Gambaran Histologi Testis Mencit (Mus musculus, L.) Setelah Pemberian Ekstrak Tumbuhan 558
Brotowali (Tinospora crispa, L.)
GAMBARAN HISTOLOGI TESTIS MENCIT ( Mus musculus, L.) SETELAH PEMBERIAN EKSTRAK TUMBUHAN BROTOWALI ( Tinospora crispa, L.)
Wa Ode Harlis 1 , Andi Septiana 2
1-2) Dosen Jurusan Biologi, FMIPA, Universitas Halu Oleo, Kendari.
E-mail :waodeharlis@gmail.com

## ABSTRAK
Tumbuhan  Brotowali  ( Tinospora  crispa, L.)  diketahui  mengandung  senyawa  yang  tergolong dalam  kelompok  antifertilitas  diantaranya  golongan  glikosida,  alkaloid,  flavonoid,  saponin  dan tanin. Kelompok senyawa-senyawa tersebut dapat memberikan efek sitotoksik pada reproduksi jantan dengan mengganggu metabolisme sel germinal dan sel spermatogenik. Tujuan penelitian ini  untuk  mengetahui  pengaruh  ekstrak  brotowali  terhadap  spermatogenesis  mencit.  20  ekor mencit  jantan  berat  20-30  gr,  berumur  2-3  bulan  dibagi  5  kelompok  yaitu;  K 1 kontrol  negatif (aquades), K 2 kontrol positif (Na CMC 0,5% ), K 3 (0,05 g/g bb), K 4 (0,06 g/g bb), dan K 5 (0,07 g/g bb)  ekstrak  brotowali.  Ekstrak  diberikan  secara  oral  selama  34  hari.  Pada  hari  ke-35 dikorbankan  dan  dilakukan  pengambilan  organ  testis  untuk  preparat  mikroanatomi.  Penelitian bersifat  deskriptif,  data  disajikan  dalam  bentuk  gambar.  Berdasarkan  hasil  penelitian menunjukkan bahwa pada penampang melintang testis nampak jelas terjadi penurunan  jumlah sel  sel  spermatogenik    dalam  tiap  penampang tubulus  seminiferous mencit,  pada  semua perlakuan yang  diberikan ekstrak tumbuhan brotowali seiring dengan meningkatnya dosis yang diberikan
Kata Kunci : Tinospora crispa, L. , histologi  testis, Mencit
ABSTRACT
Harlis, W.O. & Se ptiana, A., Biowallacea, Vol. 4 (1), Hal : 558-565,  April, 2017
The Brotowali plant ( Tinospora crispa , L.) is known to contain compounds belonging to the antifertility group such as glycosides, alkaloids,  flavonoids, saponins and tannins. These groups of compounds may have a cytotoxic effect on male reproduction by disrupting the metabolism of germ  cells  and  spermatogenic  cellsThe  aim  of  this  study  was  to  know  the  effect  of  extracts Tinospora crispa, L. on spermatogenesis of mice. The male mice were used 20 weight 30-40 g, aged 2-3 months, and were treated in 5 groups i.e. K 1 : negative control (aquadest), K 2 : positive control  (Na  CMC  0.5%),  K 3 (0.05  g/g  bb),  K 4 :  (0.06  g/g  bb),  and  K 5 (0.07  g/g  bb)  extracts  of brotowali. The extracts were given orally during 34 day.  At the 35 th the testis were collected to make microanatomy. Research is descriptive, data is presented in the form of picture. Based on the  results  showed  that  cross  sectional  testis  clearly  visible  decrease  in  the  number  of spermatogenic  cell  cells  in  each  section  of  tubular  seminiferous  mice,  in  all  treatments  given extracts of brotowali plants along with increased doses given.

## Key word : Tinospora crispa, L., testicular histology, Mice
Penggunaan obat tradisional telah dapat  diterima  hampir  semua  negara termasuk  negara  maju  baik  sebagai pelengkap  pengobatan  primer  maupun sekunder.  Salah  satu  tumbuhan  obat  yang sering  digunakan  oleh  masyarakat  untuk obat tradisional adalah  brotowali ( Tinospora crispa, L.).
Brotowali  ( Tinospora crispa, L.) merupakan tumbuhan yang hidup di daerah tropis,  termasuk  tumbuhan  merambat  yang tersebar merata di hutan  Indonesia (Dweck, 2006 dalam Widiana dan Sumarmin, 2015). Brotowali banyak dimanfaatkan oleh masyarakat  Indonesia  terutama  bagian batang, daun, dan akarnya. Batang tumbuhan brotowali rasanya pahit, sehingga tidak  ada  binatang  yang  menyentuhnya (Sukadana,  dkk.,  2007).  Brotowali  memiliki banyak  manfaat  yang  besar  antara  lain untuk  obat  memar,  demam,  merangsang nafsu makan, sakit kuning, cacingan, batuk, mencuci luka pada kulit atau gatal-gatal dan untuk  mengobati  penyakit  kencing  manis. Berdasarkan  informasi  ilmiah  juga  telah ditemukan khasiat tumbuhan brotowali yaitu ekstrak  batang  brotowali  dapat  berfungsi sebagai antioksidan untuk mencegah timbulnya  arteriosklerosis  atau  sejenis penyakit kardiovaskuler (Khamarazaman, et al ., 2012 dalam Muharni dkk., 2015)
Tumbuhan  Brotowali  ( Tinospora crispa, L.)  diketahui  mengandung  senyawa yang tergolong dalam kelompok antifertilitas diantaranya  golongan  glikosida,  alkaloid, flavonoid,  saponin  dan  tanin  (Widiana  dan Sumarmin,  2015).  Kelompok  senyawa- senyawa  tersebut  dapat  memberikan  efek sitotoksik  pada  reproduksi  jantan  dengan mengganggu metabolisme sel germinal dan sel spermatogenik (Purwoistri, 2010).
Tumbuhan  yang  mengandung senyawa metabolit sekunder berupa alkaloid dapat mempengaruhi spermatogenesis, senyawa  tersebut  dapat  menekan  sekresi hormon  reproduksi  yang  diperlukan  untuk spermatogenesis. Alkaloid juga dapat mengganggu  permeabilitas  membran  sel Leydig  sebagai  penghasil  testosteron. Senyawa  flavonoid  mampu  menghambat enzim aromatase dan mampu mempengaruhi  kerja  hormon  gonadotropin sehingga  mengganggu  spermatogenesis (Winarno, 1987 dalam Supriati, dkk., 2011). Senyawa  saponin  bersifat  sitotoksik  yang dapat  menyebabkan  penurunan  jumlah  sel spermatogenik  (Nurliani,  dkk.,  2005).  Tanin dapat menyebabkan penggumpalan sperma dan  menurunkan  motilitas  daya  hidup sperma,  sehingga  sperma  tidak  dapat mencapai  sel  telur  dan  pembuahan  dapat tercegah (Susetyarini, 2003).
Beberapa  penelitian  yang  telah dilakukan  diantaranya  yaitu  Widiana  dan

## PENDAHULUAN
Brotowali (Tinospora crispa, L.)
Sumarmin (2015), melaporkan bahwa brotowali  ( Tinospora  crispa ,  L.)  berpotensi sebagai  bahan  kontrasepsi  alami  pada hewan  betina  dengan  komponen  utamanya senyawa  alkaloid  yang  memiliki  sifat antiproliferatif  terhadap  sel-sel  reproduktif. Antiproliferatif dapat mempengaruhi karakter morfologi  dari  ovarium  sebagai  tempat keberadaan  sel-sel  reproduktif.  Penelitian Sari  dkk.,  (2012)  menggunakan  ekstrak tumbuhan brotowali pada reproduksi mencit betina mengunakan dosis 0.05  g/g bb, 0.06 g/g  bb  dan  0.07  g/g  bb  mencit,  diketahui bahwa ekstrak brotowali secara nyata dapat mengakitbatkan  gangguan  terhadap  jumlah corpus  luteum ,  jumlah  fetus  hidup,  jumlah fetus  mati,  dan  embrio  resorpsi.  Hal  ini sejalan dengan penelitian Syari (2012) yang menyatakan  bahwa  pemberian  ekstrak brotowali  berpengaruh  nyata  terhadap penurunan  jumlah folikel  de  graff,  corpus luteum dan folikel  atresia .  Sejauh  ini penelitian  tentang  tumbuhan  brotowali sebagai  antifertilitas  terhadap  jantan  belum dilakukan,

## METODE PENELITIAN
1.  Persiapan Hewan Uji
Mencit diaklimasi selama 1 minggu  dalam  kandang  dan  diberi makanan  asupan platelled  commercial dan diberi minum secara ad libitum. Alas kandang dari serbuk gergaji  yang  diganti dua  hari  sekali.  Sebelum  diberikan
perlakuan,  mencit  ( Mus  musculus, L.) dipuasakan selama 1 hari untuk memperoleh  kondisi  fisiologis  yang sama. Selanjutnya  mencit  ditimbang  dan diberi  label  sesuai  perlakuan.  Mencit yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  mencit  yang  berumur  2-3  bulan dengan berat badan rata-rata 20-30 gr.

## 2.  Pembuatan Ekstrak
Tumbuhan  brotowali  dikeringkan menggunakan  oven  selama  48  jam dengan suhu 45  C. Tumbuhan  brotowali yang  sudah  kering  diblender  sampai menjadi serbuk. Serbuk kering ditimbang sebanyak 100 g ditambahkan etanol 70% sebanyak  400  ml  kemudian  dilakukan proses ekstraksi dengan metode maserasi  selama  24  jam.  Ekstrak disaring  kemudian,  filtrat  dipekatkan dengan menggunakan rotary evaporator .

## 3.  Perlakuan
Pemberian  ekstrak  secara oral setiap paginya pukul 08.00  dengan  dosis 0,5  ml/bb  mencit.  selama  34  hari.  Pada hari  ke  35,  mencit  dikorbankan  dan diambil  organ  testisnya  untuk  dibuat preparat mikroanatomi
4.  Pembuatan Preparat Histologi
Menurut  Harlis  (2008),  tahap  dalam pembuatan  preparat  histologi  yaitu  organ testis  yang  telah  diambil  kemudian  difiksasi dalam  larutan  Bouin  selama  ±  2  hari. Setelah  ±  2  hari  organ  testis  dicuci ( Washing )  dengan  alkohol  70%  (1  x  60
Brotowali (Tinospora crispa, L.)
menit) kemudian dilakukan dehidrasi menggunakan  alkohol  70%  (1  x  60  menit), 80% (1 x 60 menit) dan alkohol 90% selama 1 malam, selanjutnya dimasukkan ke dalam alkohol 96% (1  x 60 menit), alkohol absolut (1  x  60  menit),  untuk  menjernihkan,  organ testis direndam dalam larutan toluol selama 1 malam.
Infiltrasi  parafin  kedalam  jaringan dilakukan  dengan  cara  merendam  organ testis  kedalam  campuran  toluol  dan  parafin dengan  perbandingan  1:1  (30  menit), kemudian  dilanjutkan  dengan  parafin  murni I,  II  dan  III  masing-masing  45  menit. Langkah  berikutnya  adalah embedding, yaitu  dengan  penanaman  organ  kedalam parafin cair, diatur sehingga arah pemotongan  melintang,  kemudian  dibiarkan membeku  dalam  kulkas  dan  membentuk blok  yang  sudah  siap  disayat  dengan mikrotom.  Blok  parafin  yang  berisi  dengan potongan  testis  diletakkan  pada holder dengan  parafin  cair  agar  melekat  erat  dan selanjutnya  dimasukkan  ke  dalam  kulkas. Holder dengan  blok  parafin  kemudian dipasang  pada  mikrotom  dan  selanjutnya disayat  setebal  6  µm,  sehingga  deretan irisan  membentuk  pita,  dari  irisan-irisan tersebut  dipilih  yang  bagus  kemudian ditempelkan  pada  kaca  objek  yang  telah diolesi Mayer’s  albumin dan  aquades, dibiarkan  di  dalam slide  warmer selama  24 jam agar penempelan cukup kuat.
Staining dan mounting urutan kerjanya  yaitu:  (a)  Deparafinisasi,  kaca objek yang berisi  irisan testis dicelupkan ke dalam  larutan  xylol  sampai  parafin  larut semua  (15  menit)  kemudian  dikeringkan diatas kertas saring. (b) Hidrasi, kaca objek yang  sudah  dikerigkan  dimasukkan  ke dalam alkohol dengan  konsentrasi menurun mulai dari alkohol absolut, 96%,  90%, 80%, 70%,  60%,  50%,  40%,  30%  dan  aquades masing-masing  satu  menit.  (c) Dimasukkan ke dalam staining jar yang berisi Hematoxylin Ehrlich (7 detik), dicuci dengan air  mengalir  (10  menit).  (d)  Dimasukkan  ke dalam  alkohol  30%,  50%,  60%  dan  70% masing-masing selama satu menit, selanjutnya dimasukkan kedalam Eosin-Y (2 menit),  kemudian  dibilas  dengan  alkohol 70%,  80%,  90%,  96%  dan  alkohol  absolut masing-masing  selama  satu  menit.  (e) Sediaan  dimasukkan  ke  dalam  larutan  xylol (15  menit),  kemudian  dikeringkan  di  atas kertas  saring,  selanjutnya,  di mounting dengan canada  balsam ,  ditutup  dengan kaca  penutup.  (f)  Dilakukan  pengamatan dibawah  mikroskop  untuk  memperoleh gambaran  histologi  testis.  Data  yang dikumpulkan bersifat kualitatif data disajikan dalam bentuk gambar

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Gambaran  histologi  testis  jumlah sel-sel  spermatogenik  kelompok  kontrol menunjukan gambaran yang normal dengan
susunan  sel  rapat.  Perkembangan  sel-sel spermatogenik  mulai  dari  membran  basalis ke  arah  lumen  yaitu  spermatogonium, spermatosit  dan  spermatid.  Lumen  tampak terisi  penuh  oleh  spermatozoa  baik  yang masih  menempel  pada  sel  sertoli  maupun yang  telah  mengalami  spermiogenesis, sedangkan kelompok yang diberikan ekstrak tumbuhan  brotowali  menunjukan  bahwa terjadi penurunan jumlah sel-sel spermatogenik  tampak  sel  spermatogonium
jelas  berderet  di  membran  basalis,  namun dengan  susunan  antar  sel  yang  tampak renggang,  dengan  ketebalan  yang  lebih kecil dibandingkan kelompok kontrol. Lumen tubulus  tampak  membesar,  dengan  tidak terdapat  spermatozoa  di  dalamnya.  Hal  ini menunjukkan  telah  terjadi  gangguan  pada spermatogenesis.  Berdasarkan  penjelasan di  atas,  untuk  lebih  jelasnya  dapat  dilihat pada gambar 1:
Gambar 1. Irisan melintang testis mencit setelah pemberian ekstrak tumbuhan brotowali. Berdasarkan  hasil  penelitian
terjadi penurunan jumlah sel sel spermatogenik    dalam  tiap  penampang tubulus  seminiferous mencit,  pada  semua perlakuan yang diberikan ekstrak tumbuhan
brotowali  seiring  dengan  meningkatnya dosis  yang  diberikan,    hal  ini  kemungkinan disebabkan  karena  menurunnya  jumlah  sel spermatogenik  yang  mengalami  mitosis menjadi  sel  spermatosit  primer  dan meiosis
K1 K2 K4 K5 K3 c e d b a f a b c d e f f b e a d c f b c e a d a b c d e f
kedua  menjadi  spermatid.  Jika  penurunan terus  terjadi  maka  akan  mengakibatkan penghambatan pada tahapan-tahapan berikutnya. Hal ini sejalan denagn penelitian Everitt,  (1990) dalam Apriliani  dkk.,  (2013) yang menyatakan, penurunan jumlah spermatosit menyebabkan jumlah spermatid juga  menurun,  karena  spermatosit  yang mengalami meiosis kedua menjadi spermatid menurun.
Hambatan  pada  satu    tahapan spermatogenesis    akan    berpengaruh terhadap tahapan berikutnya. Selain menurunnya  jumlah  sel  spermatosit  yang mengakibatkan jumlah sel spermatid menurun  hal  tersebut  juga  disebabkan karena  menurunnya  konsentrasi  hormon FSH  dan  testosteron  hal  ini  sejalan  dengan penelitian  Satriyasa  (2010).  Penurunana FSH  menyebabkan  perubahan  struktur sitoskletal  sel  sertoli  sehingga  mengurangi kemampuan  dalam  mengikat  spermatid, sedangkan  pada  hormon  testosteron  akan menyebabkan  penurunan  daya  adhesi antara  sel  spermatid  dengan  sel  sertoli. Penuruan  FSH  dan  testosteron    akan
menyebabakan sintesis protein untuk spermatid  terganggangu  yang  akhirnya menyebabkan degenerasi sel spermatid.
Pada  penampang  melintang testis  juga  nampak  menurunnya  kepadatan spermatozoa  dan  bahkan  tidak  ditemukan sama  sekali  dalam  penampang tubulus seminiferus disebabkan  oleh  menurunya jumlah  spermatid  dan  adanya  gangguan spermiogenesis sehingga spermatid terhambat  untuk  berdiferensiasi  menjadi spermatozoa.  Hal  ini  sejalan  dengan penelitian  (Junqueira et.  al. 1995) dalam Harlis,  2006)  selama  fase  pengamatan spermatid menjadi spermatozoa, sitoplasma residu  dibuang  dan  difagositosis  oleh  sel sertoli  dan  spermatozoa  dilepaskan  ke dalam  lumen  tubulus,  sehingga  kadar testosteron  menurun  ada  kemungkinan terjadinya  penghambatan  fase  pematangan sel spermatid melalui spermiogenesis sehingga
mengakibatkan jumlah spermatozoa menurun.
Pengamatan histologi  kepadatan  spermatozoa  disajikan pada gambar 2 berikut: K1 K2 K3
Brotowali (Tinospora crispa, L.)
Gambar 2. Irisan melintang testis memperlihatkan kepadatan spermatozoa setelah pemberian ekstrak tumbuhan brotowali.

## PENUTUP

## Simpulan
Berdasarkan hasil penelitian
menunjukkan  bahwa  pada  penampang melintang  testis  nampak  jelas  terjadi penurunan    jumlah  sel  sel  spermatogenik dalam tiap penampang tubulus seminiferous mencit,  pada  semua  perlakuan  yang diberikan ekstrak tumbuhan brotowali seiring  dengan  meningkatnya  dosis  yang diberikan

## Saran
Berdasarkan  hasil  penelitian  maka saran  yang  dapat  diajukan  adalah  perlu dilakukan  penelitian  lanjutan  mengenai tanaman  yang  berfungsi  meningkatkan kualitas spermatozoa mencit.

## DAFT AR PUSTAKA
Apriliani.  M.,  Nurcahyani,  N.,  dan  Busman,
H., 2013, Efek Pemaparan Kebisingan Terhadap Jumlah Sel-Sel Spermatogenik dan Diameter
Tubulus  Seminiferus  Mencit ( Mus
musculus, L.),  Lembaga  Penelitian
Universitas Lampung. Lampung. Harlis  W.O.,  2006. Spermatogenesis  dan
Kualitas Spermatozoa, Makalah Biologi Sel, Fakultas Biologi, Program  Pascasarjana,  Universitas Gadjah Madah, Yogyakarta. ., 2008. Kadar testosteron, Spermatogenesis, dan Morfologi Spermatozoa Epididimis Tikus
( Ratus  novervegicus, L . ) Setelah
Diperlakukan Estrak Meniran ( Phyllanthus niruri, L . ). Tesis . Sekolah Pascasarjana, UGM. Yogyakarta. Muharni,  Elfita,  dan  Masyita,  2015,  Isolasi Senyawa  Metabolit  Sekunder  dari Ekstrak n-Heksana Batang Tumbuhan Brotowali ( Tinospora crisp, L.), Jurnal Molekul , 10 ( 1 ) : 38- 44
Purwoistri, R.F., 2010, Pengaruh Ekstrak Biji Pepaya ( Carica papaya , L.) terhadap Spermatogenesis  dan  Tebal  Epitel Tubulus  Seminiferus  Testis  Mencit ( Mus musculus, L . )  Jantan, Skripsi , Universitas Islam Negeri (UIN)
Maulana  Malik  Ibrahim  Malang, Malang.
Sari,  F.M.,  Widiana,  R.,  dan  Sumarmin,  R.,
2012, Pengaruh  Ekstrak  Brotowali
K4
K5
Brotowali (Tinospora crispa, L.)
(Tinospora  crispa, L .)  terhadap Penampilan Reproduksi Mencit (Mus musculus, L. Swiss Webster) Betina , Universitas Negeri Padang, Padang. Satriyasa,  B.K.,  2010,  Fraksi  Heksan  dan
Fraksi  Metanol  Ekstrak  Biji  Pepaya Muda dapat Menghambat Spermatogonia    Mencit  Jantan  ( Mus musculus, L.), Tesis Tidak Diterbitkan,  Malang:  Jurusan  F. Farmakologi,  Universitas  Undayana Bali. Setyaningsih, R.V., 2011, Pengaruh
Pemberian  Infus  Simplisia  Rosella ( Hibiscus sabdariffa, L.)  Secara Oral terhadap Kualitas Spermatozoa
Mencit  ( Mus  Musculus, L.)  Jantan Galur  DDY, Skripsi ,  Universitas Indonesia, Jakarta.
Sukadana, M.I., Rita, S.W., dan Koreh, R.F.,
2007, Isolasi dan Identifikasi Senyawa  Antimakan  dari  Batang Tumbuhan Brotowali ( Tinospora tuberculata Beumee.), Jurnal  Kimia , 1 ( 1 ) : 55-61 Supriati, R., Ranti, K., dan Karyadi, B.,
2011,  Pengaruh  Pemberian  Getah Buah  Pepaya  ( Carica  papaya, L.) Muda  terhadap  Kadar  Gula  Darah Mencit  ( Mus  musculus Balb/C), Jurnal Konservasi Hayati , 7 (1) : 20 Susetyarini,  E.,  2003, Efek  Senyawa  Aktif
Daun  Beluntas terhadap  Kadar
Testoteron Tikus Putih (Ratus
norwegicus)  Jantan ,  Tesis  Tidak Diterbitkan,  Malang:  Jurusan  F. MIPA-Biologi
Universitas
Muhammadiyah Malang.
Syari,  N.T.,  2012,  Pengaruh  Pemberian Ekstrak  Brotowali  ( Tinospora  crispa,
L.) terhadap Perkembangan Folikel Ovarium Tikus Putih ( Rattus norvegicus, L.), Skripsi ,  Universitas Negeri Yogyakarta, Yogyakarta.
Widiana,  R.,  dan  Sumarmin,  R.,  2015 , Pengaruh Ekstrak Brotowali
(Tinospora  crispa, L .)  terhadap Siklus  Reproduksi  dan  Karakter Morfologi  Ovarium  Mencit    (Mus Musculus, L . Swiss Webster), Universitas Negeri Padang, Padang.