## PENINGKATAN EKSPRESI p53 OLEH EKSTRAK ETANOLIK RUMPUT MUTIARA
( Hedyotis corymbosa ) PADA SEL HEPAR TIKUS SPRAGUE DAWLEY TERINDUKSI 7,12-DIMETILBENZ[ a ]ANTRASENA

## INCREASING OF p53 EXPRESSION BY ETHANOLIC EXTRACT OF
Hedyotis corymbosa ON SPRAGUE DAWLEY RAT LIVER CELLS, INDUCED BY 7,12-DIMETILBENZ[ a ]ANTRASENA
Dyani Primasari Sukamdi 1 , Aditya Asyhar 1 , Rifki Febriansah 1 , Rosana Anna Ashari 1 , Riris Istighfari Jenie 1 , dan Edy Meiyanto 1,2*
1 Fakultas Farmasi, Universitas Gadjah Mada Yogyakarta
2 Cancer Chemoprevention Research Center meiyan_e@ugm.ac.id

## ABSTRAK
Asam  ursolat  dan  asam  oleanolat  yang  terdapat  dalam  Rumput  Mutiara  ( Hedyotis corymbosa )  diduga  dapat  menghambat  kanker  dengan  berbagai  mekanisme.  Penelitian  ini dirancang  untuk  mengetahui  kemampuan  ekstrak  etanolik  rumput  mutiara  sebagai  agen  pemacu apoptosis  melalui  uji  in  vivo  menggunakan  tikus  galur Sprague  Dawley terinduksi  7,12- dimetilbenz[a]antrasena  (DMBA).  Kelompok  hewan  uji  yang  digunakan  terdiri  dari  kontrol  ekstrak 1500mg/kgBB,  kontrol  pelarut  CMC-Na,  kontrol  DMBA,  perlakuan  DMBA+ekstrak  dosis 750mg/kgBB dan perlakuan DMBA+ekstrak 1500mg/kgBB. Hasil percobaan selanjutnya dianalisis menggunakan metode TUNEL ( TUNEL assay ) dan Imunohistokimia terhadap ekspresi protein p53 untuk  mengetahui  tingkat  pemacuan  apoptosis  dari  sel  kanker  hepar  hewan  uji.  Hasil  analisa menggunakan  metode TUNEL menunjukkan  hasil  bahwa  hepar  tikus  mengalami  apoptosis  relatif tinggi  pada  kelompok  perlakuan  DMBA+ekstrak.  Hasil  pengamatan  menggunakan  metode Imunohistokimia  diketahui  bahwa  sel  kanker  hepar  mengalami  pemacuan  ekspresi  protein  p53 yang  menunjukkan  terjadinya  apoptosis  pada  sel  hepar  tersebut.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa ekstrak  rumput  mutiara  dapat  memacu  apoptosis  dan  dapat  digunakan  sebagai  salah  satu alternatif pengobatan penyakit kanker.
Kata Kunci: H.corymbosa , DMBA, apoptosis, p53, TUNEL

## ABSTRACT
Rumput  mutiara  ( Hedyotis  corymbosa )  has  a  potential  as  anticancer.  This  plant  contains ursolate acid and oleanolate acid may prevent cancer with several mechanisms. This research was aimed  to  study  the  ethanolic  extract  of  rumput  mutiara  as  apoptosis  inducing  agent  in  vivo.  This study was conducted in Sprague Dawley rats induced by 7,12-Dimethylbenz[a]Antracene (DMBA). The data was analysed using TUNEL assay and immunohistochemistry method for the expression of p53 protein. The results showed that the ethanolic extract of rumput mutiara  increased the p53 protein  expression,  indicated  that  the  extract  can  induce  apoptosis  and  can  be  used  as  an alternative for anticancer medication.
Key Word : H.corymbosa , DMBA, apoptosis, p53, TUNEL

## PENDAHULUAN
Jumlah  kematian  di  dunia  karena kanker terutama  kanker  hepar  menunjukkan  insidensi yang  sangat  tinggi.  Pada  tahun  2002  jumlah kematian  akibat  kanker  hepar  di  dunia mencapai  598.000  jiwa  (Parkin et  al., 2005). Untuk  itu  diperlukan  pencegahan  terhadap penyakit  kanker  sedini  mungkin  mengingat akan  bahaya  kematian  yang  ditimbulkannya. Pilihan pengobatan baru yang aman, efektif dan selektif  untuk  penyakit  kanker  sangat  penting untuk diusahakan. Beberapa peneliti melaporkan  bahwa  bahan  dari  tanaman mempunyai  potensi  sebagai  regulator  negatif
onkogen  dan  regulator  positif  gen suppressor , sehingga  berpotensi  sebagai  agen  antikanker (Gibbs, 2000).
Salah  satu  tanaman  yang    berpotensi sebagai  antikanker  adalah  rumput  mutiara ( Hedyotis  corymbosa ).  Kandungan  dari  tana- man  ini  diantaranya  adalah  asam  oleanolat, asam  ursolat,  hentriacontane,  stigmasterol,  ß- sitosterol, γ-  sitosterol,  sitisterol-D-glucosida, asam ρ -kumarat,  dan  glikosida  flavonoid (Khastgir et  al. ,  1960).  Kandungan  aktif  dari tanaman rumput mutiara yang diduga berfungsi sebagai  senyawa  antikanker  adalah  asam ursolat  dan  asam  oleanolat.  Menurut  Sukamdi
et  al .  (2008)  ekstrak  etanolik  rumput  mutiara ( Hedyotis corymbosa )  mampu  menghambat proliferasi sel dan mampu menekan ekspresi C- Myc  (Febriansah et  al .,  2008)  pada  sel  hepar tikus  terinduksi  7,12-dimetilbenz[ a ]antrasena (DMBA).  Selain  itu  diketahui  bahwa  salah  satu senyawa  aktif  dalam  rumput  mutiara,  yaitu asam  oleanolat  mampu  menginduksi  apoptosis pada  sel  tumor  K562  (Liu et al .,  2004).  Namun belum  diketahui  kemampuan  ekstrak  etanolik rumput  mutiara  dalam  menginduksi  apoptosis pada sel hepar yang terinduksi DMBA.
Penelitian  mengenai  agen  antikanker dengan mekanisme spesifik pada apoptosis sel penting karena pada umumnya sel kanker tidak mempunyai  kemampuan  melakukan  apoptosis. Proses apoptosis sel dipengaruhi oleh beberapa  protein.  Protein  p53  merupakan contoh  protein  yang  mempengaruhi  apoptosis sel.  Protein  p53  berperan  dalam  mengatur adanya  tekanan  respon  sel  pada  mamalia melalui  aktivasi  transkripsi  gen  yang  meliputi kontrol siklus sel, perbaikan DNA dan apoptosis (Amudson et  al .,  1998).  Peningkatan  ekspresi p53 akan memacu terjadinya apoptosis melalui 2  mekanisme,  yaitu  dengan  peningkatan protein  Bax  dan  penurunan  ekspresi  protein Bcl-2  (King,  2000).  Protein  Bax  akan  berikatan dengan mitokondria dan menginduksi pelepasan  sitokrom  C  (Nuñez et  al .,  1998). Pelepasan  sitokrom  C  ini  akan  mengaktivasi salah  satu caspase dalam  jalur caspase, yaitu caspase-9 , yang selanjutnya akan mengaktivasi caspase lain yang bertindak sebagai downstream caspase seperti caspase-7 (Schafer, 1998).
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  membuk- tikan  bahwa  ekstrak  etanolik  rumput  mutiara dapat memacu apoptosis sel melalui pemacuan ekspresi protein  p53  pada  sel hepar tikus  yang telah  diinduksi  dengan  DMBA.  Hasil  dari  uji in vivo ini  dapat  digunakan  sebagai  dasar  untuk mengetahui  selektivitas  senyawa  yang  terkan- dung  dalam  tanaman  tersebut  sebagai  agen kemopreventif,  khususnya  melalui  pemacuan apoptosis dari sel kankernya.

## METODE PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  dilaksanakan  pada  bulan Februari – Mei 2008. Tempat penelitian adalah di laboratorium Cancer Chemoprevention Research  Center (CCRC)  Fakultas  Farmasi UGM  dan  Laboratorium  Patologi  Anatomi Fakultas Kedokteran UGM.

## Bahan Tanaman dan Preparasi Ekstrak
Rumput  mutiara  didapatkan  di  daerah Sleman sebanyak 8,22 kg dan telah dideterminasi  di  Laboratorium  Farmakognosi Bagian Biologi Farmasi Fakultas Farmasi UGM.
Selanjutnya dikeringkan, dibuat menjadi serbuk dengan  menggunakan  blender  ( Maspion )  dan diayak  dengan  ayakan  B40.  Lalu  serbuk dimaserasi  dengan  pelarut  etanol  96%.  Fraksi etanol  yang  didapatkan  dipekatkan  menggu- nakan rotary  evaporator hingga  didapatkan ekstrak kental.

## Hewan Uji
Tikus betina galur Sprague Dawley umur 40  hari  dengan  berat  badan  seragam  (70-120 gram)  sebanyak  30  ekor,  diperoleh  dari  Unit Pengembangan  Hewan  Percobaan  (UPHP) UGM yang kemudian dipelihara dalam kandang plastik  dengan  alas  sekam.  Hewan  uji  dalam kandang  diletakkan  dalam  ruangan  dengan suhu kamar (23-25ºC) dan diberi makan pelet.

## Bahan Kimia
Etanol 96% (Merck, Darmstadt), CMC-Na 0,5%
sebagai pelarut ekstrak, 7,12dimetilbenz[ a ]antrasena atau
DMBA (Sigma Chem. CO, St. Louis, MO) untuk induksi kanker, corn  oil sebagai  pelarut  DMBA, aquadest (Asia  Lab), formaldehyde (Sigma Chem.  CO,  St.  Louis,  MO)  sebagai  larutan fiksasi  organ,  reagen Tunel  Assay (Formalin  4 %,  gelatin,  seloidin,  parafin,  resin, xylene ,  anti flouresensi,  PBS, antibody , Tunel  kit )  sebagai pewarna pengecatan histopatologi, NaCl 0,9%.

## Perlakuan Hewan Uji
Hewan  uji  dibagi  menjadi  5  kelompok masing-masing  terdiri  dari  6  ekor  tikus. Sebelum  digunakan  tikus  diadaptasi  pada kandang  percobaan  selama  satu  minggu  dan hanya  diberikan  makan  pelet  dan  minum  air ledeng. Kelompok  I sebagai  kelompok  perla- kuan  DMBA  diberikan  larutan  DMBA  dengan dosis  20  mg/kgBB  dalam corn  oil pada  minggu pertama  secara  per  oral,  frekuensi  pemberian 10 kali pemberian selama 5 minggu. Kelompok II sebagai kelompok perlakuan ekstrak, diberikan ekstrak etanolik rumput mutiara dosis 1500  mg/kgBB  dalam  pelarut  CMC-Na  0,5% secara  peroral  setiap  hari  selama  10  hari. Kelompok  III dan IV sebagai  kelompok perlakuan  DMBA+dosis,  mulai  diberi  DMBA pada  minggu  pertama  dengan  dosis  20 mg/kgBB  secara  per  oral,  frekuensi  pemberian 10  kali  selama  5  minggu.  Setelah  pemejanan DMBA,  tikus  tidak  diberi  perlakuan  selama  4 minggu.  Kemudian  diberi  perlakuan  ekstrak yang  disuspensikan  dalam  CMC-Na  0,5% setiap  hari  selama  10  hari.  Kelompok  III  diberi dosis ekstrak 750 mg/kgBB. Kelompok IV dosis 1500  mg/kgBB.  Setelah  pemejanan  ekstrak terakhir  dilakukan  nekropsi  pada  minggu  ke-9. Kelompok  V sebagai  kelompok  perlakuan pelarut CMC-Na 0,5%
Pada minggu keempat sampai kedelapan
tidak  dilakukan  perlakuan,  hanya  diberi  makan pelet  dan  minum  air.  Awal  minggu  ke-9 dilakukan  pengorbanan  hewan  uji  dengan dislokasi  leher  dan  dilakukan  nekropsi.  Organ hepar  diisolasi  dan  diawetkan  dengan buffer formalin  untuk  analisis  induksi  apoptosis. Analisis  induksi  apoptosis  dilakukan  dengan TUNEL Assay . dan Imunohistokimia (IHC).
Pengamatan Induksi Apoptosis dengan TdT- mediated  X-dUTP  nick  end  labeling (TUNEL Assay ) Deteksi  adanya  apoptosis  dilakukan dengan  menempatkan  potongan  setebal  3-4 µm  dan  diletakkan  di  atas slide polylisin kemudian  diinkubasi  semalam  di  inkubator pada  suhu  45 0 C.  Setelah  itu  merehidrasi preparat organ dengan aquades steril, kemudian  ditambah  dengan  50µl  TUNEL label mix (campuran  5  µl enzyme  solution dan  45  µl labeling solution ) dengan TdT. Preparat ditutup dengan siliconized cover slip . Preparat diinkubasi pada suhu 37° C selama 30 menit di dalam moist  chamber .  Preparat  dicuci  dengan PBS  sebanyak  3  kali.  Preparat  diinkubasi dengan RNase  solution pada  suhu  37°  C selama  30  menit.  Kemudian    preparat  dicuci lagi  dengan  PBS  sebanyak  3  kali.  Preparat diinkubasi  dengan  larutan  Propidium  iodida pada  suhu  ruang  selama  10  menit.  Preparat dicuci  dengan  PBS  sebanyak  3  kali.  Preparat ditutup dengan cover slide diameter 18 mm dan immumount .  Pengamatan  apoptosis  dilakukan dengan menggunakan mikroskop fluorosen. Sel yang  mengalami  apoptosis  akan  mengalami fluorosensi  warna  hijau  sedangkan  sel  yang tidak  mengalami  apoptosis  akan  mengalami fluoresensi merah.

## Pemeriksaan  Ekspresi  p53  dengan  Imuno- histokimia (IHC)
Blok  parafin  yang  telah  berisi  jaringan dipotong setebal 3-4 µm dan diletakkan di atas slide polylisin  kemudian  diinkubasi  semalam  di inkubator  pada  suhu  45 0 C.  Selanjutnya dilakukan deparafinisasi dengan xilen sebanyak 3  kali  masing-masing  selama  3  menit. Dilanjutkan dengan pencucian dengan phosphate  buffer  saline (PBS)  sebanyak  3  kali masing-masing  selama  5  menit.  Preparat kemudian  direndam  dalam  3%  hidrogen peroksida  (H 2 O 2 dalam  metanol)  selama  20 menit,  lalu  dicuci  dengan  akuades  dilanjutkan pencucian  dengan  PBS  sebanyak  3  kali masing-masing  selama  5  menit.  Selanjutnya dilakukan antigen  retrieval dengan  melakukan perendaman preparat dalam bufer sitrat pH 6,0 di  dalam microwave .  Lalu  dibiarkan  dingin selama 20-30 menit lanjutkan dengan pencucian PBS sebanyak 3 kali masing-masing
selama  5  menit.  Preparat  diinkubasikan  dalam normal  mouse  serum selama  5  menit. Selanjutnya normal  mouse  serum dibersihkan (tanpa  cuci),  preparat  ditetesi  dengan  antibodi primer antibodi monoklonal anti p53 selama  60 menit  atau  semalam  dalam  lemari  es  (8 o C). Dicuci  dalam  PBS  sebanyak  3  kali  masing- masing selama 5 menit. Preparat diinkubasikan dengan  antibodi  sekunder  terbiotinilasi  selama 5  menit,  lalu  dicuci  dengan    PBS    sebanyak  3 kali  masing-masing  selama  5  menit.  Kemudian ditetesi dengan streptavidin-peroksidase selama  5  menit,  lalu  dicuci  dengan  PBS sebanyak  3  kali  masing-masing  selama  5 menit.  Preparat  dicuci  dengan  air  kran  selama 10-15 menit, selanjutnya dilakukan counterstain dengan hematoxylin selama 3-4 menit. Preparat  dicuci  dengan  air  kran  10-15  menit. Dilanjutkan  rehidrasi  secara  bertingkat  dengan etanol  absolut,  etanol  95%,  etanol  80%  dan xylol  sebanyak  2  kali.  Terakhir  dilakukan mounting sebelum  ditutup  dengan deck  glass . Pengecatan imunohistokimia dilakukan di Laboratorium Parasitologi Fakultas Kedokteran, Universitas Gadjah Mada. Selanjutnya dilakukan pengamatan ekspresi  p53  pada  sel  hepar  pada  semua kelompok  hewan  uji.  Pengamatan  dilakukan menggunakan mikroskop cahaya dengan perbesaran 100 kali. Sel
yang mengekspresikan  protein  p53  akan  tampak berwarna coklat pada sitoplasma sel, sedangkan  sel  yang  tidak  mengekspresikan memberikan  warna  ungu  pada  membran  sel. Pengamatan  ekspresi  p53  dinyatakan  secara kualitatif dengan membandingkan antara kelompok  perlakuan. Pemeriksaan  dilakukan  di bawah  mikroskop  binokuler  (Olympus ® DP12 microscope digital camera system) di Laboratorium  Patologi  Fakultas  Kedokteran Universitas Gadjah Mada.

## Analisis Data
Metode  TUNEL  assay  digunakan  untuk mengetahui  informasi  adanya  apoptosis  sel hepar  secara  kualitatif  dengan  mikroskop fluoresens.  Preparat  IHC  digunakan  untuk mengamati  ekspresi  p53  pada  sitoplasma  sel hepar tikus secara kualitatif.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil
Pengamatan TUNEL assay TUNEL Assay merupakan  metode  untuk mengamati  efek  pemberian  ekstrak  rumput mutiara  terhadap  sel  yang  mengalami  apopto- sis  (kematian  sel)  dengan  menggunakan  label secara  enzimatik.  DNA  yang  mengalami pematahan akan terlabeli dengan DNA polymerase ( Nick  Translation )  dan Terminal
Deoxynukleotidyl  Transferase  nick  end  labeling (Wyllie et al ., 2000). Ujung 3’OH dari DNA yang mengalami  fragmentasi  akan  dikenali  oleh enzim  terminal deoxynukleotidyl  transferase dan dilabeli dengan fluorescein-dUTP sehingga
dapat  diamati  dangan  mikroskop  fluoresensi (Wyllie et  al. ,  2000).  Deteksi  sel  yang  menga- lami  apoptosis  dengan  TUNEL  menggunakan alat mikroskop fluorosens.
Gambar  1 –  Pengamatan  apoptosis menggunakan metode Tunel  assay . Kontrol  CMC-Na  (a).  Kontrol  DMBA  (b).  Ekstrak dosis 1500 mg/kg BB (c). Perlakuan DMBA+Ekstrak dosis 750 mg/kg BB (d). Perlakuan DMBA+Ekstrak dosis 1500 mg/kg BB (e). Pada preparat dari berbagai perlakuan tidak menunjukkan apoptosis (perbesaran 1000x lensa obyektif). Keterangan :              sel berfluoresensi merah (belum menunjukkan apoptosis)
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa pada  seluruh  kelompok  perlakuan  hewan  uji, terlihat  sel  berfluorensensi  merah  (bukan berfluorensensi  hijau).  Hasil  menunjukkan ekstrak  etanolik  rumput  mutiara  dengan  dosis 750  mg/kgBB  dan  1500  mg/kgBB  tidak berpengaruh  terhadap  terjadinya  apoptosis pada sel hepar yang terinduksi DMBA (Gambar 1).
Pengamatan Ekspresi p53 dengan Imunohistokimia
Imunohistokimia merupakan metode yang  biasa  digunakan  untuk  menentukan adanya  antigen  dalam  suatu  jaringan  yang telah dilabel dengan antibodi, interaksi antigen- antibodi  dapat  diamati  melalui  fluoresensi, enzim  dan  elemen  radioaktif.  Interaksi  antigen- antibodi yang dihasilkan dari metode
imunohistokimia adalah spesifik sehingga dapat digunakan  untuk  mengidentifikasi  ekspresi protein. Dalam identifikasi ekspresi protein p53, digunakan  antibodi  monoklonal  yang  secara spesifik dapat mengenali p53.
Hasil pengamatan imunohistokimia menunjukkan bahwa kelompok kontrol CMC-Na (Gambar  2a)  dan  kontrol  DMBA  (Gambar  1b) tidak  menunjukkan  ekspresi  p53.  Begitu  juga halnya  dengan  kontrol  ekstrak  1500  mg/kgBB yang  tidak  menunjukkan  ekspresi  p53.  Sel berwarna  coklat  menandakan  bahwa p53 yang diekspresikan  adalah  p53 wild  type. Pada perlakuan DMBA+ekstrak 1500 mg/kgBB menunjukkan  adanya  warna  coklat  pada  sel hepar, namun intensitas warnanya lebih rendah dibandingkan dengan pada sel hepar kelompok perlakuan DMBA+ekstrak 750 mg/kgBB. Hal ini menandakan  bahwa  pada  kelompok  perlakuan
DMBA+ekstrak  1500  mg/kgBB  ekspresi  p53 lebih  rendah  daripada  pada  kelompok  perla- kuan  DMBA+ekstrak  750  mg/kgBB,  artinya
dosis  750  mg/kgBB  mampu  meningkatkan ekspresi  p53  lebih  efektif  dari  dosis  1500 mg/kgBB.
Gambar 2 – Pengamatan ekspresi p53 menggunakan metode IHC Kontrol CMC-Na (a). Kontrol DMBA (b). Ekstrak dosis 1500 mg/kg BB (c). Perlakuan DMBA+Ekstrak dosis 750 mg/kg BB (d). Perlakuan DMBA+Ekstrak dosis 1500 mg/kg BB (e). Pada preparat DMBA+ekstrak 750 mg/kgBB menunjukkan ekspresi p53 lebih intensif daripada preparat yang lain (perbesaran 1000x lensa obyektif). Keterangan :               Ekspresi p53
PEMBAHASAN
Manfaat rumput mutiara dalam pengobatan  kanker  perlu  dikembangkan.  Data- data  yang  diperoleh  melalui  penelitian  ini menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanolik  rumput mutiara memiliki potensi sebagai agen kemopreventif  melalui  mekanisme  pemacuan apoptosis  sel  kanker  tikus  yang  terinduksi DMBA.  Senyawa  yang  berperan  sebagai  agen antikanker  adalah  asam  ursolat  dan  asam oleanolat (Pheng et al ., 1997).
Menurut  Liu et  al .  (2004),  senyawa  aktif dalam  rumput  mutiara  yaitu  asam  oleanolat mampu menginduksi apoptosis sel tumor K562. Penelitian  ini  menunjukkan  pemberian  ekstrak etanolik rumput mutiara pada hewan uji selama 7  hari  belum  mampu  menginduksi  apoptosis. Peristiwa  apoptosis  sering  dikaitkan  dengan protein p53, yaitu protein yang akan terekspresi ketika terjadi kesalahan pada siklus sel. Protein p53  akan  menginduksi  terjadinya cell  cycle arrest. Protein p53 akan menginduksi peningkatan  level p21.  Respon  tersebut
bertujuan  memberikan  waktu  untuk  reparasi atas  kerusakan  DNA  yang  terjadi.  Namun,  jika kesalahan  yang terjadi tidak mampu diperbaiki, ekspresi p53 meningkat sehingga akan menginduksi  terjadinya  kematian  sel  atau proses  apoptosis  (Hanahan and Weinberg , 2000).  Pengecatan  ekspresi  p53  menggunkan antibodi  anti-p53  yang  mengenali  p53  mutan non-denaturasi  di  nukleus  atau  p53 wild  type terdenaturasi di sitoplasma. Warna coklat pada sitoplasma sel menunjukkan p53 yang diekspresikan  adalah  p53 wild  type di  sito- plasma  yang  mempunyai  peran  pada  regulasi siklus  sel  ataupun  apoptosis  (Matlashewsky, 1999).
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa dengan  pemberian  ekstrak  etanolik  rumput mutiara  selama  7  hari  pada  hewan  uji, menyebabkan  peningkatan  ekspresi  p53  pada sel  hepar  tikus  terinduksi  DMBA.  Akan  tetapi pada  perlakuan  ini  belum  memperlihatkan adanya  kejadian  apoptosis  sel.  Hal  ini  bisa disebabkan  karena  waktu  pemberian  dosis
kurang lama dan dosis  yang digunakan kurang tinggi. Penelitian terdahulu menunjukkan ekstrak  telah  mampu  menghambat  proliferasi sel  (Sukamdi et  al .,  2008;  Febriansah et  al ., 2008).  Ekspresi  p53  dalam  percobaan  ini dimungkinkan berkaitan dengan proses penghambatan  proliferasi  sel.  Ekstrak  ini  dapat dikembangkan  lebih  lanjut  sebagai  agen kemopreventif.

## KESIMPULAN
Pemberian  ekstrak  etanolik  rumput  mutiara belum  memperlihatkan  apoptosis  sel  namun dapat meningkatkan ekspresi p53.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terima  kasih  kepada  DP2M  DIKTI melalui  PKM  2008  dan  GKI  UGM  2008  atas biaya yang diberikan dalam penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Amudson,  S.A.,  Myers,  T.G., and Fornace  Jr,  A.J.,  1998.,  Roles  for  p53  in  Growth  Arrest  and Apoptosis: Putting On The Brakes After Genotoxic Stress, Oncogene , 17 , 3287 –3299
Febriansah,  R.,  Asyhar,  A., and Ashari,  R.A.,  2008,  Ekstrak  Etanolik  Rumput  Mutiara  ( Hedyotis corymbosa )  Berefek  Antiproliferasi  terhadap  Sel  Hepar  Tikus  Galur  Sprague  Dawley  Terinduksi 7,12-Dimetil Benz[ a ]Antrasena melalui Penghambatan Ekspresi Protein C-MYC, Prosiding Kongres Ilmiah XVI ISFI 2008 , ISBN: 978-979-95107-6-2. Ikatan Sarjana Farmasi Indonesia
Gibbs,  JB.,  2000,  Anticancer  Drug  Targets:  Growth  Factor  and  Growth  Factor  Signaling, J.  Clin. Inves ., 105 (1): 9 –13
Hanahan, D. and Weinberg,  R.A., 2000, The Hallmarks of Cancer, Cell , 100 , 57 –70
Khastgir,  H.N.,  Sengupta,  S.K., and Sengupta,  P.,  1960,  Note  on  The  Constituents  of  The  Indian Medicinal Plan Oldenlandia corymbosa Linn, Journal of The American Pharmaceutical Association , 49 , 562 –563
King, R.J.B., 2000, Cancer Biology , 2 nd Ed., Pearson Eduation Limited, London
Liu, H., Sanlong, W., Bin Cai, and Xinsheng, Y., 2004, Anticancer Activity of Compounds Isolated from Engelhardtia serrata Stem Bark, Pharmaceutical Biology , 42 : 475 –477
Matlashewsky, G. 1999. p53: Twenty years on, Meeting Review, Oncogene , 18 :7618-7620
Nuñez, G., Benedict, M.A., Hu, Y., and Inohara, N., 1998, Caspases: the proteases of the apoptotic pathway, Oncogene , 17 :3237 –3245
Parkin D.M., Bray, F., Ferlay, J., and Pisani, P., 2005, Global Cancer Statistics 2002, CA Cancer J Clin ., 55 , 74 –108
Peng, J.N., Feng, X.Z., Li G.Y., and Liang, X.T., 1997,  Chemical investigation of genus Hedyotis. II. Isolation and identification of iridoids from Hedyotis chrysotricha , Yao Xue Xue Bao , 32 :908 –913
Schafer., K.A. 1998. The Cell Cycle: A Review. Vet Pathol ., 35: 461-478.
Sukamdi,  D.P.,  Stefani, and Palupi,  K.P.,  2008,  Potensi  Antiproliferasi  Ekstrak  Etanolik  Hedyotis corymbosa  (L)  Lamk  terhadap  Sel  Hepar  Tikus  Terinduksi  7,12-Dimetil  Benz[ a ]Antrazena, Prosiding  Kongres  Ilmiah  XVI  ISFI  2008 ,  ISBN:  978-979-95107-6-2,  Ikatan  Sarjana  Farmasi Indonesia
Wyllie,  A.H.,  2000, Cell  Death,  Apoptosis,  and  Cell  Proliferatio n,  Roche  Diagnostic  Corporation, German