## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,

## THE POTENCY OF Mycale vansoesti SPONGE EXTRACT AND FRACTIONS FROM MANADO TUA ISLAND WATERS AGAINST THE GROWTH OF Staphylococcus aureus AND Escherichia coli
POTENSI EKSTRAK DAN FRAKSI SPONS Mycale vansoesti DARI PERAIRAN PULAU MANADO TUA TERHADAP PERTUMBUHAN BAKTERI Staphylococcus aureus DAN Escherichia coli
Komang A. M. Widyani 1)* , Defny S. Wewengkang 1) ,  Erladys M. Rumondor 1)
1) Program Studi Farmasi Fakultas MIPA UNSRAT Manado, 95115 *kamay530@gmail.com

## ABSTRACT
Sponges  are  one  of  the  coral  reefs  components  that  have  the  potential  to  produce  secondary metabolites with antibacterial, antifungal, and anticancer properties that have not been widely  used. This study aims to determine the antibacterial activity of the extract and fractions of Mycale vansoesti sponge  obtained  from  Manado  Tua  Island  waters  against  the  growth  of  Staphylococcus  aureus  as Gram-positive  representatives  and  Escherichia  coli  bacteria  as  Gram-negative  representatives. Samples were extracted using the maceration method with 95% ethanol solvent and fractionated with the  liquid-liquid  method  using  3  types  of  solvents  with  different  polarities,  namely  n-hexane, chloroform, and methanol. Antibacterial activity test using the Kirby-Bauer disc diffusion method. The test results showed that ethanol extract, n-hexane fraction, chloroform fraction and methanol fraction from  Mycale  vansoesti  sponge  sample  obtained  from  Manado  Tua  Island  waters  have  antibacterial activity against Staphylococcus aureus and Escherichia coli with moderate bacterial inhibitory power.
Keywords : Mycale vansoesti, Antibacterial, Staphylococcus aureus, Escherichia coli

## ABSTRAK
Spons  merupakan  salah  satu  komponen  penyusun  terumbu  karang  yang  berpotensi  menghasilkan senyawa  metabolit  sekunder  yang  bersifat  antibakteri,  antijamur  dan  antikanker  yang  belum  banyak dimanfaatkan. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui adanya aktivitas antibakteri dari ekstrak dan fraksi  spons Mycale  vansoesti yang  diperoleh  dari  perairan  Pulau  Manado  Tua  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus sebagai  perwakilan  Gram  positif  dan Escherichia  coli sebagai  perwakilan Gram  negatif.  Sampel  diekstraksi  menggunakan  metode  maserasi  dengan  pelarut  etanol  95%  dan difraksinasi bertingkat dengan metode cair-cair menggunakan 3 jenis pelarut dengan tingkat kepolaran yang  berbeda  yaitu  n-heksana,  kloroform  dan  metanol.  Pengujian  aktivitas  antibakteri  menggunakan metode  difusi  agar  Kirby-Bauer.  Hasil  pengujian  menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol,  fraksi  n- heksana, fraksi kloroform dan fraksi metanol dari sampel spons Mycale vansoesti yang diperoleh dari perairan  Pulau  Manado  Tua  memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli dengan daya hambat bakteri kategori sedang.
Kata kunci : Mycale vansoesti , Antibakteri, Staphylococcus aureus , Escherichia coli

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,

## PENDAHULUAN
Laut  merupakan  dunia  tiga  dimensi kompleks  yang  mencakup  sekitar  71%  dari permukaan  bumi  yang  menawarkan  potensi besar  penemuan  baru  di  semua  bidang  ilmu pengetahuan  (Totti et  al .,  2020).  Laut merupakan  habitat  yang  sangat  unik  dan dinamis.  Lautan  di  bumi  adalah  rumah  bagi beranekaragam  organisme  yang  beradaptasi dengan kondisi laut (Morrissey et al ., 2016).
Indonesia  merupakan  negara  kepulauan terbesar di dunia dengan garis pantai sepanjang 99.093  km 2 yang  kaya  akan  terumbu  karang dan  biota  laut  lainnya  (Liem et  al .,  2019). Sejak tahun 1980-an perhatian dunia pengobatan  mulai  terarah  ke  berbagai  macam biota  laut  sebagai  sumber  daya  yang  sangat berpotensi.  Spons,  moluska,  tunikata  dan bryozoa  merupakan  beberapa  biota  laut  yang diketahui  dapat  menghasilkan  senyawa  aktif (Wewengkang et al ., 2014).
Jenis  biota  laut  yang  banyak  diteliti  ialah spons.  Salah  satu  pusat  penyebaran  terbesar spons  di  dunia  yang  diperkirakan  terdapat sekitar  830  spesies  tersebar  di  wilayah  laut Indonesia  (Liem et  al .,  2019).  Spons merupakan  salah  satu  komponen  penyusun terumbu karang yang berpotensi menghasilkan senyawa  metabolit  sekunder  yang  bersifat bioaktif  sebagai  antibakteri,  antijamur  dan antikanker  yang  belum  banyak  dimanfaatkan (Menggelea et al ., 2015).
Penyakit  infeksi  merupakan  salah  satu masalah  kesehatan  yang  penting  di  Indonesia. Infeksi  merupakan  suatu  penyakit  yang disebabkan  oleh  adanya  mikroba  patogen  dan dapat  membahayakan  hidup  manusia.  Bakteri merupakan  salah  satu  penyebab  terjadinya penyakit infeksi. Bakteri yang sering menyebabkan  infeksi  pada  manusia  adalah Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus . Pengobatan  infeksi  yang  disebabkan  oleh bakteri  dapat  diatasi  dengan  penggunaan antibiotik/ antibakteri. Namun seiring berjalannya  waktu,  terdapat  bakteri  yang resisten  terhadap  beberapa  jenis  antibiotik yang  semakin  memperparah  kasus  infeksi, misalnya  pada  bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus .  Oleh  sebab  itu, penemuan  antibiotika  baru  sangat  diperlukan untuk mengatasi permasalahan tersebut (Utomo et al ., 2018).
Pada penelitian sebelumnya (Luntungan et al .,  2021),  pengujian  pada  ekstrak  etanol,
fraksi  kloroform,  fraksi  n-heksan  dan  fraksi metanol    spons Mycale  vansoesti yang diperoleh  dari  perairan  Pulau  Mantehage Minahasa  Utara  terhadap  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli menunjukkan  adanya  aktivitas  antibakteri dengan  nilai  zona  hambat  sekitar  6,63  –  8,82 mm  yang  termasuk  dalam  kategori  daya hambat sedang.
Berdasarkan  uraian  diatas, peneliti  tertarik untuk  mengetahui  lebih  jauh  tentang  potensi dari ekstrak dan fraksi spons Mycale vansoesti yang  diperoleh  dari  perairan  Pulau  Manado Tua  terhadap  bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus serta  membandingkan apakah terdapat perbedaan aktivitas antibakteri dengan  penelitian  yang  telah  dilakukan sebelumnya.

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian
Pengambilan sampel dilakukan di perairan Pulau Manado Tua. Penelitian ini dilaksanakan di  Laboratorium  Farmakognosi  &  Fitokimia dan Laboratorium Mikrobiologi Program Studi Farmasi  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan  Alam  pada  bulan  Oktober  2021 sampai dengan bulan Maret 2022.

## Bentuk Penelitian
Penelitian  ini  berbentuk  eksperimental laboratorium  dengan  rancangan  penelitian dimana sampel Mycale vansoesti yang diekstraksi dan difraksinasi. Kemudian dilakukan  pengujian  antibakteri  terhadap Escherichia coli dan Staphylococcus aureus.

## Alat dan Bahan Alat
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah masker, handscoon , kertas label, spidol permanen,  jas  lab,  gunting,  pisau,  alat scuba diving , zipper  lock  bag ,  botol  air  mineral kemasan  ukuran  600  mL,  talenan, cool  box , gelas  ukur,  gelas  kimia  timbangan  analitik, erlenmeyer,  corong,  rotary  evaporator,  corong pisah,  cawan  petri,  autoklaf,  pinset,  pembakar spritus, pipet tetes, microtubes , batang pengaduk,  tabung  reaksi,  rak  tabung  reaksi, inkubator,  mikropipet,  corong Buchner ,  labu

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
penyaring ( filtering flask ), mistar berskala dan lemari pendingin.

## Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini yaitu  Spons Mycale  vansoesti ,  bakteri  uji Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli , etanol, metanol, kloroform, n-heksana, pepton, kertas  cakram  ( blank  paper  disc ),  kertas cakram kloramfenikol ( chloramphenicol paper disc ),  alumunium  foil,  kertas  saring,  kapas, tisu, agar dan ekstrak daging ( beef extract ).

## Pengambilan Sampel
Sampel  Spons Mycale  vansoesti diambil dari perairan pulau Manado Tua menggunakan alat bantu scuba diving . Sampel yang diperoleh dimasukkan  ke  dalam  plastik zipper  lock dan diletakkan  di  dalam cool  box yang  berisi  es batu  dan  tidak  terpapar  sinar  matahari  secara langsung.  Sampel  yang  diperoleh  dibawa  ke Laboratorium  Farmakognosi  dan  Fitokimia Program  Studi  Farmasi  Universitas  Sam Ratulangi.  Sampel  difoto,  diberi  label  serta penomoran untuk selanjutnya dideterminasi.

## Ekstraksi Sampel
Spons Mycale  vansoesti diekstrak  dengan metode maserasi menggunakan etanol. Sampel yang  diperoleh  disortasi  basah  terlebih  dahulu untuk  memisahkan  kotoran  atau  bahan  asing yang  tidak  diinginkan,  dipotong  kecil  –  kecil dan dimasukkan ke dalam wadah (botol ukuran 600  mL).  145  gram  sampel  yang  diperoleh, direndam selama 24 jam menggunakan pelarut etanol  95%  hingga  terendam  seluruhnya. Setelah  perendaman  selama  24  jam,  sampel yang  direndam  disaring  menggunakan  kertas saring hingga menghasilkan filtrat 1 dan debris 1.  Debris  1  diremaserasi  selama  24  jam menggunakan  pelarut  etanol  95%  hingga terendam seluruhnya, kemudian disaring menggunakan
kertas saring hingga menghasilkan  filtrat  2  dan  debris  2.  Debris  2 diremaserasi  selama  24  jam  menggunakan etanol  95%  hingga  terendam  seluruhnya, kemudian disaring hingga menghasilkan filtrat 3 dan debris 3. Filtrat 1, 2 dan 3 yang diperoleh dari  proses  maserasi  digabung  menjadi  satu kemudian  disaring  kembali.  Setelah  disaring, filtrat  dievaporasi  pada  suhu  40°C  hingga diperoleh  ekstrak  kering  (ekstrak  kasar)  dan selanjutnya ditimbang menggunakan timbangan  analitik.  Kemudian,  ekstrak  kasar
Spons Mycale vansoesti digunakan pada proses fraksinasi  dan  pengujian  bakteri  (Silap et  al ., 2020).

## Fraksinasi
Pelarut  yang  digunakan  dalam  proses fraksinasi  ialah  n-heksana,  koroform  dan metanol. Sebanyak 3 gram ekstrak kasar Spons Mycale  vansoesti dimasukkan  ke  dalam erlenmeyer  kemudian  dilarutkan  dengan  100 mL  metanol  80%.  Ekstrak  kasar  yang  telah larut,  dimasukkan  ke  dalam  corong  pisah  dan ditambahkan  pelarut  n-heksana  sebanyak  100 mL  dan  dikocok  dalam  corong  pisah  hingga homogen. Kemudian dibiarkan sampai terbentuk  lapisan  n-heksana  dan  lapisan metanol,  lalu  masing  –  masing  lapisan ditampung  dalam  wadah  yang  berbeda. Lapisan  n-heksana  yang  terbentuk  dievaporasi hingga  kering,  kemudian  ditimbang  dan diperoleh  fraksi  n-heksana.  100  mL  aquadest ditambahkan ke lapisan metanol yang terbentuk  dan  dipartisi  di  dalam  corong  pisah dengan  perbandingan  1:1  v/v  menggunakan pelarut kloroform dan dikocok kembali hingga homogen.  Setelah  terbentuk  lapisan  metanol dan  kloroform,  masing  –  masing  lapisan ditampung  di  wadah  yang  berbeda.  Lapisan kloroform  yang  terbentuk  dievaporasi  hingga kering,  kemudian  berat  sampel  ditimbang  dan diperoleh  fraksi  kloroform.  Lapisan  metanol dievaporasi hingga kering, kemudian ditimbang dan diperoleh fraksi metanol. Fraksi metanol,  kloroform  dan  n-heksana  yang diperoleh digunakan dalam pengujian antibakteri  (Luntungan et  al .,  2021).  Menurut Ortez (2005), Rendemen yang diperoleh dalam proses fraksinasi dihitung menggunakan rumus berikut ini.
𝑅𝑒𝑛𝑑𝑒𝑚𝑒𝑛 = 𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 ℎ𝑎𝑠𝑖𝑙 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 𝑎𝑤𝑎𝑙 × 100%

## Sterilisasi Alat
Alat–alat yang digunakan dalam penelitian ini  disterilkan  terlebih  dahulu.  Jarum  ose  dan pinset disterilisasi dengan cara dibakar dengan pembakaran  diatas  api  langsung.  Media  dan alat  –  alat  gelas  disterilisasi  pada  suhu  121°C selama  15  menit  menggunakan  autoklaf  (Putri et al ., 2020).

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,

## Pembuatan Media Cair
Pembuatan  media  cair  dilakukan  dengan cara  mencampurkan  ekstrak  daging  ( beef extract )  sebanyak  0,3  g,  100  mL  aquadest, natrium klorida 0,3 g dan 0,5 g pepton hingga homogen  kemudian  disterilkan  menggunakan autoklaf  pada  suhu  121°C  selama  15  menit.  1 mL  media  cair  dimasukkan  ke  dalam  tabung reaksi  dan  ditutup  dengan  alumunium  foil. Media  cair  siap  digunakan  sebagai  media kultur bakteri (Ortez, 2005).

## Kultur Bakteri Uji
Pada  media  cair  yang  telah  disiapkan sebelumnya,  ditambahkan  masing  –  masing 100  µL  bakteri  yang  telah  dikultur  yaitu Staphylococcus aureus dan Escherichia coli ke dalam  tabung  reaksi  yang  berbeda.  Setiap tabung  reaksi  ditutup  dengan  alumunium  dan dimasukkan  ke  dalam  inkubator  pada  suhu 37°C selama 1x24 jam (Ortez, 2005).

## Pembuatan Kontrol Positif dan Negatif
Kontrol  positif  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah chloramphenicol  paper disc dengan  konsentrasi  250  µg/50  µL  dan kontrol  negatif  yang  digunakan  adalah  pelarut metanol  dengan  cara  membuat  larutan  stok metanol  konsentrasi  250  µg/50  µL  metanol kemudian  ditotolkan  pada  blank  paper  disc (Josua et al ., 2021).

## Pembuatan Larutan Uji
Pembuatan  larutan  uji  dilakukan  dengan cara  melarutkan  1  mg  ekstrak  kasar  Spons Mycale  vansoesti menggunakan  0,2  mL  (200 µL)  metanol  hingga  menghasilkan  konsentrasi larutan  uji  sebesar  250  µg/50  µL.  Dilakukan perlakuan  yang  sama  pada  fraksi  metanol, fraksi kloroform dan fraksi n-heksana (Josua et al ., 2021).

## Pembuatan Media Agar
Pembuatan  media  agar  dilakukan  dengan cara mencampurkan 0,3 g ekstrak daging ( beef extract ), 0,5 g pepton, 0,45 g agar dan 100 mL
aquadest hingga homogen kemudian
disterilkan  menggunakan  autoklaf  pada  suhu 121°C  selama  15  menit.  Media  agar  siap digunakan dalam pengujian aktivitas antibakteri (Ortez, 2005).

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
Metode  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  yaitu  metode  difusi  agar  ( disc  diffusion
Kirby  and  Bauer ).  Pada  pengujian  aktivitas antibakteri ini, kertas cakram ( paper disc ) yang digunakan berukuran 6 mm dengan daya serap 50  μL  tiap  cakram.  Sampel  yang  telah ditentukan  konsentrasinya yaitu  250  μg/50  μL ditotolkan pada masing-masing cakram dengan menggunakan  mikropipet.  Bakteri  yang  telah dikultur ( Staphylococcus aureus dan Escherichia  coli )  dipipet  dan  diinokulasi  pada media  agar,  lalu  media  agar  yang  telah diinokulasi  dituangkan  ke  dalam  cawan  petri dan  ditunggu  sampai  media  mengeras.  Kertas cakram yang telah ditotolkan sampel uji Spons Mycale  vansoesti diletakkan  menggunakan pinset  ke  dalam  cawan  petri  dan  kemudian diinkubasi selama 24 jam (Josua et al ., 2021).

## Pengamatan  dan  Pengukuran  Diameter Zona Bening
Setelah  24  jam  masa  inkubasi,  dilakukan pengamatan terhadap pengujian yang dilakukan.  Daerah  pada  sekitaran  cakram menunjukkan kepekaan bakteri terhadap antibiotik atau bahan antibakteri yang digunakan  sebagai  bahan  uji  yang  dinyatakan dengan  diameter  zona  bening.  Pengukuran diameter  zona  bening  menggunakan  mistar berskala.  Diameter  ≤5  mm  memiliki  kekuatan daya  hambat  lemah,  6-10  mm  daya  hambat sedang,  11-20  mm  daya  hambat  kuat  dan  ≥21 mm  daya  hambat  sangat  kuat  (Luntungan et al ., 2021).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Determinasi Sampel
Determinasi spons Mycale vansoesti dilakukan  di  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sam Ratulangi. Tujuan dilakukannya determinasi sampel ialah untuk memperoleh atau mengetahui kebenaran identitas  sampel  yang  ditemukan,  sehingga tidak  terjadi  kesalahan  dalam  pengumpulan ataupun  pengujian  sampel  yang  dilakukan. Hasil  determinasi sampel  yang  diperoleh  ialah spons dengan spesies Mycale vansoesti .

## Ekstraksi dan Fraksinasi
Metode  ekstraksi  yang  digunakan  adalah maserasi.  Metode  maserasi  dilakukan  dengan tujuan  memisahkan  atau  menyari  senyawa aktif yang terkandung dalam spons (Pelealu et
al .,  2021).  Perendaman  sampel  pada  metode maserasi  menyebabkan  terjadinya  perbedaan konsentrasi di dalam dan di luar sel spons yang dapat  membuat  dinding  sel  pecah/lisis  (Josua et al ., 2021).
Pelarut  yang  digunakan  dalam  proses ekstraksi ialah etanol 95%. Etanol dipertimbangkan  sebagai  cairan  penyari  yang efektif  karena  bersifat  selektif,  tidak  beracun, absorbsinya  baik,  dapat  bercampur  dengan  air dengan  segala  perbandingan  dan  mampu mengekstrak  sebagian  besar  senyawa  kimia yang  bersifat  polar,  non  polar  maupun  semi polar yang terkandung dalam sampel (Wewengkang et  al .,  2014;  Sa’adah  dan Nurhasnawati, 2017).
Hasil  ekstraksi  yang  diperoleh  berupa ekstrak  kasar  etanol  berwarna  kuning  tua dengan  berat  6  gram.  Kemudian  sebanyak  3 gram  ekstrak  kasar  diambil  untuk  proses fraksinasi  metode  cair-cair  menggunakan  3 jenis  pelarut  dengan  tingkat  kepolaran  yang berbeda-beda  (pelarut  polar,  semi  polar  dan
non  polar)  secara  bertingkat  berdasarkan tingkat  kepolaran  masing-masing  pelarut. Pelarut  yang  digunakan  adalah  metanol, kloroform  dan  n-heksana  (Luntungan et  al ., 2021).
Dalam proses fraksinasi bertingkat, terbentuk  lapisan  pemisah  diantara  2  pelarut akibat  adanya  perbedaan  massa  jenis.  Pelarut yang  memiliki  massa  jenis  yang  lebih  kecil berada  di  lapisan  bagian  atas,  sedangkan pelarut  yang  memiliki  massa  jenis  lebih  besar berada  di  lapisan  bagian  bawah.  Pada  proses fraksinasi, diperlukan pengadukan/pengocokan saat  pencampuran  pelarut.  Hal  tersebut bertujuan  agar  masing-masing  pelarut  dapat menarik  senyawa  kimia  yang  memiliki  sifat kepolaran  yang  sama  dengan  pelarut  tersebut. Setelah  dilakukan  ekstraksi  dan  fraksinasi, dilakukan  perhitungan  rendemen  ekstrak  dan fraksi  yang  diperoleh.  Hasil  perhitungan rendemen  ekstrak  dan  fraksi  spons Mycale vansoesti dapat dilihat pada tabel 1.
Tabel 1. Rendemen ekstrak dan fraksi spons Mycale vansoesti No Sampel Berat (g) Rendemen (%) Warna 1 Ekstrak Etanol 6,00 4,14 Kuning tua 2 Fraksi n-Heksana 0,12 4,00 Hijau kecokelatan 3 Fraksi Kloroform 0,07 2,33 Hijau tua 4 Fraksi Metanol 1,63 54,33 Coklat kemerahan Hasil  akhir  yang  diperoleh  adalah  ekstrak kasar  etanol  95%,  fraksi  kasar  n-heksana, fraksi kasar kloroform dan fraksi kasar metanol 40%.
Hasil perhitungan rendemen menunjukkan  bahwa  ketiga  jenis  fraksi menghasilkan  jumlah  rendemen  yang  berbeda beda,  dimana  fraksi  metanol  menghasilkan rendemen  yang  paling  tinggi  yaitu  54,33%. Nilai  tersebut  berbeda  jauh  dengan  persentase rendemen  yang  dihasilkan  oleh  fraksi  n- heksana dan fraksi kloroform.
Menurut Harborne (1987),  tingginya jumlah
rendemen yang
dihasilkan menunjukkan  banyaknya  senyawa  aktif  yang diperoleh dari suatu sampel. Berdasarkan teori tersebut,  dapat  disimpulkan  bahwa  spons Mycale  vansoesti mengandung  lebih  banyak komponen  bioaktif  atau  senyawa  kimia  yang bersifat  polar  dibandingkan  senyawa  kimia yang bersifat semi polar maupun non polar.

## Uji Aktivitas Antibakteri
Pengujian  aktivitas  antibakteri  ekstrak etanol,  fraksi  n-heksana,  fraksi  kloroform  dan fraksi  metanol  spons Mycale  vansoesti menggunakan  metode  difusi  agar Kirby-Bauer ( disc  diffusion  Kirby  and  Bauer )  yang  telah dimodifikasi  terhadap  bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus sebagai perwakilan dari Gram positif dan Gram negatif. Penggunaan  metode  difusi  agar  Kirby-Bauer dipilih karena ketelitian, kesederhanaan teknik, dapat  digunakan  pada  semua  bakteri  patogen, pertumbuhan  bakteri  yang  cepat  serta  sering digunakan dalam pengujian kepekaan antibiotik  dalam  program  pengendalian  mutu (Mpila, 2012).
Tujuan  penggunaan  perwakilan  bakteri Gram  positif  dan  Gram  negatif  adalah  untuk menguji  apakah  sampel Mycale  vansoesti memiliki aktivitas antibakteri berspektrum luas atau berspektrum sempit (Josua et al ., 2021).
Kontrol  positif  yang  digunakan  adalah kloramfenikol  ( chloramphenicol  paper  disc )

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
dan  kontrol  negatif  yang  digunakan  adalah pelarut  metanol  yang  ditotolkan  pada  kertas cakram  ( blank  paper  disc )  Pengamatan aktivitas antibakteri dilakukan setelah inkubasi selama  1x24  jam  pada  suhu  37°C  dengan melakukan  3  kali  pengulangan  pada  setiap ekstrak  dan  fraksi  masing-masing  bakteri. Tujuan  dilakukannya  pengulangan  adalah memperoleh  hasil  pengujian  yang  lebih akurat (Mujipradana et al ., 2018).
Aktivitas  antibakteri  ekstrak  dan  fraksi spons Mycale  vansoesti terhadap  bakteri Escherichia  coli dapat  dilihat  pada  Tabel  2. Aktivitas  antibakteri  ekstrak  dan  fraksi  spons Mycale vansoesti terhadap bakteri
Staphylococcus  aureus dapat  dilihat  pada Tabel 3.
Tabel 1 . Aktivitas antibakteri ekstrak dan fraksi spons Mycale vansoesti terhadap bakteri Escherichia coli Diameter Zona Hambat (mm) x EtOH n-Hxn ChCl 3 MeOH C+ C- 1 8,41 8,13 8,57 9,22 30,61 - 2 7,90 7,44 9,31 8,35 3 9,35 9,91 11,04 10,01 ∑ 25,66 25,48 28,92 27,58 𝐗 ̅ 8,55 8,49 9,64 9,19 Ket: ∑ = total pengukuran, X ̅ = rata – rata pengukuran
Tabel 2 . Aktivitas antibakteri ekstrak dan fraksi spons Mycale vansoesti terhadap bakteri
Staphylococcus aureus Diameter Zona Hambat (mm) x EtOH n-Hxn ChCl 3 MeOH C+ C- 1 8,67 7,35 8,40 7,52 30,14 - 2 8,40 7,93 9,36 8,36 3 7,74 8,40 8,92 8,38 ∑ 24,81 23,68 26,68 24,28 𝐗 ̅ 8,27 7,89 8,89 8,09 Ket: ∑ = total pengukuran, X ̅ = rata – rata pengukuran
Berdasarkan hasil pengukuran zona bening/zona  hambat  pada  pengujian  aktivitas antibakteri  yang  telah  dilakukan,  ditemukan aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol,  fraksi  n- heksana,  fraksi  kloroform  dan  fraksi  dari sampel  spons Mycale  vansoesti yang  diujikan terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli yang  ditunjukkan  dengan adanya  zona  hambat/zona  bening  di  sekitar kertas  cakram.  Dari  ketiga  pengulangan  uji antibakteri  terhadap Escherichia  coli yang dilakukan,  diperoleh  rata-rata  pengukuran diameter  zona  bening  ekstrak  etanol  sebesar 8,55  mm,  fraksi  n-heksana  sebesar  8,49  mm, fraksi  kloroform  sebesar  9,64  mm  dan  fraksi metanol  sebesar  9,19  mm.  Pada  pengujian
aktivitas  antibakteri  terhadap Staphylococcus aureus diperoleh rata-rata pengukuran diameter zona bening dari tiga kali pengulangan  yaitu  ekstrak  etanol  sebesar  8,27 mm, fraksi n-heksana sebesar 7,89 mm, fraksi kloroform sebesar 8,89 mm dan fraksi metanol sebesar 8,09 mm.
Menurut Davis dan Stout (1971), kekuatan daya antibakteri suatu sampel dapat dikategorikan  berdasarkan  diameter  zona bening yang terbentuk pada pengujian aktivitas antibakteri.  Kategori  kekuatan  daya  hambat bakteri  menurut  Davis  dan  Stout  dapat  dilihat pada tabel 4.

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
Tabel 4. Kategori daya hambat bakteri menurut Davis-Stout Diameter Zona Bening Kategori ≥ 20 mm Sangat kuat 10 – 20 mm Kuat 5 – 10 mm Sedang ≤ 5 mm Lemah
Berdasarkan  teori  tersebut,  sampel  spons Mycale  vansoesti yang  diujikan  pada  bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus memiliki  aktivitas  antibakteri  dengan  kategori daya hambat sedang. Aktivitas antibakteri yang ditimbulkan  pada  kedua  bakteri  yang  diujikan (Gram positif dan Gram negatif) menunjukkan bahwa  sampel  spons Mycale vansoesti mengandung senyawa antibakteri yang berspektrum luas. Pada penelitian sebelumnya oleh
Luntungan et  al .  (2021),  pengujian  antibakteri spons Mycale  vansoesti dari  perairan  Pulau Mantehage  terhadap  bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus diperoleh  hasil pengukuran  diameter  zona  hambat  dengan range  nilai  6,63  –  8,82  mm.  Sedangkan  pada penelitian  ini,  diperoleh  pengukuran  diameter zona  hambat  dengan  range  nilai  7,89  –  9,64 mm. terdapat sedikit perbedaan hasil pengukuran  diameter  zona  hambat  bakteri, namun  daya  hambat  bakteri  masih  dalam kategori yang sama yaitu kategori sedang.
Zona  hambat  atau  zona  bening  yang terbentuk  dapat  dipengaruhi  oleh  beberapa faktor  lingkungan  hidup  dari  spesies  tersebut. Faktor–faktor lingkungan yang dapat mempengaruhi  stabilitas  senyawa  aktif  dari suatu sampel ialah pH air, suhu, salinitas, arus air,  cahaya  dan  nutrien  yang  terkandung  di dalam air laut (Tompunu et al ., 2022).
Berdasarkan  perbandingan  hasil  penelitian ini  dan  penelitian  sebelumnya,  hanya  terdapat sedikit  perbedaan  hasil  pengukuran  diameter zona  hambat  bakteri.  Ditinjau  dari  tempat pengambilan  sampel,  perairan  Pulau  Manado Tua  dan  perairan  Pulau  Mantehage  masih dalam  garis  pantai  yang  sama  dengan  jarak antar  pulau  yang  berdekatan.  Sehingga,  hal tersebut dapat disebabkan oleh kesamaan/kemiripan  lingkungan  hidup  dari kedua sampel spons.
KESIMPULAN
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan,  dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak etanol,  fraksi  n-heksana,  fraksi  kloroform  dan fraksi  metanol  dari  sampel  spons Mycale vansoesti yang  diperoleh  dari  perairan  Pulau Manado  Tua  memiliki  aktivitas  antibakteri terhadap Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus dengan  daya  hambat  bakteri  kategori sedang.

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  yang  lebih lanjut  untuk  mengetahui  senyawa-senyawa kimia yang terkandung di dalam spons Mycale vansoesti .  Sehingga  dapat  diketahui  secara spesifik senyawa antibakteri apa yang terkandung di dalam spons Mycale vansoesti .

## DAFTAR PUSTAKA
Davis,  W.  W.,  T.R.  Stout.  1971.  Disc  Plate Method  of  Microbiological  Assay.
Journal  of  Microbiology . 22(4): 659- 665.
Harborne, J. B. 1987. Metode Fitokimia . Edisi ke-3.  Terjemahan  Padmawinata,  K.,
Soediro, I. ITB Press. Bandung.
Josua,  E.,  Wewengkang,  D.  S.,  dan  Suoth,  E. 2021.  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak dan Fraksi Spons Liosina paradoxa dari Perairan Pulau Mantehage. PHARMACON . 10(3): 933-939.
Liem,  J.,  Bara,  R.,  Sumilat,  D.,  Warouw,  V., Losung,  F.,  dan  Wantasen,  A.  2019. Bioprospeksi Antibakteri Beberapa Jenis
Spons Dari Perairan Pangalisang Bunaken. Jurnal  Pesisir  Dan  Laut Tropis . 7(1): 7-12.
Luntungan,  B.  M.,  Wewengkang,  D.  S.,  dan Rumondor,  E.  2021.  Uji  Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  dan  Fraksi  Spons Mycale  vansoesti dari  Perairan  Pulau Mantehage  Minahasa  Utara  Terhadap Pertumbuhan  Bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus
aureus .
PHARMACON . 10(2): 889-896.
Menggelea,  F.  P.,  Posangi,  J.,  Wowor,  M.  P., dan Bara, R. 2015. Uji Efek Antibakteri Jamur Endosimbion Spons Laut Callyspongia  sp. Terhadap  Bakteri
Pseudomonas aeruginosa dan
Eschericia  coli . eBiomedik . 3(1): 376- 380.
Morrissey, J., Sumich, J. L., & Pinkard-Meier, D. R. 2016. Introduction To The Biology Of  Marine  Life .  Jones  &  Bartlett Learning.
Mpila,  D.A.  2012.  Uji  Aktivitas  Antibakteri Ekstrak  Etanol  Daun  Mayana  ( Coleus atropurpureus Benth) Terhadap Staphylococcus aureus, Echerichia coli Dan Pseudomonas aeruginosa Secara
Invitro  [skripsi].  Manado:  Universitas
Sam Ratulangi.
Mujipradana,  V.N.,  D.  S.  Wewengkang.,  dan E. Suryanto. 2018. Aktivitas Antimikroba  dari  Ekstrak Ascidian Herdmania momus pada Mikroba Patogen  Manusia. PHARMACON . 7(3): 338-347.
Ortez,  J.  H.  2005. Disk  Diffusion  testing  in manual  of  antimicrobial  susceptibility testing .  Marie  B.  Coyle  (Coord.  Ed). American  society  for  Microbiology. America.
Pelealu,  E.,  Wewengkang,  D.  S.,  dan Abdullah,  S.  S.  2021.  Uji  Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  dan  Fraksi  Spons
Leucetta chagosensis Dari  Perairan Pulau Mantehage Sulawesi Utara Terhadap Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli . PHARMACON . 10(2): 834-840.
Putri, R. A., Simbala, H. E., dan Mpila, D. A. 2020.  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak Etanol  Bawang  Dayak  ( Eleutherine americana  Merr )  Terhadap  Bakteri Staphylococcus aureus , Escherichia coli dan Salmonella  typhi . PHARMACON . 9(4): 525-532.
Sa'adah,  H.,  dan  Nurhasnawati,  H.  2017. Perbandingan  Pelarut  Etanol  dan  Air Pada  Pembuatan  Ekstrak  Umbi  Bawang Tiwai  ( Eleutherine  americana Merr) Menggunakan  Metode  Maserasi. Jurnal ilmiah manuntung . 1(2): 149-153.
Silap, G. E., Wewengkang, D.,  dan Rotinsulu, H.  2020.  Uji  Aktivitas  Antimikroba
Karang Lunak Dendronephtya Sp ., Yang Dikoleksi Dari Desa Tumbak Kecamatan Pusomaen, Kabupaten Minahasa Tenggara Terhadap Escherichia coli , Staphylococcus aureus , dan Candida Albicans . PHARMACON . 9(1): 63-72.
Tompunu,  V.  F.,  Wewengkang,  D.  S.,  dan Rumondor, E. M. 2022. Potensi Antibakteri  Ekstrak  dan  Fraksi  dari Organisme Laut Stylissa Carteri terhadap Pertumbuhan Bakteri Staphyloccus  aureus dan Escherichia coli . PHARMACON. 11(1): 1255-1263.
Totti,  C.  M.,  Accoroni,  S.,  Barucca,  M., Bianchelli, S., Biscotti, M. A., Calcinai, B., Canapa, A., Corinaldesi, C.,
Danovaro,  R.,  Camillo,  C.  G.  D., Fanelli,  E.,  Gambi,  C.,  Puce,  S., Romagnoli,  T.,  dan  Cerrano,  C.  2020. Marine Biology. Biodiversity and
Functioning  of  Marine  Ecosystems:
Scientific Advancements and New Perspectives  For  Preserving  Marine Life. In  The  First  Outstanding  50 Years of “Università Politecnica delle
Marche” . Springer, Cham. 447-462.
Utomo, S. B., Fujiyanti, M., Lestari, W. P., dan Mulyani, S. 2018. Uji Aktivitas Antibakteri Senyawa C-4 Metoksifenilkaliks  [4]  Resorsinarena Termodifikasi Hexadecyltrimethylammonium-Bromide Terhadap Bakteri Staphylococcus
aureus Dan Escherichia  coli . Jurnal Kimia dan Pendidikan Kimia . 3(3): 109- 209.
Wewengkang,  D.  S.,  Sumilat,  D.  A.,  dan Rotinsulu,  H.  2014.  Karakterisasi  dan Bioaktif  Antibakteri  Senyawa  Spons Haliclona Sp . dari Teluk
Manado. Jurnal  LPPM  Bidang  Sains dan Teknologi . 1(1): 71-85.