## Jan-Jun 2018

## JURNAL FITOFARMAKA INDONESIA ( JFFI )
Laboratorium Farmakognosi- Fitokimia Fakultas Farmasi Universitas Muslim Indonesia
JURNAL FITOFARMAKA INDONESIA INDONESIAN J. PHYTOPHARM
Dewan Redaksi
Ahmad Najib, S. Si., M. Farm., Apt. (Ketua) Abd. Malik, S. Farm., M. Sc., Apt. (Anggota) Aktsar Roskiana Ahmad, S. Farm., M. Farm., Apt. (Anggota) Asni Amin, S. Si., M. Pharm., Apt. (Anggota) Dr. Hasnaeni, S. Si., M. Sc., Apt. (Anggota) Hj. Faradiba, S. Si., M. Si., PhD, Apt.(Anggota)
Mitra Bestari
Prof. Dr. Suwidjiyo Pramono, DEA, Apt. (UGM) Dr. Abdul Mun’im, M. Si., Apt. (UI)
Prof. Dr. Muhammad Hanafi (LIPI)
Prof. Dr. Gemini Alam, M. Sc., Apt. (UNHAS)
Editor Pelaksana:
Abd. Malik, S. Farm., M. Sc., Apt. Aktsar Roskiana Ahmad, S. Farm., M. Farm., Apt. Virsa Handayani, S. Farm., M. Pharm., Apt. Muammar Fawwaz, S. Farm., M. Si., Apt.
Andi Amalia Dahlia, S. Farm., M. Si
La Hamidu, S. Farm
Laboratorium Farmakognosi-Fitokimia Fakultas Farmasi
Universitas Muslim Indonesia
Jl Urip Sumohardjo Km. 5 Kampus II Universitas Muslim Indonesia,
Gedung Laboratorium Farmakognosi-Fitokimia Lantai III

## EDITORIAL

## Assalamualaikum Warahmatullahi Wabarakatuh
Puji  syukur  kami  panjatkan  kepada Allah  Subhanahu  Wa  Taala ,  pada kesempatan ini Jurnal Fitofarmaka Indonesia (JFFI) Volume 5 Nomor 1 telah terbit. Penerbitan ini terlaksana atas kerjasama seluruh anggota dari unsur Dewan Redaksi, Mitra Bestari dan Editor Pelaksana.
Eksplorasi tumbuhan obat perlu terus dilakukan dengan mencari senyawa yang aktif untuk pengembangan obat. Jurnal Fitofarmaka Indonesia volume 5 nomor 1 kali ini  membahas  mengenai  tumbuhan  obat kayu  manis,  kacang  kedelai,  daun  anting- anting,  jamur  kancing  dan  jahe  merah.  Hasil  penelitian  tersebut  diharapkan  akan menambah informasi ilmiah dalam pengembangan tumbuhan obat di Indonesia.
Kami  senantiasa  mengharapkan  adanya  saran  dan  kritikan  yang  sifatnya membangun untuk kemajuan jurnal ini. Semoga kehadiran jurnal ini dapat memberi khasanah pengetahuan dan menjadi media komunikasi ilmiah antar sesama peneliti dalam lingkup kajian bahan alam. Selamat membaca.
Wallahuwaliuttaufik walhidayah

## JURNAL FITOFARMAKA INDONESIA

## INDONESIAN J. PHYTOPHARM

## DAFTAR ISI
Halaman
Editorial i Daftar Isi ii
Efek Senyawa Bioaktif Kayu Manis Cinnamomum burmanii NEES EX.BL.)
Terhadap Diabetes Melitus: Kajian Pustaka 246-252 Emilda Isolasi Dan Karakterisasi Bakteri Asam Laktat Dari Limbah Cair Rendaman Kacang Kedelai 253-257
Zakiyah Zahra Nur Amaliah, Saiful Bahri, dan Puteri Amelia
Profil Fitokimia Dan Pemeriksaan Farmakognostik Daun Anting-Anting ( Acalypha indica . L)
258-265
Selpida Handayani, Abd. Kadir, Masdiana
Potensi Antibakteri Ekstrak Etanol Jamur Kancing ( Agaricus bisporus )
Sebagai Antibakteri 266-270 Siska Nuryanti, Fitriana Aktifitas Ekstrak Jahe Merah Dalam Menurunkan Asam Urat Pada Kelinci Serta Isolasi Dan Identifikasi Senyawa Bioaktifnya 271-278
Subehan Lallo, Muhammad Mirwan, Adrianti Palino, Nursamsiar, Besse Hardianti
JFFI. 2018; 5(1) 246-252 www.jurnal.farmasi.umi.ac.id/index.php/fitofarmakaindonesia

## EFEK SENYAWA BIOAKTIF KAYU MANIS Cinnamomum burmanii NEES EX.BL.) TERHADAP DIABETES MELITUS: KAJIAN PUSTAKA
Emilda 1
Program Studi Pendidikan Biologi, FTMIPA, Universitas Indraprasta PGRI
1 emilda1430@gmail.com

## ABSTRACT
Diabetes  Mellitus  (DM)  is  a  chronic  disorder  of  carbohydrate  metabolism  (glucose)  in  the  body  and  its prevalence is getting higher. Until 2015, 10 million cases of DM found in Indonesia and allegedly ever increasing. Type  II  DM  is  the  most  common types  of  DM  in  the  world  and  its  characterized  by  insulin  resistance  and  β  cell damage.  Due to the serious side effects caused when taking chemical antidabetes drugs, herbal medicine searches from natural materials continue to be done. Various spesieces of cinnamon plants have been studied and known to have antidiabetic activity. One of them is Cinnamomum burmanii which is found in Indonesia. Among the spesieces of cinnamon have the same health benefits including antidiabetes, antimicrobial, anti-fungal, antiviral, antioxidant, antitumor etc. Although the antidiabetic mechanism of cinnamon is still debated, it is thought that cinnamon affects several  insulin  signaling  pathways,  among  others,  in  insulin  receptors,  glucose  transporter  4  (GLUT  4),  glucose transporter-1 (GLUT 1), peroxisome proliferator activator receptor (PPAR), α activity glucosidase etc. This activity is  caused  of  the  bioactive  compounds  it  contains.  The  main  compounds  that  have  hypoglycemic  activity  are Methylhidroxy  Calcone  Polymer  (MHCP),  sinamaldehyde,  and  polymer  pro-ayanine  type-A  polymers  or proanthocyanidin.
Keywords: Diabetes melitus, C. burmanii, insulin resistence , β cell damage, bioactive compound

## I. PENDAHULUAN
Diabetes adalah kelompok penyakit metabolik kompleks yang ditandai oleh suatu keadaan hiperglikemia  yaitu  meningkatnya  kadar  gula  darah melebihi  kadar  normal  (Auroma et  al. ,  2006). Menurut  WHO,  diabetes  adalah  ancaman  yang meningkat bagi kesehatan masyarakat. Studi
epidemeologi terhadap penderita
diabetes menunjukkan  dari  30  juta  penduduk  dunia  yang menderita  diabetes  pada  tahun  1985  meningkat menjadi  171  juta  jiwa  pada  tahun  2000.  Badan Kesehatan Dunia (WHO) memperkirakan pada tahun 2030 jumlah penderitanya akan melonjak menjadi 366 juta jiwa. Indonesia menempati peringkat ke-4 jumlah penderita  diabetes  terbanyak  setelah  India,  Cina  dan Amerika Serikat. Jumlahnya 8,4 juta pada tahun 2000 dan  diperkirakan  meningkat  menjadi  21,3  juta  pada tahun 2030 (Wild et al., 2004).
Diabetes  melitus  (DM)  adalah  suatu gangguan  kronik  metabolisme  karbohidrat  (glukosa) di  dalam  tubuh.  Jumlah  prevalensinya  terus meningkat. Data  Sample  Registration  Survey tahun 2014 menunjukkan bahwa DM merupakan penyebab kematian  terbesar  nomor  3  di  Indonesia  dengan persentase sebesar 6,7%, setelah Stroke (21,1%) dan penyakit  Jantung  Koroner  (12,9%)  (Anonim,  2016). Apalagi penderita penyakit DM seringkali
berkomplikasi  kepada  penyakit  lainnya  seperti serangan jantung, stroke, infeksi kaki yang berat dan berisiko amputasi,  serta  gagal  ginjal  stadium  akhir. Estimasi  terakhir  International  Diabetes  Federation (IDF) terdapat 382 juta orang hidup dengan diabetes di  dunia  pada  tahun  2013.  Pada  tahun  2035  jumlah tersebut  diperkirakan  akan  meningkat  menjadi  592 juta (Kemenkes, 2014). Sementara di Indonesia telah ditemukan  10  juta  kasus  diabetes  pada  tahun  2015 (IDF, 2017).
Diabetes  tipe  2  merupakan  tipe  DM  yang paling  sering  diderita  masyarakat  yang  ditandai dengan  resistensi  insulin  dan  kerusakan  sel  β  (FDA, 2008).  Banyak  obat  antidiabetes  oral  yang  tersedia untuk  pengobatan  dan  pengendalian  DM  Tipe  2, seperti  agen  sulfonylurea,  biguanides  (metformin), thiazolidinedione  (TZD),  inhibitor  α-  glukosidase, dan  glucagon-like  peptide-1  (GLP-1)  inhibitor. Namun  menurut  Chattopadhyay  (2009)  dalam Fadillah (2014) obat-obat ini dapat menyebabkan efek samping  yang  serius,  diantaranya  hipoglikemia, toksisitas  hati,  peningkatan  berat  badan,  physconia (pembesaran  perut),  dan  asidosis  laktat.  Karena  itu upaya  untuk  mencari  obat-obat  alternatif  berbahan herbal  terus  dilakukan  sebagai  pengganti  obat kimiawi. WHO merekomendasikan pula penggunaan obat tradisional termasuk herbal dalam pemeliharaan
kesehatan  masyarakat,  pencegahan  dan  pengobatan penyakit,  terutama  untuk  penyakit  kronis,  penyakit degeneratif  dan  kanker.  Penggunaan  obat tradisional secara umum dinilai lebih aman dari pada obat kimia modern. Hal ini disebabkan obat tradisional memiliki efek samping yang relatif lebih sedikit dari pada obat modern (Sari, 2006).
Penelitian-penelitian  untuk  mengeksplorasi zat  aktif  pada  tumbuhan  telah  banyak  dilakukan. Diantaranya  telah  ditemukan  beberapa  spesies tumbuhan  yang  memiliki  aktifitas  antidiabetes  yang dapat menurunkan kadar gula darah atau memperbaiki sel  β  pankreas.  Govindappa  M  (2015)  berhasil mengumpulkan  sejumlah  literatur  dan  me-list  419 spesies  dari  133  famili  tumbuhan  yang  memiliki aktifitas  antidiabetes  salah  satunya  kayu  manis Cinnamomum  zeylanicum. Sedangkan  di  Indonesia, spesies  kayu  manis  yang  ditemukan  diantaranya Cinnamomum burmannii yang juga memiliki aktifitas hipoglikemia (Handayani dan Ahmad, 2006).  Tujuan penulisan makalah ini ialah untuk mengetahui potensi pemanfaatan  tumbuhan  kayu  manis Cinnamomum burmannii dalam  mengatasi  Diabetes  melitus  tipe  II dan  mengetahui  kandungan  senyawa  bioaktif  yang memiliki aktifitas antidiabetes.

## II. METODE PENELITIAN
Metode  penelitian  yang  digunakan  adalah kajian  kepustakaan  dengan  pendekatan  deskriptif berdasarkan  pustaka  sekunder  dari  artikel-artikel penelitian.  Penelusuran  pustaka  digali  melalui  situs google  ( www.google.co.id )  dan  google  scholar ( www.scholar.google.co.id ) dengan kata kunci terkait seperti  kayu  manis, Cinnamomum  burmannii
, diabetes , sinamaldehid (cynnamaldehida) , proanthocyanidin, MHCP, dsb.

## III. PEMBAHASAN

## Cinnamomi burmannii Blume (Kayu Manis)
Tumbuhan  kayu  manis  merupakan  spesies dari  genus  Cinnamomum  dengan  famili  Lauraceae, berupa  tumbuhan  berkayu  yang  umumnya  dikenal sebagai rempah-rempah (Syarif, 2006 dalam Yulianis dkk, 2011). Tumbuhan ini tersebar di Asia Tenggara, Cina dan Australia. Terdapat sekitar 250 spesies yang termasuk  genus  Cinnamomum.  Empat  spesies  yang utama  adalah Cinnamomum  zeylanicum (C. verum : ‘True cinnamon’, Sri Lanka atau Ceylon cinnamon),
C.  loureirii (Saigon  atau  Vietnamese  cinnamon), C. burmanni (Korintje  atau  Indonesian  cinnamon)  dan Cinnamomum  aromaticum (Cassia  or  Chinese cinnamon)  (Bandara,  2011). Cinnamomum  burmanii merupakan  jenis  kayu  manis  yang  berasal  dari Indonesia  (Inna  dkk,  2010).    Dalam  perdagangan Cinnamomum  burmanii diberi  nama  Padang  Kaneel atau cassiavera eks. Padang (Andianto, 2011).
Kulit  kayu  manis  memiliki  bau  yang  khas, banyak  digunakan  untuk  berbagai  keperluan,  seperti penyedap rasa makanan atau kue (Abdurachman dan Hadjib,  2011) . Kayumanis  berbau  wangi  dan  berasa manis sehingga dapat dijadikan bahan pembuat sirup dan rasa pedas sebagai penghangat tubuh. Kayu dari batang  kayumanis  dapat  digunakan  untuk  berbagai keperluan  seperti  bahan  bangunan,  meubelair,  dan kayu bakar (Ferry, 2013).
Al-Dhubiab (2012) menyebutkan komponen kimia  terbesar  pada  kayumanis  adalah  alkohol sinamat,  kumarin,  asam  sinamat,  sinamaldehid, antosinin  dan  minyak  atsiri  dengan  kandungan  gula, protein, lemak sederhana, pektin dan  lainnya. Ervina dkk  (2016)  menyatakan  bahwa  hasil  ekstraksi  kulit batang Cinnamomum burmanii mengandung senyawa antioksidan utama berupa polifenol (tanin, flavonoid) dan  minyak atsiri golongan fenol. Kandungan utama minyak atsiri kayu manis adalah senyawa sinamaldehida dan eugenol. Wang et al (2009) dalam Hasan (2011) menyebutkan bahwa komponen mayor minyak atsiri yang terkandung pada daun Cinnamomum  burmanii adalah trans sinamaldehid (60,17%),  eugenol  (17,62%)  dan  kumarin  (13,39%). Identifikasi minyak atsiri batang C. burmannii dengan GC-MS  dan  LC-MS  menemukan  adanya  senyawa utama sinamaldehid dan beberapa polifenol terutama proanthocyanidin  dan  epi-catechin  (Shan  B,  2007). Chen  et  al  (2014)  menemukan  diantara  4  spesies cinnamon  yaitu C.  burmannii , C.  verum , C. aromaticum ,  dan C.  Loureiroi semua  ekstraknya memiliki  manfaat  kesehatan  yang  sama.  Yang membedakannya C.  burmannii memiliki  rasa  yang tidak  terlalu  pahit  seperti C. cassia and C. loureiroi . Tingkat kandungan senyawa aktif pada tumbuhan bisa berubah  tergantung  metode  yang  digunakan  dalam proses ekstraksinya (Duguoa et al, 2007).
Bandara  et.al  (2011)  menyebutkan  bahwa cinnamon memiliki kemampuan antimikroba, antifungi,  antivirus,  antioksidan,  antitumor,  penurun tekanan  darah,  kolesterol  dan  memiliki  senyawa rendah  lemak.  Senyawa  eugenol  dan  sinamaldehid memiliki  potensi  sebagai  antibakteri  dan  antibiofilm (Niu C dan Gilbert ES, 2004). Penelitian Shan B et al (2007) membuktikan kemampuan ekstrak kulit batang cinnamon melawan  5  jenis  bakteri  patogen  yaitu
Bacillus
cereus, Listeria monocytogenes, Staphylococcus  aureus,  Escherichia  coli, dan Salmonella  anatum. Nisa  dan  Triastuti  (2014) melaporkan  sifat  antibakteri  ekstrak  kayu  manis terhadap E. coli dan S. aureus. Sedangkan penelitian Daker dkk (2013) menunjukkan ekstrak metanol kulit batang Cinnamomum  burmannii Blume dengan senyawa  utamanya  trans -cinnamaldehyde (TCA) yang  memiliki  kemampuan  menghambat  proliferasi human NPC cell.
Mekanisme aktifitas antidiabetes dari cinnamon masih  diperdebatkan,  namun  diduga aktifitas cinnamon berpebgaruh  pada  beberapa  jalur sinyal  insulin  yaitu  pada  reseptor  insulin,  glucose transporter  4  (GLUT  4),  glucose  transporter-1 (GLUT-1), glucagon-like peptide-1 (GLP-1), Peroxisomeproliferator  activator  receptor  (PPAR),
aktifitas α glucosidase, pengaruh pada glukoneogenesis, dan pengosongan lambung (Medagama, 2015). Pada gambar dibawah ditampilkan mekanisme molekul cinnamon mempengaruhi aktifitas hipoglikemia.
Gambar 1. Mekanisme molekul cinnamon mendesak aktifitas hipoglikemia (Medagama, 2015) (Keterangan: PK: Pyruvate Kinase, PEPCK: Phosphoenol Carboxy Kinase, PPAR-gamma: Peroxisome Proloferator Activated-Receptor gamma, WAT: White Adipose Tissue, ACO: Acyl-CoA Oxidase, GLUT-4: Glucose transporting protein 4,
LPL: Lipoprotein lipase, CD36:Fatty Acid Transporter)

## Diabetes Melitus Tipe II
Diabetes  melitus  adalah  penyakit  kronis serius  yang  terjadi  baik  saat  pankreas  tidak menghasilkan insulin yang cukup atau bila tubuh tidak dapat  secara  efektif  menggunakan  insulin  yang dihasilkannya  (WHO,  2016).  Insufisiensi  fungsi insulin  dapat  disebabkan  oleh  gangguan  atau defisiensi produksi  insulin oleh sel-sel β Langerhans kelenjar  pankreas,  atau  disebabkan  oleh  kurang responsifnya  sel-sel  tubuh  terhadap  insulin  (WHO, 1999 dalam Depkes 2005).
Berdasarkan penyebab ini, DM
diklasifikasikan sebagai berikut:
a. Tipe  I  ( disebut  juga  diabetes insulin-dependent, juvenile  or  childhood-onset )  yang  dicirikan dengan  kekurangan  produksi  insulin  oleh  tubuh (WHO, 2016).  Penyebabnya belum diketahui dan tidak  bisa  dicegah.  Gejala  yang  terlihat  adalah banyak menghasilkan urin dan sering haus, sering lapar,  penurunan  berat  badan,  penglihatan terganggu  dan  cepat  lelah.  Gangguan  produksi insulin  pada  DM  tipe  1  umumnya  terjadi  i kerudiseakan  sel-sel  β  Langerhans  karena  reaksi
otoimun.  Namun  ada  pula  yang  disebabkan  oleh virus, seperti virus Cocksakie, Rubella, CMVirus, Herpes, dan lain sebagainya (Depkes, 2005) b. Tipe  II (disebut  juga diabetes  non-insulin- dependent or adult-onset ) disebabkan penggunaan insulin yang tidak efektif oleh tubuh. Gejala mirip dengan  tipe  I  tetapi  seringkali  gejala  ini  tidak terlihat. Akibatnya, penyakit ini tidak terdiagnosis selama beberapa tahun, sampai komplikasi sudah terjadi  (WHO,  2016). Penyebab  DM  tipe  2 multifaktor  yang  belum  sepenuhnya  terungkap dengan  jelas.  Faktor  genetik  dan  pengaruh lingkungan  cukup  besar  dalam  menyebabkan terjadinya  DM  tipe  2,  antara  lain  obesitas,  diet tinggi lemak dan rendah serat, serta kurang gerak badan (Depkes, 2005).
Pada  penderita  DM  Tipe  2,  awalnya disebabkan  sel-sel  sasaran  insulin  tidak  mampu merespon  insulin  secara  normal  atau  disebut resistensi  insulin.  Resistensi  insulin  secara dramatis mengganggu ambilan glukosa di jaringan perifer dan mengakibatkan produksi glukosa yang berlebihan  oleh  hati.  Hal  ini  berpengaruh  pada terjadinya  hiperglikemia  pada  penderita  diabetes
(Olefsky dalam Tjandrawinata, 2016). Disamping itu dapat juga timbul gangguan sekresi insulin dan produksi glukosa hepatik yang berlebihan. Namun defisiensi  fungsi  insulin pada penderita DM Tipe 2  hanya  bersifat  relatif,  karena  tidak  terjadi pengrusakan sel-sel β Langerhans secara otoimun. Penelitian  mutakhir  menunjukkan  bahwa  pada penderita DM Tipe 2 umumnya ditemukan kedua faktor  tersebut,  yaitu  resistensi  insulin  dan defisiensi insulin (Depkes, 2005).
c. Diabetes Mellitus Gestasional ( GDM = Gestational  Diabetes  Mellitus )  adalah keadaan  diabetes  atau  intoleransi  glukosa  yang timbul  selama  masa  kehamilan,  dan  biasanya berlangsung  hanya  sementara  atau  temporer. Sekitar  4-5%  wanita  hamil  diketahui  menderita GDM , dan umumnya terdeteksi pada atau setelah trimester kedua (Depkes, 2005).
d. Diabetes  Melitus  Tipe  Lain yaitu  DM disebabkan  kelainan  genetik,  penyakit  pankreas, obat,  infeksi,  antibodi,  sindrom  penyakit  lain. Diabetes  tipe  lain  dapat  juga  disebabkan  defek genetik fungsi insulin, defek genetik kerja insulin, penyakit eksokrin pankreas, endokrinopati, karena obat  atau  zat  kimia  (Sutjahjo  dkk,  2006  dalam Ambarwati, 2012).
Pengobatan  DM  dapat  dilakukan  dengan pemberian  insulin,  obat  hipoglikemik  oral  baik  obat sintetis  maupun  herbal  (Wadkar et  al .,  2007  dalam Anggriawan  dkk,  2015).  Pada  DM  Tipe  II penatalaksanaan  resistensi  insulin  selain  untuk mencegah  timbulnya  diabetes  melitus,  juga  akan mencegah komplikasi penyakit kardiovaskuler (Merentek, 2006).
Aktifitas  Antidiabetes  Ekstrak  Cinnamomum burmannii Blume
Sejumlah  penelitian  tentang  pemanfaatan kayu manis khususnya jenis Cinnamomum burmannii Blume menunjukkan  adanya  aktifitas antidiabetes yang berbeda-beda. Diantaranya penelitian  Tjahjani  dkk  (2014)  membuktikan pemberian  ekstrak  etanol  kayu  manis  dosis  20,8  mg kepada  mencit  mampu  menurunkan  glukosa  darah. Ekstrak  kayu  manis  dosis  20,8  mg  sama  efektifnya dengan  glibenklamid  dalam  menurunkan  glukosa darah.  Begitupula  Alusinsing  dkk  (2014)  juga membuktikan terjadinya penurunan kadar gula darah pada  mencit  setelah  diberi  ekstrak  etanol  kulit  kayu manis. Penelitian Kusumaningtyas dkk (2014) dengan memberikan  seduhan  bubuk  kayu  manis  pada  dosis 0,73 mg/g bb mampu memperbaiki struktur pankreas mencit  jantan  strain  Balb-C  setelah  dipapar  dengan aloksan. Selain pada kulit batang, aktifitas antidiabetes  juga  didapatkan  dari  ekstrak  daun  kayu manis.  Penelitian  Kondoy  dkk  (2013)  menemukan
bahwa  ekstrak  etanol  daun  kayu  manis  dapat menurunkan kadar gula darah pada tikus putih jantan galur wistar yang diinduksi sukrosa.
Bernardo et al (2015) melaporkan bahwa teh cinnamon  dari  bubuk  kulit  batang bermanfaat  untuk mengendalikan  metabolisme  glukosa  pada  orang dewasa  nondiabetes  selama  periode  postprandial. Analisis  kimia  menunjukkan  bahwa  teh  cinnamon memiliki  kapasitas  antioksidan  yang  tinggi  yang diduga  karena  kandungan  polifenolnya.  Hasil penelitian  Anggriawan dkk (2015) bahwa ekstrak air dan  etanol C.burmannii mampu  menghambat aktivitas enzim α-Glukosidase.
Aktivitas
penghambatan tertinggi terhadap enzim α- Glukosidase  adalah  dari  ekstrak  etanol  30% C.burmannii konsentrasi  1.5%  dan  ekstrak  air C.burmannii konsentrasi  1.5%  dengan  daya  inhibisi berturut-turut  adalah  94.88%  dan  94.51%.  Ekstrak tersebut  memiliki  daya  penghambatan  tidak  berbeda nyata  dengan  kontrol  positif  yaitu  Glucobay (Akarbosa) 1% sebesar 100.03%.
Meskipun belum ada bukti yang pasti, namun diduga kuat sejumlah senyawa bioaktif yang memiliki aktifitas  antidiabetes  pada C.burmannii diantaranya Methylhidroxy Calcone Polymer (MHCP) (Dougua et al,  2007),  sinamaldehid  (Ngadiwiyana  dkk,  2011), polimer  procyanidin  type-A  polymers  (Medagama, 2015).  Sedangkan senyawa lain seperti asam sinamat, sinamid,  alkohol  sinamat,  eugenol  dan  2-metoksi sinamaldehid  menunjukkan  aktifitas  yang  kecil  atau tidak ada (Medagama, 2015)

## Sinamaldehid
Sinamaldehid  adalah  salah  satu  jenis komponen  fenilpropanoid  yang  banyak  terdapat dalam Cinnamomum  sp .    Pada Cinnamomum zeylanicum terdapat  kandungan 75%  sinamaldehid (Fazilah et al (2006) dalam Yusof (2012). Penelitian Wardatun  dkk  (2017)  menemukan  dari  100  gr  kulit kayu  manis C.burmannii kering  yang  diekstraksi dengan  teknik  maserasi  etanol  96%  diperoleh sinamaldehid sebanyak 124.14 ± 1.17 mg/g.
Joshi et  al .,  2009  dalam  Yusof  (2012) menyebutkan sinamaldehid memiliki aktifitas biologi sebagai antioksidan, antivirus, antifungi and antibakteri. Ngadiwiyana dkk (2011) telah membuktikan  bahwa  senyawa  sinamaldehid  hasil isolasi dari minyak kayu manis mempunyai nilai IC 50 sebesar  27,96  ppm  terhadap  enzim  α-glukosidase sehingga sangat potensial sebagai senyawa penghambat aktivitas enzim α-glukosidase.
Sinamaldehid  secara  signifikan  menurunkan  tingkat gula  puasa,  meningkatkan  sensitifitas  insulin  dan memperbaiki  morfologi  islet  serta  fungsi  pada  tikus db/db (Guo et al, 2017).
Zhu  R  et  al  (2017)  menyatakan  bahwa  dari berbagai  hasil  penelitian  terbukti  sinamaldehid memperlihatkan efek penurunan gula pada hewan uji melalui peningkatan pengeluaran gula dan perbaikan sensitifitas insulin pada jaringan adiposa dan jaringan otot,  meningkatkan  sintesis  glikogen  di  hati, memperbaiki disfungsi islet pankreas, memperlambat waktu pengosongan lambung, memperbaiki gangguan ginjal karena diabetes dan kerusakan otak.

## Methylhidroxy Calcone Polymer (MHCP)
Senyawa Methylhidroxy  Calcone  Polymer (MHCP)  adalah  flavonoid  yang  memiliki  efek  mirip insulin.  MHCP  pada  kayu  manis  mempunyai  kerja seperti  insulin  yaitu  mengaktivasi  sintesis  glikogen, meningkatkan  pengambilan  glukosa,  mengaktivasi insulin reseptor kinase dan menghambat defosforilasi reseptor insulin (Tjahjani, 2014).
Kerja  MHCP  antara  lain  ialah  dengan meningkatkan  konsentrasi  IRS-1,  suatu  reseptor insulin  yang  akan  mengaktifkan  jalur  PI-3K. Pengaktifan  jalur  PI-3K  ini  akan  menyebabkan peningkatan  sintesis  lipid,  protein,  glikogen  oleh glikogen  sintase,  serta  menstimulasi  proliferasi  sel- sel. Mekanisme  ini  bertanggung  jawab dalam proses distribusi  glukosa  ke  dalam  sel.  PI-3K  selanjutnya akan  menyebabkan  GLUT-4  yang  terdapat  dalam sitosol  bergerak  menuju  membran  sel  sehingga glukosa  dapat  masuk  ke  dalam  sel  dan  menuju  ke mitokondria untuk diubah menjadi ATP. Kerja MHCP lainnya  yaitu  dengan  menghambat  enzim  GSK-3b yang berfungsi untuk menghambat glycogen synthase dan  menghambat PTP-1 yang  bertugas dalam proses defosforilasi reseptor insulin (Hlebowicz  et al, 2007 dalam Gunawan dan Suhendra (2013).
MHCP menjadikan sel lemak lebih responsif terhadap  insulin  dengan  mengaktifkan  enzim  yang menyebabkan  insulin  dapat  berikatan  dengan  sel ( insulin-receptorkinase )  dan  menginhibisi  enzim yang  menghalangi  proses  ini  ( insulin-receptor- phosphatase )  yang  mendorong  proses  fosforilasi maksimal reseptor insulin yang berhubungan  dengan meningkatnya sensitifitas insulin (Safdar et al, 2004). Aktifitas  proanthocyanidin  dan  MHCP  pada  bubuk kayu  manis  juga  dapat  menurunkan  kadar  kolesterol (Soemardini dkk, 2011 dalam Vanessa dkk, 2014).

## Proanthocyanidin
Proanthocyanidin  adalah  sejenis  polifenol yang  banyak  ditemukan  pada  tumbuhan.  Peneliti  di Perancis telah menemukan suatu senyawa bioflavonoid  yang  tidak  berwarna  pada  biji  anggur merah yang ternyata mengandung proanthocyanidins sebanyak  95%.  Dalam  penelitiannya,  zat  tersebut diberi  nama  Oligomer  Proanthocyanidin  Complex (OPC)  (Liers,  1993  dalam  Djoka  dkk,  2012).
Bernardo  (2015)  menyebutkan    bahwa  dalam  kajian Peng dan rekannya menemukan bahwa proanthocyanidin  dari  ekstrak  cair  cinnamon  dapat mencegah  pembentukan advanced  glycation-end product (AGE).  Keberadaan  AGE  mengawali produksi  gula  darah  tinggi  yang  berkaitan  dengan produksi reactive oxygen species (ROS).
Aron  (2007)  dalam  Djoka  dkk  (2012)  OPC dapat berperan sebagai antioksidan melalui beberapa mekanisme yaitu scavenging free radicals, chealation of transition metals, serta inhibitor enzim (Aron, 2007 dalam  Djoka  dkk,  2012).  Flavonoid  juga  diketahui sebagai antioksidan karena mampu menurunkan stress oksidatif.  Hal  ini  dapat  menimbulkan  efek  protektif terhadap  sel  beta  pankreas  dan  meningkatkan sensitivitas  insulin  (Kaneto  et  al,  1999  dalam  Djoka dkk, 2012).

## IV. KESIMPULAN
Berdasarkan  paparan  diatas  disimpulkan bahwa tumbuhan  kayu  manis  jenis Cinnamomum burmannii Blume  yang  banyak  ditemukan  di Indonesia  memiliki  aktifitas  antidiabetes.  Ekstrak kulit  batang  atau  daunnya  berpotensi  dimanfaatkan untuk  mengatasi  DM  tipe  II  yang  ditandai  dengan resistensi  insulin  dan  defisiensi  insulin.    Aktifitas antidiabetes  yang  ditunjukkannya  berbeda-beda antara  lain  pada  penurunan  kadar  gula  darah, penghambatan terhadap aktifitas enzim α- Glukosidase  dan  pengendalian  metabolisme  glukosa pada  orang  dewasa  nondiabetes  selama  periode postprandial.  Meskipun masih diperdebatkan, diduga kemampuan antidiabetes pada kayu manis disebabkan kandungan  senyawa  bioaktif  yang  terkandung didalamnya.  Senyawa  utama  antidiabetesnya  antara lain Methylhidroxy  Calcone  Polymer (MHCP), sinamaldehid,  dan  polimer  procyanidin  type-A polymers atau proanthocyanidin.

## DAFTAR PUSTAKA
Abdurachman  dan  Nurwati  H.  2011. Sifat  Papan
Partikel dari Kayu Kulit Manis ( Cinnamomum burmanii BL). Jurnal Penelitian  Hasil  Hutan  Vol.  29  No.  2,  Juni
2011: 128-141 Al-Dhubiab, B. E. (2012). Pharmaceutical
Applications  and  Phytochemical  Profile  of Cinnamomum  burmannii . Pharmacognosy Reviews , 6 (12), 125–131.
Alusinsing G dkk. 2014. Uji Efektivitas Kulit Batang Kayu  Manis  ( Cinnamomum  Burmanii ) Terhadap  Penurunan  Kadar  Gula  Darah Tikus  Putih  Jantan  Galur  Wistar  ( Rattus Norvegicus ) yang Diinduksi Sukrosa.
Pharmacon Jurnal Ilmiah Farmasi – Unsrat Vol. 3 No. 3.
Ambarwati  WN,  2012.  Konseling  Pencegahan  dan Penatalaksanaan Penderita Diabetes Mellitus. Prosiding Seminar Nasional Keperawatan .  Program  Studi  Keperawatan Fakultas Ilmu Kesehatan. Universitas
Muhammadiyah Surakarta.
Andianto.  2011.  Pohon  Berkhasiat  Obat  dan Keberadaannya. Pusat Penelitian dan
Pengembangan  Keteknikan  Kehutanan  dan Pengolahan Hasil Hutan. Departemen Kehutanan RI.
Anggriawan MB dkk. 2015. Potensi Ekstrak Air  dan Etanol  Kulit  Batang  Kayu  Manis  Padang ( Cinnamomum Burmanii) Terhadap
Aktivitas  Enzim  A-Glukosidase. Jurnal
Kedokteran Yarsi 23 (2) : 091-102 (2015)
Anonim.    2016.  Menkes:  Mari  Kita  Cegah  Diabetes
dengan  Cerdik.  Biro  Komunikasi  dan Pelayanan Masyarakat, Kementerian Kesehatan RI. Diakses 21-11-2017.
Bandara T et al. 2011. Bioactivity of Cinnamon with Special  Emphasis  on  Diabetes  Mellitus:  A review. International  Journal  of  Food Sciences and Nutrition, 2011; Early Online: 1–7
Bernardo MA et al (2015). Research Article: Effect of
Cinnamon  Tea  on  Postprandial  Glucose
Concentration. Journal of Diabetes Research. Volume 2015, 6 pages
Chen P et al (2014). Differentiation of the Four Major Species  of  Cinnamons  ( C.  burmannii , C. verum , C.  cassia ,  and C.  loureiroi )  Using  a Flow  Injection  Mass  Spectrometric  (FIMS) Fingerprinting Method. J. Agric Food Chem 2014 Mar 26; 62(12): 2516–2521.
Daker  M  et  al.  2013.  Inhibitory  Effects  of Cinnamomum Burmannii Blume Stem  Bark Extract  and Trans -Cinnamaldehyde  on Nasopharyngeal Carcinoma Cells; Synergism With Cisplatin. Experimental and
Therapeutic Medicine 2013 Jun; 5(6): 1701– 1709. Spandidos Publications
Departemen  Kesehatan  RI.  2005.  Pharmaceutical Care  Untuk  Penyakit  Diabetes  Mellitus.
Direktorat  Bina  Farmasi  Komunitas  Dan Klinik, Direktorat Jenderal Bina Kefarmasian Dan Alat Kesehatan.
Djoka MCY dkk. 2012. Pengaruh Ekstrak Biji Anggur
Merah (Vitis Vinifera) Terhadap Penurunan
Kadar  Glukosa  Darah  Tikus  Putih  Strain Wistar Model Diabetikum. Saintika Medika Volume 8 No 1 Juni 2012
Duguoa  JJ  et  al.  2007.  From  Type  2  Diabetes  to Antioxidant  Activity:  A  Systematic  Review of The Safety and Efficacy of Common and Casia  Cinnamon  Bark. Canadian  Journal
Physiologi  Pharmacology  Vol  85,  2007.  P: 837-847
Ervina  M  dkk.  2016.  Comparison  of In  Vitro
Antioxidant Activity of Infusion, Extract and Fractions of Indonesian Cinnamon (Cinnamomum Burmannii) Bark. International Food Research Journal  23(3):
1346-1350.
Fadillah  RU.  2014.  Antidiabetic  Effect  of  Morinda Citrifolia  L.  As  A  Treatment  of    Diabetes Mellitus. Jurnal Majority  Volume 3 Nomor
7.
Ferry Y. 2013. Prospek Pengembangan Kayu Manis ( Cinnamomum Burmanii L) di Indonesia. SIRINOV, Vol 1, No 1, April 2013 ( Hal : 11

## – 20)
Food and Drug Administration.  2008. Guidance for Industry    Diabetes  Mellitus  —  Evaluating Cardiovascular  Risk  in  New  Antidiabetic Therapies  to  Treat  Type  2  Diabetes.  U.S. Department  of  Health  and  Human  Services Food  and  Drug  Administration  Center  for Drug Evaluation and Research (CDER) Gunawan CO dan Adrian S. 2013. Efek Kayu Manis ( Cinnamomum  burmannii )  Terhadap  Kadar Glukosa Darah Postprandial. Online . http://repository.maranatha.edu/12183/10/1 010066_Journal.pdf
Govindappa M.  2015.  A Review on Role of Plant(s)
Extracts  and  its  Phytochemicals  for  the Management  of  Diabetes. Journal  Diabetes Metab 2015, 6:7
Guo  X  et  al  .  2017.  Effect  of  Cinnamaldehyde  on
Glucose  Metabolism  and  Vessel  Function. Medical  Science  Monitor.  2017;  23:  3844– 3853.
Handayani  FW  dan  Ahmad  M.  2006.  Beberapa Tumbuhan Di Indonesia Berpotensi Sebagai Alternatif Obat Antidiabetes. Jurnal Farmaka Volume 4 No 4.
Hasan  NF.  2011.  Chemical  Composition  and Biological  Activity  of  Essential  Oil  From Cinnamomum spp. and Litsea spp.
Dissertation.  Faculty  of  Resource  Science and Technology. Universiti Malaysia Sarawak
Inna  M  dkk.  2010.  Potential  Use  of Cinnamomum burmanii Essential Oil-based Chewing Gum as  Oral  Antibiofilm  Agent:  Literature Review .  Journal  of  Dentistry  Indonesia 2010, Vol. 17, No. 3, 80-86
International Diabetes Federation. 2017. IDF Western
Pacific members: Indonesia.
https://www.idf.org/our-network/regions-
members/western-pacific/members/104- indonesia.html . Diakses 17-11-2017 Kementerian Kesehatan RI, 2014. Situasi dan Analisis
Diabetes  Waspada  Diabetes  Eat  Well  Live Well.  Infodatin.  Pusat  Data  dan  Informasi Kementerian  Kesehatan  RI.  Diakses  9-11- 2017
Kondoy  S  dkk.  2013.  Potensi  Ekstrak  Etanol  Daun Kayu  Manis  ( Cinnamomum  Burmanii ) Terhadap  Penurunan  Kadar  Glukosa  Darah Dari Tikus Putih Jantan ( Rattus Norvegicus )
Yang Di Induksi Sukrosa. Pharmacon Jurnal Ilmiah Farmasi – UNSRAT Vol. 2 No. 03 Kusumaningtyas  ID  dkk.  2014.  Pengaruh  Seduhan Kayu  Manis  ( Cinnamomum  burmanii )
Terhadap  Struktur  Pankreas  Mencit  ( Mus musculus )  Strain  Balb-C  Diabetik. Jurnal Ilmu Dasar, Vol.15 No.2, Juli 2014: 69-73
Medagama  AB.  2015.  The  glycaemic  outcomes  of
Cinnamon,  a  review  of  the  experimental evidence  and  clinical  trials.  Jurnal  Online. Nutrition Journal 2015 14:108
Merentek E. 2006.  Tinjauan Kepustakaan: Resistensi
Insulin  Pada  Diabetes  Melitus  Tipe  2. Cermin Dunia Kedokteran No. 150, 2006
Ngadiwiyana dkk. 2011. Potensi Sinamaldehid Hasil Isolasi  Minyak  Kayu  Manis  Sebagai
Senyawa  Antidiabetes. Majalah  Farmasi Indonesia, 22 (1), 9 – 14 .
Nisa LC dan Triastuti R. 2014. Aktivitas Antibakteri Kulit Kayu Manis ( Cinnamomum Burmanni ) Dengan  Cara  Ekstraksi  Yang  Berbeda Terhadap Escherichia Coli Dan
Staphylococcus  Aureus. Naskah  Publikasi.
Diakses 30-11-2017
Niu C dan Gilbert ES, 2004. Colorimetric Method for
Identifying  Plant  Essential  Oil  Components
That Affect Biofilm Formation and Structure. Applied Environment Microbiology.  December  2004 vol.  70 no. 126951-6956 Safdar  M  et  al,  2004.  Effect  of  various  doses  of cinnamon  on  blood  glucose  in  diabetic individuals. Pak J Nutr. 2004;3. Shan B et al. 2007. Antibacterial Properties and Major Bioactive  Components  of  Cinnamon  Stick (Cinnamomum Burmannii): Activity Against Foodborne  Pathogenic  Bacteria. Journal Agriculture  Food  Chemistry. 2007  Jul 11;55(14):5484-90. Sari  LORK,  2006.  Pemanfaatan  Obat  Tradisional
Dengan Pertimbangan Manfaat Dan
Keamanannya. Majalah  Ilmu  Kefarmasian, Vol. III, No.1, April 2006, 01 – 07
Tjandrawinata  RR.  2016.  Patogenesis  Diabetes  Tipe
2: Resistensi Insulin Dan Defisiensi Insulin.
A Working Review Paper . Dexa Laboratories of  Biomolecular  Sciences  (DLBS)  Dexa Medica Group. Diakses 24-11-2017
Tjahjani  S  dkk.  2014.    Efek  Ekstrak  Etanol  Kayu Manis  ( Cinnamomum  burmannii) Terhadap Penurunan  Kadar  Glukosa  Darah.  Online. http://repository.maranatha.edu/12623/10/11 10110_Journal.pdf
Vanessa R dkk. 2014. Pemanfaatan Minuman Serbuk Instan Kayu Manis ( Cinnamomum burmanii Bi.)  Untuk  Menurunkan  Kadar  Kolesterol
Total Darah Tikus Putih (Rattus Norvegicus). Online. http://e-
journal.uajy.ac.id/5385/1/JURNAL.pdf
Wardatun  S  dkk.  2017.  Study  Effect  Type  of Extraction Method And Type of Solvent To Cinnamaldehyde  and  Trans-Cinnamic  Acid Dry  Extract  Cinnamon  ( Cinnamomum burmanii [Nees & T, Nees]Blume) . J Young Pharm, 2017;9(1) Suppl: s49-s51
World Health Organization. 2016.  Global Report on Diabetes.  WHO  Library  Cataloguing-in- Publication Data
Yulianis  dkk.  2011.  Penetapan  Kadar  Kumarin  dari Kulit  Manis  ( Cinnamomum  burmanii Bl.) dengan  Metoda  Kromatografi  Gas. Jurnal Sains dan Teknologi Farmasi, Vol. 16, No.2, 2011, halaman 203-208
Yusof  NS.  2012.  Phytochemical  Studies  And
Biological Activity Of Cinnamomum
Microphyllum.  Thesis. Faculty  of  Resource Science and Technology. Universiti
Malaysia Sarawak
Zhu  R  et  al.  2017.    Review Cinnamaldehyde  In Diabetes:  A  Review  of  Pharmacology, Pharmacokinetics  and  Safety.  Jurnal Online. Pharmacological Research Volume 122 ,  Pages 78-89
JFFI. 2018; 5(1) 253-257 www.jurnal.farmasi.umi.ac.id/index.php/fitofarmakaindonesia

## ISOLASI DAN KARAKTERISASI BAKTERI ASAM LAKTAT DARI LIMBAH CAIR RENDAMAN KACANG KEDELAI
Zakiyah Zahra Nur Amaliah 1 , Saiful Bahri 2 , dan Puteri Amelia 1
1 Prodi Farmasi, Fakutas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan, UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 2 Prodi Farmasi, Institut Sains dan Teknologi Nasional, Srengseng Sawah, Jakarta Selatan
1 puteri.amelia@uinjkt.ac.id

## ABSTRACT
Tempe is an Indonesia traditional food, which in the manufacturers have a liquid waste that no use again namely soybean  soaking  water. Lactic Acid  Bacteria  (LAB) has been known at  every stage of tempeh production, included at soaking soybeans. This study aimed to isolate and characterize LAB contained in soybean soaking water liquid waste. After serial dilution to 10-7, soybean soaking water liquid waste was inoculated on the MRSA contained 1%  CaCO3.  After  incubation,  there  are  8  isolates  which  produce  clear  zone  around  their  colonies  with  different colony morphology suspected as LAB. Morphological, physiological and biochemical characteristics were employed to identify LAB. All isolates were non-spore forming, non-motile, catalase negative, grow well at 37° and 45°C, could be able to grow in the presence of 4% and 6.5% sodium chloride. The results of safety test showed all isolates negative for  hemolytic  activity.  Seven  of  eight  isolates  are  Gram-positive,  while  one  is  a  Gram-negative.  But  only  Gram- positive were chosen as they represent the LAB characteristic. Seven isolates were identified as Lactobacillus with heterofermentative as the type fermentation. In this study, Lactobacillus casei ATCC 393 used as reference strain
Keywords: Characterization, isolation, lactic acid bacteria, soybean soaking water

## I. PENDAHULUAN
Proses  fermentasi  merupakan  salah  satu metode  pengawetan  yang  dapat  dideskripsikan sebagai suatu proses perubahan secara biokimia pada bahan  pangan  oleh  aktivitas  mikroorganisme (Hidayat  dan  Sri,  2006).  Mikroorganisme  tersebut memanfaatkan  beberapa  komponen  bahan  dasar pangan  sebagai  substrat  untuk  menghasilkan  energi dan  komponen  seluler,  meningkatkan  populasi,  dan menghasilkan beberapa produk yang tidak digunakan sebagai  produk  akhir  yang  disekresikan  ke lingkungan.
Proses  fermentasi dapat  meningkatkan  nilai gizi bahan yang berkualitas rendah, yang merupakan suatu  cara  untuk  menghilangkan  zat  antinutrisi  dan racun  yang  terkandung  dalam  suatu  bahan  makanan (Sopandi dan Wardah, 2014).
Pangan yang diperoleh dari proses fermentasi  banyak  berasal dari  biji-bijian, salah satu diantaranya  kacang  kedelai  yang  banyak  digunakan sebagai  bahan  dasar  dari  pangan  fermentasi  seperti tempe, kecap, dan tauco. Tempe adalah makanan hasil fermentasi tradisional Indonesia.
Banyak penelitian dan review telah dilakukan  mengenai  tempe  serta  keberadaan  dari BAL pada tempe pun telah dilaporkan (Kormin, et al., 2001;  Moreno,  et  al.,  2002). Pada  tahun  2013  dan 2015,  Pisol, et  al .berhasil    mengisolasi  BAL  dari
tempe,  dimana  dilakukan  tidak  hanya  pada  produk tempe  namun  pada  tiap  langkah  pembuatan  tempe, namun didapatkan hasil yang berbeda.
Pada  proses  pembuatan  tempe  di  pabrik, dilakukan  terlebih  dahulu  perebusan  kacang  kedelai lalu  didiamkan  selama  semalaman,  setelah  itu  baru dilakukan  proses  pembuatan  tempe  selanjutnya.  Air rendaman tersebut biasanya tidak digunakan kembali sehingga  akan  dibuang  begitu  saja  atau  terkadang digunakan  juga  sebagai  pakan  cair  ternak.  Melihat ketersediaannya yang banyak serta tidak dimanfaatkan kembali, air rendaman kedelai tersebut atau  limbah  cair  ini  dapat  diteliti  lebih  lanjut mengenai  kandungan  Bakteri  Asam  Laktat  (BAL) didalamnya.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengisolasi BAL dari limbah cair rendaman kacang kedelai yang diharapkan  dapat  memberi  informasi  mengenai keberadaan  dan  karakteristik  BAL  dari  limbah  cair rendaman kacang kedelai pada produsen tempe.

## II. METODE PENELITIAN A. Bahan
Bahan  utama  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah sampel limbah cair air rendaman kacang  kedelai  dari  satu  produsen  tempe  yang berlokasi di Pancoran, Jakarta Selatan. Bahan lainnya yaitu NaCl, kalsium karbonat (CaCO3), media MRS
Agar (Merck), media MRS broth (Conda pronadisa), media  SIM  (Merck),  pepton  water  (Merck),  media blood  agar,  pewarna  Gram,  pewarna  endospora, aquadest,  hidrogen  peroksida  (H2O2)  3%,  minyak imersi, dan alkohol 70%.

## B. Peralatan
Peralatan  yang  digunakan  pada  penelitian adalah  kaca  objek,  jarum  ose,  batang  spreader, pembakar spirtus, kaca objek, tabung reaksi, beaker glass, erlenmeyer, cawan petri,  mikropipet (Thermo Scientific),  termometer,  vortex,  timbangan  analitik (Ogawa  Seiki),  anaerobic  jar  (Oxoid),  mikroskop optik,  pH  meter  (Horiba,  Jepang),  autoklaf  digital (Ogawa  Seiki),  inkubator  (France  Etuves),  laminar air  flow,  lemari  pendingin  (GEA),  dan  oven (Memmert).
C. Prosedur
1. Isolasi Bakteri Asam Laktat Sebanyak  1  mL  dari  sampel  secara  aseptis ditambahkan  ke  dalam  9  mL  pepton water steril (0,1%, b/v) dan dihomogenkan. Kemudian, dilakukan pengenceran bertingkat sampai pengenceran ke-7. Diambil 0,1 mL cuplikan dari tiga seri pengenceran terakhir dan dikulturkan pada MRS Agar  tersuplementasi  CaCO3  1%  menggunakan metode spread plate . Diinkubasi selama 48 jam pada inkubator  suhu  37°C.  Koloni  yang  tumbuh  dihitung dan  jumlah  totalnya  dihitung  menggunakan  metode total plate count (TPC).

## 2. Pemurnian
Koloni  yang  tumbuh  dengan  zona  bening disekelilingnya dilakukan pemurnian sel dengan cara menggoreskan  pada  media  MRSA  tersuplementasi CaCO3  1%  dengan  metode  kuadran  diinkubasi selama  24  jam  pada  inkubator  suhu  37°C  agar diperoleh koloni tunggal untuk selanjutnya disubkultur kembali sebagai isolat tunggal murni.
3. Karakterisasi Isolat Bakteri Asam Laktat Karakterisasi  isolat  meliputi  morfologi, fisiologi,  dan  biokimia.  Karakterisasi  morfologi terdiri dari pewarnaan Gram, pewarnaan endospora, dan  uji  motilitas,  sedangkan  karakterisasi  fisiologi dan  biokimia teridiri dari uji katalase, produksi gas, suhu, dan garam.
a. Pewarnaaan  Gram:  diteteskan  NaCl  fisiologis pada kaca ojek isolat lalu diambil satu ose isolat dari agar  miring. Isolat tersebut disebarkan pada kaca  objek  lalu  difiksasi.  Gentian  violet diteteskan  diatas  preparat  dan  biarkan  selama  1 menit.  Preparat  dicuci  dengan  air  mengalir. Cairan  lugol  diteteskan  pada  preparat  kemudian dibiarkan kembali selama 1 menit. Preparat dicuci
dan  diteteskan  dengan  alkohol  96%  selama  30 detik.  Preparat  dicuci  dengan  air  mengalir. Terakhir, preparat diteteskan dengan safranin dan dibiarkan selama 45-60 detik. Preparat dicuci dan dikeringkan  untuk  diamati  dibawah  mikroskop. Bakteri  Gram  positif  akan  berwarna  ungu  dan bakteri Gram negatif berwarna merah.
b. Pewarnaan  endospora:  Preparat  yang  telah difiksasi  diletakkan  diatas  penangas  air  lalu ditutup  dengan  kertas  saring.  Malakit  hijau diteteskan dan dibiarkan selama 5 menit. Preparat dicuci  dengan  air  mengalir.  Dilakukan  kembali pewarnaan  dengan  safranin  kemudian  biarkan selama 60 detik. Preparat dicuci, hasilnya diamati dibawah  mikroskop.  Endospora  akan  berwarna hijau  sedangkan  sel  vegetatif  akan  berwarna merah (Harley, 2005)
c. Uji  motilitas  dilakukan  dengan  media  setengah padat,  diambil  sebanyak  satu  ose  isolat  bakteri dan  diinokulasikan  secara  vertikal  pada  media SIM.  Kemudian  diinkubasi  selama  48  jam  pada suhu  37°  C.  Hasil  uji  motilitas  bakteri  positif dapat dilihat dengan adanya pertumbuhan bakteri pada  permukaan  media  atau  tidak  hanya  bekas pada  tusukan,  sedangkan  bakteri  non  motil tumbuh sepanjang tusukan (Harley, 2005).
d. Uji  katalase  dilakukan  dengan  menggunakan hidrogen  peroksida  (H2O2)  3%.  Isolat  diambil dari stok kultur dan diletakkan pada kaca objek. Satu sampai dua tetes H2O2 3% ditambahkan ke isolat. Jika terbentuk gelembung
mengindikasikan bakteri positif katalase, dan jika tidak  maka  mengindikasikan  bakteri  negatif katalase (Harley, 2005).
e. Uji produksi gas dilakukan dengan menumbuhkan  kultur  isolat  dalam  media  MRS broth  dalam  tabung  reaksi  yang  diberi  tabung durham dengan keadaan terbalik untuk menangkap gas yang dihasilkan. Lalu diinkubasi selama 2 hari pada suhu 37° C (Romadhon, et al., 2012).
f. Ditumbuhkan  pada  temperatur  yang  berbeda- beda dengan menggunakan MRS broth kemudian diinkubasi  selama  2x24  jam  dengan  seri temperatur  10°C,  37°C,  dan  45°C.  Adanya pertumbuhan  diamati  dengan  adanya  kekeruhan dalam tabung (Anastiawan, 2014).
g. Untuk  pertumbuhan  pada  konsentrasi  garam  4% dan  6.5%,  satu ose  kultur  dimasukkan  ke  dalam MRS  broth  yang  tersuplementasi  NaCl  masing- masing  berkonsentrasi  4%  dan  6.5%.  Lalu diinkubasi pada temperatur 37°C selama 24 jam. Kekeruhan  menandakan  adanya  pertumbuhan (Thakkar, et al., 2015).

## 4. Uji Keamanan Isolat Bakteri Asam Laktat
Isolat  BAL  diuji  keamanannya  dengan blood  agar yang  mengandung  5%  darah  domba.
Isolat  dari  agar  miring  diambil  satu  ose  lalu diinokulasi  ke  media blood  agar .  Media  tersebut kemudian diinkubasi secara anaerob pada suhu 37°C selama  48  jam.  Pengamatan  dilakukan  terhadap koloni  yang  tumbuh,  jika  terdapat  zona  jernih disekitar  koloni  maka  menunjukkan  reaksi  positif beta  hemolisis.  Pada  uji  ini, Staphylococcus  aureus digunakan  sebagai  kontrol  positif  (Thakkar, et  al .,
2015).

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN Isolasi Bakteri Asam Laktat
Pada tahap awal isolasi, sampel  diinokulasi ke dalam  media  MRSA  tersuplementasi  CaCO 3 1%. Didapatkan data total plate count (TPC) keseluruhan bakteri yang tumbuh sebanyak 4,99 × 10 9
koloni/mL  sedangkan  TPC  BAL  sebanyak 9,17 × 10 8 koloni/mL. Dari keseluruhan kultur bakteri yang tumbuh  terpilih  delapan  isolat  BAL  yang  memiliki karakteristik secara makroskopik berbeda.
Isolat  yang  dipilih  merupakan  isolat  yang memiliki zona bening disekitar koloni, zona tersebut terbentuk karena produksi asam organik dari bakteri sehingga  CaCO 3 pada  media  MRSA  terhidrolisis (Sun, et al., 2014; Pisol, et al ., 2015).

## Karakterisasi Isolat Bakteri Asam Laktat
Setelah  didapatkan  stok  kultur,  kedelapan isolat serta strain acuan dikarakterisasi dimana BAL memiliki ciri-ciri katalase negatif, Gram positif, non motil,  dan  tidak  membentuk  spora  (Bulut,  2003; Surono,  2004;  Sun, et al.,  2014).  Pewarnaan  Gram merupakan tahapan penting untuk mengkarakterisasi apakah isolat adalah BAL atau bukan.
Satu  isolat  berwarna  merah  pada  selnya yang  berarti  merupakan Gram  negatif dimana  isolat ini  tidak  memenuhi  syarat  BAL.  Ketujuh  isolat berwarna ungu pada  selnya  yang  berarti  merupakan Gram positif sehingga dilakukan uji selajutnya yaitu uji katalase.
Uji  katalase  digunakan  untuk  mengetahui adanya  enzim  katalase  pada  isolat  bakteri.  Hasil  uji katalase  menunjukkan  hasil  yang  negatif  pada kedelapan  isolat  dan strain acuan,  dimana  tidak terdapatnya gelembung gas yang terbentuk. Pada uji ini  digunakan Staphylococcus  aureus yang  sudah diketahui  memiliki  enzim  katalase  sebagai  kontrol positif,  hasil  uji  katalase  pada  bakteri  ini menunjukkan  terbentuknya  gelembung  gas  setelah diteteskan H 2 O 2 3% (Dewi, 2013).
Hasil  uji  pewarnaan  spora  menunjukkan ketujuh  isolat  bakteri  serta strain acuan  tidak membentuk  spora.  Ketujuh  isolat  dan strain acuan memberikan hasil uji motilitas yaitu non motil, yang berarti bakteri tidak memiliki flagela. Hasil ini dapat dilihat dari tidak  menyebarnya pertumbuhan  bakteri pada  media  SIM,  melainkan  hanya  tumbuh  pada bekas tusukan jarum inokulum saja.
Uji  produksi  gas  dilakukan  untuk  melihat aktivitas metabolisme BAL, dimana dikelompokkan menjadi  dua  sub  grup  yaitu  homofermentatif  dan heterofermentatif. Dari  hasil  uji  didapatkan strain acuan tidak memproduksi gas yang berarti memiliki tipe  fermentasi  homofermentatif.  Sedangkan,  tujuh isolat uji lainnya memproduksi gas atau termasuk ke dalam tipe fermentasi heterofermentatif.
Uji  fisiologis  selanjutnya  adalah  uji ketahanan  hidup  bakteri  pada  suhu  yang  berbeda- beda yaitu 10°, 37°, dan 45°C, didapatkan data yang seragam yakni tidak adanya pertumbuhan pada suhu 10°C  dan  tumbuh  pada  suhu  37°  serta  45°C. Uji ketahanan  hidup  bakteri  pada  konsentrasi  garam berbeda-beda  dilakukan  pada  kondisi  lingkungan dengan  konsentrasi  NaCl  4%  dan  6,5%.  Hasil  yang didapatkan  pada  uji  ini  pun  seragam  yaitu  ketujuh isolat  serta strain acuan  dapat  hidup  pada  kedua konsentrasi tersebut.
Berdasarkan hasil pengujian sifat morfologi, fisiologi,  dan  biokimia  bakteri  yang  diisolasi  dari limbah  cair  rendaman  kacang  kedelai,  diduga  jenis bakteri yang terdapat di dalamnya merupakan bakteri asam  laktat.  Data  hasil pengujian dapat dilihat pada Tabel  1,  dengan  melakukan  penelusuran  pada  buku Bergey’s  Manual  of  Determinative  Bacteriology , ketujuh isolat tersebut merupakan genus Lactobacillus .
Tabel 1. Karakteristik Isolat BAL dan Strain Acuan
Pengamatan Isolat L. casei ARK 5.1.a ARK 5.3.b ARK 6.1.c ARK 6.1.d ARK 6.3.f ARK 7.2.g ARK 7.3.h Morfologi Sel Pewarnaan Gram + + + + + + + + Bentuk Sel B B B B B B B B Pewarnaan Endospora - - - - - - - - Motilitas - - - - - - - - Biokimia Katalase - - - - - - - - Tipe Fermentasi Ho He He He He He He He Fisiologis Suhu: - 10°C - - - - - - - - - 37°C + + + + + + + + - 45°C + + + + + + + +
NaCl: - 4%
+ + + + + + + +
- 6,5%
+ + + + + + + +
Keterangan: + : hasil pewarnaan positif/motil/adanya pertumbuhan bakteri - : hasil pewarnaan negatif/non motil/tidak adanya pertumbuhan bakteri
B: Batang, Ho: Homofermentatif, He: Heterofermentatif

## Uji Keamanan Isolat Bakteri Asam Laktat
Seperti  yang  disyaratkan  oleh  FAO/WHO pada tahun 2002, probiotik tidak boleh menyebabkan reaksi  berbahaya  dan  aman  terhadap  sistem  imun (dinyatakan aman atau status GRAS). Salah satu cara untuk  melihat  kemanan  dari  isolat  BAL  ini  dengan melakukan  uji  aktivitas  hemolisis  menggunakan media blood  agar . Pada  uji  aktivitas  hemolisis digunakan Staphylococcus  aureus sebagai  kontrol positif, dengan  hasil terdapat zona bening di  sekitar koloni.
Zona  bening  yang  terbentuk  merupakan tanda  adanya  hemolisin,  yaitu  enzim  yang  bersifat toksik,  dapat  melisiskan  sel  darah  merah,  berperan dalam  meningkatkan permeabilitas sel, sehingga sel lebih  rentan  terhadap  agen  infeksi  (Khusnan et  al ., 2002). Pada  penelitian  ini,  kedelapan  isolat  BAL tidak menunjukkan terjadinya hemolisis, baik terjadi perubahan  warna  media  maupun  terbentuk  zona bening  di  sekitar  koloni  yang  menandakan  isolat BAL  termasuk  gamma  hemolisis  atau  merupakan bakteri non patogen.

## IV. KESIMPULAN
Dalam penelitian “Isolasi Dan Karakterisasi Bakteri  Asam  Laktat  Dari  Limbah  Cair  Rendaman Kacang  Kedelai”  diperoleh  delapan  isolat  yang berhasil  diisolasi  dari  limbah  cair  rendaman  kacang kedelai,  tujuh  diantaranya  teridentifikasi  sebagai
Bakteri  Asam  Laktat  (BAL)  yang  diduga  sebagai anggota genus Lactobacillus .

## DAFTAR PUSTAKA
Anastiawan. 2014. Isolasi dan  Karakterisasi  Bakteri Probiotik  yang  Berasal  dari  Usus  Itik Pedaging Anas domesticus. Skripsi: Universitas Hasanudin Makassar.
Aron, Nicoleta Maftei, Monica (Găureanu) Boev, dan
Gabriela Bahrim. Probiotics and Therapeutic  Effect  in  Clinical  Practice  – Review. Romanian Biotechnological
Letters, Vol. 20, No. 1, 2015. Breed,  Robert  S.,  E.G.D.  Murray,  dan  Nathan  R. Smith.  1957.  Bergeys’s  Manual  of Determinative Bacteriology Seventh Edition.    United  States  of  America:  The Williams & Wilkins Company.
Bulut,  Çisem.  2003.  Isolation  and  Molecular
Characterization  of  Lactic  Acid  Bacteria
From  Cheese.  Tesis:  Biotechnology  and
Bioengineering, İzmir Institute of Technology Turkey. Desai,  Ankur.  2008.  Strain  Identification,  Viability and  Probiotics  Properties  of  Lactobacillus casei.  Tesis:  School  of  Biomedical  and Health Sciences Victoria University
Australia.
Dewi,  Amalia  Krishna.  2013.  Isolasi,  Identifikasi, dan  Uji  Sensitivitas  Staphylococcus  aureus
terhadap  Amoxicillin  dari  Sampel  Susu Kambing  Peranakan  Ettawa (PE) Penderita Mastitis di Wilayah Girimulyo, Kulonprogo, Yogyakarta.  Jurnal  Sain  Veteriner  31  (2), ISSN: 0126-0421.
Gogineni  VK,  Morrow  LE,  Gregory  PJ,  Malesker MA (2013) Probiotics: History and Evolution.  J  Anc  Dis  Prev  Rem  1:107. doi:10.4172/2329-8731.1000107
Harley  JP.  Laboratory  Exercises  in  Microbiology, Sixth Edition. New York: The McGraw-Hill Companies, Inc; 2005
Hidayat,  Nur  dan  Sri  Suhartini.  Mikrobiologi
Industri.  Teknik  Industri  Pertanian  FTP Universitas Brawijaya Malang;2006.
Khusnan, Wahyu Prihtiyantoro, dan Mitra Slipranata.
Identifikasi  dan  Karakterisasi  Fenotipe
Staphylococcus aureus Asal Kasus
Bumblefoot  dan  Arthritis  pada  Broiler.
Jurnal  Kedokteran  Hewan  Vol.  6  No.  2,
September 2012 ISSN: 1978-225X.
Kormin,  Salasiah,  Gulam  R,  Son  R,  and  Foo  HL.
Bacteriocin-Producing Lactic Acid Bacteria Isolated  from  Traditional  Fermented  Food. Malays J Med Sci. 2001 Jan; 8(1): 63–68.
Moreno  M.R.F,  J.J.  Leisner,  L.K.  Tee,  C.  Ley,  S. Radu, G. Rusul, M. Vancanneyt, and L. De Vuyst.  Microbial  Analysis  of  Malaysian Tempeh,  and  Characterization  of  Two Bacteriocins  Produced  by  Isolates  of Enterococcus  faecium.  J  Appl  Microbiol. 2002;92(1):147-57. Ozyurt  VH,  Ötles  S.  Properties  of  probiotics  and encapsulated  probiotics  in  food.  Acta Sci.Pol. Technol. Aliment., 2014, 13.4: 413- 424. DOI: 10.17306/J.AFS.2014.4.8 Pisol  B,  Noriham  A,  Khalillah  AK,  dan  Lilis  N. Isolation  and  Identification  of  Lactic  Acid Bacteria from Different Stages of Traditional  Malaysian  Tempeh  production. Mal. J. Microbiol. Vol 11(4) 2015, pp. 358- 364. Pisol, B, Lilis N, Noriham A, Suliantari, dan Khalilah
AK. Isolation and Characterization of Lactic Acid  Bacteria  from  Indonesian  Soybean Tempe.
IPCBEE vol.58
DOI:
10.7763/IPCBEE. 2013. V58. 7 Romadhon,  Subagiyo,  Sebastian  M.  Isolasi  dan Karakterisasi Bakteri Asam Laktat dari Usus Udang Penghasil Bakteriosin Sebagai Agen Antibakteria  Pada  Produk-Produk  Hasil Perikanan. Jurnal Saintek Perikanan Vol. 8. No. 1 . 2012. Sopandi T dan Wardah. Mikrobiologi Pangan – Teori dan Praktik. Yogyakarta: Penerbit
ANDI;2014.
Sun, Yalian, Xiuyu Lou, Xuan Zhu, Han Jiang, Qing Gu. 2014. Isolation and Characterization of Lactic Acid Bacteria Producing Bacteriocin from  Newborn  Infants  Feces.  .  J  Bacteriol Mycol. 2014;1(2): 7.
Syafiq,  A,  Sauriasari  R,  Fikawati  S,  Amelia  P, Soemijati  A,  Christy  M,  dan  Saragih  F. 2015.  Effect  of  Inulin  Supplemented  UHT
Milk Consumption on Faecal
Bifidobacterium  sp.  And  Lactobacillus  sp. Of  Healthy  Children  in  Depok,  Indonesia.
Malaysian Journal of Nutrition 2015 Vol.21
No.2 pp.219-230 ref.19
Thakkar P, H.A. Modi, dan J.B. Prajapati. Isolation, Characterization, and Safety Assessment of Lactic Acid
Bacterial Isolates from Fermented Food Products. Int.J.Curr.Microbiol.App.Sci  (2015)  4(4): 713-725
Vandenplas  Y,  Huys  G,  Daube  G.  Probiotics:  an update. J Pediatr (Rio J). 2015;91:6---21.
JFFI. 2018; 5(1) 258-265 www.jurnal.farmasi.umi.ac.id/index.php/fitofarmakaindonesia

## PROFIL FITOKIMIA DAN PEMERIKSAAN FARMAKOGNOSTIK DAUN ANTING-ANTING (Acalypha indica. L)
Selpida Handayani 1 , Abd. Kadir, Masdiana Laboratorium Bahan Alam, Fakultas Farmasi Universitas Muslim Indonesia
1 Selpida.Handayani@umi.ac.id

## ABSTRACT
The Anting-anting (Acalypha indica L.) plant of the tribal Euphorbiaceae is one type of plant commonly used as  a  medicinal  plant.  The  Purpose  of  This  study  is  to  get  the  morphology  data,  anatomy,  organoleptic,  physical determination  of  powders,  powder  ekstrabilitas  determination,  identification  of  chemical  reactions  and  thin  layer chromatography of Anting-anting (Acalypha indica L.) plant. Extraction of Anting-anting (Acalypha indica L.) leaf is using 96% ethanol by maceration method. Longitudinal slices showed stomata leaf anatomy anisositik type. Fisic desition include 16,36 % decision of dust level 5,16% decision of unsoluble dust in acid level. Decision of cansentrate level  that  include  25,16%  consentrate  level  of  water  soluble  and  26,36%  consentrate  level  of  etanol  soluble.  The results  of  this  study  concluded  thet  the  leaf  powder  Anting-anting  (Acalypha  indica  L.)  is  positive  for  flavanoid, alkaloid, steroid, saponin and aleuron.
Keywords: Anting-anting, Acalypha indica, Farmakognostic examination

## I.  PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  salah  satu  Negara dengan  kekayaan  hayati  terbesar  di  dunia  yang memiliki  lebih  dari  30.000  spesies  tanaman  tingkat tinggi. Hingga saat ini, tercatat 7000 spesies tanaman telah  diketahui  khasiatnya,  namun  kurang  dari  300 tanaman yang digunakan sebagai bahan baku industri farmasi  secara  regular  (Saifuddin  dkk,  2011). Belakangan  ini  banyak  bermunculan  stigma  negatif dimasyarakat terhadap obat-obatan yang terbuat dari bahan–bahan  kimia.  Salah  satunya  adalah  efek samping  yang  di  hasilkan  dari  obat–obatan  sintesis tersebut  baik  itu  jangka  pendek  maupun  jangka panjang.    Sehingga  terjadi  disorientasi  pemahaman dikalangan  masyarakat  yang  mencoba  beralih kepengobatan  yang  lebih  alami  dan  natural. Banyaknya  produk–produk  herbal  saat  ini  memicu meningkatnya peranan pemanfaatan berbagai macam tanaman–tanaman serta tumbuh-tumbuhan, dan juga dari  hewan  yang  diformulasikan  dalam  bentuk herbal.  Tumbuhan  Anting-anting  ( Acalypha  indica . L)  suku  Euphorbiaceae  merupakan  salah  satu  jenis tumbuhan  yang  biasa  digunakan  sebagai  obat.
Tumbuhan  ini  memiliki  rasa  yang  pahit.  Pada  akar, batang,  dan  daun  yang  mengandung  saponin  dan tanin.  Batang  juga  mengandung  flavanoid  dan daunnya  mengandung  minyak  atsiri  (Dalimartha, 2000).  Berdasarkan  pengalaman  empiris  Anting- anting  ( Acalypha  indica .  L)  bermanfaat  untuk antibiotik,  antiradang,  peluruh  seni,  astringent,
menghentikan  pendarahan,  dan  memberikan  rasa sejuk (Ismawan, 2008).

## II. METODE PENELITIAN
A. Bahan
Air suling, Asam klorida P, Asam sulfat P,
Dietil eter, Dragendroff, Etanol 96% P, Flouroglusin LP, Fehling A dan Fehling B, Iodine 0,1 N, Kalium hidroksida 10%, Kertas saring (whatman), Kloralhidrat  LP,  Kloroform  P,  Larutan  Bauchardat, Larutan  Besi  (III)  Klorida,  Larutan  Brom,  Larutan Lieberman bauchardat, Larutan formalin 1%, Larutan Liberman,  Larutan  Luff,  Larutan  Mayer,  Larutan Molish,  Metanol,  Natrium  Hidroksida  P,  tumbuhan Anting-anting (Acalypha indica. L ) .

## B. Alat
Cawan  porselin,    Eksikator,  Erlenmeyer ( pyrex ® ), Gelas pialam ( pyrex ® ), Gelas ukur ( pyrex ® ), Lampu  UV  254  nm  dan  366  nm,  Mikroskop,  Oven listrik,  Penangas  air,  Seperangkat  alat  kromatografi lapis tipis,  timbangan analitik,  tanur.

## C. Prosedur Kerja
1. Pengambilan Sampel
Sampel  yang  digunakan  dalam  penelitian adalah  akar,  batang,  dan  daun  tumbuhan  Anting- anting (Acalypha indica. L ). Sampel yang digunakan berasal dari Kota Makassar.

## 2. Pengolahan Sampel
Sampel  yang  telah  diambil,  kemudian dicuci  bersih  dari  kotoran-kotoran  yang  melekat, dengan  menggunakan  air  yang  mengalir.  Untuk ekstraksi dan serbuk, sampel yang digunakan adalah daun.  Daun  Anting-anting (Acalypha  indica. L ) dibersihkan  dari  kotoran-kotoran  yang  melekat menggunakan  air  yang  mengalir  lalu  dikeringkan dengan  cara  diangin-anginkan.  Setelah  kering  lalu dipotong menjadi potongan-potongan kecil, dan siap untuk diserbuk dan diekstraksi.
3. Pemeriksaan Farmakognostik
a. Pemeriksaan  morfologi  tumbuhan  Anting- anting (Acalypha indica.L)
Pemeriksaan morfologi tumbuhan dilakukan dengan mengamati bentuk fisik dari akar, batang, dan daun dari sampel, kemudian dilakukan pengambilan gambar.
b. Pemeriksaan  anatomi  tumbuhan  Anting- anting (Acalypha indica.L)
Pemeriksaan  dilakukan  dengan  mengamati bentuk  sel  dan  jaringan  tumbuhan  pada  bagian penampang  melintang  dan  membujur  dari  akar, batang, dan daun secara mikroskopik. Caranya yaitu dengan  mengiris  setipis  mungkin  bagian  dari tumbuhan yang akan diperiksa dengan menggunakan pisau silet, kemudian diletakan diatas kaca objek lalu ditetesi  dengan  kloralhidrat  LP,  kemudian  difiksasi dan ditutup dengan gelas penutup, letakkan preparat yang  akan  diperiksa  diatas  meja  benda  mikroskop dan diamati dan dilakukan pengambilan gambar.
c. Pemeriksaan  organoleptik  tumbuhan  Anting- anting (Acalypha indica.L) Pemeriksaan organoleptik dilakukan dengan menggunakan panca indra mengamati warna, bentuk, bau dan rasa dari bagian tumbuhan yang masih segar meliputi  akar,  batang,  dan  daun  dari  tumbuhan Anting-anting (Acalypha indica. L ).
4. Pemeriksaan Tetapan Fisis Serbuk
a. Penetapan kadar abu total Sebanyak 3 gram serbuk daun Anting-anting
(Acalypha indica. L ) ditimbang dalam cawan porselin yang telah dikonstankan, kemudian dipijarkan dalam tanur  secara  perlahan-lahan  sehingga  arang  habis, didinginkan  dalam  eksikator    dan  ditimbang  hingga bobot  tetap  atau  konstan.  Percobaan  dilakukan sebanyak 3 kali. Kadar abu dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan diudara.
b. Penetapan  kadar  abu  yang  tidak  larut  dalam asam
Abu  yang  telah  diperoleh  dari  penetapan kadar abu total, didihkan dengan 25 ml HCl selama 5 menit.  Kemudian  dikumpulkan  bagian  yang  tidak larut dalam asam, dan disaring melalui kertas saring bebas  abu.  Lalu  dicuci  dengan  air  panas  dan dipijarkan  hingga  bobot tetap, kemudian ditimbang. Percobaan dilakukan sebanyak 3 kali. Dihitung kadar abu yang tidak larut dalam asam terhadap bahan yang telah dikeringkan diudara.
5. Pemeriksaan Ekstrabilitas Serbuk
a. Penetapan kadar sari yang larut dalam air Sebanyak 5 gram serbuk daun Anting-anting
(Acalypha  indica. L ) dimaserasi  dengan  100  ml  air kloroform  P  (2,5  ml  kloroform  dalam  1000  ml  air) selama  24  jam,  menggunakan  labu  bersumbat  kaca, sambil  sekali-kali  dikocok  selama  6  jam,  kemudian dibiarkan  selama  18  jam.  Disaring,  kemudian diuapkan  20 ml filtrate hingga kering dalam cawan yang telah dikonstankan, sisa dipanaskan pada suhu 105 o C, lalu ditimbang hingga bobot tetap. Percobaan dilakukan sebanyak 3 kali. Dihitung kadar sari yang larut dalam air terhadap bahan yang telah dikeringkan diudara.
b. Penetapan kadar sari yang larut dalam etanol
Sebanyak 5 gram serbuk dimaserasi dengan 100  ml  etanol  selama  24  jam,  menggunakan  labu bersumbat kaca, sambil sekali-kali dikocok selama 6 jam,  kemudian  dibiarkan  selama  18  jam.  Disaring, kemudian diuapkan  20 ml filtrat hingga kering dalam cawan yang telah dikonstankan, sisa dipanaskan pada suhu  105 o C,  lalu  ditimbang  hingga  bobot  tetap. Percobaan dilakukan sebanyak 3 kali. Dihitung kadar sari  yang  larut  dalam  etanol  terhadap  bahan  yang telah dikeringkan diudara.
6. Reaksi  Identifikasi  Kimia  Serbuk  Daun Anting-Anting (Acalypha indica.L)
a. Reaksi identifikasi terhadap lignin Serbuk  dibasahi  dengan  larutan  fluroglusin LP,  ditambah  HCl  P,  diamati  dibawah  mikroskop, jika dinding sel yang berlignin akan berwarna merah.
b. Reaksi identifikasi terhadap tanin
1. Reaksi identifikasi terhadap katekol a. Serbuk  ditambah  dengan  larutan  FeCl 3 1  N, jika mengandung katekol, akan menghasilkan warna hijau.
b. Serbuk  ditambah  dengan  larutan  brom,  jika mengandung katekol, akan terjadi endapan.
2. Reaksi identifikasi terhadap pirogalotanin
a. Serbuk  ditambah  dengan  larutan  FeCl 3 1  N, jika mengandung pirogalotanin, akan menghasilkan warna biru.
b. Serbuk  ditambah  dengan  larutan  brom,  jika mengandung  pirogalotanin,  tidak    terjadi endapan.
c. Serbuk ditambahkan
NaOH jika menghasilkan  warna  merah  coklat,  berarti mengandung pirogalotanin.
3. Reaksi identifikasi terhadap dioksiantrakinon Serbuk dimasukkan kedalam tabung reaksi, lalu ditetesi dengan KOH 10% b/v dalam etanol 90% P, jika mengandung dioksiantrakinon akan menghasilkan warna merah.
4. Reaksi identifikasi terhadap fenol
a. Serbuk dimasukkan dalam  vial, ditambahkan air,  lalu  ditutup  dengan  kaca  objek,  yang diatasnya  telah  diberi  kapas  yang  telah dibasahi  dengan  air,  kemudian  dipanaskan. Setelah ada uap yang berupa cairan pada kaca objek, diambil dan ditambahkan FeCl 3 P, jika mengandung fenol akan menghasilkan warna biru hitam.
b. Serbuk dimasukkan dalam tabung reaksi, lalu ditetesi dengan H 2 SO 4 P dalam Formalin 1%, jika  mengandung  Fenol  akan  menghasilkan cincin  warna  merah,  coklat,  jingga,  ungu sampai hijau.
5. Reaksi identifikasi terhadap alkaloid Dimasukkan  ekstrak  etanol  daun  Anting- anting ( Acalypha indica. L) ke dalam masing-masing tabung reaksi, kemudian ditetesi :
a. HCl 0,5 N dan pereaksi Mayer, jika mengandung alkaloid maka akan menghasilkan endapan putih.
b. HCl  0,5  N  dan  pereaksi  Bauchardat,  jika mengandung  alkaloid  maka  akan  menghasilkan endapan coklat.
c. HCl  0,5  N  dan  pereaksi  Dragendroff,  jika mengandung  alkaloid  maka  akan  menghasilkan endapan berwarna jingga.
6. Reaksi identifikasi karbohidrat Serbuk dikocok dalam air, lalu dimasukkan dalam tabung reaksi kemudian ditetesi :
a. Pereaksi  Molish,  jika  mengandung  karbohidrat akan menghasilkan cincin ungu.
b. Pereaksi Luff, jika mengandung karbohidrat akan menghasilkan endapan merah.
c. Pereaksi  Fehling  A  dan  Fehling  B,  jika mengandung  karbohidrat  akan  menghasilkan endapan kuning jingga.
7. Reaksi identifikasi terhadap pati dan aleuron a. Serbuk  di  tempatkan  diatas  kaca  objek, kemudian  ditetesi  dengan  larutan  Iodine  0,1 N, jika mengandung pati akan berwarna biru,
dan  warna  kuning  coklat  sampai  coklat  jika mengandung aleuron.
b. Serbuk  dimasukkan  kedalam  tabung  reaksi lalu  ditetesi  dengan  pereaksi  Luff  dan dipanaskan,  jika  mengandung  pati  akan menghasilkan endapan merah bata.
8. Reaksi identifikasi terhadap steroid
Ekstrak  eter  dimasukkan  kedalam  tabung reaksi,  kemudian  ditetesi  pereaksi  Lieberman Baurchardat, jika mengandung steroid akan berwarna biru sampai hijau.
9. Reaksi identifikasi terhadap saponin\
Serbuk  dimasukkan  dalam  tabung  reaksi, tambahkan  10  ml  air  panas,  dinginkan  kemudian kocok kuat-kuat selama 10 detik, terbentuk buih, lalu ditambahkan  1  tetes  asam  klorida  2  N,  buih  tidak hilang.
10. Reaksi identifikasi terhadap flavonoid
Sampel  dimasukkan  dalam  tabung  reaksi lalu  ditambahkan  FeCl 3 lalu  ditambahkan  HCl,  jika terbentuk warna merah keunguan berarti menunjukan adanya flavanoid.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Anting–anting ( Acalypha indica L.) termasuk  dalam  tumbuhan  herba  semusim,  tegak berambut, tumbuh dengan tinggi 30–50 cm. Tumbuh di pinggir jalan, lapangan rumput, dan lereng gunung. Batangnya berbentuk  bulat  berkayu,  dengan permukaan  yang  licin  berambut,  jenis  batangnya basah, arah tumbuh batang tegak dengan warna hijau pada  bagian  luar    dan  agak  keputihan  pada  bagian dalamnya.  Anting–anting  ( Acalypha  indica L.) memiliki  daun  tunggal,  dengan  bentuk  daun  bulat lonjong,  ujung  meruncing  dan  pangkalnya  tumpul, tepi daun bergerigi, permukaan daunnya licin suram, daging  daun  tipis  lunak  bertulang  menyirip  dimana ibu tulang daunnya dari pangkal ke ujung, berwarna hijau  dengan  panjang  2,5  cm.  Memiliki  akar tunggang  yang  bercabang,  yang  memiliki  akar khusus penunjang. Berbentuk bulat dengan permukaan  yang  agak  kasar,  dan  memiliki  banyak cabang akar hingga serabut akar dan berwarna putih kekuningan (Yuniarti,2008).
Dalam  penelitian  ini  digunakan  Daun Anting-anting  ( Acalypha  indica L.)  karena  Anting- anting digunakan oleh masyarakat  luas sebagai obat disentri, diare, gangguan pencernaan, muntah darah, berak darah dan kencing darah, khususnya pada daun berkhasiat  mengobati  mimisan  (Hariana,2005). Selain itu telah dilakukan beberapa penelitian bahwa Anting - anting ( Acalypha indica L.) mempunyai efek hipoglikemik terhadap  mencit ( Mus musculus )  serta sifat  kimiawi  dan  efek  farmakologis  dari  tumbuhan Anting-anting adalah rasa pahit, antibiotik, antiradang,  peluruh  seni,  astringent,  menghentikan
pendarahan (hemostatik) (Yuniarti, 2008 : Safriani.R,
2007)  .  Untuk  pemeriksaan  morfologi,  organoleptik dan  anatomi  diambil  bagian  tumbuhan  berupa  akar, batang  dan  daun  dengan  cara  diambil  bagian tumbuhan yang masih segar, dilakukan pengamatan, sedangkan  pemeriksaan  ekstrabilitas,  tetapan  fisis, identifikasi kandungan kimia bagian tumbuhan yang diambil ialah daun.
Gambar 1. Bagian-bagian Tumbuhan Anting-anting ( Acalypha indica L.) Keterangan :
1. Daun tampak Depan ( Folium )
2. Daun tampak Belakang ( Folium )
3. Batang (Caulis)
4. Akar (Radix)
Dalam  pemeriksaan  identitas  tumbuhan Anting  anting  ( Acalypha  indica L.)  dilakukan beberapa pengamatan seperti morfologi, anatomi dan organoleptik.  Pengamatan  morfologi  dilakukan dengan  mengamati bentuk fisik dari simplisia  yakni ukuran,  warna  dan  bentuk  simplisia  dan  juga merupakan  salah  satu  cara  dalam  memperkenalkan tanaman  karena  mengingat  tanaman  yang  sama belum tentu mempunyai bentuk morfologi yang sama pula.  Dari  penelitian  menunjukan  bahwa  tumbuhan Anting-anting  ( Acalypha indica L.) merupakan salah satu  tumbuhan  herba  semusim  yang  mengeluarkan aroma  khas,  dengan  tinggi  30  cm,  bulat  ( teres ), bercabang  dan  tumbuh  ke  atas,  daun  bulat  lonjong ( orbicularis ),  tepi  bergerigi  ( serratus ).  Merupakan daun tunggal bertangkai pendek,  dengan bentuk daun
bulat lonjong ( orbicularis ),   ujung ( apex ) meruncing (acuminatus)  dan  pangkalnya  ( basis )  tumpul ( obtusus ),  tepi  daun  ( margo  folii )  bergerigi ( serratus ), permukaan daunnya  licin ( laevis ),  suram ( opacus ),  daging    daun  ( Intervenium )  tipis  lunak ( herbaceus ), bertulang menyirip ( penninervis ) dimana  ibu  tulang  daunnya  dari  pangkal  ( basis )  ke ujung ( apex ), berwarna hijau dengan  panjang 2,5 cm.
Batangnya berbentuk bulat ( teres ), berkayu
( lignosus ),  dengan  permukaan  yang  licin  berambut ( Laevis ),  jenis  batangnya  basah  ( Herbaceus ),  arah tumbuh batang tegak ( fastigiatus) dengan warna hijau pada  bagian  luar  dan  agak  keputihan  pada  bagian dalamnya. Merupakan akar tunggang yang bercabang ( ramosus ),  yang  memiliki  akar  khusus  penunjang.
Berbentuk bulat ( teres ) dengan permukaan yang agak kasar,  dan  memiliki  banyak  cabang  akar  ( radix lateralis ) hingga serabut akar ( fibrilla radicalis ) dan berwarna putih kekuningan.
Gambar 2. Foto penampang melintang daun Anting-anting ( Acalypha indica L.) pembesaran 10x. Keterangan :
1. Trikoma
2. Kutikula
3. Epidermis
4. Palisade
5. Jaringan bunga karang
6. Xylem
7. Floem
8. Kolenkim
Gambar 3. Foto penampang membujur daun Anting-anting  (Acalypha indica  L.) pembesaran 10x
Keterangan :
1. Tipe stomata anisositik
Gambar 4. Foto Tipe Stomata Anisositik daun Anting-anting (Acalypha indica  L.) pembesaran 40x Keterangan :
1.  Sel pelindung
2.  Celah stomata
3.  Sel pembuka
4.  Sel penutup
Gambar 5. Foto penampang melintang Batang Anting-anting ( Acalypha   indica L.) pembesaran 10x Keterangan : 1. Rambut Penutup (Trikoma)
2. Kutikula
3. Epidermis
4. Parenkim Korteks
5. Xylem
6. Floem
7. Hablur Ca-oksalat
8. Serabut Sklerenkim
9. Empulur
Gambar 6. Foto penampang membujur Batang
Anting-anting ( Acalypha indica L.) pembesaran 10x. Keterangan :
1. Rambut Penutup
2. Kutikula 3. Epidermis 4. Sklerenkim
5. Parenkim
6. Berkas pembuluh
Gambar 7. Foto penampang melintang Akar Anting-anting ( Acalypha indica L.) pembesaran 10x Keterangan :
1. Xylem
2. Floem
3. Epidermis
4. Parenkim korteks
Gambar 8. Foto penampang membujur Akar Anting- anting (Acalypha indica L.) pembesaran 10x.
Keterangan :
1. Epidermis
2. Parenkim korteks
3. Berkas pembuluh
Pengamatan  anatomi  dilakukan    untuk mengamati bentuk sel dan jaringan, yang diuji berupa sayatan  melintang  dan  membujur  dari  sampel tumbuhan, dilakukan dengan menggunakan mikroskop  yang  derajat  pembesarannya  disesuaikan dengan keperluan. Dari hasil penilitian diperoleh data pada  penampang    melintang  daun  Anting-anting ( Acalypha  indica L.)  pembesaran  10X  terdapat trikoma,  kutikula,  epidermis,  palisade,  jaringan bunga  karang,  xylem,  floem  dan  kolenkim.  Pada jaringan        parenkim  (mesofil)  yang  berkedudukan diantara  epidermis  daun  bagian  atas  dan  bawah  ada dua  daerah  yang  dapat  dibedakan  :  bagian  atas, parenkim palisade (jaringan pagar) terdiri dari sel-sel memanjang,  dan  bagian  bawah  parenkim  spongiosa (jaringan  bunga  karang)  terdiri  atas  sel-sel  dengan bentuk yang tidak teratur dengan ruang antar sel yang luas.  Parenkim  palisade  paling  banyak  dipadati dengan  kloroplas.  Pada  epidermis  didapati  stomata yang  berfungsi  untuk  pertukaran  gas  antar  jaringan daun dan atmosfir (Fahn, 1995), dan stomata terlihat pada  penampang  membujur  daun  Anting-anting ( Acalypha  indica L.)  pembesaran  10x  terdapat  tipe stomata  anisositik,  untuk  pembesaran  40x  terdapat sel pelindung, bukaan stomata, dinding dalam dan sel epidermal.  Pada  penampang  melintang  batang Anting-anting ( Acalypha indica L.) pembesaran 10x terdapat  trikoma,  parenkim  korteks,  kutikula, epidermis,  xylem,  floem,  hablur Ca-oksalat, serabut sklerenkim, dan empulur. Sedangkan pada penampang membujur batang Anting–anting ( Acalypha  indica L.)  pembesaran  10x    terdapat rambut  penutup  (trikoma),  kutikula,  epidermis, parenkim,  berkas  pembuluh  dan  sklerenkim.  Pada penampang melintang akar Anting-anting ( Acalypha
indica L.)  pembesaran  10x  terdapat  xylem,  floem, parenkim  korteks  dan  epidermis.  Sedangkan  pada penampang membujur akar Anting-anting ( Acalypha indica L.) pembesaran 10x terdapat berkas pembuluh, parenkim korteks dan epidermis.
Tabel 1. Hasil pemeriksaan organoleptik tumbuhan Anting-anting ( Acalypha indica L.) Pengamatan organoleptik tanaman
dimaksudkan untuk mengetahui sifat-sifat fisik yang khas  dari  tanaman  tersebut  dengan  melakukan pengamatan  terhadap  bentuk,  warna,  bau  dan  rasa dari suatu tanaman yang merupakan pengenalan awal yang sederhana dan subjektif (DepKes, 1987.,2000). Dari  hasil  pengamatan  yang  diperoleh  maka  sifat organoleptik dari tumbuhan Anting-anting ( Acalypha indica L.) adalah Daun berwarna hijau, rasa pahit dan berbau khas. Batang berwarna hijau kecoklatan, tidak berasa  dan  berbau  khas  .  Akar  berwarna  putih kekuningan,  tidak  berasa  dan    berbau  khas. Berdasarkan  hal  tersebut,  maka  dilakukan  dua parameter  standar  mutu  tumbuhan  Anting-anting ( Acalypha indica L.) meliputi parameter non spesifik yaitu kadar abu total, dan kadar abu tidak larut asam. Sedangkan  parameter  standar  mutu  spesifik  yaitu identitas tumbuhan (morfologi, anatomi, organoleptik),  kadar  sari  larut  air,  kadar  sari  larut etanol, dan identifikasi kandungan kimia.
Tabel 2. Hasil pemeriksaan tetapan fisis serbuk daun Anting-anting( Acalypha indica L.) No.  Pemeriksaan Hasil 1. Kadar abu total 16,36% 2. Kadar abu tidak larut asam 5,16%
Tabel 3. Hasil pemeriksaan tetapan ekstrabilitas serbuk daun Anting-anting ( Acalypha indica L.)
No.  Pemeriksaan Hasil 1. Kadar sari larut dalam air 25,16% 2. Kadar sari larut dalam etanol 26,36%
Tetapan  fisis  dari  tumbuhan  anting-anting (Acalypha indica L .) ini di lakukan berupa penetapan kadar abu total, dan kadar abu tidak larut dalam asam. Pemeriksaan  ini  bertujuan  untuk  menentukan besarnya  kandungan  bahan  anorganik  yang terdapat pada  simplisia  tersebut,  dan  dapat  digunakan  untuk mengidentifikasi suatu simplisia karena tiap simplisia mempunyai kandungan atau kadar abu yang berbeda- beda(Anonim,  2009).  Atas  dasar  tersebut  dapat
No  Pemeriksaan Warna Rasa Bau 1 Daun Hijau Pahit Khas 2 Batang Hijau kecoklatan Tidak berasa Khas 3 Akar Putih kekuningan  Tidak berasa Khas
ditentukan besarnya cemaran bahan-bahan anorganik yang terdapat dalam simplisia yang terjadi pada saat pengolahan  ataupun  dalam  pengemasan  simplisia. Pelarut  asam  klorida  digunakan  untuk  melarutkan logam-logam  organik,  sedangkan  yang  tidak  larut dalam  asam  biasanya  mengandung  silikat  yang berasal dari tanah atau pasir. Berdasarkan penelitian yang  dilakukan  diperoleh  kadar  abu  total  sebesar 16,36%, dan kadar abu yang tidak larut asam sebesar 5,16  %.  Hal  ini  tidak  sesuai  persyaratan  kadar  abu larut asam simplisia yaitu tidak boleh lebih dari 2%. Kandungan  abu  total  yang  tinggi  dalam  bahan  dan produk pangan merupakan indikator yang sangat kuat bahwa  produk  tersebut  potensi  bahayanya  sangat tinggi  untuk  dikonsumsi.  Tingginya  kandungan  abu berarti  tinggi  pula  kandungan  unsur-unsur  logam dalam bahan atau produk pangan (Endra, 2009). Pengujian  kadar  sari  dilakukan  dengan tujuan  yaitu agar dapat  memberikan gambaran awal
jumlah senyawa kandungan dengan cara melarutkan ekstrak  sediaan  dalam  pelarut  organik  tertentu (etanol/air)  (DepKes,  2000).  Penetapan  kadar  sari yang  larut  dalam  air  digunakan  untuk  menentukan kemampuan  dari  bahan  obat  tersebut  apakah  tersari dalam  pelarut  air  dan  dapat  menjadi  acuan penggunaan jamu dalam bentuk rebusan (infusa) oleh masyarakat, sehingga efek yang diinginkan tercapai. Penetapan  kadar  sari  yang  larut  dalam  etanol digunakan  untuk  mengetahui  apakah  bahan    baku obat  tradisional  tersebut  dapat  tersari  dalam  etanol dan dapat dijadikan dasar dalam pembuatan ekstrak. Berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilakukan  maka diperoleh hasil penetapan kadar sari terhadap serbuk daun Anting-anting (Acalypha indica L .) yaitu kadar sari yang larut dalam air sebesar 25,61 %, dan kadar sari yang larut dalam etanol sebesar 26,36 %.
No. Uji Pereaksi Warna Ket. Pustaka Hasil 1. Lignin Fluoroglusin + HCl Merah Kuning kecoklatan - 2. Tanin a. Katekol b. Pirogalotanin FeCl 3 1 N Hijau Kuning kecoklatan - FeCl 3 1 N Biru Kuning kecoklatan - NaOH Kecoklatan Hijau - 3. Dioksiantrakinon KOH 10% Merah Hijau - 4. Fenol FeCl 3 Biru-hitam Kuning - 5. Flavanoid FeCl 3 + HCl Merah Merah + 6. Alkaloid HCl 0,5 N + Dragendrof Endapan Jingga merah terbentuk endapan + 7. Steroid Lieberman + bauchardad Biru – Hijau Hijau + 8. Karbohidrat Luff Endapan Merah Hijau - 9. Aleuron Pati Iodin 0,1 N Biru (pati) Kuning Coklat (Aleuron) Kuning coklat + Aleuron 10. Saponin HCl 2 N Terbentuk buih Terbentuk buih +
Identifikasi  kandungan  kimia  simplisia nabati  dilakukan  dalam  bentuk  rajangan,  serbuk, ekstrak  atau  dalam  bentuk  lain  yang  ditambahkan dengan  pereaksi  tertentu  dan  reaksi  warna.  Metode ini  digunakan  untuk  mengetahui  senyawa  yang terkandung  dalam  serbuk  daun  Anting-anting (Acalypha  indica L .). Dari  hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  senyawa  yang  terkandung dalam  serbuk  daun  Anting-anting  adalah  aleuron, steroid,  alkaloid,  saponin  dan  flavanoid.  Pada literatur  daun  Anting-anting (Acalypha  indica L .) mengandung  minyak  atsiri,  namun  pada  hasil penelitian  tidak  terdapat  minyak  atsiri  hal  ini kemungkinan disebabkan oleh sedikitnya kandungan minyak atsiri sehingga tidak tampak pada pengujian kandungan kimia yang dilakukan.

## IV. KESIMPULAN
Berdasarkan
hasil pemeriksaan farmakognostik  serta  identifikasi  komponen  kimia tumbuhan Anting-anting ( Acalypha indica L.)  dapat ditarik kesimpulan sebagai berikut :
1. Pemeriksaan  morfologi  menunjukkan  bahwa tumbuhan  ini  merupakan  salah  satu  tumbuhan herba  semusim  dengan  tinggi  30  cm.    Daunnya merupakan  daun  tunggal,  bentuk  daun  bulat lonjong ( orbicularis ), berwarna hijau. Batangnya berbentuk  bulat  ( teres ),  berkayu  ( lignosus ).
Merupakan  akar  tunggang  yang  bercabang ( ramosus ),  berbentuk  bulat  ( teres ),  berwarna putih kekuningan.
2. Pada  penampang  membujur  daun  Anting-anting (Acalypha indica L.) terdapat stomata dengan tipe Anisositik.
3. Identifikasi  komponen  kimia  terhadap  serbuk daun  Anting-anting  ( Acalypha  indica L.) diperoleh  hasil  yang  positif  terhadap  Aleuron, steroid, alkaloid, saponin dan flavanoid.
4. Pemeriksaan  tetapan  fisis  serbuk  daun  Anting- anting ( Acalypha indica L.)  diperoleh kadar abu total  16,36%  dan  kadar  abu  tidak  larut  asam 5,16%.
5. Pemeriksaan  ekstrabilitas  serbuk    daun  Anting- anting ( Acalypha indica L.)  diperoleh kadar sari yang larut dalam air 25,61% dan kadar sari yang larut dalam etanol 26,36%.

## DAFTAR PUSTAKA
Agoes,  Goeswin.  2007. Teknologi  Bahan  Alam. Institut Teknologi Bandung, Bandung.
Anonim,  2009. Pharmacognosy  Applied  And Practice .  Universitas  Muslim  Indonesia, Makassar.
Dalimarta,S. 2000. Atlas Tumbuhan Obat Indonesia, jilid 2 . Trubus agriwidjaya, Jakarta.
Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan.
2008. Farmakope Herbal Indonesia Edisi I . Departemen Kesehatan RI, Jakarta.
Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan.
1979. Farmakope  Indonesia .  Departemen Kesehatan RI, Jakarta.
Direktorat  Jendral  Pengawasan  Obat  dan  Makanan.
1987. Analisis  Obat  Tradisional,  Jilid  I. Departemen  Kesehatan RI, Jakarta.
Direktorat  JendraI  Pengawasan  Obat  dan  Makanan.
2000. Parameter  Standar  Umum  Ekstrak Tumbuhan Obat. Departemen  Kesehatan RI, Jakarta.
Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan.
1986. Sediaan Galenik . Departemen Kesehatan RI, Jakarta. Endra, 2009 . Penetapan Kadar. (Online) , ( http://eremjezone.blogspot.com/2010/05/ka dar-abu.html , Diakses 2 Februari 2012).
Fahn, A. 1995. Anatomi  Tumbuhan Edisi III . Gajah Mada University Press, Yogyakarta.
Hariana, A. 2005. Tumbuhan Obat Dan Khasiatnya,
Seri Agrisehat I , Penebar Swadaya, Jakarta.
Harmita,  2006. Analisis  Fisiko  Kimia .  Departemen Farmasi UI, Jakarta.
Indralaya,  2010. Epidermis  Pada  Tumbuhan . Universitas Sriwijaya, Palembang.
Irma, 2010. Penetapan Kadar Kandungan Simplisia . (Online),
( http://worldofandika.blogspot.com/2010/06 /gravimetri penetapan-kadar-air-dan.html)
Diakses , 4 Februari 2012).
ITIS.  1996. Integrated  Taxonomic  Information System , (Online),
(http://wwwtaxonomichierarchy- Acalypha - indica . L) Diakses,6 Juni 2012). Khopkar, S.M. 2002. Konsep Dasar Kimia Analitik . Universitas Indonesia Press, Jakarta
Safriani,  2007. Uji  Hipoglikemik  Herba  Anting- anting  (Acalypha  australis .  LINN ) pada Mencit  (Mus  musculus ),  Skripsi  Fakultas Farmasi  Universitas  Muslim  Indonesia, Makassar.
Saifudin,  A.  dkk.  2011 .  Standarisasi  Bahan  Obat Alam,  Edisi  pertama .    Graha  ilmu, Yogyakarta. Stahl, Egon. 1985. Analisis Obat Secara
Kromatografi dan Mikroskop . Institut Tekhnologi Bandung, Bandung.
Sudjadi.  2007 .  Kimia  Farmasi  Analisis. PT  Pustaka Pelajar, Jogjakarta.
Tjitrosoepomo,  G.  2005. Morfologi  Tumbuhan,
Cetakan  kelima  belas .  Gajah  Madah University Press, Yogyakarta.
Yuniarti,  T.  2008. Ensiklopedia  Tanaman  Obat Tradisional . MedPress, Yogyakarta.
JFFI. 2018; 5(1) 266-270 www.jurnal.farmasi.umi.ac.id/index.php/fitofarmakaindonesia

## POTENSI ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL JAMUR KANCING (Agaricus bisporus) SEBAGAI ANTIBAKTERI

## Siska Nuryanti, Fitriana
Fakultas Farmasi, Universitas Muslim Indonesia siska.nuryanti@umi.ac.id

## ABSTRACT
A research had been done on antibacterial activity of extract and the aim was to determine the antibacterial activity and inhibitory potency. The research was started by screening test using Bacillus subtilis, Escherichia coli, Pseudomonas  aeruginosa,  Salmonella  typhi,  Staphylococcus  epidermidis,  Shigella  dysenteriae,  Staphylococcus aureus,  Streptococcus  mutans  and  Vibrio  cholerae.  Results  showed  that  the  Agaricus  bisporus  ekstract  inhibited Bacillus subtilis, Shigella dysenteriae, Staphylococcus aureus, and Vibrio cholera at concentrations 0,1% and 1%. The results obtained Minimum Inhibitory Concentration (MIC) Agaricus bisporus extract against at concentrations of 0,1%. In the Minimum Bactericidal Concentration (MBC) test Agaricus bisporus extract against at concentrations of 0,8%. Agaricus bisporus extract has antibacterial activity wich was indicated by the inhibitory zone diameter. The biggest inhibitory zone  diameter of  Agaricus bisporus  contained in bacteria Bacillus subtilis on the concentration of 6.4% (13 mm)

## Keywords: Antibacterial, Agaricus bisporus

## I. PENDAHULUAN
Indonesia  adalah  negara  agraris  yang terkenal akan kekayaan rempah rempah dan berbagai jenis  tanaman,  dari  dulu  hingga  sekarang  tanaman herbal  ataupun tanaman  obat dapat  menyembuhkan berbagai  macam penyakit.  Salah satu tanaman  yang berfungsi  sebagai  obat  adalah  jamur.  Istilah  jamur berasal dari bahasa Yunani, yaitu fungus ( mushroom ) yang  berarti  tumbuh  dengan  subur  (Gandjar et  al., 2006).
Penggunaan jamur sebagai obat merupakan tradisi  yang  sudah  lama.  Jamur  kancing  putih ( Agaricus  bisporus )  adalah  salah  satu  jamur  yang paling  popular  yang  diambil  dari  alam  dan  dari budidaya  komersial. Agaricus  bisporus kaya  akan protein,  asam  amino  bebas,  polifenol,  polisakarida ergothionin,  vitamin.  Jamur  ini  juga  mengandung asam  linoleat  yang  tingi  dan  enzim  aromatase  yang berperan mengkatalisis hormone seks pada manusia.
Agaricus  bisporus memiliki  banyak  fungsi  seperti antioksidan,  anti  bakteri,  anti  inflamasi,  anti  tumor, dan  sistem  pertahanan  tubuh  (Falguera et  al .,2011). Menurut Jeong et al (2010) seluruh bagian dari jamur kancing  ( Agaricus  bisporus )  kaya  akan  serat, polisakarida,  antioksidan,  vitamin  dan  polifenol, dengan adanya kandungan tersebut, dapat memberikan  efek  terhadap  sel  dari  sistem  imun,  sel tumor (Adams et al ., 2008).
Pengujian  skrining  fitokimia  kandungan senyawa  bioaktif  dari  ekstrak  n-heksan  jamur
kancing  adalah  flavonoid,  kumarin,  terpenoid  dan steroid, ekstrak etil asetat jamur kancing mengandung flavonoid, kumarin, triterpenoid, sedangkan ekstrak etanol jamur kancing mengandung flavonoid,  alkaloid,  polifenol,  kumarin,  terpenoi (Suhaena dan Nuryanti,  2017).
Berdasarkan  uraian  diatas,  penulis  ingin melakukan penelitian tentang Potensi Ekstrak Etanol Jamur Kancing ( Agaricus bisporus ) sebagai antibakteri.

## II. METODE PENELITIAN A. Pengambilan dan Penyiapan Sampel
Jamur  kancing  ( Agaricus  bisporus )  yang akan  digunakan  dikumpulkan  dan  selanjutnya dibersihkan  dari  pengotor  lalu  dicuci  dengan  air mengalir  hingga  bersih.  Jamur  tersebut  diiris  tipis- tipis,  kemudian  dikeringkan  di  udara  terbuka  dan terlindung  dari  sinar  matahari  langsung,  hingga didapatkan simplisia kering.

## B. Ekstraksi Sampel
Sampel  Jamur kancing ( Agaricus bisporus ) yang  telah  diserbukkan  ditimbang  kemudian dimasukkan  ke  dalam  bejana  maserasi.  Kemudian ditambahkan  etanol  96%  hingga  merendam  seluruh simplisia  dan  dibiarkan  2  sampai  3  hari  dengan pengadukan  beberapa  kali.  Ekstrak  cair  yang diperoleh  dikeringkan  dengan  cara  dirotavapor hingga diperoleh ekstrak etanol kental.

## C. Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan pada penelitian ini yaitu autoklaf (Smic), batang pengaduk, cawan petri (Normax),  enkas,  inkubator,  labu  erlenmeyer, Laminar Air Flow (LAF),  lampu spiritus, ose bulat, oven (Memmert), shaker, spoit, tangas air, timbangan analitik (AND) dan vial.
Bahan-bahan yang digunakan pada penelitian  ini  yaitu  air  suling,  alkohol  70%, aluminium  foil, test  discs (Oxoid),  biakan  murni
( Bacillus  subtilis,  Escherichia  coli,  Pseudomonas aeruginosa,  Salmonella  typhi,  Shigella  dysenteriae, Staphylococcus  aureus , Streptococcus  mutans dan Vibrio  cholerae ),  kertas  timbang,  larutan  NaCl fisiologis, medium NA, medium NB, jamur kancing.

## D. Sterilisasi alat
Sterilisasi  alat  dan  bahan  dengan  cara membungkus alat-alat, kemudian alat-alat yang tahan terhadap pemanasan disterilkan pada Oven pada suhu 180 0 C selama 2 jam. Sedangkan alat yang tidak tahan terhadap  pemanasan  disterilkan  pada  autoklaf  pada suhu 121ºC dengan tekanan 15 atm selama 15 menit.

## E. Penyiapan Mikroba Uji

## Peremajaan mikroba uji
Disiapkan  mikroba  uji  yang  berasal  dari biakan  murni  diambil  masing-masing  1  ose  lalu diinokulasikan dengan cara digoreskan pada medium nutrien  Agar  (NA),  lalu  diinkubasi  pada  suhu  37 o C selama 1 x 24 jam.
Pembuatan suspensi mikroba uji Kultur bakteri yang telah diremajakan dalam medium Nutrien  Agar  (NA) disuspensikan  dengan NaCl  fisiologis  (NaCl  0,9  %)  kemudian  diukur kekeruhannya  25%T.

## F. Uji Skrining Mikroorganisme
Pengujian  skirining  ekstrak  etanol  jamur kancing  ( Agaricus  bisporus )  dilakukan  dengan menggunakan konsentrasi 0,1% dan 1%.  Kemudian diinkubasi  pada  suhu  37 o C  selama  1  x  24  jam. Kemudian diamati aktivitas antibakteri yang ditandai dengan ada atau tidaknya pertumbuhan bakteri pada medium NA.

## G. Uji Aktivitas Antimikroba Metode Dilusi Uji Kadar Hambat Minimum (KHM)
Pengujian KHM dilakukan pada mikroba uji yang  memberikan  penghambatan  pada  uji  skrining aktivitas  antimikroba  dari  ekstrak  etanol  jamur kancing ( Agaricus bisporus ) dengan membuat variasi konsentrasi  sampel  ekstrak.  Konsentrasi  yang digunakan  adalah  0,05%,  0,1%,  0,2%, 0,4%,  0,8% dan  1,6%.  Sampel  ditimbang  sesuai  dengan konsentrasi yang akan dibuat terhadap 5 ml medium
NB dalam vial, dilarutkan dengan DMSO, ditambah 5  ml  medium  NB,  dihomogenkan  dan  dimasukkan kedalam tabung reaksi steril, selanjutnya dimasukkan mikroba  uji  yang  positif  pada  uji  skrining antimikroba  kedalam  tiap  tabung.  Kemudian diinkubasi  pada  suhu  37ºC  selama  1x24  jam. Konsentrasi  terendah  dari  ekstrak  etanol  jamur kancing  ( Agaricus  bisporus )  dengan  parameter dimana  larutan  tampak  jernih  setelah  diinkubasi dinyatakan sebagai harga KHM.

## Uji Kadar Bunuh Minimum (KBM)
Pengujian  KBM  dilakukan  terhadap  hasil inkubasi dari uji KHM, selanjutnya digoreskan pada media  NA,  dan  diinkubasi  pada  suhu  37ºC  selama 1x24  jam.  Konsentrasi  terendah  dari  ekstrak  etanol jamur kancing ( Agaricus bisporus ) yang aktif sebagai antibakteri  dengan  parameter  berupa  daerah  tanpa pertumbuhan  setelah  diinkubasi  dinyatakan  sebagai harga KBM.

## H. Uji Aktivitas Antimikroba Metode Difusi Agar
Medium  NA  steril  yang  telah  dicairkan sebanyak  10  ml  dituang  kedalam  cawan  petri  steril dan dibiarkan memadat. Setelah memadat diapuskan masing-masing mikroba uji ke tiap-tiap cawan petri. kemudian di letakkan disc blank yang telah direndam pada pengenceran sampel  dengan konsentrasi 0,8%, 1,6%, 3,2%, dan 6,4% selama 1 jam, lalu diinkubasi pada  suhu  37 o C  selama  1  x  24  jam.  Suatu  sampel digolongkan  memiliki  aktivitas  antibakteri  jika terbentuk  zona  bening  atau  disebut  juga  zona hambatan disekitar disk sampel.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN A. Hasil Penelitian
Berdasarkan hasil penelitian yang dilakukan di  Laboratorium  Mikrobiologi  Fakultas  Farmasi UMI,  diperoleh  hasil  uji  skrining  terhadap  ekstrak etanol  jamur  kancing  ( Agaricus  bisporus )  pada konsentrasi  0,1%  dan  1%  dapat  menghambat pertubuhan  bakteri  uji Bacillus  subtilis,  Shigella dysenteriae,  Staphylococcus  aureus ,  dan Vibrio cholera. Bakteri  uji  tersebut  kemudian  dilanjutkan dalam pengujian dilusi dan difusi Agar (Tabel1).
Tabel  1. Hasil  Uji  Skrining  ekstrak  etanol  jamur kancing  ( Agaricus  bisporus )  terhadap  beberapa bakteri uji
Bakteri uji Konsentrasi % 0,1 1 SA + +
SM - +
SD + + ST - + SE - + PA - +
VC + + EC - + BS + +
Pada pengujian Konsentrasi Hambat Minimum  (KHM)  ekstrak  etanol  jamur  kancing ( Agaricus  bisporus )  diperoleh  nilai  KHM  untuk bakteri  uji Bacillus  subtilis,  Shigella  dysenteriae, Staphylococcus  aureus ,  dan Vibrio  cholera yaitu pada konsentrasi 0,1% (Tabel 2)
Tabel  2. Hasil  Uji  Konsentrasi  Hambat  Minimum (KHM)  ekstrak  etanol  jamur  kancing  ( Agaricus bisporus ) terhadap beberapa mikroba uji Bakteri uji Konsentrasi 0,05  0,1 0,2 0,4 0,8 1,6 VC - + + + + + SA - + + + + + SD - + + + + +
BS -
+ + + + +
Keterangan :
+    : Menghambat pertumbuhan bakteri uji -     : Tidak Menghambat pertumbuhan bakteri Uji
Pada pengujian Konsentrasi Bunuh
Minimum  (KBM)  ekstrak  etanol  jamur  kancing ( Agaricus  bisporus )  diperoleh  nilai  KBM  untuk bakteri  uji Bacillus  subtilis,  Shigella  dysenteriae, Staphylococcus  aureus ,  dan Vibrio  cholera yaitu pada konsentrasi 0,8% (Tabel 3)
Tabel  3. Hasil  Uji  Konsentrasi  Bunuh  Minimum (KBM)  ekstrak  etanol  jamur  kancing  ( Agaricus bisporus ) terhadap beberapa bakteri uji Bakteri uji Konsentrasi (%) 0,1 0,2 0,4 0,8 1,6 VC - - - + + SA - - - + + SD - - - + + BS - - - + + Keterangan :
+    : Membunuh bakteri uji
-     : Tidak membunuh bakteri uji
Pada  pengujian  uji  difusi  Agar  ekstrak etanol  jamur  kancing  ( Agaricus  bisporus )  diperoleh nilai  zona  hambat  terbesar  yaitu  pada  bakteri  uji Bacillus subtilis pada konsentrasi 6,4% dengan besar zona hambat 13 mm (Tabel4)
Tabel  4. Hasil Uji  difusi  Agar ekstrak etanol  jamur kancing  ( Agaricus  bisporus )  terhadap  beberapa bakteri uji
Bakteri Uji Diameter zona hambat (mm) 0,8% 1,6% 3,2% 6,4% VC 8,86 9,14 9,56 10,28 SA 9,11 9,22 9,84 10,63 SD 8,73 9,08 9,77 10,13 BS 10,02 10,17 10,48 13 Keterangan :
BS : Bacillus subtilis
EC :Escherichia coli PA :Pseudomonas aeruginosa ST  :Salmonella typhi SE  :Staphylococcus epidermidis SD :Shigella dysenteriae, SA  :Staphylococcus aureus SM : Streptococcus mutans VC : Vibrio cholera

## B. PEMBAHASAN
Senyawa  antibakteri  merupakan  senyawa antimikroba  yang  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri.  Secara  umum  senyawa  antibakteri  dapat diklasifikasikan  berdasarkan:  spektrum  aktivitas, efek  terhadap  bakteri,  dan  mekanisme  kerja penghambatan (Giguére , . 2006).
Berdasarkan efek terhadap bakteri, senyawa antibakteri dapat bersifat bakteriostatik dan bakterisidal. Bakteriostatik berarti senyawa antibakteri  memiliki  kemampuan  menghambat pertumbuhan sel, yaitu dengan menahan pertumbuhan bakteri pada fase stasioner. Bakterisidal berarti  senyawa  antibakteri  memiliki  kemampuan membunuh sel bakteri. Namun demikian, penentuan senyawa  antibakteri  bersifat  bakteriostatik  atau bakterisidal  tidak  absolut  karena  dipengaruhi berbagai faktor. Penentuan suatu senyawa antibakteri bersifat  bakteriostatik  atau  bakterisidal  dapat dipengaruhi  oleh  konsentrasi  senyawaantibakteri, jumlah  inokulum  bakteri,  dan  lama  pengujian (inkubasi) (Pankey dan Sabath, 2004).
Agaricus bisporus kaya akan protein, asam amino  bebas,  polifenol,  polisakarida  ergothionin, vitamin.  Jamur  ini  juga  mengandung  asam  linoleat yang  tingi  dan  enzim  aromatase  yang  berperan mengkatalisis hormone seks pada manusia. Agaricus bisporus memiliki banyak fungsi seperti antioksidan, anti  bakteri,  anti  inflamasi,  anti  tumor,  dan  sistem pertahanan tubuh (Falguera et al .,2011). Fenol adalah komponen  antioksidan  utama  yang  ditemukan  pada ekstrak Agaricus  bisporus (Dhamodharan  &
Mirunalini,  2010).  Menurut  Jeong et  al (2010) seluruh  bagian  dari  jamur  kancing  ( Agaricus
bisporus ) kaya akan serat, polisakarida, antioksidan, vitamin  dan  polifenol,  dengan  adanya  kandungan tersebut,  dapat  memberikan  efek  terhadap  sel  dari sistem imun, sel tumor (Adams et al ., 2008).
Berdasarkan uji skrining fitokimia kandungan  senyawa  bioaktif  dari  ekstrak  n-heksan jamur kancing  adalah  flavonoid, kumarin, terpenoid dan  steroid,  ekstrak  etil  asetat  jamur  kancing mengandung flavonoid, kumarin, triterpenoid, sedangkan ekstrak etanol jamur kancing mengandung flavonoid,  alkaloid,  polifenol,  kumarin,  terpenoid (Suhaena dan Nuryanti).
Metode uji yang digunakan pada penelitian ini  adalah    metode  dilusi  dan  difusi  agar. Metode dilusi  digunakan  untuk  menentukan  nilai  hambat minimum  dari  mikroba  uji  dengan  menggunakan medium  cair  dan  padat,  sedangkan  metode  difusi digunakan  untuk  melihat  daerah  hambatan  dari mikroba  yang  akan  diuji  dengan  menggunakan medium padat . Uji  awal  dilakukan  pengujian  skrining.
Dimana uji skrining adalah uji yang digunakan untuk melihat  daya  hambat  dari  suatu  sampel  terhadap beberapa  mikroba uji.   Mikroba uji  yang digunakan adalah Bacillus subtilis, Escherichia coli,
Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhi, Shigella dysenteriae,    Staphylococcus  aureus , Streptococcus mutans dan Vibrio  cholera dengan  menggunakan sampel  ekstrak  etanol  jamur  kancing  dengan konsentrasi  0,1%  dan  1% .  Hasil  pengujian  skrining diperoleh  konsentrasi  sampel  0,1%  dan  1%  dapat menghambat  bakteri  uji Bacillus  subtilis,  Shigella dysenteriae,    Staphylococcus  aureus ,  dan Vibrio cholera. Hasil  dari  pengujian  skrining  kemudian dilanjutkan ke metode dilusi dan difusi agar.
Pengujian  Konsentrasi  Hambat  Minimum (KHM).  Dimana  Konsentrasi  Hambat  Minimum (KHM)  adalah  konsentrasi  minimal  dari  suatu  zat yang akan menghambat pertumbuhan suatu mikroorganisme.  Pada  pengujian  ini  digunakan konsentrasi 0,05%,  0,1%,  0,2%,  0,4%,  0,8%  dan 1,6%. antara  sampel  dan  medium  Nutrien  Broth (NB).  Dimana  medium  NB  ini  merupakan  medium cair  yang  digunakan  pada  pengujian  Konsentrasi Hambat  Minimum  (KHM).  Kegunaan  dari  Uji Konsentrasi  Hambat  Minimum  (KHM)  ini  adalah untuk  mengetahui  konsentrasi  terendah  dari  suatu sampel  dalam  menghambat  pertumbuhan  mikroba uji.  Semakin  keruh  larutan  uji  maka  semakin  kecil penghambatan  terhadap  mikroba  uji  yang  terdapat pada  larutan  uji  dan  sebaliknya  dimana  semakin jernih larutan uji maka semakin besar penghambatan terhadap mikroba uji yang terdapat pada larutan uji. Hasil pengujian Konsentrasi Hambat
Minimum  (KHM)  diperoleh  nilai  KHM  0,1% terhadap  bakteri  uji Bacillus  subtilis,  Shigella
dysenteriae,    Staphylococcus  aureus ,  dan Vibrio cholera. Pengujian dilanjutkan dengan uji Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM) yaitu konsentrasi  minimal dari suatu zat yang  membunuh (KBM)  dimana  pengujian  ini  dilakukan  dengan menggoreskan masing-masing hasil inkubasi pada uji KHM pada medium Nutrien Agar (NA) dalam cawan petri dan diinkubasi kembali pada suhu 37 o C selama 1  x  24  jam.  Nilai Konsentrasi  Bunuh  Minimum (KBM) ditunjukkan dengan tidak adanya pertumbuhan  bakteri  pada  konsentrasi  terendah sampel.
Berdasarkan  hasil  pengujian  yang  telah dilakukan  maka,  diperoleh  nilai  Konsentrasi  Bunuh Minimum (KBM) untuk bakteri uji Bacillus subtilis, Shigella  dysenteriae,  Staphylococcus  aureus ,  dan Vibrio  cholera terdapat  pada  konsentrasi  0,8%. Kemudian  dilanjutkan  dengan  metode  difusi  Agar untuk  mengetahui  besaran  zona  hambat  yang dihasilkan oleh ekstrak jamur kancing.
Hasil  yang  diperoleh  dari  metode  difusi Agar  yaitu  berupa  zona  hambatan  ekstrak  etanol jamur  kancing  terhadap  mikroorganisme  uji.    Zona hambat  terbesar  yang  diperoleh  dalam  menghambat mikroorganisme uji pada bakteri  uji Bacillus subtilis pada konsentrasi 6,4% dengan nilai zona hambat 13 mm ,  Shigella  dysenteriae pada  konsentrasi  6,4% dengan nilai zona hambat 10,13 mm ,  Staphylococcus aureus pada  konsentrasi  6,4%  dengan  nilai  zona hambat  10,63  mm,  dan Vibrio  cholera pada konsentrasi  6,4%  dengan  nilai  zona  hambat  10,28 mm.

## IV. KESIMPULAN
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan  diperoleh  hasil  uji  dilusi  ekstrak  etanol jamur kancing ( Agaricus bisporus ) dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri  uji Bacillus subtilis,  Shigella  dysenteriae,  Staphylococcus aureus , dan Vibrio cholera dengan nilai KHM 0,1
% dan nilai KBM 0,8%. Sedangkan hasil uji difusi Agar  diperoleh  nilai  zona  hambat  terbesar  pada bakteri Bacillus  subtilis pada  konsentrasi  6,4% dengan nilai zona hambat 13 mm.

## V. UCAPAN TERIMAKASIH
Penulis mengucapkan terima kasih kepada Lembaga  Penelitian  dan  Pengembangan  Sumber Daya  (LP2S)  Universitas  Muslim  Indonesia  yang telah  memberi  dukungan  financial terhadap penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Adams  L.S. et  al. (2008).   White  button  mushroom ( Agaricus
bisporus) exhibits
antiproliferative and proapoptotic properties
and inhibits prostate tumor growth in athmic mice. Nutr cancer Dhamodharan  G,&  Mirunalini    S.  (2010). A  Novel Medicinal  Characterization  of  Agaricus bisporus (white button mushroom). Pharmacology online 2:456-463 Falquera  V.,  Miarnau  O.,  Pangan  J&  Ibarz  A  . (2011). Inhibitory  effect  of  melanins    from Agaricus  bisporus  polyphenol  oxidase  and two different  substrats on carboxypeptidase
A and B activity
Gandjar  I.G.  &  Rohman.  (2007). Kimia  Analisis Farmasi. Yogyakarta : Pustaka Pelajar Giguère. S., J .F. Prescott, J.D. Baggot, R.D. Walker, &  P.M.  Dowling.  (2006). Antimicrobial therapy  in  veterinary  medicine . 4th  ed . BlackwellPublishing, Iowa: xviii + 626 hlm. Jeong  SC.,  Jeong  Yt.,  Yang  BK.,  Islam  R., Koyyalamudia SR., Panga G, Choa K.Y., & Song C.H. (2010). White button Mushroom (Agaricus bisporus) lower blood glucose and cholesterol level in diabetic and hypercholesterolemic rats . Nutr Res 30:  49- 56 Pankey,  G.A.  &  L.D.  Sabath.  (2004).  Clinical relevance of
bacteriostatic versus bactericidal  mechanisms  of  action  in  the treatment of Gram-positive bacterial infection. Oxford Journal 38: 864--870. Suhaena, A. & Nuryanti, S . ( 2017). Srining Fitokimia Jamur  Kancing  (Agaricus  bisporus).  Jurnal Fitofarmaka Indonesia
JFFI. 2018; 5(1) 271-278 www.jurnal.farmasi.umi.ac.id/index.php/fitofarmakaindonesia
AKTIFITAS EKSTRAK JAHE MERAH DALAM MENURUNKAN ASAM URAT PADA KELINCI SERTA ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA BIOAKTIFNYA
Subehan Lallo 1 , Muhammad Mirwan 2 , Adrianti Palino 1 , Nursamsiar 2 , Besse Hardianti 2
1 Fakultas Farmasi, Universitas Hasanuddin
2 Sekolah Tinggi Farmasi Makassar subehan@unhas.ac.id

## ABSTRAK
Jahe merah (Zingiber officinalle var. Amarum) merupakan salah satu tumbuhan yang banyak digunakan sebagai  bumbu  makanan  sehari-hari  dan  juga  berkhasiat  sebagai  obat  tradisional  untuk  mengobati  berbagai penyakit  termasuk  asam  urat.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menguji  aktifitas  biologi  dari  jahe  merah  dan mengisolasi dan mengidentifikasi senyawa bioaktif yang tekandung di dalam ekstraknya. Berdasarkan penelitian yang dilakukan terhadap ekstrak etanol jahe merah memperlihatkan kemampuannya dalam menurunkan asam urat pada kelinci yang diinduksi dengan kalium bromat (KBrO 3 ) pada konsentrasi 0,6 b/v yang diamati pada 1 dan 3 jam  setelah  diinduksi  dan  dibandingkan  dengan allopurinol  yang  digunakan  sebagai  positif  kontrolnya.  Ekstrak etanol jahe merah juga memperlihatkan hubungan konsentrasi dengan penurunan asam urat pada kelinci. Isolasi senyawa bioaktif dalam tanaman ini telah dilakukan dengan menggunakan metode kromatografi dan identifikasi stukturnya  didasarkan  pada  analisis  data  spektrofotometri  dan  NMR.  Berdasarkan  data  spectra  yang  diperoleh terhadap senyawa yang paling dominan yang berhasil diisolasi dan diidentifikasi adalah senyawa 6-gingerol. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak etanol jahe merah memiliki aktifitas dalam menurunkan kadar asam urat dengan senyawa utama 6-gingerol.
Keywords: Jahe merah, Zingiber officinalle var. Amarum, asam urat, 6-gingerol

## I. PENDAHULUAN
Tumbuhan  merupakan  salah  satu  sumber terbesar  dari  alam  yang  digunakan  sebagai  obat tradisional  dan  menjadi  objek  penelitian  dalam pencarian  obat  baru.  Pemanfaatan  tanaman  untuk obat  tradisional  memiliki  kelebihan  tersendiri  yaitu toksisitasnya  rendah,  mudah  diperoleh,  murah harganya  dan  kurang  menimbulkan  efek  samping. Kelebihan  ini  juga  telah  dibuktikan  secara  empiris pada  penggunaan  langsung  oleh  manusia  secara tradisional.  Hal  inilah  yang  menjadi  salah  satu motivasi  untuk  melirik  kembali  potensi  alam  untuk mengupayakan  penanggulangan  berbagai  penyakit atau  gangguan  kesehatan  yang  sering  muncul termasuk  dalam  proses  pencegahannya.  Indonesia termasuk  negara  dengan  sumber  keanekaragaman hayati terbesar di dunia. Kekayaan alam yang sangat berpotensi dan besar ini seharusnya mulai dilakukan pemberdayaan  dan  pemanfaatan  serta  penelitian mengenai  obat  tradisional  untuk  memberikan  bukti ilmiah mengenai khasiat suatu tanaman obat dan juga dapat  digunakan  sebagai  sumber  senyawa  penuntun “lead  compound”  untuk  mensintesis  senyawa  obat baru.  Kemajuan  ilmu  pengetahuan  dan  teknologi dibidang ilmu kefarmasian menimbulkan
perkembangan dan inovasi penemuan obat baru yang berasal dari obat tradisional mulai berkembang pesat.
Kesadaran  masyarakat  akan  pentingnya kesehatan  juga  mengalami  peningkatan,  namun seiring  dengan  hal  tersebut  juga  berkembang berbagai jenis penyakit akibat perubahan gaya hidup yang  lebih  modern  dengan  tingkat  stres  yang  lebih tinggi.  Munculnya resistensi terhadap berbagai jenis bakteri  ataupun  parasit  mengakibatkan  perlunya pengembangan  dan  penemuan  obat  baru.  Kondisi lingkungan  yang  beriklim  tropis  juga  sangat memungkinkan  berbagai  jenis  penyakit  untuk tumbuh berkembang. Salah satu gangguan kesehatan yang  paling  banyak  muncul  diusia  lanjut  adalah penyakit asam urat.
Asam  urat  merupakan  suatu  produk  akhir dari  metabolisme  purin.  Proses  metabolisme  purin sangat  essensial  bagi  tubuh  karena  mampu menghasilkan  komponen-komponen  asam  nukleat penting seperti DNA, RNA, dan kebutuhan energi sel yaitu ATP. Produk akhir dari proses metabolime ini menjadi  bahan  dasar  untuk  pembentukan  asam  urat yang  merupakan  senyawa  yang  sukar  larut  dan apabila  terjadi  pengendapan  serta  jumlah  yang berlebih dalam darah (hiperurisemia) dapat
menyebabkan  gout  (Vincent  dkk,  2003).  Asam  urat dapat  menjadi  sumber  penyakit  bila  kadarnya berlebihan  dalam  darah  (>7  mg/dL)  atau  karena penurunan  eksresi  asam  urat oleh  ginjal,  dapat  pula karena kombinasi keduanya (Luk dan Simkin, 2005). Berbagai  teknik  pengobatan  telah  dilakukan  untuk mengatasi  penyakit  ini  termasuk  penggunaan senyawa  anti  inflamasi  seperti  anti  inflamasi  non steroid (AINS) dan penggunaan senyawa penghambat enzim xanthin oxidase untuk mengurangi  produksi  asam  urat.  Beberapa  kasus penggunaan anti inflamasi non steroid (AINS) dapat memberikan  efek  samping  berupa  retensi  nitrogen dan  hiperkalemia (Sarawek, 2007). Munculnya efek samping dan berbagai kekurangan dari berbagai obat- obat modern yang digunakan saat ini menuntut untuk tetap  mencari  obat  yang  lebih  mujarab  dengan  efek samping yang sekecil mungkin. Salah satu alternatif sumber  bahan  yang  dapat    dikembangkan  untuk membuat bahan obat baru atau obat baru adalah obat tradisional.
Berbagai  jenis  tumbuhan  obat  yang  telah terbukti secara empiris dapat menurunkan kadar asam urat.  Salah  satu  tumbuhan  yang  digunakan  untuk pengobatan  tradisional  untuk  penyakit  asam  urat adalah jahe merah ( Zingiber officinale var. Amarum). Jahe  merah  yang  merupakan  anggota  famili Zingiberaceae  merupakan  tanaman  yang  mudah tumbuh  di  tempat  terbuka  seperti  kebun  dan pekarangan. Tanaman ini juga dapat tumbuh di tanah padat, kering ataupun gembur (Heinrich dan Subroto, 2000). Ada tiga jenis jahe yang telah dibudidayakan di  Indonesia  yaitu:  Jahe  Gajah  ( Zingiber  officinale var. Officinale), Jahe Emprit ( Zingiber officinale var. Rubrum)  dan  Jahe  Merah  ( Zingiber  officinale var. Amarum)  (Wijayakusuma,  2006).  Kegunaan  praktis ketiganya  kadang-kadang  berbeda.  Jahe  gajah  yang ukurannya  besar,  berkulit  putih  atau  kuning  dan rasanya  tidak  terlalu  pedas  dapat  diolah  sebagai manisan  atau  asinan.  Jahe  emprit  yang  ukurannya kecil,  berkulit  putih  atau  kuning  dan  sangat  pedas sering  digunakan  untuk  bumbu  masakan  dan  obat. Jahe  merah  yang  ukurannya  sedang  dan  berkulit merah  umumnya  digunakan  untuk  obat.  Di  antara jahe gajah dan  jahe emprit terdapat berbagai  variasi ukuran jahe. Jahe ini paling umum ditanam dan sering diperdagangkan berdasarkan daerah asalnya (Sudemo, 2004).
Jenis Zingiber  officinale var.  Amarum merupakan  jenis  yang  sangat  populer  digunakan sebagai  bahan  baku  tradisional.  Hal  ini  disebabkan karena  kandungan  minyak  atsiri,  zat  gingeral,  serta oleoresin  atau  zat  yang  memberikan  rasa  pahit  dan pedas  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  dua  jenis jahe  lainnya,  yaitu  jahe  gajah  dan  jahe  emprit.  Jahe juga  dapat  digunakan  pada  industri  obat,  minyak
wangi,  dan  sampai  pada  industri  jamu  tradisional (Herlina, 2004). Adapun manfaat dan kegunaan lain dari  jahe  merah  secara  empiris  antara  lain  sebagai karminatif,  anti  muntah,  pereda  kejang,  anti pengerasan  pembuluh  darah,  peluruh  keringat,  anti inflamasi, anti mikroba dan parasit, anti piretik, anti rematik,  serta  merangsang  pengeluaran  getah lambung dan getah empedu (Harmono dan Andoko, 2005).
Berdasarkan  uraian  diatas,  maka  timbul suatu permasalahan yaitu untuk membuktikan secara ilmiah apakah ekstrak jahe merah ( Zingiber officinale var. Amarum) memiliki kemampuan dalam menurunkan  kadar  asam  urat  pada  hewan  coba kelinci  dan  mengisolasi  serta  mengidentifikasi komponen  kimia  dari  rimpang  jahe  merah.  Adapun tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui senyawa atau komponen kimia bioaktif dari rimpang jahe merah dengan mengisolasi dan mengidentifikasi dan menguji aktivitas ekstraknya dalam menurunkan kadar  asam  urat.  Manfaat  penelitian  ini  adalah sebagai  salah  satu  sumber  informasi  secara  ilmiah pada  bidang  kefarmasian,  tentang  penggunaan rimpang jahe merah sebagai obat tradisional maupun modern dalam menyembuhkan berbagai penyakit.

## II. METODE PENELITIAN
A. Alat dan Bahan yang Digunakan
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini  adalah  lampu  UV  254  nm  dan  366  nm, seperangkat  alat  kromatografi  lapis  tipis,  alat sentrifus  ( Hettich ),  balon  kateter,  spektrofotometer UV-Vis,  NMR  (Jeol),  Humalyser  ( human  body ), gelas arloji, labu tentukur 100 ml ( Pyrex ), lumpang dan alu, pipet ukur, tabung darah, tabung sentrifuge, timbangan  analitik  ( Sartorius ),  timbangan  gram ( O’hauss ), timbangan hewan ( Berkel ), dan spoit. Bahan-bahan yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah air suling,  etanol, jahe merah ( Zingiber  officinale Linn.Var.rubrum),  n-heksan, etil asetat, ethanol 70%, kertas saring, H 2 SO 4 10%, silica  gel,  reagen  Dragendroff,    H 2 SO 4 2N,  reagen Mayer, reagen wagner, serbuk Fe, HCl pekat, eter, asam asetat anhidrat, H 2 SO 4 pekat, FeCl 3 , silika gel, kalium  bromat  (KBrO 3 ),  natrium  CMC,  reagen untuk analisis asam urat dan tablet Allopurinol.

## B. Pengambilan dan Penyiapan Sampel
Sampel  jahe  merah  ( Zingiber  officinale Linn.Var.rubrum)  diperoleh  dari  Tana  Toraja, Sulawesi  Selatan. Sampel  dibersihkan  kemudian diangin-anginkan  pada  tempat  yang  tidak  terkena cahaya  matahari  langsung  hingga  mengering. Sebanyak kurang lebih 100 g sampel jahe merah yang telah kering, dipotong kecil-kecil kemudian dimasukkan dalam wadah maserasi, lalu
ditambahkan  dengan  cairan  penyari  sampai  sampel terendam  seluruhnya.  Ekstraksi  dilakukan  selam  5 hari,  hasil  ekstraksi  yang  diperoleh  selanjutnya diuapkan hingga diperoleh ekstrak kental.

## C. Identifikasi Golongan Kimia Ekstrak
1. Uji Alkaloid
Uji  Alkaloid  dilakukan  dengan  metode Mayer, Wagner dan Dragendorff. Sampel sebanyak 3 mL  diletakkan  dalam  cawan  porselin  kemudian ditambahkan 5 mL HCl 2 M , diaduk dan kemudian didinginkan  pada  temperatur  ruangan.  Filtrat  yang diperoleh  ditambahkan  HCl  2  N  sebanyak  3  tetes  , kemudian  dipisahkan  menjadi  3  bagian  A,  B,  C. Filtrat A ditambah pereaksi Mayer, filtrat B ditambah pereaksi  Wagner,  sedangkan  filtrat  C  ditambah Dragendorf.  Apabila  terbentuk  endapan  pada penambahan pereaksi Mayer, Wagner dan Dragendorf  maka  identifikasi  menunjukkan  adanya alkaloid

## 2. Uji Flavonoid
Sebanyak  3  mL  sampel  diuapkan,  dicuci dengan  heksana  sampai  jernih.  Residu  dilarutkan dalam 20 mL etanol kemudian disaring. Filtrat dibagi 4 bagian A dan B. Filtrat A ditambahkan 0,5 mL HCl pekat  kemudian  dipanaskan  pada  penangas  air,  jika terjadi  perubahan  warna  merah  tua  sampai  ungu menunjukkan hasil yang positif (metode Bate Smith- Metchalf).  Filtrat  B  ditambahkan  0,5  mL  HCl  dan logam Mg kemudian diamati perubahan warna yang terjadi  (metode  Wilstater).  Warna  merah  sampai jingga diberikan oleh senyawa  flavon, warna  merah tua  diberikan  oleh  flavonol  atau  flavonon,  warna hijau  sampai  biru  diberikan  oleh  aglikon  atau glikosida.

## 3. Uji Teroenoid dan Steroid
Ekstrak  dimasukkan  sedikit  dalam  tabung reaksi kecil, lalu dikocok dengan sedikit eter. Lapisan eter  diambil  lalu  diteteskan  pada  plat  tetes,  dan dibiarkan sampai kering. Setelah kering,
ditambahkan dua tetes asam asetat anhidrat dan satu tetes  asam  sulfat  pekat.  Apabila  terbentuk  warna orange, merah, atau kuning berarti positif terpenoid. Tetapi  apabila  terbentuk  warna  hijau  berarti  positif steroid.

## 4. Uji Saponin
Uji Saponin dilakukan dengan metode Forth yaitu  dengan  cara  memasukkan  2  mL  sampel kedalam tabung reaksi kemudian ditambahkan 10 mL akuades  lalu  dikocok  selama  30  detik,  diamati perubahan yang terjadi. Apabila terbentuk busa yang mantap  (tidak  hilang  selama  30  detik)  maka identifikasi menunjukkan adanya saponin.

## 5. Uji Fenolik
Sejumlah  kecil  ekstrak  dimasukkan  ke dalam  tabung  reaksi  kecil,  lalu  dikocok  dengan sedikit eter. Lapisan eter dikeringkan pada plat tetes, ditambah  larutan FeCl 3 . Terbentuk warna ungu  biru berarti positif fenolik.

## 6. Uji Tanin
Ekstrak dimasukkan ke dalam tabung reaksi kemudian dikocok dengan air panas hingga homogen kemudian  ditambahkan  FeCl 3 .  Jika  berwarna  hijau biru (hijau hitam) berarti positif adanya tanin katekol sedangkan  jika  berwarna  biru  hitam  berarti  positif adanya tanin pirogalol.
D. Pengujian Aktivitas Asam Urat
1. Penyiapan  Suspensi  Ekstrak  Etanol  Jahe Merah
Ekstrak jahe merah akan diberikan dalam 3 variasi dosis yaitu 0,2 % b/v, 0,4 % b/v, 0,6 % b/v . Untuk membuat suspensi ekstrak dengan konsentrasi 0,2  %  b/v,  sebanyak  0,2  g  ekstrak  digerus  dalam lumpang,  ditambah  larutan  koloidal  Natrium  CMC 1%  sedikit  demi  sedikit  sambil  digerus  hingga homogen, lalu dimasukan ke dalam labu tentukur dan volumenya  dicukupkan  hingga  100  ml.  Untuk membuat suspensi ekstrak dengan konsentrasi 0,4 % b/v dan 0,6 % b/v , diperlukan ekstrak masing-masing 0,4 dan 0,6  gram untuk 100 ml.

## 2. Pemilihan dan Penyiapan Hewan Uji
Hewan  uji  yang  digunakan  adalah  kelinci jantan  sebanyak  15  ekor  dengan  bobot  badan  1,5–2 kg  yang  dibagi  dalam  3  kelompok  perlakuan  yaitu kelompok  1  (kontrol  negatif)  yang  diberi  suspensi Natrium CMC 1%, kelompok 2 (kontrol positif) yang diberi  allopurinol,  kelompok  3,  4,  dan  5  diberi suspensi  ekstrak  etanol  jahe  merah  dengan konsentrasi masing-masing 0,2 % b/v, 0,4 % b/v, dan 0,6 % b/v.

## 3. Perlakuan Pada Hewan Uji
Sebelum  perlakuan  hewan  diadaptasikan dengan  lingkungan  selama  1–2  minggu,  lalu ditimbang  untuk  mengetahui  bobot  badannya, kemudian dikelompokkan menjadi 3 kelompok yang masing-masing  terdiri  dari  3  ekor,  lalu  dipuasakan selama 8 jam. Ekstrak etanol jahe merah dari larutan stok di berikan secara per oral pada kelinci kelompok ke-3 (0,2 %b/v), ke-4 (0,4 % b/v), ke-5 (0,6 % b/v). Perlakuan kontrol diberikan untuk kelinci kelompok ke-1  (Natrium  CMC  1  %)  dan  kelompok  ke-2 (Allopurinol 0,058 % b/v).
Pengambilan dan pengukuran darah dilakukan  pada  masing-masing  kelinci  di  tiap kelompok.  Pengambilan  dan  pengukuran  darah
pertama  kali  dilakukan  sebelum  semua  kelinci diberikan  perlakuan.  Pengambilan  dan  pengukuran darah  yang  kedua  kali  dilakukan  setelah  semua kelinci  di  induksi  dengan  KBrO 3 111  mg/kg  BB. Pengambilan dan pengukuran darah yang ketiga kali dilakukan  setelah pemberian obat dan sampel.

## 4. Pengukuran Kadar Asam Urat dalam Darah
Cuplikan darah  yang diperoleh (1  ml)   lalu disentrifuge selama 15 menit, akan diperoleh larutan supernatan  yang  kemudian  diukur  absorbsinya dengan menggunakan Humalyser.

## 5. Pengumpulan dan Analisis Data
Pengumpulan data berdasarkan hasil pengamatan  dilanjutkan  dengan  analisis  data  secara statistik  dengan  menggunakan  metode  Rancangan Acak  Lengkap  (RAL)  dan  analisis  lanjutan  dengan metode uji Beda Jarak Nyata Duncan (BNJD).

## E. Isolasi Senyawa
1. Kromatografi Lapis Tipis Lempeng yang telah diberi garis diaktifkan dalam  oven  dengan  suhu  100 ̊C  selama  15  menit. Ekstrak  kental  kemudian  dilarutkan  kedalam  vial dengan  pelarut,  dan  selanjutnya  ditotolkan  pada lempeng  yang  sudah  diaktifkan.  Dibuat  eluen  n- heksan:  etil  asetat  dimasukkan  kedalam  bejana setelah itu dijenuhkan dengan kertas saring kemudian dielusi.    Dilakukan  pengamatan  pada  penampakan noda dengan menggunakan UV 254 nm dan 366 nm serta pereaksi semprot H 2 SO 4 10%.

## 2. Kromatografi Kolom
Kolom kromatografi terlebih dahulu dibilas dengan  n  heksan-etil  asetat,  dimasukkan  sedikit kapas  kedalam  tabung  bagian  bawah  Kolom kromatografi  terlebih  dahulu  dibilas  dengan  n heksan-etil  asetat,  dimasukkan  sedikit  kapas  pada bagian bawah tabung kolom selanjutnya dipasangkan tegak  lurus  pada  statif.  Ke  dalam  tabung  kolom dimasukkan  sebanyak  30  gram  sedikit  demi  sedikit silica gel sambil diketuk-ketuk tabung kolom hingga memadat.
Ke dalam lumpang digerus sebanyak 5 gram ekstrak kental dan ditambahkan sedikit demi sedikit silica  gel  dan  pelarut,  sambil  di  gerus  hingga homogen.  Kemudian  dimasukkan  ke  dalam  tabung kolom dan di elusi dengan eluen n heksan : etil asetat dengan  berbagai  perbandingan.  Hasil  yang  keluar ditampung  dalam  vial  berupa  beberapa  fraksi. Diambil  masing  –  masing  fraksi  dilakukan kromatografi dengan menggunakan eluen n-heksan : etil asetat. Fraksi yang memiliki kesamaan pada KLT digabung menjadi satu fraksi.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Standarisasi  dalam  kefarmasian  tidak  lain adalah  serangkaian  parameter,  prosedur  dan  cara pengukuran  yang  hasilnya  merupakan  unsur-unsur terkait  paradigma  kefarmasian,  mutu  dalam  artian memenuhi  syarat  standar  (kimia,  biologi  dan farmasi),  termasuk  jaminan  batas-batas  stabilitas sebagai produk kefarmasian umumnya. Dengan kata lain,  pengertian  standarisasi  juga  berarti  proses menjamin  bahwa  produk  akhir  obat  (obat,  ekstrak atau  produk  ekstrak)  mempunyai  nilai  parameter tertentu yang konstan dan ditetapkan terlebih dahulu. Terdapat  dua  faktor  yang  mempengaruhi  mutu ekstrak yaitu faktor biologi dari bahan asal tumbuhan obat dan faktor kandungan kimia bahan obat tersebut (Depkes RI 2000).
Pada  penelitian  ini  dimaksudkan  untuk mengetahui pengaruh pemberian ekstrak etanol jahe merah  ( Zingiber  officinale var.  Amarum)  terhadap kadar asam urat kelinci ( Oryctolagus cuniculus ) dan isolasi  serta  identifikasi  senyawanya  dengan menggunakan metode kromatografi dan spektrofotometri.  Jahe  merah  diekstraksi  dengan menggunakan metode maserasi dengan pelarut etanol 70 %. Pelarut ini merupakan pelarut polar yang dapat mengekstraksi  lebih  banyak  kandungan  kimia  yang bersifat  polar.  Metode  maserasi  merupakan  metode ekstraksi  secara  dingin  dengan  membiarkan  pelarut atau cairan penyari masuk kedalam sel sampel secara difusi  dan  melarutkan  senyawa  dengan  jarak kepolaran  yang  sama  dengan  etanol  70%  dalam  air yang  kemudian  keluar  kembali  dari  sel  tumbuhan yang  dijadikan  sampel  dengan  membawa  senyawa kimia atau metabolic sekunder dari tanaman. Metode ini sangat sederhana namun butuh waktu yang lebih lama  untuk  proses  penyariannya  sehingga  dapat mengakibatkan  senyawa  yang  tersari  yang  bersifat kurang stabil akan terurai dan bahkan berubah bentuk menjadi  senyawa  lainnya.  Ekstrak  yang  diperoleh kemudian diliofilisasi untuk menghilangkan penyarinya untuk menghasilkan ekstrak yang kering atau kental.
Pada penelitian uji bioaktifitasnya dilakukan pengujian  kemampuan  dari  ekstrak  jahe  tersebut dalam  menurunkan  kadar  asam  urat  pada  kelinci. Penelitian ini menggunakan 5 kelompok hewan coba kelinci  dimana  kelompok  pertama  sebagai  kontrol negatif diberikan Na CMC, kelompok kedua sebagai kontrol  positif  diberikan  suspensi  allopurinol, kelompok  ketiga  sebagai  kelompok  perlakuan diberikan  suspensi  ekstrak  etanol  jahe  merah  0,2  % b/v, kelompok keempat sebagai kelompok perlakuan diberikan  suspensi  ekstrak  etanol  jahe  merah  0,4  % b/v,  dan  kelompok  kelima  sebagai  kelompok perlakuan  diberikan  suspensi  ekstrak  etanol  jahe merah  0,6  %  b/v.  Hewan  coba  kelinci  mula-mula
diukur  kadar  asam  urat  awal  sebelum  diberikan perlakuan,  dengan  tujuan  untuk  mengetahui  kadar asam  urat  kelinci  pada  keadaan  normal.  Kemudian hewan coba kelinci diinduksi dengan kalium bromat (KBrO 3 ) dengan dosis 111 mg/kg BB selama 72 jam untuk menaikkan kadar asam urat darah. Mekanisme kerja dari kalium  bromat yaitu dengan  menginduksi hiperurisemia  dan  gout.  Mekanisme  hiperurisemia dari  kalium  bromat  disebabkan  adanya  percepatan metabolisme  purin  dengan  meningkatnya  aktivitas xantin oksidase akibatnya kadar asam urat meningkat dalam  darah  (Watanabe  dkk,  2004).  Setelah  itu diberikan  perlakuan  dengan  pemberian  suspensi ekstrak  etanol  jahe  merah  dengan  konsentrasi berbagai variasi kelompok konsentrasi yang dibandingkan  dengan  kelompok  control  positif suspensi allopurinol 0,06 % b/v dan Na CMC 1 % b/v sebagai  kontrol.  Kadar  asam  urat  darah  kemudian diukur  dengan  humalizer  untuk  mengetahui  efek pemberian masing-masing perlakuan terhadap kadar asam urat darah.
Pada penelitian ini digunakan kontrol positif suspensi  allopurinol.  Senyawa  ini  dipilih  karena kemampuannya yang sangat efektif dalam menormalkan  kadar  asam  urat  dalam  daran  dan kemih  yang  meningkat  (Tan  dan  Rahardja,  2002). Allopurinol  merupakan  senyawa  alternatif  yang digunakan  untuk  meningkatkan  ekskresi  asam  urat melalui penghambatan enzim xantin oksidase dan 80 % diabsorbsi setelah pemberian oral. Seperti halnya asam  urat,  allopurinol  sendiri  dimetabolisme  oleh xantin oksidase menjadi allantoxantin,
mempertahankan  kapasitas  untuk  mencegah  xantin oksidase  dan  memiliki  durasi  efek  yang  cukup panjang sehingga terapinya cukup sekali dalam sehari (Katzung, 2001).
Berdasarkan  persen  penurunan  kadar  asam dari  data  pengamatan  terlihat  bahwa  kelompok kontrol  positif  yang  diberikan  suspensi    allopurinol memberikan efek penurunan kadar asam urat sebesar 54%.  Pada  kelompok  perlakuan  yang  diberi  ekstrak etanol jahe merah 0,2% mengalami penurunan kadar asam urat sebesar 26% dan pada kelompok perlakuan yang  diberi  ekstrak  etanol  jahe  merah  0,4% mengalami penurunan kadar asam urat sebesar 37%,
dimana  penurunan  kadar  asam  uratnya  masih  lebih kecil daripada ekstrak etanol jahe merah 0,6% yaitu sebesar  43%.  Sedangkan  kelompok  kontrol  negatif mengalami juga tetap menunjukkan penurunan kadar asam urat namun  sangat kecil  dibandingkan dengan semua jenis perlakuan yaitu sebesar 18%.
Data hasil pengamatan menunjukkan bahwa ekstrak  etanol  jahe  merah  0,6%  memberikan  efek menurunkan kadar asam urat darah kelinci yang lebih besar  daripada  ekstrak  etanol  jahe  merah  0,2%  dan ekstrak  etanol  jahe  merah  0,4%.  Ini  disebabkan karena  flavonoid  yang  ada  pada  jahe  merah menghambat  kerja  xantin  oksidase  sehingga  tidak terbentuk  asam  urat.  Efek  flavonoid  sebagai penghambatan enzim xantin oksidase tidak berlangsung  lama  karena  cepat  di  ekskresi  melalui urin.
Berdasarkan analisis statistik dengan menggunakan  metode  Rancangan  Acak  Lengkap (RAL) dan Analisis Sidik Ragam (ASR) memperlihatkan  bahwa  pemberian  ekstrak  etanol jahe  merah  memberikan  efek  yang  sangat  nyata (sangat  signifikan)  terhadap  penurunan  kadar  asam urat pada hewan coba kelinci yang dapat dilihat dari besarnya F hitung yang lebih besar daripada F tabel. Kemudian dilanjutkan dengan uji lanjutan menggunakan uji Beda Nyata Jarak Duncan (BNJD) diperoleh  bahwa  ekstrak  etanol  jahe  merah  dengan konsentrasi 0,6% b/v memberikan efek yang berbeda sangat  nyata  dengan  kontrol  negatif  dan  ekstrak etanol jahe merah dengan konsentrasi 0,2 %, hal ini berarti ekstrak etanol jahe merah dengan konsentrasi 0,6%  b/v  memberikan  efek  penurunan  yang  lebih baik daripada kontrol negatif dan ekstrak etanol jahe merah dengan konsentrasi 0,2%. Serta berbeda nyata dengan ekstrak etanol jahe merah dengan konsentrasi 0,4%  b/v,  hal  ini  berarti  efek  penurunan  ekstrak etanol jahe merah dengan konsentrasi 0,6% b/v lebih besar  dari  ekstrak  etanol  jahe  merah  dengan konsentrasi  0,4%  b/v  tetapi  berbeda  tidak  nyata dengan  kontrol  positif  (allopurinol),  hal  ini  berarti antara  kontrol  positif  dengan  ekstrak  etanol  jahe merah  dengan  konsentrasi  0,6  %  b/v  memberikan efek penurunan yang hampir sama.
Gambar 1. Penurunan Kadar Asam Urat dalam darah Kelinci
Telah dilaporkan bahwa ekstrak etanol daun singkong ( Manihot utilissima Pohl.) dengan konsentrasi 25% dapat menurunkan kadar asam urat dengan  persen  penurunan  sebesar  27  %  (Julianti, 2010).  Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  diperoleh dibandingkan  dengan  penelitian  sebelumnya  dapat disimpulkan  bahwa  ekstrak  etanol  jahe  merah ( Zingiber officinale Linn.Var.rubrum) dengan konsentrasi 0,6% mempunyai kemampuan lebih baik dibandingkan  dengan  ekstrak  etanol  daun  singkong ( Manihot utilissima Pohl.) dalam menurunkan kadar asam urat dengan persen penurunan sebesar 43%.
Penelitian  selanjutnya  dilakukan  untuk mengisolasi  senyawa  bioaktif  dari  rimpang  jahe merah  dan  mengidentifikasi  struktur  senyawanya dengan  menggunakan  spektrofotometer  UV  dan NMR. Sebelum proses pemisahan senyawa, dilakukan  terlebih  dahulu  orientasi  eluen  dengan menggunakan  pelarut  Metanol,  Heksan,  Etil  asetat, dan  Kloroform.  Orientasi  dilakukan  menggunakan kromatografi lapis tipis (KLT) dengan adsorben yang digunakan berupa Silika gel 40 F254. Hasil orientasi menunjukkan  eluen  Heksan  :  Etil  asetat  (4:3) memberikan  pemisahan  yang  baik,  kemudian dilakukan uji  identifikasi golongan terhadap ekstrak rimpang  Jahe  Merah.  Dari  hasil  identifikasi golongan,  ekstrak  Heksan  rimpang  Jahe  Merah positif mengandung Tanin dan Saponin.
Berdasarkan  profil  KLT,  heksan:etil  asetat (4:3)  adalah  merupakan  eluen  terbaik  dalam pemisahan  senyawa ini  kemudian  dilakukan
Fraksinasi  dengan    menggunakan  Kromatografi kolom konvensional, dengan fase diam silica gel 40 dan eluen yang berupa komposisi pelarut heksan:etil asetat  dengan  perbandingan  100:0,  90:10,  80:20, 70:30, dan 60:40. Hasil  fraksinasi ditampung dalam vial dengan masing-masing ukuran 10 ml
menghasilkan  berjumlah  30  vial  yang  selanjutnya disebut subfraksi.
Subfraksi  yang  telah  diperoleh  kemudian dipantau kembali dengan KLT dengan menggunakan eluen heksan:etil asetat 4:3. Subfraksi  1, 5, 10, 15, 20 dan 30 yang merupakan perwakilan dari 30 vial untuk dilakukan  KLT.  Hasil  KLT  menunjukkan  bahwa penampakkan noda terdapat pada subfraksi 1 dan 15 sehingga  memungkinkan  untuk  dilakukan  KLT kembali  pada  subfraksi  1  sampai  15.  Kromatografi diamati dibawah UV pada 254 nm dan 366 nm. Serta digunakan penampak bercak asam sulfat 10%. Hasil pemantauan dengan kromatografi lapis tipis menunjukkan  adanya  pemisahan  bercak-bercak dengan  jumlah  dan  nilai  Rf  yang  berbeda-beda  dari masing-masing  subfraksi.  Hal  ini  membuktikan bahwa proses pemisahan komponen kimia berdasarkan  tingkat  kepolarannya  sudah  terjadi. Subfraksi  yang  memiliki  kesamaan  profil  KLT disatukan yakni subfraksi 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 dan 15  sehingga  memungkinkan  untuk  dilakukan penggabungan fraksi, kemudian diuapkan. Selanjutnya, fraksi gabung diamati kembali menggunakan  KLT,  dengan  fase  gerak  heksan-etil asetat 4:3, fase diam silica gel 40 dan penampak noda menggunakan UV 254 nm, UV 366 nm, dan dengan penyemprotan  H 2 SO 4 .  Dari  hasil  pengamatan diperoleh 1 fraksi dengan nilai  Rf 0,60, dengan UV 254  nm  dan  UV  366  nm  memberikan  penampakan noda  berwarna  ungu,  dan  dengan  pereaksi  semprot H 2 SO 4 menghasilkan warna cokelat.
0 0,5 1 1,5 2 2,5 Kontrol (-) Ekstrak 0,2% Ekstrak 0,4% Ekstrak 0,6% Kontrol (+) Kad ar As am Ur at (mg /d L) Sebelum Induksi Setelah Induksi Setelah Perlakuan
Gambar 2. Hasil KLT (A) Fraksi ekstrak jahe merah dengan penampak noda H 2 SO 4 . (B) Isolat dengan penampak noda sinar UV 254 nm dan H 2 SO 4 pada lempeng KLT silica gel dielusi dengan hexan:EtoAc (4:3).
Data H-NMR (400 MHz) terhadap senyawa yang  diisolasi  menunjukkan  adanya  signal  δ H 0.87 (3H,  t,  J=6.8  Hz,  H-10),  1.25-1.40  (8H,  H-6,7,8,9), 2.50 (1H, d, J=8.8 Hz, H-4a), 2.54 (1H, d, J=3.2 Hz, H-4b), 2.74 (2H, d, J=7.1 Hz, H-2), 2.82 (2H, d, J=7.1 Hz, H-1), 3.86 (3H, s, OCH 3 ), 4.03 (1H, m, H-5), 6.65
(1H, dd, J=8, 1,9 Hz, H-6’), 6.67 (1H, d, 1,9 Hz, H- 2’), 6.81 (1H, d, J=8 Hz, H-5’). Hal ini menunjukkan adanya gugus metil primer pada δ H 0.87 yang ditandai dengan  multiplicity triplet dengan  8 proton metilen pada δ H 1.25-1.40 serta 2 proton metilen lainnya yang berada  pada  posisi  yang  lebih  bergeser  kearah downfield (deshielded) δ H 2.50 (1H, d, J=8.8 Hz, H- 4a),  2.54  (1H,  d,  J=3.2  Hz,  H-4b),  dan  4  proton lainnya  pada  δ H 2.74  (2H,  d,  J=7.1  Hz,  H-2),  2.82
(2H,  d,  J=7.1  Hz,  H-1).  Keberadaan  satu  gugus metoksi  ditandai  dengan  munculnya  signal  pada  δ H 3.86  (3H,  s,  -OCH 3 )  dengan  ciri  signal  intensitas tinggi  sebanyak  3  proton.  Proton teroksigenasi  juga terdeteksi  dengan  munculnya  sinyal  pada  δ H 4.03 (1H,  m,  H-5).  Gugus  aromatis  terlihat  pada  daerah yang  lebih  deshielded  dengan  geseran  kimia  yang lebih  besar  dari  6  ppm.  Pada  data  H-NMR menunjukkan  keberadaan  signal  tersebut  berupa aromatic dengan ABX system pada δ H 6.65 (1H, dd, J=8, 1,9 Hz, H-6’), 6.67 (1H, d, 1,9 Hz, H-2’), 6.81 (1H, d, J=8 Hz, H-5’). Berdasarkan data H-NMR ini dan  dengan  membandingkan  dengan  beberapa literature yang telah dilaporkan sebelumnya menunjukkan  senyawa  tersebut  adalah  6-gingerol (Hou  Wo,  2007).  Senyawa  ini  memang  banyak ditemukan dalam tanaman dari family Zingiberaceae termasuk  pada  tanaman  jahe  ( Zingiber  officinale ) atau  pada  lempuyang  wangi  ( Zingiber  aromaticum )
yang  merupakan  senyawa  bioaktif  dengan  berbagai aktifitas  biologi  yang  telah  dilaporkan  (Subehan, 2005).
Gambar 3. Struktur kimia 6-Gingerol

## IV. KESIMPULAN
Penelitian  ini  membuktikan  bahwa  ekstrak etanol jahe merah ( Zingiber officinale Var. Amarum) pada  konsentrasi  0,6  %  b/v  memiliki  kemampuan paling baik untuk menurunkan   kadar asam urat pada hewan  uji  kelinci  serta  6-gingerol  merupakan senyawa  bioaktif  yang  diisolasi  dari  ekstrak  etanol jahe merah.

## V. UCAPAN TERIMA KASIH
Terima kasih kepada Laboratorium Natural Products  Chemistry,  Institute  of  Natural  Medicine, University  of  Toyama  atas  dukungannya  dalam pengukuran  data  spektra  H-NMR  terhadap  isolat yang diperoleh.

## DAFTAR PUSTAKA
Vincent  M.F.,  Marie  S.,  Race  V.,  Timmerman  T., 2003.  Purine  Metabolism. Hospital  Saint- Luc University . pp.13-17.
Luk  J.  A.,  Simkin  A.  P.,  2005.  Epidemiology  of Hyperuricemia  and  Gout. The  American Journal  of  Managed  Care .  pp.  11,  S435- S442.
Sarawek  S.,  2007.  Xanthine  Oxidase  Inhibition  and Antioksidant Activity Of An Artichoke Leaf Extract (Cynara  scolymus  L.) And  its Compounds.  A  Dissertation  Presented  To The Graduate School Of The University Of Florida  In  Partial  Fulfillment  Of  The Requirements For The Degree Of Doctor Of Philosohy. University Of Florida . p. 19, 21, 25.
Heinrich  M.,  Subroto  A.,  2000.  Gempur  Penyakit dengan  Minyak  Herbal  Papua. Agromedia
Pustaka . Jakarta. pp. 5-8. Wijakusuma H., Sehat dengan Jahe. http://www.suarakarya.online/news.
Diakses 13 agustus 2006 . Sudemo  B.,  2004.  Tanaman  Obat  Populer,
Penggempur  Aneka  Penyakit. Agremedia Pustaka Pesona . pp. 1-12. Herlina  R.,  Murhananto,  Endah  J.,  Listyarini  S.P., Pribadi  S.T.,  2004.  Khasiat  Dan  Manfaat
A
B
Jahe  Merah  si  Rimpang  Ajaib. Agromedia Pustaka . pp. 1-12. Harmono, Andoko A., 2005. Budidaya dan Peluang Bisnis Jahe, Penerbit Agromedia Pustaka. Watanabe  S.,  Tajima  Y.,  Yamaguchi  T.,  Fukui  T., 2004.
Potassium Bromate-Induced Hyperuricemia  Stimulates  Acute  Kidney
Damage Oxidative Stress. Journal of Health Science. 647-653.
Tan  H.T.,  Rahardja  K.,  2002.  Obat-Obat  Penting, Khasiat, Penggunaan dan Efek-Efek
Sampingnya. ed.5. PT. Elex Media
Komputindo  Gramedia .  Jakarta..  Hal.  319, 321-322 Katzung B. G. 2001. Farmakologi Dasar dan Klinik. Ed. 8. Terjemahan oleh Bagian Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga. Salemba Medika . Jakarta. Hal 487 – 490 Julianti  T.B.  2010.,  Pengaruh  Pemberian  Ekstrak Etanol  dan  Infus  Daun  Singkong  ( Manihot utilissima Pohl.) terhadap Kadar Asam Urat Kelinci  ( Oryctolagus  cuniculus) .  Skripsi. Fakultas Farmasi  Universitas Hasanuddin . Makassar. pp. 34-36. HouWu,  2007.  Isolation  And  Characterization  Of Natural  Products  From  Ginger  And  A llium ursinum. A  Dissertation  Submited  To  The Graduate  School-New  Brunswick  Rutgers, The  State  University  Of  New  Jersey.  In Partial Fulfillment Of The Requirements For The  Degree  Of  Doctor  Of  Philosohy. Graduate Program In Food Science . P. 81. Subehan,  Usia  T.,  Kadota  S.,  Tezuka  Y.,  2005. Constituents  of Zingiber  aromaticum and Their  CYP3A4  and  CYP2D6  Inhibitory Activities. Chemical  and  Pharmaceutical Bulletin , 53(3). pp. 333-335.

## Jurnal Fitofarmaka Indonesia

## PETUNJUK BAGI PENULIS
1.  Naskah dapat merupakan hasil penelitian eksperimental, survei, atau telaah pustaka yang erat kaitannya dengan bidang kefarmasian, kesehatan, dan lingkungan hidup.
2.    Naskah berupa penelitian harus belum dan tidak pernah dipublikasikan.
3.    Naskah  berupa  ketikan  asli  ditulis  dalam  bahasa Indonesia  dengan  intisari  bahasa Inggris.
4.    Sistematika penulisan ditulis dengan urutan sebagai berikut :
a.  judul    diusahakan   cukup    informatif   dan   tidak   terlalu   panjang    dengan menggunakan huruf kapital times new roman font 14.
b.  nama  (nama-nama)  penulis  (tanpa  gelar)  dan  institusi/alamat  tempat  bekerja ditulis lengkap dan jelas.
c.  intisari dan kata kunci dalam bahasa Inggris. Intisari tidak boleh lebih dari 200 kata dan kata kunci ( keywords ) terdiri dari 1 – 5 kata.
d.  pendahuluan berisi  latar  belakang,  tujuan penelitian,  masalah  yang  mendasari penelitian dan tinjauan teori.
e.  metode  penelitian  menguraikan  bahan  dan  alat  yang  digunakan  dan  jalannya penelitian.
f.     hasil dan Pembahasan
g.    kesimpulan dan saran
h.    ucapan terima kasih (bila ada), dan
i.     daftar pustaka
5.    Cara  penulisan:  abstrak  ditulis  dengan  jarak  1  spasi  dan  naskah  2  spasi,  panjang naskah maksimal 15 halaman, dengan format atas dan kiri berjarak 4 cm, kanan dan bawah 3 cm dari tepi kertas ukuran kwarto/A4, dengan huruf times new roman font 12.
6.  Tabel  harus utuh dan  jelas  terbaca dengan judul tabel di  bagian atas dengan nomor urut angka arab.
7.  Gambar  serta  grafik  digabungkan  dalam  naskah  yang  utuh,  besarnya  maksimal  1 halaman dan minimal ¼ halaman dengan judul di bagian bawah dengan nomor urut angka arab.
8.  Pengutipan  pustaka  dalam  naskah  ditulis  dalam  sistem  nama-tahun.  Bila  pustaka mempunyai lebih dari dua penulis diikuti dkk., atau et al ., lalu tahun.
9.    Daftar pustaka disusun berdasarkan abjad.
10.  Apabila diperlukan ucapan terima kasih, supaya dicantumkan di bagian akhir naskah dengan menyebut secara lengkap: nama, gelar dan penerima ucapan atau lembaga.
11.  Naskah dikirim melalui alamat e-mail editorjfi@umi.ac.id.
12.  Naskah  yang  diterima  akan  dikoreksi,  jika  ada  perbaikan  akan  diberi  catatan  dan dikirimkan  kepada  penulis  untuk  dikoreksi  dan  dilakukan  pembetulan,  kemudian penulis mengirimkan kembali naskah yang telah dibetulkan melalui email editor.
13.  Penulis yang naskahnya dimuat akan menerima terbitan dua eksemplar.