Media Farmasi Vol. 13 No. 2 September 2016 : 227-236

## EFEK EKSTRAK ETANOL BIJI BUAH KEBIUL (Caesalpinia bonduc L. Roxb) TERHADAP BATU GINJAL TIKUS SPRAGUE DAWLEY YANG DIINDUKSI
ETILEN GLIKOL 0,75% DAN AMONIUM KLORIDA 2%
THE EFFECT OF KEBIUL ( Caesalpinia bonduc L. Roxb) SEED ETHANOL EXTRACT AGAINST RENAL CALCULI OF SPRAGUE DAWLEY RATS INDUCED BY ETHYLENE GLYCOL AND AMMONIUM CHLORIDE
Tiara Rizki Handayani, Sapto Yuliani
Fakultas Farmasi, Universitas Ahmad Dahlan, Yogyakarta Email: tiararizkihandayani@gmail.com

## ABSTRAK
Penyakit  ginjal  dapat  disebabkan  karena  ada  pembentukan  batu  yang  terbentuk dari komplek kalsium sehingga dapat mengganggu fungsi ginjal. Biji buah kebiul ( Caesalpinia  bonduc (L.)  Roxb)  mengandung  flavonoid  yang  dapat  mencegah pembentukan  endapan  batu  di  ginjal.  Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk mengetahui  efek  ekstrak  etanol biji  buah  kebiul pada  batu  ginjal  tikus Sprague Dawley (SD)  yang  diinduksi  etilen  glikol  0,75%  dan  amonium  klorida  2%. Sebanyak  30  ekor  tikus,  dewasa,  jantan,  dibagi  menjadi  6  kelompok  yang mendapat perlakuan sebagai berikut: kontrol normal diberi akuades; kontrol sakit, diberi  akuades;  kontrol  positif,  diberi  obat  X  dengan  dosis  2,7  mL/kg  BB,  dan kelompok  ekstrak  diberi  ekstrak  biji  kebiul  dengan  variasi  dosis  yaitu  250,  500, dan 1000 mg/kg BB. Induksi batu ginjal dilakukan dengan pemberian etilen glikol 0,75% dan amonium klorida 2% 2 jam setelah pemberian esktrak etanol biji buah kebiul  dan  obat  X    selama  10  hari  pada  semua  kelompok,  kecuali  kelompok normal.  Efek  terhadap  batu  ginjal  ditentukan  berdasarkan  jumlah  kalsium  urin, kadar kreatinin dan ureum serum. Data jumlah kalsium  yang diperoleh dianalisis secara statistik dengan uji Kruskall Wallis dilanjutkan dengan uji Mann Whitney, sedangkan data kreatinin  dan ureum  serum  yang  diperoleh dianalisis dengan one way  ANOVA dilanjutkan  dengan  uji  LSD.  Signifikansi  hasil  dinyatakan  dengan p<0,05. Jumlah kalsium urin, kadar kreatinin dan ureum serum kelompok ekstrak tidak  berbeda  bermakna  (p>0,05)  dibandingkan  dengan  kelompok  kontrol  sakit. Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat  disimpulkan  bahwa  pemberian  ekstrak  etanol biji buah kebiul dosis 250, 500 dan 1000 mg/kg BB tidak memberikan efek pada batu ginjal tikus SD yang diinduksi etilen glikol dan amonium klorida.
Kata kunci : biji buah kebiul, batu ginjal, kreatinin, kalsium, ureum
Tiara Rizki Handayani dan Sapto Yuliani

## ABSTRACT
Kidney disease may be caused by renal calculi formation leading to renal function disturbance.  Kebiul  (Caesalpinia  bonduce (L.) Roxb)  seed  is  one  of  the  plants which can be used for the treatment of renal calculi. The seed of kebiul contains of  flavonoid  that  can  excrete  calcium  from  kidney.  The  aim  of  the  study  was  to determine  the  effects  of  kebiul  seed  ethanol  extract  on  renal  calculi  of  Sprague Dawley  rats  induced  by  ethylene  glycol  and  ammonium  chloride.  Thirty  male adult  rats  were  devided  into  6  groups  got  orally  treatments  as  follow  :  Normal Control group, was given by aquadest; Renal calculi Control group, was given by aquadest; Positif  Control group, was given by X drug, and extract groups, were given  by  kebiul  seed  ethanol  extract  dose    250,  500    and  1000    mg/kg  bw, respectivelly.  Administration  of  ethylene  glycol  0.75%  and  ammonium  chloride 2%  were  2  hours  after  administration  of  kebiul  seed  extract  and  X  drug.  The treatments  were  carried  out  each  day  for  10  days.  On  day  11  the  rats  were measured their amount of urine calcium, serum  creatinine and ureum levels. The results obtained statistically analyzed by one way ANOVA or Kruskall Wallis tests followed  by  LSD  or  Mann  Whitney  tests  with  a  0.05  significancy  level.    The amount  of  urine  calsium,  serum    creatinine  and  ureum  levels  of  extract  and  X drug groups were no significantly different (p >0.05) with the renal calculi group. Base on the results it can be concluded that  the kebiul seed ethanol extract dose of  250,  500  and  1000  mg/kg  bw    could  not  decrease  calcium  amount,  serum creatinin  and ureum    levels  of   renal  calculi  of Sprague Dawley rat  induced by ethilen glicol and ammonium chloride.
Keywords : Caesalpinia bonduc (L.) Robx seed., renal calculi,  calsium, creatinin and ureum

## PENDAHULUAN
Batu  ginjal  adalah  partikel  padat  seperti  kerikil  yang  terdapat  di  berbagai bagian  dari  sistem  kemih  dengan  ukuran  dapat  mencapai  5  cm  yang  dapat mengganggu  fungsi  ginjal  (Ogi,  2001).  Sebanyak  90%  dari  semua  batu  ginjal mengandung kalsium, dan sekitar dua pertiga dari semua batu ginjal adalah jenis kalsium oksalat (Sylvia et al ., 2005).
Etilen  glikol  adalah  zat  yang  dapat  dimetabolisme  di  dalam  tubuh menghasilkan  senyawa  oksalat  yang  dapat  mengendap  bersama  kalsium membentuk  kristal  kalsium  oksalat.  Penambahan  amonium  klorida  dapat menginduksi  metabolik asidosis  sehingga ketika  direaksikan dengan etilen glikol akan  mempercepat  proses  terbentuknya  kristal  oksalat  (Wientarsih et  al .,  2014).
Media Farmasi Vol. 13 No. 2 September 2016 : 227-236
Oleh  karena  itu,  pemberian  etilen  glikol  dan  amonium  klorida  pada  hewan  uji dapat menjadi model pembentukan batu ginjal pada manusia.
Sampai  saat  ini  penggunaan  obat  sintesis  masih  menunjukkan  hasil  yang belum memuaskan, sehingga obat tradisional masih menjadi pilihan utama dalam pengobatan batu ginjal. Tanaman obat digunakan sebagai pencegahan batu ginjal, karena  adanya  kandungan  flavonoid  dan  garam-garam  mineral  yang  dapat melarutkan kalsium oksalat (Vogel, 1990). Biji buah kebiul merupakan salah satu bahan  tanaman  yang  mengandung  flavonoid,  alkaloid,  dan  saponin  (Kusrahman, 2012).  Flavonoid  merupakan  salah  satu  zat  aktif  dari  tanaman  yang  mempunyai berbagai  khasiat.  Beberapa  penelitian  melaporkan  peranan  penting  senyawa flavonoid  dalam  meluruhkan  batu  ginjal.  Hal  ini  disebabkan  karena  gugus  –OH dari  flavonoid  dapat  membentuk  komplek  kalsium-flavonoid  yang  mudah  larut dalam  air.  Aktivitas  diuretik  dari  flavonoid  juga  dapat  membantu  pengeluaran batu melalui urin (Nisma, 2011).
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  efek  ekstrak  etanol  biji  buah kebiul  dalam  mencegah    pembentukan    batu  ginjal  pada  tikus Sprague  Dawley yang diinduksi etilen glikol 0,75%  dan amonium klorida 2%  melalui pengamatan parameter  gangguan  fungsi  ginjal  yaitu  jumlah kalsium  urin, kadar kreatinin  dan kadar ureum pada darah.

## METODE PENELITIAN
Bahan  uji  yang  digunakan  adalah  biji  buah  kebiul,  etanol  70%  (General Labora),  etilen  glikol  (Merck),  ammonium  klorida  (Merck) , aquades  (General Labora), reagen kit untuk uji kreatinin,  ureum dan  kalsium (Dyasis). Alat  yang digunakan  adalah  kandang  metabolit,  sonde  lambung,  gelas  ukur,  timbangan digital  (Ohaous),  mikro  pipet  (Socorex), rotary  evaporator (Buchi-R-210),  alat- alat gelas, eppendorf, spektrofotometer UV-VIS (UV-1800, Shimadzu).
Jalannya Penelitian
A. Pembuatan Ekstrak Etanol Biji Buah Kebiul
Biji  buah  kebiul  yang  telah  dikeringkan  diserbuk  dengan  cara  disangrai sampai gosong lalu ditumbuk untuk mendapatkan serbuk. Serbuk biji buah kebiul dimaserasi dengan pelarut etanol 70% selama 3x24 jam. Setelah disaring,  maserat
230 Efek Ekstrak Etanol Biji
Tiara Rizki Handayani dan Sapto Yuliani
diuapkan  dengan rotary  evaporator dan di  atas  penangas  air  hingga  didapatkan ekstrak kental.
B. Uji Flavonoid Ekstrak Biji Buah Kebiul
Sebanyak 10 mg ekstrak biji kebiul dilarutkan  dalam  etanol 70% hingga 5 mL.  Larutan  diteteskan  pada  kertas  saring,  kemudian  kertas  saring  dikeringkan dan  diuapkan  dengan  amoniak.  Warna  kuning  intensif  menunjukkan  adanya flavonoid.
C. Perlakuan Hewan Uji
Sebanyak  30  ekor  tikus Sprague  Dawley ,  jantan,  umur  dewasa,  dibagi menjadi  6  kelompok  (tiap  kelompok  5  ekor).  Setelah  diadaptasikan  selama  1 minggu,  tikus  mendapatkan  perlakuan  sebagai  berikut:  kontrol  normal  diberi akuades,  kelompok  kontrol  sakit  diberi  akuades,  kontrol  positif  diberi  obat  X dengan  dosis  2,7  mL/kg  BB  dan  kelompok  ekstrak  berturut-turut  diberi    ekstrak etanol biji buah kebiul dosis 250, 500 dan 1000 mg/kg BB secara per oral.  Etilen glikol 0,75% dan amonium klorida 2% diberikan 2 jam setelah pemberian ekstrak atau obat dengan dosis 12 mL/200 g BB setiap hari  selama 10 hari. Pada hari ke 10  semua  tikus  dimasukkan  ke  kandang  metabolit  untuk  penampungan  urin selama  24  jam,  dan  kemudian  pada  hari  ke  11  semua  tikus  diambil  darahnya melalui sinus orbitalis.

## D. Pengukuran Jumlah Kalsium Urin
Pengukuran  jumlah  kalsium  urin  dilakukan  sesuai  prosedur  cara  kerja reagen  kit  dengan  menggunakan  metode  fotometri.  Prinsip  kerjanya  adalah senyawa  arsenazo  III  akan  membentuk  kompleks  biru  ungu  yang  intensitasnya proporsional  dengan  konsentrasi  kalsium  yang  diukur  pada  panjang  gelombang 650  nm.  Kadar  kalsium  urin  (mg/dL)  yang  didapat  kemudian  dikali  dengan volume urin (mL) sehingga didapatkan jumlah (mg) kalsium urin.
E. Pengukuran Kadar Kreatinin Serum
Pengukuran kadar kalsium urin dilakukan sesuai prosedur cara kerja reagen kit  dengan  menggunakan  metode  “JAFFE”.  Prinsip  kerjanya  adalah  kreatinin membentuk  kompleks  warna  merah  dengan  asam  pikrat  dalam  suasana  alkali. Perubahan  absorbansi  pada  waktu  tertentu  proporsional  dengan  konsentrasi
Media Farmasi Vol. 13 No. 2 September 2016 : 227-236
kreatinin  dalam  sampel  yang  diukur  dengan  spektrofotometer  UV-VIS  pada panjang gelombang 492 nm. Satuan kadar kreatinin adalah mg/dL.
F. Pengukuran Kadar Ureum Serum
Pengukuran kadar ureum serum dilakukan sesuai prosedur cara kerja reagen kit  dengan  metode enzymatic  UV  Test “Urease-GLDH”.  Prinsip  kerjanya  adalah urease  mengkatalisis  proses  hidrolisis  urea  menjadi  ammonia  dan  karbonat. Selanjutnya terjadi  reaksi  transaminase pada senyawa 2-Oksoglutarat  menjadi  L- Glutamat,  NADH  tereduksi  menjadi  NAD + dalam  proses  katalisis  oleh  enzim GLDH.  Reduksi  NADH    menjadi  NAD + menyebabkan  penurunan  absorbansi pada  340  nm  dan  kecepatan  perubahan  absorbansi  secara  langsung  berbanding lurus  dengan  konsentrasi  ureum  yang  diukur  dengan  spektrofotometer  UV-VIS pada panjang gelombang 340 nm. Kadar ureum urin dalam satuan  mg/dL.
G. Analisis Data
Data  jumlah  kalsium  urin  dianalisis  secara  statistik  menggunakan  uji Kruskal  Wallis  dan  dilanjutkan  dengan  uji  Mann  Whitney  sedangkan  data  kadar kreatinin  dan  ureum  serum  dianalisis  secara  statistik  menggunakan  uji one  way ANOVA dan dilanjutkan dengan uji LSD. Signifikansi ditetapkan jika p   kurang dari 0,05.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## A. Hasil Uji Flavonoid Ekstrak
Gambar 1 . Hasil Uji Flavonoid Ekstrak Etanol Biji Buah Kebiul, (a) sebelum diuapkan dengan amonia, (b) setelah diuapkan dengan ammonia, warna kuning
membuktikan adanya flavonoid
Berdasarkan  hasil  penapisan  fitokimia  ekstrak  etanol  biji  buah  kebiul menunjukkan bahwa kertas saring yang telah ditetesi ekstrak dan diuapkan dalam
(b) (a)

## Efek Ekstrak Etanol Biji Buah Kebiul
(a)
232 Efek Ekstrak Etanol Biji
Tiara Rizki Handayani dan Sapto Yuliani
uap  amonia  terbentuk  warna  kuning.  Hal  ini  menunjukkan  adanya  senyawa flavonoid pada ekstrak, seperti tersaji pada Gambar 1.
B. Hasil Analisis Jumlah Kalsium dalam Urin
Hasil  pengukuran  rata-rata  volume  dan  jumlah  kalsium  urin  dapat  dilihat pada  Tabel  I  yang  menunjukkan  bahwa  rata-rata  jumlah  kalsium  urin  kelompok kontrol  sakit  yang  hanya  diberi  etilen  glikol  dan  amonium  klorida  saja menunjukkan  lebih  banyak  secara  bermakna  dibandingkan  pada  tikus  kelompok kontrol  normal . Pemberian etilen  glikol  dapat  menghasilkan  senyawa  metabolit oksalat  yang  akan  berikatan  dengan  kalsium    dalam  darah  membentuk  kristal kalsium  oksalat    (CaO x )  yang  dapat  terakumulasi  di  ginjal,  menyebabkan  ion kalsium tidak dapat direabsorpsi (Brent, 2001; Anggraeni, 2013; Wientarsih et al. , 2014).  Senyawa  amonium  klorida  berperan  sebagai  katalisator  untuk mempercepat terbentuknya batu ginjal kalsium oksalat. Batu di dalam ginjal dapat luruh bersama dengan urin, sehingga dapat ditemukan jumlah kalsium yang tinggi pada urin (Hardiyatmo, 1988) .
Tabel I. Volume dan jumlah (mg) kalsium urin (rata-rata ± SD) tikus
Grup Volume urin (mL) Jumlah Ca (mg) Kontrol normal 0,6 ± 0,141 0,028 ± 0,012 b Kontrol sakit 2,54 ± 1,187 0,123 ± 0,056 a Kontrol positif 3,58 ± 0,943 0,164 ± 0,047 a Ekstrak dosis 250 mg/kg BB 1,58 ± 0,783 0,100 ± 0,048 a Ekstrak dosis 500 mg/kg BB 5,56 ± 3,454 0,189 ± 0,081 a Ekstrak dosis 1000 mg/kg BB 2,93 ± 2,645 0,150 ± 0,146 a
Keterangan : Nilai  pada  kolom  yang  sama  diikuti  huruf  yang  sama  menunjukkan  tidak berbeda nyata (p>0,05) dengan kelompok kontrol sakit
Berdasarkan  Tabel  I  juga  menunjukkan  bahwa  volume  urin  kelompok kontrol  sakit  lebih  sedikit  apabila  dibandingkan  dengan  volume  urin  pada kelompok  ekstrak  dosis  500  mg/kg  BB,  1000  mg/kg  BB  dan  kelompok  kontrol positif.  Hal  ini  dapat  disebabkan  karena  kecepatan  filtrasi  glomerulus  menurun dengan adanya batu ginjal yang mengganggu aliran urin (Prabosh dan Revikumar, 2012).
Berdasarkan  data  hasil  pengukuran  volume  urin  tersebut  membuktikan bahwa  pemberian  ekstrak  etanol  biji  buah  kebiul  maupun  obat  X  memiliki
Media Farmasi Vol. 13 No. 2 September 2016 : 227-236
aktivitas  sebagai  diuretik  sehingga  menyebabkan  volume  urin  yang  dihasilkan lebih  banyak  dibandingkan  dengan  kontrol  sakit.  Namun  demikian,  pemberian ekstrak dosis 250, 500,  1000 mg/kg BB dan obat X menunjukkan jumlah kalsium di  dalam  urin  yang  berbeda  tidak  bermakna  (p>0,05)  dengan  kelompok  kontrol sakit. Hal ini menunjukkan bahwa pemberian  ekstrak dan obat X  belum mampu untuk  menurunkan  jumlah  kalsium  di  dalam  urin  secara  bermakna.  Apabila ekstrak  uji  mampu  mencegah  pembentukan  batu  ginjal  maka  batu  kalsium  tidak akan terbentuk sehingga ion kalsium dapat direabsorpsi, sehingga jumlah kalsium di urin lebih sedikit (Wijaya, 2014).
C. Hasil Analisis Kadar Kreatinin Serum
Hasil pemeriksaan kadar kreatinin serum tikus pada penelitian ini disajikan pada Tabel II. Berdasarkan hasil  pengukuran kadar kreatinin serum menunjukkan bahwa  kadar  kreatinin  serum  tikus  kelompok  kontrol  sakit  lebih  kecil dibandingkan  dengan  kontrol  normal  (p<0,05).  Kreatinin  sering  dipakai  untuk menilai  fungsi  ginjal.  Kreatinin  adalah  hasil  metabolisme  keratin  fosfat  yang terjadi di dalam otot secara fisiologi. Kreatinin diekskresikan seluruhnya  melalui urin  dan  kadarnya  sangat  dipengaruhi  oleh  laju  filtrasi  glomerulus  (Madyastuti, 2015).    Substansi  nitrogen  (seperti  kreatinin,  asam  urat,  dan  nitrogen  urea)  yang merupakan  produk  buangan  utama  tubuh,  dengan  adanya  batu  ginjal  yang menghalangi  ekskresi  urin  sehingga  menyebabkan  produk  buangan  tersebut terakumulasi di darah (Prabosh dan Revikumar, 2012).
Tabel II. Kadar kreatinin serum (rata-rata + SD) tikus pada kelompok uji
Keterangan : EEBK:  ekstrak  etanol  biji  kebiul.  Nilai  pada  kolom  yang  sama diikuti huruf yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata (p>0,05) dengan kelompok kontrol sakit. Grup Kreatinin (mg/dL) Normal 0,38 ± 0,03 b Kontrol Sakit 0,29 ± 0,06 a Kontrol Positif 0,3 ± 0,08 a EEBK 250 mg/kg BB 0,37 ± 0,06 a EEBK 500 mg/kg BB 0,21 ± 0,06 a EEBK 1000 mg/kg BB 0,33 ± 0,06 a
Tiara Rizki Handayani dan Sapto Yuliani
Pada  Tabel  II  menunjukkan  rata-rata  kadar  kreatinin  kelompok  kontrol normal,  kontrol  positif,  ekstrak  dosis  250  mg/kg  BB  dan  dosis  1000  mg/kg  BB lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  kelompok  kontrol  sakit . Hal  ini  berarti pemberian  etilen  glikol  dan  amonium  klorida  tidak  berpengaruh  terhadap perubahan  kadar  kreatinin  serum.  Faktor-faktor  yang  dapat  mempengaruhi  kadar kreatinin  adalah  jenis  kelamin,  kondisi  kelaparan,  dan  ukuran  jaringan  otot. Penggunaan  tikus  yang  memiliki  umur  beragam  juga  mempengaruhi  kadar kreatinin darah. Semakin bertambahnya umur jumlah glomerulus yang rusak juga semakin  bertambah  (Wientarsih et  al. ,  2012).  Selain  itu,  pada  fungsi  ginjal  yang normal dapat terjadi peningkatan kadar kreatinin serum bila terjadi kerusakan otot yang hebat (Solicha, 2014).

## D. Hasil Analisis Kadar Ureum Serum
Hasil  pemeriksaan  kadar  ureum  serum  hewan  uji  pada  penelitian  ini  dapat dilihat pada Tabel III.
Tabel III. Kadar ureum serum (rata-rata + SD) tikus pada kelompok uji
Grup Ureum (mg/dL) Normal 36,5 ± 5,45 a Renal calculi 54,9 ± 22,18 a Kontrol positif 45,55 ± 34,14 a EEBK 250 mg/kg BB 45,97 ± 15,93 a EEBK 500 mg/kg BB 31,8 ± 4,20 a EEBK 1000 mg/kg BB 60,37 ± 21,94 a
Keterangan : EEBK: ekstrak etanol biji keniul. Nilai pada kolom yang sama diikuti huruf yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata (p>0,05) dengan kelompok kontrol sakit.
Berdasarkan    hasil    pengukuran  kadar  ureum  serum  menunjukkan  bahwa rata-rata  kadar  ureum  serum  tikus  kelompok  kontrol  sakit  lebih  besar dibandingkan  dengan  kontrol  normal  meskipun  tidak  secara  signifikan.  Ureum dalam  darah  atau  disebut  urea  nitrogen  darah  ( Blood  urea  Nitrogen /  BUN) merupakan hasil metabolisme protein  normal.  Meningkatnya ureum  dalam  darah merupakan indikasi penurunan fungsi ginjal (Madyastuti, 2015).
Tabel III menunjukkan bahwa pemberian ekstrak berbagai dosis dan obat X tidak  mempengaruhi  kadar  ureum  serum,  karena  hasil  uji  statistik  menunjukkan
Media Farmasi Vol. 13 No. 2 September 2016 : 227-236
kadarnya  tidak  berbeda  bermakna  dengan  kelompok  kontrol  sakit  (p>0,05).  Hal ini  kemungkinan  disebabkan  karena  variasi  kadar  ureum  serum  yang  besar dikarenakan  selama  perlakuan  tikus  tidak  menggunakan  kandang  individual sehingga  masing-masing  tikus  uji  mendapat  asupan  protein  dalam  pakan  yang tidak seragam.

## KESIMPULAN
Pemberian  ekstrak  etanol  biji  buah  kebiul  dosis  250,  500  dan  1000  mg/kg BB  belum  mampu  menurunkan  jumlah  kalsium  urin  dan  kreatinin  serum. Penelitian  ini  juga  belum  dapat  menyimpulkan  bahwa  pemberian  ekstrak  etanol biji  buah  kebiul  dosis  250,  500  dan  1000  mg/kg  BB  mampu  menurunkan  kadar ureum serum pada batu  ginjal tikus Sprague Dawley yang diinduksi etilen glikol 0,75%  dan  amonium  klorida  2%,  karena  kadar  ureum  serum  kelompok  kontrol sakit tidak berbeda signifikan dengan kelompok kontrol normal.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih  kepada  Kementerian  Riset  Teknologi dan  Pendidikan  Tinggi  Republik  Indonesia yang  telah  membiayai  penelitian  ini melalui Program Kreativitas Mahasiswa tahun 2016.

## DAFTARPUSTAKA
Anggraeni, S., 2013, Uji Aktivitas Penghambatan Pembentukan Batu Ginjal (Anti Nefrolitiasis)  Ekstrak  Etanol  dari  Herba  Pegagan  ( Centella  asiatica (L.) Urban) pada Tikus Jantan, Skripsi, Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Program  Studi  Farmasi,  Universitas  Islam  Negeri  Syarif  Hidayatullah Jakarta, Jakarta.
Brent, J., 2001, Current management of ethylene glycol poisoning, Drugs , 61 (7): 979-988.
Hardiyatmo, G., 1988, Pengaruh Ekstrak Air dan Ekstrak Alkohol Daun Sonchus arvensis L. terhadap Volume Urin Tikus In Vivo dan Pelarutan Batu Ginjal In Vitro, Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta. Kusrahman,  A.,  2012,  Isolasi  Karakterisasi  Senyawa  Aktif  dan  Uji  Farmaka Ekstrak  Biji  Kebiul  pada  Mencit  ( Mus  musculuc )  serta  Penerapannya dalam Pembelajaran Kimia di SMAN 1 Bengkulu Selatan, Tesis, Program
236 Efek Ekstrak Etanol Biji
Tiara Rizki Handayani dan Sapto Yuliani
Pascasarjana  Pendidikan  IPA  Fakultas  Keguruan  dan  Ilmu  Pendidikan, Universitas Bengkulu, Bengkulu.
Madyastuti, R., Widodo, S., Wientarsih, I., dan  Harlina, E., 2015, Infusum Daun Alpukat sebagai Inhibitor Kristalisasi Kalisum Oksalat pada Ginjal, Jurnal Veteriner, 16(4): 525-532.
Nisma,  F.,  2011,  Pengaruh  Penambahan  Ekstrak  Etanol  70%  Buah  Anggur  Biru ( Vitis  vinifera L.)  terhadap  Kelarutan  Kalsium  Batu  Ginjal, Jurnal Penelitian , Jurusan Farmasi FMIPA Uhamka, Jakarta.
Ogi, 2001, Batu Ginjal, http://www.metrobanjar.indonesia.com
Prabosh  G.R.  and  Revikumar  K.G.,  2012,  Effect  of  MUSA  Tablet  on  Ethylene Glycol-Induced  Urolithiasis  in  Rats, International  Journal  of  Reseach  in Pharmacuetical and Biomedical Sciences, 3 (3): 2229-3701.
Solicha,  U.,  2014,  Pengaruh  Jus  Kedondong  ( Spondias  pinnata L.)  terhadap Kadar  Kreatinin  pada  Sukarelawan  Sehat, Skripsi, Fakultas  Farmasi Universitas Ahmad Dahlan, Yogyakarta.
Sylvia Anderson.,  Price,  Lorraine McCarty Wilson., 2005, Patofisiologi: Konsep Klinis  Proses-Proses  Penyakit, diterjemahkan  oleh  Brahm  U.;editor  edisi bahasa Indonesia, Huriawati Hartanto; Edisi Ke-6.,EGC, Jakarta.
Vogel.  R.,  1990, Buku  Teks  Analisis  Anorganik  Kualitatif    Makro  dan  Semi Makro ,  diterjemahkan  oleh  Setiano,  L.,  Hadyana  Pujaatmaka,  PT. Kalman Media Pustaka. Jakarta.
Wientarsih, I., Harlina, E., Madyastuti, R,P., Trisnaning, I, H, U., 2014, Aktivitas Ekstrak  Etanol  Daun  Alpukat  terhadap  Zat  Nefrotoksik  Ginjal  Tikus. Veteriner . 15 (2):246-251.
Wientarsih,  I.,  Madyastuti,  R.,  Febran,  B,  P.,  Firnanda,  D.,  2012,  Gambaran Serum  Ureum  dan  Kreatinin  pada  Tikus  Putih  yang  Diberi  Fraksi  Etil Asetat Daun Alpukat, Veteriner 13 (1):57-62.
Wijaya,  C.,  2014,  Efek  Sediaan  Herbal  Kalkugama  terhadap  Kalsium  Urin  dan Histopatologi  Ginjal  Tikus  Urolitiasis  karena  Induksi  Etilen  Glikol, Skripsi, Fakultas farmasi Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.