POLIMORFISME VARIAN T-344C GEN FAKTOR TRANSKRIPSI STORKHEAD BOX 1 ( STOX1 ) SEBAGAI KANDIDAT BIOMARKER PREEKLAMPSIA
Mukhamad Nooryanto*, Kusnarman Keman*, Erry Gumilar Dahlan*, Anin Indriani* 

## Abstrak
Insiden preeklampsia dan eklamsia dapat menyebabkan kematian pada ibu hamil, dan pada wanita dengan riwayat keluarga menderita preeklampsia lebih berisiko dibandingkan dengan wanita tanpa riwayat keluarga dengan preeklampsia. Penelitian terdahulu mengindikasikan bahwa gen Storkhead Box 1 ( STOX1 ) merupakan  salah  satu  penyebab  preeklampsia.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menganalisis  polimorfisme varian  T-344C  gen STOX1 dalam  kromosom  10q22  sebagai  kandidat  biomarker  preeklampsia.  Penelitian dilaksanakan  secara  kuantitatif  observasional  dengan  desain cross-sectional pada  sampel  darah  wanita hamil  dengan  preeklampsia  (kelompok  kasus)  dan  darah  wanita  yang  hamil  normal  (kelompok  kontrol)  di kamar bersalin SMF Obstetri dan Ginekologi RSUD Dr. Saiful Anwar Malang. Sampel darah vena diambil dari 25 wanita hamil dengan preeklampsia dan 25 wanita hamil normal yang memenuhi kriteria penelitian dan  dilakukan  ekstraksi  DNA.  Identifikasi  gen STOX1 dilakukan  dengan  metode    PCR  dengan  forward primer  adalah  5’-TGGGTGTGAA-3’  dan  reversed  primer  5’-TTGGAGCGTTTGATGAAACA-3’  (First  Base, USA) dan analisis varian T-344C dengan RFLP menggunakan enzim Hae III. Data dianalisis secara statistik dengan  aplikasi  SPSS.  Amplifikasi  gen  STOX1  dengan  PCR  pada  kelompok  preeklamsia  dan  kontrol menunjukkan  produk sebesar 639 bp. Analisis polimorfisme varian T-344C pada kelompok normal memiliki frekuensi  TT  64%,  TC  28%,  dan  CC  8%.  Sementara  pada  kelompok  preklampsia  frekuensi  TT  72%,  TC 28%)dan  tidak  ditemukan  adanya  polimorfisme  CC  yang  bersifat  homozigot.  Tidak  ditemukan  hubungan yang signifikan antara polimorfisme varian T-344C gen STOX1 dengan preeklampsia (Uji Mann Whitney p = 0,668  >  0,05).  Kesimpulanya,  secara  teknis  pemeriksaan  varian  T-344C  gen  STOX1  dapat  digunakan sebagai  kandidat  biomarker  preeklamsia,  namun  secara  spesifik  tidak  sensitif  untuk  menjelaskan  adanya hubungan antara polimorfisme varian T-344C gen STOX1 dengan preeklampsia.
Kata kunci : biomarker, gen STOX1 , polimorfisme. preeklampsia, varian T-344C
POLYMORPHISM OF T-344C VARIANT TRANSCRIPTION FACTORS STORKHEAD BOX 1 GENE ( STOX1 ) AS A CANDIDATE OF BIOMARKER OF PREECLAMPSIA

## Abstract
The incidence of preeclampsia and eclampsia can cause death in pregnant women, and women with a family history of preeclampsia are more at risk than women without a family history of preeclampsia. Previ- ous studies have indicated that the Storkhead Box 1 ( STOX1 ) gene is one of the causes of preeclampsia. This study aims to analyse the  polymorphism of the T-344C variant of the STOX1 gene on chromosome 10q22 as a biomarker candidate of preeclampsia. The study was conducted in a quantitative observational study with a cross-sectional design on blood samples of pregnant women with preeclampsia (case group) and normal pregnant women (control group) in the delivery room at SMF Obstetrics and Gynaecology Dr. Saiful  Anwar  Public  Hospital  Malang.  Venous  blood  samples  were  taken  from  25  pregnant  women  with preeclampsia and 25 normal pregnant women who fulfilled the study criteria and carried out DNA extraction. The  identification  of  the STOX1 gene  was  carried  out  by  the  PCR  method  with  the  forward  primer  5'- TGGGTGTGAA-3  'and  the  reversed  primer  5'-TTGGAGCGTTTGATGAAACA-3'  (First  Base,  USA)  and RFLP using the Hae III enzyme to analyse T-344C variant. Data were analysed statistically by SPSS soft- ware. Amplification of the STOX1 gene by PCR in preeclampsia and normal groups showed a product of 639 bp. Polymorphism of the T-344C variant analysis in the normal  group showed TT frequency 64%, TC 28%, and CC 8%. Meanwhile, in the preeclampsia group, the frequency of TT 72%, TC 28%, and no CC polymorphism that was homozygous. There was no significant correlation between T-344C variant STOX1 gene  polymorphisms  and  preeclampsia  (Mann  Whitney  test  p  =  0.668  >  0.05).  In  conclusion,  technically examining the T-344C variant of the STOX1 gene can be used as a candidate of biomarker of preeclampsia, but it is specifically insensitive to explain the relationship between polymorphisms of the T-344C variant of the STOX1 gene and preeclampsia.
Keywords: biomarker, polimorphism. Preeclampsia, STOX1 gene, T-344C variant
* Departemen Obstetri dan Ginekologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Brawijaya  E-mail: draninspog@ub.ac.id

## Pendahuluan
Preeklampsia  dan  eklamsia  menyebab- kan  kematian  lebih  dari  50.000  ibu  hamil setiap  tahunnya  di  dunia. 1 Di  Rumah  Sakit Cipto Mangunkusumo Jakarta, ditemukan 400 -500/4000-5000 kasus pertahun. Etiologi dan patofisiologi  preeklampsia  dan  eklamsia diperkirakan akibat gangguan plasentasi pada stadium awal kehamilan akibat kombinasi dari faktor  maternal  dan  lingkungan  yang  me- nyebabkan  inflamasi  secara  sistemik, disfungsi  endotel dan manifestasi klinik yang terjadi pada maternal. 2
Faktor  kerentanan  genetik  dari  kedua orang  tua  diketahui  sebagai  penyebab preeklampsia  dan  eklamsia.  Hal  ini  berdasar pada  insidens  preeklampsia  dan  eklamsia pada  wanita  dengan  riwayat  keluarga menderita preeklampsia adalah tiga kali lebih tinggi  dibandingkan  dengan  wanita  tanpa riwayat  keluarga  dengan  preeklampsia. 3
Kendati  beberapa  lokus  genetik  telah dipetakan,  hanya  sedikit  gen  kandidat penyebab  preeklampsia  dan  eklamsia  yang telah diidentifikasikan sejauh ini. 4 Salah satu gen penyebab preeklampsia dan  eklamsia  adalah  gen  Storkhead  Box  1 ( STOX1 )  yang  terdapat  dalam  kromosom 10q22.  Penelitian  yang  dilakukan  oleh Lachmeijer et al. (2001) yang melakukan studi analisis  sib-pairs  pada  sebuah  keluarga menemukan  kecenderungan  adanya  hu- bungan  preeklampsia  dengan  kromosom 2p13,  2p22  dan  9p13. 5 Lokus  kromosom 10q22 telah diteliti merupakan suatu alel gen yang  menunjukkan  hubungan  pada  saudara yang  mengalami  preeklampsia.  Alel  tersebut hanya  mencakup  alel  maternal,  namun  tidak alel  paternal.  van  Dijk et  al .  (2005) menemukan  adanya  lima  mutasi  missense berbeda  pada  gen STOX1 yang  terdapat pada  kromosom  10q22.  Kelima  mutasi  ini diidentifikasikan  sebagai  penyebab  pre- eklampsia  pada  suatu  keluarga,  bersifat identik  pada  saudara  perempuan  yang
mengalami dan mengikuti garis maternal 6,7
Gen STOX1 berpengaruh  pada  proses transisi dari nonivasif ke trofoblas yang invasif yang  merupakan  sentral  perkembangan plasenta  normal  sehingga  dapat  dijadikan sebagai faktor penentu preeklampsia. Namun, Ignasias-Palatas et al . (2007) mengemukakan bahwa  ekspresi STOX1 sangat  rendah  pada plasenta  dan  sel  trofoblas. 8,9 Penelitian  lain membuktikan bahwa STOX1 mampu beperan langsung  pada  gen  target  spesifik  dan menginduksi  transkripsi  protein  yang  terjadi pada  preeklampsia.  Studi  sebelumnya  yang membandingkan  ekspresi  gen  pada perkembangan  awal  plasenta  (gravida  10-12 minggu)    pada  wanita  dengan  preeklampsia dengan  wanita  dengan  kehamilan  normal, menunjukkan STOX1 berperan  pada  wanita preeklampsia.  Hal  ini  membuktikan disregulasi STOX1 terjadi  dari  awal  pada preeklampsia. 10
Selain  gen STOX1 ,  beberapa  kandidat gen  lainnya  adalah CYP11B2,  eNOS ,dan ACE yang  dapat  digunakan  untuk memprediksi komplikasi seperti hipertensi dan preeklampsia. 11 Penelitian  Devendran et  al.
(2015)  pada  wanita  etnis  India  dengan kehamilan  sehat    menunjukkan    bahwa frekuensi  polimorfisme  alel  minor  -344C>T pada  gen  CYP11B2  diketahui  lebih  rendah secara  signifikan  dibandingkan  dengan populasi Jepang dan Afrika (p = 0,0001). Gen CYP11B2  berfungsi  pada  regulasi  aktivitas aldosteron dan sistem kardiovaskuler. 12 Pada gen  ini  diketahui  ada  tiga  polimorfisme  yang utama. Salah satunya adalah mutasi C-344T pada  daerah  promoter  gen  yang  terkait dengan  tekanan  darah  tinggi  dan  stroke ischemic  yang  ditemukan  pada  populasi China. 13 Oleh  karena  itu,  suatu  metode identifikasi  dini  pasien  preeklampsia  pada trimester  pertama  sebelum  ditemukan  gejala mutlak  diperlukan.  Dengan  identifikasi  dini penderita  preeklampsia  maka    dimungkinkan untuk melakukan pemantauan penderita
dengan hati-hati dan memberikan pengobatan segera  setelah  gejala  pertama  terjadi  atau bahkan  sebelumnya. 14 Tujuan  dari  penelitian ini  adalah  untuk  menentukan  polimorfisme varian  C-344T  gen STOX1 kromosom  10q22 sebagai  kandidat  biomarker  dalam mendeteksi  pasien  preeklampsia  secara  dini, serta  untuk  mengetahui  apakah  polimorfisme tersebut terkait dengan kejadian preeklamsia.

## Bahan dan Metode

## Rancangan Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  secara kuantitatif observasional dengan desain cross
-sectional .  Penelitian  eksplorasi  laboratorium ini  menggunakan  sampel  darah  vena  yang diambil  dari  kelompok  wanita  hamil  dengan preeklampsia  (kelompok  kasus)  dan kelompok  wanita  yang  hamil  normal (kelompok kontrol).

## Populasi dan Sampel Penelitian
Populasi  dalam  penelitian  ini  adalah seluruh  wanita  hamil  yang    melahirkan  di kamar  bersalin  RSUD  Dr.  Saiful  Anwar Malang yang bersedia mengikuti penelitian ini dan  memenuhi  kriteria  inklusi  yaitu:  hamil trimester  ke-3  (>34  minggu),  hamil  kurang trimester  ke-3  (<34  minggu),  primigravida, hamil  dengan  preeklampsia  (kelompok kasus),  hamil  normal  (kelompok  kontrol). Pasien wanita hamil yang menderita penyakit infeksi,  hipertensi  kronis,  dan  diabetes mellitus dikeluarkan dari penelitian ini.

## Metode Sampling dan Besar Sampel
Pengambilan  sampel  penelitian  ini  di lakukan  secara  kuota  sampling  berdasarkan kurun  waktu  sejak  Pebruari  sampai  April 2013.  Besar  sampel  pada  kelompok  kasus dan  kelompok  kontrol  pada  penelitian  ini masing-masing sebanyak 25 sampel.

## Variabel Penelitian
Variabel  bebas  pada  penelitian  ini
adalah  wanita  hamil  dengan  preeklampsia dan  wanita  hamil  normal.  Variabel  terikat adalah gen STOX1 .

## Batasan Operasional Variabel Penelitian
Preeklampsia  didefinisikan  sebagai peningkatan  tekanan  darah  ≥140/90  mmHg pada  kehamilan  di  atas  20  minggu  dengan disertai  proteinuria  (>300mg/24  jam  atau dipstick  +1)  yang  disebabkan  oleh kehamilannya  dengan  gejala-gejalanya segera  menghilang  setelah  persalinan.  Usia kehamilan  adalah  lamanya  suatu  kehamilan yang  dihitung  dari  hari  pertama  haid  terakhir menggunakan rumus Naegele. Normal adalah dengan  kriteria  tekanan  darah  <140/90  dan tidak  didapatkan  proteinuria  pada  pe- meriksaan urinalysis.

## Ekstraksi DNA
DNA  total  diekstrak  dari  sampel  darah vena  menggunakan  metode salting  out . Sebanyak  200 μl sampel darah ditambah 600 μl  larutan  potassium  acetat  untuk  melisiskan eritrosit,  lalu  disentrifus  suhu  4  °C  dengan kecepatan  maksimum    selama  3  menit. Kemudian  pelet  limfosit  dilisiskan  dengan SDS-proteinase K, diikuti dengan penambahan  sodium  klorida  6  M.  Campuran tersebut kemudian disentrifus pada kecepatan 14.000  rpm  selama  3  menit  untuk mempresipitasi protein. Supernatan dipindahkan  ke  dalam  tabung  lain  dan ditambahkan  600  μl  ethanol  absolut  dingin untuk  mempresipitasi  DNA  dan  disentrifus pada kecepatan 14.000 rpm selama 1 menit. Pelet  DNA  dicuci  dengan  500  μl  EtOH  70% dan  disentrifus  kembali.  Sampel  DNA ditambah  100  μl  buffer  TE  steril  pH  7,6  dan disimpan pada -20 °C.
Reaksi  Polymerase  Chain  Reaction (PCR ) Gen STOX1 Proses PCR dilakukan dengan mencampurkan  bahan  PCR  dengan  DNA template hingga volume akhir 50 μL.
Komponen  bahan  adalah  5  μL  10x  MgCl-2- free  PCR  buffer,  DNA template (konsentrasi akhir 200 pg/ μL), 1 μL 0,5 μM primer forward (5’-TGGGTGTGAA-3’  )  dan  1  μL  0,5  μM
p r i m e r r e v e r s e ( 5 ’ - TTGGAGCGTTTGATGAAACA-3’), 0,8 μL 0,2 mM dNTP mix, 0,5 μL 2.5U Taq polymerase, 5  μL  5%  dimethyl  sulfoxide  (DMSO)  10  μL 10%  gliserol,  1  μL  1% Perfect  Match Polymerase Enchancer (PMPE), dan ddH2O.
Proses amplifikasi gen STOX1 dilakukan pada sekuen  reaksi  berikut:  denaturasi  pada  suhu 98 °C 10 detik,  diikuti 24 siklus yang dimulai dengan denaturasi pada suhu 94 °C 10 detik , annealing suhu 67 °C  30  detik ,  extension suhu 72 °C 30 detik , elongation suhu 72 °C 5 menit . Produk  PCR  lalu  dievaluasi  dengan elektroforesis agarosa 1%.
Reaksi  Restriction  Fragment  Length Polymorphism  (RFLP) Varian  C-344T  Gen STOX1
Proses  RFLP  dilakukan  dengan mencampurkan DNA hasil amplifikasi dengan PCR yaitu sebanyak 3 μL (5 pg/mL) dengan 1 μL  enzim Hae III  dan  1  μL  buffer  enzim  2x, kemudian  ditambahkan nuclease-free  water 15  μL.  Campuran  tersebut  diinkubasi  pada suhu  37  °C  1  jam.  Reaksi  enzim  dinon-
aktifkan  dengan  inkubasi  tabung  pada  suhu 80  °C  15  menit.  Hasil  RFLP  dievaluasi dengan elektroforesis agarosa 5%.

## Analisis Data
Data  varian  C-344T  gen STOX1 pada wanita hamil normal dan wanita hamil dengan preeklampsia  dianalisis  secara  statistik menggunakan software SPSS.

## Hasil

## Karakteristik Sampel
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  50 subjek penelitian, yang terdiri dari 25 ibu hamil dengan normal (kelompok kontrol) dan 25  ibu hamil  dengan  preeklampsia  (kelompok kasus). Pada Tabel 1 ditunjukkan karakteristik sampel penelitian berdasarkan usia kehamilan yaitu early onset (usia kehamilan kurang dari dan sama dengan 34 minggu) dan late onset (usia  kehamilan  lebih  dari  34  minggu).  Pada kelompok  kontrol,  usia  ibu  hamil early  onset tidak  memiliki  perbedaan  yang  bermakna dengan  ibu  hamil late  onset (p  =  0,288). Demikian  pula  dengan  kelompok  kasus yang menunjukkan  tidak  ada  perbedaan  yang signifikan  rerata  usia  ibu  hamil  pada  kedua kelompok tersebut (p = 0,921).
Tabel 1 Karakteristik sampel penelitian berdasarkan usia kehamilan
Karakteristik sampel Normal (n = 25)
p-value Preeklampsia (n = 25) p-value Early Onset (n = 5) Late Onset (n = 20) Early Onset (n = 5) Late Onset (n = 20) Usia (tahun) 2,60 27,85 0,288) a 28,50 28,11 0,921) a Tekanan darah Sistol 110,00 111,50 0,688) a 170,00 162,63 0,069) c Diastol 70,00 73,00 0,418) a 98,33 93,68 0,198) c Cara lahir SC 3 8 3 5 Spontan 2 12 2 15 Usia kehamilan (minggu) 32,00 38,35 0,000) b 32,33 38,53 0,000) b Berat badan lahir (gram) 2532,00 3176,60 0,004) b 2710,00 2621,11 0,788) a
Keterangan: a) tidak ada perbedaan yang bermakna pada uji t, b) ada perbedaan yang bermakna pada uji t,
c) tidak ada perbedaan yang bermakna pada uji Mann-Whitney
Kemudian,  didapatkan  nilai  tekanan darah sistol dan diastol tidak ada perbedaan yang  bermaka  antara  kelompok  usia kehamilan early onset dengan kelompok usia kehamilan late  onset (berturut-turut  nilai  p  =
0,688 dan p = 0,418). Demikian pula dengan kelompok kasus yang menunjukkan tidak ada perbedaan  yang  bermakna  tekanan  darah sistol  dan  diastol  pada  kedua  kelompok (berturut-turut nilai p = 0,069 dan p = 0,198). Pada  kelompok  kontrol,  diketahui  usia kehamilan early  onset berbeda  secara signifikan  dengan  kelompok  usia  kehamilan late  onset (p  =  0,000).  Demikian  juga  pada kelompok  kasus    diketahui  usia  kehamilan early  onset berbeda  signifikan  dengan  usia kehamilan late onset (p = 0,000). Selain  itu,  pada  kelompok  kontrol diketahui  berat  badan  lahir  (BBL)  pada kelompok early  onset berbeda  secara signifikan  dengan  kelompok late  onset (p  = 0,004).  Akan  tetapi,  pada  kelompok  kasus diketahui  berat  badan  lahir  (BBL)  kelompok early  onset tidak  berbeda  bermakna dibandingkan dengan kelompok late onset (p = 0,788).
Amplifikasi  Gen  STOX1  pada  Kelompok Kontrol dan Kelompok Kasus
Pada penelitian ini didapatkan DNA total dari  darah  vena  ibu  hamil  normal  dan  ibu
hamil  preeklamsia  yang  memiliki  konsentrasi yang  adekuat  di  atas  konsentrasi  DNA minimal, yakni 50 ng/  l. Selanjutnya dari DNA total  tersebut  dilakukan  amplifikasi  gen STOX1 dengan  PCR  dan didapatkan  produk PCR  berupa  pita  DNA  sebesar  639 bp  pada kelompok  normal  (Gambar  1)  dan  kelompok kasus (Gambar 2).
Polimorfisme  Varian  T-344C  Gen  STOX-1 pada Kelompok Normal
Penentuan region yang  akan  dipotong dengan enzim restriksi Hae III pada varian T- 344C  gen STOX-1 mengikuti  sekuens referensi  NCBI:  NG_008374.1  (Gambar  3). Daerah  yang  akan  dipotong  dengan  enzim Hae III  adalah  daerah  yang  memiliki  pola restriksi  GGCC.  Titik  potong  tersebut  dapat bersifat terpotong satu titik pada posisi 402 bp atau  normal  (TT),  heterozigot(TC)  atau terpotong  pada  dua  titik  potong  yakni  pada posisi  402  bp  dan  334  bp,  dan  homozigot (CC) atau terpotong pada satu titik potong di posisi  334  bp.  Pada  Gambar  4  dapat diketahui profil potongan DNA varian T-344C gen STOX-1 pada  kelompok  kontrol.  Pada kelompok  kontrol  didapatkan  frekuensi  TT pada  varian  T-344C  memiliki  persentase tertinggi  yaitu  64%,  lalu  TC  dan  CC  yang masing-masing  sebesar  28%  dan  8%  (Tabel 2).
639 bp
Gambar 1. Hasil Amplifikasi gen STOX-1 pada sampel kelompok kontrol Keterangan : M: Marker100 bp DNA ladder (Fermentas, USA); 1- 25 : produk PCR kelompok kontrol (639 bp)
750 bp 500 bp 250 bp
639 bp
Gambar 2. Hasil Amplifikasi gen STOX-1 pada kelompok kasus
Keterangan : M: Marker 100 bp DNA ladder (Fermentas, USA); 1- 25 : produk PCR kelompok kasus (639 bp)
Gambar 3. Sekuen varian T-344C gen STOX-1 dengan posisi titik potong enzim restriksi Hae III berdasarkan sekuens referensi NCBI: NG_008374.1
M      TC     TT      TT       TT     TT      TT     CC      TT     TT       TT       TT      TT      TC 250 bp 402 bp
334 bp
Gambar 4. Profil RLFP varian T-344C gen STOX-1 dengan enzim Hae III pada kelompok kontrol Keterangan:  M:  Marker  DNA  ladder  250  bp;  TT:  Sampel  terdeteksi  pada  posisi  402  bp;  TC:  Sampel terdeteksi pada posisi 402 bp dan 334 bp; CC: Sampel terdeteksi pada posisi 334 bp
Tabel 2. Frekuensi genotip varian T-344C gen STOX-1 pada kelompok kontrol Genotip Varian  T-344C % Frekuensi (n) TT 64% (16) TC 28% (7) CC 8% (2) Total 100%(25)
Polimorfisme Varian T-344C Gen STOX-1 pada Kelompok Kasus
Profil potongan DNA varian T-344C gen STOX-1 dengan RFLP pada kelompok kasus ditemukan 2 jenis genotip, yakni normal (TT) dan  heterozigot  (TC).  Akan  tetapi  tidak ditemukan  genotip  homozigot  (CC)  (Gambar
5).  Pada  kelompok  kasus  didapatkan  dua genotip  varian  T-344C  yaitu  TT  dengan frekuensi sebesar 72% dan TC sebesar 28%
(Tabel 3).
Uj  Korelasi  antara  Polimorfisme  Varian  T-
344C Gen STOX-1 dengan Preeklaamsia
Untuk mengetahui apakah antara varian
T-344C  gen STOX1 berhubungan  dengan preeklamsia,  maka  dilakukan  uji  Mann Whitney  dan  didapatkan  nilai  p  =  0,668  > 0,05, yang berarti tidak ada  hubungan antara polimorfisme varian T-344C gen STOX1 yang teramati pada kelompok kasus dan kelompok normal  dengan  status  preeklamsia  subjek penelitian.

## M    TT    TT    TC   TC   TC   TT    TC    TT    TT   –    TT    TT    TC    TT
402 bp 334 bp 250 bp
Gambar 5. Profil RLFP varian T-344C gen STOX-1 dengan enzim Hae III pada kelompok kasus Keterangan:  M:  Marker  DNA  ladder  250  bp;  TT:  Sampel  terdeteksi  pada  posisi  402  bp;  TC:  Sampel terdeteksi pada posisi 402 bp dan 334 bp; CC: Sampel terdeteksi pada posisi 334 bp
Tabel 3. Frekuensi genotip varian T-344C gen STOX-1 pada kelompok kasus Genotip Varian  T-344C % Frekuensi (n) TT 72% (18) TC 28% (7) CC 0% (0) Total 100%(25)

## Pembahasan
Preeklampsia  adalah  suatu  kelainan vaskular  yang  spesifik  dialami  ibu  hamil. Manifestasi  klinik  preeklampsia  baru  muncul setelah  20  minggu  kehamilan,  walaupun proses  patofisiologisnya  terjadi    sejak  awal perkembangan  plasenta. 15 Faktor  risiko utama wanita menderita preeklampsia adalah nulliparitas.  Menurut  penelitian  metaanalisis dilaporkan bahwa wanita yang hamil pertama kalinya  memiliki  kemungkinan  hampir  3  kali menderita  preeklampsia  dibandingkan kehamilan  kedua  dan  seterusnya. 16 Umur juga  merupakan  faktor  risiko  penting terjadinya preeklampsia pada wanita dengan usia  ≥40  tahun  memiliki  kemungkinan  dua kali  lebih  besar  dibanding  wanita  usia  ≤40 tahun. 16 Meskipun  pada  penelitian  ini  faktor umur diketahui tidak menunjukkan perbedaan yang bermakna pada kedua kelompok (Tabel 1).
Beberapa  penelitian  terakhir  berusaha mengaitkan  antara  kejadian  preeklampsia dengan  polimorfisme  gen STOX1 pada kromosom  10q22  pada  populasi  di  Belanda dan  Finlandia  melalui  pendekatan genetic linkage  analysis .  Walaupun  hasilnya menunjukkan  bahwa  gen STOX1 belum dapat  divalidasi  sebagai a  common preeclampsia susceptibility gene . 17
Berbeda dengan penelitian sebelumnya, pada  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa secara  teknis  pemeriksaan  varian  T-344C gen STOX1 dapat  digunakan  sebagai kandidat  biomarker  pemeriksaan  molekuler preeklamsia.  Hasil  penelitian  menunjukkan adanya polimorfisme varian T-344C  (TT,TC, dan  CC)  gen STOX1 dengan  pemotongan menggunakan  enzim  restriksi Hae III  pada kelompok kontrol dan kasus. Namun, secara spesifik  varian  T-344C  gen STOX1 tidak dapat  digunakan  untuk  menjelaskan  adanya fenomena  alel  homozigot  pada  kelompok kontrol (CC).
Penelitian  Kivinen et  al .  (2007)
mendukung  hasil  penelitian  ini  melalui analisis  mutasi  pada  gen STOX1 yang menyebabkan  terjadinya  overekspresi  gen
STOX1 sehingga menghasilkan  profil transkripsi  berlebihan.  Akibat  overekspresi gen STOX1 ,  maka  invasi  trofoblas  menjadi terhambat  untuk  membentuk  penonjolan trofoblas  ekstravili  pada  trimester  pertama. Hambatan  pembentukan  tonjolan  trofoblast ekstravilli  ini  diperkirakan  dimediasi  oleh regulasi α-T-catenin yaitu protein yang terlibat dalam  adhesi  sel-sel  yang  diregulasi  pada kejadian preeklamsia. 17,18
Pada penelitian ini didapatkan frekuensi polimorfisme TT (normal) pada varian T-344C memiliki    persentase  tertinggi  yakni  sebesar 64%  pada  kelompok  kontrol  dan  72%  pada kelompok  kasus.  Kemudian  didapatkan frekuensi  TC  sebesar  28%  pada  kelompok kontrol  maupun  kelompok  kasus  dan  CC sebesar  8%  hanya  pada  kelompok  kontrol. Adanya  temuan  genotip  CC  pada  kelompok normal sejalan dengan hasil penelitian Kim et al .  (2009)  bahwa  mutasi  homozigot  (HH) varian  Y153H  gen STOX1 pada  kontrol penelitian  tidak  berhubungan  dengan preeklampsia pada populasi Korea, meskipun menurut  Mrozikiewicz et  al. (2008) seharusnya  mutasi  pada  gen STOX1 terlibat dalam kerentanan terhadap preeklampsia. 19,20 Identifikasi  gen  kerentanan  untuk preeklampsia  telah  terbukti  lebih  sulit dilakukan. Hal ini disebabkan bahwa genetika preeklampsia  memiliki  karakterisasi  penyakit yang  kompleks,  yang  melibatkan  beberapa efek  genetik  (efek  interaktif  lebih  dari  satu gen). 21 Menurut  Marie et  al. (2011),  selain gen STOX1 ada  beberapa  gen  lain    seperti gen ACVR2A atau CYP11B2 ,  yang m e m b e r i k a n   k e r e n t a n a n   u n t u k preeklampsia. 22 Penelitian  Procopciuc et  al . (2010)  menunjukkan  bahwa  polimorfisme genotip  T-344C  gen  CYP11B2  berkontribusi pada risiko preeklamsia sebesar 1,29 (95%CI [0,59-2.79], p = 0,53). 23
Oleh  karena  itu,    polimorfisme  genotip  (CC)
gen STOX1 saja  tidak  dapat  dijadikan sebagai  satu-satunya  acuan  terhadap kerentanan terhadap preeklampsia.
Meskipun  penelitian  ini  menemukan adanya  polimorfisme  varian  T-344C  gen STOX1, namun  hal  ini  tidak  berhubungan secara  bermakna  dengan  preeklamsia  (p  = 0,668  >  0,05).  Hasil  ini  sejalan  dengan penelitian George et al. (2013) pada populasi Finlandia dan Kim et al. (2009) pada populasi Korea  bahwa  tidak  ditemukannya  korelasi antara  polimorfisme  gen  STOX1  dengan preeklampsia  karena    selain  faktor  gen  juga dipengaruhi  oleh  faktor  plasenta  dan  ibu beserta kombinasinya. 18,19 Hal ini berdampak pada  keparahan  penyakit,  waktu  onset,  dan terjadinya  komplikasi  tambahan  misalnya Intra Uterine Growth Restriction (IUGR) pada penderita  preeklampsia.  Oleh  karena  itu, diperlukan  idenifikasi  gen  lain  pada  populasi yang  berbeda,  agar  didapatkan  pemahaman yang  lengkap  tentang  preeklamsia.  Hal  ini karena  gen STOX1 merupakan  faktor transkripsi  yang  mengatur    banyak  gen sehingga  perlu  identifikasi  genomik  lebih lanjut. Dengan mengidentifikasi gen lain yang terlibat  dengan  preeklamsia,  maka keberhasilan studi fungsional pada gen yang terkait  dengan  preeklamsia  akan  sesuai dengan  yang  diharapkan,  tanpa  harus  fokus hanya pada satu gen. 22

## Kesimpulan
Kesimpulan penelitian ini adalah bahwa polimorfisme  varian  T-344C  gen STOX1 dapat digunakan  sebagai kandidat biomarker molekuler  pada  pasien  preeklampsia  melaui perbedaan  profil  genotip    (TT,TC,  dan  CC) dengan  pemotongan  gen STOX1 menggunakan enzim restriksi Hae III. Namun,
tidak  spesifik  untuk  menjelaskan  hubungan antara  polimorfisme  gen  STOX1  dengan kejadian preeklampsia.

## Saran
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut untuk  menentukan  sensitifitas  varian  T-344C gen STOX1 pada  sampel  penelitian  yang lebih besar untuk mendapat gambaran peran STOX1  pada  preeklamsia  secara  yang  lebih akurat.

## Daftar Pustaka
1. Hogberg  U.  Genome-Wide  Aociation Studuies  for  Common  Disease  and Complex  Traits. Nat  Rev  Genet. 2005; 6:95-108.
2. Roberts JM and Hubel CA The Two Stage Model  of  Preeclampsia:  Variations  on the Theme.  Placenta.  2009;  30  Suppl  A:S32- 37.
3. Cnatingius  S,  Reilly  M,  Pawitan  Y  and Lichtenstein P. Maternal and Fetal Genetic Factors  Account  for  Most  of  Familial Aggregation  of  Preeclampsia  :  a Population-Based  Swedish  Cohort  Study. Am J Med Genet . 2004; A 130A:365-371.
4. Duley  L.  Pre-Eclampsia  and  the Hypertensive  Disorder  of  Pregnancy.  . Br Med Bull. 2003;  67:25, 115-121.
5. Lachmeijer AM, Arngrimsson R, Bastiaans EJ, Frigge ML et al. A Genome-Wide Scan for Preeclampsia in the Netherlands. Eur J Hum Gene . 2001; 9:758-764.
6. Laivuori  H,  Lahermo  P,  Ollikainen  V, Widen  E  et  al.  Suspectibility  Loci  for Preeclampsia  on  Chromosome  2p25  and 9p13  in  Finnish  Families .  Am  J  Hum Genet. 2003; 72:168-177.
7. van Dijk, Mulders J, Poutsma A, Konst AA et  al.  Maternal  Segregation  of  the  Dutch Preeclampsia Locus at 10q22 with a New Member  of  the  Winged  Helix  Gene Familiy. Nat Genet . 2005; 37:514-519.
8.  Oudejans CB, Mulders J, Lchmeijer Am, van  Djik  M  et  al.  The  Parent-of-Origin Effect  of  10q22  in  Pre-Eclamptic Females  Coincides  with  Two  Regions Clustered  for  Genes  with  Down- Regulated  Expression  in  Androgenetic Placentas. Mol  Hum  Reprod. 2004; 10:589-598.
9.  Iglesias-Platas  I,  Monk  D,  Jebbink  J, Buimer M et al. STOX1 is Not Imprinted and  is  not  Likely  to  be  Involved  in Preeclampsia. Nat Genet. 2007; 39:279- 280 10.  Rigourd  V,  Chauvet  C,  Chelbi  ST, Rebourcet  R  et  al.  STOX1 Overexpression  in  Choriocarcinoma Cells  Mimics  Transcriptional  Alterations Obeserved  in  Preeclamptic  Placentas.
PloS One. 2008; 3:e3905.
11.  Founds  SA,  Conley  YP,  Lyons-Weiler JF,  Jeyabalan  A  et  al.  Altered  Global Gene  Expression  in  First  Trimester Placentas  of  Women  Destined  to Develop  Preeclampsia. Placenta .  2009;
30:15-25.
12.  Devendran  A,  Nampoothiri  S,  Shewade DG,  Chatterjee  S,  Jayaraman  B, Chandrasekharan  A.  Allele,  Genotype and  Haplotype  Structures  of  Functional Polymorphic  Variants  in  Endothelial Nitric  Oxide  Synthase  (eNOS), Angiotensinogen (ACE) and Aldosterone Synthase  (CYP11B2)  Genes  in  Healthy Pregnant  Women  of  Indian  Ethnicity. J Reprod Infertil . 2015;16(4):180-192.
13.  Tu  Y,  Cui  G,  Xu  Y,  Bao  X,  Wang  X, Wang  DW.  Genetic  Polymorphism  of CYP11B2  Gene  and  Stroke  in  the  Han Chinese Population and a Metaanalysis.
Pharmacogenet  Genomics. 2011;  21 (3):115-20. 14.  Hofmeyr  GJ,  Duley  L  and  Atallah  A Dietary  Calcium  Supplementation  for Prevention of Preeclampsia and Related
Probelms:  a  Systematic  Review  and Commentary. Bjog . 2007;  114: 933-943. 15.  Steegers EAP, von Dadelszen, Duvekot JJ, and Pijnenborg R. Preeclampsia. The Lancet . 2010; 376(9741):631-644.
16.  Duckitt K and Harrington D. Risk Factors for  Preeclampsia  at  Anternatal  Booking: Systematic  Review  of  Controlled Studies. BMJ . 2005; 330:565.
17.  Kivinen  K,  Peterson  H,  Hiltunen  L,
Laivuori H, Heino S, Tiala I, Knuutila S, Rasi V, Kere J. Evaluation of STOX1 as a  Preeclampsia  Candidate  Gene  in  a Population-Wide  Sample. Eur  J  Hum Genet . 2007; 15(4):494-7.
18.  George  EM  and  Bidwell  GL. STOX1:  a New Player in Preeclampsia? . Greenville Avenue,  Dallas:  American  Heart Association, Inc. 2013. 19.  Kim SY, Park SY, Lim JH, Yang JH, Kim MY, Park HY, Lee KS, Kim YJ, Ryu HM. The Y153H Variant of the STOX1 Gene in Korean Patients with Preeclampsia. J Genet Med . 2009; 6:56-61. 20.  Agnieszka  Seremak-Mrozikiewicz,
Genetics  of  Preeclampsia  –  Current
Concepts. Archives  of  Perinatal Medicine . 2008; 14(4):9-11.
21.  Roten  LT.  Genetic  Predisposition  for Development of Preeclampsia Candidate Gene  Studies  in  the  HUNT  (Nord- Trøndelag  Health  Study)  Population. Thesis. Department of Cancer Research and  Molecular  Medicine:  Norwegian University  of  Science  and  Technology. 2009. P.157.
22.  van  Dijk  M,  Cees  B,  and  Oude  JM, STOX1:  Key  Player  in  Trophoblast Dysfunction  Underlying  Early  Onset Preeclampsia  with  Growth  Retardation. Journal  of  Pregnancy .  2011;    2011: Article  ID  521826.  7  pages. doi:10.1155/2011/521826.
23.  Procopciuc L, Caracostea G, Puscas M,
Iordache G, Olteanu I, Stamatian F. The T344c-CYP11B2  Polymorphism  as  A Risk  Factor  for  Preeclampsia  in Romanian Pregnant Women. Association  With  M235t  (AGT)  And  I/D (ACE)  Polymorphisms. Journal  of Hypertension . 2010; 28:e-Supplement A.