## EFEK SUPLEMENTASI LAKTOFERIN  PADA SUSU FORMULA TERHADAP AVAILABILITAS ZAT BESI, OKSIDASI LEMAK DAN PERTUMBUHAN Escherichia coli PADA SALURAN PENCERNAAN TIKUS
[The Effects of Lactoferrin Supplementation to Infant Formula on Iron Availability, Lipid Oxidation and Escherichia coli Growth in  RatsIntestine]
Enny Purwati Nurlaili 1) , Mary Astuti 2) , dan Y. Marsono 2)
1) Staf Pengajar Fakultas Teknologi Pertanian UNTAG Semarang 2 ) Staf Pengajar  Fakultas Teknologi Pertanian Univ. Gadjah Mada Yogyakarta

## ABSTRACT
A research on lactoferrin  supplementation to infant formula has been conducted. The objectives of this research were to study the effects of consumption of the supplemented formula on iron availability, lipid oxidation and  growth of Escherichia coli in the intestine. Fifthly newly born rats and their mother (10 rats) were used.They were divided into  5 groups of 10 newly born and 2 mother rats, and were given five different infant formula respectivelly i.e. FEAN (inorganic Fe supplementation), FEOR ( lactoferrin supplementation), FECAMP (inorganic and lactoferrin supplementation), Control (no  Fe supplementation) and Placebo. FeSO 4 . 7 H 2 O and lactoferrin were used as the source of inorganic and organic Fe respectively. During the experiment the rat baby also got regular milk from their mothers which were fed by AIN 93 diet. After 30 days  of intervention, blood were withdrawn from the retro orbital plexus for Hb, Fe and TBARS determination. The rats were executed and liver was  taken  for  Fe  and  TBARS  analysis  and  large  intestine  were  withdrawn  for  Escherichia  coli  determination.  It  was  found  that  Fe supplementation  of  the  formula  have  no  effects  on  the  serum  total  Fe,  increase  the  total  hemoglobin  of  the  baby  but  was  not  significantly different between the sources of the Fe. Total Fe of the liver was highest in FECAMP and FEOR rats (101.3 ppm and 83.38 ppm, respectively) and lowest in the Placebo groups (58.1 ppm). Inorganic Fe supplementation increase TBARS of the serum and liver of the rats. Number of total Escherichia coli was lowest in FEOR groups (1.7 10 7 cfu ) and was highest in FEAN rats (7.5 10 7 cfu).
Key words : Lactoferrin Supplementation,  Iron Availability, Lipid Oxidation,  and E. coli  growth.

## PENDAHULUAN
Anemi  gizi  merupakan  salah  satu  masalah  gizi utama di Indonesia dan sangat umum dijumpai, terutama di kalangan bayi,  balita, serta ibu hamil dan menyusui. Anemi gizi paling banyak disebabkan karena kekurangan zat besi disebut anemi gizi besi (AGB) (Husaini dan Karyadi, 1982).
Berdasarkan  hasil  Survei  Kesehatan  Rumah Tangga tahun 1992 (Anonim, 1995), prevalensi anemi gizi besi  pada  balita  di  Indonesia  masih  tinggi  yaitu  sebesar 55,5 %, ibu hamil  sebesar 63,5 %. Prevalensi yang tinggi tersebut  mempunyai  implikasi  sosial,  ekonomi  dan kesehatan masyarakat yang luas (Sutaryo, 1987).
Anemi gizi besi pada bayi, balita serta ibu hamil dan menyusui  dapat  diketahui  dari  kadar  hemoglobinnya  di bawah  normal  yaitu  kurang  dari  12  g/100  ml.  Keadaan tersebut disebabkan karena ketidakcukupan  zat besi yang tersimpan pada saat lahir, konsentrasi zat besi yang rendah pada  susu  maternal,  konsumsi  zat  besi  yang  tidak  cukup dan kekurangan zat besi pada bayi yang disebabkan oleh persediaan  zat  besi  pada  bayi  terbatas.  ASI  sebagai makanan  bayi  bukan  merupakan  sumber  zat  besi,  oleh karena itu bayi berumur lebih dari 6 bulan perlu tambahan makanan yang mengandung zat besi. Kekurangan zat besi
dapat pula disebabkan oleh availabilitas zat besi makanan yang rendah. Availabilitas zat besi meliputi jumlah zat besi yang  dapat  diserap  dan  dipergunakan  oleh  tubuh  untuk berbagai  keperluan  seperti  komponen  hemoglobin,  enzim ataupun aktivitas enzim dan katalisator suatu reaksi. Oleh karena ASI hanya dapat menyediakan zat besi yang cukup selama  6  bulan  pertama  kehidupan  bayi  maka  diperlukan tambahan  zat  besi  dari  makanan  seperti  misalnya  ekstrak daging  ataupun  bayam  yang  ditambahkan  pada  makanan setengah  padat,  zat  besi  yang  ditambahkan  pada  susu formula dan lain sebagainya (Hallberg, 1988). Upaya untuk mengatasi masalah anemi gizi besi tersebut dilakukan pula melalui peningkatan jumlah dan kualitas zat besi misalnya dengan  memberikan  pil  besi  yang  mengandung  fero fumarat,  fero  glukonat  ataupun  fero  sulfat  pada  ibu  hamil maupun tenaga kerja wanita dan juga dengan penambahan makanan  yang  mengandung  vitamin  C,  untuk meningkatkan  absorbsi  zat  besi  serta  fortifikasi  zat  besi pada  susu  formula  bayi,  tetapi  hal  ini  dirasakan  masih terlalu mahal dan agak sulit terjangkau oleh sebagian besar masyarakat.
Availabilitas  zat  besi  dipengaruhi  pula  oleh  mudah tidaknya zat besi larut dalam cairan pencernaan makanan. Zat  besi  yang  bersifat  larut  akan  mudah  diserap
dibandingkan yang kurang larut. Dengan demikian sumber zat  besi  menentukan  availabilitas  zat  besi  tersebut.  Susu formula  bayi  merupakan  salah  satu  alternatif  untuk memenuhi kebutuhan zat besi. Penambahan zat besi pada susu  formula  selain  mempengaruhi  sifat  organoleptiknya juga  dapat  meningkatkan  status  zat  besi  pada  bayi. Berbagai  sumber  zat  besi  baik  dalam  bentuk  organik maupun anorganik dapat digunakan, tetapi perlu diketahui pula bagaimana availabilitas zat besi tersebut.
Laktoferrin  merupakan  zat  besi  yang  berikatan dengan glikoprotein dari famili transferin yang secara jelas ditemukan pada kolustrum dan ASI mamalia  (Teraguchi et al.,1994).  Fungsi  laktoferrin  antara  lain  sebagai penghambat  bakteri  patogen  antara  lain Escherichia  coli yang  hidupnya  tergantung  pada  zat  besi  yang  ada  dalam saluran pencernaan dan sebagai pensuplai zat besi organik (Nagasako  et  al.,1993).  Laktoferin  meskipun  harganya sangat  mahal  digunakan  pula  sebagai  sumber  zat  besi pada  susu  formula,  dengan  maksud  agar  dapat menghambat perkembangan bakteri patogen sehingga bayi yang  mengkonsumsi  susu  formula  tersebut  tidak mengalami diare.
Zat  besi  yang  merupakan  logam  transisi  berperan sebagai katalisator pada reaksi oksidasi. Oksidasi terjadi di dalam tubuh. Salah satu hasil oksidasi adalah terbentuknya radikal bebas superoksida. Dengan adanya zat besi bebas, akan mendorong pembentukan radikal bebas hidroksil yang bersifat  reaktif  dan  mengakibatkan  kerusakan  pada  asam lemak,  protein  ataupun  DNA.  Oksidasi  pada  asam  lemak tidak  jenuh  akan  menghasilkan  senyawa  beracun  antara lain malondialdehide (MDA).
Sampai  saat  ini  penelitian-penelitian  mengenai potensi  laktoferin  sebagai  sumber  zat  besi  organik  yang dapat  mencegah  perkembangan  bakteri  patogen  maupun
availabilitas  serta  perannya  dalam  proses  oksidasi  belum banyak  dilakukan.  Oleh  karena  itu  perlu  dilakukan penelitian  bagaimana  efek  laktoferin  yang  ditambahkan pada  susu  formula  terhadap  availabilitas  zat  besi  dan pertumbuhan  bakteri  patogen  terutama Escherichia  coli sangat penting dilakukan  sehingga konsumen tidak hanya membeli susu formula yang mahal tetapi juga bermanfaat.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengevaluasi availabilitas  zat  besi  laktoferin,  mengkaji  peran  laktoferrin terhadap  oksidasi  lemak  dalam  tubuh  dan  mempelajari pengaruh laktoferin terhadap peningkatan Escherichia coli.

## METODOLOGI

## Bahan dan Alat
Bahan yang digunakan untuk penelitian antara lain laktoferin,  susu    formula  untuk  induk  tikus  (ibu  hamil  dan menyusui) dan anak tikus (codex alimentarius) yang dibuat di PT Sari Husada Yogyakarta, komposisinya dapat dilihat pada  Tabel  1  dan  2.  Bahan  kimia    untuk  analisis  dengan kualitas pro analysis (Sigma, E-Merck) diperoleh dari toko bahan kimia di Yogyakarta, pakan yang mengacu pada AIN 1993 (AIN-93 G), komposisinya  terdiri dari tepung jagung, kasein,  dekstrin  tepung  jagung,  sukrosa,    minyak  kedele, serat, campuran mineral (AIN-93 G-MX), campuran vitamin (AIN-93-VX),  L-sistin,  kolin  bitartrat,  tert-butilhidroquinon. Sedangkan  tikus  pecobaan  yang  digunakan  adalah  tikus putih  ( Rattus  norvegicus )  jenis  Wistar  yang  diperoleh  dari Laboratorium  Unit  Pengembangan  Hewan  Percobaan (UPHP) UGM,
Alat  yang  digunakan  untuk  penelitian  antara  lain spektrofotometer (DR/2000 Hach), AAS (Parkin Elmer tipe A-200S),  muffle  furnace  (Heraeus  D-6450  Hanau  tipe  M- r(110), sentrifuse (Heraeus Sepatech biofuge 15).
Tabel 1 . Komposisi Susu Formula Untuk Induk Tikus (per 100 g susu bubuk)
Komposisi Jumlah Komposisi Jumlah Protein 15 g Niasin amida 12 mg Lemak 13 g Asam folat 833 mig Karbohidrat 64 g Kholine 130 mg Air 3 g Inositol - Energi 520 kkal Ca 670 mg Vitamin A 3000 IU P 407 mg Vitamin B1 1100 mig Na 232 mg Vitamin B2 1400 mig K 613 mg Vitamin B6 1600 mig Mg 108 mg Vitamin B12 2,7 mig Cl 625 mg Vitamin C 250 mg Fe 25 mg Vitamin D3 600 IU Zn 37 mg Vitamin E 10 IU I 117 mig
Sumber : PT.Sari Husada

## Tabel 2 . Komposisi Susu Formula Untuk Anak Tikus (per 100 g susu bubuk)
Komposisi Jumlah Komposisi Jumlah Protein 12 g Asam folat 40 mig Lemak 28 g Kholine 26 mg Karbohidrat 55 g Inositol 30 mg Ash 2 g Ca 350 mg Air 3 g P 200 mg Energi 520 kkal Na 150 mg Vitamin A 2000 IU K 450 mg Vitamin B1 500 mig Mg 60 mg Vitamin B2 800 mig Cl 300 mg Vitamin B6 350 mig Zn 3 mg Vitamin B12 1 mig I 50 mig Vitamin C 50 mg Cu 300 mig Vitamin D3 3,0 IU Mn 100 mig Vitamin E 7,0 IU Taurin 38 mg Vitamin H 10 mig Laktulosa 510 mg Vitamin K1 40 mig Laktoferin 45 mg Niasin amida 7 mg Fe 6 mg Ca pantotenat 2 mg (FeSO47H 2 O)
Sumber : PT. Sari Husada Keterangan : Secara umum komposisi susu formula untuk semua perlakuan sama, hanya berbeda pada sumber zat besi.

## Cara Penelitian  dan Analisis
Penelitian  ini  diawali  dengan  adaptasi  pakan  tikus (AIN-93  G)  selama    seminggu  pada  10  ekor  calon  induk tikus, kemudian dikawinkan dan apabila sudah dinyatakan hamil diberi  susu formula untuk  induk hamil  secara paksa ( force  feeding )  sebanyak  4  ml  perhari  diberikan  2  kali, selama  20-22  hari.  Setelah  anak  tikus  lahir,  dilakukan penimbangan  berat  badan  tiap  hari,  pada  hari  ke  6  dipilih secara acak 5 anak tikus dengan berat 9-10 g dan dibagi kelompok tiap perlakuan terdiri dari 2 ekor induk tikus dan 10  ekor  anak  tikus.  Setiap  kelompok  diberi  susu  yang berbeda  berturut-turut  adalah  kelompok  FEAN  diberi  ASI induk tikus secara tak terbatas/ ad libitum dan susu formula dengan  FeSO4 7H 2 O sebagai sumber zat besi  anorganik, kelompok  FEOR  diberi  ASI  induk  tikus    secara  tak terbatas/ ad  libitum dan  susu  formula    dengan  laktoferin sebagai  sumber  zat  besi  organik.,  kelompok  FECAMP diberi  ASI  induk  tikus    secara  tak  terbatas/ ad  libitum dan susu  formula    dengan  campuran  FeSO4  7H 2 O  dan laktoferin sebagai sumber zat besi anorganik dan organic, kelompok  KONTROL    diberi  ASI    induk  tikus    secara  tak terbatas/ ad  libitum dan  susu  formula    tanpa  penambahan zat  besi,  dan  kelompok  PLACEBO  diberi  ASI  induk  tikus secara tak terbatas/ ad libitum dan tambahan air.
Pemberian susu formula dilakukan sampai umur 21 hari (usia sapih) tetapi karena adanya alasan teknis maka usia sapih dianggap 30 hari, pemberian susu secara paksa
( force  feeding )  sebanyak  0,1-0,4  ml,  2  kali  perhari.  Pada akhir perlakuan semua anak tikus diambil darahnya melalui mata ( retroorbital plexus ) dengan tabung mikro hematokrit, selanjutnya  dilakukan  pembedahaan  anak  tikus  untuk diambil hati dan ususnya.
Analisis Penentuan  kadar  hemoglobin  dalam  darah  anak tikus  menggunakan  kit  tes  fotometrik  (3317  Merckotest No.kit 1. 03317.0001), absorbansi dibaca pada λ 525 nm. Dan  penghitungan  konsentrasi  Hb  =  absorbansi  x  36,6  g Hb/dl.  Penentuan    total    zat  besi    serum  dan  hati menggunakan  metode  Astuti  (1992),  supernatan    serta homogenat  dibaca  pada  AAS  λ  525  nm  .Penentuan  MDA (Malonaldehide)/TBARS  (Thiobarbituric  Acid  Reactive Substance) serum dan hati menggunakan metode Raharjo (1992) absorbansi dibaca pada λ 525 nm, sedangkan untuk identifikasi Escherichia coli dalam usus tikus menggunakan media  EMB  (Eosin  Methylene  Blue)  sebagai  medium selektif E. coli (Wibowo dan Ristanto,1987/1988).

## Rancangan Percobaan :
Rancangan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  dengan  5 perlakuan  (FEAN,  FEOR,  FECAMP,  KONTROL  dan PLACEBO) dan 10 ulangan. Kemudian data yang diperoleh dianalisis  dengan  ANOVA  satu  arah  dan  uji  lanjut  BNT
(Beda  Nyata  Terkecil)  pada  tingkat  kepercayaan  95  % (Gasperez, 1991).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Kadar Hemoglobin Dalam Darah Anak Tikus
Hasil analisis kadar hemoglobin dalam darah (Tabel 3) menunjukkan bahwa kadar hemoglobin pada perlakuan dengan pemberian susu formula dengan penambahan zat besi  anorganik  dan  organik  (FECAMP)  tertinggi dibandingkan  dengan  perlakuan  yang  lain  dan  berbeda sangat nyata dengan plasebo (p>0,05) dan pemberian susu formula  tanpa  zat  besi/kontrol  (p>0,05).  Untuk  perlakuan pemberian  susu  formula  dengan  penambahan  zat  besi anorganik  (FEAN),  zat  besi  organik  (FEOR)  dan  kontrol tidak berbeda nyata (p<0,05).
Jika  dilihat  pada  hasil  tersebut    kadar  hemoglobin pada  perlakuan  dengan  penambahan  zat  besi organik(FEOR)  cenderung  meningkat.  Hal  ini  diperkuat dengan  hasil  penelitian  pada  anak  sapi  oleh  Kume  dan Tanabe  (1994)  yang  menyatakan  bahwa    penambahan FeSO 4 .7H 2 O dengan laktoferin mungkin lebih efektif dalam meningkatkan kadar hemoglobin pada anak sapi.
Tabel 3. Kadar Hemoglobin Dalam Darah Anak Tikus
Perlakuan Kadar Hemoglobin* (g/dl) FEAN 9,96 ab FEOR 10,11 ab FECAMP 10,30 a Kontrol 9,77 b Plasebo 8,84 c Keterangan :
*  Rata-rata dari sepuluh kali ulangan ** Huruf yang sama menunjukkan hasil tidak berbeda nyata (p>0.05, uji BNT)
Jika  dilihat  pada  hasil  tersebut  di  atas  bahwa kecenderungan  kadar hemoglobin pada perlakuan dengan penambahan  zat  besi  anorganik  dan  organik  (FECAMP) mempunyai  kadar  hemoglobin  yang  tertinggi,  kemudian diikuti oleh penambahan zat besi organik (FEOR) dan baru yang  anorganik  (FEAN).  Hal  ini  menunjukkan  bahwa suplementasi zat besi organik ternyata berpengaruh dalam peningkatan kadar hemoglobin dalam darah anak tikus. Hal ini didukung dengan hasil penelitian oleh Nagasako et al.,. (1993)  yang  menyatakan  bahwa  laktoferin  merupakan regulator  dalam  absorbsi  zat  besi  dan  mempunyai bioavailabilitas yang tinggi. Tetapi hasilnya berbeda dengan hasil  penelitian  pada  anak  sapi  oleh  Kume  dan  Tanabe (1994)  yang  menyatakan  bahwa  dengan  penambahan
laktoferin  yang  dijenuhi  zat  besi  tidak  menaikkan  kadar hemoglobin  dalam  darah  anak  sapi,  tetapi  penambahan FeSO 4 . 7H 2 O dengan laktoferin mungkin lebih efektif dalam meningkatkan  hemoglobin  pada  anak  sapi  (Kume  dan Tanabe,  1996).  Fenomena  tersebut  mungkin  disebabkan oleh laktoferin yang mengikat zat besi pada sisi yang satu sedangkan  sisi  yang  lain  bertindak  sebagai  pengikat (chelat),  sehingga  mengakibatkan  meningkatnya  absorbsi zat  besi  dari  usus  ke  hemoglobin  darah  (Nagasako,  et  al. 1993).
Hemoglobin induk  tikus pada akhir penelitian rata- rata  adalah  10,12  g/dl,  hal  ini  menunjukkan  bahwa hemoglobin  induk  tikus  lebih  rendah  daripada  hemoglobin normal  yaitu  14,8  g/dl  (Anonim,  1990,1991)  atau  antara 15,6  g/dl  (Farris  dan  Griffith.  1962).  Dan  hal  ini  akan menyebabkan hemoglobin anak tikus menjadi lebih rendah (anemi) dari  hemoglobin normal.
Tabel 4. Kadar Total Zat Besi Pada Serum dan Hati Anak
Tikus Perlakuan Total Zat Besi Serum* (ppm) Total Zat Besi Hati* (ppm) FEAN 5,87 a 60,19 b FEOR 6,21 a 83,38 a FECAMP 6,35 a 101,30 a Kontrol 5,84 a 59,92 b Plasebo 5,94 a 58,10 b Keterangan : *  Rata-rata dari sepuluh kali ulangan
** Huruf yang sama menunjukkan hasil tidak berbeda nyata (p>0.05, uji BNT)
Artinya  bahwa  suplementasi  laktoferin    berfungsi untuk  menstabilkan  kandungan  zat  besi  anorganik  yang terdapat  dalam  serum,  pendapat  ini  dikemukakan  oleh Nagasako et al., (1993) yang juga mengatakan bahwa zat besi fero mudah dirubah bentuk feri yang tak terlarut, tetapi kelarutan zat besi fero dapat distabilkan oleh laktoferin, dan aktivitas  mengikat  zat  besi  laktoferin  yang  sangat  besar mungkin  berhubungan  dengan  peranan  laktoferin  dalam absorbsi zat besi. Hal yang senada juga diungkapkan oleh Kawakami et al., (1993).
Menurut  Farris  dan  Griffith  (1962),  anak  tikus mempunyai  hemoglobin  75  %  dari  hemoglobin  tikus dewasa,  berarti  bahwa  rata-rata  hemoglobin  pada  anak tikus yang terdapat pada Tabel 2 tersebut yang seharusnya mempunyai nilai hemoglobin rata-rata 11,1 - 11,7 g/dl.
Kadar  Total  Zat  Besi  Pada  Serum  dan  Hati  Anak Tikus Hasil  perhitungan  kadar  total  zat  besi  pada  serum anak  tikus  menunjukkan  bahwa  semua  perlakuan  tidak beda nyata. Namun demikian apabila dilihat kecenderungannya  pada  perlakuan  dengan  pemberian susu formula dengan penambahan zat besi anorganik dan organic  (FECAMP)  menunjukkan  nilai  tertinggi  dari perlakuan yang lain yaitu sebesar 6,35 ppm.
Mekanisme laktoferin untuk meningkatkan absorbsi zat  besi  yang  bertanggung  jawab  terhadap  peningkatan absorbsi zat besi pada anak sapi belum diketahui dengan jelas, kecuali laktoferin yang dijenuhi zat besi kemungkinan akan mengikat zat besi pada sisi yang satu sedangkan sisi yang  lain  bertindak  sebagai  pengikat  ( chelat )  dan meningkatkan  absorbsi  zat  besi  dari  usus  ke  hemoglobin darah  daripada  yang  disimpan  dalam  jaringan  (Nagasako et al., 1993).
Penentuan kadar total zat besi pada hati anak tikus dilakukan untuk mengetahui seberapa besar zat besi yang tersimpan di dalam hati. Hasil analisis kadar total zat besi pada hati yang disajikan pada Tabel 4 menunjukkan bahwa perlakuan  dengan  pemberian  susu  formula  dengan penambahan  zat  besi  anorganik  dan  organik  (FECAMP) dan  penambahan  zat  besi  organik  (FEOR)  menunjukkan berbeda  sangat  nyata  dengan  perlakuan  yang  lain (p>0,05).  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  perlakuan  dengan penambahan  laktoferin  ternyata  akan  mempengaruhi    zat besi yang tersimpan dalam hati.

## Hasil TBARS Pada Serum dan Hati Anak Tikus
Penentuan TBARS dimaksudkan untuk mengetahui sejauh  mana  suplementasi  laktoferin    dapat  menghambat terjadinya oksidasi lemak. Tabel 5 menyajikan hasil analisis TBARS pada serum dan hati anak tikus.
Tabel 5. Hasil TBARS Pada Serum dan Hati Anak Tikus
Perlakuan TBARS Serum * ( mol/l) TBARS Hati * ( mol/l) FEAN 318,76 a 2952,34 a FEOR 274,51 b 2748,79 b FECAMP 284,66 b 2815,28 ab Kontrol 259,62 c 2729,31 b Plasebo 265,01 bc 2639,76 b Keterangan :
*  Rata-rata dari sepuluh kali ulangan ** Huruf yang sama menunjukkan hasil tidak berbeda nyata (p>0.05, uji BNT)
Dari Tabel 5  dapat dikemukakan bahwa perlakuan dengan  pemberian  susu  formula  penambahan  zat  besi
anorganik  (FEAN)  mempunyai  nilai  yang  tertinggi dibandingkan  dengan  semua  perlakuan  dan  berbeda sangat  nyata  (p>0,05).  Sedangkan  perlakuan  dengan penambahan  zat  besi  organik  (FEOR)  dan  campuran  zat besi anorganik dan organik (FECAMP) serta plasebo tidak berbeda nyata, untuk  plasebo dan tanpa penambahan  zat besi/kontrol juga tidak berbeda nyata (p<0,05).
Zat  besi  anorganik  berfungsi  sebagai  katalisator dalam  proses  oksidasi  lemak.  Dalam  penelitian  ini penambahan  zat  besi  anorganik  ternyata  menyebabkan meningkatnya  nilai  TBARS  dalam  serum.  Fungsi  zat  besi sebagai katalisator oksidasi lemak dapat dihambat dengan cara  melepaskan  katalis  logam  dari  lemak  selama  tahap permulaan  proses  oksidasi  dan  menambahkan  zat penghambat  yang  kuat  ( strong  free  radical  inhibitor )  ke dalam  sistem  autooksidasi  yang  akan  dapat  menekan tahap reaksi propagasi dan mencegah oksidasi lebih lanjut (Ketaren,  1986).    Pengaruh  suplementasi  laktoferin  dalam penelitian ini ternyata dapat menghambat terjadinya proses oksidasi lemak. Dimana zat besi organik bertindak sebagai antioksidan  dan  diperkuat  dengan  pendapat  Nagasako  et al.,  (1993).  yang  mengatakan  bahwa  sifat-sifat  fungsional laktoferin dihubungkan dengan aktivitas mengikat zat besi. Penggunaan  laktoferin  memungkinkan  untuk  mencegah proses  yang  dikatalisir  oleh  zat  besi  seperti  pembentukan radikal bebas (hidroksil) dan peroksidasi lemak. Laktoferin dapat  mengikat  zat  besi  pada  satu  sisi,  sedangkan  yang lain dapat mengikat ( chelat ) kemungkinan pada permukaan molekul  laktoferin.  Aktivitas  pengikatan  zat  besi  yang sangat  tinggi  dari  laktoferin  secara  fisiologis  sangat berperanan  dalam  absorbsi  zat  besi.  Bioavailabilitas  zat besi  anorganik  sangat  tinggi  tetapi  bersifat  sangat  mudah dioksidasi dan diubah ke bentuk yang tidak larut (Nagasako et al., 1993).
Dari Tabel 5 dapat dilihat hasil analisis TBARS pada hati  yang  menunjukkan  bahwa  perlakuan  dengan penambahan  zat  besi  anorganik  (FEAN)    tidak  berbeda nyata  dengan  penambahan  zat  besi  anorganik  dan organic/FECAMP  (p<0,05)    tetapi  berbeda  nyata  dengan perlakuan  yang  lain.  Perlakuan  dengan  penambahan  zat besi anorganik dan organik (FECAMP) juga tidak berbeda nyata dengan perlakuan kontrol dan plasebo (p<0,05).
Total Escherichia coli Pada Usus Anak Tikus E.  coli merupakan  bakteri  patogen  yang  sangat membahayakan,  biasanya  terdapat  pada  saluran pencernaan.  Dengan  penelitian  suplementasi  laktoferin  ini diharapkan E.  coli yang  terdapat  pada  usus  tikus  dapat ditekan.  Untuk  mengetahui  seberapa  besar E.  coli dapat ditekan, dapat dilhat pada Tabel 6.
Hasil Penelitian                                                        Jurnal. Teknol. dan Industri Pangan, Vol. XIII, No. 3 Th. 2002
Tabel 6. Total Escherichia coli Pada Usus Anak Tikus Perlakuan Total E. coli * (10 7 cfu) FEAN 7,5 a FEOR 1,7 d FECAMP 6,9 ab Kontrol 1,9 c Plasebo 2,9 b Keterangan :
*  Rata-rata dari sepuluh kali ulangan ** Huruf yang sama menunjukkan hasil tidak berbeda nyata (p>0.05, uji BNT)
Tabel  6  menunjukkan  bahwa  perlakuan  dengan penambahan  zat  besi  anorganik  (FEAN)  mempunyai  rata- rata E.  coli yang  tertinggi  dibandingkan  dengan  semua perlakuan.  Perlakuan  dengan  penambahan  zat  besi anorganik  (FEAN)  tidak  berbeda  nyata  dengan  perlakuan dengan  penambahan  zat  besi  anorganik  dan  organik (FECAMP),  tetapi    berbeda  nyata  dengan  perlakuan dengan penambahan zat besi organic (FEOR),  perlakuan tanpa zat besi (kontrol) dan plasebo (p>0,05).
Penggunaan laktoferin dalam penelitian ini ternyata mampu  menekan  pertumbuhan E.  coli dalam  usus. Menurut  Teraguchi  et  al.,  (1994)    mengatakan  bahwa apolaktoferin  dapat  menghambat  pertumbuhan E.  coli secara in  vitro dengan  mekanisme  pengasingan  zat  besi dengan kemampuan mengikat zat besi yang kuat, sehingga membuat  lingkungan  yang  defisien  zat  besi  untuk  semua bakteri yang memerlukan zat besi untuk pertumbuhannya. Sedangkan  menurut  Arnold  et  al.,  (1980)  mengatakan bahwa  hubungan  secara  langsung  antara  laktoferin  dan permukaan  bakteri,  mengindikasikan  bahwa  laktoferin dapat merusakkan membran bagian luar dari bakteri Gram Negatif sehingga menyebabkan terlepasnya lipopolisakarida  dari  sel  bakteri,  dengan  cara  demikian sensitifitas sel berfungsi sebagai antibiotik (Dionysius et al., 1993).

## KESIMPULAN
Hasil penelitian secara in vivo , menunjukkan bahwa suplementasi  laktoferin    pada  susu  formula  bayi  dalam bentuk FECAMP paling efektif dalam meningkatkan  kadar hemoglobin  (10,3  g/dl),  serta  total  zat  besi  pada  serum (6,35  ppm)  dan  hati  (101,3  ppm).  Suplementasi  laktoferin pada  susu  formula  dalam  bentuk  FEOR  yang  lebih efektifuntuk  menurunkan  oksidasi  lemak  pada  serum  dan hati serta total Esherichia coli dengan nilai masing-masing 274,51  mol/l, 2748,79  mol/l dan 1,7 x 10 7 cfu.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis mengucapkan banyak terima kasih kepada PT. Sari Husada Yogyakarta atas bantuan bahan laktoferin dan susu formulanya.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim.  1995. Survei  Kesehatan  Rumah  Tangga  1992. Badan  Penelitian  dan  Pengembangan  Kesehatan.
Jakarta.
______.        1990  –  1991. Animal  Research  Diets.  ICN Biomedicals, Inc.
Arnoldd, R.R., Brewer, M., Gauthier, J. 1980 . Bactericidal activity of human lactoferrin : Sensitivity of a variety of microorganism. Infect. Immun. 28 : 893 – 898.
Astuti,  M. 1992. Iron Bioavalability in Traditional Indonesia Soybean  Tempeh.  Disertasi.  Tokyo  University  of Agriculture.
Codex  Alimentarius  Commission.  1976 .  Recommended International  Standard  for  Foods  for  Infants  and Children.  CAC/RS  72/74.  Food  and  Agriculture Organization. Rome.
Dionysius,  A.  D.,  Grieve,  P.  A.,  dan  Milne,  J.  M.  1993 . Forms  of  lactoferrin  :  Their  antibacterial  effect  on enterotoxigenic E.coli. J.Dairy Sci. 76 : 2597-2606.
Farris,  E.J.  dan  Griffith,  J.  Q.  1962 .  The  Rat  in  the Laboratory  Investigation  (2nd.  ed.).  Hafner Publishing Company. New York.
Gaspersz,  V.  1991. Metoda  Perancangan  Percobaan. Amico. Bandung.
Hallberg,  L.  1984 .  Iron  dalam  Present  Knowledge  in Nutrition. 5 th ed. .The Nutrition Foundation c.
Husaini dan Karyadi, D. 1982 . Anemi Gizi. Dep. Kes. RI. Jakarta.
Kawakami, H., Shinmoto, H., Dosoko, S., dan Sogo, Y. 1987 .  One  step  isolation  of  lactoferrin  using immobilized monoklonal antibiodies. J. Dairy sci. 70: 752-759.
Kendrick, M.J., May, M.T., Plishka, M.J., Robinson, K.D. 1992. Metals  in  Biological  Systems.  Ellis  Harwood Limited. England.
Kume, S. I. dan Tanabe, S. 1994 . Effects of twinning and supplemental iron- saturated  lactoferrin on iron status  of  Newborn  Calves.  J.Dairy  Sci.  77  : 3118 - 3123.
____________________.1996. Effects  of  Supplemental lactoferrin  with  ferrous  iron  on  iron  status  of newborn calves. J.Dairy Sci. 79 : 459 – 464.
Nagasako, Y., Saito, H., Tamura, Y., Shimamura, S., dan Tomita,  M.  1993. iron  binding  properties  of bovine  lactoferrin  in  Iron  rich  solution.  J.Dairy  Sci. 76: 1876-1881.
Raharjo,  S.,  Safos,  J.  N.  dan  Scmidt,  G.  R.  1992 .  A Modified Thiobarbituric Acid C18 (TBA-C18) Method for  measuring  lipid  peroxidation  in  meat.  38  th International  Congress  of  Meat  Science  and Technologi. Proceeding Vol.3.p 571-574.
Sutaryo.  1987. Anemi  Gizi.  Hand  Out  :  Kursus  Singkat Penyakit  Kronik  Tertentu  Akibat  Kesalahan (kekurangan)  Gizi.  PAU  Pangan  dan  Gizi  UGM Yogyakarta
Teraguchi,  S.,  Ozawa,  K.,  Yasuda,  S.,  Shin,  K., Fukuwatari,  Y.,  dan  Shimamura,  S.  1994 .  The bacteriostatic  effects  of  orally  administered  bovine lactoferrin  on  intestinal  interobacteriaceae  of  SPF mice fed bovine Milk. Biosci. Bioth. Biochem. 58: (3) 482 –487.