## UJI KUALITATIF KEBERADAAN BAKTERI PATOGEN DAN TOTAL BAKTERI PADA BIOKONVERSI MANURE LAYER UNTUK BAHAN BAKU KONSENTRAT KAMBING
Farah Fadillah a , Sujatmiko b , Ramaiyulis c *
a Mahasiswa Program Studi Teknologi Produksi Ternak, Politeknik Pertanian Negeri Payakumbuh, Lima Puluh Kota, Sumatera Barat, 26271.
b Dosen Program Studi Paramedik Veteriner, Politeknik Pertanian Negeri Payakumbuh, Lima Puluh Kota, Sumatera Barat, 26271.
c Dosen Program Studi Teknologi Produksi Ternak, Politeknik Pertanian Negeri Payakumbuh, Lima Puluh Kota, Sumatera Barat, 26271.
Article history: Received: 11-07-2024 Revised: 21-08-2024 Accepted: 21-08-2024
Corresponding author: Ramaiyulis Program Studi Teknologi Produksi Ternak, Politeknik Pertanian Negeri Payakumbuh
Email: ramaiyulis@gmail.com
ABSTRAK : Manure  layer memiliki  kandungan  protein  kasar  yang  tinggi,  yang bermanfaat bagi mikroba rumen, namun penggunaannya terbatas oleh risiko kontaminasi patogen  seperti Escherichia  coli dan Salmonella  sp .  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui  total  bakteri,  keberadaan  bakteri Salmonella  sp .  dan Escherichia  coli ,  serta keberadaan  telur  cacing  pada  biokonversi Manure  layer sebagai  bahan  baku  konsentrat pakan kambing. Penelitian ini menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan 4 perlakuan dan 4 ulangan: A) Manure layer + T. viride (3 ml) + S. cerevisiae (3 ml); B) Manure layer + A. niger (3 ml) + S. cerevisiae (3 ml); C) Manure layer + T. viride (2 ml) + A. niger (2 ml) + S. cerevisiae (2 ml); dan D) Manure layer + A. niger (2 ml) + T. viride (2 ml) + S. cerevisiae (2 ml). Parameter yang diamati meliputi kandungan bahan organik, total bakteri (TPC), uji kualitatif Salmonella sp ., uji kualitatif Escherichia coli , serta total telur cacing. Hasil penelitian menunjukkan bahwa inokulasi kapang Trichoderma viride , Aspergillus niger , dan khamir Saccharomyces cerevisiae berpengaruh signifikan terhadap bahan  organik  (P<0,01).  Perlakuan  B  dengan  kombinasi A.  niger dan S.  cerevisiae menghasilkan total bakteri tertinggi dibandingkan perlakuan lainnya. Pada perlakuan ini, tidak ditemukan bakteri Salmonella sp ., namun Escherichia coli masih ada dalam jumlah kecil. Tidak ditemukan telur cacing pada biokonversi Manure layer di semua perlakuan..
Kata kunci: Manure layer , Biokonversi, Salmonella sp , Escherichia coli .
ABSTRACT: Manure  layer  has  a  high  crude  protein  content,  which  is  beneficial  for rumen microbes, but its use is limited by the risk of contamination by pathogens such as Escherichia  coli  and  Salmonella  sp.  This  study  aims  to  determine  the  total  number  of bacteria, the presence of Salmonella sp. and Escherichia coli, as well as the presence of worm eggs in the bioconversion of Manure layer as raw material for goat feed concentrate. This research was design with  Completely Randomized Design (CRD) with 4 treatments and 4 replications: A) Manure layer + T. viride (3 ml) + S. cerevisiae (3 ml); B) Manure layer + A. niger (3 ml) + S. cerevisiae (3 ml); C) Manure layer + T. viride (2 ml) + A. niger (2 ml) + S. cerevisiae (2 ml); and D) Manure layer + A. niger (2 ml) + T. viride (2 ml)  +  S.  cerevisiae  (2  ml).  Parameters  observed  included  organic  matter  content,  total bacteria (TPC), Salmonella sp. qualitative test, Escherichia coli qualitative test, and total worm eggs. The results showed that inoculation of Trichoderma viride, Aspergillus niger, and    Saccharomyces  cerevisiae  had  a  significant  effect  on  organic  matter  (P<0.01). Treatment B with a combination of A. niger and S. cerevisiae produced the highest total bacteria compared to other treatments. In this treatment, no Salmonella sp. Bacteria were found, but Escherichia coli was still present in small quantities. No worm eggs were found in the bioconversion Manure layer in all treatments.
Keywords: Manure layer, Bioconversion, Salmonella sp, Escherichia coli.

## JURNAL SAINS DAN TEKNOLOGI INDUSTRI PETERNAKAN
Fadillah  F,  Sujatmiko,  Ramaiyulis/  Uji  Kualitatif  Keberadaan  Bakteri  Patogen  dan  Total  Bakteri  pada Biokonversi Manure Layer untuk Bahan Baku Konsentrat Kambing.
https://doi.org/10.55678/jstip.v4i2.1573

## PENDAHULUAN
Penggunaan  bahan  pakan  alternatif  untuk mengatasi  keterbatasan  sumber  pakan  menjadi strategi  penyediaan  pakan.  Limbah  peternakan berupa Manure layer dari kandang closed house berpotensial  digunakan  karena  relatif  murni, tidak  banyak  dihinggapi  lalat,  dan  sistem pengelolaannya lebih baik dibandingkan dengan kandang terbuka. Manure layer tertampung pada tempat  khusus  (berupa  ban  berjalan)  dan dikumpulkan dua kali sehari. Manure layer dapat menyebabkan dampak masalah kesehatan lingkungan,  seperti  meningkatnya  polusi  udara, air  dan  tanah  serta  penyebaran  penyakit (Yanuartono et al ., 2018).
Manure  layer mengandung  nutrisi  sisa pencernaan  pakan  ayam,  berupa  protein  kasar 9,97%,  lemak  kasar  2,39%,  BETN  27,96%,  Ca 7,6%,  P  1,97%  dan  serat  kasar  30,63%  (Helda dan  Sabuna,  2012). Manure  layer berpotensi digunakan sebagai bahan pakan ternak ruminansia  karena  kemampuan  mikroba  rumen dalam  memanfaatkan  senyawa  amonia  yang terkandung dalam manure . Manure unggas dapat menjadi  sumber  protein  yang  potensial  dalam pakan  ternak  ruminansia  (Unal et  al .,  2015). Protein kasar dalam manure , berupa asam amino, amonia  dan  amida,  dapat  digunakan  oleh mikroba  rumen  (protozoa,  bakteri,  dan  jamur) sebagai  sumber  nitrogen  untuk  pertumbuhan biomassa mikroba. Namun, penggunaan manure dibatasi oleh  mikroba usus yang dikhawatirkan sebagai mikroba patogen, yaitu Escherichia coli dan Salmonella sp yang berasal dari usus ayam. Pemanfaatan nutrisi yang terkandung dalam manure ayam perlu pengolahan terlebih dahulu.
Manure ayam  yang  baru  diangkat  dari  kandang tidak tepat jika diberikan langsung sebagai bahan pakan  ataupun  campuran  pakan.  Pengolahan Manure layer dapat dilakukan dengan memanfaatkan  teknologi  fermentasi  untuk merubah  dari  bentuk manure menjadi  produk fermentasi atau disebut biokonversi. Biokonversi adalah  proses  penguraian  limbah  organik menjadi  produk  yang  bermanfaat  dan  bernilai gizi tinggi dengan menggunakan mikroorganisme  seperti  bakteri,  jamur,  kapang, dan  larva  serangga  (Latif et  al .,  2023).  Selama proses fermentasi, mikroba fermentor mengubah senyawa kompleks menjadi senyawa sederhana,
menghilangkan senyawa beracun, dan mengeliminasi  mikroba  usus  yang  berbahaya. Produk  hasil  biokonversi  akan  memiliki  nilai nutrisi lebih tinggi dan palatabilitas lebih baik.
Pada penelitian ini, mikroba fermentor yang digunakan  adalah  kapang Aspergillus  niger ,
Trichoderma viride dan Saccharomyces cerevisiae . Fermentasi dilakukan secara bertingkat, diawali dengan A. niger dan T. viride yang  bertujuan  menghasilkan  gula  reduksi, kemudian dilanjutkan dengan S. cerevisiae yang akan memanfaatkan gula reduksi tersebut untuk pertumbuhan yang optimal. Alasan
menggunakan  ketiga  jenis  kapang  tersebut, dimana  Ikhrimah,  (2015)  melaporkan  adanya interaksi  positif  antara  kapang A.  niger dan T. viride dalam  menghasilkan  gula  reduksi  untuk pertumbuhan S.  cerevisiae dalam  proses fermentasi limbah pertanian.
Interaksi  antar  mikroba  dijelaskan  oleh Suryani  &  Taupiqurrahman,  (2021)  dalam  tiga tipe,  yaitu  interaksi  positif,  negatif  dan  tidak berinteraksi. Penggunaan tiga jenis kapang, yaitu A.  niger , T.  viride dan S.  cerevisiae ,  telah dilaporkan  memiliki  tipe  interaksi  positif  atau saling menguatkan. Diharapkan, kekuatan ketiga kapang  ini  juga  dapat  berinteraksi  negatif sehingga  dapat  mengeliminasi  bakteri  usus E. coli dan Salmonella serta  keberadaan  telur cacing, sehingga biokonversi Manure layer yang dihasilkan aman digunakan sebagai bahan pakan baku konsentrat kambing. Penelitian ini bertujuan  untuk  mengetahui  total  bakteri, keberadaan bakteri Salmonella sp . dan Escherichia  coli ,  serta  keberadaan  telur  cacing pada  biokonversi Manure  layer sebagai  bahan baku konsentrat pakan kambing.

## BAHAN DAN METODE

## Bahan dan Alat
Bahan  yang  digunakan  untuk  riset  ini adalah Manure  layer segar,  alkohol  70%, alumunium  foil,  aquadest, Buffered  Peptone Water (BPW)  0,1%,  isolat Aspergillus  niger , isolat
Saccharomyces cerevisiae , isolat Trichoderma  viride ,  kapas,  kertas  timbang, kertas label, larutan gula jenuh, media Methylene Blue  Agar (EMB),  media Plate  Count  Agar (PCA),  media Potatoes  Dextrose  Agar (PDA), media Salmonella Shigella Agar (SSA), NaOH, NaCl dan tissue .
Alat yang digunakan untuk riset ini adalah autoklaf, batang pengaduk, beaker glass , bunsen, coloni  counter ,  cawan  porselen,  desikator, erlenmeyer,  gelas  ukur, hot  plate ,  inkubator, jarum ose, korek api, Laminar Air Flow (LAF), mikropipet,  mortar  dan  pestle,  nampan,  neraca analitik, object  glass , cover  glass ,  oven,  cawan petri,  pipet  tetes,  rak  tabung  reaksi,  sendok mikro,  spidol  penanda,  spuit,  tabung  reaksi,  tip mikropipet dan tanur.

## Metode Riset
Rancangan  percobaan  yang  digunakan adalah Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan 4  perlakuan  dan  4  ulangan.  Adapun  perlakuan yang  digunakan  adalah  sebagai  berikut:  A  = Manure layer (10 gram) + T. viride (3 ml) + S. cerevisiae (3 ml), B = Manure layer (10 gram) + A.  niger (3  ml)  + S.  cerevisiae (3  ml),  C  = Manure layer (10 gram) + T. viride (2 ml) + A. niger (2 ml) + S. cerevisiae (2 ml), D = Manure layer (10 gram) + A. niger (2 ml) + T. viride (2 ml) + S. cerevisiae (2 ml).
Peremajaan  Isolat  dan  Persiapan  Manure layer
Peremajaan  isolat A.  niger dan T.  viride dilakukan dengan menginokulasi satu ose isolat ke  dalam  5  ml  media  PDA  miring.  Isolat S. cerevisiae menggunakan  media Yeast  Extract Peptone  Dextrose (YEPD).  Semua  isolat diinkubasi  pada  suhu  30°C  selama  72  jam  dan siap digunakan sebagai stok isolat. Manure layer diperoleh  dari  kandang closed  house PT. Talenggak  Jaya  Farm,  Sungai  Kamuyang,  Kec. Luak,  Kabupaten  Lima  Puluh  Kota,  Sumatera Barat. Manure tersebut terkumpul selama 12 jam pada  ban  penampung  yang  terletak  di  bawah cage. Manure layer dibawa ke laboratorium dan dikeringkan menggunakan oven pada suhu 60 °C hingga  mencapai  kadar  air  sekitar  13%  dan disimpan dalam wadah tertutup pada suhu ruang sebelum digunakan.

## Penetuan Dosis Inokulasi
Pra penelitian ini, bertujuan untuk menentukan dosis yang tepat untuk menginokulasi T.  viride dan A.  niger ke  dalam Manure  layer sehingga  kapang  tersebut  dapat tercampur  merata  tanpa  kondisi  yang  terlalu basah  atau  terlalu  kering.  Prosedur  yang dilakukan  yaitu  menimbang  10  g manure ,  lalu memasukkannya  ke  dalam  empat  bungkus
plastik  (4  sampel).  Sampel  tersebut  kemudian diinokulasikan  dengan  kapang  dan  aquades. Sampel  diaduk  dan  diamati  untuk  menentukan kondisi yang tidak terlalu basah dan tidak terlalu kering (remah). Hasil pra penelitian menunjukkan bahwa sampel terbaik adalah yang diinokulasikan dengan 6 ml kapang. Perlakuan Biokonversi Manure layer Biokonversi manure dilakukan  dengan memfermentasi  10  g Manure  layer yang diinokulasi  dengan  kapang  sesuai  dengan perlakuan sebagai berikut:
A  =  Manure  layer  +  T.  viride  (3  ml)  +  S. cerevisiae (3 ml)
B  =  Manure  layer  +  A.  niger  (3  ml)  +  S. cerevisiae (3 ml)
C = Manure layer + T. viride (2 ml) + A. niger (2 ml) + S. cerevisiae (2 ml)
D = Manure layer + A. niger (2 ml) + T. viride (2 ml) + S. cerevisiae (2 ml)
Inokulasi dilakukan secara bertahap, dengan  setiap  mikroba  ditumbuhkan  selama  3 hari  sebelum  mikroba  berikutnya  ditambahkan. Semua  perlakuan  diinkubasi  pada  suhu  30°C. Kandungan nutrisi Manure layer yang digunakan untuk fermentasi dapat dilihat pada Tabel 1. Tabel 1. Kandungan nutrisi Manure layer . Jenis Nutrisi Kandungan nutrisi (%) Bahan kering 93,34 Protein kasar 12,78 Serat kasar 67,43 Lemak 0,95 Bahan organic 64,95
*)  Analisis  Laboratorium  Nutrisi  dan  Teknik  Pakan Politeknik Pertanian Negeri Payakumbuh (2024).

## Analisis Kandungan Bahan Organik
Kandungan bahan organik dari biokonversi Manure  layer diuji dengan  metode  pembakaran menggunakan  tanur  sesuai  metode  AOAC (2000).  Sebanyak  1  g  sampel  dimasukkan  ke dalam cawan porselen, kemudian dimasukkan ke dalam  oven  pada  suhu  105°C  selama  4  jam. Sampel  tersebut  kemudian  dibakar  dalam  tanur pada  suhu  400°C  selama  5  jam.  Setelah  itu, sampel  didinginkan  dalam  desikator  dan ditimbang.  Kandungan  bahan  organik  dihitung dengan rumus: Bahan Organik = 100%  - Kadar Air (%) - Kadar Abu (%).
Fadillah  F,  Sujatmiko,  Ramaiyulis/  Uji  Kualitatif  Keberadaan  Bakteri  Patogen  dan  Total  Bakteri  pada Biokonversi Manure Layer untuk Bahan Baku Konsentrat Kambing.
https://doi.org/10.55678/jstip.v4i2.1573
Perhitungan Total Bakteri (Total Plate Count)
Media  PCA  ( Plate  Count  Agar )  sebanyak 17,5  g  dilarutkan  dalam  1000  ml  aquades, kemudian  disterilisasi  menggunakan  autoklaf pada suhu 121°C, dengan tekanan 1,5 bar selama 15 menit. Sebanyak 1 g sampel ditambahkan ke dalam  9  ml  BPW  0,1%  dan  divorteks  selama  1 menit  dalam  tabung  reaksi  steril  (pengenceran 10-1).  Selanjutnya,  1  ml  suspensi  dari pengenceran  10-1  dicampur  dengan  9  ml  BPW 0,1% untuk mendapatkan pengenceran 10-2, dan proses ini diulangi hingga mencapai pengenceran 10-7. Pengenceran 10-7 dimasukkan ke dalam 3 cawan  petri  masing-masing  sebanyak  1  ml, kemudian diaduk dan dibiarkan hingga mengeras sebelum  diinkubasi  pada  suhu  37°C  selama  24 jam  dengan  posisi  cawan  petri  terbalik.  Jumlah koloni yang terbentuk pada cawan petri dihitung setelah  masa  inkubasi  berakhir  (SNI  :  2897- 2008).
Jumlah bakteri (CFU/ml) = Jumlah koloni x

## 1
𝑓𝑎𝑘𝑡𝑜𝑟 𝑝𝑒𝑛𝑔𝑒𝑛𝑐𝑒𝑟 Uji Kualitatif Bakteri Escherichia coli Uji bakteri Escherichia  coli dalam biokonversi Manure  layer dilakukan  mengikuti metode  (SNI  :  2897-2008).  Sebanyak  17,5  g media EMBA dilarutkan dalam 1000 ml aquades, kemudian  disterilisasi  menggunakan  autoklaf pada suhu 121°C dengan tekanan 1,5 bar selama 15 menit. Sebanyak 1 g sampel ditambahkan ke dalam 9 ml larutan BPW 0,1% dalam erlenmeyer steril,  lalu  divorteks  hingga  homogen  untuk menghasilkan  pengenceran  10⁻¹.  Selanjutnya,  1 ml  suspensi  dari  pengenceran  10⁻¹  dicampur dengan 9 ml larutan BPW 0,1% untuk membuat pengenceran 10⁻², dan proses ini diulangi untuk mendapatkan  pengenceran  10⁻³.  Pengenceran 10⁻³ dimasukkan ke dalam 3 cawan petri masing- masing sebanyak 1 ml, kemudian diaduk hingga merata  dan  dibiarkan  mengeras  sebelum diinkubasi pada suhu 37°C selama 24 jam dengan posisi  cawan  petri  terbalik.  Bakteri Escherichia coli pada  media  ini  memperlihatkan  koloni berbentuk bulat, berwarna hijau metalik, dengan pusat koloni yang berwarna hitam.
Uji  Bakteri Salmonella sp
Uji bakteri Salmonella sp dalam biokonversi Manure  layer dilakukan  mengikuti metode (SNI : 2897-2008). Uji ini terdiri dari dua tahap  yaitu  tahap  pertama,  63,02  g  media  SSA dilarutkan  dalam  1000  ml  aquades,  kemudian
dipanaskan di atas hot plate stirrer . Sebanyak 1 g  sampel  dicampur  dengan  45  ml  larutan  BPW 0,1%  dalam  erlenmeyer  dan  vorteks  selama  1 menit.  Campuran  ini  kemudian  diinkubasi  pada suhu  37°C  selama  16  jam.  Pada  tahap  kedua, sebanyak  1  ml  larutan  sampel  diinokulasi  ke dalam cawan petri dan dituangkan dengan media SSA.

## Pengujian Keberadaan Telur Cacing
Pengujian  keberadaan  telur  cacing  dalam biokonversi manure dilakukan mengikuti metode Shahid et  al .  (2012)  melalui  dua  metode  yaitu metode apung dan metode sedimentasi.

## Analisa Data
Data  hasil  penelitian  bahan  organik  dan total bakteri dianalisis menggunakan sidik ragam sesuai dengan Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan  4  perlakuan  dan  4  ulangan.  Perbedaan antar perlakuan diuji menggunakan DMRT pada taraf 5% (Steel dan Torrie, 1993). Data mengenai keberadaan bakteri Escherichia coli , Salmonella sp .,  serta  total  dan  keberadaan  telur  cacing disajikan secara deskriptif.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Kandungan bahan organik Biokonversi

## Manure layer
Hasil  penelitian  menunjukkan  rataan kandungan  bahan  organik  biokonversi Manure layer dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Rataan kandungan bahan organik biokonversi Manure layer (%).
Perlakuan Rataan kandungan bahan organik(%) A 77,61 b ± 0,007 B 76,47 b ± 0,007 C 81,50 a ± 0,022 D 77,29 b ± 0,012 Nilai Probability P<0,01 Standar error 0,01 Keterangan: Superskrip menunjukkan perbedaan nilai  yang  signifikan  antar  perlakuan  (P<0,05); Perlakuan  jenis  inokulan  A  = T.  viride  +  S. cerevisiae ; B = A. niger + S. cerevisiae ; C = T. viride + A. niger + S. cerevisiae ; D = A. niger + T. viride + S. cerevisiae.
Berdasarkan Tabel 2, Analisis sidik ragam menunjukkan bahwa inokulasi Aspergillus niger , Trichoderma viride , dan Saccharomyces cerevisiae berpengaruh  signifikan  (P<0,01) terhadap  kandungan  bahan  organik  biokonversi Manure  layer .  Kandungan  bahan  organik  yang
Jurnal Sains dan Teknologi Industri Peternakan 2024, 4 (1): 44-52  https://jurnal.umsrappang.ac.id/jstip e-ISSN (2775-7889)
dihasilkan  dari  biokonversi Manure  layer berkisar antara 76,47-81,50%, dengan perlakuan C menunjukkan nilai yang lebih tinggi (P<0,05) dibandingkan perlakuan lainnya.
Perbedaan dalam kandungan bahan organik menunjukkan  bahwa  inokulasi  dengan  kapang yang berbeda memberikan respon yang berbeda dalam memanfaatkan nutrisinya. Menurut Pangestu,  (2005)  laju  degradasi  bahan  organik substrat dipengaruhi oleh berbagai faktor seperti jenis kapang, jenis substrat, dan waktu inkubasi. Kandungan  bahan  organik  yang  tinggi  pada perlakuan  C  disebabkan  karena  rendahnya degradasi bahan organik oleh kombinasi kapang T. viride , A. niger , dan S. cerevisiae . Akibatnya, unsur-unsur  penyusun  bahan  organik  substrat masih  banyak  tersisa.  Akibatnya,  unsur-unsur penyusun  bahan  organik  substrat  masih  banyak tersisa. Hal ini berhubungan dengan total bakteri pada  Tabel  3  yang  menunjukkan  bahwa perlakuan C memiliki total bakteri yang rendah. Akibat dari total bakteri yang rendah ini adalah berkurangnya  aktivitas  perombakan  bahan organik  pada  perlakuan  C.  Bahan  organik dirombak oleh mikroba menjadi sumber energi, menghasilkan  CO2  dan  air  (Ramachandran, 2008).
Perbedaan jumlah kandungan bahan organik di setiap perlakuan terjadi karena nutrien yang  tersedia  telah  dirombak  dan  dimanfaatkan oleh kapang. Pertumbuhan kapang erat kaitannya dengan lama fermentasi, semakin lama fermentasi,  pertumbuhan  kapang  akan  semakin optimal sesuai dengan ketersediaan nutrien pada bahan.  Menurut  Usman et  al .  (2023)  tinggi rendahnya  kandungan  bahan  organik  pada perlakuan  dipengaruhi  oleh  aktivitas  mikroba selama proses fermentasi. Aktivitas ini menyebabkan  pemecahan  substrat,  yang  pada akhirnya  memudahkan  mikroorganisme  dalam mencerna  bahan  organik.  Produk  fermentasi bahan  organik  melepaskan  gula,  alkohol,  dan asam  amino,  sehingga  terjadi  perubahan  yang mempengaruhi nilai nutrisi hasil fermentasi. Perhitungan Total Bakteri
Hasil  penelitian Total  Plate  Count (TPC) pada  biokonversi Manure  layer dapat  dilihat pada Tabel 3.
Berdasarkan Tabel 3, Analisis sidik ragam menunjukkan bahwa inokulasi Aspergillus niger ,
Tabel 1. Rataan total bakteri biokonversi Manure layer . Perlakuan Rata-rata total bakteri (Log10 CFU/ml) A 2,69 b ± 0,21 B 3,04 a ± 0,11 C 2,62 b ± 0,20 D 2,64 b ± 0,09 Nilai Probability 0,03 Standar Error 0,05 Keterangan: Superskrip menunjukkan perbedaan nilai yang signifikan antar perlakuan (P<0,05);  Perlakuan  jenis  inokulan
A = T. viride + S. cerevisiae ; B = A. niger + S. cerevisiae ; C = T. viride + A. niger + S. cerevisiae ; D = A. niger
+ T. viride + S. cerevisiae. Trichoderma viride , dan Saccharomyces cerevisiae memberikan pengaruh nyata (P<0,05) terhadap total bakteri dalam biokonversi Manure layer .  Rataan  total  bakteri  pada  biokonversi Manure  layer berkisar  antara  2,616-3,035  Log
CFU/ml, dengan
perlakuan B yang menggunakan  inokulasi  kapang Aspergillus niger dan Saccharomyces cerevisiae
menunjukkan hasil total bakteri yang lebih tinggi (P<0,05) dibandingkan dengan perlakuan lainnya.
Hasil  ini  menunjukkan  bahwa  kapang A. niger dan S.  cerevisiae dapat  bersimbiosis mutualisme  yang  saling  menguntungkan  dalam pertumbuhan populasinya. Menurut Khasanah et al .  (2022)  kombinasi Aspergillus  niger dan Saccharomyces  cerevisiae menciptakan  kondisi yang kompatibel dalam proses fermentasi. Total bakteri  menghasilkan  peningkatan  protein  sel tunggal  dalam  biokonversi Manure  layer . Perlakuan B dengan total bakteri tertinggi dapat memberikan  kontribusi  lebih  besar  dalam meningkatkan  kandungan  protein  murni  selama proses biokonversi (Fajar, 2024 unpublish ).
Kapang A.  niger mampu  mensekresikan enzim karbohidratase yang dapat bekerja secara optimal dalam merombak karbohidrat kompleks menjadi  gula  sederhana  (gula  reduksi)  yang dibutuhkan  untuk  pertumbuhan  kapang  (Nadia, 2024 unpublish ). Gula sederhana yang dihasilkan kemudian dimanfaatkan oleh S. cerevisiae untuk pertumbuhan dan fermentasi yang menghasilkan etanol, CO2, dan asam organik, serta menciptakan lingkungan optimal untuk pertumbuhan kedua mikroba (Ramandhani et al .,
Fadillah  F,  Sujatmiko,  Ramaiyulis/  Uji  Kualitatif  Keberadaan  Bakteri  Patogen  dan  Total  Bakteri  pada Biokonversi Manure Layer untuk Bahan Baku Konsentrat Kambing.
https://doi.org/10.55678/jstip.v4i2.1573
2018).  Menurut  Bahtiar et  al .  (2024)  awal pertumbuhan  khamir S.  cerevisiae mencapai tahap stasioner saat menggunakan gula sederhana seperti fruktosa dan glukosa. Namun, ketika  jumlah  gula  sederhana  menurun,  tersisa gula polisakarida yang sulit dimanfaatkan oleh S. cerevisiae , mengganggu metabolisme sel. Akibatnya, pertumbuhan S. cerevisiae terhambat dan mengalami fase kematian sel.
Pertumbuhan kapang juga dipengaruhi oleh ketersediaan  nutrisi,  suhu  dan  pH  substrat (Nurdianto et al ., 2015). Pada penelitian ini, suhu dikontrol dengan inkubasi pada suhu stabil 30°C dalam inkubator dan pH 6,5. Ketersediaan nutrisi dalam Manure layer sebagai substrat fermentasi mengandung  protein  kasar  12,78%,  Bahan organik  64,95%.  Nutrisi  ini  menjadi  media tumbuh yang cocok untuk pertumbuhan kapang A  niger  terdiri  dari  karbohidrat  yang  mudah tersedia  (BETN),  sumber  nitrogen  dan  unsur mineral.
Pengaruh  Perlakuan  terhadap  Keberadaan Bakteri Salmonella sp.
Berdasarkan hasil inokulasi sampel
biokonversi Manure layer
pada media Salmonella Shigella  Agar  (SSA),  didapatkan hasil keberadaan bakteri Salmonella sp sebanyak 37,5%  dapat  dilihat  pada  Tabel  4.  Media  SSA merupakan  media  selektif  untuk  pertumbuhan bakteri gram negatif seperti Salmonella sp dan E. coli .  (Supriatin  dan  Yuslina  Thahir,  2017). Salmonella  sp merupakan  mikroba  patogen penyebab foodborne diseases, sehingga keberadaannya perlu dieliminasi. Tabel 2. Keberadaan bakteri Salmonella sp pada biokonversi Manure layer . Sampel A1.1 (-) A1.2 (+) A1.3 (+) A1.4 (+) B2.1 (-) B2.2 (-) B2.3 (-) B2.4 (-) C3.1 (-) C3.2 (-) C3.3 (+) C3.4 (+) D4.1 (+) D4.2 (-) D4.3 (+) D4.4 (-) Keterangan:  Perlakuan  jenis  inokulan  A  = T.
viride + S. cerevisiae ; B = A. niger + S. cerevisiae ; C = T. viride + A. niger + S. cerevisiae ; D = A. niger + T. viride + S. cerevisiae. Berdasarkan  Tabel  4,  hasil  uji Salmonella sp pada biokonversi Manure layer menunjukkan hasil  positif  pada  perlakuan  A,  C,  dan  D, sedangkan  perlakuan  B  menunjukkan  hasil negatif.  Perlakuan  inokulasi A.  niger + S. cerevisiae mampu  mereduksi  pertumbuhan
Salmonella  sp .  Reduksi Salmonella  sp pada  B diduga  terjadi  karena  bakteri  ini  membutuhkan kondisi  tertentu  untuk  tumbuh  dengan  baik. Proses  fermentasi  oleh A.  niger menghasilkan enzim  pengurai  karbohidrat  menjadi  glukosa, yang menjadi sebagai sumber energi utama bagi pertumbuhan S.  cerevisiae . S.  cerevisiae kemudian  berkompetisi  dengan Salmonella  sp untuk  mendapatkan  nutrisi.  Variam  Fas  Sabion Bakara et al . (2014) menyatakan Salmonella sp adalah  bakteri  yang  tidak  dapat  berkompetisi secara  baik  dengan  bakteri-bakteri  yang  umum terdapat di dalam makanan.
Kombinasi  metabolit  dan  aktivitas  enzim dari kedua mikroorganisme ini dapat memberikan  efek  sinergis  yang  kuat  dalam menghambat Salmonella  sp .  Kapang A.  niger dengan  enzim  hidrolitiknya  mampu  merombak struktur bahan organik, sedangkan S. cerevisiae
melalui fermentasinya dapat mengubah
lingkungan kimia. Hal ini menciptakan kombinasi  penghambatan  yang  efektif  terhadap pertumbuhan Salmonella  sp .  Kombinasi  dari kompetisi  nutrisi,  perubahan  pH,  dan  produksi senyawa  antimikroba  oleh A.  niger dan S. cerevisiae membuat mereka sangat efektif dalam mengurangi  atau  menghambat  pertumbuhan Salmonella sp . Pendekatan ini sering digunakan dalam  pengolahan  makanan  dan  bioteknologi untuk  memastikan  keamanan  mikrobiologis produk.

## Pengaruh  Perlakuan  terhadap  Keberadaan Bakteri Escherichia coli
Berdasarkan hasil inokulasi sampel biokonversi Manure  layer pada  media  Eosin Methylene  Blue  Agar  (EMBA),  diperoleh sebanyak 38% dari 16 sampel. Keberadaan hasil isolasi Escherichia  coli yang  ditampilkan  pada Tabel 5.
Berdasarkan  hasil  isolasi  dari  sampel biokonversi Manure  layer pada  media  EMBA yang  telah diinkubasi  selama 24  jam  pada  suhu 37⁰C.  Hasil  menunjukkan  bahwa  perlakuan  A dan  B  terdapat  masing-masing  1  sampel  positif dan  3  sampel  negatif  mengandung  bakteri Escherichia  coli .  Pada  perlakuan  C,  terdapat  3 sampel  positif  dan  1  sampel negatif,  sedangkan pada perlakuan D ditemukan 2 sampel positif dan 2 sampel negatif mengandung bakteri Escherichia coli .
Jurnal Sains dan Teknologi Industri Peternakan 2024, 4 (1): 44-52  https://jurnal.umsrappang.ac.id/jstip e-ISSN (2775-7889)
Tabel 3. Keberadaan bakteri Escherichia coli pada biokonversi Manure layer . Sampel Replikasi Keterangan 1 2 3 A1.1 - - - Negatif (-) A1.2 + + + Positif (+) A1.3 - - - Negatif (-) A1.4 + - - Negatif (-) B2.1 - - - Negatif (-) B2.2 - - - Negatif (-) B2.3 - - - Negatif (-) B2.4 + + - Positif (+) C3.1 + + + Positif (+) C3.2 + + + Positif (+) C3.3 - - - Negatif (-) C3.4 + + + Positif (+) D4.1 + + + Positif (+) D4.2 + + - Positif (+) D4.3 - - - Negatif (-) D4.4 - - - Negatif (-) Keterangan:  Perlakuan  jenis  inokulan  A  = T.
viride + S. cerevisiae ; B = A. niger + S. cerevisiae ; C = T. viride + A. niger + S. cerevisiae ; D = A. niger + T. viride + S. cerevisiae.
Mikroflora normal seperti Escherichia coli harus  dipertahankan  dalam  batasan  normal karena  berperan  penting  dalam  mencerna makanan  di  saluran  pencernaan.  Keberadaan bakteri Escherichia  coli pada  perlakuan  B mengalami  penurunan,  diduga  karena  bakteri masih  dalam  tahap  penyesuaian  terhadap lingkungan akibat perubahan suhu dan pH pada substrat.  Perubahan  kondisi  lingkungan  ini mempengaruhi  pertumbuhan  dan  kelangsungan hidup  bakteri,  sehingga  bakteri  yang  tidak mampu beradaptasi dengan kondisi tersebut akan mati  karena  lingkungan  yang  tidak  mendukung proses  metabolisme  mereka  (Supriatin,  2008). Pada  perlakuan  C  dan  D,  keberadaan  bakteri Escherichia  coli meningkat. Hal  ini  disebabkan oleh  peningkatan  kadar  air  pada  perlakuan tersebut, yang mendukung pertumbuhan bakteri karena  air  merupakan  media  yang  mendukung pertumbuhan  bakteri.  Penelitian  sebelumnya menjelaskan  bahwa  air  merupakan  komponen utama  dalam  sel  mikroba  dan  medium.  Air berfungsi  sebagai  sumber  oksigen  untuk  bahan organik  sel  dalam  respirasi,  serta  berperan sebagai  pelarut  dan  alat  transportasi  dalam metabolisme (Moat, dkk 2002).

## Pengaruh  Perlakuan  terhadap  Total  Telur Cacing
Telur  cacing  merupakan  jenis  endoparasit yang sering ditemukan pada feses ayam petelur. Kandungan  telur  cacing  pada  feses  ayam biasanya disebabkan
oleh manajemen pemeliharaan  yang  buruk.  Kondisi  feses  ayam yang lembab menjadi
tempat berkembangbiaknya  telur  cacing.  Kandungan telur cacing yang tinggi dapat menginfeksi ayam petelur dan akan menurunkan performa produksi ayam  petelur.  Produktivitas  ayam  petelur  dapat ditingkat  diantaranya  dengan  memperbaiki manajemen pemeliharan, pakan, pencegahan dan penanggulangan  penyakit  (Budi  Kusuma et  al .,
2021).
Berdasarkan hasil pemeriksaan telur cacing pada manure yang  belum  diberi  perlakuan, didapatkan hasil negatif. Setelah diberi perlakuan dan  dilakukan  pengecekan  terhadap  16  sampel biokonversi Manure layer dengan menggunakan dua  metode,  yaitu  metode  apung  dan  metode sedimentasi,  dinyatakan  bahwa  seluruh  sampel negatif atau tidak terdeteksi adanya telur cacing. Hal  ini  disebabkan  oleh  sumber Manure  layer yang  berasal  dari  kandang closed  house , pemberian  obat  cacing  yang  efektif,  serta pemeliharaan  yang  baik.  Pemeliharaan  ayam petelur  dengan  sistem  kandang closed  house menciptakan  kondisi  lingkungan  kandang  yang dapat  dikendalikan  melalui  pengaturan  suhu, kelembaban,  dan  sanitasi  yang  terkontrol (Mappanganro et al ., 2019).

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian ini,
disimpulkan bahwa
inokulasi kapang
Trichoderma  viride , Aspergillus  niger ,  dan khamir
Saccharomyces cerevisiae pada biokonversi Manure  layer memiliki  pengaruh signifikan  terhadap  bahan  organik  (P<0,01). Kombinasi  terbaik  diperoleh  pada  perlakuan  B dengan inokulasi Aspergillus niger dan Saccharomyces  cerevisiae ,  yang  menghasilkan total  bakteri  tertinggi  dibandingkan  dengan perlakuan  lainnya.  Pada  perlakuan  ini,  tidak ditemukan bakteri Salmonella sp ., namun masih terdapat  bakteri Escherichia  coli dalam  jumlah yang relatif kecil. Telur cacing tidak ditemukan pada  biokonversi Manure  layer dalam  semua perlakuan.
Fadillah  F,  Sujatmiko,  Ramaiyulis/  Uji  Kualitatif  Keberadaan  Bakteri  Patogen  dan  Total  Bakteri  pada Biokonversi Manure Layer untuk Bahan Baku Konsentrat
Kambing. https://doi.org/10.55678/jstip.v4i2.1573

## UCAPAN TERIMA KASIH
Tim  peneliti  berterima  kasih  kepada Simbelmawa  DIKTI  Kemendikbud  yang  telah membiayai penelitian ini melalui skim Program
Kreativitas  Mahasiswa  Riset  Eksakta  (RE) dengan nomor
kontrak
088/SPK/D.D4/PPK.02.ATVP/VI/2023.

## DAFTAR PUSTAKA
AOAC.  2000.  Official  Method  of  Analysis Association of Official Analitycal Chemist. Maryland.
BSN. 2008. Metode pengujian cemaran mikroba dalam  daging,  telur  dan  susu,  serta  hasil olahannya.  Badan  Standasisasi  Nasional, SNI 2897:2008, 36.
Bahtiar, V. K., P. Patang, & I. Indrayani. 2024. The Effect of molasses concentration on the growth of yeast  saccharomyces  cereviceae in making single cell proteins the effect of the concentrate on of waste molasses on the growth of yeast  saccharomyces  cereviceae in  the  making  of  single  cell  proteins. Formosa Journal of Applied Sciences, 3(1), 337–352. https://doi.org/10.55927/fjas.v3i1.7462. Budi Kusuma, S., S. Nusantoro, A. Awaludin, Y. Junaidi,  &  T.  Lusyta  Aulyani.  2021.
Identifikasi Keragaman
Jenis Parasit Cacing  pada  Ternak  Ayam  Kampung  di Kabupaten Jember. Jurnal Ilmu Peternakan Terapan, 4(2), 71–77. https://doi.org/10.25047/jipt.v4i2.2495.
Helda,  &  C.  Sabuna.  2012.  Goat  and  chicken fecal  fermentation  with  lontar  sap  as chicken  feed.  Partner,  19(1),  112–120. https://doi.org/http://dx.doi.org/10.35726/j p.v19i1.119.
Ikhrimah,  L.  2015.  Hidrolisis  tandan  kosong kelapa  sawit  oleh  Aspergillur  niger  dan Trichoderma viride sebagai media tumbuh protein sel tunggal Saccharomyces cereviceae.
Khasanah,  H.,  D.  C.  Widianingrum,  L.
Purnamasari,  A.  Wafa,  &  S.  G.  Hwang. 2022.  Evaluation  of  coffee  bean  husk fermented by a combination of Aspergillus niger , Trichoderma harzianum, and Saccharomyces  cerevisiae as  animal  feed. Jurnal  Ilmu-Ilmu  Peternakan,  32(3),  416–
426. https://doi.org/10.21776/ub.jiip.2022.032.0 3.13.
Latif,  S.,  P.  Ambar,  &  S.  Heru.  2023. Biokonversi  dan  bioekonomi  limbah  kulit ikan :  potensi  teknologi  pengolahan komersialisasi  (L.  Sahubawa,  A.  Agus,  & U.  I  (ed.)).  Gajah  Mada  University  Press Anggota IKAPI dan APPTI.
Mappanganro,  R.,  J.  Syam,  &  C.  Ali.  2019. Tingkat penerapan biosekuriti pada peternakan  ayam  petelur  di  Kecamatan Panca  Rijang  Kabupaten  Sidrap.  dan Industri  Peternakan  (Journal  of  Animal Husbandry Science and Industry), 4(1), 60. https://doi.org/10.24252/jiip.v4i1.9809.
Moat. et  al .  2002.  Microbial  Physiology.  New
York: Jhon Willey & Sons Ltd
Nurdianto, M., C. S. Utama, & S.
Mukodiningsih.  2015.  Total  jamur,  jenis kapang  dan  khamir  pellet  ayam  kampung super  dengan  penambahan  berbagai  level pollard berprobiotik. Jurnal Agripet, 15(2), 79–84. https://doi.org/10.17969/agripet.v15i2.237
9.
Pangestu, E. 2005. Evaluasi serat dan fermentasi zink dalam ransum berbahan hasil samping industri  pertanian  pada  ternak  ruminansia Program  Pascasarjana.  Institut  Pertanian Bogor. Bogor Disertasi.
Ramachandran,  S.,  P.  Fontanille,  A.  Pandey,  & C. Larroche. 2008. Fed-batch production of gluconic acid by terpene-treated
Aspergillus niger spores. Applied
biochemistry and biotechnology, 151, 413- 423.
Ramandhani, A., D. W. Harjanti, & A. Muktiani.
2018.  Pengaruh  pemberian  ekstrak  daun pepaya  (carica  papaya  linn)  dan  kunyit
(curcuma domestica) terhadap
fermentabilitas  rumen  sapi  perah  secara  in vitro.  Jurnal  Ilmu-Ilmu  peternakan,  28(1),
73–83.
https://doi.org/10.21776/ub.jiip.2018.028.0
1.08.
Shahid,  S.  Bin,  A.  Chowdhury,  S.  M.
Shamsuzzaman,  &  K.  Z.  Mamun.  2012. Identification of hookworm species in stool by harada mori culture. Bangladesh Journal
of  Medical  Microbiology,  4(2),  3–4. https://doi.org/10.3329/bjmm.v4i2.10821
Steel,  R.  G.  D.,  &  Torrie.  (1993).  Prinsip  dan prosedur statistika suatu pendekatan biometrik.  PT.  Gramedia  Pustaka  Utama, Jakarta.
Supriatin,  Yati.  2008.  Kajian  produksi  biogas skala  laboratorium  dengan  inokulum konsorsium alami metanogen dalam substrat  bungkil  jarak  pagar  (Jatropha curcas L). Tesis. Bioteknologi ITB.
Supriatin,  Y.,  &  B.  Yuslina  Thahir.  2017.
Analisis pertumbuhan Salmonella typhi dan shigella dysenteriae pada media Salmonella Shigella  Agar  (SSA)  dengan  penambahan tepung  darah  sapi.  Jurnal  Analis  Biologi Sekolah Tinggi Analis Bakti Asih, 01(01),
21–27.
Suryani,  Y.,  &  O.  Taupiqurrahman.  2021. Mikrobiologi  dasar.  In  LP2M  UIN  SGD Bandung. Wiley.
Unal, H. B., Ö. H. Bayraktar, L. Alkan, & R. C. Akdeniz.  2015.  Evaluation  possibilities  of chicken manure in  Turkey.  2(154),  5–14. https://doi.org/10.14654/ir.2015.154.116 Variam  Fas  Sabion  Bakara,  Ma’ruf  Tafsin,  & Hasnudi. 2014. Analisis bakteri Salmonella sp .  pada  daging  ayam  potong  yang dipasarkan pada pasar tradisional dan pasar modern di Kota Medan. Jurnal Peternakan Integratif, 3(1), 71–83. https://doi.org/10.32734/jpi.v3i1.2746 Yanuartono, A. Nururrozi, S. Inddarjulianto, N.
Haribowo,  H.  Purnamaningsih,  &  S. Rahardjo. 2018. Manure unggas: suplemen pakan  alternatif  dan  dampak  terhadap lingkungan.  Bioteknologi  dan  Biosains Indonesia, 5(2).