Jurnal Pharmascience, Vol. 11, No.1, Maret 2024, hal: 154-160 ISSN-Print. 2355 – 5386 ISSN-Online. 2460-9560 https://ppjp.ulm.ac.id/journal/index.php/pharmascience Research Article
Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Belimbing Wuluh (Averrhoa bilimbi L.) Terhadap Bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus Resistensi Antibiotik
Herlina Rante, Nasriah, Rosany Tayeb
Program Studi Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Hasanuddin, Makassar, Sulawesi Selatan, Indonesia Email: herlinarante@unhas.ac.id

## ABSTRAK
Masalah kesehatan yang berhubungan dengan infeksi merupakan tantangan yang dihadapi tidak hanya oleh negara-negara maju tetapi juga negara-negara berkembang. Meningkatnya  jumlah  kasus  bakteri  yang  kebal  terhadap  antibiotik  telah  mendorong usaha  untuk  menemukan  sumber-sumber  antibakteri  dari  bahan  alami.  Salah  satu tumbuhan  yang  diduga  memiliki  kemampuan  untuk  melawan  bakteri  Staphylococcus aureus dan Escherichia coli adalah tanaman belimbing wuluh. Penelitian ini bertujuan untuk  menguji  efek  antibakteri  dari  ekstrak  etanol  daun  belimbing  wuluh  terhadap S.aureus dan E.coli resisten antibiotik. Ekstraksi dilakukan pada daun belimbing wuluh menggunakan  etanol  70%  dengan  metode  maserasi.  Setelah  itu,  ekstrak  etanol  dibuat dalam  seri  konsentrasi  1,25%,  2,5%,  5%,  dan  10%  b/v.  Uji  aktivitas  antibakteri dilakukan melalui metode difusi agar pada medium Mueller Hinton Agar dengan bakteri uji  Escherichia coli dan  Staphylococcus aureus yang telah resisten terhadap antibiotik. Hasil  penelitian    menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  dari  daun  belimbing  wuluh  (  A. bilimbi L) efektif menghambat pertumbuhan bakteri uji pada konsentrasi sebesar 1,25% (setara dengan 0,25 mg/paper disk).
Kata  Kunci:  Bakteri  Resisten,  Maserasi,  Difusi  Agar,  Mueller  Hinton  Agar, Pertumbuhan Bakteri

## ABSTRACT
Health issues related to infections pose a challenge not only to developed countries but also to developing nations. The increasing number of antibiotic-resistant bacterial cases has driven efforts to discover natural sources of antibacterial agents. One plant suspected to possess the ability to combat Staphylococcus aureus and Escherichia coli bacteria is the A. bilimbi L. plant. This research aims to examine the antibacterial effects of ethanol extract
from A. bilimbi L.  leaves against S. aureus and E. Coli resistant antibiotic. The extraction process was conducted  using 70% ethanol through the maceration method. Subsequently, ethanol extract was prepared in a series of concentrations: 1.25%, 2.5%, 5%, and 10% w/v. The antibacterial  activity test  was  performed using the agar diffusion method on Mueller Hinton Agar medium with test bacteria, E. coli, and S. aureus, which were already resistant to  antibiotics.  The  research  findings  indicate  that  the  ethanol  extract  from  A.  bilimbi  L. leaves effectively inhibits the growth of test bacteria at a concentration of 1.25% (equivalent to 0.25 mg/paper disk).
Keywords: Resistances Bacteria, Maceration, Agar Diffusion Method, Mueller Hiltor Agar Medium, Growth of Test Bacteria

## I. PENDAHULUAN
Permasalahan  kesehatan  di  dunia yang  masih  terus  diteliti  adalah  penyakit infeksi.  Bahkan  dari  data  statistik  WHO, menyebutkan bahwa kasus kematian akibat penyakit  infeksi  dan  parasit  di  Malaysia pada  tahun  2020  paling  banyak  dialami oleh  usia  25-34  tahun  dengan  persentase 10,6% (10,4% pria dan 11,1% wanita) dan persentase  terendah  dialami  oleh  usia  <  1 tahun yaitu 3% (WHO, 2023). Munculnya patogen  yang  resisten  terhadap  beberapa obat antibiotic menjadi masalah yang serius dalam pengobatan infeksi, sehingga penemuan  senyawa  antibiotic  diharapkan dapat mengatasi permasalhan ini  (Ganesan, 2017; Rotich, 2017).
Perkembangan zaman yang semakin  maju,  membuat  perkembangan teknologi  obat  juga  semakin  berkembang. Hal  ini  menyebabkan  kasus-kasus  infeksi sebelumnya mendapatkan penanganan pengobatan yang lebih baik sehingga tidak terjadi  penumpukan  kasus  yang  tidak tertangani.  Namun,  permasalahan  ini  juga
belum  teratasi  dengan  baik  dikarenakan adanya  resistensi  yang  terbentuk  dari mikroorganisme  penyebab  infeksi  seperti virus,  jamur,  maupun  bakteri  (Yu et  al. ,
2019; Peterson, 2005).
Salah satu penyebab adanya resistensi pada antibiotik yaitu penggunaan obat  antibiotik  yang  tidak  rasional. Contohnya  kasus  yang  berasal  dari  RSUP Dr.  Soeradji  Tritonegoro,  dimana  64,8% isolat S.  aureus resistensi  terhadap antibiotik  tetrasiklin,  53,7%  terhadap antibitotik eritromisin, dan 40,7% terhadap antibiotik kloksasilin (Nuryah et al., 2019).
Strategi  untuk  menghadapi  kasus resistensi yaitu dengan melakukan
penemuan  kandidat  obat  baik  dari  bahan alam maupun sintetik, dimana sekitar 20% dari  tanaman  yang  ditemukan  di  dunia memberikan  efek  samping  yang  lebih rendah  dibandingkan  obat  sintetik.  Salah satunya adalah  tanaman belimbing wuluh. Daun  belimbing  wuluh  mengandung beberapa senyawa seperti tanin, flavonoid, saponin,  sulfur,  asam  format,  kalsium
oksalat,  dan  kalium  sitrat  (Wijayanti  &
Safitri, 2018, Hayati et al. , 2001; Ummah,
2010).
Aktivitas  daun  belimbing  wuluh telah  dilakukan  oleh  Setya  (2007)  hasil penelitian  menunjukkan  bahwa  ekstrak etanol  daun  belimbing  wuluh  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri  gram positif dan pada penelitian yang dilakukan oleh Masrifah (2009) menunjukkan  bahwa ekstrak etanol daun belimbing wuluh dapat menghambat E. coli dalam pada konsentrasi  400 mg/mL dan pada S. aureus
sebesar 900 mg/mL. Tujuan  penelitian ini adalah untuk mengetahui aktivitas antibakteri  ekstrak  etanol  daun  belimbing wuluh terhadap E. coli dan S. aureus yang resistensi antibiotik.

## II. METODE

## A. Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan  berupa
rotary evaporator , wadah maserasi (toples kaca),  timbangan  analitik,  dan  alat-alat gelas lainnya.
Bahan-bahan yang digunakan yaitu air  suling,  etanol  70%,  daun  belimbing wuluh  ( Avverhoa  bilimbi L.),  DMSO
(Dimetil Sulfoksida), kertas saring
Whatman  no.1,  medium  NA  ( Nutrient
Agar ),  medium  MHA  ( Mueller  Hinton
Agar ),  biakan  bakteri  resisten  antibiotik
( Escherichia  coli dan Staphylococcus
aureus )  yang telah di  uji dengan beberapa
antibiotic (koleksi Laboratorium
Mikrobiologi klinik  UGM)

## B. Pengambilan dan Penyiapan Sampel
Daun  belimbing  wuluh  ( Avverhoa bilimbi L.)  diambil  di  lokasi  Kecamatan Tamalanrea, Kota Makassar. Sampel daun yang  diambil  berupa  daun  hijau,  tidak muda, dan segar. Helaian daun dipisahkan dari  tangkainya  dan  dicuci  dengan  air mengalir. Daun belimbing wuluh ( Avverhoa  bilimbi L.)  dikeringkan  dengan
cara  diangin-anginkan  pada  suhu  32-35°C selama 3 hari. Kemudian dibuat serbuk dan ditimbang bobotnya.

## C. Ekstraksi Sampel
Ekstrak  etanol  didapatkan  dengan cara ekstraksi menggunakan metode maserasi  dari  400  gram  simplisia  daun belimbing  wuluh  ( Avverhoa  bilimbi L.)
yang  dilarutkan  dengan  etanol  70% sebanyak  2  L.  Simplisia  diaduk  secara merata dan ditutup rapat serta disimpan dari paparan cahaya matahari langsung, didiamkan  selama  3x24  jam  dengan pengadukan sesekali. Filtrat dan residu dari maserasi  dipisahkan  dengan  kertas  saring, dan  digunakan  kembali  redisu  untuk remaserasi  dengan  penambahan  etanol
70%. Hasil filtrat diuapkan dengan bantuan
rotary evaporator dan penangas.

## D. Uji Aktivitas Antibakteri
Ekstrak  etanol  daun  belimbing wuluh  ( Avverhoa  bilimbi L.)  dibuat konsentrasi 1,25%, 2,5%, 5%, dan 10% b/v menggunakan  pelarut  etanol.  Uji  aktivitas antibakteri  mengunakan  metode  difusi Kirby-Bauer  dengan  medium  MHA  yang telah  diberikan  suspensi  bakteri  uji  pada cawan  petri.  Kertas  cakram  ditetesi sebanyak  20  µL  dari  tiap  konsentrasi  dan digunakan  juga  kontrol  negatif  berupa pelarut  etanol  70%  sebanyak  20  µL dibiarkan  kering  sebelum  digunakan  pada pengujian. Cawan petri tersebut diinkubasi selama  1x24  jam  dengan  suhu  37°C. Setelah  inkubasi,  zona  bening  yang terbentuk  disekitar  kertas  cakram  diamati dan  diukur  menggunakan  jangka  sorong (Rante et al ., 2017).

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  ekstrak  yang  dilakukan  pada daun  belimbing  wuluh  ( Averrhoa  bilimbi
L.) menggunakan metode maserasi yaitu 34 gram  ekstrak  kental  dengan  persen rendemen  sebesar  8,5%  dari  400  gram simplisia yang digunakan.
Uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak etanol  daun  belimbing  wuluh  mampu menghambat pertumbuhan bakteri uji yang telah resistensi antibiotik (Gambar 1). Hasil ini  juga  menunjukkan  bahwa  pada konsentrasi  tersebut  memberikan  respon
hambat  sedang  untuk  bakteri  uji,  yaitu dalam diameter 6-10 mm (Purwanto, 2015).
Selain itu, pada Tabel I dapat dilihat bahwa  aktivitas  antibakteri  meningkat seiring  dengan  tingginya  konsentrasi  yang digunakan.  Sifat  dari  ekstrak  etanol  daun belimbing  wuluh  ( Averrhoa  bilimbi L.) pada  bakteri E.  coli adalah  bakteriostatik, hal  ini  dikarenakan  zona  bening  yang terbentuk pada hari kedua inkubasi menjadi kabur.  Sedangkan,  pada  bakteri S.  aureus tergolong  pada  sifat  bakteriosid  karena pada  hari  kedua  inkubasi,  zona  bening masih terlihat sama dengan hari sebelumnya.  Berdasarkan  penelitian  oleh (Pendit et  al., 2016),  dilaporkan  bahwa pada  konsentrasi  5%  ekstrak  etanol  daun belimbing  wuluh  dengan  pelarut  etanol 70%  dapat  menghambat E.  coli sebesar
8,63 mm dan pada S. aureus sebesar 13,13
mm.  Berkurangnya  zona  hambat  yang didapatkan karena adanya pengaruh resisten  pada  bakteri  uji,  sehingga  zona hambat yang terbentuk semakin melemah.
Beberapa  penelitian  menunjukkan bahwa  ekstrak  etanol  dari  daun,  biji  serta tangkai daun belimbing wuluh menunjukkan aktivitas antimikroba.
Aktivitas  antimikroba  disebabkan  adanya kandungan  senyawa  flavonoid  dan  tannin yang  terkandung  dalam  daung  belimbing wuluh (Ummah, 2010;  Zakaria et al ., 2007;
Masrifah 2010).
Gambar  1. Diameter  zona  hambat  ekstrak etanol  daun  belimbing  wuluh terhadap  bakteri S.aureus dan
E. coli
Flavonoids telah diidentifikasi
sebagai  senyawa  polifenol  yang  mampu memberikan  aktivitas  antibakteri  melalui berbagai  mekanisme.  Menurut  berbagai penelitian, flavonoid dapat menekan sintesis  asam  nukleat,  fungsi  membran sitoplasma, dan metabolisme energi (Xie et al .,  2014; Cushnie  and  Lamb,  2005;
Górniak et al. , 2019).
Flavonoids  juga  ditemukan  dapat mengurangi  adhesi  dan  pembentukan biofilm, porin pada membran sel, permeabilitas membran, dan patogenisitas,
yang semuanya penting untuk pertumbuhan bakteri (Biharee et al., 2020; Donadio et al.,
2021).  Selain  itu,  beberapa  flavonoid
tertentu  dilaporkan  dapat  membalikkan resistensi  antibiotik  dan  meningkatkan efektivitas antibiotik yang ada saat ini (Xu and Lee, 2001; Song et al. , 2021; Ruddock et al. , 2021)

## IV. KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian,  dapat disimpulkan  bahwa  ekstrak  etanol  daun belimbing  wuluh  ( Averrhoa  billimbi L.) memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap
Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus yang  resistensi  dalam  konsentrasi terkecil yaitu 1,25%.

## KONFLIK KEPENTINGAN
Seluruh penulis menyatakan bahwa tidak  ada  konflik  kepentingan  dalam penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Biharee  A.,  Sharma  A.,  Kumar  A.,  Jaitak V(2020).  Fitoterapia  Antimicrobial flavonoids as a potential substitute for overcoming antimicrobial resistance. Fitoterapia. 146:104720.
doi: 10.1016/j.fitote.2020.104720
Cushnie T.P.T., Lamb A.J.(2005). Antimicrobial activity of flavonoids. Int. J. Antimicrob. Agents. 26:343–356.
doi: 10.1016/j.ijantimicag.2005.09.00
2.
Donadio  G.,  Mensitieri  F.,  Santoro  V., Parisi V., Bellone M., De Tommasi N., Izzo  V.,  Piaz  F.D.  Interactions  with
Microbial Proteins Driving the Antibacterial Activity of Flavonoids. Pharmaceutics. 2021;13: 660.
doi: 10.3390/pharmaceutics13050660
Ganesan  P.,  David  RHA.  (2017).  Reegan AD  et  al.(2017).  Isolation  and molecular characterization of actinomycetes  with  antimicrobial  and mosquito  larvicidal  properties. Beni- Seuf University Juournal of Basic and Applied  Sciences ,  vol.  6,  no.  2,  pp. 209–217.
Górniak I., Bartoszewski R., Króliczewski J(2019).  Comprehensive  review  of antimicrobial  activities  of  plant flavonoids. Phytochem. Rev. 18:241– 272.  doi: 10.1007/s11101-018-9591- z.
Masrifah. (2009). Uji Aktivitas Antibakteri Dari Ekstrak Etanol Daun Belimbing Wuluh  (Averrhoa  bilimbi  Linn.)
Terhadap Kultur Aktif Staphylococcus aureus dan Escherichia coli . [Skripsi]. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta.
Nuryah, A., Yuniarti, N., & Puspitasari, I.
(2019).  Prevalensi  dan  Evaluasi Kesesuaian  Penggunaan  Antibiotik pada Pasien dengan Infeksi Methicillin  Resistant  Staphylococcus Aureus  di  RSUP  Dr.  Soeradji Tirtonegoro Klaten . Majalah Farmaseutik , 15 (2), 123–129. https://doi.org/https://doi.org/10.2214 6/farmaseutik.v15i2.47911
Pendit,  P.  A.  C.  D.,  Zubaidah,  E.,  & Sriherfyna,  F.  (2016). Karakteristik Fisik-Kimia  dan Aktivitas  Antibakteri Ekstrak  Daun  Belimbing  Wuluh (Averrhoa bilimbi L.) . Jurnal Pangan Dan Agroindustri , 4 (10), 400–409. Purwanto, S. (2015). Uji Aktivitas Antibakteri Fraksi Aktif Ekstrak Daun Senggani  (Melastoma  malabathricum L)  Terhadap  Escherichia  coli . Jurnal Keperawatan Sriwijaya , 2 (2), 84–92. Rante  H,  Taebe  B,  Purnasari  C,  Lethe C.(2017). Aktivitas Antibakteri Moringa  oleifera  Lam.  Terhadap
Bakteri  Patogen    Resisten  Antibiotik.
Journal of Pharmaceutical and Medicinal Sciences 2017 2(1): pp 5-8
Rotich MC., Magir E., Bii C., and N. Maina
N  (2017).  Bio-prospecting  for  broad spectrum antibiotic producing actinomycetes  isolated  from  virgin soils in Kericho
county,
Kenya. Advances  in  Microbiology , vol. 7, no. 1.
Ruddock  P.S.,  Charland  M.,  Ramirez  S.,
López  A.,  Towers  G.H.N.,  Arnason J.T., Liao M., Dillon J.-
A.R.(2011).Antimicrobial Activity of
Flavonoids from Piper lanceaefolium and  Other  Colombian Medicinal  Plants  Against  Antibiotic
Susceptible  and  Resistant  Strains of Neisseria
gonorrhoeae . Sex. Transm. Dis. 38:82–88. doi: 10.1097/OLQ.0b013e3181f0bdb
d.
Setya,  C.  (2007). Uji  Daya  Antibakteri Perasan  Buah  Dan  Ekstrak  Etanol Daun  Belimbing  Wuluh  Terhadap Bakteri  Gram  Positif  Dan  Gram Negatif  Secara  In  Vitro .  [Skripsi].
Universitas Pancasila.
Song  M.,  Liu  Y.,  Li  T.,  Liu  X.,  Hao  Z., Ding  S.,  Panichayupakaranant  P.,
Zhu K., Shen J.(2021). Plant Natural Flavonoids Against Multidrug Resistant Pathogens. Adv. Sci. 8:2100749. doi: 10.1002/advs.202100749. Ummah,M.K.    (2010). Ekstraksi  dan Pengujian Aktivitas Antibakteri Senyawa Tanin pada Daun Belimbing wuluh ( Averrhoa bilimbi L) . [Skripsi] Universitas  Islam  Negeri  Maulana Malik Ibrahim.
Wahjono,H.  (1991). Menuju  Kebijakan Penggunaan Antibiotik secara Rasional , Majalah Kedikteran
Diponegoro, Vol 26, no.1.
Wijayanti, T. R. ., & Safitri, R. (2018). Uji Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Daun Belimbing  Wuluh  (Averrhoa  bilimbi Linn) Terhadap Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aureus penyebab
Infeksi  Nifas. Jurnal  Ilmiah  Ilmu Kesehatan , 6 (3), 277–285. https://doi.org/https://doi.org/10.3336 6/cr.v6i3.999 World  Health  Organization.  (2023). WHO Mortality Database . https://platform.who.int/mortality/th emes/theme-details/topics/topic details/MDB/infectious-and- parasitic-diseases
Xie  Y.,  Yang  W.,  Tang  F.,  Chen  X.,  Ren L.(2014).  Antibacterial  Activities  of Flavonoids: Structure-Activity Relationship  and  Mechanism. Curr.
Med.
Chem. ;22:132–149.
doi: 10.2174/0929867321666140916 113443
Xu H.-X., Lee S.F.(2001). Activity of plant flavonoids against antibiotic-resistant bacteria. Phytother. Res. 15:39–43. doi: 10.1002/1099-1573(200102)15 Yu, X., Jiang, W., Shi, Y., Ye, H., & Lin, J. (2019).  Applications  of  Sequencing Technology  in  Clinical  Microbial
Infection. Journal  of  Cellular  and
Molecular  Medicine , 23 (11),  7143–
7150.
https://doi.org/https://doi.org/10.1111 /jcmm.1462
Zakaria,Z.A,  Zaiton  H,  Henie  E.F.P,  Jais Mat, A.M. Zainuddin (2007). Invtiro Antibacterial  Activity  of  Avverhoa bilimbi L leaves and Fruits Extracts. International  Journal  of  Tropical Medicine. Vol 2: 96-100.