UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL DAUN KARIKA ( Carica pubescens ) DENGAN METODE DPPH BESERTA IDENTIFIKASI SENYAWA ALKALOID, FENOL DAN FLAVONOID

## Indranila dan Maria Ulfah
Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim Semarang
e-mail: mariau_astra@yahoo.com

## ABSTRACT
Antioxidant  is  a  compound  that  can  inhibit  free  radicals.  Free  radicals  can  cause  several diseases.  The  purpose  of  this  study  is  to  reveal  the  antioxidant  activity  of  carica  leave  ethanol extract  (CLEE)  ( Carica  pubescens )  and  determine  its  active  compounds.  The  extract  produces with maceration method using ethanol 96% as a solvent. The antioxidant activities of CLEE series concentration (2.5; 5.0; 10.0; 15.0; 20.0 and 25.0) ppm and vitamin C series concentration of (0.5; 1.0; 1.5; 2.0 and 2.5) ppm as standard antioxidant were measured with DPPH method. Absorbance was  observed  by  spectrophotometer  UV-Vis.  Antioxidant  activities  presented  by  IC 50 value derived from probit analysis. Identification of active compounds in CLEE was performed by Thin Layer  Chromatography  (TLC)  method.  The  results  showed  that  the  IC 50 value  for  CLEE  and vitamin  C  as  an  antioxidant  were  30.8  ppm  and  2.9  ppm  respectively.  Base  on  TLC  analysis, alkaloids, a phenol compound, and flavonoids were found in CLEE.
Key words: antioxidant, Carica pubescens , DPPH, TLC

## PENDAHULUAN
Dunia  kesehatan  banyak  membahas  tentang  radikal  bebas  dan  antioksidan.  Hal  tersebut dikarenakan sebagian besar penyakit terjadi disebabkan adanya reaksi oksidasi yang berlebihan di dalam  tubuh.  Radikal  bebas  dapat  menyebabkan  gangguan  fungsi  sel,  kerusakan  struktur  sel, molekul  termodifikasi  yang  tidak  dapat  dikenali  oleh  sistem  imun,  dan  bahkan  mutasi.  Semua bentuk gangguan tersebut dapat memicu timbulnya berbagai penyakit (Winarsi, 2007).
Konsumsi  antioksidan  dalam  jumlah  memadai  dilaporkan  dapat  menurunkan  kejadian penyakit  degeneratif,  seperti  osteoporosis,  kardiovaskular,  kanker,  dan  lain-lain.  selain  itu, konsumsi makanan dan minuman yang mengandung antioksidan juga dapat meningkatkan sistem imun  dalam  tubuh  serta  menghambat  timbulnya  penyakit  akibat  penuaan.  Kecukupan  asupan antioksidan secara optimal diperlukan pada semua usia (Winarsi, 2007).
Tanaman karika ( Carica pubescens ) merupakan tanaman khas dataran tinggi Dieng. Karika termasuk dalam satu genus dengan papaya dengan ukuran tanaman yang lebih kecil. Masyarakat saat ini memanfaatkan daun karika sebagai pelunak daging (Hidayat, 2001). Daun karika memiliki khasiat sebagai antibakteri  yang dapat digunakan untuk terapi  penyakit diare. Senyawa fitokimia yang  terkandung  di  dalam  daun  karika  ( Carica  pubescens )  adalah  flavonoid, alkaloid,  tanin, dan fenol  (Novalina,  2013).  Buah  karika  terbukti  mengandung  vitamin  C  dan  memiliki  aktivitas antioksidan (Fatchurrozak, dkk., 2013; Laily, dkk., 2012). Selain vitamin C, senyawa aktif bahan alam yang dapat dimanfaatkan sebagai antioksidan antara lain adalah senyawa alkaloid, polifenol dan flavonoid (Tjay dan Raharja, 2010).
Berdasarkan  beberapa  hal  tersebut  dan  didukung  dengan  penelitian  terdahulu  tentang adanya kandungan senyawa aktif alkaloid, senyawa fenol, flavonoid dan tanin dalam daun karika tersebut, maka dilakukan penelitian untuk menguji aktivitas antioksidan pada ekstrak etanol daun karika.  Aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol  daun  karika  dilakukan  dengan  metode  DPPH  dan ditetapkan  aktivitasnya  dalam  nilai Inhibiton  Concentration 50  (IC 50 ).  Identifikasi  kandungan senyawa alkaloid, senyawa fenol dan flavonoid ditetapkan dengan metode Kromatgrafi Lapis Tipis (KLT).

## METODE PENELITIAN

## Bahan Penelitian
Bahan tanaman yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun karika yang diperoleh dari Desa  Sembungan,  Kecamatan  Dieng,  Wonosobo.  Bahan  kimia  dan  pereaksi  yang  digunakan adalah  etanol  96%,  DPPH  (Sigma),  vitamin  C  (Sigma),  ferri  klorida,  serbuk  magnesium,  HCl, pereaksi Dragendorff, silika gel 60 F 254 , metanol, amonia,asam formiat 10%, butanol, asam asetat, air, uap amoniak, kuinin, asam gallat, rutin (Sigma).

## Alat Penelitian
Alat-alat  yang  digunakan  adalah  seperangkat  alat  maserasi,  timbangan  eletrik,  rotary evaporator (Heidolph), corong buchner, erlenmeyer, seperangkat alat gelas, blender, alat-alat gelas (Pyrex), micro pipet (Socorex), kuvet, vortex, timbangan elektrik ( Ohaus ), spektrofotometer UV- Vis (Shimadzu), lempeng KLT, vortex, pipa kapiler, chamber (Cammag), lampu UV (Cammag), botol semprot deteksi dan oven (Memmert).

## Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Karika
Daun karika dipetik, disortir untuk memisahkannya dengan tanaman lain. Selanjutnya, daun karika  dicuci  bersih  dengan  air  mengalir,  ditiriskan  dan  diangin-anginkan.  Daun  karika dikeringkan  dalam  oven  pada  suhu 50 o C. Setelah  simplisia  kering,  simplisia  kemudian diblender dan diayak dengan ayakan 40 mesh, serta diukur kadar airnya dengan alat moisture balance. Pembuatan ekstrak pada penelitian ini dilakukan dengan metode maserasi. Sebanyak 1,0 Kg serbuk simplisia daun karika dimasukkan ke dalam toples kaca berukuran  besar, ditambah cairan penyari  etanol  96%  sebanyak  7,0  mL,  ditutup  rapat  dan  didiamkan  selama  lima  hari,  terlindung dari  paparan  cahaya  dan  sesering  mungkin  diaduk.  Setelah  lima  hari,  rendaman  simplisia  daun karika diserkai. Hasil serkaian disebut sebagai maserat I. Ampas diremaserasi dengan etanol 96% sebanyak 3,0 L selama dua hari dan diserkai kembali (maserat II). Maserat I dan II dicampur, sisa pelarut diuapkan menggunakan rotary evaporator pada suhu 50 º C sampai diperoleh ekstrak kental. Ekstrak disimpan dalam wadah kaca tertutup rapat dan terlindung dari paparan cahaya matahari.

## Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Karika dengan Metode DPPH
Ekstrak  etanol  daun  karika  dibuat  dalam  seri  konsentrasi  (2,5;  5,0;  10,0;  15,0;  20,0  dan 25,0) ppm. Seri konsentrasi vitamin C (0,5; 1,0; 1,5; 2,0 and 2.5) ppm digunakan sebagai larutan antioksidan standar. Sebanyak 2,0 mL larutan DPPH 0,1 mM ditambahkan dengan 2,0 mL larutan sampel  (seri  konsentrasi  ekstrak  etanol  daun  karika  atau  vitamin  C),  kemudian  divortex,  lalu didiamkan dalam tempat gelap selama 30 menit. Absorbansi larutan DPPH 0,1 mM dibaca dengan menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang  gelombang  516,6  nm.  Perbandingan absorbansi  sampel  dan  absorbansi  larutan  kontrol  digunakan  dalam  perhitungan  persentase aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol  daun  karika  atau  vitamin  C  terhadap  terhadap  radikal  bebas DPPH.
Identifikasi Kandungan Senyawa Aktif dalam Ekstrak Etanol Daun Karika dengan Metode KLT

## S enyawa Alkaloid
Sampel ekstrak etanol daun karika ditimbang sebanyak 100 mg, ditambahkan dengan 2 mL amonia 10% dan divortex selama dua menit. Selanjutnya, sebanyak 5 mL kloroform ditambahkan ke dalam sampel dan divortex selama dua menit. Larutan sampel disentrifugasi selama tiga menit, dan  selanjutnya  fase  kloroform  dipisahkan.  Fase  kloroform  diuapkan  dengan  gas  nitrogen  dan kemudian dilarutkan dalam 200 µL kloroform. Sampel ditotolkan sebanyak 20 µL pada lempeng silica  (fase  diam)  dan  dimasukkan  ke  dalam chamber yang  telah  dijenuhi  dengan    fase  gerak metanol  :  amonia  (100  :  1,5).  Fase  diam  dielusi  hingga  batas  (8  cm),  kemudian  diangkat  dan dikeringkan.  Bercak  yang  terbentuk  diamati  di  bawah  sinar  UV  254  nm  dan  366  nm,  serta disemprot dengan pereaksi Dragendorff dan diamati secara visibel.

## Senyawa fenol
Sampel ekstrak etanol daun karika ditimbang sebanyak 50 mg, ditambahkan metanol 1 mL,
divortex  selama  dua  menit,  kemudian  disentrifuge.  Larutan  sampel  ditotolkan  sebanyak  20  µL pada lempeng silika gel dan dimasukkan ke dalam lempeng ke dalam chamber yang telah dijenuhi dengan  fase  gerak  metanol  :  asam  formiat  10% (97  :  3). Lempeng  KLT  dielusi  hingga  batas (8 cm) dan dikeringkan. Bercak yang terbentuk diamati di bawah sinar UV 254 nm dan 366 nm, kemudian disemprot dengan pereaksi ferri klorida (FeCl 3 ) dan diamati secara visibel.

## Senyawa Flavonoid
Sampel ekstrak etanol daun karika ditimbang sebanyak 50 mg, ditambahkan dengan 10 mL asam klorida 4 N. larutan sampel dihidrolisis dengan cara direfluk menggunakan pendingin balik selama 30 menit. Larutan sampel dinginkan dan diekstraksi dengan 5 mL larutan dietil eter. Fase dietil  eter  diambil  dan  diuapkan  dengan  gas  nitrogen.  Sampel  dan  pembanding  ditotolkan sebanyak  10  µL  pada  lempeng  silica.  Lempeng  KLT  dimasukkan  ke  dalam  chamber  yang  telah jenuh  dengan  fase  gerak  butanol  :  asam  asetat  :  air  (3:1:1)  serta  dielusik  hingga  batas  (8  cm). Lempeng KLT dikeringkan. Bercak diamati di bawah sinar UV 254 nm dan 366 nm serta diuapi dengan uap amoniak dan diamati secara visibel.

## Anali sa Data
Data  hasil  uji  aktivitas  antioksidan  dengan  metode  DPPH  adalah  nilai  absorbansi  yang terbaca  pada  alat  spektrofotometer  UV-Vis.  Nilai  absorbansi  dari  sampel  atau  baku  pembanding vitamin  C  dibandingkan  dengan  nilai  absorbansi  kontrol  (absorbansi  larutan  DPPH  0,1  nM). Persentase aktivitas antioksidan dihitung dengan menggunakan rumus:
% aktivitas antioksidan= Abs kontrol - Abs perlakuan Abs kontrol x 100% Keterangan : Abs kontrol :   Absorbansi larutan DPPH 0,1 mM
Abs perlakuan  :   Absorbansi  seri  konsentrasi  ekstrak  etanol  daun  karika  atau  baku  pembanding vitamin C
Potensi  antioksidan  dari  ekstrak  etanol  daun  karika  dan  vitamin  C  dinyatakan  sebagai  nilai  IC 50 diperoleh  dengan  menggunakan  analisis  probit  pada  taraf  kepercayaan  95%.  Nilai  logaritma konsentrasi  larutan  uji  (ekstrak  etanol  daun  karika  atau  vitamin  C)  diposisikan  sebagai  variabel bebas (X) dan nilai persentasi antioksidan sebagai variable tergantung (Y).

## HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN

## Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Etanol  Daun  Karika  dan  Vitamin  C  dengan  Metode DPPH
Pengujian  aktivitas  antikosidan  dalam  penelitian  dilakukan  menggunakan  metode  DPPH. DPPH merupakan radikal bebas sintetik berwarna ungu yang banyak digunakan dalam uji aktivitas antioksidan.  Pengujian  antioksidan  pada  penelitian  ini  menggunakan  perbandingan  1  :  1,  yang artinya  2  mL  DPPH  dicampurkan  dengan  2  mL  larutan  sampel  (ekstrak  etanol  daun  karika  atau vitamin C). Hasil uji aktivitas antioksidan ekstrak etanol daun karika serta vitamin C dan nilai IC 50 dapat dilihat pada tabel I.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa semakin tinggi konsentrasi sampel ekstrak etanol daun karika  ataupun  pembanding  vitamin  C  yang  digunakan  diikuti  dengan  semakin  meningkatnya aktivitas  antioksidannya.  Hal  tersebut  dikarenakan  pada  konsentrasi  yang  tinggi,  kemampuan antioksidan  untuk  menangkap  radikal  bebas  semakin  besar.  Konsentrasi  DPPH  yang  masih  ada semakin kecil sehingga nilai absorbansi yang dihasilkan akan semakin turun.
Nilai  IC 50 ekstrak  etanol  daun  karika  adalah  sebesar  30,8  ppm  dan  vitamin  C  sebesar  2,8 ppm. Nilai IC 50 tersebut <50 ppm (aktivitas antioksidan sangat kuat) (Blois, 1958). Semakin kecil nilai  IC 50 berarti  semakin  besar  daya  antioksidannya.  Nilai  IC 50 ekstrak  etanol  daun  karika  lebih besar  dari  nilai  IC 50 vitamin  C,  berarti  menunjukkan  potensi  antioksidan  vitamin  C  lebih  tinggi dibandingkan  dengan  ekstrak  etanol  daun  karika.  Hal  ini  dikarenakan  dalam  ekstrak  etanol  daun
Indranila
karika  masih  dalam  bentuk  campuran  dari  beberapa  senyawa  yang  tidak  memiliki  aktivitas antioksidan.    Sementara  itu,  vitamin  C  merupakan  senyawa  sintesis  murni  yang  telah  dibuktikan poten  sebagai  antioksidan.  Vitamin  C  juga  memiliki  gugus  hidroksil  lebih  banyak,  sehingga vitamin  C  dapat  mendonorkan  atom  hidrogen  lebih  banyak  untuk  bereaksi  dengan  radikal  bebas DPPH.

## Tabel I.  Hasil Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Karika dan Vitamin C
Sampel Konsentrasi (ppm) Aktivitas antioksidan (%) Nilai Probit Persamaan Probit dan nilai IC 50 Ekstrak etanol daun karika 2,5 17,771 0,145 y = 0,322x + 0,006
r = 0,997 IC 50 = 30,790 5
20,517 0,222 10 26,440 0,318 15 35,272 0,381 20 45,180 0,428 25 50,350 0,465 Vitamin C 0,5 22,025 0,190 y = 0,4052x + 0,3061
r = 0,998
IC 50 = 2,857 1 24,610 0,298 1,5 36,564 0,373 2 42,488 0,429 2,5 50,458 0,473
Larutan radikal bebas DPPH memiliki atom nitrogen yang tidak berpasangan. Reaksi DPPH dengan  atom  hidrogen  yang  terdapat  pada  antioksidan  dapat  membuat  larutan  DPPH  menjadi berkurang  reaktivitasnya,  yang  dapat  ditunjukkan  dengan  memudarnya  warna  ungu  menjadi kuning  (Molyneux,  2004).Uji  aktivitas  antioksidan  ini  menunjukkan  bahwa  senyawa  aktif  yang terdapat  dalam  ekstrak  etanol  daun  karika  mampu  menangkal  radikal  bebas  difenilpikrilhidrazil dengan  cara  mendonorkan  atom  hidrogen  sehingga  berubah  menjadi  difenilpikrilhidrazin  yang bersifat  non  radikal.  Adapun  mekanisme  reaksi  peredaman  radikal  bebas  dapat  dilihat  pada Gambar 1:
OH FI OH O FI OH R RH FI-OH FI-O B B O FI OH O FI O R RH FI-quinone FI-O B B
Gambar 1. Reaksi penangkapan radikal bebas oleh senyawa flavonoid (Pietta, 2000)

## Identifikasi senyawa aktif dengan metode KLT
Identifikasi alkaloid Silika G60 F 254 dipilih sebagai fase diam karena baik untuk memisahkan senyawa alkaloid (Sastrohamidjojo,  2005).  Senyawa  alkaloid  standar  yang  digunakan  adalah  kuinin.  Harborne (1996)  menyatakan  bahwa  bercak  senyawa  alkaloid  pada  plat  KLT  akan  berwarna  coklat  jingga berlatar  belakang  kuning  setelah  disemprot  dengan  pereaksi  Dragendorff.  Pengamatan  bercak  di

## Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Karika
bawah  sinar  UV  254  nm  menghasilkan  bercak  yang  mampu  meredam  fluorosensi  silica  gel  dan bercak  berflourosensi  biru  di  bawah  sinar  UV  366  nm  (gambar  2).  Identifikasi  alkaloid  pada pengamatan  secara  visibel  diperoleh  bercak  pembanding  dan  sampel  berwarna  kuning  orange dengan  latar  belakang  kuning.  Berdasarkan  hasil  tersebut,  sampel  ekstrak  etanol  daun  karika positif  mengandung  senyawa  alkaloid  dengan  harga Retardation  factor (Rf)  sebesar  0,65.  Harga Rf  senyawa  standar  kuinin  adalah  0,47. Hal  ini  menunjukkan bahwa  kuinin  lebih polar  daripada sampel senyawa alkaloid dalam ekstrak etanol daun karika.
UV 254 UV 365 Visibel P         1 Keterangan: Fase diam : silika gel 60 F 254 Fase gerak : metanol : amonia (100:1,5) Penampak bercak : Dragendorff Warna spot pada visibel : kuning orange Rf ekstrak etanol : 0,65 Rf pembanding : 0,47 P : pembanding kuinin S : ekstrak etanol daun karika
Gambar 2. Kromatogram identifikasi senyawa alkaloid dalam ekstrak etanol daun karika

## Senyawa Fenol
Senyawa  fenol  menyerap  sinar  di  daerah  UV  pendek  dan  dapat  dideteksi  pada  lempeng silika gel yang mengandung indikator fluorosensi gelombang 254 nm. Senyawa fenol akan terlihat sebagai  bercak gelap  dengan latar  belakang berfluorosensi (Harborne,  1996). Bercak  sampel dan pembanding yang dilihat secara visibel pada identifikasi senyawa fenol berwarna hitam kelabu dan pada  sinar  UV  254  nm  berwarna hitam  kelabu dengan  latar  belakang  berfluorosensi  (gambar  3). Hal ini menunjukkan bahwa sampel ekstrak etanol daun karika mengandung senyawa fenol. Niai Rf bercak  sampel  adalah  sebesar  0,55;  sedangkan  nilai  Rf  pembanding  asam  galat  adalah  0,84. Hasil ini menandakan bahwa senyawa fenol dalam sampel ekstrak etanol daun karika lebih bersifat polar dari pembanding asam galat.

## Senyawa flavonoid
Wagner  (2001)  menyatakan  bahwa  flavonoid  dapat  berpendar  dan  memberikan  warna kuning, hijau ataupun biru. Hasil identifikasi menunjukkan bercak sampel di bawah sinar UV 254 nm  dapat  berpendar dan  berwarna kuning, sedangkan pada  pada pengamatan  di  bawah  sinar  UV 365  nm  bercak  berflourosensi  biru.  Bercak  sampel  dan  pembanding  rutin  berwarna  kuning  pada pengamatan  secara  visibel.  Hasil  identifikasi  menunjukkan  bahwa  sampel  ekstrak  etanol  daun karika  positif  mengandung  flavonoid.  Harga  Rf  bercak  sampel  sebesar  0,82  dan  pembanding sebesar 0,56. Hal ini menunjukkan bahwa pembanding rutin lebih bersifat polar daripada senyawa flavonoid yang ada dalam ekstrak etanol daun karika.
P         S P         S P         S Indranila
Keterangan: Fase diam : silika gel 60 F 254 Fase gerak : metanol : asam formiat 10% (95:5) Penampak bercak : ferri klorida Warna spot pada visibel : hitam Rf sampel uji : 0,55 Rf pembanding : 0,84 P : pembanding asam gallat S : ekstrak etanol daun karika
Gambar 3. Kromatogram identifikasi senyawa fenol dalam ekstrak etanol daun karika
Keterangan: Fase diam
: silika gel 60 F 254 Fase gerak : butanol : asam asetat : air (3:1:1) Penampak bercak : amoniak Warna spot pada visibel : kuning Rf ekstrak etanol : 0,82 Rf pembanding : 0,56 P : pembanding rutin S : ekstrak etanol daun karika
Gambar 4. Kromatogram identifikasi senyawa fenol dalam ekstrak etanol daun karika

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Ekstrak  etanol  daun  karika  ( Carica  pubescens )  mempunyai  aktivitas  antioksidan  dengan metode  DPPH.  Nilai  IC 50 yang  diperoleh  dari  ekstrak  etanol  daun  karika  ( Carica  pubescens ) adalah sebesar 30,8 ppm, dan vitamin C sebesar 2,8 ppm. Senyawa aktif yang terkandung dalam ekstrak etanol daun karika ( Carica pubescens ) adalah senyawa alkaloid, fenol dan flavonoid.

## Saran
Perlu dilakukan isolasi terhadap senyawa aktif yang terkandung dalam daun karika yang memiliki aktifitas antioksidan.

## DAFTAR PUSTAKA
Blois  M.S.,  1958,  Antioxidant  Determination  by  the  Use  of  a  Stable  Free  Radical ,  Nature , 181 , 1199-1200
Fatchurrozak,  Suranto  dan  Sugiyarto,  2013,  Pengaruh  Ketinggian  Tempat  Terhadap  Kandungan Vitamin  C  dan  Zat  Antioksidan  pada  Buah Caricapubescens di  Dataran  Tinggi  Dieng, Jurnal EL-VIVO , 1 (1), 15-22
Harborne J.B., 1996, Metode Fitokimia, Edisi Kedua , Penerbit ITB, Bandung
Hidayat S., 2001, Prospek Pepaya Gunung ( Carica pubescens ) dari Sikunang, Pegunungan Dieng, Wonosobo. Prosiding  Seminar  Sehari :  Menggali  Potensi  dan  Meningkatkan  Prospek Tanaman  Holtikultura  Menuju  Ketahanan  Pangan,  Pusat  Konservasi  Tumbuhan  Kebun Raya Bogor-LIPI, Bogor
Laily  A.N.,  Suranto,  Sugiyarto,  2012,  Characterization  of Carica  pubescens in  Dieng  Plateau, Central  Java  based  on  Morphological  Characters,  Antioxidant  Capacity,  and  Protein Banding Pattern, Jurnal Nusantara Bioscience , 4 (1), 16-21
Molyneux  P.,  2004,  The  Use  of  Stable  Free  Radical  Diphenylpicryl-hydrazyl  (DPPH)  for Estimating Antioxidant Activity, J. Sci. Technol ., 26 (2), 211-219
Pietta P.G., 2000, Flavonoids as Antioxidants, J. Nat. Prod. , 63 ( 7 ), 1035–1042
Novalina  D.,  2013,  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak Carica  pubescens dari  Dataran  Tinggi  Dieng terhadap Bakteri Penyebab Diare, Tesis , Universitas Sebelas Maret, Surakarta
Sastrohamidjojo H., 2005, Kromatografi , Edisi Kedua, Cetakan Ketiga, Liberty, Yogyakarta
Tjay  T.H.,  dan  Raharja  K.,  2010,  Enzyme-Based  Hydrolysis  Processes  for  Ethanol  from Lignocellulusic Materials: A Review BioResource , 1 (24), 707-738
Wagner  H.  and  Bladt,  S.,  2001, Plant  Drugs  Analysis  a  Thin  Layer  Chromatography  Atlas , Second edition. New York: Springer Verlag Berlin Heidenberg
Winarsi H., 2007, Antioksidan Alami dan Radikal Bebas , Penerbit Kanisius, Yogyakarta
Indranila