## Efektivitas Variasi Konsentrasi Ekstrak Etanol Daun Ketepeng Cina terhadap Pertumbuhan Shigella dysentriae
ABSTRAK

## ABSTRACT

## BIOMEDIKA
ISSN : 1979 - 035X (printed edition) ISSN : 2302 - 1306 (electronic/Portal e-Journal)
Variation Effectivity of Concentration Ketepeng Cina Ethanol Leaf Extract Growth Against Shigella dysentriae

## Yusianti Silviani* dan Leonardo Bagus Utomo
Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Nasional
yusianti.silviani@gmail.com
*Corresponding author:
Volume 10, No. 1, Maret 2017
Disentri basiler merupakan infeksi yang ditemukan di Indonesia dengan prevalensi tinggi. Salah satu bakteri penye- bab  disentri  basiler  adalah  Shigella  dysentriae. Alternatif  pengobatan  menggunakan  bahan  alami,yakni  ekstrak  kete- peng cina. Tujuan penelitian mengetahui efektivitas ekstrak etanol daun ketepeng cina terhadap pertumbuhan Shigella dysentriae.
Basiler dysentriae is an infection that most find in Indonesia. It has prevalention higher relative. One of bacterial that cause basiler dysentriae is Shigella dysentriae. Alternative option can be done is nature, Ketepeng Cina leaf extract. The purpose of this research is to know inhibitory effect of  Ketepeng Cina etanol leaf exctract to the growth of Shigella dysentriae.
Jenis penelitian analitik eksperimental dengan pendekatan post test with control  dan teknik sampling non random quota sampling. Daun ketepeng cina diperoleh di Desa Karangsari,Tawangmangu dengan teknik quota sampling. Daun ketepeng cina diekstrak secara maserasi dan dibuat berbagai konsentrasi menggunakan aquadest steril.
Konsentrasi yang digunakan pada penelitian adalah 12,5%, 25%, 50%, 100%, dan menggunakan antibiotik cipro- floksasin 5 µg sebagai kontrol positif. Adanya efek ekstrak Daun Ketepeng Cina terhadap pertumbuhan Shigella dysen- triae ditunjukkan ada zona hambat pada media NA. Uji Kruskal-wallis didapatkan p 0.000 yaitu lebih kecil dari α (0,05), konsentrasi optimum penelitian adalah 100%.
Variasi konsentrasi ekstrak ketepeng cina efektif mennghambat pertumbuhan Shigella dysentriae dengan metode difusi cakram.
Kata kunci: efektivitas, ekstrak daun ketepeng cina, Shigella dysentriae
The concentrations that using in this research are 12,5%, 25%, 50%, 100% and using ciprofloxasin antibiotic 5µg as positive control. The effect of Ketepeng Cina Extract (Cassia alata Linn ) to the Shigella dysentriae growth showed by inhibitory zone in NA media. On Kruskalwallis test showed the p (value) was 0,000 smaller than α (0,005), optimum concentration of this research is 100%.V arious concentrations of Ketepeng Cina extract is effective to inhibit the growth of Shigella dysentriae in well-diffusion method.
This research is using experimental analitic research, post test with control design by non random quota sampling technique.Ketepeng Cina leaf that can be found at Desa Karangsari, Tawangmangu. Ketepeng Cina leaf is extracted maserately and it is made by many kind of concentration aquadest.
Keywords: efectivity, ketepeng cina leaf exctract, Shigella dysentriae
Shigella  merupakan  penyebab  disentri  basiler, Angka  kejadian  tinggi  ditemukan  pada  anak  de- ngan tingkat kematian sebesar 40%. (WHO, 2009). Cakupan  penemuan  dan  penanganan  diare  di  Ja- wa  Tengah  pada  Tahun  2008  –  2009  mengalami peningkatan,  bahkan  Tahun  2012  masih  42,66%
tingkat kabupaten/kota (Abdullah, 2012).
Shigella dysentriae merupakan bakteri patho- gen  usus,  bersifat  gram  negatif,  batang  pendek, tidak berspora, tidak berflagel, dan memiliki kap- sul. Bakteri ini memiliki 2 jenis toksin yakni en- dotoksin dan eksotoksin (Radji, 2011).
Penggunaan antibiotika tidak rasional di ma-
syarakat membuat angka resistensi terhadap mi- kroba  tinggi  sehingga  terjadi  kegagalan  pengo- batan. Hal tersebut mendorong masyarakat men- cari alternative pengobatan berupa tanaman her- bal (Adila, 2013).
Salah  satu  tanaman  yang  dimanfaatkan  seba- gai obat yakni ketepeng cina. Masyarakat meman- faatkan  ketepeng  cina  sebagai  obat  panu,  kudis, dan kurap. Sule (2010) menyatakan daun ketepeng cina  mengandung  senyawa  antibakteri  dan  anti- jamur yaitu tannin, saponin, alkaloid, steroid, ter- penoid, flavonoid, dan antrakuinon. Penelitian Ya- kob  dan  Endriyati  (2010)  menyimpulkan  ekstrak etanol  daun  ketepeng  cina  mampu  menghambat pertumbuhan Staphylococcus  aureus .  Senada  de- ngan  penelitian  tersebut  Kurniawan  (2012)  me- nyatakan  ekstrak  alkohol  ketepeng  cina  mampu menghambat  pertumbuhan  mikroba Escherichia coli,  Bacillus  subtilis,  Salmonella  typhi,  Pseudo- monas aeroginosa , dan Staphylococcus aureus . Tujuan penelitian ini adalah untuk mengeta- hui efektifitas ekstrak etanol dan ketepeng China terhadap pertumbuhan Shigella dysentriae.

## METODE PENELITIAN
Desain penelitian yang digunakan adalah ana- litik eksperimental dengan post test with control . Pengambilan sampel di Desa Karangsari Tawang- mangu,  Karanganyar  dengan  teknik quota  sam- pling . Daun yang diambil merupakan daun yang segar,  berwarna  hijau,  utuh  dan  tidak  berlubang (Timothy et al ., 2012). Ekstrak daun ketepeng ci- na merupakan sediaan kental dari proses ekstrak daun  ketepeng  cina  dengan  metode  maserasi menggunakan  pelarut  etanol  80%  pada  konsen- trasi 100%, 50%, 25%, 12,5% (Yacob & Endria- ni, 2010).

## Pembuatan Ekstrak
Pembuatan  ekstrak  dilakukan  dengan  cara mengeringkan 700 gr daun ketepeng cina pada suhu  kamar  selama  3  sampai  4  hari,  kemudian daun  yang  telah  kering  digiling  halus.  Serbuk daun ketepeng cina yang telah kering ditimbang
sebanyak 500 gram. Sebanyak 500 gram dimase- rasi dengan pelarut etanol 80% sebanyak 5 liter selama  5  hari  perendaman  dengan  pengadukan selama 30 menit setiap hari. Etanol dan air dalam maserat  diuapkan  dengan  evaporator  sehingga didapatkan ekstrak kental sebanyak 75 gram. Selanjutnya ekstrak dengan konsentrasi 100% diencerkan dengan aquadest (Yacob & Endriani, 2010).
1)    Konsentrasi 50% : 2,5 ml dari konsentrasi 100% + 2,5 ml aquadest.
2)    Konsentrasi 25% : 2,5 ml dari konsentrasi 50% + 2,5 ml aquadest.
3)    Konsentrasi 12,5%:2,5 ml dari konsentrasi 25% + 2,5 ml aquadest (Permatasari, 2013).

## Pengujian Senyawa Aktif
Tanin diuji dengan cara sejumlah sampel di- tambahkan  5  ml  aquadest  kemudian  dididihkan selama  beberapa  menit.  Kemudin  disaring  dan filtratnya ditambahkan dengan FeCl  1%. Warna 3 biru tua atau hitam kehijauan yang terbentuk me- nandakan adanya tanin (Sari, et al ., 2015). Cara menguji senyawa flavonoid yaitu  sampel ditam- bahkan  serbuk  magnesium  0,1  mg  dan  0,4  ml amil  alkohol  (campuran  asam  klorida  37  %  dan etanol 95 % dengan volume yang sama) dan 4 ml alkohol kemudian campuran dikocok. Reaksi po- sitif ditunjukkan terbentuknya warna merah, ku- ning, atau jingga pada lapisan amil alkohol.
Saponin dideteksi dengan uji busa dalam air panas. Busa yang stabil terus terlihat selama 2 - 4 menit (Chunaifi dan Tukiran, 2014). Untuk men- dapatkan konsentrasi 100%, 10 gr ekstrak ditam- bahkan ke dalam 10 ml aquades.

## Penyiapan Bakteri
Persiapan sampel bakteri dimulai pada Hari I (Penyuburan Shigella dysentriae ): Shigella dysen- triae dari biakan murni diambil menggunakan ose bulat  steril, Shigella  dysentriae dimasukkan  ke dalam media Brain Heart Infusion (BHI), Media Brain  Heart  Infusion (BHI)  yang  berisi Shigella dysentriae diinkubasi  selama  24  jam  pada  suhu
37ºC. Hari II Sampel pada media BHI dilakukan pengecatan  gram  (Rahmithasuci,  2013).  Preparat diamati secara mikroskopis dengan bentuk batang ramping,  cat  Gram  (-),  warna  sel  merah,  back- ground merah muda. Setelah itu sampel dari me- dia BHI diinokulasi ke media Mac Conkey secara aseptis.  Media Mac  Conkey diinkubasi  selama 24 jam pada suhu 37ºC. Hari III Pengamatan pa- da media Mac Conkey diperoleh bentuk ireguler, koloni tidak bewarna, elevasi konveks (cembung), dan tepinya bergerigi (Brooks et al ., 2008). Satu koloni  dari  media  MC  diinokulasi  ke  media  uji biokimia dan diinkubasi selama 24 jam pada su- hu  37  ºC.  Hari  IV  Dilakukan  uji  biokimia  dan diamati hasil nya.

## Pembuatan Suspensi Bakteri
Satu ose Shigella dysentriae dari media Mac Conkey , diinokulasi ke media Nutrient Agar (NA) miring. Inkubasi selama 24 jam pada suhu 37ºC. Suspensi  bakteri  yang  telah  diinkubasi,  diinoku- lasikan dengan ose steril ke dalam tabung reaksi

## Uji Aktivitas Antibakteri
Letakkan cakram yang sebelumnya dicelupkan ke  dalam  masing-masing  larutan  ekstrak  12,5%, 25%, 50%, dan 100% kurang lebih 1 menit. Kon-

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Identifikasi  bakteri Shigella  dysentriae dari kultur murni didapatkan morfologi Shigella dy- sentriae setelah dilakukan pengecatan gram ada- lah bentuk batang, susunan menyebar, warna sel
Tabel 1. Morfologi Shigella dysentriae di MC Keterangan : Hasil Bentuk : Irreguler Warna koloni : Tidak berwarna (pucat) Elevasi : Datar Tepian : Bergerigi Tabel 2 Hasil Uji Biokimia Shigella dysentriae Tabel 3 Hasil Uji Fitokimia Ekstrak Ketepeng Cina Bahan yang diuji Interprestasi Hasil Hasil Flavonoid (+) terbentuk warna kuning atau jingga pada lapisan amil alkohol (-) Tidak terbentuk warna kuning atau jingga pada lapisan amil alkohol Tanin (+) Terbentuk warna biru tua atau hitam kehijauan (+) Terbentuk warna biru tua atau hitam kehijauan Saponin (+) Terbentuk busa stabil dalam 5 menit (+) Terbentuk busa stabil dalam 5 menit trol positif menggunakan Ciprofloxacin 5 µg dan kontrol negatif   menggunakan aquadest steril ke media  NA  plate  yang  sudah  diinokulasi  bakteri. Media diinkubasi pada suhu 37ºC selama 24 jam.
yang berisi NaCl 0,9% sampai kekeruhannya sa- ma dengan standar Mc. Farland nomor 0,5 (Ya- cob  dan  Endriati,  2010).  Inokulasi  bakteri  pada media. Suspensi bakteri pada NaCl 0,9 % diino- kulasikan ke media NA plate menggunakan ka- pas lidi steril secara merata pada semua permu- kaan media, secara aseptis.
Tabel 5.U ji Kruskal-Wallis Aktivitas Antibakteri Metode Difusi Cara Cakram
Chi-Square 36.965 Df 5 Asymp. Sig. .000 Tabel 4.D iameter Zona Radikal Hasil Uji Aktivitas Antibakteri dengan Metode Difusi Cakram Diameter Zona Hambat (mm) Variasi Konsentrasi Bahan Uji Ekstrak daun Ketepeng Cina Kontrol (-) 12,5% 25% 50% 100% Kontrol (+) I 0 0 0 0 8 35 II 0 0 0 0 8 35 III 0 0 0 0 7 35 IV 0 0 0 0 9 36 V 0 0 0 0 8 36 VI 0 0 7 8 10 36 VII 0 7 7 7 8 37 VIII 0 7 7 8 10 36 Rata- rata 0 1,75 2,625 2,875 8,5 35,75
Berdasarkan  hasil  di  atas  (Tabel  5)  p  value < 0.005 sehingga terdapat perbedaan daya hambat variasi  konsentrasi  ekstrak  etanol  daun  ketepeng china terhdap S. dysentriae .
Berdasarkan pengecatan, morfologi koloni dan uji biokimia diketahui bahwa sampel yang diguna- kan adalah benar S. dysentriae (Tabel 2).
Ekstrak etanol daun ketepeng china mengan- dung senyawa antibakteri flavonoid, tannin dan saponin (Tabel 3).
Konsentrasi  rendah  12,5%  ekstrak  etanol daun  ketepeng  cina  sudah  dapat  membentuk  zo- na  radikal  meskipun  rata-  rata  diameter  sangat kecil sebesar 1,75 mm. Seiring peningkatan kon- sentrasi terjadi peningkatan diameter zona radikal, hingga  rata-rata  diameter  zona  radikal  sebesar 8,75  mm  pada  konsentrasi  tertinggi  yaitu  100%. Bila  dibandingkan  kontrol  positif  Ciprofloksasin
merah, sifat G ram (-), background merah muda. Hasil pengamatan morfologi koloni dan uji bio- kimia disajikan pada Tabel 1 dan 2.
Tabel 6.B eda Signifikan Uji Aktivitas Antibakteri Metode Difusi Cakram
Konsentrasi Diameter Zona Radikal (mm) Kontrol negatif (0%) 0 a 12,5% 1,75 a 25% 2,62 a 50% 2,88 a 100% 8,50 b Kontrol positif 35,75 c
Keterangan :Huruf yang berbeda di belakang angka menunjukkan adanya beda signifikan pada uji Mann – Whitney dengan α = 5%.
Hasil  identifikasi  ulang  dari  kultur  murni  bak- teri Shigella dysentriae yang dilakukan pada penge- catan gram diperoleh bakteri gram (-) batang berwar- na merah. Pada media Mac Conkey terbentuk koloni irreguler dengan warna koloni tidak berwarna, mem- bentuk  elevasi  datar  dan  tepian  utuh, Shigella  dy- sentriae tidak mampu memfermentasi laktosa.
5 µg, ekstrak daun ketepeng cina ( Cassia alata Linn ) memiliki zona hambat lebih kecil diban- dingkan  Ciprofloksasin  dengan  diameter  zona radikal sebesar 35,75 mm (Tabel 4).
Bakteri Shigella  dysentriae merupakan  bakteri gram negatif berukuran 0,5-0,7 µg x 2-3 µg. Bentuk-
Beberapa faktor yang menyebabkan ekstrak etanol daun ketepeng cina memiliki aktivitas antibakteri un- tuk menghambat pertumbuhan Shigella dysentriae :
nya batang pendek atau basil tunggal, tidak berspora, tidak berflagel sehingga tidak bergerak, dan memiliki kapsul. Dinding sel bakteri Gram negatif lebih banyak mengandung lemak dibandingkan Gram positif, yaitu 11 – 12% dan sedikit lapisan peptidoglikan. Sehingga struktur dinding sel bakteri merupakan penyebab ter- jadinya reaksi pewarnaan (Rahman, 2010). Teori Sal- ton  menjelaskan  dinding  sel  bakteri  Gram  negatif mengandung kadar lipid tinggi, sekitar 20%. Saat pe- warnaan  Gram,  pencucian  dengan  sediaan  alkohol 96%  untuk melarutkan lipid (Gram C) sehingga pori– pori dinding sel membesar dan zat warna (Gram A) yang sudah diiserap sel akan dilepaskan kembali, aki- batnya bakteri tersebut tidak terwarnai kemudian ke- tika  digenangi  safranin  (Gram  D),  bakteri  akan  me- nyerap cat warna tersebut sehingga bakteri berwarna merah (Radji, 2011).
Bakteri Shigella  dysentriae bersifat  fakultatif anaerob, tetapi tumbuh paling baik secara aerob. Ko- loni berbentuk konveks, bulat, transparan dengan te- pi yang utuh dan mencapai diameter sekitar 2 mm da- lam 24 jam. Shigella dysentriae memfermentasi glu- kosa, membentuk asam dari karbohidrat tetapi jarang menghasilkan gas, dan tidak memfermentasi manitol (Brooks et al., 2008).
Hasil Kruskal  –  Wallis didapatkan  nilai  signifi- kansi (p) = 0.000 (≤ 0.05),  disimpulkan ada penga- ruh variasi konsentrasi ekstrak etanol daun ketepeng cina terhadap pertumbuhan Shigella dysentriae. Hal ini ditunjukkan dengan semakin meningkatnya kon- sentrasi ekstrak etanol daun ketepeng cina maka se- makin besar pula diameter zona radikal. Pada kon- sentrasi  100%  diperoleh  rata-rata  diameter  zona  ra- dikal  yaitu  sebesar  8,5  mm,  sedangkan  konsentrasi 12,5% sebesar 1,75 mm. Hasil penelitian ini kurang baik bila dibandingkan dengan penelitian sebelumnya Yacob dan Endriani (2010), dimana pada konsentrasi 100% rata-rata diameter zona hambat  ekstrak etanol daun ketepeng cina terhadap Escherichia coli sebesar 10 mm.
Saponin merupakan senyawa yang memiliki sifat antibakteri  dan  dapat  menimbulkan  busa  dalam  air jika  dikocok  dengan  kuat.  Saponin  bekerja  dengan mengganggu stabilitas membrane sel bakteri sehingga menyebabkan kematian sel (Zahro dan Agustini, 2013).
Tanin merupakan golongan fenol yang memiliki efek astrigen, antibakteri, dan antioksidan. Secara ki- mia tanin dibagi menjadi dua golongan, yaitu tanin terkondensasi atau tanin katekin dan tanin terhidroli- sis (Malangi, et al ., 2012).
Senyawa  tanin  ini  mampu  menghambat  enzim DNA-topoisomerase  dan  merusak  membran  sel  se- hingga sel bakteri tidak dapat terbentuk (Ngajow, et al ., 2013).
b.    Saponin
Pada pengenceran ekstrak etanol daun ketepeng cina dari konsentrasi 100%, 50%, 25%, 12,5% terja- di pengurangan zat aktif dari ekstrak etanol daun ke- tepeng cina sehingga aktivitas antibakterinya berku- rang membuktikan bahwa pengenceran berefek ter- hadap kandungan senyawa aktif ekstrak etanol daun ketepeng  cina.  Semakin  tinggi  pengenceran,  maka semakin berkurang senyawa aktif dalam ekstrak eta- nol daun ketepeng cina (Gambar 4).
Hasil  uji Post  Hoc  Mann  –  Whitney (Tabel  6) menunjukkan berbeda dengan konsentrasi 50% me- nuju konsentrasi 100% memberikan nilai signifikan (p) = 0.001 (≤ 0.05) berarti ada perbedaan signifikan variasi konsentrasi ekstrak etanol daun ketepeng cina. Aktivitas konsentrasi 100% pada metode difusi cara cakram didapatkan hasil rata – rata diameter se- besar 8,5 mm tidak sebanding pada aktivitas yang di- tunjukkan  oleh  kontrol  positif ciprofloksasin 5  μg dengan besar rata – rata diameter 35,75 mm. Karena zat aktif seperti flavonoid yang terkandung dalam ek- strak etanol daun ketepeng cina akan rusak jika pada awal  melakukan  perlakuan  ekstraksi  tersebut  mele- wati suhu tinggi (Rahayoe et al., 2008).
Konsentrasi  optimum  adalah  konsentrasi terendah  dari  variasi  konsentrasi  ekstrak  etanol daun ketepeng cina yang menunjukkan beda siq- nifikan  dengan  control  (-),  hal  ini  ditunjukkan pada Tabel 6. Zat antimikroba yang menghasilkan aktivitas  penghambatan  bakteri  uji  yang  paling
Gambar 4.Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Metode Difusi Cakram
Variasi konsentrasi ekstrak etanol daun kete- peng cina  ( Cassia alata Linn) efektif mengham- bat pertumbuhan Shigella dysentriae dengan me- tode difusi cara cakram dan konsentrasi optimum adalah 100%.
baik yaitu konsentrasi ekstrak etanol daun kete- peng cina 100% adalah konsentrasi optimum da- lam  penelitian  ini  yang  sesuai  dengan  uji Post Hoc (Mann-Whitney) .
Hasil  penelitian  ini  zona  hambat  yang  ter- bentuk lebih kecil dibandingkan dengan hasil Ya- cob  &  Endriani  (2010),  yaitu  untuk Escherichia coli sebesar 10 mm untuk konsentrasi 12,5%. Se- dangkan  hasil  penelitian  ini  juga  lebih  kecil  di- bandingkan yang dilakukan Ogunjobi dan Abiala (2013), mampu menghambat Escherichia coli se- besar 17,2 mm. Hal ini dapat disebabkan oleh fak- tor biologi dan faktor kimia dari tanaman Cassia alata Linn tersebut.
Bakteri Shigella  dysentriae menggunakan perbandingan dengan Standar Mc Farland yang digunakan adalah nomor 0,5. Menurut Mukhita- sari  (2012)  kepadatan  bakteri  yang  terkandung
8 adalah 1 x 10 CFU/ml, sesuai dengan perkiraan jumlah  bakteri  yang  dapat  menimbulkan  efek patogen bila masuk ke dalam tubuh manusia, se- dangkan  jumlah  organisme  yang  infektif  pada
3 manusia ialah 10 dimungkinkan dari itulah yang menyebabkan  zona  hambat  yang  terbentuk  ku- rang  maksimal  karena  bakteri  yang  digunakan lebih banyak dari organisme infektifnya.
Penelitian  ini  menggunakan  bakteri Shigella dysentriae yang berbeda dengan penelitian sebe- lumnya  menggunakan  bakteri Escherichia  coli dengan zona hambat lebih besar dari pada pene- litian  ini.  Bakteri Escherichia  coli lebih  sensitif terhadap  aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak  kete- peng cina. Sedangkan bakteri Shigella dysentriae mempunyai sensitifitas yang kurang terhadap ak- tivitas antibakteri dari ekstrak ketepeng cina hal ini mungkin disebab bahwa bakteri Shigella dy- sentriae mempunyai  kemampuan  membentuk
proteksi terhadap aktivitas antibakteri ekstrak ke- tepeng cina. Adapun perbedaan kedua bakteri ter- sebut dalam jumlah organisme yang dapat meng- infeksi  manusia, Shigella  dysentriae dapat  me- 3 nimbulkan  infeksi  dengan  dosis  10 sedangkan 6 bakteri Escherichia coli dengan dosis sebesar 10 9 –  10 .  Penelitian  ini  menggunakan Shigella  dy- sentriae yang memiliki dosis infektif pada manu-
3 sia sangat menular yaitu 10  dan bakteri ini me- rupakan  golongan  Shigella  spesies  yang  cende- rung  resisten  terhadap  antibiotik  (Brooks et  al ., 2008).

## KESIMPULAN

## DAFTAR PUSTAKA
Abdullah, A.Z.,A.A.Arsin dan L.Dahlan.2012.Faktor Resiko Dia- re Shigellosis pada Anak Balita. Jurnal Kesehatan Masya- rakat Nasional Vol 7(1) ISSN 1907-7505
Adila, R., Nurmiati, dan Anthoni A.2013. Uji Antimikroba Curcu- ma spp. Terhadap Pertumbuhan Candida albicans, Staphy- lococcus  aureus,  dan  Escherichia  coli . Jurnal  Bioogi  Uni- versitas Andalas vol 2(1) ISSN 2303-2162 Brooks, G. F., Butel dan Morse. 2008. Mikrobiologi Kedokteran Edisi 23. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC.
Chunaifi, M; Tukiran. 2014. Skrining Fitokimia dari Ekstrak Etil Asetat Kulit Batang Tumbuhan Nyiri Batu  ( Xylocarpus mo- luccencis ). UNESA Journal of  Chemistry 3 (3) pp 87 – 92. Kurniawan, D., Wahyuningrum,R., Dhiani,B., 2012. Pengawet Alami Ekstrak Etanol Daun Ketepeng Cina pada Sediaan Sirup Herbal Tomat. Jurnal Vol 1.nomor 1:16-21 Malangngi, L. P; Sangi, M.S; Paedong, J.J.E. 2012. Penentuan Kandungan Tanin dan Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Biji Buah Alpukat ( Persea americana Mill .) Jurnal MIPA UNSRAT 1(1). PP 5-10.
Mukhitasari, D. A., 2012. Uji Aktivitas Antibakteri Perasan Jeruk Nipis  ( Citrus  aurantifolia ,  Swingle)  Terhadap  Pertumbuh- an Shigella dysentriae Secara In Vitro . Skripsi. FK Univer- sitas Jember.
Ngajow, M; Abidjulu, J; Kamu, V.S. 2013. Pengaruh Antibakteri
Ekstrak  Kulit  Batang  Matoa  ( Pometia  pinnata) terhadap Bakteri Staphylococcus aureus secara In vitro. Jurnal MIPA UNSRAT Online 2 (2) 128-132 Ogunjobi,A.A., Abiala,M.A., 2013. Antimicrobial Activity of Senna alata and Phyllanthus amarus, Global Jurnal of Pharmacology. Vol.7, No 2:198-202 Permatasari, G. A. A., I. N. K. Besung, dan H. Mahatmi. 2013. Daya Hambat Perasan Daun Sirsak Terhadap Pertumbuhan Bakteri Escherichia  coli . Jurnal  Indonesia  Medicus  Vete- rinus Vol 2(2): 162-169.
Radji, Maksum. 2011. Buku Ajar Mikrobiologi : Panduan Maha- siswa Farmasi & kedokteran . Jakarta: EGC.
Rahayoe, R., Rahardjo, B., Kusumandari, Rr.S., 2008, Konstanta Laju  Pengeringan  Daun  Sambiloto  Menggunakan  Penge- ring Tekanan Rendah, Yogyakarta. Skripsi. Fakultas Perta- nian Universitas Gajah Mada Yogyakarta. Rahman, F. A. 2010. Pewarnaan Gram . Malang: Universitas Mu- hammadiyah Malang.
Rahmithasuci, I. 2013. Keragaman Bakteri Endofit Pada Kultivar Nanas  ( Annas  comosus (L)  Merr)  Simadu  Dan  Biasa  Di Kabupaten  Subang. Skripsi .  Universitas  Pendidikan  Indo- nesia.
Sari, P P; Rita, W.S; Puspawati, N M. Identifikasi dan Uji Akti- vitas Senyawa Tanin dari Ekstrak Daun Trambesi ( Sama- nea saman (Jacq.) Merr) sebagai Antibakteri Escherichia coli. Jurnal Kimia 9 (1) pp 27 – 34.
Zahro, L; Agustini, R. 2013. Uji Efektivitas Antibakteri Ekstrak Kasar  Saponin  Jamur  Tiram  Putih  ( Pleurotus  ostreatus ) terhadap Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli . UNESA Journal of  Chemistry 2 (3) pp 120-129.
Sule, W.F., Okonko, I.O., Joseph, T.A., Ojezele, M.O., Nwanze, J.C., Alli, J.A., et al., 2010, In-vitro antifungal activity of Senna alata Linn. Crude leaf extract, Pelagia Research Li- brary, 1(2): 14-26.
Timothy,S.Y., Lamu,F.W., Rhoda,A.S., Adiati,R.G., Maspalma, I.D.,  Askira,M.,  2012. Antimicrobial  Activity  of  Senna alata  and  Phyllanthus  amarus.  International  Research Journal of Pharmacy .  ISSN:2252-7168 World Health Organization. 2009. Who fact sheet of diarrheal disease. www.who.int diakses pada 1 September 2016 Yacob, T., Endriani, R., 2010. Daya Antibakteri Ekstrak Etanol Ketepeng  Cina  ( Senna  alata )  terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia  coli secara  In  Vitro. Jurnal  Na- tur Indonesia 13(1):63-66.