## KADAR NDF DAN ADF KULIT BUAH KAKAO YANG DIFERMENTASI SECARA BERTINGKAT MENGGUNAKAN
Trichoderma viride DAN Saccharomyces cerevisiae
(NDF and ADF Levels of Cocoa Pod Husk Gradually Fermented Using Trichoderma viride and Saccharomyces cerevisiae )
Andrik Lesmana, Ning Iriyanti dan Titin Widiyastuti
Fakultas Peternakan Universitas Jenderal Soedirman, Purwokerto E-mail : andriklesmana21@gmail.com

## ABSTRACT
The research aimed to examine the effect of gradual fermentation using Trichoderma viride and Saccharomyces cerevisiae and its most optimal level of use on lowering NDF and ADF levels of cocoa pod husks. The experiment was conducted experimentally according to a completely randomized design (CRD) consisted of four treatments and five replications. The treatments were  R 0 : cocoa pod husks without fermentation, R 1 : cocoa pod husk fermentation ( T. viride 4% and S. cerevisiae 4%), R 2 : cocoa pod husk fermentation ( T. viride 8% and S. cerevisiae 8%), R 3 : cocoa pod husk fermentation ( T. viride 12% and S. cerevisiae 12%). Data were analyzed using analysis of variance (ANOVA) with the orthogonal polynomial test. The results showed that the gradual fermentation using T. viride and S. cerevisiae was highly significant in reducing levels of NDF and ADF of cocoa pod husks, following the equation Y = 78.926 – 0.087X – 0.092 X 2 + 0.007 X 3 ,  (R 2 ) = 93.4% and Y = 75.274 – 5.698X + 1.277 X 2 – 0.073 X 3 , (R 2 ) = 99.5%, respectively. In conclusion, the optimal level of using T. viride and S. cerevisiae in lowering the levels of NDF of cocoa pod husk was 9.21%, which can reduce the NDF level as much as 3.98%, while the optimal level of using T. viride and S. cerevisiae in lowering the levels of NDF of cocoa pod husks was 3.01%, which can decrease the ADF level as much as 10.01%.
Keywords: Trichoderma viride , Saccharomyces cerevisiae , NDF, ADF, Cocoa pod husk.

## ABSTRAK
Tujuan penelitian ini adalah untuk mengkaji pengaruh fermentasi bertingkat Trichoderma viride dan Saccharomyces cerevisiae beserta level penggunaan paling optimal dalam menurunkan kadar NDF dan ADF kulit buah kakao. Penelitian dilaksanakan menggunakan metode eksperimental dengan Rancangan Acak Lengkap (RAL) yang terdiri dari 4 perlakuan dan 5 kali ulangan. Perlakuan yang diberikan yaitu R 0 : kulit buah kakao tanpa fermentasi, R 1 : kulit buah kakao fermentasi ( T. viride 4% dan S. cerevisiae 4%), R2 : kulit buah kakao fermentasi ( T. viride 8% dan S. cerevisiae 8%), R 3 : kulit buah kakao fermentasi ( T. viride 12% dan S. cerevisiae 12%). Data diolah menggunakan analisis variansi (ANAVA) dan uji orthogonal polynomial . Hasil penelitian menunjukkan bahwa fermentasi bertingkat menggunakan T. viride dan S. cerevisiae berpengaruh sangat nyata secara kubiker, menurunkan kadar NDF dan ADF kulit buah kakao, dengan persamaan masing-masing Y = 78,926 – 0,087X – 0,092X2 + 0,007 X3, (R 2 ) = 93,4% dan Y = 75,274 – 5,698 X + 1,277 X2 – 0,073 X3, (R 2 ) = 99,5%. Kesimpulan, level optimal penggunaan T. viride dan S. cerevisiae untuk menurunkan kadar NDF kulit buah kakao yaitu 9,21% mampu menurunkan kadar NDF sebesar 3,98% dan level optimal penggunaan T. viride dan S. cerevisiae untuk menurunkan kadar ADF kulit buah kakao yaitu 3,01% mampu menurunkan kadar ADF sebesar 10,01%.
Kata kunci : Trichoderma viride , Saccharomyces cerevisiae , NDF, ADF, Kulit buah kakao.

## PENDAHULUAN
Kakao  memiliki  nilai  jual  yang  cukup tinggi sebagai salah satu komoditi ekspor negara Indonesia.  Kementerian  Pertanian  melaporkan bahwa pada tahun 2010 total ekspor kakao dari
dalam  negeri  mencapai  900.000  ton,  sehingga membuat  Indonesia  menempati  urutan  ke-3 sebagai  negara  penghasil  kakao  terbesar  di dunia  (Mulyatni  dkk.,  2012).  Produksi  kakao yang melimpah ini menghasilkan hasil samping berupa  kulit  buah  kakao.  Kulit  buah  kakao

## Lesmana, dkk
merupakan  hasil  samping  atau  limbah  dari buah  kakao  yang  hasil  utamanya  yaitu  biji kakao  yang  kemudian  dapat  diolah  menjadi coklat,  sedangkan  kulit  dari  buah  kakao tersebut  belum  dimanfaatkan.  Produksi  buah kakao ( Theobroma cocoa ) segar, sekitar 1.750 kg/ ha  dengan  komposisi  kulit  buah  74,0%  dan biji 2,0% (Ginting, 2004). Hal ini menunjukkan bahwa  ketersedian  kulit  buah  kakao  sangat melimpah, namun belum dimanfaatkan secara optimal.  Seiring  dengan  berkembangnya teknologi, kulit buah kakao, dapat dimanfaatkan sebagai  bahan  pakan  alternatif.  Hal  ini dikarenakan,  kulit  buah  kakao  mempunyai komposisi  nutrisi  setara  dengan  komposisi nutrisi rumput, sehingga sangat potensial untuk dijadikan sebagai pakan alternatif (Puastuti dan Yulistiani,  2011).  Kandungan  selulosa  yang tinggi  menjadi  kendala  dalam  pemberiannya terhadap ternak. Tidak hanya selulosa, namun ada  beberapa  kandungan  nutrisi  lain  dalam kulit  buah  kakao  yang  dapat  mempengaruhi kecernaan  pakan,  seperti  kadar  ADF  58,98% dan NDF 73,9% (Zain, 2009). Kandungan ADF dan  NDF  yang  rendah  dibawah  30%  bagus bagi  ternak,  karena  hal  tersebut  menandakan bahwa  kadar  serat  kasarnya  rendah,  sehingga pakan tersebut kecernaannya tinggi, sebaliknya kadar NDF dan ADF yang terlalu tinggi yaitu lebih  dari  35%,  akan  menyebabkan  tingkat kecernaanya  menjadi  rendah.  Oleh  karena  itu, diperlukan pengolahan pada kulit buah kakao agar diperoleh kandungan NDF dan ADF yang optimal,sehingga  kulit  buah  kakao  tersebut dapat dimanfaatkan dengan baik.
Upaya  peningkatan  kualitas  nutrisi kulit  buah  kakao  dapat  dilakukan  dengan cara  fermentasi.  Fermentasi  yang  digunakan yaitu  secara  bertingkat,  menggunakan  dua jenis  mikroba  yaitu Trichoderma  viride dan Saccharomyces  cerevisiae.  T.  viride merupakan jenis  kapang  yang  dapat  menghasilkan  enzim selulase yang dapat memecah selulosa (Fardiaz, 1989). T.  viride dapat  mengubah  polisakarida menjadi disakarida, sedangkan S. cerevisiae dapat merubah  disakarida  menjadi  monosakarida (gula yang lebih sederhana) (Azizah dkk., 2012). Penelitian  Zakariah  dkk.  (2016)  menyatakan bahwa terjadi penurunan kadar NDF dan ADF pada  kulit  buah  kakao  ( cocoa  pod  husk )  yang difermentasi  menggunakan S.  cerevisiae ,  yaitu masing-masing sebesar 4,66% dan 1,56%. Oleh karena itu, dengan adanya perlakuan fermentasi bertingkat,  diharapkan  dapat  memperbaiki kualitas kandungan nutrient kulit buah kakao,
terutama  dalam  menurunkan  kadar  NDF  dan ADF kulit buah kakao tersebut.

## MATERI DAN METODE
Kulit  buah  kakao  1  kg  (BK  85%)  yang digunakan pada penelitian ini berasal dari desa Kotayasa-Sumbang, dan inokulum Trichoderma viride 60  ml  dan Saccharomyces  cereviciae 60  ml berasal dari laboratorium Biologi, Unsoed.
Penelitian dilakukan menggunakan rancangan acak lengkap (RAL) dengan 4 macam perlakuan yaitu : R 0 = kulit buah kakao tanpa fermentasi, R 1 = kulit buah kakao difermentasi dengan Inokulum ( T. viride 4% dan S. cerevisiae 4% (v/w)), R 2 = kulit buah kakao difermentasi dengan Inokulum ( T. viride 8% dan S. cerevisiae 8% (v/w)), R 3 = kulit buah kakao difermentasi dengan Inokulum ( T. viride 12% dan S. cerevisiae 12%  (v/w)).  Setiap  perlakuan  diulang  5  kali sehingga  jumlah  unit  perlakuan  sebanyak  20 unit. Variabel yang diukur dalam penelitian ini adalah  kandungan Acid  Detergent  Fiber (ADF) dan Neutral Detergent Fiber (NDF).

## Tahap persiapan
Pada  tahap  persiapan,  semua  peralatan dan media yang digunakan disterilisasi dengan metode  sterilisasi  uap  basah  menggunakan autoklaf  dengan  tekanan  1,5  atm,  dan  suhu mencapai  121 o C  selama  15  menit.  Membuat media PDB dan PCB dengan komposisi masing masing  (12  gram  +  500  ml  aquades  dan  8,5 gram  +  500  ml  aquades).  Substrat  kulit  buah kakao  dihaluskan  (ukuran  partikel  30  mesh), dan  ditimbang  50  gram  untuk  setiap  unit percobaan.

## Peremajaan dan pembuatan inokulum
Isolat yang digunakan adalah T. viride dan S. cerevisiae masing masing sebanyak 8% (w/v) diremajakan  dengan  cara  diinokulasikan  ke dalam media PDB untuk T. viride dan media PCB untuk S.  cerevisiae, kemudian  diinkubasi  pada suhu ruang selama 2 x 24 jam. Proses selanjutnya yaitu  pembuatan  inokulum,  media  PDB  dan PCB  masing  masing  200  ml  ditambahkan  5% (w/v) kulit buah kakao, kemudian di sterilisasi lalu didinginkan hingga mencapai suhu ruang. T.  viride diinokulasikan  kedalam  media  PDB dan S. cerevisiae di inokulasikan kedalam PCB, kemudian diinkubasi selama 2 x 24 jam hingga populasinya mencapai 10 8 CFU/ml.

## JITP Vol. 8 No. 2, Juli  2020

## Proses fermentasi
Setelah  inokulum  siap  digunakan, dilakukan proses fermentasi secara bach culture . Substrat  sebanyak  50  gram  kulit  buah  kakao ditambah  molases  2%  (v/w)  (sebagai  sumber energi mikroba), urea 1% (sumber N mikroba) dan  50%  aquades  dari  substrat,  disterilisasi uap  basah  dengan  autoklaf  (tekanan  1,5  atam dan  suhu  121 o C)  selama  15  menit,  kemudian didinginkan  hingga  suhu  mencapai  ±  40 o C. Setelah  itu,  inokulum T.  viride diinokulasikan pada substrat, dan diinkubasi pada suhu 37 o C selama  5  x  24  jam  dan  dilanjutkan  fermentasi kedua menggunakan S. cerevisiae, lalu diinkubasi selama 2 x 24 jam.

## Analisis data
Kandungan Acid Detergent Fiber (ADF) dan Neutral  Detergent  Fiber (NDF)  hasil  fermentasi kulit buah kakao dianalisis menggunakan  me- tode Van Soest (1976).  Data dianalisis menggu- nakan analisis variansi, apabila perlakuan ber- pengaruh  nyata,  maka  dilanjutkan  dengan  uji Orthogonal Polynomial (Steel dan Torrie, 1991).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Berdasarkan hasil penelitian, rataaan kadar NDF dan ADF kulit buah kakao, selengkapnya disajikan pada Tabel 1.
Hasil penelitian menunjukkan rataan kadar NDF  berkisar  antara  76,29%  sampai  dengan 78,93%, rataan kadar ADF berkisar antara 64,35% sampai  dengan  75,28%.  Kadar  NDF  terendah ditunjukkan oleh perlakuan level inokulum 8%, sedangkan  kadar  ADF  terendah  ditunjukkan oleh perlakuan level inokulum 12%.

## Kadar NDF kulit buah kakao hasil penelitian
Kadar  NDF  kulit  buah  kakao  yang  tidak difermentasi  sebesar  78,93  %,  sedangkan  nilai rataan  kadar  NDF  kulit  buah  kakao  yang difermentasi  menggunakan T.  viride dan S.
cerevisiae dengan level 4%, 8% dan 12% masing- masing yaitu 77,54%, 75,80%, dan 76,29%. Rataan kadar NDF kulit buah kakao yang difermentasi lebih rendah dibanding kulit buah kakao yang tidak difermentasi. Penurunan Kadar NDF kulit buah kakao yang difermentasi secara bertingkat dengan level 4%, 8%, 12% masing-masing yaitu 1,76%, 3,97%, dan 3,35%. Penurunan kadar NDF hasil penelitian, lebih rendah dibandingkan hasil penelitian  Zakariah  dkk.  (2016)  menyatakan bahwa terjadi penurunan kadar NDF pada kulit buah kakao ( cocoa pod husk ) yang difermentasi menggunakan S. cerevisiae , yaitu sebesar 4,66%. Menurut Puastuti dan Susana (2014), fermentasi kulit buah kakao menggunakan P. Chrysosporium menurunkan  kadar  NDF  dari  76,8%  menjadi 69,4%. Berdasarkan  hasil  analisis  varians menunjukkan  bahwa  fermentasi  bertingkat menggunakan T.  viride dan S.  cerevisiae berpengaruh sangat nyata (P<0,01) menurunkan kadar  NDF  kulit  buah  kakao.  Penurunan kandungan  NDF  ini  diakibatkan,  adanya aktivitas  enzim  selulase  yang  dihasilkan  oleh kedua jenis mikroba ( T. viride dan S. cerevisiae ) yang memutus ikatan lignoselulosa dan ikatan hemiselulosa  menjadi  lignin,  selulosa,  dan hemiselulosa.  Menurut  Fardiaz  (1989) T.  viride merupakan salah satu jenis kapang yang dapat menghasilkan  enzim  selulase  yang  dapat memecah selulosa. T. viride juga dapat mengubah polisakarida menjadi disakarida, sedangkan S. cerevisiae dapat  merubah  disakarida  menjadi monosakarida  (gula  yang  lebih  sederhana) (Azizah dkk., 2012). Selama fermentasi T. viride tumbuh  dan  menutupi  seluruh  permukaan substrat dengan seluruh hifa-hifanya. Hifa-hifa tersebut  kemudian  melakukan  penetrasi  ke dalam  dinding  sel  substrat  dan  mengeluarkan enzim  selulase,  sehingga  dengan  adanya penetrasi ini, dinding sel substrat akan terbuka. Dengan  terbukanya  dinding  substrat,  enzim selulase  akan  masuk  dan  merenggangkan ikatan  lignoselulosa  dan  ikatan  hemiselulosa. Hal  ini  akan  menyebabkan  larutan  neutral
Tabel 1. Rataan kadar NDF dan ADF kulit buah kakao yang difermentasi T. viride dan S. cerevisiae Level Inokulum Kadar NDF (%) Kadar ADF (%) 0% 78,93 ± 0,29 75,28 ± 0,28 4% 77,54 ± 0,22 68,23 ± 0,19 8% 75,80 ± 0,48 73,96 ± 0,47 12% 76,29 ± 0,40 64,35 ± 0,33

## Lesmana, dkk
detergent  (NDS)  akan  melarutkan  isi  sel  yang terikat, sehingga isi sel (NDS) akan meningkat, sedangkan  komponen  pakan  yang  tidak  larut dalam larutan detergent (NDF) akan mengalami penurunan, begitu juga dengan kadar ADF. Hal ini sesuai dengan pernyataan Arief (2001) yang menyatakan  bahwa  selama  berlangsungnya fermentasi,  terjadi  perenggangan  ikatan lignoselulosa  dan  ikatan  hemiselulosa  yang menyebabkan  isi  sel  yang  terikat  akan  larut dalam larutan neutral detergent.
Uji lanjut, dengan uji orthogonal polynomial menunjukkan  bahwa  fermentasi  bertingkat menggunakan T.  viride dan S.  cerevisiae berpengaruh secara kubiker menurunkan kadar NDF kulit buah kakao dengan persamaan Y = 78,926 – 0,087X – 0,092X 2 + 0,007X 3 , dengan R 2 = 93,4 %, dimana titik optimum pada penambahan inokulum ( T. viride dan S. cerevisiae ) berada pada level  9,21%,  dengan  nilai  rataan  kadar  NDF 75,78%. Grafik pengaruh fermentasi bertingkat pada kadar NDF kulit buah kakao tertera pada Gambar 1.
Gambar  1  menunjukkan  level  pemberian inokulum  yang  paling  optimal  dalam menurunkan kadar NDF kulit buah kakao yaitu pada  level  9,21%  yang  mampu  menurunkan kadar  NDF  sebesar  3,98%.  Hal  ini  diduga karena pada level 9,21%, populasi mikroba yang tumbuh  sudah  optimal  dalam  menghasilkan enzim  selulase.  Jika  penambahan  kurang dari  9,21%,  maka  produksi  enzim  selulase masih  kurang  optimal  dalam  memecah  ikatan lignoselulosa  dan  hemiselulosa  kulit  buah kakao, namun, jika lebih dari 9,21%, hal ini akan mengakibatkan tingginya kadar miselium yang tumbuh dalam substrat. Jumlah miselium yang terlalu  tinggi,  akan  meningkatan  kandungan NDF, karena kandungan miselium terdiri dari selulosa, hemiselulosa dan lignin. Hal ini sesuai
dengan  pendapat  Utomo  (2001),  melaporkan bahwa  serat  kasar  adalah  bahan  organik  yang terdiri  dari  selulosa,  hemiselulosa,  dan  lignin, komponen tersebut dapat ditemukan dalam hifa jamur. Banyaknya miselium yang menyelimuti substrat akan meningkatkan kandungan fraksi serat  dalam  substrat  khususnya  kadar  NDF, untuk itu populasi mikroba dalam substrat juga harus optimum dan tidak terlalu tinggi. Hal ini sesuai  dengan  pernyataan  Syahrir  dan  Abdeli (2005)  bahwa  peningkatan    kandungan    serat kasar  diduga  disebabkan  karena  makin  lama fermentasi,  maka  miselium  yang  terbentuk juga  semakin  bertambah sehingga  pada  saat analisis,  selulosa yang  sebagian  besar  terdapat pada dinding sel jamur juga ikut teranalisis, pada penelitian ini menunjukkan level penambahan inokulum  yang  optimum  yaitu  9,21%,  dimana enzim  selulase  yang  dihasilkan  telah  mampu menurunkan kadar NDF secara optimal.

## Kadar ADF kulit buah kakao hasil penelitian
Kadar  ADF  kulit  buah  kakao  yang  tidak difermentasi  sebesar  75,28%,  sedangkan  nilai rataan  kadar  NDF  kulit  buah  kakao  yang difermentasi  menggunakan T.  viride dan S. cerevisiae dengan level 4%, 8% dan 12% masing- masing yaitu 68,23%, 73,96%, dan 64,35%. Rataan kadar ADF kulit buah kakao yang difermentasi lebih rendah dibanding kulit buah kakao yang tidak difermentasi. Penurunan Kadar ADF kulit buah kakao yang difermentasi secara bertingkat dengan level 4%, 8%, 12% masing-masing yaitu 9,37%,  1,75%,  dan  14,52%.  Penurunan  kadar NDF hasil penelitian, lebih rendah dibandingkan hasil penelitian Sianipar dan Simanihuruk (2009) menyatakan bahwa saat proses fermentasi kadar ADF  kulit  buah  kakao  mengalami  penurunan sebesar 16,74%, diakibatkan adanya perombakan
Gambar 1. Grafik Pengaruh Fermentasi Bertingkat terhadap Kadar NDF Kulit Buah Kakao
JITP Vol. 8 No. 2, Juli  2020
serat detergent oleh mikroba anaerob. Menurut Zakariah dkk. (2016) menyatakan bahwa terjadi penurunan kadar ADF pada kulit coklat ( cocoa pod  husk )  yang  difermentasi  menggunakan S. cerevisiae , yaitu sebesar 1,56 %. Berdasarkan  hasil  analisis  variansi menunjukkan  bahwa  fermentasi  bertingkat menggunakan T.  viride dan S.  cerevisiae berpengaruh sangat nyata (P<0,01) menurunkan kadar  ADF  kulit  buah  kakao.  Penurunan kandungan ADF ini terjadi karena perombakan dinding  sel  menjadi  komponen  yang  lebih sederhana selama fermentasi, serta terlarutnya sebagian protein dinding sel dan hemiselulosa dalam  larutan  detergent  asam,  sehingga meningkatkan  porsi  ADS  dan  menurunnya kadar  ADF.  Hal  ini  sesuai  dengan  pendapat Setiawan dkk. (2014) yang menyatakan bahwa hemiselulosa  larut  dalam  larutan  alkali  dan terhidrolisis  dengan  larutan  asam  encer. Kelebihan  dari T.  viride selain  menghasilkan enzim  selulolitik,  juga  menghasilkan  enzim xyloglukanolitik,  keberadaan  enzim  ini  akan semakin  mempermudah  enzim  selulase dalam  memecah  selulosa  (Tribak  dkk.,  2002) sedangkan S.  cerevisiae mampu  memproduksi sejumlah  enzim  meliputi  amilase,  lipase, protease  dan  peptidase  yang  dapat  melisis komponen  karbohidrat,  lemak  dan  protein, sehingga adanya peningkatan kandungan nilai nutrien (Soeharsono, 2010). Selain itu menurut Perez et al. (2002) menyatakan bahwa S. cerevisiae dan T.  viride memiliki  dua  tipe  sistem  kerja enzim  ekstraseluler  :  (1)  Menghasilkan  enzim hidrolase yang bekerja merombak selulosa dan hemiselulosa (sistem hidrolitik), dan (2) sistem oksidatif  dan  sekresi  lignase  ekstraseluler
melalui depolimerisasi lignin. Ikatan lignoselulosa  dan  hemiselulosa  pada  dinding sel kulit buah kakao akan merenggang dengan adanya enzim selulase yang dimiliki oleh kedua mikroba  ini,  maka,  hal  ini  akan  menyebabkan isi  sel  yang  terikat  akan  larut  dalam  larutan neutral detergent (NDS), sehingga isi sel (NDS) akan  meningkat,  sedangkan  komponen  pakan yang tidak larut dalam larutan detergent NDF dan  ADF  akan  mengalami  penurunan.  Hal inilah yang menyebabkan terjadinya penurunan kadar ADF pada kulit buah kakao. Hal ini sesuai dengan  pendapat  Hasanudin  (2002),  bahwa enzim  selulase  yang  diproduksi  oleh  mikroba dapat  merombak  struktur  selulosa  menjadi produk  gula  yang  lebih  sederhana  yang  akan bermanfaat sebagai sumber energi bagi ternak.
Uji lanjut, dengan uji orthogonal polynomial menunjukkan  bahwa  fermentasi  bertingkat menggunakan T.  viride dan S.  cerevisiae berpengaruh secara kubik, menurunkan kadar ADF kulit buah kakao dengan persamaan Y = 75,274 – 5,698 X + 1,277 X 2 – 0,073 X 3 , dengan R 2 = 99,5%, dimana titik optimum pada penambahan level inokulum ( T. viride dan S. cerevisiae ) berada pada level 3,01%, dengan nilai rataan kadar ADF 67,70%. Grafik pengaruh fermentasi bertingkat pada kadar ADF kulit buah kakao tertera pada Gambar 2.
Gambar  2.  menunjukkan  level  pemberian inokulum  yang  paling  optimal  dalam menurunkan kadar ADF kulit buah kakao yaitu pada  level  3,01%  yang  mampu  menurunkan kadar  NDF  sebesar  10,07%.  Hal  ini  diduga, karena pada level 3,01%, populasi mikroba yang tumbuh  sudah  optimal  dalam  menghasilkan enzim  selulase.  Jika  penambahan  kurang
Gambar 2. Pengaruh fermentasi bertingkat terhadap kadar ADF kulit buah kakao

## Lesmana, dkk
dari  3,01%,  maka  produksi  enzim  selulase masih  kurang  optimal  dalam  memecah  ikatan lignoselulosa  dan  hemiselulosa  kulit  buah kakao, namun, jika lebih dari 3,01%, hal ini akan mengakibatkan tingginya kadar miselium yang tumbuh dalam substrat. Kadar miselium yang terlalu  tinggi,  akan  meningkatan  kandungan ADF,  karena  kandungan  miselium  terdiri  dari selulosa, hemiselulosa dan lignin. Hal ini sesuai dengan  pendapat  Utomo  (2001),  melaporkan bahwa  serat  kasar  adalah  bahan  organik  yang terdiri  dari  selulosa,  hemiselulosa,  dan  lignin, komponen  tersebut  dapat  ditemukan  dalam hifa jamur.
Level  penambahan  inokulum  untuk menurunkan  kadar  NDF,  lebih  tinggi  (9,21%) dibandingkan  level  penambahan  inokulum untuk  menurunkan  ADF  (3,01%).  Hal  ini diduga, karena komponen penyusun NDF lebih banyak  dibanding  komponen  penyusun  ADF, sehingga dibutuhkan lebih banyak penambahan inokulum  untuk  menurunkan  kadar  NDF. Menurut  Suparjo  (2000),  menyatakan  bahwa, NDF  mewakili  kandungan  dinding  sel  yang terdiri  dari  lignin,  selulosa,  hemiselulosa,  dan protein  yang  berikatan  dengan  dinding  sel, sedangkan ADF terdiri dari lignin dan selulosa dalam  dinding  sel  tanaman.  Tingginya  level penambahan  inokulum  untuk  menurunkan kadar NDF dan ADF kulit buah kakao, ternyata tidak sebanding dengan hasil penurunan yang didapatkan.  Level  penambahan  inokulum yang  paling  optimal  dalam  menurunkan kadar  NDF  kulit  buah  kakao  yaitu  9,21% mampu  menurunkan  kadar  NDF  sebesar 3,98% sedangkan level penambahan inokulum yang paling optimal dalam menurunkan kadar ADF  kulit  buah  kakao  yaitu  3,01%  mampu menurunkan  kadar  ADF  sebesar  10,07%.  Hal ini  dapat  terjadi  karena  level  penambahan inokulum  untuk  menurunkan  kadar  NDF lebih tinggi dibandingkan ADF, menyebabkan miselium  yang  tumbuh  juga  semakin  banyak, sedangkan  miselium  sendiri  mengandung komponen serat yang sama dengan komponen NDF.  Tidak  hanya  itu,  rendahnya  penurunan kadar  NDF  dibandingkan  kadar  ADF,  dapat disebabkan  akibat  tingginya  persentase kadar  NDF  dibandingkan  persentase  kadar ADF  dalam  kulit  buah  kakao.  Menurut  Zain (2009),  menyatakan  bahwa  Kulit  buah  kakao mengandung  NDF  73,9%,  dan  ADF    58,98%. Hal inilah yang menyebabkan penurunan kadar NDF  lebih  rendah  dibandingkan  penurunan kadar  ADF  pada  kulit  buah  kakao  setelah dilakukan fermentasi bertingkat.

## KESIMPULAN
Level optimal penggunaan T.  viride dan S. cerevisiae untuk  menurunkan kadar NDF  kulit buah kakao yaitu  9,21%  mampu  menurunkan kadar  NDF  sebesar  3,98%,  sedangkan  level optimal penggunaan T. viride dan S. cerevisiae untuk    menurunkan  kadar  ADF    kulit  buah kakao yaitu  3,01%  mampu menurunkan kadar ADF sebesar 10,07%.

## DAFTAR PUSTAKA
Arief,  R.  2001.  Pengaruh  penggunaan  jerami pada amoniasi terhadap daya cerna ndf, adf dan ads dalam ransum domba lokal. Jurnal Agroland, 8(2): 208-215.
Azizah, N., A. N. Al-Baarri, dan S. Mulyani. 2012. Pengaruh  lama  fermentasi  terhadap  kadar alkohol,  pH,  dan  produksi  gas  pada  proses fermentasi  bioetanol  dari  whey  dengan substitusi  kulit  nanas.  Jurnal  Aplikasi Teknologi Pangan, 1 (2): 72-77.
Fardiaz,  S.  1989.  Mikrobiologi  Pangan,  PAU Pangan  dan  Gizi.  Institut  Pertanian  Bogor,
Bogor. Ginting,  S.  P.  2004.  Tantangan  dan  Peluang Pemanfaatan Pakan Lokal untuk Pengembangan  Peternakan  Kambing  di Indonesia.  Prosiding  Lokakarya  Nasional Kambing Potong. Bogor. pp. 61-77.
Hasanuddin,  A.  2002.  Penggunaan  dedak  padi yang  difermentasi Neurospora sp.  sebagai pengganti  jagung  dalam  ransum  ayam petelur. Agroland, 9(1): 74-79.
Mulyatni, A. S., A. Budiani dan D. Taniwiryono. 2012. Aktivitas antibakteri ekstrak kulit buah kakao ( Theobroma cacao L .) terhadap Escherichia coli, Bacillus subtilis, dan Staphylococcus aureus. Jurnal Menara Perkebunan, 80(2): 77-84.
Perez,  J.,  J.  M.  Dorado,  T.  de  La  Rubia,  and  J.
Martinez. 2002. Biodegradation and biological treatments  of  cellulose,  hemicellulose  and lignin : an overview. Int. Microbial., 5: 53-63.
Puastuti, W dan  D. Yulistiani. 2011. Ransum berba- sis kulit buah kakao yang disuplementasi Zn organik: Respon pertumbuhan pada domba. JITV, 16: 269-277.
Puastuti, W., dan I. W. R. Susana. 2014. Potensi dan pemanfaatan kulit buah kakao sebagai pakan alternatif ternak ruminansia. Watazoa, 24(3): 151-159.
Setiawan,  G.,  T.  Dhalika,  dan  Mansyur.  2014. Pengaruh penambahan mikroba lokal (MOL)
JITP Vol. 8 No. 2, Juli  2020
terhadap  kadar  neutral  detergent  fiber  dan acid  detergent  fiber  pada  ransum  lengkap terfermentasi. Students E-Journal, 3(2): 1-11.
Sianipar, J. and K. Simanihuruk. 2009. Performans kambing  sedang  tumbuh  yang  mendapat pakan  tambahan  mengandung  silase  kulit buah  kakao.  Seminar  Nasional  Teknologi Peternakan dan Veteriner. pp 435-441.
Soeharsono. 2010. Probiotik. Basis Ilmiah, Aplikasi, dan  Aspek  Praktis.  Widya  Padjajaran, Bandung.
Steel,  R.  G.  D.,  and  Torrie,  J.  H.  1991.  Prinsip dan  Prosedur  Statistika:  Suatu  Pendekatan Biometrik.  Terjemahan  :  B.  Sumantri.  PT. Gramedia Pustaka Utama, Jakarta.
Suparjo.  2000.  Analisis  Secara  Kimiawi.  Skripsi. Fakultas Peternakan, Jambi. (Tidak dipublikasikan). Syahrir dan M. Abdeli. 2005. Analisis kandungan zat-zat  makanan  kulit  buah  kakao  yang difermentasi dengan Trichoderma sp. sebagai pakan ternak ruminansia. Jurnal Agrisains, 6
(3): 157-163.
Tribak, M., J. A. Ocampo, I. Garcia-Romera. 2002. Production  of  Xyloglucanolytic  enzymes by Trichoderma  viride,  Paecilomyces  farinosus,
Wardomyces  inflatus, and Pleurotus  ostreatus. Mycologia, 3(1): 404-410.
Utomo, R. 2001. Penggunaan Jerami Padi Sebagai Pakan  Basal  :  Suplementasi  Sumber  Energi dan Protein Terhadap Transit Partikel Pakan, Sintesis  Protein  Mikrobia,  Kecernaan,  dan Kinerja  Sapi  Potong.  Disertasi.  Fakultas Peternakan.  Universitas  Gadjah  Mada. Yogyakarta.
Van  Soest  P.  J.  1976.  New  Chemical  Methods for  Analysis  of  Forages  for  The  Purpose of  Predicting  Nutritive  Value.  Pref  IX International Grassland Cong.
Zain, M. 2009. Substitusi rumput lapangan dengan kulit  buah  coklat  amoniasi  dalam  ransum domba lokal. Media Peternakan, 3(2): 47-50.
Zakariah, M. A., R. Utomo, and Z. Bacharuddin. 2016.  Pengaruh  inokulasi Lactobacillus plantarum dan Saccharomyces  cerevisiae terhadap  fermentasi  dan  kecernaan  in  vitro silase kulit buah kakao. Buletin Peternakan,
40(2): 47-50.