ISSN 2085-2916  e-ISSN 2337-3652 Tersedia daring http://jai.ipb.ac.id
DOI: https://dx.doi.org/10.24831/jai.v47i1.21116
PENDAHULUAN
Buah kelapa kopyor adalah buah dari kelapa ( Cocos nucifera )  mutan  alami  yang  banyak  diminati  masyarakat Indonesia  (Sudarsono,  2017;  Sudarsono et  al .,  2015). Terdapat dua tipe kelapa kopyor di Indonesia, yaitu kelapa Genjah kopyor dan kelapa Dalam kopyor (Maskromo et al ., 2013;  Maskromo et  al .,  2012a;  2012b).  Endospermanya merupakan  bahan  baku  untuk  minuman  penyegar  yang memiliki rasa lezat yang khas (Maskromo, 2015; Sudarsono, 2017;  Sudarsono et  al .,  2015).  Perbedaan  utama    antara endosperma kelapa kopyor dan kelapa normal terletak pada
struktur  dan  tekstur  endospermanya  (Maskromo,  2015; Sudarsono et  al .,  2015;  Sudarsono,  2017).  Perbedaan  ini menyebabkan endosperma kelapa kopyor memiliki rasa unik dan  lebih  lembut  dibandingkan  dengan  rasa  endosperma kelapa  normal.  Kelapa  kopyor  dikonsumsi  masyarakat sebagai  makanan  dan  minuman  penyegar,  serta  sebagai bahan baku es krim (Maskromo et al ., 2015).
Endosperma  buah  kelapa  normal  yang  sudah  masak memiliki struktur padat yang keras dengan ketebalan sekitar 0.5-1.0  cm  (Kumar et  al .,  2015),  sementara  endosperma kelapa  kopyor  bersifat  lunak  dan  terlepas  dari  batoknya (Maskromo et  al .,  2014).  Sifat  buah  kopyor  diwariskan secara genetik dari tetua kepada progeninya. Kelapa mutan alami  yang  dikenal  dengan  nama  Makapuno  ditemukan di  Filipina.  Struktur  dan  tekstur  endosperma  Makapuno
Seleksi Pendonor Serbuk Sari Sifat Kuantitas Endosperma Skor Tinggi pada Kelapa Dalam Kopyor
Selection of Pollen Contributor for High Endosperm Quantity Character in Kopyor Tall Coconut
Megayani Sri Rahayu 1,2 , Asep Setiawan 2 , Ismail Maskromo 3 , Agus Purwito 2 , dan Sudarsono 2 * 1 Program Studi Pemuliaan dan Bioteknologi Tanaman, Sekolah Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor 2 Departemen Agronomi dan Hortikultura, Fakultas Pertanian, Institut Pertanian Bogor (Bogor Agricultural University), Jl. Meranti, Kampus IPB Darmaga, Bogor 16680, Indonesia
2 Balai Penelitian Kelapa (Balitka), Badan Penelitian dan Pengembangan Pertanian (Balitbangtan), Jl. Mapanget, Manado 95001, Indonesia
Diterima 20 April 2018/Disetujui 19 Desember 2018

## ABSTRACT
Endosperm quantity in kopyor coconut determines the quality of kopyor coconut. However, data of the best parental based on their progeny test is unavailable yet. In this study, we employed polycross approach and SSR molecular marker to estimate general combining ability of the best pollen contributor for the breeding purpose of this trait. Totally 151 kopyor coconuts were collected from the naturally open-pollinated population of kopyor Tall coconut Agom Lampung. The harvested nuts were rated for their endosperm quantity (scored 1-9). The analysis identified 31 paternal trees of the 53 progenies. The TJ-185 with the highest GCA has been considered as a promising paternal tree for development of high endosperm quantity of kopyor coconut.
Keywords: combining ability, molecular marker, paternal trees, polycross, tall coconut

## ABSTRAK
Kuantitas endosperma kelapa kopyor menentukan kualitas dari buah kopyor, namun hingga saat ini belum ada informasi tentang tetua persilangan terbaik untuk sifat kuantitas endosperma. Penelitian ini menggunakan pendekatan polycross dan analisis tetua jantan berbasis marka molekular SSR untuk mengidentifikasi tetua jantan dan menduga nilai daya gabung umum sifat kuantitas endosperma kelapa kopyor. Sebanyak 151 buah kelapa kopyor dipanen dari populasi kelapa Dalam kopyor Agom Lampung yang menyerbuk silang secara alami.  Buah yang dipanen diberi skor untuk sifat kuantitas endosperma (skor 1-9). Analisis tetua jantan berhasil mengidentifikasi 31 tetua jantan dari 53 progeni. Tetua jantan TJ-185 yang memiliki nilai daya gabung umum tertinggi dipertimbangkan sebagai tetua jantan terpilih untuk pengembangan kelapa kopyor dengan skor kuantitas endosperma tinggi.
Kata kunci: analisis tetua jantan, daya gabung, kelapa dalam, marka molekuler, polycross
berbeda  dari  kelapa  kopyor.  Endosperma  kelapa  kopyor jika  tua  bentuknya  remah  sedangkan  endosperma  kelapa Makapuno  membentuk  struktur  seperti  cairan  pelumas (Maskromo et al ., 2014). Perbedaan pada level molekuler antara  endosperma  Makapuno  dan  endosperma  kelapa normal  salah  satunya  adalah  endosperma  Makapuno memiliki  miRNA  terekspresi  lebih  tinggi  (176  miRNA) dibandingkan  endosperma  kelapa  normal  muda  yang memiliki 95 miRNA (Li et al., 2009). Sejumlah gen yang berasal dari kelapa kopyor telah diisolasi dan diidentifikasi tetapi masih belum dapat dipastikan hubungannya dengan sifat  endosperma  kopyor  pada  kelapa  (Sukendah et  al ., 2017; Sukendah et al ., 2011).
Tingkat terkelupasnya endosperma pada buah kelapa kopyor bervariasi. Ada buah kopyor yang endospermanya sangat terkelupas atau terkelupas semua dari batok namun ada juga  yang tingkat terkelupasnya rendah. Kelapa kopyor dengan  tingkat  terkelupas  endosperma  yang  tinggi  lebih disukai  masyarakat.  Tingkat  terkelupasnya  endosperma dikenal dengan istilah ‘kuantitas endosperma’, yang dapat dikategorikan ke dalam nilai skor 1 sampai 9  (Sudarsono et al ., 2011; Maskromo et al ., 2014). Skor 1 menggambarkan kondisi endosperma yang masih melekat pada batok kelapa (Sudarsono et al ., 2011; Maskromo et al ., 2014), sedangkan skor  9  menggambarkan  endosperma  yang  seluruhnya sudah  terkelupas  dari  batok  kelapa.  Maskromo  (2015) dan  Maskromo et  al .  (2016)  menduga  efek  xenia  cukup berperan  mengendalikan  sifat  kuantitas  endosperma  pada kelapa. Xenia oleh Olfati et al . (2010) didefinisikan sebagai fenomena  pengaruh  serbuk  sari  terhadap  perkembangan buah dan biji.
Desa  Agom  Jaya,  Kecamatan  Kalianda,  Kabupaten Lampung  Selatan  sudah  lama  dikenal  sebagai  penghasil kelapa kopyor. Kelapa kopyor yang tumbuh di desa Agom Jaya termasuk tipe kelapa Dalam (Maskromo et al ., 2012a; 2012b).  Kelapa  Dalam  memiliki  ciri  pola  penyerbukan silang (Pandin, 2009). Persebaran serbuk sari sebagai akibat penyerbukan  silang  pada  kelapa  kopyor  dapat  mencapai jarak sejauh 63 m seperti yang dilaporkan Larekeng et al . (2015a;  2015b). Tinggi  tanaman  kelapa  kopyor  di Agom, Lampung  dapat  mencapai  30  m  dan  perlu  waktu  sekitar lima tahun untuk menghasilkan buah pertamanya. Kondisi ini  menyebabkan  penerapan  persilangan  terkendali  untuk mengkaji kendali genetik suatu sifat tertentu secara teknis sulit dilakukan. Kesulitan mengumpulkan serbuk sari, proses kastrasi,  dan  penyerbukan  dapat  menyebabkan  terjadinya peluang  yang  tinggi  terhadap  kontaminasi  serbuk  sari, terbatasnya jumlah kombinasi persilangan, maupun jumlah progeni  pada  setiap  kombinasi  persilangan.  Pendekatan polycross dengan penyerbukan secara alami menjadi pilihan yang disukai, meskipun pendekatan ini memiliki kekurangan yaitu tidak diketahuinya tetua donor serbuk sari.
Sejumlah  marka  molekuler  seperti simple  sequence repeat (SSR) atau single nucleotide amplified polymorphism (SNAP)  telah  digunakan  untuk  mengevaluasi  keragaman genetik kelapa (Maskromo, 2015; Pesik et al ., 2017; Pesik et  al .,  2015).  Pelacakan  tetua  populasi  kelapa  Dalam Mapanget (Pandin et al ., 2008) dan sifat tandan buah pada
sawit  (Yono et  al .,  2017)  mengindikasikan  bahwa  marka molekuler  SSR  merupakan  marka  molekuler  yang  efektif untuk  mendukung  pemuliaan  tanaman  tahunan  seperti kelapa.  Marka  SSR  telah  banyak  digunakan  untuk  studi keragaman genetik maupun identifikasi hibrida dan progeni kelapa (Martinez et al. , 2010; Perera et al ., 2010; Pesik et al .,  2015;  Ribeiro et  al .,  2010; Yao et  al .,  2013),  namun pemanfaatan marka molekuler SSR untuk identifikasi tetua kelapa  kopyor  dengan  sifat  kuantitas  endosperma  tinggi belum pernah dilakukan.
Minimnya kajian genetik sifat kuantitas endosperma kelapa,  sulitnya  melakukan  studi  persilangan  terkontrol pada kelapa tipe Dalam, dan tersedianya marka molekuler SSR  yang  bersifat  kodominan  menjadi  latar  belakang dilakukan penelitian ini. Identifikasi tanaman sebagai tetua persilangan  dalam  pengembangan  kelapa  kopyor  unggul yang  memiliki  sifat  kuantitas  endosperma  tinggi  belum pernah  dilakukan  sebelumnya.  Penelitian  ini  bertujuan menilai  tingkat  keragaman  genetik  kebun  kelapa  Agom Lampung,  membuktikan  efektivitas  analisis  tetua  jantan ( paternal  analysis )  berbasis  marka  molekuler  SSR  dalam mengidentifikasi  donor  serbuk  sari  dan  mengidentifikasi tetua jantan terbaik untuk sifat kuantitas endosperma pada populasi alami kelapa Dalam kopyor.

## BAHAN DAN METODE

## Bahan Tanaman untuk Penelitian
Penelitian dilakukan  di  kebun  kelapa  kopyor  milik petani di desa Agom Jaya, Kecamatan Kalianda, Kabupaten Lampung  Selatan,  Provinsi  Lampung  ( GPS  position :  S 5  39.478  E  105  34.978).  Buah  yang  dipanen  merupakan hasil polycross (penyerbukan  terbuka)  yang  terjadi  secara alami tanpa campur tangan manusia. Seluruh pohon kelapa di area penelitian adalah pohon kelapa kopyor heterozigot yang  telah  didata  dan  diberi  nomor  urut.  Sebanyak  151 buah kelapa kopyor yang dihasilkan dari 125 pohon dipanen secara bertahap di kebun kelapa kopyor milik petani selama 22 bulan periode pelaksanaan penelitian yaitu  pada bulan Januari  2015  hingga  bulan  November  2016.  Setiap  buah kelapa  yang  dipanen  diberi  nomor  sesuai  dengan  nomor identitas pohon induk yang tertulis di batang pohon induk. Selain buahnya, daun kelapa dewasa juga diambil sebagai sampel  pengamatan.  Jika  dari  satu  pohon  induk  betina dipanen lebih dari satu buah, maka setiap buah diberi huruf index, seperti kode 5a dan 5b yang mengindikasikan kedua buah dipanen dari pohon induk no. 5. Buah dipanen oleh pemanjat  profesional  yang  telah  terampil  mengenali  ciri- ciri  buah  kelapa  kopyor  dengan  cara  mengetuk-ngetuk buah  kelapa  tersebut  sehingga    terdengar  suara  khas  dari dalam buah kelapa sebelum buah tersebut dipanen. Pohon kandidat  tetua  jantan  maupun  pohon  induk  adalah  kelapa kopyor  heterozigot  yang  semuanya  dapat  menghasilkan buah kopyor dan buah normal dengan rasio 1:3.
Buah  kelapa  kopyor  yang  telah  dipanen,  dikirim ke  Laboratorium Plant  Molecular  Biology (PMB), Departemen  Agronomi  dan  Hortikultura,  Fakultas
Pertanian IPB, Bogor untuk dilakukan pengukuran karakter fisik  buah  dan  skoring  kuantitas  endosperma.  Sabut  buah kelapa dikupas, untuk selanjutnya buah kelapa tanpa sabut dibelah  menjadi  dua  bagian.  Batok  kelapa  yang  terbelah serta terlihat endospermanya difoto menggunakan kamera digital. Kuantitas endosperma diberi nilai skor dengan cara membandingkan  hasil  foto  dengan  foto  standar  skoring kuantitas endosperma  (Maskromo et al ., 2014; Sudarsono et  al .,  2011). Visualisasi  endosperma  buah  kelapa  normal dan kelapa kopyor dapat dilihat pada Gambar 1.

## Ekstraksi DNA dan Analisis SSR
Ekstraksi DNA menggunakan metode CTAB (Rohde et al. , 1995), yang secara rutin telah digunakan untuk isolasi DNA dari berbagai tanaman palma di Indonesia (Ajambang et al ., 2012; Budiman et al ., 2019; Natawijaya et al ., 2019; and  Tinche et  al .,  2014).  Total  DNA  populasi  tanaman dewasa diisolasi dari jaringan daun muda. Sebaliknya untuk total DNA populasi progeni diisolasi dari jaringan embrio zigotik.
Analisis  SSR  dilakukan  dengan  menggunakan  10 primer  SSR  yang  bersifat  polimorfik  yang  dikembangkan oleh Lebrun et al . (2001), yaitu Cn Cir B12, Cn Cit 56, Cn Cir 81, Cn Cir 86, Cn Cir 87, Cn Cir 123, Cn Cir 147, Cn Cir 206, CnZ 18, CnZ 51. Amplifikasi pita DNA dilakukan menggunakan  mesin Polymerase  Chain  Reaction (PCR) dengan Kapa  2G Fast  Polymerase TM PCR  Kit (KAPA Biosystems  Inc.  USA),  jumlah  siklus  35,  suhu  denaturasi (94  ºC;  30  detik),  anealing  (48-60  ºC;  15  detik)  dan extension (72 ºC; awal 5 detik; akhir 10 menit). Pemisahan produk  amplifikasi  dilakukan  dengan Polyacrilamide  Gel Electrophoresis (PAGE) tipe vertical  selama 30 menit dengan kuat arus 100 mA dan voltase 210 volt. Gel yang digunakan adalah 6% polyacrilamide gel dalam larutan penyangga SB 1x (Brody and Kern, 2004). Visualisasi hasil elektroforesis vertikal  dilakukan  menggunakan silver  staining (Creste et  al .,  2001).  Ukuran  produk  amplifikasi  diduga  dengan menggunakan  100  bp  DNA ladders .  Pita-pita  DNA  hasil amplifikasi  PCR  ( amplicon )  yg  telah  dielektroforesis  dan
diwarnai  dengan silver  staining diberi  skor  0  jika  tidak terbentuk amplicon . Sebaliknya, jika didapatkan amplikon, maka amplicon yang  didapat  dari  seluruh  individu  dalam populasi yg dianalisis diberi nomor secara berurutan sesuai dengan ukurannya ( amplicon yang terkecil diberi no. 1, dan seterusnya hingga amplicon yang terbesar).

## Analisis Tetua Jantan
Progeni dinyatakan sebagai hibrida hasil persilangan apabila  mewarisi  alel  spesifik  yang  dimiliki  oleh  kedua tetuanya.  Jika  progeni  hanya  mewarisi  alel  dari  tetua induk  betina  maka  dikategorikan  sebagai  progeni  hasil penyerbukan sendiri. Progeni yang memiliki satu alel dari tetua  induk  betina  dan  satu  alel  yang  asalnya  bukan  dari individu  calon  tetua  jantan  dalam  populasi  persilangan diduga sebagai tipe simpang yang tetua jantannya dari luar populasi  persilangan.  Progeni  seperti  ini  tidak  digunakan dalam analisis lebih lanjut.
Identitas  tetua  jantan  dari  masing-masing  individu progeni  ditentukan  berdasarkan  hasil  analisis parentage berbasis multiple loci data hasil genotyping dengan marka SSR. Analisis parentage dilakukan menggunakan perangkat lunak  CERVUS  versi  3.0.7  (Kalinowski et  al .,  2007). Parameter yang digunakan dalam analisis adalah bootstrap 1000x dan threshold dengan tingkat kepercayaan penentuan tetua 80% ( relax ) dan 95% ( strick ).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Analisis SSR Populasi Kelapa Agom Lampung
Kesepuluh primer yang digunakan bersifat polimorfik karena sudah dilakukan penapisan primer-primer sebelum digunakan. Contoh hasil analisis parentage dari progeni F1- 40b  yang  dipanen  dari  tetua  betina  TB-40,  teridentifikasi mempunyai  tetua  jantan  TJ-185.  Berdasarkan  genotyping menggunakan  lokus  marka  SSR  CnCIR_87,  genotipe tetua betina TB-40 dan progeni F1-40b adalah homosigot 11,  sedangkan  tetua  jantan  TJ-185  adalah  heterosigot  12.

## A
B

## C
Gambar 1. Endosperma buah kelapa; (A) kelapa normal, (B) kelapa kopyor skor rendah, (C) kelapa kopyor skor tinggi
Dengan  demikian,  tetua  jantan  TB-213  (TJ185  dan  tetua betina TB-40 masing-masing berkontribusi alel 1 sehingga menghasilkan progeni F1-40b dengan genotipe homosigot 11 (Gambar 2A). Dengan analogi yang sama, tetua betina TB-213 (heterosigot 12) dan tetua jantan TJ185 (heterosigot 12) masing-masing berkontribusi alel 1 atau alel 2 sehingga menghasilkan progeni F1-213b dengan genotipe heterosigot 12 (Gambar 2.B).
Berdasarkan  analisis  frekuensi  alel,  diperoleh  nilai proporsi  heterozigositas  yang  tinggi  pada  populasi  kelapa Dalam Agom  Lampung  yaitu  Ho  =  57%  dan  He  =  67%. Nilai  ini  menggambarkan  populasi  kelapa  Dalam  Agom Lampung  merupakan  populasi  menyerbuk  terbuka  yang memiliki  keragaman  tinggi.  Nilai  Ho  populasi  kelapa kopyor  Agom  lampung  lebih  tinggi  dibandingkan  nilai heterozigositas  koleksi  kelapa  Dalam  asal  Asia  Tenggara (53.0%),  kelapa  Dalam  asal  Panama  (23.0%),  dan  kelapa Genjah asal Asia Tenggara (9.90 %) seperti yang dilaporkan oleh  Gunn et  al. (2011).  Hasil  analisis  ini  memperkuat pernyataan  sebelumnya  bahwa  populasi  pohon  kelapa Agom  Lampung  merupakan  populasi  menyerbuk  silang dan tingkat heterozigositasnya masih terjaga dengan baik. Hasil tersebut juga mengindikasikan bahwa populasi kelapa Dalam Agom Lampung merupakan sumber plasma nutfah penting bagi upaya pengembangan kelapa Dalam kopyor.

## Analisis Tetua Jantan (Paternal Analysis)
Paternal analysis pada penelitian ini dilakukan dengan melibatkan  276  data,  meliputi  125  data  SSR  DNA  tetua yang  diambil  dari  daun  pohon  dewasa  dan  151  data  SSR DNA progeni yang diambil dari embrio zigotik. Pada taraf kepercayaan 85% ( relax setting ), diperoleh 31 kandidat dari 125 kandidat donor serbuk sari (24.8%) teridentifikasi positif sebagai donor serbuk sari untuk 53 individu progeni.
Hasil  analisis  menunjukkan  bahwa  jumlah  progeni yang didapatkan dari tetua jantan berkisar antara 1 hingga 5.  Sebanyak  19  donor  serbuk  sari  teridentifikasi  hanya
menghasilkan  1  progeni.  Donor  serbuk  sari  TJ-130,  TJ- 15,  TJ-179,  TJ-180,  TJ-203,  TJ-206,  dan  TJ-208  masing- masing  berkontribusi  menghasilkan  2  progeni  (Tabel  1). Donor  serbuk  sari  TJ-185  masing-masing  berkontribusi menghasilkan 3 progeni; donor serbuk sari  TJ-198, TJ-181, dan  TJ-202  masing-masing  berkontribusi  menghasilkan 4  progeni;  dan  donor  serbuk  sari    TJ-197  berkontribusi menghasilkan 5 progeni (Tabel 2).
Sulitnya  melaksanakan  emaskulasi,    pengumpulan serbuk  sari  serta  pelaksanaan  penyerbukan  terkontrol menyebabkan  pendekatan polycross menjadi  salah  satu pendekatan  yang  banyak  dipilih,  walaupun  pendekatan ini  memiliki  kelemahan  yaitu  hilangnya  informasi  tetua jantan (Tew and Pan, 2010). Metode paternal analysis yang berbasis  marka  molekuler  SSR  memberikan  hasil  bahwa informasi tetua jantan sebagai donor serbuk sari  berhasil didentifikasi  (Tabel  1  dan  2).  Penelitian  penggunaan paternal analisis untuk mengidentifikasi tetua jantan yang menyumbang serbuk sari dalam pembentukan buah kelapa telah dilaporkan oleh Laerekeng et al . (2015a, 2015b) dan Maskromo et al . (2016). Identifikasi  tetua  terpilih  untuk  sifat  kuantitas endosperma dapat didasarkan pada hasil  uji progeni  buah kelapa  F1  tanpa  harus  menunggu  tumbuhnya  tanaman dan  buah  F2.  Identifikasi  ini  dapat  dimungkinkan  karena karakter kuantitas endosperma dapat muncul akibat adanya efek xenia ,  yaitu  efek  dari  gen  pengendali  sifat  kuantitas endosperma  terhadap  fenotipenya  dapat  langsung  dilihat dan diamati pada endosperma buah kelapa  F1.
Kegiatan  seleksi  pohon  kelapa  dilakukan  untuk mendapatkan  pohon  induk  terbaik  untuk  tujuan  produksi atau  sebagai  tetua  persilangan  untuk  perakitan  varietas unggul  baru.  Pemilihan  tetua  umumnya  didasarkan  pada nilai daya gabung tetua persilangan yang dinilai dari hasil uji progeni. Acquaah (2012)  mendefinisikan daya gabung umum  sebagai  selisih  antara  rata-rata  performa  suatu genotipe tertentu dengan rata-rata performa umum.
Gambar  2.  Skematik  segregasi  alel  SSR;  (A)  segregasi  pada  lokus  CnCir_87  persilangan TB-40  x TJ-185,  (B)  segregasi  pada  lokus CnCir_87 persilangan TB-213 x  TJ-185
Lokus SSR CnCir_87                                                                             Lokus SSR CnCir_87
F 1 -40b                                                                                                   F 1 -213b
(A)                                                                                                          (B)
X X 2 1 2 1 : 1 1 2 1 : 1 1 1 2 TB-40                           TJ-185                                                              TB-213                         TJ-185
No ID Keturunan Tetua jantan yang menghasilkan 3 progeni Trio confidence ID Induk ID Kandidat tetua jantan Trio LOD score 1 F1-40b TB-40 TJ-185 5.03E-1 + F1-197f TB-197 TJ-185 2.48E+0 + F1-213a TB-213 TJ-185 -7.23E-1 + Tetua jantan yang menghasilkan 4 progeni 1 F1-4a TB-4 TJ-198 2.76E+0 + F1-146a TB-146 TJ-198 2.50E+0 + F1-192e TB-192 TJ-198 2.17E-1 + F1-197b TB-197 TJ-198 3.98E+0 + 2 F1-155b TB-155 TJ-181 6.25E+0 * F1-11f TB-11 TJ-181 4.53E+0 + F1-40e TB-40 TJ-181 2.96E+0 + F1-175c TB-175 TJ-181 1.49E+0 + 3 F1-197a TB-197 TJ-202 -1.53E+0 + F1-197d TB-197 TJ-202 2.98E+0 + F1-197e TB-197 TJ-202 3.40E+0 + F1-217a TB-217 TJ-202 2.11E+0 + Tetua jantan yang menghasilkan 5 progeni 1 F1-91b TB-91 TJ-197 3.44E+0 + F1-213b TB-213 TJ-197 3.87E+0 + F1-219b TB-219 TJ-197 3.20E+0 + F1-255b TB-255 TJ-197 3.69E+0 + F1-270b TB-270 TJ-197 3.68E+0 +
Tabel 2. Identitas keturunan dan kandidat tetua jantan yang menghasilkan 3, 4, dan 5 progeni
Keterangan: TB = tetua betina; TJ = tetua jantan; . ID = identitas; * = sangat nyata pada taraf  95 %; + = nyata pada taraf 80%
No ID  Keturunan Tetua jantan yang menghasilkan 2 progeni Trio confidence ID Induk ID Kandidat tetua jantan Trio LOD score 1 F1-121a TB-121 TJ-130 2.26E+0 + F1-221c TB-221 TJ-130 -4.05E-1 + 2 F1-120a TB-120 TJ-15 6.83E+0 * F1-185b TB-185 TJ-15 3.76E+0 + 3 F1-203a TB-203 TJ-179 3.40E+0 + F1-221a TB-221 TJ-179 2.35E+0 + 4 F1-60a TB-60 TJ-180 2.27E+0 + F1-82f TB-82 TJ-180 4.47E+0 + 5 F1-48a TB-48 TJ-203 4.17E+0 + F1-88a TB-88 TJ-203 2.77E+0 + 6 F1-88d TB-88 TJ-206 7.61E-1 + F1-194c TB-194 TJ-206 3.55E+0 + 7 F1-79b TB-79 TJ-208 2.74E+0 + F1-185a TB-185 TJ-208 4.89E+0 +
Tabel 1. Identitas keturunan, induk, dan kandidat tetua jantan yang menghasilkan 2 progeni
Keterangan: TB = tetua betina; TJ = tetua jantan;  ID = identitas; * = sangat nyata pada taraf 95 %; + = nyata pada taraf 85 %
Pendugaan nilai daya gabung khusus dan pendugaan pengaruh inbreeding terhadap  sifat  kuantitas  endosperma belum  bisa  dilakukan  pada  studi  ini,  hal  ini  disebabkan karena  terbatasnya  data  yang  diperoleh  sebagai  akibat tidak diperolehnya data ulangan suatu persilangan spesifik. Hasil penelitian ini meskipun tidak diperoleh data ulangan persilangan  spesifik,  namun  telah  menunjukkan  bahwa pendekatan polycross yang dikombinasikan dengan  marka molekuler  SSR  berhasil  membuat  pendekatan polycross menjadi lebih baik karena tetua donor serbuk sarinya dapat diidentifikasi.
Tabel 3  menyajikan nilai skor kuantitas endosperma dari  28  kombinasi  persilangan  yang  melibatkan  10  tetua donor  serbuk  sari  dan  22  tetua  betina.  Pendugaan  nilai daya  gabung  umum  masing-masing  tetua  jantan  dihitung
dari  selisih  rataan  masing-masing  keturunan  terhadap rataan  umum  (Acquaah,  2012).  Tabel  3  memperlihatkan bahwa tetua jantan yang memiliki nilai daya gabung umum tertinggi adalah pohon tetua TJ-185 (3.36), sedangkan yang memiliki daya gabung umum terendah adalah pohon tetua TJ-130  (-1.64)  dan  TJ-15  (-1.64).  Berdasarkan  nilai  daya gabung  umumnya  maka  tetua  TJ-185 dapat  dinyatakan sebagai  donor  serbuk  sari  yang  baik  untuk  sifat  kuantitas endosperma kopyor.  Hasil penelitian ini diharapkan dapat berkontribusi  dalam  upaya  percepatan  pengembangan kelapa kopyor unggul, yang sejak tahun 2012  telah mulai dirintis  oleh  Balit  Palma  Manado  dan  Institut  Pertanian Bogor (Maskromo et al ., 2012a, 2012b; Novarianto et al .
2014).
Tetua Jantan Tetua Betina Ẋtji Stdev DGU TB-121 TB-221 TJ-130 1 2 1.5 0.7 -1.64 TB-120 TB-185 TJ-15 2 1 1.5 0.7 -1.64 TB-221 TB-203 TJ-179 1 3 2.0 1.4 -1.14 TB-11 TB-155 TB-175 TB-40 TJ-181 4 3 2 7 4.0 2.2 0.86 TB-213 TB-40 TJ-185 5 8 6.5 2.1 3.36 TB-213 TB-219 TB-255 TB-270 TB-91 TJ-197 2 2 1 8 3 3.2 2.8 0.06 TB-146 TB-192 TB-197 TB-4 TJ-198 2 5 2 3 3.0 1.4 -0.14 TB-197 TB-197 TB-217 TJ-202 3 2 6 3.7 2.1 0.56 TB-48 TB-88 TJ-203 6 1 3.5 3.5 0.36 TB-185 TB-79 TJ-208 2 3 2.5 0.7 -0.64 Rataan umum (µ) 3.1

## Tabel 3. Nilai dugaan daya gabung umum tetua donor serbuk sari
Keterangan: TJ = tetua betina; TB = tetua jantan;  1-8 = nilai skor kuantitas endosperma buah kopyor hasil persilangan tetua jantan dan tetua betina tertentu; Ẋtji = rataan sampel skor endosperma individu  tetua jantan;  µ = rataan umum skor endosperma; Stdev = simpangan baku; Nilai dugaan daya gabung umum (DGU) = Ẋtji-µ

## KESIMPULAN
Populasi  kelapa  kopyor Agom  Lampung  merupakan populasi menyerbuk silang dengan tingkat heterosigozitas yang tinggi dan merupakan sumber plasma nutfah penting bagi upaya pengembangan kelapa Dalam kopyor. Paternal analysis berbasis marka molekuler SSR dengan  pendekatan
polycross telah  berhasil  mengidentifikasi  tetua  jantan  dan menduga nilai daya gabung umum tetua jantan donor serbuk sari  untuk sifat kuantitas endosperma. Di antara tetua jantan yang telah berhasil diidentifikasi, pohon TJ-185 terseleksi sebagai  pohon  tetua  jantan  yang  berpotensi  baik  guna perbaikan sifat kuantitas endosperma kelapa kopyor.

## DAFTAR PUSTAKA
Acquaah, G. 2012. Principle of Plant Genetics and Breeding. 2 nd ed. Wiley-Blackwell, Oxford, GB.
Ajambang, W.,  Sudarsono,  D. Asmono,  N. Toruan.  2012. Microsatellite  markers  reveal  Cameroon’s  wild  oil palm  population  as  a  possible  solution  to  broaden the genetic base in the Indonesia-Malaysia oil palm breeding  programs.  Afric.  J.  Biotech.  11:13244- 13249.
Brody,  J.R.,  E.  Kern.  2004.  History  and  principles  of conductive media for standard DNA electrophoresis. Analytical Biochemistry 333:1-13.
Budiman,  L.F.,  A.  Apriyanto,  A.  Pancoro,  S.  Sudarsono. 2019. Genetic diversity analysis of Tenera × Tenera and Tenera× Pisifera Crosses and D self of oil palm ( Elaeis guineensis ) parental populations originating from Cameroon. Biodiversitas 20:937-949.
Creste,  S.,  A.T.  Neto,  A.  Figueira.  2001.  Detection  of single sequence repeat polymorphism in denaturing polyacrylamide  sequencing  gels  by  silver  staining. Plant Mol. Biol. Rep. 19:299-306.
Gunn,  B.F.,  F Baudouin, K.M.  Olsen.  2011.  Independent origins of cultivated coconut ( Cocos nucifera L.) in the old world tropics. Plos One 6:e2114.
Kalinowski, S.T., M.L.Taper, T.C. Marshall. 2007. Revising how the computer program CERVUS accommodates genotyping  error  increases  success  in  paternity assignment.  Mol.  Ecol.  16:1099-1106.  DOI: org/10.1111/j.1365-294x.2007.03089.x.
Kumar, K.D., R.K. Gautam, I. Ahmad, D.S. Roy, A. Sharma. 2015. Biochemical, genetic, and molecular basis of the novel and commercially important soft endosperm makapuno coconut a review. J. Food Agric. Environ. 13:61-65.
Larekeng, S.H., I. Maskromo, A. Purwito, N.A. Mattjik, S. Sudarsono.  2015.  Pollen  Dispersal  and  Pollination Patterns  Studies  in  Pati  Kopyor  Coconut  Using Molecular  Markers.  Int.  J.  Coconut  Res.  Dev. (CORD) 31:46-60.
Larekeng,  S.H.,  I.  Maskromo,  A.  Purwito,  N.A.  Matjik, Sudarsono.  2015.  Penyebaran  polen  berdasarkan analisis  SSR  membuktikan  penyerbukan  kelapa Dalam Kalianda Normal ke Kopyor. Buletin Palma 16:77-92.
Lebrun, P.,  L. Baudouin, R. Bourdeix,  J.L. Konan, J.H. Barker,  C.  Aldam,  A.  Herran,  E.  Ritter.  2001. Construction of a linkage map of the Rennell Island Tall  coconut  type  ( Cocos  nucifera L.)  and  QTL analysis for yield characters. Genome 44:962-970.
Li,  D.,  Y.  Zheng,  L.  Wan,  X.  Zhu,  Z.  Wang.  2009. Differentially  expressed  microRNAs  during  solid endosperm development in coconut ( Cocos nucifera L.). Sci. Hort. 122:666-669.
Martinez,  T.R.,  L.  Baudoin,  A.  Berger,  M.  Dollet.  2010. Characterization of genetic diversity of tall coconut ( Cocos nucifera L.) in the Dominican Republic using microsatellite  (SSR)  marker.  Tree  Genet.  Genomes 6:73-81.
Maskromo, I., H. Novarianto, S. Sukendah, D. Sukma, S. Sudarsono.  2014.  Keragaman  komponen  buah  dan kualitas endosperma kelapa Dalam kopyor Kalianda dan kelapa Genjah kopyor Pati. Bul. Palma 15:102- 109.
Maskromo  I.,  H.  Novarianto,  Sukendah,  D.  Sukma, Sudarsono. 2013. Productivity of three Dwarf kopyor coconut varieties from Pati, Central Java, Indonesia. Int. J. Coconut Res. Dev. (CORD) 29:19-28.
Maskromo,  I.,  Sudarsono,  H.  Novarianto.  2012.  Potensi produksi  pohon  induk  kelapa  dalam  Kopyor  asal Kalianda,  Lampung  Selatan.  hal.  430-436. Dalam Prosiding  Simposium  dan  Seminar  Bersama PERAGI-PERHORTI-PERIPI-HIGI.  Bogor  17-18 September 2012.
Maskromo, I., H. Novarianto, D. Sukma, Sudarsono. 2012. Potensi  hasil  plasma  nutfah  kelapa  Kopyor  asal Kalianda, Pati, Sumenep dan Jember. hal. 499-506. Dalam Prosiding Seminar nasional Pemanfaatan SDG Lokal  Mendukung  Industri  Perbenihan  Nasional. Bandung 17-18 Juni 2012.
Maskromo,  I.,  E. T. Tenda,  M. A. Tulalo,  H.  Novarianto, Sukendah, D. Sukma, S. Sudarsono 2015. Keragaman fenotipe  dan  genetik  tiga  varietas  kelapa  Genjah kopyor asal Pati, Jawa Tengah. J. Littri. 21:1-8.
Maskromo, I. 2015. Karakterisasi dan pemanfaatan plasma nutfah melalui pendekatan pemuliaan dan molekuler untuk  peningkatan  hasil  buah  kopyor  dan  kualitas benih  kopyor.  Disertasi.  Sekolah  Pascasarjana. Institut Pertanian Bogor. Bogor.
Maskromo I, S.H. Larekeng, H. Novarianto, S. Sudarsono. 2016.  Xenia Negatively Affecting Kopyor Nut Yield in  Kalianda  Tall  Kopyor  and  Pati  Dwarf  Kopyor Coconuts. Emir. J. Food Agric. 28:644-652.
Natawijaya, A.,  S.W. Ardie,  M.  Syukur,  I.  Maskromo, A. Hartana, S. Sudarsono. 2019. Genetic structure and diversity between and within African and American oil  palm  species  based  on  microsatellite  markers. Biodiversitas 20:1233-1240.
Novarianto,  H.,  I.  Maskromo,  D.  Dinarti,  S.  Sudarsono. 2014.  Production  technology  for  kopyor  coconut seednuts and seedlings in Indonesia. Int. J. Coconut Res. Dev. 30:31-40.
Olfati, J.A., Z. Sheykhtaher, R. Qamgosar, A.K. Sabet, G. Peyvast, H. Samizadeh, B. Rabiee. 2010. Xenia and metaxenia on cucumber fruit and seed characteristics. Int. J. Veg. Sci. 16:243-252.
Pandin,  D.S., A.  Hartana,    H. Aswidinnoor, A.  Setiawan. 2008.  Pelacakan  tetua  populasi  kelapa  dalam Mapanget  No.32  (DMT-32)  menggunakan  analisis aliran gen ( gene flow ). J. Littri. 14:131-140.
Pandin  DS.  2009.  Inbreeding  depression  analysis  based on  morphological  characters  in  four  generations  of selfed Mapanget Tall Coconut no 32 ( Cocos nucifera L.). Indonesian J. Agric. 2:110-114.
Perera,  P.I.P.,  V.  Hocher,  L.K.  Weerakoon,  D.M.D. Yakandawala,  S.C.  Fernando,  J.L.  Verdeil.  2010. Early inflorescence and floral development in Cocos nucifera L. ( Arecaceae: Arecoideae ). S. Afr. J. Bot. 76:482-492.
Pesik,  A.,  D.  Efendi,  H.  Novarianto,  D.  Dinarti,  S. Sudarsono.  2017.  Development  of  SNAP  markers based  on  nucleotide  variability of WRKY  genes  in coconut  and  their  validation  using  multiplex  PCR. Biodiversitas 18:465-475.
Pesik,  A.,  D.  Efendi,  H.  Novarianto,  D.  Dinarty,  I. Maskromo, E.T. Tenda, Sudarsono. 2015. Keragaman dan Hubungan Genetik Antara Kelapa Tetua Genjah Kuning Nias. Bulletin Palma 16:129-140.
Ribeiro,  F.E.,  L.  Baodouin,  P.  Lebrun,  L.J.  Chaves,  C. Brondani,  M.I.  Zucchi,  R.  Vencovsky.  2010. Population  structures  of  Brazillian  Tall  Coconut ( Cocos nucifera L.) by microsatellite markers. Genet. Mol. Biol. 33:696-102.
Rohde, W., A. Kullaya, J. Rodriguez, E. Ritter. 1995. Genome analysis of Cocos nucifera L. by PCR ampliification
of spacer sequences separating a subset of copies-like EcoR1 repetitive elements. J. Genet. Breed. 49:170- 186.
Sudarsono,  I.  Maskromo,  D.  Dinarti,  M.S.  Rahayu,  D. Sukma,  Yuliasti,  M.L.A.  Hossang,  H.  Novarianto. 2015.  Status  penelitian  dan  pengembangan  kelapa kopyor  di  Indonesia.  hal.  53-64. Dalam Prosiding Konferensi Nasional Kelapa (KNK) VIII, Bengkulu.
Sudarsono, H. Novarianto, I. Maskromo. 2011. Diversity of endosperm  quantity  among  Kalianda  Tall  coconut. p.  27-28 In Prosiding  of  International  Seminar  on Natural  Resources,  Climate  Change,  and  Food Security (ISNAR C2FS), Surabaya, Indonesia.
Sudarsono. 2017. From (Land-To) Lab-To Land: Menjawab Permasalahan dan Mengembangkan Potensi Kelapa Kopyor  Indonesia. Dalam Landasan  Teoritis  dan Penerapan  Genetika  serta  Rekayasa  Lingkungan untuk  Peningkatan  Produksi  Tanaman.  IPB  Press, Bogor, Indonesia
Sukendah, S., H. Volkaerd, S.  Sudarsono. 2017. Isolation and Analysis of Sucrose Synthase (SUS) Gene Fragment Originated  from  “Kopyor”  Coconut  Mutant.  Adv. Sci. Lett. 23:12223-12226.
Sukendah,  H  Volkaert,  Sudarsono.  2009.  Isolation  and analysis of DNA fragment of genes related to Kopyor trait  in  coconut  plants.  Indonesian  J.  Biotechnol. 14:1169-1178.
Tew, T., Y.B. Pan. 2010. Microsattelite (Simple sequence repeat) marker based paternity analysis of a seven- parent  sugarcane  polycross.  Crop  Sci.  50:1401- 1408.
Tinche,  D.  Asmono,  D.  Dinarti,  Sudarsono.  2014. Keragaman genetik kelapa sawit ( Elaeis guineensis Jacq.)  populasi  Nigeria  berdasarkan  analisis  marka SSR  ( Simple  Sequence  Repeat ).  Buletin  Palma 15:14-23.
Yao,  S.D.M.,  K.J.L.  Konan,  N.D.  Pokou,  K.J.N.  Konan, A.E. Assali, R.S. Sie, B.I.A. Zoro. 2013. Assessment of  the  genetic  diversity  conservation  in  three  tall coconut ( Cocos nucifera L.) accessions regenerated by  controlled  pollination,  using  microsatellite markers. Afr. J. Biotechnol. 12:2808-2815.
Yono,  D.,  Y.  Wahyu,  Sobir,  N.  Toruan-Mathius.  2017. Identifikasi  penanda  SSR  yang  berasosiasi  dengan bobot  tandan  buah  kelapa  sawit  ( Elaeis  guineensis Jacq.). J. Agron. Indonesia 45:79-85.