## Pengujian antiradikal bebas difenilpikril hidrazil (DPPH) ekstrak etil asetat daun nangka (Artocarpus heterophyllus Lamk)
[Test for diphenilphikril hydrazyl (DPPH) free antiradical from acetate etil extract of nangka leaf (Artocarpus heterophyllus Lamk)]
Hasmalina Nasution 1) dan Musyirna Rahmah Nst 2)
1) Universitas Muhamadiyah, Pekanbaru, Riau, Indonesia
2) Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Riau, Pekanbaru, Riau, Indonesia Telp. +6281371095606 dan Email: musyimarahmah@yahoo.com
diterima 25 Oktober 2014, disetujui 17 November 2014

## Abstrak
Senyawa  antioksidan  memiliki  peran  yang  sangat  penting  dalam  kesehatan.  Berbagai  bukti  ilmiah menunjukkan bahwa senyawa antioksidan mengurangi resiko terhadap penyakit kronis seperti kanker dan penyakit jantung  koroner.  Karakter  utama  senyawa  antioksidan  adalah  kemampuannya  untuk  menangkap  radikal  bebas. Senyawa  antioksidan  dari  tumbuhan  seperti  vitamin  C,  vitamin  E,  karoten,  asam-asam  fenol,  polifenol,  dan flavonoid  diketahui  berpotensi  mengurangi  resiko  penyakit  degeneratif.  Salah  satu  tanaman  obat  yang  memiliki banyak khasiat adalah tanaman nangka (Artocarpus Heterophyllus lamk). Tanaman nangka telah diketahui secara empiris  khasiatnya  baik  pada  bagian  daun,  buah,  biji  buah,  getah,  dan  kayu.  Daun  nangka  dapat  digunakan sebaga  pelancar  ASI,  borok,  dan  luka.  Selain  itu,  bioaktifnya  berkhasiat  sebagai  antikanker,  antivirus,  dan antiinflamasi. Oleh karena faktor lingkungan seperti iklim, cuaca, dan lokasi tumbuh sangat berpengaruh terhadap komponen  aktif  suatu  tumbuhan,  maka  pada  penelitian  ini  telah  dilakukan  pengujian  aktivitas  antiradikal  bebas DPPH  terhadap  daun  nangka  (Artocarpus  Heterophyllus  lamk)  yang  ada  di  Pekanbaru.  Aktivitas  Antioksidan ekstrak etil asetat daun nangka yang mengandung saponin dan steroid memiliki nilai IC 50 (Inhibition Concentration) sebesar 778,76 ppm terhadap radikal DPPH.
Kata kunci: daun nangka, ekstrak, etil asetat,  antioksidan, DPPH

## Pendahuluan
Radikal  bebas  adalah  atom  atau  molekul yang  tidak  stabil  dan  sangat  reaktif  karena mengandung  satu  atau  lebih  elektron  tidak berpasangan  pada  orbital  terluarnya.  Untuk mencapai  kestabilan  atom  atau  molekul,  radikal bebas akan bereaksi dengan molekul disekitarnya untuk memperoleh pasangan elektron.  Reaksi  ini  akan  berlangsung  terus menerus  dalam  tubuh  dan  bila  tidak  dihentikan akan  menimbulkan  berbagai  penyakit  seperti kanker,  jantung,  katarak,  penuaan  dini,  serta penyakit  degeneratif  lainnya.  Oleh  karena  itu tubuh memerlukan  suatu  substansi  penting  yaitu antioksidan  yang  mampu  menangkap  radikal bebas tersebut sehingga tidak dapat menginduksi suatu penyakit [1-3].
Di  dalam  tubuh  kita  terdapat  senyawa yang  disebut  antioksidan  yaitu  senyawa  yang dapat  menetralkan  radikal  bebas,  seperti:  enzim SOD  (Superoksida  Dismutase),  gluthatione,  dan katalase.  Antioksidan  juga  dapat  diperoleh  dari asupan  makanan  yang  banyak  mengandung vitamin  C,  vitamin  E  dan  betakaroten  serta senyawa  fenolik.  Bahan  pangan  yang  dapat menjadi  sumber  antioksidan  alami,  seperti rempah-rempah,  coklat,  biji-bijian,  buah  buahan, sayur-sayuran dan sebagainya [4-6].
Indonesia merupakan negara kaya tanaman  obat.  Berbagai  jenis  tanaman  obat tumbuh  dengan  baik.  Tanaman  obat  tersebut sudah  dipakai  oleh  masyarakat  Indonesia, terutama dipedesaan selama beratus-ratus tahun.  Sekalipun  baru  bersifat  empiris,  tanaman obat  tersebut  masih  dipakai  sampai  sekarang
karena  alasan  efektifitas    biaya  dan  tingkat keamanan.  Salah  satu  tanaman  obat  yang memiliki banyak khasiat adalah tanaman nangka (Artocarpus Heterophyllus Lamk).
Tanaman  pohon  nangka  telah  diketahui banyak  khasiatnya.  Daun  pohon  nangka  dapat digunakan sebaga pelancar ASI, borok,dan luka. Daging  buah  nangka  muda  dimanfaatkan sebagai  makanan  sayuran  yang  mengandung albuminoid  dan  karbohidrat.  Sementara  biji nangka dapat digunakan sebagai obat batuk dan tonik [7]. Biji nangka dapat diolah menjadi tepung yang  digunakan  sebagai  bahan  baku  industri makanan.  Khasiat  kayu  sebagai  anti  spasmodic dan sedative, daging buah sebagai ekspektoran. Getah  kulit  kayu  digunakan  sebagai  obat demam, obat cacing dan antiinflamasi. Kandungan  kimia  dalam  kayu  adalah  morin, sianomaklurin  (zat  samak),  flavon,  dan  tanin. Selain itu, di kulit kayunya juga terdapat senyawa flavonoid  yang  baru,  yakni  morusin,  artonin  E, sikloartobilosanton, dan artonol B. Bioaktivitasnya  terbukti  secara  empirik  sebagai antikanker,  antivirus,  antiinflamasi,  diuretil,  dan antihipertensi [8].
Oleh  karena  faktor  lingkungan  seperti iklim, cuaca, dan lokasi tumbuh sangat berpengaruh  terhadap  komponen  aktif  suatu tumbuhan,  maka  perlu  dilakukan  pengujian aktivitas  antiradikal  bebas  DPPH  terhadap  daun nangka yang ada di Pekanbaru. Dalam penelitian ini  akan  dilakukan  pengujian  antiradikal  bebas DPPH  terhadap  ekstrak  etil  asetat  daun  nangka sebagai skrining zat aktif. Penelitian ini diharapkan dapat memberikan
informasi tambahan tentang daun nangka sebagai antioksidan alami.

## Metodologi

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  yaitu  wadah/botol berwarna gelap, pisau/gunting, timbangan analitik,  spektrofotometer  UV–Vis  (Genesys  10 UV),  vacum  rotary  evaporator  (Buchi  461  Water Bath), vial, tabung reaksi, pipet tetes, pipet takar, becker  glass,  corong,  labu  ukur,  dan  aluminium foil.
Bahan-bahan  yang  digunakan:  daun nangka  segar,  etanol,  etil  asetat,  n-heksan, aquades, metanol, DPPH (2,2-diphenil-1- picrilhydrazil), dan vitamin C.

## Pengambilan dan Identifikasi Sampel
Tumbuhan Nangka (Artocarpus
Heterophyllus  Lamk)  diambil  di  daerah  Kulim Pekanbaru Riau.

## Ekstraksi Sampel
a)  Perajangan
Daun  yang  telah  diambil  dicuci  dengan  air mengalir kemudian dikering anginkan. Setelah itu  daun  dirajang,  dan  ditimbang  berat  kering daunnya.
b)  Perendaman Sampel yang telah dirajang kemudian dimasukkan  kedalam  botol  berwarna  gelap dan dimaserasi dengan pelarut nonpolar yaitu heksan, perendaman dilakukan sebanyak tiga kali  selama  ±  5  hari  dengan  sesekali  diaduk. Hasil  maserasi  kemudian  disaring  dengan kertas  saring  dan  dan  filtratnya  dipindahkan kedalam  bejana  tertutup.  Dan  hasil  maserasi di  evaporasi  sehingga  didapatkan  pelarut  dan ekstrak  yang  terpisah  (ekstrak  heksan). Residunya dimaserasi selama ± 5 hari dengan pelarut  bersifat  semi  polar  yaitu  etil  asetat hingga didapatkan filtrat dan residunya. Filtrat yang dihasilkan di evaporasi sehingga didapatkan ekstrak etil asetat,
c)  Pemekatan
Ekstrak  yang  diperoleh  dikentalkan  dengan alat  rotary  evaporator  sehingga  diperoleh ekstrak  kental  heksan,  ekstrak  kental  etil asetat, daun nangka.

## Uji Fitokimia
Uji Kandungan Kimia Golongan Alkaloid
Ekstrak  daun  nangka  masukkan  dalam tabung  reaksi  tambahkan  10  ml  kloroform amoniak 0,05 N, dikocok lalu tambahkan 10 tetes asam  sulfat  2  N  dan  kocok  perlahan.  Biarkan sejenak  hingga  terbentuk  pemisahan  lapisan asam dan lapisan kloroform. Ambil lapisan asam kedalam tabung reaksi lalu tambahkan satu tetes pereaksi  mayer.  Reaksi  positif  ditandai  dengan adanya  kabut  putih  hingga  gumpalan  putih  atau endapan.
Uji  Kandungan  Kimia  Golongan  Flavonoid, Fenolik, Saponin, Steroid dan Terpenoid
Ekstrak  daun  nangka  dimasukkan  dalam tabung  reaksi  lalu  tambahkan  pelarut  kloroform dan  air  suling  sebanyak  5  ml  (1:1),  kocok perlahan dan biarkan sampai terbentuk pemisahan  sempurna  antara  kloroform  dan  air. Masing-masing pelarut yang memisah dipindahkan  dalam  tabung  reaksi.  Lapisan kloroform  dibagian  bawah  digunakan  untuk pemeriksaan  senyawa  terpenoid  dan  steroid, sedangkan  lapisan  air  untuk  pemeriksaan kandungan  kandungan  flavonoid,  fenolik  dan saponin.

## Pengujian Aktivitas Antioksidan
Masing-masing sampel ditimbang sebanyak 5 mg kemudian dilarutkan dalam 5 mL metanol dalam labu ukur 5 mL sehingga didapat konsentrasi  larutan  sampel  0,1%.  Penentuan aktivitas  antioksidan  dipipet  0,2  mL  larutan sampel menggunakan pipet takar dan dimasukkan ke dalam vial. Kemudian ditambahkan  3,8  mL  larutan  DPPH  50  µM. Campuran  larutan  dihomogenkan,  dan  dibiarkan selama  30  menit  pada  tempat  gelap.  Serapan diukur  dengan  spektrofotometer  UV-Vis  pada panjang  gelombang  515  nm  [9].  Sebagai  kontrol positif adalah Vitamin C.
Aktivitas  antioksidan  sampel  ditentukan oleh  besarnya  hambatan  serapan  radikal  DPPH melalui  perhitungan  persentase  inhibisi  serapan DPPH dengan menggunakan rumus [10].
% Inhibisi = Abs. kontrol – Abs. sampel x 100 %, Abs. Kontrol
(1)
dengan  Abs.  kontrol  adalah  serapan  radikal DPPH  50  µM pada  panjang  gelombang  515  nm, dan  Abs.  sampel  adalah  serapan  sampel  dalam radikal    DPPH  50  µM  pada  panjang  gelombang 515 nm.

## Hasil dan Pembahasan
Hasil  identifikasi  sampel  yang  dilakukan di  laboratorium  Biologi  Universitas    Riau menunjukkan bahwa sampel merupakan tumbuhan  asam  jawa  (Tamarindus  indica  Linn) dengan famili  Moraceae (Gambar 1).

## Gambar 1.  Tumbuhan Nangka (Artocarpus Heterophyllus Lamk)
Pemeriksaan pendahuluan metabolit sekunder  atau  uji  fitokimia  dari  daun  nangka memperlihatkan  hasil  positif  terhadap  saponin dan  steroid  dan  negatif  flavonoid,  terpenoid  dan fenolik  .  Saponin  adalah  suatu  glikosida  yang ada  pada  banyak  macam  tanaman.  Saponin mempunyai  rasa  pahit,  dalam  larutan  air membentuk  busa  yang  stabil  dan  sulit  untuk dimurnikan.  Sedangkan  steroid  adalah  senyawa organik lemak sterol tidak terhidrolisis yang dapat dihasil  reaksi  penurunan  dari  terpena  atau skualena.
Tabel 1. Hasil pemeriksaan kandungan metabolit sekunder ekstrak Etil Asetat daun nangka.
No. kandungan kimia pereaksi hasil 1 Saponin Air/busa + 2 Flavonoid HCl - 3 Terpenoid Liberman- Buchard - 4 Steroid Liberman- Buchard + 5 Fenolik FeCl 3 - 6 Alkaloid Mayer - Keterangan : + = Bereaksi positif - = Bereaksi negatif
Pada  pengujian  ini  digunakan  sampel kering  daun  nangka.  Sampel  dirajang  dan dihaluskan  dengan  blender  sehingga  didapat serbuk  halus  sejumlah  50  g.  Sampel  yang  akan dimaserasi dirajang halus untuk untuk mengurangi  kadar  air  pada  sampel  sehingga dapat mencegah tumbuhnya jamur serta mempermudah proses penguapan pelarut, memperbesar luas permukaannya sehingga lebih banyak  kontak  dengan  pelarut.  Botol  yang digunakan  dalam  metoda  maserasi  ini  adalah
botol  berwarna  gelap  dan  penyimpanan  juga  di tempat  yang  terlindung  dari  cahaya.  Hal  ini dimaksudkan  untuk  menghindari  penguraian  zat oleh  cahaya  (fotolisis).    Ekstraksi  dilakukan secara maserasi bertingkat selama 3 hari dengan 3  kali  pengulangan  (3  x  3  hari).  Hal  ini dimaksudkan  agar  proses  penarikan  zat-zat  dari sampel  sempurna.  Ekstraksi  ini  dilakukan dengan  perlarut  secara  berturut-turut  dengan heksan,  diklorometan,  dan  metanol.  Kemudian maserat  diuapkan  dengan  menggunakan  rotary evaporator  dengan  suhu  30-40°C,  hingga diperoleh  ekstrak  kental  n-heksana  dan  etil asetat.
Ekstrak  kental  etil  asetat  daun  nangka dilakukan  pemeriksaan  aktivitas  antioksidan dengan metoda DPPH (1,1-difenil-2-
pikrilhidrazil). Metoda ini dipilih karena pengukurannya  sederhana,  mudah,  cepat  dan peka  serta  membutuhkan  sedikit  sampel  [9].
DPPH adalah radikal bebas yang diperdagangkan, stabil pada suhu kamar dengan bentuk serbuk violet kehitaman, cepat teroksidasi oleh  temperatur,  cahaya  dan  udara, mudah  larut dalam etanol, dengan BM 394,3 gr/mol [11]. Oleh karena  itu,  pengerjaan  pemeriksaan  aktivitas antioksidan  harus  dilakukan  dalam  ruangan gelap  dan  peralatan  yang  digunakan  harus dilapisi dengan aluminium foil.
Larutan  DPPH  50 µ M  dalam  metanol berwarna  ungu  tua  dengan  profil  spektra  sinar tampak  (360-720  nm)  seperti  terlihat  pada Gambar  11.  Adanya  delokalisasi  elektron  di seluruh  bagian  molekul  DPPH  memberikan warna  ungu  tua  (dalam  metanol),  yang  ditandai dengan  adanya  pita  absorpsi  di  sekitar  panjang gelombang 515 nm [12].
Uji  aktivitas  penangkapan  radikal  DPPH oleh  ekstrak  uji  berdasarkan  prinsip  penurunan intensitas  warna  ungu  DPPH  yang  sebanding dengan  penurunan  konsentrasi  DPPH.  Senyawa uji penangkap radikal akan memberikan hidrogen kepada  DPPH  membentuk  DPPH-H  tereduksi yang berwarna kuning. Senyawa antiradikal yang telah  menyumbangkan  H  radikal  berubah menjadi radikal baru yang stabil [13].
Aktivitas  antioksidan  sampel  ditentukan oleh besarnya hambatan DPPH melalui perhitungan  persentase  inhibisi.  Semakin  besar persentase  inhibisi  sampel  maka  semakin  tinggi aktivitas  antioksidannya  [14].  Dari  pengujian aktivitas  antioksidan  ekstrak  etil  asetat  diperoleh persen  inhibisi  pada  konsentrasi  1000  ppm adalah  65,60  %.  Hasil  ini  menunjukkan  ekstrak
etil  asetat  memiliki  potensi  aktivitas  antioksidan akan tetapi aktivitasnya lebih rendah dibandingkan  dengan  vitamin  C    96,74%.  Oleh karena  sampel  masih  dalam  bentuk  ekstrak sehingga  peneliti  belum  dapat  menentukan senyawa  apa  yang  berperan  terhadap  akitvitas tersebut  karena  pada  ekstrak  masih  banyak terdapat senyawa-senyawa kimia. Untuk menjawab hal tersebut harus dilakukan pemurnian  dengan  jalan  isolasi  senyawa  murni. Semakin  kecil  nilai  IC 50 maka  semakin  besar aktivitas antioksidannya. Menurut literatur, sampel  yang  mempunyai  aktifitas  antioksidan kuat memiliki IC 50 kurang dari 200 µg/ml [9].
Tabel 2. Nilai-nilai IC 50 ekstrak Etil Asetat daun nangka dan vitamin C.
sampel persamaan regresi linear IC 50 (ppm) Ekstrak Etil Asetat Y  =  0,062X  + 1,717 R 2 = 0,989 778,76 Vitamin C Y  =  0,468X  + 9,590 R 2 = 0,950 86,35
Hasil  analisis  nilai  IC 50 dari  ekstrak metanol  daun  nangka  adalah  778,76  ppm. Sedangkan  vitamin  C  sebagai  pembanding memiliki  IC 50 sebesar  86,35  ppm.  Berdasarkan hasil  IC 50 tersebut  diketahui  ekstrak  etil  asetat daun  nangka  memiliki  aktivitas  antioksidan sembilan  kali  lebih  kecil  dibandingkan  aktivitas antioksidan  vitamin  C  yang  telah  terbukti terhadap  penghambatan  radikal  bebas.  Aktivitas antioksidan  ekstrak  etil  asetat  daun  nangka  ini termasuk kategori lemah.
Dari  hasil  uji  fitokimia  daun  nangka, senyawa yang mengkonstribusi akitivitas antioksidan  berasal  dari  golongan  saponin  dan steroid. Aktivitas antioksidan terutama disumbangkan  oleh  senyawa  golongan  fenolik seperti  flavonoid,  asam-asam  fenolat  dan  fenol diterpen  [13].  Berbagai  senyawa    yang  memiliki aktivitas  antioksidan  diantaranya  adalah  karoten dan vitamin C serta senyawa polifenol epikatekin, katekin,  galotekin,  epigalokatekin,  quersetin, quersitrin, isoquersitrin, mirisitrin dan asam galat. Senyawa  karotenoid  larut  lemak,vitamin  C  larut air,  vitamin  E  larut  lemak.  Tingkat  efisiensi antioksidan  dari  flavonoid  tergantung  pada tingkat hidroksilasi. Aktivitas antioksidan flavonoid  akan  turun  jika  flavonoid  tersubtitusi dengan gula.

## Kesimpulan
1. Ekstrak Etil Asetat Daun Nangka mengandung senyawa saponin dan steroid.
2.  Aktivitas  antioksidan  ekstrak  etil  asetat  daun nangka  (IC 50 778,76  ppm)  terhadap  radikal DPPH  lebih  kecil  dibandingkan  Vitamin  C (IC 50 = 86,35 ppm).

## Saran
Agar  dilakukan  uji  aktivitas  antioksidan pada  ekstrak  etanol  daun  nangka  dan  dilakukan isolasi senyawa kimia untuk mengetahui senyawa  apa  yang  mengkonstribusi  aktivitas tersebut.

## Ucapan Terimakasih
Terimakasih  diucapkan  kepada  Universitas Muhammadiyah  Riau  melalui  LP2M  yang  telah membiayai  penelitian  ini  dalam  Skim  Hibah Dosen Pemula dengan
kontrak
No.806/010/KM/2013.

## Daftar Pustaka
[1].    H.  Kikuzaki,  M.  Hisamoto,  K.  Hirose,  K. Akiyama,  dan  H.  Taniguchi,  J.Agric.Food Chem, 50 (2002) pp. 2161-2168.
[2].  P.  Sibuea,  Antioksidan  Senyawa  Ajaib Penangkal  Penuaan  Dini,  Sinar  Harapan, Yogyakarta, 2003.
[3].     B. Halliwell dan J. M. C. Gutteridge, Free Radical in Biology and Medicine, Oxford University Press, New York, 2000.
[4].   A. Prakash, Analithycal Progress, 19 (2001) 2, pp 1 – 4.
[5].   B. Frei, Natural Antioxidant in Human Health and  Disease,  Academic  Press,  San  Diego, California, 1994.
[6].  R.  Trevor,  Kandungan  Organik  Tumbuhan, ed.6, diterjemahkan oleh Kosasih,
Padmawinata, ITB, Bandung, 1995.
[7].  K.  Heyne,  Tumbuhan  Berguna  Indonesia, Jilid  II,  Badan  Litbang  Kehutanan,  Jakarta, 1987.
[8].  T.  Ersam,  Senyawa  Kimia  Makromolekul beberapa  Tumbuhan  Artocarpus  Hutan tropika  Sumatera  Barat,  Disertasi  ITB, Bandung, 2001.
[9].    E.,  Hanani,  A.  Mun’im,  dan  R.  Sekarini, Majalah Ilmu Kefarmasian, II (2005) 3.
[10].  R.  Andayani,  Y.  Lisawati,  dan  Maimunah, Jurnal  Sains  dan  Teknologi  Farmasi,  Vol 13 (2008) (1).
[11].  G.  A.  Corrdel,  A.  D.  Kinghom,  dan  J.  M Pezzuto,  Sepration,  Structure  Elucidation and Bioassay of Citotoxic Natural Product, CRC Press, Florida, 1993.
[12].    P.  Molyneux,    J.Sci.  Technol.,  26  (2004) (2), pp 211-219.
[13].    S.  Nurwaini,  M.  Da’i,  dan  N.  Robithoh  N, Pharmacon, 6 (2005) (2).
[14].    M.  Latief,  S.  Soetardjo,  H.  Bahti,  dan Dachriyanus, Pharmacy, 05 (2007) (02).