Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.12, No.1, Mei 2023, pp. 70 -76 ISSN 2715-1115 (Online), ISSN 2302 – 8610 (Print)

## Nanocrystalline Toothpaste Formulation of Usnic Acid and Antibacterial Activity Test Against Streptococcus Mutans Formulasi Sediaan Pasta Gigi Nanokristal
Asam Usnat Dan Uji Aktivitas Antibakteri Terhadap

## Streptococcus Mutans
Henni Rosaini 1 , Rina Wahyuni 2 , Sapra Nadia 3 , Wahyu Margi Sidoretno 4 , Yan Hendrika 5 1,2,3 Prodi S-1 Farmasi, Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi, Padang, Indonesia
4 DIII Analis Farmasi dan Makanan, Universitas Abdurrab, Pekanbaru, Indonesia 5 Prodi S-1 Farmasi, Universitas Abdurrab, Pekanbaru, Indonesia Email Coresponden : wahyu.margi@univrab.ac.id

## Abstract
Usnic acid is a secondary metabolic compound derived from the genus usnea which has antibacterial activity. This study aims to determine the formulation of usnic acid nanocrystalline toothpaste and its antibacterial activity. The formula was prepared in  four  concentrations,  namely  F0  (1%  usnic  acid  nanocrystals  without preservatives), F1 (preservative only), F2 (2% usnic acid nanocrystals), F3 (3% usnic acid nanocrystals) and F4 (4% usnic acid nanocrystals). All formulas were tested for physicochemical characteristics (organoleptic, homogeneity, pH, foam formation) and tested for antibacterial activity against Streptococcus mutans. The results of the physicochemical characteristics test showed that all formulas met the physicochemical quality requirements of toothpaste. Antibacterial activity test with well method produced inhibition diameters of F0 (12.87 mm), F1 (6.26 mm), F2 (13.79 mm), F3 (14.16 mm), F4 (14.47 mm) and Positive Control 22.26 mm. Statistical  results  using  the  One  Way  ANOVA  method  at  the  95%  level  of confidence,  followed  by  Duncan's  test  showed  that  there  was  a  significant difference in the diameter of inhibition between each formula. Keywords:
Toothpaste Formulation ; Nanocrystal of Usnic acid; Antibacterial Activity Test

## Abstrak
Asam usnat merupakan senyawa metabolik sekunder berasal dari genus usnea yang memiliki aktivitas antibakteri . Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui formulasi  pasta  gigi  nanokristal  asam  usnat  dan  aktivitas  antibakterinya. Formula dibuat dalam empat konsentrasi yaitu F0 (1% nanokristal asam usnat tanpa pengawet), F1 (hanya pengawet), F2 (2% nanokristal asam usnat), F3 (3%  nanokristal  asam  usnat)  dan  F4  (4%  nanokristal  asam  usnat).  Semua formula dilakukan uji karakteristik fisikokimia (organoleptik, homogenitas, pH, pembentukkan  busa)  dan  uji  aktivitas  antibakteri  terhadap Streptococcus mutans .  Hasil  pengujian  karakteristik  fisikokimia  menunjukkan  semua  formula memenuhi syarat mutu fisikokimia pasta gigi. Uji aktivitas antibakteri dengan metoda sumuran menghasilkan diameter hambat sebesar F0 (12,87 mm), F1 (6,26 mm), F2 (13,79 mm), F3 (14,16 mm), F4(14,47 mm) dan Kontrol Positif 22,26 mm. Hasil statistik menggunakan metode One Way ANOVA pada taraf kepercayaan 95%, dilanjutkan dengan uji Duncan menunjukan bahwa adanya perbedaan diameter hambat yang signifikan antara masing-masing formula. Kata Kunci:
Formulasi pasta gigi ; Nanokristal Asam Usnat; Uji Aktivitas Antibakteri
Article Info
Article history Received date: 2023-05-23 Revised date: 2023-06-27 Accepted date: 2023-07-22
Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.12, No.1, Mei 2023, pp. 70 -76 ISSN 2715-1115 (Online), ISSN 2302 – 8610 (Print)
Wahyu Margi Sidoretno and wahyu.margi@univrab.ac.id

## PENDAHULUAN
Berdasarkan  hasil  Riset  Kesehatan  Dasar (Riskesdas)  tahun  2018,  persentase  penduduk yang  mempunyai  masalah  gigi  dan  mulut meningkat  dari  25,9%  menjadi  57,6%  [1]. Proporsi  terbesar  masalah  gigi  di  Indonesia adalah  gigi  rusak/berlubang/sakit  (45,3%) Sedangkan  masalah  kesehatan  mulut  yang mayoritas dialami penduduk Indonesia adalah gusi  bengkak  dan/atau  keluar  bisul  (abses) sebesar 14% [2].  Masalah gigi dan mulut yang paling rentan diderita masyarakat luas adalah karies  gigi.  Bakteri  yang  paling  umum menyababkan kerusakan gigi adalah S treptococcus  mutans kemudian  diikuti  dengan Lactobacillus  casein dan Streptococcus  sanguis [3]. Keries gigi merupakan salah satu penyakit gigi  yang  telah  menyebar  luas  di  sebagain besar penduduk dunia. Karies gigi artinya gigi berlubang dan ditandai oleh rusaknya lapisan email dan dentin yang terjadi secara progresif yang disebabkan oleh aktivitas mikroorganisme  dalam  mulut  atau  bakteri dalam plak [4].
Asam  usnat  merupakan  salah  satu  senyawa metabolik  sekunder  yang  berasal  dari  Genus usnea . Asam usnat memiliki aktivitas antimikroba  yang  baik  terhadap  sejumlah planktonik  bakteri  gram  positif  seperti Streptococcus  aureus,  Enterococcus  faecalis, Enterococcus  faecium dan  beberapa  jamur pathogen  [5].  Asam  usnat  sebagai  zat  murni telah diformulasikan dalam bentuk krim, pasta gigi, obat kumur, deodoran, produk tabir surya dan juga sebagai bahan pengawet [6]. Nanokristal  adalah  gabungan  dari  banyak molekul  yang  membentuk  suatu  kristal, merupakan  senyawa  obat  murni  dengan penyalutan  tipis  dengan  menggunakan surfaktan.  Nanokristal  memungkinkan  menjadi pengembangan formulasi melalui rute pemberian dimana ukuran partikel merupakan faktor  kritis,  seperti  obat  tetes  mata,  cairan infus, dan obat suntik [7]. Baru-baru ini, pasta gigi yang mengandung nanokristal hidroksiapatit berkarbonasi sedang dipelajari.
Pasta  gigi  ini  memiliki  aktivitas  tinggi  dimana mereka  berikatan  dengan  enamel  dan  apatit dentin  yang  menghasilkan  lapisan  biomimetik pada enamel, dan kontras dengan pembentukan  plak  gigi  dan  mencegah kerusakan gigi [8].
Pasta  gigi  merupakan  salah  satu  produk perawatan  mulut  yang  digunakan  pada kehidupan  sehari-hari,  dengan  komposisi kimiawi  yang  berbeda-beda  tergantung  dari produksi pabrik.  Pasta gigi dapat dikatakan sebagai  suatu  produk  kosmetik  ataupun  obat tergantung  fungsi  dan  kemampuan  yang diberikan oleh pasta gigi tersebut [9]. Namun banyak  masyarakat  yang  tidak  tahu  bahwa kebanyakan pasta gigi bermerek mengandung sejumlah bahan yang tidak sehat. Sedangkan pasta gigi herbal tidak mengandung pewarna, rasa atau fluorida buatan [10].
Berdasarkan  latar  belakang  di  atas,  pada penelitian  ini  dilakukan  formulasi  nanokristal asam usnat sebagai zat aktif untuk pembuatan sedian pasta gigi dan uji aktivitas antibakteri pasta  gigi  nanokristal  asam  usnat  terhadap bakteri Streptococcus mutans .

## METODE
Penelitian  dilaksanakan  di  Laboratorium Teknologi Farmasi dan Laboratorium
Mikrobiologi  Sekolah  Tinggi  Ilmu  Farmasi (STIFARM)  Padang.  Penelitian  ini  merupakan penelitian  eksperimental  deskriptif.  Pertama dilakukan pembuatan Nanokristal asam usnat. Bakteri uji yang digunakan adalah Streptococcus  mutan yang  diperoleh  dari Laboratorium Mikrobiologi Fakultas
Kedokteran  Universitas  Andalas  (UNAND)
Padang . Formulasi pasta gigi nanokristal asam Usnat,  dibuat  dengan  variasi  konsentrasi  F0 (1% nanokristal asam usnat tanpa pengawet), F1 (hanya pengawet), F2 (2% nanokristal asam usnat), F3 (3% nanokristal asam usnat) dan F4 (4% nanokristal asam usnat). Selanjutnya semua formula  yang  telah  dibuat  dilakukan  evaluasi fisikokimia  dilakukan  pada  hari  ke-1,  hari-7,
Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.12, No.1, Mei 2023, pp. 70 -76 ISSN 2715-1115 (Online), ISSN 2302 – 8610 (Print)
hari  ke-14  dan  hari  ke-21  penyimpanan [11] dan pengujian mikrobiologi.
Uji Organoleptis Dilakukan  pengamatan  visual  terhadap  bau, warna,  dan  bentuk  yang  diamati secara obyektif.  Pengamatan  ini  bertujuan  untuk melihat terjadinya perubahan secara signifikan pada sedian yang telah dibuat.

## Pemeriksaan Homogenitas
Pengujian homogenitas dilakukan dengan cara pasta  gigi  yang  akan  diuji  dioleskan  pada kaca  objek  untuk  diamati  homogenitasnya. Apabila tidak terdapat butiran-butiran diatas gelas  objek  tersebut,  maka  pasta  gigi  yang diuji dinyatakan homogen, sedangkan adanya butiran-butiran  kasar  menunjukkan  bahwa pasta gigi tidak homogen.

## Uji Pembentukan Busa
Uji pembentukan busa dilakukan dengan cara membuat larutan 1% dari berbagai konsentrasi pasta  gigi  nanokristal  asam  usnat  dalam  air. Kemudian dimasukkan ke dalam gelas ukur, lalu dikocok  selama  1  menit.  Kemudian  mengukur tinggi busa yang terbentuk.

## Pengukuran PH
Pengukuran
pH dilakukan dengan menggunakan  pH  meter  dengan  cara mencelupkan  alat  pH  meter  kedalam  sediaan pasta  gigi  sampai  menunjukkan  angka  yang konstan  setelah  beberapa  saat.  Nilai  pH didapatkan dari angka tersebut.
Uji  Aktivitas  Antibakteri  Pasta  Gigi Nanokristal Asam Urat Uji  aktivitas  antibakteri  pada  penelitian  ini menggunakan  metode  difusi  dengan  cara sumuran.  Prosedur  yang  dilakukan  adalah menyiapkan  media  Nutrien  Agar  (NA)  yang telah  disterilkan  dalam  autoklaf  suhu  121  ºC selama  15  menit.  Kemudian  dalam  keadaan masih hangat nutrient agar dituangkan pada 6 cawan petri steril sebanyak 15 mL dikerjakan
di  dalam  LAF  ( laminair  flow ),  lalu  diamkan hingga  padat.  Menyiapkan  suspensi  bakteri Streptococcus mutans yang telah diinokulasikan dalam  NaCl,  lalu  mencelupkan  kapas  steril kedalam  suspensi  bakteri  kemudian  dioleskan pada medium NA. Membuat sumuran (lubang) pada medium nutrient agar menggunakan alat tipis  diameter  7  mm,  kemudian  menyiapkan sampel  pasta  gigi  sebanyak  0,1  gram  pada variasi  konsentrasi  1%,  2%,  3%,  4%,  kontrol negatif dan kontrol positif. Pengujian dilakukan dengan  cara  memasukkan  pasta  gigi  dengan berbagai konsentrasi masing-masing sebanyak 0,1 gram ke dalam sumuran, kemudian cawan petri  diinkubasi  selama  24  jam  pada  suhu 37ºC. Pengukuran dilakukan pada zona bening yang  terbentuk  disekeliling  sumuran  yang menunjukkan  zona  hambat  pertumbuhan bakteri [11].

## Analisis Data
Data  kemudian  dikumpulkan  pada  pengujian mutu fisik kimia dianalisis secara deskriptif dan data aktivitas antibakteri diolah secara statistik dengan metode One Way ANOVA pada taraf kepercayaan  95%.  Dilanjutkkan  dengan  uji Duncan menggunakan program SPSS 22.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pemeriksaan  organoleptis  pasta  gigi  selama 21 hari penyimpanan dapat dilihat pada table 1. Bentuk pasta yang dihasilkan hampir sama namun  peningkatan  intensitas  warna  yang berbeda  antara  formula  F0,  F2,  F3  dan  F4 disebabkan  oleh  penambahan  bahan  aktif yaitu nanokristal asam usnat yang digunakan, pada F1 sediaan berwarna putih karena tidak ada penambahan zat aktif dan bentuk sediaan pada  F1  agak  kental  ini  dipengaruhi  karena tidak adanya penambahan zat aktif. Demikian juga  parameter  bau,  pasta  gigi  adalah  khas nanokristal  asam  usnat,  semakin  besar konsentrasi  nanokristal  asam  usnat  yang digunakan maka baunya akan semakin khas.
Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.12, No.1, Mei 2023, pp. 70 -76 ISSN 2715-1115 (Online), ISSN 2302 – 8610 (Print)
Tabel  1.  Hasil  Uji  Organoleptis  Sediaan  Pasta  Gigi
Nanokristal Asam Usnat . Sampel Bau Warna Bentuk F0 Bau khas Hijau muda Kental F1 Bau khas Putih Agak kental F2 Bau khas Hijau muda Kental F3 Bau khas Hijau muda Kental F4 Bau khas Hijau tua Kental
Organoleptis  merupakan  salah  satu  kontrol kualitas  untuk  spesifikasi  produk  jadi  sediaan semi padat seperti pasta gigi. Uji organoleptis merupakan  pengujian  subjektif  dengan pengamatan  bentuk,  warna,  dan  bau.  Sifat- sifat ini akan berhubungan dengan kenyamanan pengguna sediaan. Sediaan yang dihasilkan  sebaiknya  memiliki  bau  yang menyenangkan. Berdasarkan SNI 8861-2020, sediaan pasta ggi dikatakan baik jika memiliki tekstur lembut, homogen, tidak ada gelembung udara,  gumpalan  dan  partikel  yang  terpisah [12] Pemeriksaan homogenitas memperlihatkan hasil kelima formula (F0, F1, F2, F3 dan F4) memiliki homogenitas  yang  berbeda,  dibuktikan dengan  adanya  granul-granul  kasar  pada kaca  objek  pada  F1  akibat  dari  pengerusan yang  tidak  merata  karena  menggunakan lumpang  sehingga  pada  F1  sediaan  tidak homogen. Tetapi pada F0, F2, F3 dan F4 tidak terlihat  adanya  partikel-partikel  kasar sehingga  menghasilkan  pasta  gigi  yang homogen.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  semua bahan  tambahan  dan  nanokristal  asam  usnat sebagai  zat  aktif  yang  digunakan  dalam pembuatan  pasta  gigi  tercampur  secara merata.  Pasta  gigi  nanokristal  asam  usnat memiliki sifat fisik yang baik dalam berbagai kosentrasi  dengan  homogenitas  tetap  baik selama  21  hari  penyimpanan.  Pengujian homogenitas  bertujuaan  untuk  menganalisa tingkat  atau  perubahan  homogenitas  pada sediaan  pasta  gigi  yang  mungkin  terjadi karena  beberapa  faktor.  Misalnya  faktor penyimpanan  selama  berminggu-minggu  dan
misalnya  kurang  halus  mengayak  butiran  dan kurangnya pengadukan.
Pengukuran pH pasta gigi dilakukan selama 21 hari penyimpanan, nilai pH pasta gigi F0, F1, F2, F3 dan F4 masih masuk dalam persyaratan pH untuk pasta gigi yaitu berkisar antara 4,5- 10,5  [13].  Pada  pengujian  pH  pasta  gigi nanokristal  asam  usnat  menunjukkan  bahwa semakin  tinggi  kosentrasi  nanokristal  asam usnat  pada  pasta  gigi  maka  semakin  rendah pH  pasta  gigi  nanokristal  asam  usnat  dan kemungkinan juga disebabkan karena senyawa-senyawa  kimia  yang  terkandung dalam  nanokristal  asam  usnat  dapat  dilihat pada tabel berikut ini;
Tabel  2.  Hasil  Pemeriksaan  pH  Sediaan  Pasta  Gigi
Nanokristal Asam Usnat Sampel Hari ke- 1 Hari ke- 7 Hari ke- 14 Hari ke-21 F0 5,52 5,58 5,55 5,61 F1 5,72 5,69 5,72 5,77 F2 5,50 5,49 5,48 5,49 F3 5,31 5,40 5,38 5,40 F4 5,25 5,36 5,29 5,27
Nilai  pH  pasta  gigi  nanokristal  asam  usnat selama  penyimpanan  21  hari  mengalami perubahan  pH  pada  masing-masing  formula, tetapi  masih  masuk  dalam  persyaratan  pH pasta  gigi  berdasarkan  SNI.  Perubahan  pH pada setiap formula disebabkan karena faktor lingkungan  seperti  perubahan  suhu  karena penyimpanan  dilakukan  pada  suhu  ruang, pengadukan  formula  yang  tidak  homogen, serta wadah penyimpanan yang kurang kedap sehingga memungkinkan udara masuk. Pengujian  pH  pasta  gigi  dilakukan  untuk mengetahui  apakah  pasta  gigi  memenuhi persyaratan mutu fisik pasta gigi, stabil selama penyimpanan dan diharapkan tidak mengiritasi mukosa mulut. Pasta gigi dengan pH yang  rendah  dapat  menyebabkan  iritasi  dan mempermudah
pertumbuhan bakteri asidogenik yang hidup pada lingkungan asam seperti Streptococcus mutans dan Lactobacillus pada pH 4,5-5,5. Selain itu, pH di bawah 5,5
Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.12, No.1, Mei 2023, pp. 70 -76 ISSN 2715-1115 (Online), ISSN 2302 – 8610 (Print)
berpotensi menyebabkan
terjadinya demineralisasi  gigi  dan  kerusakan  email  gigi sehingga menyebabkan karies gigi [14]. Pemeriksaan  pembentukan  busa  pasta  gigi selama  21  hari  penyimpanan  menunjukkan bahwa pasta gigi nanokristal asam usnat dapat menghasilkan  busa  saat  digunakan.  Tinggi pembentukkan busa yang ditimbulkan pada F0, F1, F2, F3 dan F4 tidak terlalu jauh menunjukan perbedaan  disetiap  minggu  pengujian, dikarenakan  kecepatan  pengocokan  yang tidak teratur sehingga menghasilkan busa yang tidak  teratur  juga  pada  setiap  minggu pengujian.  Tidak  jauhnya  perbedaan  daya busa yang ditimbulkan kemungkinan disebabkan  karena  konsentrasi  natrium  lauryl sulfat yang digunakan sebagai surfaktan sama yaitu  1%.  Banyak  atau  sedikit  busa  yang dihasilkan  dipengaruhi  oleh  bentuk  sediaan pasta  gigi  jika  bentuk  sediaan  padat  maka busa  yang  dihasilkan  sedikit,  sebaliknya  jika bentuk  sediaan  lebih  encer  maka  busa  yang dihasilkan akan lebih banyak.
Tabel  3.  Hasil  Pembentukan  busa  sediaan  Pasta  Gigi
Nanokristal Asam Usnat. Sampel Hari ke- 1 Hari ke- 7 Hari ke- 14 Hari ke-21 F0 6,8 7,4 7,3 6,4 F1 6,0 7,5 7,5 6,6 F2 7,4 7,2 7,2 6,7 F3 6,0 6,8 7,3 6,0 F4 6,7 7,0 7,4 7,1
Pengujiaan  pembentukkan  busa  pasta  gigi bertujuaan  untuk  mengetahui  apakah  pasta gigi  menghasilkan  busa  saat  digunakan  dan berapa tinggi busa yang dihasilkan oleh pasta gigi. Suatu sediaan pasta gigi dikatakan baik jika terbentuk busa. Pembentukan busa dapat dihubungkan  dengan  dengan  terbentuknya suspensi  dan  kemampuan  untuk  membersihkan makanan atau kotoran gigi pada saat proses gosok gigi [15].
Pengujian  antibakteri  pasta  gigi  nanokristal asam  usnat  dilakukan  untuk  mengetahui  daya hambat  nanokristal  asam  usnat  yang
diformulasikan  dalam  sediaan  pasta  gigi. Bakteri  yang  digunakan  adalah Streptococcus mutans . Pengujian dilakukan dengan menggunakan metode difusi agar dengan cara sumuran.  Metode  Difusi  sumuran  adalah dengan  membuat  lubang  pada  media  agar padat  yang  telah  diinokulasi  dengan  bakteri. yang telah diinokulasi dengan bakteri. Jumlah lubang  disesuaikan  dengan  tujuan  penelitian, kemudian  lubang  dimasukkan  ekstrak  yang diuji. Setelah dilakukan inkubasi, pertumbuhan bakteri  diamati  untuk  melihat  ada  atau tidaknya daerah hambatan di sekeliling lubang [16].  Pasta  gigi  F0  dengan  konsentrasi nanokristal  asam  usnat  1%  ,  F1  pasta  gigi tanpat nanokristal asam usnat (kontrol negatif), F2  konsentrasi  nanokristal  asam  usnat  2%,  F3 konsentrasi nanokristal asam usnat 3% dan F4 konsentrasi  nanokristal  asam  usnat  4%  dan kontrol  positif  pasta  gigi  herbal  dari  PT. Unilever yang beredar di pasaran.
Tabel  4.  Hasil  Pembentukan  busa  sediaan  Pasta  Gigi
Nanokristal Asam Usnat. Sampel Daya hambat (mm) F0 12,87 F1 6,26 F2 13,79 F3 14,16 F4 14,47 Kontrol positif 22,26
Berdasarkan hasil data uji SPSS 22 didapatkan data yang normal karena nilai Sig-nya besar dari  0,05,  setelah  didapatkan  data  yang normal  dilanjukan  dengan  uji  homogenitas dengan  nilai  sig  homogenitas  0,089  sehingga dapat  dikatakan  data  yang  kita  peroleh homogen. Kemudian dilanjutkan dengan uji One Way ANOVA  dimana  pada  uji  anova didapatkan  nilai  sig  kecil  dari  0,05  yang menyatakan bahwa tidak terjadinya perbedaan  pada  data  yang  diperoleh. Kemudian  dilanjutkan  pada  uji  Duncan, pengujian  aktivitas  antibakteri  pasta  gigi nanokristal  asam  usnat  terhadap  bakteri Streptococcus mutans untuk  pasta gigi dengan
Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.12, No.1, Mei 2023, pp. 70 -76 ISSN 2715-1115 (Online), ISSN 2302 – 8610 (Print)
Wahyu Margi Sidoretno and wahyu.margi@univrab.ac.id
konsentrasi  nanokristal  asam  usnat  1% menghasilkan  diameter  daya  hambat  12,87 mm,  diameter  daya  hambat  untuk  pasta  gigi dengan konsentrasi nanokristal asam usnat 2% adalah  13,79  mm,  diameter  daya  hambat untuk pasta gigi dengan konsentrasi nanokristal asam usnat 3% adalah 14,16 mm dan diameter daya  hambat  pasta  gigi  dengan  konsentrasi asam  usnat  4%  adalah  14,47  mm.  Hasil  ini menunjukkan bahwa semakin tinggi konsentrasi nanokristal asam usnat dalam pasta gigi maka diameter  daya  hambat  antibakteri  akan semakin  besar.  Hal  ini  disebabkan  karena semakin  tinggi  konsentrasi  bahan  uji, menunjukkan  semakin  besar  jumlah  zat  aktif yang  terkandung  dalam  pasta  gigi,  maka semakin  besar  pula  kemampuan  bahan  uji dalam  menghambat  pertumbuhan  suatu bakteri.  Hasil  diameter  daya  hambat  untuk kontrol positif adalah 22,26 mm. Hasil diameter daya hambat pasta gigi nanokristal asam usnat pada  semua  formula  pasta  gigi  nanokristal asam  usnat  masih  belum  sebanding  dengan pasta  gigi  herbal  yang  beredar  di  pasaran (kontrol  positif)  dalam  menghambat  bakteri Streptococcus  mutans, tetapi  semua  formula pasta  gigi  nanokristal  asam  usat  telah menunjukkan  aktivitas  sebagai  antibakteri karena  suatu  bahan  baru  dapat  dikatakan memiliki  aktivitas  antibakteri  bila  diameter hambatan  yang  terbentuk  adalah  lebih  dari atau  sama  dengan  6  mm  [16,  17].  Senyawa asam usnat merupakan senyawa yang memiliki aktivitas antibakteri dan bersifat sebagai agen sitotoksik yang kuat [18].
Kontrol negatif pada pengujian antibakteri ini memberikan  daya  hambat  terhadap  bakteri Streptococcus  mutans dengan  diameter  daya hambat  adalah  6,26  mm,  tetapi  hasil  yang diperoleh  tidak  sebanding  dengan  daya hambat  pada  setiap  formula  pasta  gigi nanokristal  asam  usnat.  Daya  hambat  yang diperoleh  pada  kontrol  negatif  disebabkan karena  pasta  gigi  menggunakan  natrium benzoat,  nipagin  dan  nipasol  sebagai pengawet  [19,20].  Data  diameter  daya
hambat  yang    diperoleh  merupakan  selisih antara  diameter  daya  hambat  sedian  pasta gigi  nanokristal  asam  usnat  dengan  sediaan pasta  gigi  tanpa  nanokristal  asam  usnat (kontrol negatif ).

## SIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  dilakukan dapat  disimpulkan  bahwa  nanokristal  asam usnat dapat diformulasi dalam bentuk sediaan pasta  gigi.  Aktivitas  antibakteri  pasta  gigi nanokristal  asam  usnat  dengan  diameter hambat yaitu 12,87 mm, 6,26 mm, 13,79 mm, 14,16 mm, 14,47 mm dan 22,26 mm berturut- turut untuk F0, F1, F2, F3 dan F4.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terimakasih  kepada Ketua  Sekolah  Tinggi  Ilmu  Farmasi  (STIFARM) Padang, Ketua Yayasan Peguruan Tinggi Ilmu Kesehatan  (YPTIK)  Padang,  LPPM  Universitas Abdurrab  yang  telah  memberikan  izin penelitian.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] Kementerian Kesehatan Republik Indonesia, Laporan Riset Kesehatan dasar 2018 ,  Pusat  Data  dan  Informasi Kementerian Kesehatan Republik Indonesia, 2019. [2] Kementerian Kesehatan Republik Indonesia, Situasi kesehatan gigi dan mulut 2019 , Jakarta: Pusat Data dan Informasi Kementerian Kesehatan Republik Indonesia, 2020. [3] Pratiwi,  R.,  ”Perbedaan  daya  hambat terhadap  Streptococcus  mutans  dari beberapa pasta gigi yang mengandung herbal ( The difference of inhibition zones toward  Streptococcus  mutans  among several herbal toothpaste)”, Maj.Ked.Gigi (Dent. J.) , vol. 38, no. 2, pp. 64-67 [4] Kidd & Edwina A. M., Dasar- Dasar Karies Penyakit Dan Penanggulangannya , Jakarta: EGC, 1991.
Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.12, No.1, Mei 2023, pp. 70 -76 ISSN 2715-1115 (Online), ISSN 2302 – 8610 (Print)
Wahyu Margi Sidoretno and wahyu.margi@univrab.ac.id
[5] Francolini, I., Norris, P., Poizzi, A., Donelli, G., &Stoodley, P. “Usnic Acid, a Natural Antimicrobial  Agent  Able  to  Inhibit Bacterial  Biofilm  Formation  on  Polymer Surface”. Antimicrobial  agents  and chemotherapy , vol. 48, no. 11, pp. 4360- 4365, 2004.
[6] Ingolfsdottir,  K.  “Moleculer  of  interest Usnic acid”. Phytochemistry , vol. 61, no. 1, pp.  729-736, 2002.
[7] Rawat,  M.,  Singh,  D  &  Saraf,  S. “Nanocarriers:  promising  vehicle  for bioactive  drugs”. Biology Pharmaceutical Bulletin , vol. 29, no. 9, pp. 60-67, 2006.
[8] Khetawat, S., & Lodha, S. “Nanotechnology (Nanohydroxypatite Crystals): Recent Advancement in Treatment  of  Dentinal  Hypersensitivity”. Journal  of  Interdisciplinary  Medicine  and Dental  Science ,  vol.  3,  no.  3,  pp.1-4, 2015.
[9] Davies,  R.,  Scully,  C.,  &  Preston,  A.  J. “Dentifrices  -  an  update”. Biomaterials and  Bioengineering  in  Dentistry, vol.  15, no. 6, pp. 976–982, 2010.
[10] Abhay,  S.,  Dinimath,  B.M.  &Hullatti,  K.K. “Formulation  and  Spectral  Analysis  of New Poly Herbal Toothpaste”. Journal of Drug Delivery and Therapeutics , vol. 4, no. 6, pp. 68-74, 2014.
[11] Sari,  N.  P. Pengaruh  Konsentrasi
Poloxamer  188  Terhadap  Karakteristik Fisikokimia  Nanokristal  Asam  Usnat (Skripsi).  Padang:  STIFARM  Padang.
2018.
[12] Afni, N., Said, N., & Yuliet. “Uji aktivitas antibakteri pasta gigi ekstrak biji pinang ( Areca catechu L.) terhadap Streptococcus mutans dan Staphylococcus  aureus. GALENIKA” Journal  of  pharmacy, vol.  1, no. 1, pp. 48-58, 2015.
[13] Badan Standardisasi Nasional, “Standar Nasional  Indonesia  No.  8861tentang Pasta gigi”. Jakarta, Indonesia, 2020.
[14] Tanabe, T., M., Takakhasi, K., Shimoyama, Y.,  Toyoshima  and  Ueno,  T.  “Effects  of
Rehydration  and  Food  Consumption  on Salivary  Flow,  pH  and  Buffering Capacity  in  Young  Adult  Volunteers during Ergometer Exercise”. Journal of the International  Society  of  Sports  Nutrition. Vol. 10, no. 49,  pp. 1-6, 2013.
[15] Sidoretno,  M.,S.  A.Y.  Nasution.  Analisis Fisikokimia Pasta Gigi yang Mengandung Kalsium  berasal  dari  Tulang  Ikan  Patin (Pangasius Hypophthalmus), Jurnal Farmasi Higea , vol 12, no.2, 2020.
[16] Badan Standardisasi Nasional, “Standar Nasional  Indonesia  No.  12-3524-1995 tentang  Pasta  gigi”.  Jakarta,  Indonesia, 1995.
[17] Retnaningsih,  A.,  A.  Primadiamanti.,  I. Marisa, Uji daya hambat ekstrak etanol biji papaya terhadap bakteri Escherichia coli  dan  Shigella  dysentriae  dengan Metode  Difusi  Sumuran, Jurnal  Analis Farmasi , vol. 4, no. 2, pp.122-129, 2019.
[18] Sepahvand,  A.  E.S-Sroka,  P.  Ramak,  V. Karimian.,  “  Usnea  sp:  Antimicrobial potential, bioactive compounds,
ethnopharmacological  uses  and  other pharmacological  properties;  a  review article”. Journal  of  Ethnopharmacology , vol. 268, 113656, 2021.
[19] Maghfirah,  F.,  Saputri,  D.,  &  Basri. “Aktivitas Pembentukan Biofilm Streptococcus mutan dan Candida albicans Setelah  Dipapar  Dengan Cigarette Smoke Condensate dan Minuman Probiotik” , Journal Caninus Denstistry , vol. 2, no. 1, pp. 12-19, 2017.
[20] Manja,  K,  N.,  “Review  On-Ingredients Used  In  Toothpaste  Formulation”, Indian Journal  of  Medical  reseach  and Pharmaceutical Sciences , vol 7, no. 9, pp. 9-15, 2020.