Jurnal Ilmu Perikanan dan Kelautan, Vol. 5(2): 313-319, Juli 2023
EFEKTIVITAS VAKSIN INAKTIF Aeromonas salmonicida TERHADAP TOTAL LEUKOSIT DAN AKTIFITAS FAGOSITOSIS PADA IKAN KOI ( Cyprinus carpio )
Ciptaning Weargo Jati *) , Huriyatul Fitriyah Noor (1) , Hilma Putri Fidyandini (2)
Jl. Prof. Dr. Ir. Sumantri, Brojonegoro No.1, Gedong Meneng, Kec. Rajabasa, Kota Bandar Lampung, Lampung 35141
*) ciptaning.jati@fp.unila.ac.id

## ABSTRAK
Aeromonas    salmonicida ,  merupakan  bakteri  penyebab  ikan  menderita pendarahan, lesi otot, radang usus, pembesaran limpa dan menyebabkan kematian pada populasi ikan mas. Penyakit ini sangat merugikan dalam budidaya ikan karena serangannya  yang  cepat  dan  dapat  mematikan  hewan  budidaya  dan  menurunkan tingkat  produksi  sehingga  ikan  yang  terserang  bakteri  cukup  parah  harus  segera dimusnahkan.  Berdasarkan  hal  tersebut  diperlukan  pendekatan  pencegahan  yang lebih  alami  untuk  penanggulangan  penyakit  yang  disebabkan  oleh  bakteri A. salmonicida ,  salah  satunya  adalah  dengan  penggunaan  vaksin.  Penelitian  ini menggunakan  variabel  bebas  berupa  perlakuan  pemberian  vaksin  inaktif A. salmonicida dengan  dosis  A:  10 4 sel/ml;  B:  10 6 sel/ml;  C:  10 8 sel/ml;  D:  10 10 sel/ml dengan  tiga  kali  ulangan,  serta  menggunakan  dua  kontrol  pembanding  yaitu kontrol  negatif  dan  kontrol  positif.  Parameter  yang  dipakai  uji  viabilitas,  Total Leukosit,  Aktivitas  Fagositosis,  gejala  klinis,  dan  kualitas  air.  Pengujian  titer antibodi,  gejala  klinis,  RPS  ( Relative  Percent  Survival )  dan  kualitas  air  dilakukan setelah  1-14  hari  dari  uji  tantang  dan  pemberian  vaksin  1  dan  2  (booster).  Hasil penelitian  ini  menunjukkan  peningkatan  pada  perlakuan  C  (10 8 )  berpengaruh paling  tinggi  dalam  mencegah  infeksi  bakteri  patogen A.  salmonicida ditandai dengan peningkatan total leukosit sebelum dan sesudah infeksi sebesar 55,83 dan 59,43  sel/ml.  Nilai  aktivitas  fagositosis  sebesar  34,09  dam 31,88,  dan  pada  gejala klinis ikan mengalami penyembuhan setelah hari ke 8-14 setelah infeksi.
Kata  kunci: Vaksin  inaktif  A.  salmonicida,  ikan  koi  (C.  carpio),  uji  viabilitas,  total leukosit, aktivitas fagositosis, RPS.

## ABSTRACK
Aeromonas  salmonicida  is  a  bacterium  that  causes  fish  to  suffer  bleeding, muscle  lesions,  intestinal  inflammation,  an  enlarged  spleen,  and  death  in  goldfish populations.  It  is  very  detrimental  to  fish  farming  because  of  its  fast  attack  and because  of  its  ability  to  kill  cultivated  animals  and  reduce  production  levels,  so  fish that are seriously attacked by bacteria must be destroyed immediately. Based on this, a  more  natural  prevention  approach  is  needed  to  treat  diseases  caused  by  A. salmonicida bacteria, one of which is the use of vaccines. This study used independent variables in the form of inactivated A. salmonicida vaccine administration at a dose of
Jurnal Ilmu Perikanan dan Kelautan, Vol. 5(2): 313-319, Juli 2023
A:  10 4 cells/ml;  B:  10 6 cells/ml;  C:  10 8 cells/ml;  and  D:  1010  cells/ml  with  three replications  and  two  comparison  controls,  namely  a  negative  control  and  a  positive control.  With  the  test  parameters  of  viability,  total  leukocytes,  phagocytosis  activity, clinical symptoms, and water quality. Tests for antibody titers, clinical symptoms, RPS (Relative Percent Survival), and water quality were carried out after 1 – 14 days from the challenge test and administration of vaccines 1 and 2 (booster). The results of this study  showed  that  the  increase  in  treatment  C  (10 8 )  had  the  highest  effect  in preventing infection  with  the  pathogen  A.  salmonicida  bacteria,  characterized  by  an increase  in  total  leukocytes  before  and  after  infection  of  55.83  and  59.43  cells/ml, respectively. The values of phagocytosis activity were 34.09 and 31.88, and in clinical symptoms, the fish experienced healing after 8 – 14 days after infection.
Keywords: A. salmonicida inactivated vaccine, koi fish (C. carpio), viability test, total leukocytes, phagocytosis activity, RPS.

## PENDAHULUAN
Indonesia  memiliki  potensi  ikan hias  yang  sangat  beragam  untuk dikembangkan  yang  terdiri  dari  400 spesies  dari  1100  spesies  ikan  hias  air tawar yang telah diperjualbelikan secara global,  namun  saat  ini  tercatat  baru  90 spesies  yang  telah dapat  dibudidayakan oleh masyarakat (DJPB 2015). Ikan Hias memiliki  potensi  peningkatan  produksi disetiap  tahunnya,  terkhusus  pada  Ikan Koi (Cyprinus  carpio) .  DJPB  (2016), produksi ikan hias tahun 2017 mencapai 2,1  miliar  ekor,  dimana  ikan  koi merupakan  proporsi  tertinggi  ikan  hias Indonesia  tahun  2015-2019  dengan produksi  yang  dihasilkan  mencapai 36%.  Tetapi  dalam  pengoptimalan produksi  budidaya  ikan  koi,  terdapat kendala akibat serangan penyakit. Salah satu  penyakit  yang  banyak  menyerang
ikan  koi  adalah  penyakit  bacterial A. salmonicida .
A.  salmonicida di  Indonesia  pada akhir  tahun  1980  terjadi  kematian  ikan mas  sebanyak  125  ribu  ekor  di  daerah budidaya  di  Jawa  Barat.  Kejadian tersebut menyebabkan penurunan produksi dan kerugian berkisar 4 milyar rupiah  (Trilia et  al .,  2014). A. salmonicida adalah bakteri obligat , yaitu bakteri  yang  tidak  mampu  hidup  tanpa menempel pada inang dan bersifat tidak motil.  Bakteri  obligat A.  salmonicida , merupakan salah  satu  agen  etiologi untuk  furunkulosis,  yaitu  sebuah penyakit yang menyebabkan septikemia, pendarahan,  lesi  otot,  radang  usus, pembesaran  limpa,  yang  menyebabkan kematian  pada  populasi  ikan  salmonid (Austin dan Austin, 2007).
Jurnal Ilmu Perikanan dan Kelautan, Vol. 5(2): 313-319, Juli 2023
Penyakit  ini  sangat  merugikan dalam budidaya ikan karena serangannya  yang  cepat  dan  dapat mematikan  hewan  budidaya  dan menurunkan  tingkat  produksi  sehingga ikan yang terserang bakteri cukup parah harus  segera  dimusnahkan  (Hazzuli et al .,  2015).  Berdasarkan  hal  tersebut, diperlukan  pendekatan  pencegahan yang lebih alami untuk penanggulangan penyakit  yang  disebabkan  oleh  bakteri
A . salmonicida ,  salah  satunya  adalah dengan penggunaan vaksin. Zafran et al .,
(2006) vaksinasi diyakini dapat memberikan  kekebalan  spesifik  pada ikan  terhadap  penyakit  tertentu.  Hal tersebut  sesuai  dengan  hasil  penelitian sebelumnya yang menunjukkan imunogenitas  tinggi  pada  ikan,  ditandai dari titer antibodi yang tinggi (Setyawan et  al .,  2012).  Imunostimulan  juga dilaporkan efektif meningkatkan kekebalan  non-spesifik  ikan  terhadap penyakit (Roza et al ., 2004; Zafran et al .,
2006).
Kekebalan  non-spesifik  adalah suatu  sistem  pertahanan  tubuh  yang bersifat  bawaan  ( innate  immunity )
Respon ini meliputi pertahanan mekanik dan  kimiawi  (mukus,  kulit,  sisik  dan insang)  dan  pertahanan  seluler  (sel makrofag,  leukosit  seperti  limfosit,
monosit, neutrofil, eosinofil dan basofil) (Purwaningsih, 2013). Pertahanan pertama yaitu pertahanan fisik meliputi, sisik,  kulit,  dan  mukus.  Mukus  memiliki kemampuan  menghambat  kolonisasi mikroorganisme  pada  kulit,  insang  dan mukosa. Kerusakan pada sisik atau kulit dapat mempermudah patogen menginfeksi  inang  (Wintoko et  al ., 2012).
Pemberian  vaksin  inaktif A.
salmonicida diharapkan dapat meningkatkan  daya  tahan  tubuh  ikan sehingga meningkatkan proteksi terhadap  serangan  penyakit  tertentu dan  meningkatkan  mekanisme  respon ikan  baik  seluler  maupun  humoral (Alifuddin,  2002).  Efektvitas  vaksinasi yang  memadai  mampu  menurunkan mortalitas  ikan  tertentu  dari  serangan penyakit (Roza et al ., 2004). Oleh sebab itu,  perlu  dilakukan  penelitian  lebih lanjut  untuk  mengetahui  efektivitas vaksin  inaktif A.  salmonicida pada  ikan koi  ( Cyprinus  carpio )  yang  dilihat melalui  total  leukosit,  plasma  darah, respitory bust dan histologis.

## METODE PENELITIAN
Metode penelitian yang digunakan adalah  metode  eksperimen,  dimana
Jurnal Ilmu Perikanan dan Kelautan, Vol. 5(2): 313-319, Juli 2023
metode  ini  digunakan  untuk  menguji hubungan sebab akibat melalui pemanipulasian  variabel independent dan perubahan-perubahan yang
diakibatkan oleh pemanipulasian tersebut. Tahapan penelitian:
1).
Persipan  Wadah;  2)  Adaptasi  Ikan  Uji; 3).  Pemuatan  Vaksin;  4).  Vaksinasi;  5). Uji  Tantang;  6).  Uji  Kualitas  Vaksin. Parameter  penelitian  meliputi:  1).  Total Leukosit;  2).  Fagositosis;  3).  Gejala Klinis;  dan  4).  Kualitas  Air.  Rancangan yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  rancangan  acak  lengkap  (RAL) yang terdiri dari 4 perlakuan dan 3 kali ulangan  dengan  kontrol  negatif  (tanpa vaksinasi).  Penelitian  ini  menggunakan dosis  vaksin  sebagai  berikut:  perlakuan A: 10 4 sel/ml;  B: 10 6 sel/ml;  C: 10 8
sel/ml; B: 10 10 sel/ml; kontrol.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Parameter Imun Non Spesifik 1. Total Leukosit
Hasil  ini  menunjukkan  bahwa pemberian  vaksin  inaktif A.salmonicida bersifat  imunogenik  sehingga  dapat meningkatkan respon pertahanan seluler  berupa  peningkatan  total leukosit. Utami et al. (2013) berpendapat  bahwa  sifat  imunogenik dari  vaksin  pada  dosis  yang  sesuai
mampu peningkatan total leukosit lebih tinggi  pada  ikan  yang  divaksinasi sehingga  kekebalan  tubuh  ikan  akan meningkat.
Tabel 1. Lekosit ikan Koi (10 4 sel/ml)
Gambar  1. Histogram  Total  Leukosit Sebelum  dan  Sesudah  Uji Tantang dengan Bakteri A. salmonicida dengan Kepadatan 10 6 sel/ml
Nilai  total  leukosit  mengalami peningkatan  dapat  disebabkan  karena adanya  proses  vaksinasi.  Hal  ini berkaitan dengan fungsi sel darah putih sebagai  alat  pertahanan.  Kondisi  ini menunjukkan  bahwa  pemberian  vaksin inaktif A. salmonicida bersifat imunogenik sehingga dapat meningkatkan respon pertahanan seluler  berupa  peningkatan  total leukosit. Utami et al. (2013) berpendapat  bahwa  sifat  imunogenik dari  vaksin  pada  dosis  yang  sesuai
mampu  meningkatkan  total  leukosit lebih  tinggi  pada  ikan  yang  divaksinasi sehingga  kekebalan  tubuh  ikan  akan meningkat.

## 2. Aktivitas Fagositosis
Perubahan nilai aktivitas fagositosis  mengindikasikan  bahwa vaksin  inaktif A.  salmonicida dapat meningkatkan kinerja respon imun ikan yang  terinfeksi  bakteri.  Playfair  dan Chain (2009) interaksi antara sel fagosit dan  imun  adaptif  misalnya  antibodi dapat memperkuat fagositosis.
Gambar 2. Histogram Aktivitas Fagositosis  Sebelum dan Sesudah Uji Tantang dengan Bakteri A.  salmonicida dengan Kepadatan 10 8 sel/ml.
Nilai  terbaik  didapatkan  pada perlakuan  C  dan  penurunan  pada perlakuan D disebabkan karena semakin tingginya  dosis  vaksin  yang  diberikan mengakibatkan lambatnya proses pengenalan  antigen  atau  vaksin  oleh antibodi. Hasil penelitian
ini memperlihatkan bahwa pemberian
vaksin  inaktif A.  salmonicida mampu meningkatkan aktivitas fagositosis. Pada parameter  total  leukosit  dan  aktivitas fagositosis  sama-sama  memiliki  nilai tertinggi  pada  perlakuan  C  (10 8 ). Marentek et al ., (2013) mengungkapkan bahwa  semakin  tinggi  jumlah  leukosit, maka  semakin  tinggi  pula  aktivitas fagositosis.
Ikan  koi  yang  terbentuk  dengan ditandai oleh rekasi pewarnaan antibodi anti A. salmonicida , menunjukkan bahwa sitoplasma  jaringan  ginjal  tersebut mempunyai  sistem  kekebalan  terhadap bakteri A. salmonicida setelah dilakukan uji tantang pasca vaksinasi.

## 3. Gejala Klinis
Pada  hari  ke  4  setelah  uji  tantang ikan  mengalami  gejala  klinis  seperti warna tubuh memudar, sisik mengelupas  terjadi  pembengkakan  dan beberapa  ikan  menunjukkan  berenang berputar-putar.  Austin  dan  Austin, (2007)  mengemukakan  bahwa  secara histopatologi  bakteri A.  salmonicida menyebabkan  hemoragi  dan  nekrosis pada  organ  kulit  dan  ginjal,  degenerasi pada  organ  kulit  dan  otot  hati  serta terjadinya  fusi  pada  lamela  kedua  dari insang  dari  60%  sehingga  layak  untuk dijadikan vaksin.
Jurnal Ilmu Perikanan dan Kelautan, Vol. 5(2): 313-319, Juli 2023

## 4. Kualitas Air
Kualitas  air  merupakan  faktor penting  keberhasilan  pemeliharan  ikan dalam  penelitian  ini.  Dalam  menjaga kualitas  satu  caranya  adalah  dengan menggunakan sistem
sirkulasi, mengganti  air  secara  terus-menerus atau  melakukan  resirkulasi  dengan menggunakan  filter.  Parameter  kualitas air  dalam  akuarium  pemeliharaan selama  penelitian  dapat  dlihat  pada tabel 5.
Tabel  2. Rata-rata  Kualitas  Air  Selama Pemeliharaan
Parameter Kualitas Air Kisaran Parameter Kualitas Air pada Perlakuan Partosuwiryo dan Warseno (2011) Suhu pH DO 26-27 0 C 7,9-8 5,85-6,29 ppm 25-30 0 C 6,7-8,2 >5 ppm

## PENUTUP
Kesimpulan Kesimpulan dalam penelitian efektivitas  vaksin  inaktif A.  salmonicida
adalah:
1. Metode  pembuatan  vaksin  dengan pemberian  formalin  2%  dapat memberikan  nilai  viabilitas  vaksin sebesar 0%.
2. perlakuan  C  (10 8 )  berpengaruh paling  baik  dalam  meningkatkan aktifitas  fagositosis  dan  Total Leukosit  ikan  koi  ( Cyprinus  carpio)
yang telah diinfeksi menggunakan A. salmonicida.

## Saran
Perlu  adanya  penelitian  lanjutan untuk menguji hasil vaksin inaktif secara secara molekuler bahwa vaksin ini dapat digunakan untuk aplikasi.

## DAFTAR PUSTAKA
Alifuddin, M. 2002. Imunostimulan Pada Hewan  Akuatik. Jurnal  Akuakultur Indonesia. 1(2):87-92.
Austin,  B.  And  D.  A.  Austin.  2007. Bacterial  Fish  Pathogens  Diseases in  Farmed  and  Wild Fish. Books  In Aquatic  and  Marine  Sciences, Chichester UK Germany.
DJPB.  Direktorat  Jendral  Perikanan Budidaya.  2015.  Laporan  kinerja triwulan  II  tahun  2015.  Jakarta:
Direktorat Jendral Perikanan Budidaya.  Kementerian  Kelautan dan Perikanan.
DJPB.  Direktorat  Jendral  Perikanan
Budidaya.  2016.  Realisasi  dan Capaian  Anggaran  Tahun  2016.
Jakarta: Direktorat
Jendral Perikanan Budidaya. Grisez,  L.  and  Z.  Tan.  2005.  Vaccine Development for Asian Aquaculture.  Disease  In  Asian Aquaculture, 5 : 483- 439 Hazzulli,  Nurma  Jana.,  Agus  Setyawan dan Esti Harpeni. 2015.
Imunogenitas  Kombinasi  Vaksin Inaktif  Whole  Cell Aeromonas salmonicida dan  Vitamin  C  pada Ikan  ( Cyprinus  carpio ). Jurnal Rekayasa  dan  Teknologi  Budidaya Perairan 3 (2): 2302-3600.
Jurnal Ilmu Perikanan dan Kelautan, Vol. 5(2): 313-319, Juli 2023
Lukistyowati, Iesje. 2012. Studi Efektifitas Sambiloto ( Andrographis  paniculata Nees)
untuk Mencegah Penyakit Edwardsiellosi s  pada  Ikan  Patin ( Pangasius hypopthalmus ). Berkala Perikanan Terubuk. 40(2): 56-74. Marentek,  G.  A;  Henky,  M;  dan  Sammy, N. J. L. 2013. Evaluation of The Use of    Garlic  ( Allium  sativum )  in Enhancing  Nonspecific  Immune Response    and  Growth  of  Nile Tilapia  ( Oreochromis  niloticus ). Jurnal Budidaya Perairan . 1 (1): 1- 7.
Partosuwiryo  S  dan  W.  Yus.  2011.  Kiat Sukses  Budi  Daya  Ikan  Mas.  Citra Aji Parama. Yogyakarta. 59 hlm.
Playfair, J.H.L and B.M. Chain. 2009. At a Glance Imunologi. Penerbit Erlangga. Jakarta. 102 hlm. Purwaningsih, Uni. 2013. Vaksin Koktail
Sel  Utuh  untuk  Pencegahan Penyakit  Mycobacteriosis dan Motile  Aeromonas  Septicemia Pada  Ikan  Gurame  ( Osphronemus gouramy ).  Sekolah  Pascasarjana, Institut  Pertanian  Bogor.  Tesis tidak dipublikasikan.
Purwaningsih,  Uni.,  Agustin  I.,  dan
Angela M. L. 2014. Proteksi Vaksin Monovalen  dan  Koktail  Sel  Utuh terhadap Ko-Infeksi Mycobacterium fortuitum dan
Aeromonas  hydrophila pada  Ikan Gurame, Osphronemus  gouramy . J. Ris. Akuakultur . 9(2): 283-294.
Roza,  D.,  Johnny,  F.,  &  Tridjoko.  2004. Peningkatan  Imunitas  Yuwana Ikan  Kerapu  Bebek, Cromileptes altivelis terhadap  Infeksi Viral Nervous  Necrosis (VNN). J.  Pen.
Perik. Indonesia , 10(1): 61-70.
Setyawan,  A.,  Hudaidah,  S.,  Ranopati, Z.,Z., dan Sumino. 2012. Imunogenisitas  Vaksin  Inaktif
Whole  cell  A.  Salmonicida  pada Ikan  Mas (Cyprinus  carpio ). Jurnal Aquasains, 1(1): 17 – 21.
Tang,  Xiaoqian.,  Qin,  Yinghui.,  Sheng,  X., Jing,  X.,  Wenbin,  Z.  2017. Characterization of CD3þ T lymphocytes  of  Japanese  flounder ( Paralichthys  olivaceus )  and  its response  after  immunization  with formalin-inactivated Edwardsiella tarda . Fish & Shellfish Immunology 63 (2017) 220-227.
Utami,  Saras  Wati.  2013.  Warta  Ekspor, Peluang  Ekspor  Ikan  Hias.  Ditjen PEN/MJL,25/V/2013. Djpen.kemendag.go.id.  Tradexpo Indonesia. Hlm 3-7.
Wintoko,Fredi.,  Agus  Setyawan.,  Siti Hudaidah  dan  Mahrus  Ali.  2013. Imunogenitas Heat  Killed Vaksin Inaktif Aeromonas  salmonicida Pada  Ikan  Mas (Cyprinus  carpio). Jurnal  Rekayasa  dan  Teknologi Budidaya  Perairan 2  (1):  2302- 3600.
Yanuhar, Uun. 2011.  Respon Immun Sel Interleukin  -4  (IL-4)  Pada  Ikan Kerapu Tikus ( Cromileptes altivelis )  Yang  Dipapar  Protein Imunogenik  Vibrio  Harveyi.  Jurnal Kelautan. 4(2): 25-33.
Zafran,  Roza,  D.,  &  Johnny,  F.  2006. Produksi  dan  Uji  Efektivitas Imunostimulan  dari  Bakteri  dan Jamur untuk Meningkatkan
Imunitas  Benih  Ikan  Kerapu. Laporan  Penelitian  Balai  Besar Riset  Perikanan  Budidaya  Pantai Gondol TA 2006, 12 hlm.