## Sasambo Journal of Pharmacy
https://jffk.unram.ac.id/index.php/sjp
___________ Email: sitimaryamindriyati@gmail.com (*Corresponding Author)
Copyright © 2023, The Author(s).
This article is distributed under a Lisensi Creative Commons Atribusi 4.0 Internasional .
Penetapan  kadar vitamin C pada  daun kelor  ( Moringa oleifera L.) dan  bayam  hijau  ( Amaranthus  gangeticus L.)  dengan  metode spektrofotometri UV-Vis
Siti Maryam Indriyati 1* , Yayuk Andayani 2 , Anggit Listyacahyani Sunarwidhi 1
1 Program Studi Farmasi, Fakultas Kedokteran, Universitas Mataram, Mataram, Indonesia.
2 Departemen Pascasarjana, Magister Pendidikan IPA, Universitas Mataram, Mataram, Indonesia.
DOI: https://doi.org/10.29303/sjp.v4i1.190
Article Info
Abstract: Vitamin C is a compound that cannot be formed by the body itself. Vitamin C is needed to regulate metabolic processes and normal body functions. Lack of vitamin C can cause  a  decrease  in  the  immune  system.  During  a  pandemic,  vitamin  C  is  needed  to improve  the  immune  system  to  prevent  and  fight  disease  infections.  The  pandemic  has caused an increase in the need and price of vitamin C supplements in the market. Fulfilling the body’s vitamin C needs can use alternatives such as Moringa leaves and green spinach. This study aims to determine the levels of vitamin C in Moringa leaves and green spinach with  variations  in  temperature  and  concentration.  Analysis  of  vitamin  C was  carried  out using  UV-Vis  spectrophotometry  at  a  wavelength  of  516  nm.  The  results  of  the determination  of  vitamin  C  levels  in  Moringa  leaves  and  green  spinach  obtained  the highest  levels  of  24,9948%  and  19,0205%,  and  the  lowest  levels  of  2,2456%  and  1,8710%.
The results of the ANOVA test showed that there was a significant difference in the levels of vitamin C obtained at the given temperature and concentration variations. Received : 2022-11-07 Revised : 2023-02-13 Accepted : 2023-02-16 Keywords: Vitamin C, Moringa leaves, Green spinach, Uv-Vis spectrophotometry
Citation: Indriyati, S. M., Andayani, Y., & Sunarwidhi, A. L. (2023). Penetapan kadar vitamin C pada daun kelor ( Moringa oleifera L.) dan bayam hijau ( Amaranthus gangeticus L.) dengan metode spektrofotometri UV-Vis. Sasambo Journal of Pharmacy , 4 (1), 1-7. https://doi.org/10.29303/sjp.v4i1.190

## Pendahuluan
Vitamin C merupakan zat organik esensial yang tidak dapat dibentuk dan disimpan sendiri oleh tubuh. Vitamin  C  berperan  penting  dalam  rangka  memenuhi kebutuhan  tubuh  sehingga  proses  metabolisme  yang terjadi  dalam  tubuh  dapat  berjalan  dengan  normal, terutama  dalam  metabolisme  karbohidrat,  sintesis protein, lipid, dan kolagen (Kamiensky & Keogh, 2015). Vitamin  C  memiliki  sifat  sebagai  antioksidan  yaitu senyawa  yang  melindungi  jaringan  sel  dari  radikal bebas  dan  oksidasi,  serta  penting  untuk  produksi kolagen  dan  karnitin  yang  berkontribusi  terhadap peningkatan dan pertahanan kekebalan tubuh (Fatimah et  al.,  2011).  Kekurangan  vitamin  C  dapat menyebabkan  kelelahan,  anoreksia,  nyeri  otot,  lebih
mudah  stress  dan  infeksi  (penurunan  daya  tahan tubuh),  bahkan  dapat  menimbulkan  penyakit  skorbut. Penyakit  skorbut  dapat  ditandai  dengan  adanya pendarahan pada gusi, lemah, nyeri sendi dan  anemia (Arel et al., 2017).
Berdasarkan  Permenkes  RI  No  75  tahun  2013, angka kecukupan vitamin C minimal per hari yaitu 40- 50  mg  per  hari  untuk  bayi  dibawah  1  tahun,  40  mg untuk  umur  1-3  tahun,  45  mg  untuk  umur  4-6  tahun, 45-50 mg untuk umur 7-12 tahun, 100 mg untuk wanita hamil,  150  mg  untuk  ibu  menyusui,  dan  60  mg  untuk umur  diatas  13  tahun.  Rekomendasi  organisasi kesehatan dunia (WHO) untuk asupan vitamin C telah ditetapkan yaitu 90 mg per hari untuk dewasa normal.
Pada  saat  pandemi,  vitamin  C  sangat dibutuhkan oleh tubuh khususnya untuk
meningkatkan  dan  memperbaiki  daya  tahan  tubuh, selain  dari  berolahraga  dan  berjemur  (Hidayah  et  al., 2020).  Hal  ini  sesuai  dengan  kebijakan  yang dikeluarkan oleh pemerintah melalui Badan Pengawas Obat  dan  Makanan  (BPOM)  (2020)  bahwa  masyarakat direkomendasikan  untuk  mengonsumsi  vitamin  C,  D, E,  probiotik,  zink,  dan  selenium  untuk  memperbaiki daya tahan tubuh di masa pandemi.
Maraknya  produk  olahan  seperti  suplemen vitamin  menyebabkan  masyarakat  lebih  memilih mengonsumsi  dalam  bentuk  olahan  dibandingkan mengonsumsi  vitamin  C  dari  sumber  alami.  Hal  ini dikarenakan  produk  olahan  lebih  mudah  ditemukan dan penggunaannya relatif lebih praktis. Di Indonesia, pertumbuhan konsumsi suplemen mengalami peningkatan  sebesar  5,28%  pada  tahun  2019 (Kementerian  Perindustrian  RI,  2019).  Penelitian  pada mahasiswa  Institut  Teknologi  Sepuluh  November, ditemukan  bahwa  suplemen  yang  paling  banyak dikonsumsi adalah vitamin C (46,58%) (I Nengah et al., 2020).  Akibat  adanya  pandemi,  permintaan  dan konsumsi  suplemen  vitamin  dipasaran  semakin melonjak.  Hal  ini  menyebabkan  kelangkaan  vitamin dan  meningkat  harganya  2-3  kali  dibandingkan  dari biasanya (Handayani et al., 2020).
Berdasarkan  kandungannya,  suplemen  vitamin merupakan produk yang mengandung zat kimia sama halnya  dengan  obat.  Konsumsi  suplemen  yang  keliru dapat menyebabkan terganggunya metabolisme tubuh, toksisitas,  kerusakan  organ,  dan  bahkan  overdosis. Suplemen  memiliki  efek  farmakologi  dan  juga  dapat menyebabkan  efek  samping  terutama  untuk  individu yang rentan (Ronis et al., 2018). Oleh karena itu, untuk menghindari  masalah  kesehatan  akibat  efek  samping dan langkanya suplemen vitamin ini, maka diperlukan sumber  vitamin  C  alami  untuk  memenuhi  kebutuhan harian tubuh.
Sumber vitamin C sebagian besar tergolong dari sumber  nabati  seperti  buah  dan  sayur  segar.  Selain buah  yang  paling  banyak  dikenal  masyarakat  sebagai sumber  vitamin  C,  sayuran  seperti  daun  kelor  dan bayam hijau juga memiliki kandungan vitamin C yang cukup tinggi (Rukmana, 1994). Daun kelor dan bayam hijau  sendiri  dari  sudut  pandang  masyarakat  awam merupakan komoditas sederhana, yang mudah didapat setiap  saat,  harga  murah  dan  dapat  diolah  menjadi makanan  sederhana.  Mahmood  et  al.,  (2010) melaporkan  bahwa  dalam  100  gram  daun  kelor  segar setara  dengan  7  kali  kandungan  vitamin  C  yang  ada pada  buah  jeruk.  Kandungan  dalam  100  gram  bayam hijau segar  setara dengan  2 kali kandungan vitamin  C yang ada pada buah jeruk (IKAPI, 2012).
Penentuan  tempat  tumbuh  untuk  tanaman penting  dilakukan  karena  perbedaan  tempat  tumbuh dapat  mempengaruhi  kandungan  senyawa  metabolit
suatu tanaman (Dong et al., 2011). Pengaruh perbedaan tempat  tumbuh  tanaman  terutama  berkaitan  dengan proses  metabolisme  tanaman,  seperti  proses  biokimia dan  sintesis  senyawa  metabolit  termasuk  vitamin (Karamoy,  2009).  Penelitian  Cahyati  et  al.,  (2014) menyatakan  bahwa  kandungan  vitamin  C  dalam  100 gram  daun  kelor  tua  dipesisir  sebesar  363,49  mg  dan didaerah  pegunungan  312,05  mg.  Penelitian  lain  juga melaporkan  kandungan  vitamin  C  pada  daun  kelor sebesar 7,96 mg/g (Tahir et al., 2016).
Selain  tempat  tumbuh,  vitamin  C  yang  bersifat mudah  rusak  selama  proses  penyimpanan  dan pemasakan  atau  pengolahan  seperti  pemanasan  dapat mempengaruhi  kandungan  vitamin  C  tanaman. Manuhara  (2017)  melaporkan  kadar  vitamin  C  pada bayam  hijau  segar  0,07%,  pada  bayam  hijau  rebus 0,0207%, dan pada bayam hijau goreng 0,0037%.
Penelitian ini menentukan kadar vitamin C pada daun kelor dan bayam hijau  dengan variasi perlakuan pada  suhu  dan  konsentrasi  menggunakan  metode spektrofotometri UV-Vis, dimana metode ini merupakan  metode  yang  relatif  murah  dan  mudah yang  dapat  menghasilkan  ketepatan  dan  ketelitian yang tinggi dengan kesalahan relatif sebesar 1-3%, serta dapat  dilakukan  dengan  cepat  dan  tepat  (Wardani, 2012).  Berdasarkan  uraian  tersebut,  penelitian  ini dilakukan  untuk  mengetahui  kadar  vitamin  C  pada daun kelor dengan menggunakan metode spektrofotometri UV-Vis.

## Bahan dan Metode

## Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan  yaitu  alat-alat  gelas (Iwaki),  blender  (Philips),  botol  warna  coklat, hotplate (Labnet),  kertas  saring,  mikropipet,  perangkat spektrofotometri  uv-vis  (Analitik  Jena),  thermometer, dan timbangan analitik (Ohaus).
Bahan-bahan  yang  digunakan  yaitu  asam askorbat  p.a  (Merck),  asam  oksalat  p.a  (Merck), aquadest,  daun  kelor,  bayam  hijau,  natrium  2,6- diklorofenol indofenol p.a (Merck), natrium bikarbonat p.a (Merck).

## Prosedur Kerja Pengumpulan bahan
Sampel daun kelor dan bayam hijau diambil dari Desa  Moncok,  Kecamatan  Ampenan,  Kota  Mataram, Provinsi  Nusa  Tenggara  Barat.  Sampel  dipetik langsung dari pohonnya. Jumlah sampel yang diambil adalah 300 mg.

## Determinasi tanaman
Determinasi  dilakukan  di  Laboratorium  Ekologi dan  Biosistematika  Tumbuhan,  Fakultas  Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Mataram.

## Preparasi sampel
Daun  kelor  dan  bayam  hijau  yang  terkumpul, selanjutnya  dicuci  bersih  dengan  air  mengalir kemudian  dipotong  kecil-kecil  dan  ditimbang  masing- masing  100  mg.  Sampel  direbus  pada  suhu  0 o C,  50 o C, dan  100 o C.  Sampel  dihaluskan  dengan  penambahan aquades  100  ml,  lalu  disaring  menggunakan  kertas saring.  Setiap  variasi  suhu  lalu  dibuat  dalam konsentrasi  5  ppm,  50  ppm,  dan  100  ppm.  Variasi pegujian sampel tertera pada Tabel 1 .
Tabel 1. Variasi Pengujian Sampel
Variasi Perlakuan Suhu ( o C) Konsentrasi (ppm) T 1 C 1 0 5 T 1 C 2 0 50 T 1 C 3 0 100 T 2 C 1 50 5 T 2 C 2 50 50 T 2 C 3 50 100 T 3 C 1 100 5 T 3 C 2 100 50 T 3 C 3 100 100 Keterangan : T 1 C 1 =  Sampel suhu 0 0 C dan konsentrasi 5 ppm T 1 C 2 =  Sampel suhu 0 0 C dan konsentrasi 50 ppm T 1 C 3 =  Sampel suhu 0 0 C dan konsentrasi 100 ppm T 2 C 1 =  Sampel suhu 50 0 C dan konsentrasi 5 ppm T 2 C 2 =  Sampel suhu 50 0 C dan konsentrasi 50 ppm T 2 C 3 =  Sampel suhu 50 0 C dan konsentrasi 100 ppm T 3 C 1 =  Sampel suhu 100 0 C dan konsentrasi 5 ppm T 3 C 2 =  Sampel suhu 100 0 C dan konsentrasi 50 ppm T 3 C 3 =  Sampel  suhu  100 0 C  dan  konsentrasi  100 ppm
Validasi metode (1) Uji presisi
Larutan  induk  100  ppm  dibuat  dengan konsentrasi 5 ppm, 10 ppm, 15 ppm, 20 ppm, 25 ppm, dan  30  ppm.  Setiap  konsentrasi  diukur  absorbansinya dengan  pengulangan  dilakukan  sebanyak  3  kali.  Nilai presisi  dapat  ditentukan  dengan  parameter  relatif standar deviasi (%RSD). Presisi yang baik adalah ≤ 2% dan  dapat  dihitung  dengan  persamaan  (1)  (Harmita, 2012).
%RSD = SD 𝑥̅ x 100%............................................................ (1)
Keterangan:
SD =  Standar deviasi/simpangan baku 𝑥̅ =  Kadar rata-rata
(2) Uji akurasi Uji  ini  dilakukan  dengan  metode spiking (penambahan  baku).  Pengukuran  akurasi  dilakukan dengan menggunakan 3 konsentrasi larutan baku yang berbeda yang terdiri dari konsentrasi rendah sebesar 1 mg/L,  konsentrasi  sedang  sebesar  1,5  mg/L,  dan konsentrasi  tinggi  sebesar  2  mg/L  yang  kemudian ditambahkan  pada  sampel.  Pengulangan  dilakukan sebanyak 3 kali. Nilai akurasi dinyatakan dalam persen akurasi  dengan  nilai  syarat  pada  rentang  80-110% dengan  kadar  analit  ≤  10  ppm  (González  &  Herrador, 2007). Akurasi dihitung menggunakan persamaan (2).
%Akurasi = Cf−Cu
Ca x 100% ................................................ (2)
Keterangan:
Cf =  Kadar  teoritis  vitamin  C  di  dalam  sampel setelah penambahan baku
Cu  =  Kadar terukur vitamin C dalam sampel Ca =  Kadar vitamin C yang ditambahkan
(3) Uji linearitas Uji  linearitas  mengacu  pada  penentuan  kurva kalibrasi  yaitu  dengan  membuat  variasi  konsentrasi dari  larutan  standar  100  ppm  menjadi  konsentrasi  5 ppm,  10  ppm,  15  ppm,  20 ppm,  25  ppm,  dan 30  ppm. Setiap  konsentrasi  diukur  absorbansinya  sebanyak  3 kali  pada  panjang  gelombang  maksimum.  Data  yang diperoleh  dibuat  dalam  bentuk  kurva  linear  untuk menunjukkan  garis  linear  antara  konsentrasi  (x)  dan absorbansi  (y).  Linearitas  baik  apabila  nilai  koefisien korelasi (r) ≥ 0,995 (FDA, 2020).
(4) Uji LoD dan LoQ Batas deteksi (LoD) dan batas kuantifikasi (LoQ) dapat dihitung secara statistik dengan linear dari kurva kalibrasi. Nilai LoD dan LoQ dapat ditentukan dengan persamaan (3) dan (4).
LoD = 3 × SD slope (𝑏) ................................................................... (3) LoQ = 10 × SD slope (𝑏) ................................................................... (4)

## Penetapan kadar vitamin C
(1) Penentuan panjang gelombang maksimum Larutan induk vitamin C 100 ppm diambil 1 mL dan  dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur  10  mL. Tambahkan 2,6-diklorofenol indofenol sampai berubah warna menjadi merah muda, lalu ditambahkan dengan asam  oksalat  0,4%  sampai  tanda  batas  dan dihomogenkan.  Ukur  panjang  gelombang  maksimum menggunakan  spektrofotometri  Uv-Vis  pada  rentang 400-800 nm dengan blanko aquades.
(2) Penentuan
Operating Time Penentuan operating  time dilakukan  dengan mengukur  absorbansi  larutan  induk  10  ppm  pada panjang  gelombang  maksimum  yang  diperoleh. Absorbansi diukur setiap menit, mulai dari menit ke-0 sampai  menit  ke-30.  Menit  yang  menghasilkan absorbansi stabil merupakan operating time .
(3) Pembuatan kurva kalibrasi
Larutan  baku  asam  askorbat  100  ppm  dipipet sebanyak 0,25 ml; 0,5 ml; 0,75 ml; 1 ml; 1,25 ml; dan 1,5 ml  dan  dimasukkan  masing-masing  ke  dalam  labu ukur  5  ml.  Tambahkan  larutan  2,6-diklorofenol indofenol  dan  ditambahkan  volumenya  dengan  asam oksalat  0,4%  hingga  tanda  batas.  Diperoleh  masing- masing konsentrasi 5 ppm, 10 ppm, 15 ppm, 20 ppm, 25 ppm,  dan  30  ppm.  Setiap  konsentrasi  diukur serapannya pada panjang gelombang maksimum.
(4) Pengukuran absorbansi larutan sampel daun kelor dan bayam hijau Larutan  sampel  daun  kelor  dan  bayam  hijau dengan  variasi  suhu  dan  konsentrasi  yang  sudah dipreparasi  sebelumnya,  diambil  masing-masing sebanyak 1 ml dan dimasukkan ke dalam labu ukur 10 ml.  Sampel  kemudian  ditambahkan  2,6  diklorofenol indofenol sampai berubah warna menjadi merah muda. Lalu  ditambahkan  asam  oksalat  0,4%  sampai  tanda batas  dan  dikocok  hingga  homogen.  Campuran tersebut  diukur  serapannya  dengan  menggunakan spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang  gelombang maksimum.  Pengukuran  dilakukan  dengan  3  kali pengulangan tiap variasi suhu dan konsentrasi.
(5) Penentuan nilai kadar vitamin C
Nilai  kadar  dalam  sampel dihitung  berdasarkan nilai  konsentrasi  rata-rata  yang  diperoleh  melalui persamaan (5).
y = bx + a ..........................................................................  (5)
Keterangan :
y =  Serapan yang diperoleh
x =  Konsentrasi
b,a  =  Koefisien persamaan linier
Hasil  perhitungan  konsentrasi  dari  persamaan (5)  kemudian  dimasukkan  kedalam  persamaan  (6) untuk memperoleh nilai kadar vitamin C.
%Kadar = Creg ( mg L ) x fp x volume pelarutan (L) Berat sampel (mg) x 100 …. (6)
Keterangan: Creg  =  Konsentrasi regresi linier Fp =  Faktor pengenceran

## Hasil dan Pembahasan
Sampel  yang  digunakan  pada  penellitian  ini adalah daun kelor dan bayam hijau yang diperoleh dari Desa  Moncok  -  Kota  Mataram  dengan  lokasi  titik koordinat  Garis  Lintang  (Lat)  :  -8.570204 o dan  Garis Bujur (Long) : 116.095838 o .
Bagian  tanaman  yang  digunakan  adalah  daun. Dalam  preparasi  sampel,  mula-mula  daun  kelor  dan bayam hijau dipetik sebanyak 300 mg dan dicuci bersih dengan  air  mengalir.  Sampel  lalu  ditiriskan  dan dipotong kecil-kecil. Sampel 300 mg kemudian di bagi menjadi  3  bagian  yang  masing-masing  100  mg  dan direbus  dengan  100  ml  aquades.  Sampel  direbus dengan variasi suhu 0 o C, 50 o C, dan 100 o C. Setiap suhu lalu dibuat dengan variasi konsentrasi 5 ppm, 50 ppm, dan 100 ppm sehingga diperoleh sampel dengan variasi suhu dan konsentrasi seperti pada Tabel 1 . Pembuatan sampel dengan variasi suhu dan konsentrasi bertujuan untuk membuktikan bahwa vitamin C akan mengalami oksidasi  atau  kerusakan  pada  strukturnya  akibat adanya  pemanasan  sehingga  akan  mempengaruhi penetapan  kadar  vitamin  C  pada  sampel  struktur (Poedjiadi & Supriyanti, 1994).
Langkah pertama pada penetapan kadar vitamin C  dengan  metode  spektrofotometri  UV-Vis  adalah menetapkan panjang gelombang maksimum. Penentuan  panjang  gelombang  maksimum  ditentukan dengan cara mengambil 1  ml larutan induk vitamin  C 100 ppm yang dilarutkan pada labu ukur 10 ml dengan 2,6-diklorofenol  indofenol  sampai  berubah  warna menjadi  merah  muda,  lalu  ditambahkan  dengan  asam oksalat  0,4%  dan  dilakukan  pengukuran  absorbansi pada rentang 400-800 nm. Hasil yang diperoleh dari uji penentuan  panjang  gelombang  maksimum  yaitu  516 nm.  Selanjutnya  dilakukan  pengukuran operating  time, dimana  pada  penelitian  ini  diketahui  bahwa  hasil untuk operating  time diperoleh  waktu  5  menit, dikarenakan  pada  waktu  5  menit  absorbansi  berada pada  kondisi  stabil.  Pengukuran  larutan  uji  dapat diukur  pada  rentang  5  menit untuk  memperoleh  hasil yang linier.
Pengukuran  larutan  baku  dengan  menentukan absorbansi  dari  enam  seri  konsentrasi  larutan  baku bertujuan  untuk  membuat  kurva  baku  sehingga diperoleh  persamaan  regresi  yang  linier.  Setiap pengukuran  direplikasi  sebanyak  tiga  kali  untuk memastikan pengukuran dilakukan  secara tepat. Hasil yang diperoleh kemudian dibuat persamaan regresinya,  dimana  persamaan  yang  diperoleh  yaitu  y = 0,0194x + 0,1921 (R 2 = 0,9986).
Langkah  selanjutnya  adalah  melakukan  validasi metode  terlebih  dahulu  yang  bertujuan  membuktikan bahwa  metode  standar  yang  digunakan  untuk pengujian  data  dilakukan  pada  kondisi  laboratorium
yang digunakan (FDA, 2020). Parameter verifikasi yang dilakukan  yaitu  linearitas,  presisi,  akurasi,  LoD  dan LoQ. Hasil pengujian parameter verifikasi menunjukkan  bahwa  validasi  metode  yang  dilakukan sudah  baik  dengan  memenuhi  persyaratan  standar setiap  uji.  Pengukuran  kadar  dapat  dilakukan  setelah pengujian parameter verifikasi selesai dilakukan.
Pengukuran  kadar  vitamin  C  dari  sampel  yang telah  dipreparasi  dilakukan  dengan  mengukur absorbansinyapada  panjang  gelombang  maksimum yang  diperoleh  yaitu  516  nm.  Pengukuran  dilakukan dengan  tiga  kali  pengukuran,  dengan  rata-rata absorbansi yang diperoleh seperti pada Tabel 2 .
Tabel 2. Absorbansi Larutan Sampel Daun Kelor dan
Bayam Hijau Variasi Perlakuan Absorbansi rata-rata Kelor Bayam Hijau T 1 C 1 0,2804 0,2701 T 1 C 2 0,4716 0,3534 T 1 C 3 0,6770 0,5611 T 2 C 1 0,2577 0,2589 T 2 C 2 0,4715 0,3416 T 2 C 3 0,6711 0,5416 T 3 C 1 0,2356 0,2284 T 3 C 2 0,4081 0,3179 T 3 C 3 0,6184 0,5185
Hasil pengukuran nilai absorbansi pada Tabel 2 selanjutnya  digunakan  untuk  menghitung  konsentrasi berdasarkan  persamaan  y  =  0,0194x  +  0,1921.  Nilai konsentrasi  (x)  perolehan  kemudian  dikonversi  ke dalam  bentuk  kadar  menggunakan  persamaan  (6). Kadar  vitamin  C  dalam  sampel  dapat  dilihat  pada Tabel 3 .
Tabel 3. Kadar Vitamin C Variasi Perlakuan Kadar Vitamin C (%) Kelor Bayam Hijau T 1 C 1 4,5515 4,0240 T 1 C 2 14,4071 8,3178 T 1 C 3 24,9948 19,0205 T 2 C 1 3,3831 3,4432 T 2 C 2 14,4037 7,7096 T 2 C 3 24,6906 18,0171 T 3 C 1 2,2456 1,8710 T 3 C 2 11,1374 6,4845 T 3 C 3 21,9742 16,8264
Penentuan  kadar  vitamin  C  dalam  sampel dengan  variasi  suhu  dan  konsentrasi  pada  penelitian ini  dilakukan  untuk  membuktikan  adanya  pengaruh suhu  dan  konsentrasi  terhadap  kadar  vitamin  C  yang diperoleh pada  sampel,  dan  untuk  mengetahui bahwa kadar  vitamin  C  yang  diperoleh  dapat  digunakan sebagai alternatif pemenuhan vitamin C tubuh.
Pada Tabel 3 terlihat perbedaan kadar vitamin C perolehan  akibat  adanya  perlakuan  yang  diberikan. Pada  suhu  yang  sama  dengan  konsentrasi  yang berbeda,  kadar  vitamin  C  yang  diperoleh  semakin tinggi. Pada konsentrasi yang sama dengan suhu yang berbeda,  kadar  vitamin  C  yang  diperoleh  semakin rendah.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  semakin  tinggi konsentrasi  maka  kadar  vitamin  C  semakin  tinggi. Begitu pula semakin tinggi suhu maka kadar vitamin C semakin  rendah.  Hasil  tersebut  menunjukkan  bahwa benar  terdapat  pengaruh  suhu  dan  konsentrasi terhadap  kadar  vitamin  C  yang  diperoleh,  serta membuktikan  bahwa  pemanasan  dapat  menyebabkan oksidasi atau kerusakan pada struktur vitamin C.
Kadar  vitamin  C  pada  sampel  daun  kelor  dan bayam  hijau  yang  diperoleh  seperti  pada Tabel  3 menunjukkan  adanya  perbedaan  hasil  pada  tiap  jenis sampel.  Vitamin  C  yang  direkomendasikan  untuk dikonsumsi  oleh  orang  dewasa  sekitar  45  mg/hari. Kebutuhan  vitamin  C  dapat  terpenuhi  jika  konsumsi daun kelor dan bayam hijau sebanyak 1000-2500 mg.
Pada  penelitian  ini  dilakukan  analisis  lanjutan terkait  kadar  vitamin  C  perolehan  secara  statistik menggunakan  SPSS.  Uji  statistika  yang  digunakan berupa  uji  anova  dua  jalur.  Anova  dapat  digunakan untuk  menguji  apakah  terdapat  perbedaan  secara signifikan atau tidak pada perlakuan.
Hasil uji anova dua jalur pada sampel daun kelor dengan  variasi  suhu  menunjukkan  nilai  signifikansi sebesar  0,001  <  0,05  maka  H 0 ditolak,  berarti  kadar vitamin  C  yang  diperoleh  tersebut  memang  berbeda nyata  pada  perlakuan  variasi  suhu  yang  diberikan. Sedangkan  berdasarkan  variasi  konsentrasi  diperoleh nilai signifikansi sebesar 0,000 < 0,05 artinya H 0 ditolak, maka  kadar  vitamin  C  yang  diperoleh  tersebut memang  berbeda  nyata  pada  perlakuan  variasi konsentrasi yang diberikan.
Pada  sampel  bayam  hijau,  hasil  uji  anova  dua jalur menunjukkan nilai signifikansi untuk variasi suhu sebesar  0,000  <  0,05  maka  H 0 ditolak,  artinya  kadar vitamin  C  yang  diperoleh  tersebut  memang  berbeda nyata  pada  perlakuan  variasi  suhu  yang  diberikan. Sedangkan untuk variasi konsentrasi nilai signifikansinya sebesar 0,000 < 0,05 artinya H 0 ditolak, maka  kadar  vitamin  C  yang  diperoleh  tersebut memang  berbeda  nyata  pada  perlakuan  variasi konsentrasi yang diberikan.
Pada  sampel  daun  kelor  dan  bayam  hijau dilakukan  uji  perbandingan  dengan  uji  t  (t-test) menggunakan independent sample t-test untuk melihat ada  tidaknya  perbedaan  kadar  vitamin  C  yang diperoleh antara kedua sampel. Hasil uji perbandingan yang  telah  dilakukan,  nilai  uji  perbandingan  dapat dilihat  bahwa  nilai sig.  levene’s  test  for  equality  of variances sebesar 0,036 < 0,05 maka varians data antara
sampel  daun  kelor  dan  bayam  hijau  adalah  tidak homogen.  Varians  data  antara  kedua  sampel  tidak homogen,  maka  nilai  uji  perbandingannya  dapat dilihat  pada equal  variances  not  assumed ,  dimana  nilai sig.  (2-tailed) sebesar  0,340  >  0,05  maka  H 0 diterima, artinya  hipotesis  (Hi)  ditolak  maka  kadar  vitamin  C yang  diperoleh  pada  sampel  daun  kelor  dan  bayam hijau  tidak  terdapat  perbedaan  yang  nyata  antara kedua sampel.
Penentuan  kadar  vitamin  C  daun  kelor  pada penelitian  ini  menunjukkan  hasil  tertinggi  sebesar 24,9948  mg/L.  Sementara  pada  penelitian  Cahyati  et al.,  (2014)  dengan  menggunakan  daun  kelor menghasilkan  kadar  vitamin  C  sebesar  363,49  mg untuk wilayah pesisir dan didaerah pegunungan 312,05 mg.  Pada  bayam  hijau  segar  diperoleh  hasil  sebesar 19,0205%  dan  pada  bayam  hijau  rebus  sebesar 16,8264%. Sementara pada penelitian  Manuhara (2017) kadar  vitamin  C  pada  bayam  hijau  segar  0,07%  dan pada bayam hijau rebus 0,0207%. Perbedaan nilai kadar vitamin  C  yang  diperoleh  disebabkan  oleh  faktor perbedaan  tempat  tumbuh  dengaan  ketinggian  dan kondisi  lingkungan  yang  berbeda  sehingga  dapat mempengaruhi  kandungan  vitamin  C  tanaman tersebut.  Selain  itu,  faktor  yang  terlibat  dalam perbedaan  nilai  kadar  yang  diperoleh  juga  adalah pemanasan sehingga penentuan kadar baik pada daun kelor dan bayam hijau dipengaruhi oleh adanya variasi perlakuan yang diberikan yaitu suhu dan konsentrasi.

## Kesimpulan
Berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilakukan maka dapat disimpulkan bahwa kadar vitamin C pada sampel  daun  kelor  dan  bayam  hijau  dengan  variasi suhu  dan  konsentrasi,  diperoleh  kadar  tertinggi  pada suhu  0 o C  dengan  konsentrasi  100  ppm  sebesar 24,9948% untuk daun kelor dan 19,0205% untuk bayam hijau.  Kadar  terendah  diperoleh  pada  suhu  100 0 C dengan konsentrasi 5 ppm sebesar 2,2456% untuk daun kelor dan 1,8710% untuk bayam hijau.

## Daftar Pustaka
Arel,  A.,  Martinus,  B.  A.,  &  Ningrum,  S.  A.  (2017). Penetapan  Kadar  Vitamin  C  pada  Buah  Naga Merah  ( Hylocereus  costaricensis (FAC  Weber) Britton  &  Rose )  dengan  Metode  Spektrofotometri UV-Visibel. Scientia: Jurnal Farmasi Dan Kesehatan ,
7 (1), 1–5.
Badan  Pengawas  Obat  dan  Makanan.  (2020). Pedoman Penggunaan  Herbal  dan  Suplemen  Kesehatan  dalam Menghadapi  COVID-19  di  Indonesia .  BPOM  RI. https://www.jamudigital.com/download/BukuSa

## kuObatHerbalSaatCovid19.pdf
Cahyati,  R.  D.,  Natsir,  H.,  &  Wahab,  A.  W.  (2014). Analisis  Kadar  Asam  Askorbat  dalam  Ekstrak Daun  Kelor  ( Moringa  Oleifera  Lam )  dari  Daerah Pesisir dan Pegunungan Serta Potensinya Sebagai Antioksidan. Makassar: Universitas Hasanudin .
Dong, J., Ma, X., Wei, Q., Peng, S., & Zhang, S. (2011). Effects  of  Growing  Location  on  the  Contents  of Secondary  Metabolites  in  the  Leaves  of  Four Selected Superior Clones of Eucommia ulmoides. Industrial  Crops  and  Products , 34 (3),  1607–1614. https://doi.org/10.1016/j.indcrop.2011.06.007
Fatimah, S., Hadju, V., Bahar, B., & Abdullah, Z. (2011).
Pola  Konsumsi  dan  Kadar  Hemoglobin  pada  Ibu Hamil  di  Kabupaten  Maros,  Sulawesi  Selatan.
Makara Kesehatan , 15 (1), 31–36. https://dx.doi.org/10.7454/msk.v15i1.795
Food and Drug Administration. (2020). ORA Laboratory Manual Volume II : Methods, Method Verification and Validation . US Department  of Health and Human Service.
González, A. G., & Herrador, M. Á. (2007). A  Practical Guide to Analytical Method Validation, Including Measurement  Uncertainty  and  Accuracy  Profiles. TrAC  Trends  in  Analytical  Chemistry , 26 (3),  227– 238. https://doi.org/10.1016/j.trac.2007.01.009
Handayani, R., Dhasefa, D. A., Sari, M. W., Sukmawan, M.  S.,  &  Rofiah,  N.  (2020).  Pembuatan Smoothies Mangga  Sebagai  Imun  Booster  Bagi  Warga  Kota Kulon  Kabupaten  Garut. Aptekmas:  Jurnal Pengabdian Kepada Masyarakat , 3 (4). https://doi.org/10.36257/apts.v3i4.2962
Harmita,  H.  (2012).  Petunjuk  Pelaksanaan  Validasi Metode  dan  Cara  Perhitungannya. Majalah  Ilmu
Kefarmasian , 1 (3), 117–135. https://doi.org/10.7454/psr.v1i3.3375
Hidayah,  S.  N.,  Izah,  N.,  &  Andari,  I.  D.  (2020).
Peningkatan Imunitas dengan Konsumsi Vitamin C  dan  Gizi  Seimbang  Bagi  Ibu  Hamil  Untuk Cegah  Corona  Di  Kota  Tegal. Jurnal  ABDINUS: Jurnal  Pengabdian  Nusantara , 4 (1),  170–174. https://doi.org/10.29407/ja.v4i1.14641
I Nengah, B. S., Ahmad, F. A., Chrysella, R., Farah, K., Fitria,  F.,  Happy,  N.  E.  S.,  Hieronimus,  A.  N.  U., Safiinatunnajah,  N.,  Wahyu,  A.  D.,  Yunita,  A.,  & Rahem,  A.  (2020).  Hubungan  Usia  dengan
Pengetahuan dan Perilaku Penggunaan Suplemen pada  Mahasiswa  Institut  Teknologi  Sepuluh Nopember. Jurnal Farmasi Komunitas , 7 (1), 1–7.
Kamiensky,  M.,  &  Keogh,  J.  (2015). Farmakologi Demystified . Rapha Publishing.
Karamoy,  L.  T.  (2009).  Hubungan  Iklim  Dengan Pertumbuhan  Kedelai  (Glycine  max  L  Merrill). Soil Environment , 7 (1), 65–68.
Kementerian  Perindustrian  R.  I.  (2019). Analisis Perkembangan Industri . Kementrian Kesehatan RI.
Mahmood,  K.  T.,  Mugal,  T.,  &  Haq,  I.  U.  (2010). Moringa  oleifera:  A  Natural  Gift-A  Review. Journal  of  Pharmaceutical  Sciences  and  Research , 2 (11),
775.
https://www.researchgate.net/publication/2890 88517
Manuhara,  A.  (2017). Penetapan  Kadar  Vitamin  C  Pada Daun  Bayam  Hijau  (Amaranthus  Tricolor  L)  Segar, Rebus  Dan  Goreng  Secara  Spektrofotometri  Uv-Vis . Universitas Setia Budi
Permenkes,  R.  I.  (2013). Peraturan  Menteri  Kesehatan Republik Indonesia No 75 Tahun 2013 tentang Angka Kecukupan  Gizi  yang  Dianjurkan  Bagi
Bangsa Indonesia . Kemenkes RI.
https://peraturan.bpk.go.id/Home/Details/1392 26/permenkes-no-75-tahun-2013
Poedjiadi, A., & Supriyanti, F. M. T. (1994). Dasar-dasar Biokimia. Universitas Indonesia Press.
Ronis,  M.  J.  J.,  Pedersen,  K.  B.,  &  Watt,  J.  (2018). Adverse  Effects  of  Nutraceuticals  and  Dietary Supplements. Annual  Review  of  Pharmacology  and Toxicology ,
58 , 583–601.
https://doi.org/10.1146/annurev-pharmtox- 010617-052844
Rukmana, I. H. R. (1994). Bayam, Bertanam & Pengolahan Pascapanen . Kanisius.
Tahir,  M.,  Hikmah,  N.,  &  Rahmawati,  R.  (2016). Analisis  Kandungan  Vitamin  C  dan  β-Karoten dalam  Daun  Kelor  ( Moringa Oleifra Lam .)  dengan Metode Spektrofotometri
Uv–vis. Jurnal Fitofarmaka Indonesia , 3 (1),
135–140. https://doi.org/10.33096/jffi.v3i1.173
Wardani,  L.  A.  (2012). Validasi  Metode  Analisis  dan Penentuan  Kadar  Vitamin  C  Pada  Minuman  Buah
Kemasan dengan Spektrofotometri
Uv-Visible .
Universitas Indonesia.