## Optimasi Tween 80 dan Propilen Glikol dalam Self-
Nanoemulsifying Drug Delivery System (SNEDDS) Minyak Atsiri Daun Kemangi ( Ocimum basilicum )
( Optimiatization of Tween 80 and Propylene Glycol in Self- Nanoemulsifiying Drug Delivery System (SNEDDS) Basil Essential Oil (Ocimum basilicum) )
Nofia Elisa Putri, Dwi Nurahmanto, Viddy Agustian Rosyidi Fakultas Farmasi, Universitas Jember Jalan Kalimantan 37, Jember 68121 e-mail korespondensi: dwinurahmanto.farmasi@unej.ac.id

## Abstract
Basil (Ocimum basilicum) is a plant from Lamiaceae family that has the potential for typhoid fever treatment. Basil  essential  oil  is  a  hydrophobic  compound  being  difficult  to  dissolve  in  the  gastrointestinal  tract. SNEDDS is one system that can solve this problem. The vital components of SNEDDS are surfactants and cosurfactants to increase the stability of the SNEDDS system by forming small droplets. This research determines the best composition of Tween 80 and Propylene glycol (PG), which can form nanoemulsion spontaneously in the gastrointestinal tract with a droplet size of nanometers. This research used a factorial design method to observed responses transmittance and emulsification time. Response transmittance and emulsification time then analyzed using Design Expert 11.0 to determine the optimum formula of SNEDDS basil  essential  oil.  The  optimum  formula  of  SNEDDS basil  essential  oil  obtained  was  a  formula  with  a composition  of  2.05  mL  of  Tween  80  and  1.35  mL  of  Propylene  glycol.  The  optimum  formula characterization test results showed a pH value of 7.01 ± 0.007; particle size 46.1 ± 0.61 nm; polydispersity index 0.46 ± 0.016. The antibacterial activity test optimum formula showed the ability to inhibit the growth of Salmonella typhi bacteria with an inhibition zone diameter of 20.50 ± 0.59 mm.

## Keywords: basil essential oil, SNEDDS, tween 80, propylene glycol

## Abstrak
Kemangi ( Ocimum basilicum ) merupakan salah satu tanaman dari famili Lamiaceae yang memiliki potensi dalam pengobatan demam tifoid. Minyak daun kemangi bersifat hidrofobik sehingga sukar larut di dalam saluran pencernaan. SNEDDS merupakan salah satu sistem yang dapat membantu mengatasi masalah ini. Komponen penting SNEDDS yaitu surfaktan dan kosurfaktan untuk meningkatkan kestabilan sistem SNEDDS  dengan  membentuk  droplet yang  kecil.  Penelitian  ini  dilakukan  untuk  menentukan  komposisi terbaik dari Tween 80 dan Propilen glikol (PG) sehingga diperoleh SNEDDS yang mampu membentuk nanoemulsi  secara  spontan  di  dalam  saluran  cerna  dengan  ukuran  tetesan  nanometer.  Percobaan  ini dilakukan menggunakan metode desain faktorial dimana respon yang diamati adalah nilai transmitan dan waktu  emulsifikasi.  Nilai  respon transmitan  dan  waktu  emulsifikasi selanjutnya  dianalisis  menggunakan Desain Expert 11.0 untuk menentukan formula optimum SNEDDS minyak daun kemangi. Formula optimum SNEDDS  minyak  daun  kemangi  yang  diperoleh  adalah  formula  yang  memiliki  komposisi  Tween  80 sebanyak  2,05  mL  dan  Propilen  glikol  sebanyak  1,35  mL.  Hasil  uji  karakterisasi  formula  optimum menunjukkan nilai pH 7,01±0,007; ukuran partikel 46,1±0,61 nm; indeks polidipersitas 0,46±0,016. Hasil uji aktivitas  antibakteri  formula  optimum  menunjukkan  kemampuan  menghambat  pertumbuhan  bakteri Salmonella typhi dengan diameter z ona hambat 20,50±0,59 mm.
Kata kunci : minyak daun kemangi, SNEDDS, tween 80, propilen glikol

## Pendahuluan
Demam  tifoid  merupakan  penyakit  infeksi yang  disebabkan  karena  adanya  infeksi  bakteri Salmonella  typhi yang  ditandai  dengan  demam selama satu minggu atau lebih [1]. Pengobatan utama  untuk  demam  tifoid  yaitu  dengan pemberian  antibotik.  Keefektifan  penggunaan antibiotik  telah  berkurang  karena  adanya peningkatan  resistensi  [2].  Berdasarkan permasalahan tersebut, dikembangkan pengobatan menggunakan tanaman obat. Salah satu tanaman obat yang dapat digunakan untuk pengobatan demam tifoid adalah daun kemangi ( Ocimum basilicum ). Kemangi memiliki kandungan senyawa kimia diantaranya  linalool,  estragol,  dan  eugenol. Linalool merupakan konstituen dari minyak daun kemangi  yang  memiliki  aktivitas  sebagai antibakteri  [3].  Minyak  daun  kemangi  memiliki sifat mudah menguap dan mudah terdekomposisi oleh panas, kelembapan udara, cahaya maupun oksigen [4]. Jika digunakan secara oral, minyak daun  kemangi  tidak  mudah  diabsorbsi  dalam saluran  pencernaan  karena  bersifat  hidrofobik sehingga sukar larut dalam saluran pencernaan [5]. Salah  satu  sistem  penghantaran  obat  yang dapat  digunakan  untuk  mengatasi  masalah  di atas  adalah  SNEDDS  ( Self-Nanoemulsifying Drug  Delivery  System ).  SNEDDS  merupakan campuran isotropik antara minyak, surfaktan, dan kosurfaktan  yang  akan  membentuk  nanoemulsi M/A  (minyak  dalam  air)  secara  spontan  ketika kontak  dengan  air  dengan  agitasi  ringan  dalam saluran pencernaan. Nanoemulsi yang terbentuk akan stabil secara termodinamika dengan ukuran droplet kurang dari 200 nm [6]. SNEDDS dipilih karena dapat menutupi kekurangan minyak daun kemangi.
Surfaktan  merupakan  komponen  penting dalam  sediaan  SNEDDS  yang  dapat menurunkan  tegangan  antarmuka  antara  fase minyak  dan  fase  air  sehingga  akan  terbentuk tetesan nanoemulsi kecil yang stabil, sedangkan kosurfaktan mampu  menentukan waktu emulsifikasi  di  dalam  media  serta  ukuran nanoemulsi  karena  molekul  kosurfaktan  akan menempatkan posisinya di antara surfaktan [7].
Penelitian  ini  menggunakan  kombinasi  dari surfaktan  dan  kosurfaktan,  yaitu Tween  80  dan propilen glikol. Tween 80 dipilih karena termasuk surfaktan  non-ionik  yang  tidak  mengiritasi  serta tidak  beracun.  Propilen  glikol  dipilih  sebagai
kosurfaktan karena dapat membantu solubilisasi surfaktan  hidrofilik  maupun  obat  dalam  basis minyak [8]. Penggunaan surfaktan dikombinasikan  dengan  kosurfaktan  untuk menghasilkan ukuran droplet yang lebih kecil dan lebih stabil.
Dalam penelitian ini dilakukan optimasi untuk menentukan konsentrasi Tween 80 dan propilen glikol sehingga dapat membentuk SNEDDS yang aman dan stabil. Rancangan formula yang dibuat terdiri  dari  empat  formula  dimana  pada  tiap formula mengandung surfaktan dan kosurfaktan dengan  konsentrasi  yang  berbeda.  Selanjutnya tiap formula akan diuji sifat fisika kimianya yang meliputi  uji  organoleptis,  transmitan,  dan  waktu emulsifikasi.  Data  hasil  uji  akan  diolah menggunakan software Design Expert 11.0 untuk mencari  konsentrasi  surfaktan  dan  kosurfaktan yang  dapat  menghasilkan  formula  optimum. Formula optimum yang didapatkan  selanjutnya diuji  karakteristiknya  meliputi  uji  pH,  ukuran partikel,  dan  distribusi  ukuran  partikel,  serta dilakukan uji aktivitas antibakteri terhadap bakteri Salmonella typhi .
Metode Penelitian Penelitian  dilakukan  secara  eksperimental laboratorik  menggunakan  variabel  bebas  yakni jumlah  surfaktan  (Tween  80)  dan  kosurfaktan (propilen  glikol).  Masing-masing  variabel ditentukan  batas  atas  dan  batas  bawahnya. Adapun  variabel  terikat  yakni  transmitan  dan waktu emulsifikasi. Penelitian ini akan dilakukan dengan tahapan sebagai berikut: (1) penentuan formula  SNEDDS  minyak  daun  kemangi;  (2) pembuatan SNEDDS minyak daun kemangi; (3) evaluasi  sediaan;  (4)  penentuan  formula optimum;  (5)  pembuatan  formula  optimum;  (6) karakterisasi SNEDDS formula optimum.
Alat yang digunakan dalam penelitian adalah Spektrofotometer  UV-Vis  ( Geneys  10S ),  vortex ( Brantead ),  autoklaf  ( ALP ), laminar  air  flow ( Airflow ), sentrifuge ,  pH  meter  ( Elemetron ), hotplate ,  inkubator,  mikropipet  ( Socorex ),  PSA ( Particle Size Analyzer ) SZ-100, magnetic stirrer , jangka  sorong,  jarum  ose,  pembakar  spirtus, spatula, pinset, dan alat-alat gelas.
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian adalah  minyak  daun  kemangi  (PT.  Eteris Nusantara),  Tween  80  (PT.  Brataco  Chemica), Propilen  glikol  (PT.  Brataco  Chemica),  standar Mc  Farland  0,5,  NaCl  fisiologis, Nutrient  Agar
(NA), Mueller Hinton Agar (MHA), aquadest (CV. Makmur Sejati, dan bakteri Salmonella typhi . Sejumlah  0,45  mL  minyak  daun  kemangi dipipet  kemudian  dicampurkan  ke  dalam sejumlah  Tween  80  dan  Propilen  glikol.
Campuran tersebut
dihomogenkan menggunakan  vortex  selama  1  menit  sampai didapatkan SNEDDS yang homogen dan jernih. Rancangan  formula  SNEDDS  minyak  daun kemangi  yang  akan  diformulasi  pada  penelitian ini ditunjukkan pada Tabel 1.
Tabel 1. Rancangan formula SNEDDS
Nama Bahan Formula 1 A B AB Minyak Daun Kemangi 0,45 mL 0,45 mL 0,45 mL 0,45 mL Tween 80 1,35 mL 2,05 mL 1,35 mL 2,05 mL Propilen glikol 0,51 mL 0,51 mL 1,35 mL 1,35 mL
SNEDDS yang telah dibuat, diamati tampilan fisiknya  meliputi  warna,  kejernihan  dan  aroma. SNEDDS  minyak  daun  kemangi  juga  diukur transmitan dan waktu emulsifikasinya.
Uji  transmitan  sediaan  SNEDDS  dilakukan menggunakan  Spektrofotometri  UV-Vis  dengan panjang  gelombang  650  nm.  Apabila  nilai transmitannya  mendekati  100%,  maka  dapat dikatakan bahwa SNEDDS mempunyai kejernihan yang baik [9].
Uji  waktu  emulsifikasi  sediaan  SNEDDS dilakukan  menggunakan hotplate dengan  suhu 37±0,5°C  dan  diaduk  menggunakan magnetic stirrer pada kecepatan 100 rpm. SNEDDS yang baik  dapat  memberikan  tampilan  visual  yang jernih dalam waktu <1 menit [10].
Analisis  data  yang  dilakukan  adalah  dengan menggunakan Design  Expert  11.0 .  Data  yang diperoleh  berupa  nilai  transmitan  dan  waktu emulsifikasi sebagai respon kombinasi Tween 80 dan propilen glikol digunakan untuk membentuk contour  plot .  Pengaruh masing-masing  maupun interaksi  faktor  terhadap  respon  yang  telah ditentukan  kemudian  dianalisis.  Berdasarkan data  tersebut  selanjutnya  akan  dibuat  formula SNEDDS minyak daun kemangi untuk kemudian dilakukan  verifikasi  terhadap  kedua  respon  dan karakterisasi yang meliputi uji pH, ukuran partikel, dan  distribusi  partikel,  serta  uji  aktivitas antibakteri.
Ukuran partikel
SNEDDS diukur menggunakan  ( Particle  Size  Analyzer )  SZ-100.
Aktivitas antibakteri terhadap bakteri Salmonella typhi diuji menggunakan metode difusi cakram.
Hasil Tampilan  empat  formula  SNEDDS  yang dibuat  ditunjukkan  pada  gambar  1.  Masing- masing  formula  memiliki  tampilan  visual  yang sama.
Gambar  1.  Hasil  pembuatan  empat  formula SNEDDS minyak daun kemangi a) formula 1; b) formula A; c) formula B; d) formula AB
Hasil  pengamatan  menunjukkan  formula SNEDDS  yang  dibuat  memiliki  warna  kuning cerah,  aroma  khas  minyak  daun  kemangi,  dan tampilan visual yang jernih. Keseluruhan formula memiliki profil organoleptis yang sama.
Sifat fisika kimia dianalisis untuk memastikan keamanan sediaan. Parameter tersebut meliputi transmitan dan waktu emulsifikasi.
Tabel 2. Sifat fisika kimia SNEDDS minyak daun kemangi Formula Transmitan (%) Waktu emulsifikasi (detik) 1 91,806±0,45 80,04±1,69 A 97,328±0,028 61,86±0,36 B 98,567±0,075 55,23±0,56 AB 99,523±0,050 52,10±0,56 Keterangan  :  F1 = Tween  80  1,35  mL  dan  PG
0,51  mL; F2=  Tween  80  2,05  mL  dan  PG  0,51 mL; F3 = Tween 80 1,35 mL dan PG 1,35 mL; F1 = Tween 80 2,05 mL dan PG 1,35 mL.
Seluruh formula SNEDDS memiliki transmitan >90%  dan  waktu  emulsifikasi  sekitar  1  menit. Nilai  transmitan  yang  ideal  untuk  sediaan
F(B) F(A) F(AB) F(1)
SNEDDS  adalah  >90%  atau  mendekati  100% dan  waktu  emulsifikasi  <1  menit,  dengan demikian  seluruh  formula  SNEDDS  telah memenuhi  persyaratan  nilai  transmitan  dan waktu emulsifikasi.
Nilai  transmitan  dan  waktu  emulsifikasi selanjutnya  dianalisis  menggunakan Design Expert  11.0 untuk  mengetahui  formula  yang dapat  menghasilkan  sediaan  SNEDDS  yang optimal.  Formula  optimal  SNEDDS  yang  akan ditentukan adalah formula yang memiliki kriteria transmitan  yang  tinggi  dan  waktu  emusifikasi yang rendah.
Hasil analisis Design Expert 11.0
menghasilkan beberapa solusi komposisi Tween 80 dan propilen glikol yang dapat menghasilkan sediaan SNEDDS dengan kriteria transmitan dan waktu emulsifikasi yang telah ditentukan (Tabel 3).  Formula  yang  dipilih  adalah  formula  yang memiliki nilai desirability tertinggi.
Tabel  3.  Rekomendasi  formula  berdasarkan analisis Design Expert 11.0 No.  Tween 80 (g) PG (g) Trans- mitan Waktu emulsifi kasi (detik) Desira bility 1. 2,05 1,35  99,523  52,10  0,986 2. 2,04 1,35  99,515  52,12  0,985 3. 2,05 1,34  99,509  52,16  0,984
Berdasarkan  solusi  hasil  optimasi,  maka Tween  80  sebesar  2,05  mL  dan  Propilen  glikol sebesar  1,35  mL  dipilih  sebagai  komposisi surfaktan  dan  kosurfaktan  yang  dapat menghasilkan  formula  optimal.  Sehingga komposisi formula optimal nanoemulsi ditampilkan pada Tabel 4. Tabel  4.  Komposisi  formula  optimum  SNEDDS minyak daun kemangi Nama Bahan Fungsi Volume (mL) Minyak Daun Kemangi Bahan aktif dan fase minyak 0,45 Tween 80 Surfaktan 2,05 PG Kosurfaktan 1,35 Formula optimum yang didapatkan dari hasil analisis  dengan Design  Expert  11.0 kemudian diverifikasi  dengan  cara  melakukan  kembali pengujian  transmitan  dan  waktu  emulsifikasi. Hasil  verifikasi  formula  optimum  ditampilkan pada Tabel 5.
Tabel 5. Hasil verifikasi formula optimum Replikasi Transmitan (%) Waktu emulsifikasi (detik) R1 99,378 47,50 R2 99,986 47,44 R3 99,909 47,40 Nilai signifikasi 0,994 0,840
Formula  optimum  SNEDDS  minyak  daun kemangi yang dibuat selanjutnya dianalisis sifat fisika  kimianya  meliputi  uji  pH,  ukuran  partikel, dan distribusi partikel. Hasil karakterisasi formula optimum ditampilkan pada Tabel 6.
Tabel 6. Karakterisasi SNEDDS formula optimum Karakteristik SNEDDS formula optimum pH 7,01±0,007 Ukuran partikel (nm) 46,1±0,61 Distribusi partikel 0,46±0,016 SNEDDS formula optimum juga diuji aktivitas antibakterinya terhadap bakteri Salmonella typhi . Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri Salmonella typhi ditampilkan pada Tabel 7. Tabel 7. Uji aktivitas antibakteri SNEDDS formula optimum Perlakuan Zona hambat (mm) Minyak daun kemangi 16,25 R1 21,19 R2 20,19 R3 20,13 Rata-rata 20,50±0,59 Hasil pengujian aktivitas antibakteri menggunakan metode difusi cakram menunjukkan  adanya  aktivitas  antibakteri terhadap  bakteri Salmonella  typhi dengan terbentuknya  zona  hambat  disekitar  kertas cakram.
Pembahasan SNEDDS  minyak  daun  kemangi  yang terbentuk  dengan  Tween  80  sebagai  surfaktan dan  propilen  glikol  sebagai  kosurfaktan menghasilkan  tampilan  sediaan  yang  jernih. Tampilan  SNEDDS  yang  jernih  tersebut dikarenakan seluruh bahan yang digunakan telah tercampur  secara  homogen.  Nilai  transmitan yang tinggi dan waktu emulsifikasi yang rendah dapat  disebabkan  oleh  tingginya  konsentrasi Tween  80  sebagai  surfaktan  dan  interaksinya
dengan propilen glikol sebagai kosurfaktan yang mampu  menurunkan  tegangan  permukaan sehingga ukuran droplet menjadi lebih kecil dan menyebabkan  nilai  transmitan  lebih  tinggi  serta mampu mempercepat pembentukan nanoemulsi [11]. Optimasi  untuk  mendapatkan  formula SNEDDS  yang  optimum  adalah  berdasarkan analisis  menggunakan Design  Expert  11.0 dengan  respon  transmitan  dan  waktu emulsifikasi. Hasil
pengujian respon menunjukkan  formula  AB  merupakan  formula dengan  transmitan  paling  tinggi  dan  waktu emulsifikasi  paling  rendah.  Formula  AB merupakan  formula  dengan  konsentrasi  Tween 80 dan propilen glikol level tinggi-tinggi. Hasil percobaan respon transmitan dan waktu emulsifikasi  kemudian  dibandingkan  dengan prediksi  respon  dari  desain  faktorial  secara statistik menggunakan uji-t ( One Sample T-test ) dengan  taraf  kepercayaan  95%.  Nilai  tingkat signifikansi semua respon yang diperoleh adalah >0,05  yang  berarti  data  tidak  berbeda  secara bermakna  sehingga  data  dapat  dikatakan  valid [12]. Berdasarkan  hasil  penelitian,  pH  SNEDDS minyak  daun  kemangi  formula  optimum  adalah 7,01±0,007.  pH  ini  memenuhi  persyaratan  pH sediaan  SNEDDS  yakni  1,2-7,4  [13].  Hasil pengukuran  ukuran  partikel  SNEDDS  minyak daun  kemangi  formula  optimum  adalah 46,1±0,61  nm.  Ukuran  ini  juga  memenuhi persyaratan ukuran partikel untuk SNEDDS yakni antara 20-200 nm [14].
SNEDDS  formula  optimum  memiliki  indeks polidispersitas  sebesar  0,46±0,016  yang menunjukkan  bahwa  SNEDDS  merupakan sistem  monodispersi.  Sistem  monodispersi menunjukkan  distribusi  ukuran  partikel  yang cenderung sempit dan stabil dibandingkan sistem polidispersi yang cenderung membentuk agregat [15]. Pengujian aktivitas antibakteri menggunakan metode  difusi  cakram  dengan  media Mueller Hinton  Agar (MHA)  menunjukkan  kemampuan dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri Salmonella typhi dengan diameter zona hambat sebesar 20,50±0,59 mm yang termasuk kategori kuat  [16].  Zona  hambat  yang  terbentuk  ini menunjukkan bahwa minyak daun kemangi yang dibuat  dalam  sediaan  SNEDDS  tidak  merubah aktivitas antibakteri minyak daun kemangi secara in vitro.

## Simpulan dan Saran
Kesimpulan  dari  penelitian  ini  adalah komposisi  formula  optimum  dari  kombinasi Tween  80  dan  propilen  glkol  pada  sediaan SNEDDS  minyak  daun  kemangi  yaitu  formula dengan jumlah Tween 80 sebesar 2,05 mL dan propilen  glikol  sebesar  1,35  mL.  Hasil  uji karakterisasi formula optimum SNEDDS minyak daun  kemangi  menunjukkan  nilai  pH  7,01  ± 0,007;  ukuran  partikel  46,1  ±  0,61;  indeks polidispersitas  sebesar  0,46  ±  0,016;  serta memiliki  kemampuan  dalam  menghambat pertumbuhan  bakteri Salmonella  typhi dengan diameter zona hambat sebesar 20,50±0,59 mm. Saran  dari  penelitian  ini  adalah  perlu dilakukan  pengujian  lebih  lanjut  seperti  uji pelepasan  obat  secara  in  vitro,  viskositas, robustness , dan TEM.
Daftar Pustaka [1]  Widodo,  H.  2013. Parasitologi  Kedokteran . Yogyakarta: D- Medika.
[2]    Erviani, E. 2013. Analisis multidrug resistensi terhadap  antibiotik  pada  salmonella  typhi dengan  teknik  multiplex  pcr. Biogenesis: Jurnal Ilmiah Biologi . 1(1):51–60.
[3]   Li,  Q.  X.  dan  C.  L.  Chang.  2016. Basil (Ocimum  Basilicum  L.)  Oils .  Elsevier  Inc. Essential Oils in Food Preservation, Flavor and Safety
[4]   Bilia,  A.  R.,  C.  Guccione,  B.  Isacchi,  C. Righeschi, F. Firenzuoli, dan M. C. Bergonzi. 2014. Essential oils loaded in nanosystems: a  developing  strategy  for  a  successful therapeutic  approach. Evidence-Based Complementary  and  Alternative  Medicine .
2014:14.
[5]   Shargel, L., Pong, S. W. & Y. 2005. Applied Biopharmaceutics  And  Pharmacokinetics . Singapore:  The  Mc  Graw  Hill. Ed:  V.  411- 450
[6]   Bharat  Bhushan,  Dan  Luo,  Scott  R. Schricker,  Wolfgang  Sigmund,  S.  Z.  2014. Handbook  of  Nanomaterials  Properties . London: Springer.
[7]   Cho, Y. H., S. Kim, E. K. Bae, C. K. Mok, dan J. Park. 2008. Formulation of a cosurfactant- free  o/w  microemulsion  using  nonionic surfactant  mixtures. Journal  of  Food Science . 73(3):115–121.
[8]   Raymond C. Rowe, Paul J. Sheskey, S. C. O.  2009. Handbook  of  Pharmaceutical Excipients . Washington, USA: Pharmaceutical Press [9]   Yuliani,  S.  H.,  M.  Hartini,  Stephanie,  B. Pudyastuti,  dan  E.  P.  Istyastono.  2016.
Perbandingan  stabilitas  fisis  sediaan nanoemulsi minyak biji delima dengan fase minyak long-chain triglyceride dan medium chain  triglyceride. Traditional  Medicine Journal . 21(August):3–7
[10]  Jaiswal,  M.,  R.  Dudhe,  dan P. K. Sharma. 2015. Nanoemulsion: an advanced mode of drug delivery system. Biotech . 5(2):123–127 [11]  Kommuru, T. R., Gurley, B., Khan, M. A. & Reddy,  I.  dan  K.  Delivery.  2001.  Self emulsifying drug delivery system (sedds) of coenzyme  q10:  formulation  for  enhanced bioavailability  assessment. International
Journal of Pharmacy; 212; 233-246 [12]  Sugiyono.  2016. Metode  Penelitian Pendidikan: Pendekatan Kuantitatif, Kualitatif, Dan R&D . Bandung: Alfabeta [13]  Date,  A.  A.,  N.  Desai,  R.  Dixit,  dan  M.
Nagarsenker.  2010.  Self-nanoemulsifying drug delivery systems: formulation insights, applications  and  advances. Nanomedicine . 5(10):1595–1616
[14]  Nugroho, B. H., S. Citrariana, I. N. Sari, dan R.  N.  Oktari.  2017.  Formulation  and evaluation of snedds ( self nano-emulsifying drug  delivery  system  )  of  papaya  leaf extracts ( carica papaya l .) as an analgesic.
Jurnal Ilmiah Farmasi . 13(2):77–85 [15] Rahmawanty, D., E. Anwar,  dan A. B. 2014. Formulasi gel menggunakan serbuk daging ikan  haruan  (channa  striatus)  sebagai penyembuh. Media Farmasi. 11(1):29–40 [16]  Davis,  W.  W.  dan  T.  R.  Stout.  1971.  Disc plate  method  of  microbiological  antibiotic assay.  i.  factors  influencing  variability  and error. Applied Microbiology . 22(4):659–665.