Karakterisasi Self-Nanoemulsifying Drug Delivery System (SNEDDS) Minyak Buah Merah ( Pandanus conoideus Lam.)
Nurul Huda & Iis Wahyuningsih*
Fakultas Farmasi Universitas Ahmad Dahlan, Yogyakarta
*Corresponding author: Iis.wahyuningsih@pharm.uad.ac.id

## Abstract
Background:  Breast  cancer  ranked  second  in  Indonesia  after  cervical  cancer  in  which  women  were  being  the major  patient  in  this  disease.  One  of  the  new  medicine  discovered  was  from  natural  substance  that  showed  a pharmacological effect in overcoming cancer, it is called red fruit oil (Pandanus conoideus Lam.). Red fruit oil contain many antioxidant compounds that assisted the healing process of cancer by preventing and suppressing the growth of the cancer cells. However, giving red fruit oil directly to the patients by oral administration is not acceptable,  it  requires  the  development  of  delivery  systems  such  as  SNEDDS  (Self-Nanoemulsifying  Drug Delivery  System).  Objective:  This  research  aim  to  get  SNEDDS  characteristic  on  red  fruit  oil.  Methods:  To obtain a good SNEDDS characters, the suitable comparison of the oil surfactants and co-surfactants need to be investigated.  In  this  study    4  formulas  containing  different  composition  of  red  fruit  oil  and  the  tween  80  and propylene glycol  were tested. Thee  formulas  were   I (9:62:29), II (9:68:23), III (11:64:25) and  IV (12:65:23). The  %Transmittant,  emulsification  time  and  the  IC 50 of  each  formulas  were  determined.  Results:  The  results showed  that  the  %  transmittants  of formula  1-IV were  99.21%;  99.34%;  98.69%  and  98.27,  respectively.  The results  obtained  for  the  emulsification  time  of  the  4  formulas  in  consecutive  were  16.51;  15.40;  17.64  and 18.67 seconds. The IC 50 values of the 4 formulas were 176.81; 58.99; 6832.02 and 514.84 µL/mL, respectively. Conclusions:  The  results  indicated  that  the  best  SNEDDS  character  was  obtained  from    formula  II  which showed the highest % Transmittant, the fastest emulsification time and the smallest IC 50 value.
Keyword : red fruit oil, SNEDDS, characteristics of SNEDDS

## Abstrak
Pendahuluan: Kanker payudara di Indonesia menempati posisi kedua yang banyak diderita khususnya oleh kaum wanita setelah kanker serviks. Salah satu penemuan obat baru yang berasal dari bahan alam yang menunjukkan efek  farmakologis  dalam  mengatasi  kanker  adalah  Minyak  Buah  Merah  ( Pandanus  conoideus Lam.).  Minyak Buah  Merah  mengandung  banyak  senyawa  antioksidan  yang  membantu  proses  penyembuhan  penyakit  kanker dengan  mencegah dan  menekan perkembangan sel-sel kanker. Namun, pemberian  Minyak Buah Merah  secara langsung  per  oral  tidak acceptable sehingga  diperlukan  pengembangan  sistem  penghantaran  seperti  SNEDSS (Self-Nanoemulsifying Drug Delivery System ). Tujuan: Penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan karakteristik SNEDDS  pada  Minyak  Buah  Merah.  Metode:  Untuk  mendapatkan  karakter  SNEDDS  yang  baik  perlu  dicari perbandingan  minyak,  surfaktan  dan  ko-surfaktan  yang  sesuai.  Dibuat  4  formula  dengan  variasi  perbandingan Minyak  Buah  Merah,  tween  80,  propilen  glikol  pada  formula  1  (9:62:29),  formula  2  (9:68:23),  formula  3 (11:64:25)  dan  formula  4  (12:65:23).  Selanjutnya  SNEDDS  dibuat  dengan  mencampur  ketiga  komponen tersebut. Kemudian keempat formula ditentukan % Transmitan, waktu emulsifikasi dan nilai IC 50 untuk menilai karakter SNEDDS  yang  baik.  Hasil:  Hasil dari  penelitian diperoleh %Transmitan dari 4  formula  berturut-turut yaitu  99,21%;  99,34%;  98,69%  dan  98,27%.  Hasil  yang  diperoleh  untuk  waktu  emulsifikasi  dari  4  formula berturut-turut  adalah  16,51;  15,40;  17,64  dan  18,67  detik.  Nilai  IC 50 untuk  4  formula  diperoleh  hasil  berturut- turut  sebesar  176,81;  58,99;  6832,02  dan  514,84  µL/mL.  Kesimpulan:  Dilihat  dari  hasil  pengujian  tersebut didapatkan  formula  yang  menghasilkan  SNEDDS  paling  baik  yaitu  pada  formula  2  karena  mempunyai %Transmitan paling besar, waktu emulsifikasi paling cepat dan nilai IC 50 paling kecil.
Kata kunci : minyak buah merah, SNEDDS, karakteristik SNEDDS

## PENDAHULUAN
Kanker  payudara  di  Indonesia  menempati  posisi kedua  sebesar  12,10%  setelah  kanker  serviks  19,18% (Meiyanto  dkk.,  2006).  Pengobatan  kanker  yang dilakukan sampai sekarang meliputi radioterapi (70%), pembedahan  (20  -  25%)  dan  kemoterapi  (5  -  10%) (Tjindarbumi, 2002), namun Hamid (2008) menyatakan  bahwa  pengobatan  kanker  tersebut  hanya efektif untuk beberapa periode waktu saja dan  bersifat merusak  seluruh  sel  termasuk  sel  yang  normal sekalipun. Selain  itu,  pada umumnya  penderita kanker kurang  dapat  bertahan  dengan  efek  samping  yang timbul dari pengobatan yang diberikan (Sumarawati  & Fatmawati, 2011). Tindakan pembedahan juga mempengaruhi keadaan badan dan kekebalan, misalnya terjadi perubahan perbandingan antara berbagai macam sel  darah  putih  (Jong,  2002).  Di  sisi  lain  banyak  obat sitostatika  yang  telah  resisten  terhadap  sel  kanker, sehingga  pertumbuhan  sel  kanker  yang  seharusnya dihambat  aktivitasnya  malah  akan  semakin  tidak terkendali  pertumbuhannya.  Salah  satu  upaya  yang dilakukan  untuk  mengatasi  permasalahan  tersebut adalah  dengan  penemuan  obat  baru  yang  berasal  dari bahan  alam  yang  menunjukkan  efek  farmakologis dalam  mencegah  dan  mengobati  penyakit  kanker (Mangan, 2003).
Salah  satu  sumber  alam  lokal  yang  berpotensi sebagai  antikanker  adalah  buah  merah  ( Pandanus conoideus Lam.). Buah ini merupakan buah asli Papua yang  banyak  mengandung  senyawa  aktif  antara  lain tokoferol, alfa-tokoferol, beta-karoten, protein, kalsium,  besi,  fosfor,  vitamin  C,  asam  palmitoleat, asam  oleat,  asam  linoleat,  dan  asam  alfa-linoleat. Kandungan  kimia  terbesar  dari  buah  tersebut  adalah tokoferol  (11000  ppm),  beta-karoten  (700  ppm),  dan karoten (12000 ppm) dimana masing– masing senyawa tersebut mempunyai efek sebagai antioksidan sehingga mampu  menangkal  radikal  bebas  dan  meningkatkan sistem kekebalan tubuh. Ketiga senyawa  ini  juga  yang membantu  proses  penyembuhan  penyakit  kanker dengan  mencegah dan  menekan perkembangan  sel–sel kanker (Budi & Paimin, 2005).
Pengujian  sari  buah  merah  terhadap  efek antikanker  telah  dilakukan  pada  sel  kanker  rahim,  sel kanker  payudara  T47D  dan  sel  kanker  usus  besar CC531.  Efek  pada  sel  kanker  rahim  dan  sel  kanker usus  besar  CC531    lebih  besar  dari  pada  sel  kanker payudara. Diperoleh nilai IC 50 sari buah merah pada sel kanker usus besar adalah 200 ppm sedangkan pada sel kanker  payudara  T47D  adalah  600  ppm.  Aktivitas antikanker dari sari buah merah ini ternyata lebih besar
dibandingkan agen kemoterapi doksorubisin (Moeljopawiro dkk., 2007).
Pemberian  Minyak  Buah  Merah  secara  langsung per  oral  dipandang  tidak acceptable oleh  masyarakat karena dirasa kurang  nyaman, selain  itu   minyak tidak mudah  diabsorpsi  dalam  saluran  cerna  karena  bersifat hidrofobik  sehingga  sukar  larut  di  dalam  saluran pencernaan (Shargel dkk., 2005). Diperlukan pengembangan  sistem  penghantaran  Minyak  Buah Merah  yang  lebih acceptable .  Salah  satu  sistem penghantaran  obat  yang  dapat  digunakan  untuk mengatasi  masalah  di  atas  adalah  SNEDDS  ( Self- Nanoemulsifying Drug Delivery System ).
SNEDDS adalah salah satu formulasi nanopartikel berbasis  minyak  atau  lemak.  SNEDDS  merupakan campuran  isotropik  antara  minyak,  surfaktan,  dan ko-surfaktan yang dapat membentuk nanoemulsi secara spontan  ketika  kontak  dengan  cairan  lambung  (Sun  & Han,  2011;  Makadia  dkk.,  2013).  Formulasi  sediaan SNEDDS  akan  meningkatkan  disolusi  dari  zat  aktif dengan cara memfasilitasi pembentukan fase tersolubilisasi  dan  meningkatkan  transpor  melalui sistem  limfatik  usus,  serta  menghindari effluks P-gp, sehingga dapat meningkatkan absorpsi dan bioavailabilitas zat aktif dari saluran cerna (Singh dkk.,
2009).
Karakteristik SNEDDS dipengaruhi oleh komponen  penyusunnya,  yaitu  fase  minyak,  surfaktan dan  ko-surfaktan.  Komponen  minyak  dalam  formulasi SNEDDS  berperan  dalam  menentukan  ukuran  emulsi yang  terbentuk  serta  kapasitas  zat  aktif  yang  dapat dibawa karena minyak merupakan pembawa utama zat aktif  dalam  SNEDDS  (Date  dkk.,  2010).  Surfaktan berperan  dalam  memperkecil  ukuran  tetesan  emulsi, serta menjaga zat aktif dalam  jangka waktu lama  pada tempat  absorpsi,  sehingga  tidak  terjadi  pengendapan dalam  saluran  cerna.  Tween  80  merupakan  surfaktan non-ionik  dengan  nilai  HLB  15  yang  stabil  untuk emulsi  o/w  dan  aman  bagi  tubuh.  Ko-surfaktan  dalam formulasi  SNEDDS  dapat  membantu  surfaktan  dalam menurunkan  tegangan  permukaan  air  dan  minyak, meningkatkan disolusi dari zat aktif, serta memperbaiki dispersibilitas  dan  absorpsi  zat  aktif.  Propilen  glikol merupakan  ko-surfaktan  yang  dapat  membantu absorpsi obat (Rowe dkk., 2009). Tujuan penelitian ini untuk  mengetahui  pengaruh  perbandingan  minyak, surfaktan  dan  ko-surfaktan  dalam  formula  SNEDDS` Minyak  Buah  Merah  terhadap  nilai  %Transmitan, waktu emulsifikasi dan  IC 50 .

## BAHAN DAN METODE Bahan
Bahan  yang  digunakan  adalah  Minyak  Buah Merah  yang  diperoleh  dari  supplier  PT.  TMS,  Tween 80,  propilen  glikol  (pharmaceutical  grade)  diperoleh dari supplier PT Brataco, aqua bidestilata, media RPMI ( Rosewall Park Memorial Institute ) (Gibco), sel T47D, larutan  FBS  ( Fetal  Bovine  Serum )  (Gibco),  Natrium Bikarbonat  (NaHCO 3 ),  Asam  Klorida  (HCl),  HEPES ( N-2-hydroxylethil piperazine-N-2-ethane sulfonic acid ),  Penicillin-Streptomycin  (Sigma),  Fungison (Sigma), PBS ( Phosphate Buffer Saline ), SDS ( Sodium Dodecyl  Sulphate ),  MTT  [3-(4-5-dimetilthiazol-2-il) -2,5 difenil tetrazolium bromid] dan DMSO. Alat
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah oven, Flowcytometry , ELISA  plate  reader ,  Shimadzu- GCMS 2010S mass selective detector ( Gas Chromatography-Mass  Spechtroscopy ),  pH  meter (Hanna), ultra  sentrifuge  (eppendorf  centrifuge
5804  R),  LAF  ( Laminar  Air  Flow ),  autoklaf, haemocytometer, inkubator  sel  dengan  aliran  oksigen 95% dan karbondioksida 5%, cell counter, filter bakteri 0,2 mikroliter steril, 96- well plate dan vortex .
Metode
Identifikasi minyak buah merah ( pandanus conoideus lam ) Identifikasi  Minyak  Buah  Merah  ( Pandanus conoideus Lam)  dilakukan  dengan  menggunakan GC-MS  ( Gas  Chromatography-Mass  Spechtroscopy ) di Laboratorium Terpadu Fakultas Farmasi Universitas Ahmad Dahlan Yogyakarta.

## Pembuatan SNEDDS minyak buah merah
Sediaan  SNEDDS  Minyak  Buah  Merah  dibuat seperti  formula  yang  tersaji  pada  Tabel  1  dengan  cara mencampur  surfaktan  Tween  80  dan  ko-surfaktan propilen glikol kemudian dihomogenkan dengan vortex selama  1  menit.  Minyak  Buah  Merah  ditambahkan  ke dalam  campuran  tersebut  dan  dihomogenkan  kembali menggunakan vortex selama 1 menit.
Tabel 1. Formula SNEDDS Minyak Buah Merah (Harumawati, 2016) Formula MBM (%) Tween 80 (%) Propilen glikol (%) 1 9 62 29 2 9 68 23 3 11 64 25 4 12 65 23 Karakteristik SNEDDS minyak buah merah Uji Transmitan Pengamatan kejernihan
dilakukan secara spektrofotometri dengan  melarutkan 100 µL  SNEDDS Minyak  Buah  Merah  ke  dalam  5  mL  akuades  yang dihomogenkan  dengan  bantuan  vortex  mixer  selama 1  menit  dan  diukur  absorbansinya  pada  panjang gelombang  650  nm  dengan  blanko  akuades.  Nilai absorbansi yang mendekati 100% menunjukkan bahwa ukuran tetesan dispersi  yang dihasilkan oleh SNEDDS telah  mencapai  ukuran  nanometer,  yang  secara  visual tampak  dari  transparansi  sistem  yang  terbentuk  (Bali dkk., 2010).

## Uji waktu emulsifikasi
Penentuan  waktu  emulsifikasi  menggunakan  alat disolusi  aparatus  tipe  II.  Tiap  formula  ditambahkan 900 mL HCl 0,1 N pada suhu 37°C. Pada alat disolusi diatur  seperti  agitasi  ringan  pada  saluran  cerna  yaitu dengan kecepatan pengaduk 50 rpm. Waktu emulsifikasi  dinilai  secara  visual.  Syarat  waktu
emulsifikasi  yang  baik  untuk  SNEDDS  adalah  kurang dari 1 menit (Chintalapudi dkk., 2015).

## Uji Sitotoksik Preparasi sel T47D
Sel  yang  inaktif  dalam  wadah  ampul  diambil  dari tangki  nitrogen  cair  dan  segera  dicairkan  dalam penangas  air  pada  suhu  37º  C  sampai  gumpalan  di dalam  ampul  mencair,  kemudian  ampul  disemprot dengan  etanol  70  %.  Ampul  dibuka  dan  sel dipindahkan  ke  dalam  ruang Laminar  Air  Flow dan suspensi  sel  dihomogenkan  dengan centrifuge pada kecepatan  3000  rpm  selama  10  menit.  Supernatan dibuang, pellet ditambah  1  mL  medium  RPMI  1640 yang mengandung 10 % FBS dan disuspensikan hingga homogen, selanjutnya sel ditumbuhkan dalam beberapa petri dish flask kecil (3 - 4 buah), diinkubasikan dalam inkubator suhu 37º C dengan aliran CO 2 5% dan tutup flask  dilonggarkan.  Setelah  24  jam,  medium  diganti dan  sel  ditumbuhkan  lagi  hingga  konfluen  (sel  telah memenuhi  flask)  dan  jumlahnya  cukup  untuk penelitian.

## Panen sel
Setelah jumlah sel cukup, medium dibuang dan sel dicuci  koloninya.  Larutan  tersebut  dibuang,  lalu ditambah  larutan tripsin 2,5% sebanyak 1  mL. Supaya distribusi sel merata maka ditambah larutan PBS 3 mL, didiamkan  sekitar  3  -  5  menit  agar  tripsin  bekerja dengan  baik.  Sel  kemudian  dipindah  ke  dalam  tabung conical steril dan ditambah PBS sampai volume 10 mL dan disentrifuge 3000 rpm selama 10 menit. Sel dicuci dua  kali  dengan  medium  yang  sama  dan  dihitung jumlah  selnya  menggunakan haemocytometer .  Jumlah sel dihitung dengan rumus : Jumlah sel dalam 4 bilik x 10 4 sel/mL 4 (Doyle and Griffiths, 2000)
Suspensi sel ditambah dengan sejumlah medium kultur sehingga  diperoleh  konsentrasi  sel  sebesar  yang diperlukan.

## Uji sitotoksik dengan metode MTT
Sel  dengan  konsentrasi  5x10 4 sel/100  µL didistribusikan  ke  dalam  sumuran  (menggunakan 96-well plate ) sebanyak 100 µL pada tiap sumuran dan diinkubasi selama 24 jam di dalam inkubator CO 2 5 % agar  sel  beradaptasi  dan  menempel  di  sumuran. Selanjutnya  pada  tiap  sumuran  ditambahkan  100  µL larutan  uji  dengan  kadar  bervariasi  sesuai  yang  telah ditetapkan,  lalu  diinkubasi  kembali  selama  24  jam. Sebagai  kontrol  digunakan  larutan  DMSO  1  %.  Pada akhir  inkubasi,  media  kultur  dibuang  dengan  jalan disedot  hati-hati  dan  sel  dicuci  dengan  100  µL  PBS. Pada  masing-masing  sumuran,  kemudian  ditambahkan 100  µL    media  kultur  dan  10  µL  larutan  MTT 5 mg/mL.
Sel  diinkubasi  kembali  selama  4  jam  dalam inkubator CO 2 5 % dengan suhu 37ºC. Sel  yang hidup akan bereaksi dengan MTT membentuk formazan yang berwarna  ungu-biru  tua.  Reaksi  MTT  dihentikan dengan stopper  reagent (Sodium  dodesil  sulfat), kemudian  diinkubasi  pada  suhu  kamar  dalam  ruang gelap  selama  semalam.  Selanjutnya,  absorbansi  tiap sumuran  dibaca  dengn ELISA  reader (Bencmark  Bio Rad)  pada  panjang  gelombang  595  nm  (Sinaga  dkk., 2011).
Analisis Data

## Uji sitotoksik
Data  yang  diperoleh  berupa  absorbansi  masing- masing sumuran dikonversi ke dalam persen sel hidup. Persen kehidupan (% viabilitas sel) dihitung menggunakan rumus:
% viable cells =
Hasil    perhitungan    viabilitas    sel    yang    diperoleh dari masing–masing konsentrasi, kemudian dilanjutkan dengan  uji  korelasi  untuk  menentukan  persamaan regresi  linear  dan  menentukan  harga  IC 50. Nilai  IC 50 diperoleh dengan persamaan regresi linear (y = bx + a)  dari  grafik  antara  log konsentrasi versus
%  sel    hidup    dimana    nilai    r    dikatakan    linear    jika lebih    besar    dari  r tabel kemudian  dimasukkan  nilai y = 50 pada persamaan regresi linear dan  dicari x nya, kemudian  ditentukan  antilog  dari  konsentrasi  tersebut maka diperoleh IC 50 (Fakultas Farmasi UGM, 2009).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Skrining minyak buah merah
Senyawa  yang  terkandung  dalam  Minyak  Buah Merah  dianalisis  menggunakan Gas  Chromatography (GC).  Senyawa  yang  terdeteksi  diidentifikasi  melalui set  data  massa  spektrum  yang  ada  pada  instrumen. Komponen  utama  yang  teridentifikasi  adalah octadec-
9-enoicacid (11,27%),
dodecanoic acid,
1,2,3-propanetriyl ester (8,54%) dan hexadecanoic acid (2,61%).  Penelitian  Rohman  dkk ., (2012)  tentang karakterisasi Minyak Buah Merah ( Pandanus conoideus )  menunjukkan  bahwa  senyawa  yang  paling dominan  dari  golongan  asam  lemak  tak  jenuh  adalah asam  oleat  (68,80%),  asam  palmitat  (20,05%)  dan asam  linoleat  (8,49%).    Senyawa volatile yang  paling dominan dalam Minyak Buah Merah adalah 1,3-dimethylbenzene (27,46%), N-glycyl-L-lanin
(17,36%), trichloromethane (15,22%)  dan  etana (11,43%).  Kandungan  senyawa  Minyak  Buah  Merah hasil  penelitian  Noviyanti  (2010)  yang  melakukan modifikasi  kromatografi  kolom  untuk  pemisahan trigliserida  dari  ekstrak  buah  merah  ( Pandanus conoideus )  mendapatkan  hasil  golongan  asam  lemak tak  jenuh  metil  oleat  (56,21%),  metil  palmitat (14,33%),  asam  linoleat  (5,25%),  dan  asam  linolenat (3,24%).
Data GC-MS Minyak Buah Merah  yang diperoleh dari  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  senyawa  yang dihasilkan berupa asam lemak. Hasil analisa mendapatkan  persentase  asam  lemak  yang  terbesar adalah  asam  enoat  (11,27%).  Hasil  penelitian  ini berbeda  dengan  hasil  penelitian  Rohman  (2012) maupun  Noviyanti  (2010).  Hal  ini  kemungkinan disebabkan faktor seperti tempat tumbuh yang berbeda, metode  pembuatan  minyak  yang  berbeda  atau  saat penentuan  kadar  menggunakan  kondisi  GC-MS  yang berbeda.

## Karakteristik SNEDDS minyak buah merah %Transmitan
Kejernihan  yang  diukur  dalam  persen  Transmitan adalah  salah  satu  kontrol    terhadap    pembentukan dispersi dari SNEDDS.  Pengamatan  kejernihan  secara visual  merupakan  parameter  kualitatif  spontanitas dispersi  (Xi  dkk.,  2009).  Nilai  Transmitan  yang mendekati  100%  menunjukkan  bahwa  SNEDDS menghasilkan  dispersi  jernih  dan  transparan  dengan ukuran tetesan diperkirakan mencapai nanometer (Bali dkk. , 2010).  Untuk  memastikan  tingkat  kejernihan nanoemulsi  yang  terbentuk  selanjutnya  dilakukan
pembacaan Transmitan dengan menggunakan spektrofotometri  dengan  panjang  gelombang  650  nm (Rawat dkk., 2014; Patel dkk., 2014).
Ukuran  fase  terdispersi  sangat  mempengaruhi penampilan  emulsi  akan  jernih  atau  keruh,  hal  ini karena  ukuran  droplet-droplet  minyak  yang  terdispersi dalam  air.  Bila  sistem  emulsi  yang  memiliki  ukuran droplet  sangat  kecil  dilewati  cahaya,  maka  berkas cahaya akan diteruskan sehingga warna larutan terlihat transparan  dan  Transmitan  yang  dihasilkan  semakin besar (Sahumena, 2014). Hasil pembacaan  Transmitan 4 formula SNEDDS tersaji pada Tabel 2.
Tabel 2. %Transmitan SNEDDS Minyak Buah Merah
Keterangan :
Nilai  signifikansi  <  0,05  diperoleh  dari  semua  formula,  kecuali  antara  formula  1  dan  formula  2.  Ada  perbedaan  nilai %Transmitan dari formula 1 dan 3, formula 1 dan 4, formula 2 dan 3, formula 2 dan 4 serta formula 3 dan 4.
Hasil  uji  Transmitan  pada  Tabel  2  menunjukkan bahwa  SNEDDS  Minyak  Buah  Merah  menghasilkan dispersi  yang  jernih  secara  visual  dengan  nilai Transmitan  berkisar  98,27  –  99,34%.  Hasil  pengujian kejernihan  formula  SNEDDS  Minyak  Buah  Merah menghasilkan  dispersi  jernih  dengan  nilai  Transmitan lebih  dari  90%,  menandakan  bahwa  ukuran  tetesan yang  dihasilkan  kecil.  Hal  tersebut  dikarenakan penggunaan  Tween  80 sebagai  surfaktan  yang  mampu membentuk sistem nanoemulsi o/w secara spontan saat didispersikan  dalam  cairan  lambung  (Kommuru  dkk., 2001).  Hasil  tersebut  didukung  pula  oleh  penggunaan ko-surfaktan  yaitu  propilen  glikol  yang  dapat membantu  kelarutan  dari  Tween  80  maupun  kelarutan dari obat dalam basis minyak (Amrutkar dkk., 2014).
Berdasarkan  hasil  %Transmitan  yang  diperoleh menunjukkan  hasil  yang  paling  besar  pada  formula  2 sebesar 99,34% diikuti oleh formula 1 sebesar 99,21%, dimana  kedua  formula  ini  mempunyai  komposisi minyak yang sama yaitu sebanyak 9% namun diperoleh hasil  %Transmitan  yang  berbeda.  Hal  ini  disebabkan karena  perbandingan  antara  Tween  80  dan  propilen glikol  yang  berbeda,  dimana  formula  2  mempunyai komposisi  Tween  80  lebih  banyak  yaitu  68% sedangkan  pada  formula  1  lebih  sedikit  hanya  62%.
Komposisi  fase  minyak  yang  sama  dengan  Tween  80 yang  lebih  besar  dapat  mempengaruhi  ukuran  tetesan emulsi sehingga semakin kecil ukuran yang dihasilkan semakin  jernih  SNEDDS  yang  diperoleh,  maka %Transmitan semakin besar.
Pada  formula  3  diperoleh  %Transmitan  yang semakin rendah yaitu 98,69% karena di dalam formula 3  mengandung  komposisi  minyak  sebesar  11%  dan komposisi  surfaktan  64%,  dimana  semakin  tinggi komposisi fase minyak diperlukan surfaktan yang lebih banyak pula untuk dapat melingkupi zat aktif tersebut. Formula 4 dengan komposisi minyak sebesar 12% dan komposisi  surfaktan  sebanyak  65%,  diperoleh  hasil %Transmitan yang semakin rendah lagi dari formula 3 yaitu  98,27%,  hal  ini  juga  disebabkan  karena  fase minyak  yang  semakin  tinggi  namun  komposisi surfaktan  yang  dipakai  kurang  dapat  melingkupi Minyak Buah Merah.
Pada  keempat  formula  ini  komposisi  ko-surfaktan tidak terlalu mempengaruhi hasil %Transmitan,  karena dilihat  dari  formula  2  dan  4  yang  mempunyai komposisi  propilen  glikol  yang  sama  yaitu  23%  akan tetapi  terdapat  perbedaan  hasil  %Transmitan  yang diperoleh.  Semakin  tinggi  komposisi  minyak,  maka komposisi  surfaktan  juga  harus  semakin  besar  agar
Formula MBM (%) Tween 80 (%) Propilen glikol (%) Rata-Rata Transmitan  (%) ± SD 1 9 62 29 99,21 ± 0,228 2 9 68 23 99,34 ± 0,085 3 11 64 25 98,69 ± 0,189 4 12 65 23 98,27 ± 0,114
mampu melingkupi minyak sehingga diperoleh ukuran partikel  yang  kecil  sehingga  penampilan  SNEDDS semakin  jernih  dengan  %Transmitan  yang  besar mendekati 100%.

## Waktu emulsifikasi
Waktu  emulsifikasi  dilakukan  untuk  menentukan seberapa  cepat  formula  SNEDDS  membentuk  emulsi (Zhao,  2015).  Suatu  formula  SNEDDS  harus  mampu membentuk  emulsi  secara  spontan  setelah  kontak langsung dengan cairan gastrik, hal tersebut merupakan parameter penting dalam formulasi SNEDDS. Emulsifikasi  secara  spontan  dapat  terjadi  ketika sediaan  SNEDDS  mampu  membentuk  emulsi  tanpa adanya  proses  pengocokan  yang  berarti.  Pemilihan minyak,  surfaktan  dan  ko-surfaktan  dalam  formula SNEDDS  sangat  penting  dalam  kaitannya  terhadap
terjadinya  emulsifikasi  spontan  ketika  berada  pada saluran  cerna (Sahumena, 2014), semakin cepat waktu emulsifikasi  maka  akan  meningkatkan  absorpsi  dari obatnya (Kaur dkk., 2013).
Jika waktu emulsifikasi yang dihasilkan kurang dari 1-2 menit maka formula SNEDDS mampu membentuk emulsi  setelah  langsung  kontak  dengan  cairan  gastrik, dengan menghasilkan sistem emulsi yang cukup jernih. Bila  waktu  emulsifikasi  lebih  dari  2  menit  akan menghasilkan sistem emulsi yang keruh, sehingga tidak direkomendasikan untuk formulasi SNEDDS (Makadia dkk.,  2013).  Uji  waktu  emulsifikasi  dilakukan  pada medium akuades pada suhu 37 ± 0,5°C. Hasil uji waktu emulsifikasi  SNEDDS  Minyak  Buah  Merah  terdapat pada Tabel 3.
Tabel 3. Hasil Uji Waktu Emulsifikasi SNEDDS Minyak Buah Merah
Formula Komposisi Rata-rata Waktu emulsifikasi (detik) ± SD MBM (%) Tween 80 (%) Propilen glikol (%) 1 9 62 29 16,51 ±  0,175 2 9 68 23 15,40 ±  0,272 3 11 64 25 17,64 ± 0,194 4 12 65 23 18,67 ± 0,180
Keterangan : nilai signifikansi < 0,05 pada semua formula. Ada perbedaan bermakna antar 4 formula SNEDDS Minyak Buah Merah terhadap nilai waktu emulsifikasi yang diperoleh.
Hasil  uji  waktu  emulsifikasi  menunjukkan  bahwa formulasi  tersebut  berhasil  membentuk  SNEDDS Minyak  Buah  Merah  karena  dapat  terdispersi  dalam waktu  kurang  dari  1  menit.  Sistem  ini  masuk  dalam kategori  kelas  2,  dimana  waktu  emulsifikasi  yang terbentuk  cukup  cepat  dengan  menghasilkan  sistem emulsi  yang  jernih  (Belhadj  dkk.,  2013).  Hal  tersebut menunjukkan  ukuran  droplet  yang  terbentuk  sudah dalam  ukuran  nano  karena  semakin  jernih  maka semakin kecil ukuran dropletnya.
Pada  formula  2  diperoleh  waktu  emulsifikasi  yang paling cepat yaitu 15,40 detik diikuti dengan formula 1 yaitu  16,51  detik,  keduanya  memiliki  komposisi minyak  yang  sama  sebesar  9%  namun  komposisi surfaktan pada formula 2 lebih banyak dibanding pada formula  1.  Semakin  cepat  waktu  emulsifikasi  yang dihasilkan  menunjukkan  SNEDDS  yang  semakin jernih, dengan %Transmitan lebih besar maka semakin kecil  pula  ukuran  dropletnya.  Hal  ini  dipengaruhi karena  komposisi  surfaktan  yang  semakin  banyak sehingga  mampu  mempercepat  pembentukan  emulsi ketika kontak dengan medium (akuades). Pada formula
3  dan  4  komposisi  minyak  semakin  besar  sedangkan komposisi  surfaktan  semakin  kecil,  sehingga  kurang mampu  mengikat  minyaknya,  maka  waktu  yang diperlukan untuk terbentuknya emulsi semakin lama. Nilai IC 50 Uji  sitotoksik  adalah  uji  yang  dilakukan  untuk mengetahui kemampuan suatu senyawa dalam memberikan  efek  toksik  terhadap sel  dengan menggunakan  parameter  IC 50 .  Metode  untuk  melihat efek  sitotoksik  pada  penelitian  ini  adalah  metode kolorimetrik  menggunakan  suatu  substrat  yang  akan dimetabolisme oleh sel menjadi produk berwarna yaitu metode MTT. Senyawa MTT diabsorpsi oleh sel hidup dan direduksi oleh sistem reduktase suksinat tetrazolium yang ada dalam rantai respirasi mitokondria  menjadi  formazan  berupa zat warna  ungu (Doyle  &  Griffiths,  2000).    Semakin  banyak  sel  yang hidup akan  memberikan warna  larutan dalam  sumuran lebih biru-ungu (Meiyanto dkk., 2006).
Intensitas warna ungu dibaca dengan ELISA reader pada  panjang  gelombang  595  nm.  Gambar  sel  T47D setelah pemberian MTT dapat dilihat pada Gambar 1.

## Kristal formazan
Gambar 1. Kristal formazan SNEDDS Minyak Buah Merah dari Sel T47D setelah pemberian MTT
Berdasarkan  Gambar  1  menunjukkan  adanya pembentukan kristal formazan yang berwarna ungu dan berbentuk  seperti  jarum  setelah  pemberian  MTT. Semakin  banyak  kristal  formazan  yang  terbentuk menunjukkan  semakin  banyak  sel  yang  masih  hidup, karena  MTT  hanya  akan  bereaksi  dengan  sel  hidup membentuk  kristal  formazan  (Doyle  &  Griffiths, 2000).  Uji  sitotoksik  digunakan  untuk  menentukan nilai  IC 50 ( Inhibitory  Concentration ).  IC 50 merupakan konsentrasi  yang  dapat  menunjukkan  kemampuan senyawa dalam menghambat pertumbuhan sel sebanyak  50%.  Nilai  IC 50 menunjukkan  potensi  suatu senyawa  sebagai  sitotoksik.  Semakin  kecil  harga  IC 50
maka  senyawa tersebut semakin toksik dan  sebaliknya jika  semakin  besar  harga  IC 50 maka  senyawa  tersebut semakin tidak toksik (Padmi, 2008).
Nilai  IC 50 diperoleh  dengan  persamaan  regresi linear  (y  =  bx  +  a)  dari  grafik  antara  log  konsentrasi versus % sel hidup dimana nilai r dikatakan linear jika lebih besar dari r tabel kemudian dimasukkan nilai y = 50 pada  persamaan  regresi  linear  dan  dicari  x  nya, kemudian  dihitung  antilog  dari  konsentrasi  tersebut maka  diperoleh  IC 50 (Anonim,  2009).  Nilai  IC50 SNEDDS  Minyak Buah Merah  pada  berbagai  formula tersaji  pada Table 4.
Tabel 4. Hasil Perhitungan IC 50 SNEDDS Minyak Buah Merah Formula
Komposisi
Rata-rata IC 50 (µL/mL) ± SD MBM (%) Tween 80 (%) Propilen glikol (%) 1 9 62 29 176,81 ±  1,44 2 9 68 23 58,99 ± 76,35 3 11 64 25 6832,02 ± 144,60 4 12 65 23 514,84 ± 87,59
Pada  penelitian  uji  sitotoksik  SNEDDS  Minyak Buah Merah terhadap sel T47D dari  formula 1  hingga formula 4 diperoleh  nilai rata-rata IC 50 secara  berturut adalah  176,81  ;  58,99  ;  6832,02  dan  514,84  µL/mL. Nilai  IC 50 dari  formula  1,  3  dan  4  tergolong  tinggi karena  menurut  Meiyanto  dkk.,  (2008)  suatu  senyawa uji  memiliki  potensi  sebagai  agen  kemopreventif  jika memiliki  nilai  IC 50 kurang  dari  100  µg/L.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  3  dari  4  formula  SNEDDS  yang dibuat  dengan  perbandingan  Minyak  Buah  Merah dengan Tween 80 sebagai surfaktan dan propilen glikol sebagai  kosurfaktan  tersebut  kurang  mempunyai aktivitas sitotoksik terhadap sel T47D secara in vitro .
Pada  penelitian  Nuringtyas  dkk.,  (2014),  ekstrak metanol  buah  merah  mempunyai  nilai  IC 50 sebesar 132,83  µg/mL  terhadap  sel  T47D,  bila  dibandingkan dengan  IC 50 yang  diperoleh  dari  uji  sitotoksik SNEDDS Minyak Buah Merah terhadap sel T47D pada formula  2  sebesar  58,99  µL/mL  maka  SNEDDS Minyak  Buah  Merah  formula  2  mempunyai  aktivitas sitotoksik  yang  lebih  besar  terhadap  sel  T47D.  Dari penelitian  tersebut  dapat  diketahui  bahwa  formula  2 SNEDDS  Minyak  Buah  Merah  dengan  persentase Minyak Buah Merah 9%, Tween 80 68% dan propilen glikol  23%  memiliki  aktivitas  sitotoksik  terhadap  sel T47D secara in vitro . Formula 2 menunjukkan aktivitas
sitotoksik yang terbaik, sesuai dengan hasil %Transmitan dan waktu emulsifikasi.
Jika dilihat dari rata-rata nilai IC 50 yang dihasilkan terdapat  perbedaan.  Namun,  dengan  analisis  statistik dibuktikan  bahwa  tidak  terdapat  perbedaan  bermakna, hal  tersebut  disebabkan  karena  nilai  standar  deviasi yang dihasilkan nilainya sangat besar perbandingannya dari keempat formula. Hal ini dapat disebabkan karena pengujian  SNEDDS  dengan  bahan  dasar  minyak kurang  baik  dilakukan  pada  keadaan in  vitro ,  karena pelarut  DMSO  yang  digunakan  kurang  dapat bercampur dengan senyawa uji yaitu SNEDDS Minyak Buah  Merah.  Maka  untuk  selanjutnya  perlu  dilakukan uji aktivitas sitotoksik secara in vivo untuk mengetahui nilai IC 50 nya.
Dari  hasil  penelitian  keempat  formula  bila  dilihat dari  hasil  IC 50 nya  maka  diperoleh  formula  SNEDDS yang  mempunyai  aktivitas  sitotoksik  pada  formula  2. Dari  hasil  sebelumnya  pada  uji  %Transmitan  dan  uji waktu  emulsifikasi  juga  diperoleh  hasil  yang  paling baik  adalah  formula  2.  Maka  dapat  disimpulkan  dari formula  2  diperoleh  karakter  SNEDDS  yang  baik dengan  perbandingan  komposisi  yaitu  Minyak  Buah Merah 9%, Tween 80 68% dan propilen glikol 23%.

## KESIMPULAN
Terdapat pengaruh perbandingan persentase Minyak  Buah  Merah,  Tween  80  dan  propilen  glikol dari 4  formula terhadap nilai %Transmitan dan  waktu emulsifikasi  (sig  <  0,05),  tetapi  tidak  berpengaruh terhadap  nilai  IC 50 pada  uji  aktivitas  sitotoksik  secara in vitro (sig > 0,05). Dari 4 formula diperoleh karakter SNEDDS yang paling baik pada formula 2 dilihat dari %Transmitan  yang  paling  besar  yaitu  99,34%,  waktu emulsifikasi  yang  paling  cepat  yaitu  15,40  detik  dan nilai IC 50 yang paling kecil yaitu 58,99 µL/mL.

## DAFTAR PUSTAKA
Amrutkar,  C.,  Salunkhe  &  K.,  Chaudhari,  S.  (2014).
Study on Self Nano Emulsifying Drug Delivery System  of  Poorly  Water  Soluble  Drug Rosuvastatin  Calcium. World  Journal  of Pharmaceutical Researc; 3 (4); 2137-2151.
Bali,  V., Ali, M.  &  Ali, J.  (2010).  Study of Surfactant
Combinations  and  Development  of  a  Novel Nanoemulsion  for  Minimising  Variations  in Bioavailability  of  Ezetimibe. Colloids  and
Surfaces Biointerfaces; 76 ; 410-420.
Belhadj, Z., Suyang, Z., Wenli, Z. & Junlin, W. (2013).
Formulation  Development  and  Bioavailability Evaluationof  a  Self-Nanoemulsifying  Drug
Delivery  System  (SNEDDS)  of  Atorvastatin
Calcium, International Journal of Pharmaceutics ; 29 (1); 2051-5782.
Budi,  I.  M.  &  Paimin,  F.  R.  (2005).  Buah  Merah, Penebar Swadaya. Jakarta.
Chintalapudi,  R.,  Murthy,  T.  E.  G.,  Lakshmi,  R.  K  & Manohar, G. G. (2015). Formulation, Optimization, and Evaluation of Self- Emulsifying Drug Delivery System of Nevirapine. International Journal of
Pharmaceutical Investigation; 5 (4); 205-213.
Date,  A.,  Desai,  N.,  Dixit,  R.  &  Nagarsenker,  M. (2010).  Self-nanoemulsifying  drug  delivery systems:  formulation  insights,  applications  and advances. Nanomedicine  (Lond.) ; 5 (10);  1595- 1616.
Doyle,  A.  &  Griffiths,  J.  B.  (2000).  Cell  and  Tissue Culture  for  Medical  Research.  New  York:  John Willey and Sons Ltd; 307 – 309; 311 – 312.
Fakultas  Farmasi  UGM.  (2009).  Prosedur  Tetap  Uji Sitotoksik Metode MTT. Yogyakarta: CCRC.
Hamid,  I.  S.  (2008).  Histopatologi  dan  Aktivitas Proliferasi  Sel  Kelenjar  Mammae  Setelah Pemberian  Ekstrak  Rimpang  Temu  Putih Curcuma zedoaria dan Inisiasi DMBA (Dimethylbenzen9antrasen)  pada  Tikus  Galur Sprague dawley. Veterina Medika; 1 (3).
Harumawati,  Sri.  (2016).  Optimasi  Formula  SNEDDS (Self-Nano Emulsifying Drug Delivery System) Minyak Buah Merah (Pandanus conoideus Lam) dengan Metode Simplex Lattice Design. Skripsi; Universitas Ahmad Dahlan, Yogyakarta.
Jong,  Wim  de.  (2002).  Kanker,  Apakah  Itu?
Pengobatan,  Harapan  Hidup,  dan  Dukungan Keluarga. Jakarta: Arcan.
Kaur,  G.,  Pankaj,  C.  &  Halikumar,  S.  L.  (2013).
Formulation Development of Self- Nanoemulsifying Drug Delivery System
(SNEDDS)  of  Celecoxib  for  Improvement  of Oral Bioavailability. Pharmacophore ; 4 (4); 120- 133.
Kommuru, T. R., Gurley, B., Khan, M. A. & Reddy, I.
K..  (2001).  Self  Emulsifying  Drug  Delivery
System (SEDDS) of Coenzyme Q10: Formulation for Enhanced Bioavailability Assessment. International Journal of Pharmacy; 212; 233-246.
Makadia, H. A., Bhatt, A. Y., Parmar, R. B., Paun, J. S. &  Tank,  H.  M.  (2013).  Self-Nanoemulsifying Drug  Delivery  System  (SNEDDS):  Future Aspects. Asian J. Pharm. Res; 3 (1); 21-24.
Mangan,  Y.  (2003).  Cara  Bijak  Menaklukkan  Kanker. Jakarta: PT Agromedia Pustaka.
Meiyanto, E. S., Da’i, M. & Agustina, D. (2006). Efek antiproliferatif  pentagamavumon  –  terhadap  sel kanker payudara T47D . Laporan Hasil Penelitian; Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.
Meiyanto,  E.,  Ratna,  A.,  Sri,  H.  &  Fitri,  R.  (2008).
Ekstrak  Etanolik  Biji  Buah  Pinang (Areca catechu )  mampu  menghambat  poliferasi  dan Pemacu Apoptosis sel MCF-7. Majalah Farmasi Indonesia; 19 (1); 12-19.
Moeljopawiro, S., Anggelia,  M.  R.,   Ayuningtyas, D.,
Widaryanti,  B.,  Sari,  Y.  &  Budi,  I.M. (2007). Pengaruh Sari Buah Merah (Pandanus conoideus lamk.)  terhadap  Pertumbuhan  sel  Kanker Payudara  dan  Sel  Kanker  Usus  Besar. Berkala Ilmiah Biologi; 6(2); 121-130.
Noviyanti, L. (2010). Modifikasi Teknik Kromatografi Kolom  untuk  Pemisahan  Trigliserida  dari Ekstrak Buah Merah. Skripsi; UNS, Surakarta . Nuringtyas, T. R., Pratama, Y., Galih & Wahyuono, S.
(2014).  Cytotoxicity  of  Buah  Merah  ( Pandanus conoideus Lamk.) Extract on Breast Cancer Cell
Line (T47D). Indonesian Journal of Biotechnology Gadjah mada University,
Yogyakarta.
Padmi,  A.  (2008).  Uji  Sitotoksik  Ekstrak  Etanol  70%
Buah  Kemukus  ( Piper  cubeba L.)  terhadap  Sel HeLa. Skripsi;  Universitas  Muhammadiyah

## Surakarta.
Patel, P. K., Patel, M. R. & Patel, K. R. (2014). Design and  Development  of  Self-Microemulsifying Drug Delivery System of Febuxostat.
International  Journal  of  Universal  Pharmacy and Bio Sciences; 3(2); 285-299.
Rawat,  S.,  Derle,  D.  V.,  Parve,  B.  S.  &  Shinde,  P.  R. (2014). Self Emulsifying Drug Delivery System
(SEDDS):  A  Method for  Bioavailability
Enhancement, International Journal Of
Pharmaceutical,  Chemical  And  Biological
Sciences; 4 (3); 479-494.
Rohman,  A.,  Sugeng,  R.  &  Che  Man,  Y.  B.  (2012). Characterization of red fruit ( Pandanus conoideus Lam.)  oil. International  Food Research Journal; 19 (2); 563-567.
Rowe,  R.  C.,  Sheskey,  P.  J.  &  Owen  S.  C.  (2009). Handbook of Pharmaceutic exipients 6 th edition. London: Pharmaceutical  Press  and  American Pharmascists Assosiciation ; 549-679.
Sahumena, M. H. (2014). Pengembangan Nanopartikel Ketoprofen  dengan  Teknik  SNEDDS  dan  Uji Aktifitas  Antiinflamasi. Tesis  Program  Pasca Sarjana; Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.
Shargel,  L.,  Pong,  S.  W.  &  Yu.  A.  B.  C.  (2005). Applied Biopharmaceutics and Pharmacokinetics Ed V , 411-450. The McGraw- Hill, Singapore.
Sinaga,  E.,  Suprihatin  &  Wiryanti,  I.  (2011).
Perbandingan Daya Sitotoksik Ekstrak Rimpang 3  Jenis  Tumbuhan  Zingiberaceae  Terhadap  Sel Kanker  T47D. Jurnal  Farmasi  Indonesia ; 5 (3); 125-133.
Singh,  B.,  Bandopadhyay  S.,  Kapil  R.,  Singh  R.  &
Katare  O.  P.  (2009). Self-Emulsifying  Drug Delivery Systems (SEDDS): Formulation Deveploment, Characterization, and Applications. Critical  Reviews  in  Therapeutic
Drug Carrier Systems ; 26 (5); 427-521.
Sumarawati,  T.  &  Fatmawati.  (2011).  Isolasi  dan  Uji Sitotoksik  Senyawa  Alkaloid  Mahkota  Dewa ( Phaleria  macrocarpa )  Pada  Kultur  Sel  Kanker Payudara (T47D). Prosiding Semnas Herbs  For Cancer; 102-110.
Sun,  M.  &  Han, J.  (2011).  Design, Preparation and In Vitro Evaluation  of  Paclitaxel-Loaded  Self- Nanoemulsifying  Drug  Delivery  System. Asian Journal of Pharmaceutical Science; 6 (1); 18-25.
Tjindarbumi, D. & Mangunkusumo, R. (2002). Cancer in Indonesia, Present and Future. Japan Journal of Clinical Oncology ; 32 (1); S17-S21.
Xi, J., Chang, Q., Chan, C, K., Meng, Y., Wang, G, N., Sun, J. B., Wang, Y, T., Tong, H. Y. & Zgheng, Y.  (2009).  Formulation  Development  and Bioavailability Evaluation of a Self- Nanoemulsified  Drug  Delivery  System  of Oleanolic  Acid. AAPS  Pharmaceutical  Science and Technology; 10 (1); 172-182.
Zhao,  T.  (2015).  Self-Nanoemulsifying  Drug  Delivery
System  (SNEDDS)  for  the  Oral  Delivery  of Lipophilic Drugs. Thesis Departement Industrial Engineering ; University of Trento, Italy.