Aktivitas Sitotoksik Ekstrak Heksan, Ekstrak Etil Asetat, Ekstrak Etanol Buah Mengkudu ( Morinda citrifolia L )
Terhadap Sel T47D
Cytotoxic effect of hexane extract, ethyl acetate extract and ethanol extract of M orinda citrifolia L on T47D cells
Maryati  Maryati*,  Ahmad  Novian  Nur Anas,  Muhammad  Nur  Khairudin Fakultas Farmasi  ,Universitas Muhammadiyah  Surakarta,  Jalan A. Yani,  Tromol  Pos 1,  Pabelan Kartasura,
Surakarta E-mail: maryati@ums.ac.id
Received:  27 April  2020;  Accepted: 22  Juni 2020;  Published: 30 Juni 2020

## Abstrak
Buah mengkudu ( Morinda citrifolia L)  adalah salah satu bahan alam  yang biasa digunakan sebagai obat tradisional  untuk  mengatasi  beragam  penyakit  salah  satunya  kanker.  Buah  mengkudu  diketahui mengandung senyawa antrakinon dan kumarin  yang mempunyai  efek antikanker.  Penelitian  ini  bertujuan untuk  mengetahui  efek  sitotoksik  ekstrak n-heksan,  etil  asetat dan  etanol  buah mengkudu  dan  untuk mengetahui  keberadaan  senyawa antrakinon  dan  kumarin  dalam  ekstrak  tersebut.  Ekstraksi  dilakukan dengan metode maserasi bertingkat dengan pelarut n-heksan, dilanjutkan dengan etil asetat dan etanol. Uji efek  sitotoksik terhadap sel T47D  dilakukan  dengan metode MTT.  Identifikasi  senyawa antrakinon  dan kumarin  dilakukan  dengan metode kromatografi  lapis tipis. Hasil uji  menunjukkan  ekstrak n-heksan buah mengkudu  memiliki  efek  sitotoksik  medium  dengan nilai  IC 50 rata-rata  sebesar 582,13±61,64  µg/mL, sedangkan ekstrak etanol dan etil asetat buah mengkudu tidak memiliki  efek sitotoksik terhadap sel T47D. Hasil KLT  menunjukkan ekstrak n-heksan buah mengkudu mengandung senyawa antrakinon dan kumarin . Kata  Kunci: Morinda citrifolia L,  sitotoksik, kumarin,  antrakinon

## Abstract
Noni fruit  ( Morinda citrifolia L)  is one of the natural ingredients commonly  used as traditional  medicin e to overcome various diseases, such as cancer. Noni fruit contains anthraquinone and coumarin which have anticancer effects. This study aims to determine  the cytotoxic effects of n -hexane, ethyl acetate and ethanol extract of noni fruit and to determine the presence of anthraquinone and coumarin in the extract. Extractio n was carried out by maceration method using n -hexane, followed by ethyl acetate and ethanol. The cytotoxic activity on T47D  cells was carried out by the MTT method. The presence of ant hraquinone and coumarin was identified using thin layer chromatography (TLC).  Results sh owed that n-hexane extract had moderate cytotoxic effect on T47D  cells with IC 50 value of 582.13  ± 61.64  µg/mL,  while  the ethanol and ethyl acetate extract  did  not have cytotoxic  effect  on T47D  cells.  TLC  results indicated that n-hexane  extract  of noni fruit contains anthraquinone and coumarin.
Keywords: Morinda citrifolia L, cytotoxic, coumarine, anthraquinon

## PENDAHULUAN
Kanker  merupakan  sekelompok  sel  yang abnormal  di  dalam  tubuh  yang  menyebabkan pertumbuhan  sel  menjadi  tidak  terkendali . Kanker  disebabkan  oleh  beberapa  faktor  di antaranya  sosial,  budaya,  gaya  hidup,  hormon dan  faktor  genetik  (Hejmadi,  2010).  Pada tahun  2014 terdapat  92.200 perempuan  yang meninggal karena kanker. Persentase
tertinggi  penyebab  kematiannya  yaitu  kanker payudara  sebesar  21,4%  (World  Health Organization,  2014).
Saat  ini  penggunaan  kemoterapi  pada penderita  kanker  masih  memiliki  beberapa kelemahan  dapat  merusak  sel-sel  normal dalam  tubuh,  efek  samping  seperti  kelelahan, mual  muntah,  kerontokan  rambut.  Dengan alasan  tersebut  maka  perlu  dicari  obat  yang
selektif membunuh sel kanker dan mempunyai  efek  samping  yang  lebih  kecil (Aslam et  al. ,  2014).  Upaya  tersebut  dapat dilakukan  dengan  eksplorasi  bahan  alam, salah satunya buah mengkudu.
Buah
mengkudu  telah  digunakan  sebagai  obat tradisional untuk pengobatan beberapa penyakit  seperti  antioksidan,  antiinflamas i, analgesik,  hipertensi,  antikanker  (Kaur et al ., 2018) dan immunomodulator ( Almeida‑Souza,  2018).
Penelitian  menyebutkan  bahwa  ekstrak etil  asetat  akar  mengkudu mengandung senyawa  damnacanthal  suatu  antrakinon  yang memiliki  aktivitas  antikanker  pada  sel  MCF- 7 dengan  nilai  IC 50 sebesar 8,2  µg/mL  (Aziz et al. , 2014). Penelitian  lainnya  menyebutka n ekstrak  etanol  daun  mengkudu  memilik i aktiv itas  sitotoksik pada  sel  kanker murine WEHI-3B  leukemia  dengan  nilai  IC 50 17 µg/mL.  Senyawa  yang  bertanggung  jawab terhadap  aktivitas sitotoksik itu adalah damnacanthal  dan  scopoletin  (Ahmadi et al ., 2017). Damnacanthal pada mengkudu terbukti  mempunyai  aktivitas  sitotoksis  pada sel  kanker  kolon  ( Nualsanit et  al .,  2012) Penelitian  lain  menyebutkan  bahwa pada akar tanaman  mengkudu  mengandung  senyawa antrakinon damnacanthal dan nondamnacanthal yang  mempunyai efek sitotoksik  dan  menyebabkan cell  cycle arrest pada sel  H400 oral  cancer  cell ( Shaghayegh et  al., 2016). Kedua  senyawa  ini  terbukti dapat menghambat proliferasi dan menginduksi  apoptosis  dari  sel  H400  OSCC ( Oral
Squamosa
Cell Carcinoma ) ( Shaghayegh et  al., 2017).  Buah  mengkudu juga diketahui mengandung senyawa scopoletin. Scopoletin  merupakan  senyawa kumarin  yang  telah  dibuktikan  secara  ilmia h memiliki  aktivitas  antikanker,  antioksidan, antidiabetes tipe 2,  antihipertensi dan antibakteri  (Wijaya et  al. ,  2014). Sejauh pengetahuan peneliti belum pernah dilaporkan  efek  sitotoksik  buah  mengkudu terhadap  sel  kanker T47D,  karena  itu  penelit i tertarik  untuk  melakukan  penelitian  tentang aktivitas  sitotoksik  buah  mengkudu  terhadap
sel kanker payudara T47D. Pada penelitian  ini akan  diuji aktivitas sitotoksik ekstrak heksana,  ekstrak etil  asetat  dan ekstrak etanol buah  mengkudu  terhadap  sel  kanker T47D.

## METODE PENELITIAN Alat dan  Bahan
Alat  yang  digunakan  untuk melakuka n penelitian ini yaitu rotary  evaporator (Heidolph) ,  waterbath (Memmert),  almari pengering,  inkubator  CO 2 (Binder), 96-well plate , cytotoxic  safety  cabinet (ESCO), ELISA reader (Elx800  Bio  Tech  ),  vortexs, sonicator ,  mikroskop (Everted), neraca analitik  (Ohaus),  plat  KLT,  haemositometer (Neubauer), kondensor,  lampu  UV portable . Bahan  yang  digunakan:  buah  mengkud u, etanol  96%,  etil  asetat,  n-heksan,  air,  sel T47D,  RPMI  (Rosewell Park  Memorial Institute)  1640,  NaHCO3, DMSO,  HCl  1M, NaOH 1M, FBS 10%, HEPES,  fungison  1%, antibiotik  penisilin-streptomisin  3%,  alkohol 80%,  tripsin 0,025%,  PBS  ( Phosphat Buffered  Saline ),  larutan MTT  (3-(4,5- dimetiltiazol-2-il)
difenil tetrazolium bromida)  0,5%, larutan  SDS ( Sodium Dodesil Sulfat ), silika gel GF254, pereaksi dragrendorff,  FeCl 3 ,  pereaksi  vanillin  HCl, pereaksi  vanilin  asam  sulfat,  dan  pereaksi Liebermann-Burchard.

## Metode Uji

## Ekstraksi
Buah  mengkudu  dipotong  tipis-tip is, kemudian  dikeringkan  dengan  menggunaka n oven  selama  72  jam  pada  suhu  50 o C. Sebanyak  200  mg  simplisia selanjutnya diekstraksi dengan metode maserasi bertingkat  dengan  pelarut  heksana,  etil  asetat dan  etanol.  Maserasi  bertingkat  dilakukan dengan  kombinasi  digesti  dan  refluks  selama 1-2  jam  pada  suhu  40-60 o C.  Maserasi bertingkat  dilakukan  per pelarut  hingga  filtrat tidak  mengandung  senyawa  terlarut  lagi.  Hal ini  dicek  dengan  cara  menotolkan  filtrat dalam  lempeng  KLT  dan  diamati  di  bawah lampu  UV  254 nm  dan  366 nm,  terlihat  tidak adanya  pemadaman  atau  fluorosensi.  Setiap kali  maserasi  menggunakan  300 mL  pelarut.
Hasil  maserasi  disaring  dengan  kertas saring, selanjutnya  diuapkan  menggunakan rotary evaporator pada suhu  50 o C dilakukan  sampai mendapatkan  ekstrak kental  (Saifudin,  2014). Analisis  kandungan senyawa
Analisis kandungan senyawa buah mengkudu  dilakukan  dengan  kromatografi lapis  tipis  dengan  fase gerak n-heksan  dan etil asetat  (93:7  v/v)  dan  fase  diam  silika  gel GF 254 .  Senyawa  yang  akan  dideteksi  dari ekstrak  heksana,  etil  asetat  dan  etanol  buah mengkudu  adalah  skopolatin  suatu  kumarin dan damnacanthal suatu antrakinon. Keberadaan kumarin  dan antrakinon  dideteksi dengan  menggunakan  menggunakan  reagen semprot  KOH-etanolik,  dan diamati  di  bawah sinar  UV 254 dan  UV 366 nm  (Oktaviani et al ., 2011). Skopoletin (kumarin) setelah dilakukan penyemprotan reagen KOH- etanolik  akan  terbentuk  warna  biru  (Bhatt et al. ,  2011).  Damnacanthal  (antrakinon)  bila disemprot  dengan  reagen  KOH etanolik  akan menghasilkan  warna  merah  (Shami.,  2015) Uji  sitotoksik

## Pembuatan larutan stok sampel
Ekstrak  heksan,  etil  asetat  dan  etanol buah  mengkudu  ditimbang  kurang  lebih  10 mg  dan dilarutkan  dengan  100 µL  DMSO dan menggunakan bantuan vortex  kemudian ditambahkan media hingga 1000  µL. Selanjutnya  dibuat  5 seri  konsentrasi  sampel (25  µg/mL,  25  µg/mL,  100  µg/mL,  200 µg/mL  dan 400 µg/mL).

## Uji sitotoksik
Seratus  mikroliter  suspensi  sel  T47D dimasukkan  dalam 96-well  plate dengan kepadatan  10 4 .  Untuk  mengadaptasikan  sel, plate diinkubasi selama 24  jam  pada inkubator  CO 2 5%.  Selanjutnya  100  µL sampel  ditambahkan  dalam  sumuran  hingga diperoleh  konsentrasi  akhir  sampel  25,  50, 100,  200  dan  400  µg/mL. Plate diinkubas i pada  suhu  37˚C  dalam  inkubator  CO 2 5% selama  48  jam.  Selanjutnya  sumuran  yang berisi  medium  dibuang  dan  dicuci  dengan PBS.  Larutan MTT  0,5  %  (100  µL) ditambahkan  ke  dalam  tiap  sumuran  dan diinkubasi  pada inkubator  CO2 5% selama  4
jam pada suhu  37˚C. Reaksi  dari sel hidup  dan pereaksi  MTT  akan  membentuk  formazan (berwarna  ungu).  Selanjutnya  reagen stopper (SDS  10%  100  μL  dalam  HCl  0,01  N) ditambahkan  pada plate ,  kemudian plate dibungkus  alumunium  foil  untuk  diinkubas i selama  24  jam  di  tempat  gelap  pada  suhu kamar.  Absorbansi  dibaca  dengan  ELISA reader pada panjang  gelombang  550 nm. Data absorbansi  digunakan untuk  menghit ung persen sel hidup, selanjutnya untuk menentukan  nilai  IC 50 ekstrak.
Analisis  data
Persentase  sel  hidup dihitung dari absorbansi  yang  diperoleh,  kemudian  dibuat kurva  hubungan  antara  log  konsentrasi  versus % sel hidup,  kemudian  didapat  persamaan  y = bx+a.  Perhitungan  IC 50 dihitung  dengan  cara mensubtitusi  nilai  50  pada  Y  sehingga diperoleh  nilai  x  dan  nilai  IC 50 merupakan antilog  x.  Rumus  perhitungan  %  sel  hidup sebagai  berikut  :
1. Jika  absorbansi  kontrol  pelarut  sama dengan absorbansi kontrol sel maka perhitungan  persentase  sel  hidup

## Persentase sel hidup
= (Abs. perlakuan − Abs. kontrol media) (Abs.  kontrol sel − Abs. kontrol media) x100%
2. Jika  absorbansi  kontrol  pelarut  lebih rendah  dari  absorbansi  kontrol  sel  maka perhitungan  persentase  sel  hidup  dengan rumus  berikut:

## Persentase sel hidup
= (Abs. perlakuan − Abs. kontrol media)
(Abs. kontrol pelarut − Abs. kontrol media) x 100%
(Cancer  Chemoprevention  Research  Center, 2014) Uji  KLT  digunakan  untuk  menganalis i kandungan senyawa  yang  terdapat  pada ekstrak  heksana,  etil  asetat  dan  etanol  buah mengkudu.  Bercak  yang  dihasilkan  dihitung dengan  menggunakan  rumus  :
𝑅𝑓 = 𝐽𝑎𝑟𝑎𝑘 𝑒𝑙𝑢𝑠𝑖 𝑧𝑎𝑡 𝑡𝑒𝑟𝑙𝑎𝑟𝑢𝑡 (𝑐𝑚) 𝐽𝑎𝑟𝑎𝑘 𝑒𝑙𝑢𝑠𝑖 𝑝𝑒𝑙𝑎𝑟𝑢𝑡 (𝑐𝑚)
Plat  KLT  disemprotkan  beberapa  reagen untuk  melihat  lebih  jelas  di  bawah  sinar  UV senyawa  apa  yang  terdapat  pada  bercak kromatogram yang dihasilkan. Reagen semprot  tersebut  adalah  reagen  semprot KOH-etanolik  untuk  mendeteksi  senyawa scopoletin yang merupakan golongan kumarin.  Warna  yang  dihasilkan  adalah  biru (Wagner et al ., 1996), dan  reagen  KOH 10% untuk  mendeteksi  senyawa  damnacantha l yang  merupakan  senyawa  antrakinon.  Warna yang  dihasilkan  adalah  merah  (Warner et al, 1996 ).

## HASIL  DAN PEMBAHASAN
Pada  penelitian  ini,  ekstraksi  dilakukan dengan  metode  maserasi  bertingkat  dengan pelarut  n-heksan,  etil  asetat  dan  etanol. Maserasi  bertingkat  dilakukan  di  atas digital hot  plate dengan  suhu  40-60 o C dan  dibantu dengan magnetic  stirrer selama  1  jam. Keuntungan  metode maserasi  bertingkat  yaitu mudah,  sederhana,  tidak  ada  gangguan  fisik, rendemen  yang  dihasilkan  lebih  tinggi  dan juga  lebih  efisien  dalam  penyarian  ekstrak karena  adanya  bantuan refluks dengan pemanasan  pada  suhu  40-60 o C.  Maserasi bertingkat  dimulai  dengan  pelarut  heksan,  etil asetat  dan  terakhir  dengan  etanol  (Saifud in, 2014).  Rendemen  yang  diperoleh  adalah 1,57%  untuk  ekstrak  n-heksan,  ekstrak  etil asetat 0,82% dan ekstrak etanol  22,49%.
Identifikasi senyawa  antrakinon dan kumarin  dilakukan  dengan  kromatografi  lapis tipis  dengan  fase  diam  silika  gel  GF 254 dan fase  gerak  heksan:etil  asetat    (90:10  v/v). Visualisasi  senyawa  dilakukan  dengan  reagen semprot  KOH 10%.  Gambar  1 menunjukkan
hasil  KLT  ekstrak  etanol  mengkudu.  Hasil KLT  menunjukkan  bahwa  ekstrak  n-heksan buah  mengkudu  mengandung  antrakinon  dan kumarin (Tabel  1).  Senyawa  antrakinon berfluorosensi  merah  di  bawah  sinar  UV 366 nm,  sedangkan  kumarin  berflurosensi  biru pada UV 366 nm  (Wagner et al., 1996).
Uji  sitotoksik  ekstrak terhadap  sel  T47D dilakukan dengan  metode  MTT  dengan doksorubisin sebagai kontrol positif. Prinsip metode  MTT  didasarkan pada adanya  reduksi  garam  kuning  tetrazolium MTT (3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5- difeniltetrazolium bromida) oleh enzim reduktase  pada  mitokondria  sel  hidup  yang mengubah reagen  MTT  yang awalnya berwarna  kuning  menjadi  kristal  formazan berwarna  ungu  dan  tidak  larut  dalam  air (Doyle  and  Griffiths,  2000).
Penambahan reagen  stopper (SDS  10% dalam  0,01 N  HCl)  yang  bersifat  detergenik dapat  menghentikan  reaksi  enzimatik  dari enzim dan  melarutkan kristal  formazan sehingga  bisa  dibaca  absorbansinya  dengan ELISA reader .  Intensitas  warna  ungu  yang terbentuk  berbanding  lurus  dengan  jumlah  sel hidup,  sehingga  jika  intensitas  warna  ungu semakin  besar  maka  jumlah  sel  yang  hidup semakin  banyak  (Cancer  Chemoprevent io n Research  Center,  2014).  Pada  uji  ini  pelarut yang  digunakan  adalah  DMSO  (Capriotti et al .,  2012).  Menurut  Purwaningsih  (2014) DMSO  dengan  kadar  kurang  dari  3%  tidak bersifat  toksik  atau  membunuh  sel  kanker sehingga  dapat  digunakan  sebagai  pelarut pada uji  sitotoksik.
Kondisi  morfologi  sel  T47D  sebelum diberikan perlakuan terlihat berbentuk
Tabel  1. Hasil analisis senyawa  antrakuinon  dan  kumarin  dalam  ekstrak n-heksan buah mengkudu  menggunakan  metode  KLT, dengan  fase diam  silika gel GF254  dan  fase gerak heksan:etil asetat (9:1 v/v). NO Rf Sinar Tampak UV 366 Reagen  Semprot (KOH  etanolik) Kandungan Senyawa UV 366 1 0,33 - Merah Merah Antrakinon 2 0,78 - biru Biru Kumarin
lonjong  (Gambar  1A).  Sel  tidak  mengala mi kematian  setelah  perlakuan  ektrak  etanol dengan  konsentrasi  800  µg/mL  ini  terlihat dari  bentuk  sel  yang  masih  lonjong  (Gambar 1B).  Pada  perlakuan  ekstrak  etil  asetat  pada konsentrasi  tertinggi  yang  diujikan  (800 µg/mL)  terlihat  sedikit  sel  yang  mengala mi kematian  (Gambar  2C).  Perlakuan  sel  T47D dengan ekstrak n -heksan  (800  µg/mL) menunjukan  adanya  perubahan  morfologi  sel T47D  dari  bentuk  awal  lonjong  berubah menjadi  bintik  hitam,  ini  menandakan  bahwa sel  menggalami  kematian  (Gambar  1D.
Hasil  uji  menunjukkan  bahwa  ekstrak heksan    memiliki  aktivitas  sitotoksik  yang lemah,  sedangkan  ekstrak etil  asetat dan etanol buah  mengkudu tidak  memilki aktivitas sitotoksik  (Tabel  2).
Hasil ini berbeda dari penelit ia n sebelumnya  yang  menunjukkan ekstrak  etil asetat akar mengkudu  dan ekstrak etanol  daun mengkudu  memiliki  efek  sitotoksik  pada  sel MCF-7  dan WEHI-3B  leukemia nilai IC 50 berturut-turut  sebesar 8,2 µg/mL  pada  dan 17 µg/mL  (Aziz et  al. ,  2014,  Ahmadi et  al ., 2017). Perbedaan  ini  mungkin  disebabkan
Gambar 1. Sel T47D tanpa  perlakuan  ekstrak (A),  perlakukan  dengan  ekstrak etanol  800 µg/mL  (B), perlakuan  dengan  ekstrak etil asetat  800 µg/mL  (C) dan  perlakuan  dengan  ekstrak n -heksan  800 µg/mL  (D)
Tabel 2. Hasil uji sitotoksik ekstrak n -heksan, etil asetat dan etanol buah mengkudu terhadap sel T47D Konsentrasi ( µg/ml) Rata-rata  %  sel hidup Esktrak Heksan (X±SD) Ekstrak Etil  asetat Ekstrak Etanol 50 119,93  ± 4,72 126,88 125,65 100 113,12  ± 7,29 129,63 126,13 200 91,21  ± 9,66 147,58 125,26 400 59,32  ± 7,45 168,13 111,07 800 10,34  ± 8,97 138,68 87,33 IC 50 582,13  ± 61,64 - -
Catatan:  data ekstrak heksan yang ditampilkan  berupa rata-rata ± SD, ekstrak etil asetat dan ekstrak etanol pada pengujian pertama tidak menunjukkan adanya aktivitas, sehingga tidak dilakukan replikasi.
oleh  beberapa  hal  di  antaranya  jenis  sel  yang digunakan berbeda dari penelitia n sebelumnya.  Selain  itu  bagian  tumbuhan  yang digunakan juga berbeda sehingga kemungkinan  kandungan  senyawa  kimia  juga berbeda.  Syarat  utama  sampel  dapat  diuji  ke kultur  sel  harus  larut  dalam  media  dan kelarutannya dibantu  oleh  DMSO,  pada penelitian  ini  ekstrak  heksan  yang  agak sukar larut  di  dalam  media  dan  DMSO,  sehingga dibutuhkan  waktu  25 menit  sonikator  dan  30 menit
vortex untuk
membantu pencampurannya.
Hasil kontrol positif (doksorubisin) yang diperoleh dengan menggunakan konsentrasi tertinggi (2%) diperoleh rata-rata  persentase  sel  hidup sebesar  6,49%,  dan  konsentrasi  terendah (0,0625%) rata-rata persentase  sel hidup  yang diperoleh  sebesar  125,68% dengan  nilai  IC 50 0,3  µg/mL  (Tabel  3).  Efek  sitotoksik  suatu ekstrak  dikategorikan  berpotensi  sitotoksik
tinggi  jika IC 50 <100 µg/mL,  medium  jika IC 50 100-1000  µg/mL,  dan  tidak  berpotensi  jika IC 50 >1000  µg/mL  (Prayong et  al. ,  2008). Berdasarkan  hal  tersebut,  maka ekstrak etanol dan etil  asetat buah  mengkudu  tidak  memilik i aktivitas  sitotoksik  terhadap  sel  T47D,  dan ekstrak  n-heksan  memilki  aktivitas  sitotoksik medium. Kontrol positif dosksorubisin memiliki  aktivitas  sitotoksik  pada  sel  T47D masuk  pada kategori  tinggi.

## KESIMPULAN
Ekstrak  etil  asetat  dan  ekstrak  etanol buah mengkudu tidak memiliki efek sitotoksik  terhadap  sel  T47D.  Ekstrak  n- heksan  buah  mengkudu  memiliki  aktivitas sitotoksik  medium  dengan  nilai  IC 50 rata-rata sebesar  582,13  ±  61,64  µg/mL . Hasil  KLT menunjukkan  bahwa  esktrak n -heksan  buah mengkudu  mengandung  senyawa  antrakinon dan kumarin.

## Daftar Pustaka
Ahmadi,  H.  S.  Rahman,  R.  Rosli,  T.  A.  I.  &  S.  M.,  2017. Morinda  citrifolia leaf  extract ameliorated  leukemia  in  mice  model.  J Applied  Biotechnology  and  Bioengineering,  6(2), 249–255. https://doi.org/10.15406/jabb.2017.02.00052
Almeida‑Souza,  F., Reis  deOliveira,  A.L.,  Abreu‑Silva  A.L.,  Calabrese,  K.S., 2018. In  vitro activity  of Morinda  citrifolia Linn.  fruit  juice  against  the  axenic  amastigote  form  of Leishmania  amazonensis and  its  hydrogen  peroxide  induction  capacity  in  BALB/c peritoneal  macrophages.  BMC Res Notes, 11:492.
Aslam,  M. S., Naveed, S., Ahmed,  A., Abbas, Z., Gull,  I., Athar,  M. A., 2014. Side  effects  of chemotherapy  in  cancer patients  and evaluation  of patients  opinion  about starvation  based differential  chemotherapy.  Journal  of Cancer  Therapy,  5, 817-822.
Aziz,  M.Y.A.,  Omar,  A.R.,  Subramani,  T.,  Yeap,  S.K., Ho,  W.Y.,  Ismail,  N.H.,  Ahmad,  S., and  Alitheen,  N.B., 2014. Damnacanthal  is  a potent  inducer  of  apoptosis  with  anticancer
Tabel  3. Hasil uji sitotoksik kontrol positif  (doksorubisin) Konsentrasi (µg/ml) Rata-rata % sel hidup IC 50 (µg/ml) 0,0625
125,68  ± 14,33
0,29 0,125 87,78  ± 18,60 0,25 23,14  ± 11,07 0,5 10,22  ± 2,13 1 11,19  ± 0,16 2 6,49  ± 1,65
activity  by stimulating  p53 and p21 genes  in  MCF-7 breast cancer cells,  Oncology  Letters, 7 (5), 1479–1484.
Cancer  Chemoprevention  Research  Center,  2014,  Protokol  uji  sitotoksik,  Terdapat  di http://ccrc.farmasi.ugm.ac.id/?page_id=240  [Diakses  pada 8 Januari  2019].
Capriotti,  K., Capriotti,  J. A., 2012. Dimethyl  sulfoxide  history,  chemistry,  and  clinical  utilit y in  dermatology.  The  Journal  of  Clinical  and  Aesthetic,  5 (9), 24-26.
Doyle,  A. and Griffiths,  J.B., 2000. Cell  and  tissue  culture  for  medicina  research.  New York: John  Willey  and Sons Ltd.
Hejmadi.,  2010. Introduction  to Cancer  Biology , 2 nd Edition,  Penerbit  buku  kedokteran  EGC, Jakarta.
Kaur, H., Nisha,  G., Ruth,  G., 2018. The  noni  fruit  ( Morinda citrifolia L .): a systematic  review on  anticancer  potential  and  other  health  beneficial  pharmacological  activities.  Journal  of Medicinal  Plants  Studies;  6(2):  86-93
Nualsanit,  T.,  Rojanapanthu,  P.,  Gritsanapan,  W.,  2012.  Damnacanthal,  a  noni  component, exhibits  antitumorigenic  activity  in  human  colorectal  cancer  cells.  J  Nutr  Biochem,  23, 915-23.
Prayong,  P., Barusrux,  S., and Weerapreeyakul,  N., 2008. Cytotoxic  activity  screening  of some indigenous thai plants. Fitoterapia, 79 (7–8), 598–601. Terdapat di: http://dx.doi.org/10.1016/j.fitote.2008.06.007.
Saifudin,  A.,  2014.  Senyawa  alam  metabolit  sekunder  teori,  konsep,  dan  teknik  pemurnia n, Yogyakarta:  Deepublish.
Shaghayegh,  G., Alabsi  A.M., Ali-Saeed  R., Ali  A.M., Vincent-Chong  V.K., Zain  R.B., 2016. Cell  cycle  arrest  and  mechanism  of  apoptosis  induction  in  H400  oral  cancer  cells  in response  to  damnacanthal  and  nordamnacanthal  isolated  from Morinda  citrifolia . Cytotechnology,  69, pp.1999–2013
Shaghayegh,  G., Alabsi,  A.M.,  Ali-Saeed,  R.,  Ali,  A.M., Vincent-Chong,  V.K., Ismail,  N.H., Choon,  Y.F.,  Zain,  R.B.,  2017.  Effects  of  damnacanthal  and  nordamnacanthal  on proliferation,  apoptosis,  and  migration  of  oral  squamous  cell  carcinoma  cells.  Asian Pacific  Journal  of Cancer Prevention,  Vol  18, pp. 3333-3341.
Wagner,  H., and  Bladt,  S., 1996.  Plant  drug  analysis-a  thin  layer  chromatography  atlas  (2nd ed), Springer,  German.
Wijaya,  H., Ramadhan,  D., Has, N. and Febriyanti  E., 2014. Identifikasi  kandungan  skopoletin dalam  berbagai  jenis.  Warta  IHP/Journal  of Agro-based  Industry,  31 (1), 11–15.
World  Health  Organization,  2014. Cancer country  profiles:  Indonesia,  cancer  country  profiles.