ISSN: 2085-3653
http://jurnal.unimed.ac.id/2012/index.php/jpk
Efek Paparan Rhodamin B Terhadap Perubahan Makroskopis Dan Histopatologi Mukosa Kolon Mencit Jantan ( Mus musculus L.)
Novita Aryani 1 *
1 Jurusan Keperawatan, Akademi Kesehatan Pemkab Langkat *Korespondensi: novita_aryani15@yahoo.com
Abstract. Rhodamine B is a synthetic dye that can not be used as food additives and harmful if it enters the body, causing oxidative stress if continued resulting in cell membrane damage and cell death, but until now its use is still found in industrial-scale food production and household . The aim of research to determine  the  effect  of  rhodamine  B  exposure  and  after  cessation  of  exposure  rhodamine  B  (recovery period) to the macroscopic and histopathological changes in the colonic mucosa of mice (Mus musculus L.) males. This study tested an experimental laboratory to design the post-test only control group. The research subject of male mice (Mus musculus L.) strains DD Webster, 6-7 weeks, 25-40 grams, 28 were divided  2  treatment  groups:  (1)  P0  (control)  were  given  distilled  water  0,3ml,  (2)  rhodamine  B  dose 0.2% / day, 0,3ml. Treatment for 21 days, then continued for 7 days without any treatment to see his cell recovery.  The  results  showed  a  significant  increase  (p  <0.5)  macroscopic  colonic  damage  and histopathology colonic mucosa in the treatment group compared with the control group when treated well after treatment is stopped. Expected to society, especially with children under five and school age do not consume snacks bright.
Keywords: rhodamine B, macroscopic, histopathology, colon mucosa

## PENDAHULUAN
Rhodamin B termasuk golongan pewarna xanthene basa,  mengandung  unsur-unsur yang toksik karena memiliki gugus klorin, poli aromatic  hidrokarbon (PAH),  dan  senyawa alkilating,  mengandung  residu  logam  berat serta  terbuat  dari metadietilaminofenol dan ftalik anhidrid merupakan unsur yang bersifat karsinogenik  dan  tidak  boleh  ada  dalam produksi pangan (MSDS, 2009).
Seringkali terjadi penyalahgunaan pemakaian  zat  pewarna  rhodamin  B  untuk sembarang bahan pangan. Timbulnya penyalahgunaan tersebut antara lain disebabkan  oleh  ketidaktahuan  masyarakat mengenai  zat  pewarna  untuk  pangan,  dan disamping  harga  zat  pewarna  untuk  industri jauh lebih murah dibandingkan dengan harga zat pewarna untuk pangan. Hal ini disebabkan bea  masuk  zat  pewarna  untuk  bahan  pangan jauh lebih tinggi dari pada zat pewarna bahan nonpangan. Lagi pula warna dari zat pewarna tekstil  atau  kulit  biasanya  lebih  menarik (Dalimunte, 2010).
Pemerintah  dalam  hal  ini  Departemen Kesehatan  telah  memberikan  informasi tentang  larangan  penggunaan  rhodamin  B sebagai  pewarna  tambahan  makanan  yang tertuang  dalam  Peraturan  Menteri  Kesehatan (Permenkes)  RI  No.239/Menkes/Per/V/85
dan No.1168/Menkes/PER/X/1999 serta dalam  peraturan  Menteri  Perdagangan  RI Nomor 4/M-DAG/PER/2/2006. Tetapi sayangnya  peraturan  ini  belum  terlaksana dengan  baik.  Pada  tahun  2007,  hasil  analisis terhadap  pewarna  yang  dilarang  dalam makanan  menunjukkan  bahwa  dari  2256 sampel  jajanan  anak  sekolah  hampir  di seluruh  ibukota  propinsi  di  Indonesia  terdiri dari  sampel  es  (misalnya  es  mambo,  lolipop, dan  sebagainya),  minuman  berwarna  merah, sirup,  jelly,  agar-agar,  permen,  saos  dan kudapan  (misalnya  gorengan,  kerupuk, keripik,  kue  dan  sebagainya)  menunjukkan bahwa 98 sampel (4%) diantaranya mengandung  rhodamin  B  (Infopom,  2008). Pada jajanan anak SD di Kabupaten Labuhan Batu rhodamin B ditemukan  sebasar 0,59245  g/g  dalam  es  doger,  59,0527  g/g  dalam kerupuk,  dan  50,5181  g/g  dalam  saos (Dalimunte,  2010),  jajanan  anak  SD  di Kecamatan  Margaasih  Kabupaten  Bandung dalam  kadar  yang  cukup  besar  antara  7,841- 3226,55  ppm  (Trestiati,  2003). Food  and Drug  Administration (FDA)  menentukan bahwa kadar rhodamin B yang boleh di makan maksimal sebesar 0,75 mg/hari (IARC, 1978).
Rhodamin  B  yang  bercampur  bersama makanan  memberikan  gejala  mual,  muntah, gangguan  fungsi  dan  iritasi  kolon  yang menyebabkan diare, konstipasi, kolon
cathartic, dan  melalui  pemeriksaan  radiologi dan patologi tampak terjadi penipisan dinding dan  hilangnya  mukosa  normal  saluran  cerna serta  pendarahan  pada  gastrointestinal (MSDS, 2009).
Sel-sel mukosa kolon dalam saluran cerna cenderung lebih mudah mengalami kerusakan akibat  induksi  oklsigen  radikal  (D’Odorico, 2001 ) dan melalui kontak langsung zat toksik (Devroede,  1971).  Juga  menurut  Eaden, et  al. (2002)  menyatakan  antioksidan  endogen  di jaringan  mukosa  kolon  relatif  rendah  dari bagian lain di saluran cerna.
Saat  ini  prevalensi  penyakit  peradangan pada  kolon  dapat  terjadi  pada  semua tingkatan umur karena perubahan pola hidup manusia  dengan  penyebab  pastinya  sampai saat  ini  belum  diketahui  dengan  jelas, dipastikan  terjadi  atas  dasar  kombinasi beberapa  faktor  genetik,  sistem  imun  dan faktor lingkungan (Hendrickson et al., 2004 ). Insiden  penyakit  ini  meningkat  pada  dekade terakhir,  seperti  di  Amerika  Serikat,  Inggris, dan Skandinavia sekitar 4 sampai 12 kasus per 100.000 penduduk, dan diperkirakan prevalensinya  sekitar  70  sampai  150  per 100.000 penduduk. Puncak timbulnya penyakit  ini  terjadi  pada  umur  20  sampai  25 tahun (Cotran et al ., 2007), tetapi insiden juga meningkat  pada  anak-anak  dan  orang  tua (Sawczenko et al ., 2001).
Penderita peradangan  kolon  berisiko  terjadinya  kanker korektal  (Medhi et  al .,  2008).  Berdasarkan latar  belakang  dan  fenomena  tersebut,  maka penulis pun tertarik untuk meneliti mengenai efek  pemaparan  rhodamin  B  terhadap perubahan makroskopis kolon dan histopatologi  epitel  mukosa  kolon  mencit ( Mus musculus L.) jantan.
METODE
Jenis penelitian ini adalah studi eksperimental  laboratorik  dengan  rancangan the  post  test  only  control  group ,  Populasi penelitian  adalah  mencit  jantan  ( Mus musculus L)  strain  DDW  ( Double  Ditsch Webster )  berumur  6-7  minggu  dengan  berat badan  25-40  gram  sebanyak  28  ekor.  Alur penelitian  dalam  penelitian  ini  yaitu  pertama mencit  diadaptasikan  pada  lingkungan  dan pakan  selama  7  hari,  kemudian  dibagi kedalam  2  kelompok  perlakuan:  kelompok kontrol (P0) yang hanya diberi aqudest 0,3ml dan  kelompok  pemberian  rhodamin  B konsentrasi 0,2% sebanyak 0,3ml (P1) selama 21  hari.  Selanjutnya  sampai  hari  ke-28 perlakuan  diberhentikan  untuk  melihat recovery  sel.  Pada  hari  ke-21  dan  ke-28,  tiga jam setelah pemberian pakan sebanyak 5 ekor mencit  dari  masing-masing  kelompok  dipilih secara random kemudian didekapitasi dengan cara dislokasi leher untuk melihat peradangan kolon  secara  makroskopik  yang  dinilai berdasarkan kriteria morfologi dari Wallace et al,  1989,  dan  menilai  histopatologi  epitel mukosa  kolon  mencit  berdasarkan  kriteria Levine et al . (2002). Bahan  jaringan  kolon  yang  diambil setelah  mencit  didekapitasi  adalah  ± sepanjang  10  cm  dari  rectum  kearah  kolon desendens  kemudian  jaringan  adipose  yang melekat  dibuang  dan  dibersihkan  dengan larutan  NaCL  0,9%  .  Lalu  jaringan  dibelah dengan  pisau  dan  difiksasi  untuk  dilihat lapisan  mukosanya  secara  makroskopik. Selanjutnya  jaringan  dimasukkan  dalam larutan  formalin  buffer  10%  pH  7,  kemudian ditanam dalam paraffin blok dan dipotong dua sayatan  serial  setebal  4µm,  lalu  diwarnai dengan  pewarnaan  Haematoxyline  dan kemudian  diamati  dengan  mikroskop  cahaya pembesaran 400 x.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil pengamatan makroskopik mukosa kolon mencit
Tabel 1. Hasil rata rata penilaian makroskopik mukosa kolon
Kelompok Jlh Mencit Rata-rata± SD P0 P1 P0 (R) P1 (R) 5 5 5 5 0.00   ±  0.00 a
2.80   ±  1.10 b 0.00   ±  0.00 a
2.60   ±  0.55 b
(R): Perlakuan dihentikan Huruf yang sama berbeda tidak bermakna, p<0.05
ISSN: 2085-3653
http://jurnal.unimed.ac.id/2012/index.php/jpk
Bedasarkan  Tabel  1,  rata-rata  derajat kerusakan  mukosa  kolon  secara  makroskopik yang  tertinggi  adalah  pada  kelompok perlakuan  pemberian  rhodamin  B  (P1)  yaitu sebesar  2.80  ±  1.10,  secara  statistik
menunjukkan  ada  perbedaan  yang  bermakna (p<0.05)  terhadap  kelompok  P0,  dan  P0(R), namun  tidak  menunjukkan  perbedaan  yang bermakna (p>0.05) terhadap kelompok P1(R).
Kelompok P0          Kelompok P0(R)
Kelompok P1              Kelompok P1(R)
Gambar 1. Makroskopik mukosa kolon
Berdasarkan  Gambar  1.  Pada  kelompok P1  dan  P1(R)  ditemukan  adanya  perdarahan pada permukaan mukosa kolon, pembengkakan kelenjar (nodul) pada beberapa  tempat,  terjadinya  penipisan  kolon sehingga  konsistensi  lembek,  rapuh  dan
mudah  hancur.  Peradangan  pada  mukosa kolon  ini  masih  terbatas  pada  permukaan epitel  mukosa  saja  belum  sampai  kelapisan yang lebih dalam lagi sehingga tidak dijumpai adanya  pelengketan  antara  kolon  dengan jaringan sekitar kolon.

## Hasil pengamatan histopatologi mukosa kolon mencit
Tabel 2. Hasil Rata-rata penilaian histopatologi mukosa kolon
Kelompok Jlh Mencit Rata-rata± SD P0 P1 P0 (R) P1 (R) 5 5 5 5 0.20   ±  0.45 a
3.20   ±  0.84 b
0.40   ±  0.55 a
2.20   ±  0.84 b
(R): Perlakuan dihentikan Huruf yang sama berbeda tidak bermakna, p<0.05
Berdasarkan  Tabel  2  Derajat  kerusakan mukosa  kolon  secara  hispatologi  yang tertinggi  adalah  pada  kelompok  P1  yaitu sebesar  3.20  ±  0.84,  secara  statistik
menunjukkan  ada  perbedaan  yang  bermakna (p<0.05)  terhadap  kelompok  P0  dan  P0(R), namun  tidak  menunjukkan  perbedaan  yang bermakna (p>0.05) terhadap kelompok P1(R).

## Kelompok P0               Kelompok P0 (R)
Kelompok P1                  Kelompok P1 (R)
Gambar 2. Histopatologi sel mukosa kolon
Berdasarkan  Gambar  2  ditemukan  pada kelompok  P1  dan  P1(R)  adanya  sebukan sedang  sel-sel  radang  (jarak  sebaran  sel radang  tersebut  masih  bisa  disisipi  oleh  satu sel  radang)  pada  lapisan  superfisial  yang tersebar  difus  bahkan  ada  yang  sampai kelapisan  muskularis  mukosa,  juga  sebukan sedang sel-sel radang pada daerah kripta atau terjadi abses pada daerah kripta yang tersebar difus. Analisa  data  derajat  kerusakan  mukosa kolon  mencit  secara  makroskopik  dan histopatologi  tidak  perlu  dilakukan  analisis distribusi  dan  hormogenitas  variansi  karena data  berupa  data  ordinal  (derajat).  Data dianalisis langsung dengan uji non parametrik Kruskull-Walls. Hasilnya menunjukkan adanya  perbedaan  yang  bermakna  (p<0.05) untuk menentukan perbedaan masing-masing perlakuan  diuji  lanjut  dengan  uji  Mann- Whitney.
Makroskopik kolon Berdasarkan  hasil  analisis  statistik dengan  Krusskall  Wallis  terdapat  perbedaan yang  bermakna  (p<0.05)  antara  kelompok  P1 dan  P1(R)  dengan  kelompok  P0  dan  P0  (R). Nilai  kerusakan  tertinggi  terdapat  pada kelompok  P1  yaitu  sebesar  2.80  ±  1.10  dan nilai  tersebut  menunjukkan  perbedaan  yang tidak  bermakna  (p>0.05)  dengan  kelompok P1(R).  yang  mempunyai  nilai-nilai  sebesar 2,60±0,55 Pada semua kelmpok ini ditemukan derajat kerusakan dengan rata-rata kriteria 3 (berdasarkan kriteria Wallace et al.,
1989),  yaitu  terjadi  peradangan  pada  satu tempat.
Hal  ini  diduga  karena  rhodamin  B memiliki  gugus  klorin  (C1 - ),  juga  sebagai senyawa  akilaing  (CH3),  dengan  struktur kimia  yang  poli  aromatik  hidrikarbon  (PAH) dimana  bentuk  senyawa  tersebut  bersifat sangat  radikal  ketika  mengalami  aktivasi dengan enzim sitokrom P-50 akan membentuk radikal bebas yang sangat reaktif yang  cenderung  akan  berkaitan  dengan protein,  lemak  dan  DNA(Hansen,  et  al,  1959) juga  kolon  merupakan  tempat  yang  paling lama  terpapar  dengan  zat  toksik  yang  ada pada  feses  di  dalam  saluran  pencernaan (Devroede,  1971),  dan  paling  gampang  rusak akibat  induksi  oksidator  yang  kuat,  bersifat mutagenik, tumorigenik (OSHA, 2006).
Asam  lemak  tidak  jenuh  merupakan komponen  membran  sel  yang  paling  peka terhadap  radikal  bebas  dan  akan  membentuk reaksi  rantai  peroksida  lipid  (Patrick,  2006).. Hilangnya  asam  lemak  tak  jenuh  akan menyebabkan kerusakan struktur sel membran yang akan mempengaruhi permeabilitas dan fungsi membran sel. Reaksi rantai  peroksidasi  lipid  yang  berlangsung terus  akan  menyebabkan  membran  sel kehilangan  integritas  sehingga  akhirnya pecah.  Apabila  kerusakan  terus  berlanjut mengenai  membran  lisosom,  maka  enzim hidrolitik  akan  dilepas  sehingga  merusak organel  lain  dan  memperberat  kerusakan  sel (Kehrer, 2000).

## Histopatologi sel kolon
Dari  hasil  pengamatan  secara  hispatologi ditemukan  adanya  sebukan  sedang  sel-sel radang  (jarak  sebaran  sel  radang  tersebut masih bisa disisipi oleh satu sel radang) pada lapisan superficial yang tersebar difus bahkan ada  yang  sampai  ke  lapisan  muskularis mukosa,  juga  sebukan  sedang  sel-sel  radang pada  daerah  kripta  atau  terjadi  abses  pada daerah kripta yang tersebar difus. Berdasarkan  analisa  statistik  menunjukkan bahwa  pada  kelompok  P1  memberikan  nilai tertinggi  yaitu  sebesar  3.20  ±  0.84  berbeda tidak  bermakna  (p>0.05)  dengan  kelompok P1(R).
Sesuai  dengan  penelitian  Pravda  (2005) yaitu  stressor  oksidan  dari  rhodamin  B berinteraksi  dengan  metabolism  sel  (fase induksi  radikal)  menghasilkan  hydrogen peroksida  (H 2 O 2 )  yang  akan  berdifusi  dari Intraseluler  ke  ekstraseluler  sel  epitel  kolon melalui  membran  sel.  Kemudian  hydrogen peroksida (H 2 O 2 ) ang bebas pada ekstraseluler tersebut  bereaksi  dengan  Superoksida  (O 2 ’) pada  reaksi  katalis  metal  Haber-Weiss berubah  menjadi  radikal  hidroksil  (HO’)  dan gugus  hidroksia  (HO - ).  Radikal  hidroksil mengawali kerusakan  oksidatif pada struktur barier  seperti epithelial  tight  junction , membran barier dan epithelial lipid peroksidase  menimbulkan  aktifitas  system imunitas  yang  cenderung  akan  memperbaiki kerusakan  sel.  Selain  itu  aktifasi  imunitas secara intermitten oleh antigen bacterial kolon juga dapat memicu terbentuknya antibodi dan manifestasi  ekstra  intestinal.  Jika  kerusakan tidak  dapat  segera  diperbaiki  maka  neutrofil akan  menginfiltrasi  ke  dalam  epithelium kolon yang rusak untuk mencegah bakterimia sistemik (Pravda, 2005).
Kerusakan  mikroskopis  juga  diduga karena sel epitel saluran pencernaan termasuk kelompok  sel  yang  labil  artinya  sel-sel jaringan  mempunyai  kemampuan  untuk berpoliferasi sepanjang hidup untuk menggantikan sel-sel
yang terjejas peradangan  dengan  waktu  paruh  yang  relatif singkat  (3-5  hari).  Namun  sel-sel  ini  mudah berisiko  terjadinya  malignansi  oleh  karena tidak  sempat  diperbaiki  dalam  siklus  sel (Medhi et al ., 2008)

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian menunjukan bahwa  pemberian  rhodamin  B  dan  setelah
penghentian  pemberian  rhodamin  B  dapat mempengaruhi  kerusakan  mukosa  kolon mencit  secara  makroskopik  dan  histopatologi secara  bermakna  dibandingkan  dengan kelompok control.

## DAFTAR PUSTAKA
BPOM  RI,  2004.  Food  Watch,  Sistem Keamanan  Pangan  Terpadu,  Bahan Tambahan  Ilegal-Boraks,  Formalin  dan Rhodamin b.
Cotran.  R.  S.,  Rennke,  H.,  and  Kumar,  V. 2007. Kolitis ulseratif. Dalam: Kumar, V.,
Cotran,  R.  S.,  Robbins,  S.L.  (eds).  Buku Ajar  Patologi  Penyakit,  Volume  2.  Edisi VII. Jakarta EGC. 572 :7-594. Dalimunte,  I.  2010.  Penelitian  Analisa Rhodamin  B  Pada  Jajanan  Anak-Anak Sekolah  Dasar  di  Kabupaten  Labuhan Batu Selatan, Universitas Sumatera Utara,
Medan.
Deveroede, G.J., Taylor, W.F., and sauer, W.G. 1971.  Cancer  risk  and  life  expectancy  of children  with  ulcerative  colitis. N  Engl  J Med , 285 :17-21. Category:III. D’odorico    A.,  Bortolan,  S.,  Cardin,  R., Martines,  D.A.,  and  sturniolo,  G.C.  2001. Reduced plasma antioksidant concentrations  and  increased  oxidative DNA  damage  in  inflammatory  bowel desease. Scand J Gastroenterol , 36 :1289. Eaden,  J.A.,  and  Meyberry,  J.F.  2002.
Guidelines  for  screening  and  surveilance of  asymptomatic  colorectal  cancer  in patients with inflammatory bowel disease. Gud , 51:v10-v12 Hansen,W.H.,Fitzhugh,O.G.,Williams,M.W. 1959. Subacute Oral Toxicity of Nine D&C Coal  Tar  Colors,  J  Pharmacol  Exp  Ther,
122:  29A  di  dalam  Kelner,M.J.1985,
Rhodamine  B  Ingestion  as  a  cause  of fluorescent  red  urine. West  J  Med ,
143 :523-524 Hendrickson,B.A.,  Gokhale,R.,  &  Cho,  J.H. 2004. Clinical Aspects and Pathophysiology  of  Inflammatory  Bowel Disease. Clin Microbiol Rev 2002 , 15 :79- 94 IARC. 1978. Monographs on the Evaluation of the  Carcinogenic  Risk  of  Chemical  to Man:  International  Agency  for  Research on Cancer.1 (16)
Kehrer, J.P. 2000. The Haber-Weiss Reaction and  Mechanisms  of  Toxicity. Toxicology , 149 :43-50 Levine,  A.,  Kenet,  G.  Bruck  .,  R.,  Avni,  Y., Avinoach., I., Aceed H., Matas, Z., David, M.,  Yayon,  A.  2002.  Effect  of  heparin  on tissue binding activity of fibroblast growth factor  and  heparin  binding  epidermal growth  factor  in  experimental  colitis  in rats. Pedriatric Res , 51 :635.
Medhi,  B.,  Praskash.,  A.,  Avti,  K.P.,  Saikia, N.U.,  Prandhi,  P.,  and  Khanduja,  L.K.
2008.  Effect  of  Manuka  Honey  and Sulfasalazine  in  Combination  to  Promote Antioxidant Defense System in Experimentally Induced Ulcerative Colitis Model  in  Rats. Indian  Journal  of Experimental Biology , 46 :583-590.
MSDS.  2009.  Rhodamin  B.  Material  Safety Data Sheet. Santa Cruz. Canada.
Patrick,  S.T.  2006.  Free-radical  Mechanisms in Tissue injury. Biochem J , 222:1-15.
Pravda,  J.  2005.  Review  Radical  Induction Theory  of  Ulcerative  Colitis. World  J. Gastroenterol, 11 ( 16 ):2371-2384.
Trestiati, M. 2003. Analisis Rhodamin B pada Makanan dan Minuman Jajanan Anak SD (Studi Kasus: Sekolah Dasar di Kecamatan Margaasih Kabupaten Bandung), ITB Library, Bandung Sawczenko.,  A.  Samdhu.,  B.K.,  Logan.,  A. Jenkins.,  H.  Taylor.,  C.J.  Mian.,  S.and lynn.,  R.  2001.  Prospective  survey  of childhood inflammatory disease in Birtish Isles. Lancet , 357 ;1093-1094.
Wallace,  J.L.,  MacNaughton,  W.K.,  Morris, G.P.,  Beck,  P.L.  1989.  Inhibition  of Leukotriene Synthesis Markedly Accelerates  Healing  in  a  Rat  Model  of Inflamatory Bowel Disease. Gastroenterology , 96 :29-36.