Jurnal Pharmascience, Vol. 06 , No.02, Oktober 2019, hal: 74 - 79 ISSN-Print. 2355 – 5386 ISSN-Online. 2460-9560 https://ppjp.ulm.ac.id/journal/index.php/pharmascience

## Research Article

## Efek Sitotoksik Ekstrak Etanolik

## Ocimum basilicum , L. Pada Sel Kanker Payudara
Devi Nisa Hidayati*, Ibrahim Arifin, Fatimatuz Zahroh, Lina Wahyuni
Faculty of Pharmacy, Wahid Hasyim University, Semarang *Email: devinisahidayati@yahoo.com

## ABSTRAK
Pengobatan kanker menggunakan bahan alam terus dikembangkan. Salah satu tanaman  yang  memiliki  efek  sitotoksik Ocimum  basilicum, L.  tujuan  penelitian  ini adalah  mengetahui  aktivitas  sitotoksik  dari  ekstrak  etanol Ocimum  basilicum (EEOB) terhadap  sel  kanker  payudara  T47D  dan  MCF7. Ocimum  basilicum diekstraksi menggunakan  metode  maserasi  dengan  pelarut  etanol  70%.  Pengujian  aktivitas sitotoksik menggunakan metode MTT assay dengan  seri konsentrasi EEOB 1000; 500; 250; 125; 62.5; 31,25 µg/mL. Hasil uji aktivitas sitotoksik EEOB memperlihatkan nilai IC 50 pada sel T47D dan MCF-7 sebesar 399.86 µg/ml dan 387.76 µg/ml.
Kata Kunci— Sitotoksik, Ocinum basilicum L., T47D, MCF-7

## ABSTRACT
Cancer  treatment  using  natural  ingredients  continues  to  be  developed.  One  of  the plants that is proven to have cytotoxic activity is basil leaves (Ocimum basilicum, L. ). This study aims to determine the cytotoxic activity of ethanol extract of basil leaves (EEBL) on T47D and MCF-7 breast cancer cells. Basil leaves were extracted using maceration  with ethanol  70%.  The  cytotoxic  test  was  perfomed  using  MTT  assay  with  various  EEBL concentrations: 1000; 500; 250; 125; 62.5; 31,25 µg/mL. The results showed that IC50 of cytotoxic activity in T47D and MCF-7 was 399.86 µg/ml and 387.76 µg/ml respectively.
Keywords—Cytotoxic, Ocinum basilicum L., T47D, MCF-7

## I. PENDAHULUAN
Penderita penyakit kanker di Indonesia  cukup  besar  dan  prevalensi kematian yang diakibatkan penyakit tersebutpun  cukup  tinggi  (Ferlay et  al.,
2010).  Di  Indonesia  kanker  payudara menempati  urutan  pertama  pasien  rawat inap di seluruh rumah sakit (Rachman dan Purnami,  2012).  Pengobatan  kanker  saat ini menggunakan berbagai cara antara lain
pembedahan,  kemoterapi  dan  radiasi. Dimana  cara  tersebut  memiliki  tingkat keberhasilan  yang  masih  rendah  (King, 2000).  Pengobatan  kanker  menggunakan bahan  alam  diminati  oleh  masyarakat karena minimnya efek samping.
Ocimum  basilicum merupakan  salah satu  tanaman  yang telah terbukti memiliki aktivitas  sebagai  antikanker.  Ekstrak metanol Ocimum basilicum terbukti mampu  memicu  kematian  sel  MCF7 dengan nilai GI 50 6,7 μg/ml dan nilai  LC 50 98  μg/ml  (Qamar et  al, 2010).  Ekstrak metanol Ocimum  basilicum juga  terbukti memiliki  aktivitas  sitotoksik  terhadap  sel HL60  (Naidu et  al ,  2016)  dan  sel  MCF-7 (Al-Ali et al , 2013).
Maka  berdasarkan  latar  belakanng diatas  peneliti  ingin  mengetahui  efek sitotoksik  dari  ekstrak  etanol Ocimum basilicum terhadap  sel  kanker  payudara yaitu T47D dan MCF-7.

## II. METODE
Variabel  bebas  pada  penelitian  ini adalah  seri  konsentrasi  ekstrak  etanol Ocimum  basilicum .  Variabel  tergantung adalah persentase viabilitas sel.
A. Bahan dan Alat Penelitian
Ocimum  basilicum yang  digunakan dipanen  dari  daerah  Bandungan,  Jawa Tengah  dengan  kondisi  bebas  hama.  Sel kultur kanker payudara (T47D dan MCF-7) berasal  dari  Laboratorium  Parasitologi
Fakultas Kedokteran UGM. Media DMEM, FBS  10%,  PenSre  1%,  DMSO,  reagen MTT, PBS, SDS 10%.
Alat  yang  digunakan  antara  lain  oven, rotary evaporator, alat maserasi,  inkubator CO2, LAF, mikropipet, mikroskop,
conical tube, elisa reader.
B. Pembuatan Ekstrak Etanol Ocimum basilicum
Ocimum  basilicum dipanen  pada  usia ±  3,5  bulan.  Panen  dilakukan  pada  pagi hari. Ocimum  basilicum yang  telah dipanen  dilakukan  sortasi  basah  untuk mendapatkan Ocimum  basilicum yang segar  dan  bebas  hama. Ocimum  basilicum dikeringkan  menggunakan  oven  dengan suhu 50°C. Simplisia kering yang didaptkan  diserbuk  dan  kemudian  diayak dengan ukuran pengayak 40 mesh.
Serbuk Ocimum  basilicum sebesar 1,35  Kg  diekstraksi  menggunakan  metode maserasi  selama  5  hari  (maserasi  dan remaserasi). Total pelarut etanol 70% yang digunakan sebanyak 13,5 Liter.

## C. Uji Aktivitas Sitotoksik Ocimum basilicum
Sel  T47D  dan  MCF-7  yang  telah didistribusikan dalam 96-well plate dengan jumlah  1x10 4 sel/sumuran.  Inkubasi  pada inkubator  CO 2 dilakukan  selama  24  jam dan  pada  suhu  37°C.    Sel  yang  telah diinkubasi diberikan perlakuan menggunakan  ekstrak  etanol Ocimum
basilicum dengan  konsentrasi  yang  telah ditetapkan (1000; 500; 250; 125; 62,5; 31, 25 µg/ ml untuk sel T47D dan 1000; 500; 250; 62,5; 31, 25; 15,625 µg/ ml untuk sel MCF-7).  Sel  yang  telah  diberi  perlakuan konsentrasi  ekstrak Ocimum  basilicum diinkubasi  selama  24  jam.  Masing-masing sumuran ditambahkan dengan reagen MTT selama 4 jam pada inkubator. Selanjutnya, ditambahkan SDS selama semalaman pada suhu  kamar  dan  terlindung  dari  cahaya. Baca  absorbansi  pada  panjang  gelombang 595 nm dengan elisa reader.

## D. Analisis data
Analisis  data  pada  uji  aktivitas sitotoksik  adalah  mengkonversikan  nilai absorbansi  yang didapatkan menjadi  nilai  % viabilitas  sel  dengan  membandingkan jumlah  sel  hidup  bakteri  (viabilitas  sel) dnegan  perlakuan  (ekstrak  etanol Ocimum basilicum ,  kontrol  media,  dan  kontrol  sel) dengan rumus dibawah ini (CCRC, 2010):
Viabilitas sel yang didapatkan kemudian  dianalisis  menggunakan  regresi linier,  sehingga  didapatkan  persamaan Y=Bx+A yang digunakan untuk menghitung nilai IC 50 . Semakin besar nilai IC 50 maka senyawa tersebut semakin tidak toksik (Doyle and Griffths, 2000).
III. HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Pembuatan Ekstrak Etanol Ocimum basilicum
Ocimum  basilicum merupakan  bahan yang  akan  digunakan  pada  penelitian  kali ini.  Determinasi  tanaman  dilakukan  untuk menyakinkan  bahan  yang  digunakan adalah  benar Ocinum  basilicum L..  Hasil dari  determinasi  tanaman  membuktikan bahwa  tanaman  yang  digunakan  memang benar Ocinum  basilicum L.  dengan  kunci determinasi 1b, 2b, 3b, 4b, 6b, 7b, 9b, 10b, 11b,  12b,  13b,  14b,  161,  Golongan  10  : Daun  tunggal,  terletak  berhadapan.  239b, 243b, 244b, 248b, 259b, 250b, 266b, 267a, 268b, 271b, Famili 110 : Labiatae. 1a, 2b,
4b,  6b,  7b,  8.  Genus  :  Ocimum.  Spesies  : Ocimum  basilicum L.  Nama  lain Ocimum sanctum L. (Selasih, Telasih, Kemangi).
Serbuk Ocimum basilicum yang digunakan  memiliki  kadar  air  sebesar 5,9%. Suatu simplisia dikatakan memenuhi  syarat  apabila  kadar  air  yang didapatkan  sebesar  <10%  (Depkes  RI, 2000). Total serbuk yang digunakan dalam proses  maserasi  sebesar  1,35  Kg  dan didapatkan  ekstrak  kental  sebesar  221,5 gram  dengan  nilai  rendemen  sebesar 16,41%.  Ekstrak  kental  yang  didapatkan memiliki  warna  hijau  kehitaman  dan berbau  khas.  Pelarut  yang  digunakan adalah  etanol  70%.  Penggunaan  pelarut tersebut  karena  diduga  senyawa  yang memiliki  efek  sitotoksik  adalah  flavonoid.
Ocimum basilicum memiliki senyawa aktif antara lain minyak atsiri, saponin, flavonoid  dan  tanin  (Depkes  RI,  2001). Ekstrak  etanol Ocimum  basilicum terbukti mengandung senyawa flavonoid (Dhianawaty dkk, 2012).

## B. Uji Sitotoksik Ekstrak Etanol

## Ocimum basilicum
Uji sitotoksisitas ekstrak etanol Ocimum basilicum dilakukan  dengan  melihat  nilai
IC 50 yang  dihasilkan.    Meode  MTT  yang digunakan  untuk  mengetahui  potensi penghambatan  pertumbuhan  sel  kanker dengan  melihat  intensitas  warna.  MTT akan  direduksi  oleh  sel  hidup  menjadi krostan  formazan  yang  berwarna  ungu (Nikkah et al , 2004).
Gambar  1. Efek  perlakuan  ekstrak  etanol etanol Ocimum  basilicum terhadap  morfologi sel  MCF-7,  (A)  Kontrol  sel  atau  tanpa perlakuan  EEOB,  (B)  Sel  MCF7 dengan  perlakuan  EEOB  250  µg/ml, (C)  Sel  MCF7  dengan  perlakuan EEOB  500  µg/ml  setelah  inkubasi  24 jam. Sel yang hidup melekat berbentuk daun (           ) sedangkan sel yang mati berbentuk bulat dan mengapung (       ).
Perlakuan ekstak etanol Ocimum basilicum pada  sel  kanker  payudara    MCF-7  dan T47D memperlihatkan perubahan morfologi  sel  yang  dapat  dilihat  pada gambar  1  dan  2.  Sel  mati  terlihat berbentuk  bulat  sedangkan  sel  yang  hidup terlihat  seperti  bentuk  daun  melekat  pada dasar sumuran (Fitriasih et al , 2019).
Gambar 2. Efek perlakuan ekstrak etanol Ocimum basilicum terhadap morfologi sel T47D, (A)  Kontrol  sel  atau  tanpa  perlakuan EEOB, (B) Sel T47D dengan perlakuan  EEOB  500  µg/ml  setelah inkubasi  24  jam.  Sel  yang  hidup melekat  berbentuk  daun  (              ) sedangkan  sel  yang  mati  berbentuk bulat dan mengapung (         ) Tabel  I. Data  %  viabilitas  sel  hidup ekstrak etanol Ocimum basilicum pada uji sitotoksisitas. (-) tidak dilakukan pengujian No.  Konsentrasi EEOB (µg/ml) Viabilitas  Sel T47D (%) Viabilitas  Sel MCF  (%) 1 1000 17,50 28,15 2 500 46,42 48,45 3 250 76,55 59,92 4 125 81,28 - 5 62,5 87,09 87,50 6 31,25 102,72 90,39 7 15,625 - 91,74
Data % viabilitas sel  yang didapatkan dari  mengkonversi  hasil  absorbansi  yang didapatkan  dari  perlakuan  ekstrak  etanol Ocimum  basilicum terhadap  sel  kanker payudara  dapat  dilihat  pada  tabel  I.  Tabel tersebut  memperlihatkan  semakin  besar konsentrasi ekstrak etanol Ocimum
basilicum memperlihatkan  semakin  kecil viabilitas  sel/  sel  hidup.  Hal  tersebut memperlihatkan  bahwa  perlakuan  ekstrak etanol Ocimum  basilicum terhadap  sel T47D dan MCF-7 bersifat dose-dependent .
Nilai IC 50 dari ekstrak etanol Ocimum basilicum terhadap sel T47D dan sel MCF- 7  dikerjakan  menggunakan  regresi  linier dengan seri konsentrasi vs % viabilitas sel. Pada  sel  kanker  MCF-7  didapatkan persamaan  Y=-35,85x+142,8  dan  nilai IC 50 sebesar 387,76 µg/ml. Persamaan Y=- 52,473x+186,53  diperoleh  pada  perlakuan ekstrak etanol Ocimum basilicum terhadap sel  T47D,  sehingga  nilai  IC 50 sebesar 399,86  µg/ml.  Nilai  IC 50 yang  didapatkan memiliki  efek  sitotoksik  yang  cukup  aktif terhadap sel kanker payudara baik pada sel T47D  dan  MCF-7.    Kategori  cukup  aktif apabila  nilai  IC 50 pada  range  100-500 µg/ml  (Weerapreeyakul et  al .,  2012).
Terlihat  dari  nilai  IC 50 yang  didapatkan maka  ekstrak  etanol Ocimum  basilicum berpotensi  sebagai  antikanker  terhadap kanker payudara (T47D dan MCF-7).

## IV. KESIMPULAN
Ekstrak  etanol Ocimum  basilicum memiliki  aktivitas  sitotoksik  terhadap  sel kanker payudara T47D dan MCF-7 dengan nilai  IC 50 sebesar  399,86  µg/ml  dan 387,76 µg/ml.

## DAFTAR PUSTAKA
Al-Ali,  K.H.,  Beshbishy,  H.S.E.,  Badry, A.A.E.,  and  Alkhalaf,  M.,  2013, Cytotoxic  Activity  of  Methanolic Extract  of  Mentha  Longifolia  and Ocimum  basillicum  Against  Human Breast  Cancer ,  Pakistan  Journal  of Biological Science , 10, 1028-8880.
CCRC, 2010, Standard Operating Procedure, Cancer  Chemoprevention Research  Cancer  Fakultas  Farmasi Universitas Gadjah mada, Yogyakarta.
Depkes  RI,  2000, Parameter  Standar Umum  Ekstrak  Tumbuhan  Obat ,
Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, 11. Depkes,  RI.,  2001, Inventaris  Tanaman Obat Indonesia (1) Jilid 2, Departemen Kesehatan dan Kesejahteraan Sosial
Republik
Indonesia, Jakarta. Dhianawaty,  D.,  Panigoro,  R.,  Surialaga,
S.,  Purushothman,  P.,  2012,  Metode Cepat  Identifikasi  Flavonoid  dari Daun Ocimum  santum L.  (Selasih), MKB , 40 (1), 32-37.
Doyle A. and Griffiths J.B., 2000, Cell and Tissue  Culture  for  Medical  Research, John Wiley and Sons Ltd, New York, 402-418.
Ferlay  J,  Shin  HR,  Bray  F,  Firman  D, Mathers  C,  Parkin  D.M.,  2010, Estimates  of  World  Wide  Burden  of Cancer  in  2008,  GLOBOCAN  2008 , Int J Cancer , 127 (12), 2893-917. Firiasih.,  Komariyah,  S.M.,  Sandra,  F., Pratiwi, N., and Hidayati, D.N., 2019, Mangifera  indica  L.  Leaves  Extract Induced  Intrinsic  Apoptotic  Pathway
in  MCF-7  Cells  by  Decreasing  Bcl-2
Expression and Inducing Bax Expression, Indonesian  Journal  of Cancer Chemoprevention , 10 (1), 1-6.
King,  R.J.B.,  2000, Cancer  Biologi ,  2nd edition,  Pearson  Education  Limited, London, 149-168.
Naidu,  J.  R.,  Gunjan,  M.,  Chen,  Y., Sasidharan, S., 2016, Evaluation of in vitro  Cytotoxic  Activity  of  Ocimum
Basillicum and Mentha Spicata Extracts, Asian Journal of Pharmaceutical  Clinical  Research ,  9,
131-134.
Nikkhah,  G.,  Tonn,  J.C.,  Hoffmann,  O., Kraemer, H.P., Darling, J.L., Schönmayr,  R.,  and  Schachenmayr, W.,  2004,  The  MTT  Assay  for Chemosensitivity  Testing  of  Human Tumors  of  The  Central  Nervous System, Journal  of  Neuro-Oncology , 13, 1-11.
Qamar,  K.A.,  Dar,  A.,  Siddiqui,  B.S., Kabir,  N.,  Aslam,  H.,  Ahmed,  S., Erum,  S.,  Habib,  S.,  and  Begum,  S., 2010,  Anticancer  Activity  of Ocimum basilicum and  the  Effect  of  Ursolic Acid  on  the  Cytoskeleton  of  MCF-7 Human Breast Cancer Cells, Letters in Drug  Design  and  Discovery ,  7,  726-
736.
Rachman,  F.,  dan  Purnami,  S.  W.,  2012,
Perbandingan Klasifikasi Tingkat Keganasan  Breast  Cancer  dengan Menggunakan Regresi Logistik
Ordinal  dan  Support  Vector  Machine (SVM), Jurnal Sains dan Seni Its , 1(1), D124-D129
Weerapreeyakul, N., Nonpunya, A., Barusrux,  S.,  Thitimetharoch,  T.,  and Sripanidkulchai,  2012,  Evaluation  of The Anticancer Potential of Six Herbs Against  a  Hepatoma  Cell  Line, Chinese Medicine , 7 (15), 1-7.