## ANALISA FLAVONOID DARI EKSTRAK ETANOL 96%
KULIT BUAH OKRA MERAH (Abelmoschus esculentus L. Moench) SECARA KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS DAN SPEKTROFOTOMETRI UV-VIS
ANALYSIS OF FLAVONOIDS FROM 96% ETHANOL EXTRACT FRUIT LEATHER RED OKRA (Abelmoschus esculentus L. Moench) IN THIN LAYER CHROMATOGRAPHY AND

## SPECTROPHOTOMETRY UV-VIS
Nia Lisnawati *, Indri Astuti Handayani, Ni’matul Fajrianti Akademi Farmasi IKIFA Email: aqilputranida@gmail.com

## ABSTRAK
Telah dilakukan penelitian tentang Analisa Flavonoid dari Ekstrak Etanol 96%  Kulit  Buah  Okra  Merah  Secara  Kromatografi  Lapis  Tipis  dan Spektrofotometer UV-Vis. Tujuan penelitian ini untuk menganalisa kandungan kulit buah  okra  merah  (Abelmoschus  esculentus  L.  Moench)  dengan  menggunakan metode kromatografi lapis tipis (KLT) dibawah sinar UV dan spektrofotometri UV- Vis.  Baku  pembanding  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  Larutan Standar Rutin Kuersetin.
Hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan  dengan  metode  kromatografi  lapis tipis  didapat  nilai  Rf  sebesar  0,81  dan  menghasilkan  warna  orange.  Dan  hasil penelitian  yang  dilakukan  dengan  metode  spektrofotometri  UV-Vis  didapat 333,117 mg.L-1 atau 421,629 mg.kg-1 atau 0,84339 %.
Kesimpulan dari penelitian ini adalah bahwa ekstrak etanol 96% kulit buah okra merah (Abelmoschus esculentus L. Moench) positif (+) mengandung flavonoid dengan kadar sebesar 0,84339%.
Kata Kunci : Kulit Buah Okra Merah, Flavonoid, Kuersetin, Kromatografi Lapis Tipis (KLT) dan Spektrofotometri  UV-Vis.

## ABSTRACT
Has  done  research  on  flavonoids  Analysis  of  Ethanol  Extract  96%  Fruit Leather Red Okra In Thin Layer Chromatography and Spectrophotometer UV-Vis. The  purpose  of  this  study  was  to  analyze  the  content  of  the  fruit  skin  red  okra (Abelmoschus  esculentus  L.  Moench)  by  using  the  method  of  thin  layer chromatography (TLC) under UV light and spectrophotometry UV-Vis. Reference standards used in this study is the Standard Solution Routine Quercetin.
The results of the research that has been done by the method of thin layer chromatography obtained Rf values of 0.81 and produces the color orange. And the results  of  research  conducted  by  spectrophotometry  UV-Vis  method  obtained 333,117 mg.L-1 or 421,629 mg.kg-1 or 0,84339 %.
The conclusion from this study is that the 96% ethanol extract of the fruit leather  red  okra  (Abelmoschus  esculentus  L.  Moench)  positive  (+)  contains flavonoids with levels of 0,84339 %.
Key Words :  96%  Ethanol  Extract  Fruit  Leather  Red  Okra,  Flavonoids, Quercetin, Thin Layer Chromatography (TLC) and Spectrophotometry UV-Vis.

## PENDAHULUAN
Masyarakat  Indonesia  lebih memilih
menggunakan obat
tradisional dibandingkan dengan
menggunakan  obat  sintetik  karena pengobatan
tradisional lebih menguntungkan baik dari segi ekonomi  maupun  efek  samping, seperti  buah  dan  tumbuhan  yang merupakan  salah  satu  jenis  makanan yang  memiliki  kandungan  gizi, vitamin  serta  mineral  yang  pada umumnya sangat baik untuk dikonsumsi  setiap  hari  (Yohana  & Yovita, 2012).
Dari  sekian  banyak  jenis tanaman  yang  tumbuh  di  Indonesia, okra (Abelmoschus esculentus L.
Moench) adalah  salah  satu  tanaman yang  menarik  untuk  diteliti.Okra (Abelmoschus esculentus L. Moench) termasuk
tanaman
genus Abelmoschus dari  family Malvaceae (kapas-kapasan). Tanaman ini memiliki  julukan Lady's  Finger karena bentuk buahnya yang panjang dan  meruncing  di  bagian  ujungnya, seperti jari-jari lentik seorang wanita.
Banyak  pendapat  mengenai manfaat okra (Abelmoschus esculentus L. Moench), kemungkinan disebabkan karena okra mengandung komponen metabolit sekunder seperti alkaloid,  terpenoid,  flavonoid,  dan lain-lain.
Berdasarkan sejumlah penelitian pada tanaman obat dilaporkan  bahwa  banyak  tanaman obat  yang  mengandung  antioksidan dalam  jumlah  besar.  Salah  satunya seperti  buah  Okra,  oleh  karena  itu sangatlah  penting  untuk  dilakukan pengujian  senyawa  fitokimia  yaitu untuk memperoleh senyawa aktif dari suatu  tumbuhan  tersebut.  Flavonoid adalah  senyawa  fenol  alam  yang terdapat dalam hampir semua tumbuhan (Neldawati dkk., 2013).
Senyawa-senyawa  flavonoid merupakan senyawa alami. Lebih dari 4.000  flavonoid  telah  diidentifikasi dan  dikelompokkan  sesuai  dengan struktur  molekulnya.  Salah  satu  sifat
yang dapat menggambarkan flavonoid adalah kemampuan flavonoid  untuk  beraksi  sebagai antioksidan.  Flavonoid  juga  dapat mereduksi  inflamasi  dan  penyakit jantung  koroner . Senyawa-senyawa ini merupakan zat warna merah, ungu dan biru dan sebagai zat warna kuning yang  ditemukan  dalam  tumbuh- tumbuhan (Asnah, dkk.)
Berdasarkan  latar  belakang diatas peneliti bertujuan untuk mengetahui  kandungan  flavonoid
yang  terdapat  Pada  Ekstrak  Etanol 96%  Kulit  Buah  Okra  Merah (Abelmoschus esculentus L. Moench) secara kualitatif menggunakan kromatografi  lapis  tipis  dan  secara kuantitatif menggunakan metode spektofotometri UV-VIS.

## METODOLOGI PENELITIAN
Bahan
n-heksana,  n-butanol,  asam asetat,  etanol  96%  dan  standar  rutin kuersetin  (E.Merck),  aquadest,  buah Okra  dari  koleksi  peneliti  yang ditanam  di  Kebun  Daerah  Kawasan Industri, Jakarta Timur.
Alat
Pisau antikarat, loyang, oven, neraca  analitik,  blender,  ayakan, seperangkat  sokhlet,  kromatografi lapis tipis (KLT) kresgel 60 F 254 E. Merck,  Chamber  KLT,  Lampu  UV 366  nm,  Spektrofotometer  UV-Vis Hitachi seri U-2800.

## Prosedur
Pengumpulan Simplisia
Buah  okra  yang  digunakan adalah  buah  okra  yang  berwarna merah  dan  tidak  cacat.Pemilihan sampel  harus  diperhatikan  dengan cermat untuk menghindari komposisi
kimia sampel yang tidak representatif. Buah  yang  tidak  utuh  (cacat)  telah mengalami  kerusakan  pada  jaringan sel  sehingga  komposisinya  akan berbeda dengan komposisi buah yang utuh.
Kulit  buah  okra  dipisahkan dari  daging  dan  bijinya,  kemudian dikeringkan  dalam  oven  180 0 C
kemudian dihaluskan dengan menggunakan  blender,  lalu  diayak untuk mendapatkan serbuk halus.

## Ekstraksi Sokhletasi
Sebanyak  20  g  serbuk  kering kulit  buah  okra.  Kemudian  dikemas dengan  menggunakan  kertas  saring. Ekstraksi dilakukan dengan menggunakan  soxhlet  melalui  2 tahap. Tahap pertama dengan pelarut n-heksana  selama  5  jam.  Residu didiamkan  selama  1  malam  dalam keadaan  terendam  n-heksana.  Fraksi n-heksana diambil dan residu diekstraksi dengan etanol 96% selama 10  jam.  Residu  didiamkan  selama  1 malam  dalam  keadaan  terendam
dalam etanol 96%. Penelitian difokuskan  pada  ekstrak  etanol  dan fraksi  yang  diperoleh  kemudian difraksinasi  dengan  kromatografi lapis tipis.
Fraksinasi  ekstrak  etanol  96% mengggunakan Kromatografi

## Lapis Tipis
Plat  KLT  yang  digunakan adalah  kresgel  G  60  F  254  4x10cm. Eluen  yang  digunakan  adalah  fase atas n-butanol : asam asetat : air, 9 : 2 :  6  (v/v)  atau  BAA,  kemudian dijenuhkan. Untuk mendeteksi bercak dilakukan dengan menggunakan lampu  UV  pada  panjang  gelombang 366  nm.  Bercak  ditandai  dengan menggunakan pensil. Kemudian hitung harga Rf.
Penentuan  kandungan  Flavonoid dalam  ekstrak  etanol  96%  Kulit
Buah Okra menggunakan Spektrofotometri Standar yang digunakan adalah kuersetin. Mula-mula ditimbang 10 mg kuersetin kemudian dimasukkan dalam gelas piala 100 ml dan dilarutkan dengan etanol 96% ad tanda  batas  dan  diaduk  hingga homogen.
Larutan standar 6 ppm, 8 ppm, 10 ppm, 12 ppm, dan 15 ppm dibuat dengan dipipet dengan teliti 6, 8, 10, 12,  dan  15  ml  dari  larutan  standar induk  100  ppm  masing-masing diencerkan    dengan    pelarut   etanol
Makalah diterima: 9 Februari 2016, Diterima untuk diterbitkan: 25 Februari 2016, diterbitkan: 1 Maret 2016
96% dalam labu takar 100 ml sampai tanda  batas  dan  dikocok  hingga homogen.  Blanko  yang  digunakan adalah etanol 96% murni.
Optimasi  panjang  gelombang dilakukan untuk menentukan panjang gelombang maksimum yang akandigunakan  dalam  pengukuran menggunakan  spektrofotometer  UV- Vis  dengan  menggunakan  salah  satu larutan standar rutin. Langkah
selanjutnya adalah penentuan absorbansi  larutan  standar  pada panjang gelombang maksimum dilanjutkan dengan
penentuan absorbansi sampel
Analisa Data
Analisa  data  yang  digunakan adalah  analisa  data  presentatif.  Dari data  kurva  kalibrasi  dapat  diperoleh nilai a, b, dan r menggunakan regresi linier.  Setelah  itu  diolah  dengan menggunakan rumus : Y = a + bx Kemudian  hitung  kadar  dengan rumus Kadar % = x.fp

## HASIL DAN PEMBAHASAN Ekstraksi sokhlet
Berdasarkan metode ekstraksi sokhlet yang digunakan dalam penelitian  ini  telah  diperoleh  hasil
pengamatan  yang  dapat  ditunjukkan pada Tabel 1.
Dari tabel di atas didapat data bahwa  ekstrak  n-heksana  kulit  buah okra  merah  berwarna  kuning  emas. Hal  ini  disebabkan  karena  ekstrak kulit  buah  okra  merah  mengandung senyawa-senyawa non polar. Sedangkan  ekstrak  etanol  96%  kulit buah  okra  merah  berwarna  hijau kecoklatan. Hal ini disebabkan karena ekstrak  kulit  buah  okra  merah mengandung  senyawa  polar.  Ekstrak etanol  96%  inilah  yang  selanjutnya akan  diidentifikasi  adanya  senyawa flavonoid.
Penentuan  kandungan  flavonoid menggunakan Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
Berdasarkan identifikasi senyawa  flavonoid  kulit  buah  okra merah yang dilakukan dengan metode kromatografi  lapis  tipis  (KLT)  telah diperoleh  hasil  pengamatan  yang dapat ditunjukkan pada gambar1.
Berdasarkan pembacaan absorbansi  standar  kuersetin,  maka diperoleh  kurva  kalibrasi  larutan standar  kuersetin  yang  dilakukan pada panjang  gelombang  maksimum
yaitu 257 nm  yang ditunjukkan pada gambar 2.
Besarnya nilai R 2 0,9998, nilai ini mendekati angka 1 sehingga dapat dikatakan bahwa absorbansi merupakan  fungsi  yang  besarnya berbanding  lurus  dengan  konsentrasi dan  mengikuti  persamaan  regresi linear sebagai berikut:
y = a + bx
dan diperoleh persamaan garis sebagai berikut:
y = 0,057 + 0,077 x x : konsentrasi (C) mg.L -1 y : absorbansi (A)
Persamaan pada kurva kalibrasi  standar  kuersetin  tersebut digunakan sebagai pembanding dalam analisis kuantitatif pada pengukuran kandungan senyawa flavonoid  ekstrak  etanol  96%  kulit buah  okra  merah.Berdasarkan  hasil pengukuran  pada  sampel  kulit  buah okra diperoleh data yang ditunjukkan pada Tabel 2.
Absorbansi tersebut dimasukkan kepersamaan  y  =  0,057  +  0,077  x, maka diperoleh kadar flavonoid pada kulit  buah  merah  yang  ditunjukkan pada tabel 3.
Tabel 1. Data pengamatan warna ekstrak n-heksana dan etanol 96%
Sampel Ekstrak n-heksana Ekstrak etanol 96% Kulit buah okra Kuning emas
Hijau kecoklatan
Gambar 1. Hasil KLT kulit buah okra
Makalah diterima: 9 Februari 2016, Diterima untuk diterbitkan: 25 Februari 2016, diterbitkan: 1 Maret 2016
Gambar 2. Kurva kalibrasi standar kuersetin

## Tabel 2. Penentuan absorbansi kulit buah okra merah
Sampel Absorbansi Kulit buah okra merah 0,570

## Tabel 3. Kadar flavonoid pada kulit buah okra
Sampel Konsentrasi (ppm) Pengenceran (mL) Kadar (ppm) Kulit buak okra merah 6,66234 100 333,117 Hasil  pengukuran  kandungan flavonoid dengan menggunakan
metode  spektrofotometer  UV-Vis menunjukkan bahwa kandungan
senyawa  flavonoid  adalah  333,117
ppm  (mg.L -1 )  Konsentrasi  yang diperoleh dapat  dikonversikan dalam satuan mg.kg -1 dengan menggunakan rumus:
𝐾𝑎𝑑𝑎𝑟 = 𝑘𝑎𝑑𝑎𝑟 𝑑𝑎𝑙𝑎𝑚 1 𝑚𝑔. 𝐿 −1 × 1,2658 𝑚𝑔. 𝑘𝑔 −1 1 𝑚𝑔. 𝐿 −1
Dengan  demikian  prosentase  massa  senyawa  flavonoid  dapat  ditentukan dengan rumus:
%𝐹𝑙𝑎𝑣𝑜𝑛𝑜𝑖𝑑 = 𝑘𝑎𝑑𝑎𝑟 𝑚𝑔
1.000.000 𝑚𝑔 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝑘𝑒𝑟𝑖𝑛𝑔 × 𝑏𝑎𝑛𝑦𝑎𝑘𝑛𝑦𝑎 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 × 100%
Hasil  konversi  perolehan  kandungan  senyawa  flavonoid  dari  hasil perhitungan diatas dapat ditunjukkan pada Tabel 4.
Tabel 4. Konversi kadar flavonoid pada ekstrak etanol kulit buah okra merah
Sampel Kadar (mg.L -1 ) Kadar (mg.kg -1 ) %Flavonoid Kulit buah okra merah 333,117 421,659 0,84339 Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa kandungan
senyawa  flavonoid  pada  ekstrak
etanol  96%  kulit  buah  okra  merah adalah 421,659 mg.kg-1 atau
0,84339%.
y = 0,0779x - 0,057 R² = 0,9998 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2 0 5 10 15 20

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian maka dapat disimpulkan bahwa Hasil pengukuran  kandungan  flavonoid secara kualitatif  yang terdapat  dalam ekstrak  etanol  96%  kulit  buah  okra merah (Abelmoschus  esculentus  L.
Moench) menggunakan metode
Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT)
adalah positif (+) mengandung senyawa flavonoid yang
menghasilkan  warna  orange  dengan nilai  Rf  0,81.  Hasil  pengukuran kandungan flavonoid secara kuantitatif  yang  terdapat  dalam ekstrak  etanol  96%  kulit  buah  okra merah (Abelmoschus  esculentus  L. Moench) menggunakan metode
Spektrofotometer  UV-Vis  adalah 333,117 mg.L-1 atau 421,629 mg.kg-
1 atau 0,84339%.

## DAFTAR PUSTAKA
Asnah  M.,  Ibrahim  I.,  Dahli  M., Hardamawati. Analisis Senyawa  Flavonol  Ekstrak  n- Butanol  Biji  Pinang  ( Areca catechu L.) Metode Spektrofotometri  UV  Visibel. Fakultas  Farmasi  Universitas Hasanuddin Makassar. Bismo  S.,  2006,  Teknologi  Radiasi Sinar  Ultra-Ungu  (UV)  dalam Rancang Bangun Proses Oksidasi Lanjut untuk Pencegahan  Pencemaran  Air dan  Fasa  Gas,  Modul  Kuliah S2, Fakultas Teknik Universitas Indonesia,  Departemen  Teknik Kimia. Junaidi. 2013. Buku Panduan Prosedur  Praktikum  Farmasi Fisika. Akademi Farmasi IKIFA. Neldawati, Ratnawulan dan Gusnedi. Jurusan Fisika Universitas Negeri  Padang,  2013,  Analisis Nilai Absorbansi dalam Penentuan  Kadar  Flavonoid untuk  Berbagai  Jenis  Daun Tanaman  Obat,  Karya  Tulis Ilmiah, FMIPA UNP Air Tawar Barat, Padang. Nur. 2012. Analisa Konsistensi Kadar Ketoprofen Suppositoria Dengan Nictrose Spektrofotometri Di PT.X. Jurusan Farmasi Poltekkes Kemenkes Jakarta II. Rohyami, Y., 2008, Penentuan Kandungan Flavonoid dari Ekstrak  Metanol  Daging  Buah Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa Scheff Boerl). FMIPA, Yogyakarta
Yohana  &  Yovita.  2012.  Buah,
sayuran dan tanaman obat, Setia
Kawan Prima.