© (2017) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia

## BLOOD DESCRIPTION, PARASITE INFESTATION
AND SURVIVAL RATE OF CARP ( Cyprinus carpio ) WHICH IS EXPOSED BY SPORE PROTEIN Myxobolus koi ON REARING POND  AS IMMUNOSTIMULAN MATERIAL
Laode Abdul Syafar 1 , Gunanti Mahasri 2 , Fedik Abdul Rantam 3
1 Mahasiswa Program Studi S2 Bioteknologi Perikanan dan Kelautan, Sekolah Pasca Sarjana Universitas Airlangga
2 Sekolah Pasca Sarjana, Universitas Airlangga
3 Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Airlangga Email : laode_syafar@yahoo.co.id

## ABSTRACT
This research is an experimental   research to determine the effect of  spore protein Myxobolus koi on grass carp (Cyprinus carpio) in rearing pond. The sample used is grass carp (Cyprinus carpio) 90 fish (10-15 cm). Spore protein used in this research is Myxobolus koi spore protein, that has been found by predecessor researchers and has been tested in laboratory as immunostimulan. The exposure was done orally, mixed in the feed, with a dose of 2 μg / gram dose of protein, feeded 1 time before being reared for 30 days.  Parameters measured were: (1) leucocytes description (differentiated leucocytes of carp, (2) Parasitic infestation in carp and (3)  Survival  Rate /  SR of carp  were reared on  pond for  30  days. The collected data is analyzed descriptively.
The results showed that there was alteration of leukocytes description (differential leukocytes) in carp ( Cyprinus  carpio )  as  an  indicator  of  the  immune  response.  A  leukocyte  differential  examination showed that exposure to the Myxobolus koi spore protein, The highest total  lymphocytes occurred in carp  exposed  to Myxobolus  koi spores  protein  and  reared   from  pond  in  Mojokerto,  were   77.6%, Monocytes  of  16.3%,  Heterophyll  14.4%,  Eosinophils  7.6%  and  Basofil  0.4%.     The  highest infestation   of Myxobolus  koi occurred  in  fish  that  was  not  exposed  to  spore  protein  was  53.33% after 30 days of reared at pond, while parasitic infestation in fish exposed to spore protein was only 16.66%.    Survival  rate    of  carp  indicated  that  the  highest  occurred  in  carp  that  exposed  with  spore protein and reared from pond in Mojokerto, equal to 90%.
Myxobolus  koi spore  protein  exposure  given  orally  can  makes  alteration  of  leukocytes  description (differential leukocytes), Decreased parasite infestation and increased survival of carp fish reared for 30  days,  with  the  result  that Myxobolus  koi spore  protein  can  be  developed  as an  immunostimulant material.
Keyword: Myxobolus koi, Cyprinus carpio, spore protein, immunostimulant, infestation
© (2017) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia

## PENDAHULUAN

## 1.1  Latar belakang
Ikan  mas  ( Cyprinus  carpio )  adalah merupakan  salah  satu  spesies  ikan  air  tawar yang  mempunyai  peluang  pengembangan budidaya  besar  untuk      meraih  potensi  pasar yang  terus  meningkat.  Berdasarkan  data  dari Kementrian Perikanan dan Kelautan, dinyatakan  bahwa  produksi  ikan  mas  di Indomesia  mencapai  berturut-turut  dari  tahun 2010    sampai    dengan    tahun    2014    adalah 267.100,    280.400,    300.000,    325.000    dan 350.000  ton  (Subiyakto,  2014).  Disamping  itu i kan  merupakan  sumber  protein  hewani  untuk memenuhi gizi masyarakat Indonesia (Sutanmuda,    2007)..  Selanjutnya    juga dikatakan  mas  merupakan  jenis  ikan  konsumsi air  tawar,  di  Indonesia  telah  dibudidayakan sejak    tahun    1920.    Budidaya    ikan    mas dilakukan  di  kolam  biasa,  di  sawah,  waduk, sungai  air  deras,  maupun  dalam  keramba  di perairan umum.
Banyak kendala yang dapat mempengaruhi    tingkat  keberhasilan  budidaya ikan  mas  dimana  kendala  utama  yang  perlu diperhatikan adalah munculnya serangan penyakit.  Umumnya  penyakit  yang  sering ditemukan menyerang ikan mas dapat disebabkan  oleh  parasit,  bakteri,  virus  maupun jamur  (Anshery,  2008).  Selanjutnya  dikatakan bahwa  penyakit  tersebut   dapat  menyebabkan kerugian  hingga  80%  bahkan  dapat  mencapai 100%    pada    stadia    benih    (Mahasri,    2007). Salah  satu  penyakit  yang  sering  menyerang pada   ikan   Mas   adalah   Myxobolusis   yang disebabkan  oleh Myxobolus  koi .  Umumnya penyakit  ini  ditemukan  pada  benih  ikan Cyprinidae  dan  dapat  menimbulkan  kerugian hingga  100%  (Mahasri,  2013).  Tahun  2002 telah    terjadi    kematian    masal    ikan    mas    di daerah  Sleman  dan  Kulon  Progo  yang disebabkan  oleh  parasit Myxobolus sp  dan Henneguya (Titis,    dkk,    2009)    sehingga kerugian   yang   dialami   pembudidaya   ikan cukup  besar. Myxobolus sp  juga  ditemukan  di daerah   Ngrajek   kabupaten   Magelang   pada tahun  2006  dengan  prevalensi  mencapai  91%, (Obing,  2006).  Kemudian  di  kolam  ikan  mas koi  di  Blitar  prevalensi  mencapai  86%  pada tahun 2010 (Anugrahi, 2010).
Infeksi   Myxobolus   pada   ikan   mas dapat  diketahui  dengan  gejala klinis  yang khas itu  terdapatnya  nodul  pada  insang  ikan  mas ( Cyprinus  carpio ),  dalam  jumlah  yang  dapat menyebabkan  ikan  sulit  bernafas  yang  pada akhirnya  dapat  menyebabkan  kematian  (Yuasa et al ., 2005). Untuk itu sangat perlu   diketahui proses atau jalannya penyakit tersebut (patogenesis)  agar  dapat  dideteksi  secara  dini, sehingga  kematian  dapat  dicegah.  Untuk meningkatkan pertahanan tubuh pada ikan mas terutama    terhadap    myxobolusis,    perlu dicarikan  bahan  yang  dapat  dikembangkan sebagai imunostimuan.
Upaya  peningkatan  pertahanan  tubuh pada  ikan  dapat  dilakukan  dengan  imunisasi, dengan  imunostimulan  yang  dapat  diproduksi dari berbagai bahan dari alam maupun sintetis. Salah  satu  bahan  yang  dapat  dikembangkan sebagai  imunostimulan  adalah  protein  dari patogen  yang  dapat  menyebabkan  penyakit pada  ikan.  Salah  satu  bahan  tersebut  adalah protein  spora  spora Myxobolus  koi .  Upaya pencegahan  penyakit  yang  sudah  banyak dilakukan  umumnya  dengan  menggunakan bahan  kimia  atau  antibiotik,  akan  tetapi  al  ini dapat  menyebabkan  adanya  dampak  negatif yaitu  terjadinya  resistensi  dan  terdapatnya residu  di  dalam  tubuh  ikan   (Mahasri,  2007). Pencegahan penyakit ikan dengan menggunakan  imunostimulan  sudah  mulai dikembangkan.  Clark et  al .  (1996)  berhasil mengisolasi  protein  membran  antigen  dari Paramecium, Tetrahymena dan
Ichthyiophthirius  multifiliis ,  diduga  protein  ini berperan  dalam  infestasi  parasit  pada  inang. Selanjutnya  dikatakan  bahwa  protein  mayor merupakan  ligan  perlekatan  yang  penting  pada Ichthyiophthirius  multifiliis dan  merupakan jembatan masuknya parasit ke dalam sel.
Wang dan Dickerson (2002)
mengatakan  bahwa surface  immobilization antigen dari Ichthyophthyrius  multifiliis dapat meningkatkan  pertahanan tubuh pada Channel Catfish ( Ichtalurus   punctatus ).   Lin et   al.
(1996) , memperkuat  pernyataan  Wang  dan Dickerson, bahwa imunisasi pasif dari Ichthyophthirius  multifiliis (Ciliata  pathogen) dengan  Murine  Antibodi  Monoklonal  dapat meningkatkan ketahanan tubuh Channel Catfish .  Imunisasi  dengan  protein  membran antigen Ichthyophthirius  multifiliis stadia theront  dengan  beberapa  serotipe  juga  telah
© (2017) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
dilakukan  oleh  Leff, et  al .  (1994),  Maki  dan Dickerson  (2003)  dan  Lin, et  al .  (1996)  pada Channel    Catfish dan    berhasil    menekan infestasi parasit.
Yusuf    (2015)    telah    menganilisis respon  imun  ikan  mas  koki  yang  dipapar dengan whole protein  spora Myxobolus  koi yang  dinyatakan  terjadi  peningkatan  dan  dapat meningtkatkan kelulushidupan secara laboratoris.  Sementara  hasil  penelitian  Woro (2015)   menunjukkan   bahwa   crude   protein spora Myxobolus koi juga dapat meningkatkan kelulushidupan  dan  respon  imun  ikan  koi. Protein spora yang masuk ke dalam tubuh.
Yusuf  (2015)  mengatakan  bahwa, pemaparan protein spora Myxobolus  koi sebagai  kandidat  vaksin  myxobolusis  dapat dilakukan  dengan  pengamatan  differensial leukosit  terutama  limfosit  Tingkat  kelulus hidupan  ikan,  efektivitas  vaksin  dianggap  baik apabila  nilai  SR  ≥  50%.  Hasil  penelitiannya juga  menunjukkan  bahwa  respon  imun  dan kelulushidupan  (SR)  ikan  koi  yang  dipapar protein spora Myxobolus  koi mengalami peningkatan.  Selanjutnya  dikatakan  bahwa protein spora yang masuk ke dalam tubuh ikan mas  akan  ditangkap  oleh  reseptor  pada  sel  T helper (2), dan sel T helper (2), kemudian akan mensekresikan  sitokin  yaitu  IL-2,  IL-  4,  dan IL-6  sehingga  meningkatkan  jumlah  limfosit dalam  darah  yang  bertujuan  untuk  diferensiasi dan  proliferasi  sel  lymphosit  B.  Diferensiasi sel lymphosit B akan  menghasilkan sel plasma dan sel memori.
Penggunaan air dari kolam pemeliharaan  ikan  mas  yang  di  lapang, dikarenakan  secara  alami  banyak  parasit  yang hidup  normal  di  perairan  dan  akan  menjadi patogen  bila  lingkungan  mendukung.  Hal  ini sesuai  dengan  hasil  penelitian  dari  Mahasri (2007)  yang  menyatakan  bahwa  bebrapa protozoa akan meningkat aktivitas dan meningkat  patogenitasnya  pada  kondisi  bahan organik  yang  tinggi,  oksigen  yang  rendah  dan pada  padat  tebar  yang  tinggi.  Bertitik  tolak dari  hasil  penelitian  Yusuf  (2015)  tersebut, maka  penelitian  ini  melanjutkan  menganalisis respon imun, infestasi parasit dan kelulushidupan      ikan  mas  ( Cyprinus  carpio ) yang  dipapar  dengan  protein  spora Myxobolus koi dan  dipelihara  pada  media  pembesaran ikan mas secara laboratorium.

## 1.2  Rumusan Masalah
Berdasarkan     latar     belakang    yang sudah diuraikan di atas maka rumusan masalah dari penelitian ini adalah sebagai berikut :
1)  Bagaimanakah        gambaran        darah ( differensial Leukosit) ikan mas ( Cyprinus    carpio )    yang    dipapar dengan  potein  spora Myxobolus  koi pada media     air          dari     kolam pembesaran ikan sebagai bahan imunostimulan?
2)  Berapa  persen  ikan  mas  ( Cyprinus carpio )  yang  dipapar  dengan  potein spora Myxobolus  koi sebagai  bahan imunostimulan, terinfestasi parasit selama  pemeliharaan  pada  media  air dari kolam pembesaran?
3)   Berapakah tingkat kelulushidupan atau survival rate (SR) ikan  mas (Cyprinus carpio )   yang   dipapar   dengan crude protein  spora Myxobolus  koi sebagai bahan  imunostimulan  pada  media  air dari  kolam pembesaran?

## 1.3  Tujuan Penelitian

## 1.3.1     Tujuan umum
Tujuan   umum   dari   penelitian    ini adalah  menganalisis  gambaran  darah  (respon imun)  dan  kelulushidupan  ikan  mas  ( Cyprinus carpio )  yang  dipapar  dengan  protein  spora Myxobolus  koi pada  media  air  dari  kolam pembesaran ikan ?

## 1.3.2  Tujuan khusus
Tujuan   khusus   dari   penelitian   ini adalah sebagai berikut :
1)   Menganalisis        gambaran        darah ( differensial Leukosit)        ikan  mas ( Cyprinus    carpio )    yang    dipapar dengan crude protein spora Myxobolus koi sebagai  bahan  imunostimulan  pada media air dari kolam pembesaran ikan.
2)   Menganalisis   infeksi Myxobolus   koi pada  ikan  mas  ( Cyprinus  carpio )  yang dipapar dengan protein spora Myxobolus koi sebagai bahan imunostimulan  pada  media  air  dari kolam pembesaran.
3) Menganalisis   tingkat   kelulushidupan atau   survival   rate   (SR)   ikan   mas
© (2017) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
( Cyprinus    carpio )    yang    dipapar dengan  protein  spora Myxobolus  koi pada    media    air    dari    kolam pembesaran.
1.4   Manfaat Penelitian
1.4.1       Manfaat teoritis
Hasil  penelitian  ini  diharapkan  dapat memberikan informasi ilmiah mengenai pengaruh  pemaparan  protein  spora Myxobolus koi pada  media  pemeliharan  pembesaran  ikan mas ( Cyprinus carpio )

## 1.4.2  Manfaat Praktis
Penelitian ini diharapkan dapat digunakan  sebagai  acuan  dalam  penggunaan protein  spora Myxobolus  koi ikan  mas ( Cyprinus  carpio )  yang  dipelihara  di  tempat pembesaran ikan.

## TINJAUAN PUSTAKA
2.1. Ikan Mas ( Cyprinus carpio )
Ikan  mas  merupakan  jenis  ikan konsumsi   air   tawar,   berbadan   memanjang pipih  kesamping  dan  lunak.  Ikan  mas  sudah dipelihara  sejak  tahun  475  sebelum  masehi  di Cina.  Di  Indonesia  ikan  mas  mulai  dipelihara sekitar  tahun  1920.  Ikan  mas  yang  terdapat  di Indonesia  merupakan  ikan  mas  yang  dibawa dari  Cina,  Eropa,  Taiwan  dan  Jepang.  Ikan mas  Punten  dan  Majalaya  merupakan  hasil seleksi  di  Indonesia.  Sampai  saat  ini  sudah terdapat  10  ikan  mas  yang  dapat  diidentifikasi berdasarkan karakteristik morfologisnya (Pujiatmoko,  2008).  Perbedaan  sifat  dan  ciri dari    ras    disebabkan    oleh    adanya    interaksi antara  genotipe  dan  lingkungan  kolam,  musim dan  cara  pemeliharaan  yang  terlihat  dari penampilan  bentuk  fisik,  bentuk  tubuh  dan warnanya.   Adapun   ciri-ciri   dari   beberapa strain ikan mas adalah sebagai berikut :
1)  Ikan  mas  punten  mempunyai  ciri  sisik berwarna  hijau  gelap  ;  potongan  badan  paling pendek  ;    bagian   punggung   tinggi   melebar; mata  agak  menonjol;  gerakannya  gesit; perbandingan  antara  panjang  badan  dan  tinggi badan  antara  2,3:1. Jenis  ikan  mas  inilah  yang digunakan dalam penelitian ini.
2)  Ikan  mas  majalaya  :  sisik  berwarna  hijau keabu-abuan  dengan  tepi  sisik  lebih  gelap  ;
punggung  tinggi  ;  badannya  relatif  pendek  ; gerakannya  lamban,  bila  diberi  makanan  suka berenang  di  permukaan  air  ;  perbandingan panjang   badan   dengan   tinggi   badan   antara 3,2:1.
3)  Ikan  mas  si  nyonya  :  sisik berwarna kuning muda  ;  badan  relatif  panjang  ;  mata  pada  ikan muda  tidak  menonjol,  sedangkan  ikan  dewasa bermata  sipit  ;  gerakannya  lamban,  lebih  suka berada   di   permukaan   air   ;   perbandingan panjang   badan   dengan   tinggi   badan   antara 3,6:1.
4)  Ikan  mas  taiwan:  sisik  berwarna  hijau kekuning-kuningan  ;  badan  relative  panjang  ; penampang  punggung  membulat;  mata  agak menonjol  ;  gerakan  lebih  gesit  dan  aktif  ; perbandingan  panjang  badan  dengan  tinggi badan antara 3,5:1.
5)  Ikan  mas  koi  :  bentuk  badan  bulat  panjang dan  bersisisk  penuh  ;  warna  sisik  bermacam- macam  seperti  putih,  kuning,  merah  menyala, atau kombinasi dari warna-warna tersebut.

## 2.2. Myxobolus koi
Myxobolus  merupakan  salah  satu protozoa  yang  termasuk  ke  dalam  famili Myxobolidae.  Parasit  ini  memiliki  spora berbentuk    elipsoidal,    ovoid    atau    membulat yang   terlihat   di   dalam   valvula   (Lom   & Dykova,  1992).  Selanjutnya  dikatakan  bahwa sistematika  dari Myxobolus adalah  sebagai berikut :
Kingdom :   Animalia Phylum    :  Protozoa Class        :   Myxosporea Order       :   Bivalvulida Family     :   Myxobolidae Genus      : Myxobolus
Genus       : Myxobolus koi
Myxobolus    koi merupakan   parasit yang    menjadi    agen    penyebab    penyakit whirling  disease dan  juga  kerusakan  beberapa organ pada ikan golongan cyprinidae.
Myxobolus  ini  pertama  kai      ditemukan  pada tahun 1986 di Timur Laut Pasifik (Lorz et al. , 1989).   Kejadian    penyakit    akibat    infeksi parasit Myxosporea pada  ikan  dari  berbagai kondisi  geografis  telah  banyak  diteliti  dengan
© (2017) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
jumlah  spesies  sebanyak  1200  (Lom  & Dykova, 1992).
Myxobolus  koi merupakan  spesies yang  paling  banyak  dari  genus Myxosporea dan  terdapat  lebih  dari  450 spesies  yang telah teridentifikasi.  Sebagian  besar  dari  spesies- spesies  tersebut  memiliki  sifat  patogen  yang baik pada ikan yang hidup bebas maupun ikan budidaya.  Golongan Cyprinidae diketahui merupakan  hospes  untuk lebih  dari  40  spesies Myxobolus ,  dimana Myxobolus  cyprinii dan Myxobolus  koi merupakan  spesies  patogen yang sering menyerang ikan golongan Cyprinidae,  termasuk  di  dalamnya  ikan  mas (Kent, et al ., 1996).
Myxobolus yang  ditemukan  pada  ikan mas,   merupakan parasit yang dikenal sebagai agen penyebab penyakit whirling disease ( El –  Matbouli  &  Hoffmann,  1998).  Infeksi  berat oleh    parasit Myxobolus    cerebralis dapat menyebabkan  terjadinya  deformitas  tulang tengkorak  ikan  dan  columna  vertebralis  dan juga  kerusakan  pada  organ  auditori  yang menimbulkan     gejaa     whirling     (Hoffman, 1992).
Umumya  jumlah  spora Myxobolus  koi berjumlah  15.000  dalam  satu  nodul  ukuran kecil,  nodul  berukuran  milimeter  dengan bentuk   oval   atau   buat   telur,   ikan   yang terserang Myxobolus  koi akan  terdapat  nodul di  bagian  insang  dan  tubuh  (Lom &  Dykova, 1992).
Bentuk spora Myxobolus dari masing – masing spesies yang ada mempunyai ukuran dan  bentuk  yangn  berbeda-beda.  Spora Myxobolus  koi berbentuk  seperti  buah  pear berukuran  ±  14  -  15  x  7  -  8  µm  sedangkan kista  berdiameter  0.1  –  7  mm  (Yuasa et  al ., 2003).
Myxobolus  koi juga  menginfeksi  ikan mas  pada  ukuran  kecil  (stadium  muda).  Organ yang  terinfeksi  adalah  insang,    dimana  parasit ini  membentuk  kista  (cyste)  pads  lembar- lembar    insang    ikan,    sehingga    akan mengganggu    proses  penyerapan  zat  asam  . akan  mengakibatkan  ikan  akan  mengalami kekurangan  zat  asam  karena  sulit  bernafas. Kematian  yang  diakibatkan  oleh  infeksi  dari parasit  ini  cukup  tinggi  yaitu  bisa  mencapai 90%  (Ruliyandi,  2008).  Selanjutnya  dikatakan bahwa Myxosporeasis adalah    merupakan
penyakit  parasiter  pada  ikan  yang  disebabkan oleh  sporozoa,  antara  lain  dari  spesies Myxobolus    koi. Umumnya    organisme penyebab  ini  dikenali  dengan  morfologi sporanya,  jumlah  dan  lokasi  filamen  polar. Spesies-spesies lain yang juga dapat menyebabkan penyakit ini adalah : Thelohanellus sp .,  Myxosoma sp .,  Henneguya sp . dan Maxidium sp

## 2.3.       Siklus hidup
Lom and Dykova    (2006)  dan  Darnas (1985),  mengatakan  bahwa  cara  penyebaran dari  myxosporea  sebenarnya  belum  dapat diketahui  dengan  pasti,  namun  ada  keterangan yang  menjelaskan  bahwa  beberapa Myxobolus memiliki  siklus  hidup  secara  langsung  tanpa inang  antara.  Selanjutnya  dikatakan  bahwa siklus  hidup  diawali  dari  ikan  yang  terinfeksi Myxobolus  koi ditemukan  adanya  nodul  atau bisul  yang terdapat  pada  insang ataupun   pada permukaan   tubuh.   Setelah   nodul   matang, nodul      tersebut  akan  pecah  dan      spora  yang terdapat  di  dalam  nodul  menyebar  di  perairan yang  kemudian          termakan  oleh  ikan. Selanjutnya  spora  yang  termakan  oleh  ikan akan      masuk  ke  dalam  saluran  pencernaan. Kemudian  kapsul  polar      melebur  dan  akan berbentuk  seperti  filamen  polar  dan  akan bergelantungan  di  dinding  usus.  Selanjutnya akan  menembus  dinding  usus  ikan,  kemudian masuk  ke  pembuluh  darah  dan  menyebar  ke seluruh    organ    ikan.    Filamen    polar    tersebut akan mengalami perkembangan secara sporogony dan menjadi sporoblast dan membentuk nodul baru pada insang (Titis dkk, 2009).
Siklus  hidup  pada  Gambar  2.2. menunjukkan adanya inang antara yaitu cacing Oligochaeta  (e).  Gambar  tersebut  dapat dijelaskan bahwa nodul yang berisi spora yang terdapat  pada      permukaan  tubuh  (epidermis) mengalami  perkembangan  jumlah  spora  (a,  b dan c) dan kematangan nodul.   Setelah matang nodul akan  pecah  dan  mencemari  perairan  (d). Selanjutnya  spora  akan  termakan  oleh  cacing Oligochaeta  dan  di  dalam  tubuh  cacing  ini spora    mengalami    perkembangan    menjadi spora  triactinomyxon  (aktinospora)  dan  akan termakan   oleh   ikan   kemudian   membentuk nodul kembali (El-Matbouli et al. , 1998).
Menurut  Darnas  (1985),  daur  hidup
© (2017) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
myxobolus diawali   dengan   spora   termakan
© (2017) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
oleh  ikan  dan  masuk  ke  dalam  saluran pencernaan  ikan.  Cairan  dalam  saluran pencernaan  ikan  dapat  membantu  spora melepaskan    filamen    polar    untuk    menempel pada  sel  setelah  bagian  internal  spora (sporoplasma) berubah bentuk menjadi amoeboid  dan  melakukan  penetrasi  ke  dalam sel  usus  atau  dalam  sel  darah  untuk  menuju organ  target.  Pada  kondisi  ini  parasit  disebut thropozoit    kemudian    membelah    ( shizogony ) dan bercampur ( sporogony ) sehingga menghasilkan massa spora.
Lebih lanjut Anshary
(2008) menyatakan    bahwa    ikan    terinfestasi Myxobolus setelah  memakan  spora.  Di  dalam usus  terjadi  stimulasi  polar  kapsul  menjadi terbuka  dan  mengeluarkan  polar  filamen  yang melekat pada epitelium usus, selanjutnya valve menjadi terbuka dan amoebula keluar. Amoebula  mengikuti  aliran  darah  dan  darah membawa  ke  organ  target.  Amoebula  yang telah  mencapai  organ  target  akan  tumbuh menjadi  zigot  dan  inti  sel  mengalami pembelahan  beberapa  kali  untuk  membentuk sporogonik plasmodium.

## 2.4        Myxobolusis pada Ikan
Myxobolusis merupakan penyakit parasiter  pada  ikan  yang  disebabkan  oleh Myxobolus . Parasit  yang  menyerang insang ini diklasifikasikan   ke  dalam  kelompok   khusus dari    myxosporea.    Beberapa    spesies    parasit dapat  menginfeksi  satu  ikan,  membentuk  tiga koloni  yang  berbeda  di  jaringan  insang (Eszterbauer et al ., 2001). Myxobolus merupakan  salah  satu  genus  dari  Myxosporea, yang bersifat  parasit dan  menyerang kulit dan insang  ikan  air  tawar  maupun  ikan  air  laut. Beberapa  spesies  myxosporea  telah  dilaporkan namun  sejauh  ini  hanya  beberapa  yang menimbulkan    infeksi    serius.    Gejala    infeksi yang  biasa  terlihat  seperti  adanya cyste di antara  jaringan  insang  dan  integument  yang terdiri  dari  perkembangan  stadia  parasit, termasuk   karakteristik   dari   spora   (Robert, 1989).
Myxobolusis  umumnya  menginfeksi jaringan ikat tapis insang, tulang kartilago, otot atau  daging  dan  beberapa  organ  dalam  ikan terutama pada benih. Pada insang akan terlihat bisul atau nodul  putih seperti tumor berbentuk
bulat  lonjong  menyerupai  butiran  padi.  Pada infeksi  berat,  tutup  insang  (operculum)  tidak
© (2017) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
dapat menutup sempurna (Kementrian Perikanan  dan  Kelautan,  2010).  Secara  umum, infeksi  berat  pada  insang  akan  menyebabkan penurunan berat badan, ikan berenang di dekat pematang  kolam,  warna  kulit  pucat  dan  ikan kesulitan  untuk  bernafas  yang  dapat  berakibat pada kematian (Sugianti dkk, 2005).
Myxobolus yang  menyerang  ikan  air tawar pernah dilaporkan di Indonesia menyebabkan  masalah  serius  dalam  budidaya ikan  koi  ( Cyprinus  carpio ),  dengan  tingkat mortalitas  60  -  90%  pada  benih  ikan  koi. Myxobolus yang  menghasilkan  nodul  pada filamen  insang  ikan  koi  telah  diidentifikasi sebagai  jenis Myxobolus  koi (Kudo,  1977). Parasit  ini  telah  masuk  ke  Indonesia  melalui ikan  koi  impor  dan  menyebabkan  kerugian yang  cukup  besar  pada  budidaya  ikan  koi (Rukyani,  1990).  Menurut  Badan  Karantina Ikan, Pengendalian Mutu dan Keamanan Hasil Perikanan  (2011),  myxobolusis  pada  ikan  koi dikategorikan  pada  HPIK  (hama  dan  penyakit ikan karantina) golongan I karena belum dapat disucihamakan    dan/atau    dihilangkan    dari media pembawanya karena teknologi perlakuaan belum dikuasai.
Titis (2009) melaporkan bahwa
serangan Myxobolus menyebabkan  kematian sekitar 50% dari ikan yang terinfeksi. Menurut Wijanarko  (2011),  di  Desa  Tlogo  Kemacatan Kanigoro  Kabupaten  Blitar  sering  ditemukan serangan  parasit Myxobolus pada  benih  ikan Mas.  Warga  setempat  sering  menamakan dengan  “tumor  ikan”.  Devi  (2011)  juga melaporkan  jumlah  nodul pada  ikan  mas  yang terserang  Myxobolusis  di  Kabupaten  Blitar Jawa  Timur,  dari  200  ikan  yang  positif terinfeksi Myxobolus 19%  merupakan  infeksi berat,  55,5%  infeksi  sedang  dan  25,5% merupakan  infeksi  ringan  dari  total  sampel. Lebih  lanjut,  Firmansyah  (2012)  melaporkan prevalensi  dan  jumlah  nodul  ikan  koi  yang terserang  myxobolusis  dari  tiga  Desa  di Kabupaten  Blitar  yakni  Desa  Penataran,  Desa Nglegok  dan  Desa  Kemloko,  diperoleh prevalensi  tertinggi  di  Desa  Kemloko  yakni sebanyak 19,46% ikan yang terinfeksi Myxobolus dari   550   sampel   ikan   dimana 27,10% merupakan infeksi sedang dan 11,21% merupakan  infeksi  berat  dari  total  ikan  yang terserang myxobolusis.
© (2017) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
Diagnosa myxobolusis dapat
dilakukan  dengan  melakukan  pengamatan secara  visual  terhadap  tingkah  laku  dan  gejala klinis    pada    ikan.    Pengamatan    lebih    lanjut dapat  dilakukan  secara  mikroskopis  untuk melihat morfologi Myxobolus melalui pembuatan  preparat  ulas  dari  organ  target (Stoskopf, 1993).

## 2.5.  Protein Spora Myxobolus
Protein  dari  pathogen  (parasit,  bakteri, virus    dan    jamur)    dapat    digunakan    sebagai bahan  yang  dapat  meningkatkan  proliferasi  sel pada  ikan.  Antigen  merupakan  suatu  molekul yang  mampu  berikatan  dengan  antibody spesifik.   Sedang  antigenik  adalah  sifat  suatu molekul  atau  zat  yang  memungkinkan  untuk bereaksi  dengan  produk-produk  dari  respons imun  spesifik,  seperti  antibodi  (Tizard,  1988). Selanjutnya  dikatakan  bahwa  terdapat  dua  ciri pokok  antigenitas  yaitu  limitasi  fisikokimiawi dan  keasingan.  Limitasi  fisikokimiawi    berarti bahwa  agar  dapat  bersifat  antigenik  molekul harus  besar,  kaku  dan  kimiawi  kompleks. Molekul  kecil  juga  dapat  berlaku  sebagai antigen,  akan  tetapi  molekul  besar  jauh  lebih baik.  Protein  merupakan  antigen  yang  baik karena merupakan makromolekul dan mempunyai  struktur  kimia  yang  kompleks. Keasingan  artinya  adalah  sifat  dasar  bahan asing  yang  dapat  dikenal  sebagai  bukan  unsur tubuh  yang  normal.  Protein  dapat  merupakan antigen  yang  baik  bila  mempunyai      berat molekul  lebih  besar  dari  1.000  Dalton  dan mempunyai  kerumitan  struktur.    Baratawidjaja (2004)  mengatakan  bahwa  antigen  yang  juga disebut  dengan  imunogen  adalah  bahan  yang dapat  merangsang  respons  imun  atau  bahan yang    dapat    bereaksi    dengan    antibodi    yang sudah ada tanpa memperhatikan kemampuannya  untuk  merangsang  produksi antibodi.
Protein  spasmin  merupakan  protein membran    yang    terdapat    pada    spasmonema pada tangkai ( contractile stalk ) pada   berbagai spesies  dari  familia  Vorticellidae  (Amos, et al .,  1975;  Routledge,  1978;  Moriyama ,  et  al. , 1999;     Mcutcheon, et al ., 2002; Pylawka dan Buhse, 2003  dan Itabashi, et al ., 2003).
Amos, et al. , (1975) telah menganalisis protein dari spasmonema
kontraktil  dari Zoothamnium  arbuscula dan membandingkan   dengan   protein   lain   pada
© (2017) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
organ  lain  yang  berkontraksi.  Deteksi  protein ini   dilakukan   dengan   Polyacrylamide   Gel, hasil  dari  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa hampir 60% protein di dalam Sodium Dodecyl Sulphate Gels tersebar pada pita (band) dengan berat  molekul  mendekati  20,000  kDa.  Protein ini terdiri dari 2 protein yang sama besar yang disebut  dengan  protein  spasmin  1  dan  2. Komposisi  asam  amino  dari  ke  dua  fraksi spasmin  tersebut  yang  dideterminasi  dengan metode    Flourimetrik    menunjukkan    kaya dengan glysin dan serin tetapi tidak mengandung cystein dan methionin.
Itabashi, et al . (2003) telah melakukan karakterisasi molekuler protein spasmin Zoothamnium  arbuscula, hasil  yang  didapat menunjukkan  bahwa  satu  gen  spasmin  tidak mempunyai  intron  dan  panjang  genom 531  bp dan  diprediksi  akan  menghasilkan  177  asam amino dengan berat molekul mendekati 19.659 Da  (19,659  kDa).  Sekuen  asam  mempunyai dua    ikatan    kalsium.    Karakterisasi    protein spasmin       zoothamnium   banyak   dilakukan dengan  metode  SDS-PAGE  dengan  kadar  gel 10%  dapat  digunakan  untuk  identifikasi  berat molekul  protein,  hasil  identifikasi  berupa  pita ( band )  dan  penentuan  berat  molekulnya dilakukan   dengan   cara   melihat   kesetaraan dengan marker .
Itabashi, et  al .  (2004)  menyatakan bahwa  protein  spasmin  pada  spasmonema Zoothamnium  arbuscula sudah  dapat  dibuat antibodi    poliklonal    pada   sel    hela.    Analisis hasil  immunoblotting  menunjukkan  bahwa lokasi   protein   antigen   pada   berat   molekul 68/71 kDa, 55 kDa dan 70 kDa. Brunk (1999) merekomendasi     bahwa     protein     membran Tetrahymena  sp .  yang  merupakan  satu  familia dengan Ichthyophthyrius multifiliis
mempunyai      kemungkinan      besar dikembangkan  sebagai  bahan  vaksin  sub  unit terhadap  penyakit  bintik  putih  ( white  spot ) pada  ikan.  Preer  (1986)  menemukan  protein membran  antigenik  pada  Paramecium  dengan SDS-PAGE    dan    Western    Blotting,    dengan berat molekul 61 kDa, 63 kDa dan 65 kDa.
Lin, et  al .  (1996)  menemukan  protein membran
antigenik dari
theront
Ichthyophthyrius  multifiliis    serotype G1  berat molekul 48 kDa dan 60 kDa, dan serotype G3 dengan  berat  molekul  55  kDa,  dengan  metode standart.    Sedangkan    Maki    dan    Dickerson
© (2017) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
(2003)  sudah  berhasil  mengekstrasi  protein membran  theront Ichthyophthyrius  multifiliis serotype G5 dan mengidentifikasi SDS-PAGE 12%  serta Western  Blotting yang  dilajutkan pemurnian             dengan             Kromatografi Imunoafinitas.        Hasil        penelitian        ini menunjukkan  bahwa  telah  ditemukan  protein membran  imunogenik  dengan  berat  molekul 55 kDa dan 35 kDa.
homeostasi.  Respons  imunitas  hewan  akuatik terdiri  dari  respons non spesifik  dan  spesifik. Respons  imunitas  pada  ikan  dibentuk  oleh jaringan    limfoid.    Jaringan    limfoid    ikan menyatu  dengan jaringan mieloid  yang disebut sebagai   jaringan   limfomieloid.   Pada   ikan teleost  jaringan  limfomieloidnya  adalah  limfa, timus   dan   ginjal   depan   (Van   Muiswinkel, 2008).
Yusuf    (2015)    telah    berhasil mengisolasi whole  protein spora Myxobolus koi menggunakan    SDS-PAGE    ,    yang ditemukan  adanya  protein  digambarkan  dalam bentuk  pita-pita  pada  gel  SDS-PAGE  dan ditemukan  6  pita  (band)  protein  yaitu  dengan berat  molekul  68.1  kDa,  38.5  kDa,  25.6  kDa, 23 kDa, 21.7 kDa dan 18.9 kDa. Hasil analisis SDS-PAGE  dapat  dilihat  pada  Gambar  2.3. Selanjutnya  dikatakan  bahwa    protein  tersebut sudah  diuji  coba  secara  laboratoris  dapat meningkatkan respon
imun
dan kelulushidupan  ikan  koi  dari  19%  hingga  78% dan dapat dikembangkan sebagai bahan vaksin sub unit.
Gambar 2.4.      Hasil      karakterisasi whole protein spora Myxobolus  koi dengan SDS-PAGE menggunakan      pewarnaan perak nitrat (Yusuf, 2015).
Keterangan : Lajur (M): Marker dan lajur (S): whole protein sampel
2.6. Sistem Pertahanan Tubuh pada Ikan
Respons imunitas pada hewan merupakan  upaya  perlindungan  diri  terhadap infeksi     maupun     preservasi     fisiologik     -
Berbeda  dengan  udang,  pada  ikan terdapat  populasi  sel  B  dan  sel  T.  Sel  ini sangat  berperan  dalam  respons  imunitas  baik seluler  maupun  humoral.  Respons  dan  faktor humoral  antara  lain  antibodi,  transferin, interferon,   protein   C-reaktif;   respons   dan faktor  seluler  seperti  sel  makrofag,  sel  killer, neutrofil dan hipersensitivitas. Selain itu barier mekanik  dan  kimiawi  permukaan  seperti  kulit, sisik  dan  mukus  pada  permukaan  tubuh  dan insang  juga  merupakan  alat  pertahanan  tubuh ikan yang bersifat non spesifik (Randelli et al. , 2008).
Respons  humoral  merupakan  respons yang   bersifat   spesifik   dilakukan   oleh   suatu substansi  yang  dikenal  sebagai  antibodi  atau imunoglobulin, sedangkan respons seluler ikan bersifat non spesifik  dilakukan  oleh  " cell mediated  imunity "  (Alejo and Tafalla,  2011).
Komunikator dan amplikator dalam fungsi dan mekanisme pertahanan humoral  dan  seluler  ikan  dilakukan  oleh limfokin,   interleukin,   interferon   dan   sitokin (Sommerset et al., 2005).

## 2.7. Gambaran darah ikan
Kurniawan  (2010)  menyebutkan  bahwa darah    merupakan    salah    satu    komponen transport    yang     vital    keberadaannya    yaitu sebagai    pengangkut    bahan    kimia    seperti hormon  (hasil  kelenjar  endokrin)  ke  sel  atau organ, bahan buangan hasil metabolisme tubuh, dan  pengangkut  oksigen  dan  karbondioksida. Volume  darah  ikan  yang  beredar  dalam  sistem sirkulasi  sekitar  1,5-3%  dari  berat  tubuhnya. Nilai  ini  jauh  dibawah  volume  darah  mamalia yaitu  mencapai  6%  dari  tubuhnya,  namun  pada spesies  ikan  tertentu  mempunyai  volume  darah sekitar  5%  dari  berat  tubuhnya  (Triastuti  dkk., 2010).  Darah  terdiri  atas  komponen  cairan  dan komponen  seluler.  Komponen  cairan  disebut plasma  darah,  dan  komponen  seluler  meliputi erythrocytes  (sel  darah  merah),  leucocytes  (sel darah  putih)  dan  thrombocytes  (keping  darah) (Suprapto, 2007). Komponen darah ikan seperti
© (2017) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
trombosit  dan  plasma  darah  memiliki  peran penting  sebagai  pertahanan  pertama  terhadap serangan  penyakit  yang  masuk  ke  dalam tubuh ikan.  Gambaran  darah  dapat  digunakan  untuk mengetahui kondisi kesehatan ikan.
Penyimpangan
fisiologis ikan akan menyebabkan  komponen-komponen  darah  juga mengalami perubahan (Kurniawan, 2010).

## 2.7.1.  Eritrosit (sel darah merah)
Eritrosit  berwarna  merah  kekuningan dengan jumlah berkisar antara 20 ribu sampai 3 juta  tiap  ccnya.  Jumlah  sel  ini  tergantung aktivitas  ikan  dan  suhu  tubuhnya.  Eritrosit memiliki    fungsi    untuk    mengangkut hemoglobin  yang  berperan  membawa  oksigen dari  insang  ke  jaringan,  eritrosit  mengandung asam  karbonat  dalam  jumlah  besar  yang berfungsi  mengkatalis  reaksi  antara  CO 2 dan air,   dengan   demikian   darah   darah   dapat bereaksi dengan karbondioksida dan mentranspornya  dari  jaringan  ke  insang (Sulmartiwi dan Suprapto, 2011).
Diameter  eritrosit  ikan  antara  7-36µ. Eritrosit  yang  sudah  matang  berbentuk  oval, sedangkan  pada  sel  yang  belum  matang berbentuk  bulat  (Triastuti  dkk.,  2010).  Inti  sel eritrosit  terletak  sentral  dengan  sitoplasma  dan akan terlihat jernih kebiruan dengan pewarnaan giemsa  (Kurniawan,  2010).  Irianto  (2005) menyebutkan      bahwa      pada      ikan      teleostei, jumlah   normal   eritrosit   adalah   1,05x10 6 – 3,0x10 6 sel/mm 3 ,  sedangkan  dalam  persentase jumlah  terendah  eritrosit  96,5%  dan  tertinggi 98%.      Angka et      al., (1985) dalam Dopongtunung  (2008)  menyatakan  bahwa ukuran    eritrosit    ikan    lele    berkisar    antara 10x11µm  –  12x13µm,  dengan  diameter  inti berkisar  antara  4-5  µm.  Jumlah  eritrosit  ikan lele adalah 3,18x10 6 sel/ml.

## 2.7.2.  Leukosit (sel darah putih)
Leukosit    memiliki    peranan    utama dalam  sistem  pertahanan  tubuh.  Leukosit  juga berperan  dalam  detoksifikasi  protein  sebelum dapat  menyebabkan  kerusakan  dalam  tubuh (Sulmartiwi   dan   Suprapto,   2011).   Fujaya (2004)  menyatakan  bahwa  ikan  memiliki leukosit  (sel  darah  putih)  yang  lebih  banyak dari  manusia  yaitu   berkisar  antara  137.000- 198.000  sel/mm 3 .  Roberts  (1989)  menyatakan bahwa  pada  kondisi  ikan  terinfeksi  penyakit menyebabkan   jumlah   leukosit   yang   ada   di
dalam  darah  akan  lebih  banyak  dari  kondisi normal.  Hal  ini  disebabkan  sel  leukosit  banyak terdapat  di  jaringan  haemopoeitik  ginjal  dan akan  dilepaskan  dalam  darah  sebagai  respon non  spesifik  untuk  mempertahankan  tubuh  dari serangan penyakit.
Sulmartiwi dan Suprapto (2011) mengatakan  bahwa  leukosit  terbagi  menjadi dua  macam  berdasarkan  adanya  granul  dalam sitoplasma  yakni,  tipe  granulosit  (eosinofil, basofil  dan  neurofil)  dan  agranulosit  (monosit dan  limfosit).  Eosinofil,  neutrofil,  dan  monosit merupakan  sel  darah  putih  yang  berfungsi sebagai    fagositosis.    Eosinofil    merupakan fagosit    lemah,    sedangkan    neutrofil    dan monosit   merupakan   fagosit   kuat.   Limfosit tidak  bersifat  fagositik  tetapi  memegang peranan dalam pembentukan antibodi.
Kekurangan limfosit menyebabkan menurunnya konsentrasi antibodi dan meningkatnya  serangan  penyakit.  Persentase jumlah  monosit  berkisar  antara  3-5%,  limfosit berkisar  antara  76-97,5%,  granulosit  berkisar antara  2-10%,  eosinofil  granulosit  berkisar antara  0-1%  dan  basofil  granulosit  berkisar antara   0-0,5%   (Svobodova and vykusova, 2008).

## METODE PENELITIAN
4.1        Waktu dan Tempat Penelitian Penelitian  ini  telah  dilaksanakan  pada bulan  April  2017.  Semua  tahapan  penelitian mulai  aplikasi  pemaparan  protein  spora Myxobolus  koi ,  pemeriksaan  gambaran  darah, dan                kelulushidupan    dilakukan    di Laboratorium  Basah  Fakultas  Perikanan  dan Kelautan  Universitas  Airlangga  Surabaya. Pengamatan  differensial  leukosit  ikan  dan infestasi  parasit  dilakukan  di  Laboratorium Kering  Fakultas  Perikanan  dan  Kelautan Universitas Airlangga Surabaya.

## 4.2. Rancangan Penelitian :
Penelitian  ini  merupakan  penelitian eksperimen  laboratorik,  untuk  menganalisis respon imun (Gambaran Darah), infeksi parasit dan  kelulushidupan      ikan  mas      yang  dipapar dengan protein spora Myxobolus    koi . Penelitian   eksperimental   adalah     penelitian yang    dilakukan    dengan    mengadakan manipulasi  terhadap  obyek  penelitian  dan
© (2017) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
adanya kontrol. Penelitian eksperimental bertujuan   untuk   menyelidiki   ada   tidaknya
© (2017) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
hubungan  sebab  akibat  serta  berapa  besar hubungan  sebab  akibat  tersebut  dengan  cara memberikan  perlakuan-perlakuan  tertentu  dan menyediakan      kontrol      untuk      perbandingan (Steel and Torrie, 1992)
Ikan  mas  diuji  dengan  menggunakan  3 akuarium  dengan  kapasitas  20  lt  air.  Padat tebar  ikan  adalah      20  ekor/akuarium  dengan ukuran ikan 7-10 cm. Pemaparan protein spora Myxobolus  koi dilakukan  secara  oral  yaitu disuntikkan langsung melalui mulut ikan.  Ikan yang  digunakan  untuk  perlakuan  adalah  ikan sehat  yang  telah  direndam  dahulu  dalam Methylene  blue 3-5  g/m 3 air  selama  5  menit untuk membersihkan organisme yang menempel  pada  tubuh  ikan.Adapun  perlakuan pemaparan  protein  spora  selama  pemeliharaan adalah sebagai berikut :
K1   =   Ikan  mas  sebanyak  30  ekor  dipapar dengan  larutan  PBS,      tanpa  dipapar protein  spora Myxobolus  koi dan dipelihara  pada  media  air  bukan  air kolam pembesaran  (air PDAM).
K2    =    Ikan  mas  sebanyak  30  ekor  dipapar protein spora Myxobolus  koi dengan dosis    2    µg    protein/gram    dan dipelihara  pada  media  air  dari  kolam pembesaran
K3  =    Ikan  mas  sebanyak  30  ekor  dipapar dengan  larutan  PBS,  tanpa  dipapar protein  spora Myxobolus  koi dan
dipelihara  pada  media  air  dari  kolam pembesaran
4.3. Variabel Penelitian Variabel dalam penelitian ini digolongkan  menjadi  variabel  bebas,  variabel tergantung   dan   variabel   kendali. Variabel bebas yaitu    dosis protein  Myxobolus  koi . Variabel    tergantung yaitu    respon    imun (differensial  leukosit),  infestasi  parasit  dan kelulushidupan  ( survival  rate )  ikan  mas. Variabel  kendali yaitu  umur  dan  ukuran  ikan mas,  ukuran  akuarium  dan  kualitas  air  dan pakan.

## 4.4. Definisi Operasional
1)   Myxobolusis  adalah  salah  satu  jenis penyakit      pada     ikan     koi      yang disebabkan oleh Myxobolus koi .
2)   Ikan  mas  sehat  adalah  ikan  mas  yang memiliki   ciri-ciri   tubuh   bersih   dari
parasit,    warna    cerah,    pergerakan lincah,  organ  tubuh  lengkap  dan  tidak rusak.
3)   Ikan   mas   terinfeksi Myxobolus   koi adalah   ikan   mas   yang   ditemukan nodul berisi spora dan  sulit bernafas.
4)   Infestasi    parasit    adalah    banyaknya parasit  (jumlah)  yang  menyerang  ikan mas.
5)  Tingkat            kelulushidupan            (SR) merupakan  persentase  jumlah  ikan  koi yang    hidup    selama    pemeliharaan terhadap    jumlah    keseluruhan    ikan yang dipelihara.

## 4.5.       Materi Penelitian
4.5.1.    Peralatan Penelitian Peralatan     yang     digunakan     dalam penelitian  ini  adalah  :  nampan  bedah, mikroskop  cahaya,  pinset,  cawan  petri,  pipet, tabung   reaksi, object   glass , cover   glass ,
Beaker  glass ,  20  buah  akuarium  dengan kapasitas  15  liter,  selang  dan  batu  aerasi. Peralatan  untuk  menganalisis  leukosit  (respon imun)      adalah  : Staining  Jare ,  Spuit  1  ml,
Mikroskoskop perbesaran 1000X dan
Haemositometer.    Peralatan  untuk  mengukur parameter  kualitas  air  meliputi  :  Thermometer untuk mengukur suhu air, Refraktometer untuk mengukur  salinitas,  pH  meter  untuk  mengukur pH,      DO-meter      untuk      mengukur      oksigen terlarut  dan   tes  kit  untuk  mengukur  NH 3 dan alkalinitas.

## 4.5.2.    Bahan Penelitian
Ikan      mas   yang   digunakan   dalam penelitian  adalah  ikan  mas  sehat  (tidak terinfeksi  Myxobolus)  dengan  ukuran  10  Cm. Jumlah  sampel  ikan  mas  sehat  sebanya  80 ekor.  Protein  spora Myxobolus  koi sebagai bahan  pengembangan  imunostimulan.  Protein ini  merupakan  protein  hasil  isolasi  dan karakterisasi  dengan  SDS-PAGE  dan  sudah diuji  tantang  secara  laboratories  oleh  Yusuf (2015). Bahan yang digunakan untuk pemeriksaan  differential  leukosit  adalah  anti koagulan  (EDTA),  Metanol,  Giemsa  20%  dan minyak  emersi.      Air  yang  digunakan  untuk pemeliharaan  ikan  mas  yang  dipapar  protein spora  adalah  air  kolam  pembesaran  ikan  mas di kecamatan Dlanggu Mojokerto.

## 4.6.       Metode Penelitian
Metode    penelitian    yang    digunakan dalam   penelitian   ini   adalah   eksperimental
© (2017) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
laboratorik  untuk  menganalisis  respons  imun ikan  mas  yang  dipapar  dengan protein spora Myxobolus    koi .    Penelitian    eksperimental adalah  penelitian  yang  dilakukan  dengan mengadakan manipulasi terhadap obyek penelitian  dan  adanya  kontrol.  Penelitian eksperimental bertujuan untuk menyelidiki ada tidaknya  hubungan  sebab  akibat  serta  berapa besar  hubungan  sebab  akibat  tersebut  dengan cara  memberikan  perlakuan-perlakuan  tertentu dan  menyediakan  kontrol  untuk  perbandingan (Steel and Torrie, 1992).

## 4.7.       Pelaksanaan Penelitian
4.7.1.    Penyediaan          Protein          Spora

## Myxobolus koi
Bahan    pengembangan    dari    protein spora Myxobolus   koi menggunakan   bahan yang    sudah    dilahsilkan    Yusuf    (2015)    dan Woro  (2015).  Bahan  spora  ini  sudah  diuji tantang  secara  laboratoris.  Hasil  penelitian secara  laboratoris  menunjukkan  hasil  bahwa spora  Myxobolus  koi  dapat  dikembangkan sebagai vaksin sub unit.

## 4.7.2 Pemeriksaan Infeksi Parasit
Pengamatan parasit pada insang dilakukan  secara  natif  dengan  metode  Jhonson (1986),  yaitu  dengan  melakukan  pengerokan pada  seluruh  permukaan  tubuh      udang.  Hasil kerokan  ditaruh  di  atas  gelas  obyek,  diberi  air dan  diperika  dengan  mikroskop  dengan pembesaran  100X.  Infestasi  parasit  dihitung dengan  persentasi  udang  yang  positif  terhadap jumlah  udang  yang  diperiksa.  Kemudian pemeriksaan parasit saluran pencernaan dilakukan  dengan  cara  mengeluarkan  seluruh isi  saluran  pencernaan,  ditampung  dalam petridisk  dan  diperiksa  secara  natif  dengan pembesaran 100X.

## 4.7.3     Analisis          Gambaran          Darah (Differensial leukosit)
Pengamatan  gambaran  darah  ikan  mas dilakukan      untuk  menganalisis  respons  imun ikan  mas  yang  dipapar  dengan protein spora M.   koi .   Parameter   gambaran   darah   yang diamati  adalah  hitung  jenis  (differensial) leukosit.  Leukosit  memiliki  jumlah  yang  lebih sedikit  dibandingkan  dengan  sel  darah  merah, yaitu   berkisar   antara   20.000/mm3   sampai 150.000/mm3   (Levine,   1994).   Bentuk   sel
darah  putih  menurut  Ariaty  (1991)  adalah berbentuk  lonjong  sampai  bulat.  Guyton and Hall  (1999)  melaporkan  bahwa  leukosit  terdiri dari  agranulosit  (limfosit  dan  monosit)  dan granulosit (heterofil, eosinofil dan basofil).
Jenis  dan  jumlah  leukosit  dihitung dengan  metode  Daisley  (1973).  Darah  diambil dari  vena  caudal  dengan  menggunakan  spuit  1 ml  sebanyak  ±  1ml.      Pada  saat  pengambilan darah,   ikan   diletakkan   dengan   kepala   di sebelah  kiri.  Jarum  suntik  ( syringe )  yang sebelumnya  sudah  diberi  dengan  EDTA (sebagai  antikoagulan).  Darah  dibuat  preparat ulas  dengan  cara  menempatkan  setetes  darah segar  pada  gelas  objek  pertama,  gelas  objek kedua  diletakan  dengan  suduk  45 o terhadap gelas  objek  pertama,  kemudian  ditarik  sampai menyentuh  darah,  darah  dibiarkan  menyebar sepanjang  tepi  gelas  objek  kedua,  lalu  gelas objek  kedua  didorong  sepanjang  permukaan gelas  objek  pertama  sehingga  membentuk lapisan   darah   tipis   dan   merata   (Maswan, 2009).  Preparat  dikeringkan  di  suhu  ruang kemudian  difiksasi  dengan  metanol  absolute selama 3 menit dan dikeringkan di suhu ruang kembali  sebelum  diwarnai  dengan  pewarna Giemsa  10%  selama  15  menit,  lalu  preparat dicuci kembali dengan akuades untuk mengurangi  kelebihan  warna  dan  dikeringkan di  suhu  ruang.  Preparat  diamati  di  bawah mikroskop  dengan  perbesaran  1000x  dan dihitung  setiap  jenis  leukosit  hingga  jumlah 100 sel (Tambur et al., 2006).

## 4.7.4     Penentuan kelulushidupan (SR)
Penentuan tingkat kelulushidupan ( survival  rate )  dilakukan  sebagai  parameter penunjang  untuk  menganalisis  respons  imun ikan  mas  pada  masing  -  masing  perlakuan. Tingkat  kelulushidupan  dinyatakan  berupa persentase  jumlah  ikan  koi  yang  hidup  sampai dengan  hari  ke-14  pasca  perlakuan  percobaan terhadap  jumlah  keseluruhan  ikan  yang dipelihara. Kelulushidupan ikan dihitung dengan menggunakan rumus:
Nt SR = x 100%
No
Keterangan :
SR = Kelulushidupan ikan
© (2017) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
Nt   =   Jumlah   ikan   yang   hidup   pada   akhir pengamatan (ekor)
No  =  Jumlah  ikan  yang  hidup  pada  awal  uji tantang (ekor)

## 4.8. Pengumpulan dan Analisis Data
Data   yang   terkumpul   dianalisis   secara diskrptif  yaitu  dengan  tabel  dan  gambar  serta dilakukan   penjelasan   terhadap   data   tersebut (Steel and Torrie, 1992).

## HASIL DAN PEMBAHASAN 5.1        Hasil Penelitian
5.1.1     Analisis Gambaran Darah Ikan Mas
Hasil      analisis      gambaran      darah ( Differensial  leukosit ) ikan  mas  yang  dipapar dengan   protein   spora   Myxobolus   koi   dapat dilihat  pada Tabel 5.1.
Tabel 5.1 . Hasil Analisis Differensial Leukosit pada ikan koi.
PERLAKUAN JENIS LEUKOSIT (%) LIMFOSIT MONOSIT HETEROFIL EOSINOFIL BASOFIL K1 57,8 12,8 3,4 6,8 0,9 K2 77,6 16,3 14,4 7,6 0,4 K3 61,5 11,6 6,7 9,2 0,2 NORMAL 76-97,5% 3 – 5% 2-10% 0-1% 0-0,5% Tabel 5.1 menunjukkan bahwa
persentase  dari  masing-masing  komponen leukosit  berada  dalam  kondisi  normal  dan beberapa  juga  berada  pada  kondisi  di  bawah normal. Dilihat dari gambaran limfosit menunjukkan   limfosit  tertinggi   terjadi   pada ikan  mas  yang  dipapar  dengan  protein  spora Myxobolus  koi dan  dipelihara  pada  media  air dari  kolam  pemeliharaan  ikan  dari  Mojokerto (Perlakuan K2) yaitu sebesar 77,6%, kemudian diikuti  pada  ikan  mas  yang  tidak  dipapar  dan dipelihara  pada  media  air  dari  kolam pemeliharaan    yaitu    sebesar    61,5%    dan terendah  pada  perlakuan  K3  yaitu  ikan  mas yang tidak dipapar  protein dan  dipelihara  pada media air yang steril dari air PDAM.
Dilihat  dari  persentase  komponen leukosit   yang   lain   yaitu   monosit,   heterofi, eosinofil   dan   basofil,   hanya   monosit   yang berada  dalam  persentase  di  atas  normal  pada semua   perlakuan   yaitu   K1,   K2   dan   K3, berturut-turut  yaitu  12,8  ;  16,3  dan  11,6%. Untuk  ikan  mas  pada  perlakuan  K2  semuanya menunjukkan  pada  kondisi  di  atas  normal kecuali  basofil  dan  eosinofil  semua  masih  di atas  normal,  yaitu  0,9  untuk  basofil  dan eosinofil  semuanya  di  atas  normal  ,  berturut-
turut  pada  perlakuan  K1,  K2  dan  K3  ,  yaitu 6,8, 7.6 dan 9,8%.

## 5.1.2     Hasil Pemeriksaan Infestasi Parasit
Periksaan  infestasi  parasit  ini  hanya ditujukan untuk pemeriksaan terhadap
Myxobolus    koi .    Hasil    pemeriksaan    dapat dilihat   pada   Tabel   5.2.   yang   menunjukkan bahwa  semua  ikan  mas,    baik  yang  dipapar maupun tidak dipapar protein spora Myxobolus koi terinfestasi Myxobolus koi .
Tabel 5.2. menunjukkan bahwa persentasi  kan  mas  yang  terinfestasi  parasit tertinggi  sebesar  53,33%     terjadi  pada  ikan yang  tidak  dipapar  protein  spora  Myxobolus koi dan dipelihara pada media air yang diambil dari  kolam  mas  yang  tidak  dipapar  protein yang  dipelihara  pada  media  air  yang  sudah disterilkan  yaitu  30,00%  ,  sedangkan  yang terrendah  (16,66%)  terjadi  pada  ikan  yang dipapar  dengan  protein  dan  dipelihara  dengan air media yang diambil dari kolam pemeliharaan ikan di Desa Delanggu,
Mojokerto.
Tabel 5.2. Hasil Pemeriksaan Infestasi Myxobolus koi Pada Ikan Mas Setelah 30  Hari Pemeliharaan Perlakuan Jumlah Ikan Yang Diperiksa (Ekor) Infestasi Myxobolus koi pada Ikan Mas(Ekor / %) Positif Negatif K1 30 9 (30,00) 21(70,00) K2 30 5 (16,66) 25 (83,33) K3 30 16 (53,33) 14 (46,66)

## 5.1.3.  Penentuan  Tingkat  Kelulushidupan (SR) Ikan Mas
Kelulushidupan    udang    vaname dihitung pada saat panen yaitu pada hari ke 90. Hasil penghitungan tingkat kelulushidupan
ikan  mas  menunjukkan  bahwa  tingkat kelulushidupan ikan mas  yang dipapar dengan protein  protein  spora Myxobolus  koi dan dipelihara  pada  media  air  dari kolam pemeliharaan    ikan    nila    di    Mojokerto, mencapai  90%,  sedangkan  yang  tidak  dipapar protein    sebesar  73%  yang  dipelihara  pada  air PDAM  dan  53,33%  ikan  mas  yang  dipelihara pada  media  air  dari  kolam  pemeliharan  ikan nila di Mojokerto (Tabel 5.3).
© (2017) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
Tabel 5.3. Hasil Penentuan Tingkat Kelulushidupan Ikan Mas
Tabel 5.3. menunjukan bahwa kelulushidupan  ikan  mas  yang  tertinggi  terjadi pada  ikan  mas  yag  dipapar  dengan  protein spora Myxobolus  koi yaitu  sebesar  90%. Kemudian  diikuti  pada  ikan  mas  yang  tidak dipapar protein spora yaitu 73,33%. Persentase kelulushidupan  ikan  mas  terrendah  ditemukan pada  ikan  mas  tidak dipapar  protein  spora  dan dipelihara  pada  media  air dari  kolam  perairan
Perlakuan Jumlah Ikan Mas yang dipelihara Jumlah Ikan Mas yang Hidup setelah 30 hari Pemeliharaan Tingkat Kelulushidupan (%) K1 30 22 73,33 K2 30 27 90,00 K3 30 16 53,33
budidauya, yaitu sebesar 53,33%$.

## 5.1.4.   Kualitas air media pemeliharaan
Hasil      pemeriksaan      kualitas      air disajikan pada Tabel 5.4.
Tabel 5.4. Hasil Pemeriksaan Kualitas Air Selama Pemeliharaan 30 Hari N0  Perlakuan Paramater Suhu (°C) pH DO (ppm) NH 3 (ppm) NO2  NO3 1. K1 28 8,00 5 0 0 0
2 K2 28 7,6 5 0,05 0,02 0 3. K3 28 7,6 5 0,05 0,02 0
Tabel 5.4. menunjukkan bahwa selama penelitian  kualitas  air  dalam  keadaan  yang optimal    untuk    pertumnuhan    ikan    mas, sehingga tidak mempengaruhi perlakuan penelitian
5.2        Pembahasan
Gambaran  Darah  Putih  ( Differensial leukosit )  merupakan  indikator  ada  tidaknya respon  imun  dari  ikan  mas  sebagai  perlakuan, yang  memiliki  sistem  pertahanan  tubuh  untuk melawan  berbagai  macam  penyakit.  Apabila terjadi  perubahan  jumlah  dan  jenis  leukosit dapat  dijadikan  tanda  bahwa  adanya  infeksi penyakit  atau  faktor  lain.  Leukosit  yang digolongkan    dalam    limfosit,    monosit, heterofil,   eosinofil   dan   basofil   merupakan
salah  satu  komponen  darah  yang  berfungsi sebagai  pertahanan  tubuh  spesifik  yang  akan menetralisir    dan    memusnahkan    patogen melalui proses fagositosis. Tabel 5.1 menunjukkan bahwa persentase limfosit tertinggi  pada  perlakuan K2  (ikan  mas  dipapar dengan  protein  spora Myxoboluskoi )  yaitu sebesar  77,6%.Hal  ini  lebih  tinggi  jika dibandingkan    dengan    persentase    pada perlakuan  K1  dan  K2  yang  sama-sama  tidak dipapar  protein  spora,  yaitu  sebesar  57,8  dan 61,5%.    Dilihat    dari    besarnya    persentase limfosit     dari     ke    tiga    perlakuan,    maka persentase   limfosit   ikan   mas   yang   dipapar protein spora meningkat  hingga  melebihi batas kisaran normal .
Peningkatan  jumlah  limfosit  pada  ikan mas   ini   kemungkinan   disebabkan   karena adanya  infeksi  dari  penyakit  yang  dalam  hal ini adalah Myxobolus koi dan  kemungkan  juga oleh patogen lain.  Infeksi dengan spora M . koi merupakan  tanggapan  sistem  pertahanan  tubuh ikan  atas  masuknya  patogen.  Hal  ini  sesuai dengan    pendapat    Bastiawan    dkk    (2001), limfosit  berfungsi  sebagai  penghasil  antibodi untuk     kekebalan     tubuh     dari     gangguan penyakit.  Pada  dasarnya  sel  limfosit  terdiri dari  dua  populasi  yaitu  sel  B  dan  sel  T.  Sel  B mempunyai              kemampuan              untuk bertransformasi  menjadi  sel  plasma  yaitu  sel yang   memproduksi   antibodi.   Sel   T   sangat berperan dalam kekebalan berperantara sel (sel T  sitotoksik)  dan  mengontrol  respons  imun (sel T supresor) (Kresno 2001). Setelah terjadi pengikatan antigen dengan reseptor  antigen sel limfosit, maka sel limfosit akan membelah dan berdiferensiasi  menjadi  sel  efektor  dan  sel memori (Tizard 1988).
Dilihat  dari  gambara  monosit,  maka persentase monosit pada semua perlakuan (K1, K2  dan  K3)  berada  diatas  normal,  yang terendah     terjadi   pada   perlakuan   K3   yaitu 11,6%. Monosit ini akan memfagositosis spora M. koi yang masuk dalam tubuh ikan mas. Hal ini  sesuai  dengan  pendapat  bahwa  monosit bersama  dengan  makrofag  akan  memfagosit agen  penyebab  penyakit  yang  masuk  dalam tubuh.  Bastiawan  dkk  (2001)  menjelaskan, monosit  berfungsi  sebagai  fagosit  terhadap benda-benda asing yang berperan sebagai agen penyakit.
Jumlah  heterofil  yang  tertinggi  juga terjadi pada ikan mas pada perlakuan K2 yaitu 14,4%   dan   melebihi    kisaran    normal.    Akan tetapi  heterofil  ini  terun  pada  perlakuan  K3
© (2017) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
dan  K1.  Hal  ini  disebabkan  adanya  kenaikan pada  limfosit  dan  monosit  sehingga  heterofil menurun.  Selain  itu  heterofil  tidak  terlalu berperan dalam merespon infeksi yang diakibatkan    oleh  parasit.    Heterofil  lebih banyak berperan pada infeksi yang diakibatkan oleh bakteri.
Jumlah eosinofil menunjukkan persentase  tertinggi  pada  perlakuan  K3  yaitu sebesar  9,2%  lebih  tinggi  jika  dibandinghkan dengan  perlakuan  K1  sebesar  6,8%  Hal  ini disebabkan  kemungkinan  terjadinya  infeksi Myxobolus  koi yang  dapat  meningkatkan jumlah    eosinofil    pada    darah    ikan.    Hal    ini sesuai  dengan  pendapat  Tizard  (1988)  yang menyatakan  bahwa  eosinofil  merupakan  salah satu  sel  pertahanan  tubuh  yang  dominan  di dalam  darah  dan  akan  meningkat  tajam jumlahnya    bila    terjadi    infeksi    penyakit parasiter.
Hasil  penelitian  terhadap  persentase basofil         menunjukkan     persentase     yang terendah terjadi pada perlakuan K3 (0,2%) dan diikuti dengan K2 dan K1, yaitu 0,4 dan 0,9%, yang  semuanya  menunjukkan  persentase  yang sangat rendah. Hal ini sesuai dengan pendapat dari      Affandi  dan  Tang  (2002)  menyatakan bahwa  persentase  basofil  di  dalam  darah  ikan berkisar antara 0.17-0.194 %.
Hasil  pemeriksaan  terhadap  infeksi parasit Myxobolus  koi menunjukkan  bahwa infestasi  tertinggi  terjadi  pada  ikan  mas  yang tidak dipapar protein spora dan dipelihara pada media    air    dari    kolam    pemeliharaan    di Mojokerta   (K3)      yaitu   sebanyak   16   ekor (53,33%).  Hal  ini  disebabkan  karena  ikan  mas pada perlakuan K# tidak dipapar protein spora dan  media  air  yang  digunakan  kemungkinan sudah  terdapat  Myxobolus  koi  dari  asalnya., yang pada saat digunakan parasit masih berada pada   stadia  aktinospora.  Menurut   Lom  and Dicova  (1996)  menyatakan  bahwa  stadia infektif  dari Myxobolus  koi adalah  stadia aktinospora    yang    berada    di    perairan. Kemudian   adanya infestasi  parasit Myxobolus koi pada  ikan  mas  yang  tidak  dipapar  protein dan  dipelihara  pada  air  yang  sudah  disterilkan (perlakuan  K1),  ini  kemungkinan  disebabkan ikan  yang  digunakan  sudah  terinfestasi  sejak diambil  dari  tempat  pengambilan  dan  belum terlihat adanya gejala klinis, sehingga dimasukkan  dalam  kelompok  ikan  yang  sehat. Infestasi  terendah  terjadi  pada  kelompok  ikan mas  yang  dipapar  dengan  protein  spora  yaitu hanya  5  ekor  (30%),  hal  ini  disebabkan  karen
protein spora yang masuk ke dalam tubuh ikan mampu  menstimulasi  aktivitas  sel  imun  pada ikan  dan  juga  dapat  digunakan  sebagai  bahan pengembangan  imunostimulan  yang  dapat meningkatkan      aktivitas      sel-sel      pertahanan tubuh  ikan  terhadap Myxobolus  koi .  Ketika protein  spora      masuk      ke  dalam  tubuh  ikan, maka        akan  dipresentasikan  oleh  MHC, kemudian    ditangkap  oleh  reseptor  pada  sel  T helper  (2),  dan  sel  T  helper  (2)  akan mensekresikan  sitokin  yaitu  IL-2,  IL-  4,  dan IL-6  sehingga  meningkatkan  jumlah  limfosit dalam  darah  yang  bertujuan  untuk  diferensiasi dan  proliferasi  sel  B,  diferensiasi  sel  B menghasilkan  sel  plasma  dan  sel  memori  yang dapat    mengikat    protein    spora    dan memudahkan proses fagositosis dan akanmenyebabkan    menurunnya    infestasi parasit Myxobolus koi .
Tabel  5.1.  juga  menunjukkan  bahwa kelulushidupan  tertinggi  terjadi  pada  ikan  mas pada  perlakuan  K2  yaitu  yang  dipapar  protein spora,    yaitu   sebesar    90%,    sedang   yang terendah  terjadi  pada  ikan  mas  perlakuan  K3 yaitu 53,33%.
Tingginya tingkat
kjelulushidupan  ini  disebabkan  karena  protein spora Myxobolus koi sebagai kandidat imunostimulan dapat dapat memberikan proteksi  atau  perlindungan  yang  tinggi  ikan mas,  disamping  karena  adanya  penurunan infestasi parasit seperti telah dijelakan di atas. Berdasarkan  hasil  pengukuran  kualitas air  suhu,  pH  dan  oksigen  terlarut  pada  media pemeliharaan  seperti  yang  tertera  pada  Tabel 5.4  menunjukkan  bahwa  kualitas  air  media pemeliharaan   masih   dalam   kondisi   normal, sehingga      dapat  mendukung  kelulushidupan ikan. Hal ini sesuai dengan pendapat Amri dan Khoiruman (2002) bahwa ikan koi dapat hidup pada  kisaran  suhu  8  -  30  °C.  Kadar  ammonia (NH 3 ) sebelum dan sesudah perlakuan menunjukkan    perbedaan    dimana    ammonia sebelum perlakuan sebesar 0,05 ppm.

## KESIMPULAN DAN SARAN

## 6.1        Kesimpulan
Kesimpulan  yang  dapat  diambil  dari penelitian ini adalah sebagai berikut :
1)  Gambaran      darah      ( differensial leukosit )  ikan  mas  yang  dipapar protein  spora Myxobolus  koi dan dipelihara   pada   media   air     dari kolam         pemeliharaan         dari Mojokerto     terjadi     peningkatan lymposit   yang  cenderung  tinggi,
© (2017) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
yang  berarti  terdapat  peningkatan respon imun.
2)  Terjadinya    peningkatan    respon imun     menyebabkan     terjadinya penurunan  infestasi Myxobolus  koi pada    ikan    mas     yang    dipapar protein  spora  dan  dipelihara  pada media air yang diambil dari kolam pemeliharaan ikan di Mojokerto. 3)  Terjadinya    peningkatan    respon imun menyebabkan adanya peningkatkan kelulushidupan (SR) ikan  mas  yang  dipapar  protein spora Myxobulus      koi dan dipelihara  pada  media  air  yang diambil  dari  kolam  pemeliharaan ikan di Mojokerto.

## 6.2        Saran
Saran  yang  dapat  diajukan  dari  hasil penelitian  ini  adalah  perlu  adanya  penelitian tentang  aplikasi  pemaparan  protein  spora melalui  pakan  sehingga  bisa  diberikan  setiap minggu (14 hari), untuk menjaga respon imun ikan,  karena  pada  hari  ke  15  respon  imun sudah mulai menurun.

## DAFTAR PUSTAKA
Alejo, A and Tafalla, C., 2011. Chemokines in teleost  fish  species.  Dev.  Comp. Immunol. 35: 1215 - 1222.
Amos WB, Routledge LM, and Yew FF, 1975. Calcium-binding proteins in a vorticellid         contractile organelle. Cell Sci J, 19 (1) : 203-213.
Anugrahi  T,  2013.  Efektifitas  Daun Ketepeng                    Cina  untuk Penanggulangan  Myxobolisis  pada Ikan  Mas  ( Cyprinus  carpi Linn), Fakultas  Perikanan  dan  Kelautan, Universitas Airlangga. Surabaya.
Anshary,  H.  2008.  Modul  Pembelajaran Berbasis  Student  Center  Learning (SCL)  Mata  Kuliah  Parasitologi  Ikan. Jurusan  Perikanan  Fakultas  Perikanan dan Ilmu      Kelautan      Universitas Hassanudin. Makasar. Hal 126.
Irianto, A. 2005. Patologi Ikan Teleostei . Gajah Mada University Press, Yogyakarta. hal 243.
Ariaty  L.  1991. Morfologi  Darah  Ikan  Mas (Cyprinus  carpio Linn )  Nila  Merah (Orechromis  sp)  dan  Lele  Dumbo (Clarias  gariepinus)  dari  Sukabumi . [skripsi].  Bogor.  Fakultas  Perikanan dan  Ilmu  Kelautan,  Institut  Pertanian Bogor.
Badan Karantina Ikan, Pengendalian Mutu dan Keamanan  Hasil  Perikanan.  2011. Pedoman    Penetapan    Hama    dan Penyakit  Ikan  Karantina.  Kementrian Kelautan  dan  Perikanan.  Jakarta.  Hal 25 - 27.
Baratawidjaja.     1996.     Immunologi     Dasar. Fakultas      Kedokteran      Universitas Indonesia. Gaya Baru. Jakarta. Hal 12.
Brunk, C.F., 1999. Ciliates display promise for foreign gene expression, Nature AmericaInc,*http://biotech.nature.com.
Clark,    T.G.,    Tian-Long    Lin    and    H.W. Dickerson,    1996.    Surface    antigen cross-linking triggers forced exit of a protozoan parasite from its host, Proc. Natl.   Acad.   Sci.   USA,   Vol.   93, pp.6825 – 6829, June.
Devi,  H.  L.  N.  A.  2011.  Hubungan  Derajat Infestasi Myxobolus  koi Terhadap Jumlah  Spora  Dan  Derajat  Kerusakan Pada  Usus  Ikan  Mas  ( Cyprinus  carpio
L). Skripsi.     Budidaya     Perairan. Fakultas  Perikanan  dan  Kelautan. Universitas  Airlangga.  Surabaya.  Hal 60.
Dwijayanti,  A.  A.  2011.  Karakterisasi  protein nodul  pada  insang  ikan  mas  ( Cyprinus carpio )  akibat  infestasi Myxobolus  sp dengan  metode  SDS-PAGE.  Skripsi. Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Airlangga. Hal 2.
Easy  R.  H.,  S.  C.  Johnson  and  D.  K.  Cone.
2005.   Morphological   and   molecular comparison   of Myxobolus   procerus (Kudo,  1934)  and M.  intramusculi n. sp.  (Myxozoa)  parasitizing muscles of the            trout-perch Percopsis
© (2017) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
omiscomaycus .    J.Parasitol     61:115– 122.
El-Matbouli.  M.,  T.  W.  Holstein  and  R.  W. Hoffmann.  1998.  Determination  of nuclear  DNA  concentration  in  cells  of Myxobolus cerebralis and triactinomyxon  spores,  the  causative agent  of  whirling  disease.  J.Parasitol 84: 696-699.
Eszterbauer E., M. Benko, A. Dan and Molnar K. 2001. Identification of fish parasitic
Myxobolus (Myxosporea)    species using  a  combined  PCR-RFLP  method.
J.Dis Aquat Org 44:35–39.
Farmer,    J.    N.    1980.    The    Protozoan Introduction   to    Protozoology.    The C.V.  Mosby  Company,  St.Louis.  35- 36 p.
Firmansyah,  R.  A.  F.  2012. Prevalensi  Dan Jumlah  Nodul  Pada  Insang  Ikan  Koi ( Cyprinus  Carpio )  Yang  Terinfeksi Myxobolus Di  Sentra  Budidaya  Ikan Koi  Kabupaten  Blitar-Jawa  Timur. Skripsi.  Budidaya  Perairan.  Fakultas Perikanan  dan  Kelautan.  Universitas Airlangga. Surabaya. Hal 42-43.
Guyton Arthur C. and Hall John E. 1999. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran . Setiawan I, Tengadi  KA,  Santoso  A,  penerjemah: Setiawan  I,  editor.  Jakarta  :  EGC. Terjemahan    dari    :    Textbook    of Medical Physiology. Hal 25-27.
Itabashi  T,    Mikami  K  and    Asai  H,  2003. Characterization    of  the  spasmin  I gene  in Zoothamnium  arbuscula strain  Kawagoe              (protozoa, eiliophora)    and  its       relation    to other  spasmins      and    centris.  Res. Microbiol J, 154 ( 5 ) : 361 - 367.
Kudo,    R.    R.,    1977.    Protozoology.    Fifth Edition. Publisher Ilinois. USA. p.125- 131.
Kementerian  Kelautan  dan  Perikanan,  2010. Peikanan  Budidaya.  Jakarta.  Hal  14-
16.
Leff, A.A., T. Yoshinaga and H.W. Dickerson, 1994.  Cross  immunity  in  channel catfish, Ictalurus         punctatus
(Rafinesque), against two immobilization serotypes of Ichthyopthirus  multifiliis (Fouquet), J. of Fish Diseases, Vol. 17, pp. 429 – 432.
Levine  ND.  1994.  Buku  Pelajaran  Parasitologi Veteriner.  Ashadi,  penerjemah.  UGM Gadjah  Mada  Uni  Press.  Yogyakarta.
Terjemahan dari: Textbook of Veterinary Parasitology. Hal 31-32.
Lin, T.L., T.G. Clark and H. Dickerson, 1996. Passive   Immunization   of   Channel Catfish  ( Ictalurus  punctatus )  against the Ciliated Protozoan  Parasite Ichthyophthirius    multifiliis by    Use of  Murine  Monoclonal  Antibodies, Infection   and   Immunity,   Oct,   pp. 4085 – 4090.
Lom,  J  and  I.  Dykova.  1992.  Protozoan Parasites  of  Fishes.  Developments  in Aquaculture and Fisheries Science. 26: 315 p.
Lom,    J    and    I.    Dykova.    2006.    Myxozoan genera:  Definition  and  notes  on taxonomy,  life  cycle,  terminology  and pathogenic  species.  J.Folia  Parasitol. 53: 35-36.
Mahasri,  G.  2007.  Buku  Ajar  Ilmu  Penyakit Protozoa  Pada  Ikan  dan  Udang. Universitas Airlangga. Surabaya.
Maki,    J.L.    and    H.W.    Dickerson,    2003. Systemic  and  Cutaneous  Mucus Antibody  Responses  of  Channel Catfish  Immnunized  against  the Protozoan  Parasite Ichthyophthirius multifiliis ,  Clinical  and  Diagnostic Laboratory  Immunology,  Vol.  10,
No. 5, pp.876 – 881.
Maswan,  N.  A.  Pengujian  Efektivitas  Dosis
Vaksin  Dna  dan Korelasinya  Terhadap Parameter Hematologi Secara Kuantitatif.  2009.  Skripsi.  Teknologi dan  Manajemen  Akuakultur.  Fakultas Perikanan  dan  Ilmu  kelautan.  Institut Pertanian. Bogor. Hal 33.
Mcutcheon  SM,  NB  Mclaughhlin  and      HE Buhse Jr,    2002.    Characterization of  Cytoskeletal,      Calcium-Binding
© (2017) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
Proteins  in Vorticella  convallaria , Eukaryot Microbiol J.
Moriyama  Y,  H  Okamoto  and  H  Asai,  1999. Rubber-Like        Elasticity        and Volume  Changes  in  the      Isolated
Spasmoneme  of  Giant Zoothamnium sp . under Ca2+-Induced Contraction,  Biophys  J,     76  (2)  : 993-1000.
Nazir,   M.   2011.   Metode   Penelitian.   Ghalia Indonesia. Bogor. hal. 63-64,124.
Preer, J.R, Jr., 1986. In the molekcular biology of  ciliated  protozoa,  ed.  Gall,  J.G (Akademic London). Pp. 301-339.
Pylawka,  S  and  Buhse, Jr HE,  2003.    Protein Synthesis    and                          Telotroch
Formation  in Vorticella  convallaria , Eukaryot Microbiol J, 198 : 45 - 52
Randelli, E., F. Buonocore and G. Scapigliati. 2008.  Cell  markers  and  determinants in    fish    immunology.    J.Fish    Shell Immuno. 25: 326-340.
Robert,  J.  R.  1989.  Fish  Pathology  Second Edition.  Bailliere  Tindall.  London.  64 p.
Routledge  LM,  1978.                Calcium-binding proteins  in      the          Vorticellid spasmoneme  :        Extraction  and Characterization by Gel Electrophoresis,,   Cell Biology J, 77 : 358-370.
Randelli, E., Buonocore. F, and Scapigliati. G.,
2008.  Cell  markers  and  determinants in    fish   immunology.    J.    Fish    &
Shellfish Immunology, 25:326-340.
Sommerset  I,  Krossøy  B,  Biering  E,  Frost  P. 2005. Vaccines for fish in aquaculture.
Exp Rev Vac. 4: 89-101.
Steel  R.  G  and  Torrie  J.  H.  1993.  Prinsip Prosedur  Statistika,  Terjemahan  oleh Bambang    Sumantri.    Gramedia. Jakarta. Hal 425-478.
Stoskopf, M. K. 1993. Fish Medicine. Clinical Pathology  of  Carp,  Goldfish  and  Koi. Mexico. 882: 54-56.
Stoskopf,  M. K  and  Michael,  W.B.  1992.  Fish Medicine. Saunders Company,
Philadelphia, PA. 11 p.
NACA.  1991.  Fish  Health  Management.  In  : Asia    Pacific    report    on    a    Regional Study and  Workshop  on Fish  Diseases and  Fish  Health  Management,  ADB Agriculture  Department  Report  Series No.1  Network  of  Aquaculture  Center in Asia-Pacific, Bangkok. 627 pp.
Sugianti, B., R. C. Tarumingkeng, Z. Coto dan
Hardjanto. 2005. Pemanfaatan Tumbuhan  Obat  Tradisional  Dalam Pengendalian  Penyakit  Ikan.  Makalah Pribadi  Falsafah  Sains  (PPS-702). Program Pasca Sarjana. Institut
Pertanian Bogor. Hal 7-8.
Titis, C. D., W. S. D. Nugroho, D. Dudung, H. Nurul  dan  Sumayani.  2009.  Laporan Uji  Coba  Identifikasi  dan  Penentuan Derajat Kerusakan akibat Infeksi Myxobolus  koi pada  Ikan  Mas.  Balai Karantina    Ikan    Kelas    II.    Semarang. Hal 66.
Tizard    I.    1988. Pengantar    Imunologi
Veteriner .  Ed  ke-2.  Partodirejo  M, Hardjosworo S, penerjemah;
Surabaya:  Airlangga  University  Press. Terjemahan  dari: An  Introduction  to Veterinary Immunology .
Wijanarko,  P.  Y.  2011.  Hubungan  Jumlah Spora  Terhadap  Jumlah  dan  Ukuran
Nodul Myxobolus    koi Yang Menyerang Ikan Mas. Skripsi.
Budidaya  Perairan.  Fakultas  Perikanan dan  Kelautan.  Universitas  Airlangga. Surabaya. Hal 15.
Wang,   Xuting   and   H.W.   Dickerson.   2002. Surface  Immobilization  Antigen  of the Parasitic Ciliate Ichthyophthirius multifiliis Elicits         Protective Immunity     in     Channel     Catfish ( Ictalurus  punctatus ),  Clinical  and Diagnostic  Laboratory  Immunology, January,  Vol.  9,  No.  1,  p.  178  -181, Athens, Georgia.
Woro, A.R., Gunanti, M. dan Lucia, T.S.,
© (2017) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
2015.   Efektivitas   Vaksinasi Crude dan Soluble       Protein Spora
Myxobolus    koi terhadap    tingkat kerusakan usus ikan koi ( cyprinus carpio koi). Jurnal Ilmu Perikanan dan Kelautan. April, Vol 2. No.2. Hal. 12-17
Yuasa,  K.,  Panigoro,  N.,  Bahnan,  M.,  dan Khiidin., B. E. 2003. Panduan Diagnostik  Penyakit  Ikan.  Teknik
Diagnosa  Penyakit  Ikan  Budidaya  Air Tawar. Balai Budidaya Tawar Jambi.
Yusuf, M. 2015. Analisis Respons Imun Ikan
Koi ( cyprinus carpio koi) Yang Divaksin Dengan Whole  Protein Spora Myxobolus koi Sebagai        Kandidat        Vaksin
Myxobolusis.          Tesis.          Sekolah Pascasarjana,     Universitas     Airlangga. Surabaya. 64 Halaman.