e- Jurnal Rekayasa dan Teknologi Budidaya Perairan
Volume III No 1 Oktober 2014 ISSN: 2302-3600
HISTOPATOLOGI ORGAN KAKAP PUTIH ( Lates calcarifer ) DENGAN INFEKSI Vibrio alginolyticus DAN JINTAN HITAM ( Nigella sativa )

## SEBAGAI IMUNOSTIMULAN
Ahmad Fauzy *† , Tarsim ‡ dan Agus Setyawan ‡

## ABSTRAK
Efektifitas  jintan  hitam  ( Nigella  sativa )  sebagai  imunostimulan  untuk  ikan  yang diinfeksi Vibrio  alginolyticus dapat  diamati  melalui  profil  histopatologi. V. alginolyticus merupakan salah satu  penyebab terjadinya kematian pada budidaya kakap  putih  ( Lates  calcarifer ).  Tujuan  penelitian    untuk  mengetahui  pengaruh pemberian jintan hitam terhadap kakap putih yang diuji tantang dengan bakteri V. alginolyticus melalui  pengamatan  profil  histopatologisnya.  Penelitian  ini  terdiri dari  empat  perlakuan  yaitu  pemberian  0%;  2,5%;  5%  dan  7,5%  jintan  hitam/kg pakan.  Gambaran  histopatologi  yang  diamati  adalah  ukuran  sel,  warna,  dan kerusakan  jaringan  seperti  penumpukan  zat  besi  pada  pembuluh  darah ( hemosiderin ),  nekrosis, hipertropi, sel-sel  yang  lisis,  dan infiltrasi  jaringan ikat .Tingkat  kerusakan  jaringan  dinilai  berdasarkan  jumlah  kerusakan  yang ditemukan pada jaringan tersebut, dengan kisaran nilai 0 hingga 5. Penilaian pada tiap perlakuan diperoleh dari nilai rata-rata tingkat kerusakan jaringan. Berdasarkan tingkat  kerusakan  jaringan  pada  profil  histopatologi  menunjukkan  hasil  yang berbeda. Tingkat kerusakan jaringan pada penambahan 7,5%; 5% dan 2,5% jintan hitam pada pakan secara berturut-turut adalah 0,333; 0,733 dan 1,267. Penambahan 0%  jintan  hitam  dalam  pakan  menunjukkan  tingkat  kerusakan  jaringan  tertinggi dengan  nilai1,867.  Berdasarkan  pengamatan  profil  histopatologis,  penambahan 7,5% jintan hitam dalam pakan efektif sebagai imunostimulan kakap putih dalam mencegah infeksi V. alginolyticus tanpa menyebabkan kerusakan jaringan ikan.
Kata kunci: imunostimulan, herbal, organ, jaringan, vibriosis

## Pendahuluan
Proses  budidaya  kakap  putih  ( Lates calcarifer ) mengalami berbagai macam kendala. Salah satu masalah yang sering timbul  dalam  budidaya  kakap  putih
* Mahasiswa Jurusan Budidaya Perairan Universitas Lampung
† Surel korespondensi:ahmadfauzy92@gmail.com
‡ Dosen Jurusan Budidaya Perairan Universitas Lampung Alamat: Jl.Prof.S.Brodjonegoro No.1 Gedong Meneng Bandar Lampung 35145
adalah  infeksi  penyakit  bakterial.  Jenis bakteri  yang  sering  menyerang  kakap putih adalah Vibrio alginolyticus (Novriadi, 2010). Penanganan penyakit jenis  bakteri  dapat  diberi  antibiotik, namun  penggunaan  antibiotik  dapat
menyebabkan  resistensi  pada  bakteri dan residunya berbahaya untuk manusia.  Oleh  karena  itu,berbagai bahan herbal digunakan dalam pencegahan  penyakit  jenis  bakterial. Bahan herbal difungsikan dalam memicu  sistem  imun  non  spesifik  ikan sehingga  mampu  menahan  serangan akibat  bakteri.Salah  satu  bahan  alami yang  digunakan  untuk  pencegahan penyakit ini adalah ekstrak jintan hitam ( Nigella sativa ) (Permata, 2009). Manfaat  dari jintan hitam telah banyak dikenal  masyarakat  antara  lain  sebagai anti parasit, anti mikroba, anti inflamasi, memperbaiki  fungsi  hepar  dan  ginjal, mengobati  gangguan  pernafasan  dan pencernaan,  serta  dapat  digunakan untuk  meningkatkan  sistem  kekebalan tubuh  (Permata,  2009).  Kandungan kimia  yang  dominan  terkandung  pada tanaman  ini  adalah thymoquinon yang salah  satu  fungsinya  adalah  sebagai hepatoprotektor .
Jintan  hitam  sebagai  immunostimulan terhadap  bakteri V.alginolyticus dapat diamati  melalui  profil  histopatologi dengan  membandingkan  ikan  yang diinfeksi V.alginolyticus ,  diberi  jintan hitam,  dan  kombinasi  keduanya.  Oleh karena  itu  perlunya  kajian  mengenai aplikasi jintan hitam sebagai imunostimulan ikan dalam menghambat pertumbuhan bakteri Vibrio alginolyticus . Bahan dan Metode
Penelitian ini dilaksanakan pada Agustus - Oktober 2013 di Balai Besar Pengembangan Budidaya Laut (BBPBL)  Lampung.  Penelitian  ini terdiri  dari  4  perlakuan  dimana  setiap bak perlakuan terdiri dari 15 ekor kakap putih berukuran 10 cm. Perlakuan yang diberikan yaitu konsentrasi jintan hitam yang berbeda tiap berat (kg) pakan yang
diberikan  (0%,  2,5%,  5%,  dan  7,5%) (Akbar  dkk.,  2002).  Pemberian  jintan hitam  dilakukan  selama  38  hari pemeliharaan ditambah 7 hari masa uji tantang menggunakan Vibrio alginolyticus . Isolat  murni  bakteri V.  alginolyticus diperoleh  dari  BBPBL  Lampung.  Uji tantang dilakukan dengan menginfeksikan ikan uji dengan bakteri V. alginolyticus sebanyak    0,1 ml/ikan, injeksi  secara intra  peritoneal (i.p). setelah  diinfeksi,  ikan  diamati  gejala abnormal  yang  muncul  sebelum  ikan mengalami  kematian.  Selanjutnya  ikan dinekropsi untuk dibuat preparat histopatologi  (Genten et  al .,  2009) kemudian  diamati  perubahan  struktur jaringan  pada  ikan  uji  (Eroschenko, 2002). Efektifitas immunostimulan jintan hitam  terhadap  bakteri V.alginolyticus dapat diamati melalui profil histopatologi  dengan  membandingkan ikan yang diinfeksi V.alginolyticus saja,
diberi jintan hitam saja, dan kombinasi keduanya.
Proses analisis data dilakukan dengan membandingkan profil  histologi  ikan  dengan  dan  tanpa perlakuan.  Gambaran  histopatologis yang diamati adalah ukuran sel, warna,
dan kerusakan jaringan seperti penumpukan  zat  besi  pada  pembuluh darah ( hemosiderin ), nekrosis, hipertropi, sel-sel  yang  lisis,  dan infiltrasi jaringan ikat . Penilaian tingkat  kerusakan  jaringan  diperoleh dari jumlah jenis kerusakan yang terjadi pada  setiap  jaringan  (Eroschenko, 2002). Tingkat kerusakan diperileh dari gambar  jaringan  yang  diambil  melalui mikroskop  dengan  perbesaran  40  kali (Genten et al ., 2009).

## Hasil dan Pembahasan
Perubahan  tingkah  laku  terjadi  setelah diinjeksi dengan V. alginolyticus (Tabel
1). Pemeriksaan gejala klinis dilakukan
setelah ikan uji diinjeksi V. alginolyticus (uji  tantang)  yaitu  pada hari  ke-38  selama  masa  pemeliharaan. Pemeriksaan  dilakukan  secara  intensif karena  dikhawatirkan  gejala  yang terjadi  menyebabkan  kematian  pada ikan dan tidak dapat dilakukan nekropsi guna pengamatan secara mikroskopisnya.Gejala klinis pada ikan mulai  timbul  pada  hari  ke-3  setelah injeksi.Perubahan  tingkah  laku  ikan berupa  produksi  lendir  berlebih  yang menyebabkan air dalam bak pemeliharaan berubah keruh. Selain itu ikan  juga  sering  berdiam  diri  di  dasar dan melakukan gerakan refleks berlebihan  yang  menyebabkan  ikan sering membentur dinding bak, gerakan refleks  ikan  terjadi  akibat  adanya gerakan lain diluar bak (aktifitas penguji saat  mengamati,  beraktifitas  di  sekitar bak,  atau  memberi  pakan  pada  ikan). Gejala  paling  parah  yang  ditimbulkan ikan  yaitu  adanya  luka  (nekrosis) berwarna kemerahan pada bagian tubuh ikan dekat linea lateralis.
Tingkat kerusakan jaringan tiap perlakuan  dan  tiap  organ  dalam  satu perlakuan berbeda-beda hasilnya (Tabel 2; Gambar 1). Kerusakan pada masing- masing  penambahan jintan hitam  7,5% dapat dilihat bahwa terdapat perbedaan tingkat  kerusakan  yang  terjadi  pada
masing-masing perlakuan. Dengan penambahan  jintan  hitam  0%  rata-rata tingkat  kerusakan  jaringan  sebesar 1,876  artinya  tanpa  pemberian  jintan hitam,  kakap  putih  yang  diinjeksi V. alginolyticus mengalami  kerusakan terparah.
Komponen  utama  jintan  hitam  yaitu thymoquinone mampu  menghambat pembentukan asam  nukleat  (RNA) dan sintesis  protein  dari V.alginolyticus. Selain  itu thymoquinone menyebabkan tidak  aktifnya  protein  bakteri  dengan membentuk kompleks inversibel dengan asam amino nukleofilik sehingga protein kehilangan fungsinya. Hal ini terbukti dari hasil penelitian ini bahwa  penambahan  jintan  hitam  7,5% dapat  meningkatkan  imunitas    kakap putih  karena  infeksi V.alginolyticus hanya menyebabkan kerusakan rata-rata 0,333.  Sedangkan  tanpa  pemberian jintan hitam, tingkat kerusakan mencapai 1,867.
V.  alginolyticus menyerang  ikan  dari bagian  lendir  (mucus)  yang  diproduksi oleh tubuh karena lendir dapat menjadi media  yang  baik  untuk  perkembangan koloni bakteri (Fahri, 2009).
Selanjutnya  bakteri  masuk  ke  dalam tubuh  melalui  sistem  peredaran  untuk mengambil  proetin  yang  dibutuhkan oleh  bakteri.  Sistem  peredaran  darah bermuara  di  ginjal  yang  berfungsi sebagai  penyaring  ( filter )  darah  yang akan  dedarkan  ke  seluruh  tubuh.  Oleh karena  itu  ginjal  menjadi  organ  target bagi V.alginolyticus.

## 320                                                                      Histopatologi Organ Kakap Putih
Tabel  1.Perubahan  makroskopis  dan  kematian  kakap  putih  ( Lates  calcarifer ) setelah diinjeksi dengan Vibrio alginolyticus selama 7 hari Penambahan jintan hitam Mulai sakit Hari ke- Mati Hari ke- ∑ Mati Lesi/Gejala 0 % 2,5 % 3 3 14 14 3 3 Banyak  menghasilkan  lendir,  berdiam  di dasar, dan nafsu makan menurun. 5 % 3 14 3 Whirling, banyak  menghasilkan  lendir, berdiam  di  dasar,  nafsu  makan  menurun, dan terdapat luka di tubuh ikan 7,5 % 4 14 3 Whirling, banyak  menghasilkan  lendir, berdiam  di  dasar,  dan  nafsu  makan menurun.
Tabel  2.  Perbandingan  tingkat  kerusakan  jaringan  ( Lates  calcarifer )  setelah diinjeksi dengan Vibrio alginolyticus .
Penambahan jintan hitam Ulangan Organ Rata-rata Otak Ginjal Hati Mata Insang 0% 1 0 4 4 0
3 1,867 2 0 4 4 0 0 3 1 3 3 0 2 Rata-rata 0,333 3,667 3,667 0 1,667 2,5% 1 1 3 2 0
0 1,267 2 0 3 3 0 0 3 0 2 3 1 1 Rata-rata 0,333 2,667 2,667 0,333 0,333 5% 1 1 1 1 0 1
0,733 2 0 2 2 0
0 3 0 2 1 0 0 Rata-rata 0,333 1,667 1,333 0 0,333 7,5% 1 0 0 0 0 0
0,333 2 0 2 1 0 0 3 0 1 1 0 0 Rata-rata 0 1 0,667 0 0
Gambar  1.    Perbandingan  tingkat  kerusakan  jaringan  ( Lates  calcarifer )  setelah diinjeksi dengan Vibrio alginolyticus .
Perbedaan  profil  histopatologis  organ ginjal  dari  masing-masing  perlakuan (Gambar  2).  Secara  histologi,  ginjal tersusun dari tubula ginjal atau nephron. Ada  2  macam  bentuk  dari  tubulus  ini dan  dikenal  dengan  istilah renal corpuscle yang  berbentuk seperti
corong  dan convoluted  corpuscle yang merupakan  saluran  yang  bergulung- gulung. Renal  corpuscle tersusun  dari kapsula  Bowman  dan  glomerulus (Eroschenko, 2002). Histopatologi kontrol positif memiliki struktur tubulus dan  glomerulus  yang  rapi  sedangkan profil histopatologi A memiliki struktur tubulus yang hancur dan sulit mengenali glomerulus  karena  jaringan  telah  rusak akibat  infeksi  bakteri V.alginolyticus ( Gambar  2) . Infiltrasi  jaringan  ikat dapat  dilihat  pada  gambar  A  dengan
gejala rusaknya struktur jaringan akibat infeksi  bakteri V.alginolyticus yang menandakan  jaringan  telah  terinfeksi pada  waktu yang lama. Nekrosis dapat dilihat pada gambar A, B, dan C dengan gejala  hancurnya  struktur  jaringan akibat  infeksi V.alginolyticus yang menandakan jaringan telah mati (Gambar 2) (Prince dan Wilson, 2006). Kongesti dapat dilihat pada penambahan  jintan  hitam  5%  dengan gejala  munculnya  bercak  merah  pada jaringan  yang  menandakan  terjadinya peningkatan jumah darah dalam jaringan.Pada  gambar  D  tidak  terlihat adanya kerusakan jaringan dan memiliki struktur jaringan yang rapi bila dibandingkan dengan gambar A, B, dan C (Gambar 2).

## 322                                                                      Histopatologi Organ Kakap Putih
Gambar 2. Perbandingan profil histopatologi ginjal Kakap Putih dengan pewarnaan H-E  perbesaran  400x.  Keterangan:  1.  Tubulus,  2.  Glomelurus,  3. Infiltrasi  Jaringan  Ikat,  4.  Nekrosis,  dan  5.  Kongesti.  (Gambar  K: Kontrol positif, gambar A: Perlakuan 0%, gambar B: Perlakuan 2,5%, gambar C: 5% dan gambar D: Perlakuan 7,5%)
V.  alginoliticus menyerang  ikan  secara sistemik  dari  bagian  lendir  ( mucus ) yang  diproduksi  oleh  tubuh  (Fahri, 2009). Selanjutnya bakteri ini masuk ke dalam  tubuh  melalui  sistem  peredaran darah  dan  bermuara  pada  organ  yang dilalui  darah.  Salah  satu  organ  vital yang dilalui darah adalah ginjal  karena ginjal  berfungsi  sebagai  penyaring darah.  Kerusakan  yang  terjadi  pada ginjal sangat parah, hal ini dapat dilihat pada  gambar  dengan  membandingkan gambar  A  dengan  kontrol  positif (Gambar 2).
Perbedaan  profil  histopatologi  organ hati  dari  masing-masing  perlakuan (Gambar 3).  Gambaran  histologi organ hati  tersusun  dari  sel-sel  hepatosit  dan sel pankreas. Berdasarkan gambar yang diperoleh dapat dilihat bahwa gambaran profil histopatologis A terjadi kongesti, vakuolisasi,  infiltrasi  jaringan ikat, dan
hemosiderin.  Vakuolisasi  terbentuk karena terjadinya degenerasi jaringan.Degenerasi merupakan perubahan  jaringan  menjadi  bentuk yang  kurang  aktif  (Tavernarakis  and Driscoll,  2001).Vakuolisasi  memiliki gejala  timbulnya  seperti  ruang  kosong yang memiliki ukuran abnormal dibandingkan  dengan  yang  lainnya, vakuolisasi  juga  dapat  dilihat  pada gambar  B  (Gambar  3).    Hemosiderin memiliki  gejala  terdapat  warna  kuning pada  jaringan  yang  menandakan  telah terjadinya  perombakan  darah  secara cepat akibat infeksi bakteri V. alginolyticus, hemosiderin  juga  dapat dilihat pada gambar A. Pada gambar D tidak terlihat adanya kerusakan jaringan dan memiliki struktur jaringan yang rapi bila dibandingkan dengan gambar A, B, dan C (Gambar 3).
Gambar 3. Perbandingan profil histopatologi hati Kakap Putih dengan pewarnaan
H-E  perbesaran  400x.  Keterangan:  1.  Sel  Pankreas,  2.  Sel  Hepatosit, 3.kongesti, 4. Hemosiderin, 5. Vakuolisasi,  6.  Infiltrasi Jaringan  Ikat, dan 7. Nekrosis. (Gambar K: Kontrol positif, gambar A: Perlakuan 0%, gambar B: Perlakuan 2,5%, gambar C: Perlakuan 5%. dan gambar D: Perlakuan 7,5%) Perbedaan  profil  histopatologis  organ insang  terjadi  pada  setiap  perlakuan pemberian  jintan  hitam  yang  berbeda (Gambar  4).  Insang  berfungsi  sebagai alat respirasi pada ikan yang berhubungan langsung dengan lingkungan  luar  sehingga  berpeluang besar terinfeksi penyakit.Insang
tersusun  dari  lengkung  insang,  gerigi insang  ( gill  raker )  dan    tapis  insang. Tapis  insang  ini  tersusun  dari  lamella primer,  disepanjang  lamella  primer terdapat lembaran-lembaran halus lamella  sekunder.  Lamella  sekunder inilah yang berfungsi untuk mengambil oksigen dari air.Lamella primer tersusun  dari  sel-sel  pilar  ( pillaster cells ) yang tersusun berjajar dan sel-sel
tersebut terbungkus oleh selaput epidermis  yang  tipis  dan  bersifat semipermeabel  (Genten et  al .  2009). Profil histopatologis dengan
penambahan  jintan  hitam  0%  terjadi nekrosis,  hiperplasia,dan  rupture  epitel (Gambar  4).  Hiperplasia  memiliki gejala  terjadinya  perubahan  ukuran  sel yang  lebih  besar  dibandingkan  ukuran sel  lainnya,  hiperplasia  juga  dapat dilihat  pada  gambar  C.  Ruptur  epitel memiliki  gejala  lepasnya  epite-lepitel insang akibat gangguan yang ditimbulkan  bakteri V.alginolyticus .
Struktur  lamela  primer  dan  sekunder gambar D terlihat lebih rapi dibandingkan dengan gambar A, B, dan C (Gambar 4).

## 324                                                                      Histopatologi Organ Kakap Putih
Gambar 4. Perbandingan profil organ insang Kakap Putih dengan pewarnaan H-E perbesaran 400x. Keterangan: 1. Lamela Primer, 2. Lamela Sekunder, 3. Nekrosis, 4. Ruptur Epitel, dan 5. Hiperplasia. (Gambar K: Kontrol positif, gambar A: Perlakuan 0%, gambar B: Perlakuan 2,5%, gambar
C: Perlakuan 5%. dan gambar D: Perlakuan 7,5%)

## Kesimpulan
Pemberian jintan hitam 7,5% meningkatkan  imunitas  kakap  putih yang  diinfeksi Vibrio  alginolyticus dengan  kerusakan  jaringan  organ  yang terendah dibandingkan
dengan perlakuan yang lainnya.
. Daftar Pustaka
Akbar,  S.,  P.  Hartono  dan  B.  Kurnia. 2002. Nutrisi dan Teknik Pembuatan  Pakan  ikan  Kakap Putih dalam Budidaya  ikan  Kakap Putih  (Lates  carcarifer, Bloch. )  di Karamba Jaring Apung. Departemen Pertanian. Balai Budidaya Laut Lampung. Lampung. 65 Halaman Eroschenko, V.P. 2002. Atlas Histologi Difiore dengan Korelasi Fungsional Edisi 11. Buku Kedokteran. EGC. Jakarta. Fahri.  M.  2009. Bakteri  Patogen  pada Budidaya Perikanan Vibrio alginolyticus. http://elfahrybima.blogspot.com/20 9/01/bakteri-pathogen-pada-
budidaya.html.
Genten,  F.,  E.  Terwinghe  and    A. Dangui.  2009. Atlas  of  Fish Histology . Science Publishers.
USA.
Novriadi,  R.  2010. Aplikasi  Vaksinasi Vibrio  polivalen  melalui  Pakan pada  Ikan  Kakap  Putih  untuk Peningkatan  Imunitas  dan  Laju
Pertumbuhan . Balai Budidaya Laut Batam. Riau. Permata M.K. 2009. Pengaruh Pemberian  Ekstrak  Jintan  Hitam (Nigella sativa) terhadap Perubahan  Histopatologik  Hepar Mencit  Balb/C  yang  diinfeksi Salmonella typhimurium. Universitas
Diponegoro. Semarang
Prince, S.A. dan Wilson, L.M. 2006. Patofisiologi . Edisi VI. EGC.
Jakarta.
Tavernarakis, N and M. Driscoll. 2001.
Cell/Neuron Degeneration .
Academic Press. USA.