UJI POTENSI SARI BUAH BELIMBING WULUH ( Averrhoa bilimbi L.) DALAM MENGHAMBAT PERTUMBUHAN BAKTERI Aeromonas salmonicida smithia SECARA IN VITRO
POTENTIAL TEST CUCUMBER FRUIT JUICE ( Averrhoa bilimbi L.) IN INHIBITING GROWTH OF Aeromonas salmonicida smithia BACTERIA BY IN VITRO

## Prayogo, Boedi Setya Rahardja dan Rena Wilis Putri
Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Airlangga Kampus C Mulyorejo - Surabaya, 60115 Telp. 031-5911451

## Abstract
Giving antibiotics continuously can cause A. salmonicida smithia become resistant and residues of antibiotics may pollute the water environment. One alternative to using traditional medicinal plants that are  antibacterial.  Advantages  of  using  traditional  medicinal  plants  are  relatively  more  secure,  easily available, inexpensive, does not cause resistance, and relatively harmless to the surrounding environment. The  content  of  natural  chemicals  from  cucumber  fruit  is  known  to  have  antibacterial  effects  namely, flavonoids and phenols.
The purpose of this study to determine ability the cucumber fruit juice inhibit bacterial growth A. salmonicida  smithia and  to  determine  the  best  concentration  to  inhibit  bacterial  growth A.  salmonicida smithia with ampicillin drugs for comparison by in vitro . This research was conducted in the Bacteriology Laboratory of Fish Quarantine Center of Sidoarjo and Human Genetic Laboratory the Institute of Tropical Disease  Centre,  Airlangga  University,  Surabaya.  This  research  use  done  eksperimental  method  by in vitro ,  with  a  large  measure  of  cucumber  fruit  juice  inhibition  zone  around  the  existing  paper  disc  and comparing it to a large zone of inhibition using ampicillin .
Concentration dilution series cucumber fruit juice used during the research, began 2 gr/ 2 ml to the concentration of 0,0625 gr/ml. Result of research show at concentration 0,125 gr/ml still has ability to pursue bacterium A. smithia salmonicida , so that can be anticipated that effective cucumber fruit juice if used as by drug, because at small concentration can to pursue bacteria A. smithia salmonicida by in vitro .
Keywords : cucumber fruit juice, Aeromonas salmonicida smithia and ampicillin
Pendahuluan
Pada  tahun  1890,  Emmerich  dan Weibel pertama kali menemukan A. salmonicida pada  ikan  trout  di  Jerman.  Strain dari A.  salmonicida dapat  menimbulkan  gejala furunculosis (Holt et  al ,  1994).  Wabah A. salmonicida pernah  terjadi  pada  bulan  Oktober 1980, terutama  di  daerah  Jawa  Barat.  Kerugian yang  ditimbulkannya  kira-kira  mencapai  4 milyar  rupiah  (Departemen  Kelautan  dan Perikanan,  2007).  Serangan  bakteri  ini  baru terlihat  apabila  ketahanan  tubuh  ikan  menurun akibat  stres  yang  disebabkan  oleh  penurunan kualitas air, kekurangan pakan atau penanganan yang  kurang  tepat  (Afrianto  dan  Liviawaty, 1992).  Departemen  Kelautan  dan  Perikanan (2007),  menyatakan A.  salmonicida dapat dijumpai  di  lingkungan  air  tawar  maupun  air laut.
Penularan bakteri Aeromonas dapat berlangsung melalui  air,  kontak  badan,  kontak  dengan peralatan  yang  telah  tercemar  atau  karena
pemindahan  ikan  yang  terserang  Aeromonas dari  satu  tempat  ke  tempat  lain  (Afrianto  dan Liviawaty, 1992). Saat ini penyakit furunculosis yang  disebabkan  bakteri A.  salmonicida dilakukan  pengobatan  dengan  menggunakan antibiotik.  Menurut  Cipriano  dan  Bullock (2001),  antibiotik  yang  digunakan  untuk A. salmonicida adalah ampicillin .
Penggunaan  antibiotik  ternyata  dapat menimbulkan  efek  samping  bagi  patogen  itu sendiri  maupun  terhadap  ikan  yang  dipelihara. Pemberian antibiotik secara terus menerus dapat menyebabkan  organisme  patogen  menjadi resisten,  sehingga  penggunaan  antimikroba menjadi  tidak  efektif.  Selain  itu,  residu  dari antibiotik tersebut dapat mencemari  lingkungan perairan  yang  mengakibatkan  kualitas  air menjadi turun (Retnawati, 2008).
Berkaitan dengan
permasalahan tersebut,  perlu  adanya  alternatif  bahan  obat yang  lebih  aman  yang  dapat  digunakan  dalam pengendalian penyakit ikan. Salah satu
alternatifnya  adalah  dengan  menggunakan tumbuhan  obat  tradisional yang bersifat antibakteri. Beberapa keuntungan menggunakan tumbuhan  obat  tradisional  antara  lain  relatif lebih  aman,  mudah  diperoleh,  murah,  tidak menimbulkan  resistensi,  dan  relatif  tidak berbahaya  terhadap  lingkungan  sekitarnya (Sugianti,  2005).  Adanya  penelitian  ini,  agar dapat  menemukan  obat  alternatif  dengan  bahan yang  mengandung  antibakteri  yang  diperoleh dari  bahan  kimia  alami,  yaitu  sari  buah belimbing  wuluh  ( Averrhoa  bilimbi L.),  yang diharapkan  mampu  menghambat  pertumbuhan bakteri A.  salmonicida yang  menyebabkan kematian  pada  ikan  air  laut  maupun  air  tawar secara in vitro dan tidak menimbulkan resisten. Tanaman belimbing wuluh telah dimanfaatkan  sebagai  obat  tradisional.  Adapun kandungan  bahan  kimia  alami  dari  buah belimbing  wuluh  yang  diketahui  mempunyai efek  antibakteri  yaitu,  flavonoid  dan  fenol (Hembing,  2008).  Sehubungan  dengan  latar belakang  di  atas,  perlu  dilakukan  penelitian untuk mengetahui efek antibakteri dari sari buah belimbing wuluh dalam menghambat pertumbuhan  bakteri A.  salmonicida secara in vitro .
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui sari buah belimbing wuluh ( Averrhoa  bilimbi L.)  mampu  menghambat pertumbuhan  bakteri A.  salmonicida  smithia secara in vitro dan untuk mengetahui konsentrasi  terbaik  dari  sari  buah  belimbing wuluh ( Averrhoa bilimbi
L.) dalam menghambat pertumbuhan bakteri A.
salmonicida  smithia dengan ampicillin sebagai pembanding  secara in  vitro .  Penelitian  ini diharapkan dapat memberikan informasi tentang potensi  dari  sari  buah  belimbing  wuluh ( Averrhoa  bilimbi L.)  dalam  menghambat pertumbuhan  bakteri A.  salmonicida  smithia secara in vitro dengan metode difusi.

## Materi dan Metode
Penelitian  dilakukan  di  laboratorium Bakteriologi Balai Karantina Ikan, Sidoarjo dan laboratorium  Human  Genetic  Institute  of Tropical  Disease  Centre  Universitas  Airlangga, Surabaya.  Penelitian  ini  dilaksanakan  pada bulan  Februari  2011.  Bahan  penelitian  yang digunakan  adalah  bakteri A.  salmonicida smithia yang  diperoleh  dari  Balai  Karantina Ikan, Sidoarjo, buah belimbing wuluh, Tripticase Soy Agar (TSA), Mc Farland nomor 0,5,  aquades,  saringan,  kertas  saring,  kertas label,  aluminium  foil  dan  paper  disk.  Peralatan penelitian  yang  digunakan  meliputi  blender, tabung  erlenmeyer,  cawan  petri,  mikropipet,
rak,  tabung  reaksi,  corong,  jarum  ose, freeze dryer ,  laminar  flow, autoclave ,  pembakar bunsen,  penggaris,  botol  kaca  dan vortex . Metode  penelitian  yang  dilakukan  adalah metode  eksperimental.  Prosedur  kerja  dalam penelitian  ini  pertama  membuat  simplisia  buah belimbing  wuluh.  Buah  belimbing  wuluh ( Averrhoa bilimbi L.) dicuci kemudian dipotong kecil-kecil  untuk  selanjutnya  di  blender  sampai benar-benar  halus.  Hasil  jus  kemudian  disaring dengan  menggunakan  saringan,  selanjutnya disaring  kembali  menggunakan  kertas  saring dan dimasukkan ke dalam erlenmeyer (Adriana, 1992  ;  Adriani,  1992).  Hasil  dari  jus  buah belimbing  wuluh  kemudian  diuapkan  dengan alat freeze  dryer selama  48  jam  untuk mendapatkan  simplisia  dari  buah  belimbing wuluh  (Zalizar,  2010  ;  Trilaksani dkk .,  2006), selanjutnya  menyiapkan  larutan  sari  buah belimbing  wuluh  ( Averrhoa  bilimbi L.)  dengan berbagai  konsentrasi.  Metode  yang  digunakan adalah metode difusi dengan berbagai konsentrasi pengenceran secara berseri. Larutan sari  buah  belimbing  yang  digunakan  dalam penelitian adalah 2 gr/ 2 ml, 1 gr/ml, 0,5 gr/ml, 0,25 gr/ml, 0,125 gr/ml, dan 0,0625 gr/ml.

## Hasil dan Pembahasan
Penelitian  ini  menggunakan  metode difusi dengan paper disk.  Hasil pengamatan ini dapat  diperoleh  bahwa  sari  buah  belimbing wuluh mempunyai aktivitas menghambat pertumbuhan  bakteri A.  salmonicida ,  dengan cara  mengukur  zona  hambat  yang  ada  pada sekitar  paper  disk.  Menurut  Wibowo  (2002), cara  mengukur  zona  hambat  dilakukan  dengan mengukur  secara  garis  lurus  tengah  zona hambat  atau  diukur  dari  tepi  kanan  sampai  tepi kiri zona hambat yang terbentuk.
Hasil  penelitian  ini  dapat  dilihat  dari besar  kecil  zona  hambat  yang  terbentuk  di sekeliling  paper  disk.  Sari  buah  belimbing wuluh  dinyatakan  sangat  peka,  cukup  peka  dan tidak  peka  terhadap  bakteri A.  salmonicida smithia disesuaikan  dengan  standar  antibiotik seperti ampicillin .  Menurut  Rao  (1996), ampicillin dinyatakan  sangat  peka  dengan ukuran zona hambat 17 mm, cukup peka dengan ukuran  zona  hambat  14  –  16  mm    dan  kurang peka dengan ukuran zona hambat 13 mm.
Pada ulangan 1, 2 dan 3 dapat diamati bahwa A.  salmonicida  smithia cukup  peka terhadap  sari  buah  belimbing  wuluh  pada konsentrasi  2  gr/  2  ml,  1  gr/ml,  0,5  gr/ml,  0,25 gr/ml  dan  0,125  gr/ml.  Berdasarkan  hasil tersebut, dapat dinyatakan bahwa pada konsentrasi  2  gr/  2  ml,  1  gr/ml,  0,5  gr/ml,  0,25 gr/ml  dan  0,125  gr/ml,  sari  buah  belimbing
wuluh  dapat  digunakan  untuk  menghambat pertumbuhan  bakteri A.  salmonicida  smithia , karena  zona  hambat  yang  terbentuk  sesuai dengan standar umum antibiotik ampicillin . Hasil besar zona hambat pada konsentrasi 0,125 gr/ml pada ulangan 1, 2 dan 3 total  rata-rata  menunjukkan  diameter  yang dihasilkan  14  mm,  sehingga  pada  konsentrasi tersebut  sari  buah  belimbing  wuluh  dinyatakan sudah cukup peka dalam menghambat pertumbuhan  bakteri A.  salmonicida  smithia secara in  vitro .  Zona  hambat  yang  dihasilkan pada konsentrasi 2 gr/  2 ml, 1 gr/ml, 0,5 gr/ml, 0,25  gr/ml  dan  0,125  gr/ml  disebabkan  karena sari  buah  belimbing  wuluh  mengandung  zat antibakteri yang terdiri dari flavonoid dan fenol. Hal  ini  sesuai  dengan  pendapat  Setiabudy  dan Vincent  (1995),  bahwa  zat  antibakteri  bersifat bakteriostatik yaitu mampu menghambat pertumbuhan  bakteri,  dengan  tidak  adanya pertumbuhan koloni bakteri pada media agar.
Pada  konsentrasi  2  gr/  2  ml,  1  gr/ml, 0,5 gr/ml, 0,25 gr/ml  dan 0,125 gr/ml diameter yang  dihasilkan  14  mm  yang  sesuai  dengan standar  umum  antibiotik  seperti ampicillin .  Hal ini  disebabkan  pada  konsentrasi  2  gr/  2  ml,  1 gr/ml,  0,5  gr/ml,  0,25  gr/ml  dan  0,125  gr/ml mengandung  zat  antibakteri  yang  lebih  banyak dibandingkan  pada  konsentrasi  0,0625  gr/ml, karena  besar  zona  hambat  yang  dihasilkan  13 mm.  Boyd  (1995)  menyatakan  bahwa  semakin kecil konsentrasi maka kemampuan zat antibakteri  dalam  menghambat  pertumbuhan bakteri juga semakin kecil. Menurut Hembing (2008), buah belimbing wuluh ( Averrhoa bilimbi L.) memiliki  zat  antibakteri diantaranya  flavonoid dan fenol. Senyawa aktif flavonoid di dalam sari buah  belimbing  wuluh  memiliki  kemampuan membentuk  kompleks  dengan  protein  sel bakteri  melalui  ikatan  hidrogen.  Struktur dinding  sel  dan  membran  sitoplasma  bakteri yang  mengandung  protein,  menjadi  tidak  stabil karena struktur protein sel bakteri menjadi rusak karena adanya ikatan hidrogen dengan flavonoid,  sehingga  protein  sel  bakteri  menjadi kehilangan  aktivitas  biologinya,  akibatnya fungsi  permeabilitas  sel  bakteri  terganggu  dan sel bakteri akan mengalami lisis yang berakibat pada kematian sel bakteri (Harborne, 1987).
Pertumbuhan sel bakteri dapat terganggu  oleh  komponen  fenol  dari  sari  buah belimbing wuluh, yaitu dengan cara mendenaturasi  protein  sel  bakteri.  Akibat terdenaturasinya  protein  sel  bakteri,  maka semua  aktivitas metabolisme sel bakteri terhenti, sebab  semua aktivitas  metabolisme  sel bakteri  dikatalisis  oleh  enzim  yang  merupakan
protein  (Lawrence  dan  Block,  1968).  Menurut Marcus et  al (1991),  fenol  juga  dapat menyebabkan  kerusakan  dinding  sel.  Fenol berikatan  dengan  protein melalui ikatan hidrogen,  sehingga  mengakibatkan  struktur protein  menjadi  rusak.  Sebagian  besar  struktur dinding  sel  dan  membran  sitoplasma  bakteri mengandung protein dan lemak.
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  di dapat terjadi perbedaan dalam  hal pertumbuhan bakteri,  karena  adanya  perbedaan  konsentrasi. Hal ini seperti yang dinyatakan oleh Pelczar dan Chan  (1988),  bahwa  cara  kerja  zat  antibakteri dalam  menghambat  bakteri  dipengaruhi  oleh konsentrasi zat antibakteri tersebut.
Sari  buah  belimbing  wuluh  diduga efektif bila digunakan sebagai obat, karena pada konsentrasi  kecil  mampu  untuk  menghambat bakteri A.  salmonicida  smithia secara in  vitro . Ernst  (1991)  menyatakan,  terapi  obat  yang bermanfaat adalah dengan pemberian
konsentrasi  yang  cukup  dan  tidak  berlebihan sebagai  syarat  utama.  Pada  penelitian  ini, pemberian  konsentrasi  0,125  gr/ml  sudah mampu untuk menghambat pertumbuhan bakteri.

## Kesimpulan
Sari  buah  belimbing  wuluh  ( Averrhoa bilimbi L.) menghambat pertumbuhan bakteri A. salmonicida  smithia .  Konsentrasi  terbaik  sari buah  belimbing  wuluh  ( Averrhoa  bilimbi L.) yang  menghambat  pertumbuhan  bakteri A. salmonicida smithia adalah 0,125 gr/ml, karena pada  konsentrasi  tersebut  cukup  peka  bila dibandingkan dengan ampicillin .
Perlu  dilakukannya  penelitian  lebih lanjut mengenai mekanisme penggunaan ekstrak buah  belimbing  wuluh  terhadap  bakteri A. salmonicida smithia secara in vitro .

## Daftar Pustaka
Adriana,  Y.  1992.  Daya  Hambat  Sari  Rimpang Kunyit  ( Curcuma  domestica Val.) Terhadap Dua Jenis Jamur Dermatofita. Skripsi Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan Alam UNAND. Padang. Adriani,  A.  1992.  Daya  Antibakteri Allium sativum L.  dari  Pasar  Bringharjo Yogyakarta  Terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia  coli Koleksi Laboratorium  Mikrobiologi  Fakultas Kedokteran  Universitas  Gajah  Mada Secara In  Vitro .  Skripsi  Fakultas Farmasi UGM. Yogyakarta.
Afrianto, E dan E. Liviawaty. 1992. Pengendalian  Hama  dan  Penyakit Ikan. Kanisius. Yogyakarta. 89 hal. Boyd, R. F. 1995. Basic Medical Microbiology. Fifth  Edition.  Little  Brown  and Company. USA.
Cipriano,  R.  C.  and  Bullock  G.  L.  2001. Furunculosis and Other Disease
Caused  By Aeromonas  Salmonicida . Revision  of  “Furunculosis  and  other diseases caused by Aeromonas salmonicida ,”  by  G.  L.  Bullock,  R.  C. Cipriano, and S. F. Snieszko, 1983 . hal 9.
Departemen  Kelautan  dan  Perikanan.  2007.
Penyakit  Ikan  Karantina  Golongan
Bakteri.  Pusat  Karantina  Ikan  : Departemen  Kelautan  dan  Perikanan. Jakarta. 5 hal.
Ernts,  M.  1991.  Dinamika  Obat.  Alih  Bahasa  : M.  B.  Widianto.  ITB  Press.  Bandung. hal 30 – 40.
Harborner,  J.  B.  1987.  Metode  Fitokimia.
Penuntun  Cara  Modern  Menganalisa Tumbuhan. ITB Bandung. hal 71 – 77.
Hembing,  W.  2008.  Ramuan  Lengkap  Herbal Taklukkan  Penyakit.  Niaga  Swadaya. Jakarta.
Holt, J. G., N. R. Krieg., P. H. A. Sneath., J. T. Staley  and  S.  T.  William.  1994. Bergey’s  Manual  of  Determinative Bacteriology.  Ninth  edition.  William and  Wilkins  A.  Waferly  Company. USA. p. 260 – 274.
Lawrence,  C.  A.  And  S.  S.  Block.  1968. Desinfection, Sterilization and Preservation. Lea and Febiger. Philadelphia. P. 401 – 417.
Marcus,  E.  B.,  Daniel,  R.  D.,  Ming-Ju  Huang,
James,  J.  K.,  Emil,  P.,  Nicholas,  B.. 1991.  Application  Of  Semiempirical Molecular  Orbital  Techniques  To  The Study Of Peroxidase Mediated Oxidation Of Phenols, Anilines,
Sulfides  And  Thiobenzamides.  47  :
7525 – 7536. Pelczar,  M.  J.  and  E.  C.  S.  Chan.  1988.  Dasar- dasar Mikrobiologi. Universitas Indonesia Press. hal. 99 – 105. Rao,  S.  P.  N.  1996.  Zone  of  Inhibitions  for Various  Antibiotics-Kirby  Bauer  Disk Diffusion. (http://microrao.com). Diakses pada tanggal 23 Februari 2011. Pukul 11.05 WIB. Retnawati,  P.  E.  2008.  Pemberian  Vaksin Polivalen dengan Chitosan dari Komponen  Outer  Membran  Protein dan Lipopolisakarida Vibrio alginolyticus dan Vibrio  anguillarum terhadap Sintasan Benih Kerapu Macan ( Epinephelus fuscoguttatus ). Tesis Universitas Airlangga. Surabaya. Setyabudi,  R.  Dan  H.  S.,  Vincent.  1995. Farmakologi  dan  Terapi.  Edisi  4. Farmakologi  Kedokteran  Universitas Indonesia. Jakarta. Sugianti, B. 2005. Pemanfaatan Tumbuhan Obat Tradisional Dalam Pengendalian Penyakit Ikan. Makalah Pribadi Falsafah Sains Institut Pertanian Bogor. 3 : 1 – 37. Trilaksani,  W.,  Nurjanah,  H.W  Utama.  2006. Pemanfaatan  Gelembung  Renang  Ikan Patin ( Pangasius hypophthalmus )
Sebagai  Bahan Baku Isinglass. Buletin
Teknologi Hasil Perikanan.
Wibowo,  M.  S.  2002.  Penetapan  Potensi Antibiotik  Secara  Mikrobiologi.  ITB Bandung.
Zalizar,  L.  2010.  Efektifitas  Salep  Daun  Sirih dan  Meniran  Terhadap  Penurunan Jumlah  Bakteri  Pada  Sapi  Perah. Universitas Muhammadiyah Malang.