## KUALITAS SPERMATOZOA TIKUS PUTIH JANTAN GALUR
WISTAR ( Rattus norvegicus L.) SETELAH PEMBERIAN EKSTRAK
ETANOL DAUN SIRIH ( Piper Betle L.)
Cynthia Wuwungan 1) , Edwin de Queljoe 1) , Defny S. Wewengkang 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Family  planning  (KB)  programs  implemented  by  the  government  are  still  not  able  to  run optimally due to the very low participation of men in contraception. This is due to the unavailability of  family  planning  facilities,  which  are  completely  safe  and  comfortable  for  men.  Betel  leaf  (Piper betle L.) contains alkaloids, flavonoids, triterpenoids or steroids, saponins, and terpenes, which can be  benefited  as  natural  antifertility  drugs.  The  purpose  of  this  study  was  to  test  the  quality  of spermatozoa of male white rats wistar strain after giving ethanol extract of betel leaf. This research is experimental with complete randomized design. The subjects were 24 male white rats divided into 4 groups,  Group  1  was  not  treated  and  act  as  negative  control  and  Group  2-4  were  treated  with different  doses  of  200,  400  and  800  mg,  respectively.  The  treatment  was  performed  for  50  days according  to  the  spermatogenesis  cycle.  Spermatozoa  quality  measurements  include  motility, spermatozoa and morphology. The results showed that giving of betel leaf extract had an influence on the quality of spermatozoa. Based on the results of this study can be concluded that the provision of ethanol extract of betel leaves leads to decreased of spermatozoa quality.
Keywords :  Quality  of  spermatozoa,  antifertility,  betel  leaf  (Piper  betle  L.),  white  rat  (Rattus norvegicus L.).

## ABSTRAK
Program  keluarga  berencana  (KB)  yang  dilaksanakan  oleh  pemerintah  masih  belum  dapat berjalan optimal akibat keikutsertaan pria dalam ber-KB masih sangat rendah. Hal ini disebabkan oleh belum tersedianya sarana KB yang benar-benar aman dan nyaman bagi pria. Daun sirih ( Piper betle L.)  mengandung  alkaloid,  flavonoid,  triterpenoid  atau  steroid,  saponin,  dan  terpen  bisa  digunakan sebagai obat antifertilitas alami. Tujuan dari penelitian ini untuk  menguji kualitas spermatozoa tikus putih  jantan  galur  wistar  setelah  pemberian  ekstrak  etanol  daun  Sirih.  Penelitian  ini  bersifat eksperimental dengan rancangan acak lengkap. Subyek penelitian sebanyak 24 ekor tikus putih jantan galur wistar yang terbagi menjadi 4, Kelompok 1 tidak diberi perlakuan dan sebagai kontrol negatif dan  Kelompok  2-4  diberi  perlakuan  dengan  dosis  yang  berbeda-beda  yaitu    200,  400  dan  800  mg. Perlakuan dilakukan selama 50 hari sesuai siklus spermatogenesis. Pengukuran kualitas spermatozoa meliputi  motilitas,  jumlah  spermatozoa  dan  morfologi.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa pemberian  ektrak  daun  sirih  memiliki  pengaruh  terhadap  kualitas  spermatozoa.  Berdasarkan  hasil penelitian ini dapat disimpulkan bahwa pemberian ekstrak etanol daun sirih menyebabkan penurunan kualitas spermatozoa.
Kata  kunci :  Kualitas  spermatozoa,  antifertilitas,  Daun  Sirih  ( Piper  betle L.),  Tikus  putih  ( Rattus norvegicus L.)

## PENDAHULUAN
Kepadatan  penduduk  di  Indonesia merupakan  salah  satu  permasalahan  yang dihadapi  oleh  pemerintah.  Peningkatan jumlah
penduduk menunjukkan permasalahan yang mengkhawatirkan, karena tidak diimbangi dengan peningkatan kesejahteraan. Pertambahan jumlah penduduk  tidak  saja  mempersulit  usaha peningkatan  dan  pemerataan  kesejahteraan rakyat dibidang  pangan,  tetapi juga lapangan  kerja,  pendidikan,  kesehatan  dan perumahan (Hardjowijoto, 1992).
Program  keluarga  berencana  (KB) yang  dilaksanakan  oleh  pemerintah  masih belum  dapat  berjalan  optimal  akibat keikutsertaan  pria  dalam  ber-KB  masih sangat  rendah.  Hal  ini  disebabkan  oleh belum  tersedianya  sarana  KB  yang  benar- benar  aman  dan  nyaman  bagi  pria.  Upaya peningkatan  keikutsertaan  pria  dalam  ber KB perlu dilakukan melalui penelitian obat antifertilitas  yang  dapat  digunakan  oleh kaum  pria.  Oleh  karena  itu,  penelitian yang  bertujuan  untuk  eksplorasi  bahan alam berasal dari tanaman yang berkhasiat sebagai antifertilitas pria hendaknya mendapat  dukungan  dana  dari  pemerintah (Rina, 2014).
Sirih  adalah  tanaman  yang  tumbuh subur di daerah tropis dan telah digunakan sejak zaman dahulu sebagai tanaman obat. Berbagai  penelitian  telah  dilakukan  untuk mengeksplorasi  potensi  tanaman  ini,  dari beberapa  penelitian  dilaporkan  bahwa tanaman  ini  bermanfaat  sebagai  antifungi, antibakteri,  antioksidan,  antiinflamasi  dan antifertilitas (Moeljanto, Mulyono, 2003).
Hal  yang  melatarbelakangi  peneliti untuk melakukan penelitian dengan menggunakan  ekstrak  etanol  daun  Sirih ( Piper  betle L.)  adalah  untuk  melihat kualitas  spermatozoa.  Berbagai  penelitian tentang  daun  Sirih  ( Piper  betle L.)  telah
dilakukan  dan  untuk  penelitian  tentang kualitas  spermatozoa  setelah    pemberian ekstrak daun sirih ( Piper betle L.) peneliti hanya  menemukan  satu  jurnal  mengenai penelitian tersebut dengan ekstraksi menggunakan  aquades.  Oleh  karena  itu, peneliti  tertarik  melakukan  penelitian kualitas  spermatozoa  setelah    pemberian ekstrak  etanol  daun  sirih  ( Piper  betle L.) yang  mencakup  motilitas  spermatozoa, jumlah spermatozoa, dan morfologi spermatozoa pada tikus jantan.
Daun  Sirih  hijau  ( Piper  betle L.) mengandung  4,2%  minyak  atsiri  yang komponen  utamanya  terdiri  dari bethel phenol dan beberapa derivatnya diantaranya Euganol  allypyrocatechine
26.8  –  42.5%, Cineol 2.4  –  4.8%, methyl euganol 4.2  –  15.8%, Caryophyllen ( Siskuiterpen )  3  –  9.8%, hidroksi  kavikol , kavikol 7.2 – 16.7%, Kavibetol 2.7 – 6.2%, estragol , ilypyrokatekol 0 –  9.6%,
karvakol 2.2  –  5.6%, alkaloid , flavonoid, triterpenoid  atau  steroid,  saponin,  terpen, fenilpropan, terpinen, diastase 0.8 – 1.8% dan tannin 1  –  1.3%  (  Sastroamidjojo, 2001).

## TIKUS PUTIH JANTAN GALUR WISTAR
Tikus  adalah  salah  satu  hewan penelitian  yang  paling  banyak  digunakan dalam  fisiologi  reproduksi.  Testis  dari tikus  jantan  terdapat  pada  dua  kantung skortum  yang  dipisahkan,  oleh  membran tipis  yang  terletak  antara  anus  dan preputium (Suckow, 2006).
Spermatozoa pada tikus lebih panjang  dibandingkan  dengan  spesies mamalia  lainnya,  termasuk  manusia  dan hewan  domestik  lainnya  dan  biasa panjangnya  sekitar  150-200  mm.  Kepala sperma  pada  tikus  berbentuk  kail  hal  ini
sama  seperti  hewan  pengerat  lainnya (Krinke, 2000).

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini dilakukan di Laboratorium  Patologi  Anatomi  Fakultas
Kedokteran  Universitas  Sam  Ratulangi Manado  dan  Laboratorium  Penelitian Program Studi Farmasi
Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam Universitas  Sam  Ratulangi  Manado  yang dimulai  pada    Agustus  2016  –  Januari 2017. Jenis penelitian ini ialah eksperimen laboratorium  menggunakan  tikus  putih jantan  galur  wistar  ( Rattus  norvegicus L.) berjumlah  24  ekor  yang  dibagi  dalam  4 kelompok. Masing-masing kelompok terdapat  6  ekor  tikus.  Kelompok  1  tidak diberi  perlakuan  dan  sebagai  kontrol. Kelompok  2-4  diberi  perlakuan  dengan dosis  yang  berbeda-beda  yaitu  200,  400 dan  800  mg.  Dosis  terlebih  dahulu dikonversikan dengan menggunakan faktor konversi  Laurence.  Kelompok  I  :  Tikus putih  tidak  diberikan  perlakuan  (Kontrol); Kelompok  II  :  Tikus  putih  diberi  dosis  I (200 mg dikonversikan dalam  dosis  tikus menjadi  3,6  mg)  ekstrak  daun  sirih sebanyak 1 mL setiap hari;  Kelompok  III: Tikus  putih  diberi  dosis  II  (400  mg dikonversikan  dalam  dosis    tikus  menjadi 7,2 mg) ekstrak daun sirih sebanyak 1 mL setiap hari; dan Kelompok IV : Tikus putih diberi  dosis  III  (800  mg  dikonversikan dalam  dosis  tikus  menjadi  14,4  mg) ekstrak  daun  sirih  sebanyak  1  mL  setiap hari.
Daun  Sirih  yang  digunakan  diambil di  Perumahan  Minanga,  Minahasa.  Daun sirih  sebanyak  1500  g  berat  basah  dicuci bersih  dengan  air  mengalir,  ditiriskan  dan ditimbang  berat  basahnya.  Daun  yang telah dibersihkan dikering anginkan didalam  ruangan  selama  5  hari.  Sampel
kering  kemudian  dihaluskan  mengunakan blender  dan  diayak  mengunakan  ayakan mesh 200 dan didapatkan serbuk simplisia halus.  Daun  sirih  yang  telah  menjadi serbuk simplisia ditimbang dan dimasukkan  dalam  beker  gelas  kemudian diekstraksi menggunakan metode maserasi dengan  cara  serbuk  simplisia  direndam dalam pelarut etanol 96%, proses maserasi menggunakan  etanol  sebanyak  2500  mL dan dibiarkan selama 3  hari dengan 3 kali penggantian  pelarut.  kemudian  disaring menggunakan  kertas  saring.  Filtrat  yang peroleh  dievporasi  menggunakan  rotary evaporator  dan  diperoleh  ekstrak  kental sebanyak 61,12 g.
Pemberian perlakuan pada penelitian  ini  dilakukan  selama  50  hari sesuai  dengan  siklus  spermatogenesis tikus. Masing-masing konsentrasi menggunakan  6  hewan  uji.  Ekstrak  daun sirih  diberikan  sesuai  dosis  perlakuan secara  oral  menggunakan  sonde  dengan dispossible  syringe satu  hari  sekali sebanyak  1  mL  untuk  satu  ekor  tikus. Setelah  50  hari,  masing-masing  hewan  uji di korbankan untuk diambil organ testisnya.  Tikus  dibius  dengan  eter, kemudian  dibedah.  Diambil  testis  dan kauda  epididimisnya.  Tiap  tikus  diambil testis kanan dan kiri, masing-masing testis dibuat  tiga  preparat  yaitu  preparat  untuk motilitas,  preparat  untuk  jumlah,  dan preparat untuk morfologi spermatozoa.
Pengukuran Parameter a. Motilitas Spermatozoa
Pemeriksaaan motilitas spermatozoa
dilakukan dengan segera ketika spermatozoa diambil dari kauda epididimis.  Dengan  meneteskan  setetes sperma pada gelas obyek. Tetesan diusahakan  sama  besarnya  untuk  setiap pemeriksaan. Pengamatan dilakukan
dibawah  mikroskop  dengan  perbesaran 400 kali.
b. Jumlah Spermatozoa
Perhitungan jumlah spermatozoa dilakukan  dengan  cara  memipet  sperma menggunakan  pipet  eritrosit  sampai  skala 0,5.Kemudian  sperma  diencerkan  dengan larutan  pengencer  sampai  tanda  101 (Pengenceran 200x)  lalu dikocok menurut angka  8  selama  15-20  menit.  Kemudian buang 3 tetes pertama, sebelum diteteskan ke  kamar  hitung  Neubauer  improved. Selanjutnya  hitung  jumlah  spermatozoa. Pengamatan dilakukan dibawah mikroskop dengan perbesaran 100 kali.
c. Morfologi Spermatozoa Morfologi spermatozoa dapat diamati pada sediaan  apusan  yang  dibuat  dengan  cara sperma dikering anginkan pada objek gelas kemudian  difiksasi  dengan  dicelupkan  ke dalam  larutan  metanol  selama  5  menit kemudian  di  keringkan.  Setelah  itu dicelupkan  ke  dalam  larutan  safranin  1% selama  5  menit.  Kemudian  dibilas  dengan aquades dan dikering anginkan.
Hasil  percobaan  yang  dianalisis untuk melihat perbedaan yang nyata pada,
motilitas spermatozoa, jumlah spermatozoa,  dan  morfologi  spermatozoa dari  masing-masing  kelompok  perlakuan. Analisis  data  menggunakan  SPSS  yang meliputi  uji  normalitas,  uji  homogenitas, uji  parametrik  ( one-way ANOVA)  atau non parametrik (Kruskal Walis).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
a. Motilitas Spermatozoa Data hasil perhitungan motilitas spermatozoa  pada  tikus  dihitung  dari preparat hewan coba. Perhitungan preparat dilakukan  dengan  menentukan  jumlah spermatozoa  yang  motil  dan  non  motil pada saat menghitung kepadatan spermatozoa,  dan  dinyatakan  dalam  %. Kemudian dihitung rerata motilitas spermatozoa  setiap  dalam  tiap  kelompok. Berikut hasil perhitungan motilitas spermatozoa pada setiap kelompok perlakuan. Tabel 2. Nilai Rata-Rata Motilitas Spermatozoa Tikus Dari Setiap Perlakuan Kelompok Perlakuan Motilitas Spermatozoa (%) Kontrol 53.33 PS 2 30.83 PS 4 30 PS 8 20 Data perhitungan motilitas spermatozoa  tersebut  kemudian  diolah secara  statistik  dengan  menggunakan  uji parametrik  ( one-way ANOVA)  untuk
melihat  apakah  data  rata-rata  hasil  yang didapatkan    terdapat    perbedaan  yang bermakna  antara  kelompok  perlakuan terhadap kelompok kontrol.

## ANOVA
Tabel 3. One Way ANOVA Hasil Perhitungan Motilitas Sum of Squares        df           Mean Square               F
Sig. Between Groups                  3569.792          3                1189.931 1.859               .169
Within Groups                    12804.167         20                 640.208
Total                                   16373.958         23
Dari  hasil  pengujian  ANOVA  pada perhitungan motilitas
spermatozoa menunjukkan  nilai  Sig  0.169  (  p  >  0.05) artinya  tidak  ada  perbedaan  secara statistik.  Tidak  ada  perbedaan  secara statistik  menunjukkan  bahwa  variasi  atau keragaman  diantara  kontrol,  PS 2, PS 4 ,  dan PS 8 .  Sehingga  dari  hasil  uji  statistik  ini, tidak  ada  perbedaan  yang  bermakna  pada motilitas spermatozoa yang diberi perlakuan  terhadap  motilitas  spermatozoa kontrol.
b. Jumlah Spermatozoa
Data hasil perhitungan jumlah spermatozoa  pada  tikus  dihitung  dari preparat hewan coba. Perhitungan preparat dilakukan  dengan  menggunakan  kamar hitung  neubauer  improved.  Kemudian dihitung  rerata  jumlah  spermatozoa  setiap dalam  tiap  kelompok.  Berikut  hasil perhitungan  motilitas  spermatozoa  pada tikus  kelompok  kontrol,  kelompok  PS 2 , kelompok  PS 4 ,  dan  kelompok  PS 8 dapat dilihat pada Tabel 4. Tabel 4. Nilai Rata – Rata Jumlah Spermatozoa Tikus Dari Setiap Perlakuan Kelompok Perlakuan Jumlah Spermatozoa Kontrol 156.33 PS 2 119.67 PS 4 128 PS 8 85.33
Dilihat  dari  perubahan  penurunan jumlah spermatozoa pada tikus wistar yang mendapat  perlakuan  tidak  begitu  berbeda, bila dibandingkan dengan kelompok kontrol,  untuk  itu    data  penurunan  jumlah spermatozoa  yang  didapat  belum  bisa
memberikan  hasil  yang  pasti,  maka  perlu dilakukan  pengujian  secara  statistik  untuk melihat  apakah  terdapat  perbedaan  yang bermakna  antara  kelompok  perlakuan terhadap kelompok kontrol.

## ANOVA
Tabel 5. One Way ANOVA Hasil Perhitungan Jumlah Spermatozoa Sum of Squares                Df       Mean Square
F              Sig. Between Groups                15385.333                  3             5128.444 .659              .587 Within Groups                  155720.000                20             7786.000 Total                                 171105.333                23 Pada uji parametrik ( One Way
ANOVA )  diperoleh  hasil  bahwa  data  yang diperoleh dapat dilihat dari nilai Sig 0,587 (  p  >  0.05)  artinya  tidak  ada  perbedaan secara statistik. Sehingga dari hasil uji ini, tidak ada perbedaan secara bermakna pada
jumlah spermatozoa yang diberi perlakuan dengan jumlah spermatozoa kontrol.
c. Motilitas Spermatozoa
Data hasil pengamatan morfologi spermatozoa pada tikus kelompok kontrol, perlakuan  PS 2 ,  perlakuan  PS 4 ,  dan perlakuan PS 8 dapat dilihat pada Tabel 6.
Tabel 6. Nilai Rata – Rata Morfologi Spermatozoa Tikus Dari Setiap Perlakuan Kelompok Perlakuan Morfologi Spermatozoa (%) Kontrol 61.67 PS 2 35.83 PS 4 25 PS 8 26.67 Data pengamatan tersebut
kemudian diolah secara statistik dengan uji parametrik  ( One  Way ANOVA).  Hal  ini dilihat  dari  perubahan  penurunan  jumlah spermatozoa  pada  tikus  wistar  pada kelompok  perlakuan  tidak  begitu  berbeda, bila dibandingkan dengan kelompok
kontrol,  untuk  itu  data  penurunan  jumlah spermatozoa  yang  didapat  belum  bisa memberikan  hasil  yang  pasti,  maka  perlu dilakukan  pengujian  secara  statistik  untuk melihat  apakah  terdapat  perbedaan  yang bermakna  antara  kelompok  perlakuan terhadap kelompok kontrol.

## ANOVA
Tabel 7. One Way ANOVA Hasil Perhitungan Morfologi Spermatozoa
Sum of Squares                 df       Mean Square
F              Sig. Between Groups                   5161.458                  3             1720.486 3.048              .052 Within Groups                     11287.500                20               564.375 Total                                    16448.958                23 Hasil  analisis  uji  parametrik  ( One Way ANOVA ) menunjukkan hal yang sama seperti pada motilitas dan jumlah spermatozoa  yaitu  penurunan  morfologi spermatozoa  yang  terjadi  tidak  berbeda nyata dengan hasil 0.052 ( p > 0.05), baik antara kelompok kontrol dengan kelompok perlakuan.

## PEMBAHASAN
Spermatozoa  yang  dilepaskan  dari testis  masuk  ke  dalam  epididimis  belum dapat dikatakan matang oleh karena belum motil dan belum dapat dipergunakan untuk membuahi ovum (fertil). Proses pemasakan  spermatozoa  terjadi  dalam epididimis  melalui  tahap  konsentrasi  dan pematangan.
Motilitas  spermatozoa  tikus  dalam penelitian ini rata-rata mengalami penurunan  dibandingkan  dengan  kontrol. Hal  ini  disebabkan  oleh  kandungan  pada daun  Sirih  yaitu alkaloid,  flavonoid,
triterpenoid  atau  steroid,  saponin,  terpen, fenilpropan,  terpinen,  diastase  0.8  –  1.8% dan  tannin  1  –  1.3%  (  Sastroamidjojo, 2001).
Menurut Akbar (2010) senyawa antifertilitas  meliputi  senyawa  golongan steroid, alkaloid, isoflavonoid, triterpenoid dan  xanton.  Sumastuti  (1994)  dalam penelitiannya mengatakan golongan terpen dan  minyak  atsiri  bekerjanya  tidak  pada proses  spermatogenesisnya,  tetapi  pada proses transportasi sperma dapat menggumpalkan sperma sehingga menurunkan  motilitas  dan  daya  hidup sperma,  akibatnya  sperma  tidak  dapat mencapai  sel  telur  dan  pembuahan  dapat tercegah. Hal  ini  yang  dapat  menjadi penyebab
menurunnya motilitas spermatozoa. Parameter selanjutnya adalah perhitungan  jumlah  spermatozoa  dan morfologi  spermatozoa.  Hasil  perhitungan menunjukkan bahwa terjadinya penurunan
namun  jika  diuji  statistik  tidak  berbeda nyata  (p  >  0.05).  Penurunan  ini  terjadi dikarenakan kandungan senyawa dari daun Sirih yaitu alkaloid, flavonoid, triterpenoid atau  steroid,  saponin,  terpen,  fenilpropan, terpinen, diastase 0.8 –  1.8% dan tannin 1 –  1.3%  (  Sastroamidjojo,  2001) .  Menurut Kellis  dan  Vickery  (1984)  mengatakan bahwa,  flavonoid  yang  disintesis  oleh hampir  seluruh  dunia  tumbuhan,  dapat menghambat  enzim  aromatase.  Dengan dihambatnya  enzim  tersebut  yaitu  yang berfungsi mengkatalisis konversi androgen menjadi  estrogen,  maka  jumlah  androgen (testosteron)  akan  meningkat.  Tingginya konsentrasi testosteron akan berefek umpan  balik  negatif  ke  hipofisis  tidak melepaskan  FSH  (Follicle  Stimulating Hormone)  dan  atau  LH  (Luteinizing Hormone); dengan demikian akan menghambat spermatogenesis.
Saponin  yang  terdapat  dalam  ekstrak daun  belimbing  waluh  (Nandari,  2006), ekstrak  buah  pare  (Muchtaromah,  2009) serta  ekstrak  daun  pudding  (Elya et  al , 2011)  dilaporakan  dapat  meningkatkan kadar testosterone dalam darah. Meningkatnya kadar testosterone menyebabkan terjadinya mekanisme umpan  balik  terhadap  hipotalamus  dan hipofisis.  Testosteron  akan  menghambat hipotalamus  untuk  menghasilkan  GnRh (Gonadotropin  Releasing  Hormone)  dan menghambat  hipofisis  anterior  untuk menghasilkan LH, penurunan LH menyebabkan menurunnya kadar
testosterone  dan  penurunan  testosterone dapat menyebabkan atropi epididimis.
Dari  penjelasan  diatas,  terlihat  bahwa senyawa-senyawa  yang  terkandung  pada ekstrak daun sirih berpengaruh baik secara langsung  maupun  tidak  langsung  terhadap keseimbangan hormonal  tubuh, khususnya yang bertanggung jawab dalam
menstimulasi proses spermatogenesis yaitu testosteron,  Luteinizing  Hormone,  Follicle Stimulating  Hormone,  estrogren  dan Growth Hormone (Guyton, Hall, 2006).
Ketidakseimbangan  hormon-hormon ini  dapat  menurunkan  bahkan  dapat membuat sampai terjadinya proses spermatogenesis, sehingga infertilitas (Guyton,  Hall,  2006).  Terganggunya proses spermatogenesis juga akan berpengaruh  terhadap  motilitas,  jumlah dan morfolgi spermatozoa.
Dari  hasil  dan  pembahasan  diatas, dapat  dilihat  bahwa  ekstrak  etanol  daun sirih    berpotensi  sebagai  agen  kontrasepsi pria  karena  dapat  menekan  produksi sperma  dan  dapat  menurunkan  kualitas dari spermatozoa.

## KESIMPULAN
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan  maka  dapat  disimpulkan  bahwa pemberian ekstrak etanol daun Sirih ( Piper betle L.)  memiliki  pengaruh  terhadap motilitas, morfologi, dan jumlah spermatozoa  dari  tikus  putih  jantan  galur wistar  ( Rattus  norvegicus L.)  meskipun secara  statistik  dengan  menggunakan  uji One way ANOVA, hasil  pengujian tersebut menunjukkan tidak ada perbedaan bermakna  pada  taraf  uji  0,05  antara kelompok  kontrol,  dosis  PS2,  dosis  PS4 dan dosis PS8.

## DAFTAR PUSTAKA
Akbar  B.  2010. Tumbuhan  Dengan Kandungan  Senyawa  Aktif  Yang
Berpotensi Sebagai Bahan Antifertilitas . Adabia Press,
Jakarta.
Elya B., Kusmana D., Krinalawaty N. 2010. Kualitas Spermatozoa dari
Tanaman Polycias Guifoylei.
Makara Sains. 14 (1): 51-56
Guyton  AC.,  Hall  J  E.  2006. Textbook  of Medical  Physiology  11 th Edition .
Elsevier, Philadelphia.
Hardjowijoto S. 1992. Kontrasepsi Mantap Pria . Seminar KB Mutakhir, Surabaya.
Ilyas S. 2007. Azoospermia dan Pemulihannya  Melalui  Regulasi Apoptosis  Sel  Spermatogenik Tikus (Rattus  sp)  Pada  Penyuntikan Kombinasi TU & MPA . Disertasi Krinke  G.  2000. The  Laboratory  Rat . Academic Press, San Diego Muchtaromah  B.  2009. Potensi  Ekstrak
Buah  Pare  (Momordica  charantia
L) Terhadap Spermatogenesis
Mencit  (Mus  musculus) .  Berk.
Penel.  Hayati  Edisi  Khusus. 3D (57-60) .
Moeljanto  RD.,  Mulyono.  2003. Khasiat
&  manfaat  daun  sirih  (obat mujarab  dari  masa  ke  masa) .
Agromedia Pustaka, Jakarta
Nandari  R.  2006. Pengaruh  Pemberian Ekstrak Belimbing Wuluh
(Averrhoa  bilimbi  L.)  Terhadap Kadar  Testosteron  Bebas  dan Libido  Tikus  Jantan  Galur  Wistar . Prodi  Magister  Ilmu  Biomedik, UNDIP.
Novi  P,  Siti  M,  M.  Amrun.  2015.
Pengaruh  Ekstrak  Metanol,  Fraksi N-Heksana dan Fraksi Metanol Biji Pepaya (Carica papaya L.) terhadap Motilitas  Spermatozoa  Tikus. E- Jurnal  Pustaka  Kesehatan . 3  (1)  : 39-43.
Rina  D.  2014.  Potensi  Antifertilitas Ekstrak  Teh  Hitam  Pada  Mencit ( Musmusculus L.)  Jantan. Jurnal
Sainstek . 6 (2) : 181-188.
Sastroamidjojo, S. A. Obat Asli Indonesia .
PT. Dian Rakyat, Jakarta.
Suckow,  M.  A.,  Steven,  H.  W.,  Craig,  L. F.  2006. The  Laboratory  Rat . Academic Press, London.