## PENILAIAN TNF-ALFA PADA HATI MENCIT JANTAN SETELAH PEMBERIAN EKSTRAK ETANOL MANGGIS Garcinia mangostana L DENGAN METODE IMUNOHISTOKIMIA
Nora Maulina 1*
1 Dosen Pendidikan Dokter, Fakultas Kedokteran Universitas Malikussaleh, Lhokseumawe, Aceh
* Korespondensi: noramaulina@yahoo.co.id

## Abstract
Mangosteen  peel  extract  is  now  widely  used  as  an  alternative  treatment  by  society  as  an  anti-oxidant without  knowing  the  side  effects.  Consumption  Monosodium  glutamate  (MSG)  is  used  as  a  flavor enhancer in the food can cause various side effects due to formation of free radicals in the body such as liver dysfunction. The research method using true experimental designs aimed at comparing the effect of ethanol extract of mangosteen peel (EEKM) on liver damage caused by MSG administration to vitamin E. Of  15  fish  samples  DDW  strain  male  mice,  which  were  divided  into  three  treatment  groups,  namely control  group  /  distilled  water  (P0),  MSG  administration  group  (P2),  group  administration  MSG  and EEKM(P3). Then assessed liver function as well as evaluating the level of immunohistochemical staining of liver damage with TNF-α (NBP1-67 821, pAb, 1:50 dilution). Ethanol extract of mangosteen peel and are able to improve the look of immunohistochemical expression of TNF-α inflammatory process caused by MSG administration(p>0,05).
Keywords : monosodium glutamate, ekstrak etanol kulit manggis, TNF-α.

## PENDAHULUAN
Monosodium  glutamate  ( MSG )  sudah lama  digunakan  di  seluruh  dunia  sebagai penambah  rasa  makanan  dengan L-glutamic acid sebagai  komponen  asam  amino  (Geha et al., 2000) disebabkan penambahan MSG akan membuat  rasa  makanan  menjadi  lebih  lezat. Konsumsi MSG terbanyak  dijumpai  pada masyarakat  Korea  yang  mencapai  1,6  g/hari, sedangkan  di  Indonesia  sekitar  0,6  g/hari. Taiwan  adalah  negara  yang  paling  tinggi konsumsi MSG per kapita, mencapai  3 g/hari, sedangkan Amerika adalah negara yang paling rendah  konsumsi  MSG  per  kapita,  hanya  0,5 g/hari (Prawirohardjo, 2000). Konsumsi tersebut  bisa  tergantung  pada  isi  kandungan MSG dalam  makanan  dan  pilihan  rasa seseorang  (Geha et al .,  2000),  berkisar  antara 0,1 % dan 0,8 % dari makanan yang disajikan.
Glutamate  yang  dikomsumsi  secara  oral direabsorbsi di  rongga usus  dan masuk secara langsung melalui vena portal ke dalam hati, di dalam  hati  plasma  amino  yang  direabsorbsi itu,  konsentrasinya  diubah  sesuai  kebutuhan. Dalam  keadaan  normal  konsentrasi  glutamate relatif  rendah  5–10  μm/100  ml  dalam  darah. Sehingga  pada  konsentrasi  50-70  μm/100  ml dalam darah, glutamate dianggap tinggi (Levi, 2000).
Fungsi  hati  yang  merupakan  tempat utama  untuk  memetabolisme  obat  dan  zat toksik, dikenal sebagai proses biotransformasi. Hasil  akhir  dari  reaksi  ini  berupa  bahan  yang tidak aktif dan lebih  larut  dalam air, sehingga secara  cepat  dapat  diekskresi  melalui  empedu atau  urin.  (Malarkey,  2005).  Gejala  awal hepatotoksik  ditandai  dengan  peningkatan enzim-enzim  transaminase  dalam  serum.  Ada dua jenis aminotransferase yang sering diukur
yaitu
SGPT ( glutamate
pyruvate transaminase )/ ALT ( alanin transaminase ) dan
SGOT ( glutamate oksaloasetat transaminase )/ AST ( aspartate  transaminase ) (Morgan,  1996;  Huriawati,  2002;  Siti,  1995). Adanya  enzim  di  dalam  sel,  menyebabkan peningkatan  jumlah  enzim  yang  merupakan konsekuensi  dari  jejas  sel  sehingga  molekul- mole kul  intrasel  dapat  lolos  keluar (Huriawati, 2002).
Tumor  Necrosis  Factor merupakan faktor  pertama  dalam  peningkatan  inflamasi dan  berguna  dalam  mengaktifkan  makrofag pada  pertahanan host terhadap  mikroba  yang menginvasi selama terjadinya infeksi. Sehingga TNF dapat memediasi efek menguntungkan dan efek merugikan tergantung  pada  keadaan  proses  penyakitnya. Tumor  Necrosis  Factor kini  diketahui  terlibat dalam merangsang produksi sitokin, meningkatkan  ekspresi  molekul  adhesi  dan aktivasi  netrofil,  juga  merupakan  stimulator tambahan  untuk  aktivasi  sel  T  dan  produksi antibodi oleh sel B. Meskipun tingkat sirkulasi level TNF sangat  bervariasi,  upregulasi  dari ekspresi gen telah dilibatkan dalam patogenesis  berbagai  jenis  penyakit  dengan komponen inflamasi, autoimun, proses infeksi akut dan kronis (Jimena Cuenca et al ., 2001).

## METODE

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan:  Kandang  mencit dan  perlengkapannya,  jarum gavage untuk cekok tikus, timbangan, sekam padi. Seperangkat  alat  pemeriksaan  dengan  tekhnik imunohistokomia.  Timbangan  tikus,  gelas arloji, spuit 1 ml, bak bedah dan dissecting set , cawan  petri,  batang  pengaduk,  handscoen, masker,  kertas  milli.  Mikroskop  binokuler dengan merek Olympus CX21 Bahan  yang  digunakan: (a) Pericarp (bagian dalam kulit manggis) telah dideterminasi di Herbarium Medanense ( MEDA )  jurusan  biologi  Fakultas  Matematika
dan Ilmu pengetahuan Alam (MIPA) Universitas  Sumatera  Utara,  dan  diekstrakkan di  Fakultas  Farmasi  Universitas  Sumatera Utara. Hewan coba mencit jantan strain DDW umur  8-12  minggu  dan  berat  badan  25-30gr, berasal  dari  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu pengetahuan Alam (MIPA) Universitas Sumatera  Utara;  (b)  Pakan  standar  mencit berupa pellet produksi PT. Chaevron Pokphan Medan  dicampur  jagung  halus  dengan perbandingan 2:1.

## Prosedur kerja
Persiapan  dan  pemeliharaan  hewan mencit: Mencit  dipelihara  dalam  kandang plastik  (ukuran  30  x  20  x  10cm)  dengan anyaman  kawat  sebagai  penutup,  dasar kandang  dilapisi  sekam  padi  setebal  0,5-1cm dan diganti setiap tiga hari, ditempatkan dalam ruangan yang memiliki ventilasi dan mendapat cahaya  matahari  secara  tidak  langsung. Kandang  tempat  makan  dan  minum  mencit dibersihkan  setidaknya  tiga  kali  dalam seminggu. Sebelum perlakuan, mencit diaklimatisasi  selama  seminggu.  Pemberian makan dan minum dilakukan setiap hari secara ad libitum . Pakan yang diberikan berupa pellet c-0,5 produksi  PT.Chaevron  Pokphan  Medan dan  aquades.  Cahaya  ruangan,  kelembaban ruangan  dan  suhu  berada  pada  kisaran alamiah.  Sampel  yang  terdiri  dari  15  ekor mencit dibagi  secara  acak dalam 3 kelompok, masing-masing  kelompok  5  ekor.  Tiap kelompok diberi kode kelompok I, II, dan III.
Perlakuan  diberikan  sesuai  dengan kelompok.  Pakan  diberikan  setelah  perlakuan dilakukan berupa pellet yang dicampur jagung halus  dengan  perbandingan  2  :  1  diberikan secara ad libitum setiap pagi hari jam ± 10.00- 11.00  WIB  sebanyak  0,5-0,7  gr/hari/mencit serta air minum dari ledeng ( PAM , Perusahaan Air Minum) .
Prosedur  pembedahan  hewan  mencit. Prosedur pembedahan dilakukan melalui tahap persiapan,  pembedahan  dan  sanitasi.  Pada
tahap  persiapan,  disiapkan  pot  yang  sudah diberi  label  sesuai  dengan  nomor  perlakuan mencit  yang akan dilakukan pembedahan. Pot organ diisi dengan formalin buffer 10% untuk menyimpan  organ.  Disiapkan  spuit  insulin  1 ml  yang  sudah  diberi  label.  Disiapkan peralatan  bedah  seperti  gunting  bedah,  pinset, gelas  arloji,  cawan  petri,  papan  bedah,  pins, beker  glas.  Tahap  pembedahan,  mencit dibunuh secara neck dislocation .
Mencit  diposisikan  pada  papan  bedah menggunakan pins. Dibedah mulai dari bagian perut  menggunakan  gunting  bengkok.  Darah langsung  diambil  dari  jantung,  masukkan kedalam  tempat  penyimpanan  berisikan  es sebelum  dibawa  ke  laboratorium  dan  organ hati  diambil,  dibersihkan  dari  kotoran  yang menempel, dicuci  dengan menggunakan NaCl 0,9%  sampai  bersih.  Secara  makroskopik, ditimbang  berat  dan  ukuran  hati  mencit  dan selanjutnya diamati perubahan warna, konsistensi dan permukaan pada hati, dimasukkan kedalam pot berisi formalin buffer 10%.  Tahap  sanitasi  dilakukan  dengan  cara memasukkan  sisa  organ  mencit  yang  tidak terpakai  dalam  kantong  plastik  yang  akan dibuang.  Tempat  kerja  sisa  melakukan pembedahan  dibersihkan  dan  semua  peralatan bedah yang terpakai dibersihkan.
Pembuatan  Ekstrak  Etanol  Kulit  Buah Manggis. Sampel  yang  digunakan  pada penelitian ini adalah kulit buah manggis, yang diperoleh  dari  desa  pantai  Gemi,  Stabat,  dari kebun  penduduk  desa.  Kulit  buah  dibersihkan dari  pengotor  lalu  dicuci  hingga  bersih, dikupas  kulit  buah  terluar  dan  ditimbang. Diperoleh  berat  basah  sebesar  10  kg. Selanjutnya  kulit  buah  tersebut  dikeringkan selama  7  hari  dalam  lemari  pengering  dengan temperatur  40 o C  sampai  kulit  buah  kering, didapat berat kering 2454,7 gr. Simplisia yang telah  kering  di  blender  menjadi  serbuk  lalu dimasukkan  ke  dalam  wadah  plastik  bertutup dan  di  simpan  pada  suhu  kamar.  Kemudian
serbuk ditimbang, maka diperoleh berat kering sebesar 2262,8 gr.
Serbuk  simplisia  yang  telah  kering  tadi kemudian  dimasukkan  ke  dalam  bejana tertutup  sebanyak  2262,8  gr  dan  kemudian dibasahi  dengan  etanol  96%,  sampai  semua serbuk  terendam,  biarkan  selama  lima  hari sambil  diaduk  3-4  kali  sehari.  Setelah  itu massa  dipindahkan  ke  dalam  corong  dan disaring dengan menggunakan kertas penyaring.  Hasil  penyaringan  yang  diperoleh dipekatkan  dengan  alat rotary  evaporator . Kemudian dikeringkan selama lebih kurang 24 jam dan diperoleh ekstrak kental sebanyak 700 gr yang telah siap digunakan.
Prosedur  pewarnaan  Imunohistokimia . Dilakukan  deparafinisasi  slide  memakai  3 larutan Xylol 1,2 dan 3 masing-masing selama 5  menit,  kemudian  dilakukan  proses  rehidrasi untuk  menghilangkan  sisa  xylol  dengan menggunakan larutan alkohol absolut, alkohol 96%,  alkohol  80%,  dan  alkohol  70%  masing- masing  selama  4  menit,  kemudian  dicuci dibawah  air  mengalir  selama  5  menit. Masukkan  slide  ke  dalam  mesin  pengering merk  PT.  Link  Dako  Epitope  Retrieval, kemudian diatur set up Preheat 65 o C, running time 98 o C selama 15 menit, tunggu sampai ± 1 jam, setelah slide kering, dengan menggunakan  spidol  pap  pen,  preparat  yang ada di slide dilingkari agar pada saat penetesan antibody  atau  cairan  lainnya  tidak  keluar melewati batas lingkaran pap pen tadi.
Slide dimasukkan kedalam larutan Tris Buffered Saline ( TBS ) pH 7,4 selama 5 menit, kemudian dilakukan blocking dengan peroxidase ,  selama  5-10  menit,  kemudian kembali  dicuci  dalam  larutan Tris  Buffered Saline ( TBS ) pH 7,4  selama 5 menit blocking kembali  dengan Normal  horse  serum ( NSH ) 3%,  selama  15  menit,  cuci  dalam  larutan Tris Buffered Saline ( TBS ) pH 7,4  selama 5 menit. Setelah  itu  barulah    diinkubasi  dengan antibodi TNF-α  NBP1-67821)  pAb, dengan besar  unit  0.05  mg,  masing-masing  selama  1
jam.  Cuci  kembali  kedalam  larutan Tris Buffered  Saline ( TBS )  pH  7,4  atau Tween 20 selama 5 menit, kemudian simpan kedalam rak slide  dengan  merk Dako  Real  Envision Rabbit/Mouse selama  30  menit.  Setelah  itu slide  kembali  dicuci  dalam  larutan Tris Buffered  Saline ( TBS )  pH  7,4  atau Tween 20 selama  5-10  menit.  Kemudian  slide  ditetesi dengan kromogen Diamino Benzidin ( DAB ) + Substrat
Chromogen solution dengan pengenceran  20µL DAB :1000  µL  substrat (dapat  bertahan  5  hari  di  suhu  2-8 o C  setelah di-mix)  selama  5  menit,  di  cuci  kembali dengan air mengalir dan dilakukan pewarnaan dengan  Hematoxylin  masing-masing  selama 10 menit.
Sediaan  tersenut  dicuci  dibawah  air mengalir  selama  5  menit,  celupkan  slide preparat  kedalam  lithium carbonat  (5% dalam aqua)  selama  2  menit,  cuci  dengan  air mengalir  dan  kembali  dilakukan  proses pengeringan cairan sebelumnya dengan proses dehidrasi  menggunakan  alkohol  80%,  alkohol 96%,  alkohol  Absolut  masing-masing  selama 5  menit,  kemudian  clearing  dengan  larutan Xylol  1,  Xylol  2,  Xylol  3  masing-masing selama 5 menit, kemudian mounting dan tutup slide preparat dengan cover glass, dan preparat siap dilihat atau dinilai.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Prosedur pengamatan Imunohistokimia antioksidan TNF-α pada hati mencit
Pengamatan  dilakukan  oleh  peneliti  dan dua  ahli  patologi  anatomi  tanpa  mengetahui kelompok  perlakuan.  Jaringan  hati  yang  telah dibuat  menjadi  preparat  blok  parafin,  dan diwarnai  dengan  pewarnaan  imunohistokimia akan  diamati  di  bawah  mikroskop  cahaya,
dengan  pembesaran  40x,  100x  dan  400x  dan dinilai tampilan pewarnaan berupa:
a. Positif  :  tertampil  warna  kecoklatan pada inti sel dari jaringan hati b. Negatif:  tidak  tertampilnya  warna kecoklatan pada inti sel  jaringan hati. Kontrol yang digunakan adalah:
- Kontrol  positif,  digunakan  jaringan yang berasal dari ca colon.
Dinilai kekuatan tampilan warna kecoklatan  yang  dibandingkan  dengan  warna coklat  yang tertampil pada kontrol positif dan diberi kategori sebagai berikut:
- 0  =  Tidak tertampil / negatif - 1  =  Tertampil lemah - 2  =  Tertampil sedang - 3  =   Tertampil kuat
Selain  itu  juga  dinilai  luas  tampilan  hasil pewarnaan dan diberi skor sebagai berikut: - 0   =  Tidak tertampil - 1    =    <  25%    yang  terwarnai  positif pada membran sitoplasma - 2    =  25  –  50%    yang  terwarnai  positif pada membran sitoplasma -      3      =  >  50%    yang  terwarnai positif pada membran sitoplasma
Hasil penilaian imunohistokimia merupakan  hasil  perkalian  antara  intensitas tampilan  cokelat  dengan  luas  tampilan, didapatkan penilaian skor sebagai berikut.: - 0    = negatif - 1 - 3 = tampilan lemah - 4 - 6 = tampilan sedang - 7 - 9 = tampilan kuat
Hasil  pengamatan  terhadap  tampilan pewarnaan imuhistokimia TNF -α pada sel hati setelah diberikan perlakuan dengan pemberian MSG dan  ekstrak  etanol  kulit  manggis  dapat dilihat pada Table berikut.
Kelompok Intensitas warna Luas Tampilan Jumlah (I.Warna x L.Tampilan) Kategori P0 = Kontrol negatif P1 = MSG 2 3 1 2 2 6 2 4 P2 = MSG+EEKM 2 2 4 3
Keterangan: MSG =Monosodium glutamate, EEKM = Ekstrak etanol kulit manggis
Uji Kruskal Wallis menunjukkan  bahwa derajat kerusakan hati yang dinilai berdasarkan tampilan pewarnaan imunohistokimia TNF -α menunjukkan
perbedaan yang bermakna di antara kelompok perlakuan (p<0,05). Tampilan imunohistokimia TNF-α yang tertampil paling kuat adalah pada kelompok perlakuan P1 yang mendapat MSG selama  21  hari.  Pada kelompok  perlakuan  P2  yang  mendapat ekstrak  etanol  kulit  manggis  selama  14  hari. Hasil  uji Mann - Whitney menunjukkan  adanya perbedaan  yang  bermakna  antara  kelompok perlakuan  P1  dengan  kelompok  perlakuan  P2 dan kelompok perlakuan P3 (p < 0,05), namun tidak  ada  perbedaan  yang  bermakna  antara kelompok  perlakuan  P2  dengan  kelompok perlakuan P3 (p>0,05).
Gambaran  histopatologi  hati  yang  dinilai dengan  tampilan  pewarnaan  imunohistokimia TNF-α yang  terberat  adalah  terdapat  pada kelompok  mencit  yang  hanya  mendapatkan MSG selama 21 hari (kelompok perlakuan P1). Dimana  kelompok  P1  ini  menunjukkan tampilan  imunohistokimia TNF-α pada  hati yang  paling  kuat  dibandingkan  dengan kelompok perlakuan lainnya (kelompok perlakuan  P2,  dan  kelompok  perlakuan  P3). Perbaikan  gambaran  histopatologi  hati  yang dinilai berdasarkan tampilan pewarnaan imunohistokimia TNF-α terdapat pada kelompok  yang  mendapat  ekstrak  etanol  kulit manggis  selama  14  hari  setelah  pemberian MSG 21 hari (kelompok perlakuan P2.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  dan  pembahasan yang telah dikemukakan, maka dapat dinyatakan  bahwa  ekspresi  proses  inflamasi TNF-α akibat pemberian MSG , dapat diperbaiki  masing-masing  dengan  pemberian ekstrak  etanol  kulit  manggis  dan  vitamin  E (p<0,05).

## UCAPAN TERIMA KASIH
Artikel  ini  merupakan  hasil  mini  riset ketika  Penulis  masih  mengikuti  Program Magister Ilmu Biomedik di Fakultas Kedokteran  Universitas  Sumatera  Utara, Medan.  Oleh  sebab  itu,  melalui  kesempatan ini Penulis menghaturkan terima kasih kepada Dekan  FK  USU  beserta  Staf,  Ketua  Program Studi  Magister  Ilmu  Biomedik  FK  USU, khususnya kepada Prof. dr. Gusbakti Rusip,M. Sc,PKK, A.I.F.M. dan  dr. Betty, M.Ked (PA), Sp.PA atas bimbingan dan arahannya.

## DAFTAR PUSTAKA
Geha,  R.,  Beiser,  A.  Ren,  C.  Patterson,  R., Greenberger,  P.,  Grammer,  L.,  Ditto, A.,  Harris  K.,  Saughnessy,  M., Yarnold,  P.,  Corrent,  J.,  &  Saxon,  A. (2000). Review of allerged reaction   to monosodium glutamate and outcome of  a  multicenter  double-blind  placebo- controlled study. The   journal of nutrition , 130, 1058-1062.
Huriawati  Hartanto.  (2002).  Tinjauan  Klinis
Hasil Pemeriksaan Laboratorium
(Terjemahan).  ed  11.  Jakarta  :  EGC,  ;
341-71.
Jimena  Cuenca,  C.  A.  P.,  Adam  J,  Aguirre,
Irene Schiattino, Carlos Aguillon (2001). Genetic    polymorphism  at  position  -308 in  the  promoter  region  of  the  tumor necrosis factor (TNF) Implications of its allelic  distribution  on  susceptibility  or resistance  to  disease  in  the  Chilean population. Biological research.
Ji LL. (1999). Antioxidant and oxidative stress in exercise. Proceeding of the society for Exsperimental  Biology  and  Medicine 222: 283-292
Johnston, D. E. (1999). Special considerations in  interpreting  liver  function  test.  Am Fam Physician (59): 2223-2230 Jose  Pedraza-Chaverri  :  Noemi  Cardenas-
Rodriquez, Marisol Orozco-Ibbrra, Jazmin  M    Perez.  Faculted  de  quimica, Departemento  de  Biologia  Universad (2008).  Nacional  Automa  de  mexico (UNAM),  in    Food  and  Chemical Toxicology.
Jung  HA,  Su  BN,  Keller  WJ,  Mehta  RG, Kinghorn  AD.  (  2006).  Antioxidant xanthones from  the  pericarp  of  Garcinia mangostana (Mangosteen), J Agric Food Chem, 54(6):2077-2082.
Kaneda,  K.,  Teramoto,  K.,  Yamamoto,  H.,
Wake,  K.  and  Kamada,  N.  (1991). Localization  and  ultrastructure  of  the kupffer cells in orthopically transpalated liver  grafts  in  the  rats.  Transplant  Int (4):205-209.
Klejdus,  B.,  J.  Vacek,  L.  Benesová,  J. Kopecký,  O.  Lapcík  and  V.  Kubán. (2007).  Rapid-resolution  HPLC  with spectrometric detection for the
determination  and  identification  of isoflavones in soy preparations and plant extracts.  Anal.  Bioanal.  Chem.  389: 2277-2285.
Kinoshita S, Udaka S, Shimamoto M. (1957). "Studies  on  amino  acid  fermentation. Part I. Production of L-glutamic acid by various  microorganisms". J  Gen  Appl Microbiol 3: 193.
Kumar,  V.,Abbas,  A.K.,  Fausto,N.  (2005).
Cellular  Adaptations,  Cell  injury,  and Cell  death.  Dalam  pathologi  basic  of disease,  Edisi  ke  7.  Philadelphia:  WB Saunders Company, hlm 1-46.
Kumar,  V,  Abbas,  A.K.,  Fausto,N.  (2010).
Cellular  Adaptations,  Cell  injury,  and Cell  death.  Dalam  pathologi  basic  of disease,  Edisi  ke  8.  Philadelphia:  WB Saunders Company, hlm 1-46
Lauralee Sherwood. (2007). Fisiologi Manusia
Dari  Sel  ke  Sistem,  Edisi  2.  Penerbit Buku Kedokteran EGC.
Levi, P. E. (2000).  Toxic  action. In Hodgson, E  and  Levi,  P.  E.  (Eds).  Modern toxicology  Elsivier,  New  Yak.  P. 133- 184.
Malarkey,  D.  E.,  Johnson,  K.,Ryan,  L.,
Boorman, G.and Maronpot, R.R. (2005). New  Insights  into  Funtional  Aspects  of Liver Morphology. Toxicologic Pathology (33): 27-34. Muhammad, M. & Kelly, M.  (2000). The
administration to indonesians of monosodium  L-glutamate  in  Indonesian foods, crossover, placebo-controlled study, Journal of Nutrition ,
Netter,    F.,  (2010).  Interactive  Atlas  Of
Human Anatomy, Ciba Geigy Corporation ,
Setiawati  A,  Suyatna  FD,  Gan  S.  (2007).
Pengantar  farmakologi.  In:  Gunawan
SG,Setiabudy  R,  Nafrialdi,  Elysabeth. Farmakologi dan terapi. 5th ed. Jakarta:Departemen  Farmakologi  dan Terapeutik Fakultas Kedokteran UniversitasIndonesia; 1-11.
Thannical  VJ,  BL  Fanburg.  (2000)  Reactive Oxygen  Species  in  cell  signaling,  Am  J
physiol Lung Cell Mol Physiol,
279:1005-1028
Weecharangsan,  W.,  Opanasopit,  P.,  Sukma, M.,  Ngawhirunpat,  T.,  Sotanaphun,  U.,
Siripong,  P.  (2006).  Antioxidative  and Neuroprotective  Activities  of  Extracts from  The  Fruit  Hull  of  Mangosteen (Garcinia mangostana Linn.). Med Princ Pract , 15, 281-287.