## AQUASAINS
(Jurnal Ilmu Perikanan dan Sumberdaya Perairan)

## PENGARUH LAMA WAKTU PEMBERIAN KEJUTAN DINGIN PADA
PEMBENTUKAN INDIVIDU TRIPLOID IKAN PATIN ( Pangasius sp)
Dwi Puji Hartono 1 · Dian Febriani 1
Ringkasan Tujuan kegiatan penelitian ada- lah mengetahui pengaruh lama waktu ke- jutan suhu terhadap pembentukan indivi- du triploid pada ikan patin, tingkat derajat penetasan dan kelangsungan hidup larva ikan patin Perlakuan lama waktu kejutan suhu dingin yang diberikan masing-masing 120 detik, 180 detik dan 240 detik pada su- hu 4 o C pada fase meiosis 1. Masing-masing perlakuan dilakukan sebanyak 3 kali. Pe- netasan dan pemeliharaan larva dilakukan pada akuarium serta hapa untuk kegiatan pendederan. Hasil penelitian menunjukkan bahwa perlakuan lama waktu kejutan suhu dingin memberikan hasil yang nyata ter- hadap pembentukan individu triploid pa- da ikan patin (P<0,05). Persentase indi- vidu triploid tertinggi diperoleh pada la- ma waktu kejutan 78,33%. Selain itu ting- kat pertumbuhan benih ikan patin hingga hari ke-28 menunjukkan peningkatan sejal- an dengan peningkatan persentase indivi- du triploid dari masing-masing perlakuan. Laju pertumbuhan tertinggi diperoleh da- ri perlakuan lama waktu kejutan suhu 4 o C sebesar 10,40 %.
1 ) Staf Pengajar Program Studi Budidaya Peri- kanan Politeknik Negeri Lampung, Jl. Soekarno- Hatta Rajabasa, Bandar Lampung 35144, Telp (0721)703995 Fax (0721)787309, E-mail: dianfebriani@polinela.ac.id
Keywords ikan patin, triploid, lama waktu kejutan suhu dingin, rekayasa kromosom

## PENDAHULUAN
Dewasa ini, pengembangan rekayasa kro- mosom pada ikan patin telah mulai banyak dilakukan. Hal ini dilakukan selain untuk mencegah terjadinya perkawinan secara acak sehingga menyebabkan penurunan secara genetik yang ditandai dengan tingkat per- tumbuhan yang semakin menurun, dera- jat penetasan yang rendah serta ketahan- an tubuh yang rendah, juga dilakukan un- tuk mendapatkan individu yang mempu- nyai pertumbuhan yang cepat. Salah satu aplikasi yang telah dilakukan adalah pem- bentukan individu triploid atau yang mem- punyai struktur kromosom 3n. Pembentuk- an individu triploid yang telah dilakukan adalah dengan cara menahan terlepasnya polar body II, atau dengan cara menga- winkan ikan tetraploid dengan ikan diplo- id normal [1]. Proses ini dilakukan melalui pemberian kejutan suhu pada saat pem- belahan meiosis 1 sehingga polar body II tidak keluar dari sel telur. Beberapa apli- kasi pembentukan individu triploid dengan menggunakan kejutan suhu antara lain de- ngan menggunakan kejutan suhu panas dan suhu dingin. Permasalahan yang ditemuk- an adalah masih rendahnya persentase in-
Dwi Puji Hartono 1 , Dian Febriani 1
dividu triploid yang terbentuk. Kondisi ini disebabkan lama waktu kejutan yang dila- kukan masih belum sepenuhnya dapat me- nahan polar body II di dalam telur sehing- ga mengakibatkan individu yang terbentuk adalah individu diploid normal. Oleh kare- na itu dilakukan kajian dalam menentukan lama waktu kejutan suhu yang diberikan untuk meningkatkan persentase pemben- tukan individu triploid.
Tujuan kegiatan penelitian ini adalah un- tuk 1. mengetahui pengaruh lama waktu kejutan suhu terhadap pembentukan indi- vidu triploid pada ikan patin 2. mengetahui pengaruh lama waktu kejutan suhu terha- dap tingkat derajat penetasan dan kelang- sungan hidup larva ikan patin 3. menge- tahui pengaruh individu triploid terhadap tingkat pertumbuhan ikan patin.

## MATERI DAN METODE
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah induk ikan patin, larutan asetocar- min, asam asetat glacial, etanol absolut, al- kohol, AgNO 3 , metylene blue, gelatin, gli- serin, asam formiat, artemia, garam dapur, ovaprim, pelet, cacing serta ragi roti se- bagai bahan kultur pakan alami. Sedangk- an alat yang digunakan dalam pelaksanaan penelitian ini antara lain akuarium beserta sistem aerasinya sebagai media pemeliha- raan dengan ukuran 40 x 60 x 50 cm se- banyak 12 buah, hapa berukuran 1,3 x 1 x 0,5 m sebanyak 12 buah, pompa air, aera- tor, mikroskop, syringe, timbangan anali- tik, box staining, gelas preparat, mangkok serta perlengkapan pemijahan lainnya.

## Rancangan Penelitian
Rancangan yang digunakan dalam pene- litian ini adalah rancangan acak lengkap (RAL) dengan tiga ulangan. Sebagai per- lakuan adalah perbedaan lama waktu ke- jutan dingin serta satu buah kontrol tanpa perlakuan. Perlakukan lama waktu kejut- an yang digunakan adalah 120 detik, 180 detik dan 240 detik pada suhu 4 o C. Seti- ap perlakuan dilakukan ulangan sebanyak 3 kali. Data dianalisis dengan sidik ragam untuk mendapatkan penduga ragam galat
dan uji signifikasi untuk mengetahui per- bedaan antar perlakuan.

## Pemijahan Ikan Patin
Penelitian diawali dengan persiapan media pemijahan serta seleksi terhadap ikan pa- tin yang akan digunakan sebagai induk. In- duk ikan patin yang digunakan mempunyai berat 2-3 kg per ekor untuk betina dan 1,5- 2,5 kg untuk jantan. Proses pemijahan di- lakukan dengan menggunakan metode ka- win suntik ( induce breeding ) dengan ban- tuan rangsangan hormon ovaprim. Dosis yang digunakan dalam penyuntikan ada- lah 0,9 ml/kg. Penyuntikan hanya dilakuk- an pada induk betina dan dilakukan seba- nyak 2 kali dengan perbandingan 1/3 do- sis digunakan untuk penyuntikan pertama dan 2/3 dosis digunakan untuk penyuntik- an kedua. Jarak antar penyuntikan adalah 10 jam. Pengeluaran telur dilakukan sete- lah 6-8 jam dari penyuntikan kedua dengan cara distriping. Induk betina yang telah mengalami ovulasi, distriping untuk men- dapatkan telur. Telur hasil striping dile- takkan di dalam mangkok yang telah di- bersihkan. Pengambilan sperma dari jant- an dilakukan dengan mengurut bagian uro- genital untuk mengeluarkan sperma. Sper- ma dari induk jantan di tampung di da- lam beaker glass yang telah diberi larutan NaCl 0,9 %. Pembuahan dilakukan seca- ra buatan dengan cara mencampur telur dan sperma serta diberikan larutan pembu- ahan berupa larutan fisiologis. Telur yang telah dicampur dengan sperma kemudian ditebar pada media penetasan telur beru- pa akuarium yang telah diberi aerasi dan heater sebagai pengatur suhu pada media penetasan.

## Perlakuan Kejutan Suhu
Aplikasi kejutan suhu dilakukan dengan meng- gunakan kejutan dingin untuk memperoleh ikan triploid (3n). Tiga menit setelah ter- jadi pembuahan diikuti dengan perlakuan kejutan dingin pada suhu 4 o C selama 120
detik, 180 detik dan 240 detik Setelah dila- kukan kejutan suhu dari setiap perlakuan, telur dimasukkan ke dalam akuarium un- tuk proses inkubasi. Proses inkubasi telur dilakukan di dalam akuarium yang telah diberi air setinggi 25 cm hingga terjadi pe- netasan telur.

## Penetasan Telur
Telur yang telah ditebar pada media pe- netasan dibiarkan dan diamati perkemba- ngannya untuk menentukan derajat pem- buahan. Telur ikan patin akan menetas se- telah 20-26 jam dari proses pembuahan. Setelah proses penetasan dilakukan penyi- ponan pada media penetasan untuk mem- buang telur yang tidak menetas.

## Pemeliharaan Larva
Larva ikan patin hasil penetasan dipeliha- ra pada media akuarium. Pemberian pak- an dilakukan saat larva berumur 3 hari. Pakan yang diberikan adalah naupli arte- mia dengan frekuensi pemberian sebanyak 6 kali yaitu pada pukul 06.00, 10.00, 14.00, 18.00, 22.00, dan 02.00 WIB. Pemberian artemia dilakukan hingga larva berumur 7 hari. Pakan yang diberikan pada larva yang berumur 7 hari adalah cacing sutera de- ngan frekuensi pemberian sebanyak 3 kali yaitu pagi, siang dan sore hari secara addli- bitum. Pada media pemeliharaan larva di- lakukan penyiponan dan pergantian air se- tiap 2 hari sekali untuk menjaga kondisi media tetap bersih. Pemeliharan larva di- akuarium dilakukan hingga larva berumur 28 hari.

## Pengamatan Derajat Penetasan dan Ke- langsungan Hidup
Perhitungan derajat penetasan dari masing- masing perlakuan dilakukan setelah telur menetas dengan mengitung jumlah telur yang menetas dan jumlah telur yang tidak
menetas pada tiap lempengan kaca di ti- ap persilangan. Perhitungan derajat pene- tasan telur dilakukan dengan menggunak- an persamaan berikut :
HR = T m T m + T tm (1)
dimana HR adalah derajat penetasan (%), T m adalah jumlah telur yang menetas, T tm adalah jumlah telur yang tidak menetas
Untuk melihat kelangsungan hidup selama pemeliharaan, dilakukan sampling tiap 7 hari sekali. Sampling dilakukan secara acak pada tiap media pemeliharaan. Perhitung- an kelangsungan hidup larva dilakukan de- ngan menggunakan persamaan berikut:
SR = F st F so X 100% (2)
dimana SR adalah derajat kelangsungan hidup (%), F st adalah jumlah ikan yang hi- dup pada T1 dan F so adalah jumlah ikan yang hidup pada awal pemeliharaan

## Pengamatan Persentase Individu Triploid (3n)
Keberhasilan triploidisasi merupakan per- sentase jumlah ikan uji yang triploid da- ri jumlah total ikan uji yang diamati un- tuk tiap perlakuan. Keberhasilan triploi- disasi ini didasarkan pada hasil penguji- an yang dilakukan dengan metode peng- hitungan jumlah nukleolus.

## Pertumbuhan
Laju Pertumbuhan harian dihitung dengan menggunakan persamaan berikut :
α = ( t r wt wo ) − 1 X 100% (3)
dimana α adalah pertumbuhan harian (%), wt adalah bobot akhir pengamatan (gr), wo adalah bobot awal pengamatan (gr) dan t adalah waktu pengamatan (hari)
Dwi Puji Hartono 1 , Dian Febriani 1
Tabel 1 Derajat penetasan telur ikan patin hasil perlakuan kejutan suhu dengan lama waktu kejut- an yang berbeda
Ulangan Derajat Penetasan Telur (%) Kontrol 120 Detik 180 detik 240 detik 1 72.28 66.58 63.58 40.46 2 76.12 60.55 50.92 63.25 3 86.93 67.85 64.05 61.72 Rerata 78.44 64.99 59.52 55.14

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Derajat Penetasan Telur
Hasil pengamatan terhadap derajat pene- tasan telur ikan patin hasil perlakuan ke- jutan suhu seperti terlihat pada Tabel 1. Berdasarkan uji statistik dengan menggu- nakan sidik ragam ANOVA menunjukkan adanya perbedaan yang nyata antar per- lakuan dengan kontrol (P<0,05). Derajat penetasan tertinggi diperoleh pada perla- kuan kontrol sebesar 78,44 % sedangkan terendah pada perlakuan lama waktu ke- jutan suhu 240 detik sebesar 55,14 %.
Berdasarkan Tabel 1 menunjukkan bahwa derajat penetasan cenderung mengalami pe- nurunan sejalan dengan makin lamanya wak- tu kejutan suhu yang diberikan. Hal ini da- pat disebabkan oleh rusaknya membran te- lur dan sensivitas embrio dari perlakuan yang diberikan serta kerusakan fisik telur yang mengakibatkan proses meiosis II ma- upun pada saat mitosis terjadi mengalami gangguan [2]. Derajat penetasan telur hasil perlakuan kejutan dingin dapat digolongk- an masih lebih baik dari perlakuan dengan menggunakan kejutan panas. Menurut [3], derajad penetasan hasil perlakuan kejutan panas untuk menghasilkan individu triplo- id pada ikan lele dumbo berkisar antara 40 – 70 %. Persentase Individu Triploid.

## Persentase Individu Triploid
Hasil pengamatan ikan perlakuan terhadap pembentukan individu triploid (3n) disa- jikan pada Tabel 2. Berdasarkan uji sta- tistik yang dilakukan menunjukkan adanya
Tabel 2 Persentase individu ikan patin triploid hasil perlakuan kejutan suhu dengan lama waktu kejutan yang berbeda
Ulangan Individu Triploid (%) Kontrol 120 Detik 180 detik 240 detik 1 - 75.00 75.00 75.00 2 - 80.00 80.00 75.00 3 - 80.00 75.00 75.00 Rerata - 78.33 76.67 75.00
perbedaan yang nyata antara perlakuan de- ngan kontrol (P<0,05). Selanjutnya hasil uji lanjut yang dilakukan menunjukkan bah- wa tidak adanya perbedaan yang nyata an- tar perlakuan yang diberikan.
Nilai persentase individu triploid terting- gi diperoleh pada perlakuan lama waktu kejutan 120 detik yaitu sebesar 78,33 % dan terkecil pada perlakuan lama waktu kejutan 240 detik sebesar 68,33%, sedangk- an perlakuan tanpa diberi kejutan dingin diperoleh hasil 100 % diploid. Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa perlakuan kejutan yang diberikan pada telur mampu mencegah terjadinya pelepasan polar bo- dy II dan tidak mengakibatkan kematian total pada zigot. Tingkat keberhasilan tri- ploidisasi pada penelitian ini semakin me- nurun dengan semakin lamanya waktu ke- jutan. Menurut [4], setelah batas tertentu, hasil triploid menurun, karena polar body II telah lepas sehingga tidak dapat menya- tu kembali ke dalam pronukleus embrio. Suhu kejutan dingin merupakan salah sa- tu faktor utama dalam mengubah jumlah kromosom dari diploid (2n) menjadi triplo- id (3n) pada waktu awal setelah fertilisasi diketahui dan lama pemberian kejutan di- tentukan. Terdapatnya penambahan satu set kromosom diduga sebagai akibat dari penahanan kutup II (polar bodi II) pada saat diberi kejutan suhu. [5] menyatakan bahwa terbentuknya ikan-ikan triploid dia- kibatkan oleh adanya penambahan satu set kromosom pada saat sel diploid sedangk- an, sumber dari satu set kromosom dalam ikan trilpoid adalah badan kutup II yang terdapat dalam sel telur. Perlakuan kon- trol yang dilakukan tanpa adanya kejutan dingin menunjukkan hasil 100 % individu
diploid. Selain itu, adanya perbedaan vari- asi pada individu triploid dapat disebabk- an karena adanya variasi atau ketidak se- ragaman waktu fertilisasi pada saat pem- berian kejutan suhu panas yang dilakukan. Tidak tercapainya prosentase maksimal ke- turunan trilpoid pada ikan Channel catfi- sh disebabkan oleh adanya variasi dalam fertilisasi, dan pelepasan badan kutup II pada telur ikan salmon sangat ditentukan oleh mobilitas sperma, kecepatan sperma melewati saluran mokrofil dan kemampu- an sperma untuk penetrasi ke dalam inti sel telur. Bagian tubuh ikan yang digunak- an untuk pemeriksaan triploid adalah sirip ekor, dengan tujuan agar ikan hasil uji atau yang diambil bagian tubuhnya tidak meng- alami kematian. Jaringan yang dibutuhk- an dalam pembuatan preparat amat sedi- kit sehingga sampel dapat diperoleh tanpa membunuh ikan. Pemeriksaan triploid de- ngan perhitungan jumlah nukleolus pada setiap sel dapat dilakukan karena disam- ping murah biayanya juga peralatan yang digunakan relatif sederhana dan perhitung- an nukleolus dapat diterapkan pada seti- ap spesies ikan. Dari pengamatan prepa- rat nukleolus diperoleh 100 % ikan tan- pa kejutan memiliki maksimal 3 nukleolus per sel, individu triploid memiliki maksi- mal 4 nukleolus per sel. Dengan pewar- naan perak nitrat, sel berwarna kuning- kecoklatan dan nukleolus nampak berwar- na coklat-kehitaman. Menurut [2], pewar- na perak hanya mampu mewarnai nukle- olus pada NOR yang aktif, tidak semua NOR aktif pada saat pembuatan preparat dilakukan. Terjadinya peningkatan jumlah maksimal nukleolus sebagai indikasi pening- katan jumlah kromosom pada ikan triploid.

## Kelangsungan Hidup
Hasil pengamatan kelangsungan hidup la- rva hingga hari ke-28 disajikan pada Tabel 3. Berdasarkan uji statistik yanng dilakuk- an menunjukkan tidak adanya perbedaan yang nyata antar perlakuan (P<0,05). Hal ini menunjukkan bahwa lama waktu kejut- an dingin pada fase embrio tidak membe-
Tabel 3 Tingkat kelangsungan hidup larva ikan patin hasil perlakuan kejutan suhu dengan lama waktu kejutan yang berbeda
Ulangan Derajat Kelangsungan Hidup (%) Kontrol 120 Detik 180 detik 240 detik 1 72.94 76.25 73.95 67.30 2 83.33 74.84 75.06 62.21 3 60.59 52.61 61.73 70.28 Rerata 72.27 67.90 70.25 66.60
Tabel 4 Tingkat laju pertumbuhan ikan patin (%) hingga hari ke-28 hasil hasil perlakuan kejutan dingin pada lama waktu kejutan yang berbeda
Ulangan Derajat Kelangsungan Hidup (%) Kontrol 120 Detik 180 detik 240 detik 1 7.31 11.41 9.52 9.71 2 9.19 10.07 9.71 9.52 3 8.69 9.71 9.52 9.52 Rerata 8.40 10.40 9.58 9.58
rikan pengaruh terhadap kelangsungan hi- dup larva.
Hasil perlakuan kejutan dingin menunjukk- an tidak adanya pengaruh yang nyata ter- hadap kelangsungan hidup larva. Hal ini berbeda pada beberapa kegiatan pemben- tukan individu triploid dengan menggunak- an kejutan panas. Menurut [3] pemberian kejutan panas akan dapat menurunkan de- rajat kelangsungan hidup larva pada ik- an lele dumbo. Selanjutnya [2] menyatakan bahwa kejutan panas yang diberikan pada fase meiosis II dapat menyebabkan keru- sakan membran embrio sehingga akan da- pat menghasilkan individu abnormal. Hal ini dapat menyebabkan penurunan kelang- sungan hidup pada fase awal pemelihara- an.
Berdasarkan Gambar 1 terlihat larva ha- sil perlakuan menunjukkan pertambahan panjang yang semakin besar. Pertambah- an panjang mulai dari hari ke-7 hingga ha- ri ke 28 terbesar diperoleh pada perlakuan dengan lama waktu kejutan 120 detik yai- tu sebesar 2,53 cm sedangkan pertambah- an terkecil pada kontrol dengan pertam- bahan sebesar 1,87 cm. Pada perlakuan la- ma waktu kejutan 180 detik dan 240 de- tik masing-masing diperoleh pertambahan panjang sebesar 2,33 cm. Hasil ini menun-
Dwi Puji Hartono 1 , Dian Febriani 1
Gambar 1 Pertumbuhan panjang harian larva ikan patin ( Pangasius hypopthalmus ) hasil per- lakuan kejutan dingin pada lama waktu kejutan yang berbeda
jukkan bahwa dengan semakin tingginya jumlah individu triploid pada populasi ik- an patin akan meningkatkan pertumbuhan panjang rata-rata secara keseluruhan.
Tabel 4 menunjukkan tingkat laju pertum- buhan larva ikan patin hingga hari ke-28. Uji statistik yang dilakukan menunjukkan bahwa perlakuan tidak memberikan perbe- daan yang nyata terhadap laju pertumbuh- an ikan patin. [6] menemukan bahwa ikan tinca betina triploid tumbuh nyata lebih cepat dari pada betina diploid dan jant- an diploid serta lebih cepat dari triploid jantan. Menurut [7], ikan lele betina triplo- id lebih kecil ovarinya, berlemak, dan Go- nado Somatik Indeksnya rendah. Ratio le- mak/protein lebih tinggi pada ikan triplo- id, sedangkan pada diploid lemaknya ren- dah tetapi proteinnya tinggi. Pada umur 109 hari gonad ikan lele secara normal mu- lai berkembang, sedang ikan lele dewasa di- capai pada umur 178 hari. Dengan masa pemeliharaan yang singkat, tahap perkem- bangan gonad ikan lele masih belum bisa diketahui. Berdasarkan hasil penelitian di- ketahui bahwa ikan lele triploid pertum- buhannya lebih tinggi dari ikan lele diplo- id sampai umur 60 hari. Perbedaan anta- ra jantan dan betina ikan lele juga belum jelas sehingga tidak diketahui juga perbe- daan pertumbuhannya. Sebaiknya kecepat- an pertumbuhan ikan triploid steril dibuk- tikan setelah ikan diploid normal berkem- bang gonadnya dan mendekati musim pe- mijahan. Menurut [8], pengamatan yang dilakukan terhadap pertumbuhan ikan li- dah dan Channel Catfish triploid dalam 1 tahun menunjukkan jika pada ikan diploid
belum berkembang gonadnya, maka ikan triploid lebih cepat tumbuhnya.

## SIMPULAN
Berdasarkan hasil pengamatan yang dipe- roleh menunjukkan bahwa pemberian per- lakuan lama waktu kejutan pada suhu di- ngin 4 o C pada fase meiosis I dapat meng- hasilkan pembentukan individu triploid pa- da ikan patin. persentase terbesar individu triploid diperoleh pada lama waktu kejut- an 120 detik dan semakin lama waktu ke- jutan menunjukkan adanya kecenderung- an penurunan persentase individu triploid yang terbentuk. Semakin lama waktu ke- jutan pada suhu dingin 4 o C pada fase mei- osis I menghasilkan derajat penetasan yang semakin rendah sedangkan tingkat kelang- sungan hidup menunjukkan hasil yang re- latif sama antar perlakuan yang diberik- an. Tingkat laju pertumbuhan harian in- dividu hingga hari ke 28 hasil perlakuan lama waktu kejutan dingin tertinggi dipe- roleh pada lama waktu kejutan 120 detik sebesar 10,40 %, 180 detik dan 240 detik sebesar 9,58.

## Pustaka
1. Ihssen, P.E., L.R. McKay, I. Mc Milan and R.B. Philips. 1990. Ploidy manipulations and gyno- genesis in fishes: Cytogenetic and fisheries ap- plications. Transaction of the American Fishe- ries society, 199;689-717.
2. Carman, O. 1992. Chromosome Set Manipula- tion in Some Warm-Water Fish. Doctoral The- sis. Tokyo University of Fisheries. Tokyo. 131
p.
3. Febriani, D. dan J. Nursandi, 2007. Rekayasa Set Kromosom Pada Ikan Lele Dumbo ( Clari- as Gariepinus ) Dalam Menghasilkan Individu Unggulan. Laporan Penelitian. Politeknik Ne- geri Lampung. Lampung 4. Johnstone, R.. 1985. Induction of Triploidy in Atlantic Salmon by Heat Shock. Aquaculture,
49 : 133 – 139.
5. Thorgaard, G.H. 1983. Chromosome Set Ma- nipulation and Sex Control in Fish. In “ Fish Physiology” (Editor : W.S.Hoar, D.J.Randall, and E.M.Donaldson). Volume IXB. Academic Press, Inc. London. p. 405 – 434.
6. Flajshans, M., O. Linhart, and P. Kvasnicka. 1993. Genetic Studies of Tench ( Tinca inca L.) : Induced Triploidy and Tetraploidy and First Performance Data. Aquaculture, 13 : 301 – 312. 7. Rustidja. 1989. Artificial Induced Breeding and Triploidy in the Asian Catfish ( Clarias ba- trachus Linn.). Fakultas Pascasarjana. Institut Pertanian Bogor. Bogor. 80 hal 8. Zohar, Y. 1989. Fish Reproduction : Its Physio- logy and Artificial Manipulation. In “Fish Cul- ture in Warm Water Systems : Problems and Trends” (Editor : M. Shilo and S. Sarig). CRC Press, Inc. Boca Raton. Florida. p. 65 – 120.
Dwi Puji Hartono 1 , Dian Febriani 1