## ISOLASI DAN UJI AKTIVITAS ANTIMIKROBA BAKTERI ASAM LAKTAT DARI BLONDO VIRGIN COCONUT OIL TERHADAP BAKTERI Staphylococcus aureus
ISOLATION AND ANTIMICROBIAL ACTIVITY TEST OF LACTIC ACID BACTERIA FROM BLONDO VIRGIN COCONUT OIL AGAINST Staphylococcus aureus
Burhannuddin Rasyid, Ketut Meina Sandi, I Gede Sudarmanto, I Wayan Karta Jurusan Teknologi Laboratorium Medis Poltekkes Kemenkes Denpasar Korespondensi: Burhannuddin Rasyid. Email : boerhannuddin@gmail.com

## ABSTRAK
Blondo merupakan limbah produksi virgin coconut oil (VCO) dapat menjadi sumber untuk mengisolasi bakteri asam laktat. Bakteri asam laktat mampu menghasilkan zat antimikroba yang dapat dikembangkan untuk mengobati kasus infeksi oleh bakteri Staphylococcus aureus. Bakteri Staphylococcus aureus dapat menyebabkan infeksi  mulai  dari  keracunan  makanan,  infeksi  kulit  hingga  infeksi  sistemik.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengisolasi dan menguji aktivitas antimikroba bakteri asam laktat dari blondo terhadap bakteri Staphylococcus aureus.    Penelitian  ini  merupakan  penelitian  deskriptif  cross-sectional.  Sampel  blondo  diambil  dari  kelompok wanita tani di Tabanan yang berjumlah 16 sampel dengan pengambilan sampel secara simple random sampling. Bakteri  diisolasi  menggunakan  media  selektif  yaitu  agar  de  Man  Rogosa  and  Sharpe  (MRS)  dan  identifikasi dengan  uji  pewarnaan  gram, uji  katalase  dan  uji  produksi gas  dari  glukosa.  Uji  aktivitas  antimikroba  bakteri asam laktat dilakukan dengan menggunakan metode difusi sumuran. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa di dalam  sampel  blondo  terdapat  bakteri  asam  laktat  dari  genus  Lactobacillus  dan  Streptococcus.  Bakteri  asam laktat  yang  diisolasi  dari  blondo  VCO  mampu  menghambat  Staphylococcus  aureus  dengan  terbentuknya  zona hambat  berupa  zona  bening  dengan  rata-rata  diameter  zona  hambat  11,02  mm.  Zona  hambat  yang  terbentuk termasuk  dalam  kategori  sedang  dan  kuat,  dengan  zona  hambat  tertinggi  yang  dihasilkan  yaitu  20,8  mm  dan terendah  yaitu  9,2  mm.    Bakteri  asam  laktat  dari  blondo  memiliki  aktivitas  antimikroba  terhadap  bakteri Staphylococcus aureus.
Kata Kunci: Bakteri Asam Laktat, Blondo, Potensi Antimikroba

## ABSTRACT
Blondo is a waste from the virgin coconut oil (VCO) producted which can be used as a source of lactic acid bacteria. Lactic acid bacteria are capable of producing antimicrobial compounds to inhibit the growth of pathogenic  bacteria.  The  purpose  of  this  study  was  to  isolate  and  test  the  antimicrobial  activity  of  lactic  acid bacteria from blondo against Staphylococcus aureus bacteria. This  research is a descriptive cross¬-sectional. Blondo  samples  were  taken  at  group  of  farm  women  in  Tabanan  Regency,  which  was  16  samples  with  simple random sampling. Bacteria were isolated using selective medium de Man Rogosa and Sharpe (MRS) agar and identified with gram staining test, catalase test and gas production test from glucose. The antimicrobial activity test of lactic acid bacteria  was performed by using wells-diffusion method. The results of this study indicated there was lactic acid bacteria from the genus Lactobacillus and Streptococcus in the blondo sample. Lactic acid bacteria  isolated  from  blondo  were  able  to  inhibit  Staphylococcus  aureus  by  forming  a  clear  zone  with  an average  diameter  of  inhibition  zone  was  11.02  mm.  There  were  two  antimicrobial  potential  category,  medium and strong category, with the highest resulting inhibit zone was 20.8 mm and the lowest was 9.2 mm. Lactic acid bacteria from blondo had antimicrobials potential against Staphylococcus aureus
Keywords: Lactic Acid Bacteria, Blondo, Antimicrobial Potential
How  To  Cite : Rasyid,  B.,  Sandi,  K.,  Sudarmanto,  I.,  &  Karta,  I.  (2021).  ISOLASI  DAN  UJI  AKTIVITAS ANTIMIKROBA  BAKTERI  ASAM  LAKTAT  DARI  BLONDO  VIRGIN  COCONUT  OIL  TERHADAP BAKTERI Staphylococcus aureus.
Biomedika, 13(1), 56-67.
doi:https://doi.org/10.23917/biomedika.v13i1.11070
DOI : https://doi.org/10.23917/ biomedika.v13i1.11070

## PENDAHULUAN
Penyakit  infeksi  merupakan  suatu problema  yang  rumit  dan  kompleks  di  bidang kesehatan. Infeksi disebut juga dengan communicable disease atau transmissible disease terjadi  apabila  mikroorganisme  patogen masuk  dan  mengalahkan  sistem  pertahanan tubuh  (James et  al. ,  2008).  Mikroorganisme patogen tersebut salah satunya yaitu Staphylococcus aureus yang dapat menyebabkan keracunan makanan akibat enterotoksin  yang  dihasilkan.  Enterotoksin  ini dapat  stabil  pada  suhu  tinggi  dan  cepat  resisten terhadap zat antimikroba sehingga menimbulkan permasalahan  dalam  tata  laksana  pengobatan (Brooks et al. , 2010).
Penggunaan  antibiotik  masih  paling dominan digunakan sebagai pengobatan penyakit  infeksi  yang  disebabkan  oleh  bakteri (Sumarjo, 2009). Tidak terkendalinya penggunaan antibiotik untuk pengobatan infeksi menimbulkan  kasus  baru  di  bidang  kesehatan. Kemudahan  dalam  membeli  obat  antibiotik  di apotek  tanpa  disertai  resep  dokter  dan kurangnya  informasi  mengenai  pemilihan  serta penggunaan antibiotik yang tepat, telah berkontribusi terhadap terjadinya resistensi.
Saat  ini  bahan  alam  mulai  kembali digunakan  oleh  masyarakat  untuk  pengobatan. Eksplorasi  pengobatan  lainnya  yang  dilakukan mulai dari bahan alam bahkan sampai ke produk sampingan atau limbah yang tidak dimanfaatkan penggunaannya.
Blondo  merupakan  limbah  dari  proses pembuatan Virigin  Coconut  Oil (VCO)  yang tidak  mengalami  pengolahan  lebih  lanjut. Kebanyakan  limbah  blondo  dibuang  begitu  saja atau  beberapa  orang  hanya  memanfaatkannya kembali  menjadi  minyak  goreng.  Limbah blondo  ini  memiliki  kandungan  nutrisi  yang cukup tinggi diantaranya mengandung karbohidrat  dan  protein  yang  cukup  tinggi, lemak,  mineral,  serta  asam  lemak  essensial seperti  asam  oleat,  linoleat,  linolenat  serta bakteri yang menguntungkan yaitu bakteri asam laktat  (Haerani,  2010;  Murtius et  al .,  2012).
Pertumbuhan  bakteri  asam  laktat  pada  blondo didukung  oleh  faktor-faktor  tertentu  seperti nutrisi  pada  santan  utamanya  yaitu  karbohidrat serta  kondisi  lingkungan  yang  sesuai  (Florou- Paneri et al ., 2013).
Bakteri asam laktat merupakan bakteri Gram  positif  yang  memiliki  karakteristik berbentuk  batang  atau  kokus,  tidak  membentuk spora, menghasilkan asam laktat serta
menghasilkan substansi antimikroba diantaranya asam  organik,  bakteriosin,  hidrogen  peroksida, karbondioksida,  dan  alkohol  (Lahtinen et  al. , 2012).    Bakteri  asam  laktat  umumnya dimanfaatkan  di  bidang  pangan  yakni  pada makan  berfermentasi  yang  digunakan  sebagai pengganti bahan pengawet kimia
(biopreservatif)  pada  bahan  makanan  guna memperpanjang  umur  simpan  produk  (Kapoor, 2011). Bakteri asam laktat juga dapat dimanfaatkan  dalam  bidang  kesehatan,  salah satu contohnya yaitu sebagai minuman probiotik. Bakteri asam laktat jenis Lactobacillus  casei telah  dimanfaatkan  sebagai starter  bakteri  dalam  pembuatan  minuman probiotik  dari  air  kelapa  muda.  Fungsi  starter bakteri  pada  minuman  probiotik  adalah  untuk menjaga kesehatan tubuh, menstimulasi respons kekebalan,  dan  mengurangi  bakteri  patogen dalam usus (Yanuar dan Sutrisno, 2015).
Potensi  bakteri  asam  laktat  sebagai antimikroba  telah  banyak  diuji  oleh  beberapa peneliti.  Isolat  bakteri  asam  laktat  asal  dua  hari fermentasi kakao varietas forester memiliki sifat antibakteri  terhadap  lima  bakteri  patogen ( Bacillus  subtilis,  Escherichia  coli,  Listeria monocytogenes,  Staphylococcus  aureus  dan Salmonella typhi ) dengan menghasilkan
diameter  daya  hambat  berkisar  7-12  mm (Urnemi et  al. ,  2011).  Bakteri  asam  laktat  hasil isolasi  dari  berbagai  sumber  nabati  dan  bahan berbasis  susu  memiliki  aktivitas  antagonistik terhadap bakteri patogen Staphylococcus aureus,
Bacillus  cereus dan Escerichia  coli (Susanti et al. , 2007) .
Berbagai penelitian yang telah dilakukan  untuk  menemukan  sumber  dari bakteri asam laktat, diharapkan dapat dikembangkan  lebih  lanjut  dalam  proses penemuan bahan antimikroba baru. Berdasarkan hal  tersebut,  maka  dalam  penelitian  ini  diuji aktivitas  antimikroba  bakteri  asam  laktat  yang diisolasi dari sampel blondo terhadap salah satu bakteri patogen yakni Staphylococcus aureus

## METODE
Jenis penelitian ini merupakan penelitian    deskriptif  dengan  pendekatan cross sectional .  Bakteri  asam  laktat  yang  diuji diisolasi dari 16 sampel blondo yang dihasilkan oleh  kelompok  wanita  tani,  Desa  Tengkudak, Kecamatan  Penebel,  Kabupaten  Tabanan,  Bali. Sampel  diambil  dengan  teknik probability sampling  secara simple  random  sampling melalui teknik acak sederhana.
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian  ini  yaitu  neraca  analitik  (Radwag),
hotplate  stirrer  (Jisico),  autoklaf  (TOMY  SX- 500),  pipet  ukur  steril  (Iwaki-Pyrex®),  oven (Wegnec),  Biosafety  Cabinet  (Biobase),  Mc Farland  densitometer  (Biosan),  standar  Mc Farland (Prolab), mikropipet (Socorex)
inkubator (Esco), mikroskop binokuler (Ollympus).
Bahan-bahan  yang  digunakan  antar lain:  media  Muller  Hinton  Agar  (MHA) (Oxoid),  isolat Staphylococcus  aureus ATCC 25923, De  Man  Rogosa  and  Sharpe (MRS)
Agar  (Oxoid), De  Man  Rogosa  and  Sharpe
(MRS) Broth (Oxoid),  pewarna  Gram,  minyak emersi,  larutan  hidrogen  peroksida,  alkohol 70%,  NaCl  fisiologis  steril,  paper  disk  kosong, paper  disk  antibiotik  amoksisilin  (sebagai kontrol kerja yang efektif menghambat pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus) , dan aquades steril.
Jenis  data  yang  dikumpulkan  adalah data primer meliputi data mengenai hasil isolasi bakteri asam laktat dari sampel blondo dan hasil uji  aktivitas  antimikroba  bakteri  asam  laktat terhadap Staphylococcus aureus . Data dikumpulkan melalui pemeriksaan laboratorium, yaitu  dengan  teknik  kultur  dan  pengukuran aktivitas  antimikroba  dengan  metode  difusi
sumuran.  Data yang diperoleh dianalisis secara deskriptif.
Sampel  blondo  diambil  pada  bagian atas  serta  bagian  antara  minyak  dan  air menggunakan  spatula  dan  dimasukan  secara aseptis  ke  dalam  botol  sampel  steril.  Sampel blondo diencerkan menggunakan garam fisiologis  (NaCl  0,85%  steril)  dengan  rasio  1:9. Sampel  selanjutnya  diinokulasikan  pada  media MRS  agar  dengan  metode streak  plate , kemudian  diinkubasi    pada  suhu  37 ο C  selama 48 jam. Koloni bakteri yang tumbuh selanjutnya diidentifikasi  dengan  pewarnaan  gram,  uji katalase, dan uji produksi gas dari glukosa.
Uji  aktivitas  antimikroba  dilakukan pada media MHA. Koloni bakteri Staphylococcus  aureus usia  24  jam diambil beberapa ose kemudian disuspensikan ke dalam tabung reaksi yang berisi larutan NaCl fisiologis steril  sebanyak  5  mL.  Kekeruhan  suspensi dibandingkan  dengan  standar kekeruhan  Mc Farland 0,5%  yang  setara  dengan  1,5  ×  108 CFU/mL  pada  alat Mc  Farland  densitometer .
Swab  kapas  steril  disiapkan  dan  dicelupkan  ke dalam  suspensi  bakteri Staphylococcus  aureus , kemudian  digoreskan  merata  pada  permukaan media MHA, didiamkan selama 5-15 menit agar suspensi  dapat  meresap  ke  dalam  media.
Sumuran  dibuat  pada  media  MHA  dengan menggunakan  alat  pembuat  sumur  dengan diamater  sumuran  sama  dengan  diameter cakram.  Masing-masing  sumuran  kemudian ditambahkan  dengan  20  µl  suspensi  bakteri asam  laktat  usia  24  jam  yang  dikultur  pada media  MRS  Broth.  Media  MHA  tersebut kemudian diinkubasi pada suhu 37 ο C selama 24 jam.  Diameter  zona  hambat  yang  terbentuk diukur  untuk  menentukan  aktivitas  antimikroba bakteri  asam  laktat  terhadap Staphylococcus aureus .  Sebagai  kontrol  negatif  digunakan media  MRS  broth  steril  yang  dimasukkan  ke dalam  sumuran.  Sedangkan  kontrol  positif digunakan  cakram  antibiotik  amoksisilin  yang ditempelkan pada media MHA.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Kultur bakteri asam laktat dari sampel blondo  dilakukan  pada  media  MRS  agar  yang merupakan  media  selektif  untuk  pertumbuhan bakteri  asam  laktat.  Hasil  kultur  bakteri  asam laktat dapat dilihat pada gambar 1 di bawah ini :
Gambar 1 . Koloni bakteri yang tumbuh pada media MRS Agar (Sumber: Data Primer, 2018)
Berdasarkan  gambar  1  koloni  bakteri yang  tumbuh  pada  media  MRS  agar  memiliki karakteristik  berbentuk  bulat,  elevasi  cembung, berwarna  putih  dan  cream,  serta  tepian  yang rata.  Bakteri  asam  laktat  dapat  diisolasi  dari berbagai  sampel  yakni  susu  fermentasi,  sawi fermentasi  dan  saluran  pencernaan  ikan  nila, dengan karakteristik koloni pada media pertumbuhan  yaitu  berwarna  putih,  cream, cream  kekuningan  sampai  kuning,  bentuk  bulat dengan  tepian  rata  serta  elevasi  cembung  dan rata  (Susanti et  al. ,  2007).  Isolasi  bakteri  asam laktat dari yoghurt juga menunjukkan karakteristik  yang  serupa  yaitu  berbentuk  bulat, berwarna  cream,  kuning  muda  dan  putih kekuningan,  tepian  rata,  serta  elevasi  cembung dan datar (Riadi et al., 2017) .
Koloni bakteri yang tumbuh pada media MRS  agar  kemudian  diidentifikasi  dengan pewarnaan  gram,  uji  katalase,  dan  uji  produksi gas dari glukosa. Hasil identifikasi koloni dapat dilihat pada tabel 1, gambar 2 dan 3.
Tabel 1. Hasil Identifikasi Bakteri Asam Laktat Dari Sampel Blondo Uji Jumlah (sampel) Prosentase (%) Pewarnaan Gram: - Gram positif - Gram negatif 16 0 100 0 Bentuk sel: - Basil - Kokus 15 1 93,75 6,25
Katalase: - Negatif - Positif 16 0 100 0 Produksi gas dari glukosa: - Terdapat gas - Tidak terdapat gas 2 14 12,5 87,5 (Sumber : Data Primer, 2018)
Gambar 2. Hasil pewarnaan Gram BAL isolat Blondo
Gambar 3. Hasil uji katalase BAL isolasat Blondo
Berdasarkan  tabel  1  di  atas,  dari  hasil pewarnaan  Gram  terhadap  koloni  bakteri  yang tumbuh  ditemukan  bakteri  yang  bersifat  gram positif (gambar 2) dengan hasil negatif pada uji katalase  (gambar  3).  Beberapa  penelitian  lain juga  telah  melaporkan  hasil  identifikasi  bakteri asam  laktat  dengan  karakteristik  Gram  positif dan katalase negative (Delvia et al ., 2015; Ismail dan Yulvizar, 2017; Riadi et al ., 2017).
Bentuk  sel  dari  bakteri  asam  laktat dapat  membantu  dalam  mengetahui  genus  dari bakteri  asam  laktat.  Bentuk  sel  bakteri  asam
laktat yang ditemukan pada sampel blondo yaitu berbentuk  basil  (93,75%)  dan  kokus  (6,25%) (tabel  1).  Bentuk  sel  bakteri  asam  laktat dikelompokkan  menjadi  dua  famili  yaitu Streptococcaceae  dan  Lactobacillaceae.  Famili Lactobacillaceae yang memiliki bentuk basil dan terdiri dari genus Lactobacillus. Famili Streptococcaceae  yang  memiliki  bentuk  bulat dan terdiri dari genus Streptococcus,
Leuconostoc dan Pediococcus (Muzaifa, 2014)
Berdasarkan karakteristik bentuk selnya,  bakteri  asam  laktat  dengan  bentuk  basil diduga merupakan genus Lactobacillus.
Sedangkan  bakteri  asam  laktat  dengan  bentuk kokus,  diduga  dari  genus  Streptococcus  dan Leuconostoc.  Hal  tersebut  dikarenakan  bakteri asam  laktat  yang  ditemukan  tersusun  seperti rantai  (Holzapfel and Wood,  2014).  Namun untuk memastikan genusnya, maka dilakukan uji produksi gas dari glukosa.
Berdasarkan  uji  produksi  gas  dari glukosa yang ditunjukkan pada tabel 1, sejumlah 14  sampel  (87,5%)  yang  diuji  memiliki  tipe fermentasi  homofermentatif  yang  ditandai dengan  tidak  adanya  gas  pada  tabung  durham (gambar  4a).  Sedangkan  dua  sampel  (12,5%) lainnya  merupakan  tipe  heterofermentatif  yang
ditandai  dengan  terbentuknya  gelembung  gas pada tabung durham (gambar 4b).
a b
Gambar 4. Hasil uji produksi gas positif (a) dan produksi gas negatif (b )
Bakteri  asam  laktat  dengan  tipe fermentasi homofermentatif yaitu Streptococcus, Pediococcus  dan  Lactobacillus.  Sedangkan bakteri  asam  laktat  dengan  tipe  fermentasi heterofermentatif  seperti  Leuconostoc  dan beberapa  spesies  dari  Lactobacillus  (Aritonang et al. , 2017).
Berdasarkan  serangkaian  uji  untuk identifikasi bakteri asam laktat,  dapat diketahui jenis  bakteri  asam  laktat  yang  berhasil  diisolasi dari sampel blondo merupakan genus
Lactobacillus dan genus Streptococcus.
Penelitian  lain  yang  mengisolasi  bakteri  asam laktat  dari  sampel  blondo  juga  menemukan bakteri  dari  genus Lactobacillus  sp. dan Streptococcus  sp (Murtius et  al. ,  2012).  Jenis bakteri  asam  laktat  lainnya  yang  dapat  diisolasi dari  sampel  blondo  antara lain  L.  delbruecki subsp. bulgaricus, L. casei dan L. fermenti , yang
seluruhnya  berasal  dari  genus  Lactobacillus (Mandei, 2016).
Berdasarkan  hasil  identifikasi  dari  16 sampel  blondo  ditemukan  32  isolat  yang merupakan  bakteri  asam  laktat.  Semua  isolat bakteri  asam  laktat  selanjutnya  diuji  aktivitas antimikroba  terhadap  bakteri Staphylococcus aureus dengan metode difusi sumuran. Hasil uji aktivitas  antimikroba  dapat  dilihat  pada  tabel  2 dan gambar 4.
Tabel 2. Hasil Uji Aktivitas Antimikroba Bakteri

## Asam Laktat Isolat Blondo Terhadap
Staphylococcus Aureus No Jumlah isolate Aktivitas antimikroba Rata-rata zona hambat 1 26 Mampu menghambat 11,02 (mm) (±5,7) 2 6 Tidak mampu menghambat 0  mm (Sumber : Data Primer, 2018)
Gambar 4 . Hasil uji aktivitas antimikroba BAL isolat blondo terhadap bakteri Staphylococcus aureus
Adapun  kategori  aktivitas antimikroba yang  dihasilkan  oleh  26  isolat  bakteri  asam laktat  yang  mampu  menghambat  pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus ditunjukkan pada tabel 3 di bawah ini :
Tabel 3. Kategori Aktivitas Antimikroba Bakteri Asam Laktat Isolat Blondo Terhadap
Staphylococcus Aureus No Kategori Daya Hambat Jumlah (isolat) Prosentase (%) 1 Sedang 3 11,54 2 Kuat 23 88,46 Total 26 100 (Sumber : Data Primer, 2018) Berdasarkan Tabel 2 di atas,  sebanyak
26  isolat  (81,25%)  bakteri  asam  laktat  mampu menghambat
pertumbuhan bakteri Staphylococcus  aureus .  Aktivitas  aktimikroba bakteri  asam  laktat  tersebut  ditandai  dengan adanya  zona  bening  yang  terbentuk  di  sekitar sumuran pada media MHA yang berisi suspensi bakteri  asam  laktat.  Zona  bening  tersebut menandakan adanya aktivitas aktibakteri terhadap pertumbuhan Staphylococcus aureus .
Zona bening yang dibentuk oleh setiap isolat  bakteri  asam  laktat  menunjukkan  hasil yang  berbeda-beda  dengan  rata-rata  diameter yaitu  11,02  mm.  Hasil  zona  bening  tertinggi ditunjukkan oleh isolat bakteri G11 sebesar 20,8 mm  (gambar  4).  Sedangkan  zona  bening  yang terendah  yang  dihasilkan  yaitu  sebesar  9,2  mm yang  ditunjukkan  oleh  isolat  A21.  Perbedaan zona  bening  yang  terbentuk  dapat  disebabkan oleh  kemampuan  bakteri  asam  laktat  dalam menghasilkan zat antimikroba, jenis dan jumlah zat  antimikroba  yang  dihasilkan  serta  umur biakan bakteri (Riadi et al. , 2017)
Kategori antimikroba berdasarkan diameter zona bening yang terbentuk digolongkan  ke  dalam  kategori  kuat  (88,46%) dan  sedang  (11,54%)  (Tabel  3).  Kategori antimikroba  berdasarkan  diameter  zona  bening yang  dihasilkan  yaitu  sangat  kuat  dengan diameter  >20  mm,  kuat  diameter  antara  11-20 mm,  sedang  dengan  diameter  antara  6-10  mm dan  lemah  ≤5  mm  (Surjowardojo et  al. ,  2015).
Bakteri  asam  laktat  yang  diisolasi  masing- masing  dari  fermentasi  biji  kakao  (Ismail  & Yulvizar,  2017)  dan  bekasam  (Desniar et  al. , 2012)  juga  mampu  menghambat  bakteri Staphylococcus aureus dengan kategori kuat.
Berdasarkan tipe fermentasinya, bakteri  asam  laktat  dapat  menghasilkan  zat antimikroba yang berbeda-beda. Tipe homofermentatif  memproduksi  zat  antimikroba berupa  asam  laktat  sebagai  produk  utama  dari metabolisme  glukosa.  Sedangkan  bakteri  asam laktat  heterofermentatif  selain  menghasilkan asam  laktat  juga  menghasilkan  asam  asetat, bakteriosin  karbondioksida,  hidrogen  peroksida dan alkohol (Lahtinen et al. , 2012).
Dengan beragamnya senyawa antibakteri  yang  dihasilkan  oleh  bakteri  asam laktat  heterofermentatif  maka  diameter  zona hambat yang dibentuk akan lebih besar dari tipe
homofermentatif.  Namun  dalam  penelitian  ini isolat dengan kode B11, B12, B31 dan B32 yang merupakan  tipe  heterofermentatif,  zona  hambat yang  terbentuk  terhadap Staphylococcus  aureus tidaklah  lebih  besar  dari  tipe  homofermentatif  . Hal  ini  disebabkan  karena  konsentrasi  dari beberapa  zat  antimikroba  yang  dihasilkan jumlahnya  sedikit  dan  juga  karena  sifat karakteristik dari bakteri Staphylococcus aureus.
Hidrogen  peroksida  yang  dihasilkan oleh  bakteri  asam  laktat  heterofermentatif mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri dengan  cara  menghancurkan  enzim,  mengubah sifat  protein,  dan  mengganggu  membran  dari mikroorganisme  (Maczulak,  2011).  Namun karena  karakteristik  dari  bakteri Staphylococcus aureus yang memiliki enzim  katalase, membuat hidrogen  peroksida ini tidak  dapat  menghambat bakteri Staphylococcus  aureus (Brooks et  al. , 2010).
Mekanisme karbondioksida dalam menghambat  bakteri  belum  diketahui  secara pasti. Karbondioksida diduga mampu menyebabkan  kondisi  lingkungan  menjadi anaerob  atau  kadar  oksigen  menjadi  sedikit (Siregar, 2010). Kondisi yang anaerob ini dapat menghambat  pertumbuhan  dari  bakteri.  Namun bakteri Staphylococcus aureus diketahui bersifat
anaerob  fakultatif  yang  mampu  hidup  baik  ada maupun tidak ada oksigen, sehingga karbondioksida  tidak  dapat  bekerja  secara maksimal dalam menghambat bakteri Staphylococcus aureus (Brooks et al. , 2010).
Kemampuan bakteri asam laktat dalam
menghambat
pertumbuhan bakteri Staphylococcus  aureus sebagian  besar  karena adanya  asam  organik  yakni  asam  laktat  dan asam  asetat.  Asam  laktat  merupakan  produk utama  dari  proses  metabolisme  glukosa  oleh bakteri  asam  laktat.  Selama  24  jam  inkubasi, konsentrasi  asam  laktat  yang  diproduksi  yaitu berkisar 16,692-20,620 g/L dan akan meningkat seiring dengan lamanya waktu inkubasi (Desniar et  al. ,  2012).  Jumlah  produksi  asam  organik yang  tinggi,  membuat  asam  organik  ini  mampu menembus membran bakteri yang menyebabkan anion  asam  lemah  dan  zat  antimikroba  lainnya menumpuk di sitoplasma, sehingga mengganggu proses  metabolisme  dari Staphylococcus  aureus (Lahtinen et  al. ,  2012).  Produksi  asam  laktat yang terlalu tinggi juga menyebabkan penurunan pH pada media. Asam laktat dan penurunan pH secara sinergis bekerja sama dalam menghambat bakteri Staphylococcus  aureus .  Penurunan  pH menjadi  3–4,5  secara  tidak  langsung  membantu mengganggu  aktivitas  enzim  sehingga  sel
Staphylococcus aureus tidak mampu melakukan aktivitas metabolismenya (Sutrisna et al. , 2017).
Keberhasilan  zat  antimikroba  yang dihasilkan  oleh  bakteri  asam  laktat  juga tegantung pada struktur dinding sel bakteri yang dihambat. Struktur dinding sel akan berpengaruh pada  ketahanan  suatu  bakteri  terhadap  zat antimikroba.  Dalam  penelitian  ini  bakteri Staphylococcus aureus yang digunakan merupakan bakteri Gram positif dengan struktur dinding  sel  yang  lebih  sederhana  dibandingkan bakteri  Gram  negatif  sehingga  lebih  rentan terhadap  aktivitas  antimikroba  (Brooks et  al. , 2010)
Aktivitas  antimikroba  yang  dihasilkan oleh  bakteri  asam  laktat  yang  diisolasi  dari sampel  blondo  dapat  menjadi  informasi  baru mengenai limbah yang tidak selamanya memberikan  efek  yang  buruk.  Kemampuan bakteri  asam  laktat  yang  diisolasi  dari  blondo dalam menghambat pertumbuhan
Staphylococcus  aureus ,  dapat  dimanfaatkan sebagai  starter  bakteri  dalam  pembuatan minuman  probiotik,  namun  perlu  dilakukan tahap uji lebih lanjut yaitu hitung koloni bakteri asam  laktat,  uji  ketahanan  pH  dan  garam empedu.
Penghitungan  koloni  bakteri  asam laktat  erat  kaitannya  dengan  jumlah  zat antimikroba  yang  akan  dihasilkan.  Semakin banyak  jumlah  koloni  bakteri  asam  laktat  maka semakin banyak zat antimikroba yang dihasilkan.  Hasil  penelitian  lain  melaporkan jumlah koloni bakteri asam laktat yang diisolasi dari  blondo  VCO  berjumlah  5×10 9 CFU/ml. Jumlah tersebut cukup digunakan sebagai starter bakteri  dalam  pembuatan  minutan  probiotik (Murtius et al ., 2012).

## SIMPULAN DAN SARAN
Bakteri asam laktat yang diisolasi dari sampel blondo mampu menghambat pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus (81,25%). Rata-rata diameter zona hambat yaitu 11,02  mm,  diameter  tertinggi  yaitu  20,08  mm dan terendah yaitu 9,2 mm. Aktivitas antimikroba  bakteri  asam  laktat  terhadap Staphylococcus  aureus termasuk  ke  dalam kategori  sedang  sebanyak  11,54%  dan  kuat sebanyak 88,46%.
Bakteri asam laktat yang diisolasi dari blondo  diharapkan  dapat  digunakan  lebih lanjut sebagai  salah  satu  starter  bakteri  dalam pembuatan minuman probiotik setelah dilakukan uji tahap lanjut yaitu hitung koloni bakteri asam laktat, uji ketahanan pH dan garam empedu.

## DAFTAR PUSTAKA
Aritonang, S. N., Roza, E., Rossi E., Purwati, E., and  Husmaini,  H.  2017.  Isolation  and identification  of  lactic  acid  bacteria  from okara  and  evaluation  of  their  potential  as candidate  probiotics. Pakistan  Journal  of Nutrition. 16(8).  Pp:  618–628.  doi: 10.3923/pjn.2017.618.628.
Brooks,  G.  F., Carol,  K.  C.,.  Butel,  J.S., Morse,  S.A.,  Mietzner,  T.A.  Jawetz, M.A.  2010. Medical  Microbiology.  25th Ed . New York: Mc Graw Hil.
Delvia, F., Fridayanti, A. dan Ibrahim, A. 2015.
Isolasi  Dan  Identifikasi  Bakteri  Asam Laktat (Bal) Dari Buah Mangga
(Mangifera  indica  L.).  1(2).  Pp:  114–20. doi: 10.25026/mpc.v1i1.16. Desniar,  Rusmana,  I.,  Suwanto,  A.,  dan Mubarik, N.R. 2012. Senyawa
Antimikroba  Yang  Dihasilkan  Oleh Bakteri  Asam  Laktat  Asal  Bekasam. Jurnal Akuatika Indonesia . 3(2). Pp: 135- 45.
Florou-Paneri,  P.,  Christaki,  E.  and  Bonos,  E. 2013.  Lactic  Acid  Bacteria  -  R  &  D  for Food,  Health  and  Livestock  Purpose  in Kongo,  M.  (ed.). Lactic  Acid  Bacteria  as Source of Functional Ingredients . InTech. Pp: 589–614. doi: 10.5772/47766.
Haerani.  2010.  Pemanfaatan  Limbah  Virgin Coconut  Oil  (Blondo). Jurnal  MKMI , 6(4). Pp: 244–48.
Holzapfel,  W.  H.  and  Wood,  B.  J.  B.  (2014) Lactic  Acid  Bacteria :  Biodiversity  and Taxonomy .  New  York:  John  Wlley  and Sons. doi: 10.1002/9781118655252.ch19.
Ismail,  Y.  S.  and  Yulvizar,  C.  2017.  Isolasi,
Karakterisasi dan Uji Aktivitas
Antimikroba  Bakteri  Asam  Laktat  dari Fermentasi Biji Kakao (Theobroma cacao L.). Bioleuser . 1(2). Pp: 45–53.
James,  J.,  Baker,  C.  and  Swain,  H.  2008. Prinsip-Prinsip Sains untuk Keperawatan . Edited  by  A.  Safitri  and  R.  Astikawati.
Jakarta: Erlangga.
Kapoor,  K.  2011. Illustrated  Dictionary  of Microbiology .  New  Delhi:  Oxford  Book Company. doi: 10.1038/nchembio.618.
Lahtinen,  S.,  Ouwehand,  A.C.,  Salminen,  S., and  von-Wright,  A.  2012. Lactic  Acid Bacteria  Microbiological  and  functional aspects . 4th edn. New York: CRC Press.
Maczulak, A. 2011. Encyclopedia of Microbiology .  United  States  of  America: Facts On File, Inc.
Mandei,  J.  H.  2016.  Pemanfaatan  Blondo sebagai  Starter  dalam  Pembuatan  Yogurt. Buletin  Palma .  16(1).  p.  66.  doi: 10.21082/bp.v16n1.2015.66-76.
Murtius, W. S., Kasim, A. and Sayuti, K. 2012. Pemanfaatan  Blondo  Sebagai  Starter Dalam  Pembuatan  Minuman  Probiotik.
Universitas Andalas. 15(2). Pp: 129–39
Muzaifa,  M.  2014.  Identifikasi  Bakteri  Asam Laktat  Indigenous  dari  Belimbing  Wuluh (Averrhoa  Bilimbi  L.). Jurnal  Sagu , 13(1). Pp: 8–13. Available at:
http://ejournal.unri.ac.id/index.php/JSG/ar ticle/view/2130.
Riadi,  S.,  Situmeang,  S.  M.  .  and  Musthari,  M.
2017. Isolasi dan Uji Aktivitas Antimikroba  Bakteri  Asam  Laktat  (BAL) dari Yoghurt Dalam Menghambat Pertumbuhan Bakteri Escherichia coli dan Salmonella  typhi. Jurnal  Biosains ,  3(3).
p. 144. doi: 10.24114/jbio.v3i3.8302.
Siregar, J. A. 2010. Pengaruh Co2
(Karbondioksida) Murni Terhadap Pertumbuhan Mikroorganisme Pada Produk  Minuman  Sprite  di  PT.  Cocacola Bottling Indonesia Unit Medan . Medan.
Sumarjo,  D.  2009. Pengantar  Kimia:  Buku
Panduan  Kuliah  Mahasiswa  Kedokteran dan Program Strata I Fakultas Bioeksakta .  Edited  by  A.  Hanif  and  J Manurung. Jakarta: EGC.
Surjowardojo,  P.,  Susilorini,  T.  and  Panjaitan,
A.  2015.  Daya  Hambat  Jus  Kulit  Apel Manalagi (Malus sylvestris Mill.) terhadap Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus  aureus  dan  Escherichia
coli  Penyebab  Mastitis  Pada  Sapi  Perah’, TERNAK  TROPIKA  Journal  of  Tropical Animal  Production .  16(2).  Pp:  30–9.  doi:
10.21776/ub.jtapro.2015.016.02.5.
Susanti,  I.,  Kusumaningtyas,  R.  W.  and Illaningtyas, F. 2007. Probiotic
Characteristics  of  laactic  acid  Bacteria  as Candidate  for  Functional  Food. Jurnal Teknologi  dan  Industri  Pangan .  18(2). Pp: 89–95.
Sutrisna,  R.,  Ekowati,  C.  N.  and  Sinaga,  E.
2017.  Pengaruh  pH  terhadap  Produksi Antibakteri oleh Bakteri Asam Laktat dari Usus  Itik  Effect  of  pH  on  Production
Antibacterial  by  Lactic  Acid  Bacteria From Gut Duck. 15(3). Pp: 234–8.
Urnemi,  Syukur,S.,    Purwati,  E.,  Ibrahim,  S., dan  Jamsari .2011.  Potensi  Bakteri  Asam Laktat  dalam  Menghasilkan  Bakteriosin sebagai  Antimikroba  dan  Pengukuran Beratmolekulnya  Dengan  SDS-PAGE dari Isolat Fermentasi Kakao. Jurnal Riset Kimia . 4(2). Pp: 94–100.
Yanuar,  S.  E.  and  Sutrisno,  A.  2015.  Minuman Probiotik  dari  Air  Kelapa  Muda  dengan Starter Bakteri Asam Laktat Lactobacillus casei. Jurnal  Pangan  dan  Agroindustri . 3(3). Pp: 909-17.