## ARTIKEL RISET
URL artikel: http://jurnal.fkmumi.ac.id/index.php/woh/article/view/woh3108
Isolasi Dan Identifikasi Bakteri Tanah Burkholderia Pseudomalllei Penyebab Melioidosis Di Kota Makassar
K Nur Faidah Munir 1 , Nur Wahyuni Munir 2 1 Jurusan Teknologi Pengolahan Hasil Perikanan, Program Studi Agroindustri, Politeknik Pertanian Negeri Pangkajene Kepulauan
2 Program Studi Ilmu Keperawatan, Fakultas Kesehatan Masyarakat, Universitas Muslim Indonesia Email Penulis Korespondensi ( K ): nurfaidahmunir@gmail.com nurfaidahmunir@gmail.com 1 , nurwahyuni.munir@umi.ac.id 2
(085255668909)

## ABSTRAK
Burkholderia pseudomallei adalah jenis bakteri saprofit, bersifat patogen oportunistik , dan sebagai agen penyebab penyakit melioidosis .  Bakteri  ini  banyak  ditemukan  hidup  di  tanah,  air,  maupun  pada  sawah  pertanian.  Kasus kejadian penyakit melioidosis telah banyak dilaporkan di wilayah negara Asia, namun belum banyak informasi spesifik  mengenai  kejadian penyakit tersebut di Indonesia.  Penelitian bertujuan untuk  mengidentifikasi bakteri tanah Burkholderia pseudomalllei di Kota Makassar. Pengambilan sampel dilakukan secara acak di 11 kecamatan di  Kota  Makassar,  yaitu  Mamajang,  Tamalate,  Rappocini,  Mariso,  Bontoala,  Wajo,  Biringkanaya,  Manggala, Tamalanrea, Tallo, dan Makassar. Analisis data menggunakan metode kualitatif deskriptif dalam bentuk gambar dan  tabel.  Kulturisasi  isolat  menggunakan  medium  selektif Ashdown  Agar .  Identifikasi  bakteri  menggunakan pengecatan gram, dan beberapa uji biokimiawi. Hasil penelitian diperoleh sebanyak 100 isolat sampel, masing- masing 28 isolat sampel positif Burkholderia pseudomalllei dan 72 isolat bakteri jenis lain. Penelitian disimpulkan bahwa  terdapat  persebaran  bakteri Burkholderia  pseudomallei di  Kota  Makassar,  sehingga  disarankan  dapat menjadi acuan untuk penelitian lanjutan tentang penyakit melioidosis.
Kata kunci: Identifikasi; burkholderia pseudomalllei ; melioidosis
Window of Health : Jurnal Kesehatan, Vol. 3 No. 1 (Januari, 2020) : 065-072                    E-ISSN 2614-5375 Terakreditasi Nasional Peringkat 3 No. 36/E/KPT/2019
Article history : Received 28 Desember 2019 Received in revised form 23 Januari 2020 Accepted 24 Januari 2020 Available online 25 Januari 2020
licensed by Creative Commons Attribution-ShareAlike 4.0 International License .
PUBLISHED BY : Public Health Faculty Universitas Muslim Indonesia Address : Jl. Urip Sumoharjo Km. 5 (Kampus II UMI) Makassar, Sulawesi Selatan.
Email : jurnal.woh@gmail.com , jurnalwoh.fkm@umi.ac.id Phone : +62 85255997212
Penerbit : Fakultas Kesehatan Masyarakat Universitas Muslim Indonesia
Window of Health : Jurnal Kesehatan, Vol. 3 No. 1 (Januari, 2020) : 065-072                  E-ISSN 2614-5375

## ABSTRACT
Burkholderia pseudomallei is a type of saprophytic bacteria, is an opportunistic pathogen, and as a causative agent of melioidosis. These bacteria are found living in soil, water, and agricultural fields. Cases of melioidosis have been widely reported in Asian countries, but there is not much specific information regarding the incidence of these diseases in Indonesia. The study aims to identify the soil bacteria Burkholderia pseudomalllei in Makassar City.  Sampling  was  carried  out  randomly  in  11  districts  in  Makassar  City,  namely  Mamajang,  Tamalate, Rappocini, Mariso, Bontoala, Wajo, Biringkanaya, Manggala, Tamalanrea, Tallo, and Makassar. Data analysis uses  descriptive  qualitative  methods  in  the  form  of  figures  and  tables.  Cultivation  of  isolates  using  selective medium Ashdown Agar. Identification of bacteria using gram staining, and several biochemical tests. The results were obtained as many as 100 isolates of samples, each of 28 isolates of Burkholderia pseudomalllei positive samples and 72 isolates of other types of bacteria. The study concluded that there was a spread of the Burkholderia pseudomallei  bacterium  in  Makassar  City,  so  it  was  suggested  to  be  a  reference  for  further  research  on melioidosis.
Keywords: Identification; burkholderia pseudomallei; melioidosis

## PENDAHULUAN
Burkholderia pseudomallei (B. pseudomallei ) adalah bakteri gram negatif yang sangat menular dan  merupakan  patogen  oportunistik. 1 Bakteri  ini  dapat  hidup  di  tanah  dan  air  sehingga  dapat menginfeksi manusia maupun binatang melalui inhalasi, konsumsi, atau inokulasi perkutan . 2,3 Tingkat keparahan penyakit bervariasi dari infeksi kronis menyerupai tuberkulosis, sepsis akut, dan kemerahan. 4 Manajemen klinis dipersulit oleh resistensi antibiotik dan angka kematian tinggi meskipun diagnosis yang tepat disertai pengobatan. 5
Burkholderia  pseudomallei merupakan  agen  penyebab  penyakit  melioidosis  dan  telah  banyak dilaporkan di beberapa negara seperti Amerika, Australia, dan beberapa negara di Asia Tenggara, namun jarang  dilaporkan  di  Indonesia. 6,7 Sebuah  studi  pemodelan  terbaru  memperkirakan  bahwa  sebanyak 20.000 kasus melioidosis pada manusia per tahun di Indonesia, dengan sekitar 10.000 kematian potensial setiap tahunnya. Meski demikian, melioidosis di Indonesia masih belum diketahui. Jaringan melioidosis Indonesia dibentuk selama lokakarya melioidosis pertama pada tahun 2017 dan ditemukan 101 kasus melioidosis (99  manusia  dan  dua  kasus  pada hewan)  yang  sebelumnya  dilaporkan  dan  tambahan  45 kasus melioidosis pada manusia. Adapun sebaran dari 146 kasus yang dikonfirmasi, yaitu ditemukan di Sumatra (n = 15), Jawa (n = 104), Kalimantan (n = 15), Sulawesi (n = 11) dan Nusa Tenggara (n = 1). Secara keseluruhan, 15 (36%) kasus adalah anak-anak (usia < 15 tahun) dan 27 (64%) adalah orang dewasa (usia 15 tahun), dimana kematian keseluruhan adalah 43%. 8
Salah satu studi mengamati pola resistensi B. pseudomallei dari isolat klinis di Dr. Saiful Rumah Sakit Umum Anwar, Malang-Indonesia selama periode 2011 hingga 2013. Isolat dikonfirmasi sebagai B.  pseudomallei menggunakan  VITEK-2.  Uji  sensitivitas  antimikroba  menunjukkan  beberapa  isolat resisten  terhadap ceftazidime dan meropenem .  Resistensi  terhadap  asam amoksisilin-klavulanat , kotrimoksazol dan doksisiklin juga ditemukan dalam tingkat tinggi. 9
Dari  studi  literatur,  ditemukan  hanya  tujuh  laporan  kasus melioidosis di  Indonesia  dan  lima diantaranya sebelum tahun 1960. Pada tahun 2013-2014 ditemukan tiga kasus melioidosis di Makassar,
Window of Health : Jurnal Kesehatan, Vol. 3 No. 1 (Januari, 2020) : 065-072                  E-ISSN 2614-5375
Sulawesi  Selatan,  Indonesia,  dimana  dua  pasien  dinyatakan  meninggal.  Seluruh  pasien  terlambat mendapatkan antimikroba untuk melioidosis karena diagnosis yang kurang tepat sebelumnya. 10
Melioidosis adalah penyakit endemik di seluruh Indonesia dengan mortalitas tinggi, namun studi sebelumnya  belum  ada  yang  melakukan  penelitian  pada  tanah  sebagai  salah  satu  media  penularan melioidosis . Oleh karena itu, tujuan penelitian adalah untuk melakukan isolasi dan identifikasi bakteri Burkholderia pseudomallei di Kota Makassar sebagai salah satu kota besar di Indonesia.

## METODE
Tanah  diambil  pada  60  titik  lokasi  yang  tersebar  pada  11  kecamatan  di  Kota  Makassar (5⁰07’55.39”  LS  dan  119⁰28’19.08”  BT).  Penentuan  lokasi  ini  dilakukan  secara  acak  dengan memperhatikan kondisi lingkungan setempat. Sampel tanah diambil sebanyak l00 gram, masing-masing pada  permukaan  tanah  dan  pada  kedalaman  30  cm.  Selanjutnya  digunakan  untuk  mengisolasi B. pseudomallei sekaligus  mengkarakterisasinya  dengan  menggunakan  beberapa  uji  biokimia.
Karakterisasi pada tanah juga dilakukan dengan menganalisis berbagai faktor lingkungan tanah seperti jenis tanah, warna tanah, pH tanah, kedalaman, dan kelembaban tanah. Keasaman tanah dikategorikan tanah  asam  dan  tanah  basa.  Jenis  tanah  dikategorikan Alfisol,  Aridisol,  Entisol,  Histosol,  Inceptisol,
Mollisol, Oxisol, Spodosol, Ultisol, dan Vertisol . 11
Medium ashdown agar dengan  melarutkan sebanyak 10 gram TSB ( Tryptone Soya Broth ), 15 gram  agar,  40  ml glycerol ,  5  ml  kristal violet ,  5  ml netral  red ke  dalam aquadest 1000  mL,  lalu dipanaskan hingga larut dan disterilisasi dengan autoklaf pada suhu 121º C dengan tekanan 2 atm selama 15 menit. Setelah agak dingin, ditambahkan sebanyak 0.8 ml gentamicin lalu dibiarkan hingga larut. Untuk membuat medium ashdown broth , dilakukan cara yang sama tanpa menggunakan agar. Sampel tanah  dimasukkan  ke  dalam  botol  yang  berisi aquadest steril  sebanyak  200  ml.  Tanah  tersebut didiamkan selama 18–24 jam pada suhu kamar. Setelah itu diambil 1 ml dimasukkan ke dalam medium ashdown broth dan diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 0 C. Selanjutnya inokulum diambil sebanyak 0.1  ml,  kemudian  diinokulasikan secara  goresan  ke  dalam  cawan  petri  yang  berisi  medium ashdown agar lalu diinkubasi selama 18–24 jam pada suhu 37 0 C. Selanjutnya dilakukan uji pengecatan gram. Berdasarkan  ciri-ciri  pertumbuhan  koloninya  (koloni  merah  muda  keunguan),  koloni  bakteri  yang diduga B. pseudomallei selanjutnya diuji dengan menggunakan pengecatan gram dan uji-uji biokimia untuk lebih memastikannya. 12
Isolat  yang  diduga B.  pseudomallei dilakukan  pengujian  produksi  asam  dan  gas  dengan menggunakan medium TSIA ( Triple Sugar Iron Agar ), uji motilitas dengan menggunakan medium SIM ( Sulfid Indol Motility ), dan dilanjutkan dengan uji biokimia lainnya meliputi uji katalase, oksidase , dan arginine  dihydrolase .  Dilakukan  pula  pengecatan  gram  dan  uji aglutinasi lateks .  Isolat  tersebut diinokulasi ke dalam masing-masing medium dan dilakukan pengamatan setelah diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 0 C. Analisis data menggunakan metode kualitatif deskriptif dalam bentuk gambar dan tabel. 12
Window of Health : Jurnal Kesehatan, Vol. 3 No. 1 (Januari, 2020) : 065-072                  E-ISSN 2614-5375
HASIL
Tabel 1. Karakterisasi Sampel Tanah Ditemukan Bakteri Burkholderia Pseudomallei
Pada 11 Kecamatan di Kota Makassar Kecamatan Jumlah isolat Jenis tanah Warna pH Kelembaban (%) Mamajang 6 Alfisol, Inceptisol Kuning kecokelatan 4.6 – 6.5 20 – 60 Tamalate 22 Alfisol, Inceptisol Kuning kecokelatan 4.5 – 7.2 10 – 60 Rappocini 8 Alfisol, Inceptiso Cokelat kehitaman 4.8 – 6.8 10 – 60 Mariso 0 Inceptisol Cokelat kehitaman 7.0 10 Bontoala 2 Alfisol Kuning kecokelatan 4.8 – 6.4 20 – 60 Wajo 4 Alfisol, Inceptisol Kuning kecokelatan 5.2 – 6.8 20 – 50 Biringkanaya 29 Alfisol, Inceptisol Kuning kecokelatan 6.0 – 7.2 0 – 10 Manggala 26 Alfisol, Inceptisol Cokelat kehitaman 4.8 – 6.8 10 – 40 Tamalanrea 1 Alfisol, Inceptisol Cokelat kehitaman 4.8 – 6.4 40 – 60 Tallo 2 Alfisol, Inceptisol Kuning kecokelatan 5.8 40 Makassar 0 Alfisol, Inceptisol Cokelat kehitaman 4.6 – 5.4 40 – 60
Tabel 1 menunjukkan hubungan antara faktor lingkungan dengan pertumbuhan B. pseudomallei . Pengambilan sampel tanah dilakukan secara acak dengan memperhatikan kondisi lingkungan setempat. Bakteri Burkholderia pseudomallei diteliti di 11 kecamatan di Kota Makassar dengan meninjau jumlah isolat, jenis tanah, warna, pH, dan kelembaban tanah.
Bentuk morfologi dari Burkholderia pseudomallei yang diisolasi dari tanah di kecamatan di Kota Makassar, setelah diinokulasi  dengan metode tabur ( surface ) dan diinkubasi selama 3x24 jam, disajikan pada gambar 1.
Gambar 1.  Koloni Burkholderia Pseudomallei Pada Medium Ashdown Agar Yang Diisolasi Dari Tanah Di Kecamatan Tamalate Kota Makassar
Hasil identifikasi Burkholderia pseudomallei dari sampel tanah yang diambil secara acak di 11 kecamatan di Kota Makassar disajikan pada tabel 2.
Window of Health : Jurnal Kesehatan, Vol. 3 No. 1 (Januari, 2020) : 065-072                  E-ISSN 2614-5375
Tabel 2. Hasil Identifikasi Burkholderia Pseudomallei PG UJI BIOKIMIA LA Isolat Jumlah K  O I ADH M TSIA Slant Butt Bacill (-) + + - + + Merah merah + B. Pseudomallei 28 Bacill (+) - - - + + merah merah - A 16 Bacill (+) + - - + - merah merah - B 13 Bacill (-) - - - + + merah merah - C 2 Coccus (+) + - - - + merah merah - D 3 Coccus (+) - - - + + merah merah - E 5 Coccus (+) - - - + + hitam hitam - F 1 Coccus (+) - - - + + kuning kuning - G 2 Coccus (-) - - - + + merah merah - H 14 Coccus (-) + - - - + variabel  variabel - I 5 Coccus (-) + - - + + kuning kuning - J 8 Coccus (-) + - - + - merah kuning - K 3
Keterangan:  PG  =  Pengecatan  Gram;  K  = Katalase ;  O  = Oksidase ;  I  = Indol ;  ADH  = Arginine Dehydrolase ; M = Motil ; LA = Latex Aglutinasi

## PEMBAHASAN
Burkholderia  pseudomallei merupakan  salah  satu  jenis  bakteri  tanah  yang  pertumbuhannya sangat  dipengaruhi  oleh  faktor  lingkungan.  Jumlah  mikroorganisme  yang  terdapat  di  dalam  tanah umumnya  lebih  banyak  daripada  di  air  maupun  udara.  Aktivitas  mikroorganisme  di  dalam  tanah (terutama  bakteri)  sangat  dipengaruhi  oleh  faktor  lingkungannya.  Perubahan  lingkungan  dapat mengakibatkan perubahan sifat morfologi dan fisiologi dari mikroorganisme tersebut. Beberapa faktor abiotik  yang  mempengaruhi  pertumbuhan  populasi mikroorganisme  di  dalam  tanah antara  lain jenis tanah, warna tanah, kadar keasaman (pH), kelembaban, dan kedalaman tanah. 5
Berdasarkan hasil karakterisasi tanah, diperoleh bahwa jenis tanah sampel di Kota Makassar ada dua jenis, yaitu alfisol dan inceptisol . Karakteristik tanah berjenis alfisol , berwarna kuning kecokelatan merupakan jenis tanah yang baik sebagai tempat pertumbuhan Burkholderia pseudomallei , sedangkan tanah inceptisol berwarna  cokelat  kehitaman  juga  dapat  ditumbuhi  oleh B. pseudomallei dan  jenis bakteri  lain.  Dari  sepuluh  jenis  tanah  yang  terdapat  di  Indonesia  menurut  Sistem  Taksonomi  Tanah USDA  1975,  jenis  tanah mollisol dan inceptisol merupakan  jenis  tanah  yang  mendominasi  tanah  di bagian Sumatera, Kalimantan Timur, Sulawesi, Maluku, dan Papua. 6 Adapun jenis tanah andisol banyak terdapat  di  daerah  Sumatera  Utara,  Jawa,  dan  Maluku.  Namun,  secara  umum  jenis  tanah alfisol merupakan jenis tanah yang terdapat hampir di seluruh Indonesia termasuk Sulawesi Selatan.
Window of Health : Jurnal Kesehatan, Vol. 3 No. 1 (Januari, 2020) : 065-072                  E-ISSN 2614-5375
Berdasarkan  pada  tabel  1  diperoleh  kisaran  pH  tanah  kota  Makassar  antara  4.5–7.2  dan kelembaban relatif tanah berkisar 0–60%, kisaran pH dan kelembaban relatif tanah tersebut sesuai untuk pertumbuhan B. pseudomallei . pH optimum untuk pertumbuhan bakteri B. pseudomallei berkisar antara 6.5–7.5, dengan kelembaban relatif tanah berkisar 10–20%. 7,8,9,10
Koloni Burkholderia pseudomallei pada 11 kecamatan di Kota Makassar ditemukan umumnya terdapat/tumbuh  pada  jenis  tanah alfisol yang  berwarna  cokelat  kehitaman,  meliputi  Kecamatan Mamajang, Tamalate, Rappocini, Wajo, Bontoala, Biringkanaya, dan Makassar. Variasi warna tanah sangat tergantung pada kadar organik tanah. Semakin tinggi kadar organik tanah, maka semakin gelap pula  warna  tanahnya.  Tanah  berwarna  kuning  banyak  mengandung  besi  oksida,  sedangkan  yang berwarna cokelat atau gelap banyak mengandung karbon, nitrogen, fosfat, dan beberapa unsur lain yang penting untuk pertumbuhan bakteri tanah. 8,11,12,13,14,15
Sampel tanah yang diambil untuk mengisolasi Burkholderia pseudomallei kebanyakan diambil dari daerah persawahan yang tidak terkena paparan sinar ultraviolet secara langsung. Hal ini dilakukan berdasarkan atas hasil penelitian yang telah dilakukan sebelumnya bahwa bahwa B. pseudomallei tidak aktif setelah 7.75 menit berada di bawah paparan sinar ultraviolet sebesar 4.65 W/m 2 dengan panjang gelombang 254 nm. 9
Hasil  karakterisasi  sampel  tanah  di  Kota  Makassar  kemudian  dilanjutkan  dengan  identifikasi bakteri  menggunakan  beberapa  uji  biokimia,  pengecatan  gram,  dan  uji aglutinasi lateks .  Hal  ini dilakukan  karena  tidak  tertutup  kemungkinan  terdapat  pertumbuhan  jenis  bakteri  lain  pada  medium selektif ashdown agar .
Secara morfologi, koloni Burkholderia pseudomallei berwarna merah muda dan berupa bintik- bintik  setelah  diinkubasi  selama  24  jam.  Bentuk  koloni  datar  dan  berubah  menjadi  merah  muda keunguan setelah beberapa hari. Setelah diinkubasi selama tiga hari, biasanya terdapat flora lain pada ujung  koloni. 10 Koloni  dewasa Burkholderia  pseudomallei pada  formulasi  medium  agar  padat  yang mengandung gliserol umumnya terlihat mengkerut setelah diinkubasi beberapa hari pada suhu 23.59⁰C.
Dari hasil penelitian ini ditemukan koloni serupa seperti yang ditunjukkan pada gambar 1.
Hasil  identifikasi,  uji  biokimia,  pengecatan  gram,  dan aglutinasi lateks Burkholderia pseudomallei yang diisolasi dari 11 kecamatan di Kota Makassar diperoleh sebanyak 28 isolat positif Burkholderia  pseudomallei dari  100  isolat  tanah.  Hasil  uji  biokimia  spesifik  untuk Burkholderia pseudomallei , yang menunjukkan reaksi positif adalah uji katalase, oksidase, arginine dihydrolase , uji motilitas SIM ( Sulfid Indol Motility ), dan TSIA ( Triple Sugar Iron Agar ) bereaksi negatif terhadap uji indol . Burkholderia  pseudomallei merupakan  bakteri  gram  negatif  berbentuk basil (batang)  dengan reaksi  positif  terhadap  uji aglutinasi lateks .  Penyebaran  pertumbuhan Burkholderia  pseudomallei di Kota Makassar lebih banyak ditemukan pada jenis tanah alfisol dengan warna tanah cokelat kehitaman pH 6.5–7.2 dan kelembaban berkisar antara 0–20 %.
Window of Health : Jurnal Kesehatan, Vol. 3 No. 1 (Januari, 2020) : 065-072                  E-ISSN 2614-5375

## KESIMPULAN DAN SARAN
Penelitian  menyimpulkan  bahwa  setelah  dilakukan  pengambilan  sampel  secara  acak  di  11 kecamatan  di  Kota  Makassar,  kulturisasi  isolat  menggunakan  medium  selektif ashdown  agar ,  dan identifikasi  bakteri  menggunakan  pengecatan gram serta  beberapa  uji  biokimiawi,  diperoleh  hasil penelitian sebanyak 100 isolat sampel, dimana masing-masing 28 isolat sampel positif Burkholderia pseudomalllei dan 72 isolat bakteri jenis lain. Hal ini menunjukkan bahwa terdapat persebaran bakteri Burkholderia pseudomallei di Kota Makassar, sehingga disarankan dapat menjadi referensi acuan untuk penelitian  lanjutan  tentang  dampaka  penyebaran Burkholderia pseudomalllei terhadap  penyakit Melioidosis.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Ginther et al. Identification Of Burkholderia Pseudomallei Near-Neighbor Species In The Northern Territory Of Australia. PLoS Negl. Trop. Dis. 2015: 9: e0003892.
2. Currie BJ, Kaestli M. Epidemiology: A Global Picture Of Melioidosis. Nature. 2016; 529:290–291.
3. Wiersinga et al. Melioidosis. Nat. Rev. Dis. Primers. 2018;4:17107.
4. Randall LB, Dobos K, Papp-Wallace KM, Bonomo RA, Schweizer HP. Membrane-Bound Pena Β- Lactamase Of Burkholderia Pseudomallei. Antimicrob. Agents Chemother. 2015;60:1509–1514.
5. Rhodes KA, Schweizer HP. Antibiotic Resistance In Burkholderia Species. Drug Resisten. Update. 2016;28:82–90.
6. Hemarajata P, Baghdad JD, Hoffman R, Humpries RM. Burkholderia Pseudomallei: Challenges For Microbiology Laboratory.J. CLin. Microbiol.  2016. https://doi.org/10.1128/JCM.01636-16
7. Benoit TJ, Blaney DD, Doker TJ, Gee JE, Elrod MG, Rolim DB, Inglis TJ, Hoffmaster AR, Bower WA, Walke HT. A Review of Melioidosis Cases in the Americas. Am J Trop Med Hyg 2015;93: 1134-1139.
8. Tauran  PM,  Wahyunie  S,  Saad  F,  Dahesihdewi  A,  Graciella  M,  Muhammad  M,  Aryati  A Emergence Of Melioidosis In Indonesia And Today’s Challenges. Trop. Med. Infect. Dis. 2018;3: 32. https://doi.org/10.3390/tropicalmed3010032
9. Irmawati-Rahayu, Noorhamdani AS, Santoso S. Resistance Pattern Of Burkholderia Pseudomallei From Clinical Resistance Pattern Of Burkholderia Pseudomallei From Clinical Isolates At dr. Saiful Anwar General Hospital, Malang-Indonesia. Journal of Clinical Microbiology & Infectious Disease 2014;1(1):17-20.
10. Tauran PM, Sennang N, Rusli B, Wiersinga WJ, Dance D. Emergence Of Melioidosis In Indonesia. Am. J. Trop. Med. Hyg. 2015;93(6): 1160–1163. https://doi.org/10.4269/ajtmh.15-0292.
11. Engelkirk  PG,  Duben-Engelkirk.  Laboratory  Diagnosis  Of  Infectious  Diseases:  Essentials  Of Diagnostic Microbiology. Philadelphia: Lippincott Williams & Wilkins; 2018.
12. Howard K, Inglis TJJ. Novel Selective Medium for Isolation Of Burkholderia Pseudomallei, 2017: 41(7): 3312–3316. https://doi.org/10.1128/JCM.41.7.3312.
13. Ristiati Ni Putu, Muliadihardja Sanusi dan Nurlita Frieda. Isolasi dan Identifikasi Bakteri Penambat Nitrogen  Non  Simbiosios  Dari  Dalam  Tanah. Jurnal  Penelitian  dan  Pengembangan  Sains  & Humaniora. 2018;l(1):68-80.
Window of Health : Jurnal Kesehatan, Vol. 3 No. 1 (Januari, 2020) : 065-072                  E-ISSN 2614-5375
14. Purwaningsih, Sri. Populasi Bakteri Rhizobium Di Tanah Pada Beberapa Tanaman Dari Pulau Buton, Kabupaten Muna, Propinsi Sulawesi Tenggara. J. Tanah Trop., 2018;14(1): 65-70.
15. Priadie,  Bambang. Teknik  Bioremediasi  Sebagai  Alternatif  Dalam  Upaya Pengendalian Pencemaran Air. Jurnal Ilmu Lingkungan. 2012;10(1):38-48.