## GAMBARAN PENULARAN TRANSOVARIAL VIRUS DENGUE ANTAR NYAMUK Aedes aegypti DI KOTA TERNATE

## DESCRIPTION OF DHF VIRUS TRANSOVARIAL TRANSMISSION BETWEEN Aedes aegypti MOSQUITO IN TERNAT CITY
Amalan Tomia, Rosmila Tuharea
Program Studi Kehatan Masyarakat, Fakuktas Ilmu Kesehatan, Universitas Muhammadiyah Maluku Utara, Maluku Utara, Indonesia
Korespondensi: Amalan Tomia. Email: algaternate@gmail.com

## ABSTRAK
Virus  Dengue  merupakan  agen  penyebab  penyakit  demam  berdarah  dengue  (DBD)  yang  ditularkan melalui  nyamuk  Aedes  Sp.  Penularan  virus  Dengue  antar  Aedes  Sp.  umumnya  terjadi  secara  horisontal  dan vertical  (transovarial).  Penularan  transovarial  virus  Dengue  melalui  vektor  di  daerah  endemik  bisa  menjadi potensi peningkatan kasus DBD. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui gambaran penularan virus Dengue secara transovarial, dengan menggunakan metode RT-PCR. Sampel penelitian adalah nyamuk Aedes aegypti yang berasal dari koleksi telur Aedes sp. Koleksi telur didapatkan dari pemasangan 400 ovitrap pada 100 rumah yang berasal  dari  kelurahan  endemik  yang  terdapat  pada  4  wilayah  kerja  Puskesmas  yang  terdapat  kasus  DBD. Kemudian dilakukan pemeriksaan RT-PCR virus Dengue pada nyamuk F2 (telur dari ovitrap yang ditetaskan). Sampel  nyamuk  Ae.  aegypti  betina  F2  yang  digunakan  berjumlah  360  nyamuk.  Hasil  pemeriksaan  RT-PCR menunjukkan  bahwa  nilai  Transovarian  Invection  Rate  (TIR)  0%  atau  telur  nyamuk  Ae.aegypti  pada  wilayah tersebut tidak terinfeksi virus Dengue (negatif). Kesimpulan penelitian ini adalah penularan virus Dengue di kota Ternate belum terjadi secara transovarial.

## Kata kunci: DBD, Penularan Transovarial, Aedes aegypti

## ABSTRACT
Dengue virus is etiology of dengue hemorrhagic fever (DHF) which is transmitted through the Aedes Sp. Dengue  virus  transmission  between  Aedes  Sp.  generally  occur  horizontally  and  vertically  (transovarial). Transovarial  transmission  of  dengue  virus  through  vectors  in  endemic  areas  could  be  a  potential  increase  in dengue cases. This study aims to determine the description of dengue virus transmission transovarially, using the RT-PCR method. The research sample was the Aedes aegypti mosquito from the collection of Aedes sp. The egg collection  was obtained from the installation  of  400 ovitraps in  100 houses from endemic villages located in  4 areas of community health centers with dengue cases. Then the dengue virus RT-PCR examination was carried out on F2 mosquitoes (mosquitoes from hatched ovitrap eggs). Samples of Ae. aegypti female F2 used were 360 mosquitoes.  The  results  of  the RT-PCR  examination  showed  that  the  value  of  the Transovarian  Invection  Rate (TIR) was 0% or the Ae. aegypti mosquito eggs in the area were not infected with  the Dengue virus (negative). The  conclusion  of  this  study  is  that  the  transmission  of  dengue  virus  in  the  city  of  Ternate  has  not  occurred transovarially.

## Keywords: DHF, Transovarial Transmission, Aedes aegypti
How to Cite: Tomia, A., & Tuharea, R. (2022). Gambaran Penularan Transovarial Virus Dengue Antar Nyamuk Aedes Aegypti Di Kota Ternate. Biomedika, 14(2), 127-135. doi: https://doi.org/10.23917/biomedika.v14i2.18028
DOI: https://doi.org/10.23917/ biomedika. v14i2.18028

## PENDAHULUAN
Virus Dengue merupakan penyebab utama penyakit  Demam  Berdarah  Dengue  (DBD) (Kemenkes  RI,  2017).  Penularan  virus  Dengue selalu  dikaitkan  dengan  vektor  nyamuk Aedes spp.  Peranan  nyamuk Aedes spp  dalam membantu  penyebaran  virus  Dengue  sangat penting. Melalui gigitan nyamuk Aedes spp pada orang  yang  sedang  veremik  akan  dapat menularkan  virus  Dengue  ke  orang  yang  sehat (Kemenkes  RI,  2017).    Virus  Dengue  dapat ditemukan  di  seluruh  wilayah  Indonesia,  dan terdiri atas empat serotipe yaitu DENV-1, 2, 3, 4 Infeksi virus Dengue pada manusia dapat terjadi lebih  dari  satu  serotipe  secara  bersama-sama. Kemampuannya  untuk  membentuk  antibodi hanya terjadi pada satu serotipe, sedangkan pada serotipe  yang  lainnya  sangat  rendah  sehingga tidak mampu memberikan perlindungan terhadap serotipe tersebut (Hikmawati dan Huda, 2021).
Penularan  virus  Dengue  dapat  ditularkan antar  nyamuk  melalui  2  cara  yaitu  secara horisontal  dan  vertical  (transovarial).  Penularan harisontal  merupakan  penularan  virus  Dengue dari  nyamuk  betina  yang  terinfeksi  akibat menghisap darah viremia, kemudian menularkan virus  Dengue  melalui  gigitan  keduanya  pada orang  yang  sehat  (Wijayanti,  2019).  Sedangkan
penularan  transovarial  dapat  terjadi  melalui mekanisme  transmisi  vertikal  dalam  tubuh nyamuk  dimana  virus  ditularkan  oleh  nyamuk betina pada telurnya yang nantinya akan menjadi nyamuk (Grunnill, 2016). Penularan transovarial akan menyebabkan vurus Dengue terus bersirkulasi di suatu daerah (Martins et al., 2012).
Penularan  virus  Dengue  dipengaruhi  oleh adanya  interaksi  antara  virus,  nyamuk  vektor, manusia, dan faktor lingkungan. Interaksi faktor tersebut akan berpengaruh terhadap keberlangsungan  hidup  virus  Dengue  di  alam, sehingga sulit untuk di kendalikan (Irwan, 2017).
Potensi  penularan  virus  Dengue  di  Kota Ternate  sangat  tinggi,  terlihat  dari  penentuan status endemitas virusnya. Data Dinas Kesehatan Kota Ternate 2021 menunjukkan bahwa terdapat 33 kelurahan endemik, 27 kelurahan sporadis dan 5  kelurahan  potensial,  sedangkan  hanya  12 kelurahan  yang  masih  dinyatakan  bebas  kasus DBD  dari  77  kelurahan  yang  berada  di  Kota Ternate.
Berbagai  metode  yang  digunakan  untuk mengetahui gambaran tentang kejadian penularan  secara  transovarial  dapat  dilakukan untuk  deteksi  dini  terhadap  penyakit  DBD. Metode  yang  sering  digunakan  adalah  teknik imunositokimia , immunofluorescence,
immunoperoxydase,  atau  polymerase  chain reaction (PCR)  (Wijayanti,  2019).  Metode RT- PCR dapat memberikan hasil yang akurat dalam waktu singkat. Metode tersebut dapat mendeteksi RNA  virus  pada  berbagai  jenis  sampel  seperti penderita  suspek  Dengue,  jaringan  autopsi, maupun  pada  sampel  nyamuk  (Sorisi,  2013). Oleh  karena  itu,  penelitian  ini  menggunakan metode RT-PCR untuk  mengetahui  gambaran penularan  virus  Dengue  yang  terjadi  di  Kota Ternate

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  merupakan  jenis  penelitian deskriptif  untuk  mengetahui  adanya  gambaran penularan  virus  Dengue  oleh  nyamuk Ae. aegypti. Penelitian  dilakukan  di  Kota  Ternate pada  bulan  September  2021.  Sampel  nyamuk berasal  dari  koleksi  pada  100  rumah  penderita DBD  yang  berada  pada  empat  wilayah  kerja Puskesmas  di  Kota  Ternatae  yaitu  puskesmas Gambesi, puskesmas Kalumata, puskesmas Kota dan puskesmas Siko  ( Gambar 1 .) sesuai standar Kemenkes RI tahun 2017. Setiap rumah dipasang 4 ovitrap (2 ovitrap dalam rumah dan 2 ovitrap di luar  rumah),  sehingga  ovitrap  yang  terpasang berjumlah  400  ovitrap.  Hasil  koleksi  telur kemudian  dikirim  ke  Laboratorium  Terpadu Litbangkes Banjarnegara untuk rearing.

## Rearing nyamuk
Rearing  nyamuk  dilakukan  berdasarkan petunjuk  Kemenkes  RI  (2017)  yaitu    telur  hasil survei  ovitrap  dari  lokasi  penelitian  di  tetaskan dalam  kotak  donat  yang  berisi  air.  Larva  yang telah menetas diberi makan pakan ayam dan hati ayam. Setelah nyamuk menetas dan umur 3 hari diberi  makan  larutan  gula  10%,  dan  dipuasakan selama  4-17  jam  sebelum  dilakukan  pemberian pakan  darah  (yang  berasal  marmot)  untuk mempercepat  nyamuk  betina  untuk  bertelur. Nyamuk dipelihara sampai memperoleh nyamuk F2.  Nyamuk  F2  berumur  7  hari  kemudian dipanen dan dilakukan pengujian RT-PCR.

## Pengujian RT-PCR.
Menurut  petunjuk  manual  prosedur  oleh Geneaid yaitu  Deteksi  RNA  virus  Dengue menggunakan metode RT-PCR Superscript™ III One. Tahap RT-PCR dengan system Platinum® Taq  DNA  Polymerase  (Invitrogen,  Cat.  No. 12574-026),  menggunakan  primer  universal untuk  virus  Dengue  (primer  D1  &  D2), dilanjutkan dengan nested PCR dengan menggunakan  primer  Universal  Dengue  dan empat primer spesifi serotipe yaitu Dl, TS l, TS2, TS3  dan  TS4.  Primer-primer  yang  digunakan ditampilkan pada Tabel 1.
Tabel 1. Primer Yang Digunakan Dalam Penelitian Serotipe Virus Prim er Sekuen Ukuran amplifikasi DNA ( dalam bp) D1 5'- TCAATATG CTGAAACG CGCGAGAA ACCG-3' 511 D2 5' – TTGCACCA ACAGTCAA TGTCTTCAG GTTC-3' 511 Den1 TS1 5' – CGTCTCAGT GATCCGGG GG-3' 342 bp (D1 dan TS1) Den2 TS2 5' – CGCCACAA GGGCCATG AACAG-3' 251 bp (D1 dan TS2) Den3 TS3 5'- TAACATCA T CATGAGAC AGAGC-3' 538 bp (D1 dan TS3) Dem4 TS4 5'- CTCTGTTGT CTT AAACAAG AGA-3' 752 bp (D1 dan TS4)
Langkah  kerja  pemeriksaan RT-PCR adalah sebagai berikut :
a. Reverse  transcriptase  PCR untuk  mengubah
RNA  menjadi  cDNA  clan  amplifikasi  virus
Dengue general dengan primer DI dan D2.
b. Mix dibuat dalam PCR tube 0,2 ml yang bebas
nukclease, dan dikerjakan di dalam
Komponen  es  dengan  komposisi  sebagai berikut :  2x Reaction Mix (2.5 µI), Primer DI (2  µI),  Primer  D2  (2  µl),  Primer  D3  (2  µl), Primer  D5  (2 µl),  Reverse  (0.5  µl),  Inhibitor
(1  µl),  H2O  (5.5  µl)  dan  RNA  (8  µl).
Komponen tersebut dicampur secara perlahan-lahan,  dipastikan  semua  komponen berada  di  dasar  tabung,  jika  perlu  dapat disentrifus sebentar. PCR mix dimasukkan ke dalarn  thermal  cycler,  dengan  program sebagai  berikut:  (i)  sintesis  cDNA  I  siklus: 94°C selama 1 jam; (ii) predenaturasi 1 sik.lus :  94°C  selama  3  menit;  (iii)  amplifikasi  35 siklus  :  94°C  selama  1  menit  (denaturasi),
55°C  selama  1  menit  (annealing),  68°C selama  1,5  menit  (ekstensi);  (iv)  ekstensi akhir 1 sik.lus : 68°C selama 5 menit.
c. Amplifikasi  serotipe-spesifik  cDNA  virus
Den1,  Den2,  Den3,  dan  Den4  dilakukan sebanyak  35  Siklus.  Komponen  yang digunakan adalah 2x Reaction Mix (12, 5 µI), Superscript™ III RT/ Platinum® Taq Mix (1 µl),  MgS04  (2  µI),  Primer  DI  (Forward)  (1 µI),  TSI,  TS2,  TS3,  dan  TS4  (Reverse)  (@1 µl), dan cDNA (5 µl)
Larutan  master  mix  yang  berisi  komponen- komponen  diatas  dimasukkan  dalam  tube PCR 0,2  µI,  disentrifus  sebentar  kemudian dimasukkan ke dalam thermal cycler, dengan program  sebagai  berikut  :  (i)  denaturasi  35 siklus : 94°C selama 30 detik, annealing 55°C
selama  I  menit,  dan  ekstensi  72°C  selama  2 menit.
d. Elektroforesis.
Produk RT-PCR
dielektrofresis pada gel agarose 1.5%, SBYR dan 100 bp ladder digunakan sebagai marker untuk menganalisis besar produk RT-PCR dan ukuran  pita  yang  didapatkan  untuk  virus DEN-1  adalah  324  bp,  virus  DEN-2  adalah 119 bp, virus DEN-3 adalah 538 bp dan virus DEN-4  adalah  726  bp.  Langkah  kerja pemeriksaan  elektroforesis  adalah  sebagai berikut:
a. Agarose  gel  dibuat  dengan  menimbang
0.75  gram  agarose  dimasukkan  dalam erlemeyer,  ditambah  5  µl  SBYR  dan ditambah TBE buffer 0.5x sampai 50 ml kemudian  dihomogenisasi  di  dalam microwave sampai berwarna jernih.
b. Gel  terse  but  didiamkan  pada  suhu ruangan ± 5 menit, lalu dituang kedalam cetakan dan dibiarkan sampai mengeras.
c. Gel agarose bersarna cetakannya dimasukkan ke dalam perangkat
elektroforesis dan diberi TBE buffer 0.5x
sampai tergenang.
d. Produk RT-PCR 0.5 µl + 0.3 µI loading buffer, lalu dimasukkan kedalam
well/slot yang ad.a pada gel agarose.
e. Gel  lalu  dirunning  60  volt,  400  mA selama  35-45  menit,  setelah  itu  gel diangkat  dari  perangkat  elektroforesis dan  dimasukkan  kedalam  gel  doc  untuk mengetahui band virus Dengue.
Gambar 1. Lokasi Penelitian

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil penelitian pada empat wilayah kerja puskesmas di Kota Ternate menemukan nyamuk dari jenis Ae.aegypti. Hasil deteksi virus dengan metode RT-PCR dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Hasil Deteksi Virus Dengue Pada
Nyamuk Dengan Metode RT-PCR No Wilayah Kerja Puskesmas Jumlah sampel Hasil 1 Gambesi 90 Negatif 2 Kalumata 90 Negatif 3 Kota 90 Negatif 4 Siko 90 Negatif Hasil deteksi dengan menggunakan metode RT-PCR menunjukkan nilai
Transovarian Invection Rate (TIR) 0% atau telur nyamuk Ae.aegypti pada  wilayah  tersebut  tidak terinfeksi virus Dengue (negatif).
Ketidakberhasilan  deteksi  virus  dari  tubuh nyamuk melalui telur nyamuk dapat dipengaruhi oleh  faktor  lingkungan  terutama  faktor  iklim. Faktor  iklim  yang  mempengaruhi  proses  isolasi virus dari tubuh nyamuk diantaranya adalah suhu (Sasmanto et al., 2012).
Berdasarkan  data  Badan  Metereologi Klimatologi  dan  Geofisika  (BMKG)  Kota Ternate pada saat penelitian berlangsung berada pada  musim  pancaroba. Musim  pancaroba ditandai  dengan  cuaca  yang  tidak  stabil  serta cenderung  ekstrim  sehingga  berpengaruh  pada kenaikan kelembaban udara. Peningkatan kelembaban merupakan faktor terjadinya peningkatan penularan penyakit DBD (Kemenkes  RI,  2022). Musim  pancaroba  dapat menciptakan  sebaran  hujan  tidak  merata,  yang berakibat  pada  terjadi  perubahan  suhu  dari waktu-kewaktu.
Wowor (2017) menjelaskan bahwa peningkatan  kelembaban  udara  pada  musim hujan menyebabkan peningkatan jumlah nyamuk serta  meningkatkan  aktivitas  menggigit  dari nyamuk.  Peningkatan  kelembaban  udara  dapat berpengaruh pada memperpanjang jangka waktu hidup nyamuk, sehingga berpengaruh pada resiko penularan virus Dengue.
Pengaruh faktor lingkungan sangat penting dalam  meningkatkan  perkembangbiakan  vektor, siklus  gonotropik  nyamuk,  tingkat  gigitan, memperpendek  periode  inkubasi  patogen  dan memperpanjang  umur  nyamuk  dewasa  (Fitriana dan  Yudhastuti,  2018).  Selanjutnya  Wowor (2017)  mejelaskan  bahwa  pada  musim  hujan, banyak  terjadi  kontak  manusia  dengan  nyamuk karena  aktifitas  manusia  lebih  banyak  terjadi dalam rumah.
Suhu yang dibutuhkan oleh nyamuk dalam satu  siklus inkubasi  ekstrinsik  (waktu  yang dibutuhkan  virus  Dengue  untuk  melakukan penetrasi  kedalam  tubuh  nyamuk  sampai menimbulkan  gejala)  berkisar  antara  25-28°C (WHO, 2022). Rerata suhu setiap bulan di Kota Ternate berkisar 24-28°C (BMKG Kota Ternate, 2022).  Tingginya  suhu  udara  di  Kota  Ternate akan  berpengaruh  pada  kecepatan  terjadi  siklus gonotropik  pada  nyamuk.  Kecepatan  perubahan siklus  gonotropik  akan  menyebabkan    nyamuk Ae.  aegypti lebih  lama  bertahan  hidup  di  alam.
Selain  itu  adanya  pemanasan  global  yang berdampak  pada  perubahan  suhu,  kelembaban dan curah hujan mempercepat proses metamorfosis  dan  berpengaruh  pada  kecepatan terjadinya  siklus  gonotropik  (Wijayanti,  2019). Apabila  siklus  gonotropik  terjadi  secara  cepat
akan menyebabkan terjadinya persistensi terhadap virus Dengue. Hal ini akan menyebabkan  terjadinya  peningkatan  infeksi pada  setiap  siklus  gonotropik.  Kondisi  tersebut menyebabkan  terjadinya  peningkatan Minimum Infection  Rate (MIR).  Pengaruh  dari  terjadinya
persistensi pada beberapa generasi (transgenerasional) akan berdampak pada penularan dan penyebaran penyakit virus Dengue (Wijayanti, 2019).
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa kemungkinan  penularan  virus  Dengue  di  Kota Ternate  terjadi  secara  horisontal.  Lokasi penelitian  merupakan  daerah  padat  penduduk dengan  tingkat  kerapatan  rumah  yang  sangat berdekatan.  Sirisena et  al. (2017)  menjelaskan bahwa  apabila  kepadatan  penduduk  suatu wilayah  dengan  rumah-rumah  yang  berdekatan akan mempermudah terjadi infeksi virus Dengue melalui  gigitan  nyamuk.  Selanjutnya  semakin padat  rumah  penduduk  di  suatu  wilayah,  maka risiko  untuk  penularan  virus  Dengue  penyebab penyakit DBD semakin tinggi. Menurut Wesolowski et  al. (2015)  bahwa  sebaran  kasus DBD erat kaitanya dengan  terjadinya urbanisasi yang  tak  terkontrol,  mobilitas  penduduk, perubahan  iklim,  dan  faktor  sosio-ekonomi. Situasi  ini  sangat  sesuai  dengan  kondisi  Kota
Ternate yang merupakan daerah transit dan pintu masuk maupun keluarnya penduduk dari Propinsi Maluku  Utara,  sehingga  meningkatkan  risiko terjadinya kasus impor.
Potensi  menularkan  virus  Dengue  akibat kasus  impor  berperan  penting  pada  terjadi penyebaran  penyakit  DBD  suatu  daerah.  Faktor utama  terjadinyya  kasus  impor  disebabkan  oleh adanya  mobilitas  penduduk  yang  tinggi  pada daerah  tersebut  (Cheng et  al. ,  2016).  Tingginya potensi  penularan  virus  Dengue  oleh  vektor  di Kota Ternate dapat juga terjadi karena perubahan siklus  hidup  vektor.  Siraj et  al. (2017) menyatakan bahwa perubahan sifat epidemioligik  penyakit  DBD  dipengaruhi  oleh perubahan  lingkungan,  penggunaan  lahan,  dan transformasi demografi. Perubahan sifat epidemiologi juga akan mempengaruhi terjadinya perubahan pola sebaran virus Dengue (Haider et al ., 2015).
Nyamuk secara alami dapat juga berfungsi sebagai  reservoir  bagi  virus  Dengue.  Nyamuk menjadi  media  penyebaran  virus  Dengue  yang efektif,  tanpa  harus  berkembang  dalam  tubuh nyamuk (Hikmawati dan Huda, 2021). Penularan horisontal  dapat  terjadi  setelah  penularan vertikal. Hal ini bisa terjadi karena virus Dengue telah  persisten  dalam  tubuh  nyamuk.  Persistens
merupakan  cara  pemeliharaan  serotipe  virus Dengue oleh vektor Ae. aegypti . (Hikmawati dan
Huda, 2021)

## SIMPULAN DAN SARAN
Sampel  telur  nyamuk  yang  digunakan dalam penelitian ini adalah Ae. aegypti . Hasil uji transovarial  dengan  menggunakan  metode RT- PCR pada  telur  nyamuk  yang  berasal  dari  4 wilayah puskesmas yang berada di Kota Ternate adalah  negatif  yang  menunjukkan  bahwa penularan  virus  Dengue  di  Kota  Ternate  belum terjadi secara transovarial. Kemungkian
terjadinya  penularan  virus  Dengue  di  Kota Ternate terjadi secara horisontal.
Untuk  mengurangi  resiko  penyeberan virus  Dengue  lebih  luas,  perlu  dilakukan pencegahan  dengan  menggunakan  perangkap telur  dan  pemberantasan  sarang  nyamuk  (PSN) melalui  3M-PLUS  untuk  memutuskan  siklus hidup dari nyamuk di lapangan.

## DAFTAR PUSTAKA
BMKG.  2022.  I klim  dan  Cuaca  Rata-Rata
Sepanjang  Tahun  di  Kota  Ternate (Update Februari 2022). https://id.weatherspark.com/y/142255/C uaca-Rata-rata-pada-bulan-in-Kota- Ternate-Indonesia-Sepanjang-Tahun
Cheng Q, Jing Q, Spear RC, Marshall JM, Yang Z, Gong P. 2016. Climate and the Timing of Imported Cases as Determinants of the Dengue  Outbreak  in  Guangzhou  2014: Evidence  from  a  Mathematical  Model.
PLOS  Neglected  Tropical  Diseases . 10(2). Pp= 1-15.
Fitriana BR, dan Yudhastuti R. 2018. Hubungan Faktor  Suhu  Dengan  Kasus  Demam
Berdarah  Dengue  (DBD)  Di  Kecamatan
Sawahan  Surabaya.    The  Indonesian Journal of Public Health. 13(1). Pp= 83-94 Grunnill  M,  B.  M.  2016.  How  Important  is Vertikal Transmission of Dengue Viruses by Mosquitoes (Diptera: Culicidae)?', Jurnal Medical Entomology . 53(1). Pp= 1–19. Haider,  Z.A.,  Ahmad,  F.Z.,  Mahmood,  A., Waseem,  T.,  Syafiq,  I.,  Qazi,  J., Siddique, N., and Humayun, M.A. 2015. Dengue  fever  in  Pakistan:  a  paradigm shift; changing epidemiology and clinical patterns. Perspectives in Public Health.135(6). Pp= 294-8. Hikmawati, I. dan Huda, S. 2021 Peran Nyamuk Sebagai  Vektor  Demam  Berdarah Dengue  (DBD)  Melalui  Transovarial.
Penerbit dan Pencetak: Satria Publisher. P= 125
Irwan,  2017. Epidemiologi  Penyakit  Menular. Penerbit CV.  ABSOLUTE  MEDIA.  P= 107
Kemenkes  RI.  2017. Situasi  Kasus  Demam
Berdarah di  Indonesian Tahun
2016[Infodatin] Pusat Data dan
Informasi Kementrian Kesehatan RI Kemenkes  RI.  2022. Cegah  Ancaman  DBD  di Musim Pancaroba. Pusat Kritis Kesehatan.  Kementrian   Kesehatan  RI (Apdate, Desember 2022). https://pusatkrisis.kemkes.go.id/cegah- ancaman-dbd-di-musim-pancaroba
Martins, V.E.P., Alencar, C.H., Kamimura, M.T., de  Carvalho, A.F.M.,  de  Simone,  G., S, Dutra R.F., and  Guedes, M.I.F. 2012.
Occurrence of Natural Vertikal Transmission of Dengue-2 and Dengue-
3  Viruses  in  Aedes  Aegyptii  and  Aedes albopictus  in  Fortaleza,  Ceará,  Brazil. PLOS ONE ; 7(7). Pp= e41386
Siraj, A.S., Oidtman, R.J., Huber, J.H., Kraemer, M.U.G.,  Brady,  O.J.,  Johansson,  M.A.., and  Perkins,  T.A.  2017.    Temperature modulates dengue virus epidemic growth rates through its effects on reproduction numbers  and  generation  intervals. PLoS Negl Trop Dis . 11(7). Pp= e0005797.
Sirisena  P,  Noordeen  F,  Kurukulasuriya  H,
Romesh TA, Fernando L.2017. Effect of Climatic Faktors and Population Density on  the  Distribution  of  Dengue  in  Sri Lanka:  A  GIS  Based  Evaluation  for Prediction of
Outbreaks. PLoS
ONE. 12(1). P= e0166806
Sorisi A.MH 2013. Transmisi Transovarial Virus Dengue Pada Nyamuk Aedes spp. Jurnal Biomedik (JBM ). 5(1). Pp= 26-31
Wesolowski,  A.,  Qureshi,  T.,  Boni,  M.F.,
Sundsøyc, P.R., Johansson, M.A., Rasheed,  S.  B.,  Engø-Monsen,  K.,  and
Buckee,  C.O.  2015.  Impact  of  human mobility  on  the  emergence  of  dengue epidemics  in  Pakistan. Proceedings  of the National Academy of Sciences of the United  States  of  America. 112(38).  Pp= 11887-92.
Wijayanti,  S.P.M.  2019. Karakteristik  dan Pola  Penyebaran  Penyakit  Demam Berdarah Dengue di Wilayah Endemis. UNSOED Press. P= 54 Wowor R, 2017. Pengaruh Kesehatan Lingkungan terhadap Perubahan Epidemiologi  Demam  Berdarah  di
Indonesia. Jurnal  e-Clinic  (eCl) .  5(2).
Pp= 105-17.
WHO.  2022.  Dengue  and  severe  dengue. https://www.who.int/news-room/fact- sheets/detail/dengue-and-severe- dengue