UJI AKTIVITAS ANTIFUNGI EKSTRAK DAUN SIRIH ( Piper betle L) TERHADAP Saprolegnia sp SECARA IN VITRO
ANTIFUNGAL ACTIVITIES TEST OF BETEL LEAF EXTRACT  ( Piper betle L) ON Saprolegnia sp. BY IN VITRO
Rahayu Kusdarwati, Pustika Murtinintias dan Dewa Ketut Meles
Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Airlangga Kampus C Mulyorejo - Surabaya, 60115 Telp. 031-5911451

## Abstract
Saprolegniasis  is  a  mycotic  disease  caused  by Saprolegnia sp.  that  usually  attacking  wild  fish and  farming  fish. Saprolegnia sp. cause  a  lot of  harm  in process of the  fish  cultivation. Prevention  and treatment  of  the  common  practice  is  use  chemical  drugs,  but  the  use  of  these  chemicals  tend  to  be environmentally  unfriendly  and  there  are  has  karsinogenik  effect.  Therefore,  the  use  of  traditional medicines  is  one  of  alternative  to  control Saprolegnia sp.  safer  than  chemical  drugs.  Green  betel  leaf contains phenolic compounds and tannins are efficacious as antifungal agent.
This study aims to prove the antifungal  activity of extracts of  betel  leaf ( Piper betle L)  for Saprolegnia sp.,  and  to  know  the  minimum  concentration  of  betel  leaf  extract  ( Piper  betle L)  as  antifungal  for Saprolegnia sp.  The  design  of  this  experiment  is  used  completely  randomized  design  (CRD)  with  11 treatments  and  3  replications.  This  study  used  the  dilution  method  through  the  Minimum  Inhibitory Concentration determination (MIC) and Minimum Fungicidal Concentration (MFC). The concentration of the extract used was 50% (0.5 g/ml), 25% (0.25 g/ml), 12.5% (0.125 g/ml), 6.25% (0.0625 g/ml), 3.13% (0.0313  g/ml),  1.56%  (0.0156  g/ml),  0.78%  (0.0078  g/ml),  0.39%  (0.0039  g/ml),  0.2%  (0.002  g/ml)  of betel  leaf  extract.  A  positive  control  containing  2  ml  of  3%  hydrogen  peroxide  were  added  fungal suspension  until  4  ml  Negative  control  containing  2  ml  of  10%  DMSO  were  added  fungal  suspension until 4 ml.
The  main  parameters  in  this  study  is  the  value  of  optical  density  (OD)  for  MIC  (Minimum  Inhibitory Concentration)  test  and  the  absence  of Saprolegnia sp.  growing  on  SDA  media  for  MFC  (Minimum Fungicidal Concentration) test. 0.20% (0.002g/ml) concentration of of betel leaf extract is the minimum concentration that can  inhibit the growth of Saprolegnia sp. MFC  test results showed concentrations of 0.78% (0.0078 g/ml) betel leaf extract is the minimum concentration that can kill Saprolegnia sp.
Keywords : betel leaf, Saprolegni a sp., antifungal

## Pendahuluan
Saprolegnia sp.  merupakan  penyebab penyakit saprolegniasis yang
banyak menyebabkan  kerugian  pada  proses  budidaya ikan.  Upaya  pencegahan  dan  pengobatan  yang lazim  dilakukan  pada  ikan-ikan  yang  terkena penyakit  mikotik  adalah  menggunakan  obat- obatan kimia seperti malachite green ,  formalin, hydrogen peroxida , dan sebagainya. Akan tetapi penggunaan bahan kimia cenderung tidak ramah lingkungan  dan  ada  yang  bersifat  karsinogenik (Mayer,  2005).  Oleh  karena  itu,  pemakaian obat-obatan  tradisional  merupakan  salah  satu alternatif  pengendalian Saprolegnia sp.  yang lebih  aman.  Daun  sirih  hijau  mengandung beberapa komponen berkhasiat, dua diantaranya yang  bersifat  fungisida  adalah  kavikol  dan karvakrol (Heyne, 1987) selain itu Rahmah dan Aditya  (2010)  menyatakan  bahwa  senyawa fenolik  dan  tannin  pada  ekstrak  daun  sirih
bersifat  antifungi.  Oleh  karena  itu  tujuan  dari penelitian ini adalah untuk mengetahui aktivitas daun sirih sebagai antifungi terhadap Saprolegnia sp. secara in vitro.
Tujuan  penelitian  sebagai  berikut  : Untuk  membuktikan  ekstrak  daun  sirih  ( Piper betle L)  mempunyai  aktivitas  sebagai  antifungi terhadap Saprolegnia sp.  Untuk  mengetahui konsentrasi  minimum  ekstrak  daun  sirih  ( Piper betle L) sebagai antifungi terhadap Saprolegnia sp.
Manfaat dari riset ini adalah memberikan  informasi  mengenai  aktivitas ekstrak  daun  sirih  ( Piper  betle L)  sebagai antifungi  terhadap Saprolegnia sp,  serta memberikan  informasi  tentang  konsentrasi minimum  ekstrak  daun  sirih  ( Piper  betle L) yang  dapat  dipergunakan  sebagai  antifungi terhadap Saprolegnia sp. secara in vitro.
Metodologi Tempat dan Waktu Penelitian Penelitian dilaksanakan di Laboratorium  Fakultas  Perikanan  dan  Kelautan Universitas  Airlangga  pada  bulan  November sampai  Desember  2012.  Pembuatan  ekstrak daun sirih dilakukan di Unit Layanan Pengujian Fakultas Farmasi Universitas Airlangga Surabaya. Metode penelitian Rancangan  Percobaan  yang  digunakan adalah  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL) dengan  11  perlakuan  dan  3  kali  ulangan.
Penelitian ini menggunakan metode pengenceran ( dilution methods ) melalui penentuan Konsentrasi  Hambat  Minimum
(KHM)  dan  Konsentrasi  Bunuh  Minimum (KBM).  Konsentrasi  ekstrak  yang  digunakan adalah 50% (0,5 gram/ml), 25% (0,25 gram/ml), 12,5% (0,125gram/ml), 6,25% (0,0625 gram/ml),  3,13%  (0,0313  gram/ml),  1,56% (0,0156  gram/ml),  0,78%  (0,0078  gram/ml), 0,39% (0,0039 gram/ml), 0,2% (0,002 gram/ml) dari  ekstrak  daun  sirih.  Kontrol  positif  berisi  2 ml hydrogen  peroksida 3%  yang  ditambah suspensi  fungi  sampai  4  ml.  Kontrol  negatif berisi 2 ml DMSO 10% yang ditambah suspensi fungi sampai 4 ml.
Prosedur penelitian A. Sterilisasi Alat dan Bahan Semua peralatan dan bahan yang dipakai dalam penelitian  ini  disterilisasi  untuk  mematikan semua  mikroorganisme  yang  hidup  agar  tidak terjadi  kontaminasi. autoclave dengan  suhu 121 0 C  dan  tekanan  udara  1,5  atm  selama  15 menit.
B. Ekstraksi Daun Sirih Daun  sirih  didapatkan  dari  Nganjuk dan  dipilih  daun  yang  berukuran  7-8  cm  dan berwarna  hijau  segar.  1,5  daun  sirih  yang  telah didapatkan  dicuci  kemudian  diangin-anginkan hingga  kering  lalu  digiling.  500  gram  serbuk daun  sirih  tersebut  kemudian  direndam  dalam larutan n-hexane selama 5 hari untuk menghilangkan klorofil yang terkandung didalamnya. Ekstraksi dilakukan dengan memaserasi  serbuk  daun  sirih  dengan  etanol 95% selama 3 x 24 jam dan selanjutnya disaring menggunakan  kertas  saring.  Hasil  penyaringan diuapkan  dengan  menggunakan rotary  vacuum evaporator pada  suhu  70 0 C    dan  menghasilkan 39  gram  ekstrak  daun  sirih.  Hasil  ekstraksi berbentuk  kental,  berwarna  coklat  tua  dan beraroma khas minyak atsiri
C. Kultur Saprolegnia sp. Saprolegnia sp.  yang  diperoleh  dari Laboratorium  Mikrobiologi  Fakultas  Sains  dan Teknologi  Universitas  Airlangga  Surabaya
diambil  dengan  menggunakan  ose  lalu  ditanam pada  media  kultur  kemudian  diinkubasi  pada suhu  kamar  (25 o C)  selama  48  jam.  Menurut Akbar  (2010),  proses  pemurnian  dari  isolat Saprolegnia sp.  dapat  dilakukan  lagi  dengan cara mengkultur ulang fungi yang sudah tumbuh pada  media  SDA  dengan  menggunakan  jarum ose steril. D. Identifikasi Fungi Identifikasi dilakukan untuk memastikan fungi yang digunakan adalah benar Saprolegnia sp.  Identifikasi Saprolegnia sp. dapat  dilakukan  secara  makroskopis  dan mikroskopis.  Pengamatan  secara  makroskopis dilakukan  dengan  melihat  bentuk  dan  warna koloni dari Saprolegnia sp., koloni Saprolegnia sp. berwarna putih kecoklatan dengan permukaan  seperti  kapas,  menonjol  dan  bundar (Nuryati,dkk, 2009).
Secara  mikroskopis, Saprolegnia sp diidentifikasi berdasarkan karakteristik
morfologi  organ  reproduksi  yang  diamati  pada kultur  menggunakan  media  air  tambak  steril. Organ  reproduksi  seksual  dapat  digunakan sebagai  identifikasi  terhadap Saprolegnia sp. (Woo  and  Bruno,  1999).  Sporangium  adalah organ reproduksi aseksual Saprolegnia sp. yang merupakan  diferensiasi  dari  hifa  sehingga berbentuk  lebih  lebar  dari  hifanya.  Zoospora akan  dilepaskan  oleh  sporangium  yang  matang dan berenang keperairan (Yuasa, 2003). E. Pembuatan Larutan Zoospora
Pembuatan  larutan  zoospora  dalam penelitian ini diawali dengan menginokulasikan potongan  blok  agar  pada  bagian  yang  telah ditumbuhi  fungi  dengan  ukuran  1  cm 2 pada  air tambak  steril  dalam  cawan  petri.  Inkubasi dilakukan selama tiga hari sampai tumbuh hifa- hifa disekeliling potongan blok agar. Hifa dalam cawan  petri  dibilas  sebanyak  dua  kali menggunakan  air  tambak  steril  kemudian dipindahkan  dalam  tabung  ukur  dan  diinkubasi selama  24  jam.  Perhitungan  jumlah  zoospora dilakukan dengan menggunakan
haemacytometer. Sependapat  dengan  Yuniar (2009),  yang  mengatakan  bahwa  penghitungan jumlah  sel  dilakukan  dibawah  mikroskop dengan perbesaran 400 kali pada 9 kotak sedang haemacytometer.
Jumlah  zoospora  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  1,18  x  10 6 sel/ml. Hal  ini  sesuai  dengan  pendapat  dari  Yuasa  dkk (2003) yang mengatakan bahwa jumlah zoospora  yang  digunakan  untuk  infeksi  buatan adalah 10 5 sel/ml. Pelaksanaan A.  Penyiapan  Ekstrak  Daun  Sirih  Dengan Berbagai Konsentrasi
Pengenceran ekstrak dilakukan dengan mencampurkan  ekstrak  daun  sirih  dengan DMSO  10%    hingga  didapatkan  konsentrasi yang diinginkan. Untuk mendapatkan konsentrasi  50%,  2  gram  ekstrak  daun  sirih ditambah  dengan  DMSO  10%  hingga  4  ml. maka pada pengenceran  maka pada konsentrasi 50%  mengandung  0,5  gram  ekstrak  daun  sirih dalam  1  ml  larutan.  Pengernceran  25% didapatkan  dari  pengambilan  2  ml  larutan  dari konsentrasi 50% ditambah dengan  DMSO 10% hingga 4 ml , dan seterusnya hingga konsentrasi 0,2%.Pada  konsentrasi  0,2%  larutan  diambil  2 ml  lalu  dibuang.  Kemudian  setiap  tabung  diisi dengan  suspensi  fungi  sebanyak  2  ml.  Kontrol positif  berisi  2  ml hydrogen  peroksida 3% ditambah  dengan  suspensi  fungi  hingga  4  ml, sedangkan  kontrol  negatif  berisi  2  ml  DMSO 10%  ditambah  dengan  suspensi  fungi  hingga 4ml.  Pengenceran  ekstrak  daun  sirih  ( Piper betel L) diulang sebanyak tiga kali ulangan.
B. Metode Pengenceran
KHM  merupakan  konsentrasi  terendah yang  masih  dapat  menghambat  pertumbuhan mikroorganisme.  Pengujian  KHM  dilakukan dengan  cara  menyiapkan  hasil  pengenceran berseri  masing-masing  dari  tabung  nomor  1 sampai nomor  9 ditambahkan 2 ml Saprolegnia sp.  Pengamatan  terhadap  kekeruhan  media dilakukan  sebelum  dan  setelah  inkubasi  pada seluruh  tabung  hasil  uji  KHM  menggunakan spectrophotometer (panjang  gelombang  615 nm)  dengan  membandingkan  hasil  selisih pengukuran  setiap tabung sebelum dan sesudah inkubasi. Tujuan pengamatan dengan menggunakan spektrofotometer adalah  untuk mengetahui  nilai  kekeruhan  atau  nilai optical density (OD) dari berbagai konsentrasi
pengenceran  berseri  ekstrak  daun  sirih  ( Piper betle L)  yang  telah  diinokulasi Saprolegnia sp dan diinkubasi selama 48 jam.
Penentuan daya  fungisidal dari ekstrak daun sirih ( Piper betle L) dilakukan  dengan uji KBM  yaitu  dengan  cara  menanam  semua konsentrasi  hasil  uji  KHM  pada  media  SDA ( Sabouraud Detroxe Agar ). Apabila pada media SDA  terdapat  pertumbuhan  fungi Saprolegnia sp berarti ekstrak daun sirih ( Piper betle L) pada konsentrasi  tersebut  tidak  bersifat  fungisidal. Sedangkan  apabila  tidak  terdapat  pertumbuhan fungi Saprolegnia sp  berarti  ekstrak  daun  sirih ( Piper betle L)pada konsentrasi tersebut bersifat fungisidal.

## Analisa data
Data hasil penelitian uji KHM dalam penelitian ini  dianalisis  dengan  menggunakan  analisis varian  (ANAVA).  Apabila  perlakuan  yang diberikan  menunjukan  pengaruh  nyata  maka akan  dilanjutkan  dengan  Uji  Jarak  Berganda Duncan  dengan  taraf  kepercayaan  95%  yang bertujuan untuk mengetahui konsentrasi hambat terbaik  dari  ekstrak  daun  sirih  terhadap pertumbuhan  fungi Saprolegnia sp. Data  hasil uji  KBM  diamati  dengan  cara  melihat  ada tidaknya pertumbuhan fungi pada media SDA.

## Hasil dan Pembahasan
Identifikasi  awal  pada  fungi  dapat dilakukan dengan pemeriksaan secara
mikroskopis  dan  makroskopis  (Ronald  and Richard, 2000). Hasil  pengamatan Saprolegnia sp secara makroskopis (Gambar 1) pada penelitian ini    sesuai  dengan  pendapat    Nuryati  (2009) yang  mengatakan  bahwa koloni Saprolegnia sp berwarna  putih  kecoklatan  dengan  permukaan seperti kapas, menonjol dan bundar.
Pengamatan secara mikroskopis dilakukan  dengan  cara  mengamati Saprolegnia sp diidentifikasi berdasarkan karakteristik morfologi  organ  reproduksi  yang  yang  dikultur pada media air tambak steril. Hasil pengamatan Saprolegnia sp yang dilakukan dalam penelitian ini terlihat pada Gambar 2.
Hasil  pengamatan  uji  KHM  secara visual  menunjukan  bahwa  ekstrak  daun  sirih ( Piper betle L) pada konsentrasi 50% dan  25 % keruh  dan  hampir  mendekati  kekeruhan  pada tabung  sebelum  inkubasi,  sedangkan  pada konsentrasi  12,5%  sampai  dengan  0,2%  lebih jernih  dibandingkan  dengan  perlakuan  sebelum inkubasi.  Dengan  menggunakan  pengamatan
secara  visual  sulit  untuk  membedakan  tingkat kekeruhan  secara  pasti  sehingga,  dilakukan pengamatan  kekeruhan  dengan  menggunakan spectrophotometer (Michel and Blanc, 2001). Dari hasil uji KHM dengan
menggunakan spectrofotometer menunjukan bahwa selisih nilai OD berbanding lurus dengan masing-masing konsentrasi yang berarti semakin  tinggi  konsentrasi  maka  selisih  nilai OD  akan  semakin  besar  (Tabel  1).  Pada konsentrasi  50%  sampai  dengan  konsentrasi 0,2%  menunjukan  bahwa  selisih  nilai  OD semakin  rendah  karena  semakin  sedikit  ekstrak daun  sirih  ( Piper  betle L)  pada  masing-masing konsentrasi pengenceran
Gambar 2. Organ reproduksi Saprolegnia sp secara mikroskopis dengan perbesaran 100x
Keterangan:   (a) organ reproduksi seksual (oogonium) (b) organ reproduksi aseksual.(1: hifa, 2: sporangium)
Tabel 1. Rata- rata selisih nilai OD sebelum dan setelah inkubasi
Konsentrasi Sebelum Sesudah Selisih 50% 2,976 1,926 1,050 25% 1,575 0,707 0,867 12,5% 1,389 0,610 0,779 6,25% 1,082 0,619 0,463 3,12% 0,982 0,630 0,352 1,56% 0,905 0,601 0,304 0,78% 0,642 0,472 0,169 0,39% 0,605 0,466 0,130 0,20% 0,501 0,398 0,116 K+ 0,291 0,221 0,070 K- 0,244 0.260 0,016
Berdasarkan Analisis Varian (ANAVA)
perlakuan  konsentrasi  ekstrak  daun  sirih  ( Piper betle L)  yang  berbeda,  memberikan  pengaruh nyata (p<0,05) terhadap hambatan pertumbuhan fungi Saprolegnia sp  secara  in  vitro  (Lampiran 3). Setelah dilakukan uji jarak berganda Duncan dengan  taraf  kepercayaan  5%  didapatkan  hasil sebagai berikut (Tabel 2)
Konsentrasi  0,20%  ekstrak  daun  sirih ( Piper betle L) dengan  nilai rata-rata OD 0,116 merupakan  konsentrasi  minimum  yang  dapat menghambat  pertumbuhan Saprolegnia sp karena  merupakan  konsentrasi  terendah  yang mempunyai  nilai  OD  tidak  berbeda  dengan kontrol  positif  yaitu  dengan  rata-rata  0,070. Konsentrasi  0,2%  berarti  terdapat  0,002  gram ekstrak  daun  sirih  ( Piper  betle L)  dalam  1  ml larutan.
Pengujian KBM merupakan uji lanjutan dari  KHM untuk  membuktikan  apakah ekstrak daun sirih dapat membunuh Saprolegnia sp  dengan  cara  menanam  setiap  konsentrasi pada media SDA, hasilnya disajikan pada Tabel 3.
Hasil  KBM  menunjukan  bahwa  pada konsentrasi 0,78% sudah tidak terdapat pertumbuhan Saprolegnia sp, sehingga
konsentrasi    0,78%  merupakan  konsentrasi minimum  ekstrak  yang  dapat  membunuh Saprolegnia sp.  Konsentrasi  0,78%  berarti terdapat  0,0078  gram  ekstrak  daun  sirih  ( Piper betle L)  dalam  1  ml  larutan.  Pada  konsentrasi 0,20% dan 0,39% terdapat Saprolegnia sp Pada  kontrol  positif  yang  berisi  berisi
2 ml hydrogen peroksida 3% ditambah dengan suspensi  fungi  sampai  4  ml  tidak  terdapat pertumbuhan Saprolegnia sp, hal ini membuktikan  bahwa hydrogen  peroksida 3% dapat  membunuh Saprolegnia sp.  Pada  kontrol negatif  terdapat  pertumbuhan Saprolegnia sp. Hal  ini  membuktikan  bahwa  suspensi  fungi yang digunakan dalam keadaan hidup dan tidak terkontaminasi oleh  bakteri atau   mikroba  yang lain.
Uji  KHM  dilakukan  dengan  cara pengamatan  menggunakan spectrofotometer karena  pengamatan  secara  visual  sulit  untuk membedakan  tingkat  kekeruhan  pada  masing-
Tabel 2. Rata-rata selisih nilai OD uji KHM Konsentrasi ekstrak daun sirih (%) Rata-rata selisih nilai OD Kontrol positif  (1) 0,070 e 0,20 0,116 de 0,39 0,130 de 0,78 0,169 de 1,56 0,304 cde 3,13 0,352 cd 6,25 0,463 c 12,5 0,779 b 25 0,867 ab 50 1,050 a
Keterangan : Notasi berbeda pada kolom kedua menunjukan perbedaan yang nyata (p<0,05)
Tabel 3. Hasil KBM (Konsentrasi Bunuh Minimum) Ekstrak daun sirih (%) Ulangan I II III 50 - - - 25 - - - 12,5 - - - 6,25 - - - 3,13 - - - 1,56 - - - 0,78 - - - 0,39 + + + 0,20 + + + K+ - - - K- + + + Keterangan :
(+)  = Ada pertumbuhan fungi (-)  =  Tidak ada pertumbuhan fungi
masing konsentrasi. Hasil uji KHM menunjukan bahwa selisih nilai OD berbanding lurus dengan masing-masing  konsentrasi  ekstrak  daun  sirih ( Piper  betle L)  yang  berarti  semakin  tinggi konsentrasi  ekstrak  daun  sirih  ( Piper  betle L) maka  selisih  nilai  OD  akan  semakin  besar. Semakin rendah  ekstrak daun sirih ( Piper betle L) pada masing-masing konsentrasi pengenceran  maka  selisih  nilai  OD  akan semakin kecil, sehingga
pertumbuhan Saprolegnia sp  tidak  akan  terhambat  dengan baik.  Jawetz et  al, 1996  menyatakan  bahwa daya  kerja  antimikroba  ditentukan  oleh  bahan antimikroba itu sendiri, semakin tinggi konsentrasi  zat  antimikroba  tersebut  maka semakin  meningkat  pula  kemampuannya  untuk bekerja sebagai pembunuh mikroba.
Hydrogen peroksida digunakan sebagai kontrol positif karena memproduksi superoksida yang  merupakan  ROS  (Reactive  Oxigen Species).  Antioksidan  merupakan  penghambat ROS,  akan  tetapi  bila  keadaan  tingkat  ROS melebihi  pertahanan  antioksidan  makan  akan mengakibatkan kerusakan sel.
Menurut Nurswida (2002), efek fungisida  daun    sirih  disebabkan  adanya komponen  derivat fenol ,  seperti eugenol, iseugenol, allypyrocathechol, chavichol, safrole, anethole, cavibetol, carvacrol, betlefenol .  Mekanisme  kerja  senyawa  fenolik melalui  perusakan  membran  plasma,  inaktivasi enzim  dan  denaturasi  protein.  Disini  fenol berkaitan  dengan  membran  yang  ergosterol akan merusak membran tersebut sehingga fungi akan  mati.  Tanin  yang  juga  terkandung  dalam daun sirih segar dapat menghambat kerja enzim- enzim  termasuk  enzim  katalase  (Rahmah  dan Aditya, 2010).
Komponen  utama  dinding  sel  fungi adalah 1-3  beta-  D-  glucan. Jika  enzim  yang berperan  dalam  sinstesisnya  dihambat,  maka fungi  tidak  dapat  berkembangbiak  lebih  lanjut (Trifena,  2007).    Aktivitas  antifungi  tergantung dari adanya ikatan dengan sterol pada membran sel  kapang  atau  khamir,  terutama  ergosterol. Akibat terbentuknya  ikatan antara sterol dengan antifungi menyebabkan perubahan
permeabilitas  membran  sel  sehingga  sel  akan kehilangan  berbagai  molekul  kecil  (Bahry  dan Setiabudy 1995).
Penurunan  ergosterol  membran  sel jamur  menyebabkan  rusaknya  permeabilitas membran,  akibatnya  sel  jamur    kehilangan komponen    intraselulernya  (Aprilia,  2010). Ergosterol  memainkan  peran  penting  dalam pertumbuhan jamur dan ditemukan di membran phospholipid  bilayer  sel  sebagian  besar  dalam keadaan  bebas  dan  pada  tingkat  lebih  rendah
digunakan untuk ester asam lemak (Montgomery et  al ,  2000).    Dengan  demikian, penghambatan terhadap pembentukan ergosterol membran  plasma  sel-sel Saprolegnia sp juga berarti penghambatan terhadap reproduksinya.

## Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  analisis  dan  pembahasan dalam penelitian  ini, dapat disimpulkan  sebagai berikut  :  Ekstrak  daun  sirih  ( Piper  betle L) mempunyai  aktivitas  dalam  menghambat  dan membunuh  pertumbuhan Saprolenia sp.  secara in  vitro.  Konsentrasi  minimum    Ekstrak  daun sirih  ( Piper  betle L)  yang  dapat  menghambat pertumbuhan Saprolenia sp. adalah 0,002 gram ekstrak  daun  sirih  ( Piper  betle L)  dalam  1  ml larutan  (0,2%).  Konsentrasi  minimum    Ekstrak daun  sirih  ( Piper  betle L)  yang  dapat membunuh  pertumbuhan Saprolenia sp.  adalah 0,0078  gram  ekstrak  daun  sirih  dalam  1  ml larutan (0,78%).
Ekstrak  daun  sirih  ( Piper  betle L)  dapat dipertimbangkan  untuk  digunakan  sebagai antifungi  terhadap Saprolegnia sp.  secara  in vitro. Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut tentang  aktivitas  antifungi  ekstrak  daun  sirih terhadap Saprolenia sp. secara in vivo

## Daftar Pustaka
Akbar, J. 2010. Uji Efektivitas Ekstrak Bawang Dayak  ( Eleutherine  Palmifolia Merr) Terhadap  Penyembuhan  Infeksi  Jamur Saprolegnia Sp,  Pada  Ikan  Nila. Jurusan  Budi  Daya  Perairan,  Fakultas Perikanan Dan Ilmu Kelautan Universitas Lambung Mangkurat. Banjarbaru
Aprilia,  F.  2010.  Efektifitas  Ekstrak  Jahe
( Zingiber  Officinale  Rosc. )  3,13% Dibandingkan Ketokonazol 2% Terhadap Pertumbuhan Malassezia  Sp. PadaKetombe. Skripsi. Program Pendidikan Sarjana Kedokteran Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro.
Bahry  B,  Setiabudy  R.  1995.  Obat  Jamur.  Di
Dalam:  Sulistia  GG,  Rianto  S,  Frans
DS,  Purwantyastuti,  Nafrialdi,  editor. Farmakologi  dan  Terapi.  Ed  ke-4. Jakarta: Gaya Baru. hlm 560-570 Heyne.  1987.  Tumbuhan  Berguna  Indonesia.
Jilid  II.  Cetakan  1.  Badan  Litbang Kehutanan. Jakarta. Hal: 622-627.
Jawetz  E. 1998.  Farmakologi  dasar dan klinik. Ed  VI.  Penerbit  Buku  Kedokteran, EGC. Jakarta. Mayer,  K.  2005. Saprolegnia :  There’s  A Fungus  Among  Us.  OSU  Department
Of Fisheries And Wildlife. Http://Www.Tnfish.Org/Disease/Sapro legnia.Pdf Michel.  C  and  Blanc,  G.  2001.  Minimum Inhibitory  Concentration  Methodology i  n  Aquaculture.  Aquaculture,  196: 311-318.
Montgomery, H.J., C.M. Monreal., J.C. Young., K.A. Seifert. 2000. Determinination Of Soil  Fungal  Biomass  From  Soil Ergosterol  Analyses.  University  Of Waterloo, Land Resource Unit, Brandon  Research  Station,  Agriculture And  Agri-Food Canada, University Of Manitoba, Winnipeg, Man.Scpfrc, Agriculture  And  Agri-Food  Canada, Ecorc,  Agriculture  And  Agri-Food Canada, Ottawa,Canada. Nurswida,  I.  2002. Efektivitas  Dekok  Sirih Hijau  dan  Sirih  Kuning  Dalam
Menghambat Pertumbuhan Candida  albicans (uji  In  Vitro ). Skripsi.  Universitas Brawijaya.Malang Nuryati,  S.,  F.B.P.  Sari.,  dan  Taukhid,  2009, identifikasi  dan  uji  postulat  Koch cendawan  penyebab  penyakit  pada ikan  gurame.  Proram  studi  budidaya perairan.  Fakultas  perikanan  dan  ilmu kelautan.  Institute  pertanian  bogor. Bogor. Hal:21-27 Rahmah,  N  Dan  Aditya  Rahman.  2010.  Uji Fungistatik  Ekstrak  Daun  Sirih  (Piper Betle  L)  Terhadap  Candida  Albicans.
1Dinas Perikanan Dan Kelautan Pemerintahan Daerah Propinsi Kalimantan  Selata.  Program  Studi Biologi  Fakultas  MIPA  UNLAM Banjarbaru Kalimantan Selatan. Banjarbaru. Ronald,A., Sacher,
dan Richard,
A.
Mc.Pherson.  2000.  Tinjauan  klinis hasil  pemeriksaan  ,  Laboratorium. Penerbit buku kedokteran EGC. Jakarta. Hal:114 Trifena,  D.  2007.  Aktifitas  Kitinase  Dan  Sifat Antijamur Actinomycetes, Serratia Marcescens  Serta  Getah  Pohon  Karet.
Skripsi. Fakultas Matematika Dan Ilmu
Pengetahuan Alam. Institut Tekhnologi
Bandung. Bandung. Woo,  P.T.K  And  Bruno.  1999.  Fish  Disease And Disorder Volume 3 Viral Bacterial And Fungal
Infection.
CABI
Publishing, New York. 599.643 Hal Yuasa,  K.,  Novita,  P.,  Meliya,  B.,  Edi,  B.K.
2003.  Panduan  Diagnose  Penyakit Ikan,  Teknik  Diagnose  Penyakit  Ikan
Budidaya  Air  Tawar  Di  Indonesia.
Japan International Cooperation Agency.  Balai  Budidaya  Air  Tawar Jambi. Jambi Yuniar,  V.2009.  Toksisitas  Merkuri  Hidup, Pertumbuhan,  Gambaran  Darah  Dan
Kerusakan  Organ  Pada  Departemen Fakultas Perikanan Dan Ilmu Kelautan (Hg)  Terhadap  Tingkat  Kelangsungan Ikan  Nila Oreochromis  Niloticus. Skripsi. Departemen Fakultas Perikanan Dan Ilmu Kelautan Budidaya  Perairan  Institut  Pertanian Bogor. Bogor