PENGARUH PERUBAHAN KONSENTRASI KO-SUBSTRAT TERHADAP POPULASI MIKROORGANISME PEMUTUS ZAT WARNA AZO DI BIOREAKTOR MEMBRAN
THE EFFECT OF CO-SUBSTRATE CONCENTRATION ON MICROBIAL POPULATION IN MEMBRANE BIOREACTOR
Dini Adyasari 1 dan Agus Jatnika Effendi 2
Program Studi Teknik Lingkungan Fakultas Teknik Sipil dan Lingkungan, Institut Teknologi Bandung, l Ganesha 10 Bandung 40132
1 dini.adyasari@yahoo.com dan 2 agusje@tl.itb.ac.id
Abstrak : Zat warna azo merupakan masalah utama dari limbah yang dihasilkan oleh industri tekstil. Zat warna azo menjadi begitu berbahaya karena sifatnya yang toksik dan mutagenik untuk kehidupan. Untuk menghilangkan zat warna azo pada air buangan, maka dikembangkan strategi baru untuk pengolahan air buangan  secara  biologi  bernama  bioreaktor  membran  (BRM).  BRM  yang  memiliki  3  tangki,  yaitu anoksik, kontak, dan stabilisasi, akan beroperasi dengan konsentrasi ko-substrat yang divariasikan, yaitu 2%,  4%,  6%,  8%,  dan  10%. Tujuan  penelitian  ini  adalah mengetahui  dinamika  populasi mikroba  yang mempengaruhi  proses  rekayasa  yang  terjadi  di  dalam  BRM,  seperti  penyisihan  warna  dan  zat organik. Parameter  yang  diukur  adalah  perubahan  populasi  mikroba  per  tangki,  identifikasi  jenis  mikroba dominan,  dan  pengaruh  mikroba  terhadap  pendegradasian  warna  dan  zat  organik.  Hasil  menunjukkan bahwa  pertumbuhan  mikroba  optimum  terjadi  di  konsentrasi ko-substrat  6%.  Mikroba  sangat  berperan terhadap  pendegradasian  zat  warna  azo,  terutama  mikroba  di  tangki  anoksik.  Spesies  dominan  yang berpengaruh terhadap proses rekayasa BRM diidentifikasi berjumlah 7 spesies.
Kata Kunci : bioreaktor membran, dinamika populasi bakteri, identifikasi bakteri, pertumbuhan bakteri, zat warna azo
Abstract  :  The  azo  dye  is  the  main  problem  of  the  waste  produced  by  the  textile  industries.  It  is  very dangerous to living entities due to its toxicity and mutagenic properties. In order to remove the properties (color)  of  the  azo  dye  waste  when  disposing  to  the  water  environment,  this  research  developed  a  new concept  using  a  Biology  Treatment  Process  called  as  a  membrane  bioreactor  (BRM).  BRM  has  three tanks,  which  is  anoxic,  contacts,  and  stabilization,  and  it  operates  with  various  co-substrate concentrations,  namely  2%,  4%,  6%,  8%,  and  10%.  The  purpose  of  this  research  is  to  determine  the dynamics of microbial population that affect the engineering process occurs in the BRM, such as azo dyes decolorization  and  organic  matter  removal. Parameters  being  measured  are  the  changes  in  microbial populations in each tank, the identification of dominant microbial species, and the influence of microbes on color and organic matter removal. Results showed that optimum microbial growth occurred in the co- substrate  concentration  of  6%.  Microbes  contribute  significantly  in  azo  dyes  removal,  especially microbes  in  anoxic  tank. There  are  7  species  identified  as  dominant  species  that  contribute  in  the engineering process of BRM.
Keywords : azo dyes, membrane bioreactor, microbial growth, microbial identification, the dynamics of microbial population

## 1. PENDAHULUAN
Dewasa  ini  masalah  kerusakan  lingkungan  sudah  menjadi  isu  penting  bagi semua  negara  terutama  pada  negara  yang  sedang  berkembang  seperti  Indonesia.  Salah satu contoh pencemaran yang sering terjadi masalah air buangan limbah industri tekstil. Air  buangan  yang  dihasilkan  oleh  industri  tekstil  pada  umumnya  mempunyai karakteristik  temperatur  yang  tinggi,  pH  yang  tinggi  atau  rendah,  warna  yang  pekat, mengandung  minyak  dan  lemak,  sabun,  dan  zat  organik  yang  tinggi  yang  dapat menggangu  kehidupan  perairan  dan  badan  air  sehingga  tidak  dapat  dipergunakan  lagi untuk keperluan sehari-hari.
Zat  warna  yang  dominan  digunakan  pada  industri  tekstil  yaitu  zat  warna  azo. Masuknya  komponen  ini  ke  dalam  lingkungan  tidak  diinginkan,  tidak  hanya  karena warna  yang  ditimbulkan  tetapi  juga  karena  beberapa  zat  warna  azo  dan  produk penguraiannya  bersifat  toksik  dan  atau  mutagenik  bagi  kehidupan.  Seiring  dengan  hal tersebut  maka  Peraturan  Pemerintah  Republik  Indonesia  No.  18  Tahun  1994 menetapkan  bahwa  limbah  industri  tekstil  termasuk  limbah  B3  dari  sumber  yang spesifik.  Demikian  juga  berdasarkan  Keputusan  Menteri  Lingkungan  Hidup  KEP- 51/MENLH/10/1995 dan SK Gubernur Kepala Daerah Tingkat I Jawa Barat No.6 tahun 1994  tentang  baku  mutu  limbah  cair  bagi  kegiatan  industri,  dalam  hal  ini  parameter COD  yang  diperbolehkan  maksimum  yaitu  150  mg/L.  Berbagai  proses  pengolahan  air buangan  untuk  industri  tekstil  telah  dikembangkan  diantaranya  proses  biologi,  proses fisika-kimia, proses adsorbsi, proses ozonisasi, proses irradiasi UV, atau kombinasi dari proses  fisik-kimia.  Namun  penerapan  proses  fisik-kimia  dalam  pengolahan  zat  warna memiliki  kelemahan  yaitu  menghasilkan  lumpur  dalam  jumlah  yang  besar  dan memerlukan  biaya  yang  besar.  Tentu  saja  hal  ini  sangat  bertentang  dengan  prinsip industri yang menginginkan keuntungan yang sebesar-besarnya.
Metode  biologi  merupakan  cara  yang  paling  sering  digunakan  untuk pendegradasian  zat  warna  azo  karena  cara  kerjanya  yang  simpel  dan  tidak  memakan biaya  terlalu  mahal  (Poonam,  et  al,  1995).  Zat  warna  azo  umumnya  persisten  untuk didegradasi  pada  kondisi  aerob.  Tetapi  pada  kondisi  anaerob  zat  warna  azo  dapat direduksi  oleh  mikroorganisme  aerob  dan  menghasilkan  amina  aromatik  yang  tidak berwarna  (Brown  and  Hamburger,  1987).  Dengan  demikian  strategi  pengolahan  yang paling  logis  untuk  degradasi  sempurna  zat  warna  azo  adalah  pendekatan  rangkaian anaerob-aerob. Dalam  kasus  ini,  pendekatan tersebut diwujudkan dengan  alat bernama bioreaktor membran.
Bioreaktor  membran  (BRM)  merupakan  kombinasi  proses  lumpur  aktif  pada kontak  stabilisasi,  dimana  proses  pengolahan  air  buangan  yang  ditandai  dengan pertumbuhan  biomassa  tersuspensi,  dengan  sistem  membran  mikro  atau  ultra  filtrasi yang  dapat  menahan  partikel.  Aplikasi  bioreaktor  membran  memiliki  banyak keuntungan  dibandingkan  dengan  pengolahan  air  buangan  secara  konvensional. Keuntungan penggunaan bioreaktor membran antara lain menghasilkan kualitas efluent yang  lebih  baik,  tidak  memerlukan  lahan  yang  luas,  peralatan  membran  yang  sangat kompatibel,  waktu  pengolahan  yang  lebih  singkat,  dan  menghasilkan  lumpur  dalam jumlah yang rendah.
Konsentrasi  mikroba  di  dalam  bioreaktor  merupakan  faktor  penting  yang menentukan kemampuan mikroba dalam mendegradasi limbah. Pada BRM, konsentrasi mikroba  10.000-30.000  mg/l  umum  dijumpai,  demikian  pula  konsentrasi  mikroba  di atas  35.000  mg/l  masih  dapat  diterapkan  pada  BRM  (Stephenson,  et  al,  2000).
Penelitian lain menunjukkan sama sekali tidak ada lumpur  yang dibuang  (zero-sludge wastaged) ketika konsentrasi biomassa yang digunakan mencapai hingga di atas 50.000 mg/l  (Houten,  1997;  Muller,  et  al,  1995).  Adapun  jenis  mikroba  yang  berperan  untuk proses  pendegradasian  warna  zat  azo  biasanya  mencakup  genus  Pseudomonas  sp  dan E.coli (Mustafa and Sponza, 2002).
Tugas  Akhir  ini  akan  membahas  dinamika  populasi  mikroba  yang  mencakup identifikasi  spesies  yang  bertahan  di  setiap  proses  dan  tangki,  kemampuan  mikroba dalam menghadapi perubahan kondisi lingkungan (dalam hal ini perubahan konsentrasi ko-substrat), pertumbuhan populasi di mikroba di tiap proses dan tangki, serta pengaruh mikroba terhadap proses rekayasa yang berlangsung di dalam tangki seperti penyisihan warna  dan  penyisihan  bahan  organik  COD.  Penelitian  dilakukan  untuk  lima  variasi konsentrasi  substrat  sehingga  bisa  diketahui  mikroba  dan  konsentrasi  ko-substrat optimum untuk penyisihan senyawa-senyawa diatas.

## 2. METODOLOGI
Bioreaktor membran yang digunakan merupakan jenis reaktor kontinyu sehingga harus  diberi  input  atau  umpan  setiap  harinya.  Umpan  ini  berupa  zat  warna  azo  jenis Remazol Black V, air, serta ko-substrat berupa limbah tempe dengan variasi konsentrasi (%  volume):  2,  4,  6,  8,  dan  10.  Pergantian  variasi  substrat  dilakukan  jika  kondisi bioreaktor  sudah  tunak  untuk  setiap  variasi.  Kondisi  tunak  ditandai  dengan  perbedaan fluktuasi  penyisihan  COD  yang  tidak  lebih  dari  10%  selama  3  hari  berturut-turut. Umpan diset agar memiliki pH 7-8. Karena limbah tempe umumnya memiliki pH asam, maka umpan perlu ditambah NaOH agar pH naik ke angka 7-8.
Bioreaktor terdiri dari tiga tangki,  yaitu anoksik, kontak, dan stabilisasi. Dalam tiap tangki sudah diberikan mixed culture dimana sumber mikroorganisme berasal dari lumpur septik tank, lumpur IPAL tekstil, dan lumpur dari industri zat warna.
Gambar 1. Skema Bioreaktor Membran
Sampling dilakukan setiap hari dari tangki anoksik, kontak, maupun stabilisasi. Untuk  perhitungan  jumlah  mikroba  digunakan  metode  Total  Plate  Count  (TPC).  Tiap sampel  diencerkan  dengan  akuades  steril  sampai  rasio  pengenceran  10 -6 .  Begitu diencerkan,  suspensi  ditanam  di  media  agar  nutrisi  pada  cawan  petri  dengan menggunakan  metode  pour  plate.  Penanaman  ini  dilakukan  secara  duplo  agar  lebih akurat.  Cawan  petri  berisi  suspensi  ini  diinkubasi  semalam  dengan  suhu  37 o C,  lalu dihitung  koloninya  dengan  menggunakan  colony  counter.  Kultur  campuran  ini  dapat diisolasi lagi menjadi kultur murni untuk keperluan identifikasi mikroba.
Identifikasi  menggunakan  metode  uji  biokimia,  kemudian  hasilnya  disesuaikan dengan  Bergey's  Manual  of  Determinative  Bacteriology.  Beberapa  uji  atau  prosedur yang  dipakai  untuk  keperluan  identifikasi  adalah  pewarnaan  Gram,  pengamatan morfologi  koloni,  hidrolisa  pati,  hidrolisa  lemak,  uji  sitrat,  gelatin,  glukosa,  sukrosa, laktosa,  H 2 S,  motilitas,  uji  Methyl  Red-Vogas  Proskauer  (MR-VP),  reaksi  katalase, hidrolisa kasein, uji nitrat, uji indol, dan reaksi urease.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
3.1   Pengaruh Perubahan Konsentrasi Ko-Substrat terhadap Populasi Mikroba
Penelitian  ini  menggunakan  limbah  tempe  sebagai  ko-substrat.  Dalam  proses penyisihan  warna,  mikroorganisme  membutuhkan  ko-substrat  sebagai  sumber  nutrisi terutama  sebagai  sumber  karbon,  sehingga  mikroorganisme  memiliki  energi  untuk menghasilkan enzim yang dapat digunakan untuk proses penyisihan warna, yaitu enzim azo reduktase. Beberapa kandungan nutrisi yang ada di limbah tempe dan esensial untuk sumber  energi  mikroba  diantaranya  nitrogen,  fosfor,  Ca,  Mg, K,  Na,  dan  Fe.  Idealnya penambahan  ko-substrat  akan  memperbanyak  juga  populasi  mikroba,  karena  dengan tercukupinya nutrisi, maka perkembangbiakan mikroba semakin lancar.
Gambar 2. Perubahan Konsentrasi Ko-Substrat terhadap Populasi Bakteri di Tangki
Anoksik - 1 2 3 4 5 2% 4% 6% 8% Jumlah B akter i (10 6 sel/ml) Konsentrasi Substrat
Gambar 3. Perubahan Konsentrasi Ko-Substrat terhadap Populasi Bakteri di Tangki Kontak
Gambar 4. Perubahan Konsentrasi Ko-Substrat terhadap Populasi Bakteri di Tangki Stabilisasi
Gambar 5. Jumlah Populasi Bakteri per Tangki
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  populasi  mikroba  terus  naik  dari konsentrasi 2% ke 6%. Namun pada konsentrasi ko-substrat 8%, populasi menurun. Hal ini disebabkan pada konsentrasi 6% semua ko-substrat dikonsumsi oleh mikroba dengan optimum,  namun  pada    konsentrasi  8%  terjadi  redundansi  ko-substrat.  Artinya  beban
0 2 4 6 8 2% 4% 6% 8% Jumlah B akter i (10 6 sel/ml) Konsentrasi Substrat 0 2 4 6 8 10 2% 4% 6% 8% Jumlah B akter i (10 6 sel/ml) Konsentrasi Substrat 2871820 5210666 4260769 Anoksik Kontak Stabilisasi Jumlah (sel/m l) Jenis Tangki
organik yang diterima oleh mikroorganisme tidak sebanding dengan jumlah konsentrasi mikroorganisme yang ada. Lebih jauh lagi, konsentrasi ko-substrat yang terlalu banyak di lingkungan hidup mikroba malah dapat mengubah ko-substrat tersebut menjadi racun dan bersifat toksik bagi mikroba itu sendiri. Akibatnya populasi mikroba pun menurun.
Gambar  5  menunjukkan  jumlah  populasi  bakteri  per  tangki,  bisa  dilihat  dari gambar  tersebut  bahwa  tangki  kontak  memiliki  jumlah  bakteri  tertinggi.  Padahal  jika ditinjau dari banyaknya lumpur yang terkandung di tangki stabilisasi, seharusnya tangki tersebut-lah  yang  memiliki  jumlah  bakteri  tertinggi.  Idealnya  lumpur  yang  baik  akan mengandung  biomassa  yang  tinggi.  Ketidaksesuaian  ini  disebabkan  oleh  kurang lancarnya resirkulasi yang terjadi di pipa yang menghubungkan membran dengan tangki stabilisasi.  Jika  resirkulasi  berjalan  benar,  maka  retentat  dari  membran  akan  masuk  ke stabilisasi.  Hal  ini  nyatanya  tidak  terjadi  pada  BRM.  Kinerja  resirkulasi  yang  kurang memuaskan  ini  bisa  disebabkan  oleh  pengaturan  tekanan  pipa  resirkulasi  yang  kurang optimum.

## 3.2  Pengaruh Perubahan Populasi Mikroba pada Pendegradasian Zat Warna Azo
Banyaknya  konsentrasi  mikroba  juga  ikut  mempengaruhi  efisiensi  penyisihan warna.  Penelitian  ini  membandingkan  tangki  mana  yang  akan  mengalami  efisiensi penyisihan  warna paling  besar. Grafik di  bawah  tidak menunjukkan kuantitas efisiensi penyisihan warna maupun jumlah mikroba, melainkan hanya membandingkan dinamika perubahan kuantitas dari kedua parameter.
Gambar 6. Perbandingan Jumlah Mikroba dengan Efisiensi Penyisihan Warna di Tangki Anoksik
Gambar 7. Perbandingan Jumlah Mikroba dengan Efisiensi Penyisihan Warna di Tangki Kontak
0 10
20 30
40 50 60 Hari Efisiensi Penyisihan Warna (%) Jumlah Mikroba (*10^5 sel/ml)
1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39 41 43 45 47 49 51 53 55 Hari Efisiensi Penyisihan Warna (%) Jumlah Mikroba (*10^6 sel/ml)
Gambar 8. Hubungan Antara Jumlah Mikroba dengan Efisiensi Penyisihan Warna di Tangki Stabilisasi
Dari grafik di atas dapat dilihat bahwa efisiensi penyisihan warna terbesar terjadi di tangki anoksik, dimana efisiensi mencapai angka diatas 70% sedangkan di tangki lain angkanya  lebih  kecil  dari  70%.  Jumlah  populasi  mikroba  tangki  anoksik  rata-rata berbanding lurus dengan efisiensi penyisihan warna. Dimana jika efisiensi meningkat di hari  tertentu,  populasi  mikroba  juga  meningkat,  dan  sebaliknya.  Keadaan  ini  tidak terlalu  terlihat  di  tangki  kontak  dan  stabilisasi.  Pada  kedua  tangki  tersebut,  dinamika populasi mikroba tidak sejalan dengan naik turunnya efisiensi penyisihan warna.
Hal  ini  disebabkan  keadaan  aerob-anaerob  yang  berlaku  di  tangki  anoksik merupakan  kondisi  ideal  untuk  pendegradasian  rantai  kimia  azo  yang  bersifat  dobel nitrogen.  Tahap  pertama  meliputi  pemutusan  reduktif  ikatan  dobel  nitrogen  zat  warna azo yang menghasilkan pembentukan amina aromatik yang tidak berwarna tetapi toksik. Tahap  kedua  meliputi  degradasi  amina  aromatik.  Reduksi  zat  warna  azo  biasanya memerlukan  kondisi  anaerob,  sedangkan  biodegradasi  amina  aromatik  umumnya dilakukan secara aerob (Van Der Zee and Villaverde, 2002).
Di  tangki  lain,  kondisinya  aerob  obligat  sehingga  zat  warna  azo  tidak  bisa disisihkan secara optimum. Tangki lain, misalnya stabilisasi, akan lebih optimum untuk pendegradasian  bahan  organik  seperti  COD  karena  sifatnya  yang  aerob.  Proses  yang terjadi  pada  tangki  stabilisasi  adalah  penyempurnaan  oksidasi  bahan  pencemar  yang telah  diabsorpsi,  penghasilan  sel-sel  baru  berupa  bioflok  dan  penstabilan  bioflok. Bioflok  yang sudah  stabil  siap untuk  diresirkulasi kembali pada tangki anoxic. Tangki kontak  dimanfaatkan  untuk  menyerap  bahan-bahan  organik  oleh  mikroorganisme. Tangki kontak berfungsi juga untuk menghilangkan metabolit-metabolit yang terbentuk dari tangki anoxic.
Jika dilihat  dari Gambar  1, Gambar  2, dan  Gambar 3,  tangki  anoksik memiliki jumlah  mikroba  yang  paling  sedikit  dibanding  kedua  tangki  lainnya.  Tangki  anoksik memiliki populasi mikroba rata-rata 2.8 juta sel/ml, sedangkan tangki kontak memiliki mikroba  sebanyak  5.2  juta  sel/ml,  dan  tangki  stabilisasi  memiliki  rata-rata  4.2  juta sel/ml.  Selain  faktor  aerob-anaerob,  ada  faktor  lain  yang menyebabkan  tangki  anoksik memiliki  efisiensi  penyisihan  warna  yang  lebih  baik  dibanding  kedua  tangki  lainnya walaupun  jumlah  mikrobanya  cukup  kecil,  yaitu  persentase  mikroba  jenis  apa  yang terkandung di dalam tangki.
Mikroba  di  tangki  anoksik,  sesuai  dengan  perlakuannya,  bisa  bersifat  aerob, aerob fakultatif, atau anaerob obligat. Sedangkan mikroba yang hidup di tangki kontak dan  stabilisasi  akan  mayoritas  bersifat  aerob  atau  aerob  fakultatif.  Berikut  adalah  pie chart yang memperlihatkan persentase spesies mikroba per tangki.

## 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39 41 43 45 47 49 51 53 55

## Hari
Efisiensi Penyisihan Warna (%) Jumlah Mikroba (*10^6 sel/ml)
Gambar 9. Persentase Jenis Bakteri di Tangki Anoksik (Keterangan: BK=Bulat Kuning, BTM=Bulat Tepi Memudar, GB=Tidak Beraturan, TG=Bulat Tepi Gerigi, BTP=Bulat Tembus Pandang, BO=Bulat Oranye, R=Rhizoid)
Gambar 10. Persentase Jenis Bakteri di Tangki Kontak (Keterangan: BK=Bulat Kuning, BTM=Bulat Tepi Memudar, GB=Tidak Beraturan, TG=Bulat Tepi Gerigi, BTP=Bulat Tembus Pandang, BO=Bulat Oranye, R=Rhizoid)
Gambar 11. Persentase Jenis Bakteri di Tangki Stabilisasi
(Keterangan: BK=Bulat Kuning, BTM=Bulat Tepi Memudar, GB=Tidak Beraturan, TG=Bulat Tepi Gerigi, BTP=Bulat Tembus Pandang, BO=Bulat Oranye, R=Rhizoid)
42% 11% 0% 0% 37% 9% 1% BK BTM GB TG BTP BO R 48% 8% 1% 2% 30% 0% 11% BK BTM GB TG BTP BO R 54% 6% 4% 0% 35% 1% 0% BK BTM GB TG BTP BO R
Penamaan  didasarkan  bentuk  morfologi  bakteri  ketika  masih  berada  di  dalam kultur  campuran  di  cawan  petri.  Dari  pie  chart  dapat  dilihat  bahwa  mikroorganisme dominan  yang  ada  di  tiap  tangki  adalah  spesies  BK  dan  BTP.  Sedangkan  bakteri  lain mengalami  penurunan  atau  kenaikan  persentase  dari  tangki  anoksik  ke  stabilisasi. Contohnya  bakteri  BO  dan  BTM  hanya  dominan  berada  di  tangki  anoksik,  bakteri  R dan  TG  hanya  dominan  di  tangki  kontak,  dan  bakteri  GB  hanya  dominan  di  tangki stabilisasi.  Dinamika  populasi  bakteri  ini  dipengaruhi  oleh  banyak  hal,  seperti ketersediaan oksigen, sumber nutrisi, senyawa toksik, dan lain-lain.
Identifikasi  yang  dilakukan  terhadap  jenis  bakteri-bakteri  tersebut  sejauh  ini baru berupa pewarnaan Gram dan spora. Berikut adalah hasilnya.
Tabel 1. Identifikasi Bakteri Berdasarkan Pewarnaan Jenis Bakteri Bentuk dan Pewarnaan Gram Pewarnaan Spora BK Batang, Gram Negatif Tidak Ada Spora BTP Oval, Gram Negatif Tidak Ada Spora BTM Batang, Gram Negatif Tidak Ada Spora BO Bulat, Gram Negatif Tidak Ada Spora TG Batang, Gram Positif Spora R Batang, Gram Positif Spora GB Batang, Gram Positif Spora
Dari  Tabel  1  dapat  dilihat  bahwa  mayoritas  bakteri  yang  teridentifikasi berbentuk  batang.  57%  dari  total  bakteri  bersifat  Gram  Negatif  dan  tidak  mempunyai spora. Sedangkan sisanya bersifat Gram Positif dan memiliki spora.

## 4. KESIMPULAN
Beberapa kesimpulan yang didapat dari penelitian ini:
1. Perubahan  konsentrasi  ko-substrat  menyebabkan  perubahan  populasi  mikroba  di tangki anoksik, kontak, maupun stabilisasi.
2. Konsentrasi ko-substrat optimum untuk pertumbuhan (growth) mikroba adalah 6%.
3. Efisiensi  penyisihan  warna  di  tangki  anoksik  lebih  baik  dibandingkan  tangki lainnya, dengan nilai efisiensi diatas 70%.
4. Efisiensi warna di tangki anoksik berbanding lurus dengan jumlah mikroba.
5. Persentase mikroba mengalami perubahan di tiap tangki. Jenis mikroba yang selalu ada dan dominan tiap tangki adalah bakteri BK (42%-54%) dan BTP (30%-37%).
6. Mikroba lain yang terdeteksi adalah bakteri BTM (5%-11%), BO (dominan hanya di tangki anoksik), R (dominan hanya di tangki kontak), TG (dominan hanya di tangki kontak), dan GB (dominan hanya di tangki stabilisasi).

## DAFTAR PUSTAKA
Brown D., Hamburger B. (1987) The degradation of dye stuffs Part III:Investigation of their ultimate degradability. Chemosphere 1987, Vol 12, pp. 397 - / 404.
Houten,  R.,  D.  Eikelboom.  (1997).  High  Performance  Membrane  Bioreactors  a Physiological Approach. MBR1-Proc. 1 st Intl. Mtg. on Membrane Bioreactors for Wastewater Treatment. Cranfield University. Cranfield.UK
Müller, E.B., A.H. Stouthamber, H.W. Verseveld, D.H. Ekelboom. (1995). Aerobic Domestic Wastewater Treatment in a Pilot Plant With Complete Sludge Retention By Crossflow Filtration. Water Research, Vol 29, pp. 1179-1189.
Mustafa,  I.,  Sponza,  D.  (2002).  Effect  of  oxygen  on  decolorization  of  azo  dyes  by Escherichia  coli  and  Pseudomonas  sp.  and  fate  of  aromatic  amines.  Process Biochemistry, Vol 38, pp. 1183 - 1192, 2003.
Poonam,  N.,  Banath,  I.,  Singh,  D.,  Marchant,  J.  (1995).  Microbial  Process  for  the Decolorization  of  Textile  Effluent  Containing  Azo,  Diazo,  and  Reactive  Dyes.
Process Biochemistry, Vol. 31, No. 5, pp. 435-442, 1996.
Stephenson,  T.,  Judd,  S.,  Jefferson,  B.,  Brindle,  K.  (2000).  Membrane  Bioreactors for Wastewater Treatment. IWA Publishing Company. UK
Van  der  Zee,  F.P.,  Villaverde,  S.  (2002).  Combined  anaerobic-aerobic  treatment  of azo  dyes—a  short  review  of  bioreactor  studies.  Water  Research,  Vol  39,  pp. 1425–1440.