Pengaruh pemberian ekstrak  kedelai hitam ( Glycine soja .) berbagai dosis terhadap kadar glukosa darah, kadar insulin, dan HOMA-IR
Dewi M Kurniawati 1* , Edi Dharmana 2 , Banundari Rachmawati 3 , Tjokorda Gde Dalem Pemayun 4

## ABSTRACT
Background: Obese  is  risk  factor  for  abnormal  glucose  homeostasis  and  causes  oxidative  stress  that  can  decrease  insulin sensitivity  resulting  in  hyperglycemia  and  hyperinsulinemia.  Black  soy  bean  contains  anthocyanins  and  isoflavones,  it  is expected to reduce oxidative stress.
Objective: Determine the effect of various dosage of black soybean extract (Glycine soja.) on blood glucose, insulin levels, and HOMA - IR in obese Sprague Dawley (SD) rats.
Methods: True experimental study with randomized controlled pre test-post test design in male SD rats. Twenty four samples divided into 4 groups: control (K), 500 (P1), 750 (P2), and 1000 mg/kgBW (P3). Rats were induced to become obese with High Fat Sucrose Diet (HFSD) for 4 weeks then black soybean extracts were given for 2 weeks..
Results: There  was  no  difference  in  blood  glucose  before  and  after  treatment  (p>  0.05).  There  were  differences  on  insulin levels in 500 (p = 0.012) and 750mg/kgBW (p = 0.020) doseges. There were differences on HOMA-IR in 500 (p = 0.043) and 750mg/kgBW (p = 0.028) dosages. There was difference in insulin levels’s difference (p = 0.009) between groups. Conclusion: There  are  differences  on  insulin  levels  and  HOMA  –  IR  in  500  and  750  mg/kgBW  dosages  groups.  However, there is no difference on blood glucose before and after black soybean extract treatment. The most decreased levels of blood glucose, insulin and HOMA- IR were in 750mg/kgBW dosage.
Keyword : Obese; hyperglycemia; insulin; black soybean extract

## ABSTRAK
Latar  belakang: Obesitas  merupakan  faktor  resiko  homeostasis  glukosa  yang  tidak  normal  dan  memicu  stres  oksidatif sehingga  dapat  menurunkan  sensitivitas  insulin  yang  menyebabkan  hiperglikemia  dan  hiperinsulinemia.  Kedelai  hitam mengandung antioksidan antosianin dan isoflavon yang diharapkan dapat mengurangi stres oksidatif.
Tujuan: Mengetahui  pengaruh  ekstrak  kedelai  hitam  (Glycine  soja.)  berbagai  dosis  terhadap  kadar  glukosa  darah,  kadar insulin, dan HOMA-IR pada tikus Sprague Dawley (SD) obesitas.
Metode: True  eksperimental  dengan  rancangan  randomized  controlled  pre  test-post  test  design  pada  tikus  SD  jantan.  Dua puluh empat sampel dibagi 4 kelompok: kontrol (K), dosis 500 (P1), 750 (P2), dan 1000 mg/kgBB (P3). Tikus dibuat obesitas dengan high fat sucrose diet (HFSD) selama 4 minggu kemudian diberi ekstrak kedelai hitam selama 2 minggu.
Hasil: Tidak  ada  perbedaan  kadar  glukosa  darah  sebelum  dan  setelah  perlakuan  (p  >  0,05).  Ada  perbedaan  kadar  insulin dosis 500 (p = 0,012) dan 750mg/kgBB (p = 0,020) serta ada perbedaan HOMA-IR dosis 500 (p = 0,043) dan 750mg/kgBB (p = 0,028). Terdapat perbedaan selisih kadar insulin (p = 0,009) antar kelompok.
Simpulan: Ada  perbedaan  kadar  insulin  dan  HOMA-IR  pada  dosis  500  dan  750  mg/kgBB,  namun  kadar  glukosa  darah sebelum  dan  setelah  pemberian  ekstrak  kedelai  hitam  tidak  berbeda.  Penurunan  kadar  glukosa  darah,  kadar  insulin,  dan HOMA-IR terbesar terdapat pada dosis 750mg/kgBB.
Kata kunci : obesitas; hiperglikemia; insulin; ekstrak kedelai hitam

## PENDAHULUAN
Obesitas  adalah  terjadinya  penumpukan  lemak yang berlebihan dalam tubuh yang dapat
menyebabkan gangguan metabolik diataranya Diabetes  Melitus  (DM),  penyakit  kardiovaskuler, Non-Alcoholic  Fatty  Liver  Disease (NAFLD), dislipidemia,  dan  gangguan  metabolisme  lain. 1,2 Homeostasis  glukosa  merupakan  proses  untuk mempertahankan  kadar  glukosa  yang  stabil  dalam darah. 3 Namun,  pada  kondisi  obesitas,  homeostasis glukosa  akan  terganggu. 4 Resiko  Diabetes  Melitus Tipe 2 (DM Tipe 2) meningkat pada kondisi obesitas. Menurut World  Health  Organization (WHO),  pada tahun  2008  sebanyak  10%  laki-laki  dan  14% perempuan  dewasa  di  dunia  mengalami  obesitas. 5 Selain  itu,  WHO  juga  memprediksi  peningkatan pasien DM di Indonesia dari 8,4 juta pada tahun 2000 menjadi sekitar 21,3 juta pada tahun 2030. 6
1. Program  Studi  Ilmu  Gizi,  Departemen  Ilmu  Gizi,  Fakultas Kedokteran, Universitas Diponegoro. Jl. Prof. Soedarto SH Tembalang, Semarang 50275
2. Bagian  Parasitologi  Fakultas  Kedokteran,  Universitas Diponegoro. Kompleks RSUP Dr. Kariadi, Jln. Dr. Sutomo No.16, Randusari, Semarang 50244
3. Bagian  Patologi  Klinik  Fakultas  Kedokteran,  Universitas Diponegoro. Kompleks RSUP Dr. Kariadi, Jln. Dr. Sutomo No.16, Randusari, Semarang 50244
4. Bagian  Penyakit  Dalam  Fakultas  Kedokteran,  Universitas Diponegoro. Kompleks RSUP Dr. Kariadi, Jln. Dr. Sutomo No.16, Randusari, Semarang 50244
* Korespondensi: Email: dewimkurniawati@fk.undip.ac.id
Hubungan antara obesitas dan DM Tipe 2 dapat dijelaskan  melalui  2  mekanisme  yaitu  resistensi insulin  terkait  obesitas  dan  kegagalan  fungsi  sel  beta pankreas.  Obesitas  dan  gangguan  metabolisme  dapat menyebabkan dekompensasi sel beta, jika hal tersebut berlangsung  dalam  jangka  waktu  yang  lama,  maka akan menyebabkan hiperglikemia dan hiperinsulinemia. 7 Kelainan  metabolisme  tubuh  di mana  terjadi  penurunan  respon  atau  sensitivitas  aksi insulin  disebut  resistensi  insulin. 8 Resistensi  insulin terkait obesitas yang diketahui lebih awal, diharapkan dapat mencegah risiko DM Tipe 2 atau memperlambat tingkat  keparahannya. Homeostasis  Model  Asessment of  Insulin  Resistance (HOMA-IR)  merupakan  salah satu  indeks  pemeriksaan  resistensi  insulin.  Nilai HOMA-IR  dapat  diukur  dari  kadar  insulin  puasa (mIU/l) dan glukosa puasa (mmol/l). 9 Obesitas  selain  menyebabkan  resistensi  insulin juga  dapat  menyebabkan  stres  oksidatif. 4 Stres oksidatif  adalah  ketidakseimbangan  antara reactive oxygen species (ROS) dengan pertahanan antioksidan dalam  tubuh. 10 Aktivasi Protein  kinase  C-θ (PKC-θ) dan Protein kinase C-ε (PKC-ε) pada otot skeletal dan hati  salah  satunya  dipicu  oleh  peningkatan  asam lemak  bebas  dan  ROS.  Aksi  insulin  akan  terganggu oleh kinase tersebut melalui mekanisme penghambatan fosforilasi protein IRS pada jalur PI-3- kinase. 11 Di otot, mekanisme tersebut akan menurunkan  sintesis  glikogen  otot  dan  menurunkan translokasi  GLUT-4  di  membran    plasma,  sedangkan di hati, mekanisme tersebut akan menurunkan sintesis glikogen  hati,  meningkatkan  glukoneogenesis  hati serta menurunkan aktivasi glikogen sintase. 12
Terdapat  beberapa  zat  antioksidan  yang berperan  dalam  memperbaiki  gangguan  metabolisme glukosa,  mencegah  resistensi  insulin,  mengatasi inflamasi  intraseluler  dan  menurunkan  terjadinya stress  oksidatif.  Salah  satu  bahan  pangan  yang memiliki kandungan antioksidan tinggi adalah kedelai hitam.  Kedelai  hitam (Glycine  soja.) memiliki kandungan antioksidan yang lebih tinggi dibandingkan  dengan  kedelai  kuning  dan  hijau. 13 Kandungan antioksidan dalam 100 gram kedelai hitam terdiri  dari  222,49  mg  antosianin  dan  367,00  mg isoflavon. 14
Penelitian yang menunjukkan efektivitas antosianin  atau  isoflavon  dalam  memperbaiki  aksi insulin telah dilakukan sebelumnya. Pemberian jagung ungu  dan  ekstrak  bilberry  yang  mengandung antosianin  diketahui  dapat  meningkatkan  sensitivitas insulin. 15,16 Penelitan lain menunjukkan bahwa ekstrak kedelai hitam dapat menurunkan kadar glukosa darah dan superoksida dismutase (SOD). 17 Namun, penelitian  mengenai  kedelai  hitam  yang  berperan dalam  memperbaiki  gangguan  metabolisme  glukosa, menurunkan  kadar  glukosa  darah  dan  meningkatkan
sensitivitas insulin beum pernah dilakukan. Penelitian ini  bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh  pemberian ekstrak  kedelai  hitam (Glycine  soja.) berbagai  dosis terhadap  kadar  glukosa  darah,  kadar  insulin,  dan HOMA-IR  pada  tikus Sprague  Dawley obesitas  yang diberi high fat sucrose diet (HFSD).

## BAHAN DAN METODE
Jenis penelitian eksperimental dengan rancangan randomized  controlled  pre  test-post  test design . Pemeliharaan hewan coba dilakukan selama 7 minggu  di  Laboratorium  Penelitian  dan  Pengujian Terpadu - Layanan Penelitian Pra Klinik
Pengembangan  Hewan  Percobaan  (LPPT-LP3HP) Universitas Gadjah Mada Yogyakarta (UGM).
Subjek penelitian  adalah tikus Sprague Dawley jantan dengan umur 6 minggu dan berat badan antara 120 - 180 gram. Besar sampel dihitung mengacu pada standar  WHO,  yaitu  5  ekor  tiap  perlakuan.  Namun, untuk  mengatasi dropout peneliti  menggunakan  6 ekor.  Penelitian  ini  terdiri  dari  1  kelompok  kontrol dan  3  kelompok  perlakuan,  sehingga  total  sampel adalah 24 ekor.
Fase  adaptasi  dilakukan  selama  7  hari, kemudian  semua  kelompok  diberi  diet High  Fat Sucrose  Diet (HFSD)  secara  oral  selama  4  minggu. Diet  tinggi  lemak  diberikan  sebanyak  21%  dari  total asupan  makan  dibuat  dari  minyak  babi  sebesar  15% dan  kuning  telur  sebesar  6%  yang  dicampur  hingga homogen.  Diet  tinggi  sukrosa  sebesar  34%  dari  total asupan makan dibuat dari sukrosa murni dan aquadest dengan  konsentrasi  100%. 18 Pemeriksaan  berat  badan dan  panjang  badan  dilakukan  setelah  pemberian HFSD selama 4 minggu untuk menentukan tikus yang masuk  dalam  kriteria  obesitas  menurut  indeks  Lee. Tikus  dinyatakan  obesitas  jika  nilai  indeks  obesitas Lee    >  0,300. 19 Tikus  yang  memenuhi  kriteria  dibagi menjadi  4  kelompok  secara  acak.Kelompok  kontrol (K)  yang  diberi  HFSD,  kelompok  perlakuan  1  (P1) diberi HFSD dan ekstrak kedelai hitam 500 mg/kgBB, kelompok  perlakuan  2  (P2)  diberi  HFSD  dan  ekstrak kedelai hitam 750 mg dan kelompok perlakuan 3 (P3) diberi  HFSD  dan  ekstrak  kedelai  hitam  1000 mg/kgBB.  Pemberian  ektrak  kedelai  hitam  dilakukan selama 2  minggu sesuai dengan dosis masing-masing kelompok. 17
Pengukuran  kadar  glukosa  darah  dan  insulin dilakukan  sebelum  dan  setelah  pemberian  ekstrak kedelai  hitam.  Pemeriksaan  kadar  glukosa  darah diukur  dengan  metode  GOD-PAP  dan  tikus sebelumnya dipuasakan selama 12 jam. Kadar insulin diperiksa  menggunakan  metode  ELISA  dengan gelombang  pembacaan  450  nm  yang  diukur  setelah tikus dipuasakan 12 jam. Nilai HOMA-IR merupakan gambaran  kemampuan  aksi  metabolik  insulin  yang
dapat  dilihat  dari  dari  konsentrasi  insulin  puasa (mIU/l) dan glukosa puasa (mmol/l).
Pembuatan  ekstrak  kedelai  hitam  dilakukan  di
Laboratorium Teknologi Pangan UNIKA
Soegijapranata.  Kedelai  hitam  varietas  Mallika dibersihkan  dan  dicuci  terlebih  dahulu,  kemudian dikeringkan  menggunakan  oven  pada  suhu  40  C. Kedelai  hitam  yang  telah  dikeringkan  kemudian dihaluskan hingga menjadi serbuk simplisia. Simplisia kemudian  ditempatkan  pada  wadah  kaca  dan dicampur  dengan  ethanol  70%.  Larutan  tersebut kemudian diaduk, ditutup rapat, dan direndam selama 5  hari  pada  suhu  ruang.  Setelah  5  hari,  rendaman disaring menggunakan kertas saring untuk memperoleh  filtratnya.  Filtrat  yang    diperoleh kemudian  dipekatkan    dengan    menggunakan rotary evaporator pada suhu 50  C.
Ekstrak  kedelai  hitam  selanjutnya  diperiksa aktivitas antioksidan dan total flavonoidnya. Pemeriksaan  aktivitas  antioksidan  menggunakan metode DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil), sedangkan  pemeriksaan  total  flavonoid  menggunakan metode spektrofotometri visibel.
Data  yang  diperoleh  diolah  dengan  program komputer.  Normalitas  data  diuji  menggunakan Saphiro-Wilk dilanjutkan  uji  t  dan Wilcoxon untuk mengetahui  perbedaan  kadar  glukosa  darah,  kadar insulin,  dan  nilai  HOMA-IR  sebelum  dan  sesudah
pemberian ekstrak kedelai hitam. Uji One-way Anova dan Kruskal  Wallis digunakan  untuk  mengetahui perbedaan  selisih  kadar  glukosa  darah,  kadar  insulin, dan  HOMA-IR  sebelum  dan  setelah  pemberian ekstrak  kedelai  hitam (Glycine  soja.) antar  kelompok dosis. 20

## HASIL

## Karakteristik Hewan Coba
Sampel  hewan  coba  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah sebanyak 24 ekor. Terdapat satu hewan  coba  yang  mati  yang  berasal  dari  kelompok kontrol  selama  penelitian  ini  berlangsung.  Selain  itu, terdapat  satu  data  kadar  insulin  pada  kelompok  dosis 500  mg/kgBB  (P1)  yang  nilainya  terlalu  tinggi  dan menjadi outlier .  Data  tersebut  tidak  digunakan  agar tidak mengganggu hasil penelitian.
Rerata  berat  badan  hewan  coba  pada  semua kelompok  mengalami  peningkatan  setelah  pemberian ekstrak  kedelai  hitam.  Hasil  analisis  Tabel  1 menunjukkan tidak terdapat perbedaan bermakna pada rerata  berat  badan  antara  kelompok  sebelum  dan setelah  perlakuan  yang  di  tunjukan  dengan  nilai  p yaitu 0,168 dan 0,239 (p> 0.05). Hal ini menunjukkan bahwa  variasi  atau  karakteristik  antara  kelompok perlakuan tidak berbeda bermakna. Rerata berat badan indeks obesitas disajikan pada Tabel 1.
Tabel 1. Berat Badan Hewan Coba Rerata Berat Badan (gram) Kelompok K P1 P2 P3 p antar kelompok (x + SD) (x + SD) (x + SD) (x + SD) Sebelum perlakuan 233,12 + 19,75 212,16 + 11,64 206,22 + 26,15 209,85 + 20,53 0,195 Setelah perlakuan 246,62 + 19,33 228,22 + 12,28 222,90 + 25,12 227,93 + 20,55 0,278  BB 13,50 + 27,90 16,06 +   3,77 16,68 +   4,11 18,08 +   2,45
Keterangan:  K  =  Kelompok  kontrol;  P1  =  Kelompok  perlakuan  ekstrak  kedelai  hitam  500  mg/kgBB;  P2  =  Kelompok perlakuan ekstrak kedelai hitam 750 mg/kgBB; P3   = Kelompok perlakuan ekstrak  kedelai  hitam 1000  mg/kgBB; p = Nilai signifikansi uji One Way Anova antar kelompok
Salah  satu  kriteria  inklusi  dalam  penelitian  ini adalah  memenuhi  indeks  obesitas  hewan  coba menurut  indeks  obesitas  Lee. 68 Hewan  coba dinyatakan  obesitas  jika  indeks  obesitas  >  0,300. Berdasarkan  Tabel  2,  terdapat  perbedaan  pada  rerata berat  badan  antara  kelompok  sebelum  dan  setelah perlakuan yang di tunjukan dengan nilai p yaitu 0,011 dan  0,016  (p  <  0,05).  Hal  ini  dapat  menunjukkan bahwa  diantara  kelompok  penelitian  memiliki  indeks obesitas  yang  bervariasi.  Rerata  indeks  obesitas  tikus sebelum  dan  setelah  pemberian  ekstrak  kedelai  hitam disajikan pada Tabel 2.

## Kadar Glukosa Darah
Berdasarkan tabel 3, rerata kadar glukosa darah sebelum  dan  setelah  perlakuan  mengalami  penurunan pada  semua  kelompok.  Kelompok  yang  mengalami penurunan  glukosa  darah  terbesar  terlihat  pada kelompok  P2  atau  dosis  750mg/kgBB.  Hasil  analisis statistik menggunakan uji dependent t-test menunjukkan  bahwa  tidak  terdapat  perbedaan  kadar glukosa  darah  sebelum  dan  setelah  perlakuan  yang ditunjukkan dengan nilai p > 0,05.
Tabel 2. Indeks Obesitas Hewan Coba Nilai Tengah Indeks Obesitas Kelompok K P1 P2 P3 p antar kelompok Median + (Min-Maks) Median + (Min-Maks) Median + (Min-Maks) Median + (Min-Maks) Sebelum perlakuan 0,303 + (0,303-0,312) 0,309 + (0,306-0,311) 0,310 + (0,307-0,311) 0,313 + (0,311-0,314) 0,012 Setelah perlakuan 0,302 + (0,297-0,308) 0,305 + (0,303-0,308) 0,306 + (0,304-0,308) 0,309 + (0,306-0,313) 0,037  Indeks Obesitas 0,001 + (0,006-0,004) 0,004 + (0,003-0,003) 0,004 + (0,003-0,003) 0,004 + (0,005-0,001)
Keterangan:  K  =  Kelompok  kontrol;  P1  =  Kelompok  perlakuan  ekstrak  kedelai  hitam  500  mg/kgBB;  P2  =  Kelompok perlakuan ekstrak kedelai hitam 750 mg/kgBB; P3 = Kelompok perlakuan ekstrak  kedelai  hitam 1000  mg/kgBB; p = Nilai signifikansi uji One Way Anova antar kelompok
Tabel 3. Kadar Glukosa Darah Hewan Coba Rerata Kadar Glukosa Darah (mg/dl) Kelompok Sebelum perlakuan (x + SD) Setelah perlakuan (x + SD)  p K 105,24 +   7,77 94,82 +   5,66 -10,42 +   6,09 0,408 P1 108,66 + 15,89 94,98 + 12,58 -13,68 + 18,57 0,435 P2 118,07 + 19,77 95,83 + 12,91 -22,23 + 19,40 0,503 P3 122,70 + 11,24 101,45 + 12,45 -21,25 + 10,98 0,778
Keterangan:  K  =  Kelompok  kontrol;  P1  =  Kelompok  perlakuan  ekstrak  kedelai  hitam  500  mg/kgBB;  P2  =  Kelompok perlakuan ekstrak kedelai hitam 750 mg/kgBB; P3 = Kelompok perlakuan ekstrak kedelai hitam 1000 mg/kgBB;  = Selisih rerata kadar glukosa sebelum dan setelah perlakuan; p = Nilai signifikansi uji dependent t-test dalam kelompok

## Kadar Insulin
Tabel  4  menunjukkan  rerata  kadar  insulin sebelum  dan  setelah  perlakuan  mengalami  penurunan pada  kelompok  P1  dan  P2.  Kelompok  yang mengalami  penurunan  kadar  insulin  paling  tinggi terlihat  pada  kelompok  P2,  sedangkan  kelompok  P3
atau dosis 1000mg/kgBB justru mengalami peningkatan.  Hasil  uji dependent  t-test menunjukkan adanya penurunan kadar insulin pada kelompok dosis 500mg/kg  (p  =  0,012)  dan  dosis  750mg/kgBB  (p  = 0,020).

## Tabel 4. Kadar Insulin Hewan Coba
Rearata Kadar Insulin (  U/ml) Kelompok Sebelum perlakuan (x + SD) Setelah perlakuan (x + SD)  p K 9,38 + 1,53 7,38 + 0,59 -2,00 + 2,12 0,103 P1 11,36 + 2,64 7,59 + 1,11 -3,57 + 1,91 0,012 P2 11,84 + 3,28 8,23 + 1,42 -3,61 + 2,64 0,020 P3 8,91 + 0,67 10,54 + 3,97 1,63 + 3,57 0,315
Keterangan:  K  =  Kelompok  kontrol,  P1  =  Kelompok  perlakuan  ekstrak  kedelai  hitam  500  mg/kgBB,  P2  =  Kelompok perlakuan ekstrak kedelai hitam 750 mg/kgBB, P3 = Kelompok perlakuan ekstrak kedelai hitam 1000 mg/kgBB,  = Selisih rerata kadar glukosa sebelum dan setelah perlakuan, p = Nilai signifikansi uji dependent t-test dalam kelompok

## HOMA-IR
Berdasarkan  tabel  5,  HOMA-IR  sebelum  dan setelah  penelitian  mengalami  penurunan  pada  semua kelompok.  Kelompok  yang  mengalami  penurunan glukosa darah terbesar terlihat pada kelompok P2 atau dosis 750mg/kgBB. Hasil analisis statistik menggunakan  uji Wilcoxon menunjukkan  adanya perbedaan  nilai  HOMA-IR  sebelum  dan  setelah perlakuan pada kelompok dosis 500mg/kg (p = 0,043) dan dosis 750mg/kgBB (p = 0,028).
Selisih  kadar  glukosa  darah,  kadar  insulin,  dan HOMA-IR
Selisih  kadar  glukosa  darah,  kadar  insulin,  dan HOMA-IR  diperoleh  dari  rerata  sebelum  perlakuan dikurangi  rerata  setelah  perlakuan.  Kelompok  P1 memiliki  selisih  yang  lebih  besar  jika  dibandingkan dengan  kelompok  kontrol.  Selisih  atau  penurunan rerata  kadar  glukosa,  kadar  insulin  dan  HOMA-IR terlihat  semakin  besar  pada  kelompok  P2.  Namun pada  kelompok  P3,  selisih  yang  terjadi  justru  lebih kecil jika dibandingkan dengan kelompok P2. Tabel 6
menunjukkan  bahwa  rerata  penurunan  kadar  glukosa darah,  kadar  insulin,  dan  nilai  HOMA-IR  penurunan terbesar  terdapat  pada  kelompok  dosis  750mg/kgBB. Berdasarkan hasil analisis, terdapat perbedaan ekstrak
kedelai  hitam  terhadap  selisih  kadar  insulin  antar kelompok dosis, hal tersebut dapat dilihat dari nilai p sebesar 0,009 (p < 0,05).
Tabel 5. HOMA-IR Hewan Coba Nilai Tengah HOMA-IR Kelompok Sebelum perlakuan Median + (Min-Maks) Setelah perlakuan Median + (Min-Maks)  p K 2,56 + (1,976-4,963) 1,68 + (1,396-2,123) -0,88 + 0,49 0,800 P1 2,96 + (1,974-4,963) 1,84 + (1,396-2,123) -1,12 + 0,97 0,043 P2 3,09 + (1,992-5,521) 1,80 + (1,459-2,739) -1,29 + 1,01 0,028 P3 2,69 + (2,436-2,951) 2,38 + (1,938-4,276) -0,31 + 0,82 0,463
Keterangan:  K  =  Kelompok  kontrol;  P1  =  Kelompok  perlakuan  ekstrak  kedelai  hitam  500  mg/kgBB;  P2  =  Kelompok perlakuan ekstrak kedelai hitam 750 mg/kgBB; P3 = Kelompok perlakuan ekstrak kedelai hitam 1000 mg/kgBB;  = Selisih rerata HOMA-IR sebelum dan setelah perlakuan; p = Nilai signifikansi uji Wilcoxon dalam kelompok
Tabel 6. Selisih Kadar Glukosa Darah dan Kadar Insulin, dan HOMA-IR
 Sebelum Dan Setelah Permberian Ekstrak Kedelai Hitam
P Kelompok K P1 P2 P3 (x + SD) (x + SD) (x + SD) (x + SD) Kadar Glukosa Darah -10,42 + 6,09 -13,68 + 18,57 -22,23 + 19,40 -21,25 + 10,98 0,572 a Kadar Insulin -2,00 + 2,12 -3,57 + 1,91 -3,61 + 2,64 1,63 + 3,57 0,009 b Nilai HOMA-IR -0,71 + 0,49 -1,34 + 0,97 -1,58 + 1,01 -0,10 + 0,82 0,058 b
Keterangan:  K  =  Kelompok  kontrol;  P1  =  Kelompok  perlakuan  ekstrak  kedelai  hitam  500  mg/kgBB;  P2  =  Kelompok perlakuan  ekstrak  kedelai  hitam  750  mg/kgBB;  P3  =  Kelompok  perlakuan  ekstrak  kedelai  hitam  1000  mg/kgBB;  a = Nilai signifikansi uji One way Anova antar kelompok; b = Nilai signifikansi uji Kruskal Wallis antar kelompok

## PEMBAHASAN

## Kadar Glukosa Darah
Penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  kadar glukosa  darah  pada  semua  kelompok  perlakuan mengalami penurunan, walaupun secara statistik tidak terdapat  perbedaan  kadar  glukosa  darah  sebelum  dan setelah  pemberian  ekstrak  kedelai  hitam  berbagai dosis.  Hasil  penelitian  ini  berbeda  dengan  penelitian Takikawa,  penelitian  tersebut  menunjukkan  bahwa pemberian  jus  anggur-bilberry  dapat  menurunkan kadar glukosa darah. 16
Ekstrak  kedelai  hitam  memiliki  kandungan isoflavon yang bermanfaat untuk mencegah peroksidasi  lipid  yang  diinduksi  glukosa . 21 Selain  itu genistein bermanfaat dalam menghambat  α- glukosidase  yang  berperan  pada  beberapa  kelainan metabolik. 22 Oleh  sebab  itu,  ekstrak  kedelai  hitam diharapkan  dapat  menurunkan  kadar  glukosa  darah. Glukosa  darah  merupakan  produk  akhir  metabolisme glukosa.  Salah  satu  faktor  yang  mempengaruhi  kadar glukosa  darah  adalah  hormon  insulin  dan  glukagon. Kadar  glukosa  yang  rendah,  yaitu  hipoglikemia dicegah  dengan  pelepasan  glukosa,  sedangkan  kadar glukosa darah yang tinggi yaitu hiperglikemia dicegah oleh  perubahan  glukosa  menjadi  glikogen  dan perubahan  glukosa  menjadi  triasilgliserol  di  jaringan adiposa. 3
Beberapa penelitian tentang pengaruh antioksidan terhadap kadar glukosa darah memerlukan waktu  selama  4  minggu  agar  hasil  intervensi  dapat terlihat  pada  kadar  glukosa  darah. 16,23 Dalam penelitian  ini  pemberian  ekstrak  kedelai  hitam dilakukan  selama  2  minggu  dan  terjadi  penurunan rerata  kadar  glukosa  darah  walaupun  tidak  secara signifikan.  Hasil  penelitian  ini  berbeda  dengan penelitian  Gina,  yaitu  pemberian  ekstrak  kedelai hitam  selama  2  minggu  dapat  menurunkan  kadar glukosa darah pada tikus SD. 17

## Kadar Insulin
Penelitian ini menunjukkan bahwa kadar insulin pada  dosis  500  dan  750  mg/kgBB  mengalami penurunan.  Kelompok  yang  mengalami  penurunan kadar  insulin  paling  tinggi  terlihat  pada  dosis 750mg/kgBB,  sedangkan  pada  dosis  1000mg/kgBB justru  mengalami  peningkatan.  Hasil  analisis  statistik menunjukkan  adanya  perbedaan  kadar  insulin  pada kelompok  dosis  500mg/kg  dan  dosis  750mg/kgBB. Hasil  penelitian  ini  selaras  dengan  penelitian  yang dilakukan Jang, dimana antosianin dapat menurunkan kadar insulin mencit yang diberi diet tinggi lemak. 24 Ekstrak  kedelai  hitam  mengandung  antosianin yang  berperan  dalam  menekan  produksi  TNF  α  dan mengurangi aktivasi potein kinase sehingga menghambat terjadinya inflamasi dan resitensi insulin. Berkurangnya  produksi  kinase  akan  meningkatkan
fosforilasi  tirosin  IRS-1/IRS-2,  aktivasi  PI-3-kinase, dan downstream sinyal  insulin.  Mekanisme  tersebut akan  meningkatkan  sintesis  glikogen  otot  dan translokasi GLUT-4 di membran  plasma. Sedangkan di  hati,  mekanisme  tersebut  akan  meningkatkan sintesis glikogen hati, meningkatkan aktivasi glikogen sintase serta menurunkan glukoneogenesis hati. 11,12
Berdasarkan  hasil  penelitian  sebelumnya,  dosis 1000mg/kgBB  justru  mengalami  peningkatan.  Hasil analisis  statistik  menunjukkan  adanya  perbedaan dapat  menurunkan  kadar  glukosa  darah  dan meningkatkan aktivitas SOD. 17 Namun pada penelitian ini, dosis 1000mg/kgBB justru meningkatkan kadar insulin. Tingginya dosis antioksidan  dapat  meningkatkan  resiko  pembentukan pro-oksidan. 25 Peran  antioksidan  dalam  menstabilkan radikal  bebas  adalah  dengan  melengkapi  kekurangan elektron  pada  radikal  bebas  serta  menghambat  reaksi berantai  dari  pembentukan  radikal  bebas  yang  dapat menimbulkan  stress  oksidatif. 13 Namun,  pada  kondisi tertentu  seperti  dosis  antioksidan  yang  terlalu  tinggi atau  adanya  ion  tembaga  (Cu 2+ )  dapat  merubah antioksidan menjadi pro-oksidan. 25
Flavonoid  dapat  mengubah  Cu 2+ menjadi  Cu + , hal  tersebut  akan  memicu  terbentuknya  radikal bebas. 25 Jika kandungan flavonoid terlalu tinggi, maka jumlah  ROS  justru  meningkat  dan  menurunkan sensitivitas  insulin,  sehingga  sekresi  hormon  insulin akan  ditingkatkan  agar  homeostasis  glukosa  dalam tubuh tetap terjaga.

## HOMA-IR
Penelitian ini menunjukkan bahwa HOMA-IR pada semua kelompok perlakuan mengalami penurunan.  Hasil  analisis  statistik  menunjukkan adanya  perbedaan  HOMA-IR  sebelum  dan  setelah perlakuan  pada  kelompok  dosis  500mg/kg  dan 750mg/kgBB. Peningkatan maupun penurunan HOMA-IR  ditentukan  tinggi  dan  rendahnya  kadar insulin  dan  kadar  glukosa  darah.  Ekstrak  kedelai hitam  dengan  dosis  500mg/kgBB  dan  750mg/kgBB dapat  menurunkan  HOMA-IR.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  ekstrak  kedelai  hitam  berperan  dalam memperbaiki  kelainan  metabolisme  hormon  insulin yaitu resistensi insulin.
Selisih  Kadar  Glukosa  Darah,  Kadar  Insulin,  dan HOMA-IR
Selisih  kadar  glukosa  darah,  kadar  insulin,  dan HOMA-IR  diperoleh  dari  rerata  sebelum  perlakuan dikurangi  rerata  setelah  perlakuan.  Kelompok  P1 memiliki  selisih  yang  lebih  besar  jika  dibandingkan dengan  kelompok  kontrol.  Selisih  rerata  kadar glukosa, kadar insulin dan HOMA-IR terlihat semakin besar  pada  kelompok  P2.  Namun  pada  kelompok  P3, selisih yang terjadi justru lebih kecil jika
dibandingkan  dengan  kelompok  P2.  Hal  ini  dapat dikatakan  bahwa  dosis  yang  paling  efektif  dalam menurunkan  kadar  glukosa  darah,  kadar  insulin  dan HOMA-IR terdapat pada kelompok dosis 750mg/kgBB.
Berdasarkan  hasil  analisis,  terdapat  perbedaan ekstrak  kedelai  hitam  terhadap  selisih  kadar  insulin antar  kelompok  dosis.  Hasil  penelitian  ini  sejalan dengan  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Jang  yang menunjukkan  adanya  perbedaan  kadar  insulin  pada mencit yang diberi high fat diet . 24

## Keterbatasan Penelitian
Pembuatan  simplisia  ekstrak  kedelai  hitam membutuhkan  waktu  yang  lebih  lama  karena  kedelai harus dihaluskan secara manual yang dapat meningkatkan  resiko  kerusakan  pada  aktivitas antioksidan. Tidak dilakukan penimbangan sisa pakan sehingga  jumlah  pakan  yang  dikonsumsi  hewan  coba tiap harinya tidak dapat diketahui.

## SIMPULAN
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa ekstrak  kedelai  hitam  pada  dosis  500  dan  750 mg/kgBB  dapat  menurunkan  kadar  insulin  dan HOMA-IR.  Namun,  tidak  ada  perbedaan  kadar glukosa  darah  sebelum  dan  setelah  perlakuan. Penurunan  kadar  glukosa  darah,  kadar  insulin,  dan HOMA-IR terbesar terdapat pada dosis 750mg/kgBB. Selanjutnya,  perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut mengenai  pengaruh  ekstrak  kedelai  hitam  terhadap kadar glukosa darah dengan durasi pemberian ekstrak minimal selama 4-8 minggu.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Lois  K,  Young  J,  Kumar  S.  Obesity: Epiphenomenon or cause of metabolic syndrome? Int. J. Clin. Pract. 2008; 62:932–8.
2. Despres  JP,  Lemieux  I,  Bergeron  J,  Pibarot  P, Mathieu  P,  Larose  E,  et  al.  Abdominal  obesity and  the  metabolic  syndrome:  Contribution  to global cardiometabolic risk. Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 2008; 28:1039–49.
3. Mayes  PA.  Glukonegenesis  dan  pengontrolan kadar  glukosa  darah.  Dalam:  Robert  K.  Murray, Daryl  K  Granner,  Peter  A.  Mayes,  Victor  W. Rodwell. Biokimia Harper. Ed.27. Jakarta: EGC. 2009; hlm. 200-4.
4. Bano  G.  Glucose  Homeostasis,  obesity  and diabetes.  Best  Practice  and  Research  Clinical Obstetrics and Gynaecology. 2013; 27:715–26.
5. World Health Organization. Data and analysis of overweight  and  obesity.  2014.  [cited  Desember 2014]. Available from: http://www.who.int
6. Roglic  G,  Unwin  N.  Mortality  Attributable  to diabetes:  Estimates  for  the  year.  Diabetes Research and Clinical Practice. 2010; 87:15–19.
7. Eckel  RH,  Kahn  SE,  Ferrannini  E,  Goldfine AB,Nathan  DM,  Schwartz  MW,  et  al.  Obesity and  type  2  diabetes:  What  can  be  unified  and what  needs  to  be  individualized?  Diabetes  Care. 2011; 34:1424–30.
8. Kim  JA,  Wei  Y,  Sowers  JR.  Role  of mitochondrial  dysfunction  in  insulin  resistance. Circ Res. 2008; 102:401-14.
9. Patarrão RS, Lautt WW, Macedo PP. Assessment of  methods  and  indexes  of  insulin  sensitivity. Rev  Port  Endocrinol  Diabetes  Metab.  2014; 9(1):65–73
10. Bolisetty  S,  Jaimes  EA.  Mitochondria  and reactive oxygen species: Physiology and pathophysiology. Int. J. Mol. Sci. 2013; 14:6306- 44.
11. Rains  JL,  Jain  SK.  Oxidative  stress,  insulin signaling  and  diabetes.  Free  Radic  Biol  Med. 2011; 50(5):567–75.
12. Halfon  BS,  Zick  Y.  Phosphorylation  of  IRS proteins,  insulin  action,  and  insulin  resistance. Am  J  Physiol  Endocrinol  Metab.  2009; 296(4):581-91.
13. Kumar  V,  Rani  A,  Dixit  AK,  Pratap  D,
Bhatnagar  D.  A  comparative  assessment  of  total phenolic  content,  ferric  reducing-anti-oxidative power, free radical-scavenging activity, vitamin c and  isoflavones  content  in  soybean  with  varying seed  coat  colour.  Food  Research  International. 2010; 43: 323-8.
14. Nurrahman.  Evaluasi  komposisi  zat  gizi  dan senyawa  antioksidan  kedelai  hitam  dan  kedelai kuning. Jurnal Aplikasi Teknologi Pangan. 2015; 4(3):89-93.
15. Hong SH, Heo JI. Kim JH, Kwon SO, Yeo KM, Bakowska-Barczak  AM,  et  al.  Antidiabetic  and beta  cell-protection  activities  of  purple  corn anthocyanins.  Biomol  Ther  (Seoul).  2013; 21(4):284–9.
16. Takikawa M, Inoue S, Horio F, Tsuda T. Dietary anthocyanin-rich  bilberry  extract  ameliorates hyperglycemia  and  insulin  sensitivity  via activation  of  AMP-activated  protein  kinase  in diabetic mice. J Nutr. 2010; 140(3):527-33.
17. Gina  LP,  Mahdi  C,  Aulanni’am.  Therapy  of black  soybean  (glycine  max  (l)  merr)  water extract  on  blood  glucose  and  SOD  activity  of diabetes mellitus rats induced by MLD-STZ. The J. Pure App. Chem. Res. 2014; 3(3):131-7.
18. Yang  ZH,  Miyahara  H,  Takeo  J,  Katayama  M. Diet  high  in  fat  and  sucrose  induces  rapid  onset of  obesity-related  metabolic  syndrome  partly through  rapid  response  of  genes  involved  in lipogenesis,  insulin  signalling  and  inflammation in  mice.  Diabetology  &  Metabolic  Syndrome. 2012; 4:32.
19. Campos KE, Volpato GT, Calderon IMP, Rudge MVC,  Damasceno  DC.  Effect    of  obesity  on  rat reproduction  and  on  the  development  of  their adult  offspring.  Braz  J  Med  Biol  Res. 2008;41(2): 122-5.
20. Dahlan  MS.  Statistik  untuk  kedokteran  dan kesehatan,  Ed  Ke-4.  Jakarta:  Salemba  Medika. 2009. hlm. 114.
21. Kanamoto Y, Yamashita Y, Nanba F, Yoshida T, Tsuda  T,  Fukuda  I,  et  al.  A  black  soybean  seed coat  extract  prevents  obesity  and  glucose intolerance  by  up-regulating  uncoupling  proteins and  down-regulating  inflammatory  cytokines  in high-fat  diet-fed  mice.  J.  Agric.  Food  Chem. 2011; 59:8985-93.
22. Ghozali DS, Handharyani E, Rimbawan. pengaruh  tempe  terhadap  kadar  gula  darah  dan kesembuhan  luka  pada  tikus  diabetik.  Cermin Dunia Kedokteran. 2010; 37(3):167-73.
23. El-Kordi  EA,  Alshahrani  AM.  Effect  of genistein, a natural soy isoflavone, on pancreatic cells  of  streptozotocin-induced  diabetic  rats: histological  and  immunohistochemical  study. Journal  of  Microscopy  and  Ultrastructure.  2015; 3:108-119.
24. Jang  HH,  Park  MY,  Kim  HW,  Lee  YM,  Hwang KA,  Park  JH, et  al .  Black  rice  (oryza  sativa  l.) extract  attenuates  hepatic  steatosis  in  C57BL/6J mice  fed  a  high-fat  diet  via  fatty  acid  oxidation. Nutrition & Metabolism. 2012; 9:27.
25. Procházková  D,  Boušová  I,  Wilhelmová  N. Antioxidant  and  prooxidant  properties  of flavonoids. Fitoterapia. 2011; 82(4):513-23