## UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI NANOPARTIKEL EKSTRAK LENGKUAS PUTIH
( Alpinia galanga (L.) Willd) TERHADAP BAKTERI Klebsiella pneumoniae
Selphina Kumowal 1) , Fatimawali 1) , Imam Jayanto 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
White  galangal  rhizome  (Alpinia  galanga  (L.)  Willd's)  scientifically  proven  has  properties  as antibacterial,  antifungal,  anticancer,  antitumor, antioxidant  and cytotoxic.  In nano  size, the  contact surface area of the particle becomes larger which can increase the amount of active substance which is isolated more so that the antibacterial activity is stronger. This study aims to determine whether the white  galangal  extract  nanoparticles  have  antibacterial  activity  against  the  bacteria  Klebsiella pneumoniae  and  measure  the  inhibitory  ability  of  white  galangal  extract  nanoparticles  against bacterial  growth  and  compared  with  white  galangal  ethanol  extract.  White  galangal  was  extracted using maceration method with ethanol solvent and nanoparticle formulation made of  white galangal extract by ionic gelation method. The antibacterial activity test was carried out using agar diffusion method  and  observations were  made  1x24  hours incubation  period,  with  inhibition  zones  measured using  a  millimeter  ruler.  The  results  showed  that  the  white  galangal  extract  nanoparticles  had antibacterial activity to inhibit the bacteria Klebsiella pneumoniae, with the results of inhibition zone measurements of 22.5 mm.
Keywords : Antibacterial, Extraction, Klebsiella pneumoniae, Nanoparticles, White galangal.

## ABSTRAK
Rimpang lengkuas putih ( Alpinia galanga (L.) Willd) memiliki khasiat yang sudah dibuktikan secara ilmiah sebagai antibakteri, antijamur, antikanker, antitumor, antioksidan dan sitotoksik. Dalam ukuran nano, luas kontak permukaan partikel menjadi lebih besar yang dapat meningkatkan jumlah zat aktif yang terisolasi lebih banyak sehingga aktivitas antibakteri semakin kuat. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui apakah nanopartikel ekstrak lengkuas putih memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri Klebsiella pneumoniae serta mengukur kemampuan daya hambat nanopartikel ekstrak lengkuas putih terhadap pertumbuhan bakteri dan dibandingkan dengan ekstrak etanol lengkuas putih. Lengkuas putih diekstraksi  menggunakan  metode  maserasi  dengan  pelarut  etanol  dan  dibuat  formulasi  nanopartikel ekstrak  lengkuas  putih  dengan  metode  gelasi  ionik.  Untuk  pengujian  aktivitas  antibakteri  dilakukan dengan metode difusi agar dan pengamatan dilakukan 1x24 jam masa inkubasi, dengan zona hambat diukur menggunakan penggaris millimeter. Hasil penelitian menunjukkan bahwa nanopartikel ekstrak lengkuas  putih  memiliki  aktivitas  antibakteri  untuk  menghambat  bakteri Klebsiella  pneumoniae, dengan hasil pengukuran zona hambat sebesar 22,5 mm.
Kata Kunci : Lengkuas putih, Nanopartikel, Antibakteri, Ekstraksi, Klebsiella pneumoniae .

## PENDAHULUAN
Nanoteknologi  menjadi  salah satu dalam  bidang  rekayasa  ilmu  Fisika, Kimia, Biologi yang penting dan menarik beberapa  tahun  terakhir  ini  (Kurniasari, 2016).  Beberapa  jenis  pengembangan nanoteknologi  yang  sangat  pesat  yaitu nanomedisin, nanoemulsi dan nanopartikel.  Penelitian  tentang  nano menjadi  perhatian  penting  karena  dapat diaplikasikan  secara  luas  seperti  dalam bidang  elektronik  (Hubler  dan  Onyeama, 2010),  optik  (Taylor, et  al .,  2013)  dan biomedis  (Duncan  dan  Michael,  2015). Nanopartikel  merupakan  partikel  koloid padat  dengan  diameter  1-1000  nm (Tiyaboonchai, 2003). Bentuk dan ukuran partikel merupakan salah satu faktor yang mempengaruhi  efektifitas  obat.  Karena ukuran  partikel  sangat  berpengaruh dalam  proses  kelarutan,  absorbsi  dan distribusi obat (Prasetyorini, 2011).
Polimer  yang  digunakan  untuk pembentukan  nanopartikel  salah  satunya adalah  kitosan  dan  Na-TPP  (Natrium Tripolifosfat).  Muatan  positif  gugus amina kitosan berinteraksi dengan muatan  negatif  TPP  (Bhumkar  dan Varsha, 2006) untuk membentuk kompleks  dengan  ukuran  dalam  rentang nanopartikel  (Kafshgari, et  al .,  2011).
Kitosan  mempunyai  sifat  spesifik  yaitu adanya  sifat  bioaktif,  biokompatibel, pengkelat, antibakteri dan dapat terbiodegradasi (Ramadhan, et al ., 2010). Dalam bentuk mikro/nanopartikel, kitosan  mempunyai  banyak  keunggulan yakni  stabil  selama  penggunaan,  luas permukaan  yang  tinggi,  dapat  dijadikan matriks  untuk  berbagai  jenis  obat (Agnihotri, et  al .,  2004).  Salah  satu metode yang digunakan untuk pembuatan nanopartikel  adalah  dengan  gabungan kompleks  koaservasi  dan  gelasi  ionik. Kompleks  koaservasi  atau  gelasi  ionik dapat  diinduksi  dalam  sistem  yang mempunyai dua dispersi koloid hidrofilik
yang mempunyai muatan yang berlawanan.  Mekanisme  terbentuknya formulasi nanopartikel kitosan ini berdasarkan  pada  interaksi  elektrostatik antara gugus amina kitosan dengan gugus bermuatan  negatif  dari  suatu  polianion (Tiyaboonchai, 2003).
Di Indonesia teknologi nanopartikel terutama untuk herbal masih dikembangkan.  Penggunaan  bahan  alam kini  semakin  meningkat  pemanfaatannya sebagai  obat  tradisional.  Salah  satu keanekaragaman  hayati  yang  bermanfaat bagi  kesehatan  yaitu  lengkuas  putih . Rimpang lengkuas putih memiliki khasiat yang  sudah  dibuktikan  secara  ilmiah sebagai antibakteri, antijamur, antikanker,  antitumor,  antioksidan  dan sitotoksik  (Hernani, et  al .,  2007). Rimpang  lengkuas  putih  mengandung kurang  lebih  1%  minyak  atsiri  berwarna kuning kehijauan (Sinaga, 2005). Rimpang lengkuas putih memiliki kandungan  senyawa  flavonoid  yang diduga  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri  yang  telah  resisten  terhadap antibiotik  (Kusriani  dan  shofia,  2015). Ekstrak  lengkuas  putih  berpotensi  dalam menghambat pertumbuhan bakteri Klebsiella  pneumoniae. Dalam  ukuran nano,  luas  kontak  permukaan  partikel menjadi lebih besar yang dapat meningkatkan  jumlah  zat  aktif  yang terisolasi lebih banyak sehingga  aktivitas antibakteri  semakin  kuat  (Kammona  dan Costas, 2012).
Berdasarkan uraian di atas, mendorong peneliti melakukan penelitian yang bertujuan untuk membuat formulasi nanopartikel  ekstrak  lengkuas  putih dengan  metode  gelasi  ionik.  Serta melakukan uji aktivitas antibakteri dimana  bakteri  yang  digunakan  yaitu Klebsiella pneumoniae.

## METODOLOGI PENELITIAN

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada bulan  Mei  2019  sampai  September  2019 di Laboratorium Farmasi Lanjut, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sam Ratulangi.

## Alat dan Bahan
Alat yang digunakan dalam penelitian  ini  antara  lain  corong,  neraca analitik,  gelas  ukur,  tabung  reaksi, Erlenmeyer,  beker  gelas,  cawan  petri, magnetic  stirrer , homogenizer ,  kertas saring,  pencadang,  mikropipet, laminar air  flow (N-Biotecck), hot  plate ,  mistar berskala,    alumunium  foil,  jarum  ose, autoklaf,  inkubator,  oven,  pipet  tetes, batang  pengaduk,  pot  salep,  blender, ayakan mesh 100,  toples  kedap  udara, gunting,  arloji,  pinset,  alat  tulis,  kertas lebel.
Bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  antara  lain,  lengkuas  putih, Nutrien  Agar (NA),  ciprofloxacin 500 mg,  etanol  96%,  kitosan,  polisorbat  80, natrium  tripolifosfat  (Na-TPP),  asam asetat,  sabun  cair,
anhidrat, larutan  standar  Mc.Farland  0,5,  NaCl steril  0,9%, . O, 1%  , akuades, bakteri yaitu Klebsiella pneumoniae.

## Jenis Penelitian
Jenis penelitian ini ialah penelitian  eksperimental  dengan  sampel ekstrak dari tanaman lengkuas putih yang dibuat  menjadi  ekstrak  nanopartikel  dan dilakukan pengujian pada bakteri.
Prosedur Penelitian
Pengambilan  Sampel  dan  Persiapan Sampel
Sampel  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  ialah  lengkuas  putih  yang diambil  dari  kecamatan  Wanea,  kota Manado, Provinsi Sulawesi Utara. Sampel  ditimbang  dengan  berat  2  kg.
Kemudian  dicuci  di  bawah  air  yang mengalir,  ditiriskan  dan  dirajang  kecil- kecil.  Setelah  itu  dikeringkan  (diangin- anginkan)  selama  7  hari.  Sampel  yang sudah kering kemudian di blender hingga menjadi  serbuk  yang  dihasilkan  diayak dengan  ayakan mesh 100,  hingga diperoleh simplisia.

## Ekstraksi
Metode  yang  digunakan  yaitu metode  maserasi.  Simplisia  lengkuas putih  sebanyak  150  g  dimasukkan  ke dalam  wadah  maserasi  yang  tertutup rapat.  Kemudian  diekstraksi  dengan  750 mL  etanol  96%  pada  suhu  kamar  selama 5  hari  sambil  sesekali  diaduk.  Setelah  5 hari sampel disaring dengan menggunakan kertas saring menghasilkan filtrat. Kemudian filtrat diuapkan menggunakan  oven,  sehingga  diperoleh ekstrak kental lengkuas putih.

## Pembuatan Larutan Kitosan
Kitosan ditimbang masing-masing sebanyak  0,5  g  dan  0,1  g  kemudian kitosan  dilarutkan    dengan  larutan  asam asetat  5%    hingga  100  mL  dan  diaduk dengan magnetic stirrer hingga larut.

## Pembuatan Larutan Na-TPP
Larutan  Na-TPP  dibuat  dengan menambahkan  0,1  g  Na-TPP  ke  dalam 100 mL akuades. Larutan tersebut diaduk dengan magnetic stirrer hingga terlarut.

## Pembuatan  Formulasi  Nanopartikel
Ekstrak Lengkuas Putih
Larutan kitosan 0,5 %
dimasukkan  ke  dalam  gelas  kimia sebanyak  100  mL.  Kemudian  larutan ditambahkan  polisorbat  80  sebanyak  1 mL  dan  diaduk  dengan  menggunakan homogenizer dengan kecepatan 1000 rpm selama 10 menit. Setelah itu, pada larutan kitosan  dimasukkan  0,1  g  ekstrak lengkuas  putih  yang  sudah  dilarutkan dalam  etanol  96%  sebanyak  5  mL,  lalu diaduk dengan menggunakan
homogenizer dengan kecepatan 3000 rpm selama  30  menit.  Setelah  itu,  campuran larutan  ditambahkan  dengan  larutan  Na- TPP  0,1%  sebanyak  20  mL  lalu di homogenizer pada kecepatan 4000  rpm selama 90 menit.
Pembuatan Larutan Uji Larutan uji dibuat dengan konsentrasi  50%.  Konsentrasi  ini  dibuat dengan  cara  pengenceran  menggunakan rumus dibawah ini :
Keterangan :
= Molaritas larutan awal (M)
= Volume larutan awal (ml)
= Molaritas larutan jadi (M)
= Volume larutan jadi (ml)
Pembuatan  Media  Dasar  dan  Media Pembenihan
Ditimbang Nutrien  Agar  (NA) sebanyak 2.8 g, dilarutkan dalam akuades sebanyak  100  mL  menggunakan  labu Erlenmeyer.  Kemudian  dihomogenkan dengan magnetic  stirrer .  Media  yang telah  homogen  kemudian  disterilkan dengan menggunakan autoklaf pada suhu 121°C  selama  15  menit.  Dibiarkan sampai media cukup dingin. Media dasar dan  media  pembenihan  digunakan  dalam pembuatan  media  pengujian  sebagai lapisan  dasar  dan  lapisan  kedua  (Ortez, 2005).

## Regenerasi Bakteri Uji
Bakteri Klebsiella  pneumoniae yang  akan  diujikan  terlebih  dahulu  harus diregenerasikan. Hal pertama yang dilakukan  yaitu  membuat  media  miring nutrient agar (NA). Media (NA) dituangkan  ke  dalam  tabung  reaksi, kemudian  diletakkan  pada  posisi  miring dan  didiamkan  hingga  agar  memadat. Selanjutnya  bakteri  uji  diambil  dengan jarum  ose  steril  lalu  ditanamkan  pada media agar miring dengan cara
digoreskan  biakan  dari  stok  bakteri  ke permukaan agar dan diinkubasi pada suhu 37°C selama 24 jam.
Pembuatan  Larutan  Kontrol  Positif dan Kontrol Negatif
Kontrol positif dibuat dari sediaan obat tablet ciprofloxacin 500 mg, dengan cara  1  tablet ciprofloxacin digerus. Setelah itu ditimbang untuk mendapatkan berat  pertablet  (y),  kemudian  disetarakan dengan  50  mg ciprofloxacin .  Untuk mendapatkan  50  mg ciprofloxacin ,  maka berat pertablet (y)/500 x 50 mg = (x) mg. Lalu dilarutkan dalam akuades hingga 50 mL,  selanjutnya  dibuat  dengan  cara diambil  1  mL  larutan  dan  ditambahkan akuades hingga 10 mL untuk memperoleh larutan ciprofloxacin 50µg/50µL.  Larutan  kontrol  negatif digunakan akuades.
Pembuatan Larutan Mc.Farland 0.,5 Larutan 1% sebanyak 9,95
mL dicampurkan dengan larutan
. O  1,175%  sebanyak  0,05  mL dalam  erlenmeyer.  Kemudian  dikocok sampai  terbentuk  larutan  yang  keruh. Kekeruhan  ini  dipakai  sebagai  standar kekeruhan  suspensi  bakteri  uji  (Borges dan Bresson, 2004).

## Suspensi Bakteri
Suspensi bakteri dilakukan dengan  cara  bakteri  uji  yang  telah diregenerasi  diambil  dengan  jarum  ose lalu  disuspensikan  ke  dalam  tabung reaksi  berisi  5  mL  larutan  NaCl  steril 0,9%. Suspensi yang terbentuk disetarakan kekeruhannya dengan larutan standar Mc farland.0,5.

## Uji Aktivitas Antibakteri
Uji aktivitas antibakteri dilakukan dengan  metode  sumuran.  Media  uji dibuat  dengan  2  lapisan  media  agar. Lapisan dasar atau lapisan pertama dibuat dengan  menuangkan  masing-masing  15 mL NA ke masing-masing 3 cawan petri, kemudian  dibiarkan  memadat.  Setelah
x = x
memadat, permukaan lapisan dasar ditanam  6  pencadang  baja  yang  diatur jaraknya  agar  daerah  pengamatan  tidak bertumpu.  Kemudian  suspensi  bakteri dicampurkan ke dalam media pembenihan  NA  atau  lapisan  kedua Selanjutnya  dituangkan  15  mL  NA  pada tiap cawan petri yang diletakan pencadang sebagai lapisan kedua. Setelah lapisan  kedua  memadat,  pencadang diangkat  secara  aseptik  menggunakan pinset  dari  masing-masing  cawan  petri, sehingga  terbentuk  sumur-sumur  yang akan  digunakan  dalam  uji  bakteri. Sumuran  yang  terbentuk  diisi  dengan larutan  kontrol  dan  larutan  uji  masing- masing 50µl. Selanjutnya semua media di inkubasi dalam inkubator pada suhu 37°C selama  24  jam.  Diukur  diameter  zona bening yang terbentuk dengan menggunakan penggaris milimeter.

## Pengukuran Zona Hambat
Pengukuran zona hambat
dilakukan  pengulangan  sebanyak  3  kali pada  sisi  horizontal  dan  sisi  vertikal  lalu dijumlahkan dan dirata-rata. Hasil diameter  zona  hambat  diperoleh  dengan cara  mengurangi  diameter  zona  bening yang terbentuk disekitar sumuran dengan diameter  sumuran.  Menurut  Davis  and Stout  (1971)  kemampuan  daya  respon hambatan  pertumbuhan  bakteri  adalah  < 10  mm  lemah,  10-15  mm  sedang,  16-20 mm kuat, dan > 20 mm sangat kuat.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Ekstraksi
Pengambilan  sampel  lengkuas putih    dilakukan    di  daerah  Manado, Kecamatan  Wanea,  Provinsi  Sulawesi Utara.  Sampel  yang  telah  diambil, disortasi basah untuk memisahkan kotoran  dari  lengkuas  putih.  Kemudian dicuci  bersih  dengan  air  mengalir. Sampel basah lengkuas  putih diperoleh 2 kg,  lalu  dipotong  kecil-kecil  agar mempermudah  proses  pengeringan.  Cara pengeringan  dengan  diangin-anginkan  di
dalam  ruangan  hingga  kadar  air  dalam sampel  berkurang.  Hal  ini  agar  proses enzimatik  dapat  dihentikan  karena  dapat merusak  zat  aktif.  Selain  itu,  dapat  juga mencegah pertumbuhan mikroorganisme. Lengkuas  putih  yang  telah  kering  dibuat menjadi  serbuk  simplisia  dengan  cara diblender kemudian diayak dengan ayakan mesh 100,  hingga  diperoleh serbuk halus sebanyak 150 g.
Penghalusan  sampel  bertujuan  untuk memperluas  permukaan  sehingga  pada saat proses ekstraksi terjadi kontak antara pelarut  dan  sampel  yang  lebih  efektif serta  senyawa  dapat  terekstraksi  dengan optimal.
Serbuk simplisia diekstraksi dengan metode maserasi. Proses maserasi bertujuan  untuk  memisahkan  satu  atau dua komponen  yang terdapat  pada bahan alam  dengan  bantuan  pelarut.  Metode maserasi  merupakan  salah  satu  metode umum  yang  lebih  sederhana  dan  mudah. Caranya dengan merendam serbuk simplisia  dalam  pelarut  sehingga  pelarut akan  menembus  dinding  sel  dan  masuk kedalam  rongga  sel  yang  mengandung zat-zat  aktif sehingga zat  aktif akan larut (Harmita,  2008).  Penelitian  ini,  larutan penyari atau pelarut yang digunakan yaitu etanol  96%  sebanyak  750  mL.  Etanol digunakan karena dapat menarik senyawa polar  dan  non  polar,  serta  memiliki  daya ekstraksi  yang  luas  sehingga  semua metabolit sekunder dapat tersari.
Maserasi  dilakukan  selama  5  hari sambil  sesekali  diaduk.  Pengadukan bertujuan  untuk  mempercepat  kontak antara  sampel  dan  pelarut.  Kemudian larutan  disaring  menggunakan  kertas saring  dan  diperoleh  filtrat  500  mL dengan warna kecoklatan. Filtrat lengkuas  putih  diuapkan  menggunakan oven dengan tujuan untuk menghilangkan pelarutnya  dari  proses  maserasi  sehingga diperoleh  ekstrak  kental  sebanyak  6,8 gram.  Ekstrak  kental  yang  dihasilkan
kemudian  diuji  dan  dibuat  menjadi nanopartikel ekstrak lengkuas putih.

## Nanopartikel Ekstrak Lengkuas Putih
Pembuatan  nanopartikel  ekstrak lengkuas  putih  dibuat  dengan  metode gelasi  ionik.  Metode  gelasi  ionik  ini didasarkan  pada  interaksi  elektrostastik antara  grup  amina  kitosan  dan  grup muatan  negatif  polianion  seperti  natrium tripolifosfat (Na-TPP). Nanopartikel
dengan  reaksi  gelasi  ionik  mempunyai beberapa keuntungan yakni reaksi mudah,  tidak  memerlukan  pemanasan sehingga kemungkinan rusaknya senyawa aktif bisa dihindarkan.  Proses  pembuatan formulasi  nanopartikel  ekstrak  lengkuas putih dilakukan dengan cara mereaksikan campuran kitosan, dengan ekstrak lengkuas  putih  dan  natrium  tripolifosfat (Na-TPP).  Pada  penelitian  ini  memakai kitosan  0,5%  dan  Na-TPP  0,1%,  dengan rasio  5  :  1  antara  berat  kitosan  dan  TPP. Peningkatan  rasio  kitosan  dan  TPP, menghasilkan nanopartikel dengan ukuran yang lebih kecil, serta menghasilkan efisiensi penyerapan paling baik  dengan  struktur  nanopartikel  yang kompak (Zhang, 2004).
Pencampuran kitosan dengan ekstrak  lengkuas  putih  dan  natrium tripolifosfat  (Na-TPP),  dilakukan  secara bertahap. Larutan kitosan 0,5% ditambah dengan  polisorbat  80  sebanyak  1  ml  dan diaduk  menggunakan magnetic  stirrer dengan  kecepatan  1000  rpm  selama  10 menit.  Penambahan  polisorbat  80  untuk menstabilkan  emulsi  partikel  dalam larutan dengan cara mencegah timbulnya penggumpalan, serta memperkecil ukuran partikel.  Kemudian  pada  larutan  kitosan 0,5%,  ditambahkan  ekstrak  lengkuas putih  0,1  gr  yang  telah  dilarutkan  dalam etanol  96%  dan  diaduk  menggunakan magnetic  stirrer dengan  kecepatan  3000 rpm  selama  30  menit.  Setelah  itu ditambahkan  larutan  Na-TPP  0,1%  dan diaduk  dengan  kecepatan  4000  rpm
selama 90 menit. Selama proses pencampuran larutan, peningkatan kecepatan pengadukan bertujuan memperkecil  ukuran  partikel.  Karena semakin  cepat  proses  pengadukan  maka semakin  kecil  ukuran  partikel  yang diperoleh. Sehingga penelitian ini menghasilkan formulasi nanopartikel ekstrak lengkuas putih sebanyak 125 ml.

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
Pengujian  aktivitas  antibakteri dilakukan  dengan  metode  difusi  agar khususnya  metode  sumuran.  Metode  ini mudah dilakukan dan tidak membutuhkan waktu yang banyak, metode  ini  memiliki  tingkat  sensibilitas lebih  tinggi  dibanding  dengan  varian cakram.  Caranya,  media  agar  yang  telah ditanami  bakteri  uji  dibuat  sumuran dengan  pencadang  berdiameter  7  mm kemudian  sumuran  tersebut  diisi  dengan sampel yang akan diuji aktivitas antibakterinya.  Sampel  dalam  sumuran akan  berdifusi  pada  media  agar  yang telah  ditanami  bakteri.  Pengamatan  dari metode  ini  adalah  terbentuknya  zona bening  di  sekitar  sumuran  setelah  media agar  yang  ditanami  bakteri  diinkubasi selama  1x  24  jam  pada  suhu  37°C.  Pada pengujian  ini  bakteri  uji  yang  digunakan yaitu Klebsiella pneumoniae untuk mengetahui  kemampuan  daya  hambat dari  nanopartikel  ekstrak  lengkuas  putih serta  ekstrak  etanol  lengkuas  putih  pada konsentrasi  50%  dan  kitosan  0,1% termasuk asam asetat 5%. Hasil pengamatan  uji    aktivitas  antibakteri disajikan  pada Tabel 1.
Tabel  1.  Hasil  Pengukuran  Diameter Daya Hambat Pada pengujian aktivitas antibakteri,  kemampuan  daya  hambat pertumbuhan bakteri dikategorikan menurut kategori Davis  and Stout (1971) yang disajikan pada Tabel 2.
Tabel 2.Kategori daya hambat pertumbuhan  bakteri  Davis and Stout (1971) Pengujian ini menggunakan kontrol  negatif  dan  kontrol  positif. Kontrol  negatif  untuk  mengetahui  ada tidaknya  pengaruh  pelarut  terhadap pertumbuhan bakteri uji. Sehingga diketahui bahwa yang mempunyai aktivitas  antibakteri  adalah  zat  uji  bukan pelarut (Dwijendra, 2014). Kontrol negatif  yang  digunakan  adalah  akuades. Dari hasil pengujian yang dilakukan pada kontrol  negatif  tidak  memperlihatkan terbentuknya  zona  hambat.  Hal  ini membuktikan  bahwa    daya  hambat  yang terbentuk  tidak dipengaruhi oleh pelarut.
Antibiotik ciprofloxacin digunakan  sebagai  kontrol  positif  untuk membandingkan daya hambat antara obat antibakteri  dengan  ekstrak  nanopartikel lengkuas  putih.  Pemilihan  antibiotik
ciprofloxacin sebagai  kontrol  positif karena ciprofloxacin merupakan antibiotik  berspektrum  luas.  Antibiotik dengan  spektrum  luas,  yaitu  antibiotik yang  memiliki  aktivitas  terhadap  banyak jenis  bakteri,  virus,  jamur  dan  protozoa (Sarro,  2001).  Penelitian  ini  memperoleh zona  hambat  di  sekitar  sumuran  yang diberi ciprofloxacin . Pengukuran aktivitas  zona hambat dari kontrol positif diperoleh nilai 23,9 mm.
Hasil  pengukuran  zona  hambat nanopartikel  yaitu  22,5  mm.  Hal  ini menunjukan nanopartikel ekstrak lengkuas putih dan ciprofloxacin memiliki  kemampuan  daya  hambat  yang sama pada bakteri
Klebsiella pneumoniae. Faktor  terbentuknya  zona hambat  pada  nanopartikel  dipengaruhi oleh  larutan  kitosan,  yang  memiliki kemampuan  menghambat  bakteri.  Ada dua  kemungkinan  mekanisme  kitosan sebagai antibakteri. Yang pertama kitosan menempel  pada  permukaan  sel  bakteri membentuk membran polimer yang dapat mencegah  masuknya  nutrisi  masuk  ke dalam  sel  sehingga  sel  akan  mati.  Yang kedua  kitosan  dengan  bobot  molekul yang  rendah  dapat  masuk  ke  dalam  sel dan  meliputi  sel.  Karena  kitosan  dapat mengadsorpsi  substansi  elektronegatif dalam  sel  mengganggu  aktivitas  bakteri (Zhang, 2004).
Zona  hambat  yang  dihasilkan ekstrak  etanol  lengkuas  putih  pada konsentrasi  50%  lebih  kecil  daripada nanopartikelnya.  Hasil  juga  menunjukan bahwa  ekstrak  lengkuas  putih  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri  uji .
Hal  ini dibuktikan  dengan  terbentuknya zona  hambat  disekitar  sumuran  dengan hasil  pengukuran  10  mm.  Ekstrak lengkuas  putih  konsentrasi  50%,  punya zona  hambat  yang  dihasilkan  sebesar 9,16  mm.  Hal  ini  menunjukan  bahwa hasil selaras dengan penelitian sebelumnya.  Semakin  besar  konsentrasi
ekstrak  lengkuas  putih,  maka  semakin besar  pula  diameter  zona  bening  yang terbentuk.  Terbentuknya  zona  hambat pada  ekstrak  lengkuas  putih  karena senyawa  bioaktif  yang  terdapat  pada ekstrak  lengkuas  putih  (Hasan,  2019). Ekstrak  etanol  lengkuas  merah  dan  putih positif  mengandung  golongan  senyawa flavonoid,  tannin,  kuinon  dan  terpenoid (Kusriani,  2015).  Ekstrak  lengkuas  putih juga  mengandung  minyak  atsiri  yang berperan dalam menghambat pertumbuhan bakteri Klebsiella
pneumoniae (Sinaga, 2005).
Pada penelitian ini dilakukan juga pengujian  terhadap  larutan  kitosan  0,1% dan  asam  asetat  5%.  Tujuannya  untuk melihat aktivitas  antibakteri  pada kitosan dengan  konsentrasi  rendah  serta  untuk melihat  pengaruh  asam  asetat  terhadap zona  hambat  yang  terbentuk.  Hasil pengukuran zona hambat terhadap kitosan  0,1%  yaitu  rata-rata  16,8  mm. Sedangkan  hasil  pengukuran  terhadap asam  asetat  5%  yaitu  rata-rata  17,2  mm. Dari  pengukuran  di  atas,  asam  asetat memiliki  aktivitas  antibakteri.  Oleh karena  itu,  ketika  digunakan  sebagai pelarut  kitosan  maka  efek  antibakteri asam asetat tidak dapat diabaikan (Liu, et al ., 2006).

## KESIMPULAN
1. Nanopartikel  ekstrak  lengkuas  putih memiliki  aktivitas  antibakteri  untuk menghambat bakteri Klebsiella pneumoniae.
2. Hasil pengukuran zona hambat didapatkan  pengukuran  rata-rata  22,5 mm  untuk  nanopartikel  dan  10  mm untuk  ekstrak  etanol  lengkuas  putih pada konsentrasi 50% sehingga nanopartikel  ekstrak  lengkuas  putih memiliki  daya  hambat  yang  lebih efektif.

## SARAN
Berdasarkan penelitian  yang telah dilakukan,  penulis  memberikan  saran bahwa  perlu  dilakukan  penelitian  lebih lanjut  untuk  karakterisasi  ukuran partikel ekstrak  etanol  Lengkuas  putih  dan penelitian pembuatan nanopartikel dengan metode lain.

## DAFTAR PUSTAKA
Agnihotri,  S.A.,  Nadagounda,  N.M.,
Tejraj M.A. 2004. Recent Advances  on  Chitosan  Based Micro  and  Nanoparticles  in Drug Delivery. Journal of
Control Release . 22: (100) ,5-28.
Bhumkar, D.R.,Varsha, B.P. 2006.
Studies  on  Effect  of  pH  on
Crosslinking  of  Chitosan  With Sodium  Tripolyphosphate:  A Technical Note. AAPS PharmSciTech . 7: (2) ,1-6.
Borges,  M.  T.,  Bresson,  W.  2004.
Delivery Methods for Introducing  Endophitic  Bacteria into Maize. Biocontrol. 49 :(4) ,315-322.
Davis,  W.  W.,  Stout,  T.R.  1971.  Disc Plate  Methods  of  Microbiological Antibiotic Assay. Journal Microbiology. 22(4) : 659-665.
Duncan,  G.A.,  Michael  A.B.  2015.
Computational Design of Nanoparticle Drug Delivery Systems for Selective Targeting. Paper Nanoscale . Royal Society of Chemistry
Dwijendra.  2014.  Aktivitas  Antibakteri dan Karakteristik Senyawa
Fraksi  Spons Lamellodysidea herbacea yang      Diperoleh  dari Teluk Manado. Pharmacon
Jurnal Ilmiah Farmasi 25: (4) ,2302- 2493.
Harmita  dan  Radji,  M.,  2008.  Kepekaan Terhadap  Antibiotik. Buku  Ajar Analisis  Hayati, Eds  3.  EGC, Jakarta.
Hasan,  P.  2019.  Uji  Daya  Hambat Ekstrak Rimpang Lengkuas Putih ( Alpinia galanga L. Swartz)  Terhadap  Pertumbuhan Bakteri Klebsiella  pneumoniae
Isolat  Sputum  Pada  Penderita Pneumonia  Resisten  Antibiotik Seftriakson.  [Skripsi].  Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan  Alam,  Universitas Sam Ratulangi, Manado. Hernani,  T,M.,  Christina,  W.  2007. Pemilihan Pelarut pada Pemurnian  Ekstrak  Lengkuas ( Alpinia Galanga ) secara
Ekstraksi. Jurnal  Pascapanen .
4: (1) ,1-8.
Hubler A.W., Onyeama, O. 2010. Digital Quantum  Batteries:  Energy  and Information Storage in Nanovacuum Tube Arrays. Wiley Periodicals, Inc. Research Article . 11: (1) ,48-55.
Kafshgari, M.H., Mohammad, K., Mobina,  K.,  dan  Sahar,  K. (2011). Reinforcement of Chitosan Nanoparticles Obtained by an Ionic Crosslinking  Process. Iranian
Polymer  Journal .  20: (5) ,445- 456.
Kammona,  O.,  Costas,  K.  2012.  A Review  Recent  Advances  in Nanocarrier-based Mucosal Delivery of Biomolecules.
Journal  of  Controlled  Release. 161: (3) ,781-794.
Kurniasari,  D.  2016.  Pembuatan  Dan Karakterisasi Nanopartikel Ekstrak  Etanol  Temu  Kunci ( Boesenbergia  Pandurata )  pada Berbagai Variasi Komposisi Kitosan. [Skripsi]. Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan  Alam  Universitas Negeri Yogyakarta, Yogyakarta. Kusriani, R.H., Shofia, Z. 2015. Skrinning Fitokimia dan Penetapan Kadar Senyawa Fenolik  Total  Ekstrak  Rimpang Lengkuas  Merah  dan  Rimpang Lengkuas Putih (Alpinia galanga  L.),  Prosiding  Seminar Nasional  Penelitian  dan  PKM
Kesehatan . 1: (1) ,295-302.
Liu,  Y.,  Lotero,  E.,  Goodwin,  J.  G.  Jr,
2006. Synthesis and Pharmacological  Activities  of Xanthone  Derivatives  as  Alpha- glucosidase  Inhibitors. Bioorg Med Chem. 14: (16) ,56-83.
Ortez, J.H. 2005. Manual of
Antimicrobial Susceptibility Testing. American  Society  for Microbiology. USA.
Prasetyorini, A.E., Zainal, H., Rofiqoh, S.
2011. Penerapan Teknologi Nanopartikel  Propolis Trigona Spp Asal Bogor Sebagai Antibakteri Escherichia  Coli Secara In-Vitro. Jurnal Ekologia . 11: (1) ,36-43.
Ramadhan,  L.O.A.N,  Radiman,  C.L.,
Wahyuningrum,  D.,  Suendo,  V., Ahmad,  L.O.,  Valiyaavetil,  S.
2010.  Deasetilasi  Kitin  Secara Bertahap Dan Pengaruhnya
Terhadap  Derajat  Deasetilasi Serta  Massa  Molekul  Kitosan. Jurnal Kimia Indonesia . 5: (1) ,17-21.
Sarro,  A.D.  2001.  Adverse  Reactions  to Fluoroquinolones.  An  Overview on  Mechanism  Aspect.  Current Medicinal  Chemistry.  8: (4) ,371- 84.
Sinaga.  E.  2005. Alpinia  galangal (L.)
P3TO Universitas Nasional,
Jakarta. Taylor,  R.A.,  Todd,  P.O.,  Yasitha,  H.,
Fabienne,  B.,  Gary,  R.,  Evatt,
R.H.,  Xuchuan,  J.,  Sylvain,  C.
2013.  Feasibility  of  Nanofluid- based  Optical  Filters. Optical Society of America . 52: (7) ,1413- 1422.
Tiyaboonchai, W. 2003. Chitosan Nanoparticles: Apromising System  For  Drug  Delivery. Naresuan  University  Journal .
11: (3) ,51-6.
Zhang, et al . 2004. Immobillization of L- asparaginase on the Microparticles  of  the  Natural Silk  Sericin  Protein  and  its Characters. Biomaterials. 25: (4) ,3751-3759.