## CURRENT BIOCHEMISTRY
ISSN: 2355-7877 e-ISSN: 2355-7931 Journal homepage: http://journal.ipb.ac.id/index.php/cbj Journal E-mail: current.biochemistry@gmail.com

## Potency Evaluation of Moringa Leaf Extract Nanoparticles as a Bioactive Candidate of Eco-Friendly Antifouling Paint
(Evaluasi Potensi Nanopatikel Ekstrak Daun Kelor ( Moringa oleifera ) sebagai Kandidat Bioaktif pada Cat Antifouling Ramah Lingkungan)
Laksmi Ambarsari 1* , Riksa Nur Wahyuni 1 , Agung Isnanto 1 , Rifany Fairuz Aqilah 1 ,
1 Department of Biochemistry, IPB University, Bogor, 16680, Indonesia
Received: 20 July 2019 ; Accepted: 20 November 2019
Corresponding author : Dr. Laksmi Ambarsari, MS; Departemen Biokimia, Jl.Tanjung Grdung Departemen Biokimia, Kampus IPB Dramaga; e-mail: laksmi@apps.ipb.ac.id

## ABSTRACT
Biofouling has become a serious problem for maritime industry players. Efforts have been made to overcome  the  biofouling problem through the  use  of TBT-SPC  paint  which  is  a  heavy  metal  group.  A  new alternative to replace the antifouling material is the flavonoid of moringa leaf (Moringa oleifera). This study aims  to  analyze  the  potential  of  nanoparticles  of  moringa  leaf  to  be  a  bioactive  candidate  in  antifouling paint.  The  30.12  g extraction  of  moringa leaf  was  done  by  the  maceration  method  using ethanol  96%  and 9.32%  yield  was  obtained.  Flavonoid  was  isolated  using  the  liquid-liquid  extraction  method  and  60.11% yield  was  obtained;  then  encapsulated  in  nanoparticle  (size  31.26  nm)  with  chitosan.  The  antifouling potential was evaluated by inhibition and degradation tests using the bacteria Pseudomonas aeruginosa and Bacillus subtilis. The percentage of inhibition of moringa leaf nanoparticles and moringa leaf flavonoids had values of 43.55% and 10.29% for P. aeruginosa bacteria; while for B. subtillis bacteria 25.85% and 82.58%. The  percentage  of  biofilm  degradation  of  moringa  leaf  nanoparticle  samples  and  moringa  leaf  flavonoid extracts had values of 6.9% and 2.2% for P. aeruginosa bacteria; while for B. subtillis bacteria 87.85% and 65.91%.
Keywords: Antifouling paint, Flavonoid, Moringa leaves, Nanoparticle

## ABSTRAK
Biofouling  telah  menjadi  masalah  serius  bagi  para  pelaku  industri  maritim.  Upaya  yang  telah dilakukan  untuk  mengatasi  masalah  biofouling  melalui  penggunaan  cat  TBT-SPC  yang  merupakan golongan logam berat. Alternatif baru untuk mengganti bahan antifouling tersebut adalah dengan senyawa flavonoid daun Kelor (Moringa oleifera). Penelitian ini bertujuan menganalisis potensi nanopartikel daun Kelor  sebagai  kandidat  bioaktif  pada  cat  antifouling.  Ekstraksi  30.12  g  daun  kelor  dilakukan  dengan metode maserasi menggunakan etanol 96% dan didapatkan rendemen sebesar 9.32%. Senyawa flavonoid diisolasi  menggunakan  metode  ekstraksi  cair-cair  dan  diperoleh  rendemen  sebesar  60.11%;  kemudian dienkapsulasi  dalam  sediaan  nanopartikel  (ukuran  31.26  nm)  dengan  kitosan.  Potensi  antifouling dilakukan  dengan  uji  penghambatan  dan  degradasi  menggunakan  bakteri  Pseudomonas  aeruginosa  dan Bacillus subtilis. Persentase  penghambatan  sampel  nanopartikel  daun  kelor  dan  ekstrak  flavonoid  daun
kelor memiliki nilai  sebesar 43.55% dan 10.29% untuk bakteri P. aeruginosa; sedangkan untuk bakteri B. subtillis  sebesar  25.85%  dan  82.58%.  Persentase  degradasi  biofilm  sampel  nanopartikel  daun  kelor  dan ekstrak  flavonoid  daun  kelor  memiliki  nilai  sebesar  6.9%  dan  2.2%  untuk  bakteri  P.  aeruginosa; sedangkan untuk bakteri B. subtillis sebesar 87.85% dan 65.91%.
Kata kunci : Cat antifouling, Daun Kelor, Flavonoid, Nanopartikel

## 1. PENDAHULUAN
Biofouling
merupakan proses penempelan  organisme  pada  berbagai  struktur substrat  padat  yang  terendam  air  laut  oleh organisme fouling ,  terutama  dari  mikroba, diatom,  teritip, tunicates , bryozoan dan  spora dari ganggang laut (Bhadury dan Philip 2004). Biofouling telah  menjadi  masalah  serius  bagi para pelaku industri maritim. Sektor perikanan dan  industri  perkapalan  mengalami  dampak yang  serius  akibat  masalah biofouling ini. Penempelan  organisme  ini  menyebabkan dampak  buruk  pada  struktur  benda  di  laut, apalagi  bila  penempelan  ini  mempercepat terjadinya  proses  biokorosi  (Aulia  2011). Penempelan biofouling pada  kapal  dapat menyebabkan penambahan berat kapal, meningkatnya gaya hidrodinamik dan menurunkan  kemampuan  manuver  kapal  yang dapat  meningkatkan  biaya  akibat  peningkatan penggunaan  tenaga  kerja,  bahan  bakar,  dan waktu docking (Bazes et al . 2009).
Upaya  yang  telah  dilakukan  untuk mengatasi  masalah  biofouling  adalah  dengan penggunaan  cat antifouling pada  struktur  atau benda-benda  yang  terkena  air  laut.  Cat antifouling komersial  yang  dijual  dipasaran umumnya  mengandung  bahan  dari  logam berat.  Keberadaan  logam  berat  ini  menjadi suatu  masalah  baru  selain biofouling itu sendiri.  Penggunaan  cat antifouling komersial yang  semakin  marak  menyebabkan  jumlah logam  berat  yang  terakumulasi  dilaut  menjadi semakin  tinggi.  Hal  ini  yang  akan  berdampak pada terjadinya pencemaran lingkungan. Salah satu  contohnya  adalah  penggunaan  cat  TBT- SPC (Meseguer et al . 2004). Hal ini membuat perlunya suatu alternatif baru untuk mengganti bahan antifouling yang kurang ramah
lingkungan dengan bahan yang tidak memiliki dampak  negatif  terhadap  lingkungan;  salah satu  pilihannya  adalah  dengan  senyawa  hasil metabolit sekunder.
Kelor ( Moringa oleifera L.) merupakan sejenis  tumbuhan  dari  suku  Moringaceae. Tumbuhan ini mengandung senyawa flavonoid,  alkaloid,  fenol,  dan  saponin  (Arora et al. 2013). Senyawa aktif golongan flavonoid yang  terdapat  dalam  daun  kelor  diyakini berpotensi  sebagai antifouling karena  dapat menghambat  pertumbuhan  biofilm  (Homenta 2016).  Namun,  senyawa  flavonoid  memiliki kelemahan yaitu tidak stabil terhadap pengaruh  suhu  dan  intensitas  cahaya  tinggi sehingga  mudah  teroksidasi.  Salah  satu  upaya untuk  mencegah  kerusakan  senyawa  tersebut adalah dengan pembuatan nanopartikel. Nanopartikel  dengan  polimer  kitosan  dapat melindungi zat aktif dari pengaruh suhu tinggi dan lingkungan akibat adanya sifat tahan panas yang  dimiliki  kitosan,  sehinga  meningkatkan stabilitasnya  (Saputra  2016).  Tujuan  dari penelitian  ini  adalah  menganalisis  potensi nanopartikel  ekstrak  daun  kelor  sebagai kandidat bioaktif pada cat antifouling.

## 2. METODOLOGI
Ekstraksi  Daun  Kelor  (Modifikasi  Cahyadi 2018)
Ekstraksi  daun  kelor  menggunakan metode  maserasi  dengan  merendam  30.12 gram  daun  Kelor  dalam  300  mL  etanol  96% selama  24  jam.  Filtrat  yang  didapat  kemudian ditampung  dan  sisa  penyaringan  direndam kembali  dengan  pelarut  yang  baru.  Filtrat diuapkan  menggunakan rotary  evaporator sampai diperoleh ekstrak kasar daun Kelor.

## Isolasi  Senyawa  Flavonoid  (Andersen  dan Markham 2006)
Ekstrak  kasar  daun  Kelor  dilarutkan dengan  etanol  96%.  Filtrat  yang  diperoleh selanjutnya  dipartisi  dengan  n-heksana  di dalam  corong  pisah  dengan  perbandingan  2:1 (pelarut:  sampel)  untuk  partisi  pertama,  dan perbandingan  1:2  (pelarut:  sampel)  untuk partisi  selanjutnya.  Partisi  ini  dilakukan sebanyak tiga kali hingga terbentuk dua fraksi. Fraksi  n-heksana  dibagian  atas  dibuang, sedangkan  fraksi  etanol  dibagian  bawah dikumpulkan  dan  digunakan  kembali  untuk melakukan  partisi  selanjutnya  menggunakan kloroform.  Fraksi  etanol  ditambahkan  air dengan  perbandingan  1:1  di  dalam  corong pisah. Kemudian, pelarut kloroform ditambahkan ke dalam fraksi etanol-air dengan perbandingan  2:1  (sampel:  pelarut).  Partisi dengan  kloroform  dilakukan  sebanyak  tiga kali.  Setelah  terbentuk  dua  fraksi,  fraksi kloroform dibagian bawah dibuang, sedangkan fraksi  etanol-air  dibagian  atas  dikumpulkan. Fraksi  etanol-air  yang  telah  melalui  tahap partisi selanjutnya dipekatkan dengan penguap berputar  pada  suhu  60  °C  untuk  mendapatkan ekstrak flavonoid daun Kelor.

## Nanopartikel Daun Kelor (Saputra 2016)
Kitosan  dibuat  dengan  konsentrasi 0.4% b/v yang dilarutkan ke dalam asam asetat 1%  b/v.  Larutan  natrium  tripolifosfat  (Na- TPP)  0.1%  dibuat,  dan  larutan  stok  dibuat dengan  sebanyak  80  mg  ekstrak  flavonoid daun  Kelor  dilarutkan  dalam  10  mL  etanol 96%.  Sebanyak  1  mL  larutan  stok  ekstrak ditambahkan  kedalam  larutan  Na-TPP  0.1% dengan  cara  diteteskan  disertai  pengadukan menggunakan magnetic  stirrer .  Campuran ekstrak  flavonoid  daun  Kelor  dan  Na-TPP ditambahkan  ke  dalam  larutan  kitosan  setetes demi  setetes  pada  temperatur  ruangan  di bawah  putaran magnetic  stirrer dengan kecepatan  1500  rpm  selama  3  jam  hingga terbentuk suspensi nanopartikel daun Kelor.
Analisis  Ukuran  Partikel  dengan Particle Size Analyzer (PSA) (Hasan 2013)
Sebanyak  100  mg  nanopartikel  daun Kelor  dilarutkan  dalam  7.5  mL  akuades  dan dikocok  hingga  homogen.  Kemudian  larutan tersebut  dianalisis  dengan Particle  Size Analyzer (PSA)  untuk  ditentukan  ukuran partikel dan indeks polidispersitasnya.
Inhibisi  Ekstrak  yang  Tidak  Terjerap (Modifikasi Saputra 2016)
2.2-difenil-1-pokrilhidrazil (DPPH) dibuat  dengan  konsentrasi  40  ppm  yang dilarutkan  ke  dalam  metanol.  Sebanyak  1  mL larutan  stok  ekstrak  flavonoid  daun  Kelor dilarutkan  ke  dalam  1  mL  metanol  dan dicampurkan  dalam  2  mL  DPPH  40  ppm. Campuran  dihomogenkan  dan  diinkubasi selama 30 menit. Absorbansi diukur menggunakan  spektro  UV-Vis  pada  panjang gelombang  515  nm.  Nanopartikel  daun  Kelor dilarutkan  ke  dalam  1  mL  metanol  dan dicampurkan  dalam  2  mL  DPPH  40  ppm. Campuran  dihomogenkan  dan  diinkubasi selama 30 menit. Absorbansi diukur menggunakan  spektro  UV-Vis  pada  panjang gelombang 515 nm. Inhibisi nanopartikel daun Kelor  terhadap  DPPH  dihitung  dengan persamaan  (1)  yang  mengacu  pada  Saputra (2016):

## Keterangan :
A 0 = Absorbansi nanopartikel daun Kelor A 1 = Absorbansi ekstrak daun Kelor
Uji  Penghambatan  dan  Degradasi  Biofilm Pseudomonas aeruginosa dan Bacillus subtilis (Modifikasi  Christensen et  al .,  1985 oleh Sholeh 2017)
Uji penghambatan pembentukan biofilm  dilakukan  dengan  metode Microtiter Plat (MTP) Assay .  Bakteri P.  aeruginosa  dan B.  subtilis ditumbuhkan dalam  media  kaldu
Brain  Heart  Infusion (BHI)  selama  24  jam. Suspensi bakteri yang digunakan dibandingkan dengan  standar  Mc  Farland  V  (15x108 CFU/mL).  Suspensi  bakteri  dimasukkan  ke dalam microplat 96 sumur sebanyak 10 μL dan ditambahkan media kaldu BHI 80 μL. Sampel uji  berupa  nanopartikel  daun  Kelor,  ekstrak flavonoid  daun  Kelor,  campuran  nanopartikel daun  Kelor  dengan  cat  dasar,  campuran ekstrak flavonoid daun Kelor dengan cat dasar, dan  kontrol  negatif  berupa  nanopartikel kitosan  dan  etanol  96%.  Bakteri  diinkubasi selama  24  jam  pada  suhu  37  °C.  Suspensi bakteri dibuang dan dicuci dengan PBS pH 7.2 sebanyak 3 kali secara hati-hati. Pewarna ungu Kristal  0.1  %  ditambahkan  ke  dalam  pelat sebanyak  125  μL  dan  diinkubasi  selama  30 menit  di  suhu  ruang.  Pewarna  dibuang  dan kelebihan  warna  dicuci  dengan  akuades  steril hingga  larutan  tidak  bewarna.  Etanol  96  % ditambahkan ke dalam pelat sebanyak 200 μL dan diinkubasi di suhu ruang selama 45 menit. Larutan  etanol  dipindahkan  sebanyak  100  μL ke  pelat  yang  baru  dan  absorban  dibaca  pada panjang  geombang  595  nm  menggunakan nanospektrofotometer.
Uji degradasi biofilm dilakukan dengan metode  yang  sama  pada  uji  penghambatan biofilm. Perbedaannya ialah sampel ditambahkan setelah bakteri diinkubasi selama 24  jam  pada  suhu  37  ºC.  Pengujian  ini dilakukan  triplo,  dan  parameter  ada  tidaknya penghambatan  dilihat  dari  setiap  sampel  yang menunjukkan  nilai  persen  penghambatan. Nilai  persen  penghambatan  dihitung  dengan persamaan  (2)  dan  degradasi  dihitung  dengan persamaan  (3)  yang  mengacu  pada  Saputra (2016):
( ) Keterangan: ODs : OD sampel ODsb : OD blanko sampel ODn : OD kontrol normal ODnb : OD blanko kontrol normal ( ) Keterangan: ODk    : OD kontrol negatif ODs
: OD sampel

## 3. HASIL

## Rendemen Ekstrak Daun Kelor
Proses  ekstraksi  daun  Kelor  dilakukan dengan  metode  maserasi  dengan  pelarut alkohol  96%.  Filtrat  maserasi  kemudian diuapkan  dengan rotary  evaporator .  Metode maserasi digunakan karena memiliki kelebihan seperti  cara  pengerjaan  dan  alat  yang digunakan sederhana, biaya operasional relatif rendah,  serta  dan  dapat  menghindari  rusaknya senyawa-senyawa  yang  bersifat  termolabil karena  tidak  dilakukan  pemanasan  (Susanty dan  Bachmid  2016).  Ekstraksi  daun  Kelor menghasilkan rendemen sebesar 9.32% (Tabel 1).

## Isolasi Senyawa Flavonoid Daun Kelor
Tahap  isolasi  flavonoid  dilakukan untuk mengambil senyawa golongan flavonoid dari  ekstrak  kasar  daun  Kelor.  Golongan senyawa  flavonoid  diisolasi  karena  berpotensi sebagai senyawa antifouling . Senyawa flavonoid  diisolasi  menggunakan  prinsip ekstraksi  cair-cair. Hasil  yang  didapatkan disajikan pada Tabel 2.
Tabel 1. Hasil ekstraksi daun kelor Massa serbuk daun Kelor (gram) Volume  etanol  96% (mL) Massa  ekstrak  kasar  daun Kelor (gram) Rendemen (%) 30.12 300 2.81 9.32
Tabel 2. Hasil isolasi senyawa flavonoid daun kelor
Massa ekstrak kasar daun kelor (gram) Massa ekstrak flavonoid daun kelor (gram) Rendemen (%) 5.27 3.16 60.11
Rendemen  yang  didapat  menunjukkan hasil  yang  cukup  baik,  yaitu  sebesar  60.11%. Persentase rendemen yang besar menunjukkan bahwa  daun  Kelor  mengandung  senyawa flavonoid dengan kadar yang tinggi. Penetilian yang dilakukan oleh Lutfiana (2013), memperoleh hasil rendemen yang lebih rendah yaitu sebesar 59.645%.

## Nanopartikel Daun Kelor
Nanopartikel  daun  Kelor  dilakukan dengan  metode  gelasi  ionik  menggunakan penyalut berupa kitosan dan tripolifosfat. Hasil nanopartikel  diamati  kestabilannya  untuk melihat  keberhasilan  pembuatan  nanopartikel. Kestabilan  sampel  dilihat  melalui  pengamatan secara fisik  sebanyak tiga kali dengan rentang waktu dua minggu. Hasil pengamatan menunjukkan  kestabilan  yang  baik.  Hal  ini ditunjukkan dengan tidak terbentuknya endapan atau agregat pada sampel (Gambar 1). Menurut  Wahyudi et  al. (2011),  kestabilan nanopartikel  dikatakan  tinggi  apabila  tidak terjadi peristiwa aglomerasi.
Analisis Particle Size Analyzer (PSA) Particle Size Analyzer (PSA) dilakukan untuk  mengetahui  ukuran  patikel  sampel. Analisis  PSA  menghasilkan  tiga  puncak dengan rata-rata ukuran partikel 31.26 nm dan indeks polidispersi 0.899 (Gambar 2). Terbentuknya  tiga  puncak  pada  analisis  PSA menunjukkan  sampel  tidak  homogen.  Ukuran partikel  sampel  sudah  termasuk  nanopartikel dengan  ukuran  yang  kecil,  sedangkan  indeks polidispersi  sampel  menunjukkan  hasil  yang kurang  baik  karena  memiliki  nilai  lebih  dari 0.5.

## Inhibisi ekstrak tidak terjerap
Inhibisi ekstrak tidak terjerap menggunakan pembanding baku DPPH. Inhibisi  ekstrak  yang  tidak  terjerap  dilakukan dengan  cara  membandingkan  absorbansi ekstrak flavonoid daun kelor dengan nanopartikel daun kelor.
a b
Gambar 1. Kestabilan nanopartikel daun kelor (a) minggu kesatu (b) minggu kedua
Gambar 2 . Hasil analisis PSA
Tabel 3 . Inhibisi ekstrak tidak terjerap Sampel Ulangan Inhibisi (%) Nanopartikel daun Kelor 1 76.92 2 62.50

## Penghambatan dan Degradasi Biofilm
Nilai penghambatan menunjukkan kemampuan  suatu  sampel  dalam  mencegah terbentuknya  biofilm.  Hasil  penghambatan biofilm  dengan  sampel  nanopartikel  daun kelor  dan  ekstrak  flavonoid  daun  kelor memiliki  nilai  sebesar  43.55%  dan  10.29% untuk  bakteri P.  aeruginosa, sedangkan  untuk bakteri B. subtillis sebesar 25.85% dan 82.58% (Tabel  4). Nilai  degradasi  menunjukkan kemampuan
suatu sampel dalam menghilangkan  biofilm  yang  sudah  terbentuk. Hasil  degradasi  biofilm,  dengan  biofilm dengan  sampel  nanopartikel  daun  kelor  dan ekstrak  flavonoid  daun  kelor  memiliki  nilai sebesar  6.9%  dan  2.2%    untuk  bakteri P. aeruginosa, sedangkan  untuk  bakteri B.
subtillis sebesar 87.85%  dan  65.91%  (Tabel 4).

## 4. PEMBAHASAN
Tanaman  obat Moringa  oleifera atau yang  lebih  dikenal  dengan  nama  kelor  telah banyak dimanfaatkan oleh masyaakat indonesia.  Penelitian  yang  dilakukan  oleh Loresta et al. 2013 menunjukan bahwa ekstrak etanol  daun  kelor  mampu  menghambat pembentukan bakteri S. aureus. Penelitian lain yang  telah  dilakukan  menunjukan  bahwa ekstrak  etanol  daun  kelor  memiliki  aktivitas antibakteri,  antitumor,  antidiabetik  (Toripah 2014).
Tanaman  kelor  yang  digunakan  pada penelitian  ini  berasal  dari  pusat  studi
biofarmaka (PSB).  Ekstrak  daun  kelor diperoleh  melalui  maserasi  menggunakan etanol  96%  Penggunaan  maserasi  didasarkan oleh yang menyatakan bahwa metode maserasi dapat menghindari rusaknya senyawa-senyawa yang bersifat termolabil karena tidak dilakukan  pemanasan  (Susanty  dan  Bachmid 2016).  Selain  itu  pemilihan  etanol  96  % mengacu pada penelitian Hikma dan Ardiansyah  (2018),  dimana  ekstraksi  daun kelor  menggunakan  etanol  96%  menghasilkan rendemen sebesar 10.6 %, sedangkan penelitian yang dilakukan menghasilkan reendemen  sebesar  9.32%.  Adanya  perbedaan jumlah  rendemen  dapat  disebabkan  karena perbedaan  faktor  lingkungan  seperti  intensitas cahaya, unsur hara, suhu, kelembapan.
Ekstrak etanol yang didapat selanjutnya dilakukan isolasi senyawa flavonoid menggunakan teknik fraksinasi cair- cair.  Fraksinasi  dilakukan  dengan  larutan  n- heksana dan klorofom yang memiliki sifat non polar  dimana  bertolak  belakang  dengan  sifat flavonoid  yang  polar.  Hal  ini  didasarkan  pada prinsip like  disolve  like artinya  pelarut  akan melarutkan senyawa yang tingkat kepolarannya  sama  dengan  pelarut  tersebut (Sapri  2011).  Senyawa  flavonoid  selain memiliki  sifat  polar  juga  merupakan  senyawa yang  bersifat  tidak  tahan  panas.  Untuk mengatasi masalah ini dilakukanlah penyalutan  senyawa  flavonoid  menggunakan nanopartikel  kitosan  menggunakan  metode gelasi  ionik.  Pembuatan  nanopartikel  selain untuk meningkatkan  kestabilan  senyawa flavonoid  juga  berfungsi  untuk  meningkatkan aktivitas senyawa flavonoid dalam menghambat pembentukan biofilm.
Karakterisasi  nanopartikel  daun  Kelor dilakukan dengan melihat ukuran dan distribusinya  menggunakan Particle  Size Analyzer (PSA).  Hasil  analisis  menunjukkan nanopartikel  daun  Kelor  berukuran  31.26  nm dengan  indeks  polidispersi  0.899.  Ukuran nanopartikel  daun  Kelor  sudah  termasuk
nanopartikel dengan ukuran yang kecil. Hal ini sesuai  dengan  teori  yang  mengatakan  bahwa suatu  senyawa  dikatakan  nanopartikel  jika memiliki ukuran sebesar 1-100 nm (Rachmawati  2007).  Sedangkan  nilai  indeks polidispersi  nanopartikel  daun  Kelor  yang tinggi menunjukkan heterogenitas yang tinggi. Ukuran  dan  distribusi  partikel  yang  tidak seragam  tersebut  dapat  disebabkan  karena adanya  aglomerasi  untuk  membentuk  partikel yang  lebih  besar.  Hal  tersebut  dapat  terjadi karena  beberapa  faktor  diantaranya  formula kombinasi  kitosan  dan  STPP,  pH  larutan,  dan kecepatan pengadukkan dengan stirrer (Prasetyo et al., 2015).
Persentase  ekstrak  flavonoid  daun Kelor  yang  tidak  terjerap  atau  terenkapsulasi di  dalam  sediaan  nanopartikel  dihitung berdasarkan  inhibisi  ekstrak  tidak  terjerap. Semakin  kecil  nilai  persen  inhibisi  maka semakin  besar  kemampuan  polimer  kitosan dapat  mengenkapsulasi  dan  melindungi  zat aktif,  sehingga  semakin  besar  zat  aktif  yang dapat terenkapsulasi. Hasil penelitian menunjukkan nilai persentase inhibisi nanopartikel  daun  Kelor  besar  yang  berarti senyawa  flavonoid  yang  terjerap  oleh  kitosan sedikit. Kemungkinan lainnya adalah senyawa flavonoid  hanya  menempel  di  permukaan kitosan.
Aktivitas antibiofilm dilakukan dengan metode Microtitter Plat (MTP) Assay. Metode MTP Assay merupakan metode yang cepat dan sederhana untuk menguji pembentukan biofilm bakteri secara in vitro (Djordjrvic et al., 2010). Penghambatan  biofilm  dilakukan  dengan prinsip  mengukur  absorbansi  biofilm  yang terbentuk setelah diwarnai dengan kristal ungu (Niu  dan  Gilbert  2004).  Daun  kelor  memiliki kandungan  flavonoid  yang  tinngi.  Lee et  al (2013) menyatakan bahwa flavonoid berpotensi  menghambat  pertumbuhan  biofilm karena dapat menghambat intercellular adhesion genes icaA dan icaD .
Tabel 4 . Hasil penghambatan dan degradasi biofilm P. aeruginosa dan B. subtillis
Gen ini dapat
mensintesis
Polysaccharide  Intercellular  Adhesion (PIA) yang mempunyai peranan penting dalam agregasi sel dan pembentukan EPS dalam pembentukan biofilm  pada  bakteri Staphylococcusaureus (Archer et al ., 2011).
Hasil  penghambatan  biofilm  dengan nanopartikel daun kelor lebih baik dari ekstrak flavonoid  daun  kelor  untuk  bakteri P. aeruginosa ,  sedangkan  penghambatan  dengan sampel ekstrak flavonoid daun kelor lebih baik dari  nanopartikel  daun  kelor  untuk  bakteri B. subtillis. Nilai  penghambatan  yang  baik  oleh ekstrak  daun  kelor  pada  bakteri B.  subtillis disebabkan  oleh  nilai  absorbansi  blanko sampel  yang  besar  akibat  pencucian  pewarna kristal ungu yang kurang bersih.
Penghambatan biofilm dengan ekstrak flavonoid  daun  kelor  cukup  tinggi  apabila dibandingkan  dengan  penelitian  Kining et  al., (2016)  yang  menguji  antibiofilm  pada  ekstrak daun  papaya  terhadap  bakteri P.  aeruginosa dengan hasil penghambatan sebesar 46.748%. Hasil  degradasi  biofilm  dengan  nanopartikel daun  kelor  lebih  baik  dari  ekstrak  flavonoid daun kelor untuk bakteri P. aeruginosa dan B. subtillis. Hasil  degradasi  ekstrak  flavonoid daun  kelor  terhadap  bakteri P.  aeruginosa memiliki  nilai  yamg  lebih  rendah  apabila dibandingkan dengan persen degradasi ekstrak daun pepaya yaitu sebesar 49.029% (Kining et al .,  2016).  Nilai  degradasi  yang  baik  oleh nanopartikel  daun  kelor  pada  bakteri P. aeruginosa dan B.  subtillis membuktikan bahwa  sediaan  dalam  bentuk  nanopartikel dapat melindungi flavonoid sehingga
meningkatkan efektivitas dan stabilitas sebagai zat bioaktif dalam cat antifouling.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  ucapkan  terima  kasih  kepada Departemen  Biokimia  IPB  atas  dukungan fasilitas laboratorium yang diberikan. Terimakasih  pula  penulis  sampaikan  kepada Maftuchin  Sholeh  dan  semua  pihak  yang terlibat  sehingga  penelitian  ini  dapat  berjalan dengan lancar.

## DAFTAR PUSTAKA
Adenia  SP.  2016.  Penghambatan  senyawa metabolit sekunder daun kelor ( Moringa  oleifera )  terhadap  aktivitas enzim  alfa-glukosidase  yang  diisolasi dari beras lapuk [Skripsi]. Yogyakarta: Universitas Gadjah Mada.
Agnihotri  SA,  Nadagounda  N,  Mallikarjuna, Tejraj  M,  Aminabhavi.  2004.  Recent advances  on  chitosanbased  micro-  and nanoparticles  in  drug  delivery. J. Control 100(1): 5-28.
Archer  NK,  Mazaitis  MJ,  Costerton  JW,  Leid JG,  Powers  ME,  Shirtliff  ME.  2011.
Staphylococcus aureus biofilms properties,  regulation  and  roles  in human disease. LandesBioscience . Virulence 2(5): 445-459.
Arora  SD,  Onsare  GJ,  Kaur  H.  2013.
Bioprospecting of moringa (Moringaceae) : microbiological
prespective. Journal of Pharmacognosy and Phytocemistry 1(6): 193-215.
Aulia UN. 2011. Eksplorasi potensi dan fungsi senyawa  bioaktif ascidian  Didemnum
Sampel Penghambatan (%) Degradasi (%) P. aeruginosa B. Subtillis P. aeruginosa B. Subtillis Nanopartikel 43.55 25.85 6.9 87.85 Ekstrak 10.29 82.58 2.2 65.91 Cat Nanopartikel 11.77 0 1.88 80 Cat Ekstrak 7.6 97.51 0.68 10.25
molle sebagai  antifouling  [Skripsi]. Bogor: Institut Pertanian Bogor.
Bazes  A,  Silkina  A,  Douzenel  P,  Fay  F, Kervarec  N,  Morin  D,  Berge  JP, Bourgougnon N. 2009. Investigation of the  antifouling  constituents  from  the brown alga Sargassum muticum (Yendo)  Fensholt. J.  Appl.  Phycol 21(4): 395-403.
Bhadury  P,  Phillip  CW. 2004.  Exploitation  of marine  algae:  biogenic  compounds  for potential antifouling applications.
Planta 219: 561–578.
Cahyadi  DD.  2018.  Uji  aktivitas  diuretik ekstrak etanol 96% daun kelor ( Moringa  oleifera )  pada  tikus  galur wistar  jantan  [Skripsi].  Surakarta: Universitas Muhammadiyah Surakarta.
Dean  J.  2009. Extraction  Techniques  In
Analytical  Science .  London:  John Wiley And Sons LTD.
Djordjevic D, Wiedmann M, McLandsborough LA.  2002.  Microtiter  Plat  Assay  for assessment  of Listeria  monocytogenes biofilm formation. Applied and Enviromental Microbiology 68(6): 2950- 2958.
Fan  W,  Yan  W,  Xu  Z,  Ni  H.  2012.  Colloids and  surfaces. Biointerfaces 90(1):  21- 27.
Ferrazzano  GF,  Amato  I,  Ingenito  A,  Natale AD,  Pollio  A.  2009.Anti-cariogenic effects  of  polyphenols  from  plant stimulant beverages (cocoa, coffe, tea).
Fitoterapia 80(1): 255-262.
Gredi J. 2015. Efektivitas analgetik nanopartikel  kitosan  –  ekstrak  etanol daun  pepaya  ( Carica  papaya  l .)  pada mencit  putih  jantan  ( Mus  musculus ) [Skripsi]. Pontianak: Universitas Tanjungpura.
Hikma  SR,  Ardiansyah  S.  2018.  Kombinasi ekstrak  daun  kelor  ( Moringa  oleifera
Lamk)  dengan  ekstrak  daun  tin  ( Ficus carica Linn) sebagai larvasida terhadap larva Aedes  aegypti . Medicra 1(2):  94-
102.
Homenta  H.  2016.  Infeksi  biofilm  bakterial.
Jurnal e-Biomedik 4(1): 1-11.
Kining  E,  Falah  S,  Nurhidayat  N.  2016. Aktivitas  antibiofilm  ekstrak  air  daun pepaya  ( Caricapapaya L.)  terhadap bakteri Pseudomonas aeruginosa secara invitro. Current  Biochemistry
2(3): 150 – 163.
Lee JH, Park JH, Cho HS, Joo SW, Cho MH, Lee  J.  2013.  Anti-biofilm  activities  of quercetin  and  tannic  acid  against Staphylococcusaureus. Biofouling
29(5):491-499.
Loresta  S,  Murwani  S,  Trisunuwati  P.  2013. Efek  etanol  daun  kelor  ( Moringa olerifera ) terhadap pembentukan biofilm Staphylococcus  aureus secara in  vitro [Skripsi].  Malang:  Universitas Brawijaya.
Meseguer YD, Kiil S, Dam-Johansen K. 2004. Antifouling  technology—past  present and  future  steps  towards  efficient  and environmentally  friendly  antifouling coatings . J. Prog. Org. Coat 50(1): 75– 104.
Mohanraj  VJ, Chen Y. 2006. Nanoparticles:  a review. Tropical Journal of Pharmaceutical  Research 5(1):  561- 573.
Niu C, Gilbert ES. 2004. Colorimetric method for  identifyng  plant  essential  oil componens that affect biofilm formation  and  structure. Applied  and Enviromental  Mycrobiology 70(12): 6951-6956.
Prasetyo  YA,  Husni  P,  Mita  SR.  2015.  Long
Circulation  nanopartikel  menggunakan polimer PLGA ( Poly- Lactic-co- Glicolyc Acid ) dan poloxamer. FARMAKA 15(1): 237-247. Rachmawati  H,  Reker-Smit  C,  Hooge  MNL, Loenen-Weemaes  AMV,  Poelstra  K, Beljaars, L. 2007. Chemical
Modification  of  Interleukin-10  with Mannose  6-Phosphate  Groups  Yield  a Liver-Selective  Cytokine. DMD 35(1):
814-821.
Sapri. 2011. Uji aktivitas antiooksidan dengan ekstrak kayu bayur Sulawesi ( Pterospermum celebicum Miq.)
dengan  metode  penangkapan  radikal bebas  DPPH  ( 2,2-diphenyl-1picryl- hydrazyl ). J.  Trop.  Pharm.  Chem 1(3):
227-234.
Saputra G. 2016. Karakterisasi nanoenkapsulasi  kitosan  ekstrak  etanol
70%  daun  sirih  ( Piper  betle  Linn) dengan  metode  gelas  ionik  [Skripsi]. Pontianak: Universitas Tanjungpura.
Sholeh  MM.  2017.  Sitotoksisitas,  aktiviatas antibakteri,  dan  antibiofilm  tanaman biduri [Skripsi]. Bogor: Institiut Pertanian Bogor.
Verdiana M, Widarta  IW, Permana  IW. 2018. Pengaruh  jenis  pelarut  pada  ekstraksi menggunakan  gelombang  ultrasonik terhadap  aktivitas  antioksidan  ekstrak kulit  buah  lemon  ( Citrus  limon (Linn.) Burm  F.). Jurnal  Ilmu  dan  Teknologi
Pangan 7(4):213-222.
Wijaya  H,  Novitasari,  Jubaidah  S.  2018. Perbandingan metode
ekstraksi
terhadap rendemen ekstrak daun rambai  laut  ( Sonneratia  caseolaris L. Engl). Jurnal Ilmiah Manuntung 40(1): 79-83