Aktivitas Antikanker Ekstrak n-Heksana Emma Rahmawat, dkk 47
AKTIVITAS ANTIKANKER EKSTRAK n-HEKSANA DAN EKSTRAK METANOL HERBA PACAR AIR ( Impatiens balsamina Linn) TERHADAP SEL KANKER PAYUDARA T47D

## THE ANTICANCER ACTIVITY IN n-HEXANE AND
METHANOL EXTRACTS OF Impatiens balsamina Linn  HERBS AGAINST BREAST CANCER CELLS T47D
Emma Rahmawati 1 , Sukardiman 2 , Annisa Farida Muti 1
Program Studi Farmasi Fakultas Ilmu Kesehatan, Universitas Muhammadiyah Malang, 1
Program Studi Farmasi, Fakultas Farmasi Universitas Airlangga 2

## ABSTRAK
Pacar  Air  ( Impatiens  balsamina Linn.)  adalah  tanaman  yang  berfungsi  sebagai antikanker,  antiinflamasi,  antirematik,  analgesik,  emenagog,  dan  dapat melunakkan  benjolan  yang  keras  (tumor).  Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk menguji  aktivitas  antikanker  ekstrak  n-heksana  dan  metanol  dari  herba  pacar  air terhadap  sel  kanker  payudara  T47D  secara in  vitro dengan  metode  MTT ( microculture tetrazolium salt ).  Herba pacar air dikatakan memiliki aktivitasnya dilihat dari jumlah sel hidup yang telah diujikan terhadap sel kanker payudara (sel T47D)  dengan  metode  MTT  dalam  rentang  waktu  24  jam  setelah  pemberian konsentrasi  larutan  uji  kemudian  ditentukan  harga  IC 50 dengan  menggunakan probit  analysis .  Ekstrak  n-heksan  memiliki  harga  IC 50 97,493  µg/ml  sehingga dikatakan moderate aktif terhadap sel kanker payudara T47D. Sedangkan ekstrak metanol  memiliki  harga  IC 50 295,359  µg/ml.  Hasil  uji  KLT  terbukti  adanya kandungan flavonoid dan steroid.
Kata  Kunci  : pacar  air  ( Impatiens  balsamina Linn.),  T47D, microculture tetrazolium salt (MTT) assay .

## ABSTRACT
Impatiens  balsamina Linn .  is  a  plant  which  can  be  used  as  anti  cancer,  anti inflammatory,  anti  rheumatic,  analgesic,  laxative  menstruation  as  well  as  to temper tumor. The aim of this research is to examine the anti cancer activity in n- hexane and methanol extracts of Impatiens balsamina Linn herbs against breast cancer  cells  T47D  in  vitro  through  MTT  (microculture  tetrazolium  salt)  assay. Impatiens balsamina Linn herbs are considered active referred to the amount of the  living  cells  examined  against  breast  cancer  cells  (T47D  cell)  through Microculture Tetrazolium Salt (MTT) assay within 24 hours after being mixed by concentration  of  test  solution.  Then,  the  value  of  IC 50 is  decided  by  applying probit  analysis.  From  the  extracts  examined,  which  are  n-hexane  and  methanol
extract,    n-hexane  extract  has  IC 50 >  50  µg/ml  and  <100  µg/ml  with  the  value precisely  97,493  µg/ml  so  that  it  can  be  classified  as  moderate  active  against breast cancer cells T47D. From the result of the TLC experiment, it is found that it contains flavonoid and steroid.
Keywords: Impatiens balsamina Linn, T47D, microculture tetrazolium salt (MTT) assay

## PENDAHULUAN
Kanker  adalah  istilah  umum untuk  pertumbuhan  sel  yang  tidak normal  seperti  sel  tumbuh  sangat cepat,  tidak  terkontrol  dan  tidak berirama  yang  dapat  menyusup  ke jaringan  tubuh  normal  dan  menekan jaringan  tubuh  normal  sehingga mempengaruhi  fungsi  tubuh.  Sel-sel kanker  akan  terus  membelah  diri dengan  tidak  terkendali  (Diananda,
2007). Organisasi Kesehatan Dunia menyatakan, pada tahun 2015,
diperkirakan  ada  9  juta  orang  yang meninggal  karena  kanker  dan  pada tahun  2030  diperkirakan  ada  11,4 juta kematian karena kanker. Jumlah kematian  akibat  kanker  lebih  besar daripada  total  jumlah  kematian akibat TBC, HIV dan malaria. World Health Organization (WHO) mengungkapkan  terjadi  peningkatan jumlah penderita kanker setiap tahunnya  hingga  mencapai  6,25  juta orang dan dua pertiganya berasal dari negara berkembang
termasuk
Indonesia (Depkes RI, 2010). Salah  satu  jenis  kanker  yang sering  terjadi  saat  ini  adalah  kanker payudara.  Kanker  payudara  adalah kanker yang terjadi karena
terganggunya  sistem  pertumbuhan sel  di  dalam  jaringan  payudara. Kanker  payudara  merupakan  jenis kanker  umum  yang  terjadi  pada wanita. Hal ini berdasarkan penelitian di Amerika, yang menunjukan  bahwa  hampir  sepertiga kanker  yang  didiagnosa  pada  wanita adalah  kanker  payudara  (Diananda, 2007).
Beberapa usaha pengobatan kanker  telah  dilakukan  dengan  cara seperti pembedahan, radiasi, pemberian  obat  antikanker  atau kemoterapi (Sukardja, 2000). Namun usaha-usaha  ini  belum  memperoleh hasil  yang  memuaskan,  bahkan  efek dari  kegagalan  pembedahan  dapat menyebabkan  kanker  menyebar  ke bagian  tubuh  lain  dengan  kondisi yang  parah  (Nafrialdi  dan  Gunawan,
2007). Hal ini
mendorong dikembangkannya  obat  baru  yang mempunyai  efek  terapi  yang  baik. Penelitian  untuk  menemukan  obat antikanker  antara  lain  dilakukan dengan  menggali  senyawa-senyawa alam  yang  berasal  dari  tumbuhan. Khususnya  yang  selama  ini  telah dipercaya  oleh  sebagian  masyarakat
48
Media Farmasi, Vol 10 No.2 September 2013 : 47-55
Aktivitas Antikanker Ekstrak n-Heksana Emma Rahmawat, dkk 49
sebagai  obat  tradisional  (Mangan,
2010).
Salah  satu  bahan  tanaman  yang dapat  digunakan  sebagai  alternatif pengobatan  kanker  adalah  tanaman pacar  air  ( Impatiens  balsamina
Linn). Bunga pacar air yang mengandung antosianin, sianidin dan malvidum berkhasiat sebagai antihipertensi dan rematik. Biji pacar air  mengandung  saponin, parinaric acid ,  kuersetin,  balsaminasterol,  α- spinasterol, β-ergosterol, naphtaquinon,  minyak  atsiri,  dan derivat  kamferol  yang  berkhasiat untuk  mempermudah  persalinan  dan mengobati kanker saluran pencernaan atas (Dalimartha, 2003). Tanaman pacar air sudah terbukti memiliki aktivitas sebagai antikanker. Hal ini sudah ditunjukkan  pada  penelitian  Amelia (2011)  menggunakan  metode Brine Shrimp Lethality Test (BST). Berdasarkan  hasil  analisis  yang diperoleh harga LC 50 ekstrak metanol  744,4893  ±  85,96  µg/ml. Dimana  dinyatakan  bahwa  suatu tanaman mempunyai aktivitas antikanker apabila harga LC 50 kurang  dari  1000  µg/ml.  Dari  hasil uji skrining fitokimia pada penelitian Amelia (2011) tersebut juga diketahui  bahwa  ekstrak  metanol herba pacar air mengandung
senyawa  flavonoid,  saponin  dan steroid/triterpen  yang  merupakan komponen senyawa sitotoksik.
Tujuan  penelitian  ini  adalah mengetahui  aktivitas  antikanker  dari
ekstrak n-heksan dan ekstrak metanol  herba  tanaman  pacar  air ( Impatiens balsamina Linn) terhadap sel  kanker  payudara  T47D  secara in vitro dengan  metode  MTT.  Tujuan berikutnya adalah mengetahui golongan senyawa kimia dari ekstrak herba  tanaman  pacar  air  ( Impatiens balsamina Linn) yang efektif terhadap  uji in  vitro pada  sel  kanker payudara  T47D  dengan  metode MTT.

## METODE PENELITIAN
Bahan  tanaman  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  herba pacar  air  ( Impatiens  balsamina Linn.)  yang  diambil  dari  Materia Medika  Batu,  Jawa  Timur  kemudian diekstraksi  dengan  menggunakan pelarut n -heksana  dan  metanol. Bahan  yang  digunakan  untuk  uji aktivitas antikanker adalah sel kanker payudara T47D, Fetal Bovine Serum (FBS),  media  kultur  RPMI, Dimethyl  sulfoxide (DMSO),  reagen
MTT (3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5- difeniltetrazolium  bromid) , sodium duodecyl sulphate (SDS), doksorubisin. Alat-alat yang
digunakan  adalah  rotavapor,  silica gel,  inkubator  CO 2 ELISA reader , hemasitometer.
Uji Microculture  Tetrazolium  Salt (MTT) Assay Ekstrak n -heksana  dan  ekstrak metanol  herba  pacar  air  dibuat dengan konsentrasi larutan uji
sebesar  31,25,  62,5,  125,  250  dan 500  µg/ml.  Sebagai  kontrol  positif digunakan doksorubisin dengan konsentrasi  6,25,  12,5,  25,  50  dan 100  µg/ml.  Masing-masing  seri konsentrasi dibuat replikasi 3 kali. Suspensi sel kanker T47D (41x10 4 sel/ml)  dimasukkan  ke dalam  plate  berisi  96  sumuran  dan diinkubasi selama 24 jam. Setelah 24 jam  media  dibuang  dan  dicuci dengan PBS, dimasukkan seri konsentrasi  ekstrak n -heksana  dan ekstrak  metanol  herba  pacar  air  ke dalam  sumuran  kemudian  diinkubasi selama  24  jam.  Pada  akhir  inkubasi, larutan  dalam  plate  dibuang  dan dicuci  dengan  PBS  1x  kemudian ditambahkan  reagen  MTT  100  µg. Sel yang telah diberi MTT diinkubasi selama  2-4  jam  dalam  inkubator (sampai  terbentuk  garam  formazan). Setelah  garam  formazan  terbentuk,
ditambahkan stopper SDS  10% dalam 0,1N HCl kemudian diinkubasi  di  tempat  gelap  selama semalam.  Setelah  itu  dilakukan pembacaan  dengan  menggunakan Elisa reader dengan panjang gelombang  595  nm.  Sel  yang  hidup akan bereaksi dengan MTT
membentuk warna ungu.
Deteksi Senyawa Flavonoid Hasil ekstraksi dikocok dengan 3 ml n- heksana  berulang-ulang  sampai ekstrak  tidak  berwarna.  Residu ditambah  dengan  2  ml  etanol  80%, kemudian  disaring.  Filtrate  ditotol pada  fase  diam.  Uji  kromatografi lapis  tipis  ini  menggunakan  fase
diam silica  gel dan  fase  gerak kloroform-aseton-asam
formiat (6:6:1)  kemudian  dilakukan  uji  KLT dengan menggunakan penampak noda uap ammonia. Adanya flavonoid ditunjukkan dengan timbulnya warna kuning. Deteksi Senyawa Golongan Glikosida Saponin dan Triterpenoid
Hasil  ekstraksi  ditambah  5  ml HCl  2N,  dididihkan  dan  ditutup dengan  corong  berisi  kapas  basah selama  1  jam  untuk  menghidrolisis saponin.  Setelah  dingin,  dinetralkan dengan ammonia, kemudian diekstraksi  dengan  5  ml n -heksana sebanyak  2  kali,  lalu  diuapkan hingga  tinggal  0,5  ml,  ditotolkan pada  plat  KLT.  Uji  KLT  ini menggunakan  fase  diam  silica  gel dan fase gerak n -heksana – etil asetat (4:1) kemudian  dilakukan uji    KLT dengan menggunakan penampak noda  Anisaldehida  asam  sulfat. Adanya sapogenin ditunjukkan dengan adanya noda berwarna merah ungu (ungu).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian ini menggunakan bagian  herba  dari  tanaman  pacar  air ( Impatiens  balsamina Linn)  yang diekstraksi  dengan  metode  maserasi. Tanaman ini memiliki khasiat sebagai antiinflamasi, analgesik, antikanker,  peluruh  haid  dan  dapat melancarkan  peredaran  darah  serta melunakkan masa atau benjolan yang keras.
50
Tabel  I. Hasil  Pembuatan  Ekstrak  n-Heksana  dan  Ekstrak  Metanol  Herba  Pacar  Air ( Impatiens balsamina Linn)
Senyawa  kimia  yang  terkandung dalam  herba  pacar  air  adalah flavonoid, saponindan steroid (Steenis,  2008  ;  Dalimartha,  2003). Hasil  ekstrak  n-heksana  dan  ekstrak metanol  herba  pacar  air  ( Impatiens balsamina Linn) tersaji pada Tabel I.
Pada  penelitian  ini  metode  yang digunakan  adalah  metode  MTT. Metode Microculture  Tetrazolium Salt (MTT)  yang  merupakan  salah satu uji in vitro dengan menggunakan kultur sel yang digunakan  untuk  mendeteksi  tingka Untuk menentukan panenan sel yang akan dimasukkan ke dalam Microwell  plate  96 maka  terlebih dahulu dilakukan perhitungan dengan menggunakan hemositometer. Perhitungan sel
dilakukan  di  bawah mikroskop
inverted . Hasil perhitungan sel T47D
yang  terdiri  dari  4  kamar  hitung adalah  ∑  sel  kamar  A  =  34,  ∑  sel kamar  B  =  58,  ∑  sel  kamar  C  =  41 dan  ∑  sel  kamar  D  =  30,  maka perhitungan dilakukan dengan rumus berikut :
Dengan menggunakan rumus
tersebut  sel  yang  digunakan  untuk 100  sumuran  sebanyak  2,4  ml  dan media  kultur  yang  dibutuhkan  untuk 100 sumuran= 10 – 2,4 ml =7,6 ml.
ketoksikan  suatu  senyawa.  Prinsip dari metode  ini adalah  adanya reaksi reduksi selular yang didasarkan pada pemecahan  garam  tetrazolium  MTT (3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difenil tetrazolium bromid) berwarna kuning menjadi  kristal  formasan  berwarna biru  keunguan  (Basmal  dkk,  2009). Metode  perubahan  warna  tersebut digunakan  untuk  mendeteksi  adanya poliferasi  sel.  Sel  yang  mengalami poliferasi  akan  menyerap  MTT sehingga sel-sel tersebut akan berwarna  ungu  akibat  terbentuknya kristal tetrazolium (formazan). Penambahan reagen stopper (bersifat detergenik)  akan  melarutkan  kristal berwarna  ini  yang  kemudian  diukur absorbansinya  menggunakan  ELISA reader (CCRC, 2009) . Sel yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  sel  kanker payudara T47D. Sel T47D merupakan continous  cell  line yang diisolasi  dari  jaringan  tumor  duktal payudara  seorang  wanita  berusia  54 Juml.sel terhitung/mL  =
∑sel kamar A+∑sel kamar B+∑sel kamar C
+∑sel kamar D  x10 4 4 Aktivitas Antikanker Ekstrak n-Heksana Emma Rahmawat, dkk          51
Ekstrak metanol 500 4,5 25,20 Ekstrak n-heksana 500 4,5
3,74
Nama Bahan (gram) maserasi (Liter) Ditimbang
digunakan untuk 3 kali (gram) Berat serbuk yang Jumlah pelarut yang Berat ekstrak kental
tahun (CCRC, 2009). Hasil absorbansi  kontrol  sel  dan  kontrol media  tersaji  pada  Tabel  II  dan kondisi  sel  setelah  perlakuan  dengan metode MTT tersaji pada Gambar 1.
Tabel  III  menyajikan  hasil  uji aktivitas  antikanker  dari  kontrol positif doksorubisin sel kanker payudara  (T47D)  dengan  metode
MTT.  Hasil  absorbansi  sel  diukur dengan Elisa  reader pada  panjang gelombang 595 nm. Tabel 4
merupakan hasil uji aktivitas antikanker  dari  ekstrak  n-heksana dan  ekstrak  metanol herba pacar air
( Impatiens balsamina Linn) terhadap
sel  kanker  payudara  T47D  dengan metode  MTT.  Hasil  absorbansi diperoleh dari
pembacaan
menggunakan  ELISA reader dengan panjang gelombang 595 nm.
Gambar  2  menyatakan  hubungan antara konsentrasi kontrol positif dan bahan  uji  terhadap  persentase  sel hidup kanker payudara T47D dimana semakin  tinggi  dosisnya,  semakin sedikit  sel  kanker  payudara  T47D yang hidup. IC 50 merupakan bilangan yang menunjukkan konsentrasi ekstrak  yang  mampu  menghambat poliferasi  sel  sebesar  50%  dan menunjukkan potensi ketoksikan suatu  senyawa  terhadap  sel  kanker. Semakin  kecil  nilai  IC 50 semakin tinggi aktivitas  antikanker  (Winarno, 2011).
Tabel II. Hasil absorbansi kontrol sel dan kontrol media
Keterangan : R = replikasi ke-
Gambar 1 . Kondisi  sel  sebelum  dan  sesudah  pemberian  MTT  dilihat  di  bawah  mikroskop dengan perbesaran 40 kali
Kelompok Absorbansi Rata-rata absorbansi R1 R2 R3 Kontrol Sel 0,730 0,786 0,730 0,749 Kontrol Media 0,099 0,100 0,114 0,104 52 Media Farmasi, Vol 10 No.2 September 2013 : 47-55
Tabel III. Hasil Absorbansi kontrol positif doksorubisin Konsentrasi kontrol positif (µg/ml) Rata-rata % sel hidup Doksorubisin100 21,004 Doksorubisin 50 40,507 Doksorubisin 25 45,732 Doksorubisin 12,5 50,181 Doksorubisin 6,25 45,370
Tabel  IV. Hasil  absorbansi  ekstrak n -heksana  dan  ekstrak  metanol  herba  pacar    air  ( Impatiens balsamina Linn) Nama bahan Konsentrasi (µg/ml) Rata-rata % sel hidup Ekstrak n -heksana 500 1,190 250 7,450 125 39,731 62,5 65,701 31,25 99,224 Ekstrak Metanol 500 24,934 250 50,802 125 98,500 62,5 94,620 31,25 99,897
Gambar 2. Hubungan antara konsentrasi kontrol positif dan bahan uji terhadap viabilitas sel kanker payudara
Menurut National Cancer Institute (NCI) suatu ekstrak dinyatakan  aktif  memiliki  aktivitas antikanker apabila memiliki nilai IC-
50 < 30 µg/ml,  moderate aktif apabila memiliki nilai IC 50 ≥30  µg/ml danIC 50 <  100  µg/ml  dan  dikatakan tidak  aktif  apabila  nilaiIC 50 >  100
µg/ml.  Berdasarkan  hasil  di  atas menunjukkan  bahwa  ekstrak n - heksan  dikatakan  moderate  aktif terhadap  sel  kanker  payudara  T47D secara in  vitro dengan  metode Microculture Tetrazolium Salt (MTT). 0 50 100 150 0 40 80 120 160 200 240 280 320 360 400 440 480 sel hidup ( % ) konsentrasi heksan metanol doksorubisin
Aktivitas Antikanker Ekstrak n-Heksana Emma Rahmawat, dkk 53
Tabel IV. Hasil penentuan harga IC 50 doksorubisin, ekstrak n -heksana dan ekstrak metanol herba pacar  air  ( Impatiens  balsamina Linn)  terhadap  sel  kanker  payudara  T47D  dengan probit analysis
Nama Ekstrak Harga IC 50 (µg/ml) Doksorubisin 8,294 n- heksana 97,493 Metanol 295,359

## Uji Kromatografi Lapis Tipis (KLT)

## 3.a                                                                    3.b
Gambar 3a. Hasil KLT ekstrak n-heksan herba pacar air dengan fase gerak kloroform- aseton-asam formiat (6:6:1), penampak noda uap ammonia.
3b. Fase gerak n -heksana – etil asetat (4:1), penampak noda Anisaldehida asam sulfat.
Ekstrak n -heksana yang moderate aktif  terhadap  sel  kanker  T47D berdasarkan metode MTT selanjutnya dilakukan uji KLT untuk melihat  adanya  kandungan  senyawa flavonoid  yang  berfungsi  sebagai antikanker  serta  melihat  adanya kandungan senyawa steroid.
Hasil  uji  KLT  menunjukkan
adanya kandungan senyawa flavonoid  dengan  timbulnya  warna kuning (Gambar 3.a) serta menunjukkan adanya senyawa
terpenoid  dengan  timbulnya  warna ungu (3.b).

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak  n- heksana  herba  pacar  air  ( Impatiens balsamina Linn) memiliki harga IC 50 sebesar  97,493  µg/ml,  sedangkan ekstrak  metanol  herba  pacar  air
54
Media Farmasi, Vol 10 No.2 September 2013 : 47-55
memiliki  harga  IC 50 sebesar  295,359 µg/ml.  Hasil  uji  KLT  menunjukkan adanya senyawa flavonoid dan terpenoid  pada  ekstrak  n-heksana herba pacar air ( Impatiens balsamina Linn).

## DAFTAR PUSTAKA
Amelia,  R.,  2011,  Uji  Praskrining Aktivitas Antikanker Herba Pacar Air ( Impatiens balsamina Linn . )  dengan  Metode Brine  Shrimp  Lethality  Test (BST) , Skripsi, Malang: Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Muhammadiyah Malang. Basmal,  J.,  Amini,  S.,  Sugiyono, Murniyati, 2009, Seminar Nasional  Pengolahan  Produk dan  Bioteknologi  Kelautan  dan Perikanan, Jakarta. CCRC  ( Cancer  Chemoprevention Research Center ) , 2009, Preparasi  sample, Yogyakarta: Fakultas Farmasi UGM. Dalimartha, S., 2003, Atlas Tumbuhan  Obat  Indonesia  III, Jakarta : Trubus Agriwidya. Dalimartha, S., 2003, Ramuan
Tradisional  untuk  Pengobatan Kanker, Cetakan  VI.  Jakarta  :
Penebar Swadaya.
Depkes, 2010, Laporan PTM Berdasarkan  Rumah  Sakit  dan Puskesmas Kabupaten Sukoharjo. Sukoharjo: Depkes. Diananda,  R.,  2007, Mengenal  Seluk Beluk Kanker, Yogyakarta: Katahati. Mangan,  Y.,  2010, Solusi  Sehat Mencegah dan Mengatasi Kanker . Jakarta: Agromedia
Pustaka.
Nafrialdi  dan  Gunawan,  S,G.,  2007,
Antikanker, Farmakologi  dan Terapi, Edisi  ke-5.    Jakarta: Departemen  Farmakologi  Dan Terapeutik  Fakultas  Kedokteran Universitas Indonesia.
National  Cancer  Institute,  2001,
Measuring  Cancer  Death, Cited
Steenis,  C.  G.  G.  J.,  Den  Hoed,  D., Bloembergen,  S.,  dan  Eyma,  P. J.,  2008, Flora  untuk  Sekolah  di Indonesia , Cetakan ke-12.
Jakarta : Pradnya Paramita.
Winarno,  E,  2011,  Uji  sitoksisitas Ekstrak  Kapang Aspergillus  sp. terhadap  Sel  Kanker  Payudara T47D , Skripsi, Program  Sarjana Universitas Indonesia Aktivitas Antikanker Ekstrak n-Heksana Emma Rahmawat, dkk 55
from http://www.cancer.gov/csr. Maret 2007