## POTENSI ANTIBAKTERI KARANG LUNAK Lobophytum sp. DARI PERAIRAN PANGALISANG PULAU BUNAKEN TERHADAP BAKTERI
Pseudomonas aeruginosa DAN Staphylococcus aureus
( Antibacterial Potential of Soft Coral Lobophytum sp . From Pangalisang Waters of Bunaken Island to Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus)
Abraham L. Kowal 1* , Esther D. Angkouw 1 , Nickson J. Kawung 1 , Kurniati Kemer 1 , Henky Manoppo 2 , Deiske A. Sumilat 1
1 Program Studi Ilmu Kelautan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Sam Ratulangi, Manado.
e-mail : brmlnclnkwl@gmail.com
2 Program Studi Budidaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Sam Ratulangi, Manado

## ABSTRACT
Soft corals ar known to have a variety of bioactivity capabilities, one of them is antibacterial. Antibacterial is a compound that can interfere with the growth of bacteria or even kill the bacteria. The soft coral samples, Lobophytum sp., obtained from   Pangalisang,  Bunaken Island,  wer  extracted  by  evaporative  process,  then fractionated  into  three  fractions  by  aqueous  partitioning  technique  with  aqueous solvents, ethyl acetate, methanol and n-hexane. Antibacterial testing, with bacterial samples of Pseudomonas aeruginaso and Staphylococcus aureus were analyzed by agar diffusion / Kirby Bauer method. The results of the experiment showed that every fraction had antibacterial activity, where the largest activity was produce at concentration of 50 disc paper sampes with  7 mm (water fraction), 8 mm ( metanol fraction),  7,2  mm  (n-hexane  fraction)  in Pseudomonas  aeruginosa and  7  mm (water  fraction),  8,7  mm  (  metanol  fraction)  in Staphylcoccus  aureus. It  can  be concluded that the  inhibition zone from soft corals, Lobophytum sp., is classified as  a  weak activity,  so  it does  not  potential to  be developed  into  an  antibacterial drug.
Keywords: Antibacterial , Lobophytum sp., Pseudomonas aeruginosa, Staphylcoccus aureus.

## ABSTRAK
Karang  lunak  diketahui  mempunyai  berbagai  bioaktivitas  salah  satunya antibakteri.  Antibakteri  merupakan  senyawa  yang  dapat  mengganggu pertumbuhan  atau  bahkan  dapat  mematikan  bakteri.  Sampel  karang  lunak Lobophytum sp. yang diperoleh dari perairan Pangalisang Pulau Bunaken diambil ekstrak kentalnya melalui proses evaporasi, selanjutnya difraksinasi menjadi tiga fraksi dengan teknik partisi cair dengan pelarut aquades, etil asetat, metanol dan n-heksan. Pengujian antibakteri terhadap bakteri Pseudomonas aeruginosa dan Staphylococcus aureus dianalisis dengan metode difusi agar (disc diffusion Kirby and Bauer) . Hasil penelitian menunjukan ketiga fraksi memiliki aktivitas antibakteri, dimana  aktivitas  terbesar  dihasilkan  pada  konsentrasi  sampel  dalam  kertas cakram 50 μl dengan zona hambat 7mm (fraksi air), 8 mm (fraksi metanol), 7,2 mm (fraksi n-heksan) pada Pseudomonas aeruginosa dan 7 mm (fraksi air), 8,7 mm (fraksi  metanol)  pada Staphylococcuss  aureus. Dapat  disimpulkan  bahwa  zona
hambat yang dihasilkan karang lunak Lobophytum sp. tergolong lemah sehingga tidak berpotensi untuk dikembangkan sebagai obat antibakteri.
Kata kunci: Antibakteri, Lobophytum sp., Pseudomonas aeruginosa,
Staphylcoccus aureus.
PENDAHULUAN Daerah laut tropis termasuk perairan  Pangalisang  Pulau  Bunaken diketahui  memiliki  keanekaragaman hayati  organisme  laut  yang  tinggi (Wagey, 2017). Dimana keanekaragaman  tersebut  berpotensi sebagai  penghasil  senyawa  bioaktif yang  baru.  Organisme  laut  seperti karang  lunak  (Kawung et  al., 2017), spons  (Luissandy et  al., 2017;  Sumilat, 2017a), ascidian (Sumilat et al., 2017b; Sumilat et al., 2018),  makro alga, mikro alga  dan  ikan  merupakan  penghasil senyawa  bioaktif  yang  potensial  dari produk alam laut (Tanod, 2015)
Biota sesil terumbu karang seperti karang lunak merupakan sumber penghasil senyawa bioaktif yang
potensial.  Secara  ekologis,  biota  yang tidak  mampu  berpindah  tempat  ini memproduksi senyawa bioaktif sebagai alternatif dalam berinteraksi atau
berkompetisi  di  lingkungannya.  Oleh
karena itu, biota yang mampu mendominasi ruang hidup di ekosistem terumbu  karang  biasanya  memiliki senyawa  bioaktif  dalam  jumlah  yang besar (Iswani et al., 2014).
Menurut  Apri  (2014),  substansi kimia  yang  disekresikan  karang  lunak sebagai  senyawa  metabolit  sekunder menarik  untuk  dikaji  pemanfaatannya bagi  sumber  bahan  obat-obatan  alami. Saat ini karang lunak yang sudah diteliti dapat  menghasilkan  senyawa  bioaktif seperti antibakteri, antikanker, antiinflamasi  dan  berpotensi  digunakan dalam pengobatan kolestasis (Fattorusso et  al .,  2009;  Putra et  al.,
2012a; Putra et al., 2012b).

## . METODE PENELITIAN Lokasi Pengambilan Sampel
Karang  lunak Lobophytum sp. diambil dari perairan Pangalisang Pulau Bunaken.
Gambar. 1 Peta Pengambilan Sampel.
Pengambilan  sampel  dilakukan dengan snorkeling pada ke dalaman  5- 7  meter  dibantu  dengan  dua  set  alat snorkeling. Sampel karang lunak diambil dengan cara memotong sampel langsung  dari  substratnya.  Sampel karang  lunak  kemudian  dicuci  dengan aquades lalu dipotong kecil-kecil berbentuk  dadu  kemudian  dimasukan ke  dalam  botol  plastik  yang  berisikan etanol  dengan  konsentrasi  90%  dan setelah itu sampel dibawa ke Laboratorium  Biologi  Molekuler  dan Farmasetika  Laut  Fakultas  Perikanan dan  Ilmu  Kelautan  Universitas  Sam Ratulangi untuk penelitian lebih lanjut.

## Ekstraksi Karang Lunak
Ekstraksi  menggunakan  teknik masrasi yaitu merendam sampel dengan etanol (EtoH) selama 1x24 jam dan  dilakukan  tiga  kali  pengulangan untuk  mendapatkan  filtrat  atau  ekstrak dari sampel. Filtrat disaring menggunakan  kertas  saring  sehingga filtrat bebas dari ampas/debris, kemudian dievaporasi pada suhu 40 o C, hal  ini  bertujuan  untuk  tetap  menjaga senyawa  bioaktif  dalam  filtrat  karena biasanya  senyawa-senyawa  bioaktif rentan terhadap suhu tinggi.
Sterilisasi Alat dan Media
Alat-alat  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  berupa  cawan  petri, scapel, pinset dan tabung reaksi dicuci, dikeringkan  dan  dibungkus  dengan kertas  kemudian  dimasukan  kedalalam oven  (sterilisasi  kering)  pada  suhu 160 o C selama ±2 jam dan untuk media dimasukan  kedalam  erlenmeyer  lalu ditutup  menggunakan  aluminium  foil berikutnya  dimasukan  kedalam  oven (sterilisasi  basah)  pada  suhu  121 o C selama 15 menit.

## Fraksinasi  Karang  Lunak  Dengan Partisi Cair
Penyiapan Larutan Fraksi untuk Partisi Disedikan  empat  pelarut  yaitu aquades,  metanol,  etil  asetat,  n-
heksana dengan banyak masing- masing 100ml.

## Fraksinasi dengan Partisi Cair
Diambil  5  gr  ekstrak  kental  lalu dilarutkan  kedalam  100  ml  aquades didalam  corong  pisah  dan  dicampur dengan  etil  asetat,  selanjutnya  diaduk sampai  ekstrak  kental  benar-benar tercampur,  diamkan  beberapa  saat sampai terbentuk dua lapisan kemudian pisahkan  kedua  lapisan  kedalam erlenmeyer. Lapisan etil asetat dievaporasi  kemudian  ekstrak  kental yang  didapatkan  dilarutkan  kembali pada  metanol  dan  n-heksan  didalam corong  pisah,  selanjutnya  diaduk sampai  benar-benar  tercampur  lalu didiamkan  beberapa  saat  hingga terbentuk dua lapisan.  Pisahkan kedua lapisan kedalam erlenmeyer.

## Evaporasi Fraksi-fraksi
Ketiga  fraksi  dievaporasi  pada suhu  40 o C sampai mendapatkan ekstrak kental dari ketiga fraksi kemudian    masukan  kedalam  botol ekstrak.

## Penyiapan Pengujian Antibakteri
Media Cair B1
Media  cair  B1  dibuat  dua erlenmeyer  dengan  komposisi  bahan tiap  erlenmeyer  pepton  0,5  gram, natrium klorida (NaCl) 0,3 gram, ekstrak daging  ( meat  extract )  0,3 gram.  Bahan yang  telah  ditimbang  dimasukkan  ke dalam erlenmeyer yang sudah berisikan aquades/dH 2 O sebanyak 50 ml,
kemudian  ditutup  dan  dibungkus menggunakan  aluminium  foil  dan disterilkan menggunakan autoklaf pada suhu 121 o C selama 15 menit.

## Kultur  Bakteri
Bakteri Pseudomonas aeruginosa dan Staphylococcus  aureus diambil menggunakan  jarum  ose  kemudian dimasukan  kedalam  media  cair  B1,
selanjutnya  ditutup  dengan  aluminium foil dan diinkubasi selama 1 x 24 jam.
Media Padat B1 Media padat dibuat dua
erlenmeyer  dengan  komposisi  bahan pepton  2  gram,  natrium  klorida  (NaCl) 1,2  gram,  daging  ( meat  extract )  1,2 gram, agar 6 gram. Bahan yang sudah ditimbang dimasukkan ke dalam erlenmeyer yang sudah berisi aquades/dH 2 O sebanyak 200 ml. Media disterilkan menggunakan autoklaf pada suhu 121 o C selama 15 menit.
Pembuatan Kontrol Positif dan Kontrol Negatif Kontrol negatif menggunakan obat kloramfenikol  sebanyak  200  mg  lalu dilarutkan  ke  dalam  1  ml  aquades (200mg/ml) dan kontrol negatif menggunakan etanol 100%.

## Pembuatan  Konsentrasi Sampel
Penelitian ini menggunakan konsentrasi  200  mg/ml.  Tiap  fraksi diencerkan  dengan  pelarut  metanol 100% menggunakan mikropipet.

## Pengujian Antibakteri
Pengujian Antibakteri Hasil Partisi
Pengujian antibakteri pada
peneltian  ini  menggunakan  konsentrasi 200 mg/ml dan banyaknya ekstrak yang ditotolkan pada kertas cakram sebanyak 50  μl,  30  μl  dan  10  μl.  Metode  yang digunakan pada penelitian ini ialah difusi agar ( disc  diffusion  Kirby  and  Bauer ). Metode  ini  banyak  digunakan  untuk menguji  sensitivitas  suatu  antibiotik terhadap bakteri tertentu (Fall, 2011).

## Pengamatan dan Pengukuran
Setelah    1  x  24  jam,  amati  zona hambat  yang  terbentuk  pada  bakteri
Pseudomonas aeruginosa
dan Staphylococcus  aureus dan  ukur diameternya  dengan  penggaris  dalam satuan (mm).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengambilan dan Penanganan Sampel di Lapangan. Karang  lunak  dipotong-potong berbentuk dadu/kubus
kemudian dimasukan  kedalam  botol  plastik  yang berisikan  pelarut  etanol  90%  yang sudah diberi tanda/label terlebih dahulu (SC1, SC2 dan SC3).
Ekstraksi Karang Lunak Lobophytum sp.
Ekstrak sampel yang sudah diperoleh dari proses maserasi, difiltrasi menggunakan kertas saring ( filter paper )  dan  vakum.  Selanjutnya  filtrat sampel dipisahkan/diuapkan dari pelarut menggunakan alat rotary vacum evaporator . Ekstrak kental hasil evaporasi  diambil  kemudian  ditimbang dan  didapatkan  berat  ekstrak  kental sebanyak 32,678 gram.
Hasil Fraksinasi Karang Lunak Lobophytum sp. dengan Partisi Cair
Ekstrak  kental  yang  digunakan sebanyak  5  gram  dan  pelarut  yang digunakan aquades, etil asetat, metanol dan  n-heksan.  Hasil  yang  diperoleh didapatkan  tiga  fraksi  yang  mewakili sifat kepolaran pelarut yaitu polar, semi polar dan non polar. Banyaknya tiap-tiap fraksi sampel karang lunak Lobophytum sp. ialah 100 ml, dimana fraksi aquades memiliki  warna  coklat  pekat,  fraksi etanol memiliki warna coklat kemerahan dan  untuk  fraksi  n-heksan  memiliki warna hijau kekuningan.
Evaporasi  Fraksi  Hasil  Partisi  Cair Karang Lunak Lobophytum sp.
Fraksi-fraksi hasil partisi dievaporasi  menggunakan  alat rotary vacum  evaporator pada  suhu  40 o C untuk  memisahkan  pelarut  yang  ada.
Fraksi aquades memakan waktu paling lama dibandingkan dengan fraksi metanol dan fraksi n-heksan.
Pengujian  Bioaktivitas  Antibakteri Ketiga Fraksi Karang Lunak Lobophytum sp. Pada  pengujian  antibakteri  ini menggunakan  konsentrasi  sampel  uji
200mg/ml  dengan  banyaknya  ekstrak yang  ditotolkan  pada  kertas  cakram
ialah 50 μl, 30 μl dan 10 μl disetiap fraksi dengan kontrol positif kloramfenikol dan kontrol  negatif  pelarut  yang  digunakan pada  saat  maserasi  dengan  masing- masing tiga kali pengulangan.
Gambar 2. Hasil Penelitian Pada Media Bakteri Pseudomonas aeruginosa.
Gambar 3. Hasil Penelitian Pada Media Bakteri Staphylococcus aureus.
Tabel  1. Hasil  Pengukuran  Diameter  Zona  Hambat  Karang  Lunak  Terhadap  Bakteri Pseudomonas aeruginosa
Tabel  2. Hasil  Pengukuran  Diameter  Zona  Hambat  Karang  Lunak  Terhadap  Bakteri Staphylococcus aureus
Data yang ditampilkan pada tabel
1  dan  tabel  2,  menunjukkan  setelah dilakukan
pengujian bioaktivitas antibakteri  karang  lunak Lobophytum sp.  yang  difraksinasi  dengan  teknik partisi cair terhadap bakteri Pseudomonas aeruginosa dan Staphylococcus aureus, maka
didapatkan  zona  hambat  untuk  kedua bakteri uji pada konsentrasi 50 μl dan 30
μl, tetapi untuk konsentrasi 10 μl sampel sudah tidak menunjukkan aktivitas pada bakteri Staphylococcus aureus.
Tabel  1  memperlihatkan  ketiga fraksi  dengan  ekstrak  kental  dapat memberikan  zona  hambat  terhadap bakteri Pseudomonas  aeruginosa pada ketiga  pengulangan  tetapi  sangat  kecil aktivitas  antibakteri  yang  dihasilkan dimana  untuk  fraksi  air  diameter  zona
SAMPEL Banyak Ekstrak Dalam Kertas Cakram 50 μl 30 μl 10 μl I (mm) II
(mm) III (mm) rata- rata (mm) I (mm) II (mm) III (mm) rata- rata (mm) I (mm) II (mm ) III (mm ) rata- rata (mm ) Fr. Air 7 7 7 7 6.5 6.5 6.5 6.5 0 0 0 0 Fr. Metanol 8 9 8 8.3 8 7 7 7.3 6.5 6.5 6.5 6.5 Fr. n-heksan 7 7.5 7 7.2 6.5 6.5 6.5 6.5 0 0 0 0 Ekstrak kental 6.5 7 7 6.8 6.5 6.5 6.5 6.5 6.5 6.5 6.5 6.5 Kontrol (-) 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Kontrol (+) 32 29 29 30 28 28 27.5 27.8 24 24 24 24
Konsentrasi Tiap Fraksi, Ekstrak dan Kontrol = 200 mg/ml Diameter kertas cakram = 6 mm Daya serap kertas cakram = 50 μl
SAMPEL Banyak Ekstrak Dalam Kertas Cakram 50 μl 30 μl 10 μl I (mm) II (mm) III (mm) rata- rata (mm) I (mm) II (mm) III (mm) rata- rata (mm) I (mm) II (mm) III (mm) rata- rata (mm) Fr. Air 7 7 7 7 0 0 0 0 0 0 0 0 Fr. Metanol 8 8 10 8.7 8 8 8 8.0 0 0 0 0 Fr. n-heksan 0 0 0 0.0 0 0 0 0 0 0 0 0 Ekstrak kental 7 7 8 7.3 0 0 0 0 0 0 0 0 Kontrol (-) 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Kontrol (+) 27 27 27 27 22 24 22 22.7 14.5 14.5 14.5 14.5
Konsentrasi Tiap Fraksi, Ekstrak dan Kontrol = 200 mg/ml Diameter kertas cakram = 6 mm Daya serap kertas cakram = 50 μl
hambat  yang  dihasilkan  pada  ketiga pengulangan  7  mm,  fraksi  metanol dengan  rata-rata  8,3  mm,  fraksi  n- heksan dengan rata-rata 7,2 mm, untuk ekstrak  kental  rata-rata  6,8  pada konsentrasi  50  μl.  Konsentrasi  30  μl, ketiga  fraksi  masih  dapat  memberikan daya  hambat  fraksi  air  rata-rata  6,5, fraksi  metanol  7,3,  fraksi  n-heksan  6,5 dan ekstrak kental 6,5. Pada
konsentrasi 10 μl fraksi air dan fraksi n- heksan sudah tidak menghasilkan zona hambat.
Tabel  2  memperlihatkan  bahwa fraksi  air,  fraksi  metanol  dan  ekstrak kental mampu memberikan zona hambat terhadap bakteri Staphylococcus  aureus dengan  zona hambat fraksi air pada ketiga pengulangan  7  mm,  untuk  fraksi metanol diameter rata-rata 8,7 mm dan fraksi  ekstrak  kental  diameter  rata-rata 7,3  pada  konsentrasi  50 μl.  Pada konsentrasi  30  μl  menunjukkan  hanya fraksi  metanol  yang  memberikan  zona hambat  dan  pada  konsentrasi  10  μl ketiga  fraksi  dan  ekstrak  kental  sudah tidak  mampu  lagi  memberikan  zona hambat.
Setelah dilakukan pemisahan dengan  cara  partisi  cair  didapatkan senyawa  yang  larut  dalam  fraksi metanol  lebih  beraktivitas  pada  bakteri Staphylococcus  aureus dibandingkan bakteri
Pseudomonas
aeruginosa karena  daya  hambat  yang  dihasilkan lebih  besar.  Senyawa  antibakteri  dari karang lunak dari Lobophytum sp. yang larut  pada  fraksi  air  dan  n-heksan menunjukkan  lebih  peka  terhadap bakteri  Gram  negatif  karena  pada konsentrasi
50 μl fraksi air menghasilkan zona hambat yang sama pada kedua bakteri tetapi pada konsentrasi  30  μl fraksi air  sudah tidak lagi  menghasilkan  zona  hambat  pada bakteri Staphylococcus  aureus hanya pada bakteri Pseudomonas aeruginosa . Fraksi  n-heksan  hanya  menunjukkan zona hambat pada bakteri Pseudomonas  aeruginosa dan  tidak menunjukkan zona hambat pada bakteri
Staphylococcus aureus .
Zona hambat yang dihasilkan dari masing-masing  fraksi  terhadap  kedua bakteri uji didapati kecil (Tabel 2 & Tabel 3)  tetapi  senyawa  antibakteri  karang lunak Lobophytum sp.  lebih  bekerja pada bakteri Gram negatif dimana Bara et  al (2015)  mengemukakan,  seringkali bakteri  Gram  negatif  menjadi  kendala dalam dunia kedokteran, yang diakibatkan  oleh  adanya  karakteristik bakteri dari kelompok Gram negatif yang memiliki  dinding  peptidoglikan  yang cukup padat dan kompak serta adanya efflux-pump  mechanism yaitu  suatu mekanisme untuk mengeluarkan sanyawa-senyawa yang tidak dibutuhkan dalam proses biotransformasi  seluler  bakteri  melalui sistem  sekresi,  sehingga  menghambat proses  internalisasi  senyawa  untuk mampu mempengaruhi mekanisme
seluler dari bakteri. Hasil yang didapatkan dari penelitian ini menunjukkan karang lunak
Lobophytum sp.  mempunyai  aktivitas antibakteri yang kekuatan daya setelah digolongkan berdasarkan penggolongan  (Davis  dan  Stoud,  1971 dalam Wewengkang et  al .,  2014) menunjukkan  aktifitas  antibakterinya lemah.    Hasil  penelitian  karang  lunak Lobophytum sp.  sama  seperti  karang lunak  jenis  lainnya  yang  sudah  pernah diteliti dimana karang lunak Nephtea sp. mempunyai  aktivitas  antibakteri  tetapi sangat  kecil/lemah  (Rumengan,  2013), karang lunak Klyxum sp. juga menghasilkan senyawa antibakteri tetapi  kekuatan  aktivitasnya  lemah (Lalamentik et  al., 2017)  dan  karang lunak Sarcophyton sp. memiliki senyawa antibakteri tetapi kekuatannya lemah (Tombokan et al., 2016).

## KESIMPULAN
Ada beberapa hal yang disimpulkan dari penelitian ini, yaitu:
1.  Karang  lunak Lobophytum sp. memiliki  senyawa  antibakteri tetapi kekuatannya lemah.
2.  Fraksi air dan fraksi metanol dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri
P. aeruginosa dan S. aureus tetapi fraksi n-heksan hanya dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri P. aeruginosa .
3.  Ketiga  fraksi  dapat  menghambat pertumbuhan bakteri P. aeruginosa
pada  konsentrasi  50  μl  dan  30  μl tetapi pada konsentrasi 10 μl hanya fraksi metanol yang dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri dan pada bakteri S. aureus fraksi air dan  fraksi  metanol  menghambat pertumbuhan bakteri pada konsentrasi  50  μl  dan hanya fraksi metanol  yang    dapat  menghambat pertumbuhan bakteri pada
konsentrasi 30 μl.

## DAFTAR  PUSTAKA
Apri,  R.  2014. Kandungan  Senyawa Bioaktif Dan Uji Fitokimia Sinularia sp  dan  Lobophytum  sp  Dari Perairan  Pulau  Pongkok  Bangka Selatan . Thesis. Sekolah Pascasarjana  Institut  Pertanian Bogor, Bogor. 50 hal. Bara,  R.  A.,  Kandou,  G.,  Ola,  A,  dan Posangi, J. 2015. Analisis Senyawa  Antibiotik  Dari  Jamur Simbion  Yang  Terdapat  Dalam Ascidians Didemnum  molle Di Sekitar Perairan Bunaken Sulawesi  Utara. Jurnal LPPM Bidang  Sains  dan  Teknologi . 2(2):7-8. Fall.  2011. Kirby-Bauer  Procedure. Jackie Reynolds, Richland College . hal. 114-116.
Fattorusso,  E.A.R., Taglialatela-Scafati, O.,  Irace,  C.,  Maffettone,  C., Bavestrello,  G,  and  Cerrano,  C. 2009. Oxygenated cembranoids of the  decaryiol  type  from  the Indonesian soft coral Lobophytum sp. Tetrahedron. 65:2898 –2904.
Iswani,  S.,  Tohir,  D,  dan  Januar,  H.I.
2014. Identifikasi Senyawa
Sitotoksik Karang Lunak Sarcophyton sp.  Dari  Perairan Pulau Panggang Taman Nasional Kepulauan  Seribu. Jurnal Ilmu Kefarmasian . 12(2):238-243.
Kawung,  N  J.,  Mangindaan,  R.E.P., Rompas,  R.M.,  Chasanah,  M., Kapoyos,  M.,  Abdjul,  B.,  Januar, H.I., Fajarningsih, D, and Sumagando,  A.  2017.  Cytotoxic Anticancer  from  New  Compound Unsrat-sinularine of Softcoral Sinularia Sp. from Bunaken Island, Manado, Indonesia. International  Journal  of  Drug Development and Research . 9(3):01-04. Lalamentik,  G.J.,  Wewengkang,  D.S, dan Rotinsulu, H. Aktivitas Antibakteri Ekstrak Karang Lunak Klyxum sp.  Yang  Diperoleh  Dari Teluk Manado. Jurnal Pharmacon . 6(3):46-56.
Luissandy; Lintang, R. A. J., Sumilat, D.
A.  2017.  Bioaktivitas  antibakteri fraksi ODS spons Agelas sp. dari perairan Pangalisang Pulau Bunaken. Jurnal  Pesisir  dan  Laut Tropis. 2(1):22 –30.
Putra,  M.Y.,  Ianaro,  A.,  Panza,  E., Bavestrello,  G.,  Cerrano,  C., Fattorusso,  E,  and  Taglialatela- Scafati, O. 2012a. Sinularioside, a triacetylated  glycolipid  from  the
Indonesian soft coral Sinularia sp.,
is  an  inhibitor  of  NO  release.
Bioorg. Med. Chem. Lett,
22:2723 –2725.
Putra,  M.Y.,  Ianaro,  A.,  Panza,  E.,
Bavestrello,  G.,  Cerrano,  C., Fattorusso,  E,  and  Taglialatela-
Scafati, O. 2012b. Sinulasulfoxide and sinulasulfone, sulfur-
containing  alkaloids  from  the Indonesian soft coral Sinularia sp. Tetrahedron. Lett. 53:3937 –3939.
Rumengan,  A.P.  2013.  Antibakteri  Dari Ekstrak  Karang  Lunak Nephtea sp. Jurnal Pesisir dan Laut Tropis . 3(1):31-35.
Sumilat, D.A. 2017a. Aktivitas spons laut
Lamellodysidea  herbacea dari Perairan Malalayang. Jurnal LPPM Bidang Sains dan Teknologi. 4(1):1 –7.
Sumilat,  D.A.,  Wewengkang,  D.S., Paruntu,  C.P,  and  Rotinsulu,  H. 2017b.  Inhibitory  Activities  of Ascidian Herdmania  momus on the  Colony  Formation  of  Chinese Hamster  V79  Cells,  collected  in Manado North Sulawesi, Indonesia. Jurnal of Asean Studies  and  Maritime  Issues.
3(5):13 –19.
Sumilat,  D.  A.,  Wewengkang,  D.  S., Rotinsulu, H., Yamazaki, H., Oda, T., K. Ukai, K, and Namikoshi, M. 2018.  Bioactivity  of  Extracts  from Ascidians  Collected  in  North Sulawesi  as  Seeds  of  Marine- Derived  Drugs. AACL  Bioflux.
11(2):516 –524.
Tanod,  W.A.,  Mangindaan,  R.E.P,  dan Kapojos, M 2015. Aktivitas Antimitotik  Dari  Ekstrak  Karang Lunak  Genus Sinularia.  Jurnal Omni Akuatika . 11(2):41-49. Tombokan,  A.S.,  Wewengkang,  D.S, dan  Sudewi,  S.  2016.  Ekstraksi, Fraksinasi Dan Uji Aktivitas Antibakteri Karang Lunak Sarcophyton sp.  Yang  Diperoleh Dari Teluk Manado. Jurnal Pharmacon . 5(1):197-202. Wagey, B.T. 2017. Morphometric analiysis of congeneric seagrasses ( Cymodocea rotundata and Cymodocea serrulata)  in  the  coastal  areas  of Bunaken  National  Park,  North Sulawesi, Indonesia. AACL Bioflux. 10(6):1638-1646.
Wewengkang,  D.,  Sumilat,  D.A,  dan Rotinsulu,  H.  2014.  Karakterisasi dan  Bioaktif  Antibakteri  Senyawa Spons Haliclona sp.  Dari  Teluk Manado. Jurnal  LPPM  Bidang Sains dan Teknologi . 1(1):73-79.