## PENGARUH PENGERINGAN PREPARAT BAKTERI TAHAN ASAM PADA INKUBATOR TERHADAP HASIL PEMERIKSAAN MIKROSKOPIK
*Nining Kurniati, *Shufiyani

## Abstrak
Target  utama  pengedalian  penyakit  tuberculosis  paru  (TB)  adalah  menemukan pasien  TB  menular  (BTA  positif)  dan  menyembuhkan  penyakitnya.  Dengan memprioritaskan  pada  penemuan  pasien  TB  dengan  BTA  positif,  maka laboratorium  merupakan  kunci  utama  dalam  mendiagnosis  pasien  TB. Pemeriksaan  mikroskopik  sediaan  dahak  merupakan  salah  satu  cara  yang  paling efisien  untuk  mengidentifikasi  penderita  TB.  Penderita  dengan  sediaan  positif, sepuluh  kali  lebih  infeksius  dibandingkan  dengan  penderita  dengan  sediaan negatif. (9) Berdasarkan  hasil  pemeriksaan  data  pemeriksaan  makroskopik, mikroskopik dan kultur maka didapatkan hasil penelitian sebagai berikut, 1)Tidak ada  pengaruh  pada  pengeringan  pada  suhu  kamar  dan  suhu  inkubator.  2) Gambaran  hasil  preparat  BTA  pada  pengeringan  suhu  20 0 C  (suhu  kamar)  dan suhu incubator (50 0 C, 60 0 C dan 70 0 C), untuk sampel positif 1 didapatkan hasil 100%  hasil  pemeriksaan  mikroskopik  positif  1,  dan  sampel  positif  3  didapatkan hasil 100 % pemeriksaan mikrskop positif 3. 3)Gambaran stabilitas hasil preparat BTA pada pengeringan suhu 20 0 C (suhu kamar) dan suhu incubator (50 0 C, 60 0 C dan  70 0 C)  selama  3  minggu  100%  hasilnya  sama  menunjukan  preparat  tersebut stabil.
Kata Kunci: BTA, Preparat, TB.
*Dosen Jurusan Analis Kesehatan Poltekkes Banten

## Pendahuluan
Target utama pengedalian
penyakit  tuberculosis  paru  (TB)
adalah menemukan pasien TB
menular (BTA positif) dan menyembuhkan penyakitnya. Dengan memprioritaskan pada penemuan  pasien  TB  dengan  BTA positif,
maka laboratorium merupakan kunci utama dalam mendiagnosis  pasien  TB.  Hal  ini ditegaskan  pada  komponen  kedua
strategi  DOTS,  yaitu  penegakan diagnosis menggunakan pemeriksaan mikroskopik.
Pemeriksaan
mikrsokopik  BTA  dari  specimen sputum    memegang  peran  penting dalam diagnosis awal dan pemantauan pengobatan Tuberkulosis paru. Rangkaian
kegiatan  yang  baik  diperlukan  untuk mendapatkan  hasil  yang  akurat, mulai dari cara pengumpulan
sputum,  pemilihan  bahan  sputum yang  akan  diperiksa,  pembuatan sediaan apus sputum, teknik pewarnaan dan alat-alat atau bahan/reagen harus diperhatikan kualitasnya. (1)
Terkadang  setelah  pewarnaan hasil pembacaan sediaan BTA positif akan  berubah  setelah  penyimpanan lebih  dari  3  bulan,  BTA  positif berubah  menjadi  negatif  pada  saat akan melakukan cross-check . Pemantapan mutu sediaan mikroskopik BTA untuk mendiagnosis tuberculosis
mengandalkan  mikroskopik  sediaan dahak.  Pemeliharaan  atas  mutu mikroskopik  sangat  penting  untuk memastikan  layanan  pemeriksaan Program TB Nasional yang tepat dan terpercaya. (2) Seiring dengan tingkat kesadaran masyarakat untuk memeriksakan  diri  pada  tempat pelayanan kesehatan, termasuk Puskesmas,  jumlah  slide  yang  akan diperiksa oleh
laboratorium
puskesmas tentu akan semakin banyak  dan  memerlukan  kesigapan petugas  laboratorium.  Namun  salah satu proses dalam pemeriksaan dahak
secara mikroskopik, yaitu pengeringan slide pada suhu ruangan sesudah  pewarnaan  Ziehl  Neelsen, memakan  waktu  yang  cukup  lama sehingga  seorang  Analis  Kesehatan memerlukan  waktu  yang  lama  pula untuk  memberikan  informasi  hasil pemeriksaan dahak kepada dokter. (3)
Oleh  sebab  itu  akan  dilakukan penelitian mengenai pengaruh pengeringan  preparat  BTA  dengan menggunakan suhu incubator
terhadap hasil pemeriksaan
mikroskopik.

## Metode Penelitian
Pemeriksaan  Laboratorium Tuberkulosis Paru
Pemeriksaan mikroskopik dahak : Pemeriksaan  mikroskopik  sediaan dahak  merupakan  salah  satu  cara yang paling efisien untuk mengidentifikasi penderita TB.
Penderita  dengan  sediaan  positif, sepuluh kali lebih infeksius dibandingkan dengan penderita dengan sediaan negatif. (9)
Fungsi pemeriksaan mikroskopis dahak :
1. Menegakkan diagnosis TB
2. Menentukan tingkat penularan 3. Memantau kemajuan pengobatan 4. Menentukan terjadinya kegagalan pada akhir pengobatan
Pengumpulan dahak Dibutuhkan  3  spesimen  dahak untuk menegakkan diagnosis TB, untuk  kenyamanan  penderita, pengumpulan  dahak  dilakukan dengan  prinsip  sewaktu-pagi- sewaktu.
Sewaktu  Hari  Ke-1:  Kumpulkan specimen  pertama  pada  saat penderita  berkunjung  ke  klinik. Beri pot dahak pada saat penderita pulang untuk keperluan pengumpulan  dahak  pada  pagi hari berikutnya.
Pagi Hari Ke-2: Penderita
mengumpulkan  dahak  pada  pagi hari kedua segera setelah bangun tidur (specimen kedua) dan bawa ke klinik.
Sewaktu  Hari  Ke-2:  kumpulkan spesimen  ketiga  di  klinik  pada hari  kedua  dengan  membawa dahak pagi. (9)
Cara mengumpulkan spesimen: Jangan berdiri di depan penderita pada saat pengumpulan spesimen. Beri petunjuk penderia untuk:  1.  Tarik  nafas  dalam- dalam 2 sampai 3 kali dan setiap kali  hembuskan  nafas  dengan kuat.  2.  Batukkan  dengan  keras dari dalam dada. 3. Letakkan pot yang  sudah  dibuka  dekat  dengan mulut  dan  keluarkan  dahak  ke dalam  pot.  4.  Tutup  pot  dengan ketat dengan cara memutar tutupnya. (9)
Kualitas  spesimen  yang  baik adalah  yang  mukoid,  purulen. Kualitas  spesimen  yang  jelek adalah  spesimen  yang  encer  dan seperti  air  atau  sebagian  besar terdiri dari gelembung- gelembung. (9)
Cara Pembuatan Sediaan BTA dan Pewarnaan sediaan dahak (Ziehl Nelseen):
a. Pemberian nomor sediaan Pilih kaca sediaan  yang baru, bersih, bebas-minyak,  tanpa  goresan  dan bebas dari sidik jari.  Pastikan nomor tiap  sediaan  sesuai  dengan  nomor pada  wadah  dahak.  Tulis  nomor
urutan  tahun  dan  noor  spesimen dahak pada ujung kaca sediaan.
Gambar 2.3 Pemberian nomor sediaan (10)
a. Pembuatan sediaan dahak Gunakan lidi/batang bambu
yang dipatahkan untuk mengambil  dahak,  pilih  dan ambil dahak yang purulen/kental kuning kehijauan. Ratakan dahak pada kaca sediaan,
oleskan  dengan  pola  melingkar kecil-kecil sampai sediaan berbentuk  oval  dengan  ukuran lebar 1-2cm dan panjang 2-3cm.
Sengkelit/ose dengan diameter 3 mm  dapat  juga  digunakan  untuk memindah dahak untuk
membuat suatu olesan.
Gambar 2.4 Pembuatan sediaan
dahak ( 10 )
b. Pengeringan dan fiksasi sediaan dahak
Keringkan sediaan dahak pada  suhu  kamar.  Jangan dikeringkan  dibawah  panas matahari  atau  di  atas  api, setelah  sediaan  benar-benar kering, pegang sediaan memakai pinset/penjepit dengan  permukaan  sediaan dahak  menghadap  ke  atas. Lewatkan  sediaan  di  atas  api 2-3  kali,  sekitar  2-3  detik.
Jangan  memanaskan  sediaan terlalu lama atau mendiamkannya  di  atas  api, karena sediaan akan hangus.
Gambar 2.5 Pengeringan dan fiksasi sedaiaan dahak (10)
c. Penyusunan sediaan dahak
Sediaan  disusun  menurut  nomor seri  pada  rak  pewarnaan  dengan permukaan  sediaan  menghadap ke  atas.  Beri  jarak  yang  cukup antar  sediaan  untuk  mencegah pemindahan  bahan  dan  cairan mengalir  dari  kaca  sediaan  satu ke lainnya.
`
Gambar 2.6 Penyusunan sediaan di
rak pewarnaan ( 10 )
d. Pewarnaan dengan larutan karbol fuchsin
Genangi seluruh permukaan
sediaan  dengan  larutan  karbol fuchsin, jika cairan karbol fuchsin  mengalir,  tambahkan
lebih  banyak  untuk  menutupi seluruh kaca sediaan.
Gambar 2.7 Pewarnaan dengan larutan karbol fuchsin (10)
e. Pemanasan sediaan
Panaskan sediann sampai  timbul uap. Jangan didihkan atau membiarkan sediaan kering, karena  akan  timbul  kristal  pada sediaan.  Biarkan  5  menit  dan jangan biarkan larutan mengering.
Gambar 2.8 Pemanasan sediaan (10)
f. Pembilasan sediaan
Miringkan  kaca  sediaan  untuk mengalirkan  kelebihan  pewarna dan  cuci  cairan  pewarnaan perlahan  dengan  air  mengalir. Miringkan  kaca  sediaan  untuk mengalirkan kelebihan air cucian.
Gambar 2.9 Pembilasan sediaan ( 10 )
g. Dekolorisasi
Genangi seluruh permukaan sediaan  dengan  larutan  asam alkohol
(etanol-asam hidroklorida  3%  atau  larutan asam sulfat 20-25%) dan biarkan sekitar 3 menit. Ulangi beberapa kali sampai sediaan bersih.
Gambar 2.10 Dekolorisasi ( 10 )
h. Pembilasan sediaan Cuci  kaca  sediaan  dengan  air mengalir perlahan dan miringkan  untuk  mengalirkan
kelebihan air cucian.
i. Pewarnaan methylen biru
Tuang methylen biru 0,3% untuk
menutupi  seluruh  permukaan
sediaan  dan  tidak  boleh  lebih dari 30 detik.
Gambar 2.11 Pewarnaan methylen biru ( 10 )
j. Pembilasan sediaan
Tuang  larutan  methylen  biru
0,3%  dan  bilas  sediaan  dengan air yang mengalir perlahan.
Gambar 2.12 Pembilasan sediaan ( 10 )
k. Pengeringan  sediaan  yang  telah diwarnai
Miringkan  dan  letakkan  sediaan pada  rak  sediaan  dan  keringkan di udara.
Gambar 2.13 Pengeringan sediaan yang telah diwarnai (10)

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Dilakukan pembuatan
preparat dahak dari dua sampel BTA positif  yaitu  :  BTA  positif  1  dan
BTA  positif  3,  masing-masing  20
preparat  BTA.  Kemudian  dilakukan pewarnaan  dan  pengeringan  pada suhu kamar dan inkubator,
pembagian sampel dapat dilihat pada tabel berikut ini :

## Tabel 3.1 Sampel Preparat BTA
BTA positif 1 BTA positif 3 Suhu kamar Suhu Inkubator Suhu kamar Suhu Inkubator 50 o C  60 o C  70 o C 50 o C  60 o C  70 o C
Nom or S ampe l 1A1 1B1 1C1 1D1 3A1 3B1 3C1 3D1 1A2 1B2 1C2 1D2 3A2 3B2 3C2 3D2 1A3 1B3 1C3 1D3 3A3 3B3 3C3 3D3 1A4 1B4 1C4 1D4 3A4 3B4 3C4 3D4 1A5 1B5 1C5 1D5 3A5 3B5 3C5 3D5 Dari  data  tersebut  didapatkan hasil pembuatan preparat BTA
positif  1dan  positif  3  pada  suhu
kamar, 50 0 C, 60 0 C dan 70 0 C masing- masing 5 preparat.

## Tabel 3.2 Hasil Pemeriksaan Mikroskopik Preparat BTA
No  Suhu Nomor Sampel Jumlah BTA Hasil No Suhu Nomor Sampel Jumlah BTA Hasil 1 Suhu kamar 1A1 78 Positif 1 21 Suhu kamar 3A1 > 1000 Positif 3 2 1A2 68 Positif 1 22 3A2 > 1000 Positif 3 3 1A3 82 Positif 1 23 3A3 > 1000 Positif 3 4 1A4 81 Positif 1 24 3A4 > 1000 Positif 3 5 1A5 76 Positif 1 25 3A5 > 1000 Positif 3 6 50 o C 1B1 71 Positif 1 26 50 o C 3B1 > 1000 Positif 3 7 1B2 67 Positif 1 27 3B2 > 1000 Positif 3 8 1B3 89 Positif 1 28 3B3 > 1000 Positif 3 9 1B4 54 Positif 1 29 3B4 > 1000 Positif 3 10 1B5 67 Positif 1 30 3B5 > 1000 Positif 3 11 60 o C 1C1 76 Positif 1 31 60 o C 3C1 > 1000 Positif 3 12 1C2 78 Positif 1 32 3C2 > 1000 Positif 3 13 1C3 87 Positif 1 33 3C3 > 1000 Positif 3 14 1C4 73 Positif 1 34 3C4 > 1000 Positif 3 15 1C5 63 Positif 1 35 3C5 > 1000 Positif 3
16 70 o C 1D1 56 Positif 1 36 70 o C 3D1 > 1000 Positif 3 17 1D2 76 Positif 1 37 3D2 > 1000 Positif 3 18 1D3 46 Positif 1 38 3D3 > 1000 Positif 3 19 1D4 74 Positif 1 39 3D4 > 1000 Positif 3 20 1D5 65 Positif 1 40 3D5 > 1000 Positif 3 Didapatkan hasil pemeriksaan mikroskopis  dengan  pengeringan suhu  kamar,  50 0 C,  60 0 C  dan  70 0 C.
Masing-masing pengeringan mendapatkan  hasil  positif  sesuai dengan sampel awal. Setelah dilakukan
pengeringan  dengan  berbagai  suhu maka  dilakukan  uji  stabilitas  setiap minggu  selama  3  minggu,  dapat dilihat hasilnya pada tabel berikut ini :

## Tabel 3.3 Hasil Pemeriksaan Stabilitas Preparat BTA
No Suhu Nomor Sampel Hasil % Stabilitas Rata- rata % Minggu Ke-1 Minggu Ke-2 Minggu Ke-3 1 Suhu kamar 1A1 Positif 1 Positif 1 Positif 1 100 % 100 %
2 1A2 Positif 1 Positif 1 Positif 1 100 % 3 1A3 Positif 1 Positif 1 Positif 1 100 % 4 1A4 Positif 1 Positif 1 Positif 1 100 % 5 1A5 Positif 1 Positif 1 Positif 1 100 % 6 50 o C 1B1 Positif 1 Positif 1 Positif 1 100 % 7 1B2 Positif 1 Positif 1 Positif 1 100 % 8 1B3 Positif 1 Positif 1 Positif 1 100 % 9 1B4 Positif 1 Positif 1 Positif 1 100 % 10 1B5 Positif 1 Positif 1 Positif 1 100 % 11 60 o C
1C1
Positif 1 Positif 1 Positif 1 100 % 12 1C2 Positif 1 Positif 1 Positif 1 100 % 13 1C3 Positif 1 Positif 1 Positif 1 100 % 14 1C4 Positif 1 Positif 1 Positif 1 100 % 15 1C5 Positif 1 Positif 1 Positif 1 100 % 16 70 o C 1D1 Positif 1 Positif 1 Positif 1 100 % 17 1D2 Positif 1 Positif 1 Positif 1 100 % 18 1D3 Positif 1 Positif 1 Positif 1 100 % 19 1D4 Positif 1 Positif 1 Positif 1 100 % 20 1D5 Positif 1 Positif 1 Positif 1 100 %
21 Suhu kamar 3A1 Positif 3 Positif 3 Positif 3 100 % 22 3A2 Positif 3 Positif 3 Positif 3 100 % 23 3A3 Positif 3 Positif 3 Positif 3 100 % 24 3A4 Positif 3 Positif 3 Positif 3 100 % 25 3A5 Positif 3 Positif 3 Positif 3 100 % 26 50 o C 3B1 Positif 3 Positif 3 Positif 3 100 % 27 3B2 Positif 3 Positif 3 Positif 3 100 % 28 3B3 Positif 3 Positif 3 Positif 3 100 % 29 3B4 Positif 3 Positif 3 Positif 3 100 % 30 3B5 Positif 3 Positif 3 Positif 3 100 % 31 60 o C 3C1 Positif 3 Positif 3 Positif 3 100 % 32 3C2 Positif 3 Positif 3 Positif 3 100 % 33 3C3 Positif 3 Positif 3 Positif 3 100 % 34 3C4 Positif 3 Positif 3 Positif 3 100 % 35 3C5 Positif 3 Positif 3 Positif 3 100 % 36 70 o C 3D1 Positif 3 Positif 3 Positif 3 100 % 37 3D2 Positif 3 Positif 3 Positif 3 100 % 38 3D3 Positif 3 Positif 3 Positif 3 100 % 39 3D4 Positif 3 Positif 3 Positif 3 100 % 40 3D5 Positif 3 Positif 3 Positif 3 100 %

## Simpulan
Berdasarkan  hasil  pemeriksaan data pemeriksaan makroskopik,
mikroskopik dan kultur maka didapatkan  hasil  penelitian  sebagai berikut,  1)Tidak  ada  pengaruh  pada pengeringan  pada  suhu  kamar  dan suhu  inkubator.  2)  Gambaran  hasil preparat BTA pada pengeringan suhu
20 0 C  (suhu  kamar)  dan  suhu incubator  (50 0 C,  60 0 C  dan  70 0 C), untuk  sampel  positif  1  didapatkan hasil 100% hasil pemeriksaan mikroskopik  positif  1,  dan  sampel
positif  3  didapatkan  hasil  100  % pemeriksaan  mikrskop  positif  3. 3)Gambaran  stabilitas  hasil  preparat BTA  pada  pengeringan  suhu  20 0 C (suhu  kamar)  dan  suhu  incubator (50 0 C,  60 0 C  dan  70 0 C)  selama  3 minggu 100% hasilnya sama menunjukan preparat tersebut stabil.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Departemen Kesehatan Republik
Indonesia. 2012. Pedoman Nasional Penanggulangan Tuberculosis Edisi 2. Jakarta.
2. Direktorat Jenderal Pemberantasan Penyakit Menular  Badan  Penelitian  Dan Pengembangan Kesehatan. 2004. Kajian Riset Operasional Intensifikasi Pemberantasan Penyakit Menular Tahun 1998/1999 – 2003. Jakarta. 3. Bonang,  Gerard  &Enggar  S.
Koeswardono.
1982. Mikrobiologi Kedokteran untuk
5. Staf  Pengajar  FKUI.  1994. MikrobiologiKedokteran.
Jakarta: BinarupaAksara.
6. Moeliono AM. 1990. KamusBesar  Bahasa  Indonesia. BalaiPustaka Jakarta
7. Murray, Patrick R,. 2002. Manual of Clinical Microbiology (9th edition)
Washington D.C: ASM PRESS.
8. http://2.bp.blogspot.com/_hNzXtP QyZcs/SxotBkNLnzI/ AAAAAAA
AAAU/tJgwBxgGnxc/s320/peny
akit-tbc.jpg
9. Fujiki, Akiko. 2009. BTA Pelatihan Mikroskopis.
10. Lay, Bibiana. 1994. AnalisisMikroba di laboratorium.  Jakarta:  PT.  Raja GrafindoPersada. 11. Laboratorium dan Klinik.
Jakarta: PT. Gramedia.