## 244

## ANALISIS PRODUK DARAH: KONTAMINASI BAKTERI PADA THROMBOCYTE CONCENTRATE

## ANALYSIS OF BLOOD PRODUCT: BACTERIAL CONTAMINATION IN THROMBOCYTE CONCENTRATE
Serafica Btari Christiyani Kusumaningrum 1 *, Wiwit Sepvianti 2
* 1 Stikes Guna Bangsa Yogyakarta, Jalan Ringroad Utara Condong Catur Sleman Yogyakarta, email: seraficabtarick@gmail.com, Indonesia 2 Stikes Guna Bangsa Yogyakarta, Jalan Ringroad Utara Condong Catur Sleman Yogyakarta, email: wiwitsepvianti@gmail.com Indonesia

## ABSTRACT
Background: Bacterial  contamination  in  thrombocyte  concentrate  (TC)  blood  product becomes a  serious problem since it can cause clinical risks from mild symptom to death. TC storage condition at 22-25 o C with agitation  is  good condition for  bacterial  growth.  Source  of  bacterial  contamination  can  come  from  donor bacteremia,  not  aseptically from  taking  and  processing  blood  product.  In  a  previous  study,  showed  there were positive gram bacteria as bacterial contamination in TC.
Objective: This objective aims to determine bacterial contaminants in TC blood products. Methods: Total of 3 TC bag samples were collected from UDD PMI Kabupaten Sleman. Each sample was inoculated to nutrient agar media and it incubated for 48 jam at 37 o C. Observation of bacterial colony growth is carried out after incubation time is over.
Results: There was no bacterial growth in the media so that there was no bacterial contamination in TC. It showed  that  the  procedures,  processing,  and  storage  of  TC  products  in  PMI  Kabupaten  Sleman  were aseptic. Besides that, TC donors also did not suffer from bacteremia so there was bacterial contamination in TC.
Conclusion: In  this  study,  bacterial  contamination  in  blood  product  TC  was  not  found  since  there  was  no bacterial growth in media.
Keywords: Bacterial contamination, blood products, blood bank, thrombocyte concentrate.

## PENDAHULUAN
Transfusi  darah  merupakan  upaya perawatan  kesehatan  dengan  memindahkan darah  donor  kepada  pasien  yang  dilakukan pada beberapa kondisi seperti anemia kronik, kelainan  darah  dan  pendarahan massif. 1
Transfusi  darah  dalam  upaya  perawatan kesehatan tidak  terlepas  dari risiko seperti reaksi  hemolitik,  akumulasi  cairan,  infeksi virus, kontaminasi bakteri, dan reaksi alergi. 2
Berdasarkan  penelitian  sebelumnya 3 risiko transfusi  akibat  kontaminasi  bakteri  pada produk  darah  masih  menjadi  permasalahan yang serius di Indonesia karena keterbatasan
alat  untuk  mendeteksi  bakteri  kontaminan hampir  di seluruh  unit  donor  darah  (UDD). Sumber kontaminasi bakteri dapat disebabkan dari bakteremia pendonor, kontaminasi dari  permukaan  kulit selama prosedur pengambilan dan pengolahan produk  darah. 4 Produk  darah thrombocyte concentrate (TC)  dapat  menjadi  sumber kontaminasi  bakteri  karena  penyimpanan  TC berada  pada  suhu  20-24 o C,  penyimpanan pada kantong gas-permeabel dengan proses agitasi  dapat  menjadi  tempat  pertumbuhan yang  baik  bagi  bakteri. 4,5 Selain  itu,  TC  juga disimpan  dengan  penambahan  pengawet
seperti  laktat  dan  carnitin yang  berfungsi untuk  mempertahankan  viabilitas  trombosit, namun  juga  dapat  mendukung  pertumbuhan bakteri. 6,7
Penelitian  yang  dilakukan  di  China menyatakan  bahwa  terdapat  44  kantong  TC dari 28.711 kantong TC mengandung bakteri kontaminan  yang  berpotensi  menimbulkan reaksi  transfusi. 8 Kasus  kontaminasi  bakteri pada  platelet  yang  terjadi  di  California  dan Utah  menyebabkan  kematian  pasien  setelah transfusi  trombosit  akibat  sepsis  bakteri patogen  pada  pasien. 9 Oleh  karena  itu, kontaminasi  bakteri  pada  TC  memiliki risiko transfusi  sepsis  dan  kematian  lebih  besar daripada  produk  darah  lainnya. 10 Hal  ini diperparah karena pasien yang menerima TC sebagian besar  mengalami  immunosupresi sehingga rentan terhadap infeksi mikroorganisme. 11
Pada  penelitian  sebelumnya  berhasil mengidentifikasi  bakteri  dari  produk  darah yang  menunjukkan  keberadaan  bakteri  gram positif  yaitu Staphylococcus  hominis serta bakteri  gram  negatif  yaitu Fusobacterium varium, Prophyromonas assaccharoltica,
Sphingomonas
paucimobilis, dan Propionibacterium acnes . 3 Jenis bakteri yang terdeteksi  di  TC  sebagian  besar  adalah bakteri gram  positif yang  berasal  dari bakteri eksogen  yang  berasal  dari  kulit  pendonor, tangan  petugas  pengambil  darah, ataupun dari  peralatan  medis  akibat  dari  aplikasi teknik yang kurang aseptis saat pengambilan darah dari pendonor, dan bakteri gram negatif
yang  berasal  dari  bakteremia  donor  yang memiliki risiko transfusi sepsis dan kematian. 8,12
Berdasarkan hal tersebut, maka penting  dilakukan  penelitian  yang  dapat mengetahui  ada  atau  tidaknya  bakteri kontaminan  pada  produk  darah thrombocyte concentrate. Jenis bakteri yang teridentifikasi dapat  digunakan  sebagai informasi  sifat patogenitas  dan  bermanfaat  sebagai  upaya pengamanan  produk  darah thrombocyte concentrate di Unit Donor Darah.

## BAHAN DAN CARA PENELITIAN
Penelitian ini  dilakukan  di Unit Transfusi  Darah  Palang  Merah  Indonesia Kabupaten Sleman dan Laboratorium Mikrobiologi  Pusat  Studi  Pangan  dan  Gizi Universitas  Gadjah  Mada  Yogyakarta  pada bulan Juli sampai September 2018.
Sampel penelitian sebanyak 3 kantong sampel TC digunakan pada penelitian  ini  berdasarkan  1%  produksi  TC keseluruhan di UDD PMI Kabupaten Sleman. 13 Sampel TC tersebut telah disimpan pada agitator dengan suhu 22-25 o C dengan  usia  simpan  3-5  hari  yang  memiliki risiko proliferasi bakteri ketika terjadi kontaminasi. 3 Sampel  TC  yang  digunakan dipastikan homogen dan agregat di dalamnya tidak saling menempel.

## Inokulasi sampel pada media agar
Media  pertumbuhan  bakteri  yang digunakan adalah nutrient agar (NA). Sampel

## 246
TC  diinokulasi  pada  media  NA  steril  secara aseptis dengan metode streak plate di cawan petri . Kultur  TC  pada  media  NA diinkubasi pada  suhu  37 o C  selama  48  jam  untuk kemudian  diamati  pertumbuhan  bakteri. Adanya bakteri kontaminan pada TC diketahui dengan adanya pertumbuhan koloni bakteri pada kultur. 14

## Analisis Data
Pengamatan  dilakukan  pada  kultur TC di media  NA setelah  inkubasi  selama  48 jam.  Adanya  pertumbuhan  koloni (cfu/ml) pada  plate  menunjukkan  adanya  reaksi positif. 15

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian analisis produk darah thrombocyte concentrate yang  dilakukan  ini  bertujuan untuk mengetahui ada atau tidaknya kontaminasi  bakteri  pada  produk  darah  TC yang  pada  beberapa  penelitian  sebelumnya didapatkan  bakteri  kontaminan.  Apabila produk  darah  TC  mengandung  bakteri kontaminan  maka  akan  berisiko terhadap pasien  atau  resipien  karena  terdapat  potensi risiko transfusi  yaitu bacterial  sepsis yang memiliki  gejala  seperti muntah,  syok  septik, tachycardia,  hipotensi, rigor, dan  gejala potensial  lain. 9 Berdasarkan  penelitian  yang dilakukan, tiga kantong sampel produk darah TC  diperoleh  dari  UDD  PMI  Kabupaten Sleman  telah  disimpan  sesuai  dengan standar  penyimpanan  TC  yaitu  pada  suhu 22-25 o C  di atas  agitator dengan  masa simpan  sampai  dengan  5  hari pada  kantong
TC  yang  berisi  bahan  pengawet  untuk mempertahankan viabilitas trombosit. 13 (Gambar  1). Produk  darah  TC  yang  dipilih untuk  digunakan  sebagai  sampel  telah disimpan selama  3-5  hari pada  suhu  ruang (22-25 o C) supaya apabila terdapat kontaminasi  bakteri  maka  bakteri  yang tumbuh  akan  semakin  banyak (3) . Hal  ini memungkinkan terjadinya pertumbuhan koloni  bakteri  pada  media  setelah  dilakukan inokulasi.
Berdasarkan  hasil penelitian  yang dilakukan  diperoleh  bahwa  setelah  dilakukan inokulasi  dan  inkubasi  pada kultur  sampel produk  darah  TC  pada  media  NA  tidak menunjukkan  adanya  pertumbuhan  bakteri dengan  tidak  adanya  koloni  yang  tumbuh  di atas  media  NA  (Gambar  2). Akibat  tidak terdapat  pertumbuhan  bakteri  pada  media maka  tidak  dapat  dilakukan  karakterisasi, identifikasi  bakteri,  dan  pengamatan  sifat patogenisitas bakteri pada penelitian ini.
Gambar 2. Sampel thrombocyte concentrate
Gambar 1. Kultur sampel TC pada media NA setelah inkubasi
247
Hal  ini  menunjukkan bahwa  pada
sampel produk darah thrombocyte concentrate yang digunakan  tidak  didapati adanya  kontaminasi  bakteri. Selain  itu  juga menunjukkan  bahwa  proses  pemisahan  TC yang  dilakukan  pada  UDD  PMI  Kabupaten Sleman  dilaksanakan  secara  aseptis  dan peralatan yang digunakan dipastikan steril.
Pada penelitian sebelumnya didapatkan adanya kontaminasi bakteri Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus aureus,  Staphylococcus  haemolyticus,  dan Staphyloscoccus  epidermidis pada  TC. 3,4,9,12
Sumber  kontaminasi  tersebut  berasal  dari permukaan  kulit  saat  pengambilan  darah yang  kurang  aseptis  karena  keempat  jenis bakteri  yang ditemukan  merupakan  flora kulit. 4 Pada  penelitian  yang  dilakukan  tidak didapatkan  bakteri  kontaminan  TC  yang tumbuh  pada  media  padat, sehingga  dapat diketahui bahwa kondisi mulai dari pengambilan darah, pengolahan TC, penyimpanan  TC  pada UDD PMI  Kabupaten Sleman  dilakukan  secara  aseptis  sehingga tidak terdapat bakteri kontaminan yang dapat menimbulkan risiko transfusi pada pasien.
Kontaminasi bakteri juga dapat berasal  dari  bakteremia  donor  seperti  pada penelitian  sebelumnya  yang  menemukan Sphingomonas paucimobilis dan Propionibacterium  acnes pada  darah  donor TC. 3 Adanya  bakteremia  pada  calon  donor belum dapat dideteksi pada saat pemeriksaan atau sebelum dilakukan transfusi  karena  pada  saat  ini  regulasi
pemerintah  hanya  melakukan  uji  saring infeksi menular yang hanya mencakup infeksi penyakit  Hepatitis C  (HCV),  Hepatitis  B (HBV), Human  Imunodeficiency  Virus (HIV), dan Sypilis. 13 Pada  penelitian  ini  tidak didapati  adanya  kontaminasi  bakteri  pada produk  TC  yang  juga  menunjukkan  bahwa pendonor  TC  tidak  memiliki  bakteremia. Namun,  skrining  dan  deteksi  bakteri  pada pendonor  dapat  menurunkan risiko transfusi akibat  kontaminasi  bakteri  pada  produk  TC dan  sebagai  upaya  pengamanan  produk darah. Beberapa pemeriksaan untuk mendeteksi  bakteri  pada  unit  produk  darah sebelum transfusi yaitu kultur bakteri langsung dengan prinsip pengukuran produksi  CO 2 dan  konsumsi  O 2 ,  amplifikasi DNA bakteri,  deteksi  peptidoglikan  bakteri, deteksi  lipopolisakarida  dan  asam  teikoat, serta  deteksi  viabilitas  sel  berdasarkan aktivitas esterase. 16

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  peneltian  yang telah  dilakukan  maka  dapat  dirumuskan kesimpulan bahwa tidak terdapat pertumbuhan bakteri kontaminan yang berasal  dari  produk  darah thrombocyte concentrate sehingga  tidak  dapat  dilakukan identifikasi  bakteri  dan  sifat  patogenisitas bakteri.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  produk darah TC aman untuk diberikan kepada calon penerima  donor  karena  tidak  terdapat risiko transfusi  akibat  kontaminasi.  Hal  tersebut dapat  diperoleh  dari  pengambilan  darah,
248
pengolahan  dan  penyimpanan  produk  darah TC  dilakukan  secara  aseptis  dan  sesuai prosedur. Namun, untuk meningkatkan upaya pengamanan  darah,  unit donor darah  dapat melaksanakan  skrining  dan  deteksi  bakteri pada  pendonor  sebagai  usaha  menurunkan risiko transfusi.

## TERIMA KASIH
Ucapan  terima kasih  disampaikan kepada  DIPA  Kopertis  Wilayah  V  yang  telah mendukung dengan Dana Bantuan Penelitian dengan nomor kontrak
017/LPPM-
GB/PEN/VI/2018.

## KEPUSTAKAAN
1. Booth  C,  Allard  S.  Blood  transfusion. Medicine  (Baltimore)  [Internet].  Elsevier; 2017 Apr 1;45(4):244–50. Available from: https://doi.org/10.1016/j.mpmed.2017.01. 014
2. Delaney M, Wendel S, Bercovitz RS, Cid
J,  Cohn  C,  Dunbar  NM,  et  al.
Transfusion reactions: prevention, diagnosis, and treatment. Lancet (London, England). England; 2016 Dec;388(10061):2825–36.
3. Sudiana  IK.  Analisis  Produk  Darah Thrombocyte  Concentrate  di  Palang Merah  Indonesia  Surabaya  (  Analysis  of Blood  Product  Trombocyte  Concentrate in Red Cross Blood Donor Unit Surabaya ). 2012;14(3).
4. Farzad  BB,  Farshad  B,  Zahra  B,  Nahid A, Mahsa KB. Bacterial contamination of platelet products in the Blood
Transfusion Center of Isfahan, Iran. GMS
Hyg Infect Control. 2016;11:Doc23. 5. Muller  TH,  Mohr  H,  Montag  T.  Methods for the detection of bacterial contamination  in  blood  products.  Clin Chem Lab Med. Germany; 2008;46(7):933–46.
6. Ketter  P,  Arulanandam  B,  Cap  AP. Platelets  Feeding  Bacteria  with  Lactate
during  Room  Temperature  Storage:
Mitigated By Refrigeration. Blood [Internet]. 2017 Dec 7;130(Suppl 1):2407 LP-2407. Available from: http://www.bloodjournal.org/content/130/ Suppl_1/2407.abstract
7. Velashjerdi  Z,  Deyhim  MR,  Razjou  F, Eydi  A.  Effect  of  L-carnitine  on  platelet bacterial  contamination  and  platelet metabolism  during  5  days  of  storage  of platelet concentrates. Blood-Journal 2019  Feb  1;15(1):1–11.  Available  from: http://bloodjournal.ir/article-1-1149- en.html
8. He Z, Che J, Wang Q, Chen S, Chen Q, Yu  L,  et  al.  Bacterial  contamination  of platelet  products  in  Dongguan  Blood Center  ,  Guangdong  Province  of  China. 2018;(4):1–5.
9. Horth  RZ,  Jones  JM,  Kim  JJ,  Lopansri BK,  Ilstrup  SJ,  Fridey  J,  et  al.  Fatal Sepsis Associated with Bacterial Contamination  of  Platelets — Utah  and California , August 2017.
2018;67(25):718–22.
10. Levy JH, Neal MD, Herman JH. Bacterial contamination of platelets for transfusion: strategies  for  prevention.  Crit  Care [Internet]. 2018;22(1):271. Available from: https://doi.org/10.1186/s13054- 018-2212-9
11. Dickson  M,  Dinesh  D.  THE  NEW ZEALAND. 2013;126(1374):12–21.
12. Astuti  D,  Maharani  EA.  Identifikasi bakteri  yang  mengontaminasi  konsentrat trombosit. :61–7.
13. kemenkes-nomor-91-tahun-2015-tahun- 2016 @ peraturan.go.id [Internet]. Available from: http://peraturan.go.id/permen/kemenkes- nomor-91-tahun-2015-tahun-2016.html 14. Bolarinwa  RA,  Aboderin  OA,  Odetoyin
BW, Adegunloye AB. Bacterial contamination  of  blood  and  blood components  in  a  tertiary  hospital  setting in Nigeria. 1996;1–6.
15. Hassall O, Maitland K, Pole L, Mwarumba S, Denje D, Wambua K. T r a n  s  f  u  s  i  o  n  c  o  m  p  l  i  c  at  i  o  n  s. 2009;49(December):2594–8.
16. Störmer  M,  Vollmer  T.  Diagnostic methods  for  platelet  bacteria  screening: current status and developments.
249 Transfus Med Hemother [Internet]. 2013/12/30. S. Karger Verlag für Medizin und  Naturwissenschaften  GmbH;  2014 Feb;41(1):19–27. Available
from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24 659944