Penghambatan Proliferasi Sel Kanker Payudara T47D oleh Ekstrak Air  Daun  Kelor  ( Moringa  oleifera )  dan  Doxorubicin  dengan Metode MTT Assay
Inhibition  of  Proliferation  T47D  Breast  Cancer  Cell  by  Water  Extract  of Moringa  ( Moringa  oleifera )  Leaf  and  Doxorubicin  using  The  MTT  Assay Method
Laili Nailul Muna (a)* , Fradhika Maulidina (b)
(a)  (b) Program  Studi  Pendidikan  Kimia,  Fakultas  Ilmu  Tarbiyah  dan  Keguruan,  Universitas  Islam  Negeri Sunan Kalijaga
Article info: Received Date : 03/10/2022 Revised Date   : 06/10/2022 Accepted Date : 09/10/2022 Abstrak: Kanker  merupakan  jenis  penyakit  dengan  prevalensi  tertinggi  yang dapat  menyebabkan  kematian,  salah  satunya  kanker  payudara.
Pengobatan  kemoterapi  saat  ini  yang  dilakukan  banyak  menimbulkan risiko  terhadap  penderitanya,  misalnya  menimbulkan  resistensi,  efek samping, daya efikasi yang semakin menurun. Model pengobatan yang efektif  yakni  mengombinasikan  agen  kemoterapi  dengan  agen kemopreventif  sebagai  komplementer,  sehingga  dapat  meminimalkan efek  samping.  Tujuan  pada  penelitian  ini  yakni  mengetahui  aktivitas sitotoksik  ekstrak  air  daun  kelor  dengan  kontrol  positif  doxorubicin terhadap  sel  kanker  payudara  T47D.  Metode  yang  digunakan  pada penelitian  ini  dengan  MTT assay dengan  hasil  data  berupa  IC 50 . Hasil penelitian menunjukkan bahwa aktivitas sitotoksik terhadap sel kanker payudara  T47D  dengan  IC 50 lebih  dari  1000  µg/ml,  sedangkan doxorubicin  memberikan  nilai  IC 50 sebesar  8,17  µg/ml.  Berdasarkan nilai  IC 50 tersebut  ekstrak  air  daun  kelor  kurang  poten  dalam memberikan  aktivitas  sitotoksik  terhadap  sel  kanker  payudara  T47D, namun memberikan perubahan morfologi sel.

## Abstract
Cancer is the type of disease with the highest prevalence that can cause death. The current chemotherapy treatment that is carried out poses a lot of risks to the sufferer, for example, causing resistance, side effects, and  decreasing  efficacy.  An  effective  treatment  model  combines chemotherapy  agents  with  complementary  chemopreventive  agents  to minimize  side  effects.  This  study  aimed  to  determine  the  cytotoxic activity  of  Moringa  leaf  aqueous  extract  with  positive  control  of doxorubicin against T47D breast cancer cells. The method used in this study was using the MTT assay with data results in the form of IC 50 . This study showed cytotoxic activity against T47D breast cancer cells with an IC 50 of  more  than  1000  g/ml,  while  doxorubicin  gave  an  IC 50 value  of 8.17  g/ml.  Based  on  the  IC 50 values,  the  aqueous  extract  of  Moringa leaves are less potent in providing cytotoxic activity against T47D breast cancer cells but gave changes in cell morphology.
Keywords: Cytotoxic Moringa Leaf Water Extract T47D Doxorubicin
Corresponding Authors: Laili Nailul Muna, Program Studi Pendidikan Kimia, Fakultas Ilmu Tarbiyah dan Keguruan, Universitas  Islam  Negeri  Sunan  Kalijaga,  Jl. Laksda  Adisucipto,  Ngentak,  Caturtunggal, Kec.  Depok,  Kabupaten  Sleman,  Daerah Istimewa Yogyakarta Email: lailinailulmuna@gmail.com

## PENDAHULUAN
Kanker  merupakan  jenis  penyakit  yang ditandai  dengan  adanya  proliferasi  sel  yang abnormal  serta  dapat  menyerang  dan  berpindah antar  sel  dan  jaringan  di  dalam  tubuh  (Ningrum and Rahayu,  2021).  Menurut  WHO,  kanker merupakan  jenis  penyakit  dengan  prevalensi tertinggi yang dapat menyebabkan  kematian  bagi penderitanya.  Salah  satu  jenis  kanker  yang mempunyai  prevalensi  tinggi  di  Indonesia  yakni kanker  payudara  yang  mampu  menyerang  laki- laki  maupun  wanita  (Komite  Penanggulangan Kanker  Nasional,  2015).  Kanker  payudara disebabkan karena terjadinya proliferasi sel secara abnormal  sehingga  diperlukan  senyawa  yang mampu  mempunyai  aktivitas  sitotoksik  terhadap sel kanker payudara. Faktor risiko yang berkaitan dengan  peningkatan  kejadian  kanker  payudara antara  lain,  jenis  kelamin  wanita,  usia  lebih  dari 50  tahun,  riwayat  keluarga  yang  mempunyai riwayat  kanker,  wanita  yang  tidak  memiliki  anak dan tidak menyusui, menstruasi dini (kurang dari 12  tahun),  hormonal,  obesitas,  riwayat  dalam konsumsi alkohol, paparan lingkungan (American Cancer Society, 2020).
Peningkatan angka kematian akibat kanker payudara semakin meningkat, sehingga menyebabkan  perkembangan  jenis  pengobatan banyak  dilakukan  untuk  mencegah  kematian (Marfianti, 2021). Pengobatan kemoterapi saat ini yang  dilakukan  banyak  menimbulkan  risiko terhadap  penderitanya,  misalnya  menimbulkan resistensi,  efek  samping,  daya  efikasi  yang semakin  menurun  terhadap  pasien  kanker stadium  lanjut  (Ambarwati  and  Wardani,  2014). Saat  ini  diperlukan  pengobatan  yang  efektif sehingga  mampu  mengurangi  risiko  dari penggunaan  agen  kemoterapi.  Model  pengobatan yang  efektif  yakni  mengombinasikan  agen kemoterapi  dengan  agen  kemopreventif  sebagai komplementer,  sehingga  dapat  meminimalkan efek  samping  yang  ditimbulkan  dari  agen kemoterapi  (Jenie and Meiyanto,  2009). Kemoprevensi  merupakan  suatu  substansi  yang mampu  menghambat  terjadinya  proliferasi  sel kanker yang abnormal dan membalikkan tahapan pada proses karsinogenesis. Salah satu pendekatan  yang  dilakukan  untuk  menemukan senyawa  kemopreventif  yakni  eksplorasi  bahan alam terkait kandungan senyawa yang mempunyai  aktivitas  sitotoksik  terhadap  sel kanker  payudara.  Salah  satu  jenis  tanaman  yang mempunyai  aktivitas  sitotoksik  yakni  daun  kelor ( Moringa oleifera ) (Kusmardika, 2020).
Daun kelor, yang merupakan tanaman yang banyak  dijumpai  di  Indonesia  serta  banyak dimanfaatkan  oleh  masyarakat  sebagai  sayuran serta lalapan, ternyata mempunyai efek sitotoksik dan  modulasi  siklus  sel.  Tanaman  kelor  juga mempunyai  khasiat  dalam  bidang  kesehatan, antara  lain  sebagai  antibakteri,  antifungi,
antioksidan,  antikanker,  antitumor,  dan  antiulser (Yusuf and Tungadi, 2022). Kandungan metabolit sekunder  yang  terdapat  pada  daun  kelor  secara umum  antara  lain  flavonoid,  alkaloid,  saponin, tanin  (Muna,  2022).  Daun  kelor  banyak mengandung  senyawa  polifenol  yang  mempunyai peran  dalam  proses  antioksidan,  selain  itu  jenis kandungan  flavonoidnya  yang  terkandung  yakni lutein,  serta  jenis  alkaloidnya  yakni  moringinin (Prasanth et  al. ,  2011).  Flavonoid  yang terkandung dalam daun kelor mampu menghambat  proliferasi  sel  kanker  melalui induksi  apoptosis  dan  penghambatan  terhadap siklus sel.
Penelitian  yang  dilakukan  oleh  Gaffar, Apriani and Herlina  (2018)  menjelaskan  bahwa fraksi n -heksana daun kelor mempunyai  aktivitas sitotoksik  pada  sel  kanker  payudara  T47D  serta dapat menginduksi terjadi apoptosis dan siklus sel dengan nilai IC 50 fraksi n -heksana sebesar 235,58 μg/mL.  Hasil  fraksi  etil  asetat  juga  mempunyai aktivitas  sitotoksik  pada  sel  kanker  payudara T47D  dengan  nilai  IC 50 sebesar  243,58  μg/mL (Gaffar,  Apriani  and  Herlina,  2018).  Selain mempunyai  aktivitas  sitotoksik,  ekstrak  etanolik daun  kelor  juga  mempunyai  aktivitas  sebagai antioksidan  dengan  nilai  IC 50 4,289  mg/ml (Susanty et  al. ,  2019).  Kandungan  metabolit sekunder yang berperan dalam aktivitas antioksidan  yakni  golongan  senyawa  flavonoid yang  terkandung  dalam  daun  kelor.  Penelitian yang  dilakukan  oleh  Kusmardika  (2020) menjelaskan  bahwa  daun  kelor  mempunyai kandungan  antioksidan  dan  senyawa  bioaktif tinggi  yang  mampu  menghambat  stress  oksidatif dan  kanker.  Kombinasi  dari  banyak  kandungan antioksidan  pada  daun  kelor  menyebabkan  lebih efektif  dan  sinergis  daripada  tunggal  dengan mekanisme  peningkatan cascade antioksidan tunggal  (Berawi,  Wahyudo and Pratama,  2019). Selain  senyawa  antioksidan,  ekstrak  air  daun kelor  juga  mengandung  senyawa  isothyochianate yang mempunyai aktivitas antiangiogenesis, yakni dengan  menghambat  aktivitas  transduksi  sinyal HIF-1 dan menurunkan ekspresi VEGF (Hartono, Sulisetyawati and Jularso,  2019).  Kandungan asam  amino  yang  mempunyai  mekanisme  dalam peningkatan  sistem  imun  (Paikra,  Dhongade and Gidwani,  2017).  Pengembangan  penelitian  ini melakukan  uji  sitotoksik  ekstrak  air  daun  kelor serta doxorubicin sebagai kontrol positif terhadap sel  kanker  payudara  T47D  yang  belum  pernah dilakukan pada penelitian sebelumnya. Selain itu, ekstrak  air  daun  kelor  diekstraksi  menggunakan maserasi  bertingkat  untuk  memaksimalkan jumlah kandungan flavonoid yang terdapat dalam ekstrak.

## METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan

## Alat
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah autoclave (Hirayama  HV-25  020585175, Hirayama  Manufacturing  Co.,  Jepang),  nitrogen cair, Labconco  purifier  class  II  biosafety  cabinet (Delta  Series,  Labconco  Corporation, Missouri, USA),  inkubator  CO2  (Heraeus), inverted microscope (Nikon,  Eclipse,  TE 2000-U), hemocytometer (Nebauer  improved  0,100  mm Tiefe  Depth  Profondeur 0,0025  mm2,  Germany), Cell counter , mikropipet (Pipetman® neo Gilson, France), kamera  digital, centrifuge (Sigma  203, B.Braun  Biotech  International),  neraca  digital (Mettler  Toledo,  AG204  DeltaRange®),  stirrer (Nuova,  Thermolyne),  mixer  (Maxi Mix  II, Thermolyne  type  37600  mixer,  lowa,  USA),  oven (Memmert),  ELISA  reader (Bio-Rad  microplate reader  Benchmark  serial  no.  11565,  Jepang), peralatan disposables meliputi Tissue  Culture Dish dengan diameter 10 cm (Iwaki), conical tube 15 ml (Iwaki), yellow tip (Brand), blue tip (Brand), Eppendorf steril (plastic brand), 24-well plate dan 96-well plate (Iwaki),  6-well plate (SPL lifescience) dan cover  slip diameter  13  mm (Thermanox®).

## Bahan
Bahan  uji  diperoleh  dari  Merapi  Farma Kalasan,  Yogyakarta.  Ekstrak  air  daun  kelor dilarutkan  dengan  Dimetilsulfoksida  (DMSO) dengan  konsentrasi  maksimal  DMSO  1%  dalam medium kultur. Agen kemoterapi yang digunakan adalah doxorubicin (Sigma).
Bahan Kultur Sel Kanker Payudara T47D Sel kanker payudara yang digunakan adalah sel  kanker  payudara  T47D  yang  merupakan koleksi  Laboratorium  Parasitologi,  Fakultas Kedokteran  Universitas  Gadjah  Mada.  Kultur  sel T47D  ditumbuhkan  pada  media  kultur  DMEM high  glucose (Dulbecco’s  Modified  Eagle  Media) (Gibco)  yang  mengandung Fetal  Bovine  Serum (FBS) 10% (v/v) (FBS Qualified, Gibco, Invitrogen USA),  penisilin-streptomisin  1%  (v/v)  (Gibco, Invitrogen USA dan Fungizone 0,5% v/v (Gibco). Pemanenan  sel  dari Tissue  Culture  Dish (IWAKI brand) menggunakan tripsin-EDTA 0,25% (Gibco, Invitrogen Canada).
Bahan Uji Sitotoksisitas Uji sitotoksisitas tunggal dilakukan dengan menggunakan  metode  MTT.  Reagen  yang digunakan  untuk  uji  sitotoksisitas  menggunakan metode  MTT  adalah  3-(4,5-dimetilthiazol-2-il)- 2,5-difeniltetrazolium  bromida  (MTT)  (Sigma Aldrich,  USA).  Larutan  induk  MTT  5  mg/mL dibuat  dengan  melarutkan  MTT  dalam phosphat buffer  saline (PBS)  1  x  pH  7,4.  Pereaksi  kerja dibuat dengan mengencerkan pereaksi stok 10 kali menggunakan  media  kultur. Phosphat  buffer
saline (PBS) 1 x pH 7,4 dibuat dengan melarutkan 8  g  NaCl,  0,2  g  KCl,  0,2  g  KH2PO4  dan  1,15  g Na2HPO4,  dalam  1  liter  akuabides.  Pereaksi stopper, mengandung 10% (b/v) Sodium Dodecyl Sulphate (SDS)  (Merck-Schuchardt,  Germay) dalam  0,01  N  HCl  (Merck,  Darmstadt,  Germany) yang digunakan untuk menghentikan reaksi MTT dan melarutkan formazan.

## Prosedur Preparasi Bahan Uji
Bahan  uji  berupa  serbuk  daun  kelor dipreparasi dengan menggunakan metode maserasi  bertingkat  dengan  pelarut  air.  Maserat yang  diperoleh  dari  simplisia  masing-masing dipekatkan hingga didapatkan ekstrak kental.

## Prosedur Uji Sitotoksik MTT Assay
Pengamatan viabilitas sel dilakukan dengan MTT  assay .  Kultur  sel  yang  telah  konfluen dipanen  kemudian  didistribusikan  ke  dalam sumuran 96-well  microplate dengan  jumlah  10  x 10 3 sel/sumuran.  Sel  tersebut  diinkubasi  selama 24  jam  di  dalam  inkubator  CO 2 agar  dapat beradaptasi dan siap untuk perlakuan. Larutan uji dengan  seri  konsentrasi  yang  ditentukan dimasukkan ke dalam sumuran ( triplo ) setelah sel dicuci dengan PBS. Sel diinkubasi kembali selama 24 jam di dalam inkubator CO 2 . Setelah inkubasi, larutan  uji  dibuang  dan  ditambahkan  pereaksi MTT sejumlah 100 μl/sumuran. Pereaksi stopper ditambahkan setelah 3 jam inkubasi dengan MTT. Sel  diinkubasi  semalam  pada  suhu  kamar  dan terlindung dari cahaya. Pada akhir inkubasi, plate digoyang  dengan horizontal  shaker selama  10 menit  kemudian  dibaca  dengan ELISA  reader pada  panjang  gelombang  595  nm  (Bahuguna et al. , 2017).
Analisa Data Pada metode uji sitotoksisitas
menggunakan  metode  MTT,  penghitungan  %  sel hidup akibat perlakuan adalah dengan membandingkan antara selisih absorbansi larutan dari kontrol sel dengan absorbansi larutan dari sel yang mendapatkan perlakuan terhadap absorbansi  larutan  dari  kontrol  sel  itu  sendiri dikalikan  100%.  Hasil  pembacaan  absorbansi pada  sel  hidup  dikonversi  dalam  satuan  %  sel hidup dengan cara:
% sel hidup=
x 100%
Untuk  menentukan  ada  atau  tidaknya  efek sitotoksik  dilakukan  analisis  regresi  linier  antara konsentrasi  senyawa  uji  dengan  %  viabilitas dengan Microsoft  excel untuk  memperoleh  nilai IC 50 .  Semakin  kecil  konsentrasi  IC 50 senyawa  uji maka  semakin  poten  senyawa  tersebut  terhadap efek sitotoksiknya .

## HASIL DAN PEMBAHASAN Pengolahan sampel
Sebanyak  500  gram  sampel  daun  kelor diekstraksi  menggunakan  metode  maserasi bertingkat  untuk  meningkatkan  jumlah  zat  aktif yang  dapat  terlarut  ke  dalam  pelarut aquadest . Pelarut aquadest yang digunakan untuk maserasi sebanyak  2,5  liter,  kemudian  sampel  daun  kelor dilakukan perendaman selama
2 hari. Selanjutnya,  dilakukan  penyaringan  dan  sisa maserat dilakukan perendaman kembali dengan 1 liter aquadest .  Hasil  maserat  yang  terkumpul dilakukan  penyaringan  terlebih  dahulu  untuk menghilangkan  pengotor  yang  masuk  ke  dalam pelarut. Selanjutnya, maserat dilakukan pemekatan  dengan rotary  evaporator sampai terbentuk  ekstrak  cair.  Ekstrak  yang  diperoleh kemudian  dilakukan  pemekatan  pada  suhu  60 o C sampai  didapatkan  ekstrak  kental.  Hasil  ekstrak yang  diperoleh  sebanyak  25,726  gram,  sehingga didapatkan rendemen ekstrak sebesar 5,15%.

## Aktivitas  Sitotoksik  Tunggal  Ekstrak  Air Daun Kelor
Uji  sitotoksik  dilakukan  menggunakan metode  MTT assay .  Prinsip  dari  penggunaan metode  ini  yakni  pengukuran  secara  kolorimetri terhadap  pembentukan  garam  formazan  yang tidak  larut  dalam  air  dan  berwarna  ungu  yang berasal dari  reaksi reduksi tetrazolium yang larut air  dengan  menghasilkan  larutan  berwarna kuning (Ghasemi et al. , 2021). Pada uji sitotoksik ekstrak  air  daun  kelor  menggunakan  beberapa tingkatan konsentrasi yakni 31,25; 62,5; 125; 250; 500  dan  1000  µg/ml.  Pada  penelitian  ini, pengujian  ekstrak  air  daun  kelor  dengan konsentrasi senyawa uji yang semakin tinggi tidak memberikan  pengaruh  terhadap  %  viabilitas  sel, sehingga  didapatkan  IC 50 lebih  dari  1000µg/ml. Suatu  senyawa  jika  mempunyai  IC 50 lebih  dari 1000µg/ml  kurang  poten  apabila  dikembangkan menjadi  agen  sitotoksik  (Machana et  al. ,  2011). Hasil  pengamatan  uji  sitotoksik  ekstrak  air  daun kelor  dapat  dilihat  pada  tabel  1  serta  kurva persamaan regresi linier pada gambar 1.
Kandungan  senyawa  yang  terkandung dalam daun kelor yang mempunyai peran sebagai antikanker  yakni  senyawa  antioksidan  yang mampu  menghambat  terjadinya  stress  oksidatif sehingga  menghambat  pembentukan  sel  kanker, selain  itu  juga  terdapat potassium yang  mampu mendegradasi  sel  kanker  (Bhattacharya et  al. , 2018). Senyawa beta karoten yang terdapat dalam daun  kelor  juga  mempunyai  aktivitas  sebagai antioksidan sehingga dapat meningkatkan mekanisme cascade
antioksidan (Berawi, Wahyudo and Pratama,  2019).  Kandungan isothyocianate  mempunyai  aktivitas  sebagai penghambat  terjadinya  proses  angiogenesis  dan menurunkan
ekspresi VEGF
(Hartono,
Sulisetyawati and Jularso,  2019).  Kandungan
yang terdapat dalam ekstrak air daun kelor masih terlalu  banyak  sehingga  perlu  dilakukan  isolasi kandungan  senyawa  aktif  sehingga  didapatakn senyawa  uji  yang  selektif  (Putra,  Dharmayudha and  Sudimartini,  2016).  Kandungan  flavonoid yang  terdapat  dalam  ekstrak  air  daun  kelor mempunyai mekanisme penghambatan proliferasi terhadap  sel  kanker  payudara  dengan  cara menginduksi  terjadinya  apotosis  dan  siklus  sel (Yusuf and Tungadi, 2022).
Tabel 1. Hasil Uji Sitotoksik Ekstrak Air Daun
Kelor Kon- sentrasi µg/ml viabilitas sel (%) v1 v2 v3 rata- rata SD 1000 109,11 105,63 108,65 107,80 1,89 500 101,32 105,70 107,49 104,84 3,17 250 99,99 106,91 106,96 104,62 4,01 125 100,74 106,40 104,68 103,94 2,90 62,5 95,69 98,20 97,19 97,03 1,27 31,25 103,06 94,91 96,27 98,08 4,37
Gambar 1. Persamaan regresi linier Viabilitas Sel (Y) dan Log Konsentrasi (X)
Berdasarkan  pengamatan  secara  mikros- kopik,  pada  uji  sitotoksik  daun  kelor  terjadi perubahan  morfologi  sel  T47D  serta  perubahan kerapatan  sel.  Dengan  demikian,  semakin  tinggi konsentrasi  ekstrak  air  daun  kelor  yang digunakan  maka  akan  mengubah  morfologi  sel (sel tampak membulat), sel terlihat mengambang, perubahan  kerapatan  sel  dan  tidak  menempel antar  sel.  Morfologi  sel  T47D  setelah  diberi perlakuan  ekstrak  air  daun  kelor  dapat  dilihat pada gambar 2.

## Aktivitas Sitotoksik Tunggal Doxorubicin
Pada  uji  sitotoksik  doxorubicin  digunakan beberapa tingkatan konsentrasi yakni 0,625; 1,25; 2,5;  5;  10  dan  20  µg/ml.  Doxorubicin  pada penelitian  ini  digunakan  sebagai  kontrol  positif, sehingga  semakin  tinggi  konsentrasi  yang digunakan  akan  memberikan  pengaruh  yang signifikan  terhadap  penurunan  %  viabilitas  sel. Pada  pengujian  ini  didapatkan  IC 50 doxorubicin pada  pengujian  sitotoksik  T47D  sebesar  8,17 µg/ml.  Suatu  senyawa  uji  mempunyai  efek sitotoksik yang bagus apabila IC 50 kurang dari 100 µg/ml  (Machana et  al. ,  2011).  Hasil  pengamatan
uji sitotoksik doxorubicin dapat dilihat pada tabel 2  serta  kurva  persamaan  regresi  linier  pada gambar 3.
A
B C
Gambar 2 . Morfologi sel kanker payudara T47D setelah inkubasi 24 jam. Kontrol sel T47D (A), Ekstrak Air Daun Kelor konsentrasi 250 µg/ml (B), Ekstrak Air Daun Kelor konsentrasi 500 µg/ml (C)
Tabel 2. Hasil Uji Sitotoksik Doxorubicin Kon- sentrasi µg/ml viabilitas sel (%) v1 v2 v3 rata- rata SD 1000 109,11  105,63  108,65  107,80  1,89 500 101,32  105,70  107,49  104,84 3,17 250 99,99 106,91  106,96  104,62  4,01 125 100,74  106,40  104,68  103,94  2,90 62,5 95,69 98,20 97,19 97,03 1,27 31,25 103,06 94,91 96,27 98,08  4,37
Gambar 3. Persamaan regresi linier Viabilitas
Sel (Y) dan Log Konsentrasi (X) Doxorubicin merupakan antibiotik golongan  tetrasiklin  yang  digunakan  untuk pengobatan  pada  berbagai  macam  kanker,  salah satunya kanker payudara (Donowati, Pramodhawardhani and Lestari, 2013).
Mekanisme  aksi  doxorubicin  yakni  berinterkalasi dengan DNA serta menghambat sintesis DNA dan RNA  dengan  mengacau template dan  halangan sterik. Selain itu, doxorubicin berinteraksi dengan topoisome-rase  II  dengan  membentuk  pemotong DNA  (Fita et  al. ,  2015).  Morfologi  sel  T47D setelah diberi perlakuan doxorubicin dapat dilihat pada gambar 4.
A B C
Gambar 4. Morfologi sel kanker payudara T47D setelah inkubasi 24 jam. Doxorubicin konsentrasi 20 µg/ml (A), Doxorubicin konsentrasi 5 µg/ml (B), Doxorubicin konsentrasi 1,25 µg/ml (C)
Penelitian  lebih  lanjut  mengenai  hasil isolasi ekstrak air daun kelor perlu dilakukan agar didapatkan  senyawa  aktif  yang  murni  sehingga dapat  dikembangkan  senyawa  yang  lebih  poten dan  selektif  pada  efek  sitotoksik  terhadap  sel kanker payudara T47D.

## KESIMPULAN
Ekstrak  air  daun  kelor  menunjukkan aktivitas  sitotoksik  terhadap  sel  kanker  payudara T47D  dengan  IC 50 lebih  dari  1000  µg/ml, sedangkan  doxorubicin  memberikan  nilai  IC 50 sebesar  8,17  µg/ml.  Berdasarkan  nilai  IC 50 tersebut  ekstrak  air  daun  kelor  kurang  poten dalam  memberikan  aktivitas  sitotoksik  terhadap sel  kanker  payudara  T47D,  namun  memberikan perubahan  morfologi  sel.  Oleh  karenanya,  perlu dilakukan  pemurnian  atau  isolasi  kandungan senyawa aktif ekstrak air daun kelor.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terimakasih  kepada  UIN  Sunan  Kalijaga yang  memberikan  kontribusi  penelitian  ini melalui  Hibah  BOPTN  sehingga  penelitian  ini dapat    terlaksana  dengan  baik  dan  lancar.

## DAFTAR PUSTAKA
American  Cancer  Society,  2020,  Breast  cancer  risk  and prevention  breast  cancer  risk  factors  you  cannot  change, www.cancer.org ., accessed on July 2022.
Bahuguna, A., Khan, I., Bajpai, V.K., Kang, S.C., 2017, MTT assay to evaluate the cytotoxic potential of a drug, Bangladesh Journal of Pharmacology , 12(2):115–118.
Berawi,  K.N.,  Wahyudo,  R.,  Pratama,  A.A.,  2019,  Potensi  terapi Moringa  oleifera (Kelor)  pada  penyakit  degeneratif, Jurnal Kedokteran Universitas Lampung , 3(1):210-214.
Bhattacharya, A., Tiwari, P., Sahu, P.K., Kumar, S., 2018, Review of the  phytochemical  and  pharmacological  characteristics  of Moringa  oleifera , Journal  of  Pharmacy  and  Bioallied  Sciences , 10(4):181–191.
Donowati,  M.W.,  Pramodhawardhani,  A.Y.N.,  Lestari,  I.,  2013,
Penggunaan  obat  sitostatika  pada  anak-anak  yang  melakukan kemoterapi  di  RSUP  Dr.  Sardjito  Yogyakarta  tahun  2010, Jurnal
Farmasi Sains dan Komunitas , 10(1): 14–21.
Putra,  I.W.D.P.,  Dharmayudha,  A.A.G.O.,  Sudimartini,  L.M.,  2016, Identifikasi  senyawa  kimia  ekstrak  etanol  daun  kelor  ( Moringa oleifera L.) di Bali, Indonesia Medicus Veterinus , 5(5):464–473.
Fita, F.E., Listianingsih, D., Hapsari, Y.A., Pradana, R.G., Safitri, E.I., Arifin, I., 2015, Efek  sitotoksik kombinasi ekstrak metanol daun kenikir ( Cosmos caudatus Kunth.) dan doksirubisin terhadap sel kanker  payudara  T47D  secara  in-vitro  dan  in-silico, Prosiding Seminar Nasional  Peluang  Herbal  Sebagai  Alternatif Medicine ,  3: 49–58.
Gaffar,  S.,  Apriani,  R.,  Herlina,  T.,  2018,  Aktivitas  sitotoksik ekstrak  etanol,  fraksi  etil  asetat  dan n -heksana  daun  kelor ( Moringa oleifera ) terhadap sel kanker payudara T47D, Alchemy Jurnal Penelitian Kimia , 14(2): 302.
Ghasemi,  M.,  Turnbull,  T.,  Sebastian,  S.,  Kempson,  I.,  2021,  The MTT assay: utility, limitations, pitfalls, and interpretation in bulk and  single-cell  analysis, International  Journal  of  Molecular Sciences , 22(23): 12827.
Hartono,  D.R.N.,  Sulisetyawati,  T.I.B.,  Jularso,  E.,  2019,  The potential  effect  of Moringa  oleifera leaves  extract  on  vascular endothelial  growth  factor  expression  in  Wistar  rat  oral  cancer cells, Dental Journal (Majalah Kedokteran Gigi) , 52(2): 71–75.
Jenie,  R.I.,  Meiyanto,  E.,  2009,  Aplikasi  ko-kemoterapi  fraksi  etil asetat  ekstrak  etanolik  daun  sambung  nyawa  ( Gynura procumbens (Lour.)  Merr.)  pada  sel  kanker  payudara  MCF-7, Majalah Ilmu Kefarmasian , VI(3): 132–141.
Komite  Penanggulangan  Kanker  Nasional,  2015, Panduan Nasional  Penanganan  Kanker  Payudara ,  Jakarta:  Kementerian Kesehatan Republik Indonesia.
Kusmardika, D.A., 2020, Potensi aktivitas antioksidan daun kelor ( Moringa  oleifera )  dalam  mencegahan  kanker, Journal  of  Health Science and Physiotherapy , 2(1): 46–50.
Machana,  S.,  Weerapreeyakul,  N.,  Barusrux,  S.,  Nonpunya,  A., Sripanidkulchai,  B.,  Thitimetharoch,  T.,  2011,  Cytotoxic  and apoptotic  effects  of  six  herbal  plants  against  the  human hepatocarcinoma (HepG2) cell line, Chinese Medicine , 6: 39.
Marfianti,  E.,  2021,  Peningkatan  pengetahuan  kanker  payudara dan  ketrampilan  periksa  payudara  sendiri  (SADARI)  untuk deteksi dini kanker payudara di Semutan Jatimulyo Dlingo, Jurnal Abdimas Madani dan Lestari , 3(1): 25–31.
Muna,  L.N.,  2022,  Aktivitas  antioksidan  ekstrak  air  daun  kelor ( Moringa oleifera ) dengan metode DPPH serta analisis kualitatif kandungan  metabolit  sekunder, Sasambo  Journal  of  Pharmacy , 3(2): 91-96.
Ningrum, M.P., Rahayu, R.S.R., 2021, Determinan kejadian kanker payudara  pada  wanita  usia  subur  (15-49  Tahun), Indonesian Journal of Public Health and Nutrition , 1(3): 362–370.
Paikra, B.K., Dhongade, H.K.J., Gidwani, B., 2017, Phytochemistry and  pharmacology  of Moringa  oleifera Lam., Journal  of Pharmacopuncture , 20(3): 194–200.
Prasanth,  D.S.N.B.K.,  Sreedhara,  C.S.,  Deepak,  M.,  Sangli,  V.K., Gururaj,  V.M.,  2011,  Comparitive  study  on  estimation  of polyphenols  in  different  extracts  of Moringa  oleifera leaves  and fruits with respect to tannic acid, Journal of Pharmacy Research , 4(9): 3224–3225.
Susanty,  Ridnugrah,  N.A.,  Chaerrudin,  A.,  Yudistirani,  S.A.,  2019, Aktivitas  antioksidan  ekstrak  daun  kelor  ( Moringa  oleifera ) sebagai zat tambahan pembuatan moisturizer, Prosiding Seminar Nasional  Sains  danTeknologi, Fakultas Teknik  Universitas Muhammadiyah, Jakarta.
Ambarwati, W.N., Wardani, E.K., 2014, Efek samping kemoterapi secara  fisik  pasien  penderita  kanker  servik, Prosiding  Seminar Nasional  &  Internasional  Universitas  Muhammadiyah  Semarang , 2(2): 97–106.
Yusuf,  M.S.,  Tungadi,  R.,  2022,  Ekstrak  daun  kelor  ( Moringa oleifera ) sebagai antikanker payudara : narrative review, Journal Syifa Sciences and Clinical Research , 4(1): 237–243.