Karimah et al. Pengaruh Penggunaan Sukrosa dan Iba terhadap Induksi Akar Eksplan Tunas Anggrek (Dendrobium sp.) secara in Vitro

## PENGARUH PENGGUNAAN SUKROSA DAN  IBA TERHADAP INDUKSI
AKAR EKSPLAN TUNAS ANGGREK ( Dendrobium sp. ) SECARA IN VITRO
The Effect of Sucrose and IBA for Root Initiation on Orchid (Dendrobium sp.) Shoot Explants In vitro Culture
Nurmila Karimah 1) , Florentina Kusmiyati 2) , Syaiful Anwar 2)
1 Mahasiswa Program Studi Agroekoteknologi, Departemen Pertanian, Fakultas Peternakan dan Pertanian, Universitas Diponegoro, Tembalang, Semarang 50275
2 Dosen Program Studi Agroekoteknologi, Departemen Pertanian, Fakultas Peternakan dan Pertanian, Universitas Diponegoro, Tembalang, Semarang 50275 e-mail: 1 nurmila.key16@gmail.com 2 fkusmiyati@yahoo.co.id 3 syaifulanwar2011@lecturer.undip.ac.id

## ABSTRACT
Dendrobium  sp.  is  well  known  as  the  largest  genus  in  orchid,  every  region  has  its  own characteristics. The aim of the research was to examine the interaction effect of sucrose and IBA (indole 3-butyric  acid)  on  root  initiation  of  Dendrobium  sp.  in  vitro  culture.  This  study  used  a  completely randomized  design  (CRD)  factorial  design  3x4  with  3  replications.  The  first  factor  was  sucrose concentration (S) : S 1 (20 g/l), S 2 (30 g/l) and S 3 (40 g/l). The second factor was IBA concentration (I) : I 0 (0 mg/l), I 1 (1 mg/l), I 2 (2 mg/l) and I 3 (3 mg/l). The parameters observed were number of roots, length of root, initiation root  period, height  of plantlets, number of shoots and  culture success percentages.  Data was analysed using  analysis of variance  and further test  using  LSD  (least  significance different) with a 5% level. The result showed that the concentration of sucrose 40 g/l had a significant effect on number of roots,  length  of  root,  height  of  plantlets  and  number  of  shoots.  Concentrations  of  IBA  2  mg/l  had  a significant effect on height of plantlets. Iinteraction of both sucrose and IBA had no significant effect on all of the parameters. Two objects of culture  were contaminated by fungi. Suggest for this study  was to increase sucrose and IBA concentrations for the best result combination.
Keywords ; sucrose; IBA; orchid; root

## PENDAHULUAN
Anggrek  ( Dendrobium sp.)  merupakan tanaman  hias  yang  banyak  dijumpai  pada daerah  tropis  seperti  Indonesia,  beberapa daerah non-tropis yang memiliki karakteristik  berbeda.  Karakteristik  bentuk, ukuran,  susunan,  tangkai,  jumlah  kuntum per tangkai dan warna bunga menjadi daya tarik  tanaman  anggrek  sehingga  memiliki nilai estetika tinggi (Sukma dan Ari, 2011). Upaya menghasilkan bunga anggrek dengan kualitas  yang  baik  perlu  diikuti  dengan budidaya  yang  tepat.  Budidaya  anggrek yang  banyak digunakan yaitu teknik kultur in vitro , dikarenakan waktu yang dibutuhkan  lebih  cepat  dan  lebih  banyak menghasilkan bibit anggrek dengan kualitas baik  dibanding  budidaya  konvensional (Andri dan Willem, 2015).
Penggunaan  konsentrasi  media  yang tepat diharapkan mampu memacu
pertumbuhan  akar  eksplan  tunas  anggrek secara  optimal.  Penambahan  gula  pada media MS perlu dilakukan untuk menyediakan  sumber  energi  dalam  proses pertumbuhan  tanaman.  Pemberian  sukrosa pada  media  pengakaran  secara in  vitro berperan  sebagai  pengganti  hasil  fotosintat pada  eksplan  yang  berupa  sumber  karbon (Samudera et  al .,  2019).  Sukrosa  memiliki peranan penting dalam sel seperti menghasilkan  energi  saat  proses  respirasi, mengatur  stabilisasi  membran,  pengatur tekanan  osmotik  dan  membantu  dalam proses pembentukan sel baru pada tanaman (Heriansyah, 2019).
Induksi perakaran eksplan tunas anggrek dilakukan dengan penambahan zat pengatur tumbuh  berupa  auksin.  Induksi  akar dilaksanakan untuk
mempersiapkan pelaksanaan  aklimatisasi,  agar  nantinya planlet  yang  terbentuk  dapat  tumbuh  pada media  aklimatisasi.  Penambahan  auksin
Karimah et al. Pengaruh Penggunaan Sukrosa dan Iba terhadap Induksi Akar Eksplan Tunas Anggrek (Dendrobium sp.) secara in Vitro
berupa indole  3-butyric  acid (IBA)  pada media kultur dapat menginisiasi pertumbuhan  akar  dengan  meningkatkan pelonggaran  dan  pelenturan  dinding  sel (Mahadi, 2016). Proses munculnya perakaran dipengaruhi impermeabilitas kulit batang  terhadap  air  untuk  menyerap kandungan nutrisi. Kemampuan IBA dalam memutus ikatan hidrogen
yang menyebabkan pelenturan dinding sel mengakibatkan sel epidermis batang mengembang, sehingga mempermudah proses  masuknya  air  ke  dalam  batang  dan memacu  proses  perakaran  (Shofiana et  al ., 2013).
Penambahan  sukrosa  pada  media  kultur in vitro anggrek sebesar 40 gr/L merupakan perlakuan  dengan  pemberian  sukrosa  yang optimal  pada inisiasi jumlah akar terbanyak yaitu  7,75  buah  (Zahara et  al .,  2017). Optimalisasi  pengakaran  anggrek  dapat dilakukan  penambahan  konsentrasi  auksin eksogen  pada  media  kultur.  Pemberian hormon  IBA  1,5  dan  2  ppm  pada  eksplan anggrek  menunjukkan  jumlah  dan  panjang akar terbaik dibandingkan pemberian hormon  IAA  dan  NAA  dengan  konsentrasi yang sama (Pant dan Tapa, 2012). Tujuan  penelitian  ini  adalah  mengkaji dan  menganalisis  pengaruh  konsentrasi sukrosa  dan IBA  terhadap  keberhasilan induksi  akar  planlet  anggrek.  Manfaat  dari penelitian ini adalah memberikan informasi tentang  keberhasilan  induksi  akar  planlet anggrek  ( Dendrobium sp.)  secara  kultur in vitro dan menciptakan formulasi
penggunaan  sukrosa  dan  penambahan hormon  IBA  pada  media  kultur in  vitro secara optimal.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan Maret  2020  sampai  Juni  2020  di  Ruang Kultur Jaringan, Laboratorium Fisiologi dan Pemuliaan  Tanaman,  Fakultas  Peternakan dan  Pertanian,    Universitas  Diponegoro, Semarang.
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian adalah  timbangan  analitik,  gelas  beker, enkas sebagai  tempat  pemindahan  eksplan, cawan  petri, autoclove ,  oven  untuk mensterilkan  peralatan  tanam,  pisau  kultur atau scalpel , pinset, magnetic stirer , bunsen, labu  ukur,  gelas  kultur  sebagai  tempat kultur,  alat  tulis  dan  kamera  sebagai dokumentasi penelitian. Bahan yang digunakan  meliputi  eksplan  tunas  anggrek Dendrobium sp.  yang  berasal  dari  UPTD Kebun  Dinas  Pertanian  Mijen  Semarang, hormon  IBA,  sukrosa  murni,  agar,  larutan stok media MS ( Murashige-Skoog ), akuades dan formalin.
Pembuatan  larutan  stok  ZPT  100  ppm diawali  dengan  menimbang  IBA  sejumlah 0,01  g.  Selanjutnya  IBA  dilarutkan  dengan HCl  1  N,  kemudian  ditambah  akuades sampai volume larutan 100 ml.
Pelaksanaan  sterilisasi  terbagi  menjadi sterilisasi  ruang,  alat  dan  media.  Sterilisasi ruang dilakukan pembersihan ruang persiapan,  ruang  kultur  dan  ruang  transfer dengan cara disapu dan dipel menggunakan deterjen  dan  klorox.  Enkas  disterilisasikan dengan  alkohol  yang  disemprot  dan sebelum  enkas  digunakan  larutan  formalin dimasukkan ke dalam enkas untuk meminimalisir kontaminasi.
Sterilisasi alat berupa botol media kultur dicuci  bersih  menggunakan  sabun  piring dicampur  dengan  klorox,  peralatan  kering dimasukkan  ke  dalam  oven  dengan  suhu 120 0 C  selama  2  jam.  Alat  tanam  kultur sebelum  digunakan  disterilisasi  kembali dengan dimasukkan dalam alkohol 96% dan dibakar  di  atas  api  bunsen  setiap  akan melakukan transplanting .
Sterilisasi  media  dilakukan  dengan memasukkan  botol  yang  berisikan  media pada  autoklaf  dengan  suhu  121 0 C  dan tekanan  1,5 atm selama 15 menit.
Pembuatan larutan stok dimulai dengan penimbangan bahan kimia sesuai komposisi media  MS  ( Murashige dan Skoog )  untuk larutan  stok  (Tabel  1).  Larutan    diaduk menggunakan magnetic stirer hingga
Karimah et al. Pengaruh Penggunaan Sukrosa dan Iba terhadap Induksi Akar Eksplan Tunas Anggrek (Dendrobium sp.) secara in Vitro
larutan  homogen.  Larutan  disimpan  di dalam kulkas.
Tabel 1. Komposisi Media Murashige and Skoog (MS)
No. Komposisi Konsentrasi dalam media MS (g/l) Konsentrasi dalam stok (g/l) 1 x konsentrasi 20 x konsentrasi 1. KNO 3 1,9 38 2. NH 4 NO 3 1,65 33 3. CaCl 2 . 2 H 2 O 0,44 8,8 4. MgSO 4 . 7 H 2 O 0,37 7,4 5. KH 2 PO 4 0,17 3,4 1 x konsentrasi 100 x konsentrasi 6. H 3 BO 3 0,0062 0,62 7. MnSO 4 . 4 H 2 O 0,0169 1,69 8. ZnSO 4 .7 H 2 O H 3 BO 3 0,0086 0,86 9. Na.MoO 4 . 2 H 2 O 0,00025 0,025 10. CuSO 4 . 5 H 2 O 0,000025 0,0025 11. CaCl 2 . 6 H 2 O 0,000025 0,0025 12. KI 0,00083 0,083 1 x konsentrasi 100 x konsentrasi 13. FeSO 4 . 7 H 2 O 0,02785 2,785 14. Na 2 EDTA. 2 H 2 O 0,03725 3,725 1 x konsentrasi 1000 x konsentrasi 15. Thiamin 0,0001 0,1 16. Piridoksin HCl 0,0005 0,5 17. Nicotinic acid 0,0005 0,5 18. Myoinositol 100x (take 1 ml/l) 0,01 10
Pembuatan  media  dimulai  dengan  cara memasukkan larutan stok MS, stok hormon IBA  dan  sukrosa  sesuai  konsentrasi perlakuan  ke  dalam  erlenmeyer,  kemudian ditambahkan akuades. Media diukur keasaman  larutan  menggunakan  pH  meter dengan  angka  5,8 . Media  ditambah  agar sebanyak 8 g/l dan dipanaskan menggunakan hot  magnetic  stirer hingga mendidih. Media yang sudah siap dimasukkan  ke  dalam  botol  kultur  dengan volume  25  ml  per  botol  dan  ditutup menggunakan alumunium foil untuk disterilisasikan  menggunakan autoclave pada  suhu  121 0 C  dan  tekanan  1,5  atm selama 15 menit.
Penanaman  eksplan  tunas  anggrek dendrobium  di  dalam  enkas  yang  telah disterilisasikan.  Satu  botol  kultur  dengan media  perlakuan  berisikan  satu  eksplan tunas  anggrek.  Penyimpanan  kultur  berada di  ruangan  bercahaya  dengan  suhu  sekitar 21 0 C.
Rancangan  percobaan  pada  penelitian ini menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL)  faktorial  dengan  2  faktor  perlakuan (3  x  4)  yaitu  sukrosa  dan  IBA.  Faktor sukrosa (S) dengan taraf S 1 20 g/l, S 2 30 g/l dan S 3 40 g/l. Faktor IBA (I) dengan taraf I 1 0  mg/l,  I 2 1  mg/l,  I 3 2  mg/l  dan  I 4 3  mg/l. Percobaan diulang sebanyak 3 kali ulangan sehingga  diperoleh  36  satuan  percobaan. Data  jumlah  akar,  panjang  akar,  waktu muncul  akar,  jumlah  tunas,  tinggi  planlet dan waktu kemunculan akar yang diperoleh dianalisis  menggunakan  analisis  ragam dengan taraf 5% dan dilanjutkan dengan uji lanjut  BNT  (Beda  Nyata  Terkecil)  dengan taraf 5%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Jumlah Akar
Hasil  analisis  ragam  menunjukkan pemberian sukrosa yang berbeda berpengaruh  nyata  terhadap  parameter jumlah  akar,  namun  pemberian  konsentrasi IBA  dan  interaksi  antara  keduanya  tidak
Karimah et al. Pengaruh Penggunaan Sukrosa dan Iba terhadap Induksi Akar Eksplan Tunas Anggrek (Dendrobium sp.) secara in Vitro
menunjukkan  pengaruh  nyata  terhadap jumlah akar planlet anggrek (Tabel 2).

## Tabel 2. Jumlah Akar Perlakuan Kombinasi Sukrosa dan IBA
IBA (mg/l) Sukrosa (g/l) Rata-rata 20 30 40 --------- buah --------- 0 4,0 6,3 7,7 6,0 1 5,0 3,3 15,0 7,8 2 4,0 10,0 20,3 11,4 3 3,7 6,0 18,3 9,3 Rata-rata 4,2 b 6,42 b 15,3 a
Keterangan : superskrip berbeda menunjukkan perbedaan nyata (p<0,05)
Penambahan  faktor  tunggal  berupa hormon  IBA  tidak  memberikan  pengaruh nyata terhadap jumlah akar eksplan. Hal ini tidak sesuai dengan pernyataan Zarmiyeni dan  Munawarah  (2014)  yang  menyatakan bahwa  penambahan  IBA  pada  media dapat  memacu  pertumbuhan  akar  dalam jumlah  yang  banyak  dan  waktu  singkat. Pemberian  IBA  dalam  konsentrasi  dan tanaman  yang  sama  dapat  memberikan hasil  yang  berbeda.  Menurut  Tuhuteru et al ., (2012) bahwa kemampuan penyerapan unsur  hara  pada  tanaman  kultur  dapat dipengaruhi  oleh  planlet  tersebut  dan media yang terlalu basa. Pemberian  perlakuan  sukrosa  pada berbagai  taraf  konsentrasi  memberikan pengaruh nyata terhadap jumlah akar planlet anggrek.  Pemberian  perlakuan  konsentrasi sukrosa  sebesar  40  g/l  menunjukkan  nilai rata-rata jumlah akar 15,33 buah dibandingkan  dengan  perlakuan  sukrosa  20 g/l  dan  30  g/l  yang  menghasilkan  rata-rata
jumlah akar 4,2 dan 6,4 buah. Rittirat et al . (2012)  menyatakan  bahwa  penambahan sukrosa dengan konsentrasi 40 g/l merupakan  konsentrasi  paling  optimum dalam  menambah  tinggi  planlet,  bobot basah,  jumlah  daun,  jumlah  akar  dan panjang akar.
Pemberian  konsentrasi  sukrosa  pada media kultur eksplan anggrek efektif dalam merangsang  pertumbuhan  akar.  Menurut Roycewicz  dan  Malamy  (2012)  bahwa penambahan  konsentrasi  sukrosa  memiliki korelasi lurus terhadap peningkatan pembentukan perakaran.

## Panjang Akar
Hasil  analisis  ragam  menunjukkan bahwa  pemberian  sukrosa  memberikan pengaruh nyata terhadap parameter panjang akar,  namun  konsentrasi  IBA  dan  interaksi perlakuan sukrosa dan IBA tidak memberikan  pengaruh  nyata  terhadap panjang akar planlet anggrek (Tabel 3).
Karimah et al. Pengaruh Penggunaan Sukrosa dan Iba terhadap Induksi Akar Eksplan Tunas Anggrek (Dendrobium sp.) secara in Vitro
Tabel 3. Panjang Akar Perlakuan Kombinasi Sukrosa dan IBA IBA (mg/l) Sukrosa (g/l) Rerata 20 30 40 -------------- cm -------------
0 0,97 1,13 1,73 1,28 1 1,13 0,30 2,17 1,21 2 0,90 2,23 3,37 2,17 3 1,00 1,47 2,30 1,59
Rerata 1,01 b
1,28 b 2,39 a
Keterangan : superskrip berbeda menunjukkan perbedaan nyata (p<0,05)
Pemanjangan akar eksplan tunas anggrek  tidak  memberikan  hasil  yang berbeda  nyata  dalam  pemberian  IBA  pada media  kultur.  Kebutuhan  hormon  auksin endogen pada tanaman yang telah tercukupi tidak  memberikan  pengaruh  nyata  pada media  perlakuan.  Menurut  Suyanti et  al ., (2013)  bahwa  pemanjangan  akar  terjadi diakibatkan  oleh  hormon  endogen  dalam tanaman  terutama  pada  daerah  perakaran, sehingga pembelahan sel dapat terjadi untuk memacu pemanjangan akar.
Pemberian beberapa konsentrasi sukrosa yang berbeda pada media kultur memberikan  pengaruh  nyata  terhadap panjang  akar  planlet  anggrek.  Pemberian perlakuan konsentrasi sukrosa sebesar 40 g/l menunjukkan  nilai  rata-rata  panjang  akar tertinggi yaitu sebesar 2,39 cm dibandingkan  dengan  perlakuan  sukrosa  20 g/l  dan  30  g/l  yang  menghasilkan  rata-rata
panjang  akar  1,01  dan  1,28  cm.  Hal  ini didukung  oleh  Samudera et  al .  (2019) bahwa  tahap  pengakaran  eksplan  sangat membutuhkan  ketersediaan  sumber  energi dan karbon dalam jumlah yang cukup besar. Pemanjangan akar pada planlet diakibatkan adanya proses pembesaran dan pemanjangan  sel.  Menurut  Ruan  (2012) sukrosa  merupakan  sumber  karbon  yang berfungsi  sebagai  pengatur  siklus  sel terkait  pembelahan  dan  pembentukan  sel tanaman.

## Waktu Muncul Akar
Hasil  analisis  ragam  menunjukkan pemberian  beberapa  konsentrasi  sukrosa dan IBA dalam faktor tunggal dan interaksi perlakuan sukrosa dan IBA tidak memberikan pengaruh nyata terhadap waktu muncul akar planlet anggrek (Tabel 4).
0  1  2  3  4  5 0  1  2  3  4  5 0  1  2  3  4  5 0  1  2  3  4  5 0  1  2  3  4  5 0  1  2  3  4  5 0  1  2  3  4  5 0  1  2  3  4  5 0  1  2  3  4  5 0  1  2  3  4  5 0  1  2  3  4  5 0  1  2  3  4  5
Karimah et al. Pengaruh Penggunaan Sukrosa dan Iba terhadap Induksi Akar Eksplan Tunas Anggrek (Dendrobium sp.) secara in Vitro
Tabel 4. Waktu Muncul Akar Berdasarkan Kombinasi Sukrosa dan IBA
IBA (mg/l) Sukrosa (g/l) Rata-rata 20 30 40 --------- hari --------- 0 24,00 33,33 33,33 30,22 1 37,00 23,33 28,67 29,67 2 27,67 42,67 27,33 32,56 3 35,67 33,33 30,00 33,00 Rata-rata 31,08 33,17 29,83
Waktu  muncul  akar  pada  eksplan tunas  anggrek  tidak  menunjukkan  adanya pengaruh  nyata  dalam  pemberian  hormon IBA.  Hal  ini  tidak  sesuai  dengan  Rafique et  al .,  (2012)  yang  menyatakan  bahwa waktu  muncul  akar  pada Dendrobium sabin H.  dengan  pemberian  perlakuan tunggal  IBA  1  ppm  mampu  menginduksi akar  paling  cepat  pada  waktu  11  hari setelah  pelaksanaan  kultur  dibandingkan dengan  pemberian  IBA  3  ppm  yang  lebih lambat  pada  waktu  22  hari.  Menurut Shofiana et  al .,  (2013)  bahwa  proses perakaran sangat dipengaruhi oleh kemampuan dinding sel epidermis terhadap  penyerapan  cairan,  auksin  pada tanaman  dapat  memutus  ikatan  hidrogen yang menyebabkan pelenturan dinding sel sehingga cairan dapat masuk ke dalam sel dan memacu proses pembentukan akar.
Pengaruh  pemberian  konsentrasi sukrosa  tidak  berbeda  nyata  pada  waktu induksi perakaran eksplan anggrek. Penambahan  sukrosa  yang  optimal  pada media  kultur  yang  tepat  akan  membantu pebentukan akar adventif. Menurut Wijayanti et  al .,  (2015)  menyatakan bahwa  penambahan  sukrosa  dan  auksin eksogen
mampu menstimulasi pembelahan  sel  dalam  inisiasi  akar eksplan.  Pemberian  sukrosa  konsentrasi tinggi akan menurunkan laju pertumbuhan tanaman  kultur.  Berdasarkan  Yamaner dan  Erdag  (2013)  menyatakan  bahwa penambahan  sukrosa  pada  media  dengan
konsentrasi lebih tinggi dapat meningkatkan  tekanan  osmotik  pada media  sehingga  tekanan  osmotik  dalam sel menjadi naik.

## Tinggi Planlet
Hasil  analisis  ragam  menunjukkan pemberian sukrosa yang berbeda berpengaruh  nyata  terhadap  parameter tinggi  planlet.  Pemberian  konsentrasi  IBA memberikan pengaruh nyata, namun interaksi  perlakuan  sukrosa  dan  IBA  tidak memberikan pengaruh nyata terhadap tinggi planlet anggrek.
Hasil  pengamatan  tinggi  planlet anggrek  (Tabel  5)  menunjukkan  pemberian hormon IBA pada media kultur memberikan  pengaruh  yang  nyata  terhadap pertumbuhan  tinggi  planlet.  Penambahan IBA  pada  konsentrasi  2  mg/l  menunjukkan hasil  terbaik  tinggi  planlet  yaitu  5  cm dibandingkan  perlakuan  0,  1  dan  3  mg/l dengan  hasil  3,9  cm,  3,8  cm  dan  3,9  cm. Wulandari et al ., (2013) menyatakan bahwa penambahan  konsentrasi  IBA  yang  optimal mampu meningkatkan permeabilitas dinding  sel  sehingga  terjadi  difusi  yang meningkat  dan  terjadi  proses  pemanjangan sel. Hal ini sesuai dengan yang dikemukakan  oleh  Widiastoety  (2014) bahwa  auksin  yang  terdistribusi  pada meristem  apikal  atas  membantu  proses pembelahan  dan  diferensiasi  sel  sehingga akan meningkatkan pertumbuhan pemanjangan daun eksplan.
Karimah et al. Pengaruh Penggunaan Sukrosa dan Iba terhadap Induksi Akar Eksplan Tunas Anggrek (Dendrobium sp.) secara in Vitro
Tabel 5. Tinggi Planlet Berdasarkan Kombinasi Sukrosa dan IBA IBA (mg/l) Sukrosa (g/l) Rerata 20 30 40 -------------- cm -------------
0 3,9 3,7 4,3 3,9 b 1 3,4 3,8 4,2 3,8 b 2 3,8 5,2 6,0 5,0 a 3 3,4 3,9 4,5 3,9 b Rerata 3,6 b
4,1 a 4,7 a
Keterangan : superskrip berbeda menunjukkan perbedaan nyata (p<0,05)
Respon  tanaman  terhadap  pemberian sukrosa 40 g/l dan 30 g/l memberikan tinggi planlet  terbaik  dengan  rata-rata  4,7  cm  dan 4,1  cm  dibandingkan  konsentrasi  20  g/l dengan  rata-rata  tinggi  3,6  cm.  Tinggi planlet dalam media kultur dipengaruhi oleh kemampuan  penyerapan  dan  penyebaran nutrisi yang diperoleh melalui media kultur guna  mendukung  replikasi  sel-sel  tanaman. Hal  ini  sesuai  dengan  Darmawati  dan Yuswanti (2014) bahwa penambahan tinggi planlet diakibatkan oleh proses pembelahan dan  pemanjangan  sel  pada  jaringan meristem.  Penggunaan  sukrosa  sebagai sumber  energi  dipilih  untuk  mendukung penyerapan  yang  lebih  optimal.  Menurut Sulistiami (2012) bahwa sukrosa merupakan  produk  akhir  dari  proses asimilasi  karbon  berupa  fotosintat  yang paling mudah ditranslokasikan antar jaringan tanaman.

## Jumlah Tunas
Hasil  analisis  ragam  pemberian  sukrosa menunjukkan  pengaruh  nyata  terhadap parameter jumlah tunas, namun konsentrasi IBA  serta  interaksi  perlakuan  sukrosa  dan IBA  tidak  memberikan  pengaruh  nyata terhadap  jumlah  tunas  planlet  anggrek. (Tabel 6).
Penambahan  hormon  auksin  eksogen berupa  IBA  tidak  memberikan  pengaruh yang  berbeda  nyata  terhadap  jumlah  tunas pada  planlet  anggrek.  Terbentuknya  tunas baru diakibatkan oleh tingginya konsentrasi hormon  sitokinin  endogen  dalam  eksplan tunas  anggrek  dibandingkan  konsentrasi auksin  endogen.  Menurut  Murti et  al . (2012)  menyatakan  bahwa  akumulasi  zat pengatur tumbuh pada planlet berkaitan erat dengan  media  yang  digunakan  pada  tahap kultur sebelumnya.
6 5 4 3 2 1 0 6 5 4 3 2 1 0 7 6 5 4 3 2 1 0 7 6 5 4 3 2 1 0 6 5 4 3 2 1 0 6 5 4 3 2 1 0 7 6 5 4 3 2 1 0 7 6 5 4 3 2 1 0 6 5 4 3 2 1 0 6 5 4 3 2 1 0 7 6 5 4 3 2 1 0 7 6 5 4 3 2 1 0
Karimah et al. Pengaruh Penggunaan Sukrosa dan Iba terhadap Induksi Akar Eksplan Tunas Anggrek (Dendrobium sp.) secara in Vitro
Tabel 6. Jumlah Tunas Berdasarkan Kombinasi Sukrosa dan IBA
IBA (mg/l) Sukrosa (g/l) Rata-rata 20 30 40 --------- buah --------- 0 0,00 3,00 2,00 1,67 1 2,00 3,00 4,33 3,11 2 0,67 3,00 4,00 2,56 3 2,67 2,67 3,33 2,89 Rata-rata 1,33 b 2,92 a 3,42 a
Keterangan : superskrip berbeda menunjukkan perbedaan nyata (p<0,05).
Pemberian sukrosa dengan
konsentrasi  40  g/l  dan  30  g/l  memberikan respon  terbaik  terhadap  jumlah  tunas muncul  dengan  rata-rata  3,42  dam  2,92 buah  dibandingkan  pemberian  sukrosa  20 g/l  yaitu  1,33  buah.  Jumlah  sukrosa mempengaruhi  pertumbuhan  tunas  pada planlet.  Menurut    Ferreira et  al .,  (2011) penambahan  sukrosa  40  g/l  pada  media dengan  adanya  cahaya  mempengaruhi kenaikan  jumlah  tunas  planlet  anggrek Dendrobium .  Sukrosa  pada  media  kultur digunakan  sebagai  energi  dalam  proses
metabolisme  eksplan  maupun  planlet. Penelitian  Muzayyana et  al .,  (2020) menyatakan  bahwa  sukrosa  merupakan salah  satu  faktor  penting  yang  sangat berkaitan  dengan  sumber  karbohidrat  dan fitohormon  dalam  kultur in  vitro untuk mengoptimalkan diferensiasi sel pertunasan.

## Presentase Keberhasilan Kultur
Hasil  analisis  ragam  menunjukkan pemberian  sukrosa  dan  IBA  dalam  faktor tunggal  dan  interaksi  tidak  memberikan pengaruh nyata terhadap presentase keberhasilan kultur anggrek (Tabel 7).
Tabel 7. Presentase Keberhasilan Kultur
IBA (mg/l) Sukrosa (g/l) Rata-rata 20 30 40 --------- % --------- 0 100 100 100 100 1 67 100 100 89 2 67 100 100 89 3 100 100 100 100 Rata-rata 83 100 100
Keberhasilan  kultur  eksplan  tunas anggrek  dilihat  sesuai  dengan  adanya kontaminasi  dalam  media,  botol  maupun eksplan tunas yang telah ditanam. Penggunaan media dasar dengan
penambahan  sukrosa  dan  IBA  tidak mempengaruhi  adanya  kontaminasi  pada
botol kultur. Berdasarkan penelitian Shofiyani dan Damajanti (2015) menyatakan  bahwa  faktor  keberhasilan kultur  dipengaruhi  oleh  bahan  dasar penggunaan  eksplan  dan  teknik  sterilisasi yang  dilakukan  baik  sebelum  penanaman hingga penyimpanan.
Karimah et al. Pengaruh Penggunaan Sukrosa dan Iba terhadap Induksi Akar Eksplan Tunas Anggrek (Dendrobium sp.) secara in Vitro
Ilustrasi 1. Media Terkontaminasi Jamur
Media kultur yang digunakan ditemukan adanya  hifa  putih  pada  media  kultur mengindikasikan adanya kontaminan berupa  jamur,  jamur  ini  memang  paling sering  ditemukan  pada  botol  kultur  yang terkontaminasi.  Penelitian  Oratmangun et al .,  (2017)  menyatakan  bahwa  kontaminasi jamur  ditandai  dengan  munculnya  hifa jamur pada media kultur yang terserang dan biasanya dapat dicirikan dengan munculnya benang hifa berwarna putih, cokelat hingga hitam. Penyebab lain selain jamur, kontaminan  yang  sering  muncul  yaitu bakteri,  namun  pada  pelaksanaan  kultur tidak  ditemukan  adanya  ciri-ciri  media terkontaminasi  oleh  bakteri.  Shofiyani  dan Damajanti  (2015)  menyatakan  bahwa  ciri- ciri kontaminasi bakteri dapat dilihat dengan terbentuknya  lendir  berwarna  putih  dan kecoklatan di permukaan media kultur.

## SIMPULAN DAN SARAN
Simpulan dari hasil penelitian yang telah dilakukan  yaitu  pemberian  konsentrasi sukrosa mempengaruhi jumlah akar, panjang  akar,  tinggi  planlet  dan  jumlah tunas dengan taraf terbaik dengan konsentrasi  yaitu  40  g/l.  Perlakuan  IBA  2 mg/l  memberikan  respon  terbaik  terhadap tinggi  planlet.  Interaksi  antara  pemberian sukrosa  dan  IBA  tidak  mempengaruhi induksi perakaran eksplan tunas anggrek.

## DAFTAR PUSTAKA
Andri,  K.  B.  dan  J.  A.  T.  Willem.  2015.
Potensi  pengembangan  agribisnis bunga  anggrek  di  Kota  Batu  Jawa Timur. J. LPPM Bidang EkoSosBudKum, 2 (1) : 19-30.
Darmawati,  I.  A.  P.  dan  H.  Yuswanti. 2014. Pertumbuhan plantlet anggrek Vanda tricolor Lindl. secara in vitro dengan penambahan bubur ubi kayu pada  media  MS.  Agrotrop:  Journal on  Agriculture  Science, 4 (2)  :  126-
132.
Fathurrahman, F. 2013. Pemberian beberapa  jenis  auksin  terhadap pertumbuhan  akar  eksplan  anggrek secara in  vitro .  Dinamika  Pertanian,
28 (2) : 97-102.
Ferreira  W.,  R.  M.  Suzuki,  R.    Pescador, L.  Rita  de  Cássia  dan  G.  B.
Kerbauy. 2011. Propagation, growth, and carbohydrates of Dendrobium Second Love (Orchidaceae) in vitro as affected by sucrose,  light,  and  dark. In  vitro Cellular  &  Developmental  Biology- Plant, 47 (3) : 420-427.
Heriansyah,  P.  2019.  Multiplikasi  embrio somatis tanaman anggrek
( Dendrobium sp)  dengan  pemberian kinetin  dan  sukrosa  secara  in-vitro. J. Ilmiah Pertanian, 15 (2) : 67-78.
Jamur penyebab
kontaminasi pada media
kultur
Karimah et al. Pengaruh Penggunaan Sukrosa dan Iba terhadap Induksi Akar Eksplan Tunas Anggrek (Dendrobium sp.) secara in Vitro
Mahadi,  I.  2016.  Propagasi in  vitro
anggrek  ( Dendrobium  phalaenopsis Fitzg)  terhadap  pemberian  hormon IBA  dan  kinetin.  J.  Agroteknologi,
7 (1) : 15-18.
Murti,  R.  H.,  S.  C.  Debrath  dan  Y.  R. Yeoung.  2012.  Effect  of  high concentration  of  thidizauron  (tdz) combined with 1h-indole-3-butanoic acid  (iba)  on  albion  strawberry ( Fragaria  x  ananassa )  cultivar plantlets induction. African J. Biotechnology, 11 (81)  :  14696  – 14702.
Muzayyana,  L.,  M.  Hazmi  dan  L.  S.
Arum.  2020.  Optimization  of  honey concentration  on  in  vitro  sorghum ( Sorghum  bicolor )  shoot  induction. Indonesian Journal of Biotechnology  and  Biodiversity, 4 (2) :106-111.
Oratmangun,  K.M.,  D.  Pandiangan  dan F.E.  Kandou.  2017.  Deskripsi  jenis- jenis  kontaminan  dari  kultur  kalus
Catharanthus roseus (L.) G. Don. J. MIPA Unsrat, 6 (1) : 47-52.
Pant, B. dan D. Thapa. 2012. In vitro mass propagation  of  an  epiphytic  orchid,
Dendrobium primulinum Lindl. through  shoot  tip  culture.  African Journal  of  Biotechnology, 11 (42)  : 9970-9974.
Rafique, R., B. Fatima, S. Mushtaq, M. S. Iqbal, M. Rasheed, M. Ali dan S. U. Hasan.  2012.  Effect  of  indole-3- butyric  acid  (IBA)  on in  vitro root induction  in  dendrobium  orchid ( Dendrobium  sabin H.).  African Journal  of  Biotechnology, 11 (20)  : 4673-4675.
Rittirat,  S.,  K.  Thammasiri  dan  S.  Te- chato.  2012.  Effect  of  media  and sucrose  concentrations  with  or without  activated  charcoal  on  the plantlet  growth  of P.  cornu-cervi (Breda)  Blume  &  Rchb.  f.  J  Agric Technol, 8 (6) : 2077-2087.
Roycewicz,  P.  dan  J.  E.  Malamy.  2012. Dissecting  the  effects  of  nitrate, sucrose  and  osmotic  potential  on
Arabidopsis root  and  shoot  system growth in laboratory assays. Philosophical  Transactions  of  the Royal Society B: Biological Sciences, 367 (1595), 1489-1500.
Samudera,  A.  A.,  Rianto,  H.,  dan Historiawati.  2019.  Pengakaran in vitro eksplan  tebu  ( Saccharum officinarum L.)  varitas  bululawang pada  berbagai  konsentrasi  naa  dan sukrosa terhadap pertumbuhan planlet tebu. Vigor: J. Ilmu
Pertanian  Tropika  dan  Subtropika,
4 (1) : 5-13.
Shofiana,  A.  2013.  Pengaruh  pemberian berbagai  konsentrasi  hormon  IBA
Indole Butyric Acid ) terhadap pertumbuhan  akar  pada  stek  batang tanaman  buah  naga  ( Hylocereus undatus ). LenteraBio: Berkala Ilmiah Biologi, 2 (1) : 101-105. Shofiyani,  A.  dan  N.  Damajanti.  2015. Pengembangan  metode  sterilisasi pada berbagai eksplan guna
meningkatkan  keberhasilan  kultur kalus  kencur  ( Kaemferia  galangal L).  Agritech:  J.  Fakultas  Pertanian Universitas Muhammadiyah Purwokerto, 17 (1) : 55-64. Sukma,  D.,  dan  S.  Ari.  2011.  Pengaruh waktu  dan  frekuensi  aplikasi  pupuk daun  terhadap  pertumbuhan  dan pembungaan anggrek
Dendrobium’Tong  Chai  Gold’.  J.
Hortikultura  Indonesia, 1 (2)  :  96- 103.
Sulasiah,  A.,  C.  Tumilisar,  dan  T.
Lestaria, T. 2015. Pengaruh pemberian  jenis  dan  konsentrasi auksin  terhadap  induksi  perakaran pada tunas Dendrobium sp secara in vitro . Bioma, 11 (2) : 153-163.
Karimah et al. Pengaruh Penggunaan Sukrosa dan Iba terhadap Induksi Akar Eksplan Tunas Anggrek (Dendrobium sp.) secara in Vitro
Sulistiami,  A.,  W.  Waeniati  dan  I.  N. Suwastika. 2012. Pertumbuhan organ tanaman buah naga ( Hylocerus  undatus )  pada  medium MS  dengan  penambahan  bap  dan sukrosa. Natural Science: Journal of Science and Technology, 1 (1) : 27 - 33.
Suyanti,  Mukarlina  dan  Rizalinda.  2013. Respon  pertumbuhan  stek  pucuk keji  beling  ( Strobilanthes  crispus Bl)  dengan  pemberian  IBA  ( Indole Butyric Acid ). Protobiont, 2 (2) : 26 - 31.
Widiastoety,  D.  2014.  Pengaruh  auksin dan  sitokinin  terhadap  pertumbuhan planlet  anggrek  mokara.  J.  Hort,
24 (3) : 230 – 238.
Wijayanti,  I.,  M.  N.  Isda,  dan  W.  Lestari.
2015.  Induksi  akar  jeruk  siam  asal kampar  ( citrus  nobilis  lour .)  dari tunas in  vitro dengan  berbagai kombinasi  sukrosa  dan  naa  pada media ½ murashige and skoog. JOM FMIPA 2 (1) : 144 – 152.
Wulandari, R. C.,  L. Riza dan Mukarlina. 2013. Pertumbuhan stek melati putih ( Jasminum  sambac (L)  W.  Ait.) dengan  pemberian  air  kelapa  dan IBA( Indole Butyric Acid ) . Protobiont, 2 (2) : 39 – 43.
Yamaner, O., dan B. Erdag. 2013. Effects of  sucrose  and  polyethylene  glycol on  hypericins  content  in Hypericum adenotrichum .  Eurasian  Journal  of Biosciences, 7 (1) : 101-110.
Zahara,  M.,  A.  Datta,  P.  Boonkorkaew dan A. Mishra. 2017. The effects of different media, sucrose concentrations  and  natural  additives on  plantlet  growth  of Phalaenopsis hybrid' Pink'.  Brazilian  Archives  of Biology and Technology, 60 .
Zarmiyeni,  dan  S.  Munawarah.  2014. Pertumbuhan  tanaman  nanas  pada berbagai  konsentrasi  iba  secara in vitro .  Rawa  Sains:  Jurnal  Sains STIPER Amuntai, 4 (2) : 88-93.