Ketahanan Ikan Kerapu Hibrida Cantang ( Epinephelus fuscoguttatus >< Epinephelus lanceotatus ) Terhadap Infeksi Virus dan Bakteri
Ketahanan Ikan Kerapu Hibrida Cantang ( Epinephelus fuscoguttatus >< Epinephelus lanceotatus ) Terhadap Infeksi Virus dan Bakteri
Indah Mastuti, Dewi Syahidah, Ketut Mahardika
Laboratorium Patologi Balai Besar Riset Budidaya Laut dan Penyuluhan Perikanan Email : mastuti_indah@yahoo.com

## ABSTRAK
Ikan  kerapu  hibrida  cantang  memiliki  ketahanan  yang  baik  terhadap  patogen.  Penelitian  ini menguji  ketahanan  ikan  kerapu  cantang  terhadap  infeksi  GSDIV  (grouper  sleepy  disease iridovirus),  SBIV (sea bass iridovirus), VNN (viral nervous  necrosis)  dan bakteri Vibrio sp. Sejumlah  150  ekor  ikan  kerapu  hibrida  cantang  (rata-rata  panjang  total  11,01±1,6  cm  dan berat  14,67±1,09  g)  dibagi  dalam  5  perlakuan  dengan  3  ulangan  bak.  Setiap  ikan  diinjeksi secara  intramuskular  dengan  200  µl:  PBS  (A),  inokulum  GSDIV  (B),  inokulum  SBIV  (C), inokulum VNN (D) dan 10 10 cfu/ml suspensi Vibrio sp. (E). Parameter meliputi gejala klinis, mortalitas ikan, hematokrit pada saat dimulai gejala dan penyembuhan, serta histologi organ. Pengamatan dimulai setelah  infeksi buatan hingga kematian terhenti  sampai 14 hari. Gejala klinis  dimulai  5  hari  pasca  infeksi  (HPI)  yaitu  perubahan  warna  menjadi  hitam  atau  pucat, berkurangnya  nafsu  makan  dan  berenang  lemah.  Gejala  ini  ditunjukkan  oleh  ikan  yang diijeksi  patogen  (B,  C,  D  dan  E).  Sementara  kematian  dimulai  saat  6  HPI  pada  ikan  yang diinjeksi dengan patogen yang berupa virus (B, C, dan D). Kadar hematokrit ikan normal (A) meningkat hingga 7,5% pada akhir pengamatan. Hal ini terjadi juga pada ikan yang diinfeksi dengan GSDIV (B;19,5%) dan VNN (D;4%). Sementara penurunan kadar hematokrit terjadi pada  ikan  yang  diinjeksi  dengan  SBIV  (C;4,16%)  dan Vibrio sp.  (E;9,34%).  Gambaran histologi  menunjukkan  bahwa  ikan  yang  diinjeksi  patogen  mengalami  kerusakan  jaringan terutama  pada  limpa  dan  ginjal  depan  (B,  C,  D,  E).  Ikan  kerapu  hibrida  cantang  tahan terhadap  infeksi  bakteri Vibrio sp.,  meskipun  menunjukkan  gejala  klinis  yang  sama  dengan infeksi  virus,  namun  infeksi  virus  dapat  menyebabkan  kematian  setelah  memperlihatkan gejala klinis.
Kata kunci: Infeksi, virus, bakteri, kerapu hibrida cantang

## ABSTRACT
Hybrid  grouper  of  cantang  (Epinephelus  fuscoguttatus><Epinephelus  lanceotatus)  is  known to  have  good  resistance  to  pathogens.  This  study  was  conducted  to  test  the  resistence  of cantang  grouper  to  GSDIV  (grouper  sleepy  disease  iridovirus,  SBIV  (sea  bass  iridovirus), VNN  (viral  nervous  necrosis)  and  Vibrio  Sp.  A  total  of  150  groupers  were  divided  into  5 treatments with 3 replications. Each fish was injected intramuscularly with  200 µl: PBS (A), GSDIV inoculum (B),SBIV inoculum (C), VNN inoculum (D), and 10 10 cfu/ml of Vibrio sp. suspension  (E).Observation  were  made  on  clinical  symptoms,  mortality,  hematocrit  when shymptoms began and healing, and histology of internal organs. Observation were done until 14  days.Clinical  infection  began  5  day  post  incfection  (DPI),  fish  showed  discoloration  of black or pale, loss apetite and weak swiming. This symptoms is indicated by infected fish (B, C, D & E). Mortality began at 6 DPI on viruses  infected fish (B, C, D). Hematocrit levels of normal  fish  (A)  increased  up  to  7.5%.  Increasement  also  showed  by  GSDIV  and  VNN
Ketahanan Ikan Kerapu Hibrida Cantang ( Epinephelus fuscoguttatus >< Epinephelus lanceotatus ) Terhadap Infeksi Virus dan Bakteri
infected  fish  (B;  19.5%    and  D;  4%),  While  decrease  in  hematocrit  levels  occured  in  fish infected  with  SBIV  (C;  4.16%)  and  Vibrio  sp.  (E;  9.34%).Histological  observation demonstrated  that  some  damaged  tissue  within  eye,  spleen  and  forehead  kidney  of  the infected  fish  (B,C,D,E).  :  Hybrid  grouper  “Cantang”  tends  to  resistant  for  bacteria  (Vibrio sp.)  infection,  even  though  it  showed  similar  clinical  symptoms  with  viruses  infection, however,  viruses  (GSDIV,  SBIV  and  VNN)  caused  mortality  of  hybrid  grouper  after  the initial clinical symptoms.
Key words: Infection, Viruses, Bacteria, Cantang grouper

## 1. PENDAHULUAN
Kerapu  hibrida  cantang  (hasil  perkawinan  silang  antara  induk  betina Epinephelus  fuscoguttatus ><  dan  induk  jantan E.  lanceotatus )  merupakan  spesies yang  disukai  para  pembudidaya  karena  memiliki  laju  pertumbuhan  dan  koefisien pertumbuhannya lebih besar dibandingkan dengan benih kerapu hibrida cantik (hasil perkawinan  antara  induk  betina E.  fuscoguttatus ><  dan  induk  jantan E.  microdon ) dan  kerapu  macan  , E.  fuscoguttatus ,  (Sutarmat et  al., ).  Namun  demikian,  kematian massal  akibat  infeksi  mikroorganisme  pada  budidaya  ikan  kerapu  hibrida  cantang masih sering ditemukan. Infeksi viral nervous necrosis (VNN) yang disebabkan oleh piscine  nodavirus  masih  menjadi  penyebab  utama  kematian  massal  di hatchery , sedangkan  iridovirus  (genus  Megalocytivirus)  sering  menimbulkan  kematian  pada ikan kerapu hibrida cantang pada tahap pendederan di hatchery maupun pembesaran di  keramba  jaring  apung  (Sembiring et  al .,  2018;  Mahardika et  al .,  2019).  Selain kedua virus tersebut, bakteri dari genus Vibrio sp. juga sering menimbulkan masalah pada  budidaya  ikan  kerapu. Vibrio sp.  menimbulkan  borok  pada  sirip  (sirip  geripis) (Ebi et al ., 2018); Amalina et al ., 2019). Vibrio sp juga dapat menimbulkan luka atau borok pada ikan (Desrina et al., 2006).
Iridovirus  adalah  virus  DNA  yang  menyerang  organ  hematopoetik  sedangkan VNN adalah RNA virus yang menyerang jaringan saraf. Sementara Vibrio sp. adalah bakteri gram negatif yang menyerang jaringan terbuka /infeksi sekunder (Koeshayani et  al .,  2001).  Virus  DNA  biasanya  menginfeksi  melalui  jalur  litik.  Sedangkan  virus RNA  biasanya  menginfeksi  dengan  jalur  lisogenik.  Sementara  bakteri  merupakan
Ketahanan Ikan Kerapu Hibrida Cantang ( Epinephelus fuscoguttatus >< Epinephelus lanceotatus ) Terhadap Infeksi Virus dan Bakteri
patogen ektraseluler yang akan menginfeksi bila sistem pertahanan nonspesifik tidak berhasil  mencegahnya (Uribe et  al .,  2011).  Oleh  sebab  itu  diduga  VNN  merupakan agen  infeksi  terkuat.  Meskipun  demikian  perlu  kiranya  dilakukan  uji  laboratorium untuk  menentukan  mikroorganisme  yang  memiliki  patogenisitas  tinggi  terhadap juvenile kerapu hibrida cantang. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui ketahanan ikan kerapu hibrida cantang terhadap infeksi virus dan bakteri.

## 2. METODE PENELITIAN

## 2.1 Ikan uji
Sebanyak  150  ekor  ikan  kerapu  cantang  Ikan  uji  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  ikan  kerapu  hibrida  cantang  (rata-rata  Panjang:  11,01±1,6  cm dan  berat:  14,67±1,09  gram).  sehat  hasil  pembenihan  di  hatchery  Balai  Besar  Riset Budidaya  Laut  dan  Penyuluhan  Perikanan  (BBRBLPP),  Gondol-Bali  diaklitimasi dalam  bak  beton  volume  500  liter  selama  1  minggu  sebelum  di  uji  tantang  dengan virus dan bakteri.

## 2.2. Inokulum virus dan isolat bakteri
Sejumlah  3  isolat  virus  yaitu  VNN,  Iridovirus  dari  isolate  GSDIV  (grouper sleepy disease iridovirus) dan SBIV (sea bass iridovirus) digunakan untuk uji tantang. 3  isolat  tersebut  merupakan  stok  isolat  yang  disimpan  dalam dep  freezer (-80  C) dalam  bentuk  inokulum.  Pembuatan  inokulum  virus  mengikuti  prosedur  publikasi sebelumnya (Mahardika dan Mastuti, 2010). Isolat bakteri Vibrio sp. merupakan hasil isolasi dari ikan kerapu macan yang sakit atau borok.
2.3. Uji ketahanan
Uji ketahanan  kerapu hibrida cantang dilakukan dengan infeksi buatan  melalui injeksi intramuskular (200 µl inokulum/ekor ikan). Ikan uji dibagi dalam 5 perlakuan dengan  3  ulangan.  Setiap  perlakuan  diinjeksi  dengan  :  PBS  (A),  inokulum  GSDIV (B), inokulum SBIV(C), inokulum VNN (D) dan 10 10 cfu/ml suspensi Vibrio sp. (E).
Ikan  yang  telah  diberi  perlakuan  kemudian  dipelihara  dalam  15  bak  plastik  volume 100 liter.
Ketahanan Ikan Kerapu Hibrida Cantang ( Epinephelus fuscoguttatus >< Epinephelus lanceotatus ) Terhadap Infeksi Virus dan Bakteri
Pengamatan  dilakuan  terhadap  gejala  klinis,  mortalitas  ikan,  hematokrit  pada saat  dimulai  gejala  dan  penyembuhan,  serta  histologi  organ.  Ikan-ikan  tersebut dipelihara selama 14 hari. Data yang diperoleh dianalisis secara deskriptif.

## 2.4. Konfirmasi PCR
Ikan yang mati setelah uji tantang diambil limpa (GSDIV dan SBIV) dan mata (SBIV)  untuk  konfirmasi  terjadinya  infeksi  oleh  patogen  tersebut  dengan  PCR.  Uji PCR  dilakukan  menggunakan  primer  spesifik  untuk Megalocytivirus (GSDIV  dan SBIV) menurut Kurita et al (1998) dan VNN menurut Nishizawa et al (1997).

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Gejala klinis dimulai 5 hari pasca infeksi (HPI) yaitu perubahan warna menjadi hitam  atau  pucat,  berkurangnya  nafsu  makan  dan  berenang  lemah.  Gejala  ini ditunjukkan  oleh  ikan  yang  diijeksi  patogen  (B,  C,  D  dan  E).  Sementara  kematian dimulai saat 6 HPI pada ikan yang diinjeksi dengan patogen yang berupa virus (B, C, dan D) (Grafik 1).
Grafik 1. Persen kematiaan kumulatif setelah uji tantang Graphic 1. Pencentage of cumulative mortality during the experiment
Berdasarkan  uji  dengan  PCR,  ikan  yang  mengalami  kematian  pada  perlakuan  B,  C dan D positif terinfeksi GSDIV, SBIV dan VNN (Gambar 1)
Ketahanan Ikan Kerapu Hibrida Cantang ( Epinephelus fuscoguttatus >< Epinephelus lanceotatus ) Terhadap Infeksi Virus dan Bakteri
Gambar 1. Konfirmasi infeksi oleh virus VNN (A) dan GSDIV, SBIV (B) Picture 1. PCR confirmation on infection on VNN (A) and  GSDIV, SBIV (B).
Kadar  hematokrit  ikan  normal  (A)  meningkat  hingga  7,5%  pada  akhir pengamatan. Hal ini terjadi juga pada ikan yang diinfeksi dengan  GSDIV (B;19,5%) dan  VNN  (D;4%).  Sementara  penurunan  kadar  hematokrit  terjadi  pada  ikan  yang diinjeksi dengan SBIV (C;4,16%) dan Vibrio sp. (E;9,34%) (Grafik 2).
Grafik 2. Kadar hematokrit ikan uji pada awal dan  akhir pengamatan (%)
A B
Ketahanan Ikan Kerapu Hibrida Cantang ( Epinephelus fuscoguttatus >< Epinephelus lanceotatus ) Terhadap Infeksi Virus dan Bakteri
Graphic 2. Hematocrit level at the initial and  the end of experiment
Gambaran histologi menunjukkan bahwa ikan yang diinjeksi patogen mengalami kerusakan jaringan terutama pada limpa dan ginjal depan (B, C, D, E) (Tabel 1).
Organ Dalam Ulangan  Limpa   Ginjal  Hati  Insang  Usus  Mata Kontrol 1 2 3 Iridovirus 1 x 2 x x 3 x x x SBIV 1 x x x 2 x 3 VNN 1 x x 2 x x x 3 x Bakteri 1 x x x 2 x 3 x x x
Tabel 1. Hasil pengamatan histopatologi organ dalam. Tanda silang (x) menunjukkan adanya kerusakan
Table 1. Histopathological observation of internals organ. The damaged tissue are showed by cross (X) symbol.
Ikan  terinfeksi  VNN  menunjukkan  adanya  vakuola-vakuola  pada  retina  mata. Sementara Limpa dan ginjal depan menunjukkan adanya sel-sel nekrosis (Gambar 2).
.
Gambar  2.  Irisan  histopatologi  organ  dalam  kerapu  cantang.  A  Sel  hematopoetik  pada  limpa  yang terinfeksi GSDIV menyebabkan sel nekrosis sehingga jaringan mengalami degenerasi. B. Sel hematopoetik pada ginjal depan ikan terinfeksi SBIV nekrosis dengan inti piknotik. C. Mata  ikan  kerapu  cantang  terinfeksi  VNN.  Sel  syaraf  mengalami  nekrosis  dengan vakuolasi pada lapisan dalam intrasitoplasmik dan lapsan ganglion sel.
Figure 2. Histopatology section of hybrid grouper infected with virus. A. hematopoietic cells in spleen infected with GSDIV  were necrotized resulting in degeneration cells. Enlanged cells were occurred  in  the  splenic  pulp,  B.  Hematopoietic  cells  in  forehead  kidney  infected  with SBIV  were  necrotized  with  pyknotic  nucleus,  C.  Eye  of  hybrid  grouper  infected  VNN.
Ketahanan Ikan Kerapu Hibrida Cantang ( Epinephelus fuscoguttatus >< Epinephelus lanceotatus ) Terhadap Infeksi Virus dan Bakteri
Nerve cells are necrotized with intracytoplasmic vacuolation in the inner nuclear layer and ganglion cell layer (arrow), (40x).
Isolat  iridovirus,  genus  Megalocytivirus  yang  menginfeksi  ikan  kerapu  bebek ( Cromileptes  altivelis dan  ikan  kerapu  sunu  ( Plectropomus  leopardus )    berdasarkan analisa sekuen gen Pst1  memiliki kemiripan dengan isolat ISKNV (infectious spleen and kidney necrosis virus), sedangkan isolat iridovirus yang menginfeksi ikan kerapu macan  dan  kakap  putih  ( Lates  calcarifer )  memiliki  kemiripan  dengan  isolat  RSIV (red  sea  bream  iridovirus)  (Mahardika  dan  Mastuti,  2016).  Temuan  ini  diperkuat dengan  analisa  sekuen  DNA  beberapa  ikan  budidaya  laut  di  Indonesia  berdasarkan major capsid protein (MCP), ATPase, DNA polymerase, CY15 dan IRB6 dilaporkan memiliki  kemiripan  dengan  isolat  ISKNV  dan  RSIV (Murwantoko et  al .,  2018). Iridovirus juga dilaporkan menginfeksi ikan kerapu hibrida cantang yang didederkan di hatchery maupun  dibesarkan  di  keramba  jaring  apung  (Sembiring et  al .,  2018). Akan tetapi hasil uji tantang GSDIV dan SBIV mengindikasikan bahwa ikan kerapu hibrida  cantang  tahan  terhadap  kedua  isolat  virus  tersebut.  Hasil  analisa  hematokrit menunjukkan  nilai  30,5-33,67%  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  nilai  hematokrit ikan    kerapu  lumpur  yang  terinfeksi  GSDIV  (20-25%)  yang  mengindikasikan terjadinya  anemia  berat (Johnny, et  al .,  2009).  Anemia  juga  ditunjukkan  dengan warna insang  yang pucat (Koesharyani et al ., 2001) dan nekrosis dan degenerasi sel hematopoitik  (Mahardika et  al .,  2004).  Masih  tingginya  nilai  hematocrit  pada  ikan kerapu hibrida cantang menunjukkan bahwa infeksi kedua isolat virus tersebut tidak sampai  menimbulkan  anemia  berat  yang  berimplikasi  dengan  rendahnya  mortalitas yang ditimbulkannya.
VNN merupakan kendala utama penyebab kematian massal pada ikan kerapu dan kakap putih terutama di hatchery , walaupun juga sering terjadi di pembesaran ikan di keramba  jaring  apung  (Sembiring et  al .,  2018;  Mahardika et  al., 2019).  Virus  ini menyerang  susunan  saraf  pusat,  namun  ikan  kerapu  hibrida  cantik  yang  terinfeksi VNN memiliki nilai hematokrit dan hemoglobin sebesar 22,4±11,28% dan 7,33±2,36 100g/ml  dibandingkan  dengan  ikan  yang recovery (26,4±8,62%  dan  7,44±1,79
Ketahanan Ikan Kerapu Hibrida Cantang ( Epinephelus fuscoguttatus >< Epinephelus lanceotatus ) Terhadap Infeksi Virus dan Bakteri
100g/ml  dan  ikan  sehat  (34,6±5,94%  dan  8,68±1,59  100g/ml)  (Mahardika et  al., 2016).  Hasil  tersebut  berbeda  dengan  nilai  hematokrit  ikan  kerapu  hibrida  cantang yang  terinfeksi  virus  dalam  penelitian  ini  sebesar  43,83-47,83%  yang  berimplikasi terhadap mortalitas yang ditimbulkannya  masih rendah yaitu 40%. Beberapa spesies kerapu  seperti  kerapu  bebek,  kerapu lumpur,  kerapu  sunu,  kerapu macan  dan  kakap putih  dilaporkan  sensitif  terhadap  infeksi  VNN  dengan  mortalitas  hingga  80% (Senggagau, 2011).
Vibrio sp.  merupakan  agen  penyebab  vibriosis  pada  ikan  kerapu. Vibrio sp. tersebut meliputi: V. alginolyticus, V. anguillarum, V. metchnikovii, V. vulnificus, V. fluvialis,  V.  furnisii,  dan  V.  parahaemolyticus .  Infeksi  Vibrio  sp.  menimbulkan mortalitas  antara  17-46  jam  dengan  gejala hemorarghie pada  sirip  dan  permukaan tubuh  (Nitimulyo et  al .,  2005).  Akan  tetapi,  di  dalam  tubuh  ikan  kerapu  hibrida cantang  yang  dipelihara  di hatchery maupun  keramba  jaring  apung  sudah mengandung Vibrio sp  hingga  10 8 cfu/g 2 ,  sehingga  uji  tantang  suspense  Vibrio  sp 10 10 cfu/ml  tidak  menimbulkan  mortalitas.  Beberapa  uji  tantang V.  harveyii , V. alginoliticus hingga  10 12-13 cfu/ml  yang  dilakukan  pada  ikan  kerapu  hibrida  cantang di Laboratorium BBRBLPP tidak menimbulkan mortalitas. Ikan yang diinjeksi masih terlihat  sehat  dengan  nafsu  makan  tinggi  hingga  14  hari  pemeliharaan.  Oleh  karena itu, kerapu hibrida cantang tahan terhadap infeksi Vibrio sp. Namun, Vibrio sp. dapat menimbulkan  luka  borok  atau fin  root pada  ikan  kerapu  hibrida  cantang  yang awalnya  dipicu  oleh  faktor  lingkungan,  pakan,  kepadatan  ikan,    maupun  infeksi ektoparasit.
Rendahnya  mortalitas  yang  terjadi  ketika  ikan  kerapu  hibrida  cantang  diinfeksi inokulum  virus  iridovirus  dan  VNN  kemungkinan  disebabkan  juga  oleh  kondisi inokulum  virus  yang  sudah  lama  disimpan  dalam dep freezer (>  6  bulan).  Lamanya penyimpanan inokulum dapat menurunkan patogenisitas virus tersebut. Perlu kiranya melakukan  uji  pendahuluan  atau  peremajaan  inokulum  virus  dengan  melakukan  uji tantang  secara  berulang  sebelum  sehingga  diperoleh  patogenisitas  yang  tinggi  (>
Ketahanan Ikan Kerapu Hibrida Cantang ( Epinephelus fuscoguttatus >< Epinephelus lanceotatus ) Terhadap Infeksi Virus dan Bakteri

## 70%).

## 4. KESIMPULAN
Ikan kerapu hibrida cantang tahan terhadap infeksi bakteri Vibrio sp., meskipun menunjukkan gejala klinis yang sama dengan infeksi virus, namun infeksi virus dapat menyebabkan kematian setelah memperlihatkan gejala klinis.

## 5. REFERENSI
Amalina  NZ,  Dzarifah  Z,  Amal  MNA,      Yusof  MT,      Zamri ‐ Saad  M,      Al ‐ saari  N, Tanaka M,   Mino S, Sawabe T, Ina ‐ Salwany MY. 2019. Recent Update on the  prevalence  of Vibrio species  among  cultured  grouper  in  Peninsular Malaysia. Aquaculture Research.; 00: 1–9.
Desrina,  Taslihan  A,  Ambariyanto,  Suryaningrum  S.  2006.  Uji  Keganasan  Bakteri
Vibrio pada Ikan Kerapu Macan ( Epinephelus fuscoguttatus ). Ilmu Kelautan.; 11 (3): 119 – 125.
Ebi I, Lal TM, Ransangan J, Yong ASK,  Shapawi R. 2018. Susceptibility of Hybrid Grouper (Epinephelus fuscogutattus ♀ × Epinephelus lanceolatus ♂) to Vibrio Harveyi VHJR7. AACL Bioflux.; 11(1): 37-42.
Johnny  F,  Roza  D.  2009.  Kasus  Infeksi  Virus  Irido  pada  Benih  Ikan  Kerapu  Pasir, Epinephelus Corallicola di Hatchery. Jurnal Perikanan (J. Fish. Sci.).; XI (1): 8-12.
Koesharyani I, Roza D, Mahardika K, Johnny  F,  Zafran, Yuasa K. 2001.  Iridovirus. In:  Sugama,  K,  Ikenoue  H,  Kawahara  K  (Eds.) Manual  for  Fish  Disease Diagnosis-II.  Marine  Fish  and  Crustacean  Diseases  in  Indonesia. Gondol Marine  Research  for  Mariculture,  Central  Research  Institute  for  Sea Exploration  and  Fisheries,  Department  of  Marine  Affair  and  Fisheries,  and Japan International Cooperation Agency..
Kurita, J, Nakajima, K., Hirono, I., Aoki,T. 1998. Polymerase Chain Reaction (PCR) Amplification of DNA of Red Sea Bream Iridovirus (RSIV). Fish Pathology.; 33; 17-23.
Mahardika  K,  Zafran,  Yamamoto  A,  Miyazaki  T.  2004.  Susceptibility  of  Juvenile Humpback  Grouper  ( Cromileptes  altivelis )  to  Grouper  Sleepy  Disease Iridovirus (GSDIV). Diseases Aquatic Organism.; 59: 1-9
Mahardika  K,  Mastuti  I.  2010.  Infeksi  Iridovirus  ( Sea  Bass  Iridovirus, Genus : Megalocityvirus ) Pada Ikan Kakap Putih Lates calcarifer dan
Ketahanan Ikan Kerapu Hibrida Cantang ( Epinephelus fuscoguttatus >< Epinephelus lanceotatus ) Terhadap Infeksi Virus dan Bakteri
Patogenesitasnya  Terhadap  Ikan  Kerapu  Bebek Cromileptes  altivelis . Prosiding Seminar Nasional Perikanan Indonesia.; 167-173.
Mahardika K, Mastuti I. 2016. Sequence Analysis of Megalocytivirus Genomic DNA Isolated  from  Various  Grouper  and  Sea  Bass  on  Pst1  Fragment  Area. Prosiding Forum Inovasi Teknologi Akuakultur.; 725-732.
Mahardika K, Mastuti I, Ismi S. 2016.  Pengaruh Suhu dan Waktu Inkubasi Inokulum VNN Terhadap Patogenisitasnya pada Ikan Kerapu Hibrida Cantik. Prosiding Seminar Nasional Perikanan dan Kelautan VI, Brawijaya.; A4: 14-20.
Mahardika  K,  Mastuti  I,  Roza  D,  Syahidah  D,  Astuti  WW,  Ismi  S,  Zafran.  2019. Pemantauan Insidensi Penyakit pada Ikan Kerapu dan Kakap di Hatchery dan Keramba Jaring Apung di Bali Utara. Jurnal Riset Akuakultur; (inpres).
Murwantoko,  Kartikasari  DW,  Handayani  CR,  Whittington  RJ.  2018.  Genotype Determination  of  Megalocytivirus  from  Indonesian  Marine  Fishes. Biodiversitas.; 19(5): 1730-1736
Nishizawa,T.,  Mori,K.,  Nakai,T.,  Furusawa,I.,  Muroga,  K . 1994. Polymerase  Chain Reaction  (PCR)  Amplification  of  RNA  of  Stipped  Jack  Nervous  Necrosis Virus (SJNNV). Disease of Aquatic Organism.; 18: 103-107.
Nitimulyo  KH,    Isnansetyo  A,    Triyanto,  Istiqomah  I,  Murdjani  M.  Isolasi,  2005. Identifikasi  dan  Karakterisasi  Vibrio  spp.  Patogen  Penyebab  Vibriosis  pada Kerapu  di  Balai  Budidaya  Air  Payau  Situbondo.  Jurnal  Perikanan  (J.  Fish. Sci.).; VII(2):80-94.
Sembiring  SBM,  Wibawa  GS,  Mahardika  K,  Zeny  W,  Haryanti.  2018  Prevalensi Infeksi Penyakit Viral Nervous Necrosis (VNN) dan Iridovirus pada Budidaya Ikan Laut. Media Akuakultur. 13(2): 1-9.
Senggagau B. 2011. Uji Resistensi Terhadap Virus VNN pada Beberapa Spesies Ikan Ekonomis. Jurnal Perikanan dan Kelautan.; 1(1): 43-48.
Sutarmat T, Yudha HT. 2013. Analisis Keragaan Pertumbuhan Benih Kerapu Hibrida Hasil  Hibridisasi  Kerapu  Macan  ( Epinephelus  fuscoguttatus )  dengan  Kerapu Kertang ( Epinephelus lanceolatus ) dan Kerapu Batik ( Epinephelus microdon ). J. Ris. Akuakultur; 8(3): 363-372.
Uribe,C., Folch, H., Enriques, R., Moran G. 2011. Innate and Adaptive Immunity in
Teleost Fish : A review.. Veterinary Medicina; 56(10); 486-503.
Ketahanan Ikan Kerapu Hibrida Cantang ( Epinephelus fuscoguttatus >< Epinephelus lanceotatus ) Terhadap Infeksi Virus dan Bakteri