## Pemanfaatan  Ekstrak  Etanol  Teh  Hijau  (Camellia  sinensis  L.)    sebagai Chelating Agent Logam Berat Cu dengan Metode SSA
Utilization of Ethanol Extract of Green Tea (Camellia sinensis L.) as Chelating Agent For Heavy Metal of Cu With AAS Method
Novena Yety Lindawati * , Riska Anggraini
Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Nasional, Surakarta, Indonesia.
* E-mail: novena_yl@yahoo.com
Article Info: Received: 10 Juli 2020 in revised form: 16 Juli 2020 Accepted: 28 September 2020 Available  Online:  30  September
2020

## ABSTRACT
This  research  was  conducted  to  determine  the  ability  of  ethanol  extract  of green tea ( Camellia sinensis L.) as a chelating agent for heavy metal of Cu. Green  tea  extraction  was  carried  out  by  maceration  method  using  96% ethanol  solvent.  The  ethanol  extract  of  green  tea  was  further  tested  for phytochemical  screening.  Analysis  of  the  reduction  in  total  heavy  metal content  of  10  ppm  Cu  was  measured  with  an  Atomic  Absorption Spectrophotometer (AAS) at a wavelength of 324,8 nm. The ethanol extract of green tea ( Camellia sinensis L.) was made in series of concentrations of 3 ppm, 6 ppm, 12 ppm and 15 ppm. The results showed that ethanol extract of green tea ( Camellia sinensis L.) containing alkaloids, flavonoids, phenolics, tannins,  saponins  and  triterpenoids.  The  average  concentration  value  of ethanol  extract  of  green  tea  in  reducing  Cu  metal  up  to  50%  (EC 50 )  was 12,26 ppm with coefficient of variation 0,26%.
Keywords : Green Tea Chelating Agent
Cu Metal SSA

## Corresponding Author:
Novena Yety Lindawati Riska Anggraini Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Nasional Surakarta email: novena_yl@yahoo.com
Copyright © 2019 JFG-UNTAD
This open access article is distributed under a Creative Commons Attribution (CC-BY-NC-SA) 4.0 International license.
How to cite (APA 6 th Style):
Lindawati,  N.  Y.,  Anggraini,  R.  (2020).  Pemanfaatan Ekstrak  Etanol  Teh  Hijau  ( Camellia  sinensis L.)    sebagai Chelating Agent Logam  Berat  Cu  dengan  Metode  SSA. Jurnal  Farmasi  Galenika  :Galenika  Journal  of  Pharmacy  (e-Journal), 6 (2), 295-302. doi:10.22487/j24428744.2020.v6.i2.15198
Jurnal Farmasi Galenika (Galenika Journal of Pharmacy) (e-Journal) 2020; 6 (2): 295 – 302 ISSN : 2442-8744 (electronic); 2442-7284 (printed) Journal Homepage: https://bestjournal.untad.ac.id/index.php/Galenika DOI: 10.22487/j24428744.2020.v6.i2.15198

## ABSTRAK
Penelitian  ini  dilakukan  untuk  mengetahui  kemampuan  ekstrak  etanol  teh  hijau  ( Camellia  sinensis L.)  sebagai chelating  agent logam  berat  Cu.  Ekstraksi  teh  hijau  dilakukan  dengan  metode  maserasi  menggunakan  pelarut etanol 96%. Ekstrak etanol teh hijau selanjutnya diuji skrining fitokimia. Analisis penurunan kadar logam berat total Cu 10 ppm diukur dengan alat Spektrofotometer Serapan Atom (SSA) pada panjang gelombang 324,8 nm. Ekstrak etanol teh hijau ( Camellia sinensis L.) dibuat seri konsentrasi 3 ppm, 6 ppm, 12 ppm, dan 15 ppm. Hasil penelitian menunjukkan ekstrak etanol teh hijau ( Camellia sinensis L.) mengandung alkaloid, flavonoid, fenolik, tanin, saponin dan triterpenoid. Nilai rata-rata konsentrasi ekstrak etanol teh hijau dalam menurunkan logam Cu hingga 50% (EC 50 ) sebesar 12,26 ppm dengan koefisien variasi 0,26%.
Kata kunci: Teh hijau; chelating agent ; logam Cu; SSA.

## PENDAHULUAN
Hati  merupakan  organ  intestinal  terbesar  di  dalam  tubuh  manusia  yang  berperan  penting  untuk mengatur  metabolisme  tubuh  dengan  tugas  yang  sangat  kompleks  dan  beragam  (Direktorat  Bina Farmasi  Komunitas  dan  Klinik,  2007).  Fungsi  hati  diantaranya  sebagai  pengatur  metabolisme kolesterol,  detoksifikasi  racun,  tempat  pembentukan  protein  dan  asam  empedu,  dan  tempat  untuk menyimpan cadangan energi (Rosida, 2016).
Fungsi  hati  yang  terganggu  akan menimbulkan  berbagai  gejala  penyakit  dan  gangguan metabolisme. Beberapa  penyakit  hati  diantaranya  adalah  hepatitis,  hepatitis  kronis,  sirosis  hati,  dan  kanker  hati (Khairiah et  al., 2017).  Gangguan  fungsi  hati  dapat  disebabkan  oleh  virus,  jamur,  toksisitas  obat, alkohol, racun, serta toksisitas logam (Tandi, 2017; Agustina, 2014).
Salah  satu  logam  penyebab  kerusakan  hati  adalah  tembaga  (Cu).  Logam  tembaga  sebenarnya merupakan  suatu  logam  essensial  yang  diperlukan  oleh  tubuh,  dimana  dalam  kadar  yang  kecil dibutuhkan dalam pembentukan sel-sel eritrosit (Listiowati et al., 2011). Batas kandungan logam berat Cu pada air minum yang diizinkan yaitu sebesar 2 mg/L (Kuntum, 2014).
Kadar  berlebih  logam  tembaga  dalam  tubuh  dapat  terakumulasi  di  dalam  hati  sehingga  memicu terjadinya kerusakan pada sel-sel hati (Suyanto et al., 2010). Logam tembaga juga dapat menimbulkan efek  toksik  ditandai  dengan  terjadinya  penyakit  Wilson  dengan  gejala  terjadi  sirosis  hati,  gangguan sel-sel    otak,  demielinasi,  kinerja  ginjal  menurun,  dan  adanya  logam  tembaga yang mengendap  pada kornea  mata,  serta  penyakit  Kinsky  yang  ditandai  dengan  rambut  penderita  menjadi  kaku  dan warnanya menjadi kemerahan (Listiowati et al., 2011).
Teh  hijau  telah  diketahui  mengandung  senyawa  flavonoid  yang  dapat  mengikat  logam  berat (Hernayanti et  al., 2019). Berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan  Anggraini et  al., (2014)  pemberian air teh hijau dapat menurunkan konsentrasi ion Pb (II) dimana hasil optimum terjadi pada pemberian air teh hijau dengan waktu kontak 10 menit dan volume air teh 650 mL.
Kemampuan chelating  agent ekstrak  etanol  teh  hijau  terhadap  logam  berat  Cu  dengan  metode  SSA bertujuan  untuk  menambahkan  pemanfaatan  bahan  alam  yang  dapat  digunakan  sebagai hepatoprotektor organ hati akibat logam berat Cu.

## METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Peralatan yang digunakan yaitu Spektrofotometer serapan atom (Thermo Scientific ® iCE 3000 Series), beaker  glass  (Iwaki ® ),  neraca  analitik  (Ohaus,  EP214),  labu  ukur  (Pyrex ® ),  penangas  air,  rotary evaporator (IKA ® ), corong kaca (Herma ® ), corong pisah, cawan porselin, bejana maserasi, ayakan 60
Mesh,  gelas  ukur  (Iwaki ® ),  pipet  volume  (Pyrex ® ),  blender,  pengaduk  magnet.  Bahan-bahan  yang digunakan adalah simplisia teh hijau, serbuk CuSO 4 .5H 2 O (MERCK ® , grade Ph Eur, BP, USP), etanol 96%  (Medika ® ),  aquabidest  (Pharmindo ® ), kloroform pro  analisis  (Emsure ® , gradien grate ≥ 99,7%), NaOH 1 N (MERCK ® ), ditizon 0,005% b/v (MERCK ® ), gelatin 0,5%, pereaksi skrining fitokimia.

## Metode

## Determinasi Tanaman
Tanaman  teh  hijau  telah  dideterminasi  di  B2P2TOOT  Kecamatan  Tawangmangu,  Kabupaten Karanganyar, Jawa Tengah dengan no YK.01.03/2/3653/2019.

## Preparasi Sampel
Bahan  berupa  simplisa  teh  hijau  dilakukan  sortasi  kering,  selanjutnya  dihaluskan  menjadi  serbuk dengan menggunakan blender dan diayak dengan ayakan 60 Mesh.

## Pembuatan Ekstrak Etanol Teh Hijau
Serbuk  kering  teh  hijau  sebanyak  100  gram  dimasukkan  ke  dalam  gelas  bejana  tertutup,  kemudian ditambahkan etanol 96% sebanyak 750 mL dan dilakukan perendaman selama 5 hari (5x24 jam) serta dilakukan pengadukan setiap harinya, setelah 5 hari dilakukan penyaringan menggunakan kain flanel. Filtrat yang diperoleh selanjutnya ditampung dan ampasnya di maserasi kembali dengan pelarut yang sama  sebanyak  250  mL  selama  2  hari  (2x24 jam).  Filtrat  yang  diperoleh  dicampur  menjadi  satu  dan dipekatkan  dengan  rotary  evaporator  pada  suhu  50 o C,  kemudian  dilanjutkan  dengan  waterbath  pada suhu yang sama hingga diperoleh ekstrak kental. Pembuatan ekstrak direplikasi sebanyak 3 kali.

## Uji Skrining Fitokimia
Ekstrak etanol teh hijau yang diperoleh selanjutnya diuji kandungan fitokimianya meliputi uji alkaloid, flavonoid, fenolik, tanin, saponin, dan triterpenoid.

## Uji Kualitatif dan Kuantitatif Logam Cu dalam Sampel
Sebanyak  5  mL  ekstrak  etanol  teh  hijau  ditambahkan  dengan  larutan  NaOH  1  N  sampai  diperoleh kondisi pH 3,5, selanjutnya dalam larutan tersebut ditambahkan larutan ditizon 0,005% b/v sebanyak 5 mL  kemudian  digojog  hingga  terjadi  perubahan  warna,  jika  larutan  berwarna  ungu  maka  sampel positif  mengandung  logam  Cu (Setyaningsih et  al., 2012).  Ekstrak  etanol  teh  hijau  dengan  seri konsentrasi  berbeda  dianalisa  secara  kuantitatif  dengan  alat  SSA  dengan  panjang  gelombang  324,8 nm.

## Pembuatan Larutan Baku Tembaga
Pembuatan Larutan Baku Induk Tembaga 1000 ppm; 100,0 mL
Serbuk  CuSO 4 .5H 2 O  ditimbang  sebanyak  0,3929  gram,  selanjutnya  dilarutkan  menggunakan aquabidest secukupnya serta dimasukkan dalam labu ukur 100,0 mL, selanjutnya ditambah aquabidest hingga tanda batas dan dihomogenkan.

## Pembuatan Limbah Simulasi Cu 10 ppm; 100,0 mL
Larutan baku induk Cu 1000 ppm dipipet sebanyak 1,0 mL dan dimasukkan ke labu ukur 100,0 mL, selanjutnya  ditambah  aquabidest  hingga  tanda  batas  dan  dihomogenkan. Larutan  limbah  simulasi  Cu dibaca kadarnya pada alat SSA dengan panjang gelombang 324,8 nm.

## Uji chelating agent ekstrak etanol teh hijau terhadap logam berat Cu
Ekstrak  etanol  teh hijau  3  ppm, 6 ppm, 12  ppm,  dan  15 ppm dalam  labu ukur 100,0  mL selanjutnya direaksikan  dengan  baku  induk  tembaga  konsentrasi  1000  ppm  sebanyak  1  mL  serta  ditambahkan aquabidest  hingga  tanda  batas  (konsentrasi  larutan  limbah  simulasi  sebesar  10  ppm  pada  masing- masing  konsentrasi).  Larutan  tersebut  kemudian  diaduk  dengan  stirer  magnetik  selama  30  menit, selanjutnya dimasukkan kedalam corong pisah serta ditambahkan 10 mL kloroform, kemudian digojog selama  10  menit.  Larutan  tersebut  selanjutnya  didiamkan  hingga  terbentuk  dua  fase  yang  terpisah yaitu fase air dan fase kloroform. Fase air dipisahkan, ekstraksi diulangi sebanyak 3 kali. Fase air yang diperoleh selanjutnya dianalisis dengan alat SSA untuk mengetahui kadari Cu sisa dalam larutan.

## Analisa Data
Pengukuran penurunan kadar logam berat Cu dilakukan dengan alat SSA dengan panjang gelombang Cu  324,8  nm (Listiowati et  al., 2011).  Persen  penurunan  kadar  logam  berat  tembaga  (Cu)  diperoleh dengan menggunakan rumus :
% Penurunan = (kadar Cu awal – kadar Cu akhir) x 100% kadar Cu awal
Perhitungan  nilai  EC 50 merupakan  konsentrasi  suatu  metabolit  yang  memiliki  kemampuan  dalam menurunkan kadar logam Cu sebanyak 50% dari kadar total logam awal. Nilai EC 50 diperoleh dari data hubungan  konsentrasi  ekstrak  etanol  teh  hijau  (X)  dengan  efektivitas  penurunan  ekstrak  tersebut terhadap logam berat Cu (Y) yang dinyatakan dalam persamaan garis regresi sebagai berikut:
Y = BX + A
Keterangan : Y = persen (%) efektivitas X = konsentrasi sampel B = kemiringan kurva (slope) A = intersep
Presisi diperoleh dari data rata-rata EC 50 kadar sampel yang masing-masing dilakukan 3 kali replikasi (n=3).  Persen  presisi  dapat  dilihat  dari  nilai  koefisien  variasi  (%KV).  Semakin  kecil  nilai  %KV, artinya  data  yang  diperoleh  semakin  baik.  Nilai  %KV  dinyatakan  baik  jika  ≤  2% (Harmita,  2004). Koefisien variasi dirumuskan sebagai berikut:
% KV = (SD/rata-rata) x 100%
Keterangan : % KV = Koefisien variasi SD  = Standar deviasi

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  determinasi  menunjukkan  bahwa  tanaman  teh  hijau  yang  berasal  dari  Kemuning, Karanganyar yang  digunakan  sebagai  simplisia  dalam  penelitian  merupakan  tanaman  teh  hijau  dengan  spesies Camellia sinensis (L.) Kuntze dan termasuk dalam familia Theaceae .
Simplisia teh hijau dihaluskan hingga menjadi serbuk dengan tujuan untuk  untuk memperkecil ukuran sampel dan meningkatkan luas permukaannya, sehingga kontak antara sampel dengan pelarut semakin luas,  dengan  demikian  memungkinkan  komponen  zat  aktif  yang  terdapat  dalam  teh  hijau  dapat diekstrak secara maksimal. Serbuk simplisia  diayak dengan ayakan  60 Mesh. Penggunaan ayakan 60 Mesh didasarkan pada penelitian yang dilakukan Wartini et al., ., (2017) mengenai pengaruh kehalusan terhadap  mutu  ekstrak Sargassum  polycystum menunjukkan  bahwa  rendemen  tertinggi  didapatkan pada ukuran partikel bubuk 60 Mesh.
Serbuk  simplisa  teh  hijau  diekstraksi  menggunakan  cara  maserasi  dengan  melakukan  proses perendaman.  Maserasi  dipilih  karena  prosesnya  yang  sederhana,  tidak  memerlukan  peralatan  yang rumit, relatif murah, dan tidak melibatkan pemanasan sehingga dapat menghindari kerusakan senyawa kimia yang tidak tahan terhadap pemanasan. Hasil dari proses maserasi didapatkan rendemen  ekstrak etanol teh hijau pada replikasi 1 sebanyak 39,3% b/b, replikasi 2 sebanyak 32,7% b/b, dan replikasi 3 sebanyak 32,1% b/b.
Kandungan  senyawa  dalam  ekstrak  etanol  teh  hijau  dapat  dipastikan  dengan  uji  skrining  fitokimia. Salah  satu  senyawa  yang  dapat  berperan  sebagai chelating  agent logam  berat  Cu  adalah  flavonoid. Senyawa flavonoid diduga dapat berfungsi sebagai agen pengkhelat logam karena terdapat atom yang memiliki  pasangan  elektron  bebas  yaitu  atom  oksigen,  sehingga  dapat  berikatan  dengan logam  berat (Fitri et al., 2019).
Tabel 1. Hasil pengujian skrining fitokimia ekstrak etanol teh hijau
Uji Senyawa Reagen Teoritis Hasil Keterangan Alkaloid H 2 SO 4 2N, Mayer Wagner Dragendroff Endapan putih Endapan cokelat Endapan jingga Endapan putih Endapan cokelat Endapan jingga (+) (+) (+) Flavonoid Serbuk Mg, HCl pekat Merah, kuning atau jingga Jingga (+) Fenolik FeCl 3 1% Hitam kebiruan atau hijau Hitam kebiruan (+) Tanin Gelatin 0,5% Endapan cokelat Endapan cokelat (+) Saponin Aquadest Buih Buih (+) Triterpenoid CH 3 COOH, H 2 SO 4 pekat Merah jingga atau ungu Merah jingga (+)
Keterangan: (+) = positif
Hasil skrining fitokimia menunjukkan bahwa ekstrak etanol teh hijau mengandung senyawa alkaloid, flavonoid,  fenolik,  tanin,  saponin,  dan  triterpenoid  (Tabel  1).  Hal  tersebut  telah  sesuai  dengan
penelitian  yang  dilakukan  oleh  Setiyono  &  Budi,  (2014)  tentang  skrining  fitokimia  terhadap  enam genotipe teh.
Kandungan  logam  berat  Cu  dalam  ekstrak  etanol  teh  hijau  dapat  diketahui  dengan  dilakukan  uji kualitatif  logam  Cu.  Reaksi  larutan  ditizon  dengan  logam  Cu  akan  membentuk  kompleks  logam ditizonat yang spesifik. Reaksi yang terjadi adalah sebagai berikut :
Cu 2+ + 2HDz
Cu(HDz) 2 + 2H +
Hasil uji keberadaan logam berat Cu dalam ekstrak etanol teh hijau menunjukkan warna jingga, hal ini membuktikan bahwa ekstrak etanol teh hijau negatif mengandung logam Cu.
Keberadaan  logam  Cu  dalam  ekstrak  etanol  teh  hijau  secara  kuantitatif  dipastikan  kembali  dengan melakukan uji kuantitatif  menggunakan  alat  SSA.  Hasil  uji kuantitatif  mendukung  hasil  uji  kualitatif yaitu  menunjukkan  hasil  yang  negatif  atau  dapat  dikatakan  ekstrak  etanol  teh  hijau  yang  digunakan tidak mengandung logam Cu, sehingga tidak menganggu proses penelitian.
Ekstrak etanol teh hijau dalam beberapa seri konsentrasi dicampurkan dengan logam Cu dengan kadar 10  ppm.    Campuran  tersebut  kemudian  dihomogenkan  dengan  alat  stirer  magnetik  selama  30  menit dengan  tujuan  agar  senyawa  flavonoid  yang  terdapat  pada  ekstrak  etanol  teh  hijau  dapat  berikatan dengan Cu 2+ .
Proses  pemisahan  kompleks  dengan  sisa  logam  Cu  dilakukan  melalui  metode  ekstraksi.  Ekstraksi dilakukan  menggunakan  pelarut  organik  kloroform  sebanyak  10  ml  dengan  campuran  larutan  yang mengandung logam Cu 10 ppm dan ekstrak etanol teh hijau  dalam beberapa seri konsentrasi, dimana pada  setiap  konsentrasi  dilakukan  ekstraksi  sebanyak  3  kali  dan  digojog  selama  10  menit  untuk memaksimalkan  proses  pemisahan  kompleks  dengan  sisa  logam  Cu.  Pemilihan  kloroform  sebagai pelarut  organik  dalam  proses  ekstraksi  dikarenakan  pelarut  tersebut  mempunyai  sifat  non  polar  dan tidak  bercampur  dengan  air,  sehinga  akan  terbentuk  dua  fase  yang  terpisah  yaitu  fase  kloroform  dan fase  air.  Sifat  non  polar  tersebut  akan  sangat  berpengaruh  terhadap  kemudahan  kompleks  yang terbentuk  terdistribusi  ke  fase  kloroform,  sedangkan  sifatnya  yang  tidak  bercampur  dengan  air  akan memudahkan dalam proses pemisahan kompleks tersebut dari campurannya dalam fase air (Anggraini et  al., 2014).  Fase  air  yang  diperoleh  dilakukan  pengujian  dengan  alat  SSA  dengan  panjang gelombang  324,8  nm  untuk  mengetahui  efektivitas  penurunan  konsentrasi  logam  berat  Cu  setelah ditambahkan ekstrak etanol teh hijau dalam beberapa seri konsentrasi.
Tabel 2. Hasil penurunan kadar Cu tiap konsentrasi
Ekstrak etanol teh hijau Konsentrasi (%) Persamaan regresi EC 50 (ppm) 3 ppm 6 ppm 12 ppm 15 ppm 1 7,01 23,63 46,36 63,84 y = 4,5463x – 5,7070 12,25 2 7,83 22,77 47,45 63,30 y = 4,5207x – 5,3485 12,24 3 8,65 21,68 47,72 62,84 y = 4,4807x – 5,1035 12,30 Nilai Rata-rata EC 50 12,26 KV 0,26%
Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanol teh hijau mempunyai kemampuan dalam mengikat kadar  logam  Cu  (Tabel  2),  dimana  dengan  adanya  peninkatan  konsentrasi  ekstrak  etanol  teh  hijau maka akan semakin besar penurunan kadar logam Cu. Hal ini berarti senyawa organik yang terdapat dalam  ekstrak  etanol  teh  hijau  dapat  mengikat  logam  Cu.  Rata-rata  nilai  EC 50 yang diperoleh  adalah sebesar 12,26 ppm.
Ekstrak  etanol  teh  hijau  diketahui  memiliki  kandungan  senyawa  flavonoid  yang  diduga  dapat berfungsi sebagai agen pengkhelat logam berat (Hernayanti et al., 2019). Penurunan konsentrasi logam Cu dapat terjadi karena flavonoid yang terdapat dalam teh hijau berikatan dengan logam Cu. Semakin meningkatnya konsentrasi ekstrak etanol teh hijau yang diberikan, persen penurunan kadar logam Cu juga semakin meningkat.
Kenaikan  konsentrasi  pemberian  ekstrak  etanol  teh  hijau  dalam  larutan  menunjukkan  bahwa  jumlah flavonoid yang ada dalam sistem reaksi semakin banyak. Semakin banyak jumlah molekul flavonoid, maka  semakin  banyak  pula  elektron-elektron  yang  akan  berikatan  dengan  logam  Cu,  sehingga penurunan konsentrasi logam Cu menjadi lebih efektif.
Teh  hijau  mengandung  senyawa  polifenol  meliputi  flavanol,  flavonoid,  flavandiol,  dan  asam  fenolik dimana  keseluruhan  jumlahnya  dapat  mencapai  30%  dari  berat  teh  kering  (Chacko et  al., 2010). Kemampuan  flavonoid  sebagai  pengkhelat  didasarkan  pada  kemampuannya  untuk  mengkompleks logam  yaitu  dengan  keberadaan  pasangan  elektron  bebas  pada  salah  satu  atom  dalam  flavonoid sehingga dapat berikatan dengan atom pusat yaitu logam (Fitri et al., 2019).
Presisi atau ketelitian dalam penelitian dapat  dilihat dari nilai KV pada tabel 2. Nilai KV dinyatakan baik  jika  nilainya  ≤  2%  (Harmita,  2004).  Nilai  KV  yang  diperoleh  dari  replikasi  1,  replikasi  2,  dan replikasi  3  yaitu  sebesar  0,26%,  yang  menunjukkan  bahwa  nilai  KV  kurang  dari  2%,  artinya  proses pengerjaan yang dilakukan memiliki tingkat ketelitian yang baik.

## KESIMPULAN
Ekstrak etanol 96% teh hijau ( Camellia sinensis L . ) dapat menurunkan kadar logam berat Cu dengan EC 50 sebesar 12,26 ppm dan nilai KV sebesar 0,26%.

## DAFTAR PUSTAKA
Agustina,  Titin.  (2014).  Kontaminasi  Logam  Berat  pada  Makanan  dan  Dampaknya  Pada  Kesehatan. Teknobuga , 1(1), 53-65.
Anggraini,  D.I.,  Sukirno.,  Wulansari,  A.D.  (2014).  Antidotum  Logam  Timbal  (Pb)  Secara  In  Vitro dengan Seduhan Air Teh Hijau. Jurnal Ilmiah  Kesehatan , 6(2), 105-108.
Chacko,  S.M.,  Thambi,  P.T.,  Kuttan,  R.,  dan  Nishigaki.  (2010).  Benefical  Effects  of  Green  Tea  :  A Literature Review. Chinese Medicine , 5(13), 1-9.
Direktorat Bina Farmasi Komunitas dan Klinik. (2007). Pharmaceutical Care untuk Hati . Departemen Kesehatan RI.
Fitri, D.S., Widiyantoro, A., Gusrizal. (2019). Potensi Fraksi Etil Asetat dari Buah Mangga (Mangifera spp.)  sebagai  pengompleks  logam  Pb  (II)  dan  Isolasi  Senyawa  Flavonoidnya. Jurnal  Kimia Khatulistiwa , 8(1), 65-70.
Harmita.  (2004).  Petunjuk  Pelaksanaan  Validasi  Metode  dan  Cara  Perhitungannya. Majalah  Ilmu Kefarmasian , 1(3), 117 – 135.
Hernayanti., Moeljopawiro, S., Sadewa, A.H., Sasongko, N.D., Hidayah, H.A.  (2019). Katekin dalam Teh  Hijau  sebagai  Kelator    Alami  pada  Individu  Terpapar  Plumbum  Pembawa  Polimorfisme Gena Nitrit Oksida Sintase 3. Majalah Ilmiah Biologi Biosfera : A Scientific Journal , 36(2), 90 – 98.
Khairiah,  L.,  Tursina.,  Rismawan,  T.  (2017).  Sistem  Pakar  Diagnosis  Penyakit  Hati  dengan  Metode Dempster Shafer Berbasis Android. Jurnal Coding Sistem Komputer Untan , 5(2), 57-66.
Kuntum,  K.  (2014).  Analisis  Kadar  Tembaga  (Cu)  dan  Seng  (Zn)  dalam  Air  Minum  Isi  Ulang Kemasan Galon di Kecamatan  Lima Kaum Kabupaten Tanah Datar. Jurnal Sainstek , 6(2), 116- 123.
Listiowati., Rahayu, W.S.,  Utami, P.I. (2011). Analisis Cemaran Tembaga  dalam Air Sumur Industri Pelapisan Emas di Kota Tegal dengan Metode Spektrofotometri Serapan Atom. Pharmacy , 8(3), 71-79.
Rosida, A. (2016). Pemeriksaan Laboratorium Penyakit Hati. Berkala Kedokteran , 12(1), 123-131.
Setiyono, R.T., dan Budi, M. (2014). Skrining Fitokimia Enam Genotipe Teh. Jurnal TIDP , 1(2), 63- 68.
Setyaningsih, E., Saputro, A., dan Hariyatmi. (2012). Identifikasi Kualitatif Kandungan Logam Berat (Pb,  Cd,  Cu,  dan  Zn)  pada  Ikan  Sapu-Sapu  ( Hypostomus  plecostomus )  di  Sungai  Pabelan Kartasura tahun 2012. Seminar Nasional IX Pendidikan Biologi FKIP UNS , Surakarta.
Suyanto,  A.,  Kusmiyati,  S.,  Ch,  Retnaningsih.  (2010).  Residu  Logam  Berat  Ikan  dari  Perairan Tercemar di Pantai Utara Jawa Tengah. Jurnal Pangan dan Gizi , 1(2), 33-38.
Tandi,  J.  (2017).  Pola  Penggunaan  Obat  pada  Pasien  Penyakit  Hati  yang  Menjalani  Rawat  Inap  di Rumah  Sakit  Umum  Daerah  Undata  Palu. Jurnal  Pengembangan  Sumber  Daya  Insani ,  2(2), 218-233.
Wartini,  N.M.,  Noviantari,  N.P.,  Suhendra,  L.  (2017).  Pengaruh  Ukuran  Partikel  Bubuk  Dan Konsentrasi  Pelarut  Aseton  Terhadap  Karakteristik  Ekstrak  Warna Sargassum  polycystum . Jurnal Rekayasa dan Manajemen Agroindustri , 5(3), 102-112.