pISSN : 2355-9942, eISSN:2656-792X Terakreditasi Nasional, Dirjen Pendidikan Tinggi, Riset, dan Teknologi
Kementerian Pendidikan, Kebudayaan, Riset dan Teknologi RI S.K. No. 105/E/KPT/2022 Received: 30 September 2022, Accepted:12 Juni 2023 Published online: 25 Juni 2023 DOI: https://doi.org/10.35508/nukleus.v10i1.8347 https://ejurnal.undana.ac.id/index.php/nukleus/article/view/8347

## KUALITAS SPERMA SAPI ANGUS DALAM PENGENCER CITRATE-KUNING TELUR  YANG DITAMBAHKAN SARI BUAH TOMAT
(Sperm quality of angus bulls in citrate - egg yolk extender added tomato juice)
Valerianus Liviano Janggur 1 , Thomas Mata Hine 2 *, Petrus Kune 2 1 Mahasiswa Program Studi Peternakan, Fakultas Peternakan, Kelautan dan Perikanan, Universitas Nusa Cendana
2 Fakultas Peternakan, Kelautan dan Perikanan, Universitas Nusa Cendana, Jl. Adisucipto Penfui Kota Pos 104 Kupang 8500 Telp (038) 881580. Fax (0380) 881674 *Correspondent author, email: tomhin050566@gmail.com

## ABSTRAK
Preservasi  merupakan  teknologi  yang  dikembangkan  dalam  upaya  mempertahankan  kualitas  sperma  dalam kurun  waktu  tertentu  yang  selanjutnya  sperma  tersebut  digunakan  untuk  inseminasi  buatan.  Upaya  yang dilakukan untuk mengurangi penurunan kualitas sperma selama preservasi adalah dengan mengencerkan sperma dengan bahan yang mengandung berbagai zat nutirisi yang dibutuhkan sperma untuk mempertahankan motilitas dan daya hidupnya selama penyimpanan. Tujuan penelitian ini adalah untuk menganalisis dampak penambahan sari buah tomat (SBT) ke dalam pengencer citrate – kuning telur (CKT) terhadap kualitas sperma sapi angus. Satu ekor sapi angus jantan yang berumur tiga tahun ditampung spermanya dengan menggunakan vagina buatan, dan sperma yang berkualitas baik dipreservasi dalam pengencer CKT yang ditambahkan berbagai level SBT: 0, 1, 2, dan  3%  untuk  perlakuan  P0,  P1,  P2  dan  P3  secara  berurutan.  Pasca  pengenceran,  sperma  disimpan  di  dalam kulkas  dengan  kisaran  suhu  3-5oC.  Kualitas  sperma  dievaluasi  setiap  24  jam  hingga  motilitasnya  menurun hingga  40%.  Hasil  penelitian  hingga  hari  kelima  penyimpanan  menunjukkan  perbedaan  yang  signifikan (P<0,05)  pada  variabel  motilitas,  viabilitas,  dan  daya  tahan  hidup  sperma,  namun  tidak  ada  perbedaan  yang signifikan pada variabel abnormalitas sperma (P>0,05) antara perlakuan P2, P3 dengan kontrol. Perbandingan kualitas sperma pada perlakuan P3 vs. kontrol adalah sebagai berikut: motilitas (50,00 vs. 36,50 %,), viabilitas (54,84 vs. 47,35%), abnormalitas (7,35 vs. 7,07%), dan daya tahan hidup (5,83 vs. 4,50 hari). Hasil penelitian menyimpulkan  bahwa  penambahan  SBT  sebanyak    2  -  3%  dalam  pengencer  CKT  mampu  mempertahankan kualitas sperma sapi angus yang lebih baik dibandingkan perlakuan kontrol.
Kata-kata kunci: sari buah tomat, citrate, kuning telur, sperma, sapi angus

## ABSTRACT
Preservation is a technology created to keep sperm quality over a specific time period, which is subsequently used for artificial insemination. Attempts have been made to reduce the loss of sperm quality during storage by diluting  the  sperm  with  materials  containing  various  nutritional  components  required  by  sperm  to  preserve motility  and  vitality  during  storage.  This  study  aimed  to  analyze  the  impact  of  adding  tomato  juice  (TJ)  to citrate – egg yolk (CEG) diluent on the sperm quality of Angus bulls. One three-year-old angus bull was collected using an artificial vagina, and good quality sperm was preserved in CEG diluent with various levels of TJ added: 0,  1,  2,  and  3%  for  treatments  P0,  P1,  P2,  and  P3  sequentially.  After  dilution,  the  sperm  were  stored  in  the refrigerator  with  a  temperature  range  of  3-5oC.  Sperm  quality  was  evaluated  every  24  hours  until  motility reaches 40%. The results of the study up to the fifth day of storage showed significant differences (P<0.05) in the variables of sperm motility, viability, and survival, but there were no significant differences in the variable of sperm abnormalities (P>0.05) between the P2 and P3 with control. The following sperm quality comparisons were  made  in  the  P3  vs.  control  treatment:  motility  (50.00  vs.  36.50%),  viability  (54.84  vs.  47.35%), abnormality (7.35 vs. 7.07%), and survival (5.83 vs. 4.50 days).  The study concluded that adding  2-3% TJ in the CEG diluent could sustain the sperm quality of Angus bulls.
Keywords: tomato juice, citrate, egg yolk, sperm, angus bull

## PENDAHULUAN
Preservasi  sperma  merupakan  suatu metode yang dikembangkan untuk mempertahankan  kualitas  sperma  dalam  kurun waktu  yang  relatif  panjang  dengan  cara memperlambat  penurunan  kualitasnya  selama penyimpanan  in  vitro.    Daya  preservasi  sperma sangat  ditentukan  oleh  sejumlah  faktor diantaranya  adalah  kualitas  pengencer  yang digunakan.  Setiap  pengencer  sperma  harus memenuhi  syarat  yakni  mengandung  zat-zat nutrisi  yang  dibutuhkan  oleh  sperma  untuk mempertahankan  daya  hidup  dan  fertilitasnya, melindungi  sperma  terhadap  kejutan  dingin, mencegah pertumbuh bakteri, menjaga kestabilan  pH,  serta  mempertahankan  tekanan osmotik  yang  sesuai  dengan  kebutuhan  sperma (Hine et al ., 2014).
Salah satu bahan pengencer yang biasa di gunakan  adalah  citrate-kuning  telur  (CKT). Natrium  citrate  merupakan  penyangga  yang mampu mempertahankan kestabilan pH pengencer,  sedangkan  kuning  telur  bermanfaat sebagai  sumber  energi  dan  lipoprotein  yang dapat  memberikan  perlindungan  terhadap sperma  selama  proses  preservasi  (Nalley  dan Arifiantini, 2011; Barek et al ., 2020; Pubiandara et  al .,  2016).  Walaupun  demikian,  dalam kenyataannya,  penggunaan  citrate-kuning  telur seringkali  tidak  dapat  mempertahankan  kualitas
sperma secara signifikan. Hal ini diduga sebagai akibat  kurangnya  unsur  pelindung  terhadap sperma berupa antioksidan yang berperan untuk menetralisir  radikal  bebas  yang  diproduksi secara berlebihan selama preservasi.
Dalam  penelitian  ini,  sari  buah  tomat (SBT)  ditambahkan  ke  dalam  pengencer  CKT. Kandungan  nutrisi  yang  terdapat  dalam  buah tomat  (Solanum  lycopersicum)  diantaranya vitamin  C,  lycopen,  karbohidrat,  protein,  dan vitamin  A.  Buah  tomat  juga  mengandung  gula- gula  pereduksi  terutama  glukosa  dan  fruktosa, mineral, vitamin dan lipid (Maulida dan Naufal, 2014).  Lycopen,  vitamin  A  dan  C  berperan berfungsi  sebagai  antioksidan,  glukosa  dan fruktosa  berperan  sebagai  sumber  energi, sedangkan protein dan lipid bermanfaat sebagai pelindung membran sperma (Varela et al ., 2019, Pytlík et  al .,  2023).  Kemampuan  likopen  pada tomat  mampu  menghambat  radikal  bebas  100 kali lebih efisien daripada vitamin E atau 12.500 kali  dari  pada  gluthation.  Ketersediaan  buah tomat  yang  mudah  di  diperoleh  menjadi  salah satu  keunggulan  yang  dimiliki  oleh  buah  tomat untuk  digunakan  sebagai  bahan  pengencer. Penelitian  ini  dilakukan  dengan  tujuan  untuk mengetahui  pengaruh  penambahan  SBT  ke dalam pengencer CKT terhadap kualitas sperma sapi angus.

## METODE PENELITIAN

## Materi Penelitian
Materi  yang  digunakan  dalam  penelitian adalah semen yang dikoleksi dari satu ekor sapi angus jantan dengan umur 3 tahun yang berada dalam  kondisi  sehat,  dan  sudah  terlatih  untuk penampungan semen.

## Metode Penelitian
Penelitian dirancang dengan menggunakan  rancangan  acak  lengkap  dengan empat  perlakuan  dan  lima  ulangan.  Adapun perlakuan  tersebut  adalah  level  SBT  di  dalam pengencer CKT: 0, 1, 2, dan 3%.

## Penyiapan Sari Buah Tomat
Buah  tomat  segar  yang  sudah  matang dicuci  dengan  air  kran,  selanjutnya  buah  tomat tersebut  dipotong  menjadi  potongan-potongan kecil  dan  dihaluskan  dengan  menggunakan blender. Hasil blender tersebut di saring dengan menggunakan kain kasa, selanjutnya dimasukan
ke dalam tabung erlenmeyer 250ml dan biarkan mengendap.  Cairan  yang  berada  di  bagian  atas tabung  (supernatan)  dimasukkan  ke  dalam tabung baru dan siap digunakan untuk dicampur dengan bahan pengencer.

## Penyiapan Larutan Citrate
Larutan citrate dibuat dari natrium citrate 2,9  g  yang  dicampurkan  dengan  aquadest  100 mL.  Larutan  tersebut  dihomogenkan  dengan cara menempatkan wadah yang berisi larutan di atas stirrer dan dilakukan pemutaran selama tiga menit.  Setelah  homogen  larutan  disimpan  di dalam lemari pendingin pada suhu 3 – 8oC.

## Penyiapan Kuning Telur
Telur  ayam  ras  yang  masih  segar disterilkan  dengan  alkohol  70%,  lalu  bagian ujung  telur  yang  lancip  dipecahkan  dengan menggunakan pinset steril, putih telur dikeluarkan,  dan  kuning  teluryang  masih
terbungkus dengan membrane vitelin ditempatkan  di  atas  kertas  saring  untuk menyerap  sisa  putih  telur.  Membran  vitelin selanjutnya  disayat  dengan  menggunakan  pisau steril dan kuning telur dialirkan ke dalam tabung ukur. Kuning telur telah siap untuk digunakan.

## Pembuatan Pengencer CKT-SBT
Pengencer CKT dibuat dengan komposisi empat  bagian  larutan  citrate  dan  satu  bagian kuning  telur.  Ke  dalam  pengencer  tersebut ditambahkan  SBT  sesuai  perlakuan,  dan selanjutnya  dicampur  hingga  homogen  dengan menggunakan batang gelas pengaduk. Ke dalam setiap  mL  pengencer  tersebut  ditambahkan penicillin 1.000 IU dan streptomycin 1.000 µg.

## Penampungan dan Evaluasi Semen
Penampungan  semen  dilakukan  dengan menggunakan vagina buatan. Semen yang telah tertampung  di  dalam  tabung  sperma  dinilai secara  mikroskopis  maupun  makroskopis. Penilaian secara makroskopis meliputi: volume, warna,  konsistensi,  dan  pH  semen;  sedangkan secara  mikroskopis  meliputi    motilitas  sperma baik  secara  individu  maupun  secara  bersama- sama  (gerakan  massa),  viabilitas,  abnormalitas, dan  konsentrasi  sperma.  Semen  yang  layak untuk  dipreservasi  adalah  yang  memilki motilitas  sperma  paling  sedikit  70  persen, abnormalitas  sperma  di  bawah  20  persen,  dan konsentrasi sperma di atas 500x106 sel/mL.

## Pengenceran dan Preservasi Sperma
Semen yang memenuhi syarat diencerkan dengan  pengencer  perlakuan:  CKT  (P0), CKT+SBT  1%  (P1),  CKT+SBT  2%  (P2), CKT+SBT 3% (P3). Kadar pengenceran sperma adalah  10x106  sperma/mL  pengencer.  Sperma yang telah diencerkan dibagi ke dalam beberapa tabung  kecil  dan  disimpan  di  dalam  lemari pendingin  pada  suhu  3-8oC.  Evaluasi  kualitas sperma  dilakukan  setiap  24  jam  hingga persentase motilitasnya menurun hingga 40%.

## Pengukuran Motilitas Sperma
Teteskan  satu  drop  semen  di  atas  object glass  dan  selanjutnya  ditutup  dengan  cover
glass.  Amati di  bawah  mikroskop  pada  delapan lapang  pandang  pada  pembesaran  10x40. Pengukuran  motilitas  sperma  dilakukan  secara subyektif  dengan  membandingkan  jumlah sperma  yang  bergerak  progresif  dengan  total sperma (%).

## Pengukuran Viabilitas Sperma
Teteskan  satu  tetes  pewarna  eosin- nigrosin  di  atas  object  glass,  kemudian tambahkan  satu  tetes  semen  pada  pewarna tersebut; campur pewarna dengan semen hingga homogen. Buat preparat ulas dengan menempelkan  campuran  tersebut  pada  ujung object  glass  yang  baru,  dan  selanjutnya  ujung object  glass  tersebut  diulas  pada  permukaan object  glass  lain  secara  merata.  Object  glass ulasan  tersebut  dipanaskan  di  atas  nyala  api bunsen  hingga  kering.  Lakukan  pengamatan  di bawah  mikroskop  pada  pembesaran  10x40. Kepala  sperma  yang  berwarna  merah  jingga adalah  sperma  mati,  sedangkan  kepala  sperma yang  tidak  terwarnai  adalah  sperma  hidup. Lakukan  penghitungan  hingga  200  sel  sperma. Viabilitas  sperma  (%):  mebandingkan  jumlah sperma yang hidup dengan total sperma.

## Pengukuran Abnormalitas Sperma
Teknik  pengukuran  abnormalitas  sperma sama  dengan  viabilitas  sperma.  Namun  yang diamati  pada  pengukuran  abnormalitas  sperma adalah  bentuk  kelainan  yang  terdapat  pada sperma  baik  pada  bagian  kepala  maupun  ekor. Abnormalitas sperma (%): perbandingan jumlah sperma yang abnormal dengan total sperma.

## Pengukuran Daya Tahan Hidup Sperma
Daya  tahan  hidup  sperma  (hari):  diukur berdasarkan  lama  sperma  bertahan  hidup  di dalam penyimpanan, hingga persentase motilitasnya menurun hingga 40%.

## Analisis Data
Analisis data penelitian dilakukan dengan menggunakan  Anova  dan  dilanjutkan  dengan Uji Duncan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Motilitas Sperma
Motilitas  sangat  penting  untuk  sperma karena  hanya  sperma  yang  memiliki  motilitas progresif  yang  dapat  membuahi  sel  telur
(Dongkot et al ., 2022). Rataan motilitas sperma sapi angus pada keempat perlakuan ditampilkan pada Tabel 1.

## Tabel 1. Motilitas sperma (%) di dalam pengencer CKT yang ditambahkan berbagai level SBT
Hari ke- P0 P1 P2 P3 P-value 0 78,50 ± 2,23 a 78,50 ± 2,23 a 78,50 ± 2,23 a 78,50 ± 2,23 a 1,000 1 73,00 ± 2,73 a 73,00 ± 2,73 a 74,00 ± 2,23 a 73,00 ± 2,73 a 0,907 2 64,00 ± 4,18 a 64,50 ± 4,47 a 68,00 ± 2,73 a 68,00 ± 2,73 a 0,187 3 54,00 ± 4,18 a 58,00 ± 4,47 ab 61,50 ± 4,18 b 60,50 ± 5,12 b 0,077 4 43,50 ± 4,18 a 50,00 ± 4,67 b 54,50 ± 3,70 b 54,00 ± 4,54 b 0,003 5 36,50 ± 4,18 a 42,00 ± 3,70 b 47,50 ± 2,50 c 50,00 ± 5,30 c 0,000 6 30,00 ± 3,06 a 33,50 ± 5,47 ab 39,50 ± 2,73 c 38,00 ± 1,11 bc 0,002
Superskrip dengan huruf yang sama pada baris yang sama menunjukkan perlakuan berpengaruh tidak signifikan (P>0,05). CKT= citrate-kuning telur, SBT= sari buah tomat, P0= CKT, P1= CKT+SBT 1%, P2= CKT+SBT 2%, P3= CKT+SBT 3%.
Pengamatan  hari  ke-0  penyimpanan menunjukkan  bahwa  tidak  terdapat  perbedaan motilitas  sperma  yang  signifikan  (P>0,05) karena  persentase  motilitas  sperma  masih  sama dengan yang diamati pada semen segar (sebelum pengenceran).  Hal  ini  dapat  dimengerti mengingat pengamatan dilakukan segera setelah pengenceran  sehingga  efek  akibat  penambahan SBT  belum  dapat  terlihat.  Seiring  dengan bertambahnya  lama  penyimpanan,  terlihat bahwa  kecepatan  penurunan  motilitas  sperma pada  keempat  perlakuan  mulai  terlihat perbedaannya.  Sejak  hari  ketiga  hingga  hari kelima  penyimpanan,  perlakuan  P2  dan  P3 mengalami  penurunan  motilitas  sperma  yang lebih  sedikit  sehingga  pada  hari  kelima penyimpanan kedua perlakuan tersebut memiliki motilitas sperma tertinggi
(P<0,05) dibandingkan  dengan  P0  dan  P1.    Hal  ini memberikan petunjuk bahwa dengan penambahan  SBT  sebesar  2-3%  ke  dalam pengencer  SBT  menghasilkan  motilitas  sperma yang  lebin  tinggi  dibandingkan  dengan  level SBT 0-1%.
Lebih  tingginya  motilitas  sperma  pada perlakuan  P2  dan  P3  diduga  disebabkan  oleh adanya  zat  nutrisi  dan  antioksidan  yang terkandung di dalam SBT. Sejumlah nutrisi yang terkandung di dalam buah tomat adalah  vitamin C, lycopen, karbohidrat, protein, dan vitamin A. Buah  tomat  juga  mengandung  gula-gula pereduksi  terutama  glukosa  dan  fruktosa, mineral, vitamin dan lipid (Maulida dan Naufal, 2014).  Lycopen,  vitamin  A  dan  C  berperan berfungsi  sebagai  antioksidan,  glukosa  dan fruktosa  berperan  sebagai  sumber  energi, sedangkan protein dan lipid bermanfaat sebagai pelindung membran sperma (Varela et al ., 2019; Blaner et al ., 2021).
Keberadaan lycopene, vitamin A dan C di dalam  SBT  sangat  bermanfaat  sebagai antioksidan  yang  berperan  dalam  mengurangi efek  negatif  dari  radikal  bebas  yang  diproduksi
secara  berlebihan  selama  penyimpanan  sperma. Lycopene  memiliki  daya  hambat  radikal  bebas yang  jauh  lebih  tinggi  daripada  vitamin  E  dan glutation.  Keberadaan  radikal  bebas  yang berlebihan dapat merusak struktur membran dan DNA  sperma  (Umar et  al .,  2015;  Shahverdi et al .,  2021),  yang  selanjutnya  berakibat  pada penurunan  motilitas  dan  kelangsungan  hidup sperma (Astuti, 2018).
Sari  buah  tomat  juga  mengandung karbohidrat  yang  dapat  dijadikan  sebagai sumber  energi  bagi  sperma  (Peris-Frau et  al ., 2020; Sengupta et al ., 2020). Kandungan protein di  dalam  SBT  berperan  dalam  melindungi sperma terhadap efek dingin yang terjadi selama penyimpanan  (Varela et  al .,  2019;  Pytlik et  al ., 2023).
Di  sisi  lain,  hal  yang  teramati  pada sperma  selama  penyimpanan  adalah  terjadinya penurunan  motilitas  secara  gradual,  dan  al  ini terjadi  pada  semua  perlakuan.  Perbedaannya adalah  terletak  pada  kecepatan  penurunan motilitas di antara perlakuan tersebut. Beberapa penyebab terjadinya penurunan motilitas sperma selama  penyimpanan  adalah  umur  sperma  yang semakin  tua,  kandungan  nutrisi  yang  semakin menipis  dan  akumulasi  asam  laktat  yang semakin tinggi.
Pada umumnya, sperma yang tertampung dalam  satu  ejakulasi  memiliki  umur  yang berbeda-beda.  Ketika  terjadi  ejakulasi  atau penyemprotan  sperma  dari  penis  ke  dalam vagina  buatan  pada  saat  penampungan,  maka sperma-sperma  yang  berada  di  bagian  cauda epididymis,  vas  deferens  dan  uretra  penis  akan terdorong  masuk  ke  dalam  tabung  penampung sperma.  Sperma  yang  berasal  dari  cauda epididymis  berumur  lebih  muda  daripada sperma yang berasal dari vas deferens dan uretra penis.  Dengan  demikian,  sperma-sperma  tua akan lebih cepat mengalami kematian dibandingkan  dengan  sperma-sperma  muda. Kandungan  nutrisi  juga  akan  mempengaruhi
motilitas  sperma.  Seiring  dengan  bertambahnya lama penyimpanan, ketersediaan nutrisi di dalam pengencer  akan  semakin  menipis.  Hal  ini disebabkan  karena  selama penyimpanan, nutrisi yang  tersedia  di  dalam  pengencer  digunakan oleh  sperma  untuk  mempertahan  kelangsungan hidupnya.
Keberadaan  asam  laktat  yang  semakin tinggi  di  dalam  pengencer  (Rosmaidar et  al ., 2013)    juga  akan  berdampak  negatif  terhadap motilitas  sperma.  Asam  laktat  diproduksi sebagai  produk  sampingan  metabolism  sperma yang  terjadi  di  dalam  keadaan  anaerob. Penyimpanan  sperma  di  dalam  tabung  tertutup tanpa oksigen menyebabkan sperma melangsungkan  metabolismnya  secara  anerob yang  umumnya  terjadi  di dalam  sitoplasma  sel. Dampak  langsung  dari  metabolism  anaerob adalah menumpuknya  asam laktat  yang  bersifat racun bagi sperma (Blegur et al . (2020) sebagai hasil  sampingan  metabolisme  dan  produksi energi  yang  jauh  lebih  rendah  yakni  hanya  2 ATP  yang  terbentuk  dari  1  molekul  glukosa. Kedua hal inilah yang turut berkontribusi negatif terhadap motilitas sperma.
Penurunan  kualitas  sperma  selama preservasi  juga  disebabkan  oleh    banyaknya jumlah  sperma  yang  mengalami  kematian,  dan sperma-sperma  yang  mati  tersebut  dapat meracuni  sperma  hidup  dan  motil.  Terjadinya penurunan  suhu  penyimpanan  juga  turut mempengaruhi  motilitas  sperma.  Penurunan suhu  penyimpanan  menyebabkan  lemahnya
ikatan  kovalen  protein  pada  membran  plasma, membran  mitokondria  dan  sitoskeleton  ( Cordova-Izquierdo et al .,  2006). Persentase motilitas terbaik hasil penelitian ini terdapat pada perlakuan P2 dan P3 dengan motilitas masing-masing 47,5 dan 50,0% pada hari ke lima penyimpanan. Hasil penelitian ini sedikit lebih rendah dari penelitian Meo et al . (2022), yang memperoleh motilitas 58% dengan penambahan SBT 7% ke dalam pengencer SKT. Walaupun demikian, kedua penelitian mengindikasikan  bahwa  penambahan  SBT  ke dalam  pengencer  SKT  berdampak  positif terhadap motilitas sperma sapi.

## Viabilitas Sperma
Viabilitas  adalah  indikator  lain  dari kualitas  sperma  dan  berhubungan  erat  dengan motilitas  sperma.  Umumnya  viabilitas  sperma selalu  lebih  tinggi  daripada  motilitas  sperma. Hal  ini  disebabkan  karena  variabel  viabilitas sperma  menghitung  semua  sperma  yang  hidup yang  terdiri  atas  sperma  yang  bergerak progresif,  berberak  sirkuler,  dan  bergerak  di tempat,  sedangkan  yang  tergolong  variabel motilitas hanya sperma yang bergerak progresif. Dengan demikian, perhitungan variabel viabilitas  dimaksudkan  untuk  mengontrol kesalahan  yang  mungkin  terjadi  pada  saat evaluasi  motilitas  yang  dilakukan  secara subyektif.  Viabilitas  sperma  ditampilkan  pada Tabel 2.
Tabel 2. Viabilitas sperma (%) di dalam pengencer CKT yang ditambahkan berbagai level SBT
Hari ke- P0 P1 P2 P3 P-value 0 85,46 ± 2,36 a 85,70 ± 1,88 a 84,83 ± 1,53 a 84,46 ± 2,50 a 0,782 1 78,36 ± 2,29 a 78,76 ± 1,51 a 80,82 ± 1,06 a 79,28 ± 2,69 a 0,263 2 69,04 ± 3,14 a 72,47 ± 2,31 b 76,00 ± 2,04 c 75,43 ± 2,08 bc 0,001 3 59,92 ± 3,08 a 65,03 ± 3,53 b 69,22 ± 1,08 b 67,20 ± 4,45 b 0,002 4 53,50 ± 3,37 a 59,66 ± 2,64 b 63,00 ± 3,89 b 61,86 ± 4,82 b 0,005 5 47,35 ± 1,13 a 51,08 ± 3,15 ab 56,84 ± 2,41 c 54,84 ± 3,93 bc 0,00 6 38,48 ± 3,5 a 43,23 ± 3,70 b 50,41 ± 1,99 c 46,59 ± 1,48 b 0,00
Superskrip dengan huruf yang sama pada baris yang sama menunjukkan perlakuan berpengaruh tidak signifikan (P>0,05). CKT= citrate-kuning telur, SBT= sari buah tomat, P0= CKT, P1= CKT+SBT 1%, P2= CKT+SBT 2%, P3= CKT+SBT 3%.
Penambahan  SBT  ke  dalam  pengencer CKT  tidak  dapat  meningkatkan  viabilitas sperma  (P>0,05)  yang  diamati  pada  hari  ke-0 dan  ke-1  penyimpanan.  Namun  sejak  hari  ke-2 penyimpanan terlihat perbedaan yang signifikan (P<0,05),  dengan  viabilitas  tertinggi  dihasilkan oleh perlakuan P2 dan P3 dibandingkan dengan perlakuan  P0  dan  P1  (P<0,05)  yang  teramati pada  hari  kelima  penyimpanan  (Tabel  2).    Hal
ini  semakin  memperkuat  kesimpulan  tentang efek  positif  penambahan  SBT  ke  dalam pengencer  SKT.    Data  pada  Tabel  2  juga menunjukkan  bahwa  kandungan  nutrisi  yang terkandung  di  dalam  SBT  selain  mendukung motilitas sperma jg berperan dalam meningkatkan kelangsungan hidup sperma.
Menurut  Rosmaidar et  al .  (2013), kandungan  vitamin  A  dan  C,  serta  lycopene
yang  terdapat  di  dalam  SBT  berperan    untuk meningkatkan  laju  metabolisma  fruktosa  untuk menghasilkan  energi  bagi  sperma  selama penyimpanan.  Peningkatan  laju  metabolism berkorelasi  positif  terhadap  ketersediaan  energi untuk kebutuhan sperma baik untuk mempertahankan daya hidup maupun motilitasnya.  Selain  itu,  keberadaan  ketiga senyawa  tersebut  di  dalam  SBT  sangat bermanfaat  untuk  menetralisir  radikal  bebas yang  diproduksi  dari  hasil  sisa  metabolime sperma. Radikal bebas dapat merusak lipid pada membran  plasma  sperma,  dimana  kerusakan membran  tersebut  dapat  mengganggu  proses transportasi air, ion dan berbagai senyawa yang dibutuhkan  oleh  sperma  untuk  kelangsungan hidupnya.

## Abnormalitas Sperma
Penilaian  abnormalitas  pada  sel  sperma sangat  penting  untuk  menentukan  apakah sperma  yang  dipreservasi  masih  layak digunakan  untuk  inseminasi  buatan.  Hal  ini disebabkan sperma yang abnormal tidak mampu membuahi  sel  telur  (Afiati et  al .,  2015). Abnormalitas  dapat  terjadi  di  bagian  kepala ataupun ekor sperma, dimana bentuk abnormalitas  tersebut  dapat  terjadi  sejak pembentukan sperma di dalam tubuli seminiferi testes,  selama  perjalanan  ke  epididimis,  selama pematangan  di  epididimis,  selama  ejakulasi, ataupun  terjadi  pada  saat  perlakuan  sperma pasca  penampungan.  Abanormalitas  sperma ditampilkan pada Tabel 3.
Tabel 3. Abnormalitas sperma (%) di dalam pengencer CKT yang ditambahkan berbagai level SBT
Hari ke- P0 P1 P2 P3 P-value 0 5,83 ± 0,99 a 5,70 ± 1,03 a 5,82 ± 1,75 a 5,67 ± 1,06 a 0,996 1 6,23 ± 0,87 a 6,00 ± 0,99 a 5,88 ± 1,62 a 5,76 ± 1,07 a 0,931 2 6,27 ± 0,75 a 5,79 ± 0,61 a 5,81 ± 063 a 5,72 ± 1,09 a 0,694 3 6,61 ± 0,82 a 6,25 ± 0,47 a 6,41 ± 0,74 a 5,88 ± 1,15 a 0,576 4 6,80 ± 0,71 a 6,82 ± 0,67 a 6,66 ± 0,53 a 6,77 ± 0,81 a 0,985 5 7,07 ± 0,84 a 6,81 ± 0,71 a 7,03 ± 0,61 a 7,35 ± 0,93 a 0,748 6 6,92 ± 0,81 a 7,08 ± 0,49 a 7,22 ± 0,35 a 7,51 ± 0,93 a 0,592
Superskrip dengan huruf yang sama pada baris yang sama menunjukkan perlakuan berpengaruh tidak signifikan (P>0,05). CKT= citrate-kuning telur, SBT= sari buah tomat, P0= CKT, P1= CKT+SBT 1%, P2= CKT+SBT 2%, P3= CKT+SBT 3%.
Data  pada  Tabel  3  menunjukkan  bahwa penambahan  SBT  ke  dalam  pengencer  CKT berpengaruh  tidak  nyata  (P>0,05)  terhadap abnormalitas sperma yang diamati sejak hari ke- 0  hingga  kelima  penyimpanan.  Abnormalitas pada keempat perlakuan tergolong rendah yakni berkisar  antara  6,81  hingga  7,35%  pada  hari kelima  penyimpanan.  Hal  ini  mengindikasikan bahwa  semua  perlakuan  yang  dirancang  baik pada  perlakuan  CKT  secara  tunggal  maupun dalam kombinasi dengan SBT dapat mempertahankan  tingkat  abnormalitas  yang rendah  (berada  di  bawah  20%)  dan  memenuhi syarat  digunakan  untuk  keperluan  inseminasi buatan (Krisnaningsih (2017).
Nilai abnormalitas sperma pada semen  segar  sebelum  pengenceran  berada  di bawah  6,00  %,  namun  setelah  penyimpanan selama  lima  hari    bertambah  menjadi  7,35% pada  perlakuan  P3;  sehingga  mengalami pertambahan tingkat abnormalitas sekitar 1,50%. Adanya  peningkatan  abnormalitas  sperma tersebut  lebih  banyak  terjadi  pada  saat pembuatan preparat ulas untuk evaluasi viabiltas dan  abanormalitas  sperma.  Pembuatan  preparat
ulas  melibatkan  gesekan  dua  permukaan  object glass  sehingga  dapat  berakibat  putusnya  ekor sperma  atau  pemisahan  antara  kepala  dan  ekor sperma.
Peningkatan abnormal sperma  juga dapat disebabkan  oleh  adanya  kejutan  dingin  dan perubahan  pH  pengencer  yang  terjadi  selama penyimpanan  (Afiati et  al .,  2015).  Penurunan temperatur  dari  suhu  kamar  ke  suhu  5oC  dapat menyebabkan  kerusakan  pada  stuktur  membran sel  baik  pada  bagian  kepala,  leher,  tengah maupun  ekor  sperma.  Kerusakan  membran  sel pada bagian tengah sperma dapat menyebabkan terpisahnya ekor dari kepala sperma, sedangkan jika  kerusakan  tersebut  terjadi  bagian  tengah ataupun  ekor  sperma  menyebabkan  ekor  putus. Hal  yang  demikian  juga  terjadi  ketika  tejadi penuruna  pH  akibat  penumpukkan  asam  laktat. Faktor  lainnya  yang  ikut  berperan  adalah  umur sperma  yang  semakin  tua  menyebabkan peningkatan abnormalitas (Solihati, 2008).
Secara  umum,  bentuk  abnormalitas sperma yang teramati adalah ekor putus, kepala tanpa  ekor,  adanya  cytoplasmic  droplet  pada bagian  leher,  tengah  atau  ekor  sperma.  Ketiga
bentuk  abnormalitas  tersebut  digolongkan sebagai  abnormalitas  sekunder  yang  terjadi setelah  sperma  meninggalkan  tubuli  seminiferi testes,  sedangkan  bentuk  abnormalitas  primer seperti  kepala  terlalu  kecil  atau  terlalu  besar, kepala  ganda,  dan  ekor  ganda  tidak  ditemukan baik  pada  semen  segar  maupun  setelah penyimpanan in vitro.

## Daya Tahan Hidup Sperma
Daya  tahan  hidup  (DTH)  menjadi  salah satu  variabel  penting  dalam  evaluasi  kualitas sperma.  Semakin  tinggi  DTH  semakin  tinggi pula  dayaguna  sperma  yang  dipreservasi. Pengukuran  DTH  dilakukan  dalam  satuan  hari berdasarkan lama sperma bertahan hidup hingga persentase  motilitasnya  menurun  hingga  40% (Hine et  al .,  2014).  Daya  tahan  hidup  sperma hasil penelitian di tampilkan pada Gambar 1.
Gambar 1. Viabilitas sperma (%) di dalam pengencer CKT yang ditambahkan berbagai level SBT
Superskrip dengan huruf yang sama pada baris yang sama menunjukkan perlakuan berpengaruh tidak signifikan (P>0,05). CKT= citrate-kuning telur, SBT= sari buah tomat, P0= CKT, P1= CKT+SBT 1%, P2= CKT+SBT 2%, P3= CKT+SBT 3%.
Daya  tahan  hidup  sperma  secara signifikan lebih tinggi pada perlakuan P2 dan P3 daripada  P0  dan  P1  (P<0,05).  Besaran peningkatan  DTH  pada  perlakuan  P2  dan  P3 mencapai 1,33-1,44 hari dibandingkan perlakuan kontrol.  Hal  yang  demikian  juga  terjadi  pada perlakuan  P1 dengan  peningkatan  DTH  sebesar 0,74  hari.  Tingginya  DTH  pada  perlakuan  P2 dan  P3  berkaitan  erat  dengan  persentase motilitas  sperma  yang  lebih  tinggi  pada  kedua perlakuan tersebut dibandingkan dengan P0 dan P1.  Penyebab  hal  tersebut  diduga  disebabkan oleh  adanya  tambahan  nutrisi  dan  antioksidan yang  terkandung  di  dalam  SBT  seperti  vitamin A, vitamin C, lycopene, karbohidrat dan protein. Senyawa-senyawa  tersebut  bermanfaat  sebagai antioksidan,  sumber  energi  dan  perlindungan sperma  terhadap  kejutan  dingin  yang  dialami sperma  selama  penyimpanan  (Rosmaidar et  al ., 2013).
Keberadaan  karbohidrat  seperti  glukosa dan  fruktosa  berberan  penting  sebagai  substrat untuk  memproduksi  energi  dalam  bentuk
adenosin  trifosfat  (ATP).  Metabolisme  satu molekul glukosa (Barbonetti et al ., 2010) dapat menghasilkan  2  molekul  ATP  dalam  kondisi tanpa  oksigen,  atau  38  ATP  dalam  keadaan cukup  oksigen.  Penguraian  ATP  menjadi adenosin  difosfat  (ADP)  dan  adenosin monofosfat  (AMP)  akan  terjadi  ketika  sel sperma membutuhkan energi untuk mempertahankan  kelangsungan  hidup  dan motilitasnya. Dengan demikian bahan pengencer yang  mengandung  substrat  energi  yang  lebih tinggi  akan  menghasilkan  jumlah  ATP  yang lebih banyak pula.
Selain itu, keberadaan berbagai antioksidan  seperti  vitamin  A,  vitamin  C,  dan lycopene  di  dalam  SBT  turut  memberikan kontribusi  terhadap  peningkan  DTH  sperma melalui  peranannya  dalam  menetralisir  radikla bebas  yang  berpotensi  merusak  membran  dan DNA sperma. Demikian pula dengan kandungan protein  yang  terdapat  di  dalam  SBT  sangat bermanfaat  sebagai  pelindung  sperma  selama penyimpanan pada suhu dingin.
Hasil penelitian ini menyimpulkan bahwa penambahan  sari  buah  tomat  ke  dalam pengencer  citrate-kuning  telur  dapat  menekan laju  penurunan  kualitas  sperma  selama penyimpanan in vitro. Perlakuan yang mendapat
penambahan  sari  buah  tomat  menghasilkan kualitas  sperma  yang  lebih  tinggi  daripada perlakuan  kontrol (tanpa  penambahan  sari  buah tomat),  dengan  level  sari  buah  tomat  terbaik adalah 2-3%.

## SIMPULAN
Penambahan sari buah tomat sebanyak 2 - 3%  ke  dalam  pengencer  citrate-kuning  telur mampu  mempertahankan  kualitas  sperma  sapi
angus  yang  lebih  baik  dibandingkan  perlakuan kontrol.

## SARAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  maka  disarankan dalam  menggunakan  pengencer  citrate-kuning
telur  untuk  preservasi  sperma  sapi,  perlu ditambahkan sari buah tomat sebanyak 2-3%.

## DAFTAR PUSTAKA
Afiati  F,  Yulnawati  MR,  Arifiantini  RI.  2015.
Abnormalitas  sperma  domba  dengan frekuensi penampungan berbeda. Pros Sem Nas  Masy  Biodiv  Indon .  1(4):  930 – 934. https://doi.org/10.13057/psnmbi/m010449.
Astuti  ME.  2018.  Pengaruh  Penambahan  Sari Buah  Tomat  (Solanum  lycopersicum  ) Sebagai  Pengencer  Alami  Terhadap Kualitas  Penyimpanan  Spermatozoa  Sapi Bali  (Bos  sondaicus). Bionature 18(2):
129 – 139. https://doi.org/10.35580/bionature.v18i2.6 144 .
Barbonetti  A,  Vassallo  MRC,  Fortunato  D,
Francavilla  S,  Maccarrone  M,  Francavilla F. 2010. Energetic metabolism and human sperm  motility:  impact  of  CB1  receptor activation. Endocrinology 151(12):  5882 – 5892. https://doi.org/10.1210/en.2010- 0484 .
Barek  ME,  Hine  TM,  Nalley  WM,  Belli  H. 2020.  Pengaruh  penambahan  sari  wortel dalam  pengencer  sitrat  kuning  telur terhadap  kualitas  spermatozoa  kambing bligon. Jurnal  Nukleus  Peternakan 7(2): 109 – 117. http://ejurnal.undana.ac.id/nukleus/article/v iew/3152 .
Blaner  WS,  Shmarakov  IO,  Traber  MG.  2021.
Vitamin  A  and  Vitamin  E:  Will  the  real Antioxidant  Please  Stand  Up?Annual Review of Nutrition 41:105-131.
Blegur J, Nalley WM, Hine TM. 2020. Pengaruh penambahan  virgin  coconut  oil  dalam pengencer  tris  kuning  telur  terhadap kualitas  spermatozoa  sapi  Bali  selama
preservasi. Jurnal  Nukleus  Peternakan 7(2): 130 – 138.
Cordova-Izquierdo  A,    Oliva  JH,  Lleo  B, Garc´ıa -Artiga  C,    Corcuera  BD,  Perez- Guti  ´  errez  JF. 2006. Effect  of  different thawing  temperatures  on  the  viability,  in vitro  fertilizing  capacity  and  chromatin condensation  of  frozen  boar  semen packaged  in  5  ml  straws. Animal Reproduction Science 92: 145 – 154.
Dongkot S, Marawali A, Hine TM, Nalley WM. 2022.  Kualitas  semen  beku  babi  duroc dalam  pengencer  tris  modifikasi  dengan waktu  ekuilibrasi  yang  berbeda. Jurnal Nukleus Peternakan 9(1): 73 – 84.
Krisnaningsih ATN, Ama KT, Kusumawati ED. 2017. Kualitas spermatozoa semen sexingkambing  peranakan  etawa  (pe) dengan  metode  sedimentasi  putih  telur menggunakan  pengencer  yang  berbeda. Jurnal  Sains  Peternakan 5(1):  39 – 49. https://doi.org/10.21067/jsp.v5i1.3136 . Hine  TM,  Burhanudin,  Marawali  A.  2014. Efektivitas  air  buah  lontar  dalam mempertahankan  motilitas,  viabilitas  dan daya  tahan  hidup  spermatozoa  sapi  bali.
Jurnal Veteriner 15(2): 263-273.
Maulida  D,  Naufal  LC.  2014.  Ekstraksi antioksidan  (likopen)  dari  buah  tomat dengan menggunakan solven campuran, n- heksana,  aseton,  dan  etanol. Skripsi , Faklutas  Teknik,  Universitas  Diponegoro, pp: 1-32.
Meo MY, Telnoni SP, Dilak HI. 2022. Kualitas spermatozoa sapi angus (bos taurus) dalam pengencer  tris  kuning  telur  dengan
substitusi  ekstrak  sari  buah  tomat. Flobamora  Biological  Journal 1(1):  10 – 16. https://ejurnal.unisap.ac.id/index.php/biolo gicalJournal/article/view/167 .
Nalley  WMM,  Arifiantini  RI.  2011.  The viability  of  local  ram  semen  in  tris  buffer with  three  different  egg  yolks. Animal Production 13 (1):  39 – 44.
Peris-Frau  P,  Soler  AJ,  Iniesta-Cuerda  M , Martín-Maestro  A,  Sánchez-Ajofrín  I, Medina-Chávez  DA,  Fernández-Santos MR,  García-Álvarez  O,  Maroto-Morales A,  Montoro  V,  Garde  JJ.  2020.  Sperm Cryodamage in Ruminants: Understanding the  Molecular  Changes  Induced  by  the Cryopreservation  Process  to  Optimize Sperm  Quality. Int.  J.  Mol.  Sci. 21,  2781; https://doi.org/10.3390/ijms21082781 . Pubiandara  S,  Suharyati  S,  Hartono  M.  2016. Pengaruh  penambahan  dosis  rafinosa dalam  pengencer  sitrat  kuning  telur terhadap  motilitas,  persentase  hidup  dan abnormalitas  spermatozoa  sapi  ongole. Jurnal  Ilmiah  Peternakan  Terpadu 4 (4): 292-299. https://doi.org/10.23960/jipt.v4i4.139 . Pylik  J,  Codl  R,  Duchacek  J,  Savvulidi  FG, Vrhel  M,  Stadnik  L.  2023.  Low  density lipoprotein  supplementation  improves  the quality  of  Holstein  bulls  insemination doses. Czech Journal of Animal Science 68 (2): 64-71. https://doi.org/10.17221/223/202-CJAS . Rosmaidar,  Dasrul,  Lubis  TM.  2013.  Pengaruh penambahan sari buah tomat dalam media pengencer terhadap motilitas dan viabilitas spermatozoa  kambing  boer  yang  disimpan
pada suhu 3 – 5°C. Jurnal Ilmiah Peternakan 1(1): 7-17. http://jurnal.umuslim.ac.id/index.php/JIP/a rticle/view/208/132 .
Sengupta  P,  Durairajanayagam  D,  Agarwal  A.
2020. Fuel/Energy Sources
of
Spermatozoa.  In:  S.  J.  Parekattil et  al. (eds.),  Male  Infertility.  Springer  Nature Switzerland AG. , https://doi.org/10.1007/978-3-030-32300- 426
Shahverdi  A,  Drevet  JR,  Alizadeh  A,  Ghaleno LR,  Valojerdi  MR.  2021.  Oxidation  of Sperm  DNA  and  Male  Infertility. Antioxidants 10, 97.
Solihati  N.  2008.  Studi  terhadap  kualitas  dan daya  tahan  hidup  spermatozoa  cauda epididimidis  domba  garut  menggunakan berbagai  jenis  pengencer. Proc.  Seminar
Nasional Teknologi Peternakan DanVeteriner,  Puslitbang  Peternakan, Bandung . Pp:  401 – 408.
Umar  SH,  Queljoe  ED,  Tendean  L.  2015. Pengaruh  pemberian  ekstrak  kulit  buah manggis (garcinia mangostana l.) terhadap kualitas  spermatozoa  wistar  jantan  (rattus norvegicus)  yang  diberi  paparan  suhu panas. Jurnal  E-Biomedik 3 (2):  670-675. https://doi.org/10.35790/ebm.3.2.2015.941 5 .
Varela  E,  Rojas  M,  Restrepo  G.  2019. Membrane  stability  and  mitochondrial activity of bovine sperm frozen with low- density  lipoproteins  and  trehalose. Reproduction in Domestic Animals 55(2): 146-153. https://doi.org/10.1111/rda.13599