PENGARUH TEMPERATUR KALSINASI TERHADAP SIFAT MEKANIK MATERIAL SCAFFOLD HIDROKSIAPATIT DARI TULANG KAMBING
Setiawan Eka Prawira 1 , Joko Triyono 1 , Teguh Triyono 1
1 Teknik Mesin – Universitas Sebelas Maret e-mail addres : prawira_eka@yahoo.co.id
Keywords:
Sheep hydroxyapatite, SHA, Biomaterial, Calcination, SEM, Bone Graft
Abstract :
In  this  study,  a  preliminary  study  on  the  preparation  of hydroxyapatite (HAp) as bone filler was made from sheep femur bone by calcination method. The femur of the sheep is cut into a form of scaffold with  dimensions  of  5  mm  x  5  mm  x  5  mm.  The  calcination  process  is performed  at  four  variations  of  temperature  (700 o C,  900 o C,  1100 o C, 1300 o C).  Characterization  of  scaffold  material  done  before  and  after calcination process, it intended to find out the influence and relationship between calcination of temperature on the mechanical properties of SHA material. The results of hardness testing show that the higher calcination temperature  then  the  SHA  material  hardness  value  also  increased.  The optimum  hardness  value  occurs  at  1100 o C  calcination  temperature  of 38.23±0.985VHN.  Meanwhile,  high  calcination  temperature  will  also decrease  the  compressive  strength  of  SHA  material.  The  value  of  the optimum  compressive  strength  is  achieved  at  1100 o C  calcination temperature  of  2.23±0.249  MPa.  The  morphology  of  SHA  scaffold  was analyzed by Scanning Electronic Microscopy (SEM). The observation of SEM shows the occurrence of porous interconnections in all temperature variations. SEM analysis results show that porous interconnect is formed at all temperature variations with diameter size ± 100-500μm. Very high calcination temperature will give the impact of HAp wall is getting thinner and the porous diameter is getting bigger. Porous interconnection damage is also seen at 1300°C which causes the mechanical properties of SHA to decrease.

## PENDAHULUAN
Penggunaan bone  graft atau bone  filler sebagai  bahan  pengisi  tulang  di  Indonesia  terus meningkat dari  tahun ke  tahun  seiring  bertambahnya kasus  fraktur  yang  sebagian  besar  disebabkan  oleh tingginya  angka  kecelakaan.  Dengan  adanya graft tulang  maka  tulang  yang  rusak  dapat  dilakukan rekonstruksi sebagai solusi dari berbagai kasus fraktur yang terjadi di Indonesia. Metode rekonstruksi tulang yang umum dipakai saat ini adalah dengan cara implan atau cangkok tulang ( bone grafting ). Metode cangkok tulang berdasarkan klasifikasi asal material bone graft dari  donornya  mencakup  metode allograft yakni pengganti tulang dari manusia lainnya, autograft yakni pengganti tulang dari bagian lain di tubuh pasien, dan xenograft yakni pengganti tulang dari hewan [1]. Material bone graft tipe allograft dan xenograft memiliki  kelemahan  yaitu  kecenderungan  adanya reaksi  imun,  penolakan  oleh  jaringan  tubuh,  serta kemungkinan penularan penyakit [2]. Teknik
autograft dan allograft memerlukan  tindakan  bedah tambahan yang dapat menyebabkan trauma. Selain itu teknik ini juga dapat memperpanjang waktu bedah dan biaya perawatan [3].
Solusi untuk mengatasi resiko yang ditimbulkan dari  beberapa  metode  rekonstruksi  tulang  tersebut maka diciptakanlah Hidroksiapatit (HAp). Hidroksiapatit merupakan mineral alami dari senyawa apatit kalsium fosfat yang berupa garam kristal dengan rumus  Ca 10 (PO 4 ) 6 (OH) 2 .  HAp  merupakan  senyawa kalsium apatit yang paling stabil dibandingkan dengan kalsium  fosfat  lainnya,  yaitu  oktakalsium  fosfat (OKF),  dikalsium  fosfat  dihidrat  (DKFD),  dan trikalsium fosfat (TKF) [4].
Pengaruh  temperatur  kalsinasi  terhadap  sifat mekanik dari scaffold HAp diharapkan dapat diketahui dalam  penelitian  ini.  Selain  itu,  hasil  penelitian  ini juga  dapat  dijadikan  rujukan  referensi  untuk pengembangan penelitian berikutnya tentang
pembuatan  hidroksiapatit  berbahan  dasar  limbah tulang kambing.

## METODOLOGI PENELITIAN
Pembuatan Spesimen Scaffold SHA Langkah  awal  yang  dilakukan  dalam  penelitian yaitu  menyiapkan  tulang  kambing  bagian  pangkal paha  (femur). Tulang  kambing  diperoleh  dari  tempat pemotongan ternak kambing di Jalan Tahu, Kelurahan Gelung,  Kecamatan  Paron,  Kabupaten  Ngawi, Provinsi  Jawa  Timur.  Tulang  tersebut  kemudian dibersihkan dari daging dan lemak yang masih tersisa dan  menempel  akibat  bekas  pemotongan.  Setelah pembersihan,  tulang  kemudian  direbus  selama  2  jam sebanyak  3-5  kali  untuk  menghilangkan  minyak  dan bau amis. Tahap selanjutnya yaitu pengeringan tulang dengan  cara  dijemur di  bawah  terik  matahari.  Proses pengeringan  ini  dilakukan  kurang  lebih  selama  1-3 hari.  Setelah  tulang  benar-benar  kering  kemudian tulang  dipotong  dengan  mesin  gergaji  tulang  ( bone saw )  dan  selanjutnya  dilakukan finishing dengan cutter agar  didapatkan  bentuk/potongan  spesimen berdimensi 5 mm x 5 mm x 5 mm.
Proses Kalsinasi Pada  proses  kalsinasi scaffold tulang  kambing telah  ditentukan  melalui  empat  variasi  suhu,  yaitu 700 o C,  900 o C,  1100 o C  dan  1300 o C.  Furnace  yang digunakan  untuk  proses  kalsinasi  spesimen scaffold SHA yaitu Kejia Furnace KJ-1700X. Proses kalsinasi scaffold tulang kambing pada tiap-tiap variasi dimulai dari suhu ruangan 27 o C, dengan kenaikan temperatur 10 o C  per  menit,  waktu  penahanan  ( holding  time ) selama  2  jam,  kemudian  yang  terakhir  yaitu  proses pendinginan hingga mencapai suhu ruangan 27 o C.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Analisa Pengaruh Temperatur Kalsinasi Terhadap Perubahan Warna Scaffold SHA
Perubahan  warna  sampel scaffold SHA  untuk masing-masing variasi temperatur kalsinasi ditunjukkan pada Tabel 1.
Tabel 1. Perubahan warna scaffold SHA sebelum dan sesudah kalsinasi
700 o C Putih
900 o C Putih
1100 o C
Putih terang
1300 o C Putih terang
Dari Tabel 1, terlihat jelas bahwa sampel scaffold SHA  sebelum  dikalsinasi  masih  berwarna  putih kecokelatan.  Hal  itu  menandakan  bahwa  di  dalam tulang  tersebut  masih  terkandung  material  organik. Setelah  dikalsinasi  mencapai  temperatur  variasi 700 o C,  terjadi  perubahan  warna  yang  cukup signifikan. Warna sampel tulang kambing pada variasi temperatur  700 o C  berubah  menjadi  putih.  Sementara itu,  pada  temperatur  900 o C  warna  tulang  kambing yang  dihasilkan  tidak  jauh  berbeda  dengan  proses kalsinasi  tulang  kambing  pada  temperatur  700 o C. Proses kalsinasi sampel scaffold tulang kambing pada variasi temperatur 900 o C juga dihasilkan warna putih. Hal  ini  terjadi  karena  selama  proses  kalsinasi  pada variasi temperatur 700 o C dan 900 o C terjadi penguraian material organik. Itu artinya zat-zat organik yang terkandung  di  dalam  tulang  kambing  telah  hilang ketika temperatur kalsinasi mencapi temperatur 700 o C dan  900 o C.  Analisa  ini  diperkuat  dengan  penelitian yang  pernah  dilakukan  Ooi,  dkk  (2006)  [5]  yang melaporkan bahwa tulang yang dikalsinasi pada  suhu
Temperatur Scaffold SHA Warna Sebelum kalsinasi Putih kecoklatan
45 40
35 30
25 20 15 10 5 0 Variasi Temperatur (°C) 25.57
36.06 33.65
38.23
≥700°C,  warna  sampel  menjadi  putih,  menunjukkan hilangnya  zat  organik  pada  tulang.  Perubahan  warna tulang  ini  diyakini  terkait dengan  proses  terbakarnya dari matriks organik (protein dan kolagen).
Sementara  itu  warna  sampel  SHA  tulang kambing  yang  dihasilkan  pada  kalsinasi  variasi temperatur  1100 o C  adalah  putih  terang.  Hal  serupa juga terjadi pada kalsinasi SHA pada 1300 o C. Warna sampel scaffold tulang kambing yang dihasilkan pada kalsinasi  variasi  suhu  1300 o C  juga  terlihat  putih terang.  Warna  putih  terang  ini  terjadi  karena  pada kalsinasi temperatur 1100 o C dan 1300 o C, sampel SHA mulai terdekomposisi dan mulai berubah ke fase lain. Analisa  ini  diperkuat  dengan  penelitian  yang  pernah dilakukan  oleh  Niakan,  dkk  (2015)  [6]  yang melaporkan  bahwa  HAp  terdekomposisikan  ke  fase lain  dari  kalsium  fosfat  seperti  tri-kalsium  fosfat (TCP)  bila  dikalsinasi  pada  suhu  lebih  dari  1000°C, sehingga  suhu  kalsinasi  memainkan  peran  penting dalam  mengendalikan  stabilitas  fase  HAp  dan  sifat mekanik.  Ooi,  dkk  (2006)  [5]  dalam  penelitiannya juga  menambahkan  bahwa  hasil  yang  diperoleh  dari analisis  FTIR  menunjukkan  bahwa  tulang  secara bertahap  melepaskan  ion  OH-  pada  suhu  kalsinasi diatas 1100°C.
Dari analisa hasil kalsinasi sampel SHA dan penjelasan Ooi, dkk (2006) [5], Niakan (2015) [6] di atas  dapat  disimpulkan  bahwa  suhu  kalsinasi memainkan  peran  penting  dalam  mengendalikan stabilitas fase HA. Perubahan warna yang terjadi pada sampel  SHA  variasi  700 o C  dan  900 o C  dari  kuning kecokelatan  menjadi  putih  setelah  proses  kalsinasi disebabkan  oleh  adanya  penguraian  zat  organik (protein  dan  kolagen),  sedangkan  perubahan  warna yang  terjadi  pada  sampel  SHA  variasi  1100 o C  dan 1300 o C  setelah  proses  kalsinasi  menjadi  putih  agak terang  dikarenakan  SHA  terdekomposisi  ke  fase  tri- kalsium fosfat (TCP).

## Analisa Uji Kekerasan (Vickers Hardness Tester)
Dari  pengujian  yang  telah  dilakukan  dapat diketahui  bahwa  temperatur  kalsinasi  memiliki pengaruh  terhadap  sifat  mekanik  material scaffold SHA.  Pengujiannya  digunakan  alat  uji Vickers Microhardness berdasarkan ASTM E384-11e1 dengan  metode  pembebanan  25  gf  dan  waktu penekanan indentor selama 10 detik. Data yang telah diperoleh  selanjutnya  disajikan  dalam  bentuk  grafik yang dapat dilihat pada Gambar 1.
Dari grafik pada Gambar 1, secara umum terlihat bahwa  nilai  kekerasan scaffold SHA  mengalami peningkatan,  mulai  dari  variasi  temperatur  kalsinasi 700 o C  hingga  1300 o C.  Hasil  pengujian  sampel scaffold SHA  pada  700 o C  memeliki  nilai  kekerasan terendah yakni 16,73±0,612VHN, sedangkan pada
variasi  temperatur  kalsinasi  900 o C,  nilai  kekerasan sampel scaffold SHA  mengalami  kenaikan  menjadi 18,98±0,172VHN. Nilai kekerasan sampel SHA terus mengalami kenaikan hingga mencapi angka kekerasan optimum  yaitu  sebesar  38,23±0,985VHN  pada temperatur kalsinasi 1100 o C. Fenomena naiknya nilai kekerasan  sampel scaffold SHA  mulai  dari  variasi temperatur kalsinasi 700 o C hingga 1100 o C disebabkan oleh terjadinya proses dekarbonasi dan dehidroksilasi material  SHA  [7].  Hilangnya  unsur  organik  dan berubahnya scaffold SHA  tulang  kambing  menjadi fase  kristal  hidroksiapatit  setelah  proses  kalsinasi inilah  yang  juga  menjadi  penyebab  nilai  kekerasan sampel kontrol lebih rendah dari scaffold SHA setelah dikalsinasi.
18.98 16.73
Gambar 1. Grafik hasil Uji Kekerasan SHA
Dari  grafik  pada  Gambar  1  ditunjukkan  bahwa nilai  kekerasan  sampel scaffold SHA  kontrol  hanya 33,65VHN.  Nilai  tersebut  lebih  rendah  dari  nilai kekerasan  sampel scaffold SHA  setelah  dikalsinasi pada  variasi  temperatur  1100 o C  yakni  38,23±0,985 VHN,  dengan  selisih  nilai  kekerasannya  sebesar 4,58VHN.  Sementara  itu,  nilai  kekerasan scaffold SHA pada variasi suhu kalsinasi 1100 o C lebih tinggi dibandingkan  nilai  kekerasan  HAp  komersil.  Hal  itu karena HAp komersil dihasilkan dengan mengkalsinasi  tulang  sapi  pada  suhu  900 o C, sedangkan  pada  penelitian  ini  nilai  kekerasan  HAp tulang kambing pada suhu 900 o C sebesar 18,98±0,172VHN. Selisihnya terpaut 6,59VHN lebih rendah dibanding nilai kekerasan HAp komersil, yakni sebesar 25,57±1,069VHN.
Berbeda  pada  variasi  temperatur  1100 o C, pengujian  kekerasan  sampel scaffold SHA  pada variasi  temperatur  1300 o C,  sampel scaffold SHA cenderung  mengalami  penurunan  nilai  kekerasan yakni 36,06±1,716VHN. Penurunan nilai kekerasan
N il ai K ek er asa n (VHN )
Variasi Temperatur ( ° C) 1.80 1.29 0.87 2.23 5.80 7.63 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0
ini bisa terjadi karena temperatur 1300 o C terlalu tinggi jika  dipakai  untuk  proses  kalsinasi scaffold HAp kambing  yang  bertujuan  untuk  menghasilkan  HAp murni.  Akibatnya,  beberapa  butir  dari  senyawa  HAp menjadi  rusak  dan  mulai  membentuk  fase  lain  yaitu tricalcium  phosphate  (TCP).  Rusaknya  kandungan HAp pada suhu kalsinasi di atas 1100 o C juga pernah dilaporkan pada penelitian sebelumnya, yakni tentang sintesis  HAp  berbahan  dasar  tulang  mandibula  cumi sontong [8]. Dalam penelitian tersebut, scaffold HAp dibuat dalam bentuk serbuk dengan metode ball mill kemudian  dikalsinasi  pada  variasi  suhu  900 o C, 1000 o C,  dan  1100 o C.  Dari  pengujian  FTIR  dan pengamatan  SEM  dijelaskan  bahwa  unsur  Ca  dan PO4-3  pada  temperatur  kalsinasi  1100 o C  berbentuk semi  kristal  atau  amorphous  berupa  gumpalan  atau agglomerate, sehingga temperatur 1100 o C tidak cocok untuk  kalsinasi  yang  bertujuan  untuk  menghasilkan HAp murni.

## Analisa Uji Kuat Tekan
Temperatur kalsinasi memiliki pengaruh terhadap nilai kekuatan tekan material scaffold SHA. Hal itu dibuktikan dengan pengujian kuat tekan yang telah  dilakukan  menggunakan Universal  Testing Machine (JTM Technology Machine , 0.5 T Capacity ) berdasar  pada  ASTM  F-451-95  dengan  pembebanan load sebesar 100 kg dan dengan kecepatan penekanan 5 mm/menit. Data hasil pengujian kuat tekan beberapa sampel scaffold SHA dari beberapa variasi temperatur kalsinasi ditunjukkan pada Gambar 2 berikut.
Gambar  2.  Grafik  hasil  uji  tekan scaffold SHA
Pada  grafik  ditunjukkan  bahwa scaffold SHA tulang  kambing  untuk  variasi  temperatur  700 o C memiliki  nilai  kuat  tekan  paling  rendah  yakni 0,87±0,053MPa,   pada   temperatur   kalsinasi  900 o C
nilai kekuatannya meningkat menjadi 1,29±0,081MPa. Nilai kekuatan tekan yang optimum pada uji tekan sampel SHA ini diperoleh pada variasi temperatur kalsinasi 1100 o C sebesar 2,23±0,249MPa. Peningkatan nilai kekuatan tekan SHA yang signifikan dari  temperatur  kalsinasi  700 o C-1100 o C  ini  terjadi karena scaffold SHA  tulang  kambing  sudah  mulai terbentuk  HAp  murni.  Selain  mulai  terbentuknya hidroksiapatit murni, naiknya nilai kuat tekan tersebut juga  dikarenakan  adanya  peningkatan  kristalinitas ketika  tulang  kambing  dikalsinasi  pada  temperatur 700 o C  hingga  1100 o C.  Fenomena  peningkatan kristalinitas HAp juga pernah dijumpai pada penelitian Ooi (2007) [5] yang melaporkan adanya peningkatan kristalinitas  hidroksiapatit  pada  sampel  BHA  ketika temperatur  kalsinasinya  mencapai  600 o C  hingga 1000 o C.
Pada  Gambar  2  juga  ditunjukkan  bahwa  nilai kekuatan  tekan  SHA  tulang  kambing  mengalami penurunan  setelah  dikalsinasi  di  atas  temperatur 1100 o C.  Nilai  kuat  tekan  SHA  kambing  pada temperatur  1300 o C  adalah  1,80±0,058MPa.  Selisih penurunan nilai kuat tekannya sebesar 0,43MPa. Hal ini  terjadi  karena scaffold SHA  semakin  porous. Semakin  tinggi  temperatur  yang  digunakan  untuk kalsinasi SHA maka porous interkoneksi yang terjadi pada  sampel scaffold tulang  kambing  juga  semakin besar.  Besarnya  porous  inilah  yang  menyebabkan kekuatan  tekan  dari  sampel scaffold tulang  kambing menurun  pada  suhu  temperatur  1300 o C.  Menurut penelitian  Solechan  (2014)  [8]  temperatur  kalsinasi yang  tinggi  mengakibatkan scaffold semakin  rapuh dan  porous,  disamping  itu  kekuatan  ikatan  antar partikel  semakin  lemah.  Lemahnya  ikatan  partikel mengakibatkan scaffold sangat  getas,  dan  kekuatan tekan rendah.
Berdasarkan  data  hasil  uji  kuat  tekan  ini  dapat disimpulkan bahwa secara garis besar, sifat kuat tekan scaffold SHA berbahan dasar material tulang kambing sangat  dipengaruhi  oleh  temperatur  kalsinasi  yang digunakan.  Temperatur  kalsinasi  yang  tinggi  akan menurunkan sifat kuat tekan dari scaffold SHA tulang kambing.  Hal  tersebut  dibuktikan  dengan  pengujian kuat tekan dan terlihat bahwa nilai kuat tekan scaffold SHA  sebelum  dikalsinasi  (SHA  kontrol)  sebesar 7,63±0,062MPa mengalami penurunan nilai kekuatan tekan  setelah  dikalsinasi  pada  beberapa  variasi temperatur  yang  tinggi  (700 o C,  900 o C,  1100 o C, 1300 o C).  Turunnya  nilai  kuat  tekan  tersebut  karena berkurangnya  pengikat  organik  dan  semakin  porous (Tontowi  dkk.,  2012)  [9].  Kesimpulan  tersebut diperkuat  juga  oleh  penelitian  Solechan  (2014)[8] yang  menyatakan  bahwa  temperatur  kalsinasi  yang tinggi  mengakibatkan scaffold semakin  rapuh  dan porous,  disamping  itu  kekuatan  ikatan  antar  partikel
N il ai K ua t T ek an (MPa )
Volume 18 Nomor 1 Maret 2019
semakin lemah. Lemahnya ikatan partikel mengakibatkan scaffold sangat  getas,  dan  kekuatan tekan rendah.

## Pengamatan Scanning Electron Microscopy (SEM)
Pada tabel 2 ditunjukkan gambar hasil SEM dari sampel scaffold SHA untuk variasi suhu kalsinasi 700 o C, 900 o C, 1100 o C dan 1300 o C.
Tabel 2. Hasil foto SEM scaffold SHA
Suhu ( o C) Perbesaran 50x Perbesaran 100x 700 900 1100 1300 Dari Tabel 2, scaffold pada suhu kalsinasi 700°C terlihat adanya porous namun diameter interkoneksinya tidak begitu jelas sehingga pengamatan ukuran porous interkoneksi untuk sampel 700 o C tidak dapat dilakukan di kedua perbesaran foto. Sementara  itu  dinding  HAp  pada scaffold SHA temperatur  700 o C  sudah  mulai  muncul  dan  dapat dilakukan pengamatan.  Berbeda  dengan  suhu  700 o C, diameter porous interkoneksi pada variasi suhu 900 o C mulai  dapat  teramati  dengan  jelas  dengan  ukuran diameter  porousnya  ±100-200µm  pada  perbesaran 100x.  Dinding  HAp  juga  semakin  terlihat  jelas  pada variasi temperatur 900 o C. Proses kalsinasi  ini
menghilangkan  material  organik  dan  menyisakan material anorganik yaitu hidroksiapatit. Pada temperatur 1100 o C, porous interkoneksinya sempurna dan  teramati  dengan  jelas  pada  perbesaran  100x dengan  ukuran  diameter  porous  ±100-400µm. Sementara  itu  SHA  pada  variasi  temperatur  1300 o C, porous  interkoneksi  cenderung  membesar  dan  mulai mengalami  kerusakan.  Pada  tabel  2  ditunjukkan adanya  beberapa  patahan  porous  interkoneksi  yang menandakan bahwa kalsinasi pada temperatur 1300 o C mengakibatkan  kerusakan  porous  interkoneksi  dari scaffold SHA  kambing.  Porous  interkoneksi  yang mengalami  kerusakan  tersebut  berdiameter  ±200- 500µm.  Sementara  itu,  dinding  HAp  pada  variasi 1300 o C juga nampak semakin tipis jika dibandingkan dengan  dinding  HAp  pada  variasi  1100 o C.  Ukuran porous  SHA  yang  semakin  membesar  dan  dinding HAp  yang  semakin  tipis  inilah  yang  menyebabkan scaffold SHA  menjadi  lebih  rapuh,  sehingga menurunkan nilai kuat tekan scaffold SHA.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  pengujian  dan  pembahasan yang telah dilakukan, maka dapat ditarik kesimpulan sebagai berikut:
1. Temperatur  kalsinasi  semakin  tinggi  akan meningkatkan  nilai  kekerasan  material scaffold
SHA.  Dari  hasil  uji Vickers  Microhardness terhadap  material scaffold SHA,nilai  kekerasan tertinggi dicapai pada variasi temperatur 1100 o C sebesar 38,23±0,985VHN.
2. Material scaffold SHA tulang kambing mengalami  penurunan  nilai  kuat  tekan  setelah dikalsinasi  pada  temperatur  700 o C,  900°C, 1100 o C  dan  1300°C.  Dari  ke  empat  variasi temperatur  kalsinasi,  nilai  kuat  tekan  material SHA tertinggi dicapai pada temperatur kalsinasi 1100 o C  dengan  nilai  kuat  tekan  sebesar 2,23±0,249MPa.
3. Pengamatan  SEM  material scaffold SHA  pada temperatur kalsinasi 700 o C, 900°C, 1100 o C dan 1300°C menunjukkan
adanya porous interkoneksi  dengan  ukuran  diameter  ±100- 500μm.  Temperatur  kalsinasi  yang  tinggi mengakibatkan  dinding  hidroksiapatit  (HAp) pada  material scaffold SHA  menjadi  semakin tipis  dan  diameter  porous  interkoneksi  menjadi semakin  besar  sehingga  menurunkan  sifat mekanik dari material scaffold SHA.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] K.  Dahlan,  S.  U.  Dewi,  A.  Nurlaila,  and  D. Soejoko,  “Synthesis  and  Characterization  of Calcium Phosphate/Chitosan Composites,”  vol.
12, 2012.
[2] L. Bacáková and E. Filová, “Osteogenic Cells on Bio-Inspired Materials for Bone Tissue Engineering  Osteogenic  Cells  on  Bio-Inspired Materials  for  Bone  Tissue  Engineering,” Physiol. Res. , vol. 59, pp. 309–388, 2009.
[3] S.  Jebahi  and  al. et ,  “Biologic  Response  to Carbonated  Hydroxyapatite  Associated  with
Orthopedic  Device:  Experimental  Study  in  A Rabbit  Model,” Korean  J.  Pathol. ,  vol.  46,  no.
1, pp. 48–54, 2012.
[4] S.  Gnanasundaram,  S.  Pal,  C.  Rose,  and  T. Sastry,  “A  Novel  Bio-Inorganic  Bone  Implant Containing  Deglued  Bone,  Chitosan  and Gelatin,” Bulletin  of  materials  science vol.  24, pp. 415-420, 2001.
[5] C.  Y.  Ooi,  M.  Hamdi,  and  S.  Ramesh, “Properties  of  Hydroxyapatite  Produced  by Annealing  of  Bovine  Bone,” Ceram.  Int. ,  vol. 33, pp. 1171–1177, 2007.
[6] A.  Niakan,  “Synthesis  and  Sintering  of Hydroxyapatite  Derived  From  Eggshells  As  A Calcium  Precursor,” Ceram.  Int. ,  no.  February 2016, 2014.
[7] T.  J.  Levingstone,  “Optimisation  of  Plasma Sprayed  Hydroxyapatite  Coatings  Optimisation of  Plasma  Sprayed  Hydroxyapatite  Coatings,” Dublin City University, Ireland, 2008.
[8] Solechan,  “Pembuatan  Material  Sintesis  Nano Hydroxyapatite Untuk Aplikasi Scaffolds Tulang Mandibula Dari Tulang Cumi Sontong Menggunakan Metode Kalsinasi,” vol. 5, no. 1, pp. 1–12, 2015.
[9] A. E. Tontowi, P. Dewo, E. T. Wahyuni, and J. Triyono,  “Scaffold  dari  Bovine  Hydroxyapatite dengan Polyvynialchohol Coating,” Teknosains , vol. 1, no. 2, pp. 71–143, 2012.