## JBIO: JURNAL BIOSAINS
(The Journal of Biosciences)
http://jurnal.unimed.ac.id/2012/index.php/biosains email : jbiosains@unimed.ac.id

## PENGARUH PEMBERIAN BERBAGAI TINGKAT MIKORIZA ARBUSKULA PADA TANAH TERAKUMULASI LOGAM PbTERHADAP PERTUMBUHAN
TANAMAN BELIMBING WULUH ( Averrhoa bilimbi )
Herna Febrianty Sianipar, Apriani Sijabat, Eva Pratiwi Pane Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas HKBP Nommensen Pematangsiantar Email korespondensi : hernasianipar54@gmail.com
Diterima:  Juni 2019; Direvisi: Juli 2019; Disetujui: Agustus 2019

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh  pemberian  fungi  mikoriza  arbuskula  (FMA) terhadap  pertumbuhan  tanaman  belimbing  wuluh  yang  terakumulasi  logam  Pb  dan  mengetahui  dosis pemberian fungi mikoriza arbuskula (FMA) yang optimal terhadap pertumbuhan tanaman belimbing wuluh yang  terakumulasi  logam  Pb.  Metode  Penelitian  yang  digunakan  adalah  eksperimen  dilakukan  di  Rumah Kasa, Laboratorium Biologi Tanah dan Laboratorium Sentral Fakultas Pertanian Universitas Sumatera Utara. Penelitian  ini  menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  faktorial  dengan  satu  faktor.  Faktor  pertama adalah inokulasi mikoriza dengan 4 taraf dosis (0 g/bibit, 10  g/bibit, 20 g/bibit, 30 g/bibit). Hasil penelitian menunjukkan fungi mikoriza arbuskula memberikan  pengaruh terhadap tinggi tanaman, diameter tanaman dan  bobot  kering  tanaman.  Jadi,  dosis  mikoriza  20  g  optimal  terhadap  pertumbuhan  tanaman  belimbing wuluh yang terakumulasi logamPb.

## Kata Kunci : Mikoriza Arbuskula, Pertumbuhan, LogamPb
THE INFLUENCE OF VARIOUS LEVELS OF ARBUSCULA MICRICULTURE LEVELS IN Pb ACCUMULATED METALS ON GROWTHSTAR FRUIT PLANT ( Averrhoa bilimbi)

## ABSTRACT
This research aimed to know the effect of vesicular arbuscular mycorrhiza application on the growth starfruit  plants  in  accumulation  of  Pb  and  to  know  the  optimal  dosage  of  vesicular  arbuscular  mycorrhiza application  on  the  growth  starfruit  plants  in  accumulation  of  Pb  .The  research  method  applied  here  is experimental  in at Kasa House, Soil Biology Laboratory and Central Laboratory of the Faculty of Agriculture, University of Sumatra Utara. This research used a completely randomized design factorial with  one factors. The first factor was the inoculation of mycorrhiza with 4 levels doses (0 g/seeds, 10 g/seeds, 20 g/seeds, 30 g/seedling) The results showed vesicular arbuscular mycorrhiza had a significant effect on plant height, stem diameter  and  dry  weight  of  plants.  So,  A  20  g  mycorrhizal  was  the  optimal  dose  against  on  the  growth starfruit plants in accumulation of Pb.

## Keywords: Arbuscular Mycorrhiza, Growth, Heavy Metal Pb
Pendahuluan
Logam  berat  merupakan  salah  satu penyebab pencemaran lingkungan yang utama. Timbal atau Pb adalah logam berat yang umum dijumpai  sebagai  pencemar.  Di  kota-kotabesar,
Pb dikenal sebagai pencemar udara yang dapat mengganggu  kesehatan  manusia.  Secara  alami Pb  berasal  dari  kerak  bumi  tetapi  kebanyakan berasal  dari  aktivitas  manusia  seperti pertambangan,  perindustrian,  dan  penggunaan
Jurnal Biosains Vol. 5 No. 2 Agustus 2019                                                                         ISSN 2443-1230 (cetak) DOI: https://doi.org/10.24114/jbio.v5i2.13918
ISSN 2460-6804 (online)
bahan  bakar.  Selain  dapat  mengganggu kesehatan  manusia,  keberadaan  Pb  ini  juga dapat  mengganggu  pertumbuhan  tanaman  dan menurunkan  fungsi  dan  produktivitas  tanah jika telah melampaui ambang batas (Darmono,1995).Oleh  karena  itu,  lahan  yang telah  tercemar  logam  berat  seperti  Pb  perlu diperbaiki  untuk  meningkatkan  kualitas  tanah. Salah  satu  cara  yang  dapat  dilakukan  yaitu bioremediasi  menggunakan  Fungi  Mikoriza Arbuskula  (FMA)  dan  sengon  ( Paraserianthes falcataria ) sebagai tanaman inangnya (Wiriadinata  dan  Bamroongrugsa,  2010). Menurut  Puspitawati  (2000)  adanya  simbiosis antara FMA dengan tanaman inang diharapkan dapat  meningkatkan  kemampuan  tanaman dalam penyerapan unsur hara dan air, selain itu diharapkan pula dapat menyerap dan menjerap zat  pencemar  seperti  Pb  yang  berada disekitarnya.
Salah  satu  teknik  yang  digunakan dalampemulihan  lingkungan  yang  tercemar adalah  bioremediasi.  Bioremediasi  adalah tindakan  proses  biologi  yang  dapat  dilakukan untuk menurunkan kadar polutan yang bersifat toksik  terhadap  lingkungan,  akibat  adanya  zat yang  menyebabkan  pencemaran  dengan  cara mengolah  kontaminan  dengan  memanfaatkan mikroba,  tanaman,  enzim  tanaman  atau  enzim mikroba  (Priadie,  2012).  Teknik  bioremediasi dengan  menggunakan  tanaman  mendapat perhatian  yang  cukup  luas,  karena  terbukti lebih  murah  dibandingkan  dengan  teknik lainnya. Fitoremediasi adalah salah satu teknik dari  bioremediasi  dengan  menggunakan tumbuhan  untuk  menghilangkan  polutan  dari tanah  atau  perairan  yang  terkontaminasi. Fitoremediator  dapat  berupa  herba,  semak bahkan pohon.
Semua  tumbuhan  mampu  menyerap logam  dalam  jumlah  yang  bervariasi,  tetapi beberapa  tumbuhan  mampu  mengakumulasi unsur  logam  tertentu  dalam  konsentrasi  yang cukup  tinggi  (Juhaeti  dkk,  2005).  Tanaman seperti  belimbing  wuluhberpotensi  dapat dijadikan  sebagai  tanaman  pengakumulasi logam  Pb.  Belimbing  wuluh  dapat  tumbuh  dan berkembang pada lingkungan tercemar, dengan perakaran kuat dan dapat menyuburkan tanah,
belimbing  wuluh ini  juga  cocok  ditanam untuk memulihkan  kembali  lahan-lahan  kritis  atau tercemar.  (Wiriadinata  dan  Bamroongrugsa,
2010) Untuk mempercepat proses fitoremediasi  dapat  digunakan  mikoriza. Mikoriza  tidak  hanya  meningkatkan  laju transfer  nutrisi  di  akar  tanaman  inang,  tetapi juga meningkatkan  ketahanan terhadap cekaman biotik dan abiotik. Selain itu, mikoriza juga  membantu  mempertahankan  stabilitas pertumbuhan  tanaman  pada  kondisi  tercemar (Arisutanti dan Purwani, 2013).
Penelitian  tentang  pengaruh  logam  Pb terhadap  pertumbuhan  tanaman  belimbing wuluh  seperti  tinggi  tanaman,  diameter tanaman,  dan  bobot  kering  tanaman  belum dilaporkan  dan  penambahan  mikoriza  pada tanaman tersebut untuk mendukung pertumbuhan  juga  belum  dilaporkan,  sehingga perlu dilakukan.
Jenis  penelitian  fitoremediasi  dan mikoriza  masih  terus  dikembangkan,  untuk mengetahui  tanaman  yang  paling  efektif. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui pengaruh  pemberian  fungi  mikoriza  arbuskula terhadap  pertumbuhan  tanaman  belimbing wuluh  yang  terakumulasi  logam  Pb,  dosis optimal  fungi  mikoriza  arbuskula  terhadap pertumbuhan  tanaman  belimbing  wuluh  yang terakumulasi logam Pb.

## Bahan dan Metode
Tempat dan Waktu Penelitian Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Biologi Tanah dan Laboratorium Sentral Fakultas Pertanian Universitas Sumatera Utara. Alat dan Bahan Penelitian Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini    yaitu  Neraca  analitik  (Mettler  AE  25), Spektrofotometer Serapan Atom (SSA) BackScientific model 205 VGP. Bahan-bahan yang digunakan yaitu bibit belimbing  wuluh,  fma  terdiri  dari  ( Glomus, Gigaspora,  Acaulospora )  dengan  kepadatan spora  23  spora/g  berasal  dari  Universitas Gadjah Mada , pupuk NPK, air, KOH 2,5%, H2O2,
ISSN 2460-6804 (online)
HCl  2%,  Trypan  blue  0,25%  dan  logam  berat Pb(NO3)2. Sedangkan peralatan yang
digunakan  yaitu  polybag,  pipet,  gelas  obyek, kaca  penutup,  sprayer,  oven,  neraca  analitik, mikroskop.

## Penyiapan Media Tanam
Media  yang  digunakan  adalah  tanah, sterilisasi  tanah  dengan  fumigasidengan formalin 5%. Sterilisasi tanah dilakukan dengan cara  menuangkan  75  ml  formalin  5%  dalam masing-masing polybag yang berisi 3 kg tanah, diaduk  merata,  kemudian  tanah  dibungkus dengan  plastik  selama  7  hari  dan  setelah  itu bungkus  plastik  dibuka,  selanjutnya  polybag dihawakan selama 7 hari.
Penanaman Tanaman Media  tanam  yaitu  tanah  yang  sudah disterilkan  dengan  berat  3  kg  ditambahkan logam berat Pb(NO 3 ) 2 dengan dosis 200 mg/kg Pb(NO 3 ) 2 diaduk  sampai  rata  dan  dimasukkan ke  dalam  polybag.  Untuk  perlakuan  dengan penambahan  mikoriza,  tanaman  diinfeksi dengan  fma.  Dosis  fma  yang  diinokulasikan sesuai  dengan  perlakuan.Inokulasi  mikoriza dilakukan  dengan  fma  diletakkan  ditengah dengan  cara  dilubangi  sedalam  2  cm,  tanaman ditanam, sehingga fmadan akar menyatu. Setiap polybag  berisi  1  bibit  tanaman  kemudian ditumbuhkan  pada  rumah  kasa  selama  1,5 bulan.
Penyiraman dan Pemupukan Seluruh  polybag  disirami  dengan  air secukupnya. Penyiraman tanaman dilakukan 1- 2  kali  sehari  tergantung  keadaan  cuaca  untuk menjaga  kelembaban  media.  Pemupukan dengan  pupuk  NPK  dilakukan  sekali  yaitu ketika  penanaman  sebanyak  6  gram  untuk belimbing wuluh, jabon, petai per polybag.
Parameter Pengamatan Pengukuran Tinggi Tanaman
Tinggi  tanaman  diukur  menggunakan meteran,  dimulai  dari  batang  tanaman  diatas permukaan tanah, sampai pucuk daun tertinggi.

## Pengukuran Diameter Tanaman
Diameter tanaman diukur menggunakan jangka sorong, dengan arah yang berlawanan  pada  batang  yang  telah  diberi tanda  dengan  ketinggian  5  cm  diatas permukaan tanah.

## Pengukuran Bobot Kering
Bobot  kering  total  tanaman  diperoleh dengan  cara  mengeringkan  seluruh  bagian tanaman  yang  telah  berumur  6  minggu,  dalam oven  pada  suhu  70  °C  selama  48  jam.  Setelah tanaman dioven, kemudian ditimbang (Sianipar dkk, 2016)

## Persentase Kolonisasi AkarTanaman
Pengamatan  persentase  akar  yang terinfeksi berdasarkan bidang pandang (field of view/fov) mikroskop. Adanya infeksi pada akar diberi symbol (+) dan tidak adanya infeksi pada akar  diberi  simbol  (-).  Pengamatan  persentase akar  terinfeksi  mikoriza  dapat  dilakukan dengan teknik pewarnaan akar ( staining akar), karena  karakteristik  anatomi  yang  mencirikan ada  tidaknya  infeksi  mikoriza  tidak  dapat dilihat secara langsung.
Metode  pewarnaan  akar  dilakukan dengan  cara,  untuk  preparasi  contoh  kar  yang diawali  dengan  memotong  10  bulu  akar (˂2mm)  dari  masing-masing  sampel  akar, dicuci  dengan  air  mengalir  sampai  bersih  lalu direndam  dalam  larutan  KOH  10%  selama  12 jam. Larutan KOH dibuang dan akar dicuci pada air  mengalir  selama  5-10  menit,  kemudian sampel  akar  direndam  dalam  larutan  HCL  2% selama 30 menit. Proses ini menyebabkan akar akan  berwarna  pucat  atau  putih.  Larutan  HCL 2% kemudian dibuang dengan mengalirkannya secara perlahan.
Selanjutnya  sampel  akar  direndam dengan  larutan  staining  ( trypan  blue 0,05%) selama  24  jam.  Larutan trypan  blue 0,05% kemudian  dibuang  dan  diganti  dengan  larutan lacto glycerol untuk proses pengurangan warna ( destaining ). Perhitungan persentase akar yang terinfeksi  menggunakan  metode  panjang  slide (slide length). Diambil potongan-potongan akar yang  telah  diwarnai  secara  acak  dengan panjang  ±  1  cm  sebanyak  10  potong  akar  dan
Jurnal Biosains Vol. 5 No. 2 Agustus 2019                                                                         ISSN 2443-1230 (cetak) DOI: https://doi.org/10.24114/jbio.v5i2.13918
disusun  pada  preparat  slide  (Sibarani,  2012). Persentase  kolonisasi  mikoriza  pada akar dihitung dengan menggunakan rumus dari nadeak, 2015

## Hasil Dan Pembahasan
Rekapitulasi  hasil  penelitian  dari pengaruh pemberian berbagai tingkat Mikoriza arbuskula  pada  tanah  tercemar  logam  Pb terhadap  produktivitas  tanaman  dapat  dilihat pada tabel dibawah ini. Tabel 1. Parameter Pengamatan Pertumbuhan Belimbing Wuluh Perlakuan Parameter Pengamatan Tinggi Tanaman Diameter batang Bobot Kering  Kolonisasi Akar Mo (0 g) 31,1 cm 0,912 cm 5,1 g 0 M1(10 g) 30,5 cm 0,93 cm 6 g 10 M2(20 g) 38,7 cm 0,93 cm 7,2 g 13 M3 (30 g) 35,8 cm 1,16 cm 7,7 g 12 Tinggi tanaman Interaksi mikoriza terhadap
pertumbuhan tinggi tanaman tertinggi terdapat pada belimbing wuluh dengan dosis 20 g yaitu tertinggi  sebesar  38,7  cm.  dan  terendah  dosis 10  g  yaitu  30,5  cm.  Hal  ini  terjadi  karena pengaruh  dosis  mikoriza  untuk  setiap pengamatan  pertambahan  tinggi  tanaman menunjukkan  kecenderungan  yang  berbeda. Minggu awal belum terlihat pengaruh mikoriza dalam  pertumbuhan  tinggi  tanaman,  tetapi pada  minggu  ke3  dst    mikoriza  mampu menginfeksi  akar  tanaman  dan  memberikan pengaruh terhadap tinggi tanaman.
Diameter Tanaman Interaksi mikoriza terhadap pertambahan diameter batang tanaman terdapat  pada  belimbing  wuluh  dengan  dosis 30  g  yaitu  tertinggi  sebesar  1,16  cm.  dan terendah  dosis  0  g  yaitu  0,912  cm.  Fungi mikoriza  akan  bersimbiosis  dengan  akar tanaman  dengan  membentuk  hifa  eksternal yang  dapat  membantu  penyerapan  unsur  P. Triastuti  (2010)  menyatakan  bahwa  mikoriza arbuskular  meningkatkan  kandungan  dan serapan hara P pada tanaman jambu mete serta terdapat  ineraksi  mikoriza  arbuskular  dengan pupuk  P  untuk  meningkatkan  pertumbuhan tanaman.

## Pengukuran Bobot Kering tanaman
Interaksi  mikoriza  terhadap  bobot kering  tanaman  terbesar  terdapat  pada belimbing  wuluh  dengan  dosis  30  g  yaitu sebesar 7,7 g. dan terendah dosis 0 g yaitu 5,1 g. Fungi mikoriza akan bersimbiosis dengan akar tanaman  dengan  membentuk  hifa  eksternal yang  dapat  membantu  penyerapan  unsur  P. Triastuti  (2010)  menyatakan  bahwa  mikoriza arbuskular  meningkatkan  kandungan  dan serapan hara P pada tanaman jambu mete serta terdapat  ineraksi  mikoriza  arbuskular  dengan pupuk  P  untuk  meningkatkan  pertumbuhan tanaman  yangdapat  diendapkan  setelah  kadar air  dikeringkan.  Semakin  besar  berat  kering tanaman  menunjukkan  semakin  efisien  proses fotosintesis yang terjadi dan produktivitas serta perkembangan sel  jaringan semakin tinggi dan cepat,sehingga  pertumbuhan  menjadi  lebih baik,  yang  akhirnya  beratkering  tanaman meningkat.  Dengan  demikian,  adanya  mikoriza pada  tanaman  meningkatkan  penyerapan  hara untuk  tanaman  sehingga  dapat  meningkatkan laju  fotosintesis  sehingga  tanaman  dapat mengalami  pertumbuhan  yang  baik  yang diwujudkan  ke  dalam  produksi  biomassa tanaman  atau  berat  kering  tanaman.  Hal    ini dikarenakan tanaman yang terinfeksi oleh MVA memiliki kemampuan mengambil P dan nutrien lain  seperti N,  K, dan Mg pada zone penipisan nutrien  disekitar  akar,  selain    itu  adanya asosiasi mikoriza ini dapat membantu tanaman dalam  pengambilan  air  dan  hara  lain  untuk
proses  pertumbuhan  dan  perkembangan (Guissou, 2009).
Kolonisasi Akar Pengaruh  dosis  mikoriza  terhadap persentase  kolonisasi  akar  tertinggiterdapat pada  dosis  20  g    yaitu  sebesar    13  %,  dan terendah  pada  dosis  0  g    yaitu  sebesar  0 %.Inokulasi mikoriza hanya berpengaruh nyata terhadap  persentase  kolonisasi  akar.  Menurut Setiadi  dkk  (1992),  persentase  kolonisasi tergolong  rendah  jika  berada  di  antara  0-25% dan tergolong sedang jika berada di antara 26- 50%.  Persentase  kolonisasi  yang  diperoleh pada penelitian ini pada dosis 0-30 g tergolong rendah.  Logam  berat  menyebabkan  kenaikan derajat  infeksi  akar  secara  nyata.  Semakin tinggi  dosis  mikoriza  yang  diberikan  maka derajat  infeksi  akar  cenderung  semakin  tinggi. Hal  ini  karena  interaksi  antara  akar  tanaman dan  simbion  seperti  jamur  mikoriza  arbuskula dapat  memainkan  peran  penting  dalam kelangsungan hidup  pertumbuhan tanaman di tanah  yang  terkontaminasi.  Asosiasi  mikoriza dapat  meningkatkan  luas  permukaan  serap tanaman karena  hifa dari mikoriza menjelajahi rizosfer  di  luar  zona  akar  rambut,  yang meningkatkan  air  dan  serapan  mineral (Bhalerao,  2013).  Kolonisasi    mikoriza    akan memberikan  peran    positif  dalam  penyediaan unsur    hara  N,  P,  dan  air  sehingga    memacu pertumbuhan  yang    merupakan    manifestasi dimulai    dari    penyediaan    karbohidrat    dari organ  fotosintesis dan penyediaan air dan hara oleh  akar  sampai  kepada  sintesis  biomassa tanaman yang baru.

## Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan  maka  dapat  diperoleh  kesimpulan sebagai berikut :
1. Fungi  mikoriza  arbuskula  memberikan pengaruh yang nyata terhadap pertumbuhan tanaman  belimbing  wuluh  pada  tanah  yang terakumulasi logam Pb.
2. Dosis  mikoriza  20  g  yang  optimal  terhadap pertumbuhan  tanaman  belimbing  wuluh pada tanah yang terakumulasi logam Pb.

## Saran
1. Belimbing  wuluh  dapat  dijadikan  sebagai tanaman yang dapat mengurangi pencemaran  logam  Pb  yang  berasal  dari asap kendaraan bermotor, asap pabrik, dll 2. Pemberian mikoriza, menyebabkan interaksi yang  optimal  terhadap  tanaman  belimbing wuluh  dalam  memulihkan  lingkungan  yang tercemar logam Pb
3. Pentingnya penambahan mikoriza pada bibit tanaman  yang  akan  dijadikan  sebagai tanaman untuk Ruang Terbuka Hijau (RTH).

## Daftar Pustaka
Arisutanti,  R.J.,  dan    Purwani,  K.I.  2013. Pengaruh Mikoriza Glomus fasciculatum terhadap  Akumulasi Logam  Timbal  (Pb)  pada  Tanaman
Dahlia pinnata . Jurnal Sains Dan Seni Pomits, Vol. 2, No.2 : 2337-3520
Bhalerao,  S.A.  2013.  Arbuscular  Mycorrhizal Fungi:  A  Potential  Biotechnological Tool For Phytoremediation Of Heavy Metal Contaminated Soils. International Journal  Of Science And Nature Vol. 4 : 1-15 Darmono.  1995.  Logam  dalam  Sistem  Biologi
Makhluk Hidup. Penerbit Universitas Indonesia. Jakarta.
Guissou,  T.  2009.  Contribution  of  arbuscular mycorrhizal    fungi    to    growth    and nutrient  uptake  by  jujube  and tamarind  seedlings  in  a  phosphate (P)-deficient  soil.  African  Journal  of Microbiology Research3(5): 297-304 Juhaeti,  T.,  Syarif,  F.,  dan  Hidayati,  N.  2005. Iventarisasi  Tumbuhan  Potensial Untuk  Fitoremediasi  Lahan  Dan  Air Terdegradasi  Penambangan  Emas. Jurnal Biodiversitas. Vol. 6 No. 1 hal : 31-33 Nadeak,  J.    2015.  Pengaruh  Pemberian  Fungi Mikoriza Arbuskula Terhadap Kandungan Logam Timbal (Pb) Pada Tanaman  Sengon.  Skripsi.  Fakultas Pertanian,  Universitas  Sumatera
Utara. Medan
Priadie,  B.  2012.  Teknik  Bioremediasi  Sebagai
Alternatif Dalam Upaya Pengendalian
Pencemaran  Air.    Tesis  Program studi ilmu lingkungan program pasca sarjana.  Universitas  Dipenegoro. Semarang. Puspitawati.  2000.  Bioremediasi    Tanah Tercemar Logam  Berat  Cd,  Cu  dan Pb dengan Menggunakan Endomikoriza.    Jurnal    Online AAgroekoteknologi    ISSNNo.2337- 6597.  Vol.2 No.1:348-361. Setiadi, Y., Mansur, A. 1992. Mikrobiologi Tanah Hutan,  Pusat  Antar  Universitas Bioteknologi Tanaman Pangan, Institut Pertanian Bogor. Bogor Sianipar,  H.,  Erman,  M.,  Delvian.,  2016. Pengurangan Akumulasi Timbal (Pb) Dengan  Memanfaatkan  Mikoriza
Arbuskula  Dan  Tanaman  Belimbing
Wuluh  ( Averrhoa  bilimbi )  Jabon (Anthocephalus cadamba ) Petai
( Parkia speciosa ). J. Biosains. 2, 133- 140. Triastuti,  Y.  2010.  Fitoremediasi  Tanah Tercemar Merkuri (Hg2+)Menggunakan  Tanaman  Akar Wangi  ( Vetiver  Zizanioides )Pada Lahan  Eks-Tpa  Keputih  Surabaya. Skripsi Jurusan Teknik LingkunganFakultas Teknik Sipil Dan PerencanaanInstitut Teknologi Sepuluh Nopember. Surabaya Wiriadinata,  H.,  dan    Bamroongrugsa,  N.  2010. Plant  Resources  of  South-East  Asia, http://www.proseanet.org/prohati2 /browser.php?docsid=373,  diakses tanggal 21 Februari 2016