## Jurnal Ilmu Farmasi dan Farmasi Klinik (JIFFK)
Vol. 15, No. 2, DESEMBER 2018, Hal. 31 - 35 ISSN: 1693-7899

## AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL DAUN DAN KULIT BATANG BERENUK TERHADAP Bacillus cereus
Devi Nisa Hidayati *1) , Cicih Sumiarsih 2) , Umroh Mahmudah 2) , Anita Dwi Puspitasari 2) 1,2. 3, 4 Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim Jl. Menoreh Tengah X/22, Sampangan, Semarang Email: devinisahidayati@unwahas.ac.id

## INTISARI
Tanaman  berenuk  ( Crecentia  cujete Linn.)  diketahui  memiliki  aktivitas  antibakteri  dan  dapat digunakan  sebagai  obat  diare  akibat  mikroorganisme. Bacillus  cereus salah  satu  bakteri  penyebab  diare. Tujuan  penelitian  untuk  mengukur  daya  hambat  terhadap Bacillus  cereus yang  disebabkan  oleh  ekstrak etanol  daun  (EDB)  dan  kulit  batang  berenuk  (EKB).  EDB  dan  EKB  diekstraksi  dengan  etanol  96% menggunakan  metode maserasi. Uji antibakteri EEDKB  dilakukan  dengan  metode disk diffusion pada  EDB konsentrasi 30%, 60%, 90%, 120% dan 150% , serta pada EKB menggunakan konsentrasi 60%, 70%, 80%, 90%  dan  100%  kemudian  dilakukan  pengukuran  aktivitas  antibakteri  dengan  melihat  Diameter  Daerah Hambat (DDH). Hasil uji aktivitas antibakteri EEDKB membuktikan bahwa EDB dan EKB terbukti mampu menghambat pertumbuhan Bacillus cereus.
Kata Kunci : Antibakteri, Crescentia cujete Linn, Bacillus cereus.

## ABSTRACT
The  plants  ( Crecentia  cujete Linn)  Are  known  to  have  antibacterial  activity  and  can  be  used  as  a  diarrhea drug due to microorganisms. Bacillus cereus is one of the bacteria that causes diarrhea.This aims to the study was antibacterial activity of ethanol extract of leaves (EL) and bark  broodstock (EB) on Bacillus cereus . EL and EB were extracted with ethanol 96% using maceration method. Antibacterial activity test was carried out with disk diffusion method in EL with a concentration of 30%, 60%, 90%, 120% and 150%, and in EB using concentrations of 60%, 70%, 80%, 90% and 100% then antibacterial activity  measurements were taken.  by looking at the Diameter of the Inhibitory Area (DDH). The results of the EL and EB of antibacterial activity proved that EL and EB berenuk have antibacterial activity against Bacillus cereus .
Keywords: Antibacterial , Crescentia cujete Linn, Bacillus cereus .
Corresponding author: Devi Nisa Hidayati Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim JL. Menoreh Tengah IX/22 Sampangan Semarang Email: devinisahidayati@unwahas.ac.id

## PENDAHULUAN
Infeksi di Indonesia termasuk sepuluh penyakit memiliki angka kematian yang cukup tinggi. Penyakit tersebut salah satunya disebabkan akibat adanya bakteri yang bersifat patogen (Darmadi, 2008).  Salah  satunya  disebabkan  oleh  bakteri  penyebab  diare.  Survei  morbiditas  yang  dilakukan Departemen  Kesehatan  (2000)  sebanyak  301/1000  sampai  tahun  2010  angka  kejadiannya  sebesar 411/1000  survei  mortalitas  akibat  diare  menempati  urutan  ke  13  dengan  proporsi  kematian  3,5% (Kemenkes, 2011).
Daun  berenuk  mengandung  senyawa  fenolik  yang  terbukti  mampu  mempengaruhi penghambatan  pertumbuhan  bakteri S.  aureus dan E.  coli (Ardianti  dan  Kusnadi,  2014). Menurut Rinawati  (2011)  ekstrak  etanol  dari  daun,  kulit  batang  serta  buah  yang  segar  atau  kering  berenuk ( Crescentia cujete Linn.) memiliki daya antibakteria terhadap bakteri Vibrio alginolitycus . Agarwal dan  Chaulan  (2015)  menyatakan  bahwa  ekstrak  air  dan  ekstrak  etanol  dari  kulit  batang  dan  daun
berenuk  dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri Mycobacterium  tuberculosis .  Melihat  potensi daun  dan  kulit  batang  berenuk  sebagai  antibakteri  maka  perlu  diketahui  aktivitas  antibakteri terhadap bakteri lain yang diduga mengakibatkan diare seperti Bacillus cereus.

## METODE PENELITIAN Bahan Penelitian
Bahan  yang  digunakan  untuk  memperoleh  ekstrak  adalah  daun  dan  kulit  batang  berenuk yang  didapat  dari  perkebunan  Watu  Simbar,  Kecamatan  Gunung  Pati,  Kabupaten  Semarang masing-masing  sebanyak  15  kg  bahan  segar  yang  dipanen  pada  pagi  hari  dengan  pengambilan secara random. Bahan kimia yang digunakan etanol 96% teknis diperoleh dari PT. Bratacem Tbk, silika  pengering  dari  PT.  Bratacem  Tbk  dan  aquadest, Bacillus  cereus nutient  broth  (NB)  dan nutrien agar  (NA) DMSO dan kloramfenikol 30 μg/disk.

## Alat Penelitian
Timbangan  (Henher  Scale),  neracaanalitik  (Ohauss),  rotaryevaporator  (Heidolph),  moisture contente balance (Ohauss), ayakanno. 40, oven, vaccum, cawan petri, Laminar Air flow,jarum ose, lampu  spiritus,  inkubator,  autoklaf,  tabung  reaksi,  micropipet,  blue  tip,  paper  disc,  jangka  sorong dan vortex.

## JALANNYA PENELITIAN

## 1. Identifikasi Tanaman Berenuk (Determinasi)
Proses  identifikasi  tanaman  dilakukan  untuk  menyakinkan  bahwa  identitas  tanaman  yang digunakan  dalam  penelitian  benar  tanaman  berenuk.  Tahapan  tersebut  dilakukan  dengan  melihat ciri-ciri dari bagian tanaman baik daun, batang, bunga sesuai dengan literatur.

## 2. Pembuatan Simplisia, EDB serta EKB.
Tanaman  berenuk  bagian  daun  dan  kulit  batang  segar,  dicuci  sebelum  dikeringkan. Pengeringan  dilakukan  menggunakan  oven  pada  suhu  50°C,  dilanjutkan  proses  penyerbukan. Sebanyak 2000 gram serbuk direndam pelarut (10:1) yaitu dengan 20 L etanol  96% untuk proses maserasi dan remaserasi. Proses maserasi membutuhkan pelarut sebanyak 15 L dengan merendam serbuk selama 3 hari sesekali dilakukan pengadukan dua kali dalam satu hari. Selanjutnya, sari dan ampas  disaring  dengan  corong  buchner  hingga  didapat  maserat  (Filtrat  I).  Lalu,  dilakukan remaserasi  dengan  cara  menambahkan  etanol  96%  sebanyak  5  L  pada  ampas.  Sari  dan  ampas disaring dengan corong buchner hingga didapat Filtrat II. Maserat yang didapat (Filtrat I dan Filtrat II)  dicampur  hingga  homogen.  Selanjutnya,  maserat  dikentalkan  hingga  mendapatkan  ekstrak kental.
3. Uji Antibakteri Ekstrak Daun dan Kulit Batang Berenuk
Pengujian antibakteri menggunakan metode disc diffusion (Kirby Bauer). Suspensi bakteri 1 mL dicampurkan kedalam 15 mL nutrien agar kemudian dihomogenkan dan dituangkan pada petri disk  (Sa’diyah,  2012).  EDB  dan  EKB  dengan  masing-masing  konsentrasi  diteteskan  pada  disk, kemudian  diplotkan  pada  media  pertumbuhan  nutrien  agar  yang  telah  memadat.  Media  tersebut diinkubasi  selama  24  jam  menggunakan  suhu  37ºC.  Berikutnya  dilakukan  pengukuran  daerah hambat bakteri (DDH).

## ANALISIS DATA
Hasil DDH uji aktivitas diukur setelah 24 jam inkubasi. Dikatakan memiliki aktivitas apabila DDH > 6 mm.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Pembuatan  Simplisia  dan  Ekstrak      Daun  Berenuk  (EDB)  dan  Ekstrak  Kulit  Batang Berenuk (EKB)
Pembuatan  serbuk  simplisia  didahului  dengan  pengeringan  daun  dan  kulit  batang  berenuk. Pengeringan  dilakukan  dengan  cara  pemanasan  pada  suhu  50ºC,    sampai  kadar  air  simplisia mencapai  kurang  dari  10%  (BPOM  RI,  2014).  Proses  tersebut  untuk  menjaga  kualitas  dari simplisia  agar  mampu  disimpan  dalam  waktu  lama.  Selain  itu  juga,  proses  pengeringan  dapat
terhindar  dari  kapang  dan  bakteri  pada  saat  penyimpanan.  Kadar  air  yang  tinggi  dalam  simplisa akan  mempengaruhi  mutu  dan  kualitas  suatu  simplisia.  Simplisia  yang  telah  kering,  kemudian dihaluskan  dan  diayak  agar  ukuran  partikelnya  menjadi  lebih  kecil  sehingga  dapat  meningkatkan zat aktif yang tersari.
Metode  maserasi  merupakan  metode  penyarian  senyawa  bahan  alam  dengan  cara  dingin, sehingga  dipilih  agar  senyawa  polifenol  yang  diduga  berpotensi  sebagai  zat  antibakteri  dari  daun berenuk  tidak mengalami  kerusakan karena  adanya pemanasan. Metode maserasi juga merupakan metode  yang  sederhana  dan  tidak  membutuhkan  alat  khusus  seperti  metode  perkolasi  maupun soxletasi. Pelarut yang dipilih adalah etanol 96%. Pelarut etanol 96% lebih dipilih karena salah satu pelarut  yang  digunakan  dalam  bahan  baku  pembuatan  sediaan  herbal.  Ekstrak  daun  dan  kulit batang  berenuk  telah  dilakukan  standarisasi  ekstrak,  walaupun  hasil  yang  didapat  belum  semua parameter memenuhi persyaratan standarisasi (Hidayati et al , 2018).
B. Hasil Uji Aktivitas Antibakteri EEDKB terhadap Bacillus cereus . Pengujian  kemampuan  penghambatan  bakteri Bacillus  cereus dilakukan  menggunakan metode Disc  diffusion yang  merupakan  suhu  dan  waktu  yang  paling  optimal  untuk  pertumbuhan bakteri. Pengujian aktivitas menggunakan EDB pada konsentrasi 30%, 60%, 90%, 120% dan 150% dan  EKB  pada  konsentrasi  60%,  70%,  80%,  90%  dan  100%.  Pelarut  ekstrak  dan  kontrol  negatif ( dimethyl sulfoxide/DMSO ).  Hasil pengujian aktivitas antibakteri EDB dan EKB terhadap Bacillus cereus (Gambar 1).
A

## B
Gambar 1. Hasil Pengujian Aktivitas Antibakteri EDB (A) dan EKB (B) terhadap Bacillus cereus
Senyawa  metabolit  sekunder  dari  daun  berenuk  yang  terbukti  sebagai  antibakteri  menurut Ardianti  dan  Kusnadi  (2014)  yaitu  senyawa  fenolik,  senyawa  tersebut  berpotensi  sebagai antibakteri  dengan  merusak  membran  sel  bakteri . Sedangkan  pada  kulit  batang  berenuk  menurut Rosdiana  (2016)  mengandung  alkaloid,  flavonoid,  saponin,  tanin  dan  steroid.  Pengujian  aktvitas antibakteri  EDB  dan  EKB  terhadap Bacillus  cereus menunjukan  aktivitasnya  pada  semua konsentrasi dengan pengamatan uji aktivitas EDB dan EKB (Tabel I).
Kontrol  positif  yang  dipilih  adalah  klorampenikol  yang  bersifat  bakteriostatik  berspektrum luas  sehingga  efektif  dalam  membunuh/menghambat  bakteri  gram  positif  dan  negatif  serta merupakan  antibiotik  yang  sering  digunakan  pada  terapi  diare  akut  (Agitsah et  al, 2014). Mekanisme  kerja  klorampenikol  sebagai  antibakteri  yaitu  mengakibatkan  penghambatan  ikatan protein dengan pengikatan ribosom pada bakteri (Ganiswara, 1995).
Tabel I. Uji Aktivitas Antibakteri EDB dan EKB terhadap Bacillus cereus EDB Perlakuan Diameter Daerah Hambat (DDH) (mm) Rata-rata ± SD (mm) I II III 30% 7,715 7,78 7,14 7,545±0,35 60% 8,03 8,18 8,72 8,31±0,36 90% 9,80 10,05 9,35 9,73±0,35 120% 10,14 10,10 10,25 10,16±0,07 150% 11,25 11,06 11,70 11,33±0,32 (+) 18,14 17,74 17,61 17,84±0,27 (-) - - - - EKB Perlakuan Diameter Daerah Hambat (DDH) (mm) Rata-rata ± SD (mm) I II III 60 % 10,6 10,2 10,7 10,5 ±0,26 70 % 11,15 11,6 11,75 11,5 ±0,31 80 % 11,65 11,7 11,65 11,67± 0,02 90 % 12,5 12,8 13,25 12,85± 0,51 100 % 13,85 13,8 14,25 13,96±0,24 (+) 21,25 21,5 21,55 21,43 ±0,12 (-) - - - -
Keterangan:   (+)  klorampenikol (-)  DMSO

## KESIMPULAN
Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  EDB  menunjukkan  adanya  aktivitas  antibakteri  terhadap Bacillus  cereus ditunjukan  pada  konsentrasi  30%,  60%,  90%,  120%  dan  150%.  Sedangkan  EKB pada konsentrasi 60%, 70%, 80%, 90% dan 100%.

## DAFTAR PUSTAKA
Agarwal,  M.  and  Chauhan,  S.,  2015,  Anti-mycobacterial  Potential  of Crescentia  cujete , ( Bignoniaceae ). International Journal of Advanced Research in Botany , 1, 1, 1-9.
Agitsah, I., Rusmalina, S., Ef, J. dan Jamaludin A., 2014, Penggunaan Antibiotik Pada Terapi Diare Akut  Anak  Di  Instalasi  Rawat  Jalan  Puskesmas  Bendan  Tahun  2012, Pena  Jurnal  Ilmu Pengetahuan dan Teknologi , 27, 2.
Ardianti,  A.  dan  Kusnadi,  J.,  2014,  EkstraksiAntibakteri  Dari  Daun  Berenuk  ( Crescentia  cujete Linn.) Menggunakan Metode Ultrasonik , fakultas Teknologi Pangan Universitas Brawijaya Malang, Jurnal Pangan dan Agroindustri , 2, 2, 28-35.
BPOM  RI.,  2014,  Peraturan  Kepala  Badan  Pengawas  Obat  dan  Makanan  Republik  Indonesia Nomor 17 Tahun 2014 tentang Perubahan atas Peraturan Peraturan Kepala Badan Pengawas  Obat  dan  Makanan  Nomor  HK.03.1.23.07.11.6662  Tahun  2011 Tentang Persyaratan Cemaran Mikroba dan Logam Berat
dalam  Kosmetika ,  Jakarta,  Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia.
Darmadi., 2008, Infeksi Nasokomia Problematika dan Pengendaliannya ,  Jakarta, Salemba Medika.
Ganiswara,  V.H.S.,  1995, Farmakologi  dan  Terapi ,  Edisi  4,    Bagian  Farmakologi,  Fakultas Kedokteran, Universitas Indonesia, Jakarta.
Hidayati, D.N., Sumiarsih, C., dan Mahmudah, C., 2018, Standarisasi Non Spesifik Ekstrak Etanol Daun  dan  Kulit  Batang  Berenuk  ( Crescentia  cujete Linn), Jurnal  Cendekia  Eksata ,  3,  1, 23.
Kemenkes.,  2011, Buletin  Jendela  Data  dan  Informasi  Kesehatan Situasi  Diare  di  Indonesia , Triwulan II, Vol.2,  Kementrian Kesehatan Republik Indonesia.
Rinawati, N.D., 2011, Daya Antibakteria Tumbuhan Majapahit ( Crescentia cujete Linn.) Terhadap Bakteri Vibrio alginolyticus , Jurnal Institut Teknologi Sepuluh November.
Rosdiana, D., 2016,  Potensi Ekstrak Etanol  Kulit Batang  dan Daun Berenuk               ( Crescentia cujete Linn)  Sebagai  Antibakteri, Skripsi ,  Tidak  dipublikasikan,  Departemen  Biokimia Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institusi Pertanian Bogor, Bogor.
Sa’diyah,  M.,  2012,  Respon  Ekstrak  Etil  Asetat  Lumut  Hati  ( Dumortiera  hirsuta )  sebagai Antimikroba  terhadap Escherichia  coli , Staphylococcus  aureus dan Candida  albicans , Skripsi ,  Departemen  Biologi  Fakultas  Sains  dan  Teknologi  Universitas  airlangga, Surabaya.