## POTENTIAL OF Aaptos aaptos SPONGE EXTRACT FROM POOPOH WATERS ON THE GROWTH OF BACTERIA

## POTENSI EKSTRAK SPONS Aaptos aaptos DARI PERAIRAN POOPOH TERHADAP PERTUMBUHAN BAKTERI
Brigita Tumbelaka 1)* , Defny Silvia Wewengkang 1) ,  Julianri Sari Lebang 1)
1) Program Studi Farmasi. FMIPA. UNSRAT, MANADO 95115 *brigitatumbelaka28@gmail.com, wdefny@yahoo.com, julianrilebang@unsrat.ac.id

## ABSTRACT
Aaptos  aaptos  sponge  is  one  of  the  beauties  of  marine  biota  which  is  capable  of  producing bioactive compounds that have the potential as antibacterial. This study aims to determine and measure the activity of Aaptos Aaptos sponge extract on the growth of Gram-positive Staphylococcus aureus and Gram- negative  Pseudomonas  Aeruginosa  from  Poopoh  waters,  Tombariri  District.  Samples  were  extracted  using Maceration method with 95% ethanol solvent. Furthermore, the activity test was carried out using the Kirby and Bauer disk diffusion method. The results showed that the average diameter of the inhibition zone from the  Aaptos  aaptos  sponge  had  antibacterial  activity  from  the  resulting  extract.  Antibacterial  activity contained  in  the  methanol  extract  resulted  8.00  mm  of  inhibition  against  Staphylococcus  aureus  and  7.00 mm  of  inhibition  against  Pseudomonas  aeruginosa  bacteria..  This  antibacterial  activity  significantly indicates that the Aaptos aaptos sponge has an antibacterial role.
Keywords: Sponge, Disc diffusion Kirby and Bauer, S.aureus, P.aeruginosa.

## ABSTRAK
Spons Aaptos  aaptos adalah  salah  satu  keindahan  biota  laut  yang  mampu  menghasilkan  senyawa bioaktif  yang  berpotensi  sebagai  antibakteri.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  dan  mengukur aktivitas ekstrak spons Aaptos aaptos terhadap pertumbuhan bakteri Gram-positif Staphylococcus aureus dan Gram-negatif Pseudomonas  aeruginosa dari  perairan  Poopoh  Kecamatan  Tombariri.  Sampel  di  ekstraksi menggunakan metode maserasi dengan pelarut etanol 95% Selanjutnya dilakukan Uji aktivitas menggunakan metode disk diffusion Kirby dan Bauer . Hasil penelitian menunjukkan bahwa pengukuran rata-rata diameter zona  hambat  dari  spons Aaptos  aaptos memiliki aktivitas  antibakteri  dari  hasil  ekstrak  yang  dihasilkan. Aktivitas  antibakteri  yang  terdapat  pada  ekstrak  metanol  menghasilkan  daya  hambat  sebesar  8,00  mm menghambat Staphylococcus  aureus dan 7,00  mm  daya  hambat  yang  menghambat  bakteri Pseudomonas Aeruginosa . Aktivitas antibakteri yang signifikan menunjukkan bahwa spons Aaptos aaptos memiliki peran sebagai antibakteri.
Kata Kunci : Spons, Disc diffusion Kirby and Bauer , S.aureus, P.aeruginosa.

## PENDAHULUAN
Indonesia  adalah  salah  satu  negara kepulauan dan menjadi negara kepulauan terbesar di  dunia,  sehingga  sering  dijuluki  menjadi  negara bahari  karena  secara  mendetail  lautnya  memiliki luas  yang  lebih  besar  dari  luasnya  daratan. Indonesia  memiliki  pulau  besar  dan  kecil mencapai  17.504  pulau  dan  panjang  garis  pantai 81.290  km  sehingga menjadi  pulau  terbesar didunia  internasional  dan  dengan  berbagai keanekaragaman  dan  potensi  peran  alam  (Kadar., 2015).
Laut memiliki keunikan yang mengusulkan potensi luas dalam hal ditemukannya  karya  yang  belum  pernah  ada sebelumnya  di  beberapa  bidang  termasuk  ilmu dan  pengetahuan  (Totti et  al .,  2020).  Laut  adalah wilayah  dengan  macam  hal  yang  unik  dan berperan  penting  dalam  hidup,  di  samping  itu dalam  hal  meninjau  lebih  dalam  laut  yang  bukan hanya  dimanfaat  sebagai  sumber  persediaan makanan dari beragam jenis biota laut yang hidup, tapi  di  dalamnya  juga  ada  yang  hidup  dan berperan  sebagai  bahan  pembuat  obat  serta kosmetik.  Terdiri  dari  banyaknya  sumber  daya didalamnya  termasuk  sumber  daya  alam  terdiri dari biota-biota laut yang berfungsi sebagai bahan obat-obatan  saat  di  kelola.  Spons  menjadi  bagian jenis  biota  potensial  laut  diantaranya  sudah  ada jenis  biota  laut  yang  disudah diteliti  dan  senyawa aktif  dan  di  hasilkan  didalamnya  (Wewengkang dkk., 2014).
Spons adalah salah satu bagian penyusun  terumbu  karang,  spons Aaptos  aaptos termasuk filum porifera yang didalamnya memiliki  potensi  memproduksi  senyawa  aktif metabolit  sekunder  didalamnya  juga  bersifat  bio aktif seperti antibakteri, antijamur juga antikanker yang saat ini masih ada banyak biota yang belum dimanfaatkan  (Menggelea  dkk.,  2015).  Penelitian sebelumnya  terhadap Aaptos  aaptos menyatakan bahwa  spons  ini  memiliki  senyawa  yang  aktif, karena  mampu  menghambat  pertumbuhan  dari perwakilan  bakteri  dengan  kategorikan  kuat. (Nurhamidin.,  2022).  Penelitian  lainnya  terhadap Aaptos  aaptos yang  diperoleh  dari  perairan  selat lembeh  dilakukan  pada  tahun  2018  menunjukkan bahwa  spons  ini  memiliki  aktivitas  antibakteri terhadap bakteri Staphylococcus aureus (Tunggali., 2019).
Penyakit  infeksi  menjadi  salah  satu masalah  kesehatan  di  Indonesia  dan  harus ditelusuri  detailnya.  infeksi  adalah  suatu  penyakit yang  memiliki  sebab  oleh  didalamnya  ada
mikroorganisme  patogen  dan  dapat  menimbulkan bahaya  untuk  hidup  manusia.  Jika  terjadi  infeksi akibat bakteri tentunya pengobatan menjadi tujuan utama  dan  penyebab  infeksi    oleh  bakteri  dapat teratasi  dengan  pengobatan  obat  antibiotik.  Oleh karena  itu,  antibiotika  baru  atau  penemuan  baru sangat dibutuhkan untuk untuk mengatasi masalah tersebut,  karena  antibakteri/antibiotik  merupakan suatu  zat  yang  dapat  menghambat  pertumbuhan suatu bakteri (Utomo dkk., 2018).
Berdasarkan  uraian  diatas  dalam  latar belakang,  maka  peneliti  menarik  kesimpulan untuk  melakukan  proses  tahap  penelitian  dan pengujian  untuk  aktivitas  antibakteri  dari  spons Aaptos aaptos diambil dan diperoleh dari perairan Pantai  Kabupaten  Minahasa  Desa  Poopoh Kecamatan Tombariri terhadap tumbuhnya bakteri uji Pseudomonas  aeruginosa  dan  Staphylococcus aureus .

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  dimulai  dibulan  Januari  dan berakhir pada Mei 2023 di Program Studi Farmasi Fakultas MIPA di Laboratorium Farmakognosi & Fitokimia,  Laboratorium  Mikrobiologi  Serta Fakultas  Pertanian  di  Laboratorium  Hama  dan Penyakit Tumbuhan Universitas Sam Ratulangi.

## Jenis Penelitian
Aktivitas berupa j enis  penelitian  yang diselenggarakan  dengan  bentuknya  berupa  ragam eksperimen  laboratorium  yang  akan  dilaksanakan dengan  cara  menguji  komponen  yang  diekstrak dari spons Aaptos aaptos sebagai antibakteri pada Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa.
Alat
Dalam penelitian ini alat yang digunakan    yaitu  peralatan  selam (Scuba  diving), plastik zipper  lock  bag yang  bagus,  beberapa corong  seperti  corong  pisah  dan  gelas  corang, kaca sebagai wadah, jas laboratorium, erlenmeyer, gelas  ukur  (pyrex),  gelas  kimia  (pyrex),  pisau, sarung  tangan,  masker,  600ml  kemasan  botol  air, gunting,  talenan,  tabung  reaksi,  penyangga  untuk tabung  reaksi,  sampel  cup  ( microtubes ,  cawan petri,  timbangan  analitik,  spatula,  oven,  pencapit, batang  pengaduk,  bunsen,  pipet  pasteur,  kertas label,  spidol  permanen,  cakram  ( paper  disc ), tranfer  loop  (jarum  ose),  vial,  lemari  es  untuk pendingin, incubator inucell (N-Biotek), laminary air  flow ,  autoklaf  (autoklaf  KT-30s),  mikropipet,
Sigmat  (jangka  sorong),  pengambil  gambar (kamera), dan tissue untuk pembersih.

## Bahan
Dalam  Penelitian  ini  difungsikan  bahan yang dapat menunjang penelitian yaitu hewan laut Aaptos  aaptos, mikroorganisme  uji  dua  jenis mikroba khususnya bakteri yaitu S.aureus sebagai bakteri  Gram-Positif  dan P.eruginosa sebagai bakteri  Gram-Negatif,  akuades,  etanol,  metanol, pepton,  tissue,  natrium  klorida,  nutrient  agar, kloramfenikol, paper  disc , aluminium  foil ,  kertas penyaring steril dan media agar  ( beef extract ).

## Pengambilan Sampel
Sampel  yang  di  pakai  yaitu  spons Aaptos  aaptos diambil  dari  air  perairan  Pantai Desa  Poopoh  Kecamatan  Tombariri  Kabupaten Minahasa menggunakan alat yang bisa membantu yaitu  (tabung oksigen,  fins,  masker,  dan  snorkel). Zipper  lock  bag akan  digunakan  Saat  sampel didapat,  diambil  dan  akan  dimasukkan  kedalam plastik  tersebut  tetapi  sebelumnya  disediakan dahulu cool  box untuk  tempat  sampel,  kemudian setelah  disiapkan  sampel  dibawah  ke  Farmasi Program  studi,  Universitas  Sam  Ratulangi  di dalam  Laboratorium  pembelajaran  mata  kuliah Farmakognosi  dan  Fitokimia.  Proses  sampel diambil  gambar  dan  diberi  tanda  label  untuk penomoran sampel dilakukan di laboratorium dan selanjutnya dideterminasi .

## Ekstraksi Sampel
Ekstrak  dari Aaptos  aaptos Spons dilakukan  dengan  cara  maserasi  dimana  pelarut etanol 95% digunakan. Pada tahap awal dilakukan sortasi  basah  dengan  di  bersihkannya  sampel  dan potongannya  kecil-kecil  kemudian  masukkan  ke dalam  botol  kemasan  600mL,  kemudian  sampel direndamkan  dengan  pendispersi  etanol  sampai terendam  sempurna  semua  sampel  dengan  baik dan  selama  24  jam  didiamkan.  Setelah  di  rendam saring sampel dan untuk penyaringan kertas saring dapat  digunakan,  sehingga  setelah  di  sarang  akan filtrat  1  dan  debris  1  akan  dihasilkan.  Debris  1 yang dihasilkan kemudian diremaserasi menggunakan  pelarut  etanol  seperti  perlakuan pertama sampai semuanya terendam dan dibiarkan selama  24  jam,  sampel  tersebut  disaring menggunakan  kertas  penyaring  menghasilkan filtrat  2  dan  debris  2.  Debris  2  kemudian diremaserasi  dengan  pendispersi  etanol  sampai semuanya terendam dan dibiarkan selama 24 jam, sampel  tersebut  disaring  menggunakan  kertas
penyaring  baru yang  nantinya  akan menghasilkan filtrat  3  dan  debris  3.  Campurkan  Hasil  Filtrat 1,2  ,dan  3  yang  di  peroleh menjadi  satu, dibawah ke  Fakultas  Pertanian  khususnya  dilaboratorium hama  dan  penyakit  kemudian  disaring  pada  alat rotary evaporatory sampel untuk dievaporasi pada suhu  40℃  hingga  kering  dan  selanjutnya timbangan  analitik  difungsikan  untuk  menimbang sampel.  Selanjutnya,  ekstrak  kasar  dibawah kembali  di  Laboratorium  Farmakognosi  dan Fitokimia  untuk  digunakan  dalam  pengujian antibakteri (Ortez, 2005).

## Sterilisasi Alat
Perlengkapan alat dengan berbagai fungsi yang  akan  dipakai  dalam  pengujian  penelitian aktivitas  antibakteri  ini  disterilisasikan.  Berbagai Alat gelas yang digunakan akan diautoklaf selama 15  menit  pada  121°C  suhunya,  dibakarnya  pinset dengan  api  bunsen  langsung,  dan  media  lainnya juga  akan  disterilisasi  pada  autoklaf  disuhu  yang sama  yaitu  121°C  selama  15  menit  (Hafsan, 2014).

## Pembuatan Media Cair
Pembuatan  media  ini  dilakukan  dengan proses  pertama  yaitu  dengan  mencampurkan sebanyak  0,3 g  meet  extract  (ekstrak  daging),  0,1 L  aquadest,  pepton  0,5  g  dan  natrium  klorida sebanyak  0,3  g  menggunakan  pengaduk  magnet sampai homogen kemudian campuran media yang di  buat  yaitu  media  cair  menggunakan  autoklaf disterilisasi    terlebih  dulu  selama  waktu  15 menit pada  suhu  121°C.  Tahap  selanjutnya  dilakukan proses  pengukuran  pH  media  cair,  dimana  kertas pH  difungsikan.  Media  cair  sebanyak  1  mL  di pipet  ,  dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi  dan menggunakan alumunium  foil sebagai  penutup tabung.  Untuk  media  yang  telah  dibuat  yaitu media  cair  siap  dan  dapat  digunakan  untuk dikulturnya bakteri percobaan (Orteez, 2005).

## Kultur Bakteri
Media  cair  yang  sudah  dibuat  dan dipersiapkan  sebelumnya  dilanjutkan  dengan proses  penambahan  1000  µL  pada  jenis  bakteri yang  telah  dikultur  yaitu  bakteri S.aureus dan P.aureginosa ke  dalam  jenis  alat  tabung  reaksi pyrex  yang  berbeda.  Pada  tabung  jenis  ini digunakan kertas alumunium  foil sebagai  penutup dan selama 1x24 jam di masukkan ke dalam suhu 37°C pada alat inkubator (Orteez, 2005).

## Pembuatan  Kontrol  Positif  dan  Kontrol Negatif
Dalam pengujian yang dilakukan didalam aktivitas  penelitian  antibakteri  ini,  Kontrol  yang +(positif)  difungsikan  yaitu  Chloramphenicol dalam  bentuk  paper  disc  sedangkan    Pelarut metanol  adalah  kontrol  pembanding  yaitu  kontrol -(negatif) difungsikan,  Kemudian larutan metanol diambil  sebanyak  100  µL  untuk  ditotol  pada  atas kertas cakram.

## Pembuatan Larutan Uji
Larutan  uji  seperti  ini  disiapkan  dengan melakukan  berbagai  cara  seperti  ditimbangnya ekstrak  kasar  spons A.aaptos sebanyak  2  mg, ekstrak dilarutkan dengan bagian cara melarutkan kedalam  0,4  mL  metanol  hingga  menghasilkan konsentrasi  sebesar  250  μg/50  μL  yang  didapat (Orteez, 2005).

## Pembuatan Media Agar
Dicampurkan  berbagai bahan  untuk pembuatan  media  ini  dengan  proses  pertama mencampurkan  meat  extract  (extract  daging) sebanyak  0,3  g, 1,5  g  nutrient  agar,  pepton 0,5 g, natrium  klorida  0,3  g,  dan  250  mL  aquadest menggunakan  pengaduk  magnet  atau  magnetic stirrer  hingga  tercampur  merata  kemudian disterilisasi  menggunakan  autoklaf  dengan 121°C suhu  alat  selama  ±15  menit.  Untuk  media  agar layak  dipakai  dan  difungsikan  untuk  pengujian aktivitas antibakteri (Ortez, 2005).

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
Pengujian  penelitian  ini  difungsikan salah  satu    bagian  metode  uji  yaitu  metode disc diffusion  Kirby and  Bauer  (Metode  difusi  agar). Dalam  uji  pengujian  aktivitas  untuk  kategori antibakteri  ini,  cakram  ukuran  6  mm  (paper  disc) dipakai  dengan parameter  daya  serap  tiap  cakram yaitu  sebesar  50  µL.  Konsentrasi  sampel  250 µg/50  µL  yang  telah  ditentukan  ditotolkan
menggunakan  mikropipet  pada  tiap-tiap  cakram yang  digunakan.  Bagian  media  agar  yang  telah disterilkan  pada  autoklaf  pada  suhu  121  ˚C  di dinginkan  sampai  suhu  40˚C  setelah  15  menit diautoklaf. Ke dalam cawan petri, tuangkan media agar  dan  100  mikroliter  banyaknya  jenis  bakteri yang telah di kultur, dipipet kemudian diinokulasikan  pada  media  dan  ditunggu  sampai mengerasnya  media  agar.  Label  diberikan  pada tiap-tiap petridish dengan penomoran sampel yang sesuai  agar  tidak  terjadi  kesalahan  penomoran. Tiap  cakram  kertas  yang  telah  diteteskan  sampel uji  spons  diambil  menggunakan  pinset  dan  di masukkan  dalam  cawan  petridish  lalu  selama  24 jam masa diinkubasi (Orteez, 2005).

## Pengamatan dan Pengukuran Zona Bening
Pengamatan pada tahap ini bisa dilakukan  setelah  masa  inkubasi  1x24  jam. Daerah  sekitaran  bagian  kertas  cakram  akan menunjukkan  pekanya  bakteri  terhadap  jenis antibiotik  yang  dinyatakan  dengan  diameter  zona bening.  Mistar  berskala  dapat  digunakan  dalam mengukur  diameter  zona  bening  dari  hasil pengujian  cara  mengukur  diameter  zona  bening yaitu  horizontal  yang  ditambahkan  dengan diameter  zona  bening  vertikal  dan  dibagi  dua. Daya  hambat  dengan  nilai  diameter  ≥21  mm dikategori  sangat  kuat,  daya  hambat  berdiameter 11-20  mm  dikategori  kuat,  daya  hambat  sedang dikategori  berdiameter  6-10  dan    aktivitas  daya hambat  berdiameter  ≤5  mm  memiliki  kekuatan aktivitas daya hambat kategori lemah (Davis  and Stout 1971 : Ranggatau dkk., 2022).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil
Populasi sampel hasil dari Spons Aaptos aaptos yang  telah  diuapkan  dan  didapatkan  12 gram.  Hasil  diperoleh  rendemen  ekstrak  dimuat pada keterangan bagan rendemen ekstrak tabel 1.
Tabel 1 . Rendemen Ekstrak Spons Aaptos aaptos No Sampel Berat (g) Rendemen (%) Warna 1. Ekstrak Etanol 12,00 4,05 Merah Kecoklatan
Tabel 2. Hasil Aktivitas Pengujian Antibakteri dari Spons Aaptos-aaptos terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus & Pseudomonas aureginosa
Pembahasan
Determinasi Sampel Determinasi Spons Aaptos aaptos dilakukan  di  Fakultas  MIPA  Program  Studi Farmasi  Universitas  Sam  Ratulangi.  Determinasi pada penelitian dilakukan untuk tujuan menunjukkan  identitas  benar  dari  sampel  yang  di ambil  dan  dilakukan  uji  aktivitas  antibakteri sampel  yang  sesuai  yaitu  Spons Aaptos  aaptos agar tidak terjadi kesalahan saat penelitian.

## Ekstraksi
Sampel  spons Aaptos  aaptos adalah sampel yang diambil dari desa poopoh kecamatan tombariri  kabupaten  minahasa  pada  perairannya, di  ekstraksi  menggunakan  metode  maserasi.  Pada penelitian  metode  ini  digunakan  karena  cukup efektif,  pengerjaannya  mudah,  dan  mencegah kerusakan  karena  tidak  menggunakan  suhu  yang tinggi  sehingga  aktivitas  kandungan  kimia  pada populasi  sampel  yang  tidak  bisa  tahan  akan  suhu tinggi tidak menjadi rusak (Susanty dan Bachmid, 2016).  Pelarut  etanol  digunakan  sebagai  pelarut ekstraksi  dikarena  etanol  dapat  bercampur  air, mempunyai sifat selektif, ekonomis dan mudah di dapatkan  serta  mampu  mengekstrak  sebagian besar  senyawa  kimia  yang  terkandung  dalam populasi  sehingga  efisien  untuk  digunakan  (Chen dkk ., 2020).
Ekstraksi  pada  spons Aaptos  aaptos yang  menggunakan  metode  maserasi  dengan konsentrasi  95%  pelarut  etanol,  dikarenakan konsentrasi  pelarut  ini  tinggi  hingga  dapat menarik  kandungan  kimia  pada  populasi  sampel dengan baik dan bersifat toksiksitas  rendah untuk jenis  pelarut  ini,  sehingga  kandungan  kimiawi pada  sampel  tidak  ada  bahaya  kerusakan  dan meminimalisir bahaya yang akan terjadi (Rima,2014).  Proses  maserasi  metode  ini  dengan menggunakan  pelarut  etanol  akan  semakin  besar daya  merusak  dan  menembus  sel  dari  spons Aaptos aaptos.
Selanjutnya  remaserasi  atau  bagian pengulangan  yang  dilakukan  mendapat  hasil berwarna merah kecoklatan dan untuk meningkatkan kemaksimalan penarikan kandungan  senyawa  pada  populasi  sampel dilakukan  remaserasi  dengan  tujuan  baik  untuk memaksimalkan  aktivitas  (Mujipradana  dkk., 2018).  alat  evaporatory  pada  tahap  ini  digunakan dengan  tujuannya  untuk  menarik  cairan  pelarut pada  hasil  maserasi  dengan  suhu  40°C  dan  perlu diperhatikan  kestabilan  alat  dan  pemakaiannya agar  tidak  terjadi  kontaminasi.  Suhu  40°C  yang difungsikan harus dibawah titik didih pelarut yang di  pakai  sehingga  tidak  akan  dapat  merusak kandungan  kimia  pada  proses  penguapan.  Titik didih  pelarut  etanol  yang  digunakan  berada  pada suhu  antara  70-78°C  sehingga  suhu  yang digunakan  pada  alat  evaporator  stabil  untuk digunakan  (Galih  Panji,  2019).  Dari  proses penguapan  yang  dilakukan  didapatkan  ekstrak kasar sebesar 12 g seperti pada hasil table 1.

## Uji Aktivitas Antibakteri
Dalam  pengujian  aktivitas  antimikroba khususnya bakteri,  dipakai  dan dipilih  difusi agar sebagai metodenya. Dalam pengujian ini menggunakan jenis bakteri S.aureus juga P.aeruginosa sebagai  perwakilan  bakteri  gram positif  dan  gram  negatif,  Pengujian  dengan digunakannya  kedua  jenis  gram  bakteri  ini  agar dapat  melihat  prosesnya  hingga  aktivitas  spons sebagai antibakteri pada sampel uji Aaptos aaptos . Penggunaan  metode  pengujian  difusi  agar, dikarenakan  tekniknya  lebih  mudah,  ketelitian dalam  pengujian  sensitivitas  dan  metode  yang serbaguna  bagi  beberapa  jenis  bakteri  patogen yang  tumbuh  cepat  dan  sering  digunakan  dalam uji  kepekaan  antibiotik  (Ranggatau  dkk.,  2022). Hasil mekanisme ukur rata-rata diameter pengamatan aktivitas daya antibakteri dari sampel jenis  spons Aaptos  aaptos dari  ekstrak  yang dihasilkan  dan  kemudian  di  uji  pada  bakteri
Bakteri Bakteri S.A Bakteri P.A S. A P.A C+ C- C+ C- I 7,0 7,0 23 0 21 0 II 9,0 7,0 III 9,0 8,0 ∑ 25,00 22,00 x̄ 8,0 7,00
Staphylococcus aureus dan Pseudomonas
Aeruginosa ditunjukkan pada table 2.
Setelah  proses  inkubasi  selama  1x  24 jam  proses  pengamatan  pengujian  aktivitas  jenis antibakteri  ini  dapat  dilakukan.  Kontrol  Positif dalam  penelitian  pengujian  ini  digunakan  dan kontrol  negatif  sebagai  bagian  pembanding. Kloramfenikol  adalah  Kontrol  positif  yang digunakan  dalam  penelitian  ini,  didasarkan  untuk mengetahui  hal  yang  ada  dalam  kontrol  ini dikarenakan  dalam  kloramfenikol  memuat  dan memiliki spectrum kerja yang luas dan baik untuk mencegah  bakteri,  Kloramfenikol  juga  memiliki mekanisme  kerja  dengan  menghambat  sintesis protein,  dimana  bakteri  membutuhkan  protein sebagai nutrisi untuk perkembangan sel bakteri itu sendiri (Azhar, 2016). Metanol adalah pembandingnya yang difungsikan  sebagai kontrol negatif  dengan  tujuan  seperti  halnya  mengetahui ada tidaknya pengaruh pelarut terhadap pertumbuhan mikroba uji (Ratu dkk., 2019). Zona bening  atau  zona  hambat  yang  dihasilkan  akan menjadi perbandingan zona hambat yang terbentuk  selama  penelitian  pengujian  aktivitas antibakteri adalah penggunaan pembanding kontrol negatif dan kontrol positif.
Setelah  masa  inkubasi,  diukur  diameter zona  hambat  dimana  zona  hambat  yaitu  daerah jernih terbentuk dari sekitar disk pada tiap cakram (tidak  ada  pertumbuhan  bakteri)  diukur  diameter vertikal  dan  horizontalnya  atau  diukur  dari  ujung ke  ujung  yang  lain  melalui  tengahan  disk/cakram (Soemarno,  2000).  Perhitungan  dan  pengukuran hasil  zona  hambat  bertujuan  untuk  mengetahui zona  yang  terbentuk  dengan  diameter  satuan milimeter  (mm)  dimana  tujuan  utama  dari  mistar berskala mengukur diameter (mm).
Hasil  ukur  rata-rata  diameter  zona penghambat  ekstrak Aaptos  aaptos dengan metanol terhadap Staphylococcus aureus menghasilkan  daya  aktivitas  hambat  sebesar  8,00
mm sedangkan daya aktivitas hambat sebesar 7,00 mm  pada  bakteri Pseudomonas  aeruginosa. Aktivitas  daya  hambat  yang  paling  besar dihasilkan  oleh  kontrol  positif  yang  memakai kloramfenikol pada bakteri Staphylococcus aureus dengan  nilai  23,00  mm  dan  pada  bakteri Pseudomonas  aeruginosa dengan  nilai  21,00  mm sehingga dikategorikan daya hambat kuat sedangkan untuk ulangan I,II dan III dengan nilai rata-rata yang dihasilkan seperti diatas dikategorikan  daya  hambat  sedang  (Susanto dkk.,2012).
Dalam  penelitian  peran  uji  aktivitas antibakteri  diatas,  menunjukkan  adanya  kontrol positif seperti kloramfenikol memiliki fungsi daya aktivitas pengaruh hambatan pertumbuhan kategori sangat kuat terhadap bakteri S.aureus dan P.aeruginosa .  Hal  ini  menunjukkan  peranan kloramfenikol  bahwa  memiliki  sifat  antibakteri yang  baik  untuk  menghambat  atau  membunuh bakteri.  Dari  hasil  ini  juga  menunjukkan  bahwa ekstrak  sampel  populasi Aaptos  aaptos yang dihasilkan  memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap perwakilan bakteri uji.
Hal yang berbeda ditunjukkan berdasarkan  hasil  penelitian  sebelumnya  dari Nurhamidin  (2022)  diambil  dari  perairan  teluk manado  dan  Tunggali  dari  perairan  selat  lembeh (2019)  yang  sama  menggunakan  ekstrak Aaptos aaptos dalam pengujian aktivitas antibakteri. Pada hasil  pengujian  menunjukkan  adanya  aktivitas antibakteri dari populasi spons Aaptos aaptos dan menghasilkan  aktivitas  daya  yang  menghambat yang  lebih besar  yaitu  20,32  mm  tahun  2018  dan 18,12 mm pada tahun 2021 dikarenakan penelitian ini  di  lanjutkan  sampai  tahap  fraksinasi.  Oleh karena itu spons Aaptos aaptos memiliki aktivitas sebagai antibakteri.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  penelitian,  di  peroleh  data dan  hasil  akhir  antara  lain  menunjukkan  bahwa hasil  ekstrak  hewan  laut Aaptos  aaptos spons memiliki  peran  sebagai  antibakteri  karena  spons ini  mampu  berperan  menghambat  tumbuhnya bakteri  uji S.aureus dan P.aeruginosa ,  sebagai perwakilan  bakteri  gram  positif  dan  bakteri  gram negatif,  lewat  nilai  rata-rata  dari  aktivitas antibakteri yang dihasilkan. Dalam tahap pengujian  sebesar  8,00  mm  adalah  daya  hambat pada  bakteri  S.aureus  sedangkan  daya  hambat sebesar  7,00  mm  pada  bakteri P.aeruginosa, dengan  kedua  hasil  dikategorikan  daya  hambat sedang.

## SARAN
Perlu dilakukan penelitian tahap lanjutan perihal  peran  senyawa  aktif  yang  terkandung  dan aktivitas  biologis  dari  spons Aaptos  aaptos dengan  melanjutkan  metode  ini  ke  tahap  lebih lanjut  sampai  tahap  fraknisasi  dan  penelitian  ini bisa  diarahakan  ke  penelitian  lain  seperti  anti jamur,  antioksidan  dan  antikanker  untuk  melihat aktivitas ekstrak dari Spons Aaptos aaptos .

## DAFTAR PUSTAKA
Adelberg,  Jawetz,  Melnick.  2008. Medical Microbiology . Edisi  23.  Jakarta:  Penerbit
Buku Kedokteran EGC
Azhar, Minda (2016) Biomolekul Sel : Karbohidrat,  Protein,  dan  Enzim.  UNP Press, Padang. Centers for Disease Control and Prevention (CDC 2022), National Center for Emerging and Zoonotic Infectious Diseases (NCEZID), Division of Foodborne, Waterborne, and Environmental Diseases (DFWED) Chen  H.,  Xiao  H.,  &  Pang,  J.  2020. Parameter Optimization  and  Potential  Bioactivity Evaluation  of  a  Betulin  Extract  from White Birch Bark . Plants, 9(3) : 392
David,  W.W  dan  Stout,  T.T.,  1971. Disc  Plate Method  of  Microbiologycal  Antibiotic Assay , Microbiology.
Erlindawati.,  A.  Puji.  &  J.  Afghani.  2015.
Identifikasi dan Uji Aktivitas
Antibakteri  dari  Tiga  Isolat  Tanah Gambut  Kalimatan  Barat. Jurnal  Kimia
dan Kemasan . 4(1) :12-16.
Galih  Panji  A.  2019.  Pemurnian  Bioetanol Limbah Kulit Nanas Menggunakan Alat
Distilasi Sederhana Model Kolom Refluks . Universitas  Negeri  Padang 7(1): 22-28
Haris  A.  dan  Jamaluddin  Jompa.  2021. Spons .
Lily Publisher: Jakarta Indonesia.
Hafsan.  2014.  Mikrobiologi  Analitik.  Fatmawati
Nur  Publisher:  Alauddin  University Press.
Kadar  A.  Pengelolaan  Kemaritiman  Menuju Indonesia sebagai Poros Maritim Dunia. Jurnal Keamanan Nasional . ( Consultancy and Research ) 3(1) : 427.
Luntungan,  B.  M.,  Wewengkang,  D.  S.,  dan Rumondor,  E.  2021 . Uji  Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  dan  Fraksi  Spons
Mycale  vansoesti  dari  Perairan  Pulau Mantehage  Minahasa  Utara  Terhadap
Pertumbuhan  Bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus . PHARMACON. 10(2): 889-896. Manning, S. (2010) Infection. 2nd edn. Edited by H.  Babcock. New  York:  Chelsea  House Publish.
Marjoni,  R.  2016.  Dasar-Dasar  Fitokimia. Jakarta : Trans Info Media.
Menggelea, F.P., Posangi, J., Wowor, P.M., Bara, R.  2015.  Uji  Efek  Antibakteri  Jamur Endosimbion  Spons  Laut  Callyspongia sp.  Terhadap  Bakteri  Pseudomonas aeruginosa dan Eschericia coli. Jurnal e- Biomedik , 3(1 ):376-380.
Mutiasari,  I.  R.  2012.  Uji  Aktivitas  Antioksidan
Ekstrak Jamur Pleurotus ostreatus Dengan  Metode  DPPH  dan  Identifikasi Golongan  Senyawa  Kimia  Dari  Fraksi Teraktif.  [Skripsi].  Fakultas  Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Indonesia, Depok.
Ningrum,  M.P.  2017.  Pengaruh  Suhu  dan  Lama Waktu  Maserasi  terhadap  Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Metanol  Rumput Laut  Merah  (Euchema  cottonii). Jurnal Rekayasa dan Manajemen Agroindustri . 7(4).
Nurhamidin,  S.  J.,  Wewengkang,  D.  S.,  dan Suoth, E.J  2022. Uji Aktivitas Ekstrak dan  Fraksi  Organisme  Laut  Spons Aaptos  aaptos Terhadap  Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus  aereus dan Escherichia coli . PHARMACON . 11(1). Ortez,  J.  H.  2005. Disk Diffusion  testing  in manual  of  antimicrobial  susceptibility testing .  Marie  B.  Coyle  (Coord.ed). America
Puspadewi,  dan  Ririn,  2017.  “DETEKSI Staphylococcus  aureus Dan Salmonella PADA JAJANAN SIRUP.” 3(1): 26–33. Ramili  Yunita,.  2007.  “Struktur  morfologis  dan
perkembangan  gonad  spons Aaptos aaptos (Schmidt 1864) Kelas
Demospongiae Di  Perairan  Pulau  Pari, Kepulauan Seribu ”.[Tesis] DKI Jakarta Ranggatau,  C.  C.,  Wewengkang,  D.  S.,  dan Siampa,  J.P    2022.    Potensi  Ekstrak dan Fraksi Spons Phyllospongia
lamellosa yang Diperoleh dari Perairan Pulau Manado Tua Terhadap Pertumbuhan  Bakteri Staphylococcus
aereus dan Escherichia coli . PHARMACON . 11(3): 1637-1644.
Ratu,  K.,  Simbala,  H.,  Rotinsulu,  H.,  2019.  Uji Aktivitas  Antimikroba  Ekstrak  dan Fraksi  Spons Phyllospongia  lamellosa dari  Perairan  Tumbak,  Minahasa Tenggara terhadap Pertumbuhan Mikroba Escherichia coli , Staphylococcus  aureus dan Candida albicans .  Program  Studi  Farmasi FMIPA  Universitas  Sam  Ratulangi, Manado.
Sari,  A.,  dan  Auliya,  N.  2018.  Uji  Efektivitas
Antibakteri Ekstrak Rumput Laut (Eucheuma  Cottonii)  Terhadap  Bakteri Bacillus  Cereus  dan  Streptococcus Mutans. Pharmaceutical
and Traditional Medicine . 2(2): 53-59.
Sitepu,  J.  S.  G.  2010.  Pengaruh  Variasi  Metode Ekstraksi  Secara  Maserasi  Dan  Dengan Alat  Soxhlet  Terhadap  Kandungan Kurkuminoid Dan Minyak Atsiri Dalam Ekstrak  Etanolik  Kunyit  ( Curcuma Domestica  Val .)  [skripsi].  Fakultas Farmasi  Universitas  Sanata  Dharma,
Yogyakarta.
Soemarno. 2000. Depertemen Kesehatan Republik Indonesia Isolasi Dan Identifikasi  Bakteri  Klinik.  Akademi Analisis Kesehatan Yogyakarta. Yogyakarta. Susanto,  D.,  Sudrajat  dan  R.  Ruga.  2012.  Studi
Kandungan  Bahan  Aktif  Tumbuhan Meranti  Merah  (Shorea  leprosula  Miq) Sebagai  Sumber  Senyawa  Antibakteri. Mulawarmnan  Scientifie.  Vol. 11  (2) :
181-190.
Susanty,  Susanty  and  Fairus  Bachmid.  2016.
“Perbandingan Metode Ekstraksi
Maserasi  dan  Refluks  Terhadap  Kadar Fenolik  Dari  Ekstrak  Tongkol  Jagung (Zea  Mays  L.)” . Jurnal  Konversi 5(2): 87.
Tarkey  A.  Taylor,  S.  (2022) Staphylococcus Aureus .  Medical  Reference.  Jakarta:
Chan House Publish and Editor.
Totti,  Accoroni,  S.,  Barucca,  M.,  Bianchelli,  S., Biscotti,M. A., Calcinai, B., Canapa, A., Corinaldesi,C.,  Danovaro,  R.,Camillo, C.  G.  D.,  Fanelli,  E.,  Gambi,  C.,  Puce, S.,  Romagnoli,  T.,  dan  Cerrano.  C.,
2020. Marine  Biology.  Biodiversity  and Functioning  of  Marine  Ecosystems:
Scientific Advancements and New
Perspectives  For  Preserving  Marine Life.  In  The  First  Outstanding  50  Years of “Università Politecnica delle
Marche” . Springer, Cham.
Tri  Puji  Lestari  Sudarwati.,  M.  A.  Hanny  Ferry
Fernanda. 2019.
Aplikasi dan
Pemanfaatan  Daun  Pepaya  (Carica Pepaya) sebagai biolarvasida. Ristedikti Jakarta, Indonesia.
Tunggali,  S.  N.,  Simbala,  H.E.I  .,  dan  Rotinsulu,
H  2019.  Uji  Hambat  Ekstrak  dan Fraksi  Spons Aaptos  aaptos Terhadap Pertumbuhan Bakteri Escherichia coli , Staphylococcus  aereus, dan Candida albicans PHARMACON . 8(1).
Utomo,  S.B.,  Fujiyanti,  M.,  Lestari,  W.  P.,  dan Mulyani, S. 2018. Uji Aktivitas Antibakteri Senyawa C-4 Metoksifenilkaliks  [4]  Resorsinarena Termodifikasi Hexadecyltrimethylammonium-Bromide Terhadap
Bakteri
Staphylococcus aureus Dan Escherichia  coli . Jurnal Kimia dan Pendidikan Kimia . 3(3): 109- 209. Warsa.  2010. Kokus  positif  gram .  Dalam: Syahrurachman A, Chatim A, Soebandrio  A,  Karuniawati  A,  Santoso AUS, Harun BMH. Buku ajar mikrobiologi  kedokteran  edisi  revisi. Jakarta: Binarupa Aksara Publisher.
Wewengkang,  D.  S.,  Sumilat,  D.  A.,  dan Rotinsulu,  H.  2014.  Karakterisasi  dan Bioaktif  Antibakteri  Senyawa  Spons Haliclona  Sp .  dari  Teluk  Manado. Jurnal LPPM Bidang  Sains dan Teknologi . 1(1): 71-85.
Widyani,  K.  A.M,  Wewengkang,  D.  S.,  dan Rumondor, E.M . 2022.  Potensi Ekstrak dan Fraksi Spons Mycale vansoesti yang Diperoleh  dari  Perairan  Pulau  Manado Tua  Terhadap  Pertumbuhan  Bakteri Staphylococcus  aereus dan Escherichia coli . PHARMACON . 11(3): 1583-1590.