## ANALISIS FITOKIMIA DAN UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DARI GETAH KULIT BUAH PISANG GOROHO (Musa acuminate (L.))

## Juliana Christie Kurniawan, Edi Suryanto, Adithya Yudistira
Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT MANADO, 95115

## ABSTRACT
The  objectives  of  this  research  was  to  analyze  the  phytochemical  content  and  antioxidant activity from goroho’s sap peel. Sample preparation was cut from the banana tier, then have been cut to the both base of goroho’s peel and the fresh sap collected into the petri dish. The extraction  method  was  maceration  used  20,  40,  60  and  80%  ethanol  concentration. Phytochemical  screening  carried  out  by  analysis  of  alkaloid,  flavonoid,  saponin,  steroid, terpenoid and tannin. Determination of antioxidant activity performed by DPPH free radical scavengers.  The  phytochemical  analysis  results  was  goroho’s  sap  peel  contain  flavonoid, saponin and tannin. Ethanol extract of goroho’s sap peel with 80% concentration 100 µg/mL had the highest antioxidant activity. Results of this research concluded that phenolic extracts of goroho’s sap peel has the ability both as an antioxidant to DPPH free radicals.
Keywords: Banana sap peel goroho, phytochemical, antioxidant activity

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menganalisis  kandungan  fitokimia  dan  menentukan  aktivitas antioksidan dari getah kulit buah pisang goroho. Preparasi sampel dipotong dari bagian sisir pisangnya, kemudian dipotong kedua ujung pangkal kulit buah pisang goroho dan ditampung getah  segar  yang  keluar  ke  dalam  cawan  petri.  Ekstraksi  dilakukan  secara  maserasi  dengan menggunakan  pelarut  etanol  20,  40,  60,  dan  80%.  Penapisan  fitokimia  dilakukan  dengan analisis  alkaloid,  flavonoid,  saponin,  steroid,  terpenoid  dan  tanin.  Penentuan  Aktivitas Antioksidan  dilakukan  dengan  penangkal  radikal  bebas  DPPH.  Berdasarkan  hasil  dari penapisan  fitokimia  bahwa  ekstrak  getah  kulit  buah  pisang  goroho  mengandung  flavonoid, saponin dan tanin. Ekstrak etanol 80% getah kulit buah pisang goroho konsentrasi 100 µ g/mL memiliki  nilai  aktivitas  antioksidan  yang  paling  tinggi.  Hasil  penelitian  ini  menyimpulkan bahwa ekstrak fenolik dari getah kulit buah pisang goroho memiliki kemampuan baik sebagai penangkal radikal bebas DPPH.
Kata kunci: Getah kulit buah pisang goroho, fitokimia, aktivitas antioksidan

## PENDAHULUAN
Antioksidan  merupakan  senyawa pemberi  elektron  (electron  donor)  atau reduktan.  Senyawa  ini  memiliki  berat molekul kecil, tetapi mampu menginaktivasi berkembangnya reaksi oksidasi, dengan cara mencegah terbentuknya  radikal.  Antioksidan  juga merupakan senyawa yang dapat menghambat  reaksi  oksidasi,  dengan mengikat  radikal  bebas  dan  molekul  yang sangat  reaktif,  akibatnya  kerusakan  sel akan  dihambat.  Cara  yang  mudah  untuk mencegah  atau  mengurangi  resiko  yang ditimbulkan  oleh  aktivitas  radikal  bebas yaitu dengan mengkonsumsi makanan atau suplemen  yang  mengandung  antioksidan (Winarsi, 2007).
Pisang  goroho  (Musa  acuminate (L.)) merupakan salah satu varietas pisang dari  berbagai  jenis  pisang  yang  ada.  Bila melihat  keunikan  buah  dan  bioaktivitas, pisang  ini  berpotensi  menjadi  salah  satu buah  yang  berpotensi  untuk  diversifikasi pangan,  makanan  fungsional  dan  dapat merebut peluang pasar eskpor (Suryanto et al.,  2011;  Kiay  et  al.,  2011).  Berdasarkan penelitian  yang  sudah  dilakukan  oleh Suryanto  et  al.  (2011)  dan  Kiay  et  al. (2011)  bahwa  pisang  goroho  memiliki kandungan fitokimia dan fenolik yang bisa berperan sebagai antioksidan.
Oleh  sebab  itu  pada  penelitian  ini dilakukan  pengujian  analisis  fitokimia untuk  mengetahui  senyawa  metabolit sekunder  yang  terdapat  dalam  getah  kulit buah  pisang  goroho  serta  uji  aktivitas antioksidan  dengan  metode  DPPH  untuk mengetahui  kemampuan  ekstrak  dalam menghambat radikal bebas DPPH.

## METODOLOGI  PENELITIAN
Penelitian dilaksanakan pada bulan April  sampai  bulan  Juni  tahun  2013  di Laboratorium
Advance, Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam (MIPA) Universitas Sam
Ratulangi Manado.  Penelitian  ini  menggunakan bentuk eksperimen laboratorium.
Alat yang diperlukan dalam penelitian  ini  sebagai  berikut  :  Alat-alat gelas PYREX, mikropipet BRAND
Transferpette®  100  -  1000  µ,  timbangan analitik  AND,    spektrofotometer  UV-Vis THERMO  SCIENTIFIC  Genesys  20  & 10S,  spatula,  vorteks  mixer  K  tipe  VM- 300, kertas saringan, sentrifuse K CENTRIFUGE  tipe  Harmonic  Series, waterbath  THERMOLOGY.  Bahan  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah getah kulit buah pisang goroho berasal dari Perkebunan  Tateli,  Kota  Manado.  Bahan kimia yang digunakan yaitu etanol (20, 40, 50,  60,  80,  95,  96%),  aquades,  kloroform, H 2 SO 4 pekat,  amoniak  0,05N,  H 2 SO 4 2N, pereaksi  Dragendroff,  CH 3 COOH  glacial,
NaCl  10%,  FeCl 3 1%,  pereaksi  vanillin
4%, asam klorida pekat (HCl), serbuk Mg, larutan  natrium  karbonat  2%,  reagen Folin-Ciocalteu
50%, 1,1-difenil-2-
pikrilhidrazin  (DPPH)  93  µM,  aluminium klorida 2%.

## Persiapan Sampel
Buah  pisang  goroho  dipotong  dari bagian sisir pisangnya, kemudian dipotong kedua  ujung  pangkal  kulit  buah  pisang goroho  dan  kumpulkan  getah  segar  yang keluar ke dalam cawan petri.
Ekstraksi
Ekstraksi
getah segar menggunakan  pelarut  etanol  20,  40,  60, dan  80%.  Ekstraksi  dilakukan  secara maserasi.  Sebanyak  5  g  getah  segar  dari kulit  buah  pisang  goroho  dimasukkan  ke dalam  masing-masing  gelas  Erlenmeyer kemudian  ditambahkan  pelarut  hingga  50 mL.  Maserasi  dilakukan  selama  24  jam kemudian  disaring  dan  disentrifugasi. Untuk  menghilangkan  pelarutnya  filtrat  di keringkan  dengan  suhu  kamar  25 o C sampai 27 o C.

## Penapisan Alkaloid
Sebanyak 0,5
g ekstrak dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi. Kemudian  ditambahkan  5  mL  kloroform didiamkan  selama  30  menit  lalu  disaring dan  diambil  filtratnya.  Kemudian  filtrat ditambahkan  2,5  mL  amoniak  0,05N  dan 2,5  mL  H 2 SO 4 2N  selanjutnya  dikocok
akan  terbentuk  2  lapisan.  Fraksi  asam diambil  kemudian  ditambahkan  pereaksi Dragendorf.  Adanya  alkaloid  ditandai dengan  terbentuknya  endapan  merah  pada pereaksi Dragendorf (Harborne, 1987).

## Penapisan Flavonoid
Sebanyak 0,5 g ekstrak ditambahkan  2  mL  etanol  95%  kemudian dipanaskan    dalam  penangas  air  sampai mendidih. Pipet lapisan yang atas kemudian  ditambahkan  2-3  tetes  HCl pekat  dan  0,1  g  serbuk  Mg.  Selanjutnya diamkan  selama  3  menit,  bila  berubah warna  menjadi  merah  atau  kekuning- kuningan  berarti  menunjukkan  ekstrak positif mengandung flavonoid.
Penapisan Saponin
Sebanyak
0,5 g ekstrak ditambahkan  5  mL  aquades  sambil dikocok kuat selama 1 menit. Pada tabung sampel  terdapat  buih  setinggi  3,5  cm  dan bila  busa  yang  terbentuk  tetap  stabil  ±  7 menit,  maka  ekstrak  positif  mengandung banyak saponin.

## Penapisan Steroid dan Triterpenoid
Sebanyak  0,5  g  ekstrak  ditambahkan CH 3 COOH  glacial  sebanyak  10  tetes  dan H 2 SO 4 pekat  sebanyak  2  tetes.  Larutan dikocok  perlahan  dan  dibiarkan  selama beberapa  menit.  Steroid  memberikan warna biru atau hijau, sedangkan terpenoid memberikan warna merah atau ungu.

## Penapisan Tanin
Sebanyak  ±  0,5  g  ditambahkan etanol  96%.  Kemudian  didiamkan  ±  15 menit  lalu  disaring.  Filtrat  yang  didapat dipipet dan ditambahkan 2 tetes NaCl 10% dan 3 tetes FeCl3 1%. Terbentuknya warna biru  atau  hitam  kehijauan  menunjukkan adanya tanin.
Penentuan  Kandungan  Total  Senyawa

## Fenolik
Kandungan  total  fenolik  ekstrak getah kulit buah pisang goroho di tentukan dengan menggunakan metode Folin Ciocalteu  (Conde  et  al.,  1997).  Sebanyak 0,1  mL  larutan  ekstrak  500  µg/mL dimasukkan  dalam  tabung  reaksi,  lalu ditambahkan 0,1 mL reagen Folin Ciocalteu  50%.  Campuran  tersebut  di
vortex,  lalu  ditambahkan  2  mL  larutan natrium karbonat 2%. Selanjutnya campuran  diinkubasi  selama  30  menit. Absorbansinya dibaca λ 750 nm. Kandungan total fenolik dinyatakan sebagai  ekuivalen  asam  galat  dalam µg/mL ekstrak.
Penentuan Aktivitas Antioksidan Penentuan  Penangkal  Radikal  Bebas DPPH
Penentuan aktivitas penangkal radikal  bebas  DPPH  menurut  Burda  dan Olezek  (2001).  Sebanyak  0,5  mL  masing- masing ekstrak dengan konsentrasi 25, 50, 75,  100  µg/mL  ditambahkan  dengan  2,5 mL larutan 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil (DPPH)  93  µM  dalam  etanol  dan divorteks.  Berubahnya  warna  larutan  dari ungu  ke  kuning  menunjukkan  efisiensi penangkal radikal bebas. Selanjutnya pada 5  menit  terakhir  menjelang  30  menit inkubasi,  absorbansi  di  ukur  pada λ 517 nm dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis. Aktifitas
penangkapan radikal bebas dihitung sebagai  persentase  berkurangnya  warna DPPH dengan menggunakan persamaan :
Aktifitas  penangkal  radikal  bebas  (%)  = 1 − × 100%
Dari  harga  persen  penangkalan radikal bebas yang diperoleh, dibuat kurva antara  persen  penangkal  radikal  bebas terhadap  konsentrasi  larutan  uji.  Dari persamaan  regresi  linier  tersebut  dapat ditentukan  nilai  IC 50 yaitu  konsentrasi inhibisi larutan uji yang mampu menangkal 50% radikal bebas DPPH.

## PEMBAHASAN
Berdasarkan  lampiran  1,  dapat diketahui  bahwa  pada  getah  kulit  buah pisang  goroho  menunjukkan  hasil  yang negatif  mengandung  senyawa  alkaloid.
Uji  penapisan  flavonoid  dengan hasil  yang  diperoleh  yaitu  terjadinya perubahan  warna  menjadi  kekuning- kuningan dari perubahan tersebut
menunjukkan  bahwa  ekstrak  getah  kulit buah  pisang  goroho  positif  mengandung flavonoid.
Berdasarkan hasil yang telah diperoleh  dari  penapisan  saponin  busa yang dihasilkan agak sedikit tidak mencapai 3,5 cm dan busa hanya bertahan selama 2 menit. Berdasarkan hasil analisis dapat  diketahui  bahwa  kadar  saponin dalam  getah  kulit  buah  pisang  goroho hanya  sedikit.  Birk  dan  Peri  (1980) menyatakan  saponin  mempunyai  efek biologi terhadap hewan dan manusia. Efek toksisitas saponin lebih tinggi pada hewan berdarah  dingin  dari  pada  hewan  berdarah panas.
Pada penapisan steroid dan terpenoid, berdasarkan Lampiran 1, ekstrak  yang  telah  di  uji  menunjukkan hasil  yang  negatif  karena  pada  pengujian tidak  terjadi  perubahan  warna  hanya menjadi putih keruh.
Berdasarkan  hasil  penapisan  tanin, Reaksi  antara  polifenol  dan  FeCl 3 ini menghasilkan beragam warna yang menunjukkan  adanya  senyawa  kompleks yang tergantung dari subtituen yang terikat pada  polifenol  tersebut.  Berdasarkan  hasil analisis  yang  didapatkan  getah  kulit  buah pisang  goroho  positif  mengandung  tanin dengan  adanya  perubahan  warna  menjadi hijau kehitaman.

## Penentuan Kandungan Total Fenolik
Kandungan  total  fenolik  ekstrak getah kulit buah pisang goroho di tentukan dengan menggunakan metode Folin Ciocalteu (Conde et al., 1997). Kandungan total  fenolik  dinyatakan  sebagai  ekuivalen asam  galat  dalam  µ g/mL  ekstrak.  Hasil penelitian,  menunjukkan  ekstrak  getah kulit  buah  pisang  goroho  dengan  pelarut etanol konsentrasi 80% memiliki kandungan fenolik  yang  paling tinggi atau unggul  yaitu  160,20  µg/mL.  Berdasarkan hasil,  bahwa  dari  ekstrak  getah  kulit  buah pisang  goroho  mengalami  perubahan warna  dari  kuning  menjadi  biru  pada pelarut  etanol  dengan  konsentrasi  60,  dan 80%  pada  saat  direaksikan  antara  reagen Folin-Ciocalteu.  Nely  (2007)  menyatakan
intensitas  warna  biru  maka  semakin  besar juga kandungan fenolik yang terdapat pada sampel.

## Penentuan Aktivitas Penangkal Radikal Bebas DPPH
Aktivitas  penangkal  radikal  bebas dari  getah  kulit  buah  pisang  goroho  dapat diketahui  melalui  perubahan  warna  yang terjadi,  yaitu  dari  warna  ungu  menjadi kuning. Pada penentuan aktivitas penangkal  radikal  bebas  DPPH  ini memakai metode Burda dan Olezek (2001) yang  sedikit  dimodifikasi.  Metode  DPPH sebagai pengukur kemampuan suatu senyawa  antioksidan  dalam  menangkap radikal bebas (Naik et al., 2003).
Hasil penelitian menunjukkan bahwa  ekstrak  etanol  20,  40,  60,  80% getah  kulit  buah  pisang  goroho  dengan konsentrasi 100 µg/mL, mempunyai kemampuan  sebagai  penangkal  radikal bebas DPPH. Dalam penelitian ini ekstrak etanol  80%  menunjukkan  hasil  aktivitas yang  paling  besar  92,6%.  Persentasi aktivitas  berbeda  dengan  ekstrak  etanol 60%  yaitu 31,3%, sedangkan pada ekstrak etanol  40%  sebesar  10%.  Dan  aktivitas terendah  pada  ekstrak  etanol  20%  sebesar 1,35%.  Dari  harga  persen  penangkal radikal bebas yang diperoleh, maka di buat kurva  antara  persen  penangkal  radikal bebas terhadap konsentrasi larutan.

## KESIMPULAN
Ekstrak  getah  kulit  buah  pisang goroho  memiliki  kandungan  fitokimia seperti flavonoid, saponin dan tanin. Hasil yang diperoleh dari penentuan total fenolik menunjukkan ekstrak etanol 80% memiliki nilai  kandungan  total  fenolik  yang  paling besar.  Hasil  pengujian  aktivitas  penangkal radikal  bebas  DPPH  menunjukkan  bahwa ekstrak etanol 80% getah kulit buah pisang goroho  konsentrasi  100  µg/mL  memiliki aktivitas  penangkal  radikal  bebas  yang paling tinggi.

## DAFTAR PUSTAKA
Birk,Y.  dan  I.  Peri.  1980.  Saponin.  Toxic Constituents  of  plants  foodstuffs.
Academic Press. New York.
Burda, S. dan W. Olezek. 2001. Antioxidant and Antiradical Activities of   Flavonoids. J. Agric. Food Chem. 49 : 2774-2779.
Conde,  E.E,  M.C.  Cadahia,  Garcia- Vallejo,  B.F.D.  Simon  dan  J.R.G.
Adrados.  1997.  Low    Molecular Weight  Polyphenol  in  Cork  of Querceus  Suber.  J.  Agric.  Food
Chem. 45 : 2695-2700.
Cos,  P.,  Calomme,  M.,  Sindambiwe,  J.B.,
Bruyne, T.D., Cimanga, K.,
Pieters,  L.,  Vlietinck,  A.J.,  and Berghe,  D.V.,  2001,  Cytotoxicity and  Lipid  Peroxidation-Inhibiting Activity  of  Flavonoids,  Planta
Med., 67 : 515-519.
Harborne,  J.  B.  1987.  Metode  Fitokimia Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan. Bandung: ITB Press. Kiay,  N.,  Suryanto,  E.  dan  Mamahit,  L. 2011.  Efek  Lama  Perendaman Ekstrak Kalamansi (Citrus microcarpa)  Terhadap  Aktivitas Antioksidan Tepung Pisang Goroho  (Musa  spp.).  Universitas Sam Ratulangi: Manado. Mega,  I.M.,  dan  Swastini,  D.A.  2010. Skrining  Fitokimia  dan  Aktivitas Antiradikal Bebas Ekstrak Metanol Daun Gaharu (Gyrinops versteegii). Jurnal Kimia 4(2): 187- 192.
Naik,  G.H.,  Priyadarsini,  K.I.,  Satav,  J.G., Banavalikar,  M.M.,  Sohoni,  D.P., Biyani, M.K., and Mohan H., 2003,
Comparative antioxidant activity of individual  herbal  components  used in ayurvedic medicine, Phytochemistry, 63 (1): 97-10.
Nely,  F.  2007.  Aktivitas  Antioksidan
Rempah  Pasar  dan  Bubuk  Rempah
Pabrik  dengan  Metode  Polifenol dan  Uji  AOM  (Active  Oxygen
Method) [skripsi]. Institud Pertanian  Bogor,  Bogor.Health. Croatia : InTech.
Steinberg, D. 2009. The LDL Modification
Hypothesis of Atherogenesis.
Journal  of  Lipid  Research  50:376-
381.
Suryanto,  E.,  Momuat,  L.I.,  Taroreh,  M. dan  Wehantouw,  F.  2011.  Potensi Senyawa  Polifenol  Antioksidan dari  Pisang  Goroho  (Musa  sapien Sp.).  Universitas  Sam  Ratulangi: Manado.
Suryanto,  E.,  Momuat,  L.I.,  Taroreh,  M.
dan Wehantouw, F. 2011. Pengaruh Lemon Kalamansi (Citrus microcarpa) Terhadap
Komposisi  Kimia  dan  Fitokimia Antioksidan  dari  Tepung  Pisang Goroho  (Musa  spp.).  Universitas Sam Ratulangi: Manado.
Susanti,  M.  C.  E.  2000.  Autokondensat tanin  dan  penggunaan  sebagai perekat kayu lamina. Tesis.
Fakultas Pascasarjana. Institut Pertanian Bogor. Bogor. Theroux,  P.  dan Libby,  P.  2005. Pathophysiology of coronary artery  disease.  Circulation  111:
3481-3488.
Winarsi,  M.S.  2007.  Antioksidan  Alami dan  Radikal  Bebas.  Kansius  : Yogyakarta.

## LAMPIRAN
Lampiran 1. Hasil penapisan fitokimia dari getah kulit buah pisang goroho
Keterangan hasil pengamatan :
- : Tidak ada + : Ada No Penapisan Fitokimia Hasil Pengamatan Tes 1 Alkaloid Tidak menimbulkan endapan. Tidak berubah warna menjadi putih atau merah jingga. - 2 Flavonoid Berubah warna menjadi kekuning- kuningan. + 3 Saponin Menimbulkan busa, tetapi busa hanya bertahan sampai 4 menit. + 4 Steroid Tidak berubah warna menjadi warna biru atau hijau. - 5 Terpenoid Berwarna putih keruh, tidak berubah warna merah atau jingga. - 6 Tanin Terjadi perubahan warna menjadi warna hijau kehitaman. +