## NARRATIVE REVIEW: PARAMETER DALAM METODE ANALISIS UNTUK IDENTIFIKASI RHODAMIN B DALAM LIPSTIK
Nurlita Dwi Putri Prihasti 1 , Munir Alinu Mulki 1 , Muhammad Naufal Nurhadi Hidayat 1 ( 1 Program Studi Farmasi, Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Singaperbangsa Karawang, Jawa Barat, Indonesia, 41361)
*Email: munir.alinu@fikes.unsika

## Abstract
Rhodamine B is a synthetic dye used in the paper and textile industries, attracting attention due  to  its  potential  health  hazards.  It  is  used  in  various  cosmetic  products,  although  the Regulation of the Minister of Health of Indonesia No. 445/MENKES/PER/V/1998 prohibits its use in cosmetics due to risks of irritation, liver damage, and cancer. This article reviews the parameters of analytical methods for identifying Rhodamine B in lipstick. A narrative review was  conducted  using  Google  Scholar  as  a  database  over  the  past  10  years.  The  KLT method  was  found  to  be  more  widely  used  than  HPLC  or  UV-Vis  Spectrophotometry. Differences  in  Rf  values  in  KLT  are  due  to  variations  in  the  stationary  phase.  Parameter variations  in  HPLC  system  suitability  tests  are  caused  by  operational  conditions,  sample conditions, and instrument performance. Analytical methods for identifying Rhodamine B in lipstick include KLT, HPLC/KCKT, and UV-Vis Spectrophotometry. It is concluded that each method  has  specific  parameters  that  must  be  met:  KLT  is  qualified  if  the  Rf  value comparison  (standard  vs.  sample)  is ≤ 0.2;  HPLC/KCKT  requires  system  suitability  and validation  tests;  UV-Vis  Spectrophotometry  needs  validation  test  parameters.  KLT  is preferred due to easy sample preparation and lower costs compared to HPLC and UV-Vis Spectrophotometry.  It  is  recommended  to  consider  necessary  components  when  using these methods to maximize test results.
Keywords: rhodamine B; lipstick; methods; parameters

## Abstrak
Rhodamin B adalah pewarna sintetis yang digunakan dalam industri kertas dan tekstil, yang menarik  perhatian  karena  potensi  bahayanya  bagi  kesehatan.  Rhodamin  B  digunakan dalam  berbagai  produk  kosmetik,  meskipun  Peraturan  Menteri  Kesehatan  RI  No. 445/MENKES/PER/V/1998  melarang  penggunaannya  dalam  kosmetik  karena  risiko  iritasi, kerusakan hati, dan kanker. Artikel ini mengulas parameter metode analisis untuk identifikasi Rhodamin B dalam lipstik. Tinjauan naratif dilakukan dengan menggunakan Google Scholar sebagai  basis  data  selama  10  tahun  terakhir.  Metode  KLT  ditemukan  lebih  banyak digunakan  daripada  HPLC  atau  Spektrofotometri  UV-Vis.  Perbedaan  nilai  Rf  pada  KLT disebabkan  oleh  variasi  fase  diam.  Variasi  parameter  dalam  uji  kesesuaian  sistem  HPLC disebabkan oleh kondisi operasional, kondisi sampel, dan kinerja instrumen. Metode analisis untuk  mengidentifikasi  Rhodamin  B  dalam  lipstik  meliputi  KLT,  KCKT/HPLC,  dan Spektrofotometri  UV-Vis.  Dapat  disimpulkan  bahwa  setiap  metode  memiliki  parameter spesifik  yang  harus dipenuhi:  KLT memenuhi  syarat  jika  perbandingan  nilai  Rf  (standar  vs sampel) ≤ 0,2;  HPLC/KCKT  membutuhkan  kesesuaian  sistem  dan  uji  validasi; Spektrofotometri  UV-Vis  membutuhkan  parameter  uji  validasi.  KLT  lebih  disukai  karena persiapan  sampel  yang  mudah  dan  biaya  yang  lebih  rendah  dibandingkan  dengan  HPLC dan  Spektrofotometri  UV-Vis.  Disarankan  untuk  mempertimbangkan  komponen  yang diperlukan saat menggunakan metode ini untuk memaksimalkan hasil pengujian.
Kata Kunci: rhodamin B; lipstik; metode; parameter

## PENDAHULUAN
Lipstik  adalah  kosmetik  penting  untuk  meningkatkan  penampilan,  mewarnai  bibir,  dan memberikan efek artistik serta estetika pada wajah. Formulanya terdiri dari minyak,  lemak, lilin, asetogliserida, zat pewarna, surfaktan, pengawet, pewangi, dan antioksidan 1 . Pewarna dalam lipstik penting karena menarik konsumen. Sumber pewarna lipstik ada dua: alami dari akar, buah, dan daun tanaman, serta sintetis dari  reaksi senyawa kimia. Produsen kadang menggunakan  pewarna  berbahaya.  Rhodamin  B,  pewarna  sintetis  yang  dilarang  untuk makanan  dan  kosmetik,  biasanya  digunakan  untuk  kertas,  tekstil,  atau  tinta.  Rhodamin  B berbentuk serbuk kristal tak berbau berwarna merah keunguan dan berpendar di bawah UV.
Berdasarkan  Peraturan  MenKes  RI  No.445/MENKES/PER/V/1998  tentang  bahan,  zat warna,  substratum,  zat  pengawet  dan  tabir  surya  pada  kosmetik  dan  Keputusan  Kepala BPOM  No.HK.00.05.4.1745  tentang  kosmetik,  penggunaan  Rhodamin  B  dalam  kosmetik dilarang karena membahayakan kesehatan 2 . Dilansir dari 3 ,  tahun 2014  BPOM menemukan 9.817  produk  kosmetik  tidak  standar,  termasuk  lipstik  dengan  kandungan  Rhodamin  B. Tahun  2023,  dirilis  daftar  kosmetik  berbahaya  berjumlah  181  produk  yang  3,86% diantaranya  mengandung  Rhodamin  B 4 .  Rhodamin  B  dapat  menyebabkan  iritasi  saluran napas,  bersifat  karsinogenik,  dan  menyebabkan  kerusakan  hati  jika  terakumulasi 5 .  Oleh karena itu, penting dilakukan analisis zat kimia dalam produk kosmetik, khususnya lipstik.
Analisis bahan kimia pada kosmetik dapat dilakukan secara kualitatif ataupun kuantitaitf. Kromatografi  Lapis  Tipis,  Kromatografi  Cair  Kinerja  Tinggi  (KCKT)  atau High  Performance Liquid Chromatography (HPLC), dan Spektrofotometri UV-Vis adalah beberapa teknik yang umum  untuk  analisis  Rhodamin  B  dalam  lipstik.  Pada  setiap  metode  yang  digunakan terdapat parameter  yang  berguna untuk memastikan  analisis  dilakukan dengan  akurat  dan sesuai  dengan  standar  kualitas  yang  ditetapkan 6 .  Penulisan  artikel review ditujukan  untuk menelaah parameter pada metode analisis identifikasi keberadaan Rhodamin B dalam lipstik.

## METODE PENELITIAN
Desain studi artikel review ini adalah narrative review , yang merupakan tinjauan pustaka dari hasil penelitian sebelumnya dalam bentuk narasi. Sumber artikel diambil dari database elektronik Google  Scholar ,  mencakup  bahasan  tentang  parameter  metode  analisis  untuk identifikasi  kontaminan  Rhodamin  B  dalam  lipstik.  Data  dikumpulkan  dengan  kata  kunci “ Parameter Metode  analisis  Rhodamin  B  dalam  lipstik” pada  periode  10  tahun  terakhir (2014-2024)  dan  diteukan  13  artikel  yang  memenuhi  kriteria  inklusi.  Penilaian  artikel dilakukan dengan menyaring judul, abstrak, dan isi yang sesuai kriteria inklusi. Artikel yang sesuai kriteria inklusi yaitu artikel-artikel yang memuat parameter metode analis Rhodamin B dalam lipstik, sementara artikel yang tidak memuat parameter metode analisis Rhodamin B dalam lipstik dikecualikan.

## HASIL PENELITIAN
Bahaya  Rhodamin  B  untuk  kesehatan  seperti  dapat  menyebabkan  kanker.  Identifikasi perlu  dilakukan  dengan  teknik  yang  sesuai.  Dalam  menentukan  teknik  analisis  yang  akan digunakan  diperlukan  pengetahuan  tentang  parameter,  keunggulan,  serta  kelemahan masing-masing teknik.
Tabel 1. Metode Analisis
Referensi Zat Berbahaya Metode Analisa 7 Rhodamin B Kromatografi Lapis Tipis 8 Rhodamin B Kromatografi Lapis Tipis 9 Rhodamin B Kromatografi Lapis Tipis 10 Rhodamin B Kromatografi Lapis Tipis 11 Rhodamin B Kromatografi Lapis Tipis 12 Rhodamin B Kromatografi Lapis Tipis 13 Rhodamin B Kromatografi Cair Kinerja Tinggi 14 Rhodamin B Kromatografi Cair Kinerja Tinggi 15 Rhodamin B Kromatografi Cair Kinerja Tinggi 16 Rhodamin B Spektrofotometri UV-Vis 17 Rhodamin B Spektrofotometri UV-Vis 18 Rhodamin B Spektrofotometri UV-Vis 19 Rhodamin B Spektrofotometri UV-Vis
Literatur  di  atas  memperlihatkan  hasil  tentang  penerapan  teknik  analisis  yang  dipilih  untuk identifikasi kandungan Rhodamin B dan tersaji dalam Tabel 1.

## Tabel 2. Data Fase Diam
Referensi Fase Gerak Fase Diam Nilai Rf baku Rhodamin B 9 n-Butanol, Etil Asetat, dan Amonia (55:20:25) Plat KLT (7 x 5 cm) 0,9 8 Plat silica gel GF 254 nm (20 x 20 cm) 0,68 12 kertas saring whatman no. 42 (8 x 4 cm) 0,72
Pada analisis artikel metode KLT, didapatkan perbandingan fase diam yang digunakan yang menyebaban perbedaan nilai Rf (tersaji dalam Tabel 2).

## Tabel 3. Uji Kesesuaian Sistem Pada Instrumen HPLC
Referensi  Kolom Fase Gerak Laju Alir Volume Injeksi Detektor 13 C18 Asetonitril 95%:dapar diamonium hidrogen posfat 10 nM pH 6,0 (80:20) 0,71 ml/menit 20 μL PDA 300-800 nm, UV Vis 480 nm dan 548 nm 14 C18 Asetonitril:(NH4)2HPO 4 (80:20) 0,71 ml/menit 20 μL PDA 300-800 nm; Rhodamin B 548 nm 15 C18 Methanol:Air:Asetonitril (25:75:0) 1 ml/menit 20 μL Visible, Rhodamin B 554 nm
Tabel  3  menyajikan  komponen-komponen  yang  digunakan  pada  uji  kesesuaian  sistem instrumen HPLC.

## Tabel 4. Data Hasil Uji Kesesuaian Sistem Pada HPLC
Referensi Waktu retensi (menit) Luas area Tailing factor ( ≤ 2%) Theoretical plate ( ≥ 1000) % RSD RT ( ≤ 2%) % RSD area ( ≤ 2%) 13 5,611 1826564,28 1,374% 3648 0,088% 0,050% 14 6,02 1633701,63 1,17% 8444,71 0,04% 1,42% 15 2,050 - - - - -
Uji  kesesuaian  sistem  yang  dilakukan  pada  instrumen  HPLC  akan  menghasilkan  data parameter, pada jurnal referensi data parameter yang dihasilkan tersaji dalam table 4.
Tabel 5. Perbandingan Metode Analisis Metode Analisis KLT HPLC/KCKT Spektrofotometri UV-Vis Prinsip Dasar Perbedaan mobilitas relatif komponen sampel di atas fase diam Pemisahan komponen analit berdasarkan tingkat kepolarannya Perbedaan penyerapan cahaya oleh senyaw dalam sampel pada panjang gelombang tertentu Kuantifikasi Mengukur luas spot atau intensitas warna di bawah cahaya UV Kurva kalibrasi larutan baku Respon intensitas cahaya pada panjang gelombang tertentu Aplikasi Analisis kualitatif Analisis kualitatif dan kuantitatif Analisis kualitatif dan kuantitatif Parameter Pengujian Perbandingan nilai Rf standar dan sampel ≤ 0,2 Uji Kesesuaian Sistem dan Uji Validasi Uji Validasi Kelebihan Biaya relatif rendah, sederhana dalam pelaksanaan Resolusi tinggi, sensitivitas yang baik, dapat diotomatisasi Analisis cepat, kuantitatif, dan sensitif Kekurangan Reprodusibilitas nilai RF bergantung pada kondisi lingkungan Biaya peralatan dan perawatan yang tinggi Terbatas pada senyawa- senyawa yang memiliki gugus kromofor
Tabel 5 menyajikan kesimpulan yang didapatkan setelah dilakukan analisis perbandingan pada masing-masing metode.

## PEMBAHASAN
Dari review 13 artikel jurnal, diperoleh informasi tentang teknik analisa Rhodamin B pada lipstik.  Ramainya  kasus  penyalahgunaan  Rhodamin  B  dalam  lipstik  menjadi  alasan  untuk menganalisis zat dengan teknik yang sesuai. Beberapa teknik analisa yang dapat digunakan meliputi  Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT),  Kromatografi  Cair  Kinerja  Tinggi  (KCKT),  dan Spektrofotometri UV-Vis.

## Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
Kromatografi  adalah  teknik  analisis  cepat  dan  sederhana  yang  memisahkan  senyawa dengan  struktur  serupa  secara  selektif,  dengan  menyerapnya  pada  media  absorben  yang berbeda 20 .  Kromatografi  memiliki  dua  fase:  fase  gerak  (cairan  atau  gas)  yang  membawa
sampel  dan  fase  diam  (padatan  atau  cairan)  yang menahan sampel.  Pemisahan zat  kimia pada  kromatografi  didasarkan  pada  perbedaan  distribusi  zat  kimia  pada  fase  diam  akibat pengaruh fase gerak.
Tahapan  KLT  meliputi  pembuatan  larutan  standar  untuk  identifikasi  Rhodamin  B, pembuatan  larutan  uji  dari  lipstik,  dan  pembuatan  eluen.  Fase  diam  (plat  KLT)  diaktivasi dengan  pemanasan  oven  untuk  meningkatkan  efisiensi  pemisahan  dan  resolusi  spot senyawa. Kemudian dilakukan penotolan larutan baku dan uji, elusi, serta perhitungan nilai Rf  untuk  identifikasi  sampel.  Eluen  dibuat  sesuai  dengan  kepolaran  zat  yang  diteliti. Berdasarkan  hasil review ,  eluen  terdiri  dari  campuran  pelarut,  n-Butanol,  Etil  Asetat,  dan Amonia  (55:  20:25)  digunakan  pada  penelitian 9 8 dan 12 .  Semakin  dekat  kepolaran  eluen dengan  sampel,  semakin  mudah  sampel  terbawa  oleh  fase  gerak 12 .  Penotolan menghasilkan  spot  yang  terbawa  oleh  eluen  dan  terpisah  sesuai  dengan  kepolarannya. Noda pada fase diam dapat diamati secara visual dan di bawah sinar UV dengan panjang gelombang 254 nm. Jika terdapat Rhodamin B, noda secara visual berwarna merah muda dan dibawah sinar UV berpendar oranye 7 .
Nilai  Rf  pada  KLT  adalah  parameter  analisis  kualitatif  yang  membandingkan  jarak tempuh sampel dengan jarak tempuh fase gerak 21 . Nilai Rf berkisar antara 0 dan 1 dan nilai Rf  terbaik  antara  0,2-  0,8 22 .  Nilai  Rf  <  0,2  menandakan  komponen  senyawa  belum mencapai  kesetimbangan  antara  fase  diam  dan  fase  gerak,  menghasilkan  noda  tidak simetris.  Nilai  Rf  >  0,8  dapat  menyebabkan  noda  analit  terganggu  oleh  kontaminan  pada lempeng fase diam, terlihat dengan lampu UV untuk visualisasi 23 . Nilai RF Rhodamin B tidak dapat  disimpulkan  secara  pasti  karena  pada  hasil  penelitian 10 ,  nilai  Rf  baku  Rhodamin  B adalah  0,8.  Nilai  Rf  baku 9 0,9; 8 0,68; 11 0,92;  dan 12 0,72.  Berdasarkan  PerMenKes  RI 1998, sampel tetap dianggap positif jika selisih antara RF baku dengan sampel ≤ 0,2 . Variasi nilai  Rf  dapat  terjadi  karena  perbedaan  komponen  fase  gerak  saat  elusi.  Ini  didukung peryataan Wulandari bahwa  penyebab nilai Rf bervariasi  yaitu volume dan komponen fase gerak. Komponen yang sama juga tidak menjamin nilai Rf akan serupa (Tabel 2).
Ketiga  penelitian  pada  tabel  2  menggunakan  campuran  eluen  dan  perbandingan  yang sama,  tetapi  harga  Rf  baku  standar  yang  dihasilkan  berbeda.  Ini  dapat  disebabkan  oleh perbedaan  fase  diam  meliputi  jenis,  ukuran,  dan  cara  aktivasinya.  Berbeda  jenis  berbeda juga sifatnya. Menurut Wulandari, variasi nilai Rf dipengaruhi oleh dimensi dan jenis ruang, sifat dan ukuran lempeng, arah aliran fase gerak, volume dan komposisi fase gerak, kondisi kesetimbangan,  kelembaban,  dan  metode  persiapan  sampel  KLT 23 .  Selain  itu,  kondisi chamber (jenuh  atau  tidak  jenuh)  juga  mempengaruhi  nilai  Rf,  dengan chamber jenuh memiliki nilai Rf lebih rendah dibandingkan chamber tak jenuh dalam kondisi yang sama 23 .
Kelebihan yang dimiliki teknik KLT ini adalah sederhana, mudah dalam preparasi sampel, tidak  diperlukan  biaya  yang  besar  karena  semua  komponen  sampel  dan  standar  diujikan
dalam  waktu  yang  sama,  selain  itu  volume  pelarut  yang  digunakan  cenderung  sedikit, selektif,  dan  sensitif,  juga  kromatogramnya  dapat  diamati  secara  visual.  Di  samping  itu terdapat  kekurangan  teknik  KLT  berupa  reprodusibilitas  nilai  RF  bergantung  pada  kondisi lingkungan 23 .
Berdasarkan  pembahasan  yang  telah  dijabarkan  dapat  diasumsikan  bahwa  perbedaan fase  gerak  maupun  fase  diam  yang  digunakan  pada  KLT  dapat  menyebabkan  perbedaan nilai  Rf  yang  dihasilkan.  Hal  ini  didukung  oleh  pernyataan 23 bahwa  perbedaan  fase  gerak dapat menyebabkan perbedaan nilai Rf.  Dengan demikian, maka perlu  optimasi pada fase gerak dan fase diam untuk hasil yang optimal.

## Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT)
KCKT atau HPLC adalah perkembangan dari kromatografi kolom, bekerja memisahkan komponen analit berdasarkan kepolarannya. Pada HPLC, tekanan tinggi berguna agar fase gerak  terkirim  ke  dalam  kolom,  meningkatkan  laju,  dan  efisiensi  pemisahan.  Setiap campuran  yang  keluar  akan  terdeteksi  dengan  detektor  dan  direkam  dalam  bentuk kromatogram.  Jumlah  komponen  analit  dinyatakan  dalam  jumlah  peak  dan  konsentrasi komponen dalam campuran dinyatakan oleh luas peak 24 .
Puspitasari dkk 14 menjelaskan bahwa sebelum analisis sampel, dilakukan uji kesesuaian sistem HPLC untuk verifikasi. Larutan baku Rhodamin B diinjeksikan ke HPLC sebanyak 6x 13 atau 7x ulangan 14 . lalu akan didapatkan %RSD (nilai standar deviasi), waktu retensi, dan luas  area  dari  baku  Rhodamin  B.  Penyuntikan  berulang  dilakukan  agar  peneliti  dapat mengevaluasi variabilitas hasil dan memeriksa konsistensi sistem dari satu penyuntikan ke penyuntikan berikutnya 25 . Pada setiap uji kesesuaian sistem yang dilakukan, data parameter yang dihasilkan berbeda-beda. Seperti data-data yang tersaji dalam tabel 3.
Kolom  memisahkan  komponen  sampel  berdasarkan  interaksi  dengan  fase  diam  di dalamnya. Pada 13 14 dan 15 menggunakan jenis kolom C18 yang memungkinkan pemisahan berkecepatan  tinggi  dan  resolusi  tinggi  pada  instrumen  HPLC.  Fase  gerak berfungsi  untuk mengalirkan  dan  melarutkan  sampel,  menstabilkan  suhu,  dan  membuang  sampel  setelah melewati  detektor.  Interaksi  antara  fase  gerak  dan  fase  diam  mempengaruhi  pemisahan komponen.  Fase  gerak  yang  digunakan  oleh 13 14 dan 15 berbeda-beda,  memungkinkan terjadinya variasi data yang dihasilkan.
Laju  alir  ( flow  rate )  pada  uji  kesesuaian  HPLC  adalah  kecepatan  fase  gerak  mengalir melalui  kolom  kromatografi.  Laju  alir  tinggi  menghasilkan  elusi  cepat,  sedangkan  laju  alir rendah  menghasilkan  elusi  lambat.  Tingginya  elusi  akan  mempercepat  waktu  yang dibutuhkan  untuk sampai ke detektor. Elusi yang rendah cenderung meningkatkan resolusi karena  memberikan  lebih  banyak  waktu  untuk  pemisahan  antara  puncak-puncak.  Laju  alir yang umum digunakan di HPLC berkisar pada 1,0 – 2,0 mL/menit 26 .
Volume sampel yang diinjeksikan oleh penelitian 13 14 dan 15 adalah 20 μL . Sama seperti penelitian 25,27 . Volume injeksi umum untuk HPLC yaitu 1-100 µL, volume yang kecil dapat membuat  luas  area  maksimum  tidak  tercapai,  sementara  volume  besar  akan  membuat puncak  melebar.  Detektor  untuk  mendeteksi  komponen  sampel  dalam  aliran  yang  keluar dari  kolom. 13 dan 14 menggunakan  panjang  gelombang  548  nm,  sementara 28 panjang gelombang  554  nm.  Berdasarkan  referensi  pendukung,  pengukuran  panjang  gelombang Rhodamin  B  dilakukan  diantara  545-557  nm 29 28 .  Uji  kesesuaian  sistem  yang  dilakukan pada  instrumen  HPLC  akan  menghasilkan  data  parameter,  pada  jurnal  referensi  data parameter yang dihasilkan tersaji dalam tabel 4.
Waktu  retensi  adalah  waktu  yang  diperlukan  bagi  suatu  zat  untuk  melewati  kolom kromatografi  dan  muncul  pada  detektor.  Dalam  HPLC,  waktu  retensi  Rhodamin  B  adalah waktu  yang  dibutuhkan  Rhodamin  B  untuk  melewati  kolom  dan  muncul  pada  detektor. Seperti waktu retensi hasil dari uji kesesuaian oleh 13 menunjukkan waktu 5,661 menit yang berarti  Rhodamin  B  dalam  larutan  baku  membutuhkan  waktu  5,611  menit  untuk  melewati kolom dan muncul pada detektor. Begitu juga hasil data waktu retensi oleh 14 menunjukkan 6,02 menit  dan 15 menunjukkan  2,050 menit.  Luas  area  pada  kromatogram mencerminkan konsentrasi Rhodamin B pada sampel. Semakin besar luas area di bawah puncak, semakin banyak senyawa dalam sampel 30 . Tailing factor mengukur simetri puncak kromatografi. Nilai tailing  factor yang  ideal  adalah  mendekati  1,  menunjukkan  bahwa  puncak  kromatografi simetris dan semakin besar nilai T maka semakin asimetris puncak yang dihasilkan 31 .
Lempeng  teoritis  mengukur  efisiensi  pemisahan  kolom.  Semakin  banyak  lempeng teoritis,  semakin  baik  pemisahannya.  Nilai  standar  deviasi  adalah  ukuran  variabilitas  atau dispersi  data  dari  rerata.  Dalam  konteks  HPLC,  %RSD  ( Relative  Standard  Deviation ) mengukur seberapa konsisten hasil yang diperoleh dari beberapa pengulangan penyuntikan baku  Rhodamin  B.  Semakin  rendah  %RSD,  semakin  konsisten  hasilnya.  %RSD  RT mengukur  variasi  dalam  waktu  retensi  suatu  senyawa  pada  percobaan  berulang.  %RSD Area  mengukur  variasi  dalam  luas  area  puncak  kromatografi  dari  percobaan  berulang. Persyaratan %RSD dari USP adalah tidak lebih dari 2% 25 .
Variasi  pada  data  parameter  hasil  uji  kesesuaian  sistem  dapat  disebabkan  oleh beberapa  faktor  yaitu  variasi  kondisi  operasional  misalnya  perbedaan  aliran  pelarut, komposisi fase gerak, suhu kolom, kondisi sampel, dan kinerja instrumen meliputi kalibrasi detektor,  penggantian  kolom,  atau  perubahan  dalam  kondisi  perangkat  lunak 32 .  Seperti variasi  kesesuaian  sistem  yang  tertera  pada  table  3.  Ketiga  referensi  menggunakan komposisi  pelarut  dan  perbandingan  pelarut  serta  laju  alir  yang  berbeda.  Sehingga memungkinkan terjadinya variasi data yang dihasilkan.
Selain  melakukan  uji  kesesuaian  sistem,  diperlukan  juga  uji  validasi.  Uji  kesesuaian sistem  mengevaluasi  kinerja  instrumen  HPLC  dalam  menghasilkan  hasil  yang  sesuai
dengan parameter tertentu. Uji validasi bertujuan untuk memastikan bahwa metode analisis secara keseluruhan  dapat memberikan  hasil  yang  akurat,  konsisten, dan  dapat diandalkan dalam  aplikasi  tertentu,  biasanya  mencakup  tahap  selektifitas,  linearitas,  akurasi,  presisi, batas deteksi (LOD) dan batas kuantifikasi (LOQ).
Uji  selektifitas  dilakukan  dengan  menginjeksikan  larutan  baku  Rhodamin  B  dan  blanko masing-masing  3  kali.  Parmeter  uji  selektifitas  yaitu  dipastikan  bahwa peak yang  keluar pada waktu retensi tertentu memang merupakan peak Rhodamin B karena tidak  ada peak yang sama pada blanko. Pada uji linearitas akan diperoleh persamaan regresi linear y=bx+a dengan nilai koefisien korelasi yang memenuhi yaitu >0,99 25 .
Keunggulan  HPLC  adalah  memberikan  pemisahan  yang  optimal  antara  kompone sampel.  Ini  dicapai  melalui  penggunaan  kolom  diameter  kecil  dari  bahan  gelas  yang memungkinkan pemisahan yang lebih baik. HPLC juga dikenal karena proses analisis yang cepat dan efisien, menyesuaikan laju aliran dan memberikan tekanan yang tinggi oleh fase gerak, yang semuanya berkontribusi pada hasil analisis yang akurat dan dapat diandalkan 33 .
Keuntungan  HPLC  termasuk  penggunaan  sampel  minimal,  memungkinkan  analisis dilakukan dengan sampel yang terbatas. Pengujian sesuai dengan tingkat kuantifikasi yang diinginkan,  sehingga  memberikan  fleksibilitas  yang  besar  dalam  analisis.  Salah  satu kelemahan  HPLC  yaitu  masa  pakai  kolom  yang  tebatas  yang  dapat  mempengaruhi konsistensi  hasil  analisis.  Laju  alir  tinggi  dalam  HPLC  dapat  meningkatkan  biaya  untuk membeli dan membuang pelarut berkualitas tinggi, memerlukan investasi yang lebih besar 33 .
Pada  KCKT  dapat  diasumsikan  terjadinya  variasi  data  parameter  yang  dihasilkan disebabkan karena perbedaan komponen pada uji kesesuaian sistem. Astles memaparkan perbedaan  aliran  pelarut,  komposisi  fase  gerak,  suhu  kolom,  kondisi  sampel,  dan  kinerja instrument dapat menyebabkan perbedaan data hasil uji 32 .

## Spektrofotometri UV-Vis
Spektrofotometri UV-Vis adalah instrumen analitik yang digunakan untuk mengukur daya absorbansi suatu cairan yang memiliki gugus kromofor terhadap panjang gelombang cahaya tertentu 19 .  Instrumen  ini  mengukur  jumlah  cahaya  yang diserap  oleh  sampel  pada  panjang gelombang  tertentu,  sehingga memberikan  informasi  tentang  keberadaan  atau  konsentrasi senyawa  tertentu  dalam  sampel.  Perbandingan  antara  intensitas  cahaya  yang  melewati sampel dan referensi membantu dalam menentukan seberapa banyak cahaya yang diserap atau dilewatkan oleh sampel, yang kemudian digunakan untuk menghitung konsentrasi atau karakteristik  lain  dari  sampel.  Panjang  gelombang  pada  daerah  ultraviolet  adalah  180 nm−380 nm, sedangkan pada daerah visible adalah 380 nm−780 nm 34 .
Prosedur  penelitian  yang  pertama  kali  dilakukan  yaitu  preparasi  sampel  uji.  Proses preparasi sampel pada setiap artikel referensi berbeda. Namun jika dapat disimpulkan yaitu sampel  dilarutkan  dengan  pelarut  sesuai  dan  dilakukan  pengenceran, 17 dan 18
menggunakan  metanol  dan  beberapa  tetes  HCl, 16 menggunakan  NaOH  2%  dengan beberapa  tetes  HCl,  dan 19 menggunakan  etanol  96%  dengan  beberapa  tetes  HCl. Penggunaan  asam  dimaksudkan  untuk  menghilangkan  logam  dalam  sampel  dan  HCl terbukti efektif dalam menghilangkan logam 35 . Selajutnya dibuat larutan baku Rhodamin B dan  proses  identifikasi  yang  meliputi  pengukuran  panjang  gelombang  maksimum  baku Rhodamin  B,  validasi  metode,  pengukuran  absorbansi  sampel,  dan  perhitungan  kadar  zat Rhodamin  B.  Penetapan  panjang  gelombang  maksimum  dilakukan  untuk  mengidentifikasi panjang gelombang optimal dalam pengukuran absorbansi larutan lipstik yang mengandung Rhodamin  B  dengan  spektrofotometer  UV-Vis 19 .  Pada 17 panjang  gelombang  545  nm digunakan sebagai nilai maksimum untuk mengukur absorbansi sampel.
Validasi  metode  analisis  adalah  proses  evaluasi  terhadap  sejumlah  parameter  untuk verifikasi  bahwa  parameter-parameter  tersebut  sesuai  dengan  persyaratan  yang  telah ditetapkan.  Validasi  metode  analisis  dilaksanakan  untuk  memastikan  bahwa  metode  yang digunakan dalam analisis dapat memberikan hasil yang akurat, spesifik, dan konsisten, serta mampu  menangani  berbagai  variasi  atau  kisaran  dari  analit  yang  dianalisis.  Beberapa parameter  yang  dinilai  dalam  validasi  metode  analisis  meliputi  linearitas,  akurasi,  presisi, batas deteksi ( Limit Of Detection ), dan batas kuantifikasi ( Limit Of Quantification ).
Uji linearitas dilakukan dengan menentukan kurva kalibrasi dan persamaan regresi linier dari  larutan  baku.  Penentuan  kurva  kalibrasi  larutan  standar  bertujuan  untuk  mengetahui hubungan antara konsentrasi larutan dengan nilai absorbansinya. Pembuatan kurva larutan standar melibatkan penggunaan deret standar larutan Rhodamin B dengan berbagai variasi konsentrasi sebagai contoh 16 menggunakan deret standar 2, 4, 6, dan 8 ppm, lalu masing- masing  diukur  pada  panjang  gelombang  yang  telah  ditentukan.  Deret  standar  ini  disusun dari  larutan  awal  dengan  konsentrasi  tinggi,  yaitu  200  ppm  yang  kemudian  diencerkan menjadi  konsentrasi  yang  lebih  rendah.  Pengenceran  dilakukan  untuk  memperkecil konsentrasi larutan sehingga pembacaan nilai absorbansi menjadi lebih akurat 16 .
Dari kurva kalibrasi akan didapatkan persamaan regresi linear y=bx+a dengan koefisien relasi  R  yang  baik  adalah  R 2 ≥  0,9970 36 .  Dengan  koefisien  relasi  yang  baik  dapat dinyatakan  bahwa  terdapat  hubungan  positif  antara  konsentrasi  dan  absorbansi,  yang berarti bahwa dengan meningkatnya konsentrasi, nilai absorbansi juga meningkat 17 . Akurasi adalah  kedekatan  antara  nilai  yang  diukur  dan  nilai  standar,  mencerminkan  ketepatan metode analisis 37 . Akurasi dapat dinilai dengan cara mengukur jumlah analit yang diperoleh kembali pada suatu pengukuran dengan spiking pada suatu sampel.
Presisi adalah indikator seberapa konsisten suatu metode analisis dalam menghasilkan hasil yang serupa dari sejumlah sampel yang berbeda secara signifikan secara statistik, dan biasanya  diekspresikan  sebagai  simpangan  baku  relatif.  Presisi  dinyatakan  dalam  nilai simpangan  baku  relatif  (SBR)  dengan  syarat  penerimaannya  adalah  SBR  <  2% 38 .  Batas
deteksi atau LOD adalah konsentrasi terendah dari suatu analit yang masih dapat dideteksi, walaupun tidak selalu dapat diukur secara kuantitatif 39 .

## σ
Batas  kuantifikasi  atau  LOQ  merupakan  konsentrasi  terendah  dari  suatu  analit  dalam sampel yang dapat memenuhi kriteria presisi dan akurasi 39 .
σ
σ = nilai standar deviasi
S = slope dari kuva kalibrasi
Selanjutnya dilakukan pengukuran absorbansi sampel lipstik menggunakan spektrofotometri uv-vis  dan  perhitungan  kadar  Rhodamin  B  dalam  sampel  menggunakan  kurva  kalibrasi dengan persamaan regresi.
Spektrofotometri  UV-Vis  memiliki  kemampuan  analisis  beragam  senyawa  organik  dan anorganik, selektivitasnya, tingkat ketelitiannya yang tinggi dengan kesalahan relatif sekitar 1%-3%, Teknik ini memungkinkan analisis yang cepat dan akurat, serta dapat menentukan kuantitas  zat  dalam  jumlah  yang  sangat  kecil.  Hasil  analisis  memiliki  tingkat  akurasi  yang memadai, data hasil langsung direkam oleh detektor dan tersaji dalam bentuk angka digital atau grafik yang telah diregresikan 40 . Kekurangannya adalah senyawa yang dianalisis harus memiliki  gugus  kromofor,  pH  larutan,  suhu,  adanya  zat  pengganggu  dan  kebersihan  dari kuvet dapat mempengatuhi hasil absorbansi 40 .

## SIMPULAN DAN SARAN
Berdasarkan review ,  identifikasi  Rhodamin  B  dalam  lipstik  menggunakan  KLT,
HPLC/KCKT,  dan  Spektrofotometri  UV-Vis  memiliki  parameter  pengujian  masing-masing. Dari  13  artikel  yang  terpilih,  6  diantaranya  menggunakan  metode  KLT.  Perbedaan  nilai  rf pada  KLT  dapat  disebabkan  oleh  perbedaan  fase  gerak.  KLT  tetap    dianggap  positif  jika perbandingan  nilai  RF  standar  dan sampel  ≤  0,2 .  Komponen  dalam  uji  kesesuaian  sistem HPLC  yaitu  kolom,  fase  gerak,  laju  air,  volume  injeksi,  dan  detektor  menghasilkan  data waktu  retensi,  luas  area,  tailing  faktor,  plate,  dan  %  RSD.  Spektrofotometri  UV-Vis membutuhkan uji validasi yang terdiri dari linearitas, akurasi, presisi, batas deteksi (Limit Of Detection), dan batas kuantifikasi (Limit Of Quantification).
Berdasarkan  hal  diatas  dapat  disimpulkan  bahwa  setiap  metode  memiliki  parameter spesifik  yang  harus  dipenuhi:  KLT  memenuhi  syarat  jika  perbandingan  nilai  Rf  (standar vs sampel) ≤ 0,2;  HPLC/KCKT  membutuhkan  kesesuaian  sistem  dan  uji  validasi; Spektrofotometri  UV-Vis  membutuhkan  parameter  uji  validasi.  KLT  lebih  disukai  karena persiapan  sampel  yang  mudah  dan  biaya  yang  lebih  rendah  dibandingkan  dengan  HPLC
dan  Spektrofotometri  UV-Vis.  Disarankan  untuk  mempertimbangkan  komponen  yang diperlukan saat menggunakan metode ini untuk memaksimalkan hasil pengujian.

## DAFTAR PUSTAKA
1.   Sulastina  NA,  Fitri  M.  Analisis  Rhodamin  B  Pada  Lipstik  Yang  Di  Jual  Di  Beberapa Pasar Tradisional. Babul Ilmi J Ilm Multi Sci Kesehat. 2022;14(1):88 – 99.
2.   PERMENKES RI. Peraturan Menteri
Kesehatan Republik
Indonesia
Nomor:445/Menkes/Per/V/1998  Tentang  Bahan  Kosmetika  dan  Zat  Warna  Kosmetika. Dep Kesehat Republik Indones Jakarta. 1998;1 – 56.
3.   Rambi EGS, Dorchichylhia Mangune G, Masontik R, Syalomitha Ceasaria Kaawoan G, Natanael  Moningka  G,  Assa  L.  Review  Artikel :  Analisis  Kandungan  Berbahaya  pada Lipstik  yang  Beredar  di  Masyarakat  dengan  Berbagai  Metode.  J  Lentera  Farma. 2023;66(1).
4.   Putri  DL,  Pratiwi  IE.  BPOM  Ungkap  181  Kosmetik  Merkuri  dan  Non-merkuri  2023,  Ini Daftarnya.
Kompas.com [Internet]. 2023;
Available from: https://www.kompas.com/tren/read/2023/12/11/081500565/bpom-ungkap-181-kosmetik- merkuri-dan-non-merkuri-2023-ini-daftarnya?page=all#page2
5.   Masyulani F, Thristy I. Identifikasi Zat Pewarna Rhodamin B Pada Lipstik Yang Beredar Di  Kalangan  Mahasiswi  Fakultas  Kedokteran  Universitas  Muhammadiyah  Sumatera Utara Angkatan 2013. Anat Med J. 2019;2(3):1 – 8.
6.   Harmono  HD.  Validasi  Metode  Analisis  Logam  Merkuri  (Hg)  Terlarutn  pada  Air Permukaan dengan Automatic Mercury Analyzer. Indones J Lab. 2020;2(3):11.
7.   Afriyeni  H,  Utari  NW.  Identifikasi  zat  warna  rhodamin  b  pada  lipstik  berwarna  merah yang beredar di pasar raya padang. J Farm Higea. 2016;8(1):59 – 64.
8.   Adriani  A,  Andalia  R,  Rinaldi  R,  Ulya  N.  Analisa  Zat  Warna  Rhodamin  B  Pada  Lipstik Gloss  Dan  Matte  Yang  Dijual  Dikota  Banda  Aceh  Dengan  Metode  Kromatografi  Lapis Tipis. J Pharm Sci. 2023;6(1):90 – 4.
9.   Biasa  A,  Maarisit  W,  Pareta  D,  Lengkey  KY.  Analisis  Rhodamin  B  Pada  Lipstik  Yang Beredar Di Pasar Lirung Kabupaten Kepulauan Talaud. Trop J Biopharm. 2021;4(1):53 – 7.
10.  Jusnita  N,  Nandu  LSS.  Identifikasi  Rhodamin  B  pada  Sediaan  Lipstik  yang  Beredar  di Pasar Jakarta Utara dengan Metode Kromatografi Lapis Tipis. Indones Nat Res Pharm J. 2017;1(2):1 – 6.
11.  Pujiati  L,  Sugiyanto  S,  Hasana  AR.  Uji  Identifikasi  Rhodamin  B  Pada  Liptint  Di  Toko Kosmetik  Kota  X  Menggunakan  Metode  Kromatografi  Lapis  Tipis.  SENTRI  J  Ris  Ilm. 2023;2(11):4554 – 64.
12.  Mursyidah, Purwanti R, Christiandari H. Analisa Kualitatif Zat Warna Rhodamin B pada
Lipstik dengan Metode Kromatografi Lapis Tipis. J Permata Indones. 2019;10(November).
13.  Komarudin D, Fauziah S, Pramintari R. Analisis Rhodamin B Pada Sediaan Lipstik Dan Perona Mata Secara Kckt. J Ilm Kesehat. 2019;18(3):88 – 92.
14.  Puspitasari  L,  Azizah  K,  Thalib  A.  Analisis  Rhodamin  B  pada  Lip  Tint  Menggunakan Metode  Kromatografi  Cair  Kinerja  Tinggi  (KCKT).  Sainstech  Farma  [Internet]. 2023;16(1):28 – 32.
Available from: https://ejournal.istn.ac.id/index.php/saintechfarma/article/download/1495/990/
15.  Fauziyah  R,  Hariningsih  Y,  Maritha  V.  ANALISIS  RHODAMIN-B  PADA  LIP  CREAM YANG  BEREDAR  DI  Keywords :  Rhodamine -B  ,  lip  cream  ,  High  Performance  Liquid Chromatography ( HPLC ) Pendahuluan. Duta Pharma J. 2021;1(1).
16.  Hiola  F,  Sy  Pakaya  M,  Akuba  J.  Analisis  Kadar  Senyawa  Rhodamin  B  Pada  Sediaan Lipstik  Menggunakan  Metode  Spektrofotometri  UV-Vis.  J  Syifa  Sci  Clin  Res. 2022;3(2):98 – 105.
17.  Hipi  D,  Malaha  A,  Dunggio  T.  Analisis  Kadar  Zat  Pewrna  Rhodamin  B  Pada  Pewarna Bibir  Yang  Beredar  Di  Pasar  Minggu  Kabupaten  Gorontalo.  J  Ilm  [Internet]. 2022;2(1):11 – 21.
Available from: https://journals.ubmg.ac.id/index.php/JIAS/article/download/1074/315
18.  Juliyanti J, Karimah U, Apriyani L. Deteksi Dan Kuantifikasi Rhodamin B Pada Produk Lipstik  Tanpa  Nomor  Notifikasi  Bpom  Yang  Beredar  Di  Pasar  Malam  Kecamatan Palaran Samarinda. J Sustain Transform. 2022;1(1):1 – 8.
19.  Retnowati  D,  Rahmawati  S,  Hermansyah  O,  Slamet  S.  IDENTIFIKASI  RHODAMIN  B PADA  LIPSTIK  YANG  BEREDAR  DI  KOTA  BENGKULU  DENGAN  METODE SPEKTROFOTOMETRI  UV-VISIBEL  Program  Studi  D3  Farmasi  FMIPA  Universitas Bengkulu JP : Jurnal Pharmacopoeia PENDAHULUAN Kosmetik merupakan salah satu kebutuhan yang umum diguna. J Pharmacopoeia. 2024;3(1):24 – 32.
20.  Bintang M. Biokimia Teknik Penelitian. Jakarta: Penerbit Erlangga; 2010.
21.  Nurhayati R. Pengembangan Dan Validasi Metode Klt – Densitometri Untuk Penetapan Kadar  Filantin  Dalam  Ekstrak  Phyllanthus  Niruri  Menggunakan  Desain  Plackett  - Burman Untuk Uji Robustness. 2020; Available from: http://lib.unair.ac.id 22.  Muttaqin  FZ,  Yuliantini  A,  Fitriawati  A,  Asnawi  A.  PENETAPAN  KADAR  SENYAWA METAMPIRON DAN DIAZEPAM DALAM SEDIAAN KOMBINASI OBAT MENGGUNAKAN METODE KLT VIDEO
DENSITOMETRI. PHARMACY. 2016;13(02):127 – 36.
23.  Wulandari  L.  Kromatografi  Lapis  Tipis.  Cetakan  pe.  Jember:  PT.  Taman  Kampus Presindo; 2011.
24.  Kusuma  ASW,  Ismanto  RMH.  Penggunaan  Instrumen  High-Performance  Liquid
Chromatography    Sebagai  Metode  Penentuan  Kadar  Kapsaisin  Pada  Bumbu  Masak Kemasan “Bumbu Marinade Ayam Special” Merek Sasa. J Farmaka. 2016;14(2):41– 6. 25.  Yusransyah RC, Maghfiroh, Rochmat A. Uji kesesuaian sistem kromatografi cair kinerja tinggi fase terbalik pada bahan baku parasetamol. Farmagazine. 2014;1(2):1 – 7.
26.  Fajri  MI.  Validasi  metode  analisis  identifikasi  simultan  Hidrokuinon  dan  Asam  Retinoat secara UHPLC-PDA dalam sediaan semi solida. Erud  Indones J Food Drug [Internet]. 2020;1(1):1 – 10.
Available from: https://eruditio.pom.go.id/index.php/home/article/view/21
27.  Siswanto  A,  Fudhol  A,  Nugroho  AK,  Martono  S.  Validasi  Metode  HPLC  untuk Penetapan Aspirin dan Asam Salisilat dalam Plasma Kelinci (Lepus curpaeums) secara Simultan. J Kefarmasian Indones. 2016;6(2):68 – 78.
28.  Fauziah S, Komarudin D, Dewi C. Identifikasi dan Penetapan Kadar Rhodamin B pada Eye Shadow secara Kromatografi Lapis Tipis dan Spektrofotometri Ultraviolet-Visible. J Ilm Kesehat. 2020;19(02):81 – 6.
29.  Hadriyati  A,  Lestari  L,  Anggresani  L.  Analisis  Rhodamin  B  dalam  Bolu  Kukus  yang Beredar  di  Kota  Jambi  dengan  Metode  Spektrofotometri  UV-Vis.  J  Farm  Dan  Ilmu Kefarmasian Indones. 2021;8(1):16.
30.  Angraini  N,  Desmaniar  P.  Optimasi  penggunaan  High  Performance  Liquid Chromatography  (HPLC)  untuk  analisis  asam  askorbat  guna  menunjang  kegiatan Praktikum Bioteknologi Kelautan. J Penelit Sains. 2020;22(2):69.
31.  Nurhidayati  L,  Sofiah  S,  Sumarny  R,  Caesar  K.  HIGH  PERFORMANCE  LIQUID CHROMATOGRAPHY  METHOD  VALIDATION  OF  α -MANGOSTIN  ASSAY  IN MANGOSTEEN  (Garcinia  mangostana  L.)  FRUIT  RIND  EXTRACT  FORMULATED  IN ORAL SOLUTION. ALCHEMY J Penelit Kim. 2015;11(1):38.
32.  Astles  G.  Solving  Common  Errors  in  HPLC  [Internet].  2023.  Available  from: https://www.chromatographytoday.com/news/hplc-uhplc/31/international-labmate- ltd/solving-common-errors-in-hplc/59518
33.  Tumanduk R, Massi MN, Agus R, Sarjana SP, Studi P, Biomedik I, et al. Analisis residu amoksisilin pada hepar dan ventrikulus ayam petelur di Pasar Tradisional Makassar. J Ilmu Alam dan Lingkung. 2023;14(2):20 – 8.
34.  Warono  D,  Syamsudin.  Unjuk  Kerja  Spektrofotometer  Untuk  Analisa  Zat  Aktif Ketoprofen. J Konversi 2. 2014;
35.  Sari  LV.  Pengaruh  Variasi  Konsentrasi  HCI  Pada  Pembuatan  Nanosilika  Berbasi  Batu Apung. J Tek Kim. 2019;12:1 – 23.
36.  Rohman A. Kromatografi Untuk Analisis. Cetakan I. Graha Ilmu; 2009.
37.  WHO.  The  International  Pharmacopeia.  Edisi  ke-empat.  Electronic  Version  Geneva; 1992. 98 p.
38.  Ramadhan  SA,  Musfiroh  I.  Review  Artikel:  Verifikasi  Metode  Analisis  Obat.  Farmaka.
2021;19:87 – 92.
39.  Kruve  A,  Rebane  R,  Kipper  K,  Oldekop  M,  Evard  H.  Tutorial  Review  on  Validation  of Liquid Chromatography – Mass Spectrometry Methods: Part I. Anal Chim Acta. 2015;29 – 44.
40.  Tetha  E.S  DA,  Sugiarso  K.  S  RD.  Pebandingan  Metode  Analisa  Kadar  Besi  antara Serimetri  dan  Spektrofotometer  UV-Vis  dengan  Pengompleks  1,10-  Fenantrolin.  Akta Kim Indones. 2016;1(1):8.