## POTENSI ALERGI AKIBAT INFEKSI Anisakis typica PADA DAGING IKAN CAKALANG
[Allergic Potential of Skipjack Flesh Infected by Anisakis typica]

## Lady Cindy Soewarlan
Fakultas Kelautan dan Perikanan, Universitas Nusa Cendana, Kupang
Diterima 28 Juni 2016 / Disetujui 15 Desember 2016

## ABSTRACT
Anisakid larvae are zoonotic parasites that can cause allergy in human consuming infected raw fish. This  research  aims  to  identify  the  allergenic  potential  of  skipjack  flesh  infected  by  Anisakis  typica  larvae stage 3 (L3). Identification was done through antigen detection in protein profile of the fillet. Samples from the  white  part  of  the  skipjack  flesh  of  both  infected  and  non-infected  flesh,  as  well  as  L3  A.  typica  were analysed  using  SDS  PAGE.  Futhermore,  the  molecular  weights  from  the  analysis  were  compared  to  the literature  references  of  protein  profile.  The  result  showed  that  both  samples  have  8  similar  bands  of protein,  but  4  bands  were  found  only  from  the  infected  fish.  The  four  bands  of  212,  66,  59  and  44  kDa were antigens of L3 A. typica. The presence of antigen from L3 A. typical in the infected flesh may induce allergy when the fish is consumed.
Keywords: allergic, A. typical, fish flesh, infection

## ABSTRAK
Larva  anisakid (A.  typica) merupakan  parasit  zoonoses  yang  dapat  menyebabkan  alergi  akibat mengonsumsi  ikan  mentah  yang  terinfeksi.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengidentifikasi  potensi  alergi pada  daging  ikan  cakalang  yang  terinfeksi  larva A.  typica stadia  3  (L3).  Identifikasi  dilakukan  melalui deteksi  antigen  pada  profil  protein  daging  ikan.  Sampel  daging  putih  dari  ikan  yang  terinfeksi  dan  tidak terinfeksi  serta  L3 A.  typica dianalisis  menggunkan  SDS  PAGE.  Selanjutnya  dilakukan  studi  literatur terhadap profil protein dari kedua sampel daging untuk mengetahui kehadiran alergen larva pada daging. Hasilnya, kedua sampel daging memiliki 8 pita protein yang sama kecuali 4 pita berbeda hanya ditemukan pada  daging  ikan  yang  terinfeksi.  Empat  pita  tersebut  adalah  protein  212,  66,  59  dan  44  kDa  yang merupakan  antigen  dari L3 A.  typica .  Keberadaan  antigen dari  L3 A.  typica pada  daging  ikan  berpotensi menyebabkan alergi jika ikan dikonsumsi.
Kata kunci: alergi, A. typica , daging ikan, infeksi

## PENDAHULUAN
1
Anisakis  didefenisikan  secara  luas  merupakan ascaradoids  dengan  ikan,  reptil,  burung  yang memakan  ikan  dan  mamalia  sebagai  inang  definitif di  perairan,  transmisi  tergantung  pada  air,  biasanya melibatkan  invertebrata  air  dan  ikan  lainnya  sebagi inang  perantara.  Cacing  dewasa  menetap  di  perut host  mamalia  laut,  terutama  ikan  paus  dan  lumba- lumba.  Telur  dari  cacing  betina  menetas  dan  di- keluarkan  bersama  tinja  dalam  bentuk  embrio  ke perairan  laut.  Setelah  menetas  dari  telur,  larva
Naskah telah dipresentasi pada: Seminar Nasional Perikanan dan Kelautan V. 4-6 Mei 2015. Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan. Universitas Brawijaya. Malang.
*Penulis Korespondensi: Email: cindysoewarlan@staf.undana.ac.id
memasuki  perairan  laut.  Selanjutnya  dikonsumsi oleh  invertebrate  seperti:  krustase  dari  keluarga Euphausidae  dan  berkembang  pada  tahap  ke  tiga (Cheah  dan  Lymbrey,  2007)  dan  melalui  rantai makanan berpindah pada ikan-ikan karnivora. Selain hewan,  manusia  tanpa  sengaja  menjadi  inang ( incidental.accidental  host )  dari  nematode  parasit yang  tidak  dapat  melengkap  siklus  hidupnya  pada manusia  tetapi  dapat  secara  langsung  menyebab- kan  penyakit  yang  melemahkan  kesehatan  atau memulai immune hypersensitivity  (Moreno et  al., 2011),  yang  dikenal  dengan  penyakit  anisakiasis. Transimisi  ke  manusia  terjadi  ketika  tanpa  sengaja mengonsumsi  ikan  mentah  atau  setengah  masak yang terinfeksi.
Howgate  dan  dos  Santos.  (2011)  menjelaskan lebih  dari  500  kasus  Anisakiasis  telah  dilaporkan dari  beberapa  negara.  Beberapa  parasit  sangat
patogen  dan  menyebabkan  infeksi  pada  manusia karena  mengonsumsi  produk  mentah  atau  yang setengah matang ( undercook ). Meningkatnya konsumsi  ikan  mentah  di  beberapa  negara  seperti sushi dan sashimi merupakan  salah  satu  faktor penyebabnya.  Lymbery  dan  Waters.  (2014)  men- jelaskan  anisakiasis  terjadi  di  seluruh  dunia  dengan fokus di Asia Utara dan Eropa Barat. Lebih dari 90% kasus  dilaporkan  dari  Jepang  dan  sebagian  dari Belanda,  Prancis  dan  Spanyol.  Kasus  anisakiasis juga  dilaporkan  dari  beberapa  negara  lainnya  ter- masuk  Amerika  Serikat,  Mexiko,  Canada,  Inggris, Belgia,  Mesir,  Korea,  Philiphina,  Chili  Australia  dan New Zealand.
Kasus  anisakiasis  akibat  mengonsumsi  ikan mentah  atau  kurang  masak  ( sushi/sashimi )  di Sidoarjo  Jawa  Timur  pertama  kali  dilaporkan  oleh Uga et et al. (1996) , ini merupakan kasus pertama di Indonesia. Sampai saat penulisan artikel ini, penulis belum  menemukan  laporan  kasus  anisakiasis  di Indonesia.  Meskipun  baru  1  kasus,  tetapi  ada  ke- mungkinan  kelompok  risiko  berkembang  karena perubahan  kebiasaan  makan  khususnya  makanan mentah pada kalangan menengah ke atas. Selain itu di  beberapa  Wilayah  Indonesia  Bagian  Timur  dan Tengah  masyarakatnya  memiliki  kebiasaan  kon- sumsi ikan mentah. Wiwanitkit dan Wiwanitkit (2016) dalam  review  terhadap  perkembangan  anisakiasis menjelaskan  bahwa  anisakiasis  akan  menjadi  fokus baru bagi kedokteran pada wilayah perairan tropis.
Beberapa  peneliti  menemukan  infeksi  larva nematoda  pada  ikan-ikan  konsumsi  dari  perairan Indonesia, umumnya teridentifikasi sebagai Anisakis sp.  Sebaran  geografis  larva  anisakid  meliputi perairan  Pantai  Selatan  Kulon  Progo-Jogjakarta (Setyobudi et al ., 2011), Perairan Laut Bali (Palm et al., 2008),  Laut  Sabu-Nusa  Tenggara  Timur  (Soe- warlan et  al .,  2014)  dan  Perairan  Sulawesi  Selatan (Anshary et  al .,  2011).  Genus  ini  juga  terdeteksi pada  beberapa  ikan  yang  didaratkan  pada  Tempat Pelelangan  dan  Tempat  Pendaratan  Ikan  di Tarakan-Kalimantan Timur (Abdiani,
2010).
Anisaksis sp.  termasuk  dalam  famili  Anisakidae yang  bersifat zoonoses dan  dapat  menyebabkan Anisakiasis atau Anisakidosis (WHO, 2008). Dengan ditemukannya  infeksi  anisakis  pada  ikan-ikan konsumsi  maka  Anisakiasis  berpeluang  untuk berkembang di Indonesia.
Potensi  utama  bahaya  oleh  tertelannya  larva nematoda zoonoses ada  dua;  pertama,  tanpa sengaja  melalui  konsumsi  ikan  mentah  atau  sete- ngah  matang  dapat  menyebabkan  infeksi  lambung dan  usus  (Audicana  dan  Kennedy,  2008).  Kedua , larva  nematoda  dalam  keadaan  matipun  masih dapat  menyebabkan  reaksi  alergi  (Moneo et  al ., 2007).  Perkembangan  penelitian  tentang  alergi  dari nematoda  famili  Anisakidae  difokuskan  padai  jenis Anisakis  simplex .  Sekitar  12  alergen  teridentifikasi
dari A  simplex Ani  s  1  sampai  Ani  s  9  (Nieuwen- huizen et  al .,  2009),  Ani  s  10  (Caballero et  al ., 2011),  Ani  s  11  dan  Ani  s  12  (Nieuwenhuizen  dan Lopata,  2013).  Sementara  itu, Anisakis sp.  sendiri terdiri dari kurang lebih 9 spesis berbeda (D’Amelio, 2010). Informasi dari 8 spesis lainnya sangat minim dan  biasanya  digeneralisasi  berdasarkan  studi patogenitas  dari  infeksi A  simplex .  Sebab  itu, penting  juga  mengetahui  potensi  alergi  dari  spesis lain.
Identifikasi  molekuler  menemukan  bahwa A. typica merupakan spesis pertama family Anisakidae yang  terdeteksi  pada  perairan  Indonesia  meliputi: Perairan Bali, Perairan Selat Makassar dan Perairan Laut  Sawu  (Soewarlan et  al. ,  2014).  Dari  aspek keamanan  pangan,  penting  untuk  mengetahui kemampuan  patogenitas  berkaitan  dengan  potensi alergi  dari  spesis  ini.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui  potensi  alergi  dari  L3 A.  typica yang menginfeksi  daging  ikan  cakalang.  Ikan  cakalng adalah  ikan  yang  biasanya  dikonsumsi  mentah  dan memiliki tingkat prevalensi tinggi terhadap  infeksi L3 A.  typica (Soewarlan et  al. ,  2014).  Sebab  itu  dapat digunakan  untuk  mempelajari  potensi  alergi  dari  L3 A  typica ketika  mengkonsumsi  daging  ikan  yang terinfeksi.  Hasil  penelitian  ini  akan  memberikan informasi  tentang  potensi  bahaya  alergi  oleh  infeksi L3 A. typica pada produk perikanan.

## BAHAN DAN METODE

## Bahan
Bahan  utama  yang  digunakan  adalah  protein dari:  daging  putih  ikan  yang  tidak  terinfeksi  dan daging  putih  ikan  yang  terinfeksi,  masing-masing  2 kali ulangan. Sampel daging diambil dari otot daging putih  yang  terletak  di  bagian  bawah  antara  sirip dorsal  pertama  dan  sirip  dorsal  kedua,  pertim- bangannya  bagian  ini  yang  biasanya  dikonsumsi mentah.  Sampel  diperoleh  dari  hasil  tangkapan nelayan  pada  perairan  NTT  dari trip penangkapan dari  kapal  penangkap  yang  sama  serta  perlakuan penanganan  di  atas  kapal  relatif  sama.  Jika trip penangkapan  dan  penanganan  relatif  sama,  maka rata-rata  setiap  jenis  ikan  memasuki  dan  melewati fase rigor mortis diperkirakan adalah sama.   Sesaat setelah  ikan  tertangkap,  sekitar  15-20  ekor  ikan dengan ukuran rata-rata sama dan skor organoleptik 9 disimpan dalam coolbox untuk diperiksa intensitas infeksinya.  Setelah  didaratkan,  dilakukan  pembeda- han  untuk  memilih  sampel  ikan  yang  terinfeksi  dan tidak terinfeksi. Daging ikan yang terinfeksi dan tidak terinfeksi  selanjutnya  disimpan  dalam  larutan Phos- phate Buffer Saline (PBS) (Serva, Germany) secara terpisah kemudian dibekukan  pada suhu -20°C. Hal yang  sama  juga  dilakukan  terhadap  sejumlah  larva A.  typica .  Larva A.  typica dikoleksi  dari  daging  ikan
yang terinfeksi. Selanjutnya, untuk memastikan jenis larva  maka  dilakukan  identifikasi  morfologi  dan molekuler.  Analisis  menggunakan  SDS  PAGE merujuk pada Aulanni’am. (2004), yang keseluruhan prosesnya  meliputi:  isolasi  protein,  elektroforesis dan penentuan berat molekul sampel.

## Isolasi protein
Masing-masing  sampel  daging  ikan  ditimbang seberat  1  g  dan  cacing  0,5  g  berat  basah.  Sampel digerus dalam keadaan dingin menggunakan mortar ditambahkan Phosphate Buffer Saline - Tween Phenil Methil  Sulfoid  Fluoride (PBS  TPMSF)  (Serva, Germany)  ditambahkan  juga  pasir  kuarsa.  Hasil gerusan dimasukan ke dalam tabung falkon (Falcon BD,  Singapore)  dan  disonivikasi  (Handy  Sonic  U- 21P  Tomy,  Japan)  10  menit,  dilakukan  dalam keadaan  dingin.  Supernatant  dipindahkan  ke  mikro- tube,  ditambahkan  etanol  absolut  (1:1).  Sentrifuge (Tomy,  Japan)  pada  4°C  selama  15  menit  pada 6000  g.  Inkubasi  pada  -20°C  semalam.  Setrifuge pada  10.000  g,  suhu  4°C  selama  10-15  menit. Supernatan  dibuang  dan  pelet  diangin-anginkan sampai  bau  etanol  hilang.  Tambahkan  Tris  HCl (Nacalai,  Japan)  0,02  M,  pH  6,8  dengan  perbandi- ngan  1:1.  Selanjutnya  dilakukan  pengukuran  kon- sentrasi  isolat  protein  menggunakan  nanophoto- meter  (Implen  P-Class,  Germany).  Data  ini  untuk menyamakan konsentrasi yang akan digunakan saat running . Konsentrasi terendah akan dipakai sebagai patokan.

## Persiapan gel
Plat gel dibuat dengan merangkai dua plat kaca dengan jarak antara plat 1 mm. Dua lapis gel dibuat sebagai  tempat  pengumpulan  sampel  ( stacking  gel ) dan media untuk pemisahan protein ( separating gel ) selanjutnya  masukan  campuran separating  gel . Se- parating  gel dibuat  dengan  mencampurkan Lower Gel  Buffer (LGB),  T-Acryl,  akuades  steril, Ammo- nium  Persulphate (APS) (Sigma Aldrich, Singapore) dan N,N,N‘,N‘-Tetramethyl Ethylene Diamine (TEMED)  (Nacalai,  Japan),  gel  pengumpul  sampel ( stacking  gel )  dibuat  dengan  cara  mencampurkan Upper Gel Bufer (UGB), T-Acryl, akuades steril APS dan  TEMED  menggunakan  mikropipet  ke  dalam plate  (tempat  lapisan  gel)  dan  biarkan  10-30  menit hingga terbentuk gel.
Stacking gel selanjutnya dituang di atas separa- ting  gel sambil  dipasang  sisir  hingga  terbentuk  gel berikut  sumurannya  dan  diamkan  selama  30  menit. Setelah  gel  terbentuk,  sisir  diangkat  dengan  hati- hati.  Kemudian  plate  dipasang  pada  alat  elektro- foresis,  selanjutnya  buffer  dituangkan  pada  bejana elektroforesis  (Min-PROTEAN  Electrophoresis  Sys- tem –Bio-Rad, USA).

## Injeksi sampel
Sejumlah 10  L sampel isolat protein ditambah 10  L Tris-cl + 20  L Reducing Sample Buffer (RSB) (Serva, Germany), dan dimasukkan ke dalam mikro- tube,  kemudian  dipanaskan  dalam  pemanas  air pada suhu  100 o C selama 3 menit.  Setelah didingin- kan  sampel  dimasukkan ke  dalam sumur-sumur  gel dengan  volume  20  L  untuk  tiap  sumur.  Setelah  itu anoda  dihubungkan  pada  reservoir  bawah  dan katoda  dihubungkan  pada  reservoir  atas. Power supply dihidupkan  dengan  arus  listrik  sebesar  30 mA dan 130 V. Proses pemisahan ( running ) dihenti- kan  setelah  warna  biru  dari  penanda  mencapai ketinggian 0,5 cm dari batas bawah plat gel. Standar protein  yang  digunakan  adalah  protein  ladder  9,з– 200 kDa (Nacalai, Japan).

## Pewarnaan dan pecucian gel
Pewarnaan  dilakukan  dengan  merendam  gel dalam  larutan staining selama  30-60  menit.  Peng- hilangan  warna  dilakukan  dengan  merendam  gel dalam  larutan destaining sambil  digoyangkan dengan  penggoyang  otomatis  sampai  gel  menjadi jernih. Kemudian hasil elektroforesis discan.

## Penentuan berat molekul
Dengan  membandingkan  hasil  elektroforesis sampel  dengan  marker  protein.  Penentuan  berat molekul  dilakukan  dengan  menghitung  nilai  Rf ( Retardation factor ) dari masing-masing pita dimana:
f arak pergerakan protein dari tempat a al arak pergerakan  arna dari tempat a al
Selanjutnya  nilai  berat  mlekul  (BM)  di  log  dan dibuat  kurva  regresi  (persamaan  1).  Persamaan pada  kurva  regresi  menggunakan  nilai  Rf  dan logaritma  BM.  Untuk  mendapatkan  persamaan regresi  diolah  menggunakan softwere dan  hasilnya digunakan  untuk  menentukan  BM  dari  sampel.  BM sampel diketahui setelah penentuan Rf dari masing- masing pita sampel. Selanjutnya, nilai Rf dimasukan ke  persamaan  1.  Kemudian  dibuat  kurva  standar dengan  harga  Rf  sebagai  sumbu  x  dan  harga logaritma  BM  sebagai  sumbu  y.  Berat  molekul sampel  ditentukan  dengan  diinterpolasikan  pada kurva standar dari protein marker.

## Analisis data
Data konsentrasi isolat protein dari daging ikan yang  terinfeksi  dan  tidak  terinfeksi  dianalisis  meng- gunakan  statistik  deskriptif:  rata-rata mean .  Iden- tifikasi  protein  dari  berat  molekul  sampel  merujuk kepada data sekunder.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Konsentrasi protein
Konsentrasi  isolat  protein  dari  setiap  sampel disajikan  pada  Tabel  1.  Konsentrasi  protein  daging ikan  yang  tidak  terinfeksi  lebih  tinggi  dari  daging yang terinfeksi. Perbedaan ini diperkirakan disebab- kan oleh: pertama, sejumlah protein pada ikan yang terinfeksi  berkurang  oleh  efek  parasitik  pada  ikan sebagai  inang.  Penelitian  ini  menemukan  distribusi larva A.  typica pada  sampel  ikan  yang  terinfeksi 96,04%  pada  organ  dalam  seperti  lambung,  hati, gonad  dan  empedu  dengan  intesitas  63,45 individu/ekor  sedangkan  pada  ikan  yang  tidak  ter- infeksi, distribusinya 0,00%. Larva A. typica merupa- kan parasit saluran pencernaan, oleh Grabda (1991) dijelaskan  parasit  usus  mengorbankan  inangnya dengan  memakan  makanan  inang  atau  darah  atau cairan  jaringan  tubuh  inang,  sehingga  meng- hilangkan sejumlah besar nutrisi dari inang.
Tabel 1. Konsentrasi  protein  daging  ikan  yang terinfeksi, tidak terinfeksi dan L3 A. typica Kode Sampel Kadar Protein(mg/mL) (Mean ± Sd) Daging ikan yang tidak terinfeksi 24,4±1,5 Daging ikan yang terinfeksi 15,9±1,8 L3 A. typica 12,9
Kedua  perbedaan  saat  memasuki  fase rigor mortis dari  masing-masing  individu  yang  dijadikan sampel.  Pada  kasus  ini,  faktor  intrinsik  dan  eks- trinsik  lainnya  tidak  dilibatkan  karena  diasumsikan
sama.  Ikan  cakalang  salah  satu  dari  pelagis  besar yang  hidup  bergerombol  dan  biasanya  ditangkap menggunakan  jaring/pukat  dan  pancing.  Penangka- pan  cakalang  di  perairan  NTT  semuanya  meng- gunakan  pancing  ( pole  and  line ).  Ikan  ditangkap satu  persatu  dalam  waktu  yang  berbeda,  dengan demikian  setiap  ikan  memiliki  waktu  yang  berbeda untuk  memasuki  dan  melewati  fase rigor  mortis . Meskipun  dalam  proses  sampling  telah  diupayakan untuk  mengambil  sampel  ikan  dari  waktu,  ukuran dan trip penangkapan yang sama, tetapi proses me- masuki post  mortem masing-masing  individu  tetap bebeda.  Kedua  hal  inilah  yang  menyebabkan adanya  perbedaan  konsentrasi  protein  dari  daging ikan yang tidak terinfeksi dan yang terinfeksi.

## Berat molekul protein
Berdasarkan  hasil  elektroforesis  (Gambar  1) maka  dilakukan  pengukuran  berat  molekul  standar melalui  pengukuran  nilai  RF  dengan  memplotkan dalam  kurva  standar.  Mobilitas  protein  dapat dihitung  menggunakan  persamaan  garis  dari  kurva standr  tersebut.  Persamaan  garis  yang  diperoleh dari perhitungan tersebut adalah y = -1,054x + 2,252 dengan  nilai  R 2 =  0,949,  hasilnya  berat  molekul sampel  pada  Tabel  2.  Berdasarkan  Tabel  2, daging ikan  yang  tidak  terinfeksi  memiliki  8  pita  protein sedangkan  yang terinfeksi 12 pita protein dan  L3 A. typica 11  pita  protein.  Daging  ikan  yang  tidak terinfeksi memiliki  8  pita protein  yang  sama  dengan protein  ikan  terinfeksi  kecuali  4  pita  dengan  berat molekul:  212,  66,  59  dan  44  kDa.  Keempat  berat molekul  tersebut  juga  terdapat  pada  protein  L3 A. typica .
Tabel 2.  Profil berat molekul protein daging ikan yang terinfeski, tidak terinfeksi dan L3 A. typica
Pita Ke- BM (kDa) Daging Non Infeksi (1) Daging Non Infeksi (2) Daging Terinfeksi (1) Daging Terinfeksi (2) L3 A. typica 1 212 √ √ √ 2 110 √ √ √ √ √ 3 92 √ √ √ √ √ 4 82 √ 5 76 √ 6 71 √ √ √ √ 7 66 √ √ √ 8 59 √ √ √ 9 48 √ √ √ √ 10 44 √ √ √ 11 38 √ √ √ √ 12 32 √ √ √ √ √ 13 27 √ √ √ √ √ 14 23 √ √ √ √ √
Keterangan: √ adalah BM protein yang sama antara daging ikan terinfeksi dengan L3 A. typica , tapi tidak dijumpai pada daging ikan yang tidak terinfeksi
Gambar 1.  Hasil  elektroforesis  SDS  PAGE  (M: Marker, ni: Daging ikan yang tidak terin- feksi  (ulangan  1  dan  2),  i:  Daging  ikan yang  terinfeksi  (ulangan  1  dan  2),  c: Larva A. typica

## Protein ikan berdasarkan berat molekul
Protein  dalam jaringan otot ikan diklasifikasi ke dalam:  1).  Protein  struktural  terdiri  dari:  aktin, myosin,  tropormyosin  dan  kompleks  actomyosin. Protein  ini  memberikan  kekuatan  bagi  otot  untuk berkontraksi.  2).  Protein  yang  mengandung  enzim terdiri  dari  2  kelompok  miogen  yang  ditemukan dalam sakroplasma dan globulin dalam mitokondria. Ada  yang  menyebut  protein  ini  sebagai  protein sakroplasma  (myoalbumin,  globulin  dan  enzim). Sebagian  protein  sakroplasma  adalah  enzim-enzim yang  berperan  dalam  metabolisme  sel,  seperti konversi  energi  anaerobik  dari  glikogen  ke  ATP.  3). Stroma protein mengandung jaringan ikan terdiri dari kolagen (FAO, 2015).
Berdasarkan  berat  molekulnya  maka  profil protein  dari  otot  ikan  yang  tidak  terinfeksi  dan terinfeksi,  disajikan  pada  Tabel  3.  Protein  23  kDa oleh  Selvakumar et  al .  (2010)  ditemukan  sebagai enzim tripsin pada ikan cakalang, tongkol dan yellow fin  tuna .  Montowska et  al .  (2007)  menjelaskan  23 kDa  pada  ikan  sebagai  Myosin  Light  Chain  (MLC), adalah  bagian  dari  protein  struktural  yang  ber- tanggungjawab  untuk  kontraksi  otot.  Sampel  pada penelitian  ini  diambil  dari  daging  putih  maka  berat molekul  tersebut  diduga  merupakan  MLCl,  sebab tripsin  pada  ikan  mirip  dengan  tripsin  mamalia adalah  protein  dari  enzim  percernaan  dengan  berat molekul  berkisar  antara  23-30  kDa  (Ahmad et  al., 2011).  Berat  molekul  38  kDa  dilaporkan  sebagai alergen  dari  krustase  dan  moluska,  tapi  pada  ikan tropomiosin merupakan bagian dari protein struktural  yang  juga  berfungsi  dalam  kontraksi  otot.
Pada otot ikan salmon TM terdapat dalam 2 isoform yaitu α-TM dan β-TM (Helley et al ., 1995). Pada ikan blue  fin  tuna  ( Thunnus  thynnusorientalis )  juga  di- temukan  isoform  yang  sama  dari  TM  (Ochiai et  al ., 2010). Blue fin tuna dan K pelamis adalah kelompok tuna  dari  famili  Scrombidae.  Hal  ini  memperkuat dugaan  bahwa  berat  molekul  38  kDa  pada  sampel adalah α-TM atau β-TM.
Tabel 3.  Protein  daging  putih  ikan  Cakalang  yang tidak  terinfeksi  dan  terinfeksi  oleh  L3 A.
typica berdasarkan  berat  molekul  yang sama Protein Berat Molekul (kDa) Nama Protein Struktural 23 Myosin Light Chain (MLC) 38 Tropomyosin Sakroplasma 27 Glyceraldehyde-3- phospat dehidrogenase 32 Kelompok enzim 92 Sakroplasmik Antibodi 110 Antibodi pada otot myotomal Tidak diketahui 48, 71 -
Protein  dengan  berat  molekul  27,  32  dan  92 kDa  dilaporkan  merupakan  bagian  dari  kelompok enzim pada protein sakroplasma. Menurut Ladrat et al. (2003)  Glyceraldehyde-3-phospat  dehidrogenasi (27 kDa) adalah enzim yang terdapat pada otot ikan. Demikian  juga  protein  32  kDa  adalah  enzim  yang ditemukan pada otot ikan dan berfungsi untuk meng- katalis unit proteolisis (Yongsawatdigul et al ., 2014). Protein 92 kDa adalah protein sakroplasmik, protein jaringan  otot  yang  umumnya  terdiri  dari  kelompok enzim (Agebi et al ., 2014). Protein 110 kDa dilapor- kan  merupakan  antibodi  yang  ditemukan  pada  otot myotomal  yang  diproduksi  akibat  respons  terhadap perubahan suhu lingkungan pada ikan rainbow trout ( Orchorhynchus  mykiss )  dan Allothunnus  fallai (Korajoki  dan  Vornanen,  2012;  Sapulveda et  al ., 2008).  Pada  kasus  ini,  sampel  diambil  dari  bagian otot myotomal yaitu otot putih. Selain itu ada 4 berat molekul  protein  yang  tidak  ditemukan  pada  protein ikan  yang tidak terinfeksi tetapi  ada pada ikan  yang terinfeksi.  Keempat  protein  ini  juga  ditemukan  pada sampel A.  typica .  Mereka  adalah:  212,  66,  59  dan 44 kDa.
Protein  212  kDa  oleh  Faeste et  al. (2014)  ter- identifikasi sebagai  antigen Ani s 1  bernama animal kunitz  serine  protease  inhibitor. Protein  66  kDa sebagai antigen A simplex (Rodero et al ., 2004) dan protein 59 kDa adalah myophilin  yaitu protein struk- tural dan lokomotik otot dari A simplex (Faeste et al., 2014).  Berikutnya,  protein  44  kDa  adalah  antigen yang  terdeteksi  menggunakan  Western  Bloting  Kit pada  sampel  serum  pasien  anisakiasis  (Yera et  al.,
M ni.1 ni.2 i.1 i.2 c Berat Molekul Marker Protein (kDa) 116 200 89 69 47 37 28 21 9,3
2003). Tiga dari keempat berat molekul pada protein otot  ikan  yang  terinfeksi  yaitu  212,  66  dan  44  kDa diketahui  merupakan  antigen  dari A  simplex dan serum  pasien  anisakiasis.  Sampai  saat  ini  per- kembangan  penelitian  alergen  dari  genus  anisakis difokuskan pada A simplex dan belum ada data dari spesies  lainnya.  Kami  menduga  ada  kemiripan antara  antigen  yang  dimiliki  oleh A  simplex dengan A.  typica karena  mereka  berada  dalam  satu  genus, memiliki  karakter  morfologi  yang  mirip  dan  siklus hidup  yang  sama. Faeste et al .  (2014)  menjelaskan bahwa  antigen  dari A  simplex homolog  dengan antigen  dari  nematoda  lainnya.  Dengan  demikian kami  berkesimpulan  bahwa  protein  212,  66  dan  44 kDa  merupakan  antigen  yang  dikeluarkan  oleh A. typica ke jaringan otot ketika menginfeksi ikan.
Potensi alergi oleh A. typica pada daging ikan Konsumsi  ikan  biasanya  dilakukan  dalam beberapa  cara  seperti:  mentah  dan  dimasak.  Ikan mentah  sendiri  biasanya  dijumpai  dalam  bentuk segar, dingin dan beku. Memasak dan membekukan ikan  yang  terinfeksi  L3 A.  typica tidak  dapat  men- cegah  reaksi  alergi  karena  alergen  bersifat  ter- mostabil  sangat  tahan  pada  suhu  pembekuan  dan pemasakan  (EFSA,  2010;  Alonso et  al. ,  2007). Tejada et  al .  (2006)  menjelaskan  bahwa  pelepasan alergen  ke  daging  terjadi  selama  penyimpanan dingin.  Paparan  alergen  juga  dapat  terjadi  setelah larva-larva  tidak  ditemukan  lagi  pada  daging (Audicana dan Kennedy, 2008).
Pada ikan yang terinfeksi diduga larva A. typica mengeluarkan  metabolit  berupa  antigen  ke  jaringan otot  ikan.  Antigen  ini  kemudian  akan  menginduksi respon  imun  dari  inang.  Solas et  al. (2008)  mene- mukan  antigen  dari  Ani  s  4  tersebar  di  sekitar jaringan  otot  ikan  yang  terinfeksi.  Antigen  tersebar ke dalam otot dan dapat menyebabkan gejala alergi seperti  dyspnea,  muntah,  diare,  urtikaria,  angio- derma atau anafilaksis pada beberapa individu yang sensitif terhadap A simplex . Rodriguez-Mahillo et al. (2010) juga menemukan 1 ppm antigen Ani s 4 pada otot  ikan  beku  yang  disimpan  pada  suhu  -20°C selama 11 bulan dan berpotensi menginduksi reaksi alergi.
Jadi meskipun larva telah keluar dari tubuh ikan melalui  proses  alamiah  selama  berada  di  perairan atau  dibersihkan  dari  tubuh  ikan  pada  saat  proses penanganan,  peluang  alergi  tetap  ada.  Meskipun demikian, spesifitas respons antibodi setiap individu bervariasi  dan  berbeda  antara  individu  satu  ke individu  lain  dan  perbedaan  ini  disebabkan  oleh kontrol  genetik  (Kennedy et  al., 1991).  Jadi  potensi alergi  hanya  dapat  terjadi  apabila  individu  yang mengonsumsi ikan sensitif terhadap antigen anisakis.  Pembahasan  dalam  artikel  ini  didasarkan pada  studi  literatur  dari  penelitian-penelitian  se- belumnya.  Perkembangan  penelitian berkaitan
dengan  kemampuan  patogenesis A.  typica sampai saat  artikel  ini  ditulis  belum  banyak  dilakukan. Sebab  itu  untuk  memperkaya  dan  mempertajam pembahasan  sebaiknya  hasil  penelitian  ini  dilanjut- kan lagi dengan metode bioinformatika atau metode biomolekuler  lainnya  yang  dapat  memberikan  gam- baran  tentang  potensi  alergi A.  typica pada  daging ikan yang terinfeksi.

## KESIMPULAN
Daging ikan cakalang yang teinfeksi  memiliki 4 pita  protein  yang  sama  dengan  L3 A.  typica . Keempat  protein  dengan  berat  molekul  212,  66,  59 dan  44  kDa  berpotensi  menyebabkan  alergi  karena ketika  menginfeksi  daging  ikan  larva  melepaskan antigennya ke jaringan daging ikan.

## DAFTAR PUSTAKA
Abdiani  IM.  2010.  Infeksi  larva  anisakid  pada  ikan tongkol  ( Euthynnus sp.)  yang  didaratkan  di Tarakan. J Harpodon Borneo 3: 70-74.
Ahmad  M,  Benjakul  S,  Ovissipour  M  Prodpran  T. 2011.  Indigenous  protease  in  the  skin  of unicorn  leat  herjacket  ( Alutherus  monoceros ) and  their  influence  on  characteristic  and functional  properties  of  gelatin.  Food  Chem 127:  508-515.  DOI:  10.1016/j.foodchem.2011. 01.032.
Anshary H, Sriwulan, Freeman MA, Ogawa K. 2014. Occurrence  and  molecular  identification  of Anisakid  Dujardin,  1984  from  marine  fish  in Southern  Makassar  Strait,  Indonesia.  Korean  J Parasitol 1: 9-19. DOI: 10.3347/kjp.2014.52.1.9.
Agebi OT, Sofela SO, Adebambo AO, Awodiran MO. 2014.  Evaluation  of  protein  fraction  of  indi- genous  clariid  fish  species  ( Clarias  gariepinus and Hetereobranchus  bidorsallis )  and  their other  hibrids.  Biotechnol  13:  289-294.  DOI: 10.3923/biotech.2014.289.294.
Alonso  A,  Daschner  A,  Moreno-Ancilo  A.  2007. Anaphylaxis with Anisakis simplex in the gastric mucosa.  New  Eng  J  Medi  337:  350-351.  DOI: 10.1056/NEJM199707313370518.
Audicana  MT,  Kennedy  M.  2008. Anisakis  simplex : from  obscure  infectious  worm  to  inducer  of immune hypersensitivity. Clin Microbiol Rev 21: 360-379. DOI: 10.1128/CMR.00012-07.
Aulanni’am.  2004.  Prinsip  dan  Teknik  Analisis Biomolekul. Fakultas Pertanian Universitas. 47- 56. Brawijaya Press. Malang.
Caballero ML, Umpierrez A, Moneo I, Rodriguez PR.
2011. Ani s 10, a new Anisakis simplex alergen:
cloning  and  heterologous  expression.  Int  60: 209-2012. DOI: 10.1016/j.parint.2011.01.003.
[EFSA]  European  Food  Safety  Authority.  2010. Scientific  Opinion.  Scientific  opinion  on  risk assessement  of  parasities  in  fishery  product. Eur Food Safety Authority J 8:1-91.
[FAO]  Food  and  Agriculture  Organization.  2015. Protein  in  fish  and  fish  product.  www.fao.org/ fishery/topic/14869/en. [4 Maret 2015].
Cheah FY, Lymbery AJ. 2007. Food Borne Parasitic Zoonoses:  Anisakid  Nematodes  and  Anisa- kiasis.  Ed  1 st 185-207.  Springer,  US.  DOI: 10.1007/978-0-387-71358-8_5.
D’Amelio  S,  Busi  M,  Ingrosso,  S,  Paggi  L.  2010. Molecular  Detection  of  Foodborn  Pathogens: Anisakiasis. 757-768. CRC Press. Boca Raton, London, New York.
Faeste  CK,  Jonscher  KR,  Dooper  M  MWB,  Egge- Jacobsen  W,  Moen  A,  Daschner  A,  Egaas  E, Cristian  U.  2014.  Characterization  of  potensial novel  alergens  in  fish  parasites A  simplex .  Eur Prot  Assoc  Open  Proteomic  4:  140-155.  DOI: 10.1016/j.euprot.2014.06.006.
Helley  D,  Bieger  T,  Waddeton  DM,  Hong  C, Jackman DM, Mc Gowon, Davidson WS. 1995. Characterisation  of  fast,  slow  and  cardiac muscles  tropomyosin  from  salmoid  fish.  Eur  J Biochem 232: 226-234.
Howgate  P,  dos  Santos  CAML.  2011.  Fishborne zoonotic  parasities  and  aquaculture:  A  review. Aquaculture 318: 353-361. DOI: 10.1016/j.aqua culture.2011.05.046.
Kennedy  MW,  Wassom  DL,  McIntosh  AE,  Thomas JC.  1991.  H-2  (I-A)  control  of  the  antibody repertoire in Trichinella spiralis infection and its relevance  to  resistance  and  susceptibility.  J Immunol 73: 36-43.
Korajoki  H,  Vornanen  M.  2012.  Expression  of SERCA  and  phospholamban  in  rainbow  trout ( Onchorhynchus  mykiss ) heart: comparisson  of atrial  and  ventricular  tissue  and  effect  of thermal acclimation. J Exp Biol 215: 1162-1169. DOI: 10.1242/jeb.065102.
Ladrat  C,  Bagniz-Verrez  V,  Noel  J,  Fleurence  J. 2003.  In  vitro  proteolysis  of  myofibrillar  and sacroplasmic  proteins  of  white  muscle  of seabass  ( Dicentrachus  labrax L):  Effect  of cathepsin  B,  D  dan  L.  Food  Chem  8:  517-525. DOI: 10.1016/S0308-8146(02)00481-8.
Lymbery AJ, Waters JA. 2014. Encyclopedia of food savety.  1 st Ed.  Academic  Press.  Elsevier, Netherlands.
Moneo  I,  Caballero  ML,  Perez  RR,  Mahillo  AIR, Munoz  MG.  2007.  Sensitization  to  the  fish parasite Anisakis  simplex :  clinical  and  labo-
ratory  aspects.  Parasitol  Res  101:  1051-1055. DOI: 10.1007/S00436-007-0587-7.
Montowska  M,  Pospiech  E. 2007.  Specific  identify- cation of meat by electrophoretic methods. Acta Sci Polo Technol Alimentaria 6: 5-16.
Moreno  Y,  Gros  PP,  Tam  M,  Segura  M,  Valan- parambil  R,  Geary  TG,  Stevenson  MM.  2011. Proteomic  analysis  of  excretory  secretory product  of Heligmosoimoides  polygyrus asses- sed with next-generation sequencing transcript- tomic  information.  Plos  Negleted  Tropical Diseases  5:  1-11.  DOI:  10.1371/journal.pntd. 0001370.
Nieuwenhuizen  N,  Jeebhay,  Lopata  AL.  2009.
Allergies  in  the  workplace.  ALLSA  reseach awards  report.  Cur  Allergy  Clin  Immunol  22: 132-138.
Nieuwenhuizen  NE,  Lopata  AI.  2013.  Anisakis  a foodborne  parasite  that  triggers  allergic  host defences  Int  J  Parsitol  43:  1047-1057.  DOI: 10.1016/j.ijpara.2013.08.001.
Ochiai  Y,  Ozawa  H,  Huang  MC,  Watabe  S.  2010. Characterization  of  two  tropomyiosin  isoform from the skletal muscle of blue fin tuna Thunnus thynnusorientalis .  Archive  Biochem  Biophys 502: 96-103. DOI: 10.1016/j.abb.2010.07.015.
Palm  HW,  Damriyasa  IM,  Linda,  Oka  BM.  2008. Molecular  genotyping  of  Anisakis  Dujardin, 1845  (Nematoda:  Ascaridoidae:  Anisakidae) larva  from  marine  fish  of  Balinese  and Javanese  waters,  Indonesia.  J  Helmintologia 45: 3-12. DOI: 10.2478/s11687-008-0001-8.
Rodriguez-Mahillo  A,  Gonzales-Munoz  M,  de  las Heras  C,  Tejada  M,  Moneo  J.  2010.  Quantifi- cation of Anisakis simplex alergens in fish, long- term frozen, and cook fish muscle. J Foodborne Pathol  7:  967-973.  DOI:  10.1089/fpd.2009. 0517.
Sapulveda CA, Dicksons KA, Bernal D, Graham JB. 2008.  Elevated  red  myotomal  muscle  tem- peratures  in  the  most  basal  tuna  species, Allothunnus  fallai .  J  Fish  Biology  73:  241-249.
DOI: 10.1111/j.1095-8649.2008.01931.x.
Selvakumar  P,  Ling  TC,  Walkers  S,  Lyddiatt  A. 2010.  A  practical  implementation  and  exploit- tation  of  ATPS  for  intensive  processing  of biological  feedstock:  a  novel  approach  for heavily  biological  feedstock  loaded  ATPS. Separation  Purification  Technol  J  75:  323-332. DOI: 10.1016/j.seppur.2010.08.022.
Setyobudi  E,  Soeparno,  Helmiati.  2011.  Infection  of Anisakis sp.  Larva  in  some  marine  fishes  from the southern coast of Kulon Progo, Yogyakarta. Biodiv  12:  34-37.  DOI:  10.13057/biodiv/d120 107.
Soewarlan  LC,  Suprayitno  E,  Nursyam  H,  Hardoko. 2014. Identification of anisakid nematode infec- tion  of  skipjack  ( Katsuwonus  pelamis L.)  from Savu  Sea,  East  Nusa  Tenggara,  Indonesia.  Int J Biosci 5: 423-432. DOI: 10.12 692/ijb/5.9.423- 8.
Solas  MT,  Rodriguez-Mahillo  AL,  Gonzales-Munoz M,  de  las  Heras  C,  Tejada  M.  2008.  Anisakis antigen  detected  in  fish  muscle  with Anisakis simplex L3. J Food Protect 71: 1273-1276.
Tejada  M,  Solas  MT,  Alfonso  N,  Angel  M.  2006. Scanning  electron  microscopy  of  Anisakis larvae  following  different  treatments.  J  Food Protect 6: 1379-1387.
Uga  S,  Oto  K,  Kataoka  N,  Hasan  H.  1996. Sereoepidemilogy  of  five  mahor  zoonotic parasite  infection  in  inhabitants  of  Sidoardjo East  Java,  Indonesia.  Southeast  Asian  J  Trop Med Public Health 27: 556-561.
Wiwanitkit  S,  Wiwanitkit  V.  2016.  Anisakiasis  in Southeast  Asia:  A  story  of  new  tropical disease?.  Asian  Pasific  J  Tropical  Biomed  6: 382-383. DOI: 10.1016/j.apjtb.2015.11.011.
Yera H, Andiva S, Perret C, Limmone D, Boireau P, Camet  DJ.  2003.  Development  and  evaluation of  a  western  blot  kit  for  diagnosis  of  human trichinellosis.  Clin  Diagnostic  Lab  Immunol  10: 793-796.  DOI:  10.1128/CDLI.10.5.793-796.200 3.
Yongsawatdigul  J,  Hemung  BO,  Choi  YJ.  2014.
Proteolitic  Enzymes  and  Control  in  Surimi. Surimi  and  Surimi  Seafood.  3 rd Edition.  147. CRC Press. Boca Raton, London, New York.
[WHO]  World  Health  Organization.  2008.  Soil transmited helmits. WHO Geneva, Switzerland. http://www.who.int/intestinalworms/en.
[22 September 2015].