ANTIOXIDANT ACTIVITIES THREE ORANGE OIL (Citrus amblycarpa) AREA IN THE WEST JAVA USING THE CAROTENOID BLEACHING METHOD
Farid Pedana, Faizah Min Fadhlillah, Windi Lestari Fakultas MIPA-Universitas Garut, Jl.Jati No. 42B, Tarogong, Garut
Korespondensi: Farid Perdana (farid@uniga.ac.id)

## ARTICLE HISTORY
Received: 10 November 2016        Revised: 7 Desember 2016          Accepted: 11 Januari 2017

## Abstract
Sambal orange peel contains Sabinena and Limonena which are useful for cosmetics, aromatherapy, hair wash, and headache medications. Antioxidants are compounds that protect  body  cells  from  radical  adverse  effects.  The  purpose  of  this  study  was  to determine the antioxidant activity of sambal orange peel (Citrus amblycarpa) using the Carotenoid  Bleaching  method.  In  this  study  late  testing  of  the  antioxidant  activity  of sambal  orange  oil (Citrus  amblycarpa) in  three  regions  in  West  Java  by Carotenoid Bleaching method. The parameters for testing the antioxidant activity of sambal orange peel  oil  include  organoleptic,  specific  gravity,  refractive  index,  acid  number  and saponification  number.  The  results  of  research  conducted  on  sambal  orange  peel obtained  from  three  regions  have  good  antioxidant  activity,  especially  in  the  sambal orange  peel  obtained  from  the  Lembang  area  of  Bandung  with  antioxidant  activity  of more  than  80%.  So  that  the  results  of  this  study  show  that  the  higher  antioxidant activity  of  the  three  regions,  namely  the  Garut,  Cianjur  and  Lembang  regions,  have good activities, but for the Lembang area they have stronger antioxidant activity.
Key words : antioxidant activity, Carotenoid Bleaching, Sambal orange oil, Citrus amblycarpa
AKTIVITAS ANTIOKSIDAN MINYAK JERUK SAMBAL ( Citrus amblycarpa) DITIGA DAERAH di JAWA BARAT DENGAN METODE Carotenoid Bleaching

## Abstrak
Kulit jeruk sambal mengandung sabinena dan limonena yang berguna untuk kosmetik, aromaterapi,  pencuci  rambut,  dan  obat  sakit  kepala.  Antioksidan  adalah  suatu senyawa  yang  melindungi  sel-sel  tubuh  dari  efek  buruk  radikal.  Adapun  tujuan  dari penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  aktivitas  antioksidan  dari  kulit  jeruk  sambal (Citrus  amblycarpa) menggunakan  metode Carotenoid  Bleaching .  Pada  penelitian  ini telat  dilakukan  pengujian  terhadap  aktivitas  antioksidan  minyak  jeruk  sambal (Citrus amblycarpa) ditiga  daerah  di  Jawa  Barat  dengan  metode Carotenoid  Bleaching . Parameter  pengujian  aktivitas  antioksidan  minyak  kulit  jeruk  sambal  meliputi organoleptik, bobot jenis, indeks bias, bilangan asam dan bilangan penyabunan. Hasil

## Jurnal Ilmiah Farmako Bahari
Journal Homepage: https://journal.uniga.ac.id/index.php/JFB
penelitian  yang  dilakukan  pada  kulit  jeruk  sambal  yang  diperoleh  dari  tiga  daerah memiliki  aktivitas  antioksidan  yang  bagus  terutama  pada  kulit  jeruk  sambal  yang diperoleh dari daerah Lembang Bandung dengan aktivitas antioksidan lebih dari 80%. Sehingga hasil penelitian ini menunjukan bahwa aktivitas antioksidan yang lebih tinggi dari tiga daerah yaitu daerah Garut, Cianjur dan Lembang sama memiliki aktivitas yang bagus  namun  untuk  daerah  Lembang  lebih  memiliki  aktivitas  antioksidan  yang  lebih kuat.
Kata  kunci: Aktivitas  antioksidan, Kulit  jeruk  sambal (Citrus  amblycarpa),Metode Carotenoid Bleaching, Minyak jeruk sambal

## Pendahuluan
Radikal bebas dapat timbul akibat dari berbagai proses kimia kompleks dalam tubuh  berupa  hasil  samping  dari  proses oksidasi  atau  pembakaran  yang  berlangsung pada  proses  pernapasan,  metabolisme  sel,  terpapar  polusi  lingkungan  asap kendaraan,  asap  rokok,  radiasi  matahari.  Senyawa  yang  dapat  menangkal  radikal bebas salah satunya adalah antioksidan.
Antioksidan  adalah  suatu  senyawa  yang  melindungi  sel-sel  tubuh  dari  efek buruk  radikal  bebas  atau  melawan  bahan  toksik,  menghambat  terjadinya  kerusakan oleh  senyawa  oksigen  reaktif  (ROS; Reactive  oxygen  species ).  Berbagai  bukti  ilmiah menemukan  resiko  penyakit  kronis  akibat  senyawa  radikal  bebas.  Radikal  bebas tersebut  dapat  dikurangi  dengan  memanfaatkan  senyawa  antioksidan  seperti  vitamin C, E, A, karoten,  asam-asam fenol, polifenol, dan flavonoid. Karakter utama senyawa antioksidan  adalah  kemampuannya  untuk  menangkap,  dan  menstabilkan  radikal bebas.
Salah  satu  tanaman  dari  sekian  banyak  tanaman  yang  diduga  mempunyai khasiat obat yaitu kulit buah jeruk sambal ( Citrus amblycarpa). Tanaman ini berpotensi sebagai  penghasil  minyak  atsiri.  Kulit  jeruk  sambal    mengandung  sabinena  dan limonena  yang  berguna  untuk  kosmetik,  aromaterapi,  pencuci  rambut,  obat  sakit kepala,  nyeri  lambung.  Daunnya  juga  sering  digunakan  sebagai  rempah  yang berfungsi  untuk memberi  aroma  yang  khas  pada masakan.  Kulit  jeruk  sambal  ( Citrus amblycarpa )  mengandung  vitamin  C,  vitamin  A,  senyawa  flavonoid,  minyak  esensial, kumarin,    dan  turunan  asam  rosmarinik.  Flavonoid,  vitamin  C,  vitamin  A  merupakan salah  satu  senyawa  antioksidan  alami,  sehingga  diduga  kulit  jeruk  sambal  memiliki aktivitas  antioksidan.  Maka  perlu  dilakukan  penelitian  uji  aktivitas  antioksidan  dari minyak kulit jeruk sambal, sehingga  dapat diperoleh  informasi  lebih  lanjut ttg manfaat minyak  kulit  buah  jeruk  sambal  terutama  aktivitas  antioksidannya.  Berdasarkan  latar belakang diatas maka rumusan masalahnya adalah apakah kulit jeruk sambal memiliki aktivitas antioksidan sangat kuat, kuat, sedang, lemah. Adapaun tujuan dari penelitian ini  adalah  untuk  mengethui  aktivitas  antioksidan  dari  kulit  jeruk  sambal  ( Citrus amblycarpa) menggunakan  metode  Carotenoid  Bleaching.  Dari  penelitian  ini diharapkan  dapat  memberikan  manfaat  dan  informasi  tentang  kulit  jeruk  sambal sebagai antioksidan

## Metode
Penelitian  ini  diawali  dengan  pengumpulan  bahan  kulit  jeruk  sambal  diperoleh dari  tiga  daerah  yaitu  Lembang,  Garut  dan  Cianjur.  Selanjutnya  menetapkan kebenaran sampel tanaman kulit jeruk sambal ( Citrus amblycarpa ) berdasarkan ciri-ciri morfologis  yang  ada  pada  kulit  jeruk  sambal  dilakukan  diherbarium  Bandungense,
Vol. 8; No. 1  ; Januari 2017 Halaman 34-40
Sekolah  Ilmu  dan  Teknologi  Hayati  ITB.  Determinasi  ini  bertujuan  untuk  memastikan bahwa  memang  benar  tanaman  yang  digunakan  adalah  jeruk  sambal  ( Citrus amblycarpa )
Kemudian  dilakukan  proses  pembuatan  simplisia,  pemeriksaan  karakteristik simplisia  meliputi  pemeriksaan  makroskopik,  mikroskopik,  penetapan  kadar  air,  susut pengeringan, kadar abu total, kadar abu tidak larut asam, kadar sari larut air, dan kadar sari  larut  etanol.  Selanjutnya  dilakukan  penapisan  fitokomia  untuk  mengetahui golongan  senyawa  apa  saja  yang  terdapat  dalam  simplisia,  meliputi  pemeriksaan simplisia,  meliputi  pemeriksaan  senyawa  alkaloid,  flavonoid,  saponin,  tanin,  kuinon, fenol,  dan  steroid/triterpenoid.  Selanjutnya  dilakukan  proses  penyulingan  kulit  jeruk sambal  untuk  mendapatkan  minyak  dari  kulit  jeruk  sambal  ( Citrus  amblycarpa ).  Hasil dari  penyulingan  minyak  atsiri  kulit  jeruk  sambal  dilakukan  karakteristik  minyak  atsiri. Kemudian  pengujian  aktivitas  antioksidan  dilakukan  terhadap  minyak  dengan  metode Carotene  Bleaching dan  menentukan  nilai  AA  (aktivitas  antioksidan)  dihitung  dimana Ao dan A 0 o nilai absorbansi yang terukur pada waktu nol inkubasi sampel dan kontrol, sedangkan  At  dan  At 0 nilai  absorbansi  yang  terukur  pada  waktu  120  menit  inkubasi sampel dan kontrol.
𝐴𝐴 = 100 [1 − ( 𝐴 0 − 𝐴 𝑡 𝐴 0 𝑂 −   𝐴 𝑡 0 )]
Keterangan : AA =  Presentase Peluruhan Ao dan A 0 o =  Absorbansi  yang  terukur  pada  menit  ke  nol inkubasi sampel At dan At 0 =  Absorbansi  yang  terukur  pada  menit  ke  120
inkubasi sampel
Kemudian  dilakukan  identifikasi  senyawa  yang  diduga  sebagai  antioksidan dengan menggunakan Kromatografi Lapis Tipis (KLT).

## Alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah  penggilingan, gelas kimia, tabung  reaksi,  rak  tabung,  satu  set  alat  destilasi,  gelas  ukur,  erlenmeyer,  labu  ukur, mikropipet, pipet tetes, corong kaca, cawan krus, tang krus, spatula, batang pengaduk, mortir,  stemper,  kertas  saring  bebas  abu,  alumunium  foil,  kompor  listrik,  timbangan analitik,  penyemprot  pereaksi,  lemari  pendingin,  tanur,  desikator,  cawan  penguap, oven, rotary evaporator, pipa kapiler, plat KLT silika GF254, lampu UV 254 nm, lampu UV 366 nm, vial kaca, dan spektrofotometri Uv-Vis.

## Bahan
Bahan yang digunakan daalam penelitian ini adalah serbuk simplisia kulit jeruk sambal ( Citrus amblycarpa ) eanol pa, korofom pa, etil asetat, etanol, aquades, H 2 SO 4 10%,  HCl,  amonia  30%,  FeCl 3 1%,  natrium  asetat,  NaOH,  eter,  n-butanol,  pereaksi dragendroff, pereaksi Mayer, pereaksi Steasny, pereaksi Lieberman-Burchard, serbuk Mg, Carotene Bleaching , minyak goreng, vtamin E.
Vol. 8; No. 1  ; Januari 2017 Halaman 34-40

## Hasil
Tabel 1. Hasil Pengujian Makroskopik Simplisia Kulit Jeruk Sambal No Parameter Simplisia Hasil Rajangan 1. Bentuk Potongan kulit dengan panjang dan lebar yang bervariasi 2. Warna Hijau tua – coklat tua 3 Ukuran Lebar       =  1,7 cm panjang   =  9 cm
Tabel 2. Hasil pemeriksaan Karakterisasi Simplisia  Kulit  Jeruk sambal
Tabel 3. Hasil Penapisan Fitokimia Simplisia Kulit Jeruk Sambal
No Metabolit Sekunder Simplisia Garut Lembang Cianjur 1 Alkaloid - Mayer - Dragendorff - - - - - - 2 Flavonoid + + + 3 Tanin + + + 4 Saponin + + + 5 Steroid/triterpenoid + + + 6 Kuinon + + + 7 Fenol + + + Keterangan  : (+) = Terdeteksi : (-)  = Tidak terdeteksi No. Paramater Lembang Garut Cianjur 1 Kadar Air (v/b) 6,25 (%) 5 (%) 2,2 (%) 2 Kadar Abu Total (b/b) 8 (%) 6,1 (%) 7,8 (%) 3 Kadar Abu tidak larut Asam (b/b) 18 (%) 15 (%) 18 (%) 4 Kadar Sari Larut Air (b/b) 7 (%) 22 (%) 5(%) 5 Kadar Sari Larut Etanol (b/b) 31 (%) 5 (%) 7 (%) 6 Susut Pengeringan (b/b) 10 (%) 5,6 (%) 3,75 (%)
Vol. 8; No. 1  ; Januari 2017 Halaman 34-40
Tabel 4. Hasil Karakteristik  Kulit Minyak Jeruk Sambal No Parameter Lembang Garut Cianjur 1 Bentuk Cair Cair Cair 2 Warna Kuning tua - kecoklatan  Kuning tua Kuning tua 3 Bau Harum Harum Harum 4 Rasa Pahit Pahit Pahit
Tabel 5. Hasil Karakteristik Kulit Minyak Jeruk Sambal
No Parameter Lembang Garut Cianjur 1 Rendemen 1,411 % 1,385 % 0,658 % 2 Berat jenis (b/v) 0,857 0,872 0,795 3 Bilangan Asam 11,67 % 12,27 % 12,33 % 4 Bilangan penyabunan 93,687 % 130,713% 168,300% 5 Indek bias 1,4691 % 1,4701% 1,4644 %
(a) (b)                          (c)
Gambar 1. Hasil KLT minyak jeruk sambal  dengan Penampak Bercak Sitroborat
Keterangan :
Hasil  KLT  dengan  fase  diam  silika  gel  GF 254 dengan  fase  gerak  n-heksan:etil asetat (9:1) 1 = Minyak jeruk sambal Lembang 2 = Minyak jeruk sambal Garut
Rf = 0,94 1       2      3 1       2      3 1       2      3
Vol. 8; No. 1  ; Januari 2017 Halaman 34-40
3 = Minyak jeruk sambal Cianjur (a) = Dilihat di bawah sinar UV 254 nm (b) = Dilihat di bawah sinar UV 366 nm (c) = Pada sinar UV 366  nm setelah disemprot  dengan  siroborat
Tabel 6. Hasil Aktivitas Antioksidan Minyak Jeruk Sambal Konsentrsi Cianjur Garut Lembang Blanko Vitamin E 1% 60,6% 79,9% 63.1% - 91,69% 2% 81,6% 83,3% 84,9% 4% 83,2% 84,9% 85,8% 8% 85,8% 85,8% 86,6%

## Pembahasan
Dari  hasil  pemeriksaan  karakteristik  minyak  kulit  jeruk  sambal (Citrus amblycarpa), secara  organoleptik  dihasilkan  kualitas  minyak  cukup  baik  (berwarna kuning kehijauan serta berbau sangat harum),  rendemen minyak atsiri yang diperoleh sebesar 1,411% dengan berat jenis 0,857 pada hasil bilangan asam 11,67%, bilangan penyabunan  93,687%  dan  indeks  bias  1,4691%  ,  dan  hasil  dari  minyak  jeruk  garut rendemen yang diperoleh 1,385%, berat jenis 0,872% , untuk bilangan asam 12,27%, bilangan penyabunan 130,713%, pada indeks bias 1,4701 %. Selanjutnta dengan hasil minyak  jeruk  Cianjur  memiliki  rendemen  0,658%,  berat  jenis  0,795%  dan  bilangan asam  sebesar  12,33%,  bilangan  penyabunan  168,300%  dan  pada  indeks  biasnya 1,4644%.  Dari  hasil  pemeriksaan  karakteristik,  minyak  jeruk  sambal (citrus amblycarpa) tersebut  dapat  digunakan  untuk  penelitian  dikarnakan  sudah  memenuhi syarat.
Dari  data  aktivitas  antioksidan,  minyak  jeruk  sambal  dari  daerah  Lembang memiliki  aktivitas  paling  tinggi.  Hasil  pemeriksaan  karakteristik  senyawa  yang terkandung dalam minyak jeruk sambal (citrus amblycarpa) menggunakan metode KLT dengan fasa diam silica gel GF254 dengan fase gerak n-heksan:etil asetat (9:1) serta penampak  bercak  spesifik  sitroborat,  diduga  minyak  jeruk  sambal  mengandung senyawa flavonoid.

## Kesimpulan
Dari  hasil  pengujian  aktivitas  antioksidan  pada  Minyak  jeruk  sambal. Antioksidan yang  paling kuat dimiliki oleh  minyak jeruk sambal  dari daerah Lembang, dengan hasil aktivitas antioksidan,  63.1%, 84,9%, 85,8%, dan 86,6%.

## Daftar Pustaka
1. SAYUTI,  Kesuma;  YENRINA,  Rina.  Antioksidan  alami  dan  sintetik. Padang. Universitas Adalas , 2015.
2. Apriliani, M., Ramadhan, A. M., & Rijai, L. (2017, May). AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK  DAUN  JERUK  SAMBAL  (CITRUS  MICROCARPA)  TERHADAP
BEBERAPA BAKTERI PATOGEN. In Proceeding of Mulawarman Pharmaceuticals Conferences (Vol. 5, pp. 157-164).
3.  Departemen Kesehatan RI. Cara pembuatan simplisia. Jakarta. 1985:2-15p.
4.  Departemen  Kesehatan  RI.  Parameter  standar  umum  ekstrak  tumbuhan  obat. Cetakan 1. Jakarta 2000 :31p.
5.  Kemenkes  RI,  Suplemen  III  Farmakope  Herbal  Indonesia  Kementrian  Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta 2013, 100-102p.
6.  Depkes  RI.  Materia  Medika  Indonesia.  Jilid  V.  Jakarta  :  Ditijen  POM;  19-89:258- 261p.
7.  Muthoharoh,  Ainun  dan  Zainab.  Penafisan  fitokimia,  penetapan  kadar naftokuinon total, dan aktivitas antifungsi fraksi tidak larut etil asetat ekstrak etanol pacar  kuku (Lawsonia  inermis  L.) terhadap  Candida  albicans  ATCC  10231. Fakultas  Farmasi,  Universitas  Ahmad  Dahlan,  Yogyakarta.  Pharmaciana. 2015:5(2) 199-208p.
8.  Pratiwi Dina. Sri Wahdanigsih, Isnindar. Ujiaktivitas antiolsidan daun       bawang mekah (Eleutherine  Americana  Meer.) Dengan  Metode  DPPH (2,2-difenil-1- Pikrihidrazil). Tradisional Medience Journal.2013 18(1)9-16p.
9.  Irianti  Tatang,  Puspita  sari  andayana,  L.  Machwiyyah,HR  Rabani.  Aktivitas penangkapan  radikal 2,2-difenil-1pikrihidrazil  (DPPH) ekstrk  etanolik  daun mengkudu (Morinda citrifolia L). Dan batang brotowali (Tinospora crispa L.) fraksi air serta fraksi air terhidrolisis.
11.  Suwendar,  Siti  Hazar.  Uji  aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Etanol  Daun  jambuAir [Eugenia  aquem  (BURM.F)]  secara  in vitro  dengan metode carotenoid  bleaching, prosiding SnaPP2014 Sains, Teknologi,dan Kesehatan, 4(1),Hlm. 31-36p.
12.  Yustinah,  Fandara  Dena  Ekstraki  minyak  atsiri  dari  kulit  jeruk  sebagai  tambahan pembuatan  sabun ,  journal fakultas  kimia  universitas  Muhamadiyah  jakarta 2016.26-27.