## PENGARUH EKSTRAK ETANOL PROPOLIS TERHADAP EKSPRESI PROTEIN BCL2 DAN P21 DALAM MENEKAN PROLIFERASI DAN MENGINDUKSI APOPTOSIS PADA KULTUR SEL HEPATOMA (Hep G2)
THE EFFECT OF ETHANOL PROPOLIS EXTRACT ON BCL2 AND P21 PROTEIN EXPRESSION ON PROLIFERATION SUPRESION AND INDUCING APOPTOSIS IN HEPATOMA CELLS CULTURE (Hep G2)
Kun Salimah, Paulus Kusnanto, Bambang Purwanto Program PPDS I Ilmu Penyakit Dalam. Universitas Sebelas Maret Surakarta. Korespondensi: dr. Kun Salimah, Sp. PD. Email: kun.perdana@gmail.com

## ABSTRAK
Karsinoma  Hepatoseluler  (KHS)  merupakan  90%  dari  tumor  primer  di  hati.  Salah  satu  pengobatan  alami  yang diketahui memiliki aktivitas anti kanker adalah propolis. Aktivitas anti kankernya bekerja melalui induksi apoptosis dan  penghambatan  proliferasi  sel.  Bcl2  termasuk  kelompok  famili  protein  B-cell  lymphoma  2  yang  berperan sebagai protein apoptosis jalur intrinsic. p21 merupakan suatu protein tumor suppresor yang memiliki fungsi utama dalam  menghambat  progresi  siklus  sel. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  efek anti  kanker  ekstrak  etanol propolis  (EEP)  yang  berasal  dari  Kerjo,  Karanganyar  pada  kultur  sel  kanker  hepatoseluler  (Hep  G2)  melalui potensinya sebagai antikanker dalam meningkatkan ekspresi protein p21, menurunkan ekspresi protein bcl2 dalam menekan apoptosis dan menurunkan proliferasi sel. Penelitian ini merupakan penelitian experimental laboratories dengan post test with control  group design. Dilakukan pada sel Hep G2 dengan perlakuan pemberian konsentrasi EEP  (½IC50,  IC50,  2IC50),  sorafenib  IC50,  kombinasi  EEP  IC50+  sorafenib  IC50,  dan  kontrol.  Pengamatan ekspresi  protein  Bcl2  dan  p21  dengan  metode  imunositokimia,  pengamatan  proliferasi  sel  dengan  doubling  time, pengamatan  apoptosis dengan flowcytometry. Uji statistik  menggunakan ANOVA, dilanjutkan dengan uji post hoc Tuckey, dinyatakan bermakna bila p<0,05. Konsentrasi penghambatan 50 % sel Hep G2 oleh EEP 65,2 μg/mL, dan sorafenib  (6,08  μg/mL).  EEP  konsentrasi  2IC50  (p=  0,001),  sorafenib  1  IC50  (p=0,001),  1IC50  EEP+  1IC50 sorafenib  (p=  0,001)  mampu  meningkatkan  ekspresi  protein  p21.  Konsentrasi  2  EEP  (p=0,040),  mampu menurunkan  ekpresi  protein  Bcl2,  dengan  p=0,001. Kekuatan  EEP  1IC50  setara  dengan  sorafenib  IC50  dalam menekan  proliferasi  24  jam  (p>0,05).  Kekuatan  EEP  0,5IC50  setara  dengan  sorafenib  IC50  dalam  menekan proliferasi 48 jam (p>0,05). Kekuatan EEP 1IC50 lebih baik dari sorafenib IC50 dalam menekan proliferasi 72 jam (p>0,05).  Semua  konsentrasi  EEP  meningkatkan  ekspresi  protein  p21,  dengan  kelompok  EEP  2IC50  memberikan efek  paling  kuat.  Semua  konsentrasi  EEP  mampu  menurunkan  proliferasi  sel,  dengan  kelompok  EEP  2IC50, memberikan efek paling kuat. Konsentrasi 2IC50 EEP berpengaruh terhadap penurunan ekspresi protein bcl2 dan apoptosis sel hepatoma.
Kata kunci: Ekstrak Etanol Propolis, Bcl2, P21, Apoptosis, Proliferasi, Sel Hep G2

## ABSTRACT
Hepatocellular  carcinoma  (KHS)  is  90%  of  primary  tumors  in  the  liver.  One  of  natural  treatment  that  have  anti- cancer  activity  is  propolis.  Its  anti-cancer  activity  works  through  induction  of  apoptosis  and  inhibition  of  cell proliferation.  Bcl2  belongs  to  the  family  group  B-cell  lymphoma  2  protein  which  acts  as  an  intrinsic  pathway apoptotic protein. p21 is a tumor suppressor protein that has a primary function in inhibiting cell cycle progression. This study was aimed to determine the anti-cancer effect of propolis ethanol extract (EEP) originating from Kerjo, Karanganyar  on  hepatocellular  cancer  cell  culture  (Hep  G2)  through  its  potential  as an  anticancer  in  increasing p21 protein expression, reducing bcl2 protein expression in suppressing apoptosis and reducing cell proliferation . This research is an experimental laboratories with post test with control group design. Performed on Hep G2 cells with  the  treatment  of  EEP  concentrations  (½IC50,  IC50,  2IC50),  sorafenib  IC50,  a  combination  of  EEP  IC50  + sorafenib  IC50,  and  controls.  Observation  of  Bcl2  and  p21  protein  expression  by  immunocytochemistry  method, observing cell proliferation with doubling time, observing apoptosis with flowcytometry.  We use ANOVA statistical test, followed by the Tuckey post hoc test, were stated to be significant if p< 0.05. The inhibition concentration of 50% Hep G2 cells by EEP was 65.2 μg / mL, and sorafenib (6.08 μg / mL). EEP concentration of 2IC50 (p = 0.001), sorafenib 1 IC50 (p = 0.001), 1IC50 EEP + 1IC50 sorafenib (p= 0.001) able to increase p21 protein expression. The 2 EEP concentration (p= 0.040), was able to reduce the expression of Bcl2 protein, with p= 0.001. The strength
of EEP 1IC50 is equivalent to sorafenib IC50 in suppressing 24-hour proliferation (p> 0.05). The strength of EEP ½IC50 is equivalent to sorafenib IC50 in suppressing proliferation 48 hours (p> 0.05). The strength of EEP 1IC50 is better than sorafenib IC50 in suppressing proliferation of 72 hours (p> 0.05). All EEP concentrations increase p21 protein expression, with the EEP 2IC50 group providing the strongest effect. All EEP concentrations were able to  reduce  cell  proliferation,  with  the  EEP  2IC50  group,  giving  the  strongest  effect.  It  was  concluded  that concentration of 2IC50 EEP has an effect on decreasing the expression of bcl2 protein and hepatoma cell apoptosis.
Keywords : Ethanol Extract Propolis, Bcl2, P21, Apoptosis, Proliferation, Hep G2 Cells
How To Cite : Salimah, K., Kusnanto, P., & Purwanto, B. (2019). PENGARUH EKSTRAK ETANOL PROPOLIS TERHADAP  EKSPRESI  PROTEIN  BCL2  DAN  P21  DALAM  MENEKAN  PROLIFERASI  DAN MENGINDUKSI  APOPTOSIS  PADA  KULTUR  SEL  HEPATOMA  (Hep  G2).  Biomedia,  11(1),  5-10. doi:https://doi.org/10.23917/biomedika.v11i1.5364
DOI : https://doi.org/10.23917/biomedika.v11i1.5364

## PENDAHULUAN
Kanker hati merupakan keganasan peringkat  keenam  di  seluruh  dunia  dengan prognosis  yang  kurang  baik.  (Parkin,  2002). Menurut  data  dari  Globocan  2012,  kanker  hati lebih  banyak  menyerang  jenis  kelamin  laki-laki daripada  perempuan  dan  rasio  insidensi  terjadinya kanker hati pada laki  laki: perempuan  adalah: 2,4: 1. Kebanyakan kanker hati merupakan kanker hati primer  yaitu  sekitar  70%–85%  (Ahmed et  al., 2008).
Propolis telah digunakan secara aman oleh dokter  di  Brazil,  Jepang  dan  beberapa  negara  lain sebagai  nutrisi  suportif  yang  menyertai  terapi standar  untuk  kanker  (Paulino et  al .,  2009). Propolis terdiri  dari  campuran resin ,  serbuk  sari dan  lilin  tanaman  yang  dikumpulkan  lebah  dari berbagai  jenis  tanaman  dan  digunakan  untuk proteksi sarang lebah dari mikroba (Ananda, 2013; Watanabe,  2011). Propolis memodulasi  target  sel pada  sel  kanker  yang  berbeda  seperti nuclear transcription  factor  (NFκB); jalur  translasional pada Ras-GTPase  g ;  jalur p38-MAPK ,  jalur PI3K/Akt/PKB ; jalur COX-2 dan prostaglandin E 2 ; dan  ekspresi iNOS atau e-NOS dan  produksi  nitrit oksida.  Juga  memodulasi  fragmentasi DNA yang diinduksi  jalur Cytochrome-C ;  protein p53 ; pelepasan  protein proapoptosis BAx  dan  Bak; inhibisi neoangiogenesis dengan  modulasi  pada ekspresi matrix metalloproteinases (MMPs)  dan vascular  endothelial  growth  factor (VEGF), mengatur  diferensisasi  sel  melalui  protein p21 ( Waf1/Cip1 ) yang berhubungan dengan CDK2 dan cyclin E. Oleh karena itu propolis digunakan untuk meningkatkan  efikasi  obat  kemoterapi  (Paulino et al ., 2009).
Aktivitas antikanker propolis ini dipengaruhi  oleh  geografis  dan  tumbuhan  sebagai asal  pengumpulan  resin  oleh  lebah  untuk membentuk propolis (Syamsudin, 2009). Berdasarkan  fakta-fakta  yang  diuraikan  di  atas, mendorong  peneliti  untuk  mengetahui  pengaruh pemberian propolis yang  berasal  dari  Kerjo, Karanganyar,  Indonesia  terhadap  peningkatan ekspresi p21 dan  induksi apoptosis ,  terutama terkait  dengan  peningkatan  ekspresi  protein , p21 dan  penurunan  Bcl2 pada  kultur  sel Hep  G2 ( cell line kanker hepar).
Penelitian tentang efek anti kanker ekstrak etanol  propolis  (EEP)  yang  berasal  dari  Kerjo, Karanganyar  pada  kultur  sel  kanker  hepatoseluler (Hep  G2)  melalui  potensinya  sebagai  antikanker dalam meningkatkan ekspresi protein p21, menurunkan  ekspresi protein  bcl2  dalam  menekan apoptosis  dan  menurunkan  proliferasi  sel  belum pernah dilakukan.

## METODE
Rancangan  penelitian  ini  yaitu  penelitian experimental  laboratories,  post  test  with  control group  design.  Penelitian  dilakukan  pada  kultur sel kanker  hepatoma  Hep  G2  dengan  pemberian ekstrak  etanol  propolis  konsentrasi  EEP  (½IC50, IC50,  2IC50),  Sorafenib  IC50,  kombinasi  EEP IC50  +  Sorafenib  IC50,  dan  kontrol.  Pengamatan ekspresi  Bcl2  dan  p21  dilakukan  dengan  metode imunositokimia,  pengamatan  proliferasi  dengan metode doubling time, apoptosis dengan flowcytometry .  Analisis  statistik  menggunakan IBM  SPSS  20.  Uji  statistik  menggunakan ANOVA.  Jika  data  distribusi  normal  dilanjutkan dengan  LSD  post  hoc  test.  Sedangkan  jika  data
distribusi  tidak  normal  dilanjutkan  dengan  uji Kruskal-Wallis  yang  akan  dilanjutkan  dengan Mann whitney. Dinyatakan bermakna bila p<0,05.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
1. Uji  sitotoksisitas  dengan  MTTassay  untuk menetapkan  nilai  IC50  ekstrak  etanol  propolis dan Sorafenib.
Sel  Hep  G2  ditumbuhkan  pada  media komplit,  selanjutnya  diberikan  perlakuan  dengan ekstrak  etanol  propolis.  Sel  Hep  G2  yang  hidup memiliki  morfologi  berbentuk  poligonal  dan menempel pada dasar sumuran, sedangkan sel Hep G2  yang  mati  bentuknya  menjadi  bulat  dan  lebih kecil  dari  sel  hidup,  tersebar  dan  tidak  menempel pada  dasar  sumuran.  Data  yang  didapat  dari  uji sitotoksisitas dengan MTT assay berupa absorbansi dari tiap sumuran yang merupakan hasil pembacaan  dengan  menggunakan  ELISA  reader pada  panjang  gelombang  595  nm.  Untuk mendapatkan  persentase  viabilitas  sel,  data  yang didapat  tersebut  kemudian  diolah  lebih  lanjut dengan  perhitungan  cara  yaitu  membandingkan nilai  absorbansi  antara  sel  yang  diberi  perlakuan dan  kontrol  (sel  tanpa  perlakuan)  setelah  masing- masing  dikurangi  dengan  kontrol  media  (blank). Data  tersebut  digunakan  untuk  menetapkan  nilai IC50  bahan  uji  dengan  menggunakan  analisis regresi linear antara dosis bahan uji dan persentase viabilitas  sel  Hep  G2.  Nilai  rata-rata  persentase viabilitas  sel  Hep  G2  dan  IC50  dari  bahan  uji ditunjukkan pada Tabel 1
Tabel 1. Nilai Rata-rata Presentase Viabilitas sel Hep
G2 dan IC50 Bahan Uji Konsentrasi (µg/ mL) Rata-rata Viabilitas sel Hep G2 (%± SD) IC 50 ± SD
(µg/ mL)
Ekstrak Etanol Propolis (EEP) 7,8 106,33 ± 0,89
65,19 ± 1,81 15,6 112,59± 1,19 62,5 67,84± 1,79 125 12,83 ± 2,09 250 4,49 ± 2,39 Sorafenib 6,2 101,87± 0,79 6,08 ± 0,78
12,5 84,91± 1,09 25 59,84 ± 1,39 50 45,18 ± 1,69 100 37 ± 2,00
Tabel  1.  menunjukkan  bahwa  secara  umum peningkatan  konsentrasi  EEP  mengakibatkan penurunan  persentase  viabilitas  sel  Hep  G2.  Pada konsentrasi  EEP  yang  tertinggi  (250  µg/mL), diperoleh  persentase  viabilitas  sel  Hep  G2  yang terendah  (4,49%).  Pada  pemberian  Sorafenib secara umum lebih efektif dengan pemberian EEP,
karena pada konsentrasi yang tertinggi (100µg/uL) persentase  viabilitas  sel  Hep  G2  (mencapai  37%). Dari  analisis  regresi  linear  diperoleh  nilai  IC50 EEP  sebesar  65,9  µg/mL.  kemudian  nilai  IC50 EEP  yang  didapat  ini  digunakan  sebagai  dasar penentuan  konsentrasi  EEP  pada  uji  selanjutnya, yaitu  sebesar  60,  121,  dan  242  µg/mL  (1/2  IC50, IC50,  dan  2  IC50).  Nilai  IC50  sorafenib  yaitu sebesar  6,08  µg/mL  akan  digunakan  sebagai kontrol positif.
2. Pengamatan ekspresi protein P21 p21 adalah  suatu tumor  suppresor  protein memiliki  fungsi  utama  dalam  menekan  progresi siklus  sel.  Untuk  mengetahui  apakah  peningkatan apoptosis  sel  Hep  G2  setelah  pemberian  EEP selama  24  jam  terkait  peningkatan  ekspresi  p21, maka  dilakukan  pengamatan  peningkatan  ekspresi protein)  dan  masing-masing  kelompok  perlakuan tersebut  dibuat  duplicate.  Data  yang  diperoleh berupa  persentase  sel  yang  mengekspresikan protein P21 (tampak sebagai warna coklat pada inti sel  dan  sitoplasma)  dari  keseluruhan  sel  pada  5 lapangan  pandang  dan  penilaiannya  dilakukan pada  2  slide  dari  tiap-tiap  kelompok  perlakuan (Gambar 1).
Gambar 1. Hasil pengecatan imunositokimia perbesaran 400 kali untuk ekspresi protein P21 pada sel Hep G2 setelah perlakuan dan inkubasi selama 24 jam pada kelompok dengan EEP konsentrasi ½ IC50 (a), IC50 (b), 2IC50 (c), Sorafenib (d), Sorafenib dan EEP (e) dan control (f). Sel yang mengekspresikan protein P21ditunjukkan dengan panah warna merah.
Gambar 2. Grafik hubungan antara konsentrasi bahan uji dengan rata-rata presentase ekspresi P21 pada sel HEp G2 setelah inkubasi 24 jam. Dari grafik di atas, terlihat bahwa pemberian EEP dapat meningkatkan ekspresi Protein p21 dan pemberian S (Sorafenib) maupun gabungan EEP dan Sorafenib akan menghasilkan peningkatan ekspresi Protein p21.

## 3. Pengamatan ekspresi protein Bcl2
Pengamatan  penurunan  ekspresi  protein Bcl2 digunakan untuk mengetahui apakah peningkatan  apoptosis  sel  Hep  G2  setelah pemberian  EEP  selama  24  jam  terkait  penurunan ekspresi protein Bcl2. Data  yang diperoleh berupa persentase sel  yang  mengekspresikan  protein  Bcl2 (tampak  sebagai  warna  coklat  pada  inti  sel  dan sitoplasma)  dari  keseluruhan  sel  pada  5  lapangan pandang  dan  penilaiannya  dilakukan  pada  2  slide dari tiap-tiap kelompok perlakuan (Gambar 3).
Gambar 3. Hasil pengecatan imunositokimia perbesaran  400  kali  untuk  ekspresi Bcl2 pada  sel HepG2  setelah  perlakuan  dan  inkubasi  selama  24 jam pada  kelompok  dengan  EEP  konsentrasi  ½  IC50  (a), IC 50 (b),  2  IC 50 (c),  kelompok  denganSorafenib  (d) kelompok  IC50  EEP  +  Sorafenib  (e)  dan  kelompok kontrol (f). Sel yang mengekspresikan BCl2 ditunjukkan dengan panah warna merah.
Gambar 4. Grafik hubungan antara konsentrasi bahan uji dengan rata-rata presentase ekspresi Bcl2 pada sel Hep G2 setelah inkubasi 24 jam.
Dari  gambar  4  diatas  terlihat  bahwa pemberian EEP dapat menurunkan ekspresi protein Bcl2,  dan  pemberian  1  IC50  EEP  +  1IC50 sorafenib menurunkan ekspresi protein BCl2 lebih baik dariapda pemberian sorafenib sendiri. 4. Pengamatan proliferasi menggunakan doubling time
Gambar 5. Proliferasi 24 jam, 48 jam, dan 72 jam. Grafik ini menunjukkan bahwa semua konsentrasi EEP mampu menurunkan proliferasi sel, mulai dari ½ IC50 ,
1IC50, dan 2IC50.
Kekuatan EEP 1IC50 setara dengan Sorafenib  IC50  dalam  menekan  proliferasi  24jam (p>0,05).  Kekuatan  EEP  0,5IC50  setara  dengan Sorafenib  IC50  dalam  menekan  proliferasi  48jam (p>0,05).  Kekuatan  EEP  1IC50  lebih  baik  dari Sorafenib  IC50  dalam  menekan  proliferasi  72jam (p>0,05).
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 Ko n tr o l M ed ia
Ko n tr o l Sel 1 /2 E E P 1 E E P 2 E E P 1 So raf en ib 1 E EP + 1 So raf en ib Proliferasi Sel 24 jam Proliferasi Sel 48 Jam
Proliferasi Sel 72 Jam
5. Pengamatan apoptosis menggunakan flowcytometry Tabel 2. Rerata Apoptosis Dengan ANOVA Kelompok Rerata ± SD ANOVA (Uji F) Stat-F Sig Apoptosis Kontrol 18,71 ± 7,21
85,559 0,001 * 1/2 IC50 EEP 26,52± 14,72 1 IC50 EEP 15,75± 8,16 2 IC50 EEP 65,31 ± 2,27 1 Sorafenib 27,31± 5,31 1 IC50 EEP + Sorafenib 33,42± 14,86 Keterangan: * Signifikan pada derajat signifikansi 1 persen. Perlakuan
pemberian 1Sorafenib menghasilkan  nilai  rata-rata  Apoptosis  yang  lebih tinggi  dibandingkan  dengan  k-kontrol-sel  dan peningkatan  Apoptosis  akibat  Sorafenib  itu signifikan  pada  derajat  signifikansi  sebesar  5 persen (p < 0,05). Dampak peningkatan Apoptosis akibat  perlakuan  pemberian  1Sorafenib  itu  masih jauh dibawah pemberian EEP pada klp-2IC50EEP, klp-1IC50EEP  maupun  klp-1/2IC50EEP.  Hasil  itu menunjukkan  bahwa  pemberian  EEP  pada  ketiga kelompok  dosis  yang  berbeda  itu  memiliki pengaruh yang cenderung lebih tinggi dibandingkan dengan perlakuan pemberian 1Sorafenib,  hal  ini  dibuktikan  dengan  adanya perbedaan yang signifikan rata-rata klp-2IC50EEP, klp-1IC50EEP  atau  klp-1/2IC50EEP  masing- masing  dengan  klp-1Sorafenib  dengan  tingkat signifikansi sebesar 5 persen (p < 0,05).
Penelitian ini diawali dengan uji sitotoksisitas  senyawa  ekstrak  etanol  propolis (EEP) pada sel Hep G2 menggunakan metode MTT assay .  Uji  sitotoksisitas  ini  dilakukan  untuk menetapkan  nilai  IC50  senyawa  EEP  yang selanjutnya akan digunakan sebagai dasar penetapan  konsentrasi  EEP  untuk  pengamatan ekspresi  protein p21,  Bc2,  bax dan  uji  apoptosis, proliferasi  pada  sel  Hep  G2.  Selain  itu,  uji sitotoksisitas ini juga digunakan untuk menetapkan IC50  Sorafenib  pada  sel  Hep  G2  sebagai  kontrol positif.
Pada  uji  sitotoksisitas  ini  secara  umum didapatkan  persentase  viabilitas  sel  Hep  G2 semakin  menurun  sebanding  dengan  peningkatan konsentrasi EEP yang diberikan. Hal ini menunjukkan  bahwa  pemberian  EEP  konsentrasi 62,5-250 µg/mL selama 24 jam mampu menghambat  proliferasi  sel  Hep  G2.  Hasil  ini sejalan  dengan  beberapa  penelitian  eksperimen in
vitro yang  menyatakan  bahwa  EEP  mampu menghambat  pertumbuhan  berbagai  sel  tumor dikarenakan mempunyai efek sitotoksik, antiproliferatif  dan  induksi  apoptosis  (Kubina et al ., 2015).
Aktivitas  sitotoksisitas  EEP  pada  sel  Hep G2  setelah  inkubasi  24  jam  dinyatakan  dengan nilai  IC50  yang  diperoleh  melalui  analisis  regresi linear.  Pada  analisis  tersebut  diperoleh  IC50  EEP pada  sel  Hep  G2 di  penelitian  ini  sebesar  65,19 µg/mL. Studi di Iran pada tahun 2015 menggunakan  ekstrak  etanol  propolis  dengan teknik  MTT  assay  dengan  dosis  IC50  60,  30,  and 15 (µg/ml) in menunjukkan EEP memiliki aktivitas anti  proliferasi  pada  cell  line  A549 ()  /sel  kanker lambung.  Penelitian  ini  mengindikasikan  bahwa komposisi kimia dan farmakokinetik EEP berbeda- beda.  Hal  ini  selain  dipengaruhi  oleh  geografis juga  dipengaruhi  jenis  tanaman,  asal  propolis tersebut diperoleh.
Pada  uji  sitotoksisitas  ini  secara  umum didapatkan  persentase  viabilitas  sel  Hep  G2 semakin  menurun  sebanding  dengan  peningkatan konsentrasi EEP yang diberikan. Hal ini menunjukkan bahwa pemberian EEP pada penelitian  ini  mampu  menghambat  proliferasi  dan menurunkan  viabilitas  sel  Hep  G2  dengan  dosis optimal pada IC50 EEP dan 2 IC50 EEP.
Hasil penelitian  membuktikan  bahwa  EEP dosis  2IC50  EEP  mampu  menaikkan  ekspresi p21 serta menurunkan proliferasi kultur sejalan dengan peningkatan  dosis.  Hal  ini  sesuai  dengan  hasil penelitian  ini  yang  dilakukan  Motomura et  al . (2008)  yang  melaporkan  bahwa  ekstrak  etanol propolis  konsentrasi  100-1000  µg/mL  mampu menghambat  pertumbuhan cell  line U-937  (sel kanker leukemia) yang sebanding dengan peningkatan  konsentrasi  yang  diberikan.  Aktivitas antiproliferatif  EEP  pada  U937  sesuai  dengan penelitian  dari  Motomura et  al  ( 2012)  digunakan dosis  (100-1000  μg/ml).  Dosis  EEP  300  μg/ml  – 500 μg/ml, terjadi peningkatan p21, dan penurunan ekspresi cyclin A, cyclin B, dan CDK.
Hasil  penelitian  ini  juga  menunjukkan penurunan kadar bcl2 secara signifikan pada dosis 1  IC50EEP.  Dengan  penurunan  kadar  bcl2 diharapkan  terjadi  peningkatan  apoptosis  sel kanker. Beberapa penelitian sebelumnya mendukung hasil tersebut. Motomura et al. (2008) juga  melaporkan  propolis  mampu  meningkatkan
apoptosis  cell  line  U-937  (sel  kanker  leukemia). Sejalan  dengan  penelitian  di  atas,  Eom et  al . (2010)  melaporkan  bahwa  propolis  meningkatkan apoptosis  melalui  pelepasan cytochrome  C dari mitokondria ke dalam sitosol pada cell line HL-60 (sel kanker leukemia).
Hasil ini sejalan dengan beberapa penelitian  eksperimen  in  vitro  yang  menyatakan bahwa  EEP  mampu  menghambat  pertumbuhan berbagai  sel  tumor  dikarenakan  mempunyai  efek sitotoksik, antiproliferatif dan peningkatan apoptosis (Kubina et al., 2015).

## SIMPULAN
1. Ekstrak  etanol  propolis  konsentrasi  2IC50 meningkatkan  ekspresi  p21 pada  kultur  sel kanker hepatoma (Hep G2).
2. Ekstrak  etanol  propolis  konsentrasi  2IC50 menurunkan  ekspresi  bcl2  pada  kultur  sel kanker hepatoma (Hep G2).
3. Ekstrak  etanol  propolis  konsentrasi  ½  IC50, IC50,  dan  2IC50  menurunkan  proliferasi  sel pada kultur sel kanker hepatoma Hep G2.
4. Ekstrak  etanol  propolis  konsentrasi  2IC50 meningkatkan  apoptosis  sel  pada  kultur  sel kanker hepatoma Hep G2

## DAFTAR PUSTAKA
Ahmed,  F.,  Perz,  J.F.,  Kwong,  S.,  Jamison,  P.M.,  Friedman,  C.,  Bell,  B.P.  2008.  National  trends  and disparities in the incidence of hepatocellular carcinoma, 1998–2003. Prev. Chronic Dis . 5: A74
Ananda, S.K., Tragoolpua, K., Chantawannakul, P., Tragoolpua, Y. 2013. Antioxidant and anticancer cell proliferation  of  propolis  extracts  from  two  extraction  methods. Asian  Pac  J  Cancer  Prev . 14(11): 6991-6995.
Eom, H.S., Lee, S.J., Yoon, B.S., Yoo, B.S. 2010. Propolis inhibit the proliferation of human leukemia HL- 60 cells by inducing apoptosis through the mitochondrial pathway. Nat Prod Res. 24:375-386.
Kubina, R., Dzik, A.K., Dziedzic, A., Bielec, B., Wojtczka, R.D., Buldok, R.J., Wysznynska, M., et al. 2015.  The  ethanol  extract  of  polish  propolis  exhibits  anti-proliferative  and/or  pro-apoptotic effect  on  HCT  116  colon  cancer  and  Me45  malignant  melanoma  cell  in  vitro  conditions. Adv Clin Exp Med . 24(2): 203-212.
Motomura,  M.,  Kwon,  K.M.,  Suh,  S.J.  2008.  Propolis  induces  cell  cycle  arrest  and  apoptosis  in  human leukemic U937 cells through Bcl-2/Bax regulation. Environ Toxicol Pharmacol. 26:61-67.
Parkin, D.M., Bray, F., Ferlay, J., Pisani, P. 2005. Global cancer statistics. 2002. Cancer J Clin . 55:74– 108
Paulino,  N.,  Abreu,  S.R.L.,  Machodo,  G.,  Silveira,  E.  2009.  Scientific  evidences  to  pharmacological anticancer  action  of Baccharis  dracunculifolia Brazilian  propolis. Rev  Pesq  Inov  Farm .  1(1): 15-26.
Syamsudin,  Wiryowidagdo,  S.,  Simanjuntak,  P.,  Heffen,  W.L.  2009.  Chemical  composition  of  propolis from different region in java and their cytotoxic activity. AJBB .5(4): 180-183.
Watanabe,  M.A.E.,  Amarante, M.K.,  Conti,  B.J.,  Sforcin, J.  M.  2011.Cytotoxic  constituents  of  propolis inducing anticancer effect: a review. JPP. 63: 1378-1386.