KAJIAN AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK BATANG KECOMBRANG ( Etlingera elatior) BERDASARKAN TINGKAT KEPOLARAN PELARUT
[The Atioxidant Activity of Kecombrang ( Etlingera elatior ) Stem Extract Base on Various Levels of Polar Solvent]
Ivitri Susana 1 , Ahmad Ridhay 1* , Syaiful Bahri 1
1 Jurusan Kimia Fakultas MIPA, Universitas Tadulako Jl. Soekarno Hatta Km.9, Kampus Bumi Tadulako Tondo Palu, Telp. 0451- 422611
*)Coresponding author: ahmadridhay@yahoo.co.id
Diterima  20 November 2017, Disetujui 17 Januari 2018

## ABSTRACT
A research on the antioxidant activity of the stem extract of kecombrang ( Etlingera elatior ) based on the level of polar solvent has been performed. The method used was gradual extractions started from n-hexane, following  with ethyl  acetate, and ethanol solvents. Antioxidant activity  of each extract was measured  using  DPPH.  Results  showed  that  the  IC 50 values  of  each  n-hexane,  ethyl  acetate,  and ethanol was 711.67 ppm, 760.73 ppm, 535.78 ppm, respectively and 51.78 ppm for ascorbic acid as reference. As conclusion, stem extracts of kecombrang is categorized as very weak antioxidant.
Keywords: Stem kecombrang, Extraction, Antioxidant

## ABSTRAK
Telah dilakukan penelitian tentang aktivitas antioksidan ekstrak batang kecombrang ( Etlingera elatior ) berdasarkan  tingkat  kepolaran  pelarut.  Penelitian  ini  diawali  dengan  melakukan  ekstraksi menggunakan  pelarut n -heksan,  selanjutnya  dengan  pelarut  etil  asetat,  dan  etanol.  Hasil  ekstraksi dengan  masing-masing  pelarut diuji  aktivitas  antioksidannya  dengan  metode  DPPH.  Hasil  penelitian menyatakan  bahwa  nilai  IC 50 pada  ekstrak n -heksan,  etil  asetat,  etanol  masing –  masing  adalah 711,67  ppm,  760,73  ppm,  535,78  ppm  dan  sebagai  pembanding  asam  askorbat  diperoleh  nilai  IC 50 51,78  ppm.  Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh,  aktivitas  antioksidan  terbaik  adalah  pada  tingkat pelarut bersifat polar (ekstrak etanol) dibandingkan dengan tingkat kepolaran pelarut lainnya.
Kata Kunci : Batang Kecombrang,  Ekstraksi,  Antioksidan

## LATAR BELAKANG
Pengetahuan akan efek radikal bebas terhadap munculnya penyakit degenerative  yang  terus  berkembang mendorong  pada  semakin  bertambahnya penggunaan  senyawa  antioksidan  (Boer, 2000). Reaksi autooksidasi senyawa radikal  bebas  dalam  oksidasi  lipid  dapat dihentikan dengan menggunakan antioksidan. Kehadiran senyawa antioksidan  di  dalam  bahan  pangan  akan mempertahankan  mutu  produk  pangan tersebut,  seperti  mencegah  perubahan warna dan aroma atau ketengikan.
Senyawa antioksidan dapat diperoleh dari  berbagai  sumber,  salah  satunya adalah dari tanaman. Tanaman kecombrang ( Etlingera elatior ) adalah satu dari  sekian  banyak  jenis  tanaman  yang memiliki potensi sebagai antioksidan alami. Hampir seluruh bagian tanaman kecombrang  mulai  dari  rimpang,  batang, daun, hingga bunga mengandung senyawa metabolit sekunder yang berpotensi sebagai antioksidan, seperti fenolik, flavonoid,  triterpen,  saponin,  tanin,  steroid, alkaloid, dan glikosida (Naufalin, 2005).
Ekstraksi  senyawa  antioksidan  dari tanaman  umumnya  menggunakan  jenis pelarut  dengan  tingkat  kepolaran  yang berbeda,  seperti  etanol,  etil  asetat,  dan n - heksan.  Pemilihan  pelarut  berdasarkan tingkat  kepolarannya  sangat  bermanfaat untuk mendapatkan ekstrak dengan rendemen  yang  lebih  besar  dan  juga dimaksudkan  agar  golongan  senyawa
antioksidan yang memiliki aktivitas tertinggi dapat terekstrak (Lestario et al. , 2001).
Aktivitas antioksidan dapat ditentukan dengan menggunakan beberapa  metode,  salah  satunya  adalah metode  DPPH.  Metode  ini  sangat  umum digunakan  karena  sangat  sesuai  untuk mengukur  aktivitas  total  antioksidan  baik dalam  pelarut  polar  atau  larut  air  maupun dalam  pelarut  nonpolar  atau  larut  minyak (Prakash, 2001). Alasan lain dari penggunaan  metode  ini  adalah  lebih sederhana,  cepat,  akurat,  dan  tidak memerlukan banyak sampel.
Mekanisme  dari  pengujian  aktivitas antioksidan  dengan  metode  DPPH,  yaitu terjadinya  perubahan  warna  ungu  dari senyawa  DPPH  menjadi  lebih  pudar (kuning).  Serapan  senyawa  DPPH  yang telah  berubah  warna  akan  terdeteksi  pada panjang  gelombang  517  nm  (Hanani, 2005).  Hasil  pengukuran  pada  panjang gelombang  tersebut  akan  berkahir  pada perhitungan  nilai  IC 50 melalui  persamaan regresi. Nilai ini akan menunjukkan kemampuan  ekstrak  sampel  uji  untuk menghambat  radikal  bebas  sebanyak  50 %. Nilai IC 50 yang lebih kecil akan menjdai indikator  bahwa  suatu  ekstrak  uji  memiliki aktivitas  antioksidan  yang  tinggi  (Rohman, 2005).

## METODE PENELITIAN

## Bahan dan Peralatan
Bahan yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  batang  kecombrang yang  tumbuh  didesa  Bomba.    Bahan  lain
juga  yaitu n -heksan  teknis,  etil  asetat teknis,  etanol  teknis,  DPPH,  HCl  pekat, FeCl 3 5%,  pereaksi  dragendorf,  anhidrat asetat,  asam  sulfat  pekat,  kloroform,asam askorbat,  serbuk  magnesium,  aquades, tissue, kertas saring  dan  aluminium foil. Peralatan  yang  digunakan  terdiri  atas blender, ayakan 80 mesh, talam aluminium,  neraca  analitik ,  rotari  vakum evaporator, alat penyaring vakum, Spektrofotometer UV-VIS, erlenmeyer, plat tetes,  gelas  kimia,  kuvet,  rak  dan  tabung reaksi,  gelas  kimia,  gelas  ukur,  labu  ukur, pipet  tetes,  corong  kaca,  cawan  petri, sendok zat, pipet volum, dan botol reagen.

## Prosedur Penelitian

## Tahap pengolahan batang kecombrang
Batang  kecombrang  dipisahkan  dari umbi  dan  daunnya,  dirajang  kemudian dikeringkan  di  bawah  sinar  matahari,  lalu dihaluskan  dengan  blender  dan  diayak dengan ayakan 60 mesh untuk mendapatkan  batang  kecombrang  dalam bentuk tepung. Tepung batang kecombrang  disimpan  untuk  digunakan pada penelitian selanjutnya.

## Tahap ekstraksi batang kecombrang
Ekstraksi  dilakukan  menggunakan metode maserasi secara bertingkat dengan  menggunakan  tiga  jenis  pelarut sebagaimana  yang  telah  dilakukan  oleh Purwanto et  al. (2017).  Ekstraksi  pertama digunakan  pelarut n -heksan  dengan  cara menimbang  tepung  batang  kecombrang sebanyak 100 g, kemudian dimasukkan ke dalam erlenmeyer 1000 ml lalu
ditambahkan 1000 ml n -heksan (perbandingan pelarut dan sampel 1 : 10 ). Campuran disimpan selama 48 jam sambil sesekali diaduk, kemudian disaring dengan penyaringan  vakum.  Filtrat  yang  diperoleh pelarutnya dipisahkan dengan rotari vakum evaporator  sehingga  didapatkan  ekstrak kental  batang  kecombrang.  Residu  yang diperoleh dikering-anginkan, dan selanjutnya dimasukkan ke dalam erlenmeyer untuk diekstrak kembali dengan  pelarut  etil  asetat  dan  kemudian pelarut  etanol  dengan  perlakuan  yang sama  pada  ekstrak  menggunakan n - heksan.  Ekstrak  tiap  pelarut  dianalisis kandungan  fitokimianya  dengan  metode Harborne (1987).
Uji Aktivitas Antioksidan dengan Menggunakan  Metode  DPPH  (Pratiwi  et al., 2010)
Ekstrak n- heksan,  etil  asetat  dan etanol masing - masing ditimbang sebanyak 25 mg dan dimasukkan kedalam labu  ukur  25  mL  kemudian  dilarutkan dengan  etanol  dan  ditepatkan  volume sehingga  diperoleh konsentrasi 1000 ppm. Kemudian  lakukan  pengenceran  dengan menambahkan  etanol  sehingga  diperoleh sampel  dengan  konsentrasi  (10,  30,  50, 70,  dan  90  ppm).  Untuk  penentuan aktivitas antioksidan masing-masing konsentrasi  dipipet  sebanyak  0,2  ml larutan  sampel  dengan  pipet  mikro  dan masukan ke dalam vial, kemudian tambahkan  3,8  ml  larutan  DPPH  50  µM. Campuran  dihomogenkan  dan  dibiarkan selama  30  menit  ditempat  gelap,  serapan
diukur  dengan  spektrofotometer  UV  -  Vis pada panjang gelombang 517 nm. Aktivitas antioksidan sampel ditentukan oleh besarnya hambatan serapan radikal DPPH melalui  perhitungan  persentase  inhibisi serapan  DPPH  dengan  menggunakan rumus :

## % Inhibisi  =
Abs. Kontrol  =  Absorbansi DPPH 50 µM Abs. Sampel =  Absorbansi Sampel Uji (Pratiwi et al ., 2010).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Ekstrak Batang Kecombrang
Tahap  ektraksi  batang  kecombrang dilakukan  secara  bertahap  menggunakan tiga jenis pelarut yaitu non polar, dilanjutkan  dengan  pelarut  semi  polar  dan pelarut  polar  dengan  metode  ekstraksi secara  maserasi.  Ekstraksi  dilakukan menggunakan metode maserasi menggunakan 3 jenis pelarut yang berbeda  tingkat  kepolarannya.  Karena pelarut yang berbeda berpengaruh terhadap  senyawa  yang  akan  terlarut dalam  proses  ekstraksi  berdasarkan  sifat kepolarannya.
Golongan  Senyawa  Ekstrak  n-Heksana,

## Etil asetat dan   etanol
Hasil analisis (Tabel 1) menunjukkan bahwa  sampel  dengan  pelarut  etanol menunjukkan  reaksi  positif  pada  uji golongan  senyawa  flavonoid  dan  tanin yang  ditandai  dengan  munculnya  warna jingga  pada  uji  senyawa  flavonoid  dan munculnya  endapan  warna  coklat  pada  uji senyawa  tanin.  Untuk  pelarut  etil  asetat
menunjukkan  reaksi  positif  pada  uji senyawa  flavonoid  dan  polifenol  yang ditandai dengan adanya warna jingga pada uji  senyawa  flavonoid  dan  endapan  warna coklat  pada  uji  senyawa  tanin.  Sedangkan pelarut n -heksan  menunjukkan  reaksi positif  untuk  uji  senyawa  alkaloid  dan steroid  yang  ditandai  dengan  munculnya endapan  berwarna  merah  jingga  pada  uji senyawa  alkaloid  dan  munculnya  warna hijau pada uji senyawa steroid.

## Tabel 1 Kandungan metabolit sekunder  ekstrak batang kecombrang
Golongan senyawa Jenis Pelarut n- heksan etil asetat Etanol Flavonoid - + + Saponin - - - Polifenol/tanin - + + Alkaloid + _ - Steroid + - - Terpenoid - - -
Profil  senyawa  fenolik  dalam  ekstrak sampel dapat berubah dengan perbendaan tingkat  kepolaran  pelarut  yang  digunakan (Kahkonen et al . 2001). Perbedaan tingkat kepolaran  pelarut  tentunya  berpengaruh pada  jenis  metabolit  sekunder  yang terekstrak  (Soeksmanto et  al .,  2007).
Traithip (2005) melaporkan bahwa penggunaan  pelarut  etanol  ekstrak  daun beluntas  menghasilkan  fraksi  dengan kandungan flavonoid dan polifenol.
Aktivitas  antioksidan  ekstrak  batang kecombrang dengan menggunakan metode DPPH
Pengujian aktivitas antioksidan batang  kecombrang  dilakukan  melalui penentuan  %  inhibisi  fraksi n- heksan,  etil
asetat  dan  etanol  pada  masing –  masing konsentrasi  yaitu  10  ppm  ;  30  ppm  ;  50 ppm ; 70 ppm dan 90 ppm.
Tabel 2  Persen  inhibisi  fraksi n- heksan,  etil asetat,  dan  etanol  pada  berbagai konsentrasi.
Fraksi Konsentrasi (ppm) % Inhibisi n - Heksan 10 10,8509 30 13,2715 50 14,0836 70 14,3823 90 15,7864 Etil Asetat 10 10,5976 30 12,3694 50 13,4206 70 14,4056 90 14,7692 Etanol 10 11,9132 30 14,6502 50 16,3427 70 17,1228 90 17,7707
Aktivitas  antioksidan  (IC 50 )  pada masing –  masing  ekstrak  hasil  fraksinasi dengan  pelarut n- heksan,  etil  asetat  dan etanol  ditentukan  dengan  menggunakan persamaan regresi linier dari kurva hubungan  konsentrasi  sampel  terhadap persen inhibisi (Gambar 1-3).
Gambar 1  Hubungan  konsentrasi  ekstrak n- heksan terhadap persentase
inhibisi.
Gambar  2.  Hubungan  konsentrasi  ekstrak n- heksan terhadap persentase
inhibisi. Gambar 3.  Hubungan konsentrasi ekstrak
etanol terhadap persentase inhibis.
Dari data Tabel 2 dan Gambar 1-3 dapat  diketahui  bahwa  %  Inhibisi  tertinggi masing –  masing  untuk  pelarut n- heksan, etil  asetat,  dan  etanol  yaitu  sebesar 15,7864  ;  14,7692  dan  17,7707.  Nilai  IC 50 secara  berturut –  turut  untuk  pelarut n- heksan,  etil  asetat  dan  etanol  adalah  : 711,6758  ppm  ;  760,7322  ppm  dan 535,7828  ppm.  Nilai  IC 50 diperoleh  dari data  %  Inhibisi  yang  diperoleh  pada masing –  masing  pelarut  dengan  cara memasukkan  nilai  hasil  perhitungan  ke dalam persamaan linear dengan konsentrasi  (ppm)  sebagai  absis  (X)  dan nilai  persentase  inhibisi  sebagai  ordinat (Y), nilai IC 50 dari perhitungan pada saat % inhibisi sebesar 50% dengan persamaan Y
=  aX  +  b.  Perbandingan  nilai  IC 50 pada ketiga  jenis  pelarut  yang  berbeda-beda menurut
tingkat
kepolarannya
menunjukkan bahwa pelarut etanol memiliki  aktivitas  antioksidan  tertinggi karena memiliki nilai IC 50 yang paling kecil jika  dibandingkan  dengan  pelarut  etil asetat  serta n -heksan.  Hal  ini  diduga karena didalam sampel batang kecombrang  banyak  terdapat  senyawa bioaktif yang bersifat polar jika dibandingkan  dengan  senyawa  bioaktif yang  bersifat  nonpolar  dan  semi  polar sehingga  pelarut  polar  (etanol)  lebih banyak  menarik  komponen  bioaktif  yang ada pada batang kecombrang tersebut.
Adapun sebagai pembanding, dilakukan  pengujian  aktivitas  antioksidan terhadap  asam  askorbat  (Vitamin  C) dengan masing – masing konsentrasi 2, 3,
4, 5 dan 6 ppm pada Tabel 3.
Tabel  3  Persen  (%)  inhibisi  asam  askorbat
(vitamin C) pada berbagai konsentrasi. Konsentrasi (ppm) % Inhibisi 2 5,2536 3 6,2322 4 6,5670 5 7,6229 6 9,0651
Untuk  aktivitas  antioksidan  (IC 50 ) pada asam askorbat dapat juga ditentukan dengan  menggunakan persamaan regresi linier  dari  kurva  hubungan  konsentrasi sampel  terhadap  persen  inhibisi  (Gambar 4).
Gambar 4  Hubungan konsentrasi asam askorbat dengan persentase inhibisi
Dari  data  tabel  diketahui  bahwa  % Inhibisi  tertinggi  untuk  asam  askorbat adalah  9,065.  Dan  untuk  nilai  IC 50 asam askorbat  adalah  51,78  ppm.  Hasil  ini  lebih tinggi  jika  dibandingkan  dengan  nilai aktivitas  antioksidan  etanol  (535,78  ppm). Hal ini menunjukkan bahwa sifat antioksidan  pada  batang  kecombrang bersifat  sangat  lemah  jika  dibandingkan dengan asam askorbat.
Tresna dan Ruswanto (2015)
menyatakan bahwa pada bunga kecombrang  nilai  IC 50 ekstrak  n-heksan adalah 372,117 ppm lebih tinggi dibanding dengan  IC 50 ekstrak  etil  asetat  455,263 ppm  dan  metanol  448,389  ppm.  Hal  ini mengidikasikan  bahwa  senyawa-senyawa yang  bersifat  non  polar  dari  bunga kecombrang  memiliki  aktivitas  yang  lebih poten dibanding dengan senyawa- senyawa  yang  bersifat  semi  polar  atau polar.
Andini  (2013)  melaporkan  aktivitas antioksidan  ekstrak  daun  belimbing  wuluh ( Averrhoa bilimbi L.) menggunakan pelarut etanol,  etil  asetat,  dan n -heksan  dengan metode  emulsi  minyak  kedelai,  bahwa ekstrak etanol mempunyai aktivitas
antioksidan  paling  tinggi  yakni  (72,14%), kemudian ekstrak etil asetat yakni (60,69%),  dan  ekstrak n -heksan  yakni (48,81%).
Blois  (1985)  dalam Molyneux  (2004) menyatakan  bahwa  aktivitas  antioksidan dapat  dibagi  menjadi  beberapa  kategori yaitu sangat kuat, kuat, sedang dan lemah. Antioksidan  sangat  kuat  memiliki  nilai  IC 50 kurang dari 0,05mg/ml (<50 ppm), antioksidan  kuat  memiliki  nilai  IC 50 berada pada  kisaran  0,05 –  0.1  mg/ml  (50  ppm  – 100  ppm)  ,  antioksidan  sedang  memiliki nilai  IC 50 berkisar  antara  0,1 –  0,15 mg/ml (100  ppm –  150  ppm),  antioksidan  lemah memiliki kisaran 0,15 ppm hingga 0,2 ppm (150  ppm –  200  ppm)  dan  antioksidan sangat  lemah  memiliki  nilai  IC 50 lebih  dari 0,2 ppm ( >200 ppm).

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang diperoleh,  maka  dapat  disimpulkan  bahwa pada  pelarut  polar  terdapat  senyawa flavonoid  dan  tanin.  Pelarut  semi  polar terdapat  senyawa  flavonoid  dan  polifenol sedangkan pada pelarut non polar terdapat senyawa  alkaloid  dan  steroid.  IC 50 ekstrak batang  kecombrang  untuk  ekstrak n- heksan,  etil  asetat  dan  etanol  masing  - masing  adalah  711,67  ppm  ;  760,73  ppm dan  535,78  ppm.  Aktivitas  antioksidan (IC 50 )  batang  kecombrang  pada  ekstrak n- heksan,  etil  asetat  dan  etanol  bersifat sangat  lemah  jika  dibandingkan  dengan aktivitas antioksidan asam askorbat.

## DAFTAR PUSTAKA
Boer,  Y.  (2000).  Uji  Aktivitas  Antioksidan Ekstrak  Kulit  Buah  Kandis  ( Garcinia parvifolia Miq). Jurnal  Matematika dan IPA, 1(1): 26-33
Andini.  (2013).  Penggunaan  Jenis  Pelarut Terhadap  Aktivitas  Antioksidan  Dan Komponen  Kimia  Ekstrak  Daun Belimbing  Wuluh (Averrhoa  Bilimbi, L). Skripsi. Palu:  Program  Studi Kimia FMIPA Universitas Tadulako.
Hanani,  E.  (2005).  Identifikasi  Senyawa Antioksidan dalam Sponscallispongia Sp, dari  Kepulauan  Seribu. Majalah Ilmu Kefarmasian . 2(3):127 – 133.
Harborne,  JB.  (1987).  Metode Fitokimia Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan. Bandung: ITB
Kahkonen,  M.P.,  Hopia,  A.I.,  Heinonen.
(2001).    Berry  phenolics  and  their antioxidant activity. Journal of Agricultural  and  Food  Chemistry .  49: 4076-4082.
Lestario,  L.N.,  P.  Hastuti.,  S.  Raharjo, Tranggono.  (2001).  Sifat  Antiksodatif ekstrak  buah  duwet (Synzigium cumini) . J. Agritech. 25(1):24-31.
Molyneux,  P.  (2004).  The  Use  of  The
Stable Free Radical Diphenylpicrylhydrazyl  (DPPH)  for Estimating Antioxidant Activity. Songklanakarin J.  Sci.  Technol.
26(2): 211-219.
Naufalin, R. (2005). Kajian Sifat Antimikroba Ekstrak Bunga Kecombrang ( Etlingera elatior)
Terhadap Berbagai Mikroba Patogen dan  Perusak  pangan. Tesis. Bogor:
Jurusan  Teknologi  Pangan  Fakultas Pertanian IPB.
Prakash, A. (2001). Medallion
Laboratories:  Analytical  Progress,
Antioxidant Activity. www.terranostrachocolate.com  /files/

## Comparative_and_General_Antioxid
ant_Information.pdf,diunduh  pada  21 Maret 2017.
Pratiwi, P., M Suzery, B Cahyono.  (2010). Total  Fenolat  Dan  Flavonoid  Dari Ekstrak  Dan  Fraksi  Daun  Kumis
Kucing ( Orthoshipon  stamineus B.) Jawa Tengah Serta Aktivitas Antioksidannya . Jurnal Sains &
Matematika. 18 (4) : 140-148.
Purwanto,  D.,  Bahri,  S.,  &  Ridhay,  A. (2017).  Uji  Aktivitas  Antioksidan Ekstrak  Buah  Purnajiwa  ( Kopsia arborea Blume.)  Dengan  Berbagai Pelarut. KOVALEN , 3(1): 24-32.
Rohman,  A.,  Riyanto.  (2005).  Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Buah  Mengkudu
(Morinda Citrifolia L ,). J. Agritech. 25
(3):131-136.
Soeksmanto,  A.,  Hapsari,  Y.,  Simanjuntak P.    (2007).  Kandungan  Antioksidan
pada  Beberapa  Bagian  Tanaman Mahkota  Dewa Phaleria  macrocarpa
(Scheff) Boerl . (Thymelaceae).
Biodiversita . 8(2):92-95.
Traithip,  A.  (2005).    Phytochemistry  and antioxidant activity of Pluchea indica.
Thesis. Thailand: Mahidol University.
Tresna,  L.,  Ruswanto.  (2015).  Potensi
Antikanker Dari Ekstrak Bunga Kecombrang Dengan Berbagai Tingkat  Kepolaran  Terhadap  Sel
T47D. Jurnal Kesehatan Bakti Tunas Husada. 14(1): 8-11.