## EFEK INHIBISI ENZIM α -GLUKOSIDASE DARI EKSTRAK ETIL ASETAT, ETANOL, DAN INFUSA DAUN JAMBU MENTE
( Anacardium occidentale
Linn)

## Musyirna Rahmah Nasution, Maria Yella Ladiona, Enda Mora
Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Riau, Pekanbaru, Riau Email: musyirnarahmah@yahoo.com

## ABSTRAK
Telah dilakukan penelitian uji  efek inhibisi enzim α -glukosidase dari  ekstrak etil  asetat, etanol, dan  infusa  daun  jambu  mente  ( Anacardium  occidentale Linn).  Penelitian  ini  menggunakan metoda  spektrofotometri  dengan  substrat  p-nitrofenil-α-D-glukopiranosida.  Hasil  pengujian menunjukkan bahwa nilai  IC 50 ekstrak etil  asetat terhadap inhibisi enzim α -glukosidase sebesar 700,696  µg/ml.  Sedangkan  nilai  IC 50 ekstrak  etanol  sebesar  259,840  µg/ml.  Akarbose  sebagai pembanding  memiliki  nilai  IC 50 sebesar  0,128  µg/ml.  Selain  pengujian  ekstrak,  dilakukan  juga pengujian infusa berdasarkan penggunaan masyarakat secara tradisional yang memberikan daya inhibisi enzim α -glukosidase pada konsentrasi 0,5 g/ml sebesar 98,006 %.
Kata Kunci : α-glukosidase, inhibisi, daun jambu mente

## 1. PENDAHULUAN
Diabetes mellitus adalah keadaan hiperglikemia  disertai  berbagai  kelainan akibat  gangguan  hormonal.  Pengobatan diabetes  mellitus  pada  prinsipnya  adalah menjaga  agar  kadar  glukosa  darah  dapat dipertahankan  pada  kondisi  normal  (80-120 mg/dl).  Diabetes  mellitus  juga  dapat dikontrol  dengan  melakukan  upaya  seperti perencanaan  diet,  mempertahankan  bobot badan normal, dan melakukan olahraga yang cukup.  Obat  hanya  perlu  diberikan  apabila setelah  melakukan  berbagai  upaya  tersebut secara maksimal tidak berhasil
mengendalikan kadar glukosa darah (Ganiswara, 1999).
Inhibitor α -glukosidase digunakan untuk mengobati  diabetes  mellitus  tipe  II.  Kerja antihiperglikemik dari inhibitor α - glukosidase  merupakan  inhibisi  kompetitif terhadap  enzim-enzim  pencernaan  di  usus halus.  Enzim-enzim  ini  berperan  pada hidrolisis  karbohidrat  makanan  menjadi glukosa  dan  monosakarida  lainnya.  Pada
penderita diabetes mellitus, inhibisi terhadap enzim  ini  menyebabkan  penghambatan absorpsi  glukosa  sehingga  menurunkan keadaan hiperglikemia setelah makan.
Kebanyakan  obat antidiabetes  oral memberikan  efek  samping  yang  tidak diinginkan sehingga para ahli mengembangkan sistem pengobatan tradisional  untuk  diabetes  mellitus  yang relatif  aman  (Agoes,  1991).  Tanaman merupakan sumber yang kaya akan inhibitor α -glukosidase  serta  memiliki  penghambatan aktivitas α -glukosidase  yang  kuat,  sehingga dapat  digunakan  untuk  terapi  hiperglikemia yang  efektif  (Nguyen et  al ,  2010).  Hal tersebut  menyebabkan  banyak  dilakukan penelitian  untuk  mencari  inhibitor α - glukosidase yang berasal dari tanaman untuk mengobati  diabetes  mellitus  (Gao et  al , 2008).
Salah  satu  tanaman  yang  dimanfaatkan khasiatnya  adalah  daun  jambu  mente ( Anacardium  occidentale Linn).  Tanaman ini  secara  empiris  digunakan  sebagai
antidiabetes, tetapi belum diteliti aktivitasnya sebagai inhibitor α -glukosidase.
Kandungan  senyawa  kimia  yang  terdapat dalam  daun  jambu  mente  menunjukkan adanya  golongan  flavonoid,  tanin,  kuinon, dan saponin (Syaharuddin dkk , 2007).
Adapun  penelitian  yang  telah  dilakukan pada  daun  jambu  mente  ( Anacardium occidentale Linn)  seperti  efek  hipoglikemik dari ekstrak metanol daun jambu mente pada tikus  yang  diinduksi  streptozotosin  (Sokeng et al , 2007; Ukwenya et al , 2012).
Berdasarkan  hal  tersebut,  dilakukan penelitian antidiabetes yang bertujuan untuk mengetahui  aktivitas  inhibisi  enzim α - glukosidase  dari  ekstrak  etil  asetat  dan etanol  daun  jambu  mente  ( Anacardium occidentale Linn).

## 2. METODOLOGI PENELITIAN Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan:  alat  destilasi, rotary  evaporator,  pH  meter,  microplate reader  96  wells,  inkubator,  timbangan analitik  (Acculab),  sentrifuse, vortex  mixer (VM-2000), pipet mikro 10-100 µl dan 100- 1000  µl  (Eppendorf), eppendrorf  tube dan peralatan  gelas  yang  biasa  digunakan  di laboratorium.
Bahan  yang  digunakan  adalah  aquadest, metanol, etil asetat, n- heksan, larutan buffer fosfat  pH  7  (Sigma-aldrich,  USA), Bovin serum  albumin (BSA)  (Merck,  jerman), enzim  α-glukosidase  (Sigma-aldrich,  USA), substrat
p-nitrofenil-α-D-glukopiranosa (Sigma-aldrich,
USA), acarbose (Glucobay ® ), dimetilsulfoksida (Sigma- aldrich,  USA),  larutan  Na 2 CO 3 (Sigma- aldrich, USA) . Pengambilan dan Identifikasi Sampel Sampel dari bagian daun tanaman jambu mente  yang  akan  diteliti  diambil  di  Jalan Tanjung  Jaya  Kecamatan  Bukit  Raya, Pekanbaru.  Identifikasi  tanaman  dilakukan
di  Laboratorium  Botani  oleh  tim  botani jurusan  biologi  Fakultas  Matematika  dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Riau.
Pembuatan Ekstrak, Fraksinasi sampel dan Uji Fitokimia
Daun  jambu  mente  segar  dikumpulkan dan  dicuci  bersih,  kemudian  dikering anginkan,  dirajang  dan  ditimbang.  Lalu dimaserasi  dengan  menggunakan  pelarut etanol  hingga  terendam  dengan  sempurna. Wadah ditutup rapat dan campuran disimpan di  tempat  yang  terlindung  dari  cahaya selama  3-5  hari  sambil  diaduk  berulang. Selanjutnya filtrat diambil melalui penyaringan  dan  ditambah  kembali  dengan pengekstrak  ke  dalam  wadah  sampel, maserasi  dilakukan  sebanyak  tiga  kali. Maserat yang didapat kemudian dikentalkan dengan rotary  evaporator sampai  didapat ekstrak  kental.  Kemudian  ekstrak  kental etanol  tersebut  di  fraksinasi  menggunakan pelarut n- heksan  dan  residunya  difraksi dengan  etil  asetat.  Hasil  dari  fraksinasi dipekatkan dengan rotary evaporator sehingga  diperoleh  ekstrak  kental  fraksi n- heksan  dan  etil  asetat.  Hasil  dari  masing- masing  ekstrak  ditimbang  dan  dilakukan  uji fitokimia  diantaraya  uji  senyawa  saponin, fenolik,  flavonoid,  terpenoid,  steroid  dan alkaloid.

## Uji  inhibisi  enzim  α-glukosidase secara in vitro
Pada  microplate  96  wells  dicampurkan 10  µl  sampel  (ekstrak/infusa),  50  µl  buffer fosfat  (pH  7),  25  µl  substrat  p-nitrofenil-α- D-glukopiranosida,  dan  25  µl  enzim α - glukosidase.  Lalu  campuran  diinkubasi selama 30 menit pada suhu 37 0 C. Setelah 30 menit, reaksi dihentikan dengan penambahan  100  µl  larutan  Na 2 CO 3 . Kemudian  absorban  dari p -nitrofenol  yang terbentuk  diukur  dengan  spektrofotometer UV-vis  pada  panjang  gelombang  410  nm. Pengujian  yang  sama  dilakukan  pada
konsentrasi  500,  250,  125,  dan  62  µg/ml. Dapat  dilihat  pada  tabel  1.  Sebagai  kontrol positif  digunakan  tablet  Glucobay  yang mengandung  zat  aktif  akarbose  (Sancheti et al, 2009).

## Tabel 1.
Kondisi reaksi uji inhibisi α-glukosidase Reagen Volume (μl) Bo B1 So S1 Ao A1 Sampel - - 10 10 10 10 DMSO 10 10 - - - - Bufer fosfat 50 50 50 50 50 50 PNPG 25 25 25 25 25 25 Enzim - 25 - 25 - 25 Inkubasi 37°C, 30 menit Na 2 CO 3 100 100 100 100 100 100
Keterangan:  Bo=  kontrol  blanko,  B1=  blanko,  So= kontrol  sampel , S1=  sampel,  Ao=  kontrol  akarbose, A1= akarbose
Persen inhibisi(% I) dihitung dengan rumus: %I =  A kontrol – A sampel x 100%
A kontrol

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengujian  fitokimia  yang  bertujuan untuk  mengetahui  keberadaan  metabolit sekunder  yang  diharapkan  dapat  berfungsi sebagai  antidiabetes.  Pengujian  fitokimia meliputi pengujian alkaloid, steroid, flavonoid,  saponin,  fenolik,  dan  terpenoid. Hasil pengujian fitokimia daun jambu mente menunjukkan bahwa pada ekstrak etil asetat mengandung senyawa flavonoid dan fenolik. Sedangkan  pada  ekstrak  etanol  dan  infusa mengandung  senyawa  flavonoid,  fenolik, dan saponin.
Menurut  penelitian  Kumar et  al (2011), senyawa  metabolit  sekunder  yang  dapat menghambat  aktivitas  enzim α -glukosidase antara  lain  flavonoid,  alkaloid,  fenolik,  dan terpenoid.  Beberapa  senyawa  flavonoid yang  dapat  menghambat  aktivitas  enzim α - glukosidase seperti isoflavon dan flavonol.
Komponen  flavonoid  pada  tanaman berikatan  dengan  gula  sebagai  glikosida. Flavonoid  sangat  efektif  digunakan  sebagai antioksidan, antibakteri, dan inhibitor enzim α -glukosidase.  Hal  ini  terbukti  dari  hasil penelitian  ekstrak  flavonoid  buah  mahkota dewa  dengan  konsentrasi  1  %  (b/v)  mampu menginhibisi  aktivitas  enzim α -glukosidase sebesar 23,06-40,26 % (Hartika, 2009).
Uji penghambatan aktivitas α - glukosidase merupakan uji terhadap senyawa yang berpotensi sebagai antidiabetes  karena  penghambatan  enzim α - glukosidase  mampu  menurunkan  kadar glukosa  darah.  Biasanya  obat  antidiabetes mengandung  senyawa-senyawa  yang  bisa menghambat  kerja  enzim α -glukosidase yang berperan dalam pemecahan karbohidrat menjadi gula darah (Hanefeld, 2007).
Penghambatan enzim α -glukosidase menghambat  secara  kompetitif.  Hal  ini terjadi ketika inhibitor dan substrat berikatan dengan  enzim  pada  sisi  aktif  yang  sama karena  substrat  dan  inhibitor  memiliki struktur yang sama. Penghambatan kompetitif tidak mengubah kecepatan reaksi maksimum karena ikatan inhibitor reversible dapat  diatasi  dengan  konsentrasi  substrat yang  tinggi,  tetapi  ikatan  substrat-enzim lemah  dan  afinitas  ikatannya  terlihat menurun.
Pengujian  inhibisi  enzim α -glukosidase dilakukan dengan reaksi  enzimatis secara in vitro menggunakan  spektrofotometer  UV- vis  pada  panjang  gelombang  410  nm.  Pada uji ini, enzim α -glukosidase akan menghidrolisis  substrat  p-nitrofenil-α-D- glukopiranosida  menjadi p -nitrofenol  yang berwarna  kuning  dan  glukosa.  Aktivitas enzim  diukur  berdasarkan  hasil  absorbansi p -nitrofenol  yang  berwarna  kuning  (Artanti dkk ,  2002).  Apabila  memiliki  kemampuan menghambat  aktivitas  enzim α -glukosidase,
maka p -nitrofenol  yang  dihasilkan  akan berkurang (Sugiwati, 2005).
Pengujian  sampel  menggunakan  ekstrak etil  asetat,  etanol,  dan  infusa.  Ekstrak dilarutkan  dengan  dimetilsulfoksida  untuk membantu  melarutkan  ekstrak.  Larutan sampel  dibuat  sebanyak  lima  konsentrasi, yaitu  1000,  500,  250,  125,  dan  62  µg/ml untuk melihat perubahan aktivitas penghambatan terhadap enzim α - glukosidase,  sedangkan  infusa  tidak  dibuat serial konsentrasinya dan pengujian dilakukan  sebanyak  3  pengulangan.  Buffer fosfat  digunakan  untuk  menjaga  pH  dari larutan  enzim  dan  substrat  tetap  pada  pH  7, sedangkan larutan natrium karbonat digunakan  sebagai  larutan  penghenti  reaksi enzim.  Natrium  karbonat  dipilih  sebagai penghenti reaksi sebab
mampu meningkatkan  pH  larutan  uji  menjadi  basa, sehingga  enzim  akan  terdenaturasi.  Analisa inhibisi
enzim α -glukosidase ini menggunakan  microplate  96  wells.  Larutan uji  dibuat  sebagai  kontrol  blanko,  blanko, kontrol sampel, dan sampel (Kurnia, 2011).
Tujuan  dibuat  kontrol  blanko  adalah untuk  mengetahui  bila  bahan-bahan  yang digunakan  dalam  larutan  uji  memberikan serapan  pada  panjang  gelombang  410  nm dan  untuk  mengetahui  kemungkinan  enzim α -glukosidase  pada  blanko  masih  aktif  atau tidak  setelah  penambahan  larutan  penghenti natrium  karbonat.  Pada  pengujian  larutan sampel,  nilai  serapan  bisa  saja  tidak  murni berasal  dari p -nitrofenol  yang  terbentuk tetapi  dapat  juga  dipengaruhi  oleh  serapan sampel yang berwarna yang dapat memberikan  nilai  serapan  pada  panjang gelombang  pengukuran  yang  digunakan. Maka,  pengujian  kontrol  sampel  diperlukan untuk  menghilangkan  nilai  serapan  dari ekstrak  yang  berwarna  tanpa  adanya aktivitas  enzim  karena  telah  dibasakan  oleh natrium karbonat.
Pengujian  aktivitas  inhibisi  enzim α - glukosidase terhadap beberapa serial konsentrasi  sampel  menunjukkan  bahwa inhibisi enzim α -glukosidase dari ekstrak etil asetat  pada  konsentrasi  1000  µg/ml  sebesar 71,970 % dan ekstrak etanol sebesar 88,117 % (Gambar 1). Dari hasil penelitian tersebut dapat  diketahui  bahwa  ekstrak  etanol memiliki  aktivitas  penghambatan  enzim α - glukosidase  yang  lebih  besar  dibandingkan dengan  ekstrak  etil  asetat.  Hal  ini  dapat terlihat  dari  perbedaan  jumlah  kandungan senyawa  metabolit  sekunder  yang  terdapat pada  ekstrak  etil  asetat  dan  ekstrak  etanol dimana ekstrak etil asetat hanya mengandung senyawa flavonoid dan fenolik, sedangkan  ekstrak  etanol  mengandung senyawa flavonoid, fenolik, dan saponin.

## Gambar 1.
Diagram batang persen inhibisi enzim α - glukosidase dari ekstrak etil asetat dan etanol
Sebagai pembanding digunakan senyawa inhibitor  akarbose.  Akarbose  digunakan sebagai  standar  karena  akarbose  telah digunakan  secara  luas  sebagai  obat  di Indonesia  serta  lebih  mudah  didapat  dan banyak digunakan sebagai pembanding pada berbagai  literatur  (Shinde et  al ,  2008). Akarbose  dikenal  dengan  nama  Glucobay. Obat ini digunakan untuk menghambat kerja enzim  yang  memecah  karbohidrat  menjadi glukosa. Akarbose secara kompetitif menghambat hidrolisis enzimatik oligosakarida  oleh  enzim α -glukosidase  di
usus  halus.  Pada  pengujian  daun  jambu mente  didapatkan  persen  inhibisi  akarbose sebesar  92,927  %  dimana  pengujian  ini menggunakan tablet Glucobay.
Nilai  IC 50 merupakan  bilangan  yang menunjukkan  konsentrasi  ekstrak  (µg/ml) yang  mampu  menghambat  50  %  aktivitas enzim α -glukosidase.  Nilai  IC 50 ekstrak dibandingkan dengan nilai IC 50 pembanding (akarbose). Nilai IC 50 yang kecil disebabkan oleh  persen  inhibisi  yang  besar  dari  variasi konsentrasi  ekstrak,  sedangkan  besarnya nilai  persen  inhibisi  disebabkan  kandungan zat  aktif  yang  menghambat  enzim α - glukosidase  juga  besar.  Pada  penelitian  ini akarbose sebagai pembanding memiliki nilai IC 50 sebesar 0,128 µg/ml yang berarti bahwa pada  konsentrasi  ini  akarbose  mampu menghambat  aktivitas  enzim α -glukosidase sebesar 50% (Tabel 2).
Tabel 2. Data perbandingan nilai IC 50 dari ekstrak etil asetat, etanol daun jambu mente dan akarbose
Dari  pengujian  tersebut  dapat  diketahui bahwa  ekstrak  etanol  memiliki  aktivitas inhibisi  enzim α -glukosidase  yang  lebih besar  dibandingkan  dengan  ekstrak  etil asetat.  Tetapi,  kedua  ekstrak  ini  memiliki aktivitas  inhibisi  enzim α -glukosidase  yang lebih kecil dibandingkan dengan akarbose.

## 4. KESIMPULAN
Nilai  IC50  ekstrak  etil  asetat  terhadap inhibisi enzim α-glukosidase  sebesar 700,696 µg/ml dan nilai IC50 ekstrak etanol terhadap  inhibisi  enzim  α-glukosidase sebesar  259,840  µg/ml  dengan  pembanding akarbose  yang  memiliki  nilai  IC50  sebesar 0,128 µg/ml.

## 5. DAFTAR PUSTAKA
Anonim., 2010, Keputusan Mentri Kesehatan RI No. 492/MENKES Per/IV/ 2010 tentang Persyaratan kualitas air minum. Departemen
Kesehatan,  www.depkes.go.id,  diakses 25 Mei 2013.
Agoes, A., 1991, Pengobatan Tradisional di Indonesia , Medika, No. 8, Thn. 17, Hal. 632
Artanti,  N., Hanafi, M., dan Kardono,  L.  B.
S.,  2002,  Aktivitas  Penghambatan Ekstrak Gambir ( Uncaria gambir Roxb) dan  Ekstrak Taxus  sumatrana (Miquel) de  Laubenfels  Terhadap  Enzim  α- glukosidase, Prosiding  Temu-Ilmiah Jaringan  Kerjasama  Kimia  Indonesia Seminar  Nasional  V  Kimia  Dalam Pembangunan , Hal. 483-488 Ganiswara,  S.  G.,  1999, Farmakologi  dan Terapi ,  Edisi  4,  Fakultas  Kedokteran Universitas Indonesia, Jakarta
Gao,  Hong.,  Huang,  Yi-Na.,  Gao,  Bo.,  Xu,
Pei-Yu.,  Inagaki,  Chika.,  Kawabata, Jun.,  2008,  α-Glucosidase  Inhibitory Effect by the Flower Buds of Tussilago farfara L, Food  Chemistry  106 ,  1195- 1210
Hanefel,  M.,  2007, Cardiovascular  Benefit and Safety Profile of Acarbose Therapy in  Prediabetes  and  Established  Type  2 Diabetes , Cardiovase diabetol 6: 20 Harborne,  J.  B.,  1987, Metode  Fitokimia Penuntun  Cara  Modern  Menganalisis Tumbuhan , Edisi II, ITB, Bandung
Hartika,  R.,  2009, Aktivitas  Inhibisi  α- glukosidase Ekstrak Senyawa Flavonoid Buah Mahkota Dewa , Skripsi, Departemen Kimia Fakultas
Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor, Bogor
Kumar, S., Narwal,  S., Kumar, V., Prakash, O.,  2011, α-glucosidase  Inhibitors
From  Plants:  A  Natural  Approach  to
No Sampel IC 50 (µg/ml) 1 Ekstrak etil asetat 700,696 2 Ekstrak etanol 259,840 3 Akarbose 0,128
Treat Diabetes , Institute of Pharmaceutical  Sciences,  Kurukshetra University, India Kurnia, E., 2011 , Uji Aktivitas Penghambatan α-glukosidase dan Penapisan  Fitokimia  dari  Beberapa Tanaman  Famili  Apocynaceae  dan Clusiaceae , Skripsi, Fakultas
Matematikan  dan  Ilmu  Pengetahuan Alam,  Jurusan  Farmasi,  Universitas Indonesia, Depok
Nguyen,  X.  N.,  Kiem,  P.  V.,  Minh,  C.  V.,
Ban, N. K., Cuong, N. X., Tung, N. H.,
Ha, L. M., Ha, D. T., Tai, B. H., Quang,
T.  H.,  2010,  α-glucosidase  Inhibition Properties of Cucurbitane-type Triterpene Glycosides from the Fruits of Momordica  charantia , Chem.  Pharm. Bull 58 , 720-724 Sancheti,  S.,  Sancheti,  S.,  Sung-Yum,  S., 2009,  Chaenomeles  Sinensis:  A  potent α-and β-Glucosidase Inhibitor, American Journal of Pharmacology and
Toxicology ,  Department  of  Biology,
Kongju National University, Korea
Shinde,  J.,  Taldone,  T.,  Barletta,  M.,
Kunaparaju,  N.,  Bo,  H.,  Kumar,  S., 2008, Alpha-glucosidase Inhibitory Activity  of  Syzygium  cumini  (Linn.) Skeels  Seed  Kernel  In  Vitro  and  In Goto-Kakizaki (GK) Rats, Carbohydrate Research 343, 1278-1281
Sokeng,  S.  D.,  Lontsi,  D.,  Moundipa,  P.  F.,
Jatsa, H. B., 2007, Hypoglycemic Effect of  Anacardium  occidentale  L  Methanol
Extract and Fractions on
Streptozotocin-induced  Diabetic  Rats, Global  Journal  of  Pharmacology  1  (1):
01-05, Department of Biological
Sciences,  University  of  Ngaoundere, Cameroon Sugiwati, S., 2005, Aktivitas
Antihiperglikemik  dari  Ekstrak  Buah Mahkota  Dewa  (Phaleria  macrocarpa (Scheff)  Boerl)  Sebagai  Inhibitor  Alfa- Glukosidase  Invitro  dan  Invivo  Pada Tikus  Putih,  Tesis,  Institut  Pertanian Bogor, Bogor Syaharuddin, Padmawinata, K., dan Soetarno, S., 2007, Isolasi dan Penentuan  Struktur  Senyawa  Kimia dalam  Daun  Jambu  Mete  (Anacardium occidentale  Linn),  Sekolah  Farmasi ITB, Bandung
Ukwenya,  V.  O.,  Ashaolu,  J.  O.,  Adeyemi, A.  O.,  Akinola,  O.  A.,  Martins,  E.  A., 2012,  Antihyperglycemic  Activities  of Methanolic Leaf Extract of Anacardium occidentale  Linn  on  the  Pancreas  of Streptozotocin-induced  Diabetic  Rats, Journal  of  Cell  and  Animal  Biology, Vol.6, Department of Anatomy, Faculty of  Basic  Medical  Sciences  Bowen University, Nigeria.