INDUKSI EPIGALLOCATECHIN GALLATE EKSTRAK TEH TERHADAP AKTIVITAS FAGOSITOSIS SEL MONONUKLEAR TIKUS WISTAR

## (PHAGOCYTIC ACTIVITY OF THE MONONUCLEAR CELLS INDUCED BY
EPIGALLOCATECHIN GALLATE TEA EXTRACT)

## Juni Handajani
Bagian Biologi Oral Fakultas Kedokteran Gigi, Universitas Gadjah Mada Jl. Denta Sekip Utara Yogyakarta 55281 E-mail: junihandajani@yahoo.com

## Abtract
Epigallocatechin gallate (EGCG) represents one of the tea’s (Camellia sinensis) polyphenol component. The aim of this study was to investigate the phagocytic activity of the mononuclear cells induced by EGCG. The subjects were 20 male Wistar  rats,  which  divided  into  two  groups  (treatment  and  control).  In  the  treatment  group,  0.1%  EGCG  was  oral administration for 14 days and the control group used aquabidest. Mononuclear cells were isolated from shedlood of the rats and tested for phagocytic activity. The result showed that there was significant difference in the index of phagocytosis between treatment and control group (p<0.05). It can be concluded that the EGCG can increase the phagocytic activity of mononuclear cells.
Keywords: Epigallocatechin gallate , tea extract, phagocytic activity, mononuclear cell

## Abstrak
Epigallocatechin  gallate (EGCG)  merupakan  salah  satu  komponen  polifenol  dalam  ekstrak  teh  ( Camellia  sinensis ). Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas  fagositosis  sel  mononuklear  tikus  Wistar  setelah  diinduksi  dengan EGCG. Subjek penelitian terdiri  atas 20  ekor tikus Wistar  jantan  dibagi  menjadi  2 kelompok (perlakuan dan kontrol), masing-masing  kelompok  terdiri  atas  10  ekor.  Kelompok  perlakuan  diberi  minum  EGCG  konsentrasi  0,1%  dan kelompok  kontrol  diberi  aquabides  selama  14  hari.  Sampel  berupa  sel  mononuklear  yang  diisolasi  dari  darah  tikus kemudian  diuji  aktivitas  fagositosisnya  menggunakan  metode  uji  fagositosis  sel  mononuklear.  Hasil  penelitian menggunakan uji-t  menunjukkan terdapat perbedaan yang bermakna indeks  fagositosis kelompok perlakuan dibanding kontrol (p<0,05). Disimpulkan bahwa EGCG konsentrasi dapat meningkatkan aktivitas fagositosis sel mononuklear.
Kata kunci: Epigallocatechin gallate , ekstrak teh, aktivitas fagositosis, sel mononuklear

## PENDAHULUAN
Komposisi  fraksi  daun  teh  terdiri  atas epigal- locatechin-3-gallate (EGCG)  49%, epicatechin-3- gallate (ECG)  14%, epigallocatechin (EGC)  11%, epicatechin (EC) 6%, kafein 0,8%, asam amino ( L- theanine )  0,3%,  dan  komponen  lain  (mineral,  fla- vonol, volatile  oil dan  lain-lain)  16,9%. 1 Keempat komponen  polifenol  atau  katekin  merupakan  anti- oksidan  yang  penting. Di  antara  empat komponen tersebut  EGCG  merupakan komponen yang paling
potensial 2 dan  secara  kimia memiliki aktivitas bio- logis yang paling kuat. 3
Kandungan  polifenol  ekstrak  teh  memiliki  efek bakteriostatik  ataupun  bakterisid  tergantung  pada konsentrasi  yang  digunakan.  Ekstrak  teh  hijau mampu  membunuh Streptococcus  mutans mulai konsentrasi 2%. 4,5 Polifenol teh diketahui juga dapat menghambat perlekatan Porphyromonas gingiva lis pada   sel   epitelium   bukal  sehingga  dapat  meng- terjadinya  penyakit  periodontal.  Pertumbuhan  bak- teri  plak  dapat  dihambat  oleh polifenol teh dengan
konsentrasi  sekitar  250-1000  g  per  ml. 6 Hasil penelitian Handajani dkk. menunjukkan bahwa akti- vitas  fagositosis  sel  makrofag  tikus  Wistar  me- ningkat  setelah  diinduksi  ekstrak  daun  teh  segar dengan konsentrasi 2%. 7
Sel mononuklear yang berperan dalam sistem per- tahanan  tubuh  melawan  invasi  bakteri  dengan  cara fagositosis  adalah  makrofag.  Makrofag  juga  mem- punyai  kemampuan  untuk  memproduksi  sitokin yang berperan dalam proses fagositosis yaitu IL-1  , IL-6,  IL-8  dan  TNF  .  Sitokin  ini  diketahui  dapat memediatori  makrofag  pada  inisiasi  reaksi  infla- masi.  Proses  fagositosis  diawali  adanya  bakteri  di- kenali dan diikat oleh reseptor sel fagosit kemudian ditelan.  Selanjutnya  reseptor  mengirimkan  sinyal untuk  mengaktifkan  enzim-enzim  yang  terdapat pada  fagolisosom  yang  berperan  untuk  membunuh bakteri tersebut. 8
Fagositosis  dapat  diinduksi  oleh  adanya  invasi bakteri  pada  hospes.  Proses  fagositosis  tersebut  di- tunjukkan  adanya  ingesti  (penelanan)  dan  peng- hancuran  terhadap  mikroorganisme  sebagai  benda asing dalam hospes. Sifaf hidrofobik pada permuka- an benda  asing berperan  terhadap proses terjadinya fagositosis, benda asing akan mudah ditelan oleh sel fagosit apabila lebih hidrofobik dibandingkan sel fa- gosit.  Bakteri  non  patogen  mudah  ditelan  oleh  sel fagosit  karena  lebih  hidrofobik  dibandingkan  sel fagosit,  sedangkan  bakteri  patogen  biasanya  di- bungkus  kapsul  sehingga  sulit  ditelan  oleh  sel  fa- gosit. 9
Proses fagositosis terdiri atas pengikatan sel target pada permukaan sel fagosit, penelanan dan stimulasi aktivitas  mikrobisidal  dari  sel1 0 0 1 > BDC BT/obisidal h6.75 Tm[(-)] TJET EMC  TJ<</MCID 75>> .3 Tm[(-)] TJET EMC  /P <</MCID 97>> BD26(t)23(a)26(n)45( )-40(s)25(e)26(l45(642(i)23( )-367(p)9(a6> BDC BT1 0 EBT1 0 0 1 524.58 797.4 Tm[( )] TJETQQa)2)26(l)2i)23(h)45(( )2t(d)27(r)42(o)1 0 0 1 5246.75 81t)23(9645.55 Tm6> BDC BT1 0 EBT1d)27((n)45( )-40(s)245(642(i)23( ))23(9645.55 Tm6> B.5(d)9(i)23(n)27(g)27(k)45(a)26(n)45( )-22(6.75 Tm[(-)] TJ[(-)] TJ[(-)] TJ[(-)] L] TJ[(-)] TJ Tm[(QQQa)2)26(l)2 TJ[(-)] 6. 36>>80G)27(g) Tm[(iBT1 0 0 113>80G)27(g)[(-)] TJ41 0 0 1 96.225 379.1 Tm[( )] TJET EM5 Tm6>c36>>80G).5(d)9(i)23(n)9] TJ1 9642(o)27(s)25(e)26(s)25( )-76(t01m6>c36>>80G).5 96.225 3(u)27(n)452ai
Indeks  fagositosis (IF) dihitung dengan cara sebagai berikut :
a   x  b Indeks Fagositosis (IF) = c Keterangan : a: jumlah  bakteri  yang  difagosit  oleh  satu  sel mononuklear b: jumlah sel mononuklear yang memfagositosis c: jumlah sel mononuklear dalam sediaan
Hasil  penghitungan  IF  dianalisis  dengan  uji-t. Peningkatan  (stimulasi)  atau  penurunan  (supresi) aktivitas  fagositosis  dapat  diketahui  dengan menghitung  rata-rata  fagositosis  dalam  persen sebagai berikut :
PF =

## IF bahan yang diuji – IF kontrol x 100 %
IF (kontrol)

## HASIL
Hasil  isolasi  sel  mononuklear  ditampilkan  dalam Gambar  1.  Sel  mononuklear  terdiri  atas  makrofag dan  limfosit,  sedangkan  sel  mononuklear  yang mempunyai  kemampuan  fagositosis  adalah  makro- fag (Gambar 1).
Gambar 1.  Hasil isolasi sel mononuklear dari     darah     tikus    Wistar. Sel mononuklear  terdiri  atas makrofag dan limfosit
Gambar  2  menunjukkan  aktivitas  fagositosis  sel mononuklear  terhadap  bakteri A.actinomycetemco- mitans .  Kemampuan  fagositosis  satu  sel  mono- nuklear  untuk  memfagosit  bervariasi  dari  2  sel sampai 12 bakteri.
Aktivitas  fagositosis  setiap  sel  mononuklear  tikus Wistar  setelah  pemberian  induksi  EGCG  0,1% mengalami  perubahan.  Hal  ini  dapat  diketahui  dari hasil  perhitungan  nilai  rata-rata  Indeks  Fagositosis (IF) yang dapat dilihat pada Tabel 1.
Gambar 2.  Sel  mononuklear  sedang mem- fagosit  bakteri. Tampak  bakteri
A.actinomycetemcomitans (war- na  hitam)   berada    dalam    sel mononuklear. Kemampuan  satu sel    mononuklear    memfagosit bakteri bervariasi    antara     2 sampai dengan 12 bakteri
Tabel 1.  Hasil  rerata  dan  standar  deviasi  indeks  fago- sitosis  (IF)  sel  mononuklear  setelah  diinduksi EGCG 0,1% dan aquadest (kontrol)
Kelompok perlakuan Indeks fagositosis X  ± SD EGCG 0,1 % Kontrol 2,91  ±  0,51 1,49  ±  0,43
Normalitas  data  indeks  fagositosis  dianalisis menggunakan Shapiro-Wilk karena  jumlah  data kurang  dari  50.  Hasil  perhitungan  normalitas  data menunjukkan p > 0,05 atau dapat diartikan distribusi data  normal.  Kemaknaan  peningkatan  aktivitas fagositosis  sel  mononuklear  setelah  induksi  EGCG 0,1%  dibandingkan  dengan  kontrol  selanjutnya dianalisis  menggunakan  uji-t.  Induksi  EGCG  0,1% berbeda bermakna (p<0,05) dibanding kontrol. Nilai Persentase Fagositosis (PF) sel mononuklear adalah 113,36%

## PEMBAHASAN
Histopaque digunakan  untuk  mengisolasi  sel mononuklear  dari  darah  tikus Wistar .  Sel  mono- nuklear  yang  diperoleh  terdiri  atas  makrofag  dan limfosit.  Hasil  sel  mononuklear  yang  mempunyai kemampuan  fagositosis  adalah  makrofag.  Sistem fagosit mononuklear merupakan salah satu populasi sel  sistem  imun  dan  terdiri  atas  sel-sel  yang  mem- punyai  fungsi  utama  fagositosis.  Fagosit  mono- nuklear dahulu dimasukkan ke dalam sistem retiku- loendotelial  yang  meliputi  makrofag  yang  terdapat di  dalam  jaringan  ikat,  mikroglia  pada  sistem  saraf
pusat,  sel  endotelial  pada  sinusoid  vaskuler  dan  sel retikuler yang terdapat pada organ limfoid. Sifat sel fagosit  mononuklear  sangat  berbeda  dengan  sel-sel retikuloendotelial lainnya sehingga kelompok sel ini tidak  lagi  dimasukkan  dalam  sistem  retikuloendo- telial,  dan  digolongkan  dalam  kelompok  sistem fagosit  mononuklear  yang  meliputi  sel  monoblast, promonosit dan makrofag. 14
Semua  sel  dalam  sistem  fagosit  mononuklear berasal dari hemopoetic stem cell di dalam sumsum tulang,  yang  setelah  mengalami  pemasakan  dan aktivasi dapat  menjadi berbagai bentuk morfologis. Makrofag  dan  prekursornya  yaitu  monosit, promo- nosit,  dan  monoblas  terdapat  di  dalam  sumsum tulang. Monoblas adalah bentuk muda sistem fagosit mononuklear. Pada stadium monoblas, di dalam sel masih  banyak  ditemukan  lisozime  dan  esterase, meskipun  enzim  tersebut  sangat  sedikit  jumlahnya. Semua  monoblas  mempunyai  reseptor  untuk  IgG dan dapat memfagositosis eritrosit yang diopsonisasi dengan  IgG.  Monoblas  akan  membelah  menjadi  2 promonosit,  di  dalamnya  masih  terdapat  lisozim, esterase,  dan  peroksidase.  Kebanyakan  promonosit mempunyai  reseptor  Fc  IgG,  reseptor  C3b,  mem- fagositosis eritrosit  yang diopsonisasi uler  dan  284.5 609.357(u)27(l)23(e)261 0 0 1 176.8542( )-94(d)27(a)26(n)27(  284.5 609.357( )-20M)34(o)9(n)45(92)26(k)45( )-35( (n)27(i)23(s)25(a)26(s27(g5 Tm 0 Tc[(S)29(e)44)26(k)27(a)26(n)45( )-131(p)9(r)2(g)45(o)9(s)4424p/MCID 23>> BDC BT1 0 0 1 EMC  /P <</MCID 24(m)33( )-404(95(a)26()23(a)26(n)45( )-131(p)9(r)2(g)45(o)9(s)44245 Tm 0 Tc[(S)29(e)44)26( Tm[(f)24(a24(a)26(s)25(e7.52 Tm[(f)24(a)26(g)454ETBT158(m)33(o)9(23(3)27(b)9ET EMC  /P1 0 0 1)33( )26(n)2745(a)26(s)a7/F234(o)9(n)45(92)26(k)45( )-35( (n9 798.6 Tm[(:h9D 32>> BDC BT11] TJETBT/F2 11 34n(r)42( )-> BETBT/F213.95 Tmn)27(g)45(BT 457.52 Tm50jtv <</MCID 27>> BDC BT1 0 0 1 -3( )] TJETBT1 [(t)23(u)27(l)42(a)26(n)27(ge7.52 Tm)45( )-13( 0 1 70.825 482.73k34)] 4101.4)9(a)2(d)274. <</MCI14)26(s)25(e/o)9(n)45(o)27(b)27(l)23(a)26(s)44(,)140( )-40(P)11(a)44(d)9(a)44( 06(s)25(e)4BT/F2 11 Tf12(e/o)9(n)45(o)27(b)27(l)23(e)26(m)18TBT1 2)-131(K)13(e)44(b)9(a)26(n)27(y)235(e7.52 Tm[(on>> BDC q03(e/o)9(n)45(26(n)27(y)2(357(u)27(l)23 26>> BDC BT(n)27(g)27(a)26(l)3(i)23(t)42(o)9(s)2BT11] TJ/3(m)33(e)44( )-367(d)9(a)245(m)-3( )C BT1 0 0 1 70.825 609.35 Tm[(M)] TJET E40(212(e/o).35 Tm[(M)] p)9(r)2(g)45(o)9(s)44245 TmMC  /P3)-3( )] TJ1(e/o)9(n)45(1 )e)44(b)9(a)26( <</MCID 2()45(o)9(s)4426(s)25(e)44(p17)] TJ.29(c)44( )-206111 Tf12ek)27(u)2)33(s)33( )28(aMCID 2()45(o)9(s)4426(s)25(e40(212(e/o).6(t)MCID 2()45(o)9(s)445(o)9(s)442693>> BDC BT1 0 0 1 173.25 457.52 Tm[( )h)45r)24(a)26(s)44(a)26(l)42( )-n)45(2(o)9(m)33(o)] 4.825 5963h)45r)24(a)26(s)44(a)5u)27(t)23(i)42( )-185(s20M)34(o)931(m)14(e)26(n)27(j)23(a)26(d)27(i)42( )-131(237(y)2(357(u)27(l)2(t)MCID 2()45(o)9(sk3>> BDC 11 Tf1Tf12ek)27(u)2)33(s)33( )21Tf7(i)23(s)25d5(o)27(b)9(l)42(a)26(s6f1267(u)2)33(s)33( )2D(2(n1.4)9(a)2(d)274. <</MCIh5(m4a)26(d)24. <</MC  /P <</M274. <</ 0 1 514.55 797.4 Tm35 Tm[(m)8.5 609Dk3>>9o)9(23(3))23(t)42(o)9(7 659.95 Tmm[(d)9(a)26)26(d)24. <</MC  /P <</M)283.95 2 0 06(a)26(s)a72T)42( )-204(r)24(e)35(e7.52 Tm[(on>> BDC q0318e)44(m)] T.3>>9o)9(23(3))2334 06(a)26(s)a723(3))233(9)] 3ao> B))27(l)23 26>> BDC BT(n)27(g16(s)44(,)140( )-40(P)11(a)a723(3))233(6723(i)23(a)2s)44(e)26(l)42( )-4040)a(,)32( )-1852sidTBT1 0 0 ( )-13( 0 1 70.825 408k.1h(y)2(357(u)27(l)2(t)MC1 0 0 ( ) B227(l)2(t)MC1 20>> BDC BT1 0 0 1 70.825 ge7.52 Tm)45( )-1346( )-240(I)24(g)27(G)13( )] TJET)T1 0 6( )-240(I)24(g)27(G)11] TJ/3(m)2(n1.4)9(a)2(d)27( )] TJsorny dantvasak4(m)33( )-34JETBT37(y)2(357(u)27(l)2(t)MCID 2()45(9)9(s)44(i)23(t)42( )-94(y)27(a)295 8(i)23(t45(42(d)9(a)44(p)n).73 )] TJET6(a)26((,)323 26>> BETBT1 0 0 1 2e)44(m)33(p)9(u)27(n)27(y)293 )] TJEe6(t)4isasi29(c)44( )-20614,t2k4TBT1 TJ/3(-149(m)14(e)44(m)BT1 2)-131(K531>> BDC B1)27(r)24(s)44(o)9(r)247244(d)9(a1 TJ/3()MCID 2()45(o)9(sk3>> BDC 1r)24(s)44(4(s)44(o)9(r)21 0 1 174)MCID 2()45(n)45( )-113(e)26(n)4 Tm 0 Tcs)44(a)26(l)42( )-n24(g)27(G)11] TJ/3(m) 2()45(o)9(sk3>> BDC 1r)2193 7( )] TJmonon4
dungan  ekstrak  daun  teh  lebih  bermanfaat  karena senyawa-senyawanya  tidak  dipisahkan  dan  dapat saling  bekerja  sama. Epigallocatechin  gallate se- bagai  hasil  ekstraksi  satu  komponen  senyawa  daun teh kemungkinan sudah tidak mengandung senyawa lainnya,  sehingga  efeknya  tidak  maksimal.  Dapat disimpulkan  bahwa  induksi  EGCG  konsentrasi 0,1%  dapat  meningkatkan  aktivitas  fagositosis  sel mononuklear tikus Wistar.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terimakasih  kepada  Prof. Dr.  drg.  Al.  Supartinah  S,  SU,  SpKGA,  Prof.  dr. Marsetyawan,  PhD  dan  Prof.  drh.  Widya  Asmara, PhD  atas  bimbingannya  selama  proses  penelitian ini.

## Daftar Pustaka
1. Nune SK,  Chanda N,  Shukla R,  Katti K,  Kulkarni RR,   Thilakavathy  S,   Mekapothula  S,   Kannan  R, Katti  KV.  Green  nanotechnology  from  tea:  phyto- chemicals in tea as building blocks for production of biocompatible  gold  nanoparticles.  J  Mater  Chem 2009; 19: 2912-20.
2. Peterson  J,  Dwyer  J,  Bhagwat  S,  Haytowitz  D, Holden  J,  Eldridge  AL,  Beecher  G,  Aladesanmi J.    Major    flavonoids    in  dry  tea.  JFCA  2005;  18: 487-501.
3. Lakenbrink C, Lapczynski S, Maiwald B, Engelhardt UH. Flavonoids and other polyphenols  in consumer brews of tea and other caffeinated beverages. J Agric Food Chem 2000; 48: 2848-52.
4. Cho  YS,  Schiller  NL,  Oh  KH.  Antibacterial  effects of  green  tea  polyphenols  on  clinical  isolates  of methicillin-resistant  Staphylococcus  aureus.  Curr Microbiol 2008; 57(6): 542-6.
5. Taylor  PW,  Hamilton-Miller  JMT,  Stapleton  PD. Antimicrobial properties of green tea catechins. Food Sci Technol Bull.2005; 2: 71-81.
6. Ferrazzano  GF,  Amato  I,  Ingenito  A,  Natale  A, Pollio A. Anti-cariogenic effects of polyphenols from plant  stimulant  beverages  (cocoa,  coffee,  tea). Fitoterapia 2009; 80: 255-62.
7. Handajani  J,  Al  Supartinah,  Marsetyawan,  Asmara W.  Aktivitas  fagositosis  sel  makrofag  tikus  Wistar setelah diinduksi ekstrak teh ( Camellia sinensis ). IJD 2006; 13(1): 7-11.
8. Abbas  AK,  Lichtman  AH,  Pober  JS.  Cellular and  molecular  immunology.  Philadelphia:  WB Saunders  Co, 2001.
9. Hoebe  K, Janssen  E, Beutler  B.  The  interface  bet-
ween   innate   and   adaptive   immunity. Nature  Im- munology 2004; 5(10): 971-3.
10. Ishikawa  I,  Nakashima  K,  Koseki  T,  Nagasawa  T, Watanabe  H,  Arakawa  S,  Nitta  H.,  Nishihara  T, Induction  of  the  immune  response  to  perio- dontopathic  bacteria and  its role in the  pathogenesis of Periodontitis, Periodontology 2000; 14:79 -111.
11. Hay  FC,  Westwood  OMR.  Practical immunology, 4 rd Ed.  London:  Blackwell  Scientifif   Publications, 2002; 203-28.
12. Kelk P, Claesson R, Hänström L, Lerner UH, Kalfas S. Abundant secretion of bioactive  interleukin-1β by human  macrophages  induced  by Actinobacillus actinomycetemcomitans Leukotoxin.  Infect  Immun 2005; 73(1): 453-458.
13. Kumar S,  Gupta P, Sharma S,  Kumar D.  A  review on  immunostimulatory    plants.  JCIM  2011;  9(2): 117-28.
14. Abbas  AK,  Lichtman  AH,  Pober  JS.  Cellular and  molecular  immunology.  Philadelphia:  WB Saunders  Co, 2001.
15. Nakayama  M,  Akiba  H,  Takeda  K,  Kojima  Y, Hashiguchi  M,  Azuma  M,  Yagita  H,  Okumura  K. Tim-3  mediates  phagocytosis  of  apoptotic  cells  and cross-presentation. Blood 2009; 113(16): 3821-30.
16. Brito  RRN,  Cortez  BA,  Machado-Santelli  GM, Xander P, De Lorenzo BH, Oliveira HC, Thies FG. Kioshima ES. Maricato JT. Lopes JD. Mariano M. In vitro  and  in  vivo  phagocytic  ability  of  mouse  B-1 Cells.  Immunology  Immunogenetics  Insights  2010; 2: 31-39.
17. Rogers J, Perkins I, van Olphen A, Burdash N, Klein