Penetapan Kadar Fenol Total Ekstrak Etil Asetat dan Fraksi Dichloromethan-Etil Asetat Kulit Batang Mundu ( Garcinia dulcis. Kurz)

## ABSTRAK
ABSTRACT PENDAHULUAN

## BIOMEDIKA
Determination of Total Acetate Extracts Phenol Content and Dichloromethane-Ethyl Acetate Fraction of Mundu Stem Bark ( Garcinia dulcis. Kurz)

## Mamik Ponco Rahayu dan Lucia Vita Inanda
Fakultas Farmasi Universitas Setia Budi Jl Letjend Sutoyo , Mojosongo Surakarta
email: pi_er@yahoo.co.id
Key words: total phenolic content, mundu stem bark, spektrofotometer Uv-Vis, diclormetan-metanol fraction
Tanaman mundu merupakan salah satu genus garcinia yang potensial sebagai antimalaria. Berdasarkan penelitian sebelumnya fraksi diclormetan-etilasetat kulit batang mundu mempunyai aktivitas antiplasmodium dengan kandungan metabolitnya  flavonoid,  xanton  dan  fenol  (Rahman  et  al.  2012).  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menetapkan  kadar fenolik total pada ekstrak dan fraksi kulit batang mundu (Garcnia dulcis. Kurz)  Kulit batang mundu di ekstraksi dengan metode maserasi bertingkat dengan pelarut n-heksan dan etil-asetat dan dilakukan fraksinasi menggunakan seperang- kat alat kromatografi kolom vakum untuk ekstrak etil asetat kulit batang mundu. Fraksi diclormetan – etil asetat terdiri dari eluen penyusun n-heksana-diklorometana-etil asetat Kadar  fenolik  total  ditetapkan  menggunakan  metode  Spek- trofotometri visibel dengan pereaksi Folin Ciocalteau. Prinsip dari metode ini adalah terbentuknya senyawa kompleks berwarna biru dari fosfomolibdat-fosfotungstat yang direduksi senyawa fenolik dalam suasana basa yang dapat diukur secara spektrofotometri. Sebagai pembanding digunakan asam galat. Dari hasil penelitian, diperoleh kadar fenol pada ekstrak  etil-asetatkulit  batang  mundu  adalah  1,4998  mgGAE/100mg,  fraksi  diklorometana-etil  asetat  0,5545 mgGAE/100mg. Dapat disimpulkan bahwa ekstrak etil-asetat memiliki kadar fenol total yang lebih tinggi dibandingkan dengan fraksi dichloromethan-etil asetat kulit batang mundu.
. .
Kata kunci: kadar fenolik total, kulit batang mundu, spektrofotometer Uv-Vis, fraksi diclormetan-metanol
Mundu  plant  is  one  of  the  Garcinia  genuses  potential  as  antimalarial.  Based  on  previous  research,  fraction  of Mundu bark dichlorometane-ethylacetate contains antiplasmodium activity with the content of flavonoid metabolites, xanton and phenol (Rahman et al., 2012). This study aims to establish the total phenolic content of the extracts and fractions of Mundustem bark (Garcinia dulcis. Kurz). Mundu stem bark is extracted by moderation of maceration with solvent of n-hexane and ethyl acetate and it is carried out the fractionation using a set of tools for the vacuum column chromatography  for  ethyl  acetate  extract  of  Mundu  stem  bark.  Dichloromethane  Fraction  -  ethyl  acetate  consist  of constituent  eluent  of  n-hexane-dichloromethane-ethyl  acetate.  Total  of  phenolic  contentis  determined  using  visible spectrophotometry method with reagent of Folin Ciocalteau. The principle of this method is the formation of phenolic compounds under alkaline conditions that can be measured by spectrophotometry. Gallic acid is used as a comparison. From the research results, it is obtained phenol content in the extract of Mundu stem bark ethyl-acetate is of 1.4998 mgGAE/100mg, dichloromethane-ethyl acetate fraction is of 0.5545 mgGAE/100mg. It can be concluded that the ethyl- acetate extract contains a total phenol content higher than fraction of Mundu stem bark dichloromethane-ethyl acetate.
Xanton  merupakan  senyawa  keton  siklik polifenol dengan rumus molekul C H O . Struk- 13 8 2 tur dasar xanton terdiri dari tiga benzena dengan satu  benzena  di  tengahnya  yang  merupakan keton.  Senyawa  xanton  memiliki  aktivitas  bio- logis  dan  farmakologis  sebagai  sitotoksik,  anti- fungal,  antimikrobial,  antioksidan,  antimalaria,
antiinflamasi,  dan  aktivitas  anti-HIV  (Merzaet et al. , 2004). Xanton salah satu metabolit sekun- der  dari  tumbuhan  yang  termasuk    fenol  dan memiliki  gugus  hidroksi  (OH)  (Sukamat et  al., 2006). Fenol adalah senyawa dengan suatu gugus OH yang terikat pada cincin aromatik (Fessenden dan Fessenden, 1982). Fenolik merupakan meta- bolit  sekunder  yang  tersebar  dalam  tumbuhan.
Senyawa  fenolik  dalam  tumbuhan  dapat  berupa fenol  sederhana,  antraquinon,  asam  fenolat, kumarin,  flavonoid,  ligin  dan  tanin  (Harborne, 1987). Senyawa fenolik telah diketahui memilki efek biologis seperti aktivitas antioksidan melalui mekanisme sebagai pereduksi, penangkap radikal bebas,  pengkhelat  logam,  peredam  terbentuknya oksigen singlet serta pendonor elektron. Senyawa fenol  bisa  berfungsi    sebagai    antioksidan karena  kemampuannya  meniadakan  radikal- radikal  bebas  dan  radikal  peroksidasehingga efektif  dalam  menghambat  oksidasi  lipida (Kinsella et al. , 1993).
Penelitian ini bertujuan untuk menentukan kandungan  total  fenolik  dengan  metode  Folin- Ciocalteu  terhadap  ekstrak  dan  fraksi  dikloro- metana–etil  asetat    kulit  batang  mundu  yang sudah  diteliti  sebagai  anti  malaria.  Prinsipnya adalah  reaksi  oksidasi  dan  reduksi  kolorimetrik untuk  mengukur  semua  senyawa  fenolik  dalam sampel  uji.  Pereaksi  ini  mengoksidasi  fenolat (garam alkali), mereduksi asam heteropoli men- jadi  suatu  kompleks  molibdenum-tungsten (Folin dan Ciocalteu, 1944). Pada kenyataannya reagen  ini  mengandung  rangkaian  polimerik yang  memiliki  bentukan  umum  dengan  pusat
3- unit  tetrahedral  fosfat  (PO )   yang  dikelilingi 4 oleh beberapa unit oktahedral asam-oksi molib- denum.  Struktur  tungsten  dapat  dengan  bebas bersubstitusi dengan molibdenum. Selama reaksi berlangsung,  gugus  fenolik-hidroksil  bereaksi dengan  pereaksi  Folin-Ciocalteu,  membentuk kompleks  fosfotungstat-fosfomolibdat  berwarna biru  dengan  struktur  yang  belum  diketahui  dan dapat dideteksi dengan spektrofotometer. Warna biru  yang  terbentuk  akan  semakin  pekat  setara dengan  konsentrasi  ion  fenolat  yang  terbentuk, artinya  semakin  besar  konsentrasi  senyawa fenolik  maka  semakin  banyak  ion  fenolat  yang akan mereduksi asam heteropoli sehingga warna biru  yang  dihasilkan  semakin  pekat  (Singleton, 1965).
Tumbuhan  pada  spesies Garcinia diketahui kaya  akan  kandungan  senyawa  xanton  yang mempunyai  aktivitas  biologis  dan  farmakologis yang  beragam  seperti  sitotoksik,  antifungal, antimikrobial,  antioksidan,  antimalaria,  anti- inflamasi,  dan  aktivitas  anti-HIV  (Merza et  al ., 2004;  Lannang et  al .  2005;  Sukamat  &  Ersam, 2006).  Pemisahan  ekstrak  etil  asetat  dari  kayu batang  mundu  dengan  berbagai  metode  seperti partisi,  kromatografi  dan  kristalisasi  menghasil- kan  dua  senyawa  xanton  yaitu  1,3,4,5,8-penta- hidroksixanton  dan  1,4,5,8-  tetrahidroksixanton. Senyawa  1,3,4,5,8-pentahidroksixanton  berupa padatan  kuning  dengan  titik  leleh  pada  suhu 0 231-232 C.  Uji  kualitatif  dengan  pereaksi  FeCl 3 dalam  metanol  memberikan  warna  hijau  tua yang  menunjukkan  adanya  senyawa  fenolat (Sukamat  &  Ersam,  2006).
Biji, kulit batang dan daun Garcinia  dulcis mengandung  flavonoida, saponin,  tanin  dan  xanton  (Anonim  2000).
Ekstrak  etanol  kulit batang  mundu  ( Garcinia  dulcis (Roxb.)  Kurz) mengandung xanton, yaitu 1,7-dihydroxyxanton, 12b-hidroksi-des-D-garcigerrinA,  1- O -methyl- symphoxanton,  symphoxanton  dan  garciniaxan- ton  menghambat  pertumbuhan  parasit  malaria, Plasmodium falciparum (Likhtiwitayawuid et al.,
1998).  Hasil  analisis  secara  fitokimia  dengan KLT,  fraksikulit  batang  mundu  ( Garcinia  dulcis (Roxb.)  Kurz)  mengandung  golongan  kimia terpenoid,  flavonoid,  xanton  dan  alkaloid (Gumala et  al., 2012)  dan  fraksi  Vmengandung golongan  kimia  xanton,  tanin  dan  flavonoid (Rahman et al., 2012).
Ekstrak etanol Garcinia dulcis Kurz juga mem- punyai  aktivitas  sebagai  antiplasmodium (Likhitwitayawuid,  1998).  Berdasarkan  peneli- tian yang telah dilakukan Rahman et al., (2012) terhadap kulit batang mundu untuk  ekstrak dan fraksi  diklorometan  –  metanol  mempunyai aktivitas sebagai antimalarial.

## METODE PENELITIAN
1.    Pembuatan serbuk dan penentuan kadar air kulit batang mundu
Serbuk kulit batang mundu yang sudah dike- o ringkan dengan oven 40 C, dibuat serbuk kemu- dian diayak dengan ayakan no 60 dan ditimbang dengan  timbangan  analitik  kemudian  serbuk yang  didapat  ditentukan  kadar  airnya  dengan menggunakan alat moisture balance sampai kadar

## 2.Pembuatan ekstrak etil asetat serbuk kulit batang mundu
Serbuk  kulit  batang  mundu  ditimbang  800 gram  dan  dimasukkan  ke  dalam  botol  coklat. Dengan  perbandingan  10  bagian  sampel:  75 bagian n -heksana: 15 bagian pembilas n -heksana (800g serbuk batang mundu: 6L n -heksana: 1200 ml  pembilas n -heksana),  didiamkan  selama  5 hari  dengan  pengocokan  3x  sehari.  Setelah  5 hari,  maserat  disaring  dan  dipekatkan  dengan 0 evaporator  suhu  40 C.  Pelarut  yang  masih  ter- 0 tinggal  kemudian  diuapkan  di  oven  suhu  40 C sampai  bebas  pelarut  kemudian  dituang  dalam wadah  sebagai  ekstrak  n-heksana.  Serbuknya setelah  kering  ditimbang  dan  dimasukan  ke  da- lam  botol  coklat  ditambahkan  ke  dalam  etil asetat,  dengan  perbandingan  10  bagian  sampel: 75  bagian  etil  asetat:  15  bagian  pembilas  etil asetat didiamkan selama 5 hari, maserat disaring 0 dan dipekatkan dengan evaporator suhu 40-50 C.
Pelarut yang masih tertinggal kemudian diuapkan
0 dioven  suhu  40 C  sampai  bebas  pelarut  kemu- dian dituang dalam wadah dan ditimbang sebagai ekstrak etil asetat (Rahayu et al., 2012).
3.Has il fraksinasi dari ekstrak etil asetat kulit batang mundu
Fraksinasi  untuk  ekstrak  etil  asetat  kulit batang  mundu  menggunakan  seperangkat  alat kromatografi kolomvakum dielusi dengan pela- rut yang polaritasnya semakin meningkat secara gradien  yaitu  n  heksan-dklormetan-etilaseat- metnol. Masing-masing fraksi ditampung dalam sebuah  botol  sebagai  hasil  fraksinasi  (Rahman et  al., 2012).  Dari  hasil  penggolongan  Fraksi I-VI,  yang  digunakan  dalam  penetapan  kadar fenol  adalah  fraksi  V  dengan  penyusun  eluen diklorometana – etil asetat.

## 4. Penetapan panjang gelombang maksimum
Pembuatan  larutan  standar  dari  bahan  baku pembanding asam galat dengan cara ditimbang
5.Pembuatan kurva kalibrasi asam galat
Dibuat larutan standar dari baku pembanding asam  galat  dengan  konsentrasi  300  ppm  dan diukur  serapannya  dengan  spektrofotometer  uv pada  panjang  gelombang  620-670  nm  dengan interval  2  nm,  kemudian  ditentukan  panjang gelombang serapan maksimum.
Pada  penelitian  ini  untuk  menentukan  kadar senyawa fenol total pada sampel digunakan asam galat  sebagai  larutan  standar  dengan  konsentrasi 0, 100, 200, 300, 400 dan 500 mg/ml. Digunakan asam  galat  sebagai  larutan  standar  karena  asam galat  merupakan  salah  satu  antioksidan  alami dan stabil serta relatif murah dibandingkan lain- nya. Asam galat termasuk dalam senyawa fenolik dan  memiliki  aktivitas  antioksidan  yang  kuat (Lee et al ., 2003).
Senyawa fenolik merupakan suatu antioksidan yang  dapat  berperan  sebagai  penangkap  radikal bebas (Shahidi dan Wanasundara, 1992). Banyak- nya  senyawa  fenol  dalam  sampel  ditentukan dengan metode  Folin- Ciocalteau. Metode Folin- Ciocalteau  merupakan  salah  satu  metode  termu-
airnya diantara 5 – 10% (semakin kecil kadar air semakin baik) kemudian disimpan dalam wadah kering dan tertutup rapat.
secara seksama 0,25 g serbuk baku pembanding larutan  asam  galat,  kemudian  dimasukkan  ke dalam labu takar 50 ml dan ditambahkan aquades sampai tanda batas dan dipipet 3 ml dimasukkan ke dalam labu takar 50 ml dan ditambah aquades sampai  tanda  batas,  dipipet  1  ml  dimasukkan ke dalam labu takar 10 ml dan ditambah larutan dicampurkan  1  mL  reagen  Folin-Ciocalteu, didiamkan  selama  8  menit,  ditambah  1  mL larutan  Na CO   dikocok  sampai  homogen,  dan 2 3 didiamkan  selama  2  jam  pada  suhu  kamar.
dah  untuk  mengukur  aktivitas  antioksidan.  Pada penelitian  ini,  pada  saat  asam  galat  direaksikan dengan  reagen    Folin-Ciocalteu  dihasilkan larutan  berwarna  kuning  kehijauan,  setelah ditambahkan dengan larutan Na CO baru dihasil- 2 3 kan  larutan  komplek  berwarna  biru.  Semakin tinggi  konsentrasi  asam  galat  yang  digunakan, maka  warna  biru  yang  dihasilkan  akan  semakin pekat.  Hal  ini  sesuai  dengan  ketentuan,  bahwa adanya  inti  aromatis  pada  senyawa  fenol  dapat mereduksi  fosfomolibdat  fosfotungtat  menjadi .
Data yang diperoleh kemudian diolah dengan program computer SPSS 21 for Windows. Kadar total  fenol  ditentukan  dengan  menghitung absorbansi  sediaan  uji  dengan  pereaksi  Folin- Ciocalteu,  kemudian  hasil  dari  absorbansi  ini
Langkah  analisis  kadar  fenolat  total  meliputi pembuatan  kurva  kalibrasi  dan  analisisfenolat total.  Larutan  standar  asam  galat  (5mg/mL) dibuat  dengan  menimbang  0,25  g  asam  galat, ditambah  5  mL  metanol  dan  ditambahkan  aqua- bidest  sampai  50  mL,  sehingga  diperoleh  kon- sentrasi  5  mg/mL.  Dari  larutan  induk  dipipet 1, 2, 3, 4, 5 mL dan diencerkan dengan aquades sampai  volume  50  mL,  sehingga  dihasilkan dengan  konsentrasi  0,  100,  200,  300,  400,  dan 500  ppm  asam  galat.  Dari  masing-masing  kon- sentrasi dipipet 0,1 mL ditambah 7,9 mL aquades. Terhadap  masing-masing  larutan  dicampurkan 1  mL  reagen  Folin-Ciocalteu,  didiamkan  selama 8  menit,  ditambah  1  mL  larutan  Na CO   20% 2 3 dikocok sampai homogen, dan didiamkan selama 2  jam  pada  suhu  kamar.  Masing-masing  larutan diukur  absorbansinya  pada  panjang  gelombang maksimum 640 nm, dan dibuat kurva kalibrasi- nya yang merupakan hubungan antara konsentrasi asam    galat  (mg/L)  dengan  absorban  (Andayani et al ., 2008).
Ditimbang 20 mg ekstrak etil asetat dan fraksi kemudian dilarutkan sampai 10 ml dengan meta- nol : air (1 : 1).  Dipipet 2 ml larutan ekstrak dan ditambahkan  6  ml  aquadest  tambahkan  1  ml reagen  Folin  –  Ciocalteu  kocok.  Didiamkan selama  8  menit  kemudian  ditambahkan  1  ml Na CO   20  %  kedalam  campuran,  didiamkan 2 3 larutan  selama  2  jam  pada  suhu  kamar.  Diukur serapannya  dengan  spektrofotometer  UV-Vis pada  panjang  gelombang  serapan  maksimum
6.Penentuan kadar total fenol pada sampel
640 nm yang akan memberikan komplek biru. Dilakukan 3 kali pengulangan sehingga kadar fenol yang diperoleh hasilnya didapat sebagai mg ekuivalen asam galat/g sampel.

## 7.Analisis data

## HASIL DAN PEMBAHASAN Determinasi tanaman
Determinasi tanaman mundu ( Garcinia dulcis. Kurz ) dilakukan di Laboratorium Biologi Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Setia Budi Surakarta. Hasil  determinasi  tanaman  Mundu  sudah  sesuai dengan  pustaka  yang  ada  dan  dapat  dipastikan bahwa  tanaman  yang  digunakan  untuk  penelitian tersebut adalah tanaman mundu ( Garcinia dulcis. kurz ).

## Rendemen dan Kadar Air
Kulit batang mundu basah sebanyak gram,
0 dikeringkan  dengan  oven  pada  suhu  50 C  hingga benar  –  benar  kering.    Kemudian  dibuat  serbuk dan  diperoleh  bobot  kering  serbuk  kulit  batang mundu  sebanyak  3400  gram.    Rendemen  serbuk kering  terhadap  bobot  basah  adalah  72,033.  Rata –  rata  susut  pengeringan    dari  serbuk  kulit  batang mundu  adalah  7,33%.    Perhitungan  ini  dilakukan menggunakan  alat moisture  balance. Dari  hasil tersebut,  kadar  air  serbuk  kulit  batang  mundu memenuhi  syarat  dimana  kadar  air  suatu  serbuk simplisia tidak boleh lebih dari 10% (Depkes, 2006).
4720
Pembuatan ekstrak etil asetat serbuk kulit batang mundu
Serbuk kulit batang mundu ditimbang 800 gram dan dimasukkan ke dalam botol coklat.
molibdenum yang berwarna biru (Lee et al ., 2003) diplotkan dengan kurva standar total fenol dari asam galat standar. Kadar total fenol ekstrak etil asetat  dan  fraksi  diklorometana-etil  asetat  kulit batang  mundu  dianalisis  menggunakan  dengan metode independent sampel t-test.
Dengan  perbandingan  10  bagian  sampel:  75 bagian n -heksana:  15  bagian  pembilas n -heksana (800g sebuk batang mundu: 6L n -heksana : 1200ml pembilas n -heksana),  didiamkan  selama  5  hari dengan  pengocokan  3x  sehari.  Setelah  5  hari, maserat  disaring  dan  dipekatkan  dengan  evapo-
0 rator  suhu  40 C.  Pelarut  yang  masih  tertinggal
0 kemudian  diuapkan  di  oven  suhu  40 C  sampai bebas  pelarut  kemudian  dituang  dalam  wadah sebagai  ekstrak n -heksana. sejumlah dimasukkan
Ampas  sisa  dari  hasil maserasi n -heksana 792,157g
Untuk memilih panjang gelombang maksimal, dilakukan  dengan  membuat  kurva  hubu  ngan antara  absorbansi  dengan panjang  gelombang dari  suatu  larutan  baku  pada  konsentrasi  tertentu (Gandjar dan Rohman, 2007). Pengertian ë maks adalah  panjang  gelombang  suatu  larutan  dimana larutan  tersebut  memberikan  serapan  terbesar. Cara menentukan ë maks adalah dengan melaku -
ke  dalam  botol  coklat,  ditambahkan  etil  asetat o diamkan  selama  5  hari  pada  suhu  15-20 C, maserat disaring dan dipekatkan dengan evaporator
0 0 suhu  40 -50 C.  Pelarut  yang  masih  tertinggal
0 kemudian  diuapkan  dioven  suhu  40 C  sampai bebas  pelarut  kemudian  dituang  dalam  wadah dan  ditimbang  sebagai  ekstrak  etil  asetat. Fraksinasi  menggunakan  seperangkat  alat kromatografi  kolomvakum  untuk  ekstrak  etil asetat  kulit  batang  mundu  menghasilkan  fraksi V  dengan  penyusun  eluen  diklorometana  –  etil asetat (Rahman et al., 2012).

## Penentuan Kandungan Fenolik Total
Penetapan panjang gelombang maksimum.
Gambar 1. Kurva serapan panjang gelombang maksimum

## Pengukuran absorbansi standar asam galat
Pada  penelitian  ini  untuk  menentukan  kadar senyawa  fenol total pada sampel digunakan asam galat  sebagai  larutan  standar  dengan  konsentrasi
Senyawa fenolik merupakan suatu antioksidan yang  dapat  berperan  sebagai  penangkap  radikal bebas (Shahidi dan Wanasundara, 1992). Banyak- nya  senyawa  fenol  dalam  sampel  ditentukan dengan  metode  Folin-Ciocalteau.  Metode  Folin- Ciocalteau merupakan salah satu metode termudah untuk mengukur aktivitas antioksidan. Pada pene- litian ini, Pada saat asam galat direaksikan dengan reagen    Folin-Ciocalteu  dihasilkan  larutan  ber- warna  kuning  kehijauan,  setelah  ditambahkan dengan  larutan  Na CO   baru  dihasilkan  larutan 2 3 komplek  berwarna  biru.  Semakin  tinggi  konsen- trasi asam galat yang digunakan, maka warna biru yang  dihasilkan  akan  semakin  pekat.  Hal  ini sesuai  dengan  ketentuan,  bahwa  adanya  inti  aro- matis pada senyawa fenol dapat mereduksi fosfo- kan pembacaan serapan pada berbagai panjang gelombang dan serapan terbesar pada ë tertentu tersebut digunakan sebagai ë maks (Mulja dan Suharman,  1995).  Berdasarkan  kurva  serapan pada G ambar 2 maka diperoleh panjang gelom - bang maksimum sebesar 640 nm.
0, 100, 200, 300, 400 dan 500 mg/ml. Digunakan asam  galat  sebagai  larutan  standar  karena  asam galat merupakan salah satu antioksidan alami dan stabil  serta  relatif  murah  dibandingkan  lainnya. Asam galat termasuk dalam senyawa fenolik dan memiliki  aktivitas  antioksidan    yang  kuat  (Lee et al ., 2003).
molibdat fosfotungtat menjadi molibdenum yang berwarna biru (Lee et al ., 2003).
Langkah analisis kadar fenolat total meliputi pembuatan  kurva  kalibrasi  dan  analisis  fenolat total.  Larutan  standar  asam  galat  (5mg/mL) dibuat  dengan  menimbang  0,25  g  asam  galat, ditambah 5 mL metanol dan ditambahkan aqua- bidest  sampai  50  mL,  sehingga  diperoleh  kon- sentrasi 5 mg/mL. Dari larutan induk dipipet 1, 2,  3,  4,  5  mL  dan  diencerkan  dengan  aquades sampai  volume  50  mL,  sehingga  dihasilkan
Tabel 1. Nilai absorbansi standar asam galat
Sampel Konsentrasi (ppm)
Absorbansi Asam  Galat 100 0,148 200 0,161 300 0,314 400 0,390 500 0,461
Pada  analisa  fenol  sampel,  ketika  sampel direaksikan  dengan  akuades  dan  reagen  Folin- Ciocalteau warna yang dihasilkan untuk masing- masing  sampel  berwarna  hijau  masing-masing sampel.  Setelah  ditambahkan  dengan      Na CO 2 3 20%  warna  yang  dihasilkan  berubah  menjadi berwarna  hijau  kebiruan  untuk  keseluruhan sampel. Absorbansi diukur dengan menggunakan spektrofotometer  UV-VIS.  Konsentrasi  larutan
Berdasarkan hasil pengukuran di atas, dapat dibuat kurva kalibrasi antara absorbansi dengan konsentrasi. Pembuatan kurva kalibrasi ini ber- guna  untuk  membantu  menentukan  kadar  fenol total  dalam  sampel  melalui  persamaan  regresi dari  kurva  kalibrasi.  Dari  tabel  2  dapat  dilihat bahwa absorbansi berbanding lurus dengan kon- sentrasi yang mengikuti persamaan regresi linier. Dari  pemeriksaan  larutan  standar  asam  galat didapat kurva kalibrasi dengan persamaan regresi Y  =  0,0383x  +  0,000855  dan  harga  koefisien korelasi  (r)  sebesar    0,977.  Nilai  (r)  yang  men- dekati 1 membuktikan bahwa persamaan regresi tersebut adalah linier (gambar 2). Kurva kalibrasi
Hasil Penetapan Kadar Kandungan Fenol Total
dengan  konsentrasi  0,  100,  200,  300,  400,  dan 500  ppm  asam  galat.  Dari  masing-masing  kon- sentrasi dipipet 0,1 mL ditambah 7,9 mL aquades. Terhadap  masing-masing  larutan  dicampurkan 1  mL  reagen  Folin-Ciocalteu,  didiamkan  selama 8 menit, ditambah 1 mL larutan Na CO dikocok 2 3 sampai  homogen,  dan  didiamkan  selama  2  jam pada  suhu  kamar.  Masing-masing  larutan  diukur absorbansinya  pada  panjang  gelombang  maksi- mum  640  nm,  dan  dibuat  kurva  kalibrasinya yang  merupakan  hubungan  antara  konsentrasi asam    galat  (GAE/mg)  dengan  absorban  (Anda- yani et al ., 2008)
asam galat dalam reagen  Folin – Ciocalteau pada panjang gelombang 640 nm. Persamaan di atas digunakan sebagai standar pada peng- ukuran senyawa fenol total ekstrak etil asetat dan fraksi etil asetat.
sampel  dapat  ditentukan  dengan    menggunakan kurva kalibrasi dengan mengukur nilai absorbansi pada  pengukuran  masing-masing  sampel  yang dihitung dengan menggunakan persamaan regresi linear  dari  kurva  konsentrasi  standar  dengan absorbansi  standar  dengan  persamaan.  Hasil yang diperoleh kemudian diperhitungkan dengan faktor  pengenceran  sehingga  diperoleh  konsen- trasi fenol yang terdapat pada ekstrak dan fraksi diklorometana etil asetat.
Kandungan fenolat total dalam tumbuhan
Tabel 2. Hasil kadar fenol total dalam ekstrak etil asetat dan fraksi diklorometana-etil asetat kulit batang mundu
Sampel Absorbansi Kadar (ppm) Hasil Kadar Fenol mgGAE/Mg Hasil Kadar Fenol Total (mgGAE/100mg ) Ekstrak Etil Asetat 0,296 3,144035 1,50702 1,4998 0,286 2,897076 1,44854 0,287 2,908772 1,45439 Fraksi diklorometan – etil asetat 0,226 2,195322 0,54883 0,5545 0,228 2,218713 0,55478 0,230 2,242105 0,56053
Kandungan fenolik total pada masing-masing ekstrak  etil  asetat  kulit  batang  mundu  memiliki total  senyawa  fenolik  yang  paling  tinggi  yaitu 1,4998  mgGAE/100mg,  sedangkan  fenolik  total pada  fraksi  diklorometan-etil  asetat0,5545 mgGAE/100mg.  Dikarenakan  ekstrak  etil  asetat merupakan  pelarut  semi  polar  sehingga  kelarut- annya senyawa fenol paling tinggi dalam pelarut semi  polar  selain  itu  masih  banyak  komponen komponen  yang  terkandung  dalam  ekstrak  di- bandingkan fraksi yang sudah melalui pemisahan
dinyatakan  dalam  GAE  ( gallic  acid  equivalent ) yaitu  jumlah  kesetaraan  milligram  asam  galat dalam 1 gram sampel. Hasil dari penentuan kan- dungan senyawa fenolat, diketahui bahwa ekstrak etil asetat memiliki kandungan yang lebih tinggi dari fraksi diklormetana – etil asetat. Berdasarkan persamaan yang telah didapatkan, dapat diketahui nilai  x  atau  kandungan  fenol  total  ekstrak  dan fraksi  etil  asetat  ekuivalen  asam  galat  dengan memasukkan nilai absorbansi sampel. Dari hasil penelitian,  diperoleh  kadar  fenol  pada  ekstrak etil  asetat  kulit  batang  mundu  adalah  1,4998 mgGAE/100mg,  fraksi  etil  asetat  0,5545 mgGAE/100mg. Dapat dilihat bahwa ekstrak etil asetat memiliki kadar fenol total yang lebih tinggi dibandingkan dengan fraksi etil asetat.
pelarut  dengsan  berbagai  polaritas.Perbedaan tingkat  kepolaran  pelarutmenentukan  struktur dan  jenis  senyawa  fenolik  yang  terekstrak sehingga senyawa tertentu akan terekstrak secara spesifik pada tiap pelarut yang digunakan. Ting- ginya  total  polifenol  pada  pelarut  etil  asetat diduga adanya golongan polifenol yang memiliki sifat  polaritas  yang  sama  dengan  pelarut  etil asetat  seperti  xanton  dan  flavonoid.  Hasil  uji fitokimia didapatkan bahwa kulit batang mundu
Depkes  RI.,  2006.  Pedoman  Penatalaksanaan  Kasus  Malaria  di Indonesia. Jakarta: Direktorat Jendral Pengendalian Penyakit dan  Penyehatan  lingkungan  Grieve  M. A  Modern  herbal ,

## DAFTAR PUSTAKA
positif mengandung flavonoid, alkaloid, saponin dan  fenol.  Fraksi  diklorometana  –  etil  asetat lebih kecil kadar fenol totalnya karena senyawa fenolik  yang  berada  pada  fraksi  telah  melalui pemisahan    oleh  pelarut  semi  polar  yang  lain. Kedua  hasil  uji  kuantitatif  tersebut  kemudian dianalisis  menggunakan  dengan  metode inde- pendent  sampel  t-test .  Analisis  ini  dilakukan untuk  mengetahui  apakah  ada  perbedaan  yang nyata  antara  kandungan  fenol  ekstraketil  asetat dan  kandungan  fenol  fraksi  diklorometan-etil asetat. Dari hasil uji analisis tersebut menunjuk- kan  bahwa  nilai  sig0,000  sehingga  terdapat perbedaan  yang  nyata  kandungan  fenol  total antara  ekstrak  etil  asetat  kulit  batang  mundu dan  fraksidiklorometan-etil  asetat  kulit  batang mundu.
Andayani R L Yovita, & Maimunah. 2008. Penentuan aktivitas antioksidan,  kadar  fenolat  total  dan  likopen  pada  buah Tomat (Solanum lycopersicum  L).  Sains dan Teknologi Farmasi,13(1): 31-37.
Anonim. 2000a. Inventaris Tanaman Indonesia Obat Indonesia . Jilid  I.  Departemen  Kesehatan  dan  Kejahteraan  Sosial Republik  Indonesia  Badan  Penelitian  dan  Pengembangan Kesehatan. Jakarta. Hal. 119, 120.
Anonim.2000b. Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat . Jakarta : Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan. Direktorat Pengawsan Obat Tradisional.
Depkes RI. 2008. Pedoman Penatalaksanaan Kasus Malaria Di Indonesia . Jakarta: DEPKES RI. hlm 3,6.
Ersam, T. dan Fatmawati, S. (2002) Isolasi senyawa santon dari ekstrak  methanol  kulit  batang Garcinia  balica Miq . , Pro- siding Seminar Nasional KimiaV (ITS Surabaya) , 26 Agus- tus, 275 – 280 Fessenden dan Fessenden , 1982. Kimia Organik Edisi ketiga Aloysius  Hadyana  Pudjaatmaka, penerjemah.  Jakarta: Erlangga. hal 436-438.
Folin O, Ciocalteu V. 1944.On Tyrosine and Tryptophane Deter- minations in Proteins . Jour.Bio.Chem ., 73 : 627-650.
Gumala SI, Widodo GP, Rahayu MP. 2012. uji aktivitas anti- plasmodium  sub-fraksi n-heksana a-diklorometana  dari
Widodo, G. P., dan Rahayu, M. P. (2010). Aktivitas Antimalaria Ekstrak Etil Asetat Kulit Batang Mundu ( Garcinia dulcis Kurz). Majalah Farmasi Indonesia, 21(4).
ekstrak  etil  asetatkulit  batang  mundu  ( Garcinia  dulcis Kurz) secara in vitro [Skripsi]. Surakarta: Fakultas Farmasi, Universitas Setia Budi Gunawan D, Mulyani S. 2004. Ilmu Obat Alam (Farmakognosi) Jilid 1 . Jakarta: Penebar swadaya.
Harborne. 1987. Metode Fitokimia, Penuntun Cara Modern Menganalisa Tumbuhan , Kinsella JE et al . 1993. Possible Mechanisms For The Protective Role Of Antioxidants In Wine And Fruits Juices. J. Agric. Food Technol . 4:85-89. Kementrian Kesehatan RI. 2011. Epidemiologi Malaria di Indo- nesia .  Buletin  Jendela  Data  dan  Informasi  Kesehatan  Tri- wulan I. Pusat Data dan Informasi Kementerian Kesehatan : 1-3.
Lannang, A.M., Komguem, J., Ngninzeko, F.N., Tangmouo, J.G., Lontsi, D., Ajaz, A., Choudhary, M.I., Ranjit, R., Devkota, K.P.,  Sodengam,  B.L.  (2005)  Bangangxanthone A  and  B, two  xanthones  from  the  Stem  bark  of Garci.nia  poliantha Oliv., Phytochemistry, 66, 2351-2355 .
Lee  KI  2003.  Cocoa  Has  More  Phenolic  Phytochemical  and Higher Antioxidant Capacity than Teas and Red Wine . J. Agric . Food Chem 51:7292-7295 Merza, J., Aumond, M.C., Rondeau, D., Dumontet, V., Ray.,
Rahman A, Widodo GP, Rahayu MP. 2012. isolasi dan uji akti- vitas  antiplasmodium  fraksi  V  dan  VII n-heksana a- diklorometana-metanolekstrak etil asetatkulit batang mundu ( Garcinia  dulcis Kurz)  Secara in  vitro [Skripsi].  Surakarta: Fakultas Farmasi, Universitas Setia Budi.
Singleton  VL,  1965.  Colorimetry  of  total  phenolics  with phospomolybdic-phosphotungstic acid reagents. Am J Enol Vitic, 16: 144-158.
Sukamat,  Ersam,  T.  2006.  Dua  Senyawa  Xanton  dari  Kayu Batang Mundu Garcinia dulcis (Roxb) Kurz sebagai Anti- oksidan. Seminar Nasional kimia VIII (ITS Surabaya), 8 Agustus.
Shanmugasundaram   P, Venkataraman  S.  2006.  Hepatopro tective  and  antioxidant  effect  of  Hygrophila  auriculat (K. Schum) Heine Acanthaceae root extract. Journal of Ethnopharmacology 104:124$128
A.M.L.,  Seraphin,  D.,  Richomme,  P.  (2004)  Prenylated Xanthones and Tocotrienols from Garcinia virgata, Phy- tochemistry , 65, 2915-2920.
44    MAMIK PONCO RAHAYU DAN LUCIA VITA INANDA