## UJI AKTIVITAS ANTIRADIKAL BEBAS EKSTRAK ETANOL

## DAUN KEMANGI ( Ocimum basilicum L.) DENGAN MENGGUNAKAN METODE DPPH
Linda Erviana 1 , Abd. Malik, dan Ahmad Najib Fakultas Farmasi, Universitas Muslim Indonesia
1 lyndhaerviana@yahoo.com

## ABSTRACT
Basil  leaves  (Ocimum  basilicum  L.)  the  plant  of  the  family  Lamiaceae  that  can  act  as  a  free  radical scavenger, flavonoid compounds. The aim of this research to determine and calculate the IC 50 (Ocimum basilicum L.) that  has  activity  as  a  free  radical  based  on  the  binding  free  radical  (1,1  diphenyl  picryl-hydrazyl).  Sample masceration with ethanol, where in the amount of the extract obtained is 10.16 gr. At the free radical scavenging test ethanol  extract  has  moderate  activity  with  IC 50 value  is  52.68  μg/mL  lower  than  quercetin  with  IC 50 value  is  1.8 μg/mL.
Keywords: Ocimum basilicum L., extract ethanol, free radical scavenging

## I.  PENDAHULUAN
Indonesia  dikenal  sebagai  salah  satu  dari tujuh  negara  dengan  keanekaragaman  hayati  terbesar dan  memiliki  potensi  dalam  pengembangan  obat herbal  dalam  bidang  kesehatan.  Obat  herbal  yang biasa  digunakan  dimasyarakat  adalah  tanaman,  yang menghasilkan  senyawa  metabolit  sekunder.  Salah satu  senyawa  metabolit  sekunder  pada  tanaman adalah  flavonoid,  vitamin  C,  betakaroten,  asam  urat, billirubin, dan albumin (Vaya & Aviram, 2001).
Senyawa  flavonoid  yang  terdapat  pada tanaman  memiliki  aktivitas  antioksidan  alami  yang dapat menangkap molekul radikal bebas atau sebagai antioksidan  alami  (Amic et  al .  2003  &  Trisharyanti, 2012).
Salah  satu  tanaman  yang  memiliki  senyawa flavonoid  yaitu  daun  kemangi  ( Ocimum  basilicum L.).  Kandungan  kimia  yang  terkandung  yaitu  tanin (4,6%),  flavonoid,  steroid/triterpenoid,  minyak  atsiri (2%),  asam  heksauronat,  pentosa,  xilosa,  asam  metil homoanisat,  molludistin  serta  asam  ursolat  (Peter, 2002  dan  Meyer, et  al .,  1982),  flavonoid  pada  daun kemangi  yaitu  apigenin  yang  merupakan  golongan flavon (Hariana, 2008) yang dapat digunakan sebagai antiradikal bebas.
Radikal  bebas  adalah  senyawa  kimia  yang mempunyai satu atau lebih elektron tidak berpasangan.  Senyawa  ini  bersifat  tidak  stabil  dan sangat  reaktif.  Untuk  mencapai  kestabilan,  molekul harus mencari elektron lain sebagai pasangan. Reaksi berantai  ini  dapat  menimbulkan  kerusakan  sel  yang berujung  pada  mutasi  sel  dan  apabila  merusak  organ yang  memiliki  fungsi  tertentu  dapat  menimbulkan penyakit degeneratif. Radikal bebas dalam kehidupan sehari-hari dapat dijumpai seperti akibat metabolisme yang  berlebihan  atau  berasal  dari  lingkungan  seperti
asap  rokok,  polusi  udara,  bahan  kimia  beracun, pestisida  serta  radiasi  sinar  UV  (Raharjo,  1992; Silalahi, 2001; Youngson, 2005).
Berdasarkan  uraian  diatas,  maka  akan dilakukan  uji  antiradikal  bebas  dengan  menggunakan metode  DPPH,  dimana  metode  ini  dipilih  karena merupakan metode sederhana untuk evaluasi aktivitas antiradikal bebas (Amic et al ., 2003).

## II. METODE PENELITIAN
A. Pengambilan dan Pengolahan Sampel Sampel  daun  kemangi  ( Ocimum  basilicum L.)  yang  telah  dikumpulkan,  dicuci  bersih  terlebih dahulu,  setelah  itu  dilakukan  perajangan  atau  di potong–potong kecil. Selanjutnya, dikeringkan dengan  cara  diangin-anginkan  tanpa  paparan  sinar matahari  langsung,  kemudian  diserbukkan  dan  siap untuk diekstraksi (Dirjen POM, 1987).

## B. Pembuatan Sampel
1. Ekstraksi  secara  maserasi  pelarut  etanol  (Dirjen POM, 1987)
Ditimbang  sampel  daun  kemangi  ( Ocimum basilicum L.)  sebanyak  250  gram  dimasukkan  dalam wadah  maserasi,  tambahkan  etanol  96  %  sebanyak  2 liter  hingga  simplisia  tersebut  terendam,  dibiarkan selama  3  hari  dalam  bejana  tertutup  dan  terlindung dari  cahaya  matahari  sambil  diaduk  secara  periodik, setelah  3  x  24  jam  dilakukan  penyaringan  dan ampasnya  dimaserasi  kembali  dengan  cairan  penyari yang  baru.  Maserasi  dilakukan  sebanyak  3  kali  dan diperoleh  ekstrak  etanol  cair.  Hasil  penyarian  yang diperoleh  kemudian  diuapkan  sehinnga  diperoleh ekstrak etanol kental sebanyak 10,61 gram.
2. Uji Pendahuluan
Pengujian  dilakukan  dengan  cara  sampel ekstrak  etanol  daun  kemangi  ( Ocimum  basilicum L.) dilarutkan  dengan  etanol  96%,  kemudian  ditotolkan pada  lempeng  KLT  dengan  menggunakan  pipa kapiler.  Lempeng  yang  sudah  ditotol  dielusi  dengan eluen  n-heksan  :  etil  asetat  (7:3).  Setelah  dielusi diamati  diprofil  KLT  pada  beberapa  penampak bercak  yaitu  sinar  UV  254  nm,  366  nm  dan dilanjutkan dengan penyemprotan DPPH.
3. Uji Aktivitas pengikatan radikal bebas DPPH
a. Pembuatan Larutan DPPH (Phongphaichit et al , 2007) Larutan  DPPH  dibuat  dengan  cara menimbang  DPPH  sebanyak  5  mg  kemudian dilarutkan  dengan  100  mL  metanol  absolut dalam  labu  tentukur  dan  diperoleh  larutan DPPH dengan konsentrasi 50 ppm.
b. Pengukuran daya antioksidan blangko Pengujian dilakukan dengan memipet 3,5 mL  DPPH  50  ppm.Larutan  ini  kemudian dibiarkan  selama  30  menit  dan  diukur absorbansinya  pada  panjang  gelombang  514 nm.
c. Pengukuran  daya  antioksidan  ekstrak  etanol daun kemangi ( Ocimum basilicum L.) Dibuat larutan stok 500 ppm dengan cara menimbang  ekstrak  etanol  daun  kemangi ( Ocimum  basilicum L.)  sebanyak  25  mg  dan dilarutkan  dengan  metanol  absolut  sambil diaduk  dan  dihomogenkan  lalu  cukupkan volumenya hingga 50 mL. Selanjutnya dilakukan pengenceran :
1. Masing-masing larutan stok dipipet 0,2 mL kemudian  dicukupkan  dengan  metanol absolut  sampai  volume  akhir  5  mL  (20 ppm).
2. Masing-masing larutan stok dipipet 0,4 mL kemudian  dicukupkan  dengan  metanol absolut  sampai  volume  akhir  5  mL  (40 ppm).
3. Masing-masing larutan stok dipipet 0,6 mL kemudian  dicukupkan  dengan  metanol absolut  sampai  volume  akhir  5  mL  (60 ppm).
4. Masing-masing larutan stok dipipet 0,8 mL kemudian  dicukupkan  dengan  metanol absolut  sampai  volume  akhir  5  mL  (80 ppm).
5. Masing-masing  larutan  stok  dipipet  1  mL kemudian  dicukupkan  dengan  metanol
absolut  sampai  volume  akhir  5  mL  (100 ppm).
Pengujian dilakukan dengan memipet 0,5 mL  larutan  sampel  dari  berbagai  konsentrasi. Kemudian  masing-masing  ditambahkan  3,5  mL DPPH 50 ppm. Campuran kemudian dihomogenkan  dan  dibiarkan  pada  suhu  kamar selama  30  menit  lalu  serapannya  diukur menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis  pada panjang gelombang 514 nm.
d. Pengukuran  aktivitas  antiradikal  bebas  sampel pembanding (Kuersetin)
Dibuat  larutan  stok  50  ppm  dengan menimbang  kuersetin  setara  5  mg  kemudian dilarutkan  dengan  metanol  absolut  sambil diaduk  dan  dihomogenkan,    lalu  cukupkan volumenya hingga 100 mL, kemudian dilakukan pengenceran :
1. Masing-masing larutan stok dipipet 0,2 mL kemudian  dicukupkan  dengan  metanol absolut sampai volume akhir 5 mL (2 ppm).
2. Masing-masing larutan stok dipipet 0,4 mL kemudian  dicukupkan  dengan  metanol absolut sampai volume akhir 5 mL (4 ppm).
3. Masing-masing larutan stok dipipet 0,6 mL kemudian  dicukupkan  dengan  metanol absolut sampai volume akhir 5 mL (6 ppm).
4. Masing-masing larutan stok dipipet 0,8 mL kemudian  dicukupkan  dengan  metanol absolut sampai volume akhir 5 mL (8 ppm).
5. Masing-masing  larutan  stok  dipipet  1    mL kemudian  dicukupkan  dengan  metanol absolut  sampai  volume  akhir  5  mL  (10 ppm).
Pengujian dilakukan dengan memipet 0,5 mL  larutan  sampel  dari  berbagai  konsentrasi. Kemudian  masing-masing  ditambahkan  3,5  mL DPPH 50 ppm. Campuran kemudian dihomogenkan  dan  dibiarkan  pada  suhu  kamar selama  30  menit  lalu  serapannya  diukur  pada panjang gelombang 514 nm.
Aktivitas  penangkap  radikal  DPPH  (%) dihitung dengan rumus berikut :
% Pengikatan radikal bebas
= (Abs standar-Abs sampel) Abs standar ×100 % Data aktivitas antioksidan penangkap radikal DPPH dianalisis dan masing-masing dihitung nilai  IC 50 melalui  analisis  probit.  IC 50 adalah konsentrasi yang mampu menghambat 50% DPPH

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Simplisia Daun Kemangi ( Ocimum
Basilicum L. ) diekstraksi  dengan  menggunakan metode  maserasi,  dimana  merupakan  salah  satu metode  ekstraksi  dingin  (Tobo,  2001).  Metode  ini tidak  merusak  komponen  kimia  karena  tidak  adanya pemanasan  dalam  proses  ekstraksi  serta  pengerjaan dan  peralatan  yang  digunakan  sederhana  dan  mudah diusahakan (Adrian, 2000).
Maserasi sampel dilakukan dengan menggunakan  pelarut  etanol  karena  sifatnya  yang mampu  melarutkan  hampir  semua  zat,  baik  yang bersifat  polar,  semi  polar  dan  non  polar  serta kemampuannya  untuk  mengendapkan  protein  dan menghambat  kerja  enzim  sehingga  dapat  terhindar proses hidrolisis dan oksidasi (Helmi, 2006).
Rendamen  adalah  persentase  perbandingan antara berat bagian ekstrak dengan berat total sampel awal yang digunakan. Hasil rendamen yang diperoleh dari 250 g dalam 4000 mL etanol 96% yaitu 4,24%.
Penelitian  ini  dilakukan  dengan  pengujian secara  kuantitatif  dan  secara  kualitatif.  Pengujian aktivitas  antiradikal  bebas  secara  kualitatif  dengan menggunakan lempeng KLT. Setelah lempeng dielusi kemudian  disemprot  dengan  DPPH,  menghasilkan warna  kuning  dengan  latar  belakang  berwarna  ungu pada  nilai  Rf  0,563  dan  0,8.  Sedangkan  pada penampak  bercak  AlCl 3 menghasilkan  warna  kuning pada  nilai  Rf  0,563.  Hal  ini  dikerekan  terjadinya reaksi  antara  AlCl 3 dengan  flavonoid  membentuk kompleks  antara  gugus  hidroksil  dan  keton  yang bertetangga  atau  dengan  gugus  hidroksil  yang  saling bertetangga.
Serbuk kristal DPPH yang akan disemprotkan  pada  lempeng  KLT  dilarutkan  terlebih dahulu dengan menggunakan metanol. Metanol dipilh sebagai  pelarut  karena  metanol  dapat  melarutkan Kristal  DPPH  dan  juga  memiliki  sifat  yang  dapat melarutkan  komponen  non  polar  (Apriandi,  2011). Larutan  DPPH  yang  awalnya  berwarna  ungu  setelah bereaksi  dengan  antioksidan  alami  akan  membentuk warna  kuning  dengan  latar  belakang  ungu  pada  saat penyemprotan. Semakin tinggi kandungan antioksidan  maka  warna  ungu  pada  larutan  DPPH akan  semakin  berkurang  dan  membentuk  warna kuning (Molyneux, 2004).
Tabel  1 .    Data  %  rendamen  ekstrak  daun  kemangi ( Ocimum basilicum L.) Jenis pelarut Berat sampel kering (g) Berat Ekstrak (g) Rendamen (%) Etanol 96% 250 10,61 4,24
Tabel  2. Nila  Rf  profil  KLT  sebelum  dan  sesudah penyemprotan DPPH Penampak bercak Nilai Rf Warna Noda UV 254 0,309 hijau 0,381 hijau 0,418 kuning 0,854 kuning 0,872 hijau UV 366 0,309 kuning 0.4 hijau 0,563 kuning 0,581 hijau 0,818 hijau 0,854 hijau DPPH 0,563 kuning 0,8 kuning AlCl 3 0,563 kuning 0,6 hijau 0,854 hijau Pengujian secara kuantitatif dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis yaitu dengan membuat  larutan  stok  500  ppm,  dari  larutan  stok tersebut  dibuat  lima  konsentrasi  (20,  40,  60,  80,  dan 100)  ppm.  Kemudian  dipipet  0,5  mL  larutan  sampel dari  kelima  konsentrasi  dan  ditambahkan  3,5  mL DPPH 50 ppm. Selanjutnya campuran dihomogenkan dan  dibiarkan  selama  30  menit  dengan  tujuan  agar sampel  dapat  bereaksi  dengan  sempurna  dengan DPPH.
Metode  uji  aktivitas  antiradikal  bebas dengan  menggunakan  radikal  bebas  DPPH.  Metode DPPH  dipilih  karena  memiliki  beberapa  kelebihan antara  lain  sederhana,  mudah,  cepat,  peka,  serta memerlukan sedikit sampel. Parameter yang digunakan  untuk  mengetahui  aktivitas  antioksidan adalah  IC 50 yang  didefinisikan  sebagai  konsentrasi senyawa  antioksidan  yang  menyebabkan  hilangnya 50 % aktivitas DPPH (Molyneux, 2004).
Shahidi  dan  Naczk  (1995)  mengemukakan bahwa  senyawa  yang  tergolong  antioksidan  alami dari  golongan  senyawa  fenolik  seperti  senyawa fenolik  sederhana,  flavonoid  dan  tanin.  Senyawa flavonoid,  fenolik  sederhana  dan  tanin  merupakan senyawa antioksidan yang mengandung struktur fenol dan  memiliki  beberapa  gugus  fungsi  hidroksi  yang banyak terdapat dalam tanaman. Senyawa non fenolik yang dapat  memiliki aktivitas antioksidan antara lain alkaloid,  minyak  atsiri,  dan  saponin.  Hal  ini  sesuai dengan penelitian terdahulu yang menyatakan adanya senyawa  alkaloid  dan  saponin  dalam  tanaman Graptophylum  pictum Griff  dan Gynura  procumbens Merr.  (Ozaki  dkk.,  1989)  serta  adanya  kandungan
167 y = 0,788x + 8,487 R2 = 0,965 0 5 10 15 20 0 5 10 15
% Pen g ik a ta n DPPH Konsentrasi (ppm) EKSTRAK ETANOL DAUN KEMANGI y = 23,43x + 7,821 R2 = 0,956 0 20 40 60 0 0.5 1 1.5 % Pen g ik a ta n DPPH Konsentrasi (ppm) KUERSETIN
minyak  atsiri  dalam Ocimum  basilicum (Viera  dan simon, 2000).
Perhitungan yang digunakan dalam penentuan  aktivitas  penangkap  radikal  adalah  nilai IC 50 ( Inhibitor  Concentration 50%)  nilai  tersebut menggambarkan  besarnya  konsentrasi  senyawa  uji yang  dapat  menangkap  radikal  sebesar  50%.  Nilai IC 50 diperoleh  dengan  menggunakan  persamaan regrasi  linier  yang  menyatakan  hubungan  antara konsentrasi  sampel  (senyawa  uji)  dengan  simbol  X terhadap  aktivitas  penangkapan  radikal  rata-rata dengan  simbol  Y  dari  seri  replikasi  pengukuran. Semakin  kecil  nlai  IC 50 maka  senyawa  tersebut mempunyai  keefektifan  sebagai  penangkap  radikal lebih baik.
Hasil penelitian ekstrak etanol daun kemangi ( Ocimum  basilicum L.)  memiliki  aktivitas  sedang dengan  nilai  IC 50 52,68  μg/mL,  sedangkan  kuersetin memiliki  aktivitas  sangat  kuat  dengan  nilai  IC 50 1,8 μg/mL.  Menurut  Phongpaichit et  al (2007),  suatu senyawa  dikatakan  sebagai  antiradikal  bebas  sangat kuat  apabila  nilai  IC 50 <10  μg/mL,  kuat  apabila  nilai IC 50 antara  10-50  μg/mL,  sedang  apabila  nilai  IC 50 berkisar  antara  50-100  μg/mL,  lemah  apabila  nilai IC 50 berkisar  antara  100-250  μg/mL  dan  tidak  aktif apabila IC 50 diatas 250 μg/mL.
Tabel  3 .  Perhitungan  %  pengikatan  radikal  bebas ekstrak etanol daun Kemangi (Ocimum basilicum L.)
Gambar  1. Grafik  hubungan  antara  konsentrasi ekstrak  etanol  daun  kemangi  ( Ocimum  basilicum L.) dengan % pengikatan DPPH
Tabel  4. Perhitungan  %  pengikatan  radikal  bebas sampel pembanding kuersetin
Gambar  2 .  Grafik  hubungan  antara  konsentrasi kuersetin dengan % pengikatan DPPH

## IV. KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  dilakukan dapat disimpulkan  bahwa ekstrak etanol daun kemangi ( Ocimum basilicum L.)  memiliki aktivitas  antioksidan sedang dengan nilai IC 50 52,68 μg/mL.

## DAFTAR PUSTAKA
Adrian,  M.,  2000. Teknik  Kromatografi . Penerbit Andi, Yogyakarta.
Amic, D., Beslo, D., Trinajstic, N., Davidovic. 2003. Structure-Radical Scavenging Activity Relationships  of  Flavonoids. Croatia  Chem Acta 76 Apriandi,  A.  2011. Aktivitas  Antioksidan  dan
Komponen
Bioaktif Keong Ipong-ipong ( Fasciolaria salmo ).(Skripsi). Bogor: Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan. Institut Pertanian Bogor Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan
Makanan.1987. Analisis  Obat  Tradisional, Jilid I. Departemen Kesehatan RI, Jakarta Hariana,  A.,  2008. Tumbuhan  Obat  &  Khasiatnya . Penerbit: Penebar Swadaya. Jakarta. Meyer,  N,  1982. Brine  shrimp:  a  convenient  general bioassay  for  active  plant  constituents .  Planta Med May (Online): http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/173967 75. diakses tanggal 17 Oktober 2013. Molyneux,  P.,  2004,  The  Use  of  Stable  Free  Radical Diphenylpicrylhydrazyl (DPPH) for Sampel Konsentrasi (ppm) Absorban sampel %peredaman Radikal bebas IC 50 Ekstrak Etanol daun kemangi 2,5 1,002 9,81 52 , 68 5 0,965 13,14 7,5 0,951 14,40 10 0,924 16,83 12,5 0,913 17,82
Sampel konsentrasi (ppm) Absorbansi sampel %peredaman Radikal bebas IC 50 Kuersetin 0,25 0,954 14,131 1,8 0,5 0,878 20,972 0,75 0,851 23,402 1 0,787 29,163 1,25 0,674 39,334
Estimating  Antioxidant  Activity ,  J.  Sci. Tecnol . Peter. 2002.
Herbal
remedies . (Online): http://content.nejm.org/cgi/reprint/347/25/204 6.pdf. diakses tanggal 17 Oktober 2013. Phongphaichit, S., Nikom, J., Rungjindamai N., Jariya, S.,  2007. Biological  activities  of  extract  from endophytic  fungi  isolated  from  Garcinia plants , FEMS Immunol Med Microbial. Raharjo,  M.,  1992, Tanaman  Berkhasiat  Antioksidan , Penebar Swadaya, Jakarta. Silalahi,  J.  2006. Makanan  Fungsional. Yogyakarta: Kanisius Tobo,  F.,  2001, Buku  Pegangan  Laboratorium Fitokimia  I , Fakultas  MIPA,  Universitas Hasanuddin, Makassar. Vaya,  J,  Aviram,  M.  2001.  Nutritional  antioxidant  : mechanism  of  action,  analyses  of  activities and  medical  applications,  Curr. Med.  Chem- Imm,Endoc. &Metab Agents. Youngson, R. 2003, Antioksidan Manfaat Vitamin C Dan E Bagi Kesehatan, Arca : Jakarta.