## UJI ANTAGONIS Fusarium SP. PADA KANGKUNG BELERANG TERHADAP ISOLAT KITINOLITIK LT4 DARI LIMBAH CAIR TAHU
Jane Melita Keliat 1) danWinny Iftari 2)
1,2) Fakultas Pertanian, Universitas Nahdlatul Ulama Sumatera Utara, Jln. H. Abdul Manaf Lubis No. 2 Gaperta Ujung, Tanjung Gusta Medan 20215 Email : jane310189@gmail.com

## ABSTRAK
Uji  antagonis Fusarium sp.  pada  tanaman  kangkung  belerang  terhadap  isolat    kitinolitik  LT4  telah dilakukan pada Bulan September 2017. Identifikasi dengan gen penyandi 16s rRNA menunjukkan isolat LT4  tergolong  bakteri Bacillus  subtilis. Zona  hambat Bacillus sp  pada  hari  ke-  6  sebesar  1,39  cm. Pengamatan secara mikroskopis setelah dilakukan uji antagonis, Fusarium sp. mengalami keabnormalan hifa seperti hifa menggulung dan hifa lisis.
Kata kunci: Fusarium, Kitinolitik, Bacillus sp .
THE ANTAGONISTIC TEST OF Fusarium sp. FROM SULFUR WATER KALE AGAINST  LT4 CHITINOLITIC ISOLATE FROM LIQUID WASTE TOFU

## ABSTRACT
The antagonistic test of Fusarium s. from sulfur water kale against  LT2 chitinolitic isolate has been done on  September  2017.  Identification  LT4  isolate  using  16s  rRNA  showed Bacillus  sp. Based  on  the antagonistic  test,  it  was  shown  that Bacillus sp  in  inhibiting  the  growth  of Fusarium sp  with  inhibition zone  radius  of 1,39  cm  at  sixth  days.  By  microscopic  of Fusarium sp.  after  the  antagonistic  test  against Bacillus sp., abnormal hyphae of fusarium sp. in rolled and lysis.
Keywords: Fusarium, Chitinolitic, Bacillus sp.
Pendahuluan
Bakteri  kitinolitik  dalam  mengendalikan jamur didasarkan kepada kemampuan mendegradasi  dinding  sel  jamur.  Kitinase menghidrolisis  ikatan  glikosidik  β-1,4  senyawa kitin sehingga terbentuk oligomer kitin yang lebih sederhana  dan  lebih  mudah  dihidrolisis.  Bakteri kitinolitik  yang  berasal  dari  tanah  di  beberapa daerah  Sumatera  Utara  dan  Bangka  menunjukkan kemampuannya  dalam  menghambat G.  boninensis , F.  oxysporum ,  dan P.  Citrinum (Suryanto et  al. 2011). Bacillus sp. BK17 merupakan bakteri tanah yang  berasal  dari  daerah  Bangka  yang  telah diketahui berpotensi menghasilkan enzim kitinase yang  menghambat  pertumbuhan  jamur  patogen (Suryanto.  2008).  Enzim  kitinase  dari Bacillus sp. BK17 mampu menghambat F.oxysporum penyebab layu Fusarium pada  benih  cabai  merah  (Suryanto, et. al., 2014). Enzim kitinase dari Bacillus sp. BK17 mampu  menghambat G.boninenses penyebab busuk  pangkal  batang  pada  bibit  tanaman  kelapa sawit  (Suryanto et.  al., 2012).  Enzim  kitinase  dari Bacillus sp.  BK17  juga  mampu  menghambat
Sclerotium  rolfsii rebah  kecambah  pada  kedelai (Malinda, 2013).
Kitinase memiliki kemampuan mendegradasi  limbah  yang  mengandung  kitin (Hirano,  1996),  dalam  bidang  pertanian  kitinase berperan  sebagai  kontrol  patogen  tanaman (Dahiya et al . 2005). Hasil pengujian in vitro enzim kitinase ekstraselluler, Cellulosimicrobium cellulans 191 mampu melisiskan dinding sel jamur Rhizopus oligosporus , Mucor  miehei , Penicillium sp., Streptomyces.  phaerochromogenes , Trichoderma viride (Fleuri et al. 2009). Kangkung  belerang  merupakan  tanaman yang  satu-satunya  dibudidayakan  di  Desa Semangat Gunung Kabupaten Karo (www.karokab.go.id).  Namun  produksi  kangkung belerang mengalami penurunan. Batang kangkung belerang menguning dan layu sering mengakibatkan  gagal  panen.  Hal  ini  diduga disebabkan  oleh  jamur Fusarium .  Untuk  itu,  perlu dilakukan  upaya  mengisolasi  dan  menguji pertumbuhan Fusarium pada  tanaman  kangkung belerang terhadap isolate kitinolitik LT2.
Bahan dan Metode Alat dan Bahan Alat  dan  bahan  yang  digunakan  meliputi  cawan petri,  botol  kaca, Laminar  Air  Flow (LAF),  pipet tetes,  pipet  serologi,  inkubator  termofil,  objek glass , cover  glass ,  ose  bengkok, hockey  stick , magnetic  stirer , hotplate ,  stirer,  Erlenmeyer  500 mL, Beaker glass 500 mL, tabung reaksi, gelas ukur
500 ml ,  mikroskop,  sampel  limbah  cair  tahu, Medium  Garam  dalam  1000 mL (KH 2 PO 4 0,14%, K 2 HPO 4 0,06%,  MgSO 4 .7H 2 O  0,1%,  FeSO 4 .7H 2 O 0,02%, ZnSO 4 0,002%, MnCl 2 0,002%), koloidal kitin
0,3%,  agar-agar,  akuades,  alkohol  70%,  spirtus, blankdisc , yeast ekstrak  0,1%, Nutrient  Agar , Malacheet Green , iodine , dan safranin.
Metode Kerja Isolasi Jamur Fusarium . Isolat jamur Fusarium sp. dilakukan  dengan  isolasi  langsung  dari  tanaman kangkung belerang.
Identifikasi  Isolat  LT2 .  Isolat  LT2  merupakan isolat  yang  diperoleh  dari  limbah  cair  tahu.  Isolat LT2  diidentifikasi  dengan  menggunakan  gen penyandi 16s rRNA.
Uji  Antagonis Fusarium pada  Tanaman Kangkung  Belerang  dengan  Bakteri  Kitinolitik isolat  LT2. Aktivitas  penghambatan  ditentukan berdasarkan  zona  hambat  yang  terbentuk  di sekitar koloni. Pengamatan dimulai dari hari ke- 6 sampai hari ke-10. Pengukuran pertumbuhan fungi patogen  dilakukan  dengan  cara  mengukur  batas akhir pertumbuhan dari fungi patogen (Martorejo, 2001).
Hasil dan Pembahasan Isolasi Jamur Fusarium dari Tanaman Kangkung Belerang. Isolasi  jamur Fusarium dilakukan  terhadap tanaman  kangkung  belerang  yang  terserang penyakit.  Pada  tanaman  kangkung  belerang  yang terserang penyakit, gejala yang ditimbulkan adalah batang  yang  berwarna  kuning  menjadi  coklat  dan keriput  dan  bagian  daun  berwarna  kuning  hingga coklat  sehingga  dapat  menyebabkan  tanaman kangkung belerang menjadi layu dan mati.
Hasil  isolasi  dari  bagian  batang  tanaman kangkung belerang menunjukkan patogen tersebut adalah Fusarium yang  memiliki  miselium berwarna  putih.  pada  media  Sabarouth  Dextrose Agar (SDA) dan media Potato Dextrose Agar (PDA) disekitar  koloni  jamur  berubah  menjadi  warna kuning                (Gambar 1.)
Pada
pengamatan mikroskopis memperlihatkan  konidia  berbentuk  lonjong, mikrokonidia  hialin  dan  lonjong,  makrokonidia hialin  berbentuk  sabit,  bertangkai  kecil  dan bersekat (Gambar 2.)
Pada  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Suryani et  al., 2013  bahwa  koloni Fusarium  oxysporum isolat  A  memiliki  warna  putih  pucat  kekuningan dengan  spora  berwarna  putih.  Sementara  itu, koloni Fusarium  oxysporum isolat  B  berwarna keunguan  (violet)  dengan  warna  spora  putih. Secara  mikroskopis,  kedua  spesies Fusarium oxysporum ini  memiliki  lebih  banyak  persamaan hanya saja pada jumlah makrokonidia dan bentuk mikrokonidia terdapat sedikit perbedaan.
Menurut  Murad et  al., (2016)  bahwa keutamaan Fusarium  oxysparum terletak  pada makrokonidia yang berbentuk panjang dan pendek menengah,  berdiding  tebal  dan  melengkung. Mikrokonidia  berbentuk  oval.  Karakteristik  lain berwarna putih sampai ungu pucat dari banyaknya miselium  yang  berwarna  putih.  Klamidospora berbentuk oval yang terbentuk secara tunggal dan berpasangan.
Gambar 2. Pengamatan Mikroskopis Perbesaran 65x10. Jamur Fusarium sp. Pada Tanaman kangkung Belerang
Gambar 1. Isolat jamur Fusarium sp. pada Media PDA dan SDA
Identifikasi Isolat Terpilih dengan menggunakan gen penyandi 16s rRNA
Dari  hasil  identifikasi  berdasarkan  gen penyandi  16S  rRNA  dengan  menggunakan  primer 63s  (5’-CAG  GCC  TAA  CAC  ATG  CAA  GTC-3’)  dan 187r  (5’-GGG  CGG  WGT  GTA  CAA  GGC-3’) menunjukkan bahwa isolat LT4 tergolong ke dalam Bacillus sp. Bakteri ini tergolong ke dalam bakteri gram positif berbentuk batang.
Uji  Antagonis Fusarium pada  Tanaman Kangkung  Belerang  dengan  Bakteri  Kitinolitik Isolat LT2. Hasil uji antagonisme Fusarium kangkung belerang menunjukkan  bahwa Bacillus sp.  mampu menghambat pertumbuhan fungi patogen. Adapun zona hambatan dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel  1.  Zona  Hambat  Fusarium  sp.  terhadap
Bacillus sp. No Hari ke- Zona Hambat (cm) 1 1 0,11 2 2 0,42 3 3 0,65 4 4 0,93 5 5 1,28 6 6 1,39
Dari  hasil  pengamatan  dapat  dilihat  bahwa terjadi  peningkatan  besar  zona  hambat  sampai hari  ke-6  yakni  1,39  cm.  Penghambatan pertumbuhan jamur ditandai dengan adanya zona hambat  di  sekitar  daerah  tumbuhnya  hifa  jamur yang menunjukkan adanya aktivitas hidrolisis oleh kitinase terhadap dinding sel jamur.
Bakteri  kitinolitik  memiliki  kemampuan yang  berbeda  dalam  menghambat  pertumbuhan patogen  tanaman.  Penelitian  yang  dilakukan  oleh Malinda  (2013),  isolat  BK13  menunjukkan penghambatan  sebesar  3,75  cm,  isolat  BK15 sebesar 3,70 cm; sedangkan isolat BK17, KR05, LK08,  PB017  tidak  menunjukkan  adanya penghambatan terhadap Sclerotium rolfsii .
Gambar 2. Hifa abnormal Fusarium sp. A. Hifa Menggulung; B. Hifa Lisis.
Perbesaran 65x10
Pengamatan  secara  mikroskopis  dari  uji antagonis  yang  dilakukan  dengan  menggunakan Fusarium  dari  tanaman  kangkung  belerang terhadap Bacillus  sp .  dari  limbah  cair  tahu menunjukkan  hifa  abnormal  seperti,  menggulung dan  lisis.  Menurut  Suryanto  (2010)  menunjukkan bahwa  hasil  uji  antagonis Fusarium terhadap isolat kitinolitik lokal meliputi, melilit, keriting dan lisis;  menggulung-gulung,  lisis  dan  menyatu. Beberapa  isolat  bakteri  kitinolitik  berpotensi untuk  dikembangkan  sebagai  agen  pengendali hayati patogen tanaman.

## Ucapan Terimakasih
Ucapan  terimakasih  kami  ucapkan  kepada KEMENRISTEKDIKTI  yang  telah  memberikan Hibah Penelitian Dosen Pemula Tahun 2017.

## Daftar Pustaka
Dahiya,  N.,  Tewari,  R.,  Tiwari,  P.  &  Hoondal,  G.  S. 2005.  Production  of  an  antifungal chitinase from Enterobacter sp. NRG4 and its  application  in  protoplast  production. World  J.  Microbiol.  Biotechnol. 21:  1611-
1616. Fleuri,  L.  F.,  Kawaguti,  Y.  H.  &  Sato,  H.  H.  2009. Production, purification and application of extracellular chitinase from Cellulosimicrobium  cellulans 191. Braz.  J. Microbiol . 40: (3). 623-630.
Hirano,    S.    1996.      Chitin    biotechnology applications. Biotechnol.    Annu.    Rev. 2: 237 – 258.
Kabupaten Karo. 2016. http:www.karokab.go.id.
Diakses Bulan Maret 2016.
Malinda,  N.  Suryanto,  D.  dan  Nurtjahja,  K.  2013.
Penghambatan Serangan Sclerotium rolfsii Penyebab  rebah  Kecambah  pada  Kedelai Dengan Bakteri Kitinolitik, Skripsi .
Departemen Biologi, Universitas Sumatera Utara.
Martorejo,  T.,  C.,  Sumardiyono.,  dan  Astuti,  E.H. 2001.  Kajian  Pengendalian  Hayati  Kapang Hijau pada Buah Jeruk dengan Trichoderma  sp. Prosiding  Seminar  PFI. IPB. Bogor. 354-356. Murad, N. B. A., Kusai, N. A., dan Zainudin, N. A. I. M.
2016.  Identification  and  diversity  of Fusarium  species  isolated  from  tomato fruits. Journal of Plant Protection Research .
56(3). Suryani,  I.A.,  Ramona,  Y.,  dan  Proborini,  M.  W. 2013.  Isolasi  dan  Identifikasi  Jamur Penyebab Penyakit Layu dan Antagonisnya  Pada  Tanaman  Kentang yang  Dibudidayakan  Di  Bedugul,  Bali.
Jurnal Biologi. 17(2):37.
Suryanto, D. 2008. Potensi  pemanfaatan  isolat kitinolitik  lokal  untuk  pengedalian  hayati
A
B
jamur. Prosiding  Seminar  Hasil-hasil
Penelitian , Unversitas Sumatera Utara. Suryanto,  D.,  Asnita,  N.,  Sihombing,  S.,  Maimunah, S.,  &  Nurtjahja,  K.  2010.  Penghambatan pertumbuhan  jamur  dari  tiga  tanaman ekonomi  Sumatera  Utara  oleh  bakteri kitinolitik. Seminar  Nasional  Biologi . Medan:  Fakultas  MIPA.  Universitas Sumatera Utara.
Suryanto,  D.,  Asril,  M.,  Munir,  E.,  Kardhinata,  H.E. 2014.  Assay  of  Antagonistic  Bacteria  of Single Isolate and Combination to Control Seedling-off  in  Chili  Seed  caused  by Fusarium  oxysporum . Journal  of  Pure  & Applied Microbiology . 8: 645-650.
_______.,  Irawati,  N.,  and  Munir,  E.,  2011,.  Isolation and  Characterization  of  Chitinolytic Bacteria  Isolated  from  Soil,  and  Their Potential  to  Inhibit  Plant  Pathogenic Fungi, Microbiology ,  vol  5,  no.  3,  hal  144- 148. Suryanto,  D.,  Wibowo,  R.H.,  Siregar,  E.B.M.,  Munir, E.  2012.  A  possibility  of  chitinolytic bacteria  utilization  to  control  basal  stem disease caused by Ganoderma boninense in oil  palm  seedling. Afr.  J.  Microbiol.  Res. 6: 2053-2059.