## ISSN: 0215-7950
Volume 18, Nomor 2, Maret 2022
Halaman 75–84 DOI: 10.14692/jfi.18.2. 75–84
Penghambatan Pertumbuhan Rhizoctonia solani dan Penekanan Serangannya pada Perkecambahan Tanaman Padi oleh Bakteri Endofit Padi
Growth Inhibition of Rhizoctonia solani and Its Infection Inhibition on the Rice Seedling by Rice Endophytic Bacteria
Fitri Widiantini * , Endah Yulia, Dinda Sekar Fiko Universitas Padjadjaran, Bandung 45363

## ABSTRAK
Rhizoctonia solani merupakan salah satu patogen penting pada tanaman padi yang dapat menyebabkan  hawar  pada  benih,  daun,  dan  pelepah  daun.  Penyakit  hawar  pelepah  ini  menjadi masalah yang cukup serius di berbagai negara penanam padi, termasuk Indonesia. Pengendalian yang mengandalkan penggunaan pestisida sintetis dan varietas tahan sering kali menimbulkan permasalahan baru  baik  pencemaran  lingkungan  maupun  munculnya  populasi  patogen  resisten  sehingga  masih diperlukan pengendalian yang lebih aman dan ramah lingkungan. Penelitian ini melaporkan potensi bakteri endofit asal tanaman padi sehat dalam menghambat pertumbuhan R. solani secara in vitro dan kemampunnya dalam menekan infeksi R. solani pada perkecambahan padi. Percobaan menggunakan metode kultur ganda antara galur-galur bakteri endofit dan R. solani . Pengamatan dilakukan terhadap pertumbuhan koloni R. solani dan pertumbuhan miselium secara mikroskopis. Pengujian dilanjutkan dengan memperlakukan benih padi menggunakan bakteri endofit. Benih padi yang telah dilapisi dengan bakteri endofit kemudian ditumbuhkan pada medium agar-agar dekstrosa kentang yang telah ditumbuhi R. solani . Tingkat gangguan penyakit hawar pada benih menunjukkan bahwa hampir semua galur bakteri yang diuji dapat menghambat pertumbuhan koloni R. solani dan juga menyebabkan malformasi pada miseliumnya. Aplikasi bakteri endofit pada benih padi juga secara nyata menurunkan tingkat infeksi R. solani pada benih padi. Di antara bakteri yang diuji, OS7 berpotensi dikembangkan sebagai agens pengendali hayati hawar pelepah yang disebabkan oleh R. solani. Penelitian dalam skala rumah kaca dan skala lapangan perlu dilakukan lebih lanjut.
Kata kunci: agens pengendali hayati, malformasi, metode kultur ganda, penyakit hawar pelepah

## ABSTRACT
Rhizoctonia solani is one of the important pathogens in rice plants that can cause blight on seeds, leaves, and leaf sheaths. This rice sheath blight is a serious problem in many rice growing countries, including Indonesia. Controls that rely on the use of synthetic pesticides and resistant varieties often cause new problems, both environmental pollution and the emergence of resistant pathogen populations, so that safer and more environmentally friendly controls are still needed. This study reported the potential of endophytic bacteria from healthy rice plants in inhibiting the growth of R. solani in vitro and their ability to suppress R. solani infection in rice germination. The experiment used a dual culture method between endophytic bacterial strains and R. solani . Observations were made on the growth of R. solani colonies and microscopic mycelium growth. The test was continued by treating the rice seeds using endophytic bacteria. Rice seeds that have been coated with endophytic bacteria were then grown on

## PENDAHULUAN
Penyakit  hawar  pelepah  pada  tanaman padi yang disebabkan oleh Rhizoctonia solani merupakan salah satu faktor pembatas produksi padi yang menyebabkan kehilangan hasil  hingga  mencapai  50%  (Slaton et al. 2003). Tanaman padi yang terinfeksi oleh R. solani menunjukkan gejala bercak basah pada pelepah daun yang kemudian berkembang menjadi  keabuan  dengan  tepi  berwarna cokelat.  Bercak-bercak  tersebut  berkembang bersatu  menjadi  bercak  lebih  besar  yang kemudian mengakibatkan tanaman menjadi kering dan mati (Yellareddygari et al . 2014). Rhizoctonia solani merupakan  cendawan tanah  yang  hidup  sebagai  parasit  fakultatif. Sklerotium R. solani dapat bertahan dalam tanah lebih dari dua tahun. Cendawan ini dapat menyerang tanaman padi pada berbagai fase pertumbuhan. Serangan R. solani pada  fase pembentukan bunga atau pengisian panikel menyebabkan terganggunya transporasi air dan unsur hara serta asimilasi karbohidrat sehingga pengisian bulir padi tidak maksimal (Yellareddygari et al. 2014). Pengendalian  penyakit  hawar  pelepah masih  mengandalkan  pada  fungisida. Alternatif  pengendalian  yang  lain  perlu dilakukan, di antaranya dengan memanfaatkan bakteri  endofit  sebagai  agens  pengendali hayati.  Bakteri  endofit  merupakan  bakteri yang hidup di dalam jaringan tanaman tanpa menimbulkan gangguan bagi inangnya (Wu et al . 2021). Bakteri ini memberikan manfaat bagi tanaman  baik  secara  langsung  maupun  tidak langsung. Bakteri endofit membantu tanaman meningkatkan penyerapan nutrisi melalui fiksasi  nitrogen  dari  udara  atau  melarutkan fosfat  serta  memengaruhi  fitohormon  yang
berperan sebagai pemicu pertumbuhan. Selain itu  bakteri  endofit  secara  tidak  langsung memberikan  manfaat  bagi  tanaman  dengan memberikan perlindungan terhadap serangan patogen  baik  secara  kontak  maupun  melalui senyawa  antimikrob  yang  dihasilkannya (Ali et al .  2021).  Bakteri  endofit  juga  dapat menempati lingkungan yang sama dengan patogen pada tanaman sehingga inokulasi bakteri  endofit  sebagai  agens  pengendali hayati dianggap sebagai metode yang tepat untuk  mengendalikan  patogen  tanaman  (Wu et al . 2021).
Bakteri  endofit  telah  dilaporkan  dapat ditemukan  pada  semua  jenis  tanaman.  Conn et al. (2008)  melaporkan  diperolehnya bakteri  endofit  yang  diisolasi  dari  tanaman gandum sehat dengan mekanisme pengaktifan gen  kunci  ketahanan  tanaman.  De  Oliveira (2010)  menyatakan  bahwa  bakteri  endofit yang diisolasi dari tanaman tomat dapat meningkatkan pertahanan tanaman terhadap berbagai jenis patogen, baik patogen golongan cendawan  maupun  bakteri.  Asmoro  dan Munif  (2019)  juga  melaporkan  keberhasilan mendapatkan  bakteri  endofit  dari  tanaman paku-pakuan yang menunjukkan aktivitas penghambatan terhadap R. solani pada tanaman padi. Meskipun kisaran inang dari bakteri endofit ini cukup luas, aktivitas bakteri endofit dilaporkan lebih baik ketika diaplikasikan pada tanaman inang yang sama dengan asalnya atau yang berkerabat dekat dengan tanaman inang asal (Long et al . 2008; Afzal et al . 2019).
Widiantini et al .  (2017)  melaporkan keberhasilan diperolehnya beberapa galur bakteri  (Os)  dari  tanaman  padi  dengan kemampuan menghambat pertumbuhan cendawan Pyricularia oryzae , penyebab penyakit  blas  pada  padi.  Lebih  lanjut
potato dextrose agar medium that has been overgrown with R. solani . The level of disease blight in seeds showed that almost all of the bacterial strains tested could inhibit the growth of R. solani colonies and also cause malformations in their mycelium. The application of endophytic bacteria to rice seeds also significantly reduced the infection rate of R. solani in rice seeds. Among the bacteria tested, OS7 has the potential to be developed as a biological control agent for rice sheath blight caused by R. solani . Further research on the greenhouse and field scale needs to be done .
Keywords: biological control agent, dual culture method, malformation, sheath blight disease
Jurnal Fitopatologi Indonesia
Widiantini et al. dilaporkan pula bahwa bakteri endofit tersebut menghasilkan  senyawa  metabolit  sekunder yang juga dapat menghambat pertumbuhan P. oryzae (Widiantini et al . 2019). Oleh karena itu penelitian yang bertujuan mendapatkan bakteri endofit  Os  sebagai  agens  pengendali  hayati terhadap R. solani ini perlu untuk dilakukan.

## BAHAN DAN METODE
Perbanyakan Rhizoctonia solani dan Bakteri Endofit Perbanyakan R. solani dilakukan pada medium agar-agar dekstrosa kentang (ADK). Bakteri  endofit  yang  digunakan  berasal  dari koleksi  biakan  Laboratorium  Bioteknologi Proteksi Tanaman, Fakultas Pertanian, Universitas Padjadjaran. Sebanyak sembilan galur bakteri yang digunakan berasal dari tanaman padi (Os1, Os2, Os3, Os4, Os5, Os6, Os7, Os8, dan Os10).  Bakteri ini diperbanyak pada medium international project streptomyces 2 (ISP2). Cendawan dan bakteri tersebut diinkubasikan pada suhu ruang.
Uji Patogenisitas Rhizoctonia solani Uji patogenisitas dilakukan secara in vivo. Cendawan  ditumbuhkan  pada  medium ADK dan diinkubasi pada suhu ruang selama lima hari.  Benih  padi  varietas  Ciherang  direndam di dalam akuades selama 24 jam, ditiriskan, dan diperam selama 24 jam. Sebanyak lima benih padi ditumbuhkan di dalam cawan petri pada tempat R. solani yang telah tumbuh memenuhi  cawan.  Uji  patogenisitas  diulang sebanyak tiga kali. Benih diinkubasi selama lima hari pada suhu ruang dan gejala diamati pada  benih  padi.  Benih  padi  yang  terinfeksi R. solani ditandai dengan m unculnya bercak ber warna  kecokelatan  dari  pangkal  bakal batang hingga ujung akar.

## Uji Antagonis dan Pengaruh Perlakuan
Benih  dengan  Bakteri  Endofit  terhadap Rhizoctonia solani Kedua uji ini disusun dalam rancangan acak lengkap yang terdiri atas 10 perlakuan bakteri endofit,  termasuk  satu  perlakuan  kontrol. Uji diulang sebanyak empat kali. Data yang
diperoleh dianalisis menggunakan ANOVA dan dilanjutkan dengan uji jarak berganda Duncan  dengan  taraf  5%  menggunakan software SPSS versi 21.0.
Uji  Antagonisme  Bakteri  Endofit terhadap R. solani. Uji ini dilakukan dengan metode kultur ganda antara bakteri endofit dan R. solani . Perlakuan yang diuji ialah sembilan galur bakteri endofit yang dipasangkan dengan biakan R. solani. Bakteri  endofit  digoreskan pada  medium  separoh  ADK  dalam  cawan petri, selanjutnya 5 mm diamater miselium R. solani diletakkan berseberangan dengan jarak 30 mm dari biakan bakteri. Pengamatan dilakukan terhadap jari-jari koloni R. solani ketika pada perlakuan kontrol miselium cendawan R. solani sudah memenuhi cawan  petri.  Potensi  bakteri  endofit  dalam menghambat pertumbuhan R. solani dapat dihitung dari persentase penghambatannya. Semakin  besar  zona  hambat  terbentuk  maka bakteri endofit semakin kuat menghambat R. solani . Persentase penghambatan dihitung dengan rumus:
I = c – t c × 100%, dengan
c, jari-jari koloni R. solani pada kontrol dan t, jari-jari koloni R. solani pada perlakuan
Pengaruh  Perlakuan  Bakteri  Endofit pada Benih Padi terhadap Serangan R. solani. Sembilan  galur  bakteri  endofit digunakan untuk perlakuan benih padi. Benih  padi  yang  tidak  diberi  bakteri  endofit digunakan sebagai kontrol. Suspensi bakteri endofit  dibuat  dalam  100  mL  medium ISP2  cair,  dikocok  selama  24  jam  dengan kecepatan 100 rpm, disentrifugasi selama 10 menit dengan kecepatan 6000 rpm pada suhu ruang.  Sel bakteri diencerkan dengan larutan xanthan gum 3% dengan perbandingan 1 mL suspensi  bakteri  dan  9  mL  larutan  xanthan gum  3%.  Selanjutnya  campuran  ini  dikocok kuat  dan  kerapatan  sel  bakteri  endofit dihitung  menggunakan  spektrofotometer  dan disesuaikan hingga mencapai OD 600 = 1 yang setara dengan kerapatan sel bakteri 10 7 cfu    mL -1 . Benih padi direndam di dalam akuades selama 24 jam, diperam dalam kertas lembap
selama 24 jam.  Selanjutnya benih disterilkan dalam larutan kloroks 1% selama 30 detik dan dibilas dengan akuades steril. Masing-masing perlakuan  bakteri  endofit  diinokulasikan pada  40  benih  padi  dengan  cara  menetesi 1  mL  suspensi  bakteri  endofit- xanthan  gum. Selanjutnya benih padi dikeringanginkan dalam laminar air flow. Benih yang telah diberi perlakuan bakteri endofit ditanam pada biakan R. solani yang telah tumbuh memenuhi cawan petri. Setiap cawan petri diisi dengan 10 benih padi sehingga setiap perlakuan bakteri terdiri atas empat cawan petri sebagai ulangan.
Peubah yang diamati ialah jumlah benih padi  yang  terinfeksi R. solani. Gejala yang diamati  ialah  munculnya  pencokelatan pada akar dan pangkal bakal batang. Persentase penghambatan dihitung dengan rumus:
I = c – t c × 100%, dengan
c,  jumlah  benih  pada  perlakuan  kontrol  dan t, jumlah benih bergejala pada perlakuan.

## HASIL
Patogenisitas Rhizoctonia solani Uji patogenisitas R. solani yang dilakukan secara in vitro mengindikasikan  bahwa R. solani bersifat  patogenik . Patogenisitas R. solani pada benih dapat dilihat dari perkecambahan  benih  padi  pada  biakan cendawan yang me ngalami pencokelatan pada akar  dan  pangkal  bakal  batang  (Gambar  1). Patogenisitas  cendawan  patogen  menjadi sangat penting karena akan berpengaruh terhadap hasil pengujian antagonisme dan perlakuan benih .
Antagonisme  Bakteri  Endofit  terhadap Rhizoctonia solani Uji antagonisme menghasilkan delapan bakteri endofit yang menghambat pertumbuhan miselium R. solani, kecuali  galur Os10 (Gambar 2; Tabel 1) . Bakteri endofit  ini tidak berbeda dengan pertumbuhan R. solani pada kontrol. Delapan galur yang lain menunjukkan zona bening yang jelas dengan R. solani . Hasil analisis ragam menunjukkan bahwa semua bakteri endofit, kecuali Os10 dan Os2, dapat menghambat pertumbuhan koloni R. solani dengan baik (Tabel 2). Semakin kecil jari- jari koloni R. solani yang terbentuk , semakin baik  pula  penghambatan  bakteri  endofit terhadap R. solani. Berdasarkan persentase penghambatan yang ditimbulkannya, bakteri Os6 memiliki aktivitas antagonisme paling tinggi dibandingkan dengan kontrol dan perlakuan lainnya, yaitu sebesar 78.03%.
Lebih lanjut, hasil pengamatan mikroskopis  menunjukkan  bahwa  pada pengujian antagonisme bakteri terdapat perbedaan morfologi miselium R. solani yang terhambat pertumbuhannya. Pada perlakuan dengan bakteri Os1, Os3, Os4, Os6, dan Os7, kondisi  miselium  cendawan  pada  bagian dasar yang berhadapan langsung dengan agens antagonis menebal pada titik tertentu dan  mengalami  perubahan  warna.  Miselium tersebut selanjutnya tumbuh lebih tipis ke bagian  atas  dan  melewati  agens  antagonis karena dihambat pertumbuhannya pada bagian permukaan agar-agar (Gambar 2).
Hasil pengamatan mikroskopis menunjuk- kan  bahwa  hifa R. solani pada perlakuan kontrol  tumbuh  dengan  normal  (Gambar  3). Pada perlakuan Os1, Os3, Os4, Os6, dan Os7, hifa R. solani dihambat pertumbuhannya dan  mengalami  abnormalitas  morfologi. Hasil pengamatan mikroskopis menunjukkan terjadi  perubahan  struktur  morfologi  dari hifa  patogen R. solani seperti mengeriting, merata, membengkak; fragmentasi atau lisis; melanisasi (Gambar 3).
Gambar  1    Kecambah  padi  menunjukkan gejala  pencokelatan  pada  akar  dan  pangkal calon  batang  yang  terinfeksi Rhizoctonia solani.
Jurnal Fitopatologi Indonesia
Kontrol OS1 OS2 OS3 OS6 OS4 OS5 OS7 OS8

## OS10
Gambar 2  Kemampuan penghambatan bakteri endofit terhadap Rhizoctonia  solani pada hari kesepuluh setelah perlakuan. Kode pada setiap gambar menunjukkan kode bakteri endofit yang digunakan.
Tabel 1  Pertumbuhan koloni Rhizoctonia solani pada uji antagonisme dengan bakteri endofit pada hari kesepuluh setelah perlakuan
Bakteri endofit Jari-jari koloni (cm) Persentase penghambatan (%) Os1 1.50 ± 0.24 a 75.00 Os2 5.32 ± 0.47 cd 11.25 Os3 1.30 ± 0.70 a 75.70 Os4 1.50 ± 0.24 a 71.96 Os5 4.27 ± 0.76 b 20.83 Os6 1.17 ± 0.23 a 78.03 Os7 1.32 ± 0.96 a 75.23 Os8 5.00 ± 0.00 bc 16.66 Os10 6.00 ± 0.00 d 0 Kontrol 6.00 ± 0.00 d -
Angka  rata-rata  yang  diikuti  oleh  huruf  yang  berbeda  dalam  satu  kolom  menunjukkan  perbedaan  yang  nyata berdasarkan uji jarak berganda Duncan pada taraf nyata 5%.
Tabel  2    Kemampuan  bakteri  endofit  dalam  menghambat  serangan Rhizoctonia solani pada perkecambahan padi tujuh hari setelah perlakuan
Bakteri endofi t Rata-rata jumlah benih bergejala Persentase penghambatan benih bergejala (%) Os 1 6.00 ± 0.40 ab 40.0 Os 2 8.24 ± 0.85 bcd 17.5 Os 3 6.00 ± 0.91 ab 40.0 Os 4 6.00 ± 1.29 ab 40.0 Os 5 6.75 ± 0.40 ab 30.0 Os 6 7.50 ± 0.64 bc 25.0 Os 7 4.50 ± 0.64 a 55.0 Os 8 6.00 ± 0.70 ab 40.0 Os 10 9.00 ± 0.40 cd 10.0 Kontrol 10.00 ± 0.00 d -
Angka  rata-rata  yang  diikuti  oleh  huruf  yang  berbeda  dalam  satu  kolom  menunjukkan  perbedaan  yang  nyata berdasarkan uji jarak berganda Duncan pada taraf nyata 5%.

## Pengaruh Perlakuan Benih Padi dengan
Bakteri  Endofit  terhadap  Serangan R. solani Kesembilan bakteri endofit memengaruhi rata-rata jumlah benih bergejala yang berbeda nyata  dengan  kontrol,  kecuali  bakteri  Os2 dan  Os10.  Bakteri  endofit  Os2  dan  Os10 merupakan bakteri yang memiliki kemampuan
paling rendah dalam menekan infeksi patogen dengan persentase penghambatan masing- masing  hanya  10%  dan  17.5%.  Benih bergejala pada perlakuan Os1, Os3, Os4, Os5, Os7, dan Os8 menujukkan tidak berbeda nyata bila saling dibandingkan, bakteri-bakteri tersebut memiliki kategori cukup baik dalam menghambat serangan R. solani . Kisaran rata-
a b c d e
f
Gambar  3    Morfologi  miselium Rhizoctonia solani yang  mengalami  perubahan  morfologi karena perlakuan bakteri endofit. a, Kontrol;  b, Lisis; c, Mengeriting; d, Merata; e, Melaninsasi dan f, Melanisasi dan membengkak.
Jurnal Fitopatologi Indonesia
Widiantini et al.
rata  persentase  penghambatan  infeksi  yang ditimbulkan oleh Os1, Os3, Os4, Os5, dan Os8 ialah  30%  hingga  55%.  Meskipun  demikian berdasarkan persentase penghambatannya Os7 memiliki kemampuan menghambat infeksi R. solani yang paling baik di antara perlakuan bakteri lain dengan persentase penghambatan sebesar 55%
Bakteri endofit Os6 merupakan perlakuan yang memiliki persentase penghambatan yang juga rendah dibandingkan dengan perlakuan lainnya, yaitu 25%. Hal ini berbanding terbalik dengan hasil uji antagonisme Os6 yang dapat menekan  pertumbuhan  cendawan  patogen hingga 78.03% (Tabel 1).

## PEMBAHASAN
Keefektifan  agens  antagonis  dalam menghambat pertumbuhan patogen dapat dilihat  dari  ukuran  zona  penghambatan  atau zona  bening.  Semakin  besar  zona  bening, maka semakin besar kemampuan suatu agens antagonis untuk menghambat pertumbuhan patogen  (Balouiri et al. 2016). Perlakuan Os6 memiliki zona penghambatan lebih luas daripada perlakuan yang lainnya. Koloni R. solani yang terbentuk pada perlakuan Os6 berukuran  paling  kecil  dibandingkan  dengan perlakuan lainnya. Berdasarkan pengujian secara in vitro , perlakuan Os6 diduga mempunyai potensi yang paling besar dalam menghambat pertumbuhan patogen R. solani. Persentase penghambatan pertumbuhan koloni R. solani pada  perlakuan  Os6  mencapai 78.03%.  Perlakuan  lainnya  yang  berbeda nyata dengan kontrol dan memiliki potensi cukup  besar  ialah  perlakuan  Os3,  Os7,  Os1, dan Os4 dengan penghambatan pertumbuhan koloni R. solani pada pengamatan 10 hari setelah  perlakuan  berturut-turut  mencapai 75.4%, 75.23%, 75%, dan 71.96%.
Zona  bening  merupakan  zona  hambatan yang terbentuk di sekeliling koloni agens antagonis. Zona ini terbentuk karena adanya mekanisme  antibiosis.  Menurut  Compant et al . (2005)  terdapat  beberapa  mekanisme penekanan pertumbuhan patogen yang dilakukan oleh agens antagonis, salah satunya
adalah antibiosis. Mekanisme antibiosis merupakan penghambatan patogen oleh senyawa  metabolit  yang  dihasilkan  agens hayati  seperti  enzim,  senyawa-senyawa volatil,  zat  pelisis  dan  senyawa  antibiotik lainnya. Agens antagonis menghasilkan senyawa antibiotik yang bersifat menghambat atau membunuh patogen sehingga daerah tersebut tidak ditumbuhi oleh patogen (Nawangsih  2007).  Senyawa  antibiotik  dapat mengakibatkan terjadinya endolisis atau autolisis,  yaitu  pecahnya  sitoplasma  suatu  sel oleh  enzim  yang  diikuti  kematian  sel  yang mungkin disebabkan kekurangan hara, antibiotik ataupun  kerusakan  dinding  sel  (Raaijmakers et al .  2002).  Selain  senyawa  bioaktif  seperti antibiotik, agens antagonis juga menghasilkan enzim  hidrolitik  (protease,  kitinase,  selulase, lipase)  dan  inhibitor  enzim  (Ali et al . 2021). Aktivitas antagonis bakteri kitinolitik dapat mengakibatkan  hifa R. solani membengkok, menggulung, memendek, mengalami lisis, mengalami  fragmentasi,  mengeriting,  dan mengecil  (Novina et al . 2013).  Secara mikroskopis kondisi miselium R. solani setelah  berinteraksi  dengan  bakteri  endofit mengalami penipisan dan patah menjadi beberapa bagian kecil (fragmentasi).
Diperkirakan  bakteri  endofit  Os1  dan Os4  menghasilkan  enzim  glukanase  yang dapat menyebabkan lisis pada dinding sel cendawan. Streptomyces menghasilkan enzim glukanase yang dapat menghancurkan dinding sel  cendawan  (Valois et al. 1996).  Enzim ß-(1,3) glukanase dan kitinase juga dihasilkan oleh  agens  antagonis  cendawan  lainnya seperti Trichoderma yang bertindak sebagai mikoparasit  terhadap  cendawan R. solani dan  menyebabkan  eksolisis  pada  hifa  inang (Inayati et al . 2020). Enzim β-1,3 glukanase dan kitinase berperan dalam mendegradasi kitin sebagai komponen utama dinding sel cendawan  sehingga  hifa  akan  mengalami vakuolasi, lisis, dan hancur (Huang et al. 2005). Malformasi  miselium R. solani lainnya adalah melanisasi. Melanisasi merupakan proses pembentukan melanin yang dilakukan oleh  organisme  termasuk  cendawan  patogen untuk bertahan hidup dari cekaman lingkungan
(Henson et al . 1999). Melanin memerngaruhi virulensi  patogen  untuk  bertahan  dari  sifat antimikrob yang dilakukan oleh tanaman (Nosanchuk  dan  Casadeval  2006).  Bakteri endofit  Os6  dan  Os7  diduga  menghasilkan senyawa  anticendawan yang membuat lingkungan menjadi tidak optimal bagi pertumbuhan R. solani sehingga mengalami proses melanisasi untuk mempertahankan diri . Widiantini et al .  (2017)  melaporkan bahwa  bakteri  endofit  Os6  dan  Os7  ketika ditumbuhkan pada medium yang sama menunjukkan karakteristik yang berbeda. Pada  medium  ISP2,  Os6  berwarna  krem kecokelatan,  sedangkan  Os7  berwarna krem.  Hal  ini  dapat  menjadi  indikasi  bahwa kedua galur bakteri tersebut bukan dari jenis yang sama. Selain itu, terdapat sedikit perbedaan kerapatan bakteri Os6 dan Os7 yang digunakan pada metode pengujian perlakuan benih. Os7 memiliki kerapatan bakteri  lebih  tinggi  (1.16  ×  10 7 cfu  mL -1 ) dibandingkan dengan Os6 (1.00 × 10 7 cfu mL -1 ) (data  tidak  ditampilkan).  Kerapatan  bakteri dilaporkan dapat memengaruhi kemampuan bakteri dalam mengolonisasi akar yang akhirnya me-ningkatkan kemampuan agens biokontrol tersebut dalam mengendalikan penyakit tanaman (Compant et al. 2005). Hal ini diduga terjadi pada daya hambat oleh Os6 dan Os7 ketika digunakan sebagai perlakuan benih, yang mana penghambatan OS6 lebih rendah daripada Os7. Faktor lain yang dapat memengaruhi fenomena kontradiktif tersebut adalah quorum sensing (QS) . Quorum sensing adalah mekanisme komunikasi antarsel dalam populasi yang dilakukan oleh bakteri nonpatogenik maupun bakteri patogenik. Mekanisme komunikasi tersebut berperan penting pada pengaturan ekspresi gen dalam proses proteksi maupun infeksi pada tanaman inang (Hadiwiyono 2009). Ekspresi gen akan terfasilitasi  oleh  sistem  QS  hanya  ketika populasi bakteri telah mencapai suatu jumlah kerapatan sel yang cukup dan bergantung pada sintesis  otopengimbas  ( autoinducer ) yang dibebaskan oleh sel-sel bakteri sebagai sinyal komunikasi  bakteri  (Nasser  dan  Reverchon 2007; Williams et al . 2007). Salah satu
jenis otopengimbas ialah acyl-homoserine lactone (AHL).  Pada  kondisi  normal  AHL terbentuk pada kerapatan populasi yang cukup  tinggi  yang  selanjutnya  mengimbas ekspresi  gen  pembentuk  anticendawan seperti fenazina yang berperan sebagai agens pengendali  hayati  (Fray et al. 1999). Sistem QS menunjukkan bahwa kemampuan bakteri endofit  mengekspresikan  gen  protektif bergantung pada kerapatan sel bakteri tersebut. Pada uji pengaruh perlakuan bakteri endofit  pada  benih  padi,  metode  yang digunakan termasuk ke dalam jenis biological seed treatment. Menurut Rocha et al. (2019), pelapisan benih dengan agens biokontrol ialah metode  aplikasi  yang  efektif  dan  ekonomis dalam mengintroduksikan agens biokontrol. Meskipun biological seed treatment seringkali memiliki spektrum pengendalian yang terbatas dibandingkan dengan perlakuan bahan kimia sintetis, namun kemampuan agens biokontrol untuk mengolonisasi rizosfer tanaman dapat menghasilkan manfaat lebih pada fase perkecambahan (Callan et al . 1997).  Penggunaan  mikroorganisme  (bakteri atau  cendawan)  yang  bersifat  antagonis terhadap patogen sering dilakukan dengan mengombinasikan dengan perlakuan benih seperti seed coating, seed pelleting, dan seed priming (Silva et al. 2004). Pengnoo et al. (2006)  melaporkan  bahwa  formulasi  bakteri Bacillus firmus dapat menekan infeksi R. solani penyebab penyakit hawar daun kacang tanah melalui metode perlakuan benih . Kombinasi formulasi yang tepat, pelapisan benih dengan agens pengendali hayati dapat menjadi senjata andalan untuk mengendalikan berbagai jenis patogen dan penyakit (Rocha et al . 2019). Dari hasil penelitian ini diperoleh bakteri  endofit  Os7  sebagai  kandidat  yang mempunyai potensi dikembangkan sebagai agens pengendali hayati. Bakteri ini memiliki aktivitas penghambatan pertumbuhan dan penghambatan  infeksi R. solani yang baik. Oleh karena itu diperlukan penelitian lebih lanjut  mengenai  formulasi  bakteri  endofit Os7 untuk diaplikasikan pada tanaman padi sehingga dapat memberikan perlindungan yang baik terhadap infeksi patogen.
Jurnal Fitopatologi Indonesia
Widiantini et al.

## DAFTAR PUSTAKA
Afzal I, Shinwari ZK, Sikandar S, Shahzad S. 2019. Plant beneficial endophytic bacteria: mechanisms,  diversity,  host  range  and genetic  determinants.  Microbiological Research.  221:36–49.  DOI:  https://doi. org/10.1016/j.micres.2019.02.001. Ali M, Ali Q, Sohail MA, Ashraf MF, Saleem MH, Hussain S, Zhou L. 2021. Diversity and  taxonomy  distribution  of  endophytic bacteria  community  in  the  rice  plant  and its  prospective.  International  Journal  of Molecular  Sciences.  22:10165.  DOI: https://doi.org/10.3390/ijms221810165.
Asmoro  PP,  Munif A.  2019.  Bakteri  endofit dari tumbuhan paku-pakuan sebagai agens hayati Rhizoctonia solani dan pemacu  pertumbuhan  tanaman  padi. Jurnal Fitopatologi Indonesia. 15(6):239– 247. DOI: https://doi.org/10.14692/ jfi.15.6.239-247.
Balouiri M, Sadiki M, Ibnsouda SK. 2016.  Methods  for  in  vitro  evaluating antimicrobial  activity:  a  review.  Journal of  Pharmaceutical  Analysis.  6(2):71– 79. DOI: https://doi.org/10.1016/j. jpha.2015.11.005.
Callan NW, Mathre DE, Mathre XJB, Vavrina CS.  1997.  Biological  seed  treatments: factors involved in efficacy. HortScience. 32(2):179–183.  DOI:    https://doi. org/10.21273/HORTSCI.32.2.179 . Compant S, Reiter B, Sessitsch A, Nowak J, Cl ément C, Barka EA, 2005. Endophytic colonization  of Vitis vinifera L.  by  plant rowth-promoting  bacterium Burkholderia sp. strain PsJN. Applied and Environmental Microbiology. 71(16):85–93. DOI: https:// doi.org/10.1128/AEM.71.4.1685- 1693.2005.
Conn VM, Walker AR, Franco CMM. 2008. Endophytic actinobacteria induce defense pathways  in Arabidopsis thaliana . Molecular  Plant-Microbe  Interactions. 21(2):208–218.  DOI: https://doi. org/10.1094/MPMI-21-2-0208.
De Oliveira MF, Da Silva MG, Van Der Sand
ST. 2010. Anti-phytopathogen potential of endophytic  actinobacteria  isolated  from
tomato plants ( Lycopersicum esculentum ) in  southern  Brazil,  and  characterization of  Streptomyces  sp.  R18  (6),  a  potential biocontrol agent. Research in Microbiology. 161(7):565–572.  DOI :  https://doi. org/10.1016/j.resmic.2010.05.008 .
Fray  RG, Throup  JP,  Daykin  M, Wallace A, Williams  P,  Stewart  GSAB,  Grierson D.  1999.  Plants  genetically  modified to  produce N- acylhomoserine  lactones communicate  with  bacteria.  Nature biotechnology.  17:1017–1020.  DOI: https://doi.org/10.1038/13717. Hadiwiyono.  2009. Quorum sensing : Suatu sistem  komunikasi  bakteri  fitopatogen, peranannya  pada  proses  infeksi,  dan peluangnya sebagai basis pengembangan strategi baru dalam pengendalian penyakit tumbuhan. Jurnal Perlindungan Tanaman Indonesia. 15(2):45–54.
Henson JM, Butler MJ, Day AW. 1999. The dark  side  of  the  mycelium  melanins  of phytopathogenic  fungi.  Annual  Review Phytopathology. 37:447–471. DOI: https:// doi.org/10.1146/annurev.phyto.37.1.447.
Huang C, Wang T, Chung S, Chen C. 2005. Identification  of  an  antifungal  chitinase from a potential biocontrol agent, Bacillus cereus 28–9.  Journal  of  Biochemistry and  Molecular  Biology.  38(1):82– 88. DOI: https://doi.org/10.5483/ BMBRep.2005.38.1.082.
Inayati A, Sulistyowati L, Aini LQ, Yusnawan E.  2020.  Mycoparasitic  activity  of indigenous Trichoderma virens against mungbean soil borne pathogen Rhizoctonia solani :  hyperparasite  and  hydrolytic enzyme  production. Agrivita.  42(2):229– 242. DOI: https://doi.org/10.17503/ agrivita.v0i0.2514.
Long  HH,  Schmidt  DD,  Baldwin  IT.  2008. Native  bacterial  endophytes  promotes host growth in a species-specific manner; phytohormone manipulations do not result in  common  growth  responses.  Plos  One: e2702. DOI: https://doi.org/10.1371/ journal.pone.0002702.
Nasser W, Reverchon S. 2007. New insights into  the  regulatory  mechanisms  of the  LuxR  family  of  quorum  sensing
regulators.  Analytical  and  Bioanalytical Chemistry. 387:381–390. DOI: https://doi. org/10.1007/s00216-006-0702-0.
Nawangsih  AA.  2007.  Pemanfaatan  bakteri endofit pada pisang untuk mengendalikan penyakit darah: isolasi, uji penghambatan in vitro dan in planta. Jurnal Ilmu Pertanian Indonesia. 12(1):43–49.
Nosanchuk  JD,  Casadevall  A.  2006.  Impact of  melanin  on  microbial  virulence  and clinical  resistance  to  antimicrobial compounds  antimicrobial  agents  and chemotherapy.  Antimicrobial  Agents  and Chemotheraphy. 50(11):1723–1727. DOI: https://doi.org/10.1128/AAC.00545-06 . Novina  D,  Suryanto  D,  Elimasni.  2013. Uji potensi bakteri kitinolitik dalam menghambat pertumbuhan Rhizoctonia solani penyebab  rebah  kecambah  pada kentang varietas granola. Saintia Biologi. 1(1):26–32.
Pengnoo A, Wiwattanapattapee R, Chumthong A, Kanjanamaneesathian M. 2006. Bacterial antagonist  as  seed  treatment  to  control leaf  blight  disease  of  bambara  groundnut ( Vigna subterranea ).  World  Journal  of Microbiology and Biotechnology. 22:9–14. DOI:  https://doi.org/10.1007/s11274-005- 2820-9.
Raaijmakers  JM,  Vlami  M,  De  Souza JT.  2002.  Antibiotic  production  by bacterial  biocontrol  agents.  Antonie  van leeuwenhoek. 81(1):537–547. DOI: https:// doi.org/10.1023/A:1020501420831.
Rocha  I,  Ma  Y,  Souza-Alonso  P,  Vosatka M, Freitas H, Oliveira RS. 2019. Seed coating:  a  tool  for  delivereing  beneficial microbes to agricultural crops. Frontiers in Plant  Science.  10:1357.  DOI:  https://doi. org/10.3389/fpls.2019.01357.
Silva  HSA,  Romeiro  RDA,  Macagnan  D, Vieira  BDAH,  Pereira  MCB,  Mounteer A.  2004.  Rhizobacterial  induction  of systemic resistance in tomato plants: Non- specific protection and increase in enzyme activities.  Biological  Control.  29(2):288– 295. DOI: https://doi.org/10.1016/S1049- 9644(03)00163-4 .
Slaton NA, Cartwright RD, Meng J, Gbur JEE,
Norman RJ. 2003. Sheath blight severity
and  rice  yield  as  affected  by  nitrogen fertilizer  rate,  application  method,  and fungicide. Agronomy Journal. 95(6):1489– 1496. DOI: https://doi.org/10.2134/ agronj2003.1489.
Valois T, Fayad K, Barasubiye T, Garon M, Dery C, Brzezinski R, Beaulieu C. 1996. Glucanolytic actinomycetes antagonistic to Phytophtora fragariae var. rubi, the causal agent  of  raspberry  root  rot. Applied  and Environmental Microbiology. 62(5):1630– 1635. DOI: https://doi.org/10.1128/ aem.62.5.1630-1635.1996.
Widiantini  F,  Hartati  F,  Qadriyani  MR, Yulia  E.  2019.  Antifungal  potency  of secondary  metabolites  produced  by endophytic  bacteria  against  pathogenic fungi Pyricularia oryzae Cav.  Jurnal Perlindungan Tanaman Indonesia. 23(2):185–189.
DOI: https://doi. org/10.22146/jpti.48392.
Widiantini F, Herdiansyah A, Yulia E. 2017. Biocontrol potential of endophytic bacteria isolated  from  healthy  rice  plant  against rice  blast  disease  ( Pyricularia oryzae Cav.). 2nd International Conference on Sustainable Agriculture and Food Security: A Comprehensive Approach . 287–295. DOI: https://doi.org/10.18502/ kls.v2i6.1051.
Williams P, Winzer K, Chan WC, Camara M. 2007. Look who’s talking: communication and quorum sensing in the bacterial world. Journal of Biological Sciences. 362:1119– 1134. DOI: https://doi.org/10.1098/ rstb.2007.2039.
Wu W, Chen W, Liu S, Wu J, Zhu Y, Qin, L, Zhu B. 2021. Beneficial relationships between endophytic bacteria and medicinal plants. Frontiers in Plant Science. 12:646146. DOI: https://doi.org/10.3389/fpls.2021.646146 . Yellareddygari  SKR,  Reddy  MS,  Kloepper JW,  Lawrence  KS,  Fadamiro  H.  2014. Rice  sheath  blight:  A  review  of  disease and  pathogen  management  approaches. Journal  of  Plant  Pathology  and Microbiology.  5(4):1–4.  DOI:  https://doi. org/10.4172/2157-7471.1000241.