PERBANDINGAN NILAI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK DAUN JERUK PURUT ( Citrus hystrix ) DAN BENTUK LIPOSOMNYA
Kimiko Hikari Zuhria*, Adeltrudis Adelsa Danimayostu*  , Siti Jazimah Iswarin*

## Abstrak
Antioksidan merupakan senyawa yang memiliki mekanisme kontrol dalam menyeimbangkan konsentrasi ROS  ( Reactive  Oxygen  Species ).  Salah  satu  sumber  antioksidan  eksogen  adalah  daun  jeruk  purut  ( Citrus hystrix ). Daun jeruk purut mengandung sitronelal yang merupakan antioksidan kuat, sehingga dapat dijadikan alternatif  antioksidan  eksogen  untuk  penghambat  proses  penuaan  ( antiaging ).  Antioksidan  eksogen  pada umumnya terpenetrasi dalam kulit hanya hingga bagian epidermis. Padahal, proses penuaanterutama terjadi pada bagian dermis kulit. Sistem penghantaran obat liposom dipilih dengan tujuan meningkatkan kemampuan penetrasi zat aktif kedalam dermis. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui perbandingan antara aktivitas antioksidan  ekstrak  dan  liposom  ekstrak  daun  jeruk  purut.  Studi  eksperimental  dilakukan  dengan membandingkan  ekstrak  hasil  ekstraksi  daun  jeruk  purut  dan  bentuk  formula  liposomnya.  Dalam  formula liposom, digunakan berbagai konsentrasi lesitin yang berperan sebagai komponen utama penyusun liposom. Variabel  yang  diukur  dalam  penelitian  ini  adalah  nilai  aktivitas  antioksidan  dengan  metode  DPPH.  Hasil penelitian menunjukkan bahwa ada perbedaan signifikan antara  nilai aktivitas antioksidan yang ditunjukkan oleh nilai IC 50 antara ekstrak dengan liposom (p < 0,05). Nilai IC 50 ekstrak yaitu 27,434 ppm, lebih rendah daripada nilai antioksidan liposom formula A (28,187 ppm), formula B (28,801 ppm) dan formula  C (29,876 ppm). Semakin tinggi konsentrasi lesitin menunjukkan hasil IC 50 yang lebih tinggi. Kesimpulan dari penelitian ini adalah ada perbedaan antara aktivitas antioksidan ekstrak dan liposom ekstrak daun jeruk purut.
Kata kunci : antioksidan, antipenuaan, daun jeruk purut( Citrus hystrix ), liposom
COMPARISON OF ANTIOXIDANT ACTIVITY OF KAFFIR LIME( Citrus hystrix ) LEAF EXTRACT AND ITS LIPOSOME FORM

## Abstract
An  antioxidant  is  a  control  mechanism  substance  in  balancing  the  concentration  of  ROS  (Reactive Oxygen Species). One of the sources of exogenous antioxidant is kaffir lime( Citrus hystrix) leaf extract. Kaffir lime  contained  anantioxidant  substance,  called  citronellal,  so  it  can  be  an  alternative  to  inhibit  aging process.Exogenous antioxidant mostly penetrated only to the epidermal layer of skin, however, aging process mainly happens in the dermal layer. Liposome is chosen as a drug carrier to increase the active compound into the dermis. This research was aimed to compare antioxidant activity of kaffir lime extract and liposome contained  the  kaffir  lime  extract  by  using  DPPH  method.  The  liposome  were  divided  into  3  formulas  with various concentration of lecithine that is the main component of liposome. The result showed that there was a significant difference between the antioxidant activity of kaffir lime extract and its liposome (p < 0.05). The IC 50 value of kaffir lime extract was 27.434 ppm, lower than IC 50 value of its liposome formula  A (28.187 ppm), formula B (28.801 ppm), and formula  C (29.876 ppm). The higher concentration of lecithin makes the higher IC 50 value of liposome. In conclusion, there is the different antioxidant activity between kaffir lime extract and kaffir lime liposome.
Keywords: antioxidant, antiaging, kaffir lime ( Citrus hystrixI ) , liposome
* Program Studi Farmasi, FK UB
 E-mail: mohabbat.elcha@gmail.com

## Pendahuluan
Penuaan  kulit  merupakan  proses dinamis  yang  dapat  terjadi  karena  proses kronologis  maupun photoaging. Akumulasi hasil proses stres oksidatif dan pembentukan radikal  bebas  di  dalam  sel  kulit  merupakan mekanisme  umum  dari  kedua  mekanisme proses  penuaan.  ROS  ( reactive  oxygen species )  adalah  senyawa  pengoksidasi turunan oksigen yang bersifat sangat reaktif. ROS dalam jumlah sedikit berfungsi sebagai second  messenger pada  jalur  sinyal  dalam proses  proliferasi  dan  diferensiasi,  regulator gen,  dan  mediator  bagi  aktivasi  sel  (faktor kinase  dan  transkripsi).  Konsentrasi  ROS dalam jumlah tinggi menyebabkan terjadinya formasi  peroksinitrit  yang  mempengaruhi potensial  membran  dari  mitokondria,  yang merupakan kunci dari aktivasi jalur apoptosis sel. 1 Produksi antioksidan merupakan mekanisme  kontrol  dari  jaringan  untuk menyeimbangkan konsentrasi ROS. Antioksidan  endogen  seperti  glutation, piruvat,  dan lycopene diproduksi  oleh  tubuh untuk menghadapi akibat stres oksidatif. Jika konsentrasi  antioksidan  endogen  tidak mencukupi  atau  tidak  seimbang,  perlu bantuan  antioksidan  eksogen. 2 Antioksidan eksogen  dapat  diperoleh  dari  berbagai sumber seperti antioksidan sintetik (vitamin E dan  Vitamin  C)  dan  antioksidan  alami  yang bersumber  dari  tanaman.  Jeruk  purut( Citrus hystrix )  adalah  salah  satu  tanaman  yang tumbuh  di  daerah Indonesia,  Malaysia,  dan Thailand. Sitronelal, suatu senyawa monoterpenoid  yang  memiliki  aktivitas antioksidan,  merupakan  80%  penyusun  dari minyak atsiri daun jeruk purut. 3
Proses penuaan utamanya terjadi pada lapisan kulit bagian dermis. Maka antioksidan eksogen  yang  diberikan  harus  mencapai dermis sehingga dibutuhkan sistem penghantaran topikal karena sistem ini dapat meningkatkan  permeabilitas  kulit  dan mempertahankan  konsentrasi  yang  optimum dalam  dermis.  Studi in  vivo menunjukkan
formulasi  liposom  memiliki  kemampuan penetrasi  yang  lebih  baik  akibat  adanya sistem  fosfolipid  yang  dapat  menembus epidermis  kulit  dan  penyerapan  sistemik yang  lebih  rendah  dibandingkan  dengan formulasi  konvensional.  Formula  liposom dapat  digunakan  untuk  kulit  sensitif dibandingkan  etosom  karena  liposom  tidak mengandung etanol yang dapat menyebabkan  iritasi  kulit.  Liposom  juga memiliki efek meningkatkan stabilitas zat baik terhadap lingkungan maupun oksidasi. 4 Kelebihan yang dimilikiliposom memberikan  peluang  yang  besar  untuk membuat sediaan antipenuaan yang memiliki efektifitas  antioksidan  tinggi  dan  mampu berpenetrasi  hingga  ke  lapisan  dermis. Ekstrak  yang  diformulasikan  dalam  suatu sistem  penghantaran  liposom  menimbulkan pertanyaan  apakah  ada  perbedaan  nilai aktivitas  antioksidan  antara  ekstrak  dan liposom ekstrak daun jeruk purut.

## Bahan dan Metode
Bahan-bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  ialah  daun  jeruk  purut  segar ( Citrus  hystrix )  yang  diperoleh  dari  UPT Materia Medika Batu, lesitin kedelai (Fischer Scientific),  kolesterol  (Sigma  Aldrich),  dapar fosfat pH  5,  asam  askorbat  (Sigma  Aldrich), reagen  DPPH  (Sigma  Aldrich)  dan  pelarut etanol 96%.
Pembuatan Ekstrak Daun Jeruk Purut: Metode  ekstraksi  daun  jeruk  purut ( Citrus  hystrix )  yang  terpilih  ialah  dengan cara dingin yaitu maserasi. Daun jeruk purut kering  dihaluskan  dan  diayak.  Bubuk  daun jeruk purut sebanyak 165 g dicampur dengan etanol 96% sebanyak 825 ml, diaduk dengan shaker , lalu didiamkan selama 48 jam. Hasil maserasi disaring dan diuapkan dalam rotary evaporator pada 60 ⁰ C dengan kecepatan 80 rpm hingga mengental. Sisa pelarut diuapkan dalam oven lalu ditimbang.
Tes fitokimia terhadap ekstrak dilakukan  dengan  reagen  tertentu. Ferric
chloride test dengan reagen FeCl 3 dilakukan untuk  mengetahui  kandungan  fenol.  Tes reagen  alkali  dengan  penambahan  NaOH dilakukan  untuk  mengetahui  kandungan flavonoid.  Uji  Salkowski  dilakukan  dengan reagen  kloroform  dan  H 2 SO 4 untuk mengetahui kandungan terpenoid. 5
Pembuatan Liposom:
Liposom yang dibuat dibedakan menjadi
3 formula atas dasar perbedaan konsentrasi lesitin.  Lesitin  merupakan  komponen  utama pembentuk vesikel liposom (Tabel 1).
Tabel 1. Formula liposom
No Bahan Formula A B C 1. Ekstrak daun jeruk purut 0,5% (b/v) 0,5% (b/v) 0,5% (b/v) 2. Lesitin kedelai 2% (b/v) 3,5% (b/v) 5% (b/v) 3. Kolesterol 0,5% (b/v) 0,5% (b/v) 0,5% (b/v) 4. Kloroform:metanol (3:1, v/v) 20 ml 20 ml 20 ml 5. Dapar fosfat pH 5 50 ml 50 ml 50 ml Liposom  dibuat  dengan  menggunakan metode thin film hydration . Langkah pertama ialah  membuat  fase  lipid  terlebih  dahulu dengan melarutkan ekstrak etanol daun jeruk purutdan  lesitin  kedelai  dalam  klorofom- metanol (3:1 v/v) sebanyak 20 ml. Campuran pelarut  diuapkan  dengan rotary  evaporator pada suhu 45°C untuk mendapatkan lapisan tipis  lipid  pada  dinding  labu.  Lapisan  lipid kering  ditambahkan  dapar  fosfat  pH  5  pada suhu  ruang.  Dispersi  yang  dihasilkan dibiarkan  pada  suhu  kamar  selama  2-3  jam sehingga didapatkan suspensi vesikular MLV ( multi lamellar vesicle ). Selanjutnya, dilakukan  sonikasi  untuk  mendapatkan liposom  SLV  ( single  lamellar  vesicle )dari suspensi  vesikular  dalam bath ultrasonik  2 jam pada suhu kamar (27°C).
Hasil  pembuatan  liposom  diamati karakteristik  organoleptik  dengan  cara melihat  konsistensi,  warna,  dan  bau  secara langsung. 6 Uji nilai pH liposom menggunakan pH  meter.  PSA  ( particle  size  analyzer ) digunakan  untuk  mengetahui  ukuran  dan transmission  electron  microscopy (TEM) untuk  mengetahui  morfologi  vesikel.  Selain itu,  liposom  juga  dievaluasi  terhadap  daya penjerapannya  karena  dapat  mempengaruhi efek  antioksidan.  Penentuan  aktivitas
antioksidan dilakukan dengan metode in vitro metode  DPPH  yang  selanjutnya  diamati dengan spektrofotometri UV-Vis .
Pemeriksaan  nilai  aktivitas  antioksidan ekstrak  dan  liposom  ekstrak  yaitu  uji pendahuluan,  pemeriksaan  nilai  aktivitas antioksidan  vitamin  C  sebagai  pembanding, dan  proses  sentrifugasi  liposom  untuk mengeluarkan  zat  aktif  dari  vesikel.  Metode pemeriksaan  nilai  aktivitas  antioksidan dengan menggunakan metode DPPH yaitu 1 ml  ekstrak  tanaman  dicampur  dengan  3  ml DPPH  100  ppm.  Campuran  diukur absorbansinya  dengan  standar  asam askorbat pada 518 nm dengan menggunakan spektrofotometer  UV-Vis.  Nilai  absorbansi yang didapatkan dimasukkan dalam rumus:
[ ]
Uji  stabilitas real  time dilakukanuntuk mengetahui  kestabilan  sediaan  selama  28 hari  dalam  suhu  ruang  25 ° C  dan kelembaban 60 5%. Dipastikan bahwaselama 28 hari penyimpanan tidak ada
perubahan  organoleptik,  ukuran,  dan  pH. Analisis  data  dengan  menggunakan  aplikasi SPSS,  pertama  mengecek  normalitas  data, jika  hasil  normal  maka  dapat  dilakukan metode repeated  ANOVA ,  jika  tidak  normal maka menggunakan metode Friedman, untuk hasil  data  uji  stabilitas.  Hasil  data  uji  nilai aktivitas antioksidan diperiksa normalitasnya, jika normal dapat dilakukan metode One way ANOVA , jika tidak normal maka menggunakan metode Kruskal Wallis. Hasil
Dari  proses  ekstraksi  didapatkan ekstrak kental yang didapatkan yaitu 16,2525 g, rendemen yang didapatkan adalah 9,85%. Hasil screening fitokimia  yang  dapat  dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Hasil screening fitokimia ekstrak daun jeruk purut Pemeriksaan Reagen Perubahan Warna Kesimpulan Fenol FeCl 3 Kehitaman (+) Fenol Flavonoid NaOH Transparan (+) Flavonoid Terpenoid Kloroform dan H 2 SO 4 Cokelat kemerahan (+) Terpenoid Liposom yang telah dihasilkan kemudian  dilakukan  evaluasi  karakteristik fisik.  Uji  organoleptik    menunjukkan  bahwa liposom berbentuk cair, berwarna hijau muda kekuningan,  dan  berbau  segar  khas  daun jeruk purut. Terlihat  pada Gambar  1.  bahwa formula dengan kandungan lesitin yang lebih tinggi (F1C) memiliki warna yang lebih keruh. Selain  itu,  liposom  yang  baru  dibuat tersebut  juga  diukur  nilai  pH-nya.  Hasil  uji nilai  pH  liposom  formula  A  yaitu  5,413; formula  B  yaitu  5,686;  dan  formula  C  yaitu 5,564.  Dari  hasil  ini  terlihat  bahwa  nilai  pH liposom  telah  sesuai  dengan  spesifikasi  pH kulit yaitu 4,5-6,5.
Gambar 1. Liposom ekstrak daun jeruk purut (formula A, formula B, formula C)
Uji Stabilitas: Hasil  uji  stabilitas real  time formula liposom menunjukkan tidak adanya perubahan  bentuk,  warna,  dan  bau  namun ada  endapan  pada  liposom  hari  ke-13  dan ke-28. Endapan tersebut akan hilang dengan pengocokan ringan.
Stabilitas juga diuji pada perubahan pH masing-masing  formula.  Pada  formula  A disimpulkan bahwa ada perbedaan signifikan pada  pengukuran  hingga  hari  ke-28 ( Friedman  test ,  p  =  0,000).  Sementara formula  B  dan  C  menunjukkan  perbedaan signifikan pada pemeriksaan 3 titik ( Friedman
test , p = 0,005 dan p = 0,000). Nilai pH pada uji stabilitas dapat dilihat pada Tabel 3. Tabel 3. Hasil uji stabilitas pH liposom Formula pH Hari ke-1 Hari ke-13 Hari ke-28 A 5,622 5,797 5,782 B 5,632 5,683 5,755 C 5,656 5,814 5,770 Penentuan  ukuran  partikel  liposom  juga menjadi  parameter  penting  dalam  penelitian ini.  Dengan  menggunakan  alat particle  size analyzer, didapat  diameter  rerata  partikel liposom.  Pada  analisis  statistika,  uji  ukuran
partikel  pada  uji  stabilitas  menunjukkan adanya  perbedaan  signifikan  antara  ukuran partikel hari ke-1, ke-13, dan ke-28 pada tiap formula  liposom.    Hasil  uji  ukuran  partikel pada uji stabilitas terdapat pada Tabel 4.
Tabel 4. Hasil uji stabilitas ukuran partikel liposom Formula Ukuran Partikel (µm) Hari ke-1 Hari ke-13 Hari ke-28 A 88,783 174,580 364,740 B 53,203 73,243 106,403 C 38,223 103,580 104,463 Tidak hanya diameter rerata partikel liposom saja  yang  dapat  terlihat  oleh particle  size analyzer. Distribusi  ukuran  partikel  juga dapat  terekam.  Uji  distribusi  ukuran  partikel menunjukkan  distribusi  yang  tidak  merata untuk  seluruh  formula  liposom  pada pemeriksaan hari ke-1, ke-13, maupun ke-28. Uji Morfologi Liposom: Hasil  uji  morfologi  didapat  dari pemeriksaan menggunakan TEM ( transmission electrone microscope ). Formula  yang  diajukan  untuk  pemeriksaan dengan  TEM  adalah  formula  C  karena memiliki spesifikasi ukuran, organoleptik, nilai aktivitas  antioksidan,  dan  pH  yang  paling baik. Terlihat pada Gambar 3 bahwa liposom memiliki bentuk hamper sferis.
Gambar 2. Stabilitas distribusi partikel liposom ekstrak daun jeruk purut pada hari ke-1 (kolom kiri), hari ke-13 (kolom tengah) dan hari ke-28 (kolom kanan)
Keterangan : Formula A (atas), Formula B (tengah), Formula C (bawah) .
Gambar 3. Morfologi vesikel liposom
Uji Aktivitas Antioksidan:
Hasil  uji  pendahuluan  antioksidan ekstrak dilakukan dengan menotolkan ekstrak dan  vitamin  Cpada  KLT,  lalu  disemprot dengan  DPPH  100  ppm.  Uji  ini  ditujukan
untuk  screening  efek  antioksidan  yang dimiliki,  walaupun  belum  diketahui  seberapa besar  potensi  antioksidan.  Hasil  uji pendahuluan dapat dilihat pada Gambar 4. a b c d
Gambar 4. Hasil uji pendahuluan aktivitas antioksidan Vitamin C (a dan b) dan ekstrak daun jeruk purut (c dan d). Terlihat bahwa ekstrak daun jeruk purut memiliki efek antioksidan.
A
B C
Dari  hasil  uji  nilai  aktivitas  antioksidan menggunakan  metode  DPPH,  vitamin  C memiliki  nilai  IC 50 sebesar  4,793  ppm.  Nilai aktivitas antioksidan ekstrak yaitu 27,434 ppm. Hasil  uji  nilai  aktivitas  antioksidan  vitamin  C, ekstrak,  dan  liposom  terdapat  pada  Tabel  5. Dari  tabel  tersebut  menunjukkan  bahwa semakin  kecil  nilai  IC 50 ,  maka  semakin  tinggi aktivitas antioksidan yang dimiliki. Berdasarkan uji statistik post hoc menunjukkan  bahwa  data  yang  berbeda signifikan  adalah  antara  ekstrak  dengan formula  B  dan  formula  C  (p =  0,023  dan  p  =
0,001). Sedangkan antara ekstrak dan formula A  tidak  terdapat  perbedaan  secara  signifikan (p = 0,162). Nilai  efisiensi  penjerapan  dari  setiap formula  liposom  dapat  dilihat  pada  Tabel 6.Nilai efisiensi penjerapan liposom didapatkan  dari  perhitungan  presentase inhibisi  supernatan  yaitu  membandingkan absorbansi ekstrak dan absorbansi supernatan liposom. Nilai efisiensi penjerapan didapat  dari  mengurangkan  100%  dengan persentase  inhibisi  supernatan  yang  didapat sebelumnya.
Tabel 5. Hasil uji nilai aktivitas antioksidan (IC 50 ) Sampel/Formula Nilai IC 50 (ppm) Liposom A 28,187±0,24561 Liposom B 28,801±0,69001 Liposom C 29,876±0,08935 Ekstrak 27,434±0,67789 Vitamin C 4,793±0,047 Tabel 6. Nilai IC 50 , persentase inhibisi supernatan, dan efisiensi penjerapanliposom Formula Nilai IC 50 Persentase inhibisi supernatan Efisiensi penjerapan A 28,187 96,835% 3,165% B 28,801 94,848% 5,152% C 29,876 91,431% 8,569%

## Pembahasan
Hasil  skrining  fitokimia  sesuai  dengan determinasi  bahan  yang  didapat  dari  UPT Materia  Medika  batu  yaitu  daun  jeruk  purut ( Citrus  hystrix )  mengandung  terpenoid  dan minyak atsiri. Dalam minyak atsiri daun jeruk purut  terdapat  flavonoid  dan  fenol.  Warna liposom  hijau  muda  kekuningan  sesuai dengan spesifikasi yang ditentukan sebelumnya karena adanya campuran lesitin kedelai  dalam  liposom.  Bau  dari  liposom sesuai  dengan  spesifikasi  yaitu  segar  dan khas  daun  jeruk  purut  ( Citrus  hystrix ) sebagai zat aktif liposom.Hasil pengujian pH liposom  berada  dalam  rentang  yang diinginkan  yaitu  4,5-6,5,  sesuai  dengan spesifikasi yang diinginkan. Rentang pH 4,5- 6,5  sesuai  dengan  pH  kulit. 7 Nilai  pH  kulit asam  (4-4,5)  memudahkan  flora  normal menempel  pada  kulit,  sedangkan  pH  basa (8-9)  menyebabkan  flora  normal  terlepas dari kulit. 8
Ukuran partikel pada hari ke-1 diperiksa dengan  alat  PSA  dengan  hasil  seluruh formula  tidak  memasuki  spesifikasi  yang diinginkan.  Ukuran  vesikel  liposom  yang >1000  nm  membuat  liposom  digolongkan sebagai  GUV  ( giant  unilamellar  vesicles ). GUV  sudah  banyak  digunakan  sebagai model  liposom  dalam  studi  penetrasi  dalam membrane.
9 Faktor yang dapat mempengaruhi ukuran partikel adalah waktu sonikasi  dan  amplitudo,  semakin  lama proses  sonikasi  maka  ukuran  partikel menurun  dan  semakin  tinggi  amplitudo sonikasi  akan  menurunkan  pula  ukuran partikel.  Sonikasi  pada  frekuensi  yang  lebih rendah  dapat  mengurangi  ukuran  liposom lebih  cepat. 10 Metode  pembuatan  liposom mempengaruhi ukuran vesikel liposom yang terbentuk,  dengan  ukuran  partikel  terkecil didapat  dari  metode melting ,  lalu  diikuti dengan  metode sonication,  reverse  phase
evaporation,  thin  layer  evaporation ,  dan freezing  thawing. 11 Ukuran  vesikel  liposom dapat  juga  dipengaruhi  oleh  konsentrasi lesitin  dalam  formula.  Konsentrasi  lesitin yang  tinggi  dapat  meningkatkan  ukuran vesikel liposom. 12
Hasil  uji  nilai  aktivitas  antioksidan  yang telah dilakukan didapatkan hasil IC 50 vitamin C 4,673 ppm, IC 50 ekstrak 27,434 ppm, dan IC 50 liposom  untuk  formula  A  28,187  ppm, formula  B  28,801  ppm,  dan  formula  C adalah29,876 ppm. Nilai antioksidan ekstrak setelah  diuji  adalah  lebih  rendah  daripada vitamin  C.  Nilai  IC 50 ekstrak  kurang  dari  50 ppm  hingga  digolongkan  ke  dalam antioksidan  sangat  kuat.  Hasil  uji  statistik menggunakan Oneway ANOVA , menunjukkan  ada  perbedaan  signifikan antara nilai aktivitas antioksidan ekstrak dan liposom.  Hasil  uji post  hoc menunjukkan bahwa  nilai  IC 50 ekstrak  tidak  berbeda dengan  liposom  formula  A,  namun  berbeda dengan  nilai  IC 50 formula  B  dan  C.  Hal  ini menunjukkan bentuk liposom dapat memperbaiki  aktivitas  antioksidan  ekstrak, dan dipengaruhi oleh jumlah lesitin.
Nilai  efisiensi  penjerapan  formula  A adalah  paling  kecil  karena  mengandung lesitin  kedelai  yang  paling  sedikit, selanjutnya  formula  B  dan  formula  C menunjukkan  nilai  penjerapan  yang  lebih tinggi  karena  mengandung  konsentrasi lesitin kedelai yang lebihtinggi. Nilai efisiensi penjerapan  berbanding  lurus  dengan  IC 50 , semakin  tinggi  IC 50 liposom  maka  semakin tinggi  efisiensi  penjerapannya  karena  nilai IC 50 menunjukkan  potensi  bahan  aktif  yang dapat  menghambat  zat  oksidan  akibat adanya efisiensi penjerapan yang dialami. 1 Pada  uji  stabilitas  terdapat  perbedaan yaitu  adanya  endapan  pada  setiap  formula liposom  pada  hari  ke-13  dan  ke-28. Pengendapan  dalam  liposom  terjadi  saat nilai tegangan permukaan vesikel dan buffer
pelarut sama. Tegangan permukaan liposom dipengaruhi  oleh  fosfolipid,  rasio  molar kolesterol,  dan  konsentrasi  obat.  Tegangan permukaan  liposom  semakin  menurun  jika konsentrasi  kolesterol  dalam  lapisan  lipid meningkat.  Peningkatan  konsentrasi  obat dapat  meningkatkan  tegangan  permukaan liposom. 13
Hasil  uji  pH  pada  uji  stabilitas liposomyang  didapatkan  telah  sesuai dengan spesifikasi. Nilai pH yang berada di kisaran  angka  5  didapatkan  karena  buffer fosfat  yang  digunakan  sebagai  pelarut  dari liposom memiliki  nilai  pH  5,  namun nilai  pH dari liposom juga dipengaruhi pH dari bahan yang  digunakan  hingga  hasil  akhir  pH bervariasi. Ukuran liposom yang diperiksa pada uji stabilitas  meningkat  seiring  waktu  karena liposom mengalami agregasi yang disebabkan oleh ikatan interaksi interpartikel. Barier  dari  potensial  interaksi  biasanya berasal  dari  kombinasi  antara  tolakan elektrostatik dan gaya Van der Waals . Gaya Van  der  Waals tergantung  dengan  ukuran partikel,  semakin  besar  ukuran  partikel, maka  akan  semakin  mudah  teragregasi. 14 Pembentukan  lapis  tipis  dalam rotary evaporator dalam  formulasi  yang  dilakukan kurang  merata  dalam  kondisi  tebal  atau tipisnya layer yang  terbentuk,  hingga  dapat mengakibatkan  ukuran  vesikel  yang bervariasi. 15
Ekstrak  daun  jeruk  purut  memiliki aktivitas  antioksidan  terbukti  dapat  bereaksi dengan  radikal  bebas  (DPPH)  secara  baik meskipun  lebih  rendah  dari  vitamin  C. Liposom  sebagai sistem  penghantaran  obat tidak  mempengaruhi  aktivitas  antioksidan dari  ekstrak  daun  jeruk  purut  ditunjukkan dengan  nilai  IC 50 dari  liposom  yang  tidak lebihrendahnilai  IC 50 ekstrak.  Dengan digunakannya  liposom  sebagai  sistem penghantaran  obat  tidak  mempengaruhi
aktivitas antioksidan ekstrak hingga liposom dapat  dikembangkan  kembali  dengan memaksimalkan metode pembuatan liposom, alat, dan waktu penelitian.

## Kesimpulan
Dari  hasil  penelitian  dapat  disimpulkan bahwa liposom formula A (jumlah lesitin 2%) menunjukkan nilai aktivitas antioksidan yang tidak  berbeda  dengan  ekstrak  daun  jeruk purut.  Liposom  formula  B  dan  formula  C (menggunakan  lesitin  masing-masing  3,5% dan  5%)  menunjukkan  aktivitas  antioksidan yang lebih tinggi daripada ekstrak daun jeruk purut.

## Daftar Pustaka
1. t       v D,  Duš  a  P,  Ivana  A.
Oxidative  Stress,  Skin  Aging  and Antioxidant  Therapy. Scientific  Journal of the Faculty of Medicine in Niš. 2014; 31(4):207-217.
2. Pouillot  A,Luigi  LP,Philippe  T,Alice  N, Ada  P,and  Barbara  P. Formulating,
Packaging,  and  Marketing  of  Natural Cosmetic  Products .  New  York  :  Wiley. 2011. 3. Mahalwal VS and AliM.Volatile Constituents  of  the  Fruit  Peels  of C.
reticulate . Blanco  J  Essent  Oil  Bearing Plants. 2001; 4:45-49.
4. Varun  T.  Niosomes  and  Liposomes- Vesicular Approach Towards Transdermal Drug Delivery. International Journal of Pharmaceutical and Chemical
Sciences. 2012; 1(3).
5. Wagner  H  and    Bladt  S. Plant  Drug Analysis: A Thin Layer Chromatography. 2 nd Ed.  New  York:
Springer.1996.
6. Cardoso  A. Total  Phenolics  Extracted from  the  Skin  of  Fuji  Apple  and
Incorporated  by  Liposome  in  Galenic Bases:  an  Alternative  to  Use  By-
Products  of  Food  Industry .  Romanian Biotechnological Letters. 2011; 16(6).
7. Saba MA  and Gil Y. Skin  pH: From Basic Science to Basic Skin Care. 2012;
93(3):261-267.
8. Lambers H, Piessens S, Bloem A, Pronk H, Finkel P. Natural Skin Surface pH is on Average Below 5, which is Beneficial for its Resident Flora. Int J Cosmet Sci.
2006; 28(5):359-70.
9. Wes ł ws a O, Krystyna M, Jadw ga M, and  Hendrich  AJ. Giant  Unilamellar Vesicles  —  A  Perfect  Tool  to  Visualize Phase  Separation  and  Lipid  Rafts  in
Model Systems . 2009; 56(1):33–39. 10. Yamaguchi  T,  Nomura  M,  Matsuoka  T, Koda  S.  Effects  of  Frequency  and
Power  of  Ultrasound  on  the  Size
Reduction  of  Liposome. Chemistry  and Physics of Lipids. 2009; 160:58–62
11. Fan M, Xu S, Xia S, and Zhang X. Effect of  Different  Preparation  Methods  on Physicochemical Properties of Salidroside  Liposomes. J  Agric  Food Chem . 2007; 55: 3089−3095 3089
12. Lasic  DD  and  Barenholz  Y  (Editors). From  Gene  Delivery  and  Diagnosis  to Ecology.  Di  dalam: Handbook  of Nonmedical  Applications  of  Liposomes. Vol IV . Florida: CRC Press. 1996.
13. Butler EI, Vargha M, Foldvari and Mezei M. Study  of  the  Sedimentation Behaviour  of  Liposomal  Drug  Delivery System Colloids and Surfaces . Amsterdam: Elsevier Science Publishers. 1989. p 375-389. 14. Delgado  AV.  Interfacial  Electrokinetics and Electrophoresis . Di dalam:
Surfactant  Science .  Vol  106.  Boca Raton: CRC Press. 2001.
15. Lee  SC,  Lee  KE,  Kim  JJ,  and  Lim  SH .
The  Effect  of  Cholesterol  in  the
Liposome Bilayer on the Stabilization of Incorporated  Retinol  Cholesterol  in Liposomes  Increases  the  Stability  of Incorporated  Retinol. J  Liposome  Res. 2005; 15:157–166.