## JIUBJ
Jurnal Ilmiah Universitas Batanghari Jambi, 21(3), Oktober 2021, 1455-1458 Lembaga Penelitian dan Pengabdian kepada Masyarakat Universitas Batanghari Jambi ISSN 1411-8939 (Online), ISSN 2549-4236 (Print) DOI 10.33087/jiubj.v21i3.1736

## Evaluasi Suplementasi Indigofera zollingeriana Sebagai Sumber
Green Protein concentrate terhadap Produksi Gas Metan,

## Amonia dan Sintesis Protein Mikroba Rumen
Afzalani Afzalani*, R.A. Muthalib, Rahmi Dianita, Fachroerrozi Hoesni, Raguati Raguati, Endri Musnandar
Fakultas Peternakan Universitas Jambi *Corresponding email: afzalani@unja.ac.id
Abstrak. Penggunaan sumber protein murah, berkualitas, menghasilkan emisi metan dan ammonia rendah merupakan persyaratan yang  perlu  dipertimbangkan  dalam  sistim  produksi  ternak  ruminansia.  Adanya  pelarangan  penggunaan  sumber  protein  yang berasal dari tepung ikan oleh Europe Commission, mendorong upaya eksplorasi sumber protein yang berasal dari tanaman untuk dapat  digunakan  sebagai  sumber  protein  konsentrat  yang  dikenal  dengan green  protein  concentrate. Tanaman Indigofera zollingeriana adalah  leguminosa  yang potensial untuk digunakan sebagai sumber pakan  yang memiliki kandungan protein tinggi yakni  sekitar  25-27%.  Namun  demikian,  perlu  dilakukan  evaluasi  mendalam  terkait  dengan  sifat  metabolismenya  di  rumen. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengevaluasi  tanaman Indigofera  zollingeriana (IZ) sebagai  sumber  suplemen green  protein concentrate terhadap  produksi  gas  metan,  ammonia  dan  sintesis  protein  mikroba.  Penelitian  ini  dilaksanakan  dalam  Rancangan Acak  Lengkap (RAL) terdiri dari 4 perlakuan dan 5 ulangan. Perlakuan suplementasi I. zollingeriana ( IZ ) sebagai sumber green protein concentrate disusun sebagai berikut : R0 = Pakan dasar (60% hijauan dan 40% konsentrat + 0% IZ, R1; R0 + 10% IZ, R2; R0  +  20%  IZ,  dan  R3;  R0  +  30%  IZ.  Hasil  penelitian  mununjukkan  bahwa  suplementasi  IZ  nyata  (P<0.05)  meningkatkan produksi gas total, ammonia (N-NH 3 ), total volatile fatty acid (TVFA), metabolism energy (ME) serta berpengaruh nyata (P<0.05) menurunkan  gas  metan  dan  persentase  gas  metan.  Sedangkan  perlakuan  R1  nyata  (P<0.05)  lebih  tinggi  dalam  menghasilkan KcBK,  KcBO,  dan  produksi  protein  mikroba  (PPM).  Dari  hasil  penelitian  dapat  disimpulkan  bahwa  sifat  protein  IZ  memiliki ketahan  yang rendah terhadap perombakan  mikroba rumen, relatif rendah dalam  menurunkan produksi gas  metan. Suplementasi IZ sampai taraf 10% (R1) menghasilkan KcBK, KcBO dan PPM lebih tinggi. Perlu upaya proteksi protein asal IZ guna menekan perombakannya oleh mikroba di rumen.
Kata kunci: Amonia; Gas metan; Indigofera zollingeriana ; Protein mikroba; Suplementasi
Abstract.  The  use  of  protein  with  low-cost,  high  quality,  low  methane,  and  ammonia  emissions  are  a  prerequisite  as  a  protein source in  ruminant.  However,  the European  Commission  has  prohibited  protein derived from  fish meals for ruminant feeds.  So encouraging efforts to explore the other protein sources to be most important. Most of the high protein legumes grow in tropical areas  such  as  Indonesia  and  have  the  potential  as  an  alternative  protein  source  in  ruminant  feed,  including  Indigofera zollingeriana (25-27%  protein content).  But many browse legumes  with  high  protein are  a heterogeneous  group of plants,  with variable  secondary  metabolic  content  and  rumen  degradable  protein.  The  aim  of  this  experiment  was  to  evaluate  the characteristics fermentation of IZ as green protein supplement on in vitro methane, ammonia and microbial protein production. The experiment was a completely randomized design with four different level supplementation of Indigofera zollengeriana (IZ) as green protein concentrate and five replications. The treatment diets were R0; basal diet (60% forage + 40% concentrate) + 0% IZ, R1; R0 + 10% IZ, R2; R0 + 20% IZ, and R3; R0 + 30% IZ. The experiment result showed that supplemenatation of IZ was significant effects (P<0.05)  to increase  total  gas,  ammonia  (N-NH 3 ),  total  volatile fatty acid  (TVFA), and metabolizable energy (ME) and significant effect (P<0.05) to decrease of methane and methane percentage. Supplementation IZ at a level of 10% was significantly  higher  for  dry  matter  digestibility  (DMD),  organic  matter  digestibility  (OMD),  and  microbial  protein  production (PPM) than diets treatment of R0, R2, and R3. The experiment concluded that Supplementation of I. zollingeriana (IZ) was able to reduce the methane gas production. Protein characteristics of IZ have easily degradable by rumen microbe showed the ammonia production was linearly increasing by 45.66% for each increasing level of IZ supplementation. Microbial protein production was higher  (184.33  mg/ml)  obtained  of  IZ  supplementation  up  to  10%  (R1).  The  experiment  suggests  doing  protected  protein  of  IZ when be used as a protein source in ruminant diets.
Keywords: Ammonia; Methane, Indigofera zollingeriana; Microbial protein; Supplementation

## PENDAHULUAN
Ternak  ruminansia  memiliki  kemampuan  untuk mengkonversikan  bahan  pakan  yang  sedikit  atau  tidak bernilai  sama  sekali  bagi  manusia,  menjadi  bahan pangan  yang  berkualitas  tinggi  seperti  daging  dan  susu untuk  memenuhi  kebutuhan  nutrisi  bagi  manusia ( Broderick,  2017) .  Komposisi  asam  amino  esensial  dari
daging  dan  susu  yang  yang  diproduksi  dari  ternak ruminansia, menjadikan  sumber protein tersebut sebagai tambahan  yang  berharga  untuk  suplai  pangan  manusia. Diperkirakan  akan  ada  peningkatan  permintaan  protein ruminansia  di  masa  depan.  Peningkatan  kemampuan produktifitas  per  ekor  ternak  melalui  penggunaan sumber  protein  murah  dan  berkualitas  akan  dapat
Afzalani Afzalani et al., Evaluasi Suplementasi Indigofera zollingeriana Sebagai Sumber Green Protein concentrate Terhadap Produksi Gas Metan, Amonia dan Sintesis Protein Mikroba Rumen
menurunkan  biaya  serta  gangguan  lingkungan  selama proses  pemeliharaan  ternak  hingga  berproduksi  (daging atau susu).
Protein  bahan  pakan  pada  ternak  ruminansia dikelompokkan  dalam  dua  bagian  yakni,  protein  yang didegradasi di rumen ( rumen degradable protein = RDP) dan  protein  yang  tidak  didegradasi  di  rumen  ( rumen undegradable  protein =  RUP), dimana  RDP  terdiri  dari nitrogen  bukan  protein  (NPN)  dan  nitrogen  protein. Ketika  protein  pakan  perombakannya  berlebihan, akibatnya  efisiensi  pemanfaatannya  untuk  produksi menurun  tajam  dan  sejumlah  besar  hilang  sebagai  N- feses,  urin,  dan  gas  N  yang  dapat  menyebabkan  efek negatif terhadap lingkungan. Disamping itu menyebabkan  meningkatnya  biaya  dan  efisiensi  protein yang rendah (Bach dkk., 2005; Ružić-Muslić, 2014).
Pada  saat  ini Europe  commission telah  melarang penggunaan  tepung  ikan  dalam  makanan  untuk  ternak sebagai  sumber  protein,  sehinga  banyak  penelitian  telah difokuskan  pada  mempelajari  efek  dari  penggunaan kedelai, bunga matahari dan sumber protein " unconventional " seperti sumber protein yang bersal dari tanaman  pakan  seperti  legume  pohon  sebagai  sumber green  protein  concentrate dalam  makanan  untuk  nutrisi ruminansia. (Ružić-Muslić, 2014). Indigofera zollingeriana merupakan  salah  satu  legum  yang potensial  untuk  pakan  ternak  karena  berkualitas  tinggi dan  toleran  terhadap  beragam  kondisi  lingkungan. Disamping itu tanaman ini memeiliki kandungan protein yang  cukup  tinggi  yakni  berkisar  25.17  –  26.44% meskipun  ditanam  dengan  kerapatan  tanaman  yang berbeda (Kumalasari dkk., 2017) . Produksi dan kualitas I. zollingeriana terlihat lebih tinggi dibandingkan legum lainnya,  sehingga  termasuk  legum  yang  mempunyai prospek  tinggi  untuk  dikembangkan  sebagai  komoditi industri  konsentrat  protein  hijau  (Abdullah,  2014). Tanaman  ini  juga  adaftif  dikembangkan  di  Indonesia karena  sifatnya  yang  toleran  terhadap  musim  kering, tahan  genangan  air  serta  tahan  terhadap  salinitas  tanah. Selain  itu  tanaman  ini  memiliki  pertumbuhan  yang sangat  cepat,  adaptif  terhadap  tingkat  kesuburan  tanah rendah  dan  mudah  dalam  pemeliharaannya  (Kumalasari dkk., 2017).
Penelitian  ini  berfokus  pada  evaluasi  penggunaan I. zollingeriana sumber green protein concentrate untuk pakan ternak ruminansia.

## METODE Persiapan Sampel dan Pakan Penelitian
Sampel I.  zollingeriana dan  hijauan  rumput kolonjono  ( Brachearia  mutica )  dipanen  dari  kebun percobaan  Fakultas  Peternakan  Universitas  Jambi. Sampel  dikeringkan  pada  panas  matahari,  kemudian dilanjutkan  pengeringan  menggunakan  oven  suhu  60 o C selama  24  jam  dan  digiling  dengan  ukuran  saringan  1 mm  sebelum  digunakan  dalam  campuran  pakan penelitian serta inkubasi in vitro .
Pakan  penelitian  yang  digunakan  sebagai  pakan dasar  disusun  dengan  rasio  hijauan  konsentrat  60:40%, dengan  kandungan  protein  14%  dan  TDN  65%. Konsentrat  diformulasi  menggunakan  dedak  58%, jagung  giling  25%,  bungkil  kedele  6%,  bungkil  kelapa 9%,  mineral  mix  1%  dan  garam  1%.  Hijauan  yang digunakan yakni rumput kolonjono ( Brachiaria mutica ). Komposisi  kimia  hijauan,  konsentrat, I.  Zollingeriana dan ransum percobaan tercantum pada Tabel 1 dan Tabel 2.
Empat  jenis  pakan  percobaan  yang  digunakan dalam  penelitian  terdari  R0=  60%  Hijauan  +40% konsentrat+ 0% I. zollingeriana (IZ), R1= R0 + 10% IZ, R2= R0 + 20% IZ dan R3= R0 + 30% IZ.

## Prosedur Inkubasi In Vitro
Cairan  rumen  diambil  dari  rumah  potong  hewan dari 2 ekor ternak sapi Bali jantan sebagai donor. Ternak sapi sebelum dipotong diberi pakan 2 kali sehari dengan pakan  yang  mengandung  hijauan  konsentrat  60:40%, berlangsung  selama  3  hari  sebelum  dipotong.  Koleksi cairan  rumen dilakukan berdasarkan prosedur Bioscreen Technologies (2015) .
Cairan  rumen  dimasukkan  ke  dalam  botol  plastik dan  di  tempatkan  dalam ice  box yang  berisi  air  hangat suhu  39-40 o C,  dibawa  kelaboratorium,  disaring  dengan menggunakan  4  lapis  kain  dan  dicampur  dengan  buffer McDougall  (1:4  v/v)  sesuai  prosedur  Tilley  dan  Terry (1963).
Sebanyak  2000  ml  larutan  campuran  anatara cairan  rumen  dan  McDougall  dimasukkan  ke  dalam botol  gelap  kapasitas  2500  ml,  dialiri  dengan  gas  CO 2 dan  selanjutnya  dipasang automatic  dispenser  pipette . Ditimbang sejumlah 500 mg pakan penelitian, masukkan dalam  botol  serum  kapasitas  100  ml,  dimasukkan  ke dalam  oven  suhu  39 o C  selama  semalam,  dan  kemudian masukkan  sebanyak  40  ml  larutan  campuran  cairan rumen-buffer,  ditutup  dengan  karet  penutup  dan  dijepit menggunakan alumunium seal cup.
Sebanyak  43  botol  serum  yang  terdiri  dari  4 perlakuan,  5  ulangan  dan  masing-masing  berisi  2  unit penelitian  serta  3  larutan  blanko  (cairan  rumen-buffer) diinkubasikan  dalam  inkubator  suhu  39 o C  selama  48 jam. Setiap botol serum diinjeksi dengan syringe melalui karet penutup untuk mengeluarkan gas sebagai titik awal dimulainya inkubasi.
Produksi  gas  diukur  secara  manual  pada  waktu inkubasi  3,  6,  9,  12,  24  dan  48  jam  dengan menginjeksikan jarum menggunakan gelas syringe 10 ml ( Fortune ® ) dengan melihat pergerakan piston pada skala dari glass syringe dan dicatat sebagai produksi gas yang yang  dihasilkan.  Gas  yang  diperoleh  selanjutnya digunakan untuk mengukur produksi gas metan.
Produksi  gas  metan  diukur  menggunakan  metode yang dimodifikasi dari Fieves dkk. (2005). Syringe yang berisi gas dimasukkan melalui saluran in-let gas washing glass (Duran TM )  yang  berisi  larutan  NaOH  4  M  guna
Afzalani Afzalani et al., Evaluasi Suplementasi Indigofera zollingeriana Sebagai Sumber Green Protein concentrate Terhadap Produksi Gas Metan, Amonia dan Sintesis Protein Mikroba Rumen
menyerap  CO 2 ,  dan  pada  saluran out-let dipasang dengan  gelas  syringe  yang  lain  untuk  mengukur  gas metan.  Total  produksi  gas  (TG)  dan  gas  metan  dihitung setelah dikoreksi dengan balnko.
Konsentrasi  metan  (CH 4 )  dan  potensi  reduksinya gas  metan  (PRM)  dihitung  dengan  menggunakan persamaan berikut :
CH 4 (%) =
PRM (%)=
Kandungan  energy  metabolis  (ME,  MJ/kg  DM) dihitung  dengan  menggunakan  persamaan  Menke  and Steingass  (1988),  dan  total volatile  fatty  acid (TVFA) menggunakan persamaan Getachew dkk. (2008) sebagai berikut;
ME (MJ/kg DM) = 2.2 + 0.136 x GP 24 + 0.057 CP + 0.0029 CP2 TVFA (µmol L -1 ) = 0.0239 GP 24 – 0.00425
Dimana, CP dan GP adalah persentase protein kasar dan produksi gas pada 24 jam inkubasi. Sedangkan produksi protein  mikroba  dihitung  berdasarkan  Blummel  dkk. (1997) yakni;
Produksi protein mikroba (PPM) (mg/g BK) = mg KcBK- (ml gas/24 jam x 2.2 mg/ml), dimana 2.2 mg/ml adalah faktor stokiometri yang menggambarkan mg dari C,  H  dan  O  yang  dibutuhkan  untuk  memproduksi  VFA yang dihubungkan dalam produksi 1 ml gas.
Tabel 1 . Komposisi kimia hijauan, konsentrat, I zolingeriana dan ransum dasar
Tabel 2 . Komposisi kimia pakan penelitian

## Kecernaan Bahan Kering dan Bahan Organik
Pada  akhir  inkubasi  48  jam,  proses  fermentasi pakan penelitian dihentikan dengan ditetesi larutan HgCl jenuh  sebanyak  2  tetes,  disentrifugasi  dengan  kecepatan 3500  rpm  selama  15  menit  untuk  memisahkan  endapan pakan  dan  supernatannya.  Endapan  pakan  digunakan
untuk  mengukur  kecernaan  Bahan  Kering  (KcBK)  dan kecernaan  Bahan  Organik  (KcBO).  Sementara  itu supernatannya  digunakan  untuk  penetuan  konsentrasi ammonia.
Penentuan  KcBK  dan  KcBO  dilakukan  dengan menganalisis  kandungan  bahan  kering  dan  bahan organik  residu  sampel  setelah  48  jam  inkubasi.  KcBK dan KcBO dihitung dengan formula sebagai berikut:
Pengukuran Produksi Amonia (NH 3) Pengukuran  produksi  NH 3 menggunakan  metode Mikrodifusi conway (General  Laboratory  Procedure, 1966). Sebelum  digunakan,  bibir  cawan conway diolesi dengan  vaselin.  Sebanyak  1  ml  supernatan  diambil kemudian dimasukan pada salah satu sisi alur dari cawan conway .  Sedangkan  sisi  yang  lain  diisi  dengan  1  ml Na 2 CO 3 jenuh.  Antara  supernatan  dan  Na 2 CO 3 tidak boleh  bercampur.  Larutan  asam  borat  berindikator sebanyak  1  ml  ditempatkan  dalam  cawan  kecil  yang terletak  di  tengah  cawan conway ,  kemudian  cawan conway langsung  ditutup  rapat  hingga  kedap  udara. Kemudian  cawan conway digoyang-goyangkan  hingga supernatan  dan  NaCO 3 tercampur  rata,  disimpan  pada suhu  kamar  selama  24  jam.  Setelah  24  jam  asam  borat berindikator  dititrasi  dengan  H 2 SO 4 0,005  N  sampai terjadi perubahan warna dari biru menjadi merah. . Produksi ammonia dihitung dengan menggunakan persamaan sebagai berikut:

## Analisis Statistik
Penelitian  dilaksanakan  dalam  Rancangan  Acak Lengkap  (RAL)  yang  terdiri  dari  4  perlakuan  dan  5 ulangan. Masing-masing ulangan berisi 2 unit percobaan dan  3  blanko.  Analisis  ragam  (ANOVA)  dilakukan untuk  melihat  efek  perlakuan  terhadap  peubah  yang diukur.  Uji  Duncan  digunakan  untuk  mengidentifikasi perbedaan  rataan  dari  setiap  perlakuan,  menggunakan tingkat  kepercayaa  P<0.05.  Untuk  mengestimasi  jumlah IZ  yang  digunakan  sebagai  suplemen  protein  dalam pakan  dilihat  dengan  uji  polynomial  orthogonal menggunakan  aplikasi  exel.  Sedangkan  rataan standar error of mean (SEM) dihitung dari rerata kuadrat tengah galat.  Analisis  statistik  menggunakan  program  SPSS versi 17.
Afzalani Afzalani et al., Evaluasi Suplementasi Indigofera zollingeriana Sebagai Sumber Green Protein concentrate Terhadap Produksi Gas Metan, Amonia dan Sintesis Protein Mikroba Rumen

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Produksi Gas dan Gas Metan
Tabel 3 . Efek suplementasi I. zolingeriana (IZ) dalam pakan terhadap produksi gas total, gas metan dan persentase gas metan di rumen
SEM: standard error of mean, P: probability Superskrip  a-d  berbeda  pada  baris  yang  sama  berbeda (P<0.05)
Hasil pengukuran efek suplementasi I. zolingeriana dalam pakan terhadap produksi gas dan gas metan  seperti  tercantum  pada  Tabel  3.  Pada  Tabel  3 terlihat bahwa perlakuan suplementasi IZ sampai dengan taraf  30%  (R3)  nyata  (P<0.05)  berpengaruh  terhadap produksi gas total, gas metan dan persentase  gas metan. Produksi  gas  total  meningkat  (P<0.05)  dengan  semakin meningkatnya  taraf  suplementasi  IZ  dalam  pakan. Peningkatan ini mengindikasikan bahwa suplementasi IZ mampu  memperbaiki  fermentabilitas  dari  pakan. Disamping  itu,  IZ  memiliki  kualitas  yang  lebih  baik dibandingkan  pakan  dasar  (R0,  Tabel  1).  Namun demikian  terlihat  bahwa  produksi  gas  metan  dan persentase  gas  metan  mengalami  penurunan  dengan meningkatnya  taraf  suplementasi  IZ  dalam  pakan,
Persentase  gas  metan  mengalami  penurunan  sebesar 0.67,  5.19  dan  9.99%  masing-masing  untuk  perlakuan R1,  R2  dan  R3,  dibandingkan  dengan  R0  (kontrol). Penurunan  persentase  gas  metan  yang  diperoleh  dalam penelitian  ini  relatif  rendah  dibandingkan  dengan  yang dilaporkan  Denek  dkk.  (2017),  dimana  suplementasi pistachio  by  product yang  mengandung  8%  tannin kondensasi  mampu  menurunkan  produksi  metan  30%. Rendahnya  penurunan  persentase  gas  metan  yang diperoleh  dalam  penelitian  ini  disebabkan  karena rendahnya kandungan tannin pada IZ yakni sekitar 0.09- 0.65%  (Abdullah,  2010).  Lebih  lanjut  Hariadi  dan Santoso (2010) melaporkan bahwa produksi metan akan menurun  dengan  semakin  meningkatnya  kandungan tannin pada tanaman.

## Kecernaan Pakan dan Produk Metabolik Rumen
Kecernaan pakan yang diukur dalam penelitian ini meliputi  nilai  Kecernaan  Bahan  Kering  (KcBK)  dan Kecernaan  Bahan  Organik  (KcBO).  Sedangkan  produk metabolik  rumen  yang  diukur  terdiri  dari  nilai  pH, konsentrasi ammonia (N-NH 3 ) rumen, total volatile fatty acid (TVFA).  energy  metabolism  (ME),  dan  produksi protein  mikroba  (PPM).  Data  hasil  pengukuran kecernaan  pakan  dan  produk  metabolik  rumen  dapat dilihat pada Tabel 4.
Tabel 4 . Efek suplementasi I. zollingeriana (IZ) dalam pakan terhadap KcBK, KcBO dan produk metabolik rumen Parameter R0 R1 R2 R3 SEM P KcBK, % 50.00 b 69.06 a
47.49 bc 43.95 c 1.60 <0.001 KcBO, % 54.39 b 73.89 a
53.46 b 53.85 b 1.18 <0.001 pH 7 . 35 a . 7.04 b 6.71 c 7.20 ab 0.07 <0.001 N-NH 3 , mg/dl 9.86 a 15.37 b 18.70 b 23.97 c 1.14 <0.001 TVFA, µmol/l, 0.98 d 1.24 c 1.32 b 1.42 a 0.02 <0.001 ME, MJ/kg BK 8.13 d 9.59 c 10.08 b 10.63 a 0.12 <0.001 PPM, mg/g 154.13 b 225.83 a 110.09 c 83.53 d 7.46 <0.001
SEM:  standard  error  of  mean,  P:  probability,  KcBK  :  Kecernaan  bahan  kering,  KcBO:  Kecernaan  bahan  organik,  N-NH 3 :  N- amonia, TVFA: Total volatile fatty acid, ME: Metabolisme energy, PPM: Produksi protein mikroba. Superskrip a-d berbeda pada baris yang sama berbeda (P<0.05)
Nilai  KcBK  dan  KcBO  (Tabel  4)  yang  diperoleh nyata  P<0.05)  dipengaruhi  oleh  taraf  suplementasi  IZ dalam pakan. Nilai KcBK dan KcBO tertinggi diperoleh pada taraf suplementasi IZ sebesar 10% (R1) nyata lebih tinggi  dibandingkan  perlakuan  R0,  R2  dan  R3., peningkatan  taraf  suplementasi  IZ  di  atas  10% cenderung  menyebabkan  penurunan  nilai  KcBK  dan KcBO.  Hal  ini  terjadi  diakibatkan  oleh  karena  adanya peran  metabolik  sekunder  yang  terdapat  pada  IZ, terutama tannin. Semakin tinggi jumlah suplementasi IZ yang  diberikan  menyebabkan  terjadinya  peningkatan konsentrasi  tannin.  Besarnya  pengaruh  tannin  terhadap KcBK  dan  KcBO  merupakan  suatu  fungsi  dari  dosis, jenis  tannin  dan  bobot  molekul  (Getachew  dkk.,  2008). Pada  konsentrasi  tinggi,  tanin  dapat  mengurangi konsumsi  ransum  dikarenakan  rasanya  yang astringent
serta  menurunkan  kecernaan  (Mueller-Harvey  2006). Namun demikian, nilai KcBK dan KcBO yang diperoleh masih  berada  penilaian  kualiatas  pakan  yang  baik, sehingga  suplementasi  IZ  sampai  30%  (R3)  belum mengganggu  kecernaan  zat  makanan  meski  kandungan tanin yang diberikan meningkat. Hasil penelitian Cieslak dkk.  (2016),  dimana  penggunaan  ekstrak  tannin  dari Sanguisorba  officinale (SOTE)  sampai  40  mg  tidak menyebabkan efek negatif terhadap kecernaan. Sementara  itu  kadar  tanin  pada  penelitian  ini  berkisar antara  0.3  –  1.95  g/kg.  Tanin  mempunyai  efek  biologis baik  yang  bersifat  positif  maupun  negatif  tergantung pada  konsentrasi  serta  sumber,  tergantung  pada konsentrasi serta sumber tana-mannya (Makkar, 2003).
Pengukuran  kondisi  pH  rumen  penting  dilakukan karena kondisi pH berperan penting dalam
Afzalani Afzalani et al., Evaluasi Suplementasi Indigofera zollingeriana Sebagai Sumber Green Protein concentrate Terhadap Produksi Gas Metan, Amonia dan Sintesis Protein Mikroba Rumen
mempengaruhi aktifitas mikroba dalam proses pencernaan  pakan.  Nilai  pH  berada  di  bawah  6.2 berpengaruh  negatif  pada  kecernaan  fraksi  serat, sementara  nilai  pH  dibawah  5.5  akan  berdampak terhadap kejadian rumen asidosis, menurunkan konsumsi dan  bahkan  pada  kondisi  ekstrim  ternak  tidak  mau makan ( off feed ) serta dapat menyebabkan problem yang serius.  Oleh  karena  itu  penting  untuk  menjaga keseimbangan pH dan populasi mikroba rumen. Nilai pH dapat  bervariasi  sekitar  5.5-7.5  tergantung  pada  tipe pakan  dan  frekuensi  pemberian  pakan  (Franzolin  dan Dehority, 2010). Hasil pengukuran efek suplementasi IZ nyata (P<0.05) mempengaruhi nilai pH rumen. Nilai pH rumen  yang  diperoleh  bervariasi  antara  6.71-7.35.  Nilai pH  yang  diperoleh  masih  berada  batas  pH  yang  ideal untuk aktifitas mikroba di rumen (Van Soest, 1994), dan di  atas  6.0  yang  dibutuhkan  untuk  sintesis  protein mikroba (Russell dkk., 1992).. Jadi efek suplementasi IZ sampai  dengan  taraf  30%  (R3)  tidak  berdampak  negatif pada kondisi pH rumen.
Pengukuran konsentrasi N-NH 3 penting dilakukan pada  ternak  ruminansia  guna  mengevaluasi  kualitas pakan  sumber  protein  yang  diberikan.  Semakin  tinggi jumlah  N-NH 3 yang  terbentuk  di  rumen,  menunjukkan bahwa semakin tingginya protein pakan yang didegradasi  oleh  mikroba  rumen  serta  dapat  digunakan sebagai  indicator  rendahnya  efisiensi  sumber  protein. Hasil  pengukuran  efek  taraf  suplementasi  IZ  sebagai sumber protein, nyata (P<0.05) meningkatkan konsentrasi  N-NH 3 (Tabel  4).  Konsentrasi  N-NH 3 yang diperoleh bervariasi 9.86-23.97 mg/dl. Nilai ini berada di atas  ambang  yang  dibutuhkan  oleh  mikroba  rumen. Menurut  Satter  dan  Slyter  (1974),  konsentrasi  N-NH 3 sebesar  5  mg/dl  sudah  cukup  untuk  mendukung pertumbuhan  mikroba  yang  optimal  untuk  membantu proses  pencernaan  pakan.  Gambaran  hubungan  taraf suplementasi  IZ  dengan  konsentrasi  N-NH 3 tercantum pada Gambar 1.
Pada  Gambar  1,  terlihat  bahwa  semakin  tinggi taraf  suplementasi  IZ  konsentrasi  N-NH 3 semakin meningkat.  Kondisi  ini  menunjukkan  bahwa  kandungan protein  dari  IZ  yang  tinggi  (28.12%)  berperan  dalam meningkatkan konsentrasi N-NH 3 . Tingginya konsentrasi  N-NH 3 menunjukkan  bahwa  IZ  sebagai sumber  protein,  memiliki  sifat  ketahan  protein  yang rendah  terhadap  degradasi  oleh  mikroba  rumen.  Pada gambar  1  di  atas  terlihat  bahwa  peningkatan  taraf suplementasi IZ akan akan meningkatkan konsentrasi N- NH 3 sebesar  0,4566  mg/dl  (45.66%)  untuk  setiap peningkatan  taraf  suplementasi  IZ.  Peningkatan  ini disebabkan  karena  mikroba  rumen  cenderung  untuk merombak  protein  menjadi  ammonia,  selanjutnya ammonia  akan  digunakan  untuk  produksi  masa  sel mikroba.  Namun  demikian  tidak  semua  N-NH 3 yang terbentuk  digunakan  oleh  mikroba,  sebagian  akan  di ekskresikan  melalui  urin  dan  feses  yang  berkontribusi sebagai  polutan  pada  air,  emisi  gas  N  serta  sejumlah kecil  partikel  yang  terbentuk  di  atmosfer  (Kulling  dkk., 2003; Hristov, 2011; Hristov dkk., 2011; Cameron dkk., 2013). Bahan pakan sumber protein yang bersifat seperti di  atas,  meskipun  memiliki  kandungan  protein  yang tinggi,  namun  tidak  dapat  digolongkan  pada  sumber protein yang berkualitas untuk ternak ruminansia. Ketika protein  pakan  perombakannya  berlebihan,  akibatnya efisiensi pemanfaatannya untuk produksi menurun tajam dan sejumlah besar hilang sebagai N-feses, urin, dan gas N  yang  dapat  menyebabkan  efek  negatif  terhadap lingkungan.  Disamping  itu  menyebabkan  meningkatnya biaya  dan  efisiensi  protein  yang  rendah (Bach  dkk., 2005; Ružić-Muslić, 2014).
Efek  peningkatan  taraf  suplementasi  IZ  nyata (P<0.05)  meningkatkan  TVFA  dan  ME  (Tabel  4).  Hal ini menunjukkan bahwa IZ memiliki nilai fermentabilitas  yang  lebih  baik.  Produksi  TVFA berkorelasi  positif  dengan  nilai  ME.  Hal  ini  disebabkan karena TVFA  berkontribusi  sebesar  65-75%  terhadap ME  yang  dihasilkan  (Penner  dkk.,  2009).  Produksi  gas fermentasi  secara  kualitatif  dan  kuantitatif  merupakan hasil  dari  produksi  TVFA.  Hasil  ini  semakin  jelas mengkonfirmasi  keberadaan  tannin  pada  IZ  tidak menyebabkan  efek  negatif  terhadap  fermentabilitas, bahkan  memperlihatkan  sumbangannya  yang  besar terhadap ketersedia energy pada ternak ruminansia.
Protein  mikroba  rumen  merupakan  sumber  utama asam  amino  dan  berkontribusi  sekitar  dua  pertiga  dari asam  amino  yang  diabsorbsi  oleh  ternak  ruminansia (Pathak, 2008). Hasil pengukuran efek taraf suplementasi  IZ  sebagai  sumber  protein  nyata  (P<0.05) berpengaruh  terhadap  produksi  protein  mikroba  (PPM) (Tabel  4).  Hubungan  taraf  suplementasi  IZ  terhadap produksi  protein  mikroba  seperti  tercantum  pada Gambar 2.
Afzalani Afzalani et al., Evaluasi Suplementasi Indigofera zollingeriana Sebagai Sumber Green Protein concentrate Terhadap Produksi Gas Metan, Amonia dan Sintesis Protein Mikroba Rumen
Gambar 2 . Hubungan taraf suplementasi I. zolingeriana

## terhadap produksi protein mikroba
Pada  Gambar  2  di  atas,  terlihat  bahwa  produksi protein  mikroba  optimal  terjadi  pada  suplementasi  IZ taraf  10%  (R1).  Hal  ini  erat  kaitannya  dengan  jumlah bahan  organik  yang  dicerna.  Dimana  pada  taraf suplementasi  IZ  sebesar  10%,  jumlah  bahan  organik yang  dicerna  sebesar  73.89%  lebih  tinggi  dibandingkan dengan perlakuan R0, R2 dan R3 masing-masing sebesar 54.39,  53.46  dan  53.85%.  Pathak  (2008),  menyatakan terdapat  hubungan  yang  erat  antara  bahan  organik  (BO) yang  dicerna  dengan  sintesis  protein  mikroba,  dimana efisiensi  sintesis  protein  mikroba  meningkat  dengan meningkatnya ketersediaan bahan organik  yang dicerna. Meskipun  suplementasi  IZ  menyebabkan  peningkatan secara  linier  konsentrasi  N-NH 3 ,  namun  tidak  linier menyebabkan  peningkatan  sintesis  protein  mikroba akibat tidak cukup disuplai dari BO yang dicernaan. Hal ini  memperkuat  asumsi  bahwa  kelebihan  produksi  N- NH 3 tidak  memberikan  manfaat  yang  positif  untuk produksi  protein  mikroba,  bahkan  justru  dapat menurunkan  nilai  efisiensi  protein  karena  nitrogen  akan banyak  diekskresikan  melalui  urin  dan  feses.  Fungsi utama  metabolism  karbohidrat  oleh  mikroba  rumen adalah  untuk  menghasilkan  energy  bebas  dalam  bentuk ATP yang dibutuhkan untuk pertumbuhan mikroba. Pola dan  tingkat  metabolism  nitrogen  untuk  sintesis protein mikroba  sangat  tergantung  pada  ketersediaan  energi yang  dihasilkan  oleh  fermentasi  karbohidrat.  Rata-rata, 20  gram  protein  bakteri  disintesis  per  100  gram  bahan organik yang difermentasi dalam rumen (Harun dan Sali 2019).

## SIMPULAN
Suplementasi I. zolingeriana (IZ) mampu menurunkan  produksi  gas  metan  dan  persentase  gas metan. Karakteristik protein dari IZ tidak tahan terhadap perombakan  oleh  mikroba  rumen  yang  ditandai  dengan peningkatan  konsentrasi  N-NH 3 sebesar  45.66%  untuk setiap  peningkatan  taraf  suplementasi.  Produksi  protein mikroba  optimal  diperoleh  pada  taraf  suplementasi  IZ 10%  (R1)  yakni  sebesar  184.33  mg/ml.  Perlu  upaya proteksi  protein  dilakukan,  jika  IZ  sebagai  bahan  pakan
sumber protein hijau akan digunakan dalam pakan ternak ruminansia.

## DAFTAR PUSTAKA
Abdullah, L. 2014. Prospektif agronomi dan ekofisiologi indigofera zollingeriana sebagai tanaman penghasil  hijauan  pakan  berkualitas  tinggi. Pastura. 3 (2) : 79 – 83.
Abdullah,  L.,  2010.  Herbage  production  and  quality  of shrub Indigofera treated by different concentration of foliar fertiliser. Med. Pet. 33 (3): 169–175.
Bach,  A.,  S.  Calsamiglia,  and  M.  D.  Stern.  2005.
Nitrogen  Metabolism  in  the  Rumen.  J.  J.  Dairy Sci. 88:(E. Suppl.):E9–E21.
Bioscreen  Technologies.  2015.  Bioscreen  technologies research  laboratories  -  artificial  rumen  by-pass analysis  of  rumen  protected  feed  additives. https://www.youtube.com/watch?v=AAT63sytI0 w .
Broderick,  G.A.  2017.  Optimizing  ruminant  conversion of feed protein to human food protein. Animal, 12 (8): 1722–1734
Cameron, K. C., H. J. Di, and J. L. Moir. 2013. Nitrogen losses from the soil/plant system:  A review.  Ann. Appl. Biol. 162:145–173.
Cieslak, A., P. Zmora, A. Matkowski, I. Nawrot-Hadzik, E.  Pers-Kamczyc,  M.  El-Sherbiny1,  M.  Bryszak1 and  M.  Szumacher-Strabel.  (2016).  Tannins  from Sanguisorba  officinalis affect  in  vitro  rumen Methane  production  and  fermentation.  The  J.  of Anim. & Plant Sci. 26(1): 54-62.
Denek,  N.,  S.S.  Aydin,  A.  Can.  2017.  The  effects  of dried  pistachio  (Pistachio  vera  L.)  by-product addition  on  corn  silage  fermentation  and  in  vitro methane  production.  J  Appl  Anim  Res.  45:185– 189.
Fievez.  V.,  O.J.  Babayemi  and  D.  Demeyer,  D.  2005.
Estimation of direct and indirect gas production in syringe:  a  tool  estimate  short  chain  fatty  acid production  the  requires  minimal  laboratory facilities.  Animal  Feed  Science  and  Technology. 5(1):197-210.
Franzolin,  R.,  dan  B.A.  Dehority.  2010.  The  role  of  pH on  the  survival  of  rumen  protozoa  in  steers.  R. Bras. Zootec., 39 (10): 2262-2267.
General  Laboratory  Procedure.  1966.  Report  of  Dairy Science. University of Wisconsin Madison.USA. Getachew G., W. Pittroff, D.H. Putnam, A. Dandekar, S.
Goyal,  EJ.  DePeters.  2008.  The  influence  of addition  of  gallic  acid,  tannic  acid  or  quebracho tannins  to  alfalfa  hay  on  in  vitro  rumen fermentation  and  microbial  protein  synthesis. Anim Feed Sci Technol. 140:444–461.
Hariadi,  B.T.  and  Santoso,  B.  2010.  Evaluation  of tropical  plants  containing  tannin  on in  vitro methanogenesis  and  fermentation  parameters
y = -0,2457x 2 + 4,0941x + 167,96 R² = 0,6703
Afzalani Afzalani et al., Evaluasi Suplementasi Indigofera zollingeriana Sebagai Sumber Green Protein concentrate Terhadap Produksi Gas Metan, Amonia dan Sintesis Protein Mikroba Rumen
using rumen fluid. J. Sci. Food and Agric. 90 (3): 456-461.
Harun,  A.Y.  dan  K.  Sali.  2019.  Factors  affecting  rumen microbial  protein  synthesis:  A  review.  Vet  Med Open J. 4(1): 27-35.
Hristov,  A.  N.  2011.  Contribution  of  ammonia  emitted from  livestock  to  atmospheric  PM2.5  in  the United States. J. Dairy Sci. 94:3130–3136. Hristov,  A.  N.,  M.  Hanigan,  A.  Cole,  R.  Todd,  T.  A.
McAllister,  P.  M.  Ndegwa,  and  A.  Rotz.  2011.
Ammonia  emissions  from  dairy  farms  and  beef feedlots: A review. Can. J. Anim. Sci. 91:1–35. Kulling,  D.  R.,  H.  Menzi,  T.  F.  Krober,  A.  Neftel,  F.
Sutter,  P.  Lischer,  and  M.  Kreuzer.  2003. Ammonia,  nitrous  oxide  and  methane  emissions from differently stored dairy manure derived from grass-  and  hay-based  rations.  Nutrient  Cycling  in Agro-ecosystems 65: 13–22,
Kumalasari,  N.R.,  G.  P.  Wicaksono,  &  L.  Abdullah. 2017.  Plant  growth  pattern,  forage  yield,  and quality  of Indigofera  zollingeriana influenced  by row spacing. Media Peternakan. 40(1):14-19. Makkar, H.P.S. 2003. Effects and fate of tannins Ružić- Muslić,  D.,  M.P.  Petrović,  M.M.  Petrović,  Z. Bijelić,  V.  Caro-Petrović,  N.  Maksimović,  V. Mandić. 2014. Protein source in diets for ruminant nutrition.  J.  Biotechnology  in  Animal  Husbandry 30 (2), p 175-184.
Menke,  K.H.,  Steingass,  H.,  1988.  Estimation  of  the energetic  feed  value  obtained  from  chemical analysis  and  gas  production  using  rumen  ﬂuid. Anim. Res. Dev. 28, 7–55. Mueller-Harvey, I., 2006. Unravelling the conundrum of tannins  in  animal  nutrition  and  health.  Journal  of the  Science  of  Food  and  Agriculture  86,  2010- 2037.
Pathak,  A.K.  2008.  Various  factors  affecting  microbial protein  synthesis in  the rumen.  Review. Veterinary World, Vol.1(6): 186- 189 Penner  G.B.,  J.R.  Aschenbach,  G.  Gäbel,  R.  Rackwitz, and  M.Oba.  2009.  Epithelial  capacity  for  apical uptake  of  short  chain  fatty  acids  is  a  key determinant  for  intraruminal  pH  and  the susceptibility  to  subacute  ruminal  acidosis  in sheep. J. Nutr . 139 (9 ), 1714-1720.
Russell  J.B.,  J.D.  O’Connor,  D.G.  Fox,  P.J.  Van  Soest and  C.J.  Sniffen,  1992.  A  net  carbohydrate  and protein  system  for  evaluating  cattle  diets.  I. Ruminal fermentation. J Anim Sci 70 :3551–3561. Ružić-Muslić,  D.,  M.P.  Petrović,  M.M.  Petrović,  Z. Bijelić,  V.  Caro-Petrović,  N.  Maksimović,  V. Mandić. 2014. Protein source in diets for ruminant nutrition.  J.  Biotechnology  in  Animal  Husbandry 30 (2), p 175-184.
Satter,  L.D.  dan  L.  L.  Slyter.  1974.  Effect  of  ammonia concentration on rumen microbial protein
production in vitro . Brit. J. Nutr. 32:199-208.
Tilley,  J.M.A.  and  R..A.  Terry.  1963.  A  two-stage technique  for  the in  vitro digestion  of  forage crops. Grass Forage Sci. 18:104-111.
Van  Soest,  P.J.1994.  Nutritional  Ecology  of  the  Rumen (2 nd Ed). Comstock Publishing Associates, Ithaca, NY. p 476.