# Korespondensi:  Balai  Riset  Budidaya  Ikan  Hias.  Jl.  Perikanan No.  13,  Pancoran  Mas,  Depok  16364,  Indonesia.
Tel.  +  62  21  7520482 E-mail:  asep_aa37@yahoo.co.id
Tersedia  online  di:  http://ejournal-balitbang.kkp.go.id/index.php/jra

## PENGARUH  PEMBERIAN  HORMON  PERTUMBUHAN  REKOMBINAN DENGAN METODE YANG BERBEDA TERHADAP  PERTUMBUHAN BENIH IKAN BOTIA
(Chromobotia macracanthus)
Asep  Permana *)# ,  Alimuddin **) ,  Wartono  Hadie ***) ,  Agus  Priyadi *) ,  dan  Rendy  Ginanjar *)
*) Balai Riset Budidaya Ikan Hias Jl. Perikanan No. 13, Pancoran Mas, Depok 16364
**) Departmen Budidaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor Kampus  IPB Darmaga,  Jl. Agatis,  Babakan,  Dramaga, Bogor, Jawa Barat 16680
***) Pusat Riset Perikanan Jl. Pasir Putih II, Ancol Timur, Jakarta Utara 14430
(Naskah diterima: 15 Maret 2018; Revisi final: 16 Agustus 2018; Disetujui publikasi: 16 Agustus 2018)

## ABSTRAK
Pertumbuhan ikan botia tergolong lambat, memerlukan waktu sekitar enam bulan untuk mencapai ukuran komersial (panjang total 4-5 cm). Penelitian ini bertujuan untuk mengevaluasi respons pertumbuhan benih ikan botia yang diberi hormon pertumbuhan ikan kerapu (rElGH) melalui tiga metode yaitu: perendaman, oral, dan kombinasi perendaman  dan oral. Penelitian menggunakan rancangan acak  lengkap dan setiap perlakuan diulang  tiga kali.  Dosis rElGH  melalui perendaman  yaitu  1,2 mg/L  diberikan  pada larva  umur tujuh hari, sedangkan dosis secara oral yaitu 30 mg/kg pakan dan diberikan pada benih umur tiga bulan. Ikan dipelihara dalam akuarium sistem resirkulasi (80 cm x 40 cm x 25 cm) dengan kepadatan 5 ekor/L selama pemeliharaan tiga bulan pertama dan 1 ekor/L selama pemeliharaan periode tiga bulan kedua. Hasil penelitian  menunjukkan  bahwa  perlakuan  kombinasi  perendaman  dan  oral  memberikan  pertumbuhan yang  lebih tinggi  sebesar 12,04%  dibandingkan kontrol.  Perlakuan  ini juga  meningkatkan level  ekspresi insulin-like growth  factor-1/ IGF-1  sebesar 29,37%  dibandingkan kontrol.
KATA KUNCI: recombinant growth hormone; metode pemberian hormon; Chromobotia macracanthus
ABSTRACT: The effects of using recombinant growth hormone on the growth of Clown Loach (Chromobotia macracanthus) juveniles with different methods of administration. By: Asep Permana, Alimuddin, Wartono Hadie, Agus Priyadi, and Rendy Ginanjar
The growth of Clown Loach is slow. It takes about six months to reach the market size (4-5 cm total body length). This study aimed to evaluate the growth response of Clown Loach treated with recombinant giant grouper growth hormone (rElGH) delivered by three different methods: immersion, oral, and the combination of immersion and oral. A completely randomized design was used as the experimental design and each treatment was replicated three times. The immersion method used rElGH dose of 1.2 mg/L on seven-day-old larvae, while oral treatment used 30 mg rElGH/kg feed on the three-month-old juvenile. The fish were reared in a closed recirculation tank (80 cm x 40 cm x 25 cm) at a density of 5 fish/L for the first three months, and 1 fish/L for the second three months of rearing period. The result showed that the combination of immersion and oral treatments produced a higher growth rate of 12.04% compared to control treatment. Those treatments also increased insulin-like growth factor-1/IGF-1 expression level about 29.37% compared to the control.
KEYWORDS: recombinant growth hormone; delivery method; clownloach; Chromobotia macracanthus

## PENDAHULUAN
Pemberian  hormon  pertumbuhan  rekombinan, terutama pada ikan konsumsi, dilaporkan efektif untuk meningkatkan laju pertumbuhan ikan. Pada ikan hias, efektivitas pemberian rGH telah dilaporkan pada ikan koki  mampu  meningkatkan  bobot  sampai  3,1  kali dibandingkan  control  (Promdonkoy  et  al.,  2004; Acosta et al., 2009). Pada ikan manvish (Pterophyllum scalare) mampu meningkatkan bobot sampai 1,6 kali dibandingkan control (Acosta et al., 2009). Beberapa hormon pertumbuhan ikan sudah berhasil diproduksi, di antaranya rGH dari giant catfish (Promdonkoy et al., 2004), rGH dari ikan salmon (Moriyama & Kawauchi, 1990), rGH dari tilapia (Acosta et al., 2007), dan rGH dari ikan gurami dan ikan kerapu kertang (Alimuddin et al., 2010).
Perbandingan  produksi  protein  dari  tiga  jenis hormon pertumbuhan rekombinan yang berasal dari ikan mas, gurame, dan kerapu kertang menunjukkan bahwa  hormon  pertumbuhan  rekombinan  dari  ikan kerapu kertang (rElGH) paling banyak digunakan karena tingkat  produksi  protein  lebih  tinggi  dibandingkan dengan hormon pertumbuhan dari ikan mas (rCcGH) dan ikan gurami (rOgGH) (Irmawati et al., 2012). Selain itu,  bioaktivitas  rElGH  dalam  merangsang pertumbuhan pada ikan nila lebih baik daripada rCcGH dan rOgGH (Alimuddin et al., 2010).
Hormon  pertumbuhan  rekombinan  dapat diaplikasikan dengan cara injeksi (Promdonkoy et al., 2004),  secara oral  melalui  pakan (Hardiantho  et  al., 2012), melalui perendaman (Acosta et al., 2007), dan kombinasi  antara  perendaman  dan  oral  (Handoyo, 2012). Aminah (2012) melaporkan bahwa aplikasi rElGH pada benih ikan sidat melalui perendaman selama dua jam  dengan  dosis  3  mg/L,  dapat  meningkatkan biomassa sebesar 28% dan sintasan sebesar 15,2% lebih tinggi dibandingkan kontrol. Lebih lanjut, perendaman benih ikan  sidat dalam  air yang  mengandung rElGH selama  dua  jam  dengan  dosis  12  mg/L  dapat meningkatkan pertumbuhan sebesar 37,4% lebih tinggi dibandingkan  kontrol  (Handoyo  et  al.,  2012). Sementara itu, perendaman udang vaname stadia PL- 2 dalam air  yang mengandung rElGH  dosis 15  mg/L selama tiga jam dapat meningkatkan bobot sebesar 109,9%; panjang sebesar 26,0%; dan biomassa sebesar 66,0% lebih tinggi dibandingkan kontrol (Subaidah et al., 2012).
Budidaya ikan botia di luar habitatnya telah sukses dilakukan  di  Balai  Penelitian  dan  Pengembangan Budidaya Ikan Hias, Depok. Permasalahan utama dalam budidaya ikan botia yaitu pertumbuhan yang lambat, diperlukan waktu sekitar enam bulan untuk mencapai (panjang total 4-5 cm) atau ukuran komersial (Permana
et al., 2011). Berdasarkan hal ini, penelitian aplikasi pemberian rGH melalui kombinasi perendaman pada stadia larva dan secara oral melalui pakan pada stadia benih  dilakukan  dengan  tujuan  menguji  respons pertumbuhan  benih  ikan  botia  yang  dimediasi  oleh IGF-1 dalam hati ikan botia. Hasil akhir yang diharapkan adalah ikan botia yang diberikan rGH melalui metode yang  berbeda  dapat  tumbuh  cepat  sehingga  dapat mempersingkat masa pemeliharaan.

## BAHAN DAN METODE

## Waktu  dan  Tempat  Penelitian
Penelitian  dilaksanakan  di  Balai  Penelitian  dan Pengembangan Budidaya Ikan Hias (BPPBIH), Depok pada bulan Juli 2014 sampai dengan Desember 2014.
Prosedur Perendaman Larva dalam rElGH
Larva ikan botia yang digunakan dalam penelitian ini adalah hasil budidaya dari BPPBIH Depok, berukuran panjang 0,57 cm dan bobot 0,0019 g yang berasal dari satu induk. Larva diberikan perlakuan kejut salinitas NaCl 20 g/L selama satu menit untuk memaksimalkan proses  osmoregulasi  sebagai  jalan  rGH  masuk  ke dalam  tubuh  ikan,  kemudian  direndam  selama  satu jam dalam air mengandung larutan rElGH (rElGH dosis 1,2  mg/L  +  NaCl  3  g/L  +  BSA  100  mL/L)  di  dalam baskom plastik yang berisi 1 L air.

## Prosedur  Pencampuran  rElGH  ke  Pakan

## Bloodworm
Prosedur  pencampuran  hormon  pertumbuhan rekombinan pada bloodworm mengikuti/modifikasi dari Hardiantho et al. (2012). bloodworm beku dicairkan dan ditiriskan. Hormon rekombinan rElGH dengan dosis 30 mg/kg dilarutkan dalam 10 mL phosphate buffer sa- line (PBS). Larutan rElGH diberi binder berupa kuning telur 0,13 mg/mL dan disemprotkan pada bloodworm. Bloodworm  yang  telah  disemprot  rElGH  dibiarkan selama 5-10 menit sebelum diberikan ke benih ikan botia sesuai perlakuan. Bloodworm yang mengandung rElGH diberikan  dua kali seminggu (tiga  kali sehari) dan  disiapkan setiap  akan  diberikan  ke ikan.  Pakan diberikan secara ad satiation.

## Prosedur  Pemeliharaan  dan  Rancangan Perlakuan
Ikan dipelihara dalam akuarium ukuran 80 cm x 40 cm x 25 cm dengan sistem resirkulasi dan diberi pakan berupa naupli Artemia, dan bloodworm. Ikan dipelihara dengan padat tebar yang sama, yaitu 5 ekor/L (pada pemeliharaan  1-3  bulan)  dan  1  ekor/L  (pada pemeliharaan  4-6  bulan).  Penelitian  menggunakan rancangan acak lengkap dan setiap perlakuan diulang
tiga kali. Perlakuan yang diujikan adalah: 1) kontrol (A), ikan tidak diberi rElGH; 2) perendaman (B), ikan diberi  rElGH  melalui  perendaman;  3)  oral  (C),  ikan diberi rElGH melalui pakan; 4) perendaman dan oral (D), ikan diberi rElGH melalui perendaman dan oral.

## Parameter yang Diamati
Parameter  yang  diamati  meliputi  pertumbuhan, sintasan, dan ekspresi gen insulin-like growth factor-1 (IGF-1).  Pertumbuhan  yang  diamati  hanya  terkait panjang saja, dikarenakan untuk ikan hias parameter panjang lebih dijadikan patokan bagi ukuran jual di pasaran.
Laju pertumbuhan harian panjang (LPHp) dihitung berdasarkan formula dari Effendie (1997). LPHp = [(ln P t - ln P 0 ) /t x 100]; Pt = rerata panjang total tubuh pada akhir penelitian (mm), P 0 = rerata panjang total tubuh  di  awal  penelitian  (mm),  t=  lama  waktu penelitian (hari).
Sintasan ikan merupakan persentase jumlah ikan yang hidup pada akhir penelitian dibandingkan dengan jumlah ikan pada saat tebar Effendie (1997).
Analisis  ekspresi  gen  IGF-1  dilakukan  untuk menjelaskan mekanisme yang melibatkan rGH dalam induksi pertumbuhan ikan. IGF-1 diekspresikan di hati. Jaringan  hati  ikan  botia  dari  perlakuan  terbaik  dan kontrol  diambil  secara  acak  pada  akhir  penelitian masing-masing  sebanyak  tiga  ekor.  RNA  total diekstraksi dari jaringan hati menggunakan tri-reagent kit (Molecular Research Center). Sintesis cDNA dilakukan menggunakan Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit  (Roche )  dengan  konsentrasi  total  RNA  1  µg  tiap sampel.  Ekspresi  IGF -1  ikan  botia  dianalisis menggunakan metode RT-PCR menggunakan primer forward  IGF-1 (5’-ACC  ATG CGC  TGT  CTC CCG  AGT ACC-3’) dan reverse IGF-1 (5’-CAC ACA AAC TGC AGC GTG TCT ACA AGC TCC-3’) (Hardiantho et al., 2012). Panjang gen target IGF-1 sekitar 150 bp. PCR dilakukan menggunakan kit Dream Taq Green PCR Master Mix (2X) Thermo Scientific. Komposisi pereaksi terdiri atas: 12,5 µL master mix, primer forward 1 µL dan reverse 1 µL (20 mol), cDNA 2 µL, dan nuclease free water sampai total volume reaksi 25 µL. Proses PCR IGF-1 dilakukan dengan  program:  denaturasi  awal  pada  suhu  95°C selama  15  menit,  diikuti  oleh  35  siklus  amplifikasi pada denaturasi 94°C selama 20 detik, annealing pada suhu 65°C selama 30 detik, dan ekstensi pada suhu 72°C selama 30 detik, serta ekstensi akhir pada suhu 72°C selama 10 menit kemudian pengkondisian akhir pada suhu 4°C. Sebagai kontrol internal digunakan gen â-aktin universal-2 menggunakan primer forward (5’- TAT GAA GGT TAT GCT CTG CCC-3’) dan reverse (5’- CAT ACC CAG GAA AGA TGG CTG-3’). Primer tersebut
disusun  menggunakan  program  GENETIX  versi  7 dengan panjang gen target â-aktin universal-2 sekitar 300 bp. Proses PCR â-aktin dilakukan dengan program: denaturasi  awal pada  suhu 94°C  selama tiga  menit, diikuti oleh 30 siklus amplifikasi pada denaturasi 94°C selama 30 detik, annealing pada suhu 58°C selama 30 detik, dan ekstensi pada suhu 72°C selama 30 detik, serta ekstensi akhir pada suhu 72°C selama tiga menit kemudian pengondisian akhir pada suhu 4°C. Analisis ekspresi gen dilakukan secara semi-kuantitatif, yaitu dengan membandingkan  tingkat ekspresi  gen IGF-1 dan â-aktin. Kuantifikasi ketebalan pita pada gen IGF- 1 dan â-aktin dilakukan menggunakan program Alpha View  SA  untuk  membandingkan  antara  perlakuan terbaik dengan kontrol.

## Analisis  Data
Panjang  akhir, laju  pertumbuhan harian  panjang, serta sintasan dianalisis menggunakan uji sidik ragam (ANOVA) dan jika terdapat perbedaan nyata (P<0,05), maka dilanjutkan dengan uji Tukey dengan bantuan piranti  lunak  SPSS  versi  17.  Ekspresi  gen  IGF-1 dianalisis secara deskriptif.

## HASIL DAN BAHASAN

## Pertumbuhan  dan  Sintasan
Penelitian uji bioaktivitas pemberian rElGH melalui kombinasi perendaman pada stadia larva dan oral pada stadia  benih  didapatkan  hasil  seperti  terlihat  pada Tabel 1. Respons pertumbuhan tertinggi didapatkan pada perlakuan D yaitu kombinasi antara perendaman dan  oral.  Perlakuan  tersebut  menghasilkan  panjang akhir yang nilainya 12,04% lebih tinggi dibandingkan kontrol (P<0,05), dan laju pertumbuhan harian panjang 5,83%  lebih  tinggi  dibandingkan  kontrol  (P<0,05). Perlakuan C yaitu perlakuan pemberian rElGH secara oral  memberikan  respons  pertumbuhan  lebih  baik dibandingkan  kontrol.  Perlakuan  tersebut menghasilkan panjang akhir yang nilainya 5,87% lebih tinggi  dibandingkan  kontrol  (P<0,05),  dan  laju pertumbuhan  harian  panjang  2,92%  lebih  tinggi dibandingkan kontrol (P<0,05). Respons pertumbuhan terendah  didapat  pada  perlakuan  B  yaitu  perlakuan pemberian  rElGH  secara  perendaman.  Perlakuan tersebut  menghasilkan  panjang  akhir  yang  nilainya 3,96% lebih tinggi dibandingkan kontrol (P>0,05); dan laju pertumbuhan harian panjang 1,97% lebih tinggi dibandingkan  kontrol  (P>0,05).  Hal  ini  juga menunjukkan  bahwa  pemberian  rElGH  lebih  efektif jika diberikan secara berulang dan dalam dosis yang tepat.  Sementara  itu,  sintasan  ikan  pada  semua perlakuan tidak berbeda secara signifikan (P>0,05).
Ukuran ikan tiap perlakuan pada akhir penelitian (setelah  umur  enam  bulan)  dapat  dilihat  pada Gambar 1.
Peningkatan pertumbuhan melalui pemberian rGH pada ikan konsumsi sudah banyak dilaporkan. Metode pemberiannya juga beragam (injeksi, perendaman, dan oral). Pada ikan hias, efektivitas pemberian rGH telah dilaporkan  pada  ikan  koki  melalui  injeksi  dapat meningkatkan  pertumbuhan  bobot  hingga  3,1  kali dibandingkan kontrol (Promdonkoy et al., 2004), pada
ikan manvish melalui perendaman dapat meningkatkan pertumbuhan  bobot  hingga  1,6  kali  dibandingkan kontrol  (Acosta  et  al.,  2009).  Pemberian  rGH  pada penelitian-penelitian  sebelumnya  biasanya  hanya menggunakan  satu metode  saja. Pemberian  melalui kombinasi antar metode sudah dilakukan pada ikan sidat, yaitu melalui kombinasi perendaman dan oral. Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  kombinasi keduanya  lebih  baik  dibandingkan  hanya  melalui perendaman atau oral saja (Handoyo, 2012).
Tabel 1. Panjang akhir, laju pertumbuhan harian panjang (LPHp), dan sintasan benih ikan botia pada kontrol dan perlakuan pemberian rElGH melalui kombinasi perendaman pada stadia larva dan oral pada stadia benih
Tabel 1. Final length, length daily growth rate (LPHp), and survival rate of Clown Loach juveniles on control and rElGH delivered  through combination methods of immersion at larval stadium and oral at juvenile stadium
A B C D Kontrol Control Perendaman Immersion Oral Orally Perendaman dan oral Immersion and orally Panjang akhir (mm) Final length (mm) 40.37 ± 1.35 a 41.97 ± 0.61 ab 42.74 ± 0.62 b 45.23 ± 0.76 c LPHp (%) 1.165 ± 0.020 a 1.188 ± 0.009 ab 1.199 ± 0.009 b 1.233 ± 0.010 c Sintasan (%) Survival rate  (%) 86.00 ± 6.00 a 90.00 ± 3.00 a 89.33 ± 6.11 a 88.67 ± 2.52 a Parameter Parameters Perlakuan (Treatments ) Keterangan: Huruf superskrip yang berbeda pada baris yang sama adalah berbeda nyata (P<0,05) Note: Different  superscript  letters in  the  same  row  are statistically  different  (P<0.05)

## A B            C          D

## 1 cm
Gambar 1. Ikan botia umur enam bulan hasil percobaan perlakuan pemberian rElGH dengan metode berbeda: A) kontrol;
B) perendaman; C) oral; D) perendaman + oral.
Figure1. Six months old Clown Loach fish produced from rElGH deliv- ered through different methods: A) control; B) immersion only;
C) orally at feed only; D) immersion + orally at feed.

## A               B               C                D
Pada penelitian ini, respons perlakuan pemberian rGH melalui perendaman saja pada stadia larva hasilnya menunjukkan  tidak  berbeda  nyata  dengan  control setelah  pemeliharaan  selama  enam  bulan.  Hal  ini menunjukkan bahwa pemberian rGH hanya sekali di awal pemeliharaan yaitu pada saat larva kurang efektif untuk  meningkatkan  pertumbuhan.  Perlu  adanya pengulangan  dalam  pemberian  rGH  untuk memaksimalkan  pertumbuhan.  Hasil  ini  diperkuat dengan  data  level  IGF-1  seperti  dilaporkan  oleh Irmawati et al. (2012) yang menyatakan bahwa level IGF-1 larva ikan gurami mengalami peningkatan setelah diredam  dalam  larutan  yang  mengandung  rGH,  dan puncaknya pada jam ke-24, dan kemudian menurun sampai kembali ke kondisi semula pada jam ke-48.
Perlakuan pemberian rGH melalui oral lewat pakan bloodworm  pada  stadia  benih  memberikan  respons yang berbeda nyata dibandingkan kontrol tetapi tidak berbeda  nyata  dengan  perlakuan  pemberian  rGH melalui  perendaman  pada  stadia  larva  terhadap pertumbuhan.  Hasil  ini  juga  menunjukkan  belum optimalnya pemberian rGH melalui pemberian secara oral saja. Pemberian secara berulang perlu dilakukan untuk  meningkatkan  pertumbuhan  lebih  maksimal. Hasil ini juga diperkuat dengan data level IGF-1 ikan sidat tujuh hari setelah diberhentikan pemberian rGH secara oral antara ikan sidat perlakuan dan kontrol (0 jam)  menunjukkan  level  yang  sama,  dan  meningkat 24 jam setelah pemberian pakan yang mengandung rElGH (Handoyo, 2012).
Perlakuan  kombinasi  pemberian  rGH  melalui perendaman pada stadia larva dan dilanjutkan secara oral melalui pakan alami bloodworm pada stadia benih terbukti menghasilkan performa terbaik dibandingkan kontrol  dan  kedua  metode  yang  lain  (melalui perendaman saja atau oral saja). Hasil ini membuktikan bahwa pemberian rGH pada ikan perlu dilakukan secara berulang untuk mendapatkan hasil yang lebih maksimal seperti halnya pada ikan sidat (Handoyo, 2012). Pada ikan rainbow, Haghighi et al. (2011) menyatakan bahwa hormon  pertumbuhan  rekombinan  yang  diberikan secara oral tidak terdeteksi lagi dalam darah, saluran pencernaan,  dan  otot  pada  90  menit  setelah pemberian.
Penjelasan  mengenai  mekanisme  masuknya  rGH dalam tubuh ikan ketika diberikan melalui perendaman dan oral (melalui proses penyalutan) masih belum jelas. Pada penelitian  sebelumnya dijelaskan  bahwa gona- dotropin releasing hormone mampu terserap oleh insang ikan mas koki, dan pada percobaan BSA yang diberi label radioaktif mampu melewati insang dan lapisan epidermis ikan rainbow trout setelah direndam dalam larutan yang berisi BSA tersebut. Ukuran partikel BSA
(66,5 kDA) lebih besar dibandingkan dengan rGH (20- 25 kDa) (Moriyama & Kawauchi, 1990; Carpio et al., 2007). Dengan demikian, diduga bahwa rGH diserap oleh tubuh ikan melalui insang dan lapisan epidermis. Selanjutnya, penyerapan rGH pada pemberian secara oral adalah melalui usus (Habibi et al., 2003).
Sintasan benih ikan botia yang diberi rElGH melalui perendaman, oral, dan kombinasi perendaman dan oral tidak  berbeda  secara  signifikan  dengan  kontrol (P>0,05). Jika dilihat dari nilai sintasannya, semuanya tergolong tinggi yaitu > 86%. Kondisi ini dikarenakan selama penelitian tidak ada serangan penyakit. Terkait pengaruh rElGH terhadap sintasan, beberapa penelitian sebelumnya dilaporkan bahwa sintasan ikan yang diberi rElGH lebih tinggi daripada kontrol (Handoyo, 2012; Hardiantho et al., 2012). Pada faktanya, peningkatan daya tahan ikan yang telah diberi rGH terhadap infeksi penyakit karena GH mampu meningkatkan sel-sel yang berkompeten dalam sistem kekebalan tubuh (Kelley, 1989;  Gala,  1991;  Sakai  et  al.,  1997;  Harris  &  Bird, 2000).

## Ekspresi Gen IGF-1
Keberadaan gen IGF-1 pada benih ikan botia yang diberi perlakuan D dapat dilihat pada Gambar 2. Hasil penelitian menunjukkan  bahwa level  ekspresi IGF-1 pada ikan perlakuan D (2,91) meningkat sebesar 29,38% lebih tinggi dibandingkan kontrol (2,25) (Gambar 3). Tingginya  tingkat  ekspresi  IGF-1  akibat  pemberian rElGH menunjukkan bahwa aktivitas rElGH melibatkan IGF-1 yang telah dielektroporasi (Gambar 3).
Peran  GH  dalam  memengaruhi  pertumbuhan, penelitiannya sudah banyak dilakukan. Perkembangan terakhir diketahui adanya mekanisme pengaturan GH secara langsung  dan tidak langsung  dalam memacu pertumbuhan. Mekanisme secara langsung adalah GH akan langsung memengaruhi pertumbuhan organ tar- get (tanpa perantara IGF-1 di dalam hati). Mekanisme tidak  langsung  adalah  mekanisme  GH  dalam memengaruhi pertumbuhan yang dimediasi oleh IGF- 1 dalam hati ikan. Pada penelitian ini ekspresi IGF-1 lebih  tinggi  daripada  kontrol.  Hal  tersebut mengindikasikan  bahwa  induksi  pertumbuhan  ikan botia akibat pemberian rElGH dimediasi oleh IGF-1. Hasil yang sama juga telah dilaporkan pada ikan yellow tail  (Seriola  quinqueradiata),  perlakuan  rGH  dapat meningkatkan IGF-1 dalam hati (Pedroso et al., 2009). Pemberian  GH  secara  oral  pada  ikan  salmon  juga meningkatkan plasma IGF-1 sampai puncaknya pada 24  jam  setelah  pemberian.  Level  plasma  IGF  masih tinggi sampai tiga hari, kemudian kembali pada level normal (Moriyama et al., 2000). Mekanisme rGH dalam meningkatkan  pertumbuhan  melibatkan  beberapa
faktor  yang  berperan  yaitu:  reseptor  GH  (GHr),  GH binding proteins (GHBPs), IGF binding proteins (IGFBPs), dan  reseptor  IGF.  GHr  berfungsi  dalam  menangkap sinyal  GH  yang  disekresikan  oleh  pituitari,  GHBPs berfungsi dalam  melindungi, dan  pengangkutan GH dari pituitari di dalam darah. IGFBPs berfungsi dalam
melindungi  dan  mengangkut  IGF-1  di  dalam  darah menuju  ke  organ  target.  Reseptor  IGF-1  berfungsi untuk menangkap sinyal IGF-1 dalam organ-organ yang menjadi target (Sanchez & Pierre, 1999; Moriyama et al., 2000; Wong et al., 2006; Debnanth, 2010).
Gambar 3. Tingkat ekspresi mRNA gen insulin-like growth factor I (IGF-1) pada perlakuan kontrol (bar hitam) dan perlakuan hormon pertumbuhan rekombinan (rGH, bar  putih)  dengan  kombinasi  perendaman  dosis  1,2  mg/L  dan  oral  melalui pakan dosis 30 mg/kg pakan. Ekspresi mRNA gen â-aktin digunakan sebagai kontrol internal loading RNA total dalam sintesis cDNA.
Figure 3.
mRNA gen insulin-like growth factor I (IGF-1) exspresion level at control treatment (black  bar)  and  recombinant  growth  hormone  (rGH)  treatment  (white  bar)  with combination treatment immersion at 1.2 mg/L dose and orally at 30 mg/kg feed. mRNA gen â-aktin exspresion used as internal control on total internal loading RNA at cDNA synthesis.
Gambar 2. Amplifikasi  keberadaan  gen  IGF-1dan  gen  -aktin  pada organ hati benih ikan botia (M= marker, (A1-A3)= kontrol,
(D1-D3)= kombinasi pemberian rGH melalui perendaman dan oral).
Figure 2. Amplification of IGF-1 gene and  -actin gene presence in liver organs  of  clown  loach  juvenile  (M=  marker,  (A1-A3)=  con- trol,  (D1-D3)=  combination  of  rGH  administration  through immersion and oral).
2.250 2.911 0.000 0.500 1.000 1.500 2.000 2.500 3.000 3.500 4.000 4.500 5.000 5.500 R as io I G F1 / B et a ac ti n R at io IG F1/ B et a a ct in Perlakuan (Treatments) Kontrol rGH Kontrol (Control)      rGH M      A1     A2    A3        D1    D2    D3 bp 200 100 500 400 300 IGF-1  aktin Kontrol (Control) rGH

## KESIMPULAN
Pemberian  rElGH  melalui  perendaman  atau  oral tidak efektif dalam meningkatkan pertumbuhan ikan botia.  Pemberian  rElGH  secara  kombinasi  melalui metode perendaman pada stadia larva dan oral pada stadia benih memberikan efek signifikan terhadap laju pertumbuhan yaitu 12,04% lebih tinggi dibandingkan kontrol. Peningkatan pertumbuhan ikan botia seiring dengan meningkatnya level ekspresi gen IGF-I yaitu sebesar  29,37%  dibandingkan  kontrol.  Pemberian rElGH  secara  oral,  perendaman  ataupun  kombinasi keduanya tidak memberikan efek signifikan terhadap sintasan.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian ini merupakan kegiatan yang didanai oleh DIPA-APBN Tahun  2014. Terima  kasih kami  ucapkan kepada  para  teknisi  Hanggar  Balai  Penelitian  dan Pengembangan  Budidaya  Ikan  Hias  (BPPBIH)  Depok yang telah membantu pelaksanaan penelitian ini (Rona, Rinal, Santi, Hasan, dan Angga G.) serta tim peneliti ikan botia atas kerja samanya.

## DAFTAR  ACUAN
Acosta,  J.,  Morales,  R.,  Morales,  A.,  Alonso,  M.,  & Estrasa, M.P. (2007). Pichia pastoris expressing re- combinant tilapia growth hormone accelerates the growth of tilapia. Biotechnol Lett., 29, 1671-1676. Acosta, J., Estrada, M.P., Carpio, Y., Ruiz, O., Morales, R.,  Martinez,  E.,  Valdes,  J.,  Borroto,  C.,  Besada, V., Sanchez, A., & Herera, F. (2009). Tilapia soma- totropin  polypeptides:  potent  enhancers  of  fish growth  and  innate  immunity.  Biotechnologia Aplicada, 26, 267-272.
Alimuddin, Lesmana, I., Sudrajat, A.O., Carman, O., & Faisal,  I.  (2010).  Production  and  bioactivity potential of three recombinant growth hormones of farmed fish. Indonesian Aquaculture Journal, 5(1), 11-16.
Aminah. (2012). Aplication of giant grouper recombinant hormone on glass eel by immersed at different doses. Skripsi.  Bogor Agricultural  University.  Bogor. Carpio, Y., Leon, K., Acosta, J., Morales, R., & Estrada, M.P. (2007). Recombinant tilapia neuropeptide Y promotes  growth  and  antioxidant  defenses  in African  catfish  Clarias  gariepinus  fry.  Aquaculture, 272, 649-655.
Debnanth, S. (2010). A review on the physiology of insulin like growth factor-I (IGF-I) peptide in bony fishes  and  its  phylogenetic  correlation  in  30 different taxa of 14 families of teleosts. Advances in Environmental Biology, 5, 31-52.
Effendie,  M.I.  (1997).  Fisheries  biology.  Yogyakarta: Yayasan Pustaka Nusatama, 163 hlm.
Gala, R.R. (1991). Prolactin  and growth hormone in the regulation  of the  immune system.  Proc.  Sot. Exp. Biol. Med., 198, 513-527.
Habibi, H.R., Ewing, R., Bajwa, & Walker, R.I. (2003). Gastric uptake of recombinant growth hormone in rainbow trout. Fish Physiology and Biochemistry, 28, 463-467.
Haghighi,  M.,  Sharif,  R.M.,  Sharifpour,  I.,  Sepahdari, A.,  &  Lashtoo,  A.G.R.  (2011).  Oral  recombinant bovine  somatotropin  improves  growth  perfor- mance in rainbow trout Oncorhynchus mykiss. Ira- nian Journal of Fisheries Sciences, 10, 415-424.
Handoyo, B. (2012). Respons benih ikan sidat terhadap hormon  pertumbuhan  rekombinan  ikan  kerapu kertang melalui perendaman dan oral. Tesis. Institut Pertanian Bogor. Bogor.
Handoyo,  B.,  Alimuddin,  &  Utomo,  N.B.P.  (2012). Pertumbuhan,  konversi  dan  retensi  pakan,  dan proksimat  tubuh  benih  ikan  sidat  yang  diberi hormon  pertumbuhan  rekombinan  ikan  kerapu kertang  melalui  perendaman.  Jurnal  Akuakultur Indonesia, 11, 132-140.
Hardiantho, D., Alimuddin, Prasetyo, A.E., Yanti, D.H., & Sumantadinata, K. (2012). Performa benih ikan nila  diberi  pakan  mengandung  hormon pertumbuhan rekombinan ikan mas dengan dosis berbeda. Jurnal Akuakultur Indonesia, 11(1), 17-22. Harris, J. & Bird, D.J. (2000). Modulation of the fish immune system by hormones: Mini review. Veteri- nary Immunology  and Immunopathology,  77,  163- 176.
Irmawati,  Alimuddin,  Junior,  M.Z.,  Suprayudi,  M.A., &  Wahyudi,  A.T.  (2012).  The  increase  of  growth rate  giant  gourami  fry  Osphronemus  goramy  Lac. that  immersed  with  the  water  containing  com- mon carp growth hormone. Jurnal Iktiologi Indone- sia, 12, 13-23.
Kelley,  K.W.  (1989).  Growth  hormone,  lymphocytes and macrophages.  Biochemical  Pharmacology,  38, 705-713.
Moriyama, S. & Kawauchi, H. (1990). Growth stimu- lation of juvenile salmonids by immersion in re- combinant salmon growth hormone. Nippon Suisan Gakkaishi, 56, 31-34.
Moriyama, S., Felix, G.A., & Hiroshi, K. (2000). Growth regulation by insuline-like growth factor-1 in fish. Bioscience Biotechnology Biochemistry, 64, 1553-1562.
Pedroso, F.L., Fukada, H., & Masumoto, T. (2009). In Vivo  and  in  vitro  effect  of  recombinant  salmon growth hormone treatment on IGF-1 and IGFBPs
in yellowtail Seriola quinqueradiata. Fisheries Science, 75, 887-894.
Permana, A., Kusumah, V.R., & Priyadi, A. (2011). Cul- ture of botia fish Chromobotia macracanthus Bleeker as  ex-situ  conservation  model.  Prosiding  Forum Nasional  Pemacuan  Sumber  Daya  Ikan  III.  Hasil Penelitian Perikanan dan Kelautan, Bandung.
Promdonkoy, B., Warit, S., & Panyim, S. (2004). Pro- duction of a biologically active growth hormone
from giant catfish Pangasianodon gigas in Escheri- chia coli. Biotechnol Lett., 26, 649-653.
Sakai,  M.,  Kajita,  Y.,  Kobayashi,  M.,  &  Kawauchi,  H.
(1997).  Immunostimulating  effect  of  growth hormone:  in-vivo  administration  of  growth hormone  in  rainbow  trout  enhances  resistance to  Vibrio  anguillarum  infection.  Veterinary Immunology and Immunopathology, 57, 147-152.