Uji Aktivitas Antibakteri Fraksi n-Heksan, Kloroform, Etil Asetat Rimpang Bangle ( Zingiber casumounar Roxb.) terhadap Staphylococcus aureus
(Antibacterial Activity Test of n-Hexane Fraction, Chloroform, Ethyl Acetate of Bangle Rhizome ( Zingiber casumounar Roxb.) against Staphylococcus aureus )
HAMDAYANI LANCE ABIDIN 1* , LAODE ZUBAERDHON 1 , HERLINA RANTE 2
1 Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Makassar, Jl. Perintis Kemerdekaan KM 13,7 Makassar, Sulawesi Selatan, 90241, Indonesia
2 Fakultas Farmasi, Universitas Hasanuddin, Makassar, Sulawesi Selatan, 90245, Indonesia
Diterima 12 November 2021, Disetujui 21 April 2022
JURNAL ILMU KEFARMASIAN  INDONESIA, Oktober 2022,  hlm. ISSN 1693-1831
Abstract: The Zingiber casumounar Roxb. It is often used by the public as a traditional medicine for the treatment of rheumatism and throat inﬂ ammation. The purpose of this study was to determine the antibacterial activity of the n-hexane fraction, chloroform, and ethyl acetate of the bangle rhizome against Staphylococcus aureus . In this study, antibacterial activity testing of the n-hexane fraction, chloroform, and ethyl acetate of the rhizome of Z . casumounar Roxb was performed. against S. aureus by using the diﬀ usion method. Fractions obtained from the liquid partition results of the ethanol extract 96% of Z. casumounar Roxb. using n-hexane, chloroform, and ethyl acetate. The test results of antibacterial activity  of  all  three  fractions  indicated  the  ability  to  inhibit  the  growth  of S.  aureus . Antibacterial activity shows diﬀ erent inhibition zones, namely with an average value in crude extracts of 8.59±0.4 mm, while extracts of n-hexane fractions of 11.67±1.0 mm, chloroform fractions of 11.39±0.6 mm and ethyl acetate fractions of 13.21±0.3 mm. The ethyl acetate fraction had the highest antibacterial activity based on the area of its inhibitory zone.
Keywords: Antibacterial, ethyl acetate fraction, Staphylococcus aureus, Zingiber casumounar Roxb
Abstrak: Zingiber casumounar Roxb.  sering  dimanfaatkan  oleh masyarakat  sebagai  obat tradisonal untuk  pengobatan  reumatik  dan  peradangan  pada  tenggorokan.  Tujuan  dari  penelitian  ini  untuk mengetahui aktivitas antibakteri pada fraksi n-heksan, kloroform dan etil asetat dari rimpang bangle terhadap Staphylococcus  aureus .  Pada  penelitian  dilakukan  pengujian  aktivitas  antibakteri  terhadap fraksi n-heksan, kloroform dan etil asetat dari rimpang Z. casumounar Roxb . terhadap S. aureus dengan metode  difusi . Fraksi  diperoleh  dari hasil partisi  cair cair ekstrak  etanol  96% Z. casumounar Roxb. menggunakan  n-heksan,  kloroform  dan  etil  asetat.  Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  dari  ketiga  fraksi menunjukkan  adanya  kemampuan  untuk  menghambat  pertumbuhan S.  aureus . Aktivitas  antibakteri menunjukkan zona hambat yang berbeda yaitu dengan nilai rata-rata pada ekstrak kasar 8,59±0,4 mm, sedangkan ekstrak fraksi n-heksan 11,67±1,0 mm, fraksi kloroform 11,39±0,6 mm dan fraksi etil asetat 13,21±0,3 mm. Fraksi etil asetat memiliki aktivitas antibakteri paling tinggi dengan melihat luas zona hambatnya.
Kata kunci: Antibakteri, fraksi etil asetat, Staphylococcus aureus, Zingiber casumounar Roxb
ABIDIN ET AL.
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia
260
Indonesia ) ,  etil  asetat ( Merck ®, German ) ,  HCl kloroform ( Merck ® ,  German),  n-heksan ( Merck ®, German ) ,  media nutrient  agar  ( Merck ® ,  German ) , pereaksi Dragendorf, rimpang bangle, vanilin asam klorida, vanilin asam sulfat.
Alat. Alat-alat  gelas  (Iwaki  Pyrex ® ,  Jepang), autoklaf (GEA ®, Indonesia),  cawan porselin, cawan petri,  chamber,  Erlenmeyer  (Iwaki  Pyrex ®, Jepang), inkubator  (Memmert ® ,  German),    jangka  sorong, magnetic  stirrer,  swab  steril,  lemari  pendingin (Midea ® ,  Cina),  oven  laboratorium,  plat  tetes,  pipa kapiler, rotavapor, timbangan analitik.
METODE. Penyiapan Simplisia Z. casumounar Roxb. Proses pembuatan simplisia dengan cara sortasi basah  yakni  pembersihan  dari  benda-benda  asing, pencucian dibawah air mengalir, lalu dilakukan proses perajangan dimana ukuran partikel diperkecil untuk mempercepat  proses  pengeringan.  Setelah  dirajang maka  sampel  dikeringkan  dengan  cara  dikering- anginkan.  Setelah  menjadi  simplisia  maka  sampel siap untuk diekstraksi.
Ekstraksi Z.  casumounar Roxb. Rimpang bangle diekstraksi dengan menggunakan metode maserasi. 300 g serbuk simplisia rimpang bangle dimaserasi menggunakan larutan penyari etanol 96%  sebanyak  3.000  mL  selama  3x24  jam kemudian disaring. Filtrat dan residu dipisahkan kemudian  ﬁ ltrat  diuapkan  dengan Rotavapor. Hasil maserat yang diperoleh diuapkan dengan rotary evaporator pada suhu 40-50 °C dan maserat dipanaskan di atas penangas air pada suhu ±50 °C hingga didapatkan ekstrak kental yang akan digunakan  untuk  skrining  fitokimia  dan  uji antimikroba (9) .
Hasil  rendemen  ekstrak  tanaman  dapat dihitung  dengan  menggunakan  rumus  sebagai berikut (10) :

## PENDAHULUAN
SEIRING  perkembangan  zaman  terutama  yang berhubungan  dengan  penggunaan  tanaman  sebagai pengobatan tradisional, jauh sebelumya para leluhur telah banyak memanfaatkan bagian tanaman sebagai salah satu cara pengobatan beberapa penyakit (1) .
Penyakit infeksi di Indonesia sangatlah beragam jenisnya. Berdasarkan pola dan siklus hidup mikroor- ganisme yang menjadi peluang dalam pengembangan inovasi bioteknologi pada bidang kesehatan sehingga dapat bersaing dengan negara maju (2) .
Center  for  Disease  Control    and  Prevention (CDC) tahun 2020, menginformasikan bahwa 7 dari 10 penyakit yang menjadi penyebab kematian adalah penyakit  infeksi (3) . Salah  satu  bakteri  gram  positif adalah Staphylococcus  aureus yang  dapat  menye- babkan berbagai macam penyakit klinis. Infeksi yang disebabkan oleh bakteri patogen  umumnya bersumber dari masyarakat atau rumah sakit. Bakteri ini umum- nya tidak menyebabkan infeksi pada kulit yang sehat namun tetap perlu diwaspadai (4) .
Rimpang bangle merupakan salah satu  tanaman khas di Indonesia yang mengandung zat antibakteri dan  antioksidan. Antivitas  antibakteri  terhadap Es- cherichia coli dan Streptococcus sobrinus yanitu 16,18 mm  dan  9,86  mm  sedangkan  aktivitas  antioksidan menunjukkan nilai IC 50 0,993 µg/mL. Hasil skrining ﬁ tokimia menunjukkan bahwa ekstrak akar rimpang bangle mengandung senyawa ﬁ tokimia seperti fenolik, alkaloid, saponin, ﬂ avonoid, tanin dan triterpenoid (7) . Rimpang bangle merupakan salah satu  tanaman khas di Indonesia yang mengandung zat antibakteri dan  antioksidan. Antivitas  antibakteri  terhadap Es- cherichia coli dan Streptococcus sobrinus yanitu 16,18 mm  dan  9,86  mm  sedangkan  aktivitas  antioksidan menunjukkan nilai IC 50 0,993 µg/mL. Hasil skrining ﬁ tokimia menunjukkan bahwa ekstrak akar rimpang bangle mengandung senyawa ﬁ tokimia seperti fenolik, alkaloid, saponin, ﬂ avonoid, tanin dan triterpenoid (5) .
Ekstrak rimpang dengan konsentrasi 100% memi- liki  kemampuan  menghambat  pertumbuhan  bakteri gram  positif  dibandingkan  bakteri  gram  negatif (6) . Skrining ﬁ tokimia ekstrak rimpang bangle diketahui mengandung  senyawa  alkaloid,  ﬂ avonoid,  saponin, tanin, kuinon dan steroid. Senyawa tersebut memiliki aktivitas antiulkus menggunakan tikus yang diinduksi aspirin (7) .

## BAHAN DAN METODE
BAHAN. AlCl 3 ( Merck ® , German ) ,  akuades ( Onemed ® ,  Indonesia ),  dimethyl  sulfoxide (DMSO) ( Merck ® ,  German ) ,  etanol  96% ( Karsavicta ® ,
% Rendemen = Bobot ekstrak (g) Bobot simplisia (g) 𝑥 100 %
Fraksinasi  Ekstrak. Pada  tahapan  ini menggunakan 3 jenis pelarut yang memiliki kepolaran yang berbeda. 2 gram ekstrak Z. casumounar Roxb. dilarutkan dengan 50 mL larutan n-heksan, selanjutnya dimasukkan dalam Erlenmeyer yang terdapat magnetic stirrer kemudian disentrifus hingga terjadi perubahan warna.  Ekstrak  difraksinasi  kembali  menggunakan larutan n-heksan. Residu yang diperoleh difraksinasi kembali menggunakan kloroform, kemudian etil asetat dengan volume yang sama.
Identifikasi  KLT. Lempeng  KLT  diaktivasi pada oven dengan suhu 105-110 °C selama 30 menit kemudian  diukur  3 x  7  cm.  Dibuat  fase  gerak  dari
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia ` 261 campuran  n-heksan : etil asetat  dengan  konsentrasi (7:3)  sebanyak  15  mL.  Fase  gerak  dimasukkan  ke dalam chamber hingga mencapai kondisi jenuh.
Masing-masing  sampel  (ekstrak  awal,  fraksi n-heksan, kloroform dan etil asetat) ditotolkan pada lempeng KLT menggunakan pipa kapiler, kemudian dielusi dengan fase gerak n-heksan : etil asetat (7:3). Dimasukkan  ke  dalam  chamber.    Lempeng  KLT diamati di bawah sinar atau lampu UV dengan panjang gelombang 254 dan 365 nm.
Pengujian  Golongan  Senyawa. Pengujian flavonoid  dilakukan  dengan  cara  lempeng  KLT disemprotkan dengan AlCl 3 dan pereaksi sitroborat. Adanya  ﬂ avonoid,  diindikasikan  dari  terbentuknya warna kuning-kehijauan. Lempeng KLT disemprotkan asam sulfat dan asam asetat anhidrat untuk menguji adanya  steroid/terpenoid.  Terbentuknya  warna coklat  kemerahan  pada  plat  KLT  menunjukkan adanya  terpenoid.  Lempeng  KLT  disemprotkan pereaksi Dragendorﬀ  untuk menguji adanya alkaloid. Terbentuknya  warna  coklat  kekuningan  pada  plat KLT menunjukkan adanya alkaloid. Pengujian tanin dilakukan dengan cara lempeng KLT disemprotkan pereaksi  FeCl 3. Terbentuknya  warna  biru  kehijauan pada plat KLT menunjukkan adanya tanin.
Pengujian saponin dilakukan dengan 0,5 g ekstrak yang dilarutkan dalam 10 mL air panas, didinginkan dan kemudian kocok ±5 menit. Ditambahkan 1 tetes asam klorida 2N.  Jika terbentuk buih (busa) selama ±10  menit  maka  dapat  dikatakan  ekstrak  tersebut mengandung senyawa saponin.
Uji Aktivitas Antibakteri. Media yang digunakan adalah Nutrient  Agar sebanyak  28  g  dan  glukosa 10  g,  dilarutkan  dengan  aquades  1000  mL  dalam Erlenmeyer. Dipanaskan hingga mendidih dan tidak terbentuk gumpalan, lalu diukur pH larutan (pH 6-7). Dimasukkan  ke  dalam  autoklaf  pada  suhu  121  °C selama  15  menit.  Larutan  dituang  ke  dalam  cawan petri  yang  steril  dan  ditutup  lalu  dibiarkan  sampai memadat (11) .
Pengujian aktivitas  antibakteri fraksi n-heksan, fraksi  kloroform  dan  fraksi  etil  asetat  rimpang Z. casumounar Roxb.    terhadap  pertumbuhan  bakteri S.  aureus dilakukan  dengan  metode  difusi  agar dengan menggunakan medium Nutrient Agar . Media NA  dituang  ke  dalam  cawan  petri  steril,  kemudian dibiarkan  memadat.  Suspesi  bakteri  digoreskan menggunakan swab steril  setelah  media  memadat. Dimasukkan paper  disc yang  telah  ditetesi  dengan masing-masing  fraksi,  DMSO  sebagai  kontrol negatif  dan paper  disk tetrasiklin  sebagai  kontrol positif. Diinkubasi pada suhu 37°C selama 1x24 jam. Zona bening yang terbentuk diukur diameter daerah hambatnya menggunakan jangka sorong. Dilakukan
Simplisia kering (g) Ekstrak kental (g) Fraksi (g) n- Heksan Kloroform Etil asetat 300 38 8,4 5,2 4,8
Tabel 1. Data ekstrak kental dan fraksi rimpang bangle.
triplo (pengujian 3 kali) dan diukur zona hambatannya.
Penentuan konsentrasi hambat minimum dilakukan dengan  metode  difusi  agar  dengan  menggunakan beberapa seri kosentrasi masing-masing ekstrak lalu diuji terhadap bakteri uji S. aureus .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Berdasarkan data yang diperoleh dapat dikatakan bahwa ektrak rimpang bangle memenuhi kriteria ek- strak yang baik (>10%). Semakin tinggi nilai rende- men suatu ekstrak, maka semakin banyak komposisi senyawa  yang  tertarik  pada  saat  ekstraksi (8) .  Nilai rendemen berkaitan dengan komposisi senyawa aktif yang terkadung pada suatu tanaman obat (Tabel 1). Ada beberapa faktor yang mempengaruhi hasil nilai rendemen  suatu  ekstrak  tanaman  antara  lain,  umur atau usia tanaman, varietas, faktor lingkungan tempat tumbuhnya,  proses  dan  waktu  panen (13) .  Rendemen suatu ekstrak tanaman juga dipengaruhi oleh metode esktraksi  yang  digunakan.  Berdasarkan  penelitian Hasnaeni,  dkk (14) membuktikan  bahwa  metode  ma- serasi menghasilkan nilai rendemen yang lebih besar dibandingkan metode sokletasi dan reﬂ uks (14) .
Fraksi n-heksan, kloroform dan etil asetat kemudi- an divalidasi menggunakan metode KLT, mengguna- kan fase gerak n-heksan : etil asetat dengan konsentrasi 7:3.  Dari  hasil  KLT  didapatkan  bercak  noda  yang berbeda (Gambar 1).
Gambar 1. Proﬁ l KLT pada sinar tampak UV 254 dan 365 nm  :  ekstrak  kental  (A),  ekstrak  terpuriﬁ kasi  parsial  n- Heksan (B), ekstrak terpuriﬁ kasi parsial kloroform (C) dan ekstrak terpuriﬁ kasi parsial etil setat (D).
Fraksi etil asetat diaplikasikan (ditotolkan) pada lempeng KLT, kemudian disemprot dengan pereaksi Dragendorf (uji alkaloid), vanilin asam klorida (uji steroid), AlCl 3 (uji ﬂ avonoid) dan vanilin asam sulfat (uji tanin). Dari hasil pengujian diketahui bahwa pada fraksi etil asetat mengandung senyawa golongan ﬂ avo- noid dan tanin (Gambar 2). Hal ini dikuatkan dengan hasil  penelitian  Sanatombi  tahun  2017  ditemukan bahwa rimpang bangle memiliki kandungan senyawa aktif berupa ﬂ avonoid, fenol, dan alkaloid (15) .
Efektivitas  antibakteri  fraksi  rimpang  bangle ditunjukkan  dengan  besarnya  zona  hambatan  terh- adap S.aureus (Tabel 2, Gambar 2). Fraksi etil asetat menunjukan  aktivitas antibakteri  paling  besar  pada konsentrasi  10%  sebesar  13,21±0,3  mm  terhadap bakteri S. aureus .
Dari  hasil  yang  didapatkan  pada  uji  aktivitas antibakteri  dilanjutkan  dengan  metode  identiﬁ kasi senyawa  menggunakan  pereaksi  semprot  pada  plat KLT,  sampel  yang  digunakan  pada  pengujian  ini adalah fraksi etil asetat yang dimana dilakukan pemi- lihan terhadap sampel ini berdasarkan nilai rata-rata zona hambat terbesar yang diperoleh pada pengujian aktivitas antibakteri sebelumnya. Berdasarkan hasil pengujian tersebut didapatkan bahwa senyawa yang positif adalah ﬂ avonoid, saponin dan tanin.

## SIMPULAN
Fraksi etil asetat yang diperoleh dari ekstrak rimpang bangle  memiliki  aktivitas  antibakteri  paling  tinggi dengan diameter hambatan rata-rata 13,21±0,6 mm terhadap bakteri uji Staphylococcus aureus .

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  berterima  kasih  kepada Yayasan Almarisah Madani dan Pimpinan Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi dengan bantuan berupa fasilitas tempat dan peralatan laboratorium sehingga penelian ini dapat diselesaikan.

## DAFTAR PUSTAKA
1.   Hanani  E.  Buku Ajar  Farmakognosi.  Jakarta:  UPT UHamka Press; 2021. 1–326.
2.   Nasronudin. Penyakit Infeksi Di Indonesia. 2nd ed. Surabaya: Airlangga University Press; 2019.
3.   Rohmatilla WN, Ariﬁ n MZ, Tauladani SA, Muharam GA, Asia,  Pratoko  DK  dan  Nugraha A.  Isolasi  dan Skrining Aktivitas Antibakteri  Fungi  Tanah  Muara Desa  Katialada  Gorontalo  Lokasi  Satu  Terhadap Staphylococcus aureus . Jurnal Kefarmasian Indonesia.
2022Ags31;12(2):99–108.
4.   Tracey AT.  Unakalh  CG. Staphylococcus  aureus [Internet].  Natonal  Library  of  Medicine;  2022. Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/ NBK441868/
5.   Batubara  I,  Trimulia  R,  Rohaeti  E,  Darusma  LK. Hubungan  Lama  Distilasi,  Kandungan  Senyawa, dan Bioautograﬁ  Antioksidan Minyak Atsiri Bangle ( Zingiber purpureum) . Indonesian Journal of Essential Oilx. 2018Mei1;3(1):37–44.
6.   Nurkhasa nah,  Santos o  RD,  Fuziah  R.  The immunomodulatory  eﬀ ect  of Zingiber  cassumunar ethanolic extract on phagocytic activity, nitrit oxide
Gambar 2. Proﬁ l KLT identiﬁ kasi senyawa golongan fraksi etil asetat : uji alkaloid (a), uji steroid (b), uji ﬂ avonoid (c),
uji tanin (d). a b c d
Tabel  2.  Hasil  pengukuran  zona  hambatan  terhadap bakteri uji. Sampel Diameter Zona Hambat (mm) Rata-rata (mm) R1 R2 R3 Ekstrak Kental 8,17 9,04 8,55 8,59±0,4 Fraksi n- Heksan 10,52  12,25 12,25 11,67±1,0 Fraksi Kloroform 12,07  11,23 10,87 11,39±0,6 Fraksi Etil asetat 13,52  12,97 13,15 13,21±0,3 DMSO 6,00 7,47 7,60 7,02±0,5 Kontrol Positif 21,12  23,30 27,42 23,94±3,2
Keterangan: Data disajikan dalam rata-rata + SBR, n=3
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia ` 263
11.   Thohari NM, Pestariati, Istanto. Pemanfaatan Tepung Kacang  Hijau  ( Vigna  radiata L.)  Sebagai  Media Alternatif  NA  ( Nutrient Agar )  Untuk  Pertumbuhan Bakteri  Escherichia  coli.  Jurnal Analisis  Kesehatan Klinik Sains.2019Des31;8(2):725–37.
12.   Ambari Y,  Fitri  S,  Nurrosyidah  IH.  Uji Aktivitas Antioksidan  Masker  Gel  Peel-oﬀ  Ekstrak  Etanol Kelopak Bunga Rosela ( Hibiscus sabdariﬀa L.) dengan Metode DPPH (1,1- Diphenyl -2- picryhydrazyl ). Jurnal Farmasi Indonesia. 2021Jul1;18(1).
13.   Zuraida,  Sulistiyani,  Sajuthi  D,  Suparto  IH.  Fenol, Flavonoid  dan Aktivitas Antioksidan  Pada  Ekstrak Kulit Batang Pulai ( Alstonia scholaris R.Br). Jurnal Penelitian Hasil Hutan. 2017Okt15;35(3):211–9.
14.   Hasnaeni, Wisdawati,  Usman  S.  Pengaruh  Metode Ekstraksi  Terhadap  Rendemen  Dan  Kadar  Fenolik Ekstrak  Tanaman  Kayu  Beta-Beta  ( Lunasia amara Blanco).  Jurnal  Farmasi  Galenelika. 2019Okt19;5(2):175–82.
15.   Santoni A. Identiﬁ kasi Senyawa Metabolit Sekunder, Uji Antimikroba  dan Antioksidan  Ekstrak Akar Gantung  ( Hornstedtia  scyhifera var.  Fusiformis Holtum)  (Sijangkang).  Jurnal  Riset  Kimia. 2019Sep30;10(2):98–102
and  reaxtive  oxygen  intermediate  secretions  of macrophage  in  mice.  In:  IOP  Conference  Series, Materials  Science  and  Engineering.  Institute  of Physics Publishing.2017Nov1; 1–7.
7.   Yuniarto A,  Susilawati  E,  Rahman  TA,  Setiawa
F,  Juanda  D.  Gastric  Ulcer  Healing  Effect  of Bangle  ( Zingiber  cassumunar (Roxb.))  Rhizome Extract  in Aspirin-induced  Rats  Model.  Indonesian Journal  of  Pharmaceutical  Science  Technology. 2017Mei16;1(1):29–34.
8.   Buldani A, Yulianti  R,  Soedomo  P.  Uji  Efektivitas Ekstrak  Rimpang  Bangle  ( Zingiber  cassumunar Roxb.) Sebagai Antibakteri Terhadap Vibrio cholerae Dan Staphylococcus aureus Secara In Vitro Dengan Metode  Difusi  Cakram.  Seminar  Nasional  IPTEK Terapa. Tegal; 2017Mei20. 229–238.
9.   Riasari  H,  Rachmaniar  R,  Wahyuni  S.  Evaluation Partch  of  Rhizoma  Extract  Kencur  ( Kaempferia galanga L.)  as Anti-Inﬂ ammatory  With  Enhancer.
Jornal  of  Pharmaceutical  Science  and  Technology. 2019Jun28;6(2):59.
10.   Wijaya  H,  Novitasari,  Jubaidah  S.  Perbandingan Metode Ekstraksi Terhadap Rendemen Ekstrak Daun Rambui Laut ( Sonneratioa caselaris L. Engl.). Jurnal Ilmah Manuntung.2018Ags11;4(1):79–83.