online version : https://ojs.unimal.ac.id/index.php/agrium                                   Vol. 21, No 2,
P-ISSN 1829-9288.  E-ISSN 2655-1837
STABILITAS BAKTERI ENDOFIT Pseudomonas aeruginosa 2RWB2 DAN Pseudomonas aeruginosa 5BRB3 DALAM FORMULASI TEPUNG DENGAN

## BERBAGAI BAHAN TAMBAHAN
Stability of Pseudomonas aeruginosa 2RWB2 and Pseudomonas aerugino sa 5BRB3 in Flour Formulation with Various Additives
Novita Pramahsari Putri 1 , Andi Khaeruni 2* , Marnia Ningsi Umar 2 , La Ode Santiaji 2 , Muhammad Taufik 2 , Vit Neru Satrah 2 , Gusti Ayu Kade Sutariati 3 , Teguh Wijayanto 3
1 Program Studi Agroekoteknologi Fakultas Pertanian Universitas Malikussaleh
2 Jurusan Proteksi Tanaman Fakultas Pertanian Universitas Halu Oleo
3 Jurusan Agroteknologi Fakultas Pertanian Universitas Halu Oleo * Corresponding author: andikaeruni.uho@gmail.com

## ABSTRAK
Bakteri  endofit Pseudomonas  aeruginosa 2RWB2  dan P.  aeruginosa 5BRB3  terbukti efektif  mengendalikan Phytophthora  palmivora pada  persemaian.  Agar  aplikasi  agens  hayati dapat  bertahan  lama  diperlukan  suatu  formula  yang  mampu  mempertahankan  viabilitas  dan daya  hambat  serta  kemudahkan  penggunaannya.  Penelitian  bertujuan  untuk  mengetahui  jenis formulasi  tepung  dan  bahan  tambahan  yang  memberikan  pengaruh  terbaik  terhadap  viabilitas dan daya hambat bakteri endofit Pseudomonas aeruginosa 2RWB2 dan P. aeruginosa 5BRB3 terhadap P . palmivora .  Penelitian  dilaksanakan  di  Laboratorium  Proteksi  Tanaman  Unit Fitopatologi,  Fakultas  Pertanian  Universitas  Halu  Oleo  Kendari.  Penelitian  disusun menggunakan  Rancangan  acak  lengkap  dengan  6  perlakuan  formula  tepung  dan  bahan tambahan  yang  berbeda.  Setiap  perlakuan  diulang  sebanyak  3  kali  dan  dilaksanakan  secara paralel  dengan  dua  jenis  bakteri  endofit  yaitu: P.  aeruginosa 2RWB2  dan P.  aeruginosa 5BRB3.  Data  dianalisis  dengan  sidik  ragam  dan  apabila  terdapat  pengaruh  nyata,  maka dilanjutkan  dengan  Uji  Jarak  Berganda  Duncan.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  tepung talk  dan  tepung  tapioka  dapat  berfungsi  sebagai  bahan  dasar  dalam  formulasi  agens  hayati bakteri endofit P. aeruginosa 2RWB2 dan P. aeruginosa 5BRB3. Formulasi tepung tapioka P6 dengan  penambahan  pepton  memiliki  kemampuan  terbaik  dalam  meningkatkan  viabilitas bakteri endofit P. aeruginosa 2RWB2 yaitu sebesar 8,34 x 10 8 CFU/g pada 8 MSI, formulasi P3 memiliki kemampuan daya hambat terbaik yaitu sebesar 87,78% dengan masa simpan formulasi 10  MSI.  Sedangkan  tepung  tapioka  P5  memiliki  kemampuan  terbaik  dalam  meningkatkan viabilitas  bakteri  endofit P.  aeruginosa 5BRB3  yaitu  sebesar  8,14  x  10 8 CFU/g  pada  8  MSI, formulasi  P6  memiliki  kemampuan  daya  hambat  terbaik  yaitu  sebesar  88,89%  dengan  masa simpan formulasi 12 MSI.
Key word: Bakteri endofit, formulasi, Pseudomona aeruginosa , viabilitas

## ABSTRACT
The endophytic bacteria Pseudomonas aeruginosa 2RWB2 and P. aeruginosa 5BRB3 have  proven  effective  in  controlling Phytophthora  palmivora in  nurseries.  So  that  the application of this biological agent can last a long time, a formula is needed that can maintain its viability and inhibitory power and make it easier to use. The research aims to determine the type of  flour  formulation  and  additional  ingredients  that  have  the  best  effect  on  the  viability  and inhibitory  power  of  the  endophytic  bacteria Pseudomonas  aeruginosa 2RWB2  and P. aeruginosa 5BRB3 against Phytophthora palmivora . The research was carried out at the Plant Protection  Laboratory,  Phytopathology  Unit,  Faculty  of  Agriculture,  Halu  Oleo  University,
online version : https://ojs.unimal.ac.id/index.php/agrium                                   Vol. 21, No 2,
P-ISSN 1829-9288.  E-ISSN 2655-1837
Kendari. The research was structured using a Completely Randomized Design (CRD) with six different  treatments  of  flour  formula  and  additional  ingredients.  Each  treatment  was  repeated three times.  This  treatment  was  carried  out  in  parallel  with two types  of  endophytic  bacteria, namely: P.  aeruginosa 2RWB2  and P.  aeruginosa 5BRB3.  The  data  was  analyzed  using variance and if there was a real effect, it was continued with the Duncan Multiple Distance Test (UJBD).  The  results  showed  that  talcum  powder  and  tapioca  flour  can  function  as  basic ingredients  in  the  formulation  of  biological  agents  for  the  endophytic  bacteria P.  aeruginosa 2RWB2  and P.  aeruginosa 5BRB3.  The  P6  tapioca  flour  formulation  with  the  addition  of peptone has the  best  ability  to  increase  the  viability of  the endophytic  bacteria P.  aeruginosa 2RWB2 in the amount of 8.34x108 CFU/g at 8 WAI, the P3 formulation has the best inhibitory ability reach 87.78% with a shelf life of the formulation 10 WAI. Meanwhile, P5 tapioca flour has the best ability to increase the viability of the endophytic bacteria P. aeruginosa 5BRB3, namely 8.14 x 108 CFU/g at 8 WAI, and the P6 formulation has the best inhibitory ability in the amount of 88.89% with a shelf life of 12 WAI.
Keywords: Endophytic bacteria, formulation, viability

## PENDAHULUAN
Phytophthora  palmivora merupakan patogen  penting  pada  tanaman  kakao  yang menginfeksi  akar,  batang,  daun  dan  buah. Infeksi P.  palmivora pada  buah  dapat menyebabkan kehilangan hasil panen hingga mencapai  90%  (Wahdania et  al .,  2017). Secara  umum,  kerugian  akibat  penyakit busuk  buah  pada  pertanaman  kakao  di lapangan  antara  20-30%  pertahun  (Hebbar, 2007).    Penggunaan  pestisida  kimia umumnya  dilakukan  oleh  petani  untuk menekan perkembangan penyakit P. palmivora di  lapangan.  Mengingat  dampak negatif  yang  ditimbulkan  oleh  pestisida kimia,  maka  perlu  ada  upaya  alaternatif untuk  mengurangi  penggunaan  pestisida kimia  tersebut,  diantaranya  menggunakan agens hayati berupa bakteri endofit.
Menurut  Kado  (1992)  bakteri  endofit merupakan  bakteri  yang  hidup  di  dalam jaringan  tanaman  tanpa  merugikan  bahkan memberikan  banyak  manfaat  bagi  tanaman inangnya.  Bakteri  endofit  dapat  melakukan kolonisasi  pada  relung  yang  sama  dengan patogen  tanaman,  sehingga  bakteri  endofit lebih  cocok  sebagai  kandidat  agensia pengendali hayati (Hallmann et al., 1997). Foeh  SC et  al., (2019)  menyatakan bahwa  bakteri  endofit  asal  daun  sehat mampu menghambat P. palmivora secara in vitro  dengan  persentase  daya  hambat tertinggi  sebesar  92,52%.  Hasil  penelitian Arini et  al (2021)  menunjukkan  bahwa bakteri  endofit Pseudomonas  aerugenosa
2RWB2  dan P.  aerugenosa 5BRB3  yang diisolasi  dari  tanaman  kakao  sehat  efektif menekan  penyakit  busuk  buah  kakao masing-masing  sebesar      56,64%  dan 70,08%. Kedua bakteri endofit tersebut juga efektif  menekan  penyakit  busuk  akar  di persemaian  kakao  sebesar  47,87%  untuk P. aerugenosa 2RWB2  dan  76,79%  untuk P. aerugenosa 5BRB3  (Rahmahwati et.  al . 2021).  Bakteri  endofit  yang  berpotensi sebagai  agens  hayati  perlu  dibuat  dalam bentuk  formula  agar  dapat  disebarluaskan kepada pengguna, meningkatkan daya hidup sel  bakteri  selama  penyimpanan,  serta memudahkan aplikasinya.
Derakshan et al . (2008) mengemukakan bahwa  stabilitas  efikasi  formulasi  agens hayati  dapat  dipertahankan  apabila  bahan formula yang digunakan mengandung cukup nutrisi  dan  bahan  pembawa.  Bahan pembawa untuk formula harus mengandung komponen penting yang mendukung viabilitas  dan  pertumbuhan  mikroba  yang ada didalamnya, seperti karbohidrat, protein, air,  asam  amino,  lemak,  dan  garam  mineral (Putri et  al .,  2016).  Vidhyasekaran et  al ., (1997)  melaporkan Pseudomonas  fluoresen yang  diformula  dalam  talk  masih  tetap efektif  sampai  6  bulan  penyimpanan  pada suhu  ruang.  Advinda  (2009)  melaporkan bahwa  tepung  tapioka  merupakan  bahan pembawa terbaik untuk formulasi P.  fluoresen dengan  viabilitas  yang  tinggi, Khaeruni et al . (2022) bahwa tepung tapioka memiliki tingkat kelarutan dan daya endapan yang  lebih  baik  dibandingkan  dengan  talk
online version : https://ojs.unimal.ac.id/index.php/agrium                                   Vol. 21, No 2,
P-ISSN 1829-9288.  E-ISSN 2655-1837
Author(s): Putri N. P., et al
sebagai  bahan  pembawa  formula  bakteri endofit P. fluorescens 4RSI.
Penambahan  nutrisi  dalam  formulasi sangat penting untuk meningkatkan
viabilitas  agens  hayati  dalam  formula (Hanudin et  al .,  2010;  Mugiastuti et  al ., 2010).  Penelitian  telah  dilaksanakan  untuk mengetahui  jenis  formulasi  tepung  dan bahan tambahan yang memberikan pengaruh terbaik  terhadap  viabilitas  dan  daya  hambat bakteri  endofit Pseudomonas  aeruginosa 2RWB2 dan P. aeruginosa 5BRB3 terhadap Phytophthora palmivora.

## METODE PENELITIAN
Waktu dan Tempat Penelitian dilaksanakan di
Laboratorium  Proteksi  Tanaman  Unit Fitopatologi,  Fakultas  Pertanian  Universitas Halu Oleo Kendari.
Metode Penelitian Rancangan  penelitian  yang  digunakan adalah Rancangan Acak Lengkap  dengan 6 perlakuan. Keenam perlakuan yaitu formulasi  media  yang  digunakan  di antaranya: P1: Talk (50 g)+gula aren (1,5 g); P2: Talk (50 g)+gula aren (1,5 g)+pepton (1 g) + CMC (1 g);  P3: Talk (50 g) + gula aren (1,5 g)+urea (0,5 g)+CMC (1 g); P4: Tepung tapioka  (50  g)+gula  aren  (1,5  g);    P5: Tepung  tapioka  (50  g)+gula  aren  (1,5 g)+pepton  (1  g)+CMC  (1  g);  P6:  Tepung tapioka (50 g) + gula aren (1,5 g)+urea (0,5 g)+CMC  (1  g).  Setiap  perlakuan  diulang sebanyak  3  kali  sehingga  terdapat  18  unit percobaan.
Pelaksanaan Penelitian Penyegaran Bakteri Endofit dan
Phtophthora palmivora Masing-masing  isolat P.  aeuroginosa 2RWB2  secara  terpisah  diambil  dari  stok kultur  dengan  menggunakan  jarum  ose untuk  digoreskan  pada  media  TSA  ( Tryptic soy  agar )  lalu  diinkubasi  selama  2x24  jam pada  suhu  ruang.  Koloni  tunggal  yang tumbuh  dan  mencirikan  isolat  tersebut, diperbanyak  pada  media  TSA  untuk pengujian  selanjutnya.  Isolat P.  palmivora PPKT01 disegarkan dengan cara mengambil satu potong kultur menggunakan cork borer diameter  1  cm,  kemudian  diinokulasi  pada
media  V4  lalu  diinkubasi  selama  7x24  jam pada suhu ruang, kultur yang tumbuh tanpa kontaminasi siap digunakan untuk pengujian antagonis dan viabilitas bakteri endofit.
Uji  Antagonis  Bakteri  Endofit  terhadap P.  Palmivora secara In-vitro sebelum Formulasi
Sebelum  bakteri  antagonis  diformulasi ke  dalam  bahan  pembawa,  maka  terlebih dahulu  dilakukan  pengujian  antagonis bakteri  endofit P.  aeruginosa 2RWB2 terhadap P. palmivora menggunakan metode dual  culture. Biakan  murni P.  palmivora diambil  dengan  menggunakan cork  bore r dengan diameter 1 cm untuk diinokulasikan ke dalam cawan petri berdiameter 9 cm yang berisi  media  V4  dengan  jarak  3  cm  dari pinggiran cawan.
Satu  hari  kemudian  pada  cawan  petri yang  sama  digoreskan  secara  melintang bakteri endofit yang diuji dengan jarak 3 cm yang  berlawanan  arah  dengan  cendawan P. palmivora. Cawan diinkubasi di suhu kamar untuk  selanjutnya  diukur  daya  hambatnya pada  umur  6  hari  setelah  inokulasi  bakteri endofit.

## Penyiapan  Media  Pembawa  dalam Formulasi
Penyiapan media dasar dalam formulasi yaitu  tepung  talk  dan  tepung  tapioka masing-masing  sebanyak  150  g  dan  bahan tambahan  lainnya  berupa  gula  aren,  urea, pepton  dan  CMC.  Semua  bahan  formulasi sesuai perlakuan kemudian dicampur secara merata  ke  dalam Beaker  glass .  Bahan formulasi  yang  telah  dicampur  kemudian dimasukkan ke dalam kemasan plastik tahan panas  yang  berukuran  M  kemudian disterilkan ke dalam autoclave selama 2 jam. Setelah  disterilkan,  formulasi  tersebut kemudian  didinginkan  dalam laminar  air flow selama 2x24 jam.

## Penyiapan  dan  Pencampuran  Suspensi Bakteri Endofit dalam Bahan Formulasi
Masing-masing  isolat  bakteri  endofit dibiakkan  pada  media  TSA  secara  terpisah selama  48  jam,  kemudian  disuspensikan  ke dalam  aquades  steril  dengan  tingkat
online version : https://ojs.unimal.ac.id/index.php/agrium                                   Vol. 21, No 2,
P-ISSN 1829-9288.  E-ISSN 2655-1837
Author(s): Putri N. P., et al
kepadatan  10 8 CFU/ml  (Rahmawati,  2021). Inokulasi dilakukan dengan cara mengambil sebanyak  10  ml  suspensi  bakteri  endofit kemudian  dimaksukkan  ke  dalam  kemasan media  pembawa  dan  dicampur  secara merata.  Kemasan  formulasi  yang  telah diinokulasikan  bakteri  endofit  kemudian ditutup  rapat  dan  ditempatkan  pada  suhu ruang.

## Uji Fisik Tampilan Produk Formulasi
Uji fisik tampilan produk merujuk pada Morales et  al .  (1998)  dalam  Suwahyono et al .,  (2008)  yang  dimodifikasi.  Uji  ini meliputi 2 parameter yaitu:
1. Daya Kelarutan Produk dalam Air Pengamatan  daya  kelarutan  produk dalam  air  dilakukan  satu  minggu  setelah penyimpanan  produk.  Sebanyak  1  g  produk formulasi  dimasukkan  ke  dalam Beaker glass yang beisi 200 ml aquades, lalu diputar perlahan/digojok selama 2 menit. Kemudian didiamkan  untuk  diamati  daya  kelarutan produk  dalam  air  dengan  menggunakan  4 kriteria  rujukan  penilaian  (Suwahyono, 2008).
2. Pengendapan Produk Formulasi Pemeriksaan endapan produk formulasi diperiksa  dengan  cara  mengambil  sebanyak 100  ml  akuades  steril  (suhu  30  °C,  pH  7)
dimasukkan  ke  dalam Erlen  meyer 500  ml. Satu  gram  sediaan  produk  dimasukkan  ke dalam akuades steril tersebut, lalu di shaker atau  digoyang  selama  2  menit,  didiamkan hingga  terjadinya  pengendapan,  kemudian menimbang  berat  endapan  yang  terjadi setelah dikeringkan.
Uji  Viabiltitas  Bakteri  Endofit  dalam Formulasi
Uji viabilitas dilakukan untuk
menghitung  pertumbuhan  populasi  bakteri endofit  yang  dilakukan  dengan  cara mengambil 1 g tepung kemudian dimasukkan  kedalam  tabung  reaksi  yang telah  diisi  9  ml  aquades  lalu  memvortex sampai  homogen,  setelah  itu  dibiakkan dengan  teknik  pengenceran  berseri  sampai dengan  pengenceran  10 -5 .  Suspensi  bakteri endofit  hasil  pengenceran  10 -5 diambil sebanyak  100  µl  dibiakkan  pada  medium
TSA dan diinkubasi pada suhu ruang selama 24-48 jam. Jumlah koloni yang tumbuh pada setiap perlakuan dihitung dan dikonversikan ke  dalam  satuan  CFU  g -1 .  Beberapa  koloni yang  tumbuh  sempurna  dan  terpisah  dari koloni  lain  diisolasi  dan  disegarkan  pada media  TSA  untuk  digunakan  pada  uji  daya hambat bakteri antagonis terhadap P. palmivora. Uji viabilitas dilakukan pada masa 2, 4, 6, 8, 10 dan 12 MSI.
Uji  Daya  Hambat  Bakteri  Endofit terhadap P. palmivora Setelah Formulasi
Kultur  bakteri  endofit  yang  diperoleh dari  uji  viabilitas  pada  setiap  perlakukan diuji daya hambatnya terhadap P. palmivora dengan dual  culture .  Uji  daya  hambat bertujuan  untuk  mengetahui  daya  hambat dan mekanisme antagonis yang terjadi pada setiap isolat.  Isolat P.  palmivora yang  telah dimurnikan  diambil  dengan  menggunakan cork  borer ,  selanjutnya  diinokulasikan  di atas  cawan  petri  yang  berisi  medium  V4 dengan  jarak  3  cm  dari  tepi  cawan.  Sehari setelah inokulasi patogen, dilakukan inokulasi bakteri endofit dengan jarak 3 cm dari tepi cawan berlawanan arah. Pengamatan persentase daya hambat bakteri endofit  terhadap P.  palmivora dilakukan pada umur 6 hari setelah pengujian.

## Variabel Penelitian
Variabel  pengamatan  yang  dilakukan adalah sebagai berikut :
(1) Daya  Kelarutan  Produk  Formulasi dalam Air Pengamatan  ini  dilakukan  pada  produk yang  berumur  1  minggu  setelah  formulasi yang dilarutkan dalam air. Pengamatan daya larut produk dalam air menggunakan kriteria daya larut sebagai berikut: 1 = Sediaan larut sempurna setelah 2 menit, 2 = Sediaan larut, setelah digojok 2–3 kali selama 1–2 menit, 3 =  >50%  sebagian  saja  produk  yang  larut setelah  digojok  2  menit,  4  =  hanya  sedikit atau tidak larut sama sekali.
(2) Pengendapan Produk Formulasi (%) Pengamatan  ini  dilakukan  pada  produk yang  berumur  1  minggu  setelah  formulasi yang  dilarutkan  dalam  air.  Pengamatan dilakukan  setelah  produk  digoyang  secara perlahan  dalam  waktu  2  menit.  Lalu
online version : https://ojs.unimal.ac.id/index.php/agrium                                   Vol. 21, No 2,
P-ISSN 1829-9288.  E-ISSN 2655-1837
Author(s): Putri N. P., et al
didiamkan sampai terjadi pengendapan secara  sempurna.  Setelah  itu  endapan  di keringkan  kemudian dilakukan pengukuran berat endapan yang terjadi untuk menentukan  persentase  (%)  endapan  yang terbentuk dengan rumus :
Endapan (%)
= Berat Endapan yang Terbentuk Berat Produk Formula yang Diuji x 100%
(3) Persentase Daya Hambat Sebelum dan Sesudah Formulasi (%) Pengamatan dilakukan dengan
mengukur  panjang  jari-jari  pertumbuhan patogen ke arah tepi petri (R1) dan panjang jari-jari  pertumbuhan  patogen  ke  arah bakteri  endofit  (R2).  Pengamatan  daya hambat dilakukan pada umur 6 hari setelah uji.  Setelah  data  diperoleh,  data  tersebut kemudian  digunakan  untuk  menghitung daya hambat (DH) isolat bakteri endofit P. aeruginosa 2RWB2  terhadap  cendawan P. palmivora yang ditentukan dengan rumus:
𝐷𝐻 = 𝑅1 − 𝑅2 𝑅1 × 100%
Keterangan: DH = Daya Hambat (%); R1    =  Jari-jari  pertumbuhan  patogen ke arah tepi petri (mm); R2 = Jari-jari pertumbuhan  patogen  ke  arah  tepi isolat bakteri  endofit (mm).
(4) Viabilitas bakteri (CFU/g) diamati setiap 2 minggu sekali selama 12 minggu dengan cara menghitung koloni bakteri  yang  tumbuh  dan  diukur  dengan menggunakan  metode plate  count dengan menggunakan  rumus  menurut  sebagai berikut :
CFU/g =
Jumlah Total Koloni Volume yang disebar ke cawan petri  × Faktor pengenceran
Analisis Data Data  yang  diperoleh  dari  hasil pengamatan dianalisis menggunakan ANOVA. Jika hasil ANOVA menunjukkan hasil  berbeda  nyata  maka  dilanjutkan dengan Uji Jarak Berganda Duncan (UJBD) pada  taraf  kepercayaan  95%  untuk melihat
perlakuan  mana  yang  memberikan  efek berbeda.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil uji fisik tingkat kelarutan produk formulasi  Bakteri  endofit P.  aeruginosa 2RWB2  dan P.  aeruginosa 5BRB3 disajikan pada Tabel 1. Tabel  1.  Tingkat  kelarutan  produk formulasi  bakteri  endofit P.  aeruginosa 2RWB2 dan P. aeruginosa 5BRB3
Perlakuan Kategori Daya Larut P. aeruginosa 2RWB2 P. aeruginosa 5BRB3 P1 (Talk+gula aren) 3 3 P2 (Talk +gula aren +pepton + CMC) 3 3 P3 (Talk+gula aren+urea+CMC) 3 3 P4 (Tepung tapioka+gula aren) 2 2 P5 (Tepung tapioca+gula aren + pepton+ CMC) 2 2 P6 (Tepung tapioka+gula aren+ urea+CMC) 2 2 Keterangan: 2= Sediaan larut setelah digocok 2-3 kali selama  1-2  menit,  3=  >50%  sebagian  saja  produk yang larut setelah digocok 2 menit
Hasil tingkat kelarutan produk formulasi  pada  Tabel  1  menunjukkan bahwa  formulasi  bakteri  endofit P. aeruginosa 2RWB2  dan P.  aeruginosa 5BRB3  yang  berbahan  dasar  tepung  talk memiliki tingkat kelarutan kategori  3 yaitu 50%  sebagian  saja  produk  yang  larut setelah  digocok  2  menit.  Sedangkan formulasi  bakteri  endofit P.  aeruginosa 2RWB2  dan P.  aeruginosa 5BRB3  yang berbahan  dasar  tepung  tapioka  memiliki tingkat  kelarutan  kategori  2  yaitu  sediaan larut  setelah  digocok  2-3  kali  selama  1-2 menit.  Hal  ini  memberikan  informasi bahwa  tepung  tapioka  sebagai  bahan  dasar memberikan  respon  yang  terbaik,  dilihat dari tingkat kelarutan.

## Endapan Produk Formulasi
Persentase  endapan  produk  formulasi bakteri P.  aeruginosa 2RWB2  dan P. aeruginosa 5BRB3 dapat dilihat pada Tabel 2.
online version : https://ojs.unimal.ac.id/index.php/agrium                                   Vol. 21, No 2,
P-ISSN 1829-9288.  E-ISSN 2655-1837
Author(s): Putri N. P., et al
Tabel  2.  Persentase  Endapan  Produk
Formulasi  Bakteri P.  aeruginosa 2RWB2 dan P. aeruginosa 5BRB3 Perlakuan Persentase Endapan (%) P. aeruginosa 2RWB2 P. aeruginosa 5BRB3 P1 53,33 56,67 P2 53,33 50,00 P3 56,67 53,33 P4 40,00 43,33 P5 43,33 46,67 P6 46,67 46,67
Keterangan:  P1=  Talk+gula  aren,  P2=  Talk+gula aren+ pepton+CMC, P3= Talk+gula aren+urea+CMC,
P4=  Tepung  tapioka+gula  aren,  P5=  Tepung tapioka+gula aren+pepton+CMC, P6= Tepung tapioka+gula aren+ urea+CMC
Berdasarkan  Tabel  2  memperlihatkan bahwa  rerata  persentase  endapan  terendah pada  formulasi  bakteri P.  aeruginosa 2RWB2 terdapat pada perlakuan P4 dengan
persentase endapan sebesar 40,00%,
sedangkan  persentase  endapan  tertinggi terdapat  pada  perlakuan  P3  yaitu  sebesar 56,67%.  Pada  formulasi  bakteri  endofit P. aeruginosa 5BRB3,  persentase  endapan terendah terdapat pada perlakuan P4 dan P5 yaitu sebesar 43,33%, sedangkan persentase endapan  tertinggi  terdapat  pada  perlakuan P1  yaitu  sebesar  56,67%.  Endapan  yang terbentuk  dari  formulasi  berbahan  dasar tepung  talk  (P1,  P2  dan  P3)  lebih  banyak dibandingkan  endapan  pada  formulasi berbahan  dasar  tepung  tapioka  (P4,  P5  dan P6).

## Viabilitas  Bakteri  Setelah  Penyimpanan Formulasi
Rerata  viabilitas  dan  hasil  Uji  Jarak Berganda Duncan (UJBD 0,05 ) bakteri endofit P.  aeruginosa 2RWB2  dan P.  aeruginosa 5BRB3  setelah  penyimpanan  formulasi disajikan pada Tabel 3 dan 4.
Tabel 3. Rerata Viabilitas Bakteri P. aeruginosa 2RWB2 setelah Penyimpanan Formulasi
Perlakuan
Viabilitas Bakteri Endofit P. aeruginosa 2RWB2 Setelah Penyimpanan Formulasi Minggu Ke- 2 4 6 8 10 12 P1 2,40×10 8 1,07×10 8 1,43×10 8 1,78×10 8 1,47×10 8 0,80×10 8 P2 3,29×10 8 3,18×10 8 4,74×10 8 1,92×10 8 1,54×10 8 0,81×10 8 P3 3,19×10 8 2,54×10 8 3,50×10 8 1,74×10 8 1,19×10 8 0,61×10 8 P4 4,33×10 8 3,90×10 8 4,18×10 8 7,18×10 8 6,73×10 8 4,17×10 8 P5 4,43×10 8 5,49×10 8 8,30×10 8 8,34×10 8 7,68×10 8 5,69×10 8 P6 3,17×10 8 4,15×10 8 7,21×10 8 7,72×10 8 7,05×10 8 3,72×10 8 Log N P1 8,34 b 8,03 d 8,15 b 8,25 b 8,17 b 7,89 c P2 8,52 ab 8,50 c 8,67 b 8,27 b 8,18 b 7,90 c P3 8,50 ab 8,40 e 8,51 c 8,23 b 8,07 b 7,78 c P4 8,64 a 8,59 bc 8,62 b 8,86 a 8,83 a 8,62 ab P5 8,65 a 8,74 a 8,92 a 8,92 a 8,88 a 8,75 a P6 8,49 ab 8,62 b 8,86 a 8,88 a 8,84 a 8,57 b 2=  0,1901      0,0949 0,1742      0,1238      0,0923       0,1120 3=  0,1990      0,0993 0,1823      0,1295      0,0967       0,1173 UJBD 0,05 4= 0,2043      0,1020 0,1873      0,1330      0,0993       0,1204 5=  0,2079      0,1038     0,1905      0,1354     0,1010      0,1225 6=  0,2104  0,1050  0,1928  0,1370  0,1022 0,1240
Keterangan:  Angka-angka  yang  diikuti  oleh  notasi  huruf  yang  sama  pada  kolom  yang  sama  menunjukkan  tidak berbeda nyata yang berdasarkan UJBD 0,05 pada taraf kepercayaan 95%. P1= Talk+gula aren, P2=Talk+gula aren+pepton+CMC, P3= Talk+gula aren+urea+CMC,P4=Tepung tapioka+ gula aren P5= Tepung tapioka+gula aren+pepton+ CMC, P6= Tepung tapioka+gula aren+urea+CMC.
online version : https://ojs.unimal.ac.id/index.php/agrium                                   Vol. 21, No 2,
P-ISSN 1829-9288.  E-ISSN 2655-1837
Author(s): Putri N. P., et al
7,2 7,4 7,6 7,8 8 8,2 8,4 8,6 8,8 9 9,2 2 MSI 4 MSI 6 MSI 8 MSI 10 MSI 12 MSI P op ul as i B ak te ri ( C F U /g )
Lama Penyimpanan
P 1 P
2
Hasil uji lanjut UJBD 0,05 pada Tabel 3 menunjukkan  bahwa  setelah  formulasi disimpan selama 2 MSI populasi bakteri P. aeruginosa 2RWB2 tertinggi yaitu pada P5 sebesar  4,43  ×  10 8 CFU/g  yang  tidak berbeda  nyata  dengan  semua  perlakuan kecuali  P1.  Pengamatan  4  MSI  populasi bakteri  tertinggi  yaitu  pada  perlakuan  P5 sebesar  5,49  ×  10 8 CFU/g  yang  berbeda nyata  dengan  semua  perlakuan  kecuali  P4. Pengamatan  6  MSI  populasi  bakteri tertinggi yaitu P5 sebesar 8,30 × 10 8 CFU/g yang  berbeda  nyata  dengan  P1,  P2,  P3dan P4  kecuali  P6.  Pengamatan  8  dan  10  MSI Populasi  bakteri  tertinggi  yaitu  P5  sebesar 8,34 × 10 8 CFU/g dan   7,68 × 10 8 CFU/g yang  tidak  berbeda  nyata  dengan  P4  dan P6, tetapi berbeda nyata dengan P1, P2 dan P3.  Pengamatan  12  MSI  populasi  bakteri tertinggi yaitu P5 sebesar 5,69 × 10 8 CFU/g yang  berbeda  nyata  dengan  semua perlakuan. Pertumbuhan populasi bakteri P. aeruginosa 2RWB2 disajikan pada Gambar 1.
Gambar 1. Pertumbuhan populasi bakteri P. aeruginosa 2RWB2  dalam  formulasi setelah  penyimpanan  selama  12  MSI (minggu setelah inokulasi)
Gambar  1  menunjukkan  pertumbuhan populasi  bakteri P.  aeruginosa 2RWB2 dalam  formulasi  yang  berbahan  dasar tepung  talk  (P1,  P2  dan  P3)  mengalami penurunan,  populasi  awal  pada  2  MSI sebesar 8 (10 8 CFU/g), setelah penyimpanan  selama  12  MSI  menurun menjadi  7  (10 7 CFU/g).  Pertumbuhan populasi  bakteri  P1  mengalami  penurunan di  4  MSI,  populasi  meningkat  di  6  dan  8
MSI  kemudian  di  minggu  berikutnya populasi  menurun.  Pertumbuhan  populasi bakteri  P2  dan  P3  di  4  MSI  menurun, populasi  bakteri  meningkat  di  6  MSI kemudian  di  minggu  berikutnya  populasi menurun.
Pertumbuhan  populasi  bakteri P. aeruginosa 2RWB2  dalam  formulasi  yang berbahan dasar tepung tapioka (P4, P5 dan P6)  pada  perlakuan  P5  dan  P6  mengalami peningkatan,  populasi  tertinggi  terjadi setelah  8  MSI  kemudian  di  minggu berikutnya  populasi  menurun.  Sedangkan pertumbuhan populasi
bakteri P.
aeruginosa 2RWB2  pada  perlakuan  4 mengalami  penurunan  populasi  di  4  MSI kemudian di minggu berikutnya mengalami peningkatan, populasi tertinggi terjadi pada 8  MSI  yaitu  8,86  (7,18×10 8 ) kemudian  di minggu  berikutnya  populasi  menurun. Pertumbuhan  populasi  bakteri  endofit P. aeruginosa 2RWB2  tertinggi  terjadi  pada perlakuan  P5  setelah  formulasi  disimpan selama 8 MSI yaitu sebesar 8,92 (8,34×10 8 CFU/g). Hasil uji lanjut UJBD 0,05 pada Tabel 4. menunjukkan  bahwa  setelah  formulasi disimpan  selama  2  MSI  populasi  bakteri tertinggi  yaitu  pada  P5  sebesar  4,62×10 8 CFU/g yang tidak berbeda nyata dengan P6 dan P4, tetapi berbeda nyata dengan P1, P2 dan P3. Pengamatan 4 MSI populasi bakteri tertinggi  yaitu  P6  sebesar  3,71×10 8 CFU/g namun  tidak  berbeda  nyata  dengan  P5  dan P2, tetapi berbeda nyata dengan P1, P3 dan P4.  Pengamatan  6  MSI  populasi  bakteri tertinggi  yaitu  P5  sebesar  7,12×10 8 CFU/g yang tidak berbeda nyata dengan P4, tetapi berbeda  nyata  dengan  P1,  P2,  P3  dan  P6. Pengamatan  8  MSI  Populasi  bakteri tertinggi  yaitu  P5  sebesar  8,14×10 8 CFU/g yang tidak berbeda nyata dengan P6, tetapi berbeda  nyata  dengan  P1,  P2,  P3  dan  P4. Pengamatan  10  dan  12  MSI  populasi bakteri  tertinggi  yaitu  P5  sebesar  7,35×10 8 CFU/g dan  5,98×10 8 CFU/g  yang  tidak berbeda  nyata  dengan  P4,  tetapi  berbeda nyata  dengan  P1,  P2,  P3  dan  P6. Pertumbuhan populasi bakteri P.
aeruginosa 5BRB3  disajikan  pada  Gambar
2.
online version : https://ojs.unimal.ac.id/index.php/agrium                                   Vol. 21, No 2,
P-ISSN 1829-9288.  E-ISSN 2655-1837
Author(s): Putri N. P., et al
7,2 7,4 7,6 7,8 8 8,2 8,4 8,6 8,8 9 9,2 2 MSI 4 MSI 6 MSI 8 MSI 10 MSI 12 MSI P op ul as i B ak te ri ( C F U /g ) Lama Penyimpanan (MSI) P1 P2
P3 P4 P5 P6 Tabel 4. Rerata Viabilitas Bakteri P. aeruginosa 5BRB3 setelah Penyimpanan Formulasi
Perlakuan Viabilitas Bakteri Endofit P. aeruginosa 5BRB3 Setelah Penyimpanan Formulasi Minggu Ke- 2 4 6 8 10 12 P1 2,45×10 8 1,45×10 8 2,10×10 8 4,41×10 8 3,51×10 8 3,20×10 8 P2 1,73×10 8 3,36×10 8 2,09×10 8 2,90×10 8 2,14×10 8 1,48×10 8 P3 1,30×10 8 1,81×10 8 1,40×10 8 1,03×10 8 1,19×10 8 0,87×10 8 P4 3,62×10 8 1,92×10 8 5,58×10 8 6,98×10 8 6,60×10 8 5,42×10 8 P5 4,62×10 8 3,28×10 8 7,12×10 8 8,14×10 8 7,35×10 8 5,98×10 8 P6 4,33×10 8 3,71×10 8 4,43×10 8 7,16×10 8 5,58×10 8 3,29×10 8 Log N P1 8,35 bc 8,15 b 8,32 c 8,64 c 8,54 c 8,50 b P2 8,22 cd 8,52 a 8,31 c 8,46 d 8,32 d 8,15 c P3 8,11 d 8,24 b 8,12 d 8,01 e 8,07 e 7,94 d P4 8,55 ab 8,28 b 8,75 ab 8,84 b 8,82 a 8,73 a P5 8,67 a 8,52 a 8,85 a 8,91 a 8,87 a 8,78 a P6 8,63 a 8,57 a 8,64 b 8.85 ab 8,75 b 8,52 b 2= 0,209      0,1507      0,1493 0,05579 0,1104      0,1440 3= 0,2193      0,1578      0,1562 0,05839 0,1155      0,1507 UJBD 0,05 4= 0,2252      0,1620      0,1605 0,05997 0,1187   0,1548 5= 0,2292      0,1648      0,1632 0,06102 0,1207      0,1575
6= 0,2319  0,1668  0,1652 0,06174 0,1222  0,1593
Keterangan:  Angka-angka  yang  diikuti  oleh  notasi  huruf  yang  sama  pada  kolom  yang  sama  menunjukkan  tidak berbeda  nyata  yang  berdasarkan  UJBD 0,05 pada  taraf  kepercayaan  95%.  P1=  Talk+gula  aren,  P2=  Talk+gula aren+pepton+CMC,  P3=  Talk+  gula  aren+urea+CMC,  P4=  Tepung  tapioka+gula  aren,  P5=  Tepung  tapioka+gula aren+pepton+CMC, P6= Tepung tapioka+gula aren+urea+CM.
Gambar 2. Pertumbuhan populasi bakteri P. aeruginosa 5BRB3dalam  formulasi  setelah penyimpanan  selama  12  MSI  (minggu setelah inokulasi).
Gambar 2 menunjukkan bahwa Pertumbuhan populasi bakteri P. aeruginosa
5BRB3  dalam  formulasi  yang  berbahan dasar  tepung  talk  P1  mengalami  penurunan pada 4 MSI kemudian meningkat pada 6 dan 8  MSI,  selanjutnya  mengalami  penurunan populasi  di  10  dan  12  MSI  namun pertumbuhan populasi bakteri lebih besar di bandingkan pada 2, 4 dan 6 MSI. Perlakuan P2  mengalami  peningkatan populasi  bakteri di  4  MSI  sebesar  8,52  (3,36×10 8 CFU/g) kemudian  menurun  di  6  MSI  sebesar  8,31 (2,09×10 8 CFU/g), selanjutnya meningkat di 8  MSI  sebesar  8,46  (2,9×10 8 CFU/g) kemudian  mengalami  penurunan  pada  10 dan 12 MSI.
Perlakuan  P3  mengalami  peningkatan pada 4 MSI sebesar 8,21 kemudian menurun hingga  di  12  MSI.  Pertumbuhan  populasi bakteri P.  aeruginosa 5BRB3  dalam formulasi  yang  berbahan  dasar  tepung tapioka  (P4,  P5  dan  P6)  mengalami penurunan pada 4 MSI, selanjutnya populasi
online version : https://ojs.unimal.ac.id/index.php/agrium                                   Vol. 21, No 2,
P-ISSN 1829-9288.  E-ISSN 2655-1837
Author(s): Putri N. P., et al
meningkat  hingga  8  MSI,  kemudian populasi menurun hingga di 12 MSI.
Pengamatan  populasi  koloni  bakteri P. aeruginosa 2RWB2  dan P.  aeruginosa 5BRB3 pada 12 MSI disajikan pada Gambar 3.
Gambar  3.  Pertumbuhan  populasi  bakteri dalam  formulasi  tepung  setelah  12  MSI.  a) P.  aeruginosa 2RWB2  pada  formulasi tepung  talk,  b) P.  aeruginosa 5BRB3  pada formulasi  tepung  talk,  c) P.  aeruginosa 2RWB2  pada  formulasi  tepung  tapioka,  d) P.  aeruginosa 5BRB3  pada  formulasi tepung tapioka Daya Hambat Bakteri Setelah Penyimpanan Formulasi
Persentase  daya  hambat P.  palmivora oleh bakteri endofit secara in-vitro, dan hasil Uji  Jarak  Berganda  Duncan  (UJBD 0,05 ) bakteri P.  aeruginosa 2RWB2    dan P. aeruginosa 5BRB3  disajikan  pada  tabel  5 dan  6  Pengamatan  miselium P.  palmivora pada cawan petri dan pengamatan menggunakan  mikroskop  untuk  melihat aktivitas  antagonis  bakteri P.  aeruginosa 2RWB2 dan P. aeruginosa 5BRB3 terhadap P. palmivora disajikan pada Gambar 4.
Tabel  5.  Rerata  Persentase  Daya  Hambat Bakteri  Endofit P.  aeruginosa 2RWB2 terhadap Cendawan P. palmivora secara in- vitro  dan  Hasil  Uji  Jarak  Berganda  Duncan (UJBD 0,05 ).
Perlakuan Daya Hambat (%) P. aeruginosa 2RWB2 terhadap P. palmivora Minggu Ke- 2 4 6 8 10 12 P1 58,89 b 54,44 b 55,56 b 73,33 a 77,89 a 82,23 ab P2 67,78 ab 56,67 b 65,56 ab 61,11 bc 68,89 ab 84,47 a P3 68,89 ab 80,00 a 82,20 a 54,43 c 87,78 a 60,73 c P4 85,56 a 77,38 a 84,43 a 68,90 ab 51,11 b 78,88 abc P5 81,11 a 82,22 a 70,00 ab 72,23 a 86,67 a 86,67 a P6 83,33 a 66,67 ab 58,90 b 66,70 ab 78,89 a 63,33 bc 2= 17,57 17,19      19,78      10,07 24,73      18,08 3= 18,39 18,00      20,70      10,54 25,88      18,93 UJBD 0,05 4= 18,89 18,48      21,26      10,83 26,58      19,44 5= 19,22 18,81      21,63      11,01 27,04      19,78 6= 19,44  19,03  21,89  11,15  27,37  20,01
Keterangan:  Angka-angka  yang  diikuti  oleh  notasi huruf yang sama pada kolom yang sama menunjukkan tidak  berbeda  nyata  yang  berdasarkan  UJBD 0,05 pada taraf  kepercayaan  95%.  P1=  Talk  +  gula  aren,  P2= Talk  +  gula  aren  +  pepton  +  CMC, P3=  Talk  +  gula aren + urea + CMC, P4= Tepung tapioka + gula aren, P5=  Tepung  tapioka  +  gula  aren  +  pepton  +  CMC, P6= Tepung tapioka + gula aren + urea + CMC.
Hasil  uji  lanjut  UJBD 0,05 persentase daya hambat bakteri P. aeruginosa 2RWB2 pada  Tabel  5  menunjukkan  bahwa  setelah formulasi  disimpan  selama  2  MSI  daya hambat P.  aeruginosa 2RWB2  yang tertinggi  yaitu  P4  sebesar  85,565%  yang tidak berbeda nyata dengan semua perlakuan kecuali P1. Pengamatan 4 MSI daya hambat tertinggi yaitu P5 sebesar 82,22% yang tidak berbeda nyata pada semua perlakuan kecuali P1 dan P2. Pengamatan 6 MSI daya hambat tertinggi yaitu P4 sebesar 84,43% yang tidak berbeda  nyata  dengan  semua  perlakuan kecuali  P1  dan  P6.  Pengamatan  8  daya hambat  tertinggi  yaitu  P5  sebesar  72,23% yang  tidak  berbeda  nyata  dengan  semua perlakuan kecuali P2 dan P3. Pengamatan 10 MSI daya hambat tertinggi yaitu P5 sebesar 86,67% yang  tidak  berbeda  nyata  dengan semua perlakuan kecuali P4. Pengamatan 12
MSI daya hambat tertinggi yaitu P5 sebesar
A B C D
online version : https://ojs.unimal.ac.id/index.php/agrium                                   Vol. 21, No 2,
P-ISSN 1829-9288.  E-ISSN 2655-1837
Author(s): Putri N. P., et al
86,67%  yang  tidak  berbeda  nyata  dengan semua perlakuan kecuali P3 dan P6.
Tabel  6.  Rerata  Persentase  Daya  Hambat Bakteri  Endofit P.  aeruginosa 5BRB3 terhadap Cendawan P. palmivora secara in- vitro  dan  Hasil  Uji  Jarak  Berganda  Duncan (UJBD 0,05 ).
Perlakua n Daya Hambat (%) P. aeruginosa 5BRB3 terhadap P. palmivora Minggu Ke- 2 4 6 8 10 12 P1 74.44 ab 64,45 ab 55,55 c 57,78 bc 66,67 abc 51,11 b
P2 61.11 bc 67,78 a 65,55 ab 57,78 bc 57,78 c 50,00 b P3 55.56 c 65,57 a 64,44 ab 58,90 abc 72,23 ab 85,56 a
P4 71.11 b 56,67 b 58,89 bc 54,43 c 62,23 c 57,78 b
P5 86.67 a 70,00 a 87,78 a 61,13 ab 75,57 a 60,00 b
P6 66.67 bc 62,23 ab 62,22 abc 64,47 a 71,13 ab 88,89 a
2=  14,39      7,77      7,27      5,94     10,46 9,78 3=  15,06      8,14      7,60      6,22      10,95 10,24 UJBD 0,05 4= 15,47      8,36      7,81      6,39      11,24 10,52 5=  15,74      8,50      7,95      6,49      11,44 10,70 6=  15,93  8,60  8,04 6,58  11,57  10,83
Keterangan:  Angka-angka  yang  diikuti  oleh notasi  huruf  yang  sama  pada  kolom  yang  sama menunjukkan  tidak  berbeda  nyata  yang berdasarkan  UJBD 0,05 pada  taraf  kepercayaan 95%. P1= Talk + gula aren, P2= Talk + gula aren + pepton + CMC, P3= Talk + gula aren + urea + CMC,  P4=  Tepung  tapioka  +  gula  aren,  P5= Tepung  tapioka  +  gula  aren  +  pepton  +  CMC, P6= Tepung tapioka + gula aren + urea + CMC.
Hasil  uji  lanjut  UJBD  persentase  daya hambat bakteri P. aeruginosa 5BRB3 (Tabel 6.)  menunjukkan  bahwa  setelah  formulasi disimpan  selama  2  MSI  daya  hambat tertinggi  yaitu  P5  sebesar  86.67%  yang berbeda  nyata  dengan  semua  perlakuan kecuali P1. Pengamatan 4 MSI daya hambat tertinggi yaitu P5 sebesar 70,00% yang tidak berbeda nyata pada semua perlakuan kecuali P4.  Pengamatan  6  MSI  daya  hambat tertinggi yaitu P5 sebesar 87,78% yang tidak berbeda  nyata  dengan  semua  perlakuan kecuali  P1.  Pengamatan  8  daya  hambat tertinggi yaitu P6 sebesar 64,47% yang tidak berbeda  nyata  dengan  P3  dan  P5,  tetapi berbeda  nyata  dengan  P1,  P2  dan  P4. Pengamatan  10  MSI  daya  hambat  tertinggi yaitu P5 sebesar 75,57% yang tidak berbeda nyata dengan semua perlakuakan kecuali P2
dan  P4.  Pengamatan  12  MSI  daya  hambat tertinggi  yaitu  P6  sebesar  88,89%  yang berbeda  nyata  dengan  semua  perlakuan kecuali P3 dan P6.
Uji  daya  hambat  bakteri  endofit P. aeruginosa 2RWB2  dan P.  aeruginosa 5BRB3  terhadap P.  palmivora secara In- vitro dilakukan  untuk  melihat  aktivitas antagonis  bakteri  endofit P.  aeruginosa 2RWB2 dan P. aeruginosa 5BRB3 terhadap P.  palmivora pada  cawan  petri  dan  dengan menggunakan mikroskop. Aktivitas antagonis  kedua  isolat  bakteri  endofit terhadap P.  palmivora dapat  dilihat  pada Gambar 4.
Gambar  4.  a)  Penghambatan  miselium P.  palmivora oleh  bakteri  endofit P. aeruginosa 2RWB2;  b)  Penghambatan miselium P.  palmivora oleh  bakteri  endofit P.  aeruginosa 5BRB3;  c)  Koloni P. palmivora ;  d)    ketidaknormalan  hifa P. palmivora setelah  uji  daya  hambat (perbesaran  10×100);  e)  Hifa P.  palmivora keadaan normal (perbesaran 10×100).
Gambar  4  menunjukkan  bahwa  terjadi penghambatan miselium P. palmivora akibat adanya  aktivitas  antagonis  dari  bakteri endofit. Hasil  pengamatan  mikroskopis dengan menggunakan mikroskop
(perbesaran  10×100)  menunjukkan  bahwa hifa P.  palmivora pada  kontrol  tumbuh dengan normal, sedangkan perlakuan bakteri endofit,  penampakan  hifa  mengalami ketidaknormalan  morfologi  akibat  adanya aktivitas  antagonis  dari  bakteri  endofit P. aeruginosa 2RWB2  dan P.  aeruginosa 5BRB3.
C D A B E
online version : https://ojs.unimal.ac.id/index.php/agrium                                   Vol. 21, No 2,
P-ISSN 1829-9288.  E-ISSN 2655-1837
Author(s): Putri N. P., et al

## PEMBAHASAN
Formulasi tepung tapioka dengan bahan tambahan berupa pepton memiliki kemampuan  terbaik  dalam  meningkatkan viabilitas  bakteri  endofit P.  aeruginosa 2RWB2  dan P.  aeruginosa 5BRB3  yaitu sebesar  8,34×10 8 CFU/g  dan  8,14×10 8 CFU/g  pada  8  MSI.  Hal  ini  karena  tepung tapioka  terbuat  dari  sari  pati singkong  yang mengandung kalori, karbohidrat, protein dan lemak  yang  merupakan  nutrisi  yang dibutuhkan  bakteri  untuk  pertumbuhan. Tapioka pada dasarnya merupakan pati dari ketela pohon, dengan kandungan karbohidrat (86,9  g),  protein  (0,5  g)  dan  lemak  (0,3  g) (Wahdania et  al., 2017).  Banyaknya kandungan  karbohidrat  pada  tepung  tapioka memungkinkan  untuk  digunakan  sebagai media alternatif untuk pertumbuhan bakteri.
Media yang di gunakan untuk menumbuhkan  bakteri  cukup  memenuhi nutrisi  untuk  menumbuhkan  bakteri  seperti karbon,  nitrogen,  sulfur,  fosfor,  dan  unsur logam  seperti  Ca,  Zn,  Na,  K,  Mn,  Mg,  Fe, dan  lain-lain.  Nutrisi  media  yang  paling  di butuhkan  yaitu  karbohidrat  dan  protein (Juariah dan Sari, 2018).
Menurut  Radji  (2011)  karbohidrat sangat  dibutuhkan  oleh  bakteri  karena karbohidrat merupakan substrat utama untuk metabolisme bakteri. Hampir setengah berat kering  suatu  bakteri  adalah  unsur  karbon. Karbon  dapat  ditemukan  dalam  senyawa karbohidrat  sehingga  karbohidrat  sangat berperan  penting  untuk  pertumbuhan bakteri. Selain dipengaruhi oleh bahan dasar, pertumbuhan  bakteri  juga  dipengaruhi  oleh bahan  pengisi  yang  menyediakan  nutrisi tambahan  pada  formulasi  tersebut.  Bakteri P.  aeruginosa 2RWB2  dan P.  aeruginosa 5BRB3  memiliki  pertumbuhan  yang  cukup baik  pada  formulasi  yang  mengandung pepton. Pepton merupakan derivate sekunder dari  protein  yang  berfungsi  sebagai  sumber nitrogen  pada  media  pertumbuhan  bakteri. Pepton  digunakan  sebagai  sumber  nutrien media  untuk  mikroorganisme  (Vasquez et al .,  2004).  Pepton  merupakan  produk  dari hidrolisat  protein  yang  larut  air  dan  tidak mengalami  koagulasi  jika  dipanaskan (Saputra  dan  Nurhayati,  2013).  Selain  itu,
pepton  mengandung  nitrogen  dan  protein yang  baik  untuk  pertumbuhan  bakteri. Bakteri yang digunakan dalam penelitian ini mampu  mengasilkan  enzim  protease  yang dapat  mengubah  serta  memecah  protein menjadi asam amino untuk dapat digunakan sebagai sumber energi bagi bakteri.
Daya  hambat  bakteri P.  aeruginosa 2RWB2  sebelum  formulasi  sebesar  85,6% sedangkan  daya  hambat  tertinggi  setelah formulasi  sebesar  87,78%.  Daya  hambat bakteri P.  aeruginosa 5BRB3  sebelum formulasi  sebesar  77,8%,  sedangkan  daya hambat  tertinggi  setelah  formulasi  sebesar 88,89%. Perbedaan kemampuan penghambatan sebelum dan sesudah formulasi  diduga  karena  bakteri  endofit mampu  memanfaatkan  suatu  nutrisi  yang terkandung  dalam  formulasi  sehinga  dapat mengaktifkan  suatu  senyawa  support (senyawa antimikroba) yang dapat digunakan  untuk  meghambat  patogen P. palmivora. Mekanisme pengendalian hayati menurut Lo (1998) dan Junaid et al ., (2013) dapat berupa antibiosis, kompetisi,
mikoparasitisme, enzim pendegradasi dinding  sel,  penginduksi  ketahanan  dan pemacu  pertumbuhan.  Hasil  penelitian sebelumnya  menunjukkan  bahwa  isolat bakteri  endofit  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  mampu  menghasilkan  enzim litik berupa selulase dan protease ( Khaeruni et al., 2019).
Gambar 4  menunjukkan bahwa miselium P. palmivora mengalami lisis yang ditandai dengan terjadinya perubahan warna miselium P.  palmivora. Hal  ini  karena bakteri  endofit  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  memiliki  kemampuan  untuk menghasilkan  enzim  selulase  yang  dapat mendegradasi  dinding  sel P.  palmivora karena  dinding  sel P.  palmivora yang merupakan  kelas  Oomycetes  terdiri  dari β- glukan dan selulosa.
Selain itu, kemungkinan penghambatan P.  palmivora karena  kedua  isolat  tersebut berpotensi  menghasilkan  tiga  senyawa antibiotik yaitu phenazine-1-carboxylic acid , pyrrolnitrin dan 2,4-diacetylphloroglucinol (Arini et  al., 2021).  Hal  ini  sesuai  dengan penelitian Hasanuddin (2011) yang
online version : https://ojs.unimal.ac.id/index.php/agrium                                   Vol. 21, No 2,
P-ISSN 1829-9288.  E-ISSN 2655-1837
Author(s): Putri N. P., et al
mengatakan  bahwa Pseudomonas spp. mengeluarkan antibiotik 2,4- diacetylphloroglucinol (DAPG)  yang  dapat menekan  aneka  patogen  terbawa  tanah,  dan dipercayai telah berkontribusi pada beberapa kasus  penyakit  tanaman  yang  gagal berkembang pada jenis tanaman tertentu.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  dan  pembahasan maka dapat disimpulkan sebagai berikut:
1. Tepung  talk  dan  tepung  tapioka  dapat berfungsi  sebagai  bahan  dasar  dalam formulasi agens hayati bakteri endofit P. aeruginosa 2RWB2  dan P.  aeruginosa 5BRB3.
2. Penambahan  nutrisi  yaitu  pepton,  urea dan  gula  aren  dalam  bahan  formulasi berbahan  dasar  tepung  talk  dan  tepung tapioka  berpengaruh  nyata  dalam meningkatkan  viabilitas  dan  daya hambat  bakteri  endofit P.  aeruginosa 2RWB2 dan P. aeruginosa 5BRB3.
3. Perlakuan P5 (tepung tapioka, gula aren, CMC dan pepton) memiliki kemampuan terbaik  dalam  meningkatkan  viabilitas bakteri  endofit P.  aeruginosa 2RWB2
dan P. aeruginosa 5BRB3 yaitu sebesar 8,34 × 10 8 CFU/g 8,14 × 10 8 CFU/g pada
8  MSI,  perlakuan  P3  (tepung  talk,  gula aren,
CMC, pepton) memiliki
kemampuan  daya  hambat  terbaik  yaitu sebesar  87,78%  dengan  masa  simpan formulasi 10 MSI. Perlakuan P6 (tepung talk,  gula  aren,  CMC,  urea)  memiliki kemampuan  daya  hambat  terbaik  yaitu sebesar  88,89%  dengan  masa  simpan formulasi 12 MSI.

## DAFTAR PUSTAKA
Advinda  L.  2009.  Tanggap  Fisiologis Tanaman Pisang yang Diintroduksi dengan Pseudomonas  fluorescens terhadap Blood  Disease  Bacteria
(BDB). Disertasi . Program Pascasarjana Univ. Andalas. Padang Alfiah.  2014.  Efektivitas  formulasi  tepung biofungisida berbahan aktif Trichoderma  harzianum terhadap serangan  patogen  tular  tanah  dan
pengaruhnya terhadap pertumbuhan  tanaman  tembakau. Skirpsi . Fakultas Pertanian. Universitas Jember. Anugrah  DS,  Umrah,  Asrul.  2017.  Metode Inokulasi dan Pengamatan Perkembangan Phutophthora palmivora serta  Gejala  sebagai
Penyebab  Penyakit  Busuk  Buah Kakao  ( Theobroma  cacao L.). Jurnal Biocelebes . 12(2): 42-51.
Arini  R,  Sutariati  GAK,  Khaeruni  A,
Wijayanto  T,  Putri  NP,  Joko  T. 2021. Control Activity and Antibiotic  Gene  Detection  of Endophytic Bacteria in Suppressing  Cocoa  Black  Pod Disease  ( Phytophthora  palmivora Butl.) Indian  Journal  of Agricultural Research . 55(6): 727-
732
Bashan  Y,  de-Bashan  LE,  Prabhu  SR, Hernandez  JP.  2014.  Advances  in plant  growth-promoting  bacterial inoculant technology: formulations and  practical  perspectives  (1998– 2013). Plant Soil. 378(1): 1–33.
Derakshan  A,  Rabindra  RJ,  Ramanujam  B, Rahimi  M.  2008.  Evaluation  of Different  Media  and  Methods  of Cultivation on The Production and Viability  of  Entomopathogenic Fungi Verticillium lecanii (Zimm.) Viegas. Pak. J. of Biol. Sci . 11(11): 1-4.
Djojosumarto  P.  2000.  Teknik  Aplikasi Pestisida  Pertanian.  Yogyakarta (ID). Kanisius. 46 hal.
Foeh  SC,  Temaja  IGRM  dan  Khalimi  K. 2019.  Potensi  Bakteri  Endofit Dalam  Menekan  Pertumbuhan
Phytophthora  palmivora (Butler) Secara in Vitro. Jurnal Agroekoteknologi  Tropika. 8(4):
388-398
Hallmann  J,  Quadt-Hallmann  A,  Mahaffee WF, Kloepper JW. 1997. Bacterial
online version : https://ojs.unimal.ac.id/index.php/agrium                                   Vol. 21, No 2,
P-ISSN 1829-9288.  E-ISSN 2655-1837
Author(s): Putri N. P., et al
endophytes  in  agricultural  crops. Can J Microbiol. 4(3): 895-914.
Hanudin  W,  Nuryani  E,  Silvia  I,  Djatnika dan  Marwoto  B.  2010.  Formulasi Biopestisida berbahan Aktif Bacillus  subtilis , Pseudomonas fluorescens ,  dan Corynebacterium sp. Nonpatogenik untuk Mengendalikan  Penyakit  Karat
Pada  Krisan. J.  Hort. 20(3):  247- 261.
Hasyim  A,  Setiawati  W,  Lukman  L.  2015. Inovasi  Teknologi  Pengendalian
Opt  Ramah  Lingkungan  pada Cabai:  Upaya  Alternatif  Menuju Ekosistem Harmonis. Pengembangan  Inovasi  Pertanian . 8(1): 1-10 Hebbar PK. 2007. Cacao Diseases: a Global Perspective from an Industry Point of View. Phytopathology . 97:1658–1663.
Juariah  S  dan  Sari  WP.  2018.  Pemanfaatan Limbah Cair Industri Tahu Sebagai Media  Alternatif  Pertumbuhan Bacillus sp. Analisis  Kesehatan Sains . 6(1): 24-29.
Junaid JM, Dar NA, Bhat TA, Bhat AH, &
Bhat  MA.  2013.  Commercial biocontrol agents and their mechanism  of  action  in  the management  of  plant  pathogens. Int. J. Modern Plant & Anim. Sci . 1(2): 39-57.
Kado  CI.  1992. Plant  Pathogenic  Bacteria . p. 659– 674. In : Balows A, Truper HG,  Dworkin  M,  Harder  W,
Schleifer KH. (ed.). The prokaryotes ,  vol.  I.  New  York Springer-Verlag.
Khaeruni  A,  Wijayanto  T,  Darmansyah, Arini  R,  Sutariati  GAK.    2019.
Antagonistic activity of indigenous endophytic  bacteria  from  cocoa plants against Phytophthora palmivora  Bult  the  cause  of  black pod  rot  disease  in  cocoa.
Bioscience  Research .  16(1):  272- 280.
Kloepper JW. 1993. Plant growth promoting rhizobacteria  as  biological  control agents.  p.  255-274.  In  F.B. Meeting, Jr. (Ed.). Soil MicrobialEcology,  Applications  in Agricultural  and  Environmental Management .  Inc.  New  York Marcel Dekker
Lo CT. 1998. General mechanisms of action of  microbial  biocontrol  agents. Plant Pathol. Bull . 7: 155– 166.
Marwan H, Sinaga MS, Giyanto, Nawangsih AA.  2011.  Isolasi  dan  Seleksi Bakteri Endofit untuk Pengendalian Penyakit Darah pada Tanaman  Pisang. J.  HPT  Tropika .
11(2): 112–119.
McMahon  P  and  Purwantara  A.  2004. Phytophthora on cocoa.  In Drenth A.  &  D.I.  Guest  (eds.). Diversity and  Management  of  Phytophthora in Southeast Asia . ACIAR Monograph. 114: 104–115. Mugiastuti,  Endangg  L,  Soesanto,  dan Rahayuniati RF. 2010. Pemanfaatan Pseudomonas fluorescens P60  Dalam  Formula Cair Organik Untuk Mengendalikan  Penyakit  Layu Bakteri  pada  Tanmana  Tomat. Seminar  Nasional  Pengelolaan OPT Ramah Lingkungan. Purwokerto.  10-11  November 2010. Munif A, Wiyono S, Suwarno. 2012. Isolasi Bakteri  endofit  asal  tanaman  padi gogo dan potensinya sebagai agens biokontrol dan pemacu pertumbuhan tanaman. J Fitopatol
Indones . 8(3):57-64.
Ploetz RC. 2007. Cacao diseases: Important Threats  to  Chocolate  Production World  Wide. Phythopatology .
97(12): 1634-1639.
online version : https://ojs.unimal.ac.id/index.php/agrium                                   Vol. 21, No 2,
P-ISSN 1829-9288.  E-ISSN 2655-1837
Author(s): Putri N. P., et al
Putri D, Munif A, Mutaqin KM. 2016. Lama Penyimpanan, Karakterisasi Fisiologi,  dan  Viabilitas  Bakteri Endofit Bacillus sp. dalam Formula  Tepung. Jurnal  Fitopatol Indonesia . 12(1): 19–26. Radji  M.  2011.  Buku  Ajar  Mikrobiologi Panduan  Mahaisiwa  Farmasi  dan Kedokteran. Penerbit Buku kedokteran EGC. Jakarta. Rahmawati  R,  Khaeruni  A,  Bande  LOS. 2021. Virulensi Isolat Phytophthora  palmivora dalam Menimbulkan  Penyakit  Busuk
Akar  pada  Pembibitan  Kakao. J. Berkala  Penelitian  Agroonomi. 9(2): 1-7.
Saputra. D dan T. Nurhayati. 2013. Produksi dan  Aplikasi  Pepton  Ikan  Selar Untuk Media Pertumbuhan Bakteri. JPHPI. 16(3).
Suwahyono  U  dan  Wahyudi  P.  2008.
Produksi dan Formulasi
Bioinsektisida  dari  Propagul  Aktif Jamur Beauveria bassiana. J. Tek.
Ling. 9(1): 85-91.
Vasquez  JA,  Gonzalez  MP,  Murado  MA. 2004. A New Marine Medium Use of  Different  Fish  Peptones  and Comparative  Study  of  the  Growth of  Selected  Species  of  Marine Bacteria. Journal  of  Enzyme  and Microbial  Technology. 3(5):  385- 392.
Vidhyasekaran  P,  Sethuraman  K,  Rajappan K,  Vasumathi  K.  1997.  Powder
Formulations  of Pseudomonas fluorescensto Control  Pigeonpea Wilt. J.  Biological  Control . 8(3):166-171.
Wahdania  I,  Asrul,  dan  Rosmini.  2017.  Uji daya  hambat Aspregillus  niger pada  Berbagai  Bahan  Pembawah terhadap Phytophthora  Palmivora Penyebab  Busuk  Buah  Kakao ( Theobroma  cacao L.). e-J.
Agrotekbis. 5  (1):  18  –  26.