## AKTIVITAS ANTIDIABETES EKSTRAK ETANOL DAUN ASAM JAWA
( Tamarindus Indica Linn ) TERHADAP ENZIM ALFA GLUKOSIDASE
Hasmalina Nasution, Musyirna Rahmah Nst, Reza Abdifi
Universitas Muhamadiyah, Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Riau, Pekanbaru, Riau, Indonesia

## ABSTRAK
Secara empiris tanaman  obat  tradisional  terbukti dapat  menurunkan kadar glukosa darah. Salah satunya  daun  asam  jawa  (Tamarindus  Indica  Linn).  Telah  dilakukan  pengujian  penentuan aktivitas  antidiabetes  daun  asam  jawa  terhadap  enzim  α-glukosidase.  Hasil  skrining  fitokimia ekstrak etanol daun asam jawa mengandung senyawa metabolit sekunder flavonoid, fenolik dan saponin.  Pengujian  aktivitas  antidiabetes  ekstrak  etanol  daun  asam  jawa  terhadap  enzim  alfa glukosidase  dilakukan  dengan  menggunakan  metoda  spektrofotometri.  Pada  konsentrasi  1000 ppm  ekstrak  etanol  memiliki  efek  antidiabetes  melalui  penghambatan  enzim  α-glukosidase sebesar 20,8%. Efek antidiabetes daun asam jawa lebih kecil dibanding glukobay.
Kata kunci: antidiabetes,asam jawa, α-glukosidase

## 1. PENDAHULUAN
Diabetes  melitus  adalah  salah  satu penyakit  atau  kelainan  metabolisme  yang paling  sering  dijumpai  dalam  masyarakat. Diabetes  melitus  ini  merupakan  penyakit degeneratif yaitu penyakit akibat fungsi atau struktur dari jaringan atau organ tubuh yang secara  progresif  menurun  karena  usia  atau pengaruh  gaya  hidup.  Penderita  diabetes pada umumnya menjalani hiperglikemia.
Aktivitas  antidiabetes  dapat  terjadi berdasarkan  beberapa  mekanisme  yaitu dengan  menstimulasi  sel  β-Langerhans untuk menghasilkan insulin dan penghambatan  aktivitas  enzim  (Matsumoto, et al, 2002). α-glukosidase bertanggungjawab dalam memecah
karbohidrat menjadi glukosa pada usus halus manusia.  Dengan  penghambatan  aktivitas enzim  tersebut,  dapat  menunda  pemecahan karbohidrat  di  usus  dan  menurunkan absorbsi  gula  darah.  Oleh  karena  obat antidiabetes  oral  kebanyakan  memberikan efek  samping  yang  tidak  diinginkan  seperti kembung,  diare,  dan  kejang  perut,  maka
para ahli mengembangkan sistem pengobatan tradisional untuk diabetes melitus  yang  relatif  aman  (Lee,  2007: Modak, et al, 2007).
Makin  populernya  perilaku  back  to nature,  pengobatan  alternatif  merupakan salah satu sumber pelayanan kesehatan yang mudah  diperoleh  dan  terjangkau  oleh masyarakat  luas dan memiliki efek samping yang  relatif  kecil.  Salah  satu  cara  untuk mengatasi diabetes adalah dengan memanfaatkan potensi tanaman obat.
Salah  satunya  tanaman  obat  tradisional adalah  daun  asam  jawa  ( Tamarindus  Indica Linn ).  Secara  empiris,  menurut  Soedibjo (1998),  tumbuhan  ini  dimanfaatkan  sebagai penurun  gula  darah  dengan  cara  meminum air  rebusan  daun  asam  jawa.  Secara  invivo, ekstrak  metanol  biji  asam  jawa  berkhasiat menurunkan gula darah tikus yang diinduksi streptozotosin  (Diabetes  melitus  tipe  1) (Rachmander,  et  all,  2010  ).  Akan  tetapi belum  ada  penelitian  yang  melaporkan  efek antidiabetes  daun  asam  jawa  melalui mekanisme penghambatan enzim alfa
glukosidase.  Oleh  karena  itu,  penelitian  ini bertujuan  untuk  mendapatkan  data  ilmiah aktivitas  antidiabetes  ekstrak  etanol  daun asam  jawa  terhadap  enzim  α-glukosidase secara invitro.

## 2. METODOLOGI PENELITIAN Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan:  alat  destilasi, rotary  evaporator,  pH  meter,  microplate reader  96  wells,  inkubator,  timbangan analitik  (Acculab),  sentrifuse,  vortex  mixer (VM-2000), pipet mikro 10-100 µl dan 100- 1000  µl  (Eppendorf),  eppendrorf  tube  dan peralatan  gelas  yang  biasa  digunakan  di laboratorium.
Bahan  yang  digunakan  adalah  aquadest, etanol,  etil  asetat,  n-heksan,  larutan  buffer fosfat  pH  7  (Sigma-aldrich,  USA),  Bovin serum  albumin  (BSA)  (Merck,  jerman), enzim  α-glukosidase  (Sigma-aldrich,  USA), substrat p-nitrofenil-α-D-glukopiranosa (Sigma-aldrich, USA), acarbose (Glucobay®),  dimetilsulfoksida  (Sigma- aldrich,  USA),  larutan  Na 2 CO3  (Sigma- aldrich, USA).

## Pengambilan dan Identifikasi Sampel
Sampel  yang  digunakan  adalah  daun asam  jawa  yang  diambil  di  daerah Pekanbaru.
Pembuatan
Ekstrak,
Fraksinasi sampel dan Uji Fitokimia
Daun asam jawa segar dikumpulkan dan dicuci  bersih,  kemudian  dikering  anginkan, dirajang  dan  ditimbang.  Lalu  dimaserasi dengan  menggunakan  pelarut  etanol  hingga terendam  dengan  sempurna.  Wadah  ditutup rapat dan campuran disimpan di tempat yang terlindung  dari  cahaya  selama  3-5  hari sambil  diaduk  berulang.  Selanjutnya  filtrat diambil  melalui  penyaringan  dan  ditambah kembali  dengan  pengekstrak  ke  dalam wadah sampel, maserasi dilakukan sebanyak tiga  kali.  Maserat  yang  didapat  kemudian
dikentalkan dengan rotary evaporator sampai  didapat  ekstrak  kental.  Kemudian ekstrak  kental  etanol  tersebut  di  fraksinasi menggunakan pelarut n-heksan dan residunya  difraksi  dengan  etil  asetat.  Hasil dari  fraksinasi  dipekatkan  dengan  rotary evaporator sehingga diperoleh ekstrak kental fraksi  n-heksan  dan  etil  asetat.  Hasil  dari masing-masing ekstrak ditimbang dan dilakukan  uji  fitokimia  diantaraya  uji senyawa saponin, fenolik, flavonoid, terpenoid, steroid dan alkaloid.
Uji inhibisi enzim  α-glukosidase secara in vitro (Sancheti et al, 2009)
Pada  microplat  96  well,  10  μL  ekstrak 1000  ppm  ditambah  dengan  50  μl  buffer fosfat (pH 7), 25 μl 20 mM PNPG, 25 μl α- glukosidase (0,2 U/ml) lalu inkubasi selama 30  menit  pada  suhu  37°C.  Setelah  30  menit reaksi  dihentikan  dengan  penambahan  100 µl larutan 0,1 M Na 2 CO 3 , lalu absorban dari p-nitrofenol diukur pada panjang gelombang 410  nm  dengan  spektrofotometer.  Dengan prosedur yang sama dilakukan untuk 10 ppm glukobay sebagai kontrol.

## Tabel 1.
Kondisi reaksi uji inhibisi α-glukosidase Reagen Volume (μl) Bo B1 So S1 Ao A1 Sampel - - 10 10 10 10 DMSO 10 10 - - - - Bufer fosfat 50 50 50 50 50 50 PNPG 25 25 25 25 25 25 Enzim - 25 - 25 - 25 Inkubasi 37°C, 30 menit Na 2 CO 3 100  100  100  100  100  100 Keterangan: Bo= kontrol blanko, B1=  blanko, So= kontrol sampel , S1= sampel, Ao= kontrol glukobay, A1= glukobay Persen inhibisi(% I) dihitung dengan rumus: %I = A kontrol – A sampel x 100%
A kontrol

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil identifikasi sampel yang dilakukan di  laboratorium  biologi  Universitas  Riau menunjukkan  bahwa  sampel  merupakan tumbuhan  asam  jawa  (Tamarindus  indica Linn) dengan famili Fabaceae (Gambar 1).
Gambar 1. Tumbuhan Asam Jawa
Sampel kemudian diekstraksi dan difraksinasi  dan  diperoleh  data  persen rendemen.  Rendemen  merupakan  presentasi untuk  bagian  yang  dapat  diekstrak  dari bahan  mentah.  Besar  rendemen  hasil ekstraksi  250  g  daun  asam  jawa  dihitung dalam  persen  rendemen  yang  dapat  dilihat pada  tabel  1.  Hasil  menunjukkan  bahwa sebagai berikut fraksi etil asetat memiliki % rendemen tertinggi yaitu 3,733%. Perbedaan rendemen  yang  diperoleh  dapat  disebabkan karena  perbedaaan  kandungan  metabolit sekunder  pada  daun  asam  jawa  dan  jenis pelarut yang berbeda juga dapat mempengaruhi  jumlah  rendemen  yang dihasilkan.
Tabel 2. Rendemen ekstrak daun asam jawa Jenis sampel Rendemen % Ekstrak n- heksan Ekstrak etil asetat Esktraketanol 1,446 3,733 1,781 Daun  asam  jawa  yang  telah  diekstraksi
dan difraksinasi kemudian diperiksa
kandungan  metabolit  sekundernya.  Hasil menunjukkan bahwa ekstrak etanol mengandung senyawa flavonoid, fenolik dan saponin.  Keberadaan  senyawa  flavonoid, fenolik  dan  terpenoid  pada  daun  keji  beling diduga  berperan  sebagai  inhibitor  enzim  α- glukosidase.  Berdasarkan  phrmacognosy review  yang  ditulis  Kumar  et  al  (2011), flavonoid  dan  fenolik  berperan  dalam menghambat enzim α-glukosidase.

## Tabel 2.
Hasil pemeriksaan kandungan metabolit sekunder Eksrak etanol daun asam jawa
Ket: LB ( Lieberman-Bouchard)
Untuk mengetahui aktivitas penghambatan  senyawa  fenolik,  flavonoid dan saponin pada ekstrak etanol terhadap α- glukosidase  pada  daun  asam  jawa,  maka dilakukan ekstraksi bertingkat untuk memisahkan senyawa berdasarkan kepolarannya. Hasil uji aktivitas antidiabetes ekstrak etanol terhadap enzim α-glukosidase pada konsentrasi 250-1000 ppm menunjukkan bahwa semakin tinggi konsentrasi  semakin  tinggi  pula  %  inhibisi.
Berdasarkan  data  tabel  3  diketahui  bahwa aktivitas penghambatan (% Inhibisi) tertinggi  pada  konsentrasi  1000  ppm kategori lemah yaitu sebesar 20%. Aktivitas ekstrak  etanol  pada  konsentrasi  tertinggi 1000  ppm  belum  dapat  menghambat  50  %
Kandungan Kimia Pereaksi Ekstrak Etanol Alkaloid Flavonoid Terpenoid Steroid Fenolik Saponin Mayer Logam Mg+ HClp LB LB FeCl 3 Air/busa tidak terbentuk endapan putih (-) terbentuk  larutan merah (+)
Tidak terbentuk larutan merah(-) Tidak terbentuk larutan. Biru (-) Terbentuk larutan biru (+)
Terbentuk  busa (+)
aktivitas  enzim  sehingga  tidak  dapat diketahui nilai Inhibition concentration 50% atau IC50. Suatu ekstrak dikatakan berpotensi  memiliki  aktivitas  biologis  pada konsentrasi ≤1000 ppm.

## Tabel 3.
Hasil inhibisi ekstrak etanol dan ekstrak etil
asetat terhadap enzim α-glukosidase Konsentrasi Daya Inhibisi (% ) (ppm) Ekstrak Etanol 1000 20,8 500 5,06 250 2,67
Berdasarkan  data  tabel  4  menunjukkan bahwa  aktivitas  glukobay  lebih  besar dibandingkan  aktivitas  ekstrak  etanol.  Pada konsentrasi 10 ppm ppm, glukobay memiliki daya  inhibisi  sebesar  92,927%  %.  Aktivitas inhibisi berkurang dengan semakin kecilnya konsentrasi.  Glukobay  adalah  obat  inhibitor α-glukosidase dan digunakan dalam pengobatan  penyakit  diabetes.  Glukobay memiliki senyawa aktif akarbose. Satu tablet glukobay  mengandung  senyawa  akarbose 100  mg.  Efek  inhibisi  glukobay  lebih  besar dibanding ekstrak etanol daun asam jawa.
Tabel 4. Hasil inhibisi Glukobay terhadap α- glukosidase
Konsentrasi ppm   % inhibisi
10         92,927
5          78,894
1          60,384
0,1         41,384
Prinsip analis pengujian ini adalah suatu zat  yang  bertindak  sebagai  inhibitor  akan berikatan  dengan  enzim  α-glukosidase sehingga aktivitas enzim dalam menghidrolisis  substrat  pNPG  (p-nitrofenil- α-D-glukopiranosida)  menjadi  p-nitrofenol yang  berwarna  kuning  akan  terhambat. Absorbansi  yang diukur berdasarkan jumlah p-nirofenol  yang  terbentuk.  Pengukuran
dilakukan dengan alat spektrofotometer pada panjang  gelombang  410  nm.  Semakin sedikit  p-nirofenol  yang  terbentuk  maka semakin  kecil  nilai  absorbansi  dan  semakin tinggi aktivitas penghambatannya.

## 4. KESIMPULAN
1. Senyawa  metabolit  sekunder  ekstrak etanol  adalah  senyawa  flavonoid,  fenolik dan saponin
2. Aktivitas antidiabetes ekstrak etanol daun asam jawa terhadap penghambatan enzim α-glukosidase pada konsentrasi 1000 ppm adalah 20,8%

## 5. DAFTAR PUSTAKA
Kumar,  S.,  Narwal,  S.,  Kumar,  V.,  and Prakash, O., 2010,  -Glucosidase Inhibitor from plants: A natural approach to treat diabetes,
pharmacognosy review, vol 5
Lee,  2007,  Inhibitory  activity  of  Euonymus alatus against α-glucosidase in vitro and invivo, J.Nutr Re Pract, 1-1. 84-188
Matsumoto,  K, et  al,  2002, A novel  method for the assay of a-glukosidase inhibitory activity  using  a  multi-chanel  oxygen sensor, J anal Sci,18:1351-1319
Modak, M, Dixn, P, Londir, J, Ghaskadai, S dan  Devasagayam,TPA,  2007,  Indian herbs  and  herbal  drugs  used  for  the treatment  of  diabetes,  Journal  Clinical Biochemistry Nutrition,40:163-173
Ramchander.  T,  Rajkumar.  D,  Ravanfasad.
M, Venkateswarlu Goli, Dhanalakshmi.CH, Arjun, 2012, Antidibetic actitivity of Aqueous
Methanolic Extracts o leaf of
Tamarindus Indica, International Journal of  Pharmacognosy  and  Phytochemical
Research 4 (1): 5-7
Soedibyo. M, 1998, Alam Sumber Kesehatan,  Manfaat  dan  Kegunaan,
Jakarta: Balai Pustaka
Sancheti,  Sh.,  Sancheti,  Sa.,  Yum  Seo,  S., 2009., Chaenomeles Sinenesis: A Potent α  and  β  –Glucosidase  Inhibitor.,
American  Journal  of  Pharmacology  and Toxicology 4(1):8-11., ISSN1557-4962