## JBIO: JURNAL BIOSAINS (The Journal of Biosciences)
http://jurnal.unimed.ac.id/2012/index.php/biosains email : jbiosains@unimed.ac.id
UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK METANOL DAUN KIRINYUH ( Chromolaena odorata ) TERHADAP BAKTERI MDR ( Multi Drug Resistant ) DENGAN METODE KLT BIOAUTOGRAFI
Nurhasanah, Endang Sulistyarini Gultom Program Studi Biologi, Universitas Negeri Medan Jl. Williem Iskandar Pasar V, Medan Estate, Kota Medan Email korespondensi : anasiregar056@gmail.com
Diterima:  Januari 2020; Direvisi: Juli 2020; Disetujui: Agustus 2020

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas  antibakteri  ekstrak  metanol  daun  kirinyuh ( Chromolaena odorata ) terhadap bakteri MDR dengan metode KLT-bioautografi. Bakteri uji yang digunakan adalah  bakteri  MDR S.lugdunensis MRSA, K.pneumoniae ESBL  dan P.aeruginosa ESBL.  Metode  ekstraksi dilakukan dengan cara maserasi menggunakan pelarut metanol p.a.Untuk pengujian KLT-bioautografi, ekstrak metanol daun kirinyuh ditotolkan pada plat KLT kemudian dielusi dengan eluen metanol:kloroform (9:1, 8:2, 7:3, 6:4, 5:5, 4:6, 3:7, 2:8 dan 1:9), kemudian plat KLT ditempelkan pada media MHA yang telah diinokulasikan ke 3 bakteri MDR dan diinkubasi selama 24 jam. Zona hambat yang terbentuk dilakukan identifikasi senyawa menggunakan pereaksi semprot FeCl 3 , dragendorff, uap amoniak, SbCl 3 dan Lieberman bouchardat. Hasil uji KLT-bioautografi  menunjukkan  bahwa  ekstrak  metanol  daun  kirinyuh  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri yang ditandai terbentuknya zona bening pada EMDKF3, EMDKF7b, EMDKF9b dengan masing-masing nilai Rf 0,47 cm (fenol), 0,87 cm (flavonoid), 0,92 cm (flavonoid) pada bakteri S.lugdunensis MRSA dan EMDKF2, EMDKF7a, EMDKF7c dengan masing-masing nilai Rf 0,6 cm (flavonoid), 0,57 cm (alkaloid), 0,96 cm (flavonoid) pada bakteri K.pneumoniae ESBL, sedangkan pada bakteri P.aeruginosa ESBL ekstrak metanol daun kirinyuh tidak memiliki aktivitas antibakteri yang ditunjukkan dengan tidak ada zona bening yang terbentuk. Senyawa yang  berperan  sebagai  antibakteri  terhadap  bakteri S.lugdunensis MRSA  dan K.pneumoniae ESBL  adalah senyawa golongan alkaloid, flavonoid dan fenol.
Kata Kunci: Chromolaena odorata , Bakteri MDR, Aktivitas Antibakteri, KLT Bioautografi
ANTIBACTERIAL ACTIVITY TEST OF CIRINYUH LEAF METHANOL EXTRACT (Chromolaena odorata) ON MDR (Multi Drug Resistant) BACTERIA USING BIOAUTOGRAPH TLC METHOD

## ABSTRACT
This  study  aims  to  determine  the  antibacterial  activity  of  methanol  extract  of  kirinyuh  leaves ( Chromolaena odorata ) against MDR bacteria by TLC-bioautography method. The test bacteria used were MDR S.lugdunensis MRSA, K.pneumoniae ESBL  and P.aeruginosa ESBL.  The  extraction  method  is  carried  out  by maceration using methanol solvent p.a. for TLC-bioautographic testing, the methanol extract of the kirinyuh leaves was poured on the TLC plate then eluted with methanol:chloroform eluent (9:1, 8:2, 7:3, 6:4, 5:5, 4:6, 3:7, 2:8 and 1:9), then the TLC plate was attached to the MHA media which had been inoculated to 3 MDR bacteria and incubated for 24 hours. Inhibition zones formed were identified using compound spray reagents FeCl 3 ,  dragendorff,  ammonia  vapor,  SbCl 3 and  Lieberman  bouchardat.  The  TLC-bioautographic  test  results showed that the methanolic extract of kirinyuh leaves can inhibit bacterial growth marked by the formation of clear zones in EMDKF3, EMDKF7b, EMDKF9b with each Rf value of 0,47 cm (phenol), 0,87 cm (flavonoids), 0,92
Jurnal Biosains Vol. 6 No. 2 Agustus 2020                                                                         ISSN 2443-1230 (cetak) DOI: https://doi.org/10.24114/jbio.v6i2.16600
cm (flavonoids) in S.lugdunensis MRSA and EMDKF2, EMDKF7a, EMDKF7c bacteria with Rf values of 0,6 cm (flavonoids), 0,57 cm (alkaloids), 0,96 cm (flavonoids) in K.pneumoniae ESBL, whereas in P.aeruginosa ESBL bacteria the methanolic extract of kirinyuh leaves had no antibacterial activity as indicated by no clear zone formed. The compounds that act as antibacterial against the bacteria S.lugdunensis MRSA and K.pneumoniae ESBL are alkaloid, flavonoid and phenol compounds.
Keywords: Chromolaena odorata, MDR Bacteria, Antibacterial Activity, TLC Bioautography
Pendahuluan Penyakit  infeksi  merupakan  penyebab utama  tingginya  angka  kematian  di  negara-negara berkembang  seperti  halnya  Indonesia.  Penyakit infeksi  dapat  disebabkan  oleh  mikroorganisme patogen,  seperti  bakteri,  virus,  parasit  atau  jamur. Setiap tahun, sekitar 9 juta orang meninggal akibat penyakit  infeksi  yang  sebagian  besar  terdiri  dari anak-anak yang tinggal di negara-negara berpenghasilan rendah dan menengah (WHO, 2012).
Saat  ini  sudah  banyak  bakteri patogen yang resisten terhadap beberapa antibiotik, yang biasa disebut sebagai bakteri MDR ( multi drug resistant ).  Indonesia  merupakan  negara  dengan predikat multi  drug  resistant tertinggi  di  dunia dengan  menduduki  peringkat  ke  8  dari  27  negara (WHO,  2016).  Bakteri  MDR  ini  dapat  terjadi dikarenakan pemberian antibiotik yang kurang tepat dan  pemakaian  antibiotik  yang  tidak  tepat  dosis. Adapun bakteri yang tergolong sebagai bakteri MDR adalah Pseudomonas  sp,  Klebsiella  sp,  Serratia  sp, Enterobacter  sp,  Acinetobacter  sp , Edwardsiella  sp, Staphylococcus  aureus,  Enterococcus  sp,  Escherichia coli , Pantoea  sp dan Mycobacterium  tuberculosis (Estiningsih  dkk,  2016;  Pringgensis  dkk,  2015; Amalia dkk, 2015; Batara dkk, 2018).
Menurut  Syarmalina  dan  Laksmitawati (2005), Indonesia sangat kaya dengan berbagai jenis flora.  Dari  40.000  jenis  flora  yang  ada,  30.000 diantaranya tumbuh di Indonesia. Sekitar 26% telah dibudidayakan  dan  lebih  dari  940  jenis  digunakan sebagai obat tradisional. Salah satu tumbuhan yang dimanfaatkan  sebagai  obat  tradisional  adalah tumbuhan  kirinyuh  ( Chromolaena  odorata ).  Secara tradisional,  daun  kirinyuh  dapat  digunakan  sebagai obat  dalam  penyembuhan  luka,  obat  malaria, antidiare, antimikroba, anti hipertensi, anti inflamasi dan diuretik (Vital and Rivera, 2009). Menurut Eriadi dkk (2016), kandungan senyawa metabolit sekunder yang  ditemukan  pada  daun  kirinyuh  adalah kelompok  senyawa  alkaloid,  flavonoid,  steroid  dan saponin. Berdasarkan  hasil  uji  antibakteri  dengan metode Kirby bauer , daun kirinyuh memiliki aktivitas antibakteri  terhadap  bakteri S.aureus , Enterococcus sp , Coagulase  negatif  staphylococcus (CONS), E.coli ,
P.aeruginosa , K.pneumoniae , Proteus  sp , Acinobacter sp , Citrobacter  sp , Bacillus  subtilis , Salmonella typhimurium (Munte  dkk,  2016;  Yutika  dkk,  2015; Vital dan Rivera, 2009). Metode ini banyak digunakan untuk  menguji  kepekaan  suatu  bakteri  terhadap antibiotik, tetapi metode ini tidak dapat menentukan suatu  golongan  metabolit  sekunder  yang  berperan sebagai  antibakteri.  Metode  yang  tepat  dalam memisahkan  senyawa  metabolit  sekunder  dan mengetahui aktivitas antibakteri dari suatu golongan metabolit  sekunder  yang  terkandung  dalam  suatu sampel tumbuhan yaitu metode KLT bioautografi.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui aktivitas  antibateri  ekstrak  metanol  daun  kirinyuh ( Chromolaena odorata ) terhadap bakteri MDR ( Multi Drug Resistant ) dengan metode KLT bioautografi.

## Bahan dan Metode
Tempat dan Waktu Penelitian Penelitian dilaksanakan pada bulan Juli 2019 sampai  dengan  September  2019,  bertempat  di Laboratorium  Biologi  dan  Laboratorium  Kimia Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam Universitas Negeri Medan.

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah bejana maserasi, gelas erlenmeyer, autoclave, oven,  neraca  analitik,  cawan  petri, paper  disk , inkubator, plat KLT, kamera, chamber , tabung reaksi, gelas  ukur,  pipet  tetes,  pipet  kapiler, rotary evaporator , plastik wrap, aluminium foil, cutton bud steril, kertas saring, lemari pendingin, stopwatch , ose bulat, blender dan saringan.
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah  media  NA  ( Nutrient  Agar ),  media  MHA ( Mueller Hinton Agar ), aquades, metanol p.a, alkohol 70%,  kapas,  kloroform,  NaCl  0,9%,  Larutan  Mc Farland, serbuk Mg, HCl, CH 3 COOH, H 2 SO 4 , ammonia, pereaksi  mayer,  dragendorff,  FeCl 3 ,  liebarman bouchardat dan sitroborat.

## Pengumpulan Sampel Daun Kirinyuh
Daun  kirinyuh  diperoleh  dari  Desa  Panei Tongah,  Kec  Panei,  Kab  Simalungun.  Pengambilan sampel  dilakukan  secara  manual  dengan  cara
memetik daun. Daun tumbuhan yang diambil berasal dari daun nomor 4 sampai nomor 6, hal ini dilakukan karena  daun  nomor  4  sampai  nomor  6  telah mengalami pematangan fisiologis sehingga memiliki kandungan  metabolit  sekunder  yang  maksimal (Manguntungi dkk, 2016).
Pembuatan Ekstrak Metanol Daun Kirinyuh Simplisia  daun  kirinyuh  sebanyak  1,5 kilogram  diekstraksi  dengan  metode  maserasi menggunakan  pelarut  metanol  p.a  sebanyak  6  L selama  3  hari.  Ekstrak  yang  diperoleh  dipekatkan menggunakan rotary  evaporator pada  suhu  40 o C hingga diperoleh ekstrak kental (Handayany, 2016).
Identifikasi Metabolit Sekunder Ekstrak Metanol Daun Kirinyuh
Identifikasi  alkaloid  dilakukan  dengan melarutkan 0,5 g ekstrak dengan 2 mL kloroform dan 2  mL  ammonia,  kemudian  ekstrak  disaring.  Filtrat ditambahkan  3-5  tetes  H 2 SO 4 pekat  kemudian dikocok  hingga  terbentuk  dua  lapisan.  Fraksi  asam diambil,  kemudian  ditambahkan  reagen  Mayer, Dragendorff  dan  Wagner  masing-masing  4-5  tetes. Pereaksi  Mayer  memberikan  endapan  berwarna putih,  pereaksi  Dragendorff  memberikan  endapan berwarna merah jingga sedangkan pereaksi Wagner memberikan  endapan  warna  coklat.  Identifikasi fenolik  dilakukan  dengan  menambahkan  10  tetes FeCl 3 1% pada 0,5 g ekstrak. Hasil positif ditunjukkan dengan  perubahan  warna  menjadi  hijau,  merah, ungu,  biru  atau  hitam  pekat.  Identifikasi  flavonoid dilakukan dengan melarutkan 0,5 g ekstrak dengan 100 mL air panas, didihkan selama 5 menit, kemudian disaring. Filtrat sebanyak 5 mL ditambahkan 0,05 mg serbuk Mg dan 1 mL HCl pekat. Apabila menghasilkan warna  merah,  kuning  atau  jingga,  ekstrak  positif mengandung flavonoid. Identifikasi saponin dilakukan dengan melarutkan 0,5 g ekstrak dengan 10 mL air sambil ditambahkan 2 tetes HCl 1 N. Bila busa  yang  terbentuk  tetap  stabil  ±  7  menit,  maka ekstrak  positif  mengandung  saponin.  Identifikasi steroid dan terpenoid dilakukan dengan menambahkan 10 tetes CH 3 COOH glasial dan 2 tetes H 2 SO 4 pekat  pada  0,5  g  ekstrak.  Apabila menghasilkan warna biru atau hijau, ekstrak positif mengandung  steroid.  Sedangkan  triterpenoid menghasilkan warna merah atau ungu (Najoan dkk, 2016).
Penyiapan Bakteri Uji Regenerasi  bakteri  MDR  dilakukan  dengan menggoreskan  koloni  bakteri  pada  media  NA menggunakan jarum ose. Biakan bakteri di inkubasi selama  24  jam  pada  suhu  37 o C.  Kemudian,  biakan
bakteri yang telah diregenerasikan diambil satu ose kemudian  dimasukkan  ke  dalam  tabung  berisi larutan  NaCl  0,9%.  Suspensi  yang  terbentuk disetarakan  dengan  standar  Mc  Farland  (10 8 CFU/mL) (Sulistyani and Narwanti, 2015). Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Kasar Daun Kirinyuh terhadap Bakteri MDR
Pada  pengujian  ini,  masing-masing  biakan bakteri  MDR  diinokulasikan  pada  media  MHA. Kemudian paper disk ditetesi ekstrak daun kirinyuh sebagai  sampel, paper  disk yang  mengandung antibiotik  kloramfenikol  sebagai  kontrol  positif, paper  disk yang  mengandung  pelarut  metanol  p.a sebagai  kontrol  negatif.  Setelah  itu,  masing-masing paper disk diletakkan di atas permukaan media agar MHA. Kemudian cawan petri di inkubasi selama 24 jam pada suhu 37 o C (Kursia dkk, 2016).
Pemisahan Senyawa Secara Kromatografi Lapis Tipis Lempeng  KLT  yang  akan  digunakan berukuran  8x2  cm.  Ekstrak  metanol  daun  kirinyuh kemudian ditotolkan pada lempeng KLT menggunakan pipet kapiler. Lempeng KLT yang telah ditotolkan  dielusi  dengan  eluen  metanol:kloroform (9:1, 8:2, 7:3, 6:4, 5:5, 4:6, 3:7, 2:8 dan 1:9.). Setelah perambatan pelarut telah mencapai ketinggian yang ditentukan,  lempeng  KLT  dikeluarkan,  dikeringkan dan diamati bercak yang timbul dengan sinar UV 366 nm.  Nilai  Rf  dihitung  dari  masing-masing  bercak (Hidayatullah dkk, 2017).

## Pengujian KLT-Bioautografi
Suspensi  bakteri  MDR  diswab  pada  media MHA  menggunakan cotton  bud steril.  Kemudian lempeng  KLT  yang  telah  dielusi  diletakkan  di  atas permukaan  media  MHA.  Setelah  30  menit  lempeng tersebut diangkat dan dipindahkan. Kemudian media MHA diinkubasi pada suhu 37 o C selama 24 jam. Hasil pengujian KLT-bioautografi dengan spot/noda akan membentuk  zona  hambat  pada  permukaan  media agar padat MHA (Sulistyani and Narwanti, 2015).

## Identifikasi Golongan Senyawa Antibakteri
Noda  yang  membentuk  zona  hambat  pada lempeng  KLT  disemprot  dengan  pereaksi  semprot FeCl3,  dragendorff,  uap  amoniak,  SbCl 3 ,  dan liebarman  bouchardat  untuk  menentukan  jenis senyawa  yang  menghambat  pertumbuhan  bakteri MDR (Ramadhani, 2017).

## Hasil dan Pembahasan
Identifikasi Metabolit Sekunder Ekstrak Metanol Daun Kirinyuh
ISSN 2460-6804 (online)
Hasil  pembuatan  ekstrak  metanol  daun kirinyuh diperoleh ekstrak kental sebanyak 111,5 gr dengan  nilai  rendemen  11,15  %.  Berdasarkan  hasil penelitian  diperoleh  bahwa  ekstrak  metanol  daun
kirinyuh  mengandung  golongan  senyawa  metabolit sekunder seperti alkaloid, fenolik, flavonoid, saponin dan steroid (Tabel 1.)
Tabel 1. Hasil Uji Metabolit Sekunder Ekstrak Metanol Daun Kirinyuh No. Senyawa Kimia Pereaksi Hasil Reaksi Keterangan 1. Alkaloid Mayer + Terbentuk endapan berwarna putih Dragendorf + Terbentuk endapan berwarna jingga Wagner + Terbentuk endapan berwarna coklat 2. Fenolik FeCl 3 1% + Terbentuk warna hitam pekat 3. Flavonoid Mg-HCl pekat + Terbentuk warna jingga 4. Saponin Air + HCl 1 N + Terbentuk busa permanen ±7 menit 5. Steroid Lieberman Bouchardat + Terbentuk warna hijau Terpenoid - Tidak terbentuk warna merah/ungu. Berdasarkan  hasil  identifikasi  metabolit sekunder,  ekstrak  metanol  daun  kirinyuh  positif mengandung  senyawa  metabolit  sekunder alkaloid,  fanolik,  flavonoid,  saponin,  steroid  dan negatif  terhadap  senyawa  metabolit  sekunder terpenoid. Hal ini sesuai dengan penelitian Eriadi dkk  (2016),  menyatakan  bahwa  ekstrak  kental daun  kirinyuh  memiliki  senyawa  metabolit sekunder berupa alkaloid, flavonoid, saponin dan steroid.
Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Kasar  Daun Kirinyuh terhadap Bakteri MDR
Berdasarkan hasil pengamatan yang telah dilakukan  bahwa  ekstrak  metanol  daun  kirinyuh ( Chromolaena odorata ) memiliki aktivitas antibakteri  terhadap  bakteri Staphylococcus lugdunensis MRSA dan Klebsiella pneumoniae ESBL, tetapi ekstrak metanol daun kirinyuh ( Chromolaena  odorata )  tidak  memiliki  aktivitas antibakteri  terhadap  bakteri Pseudomonas aeruginosa ESBL. Hasil pengujian ini dapat dilihat pada Tabel 2 dan Gambar 1. Tabel 2. Hasil Uji Aktivtas Antibakteri Ekstrak Kasar Daun Kirinyuh Nama Bakteri Perlakuan Diameter Zona Hambat (mm) Rata-Rata (mm) Potensi Ulangan 1 2 3 Staphylococcus lugdunensis MRSA EMDK 14,3 15 15,4 14,9 Kuat K + 36,9 40,6 42 39,8 Sangat kuat K - - - - - - Klebsiella pneumoniae ESBL EMDK 13,2 12 13,2 12,8 Kuat K + 46,7 37,5 39,9 41,3 Sangat Kuat K - - - - - - Pseudomonas aeruginosa ESBL EMDK - - - - - K + 39,4 49,1 43,9 44,1 Sangat kuat K - - - - - - Keterangan : EMDK : Ekstrak Metanol Daun Kirinyuh Kontrol positif (K + ) : Antibiotik kloramfenikol Kontrol negatif (K - ) : Pelarut Metanol p.a
(a)
(b) (c) Gambar 1. Hasil Pengujian Aktivitas Antibakteri Ekstrak Kasar Daun Kirinyuh pada  Bakteri  (a) S.lugdunensis MRSA, (b)
K.pneumonia ESBL, (c) P.aeruginosa ESBL
Berdasarkan hasil penelitian yang diperoleh bahwa  ekstrak  metanol  daun  kirinyuh  memiliki potensi  sebagai  antibakteri  terhadap  bakteri S.lugdunensis MRSA  dan K.pneumoniae ESBL  yang ditunjukkan  dengan  terbentuknya  zona  bening dengan rata-rata diameter 14,9 mm (kuat) dan 12,8 mm (kuat). Ekstrak metanol daun kirinyuh memiliki potensi  sebagai  antibakteri  terhadap  bakteri S.lugdunensis MRSA  dan K.penumoniae ESBL dikarenakan  mengandung  senyawa  metabolit sekunder seperti alkaloid, fenolik, flavonoid, saponin dan steroid. Senyawa-senyawa ini mampu bersinergi dan saling menguatkan satu sama lain sehingga dapat menghambat pertumbuhan bakteri. Ekstrak metanol daun  kirinyuh  tidak  memiliki  potensi  sebagai antibakteri  terhadap  bakteri P.aeruginosa ESBL dikarenakan  bakteri P.aeruginosa ESBL  memiliki
efflux-pump mechanism yaitu suatu mekanisme untuk mengeluarkan senyawa-senyawa yang tidak dibutuhkan  dalam  proses  biotransformasi  seluler bakteri memalui sistem sekresi, sehingga menghambat  proses  internalisasi  senyawa  obat untuk  mampu  mempengaruhi  mekanisme  seluler dari bakteri (Bara et al, 2015).
Pemisahan Senyawa Metabolit Sekunder dengan KLT Pada  pengujian  KLT  eluen  yang  digunakan adalah  metanol:kloroform  dengan  9  perbandingan (9:1, 8:2, 7:3, 6:4, 5:5, 4:6, 3:7, 2:8 dan 1:9). Hasil KLT ekstrak  metanol  daun  kirinyuh  menunjukkan pemisahan  dan  kenaikan  noda  yang  bervariasi, seperti yang ditunjukkan pada Tabel 3.
Tabel 3. Hasil Kromatografi Lapis Tipis Ekstrak Metanol Daun Kirinyuh Perbandingan Eluen Metanol:Kloroform Noda Fraksi Nilai Rf Senyawa 9:1 1 EMDKF1 0,52 Alkaloid 8:2 1 EMDKF2 0,6 Flavonoid 7:3 1 EMDKF3 0,47 Fenol 6:4 1 EMDKF4 0,86 Flavonoid 5:5 1 EMDKF5a 0,34 Steroid 2 EMDKF5b 0,81 Flavonoid 4:6 1 EMDKF6 0,75 Fenol 3:7 1 EMDKF7a 0,57 Alkaloid 2 EMDKF7b 0,87 Flavonoid 3 EMDKF7c 0,96 Flavonoid 2:8 1 EMDKF8a 0,4 Fenol 2 EMDKF8b 0,98 Flavonoid 1:9 1 EMDKF9a 0,21 Steroid 2 EMDKF9b 0,92 Flavonoid
Keterangan  :  EMDKF1  (Ekstrak  Metanol  Daun  Kirinyuh  Fraksi  1);  EMDKF2  (Ekstrak  Metanol  Daun  Kirinyuh Fraksi 2); EMDKF3 (Ekstrak Metanol Daun Kirinyuh Fraksi 3); EMDKF4 (Ekstrak Metanol Daun Kirinyuh Fraksi 4); EMDKF5a (Ekstrak Metanol Daun Kirinyuh Fraksi 5a); EMDKF5b (Ekstrak Metanol Daun Kirinyuh Fraksi 5b); EMDKF6  (Ekstrak  Metanol  Daun  Kirinyuh  Fraksi  6);  EMDKF7a  (Ekstrak  Metanol  Daun  Kirinyuh  Fraksi  7a); EMDKF7b (Ekstrak Metanol Daun Kirinyuh Fraksi 7b); EMDKF7c (Ekstrak Metanol Daun Kirinyuh Fraksi 7c); EMDKF8a (Ekstrak Metanol Daun Kirinyuh Fraksi 8a); EMDKF8b (Ekstrak Metanol Daun Kirinyuh Fraksi 8b); EMDKF9a (Ekstrak Metanol Daun Kirinyuh Fraksi 9a); EMDKF9b (Ekstrak Metanol Daun Kirinyuh Fraksi 9b)
Berdasarkan  hasil  penelitian  diperoleh bahwa EMDKF1 dan EMDKF7a menghasilkan nilai Rf 0,52  cm  dan  0,57  cm  yang  diduga  mengandung senyawa  metabolit  sekunder  golongan  alkaloid. Menurut hasil penelitian yang dilakukan oleh Untoro dkk  (2016)  nilai  Rf  yang  dihasilkan  untuk  senyawa alkaloid  sebesar  0,56  cm.  EMDKF2  diduga mengandung senyawa metabolit sekunder golongan flavonoid  dengan  nilai  Rf  0,6  cm.  Menurut  hasil penelitian  yang  dilakukan  oleh  Rofida  dan Nurwahdaniati (2015) nilai Rf yang dihasilkan untuk senyawa  flavonoid  adalah  0,6  cm.  EMDKF7c, EMDKF8b  dan  EMDKF9b  diduga  mengandung senyawa  metabolit  sekunder  golongan  flavonoid dengan masing-masing nilai Rf 0,96 cm, 0,98 cm dan 0,92  cm.  Menurut  hasil  penelitian  yang  dilakukan oleh Rofida dan Nurwahdaniati (2015) nilai Rf yang dihasilkan  untuk  senyawa  flavonoid  berada  pada kisaran  0,9  cm.  EMDKF4,  EMDKF5b  dan  EMDKF7b juga  mengandung  senyawa  metabolit  sekunder golongan  flavonoid  dengan  masing-masing  nilai  Rf 0,86  cm,  0,81  cm  dan  0,87  cm.  Menurut  hasil penelitian yang dilakukan oleh Rohmah dkk (2019) nilai  Rf  yang  dihasilkan  untuk  senyawa  flavonoid adalah 0,88 cm dan 0,83 cm. EMDKF3 dan EMDKF8a
masing-masing menghasilkan nilai Rf 0,47 cm dan 0,4 cm  yang  diduga  mengandung  senyawa  metabolit sekunder  golongan  fenol.  Menurut  hasil  penelitian yang  dilakukan  oleh  Susanti  (2017)  nilai  Rf  yang dihasilkan  untuk  senyawa  fenol  sebesar  0,4  cm. EMDKF6  juga  diduga  mengandung  senyawa  fenol dengan  nilai  Rf  0,75  cm.  Menurut  hasil  penelitian Rofida  dan  Nurwahdaniati  (2015)  nilai  Rf  yang dihasilkan untuk senyawa fenol berada pada kisaran 0,7 cm. EMDKF5a menghasilkan nilai Rf 0,34 cm dan diduga  mengandung  senyawa  metabolit  sekunder golongan  steroid.  Menurut  hasil  penelitian  yang dilakukan  oleh  Marliana  (2007)  nilai  Rf  yang dihasilkan  untuk  senyawa  steroid  sebesar  0,37  cm. EMDKF9a  juga  diduga  mengandung  senyawa metabolit sekunder golongan steroid dengan nilai Rf 0,21  cm.  Menurut  hasil  penelitian  yang  dilakukan oleh  Rohmah  dkk  (2019)  nilai  Rf  yang  dihasilkan untuk senyawa steroid sebesar 0,2 cm.

## KLT Bioautografi
Hasil  uji  KLT  bioautografi  ekstrak  metanol daun kirinyuh terhadap bakteri S.lugdunensis MRSA, K.pneumoniae ESBL  dan P.aeruginosa ESBL  dapat dilihat pada Gambar 2.
(a)
(b) (c)
Gambar 2. Hasil pengujian KLT bioautografi ekstrak metanol daun kirinyuh pada bakteri (a) S.lugdunensis
MRSA, (b) K.pneumoniae ESBL, (c) P.aeruginosa ESBL
Pengujian  aktivitas  antibakteri  ekstrak metanol  daun  kirinyuh  dengan  metode  KLT bioautografi  menunjukkan  hasil  yang  positif terhadap  bakteri S.lugdunensis MRSA.  Noda  yang
berpotensi  sebagai  antibakteri  terdapat  pada EMDKF3, EMDKF7b dan EMDKF9b. EMDKF3 dengan nilai  Rf  0,47  cm  ketika  disemprot  dengan  pereaksi FeCl 3 akan  menghasilkan  warna  coklat  yang
Jurnal Biosains Vol. 6 No. 2 Agustus 2020                                                                         ISSN 2443-1230 (cetak) DOI: https://doi.org/10.24114/jbio.v6i2.16600
ISSN 2460-6804 (online)
menandakan  adanya  senyawa  golongan  fenol. EMDKF7b  dengan  nilai  Rf  0,87  cm  dan  EMDKF9b dengan  nilai  Rf  0,92  cm  ketika  disemprot  dengan pereaksi  uap  amoniak  akan  menghasilkan  warna coklat kehitaman yang menandakan adanya senyawa golongan  flavonoid.  Senyawa  metabolit  sekunder yang memiliki potensi sebagai antibakteri terhadap bakteri S.lugdunensis MRSA  adalah  golongan  fenol dan flavonoid.
Kandungan  fenol  pada  konsentrasi  tinggi mampu  menembus  dan  mengganggu  dinding  sel bakteri  dan  mempresipitasi  protein  dalam  sel bakteri.  Selain  itu  fenol  dapat  menyebabkan koagulasi protein, mengubah permeabilitas membran  bakteri  dan  akhirnya  sel  membran mengalami lisis (mati). Sedangkan pada konsentrasi yang lebih rendah, fenol mampu membentuk ikatan kompleks  protein  dan  fenol  yang  diikuti  penetrasi fenol ke dalam sel dan menyebabkan presipitasi serta denaturasi  protein  sehingga  menginaktifkan  sistem enzim penting dalam sel bakteri (Hidayah dkk, 2017).
Pengujian  aktivitas  antibakteri  ekstrak metanol  daun  kirinyuh  dengan  metode  KLT- bioautografi  menunjukkan  hasil  yang  positif terhadap  bakteri K.pneumoniae ESBL.  Noda  yang berpotensi  sebagai  antibakteri  terdapat  pada EMDKF2, EMDKF7a dan EMDKF7c. EMDKF2 dengan nilai Rf 0,6 cm dan EMDK7c dengan nilai Rf 0,96 cm ketika disemprot dengan pereaksi uap amoniak akan menghasilkan  warna  coklat  kehitaman  yang menandakan  adanya  senyawa  golongan  flavonoid, sedangkan EMDKF7a dengan nilai Rf 0,57 cm ketika disemprot  dengan  pereaksi  dragendorf  akan menghasilkan  warna  coklat  yang  menandakan adanya  senyawa  golongan  alkaloid.  Senyawa metabolit  sekunder  yang  memiliki  potensi  sebagai antibakteri  terhadap  bakteri K.pneumoniae ESBL adalah golongan alkaloid dan flavonoid.
Mekanisme  kerja  senyawa  alkaloid  sebagai antibakteri  adalah  dengan  mengganggu  komponen penyusun  peptidoglikan  pada  sel  bakteri  sehingga lapisan dinding sel tidak terbentuk secara utuh dan menyebabkan  kematian  sel  tersebut,  selain  itu komponen  alkaloid  diketahui  sebagai  interkelator DNA  dan  menghambat  enzim  topoisomerase  sel bakteri    (Ningsih  dkk,  2016).      Mekanisme  kerja flavonoid sebagai antimikroba dapat dibagi menjadi 3  yaitu  menghambat  sintesis  asam  nukleat, menghambat fungsi membrane sel dan menghambat metabolisme energy (Rijayanti, 2014).
Pengujian  aktivitas  antibakteri  ekstrak metanol  daun  kirinyuh  dengan  metode  KLT bioautografi  menunjukkan  hasil  yang  negatif terhadap  bakteri P.aeruginosa ESBL  pada  semua
perbandingan  fase  gerak  yang  ditunjukkan  dengan tidak terbentuknya zona hambat pada biakan bakteri yang telah dielusi plat KLT.

## Kesimpulan
Ekstrak  metanol  daun  kirinyuh  memiliki aktivitas sebagai antibakteri terhadap bakteri MDR. Senyawa metabolit sekunder dalam ekstrak metanol daun  kirinyuh  yang  memiliki  aktivitas  sebagai antibakteri  adalah  golongan  alkaloid,  fenolik  dan flavonoid.

## Daftar Pustaka
Amalia, E., Nindatama, M.R., Hayati, L.,Handayani, D.,
(2015),  Identifikasi Mutasi Gen rpobSer531Leu  Mycobacterium  tuberculosis yang Berhubungan Dengan  Resistensi Rifampisin, Biomedical Journal of Indonesia ,
1 (1): 30-34.
Bara, R.A., Grace, D.K., Antonius,  R.B.O.,  Jimmy,  P., (2015),  Analisis  Senyawa  Antibiotik  Dari Jamur Simbion yang Terdapat Dalam Ascidians Didemnum molle di  Sekitar Perairan Bunaken-Sulawesi  Utara, Jurnal  LPPM BidangSains dan  Teknologi , 2 (2): 28-35.
Batara, M., Darmawati, S., Prastiyanto, M.E., (2018), Keanekaragaman
dan Pola Resistensi Bakteri  pada  Pasien  yang  Terdiagnosa Sepsis, Jurnal Labora Medika , 2 (2): 1-5. Eriadi, A., Arifin, H., Nirwanto., 2016, Uji  Toksisitas Akut Ekstrak Etanol Daun Kirinyuh Chromolaena odorata (L)  R.M.King  &  H. Rob) Pada  Mencit  Putih  Jantan, Jurnal Farmasi Higea , 8 (2): 122-132. Estiningsih, D., Puspitasari, I., Nuryastuti, T., (2016), Identifikasi Infeksi  Multi  Drug Resistant Organisms  (MDRO)  Pada Pasien  yang Dirawat di Bangsal  Neonatal Intensive Care Unit (NICU) Rumah Sakit, Jurnal Manajemen  dan  Pelayanan Farmasi , 6 (3): 243-248. Handayany, G.N., (2016), Pengaruh Metode Ekstraksi Terhadap  Aktivitas  Antimikroba  Ekstrak Metanol  Daun  Mimba  ( Azadirachta  indica Juss), Jurnal Teknosains , 10 (2): 211-222. Hidayatullah.,  Anam,  S.,  Tandah,  M.R.,  (2017),
Identifikasi  Senyawa  Antibakteri  Ekstrak Metanol Daun  Bamban ( Donax canniformis (G.  Forst.) K. Schum.) Terhadap
Staphylococcus aureus , SCIENTIA , 7 (2):
89-95.
Hidayah,  N.,  Dewi,  M.,  Siti,  H.B.,  (2017),  Aktivitas Antibakteri  Infusa  Simplisia Sargasum
Jurnal Biosains Vol. 6 No. 2 Agustus 2020                                                                         ISSN 2443-1230 (cetak) DOI: https://doi.org/10.24114/jbio.v6i2.16600
muticum terhadap Pertumbuhan Staphylococcus aureus , Life Science , 6 (2): 49- 54. Kursia, S., Lebang, J.S., Taebe, B.,  Burhan,  A.,  Rahim,
Wa O.R., Nursamsiar,  (2016),  Uji  Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etilasetat Daun Sirih Hijau ( Piper betle L.) terhadap  Bakteri Staphylococcus  epidermidis , IJPST , 3 (2): 72- 22. Manguntungi, B., Kusuma, A.B.,  Yulianti., Asmawati., Yunianti., (2016), Pengaruh Kombinasi Ekstrak Kirinyuh ( Chromolaena  odorata )  dan  Sirih  ( Piper betle L)  dalam  Pengendalian  Penyakit
Vibriosis pada Udang, Biota , 1 (3): 138-144. Marliana, E., (2007), Analisis Senyawa Metabolit Sekunder Dari Batang Spatholobus ferrugineus (Zoll & Moritzi) Benth yang Berfungsi  Sebagai Antioksidan, JURNAL PENELITIAN MIPA , 1 (1): 23-29.
Munte,  N.,  Sartini.,  Lubis,  R.,  (2016),  Skrining Fitokimia dan  Antimikroba  Ekstrak  Daun
Kirinyuh  terhadap  Bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia  coli , BioLink ,
2 (2): 132-140. Najoan, J.J., Runtuwene, M.J.R., Wewengkang,  D.S., (2016), Uji Fitokimia  dan  Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Etanol  Daun  Tiga ( Allophylus  cobbe L.), PHARMACON  Jurnal Ilmiah   Farmasi , 5 (1): 266-274.
Ningsih,  D.R.,  Zusfahir.,  Dwi,  K.,  (2016),  Identifikasi Senyawa  Metabolit  Sekunder  Serta  Uji Aktivitas  Ekstrak  Daun  Sirsak  Sebagai Antibakteri, Molekul , 11 (1): 101-111 Pringgenis,  D.,  Jumiati,  M.,  dan  Ridho,  A.,  (2015),
Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Nudibranch Polkadot ( Jorunna funebris ) (Gastropoda :  Moluska) Terhadap Bakteri
Multidrugs  Resistant (MDR), Jurnal  Ilmu Kelautan , 20 (4): 195 206. Ramadhani,  N.,  Samudra,  A.G.  Armando,  J.,  (2017), Identifikasi Senyawa  Ekstrak  Etanol Daun  Mimba  ( Azadirachta  indica A.Juss) Sebagai Antibakteri Secara KLT- Bioautografi Terhadap Bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli , Jurnal Ilmiah Ibnu Sina , 2 (1): 74  81. Rijayanti,  R.P.,  (2014),  Uji  Aktivitas  Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Mangga Bacang ( Mangifera foetida L.) Terhadap Staphylococcus  aureus Secara  In  Vitro, Naskah Publikasi , Universitas Tanjungpura.
Rofida, S., dan Nurwahdaniati., (2015), Antibacterial
Activity of Chromolaena  odorata (L) King Leaves With Bioautography, PHARMACY , 12 (1): 29-36. Rohmah,  J.,  Chylen,  S.R.,  Fitria,  E.W.,  (2019),  Uji Aktivitas Sitotoksik Ekstrak Selada Merah ( Lactuca  sativa var. Crispa )  Pada Berbagai Pelarut  Ekstraksi  Dengan Metode  BSLT ( Brine Shrimp Lethality Test ),
Jurnal Kimia Riset , 4 (1):  18-32.
Sulistyani,  N.,  and  Narwanti,  I.,  (2015),  TLC- Bioautography Profile of Ethyl Acetate Extract of 5 Bacteria Isolated from Ficus carica L  Rhizosphere, International Journal of Public  Health Science , 4 (2): 81-87. Susanti, N.M.P., Luh Putu Mirah, K.D., Harlina, S.M., I Made Agus, G.W., (2017), Identifikasi Senyawa  Golongan  Fenol Dari Ekstrak  Etanol  Daun  Sirih  Hijau ( Piper  betle Linn.)  Dengan  Metode  KLT- Spektrofotodensinometri,
JURNAL
METAMORFOSA , 4 (1): 108-113. Syarmalina., dan Laksmitawati, D.R., (2005), Uji Efek Antibakteri Ekstrak Daun Mimba ( Azadirachta indica A Juss) terhadap Bakteri, Prosiding Seminar Nasional Tumbuhan Obat Indonesia . Untoro,  M.,  Enny,  F.,  Dewi,  K.,  (2016),  Isolasi  dan Identifikasi Senyawa Golongan  Alkaloid Dari Rimpang  Lengkuas  Merah  ( Alpinia purpurata ), Jurnal Kimia  Sains  dan  Aplikasi ,
19 (2): 58-62. Vital, P.G., and Rivera, W.L., (2009), Antimicrobacterial Activity and  Citoxcity of Chromolaena odorata (L.f)  King  and Robinson and Uncaria Perrottetti (A. Rich) Merr.  Extracts, Journal  of  Medicinal  Plant Research , 3 (7): 511 518.
Yutika, M., Rusli, R., Ramadhan, A.M., (2015), Aktivitas Antibakteri Daun Kirinyuh ( Chromolaena odorata (L.)  R.M.King  & H.Rob.)  Terhadap Bakteri Gangren, Prosiding Seminar Nasional Kefarmasian . World  Health  Organization  (WHO),  (2012),  Global Report for Research  on  Infectious Diseases of Poverty. https://apps.who.int/iris/bitstream handle/10665/44850/978924156 4 489_eng.p df?sequence=1 . World  Health  Organization  (WHO),  (2016), Tuberculosis.
http://www.searo.who.int/indones a/topics/tb/indTBmdr2016/en/.