## EFEK PERLAKUAN EKSTRAK MENIRAN MERAH ( Phyllanthus urinaria ) TERHADAP JUMLAH LIMFOSIT PADA ORGAN LIMPA MENCIT BALB/C YANG DIINFEKSI BAKTERI Salmonella thypi
THE EFFECT OF RED MENIRAN ( Phyllanthus urinaria ) EXTRACT TO LYMPHOCYTES TOTAL NUMBER IN THE SPLEEN OF BALB/C MICE INFECTED WITH Salmonella thypi .
1 2 3 Ifandari  , Suranto   dan Y. Nining Sri Wuryaningsih 1 Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Setia Budi 2 3
Jurusan Biologi  Fakultas MIPA UNS,  Fakultas Kedokteran Umum UNS.

## ABSTRAK
Meniran merah (Phyllanthus urinaria) merupakan salah atu jenis tanaman obat. Meniran merah telah diteliti sebagai diuretik, hipoglikemik, antihepatitis-B dan anti kanker. Akan tetapi manfaat tanaman ini dalam meningkatkan sistem imun belum digali. Tujuan dari penelitian ini adalah  untuk mengetahui pengaruh pemberian meniran merah terhadap jumlah limfosit pada organ Limpa  Mencit  Balb/C  yang  diinfeksi  bakteri  Salmonella  thypi  serta  mengetahui  pengaruh  variasi  dosis  ekstrak  meniran  merah terhadap  jumlah  limfositnya.  Penelitian  ini  menggunakan  rancangan  the  post  test-only  control  group  terhadap  38  ekor  mencit Balb/C  yang    terbagi  dalam  6  kelompok  dan  dilakukan  selama  10  hari.    Kelompok  kontrol  negatif,  kontrol  positif,  kelompok perlakuan ekstrak meniran merah dengan variasi dosis masing-masing 3x   0,065 mg/hr, 3x 0,130 mg/hr   dan 3x 0,260 mg/hr. Mencit  diinfeksi  S. typhi  kemudian pada hari ke-4 dan hari ke-11 limfosit diisolasi dari organ limpa, kemudian dihitung jumlahnya. Sebagai  data  pendukung  dilakukan  uji  kualitatif  senyawa  yang  terdapat  pada  ekstrak  meniran  dengan  metode  Kromarografi lapis  tipis  (KLT).  Data    jumlah  limfosit  dianalisis  dengan  T  test    untuk  melihat  perbedaanya  dan    adanya  variasi  dosis  dalam perlakuan meniran merah dilakukan uji Anava. Pemberian ekstrak meniran merah pada dosis 3 x 0,130 mg/hr dan  3x 0,260 mg/hr mampu meningkatkan jumlah limfosit di atas  keadaan normal. Variasi  dosis ekstrak meniran merah mempengaruhi peningkatan jumlah limfosit. Senyawa bioaktif yang terkandung dalam ekstrak meiran merah adalah fenol, flavanoid dan saponin.
Kata kunci: Phyllanthus urinaria, Limfosit, limpa, Salmonella thypi, senyawa bioaktif.

## ABSTRACT
Red Meniran (Phyllanthus urinaria) is one species of medicinal plants that has been investigated as a diuretic, hypoglycemic, anti-hepatitis B and anti-cancer. However, the benefit of this plant as the immune system enhancer has not been explored. The purpose of this study was to determine the effect of red meniran to the number of lymphocytes in the spleen of Balb/C mice that infected with Salmonella thypi, as well as determine the effect of dosage variation intake of red meniran extract to total lymphocytes. This study conducted post-test-only control group design. In which 38 mice Balb/C were divided into six groups and observed for ten days. The groups were negative control group, positive control group, and treatment group with variety dosage of intake (3x0.065 mg/day, 3x0.130 mg/day and 3x0.260 mg/day). Mice were infected by S. Thypi, on the fourth and eleventh day of observation, the lymphocytes isolated and calculated from spleen mice.
Keywords : Phyllanthus urinaria, Lymphocyte, spleen, Salmonella thypi, bioactive compound.

## PENDAHULUAN
B Pada  masa  sekarang  ini,  metode  pengobatan  memiliki  kecenderungan  untuk  kembali  ke  alam.  Konsep kembali ke alam ditunjukkan dengan adanya penggunaan obat – obatan dari bahan alami baik berupa tumbuhan  ataupun  hewan.  Penggunaan  tumbuhan  dalam  pengobatan  tergolong  paling  banyak  dilakukan. Tumbuhan yang memiliki manfaat dalam pengobatan sangat banyak ditemukan di Indonesia, dari tumbuhan yang endemik di wilayah tertentu sampai tumbuhan yang banyak ditemui di setiap tempat. Tumbuhan tersebut

## ARTIKEL PENELITIAN
memiliki manfaat sebagai tanaman obat. Salah satunya adalah tumbuhan meniran. Tumbuhan Meniran merupakan salah satu tumbuhan obat yang berbentuk herba dan tumbuh secara liar. Meniran yang paling umum ditemui adalah meniran hijau dan meniran merah. Meniran yang memiliki warna batang  hijau  disebut  meniran  hijau  dengan  nama  latin Phyllanthus  niruri L  dan  warna  batang  merah  disebut meniran merah dengan nama latin Phyllanthus urinaria Lin.  Perbedaan  warna  batang  pada  kedua  jenis  ini merupakan salah satu sifat pembeda pada klasifikasi yang dibuat  oleh  Hadad  dkk  pada  tahun  1993  (Hidayat  dkk, 2008).
Meniran  merah  memiliki  warna  batang  dan  tangkai daun  merah  walaupun  kadang  agak  kehijauan.  Sayatan batang  muda  berbentuk  persegi  lima  .    Jenis  ini  memiliki bentuk kristal polihedral.   Bentuk sayatan cabang berbentuk pipih  bersayap.      Meniran  merah  memiliki kristal druse pada  jaringan  palisade  dan  tulang  daun.  Pada  tepi  daun meniran merah dapat ditemukan trikoma uniseluler (Qonit, 2010). Kandungan kimia Meniran yang telah diteliti adalah kandungan kimia Meniran hijau, sedangkan untuk kandungan kimia   meniran merah belum banyak dieksplorasi. Meniran merah telah diteliti mempunyai efek sebagai anti viral (Yang et  al,  2007)  anti  kanker  (Huang  et  al,  2010),  diuretik, hipolgikemik  (Lans,2006),  antioksidan  dan  kardioprotektif (Chularojmontri  et  al,  2005) sedangkan  bagaimana  potensi Meniran Merah sebagai immunomodulator belum  digali. Bakteri Salmonella thypi adalah salah satu penyebab penyakit  demam  tifoid.  Penyakit  ini  sangat  erat  kaitanya dengan  higiene  dan  sanitasi  lingkungan.  Di  Indonesia penyakit demam tifoid masih menjadi salah satu penyakit infeksius  yang  mendapatkan  perhatian.  Walaupun  resiko kematian  lebih  kecil  dibandingkan  yang  lain,  akan  tetapi frekuensi kejadian penyakit masih besar.   Penanggulangan demam tifoid yang dilakukan secara konvensional dengan penggunaan antibiotic. Jenis antibiotic yang paling banyak digunakan    di  Indonesia    yaitu  Kloramfenikol  (Widoyono, 2008). Penggunaan antibiotic pada masa sekarang ini masih ditinjau secara mendalam mengenai efek resistensinya. Oleh karena itu diperlukan teknik penanggulangan yang lain yang
diharapkan lebih baik.
Limfosit  merupakan  salah  sel  yang  berperan  dalam system  imunitas.  Sel  limfosit  mampu  mengenali  setiap jenis antigen baik secara intraseluler maupun ekstraseluler. Sel  limfosit  dibedakan  menjadi  dua  yaitu  sel  limfosit  T dan sel Limfosit B. Pembedaan ini berdasarkan fungsinya. Sel limfosit T bertanggungjawab pada respon imun seluler dan limfosit B bertanggungjawab terhadap respon imun humoral (Bellanti, 1993).
Limfosit T mempunyai peran utama  dalam mengontrol dan  mengatasi  infeksi  intraseluler  pathogen  dengan memproduksi  sitokin.  Limfosit  T  dapat  memediasi  secara langsung  proses  pelisisan  sel  yang  terinfeksi.  Infeksi Salmonella dapat  memberikan  penghambatan  terhadap pembentukan sel Dendritik (DC). Sel Dendritik ini berperan secara langsung dalam proliferasi Limfosit T.   Jika limfosit T terganggu, maka aktivasi limfosit B juga terganggu (Velden et al.2005).
Immunomodulator merupakan rangkaian reaksi  tubuh untuk memperbaiki diri dari serangan pathogen. Pathogen yang  menyerang  dapat  berupa  virus,  bakteri,  protozoa, jamur  dan  antigen  lain.  Kemampuan  ini  dipegang sepenuhnya  oleh  sistem  pertahanan  tubuh  baik  secara seluler  maupun  humoral.  Proses  yang  diperankan  oleh sistem  pertahanan  tubuh  dapat  bekerja  bila  terdapat rangsang yang berupa antigen asing.  Stimulasi pengeluaran sitokin  dapat  dipacu  oleh  beberapa  senyawa  aktif.  Jenis – jenis senyawa aktif banyak ditemukan pada tumbuhan. Penelitian mengenai flavanoid telah memberikan keterangan bahwa  senyawa  ini  mampu  sebagai  immunostimulator dan  antioksidan  (Saraf  et  al  2007).  Jenis  tumbuhan  yang telah  diteliti  sebagai  peningkat  daya  immunomodulator salah satunya adalah Meniran Hijau (Ma'at, 1997).
Oleh  karena  itu,  peneliti  ingin  mengetahui  pengaruh pemberian  ekstrak  meniran  merah  ( P.urinaria )    terhadap jumlah  limfosit  pada  organ  limpa  Mencit  Balb/C  yang diinfeksi  bakteri Salmonella  thypi dan  efek  variasi  dosis terhadap jumlah limfositnya. Kemanfaatan yang  diharapkan dari penelitian ini adalah memberikan informasi     bahwa ekstrak meniran  merah dapat digunakan sebagai peningkat
EFEK PERLAKUAN EKSTRAK MENIRAN MERAH (Phyllanthus urinaria) TERHADAP JUMLAH LIMFOSIT PADA ORGAN LIMPA MENCIT BALB/C YANG DIINFEKSI BAKTERI Salmonella thypi
daya immunomodulator untuk penyakit demam tifoid maupun infeksi penyakit lain.

## METODOLOGI PENELITIAN Alat
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah seperangkat  alat  ekstraksi  sokhetasi,  bejana  KLT,  pipa kapiler, penyemprot, spuit , kaca objek, mikroskop cahaya, seperangkat  alat  bedah  steril,  laminar  air  flow,  pipet eppendorf, sentrifugasi dan Hemocytometer.
Bahan Dalam penelitian ini adalah : Mencit Balb/C , pellet, ekstrak  meniran  merah,  medium  trypticase  soy  broth, strain  bakteri Salmonella  thypi ,  NaCl  isotonic,  akuabides steril dan sampel berupa limfosit yang diambil dari kelenjar limpa.  Reagen  yang  digunakan  adalah:  alkohol  70%, methanol  90%,  asam  asetat  3%,  Phosphate  Buffered Saline(PBS),  RPMI  medium  1640,  Penstrep,  Fungasol, NaHC03,  Hepes,  lempeng  silica  gel  GF CHCl ,  ethyl 254, 3 asetat,  Toluen,  Diethylamina,  Methanol,  n-heksan  dan sebagai  bahan  penyemprot  uap  ammonia,  dragendrof, anisaldehid dan FeCl . 3 Prosedur kerja:

## Pembuatan Ekstrak meniran
Tumbuhan  meniran merah diekstraksi dengan metode Sohxetasi  dengan  pelarut  etanol  70%.  Ekstrak  berupa pasta  dan  dicairkan  dengan  CMCNa  0,25%.  dengan konsentrasi  sesuai  dosis.  Untuk  pemberian  ekstrak  per mencit sebanyak 0,5 mL untuk tiap dosisnya Perlakuan pada Hewan uji Hewan  uji  merupakan  mencit  galur BaLB/C yang berumur  4  –  7  minggu,  jantan,  aktif  dan  berat  badan antara  20  –  30  gr/ekor.  Sebelum  perlakuan  dilakukan aklimatisasi  selama  7  hari.  Pemberian  ekstrak  Meniran Merah  sesuai  dosis  selama  10  hari.  Dosis  perlakuan Meniran Merah adalah 3x0,065 mg/hari, 3x0,130mg/hari dan  3x0,260mg/hari.  Mencit  diberi  ekstrak  meniran mulai hari 1 sampai hari ke 10. Pada hari ke-4, mencit diinfeksi bakteri Salmonella typhi . Mencit diinfeksi Bakteri Sallmonella  thypi secara intraperitoneal .  Jumlah  bakteri
5 yang  diinfeksikan  ke  mencit  adalah  10 CFU  yang  ada dalam  medium  garam  fisiologi  dan  Inokula  bakteri  strain Salmonella thypi didapatkan dari laboratorium PAU Pangan dan Gizi UGM. Pada hari ke-11, mencit dikorbankan. Kelenjar limpa diambil dan   diletakkan dalam cawan petri diameter 50 mm yang berisi 5 mL RPMI.

## Isolasi dan Penghitungan Sel Limfosit
Limfosit  diisolasi  dari  organ  limpa  dengan  medium RPMI. Media RPMI dipompakan ke dalam organ sehingga limfosit ikut keluar bersama media. Suspensi sel dimasukkan dalam  tabung  sentrifus  10  mL  dan  disentrifus  selama  10
0 menit dengan kecepatan 1500 rpm dengan suhu 5 C. Pelet yang didapat, disuspensikan ke dalam 2 mL Tris Buffered Ammonium  Chloride untuk  proses  pelisisan  eritrosit.  Sel dicampur hingga homogen dan didiamkan pada suhu ruang selama  2  menit.  FBS  sebanyak  1  mL  ditambahkan  pada dasar  tabung.  Kemudian  suspensi  sel  dicampur  dan disentrifus  pada  1200  rpm  5°C  selama  5  menit  dan supernatan  dibuang.  Pelet  dicuci  2  kali  dengan  RPMI dan  dilakukan  proses  seperti  awal  hingga  didapatkan beningan  dan  sel  limfosit  disuspensikan  pada  medium komplit. Limfosit dihitung jumlahnya dengan hemositometer dengan  pewarnaan  biru  tripan.  Sel  yang  hidup  berwarna bening  dan  sel  yang  mati  berwarna  biru  tua.  Sel  limfosit yang dihitung merupakan sel hidup.
Analisis Senyawa dengan Kromatografi Lapis Tipis. Ekstrak  meniran  merah  dan  hijau    ditotolkan  pada lempeng  KLT  dengan  fase  diam  berupa  gel  GF   dan 254 dielusi  dengan  menggunakan  fase  gerak.  Fase  gerak yang  dipakai  adalah    CHCl   :  Ethyl  asetat  (6:4)  untuk 3 mengelusi  senyawa  Flavonoid,  Toluen:  Ethyl  asetat: diethylamina  (7:2:1)  untuk    mengelusi  senyawa  Alkaloid, n-heksan  dan  etilasetat  (3:7)    untuk    mengelusi  senyawa Tanin,  CHCl :  Metanol:  air  (6:3:1)  untuk  mengelusi 3 senyawa  saponin  dan  Ethylasetat:  Metanol:  Air  (10:  1,5:1) untuk  mengelusi senyawa fenol dalam bejana pengembang. Setelah  ekstrak  meniran  ditotolkan  pada  lempeng  silic gel  KLT,  kemudian  ditandai  dengan  pensil  untuk  titik startnya.  Setelah  itu,  lempeng  dimasukkan  ke  bejana pengembang  yang  berisi  fase  gerak  dan  ditunggu  sampai
Ifandari, Suranto,dan Y. Nining Sri Wuryaningsih
fase  gerak  mencapai  sisi  atas  lempeng.  Waktu  yang dibutuhkan sekitar 20 – 30 menit. Lempeng KLT kemudian diangkat  dari  bejana  pengembang  dan  dilakukan penyemprotan dalam lemari asam.
Senyawa  penyemprot  untuk  mendeteksi  senyawa Flavonoid adalah uap ammonia, senyawa Alkaloid adalah Dragendrof, Saponin adalah Anisaldehid, Tanin dan Fenol dengan  FeCl .  Setelah  disemprot,  lempeng  dikeringkan 3 dan  dilihat  pada  lampu  UV  dan  visible,  setelah  itu didokumentasikan.  Hasil  yang  diperoleh  merupakan spot dengan warna tertentu, setelah itu diukur jarak dan dihitung nilai Rf-nya.

## Analisis Data
Data  yang  berupa  jumlah  limfosit  dianalisis  secara statistik  dengan  bantuan  program  SPSS  versi  17.  Uji statistic  yang  digunakan  adalah  Independent  T  Test untuk  membandingkan  antar  semua  perlakuan  ekstrak dengan control negative dan control positif. Data kelompok jenis  meniran  merah  dilakukan  uji  anava  kemudian dilakukan uji lanjutan dengan DMRT.
Hasil uji senyawa kimia dengan KLT didapatkan spot dengan warna standar tertentu dan nilai Rf ( retardation faktor ) pada kromatogram . Nilai Rf dirumuskan :
Rf  =  Jarak gerakan zat terlarut Jarak gerakan pelarut

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  penenitian  menunjukkan  banyaknya  jumlah limfosit yang didapatkan pada organ limpa. Respon jumlah limfosit  yang dihasilkan  pada  perlakuan  ekstrak meniran merah  menunjukkan  hasil  positif  (Tabel  1).  Jumlah limfosit  pada  perlakuan  meniran  merah  dengan  dosis 3x0,130  mg/hari  dan  3x0,260  mg/hari  menunjukkan perbedaan yang nyata dibandingkan pada control positif atau keadaan sakit. Jumlah ini diatas dari jumlah limfosit pada control pasitif dan control negative.
Tabel 1 . Jumlah sel Limfosit mencit hasil isolasi organ Limpa
No Pemberian Rerata Sel Hasil Isolasi organ Limpa dalam 1mL 1 kontrol negatif (Kondisi sehat) 7,535,000 + 4.273.532 2 kontrol positif (kondisi sakit) 6,530,000 + 5.115.825 3 M.M dosis 3X0,065mg/hari 3,000,000 + 1.255.985 4 M.M dosis 3X0,130mg/hari 11,430,000 a + 4.253.080 5 M.M dosis 3X0,260mg/hari 12,080,000 a + 9.245.904
Keterangan: a        : Berbeda secara signifikan dengan control positif  dan nilainya diatas perlakuan kontrol positif M.M : Meniran Merah
Hasil  analisa  menunjukkan  adanya  variasi  dosis mengakibatkan  perbedaaan  secara  nyata.  Perbedaan terdapat  pada  dosis  3x0,065  mg/hari  yang  menimbulkan jumlah limfosit di bawah control positif atau juga negative. Sedangkan pada dosis 3x0,130 mg/hari dan 3x0,260 mg/hari tidak  menimbulkan  perbedaan  secara  nyata.  Jumlah limfosit  yang  meningkat  akibat  perlakuan  meniran  merah menunjukkan  adanya  peningkatan  system  imunitas  tubuh. System  imunitas  tubuh  akan  meningkat  dengan  baik pada dosis minimal 3x0,130 mg/hari. Adanya penambahan dosis  menjadi  3x0,260  mg/hari  tidak  menimbulkan  hasil yang  signifikan  bedanya  dengan  dosis  di  bawahnya  yaitu 3x0,130  mg/hari.  Oleh  karena  itu  dosis  yang  dianggap lebih  efektif  pada  3x0,130  mg/hari.  Pada  dosis  ini  akan meningkatkan system imunitas tubuh dalam waktu 6 hari setelah  proses  infeksi.  Limpa  sebagai  organ  limfoid sekunder  berfungsi  sebagai  tempat  pertemuan  limfosit dengan antigen (Velden et al. 2005).   Adanya peningkatan jumlah  limfosit  dalam  limpa  menunjukkan  adanya  proses perlawanan  yang  baik  terhadap  antigen.  Adanya  kenaikan jumlah limfosit pada perlakuan meniran merah menunjukkan respon  yang  sama  dengan  efek  yang  ditimbulkan  oleh ekstrak  meniran  hijau  yang  dilakukan  oleh  lestarini  (2008). Jumlah  limfosit  menjadi  indicator  dari  respon  imunitas tubuh.  Limfosit  yang  beredar  dalam  darah  mengalami kenaikan  jika  system  imunnya  meningkat  dibandingkan dengan  keadaan  sakit  (Lestarini,  2008).  Adanya  respon ini  ditimbulkan  oleh  kandungan  senyawa  kimia  yang  ada dalam ekstrak meniran meniran merah.
Senyawa Aktif dalam Ekstrak Meniran Hijau dan Merah Ekstrak meniran merah yang digunakan dalam penelitian ini didapatkan dengan metode Sohxletasi dengan pelarut etanol 70%. Metode ini telah dipakai sebelumnya dalam penelitian Efek Meniran Hijau pada Prosentase Neutrofil, Koloni Bakteri Limpa, dan Histopatologi Hepar Mencit Balb/C yang diinfeksi Salmonella  typhimurium (Sunarno,2007).  Untuk  mengetahui kandungan  senyawa  bioaktif  dalam  ekstrak  dilakukan  uji Kromatografi lapis tipis ( Thin layer Chromatography ). Dengan metode uji ini, akan didapatkan data kelompok senyawa aktif yang  terdapat  dalam  ekstrak  merah.  Dalam  penelitian  ini digunakan  ekstrak  meniran  hijau  sebagai  pembanding.  Dari hasil  penelitian  didapatkan    kelompok  senyawa  flavanoid, saponin dan penol (Tabel 2 dan Gambar 1).
Tabel 2. Hasil Uji Kromatografi Lapis Tipis Ekstrak Meniran Hijau dan Merah.
Senyawa aktif Hasil Uji  KLT dari ekstrak Keterangan Meniran Hijau Meniran merah Senyawa Flavonoid (+) Warna kuning (+) Warna kuning (+) bila Kuning - orange Senyawa Alkaloid (-) Warna kuning kehijauan (-) Warna kuning kehijauan (+) bila  berwarna coklat Senyawa Saponin (+) Warna ungu k ecoklatan (+) Warna ungu (+) bila Ungu Senyawa Tanin (-) Warna coklat (-) Warna coklat (+) bila Hitam kehijauan Senyawa Phenol (+) Warna coklat (+) Warna coklat (+)
bila Coklat
P M H S M H Fl M         H T M         H A M H
Gambar 1 . Pemisahan senyawa aktif pada lempeng silica gel metode Kromatografi lapis Tipis (KLT). Keterangan : A  : Plat dengan fase gerak CHCl :Ethyl asetat
3
B  : Plat dengan fase gerak Toluen:Ethyl asetat:dietil amina C  : Plat dengan fase gerak CHCl :Metanol:Air
3 D  : Plat dengan fase gerak n-Heksan:Ethyl asetat E  : Plat dengan fase gerak Ethyl asetat: Metanol: Air M : Ekstrak meniran merah (P. urinaria ) H  : Ekstrak meniran hijau (P. niruri )
P  : lempeng untuk mendeteksi senyawa Phenol. S  : lempeng untuk mendeteksi senyawa Saponin Fl : lempeng untuk mendeteksi senyawa Flavonoid T  : lempeng untuk mendeteksi senyawa Tanin Al : lempeng untuk mendeteksi senyawa Alkaloid
Nilai Rf yang terbentuk untuk masing – masing kelompok hanyak didapatkan 1 spot saja sehingga tidak dapat diketahui macam  –  macam  jenis    senyawa  yang  ada  dalam  setiap kelompok  (Tabel  3.)  hasil  yang  terbentuk  antara  meniran merah dan hijau tidak jauh berbeda. Jarak  Rf dari meniran hijau dan merah terdapat perbedaan yang nilainya kecil.
Tabel 3 . Nilai Rf yang ada pada senyawa aktif pada  Meniran Hijau dan Merah.
Senyawa Aktif yang terdapat dalam ekstrak Nilai Rf Meniran Hijau Meniran Merah Phenol 0,23 0,21 Saponin 0,88 0,85 Flavonoid 0,49 0,50 Keterangan: Rf : Retendantion factor
Hasil  uji  Kromatografi  Lapis  Tipis  menunjukkan  adanya kandungan  senyawa  dari  kelompok Flavonoid,  Phenol dan Saponin baik  dari  ekstrak  meniran  Hijau  maupun  Merah. Hasil  ini  berbeda  dengan  penelitian  yang  dilakukan  oleh Bagalkotkar et  al .  2006  yang  menyebutkan  kandungan senyawa  aktif  pada  Meniran  Hijau  ada  dari  Kelompok Lignan,  Terpen,  Flavanoid,  Lipid,  Benzoid,  Alkaloid,  Steroid, Alcanes dan senyawa lain seperti Vitamin C, Tannin, Saponin . Perbedaan  ini  dimungkinkan  dari  perbedaan  metode pengekstrakan  Meniran.  Metode  ekstraksi  secara  Sohxletasi menggunakan  pelarut  yang  dipanaskan  dan  umum digunakan  untuk  ekstraksi  tumbuhan  dengan  tekstur  keras, akan  tetapi  dari  hasil  uji  KLT  ini  menunjukkan  adanya ketidakhadiran  senyawa  tertentu  seperti  Tanin  dan  Alkaloid dalam  ekstrak.  Ketidak  hadiran  senyawa  ini  dimungkinkan adannya kerusakan dalam proses ekstraksi dengan pemanasan. Senyawa  lain  yang  mudah  teroksidasipun  rusak  dengan metode  ini.  Oleh  karena  itu,  metode  Sohxletasi  sebaiknya tidak  digunakan  untuk  pengekstrakan  tumbuhan  khususnya Meniran Hijau dan Merah.
Jenis senyawa aktif yang telah diteliti   yang berperan sebagai immunostimulator terutama proliferasi limfosit adalah  Flavonoid  (Sharififar  et  al,2009).  Senyawa  ini terdapat dalam meniran hijau dan merah akan tetapi kadarnya  belum  diteliti  lebih  lanjut.  Selain  Flavanoid masih terdapat senyawa saponin dan Fenol. Senyawa
Ifandari, Suranto,dan Y. Nining Sri Wuryaningsih
fenol  termasuk  kelompok  besar  yang  berperan  sebagai anti  radikal  bebas.  Senyawa  ini  kemungkinan  ikut  berparan dalam  peningkatan  system  imun  (Vaghasiya  et  al,  2011). Sedangkan  senyawa  saponin  belum  diketahui  secara  pasti fungsinya  dalam  peningkatan  system  imunitas.  Senyawa ini  cenderung    Selain  flavonoid  dimungkinkan  terdapat senyawa aktif lain yang berperan pula dalam meningkatkan sistem imunitas seluler. Fungsi dari senyawa lainya perlu dikaji lebih lanjut apakah berkaitan dengan fungsi immunostimulator atau tidak.

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian dapat diambil kesimpulan perlakuan   ekstrak meniran merah dengan dosis minimal 3x0,130 mg/hari dapat meningktkan jumlah limfosit limpa mencit yang diinfeksi dengan Salmonella thypi.

## DAFTAR PUSTAKA
Bagalkotkar  G, Sagineedu SR, Saad MS, Stanslas . 2006. Phytochemicals from Phyllanthus niruri  Linn. and  their pharmacological properties: a review. J J Pharm Pharmacol 58 (12) :1559-70. Bellanti J.A. 1993. Imunologi III . Terjemahan. Gadjah Mada University Press; Jogjakarta.
Chularojmontri L. Suvara K W. Angkara H. Suphan C. Somchit N and Supatra S. 2005. Antioxidative and Cardioprotective effects of Phyllanthus urinaria L on Doxorubicin-Induced Cardiotoxicity.
Biol.Pharm.Bull 28(7) 1165 – 1171.
Hidayat T. Diah K. Kusdianti. Dian D.Y. Astry A.M. Dina M. 2008. Analisis Filogenetik Molekuler pada Phyllanthus niruri L menggunakan Urutan Basa DNA Daerah ITS. Jurnal Matematika dan disdains :  Vol 13 (1). Lans C A. 2006.Ethnomedicines used in Trinidad and Tobago for urinary problems and diabetes mellitus. J of Ethnobiology and Ethnomedicines .2;45
Lestarini I.A, 2008. Pengaruh pemberian Phyllanthus niruri L terhadap respon  imunitas  seluler  mencit  balb/c  yang  diinfeksi  dengan salmonella typhimurium . Tesis . program Pascasarjana Universitas Diponegoro: Semarang Ma'at,S. 1997. Phyllanthus niruri L sebagai imunostimulator pada mencit. Disertasi . Program Pascasarjana Univ. Airlangga Qonit,  I.N.  2010. Kajian  Struktur  Tanaman  Meniran  Hijau (Phyllanthus niruri L) dan Meniran Merah (Phyllanthus urinariaLinn . ) http://digilib. upi.edu/pasca/available/etd-0724106-114018/
Sharififar F, Shirin P and Moslem A. 2009. Immune modulatory activity of Aqueous extract of Achillea wilhelmsii C. Kock. In Mice. Indian Journal of Experimental Biology Vol 47. 668 – 670. Sunarno,2007.  Efek Phyllanthus  niruri L  Pada  Prosentase  Neutrofil, Koloni Bakteri Limpa, Dan Histopatologi Hepar Mencit Balb/C Yang Diinfeksi Salmonella  typhimurium . Tesis .  Program  Pascasarjana Universitas Diponegoro. . http://eprints.undip.ac.id/ Velden, A. W.M. Michael K.C. And Michael N. Stambach. 2005. Salmonella inhibit T cell proliferation by a direct, contact -dependent immunosuppressive effect. PNAS vol. 102 (49) 17769-17774. www.pnas.org Widoyono. 2008. Epidemi, Penularan, Pencegahan dan Pemberantasannya . Pernerbit Erlangga: Jakarta. Yang C.M, Cheng H.Y, Lin T.C, Chiang L.C, Lin C.C. 2007. The  in  vitro activity  of  geraniin  and  1,3,4,6-tetra-O-galloyl-beta-D-glucose isolated  from Phyllanthus urinaria against herpes simplex virus type 1 and type 2 infection. J Ethnopharmacol .Vol. 110(3):555 -558
Vaghasiya Y. R Dave and S. Candra. 2011.Phytochemical Analysis of some Medicinal Plants from WesternRegion of India. Res. J.Med. Plant . Vol 5(5).
EFEK PERLAKUAN EKSTRAK MENIRAN MERAH (Phyllanthus urinaria) TERHADAP JUMLAH LIMFOSIT PADA ORGAN LIMPA MENCIT BALB/C YANG DIINFEKSI BAKTERI Salmonella thypi