UJI TOKSISITAS EKSTRAK DAUN BINAHONG ( Anredera cordifolia (Ten.) Steenis)
TERHADAP LARVA UDANG Artemia salina Leach DENGAN METODE BRINE SHRIMP LETHALITY TEST (BSLT)
Nur Jazilah, A.Ghanaim Fasya, Rachmawati Ningsih, Ahmad Abtokhi
UIN Maulana Malik Ibrahim Malang Jurusan Kimia, Fakultas Sains dan Teknologi,

## ABSTRACT
Binahong leaf (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) is part of a drugs plants potency that can cure many kind of illnes include as drug anticancer. This risset have whit the goal for: (1) To know toxicity level of each extract binahong leaf (Anredera cordifolia (Ten) Steenis) in each solvent n-hexane, ethyl acetate and ethanol for level mortality larva shrimp Artemia salina Leach. (2)  To Know a level of compounds that there are into extract binahong leaf (Anredera cordifolia (Ten) Steenis) with the best toxicity.
The rissed have done by extracting sample with solvent n-hexane by next wiht solvent ethyl acetate and ethanol.  Concentrated  extract  that  got  in  used  to  exam  toxicity  for  shrimp  larva  BSLT  and  phytochemical  test reagent. Mortality artemia salina by with probit analysis to know value of LC 50 .
The result from this risset show on each extract binahong leaf  (Anredera cordifiola (Ten) Steenis) have level of toxicity on shrimp larva Artemia salina Leach, show with value LC 50 <1000 ppm. The level of toxicity extract ethanol, extract ethyl acetate and n-hexane extract is an value LC 50 a lot 7.35702 ppm, 106.992 ppm and 175.800  ppm.  Into  ethanol  extract  have  done  phytochemical  test  reagent  there  are  leve  alkaloids,  flavonoids, tannins,  triterpenoin/steroids  and  saponins.  Lavel  of  that  compounds  show  there  are  potency  bioactivity  on shrimp larva Artemia salina Leach.
Keyword : Anredera cordifiola (Ten) Steenis, Artemia salina Leach, Toxicity Test and BSLT.

## ABSTRAK
Daun  binahong  (Anredera  cordifolia  (Ten.)  Steenis)  adalah  bagian  dari  tanaman  obat  potensial  yang dapat  mengatasi  berbagai  jenis  penyakit  termasuk  sebagai  obat  antikanker.  Penelitian  ini  dilakukan  dengan tujuan untuk: (1) Mengetahui tingkat toksisitas masing-masing ekstrak daun binahong (Anredera cordifolia (Ten) Steenis)  dalam  tiap  pelarut  n-heksana,  etil  asetat  dan  etanol  terhadap  tingkat  mortalitas  larva  udang  Artemia salina  Leach.  (2)  Mengetahui  golongan  senyawa  yang  terdapat  dalam  ekstrak  daun  binahong  (Anredera cordifolia (Ten) Steenis) dengan toksisitas yang terbaik.
Penelitian dilakukan dengan  mengekstraksi  sampel dengan pelarut n-heksana  yang dilanjutkan dengan pelarut etil asetat dan etanol. Ekstrak pekat yang diperoleh digunakan untuk uji toksisitas terhadap larva udang BSLT  dan  uji  fitokimia  dengan  reagen.  Data  kematian  Artemia  salina  dianalisis  dengan  analisis  probit  untuk mengetahui nilai LC 50 .
Hasil  dari  penelitian  menunjukkan  pada  masing-masing  ekstrak  daun  binahong  (Anredera  cordifiola  (Ten) Steenis) memiliki tingkat toksisitas terhadap larva udang Artemia salina Leach, ditunjukkan dengan nilai LC 50 < 1000  ppm.  Tingkat  toksisitas  ekstrak  etanol,  ekstrak  etil  asetat  dan  ekstrak  n-heksana  yaitu  dengan  nilai  LC 50 sebesar 7,35702 ppm, 106,992 ppm dan 175,800 ppm. Pada ekstrak etanol dilakukan uji fitokimia denga reagen yaitu adanya golongan senyawa alkaloid, flavonoid, tanin, triterpenoid/steroid dan saponin. Golongan senyawa- senyawa tersebut yang menunjukkan adanya potensi bioaktivitas terhadap larva udang Artemia salina Leach.
Kata Kunci: Binahong, Artemia salina Leach, Uji Toksisitas dan BSLT.

## I. PENDAHULUAN
Tanaman binahong (Anredera
cordifolia  (Ten.)  Steenis)  adalah  tanaman obat  potensial  yang  dapat  mengatasi berbagai  jenis  penyakit.  Binahong  tumbuh menjalar dan panjangnya dapat mencapai 5 meter,  berbatang  lunak  berbentuk  silindris
dan pada ketiak daun terdapat  seperti umbi yang bertekstur kasar. Daunnya tunggal dan mempunyai  tangkai  pendek,  bersusun berselang-seling  dan  berbentuk  jantung. Panjang  daun  antara  5 ˗ 10  cm  dan mempunyai  lebar  antara  3 ˗ 7  cm.  Seluruh bagian tanaman binahong dapat
dimanfaatkan,  mulai  dari  akar,  batang, daun, umbi dan bunganya (Manoi , 2009).
Zat bioaktif  yang ada pada tanaman binahong dapat membantu proses penyembuhan penyakit-penyakit degeneratif seperti kerusakan ginjal, diabetesdan lain-lainnya. Kandungan metabolit  sekunder  dalam  binahong  yang mempunyai  aktivitas  sebagai  antioksidan dan  antimikroba/antibiotik  sangat  baik dipakai  sebagai  bahan  baku  untuk  obat tradisional (Manitto, 1992).
Tanaman  binahong  mengandung fenol,  flavonoid,  saponin,  triterpenoid, steroid  dan  alkaloid  (Astuti  dkk.,  2011), adanya  aktivitas  dari  senyawa  fitokimia yang  berfungsi  menghancurkan  mikroba terutama  pada  kelompok  bakteri  gram positif (Rios dan Rico, 2005).
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui  potensi  ekstrak  yang  bersifat aktif  dilakukan  pengujian  bioaktivitasnya dengan  uji  toksisitas  terhadap  larva  udang Artemia  salina  (metode  Brine  Shrimp Lethality  Test)  dan  mengetahui  golongan senyawa  yang  terdapat  dalam  ekstrak  daun binahong (Anredera cordifolia (Ten)
Steenis) dengan toksisitas yang terbaik.
II. METODE PENELITIAN 2.1. Alat
Alat yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  oven,  blender,  kaca arloji,  cawan  penguap,  timbangan  analitik, gelas  ukur  100  mL,  erlenmeyer  300  mL, pengaduk  kaca,  penyaring  Buchner,  rotary evaporator, beaker glass 100 mL, desikator, pipet  tetes,  pipet  ukur,  tabung  reaksi, penjepit,  corong  kaca,  labu  ukur,  pipet mikro, bejana untuk  penetasan telur udang, lampu dan botol vial 2.2. Bahan
Bahan utama yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  daun  binahong (Anredera  cordifiola  (Ten)  Steenis),  etanol, etil  asetat  dan  n-heksana,  asam  sulfat, logam  Mg,  Formaldehid,  asam  klorida, asam  asetat  anhidrida,  reagen  mayer,  asam asetat  glasial,  reagen  Dragendrof,  regen Lieberman-Burchard, larutan gelatin, kertas
saring,  aluminium foil,  larva  udang (Artemia  salina  Leach),  dimetil  sulfoksida (DMSO), ragi roto dan air laut.
2.3. Uji kadar air Sampel dipotong
kecil-kecil, ditimbang sebanyak 5 g dan dimasukkan ke dalam cawan yang telah diketahui beratnya, selanjutnya dikeringkan di dalam oven pada suhu  100−105ºC  selama  sekitar  1  jam. Sampel kering didinginkan dalam desikator dan ditimbang. Sampel dipanaskan kembali dalam  oven  ±  20  menit  pada  suhu  yang sama,  didinginkan  dalam  desikator  dan ditimbang  kembali.  Perlakuan  ini  diulangi sampai  tercapai  berat  konstan.  Kadar  air dihitung menggunakan rumus:
𝑘𝑎𝑑𝑎𝑟 𝑎𝑖𝑟 = (𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑎𝑤𝑎𝑙 − 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑎𝑘ℎ𝑖𝑟)
(𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑎𝑤𝑎𝑙)
× 100%

## 2.4. Preparasi sampel
1  Kg  daun  binahong  dicuci  bersih, diiris  kecil-kecil  dan  dikeringkan  dalam oven  dengan  suhu  37−40  °C  selama  1−2 jam  kemudian  dijemur  sampai  diperoleh berat konstan (kering). Daun binahong yang kering kemudian dihaluskan menjadi serbuk dan diayak dengan ukuran 60 mesh. 2.5. Ekstraksi  senyawa  aktif  dengan maserasi
Ekstraksi  komponen  aktif  dilakukan dengan cara ekstraksi maserasi/perendaman dengan  pelarut  yang  memiliki  tingkat kepolaran  yang  berbeda  yaitu  n-heksana, etil  asetat  dan  metanol.  Serbuk  daun binahong ditimbang sebanyak 50 g direndam  dengan  n-heksana  sebanyak  150 mL  dan  dimaserasi  selama  24  jam  dengan pengocokan  selama  3  jam  menggunakan Shaker, kemudian disaring dan ampas yang diperoleh dimaserasi kembali dengan pelarut  dan  perlakuan  yang  sama  sampai tiga  kali  penggulangan  sehingga  diperoleh fitrat  yang  warnanya  pucat.  Selanjutnya disaring  dan  ampas  dikeringkan  agar terbebas  dari  pelarut  n-heksana.  Ketiga filtrat  yang  diperoleh  selanjutnya  digabung menjadi satu.
Ampas  dipartisi  dengan  pelarut  etil asetat  dan  etanol  dengan  mengunakan  cara
seperti diatas, ketiga ekstrak yang diperoleh dipekatkan dengan rotary evaporator sampai  diperoleh  ekstrak  pekat  n-heksana, etil asetat dan etanol.
2.6. Toksisitas dengan larva udang Artemia salina Leach
2.6.1. Penetasan telur Disiapkan  bejana  untuk  penetasan telur  udang.  Di  satu  ruang  dalam  bejana tersebut diletakkan
lampu untuk menghangatkan  suhu  dalam  penetasan, sedangkan  di  ruang  sebelahnya  diberi  air laut.  Kedalam  air  laut  dimasukkan  ± 50−100  mg  telur  udang  untuk  ditetaskan.
Pada bagian telur ditutup dengan aluminium  foil,  dan  lampu  dinyalakan selama 24−48 jam untuk meneteskan telur.
2.6.2. Uji Toksisitas
Perlakuan  uji  toksisitas  dilakukan sebanyak  3  kali  ulangan  pada  masing- masing  ekstrak  sampel.  Botol  disiapkan untuk  pengujian,  masing-masing  ekstrak membutuhkan  8  botol  dan  3  botol  sebagai kontrol.  Ekstrak  kental  n-heksana,  etil asetat, dan etanol  ditimbang sebanyak 100 mg  dan  dilarutkan  dengan  menggunakan pelarutnya masing-masing sebanyak 10 mL untuk  membuat  larutan  stok  10.000  ppm. Dari larutan stok tersebut kemudian dipipet sesuai  dengan  konsentrasinya,  sehingga konsentrasinya masing-masing larutan menjadi  5,  10,  15,  20,  25,  50,  75  dan  100 ppm.  dimasukkan  ke  dalam  botol  dan pelarutnya dibiarkan selama 24 jam.
Selanjutnya  dimasukkan  100  µL dimetil  sulfoksida  (DMSO),  2  mL  air  laut dan  10  ekor  larva  udang.  Kemudian ditambahkan  air  laut  sampai  volumenya menjadi  10  mL.  Kontrol  dibuat  dengan dimasukkan  2  mL  air  laut,  100  µL  dimetil sulfoksida, 10 ekor larva udang dan setetes larutan  ragi  roti  ke  dalam  botol,  kemudian ditambahkan  air  laut  sampai  volumenya menjadi  10  mL.  Pengamatan  dilakukan selama  24  jam  terhadap  kematian  larva udang.
Selanjutnya dihitung mortalitas dengan  cara:  akumulasi  mati  dibagi jumlah akumulasi hidup dan mati (total) dikali 100
%.  Grafik  dibuat  dengan  log  konsentrasi sebagai  sumbu  x  terhadap  mortalitas sebagai  sumbu  y.  Nilai  LC 50 merupakan konsentrasi dimana zat menyebabkan kematian  50  %  yang  diperoleh  dengan memakai  persamaan  regresi  linier  y  =  a  + bx.  Suatu  zat  dikatakan  aktif  atau  toksik bila  nilai  LC 50 <  1000  ppm  untuk  ektrak dan < 30 ppm untuk suatu senyawa (Juniarti dkk., 2009).

## 2.7. Uji Fitokimia Dengan Reagen 2.7.1. Uji Alkaloid
Ekstrak  daun  binahong  dimasukkan dalam tabung reaksi, ditambah 0,5 mL HCl 2  %  dan  larutan  dibagi  dalam  dua  tabung. Tabung  I  ditambahkan  2−3  tetes  reagen Dragendorff,  tabung  II  ditambahkan  2−3 tetes reagen Mayer. Jika tabung I terbentuk endapan  jingga  dan  pada  tabung  II terbentuk endapan kekuning-kuningan, menunjukkan adanya alkaloid.
2.7.2. Uji Flavonoid
Ekstrak  daun  binahong  dimasukkan dalam  tabung  reaksi  kemudian  dilarutkan dalam 1−2 mL metanol panas 50 %. Setelah itu ditambah logam Mg  dan 4−5 tetes HCl pekat.  Larutan  berwarna  merah  atau  jingga yang terbentuk, menunjukkan adanya flavonoid.
2.7.3. Uji Tanin
2.7.3.1. Uji dengan FeCl 3 Ekstrak daun binahong ditambahkan dengan  2−3  tetes  larutan  FeCl 3 1  %.  Jika larutan menghasilkan warna hijau kehitaman  atau  biru  tinta,  maka  bahan tersebut mengandung tanin.
2.7.3.2. Uji dengan Larutan Gelatin Ekstrak  daun  binahong  dimasukkan dalam  tabung  reaksi  ditambah  dengan larutan  gelatin.  Jika  terbentuk  endapan putih, menunjukkan adanya tanin.
2.7.4. Uji Saponin
Ekstrak  daun  binahong  dimasukkan dalam  tabung  reaksi  ditambah  10  mL  air sambil  dikocok  selama  1  menit,  apabila menimbulkan  busa  ditambahkan  2  tetes HCl  1  N,  bila  busa  yang  terbentuk  bisa
tetap stabil maka ekstrak positif mengandung saponin.
2.7.5. Uji Triterpenoid dan Steroid
Ekstrak  daun  binahong  dimasukkan dalam  tabung  reaksi,  dilarutkan  dalam  0,5 mL kloroform lalu dipanaskan dan didinginkan. Diambil 1 mL dan dimasukkan  dalam  tabung  reaksi  lalu diteteskan  pereaksi  Lieberman-burchard. Jika  hasil  yang  diperoleh  berupa  cincin kecoklatan  atau  violet  pada  perbatasan  dua pelarut  menunjukkan  adanya  triterpenoid, sedangkan  jika  terbentuk  warna  hijau kebiruan menunjukkan adanya steroid.

## 2.8. Analisis Data
Data  yang  diperoleh  dibuat  dalam bentuk tabel dan grafik, kemudian dideskripsikan  hasilnya.  Tingkat  toksisitas larva udang Artemia salina Leach dapatdiketahui  dengan  melakukan  uji  LC 50 menggunakan program MINITAB 14.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN

## 3.1. Analisis Kadar Air
Penentuan  kadar  air  ini  sangat penting  karena  jumlah  kadar  air  yang terkandung  dalam  suatu  sampel  akan berpengaruh  pada  stabilitas  dan  kualitas sampel.  Kandungan  air  dalam  sampel  akan mempengaruhi  proses  ekstraksi  senyawa aktif. Semakin rendah kadar air dalam suatu sampel,  maka  pelarut  akan  semakin  mudah untuk  mengekstrak  senyawa  aktif  dalam sampel  sehingga  kandungan  senyawa  yang dihasilkan  semakin  banyak.  Pengukuran kadar  air  ini  dilakukan  pengulangan sebanyak 3 kali untuk memperoleh keakuratan  data  dan  didapatkan  rata-rata 79,9311  %  pada  sampel  daun  binahong segar.
3.2. Preparasi Sampel
Daun  binahong  kering  berwarna hijau kecoklatan dihaluskan menjadi serbuk menggunakan  blender,  sehingga  diperoleh serbuk sampel berwarna hijau dan memiliki bau  seperti  daun  pacar,  fungsi  sampel dihaluskan  menjadi  serbuk  agar  dalam proses  pemisahan  dihasilkan  ekstrak  yang maksimal,  disamping  itu  mempermudah
proses ekstraksi. Pengayakan serbuk menggunkan  ayakan  dengan  ukuran  60 mesh,  dikarenakan  apabila  semakin  kecil bentuk  sampel  maka  semakin  besar  luas permukaan  yang diperoleh, sehingga dalam proses ekstraksi semakin efektif.
Serbuk  dengan  penghalusan  yang tinggi kemungkinan sel-sel yang rusak juga semakin  besar,  sehingga  memudahkan pengambilan  bahan  kandungan  lansung oleh bahan pelarut (Octavia, 2009).
3.3. Ekstraksi maserasi Tabel 1. Hasil maserasi serbuk daun binahong ( Anredera cordifolia (Ten) Steenis)
Pelarut Volume pada filtrat (mL) Perubahan warna filtrat Warna ekstrak pekat Berat ekstrak pekat (g)
n- heksana 86 Hijau tua
pekat menjadi hijau pucat Kuning kehijauan 1,2183 Etil asetat 125 Hijau kecoklatan menjadi hijau kecoklatan pucat Hijau  tua kecoklatan 0,9178 Etanol 168 Hijau kecoklatan menjadi hijau kekuningan pucat Hijau tua 1,1296
Berdasarkan Tabel 1 dapat diketahui bahwa  berat  ekstrak  pekat  n-heksana  dan ekstrak  pekat  etanol  menunjukkan  nilai yang  hampir  sama  besarnya,  hal  ini menunjukkan  bahwa  kandungan  senyawa- senyawa  non  polar  dan  polar  dalam  daun binahong  lebih  besar  daripada  senyawa- senyawa  semipolar.  Hasil  ekstrak  pekat yang diperoleh pada masing-masing pelarut digunakan  untuk  uji  selanjutnya,  yaitu  uji toksisitas  dengan  menggunkan  Artemia salina  Leach  dan  uji  fitokimia  dengan menggunakan reagen.
3.4. Uji  Toksisitas  Menggunakan  Larva Udang Artemia salina Leach
3.4.1. Penetasan Telur
Preoses  penetasan  Artemia  salina Leach  ada  beberapa  tahap  yaitu  tahap hidrasi,  pecahnya  cangkang  dan  tahap
payung  atau  tahap  pengeluaran.  Tahap hidrasi terjadi penyerapan air sehingga telur yang  diawetkan  dalam  bentuk  kering tersebut  akan  menjadi  bulat  dan  aktif bermetabolisme. Tahap selanjut  yaitu tahap pecahnya  cangkang  yang  disusul  dengan tahap  pecahnya  payung  yang  terjadi beberapa saat sebelum naupil (larva) keluar dari cangkang.
Artemia  yang  baru  menetas  disebut dengan nauplius. Nauplius berwarna orange,  berbentuk  bulat  lonjong  dengan panjang  sekitar  400  mikron,  lebar  sekitar 170  mikron,  dan  berat  0,002  mg.  Ukuran- ukuran tersebut sangat
tergantung
berdasarkan strainnya.
3.4.2. Uji Toksisitas
Perlakuan  uji  toksisitas  dilakukan  3 kali  pengulangan  pada  masing-masing ekstrak  sampel.  Larutan  uji  dibuat  dari larutan stok 10000 ppm dengan mengambil 5 µL, 10 µL, 15 µL, 20 µL, 25 µL, 50 µL, 75 µL dan 100 µL masing ekstrak ke dalam botol  vial.  Selanjutan  pelarut  masing- masing  ekstrak  diuapkan  sampai  kering dalam  desikator  agar  kematian  larva  tidak dipegaruhi  pelarutnya.  Setelah  pelarutnya mengering,  ditimbahkan  dengan  100  µL DMSO  (dimetil  sukfoksida)  dan  sedikit  air laut kemudian dilarutkan sampai ekstraknya larut  seluruhnya.  Pelarutan  ekstrak  dengan air laut sering menimbulkan masalah karena adanya perbedaan tingkat kepolaran, ekstrak  tidak  mampu  larut  dengan  air  laut sehingga digunakan
DMSO untuk melarutkannya.  DMSO  digunakan  sebagai sulfaktan  karena  ekstrak  tidak  dapat  larut dalam  air  laut.  Surfaktan  merupakan senyawa  yang  memiliki  ujung  hidrofilik dan  hidrofibik  sehingga  dapat  melarutkan ekstrak dengan air laut.
Ekstrak  yang  telah  larut  denga  air laut  selanjutnya  dipindahkan  dalam  labu ukur  10  mL.  Larva  udang  Artemia  salina Leach selanjutnya dimasukkan sebanyak 10 ekor ke dalam labu ukur yang berisi ekstrak yang  telah  larut  dengan  air  laut.  Kemudian ditambahkan  1  tetes  larutan  ragi  roti  dan ditambahkan  denga  air  laut  sampai  tanda batas.  Ragi  roti  merupakan  makanan  untuk
artemia, dibuat dalam bentuk larutan karena artemia  hanya  dapat  menelan  makanan yang berukuran kecil yaitu kekurang dari 50 mikron dan artemia akan menelan makanannya secara langsung.
Kontrol  dibuat  dengan  cara  yang sama  yaitu  denga  membuat  larutan  yang sama kecuali penambahan ekstrak. Hasil uji toksisitas  ketiga  ekstrakdan  hasil  analisa dengan program Minitab 14 dengan tingkat kepercayaan  95  %  serta  Tabel  data kematian larva dapat dilihat pada Lampiran 6.  Kurva  mortalitas  larva  udang  dapat dilihat pada Gambar 1, 2 dan 3.
konsentrasi n-heksana Pe rc en t 2500 2000 1500 1000 500 0 -500 -1000 99 95 90 80 70 60 50 40 30 20 10 5 1 Table of Statistics M ean 175.800 S tDev 150.711 M edian 175.800 IQ R 203.306 Probability Plot for mortalitas Probit Data - ML Estimates Normal - 95% CI
Gambar 1. Kurva mortalitas larva udang Artemia salina Leach ekstrak n-heksana konsentrasi etil asetat P e rc e n t 500 400 300 200 100 0 -100 -200 99 95 90 80 70 60 50 40 30 20 10 5 1 Table of Statistics Mean 106.992 StDev 81.1130 Median 106.992 IQ R 109.420 Probability Plot for mortalitas Probit Data - ML Estimates Normal - 95% CI
Gambar 2. Kurva mortalitas larva udang Artemia salina Leach ekstrak etil asetat konsentrasi etanol P e rc e n t 300 200 100 0 -100 -200 -300 99 95 90 80 70 60 50 40 30 20 10 5 1 Table of Statistics Mean 7.35702 StDev 74.7636 Median 7.35702 IQ R 100.855 Probability Plot for mortalitas Probit Data - ML Estimates Normal - 95% CI
Gambar 3. Kurva mortalitas larva udang Artemia salina Leach ekstrak etanol
Gambar  1,  2  dan  3  tersebut menunjukkan  bahwa  semakin  besar  nilai konsentrasi  masing-masing  ekstrak  maka
mortalitas  terhadap  Artemia  juga  semakin besar.  Daerah  di  sebelah  kanan  kurva menunujukkan presentasi kematian Artemia sedangkan  daerah  di  sebelah  kiri  kurva menunjukkan  presentasi  Artemia  yang masih  bertahan  hidup  pada  masing-masing konsentrasi ekstrak pelarut.
Adanya penambahan masing- masing  ekstrak  meyebabkan  kematian Artemia yang mengalami disorientasi gerak (geraknya tidak beraturan). Hal ini membuktikan  adanya  sifat  toksik  dari masing-masing  ekatrak  daun  binahong dengan  adanya  kematian  pada  hewan  uji Artemia.  Dan  berdasarkan  kurva  di  atas, ketiga  ekstrak  n-heksana,  etil  asetat  dan etanol,  masing-masing  diperoleh  nilai  LC 50 sebesar  175,800  ppm,  106,992  ppm  dan 7,35702 ppm yang dapat dilihat dari median pada  masing-masing  kurva  di  atas.  Hasil LC 50 ketiga  ekstrak  tersebut  menunjukkan bahwa  tingkat  toksisitas  senyawa  dalam ekstrak  etanol  lebih  besar  daripada  ekstrak n-heksana  dan  ekstrak  etil  asetat  dan  dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2.  Hasil  Nilai  LC 50 pada  Masing- masing Ekstrak Sampel ekstrak Nilai LC 50 (ppm) n-heksana 175,800 etil asetat 106,992 Etanol 7,35702 Meyer (1982) dalam Farihan (2006) melaporkan bahwa suatu
ekstrak menunjukkan  aktivitas  ketoksikan  dalam BSLT  jika  ekstrak  dapat  menyebabkan kematian  50  %  hewan  uji  pada  konsentrasi kurang  dari  1000  ppm.  Pernyataan  di  atas menunjukkan ketiga ekstrak daun binahong bersifat  toksik  terhadap  Artemia    karena memiliki nilai LC 50 < 1000 ppm.
Hasil  LC 50 ketiga  ekstrak  tersebut menunjukkan  bahwa  tingkat  toksisitas senyawa dalam ekstrak etanol > ekstrak etil asetat  >  ekstrak n-heksana.  Ketoksikan ekstrak etanol lebih toksik daripada ekstrak n-heksana  dan  etil  asetat  dikarenakan kandungan  senyawa  yang  terdapat  pada
ekstrak etanol merupakan senyawa- senyawa  yang  mempunyai  peran  penting sebagai antimikroba/antibiotik.

## 3.5. Uji Fitokimia
Tabel 3. Hasil  pengamatan  uji  fitokimia
terhadap Ekstrak etanol Golongan Senyawa Ekstrak Etanol Alkaloid ++ Flavonoid ++ Tanin + Triterpenoid/Steroid  + Saponin ++ Keterangan:   tanda ++: terkandung
senyawa lebih banyak/ warna pekat tanda +: terkandung senyawa/warna muda
Hasil  identifikasi  senyawa  aktif berdasarkan uji fitokimia dengan menggunakan reagen menunjukkan ketoksikan  disebabkan  adanya  senyawa aktif  golongan  alkaloid,  flavonoid,  tanin, triterpenoid/steroid  dan saponin.  Pada daun binahong  kandungan  metabolit  sekunder yang  tinggi  adalah  flavonoid,  alkoloid  dan saponin. Kandungan senyawa ini mempunyai  aktifitas  sebagai  antioksidan dan antimikroba/antibiotik, sehingga sangat baik  dipakai  bahan  baku  untuk  obat tradisional.

## IV. KESIMPULAN DAN SARAN
Kesimpulan
Masing-masing ekstrak daun binahong (Anredera cordifiola (Ten) Steenis) memiliki tingkat toksisitas terhadap larva udang Artemia salina Leach, ditunjukkan dengan nilai LC 50 < 1000 ppm. Tingkat  toksisitas  ekstrak  etanol  >  ekstrak etil asetat > ekstrak n-heksana yaitu dengan nilai  LC 50 sebesar    7,35702  ppm,  106,992 ppm dan 175,800 ppm.
Uji  fitokimia  pada  ekstrak  etanol golongan  senyawa  yang  menunjukkan keberadaan  golongan  senyawa  alkaloid, flavonoid,  tanin,  triterpenoid/steroid  dan saponin.
Saran
Hasil uji pendahuluan dengan metode  BSLT  menunjukkan  dalam  ketiga variasi  ekstrak  pelarut  daun  binahong memiliki  potensi  bioaktivitas,  sehingga perlu dilakukan pengujian bioaktivitas lebih lanjut  terhadap  tanaman  ini.  Jika  akan dilakukan  penelitian  selanjutnya  untuk mengetahui  masing-masing  senyawanya perlu dilakukan uji KLTP dengan penacarian eluen yang terbaik.

## V. DAFTAR PUSTAKA
Astuti  SM,  Mimi  SAM,  Retno  ABM.  dan Awalludin R. 2011.a. Determination
of Saponin Compound from
Anredera  cordifolia (Ten)  Steenis (Binahong)  to  potential  treatment for  several  deseases. Journal  of
Agricultural Science, Canadian
Center  of  Science  and  Education. Vol 3.No 4, December, 2011 pp 224 -232. Farihah. 2006. Uji Toksisitas Ekstrak Daun Ficus benjamina L terhadap Artemia salina Leach dan Profil Kromatografi  Lapis  Tipis. Skripsi Diterbitkan. Surakarta: Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta.
Juniarti,  Delvi  O.,  dan  Yuhernita.  2009.
Kandungan  Senyawa  Kimia,  Uji
Toksisitas (Brine  Shrimp  Lethality
Test) Dan Antioksidan (1,1- diphenyl-2-pikrilhydrazyl) Dari Ekstrak Daun Saga ( Abrus precatorius L. ). Jurnal Kimia.
Jakarta: Fakultas Kedokteran.
Universitas YARSY.
Manitto P. 1992. Biosintesis Produk Alami.
Penerjemah Koen Sumardiyah.
Semarang: IKIP Press. Hal. 70-79. Manoi,  F.  2009. Binahong  (Anredera cordifolia)(Ten)  Steenis  Sebagai
Obat.  Jurnal  Warta  Penelitian  Dan Pengembangan Tanaman Industri .Volume 15 Nomor 1:3. Meyer,  B.N.,  Ferrigni,  N.R.,  Putnam,  J.E.,
Jacobsen,  L.B.,  Nichols,  D.E.,  dan
McLaughin, J.L., 1982, Brine
Shrimp:  A  Convenient  General Bioassay for Active Plant Constituent, Planta  Medica .  45:31-
34.
Rios  JL.  dan  Rico  MC.  2005. Medicinal Plants  and  Antimicrobial  Activity . Respective paper.