## CURRENT BIOCHEMISTRY
ISSN: 2355-7877 e-ISSN: 2355-7931 Journal homepage: http://journal.ipb.ac.id/index.php/cbj Journal E-mail: current.biochemistry@gmail.com

## The Potency of Nanocurcuminoid of Temulawak as A Preventive Agent for Lipid Peroxidation on Inflammation in Rats
(Potensi Nanokurkuminoid Temulawak sebagai Pencegah Peroksidasi Lipid pada Tikus Inflamasi)
Waras Nurcholis 1* , Chelsea 1 , Laksmi Ambarsari 1
1 Department of Biochemistry, IPB University, Bogor, 16680, Indonesia
Received: 8 December 2017; Accepted: 20 May 2019
Corresponding author : Dr. Waras Nurcholis, M.Si; Departemen Biokimia IPB; e-mail: wnurcholis@gmail.com

## ABSTRACT
The  formation  of  prostaglandins  and  free  radicals  in  the  body  occurs  in  response  to inflammation. The use of non-steroidal synthetic drugs to overcome the effects of free radicals often causes  harmful  side  effects  to  the  body.  Natural  ingredients  that  have  high  antioxidant  potential, such as  curcumin,  ginger  are expected to overcome this problem. This  study aims to  measure the antioxidant  potential  of  ginger  nanocurcuminoid  preparations  coated  with  palmitic  acid,  by observing  the  lipid  peroxide  profile  in  the  liver  of  inflammatory  Spague-Dawley  rats.  Spague- Dawley  mice  were  induced  with  1%  carrageenan  to  trigger  inflammation,  then  the  lipid  peroxide levels were measured after 24 hours. Measurement of lipid peroxide levels was carried out using a spectrophotometer  with  a  wavelength  of  532  nm.  The  size  of  the  nanocurcuminoid  preparation coated  with  palmitic  acid  was  561.53  nm  with  an  IP  value  of  0.309.  Lipid  peroxide  levels  in  the curcuminoid extract group at a dose of 100 mg / kg BW and the nanocurcuminoid group at a dose of 250 mg / kg BW were 0.27x10-4 nmol / g and 1.22 x10-4 nmol / g respectively. These showed that the  antioxidant  potential  of  temulawak  nanocurcuminoids  at  a  dose  of  250  mg  /  kg  BW  was  114 times higher than that of curcuminoid extract at a dose of 100 mg / kg BW.
Keywords: Antioxidan, Lipid peroxide, Nanocurcuminoids

## ABSTRAK
Pembentukan prostaglandin dan radikal bebas dalam tubuh terjadi sebagai respon adanya inflamasi.  Penggunaan  obat  sintetik  non  steroid  untuk  mengatasi  efek  radikal  bebas  sering menimbulkan  efek  samping  yang  membahayakan  bagi  tubuh.  Bahan  alam  yang  memiliki  potensi antioksidan  yang  tinggi  seperti  kurkumin  temulawak  diharapkan  dapat  mengatasi  masalah  ini. Penelitian ini bertujuan untuk mengukur potensi antioksidan sediaan nanokurkuminoid temulawak tersalut asam palmitat, melalui  pengamatan profil  lipid peroksida pada hati tikus Spague-Dawley inflamasi.  Tikus  Spague-Dawley  diinduksi  1  %  kakaragenan  untuk  memicu  inflamasi,  kemudian dilakukan  pengukuran  kadar  lipid  peroksida  setelah  24  jam.  Pengukuran  kadar  lipid  peroksida dilakukan  menggunakan  spektrofotometer  dengan  panjang  gelombang  532  nm.  Adapun  ukuran
sediaan nanokurkuminoid tersalut asam palmitat adalah 561.53 nm dengan nilai IP sebesar 0.309. Kadar  lipid  peroksida  kelompok  ekstrak  kurkuminoid  dosis  100  mg/kg  BB  dan  kelompok nanokurkuminoid temulawak dosis  250 mg/kg BB secara berurut 0.27x10 -4 nmol/g  dan 1.22 x10 -4 nmol/g.  Data  ini  menunjukkan  bahwa  potensi  antioksidan  nanokurkuminoid  temulawak  dosis  250 mg/kg  BB  memiliki  efisiensi  114  kali  lebih  besar  dibandingkan  ekstrak  kurkuminoid  dosis  100 mg/kg BB.
Kata kunci : Antioksidan, Lipid peroksida, Nanokurkuminoid
1. PENDAHULUAN
Tubuh dalam kondisi nomal memberikan  respon  fisiologis  terhadap  luka dan  gangguan  eksternal  berupa  Inflamasi. Respon  inflamasi  yang  ditimbulkan  berupa bengkak,  nyeri,  kemerahan,  dan  panas (Murphy  2012).  Inflamasi  merupakan  salah satu  penyebab  terjadinya  proses  peroksidasi lipid.  Lipid peroksida terbentuk  akibat adanya serangan  radikal  bebas  terhadap  molekul  lipid atau  asam  lemak  tak  jenuh  ganda  dalam  sel (Yin et al . 2011). Reaksi pembentukan radikal bebas  berupa  single  oksigen  ( 1 O 2 )  salah satunya  terjadi  dari  adanya  reaksi  perubahan asam  arakidonat  menjadi  prostaglandin  yang dikatalisis  oleh  prostaglandin  endoperoksida sintetase (Winarsi 2007).
Umumnya  obat  sintetik  golongan  non- steroid ( non-steroidal anti-inflammatory
drugs , NSAIDs) digunakan sebagai antiinflamasi.  Akan  tetapi,  jika  dikonsumsi jangka  panjang  akan  menyebabkan  berbagai efek  samping  seperti  kerusakan  ginjal, gangguan  kardiovaskuler  dan  gangual  saluran cerna  (Haghighi et  al. 2005).  Oleh  karenanya, sangat  penting  untuk  menemukan  solusi alternatif,  salah  satunya  melalui  penggunaan tanaman  obat.  Tanaman  obat  yang  memiliki potensi sebagai antiinflamasi yakni temulawak ( Curcuma xanthorriza Roxb . ) (Nurcholis et al . 2012).  Temulawak  dapat  mengatasi  inflamasi dan sebagai antioksidan (BPOMRI 2005).
Salah satu kandungan metabolit sekunder
rimpang temulawak yakni kurkuminoid  (Quiles et  al. 2002).  Berbagai genus Curcuma termasuk temulawak
umumnya mengandung pigmen kuning Kurkuminoid.  Dua  jenis  kurkuminoid  yang terdapat  pada  rimpang  temulawak  yakni kurkumin  dan  desmetoksikurkumin  (Rahardjo dan  Rostiana  2003).  Berdasarkan  penelitian Kusuma (2012) Aktivitas antiinflamasi temulawak  asal  Wonogiri  secara in  vitro pada konsentrasi  100  ppm  dengan  %  inhibisi sebesar  47,45%  dan  kandungan  kurkuminoid sebesar  20.04  mg/g.  Selain  itu,  ekstrak  kasar kurkuminoid  temulawak  memiliki  potensi antioksidan  diamati  IC 50 -nya  (Wijayanto, 2013).
Senyawa kurkuminoid kaya akan bioaktivitas, namun didalam tubuh kemampuan  bioavailabilitasnya  secara  oral sangat  rendah  (Chirio et  al. 2011).  Dalam bentuk  mikropartikel  lemak  padat,  efisiensi penjerapan  senyawa  kurkuminoid  tinggi. Berdasarkan  penelitian  Yadav  et  al.  (2009) efisiensi  penjerapan  mikrokurkumin  tersalut asam  palmitat  dengan  ukuran  131  (±2.22)  µm yakni  sebesar  74.58  (±0.03)%.  Penelitian  lain dari  Mujib  (2011)  efisiensi  penjerapan nanopartikel kurkuminoid tersalut lemak padat dengan  ukuran  199.03  (±  67.62)  nm  yakni sebesar 77.65% .
Penelitian lanjutan kurkuminoid temulawak  terkait  daya  inflamasi in  vivo oleh Maulina  (2014)  menampilkan  data  persentase daya inflamasi nanokurkuminoid dengan dosis 100 mg/kg BB pada jam keenam sebesar 60%. Efek antioksidan nanokurkuminoid temulawak Ciemas  terhadap  kadar  lipid  peroksida  hati tikus Sparague  dawley jantan  dan  betina
dilakukan  oleh  Afitriansyah  (2013)  dan Atmaja (2014).
Berdasarkan  latar  belakang  tersebut, penelitian  ini  diharapkan  dapat  memperkaya informasi  ilmiah  dengan  tujuan  penelitian yakni menguji potensi sediaan nanokurkuminoid  temulawak  tersalut  asam palmitat  terhadap  kadar  lipid  peroksida  hati tikus inflamasi.

## 2. METODOLOGI
Bahan  yang  digunakan  antara  lain ekstrak  kurkuminoid  temulawak  asal  Ciemas yang  diperoleh  dari  koleksi  Pusat  Studi Biofarmaka (PSB), sekam, air reverse osmosys (RO),  asam  palmitat  (Merck),  karagenan  1% dalam  larutan  garam  fisiologis  (NaCl  0.9%), sodium dodesil sulfat (SDS) 8.1%, KCl dingin 1.15%,  poloksamer  188  (BASF),  NaOH  1  M, natrium  diklofenak,  n-butanol:piridin  (15:1 v/v), pakan standar, hati tikus, asam tiobarbiturat  (TBA)  1.0%  dalam  pelarut  asam asetat 50%, asam asetat 20%, larutan formalin 10%, akuades, dan 1,1,3,3-tetrametoksi propana (TMP) sebagai larutan standar. Hewan uji  yang  digunakan  adalah  tikus  jantan  galur Spague  Dawley sebanyak  54  ekor  berumur  2 bulan dan berbobot antara 200 gram-300 gram yang  dipesan  dari  Badan  Pengawas  Obat  dan Makanan (BPOM).
Alat  yang  digunakan  antara  lain  gunting bedah,  sarung  tangan,  masker,  kapas,  gunting, pletismometer,  sonde  oral,  kotak  pendingin, tabung  kaca,  timbangan  tikus,  neraca  analitik, penangas  air  pipet  volumetric,  pipet  mikro, homogenizer  ultra  turrax (Dispergierstation TB.10  IKA),  pelat  pemanas, ultrasonic processor (130  Watt  20  kHz,  Cole-Parmer), alat-alat  gelas,  sentrifus  (Beckmann  J2-21 Centrifuge ),  penghancur  jaringan Potter- Elvehjem tabung Eppendorf, pengaduk magnet,  spektrofotometer  UV-Vis  (Genesys 10UV, Thermo Scientific). Sementara,
kandang tikus menggunakan kandang percobaan PSB.
Pembuatan Nanopartikel Kurkuminoid Temulawak Tersalut Asam Palmitat (Mujib
2011)
Fase  lemak  dan  fase  air  disiapkan.  Fase lemak terdiri dari 1 g asam  palmitat  dan 0.1 g pasta kurkuminoid, kemudian dipanaskan pada suhu  75 dalam  penangas  lalu  diasuk menggunakan  ultrasonikator.  Sementara,  fase berair  terdiri  dari  0.5  g  poloksamer  188  dan 100  mL  air reverse  osmosys (RO)  dipanaskan pada  suhu  75 dan  diasuk  dengan  pengaduk magnetik.  Selanjutnya,  didispersikan  fase lemak  ke  dalam  fase  berair  sambil  diasuk diatas  pelat  penangas  pada  suhu  75 , dihasilkan  emulsi  nanokurkuminoid.  Emulsi nanokurkuminoid  dihomogenisasi  selama  5 menit  dengan  kecepatan  13500  rpm,  lalu ditempatkan pada wadah berisi air dan es batu. Selanjutnya,  20  mL  emulsi  nanokurkuminoid dimasukkan  ke  dalam  btol  kaca  kecil, diultrasonikasi selama 1 jam dengan amplitudo 20%.

## Rancangan Percobaan (Maulia 2014)
Tikus  sebagai  hewan  coba  dalam penelitian  ini  diadaptasikan  dalam  kandang percobaan  UKHP  PSB  selama  satu  bulan. Proses  adaptasi  hewan  dimaksudkan  untuk menyeragamkan cara hidup dan makannya. 54 ekor tikus dikelompokkan secara acak menjadi 14 kelompok, dengan jumlah 3 ekor tikus tiap kelompok.  Penentuan  dosis  sampel  dilakukan berdasarkan  bobot  badan  tikus.  Sebelum pemberian sampel tikus dipuasakan selama 12- 16  jam.  sebelum  pemberian  sampel  dilakukan induksi  inflamasi  pada  kaki  tikus,  adapun langkah-langkah  yang  dilakukan  sebelum induksi inflamasi yakni kaki tikus diberi tanda batas  pada  lututnya  untuk  menyamakan persepsi  pembacaan  setiap  jamnya  dan dilakukan pengukuran volume awal  kaki  tikus menggunakan  pletismometer  (V o ).  Proses induksi  inflamasi  dilakukan  pada  telapak  kaki belakang  yang  telah  diberi  tanda  melalui pemberian larutan karagenan 1% sebanyak 0.1
mL.  Kaki  tikus  kembali  diukur  (V K )  setelah satu jam proses induksi dilakukan. Selanjutnya,  tikus  diberi  sampel  secara  oral. Kaki tikus kembali diukur setiap jam hingga 6 jam setelah perlakuan oral (V t ). Seletah 24 jam pemberian sampel, tikus dibius secara intraperitorial menggunakan campuran xylazine  dan  ketamine,  lalu  di  nekropsi  dan diambil  hatinya  untuk  disimpan  dalam formalin 10%.
Pengukuran  Volume  Edema  (Raji et  al . 2002)
Volume  edema  pada  kaki  tikus  dihitung menggunakan rumus sebagai berikut:
V u = V t - V a
Keterangan: V u : volume edema kaki tikus pada waktu tertentu V t :  volume  kaki  tikus  setelah  diinduksi  inflamasi menggunakan karagenan 1%
V a : volume kaki tikus sebelum diinduksi inflamasi menggunakan karagenan 1%
Pengukuran  Kadar  Lipid  Peroksida  pada Hati Tikus (Modifikasi dari Yagi 1994)
Diawali dengan membuat kurva standar.  Larutan  stok  pereaksi  1,1,3,3- tetrametoksi  propana  (TMP)  6  M  diencerkan menjadi 0.002; 0.003; 0.004; 0.005; 0.006; dan 0.007  μM.  Setiap  konsentrasi  diambil sebanyak  4  mL  untuk  ditempatkan  ke  dalam tabung  reaksi  yang  berbeda.  Setiap  tabung reaksi  ditambahkan  1  mL  TBA  1%  dalam pelarut asam asetat 50%. Campuran dipanaskan  95°C  selama  60  menit.  Setelah dibiarkan  dingin  pada  suhu  ruang,  campuran ditambahkan  1  mL  akuades  dan  5  mL  n- buranol  :  piridin  (15:1  v/v),  kemudian  di vorteks  dan  disentrifugasi  pada  3000  rpm selama  15  meit.  Supernatan  diambil  lalu diukur  serapannya  dengan  spektroftometer  λ 523 nm.
Pengukuran  sampel  hati.  Hati  yang disimpan  dalam  formalin  10%  diambil  untuk
dibuat  10%  b/v  homogenat  hati  dalam  KCl dingin  1.15%.  sebanyak  0.1  mL  homogenat diambil,  dipindahkan  ke  dalam  tabung  reaksi. Ditambahkan  0,2  mL  SDS  8.1  %  dan  1.5  mL asam  asetat  20%,  pH  diatur  menjadi  pH  3.5. selanjutnya,  campuran  ditambahkan  1,5  mL TBA 1  % dalam pelarut asam  asetat 50% dan 0.7  mL  akuades,  kemudian  dipanaskan  95°C selama  60  menit.  Setelah  dibiarkan  dingin pada suhu ruang, campuran ditambahkan 1 mL akuades  dan  5  mL  n-butanol:  piridin  (15:1 v/v),  kemudian  divorteks  dan  disetrifugasi pada 4000 rpm selama 10 meit. Supernatannya diambil  untuk  diukur  serapannya  dengan spektrofotometer λ 523 nm.

## Analisis Data
Penelitian  ini  menggunakan  analisis korelasi  Pearson yang  bertujuan  untuk mengamati  hubungan  linear  antara  dua variabel.  Korelasi Pearson dinyatakan dalam  r (koefisien korelasi), yang memiliki nilai antara -1  hingga  1  atau  dapat  dinyatakan  -1  <  r  <  1. Adapun rumus korelasi Pearson:
r =
nƩxy - (Ʃx) (Ʃy)
√{nƩx 2 - (Ʃx) 2 } {nƩy 2 - (Ʃy) 2 }
Keterangan: r : koefisien korelasi x : volume edema pada kaki tikus y : konsentrasi lipid peroksida pada hati tikus n : banyak pasangan data Ʃx : total variabel x Ʃy : total variabel y Ʃx 2 : total jumlah kuadrat variabel x Ʃy 2 : total jumlah kuadrat variabel y Ʃxy : total jumlah perkalian variabel x dan variabel y Penentuan  korelasi  x  dan  y  positif  atau negatif  dilakukan  melalui  penyebaran  nilai variabel x dan y pada plot tebaran atau scatter plot .

## 3. HASIL
Karakterisasi  Nanopartikel  Kurkuminoid Tersalut Asam Palmitat
Nanopartikel  kurkuminoid  temulawak berwarna  kuning  khas,  sebagai  akibat  dari larutnya  senyawa  kurkuminoid  pada  media pendispersi,  sementara  pada  nanopartikel kosong  memiliki  warna  putih  Gambar  1. Ukuran partikel dan nilai indeks polidipersitas merupakan dua parameter karakterisiasi nanopartikel  yang  akan  diukur.  Rata-rata ukuran  nanopartikel  kurkuminoid  tersalut asam palmitat dengan nilai indeks polidipersitas  0.309  yakni  sebesar  561.53  nm. Sementara rata-rata ukuran untuk nanopartikel kosong  sebesar  354.52  nm  dan  nilai  indeks polidisperitasnya yakni sebesar 0.218.
Gambar 1 Emulsi nanopartikel kurkuminoid temulawak (kiri) dan emulsi nanopartikel kosong (kanan)

## Volume Edema Kaki Tikus
Penurunan  volume  edema  paling  baik dapat  diamati  dengan  volume  edema  yang bernilai  negatif  Gambar  2,  yakni  pada kelompok perlakuan nanopartikel kurkuminoid dengan dosis 25 mg/kg BB dan 50 mg/kg BB. Sementara, pada kelompok perlakuan nanopartikel  kosong  dengan  dosis  250  mg/kg BB  setelah  enam  jam  perlakuan  sudah  tidak terdapat  edema  (volume  edema  bernilai  0). Hasil  yang  menarik  dengan  volume  edema yang  sama  ditunjukkan  pada  tiga  kelompok perlakuan  yang  berbeda  yakni  kelompok perlakuan  natrium  diklofenak,  kelompok perlakuan  ekstrak  kasar  kurkuminoid  dan
kelompok perlakukan nanopartikel kurkuminoid dosis 75 mg/kg BB,  yang berarti ketiga  sampel  perlakukan  tersebut  memiliki potensi  yang  sama  besar  dalam  menurunkan pembengkakan yang sama.

## Konsentrasi  Lipid  Peroksida  Hati  Tikus Inflamasi
Potensi  antioksidan  nanopartikel  kurkuminoid dalam  penelitian  ini  diamati  berdasarkan pengaruh pemberian sampel berbagai konsentrasi terhadap kadar lipid peroksida hati hewan  coba  yang  telah  diinduksi  inflamasi menggunakan karagen 1%. Potensi antioksidan terbaik dari nanopartikel kurkuminoid  temulawak  ditunjukkan  oleh kelompok perlakukan nanopartikel
kurkuminoid  dosis  250  mg/kg  BB  dengan kadar  lipid  peroksida  terendah  yakni  sebesar 1.22  x10 -4 nmol/g.  Bahkan  kelompok perlakukan  nanopartikel  kurkuminoid  dosis 250  mg/kg  BB  lebih  potensial  dari  pada kelompok perlakuan yang diberi obat antiinflamasi (natrium diklofenak) yang memiliki  kadar  lipid  peroksida  sebesar  1.82 x10 -4 nmol/g. Sementara, kadar lipid peroksida kelompok perlakuan nanopartikel kosong dosis 250  mg/kg  BB  yakni  sebesar  0.52  x10 -4
nmol/g. Dari keseluruhan kelompok perlakukan  sampel,  obat  antiinflamasi  dan  air salin,  yang  menunjukkan  potensi  antioksidan yang  jauh  lebih  baik  ditunjukkan  oleh  ekstrak kurkuminoid  dosis  100  mg/kg  BB  dengan kadar  lipid  peroksida  0.27  x10 -4 nmol/g (Gambar 3).
Berdasarkan uji variasi pada taraf nyata 5% menggunakan Minitab 17 diperoleh bahwa terdapat perbedaan yang nyata pada konsetrasi lipid  peroksida  seluruh  perlakuan.  Uji  lanjut Dunnet dengan menggunakan air salin sebagai kontrol menunjukkan bahwa terdapat perbedaan yang signifikan pada setiap kelompok  perlakukan  dosis  25,  50,  75,  100, 125, 175, 200, 225 mg/kg BB.
Berdasarkan  pengamatan  konsentrasi lipid peroksida di atas, kelompok nanopartikel kurkuminoid  dosis  250  mg/kg  BB  sebagai kelompok perlakuan nanopartikel kurkuminoid dengan kadar lipid peroksida terendah dibandingkan  dengan  kelompok  perlakuan ekstrak  kurkuminoid  dosis  100  mg/kg  BB
yang  memiliki  kadar  lipid  peroksida  paling rendah dari semua perlakuan, untuk mengetahui  efisiensi  antioksidan  nanopartikel kurkuminoid. Efisiensi nanopartikel kurkuminoid  dosis  250  mg/kg  BB  jauh  lebih tinggi dari efisiensi ekstrak kurkuminoid dosis 100 mg/kg BB (Tabel 1).
Gambar 2 Kurva persentase daya antiinflamasi. AS: air salin; NaD:  natrium diklofenak; NK: nanopartikel kosong
Gambar 3 Kurva konsentrasi lipid peroksida hati tikus. AS: air salin;
NaD: natrium diklofenak; NK: nanopartikel kosong
Tabel 1 Efisiensi nanokurkuminoid dibandingkan ekstrak
Perlakuan Konsentrasi sampel (ppm) Kadar lipid peroksida (x10 -4 nmol/g) Efisiensi Nanokurkuminoid 250 mg/kg BB 129.8334 1.22 113.924 Ekstrak 100 mg/kg BB 44 600 0.27 1
-0,04 -0,03 -0,02 -0,01 0,00 0,01 0,02 0,03 0,04 0,05 Vo lu m e ed em a (m L ) Dosis (mg/kg BB) 0,00 0,50 1,00 1,50 2,00 2,50 3,00 3,50 4,00 L ip id p er o k sid a (x 1 0 -4 n m o l/g )
Dosis (mg/kg BB)

## Analisis Korelasi
Hubungan  variabel  x  yakni  volume edema  pada  kaki  tikus  dan  variabel  y  yakni kadar  lipid  peroksida  hati  tikus  ditunjukkan dengan  koefesien  korelasi  (r)  sebesar  -0.1183. Nilai tersebut menggambarkan hubungan yang
lemah  dan  tidak  linear  antara  kedua  variabel, karena  semakin  mendekati  nilai  nol.  Hal  ini didukung  oleh  pola  sebaran  pada scatter  plot volume edema pada kaki  tikus terhadap kadar lipid  peroksida  hati  tikus  yang  tidak  merata (Gambar 4).
Gambar 4 Plot tebaran volume edema kaki tikus dengan kadar lipid peroksida hati tikus

## 4. PEMBAHASAN
Komposisi  bahan  yang  digunakan  dalam pembuatan  nanopartikel  pada  penelitian  ini mengacu pada Mujib (2011), yaitu 1:0,1 (asam palmitat  :  kurkuminoid)  dalam  100  mL. Ukuran  nanopartikel  yang  dihasilkan  dalam penelitian  ini  sebesar  561,53  nm  dan  354,52 nm.  Menurut  Weiss et  al. (2008),  penyerapan nanopartikel  di  dalam  tubuh  dipengaruhi  oleh ukuran  nanopartikel  tersebut.  Nanopartikel merupakan  sistem  koloid  yang  memiliki ukuran partikel 10-1000 nm (Yen et al. 2008). Berdasarkan  hal  tersebut,  ukuran  nanopartikel kurkuminoid  dan  nanopartikel  kosong  pada penelitian  ini  masih  dalam  kategori  dapat diterima.
Selain  ukuran  partikel,  keseragaman partikel  juga  memiliki  pengaruh  terhadap kemampuan  penyerapan  partikel  tersebut. Keseragaman  partikel  dinyatakan  sebagai Indeks Polidispersitas (IP). Menurut Yen et al. (2008),  nilai  IP  <  0,3  menunjukkan  partikel memiliki  ukuran  yang  relatif  kecil  dan  dapat dikatakan  cukup  seragam.        Nanopartikel
kurkuminoid  dan  nanopartikel  kosong  yang dibuat  dalam  penelitian  ini  memiliki  nilai  IP sebesar  0,309  dan  0,18  sehingga  dapat dikatakan  partikel  yang  terbentuk  seragam. Koloid  yang  terbentuk  termasuk  stabil  karena dari  pembuatan  hingga  masa  penyimpanan tidak terbentuk agregat.
Warna  kuning  yang  dihasilkan  pada pembuatan  nanopartikel  kurkuminoid  berasal dari  ekstrak  temulawak.  Bila  dibandingkan dengan Maulia (2014), nanopartikel kurkuminoid  yang  dibuat  pada  penelitian  ini memiliki  warna  yang  lebih  keruh.  Namun nanokurkuminoid yang dibuat dalam penelitian  ini  memiliki  warna  yang  sama dengan  Mujib  (2011).  Kurkuminoid  termasuk senyawa  golongan  fenolik,  turunan  dari diferuloilmetan  (Ramirez-Ahumada et  al . 2006).  Kurkuminoid  sensitif  terhadap  cahaya, bersifat semi-polar (cenderung polar) sehingga mudah larut dalam DMSO, etanol, dan aseton. Dalam suasana basa (pH 8,5-10), kurkuminoid berubah  warna  menjadi  merah  (Andarwulan dan Faradilla 2012).
0,00 0,50 1,00 1,50 2,00 2,50 3,00 3,50 4,00 -0,04 -0,03 -0,02 -0,01 0,00 0,01 0,02 0,03 0,04 0,05 Kad ar lip id p er o k sid a (x 1 0 -4 n m o l/g ) Volume edema (mL)
Kemampuan  nanopartikel  kurkuminoid dalam  mengurangi  inflamasi  diuji  terhadap tikus Sparague  dawley jantan  yang  diinduksi dengan  karagenan  1%  pada  bagian  kakinya. Terjadinya penurunan volume edema menunjukkan  kemampuan  nanokurkuminoid untuk  meredakan  inflamasi.  Nanopartikel kurkuminoid  temulawak  dengan  dosis  100 mg/kg  BB  secara in  vivo memiliki  daya inflamasi  sebesar  60%  pada  jam  keenam (Maulia  2014).  Namun  pada  penelitian  ini nanopartikel  kurkuminoid  temulawak  dengan dosis  100  mg/kg  BB  memiliki  volume  edema tertinggi.  Berbeda halnya dengan nanopartikel asam palmitat kosong yang memiliki kemampuan  sebagai  antiinflamasi.  Hal  ini sesuai  dengan  penelitian  Maulia  (2014)  yang menunjukkan  bahwa  nanopartikel  kosong mampu menurunkan volume edema pada tikus inflamasi.
Natrium diklofenak (tergolong NSAIDs) sebagai kontrol positif bekerja dengan menghambat  enzim  siklooksigenase  yang berperan  dalam  biosintesis  prostaglandin, mediator  atau  substansi  radang  (Haghighi et al. 2005).  Menurut  Anggraeni et  al. (2012), garam  natrium  dan  garam  dietil  ammonium merupakan  senyawa  utama  yang  berperan sebagai  antiinflamasi.  Enzim  lain  yang berperan dalam reaksi inflamasi ialah lipoksigenase. Enzim ini mengkatalisis perubahan  asam  arakidonat.  Penelitian  yang dilakukan  oleh  Syahputra  (2014)  secara in silico menunjukkan  bahwa  ikatan  yang terbentuk  antara  demetoksikurkumin  dengan lipoksigenase  memiliki  kesamaan  terhadap  7 residu  asam  amino  dengan  ikatan  yang terbentuk  antara  asam  arakidonat  dengan lipoksigenase.  Energi  bebas  Gibbs  yang terbentuk  antara  bisdemetoksikurkumin  dan demetoksikurkumin dengan enzim lipoksigenase  adalah  -7.8  kkal/mol  dan  -7.3 kkal/mol.  Kestabilan  ditandai  dengan  nilai energi  bebas  Gibbs  yang  semakin  negatif. Zukhurullah et al . (2012) melakukan
penelitian  terhadap  kemampuan  kurkuminoid dalam  menghambat  enzim  siklooksigenase-2 yang  juga  berperan  dalam  perubahan  asam arakidonat menjadi prostaglandin dalam reaksi inflamasi.  Nilai  energi  bebas  Gibbs  yang didapat  yaitu  -6.51  kkal/mol.  Hasil  penelitian tersebut  mengungkapkan  bahwa  kurkuminoid temulawak memiliki potensi sebagai antiinflamasi.
Analisis  konsentrasi  lipid  peroksida terhadap  hati  tikus  pada  penelitian  ini dilakukan  24  jam  setelah  induksi  inflamasi menggunakan karagenan 1%. Molekul- molekul  seperti  superoksida  (O 2 - ),  hidrogen peroksida  (H 2 O 2 ),  hidroksil  radikal  (HO•), peroksil  radikal  (HOO•),  dan  singlet  oksigen ( 1 O 2 ) menyebabkan peroksidasi lipid (Ayala et al.  2014,  Repetto  et  al.  2012,  Winarsi  2007). Singlet  oksigen  merupakan  molekul  yang memiliki reaktivitas sangat tinggi bila dibandingkan  dengan  molekul  oksigen  pada bentuk  dasarnya.  Singlet  oksigen  terbentuk akibat kerja enzim prostaglandin endoperoksida  sintetase.  Enzim  ini  mengubah PGG 2 (endoperoksida) menjadi PGH 2
(prostaglandin).  Endoperoksida  merupakan intermediet  yang  terbentuk  dalam  reaksi perubahan asam arakidonat menjadi prostaglandin akibat kerja enzim siklooksigenase (Winarsi 2007). Tahap
terakhir proses peroksidasi lipid akan membentuk  malondialdehida  (MDA)  yang dikatalisis  oleh  logam  Fe.  Keberadaan  MDA dapat  dianalisis  dengan  asam  tiobarbiturat (Tang et al . 2000).
Nanokurkuminoid  ekstrak  temulawak mampu menghambat lipid peroksida hati pada dosis  100  mg/kg  BB  dengan  konsentrasi  lipid peroksida  sebesar  5,41  nmol/g.  Namun  bila dilihat  secara  keseluruhan,  nanokurkuminoid dengan  dosis  1500  mg/kg  BB  merupakan formula  terbaik  karena  dapat  menurunkan kadar  MDA  dan  glutation  peroksidase  serta meningkatkan  aktivitas  SOD  dan  peroksidase. Penggunaan  natrium  diklofenak  sebagai  obat
untuk meredakan inflamasi ternyata menghasilkan  kadar  lipid  peroksida  yang tinggi.  Hal  tersebut  menunjukkan  bahwa natrium  diklofenak  tidak  dapat  mengatasi radikal  bebas  yang  terbentuk  dalam  reaksi inflamasi.
Kelompok
yang diberikan nanokurkuminoid dengan dosis 250 mg/kg BB memiliki  kadar  lipid  peroksida  yang  paling rendah  bila  dibandingkan  dengan  kelompok perlakuan  nanokurkuminoid  lainnya,  yaitu 1.22 x10 -4 nmol/g. Namun secara keseluruhan, kelompok perlakuan nanokurkuminoid menghasilkan kadar lipid peroksida yang lebih tinggi daripada kelompok ekstrak. Hal tersebut dapat  disebabkan  dari  rendahnya  konsentrasi kurkuminoid pada nanokurkuminoid.
Kemungkinan  lain  yang  dapat  menyebabkan hal  tersebut  adalah  nanokurkuminoid  mampu meningkatkan  kerja  enzim  prostaglandin endoperoksida sintetase.
Ekstrak  kurkuminoid  memiliki  ukuran partikel  yang  lebih  besar  bila  dibandingkan dengan  nanokurkuminoid.  Namun  kadar  lipid peroksida  hati  tikus  inflamasi  yang  diberikan ekstrak  kurkuminoid  100  mg/kg  BB  lebih rendah  dibandingkan  dengan  kadar  lipid peroksida  hati  tikus  inflamasi  yang  diberikan nanokurkuminoid  250  mg/kg  BB,  yaitu sebesar  2.7  x10 -5 nmol/g.  Bila  dibandingkan dengan  kelompok  air  salin,  kadar  lipid peroksida  kelompok  perlakuan  ekstrak  masih lebih  rendah  sehingga  dapat  dikatakan kurkuminoid memiliki efek sebagai antioksidan.
Ukuran partikel yang kecil dari nanokurkuminoid seharusnya memiliki pengaruh  yang lebih baik  terhadap kadar lipid peroksida  hati  tikus  inflamasi.  Namun,  selain ukuran partikel, konsentrasi kurkuminoid yang diberikan  juga  mempengaruhi  kadar  lipid peroksida.  Ekstrak  kurkuminoid  100  mg/kg BB  yang  dilarutkan  dalam  0,5  mL  akuabides steril  memiliki  konsentrasi  32037,88  ppm. Nilai  tersebut  jauh  lebih  tinggi  dibandingkan
dengan  konsentrasi  nanokurkuminoid  250 mg/kg  BB  yaitu  1000  ppm.  Hal  ini  yang menyebabkan  kadar  lipid  peroksida  hati dengan  perlakuan  ekstrak  kurkuminoid  lebih kecil  dibanding  perlakuan  nanokurkuminoid 250 mg/kg BB.
Besarnya ukuran partikel ekstrak kurkuminoid  akan  mempengaruhi  efisiensi manfaatnya di dalam tubuh. Efisiensi kelompok  ekstrak  sebagai  antioksidan  lebih rendah  daripada  kelompok  nanokurkuminoid 250 mg/kg BB. Nilai efisiensi tersebut didapat dengan  membandingkan  kadar  lipid  peroksida yang terbentuk bila nanokurkuminoid memiliki  konsentrasi  yang  sama  dengan konsentrasi ekstrak.
Kadar lipid peroksida ini terbilang cukup kecil untuk dapat diukur. Namun nilai tersebut masih masuk ke dalam limit deteksi spektrofotometer  yang  digunakan.  Penentuan limit  deteksi  spektrofotometer  dilakukan dengan mengukur absorbansi blanko sebanyak 30  kali  dalam  rentang  waktu  30  detik.  Limit deteksi  spektrofotometer  yang  digunakan adalah 1.9 x10 -5 nmol/g. Kadar lipid peroksida yang  diukur  dalam  penelitian  ini  masih  lebih tinggi dari limit deteksi spektrofotometer yang digunakan  sehingga  kadar  lipid  peroksida sampel yang diukur masih dapat dihitung.
Analisis  korelasi  menunjukkan  tanda negatif  antara  volume  edema  kaki  tikus  dan konsentrasi  lipid  peroksida.  Nilai  yang mendekati  nol  menunjukkan  hubungan  yang lemah  antara  kedua  variabel.  Pola  yang terbentuk pada plot tebaran juga menunjukkan titik  yang  tersebar  secara  acak.  Hal  tersebut menunjukkan  bahwa  kedua  variabel  memiliki korelasi  linier  yang  lemah.  Berdasarkan  hasil tersebut  maka  dapat  dikatakan  pengaruh kurkuminoid  sebagai  pereda  inflamasi  dan antioksidan memiliki korelasi yang lemah.

## DAFTAR PUSTAKA
Afitriansyah  E.  2013.  Status  antioksidan  tikus jantan  diinduksi  CCl 4 dengan  perlakuan
nanopartikel  kurkuminoid  temulawak lokal  Ciemas  [skripsi]  Bogor  (ID): Institut Pertanian Bogor.
Andarwulan N, Faradilla RHF. 2012. Pewarna Alami  untuk  Pangan .  Bogor  (ID): SEAFAST Center
Anggraeni  Y,  Hendradi  E,  Purwanti  T.  2012. Karakteristik  sediaan  dan  pelepasan natrium diklofenak dalam sistem niosom dengan basis gel carbomer 940.
PharmaScientia . 1(1):1-15.
Atmaja  S.  2014. Aktivitas  antioksidan nanokurkuminoid temulawak lokal Ciemas  pada  tikus Sparague  Dawley betina  [skripsi]  Bogor  (ID):  Institut Pertanian Bogor.
Ayala A, Munoz MF, Argüelles S. 2014. Lipid peroxidation:  production,  metabolism, and signaling mechanisms of
malondialdehyde and 4-hydroxy-2-
nonenal  [ulasan]. Oxidative  Medicine and Cellular Longevity . 2014.
doi:10.1155/2014/360438.
[BPOMRI]  Badan  Pengawas  Obat  dan Makanan  Republik  Indonesia.  2005. Gerakan  nasional  minum  temulawak. InfoPOM . 6(6):1-4.
Chirio  D,  Gallarate  M,  Peira  E,  Battaglia  L, Serpe L, Trotta M. 2011. Formulation of curcumin-loaded solid lipid nanoparticles  produced  by  fatty  acids coacervation  technique. Journal  of Microencapsulation . 28(6):537-548. doi: 10.3109/02652048.2011.590615.
Haghighi  M,  Khalvat  A,  Toliat  T,  Jallaei  S.
2005.  Comparing  the  effects  of  ginger ( Zingiber officinale ) extract and ibuprofen on patients with osteoarthritis.
Arch Iranian Med . 8(4):267-271.
Katzung  BG.  2004. Farmakologi  Dasar  dan Klinik  Edisi  8 .  Jakarta  (ID):  Salemba Medika.
Kusuma  RW.  2012.  Aktivitas  antioksidan  dan antiinflamasi in  vitro serta  kandungan kurkuminoid  dari  temulawak  dan  kunyit asal  Wonogiri  [skripsi].  Bogor  (ID): Institut Pertanian Bogor.
Maulia  P.  2014.  Aktivitas  antiinflamasi sediaan nanopartikel ekstrak
kurkuminoid  termulawak  tersalut  asam palmitat  secara in  vivo [skripsi]  Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor.
Mujib  MA.  2011.  Pencirian  nanopartikel kurkuminoid tersalut lemak padat [tesis]. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor.
Murphy  K.  2012. Janeway’s  Immunobiology . New York (US): Garland Science.
Novita  R.  2014.  Aktivitas  antiinflamasi nanokurkuminoid  temulawak  tersalut asam  palmitat  pada  tikus Sparague dawley [tesis]  Bogor  (ID):  Institut Pertanian Bogor.
Nurcholis  W,  Ambarsari  L,  Sari  NL, Darusman  LK.  2012.  Curcuminoid contents, antioxidant and anti- inflammatory  activities  of Curcuma xanthorrhiza Roxb. And Curcuma domestica Val.  Promising  lines  from
Sukabumi of Indonesia. Prosiding Seminar  Nasional  Kimia  Unesa  2012 [internet].  2012  Feb  25;  Surabaya, Indonesia.  Surabaya  (ID):  Universitas Negeri  Surabaya.  hlm  C-284  –  C-292; [diunduh  2015  Mei  27].  Tersedia  pada: http://biofarmaka.ipb.ac.id/phocadownlo adpap/userupload/Publication/2012/2012 %20- %20Full%20Paper%20National%20Sem inar%20of%20Chemica l%20WN%20284-292.pdf
Quiles  JL,  Mesa  MD,  Tortosa  CLR,  Aguilera
CM,  Battio  M,  Gil  A,  Tortosa  MCR.
2002. Curcuma longa extract supplementation reduces oxidative stress and  attenuates  aortic  fatty  streak development  in  rabbits. Arterioscler Thromb  Vasc  Biol . 22:  1225-1231.  doi: 10.1161/01.ATV.0000020676.11586.F2.
Rahardjo  M,  Rostiana  O.  2003.  Standar prosedur operasional budidaya
temulawak. Sirkular . 8:33-38.
Raji Y, Udoh US, Oluwadara OO, Akinsomisoye OS, Awobajo O,
Adeshoga  K.  2002.  Anti-inflammatory and  analgesic  prperties  of  the  rhizome
extract  of Zingiber  officinale . Afr.  J. Biomed. Res . 5 (2002): 121-124.
Ramirez-Ahumada  MdC,  Timmermann  BN, Gang  DR.  2006.  Biosynthesis  of curcuminoids  and  gingerols  in  tumeric ( Curcuma  longa )  and  ginger  ( Zingiber officinale ): identification of curcuminoid synthase  and  hydroxycinnamoyl-CoA thioesterases. Phytochemistry . 67 (2006):
2017-2029. doi:10.1016/j.phytochem.2006.06.028.
Repetto  M,  Semprine  J,  Boveris  A.  2012.
Lipid peroxidation: chemical mechanism,  biological  implications  and analytical
determination.
Lipid
Peroxidation . doi:10.5772/45943.
Sharma  V  K,  Diwan  A,  Sardana  S,  Dhall  V. 2011.  Solid  lipid  nanoparticles  system: an  overview. Int.  J.  Res.  Pharm.  Sci. 2(3):450–461.
Syahputra G. 2014. Simulasi docking senyawa kurkumin dan analognya sebagai inhibitor  enzim  12-lipoksigenase  [tesis] Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor.
Tang L, Zhang Y, Qian Z, Shen X. 2000. The machanism of Fe 2+
-initiated lipid peroxidation  in  liposomes:  the  dual function of ferrous ions,  the roles  of the pre-existing lipid peroxides and the lipid peroxyl radical. J. Biochem . 352 (2000): 27-36.
Weiss  J,  Decker  EA,  McClements  DJ,
Kristbergsson  K,  Helgason  T,  Awad  T. 2008.  Solid  lipid  nanoparticles  as delivery  systems  for  bioactive  food components. Food  Biophysics .  3:146-
154. doi: 10.1007/s11483-008-9065-8.
Wijayanto EA. 2013. Kandungan kurkuminoid dan  daya  antioksidan  aksesi  temulawak ( Curcuma xanthoriza Roxb.) asal
Sukabumi  [skripsi]  Bogor  (ID):  Institut
Pertanian Bogor.
Winarsi  H.  2007. Antioksidan  Alami  dan
Radikal Bebas . Yogyakarta (ID):
Kanisius.
Yadav RV, Suresh S, Devi K, Yadav S. 2009. Novel formulation of solid lipid
microparticles  of  curcumin  for  anti- angiogenic and anti-inflammatory activity  for  optimization  of  therapy  of inflammatory  bowel  disease. Journal  of Pharmacy  and  Pharmacology. 61  (3):
311-321. doi:10.1211/jpp/61.03.0005.
Yagi  K.  1994.  Lipid  peroxides  in  hepatic, gastrointestional, dan pancreatic disease, hlm. 165-169. Di dalam Free Radicals in Diagnostic  Medicine .  Amstrong  D, penyunting.  New  York  (US):  Plenum Press.
Yen FL, Wu TH, Lin LT, Cham TM, Lin CC. 2008.  Nanoparticles  formulation  of
Cuscuta chinensis
prevents acetaminophen-induced hepatotoxicity
in  rats. Food  and  Chemical  Toxicology . 4: 1771-1777. doi:
10.1016/j.fct.2008.01.021. Yin  H,  Xu  L,  Porter  NA.  2011.  Free  radical lipid  peroxidation:  mechanisms  and analysis  [ulasan]. Chem.  Rev .  111 (2011): 5944-5972. doi:10.1021/cr200094z.
Zukhrullah  M,  Aswad  M,  Subehan.  2012.
Kajian  beberapa  senyawa  antiinflamasi:
docking terhadap siklooksigenase-2 secara in  silico . Majalah  Farmasi  dan
Farmakologi . 16 (1) : 37-44. Afitriansyah E. 2013. Status antioksidan tikus  jantan  diinduksi  CCl 4 dengan perlakuan nanopartikel kurkuminoid temulawak lokal Ciemas [skripsi] Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor.