## UJI EFEKTIVITAS EKSTRAK ETANOL DAUN TEMBAKAU
( Nicotiana tabacum L . ) TERHADAP MORTALITAS

## LARVA Anopheles aconitus
EFFECTIVENESS OF TOBACCO LEAF ETHANOL EXTRACT (Nicotiana tabacum L.)

## AGAINST Anopheles aconitus LARVA MORTALITY
Nurhayani, Dhiastika Nanda Sari, Rochmadina Suci Bestari, Erika Diana Risanti Fakultas Kedokteran, Universitas Muhammadiyah Surakarta Korespondensi: dr. Nurhayani, M.Sc. Alamat email: nur128@ums.ac.id

## ABSTRAK
Anopheles  aconitus  merupakan  nyamuk  pembawa  parasit  malaria  (Plasmodium  sp.).  Pengendalian penyakit  malaria  bergantung pada pengendalian  vektornya.  Penggunaan  larvasida  alami  perlu  dikembangkan untuk  mengurangi  dampak  negatif  larvasida  sintetis  yang  dapat  mencemari  lingkungan.  Tanaman  yang  dapat digunakan  untuk  larvasida  alami  salah  satunya  adalah  daun  tembakau  (Nicotiana  tabacum  L.)  karena mengandung  flavanoid,  alkaloid,  tanin,  saponin,  dan  minyak  atsiri.  Tujuan  penelitian  ini  untuk  mengetahui efektivitas ekstrak daun tembakau terhadap mortalitas larva Anopheles aconitus dan dosis optimal ekstrak daun tembakau  sebagai  larvasida  Anopheles  aconitus.  Penelitian  ini  bersifat  eksperimental  laboratorik  dengan rancangan post test only with control group design, dengan 4 variasi konsentrasi 0,00875%, 0,0175%, 0,035%, 0,07%,  1  kontrol  negatif  (aquadest  dan  CMC)  dan  1  kontrol  positif  (abate),  dilakukan  4  kali  pengulangan dengan pengamatan tiap 6 jam sekali selama 24 jam. Hasil uji Kruskal-Wallis menunjukan terdapat hubungan antara ekstrak daun tembakau kematian larva Anopheles aconitus (p= 0,000). Hasil uji Post Hoc Mann-whitney, semua konsentrasi memiliki perbedaan yang signifikan dibandingkan kontrol negatif, sedangkan kontrol positif dengan  konsentrasi  0,07%  tidak  berbeda  signifikan,  menunjukkan  bahwa  konsentrasi  0,07%  memiliki  potensi hampir dengan abate sebagai larvasida. Analisis probit LC50 pada 0,025% dan LT50 pada 9,877 jam. Sehingga dapat disimpulkan bahwa ekstrak daun tembakau efektif dalam membunuh larva Anopheles aconitus .
Kata Kunci : Ekstrak Daun Tembakau, Anopheles aconitus , Larvasida, Malaria

## ABSTRACT
Anopheles aconitus is a mosquito carrying malaria parasite (Plasmodium sp.). Malaria control depends on controlling  the  vector.  The  use  of  natural  larvicides  needs  to  be  developed  to  reduce  the  negative  impact  of synthetic larvicides which can pollute the environment. One of the plants that can be used for natural larvicides is tobacco leaf (Nicotiana tabacum L.) because it contains flavonoids, alkaloids, tannins, saponins, and essential oils.  The  purpose  of  this  study  was  to  determine  the  effectiveness  of  tobacco  leaf  extract  on  the  mortality  of Anopheles aconitus larvae and the optimal dose of tobacco leaf extract as Anopheles aconitus larvae. This study is  a  laboratory  experimental  study  with  post  test  only  with  control  group  design,  with  4  concentrations  of 0.00875%,  0.0175%,  0.035%,  0.07%,  1  negative  control  (aquadest  and  CMC)  and  1  positive  control  (abate) performed 4 repetitions with observations every 6 hours for 24 hours. The Kruskal-Wallis test showed that there was  a  relationship between  tobacco  leaf  extract  and  the  death  of  Anopheles aconitus  larvae  (p=  0,000).  Post- Hoc  Mann-Whitney  test  results,  all  concentrations  had  significant  differences  compared  to  negative  controls, while positive controls with a concentration of 0.07% did not differ significantly, indicating that a concentration of 0.07% had the potential to be nearly as abate as larvicide. The LC50 probit analysis was 0.025% and LT50 was  9.877  hours.  So  it  can  be  concluded  that  tobacco  leaf  extract  is  effective  in  killing  Anopheles  aconitus larvae.
Keyword: Tobacco Leaf Extract, Anopheles aconitus, Larvasida, Malaria
How  To  Cite : Nurhayani,  N.,  Sari,  S.,  Bestari,  R.,  &  Risanti,  E.  (2021). UJI  EFEKTIVITAS  EKSTRAK ETANOL  DAUN  TEMBAKAU  (Nicotiana  tabacum  L.)  TERHADAP  MORTALITAS  LARVA  Anopheles aconitus. Biomedika, 13(1), 68-75. doi:https://doi.org/10.23917/biomedika.v13i1.11272
DOI : https://doi.org/10.23917/ biomedika.v13i1.11272

## PENDAHULUAN
Malaria merupakan salah satu penyakit infeksi  yang  paling  berbahaya  di  dunia. World Health  Organization (WHO)  memperkirakan setiap  tahun  terdapat  300-500  juta  penduduk dunia menderita penyakit ini dan sekitar 2,7 juta jiwa meninggal akibat malaria (WHO, 2015).
Malaria  merupakan  suatu  penyakit infeksi  akut  maupun  kronik  yang  disebabkan oleh  infeksi Plasmodium yang  menyerang eritrosit  dan  ditandai  dengan  ditemukannya bentuk  aseksual  dalam  darah,  dengan  gejala demam,  menggigil,  anemia,  dan  pembesaran limpa ( Fitriany dan Ahmad, 2018).
Salah  satu  upaya  yang  dilakukan memutus  penyebaran  penyakit  malaria,  adalah dengan  pemberian  larvasida.  Larvasida  kimia yang banyak digunakan adalah abate.
Penggunaan  abate  memiliki  dampak  buruk yang  dapat  menimbulkan  keracunan  pada manusia,  keracunan  pada  hewan  ternak, polusi  lingkungan,  dan  serangga  lain  menjadi resisten (Pramudyo et al ., 2015). Oleh karena itu diperlukan cara-cara lain untuk memberantas vektor yang aman bagi lingkungan  dan  tidak  menganggu  ekosistem (Astriani dan Widawati, 2017).
Alternatif  digunakan  saat  ini  adalah dengan  menggunakan  larvasida  alami,  yaitu larvasida berbahan dasar tumbuhan. Larvasida memiliki  kemampuan  membunuh  yang  lebih baik daripada insektisida sintetis karena sasaran dari  larvasida  adalah  larva  nyamuk  yang  masih memiliki  kemampuan  bertahan  hidup  rendah dan  terlokalisir  di  suatu  tempat  (tidak  dapat berpindah jauh) (Yasmin dkk. , 2012).
Tumbuhan  yang  dapat  digunakan sebagai  larvasida  alami  adalah  daun  tembakau. Dalam daun tembakau diduga terdapat kandungan  flavonoid,  alkaloid,  saponin,  tanin, dan minyak atsiri yang bersifat toksik bagi larva Anopheles aconitus.
Penelitian sebelumnya  yang  dilakukan oleh Handayani dkk. (2018) bahwa ekstrak daun tembakau  efektif  dalam  membunuh  larva nyamuk Aedes  aegypti. Pada  penelitian  yang dilakukan  Wijayanti  dkk. ( 2015),  ekstrak  daun tembakau  mempunyai  efek  larvasida  dalam membunuh larva nyamuk Culex quinquefasciatus.
Berdasarkan  latar  belakang  tersebut, peneliti  menduga  daun  tembakau  mengandung flavonoid,  alkaloid,  saponin,  tanin,  dan  minyak atsiri  yang  bersifat  toksik  bagi  larva Anopheles aconitus sehingga  dapat  digunakan  sebagai
larvasida  alami  yang  efektif  untuk  nyamuk Anopheles aconitus . Peneliti berinisiatif melakukan  penelitian  untuk  mengetahui  apakah ekstrak  etanol  daun  tembakau  fektif  terhadap mortalitas  larva Anopheles  aconitus .  Sampai proposal  penelitian  ini  ditulis,  belum  ada penelitian yang  mencari tahu efektivitas ekstrak etanol  96%  tembakau  terhadap  mortalitas  larva Anopheles aconitus . Tujuan penelitian ini Untuk mengetahui  efek  ekstrak  etanol  96%  tembakau terhadap  larva Anopheles acontinus dan  untuk mengetahui  dosis  optimal  ekstrak  etanol  96% tembakau sebagai larvasida Anopheles acontinus .
Hasil  penelitian  ini  dapat  digunakan untuk  pemanfaatan  daun  tembakau  sebagai larvasida  alami Anopheles aconitus untuk mengurangi  kejadian  malaria  di  Indonesia. Hipotesis yang diharapkan adalah ekstrak etanol daun  tembakau  memiliki  efek  mortalitas terhadap larva Anopheles aconitus.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  bersifat  eksperimental laboratorik  menggunakan  metode post  test only with controlled group design. Pembuatan ekstrak dilakukan di Laboratorium Farmakologi
Fakultas Kedokteran, Universitas
Muhammadiyah Surakarta dan penelitian
dilakukan  di  Balai  Besar  Penelitian  dan Pengembangan  Vektor  dan  Reservoir  Penyakit (B2P2VRP)  Salatiga,  Jawa  Tengah.  Besar sampel  pada  penelitian  ini  menggunakan  2 kontrol  dan  4  perlakuan  dengan  25  larva  instar III  dalam  setiap  kelompok  perlakuan  yang dimasukkan  dalam  gelas  uji.  Sampel  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  ada  600  ekor. Sampel  diambil  dengan  teknik purposive sampling ,  yaitu  metode  penelitian  subjek berdasarkan atas ciri-ciri atau sifat tertentu yang berkaitan dengan karakteristik populasi. Kriteria inklusi  yaitu  larva  instar  III  dan  larva  yang bergerak aktif. Sedangkan kriteria eksklusi larva mati sebelum penelitian.
Pembuatan  ekstrak  etanol  96%  daun tembakau  ( Nicotiana  tabacum L . )    melewati tahap  pencucian  dan  pengeringan.  Setelah kering  kemudian  sampai  menjadi  simplisia kemudian ditimbang. Simplisia yang sudah siap kemudian  direndam  dengan  pelarut  etanol  96% selama  4x24  jam.  Setelah  4x24  jam  hasil maserasi  disaring  menggunakan  kertas  saring. Ekstrak  yang  telah  disaring  kemudian  diuapkan dengan  alat  evaporator  untuk  mendapatkan ekstrak kemudian dituang ke cawan porselin dan didapatkan  ekstrak.  Ekstrak  dipanaskan  pada waterbath dengan  suhu  60ºC  dalam  kondisi
diaduk  secara  terus  menerus.  Hasil  dari pemanasan  tersebut  akan  didapatkan  ekstrak kental,  lalu  dilakukan  pembuatan  larutan  stok
dengan  menggunakan  konsentrasi  0,07%  dan pelarut (CMC) 1 gr yang dilarutkan dalam 1000 ml aquadest.
Gambar 1. Konsentrasi Perlakuan Ekstrak Daun Tembakau 0,00875%, 0,0175%, 0,035%, dan 0,07%.
Kontrol  negatif  (aquades  dan  CMC),
kontrol  positif  (diberikan  abate  1  mg  dalam  99 ml  air),  perlakuan  1  (konsentrasi  ekstrak  daun tembakau  0,00875%:  12,5  ml  larutan  stok ditambah  87,5ml  air),  perlakuan  2  (konsentrasi ekstrak  daun  tembakau  0,0175%:  25  ml  larutan stok  ditambah  75  ml  air),  perlakuan  3 (konsentrasi ekstrak daun tembakau 0,035%: 50 ml larutan stok ditambah 50 ml air), Perlakuan 4 (konsentrasi ekstrak daun tembakau 0,07%: 100 ml  larutan  stok),  dengan  empat  pengulangan, diamati setiap 6 jam selama 24 jam (gambar 1).
Analisis data dilakukan, uji normalitas ( Shapiro-wilk) dan  varians  homogen  ( Levene test ),  perbedaan  pada  setiap  variabel  perlakuan terhadap kematian nyamuk (uji Kruskal Wallis) .
Selanjutnya dilakukan uji lanjut post hoc ( Mann Whitney) ,  lalu  uji  probit Lethal  Concentration
dan Lethal Time .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Uji  pendahuluan  dibagi  menjadi  6 kelompok  perlakuan  kontrol  (+),  kontrol  (-), konsentrasi  0,025%,  0,05%,  0,075%,  0,01% menunjukan  adanya  peningkatan  kematian larva Anopheles aconitus yang tinggi, sehingga konsentrasi  final  yang  digunakan  untuk  uji penelitian adalah 0,00875%, 0,0175%, 0,035%, dan  0,07%.  Uji  penelitian  dilakukan  pada  6 perlakuan selama 24 jam yang di amati setiap 6 jam  dengan  pengulangan  sebanyak  4  kali. Ditinjau  pada  Tabel  bahwa  kelompok  kontrol (+)  yang  dilakukan  pemberian  abate  dijumpai adanya  100%  kematian  larva  Anopheles aconitus,  kelompok  kontrol  (-)  yang  dilakukan pemberian  aquades  dan  CMC  tidak  dijumpai adanya  kematian  larva  Anopheles  aconitus, empat  kelompok  perlakuan  yang  dilakukan
pemberian  ekstrak  etanol  daun  tembakau dengan konsentrasi yang berbeda yaitu perlakuan 1 (0,00875%), perlakuan 2
(0,0175%), perlakuan 3 (0,035%), dan perlakuan 4 (0,07%) didapatkan angka kematian  tertinggi  yaitu  pada  perlakuan  4 dengan  konsentrasi  0,07%    menyebabkan  98%
kematian  pada  larva  Anopheles  aconitus. Berdasarkan  hal  tersebut  dapat  dilihat  bahwa semakin  tinggi  konsentrasi  ekstrak  daun tembakau  yang  diberikan  maka  semakin  tinggi pula tingkat kematian larva Anopheles aconitus.
Tabel 1. Uji penelitian Perlakukan/ Konsentrasi Pengula ngan Kematian Larva Setelah Diberi Ekstrak Daun Tembakau Rata-Rata Kematian Perkonsen trasi pada jam ke 24 Persentase Kematian Perkonsen trasi pada jam ke 24 Jam Ke-6 Jam Ke-12 Jam Ke-18 Jam Ke-24 P0 (Kontrol -) I 0 0 0 0 0 0%
II 0 0 0 0 III 0 0 0 0 IV 0 0 0 0 Rata-Rata Kematian Perwaktu (jam) 0 0 0 0 P1 (0,00875%) I 1 2 2 5
6,25 25% II 2 4 4 5 III 0 2 2 7 IV 2 3 3 8 Rata-Rata Kematian Perwaktu (jam) 1,25 2,75 2,75 6,25 P2 (0,0175%) I 3 7 8 12
11,5 46% II 0 2 4 11 III 1 1 7 8 IV 2 2 11 15 Rata-Rata Kematian Perwaktu (jam) 1,5 3 7,5 11,5 P3 (0,035%) I 5 10 12 19
18,75 75% II 2 6 16 19 III 3 9 16 19 IV 7 9 16 18 Rata-Rata Kematian Perwaktu (jam) 4,25 8,5 15 18,75 P4 (0,07%) I 10 17 23 25
24,5 98%
II 12 17 21 24 III 9 17 23 24 IV 11 17 24 25 Rata-Rata Kematian Perwaktu (jam) 10,5 17 22,75 24,5 P5 (Kontrol +) I 25 25
25 25
25 100% II 25 25 25 25 III 25 25 25 25 IV 25 25 25 25 Rata-Rata Kematian Perwaktu (jam) 25 25 25 25
Penelitian  ini  dilakukan  dengan  uji Shapiro-wilk , data hasil uji normalitas menunjukan  distribusi  data  tidak  normal  (p> 0,05).  Uji  homogenitas  dalam  penelitian  ini dilakukan  dengan  menggunakan  uji Levene . diperoleh  nilai  sig  (0,007)  <  0,05  dapat diasumsikan  bahwa  data  tidak  homogen. Berdasarkan hasil uji normalitas dan homogenitas  diperoleh  data  tidak  terdistribusi normal  dan  tidak  homogen.  Selanjutnya dilakukan  uji kruskal-wallis menunjukan  nilai sig (0,000) < 0,005, sehingga dapat disimpulkan terdapat perbedaan yang bermakna antara  setiap  penelitian.  Untuk  mengetahui kelompok  mana  yang  paling  bermakna  dalam menyebabkan  kematian  larva  (Asymp.  Sig.  < 0,05) dilakukan uji Post hoc Mann-Whitney .
Tabel 4. Uji Post hoc Mann-Whitney Mann- Whitney p Keterangan K- dan P1 0,013 Berbeda bermakna K- dan P2 0,014 Berbeda bermakna K- dan P3 0,011 Berbeda bermakna K- dan P4 0,013 Berbeda bermakna K- dan K+ 0,008 Berbeda bermakna + dan P1 0,013 Berbeda bermakna K+ dan P2 0,014 Berbeda bermakna K+ dan P3 0,011 Berbeda bermakna K+ dan P4 0,127 Tidak berbeda bermakna P1 dan P2 0,028 Berbeda bermakna P1 dan P3 0,017 Berbeda bermakna P1 dan P4 0,019 Berbeda bermakna P2 dan P3 0,018 Berbeda bermakna P2 dan P4 0,019 Berbeda bermakna P3 dan P4 0,017 Berbeda bermakna
Tampak  semua  perbandingan  antar  P0 (kontrol  (–)  aquadest  dan  CMC)  dengan kelompok  P1  (0,00875%),  P2  (0,0175%),    P3 (0,035%), P4 (0,07%) mempunyai nilai p< 0,05 yang mempunyai arti adanya perbedaan bermakna,  sehingga  dapat  disimpulkan  bahwa ekstrak  daun  tembakau  memiliki  efek  terhadap mortalitas larva Anopheles aconitus. P5 (kontrol (+) /abate) dengan kelompok P1 (0,00875%), P2 (0,0175%),    P3  (0,035%),  menunjukan  adanya perbedaan  yang  bermakna  yang  artinya  dosis tersebut  kurang  efektif  diandingkan  dengan abate. P5 (kontrol (+)/abate) dengan P4 (0,07%) menunjukan  nilai  p>0,05  yang  artinya  tidak berbeda  bermakna,  sehingga  dapat  disimpulkan dosis 0,07% memiliki potensi yang hampir sama dengan abate 1mg.
Hasil Uji probit lethal time menunjukan  bahwa  pada  konsentrasi  0,07% didapatkan  nilai  LT50  9,877  jam  yang  artinya tidak  melebihi  batas  waktu  pengamatan sehingga  konsentrasi  ini  efektif  jika  dipakai sebagai  larvasida  terhadap  larva Anopheles aconitus instar  III.  Semakin  tinggi  konsentrasi yang  diberikan  pada  larva uji, semakin  banyak kandungan  kimia  yang  terpajan  pada  larva  uji, sehingga  waktu  yang  dibutuhkan  untuk membunuh larva menjadi semakin cepat.
Hasil  dari  analisis probit  lethal consentration yang  dilakukan  pada  masing- masing  waktu  pengamatan, terlihat  nilai  LC50 hingga  jam  ke-24  membutuhkan  konsentrasi 0,025%.  Hal  ini  menunjukan  bahwa  semakin lama  pajanan  untuk menimbulkan  kematian larva 50% dari total larva uji maka dibutuhkan konsentrasi yang semakin tinggi.
Penelitian sebelumnya yang dilakukan  oleh  Wijayanti  dkk.  (2015)  bahwa tembakau  memiliki  efek  sebagai  larvasida terhadap  larva Culex  quinquefasciatus dengan dosis  0,005%,  0,011%,  0,018%,  0,031%, 0,066%,  dan  0,095%.  Pada  dosis  paling  tinggi
(0,095%) presentasi mortalitas Culex quinquefasciatus sebesar  90%,  dengan  pelarut tween  80.  Pada  penelitian  ini,  ekstrak  daun tembakau  dosis  0,07%  dapat  membunuh sebesar 98% larva. Sehingga dapat disimpulkan dengan  menggunakan  dosis  rendah  ekstrak tembakau  sudah  dapat  menyebabkan  kematian pada  larva.  Dimungkinkan  larva Anopheles aconitus lebih  rentan  terhadap  zat  aktif  pada ekstrak daun tembakau.
Berdasarkan hal tersebut dapat diduga bahwa  ekstrak  daun  tembakau  memiliki  efek larvasida karena diduga memiliki senyawa aktif yaitu  alkaloid,  flavanoid,  tanin,  minyak  atsiri
dan saponin yang bersifat toksik pada serangga, sehingga  timbul  kelemahan  gerak  otot-otot pernapasan,  menyebabkan  racun  erut,  racun kontak,  menyebabkan  gangguan  nutrisi  dan akhirnya menimbulkan kematian. Hasil penelitian ini menunjukan bahwa ekstrak etanol daun  tembakau    memiliki  kemampuan  yang signifikan  dalam  membunuh  larva    An opheles aconitus dapat  dijadikan  alternatif    sebagai larvasida alami. (Handayani dkk., 2016).

## SIMPULAN DAN SARAN
Kesimpulan  dari  penelitian  ini  adalah ekstrak  daun  tembakau  memiliki  efek  larvasida terhadap  larva Anopheles  aconitus instar  III, terutama  dosis  0,07%  efektif  membunuh  100% Larva Anopheles conitus, dan LC 50 ekstrak daun tembakau danterhadap mortalitas larva Anopheles  aconitus dalam  24  jam  sebesar 0,025%.  LT 50 ekstrak  daun  tembakau  terhadap mortalitas  larva Anopheles  aconitus dengan konsentrasi 0,07% yaitu selama 9,877 jam.
Saran  dari  penelitian  ini  yaitu  perlu penelitian  lebih  lanjut  mengenai  daya  larvasida insektisida daun tembakau dalam bentuk sediaan lain yang bisa digunakan oleh masyarakat. Perlu dilakukan  uji  toxicitas  ekstrak  yang  digunakan pada penelitian, untuk mengetahui larva tersebut mati  karena  ekstrak  tembakau (Nicotiana
tabacum L .) atau pelarut-pelarut yang digunakan.  Perlu  dilakukan  penelitian  lanjut mengenai  efektivitas  ekstrak  daun  tembakau terhadap vektor-vektor penyakit yang lain.

## DAFTAR PUSTAKA
Astriani,  Y.  dan  Widawati,  M.  2017.  Potensi Tanaman Di Indonesia Sebagai Larvasida Alami  Untuk Aedes  aegypti . Spirakel . Vol.8,No.2.
Fitriany, J. dan Ahmad, S. 2018. Malaria. Jurnal
Averrous , Vol.4, No.2.
Handayani,  S. W. , Dhian, P.,  Hasan,  B.,Ary,  O., dan Arum, S. J. 2018. Efektivitas Ekstrak Daun  Tembakau  (Nicotiana  tabacum  L) dari Semarang, Temanggung, dan Kendal Sebagai Larvasida Aedes aegypti . Balaba:
Jurnal  Litbang  Pengendalian  Penyakit Bersumber Binatang Banjarnegara . Vol.14,No.1. Pramudyo,  R.W.,  Albarda,  A.  dan  Putra,  A.B. 2015. Sistem Pencegahan Penyakit Menular  Berbasis  Informasi  Spasial (Studi Kasus Dinas Kesehatan Kabupaten Sragen). Jurnal  Edukasi  dan  Penelitian Informatika (JEPIN) , doi: 10.26418/jp.v1i1.10146. Wijayanti, M P., Sri,Y. dan Retno, H. 2015. Uji Toksisitas Ekstrak Daun Tembakau (Nicotiana  tabacum) dengan  Metode Maserasi  Terhadap  Mortalitas  Larva Culexquinquefasciatus Say Di Laboratorium . Jurnal Kesehatan
Masyarakat ,Vol 3,No.1.
World  Health  Organization  (WHO).  2015.
Guidelines  for  the  Treatment  of  Malaria .
World Health Organization.
Yasmin,  Y.,  Fitri,  L.  and  Bustam,  B.  M.  2012.
Analisis Efektifitas Tepung Jamur sebagai Larvasida Aedes  aegypti . Jurnal  Natur Indonesia . ISSN 1410-9379