MINYAK NILAM ( Patchouli alcohol ) SEBAGAI ANTIOKSIDAN DENGAN METODE DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil)
Agus Suprijono 1) , Yoel Gunawan 1) , Ariani Hesti Wulan 1)
1) Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Yayasan Pharmasi Semarang

## INTISARI
Seiring dengan makin derasnya arus informasi dan globalisasi, menyebabkan  gaya hidup masyarakat  juga  menjadi  lebih  modern  dan  lebih  maju.  Tetapi  ini  tidak  dibarengi  dengan meningkatnya  kualitas  kesehatan  masyarakat.  Gaya  hidup  yang  seperti  ini  dapat  mengakibatkan terjadinya  paparan  degna  radikal  bebas.  Antioksidan  adalah  senyawa  yang  mampu  menghambat oksidasi  dari  suatu  radikal  bebas,  sehingga  akan  membentuk  senyawa  yang  lebih  stabil.  Minyak nilam  ( Patchouli  oil )  memiliki  kandungan  patchouli  alcohol  yang  memiliki  aktivitas  sebagai antioksidan.  Tingkat  kualitas  minyak  nilam  ditentukan  oleh  kandungan  patchouli  alcohol didalamnya.  Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  membuktikan  aktivitas  antioksidan  dari minyak nilam dan mengetahui perbedaan aktivitasnya dengan baku BHT, serta untuk mengetahui konsentrasi  efektif yang  dinyatakan  dalam  nilai  EC 50 dengan  menggunakan  metode  DPPH. Pemeriksaan  dilakukan  dengan  menggunakan  larutan  uji  pada  konsentrasi  5%,  10%,  15%,  20% dan 25%. Proses untuk memperoleh minyak nilam dilakukan dengan cara melakukan destilasi uap pada herba nilam yang telah dikeringkan. Uji identifikasi untuk mengetahui kualitas dari minyak yang  dihasilkan  dengan  uji  KLT  untuk  mengetahui  aktivitas  antioksidan.  Dari  hasil  penelitian dapat  diketahui  bahwa  nilai  rata-rata  EC 50 untuk  sampel  minyak  nilam  adalah  sebesar  19,95%, sedangkan  untuk baku  BHT sebesar  11,93%.  Berdasarkan  hasil penelitian  tersebut, di  simpulkan bahwa ada aktivitas antioksidan dalam minyak nilam, dan terdapat perbedaan aktivitas antioksidan yang signifikan antara minyak nilam dengan baku BHT.
Kata kunci : minyak nilam, patchouli alcohol, antioksidan, DPPH

## ABSTRACT
Along with the rapid flow of information and globalization, led to the lifestyle of modern society  is  also  becoming  more  and  more  advanced.  But  this  was  not  accompanied  by  increased quality  of  public  health.  Lifestyle  such  as  this  may  result  in  exposure  to  free  radicals  degna. Antioxidants are compounds that can inhibit the oxidation of free radicals, so it will form a more stable compound. Oil Patchouli (Patchouli oil) contains patchouli alcohol which have antioxidant activity.  The  rate  is  determined  by  the  quality  of  patchouli  oil  patchouli  alcohol  content  therein. The  purpose  of  this  research  is  to  show  the  antioxidant  activity  of  patchouli  oil  and  standard determine  differences  in  activity  with  BHT,  as  well  as  to  determine  the  effective  concentration expressed  in  EC 50 values  by  using  DPPH  method.  The  examination  was  conducted  by  using  the test  solution  at  a  concentration  of  5%,  10%,  15%,  20%  and  25%.  The  process  to  obtain  the patchouli oil is done by means of steam distillation of the dried herb patchouli. Identification test to determine the quality of the oil produced by TLC test and also qualitative test to determine the antioxidant activity. From the research it can be seen that the average value of EC 50 for patchouli oil sample is equal to 19.95%, while 11.93% of standard BHT. Based on these results, concluded that  the  antioxidant  activity  in  patchouli  oil,  and  there  are  significant  differences  in  antioxidant activity between standard patchouli oil with BHT.
Keywords : patchouli oil, patchouli alcohol, anti-oxidant, DPPH.

## PENDAHULUAN
Seiring  dengan  makin  derasnya  arus informasi  dan  globalisasi,  menyebabkan gaya  hidup  masyarakat  juga  menjadi  lebih modern  dan  lebih  maju.  Tetapi  ini  tidak dibarengi  dengan  meningkatnya  kualitas kesehatan  masyarakat.  Gaya  hidup  modern yang  tidak  sehat  seperti  sering  keluar malam, mengkonsumsi minuman beralkohol, merokok dan juga mengonsumsi makanan  yang  tidak  sehat.  Hal  ini  apabila dibiarkan akan menimbulkan banyak penyakit  yang  berbahaya  seperti  hipertensi, kolesterol,  stroke  bahkan  penyakit  kanker
yang  banyak  disebabkan  oleh  polusi  dan radikal bebas (Chun dkk., 2003).
Radikal  bebas  adalah  atom  atau molekul  yang tidak stabil dan sangat reaktif karena mengandung satu atau lebih elektron tidak  berpasangan  pada  orbital  terluarnya. Radikal  bebas  bereaksi  dengan  molekul disekitarnya  agar  memperoleh  pasangan elektron. Reaksi ini akan berlangsung secara terus menerus dalam tubuh dapat menimbulkan  berbagai  penyakit  misalnya jantung,  kanker,  katarak,  serta  penyakit degeneratif  lainnya.  Radikal  bebas  dapat diatasi dengan konsumsi antioksidan ( Ellyta, 2004) . Antioksidan  dapat    diperoleh  dari makanan  yang  banyak  mengandung  vitamin C,  vitamin  E  dan  β-karoten  serta  senyawa fenolik.  Bahan  pangan  yang  dapat  menjadi sumber antioksidan alami, misalnya rempah- rempah,  coklat,  tomat,  papaya,  dan  jeruk. Selain itu juga bisa diperoleh dari pemanfaatan minyak nilam (Kikuzaki et al., 2002). Patchouli alcohol merupakan komponen golongan hidrokarbon beroksigen,  merupakan    senyawa  yang menentukan bau minyak nilam dan merupakan  komponen  yang  terbesar  di dalam  minyak  nilam.  Penelitian-penelitian tentang  minyak  nilam  menunjukkan  bahwa minyak nilam mempunyai beberapa aktivitas farmakologi  seperti  sifat  antiemetik,  anti bacterial dan anti fungal (Kiuchi et al ., 2004 and Zhao et al ., 2005 ).. Kandungan patchouli  alcohol dalam minyak  nilam  dapat  berfungsi  sebagai antioksidan.  Mekanisme  kerjanya  adalah dengan  cara  menyumbangkan  satu  atom hidrogen  (H)  kepada  suatu  radikal  bebas, sehingga  dapat  terbentuk  suatu  senyawa yang  sifatnya  lebih  stabil.  Radikal  bebas yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil). Digunakan  DPPH  karena  memiliki  sifat tidak stabil yang disebabkan oleh kekurangan  satu  atom  H,  sehingga  dapat distabilkan dengan adanya patchouli alcohol
yang terkandung dalam minyak nilam (Pratt, 1992).
Tujuan penelitian ini untuk mengetahui  adanya  aktivitas  antioksidan pada  minyak  nilam  dan  perbedaan  aktivitas antioksidan  dari  minyak  nilam  dan  baku BHT.  Selain  itu  juga  untuk  mengetahui
berapakah  konsentrasi  yang  paling  optimal bagi  minyak  nilam  untuk  menimbulkan aktivitas antioksidan.

## METODE PENELITIAN
Bahan  uji yang  digunakan  adalah:    herba tanaman  nilam  dari  Sumowono,  reagen DPPH    merk  Aldrich  dan  baku  Butil Hidroksi Toluene (BHT) yang diperoleh dari PT.Multi Kimia Raya.
Alat-alat yang  digunakan  antara  lain seperangkat  alat  destilasi  uap.  Alat  yang digunakan untuk uji aktivitas antiaging yaitu spektrofotometer  UV-Vis  Shimadzu,  neraca analitik Shimadzu, vortex health ® ,
mikropipet  socorex,  pipet  volume,  labu takar, kuvet.
Metode ekstraksi  : Pertama  dilakukan penimbangan  potongan  bahan  herba  nilam kering  yang  akan  digunakan  sebanyak  30 Kg.  Potongan  tanaman  nilam  sebanyak  30 Kg tersebut kemudian dimasukkan ke dalam destilator.  Tangki  air  di  isi  dengan menggunakan  air  dan  dilakukan  pemanasan terhadap  tangki  air.  Dilakukan  pemanasan terhadap tangki air, maka akan terbentuk uap air  yang  nantinya  uap  air  tersebut  akan mendestilasi potongan tanaman nilam didalam ekstraktor. Terjadi  proses destilasi, maka  aliran  uap  tersebut  akan  melalui kondensor  dan  akan  menghasilkan  destilat minyak nilam. Minyak nilam yang dihasilkan  itu  kemudian  akan  digunakan untuk  uji  kualitatif  meliputi;  uji  warna,  uji bobot  jenis,  uji  kelarutan  dalam  alkohol 90%,  uji  penentuan  indeks  bias  minyak nilam dan uji antioksidan.

## Uji Pendahuluan
Pemeriksaan dengan KLT
menggunakan  fase  diam  silika  gel  GF  254 dan fase gerak n-heksan : etil asetat (8,5:1,5) dan  baku  pembanding  BHT.  Hasil  KLT disemprot  dengan  penampak  bercak  DPPH akan  timbul  zona  bening.  Menunjukan kemampuan  sebagai  senyawa  antioksidan. Selain  itu,  juga  dilakukan  uji  karakteristik terhadap  minyak  nilam,  yaitu  uji  warna minyak  nilam,  uji  berat  jenis,  uji  kelarutan dalam alkohol 90% dan uji penentuan indeks bias minyak nilam.

## Cara pengukuran metode DPPH
Masing-masing  konsentrasi  larutan uji  baik  5%,  10%,  15%,  20%  dan  25%
dipipet  sebanyak  50  µL,  masukan  ke  dalam vial,  kemudian  tambahkan  4,0  mL  larutan
DPPH 0,1 mM. Diukur dengan spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang gelombang maksimal (520 nm). Analisis Data
Analisis data dilakukan dengan cara : data  yang  dikumpulkan  berupa  data  EC 50 (%).  Diuji Anava satu  jalan  untuk  metode
DPPH dengan program SPSS versi 16 .

## HASIL PENELITIAN
Minyak hasil proses destilasi tersebut kemudian diidentifikasi dengan menggunakan  acuan  SNI  06-2385-1998 yang  spesifik  membahas  tentang  minyak nilam. Adapun uji identifikasi yang dilakukan meliputi uji warna, uji bobot jenis,
uji  kelarutan  dalam  alcohol  90%  (1:10)  dan uji indeks bias.
Berdasarkan  uji  karakteristik  minyak nilam,  diperoleh  hasil  pengamatan  warna minyak  nilam  yaitu  kuning  muda.  Uji  berat jenis  dilakukan  sebanyak  tiga  kali  dengan hasil  pengamatan  berturut-turut  0,9611; 0,9522  dan  0,9530.  Berdasarkan  hasil  uji kelarutan dalam alkohol 90% diperoleh hasil pengujian  minyak  larut  dalam  alkohol  90%. Uji indeks bias juga dilakukan sebanyak tiga kali  dengan  hasil  pegamatan  berturut-turut 1,513;  1,5125  dan  1,5125.  Dari  hasil pengujian karakteristik minyak nilam, diperoleh kesimpulan bahwa kualitas
minyak nilam baik. Data hasil uji identifikasi minyak nilam secara keseluruhan  dapat  dilihat  pada  tabel  di bawah ini. Tabel I. Hasil Uji Identifikasi Minyak Nilam No Macam uji Replikasi Pengamatan Syarat (SNI 06- 2385-1998) Kesimpulan 1 Identifikasi warna I II III Kuning muda Kuning muda Kuning muda Kuning muda – Coklat tua Kualitas minyak baik 2 Berat jenis I II III 0,9611 0,9522 0,9530 0,943 – 0,983 Kualitas minyak baik 3 Uji kelarutan I II III Minyak larut Minyak larut Minyak larut Minyak larut Kualitas minyak baik 4 Uji indeks bias I II III 1,513 1,5125 1,5125 1,504 – 1,514 Kualitas minyak baik Identifikasi  awal  adanya  aktivitas antioksidan  dari  minyak  nilam  dilakukan dengan  menggunakan  metode  kromatografi lapis  tipis  (  KLT  ).    Pemeriksaan  dilakukan dengan menyemprotkan larutan DPPH 0,2% terhadap  lempeng  hasil  totolan  sampel minyak  dan  baku,  yang  telah  dielusikan dengan larutan n-heksan:etil asetat (8,5:1,5) . Pada senyawa yang mengandung antioksidan  akan  terjadi  suatu  zona  kuning dengan latar belakang warna ungu. Tabel II. Hasil Rf KLT Uji Aktivitas Antioksidan No Sampel Replikasi Rf Warna noda Simpulan 1 Baku BHT I II III 0,8875 0,8625 0,8750 Kuning Kuning Kuning Mempunyai aktivitas Antioksidan 2 Minyak nilam I II III 0,5875 0,6375 0,6250 Kuning Kuning Kuning Mempunyai aktivitas Antioksidan Hasil  KLT  menunjukkan  minyak nilam  mempunyai  aktivitas  antioksidan, karena  memberikan  noda  berwarna  kuning pada  lempeng  setelah  disemprot  dengan
larutan DPPH. Pemeriksaan aktivitas antioksidan  kemudian  dilanjutkan  dengan mengukur aktivitas antioksidan secara kuantitatif dengan menggunakan spektrofotometri. Dari hasil pengukuran panjang gelombang  larutan  uji  didapatkan  panjang gelombang  maksimal 520  nm,  selain menentukan  panjang  gelombang  maksimal, juga  dilakukan  penentuan operating  time
dengan  tujuan  agar  dapat  diketahui  pada
menit  keberapa  larutan  yang  diuji  konstan atau  mampu  menyerap  absorbansi  yang optimal. Operating time untuk minyak nilam dan juga BHT sama, yaitu 38 menit.
Baku  BHT  dipilih  untuk  digunakan sebagai  pembanding  karena  BHT  memiliki kemiripan struktur dengan struktur patchouli alcohol  yang  merupakan  kandungan  dari minyak  nilam.    Selain  itu  juga  memiliki mekanisme  kerja  sebagai  antioksidan  yang sama dengan patchouli alcohol .
Gambar 1. Reaksi DPPH dengan Patchouli Alcohol (Kikuzaki , 2002)
EC 50 adalah  konsentrasi  dari  minyak nilam  maupun  baku  BHT  yang  dapat menurunkan  kadar  radikal  bebas  di  dalam
tubuh  hingga  50%.  Hasil  perolehan  data nilai  EC 50 dapat  dilihat  pada  tabel  berikut ini.
Tabel III. Data EC 50 Minyak Nilam dan BHT Sampel Replikasi Hasil EC 50 (%) Rata rata Minyak Nilam I 19,3058 19,9523 % II 21,8885 III 20,2492 IV 19,5446 V 18,7736 Baku BHT I 11,7245 11,9308 % II 11,9835 III 11,4549 IV 12,5602
Keterangan: Masing-masing replikasi terdiri dari 5 konsentrasi.
Berdasarkan  hasil  pengukuran  secara kuantitatif  aktivitas  antioksidan  terhadap minyak  nilam  dan  baku  BHT  maka diperoleh nilai EC 50 untuk minyak nilam dan baku  BHT  secara  berturut-turut  adalah 19,9523%  dan  11,9308%.  Berdasarkan  data hasil pengukuran tersebut kemudian dilakukan  perhitungan  secara  statistik  untuk membandingkan  aktivitas  antioksidan  dari minyak nilam dan juga baku BHT.
Pada  penelitian  ini,  data  pengukuran yang  didapatkan  dapat  diterima,  sehingga tidak terdapat data yang dibuang.
Perhitungan  statistik  dilakukan  dengan menggunakan  α  0,05.  Dari  hasil  uji normalitas  data  secara  statistik  diperoleh nilai  signifikansi  dari  minyak  nilam  sebesar 0,664  dan  nilai  signifikansi  dari  baku sebesar 0,074. Nilai signifikan yang digunakan  adalah  nilai  perhitungan  dengan metode  Shapiro-Wilk.  Berdasarkan  nilai tersebut,  maka  dapat  disimpulkan  bahwa data yang diperoleh berdistribusi normal ( α > 0,05 )
Digunakan hasil Shapiro-Wilk karena perhitungan dengan cara ini dapat dilakukan
untuk data dengan jumlah berapapun, selain itu  juga  hasilnya  lebih  spesifik  jika dibandingkan  dengan  metode  Kolmogorov-
Smirnov a .  Hasil  uji  statistik  adalah  sebagai berikut,
Tabel IV. Hasil Uji Statistik Perbandingan Antioksidan B S Sampel Minyak Nilam Baku BHT 5% 10% 15% 20% 25% 5% 10% 15% 20% 25% 5% - BS BS BS BS TBS BS BS BS BS 10% BS - BS BS BS BS BS BS BS BS 15% BS BS - BS BS BS TBS BS BS BS 20% BS BS BS - BS BS BS BS BS BS 25% BS BS BS BS - BS BS TBS BS BS Keterangan : - BS = Berbeda signifikan.
- TBS = Tidak berbeda signifikan.
- B = Baku
- S = Sampel

## KESIMPULAN
1. Ada  aktivitas  antioksidan  dalam  baku BHT dan minyak nilam.
2. Terdapat  perbedaan  yang  signifikan antara  aktivitas  antioksidan  minyak nilam  dibandingkan  dengan  baku  BHT dengan metode DPPH.
3. Nilai  EC 50 untuk  minyak  nilam  dan baku  BHT  berturut-turut  diperoleh sebesar 19,9523% dan 11,9308%

## DAFTAR PUSTAKA
Chun,  O.K.,  Kim,  D.O.,  dan  Lee,  C.Y., 2003, Superoxide radical scavenging  Activity  of  Major Polyphenols  in  Fresh  Plums,  J.
Agric.Food Chem. , 51, 8068-8072. Ellyta  S,  2004.  “  Rancangan  distribusi  uap pada  alat  ketel  suling  untuk meningkatkan  rendemennya;  dalam kasus  Minyak  Nilam  (Pogostemon Cablin Benth)”. Laporan Penelitian . LPPM. Universitas
Bung Hatta. Padang. Kikuzaki,  H.,  Hisamoto,  M.,  Hirose,K., Akiyama,  K.,  and  Taniguchi,  H. 2002.  Antioxidants  Properties  of Ferulic  Acid  and  Its  Related Compound, J.Agric.Food  Chem ,
50 .(3) :2161-2168.
Kiuchi,  F.,  Matsuo,  K.,  Ito,  M.,  Qui,  T.K., and Honda, G., 2004, New Sesquiterpen  Hydroperoxides  with Trypanocidal Activity from
Pogostemon cablin. J. Che, Pharn.Bull, 52 (12): 1495-1496
Pratt, D.E. 1992.  Natural Antioxidants from
Plant  Material.  Di  dalam:  Huang. M.T.,  C.T  Ho.,  C.Y.  Lee  (  eds  ). Phenolic Compounds inhibitor tripsin  Food  and  Their  Effects  on Health  II.  Hal  :  54-71.  ACS, Washington DC Zhao,  Z.,  Lu  K.  Leung,  J.,  Chan,  C.H.,  and Jiang, Z.H., 2005. Determination of Patchoulic Alcohol in Herba Pogostemonis  by  GC-MS-MS. J.
Chem. Pharn. Bull , 53 (7), 856-860