Antibacterial Activity Extract of Leaves of Kaffir Lime ( Citrus hystrix DC)
Againts of Staphylococcus aureus Bacteria
Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Jeruk Purut ( Citrus hystrix DC) Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus
Siti maimunah 1* , Raihana 1 , Yosy Cinthya Eriwaty Silalahi 1
Program Studi Farmasi, Fakultas Farmasi dan Ilmu Kesehatan Universitas Sari Mutiara Indonesia, Medan. Jalan Kapten Muslim N0. 79 Medan 20123
* Email : siti_mai09@yahoo.com
Diterima 06 Juni 2020 dan Disetujui 21 Agustus 2020

## Abstrak
Jeruk purut ( Citrus hystrix DC) adalah jenis tanaman dari suku Rutaceae yang digunakan sebagai  antibakteri.  Tanaman  merupakan  tumbuhan  asli  Indonesia,  yang  mengandung flavonoid, tanin, getah, alkaloid, dan minyak esensial. Tujuan penelitian ini untuk menentukan kemampuan  ekstrak  daun  Jeruk  purut  ( Citrus  hystrix DC)  sebagai  antibakteri  terhadap Staphylococcus aureus dan untuk mengetahui  konsentrasi  yang paling efektif dalam menghambat bakteri Staphylococcus . Penelitian menggunakan daun jeruk purut yang dikeringkan dengan oven pada  suhu  45˚C,  pulverizing  oleh  ukuran  40,  dan  ekstraksi  selama  5  hari  dengan  maserasi ethanol 96%. Penelitian ini menggunakan desain rancangan acak lengkap (RAL) dengan variasi konsentrasi  5%,  10%,  15%,  dan  20%,  kemudian  digunakan  untuk  menguji  aktivitas  antibakteri dengan perbedaan disc diffiusion . Zona hambat terbentuk dari ekstrak dengan konsentrasi 5% (6,7 mm), 10% (6,8 mm), 15% (7,3 mm), dan 20% (8,3mm). Hasil analisis data menunjukkan bahwa daun  jeruk  purut  mempengaruhi  pertumbuhan Staphylococcus  aureus ,  dimana  berdasarkan penelitian nilai sig <0,05 memperoleh nilai dari sig. 0,000, dan konsentrasi 20% merupakan yang paling  efektif  dalam  menghambat  pertumbuhan  dari Staphylococcus aureus sebesar  8,3  mm. Ekstrak  daun  jeruk  purut  memiliki  aktivitas  antibakteri.  Ekstrak  daun  jeruk  purut  dengan konsentrasi 20% merupakan konsentrasi efektif untuk menghambat bakteri.
Keywords: Citrus hystrix , ekstrak, antibakteri, Staphylococcus aureus.

## Abstract
Kaffir  lime  ( Citrus  hystrix DC ) is  citrus  plant  of  Rutaceae's  family  that  was  used  as  an antibacterial.  This  plant  is  native  to  Indonesia,  which  contains  flavonoids,  tannins,  saponins, alkaloids, and essential oil. This study aimed to determine the ability of antibacterial extract lime leaves  against S.  aureus and  to  find  out  the  concentration  that  is  most  effective  in  inhibiting bacteria S. aureus . The research used lime leaves. By drying the leaves at the oven at temperature 45˚C, pulverizing by mesh 40, and extraction by maceration for 5 days with ethanol 96%. This study used a completely randomized design with treatments in various concentrations of 5%, 10%, 15%,  and 20% concentration  was  then  used  to test  the  antibacterial  activity  with  disc  diffusion. Inhibition zone formed from extracts with concentration of  5% (6,7 mm) 10% (6,8 mm) 15% (7,3 mm) and 20% (8,3 mm). The results of the data analysis showed that the administration of lime leaves extract affected the growth of S. aureus , where the value of sig <0,05 obtained a value of sig 0,000.  Based  on  the  research,  among  the  others,  the  concentration  of  20%  was  that  the  most effective in inhibiting the growth of S. aureus that was 8,3 mm. Kaffir lime ( Citrus hystrix DC.) leaf  extract  has  antibacterial  activity  against  the S.  aureus .  Concentration  extract  20%  is  an effective concentration to inhibit bacterial.
Keywords : Citrus hystrix , extract, antibacterial , Staphylococcus aureus

## PENDAHULUAN
Tanaman jeruk purut berasal dari Asia Timur, Asia Tenggara (Agusta, 2000). Di Asia Tenggara  terdapat  diantaranya  di  Indonesia  memiliki  pusat  keragaman  hayati  yang menduduki  urutan  terkaya  di  dunia  setelah  Brazil.  Diantaranya  sekitar  40.000  spesies tumbuhan, dari seluruh spesies tumbuhan tersebut ± 9.600 spesies tumbuhan berkhasiat obat dan ± 300 spesies yang dimanfaatkan sebagai obat tradisional (Depkes RI, 2006).
Di  Indonesia  banyak  masyarakat  yang  menanam  jeruk  purut  ( Citrus  hystrix )  di pekarangan  atau  di  kebun.  Merupakan  tanaman  perdu,  bentuk  buahnya  bulat  dengan tonjolan-tonjolan,  permukaan  kulitnya  kasar,  tebal  dan  mengeluarkan  aroma  khas. Karena banyak yang menanamnya sehingga jeruk purut banyak dijumpai di setiap kota yang  ada  di  Indonesia.  Tanaman  ini  berasal  dari  genus  Citrus  yang  menghasilkan minyak  atsiri.  Buah  dan  daunnya  biasa  digunakan  oleh  masyarakat  untuk  bumbu penyedap masakan. Daun jeruk purut memiliki kandungan senyawa antibakteri seperti alkaloid, flavonoid, dan tannin (Miftahendarwati, 2014).
Yuliani et al., (2011), menyatakan bahwa kandungan minyak atsiri yang terdapat di  daun jeruk purut  mampu menghambat pertumbuhan  dan  membunuh Staphylococcus aureus dan E.  coli. Minyak  atsiri  dengan  konsentasi  2%  dan  1%  sudah  dapat menghambat  pertumbuhan Staphylococcus  aureus. Konsentrasi  minyak  atsiri  1% merupakan konsentrasi terkecil yang mampu menghambat pertumbuhan Staphylococcus aureus sehingga konsentrasi tersebut dinyatakan sebagai KHM.
Dhavesia (2017) menyatakan bahwa uji aktivitas antibakteri ekstrak daun jeruk purut  dengan  konsentrasi  ekstrak  50%  memiliki  luas  zona  hambat  yang  lebih  besar dibandingkan dengan konsentrasi ekstrak 12,5 dan 25% yaitu dengan rata-rata luas zona hambat  terhadap  kedua  bakteri  yaitu  1,593  cm 2 .  Luas  zona  hambat  ekstrak  dengan konsentrasi  50%  terhadap Staphylococcus  epidermis adalah  1,251  cm 2 dan Pseudomonas aeruginosa adalah  1,934  cm 2 .  Konsentrasi  ekstrak  12,5%  memiliki  rata-rata  luas  zona hambat  sebesar  0,561  cm 2 ,  dan  konsentrasi  50%  memiliki  rata-rata  luas  zona  hambat sebesar 0,984 cm 2 (Dimenta et al ., 2020).
Staphylococcus  aureus merupakan  bakteri  Gram  positif  berbentuk  bulat, berdiameter 1 μ m tersusun berkelompok seperti anggur yang tidak teratur. Staphylococcus aureus bersifat  aerobik  atau  mikroaerofilik.  Berkembang  dengan  cepat  dengan  suhu 37 ᵒ C,  dapat  membentuk  pigmen  pada  suhu  20  -  35 ᵒ C.  Bakteri  tersebut membentuk koloni abu-abu hingga kuning emas (Jawetz, 2008). Pada media, koloninnya berbentuk bulat,  diameter  1-2  mm,  cembung,  buram,  mengkilat  dan  konsistensinya  lunak (Syahrurahman et al ., 2010). Dengan adanya senyawa flavanoid yang berfungsi sebagai antibakteri, peneliti tertarik untuk melakukan penelitian uji aktivitas antibakteri ekstrak daun jeruk purut ( Citrus hystrix ) terhadap bakteri Staphylococcus aureus.

## METODE
Jenis  penelitian  ini  adalah  eksperimental.  dilakukan  di  Laboratorium Mikrobiologi  Fakultas  Farmasi  Universitas  Sari  Mutiara  Indonesia,  Medan.  Sampel yang digunakan adalah daun jeruk purut ( Citrus hystrix ), berasal dari daerah Paloh Lada, Kecamatan  Dewantara,  Kabupaten  Aceh  Utara.  Diambil  secara  purposif,  yang
didasarkan  atas  pertimbangan  bahwa  populasi  sampel  adalah  homogen  dan  sampel yang  dianalisis dianggap sampel yang representatif.  Ekstrak  yang  digunakan  untuk uji aktivitas  antibakteri  pada  konsentrasi  5%,  10%,  15%,  dan  20%  dengan  metode  difusi cakram.  Identifikasi  sampel  daun  jeruk  purut  ( Citrus  hystrix )  dilakukan  di  Herbarium Medanense (MEDA) Universitas Sumatera Utara.

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  aluminium  foil,  autoklaf,  blender, cawan petri, inkubator, jangka sorong, jarum ose, kertas perkamen, kertas saring, kapas, kassa steril,  lemari  pendingin,  lemari  pengering,  timbangan,  neraca listrik,  laminar  air flow,   oven,  pencadang logam, pemanas  air,  pinset,  mikropipet,  lampu  bunsen,  kertas cakram, hot plate . Bahan yang digunakan adalah ekstrak daun jeruk purut ( Citrus hystrix ). Nutrient  agar , Staphylococcus  aureus ,  akuades,  etanol  96%, Standart  Mc.  Farland , Kloramfenikol.

## Penyiapan Sampel
Sampel daun jeruk purut yang masih segar dikumpulkan sebanyak 3 kg, disortasi basah, dicuci bersih dibawah air yang mengalir dan ditiriskan, selanjutnya dikeringkan di oven pada suhu 45˚C hingga meremah, dan kemudian dijadikan serbuk dengan ukuran mesh 40 (dengan modifikasi metode Miftahendrawati, 2014).
Pembuatan Ekstrak Daun Jeruk Purut ( Citrus hystrix)
Ekstrak daun jeruk purut sebanyak 200 g dimaserasi menggunakan pelarut etanol 96%. Simplisia direndam dalam pelarut sebanyak 2000 ml (perbandingan 1:10) selama 5 hari pada  suhu  ruang  (27˚C).  Selanjutnya  hasil  yang  diperoleh  disaring.  Maserat  yang diperoleh,  ditampung  dan  diuapkan  untuk  memisahkan  pelarutnya.  Penguapan dilakukan  dengan  menggunakan rotary  evaporator, kemudian  di  dapat  ekstrak  kental (dengan modifikasi Miftahendrawati, 2014).

## Pembuatan Variasi Konsentrasi Ekstrak Daun Jeruk Purut
Ekstrak  kental  yang  diperoleh  kemudian  dibuat  dengan  berbagai  konsentrasi. Konsentrasi  ekstrak  daun  jeruk  purut  yang  digunakan  sebagai  berikut:  5%,  10%,  15% dan 20%. Ekstrak daun jeruk purut dengan konsentrasi 5%. Ditimbang sebanyak 0,5 g ekstrak  kental  daun  jeruk  purut  kemudian  dicukupkan  dengan  etanol  10  ml.  Ekstrak daun jeruk purut dengan konsentrasi 10%. Ditimbang sebanyak 1 g ekstrak kental daun jeruk  purut  kemudian  dicukupkan  dengan  etanol  10  ml.  Ekstrak  daun  jeruk  purut dengan  konsentrasi  15%.  Ditimbang  sebanyak  1,5  g  ekstrak  kental  daun  jeruk  purut kemudian  dicukupkan  dengan  etanol  10  ml.  Ekstrak  daun  jeruk  purut  dengan konsentrasi  20%.  Ditimbang  sebanyak  2  g  ekstrak  kental  daun  jeruk  purut  kemudian dicukupkan dengan etanol 10 ml.
Kontrol Positif. Kloramfenikol digunakan  sebagai  kontrol  positif.  Kadar  yang  sensitif terhadap bakteri uji yaitu 30 µg. Pembuatannya dengan 30 mg kloramfenikol dilarutkan dalam 10 ml (Widiastuti, 2016).
Sterilisasi Alat. Alat-alat yang digunakan dalam uji aktivitas antibakteri ini, disterilkan terlebih  dahulu  sebelum  dipakai.  Alat-alat  gelas  disterilkan  didalam  oven  pada  suhu 170 ᵒ C selama  1 jam. Media disterilkan  di  autoklaf  pada  suhu  121 ᵒ C selama  15  menit. Jarum ose dan pinset dengan lampu bunsen (Lay, 1994).
Pembuatan  Media  Agar  Miring  (NA). Sebanyak 28  g nutrient  agar  dilarutkan  dalam air suling steril ditambahkan 1000 ml kemudian dipanaskan hingga semua larut, dalam keadaan  panas  larutan  tersebut  kemudian  dimasukan  kedalam  erlenmayer,  lalu disterilkan di autoklaf selama 15 menit pada suhu 121 ᵒ C (Oxoid, 2013).
Inokulasi Bakteri Staphylococcus aureus Pada Media Agar Miring Bakteri uji diambil dengan jarum ose steril, lalu ditambahkan pada media agar miring dengan  cara  menggores.  Selanjutnya  diinkubasi  dalam  inkubator  pada  suhu  37 ᵒ C selama 24 jam (Siregar, 2009).
Pembuatan Standar Kekeruhan Larutan (Larutan Mc. Farland ).
Sebanyak  99,5  ml  larutan  asam  sulfat  1%  v/v  dan  0,  5  ml  larutan  Barium  Klorida 1,175%  b/v,  dicampurkan  kedua  larutan  di  atas  dalam  tabung  reaksi  dan  divortex sampai homogen. Sehingga diperoleh suspensi dengan tingkat kekeruhan yang dikenal dengan  kekeruhan  Mc.  Farland.  Apabila  kekeruhan  suspensi  bakteri  uji  sama  dengan kekeruhan  suspensi  Mc.  Farland,  maka  konsentrasi  suspensi  bakteri  uji  adalah  10 8 CFU/ml (Victor, 1980).

## Pembuatan Suspensi Bakteri Uji
Bakteri  yang  telah  diinokulasi  diambil  dengan  kawat  ose  steril  lalu  disuspensikan kedalam tabung yang berisi 2 ml larutan NaCl 0,9% hingga diperoleh kekeruhan yang sama dengan standar kekeruhan larutan Mc.Farland (Mplia, 2012).
Uji Aktivitas Antibakteri Pada Ekstrak Daun Jeruk Purut Terhadap Stpahylococcus aureus
Sterilkan  semua  alat  dan bahan  yang  akan  dipakai.  Uji  aktivitas  antibakteri dilakukan dengan  metode  difusi  agar  menggunakan  kertas  cakram  ( paper  disc ).  Uji  aktivitas antibakteri dilakukan secara triplo. Kertas cakram dicelupkan ke dalam sampel dengan konsentrasi 5%, 10%, 15% dan 20%, kemudian diletakan di atas media NA yang telah diinokulasikan dengan bakteri uji. Inkubasi dilakukan dengan suhu 37˚C selama 24 jam. Pengamatan  dilakukan  terhadap  terbentuknya  zona  hambat  di  sekitar  kertas  cakram. Antibiotik kloramfenikol digunakan sebagai pembanding yang dilihat zona hambatnya pada mikroba uji (Waluyo, 2010).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil Ekstraksi Daun Jeruk Purut
Penelitian menggunakan daun jeruk purut yang segar sebanyak 3 kg dan berat daun  kering  600  gram.  Serbuk  daun  jeruk  purut  ( Citrus  hytrix )  sebanyak  200  gram dimaserasi dengan 2 liter etanol 96% hasil rendemen 1,5 L dan hasil rotary ovaporator diperoleh  ekstrak  kental  sebanyak  19,89  gram.  Warna  ekstrak  kental  hijau  tua.  Hasil ekstrak daun jeruk purut dapat dilihat pada gambar 1.
Uji Aktivitas Antibakteri Terhadap Staphylococcus aureus.
Sebanyak 10 ml media NA dituang secara aseptik ke dalam cawan Petri, setelah memadat  diinokulasikan  0,1  ml  suspensi bakteri Staphylococcus  aureus .  Uji  aktivitas antibakteri  dilakukan  dengan  metode  difusi  agar  yaitu  dengan  menempelkan    kertas cakram yang telah direndam pada masing-masing konsentrasi ekstrak daun jeruk purut 5%,  10%,  15%,  dan  20%  ke  dalam  cawan  Petri  yang  berisi  media  NA  yang  sudah diinokulasikan  bakteri Staphylococcus  aureus tersebut.  Aktivitas  antibakteri  ditentukan
dengan  mengukur  zona  hambat  yang  terbentuk  disekitar  kertas  cakram,  setelah  masa inkubasi setiap 1 x 24 jam selama 3 hari pengukuran zona hambat.
Gambar 1. Hasil Ekstraksi Daun Jeruk Purut ( Citrus hystrix ).
Hasil uji aktivitas antibakteri ( Gambar 2. ) menunjukkan bahwa pada hari ke-1 tidak  terdapat  zona  hambat  pada  sekitaran  kertas  cakram.  Kloramfenikol  sebagai kontrol  positif  dengan  perlakuan  ekstrak  daun  jeruk  purut  berbeda  secara  nyata  dan memiliki zona hambat yang paling besar sebesar 22,4 mm. Dalam hal ini kloramfenikol bersifat bakteriostatik.
A B
C
D
Gambar 2 . Hasil Pengujian Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Jeruk Purut Terhadap Staphylococcus  aureus (a) Pengulangan I; (b) Pengulangan II;  (c)
Pengulangan III; (d) Kloramfenikol
Setelah diamati 2 x 24 jam pada isolat bakteri Staphylococcus aureus tidak terdapat pertumbuhan di area zona hambat pada cakram yang sudah diberi ekstrak daun jeruk purut dengan berbagai konsentrasi. Hal ini menunjukan bahwa ekstrak daun jeruk purut dapat  menghambat  bakteri  (bakterisid).  Efek  Bakteriostatik  hanya  menghambat
pertumbuhan  sel,  hanya  menghambat  sintesis  protein  bakteri,  Efek  bakteriosida  akan mematikan  sel  bakteri  tersebut,  namun  tidak  terjadi  lisis  sel.  Sedangkan,  efek bakteriolitik akan mematikan sel bakteri serta terjadi lisis sel, menghambat dinding sel bakteri  tersebut.  Apabila  diberi  konsentrasi  yang  tinggi  dan  masa  inkubasi  yang  lama akan membunuh bakteri tersebut. (Madigan et al. , 2009). Dari penjelasan tersebut dapat disimpulkan  ekstrak  daun  jeruk  purut  bersifat  bakteriostatik,  bakteriosida,  dan bakteriolitik  yang  memiliki  aktifitas  menghambat  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus aureus .  Hasil  pengujian  aktivitas  antibakteri  ekstrak  daun  jeruk  purut  terhadap  bakteri Staphylococcus aureus bisa dilihat pada Tabel 1 .
Tabel  1. Rata-  rata  Diameter  Zona  Hambat  Perhari  (mm)  dalam  Pengamatan per 24 jam selama 3 hari.
Konsentrasi Rata-rata  Diameter Zona hambat Per hari (mm) Hari ke-1 Hari ke-2 Hari ke-3 5% 0 6,6 6,7 10% 0 0 6,8 6,8 15% 0 0 7,3 7,3 20% 0 0 8,2 8,3 Kloramfenikol 22,4 25,5 26,2
Efek  antibakteri  yang  paling  baik  terlihat  pada  konsentrasi  ekstrak  20%  pada bakteri Staphylococcus  aureus. Perubahan  rata-rata  diameter  zona  hambat  pertumbuhan baktri dapat dilihat pada Gambar 3.
Gambar  3 .  Hasil  Rata-Rata  Diameter  Zona  Hambat  Per  hari  (mm)  dalam  3  hari pengamatan
Menurut Davis & Stout (1971), jika diameter  zona hambat 5 mm atau kurang maka  aktivitas  penghambatan  dikategorikan  lemah,  diameter  zona  hambat  6-10  mm maka  dikategorikan  sedang,  diameter  zona  hambat  sebesar  11-20  mm  maka
0 5 10 15 20 25 30 1 2 3 D iam e te r Zo n a H am b at B akt e ri ( m m ) Waktu (Hari) 5% 10% 15%
20%
Kloramfenikol
dikategorikan  kuat  dan  jika  diameter  21  mm  atau lebih  maka aktivitas  penghambatan dikategorikan  sangat  kuat.  Pada  hari  ke-3  menunjukkan  bahwa  terdapat  zona  hambat pada konsentrasi 5% (6,7 mm), 10% (6,8 mm), 15% (7,3 mm), dan 20% (8,3mm). Menurut Ajizah (2004), selain faktor konsentrasi, jenis bahan antimikroba juga menentukan  kemampuan  menghambat  pertumbuhan  kuman.  Dalam  penelitian  ini konsentrasi  dan  lamanya  inkubasi  sangat  mempengaruhi  zona  hambat  bakteri Staphylococcus  aureus .  Pada  kontrol  positif  zona  hambat  pada  kertas  cakram  semakin membesar  pada  hari  ke-2.  Berdasarkan  hasil  pengujian  hipotesis  diperoleh  nilai signifikan  dibawah  0,05,  maka  hipotesis  alternatif  penelitian  diterima,  yaitu  terdapat pengaruh  konsentrasi  ekstrak  daun  jeruk  purut  terhadap  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus aueus (F-hitung = 3.633,414; sig. = 0,000). Pada hari  ke-3  terdapat  rata-rata  zona  hambat  pada  konsentrasi  5%  (6,7  mm), 10%  (7,2    mm),  15%  (7,3    mm),  dan  20%  (8,3)  rata-rata  diameter  zona  hambat dikategorikan  sedang.  Berdasarkan  hasil  pengujian  hipotesis  diperoleh  nilai  signifikan dibawah  0,05,  maka  hipotesis  alternatif  penelitian  diterima,  yaitu  terdapat  pengaruh konsentrasi ekstrak daun jeruk purut terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus (F-hitung = 1.798,674; sig. = 0,000).
Kloramfenikol  sebagai  kontrol  positif  berbeda  secara  nyata  yang  dapat  dilihat pada  (Tabel  1.),  dengan  perlakuan  ekstrak  daun  jeruk  purut  dan  memiliki  nilai  zona hambat paling besar. Kloramfenikol memiliki diameter zona hambat sebesar 26,2 mm sehingga dikategorikan sangat kuat.  Hal ini dapat terjadi karena kloramfenikol adalah antibiotik  yang  sudah  lazim  digunakan  dalam  pengobatan  penyakit  yang  disebabkan oleh  bakteri  dengan  kandungan  senyawa  aktif  yang  sudah  teruji.  Namun  penggunaan kloramfenikol dibatasi karena dapat merusak ribosom mitokondria pada sel mamalia. Pemilihan  kloramfenikol  sebagai  kontrol  positif  didasari  karena  bakteri
Staphylococcus  aureus telah  banyak  mengalami  resistensi  terhadap  beberapa  antibiotik selain  itu  antibiotik  ini  bersifat  bakteriostatik  yaitu  kemampuan  untuk  menghambat pertumbuhan  bakteri  tanpa  mematikannya  dengan  spektrum  luas  yang  aktif  terhadap bakteri  gram  positif,  menggangu  proses  sintesis  protein  bakteri,  mampu  menghambat perlekatan asam amino dari bakteri sehingga dapat menghambat bakteri Staphylococcus aureus .  Penelitian  ini  juga  pernah  dilakukan  Dhavesia  (2017)  pada  ekstrak  daun  jeruk purut  ( Citrus  hystrix )  dimana  diketahui  terdapat  aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri Pseudomonas aeruginosa memiliki zona hambat 0,605 cm 2 , 1,132 cm 2 , 1,934 cm 2 dengan konsentrasi 12,5%, 25%, dan 50%, dan Staphylococcus epidermidis memiliki zona hambat 0,518 cm 2 , 0,837 cm 2 dan 1,251 cm 2 pada konsentrasi 12,5%, 25% dan 50%. Daun jeruk purut mampu menghambat pertumbuhan bakteri (Chueahongtong et al ., 2011). Hal ini disebabkan adanya kandungan tanin 1,8%, steroid triterpenoid, dan minyak atsiri 1-1,5% (Dalimartha, 2000). Aktivitas antibakteri yang terdapat pada daun jeruk purut berasal juga dari unsur flavanoid dan tanin yang terkandung di dalamnya, flavanoid  menyebabkan  terjadinya  kerusakan  permebailitas  dinding  sel  bakteri, mikrosom,  dan  lisosom  sebagai  hasil  interaksi  antara  flavanoid  dengan  DNA  bakteri (Sabir,  2005).  Tanaman  yang  mengandung  alkaloid  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri  Gram  positif  maupun  Gram  negatif.  Flavonid  berfungsi  sebagai  antibakteri dengan menghambat fungsi membran sitoplasma. Saponin berperan sebagai antibakteri dengan  mekanisme  merusak  permeabilitas  dinding  sel  sehingga  dapat  menimbulkan kematian  sel.  Tanin  memiliki  fungsi  mempresipitasi  protein  sehingga  mengaruhi peptidoglikan bakteri, pada daun jeruk purut mengandung tanin sebanyak 1,8 %. Tanin juga menggangu fungsi sitoplasma dan membran plasma, meghambat fungsi enzim, dan menghilangkan  substrat  yang  dibutuhkan  untuk  pertumbuhan  bakteri.  Tanin merupakan  senyawa  polar.  Bakteri Staphylococcus  aureus memiliki  dinding  sel  yang bersifat  polar  sehingga  tanin  yang  juga  bersifat  polar  dapat  menembus  dinding  sel
bakteri. Dinding sel berfungsi untuk mempertahankan bentuk sel dan melindungi isi sel. Apabila  dinding  sel  rusak  maka  hal  tersebut  akan  mengganggu  kegiatan  dalam  sel sehingga  sel  tersebut  juga  akan  rusak  dan  mati.  Jadi,  tanin  berfungsi  untuk  merusak dinding sel bakteri Staphylococcus aureus (Dalimartha, 2000;Kumar et al , 2012; Min et al, 2008;  Lino et  al, 2011).  Tanin  merupakan  senyawa  fenol  bekerja  dengan  cara menghambat  pertumbuhan  bakteri  dengan  melakukan  denaturasi  protein,  sehingga permeabilitas  bakteri  meningkat.  Kerusakan  dan  peningkatan  permeabilitas  sel  bakteri menyebabkan  pertumbuhan  sel  menjadi  terhambat  dan  akhirnya  dapat  menyebabkan kematian sel (Akiyanma dkk, 2001, dan Ajizah, 2004). Dari hasil penelitian yang telah dilakukan ternyata sesuai dengan hipotesis awal. Bahwasanya ekstrak daun jeruk purut mempunyai aktivitas antibakteri terhadap bakteri Staphylococcus aureus .

## KESIMPULAN
Ekstrak  daun  jeruk  purut  ( Citrus  hystrix CD.)  memiliki  aktivitas  antibakteri terhadap bakteri Staphylococcus aureus . Konsentrasi ekstrak 20% merupakan konsentrasi yang  paling  efektif  untuk  menghambat  bakteri Staphylococcus  aureus dengan  luas  zona hambat 8,3 mm.

## DAFTAR PUSTAKA
Ajizah,  A,  2004.  Sensitivitas Salmonella  typhimurium terhadap  Ekstrak  Daun Psidium guajava L. Bioscientiae . Vol. 1(1) : 31-38.
Akiyanma, H., Fuji K., Yamasuki O., Oone T., Iwatsuki T. 2001. Antibacterial Action of Several Tannin Agains Staphylococcus aureus. J. Antimicrobial Chemotherapy . Vol 48 (2): 487-491.
Chueahongthong,  F.,  Chadarat  A.,  Okonogi  S.,  Tima  S.,  Anuchapreeda  S.  2011. Cytotoxic  Effects  of  Crude  Kaffir  Lime (Citrus  hystrix  D.C) Leaf  Fractional Extracts on leukemic Cell Lines . Journal of Medicinal Plants Research . Vol. 5(14): 3097-3105.
Dalimartha,  S.  2000. Atlas  Tumbuhan  Obat  Indonesia .  Jakarta:  Trubus  Agriwidya.  86 Halaman.
Davis,  W.W.,  Stout  T.R.  1971. Disc  Plate  Methods  of  Microbiological  Antibiotic  Assay. Microbiology. Hal 659-665.
Depkes RI. 2006. Kotranas . Jakarta: Dapartemen Kesehatan RI. Hal. 1,8.
Mpila,  D.  A.  2012. Uji  Aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol  daun  mayana  (Coleus atropurpureus)  Terhadap  Staphylococcus  aureus,  Escherichia  coli  dan  Pseudomonas aeruginosa Secara In-vitro. Manado: Universitas Sam Ratulangi. Hal 16.
Dhavesia,  V.  2017. Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Daun  Jeruk  Purut  (Citus  hystrix ) terhadap Pseudomonas  aeruginosa dan Staphylococcus  aureus .  Yogyakarta:
Universitas Atmajaya.
Jawetz., Melnick., Adelberg. 2010. Mikrobiologi Kedokteran . Edisi 23, Translation of Jawetz, Melnick, and Adelberg’s Medical Microbiology . Jakarta.
Kumar,  K.P.S.,  Bhowmik,  D.,  Duraivel,  S.  2012 . Traditional  and  Medical  Uses  of Banana. Journal Of Pharmacognosy and Phytochemestry . Vol 3(2): 51-63.
Lino,  P.B.,  Correa,  C.F.,  Archondo.,  Dellova.  2011.  Evaluation  Of  Post-Surgical Healing  In  Rats  Using  A  Topical  Preparation  Based  On  Extract  Of Musa sapientum Epicarp. Revista Brasileira De Farmacognosia . Hal: 491-496.
Lay, B.W. 1994. Analisa Mikroba di Laboratorium . Jakarta: Raja Grafindo Persada. Hal. 109.
Madigan, M.T., J.M. Martinko, J. Parker. 2009. Biology ofMicroorganisms. 12 th ed. New York: Prentice Hall International.
Martiasih,  M.,  Sidharta  B  B  R.,  Admojo  PK.  2014.  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak Pepaya (Carica  papaya  L.) Terhadap Escherichia  coli dan Streptococcus  pyogenes . Jurnal Penelitian , 5-7.
Miftahendarwati. 2014. Efek Antibakteri Ekstrak Daun Jeruk Purut (Citus hystrix) Terhadap Bakteri Staphylococcus mutans (In Vitro). Skripsi FKG Universitas Hasanuddin. Hal: 21-22.
Min, B.R., Pinchak, W.E., Merkel, R., Walker. 2008. Comparative Antimicrobial Activity of Tannin Extract From Pereminal Plants On Mastitis Pathogens . Hal: 66-73.
Mpila.  D.  A., Fatimawali,  Wiyono,  W.  I.  2012. Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol Daun  Mayana  (Coleus  atropurpureus  (L) Benth .  Terhadap  Staphylococcus  aureus, Escherichia  coli  Dan  Pseudomonas  aeruginosa  Secara  In-Vitro.  Skripsi. Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam. UNSRAT : Manado.
Oxoid. 2013. Nutrient Agar and Nutrient Browth . England: Oxoid LTD. Hal. 5.
Pratiwi, S.T. 2008. Mikrobiologi Farmasi. Jakarta: Penerbit Erlangga. Hal: 105-117.
Purnawijayanti,  H.  2001. Sanitasi,  Higiene,  dan  Keselamatan  Kerja  dalam      Pengolahan Makanan . Kanisius. Yogyakarta.
Syahrurahman.  2010. Buku  Ajar  Mikrobiologi  Kedokteran .  Jakarta:  Binarupa  Aksara Publishers.
Victor,  L.  1980. Antibiotics  in  Laboratory Test .  USA:  The  Williams  and  Wilkins Company. Hal 125.
Waluyo,  L.  2010. Teknik  dan  Metode  dasar   dalam  mikrobiologi. UMM  Press, Malang. Hal. 88.
Widyastuti,  R.,  Nurhaeni,  F.,  Marfuah.  D.  L.,  Wibowo.  G.  S .  Al. 2016. Potensi Antibakteri  dan Anticandida Ekstrak  Etabol  Daun  Pegagan  (Centella asiatica. L.  (Urb). Karya Tulis. Politekkes Bhakti Setya Indonesia: Yogyakarta.
Yuliyani, R., Indrayudha. P., Rahmi, S. S. 2011. Aktivitas Antibakteri Minyak Atsiri Daun Jeruk  Purut  (Citrus  hystix)  Terhadap  Staphylococcus  aureus  dan  Escherchia  coli. Surakarta. Jurnal Pharmacon. Vol. 12(2): 52-58.