Pengaruh  suplementasi  vitamin  e  ( α-tokoferol )  terhadap  kadar  gamma glutamil  transferase  (ggt)  dan  kadar  nitric  oxide  (no)  pada  tikus  (Studi pada  tikus  rattus  novergicus  strain  wistar  jantan  terpapar  inhalasi  uap benzene)
Roziana 1 , Hertanto Wahyu Subagio 2 , Suhartono 3 , Nyoman Suci Widyastiti 4

## ABSTRACT
Background : Exposure to benzene may cause oxidative stress, one is known as the elevation of GGT and NO levels. Vitamin E  can  reduce  and  prevent  the  products  of  free  radicals.  Hydrogen  phenolic  reactivities  to  hydroxyl  α-tocopherol  groups  be stabilize the uncouples electron in free radicals.
Objective : To prove the effects of vitamin E supplementation on GGT levels and NO levels male rats exposed to benzene vapor Method :  Experimental  research  on  animal  with  controlled  group  post  test  only  design.  Samples  were  35  male  wistar  rats. Samples  divided  randomly  into  six  groups,  consisted  of  negative  control  group,  positive  control  group  and  four  groups  of gradual doses of vitamin E suplementation (X1 = 1.8 IU; X2 = 3.6 IU; X3 = 7.2 IU and X4 = 14.4 IU per day for each of 200 gram of body weight of rats). Each of group except negative control group was exposed to 300 ppm of benzene vapor for two weeks (six days on a week and six hours on a day). The measurement of GGT level used Colorimetric Kinetic and Colorimetric Gries method for NO level in each group.
Result :  Vitamin  E  supplementation  reduced  the  level  of  GGT  significantly  (p=0.0001).  The  effect  of    benzene  exposure  to elevated levels of GGT can be well prevented by using   14.4 IU for 200 gram body weight per day of vitamin E. Vitamin E supplementation had no reducing levels of NO.
Conclusion : There was effect of vitamin E supplementation to reduce of GGT level but not to the level of NO.
Keywords : Benzene, vitamin E (α-tokoferol), GGT level, NO level

## ABSTRAK
Latar Belakang : Paparan benzene dapat menyebabkan stres oksidatif, diantaranya ditandai dengan peningkatan kadar GGT dan  kadar  NO.  Vitamin  E    dapat  mengurangi  dan  mencegah  produksi  radikal  bebas.  Reaktivitas  hidrogen  fenolik  pada kelompok hidroksil α-tokoferol akan menstabilkan elektron tidak berpasangan pada radikal bebas.
Tujuan : Membuktikan pengaruh suplementasi vitamin E terhadap kadar GGT dan kadar NO pada  tikus jantan terpapar uap benzene.
Metode : Penelitian ini adalah penelitian eksperimen pada binatang coba dengan rancangan  post test only controlled group design. Sampel 35 ekor tikus strain wistar jantan dibagi secara random dalam enam kelompok yaitu kontrol negatif, kontrol positif dan empat kelompok perlakuan suplementasi vitamin E dosis bertingkat (X1 = 1,8 IU;  X2 = 3,6 IU; X3 = 7,2 IU; dan X4 = 14,4 IU per hari untuk setiap 200 gram berat badan tikus). Setiap kelompok kecuali kontrol negatif dipapar 300 ppm uap benzene  selama  2  minggu  (6  hari/minggu,  6  jam/hari).  Pengukuran  kadar  GGT  menggunakan  metoda  Kinetik  Colorimetric dan kadar NO menggunakan metoda Colorimetric Gries dilakukan pada setiap kelompok.
Hasil :  Suplementasi  vitamin  E  berpengaruh  menurunkan    kadar  GGT  (p=0,0001).  Pengaruh  paparan  benzene  terhadap peningkatan  kadar  GGT  dapat  dicegah  dengan  baik  pada  dosis  suplementasi  vitamin  E  14,4  IU/200gr  BB  tikus/hari. Suplementasi vitamin E tidak berpengaruh terhadap kadar NO.
Simpulan :  Ada  pengaruh  suplementasi  vitamin  E  terhadap  penurunan  kadar  GGT  dan    tidak  ada  pengaruh  suplementasi vitamin E terhadap penurunan kadar NO.
Kata kunci : Benzene, vitamin E (α-tokoferol), kadar GGT, kadar NO

## PENDAHULUAN
Benzene  (C 6 H 6 )  adalah  salah  satu  produk yang  berasal  dari  minyak  bumi. (1) Secara  alami  kadar benzene  dalam  minyak  mentah  sekitar  4  gram/lt. (2) Aktivitas  manusia  menggunakan  bahan  bakar  dan produk  berbahan  benzene  akan  meningkatkan  risiko mulai  dari  efek  narkosis,  kerusakan  sumsum  tulang hingga  leukemia  myelogenous. (2,  3) Aktivitas  tersebut meliputi  pengolahan  produk  minyak  bumi,  batubara, produksi  toluena,  xilena,  dan  senyawa  aromatik lainnya  serta  penggunaan  benzene  pada  industri
1 Jurusan Gizi Poltekkes Kemenkes Riau
2 Bagian  Ilmu  Gizi  Fakultas  Kedokteran  UNDIP Semarang
3 Program  Magister  Kesehatan  Lingkungan  Pps  UNDIP
Semarang
4 Bagian  Patologi  Klinik  Fakultas  Kedokteran  UNDIP Semarang
diantaranya industri karet, kilang minyak, pom bensin, pabrik  kimia  dan  produsen  sepatu.  Benzene  juga digunakan  untuk  membuat  beberapa  jenis  pelumas, pewarna,  deterjen,  obat-obatan,  dan  pestisida. (2,  4- 6) Asap  rokok  merupakan  penyebab  utama  benzene  di rumah. (3)
The Occupational Safety and Health
Administration (OSHA)  tahun  2005,  memperkirakan sekitar  238.000  pekerja  di  Amerika  Serikat  berisiko terkena  benzene. (7,  8) Hasil  penelitian  melaporkan konsentrasi  benzene  udara  ambient  di  lingkungan sekitar  depot BBM tinggi, (9) bahkan  mobil  yang diparkir  dengan  jendela  tertutup  terutama  dibawah sinar matahari akan terisi benzene hingga 40 kali lipat kadar  benzene  yang  dapat  diterima  manusia,  karena AC  mobil  mengeluarkan  uap  benzene  dan  beberapa komponen  interior  mobil  terbuat  dari  plastik,  kain sintetis  dan  perekat  yang  diproduksi  menggunakan benzena. (10)
Paparan  tingkat  tinggi  benzene  merangsang aktivitas  CYP2E1  untuk  mengoksidasi  benzene membentuk  metabolit  benzene , dan  berkonjugasi dengan  glutathion  sebagai  mekanisme  pertahanan terhadap  senyawa  toksik. (11) Gamma  glutamyl transferase seluler (GGT) berperan dalam metabolisme  ekstraseluler  glutation  tereduksi  (GSH), memungkinkan prekursor asam amino untuk berasimilasi  dan  dimanfaatkan  kembali  untuk  sintesis GSH  intraseluler.  Penelitian  epidemiologi  secara konsisten  menunjukkan  bahwa  peningkatan  GGT serum  merupakan  enzim  awal  dan  sensitif  menilai terjadinya stres oksidatif. (12)
NO  dihasilkan  oleh inducible  NO  synthase ( iNOS) dapat berupa toksik atau pelindung tergantung kondisi,  dalam  kondisi  stres  redoks  induksi  NO berkontribusi  terhadap  kerusakan  hati.  Namun, kondisi peradangan akut berhubungan dengan paparan sitokin,  NO  bertindak  sebagai  inhibitor  poten apoptosis dalam hati. (13)
Ketika  paparan  oksidan  dari  sumber  eksogen tinggi,  pertahanan  antioksidan  tubuh  kemungkinan tidak  dapat  mengatasinya,  sehingga  diperlukan tambahan  antioksidan  eksogen  baik  dari  makanan maupun  suplemen  untuk  mengurangi  stres  oksidatif akibat  radikal  bebas  yang  disebabkan  oleh  unsur  dan senyawa  dari  lingkungan.  Salah  satu  antioksidan eksogen adalah vitamin E (14) Vitamin  E  (α-tokoferol)  sebagai  antioksidan larut  lemak,  menjadi  antioksidan  utama  dalam membran  sel  dengan  cara  melindungi  komponen membran  sel  dari  oksidasi  radikal  bebas. (15-18) Reaktivitas  hidrogen  phenolik  pada  C-6  kelompok hidroksil α-tokoferol akan menstabilkan elektron tidak berpasangan  pada  radikal  bebas. (19) AKG  2013  untuk vitamin  E  adalah  15  IU (20) dan  dosis  lebih  tinggi diyakini  diperlukan  untuk  pencegahan  penyakit  dan
promosi  kesehatan,  dosis  suplementasi  yang  umum digunakan  adalah  adalah  100,  200,  400,  dan  800 IU. (21) Maka perlu dilakukan penelitian yang bertujuan membuktikan  pengaruh  suplementasi  vitamin  E berbagai  dosis  terhadap  kadar  GGT  dan  kadar  NO pada  tikus  wistar  jantan  terpapar  uap  benzene  secara akut  sebagai  upaya  preventif  mengurangi  stres oksidatif.

## BAHAN DAN METODE

## Desain, Waktu dan Tempat
Jenis penelitian experiment dengan rancangan post  test  only  controlled  group    design, dilaksanakan pada bulan Februari 2014 di Laboratorium Pusat Studi Pangan  dan  Gizi  Universitas  Gajah  Mada  (UGM) Yogyakarta  dan  Laboratorium  GAKY  Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro Semarang.

## Subjek Penelitian
Subjek  penelitian  adalah  tikus  putih strain wistar jantan  berusia  10  -  12  minggu  dengan  berat  ± 200  gram.  Besar  sampel dihitung berdasarkan rumus Federer dan diperoleh jumlah sampel per kelompok 5 ekor.  Namun,  peneliti  menggunakan  6  ekor  disetiap kelompoknya,  kecuali  kontrol  negatif.  Penelitian  ini terdiri  dari  4  kelompok  perlakuan,  1  kontrol  positif dan 1 kontrol negatif sehingga total sampel adalah 35 ekor tikus.

## Alur Penelitian
Alur  penelitian  yaitu  sampel  terlebih  dahulu diadaptasikan  selama  3  hari,  dikandangkan  secara memadai, diberi pakan standar dan minum ad libitum, selanjutnya sampel dipilih berdasarkan kriteria inklusi dan eksklusi. Sampel dibagi menjadi 6 kelompok kecil yang dipilih secara acak, dikandangkan per kelompok dan  diberi  pakan  standar  dan  minum ad  libitum . Analisis  kadar  GGT  dan  kadar  NO  kontrol  negatif diperiksa  diawal  penelitian.  Kelompok  lainnya  diberi paparan  benzene  300  ppm  selama  2  minggu  (6 hari/minggu,6  jam/hari)  dalam  kandang  isolasi. Suplementasi  vitamin  E  diberikan  secara  oral  pada kelompok  perlakuan  dengan  4  tingkatan  dosis  (X1  = 1,8  IU;  X2  =  3,6  IU;  X3  =  7,2  IU;  X4  =  14,4  IU). Vitamin  E  terlebih  dahulu  dilarutkan  dengan  0,25 gram  MCT  dalam  2  ml  aquades.  Pada  hari  ke-15 dilakukan pemeriksaan kadar GGT dengan menggunakan metoda Kinetik Colorimetric dan kadar NO  menggunakan  metoda Colorimetric  Gries , pembacaan pada absorbance 540 nm ELISA reader .

## Pengolahan dan Analisis Data
Analisis  data  dengan  uji One  Way  Anova untuk  melihat  perbedaan  antar  kelompok,  dilanjutkan uji Post  Hoc LSD untuk  mengetahui  perbedaan  yang
signifikan  antar  setiap  kelompok.  Data  yang  tidak berdistribusi  normal  dilakukan  uji  non  parametrik Kruskal-Wallis dan dilanjutkan uji Mann-Whitney.

## HASIL
Paparan  uap  benzene  dan  suplementasi vitamin E dilakukan selama 2 minggu dalam kandang khusus berukuran 50 x 50 x 50 cm, sebesar 300 ppm atau  480  mg  benzene.  Benzene  yang  digunakan  pada penelitian  ini  adalah  benzene  produksi  Smart  Lab Indonesia  kemasan  4  liter.Vitamin  E  yang  digunakan adalah  Natur  E®  100  IU  per  kapsul,  produksi  Decha Care. Vitamin E diberikan secara oral dan setiap dosis perlakuan terlebih dahulu dilarutkan dalam 0,25 gram MCT dengan volume 2 ml/200 gram BB tikus. Tidak ada tikus yang mati selama penelitian berlangsung.

## Kadar GGT
Hasil  uji One  Way  Anova menunjukkan  ada perbedaan  yang  bermakna  antara  lebih  dari  2 kelompok  yang  diuji  ( p =  0,001).  Hasil  uji Post–hoc menunjukkan  kadar  GGT  kontrol  positif  dan  semua kelompok  perlakuan  berbeda  secara  signifikan dibandingkan  dengan  kontrol  negatif  ( p =0,0001), kelompok  perlakuan  X1,  X2  dan  X3  berbeda  secara signifikan  dibandingkan  kelompok  kontrol  negatif ( p =0,0001),  sedangkan  kadar  GGT  kelompok  X4 tidak  berbeda  secara  signifikan  dibandingkan  kontrol negatif ( p =0,116).
Perubahan  rerata  dibandingkan  kelompok kontrol  negatif,  diketahui  semakin  meningkat  dosis suplementasi  vitamin  E,  semakin  menurun  kadar GGT. Suplementasi vitamin E berpengaruh menurunkan  kadar  GGT  tikus  yang  terpapar  uap benzene pada dosis 14,4 IU/200 gram BB tikus. Hasil pemeriksaan  kadar  GGT  setiap  kelompok  perlakuan ditampilkan pada  Tabel 1.
Tabel 1. Perbedaan Kadar GGT antar Kelompok Perlakuan
Kelompok n Rerata  ±  SD (U/l) Median (min-mak) (U/l) ∆ Perubahan rerata e p K- 5 12,0 ± 0,21 c 12,8 (11,3- 12,6) 0,001 K+ 6 27,0 ± 0,42 a 27,0 (26,5 - 27,7) 15,0 X1 6 21,1 ± 0,64 a,c 21,1 (20,0 – 21,8) 9,1 X2 6 17,1 ± 0,26 a,c 17,1 (16,7 – 17,4) 5,1 X3 6 15,3 ± 0,40 a,c 15,4 (14,6 - 15,7) 3,3 X4 6 12,5 ± 0,51 c 12,4 (11,9 – 13,2) 0,5
K-  =  Kontrol  negatif,   K+ =  Kontrol positif,  X1 =  Perlakuan  I  (1,8  IU),  X2  = Perlakuan II (3,6 IU), X3= Perlakuan III (7,2 IU), X4 = Perlakuan IV (14,4 IU) Uji One Way Anova , mean ± SD
Uji Post-Hoc LSD a p < 0,05 vs K-; c p < 0,05 vs K+ e ∆ K-
Tabel 2. Perbedaan Kadar NO antar Kelompok Perlakuan
Kelompok n Rerata ± SD (U/l) Median (min-mak) (umol/l) ∆ Perubahan median e p K- 5  328,0 ± 51,55 296,1 (287,1 – 395,8) 0,013 K+ 6  486,1 ± 197,95 516,1 (223,4 – 685,8) 220,0 X1 6  622,7 ± 78,77 658,2 (519,9 – 700,0) a 362,1 X2 6  465,8 ± 126,08 488,4 (289,1 – 619,6) 192,3 X3 6  435,8 ± 44,12 453,0 (378,4 – 478,7) a 156,9 X4 6  415,6 ± 81,62 409,9 (285,8 – 534,7) 113,8
K-  =  Kontrol  negatif,    K+  =  Kontrol  positif,  X1  =  Perlakuan  I  (1,8  IU),  X2  = Perlakuan II (3,6 IU), X3= Perlakuan III (7,2 IU), X4 = Perlakuan IV (14,4 IU) Kruskall- wallis, Median , Mean ± SD Mann-Whitney, a p < 0,05 vs K-; c p < 0,05 vs K+ e ∆ K-

## Kadar NO
Hasil uji Kruskal-Walli s menunjukkan setidaknya  terdapat  perbedaan  kadar  NO  antara  dua kelompok  ( p =  0,013).  Tidak  ada  perbedaan  yang signifikan  antara  kelompok  perlakuan  dengan  kontrol positif  (p>0,05).  Perubahan  nilai  tengah  kadar  NO dibandingkan  nilai  tengah  kelompok  kontrol  negatif, terlihat  semakin  meningkat  dosis  suplementasi vitamin E, semakin menurun kadar NO. Namun, nilai perubahan  terkecil  kadar  NO  masih  cukup  besar, maka  tidak  ada  dosis  suplementasi  vitamin  E  yang berpengaruh mengendalikan kadar NO.
Hasil  pemeriksaan  kadar  NO  setiap  kelompok perlakuan  ditampilkan pada  Tabel 2.

## DISKUSI

## Kadar GGT
Penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  paparan benzene  meningkatkan  kadar  GGT.  Penelitian  lain yang menunjukkan adanya hubungan paparan benzene dengan tingkat stres oksidatif yaitu penelitian Hasan et al pada 43 orang pekerja pom bensin terpapar benzene dan  40  orang  kontrol,  dilaporkan  tingkat  metabolit benzene  pekerja  pom  bensin  lebih  tinggi  dan menginduksi stres oksidatif, ditandai dengan tingginya kadar  MDA  dan  rendahnya  kadar  SOD  dibandingkan kontrol. (22) Wetmore et  al melaporkan  tikus  terpapar 50 ppm benzene secara sendiri atau bersama antara 50 ppm  benzene  dan  100  ppm  toluena,  menunjukkan terjadinya  penurunan kadar GSH. (6)
Peningkatan aktivitas GGT merupakan respon pertahanan  dari  detoksifikasi  metabolit  toksik  hasil produksi proses metabolisme benzene. Aktivitas GGT dan pengaruh paparan benzene dalam metabolismenya berkaitan  dengan  makromolekular  GSH.  Paparan tinggi  benzene  meningkatkan  aktivitas  sitokrom CYP2E1  mengarah  terbentuknya  metabolit  benzene yang  reaktif  dan  peningkatan  pemanfaatan  glutathion untuk  oksidasi  dan  konjugasi  dengan  metabolit reaktif,  sehingga  menyebabkan  terjadinya  penurunan kadar  GSH.  Hal  ini  menyebabkan  metabolit  reaktif terlibat  dalam  siklus  redoks  dan  proses  aoutooksidasi membentuk spesies oksigen reaktif.
Metabolisme  GSH  berkaitan  erat  dengan siklus Meister γ-glutamil dimana GGT menghidrolisis GSH  menjadi  komponen  asam  amino  diantaranya sistein untuk dimanfaatkan kembali pada sintesis GSH intraseluler. (23) Sistein dan glisin jika bereaksi dengan Fe +3 dan O 2 membentuk radikal oksigen. (24-26) CYP2E1 adalah  superfamily  sitokrom  P 450 ,  yaitu  hemoprotein yang  mengandung  besi  dengan  atom  besi  yang berubah-ubah  antara  Fe 3+ dan  Fe 2+ selama  oksidasi  – reduksi.  Besi  fero  dalam  heme  mudah  mengalami oksidasi  oleh  superoksida  dan  agen  pengoksidasi lainnya (11) Akibat  toksisitas  sistein,  tingkat  fisiologis
asam  amino  dalam  sel  sangat  rendah,  sedangkan sistein  diperlukan  untuk  biosintesis  glutathion seluler. (23,27) Berkurangnya  kadar  glutathion  seluler dan sistein intraseluler diduga menginduksi peningkatan GGT untuk memicu katabolisme GSH.
Penelitian  Singh  M et  al ,  pada  60  pasien penyakit  hati  alkoholik  dengan  riwayat  konsumsi alkohol  lebih  dari  5  tahun  dan  20  orang  laki  -  laki sehat sebagai kontrol, melaporkan intake alkohol 80 – 160  gram  perhari  meningkatkan  stres  oksidatif  hati, terlihat dari meningkatnya kadar GGT dan MDA serta menurunnya antioksidan GSH dibandingkan kontrol. (23)
Suplementasi  vitamin  E  pada  penelitian  ini terbukti  efektif  mencegah  peningkatan  kadar  GGT. Hal  ini  terlihat  pada  hasil  Tabel  1,  bahwa  semakin meningkat  dosis  suplementasi  vitamin  E,  semakin menurun  kadar  GGT.  Suplementasi  vitamin  E  efektif mencegah peningkatan kadar GGT pada dosis 14,4 IU /200  gram  BB  tikus,  hasil  konversi  800  IU/hari  pada manusia.
Penelitian lain oleh Uboh et al , menunjukkan bahwa  suplementasi  vitamin  E  dosis  400  IU/kg  dan vitamin  C  200mg/kg  signifikan  memberikan  efek hepatoprotektif  terhadap  paparan  uap  bensin  pada tikus  (P  ≤  0,05).  Vitamin  E  dapat  mengekspresikan dua  fungsi  penting  dalam  membran  yaitu  mencegah kerusakan  ROS  pada  asam  lemak  tak  jenuh  ganda (sebagai  antioksidan  larut  lemak)  dan  bertindak sebagai  agen  penstabil  membran.  Vitamin  E  juga berperan dalam pemecahan rantai antioksidan, dengan cara mencegah ROS merusak membran sel. (28)
Suplementasi  vitamin  E  dalam  penelitian  ini kemungkinan  berperan  dalam  menghambat  dan mengurangi  pembentukan  radikal  bebas  dengan menyumbangkan hidrogen dari gugus hidroksil (OH - ) ke  radikal  bebas  sehingga  membuat  mereka  menjadi tidak  aktif.  Vitamin  E  juga  mengurangi  besi  labil sebagai  penyebab  kerusakan  oksidatif. (29) Selain  itu vitamin  E  diduga  memiliki  efek  protektif  terhadap glutathion. (30) Suplementasi  vitamin  E  meningkatkan konsentrasi glutathion seluler, karena vitamin E dapat memodulasi konsentrasi glutathion. Adanya vitamin E maka pemanfaatan gluthation dapat dihemat. (31)

## Kadar NO
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  paparan inhalasi  uap  benzene  tidak  signifikan  meningkatkan kadar NO. Hasil penelitian Laskin DL et al, pada tikus yang  diinjeksi  benzene  menunjukkan  benzene  dapat menekan perkembangan sel sumsum tulang dan secara signifikan  meningkatkan  kemampuan  sel  sumsum tulang  untuk  memproduksi  NO  guna  merespon mediator  inflamasi  secara  tunggal  atau  kombinasi dengan  faktor  pertumbuhan  hematopoietik. (32) Serangkaian  studi  di  sel  HL-60  juga  menunjukkan
bahwa  penambahan  hidroquinon  dan  p-benzoquinon menyebabkan peningkatan superoksida dan NO. (33)
Adanya  paparan  benzene  telah  diketahui menyebabkan  terbentuknya  radikal  bebas  seperti superoksida  (O 2 - ),  hidrogen  peroksida  (H 2 O 2 )  dan radikal hidroksil (OH - ). (33) Adanya radikal bebas akan menginduksi  iNOS  di  makrofag  untuk  menghasilkan NO  dan  ROS. (34) iNOS  terlibat  dalam  konversi L– arginin menjadi  •NO  dan citrulline .  iNOS  adalah sitokrom  P- 450 jenis  hemoprotein  yang  mengandug domain  reduktase  dan  heme  pada  polipeptida  yang sama. (11),  (34) Peningkatan  kadar  NO  merupakan mekanisme  pertahanan  tubuh  sebagai  sitotoksik terhadap  senyawa  toksik  (benzene  dan  metabolitnya) dan bagian dari upaya sel dalam menjaga homeostasis terhadap  stres  oksidatif. (35) Namun,  rangsangan produksi  NO  dan  superoksida  oleh  iNOS  dapat menyebabkan  pembentukan  peroksinitrit  (ONOO - ), suatu  perantara  reaktif  yang  diketahui  menyebabkan kerusakan protein melalui nitrasi tirosin, triptofan atau residu sistein. (36)
Penelitian  ini  membuktikan  bahwa  paparan benzene  menigkatkan  kadar  GGT  yang  berkaitan dengan  deplesi  GSH  dan  mengarah  terbentuknya radikal  bebas  sehingga  menginduksi  iNOS  untuk memproduksi  NO. (37) NO  diketahui  juga  berfungsi untuk  membatasi  efek  prooksidan  karena  oksidasi besi. (35) Sementara  itu,  karakteristik  fungsional  dari GGT  juga  dapat  mempertahankan  tingkat  glutathion intraseluler  dan  mengontrol  produksi  NO  dari  GSNO (S-nitroglutathion)  melalui  pengaturan  sel  T  dari sistem imun. (37) .
Hasil  pada  Tabel  4  menunjukkan  semakin meningkat  dosis  suplementasi  vitamin  E,  semakin menurun kadar NO. Peran vitamin E dalam penelitian ini  diduga  dapat  mengurangi  besi  labil  yang menyebabkan  kerusakan  oksidatif. (29) Vitamin  E menghambat  pembentukan  superoksida  dan  akhirnya mengurangi  hidroksil reaktif  dan  peroksinitrit dengan menyumbangkan hidrogen dari gugus hidroksil (OH - ) ke radikal bebas dan membuat mereka tidak aktif serta efek  protektif  terhadap  glutathion. (30) Hal  ini  akan memperbaiki  status  antioksidan  dan  juga  mengurangi jumlah  besi  labil  mengarah  pada  penurunan  stres oksidatif  (penurunan  kadar  GGT)  yang  akan  diikuti dengan  penurunan  ekpresi  iNOS  menghasilkan  NO terhadap  induksi  radikal  bebas  dan  produksi  NO  dari GSNO.
Dosis suplementasi pada kelompok perlakuan diduga belum memadai untuk menurunkan kadar NO. Suplementasi vitamin E diberikan dengan dosis tinggi sebagai  upaya  protektif  terhadap  kondisi  toksisitas pada  beberapa  penelitian  hewan  coba.  Eldien, menggunakan  suplementasi  vitamin  E  100  mg/kgBB tikus  digunakan  sebagai  proteksi  terhadap  kondisi cisplatin mielotoksisitas . (39) Uboh et al , menggunakan
suplementasi  vitamin  E    400  IU/kg  pada  tikus  guna mencegah  kerusakan  hati  akibat  induksi  uap bensin. (28) .

## Penerapan dan Pengembangan Hasil Penelitian
Berdasarkan  hasil  penelitian  telah  diketahui bahwa  suplementasi  vitamin  E  berpengaruh  terhadap penurunan  kadar  GGT  tikus  jantan  terpapar  benzene pada dosis 14,4 IU/200 gram  BB tikus. Apabila hasil penelitian  ini  diaplikasikan  ke  manusia  maka  nilai konversi  dosis  yang  digunakan  pada  manusia  adalah 800 IU/hari. Dosis ini adalah dosis yang relatif tinggi jika  dibandingkan  dengan  angka  kecukupan  gizi sehari yaitu 15 IU/hari.
Vitamin  E  memiliki  efek  prooksidan  jika dikonsumsi dalam dosis tinggi. (11) Selain itu vitamin E merupakan inhibitor bagi vitamin larut lemak lainnya (A,D,K). (16,  19) Walaupun  dosis  yang  digunakan  pada penelitian  ini  masih  dianggap  sebagai  dosis  aman untuk  digunakan  karena  dibawah  1000  IU  per  hari, akan  tetapi  jika  hasil  penelitian  ini  diterapkan  pada manusia, disarankan untuk dilakukan penelitian lanjut untuk menilai efek toksisitasnya.
Metabolisme benzene diantaranya dipengaruhi  oleh  aktivitas  sitokrom  p450  terutama CYP2E1,  NAD  /  NADPH  dan  GSH.    Sitokrom  p450 merupakan monooksigenase yang mengandung heme. Heme  disintesis  dari  suksinil  koA  dari  siklus  asam sitrat,  asam  amino  glisin  dan    vitamin  B6  hingga akhirnya  terbentuk  protoporfirin.  Tahap  akhir  sintesis heme  adalah  penggabungan  besi  fero  dengan protoporfirin.    NAD + dan  NADP + pembentukannya dipengaruhi  oleh  intake  karbohidrat  dan  niasin. Pembentukan glutathion dipengaruhi oleh asam amino glutamat dan sistein serta mikronutrien selenium.
Adanya  interaksi  antara  zat  gizi  dalam metabolisme  benzene,  maka  sebaiknya  dilakukan penelitian lanjutan pada manusia dengan memperhatikan  faktor-faktor  zat  gizi  lain  yang  ikut berperan terutama tingkat konsumsi zat gizi.

## SIMPULAN DAN SARAN
Suplementasi vitamin E berpengaruh terhadap penurunan  kadar  GGT  pada  tikus jantan terpapar  uap benzene.  Peningkatan  kadar  GGT  dapat  dicegah dengan  baik  pada  dosis  suplementasi  vitamin  E  14,4 IU/200  gram  BB  tikus/hari.  Suplementasi  vitamin  E tidak  berpengaruh  terhadap  pengendalian  kadar  NO pada  tikus  jantan  terpapar  uap  benzene.  Perlu dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  untuk  menilai  efek toksisitas  yang  mungkin  timbul  akibat  pemberian dosis  tinggi  vitamin  E  dan  pertimbangan  tingkat asupan zat – zat gizi yang berpengaruh lainnya.

## RUJUKAN
1. Snyder  R,  Hedli  C.  An  Overview  of  Benzene Metabolism.  Environmental  Health  Perspectives. 1996;104 (6).
2. WHO.  Preventing  disease  Through  Healthy Envirenments  Public  Health  and  Environment. 2010;xx.
3. Klaassen  CD.  Toxicology  The  Basic  Science  Of Poisons.  Seventh  ed.  Kansas:  The  McGraw-Hill Companies; 2008.
4. Ganguly  S,  Patra  SK,  Mandal  SK.  Effect  of Vitamin  E  on  Benzene  Induced  Alterations  of Some Enzymes of Carbohydrate Metabolism and Oxidative  Stress  in  Rat  Liver.  International Journal of Chemical Research. 2010;2(2):01-4.
5. Lagorio  S,  Ferrante  D,  Ranucci  A,  Negri  S, Sacco  P,  Rondelli  R,  Cannizzaro  S,  Torregrossa MV,  Cocco  P,  Forastiere  F,  Miligi  L,  Bisanti  L, Magnani  C.  Exposure  to  benzene  and  childhood leukaemia: a pilot case-control study. BMJ Open. 2013;3.
6. Wetmore  BA,  Struve  MF,  Pu  G,    Sharma  S, Allison  N,  Kay  CR,  Letinski  DJ,  Nicolich  M, Birdd  MG,  Dorman  DC.  Genotoxicity  of intermittent  co-exposure  to  benzene  and  toluene in male CD-1 mice. Jcbi. 2008;03.
7. Drew D, Deanna K, Harkins, O’Connor R, Wade FP,  Tucker  P.  Benzene  Toxicity.  ATSDR. 2006;2001-0003.
8. Wilbur  S,  Keith  S,  Faroon  O,  Wohlers  D, Stickney  J,  Paikoff  S,  Diamond  G,  Quinones  A. Toxicological  Profile  For  Benzene.  Agency  for Toxic  Substances  and  Disease  Registry  Division of Toxicology and
Environmental Medicine/Applied  Toxicology  Branch  [serial  on the Internet]. 2007; 104 (I) (13).
9. Pudyoko S, Setiani O, Joko T. Hubungan Pajanan Benzene  Dengan  Kadar  Fenol  dalam  Urin  dan Gangguan  Sistem  Hematopoietic  pada  Pekerja Instalasi  BBM  Semarang:    Tesis.  Program  Studi Magister  Kesehatan  Universitas  Diponegoro; 2010.
10.  Emery  D.  Toxic  Benzene  in  Parked  Cars. Aboutcom Urban Legends. 2009;xx.
11.  Murray  R,  Granner  D,  Rodwell  V.  Biokimia Harper. 27 ed. Jakarta: EGC; 2009.
12.  Lee  DH,  Blomoff  R,  Jacobs  DR.  Is  Serum Gamma  Glutamyltransferase  a  Marker  of Oxidative  Stress?  Taylor  &  Francis  Health Science. 2004;38:535–9.
13.  Li  J,  Blialiar  TR.  Nitric  Oxide.  The  American Physiological Society. 1999;99:1069-73.
14.  George MI, Adegoki AO. Effect of Vitamin E on Haemotological  in  Albino  Rats  Treated  with Gasoline. Journal of Scientific Research. 2012;4:437-44.
15.  Almatsier S. Prinsip Dasar Ilmu Gizi. Jakarta: PT Gramedia Pustaka Utama; 2002.
16.  Berdanier  C.  Advanced  Nutrition Mikronutrients CRC Press LLC; 1998.
17.  Uboh  FE,  Akpanabiatu  M,  Alozie  Y,  Edet  EE, Ndem  JI,  Ebong  PE.  .  Comparative  Effect  of Vitamins  A  and  E  on  Gasoline  Vapours  –
Induced  Haemototoxicity  and  Weight-Loss  in Male Rats. International Journal of Pharmacology 2009 5 (3):215-21.
18.  Langseth L. Oxidants, Antioxidants, and Disease Prevension. Brussels: ILSI Europe; 1995.
19.  Combs JF. The Vitamins Fundamental Aspects in Nutrition  and  Health.  New  York:  Elsevier Academic Press; 2008.
20.  Menkes  RI.  Angka  Kecukupan  Gizi:  Menteri Kesehatan Republik Indonesia 2013.
21.  Papas  AM.  Vitamin  E:  A  New  Perspective. NutriNews. 2008;9:1-7.
22.  Hassan  AA,  Magd  EA,  Sahar  A,  Ghareeb  AF, Bolbol  SA.  Assesment  of  Oxidative  Stress  And Antioxidant  Status  Among  Petrol  Stations Workers  Exposed  to  Benzene  In  Zagazig  City. ZUMJ. 2013;19 (5).
23.  Singh  M,  Gupta  S,  Singhal  U,  Pandey  R, Aggarwal SK. Evaluation of the Oxidative Stress in  Chronic  Alcoholics.  Journal  of  Clinical  and Diagnostic Research. 2013;7 (8):1568-71.
24.  Lee  DH,  Steffen  LM,  Jacobs  DR.  Association between  serum  -glutamyltransferase  and  dietary factors:  the  Coronary  Artery  Risk  Development in Young Adults (CARDIA) Study1–3. American Society for Clinical Nutrition. 2004;79:600-5.
25.  Cho  YG,  Park  KH,  Kim  CW,  Hur  YI.  Gamma- glutamyltransferase  and  Children’s  Overweight. Korean J Fam Med. 2011;32 (3):182-8.
26.  Lee  DH,  Gross  MD,  Jacobs  DR.  Association  of Serum  Carotenoids  and  Tocopherols  with  - Glutamyltransferase:  The  Cardiovascular  Risk Development in Young Adults (CARDIA) Study. Clinical Chemistry. 2004;50 (3):582–8.
27.  Castellano  I,  Merlino  A.  Gamma-Glutamyl Transpeptidases:Structure and Function.
SpringerBriefs  in  Biochemistry  and  Molecular Biology. 2013;XX.
28.  Uboh  FE,  Eong  PE,  Akpan  HD,  Usoh  IF. Hepatoprotective  effect  of  vitamins  C  and  E against  gasoline  vapor-induced  liver  injury  in male rats. Turk J Biol. 2012;36:217-23.
29.  Chow CK, Johnson H. Antioxidant Function and Health  Implications  of  Vitamin  E.  The  Open Nutrition Journal. 2013;7(1874-2882/13):1-6.
30.  Haaften  RI,  Haenen  GR,  Evelo  CT,  Bast  A. Effect  of  vitamin  E  on  glutathione-dependent enzymes. Drug Metabolism Reviews. 2003;35 (2- 3):215 - 53.
31.  Jain  SK,  Mcvie  R,  Smith  T.  Vitamin  E Supplementation Restores Glutathione and
Malondialdehyde  to  Normal  Concentrations  in Erythrocytes  of  Type  1  Diabetic  Children. Diabetes Care. 2000;23 (2):1389–94.
32.  Laskin  DL,  Heck  DE,  Punjabi  CJ,  Laskin  JD. Role  of  Nitric  Oxide  in  Hematosuppression  and Benzene-induced Toxicity. Environmental Health Perspectives. 1996;104:1283-7.
33.  Snyder  R.  Leukemia  and  Benzene.  International Journal  of  Environmental  Research  and  Public Health. 2012;xx.
34.  Melikian  A,  Chen  K,  Li  H,  Sodum  R,  Fala  E, Bayoumy  K.  The  role  of  nitric  oxide  on  DNA damage  induced  by  benzene  metabolites. Oncology Reports. 2008;19:1331-7.
35.  Clemens MG. The Liver: Biology and Pathobiology  Charlotte:  Department  of  Biology, University of North Carolina; 2001.
36.  Soneja  A,  Drews  M,  Malinski  T.  Role  of  nitric oxide, nitroxidative and oxidative stress in wound
healing.  Pharmacological  Reports.  2005;57:108- 19.
37.  Atakisi  E,  Atakisi  O,  Topcu  B,  Uzun  M.  Effects of therapeutic dose of ivermectin on plasma nitric oxide  and  total  antioxidant  capacity  in  rabbits.
European Review for Medical and
Pharmacological Sciences. 2009;13:425-9.
38.  Cornejo  P,  Varela  P,  Videla  LA,  Fernandez  V. Chronic  iron  overload  enhances  inducible  nitric oxide  synthase  expression  in  rat  liver.  PubMed. 2005;13 (1):54-61.
39.  Eldien HMS. The Possible Role of Vitamin E on Bone  Marrow  Cytogenic  of  Cisplatin  In  Adult Male  Albino  Rat.  The    Egyptian  Journal  Of lHistology. 2005;28 (2):79 - 186.
40.  Patrick L. Lead Toxicity Part II: The Role of Free Radical  Damage  and  the  Use  of  Antioxidants  in the  Pathology  and  Treatment  of  Lead  Toxicity. Alternative Medicine Review. 2006;11:114-27.