Korelasi antara Immature Granulocytes dan Delta He sebagai Penanda Inflamasi pada Penderita dengan Lekositosis
Novina Aryanti 1* , Juli Soemarsono 2
Bagian Patologi Klinik, FK Universitas Wijaya Kusuma Surabaya 1
Departemen Patologi Klinik, FK Unair /RSUD Dr Soetomo Surabaya 2 *e-mail: novena.aryanti@gmail.com

## Abstrak
Immature  Granulocytes dapat  digunakan  sebagai  penanda  inflamasi.  Saat  ini  Delta  He  diduga  dapat digunakan untuk penanda baru inflamasi. Tujuan penelitian ini ingin mengetahui korelasi antara Immature Granolocytes dan Delta He sebagai penanda inflamasi pada penderita dengan lekositosis. Pada penelitian ini digunakan sampel darah-EDTA dari 50 penderita lekositosis di RSUD Dr. Soetomo Surabaya mulai 10- 17 Desember 2011, yang diperiksa Delta He dan Immature granulocytes dengan Flowcytometri (Sysmex XE-2100). Hasil dianalisis secara statistik menggunakan Uji korelasi dari Pearson product moment . Hasil penelitian  menunjukkan  bahwa Mean  Immature  Granulocytes dan  Delta  He  50  penderita  dengan lekositosis  adalah  0.37  x  10 3 /µL  dan  3.03  pg.  Uji  Statistik  berdasarkan Pearson  test antara Immature Granulocytes dan  Delta  He  menunjukkan  korelasi  (r  =  0.26),  dan  nilai  p  >  0.05  sehingga  disimpulkan korelasi tersebut tidak bermakna. Inflamasi merangsang pelepasan sitokin yang akan meningkatkan kadar hepcidin , dengan akibat terjadi penurunan ferroportin pada duodenum dan makrofag sehingga suplai besi ke  sel precursor eritropoetik  berkurang  dan  menyebabkan  penurunan  sintesis  hemoglobin  (Ret  He). Penderita dengan lekositosis belum tentu menderita sepsis, sehingga tidak terjadi peningkatan Immature Granulocytes pada  semua  penderita  lekositosis.  Sehingga  dapat  disimpukan  bahwa Immature Granulocytes dan Delta He pada penderita dengan lekositosis memiliki korelasi yang kurang bermakna. Sehingga diperlukan penelitian lebih lanjut untuk menentukan apakah Delta He dapat digunakan sebagai penanda inflamasi.
Kata Kunci : Immature Granulocytes , Delta He, Lekositosis, Inflamasi, Flowcytometri .

## Correlation Between Immature Granulocytes and Delta He as Inflammation Marker in Patients With Lecocytosis

## Abstract
Immature Granulocytes are considered as an inflammation marker. Recently Delta He is suspected to be a novel marker of inflammation. The aim of this study is to know the correlation of Immature Granulocytes and Delta He as inflammation marker in patients with lecocytosis. This research used whole blood-EDTA samples from 50 lecocytosis patients in the Dr. Soetomo Hospital Surabaya from 10 until 17 December, 2011 were studied Immature granulocytes and Delta He were examined by Flowcytometry (Sysmex XE 2000i).  Analysis  of  the  results  was  performed  by  Pearson  product  moment.  Mean  result  of  Immature Granulocytes and Delta He from 50 patients with lecocytosis was 0.37 x 10 3 /µL and 3.03 pg. According to Pearson analysis test there was a correlation between Immature Granulocytes and Delta He (r = 0.26), but this was not significant (p > 0.05). Inflammation induced cytokine release and rise hepcidin, the result was decrement of ferroportin from duodenum and macrophage so the iron supply to erythropoetic precursor decrease, and the hemoglobin synthesis (Ret He) decrease. The rise of Immature Granulocytes were not happened in all lecocytosis patients, it were not certain suffered sepsis. There was no significant correlation between Immature Granulocytes and Delta He in patients with lecocytosis. A further research with more samples to determine that Delta He can be used as an inflammation marker is needed
Keywords: Immature granulocytes, Delta He, Lecocytosis, inflammation, Flowcytometry

## LATAR BELAKANG
Inflamasi  adalah  respon  biologis  yang kompleks dari jaringan vaskuler terhadap stimuli yang  membahayakan  tubuh,  seperti  patogen, perusak  sel  atau  atau  iritan.  Inflamasi merupakan  suatu  usaha  protektif  oleh organisme  guna  melenyapkan  stimuli  yang membahayakan dan merupakan usaha awal dari proses penyembuhan.
Inflamasi diklasifikasikan dalam inflamasi akut  dan  inflamasi  kronik.  Inflamasi  akut merupakan respon awal tubuh terhadap stimuli berbahaya  dan  ditandai  dengan  terjadinya pergerakan  plasma  dan  lekosit  (terutama granulosit) dari  dalam darah ke dalam jaringan yang mengalami jejas. Inflamasi yang berkepanjangan  dinamakan  inflamasi  kronis yang  ditandai  dengan  meningkatnya  jumlah berbagai macam tipe sel didalam jaringan yang mengalami  jejas  dan  terjadinya  destruksi simultan  tersebut  serta  diikuti  dengan  proses penyembuhan jaringan dari proses inflamasi.
Sel-sel  yang  berperan  dalam  inflamasi disebut  sel  inflamasi  atau  komponen  seluler inflamasi,  beberapa  diantaranya  berada  dalam jaringan  normal  antara  lain  sel  mast  dan makrofag,  sedang  yang  lain  berada  dalam sirkulasi (limfosit, Netrofil, Eosinofil,Basofil, dan trombosit)  dan  baru  akan  memasuki  jaringan apabila terdapat respon inflamasi (1,2).
Pehitungan  jumlah  lekosit,  termasuk neutrofil,  penting  pada  pasien  yang  memiliki penyakit infeksi, karena berperan penting pada peradangan akut dalam melawan infeksi bakteri. Beberapa penelitian telah membahas kegunaan dari  jumlah  total  lekosit,  jumlah  neutrofil,  dan jumlah band / stab dalam memprediksi penyakit infeksi.  Pemeriksaan  penanda shift  to  the  left dari  granulopoiesis,  telah  diketahui  sulit  untuk mengukur secara akurat atau tepat. Pengukuran granulosit  muda  bisa  menjadi  parameter  yang bermanfaat untuk
mendeteksi dini
infeksi/peradangan atau sepsis.
Immature granulocytes dan selisih kadar hemoglobin pada eritrosit matur dan retikulosit (delta  He)  pada  hematology  analyzer  dapat digunakan  untuk  mendeteksi  inflamasi.  Pada inflamasi  merangsang  pelepasan  sitokin  yang akan  meningkatkan  kadar  hepcidin,  dengan akibat  terjadi  penurunan ferroportin pada
duodenum dan makrofag sehingga suplai besi ke sel precursor eritropoetik berkurang yang akan menyebabkan  penurunan  sintesis  hemoglobin (3).
Oleh  sebab  itu  maka  tujuan  dari penelitian  ini  adalah  ingin  mengetahui  adakah hubungan  atau  korelasi  antara Immature granulocytes dan  delta  He  pada  penderita lekositosis  sehingga  dapat  diketahui  apakah delta  He  dapat  digunakan  sebagai  penanda inflamasi.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  ini  merupakan  studi cross sectional analitik,  kriteria  inklusi  penelitian adalah  penderita  dengan  lekositosis  laki-laki ataupun  perempuan  dari  51  penderita lekositosis di RSUD Dr Soetomo Surabaya mulai 10-17  Desember  2011dan  kriteria  eksklusi adalah  penderita  dengan  keganasan.  Sampel darah  diambil  dari  vena,  untuk  pemeriksaan darah lengkap dan ditampung dengan
antikoagulan EDTA ,  yang  diukur  dengan menggunakan  alat  Sysmex-  XE  2100  dengan prinsip pemeriksaan
spektrofotometri.
Lekositosis adalah kadar lekosit lebih dari 10.300 dengan  satuan  per  µL. Immature  Granulocytes (Granulosit  imatur)  adalah  netrofil  imatur (promyelosit,  metamyelosit,  myelosit,  netrofil stab  )  dengan  satuan  per  µL.  Delta  He  adalah selisih  antara  MCH  dan  Ret  He  dengan  satuan pg. MCH adalah kandungan Hemoglobin dalam eritrosit  dengan  satuan  pg.  Sedangkan  Ret  He adalah kandungan Hemoglobin dalam retikulosit dengan  satuan  pg.  Uji  statistik One-Sample Kolmogorov-Smirnov  Test menggambarkan distribusi  sampel.  Untuk  analisis  korelasi menggunakan uji korelasi Pearson.

## HASIL
Pada penelitian ini didapatkan 51 sampel penderita  dengan  lekositosis.  Dengan  uji One sample  Kolmogorov-Smirnov, didapatkan  hasil sampel penelitian terdistribusi normal sehingga dapat dianalisis menggunakan uji Pearson (tabel
1) Mean dari  IG  0.3725  dan mean Delta  He adalah  3.0373.  Standar  Deviasi  IG  adalah 0.84951 dan Delta He adalah 2.34358
Tabel 1. Uji One sample Kolmogorov-Smirnov
Tabel 2. Uji Korelasi ( Pearson )
Uji statistik berdasarkan Pearson test antara Immature Granulocytes dan Delta He dengan korelasi (r = 0,26), yang berarti semakin mendekati 1 maka korelasi semakin kuat, dan semakin mendekati nol, korelasi semakin lemah. Signifikansi korelasi (r = 0,26) antara IG dan Delta He adalah 0,858 artinya nilai p hasil analisis lebih besar dari α (0.05) sehingga disimpulkan k orelasi tersebut tidak bermakna.
IG 6 5 4 3 2 1 0 -1 DHE 12 10 8 6 4 2 0
Gambar  1 .  Diagram Scatter  Plot antara Immature Granulocytes dan Delta He
Gambar  1  menunjukkan  bahwa  korelasi antara Immature  Granulocytes dan  Delta  He
positif lemah dan kurang bermakna. Gambar 2 . Hemogram. Nilai WBC, Delta He (Ret
He-MCH) dan IG

## PEMBAHASAN
Immature granulocytes meliputi neutrofil batang, metamielosit, mielosit, dan promielosit. Neutrofil  matur  adalah  neutrofil  segmen. Inflamasi  dan  infeksi  akan  menyebabkan pelepasan  neutrofil  ke  dalam  aliran  darah, sehingga  akan  meningkatkan  jumlah  sel  darah putih.  Pada  keadaan  infeksi  bakteri  akut dijumpai pergeseran ke kiri dari neutrofil, yakni dengan  banyak  dijumpai  bentuk  batang,  dan bentuk neutrofil imatur lainnya. Neutrofil imatur umumnya ditemukan pada infeksi dan sepsis.
Delta He adalah selisih kadar Hemoglobin eritrosit muda (retikulosit) dan kadar Hemoglobin eritrosit matur, yang saat ini diduga dapat  digunakan  sebagai  penanda  inflamasi. Inflamasi akan merangsang peningkatan ekspresi  hepcidin  oleh  IL-6,  pengaruh  hepcidin ini  akan  berpengaruh  pada  metabolisme  besi (Gambar 3) yaitu menghambat release besi dari makrofag  dan  menurunkan  penyerapan  besi dari  usus  sehingga  ketersediaan  besi  untuk proses eritropoesis menjadi
terbatas (penurunan  besi  untuk  sintesis  hemoglobin, kadar  hemoglobin  retikulosit  (Ret  He)  akan menurun) (2,4,5).
Gambar 3 . Pengaturan Hepcidin pada metabolisme besi (6). Mekanisme pengaturan produksi hepcidin antara lain:
a. Pengendalian  besi  akan  meningkat  dengan pengaruh saturasi transferin yang tinggi dan menurun  dengan  kadar  besi  plasma  yang rendah serta adanya supresi akibat ekspresi hepcidin.
b. Pengendalian eritropoiesis
c. Inflamasi,  tidak  tergantung  pada  besi  dan eritropoiesis, tetapi dirangsang oleh IL-6 dan sitokin. Pada keadaan Lekositosis, kadar Immature  Granulocytes akan  meningkat, sedangkan  kadar  Delta  He  akan  menurun. Dengan  uji  statistik  berdasarkan Pearson  test antara Immature  Granulocytes dan  Delta  He menunjukkan  korelasi  kurang  signifikan  (p> 0,05),  hal  ini  di  karenakan  penderita  dengan lekositosis  tidak  seluruhnya  disebabkan  sepsis dimana Immature  Granulocytes merupakan marker  untuk  sepsis(6). Lekositosis  dapat  juga disebabkan  faktor  non  sepsis  sehingga  kadar Immature  Granulocytes dan  Delta  He  tidak dapat berkorelasi dengan baik (7).

## KESIMPULAN
Immature  Granulocytes dan  Delta  He pada  penderita  dengan  lekositosis  memiliki korelasi  yang  kurang  bermakna.  Sehingga diperlukan  penelitian  lebih  lanjut  untuk menentukan apakah Delta He dapat digunakan sebagai  penanda  inflamasi  dengan  jumlah sampel  yang  lebih  banyak  dan  menggunakan sampel  penderita  dengan  diagnosis  sepsis  dan non sepsis.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Ma’at,  S.,  2012.  Inflamasi.  Airlangga University Press.; pp: 1-25
2. Welmann A, Lun A, Lun S., 2010. Leucocyte, neutrophil,  immature  granulocyte  counts and Interleukin-6 are superior to procalcitonin,  C-reactive  protein  and  delta- He  for  detection  of  mild  inflamation:  data from  marathon  runners  producing  mild systemic  inflamation  viable  immediately after the run. J lab Med .;34(1):53-59.
3. Rossi, E., 2005. Hepcidin-the Iron regulatory Hormone. Clin Biochem Rev .; 26. pp: 47-49
4. Agustriadi O, Suega K . , 2006. Hepcidin pada Anemia  of  Chronic  Disease.  Tinjauan pustaka. Bag Ilmu Penyakit dalam FK Unud- Denpasar.; 7 (2) pp: 141-8
5. Chung Hyun Nahm, Jong Weon Choi., 2008. Delta  Neutrophil  Index  in  Automated Immature Granulocyte Counts for Assessing Disease Severity of Patients with Sepsis.; pp
1-6
6. Ganz  T,  Nemeth  E,  Goodnough  L.,  2012. Detection,  evaluation,  and  management  of
iron-restricted erythropoiesis. Review
article. Blood  journal  hematology  library
org .; 2-9
7. Hiew TM, Tan AM, Cheng HK. 1992, Clinical Features  and  Haematological  Indices  of Bacterial  Infections  in  Young  Infants. Singapore med J ; 33:125-1
8. Byung  Hoon  Park,  Young  Ae  Kang,  2011. Delta neutrophil index as an early marker of disease severity in critically ill patients with sepsis. BMC Inf. Diseases .; pp 1-9