DOI: 10.6066/jtip.2015.26.2.189 Hasil Penelitian

## MIKROEMULSIFIKASI  FRAKSI  TIDAK  TERSABUNKAN DISTILAT  ASAM  LEMAK  MINYAK  SAWIT

## [Microemulsification of Unsaponifiable Fractions of Palm Fatty Acid Distillate]
Teti Estiasih 1) *, Kgs. Ahmadi 2) ,  dan Layly  Alifatur Rizqiyah 1)
1) Program Studi Ilmu dan Teknologi Pangan, Fakultas Teknologi Pertanian, Universitas Brawijaya , Malang
2) Jurusan Teknologi Industri Pertanian, Fakultas Pertanian, Universitas Tribhuwana  Tunggadewi, Malang
Diterima 01 Oktober 2015 / Disetujui 24 Desember 2015

## ABSTRACT
Palm fatty acid distillate (PFAD) is a b y-product of palm oil refining that contains valuab le b ioactive compounds  such  as  phytosterols,  tocopherol,  tocotrienols,  and  squalene   which  acummulates  in unsaponifiab le  fraction  (USF).  In  emulsion  form,  USF  will  b e  convenien t  and  easy  to  use  as  food supplements or fortificants. Microemulsion is a type of emulsion that has stab le droplet sizes of less than 10  m.  Hence,  the  b est  emulsifier  for  USF  microemulsion  is  important  to  b e  determined.  The  USF microemulsion  was  prepared b y homogenizing  the sample mixtures at 12.000 rpm for 20 min at USF concentration of 10% (w/v) with lecithin and tween 80 as the emulsifiers at concentratiosn of 0.5 , 1.0, and 1.5% (w/v). The microemulsions were analyzed for their viscosity, stab ility, and particle size distrib utions, as  well  as  microstructures.  The  results  showed  that  characteristics  of microemulsion were affected b y emulsifier types and concentrations. Tween 80 produced b etter microemulsion than lecithin as indicated by more stab le emulsions, smaller droplet sizes, and narrower ranges of droplet size distrib utions. Increasing lectihin concentrations resulted in a narrower droplet size distrib ution b ut the average droplet size was not always smaller. Conversely, increasing tween 80 concentrations increased the average droplet sizes and ranges of particle size distrib utions. The most suitab le emulsifier for USF microemulsion was tween 80 at concentration of 0.5%. This microemulsion contained b ioactive compounds  derived from USF, namely vitamin E (mainly tocotrienols), phytosterols, and squalene.
Keywords: b ioactive  compounds,  emulsifier, microemulsion, partIcle size distrib ution, palm fatty acid distillate

## ABSTRAK
1
Distilat asam lemak minyak sawit (DALMS) merupakan hasil samping pengolahan minyak goreng yang mengandung senyawa bioaktif fitosterol, tokoferol, tokotrienol, dan skualen yang sangat berharga . Komponen-komponen  tersebut  terakumulasi pada fraksi tidak tersabunkan (FTT). Untuk memperluas pemanfaatannya sebagai suplemen dan fortifikan pangan, FTT dapat diubah menjadi emulsi sehingga mudah untuk ditangani dan digunakan. Mikroemulsi merupakan bentuk emulsi  dengan ukuran droplet kurang dari 10  m sehingga lebih stabil. Akan tetapi, jenis pengemulsi yang tepat untuk mikroemulsi FTT masih  perlu  untuk  ditentukan.  Mikroemulsi  FTT  dibuat  pada  konsentrasi  10%  (b/v)  dengan  jenis pengemulsi tween 80 atau lesitin pada konsentrasi 0,5; 1,0; dan 1,5% (b/v) menggunakan homogenizer pada kecepatan 12.000 rpm selama 20 menit. Mikroemulsi yang dihasilkan dianalisis meliputi viskositas, stabilitas,  distribusi  ukuran  partikel,  dan  mikrostruktur.  Hasil  penelitian  menunjukkan  karakteristik mikroemulsi FTT dipengaruhi oleh jenis dan konsentrasi pengemulsi. Tween 80 lebih mampu meng- hasilkan mikroemulsi yang lebih baik dibandingkan lesitin. Performa mikroemulsi yang baik ditunjukkan oleh mikroemulsi yang stabil, interval distribusi ukuran partikel yang sempit, serta ukuran droplet emulsi yang kecil. Peningkatan konsentrasi lesitin menghasilkan mikroemulsi dengan distribusi ukuran droplet yang lebih sempit, sedangkan rata-rata ukuran droplet tidak selalu lebih kecil. Sebaliknya, peningkatan konsentrasi tween 80 menyebabkan rata-rata ukuran droplet dan interval distribusi ukuran droplet yang lebih besar. Mikroemulsi terbaik menggunakan pengemulsi tween 80 dengan konsentrasi 0 ,5%. Mikro- emulsi ini mengandung senyawa bioaktif yang berasal dari FTT berupa vitamin E (terutama tokotrienol), fitosterol, dan skualen.
Kata kunci :  distribusi ukuran partikel,  distilat asam lemak sawit, mikroemulsi, pengemulsi, senyawa bioaktif
*Penulis Korespondensi: E-mail:  teties@yahoo.co.id

## PENDAHULUAN
Indonesia  mempunyai  potensi  senyawa  bioaktif yang  besar  dan  berlimpah  yaitu  hasil  samping pengolahan  minyak  goreng  berupa  distilat  asam lemak minyak sawit (DALMS). DALMS me- ngandung  asam  lemak  dan  gliserida  96,1%,  serta komponen  minor  bioaktif  seperti  tokoferol  dan tokotrienol  0,48%,  fitosterol  0,37%,  skualen  0,76%, dan  hidrokarbon  lain  0,71%  (Gapoor et  al .,  2002). Pemanfaatan  DALMS  selama  ini  difokuskan  sebagai sumber asam lemak bukan sebagai  sumber senyawa  bioaktif.  Komponen  bioaktif  dalam  DALMS merupakan  komponen  yang  berada  pada  fraksi  tidak tersabunkan (FTT) (Khatoon et al ., 2010).
Saponifikasi
DALMS pada kondisi optimum menghasilkan  FTT  yang  mengandung  tokoferol 0,06%,  tokotrienol  0,73%,  fitosterol  9,18%,  dan skualen  1,14%  (Estiasih et  al .,  2013).  Untuk  mem- perluas  kegunaan  FTT  DALMS,  maka  perlu  dikaji teknik  untuk  stabilisasi  dan  pengubahan  bentuk  FTT yang  kental  menjadi  cair  melalui  teknik  emulsifikasi. Sistem  emulsi  minyak  dalam  air  banyak  digunakan dalam  industri  pangan  dan  farmasi  dan  merupakan pembawa  bioaktif  lipofilik  (Nik et  al .,  2011).  Di  antara jenis  emulsi,  mikroemulsi  mempunyai  sifat  yang  unik yaitu  tegangan  antarmuka  yang  rendah,  lebih  stabil, dan  mempunyai  kemampuan  pelarutan  yang  tinggi (Lu et  al .,  2012).  Mikroemulsi  merupakan  emulsi dengan  ukuran  globula  kurang  dari  10  m  (Madaan et  al .,  2014).  Emulsi  dapat  digunakan  sebagai pembawa  senyawa  bioaktif  karena  dapat  secara mudah  ditambahkan  pada  produk  pangan  (Lu et  al. , 2012).
Pengemulsi  mempunyai  bagian  hidrofobik  dan hidrofilik  dalam  struktur  molekulnya  sehingga  dapat terkonsentrasi  pada  antarmuka  minyak-air  dan  me- nurunkan  tegangan  permukaan.  Pengemulsi  mem- fasilitasi pembentukkan  emulsi  selama  proses homogenisasi  (Cabezas et  al .,  2012).  Mikroemulsi dapat  dibuat  dengan  menggunakan  formulasi  sur- faktan  yang  sesuai  (Phan et  al .,  2011).  Untuk menghasilkan  emulsi  dengan  ukuran droplet yang kecil,  emulsi  kasar  dihomogenisasi  dua  kali  meng- gunakan homogenizer tekanan  tinggi  (Imai et  al ., 2008).
Pengemulsi  yang  tepat  sangat  penting  dalam menstabilkan  sistem  emulsi.  Pengemulsi  akan berada  pada  antarmuka droplet dan  fase  akueous dalam  sistem  emulsi  (Tan  dan  Nakajima,  2005; Tadros,  2013).  Pengemulsi  yang  banyak  digunakan di  industri  pangan  adalah  lesitin  (McClements,  2015) dan  tween  80  (Hasenhuetti,  2008).  Lesitin  komersial merupakan  campuran  fosfolipid  yang  tidak  larut aseton  dan  komponen  minor  lainnya  seperti  trigli- serida  dan  karbohidrat  (Cabezas et  al .,  2012).  Cam- puran  tidak  larut  aseton  terdiri  dari  fosfatidilkolin, fosfatidiletanolamin,  fosfatidilinositol,  dan  komponen
minor  meliputi  asam  fosfatidat,  karbohidrat,  dan trigliserida  (Cabezas et  al., 2009);  sedangkan  tween merupakan  polioksietilen  sorbitan  (Mahmood  dan Koofee,  2013).  Selain  jenis,  konsentrasi  pengemulsi sangat  mempengaruhi  stabilitas  emulsi.  Konsentrasi pengemulsi  yang  tinggi  menyebabkan  destabilisasi emulsi  akibat  dinamika  antara  pengemulsi  yang  ter- adsorpsi  dan  yang  tidak  teradsorpsi  pada  antarmuka (McClements,  2015),  sedangkan  pada  konsentrasi rendah  jumlah  pengemulsi  tidak  cukup  untuk  me- nutup  wilayah  antarmuka  sehingga  emulsi  menjadi tidak  stabil  (Tadros,  2013).  Oleh  karena  itu,  pada penelitian  ini  dikaji  jenis  pengemulsi  dan  konsen- trasinya  yang  tepat  dalam  menstabilkan  mikroemulsi FTT  dari  DALMS.

## BAHAN  DAN METODE

## Bahan
Bahan  baku  distilat  asam  lemak  minyak  sawit (DALMS)  diperoleh  dari  industri  pengolahan  CPO PT. Salim  Ivomas  Pratama  Surabaya.

## Pembuatan fraksi tidak tersabunkan  (FTT)
Pembuatan  FTT  mengacu  pada  hasil  pene- litian  sebelumnya  (Estiasih et  al .,  2013)  dengan menggunakan  bahan  kimia  teknis  berupa  heksana, KOH, etanol,  dan  vitamin  C (Bratachem,  Indonesia).
Pembuatan  mikroemulsi  (Modifikasi  Imai et  al. , 2008)
Pengemulsi  lesitin  (Bratacehm,  Indonesia)  atau tween  80  (Bratachem,  Indonesia)  dilarutkan  dalam akuades  sehingga  diperoleh  konsentrasi  0,5;  1,0; dan  1,5%  (%  b/v  akuades)  dan  volume  dibuat  50 mL.  FTT  sebanyak  10%  (b/v)  ditambahkan  dan kemudian  dilakukan  homogenisasi  dengan  ultraturax (Ika  T-18  Basic,  Jerman)  pada  kecepatan  12.000 rpm  selama 20  menit sampai  terbentuk  mikroemulsi.

## Rancangan percobaan dan analisis data
Rancangan  percobaan  yang  digunakan  pada penelitian  ini  adalah  rancangan  acak  lengkap  dua faktor  tiga  kali  ulangan.  Data  viskositas  dan  turbi- ditas  dianalisis  ragam  dengan  Anova  dan  jika perlakuan  menunjukkan  pengaruh  yang  nyata,  di- lakukan  analisis  lanjut  dengan  beda  nyata  jujur (BNT).  Analisis  yang  dilakukan  pada  DALMS  dan FTT  meliputi  tingkat  oksidasi  dengan  bilangan  per- oksida  (Kim,  2005)  dan  bilangan  anisidin  (IUPAC, 1979),  kadar  asam  lemak  bebas  (AOCS,  1990),  dan senyawa  bioaktif  vitamin  E  (tokoferol  dan  toko- trienol),  fitosterol,  dan  skualen.  Analisis  mikroemulsi meliputi  viskositas  (Kapillar  Viskosimeter,  Schoott Gerate),  stabilitas  terhadap  pemisahan,  dan  dis- tribusi  ukuran  partikel,  dan  mikrostruktur  dengan scanning  electron  microscope (SEM).
Analisis  skualen (Mendez et al., 2003) Analisis  skualen  menggunakan  GC  MS  (GC- MS-QP2010S  Shimadzu,  Jepang)  dengan  deriva- tisasi  metode  Mendez et  al. (2003).  Sebanyak 1  μL sampel  yang  sudah  diderivatisasi  diinjeksikan  pada GC  MS  dengan  kolom  (AGILENT  DB-1,  USA)  30  m, diameter  internal  0,25  mm,  gas  pembawa  helium dan  ionisasi  EI  70  Ev.  Kondisi  operasional  GC adalah  suhu  80°C,  suhu  injektor  310°C,  tekanan 16,5  kPa,  kecepatan  aliran  80,0  mL/menit,  kecepat- an  aliran  dalam  kolom  0,50  mL/menit,  kecepatan linier  26,1  cm/detik,  kecepatan  gas  pendorong  3,0 mL/menit  dan  rasio split 153,0.  Suhu  awal  adalah 80°C  dan  ditahan  selama  5  menit.  Suhu  ditingkatkan dengan  kecepatan  10°C/menit  sampai  305°C  dan ditahan  selama  25  menit.  Analisis  MS  dilakukan dengan  suhu  sumber  ion  250°C,  suhu interface 310°C, solvent  cut  time 80  menit,  kecepatan scan 1.250,  mulai  m/z  28,0  dan  berakhir  m/z  600,0. Standar  yang  digunakan  adalah  standar  skualen dari  Sigma-Aldrich,  Singapura.
Analisis  fitosterol  (Khatoon et al ., 2010) Analisis  dilakukan  dengan  menggunakan  HPLC Shimadzu  LC-20AD  (Jepang),  kolom  Shimpack  VP- ODS  250  mm  x  4,6  mm,  kecepatan  aliran  1,3 mL/menit,  detektor  UV/VIS  SPD-20A  pada  panjang gelombang  206  nm,  fase  gerak  metanol:akuabides (99:1)  dan standar  fitosterol  (β-sitosterol,  kam- pesterol,  stigmasterol)  (Stigma-Aldrich,  Singapura). Sampel  FTT  ditimbang  sejumlah  1  mg  dan  ditambah dengan  etanol  1  mL  lalu  disaring  dan  volume  yang diinjeksikan  20 μL.

## Analisis  vitamin E
Sampel  FTT  ditimbang  sejumlah  1  mg  dan ditambah  dengan  etanol  1  mL  lalu  disaring.  Analisis dilakukan  menggunakan  HPLC  (Shimadzu  LC- 20AD,  Jepang)  dengan  kolom  Shimpack  VP-ODS 250  mmx4,6  mm,  kecepatan  aliran  1,3  mL/menit, detektor  UV/VIS  SPD-20A  pada  panjang  gelombang 295  nm,  fase  gerak  metanol:akuabides  (95:5),  dan volume  injeksi  20 μL  dengan  standar  tokoferol  (α- tokoferol)  (Santa  Cruz  Biotechnology,  USA)  took- trienol  (α,  δ,  γ-tokotrienol)  (Santa  Cruz  Biotech- nology,  USA).
Analisis  stabilitas  emulsi  (modifikasi  Ogawa et al ., 2004)
Sampel  sebanyak  3,5  g  diencerkan  sampai konsentrasi  fase  terdispersi  0,0005%  kemudian dimasukkan  ke  dalam  kuvet  dan  disimpan  pada suhu  30°C  selama  7  hari.  Kekeruhan  diukur  dengan spektrofotometer  UV-Vis  (20D  Plus,  LaboMed,  USA) pada  panjang  gelombang  600  nm. Droplet dalam emulsi  akan  bergerak  ke  atas  karena  gravitasi. Peningkatan kekeruhan  mengindikasikan  bahwa droplet bergerak  ke  atas  karena  ketidakstabilan.
Persentase  (%)  turbiditas  diperoleh  dari  2,303  x absorbansi.
Analisis  mikrostruktur  dengan scanning  electron microscope (SEM)
Analisis  mikrostruktur  dilakukan  menggunakan SEM  (FEI  tipe  Inspect  S50,  EDAX  AMETEK,  USA). Sampel  emulsi  dikeringkan  dengan  cara  meng- hilangkan  air  menggunakan hot  plate kemudian sampel  diletakkan  dalam sample  holder yang  sudah diberi double  side  carbon  tape . Coating dilakukan dengan menggunakan sputter  coater (Emitech SC7620,  UK)  agar  sampel  dilapisi  dengan  Au-Pd. Pengukuran  dilakukan  pada  perbesaran  20.000  kali.

## Analisis  ukuran partikel
Analisis  ukuran  partikel  dilakukan  dengan menggunakan Particle  Size  Analyzer (PSA,  CILAS 1090,  USA).  Sampel  diencerkan  dengan  akuades, dengan  perbandingan  sampel:akuades  1:5.  Kemu- dian  dilakukan  pengocokan  manual  supaya  sampel homogen.  Kemudian  sampel  dimasukkan  ke  dalam chamber  filling nozzle untuk pengukuran.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Karakteristik  kimia  DALMS  dan  fraksi  tidak tersabunkan
DALMS  mempunyai  karakteristik  seperti  pada Tabel  1.  Kadar  asam  lemak  bebas  (ALB)  merupakan indikator  kadar  fraksi  tidak  tersabunkan  (FTT).  Data pada  Tabel  1  menunjukkan  bahwa  DALMS  yang  di- hasilkan  mempunyai  kadar  asam  lemak  bebas  yang memenuhi  standar  DALMS  dari Palm  Oil  Research Institute  of  Malaysia (PORIM)  (yaitu  minimum  70%. Asam  lemak  bebas  pada  FTT  merupakan  asam lemak  yang  tidak  tersabunkan  pada  proses  saponi- fikasi.  Kadar  asam  lemak  bebas  pada  FTT  merupa- kan  residu  asam  lemak  yang  tidak  tersabunkan  dan dalam  FTT  menurun  drastis  menjadi  4,06%  karena sebagian  besar  asam  lemak  tersaponifikasi  menjadi fraksi  tersabunkan.  Keberadaan  asam  lemak  bebas ini  pada  FTT  tidak  diinginkan  karena  kadar  asam lemak  yang  tinggi  menunjukkan  proses  saponifikasi tidak sempurna.
Data  Tabel  1  menunjukkan  tingkat  oksidasi DALMS  dan  FTT  berupa  bilangan  peroksida  (produk oksidasi  primer)  dan  bilangan  anisidin  (produk oksiasi  sekunder).  Produk  oksidasi  minyak  bersifat volatil  sehingga  menguap  pada  proses  deodorisasi. Pada  tahap  distilasi  untuk  mengambil  kembali  asam lemak  bebas,  kemungkinan  produk  oksidasi  minyak hanya  sebagian  yang  mengalami  kondensasi  se- hingga  kadarnya  dalam  DALMS  cukup  rendah.  FTT mempunyai  tingkat  oksidasi  yang  lebih  rendah daripada  DALMS.  Pada  proses  pembuatan  FTT, diduga  produk  oksidasi  primer  dan  sekunder  ada
fraksi  tersabunkan  sehingga  kadarnya  pada  FTT lebih  rendah.  Hal  ini  menguntungkan  jika  FTT DALMS akan dimanfaatkan sebagai sumber senyawa  bioaktif  karena  produk  oksidasi  lipid  yang berefek  negatif  terhadap  kesehatan  berada  pada kadar  yang  rendah.
Tabel  1. Karakteristik kimia DALMS  dan FTT Karakteristik DALMS FTT Kadar asam lemak bebas (%) 80,74  0,49 4,06  0,70 Bilangan peroksida (mek O 2 /kg) 4,74  0,78 3,31  0,35 Bilangan anisidin 2,79  0,67 2,32  0,20 Rendemen 2,17  0,39

## Kadar senyawa bioaktif DALMS dan FTT
Senyawa bioaktif yang terdeteksi dalam DALMS  adalah  vitamin  E,  fitosterol,  dan  skualen. Loganathan et  al .  (2009)  menunjukkan  bahwa minyak  sawit  mengandung  vitamin  E  600-1000  ppm, fitosterol  300-620  ppm,  karotenoid  500-700  ppm, skualen  250-540  ppm,  fosfolipid  20-100  ppm,  ko- enzim  Q10  10-80  ppm,  dan  polifenol  40-70  ppm. Tabel  2  menunjukkan  bahwa  secara  umum  senyawa bioaktif  yang  paling  banyak  terdapat  dalam  DALMS adalah  vitamin  E. Distillate  deodorizer dari  berbagai jenis  minyak  nabati  bervariasi  dengan  komponen dominan  dalam distillate  deodorizer minyak  kedelai adalah  fitosterol  (Khatoon et  al., 2010),  minyak canola dan  biji  bunga  matahari  adalah  fitosterol  (Naz et  al., 2014),  minyak  jagung  adalah  fitosterol  (Majoni dan  Wang,  2010),  sedangkan  Wan et  al .  (2008)  me- nyatakan  bahwa  minyak  kedelai  didominasi  toko- ferol.  Jika  dibandingkan  dengan distillate  deodorizer minyak  lain,  kadar  tokoferol  dalam  minyak canola dan  biji  bunga  matahari  adalah  3,77-6,59%  dan 6,51%  (Naz et  al .,  2014),  sedangkan  DALMS  me- ngandung  vitamin  E  4,77%.  Vitamin  E  dalam  minyak canola dan  biji  bunga  matahari  didominasi  tokoferol (Naz et  al .,  2014)  sedangan  DALMS  didominasi
tokotrienol.  Fitosterol  dalam distillate  deodorizer minyak  kedelai  adalah  6-10%  atau  60.000-100.000 ppm  (Khatoon et  al .,  2010)  sedangkan  penelitian  ini menunjukkan  kadar  fitosterol  DALMS  6.400  ppm. Naz et  al .  (2014)  menunjukkan  kadar  skualen  dalam distillate  deodorizer minyak canola dan  biji  bunga matahari  adalah  3,49  dan  4,51%,  sedangkan DALMS  menunjukkan  kadar  skualen  0,14%.  Dapat disimpulkan  bahwa  DALMS  mengandung  senyawa bioaktif  yang  lebih  rendah  dibandingkan distillate deodorizer minyak  lain.  Kadar  senyawa  bioaktif  yang lebih  rendah  dalam  DALMS  dibandingkan distillate deodorizer minyak  nabati  lain  disebabkan  kadar asam  lemak  bebas  DALMS  yang  tinggi  sehingga komponen  non  asam  lemak  termasuk  senyawa bioaktif  menjadi  rendah.  Benites et  al. (2009)  me- laporkan  kadar  asam  lemak  bebas  dalam distillate deodorizer minyak  kedelai  adalah  53%,  sedangkan DALMS  mengandung  asam  lemak  bebas  sekitar 80%.
Data  pada  Tabel  2  menunjukkan  bahwa  pem- buatan  FTT  dari  DALMS  meningkatkan  konsentrasi senyawa  bioaktif.  FTT  mengandung  vitamin  E sebesar  34,24%  (342,4  mg/g),  kadar  fitosterol sebesar  15,48%  (154,8  mg/g),  dan  kadar  skualen sebesar  2,10%  (21,0  mg/g).  Peningkatan  ini  terjadi akibat  senyawa  bioaktif  terakumulasi  dalam  fraksi tidak  tersabunkan.  Keberadaan  senyawa  bioaktif berbagai  komponen  ini  menunjukkan  bahwa  FTT kaya  bioaktif  yang  dapat  saling  bersinergi  untuk memberikan efek positif seperti peningkatan produksi  ASI,  imunomodulator  (Estiasih et  al .,  2013), penurunan  kolesterol  (Estiasih et  al .,  2014),  dan antioksidan  (Estiasih, 2014).

## Karakteristik  mikroemulsi
Fraksi  tidak  tersabunkan  yang  mengandung senyawa  tokoferol,  tokotrienol,  fitosterol,  dan  skua- len,  digunakan  sebagai  fase  terdispersi  dalam  pem- buatan  mikroemulsi.
Tabel  2.  Kadar  senyawa  bioaktif  dalam  DALMS dan  FTT
Senyawa Bioaktif DALMS FTT Mikroemulsi ppm % ppm % ppm % Vitamin E 47,682  517 4,77 342,375  6,095 34,24 714  48 0,071  α tokoferol 775  86 0,08 7,493  234 0,75 2  0,77 0,002  α tokotrienol 10,796  101 1,08 166,700  4,576 16,67 134  9 0,013  δ tokotrienol 1,908  98 0,19 32,121  287 3,21 252  1 0,025  γ tokotrienol 34,201  232 3,42 136,060  998 13,61 325  24 0,033  Total tokotrienol 46,906  431 4,69 334,882  5,861 33,49 712  47 0,071 Fitosterol 64,64  229 0,65 154,757  1,175 15,48 832  39 0,083  Beta sitosterol 1,952  67 0,20 78,506  456 7,85 80  6 0,008  Stigmasterol 1,515  28 0,15 5,254  65 0,53 41  2 0,004  Kampesterol 2,997  134 0,30 70,996  654 7,10 711  31 0,071 Skualen 1,410  347 0,14 2,101  487 2,10 25  1 0,003
0.016 0.018 0.02 0.022 0.024 0.5 1 1.5 V is ko s it a s (g /cm .s ) Konsentrasi Pengemulsi (%) Mikroemulsi Lesitin Mikroemulsi Tween 80 A 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 0.5 1 1.5 In d e ks T u rb id it a s (% ) Konsentrasi Pengemulsi (%)
Mikroemulsi Lesitin
Mikroemulsi Tween 80
B
Metode  yang  digunakan  dalam  pembuatan mikroemulsi adalah metode dengan proses mekanik,  yaitu  homogenisasi  menggunakan  ultra- turax  dengan  kecepatan  12.000  rpm  selama  20 menit.

## Viskositas  mikroemulsi
Pengaruh  penggunaan  jenis  dan  konsentrasi pengemulsi  terhadap  viskositas  mikroemulsi  dapat dilihat  pada  Gambar  1A.  Jenis  dan  konsentrasi pengemulsi tidak memberikan  pengaruh  nyata terhadap  viskositas.  Ada  kecenderungan  bahwa semakin tinggi konsentrasi pengemulsi,  maka viskositas  semakin  meningkat.  Hal  ini  disebabkan fase padatan dalam sistem emulsi semakin meningkat.  Fase  padatan  yang  tinggi  dapat  mem- pengaruhi viskositas mikroemulsi. Pengemulsi merupakan  molekul  amfifilik  yang  berpartisi  pada fase  terdispersi  dan  pendispersi.  Pada  konsentrasi pengemulsi  yang  tinggi,  pengemulsi  dapat  mem- bentuk  misel  (Mozrzymas  dan Rozycka-Roszak, 2010)  yang  berkontribusi  terhadap  peningkatan viskositas  sistem  emulsi.  Konsentrasi  misel  kritis juga dipengaruhi oleh fraksi volume minyak. Semakin  tinggi  pengemulsi,  kemungkinan  pemben- tukkan  misel  semakin  tinggi  sehingga  viskositas sistem  emulsi  meningkat.  Kemungkinan  pembentuk- kan  misel  pada  lesitin  lebih  mudah  dibandingkan tween  80.  Menurut  Widjajanti  dan  Tutik  (2004), konsentrasi  misel  kritis  untuk  lesitin  adalah  (3,62  X 10 -4 %)  pada  kondisi  tanpa  fase  terdispersi  dan kecepatan  agitasi  400  rpm  selama  15  menit.  Fraksi minyak  meningkatkan  konsentrasi  misel  kritis karena lesitin  bermigrasi  pada  antar  muka droplet emulsi untuk  stabilisasi.  Menurut  Mahmood  dan  Koofee (2013)  konsentrasi  misel  kritis  tween  80  adalah 0,0015  mM.
Viskositas  sistem  emulsi  yang  distabilkan  oleh lesitin  cenderung  lebih  tinggi  dibandingkan  tween 80.  Perbedaan  ini  diduga  disebabkan  oleh  perbeda- an  struktur  molekul  keduanya.  Lesitin  merupakan nama  komersial  dari  fosfatidilkolin  (Cheng et  al ., 2014).  Bagian  hidrofobik  lesitin  merupakan  dua rantai  asam  lemak  yang  jenisnya  bergantung  pada sumber  lesitin  (Bueschelberger,  2004).  Asam  lemak dalam  kedelai  didominasi  oleh  asam  lemak  rantai panjang  seperti  linoleat  (Wang  dan  Wang,  2008). Tween  80  atau  nama  lainnya polysorbate 80  adalah pengemulsi  dengan  gugus  hidrofilik  berupa  polio- ksietilen  sorbitan  dan  gugus  hidrofobik  berupa  oleat (Mahmood  dan  Koofee,  2013).  Perbedaan  jumlah asam  lemak  pada  pengemulsi  diduga  berpengaruh terhadap  viskositas  sistem  emulsi.  Menurut  Cheng et  al .  (2014),  fosfolipid  dapat  membentuk  gel  atau fluida  viskoelastis  di dalam  air.

## Stabilitas mikroemulsi terhadap pemisahan
Jenis  dan  konsentrasi  pengemulsi  tidak  mem- berikan  pengaruh  nyata  terhadap  indeks  turbiditas
mikroemulsi.  Pengukuran  stabilitas  terhadap  pe- misahan  ini  dilakukan  setelah  7  hari  penyimpanan pada  suhu  30°C.  Indikator  pemisahan  fase  antara lain  adalah  peningkatan  kekeruhan  yang  dinyatakan dengan  indeks  turbiditas.  Mikroemulsi  dianggap stabil  jika  nilai  turbiditas  kurang  dari  1%  (Cho et  al. , 2008).  Mikroemulsi  memiliki  rerata  turbiditas  di  atas 1%,  ini  menunjukkan  bahwa  mikroemulsi  bersifat tidak stabil.
Gambar  1.  Viskositas  (A)  dan  stabillitas  (indeks turbiditas)  (B)  mikroemulsi  pada  ber- bagai  jenis dan  konsentrasi  pengemulsi
Menurut  Shen et  al .  (2005),  stabilitas  emulsi dipengaruhi  oleh  jenis  surfaktan.  Gambar  1B  me- nunjukkan  bahwa  emulsi  yang  distabilisasi  meng- gunakan  tween  80  cenderung  lebih  stabil  dibanding- kan  lesitin,  walaupun  perlakuan  jenis  dan  konsen- trasi  pengemulsi  tidak  menunjukkan  pengaruh  yang nyata  terhadap  stabilitas  emulsi.  Perbedaan  kecen- derungan  tersebut  diduga  disebabkan  perbedaan nilai  HLB  dari  kedua  pengemulsi  tersebut.  Nilai  HLB tween  80  adalah  15  sedangkan  nilai  HLB  lesitin
adalah  4  (Estiasih et  al .,  2013).  Menurut  Bueschel- berger  (2004),  HLB  pengemulsi  2-6  mempunyai kelarutan  yang  rendah  dalam  air  dan  digunakan untuk  menstabilkan  emulsi  minyak  dalam  air.  HLB untuk  lesitin  biasanya  antara  2-7,  tetapi  karena bersifat  ionik,  kategori  sifat  pengemulsi  berdasarkan HLB  untuk  lesitin  menjadi  tidak  berlaku.  Walaupun demikian,  dari  hasil  penelitian  ini  terlihat  bahwa tween  80  lebih  mampu  menstabilkan  emulsi  FTT. Ada  kesesuaian  jenis  globula  atau droplet fase  ter- dispersi  dengan  jenis  pengemulsi.  Menurut  Hasen- huetti  (2008)  pengemulsi  dengan  asam  lemak  jenuh sesuai  untuk  menstabilkan  lemak  yang  juga  jenuh. FTT  merupakan  kumpulan  senyawa  tidak  tersabun- kan  yang  bersifat  hidrofobik  yang  mengandung vitamin  E,  fitosterol,  dan  skualen.  Pada  suhu  ruang, FTT  bersifat  semi  padat  sehingga  pengemulsi  yang sesuai  adalah  pengemulsi  yang  juga  padat  pada suhu  ruang  atau  lebih  jenuh.  Hal  ini  yang  menye- babkan  tween  80  lebih  mampu  menstabilkan  emulsi FTT  karena  mengandung  asam  lemak  yaitu  oleat yang  lebih  jenuh  dari  asam  lemak  dominan  pada lesitin, yaitu linoleat.
Peningkatan  konsentrasi  pengemulsi  menye- babkan  peningkatan  kestabilan  emulsi.  Hal  ini  dise- babkan oleh ketersediaan pengemulsi yang meningkat  sehingga  jumlahnya  cukup  untuk  men- stabilkan  permukaan droplet emulsi.  Permukaan globula  yang  tersalut  dengan  baik  oleh  pengemulsi akan  menghambat  proses  destabilisasi  yang  diawali dengan  flokulasi,  dilanjutkan  dengan  koalesensi  dan pemisahan  fase.  Indeks  turbiditas  yang  diukur menunjukkan  destabilisasi  emulsi  karena  emulsi yang  mengalami  koalesensi  akan  mempunyai  luas permukaan droplet yang  lebih  rendah  sehingga kenampakan  emulsi  akan  lebih  keruh  akibat  efek Tyndall  atau  penghabluran  cahaya  yang  lebih rendah.

## Distribusi  ukuran partikel mikroemulsi
Ukuran  partikel  mempengaruhi  berbagai  produk yang  mengandung  partikulat  dan  merupakan  salah satu  indikator  mutu  dan  performa  produk.  Dalam sistem  emulsi,  semakin  kecil  ukuran droplet menye- babkan  emulsi  semakin  stabil  (McClements,  2015). Pada  penelitian  ini  distribusi  ukuran  partikel  ditun- jukkan  oleh  nilai  D10,  D50,  dan  D90.  Nilai  D10 menunjukkan  bahwa  terdapat  10%  partikel droplet memiliki  ukuran  lebih  kecil  daripada  ukuran droplet D10.  Demikian  pula  untuk  D50  dan  D90  yang menunjukkan  bahwa  terdapat  50  dan  90% droplet berukuran  lebih  kecil  daripada  ukuran  diameter  D50 dan  D90.  D50  juga  menunjukkan  median  dari ukuran  partikel droplet emulsi.  Lebar  interval  dis- tribusi  partikel  biasa  dinyatakan  sebagai  (D90- D10)/D50  (Cilas, 2004).
Gambar 2 menunjukkan distribusi  ukuran partikel  mikroemulsi  pada  masing-masing  sampel
hanya  terdapat  satu  puncak.  Hal  ini  berarti  bahwa distribusi  ukuran  partikel  bersifat  monomodal  se- bagai  penanda  bahwa  emulsi cukup  stabil.
Menurut  Marquez  dan  Wagner  (2012),  distribusi ukuran droplet emulsi  yang  tidak  stabil  ditunjukkan oleh  hasil  pengamatan  berupa  banyak  puncak (multimodal).  Destabilisasi  emulsi  dengan  distribusi multimodal disebabkan oleh kelompok ukuran droplet emulsi  yang  sangat  beragam.  Perbedaan ukuran  ini  cenderung  menyebabkan  gaya  tarik  antar droplet menjadi  tinggi  sehingga  emulsi  cenderung mengalami Ostwald  ripening sebagai  awal  dari destabilisasi  (Tadros,  2013).  Faktor  penting  yang mempengaruhi  stabilitas  emulsi  adalah  ukuran droplet .  Pada  penelitian  ini  rata-rata  diameter droplet dapat  dilihat  pada  Tabel  3. Droplet emulsi  yang  kecil menunjukkan  emulsi  semakin  stabil  (Ogawa et  al., 2004).  Menurut  Kobayashi et  al .  (2005),  gerak droplet dalam  emulsi  terutama  ditentukan  oleh kesetimbangan  antara  gaya  gravitasi  dan  gerak Brown.  Gravitasi  menyebabkan  sedimentasi droplet , sedangkan  gerak  Brown  mendistribusikan  secara acak droplet dalam  sistem  emulsi.  Gerak  Brown lebih  dominan  untuk droplet emulsi  yang  berukuran kecil  sehingga  dapat  mencegah  fenomena  sedimen- tasi.
Ukuran  droplet  dalam  emulsi  ditentukan  oleh dua  proses  kompetitif  yaitu  pemecahan droplet dan koalesensi  (Henry et  al .,  2010).  Tabel  3  menunjuk- kan  bahwa  rerata  ukuran droplet emulsi  dipengaruhi oleh  jenis  pengemulsi.  Ukuran droplet yang  lebih besar  terdapat  pada  emulsi  yang  distabilkan  oleh lesitin.  Qian et  al .  (2011)  menyatakan  bahwa  jenis pengemulsi  mempengaruhi  ukuran droplet dalam emulsi.  Ukuran droplet emulsi  yang  distabilkan  oleh lesitin  cenderung  lebih  besar  dibandingkan  emulsi yang  distabilkan  oleh  tween  80.  Artinya  tween  80 lebih  baik  dalam  menstabilkan  emulsi  FTT.  Per- bedaan  HLB  dan  struktur  molekul  keduanya  diduga mempengaruhi  kemampuan  stabilisasi.  HLB  tinggi sesuai  untuk  sistem  emulsi  o/w  sedangkan  HLB rendah  untuk  emulsi  w/o,  walaupun  penggunaan HLB  untuk  lesitin  tidak  sepenuhnya  sesuai  akibat lesitin  merupakan  pengemulsi  ionik  (Bueschel- berger,  2004).
Peningkatan  konsentrasi  lesitin  menyebabkan rerata  diameter droplet semakin  menurun,  tetapi  hal sebaliknya  terjadi  untuk  tween  80.  Penurunan  dia- meter droplet emulsi  yang  distabilkan  oleh  lesitin akibat  peningkatan  konsentrasi  lesitin  disebabkan ketersediaan  lesitin  untuk  menstabilkan droplet emulsi  semakin  banyak.  Akibatnya  luas  permukaan droplet yang  dapat  ditutupi  lesitin  semakin  tinggi pada  kondisi  homogenisasi  yang  sama.  Henry et  al. (2010)  menjelaskan  bahwa  fosfolipid  pada  konsen- trasi  tinggi  tidak  menyebabkan  peningkatan  ukuran droplet tetapi  pada  konsentrasi  rendah  dapat  terjadi koalesensi.
Gambar  2.  Distribusi  ukuran  partikel  mikroemulsi  dengan  pengemulsi  lesitin  0,5%  (A),  1,0%  (B),  dan  1,5% (C)  serta  tween  80 0,5%  (D), 1,0%  (E), dan  1,5% (F)
A B X  (Diameter)/µm 0,04 0,1 1,0 10,0 100,0 500,0 In volume/undersize Q3 (C um ul at iv e Va lu es ) /% 20 40 60 80 100 0 In volume/undersize Q3 (C um ul at iv e Va lu es ) /% 0 20 40 60 80 100 X  (Diameter)/µm 0,04 0,1 1,0
10,0 100,0
500,0 C D X  (Diameter)/µm 0,04 0,1 1,0 10,0 100,0 500,0 Q3 (C um ul at iv e Va lu es ) /% 0 20 40 60 80 100 In volume/undersize X  (Diameter)/µm 0,04 0,1 1,0 10,0 100,0 500,0 Q3 (C um ulat iv e Values ) /% 0 20 40 60 80 100 In volume/undersize E F X  (Diameter)/µm 0,04 0,1 1,0 10,0 100,0 500,0 Q3 (C um ul at iv e Va lu es ) /% 0 20 40 60 80 100 In volume/undersize X  (Diameter)/µm 0,04 0,1 1,0 10,0 100,0 500,0 Q3 ( C u m u la tiv e V a lu e s ) /% 0 20 40 60 80 100 In volume/undersize
Pada  sistem  emulsi  yang  distabilkan  oleh tween 80  peningkatan  konsentrasi  tween  80  menye- babkan  rerata  ukuran droplet semakin  meningkat. Lesitin  merupakan  pengemulsi  ionik  yang  pada permukaan  globula  lemak  akan  berkontribusi  mem- berikan  muatan  (Bueschelberger,  2004).  Muatan  ini menyebabkan  gaya  tolak  ( repulsion  forces )  yang turut berperan meningkatkan stabilitas emulsi (Tadros,  2013).  Hasil  penelitian  Yuan et  al .  (2008) menunjukkan peningkatan konsentrasi berbagai jenis  pengemulsi  tween  menyebabkan  penurunan ukuran  partikel  pada  kondisi  homogenisasi  yang sama.  Ukuran  partikel  yang  lebih  kecil  mempunyai luas  permukaan  yang  lebih  besar  yang  membutuh- kan  pengemulsi  yang  lebih  banyak.  Pada  tween  80, penurunan  ukuran droplet emulsi  tidak  terjadi  lagi pada  konsentrasi  lebih  dari  6%  karena  semua  per- mukaan  telah  terselubungi  pengemulsi  dan  penam- bahan  pengemulsi  lebih  lanjut  tidak  akan  digunakan untuk menstabilkan  permukaan droplet .
Gambar  2  dan  Tabel  3  menunjukkan  bahwa semakin  tinggi  konsentrasi  lesitin  menyebabkan rentang  ukuran  partikel droplet emulsi  semakin sempit  yang  berarti  emulsi  semakin  stabil,  akan tetapi  fenomena  sebaliknya  terjadi  untuk  sistem emulsi  yang  distabilisasi  tween  80.  Ukuran droplet yang tidak seragam cenderung menyebabkan flokulasi sebagai tahap awal ketidakstabilan. Flokulasi  cenderung  terjadi  antar droplet yang  ber- ukuran  tidak  seragam. Droplet berukuran  kecil biasanya  menempel  pada droplet berukuran  besar. Dengan  demikian,  ukuran droplet yang  seragam yang  ditunjukkan  rentang  distribusi  ukuran  yang makin sempit menyebabkan  disparitas  ukuran droplet menjadi  kecil,  mengindikasikan  emulsi  men- jadi  lebih  stabil.  Menurut  McClements  (2015) stabilitas  emulsi  dipengaruhi  oleh  distribusi droplet emulsi,  yaitu  emulsi  lebih  stabil  jika droplet ber- ukuran  seragam.  Ukuran droplet yang  seragam  me- nyebabkan  kemungkinan  flokulasi  antar droplet menjadi  lebih  rendah.  Hasil  penelitian  Lu et  al. (2012)  menunjukkan  bahwa  semakin  tinggi  konsen- trasi  fosfolipid  menyebabkan  emulsi  semakin  tidak stabil.  Hal  ini  disebabkan  fosfolipid  yang  berlebihan dapat  menstimulasi  pembentukkan  liposom  dengan air  yang  dapat  terbentuk  pada  saat  homogenisasi. Pada  penelitian  tersebut  konsentrasi  fosfolipid  yang
digunakan  adalah  0,5-10%.  Henry et  al. (2010) sebelumnya  menjelaskan  bahwa  fosfolipid  alami lebih  sesuai  untuk  menstabilkan  emulsi  w/o  diban- dingkan  o/w  karena  nilai  HLB  yang  dimilikinya rendah. Untuk meningkatkan pengguna lesitin terutama  untuk  sistem  emulsi  o/w,  lesitin  biasanya dimodifikasi  dengan  berbagai  cara  seperti  hidrolisis parsial,  atau  penambahan  gugus  lain  yang  lebih hidrofilik.

## Mikrostruktur  mikroemulsi
Pengamatan  mikrostruktur  mikroemulsi  meng- gunakan  SEM  ditujukan  untuk  melihat  kemungkinan adanya  destabilisasi  yang  diindikasikan  dengan flokulasi  atau  koalesensi.  Emulsi  FTT  yang  distabil- kan  dengan  lesitin  atau  tween  80  menunjukkan ukuran droplet yang  beragam  sesuai  dengan  hasil analisis particle  size  analyzer .  Sebagian  besar droplet berbentuk  bulat,  dan  sebagian  kecil  ber- gerombol.  Yuan et  al .  (2008)  melaporkan  bahwa droplet  -karoten  dalam  sistem  nanoemulsi  ber- bentuk  bulat  atau  batang  pendek,  dan  sebagian  ber- bentuk  batang  atau  tidak  beraturan  yang  disebabkan aglomerasi  partikel  kecil.
Gambar  3  menunjukkan  bahwa  emulsi  yang distabilkan  dengan  lesitin  mempunyai  bentuk droplet yang  tidak  beraturan  dan  sebagian  bergerombol yang  mengindikasikan  terjadi  flokulasi  (Gambar  3A) dan  koalesensi  (Gambar  3C).  Emulsi  yang  distabil- kan  lesitin  pada  konsentrasi  0,5  dan  1,5%  menun- jukkan droplet emulsi  yang  lebih  tidak  beraturan dibandingkan  lesitin  1,0%.  Data  ini  sejalan  dengan hasil  analisis  ukuran  pertikel  yang  menunjukkan ukuran droplet emulsi  yang  paling  kecil  terdapat pada  emulsi  yang  distabilkan  dengan  konsentrasi 1,0%.  Pada  konsentrasi  lesitin  rendah,  lesitin  tidak cukup banyak untuk  menstabilkan  permukaan droplet emulsi.
Menurut  Tan  dan  Nakajima  (2005),  ketidak- cukupan  pengemulsi  dalam  menyelubungi  permuka- an droplet dapat  menyebabkan  koalesensi.  Mikro- emulsi  yang  distabilkan  dengan  tween  80  menun- jukkan  bentuk droplet emulsi  yang  lebih  beraturan dan  berbentuk  bulat.  Ukuran droplet terkecil  terlihat pada  mikroemulsi  yang  distabilkan  dengan  tween  80 pada  konsentrasi  0,5%.
Tabel  3. Distribusi ukuran  partikel  mikroemulsi
Pengemulsi Konsentrasi (%) D10 (μm) D50 (μm) D90 (μm) Distribusi Ukuran*  Rerata Diameter (μm) Lesitin 0,5 1,01  0,02 2,37  0,06   4,70  0,11 1,56  0,02 3,04  0,10 1,0 0,78  0,00 1,79  0,05  3,21  0,09 1,36  0,02 2,23  0,06 1,5 0,84  0,01 1,90  0,04  3,40  0,10 1,35  0,03 2,36  0,05 Tween 80 0,5 0,80  0,00 1,71  0,03  3,27  0,08 1,44  0,03 2,22  0,06 1,0 0,77  0,02 1,67  0,03  3,34  0,07 1,54  0,02 2,24  0,05 1,5 0,85  0,01 1,96  0,05  3,99  0,11 1,60  0,02 2,62  0,04
Keterangan: *Dihitung dari (D90-D10)/D50
Hal  ini  sejalan  dengan  analisis  ukuran  partikel yang  menunjukkan  rerata  ukuran droplet terkecil terdapat  pada  konsentrasi  tween  80.  Pada  sistem mikroemulsi ini tidak teramati flokulasi atau koalesensi.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  mikroemulsi yang  distabilkan  tween  80  mempunyai  performa yang  lebih  baik dibandingkan  lesitin.

## Senyawa bioaktif mikroemulsi
Keuntungan  menggunakan  mikroemulsi  adalah ketersediaan  dan  efisiensi  biologis  dari  senyawa bioaktif  lipofilik  yang  lebih  tinggi  dibandingkan  meng- gunakan  sistem  emulsi  biasa.  Mikroemulsi  memiliki luas  permukaan  yang  lebih  besar  sehingga  lebih efektif  sebagai  sistem  pembawa  senyawa  bioaktif. Selain  itu,  mikroemulsi  FTT  lebih  mudah  ditangani dibandingkan FTT  yang  berupa  pasta  kental. Menurut  McClements et  al .  (2015)  bioavailabilitas senyawa  bioaktif  dibatasi  oleh  sifat  fisikokimia  dan fisiologis  dalam  saluran  pencernaan.  Bioavaila- bilitas  ini  dipengaruhi  oleh  keterbatasan  pelepasan, metabolisme  atau  perubahan  selama  melewati saluran  pencernaan,  kelarutan  yang  rendah  dalam cairan  usus,  dan  permeasi  yang  rendah.  Oleh karena  itu,  senyawa  bioaktif  seringkali  diubah strukturnya  untuk  meningkatkan  bioavailabilitasnya, seperti  emulsi.
Kadar  senyawa  bioaktif  yang  terdapat  dalam mikroemulsi  dapat  dilihat  pada  Tabel  1.  Mikroemulsi mempunyai  kadar  senyawa  bioakif  yang  jauh  lebih rendah  dari  FTT  dan  DALMS.  Penelitian-penelitian sebelumnya  melaporkan  bahwa  penggunan homo- genizer bertekanan  tinggi  selama  persiapan  nano- dispersi dapat menurunkan kadar komponen fungsional  (Tan  dan  Nakajima,  2005;  Cheong et  al. , 2008;  Leong et  al .,  2011).  Selain  kemungkinan terjadi  kerusakan  selama  pembuatan  mikroemulsi, penurunan  kadar  senyawa  bioaktif  juga  disebabkan oleh  proses  pengenceran  karena  kadar  FTT  yang digunakan  dalam  sistem mikroemulsi adalah  10%.
Secara  teoritis  seharusnya  kadar  senyawa bioakif  dalam  mikroemulsi  adalah  10%  dari  kadar- nya  di  dalam  FTT.  Penurunan  yang  tajam  dapat disebabkan  oleh  kerusakan  akibat  panas  selama proses  emulsifikasi  akibat  gaya  gesekan  yang  tinggi, atau  juga  senyawa  bioaktif  teroksidasi  akibat inkorporasi  udara  ke  dalam  sistem  emulsi  selama kavitasi.  Anarjan et  al .  (2014)  menduga  bahwa kerusakan  astaxanthin  selama  homogenisasi  pada pembuatan  nanodispersi  disebabkan  oleh  pening- katan  luas  permukaan  droplet  emulsi  dan  pem- bentukkan  radikal  bebas.
Gambar  3. Mikrostruktur  mikroemulsi  dengan  pengemulsi  lesitin  0,5%   (A),  1,0%  (B),  1,5%  (C)  dan  tween  80 0,5% (D),  1,0% (E), dan  1,5% (F)  (perbesaran  20.000  kali).            koalesensi,            flokulasi
D E
F
A B
C

## KESIMPULAN
FTT dapat dibuat emulsi dengan  meng- gunakan  homogenisasi  pada  kecepatan  12.000  rpm selama  20  menit.  Emulsi  yang  dihasilkan  mem- punyai  kisaran  ukuran droplet kurang  dari  10  m yang  dapat  dikategorikan  sebagai  mikroemulsi. Lesitin  dan  tween  80  dapat  menstabilkan  mikro- emulsi  FTT  dan  performa  mikroemulsi  dipengaruhi jenis  pengemulsi  dan  konsentrasinya.  Tween  80 menghasilkan  emulsi  yang  lebih  baik  dibandingkan lesitin  yang  diindikasikan  oleh  ukuran droplet yang lebih  kecil,  rentang  distribusi  ukuran  partikel  yang lebih  sempit,  dan  mikroemulsi  yang  lebih  stabil. Peningkatan  konsentrasi  lesitin  menghasilkan  mikro- emulsi  dengan  distribusi  ukuran droplet yang  lebih sempit,  sedangkan  rata-rata  ukuran  droplet  tidak selalu  lebih  kecil.  Sebaliknya,  peningkatan  konsen- trasi  tween  80  menyebabkan  rata-rata  ukuran droplet dan  interval  distribusi  ukuran droplet yang lebih  besar.  Pengemulsi  yang  sesuai  untuk  mikro- emulsi  FTT  adalah  tween  80  dengan  konsentrasi 0,5%.  Mikroemulsi  ini  mengandung  senyawa  bioaktif berupa  vitamin  E  (terutama  tokotrienol),  fitosterol, dan  skualen,  tetapi  kadarnya  sangat  rendah,  yaitu vitamin  E  714  ppm,  fitosterol  832  ppm,  dan  skualen 25  ppm.

## UCAPAN  TERIMA KASIH
Ucapan  terima  kasih  yang  sebesar-besarnya disampaikan  kepada  Direktorat  Jenderal  Pendidikan Tinggi  Kementerian  Pendidikan  dan  Kebudayaan atas pendanaan penelitian ini melalui Hibah Penelitian  MP3EI  Tahun  2014.

## DAFTAR PUSTAKA
Anarjan  N,  Nehdi  IA,  Sbihi  HM,  Al-Resayes  SI, Malmiri  HJ,  Tan  CP.  2014.  Preparation  of astaxanthin nanodispersions using gelatin- based  stabilizer  systems.  Molecule  19:  14257- 14265.  DOI:  10.3390/molecules190914257.
[AOCS]  American  Oil  Chemist  Society.  1990. Official Methods  and  Recommended  Practices  of  the American  Oil  Chemistry  Society.  4th  ed., Broadmaker  Drive,  Champaign,  Illinois.
Benites  CI,  Chonca  VOC,  Reis  SMPM,  De  Oliveirra OC.  2009.  Physiochemical  characterization  of soybean  oil  deodorizer  distillate.  Chem  Eng Trans  J  17:  903-908.  DOI:  10.3303/CET09171 51.
Bueschelberger  HG.  2004.  Lecithins.  In  Whitehurst RJ  (ed.).  Emulsifiers  in  Food  Technology.  1-39. Blackwell Publishing  Ltd, Oxford.
Cabezas  DM,  Diehl  BWK,  Tomás  MC.  2009.
Sunflower  lecithin:  application  of  a  fractionation process  with  absolute  ethanol.  J  Am  Oil  Chem Soc  86:  189-196.  DOI  10.1007/s11746-00813 36-5.
Cabezas  DM,  Madoery  R,  Diehl  BWK,  Tomas,  MC. 2012. Emulsifying properties of different modified  sunflower  lecithins.  J  Am  Oil  Chem Soc  89:  355 –361.  DOI  10.1007/s11746-011191 5-8.
Cheng  CY,  Oh  H,  Wang  TY,  Raghavan  SR,  Tung SH.  2014.  Mixtures  of  lecithin  and  bile  salt  can form  highly  viscous  wormlike  micellar  solutions in  water.  Langmuir  30:  10221-10230.  DOI: 10.1021/la502380q.
Cheong  JN,  Tan  CP,  Man  YBC,  Misran  M.  2008. Tocopherol nanodispersions: preparation,
characterization  and  stability  evaluation.  J  Food Eng  89:  204-209.  DOI:  10.1016/j.jfoodeng. 2008.04.018.
Cho  YH,  Kim  S,  Bae  EK,  Mok  CK,  Park  J.  2008.
Formulation  of  a  cosurfactant-free  o/w  micro- emulsion  using  nonionic  surfactant  mixtures.  J Food  Sci  73:  115-121.  DOI:  10.1111/j.1750- 3841.2008.00688.x.
Cilas. 2004. Particle size analyzer cilas 920,930e,1064  &  1180  user  Manual.  www. particle-size-analyzer.com.  [28  Oktober  2015].
Estiasih  T,  Ahmadi  K,  Widyaningsih  TD, Maligan JM. 2013.  Senyawa  Bioaktif  Multikomponen  dari Distilat  Asam  Lemak  Minyak  Sawit  untuk  Me- ningkatkan  Nilai  Tambah  Industri  Pengolahan Minyak  Goreng.  Laporan  Penelitian  MP3EI Tahun  2, Universitas  Brawijaya,  Malang.
Estiasih  T,  Ahmadi  K,  Widyaningsih  TD,  Rhitmayanti E,  Fidyasari  S,  Purnomo  K,  Wahyuni  Y.  2014. The  effect  of  unsaponifiable  fraction  from  palm fatty acid distillate on lipid profile of hypercholesterolaemia  rats.  J  Food  Nutr  Res  2: 1029-1036.  DOI:  10.12691/jfnr-2-12-26.
Estiasih  T.  2014.  Antioxidant  Activity  of  Unsaponi- fiable  Fraction  of  Palm  Fatty  Acid  Distillate  on Peroxidation Rats. 10th Young Scientist Seminar,  Nov  16-17,  Yamaguchi,  Jepang.
Gapoor  A,  Hassan  WHW,  Sulong  M.  2002.  Phyto- chemical  for  nutraceutical  from  the  by  product of  palm oil  refining.  Palm Oil Develop  36:  13-19.
Hasenhuetti  GL.  2008.  Synthesis  and  Commercial Preparation  of  Food  Emulsifiers.  In  Hasen- huettl  GL,  Hartel  RW  (eds).  Food  Emulsifiers and Their Applications. 11-30. Springer Science+Business Media  LLC,  New  York.
Henry  JVL,  Fryer  PJ,  Frith  WJ,  Norton  IT.  2010.  The influence  of  phospholipids  and  food  proteins  on the  size  and  stability  of  model  sub-micron
emulsions.  Food  Hydrocolloid  24:  66 –71.  DOI: 10.1016/j.foodhyd.2009. 08.006.
Imai  H,  Maeda  T,  Shima  M,  Adachi  S.  2008. Oxidation  of  methyl  linoleate  in  oil-in-water micro-  and  nanoemulsion  systems.  J  Am  Oil Chem  Soc  85:  809-815.  DOI  10.1007/s11746- 008-1257-3.
[IUPAC]  International  Union  of  Pure  and  Applied Chemistry.  1979.  Standards  Methods  for  the Analysis  of  Oils  and  Fats  Derivatives  6th  edn. Pergamon  Press, Oxford,  (U.K).
Khatoon  S,  Raja  RGR,  Krishna  AGG.  2010. Physicochemical  characteristics  and  compo- sition  of  Indian  soybean  oil  deodorizer  distillate and  the  recovery  of  phytosterols.  J  Am  Oil Chem  Soc  87:  321-326.  DOI:  10.1007/s111746- 009-1499-8.
Kim  OS.  2005.  Radical  scavenging  capacity  and antioxidant  activity  of  the  E  vitamer  fraction  in rice  bran.  J  Food  Sci  70:  208-213.  DOI: 10.1111/j.1365-2621. 2005.tb07127.x.
Kobayashi  I,  Lou  X,  Mukataka  S, Mitsutoshi N. 2005. Preparation of monodisperse  water-in-oil-in- water  emulsions  using  microfluidization  and straight-through  microchannel  emulsification.  J Am  Oil  Chem  Soc  82:  65-71.  DOI:  10.1007/ s11746-005-1044-y.
Leong  WF,  Cheong  KW,  Lai  OM,  Long  K, Man YBC, Misran  M,  Tan  CP.  2011.  Response  surface modeling  of  processing  parameters  for  the preparation of phytosterol nanodispersions using  an  emulsification –evaporation  technique.
J  Am  Oil  Chem  Soc  88:  717 –725.  DOI: 10.1007/s11746-010-1714-7.
Loganathan  R,  Selvaduray  KR,  Radhakrishnan  A, Nesaretnam  K.  2009.  Palm  oil  rich  in  health promoting  phytonutrients.  Palm  Oil  Develop  50: 16-25.
Lu  FSH,  Nielsen  NS,  Baron  CP,  Jensen  LHS,
Jacobsen  C.  2012.  Physico-chemical  pro- perties  of  marine  phospholipid  emulsions.  J  Am Oil  Chem  Soc  89:  2011 –2024.  DOI  10.1007/ s11746-012-2105-z.
Mahmood  ME,  Koofee  DAF.  2013.  Effect  of temperature  changes  on  critical  micelle  con- centration  for  tween  series  surfactant.  Glob  J Sci Frontier  Res Chem  13: 1-8.
Majoni  S,  Wang  T.  2010.  Characterization  of  oil precipitate  and  oil  extracted  from  condensed corn  distiller  solubles.  J  Am  Oil  Chem  Soc  87: 205-213.  DOI:  10.1007/s11746-009-1491-3.
Madaan  V,  Chanana  K,  Kataria  MK,  Bilandi  A.  2014.
Emulsion  technology  and  recent  trends  in emulsion  application.  Int  Res  J  Pharm  5:  533- 542.  DOI:  10.7897/2230-8407.0507108.
Marquez  AL,  Wagner  JR.  2012.  Rheology  of  cream- like  emulsions  prepared  with  soybean  milk  and low  trans  vegetable  fat.  J  Am  Oil  Chem  Soc  89: 1857 –1865.  DOI  10.1007/s11746-012-2093-z.
McClements  DJ.  2015.  Food  Emulsions:  Principles, Practices,  and  Techniques.  3 rd Ed.  11-27,  134- 166.  CRC  Press, Boca Raton,  Florida.
McClements  DJ,  Zou  L,  Zhang  R,  Salvia-Trujillo  L,
Kumosani  T,  Xiao  H.  2015.  Enhancing  nutra- ceutical  performance  using  excipient  foods: designing  food  structures  and  compositions  to increase  bioavailability.  Compr  Rev  Food  Sci  F 14: 824-847.  DOI:  10.1111/1541-4337.  12170.
Mendez  E,  Blanco  M,  Laguna  A,  Garcia  E.  2003.
Isolation  and  characterization  of  a  mixture  of higher primary  aliphatic  alcohols  of  high molecular weight from henequen ( Agave furcroydes L.)  wax.  Revista  CENIC  Ciencias Químicas  34: 35-38.
Mozrzymas  A,  Rozycka-Roszak  B.  2010.  Prediction of  critical  micelle  concentration  of  nonionic surfactants  by  quantitative  structure  property relationship.  Comb  Chem  High  Screen  13:  39- 44.
Naz  S,  Sherazi  STH,  Talpur  FN,  Kara  K,  Uddin  S, Khaskheli  AR.  2014.  Chemical  characterization of canola and sunflower oil deodorizer distillates.  Pol  J  Food  Nutr  Sci  64:  115 –120.
DOI:  10.2478/pjfns-2013-0008.
Nik  AM,  Wright  AJ,  Corredig  M.  2011.  Micellization of  beta-carotene  from  soy-protein  stabilized  oil- in-water  emulsions  under  in  vitro  conditions  of lipolysis.  J  Am  Oil  Chem  Soc  88:  1397 –1407.
DOI:  10.1007/s11746-011-1806-z.
Ogawa  S,  Decker  EA,  McClements  DJ.  2004. Production and characterization of o/w emulsions  containing  droplets  stabilized  by lecithin−chitosan−pectin mutilayered mem- branes.  J  Agr  Food  Chem  52:  3595-3600.  DOI: 10.1021/jf034436k.
Phan  TT,  Attaphong  C,  Sabatini  DA.  2011.  Effect  of extended  surfactant  structure  on  interfacial tension and  microemulsion  formation  with triglycerides.  J  Am  Oil  Chem  Soc  88:  1223 – 1228.  DOI:  10.1007/s11746-011-1784-1.
Qian  C,  Decker  EA,  Xiao  H,  McClements  DJ.  2011.
Comparison  of  biopolymer  emulsifier  perfor- mance  in  formation  and  stabilization  of  orange oil  in  water  emulsion.  J  Am  Oil  Chem  Soc  88: 47-55.  DOI:  10.1007/s11746-010-1658-y.
Shen  Z,  Udabage  P,  Iko  B,  Augustin  MA.  2005. Characterization  of  fish  oil-in-water  emulsions using light-scattering, nuclear magnetic resonance, and gas chromatography-head-
space  analyses.  J  Am  Oil  Chem  Soc  82:  797- 811.  DOI:  10.1007/s11746-005-1146-6.
Tadros  TF.  2013.  Emulsion  Formation,  Stability,  and Rheology. In Tadros TF (ed), Emulsion
Formation  and  Stability.  1 st Ed.  1-75.  Wiley- VCH  Verlag  GmbH  & Co. KgaA, Weinheim.
Tan  CP,  Nakajima.  2005. β-carotene  nanodisper- sions:  preparation,  characterization  and  stability evaluation.  Food  Chem  92:  661-671.  DOI: 10.1016/j.foodchem.2004.08.044.
Wan  J,  Zhang  W,  Jiang  B,  Guo  Y,  Hu  C.  2008. Separation of individual tocopherols from soybean  distillate  by  low  pressure  column chromatography.  J  Am  Oil  Chem  Soc  85:  331- 338.  DOI:  10.1007/s11746-008-1198-x.
Wang  G,  Wang  T.  2008.  Oxidative  stability  of  egg and  soy  lecithin  as  affected  by  transition  metal ions  and  pH  in  emulsion.  J  Agr  Food  Chem  56: 11424-11431.  DOI:  10.1021/jf8022832.
Widjajanti  ELFX,  Tutik  RP.  2004.  Penentuan  kon- sentrasi  misel  kritis  lesitin  secara  turbidmetri.  J Kimia 2: 105-115.
Yuan  Y,  Gao  Y,  Zhao  J,  Mao  L.  2008.  Characteriza- tion  and  stability  evaluation  of  -carotene nanoemulsions  prepared  by  high  pressure homogenization under various emulsifying conditions.  Food  Res  Int  41:  61 –68.  DOI:  10. 1016/j.foodres.2007.09. 006.