## Akurasi Perhitungan Bakteri pada Daging Sapi Menggunakan Metode Hitung Cawan
(Calculation Accuracy of Bacterical in Beef Meat Using Total Plate Count Method)
Endang Soesetyaningsih, Azizah *)
Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Jember Jl. Kalimantan 37 Jember 68121
*) Penulis Korespondensi E-mail: azizah.bafared@gmail.com

## Abstrak
Daging  sapi  merupakan salah satu bahan makanan yang mengandung protein tinggi dan termasuk media yang baik bagi pertembuhan mikroorganisme seperti bakteri. Salah satu metode yang dapat digunakan untuk menghitung jumlah bakteri pada daging sapi yaitu metode hitung cawan. Beberapa cara yang dapat dilakukan pada metode hitung cawan yaitu metode pour plate, spread plate, dan drop plate . Penggunaan cara hitung cawan yang berbeda seta larutan pengencer yang berbeda menyebabkan  hasil  perhitungan   yang  berbeda   juga.   Tujuan  dari   penelitian   ini  yaitu  untuk  mengetahui   perbedaan   cara preparasi sampel serta larutan pengencer yang digunakan terhadap hasil hitung cawan bakteri pada sampel daging sapi. Metode hitung cawan yang digunakan pada penelitian ini yaitu pour plate , spread plate , dan drop plate dengan 3 jenis pelarut yaitu akuades steril, garam fisiologis 0,85% dan larutan Buffer Peptone Water (BPW) yang ditambahkan 1,25% Na Sitrat.Berdasarkan hasil penelitiandiketahui bahwa cara preparasi sampel daging sapi yang lebih efisien yaitu dengan cara dihaluskan ditunjukkan dengan hasil hitung cawan yaitu 10 6 CFU/gram  dan hasil hitung tidak bervariasi  dibandingkan daging sapi yang dipotong (10 5 CFU/gram) dengan hasil hitung yang bervariasi. Hasil analisis data menunjukkan bahwa penggunaan cara preparasi sampel yang berbeda berpengaruh pada hasil perhitungan jumlah koloni disetiap metode hitung cawan.   Larutan buffer   peptone   water dan   garam   fisiologis   0,85%   merupakan   larutan   pengencer   yang   lebih   baik dibandingkan dengan larutan akuades. Hal ini ditunjukkan dengan hasil hitung yang tidak bervariasi disetiap metode hitung cawan   yang   digunakan.   Berdasarkan   hasil   hitung   yang   didapatkan,   larutan buffer   peptone   water menghasilkan   hasil perhitungan jumlah koloni terbesar.
Kata Kunci: akurasi , metode hitung cawan, bakteri, daging sapi .

## Abstract
Beef meat is one of the food that contain high protein and also good media for the growth of microorganism such as bacteria. One of the method that can be used to count the number of bacteria in beef meat is plate count method. Some ways that can be done on plate count methode are pour plate, spread plate and drop plate methods. The use of different methods and   diluent   solutions   can   causes   different   calculation   results.   The   aim   of   this   research   is   to   determine   differences preparations sample  as well as the diluent solutions used against the results of bacterial count plates in beef meat samples. The plate count methods used in this study were pour plate, spread plate and drop plate with 3 types of solvent namely aquades, physiological salt (NaCl) 0,85% and Buffer Peptone Water (BPW) solution added 1,25% Na citrate. Based on the results showed that an efficientpreparation beef samples is by blending showed the result of calculation is 10 6 CFU/g and did   not   variated   compared   to   beff   cut   (10 5 CFU/g)   with   count   result   variated.   Data   analysis   showed   that   different preparations sample affected the results of the colonies calculation in each plate count method. Buffered peptone water solution and NaCl 0,85% is better diluent solutions than steril aquades. This indicated by count result that did not vary in each plate count method  used. Buffered peptone water solution is the diluent that results largest colony calculaton.
Keywords: accuracy, plate count method, bacteria, beef meat.

## PENDAHULUAN
Bahan makanan terdiri dari protein, karbohidrat, lemak, vitamin,   dan   mineral.   Salah   satu   bahan   makanan   yang mengandung protein tinggi yang yaitu daging [1]. Daging merupakan sumber protein, asam lemak esensial, mineral, dan   vitamin   yang   baik   namun   mudah   rusak.   Hal   ini dikarenakan daging juga merupakan media yang baik untuk pertumbuhan beberapa jenis mikroba [2, 3, 4].
Mikroba   yang   terdapat   pada   daging   dapat menguntungkan   maupun   merugikan   bagi   manusia. Beberapa mikroba pada daging dapat bersifat patogen dan menyebabkan   penyakit   bagi   manusia.   Beberapa   bakteri
patogen   penyebab   penyakit   yang  adapada   daging   yaitu Salmonella spp., Staphylococcus   aureus , Escherichiacoli , Campylobacter jejuni , Listeria monocytogenes , Clostridium perfringes , Yersinia enterocolitica
dan Aeromonashydrophila [5].  Pada penelitian Jarallah et al ., [6]   ditemukan   beberapa   jenis   bakteri   patogen   pada   hasil isolasi sampel daging yang digunakan, yaitu 40 % bakteri E. coli dan 29 % S. aureus .
Salah satu bahan makanan yang mudah terkontaminasi oleh   mikroba   adalah   daging   sapi.   Adanya   kontaaminasi mikroba pada daging sapi dapat mengakibatkan penurunan kualitas daging tersebut [4]. Kualitas daging yang menurun
ditunjukkan dengan perubahan warna, kadar pH yang tidak normal, perubahan rasa dan aroma dari daging tersebut [7]. Keberadaan mikroba pada daging segar memiliki batasan maksimum   tertentu   yaitu   untuk   bakteri E.   coli memiliki batasan sebesar 1 x 10 1 koloni/g, Salmonella sp. negatif/25 g, S. aureus 1 x 10 2 koloni/g, dan untuk Campylobacter sp. negatif/25 g [8]. Oleh karena  itu keberadaan  dan jumlah mikroba   pada   suatu   bahan   makanan   perlu   diketahui sehingga dapat diketahui pula kualitas dan taraf mutu bahan makanan tersebut.
Salah   satu   metode   yang   dapat   dilakukan   untuk menghitung jumlah mikrobadalam suatu bahan makan salah satunya   yaitu   dengan   mengukur   jumlah   sel   yang   ada menggunakan   metode   hitung   cawan   ( Total   Plate   Count ) [9].   Metode   hitung   cawan   merupakan   metode   enumerasi yang   sudah   lama   dan   banyak   digunakan   dalam   bidang mikrobiologi   pangan   untuk   memperkirakan   jumlah mikroorganisme yang ada pada suatu sampel bahan makan dengan   asumsi   bahwa   mikroorganisme   yang   ada terdistribusi secara homogen di dalam makan [10,11].
Metode   hitung   cawan   memiliki   beberapa   kelebihan diantaranya   yaitu   kapasitas   untuk   menghitung   jumlah bakteri jika terlalu banyak ataupun jika terlalu sedikit dapat menggunakan faktor pengenceran. Selain itu, metode hitung cawan ini hanya menghitung bakteri yang layak dihitung tidak termasuk bakteri mati ataupun puing-puing yang ada pada media pertumbuhan. Namun, metodi ini juga memiliki kekurangan yaitu perhitungan kumpulan sel bakteri dapat salah dihitung sebagai koloni tunggal sehingga dilaporkan sebagai   CFU/mL   daripada   sel/mL.   Selain   itu   metode   ini membutuhkan waktu yang lama karena hasil hitung cawan ini biasanya diperoleh setelah 1-3 hari [12].
Metode hitung cawan dibedakan menjadi beberapa cara yaitu metode tuang ( pour plate ), metode sebaran ( spread plate ),   dan   metode drop   plate .   Metode   hitung   cawan termasuk metode yang digunakan untuk penanaman bakteri dengan menggunakan media padat, yang prinsip kerjanya berdasarkan   pembuatan   seri   pengenceran   (homogenisasi) sampel dengan kelipatan 10[13]. Hasil perhitungan dengan menggunakan   hitung   cawan   ini   dalam   bentuk Colony forming unit (CFU). CFU ini menunjukkan jumlah koloni yang tumbuh tiap gram atau mililiter sampel yang dihitung dari jumlah cawan, faktor pengenceran, dan volume yang digunakan [10,11].
Penggunaan   metode   yang   berbeda   serta   larutan dimungkinkan   mempengaruhi   hasil   hitung   cawan   yang dilakukan. Selain itu, penggunaan larutan pengencer yang berbeda   dimungkinkan   juga   dapat   mempengaruhi   hasil hitung   cawan.   Beberapa   larutan   pengencer   yang   umum digunakan   dalam   melakukan   hitung   cawan   bakteri   yaitu akuades, garam fisiologis 0,85% dan Buffer Peptone Water (BPW).Selain   penggunaan   larutan   dan   metode   yang berbeda,   cara   preparasi   sampel   yang   digunakan   seperti diiris   ataupun   diblender   dimungkinkan   juga   akan berpengaruh pada hasil hitung cawan.
Oleh karena itu perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai perbandingan metode hitung cawan dan larutan pengencer serta metode preparasi pada hasil hitung cawan bakteri pada sampel bahan makanan terutama daging sapi. Tujuan dari penelitian ini yaitu untuk mengetahui pengaruh
perbedaan cara preparasi sampel (dipotong dan diblender) serta   larutan   pengencer   yang   digunakan   terhadap   hasil hitung cawan bakteri pada sampel daging sapi.

## METODE PENELITIAN

## A. Preparasi sampel daging
Pada penelitian ini sampel daging yang digunakan yaitu daging sapi dengan dua cara preparasi yaitu dipotong dan dihaluskan 1. Sampel daging yang dipotong
Sampel   daging   25   gr   dipotong   kecil-kecil   berbentuk dadu dengan ukuran 1 cm 3 dan dilakukan secara aseptis. Setelah itu dimasukanlarutan  penngencer  yang digunakan sebanyak   225   ml   pada   Erlenmeyer   500   ml,   kemudian dishaker   kurang   lebih   15   menit   pada   100   rpm   dan selanjutnya divortex. Lakukan seri pengenceran hingga 10 -6 pada   sampel   tersebut   dari   setiap   larutan   pengencer   yang digunakan;
2. Sampel daging yang dihaluskan
Sampel daging 25 gr diblender bersamaan dengan 225 ml larutan pengencer. Setelah itu dilakukan seri pengeceran hingga   10 -6 pada   sampel.     Inokulasi   sampel   pada   media pada   setia   metode   hitung   cawan   dilakukan   sama   seperti pada sampel daging yang dipotong.
B. Uji Total Plate Count pada sampel daging Pengujian   sampel   daging   dilakukan   berdasarkan   uji Total Plate Count (TPC) dengan menggunakan tiga metode yaitu metode pour plate , spread plate , dan drop plate . 1. Pada metode hitung cawan menggunakan metode pour plate dilakukan dengan mengambil 1 ml sampel (semua seri pengenceran) dan dituangkan ke dalam cawan petri steril. Kemudian   tuangkan   10   ml   media   PCA   ke   dalam   cawan petri   tersebut.   Setelah   itu   media   diratakan   dengan menggoyangkan cawan petri dan diinkubasi pada suhu 20 o C selama 24 hingga 48 jam;
2.   Metode spread   plate dilakukan   dengan menginokulasikan 100 µl sampel (semua seri pengenceran) pada 10 ml media PCA yang telah dituangkan pada cawan petri.   Setelah   itu   diratakan   dengan   menggunakan   batang kaca bengkok. Kemudian diinkubasi pada suhu 20 o C selama 24 hingga 48 jam;
3. Metode drop plate dilakukan dengan menginokulasikan 10  µl   sampel  (semua   seri   pengenceran)   ke  dalam   10 ml media PCA pada cawan petri. Media PCA yang digunakan terlebih   dahulu   dibagi   menjadi   6   bagian   sehingga   dalam satu   media   terdiri   dari   6   seri   pengenceran.   Kemudian diinkubasi   pada   suhu   20 o C   selama   324   hingga   48   jam. Seluruh   metode   hitung   cawan   dilakukan   dengan pengulangan sebanyak dua kali.

## C. Perhitungan Hasil Uji TPC
Jumlah   koloni   bakteri   dari   sampel   dihitung   dengan menggunakan rumus :
Koloni / gr = Ʃ koloni per cawan x 1 faktor pengenceran
Beberapa   hal   yang   perlu   diperhatikan   ketika menghitung jumlah koloni bakteri dari sampel yaitu : 1.   Cawan   yang   dipilih   dan   dihitung   adalah   yang mengandung jumlah koloni antara 30-300 CFU/g [14]. Jika jumlah   koloni   tiap   sampel   lebih   dari   300   CFU/g
dikategorikan   sebagai   terlalu   banyak   untuk   dihitung (TBUD) atau too numerous to count (TNTC) [15];
2. Beberapa koloni yang bergabung menjadi satu atau satu deret rantai koloni yang terikat sebagai suatu garis dihitung sebagai satu koloni;
3. Koloni yang tumbuh menutup lebih besar dari setengan luas cawan  petri, tidak disebut  sebagai  koloni melainkan spreader;
4.   Jika   hasil   perbandingan   jumlah   bakteri   dari   hasil pengenceran berturut-turut antara pengenceran  yang lebih besar   dengan   pengenceran   sebelumnya   adalah   <   2   maka hasilnya   dirata-rata.   Namun   jika   hasilnya   ≥   2,   maka menggunakan   jumlah   mikroba   dari   hasil   pengenceran sebelumnya (pengenceran terkecil).

## D. Analisis Data
Data yang diperoleh dianalisis dengan cara deskriptif. Data   ditampilkan   dalam   bentuk   tabel   sesuai   dengan Standard   Plate   Count (SPC)   untuk   mempermudah pembacaanhasil. SPC merupakan metode yang digunakan untuk mendapatkan hasil  hitung  mikroba  dengan   batasan
jumlah mikroba yang dihitung yaitu 30-300 CFU/ml dari pengenceran yang digunakan [16].
Data juga dianalisis dengan menggunakan uji General Linier   Model-Multivariate   Test (α   =   5%)   dan   analisis lanjutan   menggunakan   Uji   LSD.   Uji GLM-Multivarate test ini digunakan untuk mengetahui pengaruh penggunaan beberapa pelarut yang berbeda dan preparasi sampel daging yang   berbeda   pada   hasil   perhitungan   3   metode   hitung cawan.   Sedangkan   uji   lanjut   LSD   digunakan   untuk mengetahui siginifikansi dari setiap larutan yang digunakan pada   hasil   perhitungan   koloni   disetiap   metode.   Analisis statistik   dilakukan   dengan   menggunakan SPSS   15.0 Evaluation Version for Windows.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Perhitungan   jumlah   koloni   bakteri   yang   tumbuh, berdasakan hasil uji TPC yang dilakukan, hanya dilakukan pada pengenceran dengan jumlah koloni antara 30-300. Hal ini   dilakukan   untuk   mengurangi   kemungkinan   kesalahan pada perhitungan [17].
Tabel 1. Hasil perhitungan jumlah koloni pada uji TPC ( Total Plate Count) Preparasi sampel daging Larutan Pengencer Hasil Perhitungan (CFU/gram) di tiap metode Pour plate Spread plate Drop plate Sampel dipotong kecil-kecil Aquades 9,4x10 4 5,8x10 4 1,2x10 5 Garfis 0,85% 1 x 10 5 2,2x10 5 1,4x10 5 BPW 3,5x10 5 4,2x10 5 1,3x10 5 Sampel dipotong dan diblender Aquades 1,6x10 6 2,9x10 6 9,3x10 5 Garfis 0,85% 2,3x10 6 2,6x10 6 2,3x10 6 BPW 3,8x10 6 3,5x10 6 4,8x10 6
Preparasi   sampel   yang   digunakan   menyebabkan perbedaan hasil jumlah koloni yang tumbuh. Pada daging sapi yang hanya dipotong kecil menghasilkan jumlah koloni 10 5 CFU/gram dan menunjukkan hasil yang berbeda pada metode   hitung     serta   larutan   pengencer   yang   berbeda, sedangkan   sampel   yang   dipotong   dan   diblender menghasilkan   koloni   10 6 CFU/gram   dan   tidak   bervariasi (Tabel   1).   Hasil   penelitian   ini   sesuai   dengan   beberapa penelitian yaitu pada penelitian Antwi-Agyei dan Maalekuu [18] hasil hitung bakteri pada daging dan ikan yang ada di Pasar Kumasi sebesar 1,62 x 10 5 CFU/g dalam 1ml/CFU, sedangkan   pada   penelitian   Alamin   dan   Ahmed   [19] menunjukkan rata-rata bakteri pada sosis daging sapi segar sebesar   2   x   10 6 CFU/g.   Hal   ini   menunjukkan   terdapat perbedaan jumlah bakteri dari daging yang telah dihaluskan seperti   sosis   dengan   daging   yang   tidak   dihaluskan. Perbedaan   jumlah   bakteri   yang   terhitung   ini   dikarenakan pada sampel daging yang dihaluskan sel-selnya akan dapat terpecah-pecah   sehingga   menghasilkan   luas   permukaan
daging menjadi lebih besar dibandingkan pada daging yang hanya dipotong kecil dan sel bakteri yang menempel pada daging   akan   terlepas   dan   dengan   mudah   tersebar   pada larutan pengencer.
Larutan   pengencer   yang   digunakan   juga   dapat mempengaruhi jumlah koloni yang tumbuh pada uji TPC. Larutan pengencer yang digunakan yaitu larutan akuades, larutan garam fisiologis 0,85% dan larutan Buffer Peptone Water +   1,25%   Na   Sitrat.   Berdasarkan   hasil   penelitian dapat diketahui bahwa penggunaan larutan pengencer BPW dan garam fisiologis 0,85% lebih baik dibandingkan dengan akuades   steril.   Hal   ini   ditunjukkan   dengan   hasil   hitung koloni pada setiap metode dengan larutan pengencer BPW dan garam fisologis 0,85% tidak bervariasi, sedangkan pada metode   dengan   larutan   pengencer   akuades   menghasilkan hasil   hitung   jumlah   koloni   yang   bervariasi.   Selain   itu larutan   BPW   menghasilkan   perhitungan   jumlah   koloni terbesar.   Hal   ini   dikarenakan   BPW   berfungsi   dalam mendukung pH pertumbuhan akibat adanya perubahan pH
yang   disebabkan   oleh   pertumbuhan   dan   metabolisme mikroorganisme [20], serta menjaga agar mikroorganisme tidak   rusak   akibat   perubahan   pH   tersebut.   Kandungan pepton   pada   larutan   BPW   ini   berfungsi   sebagai   sumber karbon,   nitrogen,   vitamin   dan   mineral   bagi   pertumbuhan bakteri [21]. Selain itu kandungan NaCl pada larutan BPW berfungsi  dalam menjaga keseimbangan osmotik medium pertembuhan. Larutan BPW ini memenuhi ISO 6887 dan 11290   sebagai   larutan   pengencer   untuk   perhitungan mikroorganisme [22].
Berdasarkan data pada Tabel 1. dapat diketahui bahwa perbedaan metode hitung cawan yang digunakan memiliki hasil hitung yang sama pada kedua sampel dagingdengan larutan   pengecer   garam   fisiologis   dan   BPW.   Hal   ini menunjukkan bahwa jumlah inokulasi yang berbeda pada setiap metode yaitu pour plate 1 mL, spread plate 0,1 mL, dan drop plate 0,01 mL tidak mempengaruhi hasil hitung pada   sampel   daging   yang   dipotong   maupun   diblender dengan   menggunakan   larutan   pengencer   garam   fisologis dan larutan BPW. Namun hasil ini berbeda apabila larutan pengencer yang digunakan berupa akuades.
Hasil analisis data menggunakan uji GLM- Multivariate Test (α = 5%) menunjukkan bahwa terdapat pengaruh dari cara   melarutkan   sampel   daging   yang   berbeda   pada   hasil perhitungan jumlah koloni disetiap metode yang digunakan (P = 0,000). Selain itu hanya terdapat pengaruh perbedaan larutan pengencer yang digunakan pada hasil perhitungan jumlah koloni di metode pour plate saja (P (0,00) < 0,05)). Hasil uji pengaruh interaksi antara cara melarutkan sampel dan larutan pengencer yang digunakan pada hasil jumlah koloni juga hanya berpengaruh pada metode pour plate (P (0,00) < 0,05)) dan drop plate (P (0,043) < 0,05)).
Hasil uji lanjut LSD menunjukkan bahwa pada metode pour   plate larutan   pengencer   Aquades   berbeda   nyata dengan   larutan   garam   fisiologis   dan pepton   water (p < 0.05), sedangkan larutan garam fisiologis dan pepton water tidak berbeda nyata (p > 0,05). Pada metode drop plate ketiga   larutan   pengencer   yang   digunakan   tidak berbeda nyata (p > 0.05). Hasil penelitian ini sama dengan penelitian yang dilakukan 0leh Oblinger dan Kennedy [23], yang menunjukkan bahwa hasil hitung koloni bakteri pada kebanyakan   sampel   daging   yang   digunakan   lebih   tinggi pada   sampel   dengan   pelarut   pepton   0,1   %   dan   0,5   % dibandingkan   dengan   pelarut   0.85%   NaCl   dan   akuades steril.   Namun   hasil   statistik   menunjukkan   bahwa penggunaan pelarut yang berbeda tidak berbeda nyata (tidak siginifikan) diantata satu sama lain.
Penggunaan   metode   hitung   cawan   dalam   perhitungan mikroorganisme memiliki beberapa kelemahan. Kelemahan tersebut   diantaranya   yaitu   hasil   perhitungan   tidak menunjukkan   jumlah   sel   yang   sebenarnya,   medium   dan kondisi inkubasi yang berbeda dapat menghasilkan jumlah yang berbeda pula, serta memerlukan persiapan dan waktu inkubasi relatif lama [14].

## KESIMPULAN
Hasil  Total   plate   count  pada   daging   sapi   yang dilakukan, diketahui bahwa cara melarutkan sampel daging sapi yang baik yaitu dengan  cara  dihaluskan (diblender). Hasil   analisis   data   penggunaan   cara   melarutkan   sampel
yang berbeda berpengaruh pada hasil perhitungan jumlah koloni pada setiap metode hitung cawan. Larutan pengencer buffer   peptone   water merupakan   pengencer   yang menghasilkan   hasil   perhitungan   koloni   terbesar. Berdasarkan hasil analisis data penggunaan pengencer yang berbeda hanya berpengaruh pada metode pour plate .

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis   mengucapkan   terima   kasih   kepada   DIPA Universitas Jember yang telah mendanai penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] S. Nakai. dan W. H. Modler, Food Protein , (Wiley- VHC Inc., USA), 2000.
[2] P.   Williams,   Nutrional   Composition   of   Red   Meat, Nutrition & Dietetics Vol. 64 (Suppl. 4), pp. S113- S119, 2007.
[3] E. V. G. Komba, E. V. Komba, Ee. M. Mkupasi, A. O. Mbyuzi, S. Mshamu, D. Luwumba, Z. Busagwe dan A.   Mzula,   Sanitary   Practices   and   Occurence   of Zoonotic Condition in Cattle at Slaughter in Morogoro Municipality,   Tanzania:   Implications   for   Public Health, Tanzania Journal of Health Research Vol. 14
(2), pp 1-12, 2012.
[4] Sukmawati, Total Microbial Plates on Beef and Beef Offal, Bioscience Vol. 2(1), pp. 22-28, 2018.
[5] S. G.  Bhamdare, A. T. Sherikar, A. M. Patukar, V. S. Waskar dan R. J. Zende, A Comparison of Microbial Contamination on Sheep/Goat Carcasses in A Modern Indian   Abattoir   and   Tradtional   Meat   Shops, Food Control , Vol. 18 (7), pp 854-868, 2007
[6] E. M. Jarallah, S. I. Sahib dan K. Yassen, Isolation and   Identification   of   Some   Pathogenic   Bacterial Species Contaminated from Meats in Butchers Shops and   Kebab   Restaurant   in   Al-Kut   City, Euphrates Journal of Agriculture Scienc e, Vol. 6 (4), pp. 30-37,
2014.
[7] B.   Kuntoro,   R.   R.   A.   Maheswari   dan   H.   Nuraini, Hubungan   Penerapan Standard   Sanitation Operasional   Procedure (SSOP)   Terhadap   Mutu Daging   Ditinjau   dari   Tingkat   Cemaran   Mikroba, Jurnal Ilmiah Ilmu-Ilmu Peternakan Vol. 15 (2), pp. 70-80, 2012.
[8] [BSN]   Badan   Standarisasi   Nasional, Batasan Maksimum   Cemaran   Mikroba   dalam   Pangan ,   SNI 7388, 2009.
[9] J.   G.   Barus,   P.   E.   Santosa   dan   D.   Septianova. Pengaruh   Lama   Perendaman   Daging   dengan Menggunakan   Daun   Salam   ( Szygium   polynathum ) sebagai   Pengawet   Terhadap Total   Plate   Count dan Salmonella Daging Broiler, Jurnal Riset dan Inovasi Peternakan Vol. 1(3), pp. 42-47, Desember 2017.
[10] Jongenburger,   Reij,   Boer,   Gorris,   dan   Zwietering, Factors   Influencing   The   Accuracy   of   The   Plating Method Used to Enumerate Low Numbers of Viable Microorganism   in   Food, International   Journal   of Food Microbiology Vol. 143, pp. 32-40, 2010.
[11] D.   Amenu,   Factors   Influencing   The   Enumerate Numbers   of   Viable   Microorganisms   in   Foods,
Landmark Research Journals of Agriculture and Soil Sciences (LRJASS) Vol. 1(1), pp. 001-002, 2014.
[12] R. Hazan, Y.A. Que, D. Maura dan L. G. Rahme, A Method for High Throughput Determination of Viable Bacteria   Cell   Counts   in   96-well   Plates, BMC
Microbiology vol. 12(1), pp 1-7, 2012.
[13] [BSN]   Badan   Satandarisasi   Nasional, Cara   Uji Cemaran Mikroba , SNI 01-2879, 1992.
[14] S.   Sutton,Accuracy   of   Plate   Counts, Journal   of Validation Technology Vol. 17(3), pp. 42-46, 2011.
[15] Sukmawati   dan   F.   Hardianti,   Analisis Total   Plate Count (TPC) Mikroba Pada Ikan Asin Kakap Di Kota Sorong Papua Barat, Jurnal Biodjati Vol. 3(1), pp. 72- 78, 2018.
[16] M.   Yunita,   Y.   Hendrawan   dan   R.   Yulianingsih, Analisis   Kuantitatif   Mikrobiologi   Pada   Makanan Penerbangan   ( Aerofood   ACS )   Garuda   Indonesia Berdasarkan TPC ( Total Plate Count ) dengan Metode Pour Plate , Jurnal Keteknikan Pertanian Tropis dan
Biosistem Vol. 3 (3), pp. 237-248, 2015.
[17] Mailoa,   Tapotubun,   dan   Matrutty,   Analysis   Total Plate Count (TPC) on Fresh Steak Tuna Application Edible   Couting Caulerpa sp.   During   Storage   at Chilling Temperature, IOP Conference Science: Earth and Environmental Science Vol. 89, pp. 1-6, 2017.
[18] P. Antwi-Agyei dan B. K. Maalekuu, Determination of   Microbial   Contamination   in   Meet   and   Fish Products   Sold   in   The   Kumasi   Metropolis   (A   Case Study   of   Kumasi   Central   Market   and   the   Bantama Market), Meri   Research   Journal   of   Agricultural Science   and   Soil   Sciences Vol.   2(3),   pp.   038-046, 2014.
[19] S.   A.   Alamin   dan   D.   A.   Ahmed,   Astudy   of   Total Bacerial   Count   and   Organoleptic   Examination   of Different   Types   of   Sausages   in   The   Sudan, IOSR Journal of Agriculture and Veterinary Science (IOSR-
JAVS) Vol. 8 (1), pp. 18-23, 2015.
[20] C.L. Baylis, S. MacPhee dan R.P. Betts. Comparison of two commercial preparations of buffered peptone water   for   the   recovery   and   growth   of   Salmonella bacteria from foods. Journal of Applied Micribiology vol 89 (3), pp. 501-510, Mei 2000.
[21] Himedia. Buffered   Peptone   Water .   (HiMedia Laboratories Pvt, India), Mei 2019.
[22] Liofilchem. Buffered   Peptone   Water .   (Liofilchem ® s.r.l, Italy), pp 1-2, Mei 2019.
[23] J. L. Oblinger dan J. E. Jr. Kennedy, Evaluation of Diluents Used for Total Counts. Journal of Milk and Technology Vol. 39(2), pp. 114-116, 1976.