## EFFECT OF EXTRACTION METHOD ON ANTIBACTERIAL ACTIVITY OF BANDOTAN LEAF (Ageratum conyzoides L) EXTRACT
PENGARUH METODE EKSTRAKSI TERHADAP AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK DAUN BANDOTAN ( Ageratum conyzoides L)
Aliyah Purwanti *
Program Studi Sarjana Farmasi Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas dr. Soebandi *aliyahpurwanti@uds.ac.id

## ABSTRACT
Bandotan leaves ( Argentum conizoydes L .) are often called nuisance plants. They growed wild in yards, plantation and fields. The chemical compound in bandotan leaves were potential as an antibacterial agent. From this research, we would determine effect of extraction method, by maceration and soxhletation, on the chemical compounds and antibacterial activity of bandotan leaf ( Ageratum conizoydes L ) extract. Both are using 96% of ethanol. The phytochemical screening showed that both extracts contain alkaloids, flavonoids, tannins, saponins, and steroids, respectively. The photometric analysis showed the average concentration of flavonoids and tannins in  bandotan  leaf  extract  resulting  from  soxhletation,  was  177,98  mg/g  and  61,13  mg/g,  higher  than  that  of maceration,  133,67  mg/g  and  47,75  mg/g.  The antibacterial activity  of  extract  from  soxhletation had a  greater inhibitory power 7.524 mm±1.457 compared to the extract from maceration 4.749 mm±2.142. It showed that the extraction method affected the concentration of chemical compounds and antibacterial activity.
Keyword : Bandotan leaves, maceration, soxhletation, antibacterial

## ABSTRAK
Daun bandotan ( Ageratum conizoydes L) sering disebut tumbuhan pengganggu. Daun bandotan tumbuh liar di pekarangan, perkebunan dan tanah lapang. Kandungan senyawa kimia daun bandotan berpotensi sebagai zat antibakteri. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh metode ekstraksi, secara maserasi dan sokletasi terhadap  kandungan  senyawa  kimia  dan  aktivitas  antibakteri  ekstrak  daun  bandotan  ( Ageratum  conizoydes L) . Ekstraksi menggunakan pelarut etanol 96%. Hasil skrining fitokimia menunjukkan, baik ekstrak hasil maserasi maupun sokletasi positif alkaloid, flavonoid, tanin, saponin dan steroid. Hasil analisis fotometri menunjukkan rata – rata konsentrasi flavonoid dan tannin pada ekstrak daun bandotan hasil sokletasi , 177,98 mg/g dan 61,13 mg/g, lebih tinggi dibandingkan ekstrak hasil maserasi, 133,67 mg/g dan 47,75 mg/g. Uji aktivitas antibakteri terhadap Staphylococcus  aureus menunjukkan  ekstrak  hasil  sokletasi  berdaya  hambat  lebih  besar  7,524  mm±1,457 dibandingkan dengan ekstrak hasil maserasi 4,749 mm±2,142. Hasil di atas menunjukkan bahwa metode ekstraksi mempengaruhi kandungan senyawa kimia, khususnya konsentrasi flavonoid dan tanin serta aktivitas antibakteri .
Kata Kunci : Daun bandotan, maserasi, sokletasi, antibakteri

## PENDAHULUAN
Daun bandotan ( Ageratum conizoydes L) adalah tumbuhan  yang  mudah  didapatkan  karena  biasa tumbuh  liar  di  pekarangan,  perkebunan  dan  tanah lapang  sehingga  sering  disebut  sebagai  tumbuhan pengganggu (Laoli, 2018).
Namun,  kandungan  senyawa  kimia  dalam  daun bandotan,  yaitu  alkaloid,  flavonoid,  saponin,  tanin dan  steroid  dapat  dikembangkan  sebagai  zat antibakteri  (Sugara  dkk.,  2016).  Menurut  Robinson (1995)  di  dalam  penelitian  Laoli  (2018)  senyawa flavonoid,  saponin,  dan  tanin  termasuk  senyawa yang  berpotensi  sebagai  antibakteri.  Hal  serupa dijabarkan  oleh  penelitian  yang  dilakukan  oleh Mahibalan et al (2016) dimana kandungan alkaloid dalam suatu sediaan obat lebih efektif dalam proses penyembuhan luka akibat infeksi bakteri. Penggunaan  obat-obatan  tradisional  yang  berasal dari  tumbuhan  sering  ditemui  dan  digunakan  di kalangan masyarakat Indonesia untuk mencegah dan atau  mengobati  penyakit.  Umumnya,  masyarakat mengkonsumsi  hasil  rebusan  dari  tanaman  tersebut atau  bisa  juga  membubuhkan  hasil  tumbukan tumbuhan obat tersebut pada daerah tubuh yang sakit atau yang terkena infeksi.
Proses  optimasi  kualitas  suatu  ekstrak  dapat dilihat  dari  metode  ekstraksi  yang  digunakan sehingga  dapat  menghasilkan  ekstrak  dengan kandungan  senyawa  aktif  yang  optimal.  Pada penelitian  ini,  ekstrak  etanol  daun  bandotan diperoleh  dengan  menggunakan  dua  metode ekstraksi,  secara  maserasi  dan  sokletasi,  sehingga dari perbedaan tersebut dapat diketahui metode yang lebih  baik  dalam  menghasilkan  ekstrak  yang memiliki  daya  hambat  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus (Sitepu,  2015).  Metode ekstraksi  maserasi  dipilih  karena  prosedurnya  yang sederhana,  baik  dari  segi  proses  maupun  peralatan yang  digunakan.  Metode  ini  juga  sesuai  untuk ekstraksi senyawa yang tidak tahan suhu tinggi (AS Hidayati,  2017).  Metode  sokletasi  merupakan metode ekstraksi yang dapat mengekstrak zat kimia yang  terkandung  dalam  tanaman  secara  optimum dengan  suhu  tinggi  dan  pelarut  yang  lebih  sedikit (Anam, 2014).
Hal  ini  membuat  beberapa  peneliti  yang  tertarik untuk  menjadikan  daun  bandotan  sebagai  sampel penelitian  sehingga  daun  bandotan  dapat  menjadi pilihan  sebagai  bahan  obat  tradisional  untuk penyembuhan  infeksi  pada  luka  yang  disebabkan oleh  bakteri  gram  positif  seperti Staphylococcus aureus ataupun  bakteri  gram  negatif  seperti Pseudomonas  aureginosa .  Tujuan  penelitian  ini adalah ingin mengetahui kandungan senyawa kimia dan  aktivitas  antibakteri  ekstrak  daun  bandotan ( Ageratum  conizoydes L) yang  diekstrak  secara
maserasi dan sokletasi .

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian experimental  laboratory ini  sebagian besar dilakukan di Laboratorium Terpadu Universitas dr.  Soebandi  Jember  mulai  bulan  Mei  sampai  Juli 2021.

## Sampel dan Variabel Penelitian
Sampel  daun  bandotan  yang  digunakan  pada penelitian  ini  berasal  dari  salah  satu  perkebunan  di Kecamatan  Mayang  Kabupaten  Jember.  Variabel bebas/independen  pada  penelitian  ini  yaitu  metode maserasi dan sokletasi. Variabel terikat pada penelitian ini  adalah  kandungan  senyawa  kimia  dan  aktivitas antibakteri Staphylococcus aureus .

## Alat dan Bahan Alat
Autoklaf,  spektrofotometer,  inkubator, vortex, tabung reaksi, cawan petri, pinset, mikropipet, blender, bejana  maserasi,  corong  kaca, waterbath ,  neraca analitik, tabung soxhlet , hotplate , kawat ose, Bunsen.
Bahan
Daun  bandotan,  etanol  96%, nutrient  agar , nutrient  broth ,  MSA,  kultur  bakteri Staphylococcus aureus ,  NaCl,  DMSO  10%,  antibiotik levofloxacin, akuades, kertas  cakram,  BaCl 2 1%,  H 2 SO 4 1% , asam asetat  glasial,  pereaksi  besi  (III)  klorida  1  %,  serbuk Mg, HCl pekat, pereaksi dragendroff, spirtus.

## Prosedur Penelitian Determinasi Tanaman
Determinasi  daun  bandotan  untuk  mengetahui jenis  tumbuhan  secara  spesifik  dilakukan  di Laboratorium  Biologi  Fakultas  Sains  dan  Teknologi Terapan Universitas Ahmad Dahlan.

## Pengolahan Serbuk Simplisia
Daun  bandotan  yang  berwarna  hijau  dan  masih segar  dicuci  di  bawah  air  mengalir  lalu  ditiriskan. Selanjutnya,  dikering-anginkan  tanpa  terkena  sinar matahari  langsung  selama  15  hari.  Setelah  kering, simplisia  diblender  sehingga  dihasilkan  serbuk simplisia daun bandotan (Astuti, 2015).

## Ekstraksi Maserasi
Metode maserasi yang dilakukan  mengacu pada penelitian  Naibaho  (2018)  dimana  perendaman  yang dilakukan  dengan  cara  mencampurkan  serbuk simplisia  dan  pelarut  etanol  96%  dengan  rasio  1:10. Maserat  yang  diperoleh  diuapkan  di  atas water  bath , lalu ditimbang.
Ekstraksi Sokletasi
Metode sokletasi yang dilakukan mengacu pada penelitian Anam (2014) yaitu menggunakan  serbuk simplisia  dan  pelarut  etanol  96%  dengan  rasio  1:3. Setelah  proses  sokletasi  selesai  kemudian  hasilnya diuapkan di atas water bath , lalu ditimbang.

## Skrining Fitokimia Uji Alkaloid
Ekstrak etanol daun bandotan sebanyak 2 mL (± 0,05%  b/v)  ditambahkan  2  mL  HCl  dan  3  tetes pereaksi dragendroff . Adanya alkaloid dapat dilihat dengan  munculnya  endapan  berwarna  jingga (Wilapangga dkk., 2018).

## Uji Flavonoid
Ekstrak etanol daun bandotan sebanyak 2 mL (± 0,05% b/v) ditambah dengan serbuk Mg 0,1gram dan ditambah  HCl  pekat  3  tetes.  Sampel  dinyatakan mengandung flavonoid jika terjadi perubahan warna menjadi merah atau jingga (Wilapangga dkk., 2018)

## Uji Tannin
Sebanyak 0,1gram sampel dipanaskan selama 3 menit dalam 10 mL air suling lalu didinginkan dan disaring.  Filtrat  diencerkan  sampai  hampir  tidak berwarna,  lalu  ditambahkan  1-2  tetes  pereaksi  besi (III)  klorida  1  %.  Keberadaan  tannin teridentifikasi jika  terbentuk  warna  biru  kehitaman  atau  hijau kehitaman (Laoli, 2018).

## Uji Saponin
Sebanyak  2  mL  (±  0,05%  b/v)  sampel dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi,  ditambahkan akuades  dan  dikocok  selama  15  menit.  Sampel mengandung saponin jika terbentuk busa setinggi 1 cm (Wilapangga dkk., 2018).

## Uji Steroid
Ekstrak etanol daun bandotan sebanyak 2 mL (± 0,05%  b/v)  ditambahkan  asam  asetat  glasial sebanyak 20 tetes. Larutan dikocok secara perlahan, kemudian ditambahkan asam sulfat pekat sebanyak 1 tetes.  Jika  terbentuk  warna  biru  atau  hijau menunjukkan adanya steroid (Wilapangga, 2018).

## Kadar Flavonoid dan Tanin
Pengujian  kadar  flavonoid  dan  tannin  secara fotometri di UPT Laboratorium Terpadu dan Sentra Inovasi Teknologi Universitas Jember.

## Uji Antibakteri
Pengujian  kekeruhan  pada  suspensi  koloni  uji yang  distandarisasi  dengan  standar Mc  Farland . Pembuatan  standar Mc  Farland dengan  BaCl 2 1%
sebanyak 0,05 mL dicampur dengan 9,95 mL H 2 SO 4 1% , kemudian uji densitas standar Mc Farland dengan mengukur absorbansinya menggunakan alat spektrofotometer.  Absorbansi  diukur  pada  panjang gelombang 625 nm pada rentang 0,08 - 0,13 (Dalynn, 2014).
Uji  aktivitas  antibakteri  dilakukan  dengan  cara paper disc dicelupkan ke dalam DMSO 10% sebagai kontrol  negatif  (-),  untuk  kontrol  positif paper  disc dicelupkan  ke  dalam  antibiotik  levofloxacin  dan kontrol  perlakuan paper  disc dicelupkan  ke  dalam ekstrak  daun  bandotan  yang  sudah  diekstraksi menggunakan  metode  maserasi  dan  sokletasi, kemudian diletakkan di atas media Mannitol Salt Agar yang  telah  diinokulasikan  dengan  bakteri  uji, kemudian  diinkubasi  pada  suhu  37°C  selama  1×24 jam.  Aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol  daun bandotan  dengan  perbandingan  metode  maserasi  dan sokletasi ditentukan dengan berdasarkan adanya zona bening di area paper disk (Laoli, 2018).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Determinasi Tanaman
Tahap  awal  penelitian  dilakukan  uji  determinasi sampel  daun  bandotan  yang  diperoleh  dan  hasilnya menunjukkan bahwa berdasarkan identifikasi karakteristik  tanaman  sampel  menyatakan  benar bahwa sampel yang digunakan adalah daun bandotan ( Ageratum conyzoidez L). Determinasi tanaman adalah prosedur menentukan nama atau jenis tanaman secara spesifik  sehingga  kita  dapat  mengetahui  kebenaran identitas  tanaman  tersebut  dan  memastikan  bahwa tanaman  yang  digunakan  dalam  penelitian  adalah tanaman  yang  diinginkan.  Dengan  demikian  peneliti dapat  terhindar  dari  kesalahan  dalam  pengumpulan bahan yang akan digunakan sebagai sampel (Diniatik, 2015).

## Ekstraksi Maserasi dan Sokletasi
Penelitian  dilanjutkan  dengan  proses  ekstraksi daun  bandotan  ( Ageratum  conyzoidez L)  secara maserasi  dan  sokletasi  dengan  menggunakan  pelarut etanol 96%. Perbedaan mendasar dari proses ekstraksi secara  maserasi  dan  sokletasi  adalah  suhu  yang diterapkan pada saat berlangsungnya proses ekstraksi. Maserasi  dilakukan  pada  suhu  ruang,  sedangkan sokletasi  dilakukan  pada  suhu  tinggi  dan  berulang  – ulang.
Penggunaan etanol sebagai pelarut dalam proses ekstraksi  dikarenakan  etanol  merupakan  pelarut universal  yang  aman  digunakan  dan  tidak  bersifat toksik  (Irawan,  2014).  Wardaningrum  (2019) menjelaskan bahwa etanol 96% mampu mengekstraksi senyawa  polar  maupun  nonpolar,  serta  dapat menghambat  pertumbuhan  kapang  dan  kuman,  dan

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
sangat  efektif  dalam  menghasilkan  ekstrak  yang optimal.
Sebanyak  200gram  simplia  kering  diekstraksi dengan  metode  maserasi  menggunakan  pelarut etanol  96%  sebanyak  2  L  dan  dengan  jumlah  yang simplisia  kering  yang  sama  diekstraksi  secara sokletasi menggunakan 600 mL pelarut etanol 96%. Sebanyak  14,75gram  ekstrak  kental  diperoleh  dari proses  maserasi  dan  sebanyak  20,24gram  ekstrak kental  diperoleh  dari  proses  sokletasi . Setelah diperoleh  ekstrak  kental  maka  rendemen  dapat dihitung. Rendemen  dapat  didefinisikan  sebagai banyaknya metabolit yang didapatkan dari prosedur ekstraksi  dibandingkan  dengan  berat  sampel  yang diekstraksi.  Nilai  rendemen  yang  baik  jika prosentase  yang  diperoleh    lebih  dari  10% (Wardaningrum, 2019).
Hasil  perhitungan  rendemen  menunjukkan bahwa  rendemen  dari  proses  ekstraksi  secara sokletasi lebih baik dibandingkan dengan rendemen dari proses ekstraksi secara maserasi, yaitu  10,12% dan 7,38%. Secara teoritis, tingginya nilai rendemen dari  proses  ekstraksi  secara  sokletasi dapat disebabkan  oleh  panas  atau  suhu  tinggi  yang diberlakukan  selama  proses  ekstraksi  sehingga kemampuan  pelarut  untuk  mengekstraks  senyawa kimia meningkat. Selain itu, dalam proses sokletasi pelarut  selalu  bersikulasi  dalam  proses  kontak dengan  serbuk  simplisia.  Hal  ini  mengakibatkan proses  penarikan  senyawa  metabolit  menjadi  lebih maksimal  hasil  rendemen  juga  ikut  meningkat (Kadji, et al ., 2013). Proses ekstraksi secara maserasi berlangsung  pada  suhu  ruang  sehingga  maserasi dapat  dikategorikan  sebagai  ekstraksi  dingin. Menurut  Rosita dkk. (2017), metrode maserasi dapat memicu  senyawa  kimia  hanya  dapat  larut  dalam pelarut  ekstraksi  pada  suhu  kamar.  Jika  kelarutan senyawa  kimia  dalam  pelarut  kecil  maka  hasil rendemen menjadi rendah atau kurang dari 10%.

## Skrining Fitokimia
Berdasarkan  hasil  skrining  fitokimia,  jika dibandingkan antara hasil pengamatan pada masing – masing perlakuan dengan hasil study literaturnya, hasilnya menunjukkan bahwa ekstrak daun bandotan ( Ageratum  conyzoidez L)  hasil  ekstraksi  secara maserasi maupun sokletasi masing – masing positif mengandung alkaloid, flavonoid, tanin, saponin dan steroid.
Pada  proses  pengujian  keberadaan  senyawa alkaloid  dengan  menggunakan  reagen dragendroff, diamati  terbentuknya  endapan  warna  jingga  pada ekstrak,  dimana  endapan  terbentuk  karena  senyawa alkaloid  yang  terkandung  di  dalam  ekstrak berinteraksi dengan ion tetraiodobismutat (III) yang terkandung  dalam  reagen dragendroff (Sulistyarini
dkk., 2019).
Keberadaan senyawa flavonoid pada ekstrak daun bandotan  ( Ageratum  conyzoidez L)  ditunjukkan dengan  terjadinya  perubahan  warna  ekstrak  daun bandotan  ( Ageratum  conyzoidez L)  menjadi  jingga setelah  direaksikan  dengan  asam  klorida  pekat  dan magnesium.  Perubahan  warna  dapat  terjadi  karena reaksi  reduksi  senyawa  flavonoid  oleh  asam  klorida pekat dan magnesium (Wilapangga dkk., 2018).
Saponin  merupakan  senyawa  yang  mudah terdeteksi  karena  kemampuannya  dalam  membentuk busa.  Busa  yang  timbul  disebabkan  karena  senyawa saponin memiliki sifat fisik  yang  mudah terhidrolisis dalam air sehingga menimbulkan busa ketika dikocok (Sulistyarini  dkk.,  2019).  Pereaksi  FeCI 3 1  % digunakan secara luas untuk mengidentifikasi senyawa fenol  termasuk  tanin.  Penambahan  FeC1 3 1%  pada ekstrak  daun  bandotan  ( Ageratum  conyzoidez L) menimbulkan warna hijau kehitaman karena terjadinya  reaksi  antara  FeC1 3 1%  dengan  salah  satu gugus  hidroksil  yang  ada  pada  senyawa  tannin (Wilapangga dkk., 2018).
Steroid memiliki gugus –OH yang dapat bereaksi dengan  asam  asetat  glasial  dan  asam  sulfat menghasilkan  warna  biru  kehijauan.  Keberadaan steroid  di  ekstrak  daun  bandotan  ( Ageratum conyzoidez L) dikonfirmasi dengan munculnya warna biru  kehijauan  setelah  ekstrak  ditambahkan  dengan asam asetat glasial dan asam sulfat (Sulistyarini dkk., 2019).
Keberadaan  alkaloid,  flavonoid,  tanin,  saponin dan steroid pada ekstrak dari kedua metode ekstraksi disebabkan  oleh  pelarut  yang  digunakan  merupakan pelarut  yang  memiliki  sifat  kepolaran  yang  sesuai dengan senyawa – senyawa tersebut.
Berdasarkan  prinsip like  dissolves  like ,  suatu senyawa  kimia  akan  cenderung  terlarut  di  dalam senyawa  yang  mempunyai  tingkat  kepolaran  yang sama.  Flavonoid  merupakan  senyawa  golongan polifenol yang terdistribusi luas pada tumbuhan dalam bentuk  glikosida  yang  berikatan  dengan  suatu  gula sehingga  flavonoid  dapat  dikategorikan  sebagai senyawa kimia yang bersifat polar. Pelarut polar yang biasa  digunakan  untuk  mengekstrak  flavonoid  antara lain  metanol,  aseton,  etanol,  air  dan  isopropanol (Harborne, 1987).
Tannin juga  merupakan  senyawa  polar,  sehingga tannin juga mudah terlarut dalam pelarut yang bersifat polar.  Sulastri  (2009)  menunjukkan  bahwa  kadar tannin  hasil  ekstraksi  etanol  lebih  tinggi  dibanding dengan kadar tannin hasil ekstraksi dengan air sebagai pelarut.

## Kadar Flavonoid dan Tannin
Uji  kuantitatif  senyawa  kimia  juga  dilakukan pada  senyawa  flavonoid  dan  tanin  dengan  metode
fotometri. Hasil analisis diperoleh bahwa rata – rata konsentrasi flavonoid dan tannin pada ekstrak daun bandotan  ( Ageratum  conyzoidez L)  hasil  ekstraksi sokletasi , 177,98  mg/g  dan  61,13  mg/g, lebih  tinggi dibandingkan  dengan  rata  –  rata  konsentrasi flavonoid  dan  tanin  pada  ekstrak  daun  bandotan ( Ageratum  conyzoidez L)  hasil  ekstraksi  maserasi, 133,67  mg/g  dan  47,75  mg/g.  Hal  ini  dapat disebabkan  karena  pada  proses  ekstraksi  secara sokletasi,  suhu  yang  digunakan  lebih  tinggi  dan pelarut  ekstraksi  selalu  bersirkulasi  dengan  serbuk simplisia  sehingga  proses  penarikan  senyawa metabolit  lebih  maksimal.  Suhu  tinggi  membuat kelarutan  senyawa  kimia  di  dalam  pelarut  menjadi lebih tinggi.

## Uji Antibakteri
Aktivitas  antibakteri  ekstrak  daun  bandotan ( Ageratum conyzoidez L) diuji dengan metode difusi cakram  dengan  6  kali  pengulangan.  Pengujian diawali  dengan  uji  kekeruhan  standar Mc  Farland 0,5.  Hasil  pembacaan  absorbansi  diperoleh  0,121 untuk  larutan  standar Mc  Farland 0,5  dengan konsentrasi  1,5,  sedangkan  untuk  suspensi  bakteri Staphylococcus aureus diperoleh absorbansi sebesar 0,129.  Berdasarkan  hasil  tersebut  pengujian dilanjutkan  ke  tahap  selanjutnya  yaitu  menguji aktivitas  antibakteri  dengan  metode  difusi  cakram, dimana  aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak  daun bandotan  ( Ageratum  conyzoidez L)  ditunjukkan dengan  ada  tidaknya  atau  seberapa  besarnya diameter  zona  bening  yang  terbentuk  di  sekitar cakram  yang  telah  mengandung  ekstrak  dan diletakkan  di  atas  sebuah  media  yang  telah diinokulasi bakteri Staphylococcus aureus .
Gambar  1. Zona  Bening  Hasil  Uji  Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Daun  Bandotan  ( Ageratum conyzoidez L)
Setelah proses inkubasi selama 24 jam, hasilnya menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun  bandotan ( Ageratum conyzoidez L) dari metode sokletasi dapat membentuk zona bening yang lebih besar yaitu 7,524 mm  ±  1,457,  dibandingkan  dengan  ekstrak  daun
bandotan  ( Ageratum  conyzoidez L)  dari  metode maserasi,  4,749  mm  ±  2,142.  Hal  ini  diduga  karena metode  sokletasi  dapat  lebih  optimal  dalam mengekstrak  senyawa  kimia  yang  memiliki  aktivitas antibakteri, seperti flavonoid,  alkaloid, tanin, steroid, dan saponin karena dalam prosesnya melibatkan suhu lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  metode  maserasi sehingga  senyawa  –  senyawa  kimia  lebih  mudah terlarut pada pelarut dan terekstrak. Hal ini didukung dengan  hasil  rendemen  yang  diperoleh  pada  metode sokletasi  lebih  tinggi  yaitu  10,12  %  dibandingkan dengan rendemen hasil metode maserasi yaitu 7,38 %, sehingga  aktivitas  antibakteri  yang  dimiliki  oleh ekstrak daun bandotan ( Ageratum conyzoidez L) juga menjadi  lebih  besar  menggunakan  ekstrak  hasil metode  sokletasi  dibandingkan  dengan  metode maserasi.
Uji  kadar  flavonoid  dan  tannin  ekstrak  daun bandotan ( Ageratum conyzoidez L) dari hasil ekstraksi sokletasi lebih tinggi dibandingkan dengan rata – rata konsentrasi  flavonoid  dan  tanin  pada  ekstrak  daun bandotan  ( Ageratum  conyzoidez L)  hasil  ekstraksi maserasi.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  nilai konsentrasi kedua senyawa tersebut berbanding lurus dengan zona bening yang terbentuk di sekitaran kertas cakram  yang  telah  diberi  ekstrak  dengan  metode sokletasi dan  maserasi.  Semakin  tinggi  konsentrasi senyawa flavonoid dan tannin, semakin besar diameter zona  bening  yang  terbentuk.  Hal  tersebut  didukung oleh  penelitian  Laoli  (2018),  bahwa  senyawa flavonoid  dan  tanin  adalah  senyawa  kimia  yang berpotensi sebagai senyawa antibakteri.
Uji  Non  Parametrik Kruskall  Wallis yang menunjukkan p<0,000 yang artinya terdapat perbedaan  nyata  pada  tiap  perlakukan. Uji  Duncan menunjukkan  bahwa  zona  bening  bakteri  kontrol positif  berbeda  nyata  dengan  perlakuan  kontrol negatif, sokletasi dan maserasi. Diameter zona bening bakteri  kontrol  negatif  berbeda  nyata  dengan perlakuan  kontrol  positif,  sokletasi  dan  maserasi. Diameter zona bening bakteri sokletasi berbeda nyata dengan  perlakuan  kontrol positif,  kontrol  negatif  dan maserasi.  Diameter  zona  bening  bakteri  maserasi berbeda  nyata  dengan  kontrol  positif,  kontrol  negatif dan sokletasi .

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil yang diperoleh pada penelitian ini  dapat  disimpulkan  bahwa  metode  ekstraksi maserasi  dan  sokletasi  mempengaruhi  kandungan senyawa  kimia,  khususnya  pada  senyawa  flavonoid dan tannin. Uji kadar flavonoid dan tanin ekstrak daun bandotan ( Ageratum conyzoidez L) dari hasil ekstraksi sokletasi 177,98  mg/g  dan  61,13  mg/g,  lebih  tinggi dibandingkan dengan rata – rata konsentrasi flavonoid dan  tanin  pada  ekstrak  daun  bandotan  ( Ageratum
conyzoidez L) hasil ekstraksi maserasi 133,67 mg/g dan 47,75 mg/g. Hal ini menunjukkan bahwa metode ekstraksi maserasi dan sokletasi dapat mempengaruhi  konsentrasi  senyawa  kimia  yang terkandung  dalam  ekstrak.  Metode  ekstraksi maserasi dan sokletasi juga mempengaruhi aktivitas antibakteri Staphylococcus aureus yang ditunjukkan dengan adanya zona hambat yang lebih besar ketika menggunakan  ekstrak  hasil  sokletasi  7,524  mm  ± 1,457  dibandingkan  ketika  menggunakan  ekstrak dari metode maserasi 4,749 mm ± 2,142.

## SARAN
Penelitian ini dapat dilanjutkan dengan menguji aktivitas  antibakteri  pada  bakteri  lain,  seperti Pseudomonas aureginosa untuk mengetahui efektivitas  ekstrak  pada  bakteri  gram  negatif  atau Propionibacterium acnes untuk mengetahui potensi ekstrak  untuk  dapat  diformulasi  menjadi  sediaan yang dapat mengatasi jerawat . Penggunaan metode ekstraksi lain dengan menggunakan pelarut yang lebih ramah lingkungan seperti NADES ( Natural Deep Eutectic Solvents ) – UAE  ( Ultrasound Assisted  Extraction )  juga  dapat diaplikasikan dalam proses ekstraksi sehingga dapat dibandingkan  perbedaan  aktivitas  antibakterinya dengan metode ekstraksi yang telah dilakukan pada penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Astuti,  H.  (2015).  Uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak etanol dan ekstrak air daun bandotan (Ageratum conyzoides, L.) terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia
coli. Majalah
Farmaseutik , 11 (1), 290-293.
Diniatik.  (2015).  Penentuan  Kadar  Flavonoid  Total Ekstrak  Etanolik  Daun  Kepel  ( Stelechocarpus Burahol (Bl.) Hook F.  & Th .) Dengan Metode Spektrofotometri. Kartika-Jurnal Ilmiah
Farmasi , Jun 2015, 3 (1), 1-5
Harborne  J.B.  1987.  Metode  Fitokimia.  Edisi  ke-2. Padmawinata  K,  Soediro  I,  penerjemah. Bandung: Institut Teknologi Bandung. Terjemahan dari: Phytochemical Methods.
Irawan,  H.  (2014)  ‘Pengaruh  Konsentrasi  Pelarut
Etanol  Terhadap  Profil  Kromatogram  Dan Kandungan  Senyawa  Kimia  Dalam  Ekstrak Daun  Pepaya  (  Carica  papaya  L  .  )  Dan  Daun Patikan Kebo ( Euphorbia hirta L.)’, Article , pp. 40–45.
Kadji,  M.  H.,  M.  R.  J.  Runtuwene.,  dan  G.
Citraningtyas.  (2013).  Uji  Fitokimia  dan Aktivitas Antioksidan dari Ekstrak Etanol Daun Soyogik  (Saurauia  bracteosa  DC).  FMIPA
UNSRAT. Manado.
Laoli, N. S. 2018. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak
Etanol Daun Bandotan (Ageratum conyzoides L.) Terhadap  Bakteri  Bacillus substilis  dan  Proteus vulgaris .  Tugas  Akhir.  Program  Studi  Sarjana Farmasi  Fakultas  Farmasi  Universitas  Sumatera Utara Medan 4, pp. 67–73.
Rosita, J.  M., Taufiqurrahman,  I.  and  Edyson  (2017) ‘Perbedaan  Total  Flavonoid  antara  Metode Maserasi  dengan  sokletasi  pada  Ekstrak  Daun Binjai  ( Mangifera  caesia )’, Dentino  Jurnal Kesdokteran Gigi , I(1), pp. 100–105.
Sulastri, Taty., (2009). Analisis Kadar Tanin Ekstrak Air  dan  Ekstrak  Etanol  pada  Biji  Pinang  Sirih (Areca  Catechu.  L).  Jurnal  Chemica  Vo/.  10 Nomor 1 Juni 2009, 59-63.
Sulistyarini,  I.,  Sari,  D.  A.  and  Wicaksono,  T.  A. (2019)  ‘Skrining  Fitokimia  Senyawa  Metabolit Sekunder  Batang  Buah  Naga  (Hylocereus polyrhizus)’, Jurnal Ilmiah Cendekia Eksakta , pp.
56–62.
Wardaningrum,  (2019)  ‘Perbandingan  Aktivitas
Antioksidan  Ekstrak  Etanol  Terpurifikasi  Ubi Jalar  Ungu  (Ipomoea  batata  L)  dengan  Vitamin E’, artikel , 52(1), pp. 1–5.
Wipalangga, A. Sari, L.P. (2018). Analisis Fitokimia dan Antioksidan Metode DPPH Ekstrak Metanol Daun Salam ( Eugenia polyantha ). Ijobb , pp. 19- 20