DOI: https://doi.org/10.36423/agroscript.v5i2.1248
P-ISSN (2685-9505) E-ISSN (2685-9491)
URL: https://e-journal.unper.ac.id/index.php/agroscript

## TEKNIK STERILISASI EKSPLAN DAUN LAHUNG ( Durio dulcis ) PADA MEDIA MS SECARA

## IN VITRO

## STERILIZATION TECHNIQUE OF LAHUNG LEAF EXPLANT ON MS MEDIUM IN VITRO
Eka Agustiningrum, Nofia Hardarani * , Hilda Susanti Program Studi Agronomi, Fakultas Pertanian, Universitas Lambung Mangkurat Jl. Jend. A. Yani Km. 36, Kota Banjarbaru, Kalimantan Selatan, 70714
Corresponding email: hardaraninofia@gmail.com Kata kunci: Durio Eksplan Kontaminasi Pencoklatan Sterilisasi ABSTRAK
Lahung  adalah  salah  satu  jenis Durio yang  merupakan  tanaman  endemik Kalimantan  yang  sudah  sulit  dijumpai  sehingga  status  lahung  di  alam  saat  ini adalah  rawan  atau  genting.  Oleh  sebab  itu  perlu  dilakukan  pelestarian  pada tanaman  ini  dengan  teknik  kultur  jaringan  untuk  memperoleh  tanaman  yang sama  dengan  induknya.  Sterilisasi  merupakan  tahapan  penting  dalam  kultur jaringan agar memperoleh eksplan yang aseptik. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui teknik sterilisasi terbaik terhadap eksplan daun lahung pada media MS secara in vitro . Rancangan yang digunakan adalah Rancangan Acak Kelompok (RAK)  satu  faktor  dengan  perlakuan  teknik  sterilisasi  yang  terdiri  dari  6  taraf yaitu: s 1 = NaOCl, alkohol 70%, s 2 = fungisida, NaOCl, alkohol 70%, s 3 = bakterisida, NaOCl, alkohol 70%, s 4 = fungisida, bakterisida, NaOCl, alkohol 70%, s 5 = fungisida, bakterisida,  NaOCl,  alkohol  70%,  HgCl 2 0,1%  dan  s 6 =  fungisida,  bakterisida, NaOCl,  alkohol  70%,  HgCl 2 0,1%,  H 2 O 2 17,6%.  Variabel  pengamatan  pada penelitian  ini  adalah  waktu  muncul  kontaminasi,  persentase  kontaminasi, persentase browning ,  persentase  eksplan  hidup,  waktu  muncul  kalus,  warna kalus dan tekstur kalus. Hasil penelitian menunjukkan bahwa teknik sterilisasi yang efektif digunakan untuk eksplan daun lahung adalah fungisida + NaOCl  + alkohol 70%. Keywords: Browning Contamination Durio Explant Sterilization

## ABSTRACT
Lahung is a type of Durio which is a plant endemic to Kalimantan which is hard to find, so the current status of lahung in nature is vulnerable or critical. Therefore it is necessary to preserve this plant with tissue culture techniques to obtain the same  plant  as  the  mother  plant.  Sterilization  is  an  important  stage  in  tissue culture  to  obtain  aseptic  explant.  This  study  aim  to  determined  the  best sterilization technique of lahung leaf explant on MS medium in vitro. This study was designed in a one-factor Randomized Block Design (RBD) with sterilization technique treatment consisting of six levels, namely s 1 = NaOCl, alcohol 70%, s 2 = fungiside, NaOCl, alcohol 70%, s 3 = bacteriside, NaOCl, alcohol 70%, s 4 = fungiside,
bacteriside, NaOCl, alcohol 70%, s 5 = fungiside, bacteriside, NaOCl, alcohol 70%, HgCl 2 0,1% and s 6 = fungiside, bacteriside, NaOCl, alcohol 70%, HgCl 2 0,1%, H 2 O 2
17,6%. Variables observed in this study were contamination time, contamination percentage,  browning  percentage,  live  explant  percentage,  callus  appearance time, callus color and callus texture. The result showed that the most effective sterilization technique for lahung leaf explants was fungiside + NaOCl + alcohol
70%.

## PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  salah  satu negara mega biodiversitas karena
memiliki  kawasan  hutan  tropika  basah
dengan  tingkat  keanekaragaman  hayati tergolong  tinggi  di  dunia,  termasuk  juga dengan  kekayaan  keanekaragaman  jenis buah-buahan  tropisnya.  Indonesia  juga diketahui sebagai salah satu dari delapan
pusat  keanekaragaman  genetik  tanaman di  dunia  khususnya  untuk  buah-buahan tropis seperti durian (Sastrapradja & Rifai, 1989).
Durio merupakan  tumbuhan  asli yang  menghuni  daratan  Asia  Tenggara. Genus  yang  diperkirakan  berjumlah  30 jenis  itu  tersebar  dari  Sri  Lanka,  India, Myanmar,  Thailand,  Malaysia,  Filipina, Papua  Nugini  dan  Indonesia  (Sumatera dan  Kalimantan).  Kekayaan  jenis Durio yang  tumbuh  di  daratan  Kalimantan  juga menandakan bahwa daerah tersebut kaya akan  sumber  genetik  dan  ekosistemnya. Individu-individu  dari  tumbuhan Durio dapat  hidup  bersama  di  suatu  tempat membentuk  populasi  yang  begitu  besar (Priyanti, 2012).
Informasi yang berasal dari Herbarium Bogoriense menyatakan bahwa  20  dari  29  spesies  liar  durian  di dunia,  berada  di  Indonesia.  Berdasarkan sebarannya,  dari  20  spesies  yang  ada  di Indonesia  delapan  spesies  terdapat  di Kalimantan, tujuh spesies di Sumatera dan masing-masing  satu  spesies  tersebar  di Jawa,  Bali, Sulawesi, Maluku  serta Papua. Umumnya  kerabat  durian  di  Indonesia masih tumbuh liar di hutan-hutan primer ataupun  di  hutan-hutan  campuran meranti dan hanya sebagian kecil lainnya yang  telah  ditanam  penduduk  di  kebun- kebun.  Seiring  meningkatnya  kerusakan hutan  dari  tahun  ke  tahun,  maka kelestarian  kerabat  durian  khususnya yang  tumbuh  di  Kalimantan  akan
terancam  kelestariannya  bahkan  dapat mengalami kepunahan (Uji, 2005).
Tantra  (1983) dalam Antarlina (2009)  menjelaskan  bahwa  buah-buahan lokal  di  Kalimantan  khususnya  dari  jenis Durio pada umumnya merupakan tanaman  tahunan  dan  populasinya semakin  berkurang  akibat  pohon  yang telah  tua  dan  tanpa  teknologi  budidaya yang  memadai.  Langkanya  tanaman  ini juga disebabkan oleh umur berbuah yang terlalu  lama,  sehingga  orang  enggan menanamnya.  Hal  ini  merupakan  faktor penyebab  terjadinya  pengikisan  plasma nutfah, sehingga keberadaan dan kelestarian tanaman durian lokal menjadi terancam. Uji (2005) dalam penelitiannya menyatakan  bahwa  hal  ini  merupakan peluang besar untuk dapat meningkatkan kualitas dan produksi buah-buahan durian dan kerabatnya di Indonesia khususnya di Kalimantan  melalui  usaha  pemuliaan tanaman.  Namun  usaha  pemuliaan  ini perlu  waktu  yang  cukup  lama  karena kerabat durian tergolong jenis pohon yang daur hidupnya panjang.
Kenyataan ini memerlukan perhatian dari semua pihak dalam rangka pelestarian  plasma  nutfah  khususnya durian  dan  kerabatnya  yang  spesifik  di Kalimantan antara  lain dengan menanam komoditas  tersebut  pada  kebun  koleksi. Selain itu, juga dengan mempelajari teknik perbanyakan  secara  vegetatif  untuk mempercepat  umur  berbuah  (Antarlina,
2009).
Tingginya  jumlah  jenis Durio yang endemik  di  Kalimantan  menunjukkan bahwa  pulau  ini  merupakan  pusat persebaran Durio terpenting di dunia. Ada sembilan jenis Durio yang dapat dimakan buahnya  ( edible  fruits ).  Sembilan  jenis tersebut, yaitu Durio excelsus (apun), Durio grandiflorus (sukang), Durio  graveolens (tuwala), Durio  kutejensis (lai), Durio lowianus (teruntung), Durio  oxleyanus
(kerantungan), Durio testudinarum
(sekura), Durio  zibethinus (durian)  dan Durio dulcis (lahung) (Uji, 2005). Salah  satu  kerabat  durian  yang merupakan tumbuhan endemik
Kalimantan  yaitu  lahung.  Keberadaannya yang  sulit  dijumpai  bahkan  tergolong hampir  punah,  padahal  jenis  durian  ini memiliki  warna  yang  menarik  dan  rasa yang  sangat  manis,  sehingga  berpotensi untuk dikembangkan di masa mendatang (Maysyarah et al.,  2019).  Daging  buah berwarna putih kekuningan dan meskipun memiliki  daging  buah  yang  tipis,  kadar kemanisan  daging  buahnya  mencapai  32 °Brix  (Aprilianti  &  Sari,  2011).  Lahung ( Durio  dulcis )  sangat  berpotensi  untuk dikembangkan  sebagai  buah  unggulan lokal Kalimantan Selatan. Hal ini tentunya mengantisipasi  pasar  global  dimana sekarang  ini  buah  impor  sudah  cukup banyak  membanjiri  Indonesia  khususnya Kalimantan Selatan. Semakin membiarkan buah impor masuk, maka akan menyebabkan  makin  tergerusnya  produk buah  lokal  yang  sampai  saat  ini  masih
merupakan  buah  hutan  dan  belum dibudidayakan (Susi, 2017).
Lahung memiliki beberapa keistimewaan, yaitu tampilannya berbeda dengan  kerabat  durian  pada  umumnya. Tampilan dari buah ini menarik perhatian karena  memiliki  warna  kulit  berwarna merah gelap dengan ujung duri berwarna hitam.  Buah  ini  memiliki  citra  rasa  yang khas  dan  tidak  berbeda  jauh  dengan durian.  Selain  itu,  buah  ini  juga  memiliki kandungan  gizi  yang  baik  untuk kesehatan.  Susi  (2017)  menyatakan bahwa daging lahung memiliki kandungan alkaloid  harmane,  jika  dalam  jumlah tertentu  akan  mampu  meningkatkan tekanan  darah  sehingga  akan  berefek positif  untuk  penderita  tekanan  darah rendah  namun  sebaliknya  bagi  penderita tekanan darah tinggi.
World  Conservation  Monitoring Centre (WCMC )  dalam Aprilianti  (2019) menyatakan bahwa berdasarkan
International  Union  for  Conservation  of Nature (IUCN) Redlist status  keberadaan lahung di alam adalah rawan atau genting. Kayu lahung banyak dimanfaatkan sebagai bahan bangunan karena kualitasnya yang bagus.  Pohon  dewasa  semakin  sulit ditemukan,  sehingga  menjadi  ancaman pada  jenis  ini.  Habitatnya  juga  semakin terganggu  akibat  degradasi  hutan  untuk pertanian. Sehingga perlu dilakukan upaya pelestarian  plasma  nutfah  khususnya lahung.
Upaya  pelestarian  plasma  nutfah langka memiliki arti penting yaitu sebagai sumber  keberagaman.  Tujuan  dari pelestarian  plasma  nutfah  lahung  yaitu untuk menyediakan sumber genetik yang luas dan dapat mencegah atau menghindari kerusakan serta kepunahan. Plasma  nutfah  juga  dapat  dimanfaatkan untuk  meningkatkan  kualitas  tanaman sehingga  di  masa  depan  plasma  nutfah lahung  dapat  berperan  penting  dalam upaya  peningkatan  tersebut.  Selain  itu, agar kekayaan keanekaragaman jenis dan plasma  nutfahnya  terselamatkan  dan dapat dimanfaatkan secara optimal.
Ding et al.  (2015)  menyatakan bahwa tanaman durian dapat diperbanyak dengan cara generatif (biji) atau vegetatif (okulasi  maupun  sambung  pucuk).
Perbanyakan tanaman
secara konvensional  seringkali  tidak  efektif karena  dapat  merusak  pohon  induk. Sugiyarto  dan  Kuswandi  (2013)  juga berpendapat  bahwa salah  satu  hambatan dalam  budidaya  tanaman  durian  adalah penyediaan bibit yang unggul karena saat ini  dalam  penyediaan  bibit  diambil  dari pohon  induk  dan  dilakukan  secara konvensional.  Teknik  kultur  jaringan merupakan  teknik  yang  tepat  untuk memperoleh  bibit  yang  identik  dengan tanaman  induk  dan  dalam  waktu  yang singkat.
Gunawan (1995) menyatakan bahwa kultur jaringan adalah suatu upaya mengisolasi
bagian-bagian tanaman
(protoplasma,  sel,  jaringan,  organ), kemudian dikulturkan pada nutrisi buatan serta  di  bawah  kondisi  lingkungan  yang terkendali sehingga bagian-bagian tanaman  tersebut  dapat  beregenerasi menjadi  tanaman  lengkap  kembali. Mastuti (2017) mengatakan bagian-bagian tanaman  baik  sel  maupun  jaringan  yang akan  ditumbuhkan  pada  kultur  jaringan disebut  dengan  eksplan.  Kebutuhan eksplan  dalam  ukuran  kecil  tidak  akan mengganggu keberadaan tumbuhan induknya.  Hal  ini  sangat  berarti  bagi tumbuhan langka untuk menjaga kelestariannya.
Salah  satu  faktor  yang  perlu diperhatikan dalam kultur jaringan adalah penggunaan eksplan. Eksplan merupakan penentu  keberhasilan  dalam  kultur jaringan. Bagian tumbuhan yang digunakan  sebagai  eksplan  adalah  daun. Alasan  penggunaan  daun  dibandingkan dengan  eksplan  lain  yaitu  karena ketersediaan  daun  yang  melimpah  pada bahan induknya (Budiarti, 2017).
Prinsip kerja dalam kultur jaringan adalah  dalam  kondisi  steril  (aseptik). Semua kegiatan dilakukan secara aseptik, baik  bahan  maupun  alat  yang  digunakan (Rahmadi et al.,  2020).  Hal  ini  harus dilakukan untuk meminimalisir keberadaan mikroba penyebab kontaminasi yang menjadi faktor pembatas  dalam  keberhasilan  kultur jaringan. Salah satu penyebab kontaminasi adalah  sumber  kontaminan  hidup  yang
melekat  pada  permukaan  eksplan  dan
terbawa  saat  pengambilan  eksplan  dari lapangan. Pencegahan terhadap kontaminasi  dapat  dilakukan  dengan menggunakan  metode  sterilisasi  yang tepat  (Handayani et  al. ,  2018).  Sterilisasi merupakan  hal  yang  sangat  wajib dilakukan  dalam  berbagai  rangkaian kegiatan  kultur in  vitro .  Sterilisasi  juga sangat  menentukan  keberhasilan  dalam perbanyakan tanaman melalui teknik ini.
Sterilisasi  bahan  kultur  dapat dilakukan  dengan  berbagai  cara  kimiawi maupun secara mekanik (pemanasan atau pembakaran  pada  suhu  tertentu).  Bahan sterilan yang sering digunakan
diantaranya  deterjen,  clorox  atau  NaOCl, tween  80,  bakterisida  dan  fungisida (Armila et al., 2014). Sterilisasi tunas muda durian  Kamajaya  dengan  menggunakan air mengalir, perendaman dalam detergen selama  10  menit,  perendaman  dalam fungisida  selama  10  menit,  perendaman dalam  clorox  20%  +  surfaktan  poly- sorbate 3 tetes per liter selama 20 menit, perendaman dalam clorox 10% selama 10 menit,  serta  perendaman  dalam  HgCl 2
0,1% selama 1 menit memiliki persentase kontaminasi  terendah  yaitu  20%  dan persentase  hidup  tertinggi  yaitu  80%
(Rahmadi et al., 2020).
Tanaman  lahung  ini  sudah  jarang sekali  ditemui  di  hutan.  Masyarakat  pun tidak ada yang membudidayakan sehingga keberadaan  pohon  ini  terancam  punah. Alasan inilah yang membuat penelitian ini
penting  untuk  dilakukan,  agar  plasma nutfah  tanaman  endemik  Kalimantan (khususnya  lahung)  tidak  punah.  Maka dari  itu  perlu  adanya  upaya  pelestarian terhadap  tanaman  ini.  Jenis  perbanyakan yang dipilih adalah kultur jaringan dengan menggunakan eksplan daun. Lalu, karena ini  baru  pertama  kali  dilakukan  maka perlu diteliti prosedur sterilisasinya guna mendapat  bahan  sterilan  yang  tepat. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui teknik  sterilisasi  yang  terbaik  terhadap eksplan  daun  lahung  pada  media  MS secara in vitro .

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  ini  dilaksanakan  di Laboratorium  Kultur  Jaringan  Tanaman Jurusan  Budidaya  Pertanian  Fakultas
Pertanian Universitas Lambung
Mangkurat  Kota  Banjarbaru  dari  bulan Desember 2021 sampai Januari 2022.
Bahan  yang  digunakan  adalah eksplan  lahung,  media  (Murahige  dan Skoog) MS, tween 20, alkohol 70%, NaOCl, fungisida,  bakterisida,  H 2 O 2 ,  HgCl 2 ,  zat pengatur tumbuh (ZPT) 2,4-D ( dichlorophenoxyacetic acid ) dan aquades.
Alat  yang  digunakan  adalah  neraca analitik, Erlenmeyer, labu ukur, gelas ukur, pipet,  botol  kultur, aluminium  foil , hot plate dan stirrer magnetic , autoklaf, oven, laminar  air  flow ,  rak  kultur,  lampu,  alat tanam, shaker dan kertas lakmus.
Pelaksanaan  penelitian  meliputi sterilisasi  alat,  pembuatan  larutan  stok,
pembuatan media, sterilisasi aquades dan media,  sterilisasi laminar  air  fiow (LAF),
sterilisasi eksplan daun lahung, penanaman eksplan dan pemeliharaan. Rancangan penelitian yang digunakan adalah rancangan acak kelompok  satu  faktor.  Perlakuan  dalam percobaan  ini  adalah  teknik  sterilisasi yang terdiri dari 6 taraf yaitu: NaOCl 1%, alkohol  70%  (s 1 );  fungisida,  NaOCl  1%, alkohol  70%  (s 2 );  bakterisida,  NaOCl  1%, alkohol  70%  (s 3 );  fungisida,  bakterisida,
NaOCl  1%,  alkohol  70%  (s 4 );  fungisida, bakterisida, NaOCl 1%, alkohol 70%, HgCl 2
0,1% (s 5 ) dan fungisida, bakterisida, NaOCl 1%, alkohol 70%, HgCl 2 0,1%, H 2 O 2 17,6%
(s 6 ).  Fungisida  yang  digunakan  berbahan
aktif  Mankozeb  80%  sedangkan  bahan aktif  bakterisida  yang  digunakan  adalah Streptomisin Sulfat 20%. Satuan percobaan  dikelompokkan  berdasarkan posisi daun pada buku yang terdapat pada cabang,  sehingga  terdapat  24  satuan percobaan.  Setiap  satuan  percobaan terdiri  dari  5  botol  tanam  sehingga keseluruhan berjumlah 120 botol percobaan.  Variabel  yang  diamati  adalah waktu  muncul  kontaminasi  (HST), persentase  kontaminasi  (%),  persentase browning (%),  persentase  eksplan  hidup
(%),  waktu  muncul  kalus  (HST),  warna kalus dan tekstur kalus.
Analisis data yang digunakan adalah rancangan  acak  kelompok  (RAK)  satu faktor.  Data  yang  diperoleh  dari  hasil
pengamatan diuji kehomogenannya dengan  uji  Bartlett  untuk  mengetahui apakah data homogen atau tidak. Jika data homogen  maka  dilakukan  analisis  ragam (ANOVA) pada taraf nyata 5. Namun, jika data tidak homogen, maka perlu dilakukan transformasi data. Apabila analisis ragam berpengaruh  nyata,  dilakukan  uji  Beda Nyata  Jujur  (BNJ)  pada  taraf  nyata  5%. Pengujian statistik menggunakan software Minitab 17. Data hasil pengamatan warna kalus  dan  tekstur  kalus  dianalisis menggunakan  metode  deskriptif  untuk menggambarkan dan menjelaskan kondisi eksplan  daun  lahung  setelah  diberi perlakuan dan ZPT.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Waktu Muncul Kontaminasi
Rata-rata waktu muncul
kontaminasi  pada  eksplan  daun  lahung dapat dilihat pada Gambar 1. Berdasarkan Gambar  1,  waktu  rata-rata  muncul kontaminasi  pada  eksplan  daun  lahung yang  mendapatkan  perlakuan  berbagai macam  sterilan  adalah  1,15  HST  (NaOCl, alkohol  70%),  1  HST  (fungisida,  NaOCl, alkohol 70%), 1,8 HST (bakterisida, NaOCl, alkohol  70%),  1,85  HST  (fungisida, bakterisida, NaOCl, alkohol 70%), 0,8 HST (fungisida,  bakterisida,  NaOCl,  alkohol 70%, HgCl 2 0,1%) dan 1,35 HST (fungisida, bakterisida,  NaOCl,  alkohol  70%,  HgCl 2 0,1%, H 2 O 2 17,6%).
Gambar 1 . Waktu rata-rata muncul kontaminasi pada eksplan daun lahung
Kontaminan  dalam  penelitian  ini awal mula muncul umumnya pada bagian eksplannya.  Waktu  muncul  kontaminasi yang  cepat  diduga  akibat  adanya  faktor eksternal  antara  lain  mikroorganisme yang  ada  pada  permukaan  eksplan. Kontaminasi  akibat  faktor  eksternal tersebut  menyebabkan  rata-rata  waktu muncul  kontaminasi  pada  eksplan  daun lahung  di  bawah  7  HST.  Sejalan  dengan penelitian Joko & Arwiyanto (2021) dalam Handayani et al. (2022) bahwa kontaminasi  yang  muncul  pada  eksplan kurang  dari  tujuh  hari  termasuk  dalam jenis  kontaminasi  eksternal.  Sedangkan kontaminasi yang muncul lebih dari tujuh hari  hingga  satu  bulan  berikutnya termasuk jenis kontaminasi internal yang bergabung di dalam jaringan tanaman.
Tidak berpengaruhnya teknik sterilisasi  disebabkan  oleh  kondisi  dari eksplan  daun  lahung  tersebut  yaitu  pada
permukaan  bawah  daun  dilapisi  bulu halus  dan  bersisik.  Sejalan  dengan penelitian Widhiastuti et al. (2018) bahwa kondisi  pada  permukaan  eksplan  daun durian  merah  terdapat  bulu-bulu  halus (pilosis) pada lapisan abaksial.
Terdapatnya  pilosis  pada  daun  durian merah  inilah  yang  menyebabkan  eksplan lebih sulit dilakukan sterilisasi.

## Persentase Kontaminasi
Berdasarkan  hasil  analisis  ragam menunjukkan  bahwa  perlakuan  teknik sterilisasi terhadap persentase kontaminasi  tidak  berpengaruh  nyata. Hasil  rata-rata  persentase  kontaminasi pada eksplan daun lahung 1-4 MST dapat dilihat pada Tabel 1.
Rata-rata  persentase  kontaminasi pada  eksplan  daun  lahung  adalah  5%  (1 MST) dan 11,66% (2-4 MST). Eksplan yang terkontaminasi  dapat  disebabkan  oleh
1.15 1,00 1.80 1.85 0.80 1.35 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.6 1.8 2 s1 s2 s3 s4 s5 s6 W aktu Mu nc ul K on tam inas i ( HS T ) Perlakuan Keterangan: s 1 : NaOCl, alkohol 70% s 2 : fungisida, NaOCl, alkohol 70%
s 3 : bakterisida, NaOCl, alkohol 70%
s 4 : fungisida, bakterisida, NaOCl, alkohol 70%
s 5 : fungisida, bakterisida, NaOCl, alkohol 70%, HgCl 2 0,1% s 6 : fungisida, bakterisida, NaOCl alkohol 70%, HgCl 2 0,1%, H 2 O 2 17,6% s s 2 s 4 s 5 s 3 s 6
fungi  atau  bakteri.  Kontaminasi  yang disebabkan  oleh  fungi  ditandai  dengan munculnya
benang-benang halus berwarna putih. Benang-benang halus ini lama  kelamaan  akan  menyebar  dan menutupi  seluruh  permukaan  eksplan serta  media.  Jamur  yang  muncul  pada eksplan  daun  lahung  berwarna  putih,
kuning, hitam. Kontaminasi yang disebabkan  bakteri  ditandai  dengan terbentuknya cairan atau lendir berwarna putih  atau  kekuningan  pada  bagian permukaan  media  yang  sedikit  demi sedikit  akan  menyebar  ke  seluruh permukaan.
Tabel 1 . Rata-rata persentase kontaminasi (%) pada eksplan daun lahung 1-4 MST Perlakuan 1 MST 2 MST 3 MST 4 MST NaOCl, alkohol 70% 5,00 15,00 15,00 15,00 fungisida, NaOCl, alkohol 70% 0,00 0,00 0,00 0,00 bakterisida, NaOCl, alkohol 70% 20,00 25,00 25,00 25,00 fungisida, bakterisida, NaOCl, alkohol 70% 5,00 10,00 10,00 10,00 fungisida, bakterisida, NaOCl, alkohol 70%, HgCl 2 0,1% 0,00 10,00 10,00 10,00 fungisida, bakterisida, NaOCl, alkohol 70%, HgCl 2 0,1%,
H 2 O 2 17,6% 0,00 10,00 10,00 10,00 Rata-Rata 5,00 11,66 11,66 11,66
Seluruh  teknik  sterilisasi  memiliki kekuatan  yang  sama  dan  sudah  mampu menekan kontaminasi pada eksplan daun lahung  walaupun  teknik  sterilisasi  tidak memberikan  pengaruh  nyata  terhadap variabel  persentase  kontaminasi.  Hal  ini diduga  karena  stomata  dan  jaringan epidermis  yang  terdapat  pada  daun memungkinkan  fungi  dan  bakteri  masuk ke  dalam  jaringan  yang  ditunjukkan dengan  kisaran  persentase  kontaminasi yang  tergolong  rendah,  yaitu  5-11,66% dengan  kontaminasi  jamur  yang  lebih besar daripada bakteri. Kontaminasi oleh fungi sebesar 9,16% dan kontaminasi oleh bakteri sebesar 8,33%. Wati et al. (2020) yang  memperoleh  tingkat  kontaminasi pada  eksplan Begonia  bimaensis akibat fungi  juga  lebih  banyak  yaitu  sebesar
77,78%.  Sedangkan  kontaminasi  akibat bakteri sebesar 18,51%.
Persentasi Browning Hasil analisis ragam juga menunjukkan  bahwa  perlakuan  teknik sterilisasi  terhadap  persentase browning tidak  berpengaruh  nyata.  Hasil  rata-rata persentase browning pada  eksplan  daun lahung 1-4 MST dapat dilihat pada Tabel 2.
Penyebab  kematian  eskplan  selain fungi  dan  bakteri,  juga  dapat  disebabkan oleh browning .  Rata-rata  persentase browning pada  eksplan  daun  lahung adalah 27,50% (1 MST), 77,50% (2 MST), 95,83%  (3  MST)  dan  100,00%  (4  MST).
Teknik  sterilisasi  yang  digunakan  tidak memberikan  pengaruh  terhadap  eksplan daun  lahung  pada  variabel  persentase browning .  Hal  ini  diduga  akibat  adanya
senyawa  fenol  yang  terkandung  pada eksplan  daun  lahung  dan  menyebabkan kenaikan persentase browning pada setiap minggunya.  Hal  ini  dapat  terlihat  pada kondisi  eksplan  yang  semakin  hari
semakin  menurun  yang  ditandai  dengan warna eksplan yang mulai menguning dan berakhir kecoklatan.
Tabel 2 . Rata-rata persentase browning (%) pada eksplan daun lahung 1-4 MST Perlakuan 1 MST 2 MST 3 MST 4 MST NaOCl, alkohol 70% 15,00 70,00 95,00 100,00 fungisida, NaOCl, alkohol 70% 45,00 85,00 100,00 100,00 bakterisida, NaOCl, alkohol 70% 45,00 80,00 90,00 100,00 fungisida, bakterisida, NaOCl, alkohol 70% 25,00 60,00 100,00 100,00 fungisida, bakterisida, NaOCl, alkohol 70%, HgCl 2 0,1% 5,00 85,00 100,00 100,00 fungisida, bakterisida, NaOCl, alkohol 70%, HgCl 2 0,1%,
H 2 O 2 17,6% 30,00 85,00 90,00 100,00 Rata-Rata 27,50 77,50 95,83 100,00 Sejalan dengan penelitian Queiroz et
al.  (2008) dalam Adriani et al.  (2022) bahwa  munculnya browning dikarenakan terdapatnya  enzim  polifenol  oksidase yang  mengakibatkan  terjadinya  oksidasi senyawa  fenol  menjadi  quinon  yang memproduksi  pigmen  berwarna  coklat ketika  jaringan  dilukai  akibat  adanya proses pemotongan atau pengirisan pada eksplan. Hutami (2008) juga mengatakan bahwa browning biasanya  terjadi  pada tanaman  hutan  dan  berkayu,  terutama apabila  eksplan  diperoleh  dari  pohon dewasa.  Pertumbuhan  dapat  terhambat pada  beberapa  spesies  tanaman  yang  di dalamnya  mengandung  senyawa  tanin maupun hidroksifenol dengan konsentrasi tinggi.  Hal  ini  juga  didukung  oleh penelitian Imanudin (2016) yang
menyatakan  bahwa  persentase  eksplan yang  mengalami  pencoklatan  ( browning ) pada perlakuan BAP 0,5 mg L-1 = NAA 0,1
mg L-1 + k (air rebusan kentang) 100 mL L -1 mencapai  60%  sampai  4  MST  pada penelitian induksi tunas jati emas.
Beberapa  cara  telah  dilakukan untuk  mengurangi  resiko browning pada eksplan yaitu dengan menambahkan poly vinil pyrrolidone (PVP) 0,2 g L -1 pada media guna  mengurangi  resiko  terjadinya masalah browning pada saat pertumbuhan eksplan selama dalam botol kultur. Selain itu, setelah penanaman dilakukan penggelapan  selama  seminggu  dengan menggunakan kain hitam guna mengurangi browning . Hal
ini menyesuaikan  penelitian  Tarampak et al.
(2019)  yang  menyatakan  bahwa  eksplan yang  disimpan  dalam  ruang  inkubasi dengan  kondisi  gelap  selama  7  HST memiliki  rata-rata  tingkat  keberhasilan mencegah browning yaitu 56,25% dibandingkan  eksplan  yang  disimpan dalam  ruang  inkubasi  dengan  kondisi
terang  terang  yaitu  31,25%.  Cara-cara yang telah dilakukan masih belum mampu mengurangi  masalah browning yang terjadi pada eksplan daun lahung.

## Persentase Eksplan Hidup
Berdasarkan  hasil  analisis  ragam menunjukkan  bahwa  perlakuan  teknik sterilisasi  terhadap  persentase  eksplan hidup tidak berpengaruh nyata. Hasil rata- rata  persentase  eksplan  hidup  pada eksplan daun lahung 1-4 MST dapat dilihat pada Tabel 3.
Rata-rata persentase eksplan hidup (%)  daun  lahung  pada  setiap  minggunya yaitu  95,00%  (1  MST),  83,33%  (2  MST), 77,50% (3 MST) dan 68,33% (4 MST). Data tersebut  menunjukkan  bahwa  rata-rata
persentase eksplan hidup (%) mengalami penurunan  setiap  minggu.  Persentase browning dan  persentase  kontaminasi sangat mempengaruhi persentase eksplan hidup.  Tidak  berpengaruhnya  teknik sterilisasi  terhadap  eksplan  daun  lahung diduga  akibat  tingginya  persentase browning yang  terjadi  dan  menyebabkan persentase  eksplan  hidup  mengalami penurunan  di  setiap  minggunya.  Denish (2007)  dalam  penelitiannya  menyatakan bahwa  apabila  pencoklatan  dibiarkan terus-menerus  maka  akan  menyebabkan penghambatan  penyerapan  unsur  hara, sehingga  pertumbuhan  eksplan  akan terhambat  bahkan  dapat  menyebabkan kematian.
Tabel 3 . Rata-rata persentase eksplan hidup (%) pada eksplan daun lahung 1-4 MST Perlakuan 1 MST 2 MST 3 MST 4 MST NaOCl, alkohol 70% 15,00 70,00 95,00 100,00 fungisida, NaOCl, alkohol 70% 45,00 85,00 100,00 100,00 bakterisida, NaOCl, alkohol 70% 45,00 80,00 90,00 100,00 fungisida, bakterisida, NaOCl, alkohol 70% 25,00 60,00 100,00 100,00 fungisida, bakterisida, NaOCl, alkohol 70%, HgCl 2 0,1% 5,00 85,00 100,00 100,00 fungisida, bakterisida, NaOCl, alkohol 70%, HgCl 2 0,1%,
H 2 O 2 17,6% 30,00 85,00 90,00 100,00 Rata-Rata 27,50 77,50 95,83 100,00 Pengamatan terhadap eksplan hidup  dilakukan  dengan  mengamati secara visual berdasarkan kondisi eksplan daun  lahung  dan  warna  yang  diamati selama 28 HST. Eksplan daun lahung yang mengalami browning namun  masih terdapat  beberapa  bagian  yang  terlihat berwarna  hijau  dan  tidak  menunjukkan munculnya  kalus  maka  eksplan  tersebut masih  bisa  dikatakan  hidup.  Menurut
Rodinah et al. (2016) eksplan hidup adalah kondisi dimana eksplan jika dilihat secara visual  menunjukkan  warna  hijau  tidak terkontaminasi, tidak browning dan tidak menunjukkan  perubahan  warna  menuju coklat  kering.  Hal  ini  yang  menyebabkan persentase  eksplan  hidup  pada  eksplan daun lahung masih tergolong tinggi.

## Waktu Muncul Kalus
Rata-rata waktu muncul kalus pada eksplan  daun  lahung  dapat  dilihat  pada Gambar 2. Berdasarkan Gambar 2, waktu rata-rata muncul kalus pada eksplan daun lahung  yang  mendapatkan  perlakuan berbagai macam sterilan adalah 2,65 HST (NaOCl, alkohol 70%), 1,5 HST (fungisida, NaOCl, alkohol 70%), 2,9 HST (bakterisida,
NaOCl,  alkohol  70%)  dan  1,5  HST
(fungisida,  bakterisida,  NaOCl,  alkohol
70%). Sementara pada perlakuan
fungisida + bakterisida + NaOCl + alkohol 70%  +  HgCl 2 0,1%  (s 5 )  dan  fungisida  + bakterisida + NaOCl + alkohol 70% + HgCl 2 0,1%  +  H 2 O 2 17,6%  (s 6 )  tidak  muncul kalus.
Gambar 2 . Waktu rata-rata muncul kalus (HST) pada eksplan daun lahung
Eksplan daun lahung pada penelitian ini mengalami proses
organogenesis  secara  tidak  langsung.  Hal ini ditandai dengan munculnya kalus pada eksplan  yang  telah  dilukai  sebanyak 3,33%.  Munculnya  kalus  dipengaruhi karena adanya penambahan ZPT 2,4-D ke dalam  media  MS.  Rahayu et al.  (2002) menyatakan  bahwa  pembentukan  dan pertumbuhan kalus dipicu karena adanya rangsangan  terhadap  pembelahan  dan
pembesaran sel akibat adanya penambahan 2,4-D dalam media kultur.
Wattimena  (1987)  menyatakan bahwa 2,4-D adalah salah satu ZPT auksin yang  paling  sering  digunakan.  Hal  ini disebabkan karena aktivitasnya yang kuat guna memacu  proses diferensiasi sel dan menjaga  pertumbuhan  kalus.  Senyawa 2,4-D  menunjukkan  aktivitas  yang  lebih kuat  dibanding indole  acetid  acid (IAA) maupun  jenis  auksin  yang  lain.  Aktivitas 2,4-D  yang  kuat  dan  optimum  ini
2.65 1.50 2.90 1.50 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 S1 S2 S3 S4 Wak tu M uncul Ka lus (HS T) Perlakuan Keterangan: s 1 : NaOCl, alkohol 70%
s 2 : fungisida, NaOCl, alkohol 70%
s 3 : bakterisida, NaOCl, alkohol 70%
s 4 : fungisida, bakterisida, NaOCl, alkohol 70%
s 5 : fungisida, bakterisida, NaOCl, alkohol 70%, HgCl 2 0,1% s 6 : fungisida, bakterisida, NaOCl, alkohol 70%, HgCl 2 0,1%, H 2 O 2 17,6%
s 2 s 1
s 4 s 3 s 5 s 6
disebabkan  karena  gugus  karboksil  yang dipecah oleh  karbon  atau  karbon dengan oksigen.  Penggunaan  konsentrasi  2,4-D  1 ppm  pada  penelitian  ini  sudah  mampu memicu  pembentukan  kalus.  Hal  ini didukung  oleh  penelitian  Prabakti et  al .
(2017) yang menyatakan bahwa
pemberian  2,4-D  sebesar  1  ppm  dalam pembentukan  kalus  menghasilkan  nilai persentase  eksplan  terbaik  terhadap induksi kalus kluwek. Arianto et al. (2013) juga menyatakan bahwa konsentrasi 2,4-D 1  ppm  merupakan  konsentrasi  terbaik untuk  menginduksi  kalus  dan  mampu memunculkan  kalus  paling  cepat  pada klon kakao unggul Sulawesi 2.
Pada  media  yang  sama,  hanya perlakuan  s 5 (fungisida  +  bakterisida  + NaOCl + alkohol 70% + HgCl 2 0,1%) dan s 6 (fungisida + bakterisida + NaOCl + alkohol 70%  +  HgCl 2 0,1%  +  H 2 O 2 17,6%)  yang tidak terbentuk kalus pada eksplan. Hal ini diduga  karena  adanya  efek  penggunaan HgCl 2 dan  H 2 O 2 yang  memiliki  sifat  keras atau toksisitas tinggi yang bisa mematikan jaringan pada eksplan. Fauzan et al. (2017) menyatakan  bahwa  penggunaan  HgCl 2 pada  bahan  sterilan  dapat  memberikan pengaruh pada tingkat kerusakan eksplan tunas  samping  jati.  Didukung  juga  oleh penelitian  Tiwari et al.  (2012)  yaitu sterilisasi  pada  tanaman  tebu  dengan menggunakan HgCl 2 0,2% selama 12 menit
mengakibatkan eksplan mengalami browning dan mati pada 4 – 7 HST.

## Warna Kalus
Kalus berdasarkan hasil pengamatan visualisasi pada perlakuan s 1 (NaOCl, alkohol 70%), s 2 (fungisida, NaOCl, alkohol  70%),  s 3 (bakterisida,  NaOCl, alkohol  70%) dan  s 4 (fungisida, bakterisida, NaOCl, alkohol 70%) memiliki warna  yang  sama  yaitu  putih.  Tekstur kalus  pada  eksplan  daun  lahung  dapat dilihat pada Gambar 3.
Gambar 3 . Warna kalus pada eksplan daun lahung
Warna  kalus  merupakan  gambaran visual  dari  suatu  yang  dihasilkan  dari suatu  pembelahan  sel-sel  yang  aktif. Warna  pada  kalus  dapat  berupa  putih, putih  kekuningan,  putih  kehijauan  dan coklat.  Warna  kalus  yang  muncul  pada eksplan daun lahung adalah putih. Warna putih  pada  kalus  menunjukkan  bahwa pertumbuhan  kalus  tersebut  cukup  baik. Mahadi et al.  (2016)  menyatakan  bahwa warna  pada  kalus  dapat  menunjukkan apakah  kalus  tersebut  dapat  tumbuh dengan baik dengan ditandai dengan kalus yang berwarna putih dan kuning.

## Tekstur Kalus
Berdasarkan  hasil  tahap  subkultur pada  eksplan  daun  lahung,  kalus  yang muncul pada perlakuan s 1 (NaOCl, alkohol 70%), s 2 (fungisida, NaOCl, alkohol 70%),
s 3 (bakterisida, NaOCl, alkohol 70%) dan s 4
(fungisida,  bakterisida,  NaOCl,  alkohol 70%) memiliki  tekstur  yang  sama  yaitu remah.  Tekstur  kalus  pada  eksplan  daun lahung dapat dilihat pada Gambar 4.
Gambar 4 . Tekstur kalus pada eksplan daun lahung Berdasarkan penelitian ini,
pemberian  2,4-D  dengan  konsentrasi  1 ppm menghasilkan kalus yang bertekstur remah  pada  beberapa  perlakuan.  Pierik (1987) dalam Purba et al.  (2017) menyatakan  bahwa  jenis  tanaman  yang digunakan,  komposisi  hara  pada  media, keadaan  lingkungan  dan  ZPT  dapat mempengaruhi  tekstur  kalus  yang terbentuk.  Didukung  oleh  penelitian Rasud  &  Bustaman  (2020)  bahwa pemberian  2,4-D  pada  media  dengan konsentrasi  0,75  ppm  lebih  cepat menghasilkan  kalus  yang  bertekstur remah  dibandingkan  dengan  NAA  pada kultur daun cengkeh. Sejalan juga dengan
penelitian  Silvina et al.  (2021)  dimana kalus  remah  pada  kultur  daun  binahong dominan  dihasilkan  dari  pemberian  0,5 ppm, 1 ppm dan 2 ppm 2,4-D.
Tekstur  kalus  remah  memiliki struktur-struktur  sel  yang  renggang  dan mudah  mengalami  pembelahan.  Menurut Santoso & Nursandi (2003), kalus bertipe remah  struktur-struktur  selnya  renggang dan  mudah  rapuh.  Sejalan  dengan penelitian  Mahadi et al.  (2016)  bahwa tekstur kalus remah mengalami pembelahan  sel  yang  cepat  daripada tekstur kalus yang kompak. Arianto et al.
(2013)  dalam  penelitiannya  menyatakan bahwa  tekstur  kalus  remah  memiliki kualitas  yang  baik.  Hal  ini  disebabkan karena  kalus  tipe  remah  mudah  dipisah untuk menjadi sel-sel tunggal. Rosmaina et al. (2015) juga menyatakan bahwa tekstur remah  mudah  dilakukan  pemisahan menjadi  sel-sel  tunggal  pada  kultur suspensi, selain itu juga dapat meningkatkan aerasi oksigen antar sel.

## KESIMPULAN
Teknik sterilisasi tidak berpengaruh nyata pada seluruh  variabel pengamatan. Teknik  sterilisasi  yang  efektif  untuk eksplan  daun  lahung  adalah  fungisida  + NaOCl  +  alkohol  70%  dilihat  dari  waktu muncul kalus yang cepat, persentase hidup yang tinggi dan persentase browning yang rendah.

## DAFTAR PUSTAKA
Adriani, I.A.S.D., Dwiyani, R. & Darmawati, I.A.P.  (2022).  Stimulasi  tunas eksplan  kalus  cendana  ( Santalum album L.)  secara in  vitro dengan  2- isopentenyladenine  (2-iP). Jurnal Nandur , 2 (1), 41-51. Retrieved from:
https://ojs.unud.ac.id/index.php/n andur/article/view/83217 . Antarlina,  S.S.  (2009).  Identifikasi  sifat fisik  dan  kimia  buah-buahan  lokal Kalimantan. Buletin  Plasma  Nutfah , 15(2),  80-90.  Retrieved  from: https://doi.org/10.21082/blpn.v11
5n2.2009.p80-90 .
Aprilianti,  P.  (2019).  Konservasi ex-situ Durio spp.  di  Kebun  Raya  Bogor (Jawa  Barat)  dan  Kebun  Raya Katingan  (Kalimantan  Tengah). Prosiding Seminar Nasional Masyarakat Biodiversitas Indonesia 5(1),  123-128.  Retrieved  from: https://doi.org/10.13057/psnmbi/ m050123 . Aprilianti, P. & Sari, R. (2011). Keragaman tumbuhan  buah  di  Kabupaten Malinau – Kalimantan  Timur. Prosiding  Seminar  Nasional  Biologi Perspektif Biologi dalam Pengelolaan  Sumber  Daya  Hayati. Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta. Retrieved from: https://hdl.handle.net/20.500.1269 0/RIN/OVL1I8 .
Arianto, Basri, Z. & Bustamil, M.U. (2013). Induksi  kalus  dua  klon  kakao ( Theobroma  cacao L.)  unggul Sulawesi pada berbagai konsentrasi 2,4- dichlorophenoxy  acetic  acid secara in vitro . E- Jurnal Agrotekbis , 1(3),  211-220.  Retrieved  from: https://www.neliti.com/id/publica tions/249211/induksi-kalus-dua- klon-kakao-theobroma-cacao-l- unggul-sulawesi-pada-berbagai- kon . Armila,  N.K.P.,  Bustami,  M.U.  &  Basri,  Z.
(2014). Sterilisasi dan induksi kalus bawang merah ( Allium ascalonicum L.) lokal Palu secara in vitro . E- Jurnal Agrotekbis , 2(2), 129-137. Retrieved from: https://www.neliti.com/id/publica
tions/244741/sterilisasi-dan- induksi-kalus-bawang-merah- allium-ascalonicum-l-lokal-palu- secar . Budiarti,  C.  (2017). Pengaruh  teknik sterilisasi  dan  zat  pengatur  tumbuh
2,4-D (2,4-Diklorofenoksiasetat), BAP (Benzil  Amino  Purin)  terhadap induksi kalus nilam . Thesis . Universitas  Islam  Negeri  Sunan Gunung  Djati.  Retrieved  from: https://etheses.uinsgd.ac.id/7148/ . Denish, A. (2007). Percobaan perbanyakan vegetatif  Kemaitan  ( Lunasia  amara Blanco)  melalui  kultur  jaringan. Institut Pertanian Bogor.
Ding,  T.,  Sutejo,  H.  &  Patah,  A.  (2015). Pengaruh  berat  benih  dan  media tanam terhadap pertumbuhan vegetatif  bibit  durian  ( Durio zibethinus Murr.). Jurnal Agrifor, 14(2),  261-268.  Retrieved from:
https://core.ac.uk/download/pdf/2 90089485.pdf . Fauzan,  Y.S.A.,  Supriyanto  &  Tajuddin,  T. (2017).  Efektivitas  merkuri  klorida (HgCl 2 )  pada  sterilisasi  tunas samping  jati  ( Tectona  grandis ) in vitro . Jurnal Bioteknologi & Biosains Indonesia ,  4(2),  78-84).  Retrieved from: https://doi.org/10.29122/jbbi.v4i2 .2540 . Gunawan,  L.W.  (1995). Teknik  kultur  in vitro  dalam  hortikultura .  Penebar Swadaya. Jakarta.
Handayani,  A.T.,  Sandra,  E.  &  Faizah,  H. (2022). Optimasi sterilisasi eksplan daun tanaman lidah mertua ( Sansevieria sp.) pada kultur in vitro .
Jurnal  Ilmiah  Biologi ,  10(1),  109- 124. Retrieved from: https://doi.org/10.33394/bioscient ist.v10i1.4808 .
Handayani, R.S., Ismayadi, Sayuti, M. & Cici, R.H.  (2018).  Pengaruh  bahan sterilan etanol dan  merkuri klorida terhadap  pertumbuhan  eksplan tunas  durian  ( Durio  zibethinus ) secara in  vitro . Prosiding  Forum Komunikasi Perguruan Tinggi Pertanian Indonesia (FKPTPI) . Universitas  Syiah  Kuala.  Retrieved
from:
http://fkptpi.usk.ac.id/images/PDF %20PROSIDING/PDF/PDF%20AGR OTEKNOLOGI/271-276.pdf . Hutami.  (2008).  Masalah  pencoklatan pada kultur jaringan. Jurnal
AgroBiogen ,  4(2),  83-88.  Retrieved from:
https://media.neliti.com/media/pu blications/75163-ID-ulasan- masalah-pencoklatan-pada-kultur- j.pdf . Imanudin. (2016). Pengaruh penambahan air  rebusan  kentang  (Solanum tuberosum L.), BAP  dan  NAA terhadap  induksi  tunas  jati  emas (Cordia  subcordata)  secara  in  vitro . Universitas Muhammadiyah Yogyakarta. Retrieved from: http://repository.umy.ac.id/handle /123456789/6525 .
Mahadi,  I.,  Syafi’,  I.W.  &  Sari,  Y.  (2016).
Induksi  kalus  jeruk  kasturi  ( Citrus macrocarpa ) menggunakan hormon
2,4-D  dan  BAP  dengan  metode in vitro . Jurnal Ilmu Pertanian Indonesia ,  21(2),  84-89.  Retrieved from: https://doi.org/10.18343/jipi.21.2.
84 . Mastuti.  (2017). Dasar-dasar  kultur jaringan tumbuhan . UB Press. Maysyarah,  Rudiyansyah  &  Alimuddin, A.H.  (2019).  Karakteristik  senyawa triterpenoid dari fraksi diklorometana  kulit  batang  durian merah  ( Durio dulcis Becc.). Jurnal Kimia  Khatulistiwa ,  8(2),  22-27. Retrieved from: https://jurnal.untan.ac.id/index.ph p/jkkmipa/article/view/36573 .
Prabakti,  D.H.,  Restanto,  D.P.  &  Avivi,  S.
(2017).  Pengaruh  macam  eksplan dan  konsentrasi  2,4-D  terhadap induksi  kalus  kluwek  ( Pangium edule Reinw.) in vitro . Jurnal Gontor Agrotech  Science ,  3(2),  39-58. Retrieved from: https://doi.org/10.21111/agrotech .v3i2.930 . Priyanti. (2012). Keanekaragaman tumbuhan Durio spp.  menurut perspektif  lokal  masyarakat  Dayak.
Jurnal  Widya .  29(319),  46-52.
Retrieved
from:
https://www.neliti.com/id/publica tions/218678/keanekaragaman- tumbuhan-durio-spp-menurut- perspektif-lokal-masyarakat-dayak . Purba,  R.V.,  Yuswanti,  H.  &  Astawa,  I.N.G. (2017). Induksi kalus eksplan daun tanaman  anggur  ( Vitis  vinivera L.) dengan aplikasi 2,4-D secara in vitro . E-  Jurnal  Agroekoteknologi ,  6(2), 218-228. Retrieved from: https://ojs.unud.ac.id/index.php/JA T/article/view/30895 . Rahayu,  B.,  Solichatun  &  Anggarwulan,  E. (2002). Pengaruh asam 2,4- diklorofenoksiasetat (2,4-D) terhadap pembentukan dan pertumbuhan kalus serta
kandungan  flavonoid  kultur  kalus Acalypha indica L. Jurnal Biofarmasi ,
1(1),1-6. Retrieved from: https://doi.org/10.13057/biofar/f0 10101 . Rahmadi,  A.,  Wicaksana,  N.,  Nurhadi,  B., Suminar, E., Pakki, S.R.T. & Mubarok, S. (2020). Optimasi teknik sterilisasi dan  induksi  tunas  tanaman  durian ( Durio zibethinus Murr.) ‘Kamajaya’ lokal  Cimahi  secara in  vitro . Jurnal Kultivasi , 19(1), 1083-1088. Retrieved from: https://doi.org/10/24198/kultivas i.v19i1.24559 .
Rasud,  Y.  &  Bustaman.  (2020).  Induksi kalus  secara in  vitro dari  daun cengkeh  ( Syizigium  aromaticum L.) dalam  media  dengan  berbagai konsentrasi  auksin. Jurnal  Ilmu Pertanian  Indonesia ( JIPI ),  25  (1),
67 − 72. Retrieved from: https://doi.org/10.18343/jipi.25.1. 67 .
Rodinah, Razie, F., Naemah, D. & Fitriani, A. (2016). Respon bahan sterilan pada eksplan  jelutung  rawa  ( Dyra  lowii ).
Jurnal  Hutan  Tropis ,  4(3),  240-245.
Retrieved from: https://doi.org/10.20527/jht.v4i3. 3617 .
Rosmaina,  Z.,  Sutejo,  P.,  Ulfiatun  & Maisupratina. (2015). Induksi kalus pasak  bumi  ( Eurycoma  longifolia Jack)  melalui  eksplan  daun  dan petiol. Jurnal  Agroteknologi ,  6(1),
33-40. Retrieved from: https://doi.org/10.24014/ja.v6i1.1 567. Santoso, U., & F. Nursandi. (2003). Kultur jaringan tanaman . Malang: Universitas Muhammadiyah Malang
Press.
Sastrapradja,  S.D.  &  Rifai,  M.A.  (1989). Mengenal  Sumber  Pangan  Nabati dan  Sumber  Plasma  Nutfahnya . Pusat Penelitian dan Pengembangan Bioteknologi. Silvina,  F,  Isnaini  &  Ningsih,  W.  (2021). Induksi kalus daun binahong merah ( Basella rubra L.) dengan pemberian 2,4-d dan kinetin. Jurnal Agro , 8(2),
274-285. Retrieved from: https://doi.org/10.15575/14273 .
Susi.  2017.  Identifikasi  komponen  kimia dan fitokomia lahung ( Durio dulcis ) indigenous  Kalimantan. Jurnal  Al
Ulum Sains dan Teknologi , 3(1), 49- 56. Retrieved from: https://doi.org/10.31602/ajst.v3i1. 993 . Sugiyarto,  L.  &  Kuswandi,  P.C.  (2013).
Eksplorasi  metode  sterilisasi  dan macam  media  untuk  perbanyakan durian  ( Durio  zibethinus )  secara in vitro . Jurnal Sains Dasar , 2(1), 20-24. Retrieved from:
https://doi.org/10.21831/jsd.v2i1. 2374 . Tarampak, T.C., Sulistiawati & Nirmala, R. (2019). Metode mengatasi browning pada  eksplan  ulin  ( Eusideroxylon zwageri )  untuk  inisiasi  regenerasi secara in vitro . Jurnal Agroekoteknologi  Tropika  Lembab ,
1(2),  106-113.  Retrieved  from: https://doi.org/10.35941/jatl.1.2.2 019.1972.106-113 . Tiwari, A.K., Tripathi, S., Lal, M. & Mishra, S. (2012). Screening of some chemical disinfectans  for  media  sterilization during in vitro micropropagation of sugarcane. International  Journal  of Sugar  Crops  and  Related  Industry , 14(4),  364-369.  Retrieved  from: https://doi.org/10.1007/s12355- 012-0178-5 . Uji, T. (2005). Keanekaragaman jenis dan sumber plasma  nutfah durio ( Durio spp.)  di  Indonesia. Buletin  Plasma
Nutfah ,  11(1),  28-33.  Retrieved from: https://media.neliti.com/media/pu blications/53839-none- 9d6ff859.pdf . Wati,  T.,  Astarini,  I.A.,  Pharmawati,  M.  & Hendriyani, E. (2020). Perbanyakan Begonia  bimaensis Undaharta  & Ardaka  dengan  teknik  kultur jaringan. Jurnal  Metamorfosa ,  7(1), 112-122. Retrieved from: https://doi.org/10.24843/metamor fosa.2020.v07.i01.p15 . Wattimena.  G.A.  (1987).  Zat  pengatur tumbuh  tanaman.  Laboratorium Kultur  Jaringan  Tanaman,  PAU
Bioteknologi  IPB  &  Ditjen  Dikti Departemen Pendidikan dan Kebudayaan. Bogor. Widhiastuti, Yusmia, Bariyyah, K.,
Isitianingrum,  P.,  Hartatik,  S.  &
Restanto,  D.P.  (2018).  Metode sterilisasi  eksplan  durian  merah banyuwangi secara in-vitro. Prosiding  Seminar  Nasional  PPM . Retrieved from: https://scholar.google.co.id/citatio ns?view_op=view_citation&hl=id&u ser=LXt7kMIAAAAJ&citation_for_vi ew=LXt7kMIAAAAJ:9yKSN-GCB0IC .