Penulis Pramita Yuli Pratiwi 1* , Ana Mardiyaningsih 2 , Nur Ismiyati 3 , Hery Setiyawan 3
Afiliasi 1 Laboratorium  Fitokimia  Program  Studi  D3  Farmasi  Jurusan  Farmasi,  Poltekkes  Kementerian Kesehatan Surakarta, Jl. Kesatrian No.2, Danguran, Kec. Klaten Selatan, Kabupaten Klaten, Jawa Tengah 57425, Indonesia
2 Laboratorium Fitokimia Program Studi D3 Farmasi, Politeknik Kesehatan Bhakti Setya Indonesia, Jl.  Janti  Jl.  Gedongkuning  No.336,  Modalan,  Banguntapan,  Kec. Banguntapan,  Bantul,  Daerah Istimewa Yogyakarta 55198, Indonesia
3 Laboratorium  Mikrobiologi  Program  Studi  D3  Farmasi, Politeknik  Kesehatan  Bhakti  Setya Indonesia, Jl. Janti Jl. Gedongkuning No.336, Modalan, Banguntapan, Kec. Banguntapan, Bantul, Daerah Istimewa Yogyakarta 55198, Indonesia
Kata Kunci  daun binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis )  fraksi
 antibakteri
 Escherichia coli
 skrining fitokimia
Keywords  binahong leaf (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis)
 fraction
 antibacterial
 Escherichia coli
 phytochemical screening
Diterima 27 Oktober 2020 Direvisi 1 Juni 2021 Disetujui 25 Juni 2021

## *Penulis Koresponding
Pramita Yuli Pratiwi email : pramita.uli@gmail.com

## ABSTRAK
Daun  binahong  ( Anredera  cordifolia (Ten.)  Steenis  diketahui  mengandung  senyawa  yang  memiliki aktivitas  antibakteri.  Golongan  senyawa  yang  terdapat  dalam  daun  binahong  antara  lain  flavonoid, alkaloid,  saponin,  dan  tanin.  Bakteri Escherichia  coli merupakan  bakteri  gram  negatif  yang  sering menyebabkan  terjadinya  infeksi  seperti  diare.    Tujuan  penelitian  ini  yaitu  untuk  mengetahui  ekstrak etanolik,  fraksi n -heksana,  dan  fraksi  kloroformdaun  binahong  terhadap  pertumbuhan  bakteri Escherichia  coli dan  penapisan  fitokimianya.  Pada  penelitian  ini  ekstrak  etanolik,  fraksi  n-heksana,  dan fraksi  kloroform  daun  binahong  disiapkan  dengan  konsentrasi  12,5,  25,  dan  50%  untuk  pengujian terhadap  bakteri Escherichia  coli .  Kontrol  positif  yang  digunakan  yaitu  kloramfenikol  dan  kontrol negatifnya  DMSO.  Metode  untuk  uji  antibakterinya  yaitu disc  diffusion ,  ditandai  adanya  area  jernih disekitar paperdisc yang  menunjukkan  adanya  hambatan  terhadap  pertumbuhan  bakteri.  Penapisan senyawa  fitokimia  alkaloid,  flavonoid,  saponin,  dan  tanin  menggunakan  uji  tabung.  Hasil  penelitian menunjukkan  aktivitas  antibakteri  terhadap  pertumbuhan Escherichia  coli dengan  diameter  zona hambat pada konsentrasi 12,5, 25 dan 50% yaitu pada fraksi n -heksana berturut-turut sebesar 8,16; 9,73 dan 12,93 mm. Pada fraksi kloroform 7,67; 8,47 dan 9,87 mm. Dan pada ekstrak etanolik sebesar 7,33; 9,95  dan  13,32  mm.  Hasil  zona  hambat  terbesar  yaitu  pada  ekstrak  etanolik  daun  binahong  dengan konsentrasi 50%. Hasil skrining fitokimia dengan menggunakan uji tabung menunjukkan bahwa senyawa yang terkandung dalam ekstrak etanolik adalah senyawa flavonoid, alkaloid, saponin, dan tannin

## ABSTRACT
Binahong  leaves  (Anredera  cordifolia  (Ten.)  Steenis)  are  known  to  contain  antibacterial  activity compounds. The compounds contained in binahong leaves include flavonoids, alkaloids, saponins, and tannins. Escherichia coli is a gram-negative bacteria that often causes infections such as diarrhea. The purpose of this study was to determine the effect of ethanolic extract, n-hexane fraction, and chloroform fraction of binahong leaves on the growth of Escherichia coli bacteria and its phytochemical screening This research used ethanolic extract,  hexane  fraction  and  chloroform  fraction  of  binahong  leaves  against  Escherichia  coli  bacteria  with concentrations  of  12.5,  25  and  50%  The  positive  control  was  chloramphenicol  and  the  negative  control  was DMSO  The  method used disk  diffusion  technique,  marked  the  presence  of  clear areas around  the  paper disc that  showed  an  obstacle  to  bacterial  growth  phytochemical  screening  of  alkaloids,  flavonoids,  saponins  and tannins using a test tube. The result showed antibacterial activity against the growth of  Escherichia coli with the diameter of the inhibition zone at concentrations of 12.5, 25, and 50%, namely the hexane fraction of 8.16; 9.73 and 12.93 mm. At the chloroform fraction 7.67; 8.47 and 9.87 mm. and the ethanolic extract of 7.33; 9.95 and 13.32 mm. The result of the largest inhibition zone was the ethanolic extract of binahong leaves with a concentration of 50%. The results of phytochemical screening using a test tube showed that the compounds contained in the ethanolic extract were flavonoids, alkaloids, saponins, and tannins .
Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanolik, Fraksi n -Heksan, dan Fraksi Kloroform Daun Binahong ( Anredera cordifolia (Ten.) Steenis ) terhadap Bakteri Escherichia Coli serta Penapisan Fitokimianya
Antibacterial Activity of Ethanolic Extract, n-Hexane Fraction, and Chloroform Fraction of Binahong Leaves (Anredera Cordifolia) on Escherichia Coli and its Phytochemical Screening
Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanolik, Fraksi Heksan, Fraksi Kloroform Daun Binahong ( Anredera cordifolia (Ten.) Steenis ) terhadap Bakteri Escherichia Coli serta Skrining Fitokimia

## PENDAHULUAN
Bakteri  Escherichia  coli  merupakan  bakteri  yang sering  menyebabkan  penyakit  infeksi  pada  manusia Bakteri  ini  merupakan  flora  normal  manusia,  namun dapat  menyebabkan  infeksiserius  seperti hemolytic uremic  syndrome (HUS), hemorrhagic  colitis (HC), keracunan makanan, dan diare (Hemeg 2018). Penyakit diare merupakan Kejadian Luar Biasa (KLB) di Indonesia dan  risiko  yang  paling  parah  yaitu  kematian.  Tahun 2018,  perkiraan  cakupan  pelayanan  diare  di  sarana kesehatan  mencapai  62,93  %  dari  4.504.524  jumlah penderita,yang dilayani di sarana kesehatan (Kementrian  Kesehatan  RI  2018).  Faktor  penyebab diare  yang  paling  berperan  adalah  kebersihan lingkungan  (Utami  &  Luthfiana,  2016).  Diare  karena infeksi  bakteri  dapat  menyebabkan  dehidrasi  ringan hingga  sedang  dan  dapat  meningkatkan  resiko kematian (Jap & Widodo 2021). Antibiotik adalah salah satu  tatalaksana  diare  dan  penyakit  infeksi  yang disebabkan karena E. coli, sayangnya beberapa bakteri telah  resisten  terhadap  antibiotik  (Normaliska et  al. 2019).  Oleh  karena  itu,  diperlukan  solusi  lain  yaitu antibakteri  yang  berasal  dari  bahan  alam  yang  banyak terdapat  di  Indonesia,  mudah  didapatkan,  mudah tumbuh  dan  pemeliharaanya,  serta  hampir  tidak menimbulkan efek samping, misalnya; daun binahong.
Uji  aktivitas  antibakteri  daun  binahong  terhadap bakteri Shigella  flexneri menggunakan  ekstrak  etil asetat  menunjukkan  bahwa  kadar  hambat  minimum (KBM)  tertinggi  pada  konsentrasi  8%.  Dilanjutkan dengan  identifikasi  senyawa  dalam  ekstrak  etil  asetat menggunakan  uji  skrining  fitokimia  dan  identifikasi menggunakan  kromatografi  lapis  tipis  menunjukkan bahwa  ekstrak  tersebut  mengandung  senyawa polifenol  dan  saponin  (Wardhani  &  Sulistyani  2012). Berdasarkan  penelitian  Siregar  (2021)  menunjukkan ekstrak  etanol  daun  binahong  pada  konsentrasi  70%, 80%,  90%,  dan  100%  memberikan  efek  antibakteri terhadap  bakteri Enterococus  faecalis secara invitro. Ekstrak  etanol  96%  daun  binahong  juga  memiliki  daya antibakteri  terhadap  pertumbuhan Streptococcus muntans secara in vitro (Rimporok et  al. 2015). Penelitian secara in vitro menggunakan sampel ekstrak etanol  96%  daun  binahong  dan  metode  uji  yang digunakan  adalah disc  diffusion, menunjukkan  bahwa ekstrak  etanol  96%  daun  binahong  mempunyai aktivitas  antibakteri  terhadap Streptococcus  mutans ditandai  adanya  zona  hambat  sebesar  8,32  mm (Rimporok et al . 2015).
Pelarut
universal
(etanol)
dapat menarik/melarutkan  senyawa  polar,  semipolar,  dan
nonpolar  yang  terkandung  dalam  simplisia  daun binahong.  Fraksinasi  bertujuan  untuk  memisahkan senyawa yang terkandung dalam simplisia berdasarkan kepolaran  tertentu  (Sukmawati et  al .    2019).  Uji aktivitas  antibakteri  pada  daun  pandan  wangi menggunakan  fraksi  kloroform  menunjukkan  bahwa fraksi tersebut tidak dapat menghambat bakteri E. coli meskipun  ada  aktivitas  antibakteri  terhadap  uji tersebut.  Identifikasi  dengan  kromatografi  lapis  tipis menunjukkan  hasil  positif  terhadap  senyawa  alkaloid, polifenol,  dan  flavonoid  pada  fraksi  tersebut (Herdiyanti  2015).  Uji  aktivitas  antibakteri  dan identifikasi  senyawa  yang  terkandung  dalam  fraksi heksan  daun  kemangi  menunjukkan  bahwa  pada konsentrasi  30%,  50%  dan  70%  dapat  menghambat pertumbuhan bakteri E. coli, hasil skrining fitokimianya menunjukkan  fraksi  heksan  tersebut  mengandung senyawa  flavonoid,  dan  triterpenoid  (Setiawan  2015). Berdasarkan  riset  terdahulu,  maka  perlu  dilakukan penelitian  untuk  mengetahui  aktivitas  antibakteri terhadap  bakteri E.coli dengan  menggunakan  ekstrak dan  fraksi  dari  daun  binahong,  beserta  identifikasi senyawa  dari  hasil  uji  antibakteri  dari  sampel  yang paling berefek.

## METODE
Bahan  utama :  Daun  binahong  ( Anredera  cordifolia (Ten.) Steenis) yang diperoleh dari 4 titik yang berbeda di  Desa  Gedangan  Ngargosoka  Srumbung  Magelang dan  merupakan  daun  binahong  yang  matang  (tidak muda dan tidak tua), berwarna hijau dan segar, biakan bakteri  strain E.  coli ATCC  25922  dari  Balai Laboratorium  Kesehatan  Yogyakarta.  Bahan  untuk ekstraksi:  etanol  96  %  (Brataco),  heksana,  kloroform. Bahan  untuk  uji  antibakteri:  Media  Nutrien  Agar (Merck), Nutrient Broth (Merck), etanol 70 % (Brataco), NaCl  0,9  %  steril,  pembanding  Mc.Farland  10 8 cfu/ml, akuades , pelarut DMSO ( Dimethyl Sulfoxide ), Kloramfenikol  (Brataco).  Bahan  untuk  uji  skining fitokimia:  pereaksi  Dragendorff,  Mayer,  Bouchardat, Asam  klorida,  larutan  besi  (III)  Klorida  1%,  Timbal Asetat, akuades (Brataco).
Alat  ekstraksi :  Maserator,  blender,  neraca  analitik (Ohaus),  ayakan,  nampan,  cawan  porselen,  alat-alat gelas,  penangas  air,  kain  flanel,  dan  alumunium  foil. Alat-alat  untuk  uji  aktivitas  antibakteri:  autoklaf  ( All American ),  inkubator,  rak  tabung,  tabung  reaksi ( Pyrex ),  cawan  petri  (duran  group),  lampu  bunsen, mikropipet  (sorex),  ose,  kapas,  paper  disk,  jangka sorong  dan  pengaris,spidol, yellow  tip,  blue  tip ,  pinset
steril,alat-alat  gelas  steril,  bunsen.  Alat  untuk  skrining Fitokimia: tabung reaksi, rak  tabung, pipet tetes, gelas ukur, dan lampu bunsen.
Proses Penelitian a. Determinasi tanaman
Determinasi  bertujuan  untuk  memastikan  bahwa simplisia  yang  digunakan  adalah  benar  daun  binahong ( Anredera  cordifolia ).  Determinasi  dilakukan  di Laboratorium  Taksonomi,  Fakultas    Biologi  Universitas Gadjah Mada.
b. Pembuatan  ekstrak  etanolik,  fraksi  kloroform,  dan fraksi  heksan  daun  binahong  ( Anredera  cordifolia (Ten.) Steenis)
Proses  ektraksi  dilakukan  dengan  cara  maserasi menggunakan penyari etanol 70%. Ekstrak kental yang diperoleh  dimasukkan  ke  dalam  lemari  pendingin  dan dimasukkan  ke  dalam  eksikator  satu  hari  sebelum digunakan.    Proses  fraksinasi  kloroform  dan  heksan tersebut  dilakukan  dengan  cara  mengambil  ekstrak etanolik  kental  kemudian  difraksinasi  dengan  cara gerus tuang. Hasil dari fraksi diuapkan diatas waterbath sampai  diperoleh  ekstrak  kental  kembali.  Kemudian dihitung rendemen ekstrak dan fraksinya.
c. Pembuatan larutan stok
Ekstrak etanolik, fraksi heksan, dan fraksi kloroform masing – masing ditimbang sebanyak 1 gram dilarutkan dalam  1  mL  DMSO.  Penelitian  ini  menggunakan kloramfenikol sebagai kontrol positif. Kadar kloramfenikol yang sensitif terhadap bakteri uji adalah 30  µg.  Pembuatannya  dengan  cara  menimbang 30  mg kloramfenikol kemudian dilarutkan dalam 10 mL DMSO kemudian  diambil  10  µL  larutan  yang  mengandung  30 µg kloramfenikol.
d. Uji aktivitas antibakteri
Pembuatan  suspensi  bakteri  (dilakukan  dengan teknis aseptis). Pembuatan media NA yaitu dengan cara menimbang  sebanyak  2  g  dan  dimasukkan  ke  dalam erlenmeyer,  setelah  itu  ditambahkan  akuades  100  mL dan  dididihkan  diatas  kompor  listrik  hingga  jernih. Sterilisasikan di autoklaf dengan suhu 121°C selama 15 menit. Setelah disterilkan, tunggu hingga suhu dibawah 40°C.  Kemudian  masukkan  sebanyak  1  ml  (1000  µl) suspensi  bakteri  untuk  100  ml  media  NA  kemudian dihomogenkan.  Campuran  media  dan  suspensi  bakteri
dituang pada petri steril masing-masing sebanyak 15 ml kemudian tunggu sampai menggeras.
Uji  aktivitas  antibakteri  yang  dilakukan  adalah dengan metode disc diffusion (Utomo et al. 2018). Petri dibagi  menjadi  lima  bagian  yaitu  kontrol  positif (menggunakan kloramfenikol), kontrol negatif (DMSO), sampel dengan konsentrasi 12.5; 25; dan 50%. Diambil 10  µl  dari  masing-masing  konsentrasi,  serapkan kedalam  disk  steril  kosong  dengan  diameter  6  mm. Pada  petri  lainnya  digunakan  untuk  menguji  kontrol positif  dan  kontrol  negatif.  Disk  yang  sudah  berisi ekstrak  diletakkan  diatas  media  yang  telah  ditanami bakteri. Masing-masing sampel di replikasi tiga kali dan diinkubasi  24  jam  dengan  suhu  37°C.  Setelah  24  jam amati dan ukur zona hambat yang terbentuk.Terbentuknya  zona  hambat  berupa  daerah bening  di  sekitar paperdisc menunjukkan  adanya aktivitas antibakteri (Radji 2010).
e. Uji Skrining Fitokimia Uji  kandungan  senyawa  dilakukan  dengan  metode uji tabung, menggunakan pereaksi-pereaksi yang sesuai dengan  golongan  senyawa  yang  akan  diuji  yaitu alkaloid, flavonoid, saponin, dan tanin. Alkaloid dengan pereaksi  Dragendroff  positif  jika  timbul  warna  kuning, jingga  hingga  merah,  alkaloid  dengan  pereaksi Bouchardat  positif  jika  timbul  endapan  coklat  sampai kehitaman  (Izzah et  al. 2019).  Flavonoid  direaksikan dengan  timbal  asetat  positif  jika  timbulnya  flok – flok berwarna  putih  (Kumoro  2015).  Saponin  dengan  uji busa/buih  dikatakan  positif  apabila  buih  tidak  hilang selama  sepuluh  menit  dengan  ketinggian  1-3  cm (Kumoro  2015).  Uji  tanin  dengan  FeCl 3 1%  (b/v)  hasil positif apabila timbul warna hitam kehijauan atau  biru gelap (Kumoro 2015).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil uji determinasi menunjukkan bahwa  tanaman yang  digunakan  sebagai  sampel  uji  adalah  daun binahong  ( Anredera  cordifolia (Ten.)  Steenis).  Daun binahong  segar  dikeringkan,  diserbuk  lalu  diayak dengan  ayakan  mesh  20/40.  Serbuk  dimaserasi menggunakan etanol 70% dan dikentalkan, didapatkan rendemen sebesar 24.95 %. Rendemen fraksi klorofrom terhadap  ekstrak  adalah  10.4%  dan  fraksi  heksan sebesar 53.8%.
Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanolik, Fraksi Heksan, Fraksi Kloroform Daun Binahong ( Anredera cordifolia (Ten.) Steenis ) terhadap Bakteri Escherichia Coli serta Skrining Fitokimia
Rendemen  ekstrak  merupakan  perbandingan  berat akhir  yaitu  ekstrak  kental  dengan  berat  awalnya  yaitu simplisia serbuk yang digunakan dikalikan 100% (Sani et al  2014).  Sedangkan  rendemen  fraksi  dalam  hal  ini adalah  perbandingan  berat  akhir  yaitu  fraksi  kental dengan  berat  ekstrak  yang  digunakan  dikalikan  100%. Nilai  rendemen  berkaitan  dengan  kandungan  bioaktif yang  terjandung  dalam  suatu  tanaman  atau  sampel. Berdasarkan  penelitian  Ningsih  (2020)  hasil  rendemen ekstrak  etanol  daun  binahong  adalah  26,20%, sedangkan  pada  hasil  penelitian  ini  adalah  24,95%. Perbedaan  tersebut  dapat  dikarenakan  adanya perbedaan lokasi pengambilan sampel yang memungkinkan adanya perbedaan kandungan bioaktifnya.  Selain  itu  juga  adanya  perbedaan  cairan penyari  yaitu  etanol  96%  pada  penelitian  Ningsih (2020),  sedangkan  pada  penelitian  ini  menggunakan etanol 70%.

## Uji Aktivitas Antibakteri
Uji  aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri E.coli ditunjukkan  dengan  adanya  zona  hambat  berupa daerah  bening  yang  terbentuk  pada  uji  mikrobiologi menggunakan  media  Agar  dengan  metode disc diffusion dengan  paper  disk  Hasil  uji  aktivitas antibakteri    terhadap  pertumbuhan Eschericia  coli dapat  dilihat  pada Tabel  1 .  Hasil  penelitian menunjukkan bahwa kontrol negatif tidak menunjukkan hambatan pada media Agar. Hal tersebut berarti  adanya  hambatan  pada  sampel  dan  kontrol positif  bukan  berasal  dari  pelarutnya  tetapi  murni adanya  aktivitas  pada  sampel  dan  kontrol  positif. Kontrol  positif menunjukkan  adanya  zona  hambat  dan digunakan  untuk  membandingkan  zona  hambat  yang muncul  pada  sampel  atau  kelompok  perlakuan.
Kelompok  perlakuan  esktrak  etanolik,  fraksi  heksan, dan  fraksi  kloroform  memiliki  efek  antibakteri meskipun  potensi  antibiotiknya  lebih  rendah  daripada kontrol  positif  (kloramfenikol).  Kelompok  perlakuan ekstrak  etanolik  mempunyai  zona  hambat  paling  luas dibandingkan  fraksi  heksan  dan  fraksi  kloroform. Semua  kelompok  perlakuan  mempunyai  tren  semakin tinggi  konsentrasi  sampel  maka  semakin  luas  zona hambat yang terbentuk.
Sesuai Tabel  1 ,  konsentrasi  yang  memiliki  daya hambat  terbesar  adalah  ekstrak  etanolik  jika dibandingkan  dengan  fraksi  heksan  maupun  fraksi kloroform. Hal ini dikarenakan adanya berbagai macam senyawa yang terkandung dalam ekstrak etanolik daun binahong  daripada  yang  terkandung  dalam  fraksi heksan  maupun  fraksi  kloroform.  Sedangkan  fraksi merupakan ekstrak yang terpurifikasi atau ekstrak yang sudah  dimurnikan  sehingga  senyawa-senyawa  yang terkandung  lebih  sedikit/murni  daripada  ekstrak. Senyawa-senyawa  dalam  ekstrak  tersebut  dapat berupa  endointeraksi  yaitu  berupa  efek  sinergisme maupun komplementer dalam menghambat pertumbuhan  bakteri E.coli .  Senyawa  pada  ekstrak etanolik  diantaranya  adalah  flavonoid.  Mekanisme flavonoid  yaitu  dengan  menyerang  gugus  fosfat  pada membran  sitoplasma  sehingga  terjadi  kerusakan membran  (Saputra  dan  Anggraini  2016).  Penyari  yang digunakan  juga  berpengaruh  terhadap  senyawa  aktif yang  tersari  (Sugiarti  dkk  2020).  Ekstrak  etanol  dapat melarutkan  senyawa-senyawa  yang  bersifat  polar termasuk  flavonoid  dan tanin  yang  berpotensi  sebagai antibakteri.  Sedangkan  fraksi  heksan  dan  fraksi kloroform cenderung bersifat nonpolar yang akan sulit melarutkan senyawa-senyawa dengan potensi antibakteri.
Tabel 1. Hasil  Pengukuran  Zona  Hambat  Ekstrak  Etanolik,  Fraksi  Heksan  dan  Fraksi  Kloroform  Daun  Binahong terhadap Bakteri E. coli
Perlakuan Diameter Zona Hambat* Bakteri Escherichia coli (mm) Ekstrak Etanolik Fraksi Heksan Fraksi Kloroform Kloramfenikol (Kontrol positif) 21,03 25,03 20,13 DMSO (Kontrol negatif) 6,00 6,00 6,00 Ekstrak Etanol 12,5 % 7,33 8,16 7,67 Ekstrak Etanol 25 % 9,95 9,73 8,47 Ekstrak Etanol 50 % 13,32 12,93 9,87
Keterangan :* Diameter yang diukur termasuk diameter paperdisk sebesar 6,00 mm
Sesuai Tabel 1  bahwa  apabila  konsenstrasi  sampel semakin besar, maka semakin besar pula daya hambat yang  dihasilkan.  Hal  ini  berhubungan  dengan  semakin banyaknya  konsentrasi  senyawa  aktif  antibakteri  yang terkandung.
Potensi  daya  atau  kekuatan  senyawa  antimikroba dibagi  menjadi  tiga  kategori  yaitu  kategori  resisten apabila  diameter  zona  hambat  <  12  mm,  intermediet jika  diamater  zona  hambat  13-17  mm,  dan  sensitif apabila  >  18  mm  (Soleha  2015).  Oleh  karena  itu, ekstrak etanolik daun binahong konsentrasi 50% masuk dalam kategori intermediet. Menurut standar Departemen  Kesehatan  (1988),  mikroba  dinyatakan peka terhadap antimikroba asal tanaman bila diameter daya hambatnya berukuran 12-24 mm. Ekstrak etanolik daun binahong 50% dan fraksi heksan 50% mempunyai zona hambat 13,32 dan 12,93 mm, yang menunjukkan peka  atau  sensitif  terhadap  bakteri E.  coli .  Hasil penelitian  yang  dilakukan  oleh  Siregar  (2021)  pada ekstrak  etanol  daun  binahong  terhadap  bakteri Entercoccus faecalis menunjukkan hasil pada konsentrasi  70%,  80%,  90%,  dan  100%  menunjukkan adanya zona hambat  yaitu 8,81 mm, 10,19 mm, 12,25 mm, dan 14,19 mm. Peneltian tersebut sejalan dengan hasil  penelitian  ini,  bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi sampel  maka  semakin  lebar  zon  ahambat  yang terbentuk.  Adanya  perbedaan  luas  zona  hambat tersebut  dikarenakan  adanya  perbedaan  bakteri  yang digunakan,  dimana  sifat  dan  ketahanan  bakteri  dalam merespon  suatu  senyawa  kimia  berbeda-beda (Wahdaningsih dkk 2014)
Hasil  uji  menunjukkan  zona  hambat  terbesar  yaitu ekstrak  etanolik  daun  binahong  50%  selanjutnya  diuji
skrining  fitokimia  untuk  melihat  senyawa-senyawa yang terkandung didalamnya.

## Skrining Fitokimia Ekstrak Etanolik Daun Binahong
Beberapa  senyawa  dalam  ekstrak  etanolik  daun binahong  berpotensi  sebagai  senyawa  antibakteri terhadap  bakteri Escherichia  coli. Senyawa-senyawa tersebut diidentifikasi  dengan  skrining  fitokimia.  Uji alkaloid  dengan  pereaksi  Dragendorff  dan  Bouchardat untuk  menunjukkan  keberadaan  senyawa  alkaloid dalam  ekstrak.  Bila  terbentuk  endapan  berwarna oranye  dan  coklat  kehitaman,  berarti  positif  ( Tabel 2 ). Sebagai senyawa metabolit sekunder terbesar, alkaloid merupakan  senyawa  yang  banyak  memiliki  efektivitas sebagai  antibakteri.  Mekanisme  antibakteri  alkaloid dipengaruhi  oleh  aktivitas  biologis  senyawa  tersebut. Alkaloid  mempunyai  gugus  basa  yang  bersifat  reaktif dan jika kontak dengan suatu bakteri maka akan timbul reaksi  dengan  DNA  bakteri  sebagai  penyusun  utama intisel yang merupakan pusat pengatur segala kegiatan sel.  Alkaloid  juga  bereaksi  dengan  asam  amino penyusun  dinding  sel  bakteri.  Hal  itu  akan  mengubah susunan/struktur  asam  amino  dan  juga  rantai  DNA  di intisel  yang  menyebabkan  DNA  bakteri  rusak, kemudian bakteri mengalami kehancuran danmenyebabkan kematian sel tersebut (Mukti 2012).
Flavonoid  merupakan  senyawa  yang  banyak terdapat  di  alam  dan  berpotensi  sebagai  antibakteri. Daun binahong merupakan salah satu bahan alam yang mengandung senyawa flavonoid (Rimporok et al. 2015)
Mekanisme
antibakteri flavonoid dengan mendenaturasi  dan  mengkoagulasi  protein  sel  bakteri yang  akan  merusak  membran  sel  bakteri.  Flavonoid
Tabel 2. Hasil Uji Skrining Fiitokimia Esktrak Etanol Daun Binahong
Senyawa Pereaksi Hasil Keterangan Alkaloid Dragendorft (+) Terbentuk endapan coklat Bouchardat (+) Terbentuk endapan coklat kehitaman Flavonoid Timbal asetat (+) Timbulnya flok-flok putih Saponin Penggojokan (+) Buih  2  cm,penambahan  HCl  2N  buih tidak hilang Tanin FeCl 3 1% (+) Berubah  menjadi  biru  tua  atau  hitam kehijauan
Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanolik, Fraksi Heksan, Fraksi Kloroform Daun Binahong ( Anredera cordifolia (Ten.) Steenis ) terhadap Bakteri Escherichia Coli serta Skrining Fitokimia
merupakan  senyawa  turunan  fenol.  Flavonoid  dapat menghambat tumbuhnya bakteri dengan cara merusak permeabilitas  dinding  sel  bakteri,  karena  adanya polaritas  yang  berbeda  antara  gugus  alkohol  pada struktur flavonoid dengan lipid yang menyusun dinding sel  bakteri.  Kerusakan  dinding  sel  ini  diikuti  dengan penetrasi  fenol  ke  dalam  sel  bakteri,  yang menyebabkan membran sel bakteri menjadi lisis (Mukti 2012). Hasil uji flavonoid dengan pereaksi timbal asetat menunjukkan  hasil  positif  berupa  flok-flok  berwarna putih.
Ekstrak  etanolik  daun  binahong  juga  mengandung senyawa  bahan  alam  lain,  yakni  saponin.Saponin  juga memiliki  aktivitas  antibakteri  (Cahyanta  &  Ardiyanti 2018). Uji saponin dilakukan dengan proses penggojogan dan penambahan HCl 2N dan timbul buih yang  tidak  hilang  selama  sepuluh  menit.  Hasil  uji menunjukkan  positif  mengandung  saponin  dengan terbantuknya  buih  setinggi  2  cm.  Mekanisme antibakterinya yaitu dengan cara mengganggu stabilitas membran  sel  bakteri,  yang  berakibat  rusaknya membran sel.  Saponin berdifusi melalui membran luar dan  dinding  sel  yang  rentan  kemudian  mengikat membran  sitoplasma  sehingga  menganggu  dan mengurangi  kestabilan  membran  sel.  Hal  tersebut menyebabkan komponen-komponen penting sel keluar dari sel bakteri (Rahim dan Mourisa 2020). Di samping itu,  efisiensi  pemanfaatan  gula  dalam  mikroorganisme dapat  dikurangi  oleh  saponin  sehingga  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri.  Aktivitas  enzim kunci  dalam  metabolisme  fisiologis  bakteri  akan berkurang,  sehingga  dapat  menekan  sintesis  protein dan  pada  akhirnya  sel  akan  mengalami  kematian  (Zhi- hui et al. 2013).
Hasil  skiring  fitokimia  menunjukkan  bahwa  dalam ekstrak  etanol  daun  binahong  mengandung  senyawa tanin.  Sesuai  dengan  Kumoro  (2015)  bahwa  ekstrak etanolik  daun  binahong  ditambah  dengan  FeCl 3 maka akan terbentuk warna biru gelap atau hitam kehijauan menandakan positif tanin. Tanin mempunyai toksisitas terhadap membran sel suatu bakteri. Tanin mempunyai senyawa  yang  bersifat astringent yang  dapat membentuk  dan  menginduksi  suatu  ikatan  kompleks dengan  substrat  maupun  enzim  dari  suatu  bakteri. Tanin dapat mengendapkan protein sehingga mempunyai  daya  antibakteri.  Mekanismenya  dengan cara senyawa tanin bereaksi dengan membran sel dan kemudian  menginaktivasi  materi  genetik  dalam  sel bakteri  tersebut.  Penghambatan  bakteri  oleh  tanin yaitu dengan menghambat enzim reverse transkriptase dan DNA topoisomerasi yang menyebabkan sel bakteri
gagal terbentuk. Senyawa tanin juga dapat mengakibatkan  kurang  sempurnanya  pembentukan dinding  sel  bakteri  karena  polipeptida  dinding  sel bakteri  dirusak  oleh  tanin,  sehingga  sel  bakteri  akan lisis dan terjadi kematian bakteri (Suryani 2019).
Berdasarkan  data-data  yang  diperoleh,  bahwa ekstrak  etanol  daun  binahong  mempunyai  aktivitas sebagai antibakteri yang paling baik dibandingkan fraksi heksan  dan  fraksi  kloroform.  Hal  ini  dapat  dilihat  dari zona  hambat  yang  terbentuk  pada  uji  aktivitas antibakteri.  Adanya  aktivitas  antibakteri  tersebut disebabkan  oleh  senyawa-senyawa  yang  terkandung pada ekstrak etanol daun binahong antara lain alkaloid, flavonoid, saponin dan tanin. Berdasarkan Departemen Kesehatan  (1988)  bahwa  mikroba  dinyatakan  peka terhadapa  antimikroba  yang  berasal  dari  tanaman apabila mempunyai ukuran diameter zona hambat 12- 24  mm.  Ekstrak  etanol  daun  binahong  50%  pada penelitian  ini  menunjukkan  zona  hambat  terluas  yaitu 13,32  mm.  Ekstrak  etanol  daun  binahong  50%  dan dapat  dikatakan  peka  atau  sensitif  terhadap  bakteri E. coli sesuai standar zona hambat yang telah ditentukan oleh Departemen Kesehatan.

## SIMPULAN
Berdasarkan  hasil  uji  aktivitas  antibakteri  terhadap bakteri E.coli dapat  disimpulkan  bahwa  zona  hambat terluas  adalah  ekstrak  etanolik  daun  binahong dibandingkan  dengan  fraksi  heksan  dan  fraksi kloroform.  Ekstrak  etanol  daun  binahong  konsentrasi 50%  adalah  zona  hambat  terluas  yaitu  sebesar  13.32 mm.  Berdasarkan  skrining  fitokimia,  ekstrak  etanolik daun  binahong  mengandung  senyawa  aktif  antara  lain flavonoid, alkaloid, saponin, dan tanin.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Ucapan  terimakasih  kepada  Kementrian  Riset, Teknologi  dan  Perguruan  Tinggi  yang  telah  membiayai penelitian  ini  melalui  program  hibah  Penelitian  Dosen Pemula  tahun  anggaran  2019  berdasarkan  surat  No. T/140/E3/RA.00/2019 tertanggal 25 Februari 2019.

## DAFTAR PUSTAKA
Cahyanta  AN,  Ardiyanti  NY.  2018.  Uji  Aktivitas  Salep Antijerawat Ekstrak Etanol Daun Binahong ( Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) terhadap Bakteri Propionibacterium  acnes . Jurnal  Para  Pemikir . 7(2):239-43.
Departemen  Kesehatan  RI.  1988. Inventaris  Obat Indonesia  Jilid  I .  Departemen  Kesehatan  Republik Indonesia. Jakarta
Departemen  Kesehatan  RI.  1989. Materia  Medika Indonesia  Jilid  V .  Departemen  Kesehatan  Republik Indonesia. Jakarta.
Hemeg  HA.  2018.  Molecular  characterization  of antibiotic resistant Escherichia coli isolates recovered from food samples and outpatient Clinics, KSA. Saudi Journal of Biological Science. 25(1): 928- 931.
Herdiyanti, S. 2015. Skrining Fitokimia Dan Uji Aktivitas Antibakteri Fraksi Klorofrm Dari Ekstrak Etanol Daun Pandan  Wangi  ( Pandanus  amaryllifolius Roxb.) terhadap  Bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia  col i. Karya  Tulis  Ilmiah. D3  Farmasi Politeknik  Kesehatan  Bhakti  Setya  Indonesia. Yogyakarta.
Izzah N, Kadang Y, Permatasari A. 2019. Uji Identifikasi Senyawa  Alkaloid  Ekstrak  Metanol  Daun  Kelor ( Moringa  oleifera Lamk)  Dari  Kab.Ende  Nusa Tenggara  Timur  Secara  Kromatografi  Lapis  Tipis. Jurnal Farmasi Sandi Karsa. 5(1):52-56.
Jap ALS., Widodo AD. 2021. Diare Akut pada Anak yang Disebabkan oleh Infeksi. Jurnal Kedokteran Meditek . 27(3): 282-288.
Kementrian  Kesehatan  RI.  2018. Profil  Kesehatan Indonesia 2018 . Bab VI. Pengendalian Penyakit . Hal. 196.
Kumoro  AC.  2015. Teknologi  Ekstraksi  Senyawa  Bahan Aktif dari Tanaman Obat. Yogyakarta (ID): Plantaxia. Mukti D. 2012. Uji Efektivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Buah  Pare  ( Momordica  charantia L)  Terhadap S treptococcus mutans Penyebab Karies Gigi [skripsi]. Bogor (ID): Universitas Pakuan Bogor.
Ningsih  KR. 2020.  Uji  Aktivitas  Atioksidan  Bedak  Tabur dari  Serbuk  Daun  Binahong  ( Anredera  cordifolia (Ten.)  Steenis), Karya  Tulis  Ilmiah ,  Program  Studi Farmasi Politeknik Harapan Bersama Tegal.
Normaliska  R,  Sudarwanto  MB,  Latif  H.  2019.  Pola Resistensi Antibiotik pada Escherichia coli Penghasil ESBL  dari  Sampel  Lingkungan  di  RPH-R  Kota  Bogor. Acta Veterinaria Indonesiana. 7(2): 42-48.
Primadiamanti  A,  Retnaningsih  A,  Ningrum  AS.  2019.
Aktivitas  Antimikroba  Kombinasi  Air  Perasan  Daun Mengkudu (Morinda  citrifolia L.)  Dan  Daun  Pepaya ( Carica  papaya L.)  terhadap  Bakteri Escherichia  coli dan Shigella  dysenteriae. Jurnal  Analis  Farmasi.
4(2):130 – 138.
Radji  M.  2010. Buku  ajar  Mikrobiologi:  Panduan Mahasiswa  Farmasi  dan  Kedokteran. Jakarta  (ID): Penerbit Buku Kedokteran EGC.
Rahim  DA,  Mourisa  C.  2020.  Uji  Daya  Hambat  Ekstrak Kulit Lidah Buaya ( Aloe barbadensis Miller) terhadap Bakteri E. Coli. Jurnal Ilmiah Maksitek . 5(4): 48-52. Rimporok  S,  Kepel  BJ,  Siagian  KV.  2015.  Uji  Efektifitas Ekstrak Daun Binahong ( Anredera cordifolia Steenis ) Terhadap  Pertumbuhan Streptococcus  mutans Seraca  In  Vitro. Pharmacon  Jurnal  Ilmiah  Farmasi . 4(4): 15-21.
Sani RN, Fithri CN, Ria DA, dan Jaya MM. 2014. Analisis Rendemen  dan  Skrining  Fitokimia  Ekstrak  Etanol Mikroalga Laut Tetraselmis chuii . Jurnal Pangan dan Agroindustri. 2(2):121-126.
Saputra  O  &  Anggraini  N.  2016.    Khasiat  Belimbing Wuluh  ( Averrhoa    bilimbi L.)  terhadap Penyembuhan Acne Vulgaris. Majority , 5(1), 76 – 80. Setiawan M.  2015.  Skrining  Fitokimia Dan  Uji  Aktivitas Antibakteri Fraksi Heksan dari Ekstrak Etanolik Daun kemangi  ( Ocimum  sanctur L)  terhadap Escherichia coli [Karya  Tulis  Ilmiah].  Yogyakarta  (ID):  Program Studi  Farmasi  Politeknik  Kesehatan  Bhakti  Setya Indonesia.
Siregar  AL.  2021.  Potensi  Antibakteri  Ekstrak  Daun Binahong  terhadap  Bakteri Enterococus  faecalis ATCC® 29212™ ( invitro ). [Skripsi]. Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Sumatera Utara Medan. Soleha.  2015.  Uji  Kepekaan  terhadap  Antibiotik. Juke Universitas Lampung. 5(9): 119-123.
Sugiarti,  L.,  Andriyani,  D.M.,  Pratitis,  M.P.,  Setyani,  R. 2020.  Aktivitas  Antibakteri  Fraksi  N-Heksan,  Etik Asetat  dan  Air  Ekstrak  Etanol  Daun  Parijoto ( Medinilla speciosa Blume) terhadap Propionibacterium acnes dan Staphylococcus epidermidis . Cendekia  Journal  of  Pharmacy .  Vol  4, No.2.
Sukmawati  IK,  Susilawati  E,  Putri  SD.  2019. Antibacterial  Activity  of  Extracts  and  Fractions  of Wood  Ear  Mushroom  ( Auricularia  auricula ). Pharmaciana. 9(1): 157-166.
Suryani N, Nurjanah D, Indriatmoko DD. 2019. Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  batang  Kecombrang  ( Etlingera elatior (Jack) R.M.Sm.) terhadap Bakteri Plak Gigi. J. Kartika Kimia. 2(1): 23-29.
Utami,  N.,  &  Luthfiana,  N.  2016.  Faktor-Faktor  yang Memengaruhi Kejadian Diare pada Anak. Majority , 5 (4): 101-106.
Utomo SB, Fujiyanti M, Lestari WP, Mulyani S. 2018. Uji
Aktivitas Antibakteri Senyawa C-4- Metoksifenilkaliks[4]Resorsinarena termodifikasi
Hexadecyltrimethylammonium-Bromide  Terhadap Bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli.
Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanolik, Fraksi Heksan, Fraksi Kloroform Daun Binahong ( Anredera cordifolia (Ten.) Steenis ) terhadap Bakteri Escherichia Coli serta Skrining Fitokimia
91
JKPK (Jurnal Kimia Dan Pendidikan Kimia). 3(3): 201- 209.
Wahdaningsih  S,  Untari  EK,  &  Fauziah  Y.  2014. Antibakteri  Fraksi  n-Heksana  Kulit  Hylocereus polyrhizus  Terhadap  Staphylococcus  epidermidis dan  Propionibacterium  acnes. Pharm  Sci  Res ISSN 2407-2354, 1(3), 180 – 193.
Wardhani  LK,  Sulistyani  N.  2012.  Uji  Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Etil  Asetat  Daun  Binahong
(Anredera  scandens  (L.) Moq ) Terhadap Shigella flexneri Beserta  Profil  Kromatografi  Lapis  Tipis. Pharmaciana. 2(1):1-16.
Zhi-hui Y, Xue-zhi D, Li-qiu X, Xiu-quing X, Sha X, Shuang L,  Xue-mei  L.  2013.  Antimicrobial  Activity  and Mechanism of Total Saponins from Allium chinense .
Food Science. 34(15): 75-80.