ISSN: 1410-8917
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 15 (1) (2012) : 13 – 17
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi Journal of Scientific and Applied Chemistry
Journal homepage: http://ejournal.undip.ac.id/index.php/ksa
Isolasi, Identifikasi serta Uji Aktivitas Sitotoksik Senyawa Alkaloid Total Daun Ketapang ( Terminalia Catappa Linn.) dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
Choirulina Maulida a , Dewi Kusrini a* , Enny Fachriyah a
a Organic Chemistry Laboratory, Chemistry Department, Faculty of Sciences and Mathematics, Diponegoro University, Jalan Prof. Soedarto, Tembalang, Semarang
* Corresponding author: dewi.kusrini@live.undip.ac.id
A r t i c l e   I n f o

## A b s t r a c t
Keywords: Terminalia catappa Lin., alkaloid,
activity test, BSLT
Isolation of alkaloid compounds on the leaves of T. catappa which is a combretaceae family plant has  been  performed.  Isolation  of  alkaloids  was  performed  by  maceration  method  using  n- hexane solvent followed by ethanol. Ethanol extract was identified using dragendorf and meyer reagents,  followed  by  hydrolysis  of  ethanol  extract.  Liquid-liquid  extraction  was  then performed using an ethyl acetate solvent and produced a total alkaloid isolate. Alkaloid isolate analysis was performed by TLC method and separation with preparative TLC. Then, followed by analysis using UV-Vis, FTIR and LC-MS and cytotoxic test by BSLT method. The alkaloid isolates from the leaves of T. catappa were white powders. UV-Vis spectrophotometer analysis showed that isolates A1.1 and A2.1 had λ max of 220 nm. While the FTIR spectra showed that each isolate had  a  wave  number  of  3441.01;  3425,58  cm -1 (vibration  OH),  2924,09  and  2854,65  cm -1 (vibration stretches CH asymmetry and symmetry), 1627.92 cm -1 (vibration C = O), 1103.28 cm -1 (vibration  of  CO  stretched  symmetry  with  vibration  CN).  LC-MS  results  showed  compounds having  molecular  weight  of  337.34  g/mol  (A1.1)  and  337.33  g/mol  (A2.1).  The  compound  was thought  to  be  a  tropane  alkaloid  compound  with  a  group  of α , β unsaturated  acids  and  its isomers. The cytotoxic test using BSLT method showed that total alkaloid had LC 50 value 132.59 ppm that meant total alkaloid was not toxic.

## A b s t r a k
Kata kunci:
Terminalia catappa Lin., alkaloid, uji aktivitas, BSLT
Isolasi senyawa alkaloid pada daun T. catappa yang merupakan tumbuhan famili combretaceae telah dilakukan. Isolasi alkaloid dilakukan dengan metode maserasi menggunakan pelarut n- heksana  dilanjutkan  dengan  etanol.  Ekstrak  etanol  diidentifikasi  menggunakan  pereaksi dragendorf dan meyer, diikuti dengan hidrolisis ekstrak etanol. Kemudian dilakukan ekstraksi cair-cair menggunakan pelarut etil asetat dan menghasilkan isolat alkaloid total. Analisis isolat alkaloid dilakukan dengan metode KLT dan pemisahan dengan KLT preparatif. Lalu, dilanjutkan dengan  analisis  menggunakan  UV-Vis,  FTIR  dan  LC-MS  serta  uji  sitotoksik  dengan  metode BSLT.  Isolat  alkaloid  dari  daun T.  catappa berupa  serbuk  berwarna  putih.  Analisis spektrofotometer UV-Vis menunjukkan  bahwa  isolat  A1.1  dan  A2.1  mempunyai λ max  sebesar 220 nm. Sedangkan spektra FTIR menunjukkan bahwa masing-masing isolat memiliki bilangan gelombang 3441,01; 3425,58 cm -1 (vibrasi ulur O-H), 2924,09 dan 2854,65 cm -1 (vibrasi ulur C- H asimetri dan simetri), 1627,92 cm -1 (vibrasi ulur C=O), 1103,28 cm -1 (vibrasi ulur C-O yang simetri  dengan  vibrasi  ulur  C-N).  Hasil  LC-MS  menunjukkan  senyawa  mempunyai  berat molekul  sebesar  337,34  g/mol  (A1.1)  dan  337,33  g/mol  (A2.1).  Senyawa  tersebut  diduga merupakan  senyawa  alkaloid  tropane  dengan  gugus α , β asam  tak  jenuh  dan  isomernya.  Uji sitotoksik  menggunakan metode  BSLT  menunjukkan  bahwa  alkaloid total mempunyai harga LC 50 sebesar 132,590 ppm yang berarti alkaloid total bersifat tidak toksik.
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 15 (1) (2012) : 13 – 17

## 1. Pendahuluan
Ketapang ( Terminalia cattapa ) merupakan salah satu tumbuhan  dari  famili  combretaceae  yang  banyak digunakan  sebagai  obat  oleh  masyarakat  Indonesia. Secara  tradisional  daun  ketapang  digunakan  untuk mengobati  penyakit  kulit,  liver,  pernafasan,  perut, gonorrhea  dan  insomnia  [1].  Ekstrak  daun  dan  buah daunketapang  memiliki  aktivitas  anti  kanker,  anti  HIV, anti  diabetes,  memberikan  efek  anti  oksidan  serta memiliki aktivitas sebagai anti mikroba [2].
Kandungan  kimia  daun  ketapang  telah  banyak diketahui  antara  lain  senyawa  fitol,  asam  palmitat,  1- nonadekena  [3],  flavonoid,  alkaloid,  kaemferol, β - carotene, tanin, oktadekana dan saponin [4-6].
Alkaloid  merupakan  salah  satu  metabolit  sekunder yang  telah  banyak  diketahui  aktivitasnya  sebagai  obat, seperti  obat  analgetik,  obat  untuk  penyakit  radang (inflamasi)  serta  mempunyai  aktivitas  sebagai  anti tumor dan anti bakteri dan anti biotik serta anti malaria [7].
Akan  tetapi  jenis  alkaloid  dalam  daun  ketapang belum  pernah  dilaporkan  sebelumnya  maka  menarik untuk diselidiki jenis alkaloid dalam daun ketapang.

## 2. Metode Penelitian

## Alat dan Bahan
Peralatan  gelas  standar,  pipa  kapiler, chamber , spektrometer LC-MS, spektrofotometer UV-Vis (Shimadzu UV -1601),  spektrofotometer IR (Shimadzu Prestige-21), lampu detektor UV (Spectroline ENF-24/F), neraca  analitik  (Kern-870),  vakum rotary  evaporator (Buchi-B480. Daun  ketapang,  etanol,  n-heksan,  etil asetat, HCl p.a, NH 4 OH p.a, plat KLT silika gel (60 F 254 ), H 2 SO 4 p.a, pereaksi  Meyer, pereaksi  Dragendroff, kloroform  p.a,  benzena  p.a,  etil  asetat  p.a,  aquades, garam krosok, larva udang.

## Penyiapan Sampel
Sampel  penelitian  (daun  ketapang)  dibersihkan, dikeringkan  dengan  cara  diangin-anginkan  dan dihaluskan sehingga diperoleh serbuk daun ketapang.

## Pembuatan Ekstrak Etanol
Sebanyak 500 gram simplisia dimaserasi dengan n- heksan sampai bening. Filtrat dipisahkan dan residunya dikeringkan kemudian dimaserasi kembali menggunakan  etanol  hingga  bening.  Selanjutnya  filtrat diuapkan  menggunakan rotary  evaporator sehingga diperoleh ekstrak kental etanol.

## Uji Golongan Alkaloid
Simplisia  dan  ekstrak  etanol  daun  ketapang  diuji golongan alkaloidnya
menggunakan
pereaksi
Dragendorf dan  Meyer. Uji golongan  alkaloid dilakukan sesuai dengan metode yang telah dikemukakan oleh [8].

## Isolasi Alkaloid Total
Ekstrak etanol yang telah didapatkan, ditambahkan larutan  HCl  hingga  pH  3  kemudian  diekstraksi
menggunakan etil asetat. Hasil ekstraksi akan terbentuk 2  lapisan,  yaitu  lapisan  asam  dan  lapisan  etil  asetat. Kedua  lapisan  dipisahkan.  Selanjutnya  lapisan  asam ditambahkan NH 4 OH hingga pH 9 kemudian diekstraksi kembali  menggunakan  etil  asetat.  Hasil  ekstraksi  akan terbentuk  2  lapisan  yaitu  lapisan  basa  dan  lapisan  etil asetat,  kemudian  dipisahkan.  Lapisan  etil  asetat dipekatkan  menggunakan  rotary  evaporator  hingga mengental (alkaloid total).

## Pemisahan dengan KLT
Terhadap  alkaloid  total  yang  diperoleh  dilakukan KLT  dengan  pengembang  benzene:kloroform  (4:1) menggunakan plat silika gel 60GF 254 sehingga diperoleh noda – noda  isolat.  Selanjutnya  dilakukan  pemisahan menggunakan KLT preparatif.

## Karakterisasi Alkaloid
Isolat  alkaloid  dianalisis  melalui  spektroskopi menggunakan  spektrofotometer UV-Vis dan FTIR serta spektrometer LC-MS.

## Uji Sitotoksik
Telur Artemia salina , Leach ditetaskan selama 2 hari di dalam air laut buatan yang dibuat dari 38 gram garam krosok  yang  dilarutkan  pada  1000  mL  akuades.  Setelah larva  berusia  2  hari,  kemudian  dimasukkan  ke  dalam larutan  uji  dengan  konsentrasi  1000,  100  dan  10  ppm, setelah 24 jam dilakukan penghitungan larva yang mati. Uji  sitotoksik  dilakukan  3  kali  percobaan  untuk  setiap ekstrak dan sebagai kontrol berupa air garam dan tween. Untuk menentukan harga LC 50 digunakan analisis Probit melalui hubungan konsentrasi dengan persen kematian.

## 3. Hasil Dan Pembahasan
Ekstrak  etanol  yang  dihasilkan  berwarna  coklat sebanyak  17  gram.  Hasil  uji  golongan  dengan  pereaksi Dragendorf  dan  Meyer dkk. [9]  menunjukkan  bahwa ekstrak etanol mengandung alkaloid.
Ekstrak  etanol  dihidrolisis  dengan  HCl  2  M  hingga pH 3. Reaksi antara alkaloid dengan asam adalah [10]:
Hasil  reaksi  akan  membentuk  garam  alkaloid, sehingga  ketika  diekstraksi  menggunakan  etil  asetat senyawa  alkaloid  tidak  larut  dalam  fraksi  etil  asetat. Lapisan asam kemudian ditambahkan basa sampai pH 9, sehingga  terbentuk  basa  alkaloid  kembali.  Berikut merupakan reaksi antara alkaloid dengan basa [10]:
Alkaloid bebas ketika diekstraksi menggunakan etil asetat akan larut. Lapisan etil asetat diuapkan sehingga diperoleh  alkaloid  total,  selanjutnya  dilakukan identifikasi menggunakan KLT. Hasil KLT isolat alkaloid total ditampilkan pada gambar 1.
Gambar 1. KLT alkaloid total dengan pengembang kloroform:benzen (4:1)
Hasil KLT terlihat adanya 4 noda. Noda 1 mempunyai warna  yang  paling  dominan,  sehingga  dilakukan pemisahan  menggunakan  KLT  preparatif  dengan pengembang  kloroform:benzen  (4:1).  Hasil  isolat  KLT preparatif  dilakukan  KLT  kembali  menggunakan pengembang  kloroform:benzen  (5:1)  dan menghasilkan 2  noda  yaitu  noda  A 1 dan  A 2 ,  terhadap  kedua  noda kemudian  dilakukan  KLT  kembali  yang  ditampilkan ditampilkan pada gambar 2.
Gambar 2. KLT noda A 1 dan A 2
Hasil KLT menunjukkan Noda A 1 dan A 2 mempunyai 3 noda  yang  sama.  Noda  A 1.1 dan  A 2.1 mempunyai  warna yang lebih dominan, sehingga dilakukan KLT preparatif dengan  pengembang  kloroform:benzen  (5:3)  dan dianalisis  menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis  dan FTIR serta spektrometer LC-MS.
Analisis isolat alkaloid
menggunakan spektrofotometer UV-Vis dari kedua isolat (isolat A 1.1 dan A 2.1 ) ditampilkan pada gambar 3.
Gambar 3. Spektogram UV-Vis isolat A 1.1
(A) dan A 2.1 (B) Hasil analisis spektrofotometer UV-Vis
menunjukkan,  kedua  isolat  alkaloid  mempunyai λ max sebesar 220 nm dan bahu 260 nm (A 1.1 ) serta 262 nm (A 2.1 ). Menurut Humam dkk. [11], λ max 220 nm merupakan λ max dari  senyawa  alkaloid  tropan yang mengikat  gugus α , β asam tak jenuh.
Analisis  menggunakan  spektrofotometer  FTIR  dari kedua isolat disajikan pada gambar 4.
Gambar 4. Spektogram FTIR isolat A 1.1 (A) dan A 2.1 (B)
Hasil  spektogram  isolat  alkaloid  A 1.1 dan  A 2.1 menunjukkan  gugus-gugus  fungsi  dari  senyawa  yang ditampilkan pada tabel 1.
Tabel 1: Data interpretasi spektogram FTIR isolat A 1.1 dan
A 2.1
Bilangan Gelombang (cm -1 ) Jenis vibrasi 3441,01 dan 3425.68 Vibrasi ulur O-H 2924,09 Vibrasi ulur -C-H asimetri 2854,65 Vibrasi ulur -C-H simetri 1627,92 Vibrasi ulur C=O 1381,03 Vibrasi ulur –C-H alifatik bending 1103,28 Vibrasi ulur C-N yang simetri dengan vibrasi ulur C-O alkohol 794,67 Vibrasi ulur –C-H keluar bidang Hasil  LC-MS  menunjukkan  bahwa  isolat  A 1.1 mengndung  senyawa  dengan  berat  molekul  sebesar 338,34 g/mol [M+H] + dan 360,28 g/mol [M+Na] + . Isolat A 2.1 mempunyai bobot molekul 338,33 g/mol [M + H + ] dan 360,28 g/mol [M+Na] + . Berdasarkan
data spektrofotometer  UV-Vis,  FTIR dan  LC-MS diketahui bahwa  isolat  A 1.1 dan  isolat  A 2.1 merupakan  senyawa alkaloid tropan yang mengikat gugus α , β asam tak jenuh dan mempunyai gugus fungsi O-H, C=O, C-O, C-N, CH 2 dan  CH 3 .  Berat  molekul  dari  kedua  isolat  adalah  337,34 g/mol  dan  337,33  g/mol.  Analisis  menggunakan spektrometer  LC-MS  kedua  isolat  sitampilkan  pada gambar 5.
Gambar 5. Kromatogram dan spektogram LC-MS isolat A 1.1 (A) dan isolat A 2.1 (B)
Kerangka  dasar  dari  alkaloid  tropan  ditunjukkan pada gambar 6.
Gambar 6. Gambar kerangka dasar senyawa alkaloid tropane
Uji  sitotoksik  terhadap  isolat  alkaloid  total dilakukan  dengan  metode Brine  Shrimp  Lethlity  Test (BSLT) . Uji  tersebut menggunakan  larva Artemia salina Leach  yang  berumur  2  hari.  Pengamatan  pengujian adalah 24 jam setelah perlakuan. JumLah larva Artemia salina Leach  yang  mati  dihitung  dan  dicatat  untuk masing-masing  konsentrasi  larutan  uji  Berdasarkan hasil pengolahan data dengan Probit Analysis diperoleh harga LC 50 dari alkaloid total yaitu sebesar 132,590 ppm. Menurut Moshi dkk. [12] harga 30 ppm < LC 50 ≤ 100 ppm bersifat sedikit toksik, harga LC 50 >100 ppm bersifat tidak toksik. Oleh karena itu, dapat disimpulkan bahwa isolat alkaloid total bersifat tidak toksik.

## 4. Kesimpulan
Senyawa alkaloid dapat diisolasi dari daun ketapang berbentuk  serbuk  berwarna  putih.  Jenis  alkaloid  yang diperoleh adalah alkaloid tropan yang mengikat gugus α , β asam tak jenuh, mempunyai gugus fungsi O-H, C=O, C- O,  C-N,  CH 2 dan  CH 3 serta  berat  molekul  337,34 g/mol. Sedangkan  isomernya  mempunyai  gugus  fungsi  O-H, C=O, C-O, C-N, CH 2 dan CH 3 serta berat molekul 337,33 g/mol.  Hasil  uji  sitotoksik  terhadap  alkaloid  total  daun ketapang  mempunyai  harga  LC 50 sebesar  132,590  ppm yang berarti isolat alkaloid total bersifat tidak toksik.

## 5. Daftar Pustaka
[1]  Gilles  Pauly,  Cosmetic,  dermatological  and pharmaceutical  use  of  an  extract  of  Terminalia catappa, in, Google Patents, 2001.
[2] DS Mohale, AP Dewani, AV Chandewar, CD Khadse, AS Tripathi,  SS  Agrawal,  Brief  Review  on  Medicinal Potential  of  Terminalia  catappa, Journal  of  Herbal Medicine and Toxicology , 3, 1, (2009) 7-11
[3] Afni Restasari, Dewi Kusrini, Enny Fachriyah, Isolasi dan  identifikasi  Fraksi  Teraktif  dari  Ekstrak Kloroform  Daun  Ketapang  (Terminalia  catappa Linn),  Departemen  Kimia,  Universitas  Diponegoro, Semarang
[4]  Dwi  Sri  Rahayu,  Dewi  Kusrini,  Enny  Fachriyah, Penentuan Aktivitas Antioksidan dari Ekstrak Etanol Daun  Ketapang  (Terminalia  catappa  L)  dengan Metode  1,  1-Difenil-2-Pikrilhidrazil  (DPPH), Departemen Kimia, Universitas Diponegoro, Semarang [5]  Anindya  Dwi  Rosita,  Isolasi  Dan  Identifikasi Komponen-Komponen Senyawa Hidrokarbon
Dalam  Minyak  Atsiri  Daun  Ketapang  (Terminalia catappa  L),  Departemen  Kimia,  Universitas Diponegoro, Semarang
[6]  Ibok  Oduro,  C  Larbie,  TNE  Amoako,  AF  Antwi- Boasiako,  Proximate  composition  and  basic
phytochemical assessment of two common varieties of  Terminalia  catappa  (Indian  Almond), Journal  of Science  and  Technology  (Ghana) ,  29,  2,  (2009) http://dx.doi.org/10.4314/just.v29i2.46217
[7]  Anupam  Ghosh,  Bidus  Kanti  Das,  Arup  Roy,  Biplab Mandal,  Goutam  Chandra,  Antibacterial  activity  of some  medicinal  plant  extracts, Journal  of  natural medicines , 62, 2, (2008) 259-262 http://dx.doi.org/10.1007/s11418-007-0216-x
[8] Norman R. Farnsworth, Biological and phytochemical screening  of  plants, Journal  of  Pharmaceutical Sciences , 55, 3, (1966) 225-276 http://dx.doi.org/10.1002/jps.2600550302
[9] B. N. Meyer, N. R. Ferrigni, J. E. Putnam, L. B. Jacobsen, D.  E.  Nichols,  J.  L.  McLaughlin,  Brine  Shrimp:  A Convenient  General  Bioassay  for  Active  Plant Constituents, Planta  Med ,  45,  05,  (1982)  31-34 http://dx.doi.org/10.1055/s-2007-971236
[10]  RJ  Fessenden,  JS  Fessenden,  Kimia  Organik, diterjemahkan oleh Pudjaatmaka, AH, jilid , 1, (1994) 209-210
[11]  Munir  Humam,  Thomas  Kehrli,  Damien  Jeannerat, Orlando  Muñoz,  Kurt  Hostettmann,  Philippe Christen,  Schizanthines  N,  O,  and  P,  Tropane Alkaloids  From  The  Aerial  Parts  of  Schizanthus Tricolor, Journal of natural products , 74, 1, (2010) 50-
53
[12]  MJ  Moshi,  E  Innocent,  JJ  Magadula,  DF  Otieno,  A Weisheit,  PK  Mbabazi,  RSO  Nondo,  Brine  shrimp toxicity of some plants used as traditional medicines in Kagera region, north western Tanzania, Tanzania journal  of  health  research ,  12,  1,  (2010)  63-67 http://dx.doi.org/10.4314/thrb.v12i1.56287