## Borneo Journal Of Medical Laboratory Technology
Aktivitas Antibakteri Kombinasi Ekstrak Biji Manjakani (Quercus infectoria) Dan Daun Sirih Merah (Piper crocatum) Terhadap Pertumbuhan Bakteri Klebsiella pneumoniae
Antibacterial Activity Combination of Manjakani Seed Extract ( Quercus infectoria ) and Red Betel Leaf ( Piper crocatum ) Against the Growth of Klebsiella pneumoniae .
Ayu Ashari 1*
Tiara Dini Harlita 2
Ganea Qorry Aina 3
1 Politeknik Kesehatan Kementerian Kesehatan Kalimantan Timur, Samarinda, Indonesia
*2 Politeknik Kesehatan Kementerian Kesehatan Kalimantan Timur, Samarinda, Indonesia
3 Politeknik Kesehatan Kementerian Kesehatan Kalimantan Timur, Samarinda, Indonesia
*email: nonaranita@gmail.com

## Abstrak
Tanaman  potensial  yang  terdapat  di  Indonesia  dan  dapat  dimanfaatkan  untuk pengobatan  infeksi  saluran  kemih  diantaranya  yaitu:  biji  manjakani (Quercus infectoria) dan  daun  sirih  merah (Piper  crocatum). Biji  manjakani  secara farmakologi diklaim memiliki aktivitas biologis seperti anti-inflamasi, antibakteri dan antifungi. Daun sirih merah berpotensi sebagai antibakteri pada pengobatan penyakit  infeksi.  Tujuan  penelitian  ini  mengetahui  adanya  aktivitas  antibakteri pada kombinasi ekstrak biji manjakani dan daun sirih merah dalam menghambat pertumbuhan bakteri K. pneumoniae. Jenis penelitian yang digunakan adalah studi true  experiment dengan  rancangan  acak  lengkap  (RAL)  tiga  faktor  yaitu  jenis pelarut  ( n- heksan,  etil  asetat,  etanol  96%),  perbandingan  (1:1,  1:2,  2:1)  dan konsentrasi (75% dan 100%) dengan masing-masing perlakuan dilakukan dua kali pengulangan.  Penelitian  ini  dilakukan  di  laboratorium  mikrobiologi  labkes provinsi  kaltim.  Populasi  dalam  penelitian  ini  adalah  tanaman  manjakani (Q. infectoria) dan tanaman sirih merah (P. crocatum) dan diuji menggunakan teknik difusi agar metode Kirby Bauer dengan kontrol positif ( Ciprofloxacin ) dan kontrol negatif  ( aquadest ) . Analisis  data  yang  digunakan  adalah One  Way  Anova dan  uji lanjutan  metode Duncan dengan  taraf  signifikasi  0,05.  Hasil  yang  didapatkan terdapat  pengaruh  aktivitas  antibakteri  ekstrak  biji  manjakani  dan  daun  sirih merah  terhadap  pertumbuhan K.  pneumoniae .  Konsentrasi  yang  paling  efektif terdapat  pada  ekstrak  etanol  96%  kombinasi  2:1  konsentrasi  100%  sebesar 13,97 mm dan efektivitasnya sebesar 55,74% dengan kontrol positif ciprofloxacin 5µg  sebesar  25,06  mm.  Dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak  kombinasi  biji manjakani (Q.  infectoria) dan  daun  sirih  merah (P.  crocatum) memiliki  aktivitas antibakteri  terhadap  bakteri K.  pneumoniae, namun  potensinya  masih  dibawah ciprofloxacin.
Kata Kunci: Antibakteri, Ciprofloxacin, Klebsiella pneumoniae, Manjakani (Quercus infectoria) , Sirih Merah (Piper crocatum).
Keywords : Antibacterial, Ciprofloxacin, Klebsiella pneumoniae, Manjakani Seeds (Quercus infectoria) , Red Betel (piper crocatum).

## Abstract
Potential  plants  found  in  Indonesia  that  can  be  used  for  the  treatment  of urinary  tract  infections  include:  Manjakani  seeds (Quercus  infectoria) and  red betel leaves (Piper crocatum) . Manjakani seeds are pharmacologically claimed to have biological activities such as anti-inflammatory, antibacterial and antifungal. Red betel leaf has the potential as an antibacterial in the treatment of infectious diseases. The purpose of this study was to determine the antibacterial activity of the combination of manjakani seed extract and red betel leaf in inhibiting the growth of Klebsiella  pneumoniae  bacteria. The  type  of  research  used  istrue  experiment study with a completely randomized design (CRD) with three factors, namely the type of solvent n-hexane, ethyl acetate, ethanol 96%, ratio (1:1,1:2,2:1) and concentration  (75%,100%)  with  each  treatment  being  repeated  twice.  This research  was  conducted  in  the  microbiology  laboratory,  Labkes,  East Kalimantan.  The population  in  this  study  is  the  manjakani  plant  and  red betel plant and  tested  using  the  agar  diffusion  technique  method  Kirby  Bauer  with positive  control  (Ciprofloxacin)  and negative control (aquadest).  Data  analysis used  is  One  Way  ANOVA  and  advanced  test  methods  Duncan  with  a significance level of 0,05. The results obtained showed that there was an effect of antibacterial activity of Manjakani seed extract and red betel leaf on growth K.  pneumoniae. The  most  effective  concentration  was  found  in  ethanol  96% extract,  (2:1  combination  of  100%  concentration)  of  13,97  mm  and  an effectiveness of 55,74% with a positive control ciprofloxacin 5µg of 25,06 mm. It can be concluded that the combined extract of manjakani seeds and red betel leaves  has  antibacterial  activity  against  bacteria Klebsiella  pneumoniae ,but  the potential is still low of ciprofloxacin.

## PENDAHULUAN
Di  Indonesia  penyakit  infeksi  masih  termasuk  dalam sepuluh  penyakit  terbanyak,  salah  satunya  adalah penyakit  infeksi  saluran  kemih  (ISK).  Menurut World Health  Organization (WHO),  ISK  menempati  posisi kedua  tersering  pada  tubuh  dalam  penyakit  infeksi setelah  infeksi  saluran  pernafasan  dan  jumlah  kasus yang  dilaporkan  pertahunnya  terdapat  sebanyak  8,3 juta  kasus.  Berdasarkan  data  Departemen  Kesehatan Republik  Indonesia  (Depkes  RI)  tahun  2014,  jumlah penderita ISK di Indonesia mencapai 90-100 kasus per 100.000  penduduk  per  tahun  atau  sekitar  180.000 kasus  per  tahun  (Nemin,  2019).  Bakteri  utama penyebab  ISK  yang  didapati  di  urin  sebagian  besar adalah Escherichia coli (85%) kemudian Klebsiella sp. dan Streptococcus  sp. dan  beberapa  bakteri  lain  seperti Proteus,  Staphylococcus  epidermidis,  Pseudomonas aeruginosa dan beberapa bakteri lainnya (Lubis, 2019).
Antibiotik yang biasa digunakan dalam pengobatan ISK adalah ciprofloxacin. Antibiotik ini merupakan golongan florokuinolon  yang  paling  banyak  digunakan  untuk pengobatan  terutama  yang  disebabkan  oleh  bakteri Gram  negatif  (Listyorini,  2019).  Berdasarkan  data Kementerian  Kesehatan  (Kemenkes)  tahun  2011, berbagai  studi  menemukan  adanya  penggunaan antibiotik  secara  tidak  tepat  sekitar  40-62%  untuk penyakit-penyakit  yang  sebenarnya  tidak  memerlukan antibiotik.  Pada  penelitian  kualitas  penggunaan antibiotik  di  berbagai  bagian  rumah  sakit  ditemukan adanya  30%-80%  yang  tidak  didasari  oleh  indikasi (Muntasir et  al., 2020).  Penggunaan  antibiotik  yang terus-menerus dengan dosis yang tidak tepat dan pola minum yang tidak sesuai akan menyebabkan resistensi antibiotic  yang  tentunya  akan  berdampak  pada pengobatan dan tingkat kesembuhan yang terhambat. Biji  manjakani (Q.  Infectoria) merupakan  tanaman tradisional  yang  diklaim  memiliki  berbagai  aktivitas biologis seperti anti-inflamasi (Triandini et al., 2018),
antibakteri (Himalaya, 2017) dan antifungi (Yanti et al. , 2016).  Skrining  fitokimia  manjakani  menunjukkan adanya  kandungan  fenol,  flavonoid,  steroid,  triterpen, tanin sekitar 50-70% , saponin, alkaloid dan asam galat yang  juga  merupakan  senyawa  aktif  yang  bertanggung jawab sebagai antibakteri (Himalaya, 2017). Daun sirih merah (P. crocatum) juga berpotensi sebagai antibakteri karena  mengandung  senyawa  fenol  yang  berpotensi sebagai  antibakteri  (Wiladatika,  2013),  dan  senyawa flavonoid yang memiliki aktivitas antimikroba yang aktif terhadap  bakteri  Gram  positif  dan  Gram  negatif  yang mampu  melepaskan  energi  tranduksi  terhadap membran  sitoplasma  bakteri  dan  menghambat motilitas bakteri (Listyorini, 2019).
Beberapa  penelitian  telah  melaporkan  bahwa  baik ekstrak  biji  manjakani  maupun  daun  sirih  merah mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri.  Asparinda &  Juwitaningsih  (2020)  telah  melakukan  uji  aktivitas antibakteri fraksi non polar gal manjakani pada bakteri Gram  negatif  yaitu E.  coli dengan  metode  ekstraksi yang digunakan adalah ekstraksi bertingkat menggunakan  pelarut  aseton  dan n- heksan.  Rohadi et al. , (2019) juga pernah meneliti uji daya hambat ekstrak etanol  daun  sirih  merah  terhadap  bakteri E.  coli menggunakan metode ekstraksi tunggal. Namun, dalam penelitian yang akan dilakukan ini peneliti menggunakan metode  ekstraksi  dan  pelarut  yang  berbeda  yaitu metode  ekstraksi  bertingkat  dengan  tiga  pelarut  yang berbe  da  kepolarannya  yaitu n- heksan  sebagai  pelarut non  polar,  etil  asetat  sebagai  pelarut  semi  polar  dan etanol  96%  sebagai  pelarut  polar  agar  dapat  diketahui aktivitas  antibakteri  pada  masing-masing  fraksi  dari pelarut  dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri

## K. pneuominae.
Berdasarkan  latar  belakang  tersebut,  maka  peneliti tertarik  untuk  meneliti  dengan  judul  “Aktivitas Antibakteri Kombinasi Ekstrak Biji Manjakani (Quercus infectoria) dan  Daun  Sirih  Merah  ( Piper  crocatum) terhadap Pertumbuhan Bakteri Klebsiella pneumoniae ”.

## METODE PENELITIAN
Jenis  penelitian  yang  digunakan  adalah studi  true experiment dengan  menggunakan  rancangan  acak lengkap  (RAL)  tiga  faktor  yaitu  kombinasi  ekstrak  biji manjakani (Q.  infectoria) dan  daun  sirih  merah (P.  crocatum) dengan  pelarut n- heksan,  etil  asetat  dan etanol  96%.  Konsentrasi  75%  dan  100%  yang diencerkan  dalam aquadest dengan  perbandingan  1:1,
1:2  dan  2:1.  Kontrol  positifnya  menggunakan ciprofloxacin 5µg dan kontrol negatifnya adalah aquadest steril.

## IDENTIFIKASI TUMBUHAN
Determinasi        tumbuhan        manjakani  ( Q.  infectoria) dan  sirih  merah (P.  crocatum) dilakukan    di Laboratorium  Biologi,  Fakultas  Matematika  dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Mulawarman.

## PREPARASI SAMPEL
Biji  Manjakani  dan  daun  sirih  merah  dicuci  terlebih dahulu sampai bersih agar tidak terdapat kotoran yang dapat  mencemari  ekstrak.  Biji  manjakani  lalu dikeringkan  dalam  oven  dengan  suhu  50 0 C  selama 1x24  jam  kemudian  biji  dihaluskan  menggunakan grinding mesh sampai menjadi serbuk halus. Sedangkan daun sirih merah ditiriskan, dipotong dengan ketebalan ±2  cm  kemudian  di  keringkan  menggunakan  oven dengan suhu 40 0 C selama 1 jam mengacu pada (Rohadi et  al. ,  2019).  Setelah  itu,  dihaluskan  menggunakan blender sampai  halus  dan  disaring  menggunakan saringan.  Serbuk  yang  diperoleh  ditimbang  dan disimpan dalam wadah botol kering.

## EKSTRAKSI SENYAWA ANTIBAKTERI
Pembuatan ekstrak biji manjakani dan daun sirih merah menggunakan  metode  maserasi  bertingkat  mengacu pada  (Harlita et  al., 2018).  Serbuk  biji  manjakani  dan daun  sirih  merah  masing-masing  ditimbang  sebanyak 1000  gr  kemudian  dimasukkan  dalam  wadah  kaca  dan dimaserasi  dengan  pelarut n- heksan  sebanyak
2000  ml  (perbandingan  1:2  (b/v)).  Sampel  dimaserasi selama 3x24 jam dengan perlakuan diaduk setiap 1 jam. Filtrat  dipisahkan  dari residu  dengan  cara  disaring menggunakan kertas saring. Residu tersebut kemudian ditambahkan  pelarut  etil  asetat  sebanyak  2000  ml. Sampel dimaserasi  selama 3x24 jam dengan perlakuan diaduk  setiap  1  jam.  Filtrat  dipisahkan  dari  residu dengan  cara  disaring  menggunakan  kertas  saring kemudian  ditambahkan  pelarut  etanol  96%  sebanyak 2000  ml.  Sampel  dimaserasi  selama  3x24  jam  dengan perlakuan  diaduk  setiap  1  jam.  Filtrat  dipisahkan  dari residu dengan cara disaring menggunakan kertas saring. Filtrat  yang  dihasilkan  dari  ketiga  pelarut  tersebut kemudian  dipekatkan  menggunakan rotary  evaporator pada suhu 50 0 C dengan kecepatan putar 30 rpm hingga diperoleh  ekstrak  kental.  Ekstrak  yang  diperoleh ditimbang,  dihitung  nilai  rendemennya,  dimasukkan  ke dalam  botol  steril  untuk  mencegah  kontaminasi  dan disimpan.

## UJI BEBAS ETANOL
Hasil  ekstraksi  terlebih  dahulu  dilakukan uji  bebas etanol    dengan    cara    meletakkan    sedikit  ekstrak dalam tabung reaksi, kemudian  ditambahkan  dengan 2 tetes  asam  sulfat  (H 2 SO 4 )  pekat  dan  1  ml  kalium dikromat,  apabila  ada  perubahan  warna  dari  jingga menjadi  hijau  kebiruan,  maka  ekstrak  mengandung etanol (Klau et al., 2021).

## PEMBUATAN LARUTAN UJI
Masing-masing  ekstrak  kental  yang  diperoleh  dibuat larutan  dengan  konsentrasi  10  mg/mL,  dengan menimbang  1  gr  ekstrak  kemudian  dilarutkan  dalam 100  mL aquadest steril,  dan  dihomogenkan.  Ektrak yang  tidak  dapat  larut  sempurna  ditambahkan pengemulsi berupa Tween 80 . Kombinasi ektrak dibuat dengan  mencampurkan  masing-masing  ekstrak  biji manjakani  dengan  daun  sirih  merah  dengan perbandingan 1:1, 1:2 dan 2:1.

## UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK KOMBINASI
Uji  aktivitas  antibakteri  dilakukan  menggunakan metode  disc  difusi  Kirby-Bauer.  Dan  perbandingan kombinasi  yang  digunakan  adalah  1:1,  1:2  dan  2:1 dengan  konsentrasi  75%  dan  100%.  Bakteri  ujinya adalah Klebsiella pneumoniae ATCC 13883. Uji aktivitas antibakteri  dilakukan  di  Laboratorium  Kesehatan Provinsi  Kalimantan  Timur,  pada  Laboratorium Mikrobiologi.  Kontrol  positif  yang  digunakan  adalah Ciprofloxacin dan  kontrol  negatifnya  adalah aquades steril.
Siapkan  suspensi  bakteri  uji  yang  telah  distandarisasi dan media kultur MHA plate. Kultur bakteri uji diambil menggunakan kapas lidi steril, kemudian diinokulasikan secara spread pada medium MHA plate. Kertas cakram steril  berdiameter  6  mm,  ditetesi  dengan  larutan kombinasi  ekstrak  yang  telah  dibuat  sebanyak  15 μ l, kemudian  diletakkan  pada  permukaan  media  MHA plate dan ditekan menggunakan pinset agar menempel sempurna  pada  permukaan  media.  Kemudian diinkubasi  pada  suhu  37oC  selama  24  jam.  Diameter zona  hambat  yang  terbentuk  diukur  menggunakan penggaris  pada  batas  terpanjang  dan  batas  terpendek daerah hambat yang terbentuk dalam satuan milimeter (mm).

## ANALISIS DATA
Aktivitas penghambatan dihitung menggunakan persamaan : (Harlita, T. et al., 2022)
Aktivitas penghambatan (%) = (𝑑2−𝑑1) 𝑑1 x100%
Keterangan : d1 = diameter disc (6 mm) d2 = diameter zona hambat (mm)
persentase  aktivitas  penghambatan  kemudian dianalisis menggunakan ragam analysis varian (ANOVA) dan  uji  lanjutan  DMRT.  Efektivitas  antibakteri kemudian  dihitung  dengan  membandingkan  diameter zona  hambat  yang  dihasilkan  oleh  antibiotik  kontrol
positif  yaitu ciprofloxacin. Efektivitas  antibakteri terhadap  antibiotik  dapat  dihitung  menggunakan persamaan sebagai berikut: (Harlita, T. et al., 2022)
E = 𝐷 𝐷𝑎 x 100%
Keterangan:
E : efektivitas antibakteri (%)
D : diameter zona hambat kombinasi ekstrak (mm) Da  :  diameter  zona  hambat  antibiotik  kontrol  positif (mm)

## HASIL DAN PEMBAHASAN HASIL
Hasil  identifikasi  tumbuhan  manjakani  dengan  Nomor: 051/UN17.7.025.16/HA/VI/2023  menyatakan  bahwa tumbuhan  manjakani  merupakan  spesies Quercus infectoria Olivier.
Hasil  identifikasi  tumbuhan  daun  sirih  merah  Nomor: 050/UN17.7.025.16/HA/VI/2023  menyatakan  bahwa sirih  merah  yang  digunakan  merupakan  spesies Piper crocatum Ruiz & Pav.
Gambar 1. Biji manjakani (a) segar; (b) setelah dihaluskan
Gambar 2. Daun sirih merah (a) segar; (b) setelah dihaluskan
Biji  manjakani  dan  daun  sirih  merah  diiris  dan dikeringkan  untuk  mengurangi  kadar  air.  Irisan tersebut  kemudian  dihaluskan  dengan  tujuan memperluas  permukaan  agar  proses  ekstraksi  lebih efektif.
Tabel I. Nilai Rendemen dari Ekstrak Biji Manjakani dan Daun Sirih Merah Jenis Ekstrak Jenis Pelarut Bobot Ekstrak (gr) Warna Ekstrak Rendemen(%) Biji Manjakani n- heksan 15,42 Hijau Muda 1,5 % Etil Asetat 440,87 Kuning Kecoklatan 44,1% Etanol 96% 353,65 Coklat Kehitaman 35,4% Daun Sirih merah n- heksan 25,20 Kuning Kehijauan 2,52% Etil Asetat 62,14 Hijau Tua 6,21% Etanol 96% 58,71 Hijau Kehitaman 5,87%
Sebelum dilakukan pengujian aktivitas antibakteri, hasil ekstraksi  dilakukan  uji  bebas  etanol  untuk membebaskan ekstrak dari etanol sehingga didapatkan ekstrak  yang  murni  tanpa  ada  kontaminasi,  dan  tidak akan menimbulkan positif palsu pada perlakuan sampel. Hasil  yang  diperoleh  dari  uji  tersebut  adalah  larutan tidak  berubah  warna  yang  terjadi  sehingga  dapat disimpulkan  bahwa  kedua  ekstrak  telah  bebas  etanol dan dapat dilanjutkan dengan menguji ekstrak terhadap bakteri K. pneumoniae.
Uji  aktivitas  antibakteri  kombinasi  ekstrak  kombinasi biji manjakani dan daun sirih merah terhadap bakteri K. pneumoniae dilakukan  menggunakan  teknik disc difusi Kirby-Bauer .  Sebelum  melakukan  uji  aktivitas  terhadap berbagai  perbandingan  kombinasi  dan  konsentrasi ekstrak terlebih dahulu dilakukan uji terhadap masing-
masing  ekstrak  biji  manjakani  dan  daun  sirih  merah dengan  konsentrasi  10  mg/mL  (Gambar  3).  Hasil  uji antibakteri menunjukkan bahwa ekstrak manjakani dan ekstrak  sirih  merah  pada  setiap  pelarut  positif menghambat  pertumbuhan K.  pneumoniae .  Hasil  uji pada masing-masing ekstrak dapat dilihat pada Tabel II.
Gambar 3. (a) Diameter zona hambat ekstrak biji manjakani terhadap bakteri K. pneumoniae; (b) Diameter zona hambat ekstrak daun sirih merah terhadap bakteri K. pneumoniae
Tabel II. Diameter zona hambat antibakteri ekstrak terhadap pertumbuhan K. pneumoniae
Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  kombinasi  ekstrak  biji manjakani dan daun sirih merah dengan konsentrasi 10 mg/mL pada perbandingan yang berbeda (1:1, 1:2, dan
2:1)  dengan  konsentrasi  (75%  dan  100%)  terhadap
bakteri K. pneumoniae didapatkan aktivitas penghambatan  yang  bervariasi,  hasil  uji  aktivitas kombinasi ekstrak disajikan pada Tabel III dan Gambar
4. . Pelarut Ekstrak Biji Manjakani Daun Sirih Merah Diameter Zona Hambat Aktivitas Antibakteri Diameter Zona Hambat Aktivitas Antibakteri n- heksan 8,64 mm 44% 7,89 mm 31,5% Etil Asetat 11,26 mm 87,66% 9,61 mm 60,16% Etanol 96% 14,10 mm 135% 10,47 mm 74,5%
Tabel  III. Diameter  zona  hambat  antibakteri  kombinasi  ekstrak  biji  manjakani  dan  daun  sirih  merah  terhadap pertumbuhan K. pneumoniae
Gambar 4. Grafik aktivitas antibakteri kombinasi ekstrak biji manjakani dan daun sirih merah terhadap pertumbuhan bakteri K. pneumoniae (a) Konsentrasi 75%; (b) Konsentrasi 100%
Grafik diatas menunjukkan bahwa pada ekstrak kombinasi  biji  manjakani  dan  daun  sirih  merah menggunakan  pelarut n- heksan,  aktivitas  antibakteri meningkat  dibandingkan  antibakteri  tanpa  kombinasi. Pada pelarut etil asetat, pada perbandingan 1:1 aktivitas antibakteri  yang  dihasilkan  lebih  kecil  dibandingkan dengan aktivitas antibakteri pada ekstrak biji manjakani, tetapi  perbedaannya  tidak  signifikan.  Antibakteri kembali  meningkat  saat  dikombinasikan  dengan
perbandingan 1:2 dan 2:1.  Pada ekstrak kombinasi biji manjakani  dan  daun  sirih  merah  menggunakan  pelarut etanol  96%,  aktivitas  antibakteri  menurun  saat dikombinasikan dengan perbandingan 1:1, 1:2 dan 2:1.
Efektivitas  antibakteri  kombinasi  ekstrak  biji manjakani  dan  daun  sirih  merah  diperoleh  dengan membandingkan  daya  hambatnya  dengan  daya  hambat kontrol  positif  yaitu  antibiotik ciprofloxacin 5  µg sebesar 25,06 mm (Tabel IV).
66.17
54.58
96.08 79 79.25 114.17 102.17 82.42 116.42 -40 10 60 110 160 1:1 1:2 2:1 A kt ivi ta s A nt iba kt er i ( % ) Perlakuan n-heksan Etil Asetat Etanol 96% 44 31.50 99.58 63.33 109.25 87.66 60.16 86.25 106.42 126.42 135 74.50 113.67 93.50 132.83 0 50 100 150 Manjakani Sirih Merah 1:1 1:2 2:1 A kt ivi ta s A nt iba kt er i ( % ) Perlakuan n-heksan Etil Asetat Etanol 96% Konsentrasi Pelarut Jenis Pelarut n- heksan Etil Asetat Etanol 96% Diameter Zona Hambat Aktivitas Diameter Zona Hambat Aktivitas Diameter Zona Hambat Aktivitas 75% 1:1 9,93 mm 65,5% 10,74 mm 79,00% 12,13 mm 102,16% 1:2 9,28 mm 54,66% 10,89 mm 81,50% 10,95 mm 82,50% 2:1 11,77 mm 96,16% 12,85 mm 114,16% 12,99 mm 116,50% 100% 1:1 11,83 mm 97,16% 11,18 mm 86,33% 12,82 mm 113,66% 1:2 9,80 mm 63,33% 12,39 mm 106,50% 11,61 mm 93,50% 2:1 12,56 mm 109,33% 13,58 mm 126,33% 13,97 mm 132,83%
Tabel IV. Efektivitas antibakteri kombinasi ekstrak biji manjakani dan daun sirih merah terhadap ciprofloxacin 5 µg Jenis Pelarut Kelompok Perlakuan Efektivitas Ekstrak Rerata Ulangan Efektivitas n- heksan 75% (1:1) 9,93 mm 39,62% 75% (1:2) 9,28 mm 37,03% 75% (2:1) 11,77 mm 46,96% 100% (1:1) 11,83 mm 47,20% 100% (1:2) 9,80 mm 39,10% 100% (2:1) 12,56 mm 50,12% Etil Asetat 75% (1:1) 10,74 mm 42,85% 75% (1:2) 10,89 mm 27,29% 75% (2:1) 12,85 mm 51,27% 100% (1:1) 11,18 mm 44,61% 100% (1:2) 12,39 mm 49,44% 100% (2:1) 13,58 mm 55,06% Etanol 96% 75% (1:1) 12,13 mm 48,40% 75% (1:2) 10,95 mm 43,69% 75% (2:1) 12,99 mm 51,83% 100% (1:1) 12,82 mm 51,15% 100% (1:2) 11,61 mm 46,32% 100% (2:1) 13,97 mm 55,74%
Hasil menunjukkan bahwa efektivitas antibakteri tertinggi didapatkan pada ekstrak kombinasi pelarut etanol 96% perbandingan 2:1 konsentrasi 100% terhadap pertumbuhan bakteri K. pneumoniae sebesar 55,74%.

## PEMBAHASAN
Hasil  uji  pada  Gambar  2  dan  Tabel  2  telah menunjukkan  bahwa  uji  aktivitas  antibakteri  dari masing-masing  fraksi n- heksan,  etil  asetat,  dan  etanol 96%  pada  masing-masing  ekstrak  biji  manjakani  dan daun  sirih  merah  mendapatkan  hasil  bahwa  kedua ekstrak tersebut memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri K.  pneumoniae. Hal  ini  ditandai  dengan  adanya zona  hambat  yang  terbentuk  di  sekitar  disk . Pada ekstrak biji manjakani memiliki daya hambat lebih besar dibandingkan  ekstrak  daun  sirih  merah.  Hal  ini dikarenakan berbedanya kandungan senyawa antara biji manjakani  dan  daun  sirih  merah.  Uji  fitokimia  yang dilakukan oleh Himalaya (2017) menyatakan bahwa biji manjakani  memiliki  kandungan  senyawa  fenol, flavonoid,  steroid,  triterpen,  tanin,  saponin  dan alkaloid,  sedangkan  daun  sirih  merah  memiliki kandungan  senyawa  minyak  atsiri,  alkoloid,  saponin, tanin, dan flavonoid.
Kandungan  senyawa  antibakteri  dalam  ekstrak  biji manjakani  lebih  kompleks  dibandingkan  daun  sirih merah  sehingga  dapat  menjadi  faktor  aktivitas penghambatan yang lebih besar pada biji manjakani. Hal ini  sejalan  dengan  Listyorini  (2019)  yang  menyatakan bahwa  aktivitas  antibakteri  dapat  dipengaruhi  oleh beberapa  faktor  yaitu  kandungan  senyawa  antibakteri, daya  difusi  ekstrak,  jenis  bakteri  yang  dihambat  dan konsentrasi  ekstrak  yang  digunakan.  Berdasarkan  hal tersebut, pada kombinasi ekstrak dengan perbandingan ekstrak  biji  manjakani  lebih  besar  dibandingkan  daun sirih  merah  akan  membentuk  zona  hambat  yang  lebih besar pula.
Tabel  III  menunjukkan  bahwa  diameter  zona  hambat terbesar  terdapat  pada  pelarut  etanol  96% perbandingan  2:1  dengan  konsentrasi  100%  (13,97 mm).  Daya  hambat  terkecil  terdapat  pada  pelarut n- heksan  perbandingan  1:1    dengan  konsentrasi  75% (9,93 mm). Ketentuan kekuatan suatu zat uji terhadap bakteri  yaitu  bila  ukuran  diameter  zona  hambat  >20
mm tergolong sangat kuat, 10-20 mm tergolong kuat, 5-10  mm  tergolong  sedang,  dan  <5  mm  tergolong lemah  (T.  Harlita  &  Aina,  2023).  Hasil  penelitian menunjukkan bahwa kombinasi biji manjakani dan daun sirih  merah  tergolong  sebagai  antibakteri  dengan kekuatan uji sedang-kuat.
Kekuatan  daya  hambat  suatu  ekstrak  menunjukkan kemampuan  ekstrak  tersebut  dalam  aktivitasnya menghambat  pertumbuhan  bakteri,  dimana  semakin lebar  diameter  zona  penghambatannya  akan  semakin besar  pula  aktivitas  penghambatannya.  Berdasarkan Gambar  4,  diketahui  bahwa  aktivitas  antibakteri kombinasi ekstrak biji manjakani dan daun sirih merah dengan  penghambatan  terbesar  yaitu  pada  pelarut eatnol  96%  kombinasi  2:1  (biji  manjakani:daun  sirih merah)  sebesar  132,83%  dan  terkecil  pada  pelarut n- heksan kombinasi 1:2 konsentrasi 75% sebesar 54,66%. Berdasarkan  hasil  uji  DMRT,  kombinasi  ektstrak dengan  pelarut  etanol  96%  menghasilkan  antibakteri tertinggi  dan  berbeda  nyata  dengan  pelarut  yang lainnya dan kombinasi ekstrak dengan pelarut n- heksan menghasilkan antibakteri terendah. Terdapat pengaruh perbandingan  yang  digunakan,  ekstrak  kombinasi  yang menghasilkan  antibakteri  tertinggi  dihasilkan  oleh perbandingan  2:1  dan  berbeda  nyata  dengan perbandingan  yang  lain  dan  antibakteri  terendah dihasilkan  oleh  perbandingan  1:1.  Terdapat  pula pengaruh konsentrasi ekstrak dengan F hitung lebih besar dari  F tabel dengan  hasil  antibakteri  tertinggi  dihasilkan oleh  konsentrasi  100%.  Kombinasi  ekstrak  terbaik dihasilkan  oleh  ekstrak  etanol  96%    perbandingan  2:1 (100%)  dan  oleh  ekstrak  etil  asetat  perbandingan  2:1 (100%),  keduanya  merupakan  kombinasi  yang menghasilkan  antibakteri  tertinggi.  Kombinasi  ekstrak n- heksan  perbandingan  1:1  (75%)  merupakan kombinasi yang menghasilkan antibakteri terendah. Berdasarkan  uji  statistik  tersebut,  penelitian  ini menunjukkan  bahwa  dari  setiap  pelarut  yang digunakan,  zona  hambat  terbesar  selalu  didapatkan pada kombinasi 2:1 dan dengan konsentrasi 100%. Hal
ini  menunjukkan  bahwa  kedua  bahan  uji  memiliki potensi yang saling menunjang jika digabungkan dengan perbandingan  yang  sama.  Tetapi  ketika  dilakukan kombinasi  dengan  perbandingan  yang  lebih  besar  dari salah  satunya,  ekstrak  biji  manjakani  lebih  memiliki pengaruh  yang  lebih  besar  dibandingkan  dengan  daun sirih merah.
Jenis  pelarut  yang  digunakan  berpengaruh  terhadap senyawa aktif yang ikut terekstraksi. Pelarut polar akan menarik  senyawa  yang  bersifat  polar,  sedangkan pelarut  non-polar  akan  menarik  senyawa  non-polar dan  pelarut  semi  polar  akan  menarik  senyawa  polar (Harlita,  T. et  al. ,  2022)  Pada  penelitian  ini menggunakan tiga jenis pelarut dengan kepolaran yang berbeda  secara  berturut-  turut  adalah n- heksan,  etil asetat  dan  etanol  96%.  Pada  metode  maserasi bertingkat  didapatkan  hasil  ekstrak  cair  yang berkualitas karena masing-masing pelarut akan menarik senyawa yang sesuai dengan tingkat kepolaran sehingga mudah menarik senyawa tanpa ada gangguan yang ikut terekstrak  dari  senyawa  golongan  lain  dan  dapat teristribusi  berdasarkan  kepolaran  pelarut  yang digunakan.
Peneliti  mendapatkan  ekstrak  daun  sirih  merah  sukar larut dalam aquadest, sedangkan ekstrak biji manjakani mudah  larut  dalam aquadest .  Oleh  karena  itu,  ekstrak daun sirih merah membutuhkan pengemulsi ( Tween 80 ) untuk dapat larut sempurna dalam aquadest. Tween 80 merupakan  surfaktan  non-ionik,  berwujud  cair, berwarnan kekuningan, berminyak, dan larut dalam air, dan digunakan sebagai peningkat kelarutan. Pengemulsi ini  tergolong  surfaktan  non-ionik  yang  memiliki toksisitas  rendah  sehingga  dapat  menaikkan  laju kelarutan  minyak  dengan  cara  menurunkan  tegangan antarmuka zat aktif suatu ekstrak dan medium pelarut sekaligus  membentuk  misel  sehingga  molekul  minyak akan terbawa oleh misel larut dalam medium. Misel ini berperan  dalam  pelarutan  yang  terjadi  pada  molekul zat  yang  sukar  larut  dalam  air  melalui  interaksi  yang reversibel dengan misel dari surfaktan larutan sehingga
suatu  larutan  stabil  secara  termodinamika. Tween  80 baik  digunakan  sebagai  agen  peningkat  kelarutan karena  memiliki  nilai  HLB  15,  dimana  persyaratan sebagai agen pensolubilisasi adalah memiliki nilai HLB ≥ 15. (Nurhadi, 2015).
Aktivitas  daya  hambat  yang  didapatkan  tidak dipengaruhi  dari  pelarut  maupun  pengemulsi.  Hal  ini dibuktikan dengan uji bebas etanol yang dilakukan oleh peneliti  dengan  hasil  tidak  adanya  perubahan  warna dari  jingga  ke  hijau-kebiruan,  sehingga  ekstrak  yang menggunakan  pelarut  etanol  96%  terbukti  tidak memiliki kandungan etanol yang tersisa dalam esktrak. Peneliti  juga  melakukan  uji  aktivitas  antibakteri  pada aquadest yang  digunakan untuk mengencerkan ekstrak dan pada Tween 80 yang digunakan sebagai pengemulsi pada  ekstrak  daun  sirih  merah.  Hasil  yang  didapatkan dari uji tersebut adalah tidak adanya zona hambat pada sekeliling disc yang  berisi aquadest maupun Tween  80 yang  artinya  dari  keduanya  tidak  memiliki  kandungan antibakteri  yang  dapat  mempengaruhi  zona  hambat yang  terbentuk  dari  kombinasi  ekstrak  biji  manjakani ( Q. infectoria) dan daun sirih merah ( P. crocatum).
Kontrol  positif  digunakan  sebagai  pembanding  dalam menentukan  efektivitas  antibakteri  dari  kombinasi ekstrak  biji  manjakani    ( Q.  infectoria) dan  daun  sirih merah  ( P.  crocatum). Kontrol  positif  yang  digunakan adalah ciprofloxacin 5µg.  antibiotik ciprofloxacin dipilih sebagai  kontrol  positif  karena  merupakan  antibiotik yang  dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri  Gram negatif dengan mekanisme menghambat replikasi DNA dan  protein  bakteri. Ciprofloxacin juga  banyak digunakan  untuk  pengobatan  infeksi  yang  disebabkan oleh  bakteri  Gram  negatif  salah  satunya  adalah penyakit  ISK  yang  disebabkan  oleh K.  pneumoniae.
Mekanisme pertumbuhan bakteri K. pneumoniae adalah dengan  cara  menguraikan  laktosa  dan  replikasi  DNA (Pratiwi,  2013) . Hasil  penelitian  terhadap  kontrol positif  ( Ciprofloxacin) menghasilkan  zona  hambat terhadap  bakteri  uji  sebesar  25,06  mm  dan  kontrol
negatif  ( aquadest dan Tween  80 )  tidak  menunjukkan adanya penghambatan terhadap pertumbuhan bakteri. Ciprofloxacin 5µg  sebagai  kontrol  positif  menghasilkan zona  hambat  sebesar  sebesar  25,06  mm  terhadap bakteri K.  pneumoniae. Menurut Clinic  Laboratory Standards  Institute (CLSI)  Kriteria  pola  kepekaan antibiotik disc 5µg ciprofloxacin adalah  resisten  ≤  15 mm, intermediate 16-20  mm  dan sensitive ≥  21  mm dengan demikian dapat disimpulkan bahwa ciprofloxacin 5µg  sensitif  terhadap  bakteri K. pneumoniae. Pada  penelitian  ini  zona  hambat  terbesar pada  ekstrak  kombinasi  etanol  96%  perbandingan  2:1 dengan  konsentrasi  100%  didapatkan  efektivitas terhadap  pertumbuhan  bakteri K. pneumoniae sebesar 55,74%. Dengan demikian ekstrak kombinasi  biji  manjakani (Q.  infectoria) dan  daun  sirih merah (P.  crocatum) memiliki  potensi  sebagai antibakteri terhadap pertumbuhan bakteri K.  pneumoniae, namun  potensinya  masih  dibawah ciprofloxacin.

## KESIMPULAN
Hasil  dari  masing-masing  fraksi n- heksan,  etil  asetat, dan  etanol  96%  pada  masing-masing  ekstrak  biji manjakani (Q.  infectoria) dan  daun  sirih    merah (P.  crocatum) memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap pertumbuhan bakteri K. pneumoniae. Terdapat aktivitas antibakteri  pada  ekstrak  kombinasi  biji  manjakani  dan daun sirih merah dengan perbandingan 1:1, 1:2 dan 2:1 dan    konsentrasi  75%  dan  100%  pada  masing-masing fraksi n- heksan,  etil  asetat  dan  etanol  96%  terhadap pertumbuhan  bakteri K.  pneumoniae. Konsentrasi  dan perbandingan yang paling efektif terdapat pada ekstrak etanol  96%  kombinasi  2:1  dengan  konsentrasi  100% yaitu  sebesar  13,97  mm  dan  efektivitasnya  sebesar 55,74% dengan kontrol positif ciprofloxacin 5µg sebesar 25,06  mm  sehingga  dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak kombinasi  biji  manjakani (Q.  infectoria) dan  daun  sirih merah (P.  crocatum) memiliki  efektivitas  antibakteri
terhadap  bakteri K.  pneumoniae, namun  potensinya masih dibawah ciprofloxacin.

## DAFTAR PUSTAKA
Asparinda,  I.,  &  Juwitaningsih,  T.  2020.  Uji  Aktivitas Antibakteri  dan  Uji  Toksisitas  Fraksi  Non  Polar  Gal Manjakani  ( Quercus  infectoria ). Acta  Pharm  Indo , 8 (2), 69–79.
Harlita, T., & Aina, G. 2023. The Antibacterial Activity of Dayak Onion Ethanol Extract (Eleutherine Palmifolia (L.) Merr) and Red Ginger ( Zingiber Officinale Rosc Var. Rubrum)  on  Growth  Gi  Tract  Pathogen  Bacteria. Jurnal Analis Medika Biosans (JAMBS) , 10 (1), 61–69.
Harlita,  T.,  Aina,  G.,  Kartini,  R.  (2022).  Aktivitas Antibakteri  Kombinasi  Ekstrak  Etanol  Bawang  Dayak ( Eleuthrerine  palmifolia (L.)  dan  Jahe  Merah  ( Zingiber officinale  Rosc Var.  Rubrum)  Terhadap  Pertumbuhan Salmonella typhy. Sains Medisina , 1 (2), 109–117.
Harlita,  T.  D.,  Oedjijono,  &  Asnani,  A.  2018.  The Antibacterial  Activity  of  Dayak  Onion  ( Eleutherine palmifolia (L.)  merr)  Towards  Pathogenic  Bacteria. Tropical  Life  Sciences  Research , 29 (2),  39–52. https://doi.org/10.21315/tlsr2018.29.2.4
Himalaya,  D.  2017.  Pengaruh  Pemberian  Ekstrak  Biji Manjakani  (Quercus  infectoria  Gall)  Terhadap  Bakteri Vginosis dan Candida Penyebab
Keputihan (Leukorrhea). Journal of Midwifery , 5 (1), 38–44.
Klau, M. L. C., Indriarini, D., & Nurina, R. L. 2021. Uji Aktivitas  Ekstrak  Etanol  Daun  Kemangi  ( Ocimum Sanctum L.) Terhadap Pertumbuhan Bakteri Escherichia  Coli  Secara  in  Vitro. Cendana  Medical Journal (CMJ) , 9 (1),
102–111. https://doi.org/10.35508/cmj.v9i1.4942
Listyorini,  D.  (2019).  Uji  Daya  Hambat  Antibakteri Kombinasi Ekstrak Daun Sirih Merah (Piper crocatum) dan Daun Kelor (Moringa oleifera L.) Terhadap Bakteri Escherichia  coli. Karya  Tulis  Ilmiah. STikes  Bhakti Husada Mulia Madiun.
Lubis,  A.  A.  G.  (2019).  Uji  Resistensi  Aantibiotika Terhadap  Bakteri  Penyebab  Infeksi  Saluran  Kemih (ISK)  Di  RSUP  H.  Adam  Malik  Medan. Karya  Tulis Ilmiah. Politeknik Kesehatan Kemenkes RI Medan.
Muntasir,  Abdulkadir,  W.  S.,  Harun,  A.  I.,  Priska Ernestina  Tenda,  Makkasau,  Muliyadi,  Saksosno,  R.  Y., Fernandez,  S.,  &  Wonga,  T.  M.  (2021). Antibiotik  dan Resistensi Antibiotik. Rizmedia Pustaka Indonesia.
Nemin,  A.  M.  (2020).  Karakteristik  Pasien  Infeksi Saluran  Kemih  Dirumah  Sakit  Umum  Lasinrang Kabupaten  Pinrang  Provinsi  Sulawesi  Selatan  Tahun
2018-2019 . Skripsi. Universitas Hasanuddin, Makassar.
Nurhadi,  G.  (2015).  Pengaruh  Konsentrasi  Tween  80 Terhadap  Stabilitas  Fisik  Obat  Kumur  Minyak  Atsiri Herba Kemangi (Ocimum americanum L). Skripsi. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta.
Pratiwi,  D.  S.  (2013).  Kajian  Uji  Resistensi  Dan Sensitivitas  Antibiotik  Ceftriaxon  dan  Ciprofloxacin pada  Penderita  Infeksi  Saluran  Kemih  di  RSUP Fatmawati. Skripsi , UIN Syarif Hidayatullah Jakarta.
Rohadi, D., Zamzam, M. Y., & Rachmany, L. S. (2019). Uji  Daya  Hambat  Ekstrak  Etanol  Daun  Sirih  Merah (Piper  crocatum  Ruiz  &  Pav.)  Terhadap  Pertumbuhan Bakteri Escherichia coli. Medimiuh , 1 (2), 171–178.
Triandini, I. G. A. A. H., Ruqqayah, S., & Astuti, N. L. B.  (2018).  Jurnal  In  Vitro  Tanaman  yang  Berpotensi Sebagai  Antibiotik  Alami  Untuk  Radang  Payudara (Mastitis). Jurnal Sangkareang Mataram , 4 (3), 14–17.
Wiladatika, M. (2013). Aktivitas Antibakteri Kombinasi Ekstrak Etanol Daun Sirih Merah (Piper crocatum Ruiz and Pav.) Dan Siprofloksasin Terhadap Staphylococcus aureus,  Pseudomonas  aeruginosa,  dan  Klebsiella pneumoniae Beserta Bioautografinya. Naskah Publikasi. Universitas Muhammadiyah Surakarta.
Yanti, N. (2016). Uji Aktivitas Antifungi Ekstrak Etanol Gal Manjakani (Quercus infectoria) Terhadap Candida albicans. Jurnal Ilmiah Mahasiswa Pendidikan Biologi , 1 (1), 1–9.  https://medium.com/@arifwicaksanaa/pengertian- use-case-a7e576e1b6bf