Pola Pertumbuhan Pseudomonas sp. dengan Menggunakan Variasi konsentrasi D-glukosa dalam Media Pertumbuhan terhadap Waktu Inkubasi
Agusniar Furkani Listyawati*
Bagian Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Wijaya Kusuma Surabaya *e-mail: furkani.listya@gmail.com

## Abstrak
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pola pertumbuhan Pseudomonas sp. dengan pemberian variasi konsentrasi  D-glukosa  pada  media  pertumbuhan  serta  untuk  melihat  pengaruhnya  terhadap  berbagai waktu inkubasi. Penambahan D-Glukosa dalam media pertumbuhan sebagai sumber karbon bakteri yang dapat menunjang proses pertumbuhan sel. Hasil penelitian menunjukan bahwa, penggunaan D-glukosa dengan berbagai variasi konsentrasi dalam media pertumbuhan Pseudomonas sp. dapat mempengaruhi pembentukkan  pola  pertumbuhan  sel  bakteri.  Penelitian  ini  menunjukkan  bahwa Pseudomonas sp. menggunakan substrat D-glukosa untuk pertumbuhan selnya. Sedangkan semakin lama waktu inkubasi yang  diberikan  tidak  berpengaruh  terhadap  pola  pertumbuhan  sel  dikarenakan  bergantung  pada kemampuan bakteri dalam mengkonsumsi substrat yang ditambahan kedalam media pertumbuhan.
Kata kunci : Pseudomonas sp., konsentrasi D-glukosa, waktu inkubasi, pola pertumbuhan

## Growth Pattern of Pseudomonas sp. by Using D-glucose concentration Variation in Growth Media Against Incubation Time

## Abstract
This  study  was  to  determine  the  growth  pattern  of  Pseudomonas  sp.  by  administering  various concentration  of  D-glucose  to  the  growth  medium  and  to  see  its  effect  on  various  incubation  times. Addition of D-Glucose in the growth medium as a source of bacterial carbon that can support the cell growth process. The results showed that, the use of D-glucose with various concentration in growth media of  Pseudomonas  sp.  affect  the  formation  of  bacterial  cell  growth  patterns.  This  study  showed  that Pseudomonas sp. using D-glucose substrate for it’s cell growth. While the longer incubation time didn’t had effect for the cell growth pattern due to the ability of bacteria in consuming substrates that are added to the growth medium.
Keywords: Pseudomonas sp., D-glucose consentration, incubation time, growth pattern

## PENDAHULUAN
Media pertumbuhan bakteri
memerlukan  berbagai jenis nutrisi dan sumber karbon untuk menunjang pertumbuhan bakteri. Salah satu sumber karbon yang diperlukan oleh bakteri  adalah  glukosa.  Glukosa  merupakan salah  satu  jenis  karbohidrat  sederhana  yang dapat larut didalam air dikarenakan memiliki 6 buah atom karbon sehingga mudah didegradasi oleh bakteri. Menurut Nugroho (2006), glukosa dapat langsung digunakan bakteri dalam proses metabolisme  sel  bakteri  (1).  Pada  penelitian yang  dilakukan  oleh  Cooper et  al .,  (1981)  dan
Guerra-Santos, et al , (1984), glukosa merupakan substrat  dan  sumber  karbon  yang  baik  bagi pertumbuhan Bacillus subtilis dan Pseudomonas aeruginosa (2,3) . Sedangkan  menurut  Shuler and Kargi  (1992),  substrat  glukosa  yang digunakan  bakteri  sebagai  sumber  karbon  dan energi berfungsi dalam empat proses metabolisme, yakni, assimilasi sintesis
biomassa, assimilasi sintesis produk
ekstraseluler,  energi  untuk  pertumbuhan,  dan energi untuk pemeliharaan (4).
Pertumbuhan  mikroorganisme  mengacu pada  beberapa  fase  pertumbuhan  dan  glukosa sebagai sumber karbon berperan penting
dalam pembentukkan pola pertumbuhan tersebut. Pada gambar grafik berikut menunjukkan pola pertumbuhan mikroorganisme dengan beberapa fase pertumbuhan yang terbentuk (5,6,7). Gambar 1 . Pola Pertumbuhan Mikroorganisme (7)
Pada  grafik  tersebut  dapat  terlihat bahwa  pola  pertumbuhan  mikroorganisme terbagi atas:
1. Fase  adaptasi  ( lag  phase/initial  stationary phase )
Fase  yang  menunjukkan  bahwa  jumlah mikroorganisme  masih  dalam  keadaan konstan  atau  dapat  diartikan  bahwa  pada fase ini mikroorganisme baru saja mengalami proses inokulasi.
2. Fase  pertumbuhan  awal  ( acceleration phase/phase of positive growth acceleration ) Fase  yang  menunjukkan  bahwa  kecepatan pertumbuhan mikroorganisme mulai meningkat  seiring  dengan  waktu  generasi mikroorganisme tersebut
3. Fase  pertumbuhan  logaritmik  ( growth phase/logarithmic growth phase) Fase  yang  menunjukkan  bahwa  kecepatan pertumbuhan mikroorganisme sudah dalam keadaan  konstan  dengan  waktu  generasi yang tetap
4. Fase pertumbuhan lambat ( decline phase ) Fase  yang  menunjukkan  bahwa  kecepatan pertumbuhan  mikroorganisme  mengalami penurunan,  namun  waktu  generasi  dan jumlah  mikroorganisme  meningkat,  tetapi bila  dibandingkan  dengan  fase  logaritmik
maka kecepatan pertumbuhan mikroorganisme lebih lambat 5. Fase pertumbuhan tetap ( stationary phase/maximum stationary phase )
Fase  yang  menunjukkan  bahwa  jumlah mikroorganisme  yang  hidup  tetap  konstan dan  rata-rata  kematian  sama  dengan  rata- rata peningkatan
6. Fase menuju kematian ( phase of accelerated death) F
Fase  yang  menunjukkan  bahwa  jumlah mikroorganisme berkurang namun mengalami  peningkatan  kecepatan  hingga terjadi fase kematian ( death phase/logaritmic  death  phase )  dengan kecepatan kematian yang konstan.
Pada penelitian ini menggunakan bakteri Pseudomonas sp.  sebagai  sampel  penelitian. Bakteri  ini  merupakan  kelompok  bakteri  Gram negatif  yang  bersifat  hidrokarbonoklastik dikarenakan  mampu  mendegradasi  berbagai jenis  hidrokarbon.  Morfologi Pseudomonas sp. berbentuk batang lonjong dengan ukuran 0,5 –
1,0  µm,  berwarna fluorescent ,  bersifat  aerob obligat  yang  berarti  hanya  dapat  hidup  pada kondisi  lingkungan  yg  kaya  akan  oksigen. Pseudomonas sp.  tidak  dapat  membentuk spora,  uji  oksidase  positif,  dan  memiliki  satu atau lebih flagel yang berfungsi sebagai motilitas atau  alat  pergerakkan.  Berikut  morfologi Pseudomonas sp. secara mikroskopik (8):
Gambar 2 . Morfologi Pseudomonas sp. (8)

## METODE
Penelitian ini menggunakan biakan murni Pseudomonas sp.  sebagai  sampel  penelitian. Sedangkan  bahan  dan  alat  yang  digunakan antara  lain, Nutrient  Agar (NA), Nutrient  Broth (NB),  D-Glukosa,  aquades,  spiritus,  alkohol, aluminium  foil,  kapas,  selotip,  kertas  koran,
tissue,  label, autoclave , vortex , incubator ,  labu Erlenmeyer,  cawan  petri,  mikropipet,  tip mikropipet,  pipet volume, pump pipet volume, gelas ukur, jarum ose loop , gelas Beaker , tabung reaksi,  rak  tabung  reaksi, spektrofotomometer, botol  UC  100  ml,  botol  kultur  250  ml,  botol kultur 500 ml, pembakar bunsen.
Tahap  awal  penelitian  adalah  membuat variasi  konsentrasi  media  pertumbuhan  yang telah  ditambahkan  D-Glukosa  sebagai  sumber karbonnya. Konsentrasi yang digunakan adalah 0%,  1%,  2%,  dan  3%.  Kemudian  membuat peremajaan  bakteri Pseudomonas sp.  pada
media  NA  dan  diinkubasi  selama  24  jam. Kemudian  setelah  24  jam  maka Pseudomonas sp. pada media NA diambil 1 ose secara aseptik untuk  diinokulasikan  ke  media  NB  yang  telah ditambahkan D-Glukosa sesuai konsentrasi yang telah  ditetapkan.  Tahap  berikutnya  adalah menginkubasi  semua  perlakuan  kedalam inkubator selama 6 hari mulai hari ke-0 sampai hari ke-5. Namun setiap 24 jam diambil 1 botol untuk  tiap-tiap  konsentrasi  dengan  tujuan mengukur  nilai  kekeruhannya  dan  memetakan pola pertumbuhan yang terbentuk.

## HASIL
Tabel 1. Nilai absorbansi (λ=650 nm) Pseudomonas sp. dengan variasi konsentrasi D-glukosa terhadap waktu inkubasi
Keterangan: G = D-Glukosa (%) H = Waktu inkubasi (hari)
Gambar  3 .  Kurva  pertumbuhan Pseudomonas sp.  dengan  variasi  konsentrasi  D-Glukosa terhadap waktu inkubasi

## PEMBAHASAN
Berdasarkan data pada Tabel 1 dan kurva pertumbuhan  pada  Gambar  3,  menunjukkan bahwa  pola  pertumbuhan Pseudomonas sp. pada  masing-masing  konsentrasi  D-glukosa memiliki  pola  yang  sama,  yakni,  pertumbuhan mencapai growth  phase/logarithmic  growth phase pada waktu inkubasi hari ke-2 hingga hari ke-4. Pola ini menunjukkan bahwa kemampuan Pseudomonas sp. dalam rentang waktu inkubasi tersebut  sudah  tidak  mengalami  proses perebutan nutrisi untuk meningkatkan pertumbuhan sel. Fase pertumbuhan pada pola seperti  ini  menunjukkan  bahwa  kecepatan pertumbuhan  mikroorganisme  sudah  dalam keadaan  konstan  dengan  waktu  generasi  yang tetap (5,6,7). Saat memasuki waktu inkubasi hari ke-5  untuk  konsentrasi  D-glukosa  1%  dan  3%
pola pertumbuhan mengalami proses 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 0 1 2 3 4 5 6 Waktu inkubasi (hari) N il a i a bs orba ns i (λ = 6 5 0 nm ) 0% 1% 2% 3% Waktu inkubasi (hari) Nilai absorbansi (λ=650 nm)
G 0 G 1 G 2 G 3 H 0 0,29±0,01 0,32±0,23 0,19±0,05 0,20±0,03 H 1 0,33±0,02 0,67±0,12 0,60±0 0,47±0,12 H 2 0,53±0,32 0,53±0,32 0,87±0,06 0,50±0,35 H 3 0,37±0,05 1,60±0,17 2±0,46 2,10±0,52 H 4 0,32±0,01 2,27±0,23 2,93±0,23 3,13±0,31 H 5 0,30±0 2±0 3,20±5,44 3,07±0,23
perlambatan.  Pola  ini  menunjukkan  bahwa kecepatan  pertumbuhan  sel Pseudomonas sp. mengalami  penurunan  dan  menuju stationary phase .  Sedangkan  pada  konsentrasi  D-glukosa 2%  pola  pertumbuhan  tetap  berada  pada exponential  phase setelah  waktu  inkubasi  hari ke-4.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  pada konsentrasi  D-Glukosa  2%  kebutuhan  akan sumber  karbon  sel Pseudomonas sp.  masih melimpah  sehingga  proses  pertumbuhan  sel dapat  terus  berlanjut.  Proses  yang  terjadi  ini sesuai dengan pernyataan Schlegel and Schmidt (1964)  yang  menyatakan  bahwa  ketepatan komposisi  media  dan  substrat  yang  tersedia mempengaruhi pertumbuhan mikroba (9).

## KESIMPULAN
Penambahan  substrat  D-Glukosa  pada media pertumbuhan Pseudomonas
sp. mempengaruhi
pembentukkan pola
pertumbuhan Pseudomonas sp.  Sedangkan lama  penggunaan  waktu  inkubasi  belum  tentu mempengaruhi pembentukkan
pola
pertumbuhan
sel dikarenakan
pola pertumbuhan sel bergantung pada kemampuan bakteri  dalam  mengkonsumsi  substrat  yang diberikan dalam media pertumbuhan.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Nugroho  A.,  2006.  Produksi  Biosurfaktan oleh Bakteri Pengguna Hidrokarbon dengan Penambahan  Variasi  Sumber  Karbon. Biodiversitas. 7(4): 312-316.
2. Ghribi  D  and  Ellouze-Chaabouni  S,  2011. Enhancement of Bacillus subtilis Lipopeptide Biosurfactants Production through Optimization  of  Medium  Composition  and Adequate Control of Aeration. Biotechnology Research International . 2011: 1-6
3. El-Sheshtawy  HS  amd  Doheim  MM,  2014. Selection  of Pseudomonas  aeruginosa for biosurfactant  Production  and  Studies  of  Its Antimicrobial  Activity. Egyptian  Journal  of Petroleum . 23: 1-6
4. Shuler  ML,  and  Kargi  F,  2002. Bioprocess Engineering  Basic  Concepts 2 nd Edition. Prentice-Hall, Inc., New Jersey
5. Fardiaz S 1993. Analisis Mikrobiologi Pangan. Edisi 1. Cetakan 1. Jakarta
6. Riadi  L,  2007. Teknologi  Fermentasi .  Edisi pertama, Yogyakarta, Graha Ilmu
7. Maier, RM, 2000. Bacterial Growth. Chapter 3. https://booksite.elsevier.com
8. Tille PM, 2014. Bailey and Scotts ’s Diagnostic
Microbiology, 13 th ed.
9. Schlegel  HG.  and  Schmidt  K,  1994. Mikrobiologi Umum. Gadjah Mada University Press. Yogyakarta.