## EFEK EKSTRAK ALOE VERA  TERHADAP CANDIDA ALBICANS YANG DIISOLASI DARI RONGGA MULUT PENDERITA HIV/AIDS DENGAN TEKNIK TUBE DILUTION
(EFFECT OF ALOE VERA LEAF  EXTRACT TO CANDIDA ALBICANS  ISOLATED FROM ORAL CAVITY OF HIV/AIDS PATIENTS BY TUBE DILUTION TECHNIQUE)
Elizabeth Fitriana Sari*, Gus Permana Subitha**
* Departemen Oral Medicine Fakultas Kedokteran Gigi, Universitas Padjadjaran
Jl. Sekeloa Selatan I no.1. Bandung ** Departemen Oral Medicine Fakultas Kedokteran Gigi, Universitas Indonesia
Jl. Salemba Raya no. 4. Jakarta Pusat E-mail: e_fitrianasari@yahoo.com

## Abstract
Oral candidiasis  is the third major opportunistic infection in people with HIV/AIDS. The antifungal has a very important role to prevent candidemia. But the use of antifungal has developed resistancy, for this reason it is important to find other high potent and cost effective antifungal. In this study Aloe vera was choosen because  of its beneficial properties which has  already  been  proven  scientifically.  The  objective  of  the  study  was  to  investigate  antifungal  effect  by  finding  the minimal inhibitory concentrations (MICs) and minimal fungicidal concentrations (MFCs) of Aloe vera leaf to Candida albicans isolated from  oral  cavity of  HIV/AIDS  patients,  and to Candida  albicans ATCC  10231  strain as  the  control group. Ethanol was used for the extraction of the leaf after obtaining the gel from it . MICs and MFCs were tested by tube dilution technique. Eight identified samples of Candida albicans isolated from oral cavity of HIV/AIDS patients. The result  showed that from 3 samples had MIC 25%, and 4 samples 50%. MFC showed 1 sample in 12.5%, 3 samples in 100%,  but  4  samples  could  still  grow  in  100%  concentration  with  different  number  of  colony  forming  units.  As  the control group, Candida albicans ATCC 10231 showed MIC in 25% and MFC in 75%. In conclusion, aloe vera plants seem  to  have  promising  role  to  cure  oral  candidiasis  in    HIV/AIDS  patients  because  of  its  antifungal  and immunomodulatory properties.
Key words: Aloe vera leaf extract, Candida albicans , antifungal MICs and MFCs, HIV/AIDS

## PENDAHULUAN
Jumlah  penderita  HIV/AIDS  (ODHA)  di  Indo- nesia  meningkat  secara  tajam.  Berdasarkan  data Departemen  Kesehatan  Indonesia  terdapat  22.664 kasus HIV/AIDS pada tahun 2008 yang sangat jauh berbeda  jika  dibandingkan  tahun  1987  yang  hanya mencapai  60  kasus  saja.  Menurut  UNAIDS,  data ODHA di Indonesia sampai akhir tahun 2008 men- capai  angka  270.000  jiwa. 1 Jumlah  ODHA  secara global di seluruh dunia pada akhir tahun 2010 men- capai  40  juta  jiwa. 2,3 Negara-negara  di  Asia  me- nunjukkan peningkatan jumlahnya lebih dari 150 % pada  tahun  2007, dan  di  tahun  yang sama  negara
Indonesia  menunjukan pertumbuhan  epidemik  ter- cepat. 4
Infeksi  oportunistik  masih  tetap  menjadi  kompli- kasi  terbesar  pada  ODHA  walaupun  terjadi  pe- nurunan  yang  dramatik  dengan  pemberian highly active antiretroviral therapy (HAART), akan tetapi masih  terdapat  angka  kesakitan  (morbiditas)  dan kematian  (mortalitas)  yang  cukup  signifikan. 5 Oro- pharingeal  candidiasis merupakan  infeksi  opor- tunistik  terbanyak ke-3 pada ODHA. 4 Oral  candi- diasis yang  disebabkan  oleh  spesies oral  candida terutama Candida albicans merupakan infeksi opor- tunistik yang paling sering ditemukan dan memiliki risiko terjadinya candidemia terutama pada ODHA Edisi Cetak Dentika Dental Journal, Desember 2011 (ISSN: 1693-671X)
sehingga dapat menyebabkan kesakitan dan kemati- an .5,6
Obat-obat  anti  jamur memiliki peran yang  sangat penting  dalam  menghadapi oral  candidiasis .  Pada riwayat  penggunaannya,  banyak  terjadi  resistensi terhadap obat  anti  jamur yang  sering diberikan  dan dicurigai salah satunya karena phenotypic switching pada C.  albicans . 7 Oleh  karena  itu,  dibutuhkan penelitian  untuk  mencari  obat  anti  jamur  lain  yang efektif,  mudah  didapat,  dengan  harga  terjangkau untuk oral candidiasis pada penderita HIV/AIDS.
Aloe vera adalah tanaman obat yang tumbuh subur di Indonesia. Penelitian terhadap tanaman ini masih terus  berlanjut  karena Aloe  vera banyak  mengan- dung  zat-zat  yang  sangat  bermanfaat  untuk  ke- sehatan. 8,9 Daun Aloe  vera terdiri  atas  bagian  kulit dan gel.  Ketika kulit daun dipisahkan, substansi mu- cilaginous keluar dan mengandung banyak serat dan air, bagian ini disebut sebagai gel. Aloe vera gel me- ngandung 99,3% air. 10
Penelitian  yang  dilakukan  Agarry,  Olaleye,  dan Bello-Michael  melaporkan  ekstrak  25% Aloe  vera dapat  menghambat  pertumbuhan Candida  albi- cans . 10 Melihat potensi yang cukup menjanjikan dari Aloe vera , merupakan tantangan bagi peneliti untuk mengetahui potensi Aloe vera yang memiliki aktifi- tas anti jamur dan imunomodulator terhadap spesies Candida  albicans yang  langsung  diambil  dari ODHA.

## BAHAN DAN METODE
Daun aloe  vera diambil  dari  kebun Aloe  vera di Pusat  Riset  &  Bisnis  Fakultas  MIPA  Universitas Indonesia  diiris  dan  direndam  dalam  bahan  pelarut etanol selama 1-2 hari, kemudian dilakukan ekstrak dengan rotary  evaporator  extractor .  Hasil  ekstrak merupakan  ekstrak Aloe  vera dengan  konsentrasi 100%  yang  akan  di  uji  cobakan  dalam  penelitian ini. 10
C.  albicans diisolasi  dari  rongga  mulut  ODHA menggunakan  teknik  dengan  10  ml  cairan  PBS selama  1-1,5  menit,  kemudian  di  ludahkan  dan  di- tampung dalam kontainer  steril,  selanjutnya dilaku- kan sentrifugasi dengan kecepatan 1000 rpm selama 10  menit.  Hasil  sentrifugasi  didapat  endapan  (sedi- men)  yang  diambil  sebanyak  100-200  μL  dan  di- inokulasi pada CHROM-agar untuk dilakukan iden- tifikasi jenis C. albicans 11 , hanya 8 orang menunjuk- an gambaran morfologi dan warna C.albicans yang jelas,  kemudian  ditanam  dalam Saboroud  Dextral Agar (SDA)  dan  dilihat  pengaruh  pemberian  ber- bagai ekstrak Aloe vera leaf untuk dicari  Konsen- trasi   Hambat   Medice   (KHM)    dan   Konsentrasi
Bunuh   Minind  (KBM).  Setelah  itu diinkubasi  se- lama  24  jam  dibuat  suspensi  menggunakan Sabo- roud  Dextral  Broth (SDB)  dengan  kekeruhan  0,5 Mc  Farland  atau  se-banding  dengan  10 8 CFU/ml, juga dibuat  suspensi dengan kekeruhan yang sama pada C. albicans ATCC 10231. 12
1 ml     1ml        1ml 1ml       1ml dibuang K(-)                1            2           3 4 K (+) Ekstrak 100% Aloe vera leaf 1ml SDB
Gambar 1.  Teknik Tube  Dilution untuk  menentukan KHM dan KBM 13
KHM  ekstrak Aloe  vera kemudian  ditentukan dengan  teknik Tube  dilution pada  konsentrasi  50, 25,  12,5,  dan  6,25%.  Setelah  diinkubasi  selama  24 jam,  pada  konsentrasi  tertentu  akan  terlihat  per- bedaan  kejernihan. 13 Pada  tabung  pertama  yang terlihat  jernih  inilah  yang  menunjukkan  KHM. Namun karena dikarenakan ekstrak Aloe vera mem- perlihatkan  cairan  yang  keruh,  sulit  untuk  dilihat perbedaan  kejernihan  untuk  menentukan  KHM. Oleh karena itu, dilakukan penanaman kembali pada SDA  sebanyak  100  μL  larutan  pengenceran  pada setiap  konsentrasi  ekstrak Aloe  vera setelah  di- inkubasi selama 24 jam sehingga diperoleh KHM.

## HASIL
Hasil  penelitian  menggunakan  teknik Tube  dilu- tion menunjukan  KHM  pada  konsentrasi  25% terhadap C.  albicans ATCC  10231,  sedangkan KHM  terhadap C.  albicans dari  rongga  mulut ODHA   bervariasi   dari   konsentrasi  12,5   sampai dengan 50% (Tabel 1).
Penentuan KHM Ditanam kembali pada Suboroud Dextrose Agar
Penentuan KBM
Tabel  1.  Konsentrasi  Hambat  Minimal  (KHM)  ekstrak Aloe  vera terhadap C.albicans ATCC  10231 dan C.albicans yang  diisolasi  dari  delapan sampel ODHA
Sampel KHM Ekstrak Aloe vera (%) C. albicans ATCC 10231 25 C. albicans Sampel I 12,5 C. albicans Sampel II 25 C. albicans Sampel III 50 C. albicans Sampel VII 50 C. albicans Sampel IX 25 C. albicans Sampel X 50 C. albicans Sampel XIII 50 C. albicans Sampel XIV 50
Hasil  tersebut  belum  diperoleh  KBM  walaupun telah diinokulasi kembali pada SDA, disebabkan C. albicans masih  dapat  hidup  pada    konsentrasi  pe- ngenceran  tertinggi  ekstrak Aloe  vera , kecuali pada sampel  I  di  mana C.  albicans sudah  tidak  tumbuh pada konsentrasi 12,5%. Oleh karena itu, dilakukan lagi  pengenceran  mulai  dari  ekstrak Aloe  vera 100%, 75%, dan seterusnya lalu diinokulasi kembali pada SDA, sehingga diperoleh KBM (Tabel 2).
Tabel 2.  Konsentrasi  Bunuh  Minimal  (KBM)  Ekstrak Aloe  vera terhadap C.  albicans  ATCC 10231 dan C.albicans yang diisolasi dari ODHA
A
B
Gambar 2.  A.  KHM  pada  konsentrasi  25%,  B.  KBM diperoleh pada konsentrasi 75%  ekstrak Aloe vera terhadap C.albicans ATCC  10231

## PEMBAHASAN
Hasil penelitian ini menunjukan bahwa Aloe vera memiliki  aktifitas  anti  jamur  terhadap C.  albicans baik  ATCC  10231  maupun  yang  diisolasi  dari rongga mulut ODHA. Aloe vera dapat memberikan efek  fungistatik  dan  fungisid.  Berdasarkan  hal tersebut Aloe  vera dapat  dipertimbangkan  untuk tujuan  terapi  di  kemudian  hari,  mengingat  sudah banyak  ODHA  yang  resisten  terhadap  anti  jamur terutama fluconazole . 10
Kandungan Acemannan dan  zat  aktif  lainnya  di dalam Aloe  vera berperan  aktif  sebagai  anti  jamur dan  imunomodulator yang  bekerja sama secara si- nergis,  hal  ini  membuat  harapan  yang  cukup  men- janjikan  untuk  pengembangan Aloe  vera sebagai obat  anti  jamur  alternatif  lain  khususnya  untuk ODHA. Acemannan adalah sejenis karbohidrat ran- tai panjang yang dapat mempercepat penyembuhan luka, memodulasi fungsi imun terutama mengaktif- kan makrofag dan produksi sitokin. 14
Aloe vera mengandung polisakarida rantai panjang utama  yaitu Acemannan dan glucomannan ,  yang merupakan  karbohirat  golongan mannan sehingga memiliki epitop yang dapat bereaksi silang terhadap fungi  khususnya  spesies candida .  Oleh  karena  itu, Aloe  vera dimungkinkan  dapat    membantu  mem- bentuk  antibodi antimannan yang  merupakan  anti- gen  yang  terdapat  pada  dinding  sel Candida dan beberapa  fungi  lain,  namun  untuk  mengetahui dengan  pasti  reaksi  nya  secara  langsung  terhadap respon  imun  ini  harus  dilakukan  penelitian  lebih lanjut.
Acemannan telah  diteliti  sebelumnya  dapat  be- kerja sebagai imunostimulan, sebagai adjuvant acti- vity pada  produksi  antibodi  spesifik,  meningkatkan pelepasan  interleukin-1  (IL-1),  interleukin-6  (IL-6), Tumor  Necrosis  Factor (TNF-α),  dan  interferon-γ (INF-γ).  Pelepasan  sitokin  ini  dapat  meningkatkan replikasi  fibroblas  dalam  kultur  jaringan  dan  me- ningkatkan  fagositosis  makrofag.  Proliferasi  fibro- blas  ini  bertanggung  jawab  untuk  proses  pe- nyembuhan luka bakar, ulser, dan luka lainnya pada mukokutan. 15
Penelitian  yang  dilakukan  Agarry,  Olaleye,  dan Bello-Michael  menunjukkan  bahwa Aloe  vera  leaf memiliki  KHM  terhadap C.  albicans pada  kon- sentrasi  25%. 10 Hasil  penelitian  ini  terhadap C. albicans ATCC 10231g menunjukan KHM ekstrak Aloe  vera yang  sama  pada  konsentrasi  25%, sedangkan  KBM  diperoleh  pada  konsentrasi  75%. Kesamaan  hasil  KHM  menunjukkan  bahwa  kedua jenis C.  albicans tersebut  masih  memiliki  tingkat sensitifitas  yang  sama  terhadap Aloe  vera .  Kedua-
Sampel KBM ekstrak Aloe vera leaf (%) Keterangan C. albicans ATCC 10231 75 - C. albicans Sampel I 12,5 - C. albicans Sampel II 100 - C. albicans Sampel III - Pada ekstrak 100% masih tumbuh 8 koloni C. albicans Sampel VII - Pada ekstrak 100% masih tumbuh  >50 koloni C. albicans Sampel IX 100 - C. albicans Sampel X - Pada ekstrak 100% masih tumbuh 6 koloni C. albicans Sampel XIII 100 - C. albicans Sampel XIV - Pada ekstrak 100%  masih tumbuh 1 koloni
nya  merupakan Candida subkultur  laboratorium yang sudah dimurnikan.
KHM  dan  KBM  ekstrak Aloe  vera terhadap delapan sampel C. albicans yang diisolasi dari rong- ga mulut ODHA menunjukan nilai konsentrasi yang berbeda-beda. Dua sampel menunjukan KHM pada konsentrasi  25%  dan  lima  sampel  menunjukan KHM pada konsentrasi 50%. Perbedaan KHM pada beberapa  ODHA  dimungkinkan  antara  lain  karena perbedaan tingkat sensitifitas C. albicans klinis atau wild type terhadap Aloe vera . Phenotyping switching pada  strain C.  albicans pada  ODHA  frekuensinya meningkat. Switching ini berpengaruh pada sensitifi- tas terhadap obat anti-fungal dan level secreted pro- teinase  activity begitu  pula  dapt  terjadi  jika  di- reaksikan dengan Aloe vera . 7
Tiga sampel yang diisolasi dari rongga mulut OD- HA menunjukan KBM pada konsentrasi 100% dan empat  sampel  masih  menunjukan  pertumbuhan C. albicans pada  konsentrasi  ekstrak  100%,  hal  ini dapat  terjadi  karena  beberapa  faktor,  antara  lain adanya  perbedaan  sensitifitas C.  albicans ,  terdapat berbagai  strain  atau subtype pada C.  albicans ,  dan sedikit  yang  mengetahui  tentang micro-evolution sejalan dengan waktu dan progresifitas dari penyakit HIV. 16 Data  tersebut  sangat  memungkinkan  bahwa terdapat perbedaan strain C. albicans yang diisolasi dari  rongga  mulut  ODHA,  sehingga  respons  ter- hadap Aloe vera menjadi berbeda-beda, perubah-an genetik  evolusi  sesuai  tahapan  progresifitas  pe- nyakit  tidak dihomogenisasi pada penelitian ini se- hingga  responsnya  terhadap Aloe  vera juga  dapat berbeda-beda.
Biofilm  adalah  lingkungan  sel-sel  mikroba  yang terikat pada permukaan yang kemudian ditutupi ma- terial  matriks  ekstraseluler.  Sekali  tertanam  dalam pertumbuhan biofilm, sel-sel mikrobial menunjukan berbagai phenotypic  properties yang  berbeda-beda dibanding  dengan  sel  planktonik  yang  melayang bebas. Beberapa penelitian mempertimbangkan bah- wa  permukaan  protein  hifa  penting  dalam  pem- bentukan  biofilm. Phenotypic  properties yang  ber- beda-beda  pada  berbagai  strain C.albicans ini  juga yang mungkin menyebabkan perbedaan daya bunuh Aloe vera terhadap C. albicans klinis atau wild type yang diisolasi dari rongga mulut ODHA. 17,18,19,20
Perbedaan  KBM  pada  sampel  yang  diambil  dari ODHA juga mungkin menunjukan suatu refractory atau kegagalan dalam merespons  perawatan anti ja- mur dengan dosis  dan durasi yang sudah tepat. Be- berapa hal yang dapat menyebabkan kondisi refrac- tory adalah perkembangan penyakit HIV (CD4cells <50  cells/mm3),  terekspos  obat  antifungal  jangka panjang, dan riwayat penyakit oportunistik sebelum- nya. 21 Dapat disimpulkan bahwa tanaman Aloe vera
dapat  memberikan  harapan  besar  dalam  me- nyembuhkan oral candidiasis terutama pada ODHA karena Aloe  vera memiliki  antifungal  sekaligus imunomodulator.  Diharapkan  dapat  dilakukan  pe- nelitian  lebih  lanjut  yang  lebih  dikembangkan  ke arah  uji  coba  klinis,  penentuan  dosis  dan  waktu kontak yang tepat untuk terapi oral candidiasis .

## Daftar Pustaka
1. Anonymous.  Penanggulangan  HIV/AIDS  kalah  ce- pat dengan penularan. 7 Januari 2009.  <http://www- .bkkbn.go.id/webs/Detailberita.aspx?MyID  =6439> (29 Januari 2009).
2. Anonymous. Epidemiological fact sheet on HIV and AIDS for Indonesia. Core data on epidemiology and response.<  http://www.who.int/hiv  >  (28  Desember 2010).
3. HIV/AIDS.<http://www.hiv.developmentgateway.or g/Community.content >(28 Desember 2010).
4. Data  HIV/AIDS  di  Indonesia.<http://www.koa- lisi.org.> (29 Januari 2009).
5. Melody  L,  Duffalo  P . Fungal  opportunistic  in- fections  in  HIV  disease.  J  Pharmacy  Practice 2006; 19; 17.
6. Capoluongo  E,  Moretto  D,  Giglio  A,  Belandi  M, Prignano  G,  Crescimbeni  E,  et  al.  Heterogeneity  of oral  isolates  of candida  albicans in  HIV  positives patients:  correlation  between  candidal  carriage, karyotype and disease stage. J Med Microbiol 2000; 49: 985-91.
7. Vargas  K,  Messer  SA, Pfaller  M, Lockhart  SR, Stapleton JT, Hellstein HJ, et al. Elevated phenotypic switching  and  drug  resistance  of Candida  albicans from  human  immunodeficiency  virus-positive  indi- viduals prior to first thrush episode . J  Clin Microbiol 2000; 38 (10): 3595-607.
8. Furnawanthi  I.  Khasiat  &  manfaat  lidah  buaya  si tanaman ajaib. Jakarta: Agro Media Pustaka, 2004.
9. Purbaya,  JR.  Mengenal  &  memanfaatkan  khasiat Aloe Vera. Bandung: CV. Pionir Jaya, 2003.
10. Agarry O, Olaleye MT, Bello-Michael CO. Compa- rative  antimicrobial  activities  of aloe  vera gel  and leaf. African J Biotechnol 2005;  4 (12):1413-14.
11. Mizugai  H,  Isogai  E,  Hirose  K,  Chiba  I.  Effect  of denture wearing on occurrence of candida species in the oral cavity. J Applied Res 2007; 7 (3): 250-54.
12. Mason, Connie, Manuselis, George. Textbook of di- agnostic  microbiology.  2 nd ed.,  Baltimore:  Saunders 2000, 50-3.
13. Brooks GF, Butel JS, Morse SA, Jawetz. Melnick & Adelberg. Medical microbiology. 23 th .ed., Conecticut
: Appleton & Lange, 2004, 186-9.
14. Kemper  KJ,  Chiou  V.  Aloe  vera.  <http://www.- mcp.edu/herbal/default.htm> (11 Februari 2009).
15. Nin  Chow  JT,  Williamson  DA,  Yates  KM,  Goux
16. WJ,  Chemical  characterization  of  the  immuno- modulating polysaccharide of Aloe Vera L. J Carres 2005; 340(6): 1131-42.
17. Samaranayake  LP,  Dessanayake  JYY,  Tsang  WK, Heung  BPK,  Yeung  KWS.‘Genotypic  shuffling  of sequential  clones  of  Candida  albicans  in  HIV- infected  individuals  with  and  without  symptomatic oral candidiasis. J Med Mirobiolog 2003; 52: 349-59.
18. Zhao X, Daniels KJ, Hwan-oh S, Green CB, Yeater KM,  Soll  DR, et  al . Candida  albicans Als3p  is required for wild-type biofilm formation on silicone elastomer  surfaces.  Microbiology  2006;  152  (8): 2287-99.
19. Ramage  G, Saville SP, Wickes BL, Lopez-Ribot JL. Inhibition of Candida albicans biofilm formation by farnesol, a  quorum-sensing  molecule. Appl Environ
Microbiol 2002a; 68: 5459-63. 20. Nobile  CJ,  Mitchell  AP.  Regulation  of  cell-surface genes  and  biofilm  formation  by  the C.  albi- cans transcription factor Bcr1p.  Curr Biol 2005; 15:
1150-55.
21. Richard  ML,  Nobile  CJ,  Bruno  VM,  Mitchell  AP. Candida  albicans biofilm-defection  mutants.  Eu- karyot Cell 2005; 4:1493-502.
22. Fichtenbaum CJ, Koletar S, Yiannoutsos C, Holland F,  Pottage  J,  Cohn  SE, et  al .  Refractory  mucosal candidiasis  in  advanced  human  immunodeficiency virus infection. Clin Infect Dis 2000; 30: 749-56.