BioEksakta: Jurnal Ilmiah Biologi Unsoed Volume 4 Nomor 3 (2022):  152-159 E-ISSN: 2714-8564

## Diferensial Leukosit Beberapa Spesies Ikan Tangkapan Dari Familia Cyprinidae Di Sungai Banjaran, Kabupaten Banyumas

## Nabilla Gina Irwanti, Priyo Susatyo*, Eko Setio Wibowo
Fakultas Biologi, Universitas Jenderal Soedirman, Jl. dr. Suparno 63 Purwokerto 53122 *Correspondent e-mail: priyo.susatyo@unsoed.ac.id
Rekam Jejak Artikel:
Diterima  : 18/08/2021 Disetujui  : 19/09/2022

## Abstract
The  family  Cyprinidae  can  be  found  in  almost  all  Indonesian  rivers,  including  the  Banjaran River,  Banyumas  Regency.  Leukocyte  differential  aims  to  determine  the  difference  in  the percentage  of  leukocytes.  This  study  was  to  determine  the  relationship  between  sampling locations (upstream, middle, and downstream) with differential leukocytes and to determine the picture of blood smears from several species of fish in the family Cyprinidae. Sampling using purposive sampling technique at three different stations. The data obtained were analyzed using the Analysis of Variance (ANOVA) method with an error rate of 5% and a description of the results  of  microscopic  observations  of  the  types  of  leukocytes.  The  results  showed  that  the comparison  of  the  percentage  of  leukocytes  in  nilem  fish  ( Osteochilus  vittatus ),  brek  fish ( Barbonymus  balleroides ),  and  lunjar  fish  ( Rasbora  argyrotaenia )  with  locations  Upstream, Middle, Downstream of the Banjaran River, Banyumas, was significantly different (p<0.05). The highest  percentage  of  leukocyte  cells  is  in  the  Downstream  zone  in  the  Banjaran  River, Banyumas, namely neutrophil cells and monocyte cells. The percentage of neutrophil cells for Nilem Fish was 9.5%, Brek Fish 8.5%, and Lunjar Fish 9.4%. The percentage of monocyte cells in Nilem Fish was 8.9%, Brek Fish 8.7%, and Lunjar Fish 8.5%. Neutrophil cells have a finely granular  cytoplasm  and  a  segmented  nucleus  in  the  center.  Eosinophil  cells  have  a  redder cytoplasm,  the  nucleus  is  located  elongated  at  the  edge  of  the  cell,  has  large  granules. Lymphocyte have a dark blue cytoplasm, and a round to oval nucleus. Monocytes have pale blue cytoplasm and the shape of the nucleus varies from kidney-shaped to two large lobes. Key words: Banjaran River, Family Cyprinidae, Hematology, Leukocyte Differential.

## Abstrak
Familia  Cyprinidae  dapat  ditemukan  di  hampir  seluruh  sungai  Indonesia  termasuk  Sungai Banjaran,  Kabupaten  Banyumas.  Perhitungan  diferensial  leukosit  dilakukan  adalah  untuk mengetahui persentase masing-masing jenis leukosit, yaitu neutrophil, monosit, eosinophil dan limfosit.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  hubungan  diferensial  leukosit  dengan beberapa spesies ikan Cyprinidae dari perolehan sampel di bagian hulu, tengah, dan hilir sungai Banjaran. Pengambilan sampel menggunakan teknik purposive sampling pada tiga stasiun yang berbeda. Data yang diperoleh dianalisis dengan metode Analysis of Variance (ANOVA) dengan tingkat kesalahan 5% dan gambaran hasil pengamatan mikroskopis jenis-jenis leukosit. Hasil penelitian  menunjukkan  bahwa  perbandingan  persentase  sel  leukosit  pada  ikan  nilem ( Osteochilus  vittatus ),  ikan  brek  ( Barbonymus  balleroides ),  dan  ikan  lunjar  ( Rasbora argyrotaenia ) dengan lokasi Hulu, Tengah, Hilir Sungai Banjaran, Banyumas, berbeda secara signifikan (p<0,05). Persentase sel leukosit yang paling tinggi ada pada zona Hilir di Sungai Banjaran,  Banyumas  yaitu  sel  neutrofil  dan  sel  monosit.  Presentase  sel  neutrofil  ikan  nilem didapatkan sebesar 9,5%, ikan brek sebesar 8,5% dan ikan lunjar sebesar 9,4%. Presentase sel monosit pada ikan nilem sebesar 8,9%, ikan brek sebesar 8,7% dan ikan lunjar sebesar 8,5%. Sel neutrofil memiliki sitoplasma bergranula halus dan ditengahnya terdapat inti bersegmen. Sel  eosinofil  mempunyai  sitoplasma  berwarna  lebih  merah,  inti  yang  terletak  memanjang  di tepi sel, memiliki granula besar. Sel limfosit memiliki sitoplasma berwarna biru gelap dan inti berbentuk bulat hingga oval. Sel monosit memiliki sitoplasma berwarna biru pucat dan bentuk inti bervariasi ada yang berbentuk seperti ginjal hingga yang berbentuk dua lobus besar. Kata kunci : Diferensial Leukosit, Familia Cyprinidae, Sungai Banjaran

## PENDAHULUAN
Ikan termasuk hewan vertebrata yang hidup dii perairan.  Ikan  yang  hidup  pada  perairan  air  tawar terdiri dari banyak Familia, salah satu familia ikan air tawar  yaitu  Cyprinidae.  Familia  Cyprinidae  dapat
ditemukan  di  sungai  -  sungai  hampir  seluruh  dunia termasuk  Indonesia,  sehingga  sering  dimanfaatkan oleh  masyarakat  sebagai  ikan  hias  dan  juga dikonsumsi  karena  protein  dalam  ikan  yang  tinggi (Wartika et  al .,  2017).  Ikan  merupakan  salah  satu
sumber makanan utama yang dikonsumsi masyarakat dunia,  maka  dari  itu  secara  berkala  perlu  dilakukan pengamatan  mengenai  kesehatan  ikan  dan  faktor- faktor yang mempengaruhinya (Meraj et al ., 2017). Faktor  lingkungan  dapat  mempengaruhi kesehatan ikan dikarenakan habitat ikan pada perairan air  tawar  semakin  berubah  selama  beberapa  abad terakhir, termasuk penurunan kualitas air (Jacquemin &  Pyron,  2016).  Kulitas  air  dapat  mempengaruhi tingkat  pertumbuhan,  kesehatan,  dan  fisiologi  ikan (Moniruzzaman et al ., 2017). Faktor lingkungan yang mempengaruhi  fisiologis  ikan  termasuk  ketinggian dari habitat ikan tersebut. Berdasarkan ketinggian dan jarak dari muara, sungai dapat dibagi menjadi 3 zona yaitu,  zona  hulu,  zona  tengah  dan  zona  hilir.  Faktor hidrologi  dan  beberapa  parameter  fisika-kimia  air, serta  ketinggian  yang  berbeda  dari  ketiga  zona tersebut  mempengaruhi  karakteristik  habitat  di  zona tersebut (Samuel & Adjie, 2008). Karakteristik habitat yang  berbeda  dapat  menyebabkan  respon  fisiologis ikan  yang  berbeda  pula,  hal  tersebut  dapat menyebabkan  komponen-komponen  darah  juga mengalami  perubahan  sehingga  terjadi  perbedaan tingkat kesehatan dari ikan tersebut (Sabilu, 2010).
Pemeriksaan hematologi signifikan digunakan dalam  mendeteksi  respon  fisiologis  ikan  dengan kondisi  lingkungannya  yang  berhubungan  dengan status kesehatan ikan, sehingga parameter hematologi banyak digunakan sebagai indikator adanya pestisida, logam  dan  senyawa  toksik  yang  berpengaruh  bagi makhluk  hidup  di  lingkungan  perairan  (Duman, 2020).  Hal  tersebut  dikarenakan  darah  merupakan salah  satu  komponen  pertahanan  dari  penyakit  yang masuk kedalam tubuh ikan (Utami et al ., 2013). Darah juga  dapat  digunakan  sebagai  salah  satu  parameter untuk  mengetahui  proses  adaptasi  ikan  terhadap perubahan  salinitas.  Respon  stres  pada  ikan  dapat dilihat  dari  jumlah  leukosit  yang  cenderung meningkat (Royan et al ., 2014).
Darah  terdiri  dari  sel  darah  yang  berfungsi sebagai  komponen  sistemik  sangat  penting  dalam proses  penutupan  luka  (Agungpriyono et  al .,  2020), mengangkut  hormon  dan  beperan  penting  dalam sistem  kekebalan,  terutama  sel  darah  putih  atau leukosit. Pemeriksaan darah dilakukan untuk melihat pola  respon  imun  dengan  cara  menghitung  total leukosit  dan  diferensial  leukosit  dalam  darah (Widyaningrum et  al .,  2017).  Diferensial  leukosit bertujuan mengetahui perbedaan persentase komponen sel leukosit. Leukosit pada ikan yang dapat diamati  dibagi  menjadi  2  yaitu  granulosit  (neutrofil, eusinofil,  dan  basofil)  dan  agranulosit  (monosit  dan limfosit) (Suhermanto et al ., 2011).
Tujuan dilakukannya penelitian ini adalah untuk mengetahui  persentase  masing-  masing  jenis sel leukosit dari beberapa ikan familia Cyprinidae pada 3 lokasi pengambilan sampel di hulu, tengah, hilir dan mendiskripsikan  gambaran  apusan  darah  dari beberapa spesies ikan familia Cyprinidae.
Hasil penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi terkait diferensial leukosit dari beberapa  spesies  ikan  dari  familia  Cyprinidae  yang tertangkap di Sungai Banjaran, Kabupaten Banyumas dan  digunakan  sebagai  dasar  untuk  menentukan tingkat kesehatan ikan pada suatu perairan.

## MATERI DAN METODE
Alat–alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  pancing,  Altimeter,  thermometer,  akuarium ukuran 30 x 40 x 30 cm, aerator, baki preparat, pipet tetes, object  glass ,  kamera, spuit injeksi,  mikroskop cahaya, stopwatch , hand counter , dan alat tulis.
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini diantaranya,  darah  dari  beberapa  spesies  ikan  dari Familia  Cyprinidae,  pewarna  giemsa  7%,  methanol 70%, larutan EDTA, tabung kapiler hematokrit, kertas lakmus, label dan tissue . Lokasi pengambilan sampel penelitian dilakukan pada tiga stasiun yaitu hulu, tengah, hilir di Sungai  Banjaran,  Kabupaten  Banyumas.  Proses pembedahan di Laboratorium Struktur dan Perkembangan  Hewan  Fakultas  Biologi  Universitas Jenderal  Soedirman.  Proses  pembuatan  sediaan apusan  darah  dan  Analisis  data  dilaksanakan  di Laboratorium  Struktur  dan  Perkembangan  Hewan Fakultas Biologi Universitas Jenderal Soedirman.
Metode  yang  digunakan  pada  penelitian  ini adalah metode Survei. Sampel diambil menggunakan teknik purposive sampling. Pengambilan sampel tiga kali di bulan Mei, April dan Maret pada tiga stasiun yang berbeda di lokasi hulu, tengah dan hilir Sungai Banjaran, Banyumas.
Variabel  yang diamati  pada  penelitian  ini  yaitu diferensial leukosit ikan familia Cyprinidae. Parameter  yang  diamati  yaitu  Persentase  jumlah neutrofil,  eusinofil,  limfosit,  serta  monosit,  dan gambaran  apusan  darah.  Sampel  ikan  dari  masing- masing  stasiun  pada  Sungai  Banjaran,  Kabupaten Banyumas  diambil  menggunakan  alat  pancing. Sampel yang digunakan yaitu berjumlah tiga spesies ikan  yaitu,  Ikan  Nilem  ( Osteochilus  vittatus ),  Ikan Brek  ( Barbonymus  balleroides ),  dan  Ikan  Lunjar ( Rasbora  argyrotaenia )  dari  masing-masing  titik. Pengambilan  sampel  ikan  Nilem  dan  ikan  Lunjar dilakukan  pada  siang  hari,  sedangkan  ikan  Brek dilakukan pada siang malam hari. Kemudian, diukur ketinggian dari masing-masing stasiun menggunakan Aplikasi  Altimeter,  pH  diukur  menggunakan  kertas pH  universal,  serta  suhu  air  diukur  dengan thermometer. Sampel yang sudah             didapatkan dimasukkan kedalam wadah yang sudah berisi air dan diberi  label,  setelah  itu  dibawa  ke  Laboratorium Struktur Perkembangan Hewan.
Ikan  yang  berhasil  ditangkap  dari  Sungai Banjaran, Kabupaten Banyumas, kemudian dimasukkan  ke  dalam  akuarium  dilengkapi  dengan aerator selama sehari. Tujuannya agar ikan yang telah ditangkap  tersebut,  tetap  hidup  sebelum  diambil darahnya dan diamati.
Pengambilan  darah  ikan  pada  masing-masing spesies  sebanyak  5  kali  ulangan.  Ikan  diletakkan  di atas  nampan  plastik  dengan  posisi  kepala  ikan menghadap sisi kiri dan badan ikan dibungkus dengan lap  basah  agar  badan  ikan  tidak  banyak  bergerak. Pengambilan  darah  dilakukan  dengan  badan  ikan ditusuk  pada  bagian  jantung  dengan  spuit  injeksi, yang sebelumnya sudah dilapisi dengan cairan EDTA agar  darah  tidak  menggumpal.  Kemudian,  darah dimasukkan kedalam tabung kapiler hematokrit agar darah dapat mudah diteteskan di atas object glass . Darah dalam tabung kapiler hematokrit kemudian  diteteskan  diatas  salah  satu  ujung object glass sedemikian  rupa  sehingga  tetesan  membentuk lingkaran  dengan  diameter  ±3-5  mm. Object  glass kedua  diletakkan  didepan  tetesan  darah  tersebut dengan  sudut  45 o ,  kemudian  ditarik  sedikit kebelakang  hingga object  glass kedua  mencapai bagian  tengah  dari  tetesan  darah  sehingga  timbul gerakan kapiler yang memungkinkan darah menyebar merata ke kiri dan kanan object glass pertama. Setelah itu, object  glass kedua  didorong  sesuai  dengan  arah sudut  dari  kedua object  glass dengan  kekuatan  dan kecepatan  yang  konstan  sehingga  diperoleh  apusan yang rata.
Object glass yang telah terbentuk apusan darah di  atasnya  didiamkan  pada  suhu  ruang  hingga mengering.  Kemudian,  difiksasi  dengan  Methanol 70% selama 5 menit agar pada saat pewarnaan apusan darah dapat menyerap zat pewarna dengan sempurna dan  melekatkan  apusan  darah  pada object  glass sehingga  apusan  darah  tidak  mudah  mengelupas. Staining dilakukan  dengan  menggunakan  pewarnaan Giemsa 7% selama 20 menit. Setelah itu object glass dibilas dengan
air mengalir kemudian dikeringanginkan dengan tissue secara perlahan. Hasil apusan  darah  diamati  di  bawah  mikroskop  dengan perbesaran 400x.
Perhitungan  persentase  leukosit  dilakukan dengan menghitung 100 sel leukosit secara scanning dengan perbesaran 400x dari mulai tepi apusan darah, kemudian  Persentase  jenis  leukosit  dapat  diketahui dan  dinyatakan  dalam  persen  (%)  (Svobodova  & Vykusova,  1991).  Dihitung  masing-masing  jenis leukosit,  yaitu  neutrofil,  eosinofil,  basofil,  limfosit dan monosit dengan rumus sebagai berikut :
%L : ( 𝑁 100 ) x 100%
Keterangan : %L   : Persentase sel leukosit yang dihitung N : Jumlah sel leukosit yang dihitung 100 : 100 sel leukosit
Data  hasil  perhitungan  persentase  neutrofil, eosinofil, limfosit, dan monosit yang diperoleh dalam penelitian  dibandingkan  dengan  3  zona  yaitu,  zona hulu, zona tengah dan zona hilir menggunakan metode Analysis  of  Variance (ANOVA)  dengan  tingkat kesalahan 5% dengan bantuan aplikasi SPSS 16 dan
gambaran  hasil  pengamatan  mikroskopis  dari  jenis- jenis leukosit dianalisis secara deskriptif.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Berdasarkan  hasil  penelitian,  dari  kegiatan penangkapan  ikan  Familia  Cyprinidae  di  Sungai Banjaran,  Banyumas  didapatkan  tiga  species  ikan, yaitu  Ikan  Nilem  ( O.  vittatus ),  Ikan  Brek  ( B. balleroides ),  dan  Ikan  Lunjar  ( R.    argyrotaenia ). Menurut  penelitian  Susatyo, et  al .  (2016)  bahwa spesies tersebut merupakan Familia Cyprinidae yang termasuk  ikan  indigenous  yang  berada  pada  Sungai Banjaran. Disekitar pengambilan sampel pada daerah Hulu  Sungai  Banjaran  terdapat  banyak  naungan pohon dikarenakan kanan kirinya hutan, dasar sungai berpasir,  berbatuan  besar,  dan  sungai  cukup  dalam. Pada daerah Tengah Sungai Banjaran, hanya terdapat sedikit  naungan  pohon  dikarenakan  kanan  kirinya terdapat rumah warga, dasar sungai berbatuan besar. Sedangkan,  pada  daerah  Hilir  Sungai  Banjaran, dikelilingi terdapat perumahan warga dan disamping jalan  raya,  dasar  sungai  berbatuan  kecil  dan  tidak terlalu dalam.
Hasil perhitungan diferensial leukosit dari ketiga species  ikan  Familia  Cyprinidae  yang  tertangkap  di Sungai  Banjaran,  Banyumas  disajikan  dalam  bentuk histogram pada Gambar 1., Gambar 2., dan Gambar 3. Hasil  tersebut  menunjukkan  bahwa  persentase limfosit  tertinggi  terlihat  pada  species  ikan  yang tertangkap  di  daerah  Hulu,  sedangkan  persentase neutrofil,  eosinofil,  dan  monosit  ditemukan  paling tinggi pada species ikan dari daerah Hilir.
Gambar  1. Persentase  leukosit  pada  ikan  nilem  ( O. vittatus ) yang terdapat dilokasi hulu, tengah, dan hilir.
Gambar  2 .  Persentase  leukosit  pada  ikan  brek  ( B. balleroides ) yang terdapat dilokasi hulu, tengah, dan hilir.
Gambar  3. Persentase  leukosit  pada  ikan  lunjar  ( R. argyrotaenia ) yang terdapat dilokasi hulu, tengah, dan hilir.
Persentase  masing-masing  jenis  leukosit  dari ketiga  species  ikan  dan  tiga  lokasi  adalah  sebagai berikut::

## a. Persentase Sel Neutrofil
Hasil  analisis  menunjukan  perbandingan persentase  sel  neutrofil  masing–masing  spesies  pada masing–masing  lokasi  pengambilan  sampel  berbeda signifikan  (p<0,05).  Hasil  uji  lanjut  memperlihatkan bahwa  presentase  sel  neutrofil  dilokasi  Hulu  dan Tengah tidak berbeda nyata, sedangkan dengan lokasi Hilir  menunjukkan  persentase  sel  neutrofil  yang berbeda  nyata.  Persentase  sel  neutrofil  yang  paling tinggi  berada  pada  lokasi  Hilir,  Sungai  Banjaran (Gambar 4.)
Gambar 4 . Persentase neutrofil dilokasi hulu, tengah, dan hilir Sungai Banjaran, Banyumas.
Keterangan:  Diagram  batang  pada  jenis ikan yang sama dengan huruf berbeda menunjukan berbeda signifikan (p<0,05).
Persentase  sel  neutrofil  di  lokasi  Hilir  Sungai Banjaran, pada Ikan Nilem didapatkan persentase sel neutrofil sebesar 9,5%, pada Ikan Brek persentase sel neutrofil  sebesar  8,5%  dan  pada  Ikan  Lunjar persentase  sel  neutrofil    sebesar  9,4%.  Menurut Hrubec  &  Smith  (2010),  persentase  sel  neutrofil normal  pada  ikan  Familia  Cyprinidae  yaitu  3,25  – 8,40%.  Hasil  penelitian  menunjukkan  persentase  sel neutrofil di lokasi Hilir Sungai Banjaran lebih tinggi dari  kisaran  normal  ikan    Familia  Cyprinidae.    Hal tersebut  mengindikasikan  adanya  aktivitas  sel neutrofil  yang  berfungsi  sebagai  penghancur  benda asing  baik  berupa  bakteri,  virus,  maupun  patogen
melalui  proses  fagositosis  yang  tinggi  pada  Ikan dilokasi Hilir Sungai Banjaran. Menurut Rustikawati (2012), jumlah sel neutrofil yang tinggi mengindikasikan adanya peningkatan kegiatan pengumpulan makrofag  di  tempat  terjadinya  infeksi. Aktivitas  fagositosis  merupakan  pertahanan  pertama dari  respon  seluler  yang  dilakukan  oleh  monosit (makrofag)  dan  granulosit  (neutrofil)  (Utami, et  al ., 2013).
Persentase sel neutrofil ikan Familia Cyprinidae pada  Lokasi  Hulu  Sungai  Banjaran  masih  dalam kisaran  normal.  Ikan  Nilem  memiliki  persentase  sel neutrofil  sebesar  4,6%,  Ikan  Brek  persentase  sel neutrofil  sebesar  4,5%  dan  Ikan  Lunjar  memiliki persentase sel neutrofil sebesar 4,8%. Lokasi Tengah Sungai Banjaran, juga menunjukkan hasil persentase sel  neutrofil  yang  normal.  Ikan  Nilem  memiliki persentase  sel  neutrofil  sebesar  7,8%,  Ikan  Brek persentase sel neutrofil sebesar 5,2% dan Ikan Lunjar memiliki  persentase  sel  neutrofil  sebesar  5,5%. Presentase neutrofil yang rendah pada lokasi Hulu dan Tengah  Sungai  Banjaran  menunjukkan  ikan  dalam kondisi  yang  cukup  sehat.  Menurut  Hartika, et  al . (2014)  jumlah  neutrofil  yang  rendah  menunjukkan tidak adanya serangan benda asing sehingga neutrofil belum  banyak  diproduksi  oleh  tubuh  ikan.  Semakin rendah  jumlah  sel  neutrofil  juga  disebabkan  karena berkurangnya  infeksi  akibat  serangan  bahan  asing. Setelah proses infeksi, maka jumlah sel neutrofil dapat ditekan  karena  jaringan  nekrotik  yang  mengandung neutrofil yang telah mati akan mengalami lisis selama beberapa  hari  (Utami, et  al .,  2013).  Sel  neutrofil memiliki sitoplasma bergranula halus dan ditengahnya  terdapat  inti  bersegmen  seperti  pada (Gambar 5.) (Suhermanto, et al ., 2011).
Gambar 5 . Sel neutrofil ikan brek ( B. balleroides ) di Sungai Banjaran, Banyumas.
b. Persentase Sel Eosinofil.
Hasil  uji  Anova  persentase  sel  eosinofil  pada masing-masing lokasi pengambilan sampel menunjukkan hasil berbeda nyata (p<0,05). Hasil uji lanjut  Duncan  memperlihatkan  bahwa  dilokasi  Hulu dan  Tengah  tidak  menunjukkan  tersentase  sel eosinofil yang berbeda nyata, sedangkan pada lokasi Hilir menunjukkan persentase eosinofil yang berbeda nyata.  Persentase  sel  eosinofil  yang  paling  tinggi berada pada lokasi Hilir, Sungai Banjaran (Gambar 6.)
Gambar 6 . Persentase eosinofil dilokasi hulu, tengah, dan hilir Sungai Banjaran, Banyumas. Keterangan: Diagram batang pada jenis ikan yang sama dengan  huruf berbeda  menunjukan  berbeda  signifikan (p<0,05 ).
Persentase  eosinofil  pada  ikan  nilem  sebesar 5,5%,  pada  ikan  brek  sebesar  7,2%  dan  pada  ikan lunjar sebesar 6,8%. Menurut Hrubec & Smith (2010), persentase  sel  eosinofil  normal  pada  ikan  Familia Cyprinidae  yaitu  2,4  –  8%.  Hasil  tersebut menunjukkan  bahwa  di  lokasi  Hilir  memiliki persentase  sel  eosinofil  yang  tinggi,  tapi  masih termasuk dalam kisaran normal. Persentase eosinofil yang  dalam  kisaran  normal  mengindikasikan  ikan masih dalam kondisi kesehatan yang baik (Lestari et al ., 2017). Sel Eosinofil merupakan sel fagosit, namun lemah. Sel eosinofil akan melekat pada parasit untuk menetralisasikan hasil produk sekresi parasit tersebut dan  kemudian  membunuhnya  (Suhermanto, et  al ., 2011).
Persentase  sel  eosinofil  yang  lebih  rendah terdapat dilokasi Hulu dan Tengah Sungai Banjaran. Persentase  sel  eosinofil  dilokasi  Hulu  Sungai Banjaran  pada  ikan  Nilem  sebesar  2,6%,  Ikan  Brek sebesar 2% dan Ikan Lunjar sebesar 2,2%. Sedangkan, persentase  sel  eosinofil  dilokasi  Tengah  Sungai Banjaran, yaitu: pada Ikan Nilem sebesar 3,8%, Ikan Brek  sebesar  4%  dan  Ikan  Lunjar  sebesar  4,4%. Menurut  Hikmah, et  al .  (2017),  persentase  eosinofil yang  rendah  juga  dapat  dikarenakan  eosinofil memiliki  waktu  peredaran  yang  singkat  di  sirkulasi darah,  hanya  sekitar  6-12  jam,  dan  kemudian  akan bertahan  hidup  dalam  jaringan  selama  dua  minggu. Sel  eosinofil  mempunyai  inti  yang  terletak memanjang  di  tepi  sel,  memiliki  granula  besar  dan sitoplasma  berwarna  lebih  merah  seperti  pada (Gambar 7.) (Suhermanto, et al ., 2011).
Gambar  7 .  Sel  Eosinofil  pada  ikan  brek  ( B. balleroides ) di Sungai Banjaran, Banyumas.
c. Persentase Sel Limfosit. Hasil  uji  Anova  persentase  limfosit  pada masing-masing lokasi pengambilan sampel menunjukkan nilai yang signifikan (p<0,05). Hasil uji lanjut  Duncan  di  lokasi  Hulu,  Tengah  dan  Hilir, Sungai Banjaran menunjukkan persentase sel limfosit yang berbeda nyata (Gambar 8).
Gambar  8 .  Persentase  sel  limfosit  dilokasi  hulu, tengah, dan hilir Sungai Banjara, Banyumas.
Keterangan:  Diagram  batang  pada  jenis  ikan yang  sama  dengan  huruf  berbeda  menunjukan berbeda signifikan (p<0,05).
Persentase sel limfosit yang tertinggi terdapat di lokasi Hulu Sungai Banjaran, hasil ini mengindikasikan pembentukan antibodi ikan dilokasi Hulu  masih  tinggi  dan  baik.  Ikan  Nilem  memiliki persentase  sel  limfosit  sebesar  89,2%,  Ikan  Brek sebesar  90%  dan  pada  Ikan  Lunjar  sebesar  89,8%. Menurut  Hrubec  &  Smith  (2010),  persentase  sel limfosit normal pada ikan Familia Cyprinidae yaitu 60 –  81%.  Hal  tersebut  berpengaruh  terhadap  kondisi kesehatan ikan, dikarenakan limfosit berperan cukup besar  terhadap  peningkatan  respon  imun  atau ketahanan  tubuh  dalam  pembentukan  antibodi  ikan terhadap  serangan  penyakit  dan  infeksi  (Hartika, et al ., 2014).
Limfosit  dapat  digolongkan  mejadi  dua, Limfosit T dan Limfosit B. Pada sel limfosit T, ketika tubuh  atau  jaringan  terpapar  oleh  antigen,  maka limfosit  T  tidak  mampu  mengenal  antigen  tersebut sendirian  tanpa  melalui  reseptor  pesifik.  Dengan adanya sel reseptor spesifik ini memungkinkan sel T lebih  cepat  mengenali  antigen  yang  ada  sehingga langsung memberikan reaksi kekebalan dan menstimulasi  sel  B  untuk  mengeluarkan  antibodi humoral dalam peredaran darah dan mengikat secara khusus  antigen  asing  penyebab  fagositosis,  lisis  sel dan  sel  pembunuh  (killer  sel  atau  sel  K)  dari organisme yang menyerang (Utami, et al ., 2013).
Persentase  sel  limfosit  yang  lebih  rendah terdapat  dilokasi  Hilir  dan  Tengah  Sungai  Banjaran namun  masih  dalam  kosaran  normal  ikan  familia Cyprinidae.  Persentase  sel  limfosit  dilokasi  Hilir Sungai Banjaran pada Ikan Nilem sebesar 76,1%, Ikan Brek sebesar 75,6% dan Ikan Lunjar sebesar 75,3%. Sedangkan,  persentase  sel  limfosit  dilokasi  Tengah Sungai Banjaran pada Ikan Nilem sebesar 83,2%, Ikan
Brek sebesar 85,2% dan Ikan Lunjar sebesar 83,9%. Menurut Preanger, et al . (2016) stres dan lingkungan yang  kurang  baik  dapat  mengakibatkan  terjadinya peningkatan sekresi hormon kortisol, sehingga jumlah limfosit di dalam sirkulasi darah menurun. Sel limfosit mempunyai  bentuk  bulat,  memiliki  sitoplasma berwarna  biru  pucat  dan  inti  berbentuk  bulat  hingga oval bisa dilihat pada (Gambar 9) (Suhermanto et al ., 2011).
Gambar  9. Sel  Limfosit  pada  ikan  brek  ( B. balleroides ) di Sungai Banjaran, Banyumas.
d. Persentase Sel Monosit.
Hasil  uji  Anova  persentase  sel  monosit  pada masing-masing lokasi pengambilan sampel menunjukkan hasil berbeda nyata (p<0,05). Hasil uji lanjut  Duncan  menjelaskan  bahwa  dilokasi  Hulu, Tengah  dan  Hilir,  Sungai  Banjaran  menunjukkan persentase sel monosit yang berbeda nyata. Persentase sel  monosit  yang  paling  tinggi  berada  pada  lokasi Hilir, Sungai Banjaran (Gambar 10)
Gambar  10 .  Persentase  sel  monosit  dilokasi  hulu, tengah, dan hilir Sungai Banjara, Banyumas. Keterangan: Diagram batang pada jenis ikan yang sama dengan huruf berbeda menunjukan berbeda signifikan (p<0,05).
Persentase  sel  monosit  tertinggi  pada  Ikan Nilem  didapatkan  sebesar  8,9%,  pada  Ikan  Brek sebesar  8,7%  dan  pada  Ikan  Lunjar  sebesar  8,5%. Menurut  Hrubec  &  Smith  (2010),  persentase  sel monosit normal pada ikan Familia Cyprinidae yaitu 1 -  8%.  Hasil  penelitian  menunjukkan  persentase  sel monosit yang tinggi di lokasi Hilir Sungai Banjaran. Monosit merupakan sel fagositik yang berperan dalam sistem  imunitas  ikan  melalui  aktivitas  fagositosis. Aktivitas  fagositosis  untuk  melawan  patogen dilakukan oleh monosit melalui beberapa tahap yaitu
pelekatan,  penelanan,  pencernaan  dan  pengeluaran partikel  patogen  (Agung, et  al .,  2013).  Monosit berkemampuan  dapat  masuk  kedalam  jaringan  dan berdiferensiasi menjadi makrofag. Ketika mengalami aktivasi,  makrofag  memiliki  kapasitas  fagosit  lebih kuat daripada sel neutrofil (Suhermanto, et al ., 2011). Persentase  sel  monosit  terendah  pada  ikan familia  Cyprinidae,  terdapat  dilokasi  Hulu  Sungai Banjaran. Ikan Nilem memiliki persentase sel monosit sebesar 3,6%, Ikan Brek sebesar 3,3% dan Ikan Lunjar sebesar  3,2%.  Lokasi  Tengah  Sungai  Banjaran,  juga menunjukkan  hasil  persentase  sel  monosit  dalam kisaran  normal.  Ikan  Nilem  memiliki  persentase  sel monosit  sebesar  4,2%,  Ikan  Brek  persentase  sebesar 5,6%  dan  Ikan  Lunjar  sebesar  6,2%.  Jumlah  yang normal menunjukkan bahwa ikan dalam kondisi yang sehat,  sehingga  tidak  diperlukan  banyak  sel  monosit untuk  memfagosit  dikarenakan  hanya  sedikit  infeksi yang  masuk  ke  dalam  tubuh  atau  belum  adanya rangsangan dari benda-benda asing untuk memproduksi monosit (Hartika, et al ., 2014). Kondisi ini diduga karena adanya persentase sel limfosit yang tinggi  di  dalam  darah  ikan  sehingga  menyebabkan persentase  sel  monosit  yang  rendah.  Hal  ini  sesuai dengan  pernyataan  Kurniawan, et  al .  (2013)  bahwa penurunan  persentase  monosit  diduga  dikarena meningkatnya persentase limfosit untuk memproduksi antibodi,  sehingga  produksi  monosit  terhambat.  Sel monosit memiliki sitoplasma berwarna biru pucat dan bentuk  inti  bervariasi  ada  yang  berbentuk  seperti ginjal  hingga  yang  berbentuk  dua  lobus  besar,  bisa terlihat pada (Gambar 11) (Suhermanto et al ., 2011).
Gambar  11 .  Sel  monosit  pada  ikan  brek  ( B. balleroides ) di Sungai Banjaran, Banyumas.
Penelitian  ini  juga  mengambil  beberapa parameter lingkungan dari 3 zona, yaitu hulu, tengah, dan  hilir  pada  Sungai  Banjaran,  Banyumas.  Pada lokasi  Hulu  Sungai  Banjaran,  mempunyai  suhu berkisar  23  -  24 o C,  pada  lokasi  tengah  Sungai Banjaran,  mempunyai  suhu  berkisar  26  –  28 o C,  dan pada  lokasi  hilir  Sungai  Banjaran,  mempunyai  suhu berkisar 27-30 o C, kisaran ini masih termasuk kedalam baku  mutu kualitas  air  Peraturan  Pemerintah  Nomor 82  Tahun  2001  kelas  III.  Menurut  Arkianti, et  al. (2019),  kisaran  suhu  yang  normal  untuk  kehidupan ikan  adalah  20-30 o C,  suhu  yang  lebih  rendah  akan mengurangi  imunitas,  sedangkan  suhu  terlalu  tinggi dapat  mempercepat  terjadinya  infeksi  bakteri.
Sehingga, suhu di Sungai Banjaran, Banyumas masih dapat mendukung kehidupaan organisme yang hidup didalamnya  termasuk  ikan.  Nilai  pH  di  Sungai Banjaran berkisar antara 7  - 6. Hal ini menunjukkan bahwa perairan sungai cenderung bersifat basa. pH di Sungai Banjaran termasuk normal, sesuai PP No. 82 Tahun  2001  untuk  kelas  III  yakni  sekitar  6  -  9. Kualitas pH di Sungai Banjaran masih dikatakan baik, hal  tersebut  sesuai  dengan  Kadarsah, et  al .  (2017) yang  menyatakan  nilai  pH  yang  normal  bagi kehidupan ikan di perairan alami berkisar antara 6,5- 9.
Pada lokasi Tengah dan Hulu Sungai Banjaran, beberapa  jumlah  sel  leukosit  cukup  rendah  dan terbilang normal. Hal tersebut dikarenakan lokasi ini merupakan  titik  yang  cukup  jauh  dari  perumahan warga, di sekitarnya masih banyak pohon-pohon  yang menaungi  di  sekelilingnya,  kondisi  airnya  nampak jernih. Kualitas air sangat mempengaruhi kelangsungan hidup ikan, termasuk kondisi kesehatan.  Familia  Cyprinidae  termasuk  spesies  air tawar  yang  dapat  hidup  dengan  baik  pada  daerah sungai  yang  mempunyai    arus  yang  deras  maupun lemah  dengan  kualitas  air  yang  baik  (Wahyuni  & Zakaria, 2018).

## SIMPULAN
Persentase  leukosit  dari  ketiga  spesies  paling tinggi  pada  zona  Hilir  dan  persentase  diferensiasi leukosit  melebihi  kisaran  normal    neutrofil  dan monosit.  Presentase  neutrofil  Ikan  Nilem  sebesar 9,5%, Ikan Brek sebesar 8,5% dan Ikan Lunjar sebesar 9,4%. Presentase sel monosit pada Ikan Nilem sebesar 8,9%, Ikan Brek sebesar 8,7% dan Ikan Lunjar sebesar 8,5%.
Sel  Granular,  yang  teramati  yaitu  neutrofil  dan eosinofil.  Neutrofil  memiliki  sitoplasma  bergranula halus  dan  ditengahnya  terdapat  inti  bersegmen. Eosinofil  mempunyai  sitoplasma  berwarna  lebih merah,  inti  yang  terletak  memanjang  di  tepi  sel, memiliki  granula  besar.  Sedangkan,  Sel Agranular yang  teramati  yaitu  limfosit  dan  monosit.  Limfosit mempunyai  bentuk  bulat,  memiliki  sitoplasma berwarna  biru  gelap  dan  inti  berbentuk  bulat  hingga oval.  Monosit  memiliki  sitoplasma  berwarna  biru pucat  dan  bentuk  inti  bervariasi  ada  yang  berbentuk seperti ginjal hingga yang berbentuk dua lobus besar.
Perlu diadakan penelitian lebih lanjut mengenai faktor  dari  peningkatan  sel  leukosit  yang  melebihi kadar  normal  dari  masing-masing  ikan  Familia Cyprinidae  di  Sungai  Banjarangan,  Banyumas  agar dapat  dikorelasikan  dengan  jelas  sehingga  dapat menyajikan data dan informasi terbaru dari beberapa spesies  ikan  dari  Familia  Cyprinidae  dari  Sungai Banjaran, Banyumas.

## DAFTAR REFERENSI
Agung,  L.  A.,  Prayitno,  S.  B.  &  Sarjiyo.,  2013. Pengaruh  Pemberian  Ekstrak  Daun  Jeruju ( Acanthus  ilicifolius )  Terhadap  Profil  Darah
Ikan Kerapu Macan ( Epinephelus fuscoguttatus ). Journal of Aquaculture Management  and  Technology ,  2(1),  pp.  87- 101.
Agungpriyono,  S.,  Prawira,  A.  Y.,  Darusman,  H.  S., Farida, W. R. & Novelina, S., 2020. Anotomi Makroskopis  dan  Analisis  Dinamika  Profil Darah  Pada  Proses  Penyembihan  Luka  Pada Kulit Landak Jawa ( Hystrix javanica). Jurnal Veteriner , 22(1), pp. 1-13.
Arkianti, N., Dewi, N. K. & Martuti, N. K. T., 2019. Kandungan  Logam  Berat  Timbal  (Pb)  pada Ikan  di  Sungai  Lamat  Kabupaten  Magelang. Life Science, 8(1), pp. 54 -63 .
Duman, S., 2020. Determination of Reference Values of  Some  Hematological  and  Immunological Parameters  in  Healthy  Russian  Sturgeon ( Acipenser gueldenstaedtii ). Journal of Anatolian Environmental and Animal Science , 5(2), pp. 212-217.
Hartika,  R.,  Mustahal.  &  Putra,  A.  N.,  2014. Gambaran  Darah  Ikan  Nila  ( Oreochromis niloticus ) Dengan Penambahan Dosis Prebiotik Yang Berbeda Dalam Pakan. Jurnal
Perikanan dan Kelautan , 4(4), pp. 259-267.
Hastuti,  S.  &  Subandiyono.,  2011.  Performa Hematologis  Ikan  Lele  Dumbo  ( Clarias gariepinus )  dan  Kualitas  Air  Media  Pada Sistim  Budidaya  Dengan  Penerapan  Kolam Biofiltrasi. Jurnal Saintek Perikanan , 6(2), pp.
1-5.
Hrubec,  T.  C.  &  Smith,  S.  A.,  2010. Hematology  of Fishes. Singapura: Wiley-Blackwell.
Jacquemin,  S.  J.  &  Pyron,  M.,  2016.  A  Century  of Morphological Variation in Cyprinidae Fishes. BMC Ecology, 16(48), pp. 1-18.
Kadarsah, A., Muhamat. & Hidayaturrahmah., 2017. Keanekaragaman Jenis dan Prevalensi Ektoparasit  Pada  Lima  Jenis  Ikan  Komersial Di Desa Sungai Batang Kecamatan Martapura Barat. Bioscientiae, 14(1), pp. 1-8.
Kurniawan., Prayitno, S. B., Sarjito. & Angela, M. L.,
2013. Pengaruh Ekstrak Daun Sirsak ( Annona muricata L)  Terhadap  Profil  Darah  dan Kelulushidupan Ikan Lele Sangkuriang ( Clarias  gariepinus Var.  Sangkuriang)  yang Diinfeksi  Bakteri Aeromonas  Hydrophila . Journal  of  Aquaculture  Management  and Technology , 2(4), pp. 50-62.
Lestari,  E.,  Setyawati,  T.  R.  &  Yanti,  A.  H.,  2017. Profil Hematologi Ikan Gabus ( Channa striata Bloch, 1793). Jurnal Protobiont , 6(3), pp. 283- 289.
Maftuch,  Nursyam,  H.  &  Sukarni,  2012.  Kajian
Penggunaan Ciprofloxacin Terhadap
Hematologi  Ikan  Botia  ( Botia  macracanthus , Bleeker)  yang  Diinfeksi  Bakteri Aeromonas hydrophila . Journal Exp. Life Sci ., 2(2), pp. 65- 69.
Meraj, M., Nizam, M., Wani, S. A., Maqbool, F., Ali. M.  N.,  Ganai,  B.  A.  &  Bhat,  F.  A.,  2017. Alteration  in  Hematology  of Cyprinus  carpio Under The Stress of Pollution of Water Bodies of  Kashmir  Valley. International  Journal  of Fisheries  and  Aquatic  Studies ,  5(5),  pp.  176- 179.
Moniruzzaman,  M.,  Mukherjee,  J.,  Das,  D.  &
Chakraborty,  S.  B.,  2017.  Impact  of  Physical Aquatic Parameters on The Annual
Rhythmicity  of  Sex  Steroid  and  Cartisol  and Their  Interrelationship  in  Two  Distanly Related  Fish  Population. Biology  Rhythm Research , 48(4), pp. 1-12.
Preanger,  C.,  Utama,  I.  H.  &  Kardena,  I.  M.,  2016. Gambaran Ulas Darah Ikan Lele Di Denpasar Bali.  Indonesia  Medicus  Veterinus,  5(2),  pp. 96-103.
Royan,  F.,  Rejeki,  S.  &  Haditomo,  A.  H.  C.,  2014.
Pengaruh  Salinitas  Yang  Berbeda  Terhadap Profil Darah Ikan Nila (Oreochromis niloticus).  Journal  Aquaculture  Management and Technology, 3(2), pp. 109-117.
Rustikawa, I. 2012. Efektivitas Ekstrak Sargassum sp. Terhadap  Diferensiasi  Leukosit  Ikan  Nila ( Oreochromis niloticus ) yang Diinfeksi Streptococcus iniae. Jurnal Akuatika , 3(2), pp. 125-134.
Sabilu, K., 2010. Dampak Toksisitas Nikel Terhadap Kondisi  Hematologi  Ikan  Bandeng Chanos chanos Forsskal,  Studi  Lanjut  Respon Fisiologi. Paradigma , 16(2), pp. 205-2016.
Samuel.  &  Adjie,  S.,  2008.  Zonasi,  Karakteristik Fisika-Kimia  Air  Dan  Jenis-Jenis  Ikan  Yang Tertangkap Di Sungai Musi, Sumatera Selatan. Jurnal Ilmu-ilmu dan Perikanan Indonesia, 15, pp. 41-48.
Suhermanto,  A.,  Andayani,  S.  &  Maftuch,  2011. Pemberian  Total  Fenol  Teripang  Pasir ( Holothuria  scabra )  Untuk  Meningkatkan Leukosit  Dan  Diferensial  Leukosit  Ikan  Mas ( Cyprinus  carpio )  Yang  Diinfeksi  Bakteri Aeromonas hydrophila . Jurnal Kelautan , 4(2), pp. 150-157.
Sula,  E.  &  Aliko,  V.,  2017.  Effects  of  Stressors  on Hematological  and  Immunological  Response in  The  Fresh  Water  Crucian  Carp  Fish, Carassius carassius . Albanian Journal Agricultural Science , pp. 1-8.
Suroso, Nugroho, P. S. & Pamuji, P., 2007. Evaluasi Kinerja  Jaringan  Irigasi  Banjaran  Untuk
Meningkatkan
Efektivitas dan Efisiensi Pengelolaan  Air  Irigasi. Dinamika  TEKNIK SIPIL , 7(1), pp. 55-62.
Susatyo,  P.,  Sugiharto,  Hana  &  Chasanah,  T.,  2016.
Effects of Some Feed Suplements Types to the Growth of Javaen Barb/Brek Fish ( Barbonymus  balleroides )  Second  Filial  as Domestication Product. Biosaintifika , 3(8), pp.
278-285.
Suwarsito  &  Sarjanti,  E.,  2019.  Analisis  Spasial
Tingkat Pencemaran Sungai-Sungai Di
Purwokerto,  Jawa  Tengah. Seminar  Nasional Hasil  Penelitian  dan  Pengabdian  Pada Masyarakat IV , pp. 545-551.
Svobodova,  Z.  &  Vykusova,  B.,  1991. Diagnostics, Prevention, and Therapy of Fish Diseases and
Intaxications. Czechoslavakia: Research Institue  of  Fish  Culture  and  Hydrobiology Vodnany.
Utami,  D.  T.,  Prayitno,  S.  B.,  Hastuti,  S.  &  Santika,
A.,  2013.  Gambaran  Parameter  Hematologis Pada Ikan Nila ( Oreochromis niloticus ) Yang Diberi  Vaksin  DNA Streptococcus  iniae Dengan  Dosis  Yang  Berbeda. Journal  of Aquaculture  Management  and  Technology , 2(4), pp. 7-20.
Wahyuni, T. T. & Zakaria, A., 2018. Keanekaragaman Ikan di Sungai Luk Ulo Kabupaten Kebumen. Biosfera , 35(1), pp. 23-28.
Wartika, Purnama, A. A. & Lestari, R., 2017. Jenis- Jenis  Ikan  Cyprinidae  Di  Sungai  Kumango Kecamatan Tambusai Kabupaten Rokan Hulu.
Jurnal  Mahasiswa  FKIP  Prodi  Pendidikan Biologi, 3(1), pp. 1-4.
Widyaningrum, H., Simanjuntak, S. B. I. & Susatyo,
P.,  2017.  Diferensial  Leukosit  Ikan  Gurami ( Osphronemus gouramy Lac.) Dengan Perbedaan  Level  Suplementasi  Spirulina platensis  Dalam  Pakan. Scripta  Biologica, 4(1), pp. 37-4