UJI AKTIVITAS ANTIFUNGI MINYAK ATSIRI RIMPANG TEMULAWAK ( Curcuma xanthorriza Roxb.) SECARA IN VITRO

## TERHADAP Candida albicans
Heru Sudrajad, Firman Al Azar
Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Tanaman Obat dan Obat Tradisional Badan Penelitian dan Pengembang Kesehatan Kementerian Kesehatan RI

## ABSTRAK
Temulawak  ( Curcuma  xanthorrhiza Roxb.)  merupakan  tanaman  obat-obatan yang  tergolong  dalam  suku  temu-temuan  (Zingiberaceae)  sering  dimanfaatkan masyarakat  baik  sebagai  bumbu  masakan  maupun  digunakan  sebagai  bahan  obat.Temu lawak  diketahui  mengandung  senyawa  kimia  kurkuminoid  dan  minyak  atsiri.  Negara Indonesia memiliki iklim tropis dengan udara lembab dan panas. Jamur merupakan salah satu  penyebab  infeksi  terutama  di  negara-negara  tropis.  Tujuan  penelitian  untuk mengetahui  aktivitas  minyak  atsiri  rimpang  temu  lawak  terhadap  pertumbuhan  jamur Candida  albicans. Penelitian  dengan  menggunakan  konsentrasi  minyak  atsiri  masing- masing  0,25;  0,3;  0,35;  0,4;  0,45  dan 0,5%. Ketokonazol  2%  dan  metanol  sebagai  baku pembanding  kontrol  positif  dan  negatif.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  minyak atsiri  rimpang  temu  lawak  dapat  menghambat  pertumbuhan  jamur Candida  albicans . Semakin  besar  konsentrasi  maka  rata-rata  diameter  pertumbuhan  jamur  semakin menurun. Dari  hasil  penelitian  dapat  disimpulkan  bahwa  minyak  atsiri  konsentrasi  0,25 sampai 0,5% dapat menghambat  pertumbuhan Candida albicans . Diamater daya hambat paling besar diperoleh pada minyak atsiri rimpang temu lawak  dengan konsentrasi 0,5% dan  diamater daya  hambat paling  kecil  diperoleh  dari minyak  atsiri rimpang  temulawak dengan konsentrasi 0,25%.
Kata kunci: Curcuma xanthorriza Roxb., Candida albicans ,minyak atsiri, invitro

## PENDAHULUAN
Temulawak  ( Curcuma  xanthorrhiza Roxb.)  merupakan  tanaman  obat-obatan yang  tergolong  dalam  suku  temu-temuan  (Zingiberaceae)  sering  dimanfaatkan masyarakat baik sebagai bumbu masakan maupun digunakan sebagai bahan obat.
Temulawak merupakan komponen penyusun hampir setiap jenis obat tradisional yang  dibuat  di  Indonesia.  Hasil  survei  pemanfaatan  tanaman  obat  dalam  industri  obat tradisional  menunjukkan  bahwa  temulawak  dipergunakan  sebagai  bahan  baku  44  jenis produk obat tradisional. Penggunaan temulawak mengalami perkembangan, dimulai dari sediaan obat tradisional, melalui sediaan obat herbal terstandar, akhirnya menjadi sediaan fitofarmaka.  Saat  ini  total  serapan  temulawak  dalam  industri  obat  tradisional  dan  obat fitofarmaka diperkirakan mencapai 8.750 ton/tahun (Kemala et al ., 2004).
Temulawak  diketahui  mengandung  senyawa  kimia  yang  mempunyai  keaktifan fisiologi,  yaitu  kurkuminoid  dan  minyak  atsiri.  Kurkuminoid  terdiri  atas  senyawa berwarna  kuning  kurkumin  dan  turunannya.  Kurkuminoid  yang  memberi  warna  kuning pada  rimpang  bersifat  antibakteria,  antikanker,  antitumor  dan  antiradang,  mengandung antioksidan  dan  hypokolesteromik.  Sedangkan  minyak  atsiri  berbau  dan  berasa  yang khas.  Kandungan  minyak  atsiri  pada  rimpang  temulawak  3-12%  Sedangkan  untuk kurkuminoid,  dalam  temulawak  1-2%.  Untuk  menentukan  persentase  ini  dilakukan
pemanasan  pada  temperatur  50-55 o C,  supaya  tidak  merusak  zat  aktifnya  dan  untuk mendapatkan warna yang baik dari kurkuminoid (Parahita, 2007).
Minyak  atsiri  pada  rimpang  temulawak  ( Curcuma  xanthorriza Roxb.) mengandung  siklo-isoren,  mirsein,  d-kamfer  p-tolil  metilkarboni,  zat  warna  kurkumin, felandrena, turmerol dan pati (Soesilo, 1989).
Negara Indonesia memiliki iklim tropis dengan udara lembab dan panas. Dengan suasana yang demikian apabila hygenis lingkungan kurang diperhatikan, lingkungan yang padat dan sosio ekonomi yang rendah maka infeksi  fungi  akan mudah menyerang. Salah satu fungi yang menyerang yaitu Candida albicans .
Candida albicans adalah sebuah jamur seksual diploid (sebuah bentuk ragi), dan merupakan  agen  penyebab  infeksi  oral  dan  vaginal  oportunis  pada  manusia.  Infeksi- infeksi jamur sistemik (fungemia) telah menjadi penyebab morbiditas dan mortalitas yang penting  pada  pasien  yang  terganggu  sistem  kekebalannya  (seperti  pasien  AIDS, kemoterapi  kanker,  transplantasi  organ  atau  sumsum  tulang).  Disamping  itu  infeksi terkait rumah sakit pada pasien yang sebelumnya tidak dianggap berisiko (seperti pasien yang dirawat di unit perawatan intensif) telah menjadi salah satu penyebab kekhawatiran kesehatan utama (Masdin, 2010).
Jamur merupakan salah satu penyebab infeksi pada penyakit terutama di negara- negara tropis. Penyakit kulit akibat jamur merupakan penyakit kulit yang sering muncul di tengah masyarakat Indonesia. Dicarilah solusi pengobatan yang tepat terhadap infeksi yang  disebabkan  oleh Candida  albicans dengan  bahan  yang  mudah  didapat  oleh masyarakat  luas  dan  harganya  juga  terjangkau.  Karena  itu  dilakukan  penelitian  uji aktifitas  antifungi  minyak  atsiri  rimpang  temulawak  secara  invitro  terhadap Candida albicans.

## METODOLOGI

## Bahan Penelitian
Bahan yang digunakan  dalam penelitian ini yaitu rimpang temulawak, Candida albicans , methanol, PDA (Potato Dextrose Agar), aquades, vanillin, toluene, asam sulfat pekat, etil asetat, silika Gel GF 254, kertas cakram, NaCl 0,9% dan ketokonazol 2%.

## Alat Penelitian
Alat  yang  digunakan  yaitu  labu  alas  bulat  5000  ml,  kondensor,  stahl  destilasi,  beaker glass  50  ml,  500  ml,  gelas  ukur  10  ml,  erlenmeyer  500  ml,  pipet,  botol  vial,  timbangan analitik,  timbangan  digital,  oven,  lampu  UV,  cawan  petri,  tabung  reaksi,  hot  plate, magnetic stirrer, autoclave, LAF, mikropipet.

## Jalannya Penelitian
Penelitian dilakukan di Laboratorium Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Tanaman  Obat  dan  Obat  Tradisional  Tawangmangu.  Pelaksanaan  penelitian  dimulai penyulingan  minyak  atsiri  dengan  metode  Stahl  Destilasi.  Selanjutnya  minyak  atsiri dianalisis  dengan  KLT.  Penyiapan  uji  antijamur  yaitu  dengan  pembuatan  media  PDA (Potato  Dextro  Agar),  identifikasi  jamur  uji  dan  penyiapan  mikroba  uji,  pembuatan suspensi jamur dan pengujian antijamur  menggunakan  minyak atsiri dengan konsentrasi masing-masing 0,25; 0,3; 0,35; 0,4; 0,45 dan 0,5%. Ketokonazol 2% dan metanol sebagai baku  pembanding  kontrol  positif  dan  negatif  dengan Metode  Difusi  Cakram.  Kemudian data dianalisis dengan Uji One-Way Anova.

## HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN

## 1. Rendemen Minyak Atsiri
Penyulingan  minyak  atsiri  dari  tanaman  dalam  skala  laboratorium  diperlukan untuk  mengetahui  mutu  bahan  yang  mengandung  minyak  atsiri,  yang  akan  diusahakan secara komersial (Ketaren, 1985). Penetapan rendemen minyak atsiri rimpang temulawak menggunakan alat destilasi stahl. Berat rimpang temulawak yang digunakan sebanyak 2 kg  dan  penyulingan  dilaksanakan  selama  4-6  jam,  dimaksudkan  supaya  minyak  atsiri yang terdapat dalam rimpang temulawak benar-benar tersuling. Rendemen minyak atsiri dihitung  sebagai  perbandingan  antara  volume  minyak  atsiri  hasil  penyulingan  terhadap bobot  bahan  yang  didestilasi.  Rendemen  minyak  atsiri  rimpang  temulawak  dengan  dua kali perlakuan dapat dilihat pada Tabel I.
Tabel I.  Hasil  pengukuran  rendemen  minyak  atsiri  rimpang  temulawak  ( Curcuma xanthorriza Roxb.) Parameter Pengukuran I II Berat yang ditimbang (g) Volume minyaki atsiri (ml) Rendemen (% v/b) 1000 4 0,4 % 1000 5,2 0,52 %
Keterangan : rata-rata rendemen minyak atsiri 0,46% (v/b).
Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh  dapat  diketahui  bahwa  rata-rata  rendemen minyak atsiri rimpang temulawak yang diperoleh yaitu  0,46% v/b.

## 2. Hasil kromatografi lapis tipis
Hasil penelitian kromatografi lapis tipis minyak atsiri rimpang temulawak dapat dilihat pada Tabel II.

## Tabel II. Hasil Perhitungan Rf Minyak Atsiri dari KLT
No. Rf Kenampakan warna spot Tampak Mata UV 254 Reagen H 2 SO 4 : Vanillin (5:1) 1. 2. 3. 4.
5. 6.
7. 8. Rf 1 Rf 2
Rf 3 Rf 4 Rf 5
Rf 6
Rf 7 Rf 8 0,11 0,36 0,45 0,51 0,59 0,65 0,71 0,74 Kuning - - - - - - - Abu-abu kemerahan Abu-abu kemerahan - - Abu-abu kemerahan Abu-abu Abu-abu Abu-abu kemerahan Abu-abu Biru muda Abu-abu kemerahan Biru kehijauan Putih tulang Ungu Kuning Merah muda

## A B
Gambar 1.
Hasil  kromatografi  lapis  tipis  minyak  atsiri  rimpang  temulawak  ( Curcuma xanthorriza Roxb.) Keterangan A  =  Kenampakan kromatogram dilihat di bawah sinar UV 254 nm B  =  Kenampakan kromatogram setelah di semprot dengan Etanol Asam sulfat : Etanol Vanilin (5:1)
Pemeriksaan  dengan  menggunakan  KLT  ini  dimaksudkan  sebagai  data pendukung  untuk  mengetahui  senyawa  dari  minyak  atsiri  yang  berkhasiat  sebagai antifungi.  Uji  pendahuluan  KLT  dilakukan  untuk  menentukan  fase  gerak  yaitu menggunakan fase gerak Etanol Asam sulfat : Etanol Vanilin (5:1) dan  memberikan hasil pemisahan yang terbaik.
Hasil  kromatografi  lapis  tipis  menunjukkan  komponen  penyusun  minyak  atsri rimpang temulawak  yang  diambil dari kebun pada ketinggian ± 600 m dpl dapat dilihat dari jumlah spot dan R f hasil kromatografi. Berdasarkan hasil tersebut dapat pula diduga bahwa  komponen  penyusun  minyak  atsiri  rimpang  temulawak  minimal  tersusun  dari delapan  komponen  minyak  atsiri  dengan  R f minimal  sebesar  0,11  dan  R f maksimal sebesar 0,74.
Berdasarkan  spot  yang  muncul  pada  plat  KLT,  spot  dengan  R f sebesar  0,74 diduga  senyawa  tersebut  merupakan  senyawa  dominan  dalam  minyak  atsiri  rimpang temulawak  ( Curcuma  xanthorriza Roxb.),  dimana  dugaan  ini  didasari  oleh  ukuran  spot yang lebih besar apabila dibandingkan dengan ukuran spot yang lain .

## 3. Uji antifungi rimpang temulawak
Uji  aktivitas  antifungi  bertujuan  untuk  mengetahui  daya  hambat  minyak  atsiri rimpang  temulawak  terhadap  jamur Candida  albicans .  Uji  aktivitas  antifungi  pada penelitian  ini  dilakukan  dengan  menggunakan  metode  difusi.  Media  yang  digunakan dalam  uji  aktivitas  antifungi  adalah  PDA  (Potato  Dextro  Agar  dengan  jamur Candida albicans.
Hasil  dari  daya  hambat  diperoleh  dengan  melakukan  uji  aktivitas  antifungi menggunakan  minyak  atsiri  yang  dilarutkan  dengan  pelarut  metanol,  minyak  atsiri berbagai konsentrasi yaitu 0,25%, 0,3%, 0,35%, 0,4%, 0,45% dan  0,5%.
Dari  Gambar  3  histogram  hasil  pengujian  DDH  (Diameter  Daerah  Hambat) pertumbuhan  jamur Candida  albicans yang  diberi  perlakuan  uji  minyak  atsiri  dengan berbagai  konsentrasi  setelah  diinkubasi  selama  2  x  24  jam  diketahui  bahwa  diameter pertumbuhan  jamur  pada  setiap  konsentrasi  perlakuan  mengalami  peningkatan  seiring dengan  peningkatan  konsentrasi  minyak  atsiri  rimpang  temulawak.  Pada  perlakuan
ketokonazol diameter pertumbuhan jamur sama dengan perlakuan uji pada minyak atsiri 0,5%.
Gambar  2.Histogram  hubungan  konsentrasi  ketokonazol  dan  minyak  atsiri  rimpang  temu lawak ( Curcuma xanthorriza roxb.) terhadap diameter daya hambat (mm)
Keterangan A : Ketokonazol 2% E : Minyak Atsiri 0,4% B : Minyak Atsiri 0,25% F : Minyak Atsiri 0,45% C : Minyak Atsiri 0,3% G : Minyak Atsiri 0,5%
D : Minyak Atsiri 0,35%
Adanya  hambatan  dari  minyak  atsiri  rimpang  temulawak  ( Curcuma  xanthorriza Roxb.) terhadap pertumbuhan jamur Candida albicans karena adanya senyawa-senyawa yang  terkandung  di  dalam  minyak  atsiri  temulawak  yang  mempunyai  sifat  antifungi. Hasil  dari  uji  kontrol  minyak  atsiri  temulawak  serta  hasil  uji  hambatan  dari  beberapa konsentrasi minyak atsiri temu lawak dapat dilihat pada Gambar 3 dan 4 berikut.
Gambar 3.  Hasil uji daya hambat minyak atsiri rimpang temulawak ( Curcuma xanthorriza Roxb.) dengan kontrol positif dan negatif
Keterangan A : Ketokonazol 2% (Kontrol Positif) B  :  Minyak  Atsiri 0,45% C : Minyak Atsiri 0,5%
D : Metanol (Kontrol Negatif)
0 5 10 15 20 25 30 A B C D E F G Dia m et er Da y a H a m ba t (m m ) Konsentrasi Minyak Arsiri dan Ketokonazol Ulangan I Ulangan II Ulangan III
Gambar 4.  Hasil uji daya hambat beberapa konsentrasi minyak atsiri rimpang temu lawak ( Curcuma xanthorriza Roxb.) Keterangan
A : Minyak Atsiri 0,4% ;  B  : Minyak Atsiri 0,35%
C  : Minyak Atsiri 0,3% ;  D  : Minyak Atsiri 0,25 %
Gambar  di  atas  menunjukkan  bahwa  semakin  besar  konsentrasi  minyak  atsiri rimpang temulawak maka diameter daya hambat akan semakin besar.

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
1. Minyak atsiri rimpang temulawak dibuat konsentrasi 0,25 ; 0,3 ; 0,35 ; 0, 4 ; 0,45 , dan 0,5% dapat memberikan hambatan pada pertumbuhan Candida albicans .
2. Diamater daya hambat paling besar di peroleh dari minyak atsiri rimpang temulawak dengan konsentrasi 0,5% dan setara dengan ketokonazol.

## Saran
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  minyak  atsiri  rimpang  temulawak  ( Curcuma xanthorriza Roxb.)  dengan  metode  dilusi  dan  bioautografi,  perbandingan  antara  ekstrak dan minyak atsiri temulawak ( Curcuma xanthorriza Roxb.) dengan berbagai konsentrasi serta menggunakan mikroba lain.

## DAFTAR PUSTAKA
Gerai, 2007. Seribu Khasiat Temu lawak . Majalah Farmacia. Edisi April (Vol.6 No.9), Halaman: 28 (1813 hits).
Guenther, E., 1987. Minyak Atsiri. Universitas Indonesia Press. Jakarta. Harborn,  J.  B.,  1987, Metode  Fitokimia  Penuntun  Cara  Modern  Menganalisis  Tumbuhan . diterjemahkan oleh Padmawinata, K., dan Soediro. ITB. Bandung.
Ketaren S., 1985. Pengantar Teknologi Minyak Atsiri . Balai Pustaka, Jakarta. Lay, Bibiana W, Sugyo Hastowo. 1992. Mikrobiologi . Cetakan pertama. CV Rajawali. Jakarta.. Moffat, A.C.. (1986). Clarke’s Isolation and Identification of Drugs . Second Edition. London. The Pharmaceutical Press. Page 633.
Sastrohamidjojo, H., 1991. Kromatografi . Edisi II. Liberty Press.Yogyakarta. Sastrohamidjojo,  H.,  2004, Kimia  Minyak  Atsiri .  Cetakan  Pertama.  Gadjah  Mada  University Press.Yogyakarta
Sundari,  D  &  M.  Wien  Winarno.,  2001. Informasi  Tumbuhan  Obat  Sebagai  Anti  Jamur .  Pusat Penelitian  dan  Pengembangan.  Badan  Penelitian  dan  Pengembangan  Kesehatan.  Depkes RI. Jakarta.
Soesilo,.  S.,  1989. Vademekum  Bahan  Obat  Alam .  Jakarta:  Departemen  Kesehatan  Republik Indonesia.
Tjampakasari,  Conny  Riana.,  2006. Karakteristik  Candida  albicans.  Staf  Pengajar  Bagian Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia . Jakarta.