EKSTRAK DAUN Avicennia marina UNTUK MENEKAN AKTIFITAS BAKTERI Vibrio spp. YANG DIISOLASI DARI KEPITING BAKAU ( Scylla serrata) SECARA IN VITRO
Karmila Dewi 1) , Ery Gusman 2) , Mohammad Fadnan Akhmadi 2)
1) Mahasiswi Budidaya Perikanan
2) Staf Pengajar Budidaya Perairan Fakultas Perikanan Dan Ilmu Kelautan E-mail: Karmiladewi422@gmail.com

## ABSTRACT
Avicennia  marina  leaf  extract  is  known  to  suppress  the  activity  of  Vibrio  spp.  using solvent klorform and methanol. Therefore, the authors conducted a further study using different solvents. This research interest determine the ability of extracts of A. marina in suppressing the activity of Vibrio spp. isolated from mud crab (Scylla serrata). A. Marina leaf take in Pantai Amal Lama, The process of extraction, isolation and testing of clear zone  performed  at  the  Laboratory  of  the  Faculty  of  Fisheries  and  Marine  Sciences, University  of  Borneo  Tarakan.  Stages  of  research  are:  manufacture  A.  marina  leaf extract,  isolation,  culture  of  Vibrio  spp.,  and  data  analysis.  The  study  consisted  of  6 treatments,  blank  control,  negative  control,  positive  control,  A.  marina  leaf  extract concentration  of  15%,  25%  and  35%,  A.  marina  leaf  extract  in  each  treatment  were significantly different (P <0.05). Diameter of clear zone produced at a concentration of 15% obtained an average value of 12.25 ± 5.37 mm, at a concentration of 25% 24.4 ± 1.41 mm, at a concentration of 35% 30.37 ± 0.95 mm. While the positive control 42.5 ± 0:00 mm. But the blank control and negative controls do not form clear zones. Based on these  results  it  can  be  concluded  that  there  are  indications  A.  marina  leaf extract in suppressing the activity of Vibrio spp. were tested in vitro.
Keywords : Avicennia marina, Vibrio, crabs (Scylla serrata), in Vitro

## PENDAHULUAN

## Latar Belakang
Kota  Tarakan  merupakan  salah satu    kota  yang  terdapat  di  Provinsi Kalimantan  Utara  yang    memiliki  luas sebesar  ±  657,33  km 2 .    Kota  ini  terdiri 38,  15%  luas  daratan  dan  61,85%  luas lautan    sehingga    kota  ini  mempunyai potensi  sumberdaya  perikanan  yang cukup  besar.  Kota  Tarakan  merupakan pusat  pengumpulan    kepiting  bakau ( Scylla serrata )  yang berasal dari hasil tangkapan  nelayan  di  wilayah  perairan provinsi  Kalimantan  Utara.  Hal  ini
disebabkan oleh berbagai  macam faktor diantaranya  adalah  penurunan  daya dukung lingkungan, penyakit dan manajemen  budidayanya. Vibrio spp. adalah salah satu kelompok bakteri yang sangat menggangu biota yang dibudidayakan  ( S.  serrata )  sehingga dapat menurunkan produksinya. Bakteri ini    merupakan  bakteri  patogen  yang tergolong  dalam  divisi  bakteri ,  Class Schizo-micetes,  Order  Eubacteriales, Family Vibrionaceae . Bakteri ini bersifat gram  negatif,  fakultatif  anaerobik, fermentatif,  bentuk  sel  batang  dengan ukuran panjang antara 2-3 µm,
menghasilkan katalase dan oksidase dan bergerak dengan satu flagella pada ujung sel (Austin, 1988).
Seiring  dengan  perkembangan ilmu dan teknologi, beberapa pakar giat melakukan penelitian tentang mangrove. Penemuan baru dibidang farmasi sangat bermanfaat  bagi  kehidupan  manusia, seperti ditemukannya kandungan senyawa  bioaktif  dari  beberapa  jenis mangrove  yang  dapat  digunakan  untuk bahan  obat-obatan,  zat  antibiotik,  dan bahan  kosmetik,  akan  tetapi  sebagian besar  potensi  sumberdaya  hayati  ini pemanfaatannya belum optimal. Melihat banyaknya  kebutuhan  akan  bahan  baku untuk  industri  farmasi  tersebut,  maka diadakan  eksploitasi  terhadap  bahan- bahan  yang  berasal  dari  tumbuhan pesisir laut dan salah satu yang menjadi objek  penelitian  ini  adalah  mangrove Api- api ( Avicennia marina ).
Menurut  Oktavianus    (2013), bahwa  ekstrak  daun Avicennia  marina diketahui dapat menekan aktifitas bakteri Vibrio Spp. dengan
menggunakan  pelarut  klorform  dan metanol.  Oleh  karena  itu,  penulis melakukan  penelitian  lanjutan  dengan menggunakan  pelarut  yang  berbeda, menggunakan    pelarut  Etanol  70%. Maka  peneliti  tertarik  untuk  meneliti ekstrak    daun A.  marina dengan menggunakan  pelarut  yang  berbeda untuk  melihat  hasil  ekstrak  yang didapatkan dan dapat sebagai anti bakteri pada Vibrio spp.  yang  diisolasi  dari kepiting bakau di Kota Tarakan.
Adapun  tujuan  dari  penelitian  ini untuk mengetahui kemampuan ekstrak daun Avicennia  marina untuk  menekan  aktifitas bakteri Vibrio Spp. yang berpotensi sebagai antibakteri secara In Vitro.

## METODOLOGI

## Waktu dan Tempat
Penelitian ini  dilaksanakan pada bulan  Desember  2016  sampai  Februari 2017.  Lokasi pengambilan sampel daun mangrove A.  marina dilakukan  di  Desa Pantai  Amal  Kec.  Tarakan  Timur  Kota Tarakan.  Proses  ekstraksi,  isolasi  dan pengujian  zona  bening  dilakukan  di Laboratorium lingkungan, nutrisi, biologi  perikanan,  dan  kualitas  air Fakultas  Perikanan  Dan  Ilmu  Kelautan Universitas Borneo Tarakan.

## Alat dan Bahan
Peralatan yang digunakan selama penelitian dibagi atas beberapa bagian  : Peralatan  ekstraksi  daun A.  marina, isolasi  bakteri,  kultur  bakteri  dan perlakuan  (eksperimen).  Alat  yang digunakan  dalam  ekstraksi  antara  lain blender (Panasonic), nampan, timbangan,  spatula,  maserator,  beaker glass dan 1 set evaporator. Sterilisasi dan
Isolasi  : autoclave ,  open  pengering, cawan  pertri,  tabung  reaksi,  jarum  ose, neraca  analitik,  erlenmeyer, beaker glass , gelas ukur, hot plate, mikropipet, pippet tip , rak tabung, lumpang, vortex, bunsen, botol semprot, water bath .
Adapun  bahan  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  dibagi  menjadi empat yaitu bahan yang digunakan untuk ekstraksi daun A. marina, isolasi bakteri, kultur  bakteri  dan  perlakuan.  Bahan yang digunakan dalam ekstraksi daun A. marina :  daun A.  marina yang  telah dihaluskan dan etanol 70%. Bahan yang digunakan  dalam  isolasi  bakteri  : kepiting  bakau,    media  agar  TCBS ( Thiosulfate citrate balt sucrose ), Alkohol,  aquades  steril,  tisu  dan  kapas Chloramphenicol 250  gr,  pelarut  etanol 70%, Alumunium  foil ,  kertas  label, spritus, kertas saring. Perlakuan (eksperimen)  :  bakteri Vibrio spp., ekstrak etanol daun A. marina.
Metode Penelitian
1. Persiapan Alat dan Bahan Alat yang akan digunakan selama  proses  sterilisasi  menggunakan autoclave pada  suhu  121 ° C  tekanan  2 atm selama 15 menit (Lim, 1998).
2. Pembuatan Ekstrak Daun Avicennia marina Pengambilan  daun A.  marina
dilakukan di Pantai Amal Lama daun A. marina diambil sebanyak 2 kg, dikeringkan dalam suhu ruang selama 7 hari.  Setelah  daun  kering  ditimbang hingga  mendapatkan  hasil  1,4  kg  lalu diblender  hingga  halus,  setelah  halus ditimbang  hingga  mendapatkan  hasil 500 gr kemudian dilakukan perendaman dengan  metode  maserasi,  sebanyak  500 gr : 2 L etanol 70% selama 3 hari. Proses pemanenan  dilakukan  dengan  cara memutar selang kaca yang ada pada alat maserasi  untuk  mengeluarkan  cairan ekstrak.  Selanjutnya  cairan  ekstrak dievaporasi  selama  8  jam  untuk memisahkan  cairan  etanol  dari  ekstrak daun A.  marina ,  lalu  di  uapkan  dengan menggunakan water  bath selama  4  hari untuk mendapatkan ekstrak yang berbentuk pasta. 3. Isolasi Isolasi dilakukan dengan
menggunakan  metode  tuang  (Lim, 1998).  Isolasi  bakteri Vibrio spp.  yang berasal  dari  kepiting  bakau  dilakukan dengan  beberapa  tahap,  yaitu  sterilisasi alat  yang  dilakukan  dengan  cara membersihkan  seluruh  peralatan  yang akan  digunakan.  Peralatan  sterilisasi dengan menggunakan 2 macam sterilisasi  yaitu  sterilisasi  basah  dan kering.  Proses  sterilisasi  disesuaikan dengan  jenis  peralatan  yang  digunakan. Peralatan yang telah digunakan kemudian  dibersihkan  kembali  dan disimpan  dalam  rak  atau  tempat penyimpanan.  Lalu  dilakukan  isolasi bakteri,  kepiting  yang  masih  segar dimatikan  dengan  cara  menusuk  tepat
pada  bagian  dada  kepiting  dengan menggunakan benda tajam, bagian yang diambil  yaitu  insang  dari  kepiting kemudian ditimbang sebanyak 10 gr lalu dihaluskan dengan menggunakan mortal. Setelah halus sampel dimasukkan kedalam tabung reaksi yang telah  berisi  aquades  sebanyak  90  ml. Setelah itu dilakukan metode pengenceran  dengan  menyediakan  7 tabung  reaksi  dengan  masing  masing kode 10 -1 sampai dengan 10 -7. Selanjutnya 10 -7 diambil untuk dilakukan kultur bakteri, lalu
menyiapkan  cawan  petri  yang  telah berisi  media  agar  TCBS  ( Thiosulfate citrate  bile  sucrose )  pengenceran  10 -7 yang  berisi  bakteri    difortex  kemudian diambil  sebanyak  1000 μ l  dengan menggunakan  mikropipet  lalu  dituang kecawan petri yang berisi media TCBS, bakteri  diratakan  menggunakan  stik kapas  dan  diinkubasi  selama  24  jam dengan suhu 30˚C atau suhu ruang.
4. Uji  antibakteri  ekstrak  daun

## Avicennia marina
Uji antibakteri dilakukan dengan menggunakan  metode  difusi  lempeng agar  (Lalitha,  2004).  Ekstrak  daun A.
marina ditimbang sesuai dengan konsentrasi  yang  telah  ditentukan  yaitu 35% (3,5 gr), 25% (2,5 gr), 10% (1,0 gr), masing-masing  konsentrasi  dilarutkan dengan pelarut aquades sebanyak 10 ml disetiap  tabung  reaksi.  Selanjutnya dihomogenkan  dengan  menggunakan vortex  untuk  siap  dilakukan  pengujian (Abeysinghe et.al., 2006).  Sebagai kontrol positif digunakan
Chloramphenicol (250  gr)  sebanyak  1 buah  kapsul  dilarutkan  dengan  akuades sebanyak  10  ml,  kontrol  negatif  yang hanya menggunakan akuades 10 ml, dan pada kontrol blank tidak ada perlakuan. Kontrol  positif  sebagai  tolak  ukur menentukan kemampuan ekstrak menghambat  bakteri.  Jika  nilai  zona bening  yang  dihasilkan  mendekati  atau
melebihi  nilai  kontrol  positif  maka ekstrak berpotensi sebagai antibakteri.
Media TCBS yang telah disiapkan dituang secara perlahan ke 24 cawan  petri  dan  dibiarkan  memadat. Bakteri  yang  telah  di  kultur  diambil menggunakan  jarum  ose  yang  telah disterilkan  dengan  bunsen,  kemudian diletakkan  ditabung  reaksi  yang  berisi akuades sebanyak 10 ml dengan medote miring lalu divortex. Selanjutnya bakteri diambil menggunakan mikropipet 100 μl dituang ke cawan petri yang telah terisi media TCBS  yang padat, lalu diratakan menggunakan  stik  kapas.  Hal  ini dilakukan  sebanyak  24  kali  dengan mengganti  setiap  stik  kapas  yang digunakan.  Masing-masing  24  cawan petri diberikan label secara acak. Ekstrak daun A.  marina dan  kontrol yang  telah dilarutkan  diletakkan  ke  cawan  petri, lalu  kertas  cakram  direndam  kedalam masing-masing  setiap  larutan  sebanyak 16 kertas cakram yang berukuran 6 mm selama  5  menit.  Kemudian  kertas cakram diletakkan ke dalam media yang berisi  bakteri  sesuai  dengan  label  yang diberikan sebanyak 4 kertas cakram, hal itu  dilakuan  sebanyak  24  kali.  Cawan petri  diinkubasi  selama  24  –  48  jam dengan suhu 30˚C. Kemampuan ekstrak sebagai anti mikroba ditunjukkan dengan  adanya  daya  hambat  (zona bening)  disekitar  cawan  petri.  Untuk mendapatkan  nilai  zona  bening  yang dihasilkan dilakukan pengukuran dengan menggunakan penggaris.
5. Metode Penelitian Penelitian  ini  menggunakan  6 perlakuan  4  kali  ulangan  dengan perlakuan Kontrol blank, kontrol negatif, Kontrol  Positif  ( Chloramphenikol 250 gr), konsentrasi 15 %, konsentrasi 25 % dan konsentrasi 35 % 6. Analisis Data Data yang telah diperoleh berupa diameter  zona  bening  dari  masing- masing perlakuan yang dianalisis secara
deskriptif  dengan  menampilkan  tabel dari gambar mengenai penekanan pengaruh dari masing-masing perlakuan terhadap Vibrio spp. maka data diameter zona  bening  kemudian  dianalisis  secara statistik  dengan  menggunakan  analisis varians  (One-Way  ANOVA)  Untuk mengetahui  perbedaan  antara  perlakuan dan kontrol. Untuk mengetahui signifikansi  perbedaan  rata-rata  dengan tingkat  kepercayaan  95  %  (kesalahan yang  terjadi  hanya  5%).  Program  yang digunakan  untuk  menganalisis  data tersebut  menggunakan  software  SPSS 16.0.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Ekstraksi Daun Mangrove Avicennia marina Sampel mangrove yang digunakan  adalah  daun  yang  tua  dan kondisinya utuh. Sampel daun Avicennia  marina diambil  sebanyak  2 kg,  lalu  dikering  anginkan  pada  suhu ruangan selama 7 hari. Didapatkan berat kering  sampel  sebanyak  1,4  kg  (70%) dan berat air 0,6 kg (30%). Sampel  daun A.marina kemudian  dihaluskan,  lalu ditimbang  dan  didapatkan  berat  sampel daun A.marina sebanyak  500  gr (35,7%).  Selanjutnya  dilakukan  proses maserasi  dengan  menggunakan  etanol 70% sebanyak 2 liter. Setelah melewati proses maserasi, evaporasi dan
Penguapan  didapatkan  berat  ekstrak kasar  atau  rendemen  daun Avicennia marina sebanyak 48,45 gr (9,69%). Nilai berat  ekstrak  diperoleh  dari  hasil penimbangan  ekstrak  yang  ada  pada gelas  bekker  dengan  mengurangi  berat bobot awal ( glass bekker tanpa ekstrak).
Isolasi Bakteri Vibrio spp.
Hasil  dari  isolasi  bakteri Vibrio spp.  pada    kepiting  bakau  ( Scylla serrata )  yang  ditumbuhkan  pada  media
TCBS, media tersebut merupakan media yang  cocok  untuk  menumbuhkan  dan menyuburkan bakteri Vibrio spp.
Beberapa  isolat  yang  tidak  mampu tumbuh  menunjukkan  bahwa  media selektif  TCBS  mampu  mendeteksi  atau menyeleksi beberapa isolat bakteri yang tidak termasuk bakteri Vibrio spp. Isolat yang tumbuh pada media selektif TCBS memiliki  beberapa  sifat  morfologi koloni;  warna  koloni  yang  beragam (kuning,  orange,  hijau,  hijau  transparan dan  hijau  kebiruan),  bentuk  koloni circular, tepi  koloni entire dan  elevasi
koloni yang bermacam pula ( law conver,
conver dan effuse ), (Ihsan dan Retnaningrum, 2017).

## Aktivitas Daya Hambat Ekstrak
Daun Avicennia marina
Terbentuknya zona bening akibat adanya aktivitas antibakteri hasil rendaman  ekstrak  daun A.marina Pada ekstrak daun A. marina dengan menggunakan  etanol  70%    zona  bening yang dihasilkan menunjukkan hasil yang berbeda.  Adapun  hasil  pengukuran disajikan pada tabel berikut:
Tabel 1. Hasil Pengukuran Diameter Zona Hambat Bakteri Vibrio spp. Perlakuan Diameter Zona Hambat ( mm ) Rata- rata Keterangan Ulangan Konsentrasi 35 % 32 30 31 30 30,75 Ada Konsentrasi 25 % 25,5 25,4 25 22,5 24,6 Ada Konsentrasi 15 % 19,5 11,7 11,3 6,5 12,25 Ada Kontrol Positif 42,5 42,5 42,5 42,5 42,5 Ada Kontrol Negatif 0 0 0 0 0 Tidak ada Kontrol Blank 0 0 0 0 0 Tidak ada
Berdasarkan data Tabel 1 diketahui bahwa ekstrak daun A. marina berpengaruh untuk  menghambat  pertumbuhan  Bakteri Vibrio spp.  Hal  ditunjukkan  oleh  nilai diameter  zona  bening  yang  dihasilkan  dari daun ekstrak daun A.marina . Pada perlakuan  yang  telah  diberikan,  hasil tertinggi ditunjukkan oleh perlakuan dengan  konsentrasi  35%  dengan  zona bening  yang  dihasilkan  adalah  sebesar 30,75  mm.  Selanjutnya  pada  perlakuan dengan  konsentrasi  25%  dihasilkan  zona bening sebesar 24,6 mm dan pada perlakuan 15%  dihasilkan  zona  bening  terendah sebesar 12,25 mm. Hasil zona bening yang didapatkan  dari  ke  3  perlakuan  dapat diketahui bahwa semakin besar konsentrasi ekstrak daun A.marina yang diberikan maka semakin besar zona bening yang dihasilkan.
Sementara  diameter  zona  bening yang hasilkan oleh kontrol positif ( Chloramphenicol ) sebesar 42,5 mm hal ini dikarenakan Chloramphenicol cukup efektif  dalam  menghambat  pertumbuhan bakteri, karena
Chloramphenicol
merupakan  antibiotik  bakteristatik  dan bakterizidal,  sedangkan  pada  kontrol negatif dan kontrol blank tidak menghasilkan  zona  bening  di  karenakan Aquades,  media  dan  kertas  cakram  yang digunakan bukan sebagai antibakteri.
Berdasarkan  hasil  analisis  statistik anova penggunaan ekstrak daun A. marina memberikan  pengaruh  yang  berbeda  nyata (P  <  0.05).  Nilai  rata  –  rata  diameter  zona bening  yang  dihasilkan  perlakuan  ekstrak daun A.  marina menunjukkan  perbedaan pada konsentrasi 15% didapatkan rata- rata 12,25  mm  ±  5,37,  pada  konsentrasi  25% rata- rata diameter zona bening 24,4 mm ± 1,41  dan  pada  konsentrasi  35%  rata-  rata diameter yang didapatkan  30,37 mm ± 0,95 sedangkan  pada  kontrol  positif  yang menggunakan Chloramphenicol menghasilkan  diameter  zona  bening  yang lebih besar dibandingkan dengan perlakuan lainnya  dimana    rata-  rata  diameter  zona bening  yang  dihasilkan  adalah  42,5  mm  ± 0,00  sedangkan    pada  kontrol  negatif (Aquades)  dan  blank  tidak  terbentuk  zona bening.  Selanjutnya berdasarkan Uji  BNT (uji Beda Nyata Terkecil), perlakuan terbaik didapatkan  pada  perlakuan  kontrol  positif, sedangkan  perlakuan  terbaik  dari  3  (tiga) perlakuan ekstrak daun A. Marina (konsentrasi 15%, 25% dan 35%),
didapatkan perlakuan terbaik pada
konsentrasi 35%.

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
1. Ekstrak  daun A.  marina mampu menekan aktifitas bakteri Vibrio spp.
2. Ekstrak daun A. marina memiliki potensi sebagai  obat  antibakteri  pada  bakteri Vibrio spp.  dengan  konsentrasi  yang terbaik  adalah  35%  dengan  diameter zona  bening  30,75  mm,  namun  masih dibawah Chloramphenicol dengan diameter zona bening 42,5 mm.

## Saran
1.  Pada  penelitian  ini  didapatkan  pada konsentrasi  35%    menunjukkan  zona bening yang besar maka, Perlu dilakukan Analisis  lebih  lanjut  mengenai  Ekstrak daun A.marina dalam  penentuan konsentrasi yang optimal.
2.  Di  perlukan  uji  lanjutan  secara In  vivo pada kepiting yang di uji tantang dengan pemberian  bakteri Vibrio spp. untuk mengetahui  tingkat  aktivitas  antibakteri pada Ekstrak Daun A.marina .

## DAFTAR PUSTAKA
Abeysinghe,  P.  D.,  &  Wanigatunge,  R.  P. 2006.  Evaluation  of  antibacterial activity  of  different  mangrove  plant extracts. Ruhuna  Journal  of  Science,
1 , 104-112.
Austin  B.  1988.  Marine  microbiology, Cambridge university press. Cambridge. England 222p.
Gambar 11. Grafik Rata- rata  diameter zona hambat (mm) bakteri Vibrio spp. a a e d c b 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 kontrol blank kontrol negatif kontrol positif 35% 25% 15% Zo n a b e n in g (m m ) Perlakuan
Awaludin,  R.  Ahmad  2015.  Analisis Kematangan  Gonad  Induk  Udang
Putih ( Litopenaeus vannamei ) setelah Pemberian Ekstrak Etanol Karamunting ( Melastoma malabathricum ). Tesis. SITH ITB.
Ihsan B, Retnaningrum E. 2017. Isolasi dan
Identifikasi  Bakteri Vibrio sp.  Pada Kerang Kapah ( Meretrix meretrix) di Kabupaten Trenggalek. Jurnal Harpodon  Borneo Vol.10.  No.1.  April. 2017 hal 24-25 Lalitha, M.K. 2004.
Manual on Antimicrobial  Susceptibility  Testing. Christian  Medical  College.  Vellore, Tamil Nadu.
Lim, 1998,  Microbiology,  a  Laboratory Manual,  Adison-Wesley  Publishing company, California.
Oktavianus,  S.  2013. Uji  daya  hambat ekstrak daun mangrove jenis
Avicennia  marina  terhadap  bakteri Vibrio  parahaemolyticus .  Skripsi. Universitas Hasanuddin: Makassar.