## BIOETANOL DARI LIMBAH KEJU (WHEY) MENGGUNAKAN KLUYVEROMYCES MARXIANUS
BIOETHANOL FROM CHEESE WASTE (WHEY) USING KLUYVEROMYCES MARXIANUS
Alif Nur Laili Rachmah 1* , Ratri Sekaringgalih 2 , Binti Ruliana 3 , Ansori Ansori 4
1,2,4, Program Studi Teknik Kimia, , Institut Teknologi dan Bisnis Muhammadiyah Banyuwangi, Indonesia 3 Program Studi Teknik Mesin, Fakultas Teknik, Univeristas Mercu Buana Jakarta, Indonesia *Email: alifnurlailirachmah@itbmb.ac.id
Diterima: 24 September 2023. Disetujui: 24 Nopember 2023. Dipublikasikan: 18 Desember 2023
Abstrak: Alternatif  pengganti  kelangkaan  minyak  bumi  menjadi  banyak  perhatian  para  peneliti.  Pengembangan bioetanol  merupakan  salah  satu  energi  terbarukan  yang  harus  didukung  dengan  adanya  penelitian  dari  berbagai sumber-sumber bahan baku sehingga dapat di konversi menjadi bioetanol. Karena bahan baku bioetanol umumnya menggunakan biomassa yang mengandung gula dan bahan baku pati, jika biomassa yang di gunakan seperti tebu dan singkon maka ketersediaan pangan juga akan terancam. Oleh karena itu Salah satu bahan baku alternatif yang dapat  digunakan  adalah  limbah  industri  keju  (whey).  Whey  adalah  produk  sampingan  dari  industri  keju,  yang memiliki kandungan laktosa 4-5%.  Tujuan dari penelitian ini adalah mengoptimasi proses fermentasi whey untuk pembuatan bioetanol menggunakan Kluyveromyces Marxianus dengan variasi waktu dan volume starter. Pembuatan bioetanol dengan bahan baku laktosa dalam whey menggunakan bakteri Kluyveromyces Marxianus menggunakan variabel berubah yaitu waktu fermentasi dan volume starter. Untuk variabel waktu fermentasi yaitu 24, 48, 60, 72 dan  84  jam  dan  untuk  variabel  volume  starter  yaitu  20%,  22%  dan  24%  v/v.  Kadar  etanol  tertinggi  pembuatan bioetanol  menggunakan Kluyveromyces  Marxianus yaitu  pada  variabel  volume  starter    24%  dan  waktu  84  jam diperoleh kadar bioetanol 0,32% dengan pH 3,5.
Kata Kunci : Bioetanol, Kluyveromyces Marxianus, Limbah Keju, Fermentasi
Abstract: Alternatives to petroleum scarcity are of much concern to researchers. The development of bioethanol is one of the renewable energies that must be supported by research from various sources of raw materials so that it can  be  converted  into  bioethanol.  Generally,  the  raw  material  of  bioethanol  used  contains  sugar  and  starch.  if biomass  usessugar  cane  and  cassava  then  the  availability  of  food  will  also  be  threatened.  Therefore,  one  of  the alternative raw materials that can be used is industrial waste cheese (whey). Whey is the side of the product cheese industry,  which  contains  4-5%.  The  study  aims  to  optimate  whey  fermentation  to  the  production  of  bioethanol using Kluyveromycesmarxianus with  the  variation  of  time  and  starter  volume.  Bioethanol  production  with  raw material  lactose  which  is  contained  in  whey  used KluyveromycesMarxianus with  variabel  changed  time fermentation and starter volume. For time fermentation variables are 24, 48, 60, 72 dan 84 hours, and for volume starter  variabel  are  20%,  22%,  dan  24%  v/v.  The  highest  content  of  bioethanol  production  used KluyveromycesMarxianus on variable starter volume 24% at time 84 hours was obtained 0,32% bioethanol content with pH 3,5.
Keywords : Bioethanol, KluyveromycesMarxianus, Whey Cheese, Fermentation

## PENDAHULUAN
Cadangan  Minyak  bumi  semakin  lama semakin  menipis. Untuk  menjaga  keamanannya, pengembangan  energi  baru  dan  terbarukan  perlu dilakukan,  karena  populasi  dan  pertumbuhan ekonomi  terus  meningkat . Baru-baru  ini,  etanol merupakan  salah  satu  komoditas  utama  yang dikembangkan  dan  digunakan  sebagai  bahan  bakar cair  ( gasoline  partial  substitution ),  dan  proses pembuatan  etanol  dari  berbagai  bahan  baku  banyak dipelajari . Produksi  etanol  dalam  pengembangan generasi  pertama  energi  terbarukan  umumnya menggunakan  biomassa  yang  mengandung  gula  dan bahan baku pati sebagai bahan baku. Namun  terjadi kekhawatiran mengenai hal ini karena jika Biomassa seperti  tebu  dan  singkong  yang  digunakan  dalam produksi  bioethanol,  masih  dikategorikan  sebagai makanan  pokok, maka  ketersediaan  pangan  juga akan  terancam[1].    Sehingga  untuk  produksi
bioetanol  di  butuhkan  alternatif  bahan  baku. pengembangan energi baru generasi kedua menekankan  pada  biomassa  dari  limbah.  bahan seperti  limbah  pertanian,  atau  dari  limbah  industri keju. Salah satu contoh dari limbah industri yang bisa dimanfaatkan  untuk  pembuatan  bioetanol  adalah limbah  industri  keju  yakni  whey.  Selain  itu  whey keju  mengandung  tinggi  karbohidrat  organik  dan asam  organik  lainnya,  yang  membuatnya  menjadi substrat yang layak untuk produksi biohidrogen [2].
Industri  whey  saat  ini  menghadapi  tantangan baru  dan  peluang.  Contohnya  adalah  perluasan produk susu industri, di mana produksi whey adalah bagiannya.  Contoh  lain  termasuk  produksi  whey asam  [3].Indonesia  memilikibanyak  industri  keju skala  besar  maupun  skala  kecil,  yakni  tersebar  di daerah  DKI  Jakarta,  Jawa  Barat,  Jawa  Tengah,  dan Jawa  Timur.  Bahan  baku  susu  segar  di  peroleh  dari peternak  lokal  500  liter  dengan  rata-rata  produksi
industri  keju di Indonesia  sebesar 50 kg per hari[4]. Salah  satu  industri  rumahan  keju  di  Jawa  Timur adalah Narendara Food Company yang memproduksi keju  mozzarella.  Dalam  setiap  harinya,  rata-rata Narendara  Food  Company  memproduksi  keju  dari susu  cair  setiap  batch  memerlukan  480  liter  susu untuk dapat menjadi keju. Dalam satu batch tersebut didapatkan  curd  atau  keju  80  liter,  sedangkan  whey yang diperoleh 400 liter.
Berdasarkan  Penelitian  yang  telah  dilakukan Whey  adalah  limbah  industri  yang  mengandung polusi  tingkat  tinggi,  Untuk  membuat  1  kg  keju dihasilkan limbah whey sebanyak 9 kg yang dibuang ke  lingkungan.  Whey  mengandung  bahan  organik besar dengan nilai BOD dan COD masing-masing 50 dan 80 g / L [5]. Di sisi lain, whey juga mengandung laktosa  (disakarida)  sekitar  4,5  -  5%;  laktosa  adalah sumber karbon yang bisa dijadikan bahan baku untuk beberapa  produk.  Proses  fermentasi  dengan menggunakan  ragi  dapat  mengkonversi  laktosa menjadi
etanol,
terutama jenis KluyveromycesMarxianus [6].  Adanya  laktosa  dalam whey  sebagai  satu-satunya  karbohidrat  dapat membatasi  pertumbuhan  mikroorganisme  lainnya. Spesies Kluyveromyces  Marxinaus dapat  secara optimal  memecah  laktosa  menggunakan  enzim laktase.Selain  laktosa,  whey  juga  mengandung vitamin  dan  mineral  yang  dapat  meningkatkan aktivitas  fisiologis  sel. Whey  protein  berhasil digunakan  dalam  produksi  sosis, karena tidak hanya menggantikan  lemak,  tetapi  juga  mempertahankan kelembaban [7]. Ini berarti bahwa hasil produk akhir dapat  ditingkatkan  tanpa  mengurangi  kandungan protein  hewani  yang  berharga  atau  menggunakan Aditif.  Selain  itu,  produk  akhir  memiliki  lebih  baik sifat  fungsional  dan  teknologi,  serta  peningkatan karakteristik rasa [8].
Saat  ini  whey  dimanfaatkan  sebagai  pakan ternak,  produk  makanan  dan  minuman  beralkohol Pemanfaatan  whey  sebagai  bahan  baku  proses pembuatan  etanol  belum  bisa  diimplementasikan karena  perkembangan  teknologinya  masih  terbatas. Maka  berdasarkan  hal  tersebut,  penelitian  tentang pemanfaatan  whey  sebagai  bahan  baku  bioetanol sangat penting dan dibutuhkan.
Penelitian  tentang  pembuatan  etanol  dari limbah keju mengguanakan kluyveromyces marxianus  dan  Saccaromyces  Cerevisae    dengan melalui  perbandingan  treatment  dan  non  treatment awal  pada  whey,  diperoleh  perbedaan    hasil  etanol pada  non-treatment  ialah  3,4  –  18,5  g/l  sedangkan etanol pada treatmen 24,11 – 57,66 g/l. pH maximum 5,5 dan waktu optimum 48 jam dengan penambahan 0,3  %    yeast  ekstrak  dari  jumlah  whey  di  peroleh hasil etanol dengan saccharomyces sebesar 65,36 g/l dan  etanol  menggunakan Kluyveromyces  Marxianus sebesar 69,85 g/l[9].
Penelitian  yang  sama,  yaitu  pembuatan bioetanol  dari  limbah  keju  menggunkan  yeast kluyveromyces  marxianus,  dari  hasil  penelitian tersebut  diketahui  pada  10  jam  pertama  laktose
mengalami  penurunan  tetapi  tidak  signifikan,  pada proses  tersebut kluyveromyces  marxianus bekerja memecah  laktosa  menjadi  glukosa,  setelah  10  jam pertama  laktosa  mengalami  penurunan  secara derastis,  sedangkan  etanol  yang  terbentuk  semakin meningkat,  hal  ini  di  sebabkan  terjadinya  proses konversi  glukosa  menajdi  etanol,  sedangkan  pada waktu ke  60 jam dan seterusnya COD, laktosa, dan etanol  semuanya  dalam  kondisi  stabil.  Penelitian tersebut diperoleh hasil etanol 10 g/l ; biomass 8 g/l ; dan laktosa 5 g/l dengan waktu oprtimum selama 24 jam,  suhu  fermentasi  sebesar  34 0 C  dengan  pH  4,5. Berdasarkan  analisis  statistik,  mengikuti  kondisi optimal  untuk  hidrolisis  protein  whey  keju  cottage: suhu  46.4°C;  durasi  180  menit;  dan  jumlah  enzim 9.5%  dari  kandungan  protein.  Kondisi  ini memberikan  kapasitas  antioksidan  7,5  TE  mmol/L dengan 17,96% tingkat hidrolisis, membuka prospek baru  untuk  Mengolah  whey  keju  cottage  asam  dan menggunakan  whey  protein  sebagai  komponen fungsional potensial dengan peningkatan antioksidan[10].Pembuatan  bioetanol  dari  limbah keju  yang  mengandung  laktosa  sebesar  5,91%, difermentasi  dengan  menggunakan Kluyveromyces Marxianus dengan  variabel  waktu  fermentasi  (  12, 24, 36, 48, 60) jam dan starter (8%, 10%, 12%, 14%, 16%,  18%)  dari  volume  whey.  Dari  hasil  penelitian tersebut  dipeoleh  kadar  etanol  tertinggi  sebesar 0,24142%  pada  waktu  60  jam  dengan  penambahan starter sebanyak 18% dari volume whey . Berdasarkan  penelitian  terdahulu,  maka diperlukan  penelitian  lebih  lanjut  untuk  mengetahui penambahan  jumlah  starter  dan  waktu  fermentasi yang tepat untuk menghasilkan bioetanol dari limbah keju (whey) yang mengandung laktosa.

## METODE PENELITIAN
1. Preparasi limbah keju (whey). Limbah  keju  suhu  90 o C  selama  15  menit untuk  deprotenisasi,    memisahkan  sisa  curd pada limbah keju, cairannya dengan suhu 100 o C selama  15  menit  untuk  pasteurisasi,  analisa Laktosa  pada  whey  menggunakan  metode Luff Schrooll.
2. Pembuatan starter Whey  yang  telah  di  preparasi  ke  dalam erlenmeyer  sebanyak  200  ml  ditambah  0,3  % yeast  ekstrak  dari  volume  whey,  0,6  gram KH 2 PO 4 ,  0,6  gram  (NH4) 2 SO 4 serta  biakan kluyveromyces  marxianus  sebanyak  10  ose, starter di homogenkan pada suhu 30 o C selama 2 x 24 jam di dalam water batch shaker
3. Proses Fermentasi
Whey  sebanyak  200  ml  yang  sudah  di tambahkan starter dan 0,3 % yeast ekstrak dari volume  whey,  0,6  gram  KH 2 PO 4 ,  0,6  gram (NH4) 2 SO 4 ,  pengadukan  selama  15  menit dengan  suhu  35 o C,  serta  diinkubator  oven sesuai  dengan  waktu  variabel  yang  di  tentukan dengan  suhu  35 o C.  Kadar  Etanol  di  analisa menggunakan Gas Chromatgoraphy (GC) .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
1. Analisa awal pada Limbah Keju
Tahap pertama dalam pelaksanaan penelitian  ini  adalah  menganalisa  kandungan laktosa, protein, lemak, abu dan keju  (whey)  yang  berpotensi  untuk  dijadikan etanol.  Berikut  adalah  hasil  analisa  terhadap limbah keju (whey) :
Tabel 1. Hasil Analisa Whey Jenis Analisa Hasil Analisa Laktosa (%) 4,9 Protein (%) 0,31 Lemak (%) Abu (%) <0,01 0,79 PH awal 5,5 Limbah Keju mengandung 4,9%,  protein  0,31%,  lemak  <0,01,  abu  0,79% dan  pH  awal  sebesar  5,5.  Kandungan  laktosa dalam  whey  sebesar  4-5%.  Pada  whey  asam yang di gunakan pada penelitian ini ialah 4,9%,  sehingga  limbah  keju  (whey)  berpotensi untuk dijadikan etanol[11].
2. Pengaruh  waktu  fermentasi  dan  volume starter terhadap kadar etanol Proses fermentasi bertujuan
untuk mengkonversi  glukosa  menjadi  etanol  dengan bantuan mikroba yaitu Marxianus. Kluyveromyces
Marxianus menghasilkan  enzim  beta-galaktosidase  yang juga  berfungsi  memecah  laktosa  menjadi glukosa  dan  galaktosa.  Pro menggunakan variasi starter 20% v/v, 22% v/v, 24%v/v,  dan  waktu  fermentasi  selama  24,  48, 60 72, dan 84 jam[12].
Semakin  lama  waktu  yang  di  gunakan maka  kadar  etanol  yang  di  hasilkan  semakin meningkat.  Pada  proses  fermentasi fermentasi akan mempengaruhi mikroba[13].Kadar  etanol  tertinggi  pada  waktu ke 84 jam dengan kadar sebesar 0,32%. Hal ini berarti  pertumbuhan  yeast  kluyveromyces Marxinus pada waktu tersebut berada pada fase eksponensial  yaitu  fase  perkembangan  yang meningkat,  selain  itu  belum  terjadi  penurunan pada  variabel  waktu  yang  telah  digunakan, berarti  dapat  di  simpulkan  bahwa  yeast Kluyveromyces  Marxianus masih dapat bekerja hingga  waktu  yang  lebih  lama  dan  belum mengalami fase kematian.
Jurnal Inovasi Pendidikan dan Sains
71 ISSN 2721 Analisa awal pada Limbah Keju Tahap pertama dalam pelaksanaan penelitian  ini  adalah  menganalisa  kandungan dan pH dari limbah yang  berpotensi  untuk  dijadikan etanol.  Berikut  adalah  hasil  analisa  terhadap
Hasil Analisa Whey Asam
Hasil Analisa 4,9 0,31 <0,01 0,79 5,5 mengandung laktosa sebesar
,  protein  0,31%,  lemak  <0,01,  abu  0,79%
andungan  laktosa
Pada  whey  asam yang di gunakan pada penelitian ini ialah kadar
limbah  keju  (whey)  berpotensi Pengaruh  waktu  fermentasi  dan  volume starter terhadap kadar etanol Proses fermentasi bertujuan
untuk mengkonversi  glukosa  menjadi  etanol  dengan bantuan mikroba yaitu Kluyveromyces Marxianus. Kluyveromyces Marxianus galaktosidase  yang
juga  berfungsi  memecah  laktosa  menjadi glukosa  dan  galaktosa.  Proses  fermentasi menggunakan variasi starter 20% v/v, 22% v/v, 24%v/v,  dan  waktu  fermentasi  selama  24,  48,
emakin  lama  waktu  yang  di  gunakan
anol  yang  di  hasilkan  semakin proses  fermentasi,  lama fermentasi akan mempengaruhi
Kadar  etanol  tertinggi  pada  waktu ke 84 jam dengan kadar sebesar 0,32%. Hal ini berarti  pertumbuhan  yeast  kluyveromyces Marxinus pada waktu tersebut berada pada fase tu  fase  perkembangan  yang meningkat,  selain  itu  belum  terjadi  penurunan pada  variabel  waktu  yang  telah  digunakan, berarti  dapat  di  simpulkan  bahwa  yeast masih dapat bekerja hingga  waktu  yang  lebih  lama  dan  belum
Grafik 1. pengaruh waktu fermentasi terhadap kadar etanol Pada penelitian dari pada waktu fermentasi 24 jam etanol  terendah  yaitu  0,1393%  dengan penambahan startersebanyak 20% v/v.
3. Pengaruh  volume  starter  terhadap  kadar etanol yang di hasilkan
Grafik 2. pengaruh volume starter terhadap kadar etanol Semakin  banyak  volume  starter  yang  di tambahkan  maka meningkat hal ini di karenakan semakin banyak jumlah  starter  yang  di  tambahkan  maka semakin  banyak  jumlah  yeast  yang  akan memecah  laktosa  menjadi  glukosa  dan memfermentasi  glukosa  tersebut  menjadi etanol.  faktor  fermentasi  dipengaruhi jumlah mikroba,  lama  fermentasi,  pH (keasaman), suhu, oksigen, dan substrat. Tetapi pada  grafik  diatas,  penambahan  volume  starer ebanyak 24% v/v  waktu 48 jam terjadi sedikit penurunan  kadar  dari  0,27%  menjadi  0,25%  , hal ini dapat di sebabkan karena salah  satunya ialah  jarak  waktu  fermentasi dan pengujian kadar etanol yang terlalu lama
4. Pengaruh  waktu  fermentasi  da starter terhadap pH akhir Semakin  lama  waktu  fermentasi  yang  di gunakan  maka  semakin  turun  nilai  pH tersebut merupakan p terhadap pH etanol yang di hasilkan proses  fermentasi  terdapat
pengaruh waktu fermentasi terhadap kadar etanol ada penelitian dari  dari  grafik 1  tersebut pada waktu fermentasi 24 jam di peroleh kadar etanol  terendah  yaitu  0,1393%  dengan penambahan startersebanyak 20% v/v.
Pengaruh  volume  starter  terhadap  kadar etanol yang di hasilkan
pengaruh volume starter terhadap kadar etanol Semakin  banyak  volume  starter  yang  di tambahkan  maka  kadar  etanol  semakin meningkat hal ini di karenakan semakin banyak jumlah  starter  yang  di  tambahkan  maka semakin  banyak  jumlah  yeast  yang  akan memecah  laktosa  menjadi  glukosa  dan memfermentasi  glukosa  tersebut  menjadi etanol.  faktor  fermentasi  dipengaruhi  oleh jumlah mikroba,  lama  fermentasi,  pH (keasaman), suhu, oksigen, dan substrat. Tetapi pada  grafik  diatas,  penambahan  volume  starer ebanyak 24% v/v  waktu 48 jam terjadi sedikit penurunan  kadar  dari  0,27%  menjadi  0,25%  , hal ini dapat di sebabkan karena beberapa faktor salah  satunya ialah  jarak  waktu  fermentasi dan pengujian kadar etanol yang terlalu lama[9].

## Pengaruh  waktu  fermentasi  dan  volume
starter terhadap pH akhir emakin  lama  waktu  fermentasi  yang  di gunakan  maka  semakin  turun  nilai  pH  hal tersebut merupakan pengaruh waktu fermentasi terhadap pH etanol yang di hasilkan. Pada saat proses  fermentasi  terdapat  proses  biosintesis
Jurnal Inovasi Pendidikan dan Sains Vol. 4 No.3, Desember 2023:167-171
piruvat yang
menghasilkan produk asamsehingga  membuat  pH  semakin  rendah atau  asam  [14].Asam piruvat terkonversi    menjadi  asam  as CO 2 yang  terjadi  pada  proses  fermentasi anaerob [15] .
Gambar 3 . Pengaruh waktu fermentasi terhadap pH fermentasi
Pada  akhir  fermentasi  jam  ke peroleh  nilai  pH  nya  paling  rendah. berkontribusi  terhadap  penurunan  pH gas  CO 2 merupakan  gas  yang  bersifat  asam Selain  itu,  selama  penyimpanan  atau pembuatannya, kontaminasi bakteri asam asetat dan  penguraian  (oksidasi)  bioetanol menyebabkan terkonversinya bioetanol menjadi asam asetat, sehingga hal tersebut juga menjadi faktor terjadinya penurunan pH
5. Pengaruh  waktu  fermentasi  dan  volume starter terhadap pH Pengaruh  volume  starter  terhadap  pH etanol  yang  di  hasilkan    ialah  semakin  lama volume  starter  yang  di  tambahkan  pada fermentasi maka semakin turun nilai pH. Kadar etanol  yang  terkandung  di  dalam  substrat setelah  difermentai  secara  tidak  langsung  akan mempengaruhi pH substrat.  Hal  ini disebabkan karena semakin banyak volume tambahkan  maka  produksi  etanol  semakin meniungkat,  dan  semakin  tinggi  kadar  etanol maka  pH  substrat  akan  semakin  asam  dan semakin rendah  kadar etanol maka pH substrat makin  mendekati  pH  asli  substrat.  oleh  karena itu  semakin  banyak  volume  starter  yang  di tambahkan  maka  nilai  pH  semakin  menurun. Semakin  tinggi  produksi  etanol  yang  di hasilkan, maka pH nya semkain menurun
Jurnal Inovasi Pendidikan dan Sains
71 ISSN 2721 menghasilkan produk sehingga  membuat  pH  semakin  rendah sam piruvat  tersebut menjadi  asam  asetat,  etanol  dan terjadi  pada  proses  fermentasi
. Pengaruh waktu fermentasi terhadap pH fermentasi
ada  akhir  fermentasi  jam  ke-84  di nya  paling  rendah.  Gas  CO 2 berkontribusi  terhadap  penurunan  pH,  karena merupakan  gas  yang  bersifat  asam. selama  penyimpanan  atau  pada  saat kontaminasi bakteri asam asetat dan  penguraian  (oksidasi)  bioetanol  juga  dapat terkonversinya bioetanol menjadi hal tersebut juga menjadi faktor terjadinya penurunan pH[16].

## Pengaruh  waktu  fermentasi  dan  volume
Pengaruh  volume  starter  terhadap  pH etanol  yang  di  hasilkan    ialah  semakin  lama volume  starter  yang  di  tambahkan  pada fermentasi maka semakin turun nilai pH. Kadar etanol  yang  terkandung  di  dalam  substrat setelah  difermentai  secara  tidak  langsung  akan Hal  ini disebabkan karena semakin banyak volume Starter yang di tambahkan  maka  produksi  etanol  semakin meniungkat,  dan  semakin  tinggi  kadar  etanol maka  pH  substrat  akan  semakin  asam  dan semakin rendah  kadar etanol maka pH substrat kin  mendekati  pH  asli  substrat.  oleh  karena itu  semakin  banyak  volume  starter  yang  di tambahkan  maka  nilai  pH  semakin  menurun. emakin  tinggi  produksi  etanol  yang  di hasilkan, maka pH nya semkain menurun[17].
Gambar 4. Pengaruh fermentasi
6. Analisa Statistika menggunakan metode
Factorial. Analisa  Statistika  ANOVA  menggunakan minitab  16  metode  full  factorial  menunjukan bahwa  variabel  waktu  fermentasi  dan  volume starter  sangat  berpengaruh  signifikan  pada kadar  etanol  yang  di  hasilkan  ( 0,05 ) [13] . Tabel 2. Tabel Anova pengaruh waktu fermentasi dan Source  DF Adj SS Model 6 0,052593 Linear 6 0,052593 time 4 0,050557 starter 2 0,002036 Error 8 0,001596 Total 14 0,054188
S : 0,0141233; R-sq : 97,06%; R-sq(adj): 94,85%; R-sq(pred) :89,65%
Gambar 5. Grafik Normal Probability
Pada  gambar  5  sumbu pada  garis  diagonal  sehingga  dapat  di simpulkan bahwa
terdistribusi  secara  normal.  Dibuktikan  dengan adanya distribusi normal lurus  diagonal.  Uji  normal  probability  ini bertujuan  untuk  mengetahui  variabel  penelitian sesuai  dengan  model  regresi  yang  di  gunakan sudah baik atau sebaliknya
ISSN 2721-9119 (Online)

## Pengaruhvolume starterterhadap pH fermentasi

## Analisa Statistika menggunakan metode
Full
Analisa  Statistika  ANOVA  menggunakan minitab  16  metode  full  factorial  menunjukan variabel  waktu  fermentasi  dan  volume starter  sangat  berpengaruh  signifikan  pada kadar  etanol  yang  di  hasilkan  ( P-Value <
Tabel Anova pengaruh waktu fermentasi dan volume starter Adj SS F-Value  P-Value 0,052593 43,94 0,000 0,052593 43,94 0,000 0,050557 63,37 0,000 0,002036 5,10 0,037 0,001596 0,054188 sq : 97,06%; sq(pred) :89,65%

## Normal Probability
Pada  gambar  5  sumbu  tidak    menyebar pada  garis  diagonal  sehingga  dapat  di simpulkan bahwa probaility plot tidak terdistribusi  secara  normal.  Dibuktikan  dengan adanya distribusi normal membentuk satu garis .  Uji  normal  probability  ini bertujuan  untuk  mengetahui  variabel  penelitian sesuai  dengan  model  regresi  yang  di  gunakan sudah baik atau sebaliknya [18].

## KESIMPULAN
Volume starter berpengaruh  terhadap  hasil fermentasi  yaitu  semakin  banyak  volume starter yang  di  tambahkan,  maka  kadar  etanol  semakin meningkat,  dan  kadar  etanol  terbaik  sebesar  0,32% pada penambahan starter 24% v/v. Waktu Fermentasi berpengaruh terhadap kadar etanol yang di hasilkan, yaitu  semakin  lama  waktu  fermentasi  maka  kadar etanol yang dihasilkan semakin meningkat, dan kadar etanol  terbaik  yaitu  0,32%pada  waktu  84  jam. Variabel  volume  starter  dan  waktu  fermentasi berpengaruh  signifikan  pada  proses  pembentukan etanol,  hal  tersebut  di  buktikan  pada  uji  ANOVA bahwa P value < 0,05.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] Sims,  R.  E.  H.,  Mabee,  W.,  Saddler,  J.  N., &Taylor,M.(2010).Anoverviewofsecondgener ationbiofueltechnologies. BioresourceTechnol ogy , 101 (6),1570–1580.
[2] Rao,R.,&Basak,N.(2021).Fermentativemolecu lar biohydrogen
production from
cheesewhey:presentprospectsandfuturestrateg y. AppliedBiochemistryandBiotechnology , 193 ( 7),2297–2330.
[3] Sebastián-Nicolás,  J.  L.,  González-Olivares, L.G.,Vázquez-Rodríguez,G.A.,Lucho- Constatino,C.A.,Castañeda- Ovando,A.,&Cruz-
Guerrero,A.E.(2020).Valorizationofwhey using a biorefinery. Biofuels, Bioproductsand Biorefining , 14 (5),1010–1027.
[4] Siti,D.P.,Puspita,A.A.,&Ariyanti,D.(2013).
Pembuatan Bioetanol Dari Limbah Keju(Whey)MelaluiProses FermentasiFed- BatchDenganKluyveromyces Marxianus.In
JurnalTeknologiKimiaDanIndustri (Vol.2,Issu e3). Http://EjournalS1.Undip.Ac.Id/Index. Php/Jtki
[5] Zafar,  S.,  &  Owais,  M.  (2006).  Ethanol
Production rom Crude Whey by Kluyveromyces marxianus. Biochemical Engineering Journal,  27(3), 295-298
[6] Domingues,L.,Guimarães,P.M.R.,&Oliveira,
C. (2010).
Metabolic engineering ofSaccharomycescerevisiaeforlactose/wheyfe rmentation. BioengineeredBugs , 1 (3),164–
171.
[7] Zou, J., & Chang, X (2022). Past, Present, and Future  Perspectives  on  Whey  as  a  Promising Feedstock  for  Bioethanol  Production  by Yeast. JournalOfFungi , 8 (4). [8] Mansor,E. S.,Ali,E.A.,&
Shaban,A.M.(2021).Tightultrafiltrationpolyet hersulfonemembraneforcheesewheywastewat ertreatment. Chemical  Engineering  Journal , 407 ,127175.
[9] Mohamed,H.,Abdel,N.A.Z.,& Maysa,M.A. A.(2013).Optimizationofthefermentationcond itionsforethanolproductionbynewthermotolera nt  yeast  strains  ofKluyveromycessp. African
Journal of Microbiology Research , 7 (37),4550–4561.
[10] Agarkova,E.Y.,Kruchinin,A.G.,Zolotaryov, N. A., Pryanichnikova, N. S., Belyakova,  Z.
Y.,&  Fedorova, T. V. (2020).  Processing cottagecheesewheycomponentsforfunctio nalfoodproduction. Foods andRaw Materials , 8 (1).
[11] Siti,D.P.,Puspita,A.A.,&Ariyanti,D.(2013). Pembuatan Bioetanol Dari Limbah Keju(Whey)MelaluiProses  FermentasiFed-
BatchDenganKluyveromyces  Marxianus.In JurnalTeknologiKimiaDanIndustri (Vol.2,Iss ue3). Http://EjournalS1.Undip.Ac.Id/Inde x.Php/Jtki.
[12] Tesfaw,  A.,  Oner,  E.  T.,  &  Assefa,  F.
(2021).EvaluatingCrudeWheyForBioethanol Production Using Non- SaccharomycesYeast,KluyveromycesMarxia nus. SNAppliedSciences , 3 (1),1–8. [13] Rachmah,A.N.L.,Fatmawati,A.,&Widjaja,A. (2022). Impact of surfactant-aided subcriticalwaterpretreatmentprocessconditio nsonthereducing  sugar  production  from  oil palm  emptyfruit  bunch. IOP  Conference Series:
Earth andEnvironmentalScience , 963 (1).
[14] Rachmah,  A.N.L.,  Susanti,  Y.,  A’yun,  A. Q.,Ansori,A.,&Sekaringgalih,R.(2023).Pema nfaatanBijiLamtorountukPembuatanKecapda nPemberdayaanKelompokPKKdiDesaKalipl osoCluring,Banyuwangi. WartaLPM ,
26 (2),157–165.
[15] Menon,V.,
&Rao,M.(2012).Trendsinbioconversionoflig nocellulose:Biofuels,platformchemicals&bio refineryconcept. Progress
inEnergyand
CombustionScience , 38 (4),522–550.
[16] Syauqiah,I.(2015).PengaruhWaktuFermentas iDanPersentaseStarterPadaNiraAren(Arenga Pinnata)TerhadapBioetanolYang Dihasilkan. InfoTeknik , 16 (2),217–226.
[17] Yeast,T.,Dahiya,M.,&Vij,S.(2012). Comparati veAnalysisOfBioethanolProduction From Whey By Different Strains OfImmobilized . 2 (3),2–6.
[18] Budiantono,S.,Retnaningsih,S.,&Aksioma,D.( 2016).MeasurementSystemAnalysisRepeatabi litydanReproducibility(GaugeR&R) pada Alat
Vickers  Hardness  Tester  Di  PTJaykay  Files Indonesia. Jurnal Sains Dan SeniITS , 5 (2),468–473.