Uji Aktivitas  Toksisitas Dan  Antimikroba   Flavonoid  Total Daun Benalu (Dendrophthoe pentandra (L) Miq) Dari Pohon Glodokan (Polyalthia longifolia)
Aliyah Fahmi* 1 ,  Rumondang Bulan 2 , Hamonangan N 2
1 ,2 Program Studi S2 Kimia, FMIPA, Universitas Sumatera Utara, Jl. Dr. Mansyur, Medan, Sumatera Utara, 20155 e-mail: * 1 Faradisty@yahoo.com
Diterima: 02 Mei 2018 / Disetujui: 20 Mei 2018 / Dipublikasi online: 30 Juni 2018 https://doi.org/10.22437/chp.v3i1.4733

## ABSTRAK
Penelitian  mengenai  uji  aktivitas  toksisitas  dan  antimikroba  flavonoid  total  daun benalu (Dendrophthoe pentandra (L) Miq) dari pohon glodokan (Polyalthia longifolia) telah dilakukan. Penelitian  ini bertujuan untuk  mengetahui  aktivitas  toksisitas dari flavonoid  total  daun  benalu  pohon  glodokan  berdasarkan  metode  Brine  Shrimp Lethality  Test  (BSLT)    menggunakan  larva  udang  Artemia  salina  Leach  diperoleh Lethal  Concentration  (LC50)  sebesar  30.06  mg/L  yang  berarti  memiliki  aktivitas toksisitas  yang  toksik  sementara  untuk  aktivitas  antimikroba  dari  flavonoid  total daun  benalu  pohon  glodokan  dengan  Metode  Difusi  Agar  diperoleh  diameter  zona hambat pada Streptococcus  mutans pada konsentrasi sampel flavonoid total pohon glodokan 3%, 6% dan 9 % adalah 6; 9 dan 17.25 mm, pada Escherichia coli adalah 3.55; 4.25 dan 9.15 mm dan pada Candida  albicans adalah 8.30; 4 dan 5.30 mm dimana semakin besar konsentrasi maka daya hambat pada S. mutans dan E. coli semakin  besar  namun  pada  C.  albicans  kurang  mempengaruhi  tetapi  memiliki aktivitas hambat yang baik sehingga efektif dikembangkan sebagai zat antimikroba.
Kata Kunci: Daun Glodokan, antimikroba, toksisitas, difusi agar and BSLT.

## ABSTRACT
Researches  were  based  on  antimicrobial  and  toxicity  tests  of  flavonoid  total Dendrophthoe  pentandra  (L)  Miq  from  false  ashoke  tree  (Polyalthia  longifolia)  have been done. This study aims  to determine  the activity of  toxicity of total flavonoid of Dendrophthoe  pentandra  (L)  Miq  as  mistletoe  from  false  ashoke  tree  (P.  longifolia) based  on  Brine  Shrimp  Lethality  Test  (BSLT)  method  using  Artemia  salina  Leach shrimp  larvae  obtained  Lethal  Concentration  (LC 50 )  of  30.06  mg  /  L  which  means having  strong  toxic  activity.  Antimicrobial  test  of  flavonoid  total  had  used  the diffusion method in order to obtain the inhibit zone diameter on Streptococcus mutans at  the  total  flavonoids  concentration  of  3%,  6%  and  9%  were  6;  9  and  17.25  mm, Escherichia coli was 3.55; 4.25 and 9.15 mm and at Candida albicans was 8.30; 4 and 5.30 mm where  S. mutans and  E. Coli were greater but  C. albicans less affect but  still  had  good  inhibitory  activity  so  they  are  effective  to  be  developed  as antimicrobial agents.
Key words: False Ashoke leaves, antimicrobial, toxicity, agar diffusion and BSLT

## PENDAHULUAN
Sebagai  negara  mega  biodiversitas,  Indonesia  memiliki  kekayaan  akan keanekaragaman  hayati.  Sejumlah  penelitian  dilakukan  untuk  meneliti  potensi
tumbuhan  di  Indonesia  sebagai  bahan  baku  obat.  Terdapat  kurang  lebih  7000 jenis  tumbuhan  yang  termasuk  tumbuhan  obat      dari  ±  28000  jenis  tumbuhan yang dapat ditemukan di Indonesia. Tumbuhan obat adalah kelompok tumbuhan yang  dapat  digunakan  sebagai  obat  atau  bahan  baku  obat.  Pemanfaatan tumbuhan  obat  biasanya  dalam  bentuk  simplisia  dari  bagian  tumbuhan  seperti akar, batang, daun, dan buah atau biji (Fatmawati, 2008).
Tumbuhan  benalu  juga  sudah  dikenal  sebagai  tumbuhan  obat. Benalu kopi biasanya  digunakan  untuk  mengobati  penyakit  campak.  Benalu  yang  menempel pada  tumbuhan  jeruk  nipis  dimanfaatkan  sebagai  ramuan  obat  untuk  penyakit amandel,  sementara  benalu  teh  dan  benalu  mangga  dilaporkan  dapat  digunakan sebagai  obat  kanker  (Purnomo,  2000).  Efek  klinis  pada  benalu  diduga  karena adanya  senyawa  bioaktif  yang  terkandung  di  dalam  benalu  berupa  asam  amino, karbohidrat,  flavonoid,  alkaloid,  dan  saponin  yang  dapat  menetralkan  pengaruh bahan toksik sehingga mengurangi kerusakan sel (Pitoyo, 1996).
Benalu pada glodokan dapat kita temui hidup menempel pada ranting pohon glodokan.  Pohon  glodokan  tersebut  banyak  kita  temui  sebagai  tanaman  untuk peredam polusi suara dan memiliki khasiat sebagai tanaman obat untuk penyakit kulit,  demam,  hipertensi  dan  helmenthiasis  (Rastogi,  1997).  Beberapa  penelitian terbaru  menunjukkan  pohon  glodokan  berfungsi  sebagai  obat  antidiabetes (Aparna, 2011), anti-ulcer (Malairajan, 2008) dan efektif untuk sel kanker Hela dan sel MCF-7 (Santhepete, 2010). Untuk benalu dari pohon glodokan belum ada yang menguji aktivitasnya sebagai tanaman obat. Oleh karena itu Penulis ingin menguji aktivitas  toksisitas  dan  antimikroba  dari  flavonoid  total  daun  benalu  pohon glodokan  serta  skrining  fitokimianya.  Diketahui  pohon  glodokan  termasuk  family dari Annonaceae yang merupakan family dari pohon sirsak dan pohon nona yang telah  di  uji  memiliki  aktivitas  antimikroba  dan  toksisitas  yang  tinggi  karena memiliki  kandungan  senyawa  –  senyawa  aktif  yang  bersifat  sebagai  obat fitofarmaka.

## METODOLOGI PENELITIAN
Metode  penelitian  bersifat  eksperimental  dimana  dilakukan  di  laboratorium menggunakan peralatan antara lain: Peralatan gelas pyrex, botol gelap, botol vial, blender, kertas Whatman, kapas, plat tetes, pisau, penangas air, rotary evaporator, neraca  analitik,  statif  dan  klem,  wadah  air  laut  buatan,  inkubator,  autoklaf, bunsen, jarum ose, karet hisap, rak tabung, cotton bud, thermometer, mikro pipet, spatula,  aluminium  foil,  jangka  sorong  dan  seal  wrap.  Bahan-bahan  yang
digunakan antara lain: daun benalu glodokan, metanol pa Merck, pereaksi Mayer, pereaksi Dragondorf, pereaksi Wagner/ Bouchardat, Mg pa Merck, HCl p.a Merck, cerrium  sulfat,  asam  asetat  anhidrat  p.a  Merck,  aquadest,  H2SO4  p.a  Merck, FeCl3  pa  Merck,  DMSO  pa  Merck,  garam  laut  kemasan,  Kista  Artemia  salina, nutrient agar (NA) Difco, nutrient broth (NB) Difco, kultur E. coli, kultur S. Mutans, C. Albicans, Mueller Hinton agar (MHA).

## Preparasi Sampel
Daun  benalu  pohon  glodokan  yang  tumbuh  di  sekitar  Perpustakaan  USU dikumpulkan secara purposif (tidak membandingkan dengan daerah lain) sebagai sampel. Daun benalu dibersihkan dan ditimbang selanjutnya di kering-anginkan. Setelah  kering,  sampel  dihaluskan  menggunakan  blender.  Kemudian  sebanyak 200  g serbuk  daun benalu  dimasukkan  ke  dalam  gelas  Erlenmeyer  ditambahkan dengan 1 L metanol. Dimaserasi selama 1x24 jam pada suhu kamar. Selanjutnya diambil maserat, ditambahkan metanol kembali pada ekstrak daun benalu sampai pelarut  berwarna  bening  kemudian  dikumpulkan  maserat  yang  telah  disaring, diuapkan  dengan  Rotary  Evaporator  pada  keadaan  vakum  sampai  diperoleh ekstrak  kental.  Ekstrak  kental  di  evaporasi  sampai  pelarut  menguap  sempurna dan diperoleh ekstrak pekat metanol daun benalu (Depkes RI, 2000). Selanjutnya ekstrak pekat daun benalu dilarutkan dengan etil asetat disaring kemudian filtrat diuapkan kembali sampai pelarut menguap sempurna sehingga diperoleh ekstrak etil asetat daun benalu yang kemudian dilarutan kembali dengan metanol sampai larut  sempurna  dan  di  partisi  dengan  n-heksana  terbentuk  dua  lapisan,  diambil lapisan bawah dan diuapkan sampai diperoleh flavonoid total.

## Uji Fitokimia
Preparasi  sampel  daun  benalu  segar.    Diambil  ±  100  gram  daun  benalu segar,  dibersihkan,  di  potong  kecil  dan  dimasukkan  ke  dalam  gelas  Erlenmeyer kemudian  di  tambahkan  metanol  ±  100  mL  dipanaskan  dengan  penangas  air sampai diperoleh ekstrak metanol kemudian didinginkan dan diambil filtratnya.
Uji alkaloid.  Sebanyak ± 5 tetes filtrat ekstrak metanol daun benalu masing- masing  diteteskan  pada  empat  tabung  reaksi.  Tabung  reaksi  pertama  ditetesi  2 tetes pereaksi Mayer (positif jika membentuk endapan putih atau keruh), Tabung reaksi kedua ditetesi 2 tetes pereaksi Dragendorf (positif jika membentuk endapan jingga),  Tabung  reaksi  ketiga  ditetesi  2  tetes  pereaksi  Wagner  (positif  jika membentuk  endapan  merah  coklat)  dan  tabung  reaksi  keempat  ditetesi  2  tetes
pereaksi Bouchardat (positif jika membentuk endapan merah).  Diamati perubahan yang terjadi (Harborne, 1987).
Uji  fenolik.    Sebanyak  ±  5  tetes  filtrat  ekstrak  metanol  daun  benalu diteteskan pada sebuah tabung reaksi kemudian ditambah masing-masing dengan 3  tetes  larutan  FeCl 3 1%  (positif  jika  membentuk  coklat  kehitaman).  Diamati perubahan yang terjadi (Harborne, 1987).
Uji  flavonoid.    Sebanyak  ±  5  tetes  filtrat  ekstrak  metanol  daun  benalu diteteskan  pada  sebuah  tabung  reaksi  dengan  ±    3  tetes  etil  asetat  ditambah  2 tetes  FeCl 3 1%  sehingga  terbentuk warna  hijau  sampai  coklat  kehitaman (positif membentuk  warna  hijau  sampai  coklat  kehitaman).  Diamati  perubahan  warna yang terjadi (Harborne, 1987).

## Uji Terpenoid dan Steroid
Uji Liebermann Bouchard.  Sebanyak ± 20 mL ekstrak metanol daun benalu dimasukkan  ke  dalam  gelas  beaker  kemudian  diuapkan  sampai  pelarut  habis kemudian  didinginkan  kemudian  ditetesi  ±  5  tetes  asetat  anhidrat  dan  ±  5  tetes asam sulfat pekat (positif terpenoid jika terbentuk warna merah kecoklatan sampai violet  dan  positif  steroid  jika  terbentuk  warna  hijau  sampai  biru).  Diamati perubahan yang terjadi (Harborne, 1987).
Uji plat tipis.  Sebanyak ± 3 mL ekstrak metanol daun benalu ditetesi pada plat  tipis  dipanaskan  pada  hotplate  di  tetesi  ±  2  tetes  asam  sulfat  pekat  (positif terpenoid jika terbentuk warna kemerahan). (Harborne, 1987)
Uji saponin.  Sebanyak ± 5 tetes ekstrak metanol daun benalu dimasukkan pada sebuah tabung reaksi kemudian dengan 20 mL aquadest. Filtrat didinginkan kemudian diguncang kuat selama 10 detik dan didiamkan selama 10 menit (positif jika terbentuk busa). Diamati perubahan yang terjadi. (Harborne, 1987)

## Uji Toksisitas dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
Persiapan  larva  udang.    Larutan  induk  wadah  disekat  dua  bagian,  diisi dengan 38 g garam laut dilarutkan dalam 1 L aquadest diperoleh air laut buatan. Sebanyak  20  mg  telur  Artemia  salina    dimasukkan  pada  bagian  sekat  yang tertutup  dan  sekat  yang  satu  dibiarkan  terbuka,  kemudian  diberi  lampu  diatas bagian  yang  terbuka  untuk  menarik  udang  Artemia  salina  menuju  bagian  yang terkena  cahaya  lampu  sehingga  terpisah  dari  cangkangnya.  Telur-telur  dari Artemia  salina  akan  menetas  menjadi  larva  dalam  waktu  24-48  jam  jam  dan digunakan  uji  toksisitas  dari  flavonoid  total  daun  benalu.  Dibuat  larutan  induk dengan  100  mg  flavonoid  total  daun  benalu  ditambah  3  tetes  DMSO,  dilarutkan
sampai  10  mL  dengan  air  laut  buatan  diperoleh  konsentrasi  larutan  induk  yaitu 10.000 mg/L kemudian diencerkan menjadi 3 konsentrasi yaitu 10,100 dan 1000 ppm.  Konsentrasi  0  ppm  sebagai  kontrol  negatif  dan  positif  dengan  penambahan DMSO. (McLaughlin, 1998)
Uji toksisitas.  Sebanyak 10 ekor larva dimasukkan ke dalam masing-masing tabung  reaksi  yang  telah  diisi  5  mL  larutan  ekstrak  pekat  daun  benalu  dengan konsentrasi  masing-masing  1000,100  dan  10  ppm.  Dibuat  tiga  pengulangan. Setelah 24 jam, diamati jumlah larva yang mati untuk tiap-tiap konsentrasi.

## Uji Antimikroba
Pembuatan  media  nutrient  agar  (NA).    Ditimbang  sebanyak  23  g  Nutrien agar  kemudian  dimasukkan  ke  dalam  gelas  Erlenmeyer  kemudian  disuspensi dengan aquadest hingga 1000 mL kemudian dipanaskan hingga mendidih sambil diaduk kemudian disterilkan dengan autoklaf pada suhu 121 0 C selama 15 menit. (Difco, 1997)
Pembuatan  media  nutrient  broth  (NB).    Ditimbang  sebanyak  4  g  Nutrien Broth  dimasukkan  ke  dalam  gelas  Erlenmeyer  kemudian  disuspensi  dengan aquadest hingga  1000  mL  kemudian  dipanaskan  hingga  mendidih  sambil  diaduk kemudian disterilkan dengan autoklaf pada suhu 121 0 C selama 15 menit (Difco, 1997).
Pembuatan  media  mueller  hinton  agar  (MHA).    Ditimbang  sebanyak  38  g serbuk  MHA  kemudian  dimasukkan  ke  dalam  gelas  Erlenmeyer  kemudian disuspensi  dengan  aquadest  hingga  1000  mL  kemudian  dipanaskan  hingga mendidih sambil diaduk sampai bahan larut sempurna. Ditutup gelas Erlenmeyer dengan kapas dan di seal kemudian disterilkan di autoklaf pada 121 0 C selama 15 menit. (Difco, 1997)
Pembuatan Stok Kultur.   Biakan mikroba  Streptococcus  mutans  dari strain utama diambil dengan jarum ose steril kemudian diinokulasikan pada permukaan media nutrient agar miring dengan cara menggores kemudian diinkubasi di dalam inkubator pada suhu 35 0 C selama 18-24 jam (Ditjen POM, 1995). Dilakukan hal yang sama dengan Escherichia Coli dan Candida albicans.
Penyiapan inokulum bakteri.  Koloni mikroba Streptococcus mutans diambil dari stok kultur menggunakan jarum ose steril kemudian disuspensi ke dalam 10 mL  media  nutrient  broth  steril  lalu  diinkubasi  pada  suhu  35  ±  2 0 C  sampai diperoleh kekeruhan dengan transmitan dengan alat spektrofotometer UV panjang
gelombang  580  nm  (Ditjen  POM,  1995).    Dilakukan  hal  yang  sama  pada Escherichia coli dan Candida albicans.
Pembuatan  larutan  uji.    Disiapkan  tiga  tabung  reaksi  untuk  persiapan konsentrasi larutan uji 3%,6% dan 9% dengan penambahan 60 µL ekstrak pekat ke dalam 2000 µL , 120 µL ekstrak pekat ke dalam 2000 µL  dan 180 µL ekstrak pekat ke dalam 2000 µL  Larutan DMSO.
Pengujian  aktivitas  antimikroba  dengan  difusi  agar.    Disiapkan    10  mL larutan Mc. Farland (10 8 CFU/mL) kemudian diambil Streptococcus mutans dengan jarum    ose  steril  kemudian  dimasukkan  ke  dalam  10  mL  aquadest  pada  tabung reaksi  kemudian  di  suspensi,  di  vortex  sampai  homogen  dan  ditutup  tabung dengan  kapas  dan  seal  wrap.Dioleskan  Streptococcus  mutans  pada  cawan  petri yang  berisi  MHA  dengan  steril  kemudian  dilubangi  MHA  pada  petri  yang  telah dioleskan  tersebut  dengan  lubang  yang  seragam  menggunakan  Cop  Borer kemudian dimasukkan 50 µL sampel uji dengan konsentrasi 3%,6%,9% dan DMSO sebagai  blanko  kemudian  ditutup  rapat  dengan  seal  wrap  dan  diinkubasi  pada suhu  35±2 0 C  selama  24  jam.    Selanjutnya  diukur  diameter  daerah  hambat disekitar  lubang  dengan  menggunakan  jangka  sorong.  Dilakukan  hal  yang  sama pada Escherichia coli dan Candida albicans. (Ditjen POM, 1995).

## PEMBAHASAN

## Preparasi Sampel dan Skrining Fitokimia
Sampel daun benalu segar dengan berat awal yaitu 1000 g. Kemudian sampel dibiarkan mengering dan ditimbang kembali sebagai berat akhir yaitu 230 g atau sebesar 23.  Perhitungannya adalah sebagai berikut:
𝑃𝑒𝑟ℎ𝑖𝑡𝑢𝑛𝑔𝑎𝑛 𝑘𝑎𝑑𝑎𝑟 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝑘𝑒𝑟𝑖𝑛𝑔 = 𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝑘𝑒𝑟𝑖𝑛𝑔 𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝑠𝑒𝑔𝑎𝑟 × 100%
= 230𝑔 1000 𝑔 × 100%
= 23 %
Ekstrak  tidak  mengandung  sisa  pelarut  oleh  karena  itu  susut  pengeringan yang identik dengan kadar air, maka ekstrak yang dihasilkan dalam penelitian ini adalah  ekstrak  kental  yang  liat  pada  keadaan  dingin,  sukar  dituang  dan persentase  kandungan  air  sebesar  5-30%.  (DEPKES  RI,  2000).  Sampel  serbuk daun  benalu  pada  penelitian  ini  adalah  sebanyak  200  g  dan  ekstrak  kental metanol  daun  benalu  pohon  glodokan  sebanyak  24,5  g  atau  sebesar  12,25  %. Perhitungan  kadar  ekstrak  kental  metanol  daun  benalu  pohon  glodokan  adalah sebagai berikut:
𝑃𝑒𝑟ℎ𝑖𝑡𝑢𝑛𝑔𝑎𝑛 𝑘𝑎𝑑𝑎𝑟 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 𝑘𝑒𝑛𝑡𝑎𝑙  = 𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 𝑘𝑒𝑛𝑡𝑎𝑙
𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑠𝑒𝑟𝑏𝑢𝑘 𝑑𝑎𝑢𝑛 × 100%
= 24,5 𝑔 200 𝑔 × 100%
= 12,25%
Flavonoid total sebanyak 4,98 g atau sebesar 2,49 % dengan perhitungan sebagai berikut :
𝑃𝑒𝑟ℎ𝑖𝑡𝑢𝑛𝑔𝑎𝑛 𝑘𝑎𝑑𝑎𝑟 𝑓𝑙𝑎𝑣𝑜𝑛𝑜𝑖𝑑 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 = 𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑓𝑙𝑎𝑣𝑜𝑛𝑜𝑖𝑑 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑠𝑒𝑟𝑏𝑢𝑘 𝑑𝑎𝑢𝑛 × 100%
= 4,98 𝑔 200 𝑔 × 100%
= 2,49 %

## Tabel 1. Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak Metanol Daun Benalu
No  Golongan Pereaksi Hasil 1 Alkalod Meyer - Buchardat - Dragendorf - Wagner - 2 Fenolik Flavonoid (Ekstrak Et.asetat FeCl 3 1%) ++++ Fenolik (Ekstrak Metanol FeCl 3 1%) ++++ 3 Saponin Aquadest - 4 Terpenoid/Steroida  Lieberman Bouchard +++ CeSO4 1% dalam H2SO4 dengan Plat TLC +++
Ket: - (Negatif) dan + (Positif)
Dari  uji  skrining  fitokimia  daun  segar  benalu  yang  dilakukan  bahwa  uji Alkaloid  antara  lain  ekstrak  metanol  daun  benalu  dengan  penambahan  pereaksi Meyer, Dragondorf, Wagner  dan Bouchardat tidak memberikan perubahan warna (negatif  alkaloid)  demikian  juga  halnya  saponin  tidak  menghasilkan  busa  yang konstan  (negative  saponin)  tetapi  untuk  uji  Fenolik  ekstrak  metanol  dengan penambahan  FeCl 3 1%  terjadi perubahan warna  coklat  kehitaman  (positif  fenolik) dan  dengan  ekstrak  etil  asetat  ditambah  FeCl 3 1%  memberikan  warna  coklat kehitaman  (positif  flavonoid)  demikian  pula  dengan  uji  terpenoid  dengan  CeSO 4 memberikan warna merah pada plat TLC dan dengan pereaksi Lieberman Bouchad memberikan  perubahan  warna  merah  kehitaman.  Dapat  dilihat  pada  Tabel  1 bahwa tanda Positif ++++ menunjukkan perubahan warna yang kuat dan kontras menunjukkan bahwa daun benalu mengandung senyawa metabolit sekunder yaitu Fenolik, Flavonoid dan Terpenoid.

## Uji Toksisitas dengan Brine Shrimph Lethality Test (BSLT)

## Tabel 2. Pengamatan dengan Brine Shrimph Lethality  Test
No Konsentrasi (ppm) Jumlah Larva hidup Jumlah Larva Mati 24 jam 1 1000 10 10 10 10 10 10 2 100 10 2 10 1 10 1 3 10 10 0 10 1 10 1 4 Blanko + 10 0 10 0 Blanko - 10 0 10 0
Dari  Tabel  2  Pengamatan  dengan  Brine  Shrimph  Lethality  Test  pada konsentrasi 1000 ppm terlihat kematian total larva udang setelah 24 jam. Tabung reaksi  yang  berisi  larva  udang  dengan  konsentrasi  ekstrak  100  ppm  mengalami kematian rerata 1,3 skala 10 larva udang dan pada 10 ppm mengalami kematian rerata 0,6 skala 10 larva udang di setiap tabung reaksi.
Tabel 3. Pengamatan Uji Aktivitas Toksisitas dengan BSLT Selama 24 jam
No Konsentrasi (ppm) Larva Hidup Larva Mati A B C B+C=D B/D E 1 1000 10 10 10 10 0 10 1 100 10 10 10 10 2 100 10 2 1,3  11,3  8,7 20 0,57 57 10 1 10 1 3 10 10 0 0,6 12 18,1 30,1 0,40 40 10 1 10 1
Ket:  A=Rerata  Larva  Mati,  B=Akumulasi  Larva  Mati,  C=Akumulasi  Larva  Hidup,D=Total Mortalitas dan E=Persen Mortalitas.
Dari  tabel  3  Pengamatan  Uji  Aktivitas  toksisitas  dengan  Brine  Shrimph Lethality test selama 24 jam diperoleh % kematian pada konsentrasi flavonoid total daun benalu pohon glodokan 10 ppm adalah 40%, 100 ppm adalah 57 % dan 1000 ppm adalah 100%. Jika Persen Mortalitas adalah sumbu Y dan antilog konsentrasi sampel  sebagai  sumbu  X  maka  untuk  perhitungan  probit  diperoleh  sebagaimana dapat dilihat pada Tabel 4.
Jika  LC 50 merupakan  antilog  dari  kematian  Larva  udang  dalam  50%  maka diperoleh  LC 50 sebesar  30,06  mg/L.  Menurut  Mayer  dkk,  1982  suatu  ekstrak
dianggap toksik apabila memiliki nilai LC 50 <1000 ppm sedangkan untuk senyawa murni  dikatakan  toksik  apabila  LC 50 <200  ppm.  LC 50 adalah  konsentrasi  dari suatu    senyawa  kimia  di  udara  atau  dalam  air  yang  dapat  menyebabkan  50% kematian pada suatu populasi hewan uji atau makhluk hidup tertentu. Sedangkan LD 50 adalah  dosis  dari  suatu  senyawa  kimia  yang  dapat  menyebabkan  50% kematian  hewan  uji  yang  diberikan  pada  setiap  individu  yang  telah  ditentukan atau  yang  lebih  tepat  ádalah  dosis  tunggal  yang  diperoleh  secara  statistik  dari suatu bahan yang dapat menyebabkan 50% kematian hewan uji.Digunakan Larva udang  sebagai  sampel  karena  dianalogikan  larva  udang  (Artemia  salina)  memiliki pembelahan  sel  yang  sama  dengan  pembelahan  sel  kanker,  setelah  kista  udang menetas  pada  24-48  jam,  larva  udang  mengalami  pertumbuhan  yang  cepat sehingga diasumsikan sebagai pertumbuhan sel yang abnormal.

## Tabel 4. X dan Y dalam persamaan garis regresi
X Y XY X2 1 40 40 1 2 57 114 4 3 100 300 9 Σ X = 6 Σ Y = 197 Σ X.Y = 454 Σ X 2 = 14 X = 2 Y = 65,67 X.Y = 151,33 Keterangan:
X= log konsentrasi
Y=Persen Kematian larva udang (A. salina Leach)
Dengan persamaan garis regresi diperoleh bahwa nilai:
a = (𝛴𝑋𝑌)−(𝛴𝑋)(𝛴𝑌)/𝑛 (𝛴𝑋2)−(𝛴𝑋)2/𝑛
a = (454)−(6)(197)/3 (14)−(6)2/3
a = (454)−(394)
2 a = 30 b = Y- aX b
= 65,67- (30) 2 = 5,67 Y =aX+b LC 50 = 30 (X)+5,67 50-5,67=30 X
X        = 1,478
Antilog X = 30,06mg/L (ppm)

## Uji Aktivitas Antimikroba
(a)
(b) (c)
Gambar 1.  Uji Aktivitas Antimikroba (kiri ke kanan) (a) S. mutans (b) E. coli dan (c)
C. albicans Flavonoid Total Daun Benalu Pohon Glodokan
Dari  tabel  5  dapat  kita  lihat  zona  hambat  dari  variasi  konsentrasi  flavonoid  total benalu  dengan  E.  coli  sebagai  bakteri  gram  negartif,  S.  mutans  sebagai  bakteri gram positif dan  Candida  albicans sebagai jamur. Menurut Davis, WW dan Stout TR, 1971 bahwa ketentuan daya antibakteri suatu ekstrak didasarkan pada zona hambat  dimana  jika  <5  mm  daya  hambatnya  bersifat  lemah,  jika5-10  mm  daya hambatnya  bersifat  sedang,  10-20  mm  daya  hambat  bersifat  kuat  dan  >  20  mm daya  hambatnya  bersifat  sangat  kuat.  Dari  Tabel  5.  dapat  kita  lihat  grafik  pada Gambar 2.

## Tabel  5.  Hasil  Pengukuran  Diameter  Zona  Hambat  Uji  Aktivitas  Antimikroba Flavonoid Total Daun Benalu Pohon Glodokan
No Konsentrasi (%) Diameter Zona Hambat (mm) S. mutans E. coli C. Albicans 1 3 6 3,55 8,30 2 6 9 4,25 4 3 9 17,25 9,15 5,30 4 Blanko 0 0 0
(a) (b)

## (c)
Gambar 2. (a) Aktivitas Penghambat oleh S. mutans; (b) Aktivitas Penghambat oleh E. coli; dan (c) Aktivitas Penghambat oleh Candida albicans
Gambar 2a, 2b dan 2c menjelaskan bahwa daya hambat  S. mutans, E. coli dan Candida  albicans  semakin besar dengan kenaikan konsentrasi dari flavonoid total daun benalu, hal ini membuktikan bahwa antimikroba tersebut efektif untuk dikembangkan  sebagai  zat  antibakteri.    Flavonoid  berperan  dalam  inhibisi  pada sintesis  DNA-RNA  dengan  interkalasi  atau  ikatan  hidrogen  dengan  penumpukan basa asam nukleat, serta berperan menghambat metabolisme energi. Senyawa ini mengganggu  metabolisme  energi  dengan  menghambat  sistem  respirasi  karena dibutuhkan  energi  yang  cukup  untuk  penyerapan  aktif  berbagai  metabolit  dan untuk biosintesis makromolekul (Nuria, 2009).

## KESIMPULAN
Dari hasil penelitian yang dilakukan terhadap daun benalu pohon glodokan dapat  disimpulkan:  (1)  Untuk  uji  aktivitas  toksisitas  flavonoid  total  daun  benalu pohon  glodokan  dengan  menggunakan  Brine  Shrimp  Lethality  Test  (BSLT) diperoleh LC 50 sebesar 30,06 mg/L yang berarti aktivitas toksisitas terhadap larva udang (Artemia salina Leach) cukup toksik; dan (2) Untuk uji aktivitas antimikroba flavonoid total daun benalu pohon glodokan) dengan Metode Difusi Agar diperoleh zona  hambat  pada  S.  mutans  konsentrasi  ekstrak  berturut–turut  3%,6%  dan  9% adalah  6;  9 dan 17.25 mm , pada E. coli  adalah  3.55;  4.25 dan 9.15 mm dan pada  C.  albicans  adalah  8.30;  4 dan  5.30 mm  dimana  pada  E.coli  dan  S.  mutans semakin besar konsentrasinya maka daya hambat semakin besar pula sedangkan pada  C.  albicans  semakin  besar  konsentrasi  kurang  mempengaruhi  daya hambat namun begitu  ketiga mikroba  tersebut  disimpulkan   efektif untuk  dikembangkan sebagai zat antimikroba.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih  kepada  Bapak  Lamek  Marpaung  M.Phil, Ph.D  yang  telah  banyak  memberikan  kontribusi  dan  bimbingan  dalam  penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim.  2000.  Parameter  Standar  Umum  Ekstrak  Tumbuhan  Obat.  Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Hal. 1.
Anonim.  1977.  Difco  manual  of  Dehydrated  culture  Media  and  Raegent  for Microbiology  and  clinical  Laboratory  Procedures.  9th  edition.,  Michigan:  Difco Laboratories
Apharna, L. 2011. Antidiabetic and Wound Healing Activity of Various Bark Extract of  Polyalhia  longifolia.,  Pidathapolur,  Nellore,  India:  Ratnam  Institute  of Pharmacy.
Bobbarala, V. 2012. Antimicrobial Agents. Croatia. Intech.
Davis,    W.W    dan    Stout,    T.R.  1971).  Disc    Plate    Methods    of    Microbiological Antibiotic Assay. Microbiology, 22(4): 659-665
Ditjen POM. 1995. Farmakope Indonesia. Edisi IV. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Hal. 925.
Farmawati.  D.A.  2008.  Pola  Protein  dan  Kandungan  Kurkuminoid  Rimpang Temulawak (Curcuma xhantorriza roxb). FMIPA IPB, Bogor.
Harborne,  J.B.  1987.  Metode  Fitokimia  Penuntun  Cara  Modern  Menganalisa Tumbuhan. Penerjemah: Kosasih Padmawinata dan Iwang Soediro. Bandung: Penerbit ITB. Hal. 147, 259. 46.
Hariana, H. A. 2003. Tumbuhan  Obat  dan  Khasiatnya.   Bogor: Penebar Swadaya. Hal. 91.
Heyne,  K.  1987.  Tumbuhan  Berguna  Indonesia  I.  Jakarta:  Yayasan  Sarana  Wana Jaya. Hal. 526 - 527.
Kokare. C. R. 2007.  Pharmaceutical Microbiology Principles and Applications. Nirali Prakashan.
Madigan, M.T., dan Martinko, J.M. 2006. Brock Biology of Microorganisms, 11th ed. London: Pearson Prentice Hall, Inc., Hal. 376-377.
Malairajan, P. (2008). Evaluation of Anti Ulcer Activity of Polyalhia longifolia (sonn) Thwaites in Experimental animals. Indian Pharmacology.
McLaughlin, J.L. dan Rogers,L.L. 1998). The Use Of Biological Assays To Evaluate Botanicals. Drug Information Journal. 32: 513-517.
Mehltreter, K.L. 2010. Fern Ecology. New York: Cambridge University Press.
Meyer, B.N., Ferrigni, N.R., Nichols,D.E., Jacobsen,L.B., dan Mclaughlin,J.L. 1982. Brine  Shrimp:  A  Convenient General  Bioassay  far  Active  Plant  Constituents. Plant Medica Journal. 45: 31-35.
Nuria,  M.C.,  A.  Faizatun.,  dan  Sumantri.  (2009).  Uji  Antibakteri  Ekstrak  Etanol Daun Jarak  Pagar  (  Jatropha  cuircas  L)  terhadap  Bakteri  Staphylococcus aureus ATCC  25923,  Escherichia  coli  ATCC  25922,  dan  Salmonella  typhi ATCC 1408. Jurnal Ilmu – ilmu Pertanian. Hal. 26 – 37.
Pitoyo,  S.  1996.  Benalu  Holtikultura:  Pengendalian  dan  Pemanfaatan.  Trubus Agriwidaya
Purnomo, B. 2000. Uji Ketoksikan Akut Fraksi Etanol Daun Benalu (Dendropthoe Sp) Pada Mencit Jantan Dan Uji Kandungan Kimia. Skripsi. Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada. Yogyakarta
Rastogi, R.P. 1997. Compendium of Indian Medicinal Plants. New Delhi, CSIR.
Rasyid, A.  2008. Pentingnya Peranan Radiologi Dalam Deteksi Dini Dan Pengobatan Kanker Hati Primer, USU e-Repository.
Santhepete.  N.  dan  Manjula,  M.  2010.  Antitumor  and  Antioxidant  Activity  of Polyalhia  longifolia  Stem  Bark  Ethanol  Extract.  Department  of  Pharmacology. Manipal College of Pharmaceutical Sciences, Manipal, India.
Sari,    F.P.,    dan    S.    M.    Sari.  2011.    Ekstraksi    Zat    Aktif    Antimikroba    dari Tanaman Yodium  (Jatropha  multifida  Linn)  sebagai  Bahan  Baku  Alternatif Antibiotik A lami. Semarang:  Fakultas Tekn ik Universitas Diponegoro .