Penetapan Kadar Asam Galat dan Kuersetin Serta Aktivitas Inhibisi Enzim Tirosinase Freeze Dry Jus Buah Jamblang ( Syzygium cumini (L.) Skeels)
Determination Of Gallic Acid and Quercetin Content And Tyrosinase Enzyme Inhibition Activities From Freeze Dry Jamblang ( Syzygium cumini (L.) Skeels) Fruit Juice
Nani Suryani 1* , Dimas Danang Indriatmoko 2 , Alfi Mahmudah 2 dan Dodik Efendi 2 1 Program Studi Kimia, Fakultas Sains, Farmasi dan Kesehatan, Universitas Mathla’ul Anwar Banten. Pandeglang, Banten.
2 Program Studi Farmasi, Fakultas Sains, Farmasi dan Kesehatan, Universitas Mathla’ul Anwar Banten. Pandeglang, Banten. *email: nanisuryani7688@gmail.com
(tanggal diterima: : 15 -08-2021 , tanggal disetujui: 01 -04-2022)

## INTISARI
Kulit merupakan organ terbesar yang melindungi tubuh dari berbagai trauma seperti radiasi termal,  kimia,  dan  ultraviolet.  Biosintesis  melanin  yaitu  perubahan  senyawa  dari  L-Tirosin  (4- hidroksifenilalanin)  menjadi  L-DOPA (L-3,4-hidroksifenilalanin)  yang dikatalisis  enzim  tirosinase. Fenolik  dan flavonoid  dilaporkan  secara signifikan  dapat  mempengaruhi penghambatan aktivitas tirosinase.  Fenolik  dan  flavonoid  diduga  terkandung  dalam  buah Syzygium  cumini .  Penelitian  ini bertujuan  untuk  menentukan  kadar  asam  galat  dan  kuersetin  serta  mengetahui  aktivitas  inhibisi enzim tirosinase dari freeze dry jus buah S. cumini .
Metode  yang  digunakan  pada  penetapan  kadar  asam  galat  dan  kuersetin  menggunakan metode  spektrofotometri  UV-Vis  serta  uji  inhibisi  enzim  tirosinase  dengan  secara  in  vitro meggunakan ELISA ( Enzyme Linked Immunosorbent assay )
Freeze dry jus buah S.cumini mengandung asam galat sebesar 0,13155 mg/g dan kuersetin 37,333 mg/g. Freeze dry jus buah S. cumini memiliki potensi sebagai inhibitor enzim tirosinase pada 31,25 ppm (14,846%), 62,5 ppm (16,246%), 125 ppm (19,238%), 250 ppm (22,059%), 500 ppm (25,665%), 1000 ppm (32,283%) dan 2000 ppm (44,188%).
Kata Kunci : asam galat; Jamblang; kuersetin; Syzygium cumini ; Tirosinase.

## ABSTRACT
The skin is the largest organ that protects the body from various traumas such as thermal, chemical, and ultraviolet radiation. Melanin biosynthesis is the conversion of compounds from  L- Tyrosine (4-hydroxyphenylalanine) to L-DOPA (L-3,4-dihydroxyphenylalanine) which is catalyzed by  the  enzyme  tyrosinase.  Phenolics  and  flavonoids  were  reported  to  significantly  affect  the inhibition of tyrosinase activity. Phenolics and flavonoids are thought to be contained in the fruit of Syzygium cumini . This study aims to determine the levels of gallic acid and quercetin and to determine the tyrosinase enzyme inhibitory activity of freeze-dried S. cumini fruit juice.
The  method  used  to  determine  the  levels  of  gallic  acid  and  quercetin  using  UV-Vis spectrophotometry  and  tyrosinase  inhibition  test  using  in  vitro  ELISA  (Enzyme-Linked Immunosorbent assay).
Freeze  dry  fruit  juice S.  cumini contains  gallic  acid  of  0.13155  mg/g  and  quercetin  37,333 mg/g. Freeze dry fruit juice of S. cumini has potential as a tyrosinase enzyme inhibitor at 31.25 ppm (14.846%), 62.5 ppm (16.246%), 125 ppm (19.238%), 250 ppm (22.059%), 500 ppm (25.665). %), 1000 ppm (32.283%) and 2000 ppm (44.188%).
Keywords: gallic acid; Jamblang; quercetin; Syzygium cumini ; Tyrosinase.

## 1. PENDAHULUAN
Kulit merupakan organ terbesar yang berfungsi untuk melindungi tubuh dari berbagai trauma seperti radiasi termal, kimia, dan ultraviolet. Biosintesis melanin yaitu perubahan senyawa dari L-Tirosin (4-hidroksifenilalanin) menjadi L-DOPA (L- 3,4-di hidroksifenilalanin) yang dikatalisis enzim tirosinase. Tirosinase merupakan enzim yang berperan terhadap pigmentasi kulit (1). Hasil dari beberapa penelitian menunjukkan bahwa jumlah dan letak hidroksil pada fenolik dan flavonoid secara signifikan  mempengaruhi  penghambatan  aktivitas  tirosinase  (2).  Fenolik  dan flavonoid adalah metabolit  sekunder yang  memiliki  aktivitas  sebagai  antioksidan karena  dapat  menghilangkan  elemen  radikal  bebas,  menekan  enzim  yang  terkait dengan pembentukan radikal bebas, dan menstimulasi enzim internal antioksidan (3). Tumbuhan yang memiliki aktivitas antioksidan dan kaya fenolik salah satunya adalah  tumbuhan  jamblang,  dimana  ekstrak  etanol  buah  Jamblang  ( Syzygium cumini ) dilaporkan memiliki aktivitas antioksidan (4). Jamblang  ( Syzygium  cumini (L.)  Skeels)  adalah  tumbuhan  yang  memiliki berbagai aksi farmakologis. Buah S. cumini memiliki rasa yang sepat dan bervariasi dari  asam  sampai  manis  dan  terkadang  tidak  enak  untuk  dikonsumsi.  Buah  ini berwarna  ungu atau  putih,  banyak mengandung air,  dengan biji  tunggal,  lonjong, hijau atau coklat, panjang hingga 4 cm (4). Ekstrak dari berbagai bagian S. cumini mengandung  metabolit  sekunder  seperti  tanin,  antosianin,  terpen,  flavanols  dan asam  alifatik.  Semua  bagian  dari S.  cumini kaya  akan  polifenol  (5).  Tumbuhan S. cumini dilaporkan memiliki aktivitas farmakologis setiap bagiannya seperti  bagian daun (kardioprotektif, antioksidan, menghambat lipid peroksidasi, antivirus), kulit kayu  (antiinflamasi,  antivirus),  bunga  (antifertilitas),  buah  (antikanker  dan antioksidan), biji (hepatoprotektif, antidiabetes, antioksidan, antidiare, antipiretik, antihistamin, gastroprotektif) (4).
Kandungan kimia dari S. cumini pada bagian daun mengandung senyawa β- sitosterol,  asam  betulinat,  asam  maslinat, n -heptanosan,  flavonol, n -nonakosan, n -hentriakontan, n -oktakosanol, flavonol glikosida, n -triakontanol, n -dotrikontanol, kaemferol,  mirisetin,  kuersetin,  dan  glikosida.  Pada  bagian  buah  kaya  akan antosianin  seperti  (sianidin,  delphinidin,  cpeonidin,  pelargonidin,  petunidin  dan malvidin), rafinosa, glukosa, fruktosa, asam sitrat, asam malat, asam galat,  (6) (5). Penelitian ini bertujuan untuk menganalisis kadar asam galat dan kuersetin freeze dry jus  buah S.cumini serta  menganalisis  potensinya  sebagai  inhibitor  enzim tirosinase yang hingga saat ini belum dilaporkan dari spesies ini.

## 2. METODE PENELITIAN
2.1 Bahan dan Alat
Bahan: freeze dry buah S. cumini , pereaksi Folin-Ciocalteu, asam galat, natrium karbonat  (Na 2 CO 3 )  7,5%,  metanol  p.a,  larutan  dapar  pottasium  fosfat  pH  (6,5), DMSO  (Dimetil  Sulfoksida),  substrat  L-DOPA  (Sigma  Aldrich),  tirosinase  (Sigma Aldrich),  asam  kojat,  buffer  fosfat,  natrium  hidroksida,  Aluminum  klorida  (AlCl 3 ) 2%, Natrium asetat trihidrat (CH 3 COONa.3H 2 O), kuersetin dan akuades.
Alat:  alat-  alat  gelas  laboratorium,  Sentrifugasi,  kaca  arloji,  spatula,  pipet, waterbath, Spektrofotometer UV-VIS (OPTIMA SP-300), kuvet, timbangan analitik, ELISA ( Enzyme linked Immunosorbent Assay ), micro plate.
2.2 Cara Kerja

## Penetapan Kadar Asam Galat
Sebanyak  0,5  g  sampel freeze  dry jus  buah S.  cumini ditambahkan  1,25  mL Folin-Ciocalteu  (10%)    dan  1  mL  Na 2 CO 3 (7,5%).  Kemudian  campuran  diikubasi dalam waterbath (15 menit dengan suhu 45 ° C). Setelah diinkubasi sampel diukur absorbansinya  dengan  panjang  gelombang  765  nm.  Lakukan  pengulangan pengukuran  untuk  standar  asam  galat  dan  membuat  kurva  baku  standar  untuk menentukan konsentrasi sampel.

## Penetapan Kadar Kuersetin
Pembuatan kurva baku kuersetin
Baku  standar  kuersetin  10  mg  dilarutkan  dengan  100  mL  metanol  p.a (konsentrasi baku kuersetin 100 ppm). Kemudian larutan tersebut konsentrasi 40, 50, 60, 70 dan 80 ppm. 1 mL Larutan standar kuersetin ditambahkan 1 mL larutan AlCl 3 2% dan 1 mL C 3 H 3 KO 2 120 mM, lalu diinkubasi 1 jam, kemudian absorbansi diukur dengan spektrofotometer UV-VIS pada λ maks 435 nm. Penetapan kadar kuersetin pada sampel ekstrak freeze dry jus buah S. cumini Ekstrak  15  mg  dilarutkan  dalam  10  mL  metanol  p.a  sehingga  diperoleh konsentrasi 1500 ppm. Kemudian  1 mL campuran ditambahkan  1 mL AlCl 3 2% dan 1  mL  C 3 H 3 KO 2 120  mM,  sampel  kemudian  diinkubasi  1  jam.  Ukur  dengan spektrofotometer UV-Vis pada λ maks 435 nm. Pengukuran dilakukan secara triplo.

## Pengujian aktivitas inhibisi enzim tirosinase
Sebanyak 1 g Freeze dry jus buah S. cumini dilarutkan dengan DMSO 100 mL (Larutan  stok  ekstrak  10.000  ppm),  kemudian  diencerkan  pada  50  mM  dapar pottasium  fosfat  (pH  6,5).  Ekstrak  diukur  pada  konsentrasi  antara  7,8125-2000 mg/mL.  Sebagai  pembanding,  asam  kojat  dilarutkan  dalam  DMSO  100  mL  dan dibuat deret konsentrasi 7.8125-500 mg/mL. Pada 96-well micro plate , sebanyak 70 µg dari setiap pengenceran ekstrak dikombinasikan dengan 30 uL tirosin (Sigma, 333  unit/mL  dalam  buffer  fosfat)  kemudian  diinkubasi  pada  5  menit  pada  suhu ruang, lalu  substrat (2 mM L-tirosin) sebanyak 110 μL ditambahkan pada setiap sampel uji. Inkubasi kembali 30 menit pada suhu ruang. Sampel diukur pada λ maks 510 nm.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil Penetapan asam galat dan kuersetin
Penentuan  kadar  asam  galat  pada freeze  dry jus  buah S.  cumini dilakukan menggunakan  metode  Spektrofotometri  UV-Vis  menggunakan  pereaksi Folin- Ciocalteau .  Prinsip  dari  metode  ini  adalah  reaksi  oksidasi  pada  gugus  fenolik hidroksil  oleh Folin-Ciocalteau .  Pereaksi Folin-Ciocalteau mengoksidasi  fenolat (garam alkali), mereduksi asam heteropoli menjadi suatu kompleks molibdenum- tungsten (Mo-W). Gugus fenolik-hidroksil bereaksi dengan pereaksi Folin-Ciocalteu
(Gambar  1),  sehingga  kompleks  fosfotungstat-fosfomolibdat  berwarna  biru terbentuk. Warna biru yang lebih pekat, setara dengan konsentrasi ion fenolik yang terbentuk. Artinya, semakin pekat warna biru yang dihasilkan, maka semakin besar konsentrasi fenolik yang terkandung (7).
Tabel 1. Perhitungan asam galat freeze dry jus buah S. cumini
Freeze Buah S. cumini Absorbansi Kandungan asam galat (mg/L) Kandungan asam galat (mg/g ekstrak) Rata-rata Kandungan asam galat (mg/g) 1 1,071 5,262 0,13155 0,13155 2 1,073 5,272 0,1318 3 1,069 5,252 0,1313
Asam galat digunakan sebagai standar pada penelitian ini, karena asam galat adalah turunan senyawa hidrobenzoat yang merupakan asam fenol sederhana yang bersifat  murni,  stabil  juga  dapat  efektif  membentuk  senyawa  kompleks  dengan reagen  Folin-Ciocalteau.  Asam  galat  bereaksi  dengan  reagen  Folin-Ciocalteu membentuk  kompleks  warna  kuning  yang  menunjukkan  bahwa  sampel mengandung  fenolik  ketika  direaksikan  Na 2 CO 3 ditambahkan  untuk  membentuk kondisi  basa.  Asam  galat  memiliki  aktivitas  seperti  antioksidan,  antivirus  dan antijamur.  Kurva  standar  diperoleh  dengan  persamaan  regresi  linier  untuk absorbansi  dari  asam  galat  y  =  0.0002x  +  0.0186  dengan  koefisien  korelasi  r = 0.9878  digunakan  untuk  menentukan  kandungan  asam  galat  pada  sampel.  Hasil pengukuran freeze  dry jus  buah S.  cumini menggunakan  spektrofotometri  UV-Vis diperoleh kadar asam galat 0,13155 mg/g,  lebih rendah kadarnya jika dibandingkan pada ampas buah freeze dry S.cumini mengandung 11,74 mg/g (8).
Gambar 1. Reaksi senyawa fenol dengan pereaksi Folin-Ciocalteu [8] Tabel 2. Hasil perhitungan kuersetin freeze dry jus buah S. cumini
Freeze Buah S. cumini Absorbansi Kandungan kuersetin (mg/L) Kandungan kuersetin (mg/g ekstrak) Rata-rata Kandungan kuersetin (mg/g) 1 0,742 6 4 37,333 2 0,736 5,2 34,667 3 0,739 5,6 37,333 Fenol             Air Folin-Ciocalteu              Kuinon            Kompleks ( molybdenum-blue)
Penentuan kadar kuersetin freeze dry jus buah S. cumini menggunakan metode kolorimetri.  Prinsip  dari  metode  kolorimetri  berdasarkan  pembentukan  warna dengan  reagen  aluminium  klorida  (AlCl 3 ).  Metode  ini  dapat  digunakan  untuk menentukan  jumlah  kelompok  flavonoid  dan  flavonol.  Prinsip  penentuan  kadar flavonoid  dengan  metode  kolorimetri  AlCl 3 adalah  pembentukan  kompleks aluminium klorida dengan gugus keto pada atom C-4 dan gugus hidroksi pada atom C-3  atau  C-5  yang  dikelompokkan  menjadi  flavon  dan  flavonol  (10) yang ditunjukkan pada Gambar 2.
Penelitian  ini  menggunakan  kuersetin  sebagai  standar.  Kuersetin  adalah senyawa golongan flavonol yang paling umum dan banyak ditemukan di alam (11). Kuersetin  merupakan  flavonoid  golongan  flavonol  yang  mempunyai  gugus  keto pada C-4 dan memiliki gugus hidroksil pada atom C-3 atau C-5 yang bertetangga dari flavon dan flavonol (7). Persamaan regresi linier dari kurva baku kuersetin yaitu y  =  0,0075x  +  0,697  dan  nilai  r  =  0,9987  dimana  y  merupakan  absorbansi  dari kuersetin  yang  direaksikan  dengan  reagen  alumunium  klorida  dan  x  merupakan konsentrasi kuersetin.
Hasil pengukuran menggunakan spektrofotometri UV-Vis memiliki rata-rata kadar  kuersetin  sebesar  37,333  mg/g,  lebih  tinggi  dari freeze  dry ampas  buah S.cumini dengan kandungan kuersetin sebesar 14,9 mg/mL (8).
Kuersetin                 Kompleks kuersetin-AlCl 3 (kuning) Gambar 2. Reaksi pembentukkan kompleks kuersetin dengan AlCl 3 (10).
b. Hasil Inhibisi Enzim Tirosinase pada Freeze Dry Jus Buah S. cumini Tabel 3. Inhibisi Enzim Tirosinase Freeze Dry Jus Buah S. cumini Konsentrasi (ppm) Freeze dry buah S. cumini % Inhbisi L-DOPA Absorbansi kontrol/ sampel Absorbansi kontrol/ sampel+enzim Absorbansi rata-rata 0,952 2000 0,061 0,065 0,596 44,188 1000 0,059 0,057 0,701 32,283 500 0,054 0,055 0,762 25,665 250 0,047 0,047 0,789 22,059 125 0,045 0,045 0,813 19,328 62,5 0,043 0,044 0,841 16,246 31,25 0,04 0,043 0,853 14,846 0 0,041 0,039 0,991 0

## Tabel 4. Inhibisi enzim tirosinase oleh Asam Kojat
Konsentrasi (ppm) Asam Kojat % Inhbisi L-DOPA Absorbansi kontrol/ sampel Absorbansi kontrol/ sampel+enzim Absorbansi rata-rata 0,952 500 0,041 0,042 0,098 94,118 250 0,042 0,041 0,145 89,006 125 0,042 0,042 0,236 79,622 62,5 0,041 0,042 0,394 62,955 31,25 0,041 0,042 0,637 37,430 15,625 0,041 0,041 0,841 15,966 7,8125 0,041 0,043 0,866 13,515 0 0,041 0,039 0,991 0
Pengujian  aktivitas  inhibisi  enzim  tirosinase  dilakukan  untuk  mengukur  inhibisi senyawa bioaktif pada freeze dry jus buah S. cumini . Prinsip kerja inhibisi enzim tirosinase secara in vitro yaitu didasarkan pada penurunan jumlah dopakrom yang merupakan hasil oksidasi senyawa DOPA ( dihydroxyphenylalanine ) oleh enzim tirosinase. Terbentuknya dopakrom akan menghasilkan warna orange pekat hingga warna merah. Jika aktivitas enzim  tirosinase  terhambat  menyebabkan  intensitas  warna  dopakrom  menurun sehingga absorbansi dapat diukur menggunakan microplate reader ( ELISA ) pada panjang gelombang maksimum 510 nm. Pada panjang gelombang tersebut menunjukkan puncak dengan absorbansi terbesar, yang artinya terjadi pembentukkan dopakrom yang paling banyak  (12).  Pada  penelitian  ini  substrat  yang  digunakan  adalah  L-DOPA  karena berdasarkan  reaksinya  akan  dihasilkan  produk  dopakrom  dimana  nilai  serapan  dapat diukur dengan metode spektrofotometri UV-Vis.
Pada penelitian ini asam kojat digunakan sebagai baku. Asam kojat adalah metabolit yang  dihasilkan  oleh  jamur  yang  menunjukkan  aktivitas  penghambatan  tirosinase dengan  tingkat  kestabilan  yang  tinggi.  Penghambatan  asam  kojat  berkaitkan  dengan kemampuannya sebagai chelator yang baik untuk logam transisi seperti Cu² + dan Fe 3+ . Asam  kojat  dilaporkan  memiliki  efek  penghambatan  kompetitif  pada  aktivitas monofenolase  dan  efek  penghambatan  campuran  pada  aktivitas  difenolase.  Namun, penggunaannya  dibatasi  karena  beberapa  efek  sampingnya  yang    menunjukkan sitotoksisitas  yang  tinggi  dan  ketidakstabilan  bahan  kimia  selama  penyimpanan  yang dapat mengakibatkan iritasi kulit (13) (14) (15).
Nilai persentase penghambatan enzim tirosinase pada freeze dry jus buah S. cumini masih lebih rendah nilainya dibandingkan dengan asam kojat. Dari beberapa konsentrasi terhadap daya hambat inhibisi tirosinase freeze dry jus buah S. cumini konsentrasi 2000 ppm  merupakan  konsentrasi  yang  memiliki  nilai  tertinggi  dengan  nilai  44,188%. Sehingga semakin tinggi konsentrasi S.cumini maka semakin tinggi pula aktivitas inhibisi tirosinase.  Reaksi  asam  kojat  dengan  enzim  tirosinase  ditunjukkan  pada  bagian hidroksimetil pada posisi ke-6 cincin piranon yang merupakan tempat untuk mengikat salah satu ion tembaga dari sisi aktif tirosinase yang membentuk kompleks dengan logam (16) yang ditunjukkan pada Gambar 4.
Penghambatan  enzim  tirosinase  oleh  flavonoid  dapat  disebabkan  oleh  interaksi flavonoid dengan radikal bebas yang dihasilkan di sisi aktif enzim atau pada ion tembaga
(Cu)  yang  merupakan active  site enzim  tirosinase  (Gambar  4) yang  merupakan sisi tempat gugus hidroksi menempel pada struktur benzena dan juga jumlah gugus hidroksil pada  suatu  flavonoid  berperan  penting  dalam  proses  penghambatan  aktivitas  enzim tirosinase. Senyawa fenolik seperti flavonoid juga dapat sebagai substrat alternatif untuk enzim  tirosinase.  Senyawa  flavonoid  menunjukan  afinitas  yang  baik  dengan  enzim sehingga  pembentukan dopacrome dapat  dicegah.  Semakin  banyak  dopakrom  yang dihasilkan  maka  penghambatan  enzim  tirosinase  tidak  terjadi,  sebaliknya  apabila dopakrom  tidak  terbentuk  maka  penghambatan  terhadap  enzim  tirosinase  terjadi maksimal (17) (18).
Tirosinase memiliki dua aktivitas dalam siklus katalitiknya. Aktivitas monofenolase yaitu menghidroksilasi L-tirosin menjadi o-difenol (L-DOPA) dan aktivitas difenolase di mana  tirosinase  mengoksidasi  o-difenol  menjadi  o-quinon  ( o-dopaquinone ).  Pada  saat yang sama reaksi enzimatik ini terdapat reaksi kimia yang berbeda yang digabungkan dimana  dua  molekul o-dopaquinone bereaksi  sendiri  menghasilkan  molekul  o-difenol (L-DOPA) dan molekul dopachrome seperti yang digambarkan pada Gambar 5 . (19).
Gambar 3. Reaksi asam kojat dengan enzim tirosinase (16)
Gambar 4. Reaksi flavonoid dengan enzim tirosinase secara komputasi (20)
Gambar 5. Siklus katalitik hidroksilasi monofenol dan oksidasi o-difenol menjadi o-kuinon oleh tirosinase (21) .
Molekular docking
ISSN: 1693-8615 EISSN : 2302-4291

## 4. KESIMPULAN
Penelitian  ini  dapat  disimpulkan  bahwa freeze  dry jus buah S.cumini mengandung asam galat sebesar 0,13155 mg/g dan kuersetin sebesar 37,333 mg/g. semakin tinggi konsentrasi Freeze dry jus buah S. cumini maka semakin besar daya inhibisi enzim tirosinase.

## 5. DAFTAR PUSTAKA
[1] Karim A.A., Azlan A., Ismail .A., Hashim P., Gani A.S.S., & Zainudin B.H. Phenolic composition, antioxidant, anti-wrinkles and tyrosinase inhibitory activities of cocoa  pod  extract.  BMC  Complement  Altern  Med.  2014;14(1):1–13.  DOI: 10.1186/1472-6882-14-381 ·
[2] Zuo A.R., Dong H.H., Yu Y.Y., Shu Q.L., Zheng L.X, &Yu X.Y. The antityrosinase and antioxidant activities of flavonoids dominated by the number and location of phenolic  hydroxyl  groups.  Chinese  Med  (United  Kingdom)  [Internet]. 2018;13(1):1–12. DOI: 10.1186/s13020-018-0206-9
[3] Banjarnahor  S.D.S  &  Artanti  N.  Antioxidant  properties  of  flavonoids.  Med  J Indones. 2014;23(4):239–44. DOI: 10.13181/mji.v23i4.1015 .
[4] Bijauliya R.K., Alok S., Sabharwal. M & Chanchal D.K. Syzygium Cumini (Linn.) - an Overview on Morphology, Cultivation, Traditional Uses and Pharmacology. Int  J  Pharm  Sci  Res.  2018;9(9):3608–20.  DOI:  10.13040/IJPSR.0975- 8232.9(9).3608-20.
[5] Ahmed  R.,  Tariq  ,M.,  Hussain  M.,  Andleeb  A.,  Masoud  M.S  &  Ali  I.  Phenolic contents-based assessment of therapeutic potential of Syzygium cumini leaves extract. PLoS One. 2019;14(8):1–16.DOI: 10.1371/journal.pone.0221318
[6] Swami S.B., Thakor N.S.J., Patil M.M & Haldankar P.M. Jamun ( Syzygium cumini (L.)):  A  Review  of  Its  Food  and  Medicinal  Uses.  Food  Nutr  Sci. 2012;03(08):1100–17. DOI:10.4236/fns.2012.38146
[7] Heri, W., Siti, J., Achmad K.A., Henny N & Sandeep P. Determination of phenolic and flavonoid levels and antioxidant activity test from ethanol extract of biak- leaves  ( Mitragyna  speciosa )  with  ABTS  method  [2,2-azinobis-  (3- ethylbenzotiazolin) -6-sulfonic acid]. Res J Chem Environ. 2020;24(5):31–5.
[8] Singh J.P., Kaur, A., Singh, N., Nim, L., Shevkani, K & Kaur H. In vitro antioxidant and antimicrobial properties of jambolan ( Syzygium cumini ) fruit polyphenols.
Lwt [Internet]. 2016;65:1025–30. Available from: http://dx.doi.org/10.1016/j.lwt.2015.09.038. DOI: doi:10.1111/ijfs.13841
[9] Khadijah,  Jayali,  A.M  &  Umar  S.I.S.  Penentuan  Total  Fenolik  Dan  Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanolik Daun Samama ( Anthocephalus macrophylus ) Asal Ternate,  Maluku  Utara.  J  Kim  Mulawarman.  2017;15(1):11. DOI: https://doi.org/10.30872/jkm.v15i1.495
[10] Estikawati  I  &  Lindawati  N.Y.  Penetapan  Kadar  Flavonoid  Total  Buah  Oyong ( Luffa acutangula (L .) Roxb.) dengan Metode Spektrofotometri UV-Vis. J Farm Sains dan Prakt. 2019;5(2):96–105. https://doi.org/10.31603/pharmacy.v5i2.2684
[11] Formagio  A.S.N.,  Volobuff  C.R.F.,  Santiago  M.,  Cardoso  C.A.L.,  Vieira  M.D.C  & Pereira  Z.V.  Evaluation  of  antioxidant  activity,  total  flavonoids,  tannins  and phenolic compounds in Psychotria leaf extracts. Antioxidants. 2014;3(4):745– 57. doi:10.3390/antiox3040745
[12] Tristiyanti  D.,  Ledianasari  &  Oktaviani  S.  Inhibitory  Activity  of  Tyrosinase Enzyme on Lotion Contains Pear ( Pyrus pyrifolia (Burm.F) Nakai) Rind Extract.
ISSN: 1693-8615 EISSN : 2302-4291
2020;26:88–91. https://doi.org/10.2991/ahsr.k.200523.022
[13] Cui  H.X.,  Duan  F.F.,  Jia  S.S.,  Cheng  F.R  &  Yuan  K.  Antioxidant  and  tyrosinase inhibitory activities of seed oils from Torreya grandis Fort. ex Lindl. Biomed Res Int. 2018;2018. https://doi.org/10.1155/2018/5314320
[14] Kurniasari A, Anwar E & Djajadisastra J. Potensi Ekstrak Biji Coklat ( Theobroma cacao Linn)  sebagai  Inhibitor  Tirosinase  untuk  Produk  Pencerah  Kulit.  J Kefarmasian Indones. 2018;8(1):34–43. DOI :10.22435/jki.v8i1.7722.34-43.
[15] Junlatat  J,  Fangkrathok  N,  Sripanidkulchai  B.  Antioxidative  and  melanin production inhibitory effects of Syzygium cumini extracts. Songklanakarin J Sci Technol. 2018;40(5):1136–43.
[16] Karakaya G, Türe A, Ercan A, Öncül S, Aytemir MD. Synthesis, computational molecular docking analysis and effectiveness on tyrosinase inhibition of kojic acid  derivatives.  Bioorg  Chem  [Internet].  2019;88(April):102950.  Available from: https://doi.org/10.1016/j.bioorg.2019.102950
[17] Sholikha M, Wulandari A. Phytochemical Screening And Tyrosinase Inhibition Activity  Of  Leaves  Cassia  siamea  L.  J  Midpro.  2020;12(2):198. DOI: https://doi.org/10.30736/md.v12i2.240
[18] Mustika R, Hindun S & Auliasari. Tanaman Pencerah  Alami. Jurnal Sains dan Kesehatan. 2020;2(4):558–62. doi:10.25026/jsk.v2i4.233.
[19] Zolghadri  S,  Bahrami  A,  Hassan  Khan  MT,  Munoz-Munoz  J,  Garcia-Molina  F, Garcia-Canovas  F,  et  al.  A  comprehensive  review  on  tyrosinase  inhibitors.  J Enzyme  Inhib  Med  Chem  [Internet].  2019;34(1):279–309.  Available  from: https://doi.org/10.1080/14756366.2018.1545767
[20] Şöhretoğlu D, Sari S, Barut B, Özel A. Tyrosinase inhibition by some flavonoids: Inhibitory  activity,  mechanism by  in  vitro  and  in  silico  studies.  Bioorg  Chem [Internet]. 2018;81:168–74. Available from:
https://doi.org/10.1016/j.bioorg.2018.08.020
[21] Chen X.X., Shi Y., Chai W.M., Feng H.L., Zhuang J.X & Chen Q.X. Condensed tannins from  Ficus  virensas  tyrosinase  inhibitors:  Structure,  inhibitory  activity  and molecular mechanism. PLOS ONE. 2014;9(3):1–12. doi:10.1371/journal.pone.0091809