Hubungan Ekspresi Glucose Transporter 1 (Glut-1) di Jaringan Plasenta dengan Kejadian Pertumbuhan Janin Terhambat pada Mencit Bunting yang Diinfeksi Plasmodium berghei
Nur Fahma Pradiptasari*, Loeki Enggar Fitri**, Teguh Wahju Sardjono**

## ABSTRAK
Glukosa merupakan substrat utama untuk perkembangan plasenta dan  janin yang ditranspor ke plasenta dengan cara difusi terfasilitasi tidak terikat natrium. Glucose Transporter 1 (GLUT-1) merupakan isoform utama yang  mentranspor  glukosa  melalui  plasenta.  Malaria  pada  kehamilan  memungkinkan  terjadinya  hipoksia plasenta  yang  dapat  mengganggu  transpor  sejumlah  nutrisi  bagi  janin  termasuk  glukosa.  Ekspresi  GLUT-1 diduga  menurun  pada  kejadian  malaria  pada  kehamilan.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengamati  ekspresi GLUT-1 pada jaringan plasenta mencit serta hubungannya dengan kejadian berat badan janin rendah. Penelitian ini  menggunakan  17  ekor  mencit  bunting  galur  BALB/c  yang  terdiri  atas  9  ekor  yang  diinfeksi Plasmodium berghei pada hari ke-9 setelah dikawinkan sebagai kelompok perlakuan dan 8 ekor yang tidak diinfeksi sebagai kelompok  kontrol.  Pada  hari  ke-18  pasca  kawin  mencit  dikorbankan  untuk  mengisolasi  plasenta  dan  janin. Hambatan pertumbuhan janin mencit diukur dengan menimbang berat badan janin mencit menggunakan neraca analitik.  Ekspresi  GLUT-1  di  jaringan  plasenta  diamati  secara  mikroskopis  menggunakan  metode Imunohistokimia.  Rata-rata  berat  badan  janin  pada  kelompok  perlakuan  (0.63±0.12  g)  lebih  rendah  daripada kelompok kontrol (0.94±0. Glukosa merupakan substrat utama untuk perkembangan plasenta dan  janin yang ditranspor  ke  plasenta  dengan  cara  difusi  terfasilitasi  tidak  terikat  natrium. Glucose  Transporter  1 (GLUT-1) merupakan isoform utama yang mentranspor glukosa melalui plasenta. Malaria pada kehamilan memungkinkan terjadinya  hipoksia  plasenta  yang  dapat  mengganggu  transpor  sejumlah  nutrisi  bagi  janin  termasuk  glukosa. Ekspresi  GLUT-1  diduga  menurun  pada  kejadian  malaria  pada  kehamilan.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengamati ekspresi GLUT-1 pada jaringan plasenta mencit serta hubungannya dengan kejadian berat badan janin  rendah.  Penelitian  ini  menggunakan  17  ekor  mencit  bunting  galur  BALB/c  yang  terdiri  atas  9  ekor  yang diinfeksi Plasmodium berghei pada hari ke-9 setelah dikawinkan sebagai kelompok perlakuan dan 8 ekor yang tidak  diinfeksi  sebagai  kelompok  kontrol.  Pada  hari  ke-18  pasca kawin  mencit  dikorbankan  untuk  mengisolasi plasenta dan janin. Hambatan pertumbuhan janin mencit diukur dengan menimbang berat badan janin mencit menggunakan neraca analitik. Ekspresi GLUT-1 di jaringan plasenta diamati secara mikroskopis menggunakan metode  Imunohistokimia.  Rata-rata  berat  badan  janin  pada  kelompok  perlakuan  (0.63±0.12  g)  lebih  rendah daripada kelompok kontrol (0.94±0.19 g) dengan perbedaan yang bermakna (p = 0,002). Ekspresi GLUT-1 pada jaringan  plasenta  kelompok  perlakuan  lebih  rendah  secara  bermakna  dibandingkan  kelompok  kontrol  (p  = 0,000).  Hubungan  antara  penurunan  ekspresi  GLUT-1  dengan  penurunan  berat  badan  janin  menunjukkan hubungan yang tidak bermakna (r = 0,284; p = 0,269). Infeksi Plasmodium berghei mengakibatkan penurunan berat  badan  janin  serta  penurunan  ekspresi  GLUT-1  namun  penurunan  berat  badan  janin  tidak  disebabkan secara  langsung  oleh  penurunan  ekspresi  GLUT-1.  Hal  ini  menjelaskan  bahwa  hambatan  pertumbuhan  janin pada  infeksi  malaria  kehamilan  disebabkan  oleh  banyak  faktor  penyebab19  g)  dengan  perbedaan  yang bermakna  (p  =  0,002).  Ekspresi  GLUT-1  pada  jaringan  plasenta  kelompok  perlakuan  lebih  rendah  secara bermakna dibandingkan  kelompok kontrol (p = 0,000). Hubungan antara penurunan ekspresi GLUT-1 dengan penurunan  berat  badan  janin  menunjukkan  hubungan  yang  tidak  bermakna  (r  =  0,284;  p  =  0,269).  Infeksi Plasmodium  berghei mengakibatkan  penurunan  berat  badan  janin  serta  penurunan  ekspresi  GLUT-1  namun penurunan  berat  badan  janin  tidak  disebabkan  secara  langsung  oleh  penurunan  ekspresi  GLUT-1.  Hal  ini menjelaskan bahwa hambatan pertumbuhan janin pada infeksi malaria kehamilan disebabkan oleh banyak faktor penyebab.
Kata kunci: GLUT-1, Plasmodium berghei , Pertumbuhan janin.
Expression of Placental  Glucose Transporter 1 (GLUT-1) and Its Correlation with Low Fetal Weight Incidence in Plasmodium berghei Infected Mice

## ABSTRACT
Glucose is the primary substrate for fetal and placental development. It is transferred across the placenta by sodium-independent  facilitated  diffusion.  Glucose  transporter  1  (GLUT-1)  is  known  as  the  main  isoform  of glucose transporter through placenta. Pregnancy-associated malaria can leads to placental hypoxia which cause interference in transportation of many nutrients for the fetus such as glucose. It was assumed that expression of placental GLUT-1 was down regulated during pregnancy-associated malaria.  This study aimed to observe the expression of GLUT - 1 in mouse placenta tissue and its relationship with the incidence of low fetal weight. This experimental study used 17 pregnant BALB/c strain mice, consist of 9 mice which were infected by Plasmodium berghei on the 9 th day post mating (treatment group) and 8 mice were not infected (control group). On the day of 18 th post mating the mice were sacrificed, then their fetus and placenta were isolated. The fetal growth restriction was  measured  by  analytical  scale.  Expression  of  GLUT-1  in  the  placenta  was  examined  microscopically  by immunohistochemistry  method.  The  mean  of  mice  fetal  weight  in  treatment  group  (0.63±0.12  g)  was  lower compared  to  control  group  (0.94±0.19  g)  and  significantly  different  (p  =  0.002).  Expression  of  GLUT-1  in treatment  group  showed  lower  expression  compared  to  control  group  significantly  (p  =  0.000).  There  was  no
significant correlation between the lower expression of GLUT-1 and the lower fetal weight of mice (r = 0.284, p = 0.269). It can be concluded that infection of P. berghei in pregnant mice induce the fetal low birth weight (LBW) and  downregulates  the  expression  of  placental  GLUT-1,  but  the  fetal  LBW  was  not  directly  caused  by  the decreasion of GLUT-1 expression. It was further indicated that intrauterine growth restriction during pregnancy associated malaria infection had multifactorial causes.
Keywords: Intrauterine growth, GLUT-1, Plasmodium berghei .
*   Program Studi Pendidikan Dokter, Fakultas Kedokteran, Universitas Brawijaya ** Lab Parasitologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Brawijaya

## PENDAHULUAN
Malaria merupakan salah satu masalah kesehatan  masyarakat  di  Indonesia. Penyakit  ini  dapat  menyebabkan  kematian, terutama  pada  kelompok  risiko  tinggi  yaitu bayi, anak balita, dan ibu hamil. Malaria juga berdampak  pada  penurunan  produktivitas kerja  akibat  anemia.  Saat  ini  malaria merupakan  penyakit  endemis  di  sebagian besar  wilayah  Indonesia,  namun  lebih banyak  terjadi  di  daerah  pedesaan  dan terpencil. 1
Dari  85,3  juta  kehamilan  di  area transmisi Plasmodium  falciparum ,  54,7  juta kehamilan  terjadi  di  area  dengan  transmisi stabil dan 30,6 juta di area dengan transmisi tidak  stabil  (insidensi  klinis  <  1  per  10.000 populasi  per  tahun). 2 Sekitar 50  juta  wanita mempunyai  risiko  terpapar  malaria  selama kehamilan  setiap  tahunnya.  Malaria  pada kehamilan  dapat  berdampak  pada  ibu  dan khususnya  bagi  morbiditas  bayi  dan  janin yang  menyebabkan  kematian  bayi  sekitar 75.000-200.000  setiap  tahunnya. 3,4 Di daerah  endemis  malaria,  sekitar  19  %  bayi mengalami berat badan lahir rendah (BBLR) yang disebabkan oleh malaria dan sebanyak 6  %  bayi  meninggal  dunia  karena mengalami  BBLR  akibat  malaria  pada kehamilan. 5 Wanita  hamil  (terutama  pada kehamilan pertama dan kedua) lebih rentan terserang  malaria  dibandingkan  dengan wanita  yang  tidak  hamil.  Kerentanan  ini berkaitan  dengan  perubahan  imunitas maternal  selama  masa  kehamilan  yang bertujuan  untuk  mencegah  rejeksi  dari janin. 6,7 . Studi terdahulu menyatakan bahwa antibodi  yang  melawan  eritrosit  terinfeksi  di plasenta  penting  sebagai  perlindungan  dan biasanya  antibodi  ini  tidak  terdapat  pada saat kehamilan pertama. 8
Pada  daerah  dengan  transmisi  rendah, wanita  hamil  mudah  mengalami  gejala simtomatis dan penyakit maternal yang berat akibat  malaria;  dan  pada  bayinya  akan terjadi  keguguran,  lahir  mati,  malaria kongenital, dan berat badan lahir rendah. 9,10
Di daerah transmisi tinggi, dengan penduduk yang  sudah  memiliki  kekebalan,  gejala malaria pada umumnya bersifat asimtomatis tetapi  dapat  mengakibatkan anemia  berat,
infeksi  plasenta  (pertumbuhan  janin terhambat,  kelahiran  prematur,  kematian perinatal,  abortus,  malaria  kongenital) hingga  kematian  ibu  dan  bayi. 1 Berbagai variasi  hipotesis  telah  berkembang  untuk menjelaskan  patofisiologi  malaria  pada kehamilan atau malaria plasenta. Salah satu hipotesis  yang  berkembang  bahwa  proses infeksi  Plasmodium  yang  terjadi  pada kehamilan disebabkan oleh dua faktor utama yaitu  supresi  sistem  imun  pada  kehamilan dan  sekuestrasi  eritrosit  terinfeksi  pada plasenta. 11 Sekuestrasi  merupakan  faktor utama  penyebab  berbagai  komplikasi  pada malaria,  salah  satunya  bayi  dengan  berat badan  lahir  rendah  (BBLR).  Berkumpulnya parasit pada vaskuler plasenta menyebabkan  timbulnya  reaksi  inflamasi yang  ditandai  dengan  infiltrasi  monosit  ke dalam  ruang  intervilus  plasenta,  sekresi sitokin,  dan  kemokin.  Selain  itu,  disregulasi faktor  angiogenesis  juga  berperan  dalam perkembangan BBLR pada malaria plasenta. 12 Inflamasi  dapat  menyebabkan anemia  maternal,  kelahiran  bayi  prematur, dan pertumbuhan janin terhambat.
Sekuestrasi  eritrosit  terinfeksi  dapat menstimulasi sel beta pankreas menghasilkan insulin sehingga menyebabkan hiperinsulinemia dan hipoglikemia. 11
Malaria  yang  terjadi  pada  kehamilan memungkinkan terjadinya gangguan transpor  nutrisi  bagi  janin,  salah  satunya glukosa.  Glukosa  adalah  zat  utama  yang digunakan  untuk  perkembangan  janin  dan plasenta. 13 Pada  umumnya,  proses  ini difasilitasi  oleh  suatu  protein  pengangkut glukosa  ( glucose  transporter ),  yaitu glucose transporter 1  (GLUT-1)  yang  merupakan protein pengangkut glukosa utama di dalam plasenta. 14
Di dalam plasenta, telah terbukti bahwa GLUT-1  berperan  dalam uptake glukosa yang berasal dari aliran darah maternal [15]. Sebagian  besar  protein  GLUT-1  dapat terdeteksi di membran plasma trofoblas dan juga  di  dalam  populasi  sel  plasenta  lainnya pada  semua  tahapan  kehamilan. 16,17 Ekspresi  GLUT-1  yang  menurun  pada infeksi  malaria  kehamilan  diduga  dapat mempengaruhi terjadinya pertumbuhan janin
terhambat.
8 Dalam penelitian ini, akan diteliti bagaimana  ekspresi  GLUT-1  pada  jaringan plasenta mencit serta hubungannya dengan kejadian berat badan janin rendah.

## BAHAN DAN METODE
Desain Penelitian Penelitian  yang  akan  dilakukan merupakan penelitian eksperimental laboratorik  dengan  desain post  test  only control  group  design yaitu  dengan membandingkan  hasil  yang  didapat  pada kelompok  perlakuan  dan  kelompok  kontrol. Secara  umum,  penelitian  dibagi  menjadi  2 tahapan  yaitu:  (1).  Pembuntingan  mencit dan  inokulasi Plasmodium  berghei galur ANKA  untuk  mencit  bunting  perlakuan,  (2). Pemeriksaan  derajat  parasitemia  dan pembedahan  pada  hari  ke  18  pasca  kawin serta pengambilan sampel jaringan plasenta untuk  pemeriksaan  ekspresi  GLUT-1. Hewan coba dibagi dalam 2 kelompok yaitu 1  kelompok  kontrol  yang  merupakan kelompok  mencit  bunting  sehat,  tanpa diinokulasi Plasmodium  berghei dan  1 kelompok  perlakuan  yang  diinokulasi dengan P.  berghei .  Hewan  coba  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah mencit galur BALB/c primigravida.

## Pembuntingan Mencit
Pembuntingan  mencit  dilakukan  secara simultan  setelah  dipersiapkan  sinkronisasi oestrus dengan  memanfaatkan  fenomena biologis  yaitu Lee  Boot effect , Pheromone effect, dan W hitten effect. 18 Caranya adalah mencit  betina  dikandangkan  sesama  betina selama waktu aklimatisasi 7-10 hari. Dengan cara  ini  mencit  akan  berada  dalam  kondisi un-oestrus ( Lee  Boot effect ).  Mencit  betina yang  telah  dipisahkan  tersebut  akan memulai  siklus  birahinya  bila  dipapar dengan  bau-bauan  yang  berasal  dari pejantan, misalnya urin ( Pheromone effect ).
Dengan  cara  ini  mencit  betina  akan mengalami  birahi  pada malam  ke  3 setelah pemaparan  ( Whitten  effect ).  Mencit  dikawin selama 1 malam dengan rasio 1:1.
Inokulasi P. berghei Galur ANKA
Inokulasi P.  berghei galur  ANKA  pada mencit  dilakukan  dengan  menginjeksikan parasit sebesar 1x10 6 /ml secara
intraperitoneal pada hari ke sembilan setelah perkawinan mencit (organogenesis).

## Pemeriksaan Derajat Parasitemia
Derajat  parasitemia  dihitung  dari sediaan  hapusan  darah  tipis  yang  diambil dari  ujung  ekor  dan  kemudian  dipulas dengan  pewarna  Giemsa.  Jumlah  parasit dihitung per 1000 eritrosit dengan mikroskop pembesaran  1000x.  Untuk  penghitungan persentase
parasitemia dihitung berdasarkan  jumlah  eritrosit  yang  terinfeksi malaria dalam 1000 eritrosit pada 20 lapang pandang mikroskop.

## Pembedahan Mencit
Pembedahan dilakukan pada hari ke-18 pasca  kawin.  Mencit  dibius  dengan kloroform  yang  telah  dijenuhkan  di  dalam toples  besar.  Pembedahan  dilakukan  untuk mengambil plasenta dan fetus.

## Isolasi Darah dan Jaringan Plasenta
Setelah  hari  ke-18  mencit  dikorbankan untuk  diambil  darah  dan  organ  plasenta untuk  meneliti  variabel.  Pembedahan dilakukan  dengan  anestesi  per  inhalasi menggunakan kloroform. Mencit selanjutnya diletakkan  di  atas  papan  untuk  dibedah. Pembedahan  dilakukan  dengan  membuka kulit  abdomen  dan  rongga  abdomen.  Janin dan  plasenta  disolasi  kemudian  ditimbang beratnya.  Plasenta  disimpan  dalam  botol organ  dengan  formalin  10  %.  Mencit  yang sudah  dikorbankan  dan  janin  selanjutnya dikuburkan di dalam tanah.

## Pembuatan Preparat Jaringan Plasenta
Pembuatan preparat histopatologi dilakukan  dengan  metode  paraffin  di Laboratorium  Patologi  RS.  Dr.  Soetomo
Surabaya.
Pemeriksaan Ekspresi GLUT-1 di Jaringan Plasenta Pemeriksaan ekspresi GLUT-1 dilakukan  dengan  metode  imunohistokimia di Laboratorium Biomedik Fakultas Kedokteran  Universitas  Brawijaya.  Untuk pengecatan  imunohistokimia  pada  slide dilakukan  deparafinisasi  dengan  xylol  2x10 menit,  ethanol  absolute  1x5  menit,  ethanol
90  %  1x5  menit,  ethanol  80  %  1x5  menit, ethanol 70 % 1x5 menit, aquades steril 3x5 menit. Slide selanjutnya dicuci dengan PBS steril  3x5  menit,  dikeringkan  dan  ditetesi dengan  H 2 O 2 3  %  dalam  methanol  dan diinkubasi  15–20  menit,  kemudian  dicuci dengan  PBS  steril  3x5  menit.  Selanjutnya, dilakukan antigen  retrieval (AR)  pada  slide menggunakan heat induced epitope retrieval (HIER)  dengan  pemanasan  95 o C  dalam water  bath selama  20  menit  dalam buffer citrate pH  0,6.  Slide  didinginkan  secara perlahan. Blocking protein  yang  tidak spesifik  dilakukan  dengan  meneteskan triton-x100  0.25  %  dalam blocking  buffer BSA  selama  1  jam  suhu  ruang  dan  dicuci dengan  PBS  steril  3x5  menit.  Selanjutnya, slide  ditetesi  dengan  antibodi  primer (antibodi  primer:  FBS  5  %  =  1:100)  dalam blocking  buffer BSA  dan  diinkubasi  satu malam dalam suhu 4 o C. Keesokan harinya slide  dicuci  dengan  PBS  steril  3x5  menit. Diinkubasi  dengan  antibodi  sekunder anti- IgG rabbit anti-mouse selama 60 menit suhu ruang,  dan  dicuci  dengan  PBS  steril  3x5 menit.  Setelah  itu  slide  ditetesi  dengan streptavidin horeseradish
peroxidase
(SAHRP) (SAHRP dalam PBS steril 1:500), diinkubasi  40  menit  suhu  ruang,  dicuci dengan  PBS  steril  3x5  menit,  dan  dicuci dengan  aquades  steril  3x5  menit  kemudian ditambahkan  kromogen diaminobenzidine (DAB)  (1:50),  diinkubasi  30  menit  suhu ruang,  dan  dicuci  PBS  steril  3x5  menit. Terakhir  slide  ditetesi  dengan  hematoksilin mayer  sebagai  larutan counterstain , diinkubasi  5–10  menit  suhu  ruang,  dan dicuci dengan tap water 3x5 menit.

## Pengamatan Imunohistokimia
Ekspresi  GLUT-1 dideteksi  dari  warna coklat  yang  mengitari  seluruh  permukaan membran sel trofoblas yang terakumulasi di jaringan plasenta. Preparat jaringan plasenta diamati  di  bawah  mikroskop  perbesaran 1000x  dengan  minyak  imersi.  Pengukuran ekspresi  GLUT-1  diamati  pada  20  lapang pandang  mikroskop,  karena  diasumsikan terdapat  1000  sel  yang  terdapat  dalam  20 lapang pandang, kemudian diambil rata-rata dari  total  ekspresi  GLUT-1  untuk  tiap-tiap sampel. 19

## Pemeriksaan Berat Badan Janin Mencit
Gangguan  pertumbuhan  janin  diukur melalui  berat  badan  janin  menggunakan timbangan  analitik.  Penimbangan  berat badan  janin  mencit  dilakukan  setelah parturisi  yaitu  pada  hari  ke-18  setelah perkawinan.  Janin  dipisahkan  dengan plasenta  dan  dibersihkan  selaput  lendirnya, selanjutnya  ditimbang  satu  persatu  dengan menggunakan  timbangan  analitik  dengan satuan ukuran gram.

## Analisis Data
Data  yang  diambil  berupa  ekspresi GLUT-1  jaringan  plasenta  dan  berat  badan janin  mencit  pada  kelompok mencit  bunting kelompok  kontrol  dan  mencit  bunting kelompok  perlakuan.  Perbedaan  variabel antara  dua  kelompok    dianalisis  dengan  uji beda t . Hubungan antara variabel dependen dan independen dianalisis menggunakan uji korelasi  Pearson  dengan  α  =  0,05.  Analisis data dilakukan dengan SPSS 16.

## HASIL
Jumlah  Mencit  Bunting  dan Pregnancy Rate
Pembuntingan mencit dilakukan dengan mengawinkan  satu  ekor  mencit  jantan  dan satu ekor mencit betina. Dari 50 ekor mencit jantan  dan  betina,  dilakukan  proses pembuntingan  sebanyak  tiga  kali  untuk memenuhi  jumlah  sampel  yang  diinginkan. Dari tahap pertama pembuntingan didapatkan  10  ekor  mencit  bunting.  Pada tahap  kedua  pembuntingan  didapatkan  5 ekor mencit bunting, dan pada tahap ketiga didapatkan 2 ekor mencit bunting. Sehingga didapatkan  17  ekor  mencit  bunting  dari  50 ekor  mencit  betina.  Dari  17  ekor  mencit bunting  yang  didapatkan,  8  ekor  dipilih sebagai kelompok kontrol dan 9 ekor dipilih sebagai  kelompok  perlakuan. Pregnancy rate dapat  diketahui  dengan  cara  membagi jumlah  total  mencit  betina  yang  dikawinkan dari jumlah total mencit betina yang bunting. Jadi  dalam  penelitian  ini  didapatkan pregnancy rate sebesar 20 %, 12,5 %, dan 5,71 %.
Tabel 1. Jumlah mencit bunting dan pregnancy rate
Pembuntingan Mencit yang Dikawinkan (ekor) Mencit Bunting (ekor) Preg- nancy Rate (%) Tahap I 50 10 20 Tahap II 40 5 12,5 Tahap III 35 2 5,71 Total 17 Derajat Parasitemia Pengukuran derajat parasitemia dilakukan  pada  kelompok  perlakuan (diinfeksi Plasmodium berghei ) dengan cara menghitung  jumlah  parasit  yang  terdapat dalam eritrosit total per 1000 jumlah eritrosit dengan rata-rata yaitu 41,93±21,55 %.

## Rerata Berat Badan Janin Mencit
Pengukuran  berat  badan  janin  mencit dilakukan  dengan  menggunakan  neraca analitik.  Setiap  induk  mencit  dapat melahirkan  5-14  ekor  anakan.  Berat  badan janin  mencit  rata-rata  ditentukan  dengan cara  menjumlahkan  berat  badan  janin  dari jumlah total anakan kemudian dibagi dengan jumlah anakan.

## Tabel 2  Rerata berat badan janin mencit
Rerata  Ekspresi  GLUT-1  di  Jaringan Plasenta Pengukuran  ekspresi  GLUT-1  pada kedua kelompok menggunakan mikroskop cahaya  pembesaran  1000x  dengan  minyak imersi.  Ekspresi  GLUT-1  dihitung  di  tiap lapang  pandang,  sebanyak  20  lapang pandang,  kemudian  diambil  rata-rata  dari tiap lapang pandang.
Tabel 3 Rerata ekspresi GLUT-1
Gambar  1.  Ekspresi  GLUT-1  pada  kelompok  kontrol. Tanda  panah  menunjukkan  ekspresi  positif GLUT-1 pada membran plasma trofoblas (1000x)
Kontrol (gram) Perlakuan (gram) Nilai p Rerata±SD 0,94 ± 0,19 0,65 ± 0,13 0,002
Kontrol Perlakuan Nilai p Rerata±SD  11,5 ± 2,2 5,90 ± 2,51 0,000
Gambar 2. Ekspresi GLUT-1 pada kelompok perlakuan. Tanda panah menunjukkan tidak ada ekspresi positif GLUT-1 pada membran plasma trofoblas (1000x)
Hubungan  Antara  Ekspresi  GLUT-1  dan Berat Badan Janin Mencit Uji  Korelasi  Pearson  bertujuan  untuk mencari  hubungan  antara  ekspresi  GLUT-1 dan  berat  badan  janin  mencit,  yang menunjukkan angka korelasi R =  0,284; p = 0,269 yang berarti bahwa tidak ada korelasi yang  bermakna  antara  ekspresi  GLUT-1 terhadap berat badan janin mencit.

## PEMBAHASAN
Pada proses pembuntingan mencit yang dilakukan  dengan  memanfaatkan  fenomena Lee  Boot  Effect , Pheromone  Effect ,  serta Whitten Effect mampu menghasilkan 17 ekor mencit  bunting  dari  50  ekor  mencit  betina yang dikawinkan. 18 Pregnancy rate diperoleh dari persentase jumlah mencit yang bunting dari sejumlah ekor mencit yang dikawinkan. Karena  terdapat  3  tahapan  pembuntingan, maka pregnancy  rate dalam  penelitian  ini yaitu 20 %, 12,5 %, dan 5,71 %. Perbedaan keberhasilan pembuntingan mencit ini dapat dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor,  yaitu waktu  aklimatisasi  yang  kurang  panjang, pemisahan mencit betina dan mencit jantan yang  tidak  adekuat,  serta  kesehatan reproduksi dari individu mencit itu sendiri.
Derajat parasitemia yang diperoleh dari masing-masing mencit perlakuan menunjukkan  hasil  yang  bervariasi.  Rata- rata  derajat  parasitemia  pada  kelompok mencit  perlakuan  yaitu  41,93±21,55  %.
Perbedaan  derajat  parasitemia  pada masing-masing  mencit  terjadi  oleh  karena ketidakseimbangan  faktor host , agent ,  dan environment.
Pada  hasil  penelitian  ini  didapatkan perbedaan  yang  bermakna  antara  rata-rata berat badan janin pada kelompok kontrol
dan  kelompok  perlakuan,  yaitu  berat  janin rata-rata  pada  kelompok  perlakuan  lebih rendah  daripada  kelompok  kontrol.  Diduga hal  ini  disebabkan  oleh  parasit  yang menginfeksi  eritrosit  menyebabkan  kondisi parasitemia yang dapat memicu peradangan lokal  di  berbagai  organ  termasuk  plasenta. Malaria  pada  kehamilan  terjadi  akibat mekanisme  sekuestrasi  eritrosit  terinfeksi pada ruang intervilus plasenta. 8 Sekuestrasi merupakan faktor utama penyebab berbagai komplikasi pada malaria, salah satunya bayi dengan  berat  badan  lahir  rendah  (BBLR). Berkumpulnya  parasit  pada  vaskuler plasenta  menyebabkan  timbulnya  reaksi inflamasi.  Infiltrasi  monosit  ke  dalam  ruang intervilus  plasenta,  sekresi  sitokin  dan kemokin  menyebabkan  disregulasi  faktor angiogenesis  yang  juga  berperan  dalam perkembangan BBLR pada malaria plasenta. 12
Terdapat  perbedaan  ekspresi  GLUT-1 yang  bermakna  antara  kedua  kelompok, yaitu  kelompok  kontrol  memiliki  ekspresi GLUT-1  lebih  tinggi  daripada  kelompok perlakuan. Di dalam plasenta, telah terbukti bahwa  GLUT-1  berperan  dalam uptake glukosa  yang  berasal  dari  aliran  darah maternal  namun  peran  GLUT-1  dalam patofisiologi  malaria  plasenta  belum  dapat dipahami secara keseluruhan. 15
Aliran  darah  yang  berkurang  menuju plasenta mengakibatkan jaringan mengalami hipoksia  sehingga  memicu  penurunan berbagai aktivitas sejumlah protein pengangkut. 8 Hambatan  aliran  darah maternal  juga  dapat  mengganggu  transpor nutrisi yang penting bagi pertumbuhan janin. Glukosa adalah substrat energi utama yang digunakan  untuk  perkembangan  janin  dan
plasenta. 13 Gangguan  transpor  glukosa menuju  janin  mengakibatkan  hambatan pertumbuhan  janin  dan  berat  badan  lahir rendah. Hipoksia  pada  jaringan  plasenta mengakibatkan  gangguan  sejumlah  protein pengangkut  sehingga  transpor  nutrisi  ke janin menjadi terganggu. Gangguan transpor nutrisi  pada  malaria  kehamilan  dapat mendasari  terjadinya  IUGR,  kelahiran prematur,  maupun  abortus.  Selanjutnya, infeksi  yang  berlangsung  lama  dapat mengganggu  sejumlah  aktifitas  reseptor GLUT-1  yang  terdapat  di  jaringan  plasenta sehingga  terbukti  bahwa  infeksi  malaria pada  kehamilan  menurunkan  ekspresi GLUT-1 pada jaringan plasenta.
Dalam  penelitian  ini  tidak  didapatkan hubungan  yang  bermakna  antara  ekspresi GLUT-1 dan berat badan janin mencit yang disebabkan  karena  terdapat  dua  isoform GLUT  teridentifikasi  di  jaringan  plasenta manusia dan hewan pengerat, yaitu GLUT-1 dan  GLUT-3  yang  berperan  dalam  proses transpor  glukosa. 20 Aktifitas  serta  ekspresi GLUT-1 dan GLUT-3 belum diketahui secara keseluruhan  bagaimana  perannya  masing- masing  dalam  mentranspor  glukosa transplasenta.
Proses  transpor  glukosa  transplasenta yang  melibatkan  dua  isoform  GLUT menunjukkan  bahwa  GLUT-1  bukan  satu- satunya  transporter  yang  berperan  dalam uptake glukosa  dari  aliran  darah  maternal meskipun  peran  GLUT-1  lebih  dominan dibandingkan  dengan  GLUT-3.  Selain  itu, penurunan  berat  badan  janin  yang  terjadi pada  malaria  kehamilan  dapat  dipengaruhi oleh  beberapa  faktor,  diantaranya  yaitu infiltrasi  monosit  pada  ruang  intervilus, sekresi  sitokin  maupun  kemokin , serta disregulasi  faktor  angiogenesis. 21-26 Hal  ini dapat sedikit menjelaskan bahwa penurunan berat  badan  janin  mencit  pada  malaria kehamilan  tidak  dipengaruhi  langsung  oleh ekspresi  GLUT-1  yang  menurun  pada mencit yang diinfeksi Plasmodium berghei.

## KESIMPULAN
Infeksi Plasmodium berghei menurunkan  ekspresi  GLUT-1  di  jaringan plasenta  dan  berat  badan  janin  mencit,
namun  penurunan  keduanya  tidak  memiliki hubungan yang bermakna.

## SARAN
1. Dibutuhkan  penelitian  lanjutan  tentang mekanisme  GLUT-1  dan  GLUT-3  pada jaringan  plasenta  dalam  mentranspor glukosa bagi janin. 2. Dibutuhkan penelitian lanjutan mengenai patomekanisme  malaria  pada  kehamilan sehingga  dapat  diketahui  faktor-faktor  yang dapat mempengaruhi hambatan pertumbuhan janin.

## DAFTAR PUSTAKA
1. [KEMENKES RI] Kementerian Kesehatan RI. Buletin Jendela, Data dan Informasi Kesehatan: Epidemiologi Malaria  di  Indonesia. Jakarta:  Bhakti Husada. 2011.
2. Dellicour  S, Tatem AJ, Guerra CA, Snow RW,    ter  Kuile  FO.  Quantifying  the Number  of  Pregnancies  at  Risk  of Malaria  in  2007:  A  Demographic  Study. PLoS Med . 2010; 7(1): e1000221.
3. Steketee  RW,  Nahlen  BL,  Parise  ME, Menendez  C.  The  Burden  of  Malaria  in Pregnancy  in  Malaria-Endemic  Areas . Am J Trop Med Hyg. 2001; 64(1–2) : 28– 35.
4. Desai  M,  ter  Kuile  FO,  Nosten  F, McGready R, Asamoa K, Brabin B et al . Epidemiology  and  Burden  of  Malaria  in Pregnancy . Lancet  Infect  Dis .  2007; 7 : 93–104.
5. Guyatt HL, Snow RW. Impact of Malaria During Pregnancy  on  Low Birth Weight in  Sub-Saharan  Africa. Clin  Microbiol Rev . 2004;17:760-769.
6. Raghupathy  R.  Th1-Type  Immunity  is Incompatible with Successful Pregnancy . Immunol Today . 1997; 18 : 478–82.
7. Conroy  AL.  Biomarkers  of  Severe Malaria:  Complement  Activation  and Dysregulated  Angiogenesis  in  Placental Malaria  and  Cerebral  Malaria. Toronto  : Laboratory  Medicine  and  Pathobiology University of Toronto. 2011.
8. Rogerson SJ, Hviiid L, Patrick ED, Rose FGL,  Diane  WT.  Malaria  in  Pregnancy:
Pathogenesis  and  Immunity .  Lancet
infect Dis .  2007; 7:105-17.
9. Ndyomugyenyi R, Magnussen P. Malaria Morbidity,  Mortality  and  Pregnancy Outcome  in  Areas  with  Different  Levels of  Malaria  Transmission  in  Uganda:  A Hospital  Record-Based  Study .Trans  R Soc Trop Med Hyg . 2001; 95:463–468.
10. Nosten  F,  Rogerson  SJ,  Beeson  JG, McGready R, Mutabingwa TK, Brabin B. Malaria  in  Pregnancy  and  The Endemicity  Spectrum:  What  Can  We Learn?. Trends Parasitol. 2004; 20 425– 432.
11. Julianna  SD,  Nour  NM.  Malaria  and Pregnancy: A Global Health Perspective. Review  Obstetric  &  Gynecology .  2009; 2(3):186-192.
12. Silver  KL,  Conroy  AL,  Leke  RGF,  Leke RJI,  Gwanmesia  P,  Molyneux  ME et  al . Circulating  Soluble  Endoglin  Levels  in Pregnant  Women  in  Cameroon  and Malawi-Associations with Placental Malaria  and  Fetal  Growth  Restriction . PLoS ONE . 2011; 6(9): e24985.
13. Korgun  ET,  Acar  N,  Sati  L,  Korgun  DK, Ozen  A et  al. Expression  of Glucocorticoid  Receptor  and  Glucose Transporter-1 During Placental Development  in  the  Diabetic  Rat. Folia Histochemica  Et  Cytobiologica .  2011; 49:325-334.
14. Fretes  RE,  Kemmerling  U,  Sarr  D. Congenital  Transmission  by  Protozoan .
Journal of Tropical Medicine . 2012. 15. Desoye  G  &  Shafrir  E.  Placental Metabolism and Its Regulation in Health and  Diabetes . Mol  Aspects  Med .  1994; 15:505–682.
16. Hahn  T,  Hartmann  M,  Blaschitz  A, Skofitsch  G,  Graf  R,  Dohr  G et  al .
Localisation  of  the  High  Affinity Facilitative  Glucose  Transporter  Protein GLUT  1  in  the  Placenta  of  Human, Marmoset  Monkey  ( Callithrix  jacchus ) and  Rat  at  Different  Developmental Stages. Cell  Tissue  Res .  1995; 280(1):49-57.
17. Clarson LH, Glazier JD, Sides MK, Sibley CP.  Expression  of  the  Facilitated
Glucose  Transporters  (GLUT1  and GLUT3) by A Choriocarcinoma Cell Line (Jar)  and  Cytotrophoblast  Cells  in
Culture . Placenta . 1997; 18:333–339. 18. Sardjono TW. Pengaruh Infeksi Toxoplasma  pada  Hasil  Kehamilan Melalui  Interferon  Gamma  (IFN 
Caspase-3,  dan  Apoptosis  Sel-Sel Plasenta: Penelitian Eksperimental
Laboratoris  pada  Mencit  Balb/C  Bunting yang  Diinokulasi  dengan  Takhizoit Toxoplasma  gondii Galur  RH.  Disertasi. Surabaya: Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga. 2005. 19. Soini  Y,  Paakko  P,  Lehto  VP.
Histopathological Evaluation of Apoptosis in  Cancer. Amer  J  Pathol .  1998; 153:1041-53.
20. Takata  K,  Hirano  H.  Mechanism  of Glucose Transfer Cross the Human and Rat Placental Barrier: A Review . Microsc Res Tech . 1997; 38:145–152.
21. Menendez  C,  Ordi  J,  Ismail  MR, et  al . The  Impact  of  Placental  Malaria  on Gestational  Age  and  Birth  Weight . J Infect Dis . 2000; 181 : 1740–45.
22. Rogerson  SJ,  Pollina  E,  Getachew  A, Tadesse  E,  Lema  VM,  Molyneux  ME.
Placental Monocyte Infiltrates in
Response  to Plasmodium  falciparum Infection  and  Their  Association  with Adverse  Pregnancy  Outcomes .  Am  J Trop Med Hyg . 2003; 68:115–119.
23. Fried M, Muga RO, Misore AO, Duffy PE. Malaria  Elicits  Type  1  Cytokines  in  the Human Placenta: IFN-Gamma and TNF- Alpha  Associated  with  Pregnancy Outcomes . J Immunol . 1998; 160(5):2523-30.
24. Moormann  AM,  Sullivan  AD,  Rochford RA, Chensue SW, Bock PJ et al . Malaria and  Pregnancy:  Placental  Cytokine Expression  and  Its  Relationship  to Intrauterine Growth  Retardation. J  Infect Dis . 1999; 180(6):1987-93.
25. Rogerson  SJ,  Brown  HC  ,  Pollina  E, Abrams ET, Tadesse E, Lema VM et al . Placental  Tumor  Necrosis  Factor  Alpha but Not Gamma Interferon is Associated with  Placental  Malaria  and  Low  Birth Weight  in  Malawian  Women .  Infect Immun. 2003; 71(1):267-270.
26. Muehlenbachs  A,  Mutabingwa  TK, Edmonds  S,  Fried  M,  Duffy  PE.
Hypertension and Maternal-Fetal Conflict
During  Placental  Malaria .  PLoS  Med . 2006; 3(11): e446.