## Pharmauho Volume 4, No. 1, April 2018, Hal. 12-15
Jurnal Farmasi, Sains, dan Kesehatan ISSN 2442-9791
Uji Toksisitas Akut dan Gambaran Histopatologi Hepar Mencit yang Diberi  Ekstrak  Terpurifikasi  Daun  Galing  ( Cayratia  trifolia L.
Domin)
Muhammad Ilyas Yusuf 1,2* , Randa Wulaisfan 3 , Haswika 3 , Wahyuni 1
1 Fakultas Farmasi Universitas Halu Oleo, Kampus Hijau Bumi Tridharma Anduonohu Kendari 93232
2 Akademi Analis Kesehatan Bina Husada Kendari, Jl. Sorumba no. 17 Kendari, 93117
3 Akademi Farmasi Bina Husada Kendari, Jl. Sorumba No.17 Kendari, 93117

## Abstrak
Daun  galing memiliki  manfaat sebagai  antidiabetik, hepatoprotektor,  menurunkan  kadar kolesterol  dalam darah, meningkatkan kekebalan  tubuh,  sebagai  antioksidan,  antivirus,  antibakteri  dan  antikanker.  Keamanan  adalah  suatu  syarat  penting  yang  harus dimiliki suatu obat, oleh karena itu perlu dilakukan uji untuk mengetahui keamanan pemanfaatan daun galing perlu diteliti. Tujuan penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  LD 50 ekstrak  terpurifikasi  daun  galing    dan  mengetahui  gambaran  histopatologi  hepar mencit setelah pemberian ekstrak terfurifikasi daun galing. Penelitian ini adalah penelitian ekperimental, dengan rancangan Post test only controlled group design yang terdiri dari 5  kelompok perlakuan, terdiri dari kelompok kontrol negatif yang diberi Na CMC 0,5% , kelompok perlakuan yang diberi ekstrak terpurifikasi daun galing 50 mg/kgBB, 500 mg/kgBB, 5.000 mg/kgBB dan 50.000 mg/kgBB, tiap kelompok perlakuan yang terdiri atas 4  ekor mencit . Hasil penelitian menunjukkan ekstrak terpurifikasi daun  galing  bersifat  sangat  toksik  berdasarkan  klasifikasi  toksisitas  dengan  nilai  LD 50 499,9  mg/kgBB,  dengan  gambaran histopatologi hepar mencit pada kelompok perlakuan ekstrak dosis 5.000 dan 50.000 (mg/kgBB) menunjukkan adanya kerusakan sel hepar, sedangkan pada kelompok perlakuan dosis 50, 500 (mg/kgBB) dan kontrol negatif tidak mengalami kerusakan (nekrisis) sel hepar.
Kata Kunci: Daun galing, purifikasi, histopatologi hepar, toksisitas, mencit

## 1. Pendahuluan
Penggunaan  obat  tradisional  di  Indonesia merupakan  bagian  dari  budaya  bangsa  dan  banyak dimanfaatkan  oleh  masyarakat,  namun  efektivitas  dan keamanannya  belum  sepenuhnya  didukung  oleh penelitian.  Sumber  daya  alam  obat  tradisional merupakan  aset  nasional  yang  perlu  digali,  diteliti, dikembangkan dan dioptimalkan pemanfaatannya [9].
Salah satu tumbuhan di Indonesia yang dijadikan sebagai  obat  tradisional  adalah  tumbuhan  galing ( Cayratia  trifolia L.  Domin)  berkhasiat  sebagai antidiabetik, hepatoprotektor, menurunkan kadar kolesterol dalam darah, meningkatkan kekebalan tubuh, sebagai antioksidan, antivirus, antibakteri, dan antikanker  [8].  Keamanan  adalah  syarat  penting  yang harus  dimiliki  oleh  obat  herbal.  Uji  toksisitas  penting bagi perkembangan obat baru sebelum dapat  digunakan
* KBK Farmakologi dan Farmasi Klinik Fakultas Farmasi UHO Email: ilyasyusufmuhammad.apt@gmail.com
bagi manusia. Uji toksisitas dilakukan untuk menentukan bahaya atau resiko dari suatu substansi [1].
Pengujian toksisitas akut terhadap daun tumbuhan galing  dengan  hewan  uji  mencit  dipilih  karena sebelumya  telah  dilakukan  uji  toksisitas  akut  daun tumbuhan  galing    menggunakan  metode  BSLT (Brine Shrimp  Lethality  Test) dengan  hewan  uji  larva  udang ( Artemia salina Leach) menunjukan hasil nilai LD dari ekstrak  daun  galing  sebesar  405,4  μg/mL  [2].  Namun dalam  penelitian  tersebut  masih  menggunakan  ekstrak etanol daun galing, dimana pada ekstrak tersebut masih mengandung zat pengotor seperti lemak, klorofil, resin, protein dan karbohidrat yang dapat mengganggu bahan alam dalam menghasilkan aktivitas biologi [16]. Sampai saat  ini  informasi  ilmiah  tentang  uji  tosisitas  akut  dan histopatologi  organ  hepar  pada  hewan  uji  mencit  oleh ekstrak  purifikasi  daun  galing  belum  banyak  diteliti,
Yusuf, dkk: Uji Toksisitas Akut dan Gambaran Hispatologi Hepar Mencit Jantan (Mus musculus L.)
yang Diberi Ekstrak Terpurifikasi Daun Galing (Cayratia trifolia L. Domin)
sehingga  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  mengenai toksisitas dari daun galing.

## 2. Metode

## 2.1 Umum
Jenis  penelitian  yang  digunakan  adalah  penelitian eksperimen,  dengan  desain  penelitian Post-test  only controlled  group  design dengan  menggunakan  20  ekor mencit . Sampel  daun  galing  diperoleh  dari  wilayah Kelurahan Anduonohu Kecamatan Poasia Kota Kendari. Penelitian ini dilakasanakan di Laboratorium Farmakologi  Akademi  Farmasi  Bina  Husada  dan Laboratorium  Patologi  Anatomi  Rumah  Sakit  Aliyah Kendari.

## 2.2 Preparasi Sampel dan Ekstraksi
Sampel  daun  galing  dibersihkan,  dikeringkan  dan diekstraksi  dengan  metode  maserasi  menggunakan pelarut  etanol  96%  selama  3  hari.  Ekstrak  cair dikentalkan dengan menggunakan  rotavapor, kemudian ekstrak  dipurifikasi  dengan  menggunakan n -heksana. Lapisan n -heksana dipisahkan, dan dilakukan pengulangan  purifikasi  ekstrak  sampai  fase n -heksana berwarna bening. Fase etanol yang diperoleh selanjutnya dipekatkan dengan waterbath.

## 2.3 Pengujian Toksisitas Akut
Hewan  coba  dibagi  dalam  5  kelompok  yaitu, kelompok perlakuan I diberi Na CMC 0,5%, kelompok perlakuan II diberi ekstrak 50 mg/kgBB, kelompok perlakuan  III  diberi  ekstrak    500  mg/kgBB,  kelompok perlakuan  IV  diberi  ekstrak    5.000  mg/kgBB,  dan kelompok perlakuan V diiberi ekstrak  50.000 mg/kgBB. Perlakuan pada hewan uji selama 7 hari secara peroral 1 kali  sehari.  Sebelum  dilakukan  perlakuan,  hewan  uji dipuasakan terlebih dahulu selama 6-8 jam dengan tetap diberi minum atlibitum .

## 2.4 Pemeriksaan Histopatologi Organ Hati
Hewan  uji  mencit  dari  tiap  kelompok  dianestesi dengan kloroform kemudian dilakukan pembedahan pad ahari ke delapan. Organ hepar yang diperoleh kemudian ditimbang  dan  diukur  volumenya,  dan  dimasukkan  ke dalam wadah yang berisi formalin 10% untuk kemudian diamati histopatologinya.

## 2.5 Analisis Data
Data  yang  diperoleh  diolah  dengan  menggunakan rumus  perhitungan  LD 50 dengan  metode  perhitungan menurut Thomson dan Weill (1952) [15].

## 3. Hasil dan Pembahasan
Simplisia kering diekstraksi dengan menggunakan metode  maserasi.  Metode  maserasi  dipilih  karena penyariannya  yang  sederhana  mudah  dilakukan  dan cocok  untuk  sampel  yang  lunak  [17].  Pelarut  yang digunakan adalah  etanol 96% karena bersifat universal, tidak bersifat toksik, dan tidak mudah mengurai senyawa zat aktif dari tanaman tersebut [18].
Pengujian  toksisitas  akut  dilakukan  untuk menentukan efek toksik suatu senyawa yang akan terjadi dalam masa pemejanan dengan waktu yang singkat [12]. Metode  Thomson  dan  Weil  dipilih  karena  tingkat kepercayaan  yang  cukup  tinggi,  metode  yang  sering digunakan  karena  tidak  memerlukan  hewan  percobaan yang banyak [12]. Penelitian ini menggunakan 20 ekor mencit yang dibagi dalam 5 kelompok perlakuan. Pada kontrol negatif diberikan Na CMC 0,5% karena Na CMC merupakan  senyawa  yang  tidak  toksik  dan  tidak menimbulkan iritan [13].
Pengujian toksisitas akut ekstrak terpurifikasi daun galing  pada  hewan  uji  mencit  dilakukan  selama  7  hari karena  kerusakan  hepar  dapat  terjadi  beberapa  minggu sampai beberapa bulan setelah terkena paparan zat toksik [3].  Hasil  dari  perhitungan  LD 50 ekstrak  terpurifikasi daun galing sebesar 499,9 mg/kgBB yang dikategorikan sebagai  zat  yang  sangat  toksik.  Efek  toksik  yang  ada pada ekstrak terpurifikasi daun galing disebabkan karena kandungan  senyawa  metabolit  sekunder  tanaman tersebut, seperti alkaloid, steroid dan saponin. Metabolit sekunder yang diduga dapat menyebabkan kerusakan sel adalah saponin dan alkaloid. Saponin dapat menimbulkan hemolisis sel darah merah sehingga dapat mengganggu  lingkungan  ekstra  sel  dari  sel  hepatosit. Sementara  alkaloid  juga  memiliki  sifat  toksik  karena memerlukan waktu yang lama untuk dapat diekskresikan dan  dimetabolisme,  sehingga  kontak  alkaloid  dengan sel-sel hati menjadi lebih lama dan merusak hati [11].
Setelah  dilakukan  pemeriksaan  makroskopik, organ hepar dibuat preparat histologi dengan pewarnaan Hemotoksilin-Eosin. Tahap pembuatan preparat meliputi  proses  fiksasi  dimana  organ  hepar  yang  telah diambil  dimasukkan  kedalam  larutan  formalin  10% dengan tujuan untuk mempertahankan susunan jaringan serta mengeraskan jaringan agar memudahkan pengirisan  sehingga  agar  organ  hepar  tidak  mengalami pembusukan  dan  kerusakan  jaringan  hepar [6].  Setelah itu  dilakukan cut  up pada  sampel,  kemudian  tahap selanjutnya dehidrasi tujuan  dari  tahapan  ini  adalah untuk  menghilangkan  cairan  yang  terdapat  dalam jaringan yang telah difiksasi. Clearing dilakukan untuk membersihkan  jaringan  dengan  menggunakan  larutan yang dapat berikan dengan parafin [6].
Yusuf, dkk: Uji Toksisitas Akut dan Gambaran Hispatologi Hepar Mencit Jantan (Mus musculus L.) yang Diberi Ekstrak Terpurifikasi Daun Galing (Cayratia trifolia L. Domin)
Selanjutnya dilakuan blocking proses ini dilakukan agar  preparat  dapat  dipotong  dengan  mikrotom, kemudian  dilakukan sectioning dengan  mikrotom. Staining merupakan  proses  pemberian  warna  pada jaringan  yang  telah  dipotong  sehingga  jaringan  dapat diamati di mikroskop. Pewarna Hemotoksilin memberikan  warna  biru  pada  inti  sel  sedangkan  Eosin memberikan warna merah pada sitoplasma [6].
Hasil pengamatan mikroskopik gambaran histopatologi sel hepar mencit setelah perlakuan selama 7  hari dapat  ditunjukkan  pada gambar  1 .  Perlakuan A menunjukkan gambaran histologi sel hepar yang terlihat masih normal. Hal ini ditandai dengan sel-sel hepatosit masih  tersebar  rata,  inti  sel  bulat  di  tengah,  padat  dan batas sel (sinusoid) masih terlihat jelas serta vena sentral tidak mengalami kongesti atau pembendungan darah [5]. Pada perlakuan B menunjukkan gambaran histopatologi sel hepar mengalami kerusakan. Hal ini ditandai dengan terjadi  degenerasi  dimana  terjadi  pembengkakan  pada sitoplasma. Degenerasi merupakan tanda awal kerusakan  hepar  akibat  toksin  yang  bersifat  sementara dan  sel  masih  bisa  pulih  atau  normal  kembali  apabila paparan toksin dihentikan [4].  Sinusoid pada perlakuan ini  masih  terlihat  jelas  tetapi  arahnya  sudah  tidak bermuara  ke  vena  sentral.  Vena  sentral  mengalami kongesti,  kerusakan  ini  terjadi  karena  terlalu  banyak darah  yang  masuk  ke  arteri  atau  terlalu  kecilnya  darah yang menuju vena. Secara mikroskopis kongesti ditandai dengan  adanya  dilatasi  pada  dinding  arteri  yang disebabkan  oleh  banyaknya  volume  darah  pada  bagian tersebut  [7].  Perlakuan C menunjukkan  gambaran histopatologi  sel  hepar  mengalami  kerusakan.  Hal  ini ditandai terjadi degenerasi dimana terjadi pembengkakan pada sitoplasma. Degenerasi merupakan
tanda awal kerusakan hepar akibat toksin  yang  bersifat sementara dan sel masih bisa pulih atau normal kembali apabila paparan toksin dihentikan [4].
Sinusoid  pada  perlakuan  ini  masih  terlihat  jelas  tetapi arahnya  sudah  tidak  bermuara  ke  vena  sentral.  Vena sentral mengalami kongesti, kerusakan ini terjadi karena terlalu  banyak  darah  yang  masuk  ke  arteri  atau  terlalu kecilnya  darah  yang  menuju  vena.  Secara  mikroskopis kongesti  ditandai  dengan  adanya  dilatasi  pada  dinding arteri  yang  disebabkan  oleh  banyaknya  volume  darah pada bagian tersebut [7].
Pada  perlakuan D menunjukkan  gambaran histopatologi sel hepar mengalami kerusakan (nekrosis), hal ini ditandai dengan inti sel tidak terlihat  karena telah mengalami  nekrosis  ditandai  dengan  ciri-ciri  nukleus mengkerut  (piknosis),  nukleus  pecah  (kariokinesis), nukleus  lisis  (kariolisis),  membran  sel  mengalami  lisis sehingga  menimbulkan  ruang-ruang  kosong.    Sinusoid antara  sel  tidak  nampak  jelas  [5].  Vena  sentral mengalami kongesti, kerusakan ini terjadi karena terlalu banyak darah yang masuk ke arteri atau terlalu kecilnya darah  yang  menuju  vena.  Secara  mikroskopis  kongesti ditandai dengan adanya dilatasi pada dinding arteri yang disebabkan  oleh  banyaknya  volume  darah  pada  vena sentral  [7].  Perlakuan E menunjukkan  gambaran histopatologi sel hepar mengalami kerusakan (nekrosis), hal ini ditandai inti sel tidak terlihat serta batas sel yang tidak  jelas  karena  telah  mengalami  nekrosis  yang ditandai  dengan  ciri-ciri nukleus  mengkerut  (piknosis), nukleus  pecah  (kariokinesis),  nukleus  lisis  (kariolisis), membran  sel  mengalami lisis  sehingga  batas  antara  sel tidak  nampak  jelas  [5].  Vena  sentral  mengalami kongesti,  kerusakan  ini  terjadi  karena  terlalu  banyak
Gambar 1. Hispatologi hepar mencit Gambaran histopatologi hepar mencit yang diberikan. A= (Na CMC 0,5%); B =(Ekstrak 50 mg/kgBB); C =(Ekstrak 500 mg/kgBB); D=(Ekstrak 5.000 mg/kgBB); E =(Ekstrak 50.000 mg/kgBB); → Vena sentral; → Inti sel; → Sinusoid; → Nekrosis.
Yusuf, dkk: Uji Toksisitas Akut dan Gambaran Hispatologi Hepar Mencit Jantan (Mus musculus L.) yang Diberi Ekstrak Terpurifikasi Daun Galing (Cayratia trifolia L. Domin)
darah  yang  masuk  ke  arteri  atau  terlalu  kecilnya  darah yang menuju vena. Secara mikroskopis kongesti ditandai dengan  adanya  dilatasi  pada  dinding  arteri  yang disebabkan  oleh  banyaknya  volume  darah  pada  vena sentral  [7].
Hasil  gambaran  histopatologi  yang  diberikan    Na CMC 0,5% yang terlihat masih normal. Hal ini ditandai dengan sel-sel hepatosit masih tersebar rata, inti sel bulat di  tengah,  padat  dan  batas  sel  (sinusoid)  masih terlihat jelas [5].  Hasil gambaran histopatologi yang diberikan ekstrak  terpurifikasi  daun  galing  telah  mengalami kerusakan. Hal ini ditandai dengan terjadinya degenerasi karena pembengkakan pada sitoplasma [4]. Inti sel tidak terlihat,  serta  batas  sel  yang  tidak  jelas  karena  telah mengalami  nekrosis  [5].  Vena  sentral  mengalami kongesti  pada  dinding  arteri  yang  disebabkan  oleh banyaknya volume darah pada bagian tersebut.

## 4. Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  uji  toksisitas  akut ekstrak  terpurifikasi  daun  galing  ( Cayratia  trifolia L. Domin)  pada  hewan  uji  mencit,  dapat  disimpulkan bahwa nilai LD 50 adalah 499,9 mg/kgBB kategori sangat toksik berdasarkan klasifikasi toksisitas dan berdasarkan pengamatan histopatologi organ hepar hewan uji mencit menunjukkan  adanya    kerusakan  sel  (nekrosis)  pada dosis 5.000 mg/kgBB dan 50.000 mg/kgBB.

## Daftar Pustaka
1. Arome  D,  Chinedu  E.  The  Importance  of  Toxicity Testing, J. Phar. BioSci., 4(2013) ; 146-148.
2. Febryanti,  A.  2016,  “Uji  Toksisitas  Akut  Ekstrak  Daun dan Batang Galing ( Cayratia trifolia L.Domin) Terhadap Larva  Udang (Artemia  salina Leach) ”.  Karya  Tulis Ilmiah, Amd.  Farm,  Kendari:  Akademi  Farmasi  Bina Husada, 2016.
3. Crawford  JM. Liver  and  Biliary  Tract .  Philadelphia: Elsevier Sounders, 2005.
4. Harada  T. Pathology  of  the  Mouse:  Liver  and  Gall Bladder. Chache River Press, 1999.
5. Hastuti  US. Pengaruh  Berbagai  Dosis Citrinin  Terhadap Kerusakan  Struktur  Hepatosit  Mencit  (Musmusculus)
Pada  Tiga  Zona  Lobulus  Hepar. Jurnal  Kedokteran Brawijaya , 2006, 3; 121-126
6. Jusuf AA. Histoteknik Dasar . Jakarta: FK UI, 2009.
7. Jones  TS,  Bodtker  A,  Kmitta  D. Comprehensive  Peer Mediation Evaluation Project, Preliminary Final Report. Philadelphia: Temple University, 1997.
8. Kumar D, Gupta J, Kumar S, Arya R, Kumar T, Gupta A. Pharmacognostic  Evaluation  of Cayratia  trifolia (Linn.)
Leaf, Asian Pacific J. of Tropical Biomed. , 2012, 2 ;6-10.
9. Peraturan Menteri Kesehatan Republik Indonesia Nomor 88 Tahun 2013. Tentang Rencana Induk Pengembangan Bahan  Baku  Obat  Tradisional, Jakarta:  Kementerian Kesehatan Republik Indonesia, 2013.
10. Moslen  NT. Toxic  Responses  of  Liver .  New  York: McGraw Hill, 2001.
11. Nurqolbiah  E,  Kusharyanti  I,  dan  Nurbaeti  SN.  Uji Toksisitas Fraksi Air Impatiens pada Tikus Betina Galur Sprague Dawley . Pharm Sci Res, 2014, 1(1) ;16-29.
12. Priyanto. Toksikologi Mekanisme, Terapi Antidotum, dan Penilaian Resiko . Depok: Lembaga Studi dan Konsultasi Farmakologi (Leskonfi), 2009.
13. Rowe  RC,  Sheykey  PJ,  dan  Quin  ME. Handbook  of Pharmaceutical  Exipients  Sixth  Edition. London: Pharmaceutical Press, 2009
14. Susanti  D,  Ardiana  D,  Gumelar  GP,  dan  Bening  YG. Polaritas Pelarut Sebagai Pertimbangan Pemilihan Pelarut Untuk  Ekstraksi  Bekatul  Dari  Bekatul  Varietas  Ketan (Oriza sativa  glatinosa) . Prosiding Simposium Nasional RAPI XI FT UMS; 2012, Surakarta. ISSN: 1412-9612; 8- 14
15. Thompson WR, Weil CS. On The Contruction of Tables For Moving Average  Interpolation, Biometrics, 1952, 8 ; 51-54.
16. Widyaningtias  NMSR,  Yustiantara  PS,  dan  Paramitha NLPV.  Uji  Aktivitas  Ekstrak  Terpurifikasi  Daun  Sirih
Hijau (Piper betle L.) Terhadap Bakteri
Propionibacterium  acnes,  Jurnal  Farmasi  Udayana,
2014, 3(1) ; 50-53.
17. Departemen  Kesehatan  RI. Parameter  Standar  Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Jakarta: Direktorat Pengawasan Obat Tradisional, 2000.
18. Gruben  GJH,  Denton  OA. Plant  Resources  of  tropical Africa 2: Vegetables . Wageningen: PROTA Foundation/ Backhuys Publishers/CTA, 2004.