IDENTIFIKASI FITOKIMIA, UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DENGAN METODE 1.1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH), DAN

## TOKSISITAS DENGAN METODE Brine Shrimp Lethality Test
(BSLT) DARI EKSTRAK ETANOL TANGKAI BUAH
PINANG YAKI  ( Areca vestiaria Giseke)
Glorya Weroy Karundeng 1) , Herny E. Simbala 1) , Imam Jayanto 1)
1) Program Studi Farmasi Fakultas MIPA UNSRAT Manado

## ABSTRACT
Pinang Yaki  (Areca  vestiaria  Giseke)  which is  a  kind  of  wild  palm,  is  a  multi-functional  plant.  The people of North Sulawesi empirically use this plant to cure various diseases. In a previous study that said leaves, seeds and even the seed skin of areca nut have very high antioxidant content. Because of the  large  amount  of  antioxidants  contained  in  Pinang  Yaki  plants,  the  study  wanted  to  examine  the compound content of the stalks of this plant. This study aims to determine the phytochemical content, ability of antioxidant activity, and plant toxicity, so that later it can be used as medicine. The results of  this  study  indicate  that  the  ethanol  extract  of  areca  fruit  stalk  has  flavonoids,  saponins, triterpenoids which have the potential as antioxidants and have a strong Inhibition Concetration 50 (IC50) value, ie, 16.52 μg / mL based on the 1.1-diphenyl-2-picrylhydrazyl method (DPPH), and the level  of  toxicity,  namely  the  value  of  Lethality  Concetration  50  (LC50)  of  602  μg  /  mL  which  was carried out by the Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) method.
Keywords : Areca vestiaria Giseke, Antioxidants, Toxicity, DPPH, BSLT

## ABSTRAK
Pinang Yaki ( Areca vestiaria Giseke) yang  merupakan sejenis palem liar, merupakan tanaman yang multi  fungsi.  Masyarakat  Sulawesi  Utara  secara  empiris  menggunakan  tanaman  ini  untuk menyembuhkan  berbagai  macam  penyakit.  Pada  penelitian  yang  sebelumnya  mengatakan  bahwa daun, biji bahkan kulit biji dari Pinang Yaki mempunyai kandungan antioksidan yang sangat tinggi. Oleh  karena  banyaknya  kandungan  antioksidan  yang  terkandung  dalam  tanaman  Pinang  Yaki  maka peneliti  ingin  meneliti  kandungan  senyawa  dari  tangkai  buah  tanaman  ini.  Penelitian  ini  bertujuan untuk  mengetahui  kandungan  fitokimia,  kemampuan  aktivitas  antioksidan,  dan  toksisitas  tanaman, agar  nantinya  bisa  digunakan  sebagai  obat.  Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol tangkai  buah  Pinang  Yaki  memiliki  kandungan  flavonoid,  saponin,  triterpenoid  yang  berpotensi sebagai antioksidan dan memiliki nilai Inhibisi Concetration 50 (IC50) yang sangat kuat yakni, 16.52 μg/mL  berdasarkan  pengujian  dengan  metode 1.1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH),  dan    kadar toksisitas  yakni  nilai  Lethality  Concetration  50  (LC50)  sebesar  602  μg/mL  yang  dilakukan  dengan metode pengujian Brine Shrimp Lethality Test (BSLT).
Kata kunci : Pinang Yaki, Antioksidan, Toksisitas, DPPH, BSLT

## PENDAHULUAN
Antioksidan merupakan senyawa yang dapat  menginaktivasi  radikal  bebas  serta menghambat  pembentukan  radikal  bebas baru  dengan  cara  mendonorkan  elektron dan  mengikat  radikal  bebas.  Antioksidan berperan penting dalam pencegahan penyakit  kanker  dan  penyakit  degeneratif. Secara  alami  antioksidan  dapat  diperoleh dari daun sayuran dan biji – bijian, seperti asam  askorbat,  vitamin  E,  dan  senyawa fenolik.  Zat  antioksidan  yang  berasal  dari tumbuhan banyak diteliti dan dikembangkan.  Secara  alami,  tumbuhan yang  mengandung  antioksidan  tersebar pada  berbagai  bagian  tumbuhan  seperti akar,  batang,  kulit,  ranting,  daun,  buah, bunga dan biji (Hutapea, 2005). Pinang  Yaki (Areca  vestiara Giseke)  yang  merupakan  sejenis  palem liar,  merupakan  tanaman  yang  multi fungsi.  Masyarakat  Sulawesi  Utara  secara empiris  menggunakan  tanaman  ini  untuk menyembuhkan  berbagai  macam  penyakit seperti  diabetes  dan  diare.  Selain  itu  juga dipakai  sebagai  obat  kontrasepsi  dan  anti tumor/anti  kanker.  Berdasarkan  penelitian sebelumnya  mengenai  tanaman  Pinang Yaki,  buah,  biji,  bahkan  kulit  biji  dari tanaman ini diketahui mengandung senyawa metabolit sekunder yaitu flavonoid,  triterpenoid,  tanin,  dan  saponin (Simbala,  2006).  Oleh  karena  banyaknya kandungan  senyawa  yang  terkandung dalam  tanaman  Pinang  Yaki  seperti  pada buah,  biji,  bahkan  kulit  biji  dari  tanaman ini  maka  kali  ini  peneliti  ingin  meneliti kandungan  senyawa  tangkai  buah  dari tanaman Pinang Yaki. Dalam penelitian ini dilakukan  identifikasi  fitokimia  untuk mengetahui  senyawa  metabolit  sekunder yang  terdapat  dalam  tangkai  buah  Pinang Yaki serta uji aktivitas antioksidan dengan
metode 1,1 – diphenyl – 2 - picrylhydrazyl (DPPH)  untuk  mengetahui  kemampuan ekstrak  dalam  menghambat  radikal  bebas dan Uji toksisitas (Simbala, 2006).
Untuk  mengidentifikasi  senyawa antioksidan  dapat  menggunakan  senyawa 1.1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH).
Senyawa  radikal  kromogen  seperti  DPPH dapat  secara  langsung  bereaksi  dengan antioksidan.  DPPH  digunakan  untuk mengevaluasi kemampuan antioksidan dari komponen  dengan  mengukur  perubahan absorbansi, absorbansi DPPH akan menurun  apabila  elektron  ganjil  dari  atom hidrogen  dalam  DPPH  direduksi  dengan penerimaan  sebuah  atom  hidrogen  dari antioksidan. Pengukuran aktivitas antioksidan  dapat  diketahui  berdasarkan nilai Inhibisi Concetration (IC) 50, dimana menunjukkan kemampuan senyawa menghambat  proses  oksidasi  sebesar  50% (Molyneux, 2004).
Uji toksisitas merupakan uji pendahuluan yang dilakukan untuk mengetahui  efek  toksik  dan  ambang  batas penggunaan  suatu  tumbuhan  sebagai  obat. Uji  toksisitas  dapat  dilakukan  dengan menggunakan metode Brine Shrimp Lethality  Test  (BSLT)  terhadap  larva Artemia  salina Leach.  BSLT  merupakan metode untuk mengetahui tingkat toksisitas  suatu  senyawa  aktif  terhadap larva udang Artemia salina . Senyawa aktif yang  memiliki  daya  toksisitas  tinggi diketahui berdasarkan nilai Lethal Concetration 50% (LC 50 ). Nilai LC 50 yaitu suatu  nilai  yang  menunjukkan  konsentrasi zat  toksik  yang  menyebabkan  kematian hewan uji sebesar 50%. Hasil uji toksisitas dapat  dijadikan  tolak  ukur  penggunaan konsentrasi  senyawa  aktif  yang  aman untuk digunakan sebagai obat.

## METODOLOGI PENELITIAN
Alat  yang digunakan dalam penelitian yakni  blender,  ayakan,  kertas    saring whatman  42,  tabung  reaksi,  rak  tabung, cawan  petri,  labu  takar,  mikroppet,  pipet tetes,  baker  glass,  timbangan  analitik, gelas  ukur,  erlenmeyer,  incubator,  batang pengaduk,  alumunium  foil,  orbital  shaker, spektrofotometer uv-vis, spatula, corong. Bahan yang digunakan dalam penelitian  ini  yaitu  tangkai  buah  Pinang Yaki  ( Areca  vestiaria ).  Bahan  kimia  yang digunakan  Etanol  96%,  metanol  pro analisis,  vitamin  C  p.a,  Air  laut,  Naupilus Artemia  salina,  Aquadest,  DPPH,  HCl pekat, NaOH, FeC l3 , Serbuk Magnesium.

## PENGAMBILAN  DAN  PERSIAPAN SAMPEL
Sampel  yang  digunakan  pada penelitian  ini  yaitu  tangkai  buah  dari Pinang  Yaki  ( Areca  vestiaria )  yang diambil di Desa Tanggari Kec. Airmadidi, Sulawesi  Utara.  Sampel  kemudian  dicuci untuk  menghilangkan  sisa  kotoran  yang dapat mengganggu dan dikeringkan sampai kering. Selanjutnya sampel ditimbang berat basah kemudian dihaluskan  menggunakan  blender  hingga sampel  menjadi  halus  lalu  diayak  dengan ayakan.

## IDENTIFIKASI TANAMAN
Identifikasi  tanaman  dilakukan  di Bagian  Taksonomi  Tumbuhan  Program Studi  Biologi  Fakultas  Matematika  dan Ilmu  Pengetahuan  Alam,  Universitas  Sam Ratulangi Manado.

## EKSTRAKSI SAMPEL
Sampel  yang  digunakan  pada penelitian  ini  yaitu  tangkai  buah  dari Pinang  Yaki  ( Areca  vestiaria) yang
diambil di Desa Tanggari Kec. Airmadidi, Sulawesi  Utara.  Sampel  kemudian  dicuci untuk  menghilangkan  sisa  kotoran  yang dapat mengganggu dan dikeringkan sampai kering. Selanjutnya sampel ditimbang berat basah kemudian dihaluskan  menggunakan  blender  hingga sampel  menjadi  halus  lalu  diayak  dengan ayakan.

## UJI FITOKIMIA
Uji fitokimia merupakan uji kualitatif  untuk  mengetahui  keberadaan senyawa metabolit sekunder yang terkandung  dalam  ekstrak  tangkai  buah Piang  Yaki.  Identifikasi  yang  dilakukan adalah  identifikasi  flavonoid,  saponin, triterpenoid, dan tanin.

## IDENTIFIKASI FLAVONOID
Sebanyak 0.5 gram ekstrak ditambahkan  2  mL  etanol  96%,  kemudian dipanaskan  dalam  penangas  air  sampai mendidih.  Dipipet  lapisan  yang  atas kemudian  ditambahkan  2-3  tetes  HCL pekat dan 0.1 gram serbuk Mg.
Selanjutnya  diamkan  selama  3  menit,  bila terjadi  perubahan  warna  menjadi  merah atau kekuning-kuningan berarti menunjukkan adanya flavonoid.

## IDENTIFIKASI SAPONIN
Sebanyak 0.5 gram ekstrak ditambahkan  5  mL  aquades  sambil dikocok kuat selama 1 menit. Pada tabung sampel  terdapat  buih  setinggi  3.5  cm  dan bila  busa  yang  terbentuk  tetap  stabil  ±  7 menit,  berarti  menunjukanadanya  banyak saponin.

## IDENTIFIKASI TRITERPENOID
Sebanyak 0.5 gram ekstrak ditambahkan CH3COOH glacial sebanyak
10  tetes  dan  H2SO4  pekat  sebanyak  2 tetes.  Larutan  kemudian  dikocok  perlahan dan  dibiarkan  selama  beberapa  menit. Steroid memberikan warna biru atau hijau, sedangkan triterpenoid  memberikan warna merah atau ungu.

## IDENTIFIKASI TANIN
Sebanyak 0.5 gram ekstrak ditambahkan  etanol 96%.  Kemudian didiamkan ± 15 menit, lalu disaring. Filtrat yang  didapat  dipipet  dan  ditambahkan  2 tetes  NaCL  10%  dan  3  tetes  FeCL3  1%. Terbentuknya  warna  biru/hitam  kehijauan menunjukkan  adanya  tannin  (Sangi et  al ., 2008).

## UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DENGAN METODE DPPH
Pengujian aktivitas antioksidan ekstrak  tangkai  buah  Pinang  Yaki  ini menggunakan  radikal  bebas 1.1-diphenyl- 2-picrylhydrazyl (DPPH)  seperti  yang dilakukan oleh Molyneux (2004).
Konsentrasi  ekstrak  Pinang  Yaki  yang digunakan  adalah  l0  μg/ml,  8  μg/ml,  6 μg/ml,  4  μg/ml,  dan  2  μg/ml.  Untuk pembuatan  larutan  stok  diambil  10  mg ekstrak  dan  dimasukkan  ke  dalam  10  mL pelarutnya,  hingga  diperoleh  konsentrasi larutan stok 1000 μg/ml.
a. Untuk  konsentrasi  10  μg/ml  dibuat dengan  cara  diambil  0,1  mL  larutan stok  dan  dimasukkan  ke  dalam  9,9  mL pelarutnya.
b. Untuk  konsentrasi  8  μg/ml  dibuat dengan  cara  diambil  0,08  mL  larutan stok dan dimasukkan ke dalam 9,92 mL pelarutnya.
c. Untuk  konsentrasi  6  μg/ml  dibuat dengan  cara  diambil  0,06  mL  larutan stok dan dimasukkan ke dalam 9,94 mL pelarutnya.
d. Untuk  konsentrasi  4  μg/ml  dibuat dengan  cara  diambil  0,04  mL  larutan stok dan dimasukkan ke dalam 9,96 mL pelarutnya.
e. Untuk  konsentrasi  2  μg/ml  dibuat dengan  cara  diambil  0,02  mL  larutan stok dan dimasukkan ke dalam 9,98 mL pelarutnya.
Larutan  DPPH  0,4  mM  dibuat  dengan cara  ditimbang  7,88  mg  DPPH  (BM 394,32  g/mol)  dilarutkan  dengan  metanol p.a  hingga  50,0  mL  dalam  labu  takar  50 mL. Kedalam tiap tabung reaksi ditambahkan 1 mL larutan DPPH 0,4 mM dalam metanol. Masing-masing
konsentrasi  sampel  dimasukkan  kedalam tabung  reaksi,  volume  dicukupkan  sampai 5  mL,  kemudian  diinkubasi  pada  suhu 27°C  selama  30  menit.  Hal  ini  dilakukan untuk  mengoptimumkan  aktivitas  DPPH agar  terjadi  reaksi  antara  DPPH  dengan sampel  yang  diuji.  Selanjutnya  serapan diukur  dengan  spektrofotometer  UV-Vis pada panjang gerombang 517 nm. Vitamin C  p.a    digunakan  sebagai  pembanding dengan  konsentrasi  2  μg/mL,  4  μg/mL,  6 μg/mL, 8 μg/mL, 10 μg/mL.

## ANALISIS DATA ( PENENTUAN
NILAI IC 50 ( Inhibitory Concentration )
Kemampuan untuk meredam radikal  bebas  DPPH,  Parameter  yang  bisa digunakan  untuk menginterprestasikan hasil  dari  uji  aktivitas  antioksidan  dengan metode  DPPH  adalah  dengan  nilai  IC 50 , yaitu  konsentrasi  yang  menyebabkan hilangnya  50%  aktivitas  DPPH.  Untuk menghitung  nilai  IC 50 diperlukan  data persen  inhibisi  dari  pengujian  yang dilakukan.  Persen  inhibisi  dapat  dihitung dengan  menggunakan  rumus  sebagai berikut:
x 100%

## UJI TOKSISITAS DENGAN METODE BSLT
Pengujian toksisitas ekstrak tangkai buah  Pinang  Yaki  menggunakan  metode Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT)  yang mengacu  pada  Krishnaraju et  al .  (2005) dengan  cara  mengujikan  senyawa  yang diduga toksik terhadap larva A. salina.
PERSIAPAN LARVA Artemia salina L.
Penetasan  telur
Artemia  salina
dilakukan dengan cara merendam sebanyak  50  mg  telur Artemia  salina dalam  wadah  yang  berisi  air  laut  dibawah cahaya  lampu  25  watt.  Telur Artemia salina akan  menetas  dan  menjadi  larva setelah 24 jam. Larva Artemia salina yang baik digunakan untuk uji BSLT yaitu yang berumur  48  jam  sebab  jika  lebih  dari  48 jam  dikhawatirkan  kematian Artemia salina bukan disebabkan toksisitas melainkan  oleh  terbatasnya  persediaan makanan (Pamolango, 2016).

## PEMBUATAN KONSENTRASI SAMPEL UJI
Pembuatan  konsentrasi  larutan  uji untuk  BSLT  adalah  1000  μg/mL,  100 μg/mL,  l0  μg/mL,  1  μg/mL,  dan  larutan kontrol negatif sesuai metode yang dipakai oleh Surya (2018).
a. Masing-masing  ekstrak  etanol  96% tangkai  buah  Pinang  Yaki  ( Areca vestiaria )  ditimbang  sebanyak  50  mg,
kemudian  dilarutkan  dengan  air  laut sebanyak  50  mL  untuk  memperoleh konsentrasi 1000 μg/mL.
b. Dari  larutan  dengan  konsentrasi  1000 μg/mL  diambil  5mL  dan  dilarutkan dengan  air  laut  hingga  50  mL  untuk mendapatkan konsentrasi 100 μg/mL.
c. Dari  larutan  dengan  konsentrasi  100 μg/mL  diambil  5mL  dan  dilarutkan
dengan  air  laut  hingga  50  mL  untuk mendapatkan konsentrasi 10 μg/mL.
d. Dari  larutan  dengan  konsentrasi  10 μg/mL  diambil  5mL  dan  dilarutkan dengan  air  laut  hingga  50  mL  untuk mendapatkan konsentrasi 1 μg/mL.
e. Untuk  mendapatkan  larutan  control negatif  dibuat  dengan  mengambil  10 mL air laut.

## PELAKSANAAN UJI TOKSISITAS
Pada setiap konsentrasi dari ekstrak etanol 96% tangkai Pinang Yaki dilakukan Uji Toksisitas dengan 3 replikasi menggunakan  10  ekor  larva  pada  setiap kelompok  uji.  Sebanyak  3  replikasi digunakan untuk konsentrasi 100 μg/mL, 3 replikasi  untuk  konsentrasi  10  μg/mL,  3 replikasi untuk konsentrasi 1 μg/mL, dan 3 replikasi  untuk  sebagai  kontrol  negatif. Pengamatan  dilakukan  selama  24  jam terhadap kematian larva A. salina. Kriteria standar  untuk  menilai  kematian  larva  A. salina  yaitu  bila  larva  A.  salina  tidak menunjukkan pergerakkan selama beberapa  detik  observasi  (Krishnaraju et al ., 2005).

## ANALISIS DATA
Data  hasil  penelitian  akan  diolah dalam  bentuk  tabel  dan  grafik.  Data  akan dianalisis  dengan  analisis  regresi  linier menggunakan aplikasi perhitungan
Microsoft  Excel  2013  untuk  memastikan nilai IC 50 dan LC 50 .

## HASIL DAN PEMBAHASAN PENYIAPAN SIMPLISIA
Bagian  tanaman  yang  digunakan yakni  tangkai  buah  dari  Pinang  Yaki ( Areca  vestiaria )  yang  diambil  di  Desa Tanggari  Kec.  Airmadidi,  Sulawesi  Utara. Sampel  dicuci  dengan air dan dikeringkan
kemudian  diserbuk  menggunakan  alat blender dan diayak dengan ayakan. Proses pencucian sampel yang dilakukan bertujuan  untuk  memisahkan  kotoran- kotoran  atau  bahan  asing  lainnya  yang menempel pada sampel. Proses pengeringan sampel bertujuan untuk menghilangkan  kadar  air  dalam  sampel karena  selain  dapat  mengganggu  proses penarikan  zat  aktif,  kadar  air  yang  tinggi juga  dapat  membuat  sampel  mudah  rusak oleh  adanya  pertumbuhan  jamur.  Proses penyerbukkan  sampel  bertujuan  untuk memperbesar  luas  permukaan  kontak dengan  pelarut  sehingga  mengoptimalkan proses ekstraksi. Proses pengayakan bertujuan  untuk  menyeragamkan  ukuran partikel,  dimana  keseragaman  ukuran partikel ini dapat mempengaruhi keseragaman  tahapan  ekstraksi  (Saifuddin et al, 2011).

## EKSTRAKSI
Proses  ekstraksi  serbuk  tangkai  buah Pinang  Yaki  diekstraksi  menggunakan metode maserasi dengan sistem remaserasi atau  maserasi  berulang.  Serbuk  tangkai buah  yang  digunakan  sebesar  200  gram direndam menggunakan etanol 96%
kemudian dimasukkan ke dalam Erlenmeyer dan digojok menggunakan alat orbital  shaker  dengan  pengadukan  selama 24  jam  dengan  kecepatan  150  rpm. Pemilihan  metode  maserasi  dikarenakan maserasi adalah metode pemisahan senyawa dengan cara perendaman menggunakan pelarut organik pada temperatur  ruangan.  Proses  maserasi sangat  menguntungkan  dalam  isolasi senyawa  bahan  alam  karena  selain  murah dan mudah dilakukan, dengan perendaman sampel  tumbuhan  akan  terjadi  pemecahan dinding dan membran sel akibat perbedaan
tekanan  antara  di  dalam  dan  di  luar  sel, sehingga  senyawa  metabolit  sekunder yang ada di dalam sitoplasma akan terlarut dalam  pelarut  (Pamolango,  2016).  Tahap remaserasi  bertujuan  untuk  mendapatkan hasil  ekstrak  yang  banyak  dimana  seluruh zat aktif akan tersari sempurna. Penggantian  pelarut  dengan  yang  baru setiap kali proses remaserasi akan menghindari  terjadinya  kejenuhan  dalam proses penyarian (Edy, 2016).

## IDENTIFIKASI FITOKIMIA
Identifikasi fitokimia  bertujuan untuk  mengetahui  kandungan  golongan senyawa  sebagai  suatu  tumbuhan  sebagai informasi awal untuk meramalkan aktivitas  biologi  suatu  tanaman.  Pada penelitian ini dilakukan identifikasi fitokimia  untuk  menguji  ada  tidaknya golongan senyawa yang berpotensi sebagai antioksidan  dan  berpotensi  toksik,  yaitu golongan  flavonoid,  tanin,  saponin,  dan triterpenoid. Hasil penujian fitokimia dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil Identifikasi fitokimia.
Senyawa Metabolit Perubahan Positif Perubahan yang terjadi Flavonoid Warna merah, kuning, atau jingga + Saponin Busa stabil setinggi 1- 10 cm + Triterpen Cincin kecoklatan atau violet + Tanin Warna hitam kebiruan atau hijau -

## UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DENGAN METODE DPPH
Pengujian aktivitas antioksidan pada  ekstrak  etanol  tangkai  buah  Pinang Yaki  dilakukan  dengan  menggunakan metode DPPH dengan panjang gelombang 517nm. Menurut Molyneux (2004), penggunaan  metode  DPPH  merupakan cara  pengujian  yang  cepat,  mudah,  dan peka  serta  hanya  memerlukan  sedikit sampel untuk evaluasi aktivitas antioksidan  dari  senyawa  bahan  alam. Hasil  pengujian  DPPH  dapat  dilihat  pada Tabel 2.
Tabel 2. Perbandingan Aktivitas Antioksidan
Gambar 1. Grafik Aktivitas Antioksidan
Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh pada pengujian DPPH persen inhibisi pada ekstrak  etanol  tangkai  buah  Pinang  Yaki mengalami  peningkatan  pada  konsentrasi tertinggi  yaitu  10  μg/mL  yakni  28,13%.
Peningkatan  persen  inhibisi  ini  pada ekstrak menandakan bahwa semakin besar
konsentrasi  ekstrak  maka  semakin  besar persen  inhibisi.  Hal  ini  didukung  oleh penelitian  yang  dilakukan  oleh  Hanani et al .,  (2005)  yang  menyatakan  bahwa presentase penghambatan (persen inhibisi) terhadap  aktivitas  radikal  bebas  akan  ikut meningkat  seiring  dengan  meningkatnya konsentrasi.
Berdasarkan perubahan warna yang terjadi  dapat  diketahui  bahwa  ekstrak memiliki aktivitas antioksidan yang sangat kuat, hal ini ditunjukan dengan warna yang berubah  pada  larutan  dari  ungu  menjadi kuning  pucat.  Adanya  perubahan  yang terjadi  disebabkan  ketika  larutan  DPPH dicampur  dengan  suatu  senyawa  yang dapat  mendonasikan  atom  hidrogen,  maka DPPH  berubah  menjadi  bentuk  tereduksi ( 1,1-difenil-2-pikrihidrazin ) dengan kehilangan  warna  violet  menjadi  warna kuning.  Perubahan  warna  kuning  ini menghasilkan senyawa bukan radikal ( 1,1- difenil-2-pikrihidrazin )  dan  radikal  (A.)
(Suryanto, 2012).
Kemampuan  aktivitas  penangkal radikal bebas eksrtrak tangkai buah Pinang Yaki ini dibuktikan dengan nilai IC 50 yang sangat kuat sebesar 16.52 μg/mL, Nilai ini didapat  dengan  menghitung  persamaan linear dari Gambar 1. Flavonoid merupakan  senyawa  penyebab  adanya antioksidan.  Senyawa  flavonoid  memiliki potensi sebagai antioksidan karena memiliki gugus hidroksil yang terikat pada karbon  cincin  aromatik  sehigga  dapat menangkap  radikal  bebas  yang  dihasilkan dari  reaksi  peroksidasi  lemak.  Senyawa flavonoid akan menyumbangkan satu atom hidrogen  untuk  menstabilkan  radikal peroksi lemak (Dewi, 2014).
Pembanding yang digunakan dalam penelitian  ini  yaitu  vitamin  C  p.a  dengan konsentrasi  yaitu    2  μg/mL,  4  μg/mL,  6
Sampel IC 50 (μg/mL) Ekstrak Etanol Tangkai Buah Pinang Yaki 16.52 Vitamin C p.a 7.28
μg/mL,  8  μg/mL,  10  μg/mL.  Nilai  IC 50 dari  Vitamin  C  didapat  sebesar  7.28 μg/mL,  nilai  ini  menunjukkan  bahwa kemampuan  penangkal  radikal  bebas  dari Vitamin C lebih kuat dibandingkan dengan ekstrak  etanol  tangkai  buah  Pinang  Yaki. Vitamin  C  memiliki  aktivitas  antioksidan yang  tinggi  karena  vitamin  C  memiliki  2 gugus hidroksil yang mengakibatkan lebih mudah dalam pendonoran hidrogen (Blois, 2005).
Menurut  Molyneux  (2004),  suatu antioksidan  dikatakan  sebagai  antioksidan dengan  aktivitas  sangat  kuat  ketika  nilai IC50  kurang  dari  50  µg/mL  (IC50<  50 µg/mL),  kuat  (50  µg/mL  <  IC50<  100 µg/mL), sedang (100 µg/mL < IC50< 150 µg/mL),  lemah  (150  µg/mL  <  IC50<  200 µg/mL),  dan  sangat  lemah  (IC50>  200 µg/mL).  Hal  ini  menunjukan  bahwa vitamin  C  dan  ektrak  etanol  tangkai  buah Pinang Yaki merupakan antioksidan dengan aktivitas sangat kuat.
Tabel  3.  Presentase  Jumlah  Kematian Larva
Menurut  Apu  (2013)  Tingkat kematian dapat ditemukan secara langsung melalui  perbandingan  konsentrasi  yang berkisar  dari  konsentrasi  terendah  hingga konsentrasi  tertinggi.  Dengan  kata  lain,
kematian  larva  udang  disebabkan  oleh peningkatan  konsentrasi  dalam  sampel. Pada kontrol negatif tidak terjadi kematian, sehingga dapat dikatakan bahwa kematian larva bukan dikarenakan pengaruh  air  laut,  melainkan  karena ekstrak yang diberikan.
Hasil pengujian tersebut memberikan nilai

## PENGUJIAN  TOKSISITAS  DENGAN METODE BSLT
Pengujian  aktivitas  toksisitas  yang dilakukan dengan metode BSLT menggunakan larva udang Artemia salina . Kemampuan  toksisitas  ekstrak  etanol  dari tangkai buah Pinang Yaki dalam mematikan  larva  udang  yang  telah  diberi perlakuan  dengan  konsentrasi  1,  10,  100 dan 1000 mg/L dapat dilihat dalam tabel 3.
Berdasarkan  Tabel  3  dapat  dilihat bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi  maka semakin besar juga tingkat kematian larva, dimana tingkat kematian tertinggi terdapat pada  konsentrasi  1000  μg/mL  dan kematian  terendah  pada  konsentrasi  1 μg/mL.
LC 50 sebesar  602  μg/mL  yang  dihitung menggunakan analisis probit.
Pengujian Kontrol (-) 0 μg/mL Jumlah Kematian Setiap Konsentrasi 1 μg/mL 10 μg/mL 100 μg/mL 1000 μg/mL 1 0 0 2 4 6 2 0 0 1 3 6 3 0 0 1 2 5 Total Kematian 0 0 4 9 17 Rata-rata 0 0 1.3 3 5.6 Persentase Kematian 0% 0% 13% 30% 56%

## Tabel 4. Nilai Probit
Konse ntrasi (μg/m L) Log Konse ntrasi (x) Kem atian (%) Nilai Prob it (y) LC 50 (μg/ mL)
0 0
602
1 0 0 0
10 1 13 3.87 100 2 30 4.48 1000 3 56 5.15
Gambar 2. Grafik Analisis Probit
Suatu  ekstrak  dapat  disebut  toksik apabila  mempunyai  nilai  LC 50 <1000 mg/L.  LC 50 yaitu  konsentrasi  yang  dapat mematikan  50%  larva  udang  laut.  Hasil analisis probit pada gambar 2 menggunakan  persamaan  regresi  linear yang  menunjukkan  bahwa  nilai  LC 50 dari ekstrak  etanol  tangkai  buah  piang  yaki yakni  602  μg/mL.  Hal  ini  menunjukkan bahwa ekstrak etanol tangkai  buah Pinang Yaki bersifat toksik.
Kematian larva A. salina disebabkan  karena  keberadaan  senyawa metabolit  sekunder  yang  bersifat  toksik. Triterpenoid merupakan senyawa penyebab adanya sifat toksik. Berdasarkan identifikasi  fitokimia  yang  dilakukan didapati ekstrak etanol positif mengandung triterpenoid.  Ketika  senyawa  tersebut tertelan oleh larva, maka akan menyebabkan efek antifeedant yang membuat larva A. salina tidak bisa makan,
sehingga  menyebabkan  larva    mati. Kemampuan  suatu  ekstrak  menyebabkan kematian larva melalui mekanisme stomach poisoning dimana larva mengalami gangguan pada saluran cernanya  serta  reseptor  permukaan  mulut larva  dihambat  sehingga  larva  tidak  bisa mendeteksi makanan sehingga mati kelaparan (Julfitriyani, 2016).

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang telah  dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa ekstrak  etanol  tangkai  buah  Pinang  Yaki ( Areca vestiaria ) memiliki senyawa
metabolit sekunder yaitu Flavonoid, Saponin,  dan  Triterpenoid.  Ekstrak  etanol tangkai buah Pinang Yaki ( Areca vestiaria )  memiliki  aktivitas  antioksidan sangat kuat dengan nilai IC 50 sebesar 16.52 μg/mL.  Dan  ekstrak  etanol  tangkai  buah Pinang  Yaki  ( Areca  vestiaria )  memiliki sifat  toksik  dengan  nilai  LC 50 sebesar  602 μg/mL.

## SARAN
Dari  hasil  penelitian  ini  perlu dilakukannya penelitian lebih lanjut mengenai khasiat dari tangkai buah Pinang Yaki  ( Areca  vestiaria )  karena  memiliki aktifitas  antioksidan  yang  sangat  kuat  dan bersifat  toksik  yang  bisa  berpotensi sebagai bahan obat.

## DAFTAR PUSTAKA
Dewi,  A.  C.,  N.  M.  Puspawati.,  I.  M.  D.
Swantara.,  A.  Asih.,  W.  S.  Rita. 2014. Aktivitas Antioksidan Senyawa Flavonoid Ekstrak Etanol Biji  Terong  Belanda  ( Solanum betaceum, syn ) Dalam
Menghambat  Reaksi  Peroksidasi Lemak  Pada  Plasma  Darah  Tikus
Wistar. Jurnal  Cakra  Kimia .  2:( 4 ) 7- 16
Edy,  H.  J.,  Marchaban,  S.  Wahyuono,  A.
E.  Nugroho.  2016.  Formulasi  dan Uji  Sterilitas  Hidrogel  Herbal Ekstrak  Etanol  Daun Tagetes erecta L. Pharmacon. 5( 2 ) 9-16.
Hernani, R. M. 2005. Tanaman Berkhasiat Antioksidan , Jakarta: Penebar
Swadya.
Hutapea, R. 2005. Sehat dan Ceria Diusia Senja . Jakarta: Rineka Cipta.
Julfitriyani,  M.  R.  J.  Runtuwene,.  D.
Wewengkang.  2016.  Uji  Aktivitas Antioksidan Dan Toksisitas Ekstrak Etanol  Daun  Foki  Sabarati ( Solanum  Torvum ). Pharmacon .
5( 3 ) 94-101
Krishnaraju  A.  V.,  Rao.,  Sundraraju,  A.
2005. Assestment of Biooctivity of Indian  Medical  Plants  tlsing Brine Shrimp ( Artemia  salina )  Lethality Assay. lnternational Journal Applied Science and Engineering. (2) : 125-134.
Molyneux, P. 2004. The Use of The Stable
Free Radical diphenylpicrylhydrazyl (DPPH) for Estimating  Antioxidant  Activity,
Songklanakarin:  Journal  Science
Technology , 26: (2) 211-219.
Pamolango,  S.  A.,  W.  Bodhi.,  A.  C.
Wullur. 2016. Uji Fitokimia,
Antioksidan,  Dan  Toksisitas  Dari Ekstrak  Daun  Kentang  ( Solanum tuberosum )  Dengan Metode  1.1-
diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) dan Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT). Pharmacon . 5:( 3 ) 75-84.
Saifudin,  A.,  Rahayu,  V.,  Teruna,  H.  Y.
2011. Standardisasi  Bahan  Obat Alam . Graha Ilmu: Jakarta.
Sangi,  M.,  Runtuwene,  M.  R.  J.,  Simbala, H.  E.  I.,  Makang,  V.  M.  A.  2008. Analisis Fitokimia Tumbuhan Obat di  Kabupaten  Minahasa  Utara.
Chemistry Progress. 1 (1) .
Simbala,  H.E.I.  2006.  Keanekaragaman Floristik dan Pemanfaatannya sebagai Tumbuhan Obat di
Kawasan  Konservasi  II  Taman Nasional  Bogani  Nani  Wartabone (Kabupaten  Bolaang  Mongondow Sulawesi  Utara). Disertasi .  Institut Pertanian Bogor, Bogor.
Surya, A. 2018.Toksisitas Ekstrak Metanol
Kulit Jengkol ( Pithecellobium
Jiringa )  dengan  Metode Brine
Shrimp LethalityTest terhadap Larva Udang ( Artemia salina),Jurnal  Rekayasa  Sistem Industri. 3 :(2) 149-153.
Suryanto,  E.  2012. Fitokimia  Antioksidan , Surabaya; Putra Media Nusantara.