## EFEKTIFITAS EKSTRAK ETANOL DAUN RUMPUT MALAYSIA
( Chromolaena odorata L) PADA LUKA DIABETES MENCIT JANTAN ( Mus muscullus )
Submitted : 11 September 2019 Edited : 15 Juni 2020
Accepted : 25 Juni 2020
Setya Enti Rikomah, Fiske Rani Firdita
Akademi Farmasi Al-Fatah Bengkulu Jl. Indragiri gang 3 Serangkai Padang Harapan Bengkulu Email : setyaentirikomah@gmail.com

## ABSTRACT
Diabetic wounds are a form of diabetic complications that results in wounds experiencing deeper tissue damage and a longer healing process due to the condition of hyperglycemia. One of  the  plants  known  to  the  community  as  a  wound  medicine  is  the  Malaysian  grass  plant (Chromolaena  odorata  L).  The  purpose  of  this  study  was  to  determine  whether  the  ethanol extract  of  Malaysian  grass  leaves  can  accelerate  the  wound  healing  process  in  diabetes mice.The research process using the induction of alloxan monohydrate and the wound observed in this study was a cut. Diabetes mice were injured along 1.5 cm on the back of the scalpel and then  divided  into  5  treatment  groups  namely  not  treated  (KN),  ointment  Betadine®  (KP), ethanol extract of Malaysian grass leaves at a dose of 5 mg (P1), 10 mg ( P2) and 15 mg (P3). Basting  is  done  twice  a  day  for  14  days.One  Way  Anova    analysis  results  0.033>  0.05  which shows  that  there  are  significant  differences  between  each  treatment  group.  In  the  study  it was found  that  treatment  group  3  with  a  dose  of  15  mg  better  accelerated  wound  healing  and followed by positive control and treatment group 1.
Keywords : Chromolaena odorata,Wound healing, Diabetic, Mice

## PENDAHULUAN
Diabetes  mellitus    menjadi  penyebab dari  1,6  juta  kematian  dan  2,2  juta  lainnya disebabkan oleh glukosa darah tinggi. Jumlah penderita  diabetes  melitus  saat  ini  mencapai 422  juta  jiwa.    Prevalensi  diabetes  melitus meningkat  lebih  cepat  di  negara-negara berpenghasilan menengah dan rendah.
Diabetes  menjadi  penyebab  utama  kebutaan, gagal  ginjal,  serangan  jantung,  stroke  dan amputasi tubuh bagian bawah seperti kaki (1) . Luka  diabetes  salah  satu  bentuk komplikasi penyakit diabetes yang mengakibatkan  luka  mengalami  kerusakan jaringan  yang  lebih  dalam  serta  mengalami proses  penyembuhan  yang  lebih  lambat karena adanya kondisi hiperglikemia. Kondisi
ini mengakibatkan peningkatan resiko infeksi pada  luka  karena  adanya  penurunan  aliran darah,  respon  imun  dan  nutrisi  pada  daerah luka (2) .  Sekitar  68%  penderita  gangren diabetik  adalah  laki-laki,  sebanyak  14,3% akan  meninggal  dalam  setahun  pasca amputasi dan 37% akan meninggal tiga tahun pasca-operasi (3,4) .
Tumbuhan rumput malaysia ( Chromolaena  odorata L)  dikenal  juga dengan  sebutan  kirinyuh  yang  sangat  mudah tumbuh  dan  dapat  ditemukan  secara  liar  di kebun  atau  hutan,  sebagian  masyarakat menggunakan  remasan  tumbuhan  ini  sebagai obat  luka.  Tumbuhan  rumput  malaysia ( Chromolaena odorata L)belum bayak dimanfaatkan  secara  optimal  sebagai  bahan
pengobatan dalam dunia kesehatan (5) .
Tanaman  rumput  malaysia  ( Chromolaena odorata L)  terbukti  berpotensi  sebagai antidiabetes  pada  mencit  dengan  dosis  5
mg (6) . Tanaman rumput malaysia ( Chromolaena odorata L)mengandung senyawa metabolit sekunder alkaloid, flavonoid, steroid, saponin, fenolik, terpenoid dan tanin (7,8) . Senyawa-senyawa tersebut telah diketahui  berperan  dalam  penyembuhan  luka melalui mekanisme antimikroba, meningkatkan neovaskularisasi dan kepadatan kolagen, serta sebagai
adstringensia dan antioksidan (9) . Krim ekstrak etanol  daun  rumput  malaysia  ( Chromolaena odorata L) diketahui mempercepat penyembuhan luka terbuka pada mencit lebih cepat dengan konsentrasi 10% (7) .

## METODE PENELITIAN Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian  ini  akan  dilakukan  pada bulan Januari sampai dengan bulan Juni 2018 di  Laboratorium  Fitokimia  dan  Farmakologi Akademi Farmasi Yayasan Al-Fatah Bengkulu. Penelitian ini merupakan
penelitian yang bersifat experimental.

## Alat dan Bahan Penelitian
Handscoon,  masker,  spuit,  ,  pisau bedah, timbangan analitik digital, satu set alat ukur  gula  darah,  spatel,  pipet  tetes.  rumput malaysia  ( Chromolaena  odorata L),  etanol 70%,  aloksan monohydrate,  salep Betadine® sebagai  kontrol  positif,  Na  CMC  1%,  pisau cukur dan makanan standar mencit.

## Penapisan Fitokimia
Penapisan  Fitokimia  meliputi  Uji alkaloid,  flavonoid,  triterpenoid,  steroid, saponin dan tanin.

## Evaluasi Ekstrak
Pemeriksaan karakteristik ekstrak etanol daun Rumput Malaysia yang dilakukan
yaitu organoleptik, kelarutan, pemeriksaan pH, rendemen, susut pengeringan dan kadar abu.

## Perlukaan Pada Hewan Coba Diabetes
Pada  penelitian  ini  digunakan  25 ekor  mencit  yang  dibagi  menjadi  5 kelompok. Hewan coba yang telah dipuasakan dari makanan  selama 8-12 jam (hanya  disediakan  air)  diinduksi  dengan aloksan  3mg/20  gr  BB.  Setelah  mencit menderita  diabetes  menunjukkan  kadar gula  darah  >176  mg/dl (10) .  Kemudian mencit  diberi  luka  sayatan  pada  punggung masing-masing  mencit  sepanjang  1,5  cm dan kedalaman 2 mm.
a. Kelompok  I  sebagai  kontrol  negatif diinduksi diabetes tidak diobati
b. Kelompok  II  sebagai  kontrol  positif, diinduksi diabetes, diberi luka dan diberi obat komersial povidon iodine 10% .
c. Kelompok  III  sebagai  konsentrasi  I diinduksi  diabetes,  diberi  luka,  diberi ekstrak daun rumput malaysia ( Chromolaena odorata L) sebanyak 5 mg setiap pengolesan.
d. Kelompok  IV  sebagai  konsentrasi  II diinduksi  diabetes,  diberi  luka,  diberi ekstrak daun rumput malaysia ( Chromolaena  odorata L)  sebanyak  10 mg setiap pengolesan.
e. Kelompok  V  sebagai  konsentrasi  III diinduksi  diabetes,  diberi  luka,  diberi ekstrak daun rumput malaysia
( Chromolaena  odorata L)  sebanyak  15 mg setiap pengolesan.
Ekstrak  etanol  daun  rumput  malaysia ( Chromolaena  odorata L)  dioleskan  2 kali/hari  selama  14  hari.  Panjang  penutupan luka  secara  morfologis  diamati  dengan  cara mengukur  panjang  luka  kulit  mencit  semua kelompok  perlakuan  dengan  menggunakan penggaris  selama  14  hari.  Pengukuran dilakukan pada hari ke 0, 3,7 dan 14 (7,11) .

## Analisa Data
Analisa  data  menggunakan  one  way anova dengan tingkat kepercayaan 95%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penyembuhan luka merupakan proses yang  kompleks  untuk  mengembalikan struktur  dan  anatomi  kulit.  Penyembuhan luka  terdiri  dari  4  fase  yaitu  fase hemostatis,  fase  inflamasi,  fase  proliferasi dan fase maturasi atau resorbsi (11) .
Pada  penelitian  ini  fase  hemostatis dapat  terlihat  pada  hari  ke-0  yaitu  sejak terjadinya luka ditandai dengan pendarahan pada luka dan luka tampak merah (Tabel I). Pendarahan  mulai  terjadinya  luka  sampai 30  menit  kemudian.  Secara  teori,  fase hemostatis  dapat  terlihat  pada  10-30  menit setelah terjadinya luka (11) . Setelah dilakukan pengolesan kontrol positif
tampilan  luka  masih  memiliki  sedikit pendarahan  jika  dibandingkan  pada  saat
mulai  terjadinya  luka.  Kemudian  pada perlakuan  yang  diolesi  ekstrak  etanol  daun rumput malaysia dengan dosis pemberian 5 mg, 10 mg dan 15 mg tidak lagi mengalami pendarahan.  Hal  ini  karena  pada  fase  ini senyawa  metabolit  sekunder  yang  bekerja adalah  tanin  dan  saponin.  Senyawa  tanin bersifat  astringensia  yang  menyebabkan pori-pori  kulit  mengecil  dan  memperkeras kulit  yang  membantu  re-epitelisasi (12) . Kandungan  tanin  juga  dapat  berfungsi sebagai  antioksidan  yang  menghambat pertumbuhan  tumor  dan  enzim.  Selain  itu kandungan  tanin  juga  berfungsi  sebagai antiseptik  yang  dapat  mencegah  kerusakan yang disebabkan oleh bakteri dan jamur (13) . Pada fase hemostatis senyawa saponin yang dapat  digunakan untuk menghentikan pendarahan yang memiliki sifat mengendapkan ( precipitating ) dan mengumpulkan  ( coagulating )  sel  darah merah (14) .
Tabel 1. Hasil Pengamatan Pengukuran Penutupan Luka pada Mencit Diabetes
Perlakuan Panjang luka (cm) Hari ke 0 Hari ke 3 Hari ke 7 Hari ke 14 Kontrol Negatif 1,5±0 1,29±0,07 0,74±0,14 0,18±0,09 Kontrol Positif 1,5±0 1,13±0,13 0,75±0,16 0±0 Perlakuan 1 1,5±0 1,162±0,2 0,79±0,12 0±0 Perlakuan 2 1,5±0 1,06±0,18 0,84±0,13 0±0 Perlakuan 3 1,5±0 1,11±0,08 0,55±0,1 0±0
Tabel 2. Persentase Penyembuhan luka Diabetes Perlakuan Persentase penyembuhan luka % Hari ke 0 Hari ke 3 Hari ke 7 Hari ke 14 Kontrol Negatif 0 14 50,67 88 Kontrol Positif 0 24,67 50 100 Perlakuan 1 0 22,53 47,33 100 Perlakuan 2 0 29,33 44 100 Perlakuan 3 0 26 63,33 100
Pada  penelitian  ini,  fase  selanjutnya terjadi pada hari ke-3 ditandai dengan merah dan  bengkak  pada  daerah  luka  (Tabel  II). Hal  ini  dikarenakan  banyaknya  sel  neutrofil dan  makrofag  pada  luka  yang  membantu fagositosis  bakteri  dan  benda  asing  yang menyebabkan  bengkak (15) .  Pada  kontrol negatif  luka  masih  terbuka  dan  merah dengan  panjang  rata-rata  penutupan  luka 1,29  cm  dan  persentase  penyembuhan  luka 14%.  Kontrol  positif  mempunyai  tampilan luka  berwarna  merah  tetapi  tidak  lagi memiliki bengkak. Panjang rata-rata penutupan  luka  pada  kontrol  positif  adalah 1,13  cm  dengan  persentase  penyembuhan 24,67%.  Fase  ini  adalah  fase  inflamasi  atau disebut  juga  fase  radang.  Inflamasi  adalah sebuah  bagian  vital  dari  respon  normal untuk  luka  atau  adanya  infeksi,  akan  tetapi jika infeksi menjadi luas dan lama maka hal itu dapat memperlambat proses
penyembuhan  atau  bisa  menyebabkan  luka yang lebih berbahaya (13) .
Pada  kelompok  ekstrak  etanol  daun rumput  malaysia  mempunyai  tampilan  luka yang hampir sama yaitu berwarna merah dan bengkak  pada  daerah  luka  serta  panjang rata-rata  penutupan  luka  pada  perlakuan  1 adalah 1,162 cm dengan persentase penyembuhan luka 22,53%,  pada perlakuan
2  panjang  rata-rata  penutupan  luka  adalah
1,06 cm dengan persentase 29,33%, sedangkan  pada  perlakuan  3  panjang  rata- rata  penutupan  luka  adalah  1,11  cm  dengan persentase penyembuhan 26%. Pada hari ke- 3  perlakuan  2  dengan  dosis  pengolesan  10 mg  memberikan  efek  penyembuhan  yang lebih  baik  dibandingkan  perlakuan  1  dan perlakuan 3. Hal ini dikarenakan pengolesan ekstrak  pada  perlakuan  1  dengan  dosis pengolesan  5  mg  tidak  meratanya  ekstrak saat pengolesan dan memiliki dosis pemberian  terlalu  rendah,  sedangkan  pada perlakuan 3 dengan dosis pengolesan 15 mg terlalu  tebalnya  ekstrak  pada  luka  sehingga tidak memberikan efek yang optimal.
Pada fase inflamasi senyawa metabolit  sekunder  dari  daun  rumput malaysia  yang  bekerja  adalah  saponin,
flavonoid dan tanin yang memiliki kemampuan  antimikroba  berupa  antibakteri dan  antifungi (9) .  Hal  ini  membantu  dalam melawan  infeksi  mikroba  yang  terjadi  di daerah  luka,  sehingga    fase  inflamasi  dapat berjalan normal  dan luka segera mengalami fase  proliferasi.  Selain  itu  kandungan flavonoid    berfungsi  sebagai  analgetik menyebabkan  yang  mencit  tidak  menjadi hiperaktif  jika  dibandingkan  dengan  mencit yang  diolesi  dengan  salep  Betadine®    yang mengandung Povidone Iodine (13) .
Pada penelitian ini penyembuhan luka fase  proliferasi,  yaitu  fase  pembentukan jaringan baru berupa re-epitelisasi, neovaskularisasi dan pembentukan kolagen (16) .    Pada  penelitian  ini  fase proliferasi  dapat  dilihat  pada  hari  ke-7 ditandai  dengan  luka  yang  mulai  menutup. Fase proliferasi dapat berlangsung pada hari ke 5-21 setelah terjadinya luka. Pada kontrol negatif  luka  sudah  mengering  dan  mulai membentuk  jaringan  baru  dengan  panjang rata-rata  penutupan  luka  0,74  cm  dan persentase  penyembuhan  luka  50,67%. Perlakuan dengan salep Betadine®
memiliki  tampilan  luka  yang  sama  dengan perlakuan  ekstrak  etanol  daun  rumput malaysia.
Pada  kelompok  ekstrak  etanol  daun rumput  malaysia  mempunyai  tampilan  luka yang  sama  yaitu  luka  sudah  menutup  dan kulit  mencit  pada  daerah  bekas  luka berwarna merah. Panjang rata-rata penutupan  luka  pada  perlakuan  1  dengan dosis  pengolesan  5  mg  adalah  0,79  cm  dan persentase  penyembuhan  luka  47,33%, panjang  rata-rata  penutupan  luka  pada perlakuan 2 dengan dosis pengolesan 10 mg adalah 0,84 cm dan persentase penyembuhan  luka  44%  sedangkan  pada perlakuan 3 dengan dosis pengolesan 15 mg memiliki  panjang  rata-rata  0,55  cm  dan persentase penyembuhan luka 63,33%. Pada hari  ke-7  perlakuan  3  memiliki  persentase penyembuhan yang lebih baik dibandingkan perlakuan  1  dan  perlakuan  2.  Hal  ini
dikarenakan  terjadi  penumpukan  ekstrak pada  perlakuan  sebelumnya  yang  mana  saat terkelupasnya  ekstrak  dari  kulit  mencit  juga terjadi penutupan luka.
Tabel 3. Hasil  pemeriksaan  Karakteristik Etanol  Daun  Rumput  Malaysia ( Chromolaena Odorata L) Karakteristik Ekstrak Ekstrak etanol daun rumput malaysia a. Organoleptik
● Konsistensi
● Warna ● Bau ● Rasa Ekstrak kental Hijau pekat Khas Pahit b. Kelarutan ● Aquadest
● Etanol 70% ● Etanol 96% Larut Agak sukar larut Praktis tidak larut c. Pemeriksaan pH 5,00 (asam) d. Rendemen ekstrak 27,42% e. Susut pengeringan 2% f. Kadar abu 3,6%  ** Tabel 4. Penapisan Fitokimia Ekstrak Etanol  Daun  Rumput  Malaysia ( Chromolaena Odorata L) No. Senyawa Kimia Hasil Pengamatan Keterang an 1. Flavonoid Warna jingga + 2. Saponin Timbulnya busa + 3. Terpenoid Warna merah + 4. Tanin Warna hijau + 5. Steroid Warna merah - 6. Alkaloid Gumpalan putih + Keterangan : (+) menunjukkan reaksi positif (-) menunjukkan reaksi negatif Pada fase proliferasi senyawa metabolit  sekunder  daun  rumput  malaysia adalah  flavonoid,  alkaloid  dan  triterpenoid. Senyawa flavonoid berperan dalam aktivitas
antioksidan,  sehingga  dapat  menghambat pelepasan  senyawa  oksigen  reaktif  pada jaringan  luka  yang  dapat  merusak  sel-sel pada  jaringan  luka.  Selain  itu,  flavonoid merupakan vasculoprotectoragent yang
merupakan agen untuk memperbaiki peredaran  darah  dengan  meningkatkan pembentukan kapiler darah atau neovaskularisasi (17) .  Senyawa  alkaloid  dan triterpenoid  memiliki  kemampuan  untuk meningkatkan sintesis kolagen yang
merupakan  salah  satu  komponen  yang penting dalam penyembuhan luka (18) .
Hasil  pengamatan  pada  hari  ke-14, luka  pada  kontrol  negatif  belum  hanya mencapai  88%  penyembuhan  luka  dengan panjang  luka  0,18  cm.  Tampilan  luka  pada kontrol  negatif  masih  membentuk  jaringan baru  berwarna  merah.  Kontrol  positif  dan kelompok  perlakuan  dengan  ekstrak  etanol daun  rumput  malaysia  memiliki  persentase penyembuhan  100%.  Ditandai  dengan  tidak adanya lagi jaringan berwarna merah dan di sekitar  bekas  luka  sudah  mulai  ditumbuhi rambut.  Kontrol  negatif  mengalami  proses penyembuhan  yang  lebih  lama,  hal  ini karena  induksi  aloksan  mengakibatkan mencit  dalam  kondisi  hiperglikemia  yang dapat berpengaruh pada proses
penyembuhan  luka.  Semakin  tinggi  kadar glukosa  darah  maka  semakin  lama  pula waktu penyembuhannya (19) .
Pada  penelitian  ini  kelompok  terbaik adalah perlakuan 3 dengan dosis pengolesan 15  mg  memiliki  tingkat  penyembuhan terbaik  pada  hari  ke-9.  Sedangkan  pada perlakuan  kontrol  positif  (salep  Betadine®) memiliki  tingkat  penyembuhan  terbaik  pada hari  ke-10.  Sedangkan  pada  pada  penelitian Rahmawati  (2014),  dengan  pemberian  30 gram  gerusan  daun  petai  cina  merupakan kelompok  perlakuan  terbaik  dengan  lama penyembuhan  terbanyak  pada  hari  ke-5 sedangkan  pada  perlakuan Povidone iodine  10% yang  merupakan  kontrol positif  memiliki lama  penyembuhan
terbanyak  pada  hari  ke-10 (13) .  Dimana kondisi  hiperglikemia  dapat  menghambat proses  penyembuhan  luka  karena  adanya hambatan  sirkulasi  darah  dan  oksigen akibat peningkatan kadar gula darah (20) . Hasil  uji  normalitas  didapatkan nilai  signifikansi  0,2  (p>0,05)  yang berarti data terdistribusi normal. Sehingga dapat  dilanjutkan  pada  uji  homogenitas. Hasil  uji  homogenitas  didapatkan  nilai signifikansi  0,061  (p>0,05)  yang  artinya varian  data  homogen,  dengan  hasil tersebut  dilakukan  pengujian  lebih  lanjut dengan One  Way  Anova .  Berdasarkan hasil  analisa  data One  Way  Anova diketahui nilai signifikansi 0,033
(p>0,05)  yang  berarti  terdapat  perbedaan yang  bermakna  pada  setiap  kelompok perlakuan.

## SIMPULAN
Ekstrak etanol daun rumput
malaysia  ( Chromolaena  odorata L)  dapat
mempercepat  penyembuhan  luka  mencit diabetes.
Perlakuan terbaik pada penyembuhan luka diabetes mencit adalah perlakuan  3  dengan  dosis  15  mg  yang diikuti kontrol positif dan perlakuan 1.

## DAFTAR PUSTAKA
1. World  Health  Organization.  2016. Global Report of Diabetes. http://www.who.int/entity/diabetes/gl obal-report/en/index.html. diunduh
tanggal 13 November 2017 (21.31).
2. Brem  H.,  and  Tomic  Canic  M.  2007. Cellular  and  Molecular  Basis  of Wound  Healing  in  Diabetes. J  Clin Investig. 117:1219-1222.
3. Tjokroprawiro  A.  2007. Buku  Ajar Ilmu  Penyakit  Dalam .  Airlangga University Press: Surabaya
4. Widyatmoko S, Sulistiyani, Ulum M. 2012. Hubungan  Perawatan  Kaki
Pasien  Diabetes  Melitus  Tipe  2
dengan  Kejadian  Ulkus  Diabetik  di
RSUD Dr. Moewardi. Penerbit Universitas Muhammadiyah Surakarta: Surakarta; p. 5. 5. Sagala,  N.S.  2009. Pemanfaatan
Semak  Bunag  Putih  (Chromolena odarata) Terhadap Pertumbuhan dan IOFC  Dalam  Ramsun  Burung  Puyuh (Cortunix-cortunix japonica) Umur 1 sampai 42 Hari . Universitas Sumatera Utara:  Medan 6. Marianne, P. Lestari. D, Sukandar. E. Y, Kurniati. N. F, Nasution. R. 2014. Antidiabetic Actifity of Leaves Ethanol Extract Chromolaena odorata (L.)  R.  M.  King  on  Induced Male Mice with Alloxan Monohydrate. Jurnal Natural. 14
(1):1-4
7. Yenti  .R.,  R.  Afrianti,  L.  Afriani.
2011.  Formulasi  Krim  Ekstrak  Daun Kirinyuh ( Euphatorium odoratum. L) Untuk Penyembuhan Luka. PharmaMedika . 3 (1):227-230. 8. Munte  N,  Sartini,  Rosliana  L.  2016.
Skrining  Fitokimia  dan  Antimikroba Ekstrak  Daun  Kirinyuh  Terhadaap
Bakteri Staphylococcus  aereus dan Escherichia coli . BioLink . 2 (2): 132-
140 9. Mukherjee  PK.  2015. Evidence- Based Validation of Herbal Medicine . Elsevier: Amsterdam 10. Nicols,  J.B.,  2003, The  Laboratory Mouse . University Veterinarian, Florida
11. Malini. DM,  Madihah,  Fitri  K. 2017.
Uji  Potensi  Sediaan  Salep  Ekstrak Etanol  Kulit  Buah  Jengkol  Untuk Mempercepat  Penutupan  Luka  pada Kulit  Mencit  Model  Diabet. PROS SEM  NAS  MASY  BIODIV  INDON. 3 (2) :205-210.
12. Robinson, T. 1995. Kandungan
OrganikTumbuhan  Tingkat  Tinggi .
Bandung: ITB.
13. Rahmawati,  Ika.  2014.  Perbedaan Efek  Perawatan  Luka  Menggunakan
Gerusan  Daun  Petai  Cina  ( Leucaena
glauca,  Benth )  dan Povidon  Iodine 10% dalam Mempercepat Penyembuhan  Luka  Bersih  pada Marmut  ( Cavia  porcellus ). Jurnal Wiyata. 1 (2): 227-235.
14. Okwu DE. 2004. Phytochemicals and Vitamin Content of Indigenous Spices  of  Southeastern  Nigeria. J Sustain Agric Environ. 6 (1): 30-37
15. Baranoski  S.,  dan  Ayello  EA.  2008. Wound Care Essential Practice Principle. Lippincott  Williams  & Wilkins. New York
16. Bryant RA, dan Nix D. 2007. Acute and
Chronic  Wounds:  Current  Management Concepts. Elsevier . Missouri.
17. Soni  H,  Singhai  AK.  2012.  A  Recent Update  of  Botanicals  for  Wound Healing  Activity. Intl  Res  j  Pharmac .  3
(7): 1-7
18. Hashim  P,  Sidek  H,  Helan  MHM, Palanisamy  UD,  Ilham  M.  2011. Triterpene Composition and Bioactivities of Centella asiatica . Molecules . 16.(2): 1310-1322
19. Vincent.  2004.  Oxidative  Stress  in  The Phatogenesis  of  Diabetic  Neuropathy.
Endocrine Reviews . 25(4): 612-628
20. Nayak BS, Pereira LMP. 2006. Catharanthus roseus Flower Extract Has Wound  Healing  Activity  In  Sprague Dawley Rats. Compt Altern Med . 6: 41