Journal of Aquaculture and Fish Health Vol. 9(3) - September 2020 DOI : 10.20473/jafh.v9i3.16321
Penggunaan Ekstrak Daun Kelor Moringa oleifera (Lam, 1785) Untuk Meningkatkan Imunitas Non Spesifik Benih Ikan Nila Oreochromis niloticus (Linnaeus, 1758) yang Diinfeksi Aeromonas hydrophila
The Application of Moringa Leaf Extract Moringa oleifera (Lam, 1785) to Increase Non Specific Immunity of Tilapia Oreochromis niloticus (Linnaeus 1758) Infected by Aeromonas hydrophila
Nurlia Subryana 1* , Wardiyanto 1 dan Oktora Susanti 2
1 Program Studi Budidaya Perairan, Fakultas Pertanian Universitas Lampung, Jl. Prof. Dr. Ir. Sumantri Brojonegoro, Gedong Meneng, Rajabasa, Bandar Lampung, Lampung 35141, Indonesia 2 Program Studi Budidaya Ilmu Kelautan, Fakultas Pertanian Universitas Lampung, Jl. Prof. Dr. Ir. Sumantri Brojonegoro, Gedong Meneng, Rajabasa, Bandar Lampung, Lampung 35141, Indonesia

## Abstrak
Pertahanan  non-spesifik  adalah  pertahanan  utama  pada benih  ikan.  Salah  satu  bahan  alami  sebagai  sumber imunostimulan  adalah  tanaman  kelor.  Daun  kelor mengandung  senyawa  flavonoid,  alkaloid,  terpenoid  dan saponin sebagai agen imunostimulan. Imunostimulan adalah senyawa biologis yang dapat meningkatkan sistem kekebalan tubuh.Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui pengaruh  ekstrak  daun  kelor  dalam  meningkatkan  imunitas non-spesifik pada benih ikan nila ( Oreochromis niloticus ) yang terinfeksi Aeromonas  hydrophila .  Dalam  pemberian  ekstrak daun  kelor  diberikan  injeksi  intramuskular  0,1  mL/ikan dengan konsentrasi 50 mg, 75 mg dan 100 mg. Pada metode penelitian  ini,  digunakan  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL) dengan  4  perlakuan  dan  3  ulangan  yang  setiap  akuarium masing-masing berisi 12 ekor benih nila berukuran 8-10 cm. Pemberian  pakan  pada  benih  nila  dilakukan  setiap  3  kali sehari  yaitu  pagi,  siang  dan  sore  hari.  Parameter  yang  diuji adalah  leukosit,  diferensial  leukosit,  eritrosit,  aktivitas fagositosis dan indeks. Hasil penelitian menunjukkan bahwa pemberian  ekstrak  daun  pada  benih  ikan  nila  dapat meningkatkan  kekebalan  non-spesifik,  yaitu  total  leukosit, total  eritrosit,  leukosit  diferensial,  aktivitas  dan  indeks fagositosis.

## Abstract
Non-specific immunities are the main defenses in the fish seed.  One  of  the  natural  ingredients  as  a  source  of immunostimulants is Moringa oleifera . Moringa leaves contain flavonoids,  alkaloids,  terpenoids  and  saponins  as immunostimulant  agents.  Immunostimulants  are  biological
*Correspondence : nsubryana@gmail.com
Received : 2019-11-28 Accepted : 2020-08-13
Kata Kunci : Imunitas non spesifik, Imunostimulan, Ekstrak daun kelor, Oreochromis niloticus, Aeromonas hydrophila
Keywords : Non specific immunity, Immunostimulant, Moringa leaf extract, Oreochromis niloticus, Aeromonas hydrophila
that  can  enhance  the  immune  system.  The  purpose  of  this study was to determine the effect of Moringa leaf extract in increasing  non-specific  immunity  in  tilapia  ( Oreochromis niloticus )  seeds  infected  by Aeromonas  hydrophila .  In  giving Moringa  leaf  extract  intramuscular  injection  of  0.1  mL/fish with  concentrations  of  50  mg,  75  mg,  and  100  mg.  In  this research method, a completely randomized design (CRD) was used  with  4  treatments  and  3  replications,  each  aquarium containing  12  tilapia  measuring  8-10  cm  each.  Feeding  on tilapia is done every 3 times a day namely morning, afternoon, and  evening.  The  parameters  tested  were  leukocytes, differential leukocytes, erythrocytes, phagocytic activity, and index. The results showed that the administration of Moringa leaf’s  extract  injected  into  tilapia  seed  can  increase  non- specific  immunity,  which  are  total  leukocytes,  total erythrocytes, differential leukocytes, activity, and phagocytosis index.

## PENDAHULUAN
Ikan  nila (Oreochromis  niloticus)
merupakan  salah  satu  komoditas  yang dikembangkan untuk mendukung ketahanan  pangan  nasional  maupun ketahanan  ekonomi,  serta  peningkatan kesejahteraan  masyarakat.  Dalam  usaha budidaya,  sering  terjadi  masalah  yang disebabkan  oleh  faktor  lingkungan. Serangan dari penyakit dapat
mengakibatkan  penurunan  mutu  dan kualitas  ikan.  Penyakit  pada  ikan  nila dapat  disebabkan  oleh  bakteri  yang bersifat  patogen  seperti Aeromonas hydrophila. Serangan dari bakteri ini akan mengakibatkan  ikan  menjadi  stres sehingga sistem imun menurun.
Benih  nila  yang  terserang  bakteri tersebut  akan  menunjukkan  gejala  klinis antara  lain  terdapat  luka  pada  kulit. Upaya pencegahan penyakit dalam usaha budidaya
salah satunya dapat menggunakan  bahan-bahan  alami  atau dengan  tanaman  obat  sebagai  sumber imunostimulan.  Imunostimulan  meru- pakan suatu senyawa biologis dan sintetis atau bahan lainnya yang dapat meningkatkan  sistem  kekebalan  tubuh. Menurut Raa (1992) apabila
imunostimulan  masuk  ke  dalam  tubuh ikan,  akan  merangsang  makrofag  untuk memproduksi  interleukin  yang  akan membuat  sel  limfosit  membelah  menjadi limfosit-T  dan  limfosit-B  dan  membuat
limfosit  B  menjadi  lebih  aktif  dalam memproduksi antibodi.
Salah satu bahan alami yang dapat menjadi  bahan  imunostimulan  yaitu tanaman  daun  kelor  ( Moringa  oleifera ). Daun  kelor  mengandung  senyawa flavonoid,  alkaloid,  fenol  dan  saponin (Arora et  al .,  2013).  Pemberian  ekstrak daun kelor dengan konsentrasi > 150 mg akan mengakibatkan sirip ikan lepas dan terjadi pendarahan pada insang (Farika et al .,  2014).  Flavonoid  memiliki  peran sebagai antioksidan dan mampu menghentikan  reaksi  berantai  radikal bebas,  sedangkan  saponin  berfungsi sebagai agen imunostimulan (Bamishaiye et al ., 2011).
Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui  suatu  pengaruh  pemberian ekstrak dari daun kelor ( Moringa oleifera ) dengan  dosis  yang  berbeda  dalam meningkatkan imunitas non spesifik pada benih  ikan  nila  ( Oreochromis  niloticus ) yang diinfeksi Aeromonas hydrophila.

## METODOLOGI Waktu dan Tempat
Penelitian dilaksanakan pada bulan September sampai dengan Oktober tahun 2019 bertempat di Laboratorium
Kesehatan  Ikan  Jurusan  Perikanan  dan Kelautan,  Fakultas  Pertanian,  Universitas Lampung.

## Materi Penelitian
Bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  benih  ikan  nila berukuran 8-10 cm yang diambil dari Balai Benih Ikan di Metro, ekstrak daun kelor, minyak cengkeh,  larutan  Hayem,  larutan Turk’s,  dan  larutan  Giemsa.  Sedangkan alat  yang  digunakan  yaitu  Akuarium ukuran 50x40x40 cm 3 , aerasi, alat bedah, spuit,  tabung  EDTA,  kaca  preparat, haemocytometer ,  sentrifuse,  mikroskop, hand counter , dan kasa.

## Rancangan Penelitian
Penelitian  ini  melakukan  uji antibakteri dengan menggunakan metode difusi (Trianto et al ., 2019), lalu dilakukan persiapan
akuarium dengan
menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap (RAL) dengan 4 perlakuan dan 3 ulangan, yang  masing-masing  setiap  akuarium dimasukkan  12  ekor  benih  nila. Pemberian pakan ikan uji dilakukan 3 kali sehari  yaitu,  pagi,  siang  dan  sore. Sedangkan  pengukuran  kualitas  air dilakukan  pada  awal  pemeliharaan  dan akhir  pemeliharaan.  Metode  pemberian ekstrak daun kelor diberikan dengan dosis 0  mg,  50  mg,  75  mg  dan  100  mg  pada minggu  ke-2  setelah  aklimatisasi,  dan pengambilan  darah  dilakukan  pada  hari ke-1  sebelum  diberi  ekstrak  daun  kelor, hari ke-8 setelah diberi ekstrak daun kelor, dan hari ke-22 setelah di uji tantang.

## Prosedur Kerja Gambaran Darah
Pengambilan darah diambil melalui vena  caudalis dan  dilakukan  sebelum diberikan  ekstrak  daun  kelor,  setelah diberi  ekstrak,  dan  setelah  dilakukannya uji tantang. Gambaran darah yang diamati yaitu  total  eritrosit,  total  leukosit, diferensial  leukosit,  aktivitas,  dan  indeks fagositosis.
Jumlah  eritrosit  dan  leukosit dihitung  sesuai  dengan  Bijanti  (2005), yaitu  dengan  cara  darah  dihisap  dengan pipet  Thoma  eritrosit  berskala  sampai skala  0.5  dan  ditambah  larutan  Hayem sampai  skala  101.  Setelah  itu  pipet
digoyangkan  dengan  membentuk  angka delapan dan empat tetes pertama larutan tersebut dibuang. Kemudian larutan darah diteteskan  ke  dalam haemocytometer, ditutup dengan cover glass , dan diamati di bawah  mikroskop  binokular  dengan pembesaran  400  kali.  Perhitungan  total eritrosit  dilakukan    dengan  menghitung eritrosit  di  kotak  kecil  bagian tengah, dengan rumus berikut:
∑Eritrosit =  n x 10 . sel/mm 3
Total leukosit dihitung dengan cara menghisap  darah  menggunakan  pipet Thoma  leukosit  sampai  skala  0.5 kemudian ditambah larutan Turk’s sampai skala  11.  Digoyangkan  selama  3-5  menit hingga  homogen,  kemudian  empat  tetes pertama  dibuang.  Selanjutnya  diteteskan di haemocytometer dan  ditutup  dengan cover  glass .  Kemudian  diamati  di  bawah mikroskop binokular dengan pembesaran 400  kali,  leukosit  dihitung  pada  empat kotak besar di bagian sudut kiri dan kanan atas  serta  pada  sudut  kiri  dan  kanan bawah.  Lalu  dihitung  menggunakan rumus:
∑Leukosit =  n x 500 sel/mm 3 Perhitungan leukosit
dapat dilakukan dengan membuat preparat ulas. Pada kaca preparat yang telah dibersihkan dengan  etanol,  diletakan  setetes  darah, kemudian darah tersebut digeser ke arah kanan sehingga darah menyebar sepanjang kaca preparat. Setelah dikeringkan, preparat ulas darah diwarnai dengan  larutan  giemsa  (Anderson  dan Siwick, 2017).
Pengamatan  aktivitas  dan  indeks fagositosis dilakukan dengan menyiapkan preparat ulas darah dari sampel darah 50 µl  dicampur  dengan  50  µl  bakteri A. hydrophila dan ditambahkan 250 µl PBS. Kemudian  dihomogenkan  menggunakan vortex  dan  diinkubasi  selama  20  menit. Pereparat  ulas  dikeringkan  selama  20 menit,  selanjutnya  diwarnai  dengan larutan  giemsa  dan  diamati  di  bawah miksroskop binokular dengan perbesaran 400 kali.

## Survival Rate (SR)
Kelangsungan hidup ( Survival Rate ) benih  ikan  nila  dapat  dihitung  dengan rumus berikut (Effendi, 2004) :
SR= 89 8: x 100%
Keterangan: SR  =  Tingkat kelangsungan hidup (%) Nt  =  Jumlah  ikan  yang  hidup  pada  akhir pemeliharaan (ekor)
Relative Percent Survival (RPS) benih ikan  nila  dihitung  menggunakan  rumus menurut Effendi (2004):
RPS= <1 − >? >@ x 100%A Keterangan: RPS = Relative percent survival (%) Mn  =  Mortalitas pada perlakuan N (%) Mk  =  Mortalitas  pada  perlakuan  kontrol positif (%)

## Kualitas Air
Parameter  kualitas  air  yang  akan diukur  adalah dissolved  oxygen (DO), suhu,  dan  pH.  Pengukuran  kualitas  air dilakukan  pada  awal  pemeliharaan  dan akhir pemeliharaan.

## Analisis Data
Data  hasil  penelitian  dinyatakan dalam  bentuk  nilai  rata-rata  ±  standar deviasi.  Setelah  itu  data  zona  hambat, hematologi  ikan  (total  leukosit,  total eritrosit, diferensial leukosit, dan aktivitas fagositosis), Relative Percent Survival , dan Survival  Rate dianalisis  uji  ANOVA  dan dilanjutkan  dengan  uji  Duncan  untuk melihat perbedaan nyata antar perlakuan. Jika  tidak  beda  nyata  antar  perlakuan maka  dilakukan  uji  lanjut  menggunakan uji repetead  measures ANOVA  untuk melihat
pengaruh pada waktu pengamatan. Sedangkan pada kualitas air dianalisis  secara  deskriptif  dan  gejala klinis dianalisis menggunakan skoring.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Gambaran Darah Total Leukosit
Gambar 1.  Nilai rata-rata leukosit (x10 4 sel/mm 3 ) benih ikan nila.
Menurut  Hartika et  al. (2014), jumlah setiap mm 3 pada ikan nila normal berkisar  3,2-14,6  x10 4 sel/mm 3 .  Setelah infeksi bakteri A. hydrophila konsentrasi 0 ppm dan konsentrasi 50 ppm mengalami penurunan.  Hal  ini  diduga  karena  pada konsentrasi 0 mg tidak diberikan ekstrak daun  kelor,  sedangkan  pada  konsentrasi 50  mg  yang  digunakan  tersebut  belum bisa untuk mencegah adanya infeksi dari
bakteri A.  hydrophilla dan  belum  dapat merespon adanya benda asing yang masuk ke dalam tubuh ikan. Menurut Nuryati et al. (2010), penurunan jumlah leukosit ini dapat disebabkan karena adanya gangguan  pada  fungsi  ginjal  dan  limpa dalam  memproduksi  leukosit  yang disebabkan  oleh  infeksi  penyakit  atau patogen.
3,10 ± 0,86a 3,16 ±0, 16 a 3,03 ±0, 90 a 3,15 ± 0,86a 6,73 ± 0,11b 5,38 ± 0,13b 3,13 ± 0,57a 7,78 ± 0,95bc 9,20 ± 0,11c 3,1 ±0, 50 a 8,90 ±0, 17 c 9,00 ±0, 10 c 0,00 2,00 4,00 6,00 8,00 10,00 12,00 Sebelum Perlakuan Setelah Perlakuan Setelah U.Tantang To ta l L euk os it ( × 104 sel/m m 3) Pengamatan Dosis ekstrak daun kelor 0 mg Dosis ekstrak daun kelor 50 mg
Dosis ekstrak daun kelor 75 mg
Dosis ekstrak daun kelor 100 mg
Gambar 2.  Nilai rata-rata sel darah merah (x10 6 sel/mm 3 ) benih ikan nila.
Menurut  Hartika et  al .  (2014), jumlah  kisaran  normal  ikan  nila  yaitu berkisar 0,02-3,00x10 6 sel/mm 3 . Sel darah merah benih nila mengalami peningkatan pada masing-masing konsentrasi pemberian  ekstrak,  namun  masih  dalam kisaran yang normal. Hal ini terjadi karena bahan  aktif  dalam  ekstrak  daun  kelor dapat  meningkatkan  daya  tahan  tubuh ikan.  Sesuai  dengan  pernyataan  Arora et al . (2013), daun kelor memilki kandungan flavonoid,  dan  saponin.  Kandungan flavonoid memiliki peran sebagai
antioksidan  dan  mampu  menghentikan reaksi  berantai  radikal  bebas,  sedangkan senyawa  saponin  berfungsi  sebagai  agen imunostimulan (Bamishaiye et al ., 2011).
Pasca infeksi bakteri pada konsentrasi  0  mg  dan  100  mg,  jumlah eritrosit  mengalami  penurunan  karena adanya  pendaharan  akibat  infeksi A. hydrophilla ,  yang  merusak  organ  luar sehingga  menimbulkan  luka.  Menurut Dangeubun  dan  Metungun  (2017),  ikan yang tidak sehat seperti terluka dan terjadi pendarahan  akan  mengalami  penurunan jumlah  eritrosit  dan  mengakibatkan  ikan mengalami  stres  karena  tubuh  melawan patogen.

## Diferensial Leukosit
Diferensial  leukosit  yang  diamati yaitu limfosit, neutrofil dan monosit. Hasil pengamatan  diferensial  leukosit  adalah sebagai berikut:
Tabel 1.   Hasil pengamatan limfosit. Pengamatan Limfosit Dosis Ekstrak Daun Kelor 0 mg 50 mg 75 mg 100 mg Sebelum  Pemberian  Ekstrak Daun Kelor 82,6±2,0 a % 82,6±1,52 a % 82,3±1,15 a % 82,3±3,2 a % Setelah  Pemberian  Ekstrak Daun Kelor 82,3±2,30 a % 84,3±2,30 a % 85±1 a % 86±1,7 a % Setelah U. Tantang 67,6±2,51 a % 79±2 b % 78±1 b % 78.6±1,52 b %
Tabel 2.   Hasil pengamatan neutrofil.
Pengamatan Neutrofil Dosis Ekstrak Daun Kelor 0 mg 50 mg 75 mg 100 mg Sebelum Pemberian Ekstrak Daun Kelor 13±1,73 a % 13±1 a % 12,6±2,08 a %
12,6±3,21 a % Setelah  Pemberian  Ekstrak Daun Kelor 12,6±1,15 a % 12±1,73 a % 12,3±0,57 a % 12±3 a % Setelah U. Tantang 22,3±1,52 b % 15,6±1,15 a % 16,3±1,52 a % 15,6±1,1 a %
1.03 ±0. 14 a 1.03 ±.1 0 a 1.01 ±0. 9 a 1.03 ±0. 16 a 1.51 ±0. 24 b 1.52 ±0. 39 b 1.03 ±0. 60 a 1.61 ±0. 26 b 1.67 ±0. 26 b 1.03 ±.0 .1 0 a 1.73 ±0. 24 b 1.64 ±0. 22 b 0,00 0,50 1,00 1,50 2,00 2,50 3,00 Sebelum Pelakuan Setelah Perlakuan Setelah U.tantang To ta l E rit ro sit ( × 106 sel/m m 3) Pengamatan dosis ekstrak daun kelor 0 mg dosis ekstrak daun kelor 50 mg dosis ekstrak daun kelor 75 mg
dosis ekstrak daun kelor 100 mg

## Tabel 3. Hasil pengamatan monosit.
Pengamatan Monosit Dosis Ekstrak Daun Kelor 0 mg 50 mg 75 mg 100 mg Sebelum  Pemberian  Ekstrak Daun Kelor 4,33±0,57 a % 4±1 a % 4,33±0,57 a % 4,66±0,57 a % Setelah  Pemberian  Ekstrak Daun Kelor 4,33±1,15 a % 3,36±0,57 a % 4,33±1,52 a % 3,66±1,15 a % Setelah U.Tantang 10±1 b % 5,33±1,15 a % 5,66±0,57 a % 5,66±2,08 a %
Hasil  uji  ANOVA  diferensial  leukosit sebelum  dan  setelah  pemberian  ekstrak daun  kelor  menunjukkan  tidak  terdapat pengaruh  nyata  terhadap  limfosit, neutrofil, dan monosit. sedangkan setelah uji tantang neutrofil dan monosit di dosis 0 mg berbeda nyata dengan dosis 50 mg, 75 mg, dan 100 mg. Pada limfosit setelah uji  tantang  dosis  50  mg  berbeda  nyata dengan  dosis  0  mg, 75 mg  dan  100  mg. Menurut  Hardi et  al. (2011),  kisaran normal persentase limfosit pada ikan nila yaitu  68-86%.  Setelah  diberi  perlakuan ekstrak  daun  kelor  dari  masing-masing konsentrasi  yang  digunakan  persentase limfosit mengalami peningkatan. Menurut Rustikawati  (2011),  peningkatan  jumlah sel  limfosit  dalam  sel  darah  putih disebabkan  masuknya  senyawa  yang berperan sebagai imunostimulan. Setelah diinfeksi  bakteri,  sel  limfosit  akan mengalami  penurunan  karena  antibodi yang terbentuk digunakan untuk menyerang  bakteri.  Menurut  Rustikawati
(2012), penurunan limfosit terjadi karena sebagian besar dari limfosit berpindah ke sirkulasi  lain,  berkompetisi  ke  dalam jaringan tubuh dimana terdapat peradangan.
Pada  Tabel  2,  rata-rata  nilai neutrofil  awal  ikan  nila  sebelum  diberi ekstrak berkisar antara 12.6-13.1%, pada pemberian  ekstrak  daun  kelor  dengan konsentrasi 50 mg jumlah neutrofil benih ikan nila yaitu 12%, pada konsentrasi 75 dan  100  mg  yaitu  12.3% dan  12%. Menurut  Hardi et  al. (2011),  kisaran persentase neutrofil normal pada ikan nila adalah 10-18.1%. Pada sel neutrofil yang diberi  ekstrak  daun  kelor  memiliki  nilai persentase  yang  lebih  kecil  dari  sebelum diberikan  ekstrak  daun  kelor.  Hal  ini
disebabkan karena  sel  neutrofil  berperan dalam penghancuran benda asing melalui fagositosis.  Menurut  Ilmayati  (2015), neutrofil berperan hanya dalam merespon kekebalan  tubuh  terhadap  serangan  dari organisme  patogen  dan  mempunyai  sifat fagositik.  Pada  pasca  infeksi  bakteri A. hydrophila neutrofil mengalami peningkatan  karena  adanya  aktivitas menyerang patogen yang masuk ke dalam tubuh  sehingga  menunjukkan  terjadinya proses  fagositosis.  Menurut  Harikrishnan et  al. (2003),  neutrofil  akan  meningkat jika  terjadi  infeksi  dan  berperan  sebagai pertahanan dalam tubuh.
Pada Tabel 3, rata-rata nilai monosit ikan  nila  sebelum  diberi  ekstrak  yaitu berkisar  antara 4-4.,6%,  pada  pemberian ekstrak daun kelor dengan konsentrasi 50 ppm jumlah monosit benih ikan nila yaitu 4.33%, pada konsentrasi 75 dan 100 ppm yaitu 3.36% dan 4.33%. Menurut Hardi et al. (2011), kisaran  normal monosit  pada ikan nila yaitu 3.9-5.9% dari total jumlah sel darah putih.
Monosit  berfungsi  hampir  sama dengan neutrofil yaitu untuk
menghancurkan benda asing yang masuk ke  dalam  tubuh,  namun  aktivitas  fagosit dari  sel  monosit  ini  relatif  lama (Suhermanto et  al .,  2011),  sedangkan pada  saat  pasca  infeksi  bakteri A. hyrophila sel monosit mengalami peningkatan. Meningkatnya persentase sel monosit  ini  disebabkan  karena  ikan mengalami  infeksi  oleh  bakteri  tersebut. Menurut Utami et al. (2013), infeksi yang masuk  ke  dalam  tubuh  merangsang  sel darah  putih  untuk  memproduksi  sel monosit lebih banyak.

## Aktivitas dan Indeks Fagositosis
Gambar 3.  Nilai rata-rata aktivitas fagositosis (%) benih nila.
Gambar 4. Nilai rata-rata indeks fagositosis (%) benih nila.
Pada  perlakuan  yang  diberikan ekstrak  daun  kelor menunjukkan  adanya peningkatan sistem imun pada benih nila. Pengaruh dari pemberian ekstrak tersebut dapat  meningkatkan  aktivitas  sel  fagosit. Hal  ini  sesuai  dengan  Pratama  (2017) yang  menyatakan  bahwa  ekstrak  daun kelor  dapat  meningkatkan  aktivitas fagositosis  karena  kandungan  pada ekstrak  daun  kelor  memiliki  aktivitas antibakteri.  Sedangkan  pada  indeks fagositosis  mengalami  peningkatan  pada
pasca  infeksi  bakteri A.  hydrophila . Menurut Qomariyah et al . (2017), adanya peningkatan  kekebalan  tubuh  ikan  dapat dilihat dari peningkatan indeks fagositosis.
Survival  Rate (SR)  dan Relative Percent Survival (RPS) Berikut data Survival Rate (SR) dan Relative  Percent  Survival (RPS)  masing- masing perlakuan di Tabel 4:
Tabel 4.   Hasil pengamatan survival rate dan relative percent survival . Konsentrasi SR (%) RPS (%) 0 ppm 43,33±11,5 - 50 ppm 76,66±5,77 55,56±19,2 75 ppm 83,33±5,77 72,22±9,62 100 ppm 73,33±15,2 55,55±25,4 Menurut  Nur et  al .  (2004),  kisaran normal  untuk  RPS  yaitu  >60%. Berdasarkan hasil uji in vitro, konsentrasi yang baik untuk menghambat perkembangan
bakteri
Aeromonas hyrophilla adalah  75  ppm,  karena  hasil persentase  kelangsungan  hidup  pada konsentrasi  75  ppm  lebih  besar
31 ±6, 08 a 31 ±1 a 29 ±5, 29 a 30,6 ±5, 85 a 56,3 ±6, 65 b 46,3 ±6, 65 b 32 ±3 a 65,6 ±5, 85 b 55 ±3, 60 b 32,3 ±4, 72 a 67,3 ±11, 06 b 53 ±3, 60 b 0,00 10,00 20,00 30,00 40,00 50,00 60,00 70,00 80,00 Sebelum Perlakuan Setelah Perlakuan Setelah U.Tantang A kt iv it as f ag os it os is ( % ) Pengamatan dosis ekstrak daun kelor 0 mg dosis ekstrak daun kelor 50 mg dosis ekstrak daun kelor 75 mg dosis ekstrak daun kelor 100 mg 2,27 ±0, 67 a 2,27 ±0, 03 b 2,25 ±0, 37 a 2,27 ±0, 40 a 2,25 ±0, 30 a 2,31 ±0, 54 a 2,26 ±0, 16 a 2,28 ±0, 26 ab 2,50 ±0, 12 a 2,26 ±0, 44 a 2,28 ±0, 26 ab 2,67 ±0, 21 a 2,00 2,10 2,20 2,30 2,40 2,50 2,60 2,70 2,80 Sebelum Perlakuan Setelah Perlakuan Setelah U.Tantang Ind ek s fa go sit os is ( % ) Pengamatan dosis ektrak daun kelor 0 mg dosis ektrak daun kelor 50 mg dosis ektrak daun kelor 75 mg dosis ektrak daun kelor 100 mg
dibandingkan dengan konsentrasi 50 dan 100  ppm.  Uji  statistik  dengan  analisis variansi  (ANOVA)  menunjukkan  ekstrak daun  kelor  berpengaruh  nyata  terhadap Survival rate dan Relative Percent Survival ikan  uji.  Setelah  diuji  lanjut  dengan  uji Duncan menunjukkan konsentrasi 0 ppm berbeda nyata dengan perlakuan lainnya.

## Gejala Klinis
Gejala  klinis  pada  ikan  uji  yang diinfeksi A.  hydrophila ditandai  dengan perubahan  tingkah  laku  setelah  infeksi. Perubahan  tingkah  laku  ditandai  dengan ikan  berenang  pasif,  tidak  nafsu  makan, berdiam di dasar akuarium, dan berenang
mendekati  batu  aerasi.  Selain  gejala tingkah  laku,  ikan  uji  juga  mengalami perubahan  organ  eksternal  dan  internal meliputi sirip menggeripis, sisik melupas, timbulnya warna kemerahan,  tubuh ikan menjadi gelap, terjadinya haemoragi pada insang,  dan  mengalami  pemucatan  dan pembengkakan  pada  organ  internal  ikan uji.  Hal  ini  sesuai  dengan  Yulianto et  al. (2013)  yang  menyatakan  bahwa  ikan yang  terinfeksi  bakteri A.  hydrophila memiliki  gejala  klinis  berupa  timbulnya hiperemia  (tanda  kemerahan),  yang selanjutnya akan muncul peradangan luka borok  yang  melebar,  dan  mengalami pembengkakan  pada  bagian  internal seperti limpa, hati, dan lambung.
Gambar 5.  Nilai rata-rata skoring gejala klinis benih ikan nila yang diinfeksi A. hydrophila . Skor 1  (kurang  nafsu  makan),  skor 2  (bercak merah, renang  lambat),  skor 3 (sisik melupas, sirp menggeripis, tubuh menjadi gelap), skor 4 (ikan mengalami kematian).
Kualitas Air Berikut  ini  kualitas  air  yang  diukur selama penelitian (Tabel 5). Tabel 5. Hasil pengamatan kualitas air. Parameter Hari Pengamatan Nilai Optimum Awal Akhir Suhu ( o C) 26,9-27,5 27,4-27,8 23-34* pH 6-7,8 6,3-7,9 5-8,9* DO (mg/l) 4-4,5 4,2-4,7 >3**
Sumber: *Khairuman dan Amri (2012); **Siniwoko (2013)
Hasil pengukuran kualitas air selama penelitian  didapatkan  kisaran  nilai  suhu pada awal pemeliharaan 26,9-27,5 ° C dan pada akhir pemeliharaan 27,4-27,8 ° C, pH di awal pemeliharaan yaitu 6-7,8 dan pada akhir  pemeliharaan  6,3-7,9,  sedangkan DO di awal pemeliharaan 4-4,5 mg/L dan pada  akhir  akhir  pemeliharaan  berkisar antara  4,2-4,7mg/L.  Menurut  Khairuman dan  Amri  (2012),  kisaran  toleransi
kualitas air untuk ikan nila yaitu suhu 23- 34 ° C dan pH berkisar 5-8,9. Kandungan oksigen terlarut selama pemeliharaan ikan nila sebesar >3 mg/L (Siniwoko, 2013).

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang telah  dilakukan,  pemberian  ekstrak  daun kelor  secara  injeksi  pada  benih  nila
33,3 20 20 16,6 50 26,6 10 20 26,7 23,3 16,6 26,6 43,3 23,4 16,7 10 0,00 10,00 20,00 30,00 40,00 50,00 60,00 0 mg 50 mg 75 mg 100 mg % R at a- ra ta I nd iv id u Perlakuan skor 1 skor2 skor 3 skor 4
berpengaruh  nyata  pada  total  leukosit, total  eritrosit,  aktivitas  dan  indeks fagositosis.  Sedangkan  pada  parameter diferensial  leukosit  tidak  berpengaruh nyata.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terimakasih kepada  semua  pihak  yang  telah membantu kelancaran penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Anderson, D.P. dan Siwick, A., 2017. Basic Hematology  and  Serology  for  Fish Health  Programs .  Asia  Fisheries Society. Manila. 96 pp. Arora, D.S., Jemimah, G.O., and Harpreet, K.,  2013.  Bioprospecting  of moringa ( Moringaceae ). Journal of Pharmacognosy and Phytocemistry , 1(6),  pp.  190-193.  http://www. phytojournal.com/vol1Issue6/Issu e_march_2013/15.pdf
Bamishaiye,  E.I.,  Olayemi,  F.F.,  Awagu,
E.F.  and  Bamshaiye,  O.M.,  2011. Proximate  and  phytochemical composition  of  Moringa  oleifera leaves  at  three  stages  of maturation. Advance  Journal  of Food Science and Technology , 3 (4), pp.233-237. http://maxwellsci. com/print/ajfst/v3-233-237.pdf, Bijanti, R., 2005. Hematologi ikan (teknik pengambilan darah dan pemeriksaan  hematologi  ikan). Buku Ajar. Bagian Ilmu Kedokteran Dasar Veteriner, Fakultas Kedokteran Hewan. Universitas  Airlangga.  Surabaya. P. 22. Dangeubun, J.L. dan Metungun, C., 2017. Hematology of Vibrio alginolyticus infected humpback grouper Cromileptes altivelis, under treatment  of Alstonia  acuminata shoot extract. AACL Bioflux , 10(2), pp.  274-284. http://www.bioflux. com.ro/docs/2017.274-284.pdf.
Effendi,  I.,  2004.  Pengantar  Akuakultur. Penebar Swadaya, Jakarta, p.108.
Farika,  E.Y.,  Suratma,  N.A.  dan Damriyasa,  I.M.,  2014.  Ekstrak daun  kelor  (Moringa  oleifera) sebagai pengendali infestasi Argulus  sp.  pada  ikan  komet (Carassius auratus auratus). Jurnal Ilmu dan Kesehatan Hewan , 2 (1), pp.1-11. https://ojs.unud.ac. id/index.php/jikh/article/downlo ad/13531/9216 Hardi,  E.H.,  Sukenda,  Harris,  E.,  dan Lusiastuti, A.M., 2011. Karakteristik  dan  patogenitas
Streptococcus  agalactiae tipe  ß- hemolitik dan non-hemolitik pada ikan  nila. Jurnal  Veteriner , 12 (2), pp.  152-164.  https://ojs.unud.ac. id/index.php/jvet/article/view/34
96/2529. Harikrishnan,  R.,  Rani,  M.N.  dan Balasundaram, C., 2003. Hematological  and  biochemical parameters  in  common  carp, Cyprinus  carpio,  following  herbal treatment for Aeromonas hydrophila  infection. Aquaculture , 221 (1-4),  pp.41-50.  https://doi. org/10.1016/S0044-8486(03)000 23-1.
Hartika, R., Mustahal, M. dan Putra, A.N., 2014.  Gambaran  darah  ikan  nila (Oreochromis  niloticus)  dengan penambahan  dosis  prebiotik  yang berbeda  dalam  pakan. Jurnal Perikanan  dan  Kelautan , 4 (4). http://dx.doi.org/10.33512/jpk.v 4i4.174. Ilmayati,  M.,  2015. Differentiation  Of leukocytes
of nile tilapia
(Oreochromis  niloticus)  with  feed consist of noni fruit flour (Morinda citrifolia  L). Faculty  of  Fisheries and  Marine  Science  University  of Riau Pekanbaru, p 12.
Khairuman,  H.  dan  Amri,  K.,  2012. Pembesaran nila di kolam air deras . PT  Agro  Media  Pustaka,  Jakarta, pp. 13 – 25.
Nur,  I.,  Sukenda,  dan  Dana,  D.,  2004. Ketahanan  benih  ikan  nila  gift ( Oreochromis  niloticus  Linn) dari hasil  induk  yang  diberi  vaksin
terhadap infeksi buatan Streptococus iniae . Jurnal Akuakultur Indonesia , 3 (1), pp. 37-
43. Nuryati, S., Maswan, N.A., Alimuddin, S., Sumantadinata, K., Pasaribu, F.H., Soejoeno,  R.D.  dan  Santika,  A., 2010.  Gambaran  darah  ikan  mas setelah  divaksinasi  dengan vaksin DNA dan diuji tantang dengan koi herpes  virus. Jurnal  Akuakultur Indonesia , 9 (1),  pp.9-15.  https:// doi.org/10.19027/jai.9.9-15.
Pratama, D., 2017. Pengaruh Ekstrak Daun Kelor (Moringa Oleifera) Terhadap Aktivitas  Lokomotor  Dan  Motilitas Larva Zebrafish (Danio Rerio) Yang
Dipapar  Dengan  Etanol (Doctoral dissertation, Universitas Brawijaya). Qomariyah,  N.,  Suprapto,  H.,  dan
Sudarno, 2017. Pemberian vaksin formalin  killed  cell  (FKC )  Vibrio alginolitycus untuk  meningkatkan survival  rate  (SR),  titer  antibodi dan  fagositosis  leukosit  pada kerapu  cantang  ( Epinephelus sp.) setelah  uji  tantang  bakteri Vibrio alginolitycus . Jurnal Ilmiah Perikanan dan Kelautan , 9(1), pp. 15-24. http://dx.doi.org/10. 20473/jipk.v9i1.7625. Raa, J., 1992. The use of immunostimulants  to  increase resistance  of  aquatic  organism  to microbial  infections. Diseases  in Asian aquaculture , pp.39-50. https://ci.nii.ac.jp/naid/1002984
4043/
Rustikawati,  I.,  2011.  Efektifitas  ekstrak Sargassum sp. dalam meningkatkan  imunitas  ikan  nila ( Oreochromis  niloticus )  terhadap serangan  Streptocciasis. Tesis . Program  Pascasarjana  Universitas Padjadjaran  Bandung,  Bandung. 84 p.
Rustikawati,  I.,  2012.  Efektivitas  ekstrak Sargassum sp. terhadap diferensiasi  leukosit  ikan  nila ( Oreochromis niloticus ) yang diinfeksi Streptococcus iniae .
Jurnal  Akuatika ,  3(2),  pp.  125– 134. http://jurnal.unpad.ac.id/ akuatika/article/download/1609/ 1601.
Siniwoko, E.D., 2013. Budidaya dan Bisnis Ikan  Nila .  PT  Gramedia  Pustaka, Jakarta, 62 p.
Suhermanto,  A.,  Andayani,  S.  dan
Maftuch,  M.,  2011.  Pemberian total fenol teripang pasir (holothuria scabra) untuk meningkatkan leukosit dan diferensial  leukosit  ikan  mas (cyprinus  carpio)  yang  diinfeksi bakteri  Aeromonas  Hydrophila. Jurnal Kelautan: Indonesian Journal  of  Marine  Science  and Technology , 4 (2),  pp.150-157. https://doi.org/10.21107/jk.v4i2. 879.
Trianto,  A.,  Nirwani.,  Susanti,  O., Maesaroh,  D.,  dan  Radjasa,  O.K., 2019. The bioactivity of bacterium and fungi living associate with the sponge Reniera sp.  against multidrug-resistant Staphylococcus aureus and Escherichia coli. Jurnal Biodiversitas, 4  (8),  pp.  2302- 2307.  https://doi.org/10.13057/ BIODIV%2FD200827. Utami, D.T., Prayitno, S.B., Hastuti, S. dan Santika,  A.,  2013.  Gambaran parameter Hematologis pada ikan nila  (Oreochromis  niloticus)  yang diberi  vaksin  DNA  Streptococcus iniae  dengan  dosis  yang  berbeda.
Journal of Aquaculture Management And Technology , pp.7-
20.  https://ejournal3.undip.ac.id/ index.php/jamt/article/view/480 3/4635.
Yulianto, R., Adiputra, Y.T., dan Agus, S., 2013.  Perubahan  jaringan  organ ikan komet ( Carrasius auratus ) yang diinfeksi
dengan
Aeromonas hydrophila . Jurnal  Rekayasa  dan Teknologi  Budidaya  Perairan , 2 (1), pp. 197–204. http://jurnal.fp.unila. ac.id/index.php/bdpi/article/downl oad/227/226.