Research Article UNPAD

## PUB LIS HED
Accute Toxicity of Extract from Melinjo ( Gnetum gnemon L) Leaf with Fixed Dose Procedure Method
Ayu Adelia Lestari 1 , Herlina 1 *, Annisa Amriani 1 , Dina Permata Wijaya 1 11 Jurusan Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sriwijaya, Sumatera Selatan, 30802, Jurusan Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sriwijaya, Sumatera Selatan, 30802,
Indonesia Indonesia
Submitted 16 February 2020; Revised 28 September 2020; Accepted 22 December 2020; Published 31 Oktober 2022 *Corresponding author: rinaafdil@gmail.com
Abstract
Melinjo  leaves  has  several  benefits  as  antidiabetic,  antihyperglycemia,  antioxidant  and  diuretic.  In this experiment the acute toxicity test of ethanol extract of melinjo (Gnetum gnemon L). leaves on male  white  rats  of  wistar  strain  with  fixed  dose  procedure  method. The  result  of  the  screening  of the phytochemical showed that the leaves of beluntas contained alcaloid, flavonoid, saponin, fenolic, and tanin. Ethanol extract of melinjo leaves was obtained by maceration using ethanol 70%. From the observational study, the dose 2000 mg/kg BW was chosen as starting dose for the main study. Experimental animal subject used in the main study were 10 male white rats of wistar which were divided into 2 group, normal group and treatment group with a dose of 2000 mg/kgBW. The result showed  that  there  were  no  death  or  toxicity  sign  in  all  experimental  animals.  During  the  14  days observation period, there were no significant changes in body weight of rats either in normal control group and treatmen group with a dose of 2000 mg/kg BW (p>0.05). Melinjo leaves had no effect on the macroscopic organs of liver, kidneys and heart of the test animals (p>0.05). The average level of biochemical parameters in the normal group is SGOT 54.13±11.428 U/L, SGPT 47.476±21.655 U/L, creatinine 0.632±0.199 mg/dL, and urea 14.46±2.267 mg/dL, while the 2000 mg/kg BW dose group is SGOT 60.192±14.198 U/L, SGPT 55.968±22.998 U/L, creatinine 0.756±0.204 mg/dL, and urea 16±2.561 mg/dL. It showed that the ethanol extract of melinjo leaves with a dose of 2000 mg/kgBW are the category of practically non-toxic.
Keywords: acute toxicity, fixed dose procedure, Gnetum gnemon L., melinjo leaves.
Toksisitas Akut Ekstrak Daun Melinjo ( Gnetum gnemon L) dengan Metode Fixed Dose Procedure

## Abstrak
Daun Melinjo memiliki beberapa khasiat sebagai antidiabetes, antihiperglikemia, antioksidan dan diuretik. Telah dilakukan uji toksisitas akut ekstrak etanol daun melinjo ( Gnetum gnemon L.) terhadap tikus putih jantan galur Wistar dengan metode fixed dose procedure.  Hasil skrining fitokimia daun melinjo mengandung senyawa alkaloid, flavonoid, saponin, fenolik dan tanin. Pada uji pendahuluan didapatkan dosis  2000  mg/kg  BB  sebagai  dosis  awal  untuk  uji  utama.  Hewan  uji  yang  digunakan kelompok  normal  dan  kelompok  perlakuan  dosis  2000  mg/kg  BB.  Hasil  penelitian  menunjukkan tidak terjadi kematian maupun gejala toksik pada semua kelompok perlakuan. Selama 14 hari masa pengamatan, tidak terjadi perubahan bobot tikus yang signifikan baik pada kelompok normal maupun kelompok dosis 2000 mg/kgBB (p>0,05). Daun melinjo tidak berpengaruh terhadap makroskopis hati, ginjal dan jantung hewan uji (p>0,05). Rata-rata kadar parameter biokimia kelompok normal untuk SGOT 54,13±11,428 U/L, SGPT 47,476±21,655 U/L, kreatinin 0,632±0,199 mg/dL, dan urea 14,46±2,267 mg/dL, sedangkan kelompok tikus dosis 2000 mg/kgBB untuk SGOT 60,192±14,198 U/L, SGPT 55,968±22,998 U/L, kreatinin 0,756±0,204 mg/dL, dan urea 16±2,561 mg/dL. Hal ini menunjukkan bahwa sediaan ekstrak etanol daun melinjo ( Gnetum gnemon L.) dosis 2000 mg/kg BB berada dalam kategori praktis tidak toksik.
Kata Kunci: daun melinjo, fixed dose procedure, Gnetum gnemon L., toksisitas akut

## PUB LIS HED

## 1.  Pendahuluan
Obat tradisional merupakan bahan atau campuran bahan yang berupa tumbuhan, hewani, mineral, sediaan galenika atau campuran dari bahan tersebut yang sudah dilakukan secara turun-temurun untuk pengobatan serta diterapkan berdasarkan tata cara yang berlaku di masyarakat 1 . Obat tradisional lebih mudah diterima oleh masyarakat dikarenakan harganya yang relatif lebih murah dan mudah didapatkan. Salah satu tanaman yang dapat digunakan sebagai obat tradisional yaitu daun melinjo ( Gnetum gnemon L.) dimana daun melinjo ( Gnetum gnemon L.) mengandung metabolit sekunder berupa alkaloid, steroid, tannin dan flavonoid2 .
Berdasarkan penelitian daun melinjo memiliki aktivitas sebagai diuretik dengan ED50 = 1068 mg/kgBB 3 , sebagai antidiabetes dengan  ED50  =  720,86  mg/kgBB4 , sebagai antihiperlipidemia  dengan  ED50  =  879,74 mg/kgBB 5 . Nilai IC50 fraksi etil asetat daun melinjo  19,50  mg/L  dan  kandungan  fenolik totalnya 1227,8 mg/L sehingga daun melinjo memiliki aktivitas sebagai antioksidan 6 . Untuk mengetahui keamanan daun melinjo (Gnetum gnemon L.) maka perlu dilakukan uji toksisitas.
Uji toksisitas adalah uji untuk mendeteksi efek toksik suatu zat pada sistem biologi, dan untuk memperoleh data dosis respon yang khas dari sediaan uji. Salah satu uji yang bisa dilakukan adalah uji toksisitas akut yaitu uji untuk mendeteksi efek toksik yang muncul dalam waktu singkat setelah pemberian sediaan uji yang diberikan secara oral dalam dosis tunggal, atau dosis berulang yang diberikan dalam waktu 24 jam. Metode yang digunakan pada uji toksisitas ini adalah Fixed  Dose  Method.  Prinsip  dari  metode Fixed  Dose  dengan  menggunakan  dosis bertingkat 5, 50, 300 dan 2000 mg/kgBB. Sebelum dilakukan uji utama dilakukan uji pendahuluan untuk menentukan dosis yang menimbulkan gejala toksisitas 7 . Gejala toksisitas dapat diketahui dari pengamatan terhadap makroskopis hati,
ginjal, dan jantung. Organ hati, ginjal, dan jantung cenderung berwarna kecoklatan. Zat yang bersifat toksik dapat mempengaruhi perubahan warna organ hati, ginjal, dan jantung menjadi warna kuning atau hitam. Warna kuning dapat mengindikasikan adanya perlemakan pada organ, sedangkan warna hitam dapat mengindikasikan adanya kematian sel pada organ. Perubahan bentuk dan bobot organ pun dapat mengindikasikan terjadinya kerusakan organ atau gangguan fungsi organ akibat zat toksik 8 . Penelitian ini tidak hanya mengenai rentang dosis toksik (range LD50) tetapi juga terhadap gejala toksik yang timbul berupa perubahan tingkah laku tikus seperti tremor, salivasi diare, lemas, jalan mundur, dan jalan menggunakan perut 7 . Pengamatan juga dilakukan terhadap makroskopis hati, ginjal, dan jantung (bentuk, bobot, dan warna organ) serta  parameter  biokimia  seperti  SGOT, SGPT, Kreatinin, dan Ureum.

## 2.  Metode
2.1.  Bahan Daun melinjo diperoleh dari daerah Indralaya,  Sumatera  Selatan.  Tanaman ditaksonomi di Departemen Biologi Universitas  Sriwijaya  dengan  No.0043/ IPH.06/HM/I/2019.  Etanol  70%  (PT.  Dira Sonita),  akuades  (PT.  Dira  Sonita),  kertas saring,  Na  CMC  0,5%  (Bratachem),  reagen SGOT dan SGPT (Dialab®), reagen penetapan kadar ureum dan kreatinin (Dialab®).

## 2.2.  Prosedur Penelitian
2.3.1. Pembuatan Ekstrak Daun melinjo sebanyak 2 kg diambil dari daerah Indralaya, Sumatera Selatan. Daun melinjo disortasi basah, dicuci, dirajang, dikeringkan dan dihaluskan menjadi serbuk. Serbuk daun melinjo sebanyak 1 kg direndam  dengan  6  L  etanol  70%  di  dalam bejana maserasi yang tertutup rapat pada suhu kamar dan terlindung dari cahaya selama 2 hari. Penggantian pelarut dilakukan setelah 48  jam  dan  dilakukan  remaserasi  dengan  4 L etanol 70% selama 24 jam. Perbandingan

## PUB LIS HED
sampel dengan pelarut 1:10. Maserat yang didapat kemudian disaring dan dipekatkan menggunakan rotary evaporator pada suhu 70°C. Untuk ekstrak daun melinjo dilakukan skrining fitokimia.

## 2.3.2. Uji Pendahuluan
Penelitian  telah  disetujui  oleh  Komisi Etik  Penelitian  Kesehatan  RS  Umum  Pusat Moahmmad Hosein dan Fakultas Kedokteran Unpad dengan nomor persetujuan etik 556/ kepkrsmhfkunsri/2019. Pada uji pendahuluan jumlah hewan uji yang digunakan masing- masing 1 ekor untuk tiap tingkatan dosis. Dosis yang digunakan dapat dipilih dari tingkatan  fixed  dose:  5,  50,  300  dan  2000 mg/kgBB. Pengujian kali ini dosis awal yang digunakan adalah 5 mg/kgBB9. Hewan uji sebagai kelompok normal hanya diberi akuades dan tikus perlakuan diberi sediaan uji dosis tunggal 5, 50, 300 dan 2000 mg/ kgBB menggunakan oral sonde. Pengamatan dilakukan  secara  rutin  pada  4  jam  pertama setelah pemberian dosis selama 24 jam.
Pengamatan ini dilakukan terhadap ada tidaknya kematian ataupun gejala toksik yang muncul dari hewan uji.
2.3.3. Uji Utama Sebelum diberi perlakuan hewan uji  diaklimatisasi  selama  7  hari.  Hewan uji  dipuasakan  selama  14-18  jam,  namun diperbolehkan pemberian air minum. Setelah dipuasakan, hewan ditimbang kemudian diberikan sediaan uji dalam dosis tunggal secara oral menggunakan sonde. Pakan boleh diberikan  kembali  setelah  3-4  jam  setelah diberikan perlakuan.
Dosis awal ditentukan dari hasil yang diperoleh pada uji pendahuluan yang telah dilakukan. Pada uji utama ini hewan uji dilebihkan 1 ekor pada tiap kelompok yang bertujuan untuk mencegah kekurangan sampel jika terjadi kematian atau hilangnya hewan uji pada saat penelitian. Sehingga hewan uji yang digunakan pada uji utama sebanyak 5 ekor setiap kelompok. Apabila pada uji pendahuluan tidak ada kematian pada tingkat dosis 2000 mg/kgBB maka tidak perlu diberikan dosis melampaui
2000 mg/kgBB. Pengamatan secara rutin dilakukan pada 30 menit pertama setelah pemberian sediaan uji dan secara periodik setiap 4 jam selama 24 jam pertama kemudian sehari sekali selama 14 hari. Pengamatan yang dilakukan meliputi ada tidaknya kematian ataupun gejala toksik yang ditunjukkan oleh hewan uji 7 .

## 2.3.4. Pengamatan
Hal-  hal  yang  harus  diamati  dalam periode observasi selama perlakuan yaitu jumlah hewan yang mengalami gejala toksik, seperti perubahan tingkah laku hewan (jalan mundur, jalan menggunakan perut, tremor, diare, salivasi, dan lemas), serta jumlah hewan yang mati selama uji. Berat badan masing- masing hewan uji harus dicatat pada saat sebelum diberikan sediaan uji dan 2 minggu setelahnya. Pada akhir penelitian, hewan yang masih bertahan hidup ditimbang kemudian dikorbankan. Seluruh hewan (termasuk yang mati selama penelitian maupun yang dikorbankan)  harus  dinekropsi.  Kemudian dilakukan pengamatan terhadap makroskopik organ berupa perubahan bentuk, warna, dan bobot organ (khususnya organ hati, ginjal, dan jantung) dan pengukuran kadar parameter biokimia berupa SGOT, SGPT, kreatinin, dan ureum. Pada bagian pankreas dilakukan pengamatan histopatologi. Adapun kelompok perlakuan yang digunakan, yaitu kelompok normal, kelompok dosis 720,86 mg/kgBB dan kelompok dosis 2000 mg/kgBB. Selanjutnya, hasil pemeriksaan preparat dilakukan dengan mengamati bentuk morfologi struktur jaringan pankreas tikus.
2.3.5. Analisis Data
Analisis data penelitian diproses dengan aplikasi pengolah data SPSS. Hasil penelitian dianalisis secara statistik dengan uji normalitas (Normality Test). Untuk mengetahui adanya perbedaan berat badan hewan uji pada saat sebelum dan sesudah perlakuan, data berat badan hewan uji yang diperoleh dianalisis dengan  uji  T  berpasangan  (Paired  T-test). Untuk data bobot organ, kadar SGOT, SGPT,

## PUB LIS HED
kreatinin,  dan  kadar  ureum  dilakukan  uji T independen  (Independent  T-test),  analisis ini dilakukan untuk membandingkan 2 kelompok perlakuan yang berbeda.
3.  Hasil 3.1.  Skrining Fitokimia Ekstrak kental daun melinjo (Gnetum gnemon  L.)  diperoleh  sebanyak  204,9  g. Adapun persen rendemennya yaitu 20,49%. Hasil skrining fitokimia ekstrak etanol daun melinjo  dapat  dilihat  pada  Tabel  1.  Daun melinjo (Gnetum gnemon L.) mengandung metabolit sekunder alkaloid, saponin, tanin dan flavonoid.

## 3.2.  Uji Pendahuluan
Hasil  pengamatan  uji  pendahuluan dapat  dilihat  pada  Tabel  2.  Tabel  2 menunjukkan tidak ada gejala toksik seperti tremor, salivasi, diare, lemas, jalan mundur, dan jalan menggunakan perut. Apabila tidak ada gejala toksik ataupun kematian pada uji pendahuluan, maka dosis 2000 mg/kgBB ditetapkan sebagai dosis pada uji utama.
3.3.  Uji Utama Hasil  pengamatan  uji  utama  dapat dilihat  pada  Tabel  3.  Berdasarkan  hasil pengamatan uji utama sama seperti uji pendahuluan bahwa tidak ada terjadi kematian maupun gejala toksik seperti jalan mundur, jalan dengan perut, tremor, diare, salivasi dan lemas pada hewan uji selama 14 hari masa pengamatan, hal ini menunjukkan bahwa tidak ada pengaruh sediaan uji terhadap toksisitas.
3.4.  Pengamatan Histopatologi Pankreas
Tabel 1: Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Melinjo

## Gambaran histopatologi pankreas pulau
Langerhans perbesaran 100x dapat dilihat pada gambar 1. Derajat kerusakan pulau langerhans dapat dilihat pada Tabel 4. Hasil pengamatan menunjukkan bahwa kondisi pankreas kelompok normal tidak terjadi kerusakan pada jaringannya atau kondisi pankreas sehat (Gambar  a).  Hal  ini  terbukti  dengan  derajat kerusakannya adalah 0, dimana pada derajat kerusakan 0 menunjukkan bahwa tidak adanya kerusakan pada pulau Langerhans. Pada gambar b (Kelompok dosis 720,86 mg/kgBB) dan c (Kelompok dosis 2000 mg/kgBB) terlihat bahwa kondisi pankreas terdapat kerusakan pada jaringannya.
3.5. Pemeriksaan Parameter Kadar Biokimia Hasil  penetapan  kadar  SGOT,  SGPT, kreatinin, dan urea disajikan pada Tabel 5. Pada tabel 5 dapat dilihat bahwa kadar parameter biokimia  SGOT,  SGPT  kreatinin  dan  ureum pada kelompok normal masuk kedalam rentang kadar normal. Begitupun pada kelompok tikus dosis 2000 mg/kgBB kadar parameter biokimia SGOT, SGPT, kreatinin dan ureum juga masuk ke dalam rentang kadar normal.
3.6. Pemeriksaan Parameter Kadar Biokimia Hasil  penetapan  kadar  SGOT,  SGPT, kreatinin, dan urea disajikan pada Tabel 5. Pada tabel 5 dapat dilihat bahwa kadar parameter biokimia SGOT, SGPT, kreatinin, dan ureum pada kelompok normal masuk kedalam rentang kadar normal. Begitupun pada kelompok tikus dosis 2000 mg/kgBB kadar parameter biokimia SGOT, SGPT, kreatinin dan ureum juga masuk ke dalam rentang kadar normal.
4.  Pembahasan Persentase rendemen ekstrak menyatakan banyaknya ekstrak senyawa yang dapat tersari dalam pelarut yang digunakan. Besar kecilnya nilai persen rendemen ekstrak yang  didapat  menunjukkan  efektifitas  proses ekstraksi. Disamping itu sifat kelarutan dari komponen aktif juga mempengaruhi tingginya nilai rendemen 11 . Adapun hal yang dapat mempengaruhi nilai persen rendemen ekstrak yaitu durasi proses ekstraksi dan derajat

## PUB LIS HED
kehalusan simplisia. Semakin lama proses ekstraksi maka semakin tinggi nilai persen rendemen yang diperoleh 12 . Semakin tinggi rendemen dari suatu ekstrak makan semakin tinggi juga kandungan zat yang tertarik dari suatu bahan baku 13 . Prinsip  dasar  dari  skrining  fitokimia adalah adanya reaksi pengujian warna dengan suatu  reaksi  warna.  Terjadinya  perubahan warna, terbentuk endapan serta terbentuknya busa pada larutan uji menunjukkan hasil positif  pada  pengujian  ini.  Uji  flavonoid menunjukkan hasil positif ditandai dengan adanya perubahan warna merah pada larutan uji.  Identifikasi  alkaloid  menggunakan perekasi mayer ditandai dengan terdapatnya endapan putih, pereaksi wagner ditandai adanya endapan coklat dan endapan merah jingga  pada  perekasi  dragendroff.  Uji Saponin menunjukkan hasil positif ditandai dengan adanya busa setinggi 1 cm selama 10
menit setelah dilakukan pengocokkan yang kuat pada larutan uji.  Hasil positif dari uji senyawa tanin ditandai dengan terbentuknya warna hijau kehitaman pada sampel setelah penambahan pereaksi FeCl3 14 . Berdasarkan skrining fitokimia  ekstrak  daun  melinjo  (Gnetum gnemon L.) mengandung metabolit sekunder berupa alkaloid, saponin, tanin dan flavonoid 2 . Penurunan maupun kenaikan bobot tubuh yang terjadi pada hewan uji kelompok normal maupun kelompok dosis 2000 mg/kgBB selama penelitian  tidak  lebih  dari  10%,  hal  tersebut menunjukkan bahwa tidak ada pengaruh secara  signifikan  terhadap  perubahan  bobot hewan selama pengujian. Berat badan tikus adalah salah satu data pendukung guna melihat pengaruh toksisitas 15 . Pengamatan dilakukan dengan interval pengamatan  minimal  24  jam  pada  setiap dosis. Namun setiap setelah pemberian dosis, dilakukan  pengamatan  pada  4  jam  pertama
Tabel 2: Hasil Pengamatan Uji Pendahuluan
Keterangan: 1. Jalan mundur, 2. Jalan dengan perut, 3. Tremor, 4. Diare, 5. Salivasi, 6. Lemas; (-) Tidak menunjukkan gejala
Tabel 2: Hasil Pengujian Utama
Keterangan: 1. Jalan mundur, 2. Jalan dengan perut, 3. Tremor, 4. Diare, 5. Salivasi, 6. Lemas; (-) Tidak menunjukkan gejala

## PUB LIS HED
untuk melihat gejala toksik yang muncul pada hewan uji yang kemudian dilanjutkan dengan pengamatan  selama  minimal  24  jam  pada setiap dosis. Hal ini dikarenakan pada 4 jam pertama obat telah terabsorbsi ke dalam tubuh sehingga telah menimbulkan efek 16 . Pemberian ekstrak dilakukan melalui rute  oral.  Hal  ini  memungkinkan  terjadinya siklus enterohepatik, setelah terjadi absorpsi pada saluran cerna, maka senyawa akan dibawa oleh vena porta menuju hati. Sekitar 80 % darah yang ada dalam hati berasal dari vena porta, sehingga hati sering menjadi organ sasaran senyawa toksik didalam tubuh 17 . Secara makroskopis terlihat bahwa tidak terjadi abnormalitas pada bobot, bentuk dan warna organ hati, ginjal, dan jantung. Selain itu tidak terjadi gejala toksisitas seperti perubahan warna organ hati, ginjal dan jantung menjadi lebih pucat atau lebih gelap. Warna organ tikus kelompok dosis 2000 mg/ kgBB sama dengan tikus kelompok normal, pada organ hati berwarna merah kecoklatan, sedangkan warna organ ginjal berwana
kecoklatan dan organ jantung berwarna merah tua. Hasil pengukuran diketahui bahwa tidak  ada  perbedaan  yang  signifikan  pada bobot organ hati, ginjal dan jantung antara kelompok normal dan kelompok dosis 2000 mg/kgBB  (p>0,05).  Hal  ini  menunjukkan bahwa pemberian ekstrak etanol daun melinjo (Gnetum gnemon L.) dosis 2000 mg/kgBB tidak berpengaruh terhadap bobot organ hati, ginjal dan jantung.
Organ yang diamati adalah paru-paru, hati, ginjal dan jantung. Rasio berat organ biasanya merupakan petunjuk sangat peka dari efek toksik. Organ-organ ini dapat dirusak berbagai jenis zat kimia yang bekerja secara langsung pada organ sasaran ataupun secara tidak langsung yakni melalui susunan saraf pusat atau pembuluh darah. Jantung mudah mengalami kelainan yang diakibatkan oleh senyawa-senyawa kimia, karena mitokondria yang terdapat diotot jantung dengan jumlah yang relatif besar lebih sering menjadi sasaran kardiotoksisitas 17 .
Ekstrak daun melinjo memiliki aktivitas (a)
(b) (c)
Gambar 1: Gambaran histopatologi pancreas pulau Langerhans perbesaran 100× Keterangan: (a) Kelompok normal (b) Kelompok dosis 720,86 mg/kgBB(c) Kelompok
dosis 2000 mg/KgBB
Tabel 4 : Derajat Kerusakan Pulau Langerhans 10

## PUB LIS HED
sebagai antihiperlipidemia dimana dosis 500 mg/kgBB mempunyai efek penurunan kadar lipid  sebesar  40,449%  sehingga  didapatkan ED50 ekstrak etanol daun melinjo sebesar 879,74 mg/KgBB. Pengamatan makroskopis hati didapat hasil dengan dosis 125 mg/ KgBB  warna  hati  merah  keunguan,  tekstur agak keras, dan terdapat balloning sedangkan dengan  dosis  250  mg/KgBB  dan  500  mg/ KgBB  hati  berwarna  merah  kecoklatan, tekstur kenyal, dan tidak terdapat balloning seperti hati pada kelompok kontrol normal 5 . Penelitian sebelumnya, pemberian ekstrak etanol daun melinjo dosis tertinggi 500 mg/kgBB dapat menurunkan kadar glukosa darah dan memperbaiki gambaran pankreas yang telah rusak lebih baik dibandingkan dosis 125 mg/kgBB  dan 250 mg/kgBB, sehingga didapatkan ED50 ekstrak etanol daun melinjo sebagai antihiperglikemia sebesar 720,86 mg/ kgBB Hasil pengamatan menunjukkan bahwa kondisi pankreas kelompok normal tidak terjadi kerusakan pada jaringannya atau kondisi  pankreas  sehat  (Gambar  1a).  Hal ini terbukti dengan derajat kerusakannya adalah 0, dimana pada derajat kerusakan 0 menunjukkan bahwa tidak adanya kerusakan pada pulau Langerhans 18 . Namun, pada gambar 1b kerusakan yang terjadi tidak terlalu parah karena derajat kerusakannya adalah 2 (jumlah kerusakan tidak mencapai ½ dari pulau Langerhans) 18 . Berbeda dengan gambar 1c, kerusakan pankreas  yang  terjadi  relatif  parah.  Hal
ini terbukti dengan derajat kerusakannya mencapai hingga 5 yang dimana kerusakan yang terjadi mencapai 5/8 pulau Langerhans 10 . Berdasarkan hasil pengamatan yang telah dilakukan dapat diketahui bahwa pemberian ekstrak etanol daun melinjo pada dosis  720,86  mg/kgBB  tergolong  aman digunakan sebagai antidiabetes karena pada dosis tersebut tidak menyebabkan terjadinya kerusakan yang parah pada pankreas. Sedangkan pada dosis 2000 mg/kgBB secara histopatologi terjadinya kerusakan (nekrosis) yang sangat parah Menurut BPOM ada 4 macam parameter biokimia utama yang harus diperiksa antara lain  kadar  SGOT,  SGPT,  kreatinin,  dan urea. Rentang normal untuk hewan uji tikus yang  berumur  ±  3  bulan  yaitu  untuk  kadar parameter  biokimia  SGOT  sebesar  45-90 U/L, kreatinin 0,3-0,8 mg/dl, dan urea 12–18 mg/dl, sedangkan kadar normal SGPT untuk tikus putih yaitu ≤ 134,47 U/L. Pada penelitian ini dilakukan penetapan kadar parameter biokimia antara lain kadar SGOT,  SGPT,  kreatinin,  dan  urea.  SGOT dan  SGPT  merupakan  parameter  biokimia yang dapat menggambarkan kondisi organ hati, sedangkan kreatinin dan urea dapat memberikan gambaran mengenai kondisi organ ginjal 20
Peningkatan parameter biokimia SGOT, SGPT, kreatinin dan urea tidak hanya karena pengaruh toksisitas dari pemberian sediaan ekstrak etanol daun melinjo, namun bisa terjadi karena adanya faktor lain yang dapat
Tabel 5: kadar SGOT, SGPT, Kreatinin, dan Ureum

## PUB LIS HED

## mempengaruhi kadar parameter biokimia.
Peningkatan  kadar  SGOT  dan  SGPT bisa disebabkan banyak hal, namun pada prinsipnya peningkatan terjadi akibat cedera pada sel hati sehingga menyebabkan produksi enzim liver tersebut meningkat 21 . Kreatinin  dan  ureum  merupakan  hasil akhir dari metabolisme protein yang normalnya dieksresikan dalam urin. Peningkatan kadar kreatinin tidak hanya disebabkan oleh pemberian sediaan ekstrak etanol daun melinjo.  Kadar  protein  dalam  pakan  dapat berpengaruh terhadap peningkatan kadar kreatinin.  Hal  ini  dikarenakan  kreatinin merupakan hasil metabolisme dari kreatin dan fosfokreatin yang dibiosintesis di ginjal dengan melibatkan asam amino arginin dan glisin 22 . Hasil  normalitas  menunjukkan  bahwa kadar parameter biokimia kreatinin dan ureum terdistribusi normal sehingga dilanjutkan dengan uji T independen (Independent T-Test). Hasil  analisis  statistik  uji  T-Independen (Independen  T-Test)  menunjukkan  bahwa tidak  terdapat  perbedaan  yang  signifikan (p>0,05) pada parameter biokimia kreatinin dan ureum.
Sedangkan  parameter  biokimia  SGOT dan SGPT pada uji normalitas menunjukkan data tidak terdistibusi normal. Sedangkan pada hasil analisis statistik Mann-Whitney Test juga menunjukkan bahwa tidak terdapat perbedaan  yang  signifikan  (p>0,05)  pada parameter  biokimia  SGOT  dan  SGPT.  Hal ini menunjukkan bahwa pemberian ekstrak etanol daun melinjo (Gnetum gnemon L.) dosis 2000 mg/kgBB tidak berpengaruh secara  signifikan  terhadap  kadar  SGOT, SGPT, kreatinin dan ureum pada hewan uji.
5.  Simpulan Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan diperoleh kesimpulan  bahwa sediaan ekstrak etanol daun melinjo (Gnetum gnemon L.) dosis 2000 mg/kgBB berada dalam kategori praktis tidak toksik.
Daftar Pustaka 1.  Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik  Indonesia.  Peraturan  Kepala
Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik  Indonesia  Nomor  12  Tahun 2014  tentang  Persyaratan  mutu  obat tradisional, Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia, Jakarta, Indonesia, 2014.
2. Kining, E., Aktivitas Antibiofilm Ekstrak Air Daun Melinjo, Daun Singkong dan Daun Pepaya terhadap Bakteri Pseudomonas aeruginosa Secara In Vitro, Institut Pertanian Bogor, Bogor, Indonesia, 2015.
3.  Santoso, I. Uji Aktivitas Diuretik Ekstrak Etanol Daun Melinjo (Gnetum gnemon L.) Pada Tikus Putih Jantan Galur Wistar (Rattus norvegicus), Skripsi, Jurusan Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sriwijaya, Indralaya, Indonesia. 2019.
4.  Noviarny,  H.  Uji  Antidiabetes  Ekstrak Etanol Daun Melinjo (Gnetum gnemon L.)  Terhadap  Tikus  Putih  Jantan Galur  Wistar  Terinduksi  Aloksan  dan Histopatologi Pankreas, Skripsi, Jurusan Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sriwijaya, Indralaya, Indonesia. 2019.
5.  Cahya, M.A.D. Uji Aktivitas Antihiperlipidemia Ekstrak Etanol Daun Melinjo (Gnetum gnemon Linn.) Pada Tikus Putih Jantan Galur Wistar, Skripsi, Jurusan Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sriwijaya, Indralaya, Indonesia. 2019.
6. Rafiqi,  RR.  Aktivitas  Antioksidan  Dan Kandungan Dari Fenolik Total Berbagai Fraksi Dari Ekstrak Metanol Daun Melinjo (Gnetum gnemon L.), Skripsi, Jurusan  Kimia,  Fakultas  Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Andalas, Padang, Indonesia. 2017.
7. Badan Pengawasan Obat dan Makanan R.I.  Lampiran  Peraturan  Kepala  Badan Pengawasan Obat dan Makanan Republik Indonesia  Nomor:  7  tentang  Pedoman Uji Toksisitas Nonklinik Secara In Vitro. Indonesia: Badan Pengawasan Obat dan Makanan Republik; 2012.
8.  Vina, D.A., ‘Uji toksisitas akut ekstrak etanol daun belimbing wuluh (Averrhoa

## PUB LIS HED
bilimbi L.) terhadap tikus putih jantan galur wistar  menggunakan  fixed  dose  method’, Skripsi, S.Farm, Jurusan Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sriwijaya, Indralaya, Indonesia, 2018.
9. Organization for Economic Cooperation and Development. 2001a., OECD guideline for  testing  of  chemicals.  Test  No.  420: Acute oral toxicity – fixed dose procedure, OECD, Paris, 2001 10. Permatasari, AA. Pengaruh Pemberian Jus Jambu Biji (Psidium guajava L.) Terhadap Kadar Gula Darah Dan Histologi Pankreas Mencit (Mus musculus) Yang Diinduksi Aloksan, Skripsi, Jurusan Biologi, Fakultas Sains  dan  Teknologi,  Universitas  Islam Negeri Malang, Malang, Indonesia. 2014.
11. Ningsih,  A.W.,  Hanifa,  L.,  &  Hisbiyah. A., Pengaruh Perbedaan Metode Ekstraksi Rimpang  Kunyit  (Curcuma  domestica) Terhadap  Rendemen  Dan  Skrinning Fitokimia, Journal of Pharmaceutical Care Anwar Medika, 2020; 2(2): 49-57
12. Wijaya,  H.,  Novitasari,  Jubaidah,  S. Perbandingan  Metode  Ekstraksi  Terhadap Rendemen Ekstrak Daun rambai Laut (Sonneratia caseolaris L. Engl), Jurnal Ilmiah Manuntung. 2018;4(1): 79-83. 13. Budiyanto, A., Potensi Antioksidan,
Inhibitor  Tirosinase  dan  Nilai  Toksisitas dari Beberapa Spesies Tanaman Mangrove di Indonesia. Bogor: Institute Pertanian Bogor, 2015 14. Marliana,  S.D.,  Suryanti,  V.  &  Suyono. Skrining Fitokimia dan Analisis Kromatografi  Lapis  Tipis  Komponen Kimia  Buah  Labu  Siam  (Sechiumedule Jacq.  Swartz.)  Dalam  Ekstrak  Etanol, Biofarmasi  Jurusan  Kimia  FMIPA  UNS, Surakarta. 2005; 3(1): 26 – 31.
15. Setiabudi,  D.S.  &  Tukiran.  Uji  skrining fitokimia  ekstrak  metanol  kulit  batang tumbuhan klampok watu (Szygium litorale), Journal of Chemistry. 2017; 6(3):
157.
16. Shargel,  L  &  Andrew.,  Applied Biopharmaceutics  &  Pharmacokinetics,
McGraw-Hill Companies, New York, 2012. 17. Kuncarli,  I.  &  Djunarko,  I.  Uji  toksisitas
subkronik infusa daun sirih merah (Piper crocatum  Ruiz  &  Pav)  pada  tikus:  studi terhadap gambaran mikroskopis jantung dan kadar SGOT darah, Jurnal Farmasi Sains dan Komunitas. 2014; 11(2):86-95.
18. Dharma, I.G.B.S., Berata, I.K., Suri, S.. Studi Histopatologi  Pankreas  Tikus  Putih  (Rattus novergicus) yang Diberi Deksametason dan Suplementasi Vitamin E, Indonesia Medicus Veterinus, 2015; 4(3): 257-266.
19. Lu, F.C. & Kacew, S. Lu’s basic toxicology: Fundamentals, target organ and risk assessment, 4th ed, Taylor and francis, London and New York city. 2002.
20. Laksmi,  M.C.,  Dada,  A.  &  Damriyasa. 2014,  Bioaktivitas  ekstrak  daun  tapak  dara (Catharanthus roseus) terhadap kadar kreatinin dan kadar ureum darah tikus putih (Rattus norvegicus), Buletin Veteriner Udayana. 2014; 6(2):147-152.
21. Capriyanti, H. Hormon-hormon yang berperan pada proses metabolisme, Bandung: Dept. Biokimia & Biologi Molekuler FK UI Press.; 2015.
22. Astrid,  A.A.,  Arthur,  E.M.  &  Maya,  F.M. Gambaran  Kadar  Kreatinin  Serum  pada Pasien  Penyakit  Ginjal  Kronik  Stadium  5 Non Dialisis, Jurnal e-Biomedik, 2016; 4(1): 179. adhesive. Int J Biol Macromol. 2019 Jul 1;132:1121-1130.
23. Wang  WH,  Lin  WS,  Shih  CH,  Chen  CY, Kuo  SH,  Li  WL,  Lin  YS.  Functionality  of Silk  Cocoon  (Bombyx  mori  L.)  Sericin Extracts Obtained through High-Temperature Hydrothermal  Method.  Materials  (Basel). 2021;14(18):5314. doi: 10.3390/ma14185314.