## KARAKTERISASI BAKTERI ENDOFIT PELARUT FOSFAT DARI KULIT BATANG TUMBUHAN RARU ( Cotylelobium melanoxylon )
Nurul Fitri Fadhilah 1) , Dra. Uswatun Hasanah, M,Si 2) , Idramsa, S.Pd, M.Si 3)
1 Mahasiswa Program S1 Biologi, FMIPA, Universitas Negeri Medan, Sumatera Utara 2 Dosen Biologi , FMIPA, Universitas Negeri Medan, Sumatera Utara
3 Dosen Biologi , FMIPA, Universitas Negeri Medan, Sumatera Utara
nurulfadhilah11@ymail.com

## Abstrak
Penelitian  ini  bertujuan  untuk menyeleksi  bakteri  endofit  pelarut  fosfat  dan  mengetahui  karakter isolat bakteri yang mampu melarutkan fosfat berdasarkan karakter morfologi, karakter fisiologi dan karakter biokimia.    Penelitian  ini  dilaksanakan  di  laboratorium  Biologi  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan Alam, Universitas Negeri Medan selama 3 bulan yaitu mulai November 2014 sampai Februari 2015.   Bakteri endofit  dari  kulit  batang  tumbuhan  raru  sudah  tersedia  di  Laboratorium  Biologi  FMIPA  Universitas  Negeri Medan.    Seleksi  bakteri  endofit  kulit  batang  tumbuhan  raru  ( Cotylelobium  melanoxylon )  yang  dapat melarutkan    fosfat  dilakukan  secara  kuantitatif  dengan  melihat  zona  bening  pada  media  pikovskaya  yang telah  diinokulasikan  bakteri  endofit  setelah  diinkubasi  pada  suhu  30°C  selama  10  hari.    Hasil  penelitian menunjukkan bahwa dari 24 isolat diperoleh 2 isolat yang mampu melarutkan fosfat yaitu ER12 dan ER23. Karakterisasi bakteri yang positif pelarut fosfat dilakukan berdasarkan morfologi, fisiologi dan biokimianya dengan melihat perubahan warna pada media yang digunakan.  Karakter bakteri ER12 memiliki koloni bulat dengan tepi koloni rata, warna  koloni putih bening, dengan permukaan licin dan elevasi yang rata, bakteri ER 23  memilki  tipe  tepi  koloni  berombak,  warna  koloni  putih  dengan  permukaan  licin  dan  elevasi  yang    rata, kedua  bakteri  tersebut  termasuk  Gram  positif.    Dari  uji  biokimia  bakteri  endofit  ER  12  dan  ER  23  dapat menghasilkan  asam  campuran,  menghidrolisis  protein,  menghasilkan  enzim  gelatinase,  katalase  dan  tidak dapat menghasilkan enzim urease, sitrase dan tidak dapat menghidrolisis hydrogen sulfida.   Suhu optimum untuk  pertumbuhan  isolat  bakteri  ER  12  dan  ER  23  adalah  35°C.    pH  optimum  untuk  pertumbuhan  isolat bakteri ER 12 adalah 7,2 dan 8,9 sementara ER 23 dapat tumbuh optimum pada rentang pH  lebih luas yaitu 6,5 sampai 8,9.

## Kata kunci: Karakterisasi, bakteri endofit, pelarut fosfat

## CHARACTERIZATION OF  PHOSPHATE SOLVENT ENDOPHYTIC BACTERIA OF STEM  SKIN RARU ( Cotylelobium melanoxylon )

## Abstract
This  study  aims  to  select  endophytic  bacteria  phosphate  solvent  and  characterization  of  bacterial  isolates knowing  capable  of  dissolving  phosphate  based  on  morphological  characters,  character  physiological  and biochemical characters. The research was conducted in the laboratory of Biology, Faculty of Mathematics and
Natural  Sciences,  University  of  Medan  for  3  months,  ie  from  November  2014  to  February  2015.  The endophytic  bacteria  from  the  bark  of  plants  raru  already  available  in  the  Laboratory  of  Biology,  State University of Medan. Isolation of endophytic bacteria bark of plants raru (Cotylelobium melanoxylon) which can dissolve phosphate performed a quantitative analysis by looking at the clear zone pikovskaya media that has been inoculated endophytic bacteria after incubation at 30 ° C for 10 days. The results showed that of the 24  isolates  obtained  2  isolates  were  capable  of  dissolving  phosphate  ER12  and  ER23.  Characterization  of phosphate solvent positive bacteria carried by morphology, physiology and biochemistry to see the change in color of the media used. ER12 has a rounded character bacterial colonies with flat edges, translucent white colony color, with a smooth surface and a flat elevation, ER 23 bacterial colonies have the type of edge wavy, white  colony  color  with  a  smooth  surface  and  a  flat  elevation,  including  both  Gram-positive  bacteria.  Of biochemical tests of endophytic bacteria ER 12 and ER 23 can produce a mixture of acid, hydrolyze proteins, produce gelatinase enzyme, catalase and can not produce the enzyme urease, sitrase and can not hydrolyze hydrogen sulfide. The optimum temperature for growth of bacterial isolates ER 12 and ER 23 is 35 ° C. The optimum pH for growth of bacterial isolates ER 12 is 7.2 and 8.9 while ER 23 can grow optimum pH range of 6.5 to wider 8.9.

## Keywords: Characterization, endophytic bacteria, phosphate solvent

## Pendahuluan
Di Sumatera
Utara, kulit raru Cotylelobium  melanoxylon dikenal  secara  lokal sebagai  tumbuhan  raru  (Pasaribu, dkk ,.  2011). Raru  ( Cotylelobium  melanoxylon )  merupakan tumbuhan tingkat tinggi dari famili Dipterocarpace.    Raru  merupakan  tanaman  yang termasuk dalam kategori hampir punah.  Selain itu tumbuhan raru ( Cotylelobium melanoxylon ) adalah tumbuhan  endemik  yang  ada  di  Kabupaten Tapanuli  dan  hidup  liar  di  dalam  hutan  dengan berbagai  tumbuhan  lain  di  sekitarnya.    Raru merupakan  sebutan  untuk  jenis  kulit  kayu  yang ditambahkan pada nira aren yang bertujuan untuk meningkatkan  cita  rasa,  kadar  alkohol  dan mengawetkan minuman tradisional tuak (Pasaribu,  2011).    Tumbuhan  ini  telah  banyak dimanfaatkan  oleh  masyarakat  setempat  sebagai obat herbal tradisional (Pasaribu, dkk ., 2011).
Dari  sekitar  300.000  jenis  tanaman  yang tersebar  di  muka  bumi  ini,  masing-masing tanaman  mengandung  satu  atau  lebih  mikroba endofit termasuk juga tanaman raru (Strobel, dkk ., 2003). Mikroba endofit merupakan mikroorganisme  yang  tumbuh  dalam  jaringan tumbuhan  dan  dapat  dijumpai  pada  bagian  akar,
daun  serta  batang  tumbuhan.    Mikroba  endofit dapat  berupa  bakteri  endofit  atau  jamur  endofit (Silitonga, dkk, . 2012).  Bakteri endofit merupakan mikroorganisme
menguntungkan yang berinteraksi dengan
tumbuhan tanpa
menyebabkan  gangguan  atau  kerusakan  pada tubuh inangnya (Desriani, dkk ., 2014).
Bakteri  endofit  memiliki  kemampuan sebagai  penambat  nitrogen,  pelarut  fosfat, penghasil  fitohormon  (hormon  IAA,  hormon giberelin  dan  hormon  sitokinin)  juga  sebagai antimikroba.  Bakteri endofit pelarut fosfat adalah bakteri  yang  berperan  dalam  melarutkan  fosfat organik  dan  anorganik  menjadi  fosfat  terlarut sehingga  dapat  digunakan/diserap  oleh  akar tumbuhan  (Pawana,  2011).    Miliute, dkk., (2011) membuktikan bahwa dari 18 isolat bekteri endofit yang  di  isolasi  dari  tunas  Apel  ( Malus  domestica ) terdapat 10 isolat yang mampu melarutkan fosfat. Ji, dkk., (2013)  melaporkan  bahwa  dari  12  isolat yang  diisolasi  dari  daun,  batang  dan  akar  padi ( Oryza  sativa )  terdapat  4  isolat  yang  mampu melarutkan fosfat. Milca, dkk., (2014)
membuktikan bahwa dari 31 bakteri endofit yang diisolasi dari tumbuhan jambu mete ( Anacardium occidentale) terdapat  4  isolat  yang  mampu
melarutkan  fosfat.    Amrutha, dkk., (2014)  juga membuktikan  dari  11  bakteri  endofit  yang diisolasi  dari  tumbuhan  Cabai  Kathur  ( Capsicum frutescence) terdapat  2  isolat  yang  mampu melarutkan  fosfat.    Tan, dkk., (2014)  telah membuktikan  bahwa  dari  107  bakteri  endofit yang  diisolasi  dari  akar  padi  ( Oryza  sativa ), kedelai  ( Glycine  max )  dan  putri  malu  ( Mimosa pudica )  terdapat  52  isolat  yang  mampu melarutkan fosfat.
Mikroorganisme pelarut fosfat merupakan penentu dinamika ketersediaan fosfat bagi tanaman (Sutiknowati, 2010).
Mikroorganisme  pelarut  fosfat  berperan  dalam penyuburan tanah karena bakteri tipe ini mampu melakukan  mekanisme  pelarutan  fosfat  dengan mengsekskresikan sejumlah asam organik berbobot  molekul  rendah  seperti  oksalat, suksinat,  fumarat,  malat  (Pawana,  2011).    Asam- asam  organik  ini  dapat  membentuk  khelat (kompleks  stabil)  dengan  kation  Al,  Fe  atau  Ca yang  mengikat  P,  sehingga  ion  H 2 PO 4 menjadi bebas  dari  ikatannya  dan  tersedia  bagi  tanaman untuk diserap (Sutiknowati, 2010).  Fosfat yang di serap  oleh  akar  tumbuhan  berperan  dalam membantu  merangsang pertumbuhan  akar, batang  dan  bunga  tumbuhan  (Pawana,  2011). Premono,
(1996) membuktikan bahwa mikroorganisme pelarut fosfat yang di inokulasikan ke tanaman tebu dapat meningkatkan  pertumbuhan  awal tanaman tebu, yakni  meningkatkan  bobot kering 13-38%.

## Bahan dan Metode

## Alat dan Bahan
Alat  dan  bahan  yang  digunakan  adalah, Autoklaf,  Laminar  Air  Flow  Inkubator,  Magnetik Stirer,  Cawan  Petri,  Jarum  Ose,  Lampu  Bunsen, Mikroskop, Erlenmeyer ukuran 250ml dan 500ml, Gelas  ukur  ukuran  500ml,  pH  meter  digital, Tabung  Reaksi,  Timbangan  Digital,  Rak  tabung, Objek  glass,  Cover  glass,  Pipet  tetes,  Mikro  pipet, Yellow  Tip,  Vortex,  Pikovskaya  Agar,  Aquades Steril,  Nutrien  Agar  (NA),  Alkohol  70%,  Alkohol 96%,  NaCl,    Gelatin,  MR-VP  broth,  Methyl  red, Simmons  citrate  agar,  Urea  broth,  Litmus  milk
broth, Trypticase soy agar, H 2 O 2 , Triple Sugar Iron Agar, Cristal violet, Gram iodine, Safranin.

## Metode Kerja
1. Seleksi Bakteri Endofit Pelarut Fosfat. Untuk mengetahui  kemampuan  bakteri  endofit  yang dapat melarutkan fosfat pertama-tama menginokulasikan  jarum  ose  yang  berisi  isolat bakteri  ke  dalam  aquadest  steril,  kocok  hingga homogen.  Mengambil  1  ml  dan  dituang  ke  dalam cawan petri selanjutnya tuangkan media pikovskaya  agar,  lalu  inkubasi  suhu  +/-  30°C selama 10 hari. Isolat yang positif sebagai pelarut fosfat  akan  terdapat holozone (zona  bening)  di media.
2.  Karakterisasi  Morfologi  Bakteri  Endofit Pelarut Fosfat. Isolat bakteri endofit yang positif sebagai  pelarut  fosfat  selanjutnya  dikarakterisasi berdasarkan  warna  koloni,  cahaya  transmisi, bentuk  koloni,  tepi  koloni,    permukaan  koloni, elevasi  koloni,  tekstur  koloni  dan  pewarnaan Gram.
3.  Karakterisasi  Fisiologi  Bakteri  Endofit Pelarut Fosfat. Isolat bakteri endofit yang positif sebagai  pelarut  fosfat  selanjutnya  dikarakterisasi berdasarkan pertumbuhannya pada media dengan pH  5.2,  6.5,  7.2,  8.9,  10.2,  dan  pertumbuhannya pada suhu 4, 24, 35, 43 dan 60°C.
4.  Karakterisasi  Biokimia  Bakteri  Endofit Pelarut Fosfat. Isolat bakteri endofit yang positif sebagai  pelarut  fosfat  selanjutnya  dikarakterisasi berdasarkan  uji  hidrolisis  gelatin,  uji  methyl  red, uji  sitrat,  uji  urea,  uji  fermentasi  karbohidrat,  uji reaksi litmus milk, uji katalase dan uji triple sugar iron agar.

## Hasil dan Diskusi
Seleksi  bakteri  endofit  pelarut  fosfat  dari  kulit batang tumbuhan raru ( Cotylelobium melanoxylon )  menggunakan  media  pikovskaya agar  yang  diinkubasi  selama  10  hari  pada  suhu 30°C diperoleh 2 isolat yaitu isolat ER12 dan isolat ER23  karena  adanya  indicator  zona  bening  di sekeliling  koloni    (Gambar  1).    Berdasarkan karakter  morfologi,  fisiologi  dan  biokimia didapatkan hasil yang beragam (Tabel 1, 2 dan 3).
Hasil pengujian pelarut fosfat pada yang membentuk zona bening di sajikan pada gambar 1 dibawah ini.
(a) (b) Gambar 1. Zona bening isolat yang mampu melarutkan fosfat (a) ER12 dan (b) ER23
Dari  Gambar  1  di  atas  dapat  dilihat  bahwa  pada  ER12  dan  ER23  terdapat  zona  bening  di  sekitar  koloni bakteri, hal ini merupakan indikator dari adanya mekanisme pelarutan fosfat.
Hasil karakterisasi morfologi bakteri endofit pelarut fosfat disajikan pada Tabel 1 berikut ini. Tabel 1. Karakteristik morfologi isolat bakteri endofit tumbuhan raru ( Cotylelobium melanoxylon ) yang mampu melarutkan fosfat
Karakter                                              ER12                                                ER23
Warna Atas Koloni                             Putih                                                Putih susu Warna Bawah Koloni               Putih Kekuningan                         Putih Kekuningan Bentuk Koloni                                    Bundar                                                Bundar Tepi Koloni                                           Utuh                                                Berombak Permukaan Koloni                             Licin                                                     Licin Elevasi Koloni                                      Rata                                                     Rata Tekstur Koloni                                   Cairan                                                Cairan Warna Koloni                                      Putih                                                   Putih di NA Miring Transmisi Cahaya                      Tembus Cahaya                              Tembus Cahaya Sebahagian                                     Sebahagian Bentuk Koloni                          Berbentuk Pedang                         Berbentuk Pedang
di NA Miring
Pewarnaan Gram                          Gram positif                                    Gram positif
Dari  Tabel  1  dapat  dilihat  bahwa  isolat  ER12  dan  ER23  berbeda  pada karakter  tepi  koloni,  pada  ER12  tepi koloni berbentuk utuh, sedangkan ER23 berbentuk berombak.
Hasil karakterisasi fisiologi bakteri endofit pelarut fosfat di sajikan pada tabel 2 berikut ini. Tabel 2. Karakteristik fisiologi isolat bakteri endofit tumbuhan raru ( Cotylelobium melanoxylon ) yang mampu melarutkan fosfat
Karakter                                              ER12                                                ER23
pH 5.2                                                      +                                                        + pH 6.5                                                     ++                                                      ++ pH 7.2                                                     ++                                                      ++ pH 8.9                                                      +                                                       ++ pH 10.2                                                    +                                                        + Suhu 4°C                                                  -                                                        - Suhu 24°C                                               +                                                        + Suhu 35°C                                              ++                                                      ++ Suhu 43°C                                               +                                                        + Suhu 60°C                                               -                                                         -
NB:  -   = Tidak tumbuh +   = Tumbuh tipis ++ = Tumbuh tebal
Dari Tabel 2 dapat dilihat bahwa isolat ER12 dan ER23 sama-sama tidak tumbuh pada suhu 4°C dan 60°C dan optimum pada suhu 35°C, dengan rentang pH optimum 6.5 sampai 7.2 pada ER12 dan 6.5 sampai 8.9 pada ER23.
Hasil karakterisasi biokimia bakteri endofit pelarut fosfat disajikan pada Tabel 3 berikut ini. Tabel 3. Karakteristik fisiologi isolat bakteri endofit tumbuhan raru ( Cotylelobium melanoxylon ) yang mampu melarutkan fosfat
Karakter                                              ER12                                                ER23
Uji Triple Sugar Iron Agar                    +                                                        + Uji Hidrolisis Gelatin                             +                                                        + Uji Litmus Mulik                                     +                                                        + Uji Sitrat                                                    -                                                         - Uji Urea                                                     -                                                         - Uji Methyl Red                                        +                                                        + Uji Katalase                                             +                                                        + Uji Karbohidrat Laktosa                      +                                                        + Uji Karbohidrat Sukrosa                      +                                                        + Uji Karbohidrat Dekstrosa                  +                                                        + NB:  -   = Negatif
+   = Positif
Dari Tabel 3 dapat dilihat bahwa isolat ER12 dan ER23 sama-sama negatif pada uji sitrat dan uji urea.
Berdasarkan  hasil  penelitian  pada  ER12 dan  ER23  terdapat  zona  bening  di  sekitar  koloni. Dari  Gambar  1  di  atas  dapat  dilihat  bahwa  pada tepi  koloni  isolat  ER12  dan  ER23  terdapat  zona bening,  hal  ini  merupakan  indikator  dari  adanya pelarutan fosfat. Adanya zona bening menandakan  bahwa  bakteri  endofit  ER12  dan ER23  mampu  melarutkan  fosfat,  hal  ini  sesuai dengan  yang  dikemukakan  oleh  Pawana  (2011) bahwa  bakteri  pelarut  fosfat  mampu  melakukan
mekanisme pelarutan fosfat dengan mengsekskresikan sejumlah asam organik berbobot  molekul  rendah  seperti  oksalat, suksinat,  fumarat,  malat.    Asam-asam  organik sangat  berperan  dalam  pelarutan  fosfat  karena asam  organik  tersebut  relatif  kaya  akan  gugus- gugus  fungsional  karboksil  (-COO - )  dan  hidroksil (-O - ) yang bermuatan negatif sehingga memungkinkan  untuk  membentuk  senyawa komplek dengan ion (kation) logam yang biasa di
sebut  chelate  (Khan,  2009).    Asam-asam  organik meng-chelate  Ca,  mengakibatkan  fosfat  terlepas dari  ikatan  Ca 3 (PO 4 ) 2 sehingga  terdapat  zona bening  karena  fosfat  pada  media  terlepas (Stevenson, 2005).
Kedua  isolat  yang  positif  melarutkan fosfat  tersebut  memiliki  beberapa  karakter. Karakter  tersebut  di  antaranya,  ER12  memiliki bentuk  bulat  dengan  tepi  koloni  rata,  warna koloni  putih  bening,  dengan  permukaan  licin  dan elevasi  yang  rata,  ER23  memilki  bentuk  bulat dengan tepi koloni berombak, warna koloni putih dengan  permukaan  licin  dan  elevasi  yang    rata. Sesuai  dengan  hasil  penelitian  yang  dilakukan oleh  Silitonga  (2013)  bahwa  pada  media  padat, pertumbuhan  mikroorganisme  ditandai  dengan bentuk koloni yang berbeda-beda seperti circular, irregular  dan  lainnya.    Sedangkan  menurut Fardiaz  (1992)  koloni  bakteri  dipengaruhi  oleh umur  dan  syarat  pertumbuhan  tertentu,  apabila kondisi  lingkungan  dan  makanan  cocok  untuk mikroorganisme  tersebut  maka  mikroorganisme tersebut akan tumbuh dengan baik dan sempurna.
ER12  dan  ER23  termasuk  bakteri  Gram positif  yang  ditunjukkan  oleh  crystal  violet  yang dapat  diikat  dengan  baik  oleh  sel  bakteri  ER12 dan  ER23,  dan  tidak  dapat  di  lunturkan  oleh alkohol.    Hal  ini  menandakan  bahwa  stuktur dinding  sel  bakteri  ER12  dan  ER23  memiliki struktur  dinding  sel  yang  tebal.      Menurut  Pastra (2012)  dan  Sutrisna  (2013)  Bakteri  Gram  positif mempunyai  dinding  sel  yang  tebal,  yaitu  sekitar 15-80nm, dan berlapis tunggal, dengan komposisi peptidoglikan yang tebal dan lipid yang tipis.
Hasil uji fisiologi menunjukkan bahwa pH optimal bagi pertumbuhan ER12 aberkisar antara pH  6.5  –  7,2.    Hal  ini  dilihat  dari  pertumbuhan koloni  yang  lebat  dan  subur  jika  di  bandingkan pada  media  NA  dengan  pH  5.2,  8.9  dan  10.2. Sementara  pada  ER23  kisaran  pH  optimal pertumbuhannya  lebih  luas  yaitu  6.5  –  8.9. Menurut  Saha  (2014) pH  merupakan  kunci pertumbuhan  bakteri  pada  media.    Sedangkan menurut  Pelczar  dan  Chan  (1986)  pengaruh  pH terhadap  pertumbuhan  bakteri  ini  berkaitan dengan aktifitas enzim.  Enzim ini dibutuhkan oleh beberapa  bakteri  untuk  mengkatalisasi  reaksi- reaksi  yang  berhubungan  dengan  pertumbuhan bakteri.
Dari hasil pengujian yang telah dilakukan didapatkan hasil bahwa suhu optimum
pertumbuhan bagi bakteri ER12 dan ER23 adalah kisaran  +/-  35°C.    Namun  tetap  dapat  tumbuh pada  suhu  dari  25°C  dan  45°C.    Sementara  pada suhu dingin 4°C tidak dapat hidup, dan pada suhu panas  60°C  juga  tidak  dapat  hidup.    Hal  ini menandakan  bahwa  bakteri  ER12  dan  ER23 termasuk  dalam  kategori  mesofil,  ini  sesuai dengan  yang  dikemukakan  oleh  (Hasanah,2013) bakteri mesofil memiliki kisaran suhu pertumbuhan  10  -  45°C  dengan  suhu  optimum pertumbuhan  20  -  40°C.    Menurut  Knob  dan Carmona  (2008)  suhu  sangat  memengaruhi kecepatan  pertumbuhan  bakteri,  kecepatan sintesis enzim dan kecepatan inaktivasi enzim.
Hasil uji biokimia pada bakteri ER12 dan ER23 didapatkan hasil positif dalam beberapa uji, di  antaranya  uji  triple  sugar  iron  agar,  menurut Capucino  dan  Sherman  (2001)  munculnya  warna merah pada permukaan media dan warna kuning pada  dasar  media  menandakan  terjadinya fermentasi  glukosa  dengan  konsentrasi gula  yang rendah.    Pada  uji  litmus  milk  media  berubah menjadi  warna  putih,  dan  terdapat  cincin berwarna  pink  di  permukaan  media,  ini menandakan  bahwa  bakteri  mampu  merubah laktosa  dalam  substrat  susu  manjadi asam  laktat. Pada  uji  methyl  red  dilakukan  untuk  melihat kemampuan bakteri dalam memfermentasi glukosa  menjadi  asam,  munculnya  warna  merah menandakan  bakteri  mampu  menghasilkan asam. Uji  gelatin  dilakukan  untuk  melihat  apakah bakteri  tersebut  mempunyai  enzim  gelatinase yang  mampu  menghidrolisis  gelatin,  perubahan pada  media  yang  menjadi  mencair  menandakan bakteri  memiliki  enzim  gelatinase.    Uji  katalase dilakukan  untuk  melihat  kemampuan  bakteri dalam mengubah  hidrogen  peroksida  menjadi air dan  oksigen  sehingga  tidak  berbahaya,  hal  ini dapat  dilihat  saat  terdapat  gelembung  pada biakan  yang  ditetesi  H 2 O 2 .    Uji  fermentasi karbohidrat  laktosa,  dekstrosa  dan  sukrosa didapatkan  hasil  warna  media  berubah  menjadi warna  kuning.    Adanya  perubahan  pada  media tersebut  merupakan  hasil  fermentasi  karbohidrat berupa  asam.  Asam  yang  dihasilkan  akan menurunkan  pH  media  biakan.  Pembentukan asam  laktat  akan  ditandai  oleh  perubahan  warna media  menjadi  kuning,  perubahan  warna  dengan diikuti  terbentuknya  gas  pada  tabung  durham merupakan  fermentasi  asam  campuran  (Jasim, 2014).    Pada  dua  uji,  di  antaranya  uji   sitrat
digunakan untuk melihat
kemampuan mikroorganisme  menggunakan  sitrat  sebagai satu-satunya sumber karbon dan energy diperoleh  hasil  negatif  demikian  juga  dengan  uji urea  dilakukan  untuk  membedakan  bakteri  yang mampu  menghasilkan  eksoenzim  yaitu  enzim urease.    Dari  kedua  uji  tersebut  didapatkan  hasil bahwa  bakteri  ER12  dan  ER23  tidak  mampu menggunakan  sitrat  sebagai  sumber  karbon  dan tidak mampu menghasilkan enzim urease.

## Kesimpulan
1. D ari  ke  24  isolat  yang  telah  diuji kemampuannya  dalam  melarutkan  fosfat didapatkan 2 isolat yaitu ER12 dan ER23. 2. B
erdasarkan  karakter  morfologinya  ER12 memiliki bentuk bulat dengan tepi koloni rata,  warna    koloni  putih  bening,  dengan permukaan  licin  dan  elevasi  yang  rata, ER23  memilki  bentuk  bulat  dengan  tepi koloni  berombak,  warna  koloni  putih dengan permukaan licin dan elevasi yang rata,  ER12  dan  ER23  termasuk  bakteri Gram positif.
3.
B
erdasarkan  karakter  fisiologi  bakteri, suhu optimum untuk pertumbuhan isolat bakteri ER 12 dan ER 23 adalah 35 0 C.  pH optimum  untuk  pertumbuhan  isolat bakteri  ER  12  adalah  7,2  dan  8,9 sementara ER 23 dapat tumbuh optimum pada semua pH yaitu 6,5 sampai 8,9. 4.
B
erdasarkan  karakter  biokimia  bakteri ER12  dan  ER23  mampu  memfermentasi glukosa,  laktosa,  dekstrosa  dan  sukrosa. Mampu menghasilkan enzim katalase dan enzim  gelatinase  namun  tidak  mampu menghasilkan  enzim  urease.    Tidak mampu menggunakan sitrat sebagai satu- satunya sumber karbon.

## Saran
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  terhadap bakteri  endofit  dari  kulit  batang  tumbuhan  raru ( Cotylelobium melanoxylon ) yang mampu
melarutkan fosfat untuk mengetahui berapa besar fosfat yang mampu dilarutkan oleh bakteri endofit tersebut.

## Ucapan Terima Kasih
Ucapan  terima  kasih  penulis  sampaikan  kepada Dra.  Uswatun  Hasanah,  M.Si,  selaku  dosen pembimbing  dan  ketua  Laboratorium  Biologi serta Bapak Idramsa, S.Pd, M. Si yang telah banyak meluangkan waktu dalam membimbing, mengarahkan  dan  memberikan  masukan  kepada penulis  selama  melaksanakan  penelitian.  Kepada Bapak  Drs.  Hudson  Sidabutar,  M.Si  selaku  dosen Pembimbing  Akademik.  Kepada  kedua  orang  tua, Ayahanda  Armon  Suarsono  dan  Ibunda  Sriweni Utari,  S.E,  tak  lupa  juga  teman  terspesial  penulis Akbar  Hadita  serta  adik  Muhammad  Fadel Elgfhifari  yang  telah  memberikan  dukungan kepada  penulis  mulai  saat  melakukan  penelitian sampai jurnal ini selesai.

## Daftar Pustaka
Amrutha, V.A,. Sudhir, A,. P. Chowdappa.,   (2014),
Plant growth promoting potential of a novel endophytic curtobacterium ceg: isolation, evaluation and formulation . Annals of Biological Research, 5   (5):15- 21
Cappuccino,  J.  G  dan  Sherman,  N,  (2001),
Microbiology a laboratory Manual . San Francisco. Benjamin Cummings Desriani, Ukhradia, M.S.P,. Maria, B,. Akhmad, R,. Puspita, L., (2014),   Isolat dan karakteristik bakteri endofit dari tanaman binahong dan
ketepeng china. Jurnal kesehatan  Andalas 3(2): 19-27
Ishwari PP, 2006. Produksi Hormon Asam Indol-3- Asetat  Oleh  Bakteri  Diazotrof  Endofitik dan  Aplikasinya  Pada  Tanaman  Kentang.. Bogor: Institut Pertanian Bogor.
Jasim  (2014) Isolation  And  Characterization  Of Plant  Growth  Promoting  Endophytic Bacteria  From  The  Rhizome  Of  Zingiber
Officinale .  3  Biotech  (2014)  4:197–204 Doi 10.1007/S13205-013-0143-3
Ji,  S.H,.  Gururani,  M.A,.  Chun,  S.E.,  (2013),
Isolation and characterization of   plant growth promoting endophyticdiazotrophic bacteria    from Korean   rice  cultivars . Microbiological Research 16(5):39- 46
Long  HH.,  Schmidt  DD.,  Baldwin  (2008) Native bacterial  enndophytes  promote  Host Growth  in  a  species  –  specific  Manner; phytohormone  manipulation  do  not  result in  common  growth  response. Journal  plos one 3(7) : 2702
Milca, R.C.R.L,. Jessica, M.F,. Nataliane, M.V,. Danilo, M.S.S,. Ozias, E.F,.  Joao, L.A,. Janete, M.A and   Glaucia,  M.S.L.,  (2014),
Plant   growth   promoting  potential  of endophytic bacteria isolated from  cashew leaves . African   Journal  of  Biotechnology 13(33):  27-35
Miliūtė, I,. Buzaitė, O,. (2011), IAA production  and  other  plant  growth promoting traits of endophytic bacteria from apple tree . Biologija 57(2) : 98–102
Pasaribu,  G  (2011),  Aktivitas  inhibisi  alfa glukosidase  pada  beberapa  jenis  kulit kayu raru. Jurnal Penelitian Hasil  Hutan 29(1) : 10-19
Pasaribu,  G  dan  Setyawati,  T.  ,  (2011), Aktivitas  antioksidan  dan  toksisitas ekstrak  kulit kayu raru (sp). Jurnal Penelitian Hasil Hutan .   29(4): 322-330
Pawana,  G  (2011),  Pelarutan  fosfat  dari trikalsium  fosfat  oleh  pseudomonas pendarflour  isolate  pemekasan  pada media nutriem broth. Seminar nasiona l. universitas trunojoyo   Madura
Premono,  M.E.,    Anas,  I.,  Soepardi,  G., Hadioetomo, R.S., (1996), Peranan jasad  renik    pelarut  fosfat  dalam meningkatkan  keefisienan    pupuk  p dan pertumbuhan
tebu. Pusat
Penelitian dan Pengembangan Bioteknologi. LIPI
Silitonga,  D,  (2012),  Isolasi  dan  uji  potensi isolat bakteri pelarut fosfat dan   bakteri penghasil hormone IAA  ( indole acetic acid ) terhadap   pertumbuhan   kedelai
( Glycine max L.)  Pada  Tanah  Kuning,
Medan : USU Stevenson, F. J., (2005), Cycles of Soil: Carbon, Nitrogen, Phosphorus, Sulfur, Micronutrients . John Wiley and Sons, New York. Strobel, G, A., and Daisy, B., (2003 ), Bioprospecting for microbial endophytes and their natural product s. Microbiol. and Mol. Biology
Rev 67(4):491-  502.