## POTENTIAL EXTRACTS AND FRACTIONS OF Theonella swinhoei SPONGE EXPLORED FROM THE WATERS OF OLD MANADO ISLAND ON THE GROWTH OF THE BACTERIA OF Staphylococcus aureus and Escherichia coli

## POTENSI EKSTRAK DAN FRAKSI SPONS Theonella swinhoei YANG DIEKSPLORASI DARI PERAIRAN PULAU MANADO TUA TERHADAP PERTUMBUHAN BAKTERI Staphylococcus aureus DAN Escherichia coli
Diana G. Maniagasi 1)* , Defny S.Wewengkang 2) ,  Deby A, Mpila 3)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT MANADO, 95115 *dianagraseliamaniagasi@gmail.com

## ABSTRACT
Sponges  are  one  of  the  components  of  underwater  life,  sponges  are  also  one  of  the  marine biotas that make up coral reefs which have bioactive potential that has not been widely used. This study aims to determine the antibacterial activity of Theonella swinhoei sponge extract against  the  growth  of  Staphylococcus  aureus  and  Escherichia  coli  bacteria.  The  extraction method used is maceration using 95% ethanol as solvent. Testing of antibacterial activity using the Kirby-Bauer disc diffusion method. The results are shown from the antibacterial activity test  against  Staphylococcus  aureus  bacteria  resulted  in inhibition  zones  for  all extracts  and fractions, namely, ethanol extract with an inhibitory power of 9.17 mm, n-hexane fraction 8.89 mm, chloroform fraction 9.35 mm, and methanol fraction. 9.27 mm while in Escherichia coli bacteria produced inhibition zones for all extracts and fractions, namely, ethanol extract with an inhibitory power of 8.17 mm, n-hexane fraction 7.46 mm, chloroform fraction 8.86 mm, and methanol fraction 8.85mm. Thus, extracts and fractions from Theonella swinhoei samples had activity against Staphylococcus aureus and Escherichia coli bacteria with moderate inhibitory power.
Keywords: Sponge Theonella swinhoei , Antibacterial , Staphylococcus aureus , Escherichia coli

## ABSTRAK
Spons  merupakan  salah  satu  penyusun  komponen  kehidupan  bawah  laut,  spons  juga  adalah salah satu biota laut penyusun terumbu karang yang mempunyai potensi bioaktif yang belum banyak  dimanfaatkan.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas  antibakteri  dari ekstrak  spons Theonella  swinhoei terhadap  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus aureus dan Eschericia  coli .  Metode  ekstraksi  yang  digunakan  adalah  maserasi  dengan  menggunakan pelarut etanol 95%. Pengujian aktivitas antibakteri menggunakan metode disc diffusion Kirby- bauer .  Hasil  yang  ditunjukkan  dari  pengujian  aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri Staphylococcus aureus menghasilkan zona hambat pada semua ekstrak dan fraksi yaitu, ekstrak etanol dengan daya hambat 9,17 mm, fraksi n-heksan 8,89 mm, fraksi kloroform 9,35 mm, dan fraksi methanol 9,27 mm sedangkan pada bakteri Escherichia coli menghasilkan zona hambat pada semua ekstrak dan fraksi yaitu, ekstrak etanol dengan daya hambat 8,17 mm, fraksi n- heksan 7,46 mm, fraksi kloroform 8,86 mm, dan fraksi methanol 8,85 mm. Dengan demikian, ekstrak  dan  fraksi  dari  sampel Theonella  swinhoei memiliki  aktivitas  pada  bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli dengan daya hambat kategori yang sedang.
Kata kunci : Spons Theonella swinhoei , Antibakteri, Staphylococcus aureus , Escherichia coli

## PENDAHULUAN
Spons merupakan salah satu penyusun komponen kehidupan bawah laut, terutama pada terumbu karang. Spons juga merupakan  salah  satu  biota  laut  yang mempunyai potensi bioaktif sebagai antibakteri,  antikanker,  dan  antijamur namun  masih  belum  sering  dimanfaatkan (Sibarani  dkk,  2020). Theonella  swinhoei sendiri sering ditemukan di daerah tropis di mana Teluk Manado berada dalam kawasan tersebut (Lamatenggo dkk, 2018).
Senyawa  antibakteri  adalah  zat  yang dapat  mengganggu  pertumbuhan  bahkan dapat  mematikan  bakteri  dengan  cara merusak  sistem  metabolisme  mikroba tersebut. Salah satu organisme yang sangat berpotensi sebagai sumber obat antibakteri adalah spons (Liem dkk, 2019).
Menurut  Liem  dkk,  (2019)  spons mampu  memproduksi  beragam  metabolit sekunder  yang  memiliki  potensi  sebagai senyawa  bioaktif  antibakteri.  Hal  ini diketahui bahwa metabolit sekunder merupakan  pertahanan  kimia  alami  bagi biota  laut  tertentu  yang  dapat  melindungi makhluk  hidup  lainnya  bertolak  belakang dari  asumsi  potensi  sekunder  maka kemudian berkembanglah penelitian pemanfaatan  metabolit  sekuder  untuk kesehatan manusia dengan meneliti antibakteri dari spons.
Menanggapi permasalahan diatas, maka penelitian ini dilakukan untuk mengenai uji aktivitas  antibakteri  ekstrak  dan  fraksi spons Theonella swinhoei yang diambil dari perairan  Pulau  Manado  Tua  dengan bioindikator bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli .

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada bulan Oktober 2021 sampai Maret 2022 di Laboratorium Penelitian Lanjutan Program Studi  Farmasi,  Fakultas  Matematika  dan Ilmu Pengetahuan Alam

## Bentuk Penelitian
Penelitian ini berbentuk eksperimen laboratorium  yang  dilakukan  dengan  cara
menguji  komponen  yang  diekstrak  dari spons
Theonella swinhoei sebagai antibakteri pada Staphylococcus aureus dan Escherichia coli
Alat dan Bahan
Alat
Alat yang digunakan dalam penelitian ini yaitu Sarung tangan, gunting, pisau,  talenan, scuba  diving ,  kertas  label, tisu,  spidol  permanen, zipper  lock  bag , kamera underwater , botol plastik, cool box , spatula,  timbangan  analitik,  cawan  petri, gelas  ukur,  autoklaf,  batang  pengaduk, inkubator Inucell (N-Biotek), corong pisah, kertas saring, mikropipet, pipet tetes, lemari pendingin, Laminary  air  flow ,  rak  tabung reaksi, tabung reaksi, pinset, vortex , micro tubes , digital caliper , gelas kimia, alumunium  foil, magnetic  stirrer , rotary evaporator , mistar berskala
Bahan Bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  yaitu  Spons Theonella swinhoei , bakteri uji Staphylococcus aureus dan Escherichia coli , etanol 95%, akuades, metanol,  n-heksan,  kloroform,  nutrient agar,  kloramfenikol,  kloromform,  pepton natrium  klorida,  media  agar  B1  ( beef extract )

## Pengambilan Sampel
Sampel  Spons Theonella  swinhoei diambil  dari  perairan  pulau  Manado  Tua Sulawesi  Utara  dengan  menggunakan  alat bantu  (masker,  tabung  udara, snorkel dan fins ). Sampel difoto kemudian diambil, lalu dimasukkan  kedalam zipper  lock  bag dan disimpan  didalam cool box .  Kemudian dipotong-potong kecil-kecil, kemudian sampel  dimasukkan  kedalam  botol  plastik yang  berisi  etanol  95%  dan  sampel langsung dibawa ke Laboratorium
Penelitian Lanjutan Program Studi Farmasi Universitas Sam Ratulangi.

## Ekstraksi Sampel
Ekstrak  kasar  spons Theonella swinhoei yang  diperoleh  dimasukkan  ke dalam  erlenmeyer,  kemudian  dilarutkan dengan  metanol  80%  sebanyak  100  mL
(Lamatenggo  dkk,  2018).  Setelah  larut, dimasukkan  ke  dalam  corong  pisah  dan ditambahkan  pelarut  n-heksan  sebanyak 100  mL  setelah  itu  dikocok  dalam  corong pisah  sampai  homogen.  Dibiarkan  sampai terbentuk  lapisan  metanol  dan  lapisan  n- heksan, kemudian  masing-masing  lapisan ditampung  dalam  wadah  yang  berbeda. Lapisan  n-heksan  kemudian  dievaporasi menggunakan rotary  evaporator hingga kering, lalu ditimbang dan diperoleh fraksi n-heksan.  Selanjutnya,  lapisan  metanol ditambahkan  akuades  sebanyak  100  mL kemudian dipartisi dengan pelarut kloroform  dengan  perbandingan  1:1  v/v dalam  corong  pisah,  setelah  itu  dikocok kembali  sampai  homogen.  Dibiarkan sampai terbentuk dua lapisan yaitu lapisan metanol dan kloroform, kemudian masing- masing  lapisan  ditampung  dalam  wadah yang berbeda. Lapisan kloroform selanjutnya dievaporasi menggunakan rotary  evaporator hingga  kering  lalu ditimbang berat sampel dan diperoleh fraksi kloroform.  Lapisan  metanol  kemudian dievaporasi menggunakan rotary evaporator hingga  kering,  lalu  ditimbang dan diperoleh fraksi metanol. Ketiga fraksi yang  diperoleh  akan  digunakan  dalam pengujian antibakteri

## Sterilisasi Alat
Alat-alat  yang  digunakan  dalam penelitian aktivitas antibakteri ini disterilkan  terlebih  dahulu.  Alat-alat  gelas disterilkan  dengan  autoklaf  pada  suhu 121˚C  selama  15  menit,  pinset  dibakar dengan  pembakaran  di  atas  api  langsung dan media disterilkan di autoklaf pada suhu 121˚C selama 15 menit (Ortez, 2005).

## Pembuatan Media Cair B1 (Beef Extract)
Pepton  0,5  g,  ekstrak  daging  ( meat extract )  0,3  g,  natrium  klorida  0,3  g,  dan aquades  sebanyak  100  mL  diaduk  sampai rata kemudian dibuat homogen menggunakan magnetic stirrer lalu diautoklaf  pada  suhu  121  ˚C  selama  15 menit, ukur pH dengan menggunakan kertas pH. Dipipet 1 mL media cair B1, kemudian masukkan  dalam  tabung  reaksi  dan  tutup
dengan aluminium foil. Media cair B1 siap digunakan  sebagai  media  kultur  bakteri (Ortez, 2005).

## Kultur Bakteri
Media cair B1 yang sudah disiapkan sebelumnya,  ditambahkan  dengan  masing- masing  bakteri  yang  sudah  dikultur ( Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli )  dipipet  sebanyak  100  µL  kedalam tabung reaksi yang berbeda. Tutup dengan aluminium  foil  tiap  tabung  reaksi  dan dimasukkan  kedalam  inkubator  selama 1x24 jam pada suhu 37 ˚C (Ortez, 2005).

## Kontrol Positif dan Kontrol Negatif
Kontrol  positif  dalam  pengujian antibakteri ini menggunakan kloramfenikol paper disc . Kontrol negatif yang digunakan dalam  penelitian  ini  yaitu  menggunakan pelarut  metanol,  dengan  cara  membuat larutan  stok  metanol  dengan  mengambil sebanyak  200  µL  metanol  kemudian ditotolkan pada kertas cakram.

## Pembuatan Larutan Uji
Larutan uji dibuat dengan cara 2 mg ekstrak  kasar  spons Theonella  swinhoei kemudian dilarutkan dalam 400μL metanol sehingga menghasilkan konsentrasi larutan uji  sebesar  250  μg/50  μL.  Perlakuan  yang sama dilakukan pada fraksi n-heksan, fraksi kloroform dan fraksi metanol (Ortez, 2005).

## Pembuatan Media Agar B1
Pepton  0,5  g,  ekstrak  daging  ( meat extract )  0,3  g,  natrium  klorida  0,3  g,  agar 1,5 g dan aquades sebanyak 100 mL diaduk sampai  rata  kemudian  dibuat  homogen menggunakan magnetic stirrer lalu diautoklaf  pada  suhu  121  ˚C  selama  15 menit. Media agar B1 siap digunakan untuk uji aktivitas antibakteri (Ortez, 2005).

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
Metode  yang  digunakan  dalam penelitian ini yaitu metode difusi agar ( disc diffusion Kirby and Bauer ). Pada pengujian aktivitas  antibakteri  ini,  cakram  ( paper disc )  yang  digunakan  berukuran  6  mm dengan  daya  serap  50  µL  tiap  cakram. Sampel yang telah ditentukan
konsentrasinya  250  µg/50  µL  ditotolkan pada masing-masing cakram dengan menggunakan  mikropipet.  Untuk  media agar  B1  yang  sudah  disterilkan  pada  suhu 121  ˚C  selama  15  menit,  kemudian dinginkan  sampai  suhu  40  ˚C.  Tuangkan media  agar  B1  ke  cawan  petri,  Ambil sebanyak  100  µL  bakteri  yang telah  di kultur  dalam  tabung  reaksi,  dipipet  dan diinokulasi pada media agar B1 dan tunggu sampai  media  agar  B1  mengeras.  Masing- masing cawan petri diberi label dan nomor sampel  yang  sesuai.  Letakkan  kertas cakram  yang  telah  ditotolkan  sampel  uji spons Theonella  swinhoei dengan  pinset kedalam cawan petri lalu diinkubasi selama 1x24 jam pada suhu 37˚C (Ortez, 2005).

## Pengamatan  dan  Pengukuran  Diameter Zona Bening
Pengamatan  dilakukan  setelah  24 jam  masa  inkubasi.  Daerah  pada  sekitaran cakram  menunjukkan  kepekaan  bakteri terhadap  antibiotik  atau  bahan  antibakteri yang  digunakan  sebagai  bahan  uji  yang dinyatakan  dengan  diameter  zona  bening.
Diameter zona bening diukur menggunakkan mistar berskala dengan cara diukur  diameter  zona  bening  horizontal ditambahkan dengan diameter zona bening vertikal lalu dibagi dua. Diameter ≤ 5 mm memiliki kekuatan daya hambat lemah, 6 - 10  mm  daya  hambat  sedang,  11-20  mm daya hambat kuat dan ≥21 mm daya hambat sangat kuat (Susanto dkk, 2012).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Determinasi Sampel
Determinasi Spons Theonella swinhoei dilakukan di Laboratorium
Penelitian Lanjutan Farmasi, Program Studi Farmasi,  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam. Determinasi dilakukan untuk mengetahui sampel yang diambil dan dilakukan penelitian uji aktivitas antibakteri merupakan sampel yang sesuai yaitu spons Theonella swinhoei .

## Ekstrasi dan Fraksinasi
Sampel spons Theonella swinhoei yang diambil  dari  perairan  Pulau  Manado  Tua
dipotong  kecil  -  kecil,  setelah  itu dimasukkan  ke  dalam  wadah,  hal  ini bertujuan  untuk  memperluas  permukaan yang  berinteraksi  dengan  pelarut  sehingga lebih  banyak  senyawa  yang  dapat  ditarik oleh pelarut. Untuk mendapatkan penyairan yang  maksimal,  agar  senyawa  kimia didalam  sampel  dapat  terekstrak  secara menyeluruh  maka  dilakukan  remaserasi atau pengulangan dengan pergantian pelarut selama  tiga  kali  menggunakan  pelarut etanol.  Proses  ekstraksi  sampel  spons menggunakan larutan etanol 95%, pemilihan  pelarut  merupakan  salah  satu faktor  yang  menentukan  keberhasilan proses ekstraksi.
Maserasi  dilakukan  selama  3  x  24  jam dengan  pelarut  yang  sama  yaitu  dengan menggunakan  pelarut  etanol.  Pengulangan maserasi  atau  remaserasi  pada  sampel bertujuan untuk memaksimalkan penarikan kandungan kimia pada sampel oleh pelarut yang  digunakan.  Filtrat  hasil  maserasi didapat  setelah  itu  kemudian  dilakukan Teknik  evaporasi  atau  penguapan  dengan menggunakan rotary evaporator . Penggunaan rotary evaporator ini bertujuan untuk menguapkan pelarut dan memperoleh senyawa  hasil  ekstraksi  yang  diinginkan. Suhu  yang  digunakan  dalam  proses  ini adalah  37 o C  dengan  tujuan  agar  tidak merusak  senyawa  bioaktif  yang  terdapat pada filtrat apabila menggunakan suhu yang tinggi.
Fraksinasi  dilakukan  untuk  senyawa berdasarkan  perbedaan  kepolaran.  Proses fraksinasi  bertujuan  untuk  memisahkan kandungan kimia dari sampel sesuai dengan tingkat  kepolarannya.  Metode  fraksinasi yang  digunakan  yaitu  fraksinasi  cair-cair dimana  disesuaikan  dengan  perbedaan tingkat  kepolaran  dari  tiap-tiap  pelarut. Hasil  dari  fraksinasi  yang  telah  diperoleh dari  ketiga  pelarut  tersebut  akan  di evaporasi  atau  penguapan  lagi  sehingga menghasilkan ekstrak kasar masing-masing yang  akan  digunakan  dalam  pengujian aktivitas antibakteri.
Pengujian  Aktivitas  Antibakteri  Spons Theonella swinhoei
Pengujian  aktivitas  antibakteri  dari ekstrak  dan  fraksi  dari  spons Theonella swinhoei diuji terhadap bakteri
Staphylococcus  aureus yang  mewakili bakteri gram positif sedangkan Escherichia coli mewakili gram negatif dengan metode difusi  agar.  Metode  difusi  agar  dipilih karena  memiliki  kelebihan yang  dapat digunakan untuk senyawa non polar, cepat, mudah  dan  sederhana.  Metode  difusi  agar ini  dilakukan  dengan  cara  kertas  cakram yang berisi senyawa antimikroba, kemudian diletakkan  pada  media  padat  yang  telah diinokulasi mikroba. Senyawa antimikroba akan  berdifusi  kedalam  media  padat  yang diinokulasi  mikroba  dan  menghambat pertumbuhan mikroba yang ditandai dengan terbentuknya  daerah  jernih  disekeliling kertas  cakram.  Aktivitas  antibakteri  dari sampel dapat dilihat dari zona hambat yang akan terbentuk disekitar cakram (Brooks et al , 2005).
Penggunaan mikroba uji ini bertujuan untuk  mengetahui  bahwa  apakah  ekstrak kasar  dan  fraksi  dari  spons Theonella swinhoei ini  dapat  berasosiasi  memiliki aktivitas  sebagai  antimikroba  serta  apakah mempunyai  spektrum  luas  yaitu  dapat membunuh  bakteri  gram  positif  dan  gram negatif  atau  mempunyai  spektrum  sempit yaitu  hanya  dapat  membunuh  salah  satu bakteri  gram  positif  atau  gram  negatif (Valgas et al , 2007).
Kontrol  positif  yang  digunakan  pada penelitian  ini  adalah  kloramfenikol,  kontrol positif berfungsi sebagai kontrol zat uji, dengan membandingkan diameter daerah hambat yang terbentuk. Kloramfenikol merupakan antibiotik bakteriostatik berspektrum aerobik dan anaerobik, bakteri gram positif maupun negatif. Kloramfenikol aktif terhadap bakteri Escherichia  coli dan  bakteri Staphylococcus aureus (Noviana, 2004). Kloramfenikol bekerja dengan  cara  menghambat  sintesis  protein  sel bakteri  yang  berlangsung  di  ribosom  (Pelczar dan  Chan,  2008).  Sedangkan  kontrol  negatif pada  penelitian  ini  menggunakan  metanol. Kontrol negatif berfungsi untuk mengetahui ada  tidaknya  pengaruh  pelarut  terhadap pertumbuhan  mikroba  uji  yaitu  bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli sehingga  dapat  diketahui  bahwa  yang
mempunyai  aktivitas  antimikroba  adalah zat uji bukan pelarut (Dwijendra, 2014).
Tabel  1. Rendemen  ekstrak  dan  fraksi  Spons Theonella swinhoei
No  Sampel Berat (g) Rendemen (%) warna 1 Ekstrak etanol 63 5,13 Hijau kecoklatan 2 Fraksi  n- heksan 2 6,34 Hijau kecoklatan 3 Fraksi kloroform 16 50,79 Hijau tua 4 Fraksi metanol 1 3,17 coklat
Tabel  2. Hasil  pengukuran  diameter  zona bening  ekstrak  dan  fraksi  Spons Theonella swinhoei terhadap Staphylococcus aureus.
Tabel  3. Hasil  pengukuran  diameter  zona bening  ekstrak  dan  fraksi  Spons Theonella swinhoei terhadap Escherichia coli .

## Rata-rata diameter zona bening (mm)
Staphylococcus aureus
No  EtOH n- Hxn CHCl 3 MeOH C+ C- 1 8,26 8,78 8,71 8,04 22,79 - 2 9,34 9,03 8,49 7,79 - 3 9,92 8,88 10,85 11,99 - ∑ 27,52  26,69 28,05 27,82 - 𝑋̅ 9,17 8,89 9,35 9,27 -

## Rata-rata diameter zona bening (mm)

## Escherichia coli
No  EtOH n- Hxn CHCl 3 MeOH C+ C- 1 8,44 7,90 9,14 9,57 25,39 - 2 7,57 7,94 9,02 8,72 - 3 8,50 6,56 8,43 8,28 - ∑ 24,51  22,40 26,59 26,57 - 𝑋̅ 8,17 7,46 8,86 8,85 -
Hasil  pengukuran  diameter  dan rata-rata  diameter  pengamatan  daya hambat  antibakteri  dari  sampel  spons Theonella  swinhoei yang  dibagi  menjadi ekstrak  etanol,  fraksi  n-heksan,  fraksi kloroform  dan  fraksi  metanol  terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia  coli ditunjukan  pada  Tabel  2 dan  Tabel  3.  Pengamatan  yang  dilakukan pada pengujian ini yaitu setelah diinkubasi selama 1 x 24 jam masa inkubasi dengan 3 kali  pengulangan  untuk  masing-masing bakteri terhadap spons Theonella swinhoei . Pengulangan ini dilakukan untuk lebih  mengakuratkan  hasil  yang  akan diperoleh.  Ekstrak  dan  fraksi  dari  spons Theonella swinhoei pada pengujian aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus terdapat  zona hambat  disekitaran  kertas  cakram  sebesar 9,17  mm  pada  ekstrak  etanol;  8,89  mm pada fraksi n-heksan; 9,35 mm pada fraksi kloroform  dan  9,27  pada  fraksi  metanol. Hasil dari zona hambat setiap ekstrak dan fraksi  spons Theonella  swinhoei pada bakteri
Staphylococcus aureus
dikategorikan daya hambat sedang. Kemudian hasil pengujian aktivitas antibakteri  terhadap  bakteri Escherichia coli terdapat zona hambat disekitar kertas cakram  sebesar  8,17  mm  pada  ekstrak etanol; 7,46 mm pada fraksi n-heksan; 8,86 mm  pada  fraksi  kloroform  dan  8,85  mm pada  fraksi  metanol.  Hasil  dari  zona hambat  setiap  ekstrak  dan  fraksi  spons Theonella swinhoei pada bakteri Escherichia  coli dikategorikan  daya hambat sedang.
Hasil pengukuran zona hambat dari kontrol positif dan kontrol negatif. Kontrol positif  yaitu  kloramfenikol  memiliki aktivitas  antibakteri  yang  lebih  besar terhadap  bakteri  uji  dibandingkan  ekstrak dan  semua  fraksi  spons Theonella swinhoei .  Diameter  zona  bening  yang dihasil kloramfenikol pada bakteri Staphylococcus aureus yaitu sebesar 22,79 mm  dan  pada  bakteri Escherichia  coli yaitu  sebesar  25,39  mm.  sedangkan kontrol  negatif  yang  digunakan  dalam pengujian  ini  yaitu  metanol, kontrol
negatif  digunakan  untuk  mengetahui bahwa  aktivitas  yang  ditunjukan  oleh ekstrak  atau  fraksi  ialah  zat  yang terkandung  dalam  sampel  bukan  berasal dari pelarut yang digunakan, sesuai dengan hasil  yang  diperoleh  metanol  sebagai kontrol negatif tidak menunjukkan adanya aktivitas  antibakteri  baik  terhadap  bakteri Staphylocuccus  aureus maupun  bakteri Escherichia  coli .  Hal  ini  membuktikan bahwa  senyawa-senyawa  yang  terdapat pada  spons Theonella  swinhoe i  yang terdapat  aktivitas  antibakteri  dan  bukan dari  pelarutnya.  Jadi  pada  penelitian  ini ekstrak  dan  fraksi  yang  diperoleh  dari ekstrak  etanol,  fraksi  n-heksan,  fraksi kloroform  dan  fraksi  metanol  pada pengujian  bakteri Staphylococcus  aureus (gram positif) memiliki nilai hambat yaitu pada sekitar 8-9 mm dan untuk pengujian terhadap  bakteri Escherichia  coli (gram negatif) yaitu pada sekitar 7-8 mm. Semua ekstrak  dan  fraksi  yang  digunakan termasuk  dalam  satu  kategori  yang  sama yaitu  kategori  sedang.  Hal  ini  terjadi karena  adanya  perbedaan  sensitivitas bakteri terhadap antimikroba yang dipengaruhi  oleh  dinding  sel  bakteri. Bakteri  gram  positif  cenderung  lebih sensitif  terhadap  antimikroba,  karena struktur  dinding  sel  bakteri  gram  positif lebih  sederhana  dibandingkan  struktur dinding sel bakteri gram negatif sehingga memudahkan  senyawa  antimikroba  untuk masuk  kedalam  sel  bakteri  gram  positif. Adanya perbedaan struktur-struktur dinding  sel  diduga  dapat  menentukan penetrasi,  ikatan  dan  aktivitas  senyawa antimikroba (Brooks et al, 2005).

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat disimpulkan  bahwa  pengujian  aktivitas antibakteri spons Theonella swinhoei yang diperoleh dari perairan Pulau Manado Tua, pada bakteri Staphylococcus aureus yaitu, ekstrak  etanol  dengan  daya  hambat  9,17 mm,  fraksi  n-heksan  8,89  mm,  fraksi kloroform  9,35  mm,  dan  fraksi  metanol 9,27 mm sedangkan pada bakteri Escherichia  coli menghasilkan  zona
hambat  pada  semua  ekstrak  dan  fraksi yaitu, ekstrak etanol  dengan  daya  hambat 8,17 mm, fraksi n-heksan 7,46 mm, fraksi kloroform  8,86  mm,  dan  fraksi  metanol 8,85  mm.  Dengan  demikian,  ekstrak  dan fraksi  dari  sampel  spons Theonella swinhoei memiliki  aktivitas  pada  bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli dengan  daya  hambat  kategori  yang sedang.

## SARAN
1. Perlu  dilakukannya  optimalisasi  pada proses  ekstraksi  dari  spons Theonella swinhoei untuk  mendapatkan  hasil ekstrak yang diharapkan.
2. Perlu  dilakukan  pengujian  lain  untuk mengetahui  aktivitas  biologi  seperti  uji antioksidan dari spons Theonella swinhoei .

## DAFTAR PUSTAKA
Brooks,  G.  L.,  J.S.  Butel  &  S.A  Morse.  2005.
Mikrobiologi  Kedokteran  Ed .  23, Translation of Medical Microbiology ,
23th  Ed .  Alih  Bahasa  oleh  Hartanto, Salemba Medika, Jakarta.
Dwijendra,  I.  M.  2014. Aktivitas  Antimikroba dan  Karakterisasi  Senyawa  Fraksi Spos  Lamellodysidea  herbacea  yang Diperoleh dari Teluk Manado
[skripsi].  Program  Studi  Farmasi FMIPA  Universitas  Sam  Ratulangi,
Manado.
Lamatenggo, A.D., D.S Wewengkang., dan H.  E.  I.  Simbala.  2018.  Aktivitas Antimikroba  Spons Thenonella Swinhoei Pada  Mikroba  Patogen
Manusia. Jurnal  Ilmiah  Farmasi Pharmacon . 7(4): 2302-2493. Liem,  J.W.,  R.  A.  Bara.,  D.A.  Sumilat.,  V. Warouw.,  F.  Losung.,  dan  A. Wantasen. 2019. Bioprospeksi
Antibakteri  Beberapa  Jenis  Spons Dari  Perairan  Pangalisang  Manado. Jurnal  Pesisir  dan  Laut  Tropis. 1(1): 7-12.
Noviana, H. 2004. Isolasi Salmonella typhi dari Penderita  Demam  Tifoid,  Jurnal Kedokteran Yarsi. 12: 54-60. Ortez,  J.  H.  2005. Disk  Diffusion  testing  in manual of an timicrobial susceptibility testing . Marie B. Coyle (Coord.  Ed).  American  society  for Microbiology.
Pelczar  MJ,  Chan  ECS.  2008. Dasar-Dasar Mikrobiologi  2 .  Hadioetomo  et  al., penerjemah.  Jakarta  (ID):  UI-Press.
Terjemahan dari: Elements of
Microbiology . hlm: 452-539. Sibarani, S.I.M., A. Yudistira., dan D.A. Mpila. 2020. UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN SPONS Stylissa sp. DENGAN MENGGUNAKAN METODE DPPH ( 1,1-difenil-2- pikrilhidrazil ). Jurnal  Pharmacon . 3(9) :420.
Susanto, D., Sudrajat dan R, Ruga. 2012. Studi Kandungan  Bahan  Aktif  Tumbuhan Meranti  Merah  (Shorea  leprosula Miq)  Sebagai  Sumber  Senyawa Antibakteri. Mulawarmnan Scientifie . 11(2) : 181-190.
Valgas,  C.,  Souza,  S.  M.  D.,  Smania, E. F. A. and Artu, S. 2007. Screening Methods to Determine Antibacterial Activity of Natural Products. Brazilian Journal of Microbiology . 38, p. 369- 380.