## JASD
Jurnal Akuakultur Sungai dan Danau, 8(1) April 2023, pp.28-37 ISSN 2503-4766 (Print) | ISSN 2597-8837 (Online) | DOI 10.33087/akuakultur.v8i1.155 Publisher by : Program Studi Budidaya Perairan Fakultas Pertanian Universitas Batanghari
Maskulinisasi Ikan Cupang (Betta Sp ) Melalui Perendaman Larva dengan Estrak Akar Pasak Bumi ( Eurycoma longifolia Jack), Propolis Madu dan 17α- Methyltestosterone

## *Noor Syarifuddin Yusuf, Inga Torang dan Nahwani
Program Studi Budidaya Perairan, Universitas Palangka Raya, Jalan Yos Sudarso II B No. 3 Palangka Raya * e-mail korespondensi: noorsyarifuddinyusuf71@gmail.com
Abstract. The  purpose  of  this  study  was  to  determine  the  effectiveness  of  using  Pasak  Bumi  Root  Extract,  Honey  Propolis  on masculinization of Betta fish (Betta sp) and to compare the success of masculinization with 17-α Methyltestosterone. The method used  was  a  completely  randomized  design  (CRD)  experimental  method  with  4  treatments  and  3  replications.  Treatment  A  = Soaking Pasak bumi root methanol extract (EPB) with a concentration of 10 ml/liter, Treatment B = Soaking Honey Propolis (PM) with a concentration of 60 ml/liter, Treatment C = Soaking 17α-Methyltestosterone (MT) with dose concentration of 500 µg/liter  (control +)  Treatment D = Soaking using water (TH)  without using hormones (control  -). Analysis was performed by males using analysis of variance (ANOVA) and the DUNCAN test. The results showed that the treatment given had a significant effect (p ≤ 0.05) on the percentage of male fish, intersex fish, survival and fish weight. The percentage of male fish EPB was 68.54% and PM was 53.63% lower than MT which could reach 89.26%. Betta fish that are intersex in EPB is 15.71%, PM is 5.15%  higher  than  MT  which  is  only  4.06%  and  TH  is  1.15%.  The  viability  of  seeds  produced  by  PM  was  80.83%, EPB  was 74.17%  higher  than  TH  which  was  73.33%  and  EPB  was 61.67%.  The average  weight of  individual  EPB  betta  fish was  0.77 gram, PM was 0.56 gram higher than MT which was 0.50 gram and TH was 0.52 gram.  The use of natural ingredients in the form  of  Pasak  Bumi  Root  Extract  at  a dose  of  10  ml/liter  and  Honey  Propolis  at a  dose  of  60  ml/liter  is  quite  effective  as  an alternative to the use of MT synthetic hormones in masculinizing Betta fish.
Keywords: Betta Fish, Pasak Bumi Root Extract, Honey Propolis, 17α-Methyltestosterone.
Abstrak. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui efektivitas penggunaan Ekstrak Akar Pasak Bumi, Propolis Madu terhadap maskulinisasi ikan Cupang ( Betta sp ) dan membandingkan keberhasilan maskulinisasi dengan 17-α Methyltestosteron . Metode yang digunakan adalah metode eksperimental model rancangan acak lengkap (RAL) dengan 4 perlakuan dan 3 ulangan. Perlakuan A = Perendaman Estrak metanol Akar Pasak bumi  (EPB) dengan konsentrasi dosis sebesar 10 ml/liter, Perlakuan B = Perendaman  Propolis  Madu  (PM)  dengan  konsentrasi  dosis  sebesar  60  ml/liter,  Perlakuan  C=Perendaman  17α- Methyltestosterone (MT) dengan konsentrasi dosis 500 µg/liter (kontrol +) Perlakuan D = Perendaman menggunakan air  (TH) tanpa  menggunakan  hormon  (kontrol  -).  Analisis  dilakukan  jantan  menggunakan analysis  of  variance (ANOVA)  dan  uji DUNCAN.  Hasil  penelitian  menunjukkan  perlakuan  yang  diberikan  berpengaruh  nyata  (p  ≤  0,05)  terhadap  Persentase  ikan jantan, ikan intersex, kelangsungan hidup dan bobot ikan.  Persentase ikan jantan EPB sebesar 68,54% dan PM sebesar 53,63% lebih rendah jika dibandingkan MT yang  dapat  mencapai 89,26%.  Ikan Cupang yang intersex pada EPB sebesar 15,71%, PM sebesar 5,15% lebih tinggi dibandingkan MT yang hanya sebesar 4,06% dan sebesar TH 1,15%. Kelangsungan hidup benih yang dihasilkan PM sebesar 80,83%, EPB sebesar 74,17% lebih tinggi dibandingkan TH sebesar 73,33% dan EPB sebesar 61,67%. Bobot rata-rata individu ikan Cupang EPB sebesar 0,77 gram, PM sebesar 0,56 gram lebih tinggi dari MT sebesar 0,50 gram dan TH sebesar 0,52 gram.  Penggunaan bahan alami berupa Ekstrak Akar Pasak Bumi dengan dosis 10 ml/liter dan Propolis Madu dosis 60 ml/liter cukup efektik untuk alternatif pengganti penggunaan  hormon sintetik MT dalam maskulinisasi ikan Cupang.
Kata Kunci: Ikan Cupang, Ekstrak Akar Pasak Bumi, Propolis Madu, 17α-Methyltestosterone.

## PENDAHULUAN
Jenis  Ikan  Cupang  ( Betta sp)  berkelamin  jantan  dipelihara  sebagai  ikan  hias  dan  ikan  aduan  memiliki keunggulan harga yang lebih mahal dibandingkan dengan ikan betina, morfologi warna tubuh yang menarik, bentuk sirip  indah  menjadikan  nilai  estetikanya  dengan  gerakan  tenang  dan  berwibawa.    Salah  satu  upaya  untuk meningkatkan jumlah produksi ikan Cupang jantan adalah dengan melakukan maskulinisasi untuk mengarahkan ikan menjadi berkelamin jantan.
Maskulinisasi  sudah  banyak  dilakukan  pada  beberapa  ikan  hias  menggunakan  bahan  yang  berbeda. Maskulinisasi    dilakukan  dengan  pemberian  hormon  androgen  pada  fase  diferensiasi  gonad  pada  ikan.  Perubahan lingkungan yang diakibatkan pemberian hormon dari luar dapat menyebabkan rangsangan pada sistem saraf ikan dan memacu pelepasan hormon gonadotropin untuk pembentukkan gonad jantan (Mylonas et al., 2010).
Hormon  steroid  yang  selama  ini  banyak  digunakan  untuk  maskulinisasi  adalah  golongan  androgen  yakni hormon  sintetik  17α- Methyltestosterone namun  penggunaannya  dibatasi  dan  dilarang  dalam  kegiatan  akuakultur karena bersifat karsinogenik bagi manusia, berpotensi mencemari lingkungan karena sulit terdegradasi secara alami (Contreras-Sancez et al., 2001) bahkan  DKP (2008), menyatakan larangan penggunaan 21 jenis obat-obatan dalam
Noor  Syarifuddin  Yusuf,  Inga  Torang  dan  Nahwani. Maskulinisasi  Ikan  Cupang  (Betta  Sp)  Melalui  Perendaman  Larva dengan Estrak Akar Pasak Bumi (Eurycoma longifolia Jack), Propolis Madu dan 17α-Methyltestosterone
kegiatan  budidaya  perikanan,  salah  satunya    steroid  sintetik  ( Methyltestosteron ).  Diperlukan  bahan  alternatif  yang memiliki  bahan  aktif  untuk  pengarahan  kelamin  yang  bersifat  lebih  alami,  ramah  lingkungan  untuk  menggantikan kinerja hormon sintetik.
Banyak  bahan  alami  yang  telah  digunakan  untuk  maskulinisasi  ikan  Nila  ( Oreochromis  niloticus ) menggunakan  ekstrak  tumbuhan  purwoceng  (Putra,  2011),  ekstrak  akar  pasak  bumi  (Yusuf,  et  al.,  2019), Maskulinisasi  Ikan  Guppy  ( Poecilia  reticulata )  menggunakan  propolis  atau  madu  (Soelistyowati  et  al., 2007; Ibrahim,  et  al.,  2016),  namun  bahan  alami  ini  jika  diberikan  pada  ikan  Cupang  apakah  akan  menghasilkan keberhasilan yang sama. Penelitian ini dilaksanakan dengan tujuan untuk mengetahui efektivitas penggunaan Ekstrak Pasak  Bumi,  Propolis  Madu  terhadap  maskulinisasi  ikan  Cupang  ( Betta  sp )  dan  membandingkan  keberhasilan maskulinisasi dengan menggunakan 17-α Methyltestosteron .

## METODE PENELITIAN

## Waktu Dan Tempat
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan September 2020  sampai dengan  Mei  2021 di Farm Griya Aquatica Jalan Krakatau No 4 Kota Palangka Raya  Provinsi Kalimantan Tengah.

## Alat dan Bahan
Peralatan yang digunakan selama percobaan ini terdiri dari toples yang berukuran diameter 20 cm dan tinggi 20 cm sebanyak 20 buah untuk perkawinan induk ikan Cupang.  Akuarium ukuran 60 cm x 30 cm x 40 cm sebanyak 4  buah  untuk  merendam  ikan  dengan  hormon  yang  telah  ditentukan,  12  buah  akuarium  dengan  ukuran  yang  sama untuk pemeliharaan larva ikan hingga berukuran 2 bulan. Gelas plastik berukuran diameter 10 cm tinggi 20 cm untuk pemeliharaan  induk  jantan  secara  tunggal  sebanyak  50  buah  dan  akuarium  ukuran  60  cm  x  30  cm  x  40  cm  untuk pemeliharaan induk betina secara bersama sebanyak 4 buah. Peralatan aerasi, alat sipon, saringan plastik, gelas ukur, timbangan digital, gelas objek dan penutup, pipet, seperangkat alat bedah, mikroskop, peralatan pengukur kualitas air yang  terdiri  dari  thermometer  digital,  pH  meter,  DO  meter,  CO 2 test  kit,  Amoaniak  test  kit.  Air  yang  digunakan adalah  air  PDAM  yang  sudah  ditampung  didalam  tong  selama  beberapa  hari  sebelum  digunakan  pada  percobaan. Ikan yang digunakan dalam percobaan ini adalah larva ikan Cupang ( Betta sp) berumur 3 hari dan telah habis kuning telurnya yang dihasilkan dari  pemijahan alami.
Bahan  untuk  pengujian  yang  digunakan  adalah  Ekstrak  akar  tumbuhan  Pasak  Bumi  ( Eurycoma  longifolia Jack) yang didapatkan melalui metode ekstraksi maserasi akar tumbuhan Pasak Bumi dengan pelarut metanol yang mengacu pada dosis optimum sebesar 10 ml/liter dari penelitian yang dilakukan oleh  Yusuf (2014). Propolis Madu dengan merk Melia dengan konsentrasi dosis sebesar 60 ml/liter. Dosis ini ditentukan berdasarkan hasil terbaik yang dilakukan oleh Martati (2006).  Hormon 17α- Methyltestosterone merk Aldrich dengan konsentrasi dosis sebesar 500 µg/liter (kontrol +) dosis ini ditentukan mengacu pada dosis hormon 17α- Methyltestosterone yang umum digunakan untuk kegiatan nisbah kelamin yaitu sebesar 500 µg/liter.
Makanan  yang  diberikan  kepada  larva  adalah  air  hijau  yang  diambil  dari  kolam  pemeliharaan  ikan  yang diselingi  dengan  artemia  hingga  larva  berumur  dua  minggu.    Setelah  itu  selama  masa  percobaan,  ikan  uji  diberi cacing rambut yang diselingi dengan pellet halus.
Larutan Asetokarmin digunakan  untuk  pewarnaan  jaringan  sebelum  pemeriksaan  gonad.    Larutan  ini  dibuat dengan cara melarutkan 0,6 gram bubuk  Karmin ke dalam 100 ml  Asam asetat 45%. Larutan didihkan selama dua hingga  empat  menit,  selanjutnya  didinginkan  dan  disaring  dengan  menggunakan  kertas  saring  untuk  memisahkan suspensinya

## Rancangan Percobaan
Rancangan  percobaan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  yang terdiri dari empat perlakuan dan tiga ulangan yaitu:
A : Perlakuan  dengan  perendaman  Estrak  Metanol  Akar  Pasak  bumi  (EPB)  konsentrasi  dosis  sebesar  10 ml/liter
B : Perlakuan dengan perendaman Propolis Madu (PM) konsentrasi dosis sebesar 60 ml/liter
C : Perlakuan dengan perendaman 17α- Methyltestosterone (MT) konsentrasi dosis 500 µg/liter (kontrol +) D: : Perlakuan  dengan perendaman menggunakan air  (TH) tanpa menggunakan hormon (kontrol -)

## Prosedur Penelitian
Tahap  persiapan  merupakan  tahap  pemeliharaan  induk  ikan  Cupang  sampai  matang  gonad  dan  terjadi pemijahan.  Induk jantan dan betina dipelihara secara terpisah. Induk jantan dipelihara didalam toples secara tunggal,
Noor  Syarifuddin  Yusuf,  Inga  Torang  dan  Nahwani. Maskulinisasi  Ikan  Cupang  (Betta  Sp)  Melalui  Perendaman  Larva dengan Estrak Akar Pasak Bumi (Eurycoma longifolia Jack), Propolis Madu dan 17α-Methyltestosterone
sedangkan ikan betina di pelihara secara bersama-sama dalam akuarium. Induk di beri pakan berupa cacing rambut ( Tubifex ), jentik nyamuk. Selama masa pemeliharaan dan pematangan gonad ini kualitas air dijaga dengan melalukan penyiponan  dan  penggantian  air  secara  periodik.  Masih  dalam  tahap  persiapan,  dipijahkan  induk  ikan  Cupang ( Betta. sp)  jenis halfmoon .  Induk  yang  digunakan  adalah  ikan  Cupang  yang  telah  matang  gonad  dan  siap  untuk dipijahkan.
Induk  terdiri  dari  1  pasang  dengan  perbandingan  jantan  dan  betina  1:1.  Induk  Cupang  jantan  yang  sudah matang gonad dapat dilihat dari adanya bintik-bintik hitam pada sirip punggung dan garis vertikal  berwarna  kemerahan  pada  tutup  insang.  Sedangkan  pada  betina,  induk  yang  sudah  matang  gonad  dapat dilihat  dari  perutnya  yang  membuncit  dan  terdapat  2-3  garis  vertikal  berwarna  kelabu  pada  sisi  tubuhnya. Berdasarkan umurnya, Cupang yang siap melakukan pemijahan adalah Cupang yang sudah berumur lebih dari 5 bulan (Daelami, 2001).
Pemijahan  dilakukan  dengan  metode  pemijahan  alami,  yaitu  dengan  memisahkan  induk  betina  dan  jantan terlebih  dulu  dalam  satu  wadah.  Induk  jantan  disimpan  di  dalam  toples  dan  induk  betina  dipisahkan  dengan menggunakan  wadah  transparan  atau  toples  yang  sama  dengan  induk  jantan.  Pemisahan  induk  dilakukan  sampai induk jantan membuat busa-busa di permukaan air sebagai tanda siap memijah. Setelah induk jantan membuat busa- busa,  induk  betina  kemudian  disatukan  dengan  induk  jantan  dalam  satu  akuarium.  Pemijahan  terjadi  saat  induk jantan melingkarkan tubuhnya membentuk huruf U melilit induk betinanya. Setelah proses pemijahan selesai, induk jantan  dan  betina  dipindahkan  ke  dalam  wadah  yang  berbeda.  Telur  yang  dibuahi  kemudian  diangkat  dan dipindahkan dalam akuarium hingga menetas dan sampai masa kuning telur berakhir (hari ke-3).
Tahap  perlakuan  merupakan  tahap  perendaman  larva  ikan  Cupang  yang  telah  berumur  3  hari.  Sebelum dilakukan  perendaman  terlebih  dahulu  disiapkan  empat  buah  akuarium  yang  telah  di  isi  air  sebanyak  2  liter. Kemudian dimasukan ke dalam akuarium tersebut masing-masing hormon yang akan digunakan yaitu  ekstrak pasak bumi, Propolis Madu , 17α-methyltestosterone sesuai dengan dosis yang telah ditentukan. Setelah kempat akuarium tersebut siap dimasukan masing-masing sebanyak 150 ekor larva ikan  Cupang ke dalam akuarium tersebut dengan aerasi yang kecil larva dibiarkan direndam selama 10 jam.
Tahap pemeliharaan dilakukan dengan memindahkan larva ikan  Cupang yang telah direndam selama 10 jam sesuai  dengan  perlakuan  yang  diberikan  ke  dalam  akuarium  pemeliharaan.  Mengikuti  denah  dan  posisi  akuarium hasil pengacakan pada tiap akuarium dimasukan sebanyak 40 ekor larva sesuai dengan perlakuan dan ulangan yang telah  ditentukan.  Sebelum  dimasukan  ke  dalam  akuarium  larva  ikan  di  timbang  terlebih  dahulu  untuk  mengetahui berat awal larva ikan.  Selama masa pemeliharaan ikan diberi makanan air hijau dari kolam, cacing rambut ( Tubifex ) dan untuk menjaga kualitas air, setiap 2 satau 3 hari sekali dilakukan penyiponan dan penggantian air sebanyak 30%.
Tahap  pengamatan  yang  dilakukan  berupa  penentuan  jenis  kelamin  yang  dihasilkan  dalam  setiap  perlakuan dan  tingkat    kelangsungan  hidup  ikan  selama  percobaan.  Penentuan  jenis  kelamin  dilakukan  secara  morfologi (mengamati  Karakteristik  sekunder)  dan  histologi  melalui  teknik  pewarnaan  astokarmin.    Pengamatan  morfologi dilakukan secara langsung dengan melihat perbedaan sirip, warna dan bentuk badan untuk menentukan jumlah jantan dan betina.  Sedangkan preparat histologi dengan pewarnaan asetokarmin dibuat dengan mencacah gonad, dan diberi tetes larutan asetokarmin kemudian diamati dibawah mikroskop untuk diidentifikasi jenis kelaminnya.
Pemeriksaan gonad dilakukan setelah ikan berumur 60 hari dengan mengambil sampel seluruh ikan uji. Ikan dibedah dan diambil gonadnya secara hati-hati  menggunakan  pinset.  Untuk  memudahkan  pengambilan  gonad, usus dan  organ  dalam  perut  dikeluarkan.  Sebagian  gonad  diletakkan  di  atas  gelas objek  kemudian  dicincang dengan    menggunakan    pisau    skalpel    sampai    halus.  Kemudian    cincangan    gonad    di    atas    objek    gelas    diberi larutan    asetokarmin  sebanyak  2  tetes.  Objek  gelas  ditutup  dengan  cover  gelas.  Gonad  siap  diamati  dibawah mikroskop binokuler dengan pembesaran 40X.

## Parameter yang Diamati Persentase Ikan Jantan dan Ikan Intersex
Perhitungan persentase ikan jantan, betina dan intersek menggunakan rumus sebagai berikut:
Persen (%) Ikan Jantan
= Σ Ikan Jantan
X     100%
Σ Total ikan
Persen (%) Ikan Intersek = Σ Ikan Intersek X     100% Σ Total ikan

## Bobot Rata-rata Akhir Ikan Uji
Pengukuran  bobot  rata-rata  akhir  ikan  dilakukan  dengan  menimbang  semua  ikan  yang  hidup  pada  akhir
Noor  Syarifuddin  Yusuf,  Inga  Torang  dan  Nahwani. Maskulinisasi  Ikan  Cupang  (Betta  Sp)  Melalui  Perendaman  Larva dengan Estrak Akar Pasak Bumi (Eurycoma longifolia Jack), Propolis Madu dan 17α-Methyltestosterone
perlakuan dengan menggunakan timbangan digital.

## Kelangsungan Hidup
Kelangsungan hidup merupakan jumlah larva ikan Cupang yang ditebar pada awal percobaan  dan jumlah ikan Cupang akhir percobaan.  Perhitungan kelangsungan hidup menggunakan rumus:
SR t (%) = Nt t X     100%
No t
Keterangan: SR t = Survival rate selama perlakuan
Nt t = Jumlah ikan pada akhir perlakuan (ekor)
No t = Jumlah ikan pada awal perlakuan (ekor)

## Pengukuran Kualitas Air
Pengukuran  kualitas  air  meliputi  suhu  air,  oksigen  terlarut,  pH,  CO 2 dan  NH 3 .  Suhu  diukur  menggunakan termometer,  oksigen  terlarut  menggunakan  DO  meter,  pH  dengan  pH  meter,  CO 2 dan  NH 3 diukur  setiap  minggu menggunakan CO 2 Test Kit dan amoniak Test kit.

## Analisis Data
Data pertumbuhan berat ikan, persentase kelangsungan hidup, persentase ikan jantan, persentase ikan intersex dibuat tabulasi.  Data dari tabulasi diolah menggunakan program Microsoft Excel 2018 dan program STATISTICA 8.    Data  yang  sudah  diolah  dilakukan  analisis  sidik  ragam  (ANOVA)  dengan  uji  F  bila  terdapat  perbedaan  nyata maka dilanjutkan dengan uji Duncan untuk menentukan perlakuan yang memberikan respon terbaik.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Pengamatan Gonad
Pengamatan  terhadap  jaringan  gonad  ikan  Cupang  menggunakan  metode  pewarnaan  asetokarmin  di  bawah mikroskop,  bentuk  gonad  menyerupai  sebuah  benang  tipis  memanjang  dan  terletak  tepat  di  bawah  gelembung renang.    Hasil  identifikasi  menunjukkan  bahwa  pada  gonad  ikan  jantan  dapat  ditemukan  adanya  sel  spermatozoa dengan bentuk dan ukuran yang tidak beraturan.  Ukuran sel spermatozoa tersebut lebih kecil dibandingkan dengan sel  telur  dan  jumlahnya  banyak,  apabila  diperhatikan  sepintas  dengan  pembesaran  tertentu,  hanya  akan  tampak berupa titik-titik kecil.
a. Gonad Jantan b. Gonad Betina
c. Gonad Intersex
Gambar 1. Gonad ikan Cupang : (a) Gonad ikan jantan, (b) gonad ikan betina, dan  (c) gonad intersex dengan pewarnaan Asetokarmin
Gambar  1  memperlihatkan  gonad  ikan  Cupang  jantan  (secara  morfologi)  memiliki  jaringan  gonad  berupa bakal  sperma  (gambar  1a).  Sedangkan  pada  ikan  Cupang  betina  memiliki  jaringan  gonad  berupa  bakal  sel  telur (gambar 1b) sedangkan pada gonad yang intersex terdapat bakal sel sperma dan bakal sel telur (gambar 1c).
Bakal Sperma
Bakal Sel Telur
Bakal Sperma Bakal Sel Telur
Noor  Syarifuddin  Yusuf,  Inga  Torang  dan  Nahwani. Maskulinisasi  Ikan  Cupang  (Betta  Sp)  Melalui  Perendaman  Larva dengan Estrak Akar Pasak Bumi (Eurycoma longifolia Jack), Propolis Madu dan 17α-Methyltestosterone

## Persentase (%) Ikan Jantan
Gambar 2. Persentase (%) Ikan Cupang jantan di akhir percobaan
Hasil  pengamatan  gonad  ikan  Cupang  pada  masing-masing  perlakuan  melalui  metode Asetokarmin pada Gambar 2 memperlihatkan persentase (%) ikan  Cupang jantan terbanyak di akhir percobaan adalah perlakuan 17α- methyltestosterone sebesar 89,26% ± 1,46,  perlakuan Ekstrak Pasak Bumi sebesar 68,54% ± 1,39.  Perlakuan Madu Prolis sebesar 53,63%  ± 1,97 dan perlakuan tanpa hormon sebesar 43,13%  ± 1,56. Berdasarkan analisis keragaman (anova), perlakuan yang diberikan memberikan pengaruh nyata pada taraf 1%   (F= 309,08; p=0,000000) tingginya angka persentase (%) ikan Cupang jantan.  Uji lanjut dengan Duncan menunjukkan semua perlakuan berbeda sangat nyata.    Perlakuan  17α- Methyltestosterone (C)  berbeda  sangat  nyata  dengan    perlakuan  Ekstrak  Akar  Pasak    Bumi (A), perlakuan Propolis Madu  (B) dan perlakuan tanpa hormon (D).
Dunham  (2004)  menyatakan  hormon  androgen  mempunyai  sifat  anabolik  maupun  katabolik  yang berhubungan  dengan  pertumbuhan  ikan  setelah  perlakuan.  Phelps  dan  Thomas (2000),  mengatakan  bahwa  hormon androgen mempunyai dua aksi fisiologis; (1) bersifat androgenik, dimana pertumbuhan didorong oleh karakter jantan yang  terbentuk  pada  ikan:  dan  (2)  bersifat  anabolik,  dimana  hormon  androgen  menstimulasi  biosintesis  protein  di dalam tubuh ikan. Pertumbuhan ikan sendiri harus didukung oleh kondisi lingkungan yang optimal dan pemberian pakan  yang  cukup.  Secara  genetik  dalam  keadaan  normal  ikan  akan  menghasilkan  keturunan  dengan  rasio  seks jantan  dan  betina  50%  :  50%  (Tave,  1993;  Pandian  1999).  Rasio  seks  tersebut dapat  diarahkan  menjadi  mayoritas jantan maupun betina sesuai kepentingan dengan teknik alih kelamin (Tave, 1993; Bearmore et al., 2000; Preferrer, 2001; Zairin, 2003; Desprez et al., 2003). Persentase ikan jantan yang lebih tinggi merupakan indikator keberhasilan dari teknik maskulinisasi pada ikan (Zairin, 2003).
Tingkat  keberhasilan  teknik  alih  kelamin  akan  sangat  ditentukan  oleh  jumlah  hormon  yang  diberikan,  lama waktu  perlakuan,  dan  frekuensi  perlakuan  baik  melalui  pemberian  hormon  melalui  pakan  maupun  dengan  teknik perendaman (Piferrer, 2001; Devlin dan Nagahama, 2002). Perlakuan maskulinisasi ikan  dengan teknik perendaman menggunakan  hormon  MT  paling  tepat  dilakukan  pada  saat  larva  baru  menetas  hingga  mendekati  masa  definitif pembentukan kelamin (Pandian dan Sheela, 1995).
Tingginya  jumlah  ikan  jantan  perlakuan  Ekstrak  Pasak  Bumi  sebesar  68,54%.    dalam  penelitian  ini  diduga akibat  adanya  senyawa  stigmasterol  dalam  ekstrak  Pasak  bumi.  Senyawa  stigmasterol  mempunyai  daya  ikat  pada reseptor  sehingga  mempengaruhi  sistem  endokrin  ikan.  Daya  ikat  stigmasterol  pada  reseptor  akibat  adanya kemiripan  antara  struktur  molekul  stigmasterol  dengan  kolesterol  dan  hormon  androgen  (Tremblay  dan  Van  der Kraak, 1998).
Keberhasilan  perubahan  kelamin  jantan  dengan  menggunakan  propolis  diduga    karena    tinggi  kandungan kalium  dalam  perlakuan  tersebut.  Syaifuddin  (2004),  mengatakan  bahwa  kalium  dapat  merubah  lemak    menjadi prenegnolon,    diketahui        prenegnolon    dapat    mengubah    estrogen    menjadi    progesteron.  Berubahnya  estrogen menjadi progesteron, maka ikan yang tadinya menjadi betina akan diarahkan menjadi ikan  jantan.
IJEACCM    (2006),  melaporkan    bahwa    madu    mengandung    senyawa  chrysin  yang    berfungsi    sebagai aromatase  inhibitor  alami.  Ballthazart  dan  Ball  (1989),  melaporkan  bahwa  aromatase  inhibitor  mengakibatkan terjadinya  penurunan  konsentrasi  estrogen  yang  mengarah  pada  tidak  aktifnya transkripsi  dari  gen aromatase. Penurunan    konsentrasi    estrogen,    mengakibatkan    banyaknya    hormon  testosteron  yang  kemudian  akan mengarahkan kelamin menjadi jantan. Sever et al. (1999), menambahkan bahwa  larva  yang  mengalami  aktivitas
Noor  Syarifuddin  Yusuf,  Inga  Torang  dan  Nahwani. Maskulinisasi  Ikan  Cupang  (Betta  Sp)  Melalui  Perendaman  Larva dengan Estrak Akar Pasak Bumi (Eurycoma longifolia Jack), Propolis Madu dan 17α-Methyltestosterone
aromatase  rendah  akan  mengarah  pada  terbentuknya  testis, sebaliknya larva yang mengalami aktivitas aromatase tinggi  akan  mengarah  pada  terbentuknya  ovari.  Selain  gonad  jantan  dan  betina,  dalam  perlakuan  yang  diberikan didapati  gonad  dengan  status  intersex,  dimana  dalam  satu  gonad  terdapat  bakal  sel  jantan  (sperma)  dan  bakal  sel betina (ovum).

## Persentase (%) ikan Intersex
Gambar 3 .  Persentase (%) Ikan Cupang intersex di akhir percobaan
Gambar 3 diatas diketahui persentase (%) ikan Cupang intersex tertinggi terjadi pada perlakuan Ekstrak Pasak Bumi  (A)  yaitu  sebesar  15,71%±3,04,  perlakuan  Propolis  Madu  (B)  sebesar  5,15%  ±  1,43,  perlakuan  17α- methyltestosterone  (C)  sebesar  4,06%  ±  0,21  dan  perlakuan  tanpa  hormon  (D)  sebesar  1,15%  ±1,63.    Analisis keragaman  (anova)  dari  perlakuan  yang  diberikan  menunjukkan  bahwa  perlakuan  yang  diberikan  memberikan pengaruh nyata pada taraf 1% (F=23,13; P=0,000269).  Uji lanjut  dengan Duncan menunjukkan perlakuan Ekstrak Pasak    Bumi  (A)  berbeda  sangat  nyata  dengan  ketiga  perlakuan  lainnya  yaitu  perlakuan  Propolis  Madu    (B), perlakuan 17α- Methyltestosterone (C) dan perlakuan tanpa hormon (D) namun ketiga perlakuan ini masing-masing satu sama lainnya tidak berbeda nyata.
Menurut  Zairin  (2002),  ikan  intersex  merupakan  penyimpangan  pembentukan  kelamin  akibat  dosis  hormon atau lama perlakuan yang kurang tepat pada saat perlakuan. Oleh karena itu, sangat penting untuk mencari dosis dan lama  perlakuan  optimum  dalam  perlakuan  alih  kelamin  untuk  meningkatkan  populasi  jantan  dan  mengurangi  ikan intersex.

## Kelangsungan Hidup Larva
Gambar 4. Persentase (%) kelangsungan hidup rata-rata individu ikan Cupang (gram) di akhir percobaan
Noor  Syarifuddin  Yusuf,  Inga  Torang  dan  Nahwani. Maskulinisasi  Ikan  Cupang  (Betta  Sp)  Melalui  Perendaman  Larva dengan Estrak Akar Pasak Bumi (Eurycoma longifolia Jack), Propolis Madu dan 17α-Methyltestosterone
Kelangsungan hidup individu ikan Cupang yang dipelihara selama masa pengamatan menunjukkan perlakuan Propolis  Madu    (B)  dengan  nilai  sebesar  80,83%  ±  0,47    paling  tinggi  dibandingkan  dengan  perlakuan  lainnya. Perlakuan Ekstrak Pasak Bumi (A) sebesar 74,17% ± 0,47, perlakuan tanpa hormon (D) sebesesar 73,33%   ± 1,25 dan perlakuan dengan 17α-methyltestosterone (C) sebesar 61,67% ±1,25. Uji Anova yang dilakukan memperlihatkan bahwa  perlakuan  yang  diberikan  memberikan  pengaruh  yang  sangat  nyata  pada  taraf  1%  (F=22,83;P=0,000282) terhadap kelangsungan hidup ikan Cupang dan dari hasil analisis lanjut dengan uji Duncan menunjukkan perlakuan Propolis Madu  (B) berbeda sangat nyata dengan ketiga perlakuan lainnya yaitu Perlakuan ekstrak Pasak bumi (A), perlakuan  dengan  17α-methyltestosterone  (C)  sebesar  dan  perlakuan  tanpa  hormon  (D).    Perlakuan  ekstrak  pasak bumi  (A)  menunjukkan  nilai  kelangsungan  hidup  ikan  Cupang  yang  tidak  berbeda  nyata  dengan  perlakuan  tanpa hormon (D).
Kelangsungan hidup merupakan salah satu parameter yang sangat penting dalam perlakuan maskulinisasi ikan Cupang sebagai indikator apakah bahan yang dipakai memiliki efek negatif yang dapat menyebabkan kematian atau tidak.  Perendaman larva ikan Cupang memperlihatkan bahwa perlakuan yang diberikan memberikan pengaruh yang sangat nyata terhadap kelangsungan hidup ikan Cupang. Mantau (2005) menyebutkan bahwa tingkat kelangsungan hidup  ikan  selama  proses  pengalihan  jenis  kelamin  dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor  seperti  padat  penebaran, pemberian  pakan,  temperatur  dan  kondisi  lingkungan  lainnya.  Selama  pelaksanaan  teknis  penelitian,  semua  larva ikan  Cupang  pada  setiap  perlakuan  mendapatkan  proporsi  dan  penanganan  yang  sama.    Kepadatan  larva  pada masing-masing  percobaan  sebanyak  40  ekor,  pakan  diberikan  secara ad  libitum (sekenyangnya)  dengan  frekuensi pemberian  3  sampai  4  kali/  hari.  Temperatur  pada  masing-masing  media  baik  pada  saat  perlakuan  perendaman maupun pemeliharaan dipertahankan stabil pada kisaran 26,63 - 31,06 0 C.
Penggunaan  hormon  atau  bahan  kimia  sintetik  dalam  aplikasi  alih  kelamin  pada  ikan  secara  umum mempengaruhi  tingkat  kelangsungan  hidup  karena  diduga  mempengaruhi  adanya  tekanan  fisiologi  terhadap  ikan yang  diberi  perlakuan.    Larva  ikan  Cupang  masih  dalam  fase  larva  sehingga  kondisi  fisiologinya  masih  lemah. Sedangkan  bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  merupakan  bahan  alami  dari  tumbuhan  pasak  bumi  dan Propolis  Madu    yang  tidak  menyebabkan  tekanan  terhadap  fisiologi  benih  ikan  Cupang  sehingga  tingkat kelangsungan  hidup  benih  ikan  Cupang  relatif  tinggi  karena    itu  diduga  rendahnya  kelangsungan  hidup  perlakuan MT karena berasal dari jenis hormon sintetik.

## Pertumbuhan Berat
Gambar 5. Bobot akhir rata-rata individu ikan Cupang (gram) di akhir percobaan
Bobot  rata-rata  individu  ikan  Cupang  pada  Gambar  5  memperlihatkan  perlakuan  dengan  menggunakan Ekstrak  Pasak  Bumi  (A)  memiliki  nilai  bobot  yang  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  perlakuan  dengan  Propolis Madu  (B), perlakuan 17α-methyltestosterone (C), dan perlakuan tanpa hormon (D). Bobot rata-rata individu ikan Cupang  pada  akhir  percobaan  untuk  perlakuan  Ekstrak  Pasak  Bumi  (A)  sebesar  0,77  gram  ±  0,03  lebih  tinggi dibandingkan perlakuan Propolis Madu  (B) sebesar 0,56 gram ± 0,02, perlakuan 17α-methyltestosterone (C) sebesar 0,50 gram ± 0,02, dan perlakuan Tanpa Hormon (D)  sebesar 0,52 gram ± 0,02.
Hasil  analisa  keragaman  (Anova)  bobot  rata-rata  individu  ikan  Cupang  di  akhir  percobaan  menunjukkan bahwa  perlakuan  yang  diberikan  berpengaruh  sangat  nyata  pada  taraf  1%  (F=56,091;  p=0,000010)  terhadap  bobot akhir  rata-rata  individu  ikan  Cupang  dan  hasil  analisis  lanjut  menggunakan  Uji  Duncan  memperlihatkan  bahwa
Noor  Syarifuddin  Yusuf,  Inga  Torang  dan  Nahwani. Maskulinisasi  Ikan  Cupang  (Betta  Sp)  Melalui  Perendaman  Larva dengan Estrak Akar Pasak Bumi (Eurycoma longifolia Jack), Propolis Madu dan 17α-Methyltestosterone
bobot  rata-rata  ikan  Cupang  dengan  perlakuan  Ekstraks  Pasak  Bumi  (A)  berbeda  sangat  nyata  dengan  perlakuan Propolis Madu  (B),  perlakuan 17α-methyltestosterone (C) dan perlakuan Tanpa Hormon  (D) namun bobot rata-rata individu ikan Cupang pada perlakuan Propolis Madu  (B) tidak berbeda nyata dengan perlakuan tanpa Hormon (D).
Pertumbuhan  merupakan  pertambahan  bobot  ikan  selama  pemeliharaan.  Parameter  pertumbuhan  penting diamati  untuk  mengetahui  kondisi  fisiologis  ikan  yang  dipelihara.  Bobot  rata-rata  individu  ikan  Cupang  di  akhir percobaan menunjukkan bahwa perlakuan yang diberikan berpengaruh sangat nyata dan memperlihatkan perlakuan Ekstrak  Pasak  Bumi  (A)  lebih  menonjol  dibandingkan  yang  lain  yaitu  sebesar  0,77  gram.    Diduga  Ekstrak  Pasak Bumi memiliki efek anabolik yang lebih kuat dibanding perlakuan lainnya terhadap ikan Cupang.

## Kualitas Air
Pengukuran  kualitas  air  terdiri  dari  suhu  harian,  pH  harian  dan  Oksigen  terlarut  (DO)  harian.    Sedangkan pengukuran  CO 2 dan  NH 3 dilakukan  menjelang  sampling  pada  setiap  periode  dua  mingguan.  Data  pengukuran kualitas air disajikan pada Tabel 1 di bawah ini.
Tabel 1.  Kisaran kualitas air selama masa pemeliharaan
No. Parameter Perlakuan EPB (A) PM (B) MT (C) (K+) TH (D) (K-) 1. Suhu ( o C) 27,10-31,06 27,15-30,95 26,63-30,23 27,78-30,91 2. pH 5,45-8,12 5,60-8,23 5,59-8,16 5,32-7,82 3. DO (mg/l) 6,02 -8,05 6,19-8,10 5,23-8,44 5,36-8,18 4. CO 2 -Total (mg/l) 4,12-11,37 4,86-12,02 3,89-12,21 4,04 – 12,34 5. NH 3 -N (mg/l) 0,18-0,46 0,21-0,56 0,16-1,02 0,21-0,66
Secara umum kisaran kualitas air pada wadah pemeliharaan masih berada dalam kisaran yang optimal untuk budidaya  ikan.    Pengukuran  suhu  air,  pH  air, oksigen  terlarut (DO)  dilakukan  setiap  hari  pada  pukul  07.00  –  9.00 WIB.   Fluktuasi suhu air harian cenderung stabil selama masa pemeliharaan. Fluktuasi pH air pada masing-masing wadah pemeliharaan secara umum kecenderungan meningkat pada minggu ke tiga pemeliharaan hingga  minggu ke enam atau akhir penelitian. Fluktuasi oksigen terlarut menunjukkan kecenderungan penurunan pada minggu ke tiga pemeliharaan  hingga    minggu  ke  enam.    Pengukuran  karbondioksida  dilakukan  setiap  dua  minggu  menjelang sampling  rutin  dilakukan.   Karbondioksida  secara  keseluruhan  menunjukkan  pola  peningkatan  dari  waktu kewaktu hingga  akhir  penelitian.    Pengukuran  NH 3 -N  dilakukan  setiap  dua  minggu  sekali  sebelum  sampling  dimulai. Fluktuasi NH 3 -N secara umum menunjukkan kecenderungan yang terus meningkat hingga akhir penelitian. Salah satu parameter kualitas air yang sangat mempengaruhi rasio seks ikan adalah temperatur (Zairin, 2003; Devlin  dan  Nagahama,  2002;  Goto-Kazeto,  2006).  Pada  temperatur  yang  tinggi  akan  menyebabkan  arah  kelamin menjadi  jantan  sedangkan  pada  temperatur  rendah  umumnya  akan  mengarah  menjadi  betina  (Goto-Kazeto,  2006). Sejak stadia embrio temperatur telah mempengaruhi seks rasio maupun perkembangan ikan (Devlin dan Nagahama, 2002).  Pada  suhu  15 o C  populasi  ikan  mas  ( Carassius  auratus )  betina  dapat  mencapai  94,6%,  pada  suhu  23 o C populasi  betina  berada  pada  kisaran  normal,  berjumlah  46,6%  dan  pada  suhu  dan  pada  temperatur  30 o C  populasi jantan  dapat  mencapai  92,3%  (Goto-Kazeto,  2006).  Menurut  Pillay  (1981),  peningkatan  temperatur  dapat meningkatkan  jumlah  ikan  jantan  dan  pada  fase  dewasa  dapat  meningkatkan  hormon  testesteron  dan  11- ketotestesteron.

## KESIMPULAN
Perlakuan  Ekstrak  Akar  Pasak  Bumi,  Propolis  Madu,  dan  17-α Methyltestosteron berpengaruh  terhadap terhadap Persentase ikan jantan, ikan intersex, kelangsungan hidup dan bobot ikan.  Persentase ikan jantan  Ekstrak Akar  Pasak  Bumi  sebesar  68,54%  dan  Propolis  Madu  sebesar  53,63%  lebih  rendah  jika  dibandingkan  17-α Methyltestosteron yang dapat mencapai 89,26%.  Ikan Cupang yang intersex pada Ekstrak Akar Pasak Bumi sebesar 15,71%, Propolis Madu sebesar 5,15% lebih tinggi dibandingkan 17-α Methyltestosteron yang hanya sebesar 4,06% dan  sebesar  TH  1,15%.  Kelangsungan  hidup  benih  yang  dihasilkan  Propolis  Madu  sebesar  80,83%,  Ekstrak  Akar Pasak Bumi sebesar 74,17% lebih tinggi dibandingkan Tanpa Hormon sebesar 73,33% dan Ekstrak Akar Pasak Bumi sebesar 61,67%.  Bobot rata-rata individu ikan Cupang Ekstrak Akar Pasak Bumi sebesar 0,77 gram, Propolis Madu sebesar  0,56  gram  lebih  tinggi  dari  17-α Methyltestosteron sebesar  0,50  gram  dan  TH  sebesar  0,52  gram. Penggunaan bahan alami berupa Ekstrak Akar Pasak Bumi dari dengan dosis 10 ml/liter dan Propolis Madu dosis 60 ml/liter  cukup  efektik  untuk  alternatif  pengganti  penggunaan      hormon  sintetik  17-α Methyltestosteron dalam maskulinisasi ikan Cupang.
Noor  Syarifuddin  Yusuf,  Inga  Torang  dan  Nahwani. Maskulinisasi  Ikan  Cupang  (Betta  Sp)  Melalui  Perendaman  Larva dengan Estrak Akar Pasak Bumi (Eurycoma longifolia Jack), Propolis Madu dan 17α-Methyltestosterone

## DAFTAR PUSTAKA
Balthazart,  J.  &  Ball,  G.F.  1998.    New  Insight  Into  Regulation  And  Function  of  Brain  Estrogen  Synthase (aromatase).  Review.  Control  and  Function  of  brain  Aromatase. Journal  Trends  In  Neirosciences ,  21  (6) 243-249.
Bearmore,  J.A.,    Mair    G.C.,    &  Lewis,  R.I.    2000.    Monosex    male    production    in  finfish    as    exemplified    by tilapia:  applications,  problems,  and  prospects. Aquaculture 197 : 283-301.
Contreras-Sanchez, W.M. & Fitzpatrick. M.S. 2001. Fate of Methyltestosterone in The Pond Environment: Impact of MT-Contaminated  soil  On  Tilapia  sex  Differentation. http://pdacrsp.  oregonstate,  edu/  pubs/ technical/18tchh tml/ 9ER2c.html  IJEACCM.  2006.  Evaluation  of  a  New  Class  1  Substance  “Chrysin”, IJEACCM. 03.
Daelami, D. 2001. Usaha Pembenihan Ikan Hias Air Tawar. Penebar Swadaya Jakarta. 166 halaman. Desprez,  D.,  Geraz,  E.,  Hoareau,  M.C.,  Melard,  C.,  Bosc,  P.,  and  Baroiller,  J.F.  2003.  Production    of    a    High Persentage  of  Male  Offspring  with  a  Natural Androgen,   11β-Hydroxyandrostenedione   (11   Βoha4), in   Florida   Red Tilapia. Aquaculture 216 : 55-65.
Devlin, R.H., & Nagahama, Y. 2002. Sex Determination and Sex Differentiation in Fish: an Overview of Genetic,
Physiological, and Enviromental Influences. Aquaculture 208 : 191-364.
Dunham, R.A. 2004. Aquaculture and Fisheries Biotechnology: Genetic Approaches. CABI Publ. Cambridge, USA.
357 P.
DKP.  2008.    Obat-obatan  yang  dilarang.    Dirjen  Perikanan  Budidaya.    Balai  Besar  Pengembangan  Budidaya  Air Tawar.  Sukabumi.
Goto-Kazeto, R., Abe, Y., Masai, K., Yamaha, E., Adachi, S., and Yamauchi, K. 2006. Temperature-dependent sex differentiation  in  goldfish:  Establishing  the  temperature-sensitive  period  and  effect  of  constant  and fluctuating water temperatures. Aquaculture 254 : 617–624.
Ibrahim,  A.,  Syamsuddin,  Jualiana.  2016.    Penggunaan  Madu  dalam  Perendaman  Induk  Guppy  untuk  Jantanisasi Anakan.  Nikè:Jurnal  Ilmiah  Perikanan  dan  Kelautan.  Volume  4  Nomor  3,  September  2016.  Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan – Universitas Negeri Gorontalo.
IJEACCM.    2006.    Evaluation    of    a    new    Class    1   substance    “Chrysin”.  IJEACCM03.  http:  //medsafe.govt.nz/ regulatory/ CompMed / PIL / IJEACCM / 3 /Chrysin.pdf.
Mantau, Z. 2005. Produksi benih ikan nila jantan dengan rangsangan hormon metil testosteron dalam tepung pellet.
Jurnal Litbang Pertanian, 24(2), 80- 84.
Martati,  E.  2006.  Efektivitas  Madu  Terhadap  Nisbah  Kelamin  Ikan  Gapi  ( Poecilia  reticulata Peters).  Skripsi. Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan. Institut Pertanian Bogor.
Mylonas,  C.C.,  Fostier,  A.,  Zanuy,  S.  2010.  Broodstockmanagement  and  hormonal  manipulations  offish reproduction. General and Comparative Endocrinology 165: 516–534.
Pandian, T.J., & Sheela, S.G. 1995. Hormonal Induction of Sex Reversal in Fish. Aquaculture 138 : 1-22. Piferrer, F. 2001, “Endocrine Sex control Strategies for Feminization of Teleost Fish” Aquaculture 197: 229–281. Phelps, R.P., & Thomas, J.P. 2000. Sex Reversal of Tilapia. Page 34-59 in B.A. Costa-Pierce and J.E. Rakocy, eds. Tilapia  Aquaculture  in  the  Americas,  Vol  2.  The  Word  Aquaculture  Society,  Baton  Rounge,  Louisiana, United States.
Pillay,  T.V.R.  1981.  Reproductive  Physiology  of  Teleost  Fishes:  A  Review  of  Present  Knowledge  and  Needs  for Future Research. UNDP and FAO.
Putra,  S.  2011.  Maskulinisasi  ikan  nila  ( Oreochromis  niloticus )  melalui  perendaman  dalam  ekstrak  purwoceng ( Pimpinella alpina ). Tesis. Ilmu Akuakultur. Institut Pertanian Bogor.
Sever, D.M., Halliday, V., Waight, J., Brown, H.A.,  Davies, and Moriarty, E.C. 1999. Sperm Storage In Female of The  Smooth  News  ( Triturus  vulgaris L)I  Ultrastructure  of  the  Spermathecal  during  the  breeding  season. Journal of the Experimental Zoology. 283: 51-70 : Wiley-Liss inc.
Soelistyowati, D.T., Martati, E., Arfah, H. 2007.  Efektivitas madu terhadap pengarahankelamin ikan gapi Poecilia reticulata Peters.Jurnal Akuakultur Indonesia 6: 155–160 Syaifuddin,  A.  2004.  Pengaruh  Pemberian  Suplemen  Madu  Pada  Pakan  Larva  Ikan  Nila  GIFT  ( Oreochromis niloticus ) Terhadap Rasio Jenis Kelaminnya. Skripsi. Universitas Brawijaya. Fakultas Perikanan. Malang. Tave, D. 1993. Genetics for Fish Hatchery Managers. AVI Publishing, Co. Inc, Westport, Connecticut. USA. Tremblay, L. & Van Der Kraak, G. 1998. Use of a series of homologous in vitro and  in  vivo  assays  to  evaluate the  endocrine  modulating  actions  of  β- sitosterol in rainbow trout. Aquatic Toxicology 43; 149–162. Yusuf,  N.S.  2014.    Uji  Toksitas  Ekstrak  Tumbuhan  Pasak  Bumi  ( Eurycoma  longifolia Jack)  dengan  Metode Maserasi  Terhadap  Mortalitas  Larva  Ikan  Nila  ( Orechromis  niloticus ).  Program  Studi  Budidaya  Perairan. Jurusan Perikanan.  Fakultas Pertanian Universitas Palangka Raya.
Noor  Syarifuddin  Yusuf,  Inga  Torang  dan  Nahwani. Maskulinisasi  Ikan  Cupang  (Betta  Sp)  Melalui  Perendaman  Larva dengan Estrak Akar Pasak Bumi (Eurycoma longifolia Jack), Propolis Madu dan 17α-Methyltestosterone
Yusuf,  NS.,  Andayani,  S.,  Risjani,  Y.,  Faqih  A.R.  2019.    Masculinization  of  tilapia  ( Orechromis  niloticus )  by immersion  method  using  methamol  extract  of  Pasak  Bumi  Roots  ( Eurycoma  Longifolia Jack).  RJOAS, 9(93), September 2019. DOI 10.18551/rjoas.2019-09.08. Zairin, Jr.M. 2002. Sex Reversal Memproduksi Benih Ikan Jantan dan Betina. Penerbit Swadaya. Bogor. Zairin, Jr.M.  2003.  Endokrinologi  dan  Perannya  Bagi  Masa  Depan  Perikanan  Indonesia.  Orasi  Ilmiah  Pengukuhan Guru Besar Tetap Ilmu Fisiologi Reproduksi dan Endokrinologi Hewan Air. Institut Pertanian Bogor.