## UJI AKTIVITAS PENURUNAN KADAR ASAM URAT EKSTRAK
ETANOL BUAH PINANG YAKI ( Areca vestiaria ) PADA TIKUS PUTIH GALUR WISTAR ( Rattus norvegicus )

## YANG DIINDUKSI KALIUM OKSONAT
Christani Imanuel Jabriel Rambi 1) , Edwin de Queljoe 2) , Herny E. Simbala 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115
2) Jurusan Biologi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
An unhealthy diet in a high society protein, especially animal protein that contains a lot of purine, causes hyperuricemia (excess uric acid) to increase. The use of allopurinol that is too frequent or excessive  can cause dangerous side effects. Based on these things, it is necessary to do research on antihyperuricemia substances that have high effectiveness and guaranted safety. This study aims to determine the potential for decreasing uric acid levels of areca nut fruit. This type of research as laboratory experiments using a Completely  Randomized  Design  (CRD),  with  5  types  of  treatment  each  treatment  with  3  replications. Group 1 as a negative control was given induction of potassium oxonate, Group 2 as a positive control was  given induction of potassium  oxonate  and allopurinol.  Group  3-5  was  trated  with  betel  nut  extract with different doses of 3,6 mg; 7,2 mg and 14,4 mg. Based on the results of the ANOVA statistical test, serum  uric  acid  levels  were  significantly  different  from  p  =  0,002  (<  0,05).  The  results  of  the  ethanol extracts of pinangyaki fruit at doses of 3,6 mg / 200gr BW, 7.2mg / 200gr BW and 14,4mg / 200gr BW can reduce serum uric acid levels by anova statistical test with a confidence level of 95%.
Keywords: Yaki Areca Fruit, Anthihiperurisemia, Anova

## ABSTRAK
Pola  makan  yang  tidak  sehat  dalam  masyarakat  yang  berprotein  tinggi,terutama  protein  hewani  yang banyak  mengandung  purin,  menyebabkan  penyakit  hiperurisemia  (kelebihan  asam  urat)  semakin meningkat. Penggunaan allopurinol yang terlalu sering atau berlebihan dapat menimbulkan efek samping yang berbahaya. Berdasarkan hal-hal tersebut, perlu dilakukan penelitian mengenai zat antihiperurisemia yang  memiliki  efektivitas  tinggi  dan  terjamin  keamanannya  .  Penelitian ini  bertujuan  untuk  mengetahui potensi aktivitas penurunan kadar asam urat dari Buah Pinang Yaki. Jenis penelitian ini ialah eksperimen laboratorium  menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL),  dengan  5  macam  perlakuan  masing- masing perlakuan dengan 3 ulangan. Kelompok 1 sebagai kontrol negatif diberi induksi kalium oksonat), Kelompok 2 sebagai kontrol positif diberi induksi kalium oksonat dan Allopurinol.  Kelompok3-5 diberi perlakuan ekstrak buah pinang yaki dengan dosis yang berbeda-beda yaitu 3,6 mg; 7,2 mg dan 14,4 mg. Berdasarkan hasil uji statistik Anova didapatkan kadar asam urat serum berbeda secara bermakna dengan p = 0,002 (<0,05). Hasil dari ekstrak etanol buah pinang yaki di dosis 3,6mg/200grBB, 7,2mg/200grBB dan 14,4mg/200grBB dapat menurunkan kadar asam urat serum dengan uji statistik Anova dengan tingkat kepercayaan 95%
Kata kunci : Buah Pinang Yaki, Antihiperurisemia, Anova

## PENDAHULUAN
Pola  makan  dalam  masyarakat  yang mengandung  protein  tinggi,terutama  protein hewani  yang  banyak  memiliki  kandungan purin dapat menyebabkan penyakit hiperurisemia (kelebihan asam urat) semakin meningkat.  Penumpukan  kristal  umumnya terjadi pada jaringan sekitar sendi,  sehingga menimbulkan  rasa  nyeri  di  daerah  tersebut. Penyakit akibat hiperurisemia dikenal sebagai gout atau penyakit pirai (Pribadi dan Ernawati, 2010).
Gout    di  derita  pada  usia  yang  lebih awal  dibandingkan  dengan  negara  barat serta  lebih  sering  menyerang  laki-laki dibandingan  wanita,  sebab  wanita  lebih banyak memproduksi hormon estrogen yang mampu  mencegah  pembentukan  asam  urat. Sekitar 98% serangan asam urat pada wanita hanya  terjadi  pada  usia  manapouse.  Kadar normal  asam  urat  dalam  darah  adalah  3,4- 7,0 mg/dL pada laki-laki dan 2,4-,5,7 mg/dL pada wanita (Hawkins dan Daniel, 2005).
Obat  sintetik  yang  biasa  dikonsumsi untuk mengobati asam urat oleh masyarakat adalah allopurinol yang menginhibisi aktivitas  xantin  oksidase.  Xantine  oksidase mengkatalisis  oksidasi  xantin  menjadi  asam urat.  Penggunaan  allopurinol  yang  terlalu sering  atau  berlebihan  dapat  menimbulkan efek  samping,  yaitu  hepatitis,  ruam  pada kulit,  berkurangnya  jumlah  sel  darah  putih, reaksi alergi, dan kerusakan hati ( Mo, et al . 2007).
Berdasarkan  hal-hal  tersebut,  perlu dilakukan penelitian mengenai zat antihiperurisemia  yang  memiliki  efektivitas tinggi dan terjamin keamanannya. Salah satu tanaman
yang berpotensi
untuk
dimanfaatkan sebagai antihiperurisemia
adalah  Pinang  Yaki.  Beberapa  penelitian telah  membuktikan  bahwa  ekstrak  etanol buah  Pinang  Yaki  memiliki  aktivitas antioksidan, karena adanya flavonoid (Simbala,  2006),  yang  dapat  digunakan sebagai  penghambat    xantin  oksidase  dan sebagai  penurun  kadar  gula  darah  (Aminah, 2014).

## METODOLOGI PENELITIAN

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini dilakukan di Laboratorium  Penelitian  dan  Laboratorium Farmakologi Program Studi Farmasi, Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan Alam,  Universitas  Sam  Ratulangi  Manado yang dimulai pada  November 2018 – Maret 2019.

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  : Syringe 1mL, alat  ukur  asam  urat  ( Autocheck ),  strip  asam urat  ( Autocheck ),  Ayakan  200  mesh, oven,sonifikator, sonde oral, batang pengaduk,  timbangan  analitik  (ADAM, KERN),  gelas  ukur  ( Pyrex ),  bekergelas ( Pyrex ),  kertas  saring,  sarung  tangan  lateks, masker  (SENSI Mask ),  botol  sampel, gunting,  blender,  cawan  petri  ( Pyrex ), kandang.Bahan yang digunakan: Tikus putih jantan  galur  wistar  ( Rattusnovergicus )  15 ekor,buah  pinang  yaki  ( Areca  vestiaria. ), CMC  ( carboxymethylcellulose ),  aquades, etanol  96%,  pangan  tikus  wistar  jantan ( Rattusnovergicus )  berupa  beras  jagung, allopurinol,  kalium  oksonat  dan  strip  asam urat.

## Prosedur Penelitian

## Pembuatan Ekstrak Buah Pinang Yaki
Ekstraksi  dilakukan  dengan  metode
ekstraksi
dingin yaitu maserasi menggunakan  pelarut  etanol  96%.  Buah Pinang  Yaki  yang  telah  menjadi  serbuk simplisia  ditimbang  dan  dimasukkan  ke dalam  beker  gelas  kemudian  diekstraksi dengan  cara  serbuk  simplisia  direndam dalam  pelarut  etanol  96%  dan  dibiarkan selama 5 hari kemudian disaring menggunakan  kertas  saring.  Filtrat  yang diperoleh  dipekatkan  menggunakan  oven pada  suhu  40 o C  sampai  diperoleh  ekstrak kental.
Pembuatan Larutan CMC 1%
Larutan stok CMC 1% dibuat dengan menimbang  serbuk  CMC  sebanyak  1  gram kemudian  dicampurkan  dengan  100  mL aquades dihomogenkan dengan cara pemanasan menggunakan hot plate , kemudian didinginkan .Perbandingan aquades  dengan  CMC  adalah  100:1  artinya didalam  100  ml  aquades  terdapat  1  gram CMC.

## Pembuatan Larutan Uji
Pembuatan larutan uji diawali dengan  menimbang  ekstrak  kental  Buah Pinang  Yaki  ( Areca  vestiaria. )  sesuai dengan  masing-masing  dosis  (18  mg;36 mg;72 mg), kemudian masing-masing ekstrak  yang  telah  ditimbang  dimasukan dalam  labu  ukur  10  mL  dan  ditambahkan larutan  CMC  1%  sebanyak  10  mL  dan disonifikasi  sampai  homogeny  selama  30 menit.  Setelah  homogen,  masing-masing dosis  ekstrak  di  masukkan  kedalam  botol sampel  dan  diberi  label.  AV1  untuk  ekstrak
etanol  Buah  Pinang  Yaki  dengan  dosis  I; AV2 untuk ekstrak etanol Buah Pinang Yaki dengan  dosis  II;  dan  AV3  untuk  ekstrak etanol Buah Pinang Yaki dengan dosis III.

## Pembuatan Larutan Allopurinol
Larutan  stok  allopurinol  dibuat dengan  menimbang  allopurinol  sebanyak 17,5  mg  kemudian  dicampurkan  dengan larutan  CMC  1%  sebanyak  10mL  didalam labu  ukur  kemudian  dihomogenkan  dengan sonifikator selama 5 menit. Setelah homogen  disimpan  dalam  wadah  dan  diberi tanda.

## Pembuatan Larutan Kalium Oksonat
Larutan stok dibuat dengan
menimbang kalium oksonat sebanyak 112,5mg yang dicampurkan dengan aquades steril  sebanyak  25mL  di  dalam  labu  ukur kemudian  disonikasi  dengan  sonifikator selama  30menit  hingga  larut,  setelah  dilihat cukup  larut  dimasukan  dalam  wadah  dan diberi tanda.

## Pemberian Perlakuan
Pemberian
perlakuan untuk penelitian  ini  masing-masing  konsentrasi menggunakan  3  hewan  uji  dengan  total  15 ekor  tikus  jantan  galur  wistar.Semua  hewan uji  terlebih  dahulu  dibuat  hiperurisemia dengan  menginduksi  kalium  oksonat  secara intraperitoneal  kemudian  ekstrak  etanol buah  Pinang  Yaki  diberikan  sesuai  dosis perlakuan  secara  oral  dengan  pensuspensi CMC 1% sebanyak 2 mL menggunakan alat penyekok oral (Sonde) dengan dispo .

## Pengambilan Sampel
Hewan uji dipuasakan terlebih dahulu  selama  18jam  sebelum  diambil darahnya. Pengambilan darah untuk
pengujian  kadar  asam  urat  serum  dilakukan sebanyak  5  kali  yaitu  setelah  dipuasakan, setelah  1  jam  diinduksi  kalium  oksonat, setelah  2  jam  diinduksi  kalium  oksonat, dimana  sudah  termasuk  1  jam  diberikan sediaan secara oral, setelah 4 jam dan 6 jam diinduksi.  Sampel  darah  diambil  melalui vena  ekor  mencit  putih  kemudian  dianalisis kadar asam urat nya pada strip Autocheck.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Pengamatan Kadar Asam Urat
Pengukuran kadar asam urat dilakukan  sebanyak  5  kali  dalam  waktu  6 jam  dimana  kadar  asam  urat  diukur  dengan interval  waktu  yang  berbeda.  Kadar  asam urat  puasa  (t0)  diambil  setelah  18  jam  tikus putih jantan dipuasakan untuk menghilangkan resiko kenaikan atau penurunan kadar asam urat yang dipengaruhi  oleh  pangan  tikus.Pemeriksaan kadar  asam  urat  selanjutnya  dilakukan setelah  1  jam  diinduksi  kalium  oksanat secara  intraperitoneal.  Hal  ini  dilakukan untuk  melihat  penyerapan  kalium  oksanat yang  dipengaruhi  oleh  respon  tubuh  tikus. Di saat setelah pemeriksaan kadar asam urat, diberikan sediaan CMC 1%, allopurinol, dan ekstrak  dengan  3  dosis  berbeda.  1  jam setelah  nya  dilakukan  kembali  pemeriksaan kadar asam urat karena menurut Huang et al (2008)  puncak  tertinggi  efektivitas  kalium oksonat  di  jam  ke-  2  setelah  pemberian kalium  oksanat  melalui  intraperitoneal. Pemeriksaan  kadar  asam  urat  berikut  nya dilakukan  di  jam  ke-  4  dan  ke-  6  setelah diinduksi  kalium  oksonat  hal  ini  dilakukan karena  menyesuaikan  pengambilan  data  di jam ke 2. Pengukuran kadar asam urat dapat dilihat pada grafik berikut.
Tabel 1. Hasil pengukuran kadar asam urat tikus
Perlakuan No Kadar Asam Urat Tikus Selama
Pengujian (mg/dl) Hewan
Uji t0 t1 t2 t4 t6 Kontrol Negatif 1 4,8 8,9 9,2 8.5 9,2 2 3,2 5,7 18,5 15,3 7,7 3 3,2 12,9 4,8 6 3,3 Rata- rata 3,7 9,1 10,8 9,9 6.7 Kontrol Positif 1 3,9 4,7 8 5,4 3,7 2 3,8 3,6 11,4 5,4 9,4 3 4,3 5,2 14 3,2 3,1 Rata- rata 4 4,5 11,1 4,6 5,4 EBPY 3,6mg/BB 1 7,1 8 6,8 5,1 3,1 2 3 3,3 3,2 17,3 3 3 3,4 7,2 11,5 3,1 3,2 Rata- rata 4,5 6,1 7,1 8,5 3,1 EBPY 7,2mg/BB 1 3,4 12,3 15,1 9,9 3,7 2 8,9 8,3 4,8 9,1 7 3 3,2 5,2 5,4 3 3,2 Rata- rata 5,1 8,6 8,4 7,3 4,6 EBPY 14,4mg/BB
1 6,6 5,7 14,7 7,3 4,3 2 5 4,7 4,8 4,3 5,3 3 4,7 4 8,2 3,2 3,3 Rata- rata 5,4 4,8 9,2 4,9 4,3
Gambar  1 . Grafik  rerata  pengukuran kadar asam urat
Dari hasil yang diperoleh pada Tabel 1  dan  Gambar  1  terlihat  bahwa  perlakuan kontrol  negatif  yang  diinduksi  kalium oksonat  dapat  meningkatkan  kadar  asam urat darahmencapai puncak 10,8mg/dL pada jam  ke  2  (t2)  dan  terjadi  penurunan  kadar asam urat sedikit demi sedikit sampai 6 jam setelah  pemberian  induksi.  Hal  ini  sesuai dengan  penelitian  sebelum  nya  (Huang et al .,2008). Allopurinol sebagai terapi farmakologi  yang  biasa  digunakan  secara klinis  dapat  menurunkan  kadar  asam  urat secara  bermakna  setelah  jam  ke  2  (t2) hingga  jam  ke  6  (t6)  dibandingkan  dengan kelompok  kontrol  negatif.  Efektivitas  yang sama  juga  ditunjukkan  oleh  kelompok ekstrak buah pinang yaki. Ke tiga kelompok perlakuan
dosis ekstrak
ini (200,400,800mg/kgBB)  dapat  menurunkan kadar  asam  urat  darah  secara  bermakna dimulai  dari  jam  ke  2  (t2)  hingga  jam  ke  6 (t6).  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  kelompok perlakuan  dosis  ekstrak  maupun  kontrol positif dapat menghambat terjadinya hiperurisemia yang diinduksi kalium oksonat.Penurunan  kadar  asam  urat  oleh allopurinol telah diketahui melalui penghambatan  pembentukan  asam  urat  dari xantin (Katzung et al., 2012).

## Pengujian Statistik
Untuk  mendapatkan  data  yang  lebih spesifik  mengenai  pengaruh  ekstrak  etanol buah  pinang  yaki  terhadap  penurunan  kadar asam  urat  disetiap  kelompok  perlakuan dilakukan  uji  statistik ANOVA  one  way dan LSD.
Uji One Way ANOVA
Uji One Way Anova dilakukan untuk mengetahui  pengaruh  ekstrak  etanol  buah
pinang  yaki  terhadap  kadar  asam  urat  pada tikus  dengan  hipotesis  H0  tidak  ada perbedaan  yang  bermakna  antar  kelompok, dan  H1  terdapat  perbedaan  yang  bermakna antara setiap kelompok.Uji Anova didapatkan  kadar  asam  urat  serum  akhir tikus putih berbeda secara bermakna dengan p  =  0,002  (<0,05)  dimana  hasil  yang ditunjukkan  hipotesis  menolak  H0  dan menerima H1, maka didapatkan hasil bahwa efek  penurunan  kadar  asam  urat  ekstrak etanol  buah  pinang  yaki  terdapat  perbedaan yang signifikan  (p<0,05).
Tabel 2. Hasil Uji One Way ANOVA
Sum of Squares Df Mean Square F Sig. Between Groups 74,586 4 18,647 6,277 ,002 Within Groups 59,408 20 2,970 Total 133,994 24 Uji LSD ( Least  Significant Difference )
Uji LSD dilakukan untuk mengetahui kelompok perlakuan mana yang memiliki perbedaan secara bermakna. Penurunan  kadar  asam  urat  serum  oleh ekstrak  etanol  buah  pinang  yaki  pada  tikus putih  lebih  tinggi  dari  kontrol  negatif  dan lebih  rendah  dibandingkan  dengan  kontrol positif.  Demikian  pula  dengan  potensi penurunan  kadar  asam  urat  dibandingkan dengan  kelompok  perlakuan  kontrol  positif, ekstrak etanol buah pinang yaki dalam dosis 3,6mg dan 7,2mg/200gBB tersebut memiliki potensi  penurunan  kadar  asam  urat  yang paling tinggi.
Tabel 3. Hasil Uji LSD ( Least Significant Difference ) Kelompok P Keterangan I – II 0.071 Tidak Berbeda I – III 0.000 Berbeda Signifikan I – IV 0.033 Berbeda Signifikan I – V 0.800 Tidak Berbeda II – I 0.071 Tidak Berbeda II - III 0.022 Berbeda Signifikan II - IV 0.704 Tidak Berbeda II - V 0.114 Tidak Berbeda III - I 0.000 Berbeda Signifikan III - II 0.022 Berbeda Signifikan III - IV 0.049 Berbeda Tidak Signifikan III - V 0.001 Berbeda Signifikan IV - I 0.033 Berbeda Signifikan IV - II 0.704 Tidak Berbeda IV - III 0.049 Berbeda Tidak Signifikan IV - V 0.055 Tidak Berbeda V - I 0.800 Tidak Berbeda V - II 0.114 Tidak Berbeda V - III 0.001 Berbeda Signifikan V - IV 0.055 Tidak Berbeda

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang didapatkan  bahwa  ekstrak  etanol  buah pinang  yaki  ( Areca  vestiaria )  memiliki pengaruh  terhadap  penurunan  asam  urat serum tikus putih jantan galur wistar ( Rattus norvegicus )padadosis  I,II,dan  III.  Hasil  uji ANOVA  pada  taraf  uji  0,05  menunjukan hasil  bahwa  terdapat  perbedaan  bermakna antar kelompok perlakuan.

## SARAN
Perlu  adanya  penelitian  yang  lebih mendalam  mengenai  mekanisme  flavonoid yang  terdapat  dalam  ekstrak  buah  pinang yaki terhadap penurunan asam urat.

## DAFTAR PUSTAKA
Aminah, S. 2014. Uji  Aktivitas Antidiabetes Ekstrak  Etanol  Kulit  Buah  Salak Salacca  zalacca  (Gaertner)  Voss pada Mencit Swiss Webster Jantan  yang  Diinduksi  Aloksan [Skripsi] . Bandung  :  Program Studi Farmasi. FMIPA. Universitas Islam Bandung. Hawkins,  D.W.,Daniel,  W.Rahn.  2005. Pharmacotheraphy:
A Pathophysiological  Approach  3 rd Edition. London:  Black  Well Scientific Publication.
Huang,  Shang,  Zhang  Li,Jiao.  2008.
Hypouricemic Effects of Phenylpropanoid Glycosides Acteoside of Scrophularia
ningpoensis on  Serum  Uric  Acid Levels  in  Potassium  Oxonate- Pretreated  Mice. The  American Journal of  Chinese Medicine. Vol. 36 (1): 149-157.
Katzung,  B.G.,  Masters,  S.B  Trevor,  A.J.
2012. Basic and Clinical
Pharmacology . Edisi 12.Mc Graw
Hill Medical, New York.
Mo,Shi  Fu.,  Feng  Zhou,  Yao  Zhong  Lv,
Qing  Hua  Hu,  Dong  Mei  Zhang, Ling Dong Kong.2007. Hypouricemic  Action  of  Selected Flavonoid  in  Mice:  Structure Activity Relationship. Nanjing: Nanjing University. Pribadi,F.W., Ernawati,D.A.2010. Efek Catechin  Terhadap  Kadar  Asam Urat,  C-Reaktive  Protein  (CRP) dan  Malondialdehid  Darah  Tikus Putih ( Rattus norvegicus ) Hiperurisemia. Mandala of Health.
4(1): 39-46
Simbala,  H.E.I.  2006.  Keanekaragaman
Floristik dan Pemanfaatannya Sebagai Tumbuhan Obat di Kawasan  Konservasi  II  Taman Nasional  Bogani  Nani  Wartabone
(Kabupaten  Bolaang  Mongondow Sulawesi Utara) Provinsi Sulawesi Utara  [Disertasi].  FMIPA  IPB, Bogor.