http://jurnal.farmasi.umi.ac.id/index.php/fitofarmakaindo/index
Uji Aktivitas Antinosiseptif Kombinasi Ekstrak Daun Dandang Gendis [ Clinacanthus nutans (Burn F) Lindau] Dan Daun Bakung ( Crinum asiaticum L.) secara In Vivo
Essty Damayanti 1* , Chaidir 1,2 , Rachmaniar Rachmat 1,3
1 Fakultas Farmasi, Universitas Pancasila
2 Badan Pengkajian dan Penerapan Teknologi (BPPT)
3 Puslit Oseanografi, Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI)
Article info Abstract History
Submission : 27-01-2021
Review : 15-04-2021 Accepted : 23-07-2021
* Email: essty007@gmail.com
DOI: 10.33096/jffi.v8i2.730

## Keywords:
Ntinosiseptif; daun dandang gendis; Clinacanthus nutans ( Burn F)Lindau ; daun bakung; Crinum asiaticum L dsdfsdf
The development of new and effective pain medications that are natural is expected to have the benefits of treatment. The purpose of this study was to determine the antinociceptive effectiveness of a combination of 75% ethanol extract  from  dandang  gendis  leaves  and  96%  ethanol  fraction  of  bakung leaf. In this study was used chemical method induction (Sigmund's method) in  25  male  mice  which  were  divided  into  5  treatment  groups,  namely treatment  group  I  as  negative  control  was  given  CMC  0.5%,  treatment group II as positive control was given acetosal 100 mg / kg BW, treatment groups III, IV and V were given combinations extract. Each group was given treatment  orally,  thirty  minutes  then  induced  with  0.6%  acetic  acid intraperitonially, after which it was observed and counted for the amount of stretching for sixty minutes. Data were analyzed by one-way ANOVA test. The results of this study showed that all treatment groups had a significant difference  (p  <0.05),  the  combination  of  75%  ethanol  extract  dandang gendis leaf and 96% ethanol fraction of bakung leaf with a dose of 100 mg / kg BW had good effectiveness with a percent effectiveness value of 92.50%. The  results  of  this  study  indicate  that  the  combination  of  75%  ethanol extract from dandang gendis leaf (Clinacanthus nutans (Burn F) Lindau) and  96%  ethanol  fraction  from  bakung  leaf  (Crinum  asiaticum)  with  the same  concentration  ratio,  have  relatively  higher  antinociceptive  of  the activity of each extract, in other words both of them work together.

## I. Pendahuluan
Hampir  semua  penyakit  pada  tubuh menimbulkan nyeri (Guyton and Hall, 2016). Nyeri adalah  gejala  yang  paling  umum  terjadi,  baik  pada pasien rawat inap maupun rawat jalan. Secara klinis, nyeri  adalah  apapun  yang  diungkapkan  oleh seseorang  mengenai  sesuatu  yang  dirasakannya sebagai  suatu  hal  yang  tidak  menyenangkan  atau sangat  mengganggu  (Dharmady,  2004).  Nyeri merupakan  mekanisme  perlindungan  yang  timbul jika ada kerusakan jaringan dan akan menyebabkan individu  bereaksi  dengan  cara  menghilangkan stimulus nyeri (Guyton and Hall, 2016).
Obat  tradisional  yang  telah  dikenal masyarakat memiliki khasiat yang bermanfaat bagi tubuh  adalah  dandang  gendis  [Clinacanthus  nutans (Burn F) Lindau] atau disebut ki tajam. Kandungan metabolit sekunder dari dandang gendis terdiri dari golongan  senyawa  fenolik  seperti  flavonoid,  asam fenolat, tanin, kumarin dan lignin serta mengandung derivat  clinamide,  fitosterol,  alkaloid,  klorofil, glikosida, saponin, dan triterpen (Kurdi, 2010; Raya et al. , 2015; Alam et al. , 2016; Kosai, Sirisidthi and
Jiraungkoorskul, 2016; Rahim et al. , 2016; Zulkipli et al. , 2017). Senyawa flavonoid, saponin, alkaloid dan  triterpen  merupakan  senyawa  bioaktif  yang sangat  terkait  dengan  aktivitas  farmakologinya sebagai antinosiseptif (Rahim et al. , 2016; Zulkipli et al. , 2017). Hasil  penelitian  menunjukkan  respon antinosiseptif ekstrak metanol dandang gendis yang signifikan dengan nilai p < 0,05 pada semua metode pengujian  dengan  nilai  ED50  279,3  mg/kg  untuk ACT dan untuk fase awal dan akhir dari metode FT nilai  ED 50 masing-masing  >500mg/kg  atau  227,7 mg/kg  (Rahim et  al. ,  2016).  Penentuan  nilai  LD 50 ekstrak dandang gendis telah dilakukan pada hewan uji dengan dosis tunggal masing-masing 0,9 g/kg BB dan  1,8  g/kg  BB.  Hasil  pengujian  pada  masing- masing pemberian dosis ekstrak tidak menyebabkan efek samping atau kematian hewan uji. Berdasarkan pengujian  tersebut,  maka  LD 50 dari  ekstrak  daun dandang gendis lebih besar dari 1,8 g/kg BB (P’ng, Akowuah and Chin, 2012).
Tanaman  lain  yang  memiliki  aktivitas farmakologi  sebagai  antinosiseptif  adalah  daun
bakung  ( Crinum  asiaticum L).  Bakung  merupakan salah  satu tumbuhan liar dan  sebagai tanaman  hias yang  seluruh  bagian  tanamannya  dimanfaatkan sebagai  obat  tradisional  untuk  dysuria,  edema, antidotum (Fennell and Staden, 2001; Zulkipli et al. , 2017).  Penelitian  aktivitas  antinosiseptif  telah dilakukan  menggunakan  daun  bakung  yang  di ekstraksi  secara  berurutan  menggunakan  pelarut petroleum  eter,  kloroform  dan  metanol.  Aktivitas antinosiseptif  terbaik  ditunjukkan  oleh  ekstrak kloroform  dengan  dosis  250  mg/kg  (p  <  0,05) kemudian diikuti ekstak  metanol, dan pada ekstrak petroleum  eter  tidak  ada  aktivitas  yang  teramati sampai  dosis  1000  mg/kg.  Skrining  fitokimia  dari fraksi aktif menunjukkan adanya alkaloid, kumarin, glikosida,  triterpen  dan  flavonoid  (Asmawi et  al. , 2011).
Pada  penelitian  ini  akan  dilakukan pengujian aktivitas antinosiseptif kombinasi ekstrak daun  dandang  gendis  dan  daun  bakung  dengan beberapa konsentrasi yang berbeda untuk meningkatkan efektifitasnya.
II. Metode Penelitian

## II.1 Determinasi Sampel
Determinasi tumbuhan dandang gendis dan bakung  dilakukan  di  Herbarium  Bogoriense  Pusat Penelitian Biologi LIPI Cibinong Bogor.
II.2 Ethical clearance
Surat  pernyataan ethical  clearance untuk penelitian ini diperoleh setelah  mengajukan ethical approval kepada Komisi Etik Penelitian Kesehatan Fakultas Kedokteran Universitas Maranatha Bandung.  Penelitian  ini  dinyatakan  lolos  kode  etik berdasarkan  surat  pernyataan  ethical  clearance dengan nomor protokol 001/KEP/I/2019.

## II.3  Pengumpulan  dan  Penyediaan  Bahan Penelitian
Daun  dandang  gendis  dan  daun  bakung diperoleh  dari  Balai  Penelitian  Tanaman  Rempah dan Obat (Balitro) Bogor. Daun dandang gendis dan daun bakung masing-masing diambil sebanyak 2 kg. Daun  dandang  gendis  dan  daun  bakung  kemudian dibersihkan  dengan  cara  dicuci  menggunakan  air tawar untuk menghilangkan kotoran, dianginkan dan dikeringkan  dengan  sinar  matahari  tidak  langsung. Simplisia  daun  dandang  gendis  dan  daun  bakung yang  telah  kering  kemudian  dibuat  serbuk menggunakan  blender  dan  diayak  dengan  ukuran 4/18.

## II.4 Pembuatan Ekstrak II.4.1 Pembuatan Ekstrak Daun Dandang Gendis
Serbuk kering daun dandang gendis masing – masing (dibuat 3 bagian) ditimbang sebanyak 150 gram,  kemudian  masing  –  masingdi  maserasi dengan  menggunakan  pelarut  etanol  96%,  etanol 75%  dan  etanol  50%  dengan  perbandingan  1:20 selama  2  jam  pada  suhu  kamar.  Hasil  maserasi disaring,  kemudian  ampas  nya  dimaserasi  kembali
sebanyak  1  kali,  serta  disaring  kembali.  Maserat dikumpulkan  dan  diuapkan  menggunakan  rotary evaporator pada suhu 40˚C. Ekstrak yang diperoleh berupa  ekstrak  kental  dari  ekstrak  etanol  96% (EE96),  ekstrak  etanol  75%  (EE75)  dan  ekstrak etanol 50% (EE50) kemudian ekstrak ditimbang dan simpan pada suhu 4˚C sebelum digunakan.

## II.4.2 Pembuatan Ekstrak Daun Bakung
Serbuk  kering  daun  bakung  ditimbang sebanyak 300 gram (1) dan 150 gram (2), kemudian masing-masing  di  maserasi  dengan  menggunakan pelarut  etanol  96%  dengan  perbandingan  1:20 selama  2  jam  pada  suhu  kamar.  Hasil  maserasi disaring,  kemudian  ampas  dimaserasi  kembali sebanyak 1 kali, serta disaring kembali, dan masing- masing maserat dikumpulkan. Maserat 1 kemudian dilakukan  partisi  cair  –  cair  dengan  pelarut  heksan menggunakan corong pisah. Tiap lapisan ditampung dan masing- masing diuapkan menggunakan rotary evaporator pada suhu 40˚C. Ekstrak yang diperoleh adalah  ekstrak  fraksi  heksan  (EFH)  dan  ekstrak fraksi etanol (EFE). Maserat 2 diuapkan menggunakan  rotary  evaporator  pada  suhu  40˚C (Rahim et al. , 2016). Ekstrak yang diperoleh adalah ekstrak etanol bakung (EKE). Seluruh ekstrak yang diperoleh ditimbang kemudian disimpan pada suhu 4˚C sebelum digunakan.

## II.5 Pengujian Mutu Serbuk Simplisia Dan Mutu
Ekstrak

## II.5.1 Derajat Kehalusan
Serbuk uji dimasukkan kedalam pengayak no 4 yang  mempunyai panci penampung dan tutup yang sesuai. Goyang pengayak dengan arah putaran horizontal  dan  ketukkan  secara  vertikal  pada permukaan yang keras selama tidak kurang dari 30 menit  atau  sampai  pengayakan  praktis  sempurna. Serbuk kemudian dimasukkan kedalam pengayak no 18  yang  mempunyai  panci  penampung  dan  tutup yang sesuai. Goyang pengayak dengan arah putaran horizontal  dan  ketukkan  secara  vertikal  pada permukaan  yang  keras  sampai  diperoleh  serbuk tidak lebih dari 40% dari bobot awal.

## II.5.2 Susut pengeringan
Sebanyak 1 g serbuk simplisia dalam krus porselen bertutup yang sebelumnya telah dipanaskan  pada  suhu  105 o C  selama  30  menit  dan telah  ditara.  Ratakan  simplisia  dengan  cara menggoyangkan  hingga  merupakan  lapisan  setebal lebih kurang 5 mm – 10 mm, masukkan dalam ruang pengering,  buka  tutupnya  keringkan  pada  suhu penetapan  105 o C  hingga  bobot  tetap.  Krus didinginkan dalam keadaan tertutup dalam desikator hingga  suhu  kamar,  kemudian  dicatat  bobot  tetap yang  diperoleh  untuk  menghitung  persentase  susut pengeringannya  ( Farmakope  Herbal  Indonesia . Edisi I, 2008).

## II.5.3 Kadar Air
Pengukuran  kadar  air  dilakukan  dengan cara  titrasi  menggunakan  pereaksi  Karl  Fischer. Masukkan kurang lebih 20 ml methanol P ke dalam labu  titrasi.  Titrasi  dengan  pereaksi  Karl  Fischer hingga  titik  akhir  tercapai.  Masukan  ekstrak  yang telah ditimbang kedalam labu titrasi, aduk selama 1 menit.  Titrasi  dengan  pereaksi  Karl  Fischer  yang telah diketahui  kesetaraan airnya  hingga  titik akhir tercapai. Hitung jumlah air dalam mg dengan rumus V x F. V adalah volume pereaksi Karl Fischer dan F adalah  faktor  kesetaraan  air  (Direktorat  Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, 2000).

## II.5.4 Kadar abu
Masing-masing  sebanyak  2  g  ekstrak ditimbang  dengan  seksama  ke  dalam  krus  silikat yang  telah  ditara.  Krus  silikat  yang  berisi  serbuk simplisia  dipijarkan  perlahan  lahan  hingga  arang habis, kemudian didinginkan dan ditimbang. Kadar abu  total  dihitung  dihitung  terhadap  berat  sampel awal  dan  dinyatakan  dalam  %  b/b  (Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, 2000).

## II.5.5 Kadar Abu Tidak Larut Asam
Abu  yang  diperoleh  dari  penetapan  kadar abu,  didihkan  dengan  25  ml  asam  klorida  encer  P selama  5  menit,  bagian  yang  tidak  larut  asam dikumpulkan,  disaring  melalui  kertas  saring  bebas abu,  dicuci  dengan  air  panas,  disaring  dan ditimbang.  Kadar  abu  tidak  larut  asam  dihitung terhadap berat sampel awal dan dinyatakan dalam % b/b  (Direktorat  Jenderal  Pengawasan  Obat  dan Makanan, 2000).

## II.5.6 Kadar Sari Larut Air
Masing-masing sebanyak 5 g ekstrak disari selama  24  jam  dengan  100  ml  air-kloroform  LP, menggunakan  labu  bersumbat  sambil  berkali-kali dikocok  selama  6  jam  pertama  dan  kemudian dibiarkan  selama  18  jam,  saring.  Sebanyak  20  ml filtrat  diuapkan  hingga  kering  dalam  cawan penguap, residu dipanaskan pada suhu 105 o C hingga bobot  tetap.  Kadar  senyawa  yang  larut  dalam  air dihitung  terhadap  berat  simplisia  awal  dan dinyatakan  dalam  %  b/b  (Direktorat  Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, 2000).

## II.5.7 Kadar Sari Larut Etanol
Masing-masing  sejumlah  5  g  ekstrak dimaserasi selama 24 jam dengan 100 ml etanol 96% menggunakan  labu  bersumbat  sambil  berkali  kali dikocok  selama  6  jam  pertama  dan  kemudian dibiarkan  selama  18  jam.  Filtrat  disaring  cepat dengan  menghindari  penguapan  etanol,  kemudian diuapkan  20  ml  filtrat  hingga  kering  dalam  cawan penguap  yang  telah  ditara,  residu  dipanaskan  pada suhu 105 o C hingga bobot tetap. Kadar senyawa yang larut dalam etanol dihitung terhadap berat simplisia awal  dan  dinyatakan  dalam  %  b/b  (Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, 2000).

## II.6 Pengujian Fitokimia
Pengujian  Fitokimia  meliputi  identifikasi senyawa  alkaloida,  flavonoid,  saponin,  terpenoid, steroid,  dan  tannin  (Departemen  Kesehatan Republik Indonesia, 1995; Tiwari et al. , 2011).

## II.7 Pengujian Aktivitas Antinosiseptif II.7.1 Persiapan Hewan Uji
Hewan  uji  yang  digunakan  adalah  mencit jantan  dewasa  dengan  BB  25  –  30  g.  Aklimatisasi mencit  selama  1  (satu)  minggu  dengan  tujuan mengadaptasikan  mencit  dengan  lingkungan  baru. Mencit  ditempatkan  pada  suhu  kamar  (27  ±  2˚C, kelembaban  70-80%)  (Rahim et  al. ,  2016).  Pada tahap  ini  dilakukan  pengamatan  terhadap  keadaan umum  mencit,  meliputi  berat  badan  dan  keadaan fisiknya. Mencit yang sehat memiliki ciri – ciri bulu bersih  dan  tidak  berdiri,  mata  jernih  bersinar,  dan berat  badan  bertambah  atau  tidak  berkurang  setiap hari (Marlyne, 2012). Mencit yang dinyatakan sehat dikelompokkan menjadi  8  kelompok untuk pengujian  ekstrak  tunggal  dengan  jumlah  mencit pada  masing-masing  kelompok  adalah  3  ekor (mengikuti  rumus  Federer).  Pada  pengujian kombinasi  ekstrak,  mencit  dibagi  menjadi  5 kelompok  dengan  jumlah  mencit  pada  masing- masing  kelompok  adalah  5  ekor  (mengikuti  rumus Federer.

## II.7.2 Persiapan Bahan Uji II.7.2.1 Pembuatan Larutan CMC 0,5% (Kontrol Negatif)
Sejumlah  0,25  gram  CMC  ditimbang kemudian  dikembangkan  dalam  5  ml  air  panas selama  30  menit,  setelah  itu  digerus  dan ditambahkan  aquadest  sampai  50  ml.  Diberikan dengan  dosis  10  ml/kg  BB (Rahim et  al. ,  2016). Dosis  yang  diberikan  untuk  bobot  30  g  mencit adalah 0,3 ml larutan CMC 0,5%.

## II.7.2.2 Pembuatan Larutan Asam Asetilsalisilat (Kontrol Positif)
Dosis  Asetosal  yang  digunakan  adalah  100 mg/kg BB. Untuk bobot mencit 30 g dosis asetosal adalah  3  mg.  Sejumlah  100 mg  asetosal  ditimbang kemudian dilarutkan dalam aquadestilata sampai 10 ml. Diberikan dengan voume 10 ml/kg BB  (Rahim et al. , 2016). Volume yang diberikan untuk bobot 30 g mencit adalah 0,3 ml.

## II.7.2.3 Pembuatan Larutan Asam Asetat
Asam  asetat  glasial  mengandung  tidak kurang dari 99,5% dan tidak lebih dari 100,5% b/b asam asetat ( Farmakope Herbal Indonesia . Edisi I, 2008).  Dari  asam  asetat  glasial  dibuat  asam  asetat 10%  terlebih  dahulu  kemudian  dibuat  asam  asetat glasial 0,6% dengan metode pengenceran menggunakan  NaCl  fisiologis  sebagai  pelarut 9 .
Sejumlah 1 ml asam asetat glasial diukur, kemudian ditambahkan  NaCl  fisiologis  sampai  10  ml.Setelah itu  sejumlah  3  ml  asam  asetat  10%  ditambahkan
NaCl  fisiologis  sampai  50  ml.  Diberikan  dengan volume 10 ml/kg BB (Rahim et al. , 2016). Volume yang diberikan untuk bobot 30 g mencit adalah 0,3 ml.

## II.7.2.4 Ekstrak
Untuk  ekstrak  daun  dandang  gendis, pemberian  dosis  pada  mencit  didasarkan  pada penelitian  Rahim  (2016)  yaitu  279,3  mg/kg  BB (ED 50 ).  Diberikan  dengan  volume  10  ml/kg  BB 9 . Volume  yang  diberikan  untuk  bobot  30  g  mencit adalah  0,3  ml  yang  mengandung  ekstrak  daun dandang gendis 8,38 mg. Sejumlah 139,67 mg dari masing – masing EE96, EE75 dan EE50 ditimbang, kemudian  dilarutkan  dalam  larutan  CMC  0,5% sampai 5 ml.
Untuk  ekstrak  daun  bakung,  pemberian dosis  pada  mencit  didasarkan  pada  penelitian Asmawi (Asmawi et al. , 2011) yaitu 250 mg/kg BB. Diberikan  dengan  volume  10  ml/kg  BB.  Volume yang diberikan untuk bobot 30 g mencit adalah 0,3 ml  yang  mengandung  ekstrak  daun  bakung  5  mg. Sejumlah 125 mg dari masing – masing EKE, EFH dan  EFE  ditimbang,  kemudian  dilarutkan  dalam larutan CMC 0,5% sampai 5 ml.

## II.7.2.5 Kombinasi Ekstrak
Hasil  dari  penentuan  ekstrak  dari  daun dandang gendis dan daun bakung dibuat kombinasi ekstrak  untuk  dilakukan  pengujian  aktivitas antinosiseptif. Bobot total kombinasi ekstrak adalah 200  mg/kgBB,  berdasarkan  pada  hasil  aktivitas antinosiseptif penelitian sebelumnya (Asmawi et al. ,
2011; Rahim et al. , 2016). Diberikan dengan volume 10  ml/kg  BB  (Rahim et  al. ,  2016).  Volume  yang diberikan  untuk  bobot  30g  mencit  adalah  0,3  ml. Persentase kombinasi ekstrak daun dandang gendis dan daun bakung dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel  1 .  Persentase  kombinasi  ekstrak  daun dandang gendis dan daun bakung
Kombinasi Dosis Ekstrak Daun Dandang Gendis* Ekstrak Daun Bakung* 1 75% 150 mg/kg BB (4,5 mg/30 g) 25% 50 mg/kg BB (1,5 mg/30 g) 2 50% 100 mg/kg BB (3 mg/30 g) 50% 100 mg/kg BB (3 mg/30 g) 3 25% 50 mg/kg BB (1,5 mg/30 g) 75% 150 mg/kg BB
(4,5 mg/30 g)
*ekstrak  yang  memiliki  efektifitas  paling  besar  pada  pengujian aktivitas antinosiseptif ekstrak tunggal

## II.7.3 Perlakuan II.7.3.1 Ekstrak
Mencit  jantan  dikelompokkan  secara  acak menjadi  8  kelompok,  masing-masing  kelompok berjumlah  3  ekor  mencit  yaitu  kelompok  kontrol positif, kontrol negatif, kelompok EE96, kelompok EE75,  dan  kelompok  EE50,  kelompok  EKE, kelompok  EFH,  dan  kelompok  EFE.  Semua kelompok diberikan induksi asam asetat.

## II.7.3.2 Kombinasi Ekstrak
Mencit  jantan  dikelompokkan  secara  acak menjadi  5  kelompok,  masing  –  masing  kelompok berjumlah  5  ekor  mencityaitu  kelompok  kontrol positif,  kontrol  negatif,  kelompok  dosis  kombinasi 1,  kelompok  dosis  kombinasi  2  dan  kelompok dosiskombinasi  3.  Semua  kelompok  diberikan induksi asam asetat.

## II.7.4 Prosedur Uji Antinosiseptif II.7.4.1 Ekstrak
Uji  antinosiseptif  masing-masing  ekstrak dari daun dandang gendis dan daun bakung terhadap hewan  uji  dilakukan  dengan  cara  mencit  jantan dipuasakan ± 18 jam sebelum pengujian, air minum tetap diberikan. Pada hari pengujian,  mencit jantan ditimbang bobotnya dan dikelompokkan secara acak menjadi  8  kelompok  dengan  jumlah  mencit  jantan masing  –  masing  kelompok  adalah  3  ekor  mencit jantan. Pada kelompok kontrol negatif, setiap mencit jantan  diberikan  larutan  CMC  0,5%  sebanyak  0,3 ml/30  gram  BB  mencit  secara  oral  dan  setelah  30 menit  diinduksi  dengan  asam  asetat  secara intraperitonial.  Pada  kelompok  kontrol  positif, setiap  mencit  jantan  diberikan  larutan  asetosal sebanyak 0,3 ml/30 gram BB mencit secara oral dan setelah  30  menit  diinduksi  dengan  asam  asetat secara  intraperitonial.  Pada  masing  –  masing kelompok  perlakuan,  kelompok  EE95,  kelompok EE75, kelompok EE50, kelompok EKE, kelompok EFH  dan  kelompok  EFE,  mencit  jantan  diberikan bahan uji masing-masing sebanyak 0,3 ml/30 g BB mencit  secara  oral  dan  setelah  30  menit  diinduksi dengan  asam  asetat  secara  intraperitonial.  Jumlah geliat  mencit  dihitung  dengan  interval  waktu  lima menit selama 60 menit. Semua data yang diperoleh dianalisa  secara  statistik  dan  dihitung  persentase proteksi  serta  persentase  efektifitas  antinosiseptif (Marlyne, 2012; Rahim et al. , 2016).

## II.7.4.2 Kombinasi Ekstrak
Uji  antinosiseptif  kombinasi  ekstrak  daun dandang gendis dan daun bakung terhadap hewan uji dilakukan  dengan  cara  mencit  jantan  dipuasakan  ± 18  jam  sebelum  pengujian,  air  minum  tetap diberikan.  Pada  hari  pengujian,  mencit  jantan ditimbang bobotnya dan dikelompokkan secara acak menjadi  5  kelompok  dengan  jumlah  mencit  jantan masing  –  masing  kelompok  adalah  5  ekor  mencit jantan. Pada kelompok kontrol negatif, setiap mencit
jantan  diberikan  larutan  CMC  0,5%  sebanyak  0,3 ml/30  gram  BB  mencit  secara  oral  dan  setelah  30 menit  diinduksi  dengan  asam  asetat  secara intraperitonial.  Pada  kelompok  kontrol  positif, setiap  mencit  jantan  diberikan  larutan  asetosal sebanyak 0,3 ml/30 gram BB mencit secara oral dan setelah  30  menit  diinduksi  dengan  asam  asetat secara  intraperitonial.  Pada  masing  –  masing kelompok perlakuan, kelompok dosis kombinasi 1, kelompok  dosis  kombinasi  2  dan  kelompok  dosis kombinasi  3,  mencit  jantan  diberikan  bahan  uji masing-masing  sebanyak  0,3ml/30  g  BB  mencit secara  oral  dan  setelah  30  menit  diinduksi  dengan asam  asetat  secara  intraperitonial.  Jumlah  geliat mencit  dihitung  dengan  interval  waktu  lima  menit selama  60  menit.  Semua  data  yang  diperoleh dianalisa  secara  statistik  dan  dihitung  persentase proteksi  serta  persentase  efektifitas  antinosiseptif (Marlyne, 2012; Rahim et al. , 2016).

## II.8 Cara Pengolahan Dan Analisis Data
Data  yang  diperoleh  dari  uji  mutu  serbuk simplisia,  uji  mutu  ekstrak,  pengujian  aktivitas antinosiseptif  dimasukkan  kedalam  tabel  induk, kemudian  data  diolah  secara  manual  dengan menggunakan  bantuan  program  komputer.  Hasil pengolahan data disajikan dalam bentuk teks, tabel dan atau gambar.
Data  jumlah  geliat  mencit  yang  diperoleh dari  pengujian  ekstrak  tunggal  dan  kombinasi
ekstrak  dianalisis  menggunakan  program  SPSS ( Statistical Package for the social Sciens) statistics 17.0, meliputi pengujian normalitas yang dilakukan dengan  metode Shapiro-Wilktest dan Kolmogorov- Smirnov ,  kemudian  pengujian  homogenitas Levene Statistic .  Jika  data  terdistribusi  normal  dan homogen, maka analisis akan dilanjukan menggunakan ANOVA ( Analysis of Variance ) satu arah.  Jika  hasil  uji  ANOVA  menunjukkan  adanya perbedaan yang nyata secara statistik pada masing- masing  kelompok  perlakuan, maka  analisis dilanjutkan  menggunakan  uji  BNT  (Bebas  Nyata Terkecil)  dengan  taraf  signifikasi  5%  (0,05)  untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan antara tiap kelompok perlakuan.
Dari  masing-masing  data  jumlah  geliat mencit  pada  pengujian  aktivitas  antinosiseptif ekstrak  tunggal  dan  kombinasi  ekstrak,  dihitung persentase  proteksi  bahan  uji,  yaitu  kemampuan bahan  uji  dalam  mengurangi  respon  geliat  yang disebabkan oleh induksi asam asetat. Persentase ini menggambarkan  daya  antinosiseptif  bahan  uji. Persentase proteksi diperoleh dengan membandingkan  rata-rata  jumlah  geliat  tiap kelompok  perlakuan  terhadap  kelompok  perlakuan kontrol  negatif.  Persen  proteksi  terhadap  induksi asam  asetat  dihitung  dengan  rumus  1  (Galani  and
Patel, 2011).
% Proteksi =
Rata-rata Jumlah geliat (Kelompok kontrol negatif-kelompok bahan uji) Rata-rata jumlah geliat kelompok kontrol negatif x 100%
Berdasarkan  hasil  perhitungan  persen proteksi masing-masing kelompok perlakuan, maka dilakukan perhitungan persentase efektifitas dengan cara membandingkan antara masing-masing
kelompok  perlakuan  dengan  persen  proteksi kelompok  perlakuan  kontrol  positif  yang  dihitung dengan  rumus  2  (Wahyuni,  Astuti  and  Nuratmi, 2003).
% Efektifitas = % P roteksi Kelompok Bahan Uji
% Proteksi Kelompok Kontrol Positif x 100%

## III. Hasil dan Pembahasan
Tanaman  daun  dandang  gendis  dan  daun bakung  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini merupakan  hasil  tanaman  yang  dibudidayakan, diperoleh  dari  Balai  Penelitian  Tanaman  Rempah dan  Obat  (Balitro)  Bogor.  Determinasi  tanaman dilakukan di Herbarium Bogoriense Bidang Botani Pusat  Penelitian  Biologi,  LIPI  Bogor.  Hasil determinasi  menunjukkan  bahwa  tanaman  yang diidentifikasi adalah jenis dandang gendis [ Clinacanthus  nutans (Burn  F)  Lindau]  suku Acanthaceae  dan  Bakung  ( Crinum  asiaticum L) suku Amarylidaceae.
Daun  dandang  gendis  dan  daun  bakung yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  dipanen  saat usia  tanaman  3  (tiga)  bulan.  Daun  yang  diperoleh kemudian  dicuci  dan  dibersihkan  kemudian
dilakukan  perajangan  menjadi  ukuran  yang  lebih kecil,  setelah  itu  dikeringkan  dengan  cara  diangin- anginkan  menggunakan  sinar  matahari  tidak langsung selama 7 hari.
Pengujian  mutu  serbuk  simplisia  daun dandang gendis dan daun bakung meliputi pengujian derajat kehalusan dan susut pengeringan. Pengujian susut  pengeringan  memberikan  batasan  maksimal (rentang)  tentang  besarnya  senyawa  yang  hilang pada  proses  pengeringan  (Direktorat  Jenderal Pengawasan  Obat  dan  Makanan,  2000).  Susut pengeringan  menunjukkan  jumlah  zat  yang menguap  atau  hilang  akibat  pemanasan.  Hasil pengujian  mutu  serbuk  simplisia  daun  dandang gendis dan daun bakung dapat dilihat dalam Tabel 2.
(2)
(1)
Tabel 2 . Hasil pengujian mutu serbuk simplisia
Nama Simplisia Derajat Kehalusan Susut Pengeringan Daun  Dandang Gendis 4/18 7,45% Daun Bakung 4/18 5,22%
Berdasarkan hasil pengujian pada Tabel 4, persen  susut  pengeringan  untuk  daun  dandang gendis  lebih  besar  dibandingkan  dengan  persen susut  pengeringan  pada  daun  bakung,  artinya  pada daun dandang gendis besarnya senyawa yang hilang pada  proses  pengeringan  lebih  banyak  dibanding dengan daun bakung.
Pembuatan  ekstrak  pada  penelitian  ini melalui  proses  yang  berbeda  untuk  masing-masing tanaman.  Hal  tersebut  didasarkan  pada  penelitian yang  telah  dilakukan  oleh  Rahim  (Rahim et  al. , 2016) bahwa ekstrak daun dandang gendis diperoleh dengan  cara  maserasi  menggunakan  metanol.  Oleh karena itu, pada penelitian ini untuk daun dandang
gendis  pembuatan  ekstrak  menggunakan  etanol dengan konsentrasi yang berbeda-beda yaitu etanol 96%, etanol 75% dan etanol 50% sehingga diperoleh tiga macam ekstrak. Sedangkan untuk daun bakung, penelitian  yang  telah  dilakukan  oleh  Asmawi (Asmawi et al. , 2011) menggunakan ekstrak fraksi kloroform. Oleh karena itu, pembuatan ekstrak pada penelitian  ini  menggunakan  pelarut  etanol  96%, kemudian dilakukan partisi cair-cair dengan pelarut n -heksan,  sehingga  diperoleh  tiga  macam  ekstrak, yaitu  ekstrak  total  daun  bakung,  fraksi  non  polar dalam  heksan  dan  fraksi  semi  polar/polar  dalam etanol.
Bobot  masing-masing  ekstrak  dan  fraksi serta  rendemennya  yang  diperoleh  dapat  dilihat dalam Tabel 3.
Tabel 3. Bobot ekstrak dan rendemen daun dandang gendis dan daunbakung
Nama Simplisia Jenis Pelarut Bobot serbuk simplisia (g) Jumlah Ekstrak (g) Rendemen DaunDandang Gendis Etanol 96% 150 34,01 22,67% Etanol 75% 150 24,38 16,25% Etanol 50% 150 42,40 28,27% Daun Bakung Etanol 96% 150 17,01 11,34% Fraksi Heksan 300 45,51 15,17% Fraksi Etanol 300 6,94 2,31%
Berdasarkan  Tabel  3,  untuk  ekstrak  fraksi heksan  dan  etanol  daun  bakung,  bobot  yang diperoleh mengalami bias jika dibandingkan dengan bobot  ekstrak  etanol  daun  bakung.  Pada  bobot ekstrak  fraksi  etanol,  bobot  yang  diperoleh  relatif lebih  kecil  jika  dibandingkan  dengan  ekstrak etanolnya.  Hal  tersebut  kemungkinan  dikarenakan pada  saat  melakukan  partisi  cair-cair  waktu  yang digunakan relatif kurang lama, sehingga pemisahan belum terjadi dengan sempurna.
Pemeriksaan ekstrak daun dandang gendis dan daun bakung meliputi pemeriksaan organoleptis dan  pengujian  mutu  ekstrak  diantaranya  kadar  air, kadar  abu,  kadar  abu  tidak  larut  asam,  kadar  sari larut  air  dan  kadar  sari  larut  etanol.  Untuk pemeriksaan organoleptis menggunakan pengamatan  secara  visual  untuk  melihat  bentuk, warna, bau dan rasa. Hasil pemeriksaan organoleptis dapat dilihat dalam Tabel 4.
Tabel 4. Hasil pemeriksaan organoleptis ekstrak daun dandang gendis dan daun bakung
Ekstrak Bentuk Warna Bau Rasa EE 96 Ekstrak Kental Hijau Tua Khas Kelat EE 75 Ekstrak Kental Hijau Tua Khas Kelat EE 50 Ekstrak Kental Coklat Tua Khas Kelat EKE Ekstrak Kental Hijau Tua Khas Kelat EFH Ekstrak Kental Hijau Tua Khas Kelat EFE Ekstrak Kental Hijau Tua Khas Kelat
Ket:  EE  96:  ekstrak  etanol  96%;  EE  75:  ekstrak  etanol  75%;  EE 50:  ekstrak  etanol  50%;  EKE:  ekstrak etanol bakung; EFH: Ekstrak fraksi heksan; EFE: ekstrak fraksi etanol
Pengujian kadar air pada ekstrak bertujuan untuk memberikan batas maksimal (rentang) tentang besarnya kandungan air di dalam ekstrak. Pengujian kadar abu tujuannya adalah memberikan gambaran kandungan  mineral  internal  dan  eksternal  yang berasal  dari  proses  awal  sampai  terbentuknya
ekstrak  (Direktorat  Jenderal  Pengawasan  Obat  dan Makanan, 2000), sedangkan pengujian kadar abu tak larut asam memberikan gambaran cemaran senyawa logam berat yang terkandung dalam ekstrak. Untuk pengujian kadar sari larut etanol dan kadar sari larut air  tujuannya  adalah  memberikan  gambaran  awal
sejumlah kandungan dapat tersari dalam pelarut air dan  dalam  pelarut  etanol.  Hasil  pemeriksaan pengujian mutu ekstrak dapat dilihat dalam Tabel 5.
Tabel 5 . Hasil pengujian mutu ekstrak
Sampel Parameter Mutu Ekstrak Kadar Air (%) Kadar Abu (%) Kadar Abu Tak Larut Dalam Asam (%) Kadar Sari Larut Etanol (%) Kadar Sari Larut Air (%) EE 96 1,56 0,15 0,04 37,58 55,00 EE 75 2,77 0,24 0,03 36,15 60,81 EE 50 3,36 0,14 0,02 34,48 63,61 EKE 1,10 0,46 0,06 32,18 44,32 EFH 2,15 0,40 0,05 30,14 44,65 EFE 3,19 0,21 0,03 38,23 42,36 Syarat menurut FHI ≤ 10% < 1% ≤ 0,5% - -
Ket: EE 96: ekstrak etanol 96%; EE 75: ekstrak etanol 75%; EE 50: ekstrak etanol 50%; EKE: ekstrak etanol bakung; EFH: Ekstrak fraksi heksan; EFE: ekstrak fraksi etanol; FHI: Farmakope Herbal Indonesia
Berdasarkan  data  hasil  pengujian  mutu dalam  Tabel  5,  maka  semua  ekstrak  menunjukkan kadar  air,  kadar  abu  dan  kadar  abu  tak  larut  asam dalam rentang yang dipersyaratkan sesuai Farmakope  Herbal  Indonesia,  yaitu  ≤  10%  untuk kadar air, < 1% untuk kadar abu dan ≤ 0,5% untuk kadar  abu  yang  tidak  larut  asam.  Sehingga  dapat disimpulkan  bahwa  seluruh  ekstrak  yang  dibuat memiliki mutu yang baik.
Berdasarkan  hasil  pengujian,  seluruh ekstrak  daun  dandang  gendis  dan  daun  bakung memiliki  kandungan  senyawa  kimia  diantaranya alkaloid,  flavonoid,  saponin,  terpenoid  &  steroid serta  tannin.  Hasil  pengujian  tersebut  mengandung golongan senyawa yang sama seperti pada pengujian aktivitas  antinosiseptif  yang  telah  dilakukan sebelumnya  (Asmawi et  al. ,  2011;  Rahim et  al. ,
2016).  Pada  ekstrak  daun  dandang  gendis terkandung  senyawa  flavonoid,  saponin,  alkaloid dan  triterpen (Rahim et  al. ,  2016;  Zulkipli et  al. , 2017). Sedangkan untuk daun bakung mengandung senyawa alkaloid, flavonoid, triterpen, glikosida dan kumarin  (Sun et  al. ,  2008;  Asmawi et  al. ,  2011; Kogure et  al. ,  2011;  Rahman et  al. ,  2013;  Haque, Jahan and Rahmatullah, 2014; Patel, 2017). Golongan senyawa alkaloid dan flavonoida yang  terkandung  dalam  ekstrak  daun  dandang gendis  dan  daun  bakung  merupakan  golongan senyawa yang berperan dalam aktivitas antinosiseptif. Banyak alkaloida bekerja pada sistem syaraf  (Bribi,  2018).  Aktivitas  antinosiseptif alkaloida kemungkinan disebabkan adanya penghambatan pelepasan interleukin-1β dan interleukin-8  oleh  sel  peritoneum  atau  melalui penghambatan prostaglandin dan bradykinin (Hayfaa,  Sahar  and  Awatif,  2013).  Sedangkan senyawa  flavonoida  golongan  flavon  berperan dalam  aktivitas  antinosiseptifmelalui  mekanisme yang  melibatkan  penghambatan  produksi  sitokin (yaitu interleukin-1β) dan prostaglandin (Verri et al. , 2012).  Oleh  karena  itu  kandungan  senyawa alkaloida dan flavonoida pada daun dandang gendis
dan  daun  bakung  pada  penelitian  ini  merupakan senyawa  yang  berperan  dalam  aktivitas  sebagai antinosiseptif.
Hewan uji yang digunakan pada penelitian ini adalah mencit ( Mus musculus) . Mencit diperoleh dari  laboratorium  hewan,  sekolah  farmasi  ITB Bandung.
Metode  pengujian  untuk  mengetahui aktifitas antinosiseptif dari kombinasi ekstrak yang digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  metode induksi cara kimia (Metode Sigmund) yaitu metode geliat.  Model  untuk  uji  antinosiseptif  diperoleh dengan  cara  menyuntikan  asam  asetat  0,6%  secara intraperitoneal sebagai bahan penginduksi. Pemberian  induksi  bahan  kimia  asam  asetat  secara intraperitoneal  pada  mencit  akan  menimbulkan iritasi  pada  perut  sehingga  mengakibatkan  efek geliat (Parmar and Prakash, 2006).
Pada  pengujian  aktifitas  antinosiseptif ekstrak  tunggal  maupun  kombinasi  dari  daun dandang gendis dan daun bakung terdapat beberapa kelompok  perlakuan  diantaranya  kontrol  positif, kontrol  negatif,  pemberian  masing-masing  ekstrak tunggal  dan  ekstrak  kombinasi.  Sebagai  kontrol negatif  digunakan  CMC  0,5%,  yaitu  bahan  inert yang tidak menghasilkan efek setelah pemberian per oral  pada  mencit,  sedangkan  pada  kontrol  positif diberikan  asetosal  100  mg/kgBB  yang  merupakan obat  yang  luas  digunakan  untuk  meredakan  nyeri dengan  mekanisme  kerja  menghambat  sintesis prostaglandin (Syarif et al. , 2007).
Hasil rata-rata jumlah geliat mencit selama 60 menit pengamatan dapat dilihat dalam Tabel 6.
Tabel 6 . Hasil rata-rata jumlah geliat mencit pada ekstrak tunggal
Perlakuan Jumlah Rata-Rata Geliat menit ke- 0 - 5 6-10 11- 15 16- 20 21- 25 26- 30 31- 35 36- 40 41- 45 46- 50 51- 55 56- 60 Kontrol Negatif 2.67 5.00 8.67 9.00 9.33 4.33 4.67 4.33 4.00 3.67 2.33 1.00 Kontrol Positif 0.00 1.00 2.00 1.67 2.67 2.33 2.00 1.00 1.67 1.00 0.67 0.00 EE 96 2.33 3.00 4.00 6.00 9.33 6.33 5.33 4.00 3.00 3.00 2.33 1.33 EE 75 0.33 0.67 2.00 2.33 4.33 3.67 3.00 2.00 2.00 1.67 1.33 0.33 EE 50 0.67 2.67 4.00 4.67 8.67 5.67 4.33 3.67 2.00 3.00 1.67 1.00 EKE 0.67 2.33 2.33 4.00 6.33 5.00 3.67 2.67 2.33 1.33 1.00 1.00 EFH 1.33 3.67 4.67 5.67 9.67 8.00 7.00 5.00 3.67 1.67 2.33 1.00 EFE 0.67 2.33 2.00 3.33 5.67 3.67 3.00 2.33 1.67 1.00 1.00 0.33
Ket: EE 96: ekstrak etanol 96%; EE 75: ekstrak etanol 75%; EE 50: ekstrak etanol 50%; EKE: ekstrak etanol bakung; EFH: Ekstrak fraksi heksan; EFE: ekstrak fraksi etanol
Berdasarkan data dari Tabel 6, jumlah rata- rata geliat dari kontrol positif dan semua kelompok ekstrak  lebih  rendah  dibandingkan  dengan  kontrol negatif.  Hal  tersebut  menunjukkan  bahwa  pada perlakuan kontrol positif danekstrak dapat mengurangi  jumlah  rata-rata  geliat  mencit  sebagai respon  nyeri  akibat  pemberian  bahan  penginduksi asam  asetat  secara  intraperitoneal.  Semakin  sedikit rata-rata  jumlah  geliat  pada  setiap  perlakuan,
menunjukkan  bahwa  efek  antinosiseptif  yang semakin baik. Jumlah rata-rata geliat paling banyak terjadi  pada  menit  ke  21-25  dan  mulai  mengalami penurunan pada menit ke 26-30. Hal ini dikarenakan konsentrasi  dari  berbagai  perlakuan  dan  bahan penginduksi  asam  asetat  sudah  mulai  mengalami eliminasi.  Peningkatan dan penurunan jumlah rata- rata geliat mencit dapat dilihat pada grafik Gambar 1.
Gambar 1. Grafik hubungan antara jumlah rata-rata geliat mencit dengan waktu pengamatan pada ekstrak tunggal
Untuk  melihat  adanya  perbedaan  efek antinosiseptif pada setiap perlakuan, maka dilakukan analisis data statistik. Pengujian normalitas  distribusi  pada  data  interval  atau  rasio sebaiknya  menggunakan  uji Saphiro-Wilk, karena memiliki  tingkat  konsistensi  yang  lebih  baik
dibandingkan  uji Lilliefors dan  uji Kolmogorov- Smirnov (Oktaviani and Notobroto, 2014) . Untuk melihat normalitas atau sebaran data dari  jumlah  geliat  tersebut,  maka  data  dianalisis dengan uji Saphiro-Wilk . Data dikatakan terdistribusi  normal  apabila  nilai  Sig.  >  0,05. Berdasarkan hasil pengujian Saphiro-Wilk
0 2 4 6 8 10 12 0 -5 6 -1 0
1 1 -1 5
1 6 -2 0
2 1 -2 5 2 6 -3 0 3 1 -3 5
3 6 -4 0
4 1 -4 5
4 6 -5 0
5 1 -5 5 5 6 -6 0 Jumlah Rata-Rata Geliat menit ke- 1 Kontrol Negatif 2 Kontrol Positif 3 EE 96 4 EE 75 5 EE 50 6 EKE 7 EFH g e l i a t
Interval waktu
menunjukkan bahwa semua kelompok perlakuanmemiliki  nilai  Sig.  >  0,05,  maka  dapat disimpulkan  bahwa  data  tersebut  terdistribusi normal.  Hasil  pengujian Saphiro-Wilk masing- masing ekstrak tunggal dapat dilihat dalam Tabel 7.
Tabel 7 . Hasil uji normalitas saphiro-wilk ekstrak tunggal
Perlakuan Shapiro-Wilk Sig. Kontrol Negatif 1,000 Kontrol Positif 0,220 EE 96 0,463 EE 75 0,726 EE 50 0,363 EKE 0,637 EFH 0,567 EFE 0,843
Pengujian  statistik  dilanjutkan  denganuji homogenitas  menggunakan Levene  Statistic. Data dikatakan  homogen  apabila  nilai  Sig.  >  0,05. Berdasarkan  hasil  pengujian Levene  Statistic menunjukkan bahwa  nilai Sig. > 0,05, yaitu 0,280, maka  dapat  disimpulkan  bahwa  data  tersebut homogen.
Analisis dilanjutkan dengan menggunakan Anova  untuk  melihat  adanya  perbedaan  pada kelompok  perlakuan.  Apabila  pada  uji  Anova  nilai Sig. < 0,05 maka terdapat perbedaan yang signifikan antar  perlakuan.  Berdasarkan  hasil  uji  Anova didapatkan nilai Sig. sebesar 0,000 (p < 0,05), dapat disimpulkan  bahwa  terdapat  atau  ada  perbedaan yang signifikan antar perlakuan.
Berdasarkan  uji  BNT  (Beda  Nyata Terkecil)  dengan  taraf  signifikasi  5%  (0,05),  maka
antara kelompok perlakuan kontrol negatif terdapat perbedaan  yang  signifikan  dengan  kelompok perlakuan  kontrol  positif,  EE75,  EE50,  EKE  dan EFE karena nilai Sig.  kurang dari 0,05 (p < 0,05). Sedangkan  antara  kelompok  perlakuan  kontrol negatif  dengan  EE96  dan  EFH  tidak  terdapat perbedaan yang signifikan, ditunjukkan dengan nilai Sig. lebih dari 0,05 (p > 0,05).
Berdasarkan  data  grafik  pada  Gambar  2, persen  proteksi  terbesar  ditunjukkan  oleh  kontrol positif yaitu sebesar 72,88%, artinya pada perlakuan kontrol  positif  paling  banyak  menghambat  respon geliat mencit akibat pemberian asam asetat sebagai bahan  penginduksi.  Sedangkan  untuk  perlakuan sampel  ekstrak  daun  dandang  gendis,  persen penghambatan respon geliat mencit akibat pemberian  asam  asetat  sebagai  bahan  penginduksi paling besar ditunjukkan oleh EE75 dengan persen proteksi  sebesar  59,88%  dan  untuk  ekstrak  daun bakung  persen  proteksi  terbesar  ditunjukkan  oleh EFE yaitu 54,24%.
Dari  data  persen  proteksi,  dapat  diketahui persentase  efektifitas  antinosiseptif  dari  masing- masing  perlakuan  dengan  cara  membandingkan persen  proteksi  seluruh  kelompok  perlakuan terhadap  persen  proteksi  kelompok  perlakuan kontrol negatif. Berdasarkan data hasil perhitungan, persen  efektifitas  pada  perlakuan  sampel  ekstrak yang  mendekati  persen  efektifitas  asetosal  sebagai kontrol positif yaitu EE75 sebesar 82,16% dan EFE sebesar  74,42%  (Gambar  2),  artinya  sampel  EE75 dan EFE memberikan efektifitas antinosiseptif yang paling  baik  dibandingkan  dengan  kelompok perlakuan ekstrak lainnya.
Gambar 2 . Grafik persentase proteksi dan efektifitas ekstrak tunggal
Setelah  melakukan  pengujian  aktivitas antinosiseptif  pada  masing-masing  ekstrak  daun dandang  gendis  dan  daun  bakung  dengan  berbagai perlakuan, maka ekstrak dengan persen proteksi dan
persen efektifitas terbesar yaitu EE75 dan EFE akan dilakukan  kombinasi  dalam  3  (tiga)  variasi  dosis. Dosis  kombinasi  ekstrak  yang  akan  digunakan adalah 200 mg/kg BB.
0% 20% 40% 60% 80% 100% 120% % Proteksi % Efektifitas
Kombinasi  ekstrak  disiapkan  dengan  cara disuspensikan  pada  larutan  CMC  0,5%  dan diberikan  peroral  pada  mencit  30  menit  sebelum diinduksi  dengan  asam  asetat  0,6%,  kemudian
jumlah geliat mencit dihitung selama 60 menit. Hasil rata-rata  jumlah  geliat  mencit  selama  60  menit pengamatan dapat dilihat dalam Tabel 8.
Tabel 8 . Hasil rata-rata jumlah geliat mencit pada kombinasi ekstrak
Perlakuan Jumlah Rata-Rata Geliat menit ke- 0 - 5 6-10 11- 15 16- 20 21- 25 26- 30 31- 35 36- 40 41- 45 46- 50 51- 55 56- 60 Kontrol Negatif 1,40 3,40 5,60  8,00 9,60 6,60  6,60  4,40  3,40  2,20  1,20  0,60 Kontrol Positif 0,00 1,00 1,00  1,40 2,40 1,80  1,60  1,20  1,20  1,00  0,40  0,00 Dosis Kombinasi 1 1,00 2,00 3,80  4,60 7,20 4,00  3,60  2,60  2,40  2,40  1,60  0,80 Dosis Kombinasi 2 0,40 0,80 1,40  1,80 2,40 3,40  2,20  1,60  1,00  0,60  0,40  0,00 Dosis Kombinasi 3 0,00 0,80 1,00  2,40 2,60 4,60  2,80  2,20  1,20  1,20  1,20  0,40
Berdasarkan data dari Tabel 8, jumlah rata- rata  geliat  dari  kontrol  positif  dan  semua  dosis kombinasi  lebih  rendah  dibandingkan  dengan kontrol  negatif.  Hal  tersebut  menunjukkan  bahwa pada perlakuan kontrol positif dan dosis kombinasi dapat  mengurangi  jumlah  rata-rata  geliat  mencit sebagai  respon  nyeri  akibat  pemberian  bahan penginduksi  asam  asetat  secara  intraperitoneal. Semakin  sedikit  rata-rata  jumlah  geliat  pada  setiap perlakuan,  menunjukkan  bahwa  efek  antinosiseptif yang semakin baik.
Pada  perlakuan  dosis  kombinasi  1, akumulasi  jumlah  geliat  dari  menit  ke  0  sampai menit ke 60 juga lebih rendah dibandingkan dengan akumulasi  jumlah  geliat  dari  menit  ke  0  sampai menit ke 60 pada ekstrak tunggal EE96, EE50, EKE dan  EFH.  Sedangkan  pada  perlakuan  dosis kombinasi  2  dan  dosis  kombinasi  3,  akumulasi jumlah  geliat  dari  menit  ke  0  sampai  menit  ke  60 juga  mengalami  penurunan  dibandingkan  dengan akumulasi  jumlah  geliat  dari  menit  ke  0  sampai menit  ke  60  pada  semua  ekstrak  tunggal.  Hal tersebut menunjukkan bahwa pada ekstrak kombinasi  jumlah  rata-rata  geliat  mencit  sebagai respon  nyeri  akibat  pemberian  bahan  penginduksi asam asetat secara intraperitoneal semakin berkurang,  menunjukkan  bahwa  pada  ekstrak kombinasi  efek  antinosiseptif  semakin  baik dibandingkan dengan ekstrak tunggalnya.
Jumlah rata-rata geliat paling banyak pada perlakuan kontrol negatif, kontrol positif dan dosis kombinasi 1 terjadi pada menit ke 21-25 dan mulai mengalami  penurunan  pada  menit  ke  26-30  sama seperti  pada  ekstrak  tunggalnya.  Sedangkan  pada perlakuan dosis kombinasi 2 dan dosis kombinasi 3 jumlah  rata-rata  geliat  paling  banyak  terjadi  pada menit  ke  26-30  dan  mulai  mengalami  penurunan pada  menit  ke  31-35.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa pada  dosis  kombinasi  2  dan  dosis  kombinasi  3 terjadi perubahan waktu eliminasi.
Peningkatan  dan  penurunan  jumlah  rata- rata geliat selama 60 menit pengamatan dapat dilihat juga dalam Gambar 3.
Untuk melihat normalitas atau sebaran data dari  jumlah  geliat  tersebut,  maka  data  dianalisis dengan uji Saphiro-Wilk . Data dikatakan terdistribusi  normal  apabila  nilai  Sig.  >  0,05. Berdasarkan hasil pengujian Saphiro-Wilk menunjukkan  bahwa  semua  kelompok  perlakuan memiliki nilai Sig. > 0,05, maka dapat disimpulkan bahwa  data  tersebut  terdistribusi  normal.  Hasil pengujian Saphiro-Wilk dapat dilihat dalam Tabel 9.
Tabel 9. Hasil uji saphiro-wilk kombinasi ekstrak
Perlakuan Saphiro-Wilk Sig. Kontrol Negatif 0,184 Kontrol Positif 0,585 Dosis Kombinasi 1 0,785 Dosis Kombinasi 2 0,582 Dosis Kombinasi 3 0,984
Pengujian  statistik  dilanjutkan  dengan  uji homogenitas  menggunakan Levene  Statistic. Data dikatakan  homogen  apabila  nilai  Sig.  >  0,05. Berdasarkan  hasil  pengujian Levene  Statistic menunjukkan bahwa nilai Sig. > 0,05, yaitu 0,101, maka  dapat  disimpulkan  bahwa  data  tersebut homogen.
Pengujian  statistik  dilanjutkan  dengan  uji Anova  untuk  melihat  adanya  perbedaan  pada kelompok  perlakuan.  Apabila  pada  uji  Anova  nilai Sig. < 0,05 maka terdapat perbedaan yang signifikan antar  perlakuan.  Berdasarkan  hasil  uji  Anova didapatkan nilai Sig. sebesar 0,000 (p < 0,05), dapat disimpulkan  bahwa  terdapat  atau  ada  perbedaan yang signifikan antar perlakuan.
Gambar 3. Grafik hubungan antara jumlah rata-rata geliat mencit dengan waktu pengamatan pada kombinasi ekstrak
Berdasarkan  uji  BNT  (Beda  Nyata Terkecil)  dengan  taraf  signifikasi  5%  (0,05),  maka antara  kelompok  perlakuan  kontrol  positif  terdapat perbedaan  yang  signifikan  dengan  kelompok perlakuan  kontrol  negatif  dan  kelompok  perlakuan dosis kombinasi 1 karena nilai Sig.  kurang dari 0,05 (p  <  0,05).  Sedangkan  antara  kelompok  perlakuan kontrol  positif  dengan  kelompok  perlakuan  dosis kombinasi  2  dan  kelompok  perlakuan  dosis kombinasi  3  tidak  terdapat  perbedaan  yang signifikan, ditunjukkan dengan nilai Sig. lebih dari 0,05 (p > 0,05).
Persen  proteksi  terbesar  ditunjukkan  oleh kontrol  positif  yaitu  sebesar  75,47  %  (Gambar  4), artinya pada perlakuan kontrol positif paling banyak menghambat respon geliat mencit akibat pemberian asam asetat sebagai bahan penginduksi. Sedangkan untuk perlakuan dosis kombinasi, persen penghambatan respon geliat mencit akibat pemberian  asam  asetat  sebagai  bahan  penginduksi paling  besar  ditunjukkan  pada  dosis  kombinasi  2 dengan persen proteksi sebesar 69,81%.
Dari  data  persen  proteksi,  dapat  diketahui persen efektifitas antinosiseptif dari masing-masing perlakuan  dengan  cara  membandingkan  persen proteksi  kelompok  perlakuan  dosis  kombinasi terhadap  persen  proteksi  kelompok  perlakuan kontrol negatif.
Berdasarkan data hasil perhitungan (Gambar  4),  persen  efektifitas  pada  perlakuan sampel  ekstrak  yang  paling  mendekati  persen efektifitas asetosal sebagai kontrol positif yaitu dosis kombinasi  2  sebesar  92,50%,  artinya  sampel  dosis kombinasi 2 memiliki efektifitas antinosiseptif yang mendekati persen efektifitas asetosal sebagai kontrol positif.  Dosis  kombinasi  2  terdiri  dari  campuran sama  banyak  (50%:50%)  antara  ekstrak  daun
dandang gendis dan daun bakung. Persen efektifitas dosis  kombinasi  2  ini  lebih  besar  daripada  persen efektifitas  dari  masing-masing  ekstrak  tunggal,  hal ini  dimungkinkan  karena  ada  efek  sinergisme  dari senyawa-senyawa  yang  sama  dari  kedua  ekstrak, diantaranya  alkaloid  dan  flavonoid  yang  berperan dalam aktivitas sebagai antinosiseptif.
Berdasarkan  rata-rata  jumlah  geliat  pada interval waktu 5 menit pertama, respon geliat mencit untuk  dosis  kombinasi  3  lebih  rendah  dibanding jumlah  geliat  dari  masing-masing  ekstrak  tunggal. Dengan  demikian,  dengan  adanya  kombinasi ekstrak, maka respon geliat menjadi menurun karena ada proteksi akibat dari pemberian kombinasi ektrak tersebut.  Untuk  dosis  kombinasi  2,  jumlah  respon geliat  lebih  rendah  dibanding  ektrak  tunggal  pada pemberian  EFE  tetapi  lebih  tinggi  0,07  dari pemberian  ektrak  tunggal  EE75.  Untuk  interval waktu  5  menit  kedua,  respon  geliat  mencit  untuk dosis kombinasi 2 dan dosis kombinasi 3 mengalami penurunan jumlah respon geliat, hal ini menunjukkan  bahwa  efek  antinosiseptif  semakin baik. Hal tersebut juga dapat dibuktikan dari persen proteksi  antar  dosis  kombinasi  2  dan  dosis kombinasi 3 yang lebih tinggi dibandingkan dengan persen proteksi masing-masing ekstrak tunggal.
0 2 4 6 8 10 12 0 -5 6 -1 0 1 1 -1 5 1 6 -2 0 2 1 -2 5 2 6 -3 0 3 1 -3 5 3 6 -4 0 4 1 -4 5 4 6 -5 0 5 1 -5 5 5 6 -6 0 Waktu (Menit) 1 Kontrol Negatif 2 Kontrol Positif 3 Dosis Kombinasi 1 4 Dosis Kombinasi 2
5 Dosis Kombinasi 3
g e l i a t
Gambar 4. Grafik persentase proteksi dan efektifitas kombinasi ekstrak

## IV. Kesimpulan
Kombinasi  ekstrak  daun  dandang  gendis (etanol  75%)  dengan  fraksi  etanol  (96%)  pada kombinasi 1:1 memiliki persen proteksi dan persen efektifitas sebesar 69,81% dan 92,50% menunjukkan ekstrak daun dandang gendis dan daun daun bakung bersinergi sebagai antinosiseptif.

## Daftar Pustaka
Alam,  A. et  al. (2016)  ‘Clinacanthus  nutans:  A review of the medicinal uses, pharmacology and phytochemistry’, Asian
Pacific Journal of Tropical Medicine , 9(4),
pp. 402–409.
doi:
10.1016/J.APJTM.2016.03.011. Asmawi,  M.  Z. et  al. (2011)  ‘In  vivo
Antinociceptive Activity of Leaf Extract of Crinum  asiaticum  and  Phytochemical Analysis  of  the  Bioactive  Fractions’, International  Journal  of  Pharmacology , 7(1), pp. 125–129.
doi:
10.3923/ijp.2011.125.129.
Bribi,  N.  (2018)  ‘Pharmacological  activity  of aporphinoid  alkaloids.  A  review’, Asian Journal  of  Botany ,  1,  pp.  1–6.  doi: 10.63019/ajb.v1i2.467.
Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia  (1995)
Materia  Medika  Indonesia .  Jilid  VI.
Jakarta:  Departemen  Kesehatan  Republik Indonesia.
Dharmady,  T.  (2004)  ‘Manajemen  Nyeri  dalam Suatu  Tatanan  Tim  Medis  Multidisiplin’, Majalah Kedokteran Damianus , 3(1), p. 1. Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan (2000) Parameter  Standar  Umum  Ekstrak Tumbuhan  Obat .  Cetakan  I.  Jakarta: Departemen Kesehatan RI.
Farmakope  Herbal  Indonesia .  Edisi  I  (2008).
Jakarta: Kementrian Kesehatan RI. Fennell, C. W. and Staden, J. Van (2001)  ‘Crinum Species  in  Traditional  and  Modern Medicine’, Journal of ethnopharmacology , 78(1),  pp.  15–26.  doi:  10.1016/s0378- 8741(01)00305-1.
Galani, V. J. and Patel, B. G. (2011) ‘Analgesic and Anti-Inflammatory  Activity  of  Argyreia speciosa  and  Sphearanthus  indicus  in  The Experimental Animals’, Global Journal of Pharmacology , 4(3), pp. 136–141.
Guyton,  A.  .  and  Hall,  J.  E.  (2016) Buku  Ajar Fisiologi  Kedokteran:  diterjemahkan  oleh Ermita,  I  dan  Ibrahim  Ilyas .  Edisi  12. Edited  by  M.  D.  Widjajakusumah  and  A. Tanzil.  Jakarta:  Penerbit  buku  kedokteran EGC.
Haque,  M.,  Jahan,  S.  and  Rahmatullah,  M.  (2014)
‘Ethnomedicinal Uses of Crinum Asiaticum :  A  Review’, World  Journal  of Pharmacy  and  pharmaceutical  sciences , 3(9), pp. 119–128.
Hayfaa, A. A.-S., Sahar, A. A. M. A.-S. and Awatif, M.  A.-S.  (2013)  ‘Evaluation  of  Analgesic Activity  and  Toxicity  of  Alkaloids  in Myristica fragrans Seeds in Mice’, Journal of  Pain  Research ,  6,  pp.  611–615.  doi: 10.2147/JPR.S45591.
Kogure, N. et al. (2011) ‘Two New Alkaloids from Crinum asiaticum var. japonicum’, Chemical  and  Pharmaceutical  Bulletin , 59(12), pp. 1545–1548. doi:
10.1248/cpb.59.1545.
Kosai,  P.,  Sirisidthi,  K.  and  Jiraungkoorskul,  W. (2016)  ‘Evaluation  of  Total  Phenolic Compound  and  Cytotoxic  Activity  of Clinacanthus  nutans’, Indian  Journal  of Pharmaceutical  Sciences ,  78(2),  pp.  283–
0% 20% 40% 60% 80% 100% 120% Kontrol
Negatif Kontrol Positif Dosis Kombinasi 1 Dosis Kombinasi 2 Dosis Kombinasi 3 % Proteksi
% Efektifitas
286. doi: 10.4172/pharmaceutical-
sciences.1000115.
Kurdi, A. (2010) Tanaman Herbal Indonesia: Cara Mengolah dan Manfaatnya Bagi
Kesehatan .
Marlyne,  R.  (2012) Uji  Efek  Analgesik  Ekstrak Etanol 70% Bunga Mawar (Rosa chinensi Jacq.)  Pada  Mencit  Yang  Diinduksi  Asam Asetat . Universitas Indonesia.
Oktaviani,  M.  A.  and  Notobroto,  H.  B.  (2014)
‘Perbandingan Tingkat Konsistensi Normalitas Distribusi Metode Kolmogorov-Smirnov,  Lilliefors,  Shapiro- Wilk,  dan  Skewness-Kurtosis’, Jurnal
Biometrika  dan  Kependudukan ,  3(2),  pp. 127–135. Available at:
http://journal.unair.ac.id/download- fullpapers-biometrikd8bc041810full.pdf.
P’ng, X. W., Akowuah, G. A. and Chin, J. H. (2012) ‘Acute Oral Toxicity Study of Clinacanthus nutans  in  Mice’, International  Journal  of Pharmaceutical  Sciences  and  Research , 3(11), pp. 4202–4204. doi: http://dx.doi.org/10.13040/IJPSR.0975- 8232.3(11).4202-05. Parmar,  N.  .  and  Prakash,  S.  (2006) Screening Methods  in  Pharmacology .  1st  Editio. Oxford, U.K: Alpha Science International. Patel,  D.  (2017)  ‘Crinum  asiaticum  Linn:  A Medicinal  Herb  as  Well  as  Ornamental Plant  in  Central  India’, International Journal  of  Environmental  Sciences  & Natural  Resources ,  6(1),  pp.  1–7.  doi: 10.19080/ijesnr.2017.06.555678. Rahim, M. H. A. et al. (2016) ‘Methanolic Extract of Clinacanthus
nutans Exerts Antinociceptive Activity Via The Opioid/Nitric Oxide-mediated, but cGMP- Independent, Pathways’, Hindawi: Evidence-based
Complementary and Alternative  Medicine ,  2016,  p.  11  pages. doi: 10.1155/2016/1494981. Rahman,  M.  A. et  al. (2013) ‘Analgesic  and  Anti- Inflammatory Effects of Crinum asiaticum Leaf Alcoholic Extract in Animal Models’, African  Journal  of  Biotechnology ,  12(2), pp. 212–218. doi: 10.5897/ajb12.1431. Raya, K. B. et al. (2015) ‘Changes in Phytochemical Contents in Different Parts of Clinacanthus nutans  (Burm.  f.)  Lindau  Due  to  Storage Duration’, Bragantia, Cantinas , 74(4), pp. 445–452. doi: 10.1590/1678-4499.0469. Sun, Q. et al. (2008) ‘A New Phenolic  Compound from  Crinum  asiaticum  L’, Chinese Chemical Letters , 19(4), pp. 447–449. doi: https://doi.org/10.1016/j.cclet.2008.01.02 Syarif,  A. et  al. (2007) Farmakologi  dan  Terapi . Edisi 5. Jakarta: Departemen  Farmakologi dan Terapeutik FK UI. Tiwari,  P. et  al. (2011)  ‘Phytochemical  screening
and  Extraction:  A  Review’, International Pharmaceutical Sciencia , 1(1), pp. 98–106. Verri,  W.  A. et  al. (2012) Flavonoids  as  Anti- Inflammatory and Analgesic Drugs: Mechanisms of Action and Perspectives in The  Development  of  Pharmaceutical Forms , Studies  in  Natural  Products Chemistry . Bioactive Natural Product. doi: 10.1016/B978-0-444-53836-9.00026-8. Wahyuni, I. T., Astuti, N. Y. and Nuratmi, B. (2003) ‘Uji  Perbandingan  Efek  Analgesik  Infus Temu  Putih  (Curcuma  zedoria  Rosc.)  dan Temu  Mangga  (Curcuma  mangga  Val.  Et Zipp)  pada  Mencit’, Jurnal  Bahan  Alam , 2(3), pp. 81–84. Zulkipli, I. N. et al. (2017) ‘Clinacanthus nutans: A Review on Ethnomedicinal Uses, Chemical Constituents
and Pharmacological Properties’, Pharmaceutical Biology , 55(1), pp. 1093–1113. doi: 10.1080/13880209.2017.1288749.