## Oceana Biomedicina Journal
ocean-biomedicina.hangtuah.ac.id/index.php/journal eISSN 2614-0519
Volume 6 Issue 1: Januari – Juni 2023

## THE EXPRESSION OF p53 AND p16 IN LOW GRADE AND HIGH GRADE SEROUS CARCINOMA OF OVARY
Yuliawaty 1 , Siti Amarwati, 2 Ika Pawitra Miranti 2
1 Resident of the Departement of Anatomic Pathology, Faculty of Medicine, Diponegoro University, Dr Kariadi Hospital, Semarang, Indonesia
2 Lecturer of the Departement of Anatomic Pathology, Faculty of Medicine, Diponegoro University, Dr Kariadi Hospital, Semarang, Indonesia

## Correspondence writer :  yuliahuger@gmail.com

## ABSTRACT
Background Ovarian  serous  carcinoma  is  a  common  ovarian  epithelial  malignancy, divided  into  low  grade  serous  carcinoma  (LGSC)  and  high  grade  serous  carcinoma (HGSC). HGSC accounts for 60-80% of ovarian carcinomas and is the most aggressive type and has a poor prognosis. The literature has described various genetic mutations involved in the occurrence of HGSC, one of which is p53 and p16 mutations. Diagnostic and prognostic value of LGSC and HGSC related to its targeted therapy.
Objective This study aimed to  analyze the differences in the expression of p53 and p16 in LGSC and HGSC at anatomical pathology of laboratory dr. Kariadi Hospital.
Methods : This study was an observational analytic study with a cross sectional design involving  65  patients  with  ovarian  serous  carcinoma  diagnosed  between  January  2017 and December 2021. The data collected were age, LGSC and HGSC subtypes as well as p53 and p16 expressions were obseved by a pathologists and a resident. Compatibility between observers were tested using Kappa test. Data analysis used Chi square test and Fisher's exact test.
Results This study included 65 patients aged between 30-68 years, consist of 50 patients with  HGSC  and  15  patients  with  LGSC  (P  <0,001).  Kappa  test  results  between  two observers showed a score of k = 0,88.
Conclusion There is a significant difference between the expression of p53 and p16 in HGSC,  as  the  expression  of  p53  and  p16  is  much  stronger  and  diffuse  in  high  grade serous carcinoma compared to LGSC.
Key word Ovarian serous carcinoma, p53, p16.

## Oceana Biomedicina Journal
ocean-biomedicina.hangtuah.ac.id/index.php/journal eISSN 2614-0519
Volume 6 Issue 1: Januari – Juni 2023

## EKSPRESI p53 DAN p16 PADA LOW GRADE DAN HIGH GRADE SEROUS CARCINOMA OF OVARII
Yuliawaty 1 , Siti Amarwati, 2 Ika Pawitra Miranti 2
1 Residen Departeman Patologi Anatomik, Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro, Semarang, Indonesia
2 Staf Pengajar Departemen Patologi Anatomik, Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro, Semarang, Indonesia
Alamat email koresponden : yuliahuger@gmail.com

## ABSTRAK
Latar belakang Karsinoma serosa ovarium merupakan keganasan epitelial ovarium yang terbagi menjadi low grade serous carcinoma (LGSC) dan high grade serous carcinoma (HGSC). HGSC menyumbang 60-80% dari karsinoma ovarium dan merupakan jenis yang paling agresif dan memiliki prognosis yang buruk. Literatur telah menjelaskan berbagai mutasi genetik yang terlibat dalam terjadinya HGSC, salah satunya yaitu mutasi p53 dan p16.
Objektif Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menganalisis  perbedaan  ekspresi  p53  dan  p16 pada LGSC dan HGSC.
Metode Penelitian  berjenis  analitik  observasional  dengan  desain  cross  sectional melibatkan 65 pasien karsinoma serosa ovarium yang didiagnosis antara Januari 2017 sampai Desember 2021. Data yang dikumpulkan berupa usia, subtipe HGSC dan LGSC serta  ekspresi  p53  dan  p16  yang  dibaca  oleh  seorang  patolog  dan  seorang  residen. Kesesuaian antara pengamat diuji menggunakan uji Kappa. Analisis data menggunakan uji Chi square dan uji Fisher's exact.
Hasil Penelitian mengikutsertakan 65 pasien berusia antara 30-68 tahun, dengan HGSC sebanyak 50 pasien dan LGSC sebanyak 15 pasien, didapatkan hasil ekspresi p53 dan p16  pada  HGSC  menunjukkan  skor  yang  lebih  tinggi  dibandingkan  ekspresinya  pada LGSC (P <0.001).  Hasil uji Kappa antara dua pengamat menunjukkan skor k = 0,88. Kesimpulan : Terdapat signifikansi perbedaan antara ekspresi p53 dan p16 pada HGSC dengan  LGSC,  dimana  ekspresi  p53  dan  p16  jauh  lebih  kuat  dan  difus  pada  HGSC dibandingkan dengan LGSC.
Kata kunci Karsinoma serosa ovarium, ekspresi p53, p16.

## Oceana Biomedicina Journal
ocean-biomedicina.hangtuah.ac.id/index.php/journal eISSN 2614-0519
Volume 6 Issue 1: Januari – Juni 2023

## PENDAHULUAN
Kanker ovarium  merupakan salah satu penyebab kematian utama pada wanita dan mempunyai  agresifitas  yang  tinggi. 1 Kanker  ovarium  merupakan  kanker  terbanyak keenam  yang  paling  sering  ditemukan  (18,4%)  pada  wanita  diseluruh  dunia  setelah kanker  payudara,  colorectal,  cervix  uteri,  paru,  dan  tiroid.  Penyebab  kanker  ovarium sangat  komplek,  beberapa  faktor  yang  berperan  antara  lain  genetik,  usia,  paritas, hormonal,  reproduksi,  pil  kontrasepsi,  terapi  hormon  pengganti  pada  massa menopause. 2,3
Karsinoma  serosa  ovarii  merupakan  keganasan  yang  paling  sering  ditemukan. Secara  histologi  terbagi  menjadi low  grade  serous  carcinoma (LGSC)  dan high  grade serous carcinoma (HGSC). HGSC menyumbang sekitar 75% dari seluruh kanker ovarium dan 90% menyebabkan kematian. Salah satu penyebab yang paling utama adalah mutasi genetik.  Berbagai  macam  mutasi  genetik  ditemukan  pada  karsinoma  serosa  ovarium, seperti WT1, p53, p16, PAX 8, dan ER. Namun diantara antibodi tersebut, terdapat pola imunoreaktivitas antara LGSC dan HGSC, yaitu pada ekspresi p53 dan p16. 2,3 p53  dan  p16  merupakan  salah  satu  gen  penekan  tumor  yang  berfungsi  melindungi individu dari kanker, yaitu dengan menghentikan siklus sel, memperbaiki  DNA yang rusak serta  mengarahkan  pada  apoptosis  /  kematian  sel  bila  DNA  yang  rusak  tidak  dapat diperbaiki. 4,5
Perbedaan ekspresi p53 dan p16 terhadap LGSC dan HGSC belum pernah dilakukan di RSUP Dr Kariadi, menimbang pentingnya hasil penelitian ini terhadap target terapi  dan prognosis bagi pasien karsinoma serosa ovarium.

## METODE DAN BAHAN

## Pasien dan metode penelitian
Penelitian ini berjenis analitik observasional yang dilakukan menggunakan desain cross sectional . Sebanyak 65 sampel  yang telah didiagnosis karsinoma serosa ovarium, terdiri dari 50 sampel HGSC dan 15 sampel, antara Januari 2017 sampai Desember 2021 oleh dokter spesialis patologi anatomik Rumah Sakit Dokter Kariadi Semarang. Pengambilan data dilakukan melalui rekam medis. Data yang dikumpulkan meliputi usia, riwayat paritas dan  pola  ekspresi  pulasan  p53  dan  p16  yang  dinilai  oleh  2  pengamat.  Analisis  data menggunakan  uji  parametric  chi-square  dan  uji alternatif  fisher’s  exact.  Kesesuaian penilaian  antara  2  pengamat  dilakukan  uji  Kappa.  Penelitian  ini  dilakukan  setelah mendapatkan ethical clearance dari Komisi Etik Penelitian Kesehatan (KEPK) RSUP Dr. Kariadi (Nomor izin : No.1049/EC/KEPK-RSDK/2022).

## Metode pulasan imunohistokimia
Blok paraffin dari setiap pasien dikumpulkan, kemudian dipotong menggunakan mikrotom hingga  menghasilkan  pita  jaringan dengan  ketebalan 3-4  µm.  Selanjutnya  pita paraffin dideparafinisasi menggunakan xylol dan rehidrasi.
Antigen retrieval dengan pH 6 selama 40 menit dalam microwave bersuhu 96°C. Slide kemudian dicuci dengan phosphate buffer saline (PBS).

## Oceana Biomedicina Journal
ocean-biomedicina.hangtuah.ac.id/index.php/journal eISSN 2614-0519
Volume 6 Issue 1: Januari – Juni 2023
Eliminasi  peroksidase  endogen  menggunakan  H2O2  peroksidase  selama  20 –  30 menit.  Bilas  air  mengalir  selama  10  menit  dan  cuci  dengan  PBS.  Slide  ditetesi background  sniper selama  10  menit.  Setelah  itu  slide  ditetesi  antibodi  p53  atau  p16 dengan pengenceran 1:100 dalam suhu 2-8°C.
Semua slide yang sudah diwarnai akan dinilai di bawah mikroskop pada pembesaran 100x dan 400x. Proporsi sel yang positif dan intensitas pulasan dari p53 dan p16 dinilai berdasarkan  sistem  skoring  Allred,  yaitu  proporsi  sel-sel  tumor  yang  positif  (dalam persentase) dijumlah dengan intensitas pewarnaan.
Persentase sel tumor (0 untuk tidak ada sel yang terpulas; 1 untuk < 1%; 2 untuk 1 – 10%; 3 untuk 11 – 33%; 4 untuk 34-66%; dan 5 untuk 67 – 100%, sedangkan intensitas pulasan (0 untuk tidak terwarna; 1 untuk lemah; 2 untuk sedang; 3 untuk kuat) (Gambar 1).
Gambar  1.  Ekspresi  p53  dan  p16  pada  LGSC  (100x).  A)  p53  dan  B)  p16,  keduanya menunjukkan skor proporsi 1 (jumlah sel yang terwarna < 5%) dan skor intensitas pulasan 1 (lemah), sehingga Allred score total 2 (positif lemah).

## Oceana Biomedicina Journal
ocean-biomedicina.hangtuah.ac.id/index.php/journal eISSN 2614-0519
Volume 6 Issue 1: Januari – Juni 2023
Gambar 2. Ekspresi p53 dan p16 pada HGSC (400x). A) p53 menunjukkan skor proporsi 5  (jumlah  sel  yang  terpulas  67-100%)  dan  skor  intensitas  pulasan  3  (kuat),  sehingga Allred score total 8 (positif kuat). B) p16 menunjukkan skor proporsi 5 (jumlah sel yang terpulas 67-100%) dan skor intensitas pulasan 2 (sedang), sehingga Allred score total 7 (positif sedang).

## Analisis statistik
Karakteristik  klinis  setiap  pasien  dikumpulan,  meliputi  usia  saat  diagnosis,  derajat karsinoma  serosa  (HGSC  atau  LGSC)  dan  skor  ekspresi  p53  dan  p16  (skor  2 –  8). Analisis  data  secara  statistik  menggunakan  program Statistical  Package  for  Social Sciences (SPSS) versi 21 (IBM Chicago, IL).
Hubungan  antara  variabel  penelitian,  dilakukan  uji  Chi  square  dan  uji  alternatif Fisher’s  exact,  dengan  derajat  kemaknaan  p  <  0.05,  serta  kesesuaian  antara  kedua pengamat dilakukan uji Kappa dengan nilai kemaknaan sebesar k > 0.75.

## HASIL Karakteristik usia subjek penelitian
Sebanyak  65  sampel  karsinoma  serosa  ovarium  di  RS  Dokter  Kariadi  Semarang diikutsertakan dalam penelitian ini. Sebagian besar pasien terdiagnosis sebagai HGSC (50 sampel), berusia antara 51 tahun hingga 68 tahun dengan  rerata usia 52,40 ± 8,79 untuk HGSC dan 50,67 ± 13,90 untuk LGSC.

## Pola ekspresi p53 terhadap karsinoma serosa ovarium
Hasil  pengamatan  terhadap  ekspresi  p53  pada  HGSC  menunjukkan  skor  yang bervariasi dengan kisaran antara skor 4 sampai 8. Skor yang paling banyak adalah skor 7 dan 8, sedangkan pengamatan ekspresi p53 pada LGSC menunjukkan skor antara 2 hingga 4 dengan skor terbanyak adalah skor 2.
Hasil  uji  hubungan  ekspresi  p53  terhadap  karsinoma  serosa  ovarium  menunjukkan

## Oceana Biomedicina Journal
ocean-biomedicina.hangtuah.ac.id/index.php/journal eISSN 2614-0519
Volume 6 Issue 1: Januari – Juni 2023
signifikansi p<0.001, yang menyimpulkan bahwa ekspresi p53 lebih kuat dan difus pada HGSC  dibandingkan  LGSC  (Tabel  1).  Hasil  uji  Kappa  k  =  0,88,  sehingga  disimpulkan kesesuaian antara 2 pengamat sangat baik.

## Tabel 1. Hubungan ekspresi p53 terhadap karsinoma  serosa ovarium

## Pola ekspresi p16 terhadap Karsinoma serosa ovarium
Hasil  pengamatan  terhadap  ekspresi  p16  pada  HGSC  menunjukkan  skor  yang bervariasi dengan kisaran antara skor 4 sampai 7. Skor yang paling banyak adalah skor 6, sedangkan pengamatan ekspresi p16 pada LGSC menunjukkan skor antara 2 hingga 4 dengan skor terbanyak adalah skor 3 dan 4.
Hasil  uji  hubungan  ekspresi  p16  terhadap  karsinoma  serosa  ovarium  menunjukkan signifikansi p<0.001, yang menyimpulkan bahwa ekspresi p16 lebih kuat dan difus pada HGSC  dibandingkan  LGSC  (Tabel  2).  Hasil  uji  Kappa  k  =  0,88,  sehingga  disimpulkan kesesuaian antara 2 pengamat sangat baik.

## Tabel 2. Hubungan ekspresi p16 terhadap karsinoma serosa ovarium

## DISKUSI
Pada penelitian ini sebanyak 65 pasien yang didiagnosis karsinoma serosa  ovarium di RS Dokter Kariadi periode Januari 2017 hingga Desember 2021, dilakukan penilaian oleh  dua  pengamat  untuk  menilai  pola  ekspresi  p53  dan  p16  pada  HGSC  dan  LGSC menggunakan pemeriksaan imunohistokimia.
Protein 53 (p53) berfungsi sebagai gen penekan tumor, yaitu gen yang menghentikan siklus sel, memperbaiki DNA yang rusak, dan menginduksi apoptosis bila kerusakan DNA tidak  dapat  diperbaiki. 6,7 Mutasi  TP53  menyebabkan  protein  53  menjadi  inaktif  dan terakumulasi  dalam  inti  sehingga  terdeteksi  oleh  pengecatan  imunohistokimia.  Mutasi Gen  TP53  ditemukan  pada  serous  tubal  intraepithelial  carcinoma  (STICs)  yang merupakan lesi prekursor dari karsinoma serosa ovarium. 8
Penelitian  ini  melaporkan  bahwa  ekspresi  p53  pada  HGSC  menunjukkan  skor  7 hingga  8,  sedangkan  ekspresi  p53  pada  LGSC  menunjukkan  skor  2,  sehingga disimpulkan  bahwa  ekspresi  p53  lebih  kuat  dan  difus  pada  HGSC  dibanding  LGSC. Temuan  ini  sejalan  dengan  literatur  yang  melaporkan  bahwa  mutasi  TP53  ditemukan

## Oceana Biomedicina Journal
ocean-biomedicina.hangtuah.ac.id/index.php/journal eISSN 2614-0519
Volume 6 Issue 1: Januari – Juni 2023
pada sebanyak 96% kasus HGSC. 8 Studi lain juga melaporkan ekspresi p53 difus pada sebanyak 68.2% kasus HGSC sedangkan pada LGSC tidak terekspresi sebanyak 81% kasus. 6 Penelitian lainnya juga ikut menyokong hasil pengamatan ini dengan melaporkan ekspresi p53 terwarna kuat dan difus pada 64% kasus HGSC sebaliknya ekspresi p53 lemah dan fokal pada 18% kasus LGSC. 9
p16 adalah gen supressor tumor yang berfungsi sebagai inhibitor cyclin  -dependent kinase inhibitor CDK4 yang menghentikan siklus sel. Delesi pada gen ini dapat membuat penurunan fungsi atau inaktivasi p16, mempercepat siklus sel dan dapat menyebabkan proliferasi neoplastik pada sel hingga berkembang menjadi berbagai jenis kanker, salah satunya karsinoma serosa ovarium. 6,8-10
Penelitian  ini  melaporkan  bahwa  ekspresi  p16  pada  HGSC  menunjukkan  skor  6, sedangkan  pada  LGSC  menunjukkan  skor  2  hingga  4,  sehingga  disimpulkan  ekspresi p16  jauh  lebih  kuat  dan  difus  pada  HGSC  dibandingkan  LGSC.  Temuan  ini  sejalan dengan  literatur  yang  melaporkan  bahwa  ekspresi  p16  negatif  pada  90.5%  LGSC berbeda  dengan  ekspresi  p16  yang  kuat  pada  88.1%  HGSC. 8 Literatur  lain menambahkan hasil penelitian mereka menunjukkan ekspresi p16 pada HGSC difus dan intens pada 60-80% kasus HGSC. 6

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian dan pembahasan dapat disimpulkan sebagai berikut :
 Tidak ada signifikansi karakteristik usia terhadap HGSC dan LGSC
 Terdapat perbedaan ekspresi p53 dan p16 pada HGSC dan LGSC, ekspresi p53 dan p16 jauh lebih kuat dan difus pada HGSC dibandingkan LGSC
 Hasil penelitian pada ekpresi p53 dan p16 sebagai salah satu penanda yang baik dalam  membantu  menegakkan diagnosis LGSC dan HGSC untuk klinisi yang  berkaitan  dengan  target  terapi  dan  prognosis  bagi  pasien  karsinoma serosa ovarium

## 

## DAFTAR PUSTAKA
1. Kobel M, Kalloger SE, Lee S, Duggan MA, Kalemen LE, Prentise L, et al. -Biomarker- based Ovarian Carcinoma typing : A Histological Investigation in the Ovarian Tumor Analysis Consortium. 2013 October, 22(10):1677-86
2. Lax SF, Cheung  An, Oliva E. WHO Classification of Tumours of Female.  5 edition. 2020, 31-45.
3. Kumar V, Abbas A.K, Aster, J.C. Robbins and Cotran Pathologic Basis of Disease. 9th ed. Philadelphia: Elsevier; 2015.
4. Yemelyanova  A,  Vang  R,  Kshirsagar  M,  Lu  D,  Marks  M,  Shih  L,  Kurman  R. Immunohistochemical  staining patterns  of  p53  can  serve as  a  surrogate  marker  for TP53  mutations  in  ovarian  carcinoma  :  an  immunohistochemical  and  nucleotide sequencing analysis.  Mod Pathol 2011 March, 10(24) : 1248-53.
5. Manu  V,  Tin  Aung  Hein,  Boruah  D,  Srinivas  V.  Serous  ovarian  tumors  : Immunohistochemical profiling as an aid to grading and understanding tumorigenesis.

## Oceana Biomedicina Journal
ocean-biomedicina.hangtuah.ac.id/index.php/journal eISSN 2614-0519
Volume 6 Issue 1: Januari – Juni 2023
Med J Armed Forces India. 2020 Jan, 76(1):30-36.
6. Luis F, Liliana A, Susana R et. al. WT1, p53 and p16 expression in the diagnosis of low and high grade serous ovarian carcinomas and their
7. relation to prognosis. Oncotarget. 2018. Feb 19, 9(22): 15818-27.
8. Robboy SJ, Mutter GL, Pratt J. Robboy’s Pathology of Female Reproductive Tracts. Elsevier. 2014, 608-617
9. Jie li,  Oluwole  Fadarre,  Li  Xiang,  Beihua Kong,  Wenxin  Zheng.  Ovarian  serous carcinoma  recent  concepts  on  its  origin  and  carcinogenesis.  China:  Journal  of hematology and oncology; 2012, 5(1) : 8
10. Freddie  B  et.al. Global  Cancer  Statistic 2018  :  GLOBOCAN  estimates  of  incidence and mortality worldwide for 36 cancer in 185 countries. ACS Journal. A cancer journal for clinicians; 2018, 68(6).
11. Asmuddin. Peran Gen p16 pada siklus sel terhadap pembentukan kanker. 2011