media  kultur  yang  terdiri  atas dua  jenis  yaitu  MS0  dan  MS  +  3  mg  L -1 BAP  (MSB3). Faktor  ke  dua  adalah  posisi single  node yang  terdiri  atas tiga posisi yaitu pangkal (1-2 buku paling bawah), tengah (buku ke-3 dan 4 dari pucuk), dan ujung (1-2 buku paling atas).  Kombinasi  dari  dua  faktor  tersebut  menghasilkan enam kombinasi perlakuan. Terdapat empat kelompok yaitu subkultur  ke-1,  2,  3  dan  4  yang  masing-masing  diulang sebanyak 10 kali sehingga terdapat 240 satuan percobaan. Kultur  dipelihara  di  ruang  kultur  dengan  suhu  ±  25 o C, penerangan dari 2 buah lampu fluorescence dan fotoperiode 24 jam selama 12 minggu.
Peubah  yang  diamati  meliputi  waktu  munculnya tunas, tinggi tunas, jumlah daun, jumlah buku, dan jumlah tunas. Waktu munculnya tunas diamati setiap hari sampai tunas  pertama  terbentuk,  sedangkan  peubah  tinggi  tunas, jumlah daun, jumlah buku, dan jumlah tunas diamati setiap minggu  hingga  12  minggu  setelah  kultur  (MSK).  Selain itu  dilakukan  pengamatan  anatomi  jaringan  buku  bagian pangkal, tengah, dan ujung.

## Aklimatisasi Bibit Ubi Kayu Hasil Perbanyakan In Vitro
Penelitian  disusun  berdasarkan  rancangan  acak lengkap  (RAL)  satu  faktor  yaitu  periode  kultur  sebelum aklimatisasi  yang  terdiri  atas  empat  periode  (12,  24,  36, dan 48 MSK). Planlet yang berasal dari single node bagian tengah  yang  dikulturkan  dalam  media  MS0  dan  telah berumur  12  MSK  kemudian  disubkultur  (eksplan  berupa buku  tunggal)  ke  dalam  media  MS0  (subkultur  ke-1). Setelah  tunas  baru  muncul  dan  berumur  12  MSK,  tunas baru kemudian disubkultur (eksplan berupa buku tunggal) kembali ke media MS0 baru (subkultur ke-2). Kegiatan ini dilakukan hingga subkultur ke-4. Planlet asal subkultur ke-1,
2, 3, dan 4 yang berurutan memiliki periode 48, 36, 24, dan 12 MSK diaklimatisasi pada media yang berisi campuran kompos : arang sekam (1:1, v/v). Terdapat 10 ulangan yang tiap ulangan terdiri atas satu pot media yang masing-masing berisi  satu  bibit  tanaman.  Pengamatan  yang  dilakukan meliputi  persentase  tanaman  hidup,  tinggi  tanaman,  dan jumlah daun total yang dilakukan setiap minggu hingga 8 minggu setelah aklimatisasi (MSA).
Data penelitian dianalisis dengan analisis sidik ragam (ANOVA)  untuk  mengetahui  pengaruh  antar  pelakuan. Analisis data menggunakan program SAS 9.1.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Multiplikasi Tunas Ubi Kayu secara In Vitro
Secara  umum,  munculnya  tunas  pada  penelitian  ini kurang dari 2 minggu. Waktu muncul tunas ini lebih cepat bila dibandingkan dengan hasil penelitian yang dilakukan Wasswa et al . (2010) yang menunjukkan bahwa tunas ubi kayu  terbentuk  saat  2-4  MSK  pada  beberapa  kultivar  ubi kayu. Penelitian Wasswa et al . (2010) menggunakan semua buku ( node ) pada batang tunas, dengan single node sebagai eksplan.  Beragamnya  waktu  munculnya  tunas  antara penelitian Wasswa et al . (2010) dengan penelitian ini diduga karena  beragamnya  posisi single  node yang  digunakan sebagai eksplan.
Penggunaan jenis media dan eksplan single node dari posisi berbeda (pangkal, tengah, dan ujung) menunjukkan perbedaan  kecepatan  inisiasi  munculnya  tunas  pada penelitian ini (Gambar 1). Waktu muncul tunas pada eksplan single node bagian tengah lebih cepat dibandingkan single node bagian pangkal dan ujung saat dikulturkan pada media MS0. Hal ini memberi indikasi bahwa single node ke 3-4 dari pucuk memiliki daya regenerasi yang baik. Khumaida dan  Fauzi  (2013)  juga  menggunakan single  node ke  2-4 dari pucuk dalam penelitian perbanyakan planlet ubi kayu varietas Adira 2 dengan kecepatan inisiasi tunas pada media MS0 dan MSB3 berturut-turut sebesar 8.50 dan 3.25 hari.
Interaksi  jenis  media  kultur  dan  posisi single  node berpengaruh nyata terhadap tinggi tunas ubi kayu genotipe Jame-jame  (Tabel  1).  Secara  umum,  interaksi  perlakuan yang menghasilkan tunas tertinggi pada 12 MSK diperoleh dari  eksplan single  node bagian  tengah  yang  dikulturkan pada  media  MS0.  Tunas  pada  media  MS0  menghasilkan planlet  yang  lebih  tinggi  dibandingkan  jika  dikulturkan pada  media  MS  +  3  mg  L -1 BAP  (MSB3).  Pertambahan tinggi tunas pada media MSB3 sangat lambat pada minggu awal dikulturkan. Hal ini diduga karena pertumbuhan tunas pada media MSB3 lebih mengarah ke pembentukan tunas majemuk.
Jumlah  tunas  yang  dihasilkan  pada  media  MSB3 lebih  tinggi  dibandingkan  pada  media  MS0  (Tabel  2). Penambahan zat pengatur tumbuh (ZPT) jenis BAP sebesar
0 5 10 15 20 25 30 MS0 MSB3 MS0 MSB3 MS0 MSB3 Pa ng ka l Te ng ah U ju ng Waktu muncul tunas (hari) Gambar 1. Waktu muncul tunas ubi kayu genotipe Jame-jame. MS0 = MS tanpa ZPT; MSB3 = MS + 3 mg L -1 BAP. Data menunjukkan nilai rataan ± standar deviasi
Posisi single node 8 MSK 12 MSK MS0 MSB3 Rata-rata MS0 MSB3 Rata-rata Pangkal 1.32aA 0.87aA 1.10a 2.88bA 1.06aA 1.97b Tengah 1.90aA 0.83aB 1.37a 5.36aA 1.05aB 3.21a Ujung 1.81aA 0.80aA 1.31a 4.84bA 1.02aB 2.93ab Rata-rata 1.68A 0.84B 4.36A 1.04B
Tabel 1. Tinggi tunas (cm) ubi kayu genotipe Jame-jame
Keterangan:  MS0 = MS tanpa ZPT; MSB3 = MS + 3 mg L -1 BAP. Angka yang diikuti huruf kecil yang sama pada kolom umur yang sama dan angka yang diikuti huruf kapital yang sama pada baris yang sama artinya tidak berbeda nyata berdasarkan uji DMRT pada taraf α = 5%; MSK = minggu setelah kultur

## 3  mg  L
-1 memacu  tumbuhnya  tunas-tunas  adventif  pada bagian  pangkal  eksplan  yang  didahului  oleh  munculnya kalus. Lizawati et al . (2009) melaporkan bahwa penambahan BAP ke dalam media dapat merangsang pembentukan tunas majemuk  pada  planlet  jarak  pagar.  Manfaat  BAP  dalam induksi tunas juga dilaporkan oleh Cacai et al. (2013b) yang menyatakan  bahwa  penambahan  BAP  sebesar  0.2  mg  L -1 pada  media  MS  dapat menginduksi pembentukan tunas maksimum pada beberapa genotipe ubi kayu asal Benin.
Berdasarkan hasil pengamatan terlihat bahwa interaksi perlakuan  jenis  media  kultur  dan  posisi single  node memberikan  pengaruh  nyata  terhadap  jumlah  tunas  pada Jame-jame  (Tabel  2).  Jumlah  tunas  terbanyak  umumnya dihasilkan  dari  eksplan single  node bagian  tengah  yang dikulturkan pada media MSB3. Jumlah tunas yang dihasilkan mencapai  2  tunas  per  eksplan.  Penelitian  Khumaida  dan Fauzi (2013) menghasilkan kurang dari 2 tunas per planlet pada media kultur yang sama.
Interaksi  perlakuan  posisi single  node dan  media berpengaruh nyata terhadap jumlah daun per planlet pada 4 dan 8 MSK (Gambar 2). Rata-rata jumlah daun per planlet tidak lebih dari empat daun pada 8 hingga 12 MSK. Hal ini disebabkan karena daun banyak yang mengalami senescence (gugur  daun).  Gugurnya  daun  diduga  karena  adanya ketidakseimbangan kandungan auksin-sitokinin endogen di dalam jaringan tanaman. Kandungan auksin endogen dalam
tanaman  sangat  tinggi  sehingga  meningkatkan  aktivitas etilen  yang  menyebabkan  daun  menjadi  gugur.  Menurut Wattimena (1988) auksin merupakan salah satu faktor kunci dalam  sintesis  etilen,  karena  auksin  merupakan  prekursor dalam  perubahan  SAM  menjadi  ACC  (senyawa  antara dalam sintesis etilen). Gejala gugur daun pada penelitian ini mulai terjadi pada 4 MSK. Menurut Hankoua et al. (2005), biakan in  vitro ubi  kayu  biasanya  disubkultur  setiap  4-5 minggu sekali agar selalu berada dalam kondisi optimal dan menghindari terjadinya senescence . Interaksi  perlakuan  jenis  media  kultur  dan  posisi single  node tidak  berpengaruh  nyata  (α  >  0.05)  terhadap jumlah  buku  pada  genotipe  Jame-jame.  Hasil  penelitian ini menunjukkan bahwa posisi single node mempengaruhi respon  pertumbuhan  planlet.  Pertumbuhan  planlet  terbaik dihasilkan  dari  eksplan single  node bagian  tengah. Pengaruh  posisi single  node terhadap  pertumbuhan  tunas diduga  akibat  perbedaan  fase  perkembangan  jaringan. Anatomi  jaringan  pada  masing-masing  posisi single  node menunjukkan perbedaan (Gambar 3). Jaringan s ingle node bagian  pangkal  sudah  terdeferensiasi  secara  sempurna, yaitu terdiri atas epidermis, korteks, dan jaringan pembuluh. Jaringan epidermis pada single node bagian pangkal sudah terbentuk sempurna dan diduga menyulitkan dediferensiasi menjadi jaringan lain.
Posisi single node 8 MSK 12 MSK MS0 MSB3 Rata-rata MS0 MSB3 Rata-rata Pangkal 1.0aB 1.7aA 1.4a 1.0aB 1.1aA 1.5a Tengah 1.0aB 1.7aA 1.4a 1.0aB 2.0aA 1.5a Ujung 1.0aB 1.5aA 1.3a 1.0aB 1.8aA 1.4a Rata-rata 1.0B 1.7A 1.0B 1.9A

## Tabel 2. Jumlah tunas planlet ubi kayu genotipe Jame-jame
Keterangan: MS0 = MS tanpa ZPT; MSB3 = MS + 3 mg L -1 BAP. Angka yang diikuti huruf kecil yang sama pada kolom umur yang sama dan angka yang diikuti huruf kapital yang sama pada baris yang sama artinya tidak berbeda nyata berdasarkan uji DMRT pada taraf α = 5%; MSK = minggu setelah kultur
-1.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 MS0 B3 MS0 B3
MS0 B3 MS0 MSB3 MS0 MSB3 MS0 MSB3 Pangkal Tengah Ujung Pangkal Tengah Ujung 4 MSK
8 MSK Ju ml ah d au n pe r p la nl et Umur (MSK)
Anatomi single  node bagian  ujung  menunjukkan jaringan-jaringan  yang  belum  terbentuk  secara  jelas. Jaringan pembuluh, korteks dan sebagainya belum jelas arah pembentukannya. Buku bagian ujung ini apabila dijadikan sebagai  eksplan  akan  menghasilkan  planlet  yang  kurang optimal pertumbuhannya yaitu cenderung kurus dan tidak tegar. Hasil anatomi single node bagian tengah menunjukkan terbentuknya  jaringan  pembuluh,  korteks,  dan    jaringan lainnya. Tunas yang terbentuk dari single node bagian tengah tumbuh optimum ditandai dengan tinggi, jumlah daun serta ketegaran planlet yang baik (Tabel 1 dan 2, Gambar 2).
Aklimatisasi Bibit Ubi Kayu Hasil Perbanyakan In Vitro
Planlet yang memiliki periode 48, 36, 24, dan 12 MSK diaklimatisasi pada media yang berisi campuran kompos : arang  sekam  (1:1,  v/v).  Tingkat  keberhasilan  aklimatisasi planlet ubi kayu pada penelitian ini tergolong cukup tinggi. Berdasarkan  hasil  pengamatan  hingga  8  minggu  setelah aklimatisasi (MSA), persentase tanaman hidup yang berasal dari planlet periode 12, 24, 36, dan 48 MSK berturut-turut yaitu  sebesar  80,  80,  50,  dan  40% . Planlet  yang  terlalu lama hidup di media kultur akan mengalami pertumbuhan yang  tidak  optimum,  mengalami senescence hingga
mengalami  kematian  karena  kehabisan  hara  dalam  media kultur  dan  terakumulasinya  gas  etilen  dalam  botol  kultur. Akumulasi gas etilen dalam jumlah tertentu dapat merusak pertumbuhan planlet (Kozai dan Kubota, 2005). Hal ini yang menyebabkan persentase hidup dari bibit periode 12 dan 24 MSK  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  bibit  periode  36 dan 48 MSK. Selama periode aklimatisasi, perawatan dan pemeliharaan tanaman harus diperhatikan secara baik untuk menjaga kelangsungan hidup tanaman. Ogero et al. (2012) menyatakan  bahwa  perawatan  yang  intensif  dan  optimasi media mempengaruhi keberhasilan tahapan aklimatisasi.
Tingkat  ketegaran  dan  kesegaran  tanaman  hingga 8  MSA  juga  cukup  baik  (Gambar  4a).  Hasil  aklimatisasi menunjukkan jumlah cuping daun tanaman hingga 8 MSA berjumlah  tiga  (Gambar  4b).  Jumlah  cuping  daun  ini berbeda dengan morfologi daun di lapangan yang normalnya berjumlah 5-7 cuping (Gambar 4c). Pengamatan mikroskopis tambahan menunjukkan daun tanaman aklimatisasi memiliki karakteristik stomata yang lebih terbuka dibandingkan daun tanaman  di  lapangan  (Gambar  4d,  e).  Perbedaan  jumlah cuping  daun  dan  karakteristik  stomata  ini  dimungkinkan tanaman masih melakukan proses adaptasi selama tumbuh di media aklimatisasi.
Pertumbuhan  tanaman  selama  aklimatisasi  berupa tinggi  tanaman  dan  jumlah  daun  diamati  hingga  8  MSA.
1 A B C D E
Gambar 4. Morfologi tanaman ubi kayu genotipe Jame-jame: (A) tanaman hasil aklimatisasi saat 8 MSA, (B) helai daun umur 10 hari dari tanaman hasil aklimatisasi, (C) helai daun umur 10 hari dari tanaman di lapangan, (D) karakteristik stomata daun hasil aklima- tisasi, dan (E) karakteristik stomata daun  di lapangan
C B

## A
Gambar 3. Irisan melintang buku tunas ubi kayu genotipe Jame-jame: (A) pangkal, (B) tengah, dan (C) ujung
Berdasarkan  hasil  pengamatan,  perbedaan  periode  kultur tidak  berpengaruh  nyata  terhadap  tinggi  tanaman  saat aklimatisasi. Secara umum, tanaman mengalami pertambahan tinggi pada minggu-minggu awal (1-3 MSA) dan mengalami perlambatan pertumbuhan tinggi tanaman hingga 5 MSA, kemudian mengalami peningkatan pertambahan tinggi lagi hingga  8  MSA  meskipun  peningkatan  yang  terjadi  tidak setinggi  jika  dibandingkan  dengan  minggu-minggu  awal aklimatisasi (Gambar 5). Tanaman tertinggi hingga 8 MSA
diperoleh dari aklimatisasi planlet yang berasal dari periode 12 MSK yaitu sebesar 12.81 cm. Hal yang tidak jauh berbeda ditunjukkan terhadap pembentukan daun. Perbedaan periode kultur tidak berpengaruh nyata terhadap jumlah daun pada minggu-minggu awal aklimatisasi. Perbedaan nyata hanya terjadi  pada  8  MSA  yang  menunjukkan  jumlah  daun terbanyak diperoleh dari aklimatisasi planlet yang berasal dari periode 12 MSK (Gambar 6).

## KESIMPULAN
Posisi single  node dan  jenis  media  yang  berbeda pada  kultur  ubi  kayu  memberikan  respon  pertumbuhan planlet yang berbeda. Posisi s ingle node yang memberikan respon  pertumbuhan  (tinggi  tunas,  jumlah  daun,  jumlah buku,  dan  jumlah  tunas)  terbaik  adalah  bagian  tengah. Umumnya planlet memberikan respon pertumbuhan berupa tinggi  tunas,  jumlah  daun,  dan  jumlah  buku  terbaik  jika menggunakan single  node bagian  tengah  dan  dikulturkan dalam media MS0, sedangkan untuk pertumbuhan jumlah tunas terbaik jika menggunakan single node bagian tengah dan dikulturkan dalam media MS + 3 mg L -1 BAP. Walaupun periode kultur sebelum aklimatisasi tidak berpengaruh nyata terhadap peubah tinggi tanaman dan jumlah daun, bibit dari periode  12  dan  24  MSK  memiliki  persentase  kehidupan
aklimatisasi (80%) lebih tinggi dibandingkan dengan bibit dari periode 36 dan 48 MSK (50 dan 40%).

## DAFTAR PUSTAKA
Cacai, G.H.T., H. Adoukonou-Sagbagja, B.S. Kumulugui, P.O.  Ovono,  J.  Houngue,  C.  Ahanhanzo.  2013a. Eradication  of  cassava  ( Manihot  esculenta )  mosaic symptoms  through  thermotherapy  and  meristems cultured in vitro . Intl. J. Agron. Plant. Prod. 4:3697- 3701.
Cacai, G., C. Ahanhanzo, A. Adjanohoun, S. Houedjissin, P. Azokpota, C. Agbangla. 2013b. Hormonal influence on the in vitro bud burst of some cassava varieties and accessions from Benin. Afr. J. Biotechnol. 12:1475- 1481.
Gambar 5. Tinggi tanaman ubi kayu genotipe Jame-jame hasil aklimatisasi
Gambar 6. Jumlah daun total tanaman ubi kayu genotipe Jame-jame hasil aklimatisasi. Data menunjukkan nilai rataan ± standar deviasi
0 2 4 6 8 10 12 14 1 2 3 4 5 6 7 8 Ti ng gi ta na man (c m) Umur (MSA) Periode 48 MSK Periode 36 MSK Periode 24 MSK Periode 12 MSK 0 2 4 6 8 10 12 14 1 2 3 4 5 6 7 8 Ti ng gi ta na man (c m) Umur (MSA) Periode 48 MSK Periode 36 MSK Periode 24 MSK Periode 12 MSK 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 Periode 12 MSK Periode 24
MSK Periode 36 MSK Periode 48 MSK Periode 12 MSK Periode 24 MSK Periode 36 MSK Periode 48 MSK
4 MSA 8 MSA Ju ml ah d au n to ta l
Umur (MSA)
Feitosa,  T.,  J.L.P.  Bastos,  L.F.A.  Ponte,  T.L.  Juca,  F.A.P.
Campos.  2007.  Somatic  embryogenesis  in  cassava genotypes  from  the  Northeast  of  Brazil.  Brazilian Arch. Biol. Technol. 50:201-206.
Food  and  Agriculture  Organization.  2014.  Data  impor tepung terigu dan produk gandum Indonesia. http:// www.fao.org.  [27 Desember 2014].
Hankoua, B.B., N.J. Taylor, S.Y.C. Ng, I. Fawole, J. Puonti- Kaerlas, C. Padmanabhan, J.S. Yadav, C.M. Fauquet, A.G.O.  Dixon, V.N.  Fondong.  2006.  Production  of the first transgenic cassava in Africa via direct shoot organogenesis  from  friable  embryogenic  calli  and germination  of  maturing  somatic  embryos.  Afr.  J. Biotechnol. 5:1700-1712.
Hankoua,  B.B.,  S.Y.C.  Ng,  J.  Puonti-Kaerlas,  I.  Fawole, A.G.O.  Dixon,  M.  Pillay.  2005.  Regeneration  of  a wide range of African cassava genotypes via shoot organogenesis  from  cotyledon  of  maturing  somatic embryos  and  conformity  of  the  field-established regenerants.  Plant  Cell  Tiss.  Org . Culture  81:200- 211.
Hartati, N.S., N. Rahman, H. Fitriani, E. Sudarmonowati. 2013.  Koleksi  kultur in  vitro ubi  kayu  ( Manihot esculenta Crantz.)  sebagai  material  perakitan  bibit unggul.  hal.  389-398. Dalam Sutanto,  R.U.M.S. Soedjanaatmadja,  U.  Supriatman,  T.  Panji  ( Eds .). Seminar  Nasional  Riset  Pangan,  Obat-obatan,  dan Lingkungan  untuk  Kesehatan.  Bogor  27-28  Juni 2013.
Khumaida,  N., A.R.  Fauzi.  2013.  Induksi  tunas  ubi  kayu ( Manihot  esculenta Crantz.)  var. Adira  2  secara in vitro . J. Agron. Indonesia 41:133-139.
Kozai, T., C. Kubota. 2005. In vitro aerial environments and their  effects  on  growth  and  development  of  plants. p.  31-52. In Kozai  T,  F.  Afreen,  S.M.A.  Zobayed ( Eds .).  Photoautotrophic  (Sugar  Free  Medium) Micropropagation  as  a  New  Micropropagation  and Transplant  Production  System.  Kluwer  Academic Publisher, Netherlands.
Lizawati, T., Novita, R. Purnamaningsih. 2009. Induksi dan multiplikasi tunas jarak pagar ( Jatropha curcas L.) secara in vitro . J. Agron. Indonesia 37:78-85.
Mapayi,  E.F.,  D.K.  Ojo,  O.A.  Oduwaye,  J.B.O.  Porbeni. 2013. Optimization of in vitro propagation of cassava ( Manihot esculenta Crantz.) genotypes. J. Agric. Sci. 5:261-269.
Mushiyimana,  I.,  E.  Hakizimana,  G.  Gashaka,  P.Y.K. Sallah, S. Kalisa, F. Gatunzi, T. Asiimwe, J. Kahia,
D.  Gahakwa.  2011.  Micro-propagation  of  disease resistant  cassava  variety  in  Rwanda.  Rwanda  J. 24:49-57.
Ogero,  K.O.,  N.M.  Gitonga,  M.  Mwangi,  O.  Ombori,  M. Ngugi.  2012.  Cost-effective  nutrient  sources  for tissue culture of cassava ( Manihot esculenta Crantz.). Afr. J. Biotechnol. 11:12964-12973.
Onuoch, C.I., N.I.C. Onwubiku. 2007. Micropropagation of cassava ( Manihot esculenta Crantz.) using different concentrations of benzylaminopurine (BAP). J. Eng. Appl. Sci . 2:1229-1231.
Rossin, C.B., M.E.C. Rey. 2011. Effect of explant source and  auxins  on  somatic  embryogenesis  of  selected cassava ( Manihot esculenta Crantz.) cultivars. South African J. Bot. 77:59-65.
Sriroth,  K.,  K.  Piyachomkwan,  S.  Wanlapatit,  S. Nivitchanyong. 2010. The promise of a technology revolution in cassava bioethanol: from Thai practice to the world practice. Fuel 89:1333-1338.
Sudarmonowati, E., R. Hartati, T. Taryana. 2002. Produksi tunas, regenerasi dan evaluasi hasil ubi kayu ( Manihot esculenta ) Indonesia asal kultur jaringan di lapang. Natur Indonesia 4:96-108.
Wasswa, P., T. Alicai, S.B. Mukasa. 2010. Optimisation of in  vitro  techniques  for  cassava  brown  streak  virus elimination from infected cassava clones. Afr. Crop. Sci. J. 18:235-241.
Wattimena,  G.A.  1988.  Zat  Pengatur  Tumbuh  Tanaman. Laboratorium  Kultur  Jaringan  (PAU)  Bioteknologi, Institut Pertanian Bogor, Bogor.
Wongtiem, P., D. Courtois, B. Florin, M. Juchaux, D. Peltier, P. Broun, J.P. Ducos. 2011. Effects of cytokinins on secondary somatic embryogenesis of selected clone Rayong  9  of Manihot  esculenta Crantz  for  ethanol production. Afr. J. Biotechnol. 10:1600-1608.