ANALISIS FINGERPRINT DAUN GEDI HIJAU (A belmoschus manihot L ) UNTUK MEMPREDIKSI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN MENGGUNAKAN

## KOMBINASI SPEKTROSKOPI IR DENGAN PARTIAL LEAST SQUAREREGRESSION
Marino Novri Warongan 1) , Sri Sudewi 1) , Adithya Yudistira 1 )
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
The  study  aims  to  determine  the  antioxidant  activity,  infrared  spectra  and  correlation  between spectral data and antioxidant activity of green gedi leaves. Method of determining prediction of antioxidant activity through fingerprint analysis using combination of IR spectroscopy and Chemometric Partial Least Square  Regression  (PLSR).  DPPH  method  is  used  to  prevent  free  radical  and  free-radical  yield  of  free radical  or  concentration  150  ppm  Bitung  A  sample  91.392  ±  1.125,  Bitung  B  sample  88.493  ±  1.515  dan Bitung C sample 91.663 ± 1.184, Manado A sample 89.464 ± 1.642, Manado B sample 90.096 ± 3.510, and Manado C sample 89.477 ± 0.850,  and in the Kotamobagu sample A 86.678 ± 3.703, Kotamobagu sample B 82.963 ± 2.991 and Kotamobagu sample C 83.163 ± 6.354. Gedi leaves from the city of Bitung, Manado, and Kotamobagu  has  a  relatively  similar  spectrum.  This  combination  involves  the  FTIR  spectrum  as  the  “x” variabel and the result data of the DPPH method as the “y” variabel. The prediction model can be used because it has error value ( standar error calibration (SEC = 0.0615), standard error of prediction (SEP = 0.0763)) and calibration value of 0.4181, and r validation of 0.2917.
Keywords : Antioxidant, Green Gedi Leaves, FTIR Spectrophotometry, UV-VIS Spectrophotometry, Chemometric .

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan untuk  mengetahui aktivitas  antioksidan, spektrum  infra merah  dan  korelasi antara  data  spektrum  dan  aktivitas  antioksidan  daun  gedi  hijau.  Metode  penentuan  prediksi  aktivitas antioksidan  melaui  analisis fingerprint menggunakan  kombinasi  Spektroskopi  IR  dan  Kemometrik Partial Least Square Regression (PLSR). Metode DPPH digunakan untuk menangkal radikal bebas dan hasil persen penangkal  radikal  bebas  pada  konsentrasi  150  ppm  Sampel  Bitung  A  91.392  ±  1.125,  Sampel  Bitung  B 88.493 ± 1.515 dan Sampel Bitung C 91.663 ± 1.184, Sampel Manado A 89.464 ± 1.642, Sampel Manado B 90.096 ± 3.510, dan Sampel Manado C 89.477 ± 0.850, dan terakir pada Sampel Kotamobagu A 86.678 ± 3.703,  Sampel Kotamobagu  B  82.963  ±  2.991  dan  Sampel  Kotamobagu  C  83.163  ±  6.354.Daun  Gedi  dari kota Bitung, Manado dan Kotamobagu ini memiliki spektrum yang relatif sama. Kombinasi ini melibatkan dari  spektrum  FTIR  sebagai  variabel x dan  data  hasil  analisis  metode  DPPH  sebagai  variabel y .  Model prediksi  dapat  digunakan  karena  memiliki  nilai  kesalahan  ( standar  error  calibration  ( SEC  =  0.0615), standard error of prediction ( SEP = 0.0763)) dan nilai r kalibrasi 0.4181, serta r validasi 0.2917.
Kata Kunci : Antioksidan, Daun Gedi Hijau, Spektrofotometri FTIR, Spektrofotometri UV-VIS, Kemometrik.

## PENDAHULUAN
Daun gedi hijau ( Abelmoschus manihot L.  Medik)  merupakan  salah  satu tumbuhan  dari  suku  Malvaceae  umum ditanam dan dapat dimanfaatkan  oleh masyarakat  Manado  sebagai  bahan  makanan yang dikenal sebagai Bubur Manado (Tinutuan),  khas  dari  Manado,  sedangkan untuk  gedi  merah  secara  tradisional  dapat menyembuhkan  beberapa  penyakit  (Mamahit dan Soekarno, 2010).
Hasil penelitian Jeni (1992) mengidentifikasi  adanya  flavonoid  pada daun gedi  yang  diekstrak  dengan  pelarut  etanol. Adapun  Pine et  al (2011)  melaporkan  bahwa daun  gedi  yang  diekstrak  dengan  etanol  96% memiliki  total  flavonoid  sebesar  41,56%. Senyawa  flavonoid  mempunyai  berbagai fungsi  penting  untuk  kesehatan  salah  satunya sebagai antioksidan (Hodgson et al .,2006).
Antioksidan  adalah  senyawa  kimia yang  dapat  digunakan  untuk  melindungi komponen  biologi  seperti  lipid,  protein, vitamin  dan  DNA  melaui  perlambatan kerusakan,  ketengikan  atau  perubahan  warna yang  disebabkan  oleh  oksidasi  (Jadhav et al .,1996).  Metode  DPPH  merupakan  metode yang  dapat  mengukur  efektifitas  antioksidan secara  cepat,  sederhana,  dan  DPPH  telah digunakan  secara  luas  untuk  mengukur kemampuan suatu senyawa untuk menghambat  radikal  bebas  atau  sebagai pendonor hydrogen (Pine et al ., 2011).
Aplikasi  kombinasi  spektrum  FTIR
( Fourier Transformed Infrared Spectrophotometer ) dengan
metode kemometrik  telah  banyak  digunakan  di antaranya  model  klasifikasi  asal  daerah meniran  (Dharmaraj et  al .,  2006),  metode deteksi  pemalsuan  atau  diskriminasi  bahan baku  pangan  atau  obat  herbal  (Liu et  al ., 2008;  Chen et  al .,  2007),  prediksi  kadar flavonoid  total  tempuyung  (sonchus  arvensis L.),  serta  prediksi  kapasitas  antioksidan  total
pada  minuman  anggur  (Versari et  al .,  2010). Pemakaian  yang  luas  tersebut  karena  teknik ini  memberikan  hasil  yang  cukup  teliti  dan akurat.
Dalam penelitian ini, metode kemometrik  digunakan  untuk  menemukan korelasi  statistika  antara  data  spektrum  dan informasi  yang  telah  diketahui  dari  sampel, yang  dalam  hal  ini  berupa  Aktivitas antioksidan . Aktivitas antioksidan dari setiap sampel  diukur  dengan  menggunakan  metode rujukan  yang  diakui,  yaitu  metode  DPPH. Spektrum  FTIR  dari  sampel  yang  telah diketahui  aktivitas  antioksidannya  tersebut lalu digunakan untuk membentuk suatu model kalibrasi  multivariat  dengan metode statistika yaitu  regresi  kuadrat  terkecil  parsial  (partial least  squareregression,  PLSR).  Kebaikan model  kalibrasi  prediksi  aktivitas  antioksidan yang terbentuk di evaluasi menggunakan nilai koefisien  korelasi  (r)  kalibrasi  maupun validasi, SEC (Standar Error of Calibration ), dan SEP ( Standard Error of Prediction ).

## BAHAN DAN CARA KERJA Alat
Spektrofotometer  FTIR  (Shimazdu 8400 FTIR), spektrofotometer UV-VIS
(Shimadzu  00780),  Komputer  pengolah  data,
Alat-alat gelas , Vortex dan Rotary Evaporator.

## Bahan
Daun gedi hijau dari 3 tempat tumbuh yang  berbeda  yaitu  Kota  Bitung  (sampel  A), Kota  Manado  (sampel  B),  dan  Kota Kotamobagu  (sampel  C).  Etanol  teknis  96%, KBr, 2,2-diphenil-1-picrylhydarzyl (DPPH) dan Metanol (Pa).

## Cara Kerja
Pengambilan Sampel Sampel daun Gedi Hijau
( Abelmoschus  manihot (L.)  Medik.)  diambil dari  Kota  Bitung,  Kota  Manado  dan  Kota
Kotamobagu. Selanjutnya setiap sampel daun gedi  hijau  ( Abelmoschus  manihot L . )  dibuat simplisia. Simplisia dibagi menjadi 3 kelompok  dan  setiap  kelompok  ini  kemudian diukur  aktivitas  antioksidan  dan  spektrum inframerah  tertransformasi  Fourier  sehingga dari  3  sampel  daun  Gedi  Hijau  diperoleh  9 pasang data.

## Ekstraksi
Sebanyak 100 g simplisia dimasukkan ke  dalam  maserator  500  mL  dan  kemudian ditambahkan etanol 96%. Ekstraksi dilakukan dengan  cara  maserasi  selama  24  jam  dengan beberapa  kali  pengocokan.  Ekstrak  hasil maserasi  kemudian  diuapkan  dengan  rotary evaporator hingga terbentuk ekstrak kental.

## Pengujian  Aktivitas  Antioksidan  Sebagai Penangkal Radikal DPPH
Pengujian ini dilakukan untuk
mengetahui ada tidaknya aktivitas antioksidan sebagai  penangkal  radikal  bebas  menurut Chandini et al (2008). Sebanyak 1 mL ekstrak daun  gedi  hijau  dengan  konsentrasi  150 μg/mL ditambah dengan 2 mL larutan DPPH dalam  metanol  0,08  mM.  Campuran  tersebut kemudian  divorteks  dan  dibiarkan  selama  30 menit pada suhu kamar dalam keadaan gelap. Absorbansi  diukur  pada  panjang  gelombang 517  nm  dan  sebagai  blanko  digunakan metanol. Dan digunakan pembanding aktivitas  penangkal  radikal  bebas  dengan asam galat. Hasil presentase aktivitas penangkal  radikal  bebas  DPPH  dihitung menurut persamaan :
Aktivitas penangkal radikal bebas (%) =
100% x l
Abs.kontro Abs.Sampel l Abs.kontro 
Pembuatan spektrum FTIR
Sebanyak  0.5  mg  serbuk  daun  gedi hijau  ( Abelmoschus  manihot (L.)Medik.) dicampurkan dengan 0.025 mg KBr, dihomogenisasi.  Pengukuran  spektrum  FTIR dilakukan  pada  daerah  IR  tengah  (4000-  400 cm -1 )  dengan  melibatkan  pengontrol  kerja berupa  personal  komputer  yang  dilengkapi perangkat  lunak  OPUS  versi  4.2.  Spektrum dihasilkan  dengan  kecepatan  32  detik  dan resolusi 4 cm -1 . Tampilan data spektrum akan menampilkan  jumlah  titik  serapan  kemudian diubah  ke  dalam  format  DPT  ( data  point table ) untuk keperluan pengolahan data. Data ini  dapat  dibuka  dengan  program Microsoft Excel .  Selanjutnya  data  jumlah  titik  serapan yang  ditampilkan  (telah  dihilangkan  serapan CO 2 -nya pada 2399-2252 cm -1 ) diolah dengan program The Unscrambler versi 9.7 (CAMO, Norwegia)  yang  dijalankan  dengan  sistem operasi Microsoft  Windows  XP  Professional (Rohaeti el al, 2011).
Pembuatan model prediksi Aktivitas Antioksidan
Model  kalibrasi  multivariat  dibuat dengan  program The  Unscrambler versi  9.7 menggunakan  metode  PLSR.  Pembentukan model prediksi aktivitas antioksidan dilakukan  oleh  PLSR  dengan  melibatkan variabel x (hasil  pengukuran  FTIR)  dan variabel y (data hasil analisis metode DPPH). Kalibrasi  dan  validasi  model  diolah  dengan teknik  validasi  silang.  Keakuratan  model dapat dilihat pada nilai korelasi atau koefisien determinasi dan nilai kesalahan yang dihasilkan.  Model  dapat  digunakan  bila memiliki  nilai  kesalahan  ( standar  error calibration  ( SEC), standar  error  of  cross validation  ( SECV)  atau standard  error  of prediction  ( SEP))  rendah  dan  nilai  korelasi atau koefisien determinasinya tinggi  (Rohaeti el al, 2011).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Aktivitas  Antioksidan  Sebagai  Penangkal Radikal DPPH
Tahapan  analisis  aktivitas  antioksidan dengan  metode  DPPH  merupakan  tahapan analisis  yang  cukup  panjang.  Tahapan  ini diawali  dengan  ekstraksi  oleh  pelarut  polar, pemekatan ekstrak, hingga pengukuran dengan spektrofotometer UV-Vis.
Berdasarkan  metode  analisis  ini, aktivitas antioksidan yang terukur merupakan kemampuan  antioksidan  untuk  menghambat radikal  bebas  dengan  mendonorkan  atom hidrogen kepada DPPH, sehingga DPPH yang telah  berpasangan  dengan  atom  hidrogen tersebut menghasilkan DPPH tereduksi (DPPH-H)  (Hardiana,  2012).  Serta  adanya perubahan warna ungu menjadi kuning ketika terdapat  senyawa  antioksidan  yang  meredam radikal bebas DPPH (Dehpour et al , 2009).
Ketiga  sampel  Daun  gedi  hijau  asal Bitung,  Manado  serta  Kotamobagu  memiliki aktivitas  penangkal  radikal  bebas  yang berbeda. Perbedaan aktivitas penangkal
radikal  bebas  dari  daun  gedi  hijau  tersebut salah satunya menggambarkan adanya keragaman  konstituen    kimia  tumbuhan sebagai akibat perbedaan  kondisi lingkungan tempat tumbuh. Suhu, sinar  ultraviolet, hara, ketersediaan air, dan kadar CO 2 pada atmosfer adalah  beberapa  faktor  lingkungan    yang mempengaruhi metabolisme
tumbuhan
(Summanen, 1999) Tabel 1. Hasil pengukuran aktivitas antioksidan daun gedi hijau Sampel Daun Gedi Aktivitas antioksidan ( %inhibisi ± sd) Bitung A 91.392 ± 1.125 Bitung B 88.493 ± 1.515 Bitung C 91.663 ± 1.184 Manado A 89.464 ± 1.642 Manado B 90.096 ± 3.510 Manado C 89.477 ± 0.850 Kotamobagu A 86.678 ± 3.703
Kotamobagu B 82.963 ± 2.991 Kotamobagu C 83.163 ± 6.354

## Spektrum FTIR Daun Gedi Hijau
Analisis  FTIR  menjadi  metode  yang efektif dalam menentukan keberadaan berbagai gugus fungsional dari suatu senyawa atau  molekul  (Joshi,  2012).  Identifikasi adanya  gugus  fungsi  tersebut  ditafsirkan berdasarkan    area  spektrum  infra  red  atau infra  red  chart. Spektrum  FT-IR  daun  gedi memberikan  pola  yang  hampir  mirip  satu sama  lain,  hal  ini  menandakan  bahwa senyawa kimia yang dikandung hampir sama.
(a) (b) (c)
Gambar 1. Spektra FT-IR Daun Gedi Hijau (a) Bitung, (b) Kotamobagu,
(c) Manado
Berdasarkan  pengujian  dari  ke  9 sampel  menggunakan  instrument  FT-IR, diperoleh  puncak  absorbansi  pada  panjang gelombang  3580,05  cm -1 -3649,76  cm -1 menunjukan  gugus  OH  (alkohol),  pada panjang  gelombang  3392,69  cm -1 –  3496.99 cm -1 menunjukan  adanya  gugus  NH  (  Amina Sekunder).  Pada  ikatan  C=O  (Aldehid) terlihat  di  panjang  gelombang  1720,43– 1739,99  cm -1 ,  C=O  (keton)  pada  1675-1725
cm -1 ,  C=O  (asam  karboksilat)  pada  1700- 1725 cm -1 . Adanya ikatan C=C (alkena) pada panjang  gelombang  1620  cm -1 –  1680  cm -1 .
Selain  itu  pada  1550-1570  cm -1 terdapat  –C- NO 2 (nitro).Serapan di daerah 1400-1500 cm -1 menunjukan adanhya C-C aromatik.
Penafsiran  spektrum  FTIR  mengenai keberadaan suatu senyawa berdasarkan identifikasi gugus fungsi tersebut belum dapat dipastikan.  Konfirmasi  keberadaan  senyawa seperti  fenol  dan  flavonoid  yang  berperan terhadap  kemampuan  antioksidan  daun  gedi hijau  dapat  diketahui  melalui  analisis  total fenol,  total  flavonoid  yang  dikorelasikan dengan  aktivitas  antioksidannya.  Adanya korelasi dengan aktivitas antioksidan mengindikasikan senyawa fenol dan flavonoid tersebut.
Pembuatan model prediksi Aktivitas

## Antioksidan
Kalibrasi  multivariat  dengan  metode Partial Least Square Regression (PLS) secara otomatis akan memberikan informasi spektrum  yang  khusus  dan  relevan  dengan suatu  sifat  kimia  dari  model  kalibrasi  pada bilangan gelombang tertentu (Van der Vort et al .,  1992).  Pada  analisis  aktivitas  antioksidan daun  gedi  hijau,  variabel x merupakan  nilai absorbans  pada  bilangan  gelombang  tertentu sedangkan  variabel y -nya  merupakan  kadar aktivitas  antioksidan  hasil  analisis  DPPH. Model  dapat  digunakan  bila  memiliki  nilai kesalahan  ( standar  error  calibration( SEC), standar error of cross validation ( SECV) atau standard  error  of  prediction  ( SEP))  rendah dan nilai korelasi atau koefisien
determinasinya  tinggi  (Miller  and  Miller, 2010).
Keterangan:
Validasi Kalibrasi
Gambar 2. Plot Regresi PLS daun gedi hijau
Hasil prediksi PLS menunjukkan nilai korelasi ( r) kalibrasi = 0.418, nilai korelasi ( r ) validasi  =  0.291  dan  nilai  SEP  =  0.076  dan SEC  =  0.061.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa model  kalibrasi  dapat  diterima  dikarenakan memenuhi  syarat  dengan  nilai  koefisian determinasi yang tinggi dan galat yang rendah (Miller and Miller, 2010).
Kalibrasi  dan  validasi  model  diolah dengan  metode  validasi  silang.Teknik  sangat bermanfaat untuk menentukan jumlah komponen  yang  optimum  dari  jumlah  contoh yang sedikit secara independen (Stchur et al., 2002).  Berdasarkan  hasil  validasi  silang dalam  menentukan  keakuratan  dan  ketelitian model  yang  terbentuk  dihasilkan  nilai  R 2 = 0,291 dengan RMSEP  = 0,072 seperti halnya pada plot validasi berikut.
Gambar 3. Plot validasi prediksi aktivitas antioksidan daun gedi hijau
Plot  regresi  memperlihatkan  mutu model  regresi  yang  dihasilkan.  Model  data spektrum  yang  terbentuk  merupakan  model yang  kurang  baik  karena  menghasilkan  titik yang  tidak  berdekatan  satu  sama  lain, sehingga  memperoleh  nilai  korelasi  yang
rendah.  Model  yang  baik  akan  menghasilkan titik-titik  yang  berdekatan  sepanjang  garis regresi dengan nilai slope mendekati 1 dengan nilai  kalibrasi  dan  validasi  yang  saling berdekatan atau berimpitan (Naes et al. 2002).
Membedakan  3  daerah  pengambilan sampel daun gedi hijau menjadi penting untuk dilakukan dalam rangka identifikasi daun gedi hijau.  Analisis  PCA  merupakan  salah  satu teknik  kemometrik  yang  dapat  digunakan untuk  mengekstrak  informasi  dari  data  yang didapatkan  sehingga  kita  dapat  melakukan pengenalan  pola  untuk  mengelompokkan tanaman gedi hijau berdasarkan asal daerahnya. Analisis PCA dilakukan pada data yang telah didapatkan melalui hasil pengukuran.Pengukuran  yang  dilakukan  pada sampel  daun  gedi  hijau  daerah  Bitung, Manado dan Kotamobagu. Dengan menggunakan PCA data yang berukuran besar ini  selanjutnya  direduksi  menjadi  komponen utama  atau principle  component (PC)  yang dapat  mewakili  struktur  dan  varians  dalam data (Miller dan Miller, 2000).
Gambar 4. Data Scoreplo t PC1 dan PC2
Hasil  ini  diperkuat  dengan score  plot antara  PC  1  dan  PC  2  pada  gambar    yang menunjukkan  bahwa  sampel  daun  gedi  hijau dari beberapa daerah sudah dapat terpisah dan dikelompokkan  dengan  baik.  Dapat  di  lihat Bitung  B,  Bitung  C,  Manado  A  dan  Manado B berada di kuadran 1, Kotamobagu A dan B berada  di  Kuadran  2,  Kotamobagu  C  dan Manado  C  berada  di  kuadran  3  sedangkan
Bitung A berada di kuadran 4. Dua komponen utama  menunjukkan  bahwa  masing-masing daerah  pengambilan  sampel  dikelompokkan ke  dalam  jarak  yang  berbeda  satusama  lain. Jarak  antara  sampel  menunjukan  kesamaan antar  sampel.Semakin  jauh  jarak,  maka semakin  sedikit  kesamaan  yang  dimiliki antara  sampel  tersebut  (Miller  dan  Miller, 2000).

## KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpulan
1. Daun gedi hijau ( Abelmoschus manihot L . ) dari kota Bitung, Manado dan Kotamobagu memiliki aktivitas antioksidan yang sangat baik.  Pada  konsentrasi  150  ppm  Sampel Bitung A 91.392 ± 1.125, Sampel Bitung B 88.493  ±  1.515  dan  Sampel  Bitung  C 91.663  ±  1.184,  pada  Sampel  Manado  A 89.464 ± 1.642, Sampel Manado B 90.096 ±  3.510,  dan  Sampel  Manado  C  89.477  ± 0.850, dan terakir pada Sampel Kotamobagu  A  86.678  ±  3.703,  Sampel Kotamobagu B 82.963 ± 2.991 dan Sampel Kotamobagu C 83.163 ± 6.354. 2. Analisis FT-IR daun gedi hijau
( Abelmoschus  manihot L . Medik.)  yang tumbuh ditempat berbeda secara geografis, diperoleh  hasil  spektrum  yang  hampir sama.
3. Data spektrum daun gedi hijau dengan data yang  diketahui  (aktivitas  radikal  bebas) memiliki  hubungan  sehingga  dapat  dibuat pemodelan  Aktivitas  Antioksidan  daun gedi  hijau  bisa  digunakan  dikarenakan memiliki  nilai  SEP  =  0.076  dan  SEC  = 0.061  sedangkan  nilai r kalibrasi  =  0.418
dan r validasi = 0.291.

## Saran
Disarankan  untuk  dilakukan  analisis  lebih lanjut tentang pengukuran total fenol dan total
flavonoid yang dikorelasikan dengan aktivitas antioksidan.

## DAFTAR PUSTAKA
Chandini,  S.K.,  Ganesan,  P.  dan  Bhaskar,  N.
2008.  In vitro antioxidant activities of there  selected  brown  seaweeds  of India. Food  Chemistry 107 (2):  707- 713.
Chen,  H.,  Bao,  Y.,  He,  Y.,  and  Sun,  D.  W.,
2007,  Visible  and  Near  Infrared
Spectroscopy    for  Rapid  Detection  of Citric  and  Tartaric  Acids  in  Orange Juice, Journal Food Engineering , 82 : 253-260.
Dehpour,  A.A.,  Ebrahimzadeh,  M.A.,  Fazel,
N.S.,  and  Mohammad,  N.S.,  2009.
Antioxidant  Activity  of  Methanol Extract  of  Ferula  Assafoetida  and  Its Essensial  Oil  Composition. Grasas Aciees . 60 (4), 405-412.
Dharmaraj,  S.,  Jamaludin,  A.  M.,  Razak,  H .M.,  Valliappan,  R.,  Ahmad,  N.  A., and  Ismail,  Z.  A.,  2006,  The Classification  of Phyllanthus  niruri
Linn,  According  to  Location  by Infrared  Spectroscopy, Vibrational Spectroscopy , 41 : 68-72.
Hardiana,  R.  2012. Aktivitas  Antioksidan Senyawa Golongan Fenol Dari
Beberapa  Jenis  Tumbuhan  Family Malvaceae .[Skripsi].  Fakultas  Mipa. Pontianak.
Hodgson,  J.M.,  and  Kevin  D.C.,  2006, Review  Dietary  flavonoids:effects  on endothelial function and blood pressure, Journal Science Food Agriculture, 86 :2492-2498 .
Jadhav,  S.J.,  Nimbalkar,  S.S.,  Kulkarni,  A.D
& Madhavi,D.L. 1996. Lipid
Oxidantion  in  Biological  and  food systems.  Dalam  D.L.Madhavi,  S.S. Deshpandeand  D.K.  Slunkhe  (eds.) Food Antioxidants Technological, Toxicological, and Health, Drespectives .  Marcel  Dekker,  Inc,
New York.
Jeni, T. 1992. Pemeriksaan Kandungan Kimia Daun  Gedi  (Abelmoschus  manihot  L. Medik) . Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan  Alam.  Institut  Teknologi Bandung, Bandung.
Joshi, R. K. 2012 .  Chemical constituents and antibacterial property of the essential oil of the roots of Cyathocline purpurea . Pub Med, J.
Ethnopharmacol 2013 Jan 30; 145 (2):621-5.
Liu,  D.,  Li,  Y.  G.,  Xu,  H.,  Sun,  S.  Q.,  and Wang,  Z.  T.,  2008.  Differentiation  of The  Root  of  Cultivated  Ginseng, Mountain  Cultivated  Ginseng  and Mountain  Wild  Ginseng  using  FT-IR and  Two-Dimensional  Correlation  IR Spectroscopy . Journal Molecular Structure., 883-884 : 228-235 Mamahit  L.P.  &  Soekarno,N.H.,  2010.  Satu senyawa  organic  yang  diisolasidari daun  gedi  ( Albemoschus  manihot L. Medik) Asal Sulawesi Utara. Chemistry  Program ,  Vol.  3  No.
1, P. 45.
Miller,  J.N.,  and  Miller  J.,  C.,  2000. Statistic and  Chemometrics  for  Analytical Chemistry  Four  Edition .  Pearson Education, Harlow.
Miller,  J.N.,  and  Miller.  J.C.  2010. Statistics and  Chemometrics  for  Analytical Chemistry  Sixth  Edition .  Pearson Education Limited, England.
Naes, T., Isaksson, T., Fearn, T., and Davies,
T.,  2002. A  User  Friendly  Guide  to Multivariate Calibration and Classification , NIR Publication,
Chichester.
Pine,  A.T.D.,  Alam,  G.  dan  Attamim,  F.
2011.Standarisasi  mutu  ekstrak  daun gedi ( Abelmoschus manihot L. Medik) dan  uji  efek  antioksidan  dengan metode
DPPH.
http://www.pasca.unhas.ac.id/jurnal.
[21 Agustus 2012].
Rohaeti,  E.,  Heryanto,  R.,  Rafi,  M., Kurniasari,  I.,  and  Darusman,  L.  K. 2011.Prediksi  kadar  flavonoid  total tempuyung  ( sonchus  arvensis l.)
Menggunakan kombinasi spektroskopi ir  dengan  regresi  kuadrat  terkecil parsial. Jurnal Kimia 5 (2) : 101-108.
Stchur,  P.,  Cleveland,  D.,  Zhou,  J.,and Michel,  R.G.  2002.  A  Review  Of Recent  Applications  Of  Near  Infrared Spectroscopy, And The Characteristics Of  A  Novel  Pbs  CCD  Array-Based Near  Infrared  Spectrometer. Appl
SpectRev . 37: 383-428
Summanen, J. A. 1999. A Chemical and Ethnopharmalogical Study on Phyllantus emblica (Euphorbiaceae ). [ Disertasi ]. Faculty of Science University of Helsinki, Helsinki.
Van de Voort, F.R., Sedman,J., Emo, G., and Ismail,  A.A.  1992.  Rapid  and  Direct Iodine  Value  and  Saponofication Number  Determination  of  Fats  and
Oils by Attenuated Total Reflactance/Fourier Transform Infrared  Spectroscopy, Journal  of theAmerican  Oil  Chemists’  Society
69 (11):1118-1123.
Versari,  A.,  Parpinello,  G.  P.,  Scazzina,  F., and  Rio,  D.  D.,  2010.  Prediction  of Total  Antioxidant  Capacity  of  Red Wine  by  Fourier  Transform  Infrared Spectroscopy, Food  Control , 21 : 786–789.