## APLIKASI Bradyrhizobium japonicum DAN Aeromonas salmonicida PADA PENANAMAN KEDELAI DI TANAH ASAM DALAM PERCOBAAN RUMAH KACA
1 Sonya Tobing, 2 Nisa Rachmania Mubarik dan 3 Triadiati 1,2,3 Departemen Biologi FMIPA Institut Pertanian Bogor Email: nrachmania@ipb.ac.id

## ABSTRAK
Kedelai  (Glycine  max)  merupakan  salah  satu  tanaman  pangan  yang  dibudidayakan.  Kebutuhan  kedelai yang  selalu  meningkat  setiap  tahun  mendorong  usaha  peningkatan  terhadap  produksi  kedelai.  Upaya peningkatan produksi dapat dilakukan dengan menggunakan pupuk hayati dan memanfaatkan lahan yang kurang  produktif  di  Indonesia.  Pupuk  hayati  yang  digunakan  mengandung  isolat Bradyrhizobium japonicum sebagai  penambat  nitrogen  dan Aeromonas  salmonicida sebagai  pelarut  fosfat.  Isolat  yang terdapat  dalam  pupuk  hayati  diharapkan  dapat  membantu  pertumbuhan  kedelai  di  tanah  asam  dengan menyediakan  unsur  nitrogen  dan  fosfat.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh  pemberian pupuk  hayati  yang  terdiri  atas B.  japonicum (BJ  11  wt)  dan A.  salmonicida pada  penanaman kedelai  di tanah asam. Tanaman percobaan dibuat dalam empat kelompok, yaitu dengan inokulasi Isolat BJ 11 (wt), PP, BJ 11 ditambah dengan PP, dan tanpa inokulasi (kontrol). Hasil penelitian menunjukkan bahwa aplikasi B. japonicum dan A. salmonicida cenderung dapat meningkatkan laju pertumbuhan tanaman, jumlah daun, dan bobot kering akar.
Kata Kunci: Bradyrhizobium japonicum, Aeromonas salmonicid, Tanah Masam dan Kedelai

## ABSTRACT
Soybean (Glycine max) is one of cultivated food crops. Since the need of soybean is always increased every year,  it  needs some efforts  to  improve  soybean  production.  One  of  the  steps can  be  done  is  by  using biofertilizer  in  a  less  productive  land  such  as  acid  soil.  Biofertilizer  that  used  in  this  study  consist  of Bradyrhizobium  japonicum as  nitrogen  fixation  and Aeromonas  salmonicida as  phosphate  solubilizer bacteria (PP). Isolates contained in the biological fertilizer is expected to help the growth of soybean in acid soils by providing elements of nitrogen and phosphate. The aim of this research was to know the effect of using biofertilizer consisted of B. japonicum (BJ 11 wt) and A. salmonicida (PP) to soybean growth in acid soils. The experiment was arranged with four group treatments that were inoculation with BJ 11 (wt), PP, BJ 11 plus PP, and without inoculation (as control). The results showed that the application of B. japonicum and A. salmonicida as inoculant mixture tend to increase plant growth, leaf number, and dry root weight.
Keywords: Bradyrhizobium japonicum, Aeromonas salmonicid, Acid Soil and Soybean

## PENDAHULUAN
emerintah  saat  ini  berusaha  untuk mewujudkan  swasembada  kedelai    baik melalui  perluasan  areal  tanam  dan peningkatan produktivitas. Pemupukan ialah salah satu  cara  untuk  meningkatkan  produktivitas kedelai. Pemupukan kedelai membutuhkan nitrogen,  fosfat  dan kalium,  yang  selama  ini dipenuhi  dengan  menggunakan  pupuk  urea  dan TSP  [1].  Pupuk  Urea  dan  TSP  merupakan  jenis pupuk  kimia  yang  dapat  menyisakan  residu  pada tanaman dan  berbahaya bagi lingkungan sehingga penggunaan  pupuk  kimia  saat  ini  mulai  diganti dengan  menggunakan pupuk hayati. Pupuk hayati adalah  pupuk  yang  mengandung  inokulan  dengan
bahan aktif mikroorganisme hidup yang berfungsi untuk  memperbaiki  unsur  hara    dan  memfasilitasi ketersediaan hara tanah untuk tanaman [2]. Pupuk hayati yang digunakan pada penelitian  ini  mengandung  2  jenis  bakteri  yaitu
Bradyrhizobium  japonicum sebagai  penambat introgen  dan Aeromonas  salmonicida sebagai bakteri  pelarut  fosfat  (PP). Bradyrhizobium japonicum adalah  salah  satu  jenis  bakteri  bintil akar  (BBA)  yang  berperan  penting  dalam meningkatkan  produktivitas  tanaman  kedelai secara  simbiosis.  Bintil  akar  merupakan  proses kompleks yang  membutuhkan koordinasi ekspresi kedua  gen  bakteri  dan  tanaman.  Flavonoid  dalam
eksudat  akar  tanaman  menginduksi  ekspresi  dari gen bintil di Bradyrhizobium [3].  Di  dalam  bintil,
BBA mengubah nitrogen menjadi amonia sebagai suplai  nitrogen  bagi  pertumbuhan  tanaman  [4]. Bradyrhizobium  japonicum juga  menghasilkan lendir  dari  karbohidrat  permukaan  sel  yang sebagian  besar  berupa  polisakarida  ekstraseluler (EPS)  dan  berfungsi  sebagai  toleransi  terhadap asam [5]. Isolat  lain  yang  digunakan  sebagai  pupuk hayati  adalah Aeromonas  salmonicida yang digunakan  dengan  tujuan  sebagai  bakteri  pelarut fosfat.  Pada  tanah  asam,  tingkat  Al  maupun  Fe sangat  tinggi  sehingga  P  terikat  dengan  Al maupun  Fe  [6]  sehingga  membentuk  AlH 2 PO 4 maupun  FeH 2 PO 4 [7].  Peningkatan  ketersediaan fosfat  bagi  tanaman  disebabkan  oleh  adanya bakteri  pelarut  fosfat  yang  mereduksi  pH  substrat dan mensekresikan asam organik yang kemungkinan  membentuk  khelat  dengan  kation- kation  pengikat  P  sehingga  tersedia  P  yang  dapat diserap  tanaman.  Namun  hingga  saat  ini  belum dapat  dijelaskan  hubungan  antara  penurunan  pH medium  dengan  sekresi  asam  organik  sebagai mekanisme pelarutan P [8].
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengamati pengaruh pemberian pupuk hayati yang terdiri atas Bradyrhizobium japonicum dan Aeromonas salmonicida terhadap pertumbuhan kedelai
varietas  Tanggamus  pada  tanah  asam  di  rumah kaca.

## METODE PENELITIAN
Bahan Isolat B.  japonicum BJ  11  (wt, wild-type) adalah  galur  tipe  liar    toleran  asam  dan A. salmonicida merupakan  koleksi  laboratorium Mikrobiologi,  Departemen  Biologi,  FMIPA,  IPB. Benih kedelai varietas Tanggamus yang digunakan diperoleh  dari  Balai  Penelitian  Biologi  dan
Genetika  Molekuler  (Balitbiogen),  Cimanggu, Bogor.  Tanah  asam  diambil  dari  Jasinga,  Bogor dengan  pH  4,7.  Gambut  sebagai  bahan  pembawa diperoleh  dari  Balai  Penelitian  Bioteknologi Perkebunan Indonesia.

## Rancangan Percobaan
Percobaan  disusun  dalam  Rancangan  Acak lengkap  dengan  4  perlakuan,  yaitu:  1)  tanaman dengan inokulasi Isolat BJ 11; 2) tanaman dengan inokulasi  PP;  3)  tanaman  dengan  inokulasi  kedua
isolat  BJ  11  (wt)  dan  PP,  dan  4)  tanaman  tanpa inokulasi  kedua  isolat.  Setiap  perlakuan  dibuat dalam  3  ulangan  sehingga  terdapat  12  unit percobaan.  Data  dianalisis  secara  statistik  dengan analisis  sidik  ragam  dan  uji  lanjutan  Duncan Multiple Range Test (DMRT) pada p<0,05 %.

## Peremajaan Isolat dan Penyiapan Inokulan
Isolat B.  japonicum ditumbuhkan  pada media yeast  mannitol  agar (YMA)  yang  terdiri atas  manitol  10  g/L,  K 2 HPO 4 0,5  g/L,  MgSO 4 7H 2 O  0,2  g/L,  NaCl  0,2  g/L,  ekstrak  khamir  0,5 g/L  yang  ditambahkan  merah  kongo  sebanyak 0,00025%  dan  antibiotik  rifampisin  sebanyak  50 µg/ml. Inkubasi dilakukan pada suhu ruang selama 7-8  hari.  Inokulan  dibuat  dengan  memindahkan isolat  hasil  peremajaan  ke yeast mannitol  broth (YMB)  dan  diinkubasi  selama  5  hari  pada inkubator  bergoyang  dengan  kecepatan  125  rpm. Isolat A.  salmonicida.  ditumbuhkan  pada  media Pikovskaya  agar  yang  terdiri  atas  glukosa  10g/L,
Ca 3 (PO 4 ) 2 5 g/L, (NH 4 ) 2 SO 4 0,5 g/L, KCl 0,2 g/L, MgSO 4 . 7H 2 0 0,1  g/L,  FeSO 4 25  mg/L,  ekstrak khamir  0,5  g/L,  MnSO 4 25  mg/L.  Inkubasi dilakukan  pada  suhu  ruang  selama  24  jam. Inokulan  dibuat  dengan  memindahkan  isolat  hasil peremajaan  ke  kaldu  Pikovskaya  dan  diinkubasi selama  24  jam  pada  inkubator  bergoyang  dengan kecepatan 125 rpm.

## Pembuatan Inokulan
Sebanyak  100  g  gambut  sebagai  bahan pembawa  inokulan  disterilkan  dua  kali  masing- masing  selama  1  jam  pada  suhu  121 0 C  dengan tekanan  1  atm  dengan  selang  waktu  1  malam.
Gambut  tersebut  ditambahkan  dengan  3%  (b/b) gum  arab, 5%  (b/b)  CaCO 3 dan  10%  (b/b)  zeolit. Gambut  disterilisasi  lagi  selama  1  jam  kemudian diinokulasi  dengan  isolat B.  japonicum dan A. salmonicida setelah gambut kembali dingin. Isolat B.  japonicum dan A.  salmonicida dalam  suspensi dengan kepadatan populasi 10 8 sel/ml diinokulasikan ke dalam bahan pembawa sebanyak 10% suspensi (v/b).
Penanaman Tanah asam terlebih dahulu dikeringanginkan,  disaring/diayak  dengan  mata saringan  berukuran  2  mm.  Sebelum  ditanam,  biji kedelai  dibedaki  dengan  gambut  yang  telah masing-masing  diberi  inokulan  sesuai  dengan
perlakuan  sebanyak  0,3  g  gambut  untuk  30  biji kedelai,  dan  ditanam  pada  tanah  asam.  Setiap polibag  berukuran  5  kg  yang  berisi  5  kg  tanah ditanami 5 benih kedelai dan disisakan 3 tanaman yang  tumbuh  baik    pada  14  hari  setelah  tanam
(HST).

## Pengamatan Respon Tanaman
Setiap  10  hari  dilakukan  pengamatan terhadap  tinggi  tanaman,  jumlah  trifoliat  dan jumlah  bunga.  Pemanenan  dilakukan  45  HST,
kemudian  dilakukan  penghitungan  terhadap  bintil akar. Selain itu penghitungan terhadap bobot basah (BB)  tajuk,  bobot  kering  (BK)  tajuk,  bobot  basah (BB) akar dan bobot kering (BK) akar.

## Uji Viabilitas Isolat
Media  tanam  yang  telah  ditanami  kedelai diambil  5  g  dari  tiap  polibag,  diinokulasikan  ke dalam  tabung  reaksi  berisi  9  ml  larutan  garam fisiologis, kemudian dilakukan pengenceran serial. Penghitungan  populasi  sel  dilakukan  dengan metode  cawan  hitung.  Uji  viabilitas  sel  dilakukan pada saat tanaman berumur 30 HST.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Peremajaan Isolat Isolat BJ 11 (wt) mampu ditumbuhkan pada media yeast  mannitol  agar (YMA)  yang ditambahkan merah kongo sebanyak 0,0025% dan antibiotik  rifampisin  sebanyak  50  µg/100  ml setelah diinkubasi selama 7 hari pada suhu ruang.
Ciri  koloni B.  japonicum,  yaitu berlendir,  kurang mampu  menyerap  warna  merah  dari  pewarna merah kongo, dan berelevasi cembung (Gambar 1A). Isolat Aeromonas salmonicida dapat ditumbuhkan  pada  media  Pikovskaya  setelah diinkubasi selama 24 jam pada suhu ruang. Bakteri
A.  salmonicida berbentuk  batang  dan  Gram negatif.  Koloni  berelevasi  cembung  rata-rata kurang  dari  1  mm  dan  membentuk  zona  bening pada media yang mengandung fosfat (Gambar 1B).

## Pengamatan Respon Pertumbuhan Tanaman
Respon  tanaman  akibat  pengaruh  pupuk hayati  diamati melalui  pertambahan  tinggi tanaman.  Tinggi  tanaman  tidak  menunjukkan adanya perbedaan nyata saat 20-40 HST. Tanaman kontrol  cenderung  lebih  tinggi  dari  pada  tanaman yang  lain  saat  20  HST.  Tinggi  tanaman  dengan perlakuan kedua isolat cenderung lebih tinggi dari pada  tanaman  dengan  perlakuan  lain  saat  30-40
HST  (Tabel  1).  Namun  hasil  analisis  statistik menunjukkan  bahwa  tidak  ada  perbedaan  yang nyata  untuk  setiap  perlakuan  (data  tidak ditampilkan).
Tanaman  dengan  perlakuan  isolat  PP memiliki  jumlah  bunga  yang cenderung  lebih banyak  dari  pada  tanaman  dengan  perlakuan  lain. Tanaman  dengan  perlakuan  BJ  11  cenderung memiliki  jumlah  bintil  akar  yang  lebih  banyak, namun  hanya  terdapat  3  bintil  yang  efektif.  Bintil efektif juga tidak ditemukan pada tanaman dengan perlakuan  lain.  Jumlah  trifoliat  tanaman  dengan perlakuan campuran kedua isolat, cenderung lebih tinggi daripada tanaman dengan perlakuan lain. Bobot basah dan kering akar dan tajuk, tidak
A B
Gambar 1. a) Koloni B. japonicum BJ 11 berumur 7 hari pada media YMA + merah kongo 0,0025% +  rifampisin  50  µg/ml;  dan b)  Koloni A. salmonicida berumur  24  jam  pada  media Pikovskaya
menunjukkan  perbedaan  yang  nyata.  Bobot  basah dan kering tajuk tanaman dengan perlakuan isolat BJ  11  cenderung  lebih  tinggi  dari  pada  tanaman dengan perlakuan lain. Tanaman dengan perlakuan BJ 11  memiliki bobot basah akar yang cenderung lebih  tinggi  dari  pada  tanaman  dengan  perlakuan lain.  Bobot  kering  akar  yang  cenderung  lebih tinggi  didapatkan  dari  tanaman  dengan  perlakuan BJ 11 + PP (Tabel 2).

## Uji Viabilitas Isolat
Uji  viabiltas  isolat  dilakukan  saat  30  HST dengan  menggunakan  dua  media  tumbuh  yaitu YMA  dan  Pikovskaya.  Bakteri  bintil  akar (Bradyrhizobium)  tumbuh  pada  media  YMA,
sedangkan untuk mendeteksi bakteri pelarut fosfat menggunkan  media  Pikovskaya.  Jumlah  bakteri Bradyrhizobium dan pelarut fosfat yang terdapat di dalam tanah pada tanaman 30 HST masih berkisar 10 5 -10 6 sel/ml (Tabel 3).
Bradyrhizobium    japonicum adalah  bakteri bintil  akar  yang  berupa  bakteri  Gram  negatif berbentuk batang. Koloni B. japonicum berbentuk bundar,  berelevasi  cembung,  berwarna  putih  dan tumbuh  lambat  pada  media  yang  mengandung manitol dengan waktu inkubasi 5-7 hari [9].
Bakteri B.  japonicum bersimbiosis  dengan tanaman  kedelai  dengan  cara    menginfeksi  akar tanaman  kedelai,  lalu  membentuk  struktur  akar khusus  yang  disebut  bintil  akar  atau  nodul.  Pada bintil itu, bakteri berdiferensiasi menjadi bakteroid dan  mengubah  N 2 menjadi  amonia  dengan menggunakan kompleks enzim nitrogenase, proses ini disebut fiksasi nitrogen [4].
Aeromonas  salmonicida membentuk  zona bening  pada  media  pikovskaya  yang  menandakan pelepasan  ion  Ca  yang  mengikat  fosfat.Bakteri pelarut fosfat menghasilkan  dan melepaskan asam organik, yang melalui kelompok karboksilat
Tabel 1. Pengaruh Inokulasi Bakteri terhadap Pertumbuhan Tanaman Kedelai pada 20 - 40 HST
Perlakuan Tinggi Tanaman 20 HST (cm) Tinggi tanaman 30 HST (cm) Tinggi tanaman 40 HST (cm) Jumlah bunga per tanaman Bintil akar per tanaman Jumlah trifoliat per tanaman Kontrol 40,9± 3,3 51,1± 2,9 59± 5,2 6,7± 3,7 1,3± 2,3 2,7± 0,1 PP 38,2± 1,7 46,7± 3,3 57,7± 7,5 8,3± 3,0 0± 0,0 2,6± 0,8 BJ 11 33,3± 1,3 52,9± 9,0 65,3± 19,1 7± 2,6 6± 6,2 2,1± 0,6 BJ 11 + PP 36,1± 8,8 54,5± 16,1 66,3± 11,3 6± 3,4 1± 1,0 3,1± 0,8
Data ± SD merupakan nilai rata-rata dari 3 ulangan
Tabel 2. Pengaruh Inokulasi Bakteri terhadap Bobot Basah dan Kering Tajuk dan Akar Tanaman Kedelai 45 HST Perlakuan Tajuk Akar Bobot Basah Bobot Kering Bobot Basah Bobot Kering Kontrol 1,02± 0.1 0,12± 0.06 0,29± 0.02 0,09± 0.01 PP 1,20± 0.3 0,10± 0.1 0,31± 0.03 0,10± 0.06 BJ 11 (wt) 1,86± 0.7 0,20± 0.2 0,55± 0.07 0,14± 0.03 BJ 11 (wt) + PP 1,04± 0.4 0,15± 0.1 0,33± 0.06 0,29± 0.3 Data ± SD merupakan nilai rata-rata dari 3 ulangan Tabel 3. Perhitungan Jumlah Koloni Bakteri 30 HST dari Tanah Perlakuan Inokulasi awal Media YMA Media Pikovskaya Kontrol * * * Bradyrhizobium 1,5 x 10 10 sel/ml 5,2 x 10 5 sel/ml - Pelarut fosfat 2,47 x 10 10 sel/ml - 1,47 x 10 6 sel/ml Bradyrhizobium + Pelarut fosfat - 8,8 x 10 5 sel/ml 1,57 x 10 6 sel/ml
Keterangan: * tidak diberi perlakuan bakteri; - tidak dijumpai pertumbuhan bakteri
mengkelat  kation (terutama  Ca)  yang  terikat  pada fosfat  mengubahnya  menjadi  bentuk  terlarut  [10]. Spesies  Aeromonas  lain  yang  sering  digunakan sebagai  bakteri  pelarut  fosfat  ialah Aeromonas punctata yang  digabung  dengan  bakteri  lain sebagai  inokulan  campuran  dan  juga  berfungsi sebagai pelarut fosfat [11] dan [12]. Faktor yang berpotensi membatasi pertumbuhan  terkait  dengan  tanah  asam    adalah pH tanah  yang  rendah seringkali  memiliki tingkat Al larut dan Mn yang tinggi, sehingga mengurangi ketersediaan  Ca,  Mg,  P,  dan  Mo  serta  membatasi pengaruhnya  terhadap  pertumbuhan  tanaman  dan kelangsungan  hidup  serta  efektivitas  simbiosis B. japonicum dengan  kedelai  [13].  Oleh  karena  itu, isolat B.  japonicum yang  digunakan  harus  toleran terhadap  asam  dan A.  salmonicida harus  dapat melepaskan  fosfat  yang  pada  umumnya  terikat dengan  Al  pada  tanah  asam.  Ketahanan  isolat B. japonicum terhadap kondisi asam ditandai dengan sekresi  eksopolisakarida  (EPS)  pada  media  yang mengandung manitol [5].
Pengamatan  terhadap  tinggi  tanaman  yang dilakukan  setiap  10  hari,  memperlihatkan  bahwa tanaman yang diinokulasi dengan campuran isolat
B. japonicum dan A. salmonicida cenderung dapat meningkatkan  tinggi  tanaman  pada  30-40  HST.
Hal ini juga terlihat pada jumlah trifoliata tanaman yang  diinokulasi  dengan  campuran  isolat B. japonicum dan A.  salmonicida yang  cenderung lebih  banyak.  Unsur  N  dapat  memperbaiki pertumbuhan  vegetatif  tanaman  dan  unsur  P mempunyai  salah  satu  peran  yang  cukup  penting yaitu  mendukung  pembelahan  sel  [7].  Penelitian Fatima  (2006)  juga  menunjukkan bahwa   aplikasi campuran B.  japonicum dengan  bakteri  pelarut fosfat dapat membantu meningkatkan pertumbuhan kedelai [14]. Fungsi lain dari unsur P adalah  untuk  pembentukan  bunga,  buah  dan  biji. Hal  ini  juga  terlihat  pada  respon  tanaman  yang diberi isolat PP memiliki jumlah bunga cenderung lebih tinggi daripada tanaman lain.
Jumlah bintil akar perlakuan inokulasi BJ 11 cenderung lebih banyak yaitu 6 bintil dan terdapat 3  bintil  efektif.  Namun  jumlah  bintil  yang dihasilkan dari penelitian ini lebih sedikit daripada penelitian  sebelumnya  yaitu  15  bintil  [15]  dan  10 bintil  [16]. Hal  ini  disebabkan  N  tersedia  dalam tanah  dalam  penelitian  ini  rendah  (0,2%)  dan dengan penambahan inokulan BJ 11 masih belum mencukupi kebutuhan N tersedia untuk
mendukung  pembentukan  bintil.  Kebutuhan  N tersedia  dalam  tanah  untuk  kedelai  agar pertumbuhannya optimal adalah sekitar 4,2% [7].
Bintil  akar  efektif  menandakan  adanya aktifitas nitrogenase pada bintil akar kedelai. Bintil efektif ditandai dengan adanya warna merah muda di  dalam  bintil  yang  dinamakan  leghaemoglobin. Leghaemoglobin  berfungsi  sebagai  pembawa elektron,  memasok  oksigen  ke  bakteroid  untuk produksi  ATP,  tetapi  pada  saat  yang  sama melindungi  sistem  nitrogenase  yang  sensitif terhadap oksigen [4]. Bintil akar menambat N 2 dari udara  dan    mengubahnya  menjadi  amonia  yang dapat  digunakan  oleh  tanaman.    Sekitar  75,3% hasil  penambatan  nitrogen  didistribusikan  ke bagian  tajuk  tanaman  [17].  Hal  tersebut  terlihat dari bobot kering tajuk tanaman dengan perlakuan BJ 11 yang cenderung lebih tinggi daripada tanaman  lain.
Bobot  kering  akar  yang  cenderung  lebih tinggi  didapatkan  dari  tanaman  yang  diinokulasi dengan isolat BJ 11 dan PP. Unsur P penting untuk pembentukan akar halus dan rambut akar sehingga hasil perpaduannya dengan BJ dapat meningkatkan pertumbuhan vegetatif tanaman [7]. Campuran  inokulan  Rhizobium  dengan  pelarut fosfat dapat meningkatkan berat kering akar [14].
Fosfat  berasal  dari  pelapukan  batuan  akibat erosi,  sehingga  menjadi  muncul  di  permukaan tanah.  Fosfat  di  dalam  tanah  berbentuk  P-organik dan  P-anorganik.  Tanaman  menyerap  P  dalam bentuk  anorganik,  oleh  karena  itu  P-organik diubah  mikrob  menjadi  P-anorganik  melalui aktivitas  mikrob  dalam  dekomposisi  bahan organik.
Dekomposisi  bahan  organik  oleh  mikrob melepaskan  P  selama  proses,  hal  ini  disebut dengan mineralisasi. Tingkat mineralisasi dipengaruhi  oleh  nisbah  C/P  bahan  organik  yang mengalami  dekomposisi  dan  jumlah  P  tersedia dalam  tanah.  Mineralisasi  terjadi  pada  nisbah  C/P <  200:1  sedangkan  pada  nisbah  C/P  >  300:1,  P digunakan kembali oleh mikroba untuk
pembentukan  biomassanya,  hal  ini  disebut imobilisasi [18].
Tanaman  yang  diberi  perlakuan  dengan isolat  PP  tidak  menghasilkan  bintil  akar.  Pada tanaman  dengan  perlakuan  PP  tidak  ditemukan adanya  bintil  akar.  Hal  ini  tidak  sesuai  dengan penelitan Cassman et al. (1980) yang menunjukkan bahwa aplikasi fosfat dapat
meningkatkan jumlah bintil [19]. Nisbah C/P yang terdapat  pada  media  tanah  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  835:  1,  maka  fosfat diimobilisasi  oleh  bakteri  dan  menjadi  tidak tersedia  bagi  tanaman.  Sehingga  inokulasi  isolat PP pada tanaman cenderung kurang berperan dalam pembentukan bintil akar. Bahan  pembawa  inokulan  yang  digunakan digunakan  adalah  gambut,  ini  merupakan  bahan pembawa  yang  umum  digunakan  [2].  Gambut mengandung  inokulan  yang  dilumurkan  pada  biji kedelai  ternyata  tidak  mampu  meningkatkan jumlah isolat. Uji viabilitas isolat dilakukan saat 30
HST dengan cara pengenceran serial media tanam disekitar perakaran.
Hasil uji menunjukkan penurunan jumlah sel
dari  10 10 sel/ml  menjadi  10 5 dan  10 6 sel/ml. Penurunan  jumlah  bakteri  juga  dialami  oleh penelitian  lain  dimana  jumlah  bakteri  dari  10 8 sel/ml  turun  menjadi  10 6 sel/ml  [15].  Hal  ini diduga  karena  sebagian  bakteri  masuk  ke  dalam akar kedelai dan membentuk bakteroid. Kemungkinan  lain  adalah  bakteri  kurang  dapat berkembangbiak  dengan  baik  di  dalam  tanah
karena  tanah  yang  digunakan  miskin  hara,  di samping  itu  media  tanam  disterilisasi  sebelum digunakan serta tidak diberi pupuk tambahan.
Tanah yang ditambah dengan pupuk kompos akan  dapat  meningkatkan  populasi  isolat  bakteri karena  kompos  adalah  hasil  dekomposisi  bahan organik  yang  mengandung  C dan  N  organik sehingga  dapat  digunakan  oleh  mikrob  sebagai sumber  nutrisi.    Penambahan  kompos  ke  dalam tanah dapat memperbaiki keadaan areasi, drainase, absorbsi  panas,  kemampuan  daya  serap  tanah terhadap  air  serta  berguna  untuk  mengendalikan erosi  tanah [20],  sehingga  tersedia  lingkungan hidup yang baik bagi mikrob.

## KESIMPULAN
Aplikasi Bradyrhizobium  japonicum BJ  11 dan Aeromonas  salmonicida PP  sebagai  inokulan campuran  cenderung  dapat  meningkatkan  laju pertumbuhan tanaman kedelai varietas Tanggamus,  trifoliata,  dan  bobot  kering  akar. Namun    kurang  berpengaruh  pada  peningkatan jumlah  bunga,  bintil  akar  dan  bobot    kering  tajuk sampai 45 hari setelah tanam.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] Lingga,  P.  & Marsono.  2008. Petunjuk Penggunaan  Pupuk.  Jakarta:  Penebar Swadaya. [2] Simanungkalit,  R.D.M.,  Suriadikarta, D.A., Saraswati,  R.,  Setyorini,  &  Hartatik, W. 2006. Pupuk  Organik  dan Pupuk Hayati. Bogor: Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Sumberdaya Lahan Pertanian. [3] Smith,  G.B.  &  Wollum,  A.G.  1989. Nodulation  of Glycine  max by  Six Bradyrhizobium  japonicum strains  with different competitive abilities. Appl Environ Microbiol., 5, 1957-1962. [4] Atlas,  R.M.  &  Bartha,  R.  1981. Microbial Ecology, Fundamentals and Application. Menlo Park: Addison Wesley Longman, Inc. [5] Lounch, H.A. & Miller, K.J. 2001. Synthesis of  a  low-molecular-weight  form of exopolysaccharide by Bradyrhizobium japonicum USDA  110. Appl Environ Microbiol., 67, 1011- 1014. [6] Sanchez,  P.A.  1992. Sifat  dan  Pengelolaan Tanah Tropika. Jayadinata JT, penerjemah; Purbo S, Hadiwijoyo, editor. Bandung: Penerbit ITB. Terjemahan dari: Properties and Management of Soils in The Tropics. [7] Hardjowigeno, S. 2003. Ilmu Tanah. Jakarta: Akamedika Pressindo. [8] Rao, N.S. 1994. Mikroorganisme Tanah dan Pertumbuhan Tanaman. Jakarta: UI Press. [9] Holt,  J.G.,  Krieg,  N.R.,  Sheath,  P.H.A., Staley,  J.T.,    &  Williams,  S.T.  1994. Bergeys’s Manual of Determinative Bacterorology.  Edisi  ke-9.  Baltimore: Williams & Wilkins. [10] Chen, Y.P. et al. 2006. Phosphate solubilizing bacteria from subtropical soil and  their  tricalcium  phosphate solubilizing abilities. Appl Soil Ecology, 34, 33 – 41. [11] Goenadi,  D.H.  &  Santi,  L.P.  2009. Introduction  of  microbial  inoculants  to improve fungsional relationship between above- and  below  ground  bio-diversity.
Menara Perkebunan, 77 (1), 58-67. [12] Widiastuti,  H.  &  Suharyanto.  2007. Growth response of Calopogonium caeruleum and Centrosema pubescens ground cover
Sonya Tobing, dkk.
crops toward inoculation of Bradyrhizobium, Aeromonas punctata, and Acaulospora  tuberculata. Buletin Plasma Nutfah. 13,1. [13] Indrasumunar,  A.,  Dart,  P.J.,  &  Menzies, M.W. 2000. Root colonization  and symbiotic effectiveness of acid tolerant and acid sensitive strains of bradyrhizobia  in  acid soils. J Mikrobiol Indon., 5, 24-28. [14] Fatima,  Z.,  Zia,  M.,  &  Chaudhary,  M.F. 2006.  Effect  of Rhizobium strains  and z phosphorus on growth of soybean (Glycine max) and survival of Rhizobium and P solubilizing bacteria. Pak J Bot., 38, 459-464. [15] Situmorang,  A.R.F., Mubarik,  N.R.,  & Triadiati. 2009. The use of acid- alumunium tolerant Bradyrhizobium japonicum inoculant for soybean grown on acid  soils. Hayati  J  Biosci., 16,  157- 160. [16] Ramasita,  Y.  2010.  Pertumbuhan  dan produksi  kedelai  willis  yang  diinokulasi
dengan Bradyrhizobium  japonicum dan pemberian  pupuk  kimia  di  tanah  asam [skripsi]. Bogor: Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor. [17] Nainggolan,  G.  2004.  Respon  kedelai (Glycine  max (L.)  Merr)  kultivar  Leuser dan Kawi terhadap inokulasi Bradyrhizobium japonicum-iaaMtms RD-69. [skripsi]. Bogor: Fakultas Pertanian, Institut Pertanian Bogor. [18] Handayanto,  E.  &  Hairiah.  K.  2007. Biologi Tanah. Yogyakarta: Pustaka Adipura. [19] Cassman, K.G., Whitney, A.S., & Stockinger, K.R. 1980. Root growth and dry matter  distribution  of  soybean as affected  by  phosphorus  stress, nodulation, and nitrogen source. Crop Sci., 20, 239- 244.
[20] Djuarni,  N.,  Kristian,  &  Setiawan,  B.S.
2005. Cara  Cepat  Membuat  Kompos.
Jakarta: Agromedia Pustaka.