TOKSISITAS EKSTRAK  UMBI SINGKONG ( Manihot esculanta Crantz)
Nur Hasanah 1* , Ihsan Nursobah 2 , Nur Wulan Adi Ismaya 3 ,
1,2, 3 STIKes Kharisma Persada, Jalan Pajajaran No.1, Pamulang, Tangerang Selatan 15417, Indonesia

## A RTICLE I NFORMATION
A B S T R A C T * Nur Wulan Adi Ismaya E-mail:nurwulan@masda.ac.id Cassava bulbs (Manihot esculanta Crantz) is one of the food  plants that grow  in  Indonesia.  Cassava  bulbs  find  Alkaloids,  Saponins,  Phenolics,
Flavonoids, Triterpenoids, and Glycosides. The purpose of this research is to know more about cassava extract (Manihot Esculanta Crantz), to know the  appearance  of  cassava  extract  (Manihot  esculanta  Crantz),  and  to know  the  phytochemical  content  of  cassava  extract  (Manihot  esculenta, Crantz).  The  method  used  in  this  study  is  the  method  of  Brine  Shrimp Lethality Test (BSLT). This research used Artemia salina Leach larvae test animals  which  were  divided  into  9  groups,  each  group  consisted  of  10 tails,  with  replication  2  times  each  group.  The  concentration  of  cassava extract  (Manihot  esculanta  Crantz)  is  0  ppm,  10 ppm,  50 ppm,  100  ppm, 300  ppm,  500  ppm,  600  ppm,  800  ppm,  and  1000  ppm,  and  extract partition with Ethanol, n- Heksan , and Ethyl acetate. Observation of dead larvae was performed 24 hours after administration of the extract. Based on  the  data,  LC 50 cassava  extract  (Manihot  esculenta,  Crantz)  was determined  by  probit  analysis.  The  result  of  probit  analysis  showed  LC 50 Ethanol  phase  showed  value  1462  ppm,  n-Hexane  phase  showed  LC 50 value 2994 ppm, and phase of Ethyl acetate showed LC 50 value 3217 ppm. The  results  show  that  cassava  tuber  extract  (Manihot  esculenta,  Crantz) did not show toxic potential, this is indicated by the price of LC 50 > 1000 ppm.
Keywords: (3-5 words or phrase) Toxicity _1
Cassava Tuber Extract (Manihot esculanta Crantz) _2 Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)_3
Available online: http://openjournal.wdh.ac.id/index.php/edudharma

## Edu Dharma Journal
ISSN (Print)  2597-890 X  ,  ISSN (Online)  2686-6366
Kata Kunci: ( 3-5 kata atau frase) Toksisitas _1 Ekstrak umbi singkong ( Manihot esculanta Crantz) _2 Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)_3 ,

## A B S T R A K
Singkong  (Manihot  esculanta  Crantz)  merupakan  salah  tanaman  pangan yang  tumbuh  mudah  tumbuh  di  Indonesia.  Umbi  singkong  mengandung alkaloid, saponin, fenolik, flavonoid, triterpenoid, dan glikosida. Penelitian ini  bertujuan  untuk  mengetahui  kandungan  senyawa  fitokimia  dan mengetahui  tingkat  toksisitas  ekstrak  umbi  singkong  (Manihot  esculanta Crantz).  Metode  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  yaitu  metode  Brine Shrimp  Lethality  Test  (BSLT).  Penelitian  ini  menggunakan  hewan  uji berupa  larva  udang  (  Artemia  salina  Leach)  yang  dibagi  dalam  9 kelompok,  setiap  kelompok  terdiri  dari  10  ekor,  dengan  replikasi  2  kali setiap  kelompok.  Konsentrasi  ekstrak  umbi  singkong  (Manihot  esculanta Crantz) yang digunakan yaitu 0 ppm, 10 ppm, 50 ppm, 100 ppm, 300 ppm, 500 ppm, 600 ppm, 800 ppm, dan 1000 ppm, dan dilakukan partisi ekstrak dengan pelarut etanol, n-heksan, dan etil asetat. Pengamatan terhadap larva yang mati dilakukan 24 jam setelah pemberian ekstrak. Berdasarkan data, LC50  ekstrak  umbi  singkong  (Manihot  esculenta,  Crantz)  ditentukan dengan  analisa  probit.  Hasil  dari  analisa  probit  menunjukan  LC50  fase etanol menunjukan nilai 1462 ppm, fase n-heksan menunjukan nilai LC50 2994  ppm,  dan  fase  etil  asetat  menunjukan  nilai  LC50  3217  ppm.  Hasil tersebut  menunjukan  bahwa  ekstrak  umbi  singkong  (Manihot  esculenta, Crantz) tidak menunjukan potensi toksik, hal ini ditunjukan dengan harga LC50 > 1000 ppm.
This is an open access article under the CC–BY-NC-SA license.
© 2020 Some rights reserved

## TOKSISITAS EKSTRAK UMBI SINGKONG

## PENDAHULUAN
Penggunaan  obat  yang  berasal  dari tanaman  saat  ini  menjadi  pilihan  bagi masyarakat.  Menurut  perkiraan  badan kesehatan  dunia  (WHO),terdapat  80% penduduk dunia memilih melakukan pengobatan secara tradisional menggunakan  bagian  utuh  tanaman  untuk pertolongan  pertama  terhadap  gangguan kesehatan.  Sekitar  25%  dari  obat  yang beredar di dunia berasal dan dikembangkan dari tanaman yang kemudian bahan aktifnya yang diisolasi Untuk  spesies  tanaman,  ada  setidaknya 1000 spesies yang telah diketahui manfaatnya sebagai bahan baku pembuatan obat  Anonim,  1992).  Telah  ada  penelitian yang menjelaskan bahwa tanaman tersebut menghasilkan metabolit sekunder sehingga dari  setiap  metabolit  sekunder  tersebut mempunyai  kemampuan  yang  berbeda sehingga dapat dikembangkan sebagai obat sesuai  dari  struktur  dan  kemampuan biologinya sehingga memiliki potensi yang baik untuk dikembangkan menjadi obat Masyarakat  indonesia  sangat  beragam, sebagian  tersebar  dan  hidup  sebagai  suku di  beberapa  pelosok  tanah  air.  Sebagian besar  dari  mereka  masih  memegang  erat pengetahuan  atau  kearifan  lokal  suku mereka  termasuk  cara  pandang  dalam menghadapi  dan  mengobati  penyakit,
sehingga pada umumnya mereka memanfaatkan  tumbuhan  yang  berada  di sekitar lingkungan.
Senyawa  toksik  merupakan  senyawa ataupun  zat  yang  memiliki  sifat  racun  dan dapat membahayakan apabila terakumulasi di dalam tubuh. Uji toksisitas adalah suatu uji  yang  dilakukan  untuk  mengetahui potensi  adanya  racun  dari  suatu  sampel, mengetahui  seberapa  besar  efek  toksik tersebut  melalui  efek,  karakteristik  dan sifat  biologi  yang  ditimbulkan  (Priyanto, 2009).
Tanaman  singkong  biasanya  dimanfaatkan masyarakat  Indonesia  untuk  mengobati penyakit  diantaranya  demam,  disentri, maag,  anemia,  typoid.  Selama  ini  belum ada  penelitian  terhadap  toksisitas  ekstrak etanol  umbi  singkong yang  diduga mempunyai efek toksik dan umbi singkong ini di harapkan dapat mengobati penyakit.

## METODE PENELITIAN
Alat  yang  digunakan  yaitu  mortar  dan stamper,  kertas  saring,  pisau,  cawan penguap,  kaki  tiga  dan  kassa  asbes,  pipet tetes,  gelas  ukur,  gelas  beker,  tabung reaksi,  penangas,  rak  tabung,  batang pengaduk, water  bath ,  timbangan  analitik, allumunium  foil,  larutan  spiritus,  toples, kertas  perkamen,  corong  kaca,  oven  dan airator.  Bahan  yang  digunakan  yaitu  umbi

## TOKSISITAS EKSTRAK UMBI SINGKONG
singkong  ( Manihot  esculenta Crantz), aquadestilata,  kapas,  air  laut,  telur  udang aretmia  salina  leach ,  etanol  70%,  n- Heksan, dan etil asetat.
Sampel  yang  digunakan  adalah  ekstrak umbi  singkong  yang  telah  dikelompokkan berdasarkan  konsentrasi.  Hewan  uji  yang digunakan adalah larva udang  yang masih bergerak  aktif  ( Artemia  salina Leach) berumur  48  jam.  Jumlah  hewan  uji  yang digunakan  pada  penelitian  ini  sebanyak 180 ekor.
Masing-masing kelompok perlakuan menggunakan 10 ekor larva. Pada penilitan ini  menggunakan    9  kelompok  perlakuan, yaitu konsentrasi 0 ppm, 10 ppm, 50 ppm, 100  ppm,  300  ppm,  500  ppm,  600  ppm, 800  ppm,  1000  ppm.  Dan  masing-masing kelompok  perlakukan  dilakukan  2  kali pengulangan.
Penetasan  larva Artemia  salina  Leach dilakukan  selama  48  jam.  Langkah  yang dilakukan  mempersiapkan  alat  penetas telur,  alat  tersebut  dilengkapi  dengan lampu  sebagai  sumber  cahaya  dan  agar telur  tidak  mengendap  maka  ditambahkan aerator,  aerator  juga  berfungsi  sebagai penyuplai  oksigen.  Selanjutnya  timbang telur Artemia salina sebanyak  5  gram  per liter  air  laut.  Telur Artemia  salina di rendam  dalam  wadah  berbentuk  kerucut yang  berisi  air  laut.  Biarkan  selama  24
jam.  Selanjutnya  telur  yang  telah  menetas (larva)    dipindahkan  dalam  wadah  yang lebih  kecil  berisi  600  ml  air  laut  dan biarkan selama 48 jam.
Setelah usia larva 48 dari waktu penetasan, maka  larva  siap  sebagai  hewan  uji. Selanjutnya  dilakukan  pembuatan  larutan induk  ekstrak  umbi  singkong  dengan konsentrasi    2000  ppm  atau  sebanyak  400 mg  ekstrak  dalam  200  ml  air  laut. Kemudian  dilakukan  pengenceran  dengan air  laut  menjadi  konsentrasi  0  ppm,  10 ppm,  50  ppm,  100  ppm,  300  ppm,  500 ppm, 600 ppm, 800 ppm, dan 1000 ppm. Pembuatan partisi ekstrak n-Heksan dilakukan  dengan  menimbang  2g  ekstrak etanol umbi singkong lalu ditambahkan air sebanyak  20  ml,  setelah  larut  dimasukkan dalam  corong  pisah  dan  ditambahkan dengan  total  n-Heksan  sebanyak  65  ml, kemudian  diuapkan  didapatkan  ekstrak kental.  Cara  tersebut  juga dilakukan pada pembuatan  partisi  ekstrak  etil  asetat.  0 ppm, 10 ppm, 50 ppm, 100 ppm, 300 ppm, 500  ppm,  600  ppm,  800  ppm,  dan  1000 ppm.
10  ekor  larva Artemia  salina  Leach dimasukkan  kedalam  tabung  reaksi  yang berisi  10  ml  konsentrasi  masing-masing kelompok perlakuan (10 ml untuk konsentrasi  10  ppm,  10  ml  konsentrasi  50 ml,  10  ml  konsentrasi  100  ppm,  10  ml

## TOKSISITAS EKSTRAK UMBI SINGKONG
konsentrasi  300  ppm  ,  10  ml  konsentrasi 500  ppm,  10  ml  konsentrasi  600  ppm,  10 ml  konsentrasi  800  ppm  dan  10  ml konsentrasi  1000  ppm.  Selain  itu,  dibuat kontrol  negatif  yang  berisi  10  ml  air  laut tanpa penambahan ekstrak. Kriteria standar untuk menilai kematian larva udang adalah apabila  larva  udang  tidak  menunjukkan pergerakan selama beberapa detik observasi.
Data  yang  diperoleh  merupakan  data primer  penelitian  berdasarkan  jumlah kematian  larva  udang  setelah  24  jam perlakuan  pada  masing-masing  kelompok
perlakuan.  Adapun  pengamatan  dilakukan dengan cara menghitung persentase kematian  (mortalitas)  larva Artemia  salina Leach  pada  masing-masing  kelompok perlakuan.  Hasil  perhitungan  kematian diperoleh dari hasil perkalian rasio dengan 100%  untuk  tiap  konsentrasi.  Setelah  itu, membandingkan  pelarut  ekstrak  umbi singkong  anatara  polar,  semipolar,  dan nonpolar.  Maka  dapat  diketahui  ekstrak umbi  singkong  dengan  pelarut  manakah yang lebih toksik.

## HASIL
Tabel 1. Hasil Partisi Ekstrak
Parameter Ekstrak Etanol Partisi Ekstrak n-Heksan Etil Asetat Jumlah 23 gram 0,23 gram 0,11 gram Rendemen 3,83 % - - Kadar Air 62 % - - Kadar Abu 10,92 % - - Kadar Abu tak larut asam 0,04 % - - Organoleptis a. Warna Coklat muda Coklat muda Coklat muda b. Aroma Khas (aromatik) Khas (aromatik) Khas (aromatik) c. Bentuk Pasta Pasta Pasta d. Rasa Pahit Pahit Pahit
Berdasarkan Tabel 1, diketahui bahwa jumlah ekstrak etanol yang didapatkan adalah 23 gram, 0,4 gram. Hasil partisi ekstrak n-Heksan didapatkan sebanyak 0,24 gram, dan hasil partisi ekstrak etil asetat didapatkan sebanyak 0,11 gram. Hasil organoleptis yang didapatkan dari ketiga partisi ekstrak yaitu berwarna coklat muda, berbau khas aromatik, berbentuk pasta, dan memiliki rasa pahit.

## Tabel 2. Hasil Uji Toksisitas Awal
Crude Ekstrak Nilai LC 50 Fase Etanol 1462 ppm Fase n-Heksan 2994 ppm Fase Etil Asetat 3217 ppm
Berdasarkan  Tabel  2,  diketahui  bahwa ekstrak  yang  memiliki  nilai  toksisitas paling tinggi yaitu pada fase etanol dengan nilai  LC 50 sebesar  1262  ppm  ,  selanjutnya pada  fase  non  polar  (n-heksan)  dengan nilai  konsentrasi  kematian  (LC 50 )  sebesar 2994  ppm,  dan  pada  fase  semipolar  (etil asetat) memiliki nilai konsentrasi kematian (LC 50 ) terendah yaitu 3217 ppm.
Tabel 3. Hasil Uji Fitokimia
Uji Fitokimia Hasil Alkaloid + Saponin + Tanin -
Fenolik + Flavonoid + Triterpenoid + Steroid - Glikosida +
Berdasarkan  Tabel  3,  diketahui  bahwa ekstrak umbi singkong ( Manihot esculenta Crantz)  memiliki  kandungan  alkaloid, saponin,  fenolik,  flavonoid,  triterpenoid, glikosida.

## PEMBAHASAN
Pada  penelitian  ini,  untuk  memastikan kebenaran  suatu  tanaman  yang  akan diteliti, agar terhindar terjadinya kesalahan dalam  penentuan  nama  spesies  tanaman, maka  dilakukan  determinasi  terhadap bagian  dari  tubuh  tanaman  tersebut.  Dari hasil determinasi tumbuhan tersebut diperoleh  hasil  bahwa  tanaman  yang  akan diteliti  adalah  umbi  dari  tanaman  jenis
Manihot esculenta Crantz, suku Euphorbiaceae, dikenal sebagai Singkong.
Pengujian  pada  ekstrak  umbi Manihot esculenta
Crantz bertujuan untuk mengetahui  toksik  tidaknya  umbi Manihot esculenta Crantz.  Ekstrak  etanol  dengan berat  23 gram  yang memiliki bentuk pasta berwarna  coklat  tua  pekat  beraroma  khas aromatik  kemudian  dilarutkan  ke  dalam pelarut  organik  non  organik  hingga  polar dilarutkan  berurutan.  Adapun  penggunaan
Etanol  sebagai  pelarut  dikarenan  etanol mempunyai  tingkat  kelarutan  yang  tinggi sehingga  dapat  melarutkan  bahan  aktif yang bersifat polar lebih banyak dibandingkan  jenis  pelarut  polar  lainnya, titik  didih  etanol  yang  rendah  dan  mudah menguap  serta  etanol  tidak  berbahaya  dan beracun  sehingga  lebih  aman  untuk diaplikasikan untuk produk-produk farmasi, (Gamse T, 2002). Agar kandungan yang berada di ekstrak tersebut tidak  rusak,  maka  tiap  ekstrak  yang  telah diperoleh  kemudian  di  pekatkan  dengan water bath dengan suhu 70ºC.
Ekstrak  etanol  umbi Manihot  esculenta Crantz yang sudah kental setelah melakukan  tahap  evaporasi,  selanjutnya dipartisi  dengan  pelarut  organik  non- polar  hingga  polar  secara  berurutan. Partisi  ini  bertujuan  untuk  memisahkan senyawa-senyawa  yang  bersifat  non- polar  dan  polar.  Bagian  yang  larut  tiap ekstrak yang didapat kemudian dipekatkan menggunakan waterbath dengan  suhu  40  sampai  50ºC  hingga kering.
Partisi  awal  menggunakan  pelarut  n- Heksan  yang  bersifat  non-polar  dengan perbandingan  ekstrak  etanol  kental  :  n- Heksan (4 gram/20 ml : 65 ml) sebanyak 3  kali  partisi,  maka  akan  diperoleh  fase
n-Heksan  seberat  0,23  gram.  Alasan penggunaan  n-Heksan  sebagai  pelarut karena  n-Heksan  bersifat  nonpolar, sehingga  dapat  menarik  senyawa  polar dan non polar.
Tahap  berikutnya  partisi  dengan  pelarut Etil  asetat  yang  bersifat  semipolar dengan  total  penambahan  65  ml  dan diperoleh  fase  Etil  asetat  seberat  0,11 gram.  Penggunaan  Etil  asetat  sebagai pelarut  karena  Etil  asetat  bersifat semipolar,  sehingga  dapat  mengikat senyawa  aktif  yang  larut  air  (polar)  dan tidak  larut  air  (non  polar),  memiliki toksisitas rendah, dan mudah diuapkan.
Dari  hasil  penelitian  uji  toksisitas  yang dilakukan  menunjukan  bahwa  fraksi  larut air  yang  menggunakan  pelarut  etanol diperoleh  bahwa  kematian  larva  (LC 50 ) berada  pada  konsentrasi  1462  ppm. Senyawa  polar  yang  terkandung  dalam umbi  singkong  diantaranya  flavonoid, fenolik,  glikosida,  dan  saponin  karena senyawa  tersebut  larut  pada  pelarut organik polar seperti etanol.
Pada  pengujian  menggunakan  pelarut yang  menggunakan  pelarut  semipolar diperoleh  bahwa  kematian  larva  (LC 50 ) berada  pada  konsentrasi  3217  ppm. Senyawa  semipolar  yang  terkandung dalam umbi singkong diantaranya
flavonoid, steroid, alkaloid karena senyawa tersebut larut pada pelarut organik semipolar seperti Etil asetat.
Pada  pengujian  menggunakan  pelarut  n- Heksan yang menggunakan pelarut nonpolar  diperoleh  bahwa  kematian  larva (LC 50 ) berada pada konsentrasi 2994 ppm.
Senyawa nonpolar  yang  terkandung dalam umbi singkong diantaranya steroid, alkaloid,  triterpenoid  karena  senyawa tersebut larut pada pelarut organik nonpolar seperti n-Heksan.
Hasil  uji  toksisitas crude ekstrak  umbi singkong  ( Manihot  esculenta Crantz) dengan  metode  BLST  menunjukan  bahwa ekstrak Manihot  esculenta Crantz  dari ketiga  fase  tersebut  yaitu  fase  etanol dengan  nilai  LC 50 pada  konsentrasi  1462 ppm,  fase  Etil  asetat  dengan  nilai  LC 50 pada  konsentrasi  3217  ppm,  dan  fase  n- Heksan dengan nilai LC 50 pada konsentrasi 2994 ppm. Hasil tersebut tidak menunjukan  efek  toksisitas  pada  larva Artemia  salina karena  senyawa  dapat dikatakan  toksik  apabila  memiliki  nilai memiliki nilai LC 50 kurang dari 1000 ppm (Wagner et al ., 1993).
Pada uji fitokimia menunjukan bahwa pada umbi singkong ( Manihot esculenta Crantz) terdapat adanya senyawa metabolit sekunder  yaitu  alkaloid,  saponin,  fenolik,
flavonoid, triterpenoid, glikosida. Senyawa alkaloid  memiliki  kemampuan  sebagai penstimulasi  sistem  syaraf,  menaikan tekanan  darah,  mengurangi  rasa  sakit, antibakteri  dan  anti  jamur,  obat  penenang (Robinson, 1995).
Senyawa saponin mempunyai efek terhadap sistem imun spesifik, diantaranya adanya  potensi sebagai senyawa sitotoksik terhadap sel kanker, antitumor, antiinflamasi,  dan  antimutagen  (Wagner, 1996).  Saponin  bersifat  toksik  bagi  hewan berdarah dingin sehingga banyak diantaranya  digunakan  sebagai  racun  ikan (Gunawan dan Mulyani 2010).
Senyawa  fenolik  memiliki  kemampuan sebagai  antioksidan,  antiradical  bebas, antialergi, anti radang, dan antiradiasi sinar UV  (Berthon  et.al,,  2017).  Adapun manfaat  lainnya,  diantaranya  sebagai penghambat  pelepasan  histamin  ketika terjadi elergi yang menyebabkan peradangan  pada  kulit,  sehingga  mampu mencegah  terjadinya  dermatitis  atopic (Heo et al ., 2009).
Senyawa  flavonoid  memiliki  kemampuan sebagai  agent  antioksidan,  antimikroba, antivirus,  antiinflamsi,  antialergi,  dan  anti kanker  (Miller  1996).  Menurut  Robinson 1995 senyawa ini dapat digunakan sebagai antihipertensi,  merangsang  pembentukan
estrogen,  dan  mengobati  gangguan  fungsi hati.
Senyawa  triterpenoid  memiliki  fungsi sebagai  pertahanan  terhadap  serangga senyawa  pengganggu  dan  senyawa  ini merupakan komponen aktif dalam
tumbuhan obat yang telah digunakan untuk penyakit  diabetes,  gangguan  menstruasi serta beberapa senyawa triterpenoid menunjukan  aktifitas  antibakteri  atau antivirus (Harborne 1987; Robinson 1995). Glikosida memiliki potensi terapeutik yang sering  digunakan  sebagai  obat  jantung yaitu glikosida dari digitalis, atrophanthus, squill,  convallaria,  apocynum.  Adapun glikosida antrakinon dalam bentuk “morindon”  dapat  digunakan  sebagai  obat pencahar (Ningsih IA et al ., 2003).

## KESIMPULAN
Hasil  Penelitian  menunjukan  bahwa  nilai LC 50 fraksi  Etanol  umbi  singkong  berada pada  konsentrasi  1462  ppm,  nilai  LC 50 fraksi  Etil  asetat  umbi  singkong  berada pada konsentrasi 3217 ppm, dan nilai LC 50 fraksi  n-Heksan  umbi  singkong  berada pada konsentrasi 2994 ppm. Organoleptis ekstrak umbi singkong
didapatkan hasil warna coklat tua, berbentuk  pasta,  berasa  pahit,  dan  berbau khas (aromatik).
Hasil  uji  fitokimia  diketahui  bahwa alkaloid,  saponin,  fenolik,  flavonoid, triterpenoid, glikosida merupakan senyawa yang  paling  aktif  yang  terkandung  dalam umbi singkong.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim,  1992.  (diambil  dari  Jenova  R, 2009). Uji  Toksisitas  Akut  Yang Diukur  Dengan  Penentuan  LD50 Ekstrak Herba Putri Malu ( Mimosa pudica L. ) Terhadap Mencit . [Skripsi].  Universitas  Diponegoro  : Semarang.
Berthon JR, Nachat KM, Bey JP, Renimel dan Filarire  E.  2017. Marine  Algae  as Attractive  Source  to  Skin  Care .  Free Radical Research
Dalimarta,  2000.  (diambil  dari  Jenova  R, 2009). Uji  Toksisitas  Akut  Yang Diukur  Dengan  Penentuan  LD50 Ekstrak  Herba  Putri  Malu ( Mimosa pudica L. ) Terhadap Mencit . [Skripsi]. Universitas Diponegoro : Semarang.
Gamse  T.  (2002). Liquid-Liquid  Extraction and  Solid  Liquid  Extrsction .  Institute of Thermal Process and Environmental Engineering.
Gunawan D, dan Mulyani S. (2010). Ilmu Obat Alam  (Farmakognosi) Jilid  1.  Penebar Swadaya : Jakarta.
Harbone  JB  (1987). Metode  Fitokimia: Penuntun  Cara  Modern  Menganalisis Tumbuhan ,  Terbitan  Kedua.  ITB  :
Bandung.
Heo  SJ,  Ko  SC,  Cha  SH,  Kang  DH,  Park  HS dan  Choi  Y.  (2009).  (diambil  dari Sedjati  S,  Suryono,  Santosa  A, Ssupriyantini  dan  Ridlo  A.  2017). Aktivitas  Antioksidan  dan  Kandungan Senyawa  Fenolik  Makroalga  Coklat . Jurnal.  Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu
Kelautan. Universitas  Diponegoro  : Semarang.
Marlina  N.  (1996).  Analisis  Sianida  dalam singkong  dengan  Metode  Lian  dan Hamir yang Dimodifikasi. Balai Penelitian Ternak : Bogor.
Miller  AL.  (1996).  Antioksidan  Flavonoid
: Struktur, Fungsi, dan Penggunaan
Klinis. Jurnal Tinjauan Obat Alternatif. Volume  1.  Thorne Research, Inc.
Ningsih  IA,  Chatun  S,  dan  Anggarwulan  E.
(2003). Pertumbuhan Kalus dan
Produksi Antrakuinon Mengkudu (Morinda citrifolia L.). Jurnal.
Jurusan  Biologi  FMIPA. UNS  : Surakarta.
Priyanto.  (2009). Toksikologi  :  Mekanisme, Terapi  Antidotum,  dan  Penilaian
Resiko . Leskonfi : Depok.
Rahayu MS. (2011). Pemanfaatan Tumbuhan  Obat  Oleh  Masyarakat
Kabupaten  Subang,  Jawa  Barat.
[Skripsi]. Institut Pertanian Bogor : Bogor.
Robinson  T.  (1995). Kandungan  Organik Tumbuhan Obat Tinggi . Diterjemahkan oleh Kokasih
Padmawinata. ITB : Bandung.
Wagner H dan Bladt S. (1993).
Pharmazeutische  Biologie.  New York : USA.
Wagner  H.  (1996). Plant  Drug  Analysis  :
A  Thim  Layer  Cromatography Atlas .  Edisi  II.  Springer  :  New York.