Journal Syifa Sciences and Clinical Research (JSSCR) Volume 5 Nomor 2, 2023
Journal Homepage: http://ejurnal.ung.ac.id/index.php/jsscr , E-ISSN: 2656-9612 P-ISSN:2656-8187 DOI : https://doi.org/10.37311/jsscr.v5i2.19371
Penentuan Kadar Flavonoid Daun Rumput Knop ( Hyptis capitata Jacq.)  Menggunakan Spektrofotometri UV-Vis
Hamsidar Hasan 1* , A. Mu'thi Andy Suryadi 2 , Syamsul Bahri 3 , Ni Luh Widiastuti 4
1,2,4 Jurusan Farmasi Fakultas Olahraga dan Kesehatan, Universitas Negeri Gorontalo, Jl. Jenderal Sudirman No. 06 Kota Gorontalo 96128, Indonesia
3 Fakultas Pertanian, Universitas Negeri Gorontalo,
Jl. Jenderal Sudirman No. 06 Kota Gorontalo 96128, Indonesia
* Penulis Korespondensi. Email: hamsidar.hasan@ung.ac.id

## ABSTRAK
Rumput  Knop  ( Hyptis  capitata Jacq.)  merupakan  salah  satu  tumbuhan  gulma  yang dimanfaatkan menjadi obat tradisional khususnya pada bagian daun. Flavonoid adalah salah satu metabolit sekunder yang terkandung dalam daun Rumput Knop ( Hyptis capitata Jacq.) yang  berfungsi  sebagai  anti  inflamasi,  analgesik,  antipiretik  dan  anti  diabetes.  Besarnya kadar flavonoid yang dapat tertarik dioptimalkan dengan pemilihan metode ekstraksi yang tepat. Metode ekstraksi yang tepat akan menentukan banyaknya zat yang dapat tertarik dan mendapatkan  kandungan  zat  aktif  yang  tinggi.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk membandingkan kadar flavonoid dalam ekstrak metanol daun Rumput Knop ( Hyptis capitata Jacq.) pada dua metode maserasi berbeda yaitu maserasi bertingkat dan maserasi total. Pada maserasi  bertingkat  menggunakan  pelarut  n-heksan,  etil  asetat  dan  metanol  sedangkan maserasi  total  menggunakan  pelarut  metanol.  Analisis  kualitatif  pada  penelitian  ini menggunakan  metode  uji  pereaksi  warna  dan  kromatografi lapis  tipis  menggunakan  eluen yaitu n-heksan : etil asetat dengan perbandingan (7:3) dan analisis kuantitatif menggunakan metode  spektrofotometri  UV-Vis  pada  panjang  gelombang  maksimum  435  nm  dengan pembanding standar quarsetin. Hasil menunjukkan bahwa kadar rata-rata flavonoid ekstrak metanol  daun  Rumput  Knop  ( Hyptis  capitata Jacq.) dengan  menggunakan  metode  maserasi bertingkat  sebesar  2,9750%  dan  metode  maserasi  total  sebesar  4,8822%.  Kadar  tertinggi diperoleh  dari  ekstrak  metanol  daun  Rumput  Knop  ( Hyptis  capitata Jacq.)  dengan  metode maserasi total. Kata Kunci: Rumput Knop (Hyptis capitata Jacq.), Flavonoid, Maserasi, Spektrofotometri UV-Vis
Diterima: 18-02-2023 Disetujui: 29-04-2023 Online: 01-05-2023

## ABSTRACT
Knop grass (Hyptis capitata Jacq.) is a weed used as a tradisional medicine, especially for the leaves. Flavonoids are one of the secondary metabolites contained in the Knop Grass (Hyptis capitata Jacq.) leaves,  wich  function  as  anti-inflammatory,  analgesic,  antipyretic  and  anti-diabetic.  The  amount  of extracted  flavonoids  is  optimized  by  choosing  the  right  extraction  method,  as  it  will  determine  the amount  of  substance  that  can  be  attracted  and  obtain  a  high  content  of  active  substansces.  This research aimed to compare the flavonoid levels in the methanol extract of Knop Grass (Hyptis capitata Jacq.)  leaves  in  two  different  maceration  methods:  multilevel  maceration  and  total  maceration. Multilevel maceration employed n-hekxane, ethyl acetat and methanol solvents, while total maceration employed methanol  solvent. In the meantime, the qualitative analysis in this reaserch used the  color reagent test method, whereas the thin layer chromatography used the eluent, namely n-hexane : ethyl
acetate with a ratio (7:3). In addition, the quantitative analysis used the UV-Vis  spectrophotometry method  at  a  maximum  wavelength  of  435  nm  with  standard  quercetin  as  a  comparison.  The  result signified that the average flavonoid level in the methanol extract of Knop Grass (Hyptis capitata Jacq.) leaves  using  the  multilevel  maceration  method  was  2,9750%.  The  total  maceration  method  was 4,8822%. Furthermore, the total maceration method donated the highest concentration obtained from the methanol extract of Knop Grass (Hyptis capitata Jacq.) leaves . Copyright © 2023 Jsscr. All rights reserved.
Keywords: Knop Grass; Hyptis capitata Jacq.; Flavonoid;  Maceration; UV-Vis Spechtrofotometry Received: 2022-02-18 Accepted: 2023-04-29 Online: 2023-05-01

## 1. Pendahuluan
Rumput Knop ( Hyptis capitata Jacq.) dikenal di daerah Gorontalo dikenal dengan nama  Dungo  Herani.  Rumput  Knop  telah  dimanfaatkan  oleh  beberapa  suku  di Indonesia untuk mengatasi berbagai macam penyakit, seperti obat pada luka terbuka, demam  maupun  diabetes.  Organ  tumbuhan  yang  dimanfaatkan  sebagai  obat  juga bervariasi mulai dari daun, pucuk, batang muda dan bunga. Pada penelitian Kusuma et  al .,  [1]  mengemukakan  bahwa  ekstrak  metanol  daun  Rumput  Knop  mengandung sejumlah  senyawa  fitokimia  seperti  alkaloid,  tanin  dan  flavonoid.  Kandungan flavonoid  sebagai  kandidat  antioksidan  pada  Rumput  Knop  yang  berkontribusi sebagai analgesik atau pereda nyeri dan inflamasi pada sakit kepala, demam dan perut kembung serta anti kanker dan anti diabetes [2].
Ekstraksi merupakan suatu metode pemisahan suatu zat yang didasarkan pada perbedaan  kelarutan  terhadap  dua  cairan  tidak  saling  larut  yang  berbeda,  biasanya yaitu air dan yang lainnya berupa pelarut organik. Metode ekstraksi yang dilakukan pada  penelitian  ini  adalah  maserasi  total  dan  maserasi  bertingkat.  Metode  maserasi digunakan  karena  memiliki  beberapa  keunggulan  yaitu  metode  sederhana,  mudah, relatif  murah,  terjadinya  kontak  antara  sampel  dengan  pelarut  yang  cukup  lama memudahkan pelarut untuk mengikat senyawa yang ada pada sampel dan tidak perlu pemanasan sehingga kecil kemungkinan bahan alam menjadi rusak atau terurai [3,4]
Metode  maserasi  total  adalah  metode  yang  hanya  menggunakan  satu  pelarut untuk  ekstraksi.  Kelebihan  metode  ini  yaitu  lebih  sederhana  dan  tidak  memerlukan waktu  yang  lama,  akan  tetapi  rendemen  yang  dihasilkan  sangat  sedikit.  Sedangkan metode maserasi bertingkat merupakan metode yang akan mengekstrak keseluruhan senyawa dari suatu bahan berdasarkan polaritas pelarut yang akan digunakan secara bertahap.  Kelebihannya  yaitu  ekstrak  yang  didapatkan  lebih  murni  dibandingkan dengan maserasi total, menghasilkan senyawa secara spesifik pada tiap pelarut yang digunakan  dan  menghasilkan  rendemen  dalam  jumlah  yang  besar  akan  tetapi penggunaan pelarut akan sangat banyak [5,6]
Menurut  Sàadah et  al .,  [7],  kandungan  metabolit  sekunder  utama  didapatkan dengan  cara  melakukan  optimasi  dalam  proses  pembuatan  ekstrak.  Optimasi pembuatan  ekstrak  perlu  dilakukan  untuk  mendapatkan  kandungan  zat  aktif  yang tinggi.  Optimasi  pembuatan  ekstrak  salah  satunya  adalah  metode  ekstraksi.  Metode ekstraksi akan menentukan banyaknya zat yang dapat tersari dari simplisia tanaman sesuai  dengan  tingkat  kepolaran  pelarut.  Banyaknya  zat  yang  dapat  tersari  dapat dilihat  dengan  optimasi  metode  ekstraksi  sehingga  perlu  dilakukan  penelitian  untuk membandingkan kadar metabolit sekunder yaitu flavonoid pada ekstrak daun Rumput Knop dengan metode maserasi total dan maserasi bertingkat.
Penetapan  kadar  flavonoid  akan  diuji  menggunakan  spektrofotometri  UV-Vis pada bilangan gelombang maksimum lalu diamati puncak serapannya sehingga akan menghasilkan  nilai  absorbansi  dan  dianalisis  kadar  senyawa  pada  ekstrak. Spektrofotometer  UV-Vis  dapat  digunakan  untuk  menganalisis  banyak  zat  organik dan  anorganik,  selektif  mempunyai  ketelitian  yang  tinggi  dengan  kesalahan  relatif sebesar  1%-3%,  analisis  dapat  dilakukan  dengan  cepat  dan  tepat,  serta  dapat digunakan untuk menetapkan kuantitas zat yang sangat kecil. Spektrum serapan ultra violet  dan  serapan  tampak  merupakan  cara  tunggal  yang  paling  bermanfaat  untuk mengidentifikasi  struktur  flavonoid.  Flavonoid  mengandung  sistem  aromatis  yang terkonjugasi dan dapat menunjukkan pita serapan kuat pada daerah UV-Vis [8,9].
Permadi et  al .,  [10]  telah  melakukan  penelitian  tentang  perbandingan  metode maserasi  berbeda  terhadap  kadar  flavonoid  total  ekstrak  herba  ciplukan  secara kolorimetri, hasil menunjukkan tidak ada perbedaan nyata pada kadar flavonoid total dari kedua metode ekstraksi dan kedua metode ekstraksi tidak memberikan pengaruh terhadap hasil kadar flavonoid.
Handayani et  al .,  [11]  telah  melakukan  penelitian  tentang  perbandingan  kadar flavonoid  pada  ekstrak  buah  mahkota  dewa  ( Phaleria  macrocarpa )  pada  metode ekstraksi  dingin yang  berbeda,  hasil  menunjukkan  kadar  flavonoid yang  didapatkan lebih tinggi pada metode remaserasi dibandingkan metode perkolasi.
Berdasarkan uraian diatas dapat dinyatakan bahwa pemilihan metode ekstraksi yang  tepat  dapat  mempengaruhi  banyaknya  kandungan  senyawa  flavonoid  yang dapat  tertarik  di  dalam  pelarut,  maka  dari  itu  perlu  adanya  penelitian  tentang perbandingan kadar flavonoid ekstrak daun Rumput Knop ( Hyptis capitata Jacq.) pada metode maserasi berbeda secara Spektrofotometri UV-vis.

## 2.  Metode Desain Penelitian
Penelitian  ini  menggunakan  desain  penelitian  eksperimental  laboratorium dengan  tujuan  untuk  membandingkan  kadar  senyawa  flavonoid  dari  ekstrak  daun Rumput  Knop  ( Hyptis  capitata Jacq.)  pada  metode  maserasi  bertingkat  dan  maserasi total dengan menggunakan metode Spektrofotometri UV-Vis.
Bahan Penelitian
Bahan yang digunakan pada penelitian yaitu aluminium foil, asam klorida (HCl), serbuk simplisia daun Rumput Knop ( Hyptis capitata Jacq.), etanol 70%, etil asetat, kain saring, kertas saring, lempeng KLT silika gel, metanol p.a (pro analysis) dan metanol teknis, n-Heksan, serbuk Magnesium (Mg) dan tisu.

## Alat Penelitian
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  yaitu  batang  pengaduk,  blender, cawan porselen, camber, gelas kimia (Pyrex®), gelas ukur (Pyrex®), hot plate, lampu UV 254 nm dan 366 nm (Camag®), mikropipet, neraca analitik (Osuka®), pipa kapiler, pipet  tetes,  pisau,  rak  tabung  reaksi,  Spektrofotometer  UV-Vis  (Thermo  Scientific®; Jerman), spatula, tabung reaksi, vial dan wadah maserasi.

## Ekstraksi Daun Rumput Knop
Ekstraksi  dilakukan  menggunakan  metode  maserasi  total  yaitu  hanya menggunakan satu jenis pelarut. Serbuk simplisia daun Rumput Knop ( Hyptis capitata Jacq.)  sebanyak  300  g  dimasukkan  ke  dalam  wadah  maserasi  lalu  ditambahkan metanol sebanyak 3000 mL atau hinga sampel terendam. Kemudian didiamkan selama
3  x  24  jam  sambil  sesekali  diaduk  (setiap  6  jam).  Setelah  3  x  24  jam  hasil  ekstraksi dipisahkan  residu  dan  filtrat.  Filtrat  yang  didapatkan  kemudian  diuapkan menggunakan  hot  plate  hingga didapatkan  ekstrak  kental.  Hasil  ekstrak  kental akan dihitung %rendamennya.

## Maserasi Bertingkat
Ekstraksi  dilakukan  menggunakan  metode  maserasi  bertingkat  menggunakan pelarut  dengan  kepolaran  makin  meningkat  yaitu  n-heksan,  etil  asetat  dan  metanol. Serbuk simplisia daun Rumput Knop (Hyptis capitata Jacq.) ditimbang sebanyak 300 g dimasukkan ke dalam wadah maserasi lalu ditambahkan n-heksan sebanyak 3000 mL atau hinga sampel terendam. Kemudian didiamkan selama 3 x 24 jam sambil sesekali diaduk (setiap 6 jam). Setelah 3 x 24 jam hasil ekstraksi dipisahkan residu dan filtrat. Residu (ampas) serbuk simplisia dikeringkan dengan cara diangin-anginkan beberapa saat  hingga  kering.  Setelah  residu  kering  dimaserasi  kembali  selama  3  x  24  jam menggunakan  pelarut  etil asetat  sebanyak 3000  mL  dengan  sesekali  diaduk  (setiap  6 jam), setelah 3 x 24 jam residu dipisahkan dari filtrat. Residu (ampas) serbuk simplisia dikeringkan  kembali  kemudian  dimaserasi  lagi  menggunakan  pelarut  metanol sebanyak 3000 mL dengan prosedur yang sama.
Hasil filtrat dari masing-masing pelarut kemudian diuapkan menggunakan hot plate  hingga  terbentuk  ekstrak  kental  dan  akan  dihitung  %rendamennya menggunakan rumus [12]:
Skrining Fitokimia Ekstrak Daun Rumput Knop ( Hyptis capitata Jacq.)

## Uji Flavonoid
Sebanyak  ±  1  mL  ekstrak  cair  masing-masing  dimasukkan  ke  dalam  tabung reaksi  kemudian  ditambahkan  HCl  Pekat  dan  Serbuk  Magnesium,  lalu  dipanaskan dengan waktu 15 menit di atas penangas air. Apabila terbentuk warna kuning, jingga dan merah berarti positif flavonoid [13].

## Analisis Kromatografi Lapis
Ekstrak  metanol  kental  masing-masing  metode  ekstraksi  daun  Rumput  Knop ( Hyptis capitata Jacq.) dianalisis menggunakan Kromatografi Lapis Tipis (KLT) dengan fase  diam  silika  gel  dan  fase  gerak  eluen  n-heksan  dan  etil  asetat  pada  berbagai perbandingan.  Masing-masing  ekstrak  dilarutkan  dengan  pelarut  yang  sesuai, ditotolkan  pakai  pipa  kapiler  pada  lempeng  tepat  pada  garis  batas  awal  elusi  lalu dikeringkan. Setelah itu lempeng dimasukan dalam chamber yang telah diisi dengan beberapa  perbandingan  eluen  yang  digunakan.  Plat  dikeluarkan  dari  camber  dan dikeringkan.  Masing-masing  KLT  divisualisasi  di  bawah  lampu  UV  254  nm  dan  366 nm.  Lalu  lempeng  KLT  disemprotkan  dengan  penampak  bercak  yaitu  reagen  AlCl 3 10%. Setelah didapatkan noda yang diinginkan dilanjutkan dengan menghitung nilai Rf-nya menggunakan rumus [14]:
Rendamen ( % ) = Berat Ekstrak Berat Simplisia Awal x 100% Rf= Jarak yang Ditempuh oleh Komponen Jarak yang Ditempuh oleh Pelarut

## Penetapan Kadar Flavonoid

## Pembuatan larutan standar Quarsetin
Dilakukan  penimbangan  sebanyak  10  mg  baku  standar  quersetin  yang digunakan  dan  dilarutkan  dalam  metanol  p.a  ( pro  analysis )  sebanyak  10  ml  yang digunakan untuk 1000 ppm. Dari larutan standar quarsetin 1000 ppm tersebut, dipipet sebanyak 2  mL  yang  dilarutkan  ke dalam  metanol  p.a  ( pro  analysis )  sebanyak 20  mL yang digunakan untuk 100 ppm [15].

## Pembuatan seri konsentrasi standar Quarsetin
Dari  konsentrasi  100  ppm  dibuat  beberapa  konsentrasi  yang  berbeda  yaitu  10 ppm, 20 ppm, 30 ppm, 40 ppm, dan 50 ppm dengan memipet 1 ml, 2 ml, 3 ml, 4 ml, 5 ml  berturut-turut  dan  dilarutkan  dengan  metanol  p.a  ( pro  analysis )  hingga  10  ml. Kemudian  dipipet  sebanyak  0,5  ml  masing-masing  konsentrasi  larutan  quarsetin diencerkan  dengan  1,5  ml  metanol  p.a  ( pro  analysis )  lalu  di  tambahkan  0,1  ml  AlCl 3 10%, 0,1 ml Natrium asetat 1M dan 2,8 ml aquadest. Setelah itu didiamkan pada suhu ruang selama operating time (30 menit) [15].

## Optimasi Panjang Gelombang Maksimum (λmax) Quarsetin
Optimasi  panjang  gelombang  dilakukan  yaitu  untuk  mengetahui  panjang gelombang maksimum yang akan digunakan dalam pengukuran kadar sampel ekstrak metanol  daun  Rumput  Knop  ( Hyptis  capitata Jacq.)  menggunakan  spektrofotometri UV-Vis. Salah satu konsentrasi larutan standar quarsetin yang digunakan akan diukur pada  panjang  gelombang  400-450  nm  untuk  melihat  gelombang  maksimum  dengan absorbansi tertinggi [15].

## Pembuatan Kurva Kalibrasi Standar Quarsetin
Larutan standar quarsetin yang telah dibuat pada beberapa konsentrasi dan telah didiamkan pada suhu ruang yaitu konsentrasi 10 ppm, 20 ppm, 30 ppm, 40 ppm, dan 50  ppm  dilakukan  pengukuran  untuk  mendapatkan  nilai  absorbansi  menggunakan spektrofotometer  UV-Vis  pada  gelombang  maksimum  yang  diperoleh  sebelumnya [15].

## Penetapan kadar flavonoid dalam sampel Ekstrak metanol daun Rumput Knop
Penetapan kadar flavonoid ekstrak metanol daun Rumput Knop ( Hyptis capitata Jacq.)  dari  2  metode  yaitu  maserasi  tunggal  dan  maserasi  bertingkat  masing-masing dibuat pada konsentrasi sebesar 1000 ppm dengan menimbang sebanyak 100 mg dari ekstrak,  kemudian  dilarutkan  dalam  metanol  p.a  ( pro  analysis )  sebagai  pelarut sebanyak  100  mL.  Larutan  uji  1000  ppm  kemudian  dipipet  sebanyak  0,5  ml  lalu ditambahkann dengan 1,5 ml metanol p.a ( pro analysis ), kemudian di tambahkan 0,1 ml AlCl 3 10%, 0,1 ml Natrium asetat 1 M, dan 2,8 ml aquadest. Setelah itu didiamkan pada suhu ruang selama operating time (30 menit). Absorbansi larutan dibaca pada panjang gelombang  maksimum  yang  telah  diperoleh  sebelumnya  dilakukan  dalam  tiga replikasi  untuk  setiap  larutan.  Hasil  absorbansi  kemudian  dihitung  menggunakan persamaan  regresi  linear  dari  kurva  baku  standar  quarsetin  yang  telah  diukur sebelumnya untuk memperoleh konsentrasi flavonoid yang terkandung pada ekstrak [15].

## 3.  Hasil dan Pembahasan

## Ekstraksi Daun Rumput Knop
Daun  Rumput  Knop  ( Hyptis  capitata Jacq.)  diperoleh  dari  Desa  Tri  Rukun, Kecamatan  Wonosari,  Kabupaten  Boalemo,  Provinsi  Gorontalo.  Daun  Rumput  Knop yang telah diambil dicuci bersih, dirajang kemudian dikeringkan dan dihaluskan agar memperoleh serbuk simplisia.
Tabel 1. Hasil Rendamen Daun Rumput Knop ( Hyptis capitata Jacq.) Metode Ekstraksi Ekstrak Berat Sampel (gram) Volume Pelarut (mL) Berat Ekstrak (gram) Rendemen (%) Maserasi Bertingkat n-Heksan 300 3000 40 13,3 Etil Asetat 289 3000 42 14,5 Metanol 276 3000 48 15,6 Maserasi Total Metanol 300 3000 52 17,3
Tabel  1  menunjukkan  bahwa  hasil  ekstrak  dari  maserasi  bertingkat  dengan sampel  daun  Rumput  Knop  ( Hyptis  capitata Jacq.)  sebanyak  300  g  menggunakan pelarut n-heksan diperoleh persen rendemen sebanyak 13,3%, pelarut etil asetat persen rendemen  sebanyak  14,5%,  dan  pelarut  metanol  persen  rendemen  sebanyak  15,6%. Sedangkan  hasil  ekstrak  dari  maserasi  total  dengan  sampel  daun  Rumput  Knop ( Hyptis capitata Jacq.) sebanyak 300 g menggunakan pelarut metanol diperoleh persen rendemen  sebanyak  17,3%.  Hasil  persen  rendemen  dari  masing-masing  ekstrak  n- heksan, etil asetat, metanol pada maserasi bertingkat dan metanol pada maserasi total memiliki persen rendemen yang memenuhi syarat, dimana hasil tersebut menunjukan bahwa  proses  ekstraksi  berjalan  dengan  baik.  Hal  ini  disesuaikan  dengan  syarat rendemen  ekstrak  kental  daun  Rumput  Knop  menurut  Depkes  RI,  [16]  yaitu  tidak kurang  dari  13,0%.  Menurut  Apriliani et  al .,  [17]  mengemukakan  bahwa  faktor  yang mempengaruhi  rendemen  adalah  kadar  air  dan  kadar  lemak  dalam  produk  akhir. Hasil  rendemen  dari  suatu  sampel  sangat  diperlukan  karena  untuk  mengetahui banyaknya  ekstrak  yang  diperoleh  selama  proses  ekstraksi.  Semakin  tinggi  nilai rendemen menunjukkan bahwa ekstrak yang dihasilkan semakin besar.

## Skrining Fitokimia Senyawa Flavonoid Ekstrak Daun Rumput Knop
Skrining  fitokimia  dilakukan  untuk mengetahui  kandungan  senyawa  flavonoid pada  masing-masing  ekstrak.  Uji  skrining  fitokimia  ini dilakukan  pada  ekstrak daun Rumput Knop metode maserasi bertingkat dan maserasi total menggunakan pereaksi wilstater dilakukan  dengan  menambah  asam  klorida  (HCl)  dan  sebuk  Magnesium (Mg).
Tabel 2. Hasil Skrining Fitokimia Senyawa Flavonoid Ekstrak Daun Rumput Knop
( Hyptis capitata Jacq.) Metode Maserasi Ekstrak Daun Rumput Knop Reagen Positif Hasil Keterangan Maserasi Bertingkat n-Heksan HCl + Serbuk Mg Hijau, Merah, Kuning, Ungu (-) Tidak berubah Warna Etil Asetat HCl + Serbuk Mg Hijau, Merah, Kuning, Ungu (+) Merah tua Metanol HCl + Serbuk Mg Hijau, Merah, Kuning, Ungu (+) Merah tua Maserasi Total Metanol HCl + Serbuk Mg Hijau, Merah, Kuning, Ungu (+) Merah tua
Tabel 2 menunjukkan data hasil uji skrining fitokimia senyawa flavonoid ekstrak daun  Rumput  Knop  ( Hyptis  capitata Jacq.)  metode  maserasi  bertingkat  positif mengandung flavonoid pada ekstrak etil asetat dan metanol. Sedangkan pada metode maserasi  total  positif  mengandung  senyawa  flavonoid  pada  ekstrak  metanol  yang ditandai  dengan  terjadinya  perubahan  warna  merah  tua.  Hal  ini  sesuai  menurut Rukmini et al ., [18] dan Dewi et al ., [19] bahwa uji positif flavonoid ditunjukkan dengan terbentuknya  warna  merah,  kuning,  atau  jingga.  Uji  flavonoid  positif  pula  yakni dengan adanya perubahan warna hijau kehitaman atau hijau pekat. Hal ini didukung menurut  Tambaru et  al .,  [20]  yang  menyebutkan  bahwa  daun  Rumput  Knop  ( Hyptis capitata Jacq.) mengandung senyawa flavonoid.

## Hasil Kromatografi Lapis Tipis Ekstrak Daun Rumput Knop
Pengujian kualitatif ekstrak daun Rumput Knop ( Hyptis capitata Jacq.) dilakukan dengan  menggunakan  metode  kromatografi  lapis  tipis  (KLT),  dielusi  menggunakan eluen  n-heksan  :  etil  asetat  dengan  perbandingan  7:3.  Setelah  dilakukan  proses  elusi kemudian  dilihat  bercak  noda  pada  lampu  UV  254  nm,  UV  366  nm  dan  ditegaskan menggunakan pereaksi AlCl 3 10%.
Hasil noda yang nampak berfluoresensi berwarna kemerahan dan bercak noda pada  ekstrak  metanol  maserasi  bertingkat  terdapat  7  Sedangkan  hasil  bercak  noda pada  ekstrak  metanol  maserasi  total  terdapat  8.  Hasil  nilai  Rf  akan  dibandingkan dengan nilai Rf dari pembanding yaitu standar quarsetin. Nilai Rf quarsetin yaitu pada rentang  nilai  0,64  -  0,69  [10,21,22].  Salah  satu  bercak  noda  dari  8  noda  yang teridentifikasi pada ekstrak metanol maserasi total memiliki nilai Rf yang sama dengan quarsetin  yaitu  0,67.  Hal  ini  menandakan  bahwa  ekstrak  metanol  maserasi  total mengandung senyawa flavonoid. Pada ekstrak metanol maserasi bertingkat memiliki 7 bercak  noda,  salah  satunya  memiliki  nilai  Rf  0,63  yang  relatif  sama  dengan  nilai  Rf standar  quarsetin  sehingga  ekstrak  metanol  maserasi  bertingkat  juga  mengandung flavonoid.
366 nm 254 nm AlCl 3 Gambar  1. Hasil  KLT  Ekstrak  Metanol  Daun  Rumput  Knop  ( Hyptis  capitata Jacq.) Metode Maserasi Bertingkat Fase Gerak (7 : 3) Pada Lampu UV 366 nm, UV
254 nm dan Setelah Penyemprotan Pereaksi AlCl 3 366 nm 254 nm AlCl 3 Gambar 2. Hasil KLT Ekstrak Metanol Daun Rumput Knop ( Hyptis capitata Jacq.) Metode Maserasi Total Fase Gerak (7 : 3) Pada Lampu UV 366 nm, UV 254
nm dan Setelah Penyemprotan Pereaksi AlCl 3
Nilai Rf flavonoid menurut Rahayu et al ., [23] adalah noda dengan nilai Rf antara 0,2 – 0,75 menunjukkan noda yang mengandung flavonoid. Hasil noda yang nampak pada UV 366 nm menunjukan fluoresensi berwarna kemerahan menunjukkan bahwa mengandung  senyawa  flavonoid.  Menurut  Yuda et  al .,  [24]  dan  Robinson,  [25] mengemukakan bahwa terdapat penafsiran warna bercak dari segi struktur flavonoid, yang dimana  pada  sinar  UV  366  nm  terdapat  noda  fluoresensi  biru  muda.  Beberapa senyawa (flavonol, kalkon) akan berfluoresensi di bawah sinar UV 366 nm sedangkan senyawa  lain  (glikosida  flavonol,  antosianin,  flavon)  menyerap  sinar  dan  tampak sebagai  bercak  gelap  dengan  latar  belakang  berfluoresensi.  Glikosida  flavon  dan flavonol  berfluoresensi  kuning,  flavonol  kelihatan  kuning  pucat,  katekin  biru  pucat, antosianin kelabu biru, kalkon dan auron merah.
Hasil  bercak  noda  profil  KLT  pada UV 366  nm  dan  254  nm  dipertegas  dengan penyemprotan  pereaksi  AlCl 3 didapatkan  hasil  perubahan  warna  menjadi  warna kuning. Hal ini menandakan bahwa kedua ekstrak positif mengandung flavonoid. Hal ini  sesuai  menurut  Asmorowati  et  al.,  [26]  dan  Nunung et  al .,  [27]  mengemukakan
0,23 0,5 0,63 0,8 0,4 0,57 0,7 0,65 0,72 0,75 0,5 0,3 0,15 0,2 0,4 0,67 0,8 0,2 0,63 0,7
bahwa penambahan reagen semprot AlCl 3 menunjukkan bercak warna kuning menjadi lebih  intensif,  hal  ini  terjadi  karena  adanya  pembentukan  senyawa  kompleks. Penggunaan  pereaksi  AlCl 3 untuk  mendeteksi  senyawa  golongan  flavonoid  akan menghasilkan warna kuning.
Hasil  pengukuran  panjang  gelombang  maksimum  quarsetin  diperoleh  435  nm (λmax Quarsetin) pada pengukuran quarsetin dari rentang panjang gelombang 400-450 nm menggunakan salah satu konsentrasi baku quarsetin.
Tabel 3. Hasil Pembacaan Nilai Absorbansi Larutan Baku Quarsetin Konsentrasi (ppm) Absorbansi 10 0,098 20 0,224 30 0,357 40 0,498 50 0,633
Gambar 3. Kurva Baku Quarsetin
Berdasarkan  data  hasil  pada  gambar  3  diperoleh  persamaan  regresi  linear pembanding quarsetin yaitu y = 0,0129x - 0,0196 dengan koefisien korelasi (r) = 0,997.

## Flavonoid Ekstrak Metanol Daun Rumput Knop
Tabel  4  menunjukkan  hasil  kadar  rata-rata  flavonoid  ekstrak  metanol  daun Rumput Knop dengan menggunakan metode maserasi bertingkat sebesar 2,9750% b/v dan metode maserasi total sebesar 4,8822% b/v. Dari hasil tersebut didapatkan bahwa kadar  flavonoid  pada  metode  maserasi  total  lebih  tinggi  dibandingkan  pada  metode maserasi  bertingkat.  Perbedaan  kadar  yang  diperoleh  kemungkinan  karena  pada maserasi  bertingkat  pada  proses  penarikan  senyawa  terjadi  pada  tiga  jenis  pelarut yang  berbeda  sehingga  senyawa  flavonoid  lainnya  telah  terekstraksi  pada  pelarut  n- heksan, etil asetat lalu terakhir pada metanol.
y = 0,0129x - 0,0196 R² = 0,997 -0,2 0 0,2 0,4 0,6 0,8 0 20 40 60 A b so rb an si Konsentrasi (ppm) Kurva Baku
Tabel 4. Hasil Kadar Flavonoid Daun Rumput Knop ( Hyptis capitata Jacq.) Metode Maserasi Berat Sampel (mg) Replikasi Absorbansi Kadar (mg/L) Persentase Kadar (%) b/v Rata- rata (%) b/v Bertingkat 100 1 0,108 9,8915 2,9671 2,9750 2 0,109 9,9690 2,9907 3 0,108 9,8915 2,9671 Total 100 1 0,189 16,1705 4,8512 4,8822 2 0,190 16,2481 4,8744 3 0,192 16,4031 4,9209
Hal ini didukung pada hasil skrining fitokimia pada tabel 2 bahwa pada ekstrak etil  asetat  juga  positif  flavonoid  sehingga  terdapat  sebagian  senyawa  flavonoid  telah ditarik sebelumnya ke pelarut etil asetat lalu setelah itu ke pelarut metanol sehingga membuat  kadar  flavonoid  ekstrak  metanol  maserasi  bertingkat  berkurang.  Berbeda dengan  maserasi  total  yang  hanya  menggunakan  satu  jenis  pelarut  yaitu  metanol sehingga  senyawa  flavonoid  lebih  banyak  tertarik  pada  pelarut  tersebut.  Hal  ini didukung menurut Permadi et al ., [10] bahwa maserasi bertingkat membuang senyawa non-polar  dan  semi  polar  dengan  n-heksan  dan  etil  asetat  sehingga  menyisakan senyawa  polar  dan  akhir  diekstrasi  kembali  dengan  pelarut  polar  metanol.  Menurut Hendryani et al ., [28] mengemukakan bahwa secara umum flavonoid adalah senyawa polar karena memiliki gugus -OH yang membentuk ikatan hidrogen, namun beberapa flavonoid  bebas  jenis  isoflavon,  flavon,  flavanon,  auron,  kalkon,  antosianin  dan flavonol  termetoksilasi  merupakan  senyawa  kurang  polar  sehingga  flavon  jenis  lain akan dapat terekstraksi pada pelarut n-Heksan maupun etil asetat.

## 4. Kesimpulan
Ekstrak  daun  Rumput  Knop  ( Hyptis  capitata Jacq.)  pada  maserasi  bertingkat positif  mengandung  senyawa  flavonoid  dalam  ekstrak  etil  asetat  dan  metanol sedangkan pada maserasi total positif mengandung senyawa flavonoid dalam ekstrak metanol  dilihat  dari  hasil  uji  pereaksi  wilstater  dan  hasil  Kromatografi  Lapis  Tipis (KLT). Kadar rata-rata flavonoid pada ekstrak metanol Rumput Knop (Hyptis capitata Jacq.)  maserasi  bertingkat  diperoleh  sebesar  2,9750%  b/v  dan  pada  ekstrak  metanol Rumput  Knop  ( Hyptis  capitata Jacq.)  maserasi  total  diperoleh  sebesar  4,8822%  b/v. Terdapat  perbedaan  kadar  rata-rata  flavonoid  dalam  ekstrak  metanol  daun  Rumput Knop  ( Hyptis  capitata Jacq.)  dengan  metode  maserasi  bertingkat  dan  maserasi  total. Didapatkan  bahwa  kadar  flavonoid  pada  metode  maserasi  total  lebih  tinggi dibandingkan pada metode maserasi bertingkat.

## Referensi
[1]. Kusuma,  I.W. et  al .  (2020)  ‘Biological  Activities  and  Phytochemicals  of  Hyptis capitata  Grown  in  East  Kalimantan,  Indonesia’, Journal  of  Applied  Biology  and Biotechnology , 8(2), pp. 58–64.
[2]. To’bungan, N. et al . (2021) ‘Toksisitas Akut Ekstrak Etanol Batang Rumput Knop (Hyptis capitata Jacq.) dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)’, Biota : Jurnal Ilmiah Ilmu-Ilmu Hayati , 6(1), pp. 52–57.
[3]. Susanty  and  Bachmid,  F.  (2016)  ‘Perbandingan  Metode  Ekstraksi  Maserasi  dan Refluks  terhadap  Kadar  Fenolik  dari  Ekstrak  Tongkol  Jagung  (Zea  mays  L.)’, Jurnal Konversi , 5(2), pp. 87–93.
[4]. Badaring, D.R. et al . (2020) ‘Uji Ekstrak Daun Maja (Aegle marmelos L.) terhadap Pertumbuhan  Bakteri  Escherichia  coli  dan  Staphylococcus  aureus’, Indonesian Journal of Fundamental Sciences (IJFS), 6(1), pp. 16–26.
[5]. Septiana,  A.T.  and  Asnani,  A.  (2012)  ‘Kajian  Sifat  Fisikokimia  Ekstrak  Rumput Laut  Coklat  (Sargassum  duplicatum)  Menggunakan  Berbagai  Pelarut  Dan Metode Ekstraksi’, AGROINTEK , 6(1), pp. 22–28.
[6]. Putri, N.A. et al . (2022) ‘Ekstraksi Maserasi Bertingkat Kulit Mangga (Mangifera indica L.) Untuk Pengambilan 𝛽 -Karoten’, Seminar Nasional Teknik Kimia Soebardjo Brotohardjono XVIII , pp. 66–70.
[7]. Sàadah, H. et al . (2017) ‘Pengaruh Metode Ekstraksi Terhadap Kadar Flavonoid Ekstrak Etanol Umbi  Bawang Dayak  (Eleutherine  palmifolia  (L.)  Merr)  Dengan Metode Spektrofotometri’, Jurnal Borneo Journal of Pharmascientech , 1(1).
[8]. Mukhriani et al . (2015) ‘Analisis Kadar Flavonoid Total Pada Ekstrak Daun Sirsak (Annona  muricata L.)  Dengan  Metode  Spektrofotometri  UV-Vis’, Jurnal  Farmasi UIN Alaudin Makassar , 3(2), pp. 37–42.
[9]. Rohmah,  S.A.A. et  al .  (2021)  ‘Validasi  Metode  Penetapan  Kadar  Pengawet Natrium  Benzoat  pada  Sari  Kedelai  di  Beberapa  Kecamatan  di  Kabupaten Tulungagung  Menggunakan  Spektrofotometer  Uv-Vis’, Jurnal  Sains  dan Kesehatan , 3(2), pp. 120–127.
[10]. Permadi,  A. et  al .  (2018)  ‘Perbandingan  Metode  Ekstraksi  Bertingkat  dan  Tidak Bertingkat  Terhadap  Flavonoid  Total  Herba  Ciplukan  (Physalis  angulata  L.) Secara Kolorimetri’, Jurnal Online Mahasiswa (JOM) Bidang Farmasi , 1(1), pp. 1–10.
[11]. Handayani,  I.A. et  al .  (2016)  ‘Perbandingan  Kadar  Flavonoid  Ekstrak  Buah Mahkota  Dewa  (Phaleria  macrocarpa  [Scheff]  Boerl)  Secara  Remaserasi  dan Perkolasi’, Jurnal Ilmiah Ibnu Sina , 1(1), pp. 79–87.
[12]. Dewatisari,  W.F. et  al .  (2017)  ‘Rendemen  dan  Skrining  Fitokimia  pada  Ekstrak Daun Sanseviera sp’, Jurnal Penelitian Pertanian Terapan, 17(3), pp. 197-202.
[13]. Muthamainnah, B. (2017) ‘Skrining Fitokimia Senyawa Metabolit Sekunder Dari Ekstrak  Etanol  Buah  Delima  (Punica  granatum  L.)  Dengan  Metode  Uji  Warna’, Media Farmasi, 13(2), pp. 23-28.
[14]. Kamar,  I. et  al .  (2021)  ‘Identifikasi  Parasetamol  dalam  Jamu  Pegal  Linu Menggunakan Metode Kromatografi Lapis Tipis’, Jurnal Kimia Sains dan Terapan , 3(1), pp. 24-29
[15]. Mukhriani et al . (2015) ‘Analisis Kadar Flavonoid Total Pada Ekstrak Daun Sirsak (Annona  muricata L.)  Dengan  Metode  Spektrofotometri  UV-Vis’, Jurnal  Farmasi UIN Alaudin Makassar , 3(2), pp. 37–42.
[16]. Depkes RI (2017) Farmakope Herbal Indoneisa Edisi II. 2nd edn, Kementrian Kesehatan Republik Indonesia . 2nd edn. Jakarta, Indonesia: Kementrian Kesehatan RI.
[17]. Apriliani, A. et al . (2019) ‘Perbandingan Metode Maserasi Dan Refluks Terhadap Rendemen  Ekstrak  Daun  Selutui  Puka  (Tabernaemontana  macrocarpa  Jack)’, Farmasi Galenika , 6(1), pp. 33–42.
[18]. Rukmini, A. et al . (2020) ‘Skrining Fitokimi Familia Piperaceae’, Jurnal Biologi dan Pembelajarannya , 7(1), pp. 28–32.
[19]. Dewi,  I.S.  et  al.  (2021)  ‘Skrining Fitokimia  Ekstrak  Etanol  Kulit  dan  Biji  Terong Belanda (Solanum betaceum Cav.)’, UNIMUS , 4, pp. 1210–1218.
[20]. Tambaru,  E. et  al .  (2019)  ‘Jenis  Tumbuhan  Liar  Familia  Lamiaceae  Berkhasiat Obat  di  Hutan  Kota  Universitas  Hasanuddin  Tamalanrea  Makassar’, Bioma : Jurnal Biologi Farmasi , 4(1), pp. 77–87.
[21]. Koirewoa,  Y.A. et  al .  (2012)  ‘Isolasi  dan  Identifikasi  Senyawa  Flavonoid  Dalam Daun Beluntas (Pluchea indica L.)’, Pharmacon UNSRAT , 1(1), pp. 47–52.
[22]. Priyanto, J.A. et al . (2014) ‘Flavonoids Production Capability Test of Tea Mistletoe (Scurrula atropurpurea BL. Dans) Endophytic Bacteria Isolates’, Jurnal Sains dan Matematika , 22(4), pp. 89–96.
[23]. Rahayu,  S. et  al .  (2015)  ‘Ekstraksi  dan  Identifikasi  Senyawa  Flavonoid  dari Limbah Kulit Bawang Merah Sebagai Antioksidan Alami’, Jurnal al Kimiya , 2(1), pp. 1–8.
[24]. Yuda, P.E.S.K. et al . (2017) ‘Skrining Fitokimia dan Analisis Kromatografi Lapis Tipis  Ekstrak  Tanaman  Patikan  Kebo  (Euphorbia  hirta  L.)  ’, Jurnal  Ilmiah Medicamento , 3(2), pp. 61-70.
[25]. Robinson, T. (1995) Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi . Edisi ke-4 Terjemahan Kosasih Padmawinata. Bandung: ITB Press
[26]. Asmorowati,  H.  and  Lindawati,  N.Y.  (2019)  ‘Penetapan  Kadar  Flavonoid  Total Alpukat (Persea americana Mill.) Dengan Metode Spektrofotometri’, Jurnal Ilmiah Farmasi , 15(2), pp. 51–63.
[27]. Nunung et  al .  (2019)  ‘Identifikasi  Senyawa  Flavonoid  Ekstrak  Daun  Senggani (Melastoma malabathricum L.) Menggunakan Metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT)’, Jurnal Mahasiswa Farmasi Fakultas Kedokteran UNTAN , 4(1).
[28]. Hendryani,  R. et  al .  (2015)  ‘Ekstraksi  Antioksidan  Daun  Sirih  Merah  Kering (Piper  crotatum)  Dengan  Metode  Pra-Perlakuan  Ultrasonic  Assisted  Extraction (Kajian  Perbandingan  Jenis  Pelarut  dan  Lama  Ekstraksi)’, Jurnal  Bioproses Komoditas Tropis , 3(2), pp. 33–38.