p-ISSN : 2528-3561 e-ISSN : 2541-1934
Identifikasi Bakteri Escherichia Coli Pada Es Kristal Di Rumah Makan Kecamatan Baiturrahman - Banda Aceh
Yuni Dewi Safrida 1 *, Thaharah 2
1,2 Akademi Analis Farmasi dan Makanan Banda Aceh * Koresponden email : yunidewi_safrida@yahoo.com Diterima: 4 Juni 2020 Disetujui: 16 Juni 2020

## Abstract
Water is the main component for producing crystal ice cubes, where the water used should fulfill the drinking water  criteria  that  was  not  allowed  to  contain Escherichia  coli .  This  research  was  conducted  at  the Microbiology  Laboratory,  AKAFARMA,  Banda  Aceh.  This  study  aimed  to  determine  the  presence  of contamination  of Escherichia  coli bacteria  contained  in  crystal  ice  cubes.  This  research  used  a  descriptive method. The results showed that the six samples of crystal ice cubes in the Baiturrahman District restaurant negatively  contained Escherichia  coli because  they  did  not  show  colors  that  match  the  characteristics  of Escherichia coli bacteria. Keywords : Banda Aceh, Baiturrahman, rumah makan, es kristal, Esherichia coli

## Abstrak
Air  merupakan  komponen  utama  pada  produksi  es  batu  kristal,  sehingga  air  yang  dipakai  harus  bersih, higienis,  dan  tidak  mengandung Escherichia  coli .  Penelitian  ini  dilakukan  di  Laboratorium  Mikrobiologi, AKAFARMA,  Banda  Aceh.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  keberadaan  cemaran  bakteri Escherichia  coli yang  terdapat  dalam  es  batu  kristal.  Penelitian  ini  menggunakan  metode  deskriptif.  Hasil penelitian  menunjukkan  bahwa  keenam  sampel  es  batu kristal  di  rumah  makan  Kecamatan  Baiturrahman negatif mengandung Escherichia coli karena tidak menunjukkan warna yang sesuai dengan sifat-sifat bakteri Escherichia coli . Kata Kunci : Banda Aceh, Baiturrahman, rumah makan, es kristal, Esherichia coli

## 1. Pendahuluan
Air yang dapat langsung diminum adalah air yang sesuai standar kesehatan. Adapun syarat air minum yang layak untuk diminum, yaitu jernih, tawar, bening, dan tidak berbau. Selain itu, air minum yang baik bagi kesehatan adalah yang tidak mengandung bakteri patogen dan mikroorganisme lainnya [1]. Menurut Ref. [2] untuk mengetahui kualitas air minum terhadap cemaran bakteri patogen dapat dilakukan melalui pemeriksaan terhadap sampel air tersebut.
Air  minum  untuk  sehari-hari  dapat  berasal  dari  berbagai  sumber,  yaitu  air  minum  kemasan  serta  air minum yang didistribusikan ke setiap rumah  melalui tangki air. Hal tersebut mengacu pada Permenkes No. 736 Tahun 2010. Air minum tersebut harus sesuai standar nilai baku mutu yang terdapat dalam Permenkes RI Nomor  492/PERMENKES/PER/IV/2010.  Indikator  mikrobiologi  merupakan  salah  satu  faktor  yang  ditinjau dalam penentuan nilai baku mutu kualitas air. Indikator tersebut menyebutkan bahwa APM ( Most Probable Number ) coliform yaitu  0 coliform /100  ml  air  dan  untuk  bakteri  patogen  seperti Escherichia  Coli yaitu  0 koloni/ml  air.  Oleh  karena  itu, jika  jumlah  bakteri  dalam  air  minum  melebihi  standar  nilai  baku  yang  telah ditetapkan, maka air tersebut tidak sehat untuk diminum.
Es  batu  adalah  massa  padat  yang  dihasilkan  dari  air  yang  dibekukan  dengan  suhu  dibawah  0ºC. Umumnya es batu digunakan sebagai komponen utama dalam pembuatan minuman dingin. Selain itu, es batu juga  dapat  digunakan  untuk  menjaga  ketahanan  dan  kesegaran  pangan.  Suhu  es  batu  yang  rendah  diduga dapat menghambat pertumbuhan mikroorganisme [3]. Jenis es batu yang sering digunakan oleh masyarakat di Banda Aceh adalah es batu kristal. Air merupakan bahan baku utama dalam produksi es batu kristal. Menurut Ref.  [4]  pada  proses  produksi  es  batu  harus  menggunakan  sumber  air  yang  bersih  yang  telah  memenuhi
p-ISSN : 2528-3561 e-ISSN : 2541-1934
standar kesehatan. Adapun sumber air utama yang digunakan oleh masyarakat dalam pembuatan es yaitu air PDAM, air sungai, air waduk dan air hujan.
Es kristal adalah es yang diproduksi menggunakan mesin dengan menghasilkan bentuk seperti kristal dan  merupakan  es  yang  sering  dikonsumsi  masyarakat  sebagai  produk  pelengkap  yang  ditambahkan  dalam minuman [5]. Proses pembuatan es kristal dilakukan menggunakan mesin es kristal, mesin penyimpan es, dan mesin  penyaring  air.  Langkah  pertama  pembuatan  es  kristal  adalah  dengan  memompa  air  dari  sumbernya, lalu  air tersebut  ditampung  dalam  wadah  penampungan,  kemudian  disaring  dengan  penyaring  air.  Air  yang berbentuk es kristal lalu dimasukkan kedalam kantong plastik. Pembuatan es kristal dengan mesin memiliki kapasitas produksi yaitu 1.500 kg/hari [6].
Ketentuan  mengenai  standar  kualitas  es  batu  mengacu  pada  SNI  01-3839-1995  yaitu  kualitas  dari  es batu  tersebut  harus  memenuhi  persyaratan  air  minum.  Indikator  dalam  mikrobiologi  yang  dijadikan  acuan untuk  menentukan  kualitas  es batu  agar  layak  untuk  diminum  adalah  tidak  boleh  terdapat coliform ataupun coliform  fecal di  dalam  100  ml  es  (MPN coliform / coliform  fecal =  0/100).  Hal  serupa  dengan  Keputusan Menteri  Kesehatan  RI907/MENKES/SK/VII/2002  mengenai  kualitas  air  minum,  bahwa  air  minum  tidak boleh mengandung coliform fecal (seperti; Escherichia coli ) dalam 100 ml air (MPN = 0/100 ml) [3]. Ref. [7] juga melaporkan bahwa berdasarkan ketentuan WHO, jumlah maksimum cemaran Escherichia coli dalam per 100  ml  air  minum  adalah  0.  Penentuan  keberadaan  bakteri  dalam  air  bertujuan  untuk  melihat  ada  atau tidaknya bakteri patogen yang berdampak negatif bagi tubuh.
Rendahnya kualitas es kristal disebabkan oleh beberapa faktor yaitu sumber air, alat-alat yang dipakai dalam  produksi  es  kristal,  pengemasan,  penyimpanan  dan  pengangkatan.  Hal  tersebut  dapat  meningkatkan resiko  terjadinya  kontaminasi  bakteri.  Bakteri  patogen  yang  sering  dijadikan  sebagai  indikator  kualitas  air adalah Escherichia  coli . Escherichia  coli adalah  bakteri  gram  negatif  yang  banyak  ditemukan  dalam  kolon manusia.  Jika Escherichia  coli yang  berasal  dari  luar  masuk  ke  dalam  tubuh  maka dapat  menimbulkan penyakit diantaranya, yaitu demam, sakit perut, mual, muntah, dan diare akut [8].
Penelitian yang dilaporkan oleh WTHR Tahun 2008 menunjukkan bahwa 13 dari 25 sampel es yang diperoleh  dari  restoran  dan  bar  di  daerah Indianapolis positif  mengandung  bakteri coliform .  Sementara  itu, penelitian yang dilakukan oleh LPPM Institut Pertanian Bogor Tahun 2009 terhadap produksi dan distribusi es batu kristal menunjukkan bahwa 14 dari 31 sampel es kristal tersebut positif tercemar bakteri coliform dan 3 diantaranya teridentifikasi sebagai bakteri Escherichia coli . Penelitan yang sama juga dilaporkan oleh Ref. [9] bahwa 2 dari 3 sampel es batu kristal dari tiga warung ayam goreng di Bandung memberikan hasil positif mengandung Escherichia coli .
Escherichia  coli merupakan  spesies  bakteri  gram  negatif  fakultatif  anaerobik  yang  memiliki  ukuran dengan panjang 1,1-1,5 µm dan tebal 0,2-0,6 µm, tidak berspora, dan memiliki pili sebagai penghubung saat pemindahan materi genetik pada proses konjugasi  [10,11]. Bakteri Escherichia coli termasuk dalam familia Enterobacteriaceae yang merupakan flora normal pada usus besar dan ikut keluar melalui feses. Selain hidup secara komensal dalam usus besar, Escherichia coli juga berkembangbiak di lingkungan sekitar manusia. Jika jumlah Escherichia coli dalam saluran pencernaan meningkat maka bakteri tersebut berubah menjadi patogen bagi  manusia  [12],  sehingga  ketika  bakteri  tersebut  tersangkut  di  organ  tubuh  manusia  (misalnya  saluran kemih) maka dapat menimbulkan penyakit [13].
Escherichia  coli yang  keluar  melalui  tinja  dapat  mencemarkan  lingkungan.  Tinja  merupakan  sumber utama agen penyebab penyakit dalam air. Sehingga coliform fekal seperti Escherichia coli banyak digunakan sebagai indikator kontaminasi yang dapat mempengaruhi kualitas air di sungai, danau, laut, dan lain-lain [14]. Disisi lain, Escherichia coli juga termasuk bakteri patogen penyebab penyakit keracunan pangan ( foodborne pathogenic ). Gejala paling menonjol yang disebabkan oleh mikroorganisme ini adalah diare. Selain itu, juga dapat menyebabkan sepsis, meningitis, dan banyak penyakit enterik [15]. Dalam hal ini, penelitian dilakukan untuk mengidentifikasi keberadaan bakteri Escherichia coli dalam es kristal yang terdapat pada rumah makan di Kecamatan Baiturrahman Banda Aceh.

## 2. Metodologi Penelitian
Alat dan bahan yang digunakan  pada penelitian ini adalah batang pengaduk, cawan petri,  gelas ukur, erlenmeyer, inkubator, lampu spirtus, neraca analitik, ose, oven,  hot plate, rak tabung reaksi, tabung reaksi, dan autoclave , aquades, kasa, kapas, reagen kovac, media Nutrient Agar (NA), media Simmons Citrate (SC),
p-ISSN : 2528-3561 e-ISSN : 2541-1934
media SIM (Sulfur, Indole), reagen Alpha-naphtol , reagen Methyl Red (MR), kalium hidrosida, etanol 70 %, dan sampel es kristal seperti Gambar 1. .
Gambar 1. Es Kristal Sumber: Gambar pribadi

## Pembuatan media Nutrient Agar (NA )
Ditimbang  sebanyak  2,4  gram  Nutrient  Agar  (NA)  dan  dilarutkan  dalam  120  ml  aquades  (20 gram/1000  ml)  menggunakan  erlenmeyer.  Aduk  rata  dan  dipanaskan  sampai  mendidih,  lalu  disterilkan menggunakan autoclave pada  suhu  121 o C  selama  15  menit.  Diamkan  beberapa  saat  hingga  suhunya  turun menjadi 52-45 o C, kemudian  tuangkan  media NA tersebut  ke dalam 6 petridish masing-masing sebanyak 20 ml.

## Pembuatan media Indole
Ditimbang  sebanyak  0,9  gram  bubuk  SIM  (Sulfur,  Indole),  lalu  dilarutkan  dalam  30  ml  aquades  (30 gram/1000  ml)  dan  dipanaskan  menggunakan hot  plate .  Diaduk  perlahan  hingga  larutan  menjadi  homogen dan jernih dengan menggunakan magnetic stirrer , kemudian disterilisasi dengan autoclave pada suhu 121 o C dengan  waktu  15  menit.  Didistribusikan  media  indole  tersebut  sebanyak  5  ml  ke  dalam  masing-masing tabung reaksi secara aseptis. Media Indole dapat dilihat pada Gambar 2.
Gambar 2. Media Indole Sumber: Gambar pribadi

## Pembuatan media Methyl Red-Voges proskauer (MR-VP)
Ditimbang  sebanyak  1,02  gram  bubuk  MR-VP,  lalu  dilarutkan  dalam  60  ml  aquades  (17  gram/1000 ml) dan dipanaskan menggunakan hot plate . Diaduk hingga larutan menjadi homogen dengan menggunakan magnetic stirrer . Kemudian disterillisasi menggunakan autoclave pada suhu 121 o C dengan waktu 15 menit. Didistribusikan media MR-VP tersebut sebanyak 5 ml ke dalam masing-masing tabung reaksi secara aseptis seperti Gambar 3 .
Gambar 3. Media MR-VP Sumber: Gambar pribadi

## Pembuatan media Simmons Citrate (SC)
Ditimbang  sebanyak  0,67  gram  bubuk  Simmons  Citrate  (SC),  lalu  dilarutkan  dalam  30  ml  aquades (22,5  gram/  1000  ml)  dan  dipanaskan  menggunakan hot  plate .  Diaduk  perlahan  hingga  larutan  menjadi homogen dan jernih dengqn menggunakan magnetic stirrer . Selanjutnya disterilisasi menggunakan autoclave pada suhu 121 o C dengan waktu 15 menit. Didistribusikan media SC ( Gambar 4) tersebut sebanyak 5 ml ke dalam masing-masing tabung reaksi secara aseptis dan didiamkan hingga membeku dalam posisi miring.
Gambar 4. Media SC Sumber: Gambar pribadi

## Penanaman pada media Nutrient Agar (NA)
Diambil  sampel  sebanyak  satu  ose  dan  ditanam  pada  media  NA,  kemudian  diinkubasi  dengan  waktu 24-48 jam pada suhu 37 o C. Pertumbuhan media tampak dalam Gambar 5.
Gambar 5. Pertumbuhan bakteri pada media NA
Sumber: Gambar pribadi

## Identifikasi bakteri Escherichia coli
Koloni  bakteri  yang  tumbuh  dalam  media  NA  kemudian  ditanam  pada  media  SIM  (Sulfur,  Indole), Voges  Proskauer (VP), Methyl  Red (MR),  dan Simmons  Citrate (SC).  Diinkubasi  pada  suhu  37 o C  dengan waktu  24-48  jam.  Setelah itu  diamati  pertumbuhannya  pada setiap  media  dan  dilihat  kecocokannya  dengan karakteristik  bakteri Escherichia  coli .  Ciri-ciri  bakteri Escherichia  coli ,  yaitu  menunjukkan  uji  Indole positif/negatif, uji MR positif, uji VP negatif, dan uji SC negatif. Jika hasil uji kecocokan sesuai dengan ciri- ciri bakteri Escherichia coli , maka dapat diasumsikan bahwa sampel yang diteliti positif mengandung bakteri Escherichia coli . a. Uji Indole
Satu koloni terpisah diambil dengan jarum ose steril, lalu dipindahkan ke media SIM (Sulfur, Indole) dan  diinkubasi  pada  suhu  37 o C  selama  24-48  jam.  Setelah  itu  ditambahkan  reagen  kovac  sebanyak  10-12. Hasil  uji  indole  posistif  terhadap  bakteri coliform ditandai  dengan  terbentuknya  lapisan  merah  pada permukaan biakan [16].
b. Uji Methyl Red (MR)
Satu  koloni  terpisah  diambil  dengan  jarum  ose  steril,  lalu  dipindahkan  ke  media  MR-VP  dan diinkubasi pada suhu 37 o C dengan waktu 24-48 jam. Setelah itu ditambahkan indikator methyl red sebanyak 3-4  tetes.  Hasil  uji methyl  red (MR)  posistif  terhadap  bakteri coliform terlihat  berwarna  merah  pada  media [16].
c. Uji Voges Proskauer (VP)
Satu  koloni  terpisah  diambil  dengan  jarum  ose  steril,  lalu  dipindahkan  ke  media  MR-VP  dan diinkubasi  pada  suhu  37 o C  dengan  waktu  24-48  jam.  Dimasukkan  1  ml  suspensi  kedalam  tabung menggunakan  pipet  tetes,  kemudian  ditambahkan  juga  0,6  ml  larutan  napthol  dan  0,2  ml  larutan  kalium hidrosida.  Kemudian  dikocok  agar  homogen  dan  dibiarkan  selama  2-4  jam.  Hasil  uji  VP  posistif  terhadap bakteri coliform terlihat adanya perubahan warna menjadi merah muda atau merah tua [17]. d. Uji Simmons Citrate (SC)
Satu  koloni  terpisah  diambil  dengan  jarum  ose  steril,  lalu  dipindahkan  ke  media  SC  dan  diinkubasi pada  suhu  37 o C  dengan  waktu  24-48  jam.  Kemudian  dilihat  perubahan  warna  yang  terjadi  pada  media  SC [16]. Hasil uji SC positif terhadap bakteri coliform terlihat berwarna biru pada media [18].
p-ISSN : 2528-3561 e-ISSN : 2541-1934

## 3. Hasil dan Pembahasan
Hasil identifikasi bakteri Escherichia coli pada rumah makan di Kecamatan Baiturrahman Kota Banda Aceh dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1 . Hasil Identifikasi bakteri Escherichia coli Nama Sampel Indole MR VP SC Hasil RM.A - + - + Negatif RM.B - - - + Negatif RM.C - - - + Negatif RM.D - + - + Negatif RM.E - + - + Negatif RM.F - + - + Negatif Sumber: Olah Data Penelitian (2020)
Berdasarkan Tabel 1 terlihat bahwa dari enam sampel es kristal menunjukkan  uji indole dengan hasil negatif. Pada uji methyl red (MR) menunjukkan hasil positif pada sampel RM A, RM D, RM E, dan RM F, sedangkan hasil negatif ditunjukkan pada sampel RM B dan RM C. Uji Voges Proskauer (VP) menunjukkan hasil  negatif  pada  enam  sampel  es  kristal,  sedangkan  uji  Simmons  Citrate  (SC)  menunjukkan  hasil  positif pada  enam  sampel  es  kristal.  Hasil  uji  Indole,  Methyl  Red  (MR),  Voges  Proskauer  (VP),  dan  Simmons Citrate (SC) dapat dilihat pada Gambar 6 - Gambar 9 .
Gambar 6 . Hasil uji Indole

## Sumber: Gambar pribadi
Berdasarkan Gambar 6 terlihat bahwa dari keenam sampel es kristal tersebut tidak terbentuk lapisan berwarna merah di bagian atas biakan. Hal ini menunjukkan bahwa hasil uji sampel terhadap Escherichia coli adalah  negatif.  Menurut  Ref.  [19]  uji  indole  merupakan  uji  biokimia  yang  dilakukan  pada  spesies  bakteri untuk menentukan kemampuan bakteri tersebut dalam mengubah triptofan menjadi indol.
Berdasarkan Gambar 7 . terlihat bahwa sampel es kristal yang berasal dari RM A, RM D, RM E, dan RM  F  menunjukkan  adanya  perubahan  warna  pada  media  menjadi  merah,  hal  ini  mengindikasikan  bahwa terbentuk  asam  pada  media  tersebut.  Sementara  sampel es  kristal  yang  berasal dari  RM  B  dan  RM  C tidak menunjukkan  adanya  perubahan  warna  pada  media  atau  hasil  uji  negatif.  Uji methyl  red dilakukan  untuk melihat  keberadaan  bakteri  dengan  asam  campuran.  Menurut  Ref  [20]  beberapa  jenis  bakteri  mampu memfermentasikan  glukosa  dan  menghasilkan  metabolit  yang  bersifat  asam,  sehingga  menyebabkan terjadinya  penurunan  pH  pada  media.  Penambahan  indikator  pH methyl  red berfungsi  untuk  melihat terbentuknya lingkungan asam pada media bakteri yang ditandai dengan warna merah.
Gambar 7 . Hasil uji MR Sumber: Gambar pribadi
Gambar 8. Hasil uji VP Sumber: Gambar pribadi
Berdasarkan Gambar 8 terlihat bahwa tidak terjadi perubahan warna menjadi merah muda atau merah tua pada larutan VP. Hal ini menunjukkan hasil negatif terhadap keenam sampel es kristal tersebut. Menurut Ref.  [21]  uji  VP  menunjukkan  hasil  negatif  karena  bakteri  target  yang  diharapkan  tidak  dapat memfermentasikan 2,3-butanadiol.
Gambar 9. Hasil uji SC Sumber: Gambar pribadi
A D E F B C
p-ISSN : 2528-3561 e-ISSN : 2541-1934
Berdasarkan Gambar 9 terlihat bahwa seluruh media biakan berubah warna menjadi biru. Hal tersebut menandakan  bahwa  hasil  uji  SC  terhadap Escherichia  coli adalah  positif.  Menurut  Ref.  [22]  terjadinya perubahan warna media menjadi biru disebabkan oleh penggunaan sitrat sebagai sumber karbon untuk proses pertumbuhan dengan menghasilkan kondisi  basa. Kondisi alkali (basa) tersebut yang  merubah warna media menjadi biru.
Hasil penelitian menyatakan bahwa semua sampel yang diteliti negatif mengandung Escherichia coli . Hal  tersebut  mengindikasikan  bahwa  produsen  yang  memproduksi  es  kristal  tersebut  menggunakan  sumber air  yang  telah  memenuhi  standar  kelayakan  konsumsi  sehingga  dapat  meminimalisir  keberadaan mikroorganisme  dalam  air.  Hal  ini  sesuai  dengan  Ref.  [9]  jika  es  kristal  diproduksi  menggunakan  air  yang matang, maka pada saat proses perebusan gas di dalam air tersebut akan terlepaskan sehingga menyebabkan es  kristal  terlihat  bening.  Ref.  [23]  juga  melaporkan  bahwa  penggunaan  air  yang  tidak  bersih  dan  higienis dalam  proses  pembuatan  es  batu  dapat  meningkatkan  resiko  cemaran Escherichia coli .  Hal  ini  disebabkan karena proses pembekuan  tidak  mampu  membunuh Escherichia coli . Selain itu, Ref. [24] juga  menyatakan bahwa proses produksi dan proses pengangkutan sangat mempengaruhi kualitas dari es kristal tersebut. Oleh karena itu, penting untuk memperhatikan semua faktor yang dapat berpengaruh terhadap mutu dari es kristal selama proses pembuatan.

## 4. Kesimpulan dan Saran
Penelitian  yang  dilakukan  pada  keenam  sampel  es  kristal  dari  rumah  makan  di  Kecamatan Baiturrahman Kota Banda Aceh menunjukkan hasil yang negatif atau sampel tidak mengandung Esherichia coli. Hasil penelitian ini sesuai dengan Menteri Kesehatan RI907/MENKES/SK/VII/2002 mengenai kualitas air minum, bahwa air minum tidak boleh mengandung coliform fecal (seperti; Escherichia coli ) dalam 100 ml air  (MPN  =  0/100  ml).  Rumah  makan  yang  terdapat  di  Kecamatan  Baiturrahman  Banda  Aceh  telah menerapkan  standar  kesehatan  sesuai  dengan  aturan  pemerintah.  Diharapkan  agar  penelitian  selanjutnya dapat meneliti bakteri lainnya, seperti Salmonella Enterica dan dapat menguji keberadaan bakteri Escherichia coli dengan identifikasi yang lebih lengkap.

## 5. Ucapan Terima Kasih
Peneliti  mengucapkan  banyak  terima  kasih  kepada  keluarga  dan  teman-teman  sejawat  yang  telah banyak memberikan dukungan serta bantuan kepada peneliti.

## 6. Referensi
[1] Departemen  Kesehatan, Peraturan  Menteri  Kesehatan  Republik  Indonesia  Nomor  492  Tahun  2010 tentang Persyaratan Kualitas Air Minum , Departemen Kesehatan, Jakarta, 2010.
[2] N. Soekidjo, Kesehatan Masyarakat Ilmu dan Gizi , Rineka Cipta, Jakarta, 2007.
[3] F.  Antung  Sima, “Evaluasi  Bakteri  Indikator  Sanitasi  Di  Sepanjang  Rantai  Distribusi  Es  Batu  Di Bogor,” J .II.Pert.Indon , 2006.
[4] B.  Hadi,  E.  Bahar,  dan  R.  Semiarti,  “Uji  Bakteriologis  Es  Batu  Rumah  Tangga  yang  Digunakan Penjual  Minuman  di  Pasar  Lubuk  Buaya  Kota  Padang,”  Fakultas  Kedokteran  Universitas  Andalas, 2014.
[5] N.  Putri,  “Warung  Nasi  Dikelurahan  Pisangan,”  Program  Studi  Pendidikan  Dokter  Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah, Jakarta, 2015.
[6] Agus,  2015,  Cara  Membuat  Es  Tube/Es  Kristal,  Diakses  pada  Tanggal  8  Juni  2020  di http://tokomesinusaha.com
[7] U.H. Suriawiria, Sukses Beragrobisnis Jamur Kayu Shitake, Kuping, Tiram , Penebar Swadaya, Jakarta, 2004.
[8] I.  Entjang, Mikrobiologi  dan  Parasitologi  untuk  Akademi  Keperawatan  dan  Sekolah  Tenaga Kesehatan yang Sederajat , Citra Adtya Bakti, Bandung, 2003.
[9] Michael, dkk, “Bakteri Coliform dalam Es Batu pada Tiga Rumah Makan Ayam Goreng Siap Saji di Bandung,” JKM , Vol.9 No.2, 2010.
[10]  Ikmalia, “Analisa Profil Protein Isolat Escherichia coli S1 Hasil Iradiasi Sinar Gamma,” Fakultas Sains Teknologi, Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah. Jakarta, 2008.
[11]  D. Elfidasari, et al., “Perbandingan Kualitas Es di Lingkungan Universitas Al Azhar Indonesia dengan Restoran Fast Food di Daerah Senayan dengan Indikator Jumlah Escherichia coli Terlarut,” Jurnal Al- Azhar Indonesia Seri Sains dan Teknologi , Vol.1(No.1), 2011.
[12]  D.  Ismail, “Uji Bakteri Escherichia coli Pada Minuman Susu Kedelai Bermerek dan Tanpa Merek di Kota  Surakarta,” Naskah  Publikasi ,  Fakultas  Kedokteran,  Universitas  Muhammadiyah  Surakarta, 2012.
[13]  Antung,  SF.  2009,  Evaluasi  Bakteri  Indikator  Sanitasi,  Diakses  pada  Tanggal  8  Juni  2020  di http://web.ipb.ac.id/ ∼ Ippm/ID/index.php?view=jurnal/detail2JIPI&volume=11&no=2&id=91
[14]   S.  Ishi,  M.J.  Sadowsky,  “Escherichia  coli in  the  environment:  Implications  for  water  quality  and human health,” Microbes Environ , 23:101-108, 2008.
[15]   G. Ekici and E. Dümen, 2019, Escherichia coli and Food Safety, Diakses pada Tanggal 12 Juni 2020 di https://www.intechopen.com/books/the-universe-of-escherichia-coli/-em-escherichia-coli-em-and- food-safety
[16]  R.S. Hadietomo, Mikrobiologi Praktek Teknik dan Prosedur Dasar Laboratorium, Gramedia, Jakarta, 1993.
[17]  BSN, Cara  Uji  Makanan  dan  Minuman  (SNI  01-2891-1992) ,  Badan  Standarisasi  Nasional,  Jakarta, 1992.
[18]  A.  Sudarsono,  “Isolasi  dan  Karakteristik  Bakteri  Pada  Ikan  Laut  Dalam  Spesies  Ikan  Giandara (Lepidocibiu Flavobromeum),” Skripsi , Institut Pertanian Bogor, Bogor, 2008.
[19]  M.J.  Leboffe,  dan  B.E.  Pierre, A  Photographic  Atlas  for  the  Microbiology  Laboratory ,  Morton Publishing Company, 2011.
[20]  I. Saridewi, A. Pambudi, dan Y. F. Ningrum, “Analisis Bakteri Escherichia Coli Pada Makanan Siap Saji Di Kantin Rumah Sakit X Dan Kantin Rumah Sakit Y,” Biologi UNJ Press , BIOMA 12 (2), 2016.
[21]  R. Puspadewi, A. Putranti, dan A. Afif, “Deteksi Staphylococcus aureus dan Salmonella pada Jajanan Sirup,” Jurnal Ilmiah Manuntung , 3(1), 26-33 hal. 2017.
[22]  R.  Sari,  dan  A,  Pratiwi,  “Cemaran  Bakteri Eschericia  coli dalam  Beberapa  Makanan  Laut  yang Beredar  di  Pasar  Tradisional  Kota  Pontianak,” Kartika    Jurnal    Ilmiah  Farmasi ,  2  (2),  14-19  hal, 2014.
[23]  R.  Saraswati,  Y.  Erny,  H.  Kurniawan,  “Pengembangan  Teknologi  DSA  untuk  percepatan pengomposan  kurang  dari  10  hari,” Laporan  Akhir  Shinta ,  Balittanah  BBSDLP,  Bogor-Indonesia, 2010.
[24]  I.  Sabrina, “Perbandingan  Kualitas  Es  Batu  di  Warung  Makan  dengan  Restoran  di  DIY  dengan Indikator  Jumlah  Bakteri  Coliform  dan  Escherichia  Coli  Terlarut,” Mutiara  Medika ,Vol.11  No.3, 2011.