## KEANEKARAGAMAN GENETIK SALACCA ZALACCA BERDASARKAN PENANDA AFLP
Zumaidar 1,2 , Tatik Chikmawati 3 , Alex Hartana 3,4 & Sobir 5
1 Program Pascasarjana Biologi Tumbuhan, Departemen Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor, Kampus Darmaga, Bogor 16680, Indonesia.
2 Departemen Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Syiah Kuala, Jl. Syech Abdur Rauf, Darussalam Banda Aceh, Indonesia. Email: zumaidar@yahoo.com .
3,4 Departemen Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor, Kampus Darmaga, Bogor 16680, Indonesia.
5 Departemen Agronomi dan Hortikultura, Institut Pertanian Bogor, Kampus Darmaga, Bogor 16680, Indonesia Email: sobir@ipb.ac.id.
Zumaidar, Tatik Chikmawati, Alex Hartana & Sobir. 2015. Genetic Diversity of Salacca zalacca Based on AFLP Markers. Floribunda 5(2): 60–70. — Salacca zalacca has two varieties, namely Salacca zalacca var. zalacca called salak Jawa and Salacca zalacca var. amboinensis called salak Bali . Based on agronomical and morphological characters, people have known several cultivars of both varieties. This study aims to de- termine the genetic differences between them. Salak samples ( Salacca zalacca ) accounted for 91 accessions from Aceh, West Java (Bogor, Sumedang, Tasikmalaya), Central Java, Jogjakarta, and Sulawesi, included 22 cultivars consisted of 11 released cultivars and 11 local cultivars. Molecular marker was used Amplified Fragment Length Polymorfism markers (AFLP) that consisted of two different primer combinations are Eco RI-ACT and Mse 1-CAT; and Eco RI-ACC and Mse 1-CTT. Data were analyzed using the UPGMA method. The results showed that the data fragments that were scored from the combination of two different primer were 531. Those were polymorphic on the size of 140–489 bp for ACT-CAT and 140–447 bp for ACC-CTT. Primer combinations of EcoRI-ACC and Mse1-CTT produced polymorphic data moresomore efficiently than primer combination of EcoRI-ACT and Mse1-CAT. Phenetic analysis illustrates the genetic relationship between salak Jawa and salak Bali on 0.61 similarity coefficient. Dendrogram showed union of salak Bali accessions at tree branches. Molecularly AFLP markers indicated separation of salak Jawa and salak Bali.
Keywords: molecular, salak Bali, salak Jawa, Salacca zalacca, AFLP markers.
Zumaidar, Tatik Chikmawati, Alex Hartana & Sobir. 2015. Keanekaragaman Genetik Salacca zalacca Berdasarkan Penanda AFLP. Floribunda 5(2): 60–70. — Salacca zalacca memiliki dua varietas, yaitu Salacca zalacca var. zalacca disebut  salak Jawa dan Salacca zalacca var. amboinensis disebut salak Bali . Berdasarkan karakter agronomi dan morfologi, masyarakat telah mengenal beberapa kultivar dari kedua varietas. Penelitian ini bertujuan menganalisis perbedaan genetik di antara keduanya. Sampel salak ( Salacca zalacca ) yang dikoleksi berjumlah 91 aksesi, berasal dari Aceh, Jawa Barat (Bogor, Sumedang, Tasik- malaya), Jawa Tengah, Jogjakarta, dan Sulawesi, seluruhnya termasuk ke dalam 22 kultivar yang terdiri atas 11 kultivar yang telah dilepas oleh pemerintah dan 11kultivar lokal. Penanda molekuler yang digunakan adalah Am-plified Fragment Length Polymorfism markers (AFLP) yang terdiri atas dua kombinasi primer yang berbeda yaitu Eco RI-ACT dan Mse 1-CAT; dan Eco RI-ACC dan Mse 1-CTT. Data dianalisis menggunakan metode UPGMA. Hasil menunjukkan bahwa fragmen data yang dihasilkan dari kombinasi dua primer berjumlah 531. Seluruh data bersifat polimorfik pada panjang basa 140–489 untuk ACT-CAT dan 140–447 untuk ACC-CTT. Kombinasi primer EcoRI-ACC dan Mse1-CTT menghasilkan data polimorfik yang lebih banyak sehingga lebih efisien dibandingkan dengan kombinasi primer EcoRI-ACT dan Mse1- CAT. Analisis fenetik menggambarkan kemiripan genetik salak Jawa dan salak Bali pada nilai koefisien kemiripan 0.61. Dendogram memperlihatkan adanya penyatuan aksesi salak Bali pada tiga cabang. Secara molekuler penanda AFLP mengindikasikan pemisahan salak Jawa dan salak Bali.
Kata kunci: molekular, salak Bali, salak Jawa, Salacca zalacca, penanda AFLP.
Salacca zalacca adalah salah satu jenis dari 23 jenis salak yang ada di dunia (Goavaerts et al . 2013, Zumaidar et al . 2014). Jenis ini pertama kali
dideskripsikan oleh Gaertner pada tahun 1791 berdasarkan buah dari Calamus zalacca yang ternyata merupakan Salacca edulis koleksi A Cl.
Thunberg. Pada tahun 1895 Voss mempublikasi- kan kombinasi nama S. zalacca (Mogea 1982). S. zalacca disebut salak Jawa, disebabkan domestikasinya tersebar di daerah Jawa. Namun saat ini budi daya jenis ini telah tersebar di seluruh pulau di Indonesia dari Sumatra hingga Ambon.
S. zalacca terdiri atas dua varietas yaitu varietas zalacca disebut salak Jawa dan varietas amboinensis disebut salak Bali. Penyematan nama amboinensis dideskripsikan dari spesimen yang berasal dari Ambon. Salak yang proses pengem- bangan budi dayanya terdapat di pulau Bali kemu- dian dikenal sebagai salak Bali, yang memiliki banyak kesamaan morfologi dengan salak yang berasal dari Ambon (Mogea 1982).
Sejak lama di beberapa daerah di Indonesia, masyarakat secara tradisional telah mengenal tumbuhan salak dengan baik. Melalui pengetahuan tradisional sebagian masyarakat telah membudi- dayakan dan telah dapat membedakan salak dalam beberapa kultivar lokal. Di Bali, masyarakat me- ngenal 12 kultivar lokal dengan ciri khas masing- masing (Suter 1988). Masyarakat Madura menge- nal sebanyak 12 kultivar salak yang dibedakan berdasarkan karakter buahnya (Harsono & Hartana 2003).
Secara morfologi terlihat adanya perbedaan antara salak Bali dan salak Jawa seperti pada ukur- an dan warna buah. Namun secara genetik, perbe- daan antara salak Bali dan salak Jawa belum diteliti.Variasi morfologi sangat erat kaitannya dengan variasi genetik untuk menentukan ciri-ciri penanda khusus suatu takson. Pengetahuan tentang keanekaragaman genetik tanaman dapat digunakan untuk keperluan evaluasi dan seleksi tanaman yang akan dibudidayakan. Informasi filogeni molekuler sangat penting dalam rangka memperjelas kedu- dukan sistematika (klasifikasi), konservasi, dan menjadi data dasar  keanekaragaman genetik untuk penangkar tanaman dalam rangka perakitan ta- naman unggul Indonesia (Fitmawati 2008). Variasi genetik dari kultivar S. zalacca di Jawa sudah dilakukan dengan menggunakan penanda mole- kuler RAPD (Kaidah 1999, Nandariyah et al . 2004).
Penanda Amplified Fragment Length Polymorfism (AFLP) merupakan salah satu penan- da DNA yang dapat digunakan untuk mengenali hubungan kekerabatan yang sangat dekat antar genotipe, perbedaan antar klon dalam satu kultivar, keanekaragaman yang disebabkan oleh mutasi yang sangat sedikit atau adanya perbedaan genetik yang sangat kecil (Cabrita et al . 2001). Identifikasi keanekaragaman tanaman dengan menggunakan
AFLP telah banyak dilakukan. Penanda AFLP juga telah digunakan untuk melihat keanekaragaman morfologi dan genetik pada sejumlah tanaman palem. Penanda AFLP berhasil mengenali variasi morfologi dan genetik dari tanaman sagu ( Metro- xylon sagu ) yang membentuk pola distribusi secara geografis di Papua New Guinea (Kjaer et al . 2004). Namun penanda AFLP belum digunakan untuk mengenali  keanekaragaman genetik pada tanaman S. zalacca. Tulisan ini melaporkan hasil penelitian keanekaragaman kultivar S. zalacca berdasarkan data genetik menggunakan penanda AFLP. Hasil penelitian diharapkan dapat memberikan indikasi ada tidaknya pemisahan antara salak Jawa dan salak Bali.

## BAHAN DAN METODE

## Bahan Tanaman
S. zalacca yang dikoleksi berjumlah 91 aksesi meliputi  kultivar lokal berasal dari Jawa Barat: Bogor (Kebun Raya Bogor, Kebun Pribadi Gregory Hambali, dan Taman Buah Mekar Sari), Sumedang, Tasikmalaya; Jawa Tengah, Jogjakarta, Sulawesi, dan Aceh (Tabel 1). Dari 91 aksesi sal- ak, seluruhnya termasuk dalam 22 kultivar, terdiri atas 11 kultivar yang telah dilepas oleh pemerintah dan 11 kultivar lokal. Adapun kultivar yang telah dilepas adalah Condet, Salak Tanpa Duri, Pondoh, Gading, Slebong, Jawa Lokal, Nglumut, Gula Pa- sir, Bali, Manggala, dan Madu (Kaidah 1999, PPVT 2013, Ditbenih Hortikultura 2015). Dari 22 kultivar tersebut, 6 kultivar termasuk dalam kelompok salak Bali dan 16 kultivar termasuk dalam kelompok salak Jawa. Seluruh aksesi salak di simpan di Herbarium Bogoriense, Cibinong.

## Metode
Pemilihan individu sebagai aksesi salak yang dikoleksi untuk pembuatan spesimen herba- rium mewakili kultivar yang dimaksud oleh petani. Masing-masing kultivar salak diambil sebanyak 3 sampel pada setiap lokasi. Pengamatan morfologi pada seluruh tanaman salak mengacu pada kriteria yang digunakan oleh Rifai (1976), Vogel (1987), Schuiling & Mogea (1992), Haris & Haris (2013), PPVT (2006), dan Dransfield et al . (2008). Karak- ter morfologi yang diamati meliputi karakter organ vegetatif dan generatif.
Pengamatan molekuler dilakukan dalam be- berapa tahapan yang terdiri atas isolasi, restriksi dan ligase, preamplifikasi, dan amplifikasi men- gacu pada protokol yang dimodifikasi dari Vos et al . (1995). Tampilan floresensi pada ukuran ter-
Tabel 1. Nomor dan asal koleksi salak ( S. zalacca ) yang diamati
No No Koleksi Asal Koleksi Desa Kecamatan Kabupaten/ Kota Provinsi 1.  ZM 01 Bongkok Bongkok Paseh Sumedang Jawa Barat 2.  ZM 02–ZM03 Slebong Bongkok Paseh Sumedang Jawa Barat Nama Kultivar 3.  ZM 04 Manonjaya Lokal   Cilangkap Manonjaya   Tasikmalaya   Jawa Barat 4.  ZM 05 Pontas Cilangkap Manonjaya   Tasikmalaya   Jawa Barat 5.  ZM 08 Kembang Arum Taman Salak Nusantara   Turi Sleman Jogjakarta 6.  ZM 09 Tanpa Duri Taman Salak Nusantara   Turi Sleman Jogjakarta 7.  ZM 10 Gading Taman Salak Nusantara   Turi Sleman Jogjakarta 8.  ZM 11 Manggala Hijau Taman Salak Nusantara   Turi Sleman Jogjakarta 9.  ZM 12 Ciamis Taman Salak Nusantara   Turi Sleman Jogjakarta 10.  ZM 13 Bali Taman Salak Nusantara   Turi Sleman Jogjakarta 11.  ZM 14 Totok Lebar Taman Salak Nusantara   Turi Sleman Jogjakarta 12.  ZM 15 Totok Kecil Taman Salak Nusantara   Turi Sleman Jogjakarta 13.  ZM 16 Gula Pasir Taman Salak Nusantara   Turi Sleman Jogjakarta 14.  ZM 17 Super Hijau Taman Salak Nusantara   Turi Sleman Jogjakarta 15.  ZM 18; ZM 22–ZM 23   Pondoh Kuning Taman Salak Nusantara   Turi Sleman Jogjakarta 16.  ZM 19 Nglumut Nglumut - Magelang Jawa Tengah 17.  ZM 20–ZM 21 Madu Baleranti Turi Sleman Jogjakarta 18.  ZM 24 Jawa Lokal Babatan Turi Sleman Jogjakarta 19.  ZM 25 Pondoh Kuning Babatan Turi Sleman Jogjakarta 20.  ZM 26 Pondoh Hitam Babatan Turi Sleman Jogjakarta 21.  ZM 27–ZM 28 Madu Soko Turi Sleman Jogjakarta 22.  ZM 43–ZM 47 Bali Jawa Taman Buah Mekar Sari Cileungsi Bogor Jawa Barat 23.  ZM 48–ZM 49 Condet Taman Buah Mekar Sari Cileungsi Bogor Jawa Barat 24.  ZM 61–ZM 63; ZM 126 Pondoh - - Minahasa Sulawesi 25.  ZM 69–ZM 73 Pondoh - - Aceh Teng- gara Aceh 26.  ZM 77–ZM 78 Jawa Kebun Raya Bogor Bogor Utara   Bogor Jawa Barat 27.  ZM 80–ZM 83 Gading Kebun Raya Bogor Bogor Utara   Bogor Jawa Barat 28.  ZM 84–ZM 86 Jawa Lokal Kebun GG Hambali Bogor Timur   Bogor Jawa Barat 29.  ZM 87–ZM 89 Bali Sedikit Duri   Kebun GG Hambali Bogor Timur   Bogor Jawa Barat 30.  ZM 90–ZM 92 Kate Kebun GG Hambali Bogor Timur   Bogor Jawa Barat
No No Koleksi Nama Kultivar Asal Koleksi Desa Kecamatan Kabupaten/ Kota Provinsi 31.  ZM 93–ZM 95 Bali Lokal Kebun GG Hambali Bogor Timur   Bogor Jawa Barat 32.  ZM 96–ZM 98 Gula Pasir Kebun GG Hambali Bogor Timur   Bogor Jawa Barat 33.  ZM 99–ZM 101 Gading Bali Kebun GG Hambali Bogor Timur   Bogor Jawa Barat 34.  ZM 102–ZM 103 Sedikit Duri Asal Batujajar Kebun GG Hambali Bogor Timur   Bogor Jawa Barat 35.  ZM 104–ZM 109 Mawar Kebun GG Hambali Bogor Timur   Bogor Jawa Barat 36. ZM 110–ZM 112; ZM 185–ZM 195 Pondoh Kebun GG Hambali Bogor Timur   Bogor Jawa Barat 37.  ZM 113–ZM 114 Gading Jawa Kebun GG Hambali Bogor Timur   Bogor Jawa Barat 38.  ZM 115 Jawa lokal Kebun GG Hambali Bogor Timur   Bogor Jawa Barat
Tabel 1. Nomor dan asal koleksi salak ( S. zalacca ) yang diamati (Lanjutan)
tentu dari kedua kombinasi primer disebut elektro- fenogram. Pembacaan elektro fenogram berupa ada tidaknya puncak pada panjang basa tertentu ditan- dai dengan angka 1 dan 0.

## Analisis Data
Analisis data diolah dengan menggunakan program NTSYS ( Numerical Taxonomy and Multi- variate System ) versi 2.02. Matrik data kualitatif disusun dalam bentuk NT Edit (Rohlf 1998). Ana- lisis kesamaan data dilakukan dengan mengguna- kan prosedur SIMQUAL ( Similarity for Qualita- tive Data ) yang dihitung dengan menggunakan koefisien SM ( Simple Matching ). Dendrogram di- hasilkan dari analisis dengan SAHN ( Sequential Agglomerative Hierarchical and Nested Cluster- ing ) dan metode UPGMA ( Unweighted Pair- Group Method Arithmetic Average ).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Karakter Morfologi Salak Bali dan Salak Jawa Secara morfologi salak Bali dan salak Jawa berbeda pada beberapa organ tanaman. Perawakan salak Bali umumnya sama dengan salak Jawa, tinggi pohon berkisar dari 4–8 m. Salah satu kulti- var salak Bali yang sangat berbeda perawakannya dengan kultivar lainnya adalah kultivar Kate yang memiliki perawakan kecil dan kerdil dengan tinggi pohon hanya 0.75 m. Jumlah daun yang dimiliki salak Bali lebih banyak dibandingkan dengan salak Jawa. Salak Bali memiliki 8–21 daun pada setiap pohon sedangkan salak Jawa umumnya memiliki 5–10 daun pada setiap pohon. Jumlah anak daun pada salak Bali memiliki kisaran yang lebih luas
dibandingkan salak Jawa, berkisar 25–50 pada setiap sisi daun sedangkan salak Jawa berkisar 30– 40 pada setiap sisi daun. Helaian daun salak Bali memiliki ukuran lebih pendek dibandingkan de- ngan salak Jawa, berkisar 0.6–3.75 m sedangkan salak Jawa berkisar 2–4 m. Anak daun yang me- nyatu di ujung daun salak Bali memiliki kisaran jumlah yang lebih sedikit (2–4) dibandingkan salak Jawa (2–6). Warna duri salak Bali lebih gelap di- bandingkan salak Jawa, kecuali kultivar Gading berwarna kekuningan. Duri pada salak Bali me- miliki ukuran lebih pendek (7 cm) dibandingkan salak Jawa (10 cm).
Perbungaan salak Bali bersifat monoesis (berumah satu) sedangkan salak Jawa dioesis (berumah dua) (Schuiling & Mogea 1992). Secara umum diketahui bahwa perbungaan salak bersifat dioesis. Pada satu pohon terdapat perbungaan jan- tan dengan rakila jantan tersusun diad dan terdiri atas dua bunga jantan yang menghasilkan serbuk sari. Pada pohon yang lain terdapat perbungaan betina dengan rakila betina tersusun diad namun berbeda dengan rakila jantan, karena rakila betina terdiri atas satu bunga betina dan satu bunga jantan yang tidak menghasilkan serbuk sari. Bunga betina memiliki bakal buah dan juga benangsari namun tidak juga menghasilkan serbuk sari.
Di Bali masyarakat mengenal salak jantan sebagai salak Muani. Pola dan bentuk perbungaan salak Muani sama dengan perbungaan salak Bali yang menghasilkan buah atau sama dengan per- bungaan betina seperti yang terdapat pada salak Condet. Salak Bali termasuk tanaman andromono- esis karena memiliki bunga hermaprodit dan bunga jantan dalam satu tanaman, dan bukan monoesis
(Darmadi et al . 2002). Pada dasarnya semua jenis salak yang termasuk seksi Salacca memiliki per- bungaan betina seperti halnya salak Bali, yaitu bunga tersusun diad terdiri dari bunga hermaprodit dengan bunga jantan. Pada bunga hermaprodit dan bunga jantan terdapat benangsari yang bersifat steril.
Karakteristik karangan bunga salak Bali berumah satu adalah bunga majemuk terdiri dari 1–7 rakila, namun yang bertahan hidup dan men- jadi buah 1–3 rakila. Masing-masing rakila dite- mukan bunga jantan yang tersusun atas tiga daun kelopak, tiga daun mahkota, dan enam benangsari, dan bunga hermaprodit tersusun atas tiga daun kelopak, tiga daun mahkota; dan tiga benangsari dengan tangkai melekat pada mahkota, tiga be- nangsari melekat pada perlekatan antara dua daun mahkota, dan satu putik dengan kepala putik bercabang tiga. Setiap rakila terdiri dari 91–214 bunga, 33–93 bunga hermaprodit, dan 50–125 bunga jantan (Kriswiyanti et al . 2008). Hal ter- sebut menunjukkan bahwa perbandingan bunga jantan lebih banyak dari bunga betina, berbeda dengan hasil penelitian salak ‘Bangkok’ ('Nern Wong' salak) yang menunjukkan perbandingan bunga jantan dan hermapodit adalah sama 1:1 (Kimsri 1997). Daun mahkota pada kultivar Kate mengalami perubahan jumlah yang biasanya hanya 3 menjadi 7. Daging buah salak Bali juga ada yang berwarna kemerahan, tetapi pada salak Jawa belum ditemukan variasi ini. Pada salak Bali juga dite-
mukan perkembangan pada biji berupa tonjolan di dekat embrio, seperti pada kultivar Boni, kultivar Gula Pasir, dan kultivar Kate (Gambar 1).
Penelitian salak Bali pada kultivar Gading, Gula Pasir, dan Boni disimpulkan bahwa proses pembentukan buah terjadi secara apomiksis, mela- lui perlakuan pembungkusan rakila bunga betina untuk menghindari terjadinya penyerbukan dari tanaman lain. Uji viabilitas serbuk sari, dari bunga jantan pada perbungaan betina, menunjukkan bah- wa serbuk sari steril menguatkan kesimpulan ter- jadinya proses apomiksis pada salak Bali (Hu- tauruk 1999). Pada penelitian lainnya disimpulkan bahwa terjadi proses penyerbukan dan fertilisasi pada salak Bali. Pembentukan buah terjadi pada kultivar Gading dan Gula Pasir melalui penyer- bukan alami dan penyerbukan buatan. Pada pe- nyerbukan buatan kedua kultivar mampu me- ningkatkan persentase pembentukan buahnya (Zai- mudin 2002). Kemampuan bersilang salak Bali dengan salak Jawa juga terbukti pada beberapa kultivar yang telah dilepas oleh pemerintah yang berasal dari BPTBT Riau yaitu kultivar Sari Intan 295 Tahun 2010, Sari Intan 48 Tahun 2009, dan Sari intan 541 Tahun 2009 (Ditbenih Hortikultura 2015). Adanya kultivar Mawar yang merupakan hasil persilangan kultivar Gula Pasir dan salak Sidempuan oleh GG Hambali semakin menguatkan asumsi bahwa pembuahan salak Bali terjadi melalui proses fertilisasi.

## a b c
d
Gambar 1. Variasi morfologi salak Bali a) Bunga betina kultivar Kate, b) Duri kultivar Kate, c) Daging buah kultivar Boni, d) Tonjolan pada biji.
Warna daging buah yang kemerahan pada salak Bali berbeda dengan warna kemerahan pada salak Sidempuan. Jika pada salak Bali warna kemerahan hingga ke bagian dalam daging buah tetapi pada salak Sidempuan warna kemerahan hanya sedikit terdapat pada bagian dalam daging
buah (Gambar 2).
Secara morfologi terdapat beberapa perbe- daan yang mencolok antara salak Bali dan salak Jawa. Salak Bali memperlihatkan perkembangan yang berbeda dengan salak Jawa (Tabel 2).
Gambar 2. Warna daging buah salak Sidempuan ( S. sumatrana ).
Tabel 2. Perbedaan morfologi salak Jawa dan salak Bali
No Ciri Morfologi Salak Jawa Salak Bali 1. Perawakan ≤ 75 cm Tidak ada Ada 2. Jumlah daun pada pohon 5–10 8–21 3. Jumlah anak daun pada satu sisi daun 30–40 25–50 4. Panjang helaian daun 2–4 m 0.6–3.75 m 5. Jumlah anak daun menyatu di ujung daun 2–6 2–4 6. Warna duri Kekuningan-coklat kehita- man Kekuningan-hitam 7. Ukuran duri terpanjang 10 cm 7 cm 8. Perbungaan jantan Ada Tidak ada 9. Daun mahkota 3 3–7 10.  Warna daging buah Putih, kekuningan Putih, kekuningan, sebagian merah 11.  Tonjolan pada biji Tidak ada Ada

## Karakter Genetik Salak Bali dan Salak Jawa
Dari 91 aksesi S. zalacca yang diuji DNAnya, hanya 38 aksesi menghasilkan data yang dapat dibaca pada elektro fenogram. Seluruh aksesi yang memiliki data genetik terdiri atas salak Jawa meliputi 23 aksesi dan salak Bali meliputi 15 ak- sesi. Penggunaan penanda AFLP pada salak Bali dan salak Jawa dengan dua kombinasi primer ber- beda, primer Eco RI dan Mse I, telah menghasilkan 531 ciri genetik yang bersifat polimorfik dari 38 aksesi. Aksesi lainnya tidak memberikan hasil yang baik pada elektro fenogram. Data dari kombi- nasi primer Eco RI-ACC dan Mse 1-CTT lebih ba- nyak ditemukan dibandingkan Eco RI-ACT dan Mse 1-CAT. Kombinasi kedua primer memiliki fragmen pada panjang basa 140 hingga 489 pada kombinasi primer Eco RI-ACT dan Mse 1-CAT, dan 140 hingga 447 pada kombinasi primer Eco RI- ACC dan Mse 1-CTT pada elektro fenogram (Gambar 3).
Kombinasi primer Eco RI-ACC dan Mse 1- CTT menghasilkan data polimorfik yang lebih ba- nyak dibandingkan dengan kombinasi primer Eco RI-ACT dan Mse 1-CAT. Pada tanaman salak kombinasi primer Eco RI-ACC dan Mse 1-CTT dianggap lebih efisien dibandingkan kombinasi primer Eco RI-ACT dan Mse 1-CAT. Primer yang menghasilkan data polimorfik dalam jumlah ba- nyak, lebih efisien dibandingkan primer yang menghasilkan data polimorfik sedikit (Chikma- wati et al. 2005).
Salak Jawa memiliki data polimorfik lebih banyak dibandingkan dengan salak Bali (Tabel 3). Pada kedua kombinasi primer, salak Jawa juga memiliki data polimorfik lebih banyak dibanding- kan dengan salak Bali. Data polimorfik yang ba- nyak pada salak Jawa menunjukkan bahwa keane- karagaman genetik salak Jawa lebih tinggi diban- dingkan salak Bali menggunakan penanda AFLP. Keanekaragaman genetik yang tinggi pada salak
Gambar 3.  Elektro fenogram data genetik S. zalacca dari metode AFLP.
Tabel 3. Data genetik salak Jawa dan salak Bali
Takson Data Monomorfik Data Polimorfik Jumlah Persentase ACT-CAT ACC-CTT Jumlah Persentase  Jumlah  Persentase Salak Jawa 31 500  94.1 243 45.8  257  48.3 Salak Bali 93 438  82.4 198 37.2  240  45.2
Kultivar Kembang Arum memiliki data poli- morfik paling banyak (53 %) pada kombinasi primer Eco RI-ACT dan Mse 1-CAT sedangkan kul- tivar Bongkok memiliki data polimorfik paling banyak (52 %) pada kombinasi primer Eco RI-ACC dan Mse 1-CTT (Tabel 4). Dari seluruh data poli- morfik, gabungan kedua kombinasi primer, maka kultivar Bongkok memiliki data polimorfik paling banyak (52 %) dibandingkan kultivar lainnya.

## Analisis Fenetik
Analisis hubungan kekerabatan dari kultivar S. zalacca menghasilkan dendrogram dengan nilai koefisien kesamaan berkisar dari 0.61 hingga 0.94 (Gambar 4). Nilai kesamaan  tersebut menunjuk- kan hubungan kekerabatan yang dekat antara salak Bali dan salak Jawa karena nilai koefisiennya di atas 50 %. Nilai koefisien yang tidak mencapai angka 1 menggambarkan bahwa tidak ada satu ak-
sesi pun yang memiliki data genetik yang mirip dengan aksesi lainnya. Hanya ada satu cabang yang menunjukkan hubungan kekerabatan paling dekat pada nilai koefisien 0.94 yaitu dua aksesi kultivar Kate.
Kultivar Bongkok memisah dengan kelom- pok salak lainnya pada cabang A. Secara morfologi ciri yang memisahkan kultivar Bongkok dengan yang lain adalah buah dengan ukuran paling besar dan daging buah paling tebal dan banyak me- ngandung air sehingga lebih cepat busuk diban- dingkan kultivar lainnya. Kultivar salak Bongkok memiliki jumlah data fragmen terbanyak diban- dingkan aksesi lainnya. Data fragmen yang dimi- liki salak Bongkok adalah 277.
Pada cabang B dan C memperlihatkan ga- bungan aksesi salak Bali dan salak Jawa. Beberapa aksesi salak Bali dan salak Jawa mengelompok karena berasal dari lokasi yang sama. Dari sepuluh
Jawa disebabkan oleh kemampuan bersilang salak Jawa karena perbungaannya yang bersifat dioesis. Perbungaan salak Bali yang bersifat monoesis me-
nyebabkan terjadinya penyerbukan sendiri pada salak Bali, diduga mengakibatkan keanekaragaman genetiknya lebih rendah dibandingkan dengan salak Jawa.
No Nama Kultivar Jumlah data polimorfik pada primer ACT-CAT % dari total 260 ACC-CTT % dari total 271 1. Bali 34 13 29 11 2. Gula Pasir 90 35 117 43 3. Bali 88 34 129 48 4. Bali Jawa 24 10 37 14 5. Bali Sedikit Duri 102 40 74 27 6. Bali Sedikit Duri 110 42 130 48 7. Gading Bali 88 34 120 44 8. Gading Bali 101 34 101 37 9. Jawa Sedikit Duri 97 37 96 35 10.  Jawa Sedikit Duri 89 34 117 43 11. Bongkok 136 52 140 52 12. Bongkok 98 38 114 42 13. Lokal Manonjaya 95 37 na na 14. Pontas 105 40 117 43 15. Kembang Arum 137 53 25 9 16.  Jawa Sedikit Duri 11 04 na na 17. Gading Jawa 78 30 125 46 18. Manggala Hijau 71 27 123 45 19. Ciamis 35 13 45 17 20. Super Hijau 72 28 88 32 21. Nglumut 63 24 91 34 22. Madu Baleranti 87 33 136 50 23. Jowo 67 26 109 40 24. Madu 17 7 31 11 25. Bali Jawa 83 32 111 41 26. Condet 32 12 35 13 27. Gading Jawa 111 43 90 33 28. Gading Jawa na na 90 33 29. Pondoh 82 32 66 24 30. Gading Jawa 77 30 89 33 31. Pondoh Sulawesi 83 32 81 30 32. Kate 81 31 88 32 33. Kate 84 32 86 32 34. Kate 87 33 50 18 35. Bali Lokal 131 50 135 50 36. Gula Pasir 102 39 128 47 37. Gula Pasir 114 44 126 47 38. Pondoh Kuning 104 40 77 28 39. Pondoh Kuning 72 28 61 23 40. Jawa Lokal 76 29 115 42 41. Jawa Lokal 77 30 98 36
Tabel 4. Data polimorfik kultivar salak Jawa dan salak Bali
lokasi perkebunan S. zalacca yang diteliti pada penelitian ini, tiga lokasi ditanami salak Bali yaitu Taman Buah Mekar Sari, Kebun GG Hambali, dan Taman Salak Nusantara. Pada tiga lokasi tersebut
salak Bali ditanam bersama dengan salak Jawa pohon jantan dan pohon betina. Besar kemung- kinan terjadinya persilangan antara salak Bali dan salak Jawa.
BaliTN
BajaMS madusoko condet
CiamisTN ponhitio jakalPG jakalPG
GusirTN BaliMS BalikitG BalikitG GadBaPG GadBaPG Jakitjar
Jakitjar bongkok pontas GadingTN ManggTN perjauTN nglumut baleran jowoJog bajaMS jawaKRB pondohPG sulawesi gadjaPG kate kate kate Karum baliloPG gulpaPG gulpaPG ponkunjo 0,61 0,69 0,77 0,86 0,94 A B C 1 2 3
Gambar 4. Dendrogram kesamaan genetik S. zalacca menggunakan metode UPGMA.
Arah perkembangan morfologi yang sama dengan salak Jawa juga tampak pada salak Bali yaitu jumlah duri yang sedikit pada batang dan daun, serta duri dan buah yang berwarna kekuning- an/gading. Kultivar yang menggambarkan ciri morfologi tersebut dikenal pada salak Bali dan salak Jawa yaitu salak Jawa Tanpa Duri, salak Bali Sedikit Duri, salak Jawa Gading, dan salak Bali
Gading (Komunikasi pribadi dengan GG Hambali 2013).
Cabang yang ditandai dengan angka 1, 2, dan 3 menunjukkan pengelompokan salak Bali di antara aksesi salak Jawa. Cabang 1 mengelom- pokkan tiga kultivar salak Bali terdiri atas satu kultivar salak Bali Lokal dan dua kultivar salak Gula Pasir yang berasal dari lokasi yang sama
yaitu Kebun GG Hambali. Cabang 2 menunjukkan penggabungan tiga kultivar salak Kate yang ber- asal dari lokasi yang sama yaitu Kebun GG Hambali. Sesuai namanya kultivar Kate memiliki pohon paling pendek dan duri paling tebal. Cabang 3 menunjukkan penggabungan dua kultivar salak Bali Sedikit Duri dan dua kultivar Gading Bali yang berasal dari Kebun GG Hambali, satu kultivar Gula Pasir yang berasal dari Taman Salak Nusan- tara, dan satu kultivar Bali Lokal dari Taman Buah Mekar Sari. Pengelompokan aksesi pada cabang 3 menunjukkan adanya kemiripan sejumlah gen yang dimiliki oleh kultivar salak Bali meskipun berasal dari lokasi yang berbeda.
Pengelompokan aksesi salak Bali pada cabang 1, 2, dan 3, pada dendrogram mengindika- sikan adanya peluang pemisahan secara genetik antara salak Bali dan  salak Jawa. Secara agrono- mi saat ini masyarakat mengenal perbedaan antara salak Jawa dan salak Bali khususnya untuk kultivar yang bernilai ekonomi tinggi seperti kultivar Pondoh, Gading, dan Gula Pasir, melalui ukuran, warna, dan rasa buah. Dari delapan varietas salak pondoh di Sleman yang mempunyai nilai jual tertinggi adalah varietas Gading dan Manggala. Kedua varietas tersebut memiliki ukuran buah relatif lebih besar, rasanya lebih manis, dan belum banyak dikembangkan oleh masyarakat sehingga terkesan eksklusif (Suskendriyati et al. 2000).
Dengan menggunakan dua kombinasi pri- mer, penanda AFLP telah memberikan indikasi pemisahan salak Jawa dan salak Bali. Kajian se- cara molekuler pada tanaman palem, kelapa sawit, penanda AFLP telah menjadi alat yang berharga untuk membedakan pada tingkat populasi dan individu (Matthes et al . 2001). Data fragmen polimorfik yang diperoleh dari salak Bali dan salak Jawa berjumlah banyak, menandakan bahwa pe- nanda AFLP berhasil digunakan untuk tanaman salak, karena salah satu tujuan penggunaannya adalah dapat menghasilkan data polimorfik dalam jumlah banyak. Pada kajian tanaman palem lainnya, Metroxylon sagu , kurangnya data fragmen polimorfik dari penanda AFLP yang hanya ber- jumlah 32, menyebabkan pengelompokan 76 in- dividu yang diteliti kurang mampu dikenali  (Kjaer et al . 2004).
Pada dendrogram aksesi salak Bali belum membentuk cabang tersendiri yang memisah dari salak Jawa. Ada tiga aksesi salak Bali yang masih bergabung dengan aksesi salak Jawa. Hal ini di- duga karena penggunaan primer yang masih umum dan dua primer yang digunakan belum cukup sehingga diperlukan rancangan kombinasi primer
AFLP yang terpaut  dengan tanaman salak.

## KESIMPULAN
Ciri morfologi pada perawakan, daun, duri, bunga, buah, dan biji menunjukkan bahwa salak Bali berbeda dengan salak Jawa. Penanda AFLP pada salak Bali dan salak Jawa mampu meng- hasilkan ciri polimorfik dalam jumlah banyak (531). Kombinasi primer Eco RI-ACC dan Mse 1- CTT menghasilkan data polimorfik yang lebih banyak sehingga lebih efisien dibandingkan de- ngan kombinasi primer Eco RI-ACT dan Mse 1- CAT. Analisis fenetik menggambarkan kemiripan genetik antara salak Bali dan salak Jawa pada nilai koefisien kemiripan 0.61. Secara molekuler, pe- nanda AFLP memberikan indikasi pemisahan salak Bali dengan salak Jawa.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan terimakasih terutama disampaikan penulis pertama (ZR) kepada Prof. Dr. Mien A. Rifai sebagai pembimbing di IPB, Bogor yang telah banyak membantu dalam mengarahkan penelitian ini; Gregory Garnadi Hambali M.Sc. yang telah membantu penyediaan sampel salak dan diskusi yang sangat berguna; Dikti melalui dana penelitian Disertasi Doktor Tahun 2014; Lembaga Penelitian Universitas Syiah Kuala; Herbarium Bogoriense yang telah memfasilitasi pengamatan dan penyimpanan spesimen salak; Kebun Raya Bogor; Taman Buah Mekar Sari; Pak Camat Krido Jogjakarta dan staf pengelola Taman Salak Nusantara Jogjakarta; Dr. Rugayah M.Sc., Prof. Dr. Elizabeth A. Widjaja M.Sc., Dr. Himmah Rustiami M.Sc., Dr. Marlina Ardyani M.Sc., dan Dr. Kusumadewi Sri Yulita M.Sc. untuk waktu diskusi dan idenya, Dr. Fitmawati M.Si. untuk segala kebaikannya dalam membantu koleksi dan diskusi yang mencerahkan.

## DAFTAR  PUSTAKA
Cabrita LF, Aksoy, Hepaksoy & Eitao JL. 2001. Suitability of isozyme, RAPD and AFLP markers to assess genetic differences and relatedness among Fig ( Ficus carica L.) clones. Hort. Science 87: 261–273. Chikmawati T, Scovmand B & Gustafson JP.
2005. Phylogenetic relationships among Secale species revealed by amplified fragment length polymorphisms. Genome 48: 792–801.
Darmadi AAK, Hartana A & Mogea JP. 2002. Catatan penelitian perbungaan salak Bali. Hayati 9(2): 59–61.
Ditbenih Hortikultura. 2015. Database varietas terdaftar hortikultura [Internet]. [Diacu 2 Februari 2015]. Tersedia dari: http://vari- tas.net/dbvarietas/.
Dransfield  J, Uhl NW, Asmussen CB, Baker WJ, Harley MM & Lewis CE. 2008. Genera Palmarum , The Evolution and Clasification of Palms . Royal Botanical Garden,  Kew. Fitmawati. 2008. Biosistematika Mangga Indone- sia.[Disertasi] . Program Pascasarjana IPB,
Bogor.
Govaerts R, Dransfield J, Zona SF, Hodel DR & Henderson A. 2013. World checklist of Are- caceae . Facilitated by the Royal Botanical Gardens, Kew. [Internet].[Diacu 4 Juni 2013]. Tersedia dari: http://apps.kew.org/ wcsp/.
Haris JG & Haris MW. 2013. Plant Identification Terminology . An Illustration Glossa- ry.Fifteenth Printing. Spring Lake Publish- ing, USA.
Harsono T & Hartana A. 2003. Biosistematika kul- tivar salak di Bangkalan Madura. Flori- bunda 2(4): 89–116.
Hutauruk D. 1999. Pembentukan Biji Salak Bali ( Salacca zalacca var. amboinensis ).
[Thesis]. Program pascasarjana IPB, Bogor. Kaidah S. 1999. Analisis Keragaman Genetik Ta- naman Salak ( Salacca sp.) Indonesia de- ngan Teknik Random Amplified Polymor- phic DNA (RAPD).[Thesis]. Program Pasca- sarjana IPB, Bogor.
Kimsri C.1997. Studies on floral biology. Po- llination and fruit seed of "Nern Wong Salak" ( Salacca sp). Agris Record no.
2000001856 .  Univ Bangkok, Thailand. Kjaer A, Barfod AS, Asmussen CB & Seberg O. 2004. Investigation of genetic and morpho- logical variation in the sago palm ( Metro- xylon sagu ; Arecaceae ) in Papua New Guinea. Annals of Botany 94: 109–117.
Kriswiyanti E, Muksin IK, Watiniasih L & Suartini M. 2008. Pola reproduksi pada salak Bali ( Salacca zalacca var. amboinensis (Becc.) Mogea). Jurnal Biologi 11(2): 78–82.
Matthes M, Singh R, Cheah SC & Karp A. 2001. Variation in oil palm ( Elaeis guineensis
Jacq.) tissue culture-derived regenerants re- vealed by AFLPs with methylation-sensitive enzymes. Theoretical and Applied Genetics 102: 971–979.
Mogea JP. 1982. Salacca zalacca. the correct name for salak palm. Principes 26(2): 70–72. Nandariyah, Soemartono, Artama WT & Taryono. 2004. Keragaman kultivar salak ( Salacca zalacca (Gaertner). Agrosains 6(2): 75–79. PPVT. 2006. Panduan Pengujian Individual Tana- man Salak .Deptan RI. Jakarta.
PPVT. 2013. Daftar Pendaftaran Varietas Lokal Tahun 2005–2012 [Internet]. [Diacu 23 Fe- bruari 2014].
Rifai MA. 1976. Sendi-sendi Botani Sistematika. Lembaga Biologi Nasional.LIPI. Bogor.
Mimeograf .
Rohlf FJ. 1998. NTSys-pc. Numerical Taxonomy and Multivariate Analysis System. Versi 2.02. Exerter Software, New York.
Schuiling DL & Mogea JP. 1992. Salacca zalacca (Gaertner) Voss. In : Verheij EWM & Coro- nel RE. (eds.). Plants Resources of South East Asia 2. Edible Fruit and Nuts . Bogor.
Indonesia: 281–284.
Suskendriyati H, Wijayati A, Nur Hidayah & Cah- yuningdari D. 2000. Studi morfologi dan hubungan kekerabatan varietas salak Pondoh ( Salacca zalacca (Gaert.)Voss.) di dataran tinggi Sleman. Biodiversitas 1(2): 59–64. Suter IK. 1988. Telaah Sifat Buah Salak Bali seba- gai Dasar Pembinaan Mutu Buah. [Diser- tasi]. Institut Pertanian Bogor, Bogor.
Vogel EF de. 1987. Guidelines for the pre- paration of revisions . Manual of Herbarium Taxonomy: Theory and Practice . UNESCO. Jakarta (ID).
Vos P, Hogers R, Bleeker M, Reijans M, Lee T van de & Hornes M. 1995. AFLP: a new technique for DNA fingerprinting. Nucleic Acids Research 23: 4407–4414.
Zaimudin A. 2002. Pengaruh Penyerbukan dan Varietas Sumber Serbuk Sari Terhadap Pro- duksi Buah dan Viabilitas Benih Salak Bali.
[Skripsi] . Institut Pertanian Bogor, Bogor. Zumaidar, Chikmawati T, Hartana A, Sobir & Borchsenius F. 2014. Salacca acehensis ( Arecaceae ), a new species from Sumatra.
Indonesia. Phytotaxa 159(4): 287–290.