Bioeksperimen Volume 2 No. 1, (Maret 2016) ISSN 2460-1365
SINYAL INTRASEL PEMICU REORGANISASI SITOSKELETON SEL MAST PADA REAKSI HIPERSENSITIVITAS TIPE I
Safari Wahyu Jatmiko Departemen Patologi Klinik Fakultas Kedokteran Universitas Muhammadiyah Surakarta E-mail korespondensi: safari.wahyu@ums.ac.id
Abstract – Mast cells plays an important role in the occurrence of type I hypersensitivity reaction. Degranulation is believed to underlie the role of mast cells in eliciting the reaction. The process of mast cell degranulation occurs due to migration of mast cell granules from cytoplasm to the cell membrane and release granule contents into the environment. It is determined by the reorganization of the cytoskeleton composed of microtubules, actin micro fi laments,  and intermediate fi laments. Cytoskeleton reorganization begins with mast cell activation by binding between the allergens with IgE a tt ached to Fc ε R. Mmast cells activation is reinforced by ties between c-Kit on the membrane surface of mast cells with c-Kit ligand. This raises a series of activation of intracellular processes that trigger the initiation of reorganization.
Keywords: mast cell,intracellular signal,cytoskeleton, type I hipersensitivitas
Abstrak – Sel mast mempunyai peranan yang penting dalam terjadinya reaksi hipersensitivitas tipe I. Degranulasi sel mast diyakini mendasari peran sel mast dalam memunculkan reaksi tersebut. Proses degranulasi sel mast terjadi karena berpindahnya granula sel mast dari sitoplasma menuju ke membran sel dan memuntahkan isi granula ke lingkungan sekitarnya. Proses transport ini sangat ditentukan oleh reorganisasi sitoskeleton yang terdiri atas mikrotubulus, aktin mikro fi lamen, dan intermediate fi lament. Reorganisasi sitoskeleton diawali dengan aktifasi sel mast oleh ikatan antara alergen dengan IgE yang menempel pada Fc ε R. Aktfasi sel mast diperkuat dengan adanya ikatan antara c-Kit pada permukaan membran sel mast dengan c-Kit ligan. Aktifasi ini menimbulkan serangkaian proses intrasel yang memicu inisiasi reorganisasi.
Kata kunci : sel mast, sinyal intrasel, sitoskeleton, Hipersensitivitas tipe I

## PENDAHULUAN
Sel mast pertama kali dideskripsikan oleh Friedrich von Recklinghausen pada tahun 1863. Pada tahun 1878 Paul Ehrlich mendeskripsikan hal yang sama dan memberi nama ma tz ellen yang berarti sel yang kenyang makanan (Blank et al , 2013). Belakangan diketahui bahwa ma tz ellen berperan dalam munculnya alergi,
imunitas terhadap parasit, in fl amasi,  dan homeostasis. Saat ini ma tz ellen lebih dikenal dengan nama sel mast (Beaven, 2009).
Sel mast bisa berbentuk bulat, oval ataupun gelondong dengan ukuran 7-20 μ m. Secara mikroskopis tampak  tonjolan- tonjolan sitoplasma yang disebut dengan microplicae . Granula sel mast terwarna dengan methilen blue dan akan terlihat
Bioeksperimen
Volume 2 No. 1, (Maret 2016) ISSN 2460-1365
metakromasi.  Membran sel mast dilengkapi dengan berbagai reseptor seperti Fc ε R, Fc γ R, CR ( complemenr receptor ), reseptor β 2 adrenergik, reseptor Adenosin, reseptor TSLP ( Thymic Stromal Lymphopoietin ) dan IL-33R ( Interleukin 33 receptor ) (Jatmiko & Aisyah, 2015).
Telah diyakini bahwa sel mast banyak ditemukan di jaringan ikat dan berperan penting dalam munculnya reaksi hipersensitivitas tipe I. Keterlibatan sel mast dalam reaksi hipersensitivitas tipe I di perankan oleh berbagai senyawa yang tersimpan di dalam granula (Amin, 2012; Bradding et al , 2006).

## INISIASI DEGRANULASI SEL MAST
Pada pasien dengan reaksi hipersensitivitas tipe I, sel mast telah tersensitisasi oleh alergen. Sel mast pada kondisi ini mengandung 500.000 molekul IgE pada permukaan membran selnya. Bagian Fab dari IgE dalam posisi bebas sedangkan bagian Fc berikatan dengan
Fc ε RI. Alergen yang masuk akan ditangkap oleh bagian Fab dari IgE. Ikatan silang antara alergen dengan minimal 2 molekul IgE akan mengakti fk an sel mast. Ikatan ini merupakan faktor yang mengawali terjadinya degranulasi (Amin, 2012).
Aktifasi sel mast oleh alergen diketahui ditingkatkan oleh adanya Stem Cell Factor (SCF) yang sering disebut juga sebagai c-Kit ligan. Saat ini diketahui bahwa SCF dihasilkan oleh sel endotel dan sel fi broblast  (Lennartsson &Rönnstrand, 2012; Theoharides et al , 2010).

## SINYAL INTRASEL PEMICU REORGANISASI SITOSKELETON
Ikatan antara alergen dengan IgE dan c-Kit ligan dengan c-Kit memicu serangkaian proses sinyal intrasel yang memicu degranulasi. Proses perjalanan sinyal intrasel yang memicu reorganisasi sitoskeleton dapat dilihat dalam gambar 1 di bawah ini.
Gambar 1. Skema aktifasi sel mast (keterangan lihat teks)

## Bioeksperimen
Volume 2 No. 1, (Maret 2016) ISSN 2460-1365

## AKTIFASI SEL MAST OLEH IgE
Ikatan silang alergen dengan minimal dua Fc ε RI α mengakti fk an protein Fyn dan Lyn (Pullen et al , 2012). Aktifasi Fyn dan Lyn memfosforilasi motif ITAM ( Immunoreceptor Tyrosine Activation Motif ) dari Fc ε RI β dan Fc ε RI γ . Fosforilasi ini membuat protein Syk menempel kepada ITAM. Penempelan Syk menimbulkan perubahan konformasional dari Syk itu sendiri dan menyebabkan meningkatnya kemampuan akti fi tas enzimatik dari Syk (Siraganian et al, 2010). Selain memicu fosforilasi ITAM, Fyn yang aktif juga mengakti fk an protein Syk dan Gab2 ( Grb-2 Associated binding protein 2 ) sedangkan Lyn mengakti fk an Syk (Okayama et al , 2012; Ra et al , 2012;Sibilano et al , 2014). Selanjutnya Syk memicu fosforilasi NTAL ( Non T Cell Activation Linker ), LAT ( Linker for Activation of T Cells ), dan mendorong terjadinya reorganisasi sitoskeleton (Polakovicova et al, 2014; Draber et al , 2012; Tumova´ et al , 2010).

## 1.  Efek Fosforilasi NTAL
NTAL yang telah terfosforilasi menarik Grb2 (Orr& McVicar, 2011;Yamasaki et al, 2007). Melekatnya Grb2 kepada NTAL menjadikan Gab2 yang telah diakti fk an oleh Fyn bergabung dengan NTAL. Setelah Gab2 membentuk kompleks dengan Grb2, maka PI3K (Phosphatidylinositol 3 Kinase) ikut begabung dengan kompleks tersebut (Siraganian, 2003; Yu et al, 2006). Kompleks signalosom yang terbentuk kemudian mengakti fk an berbagai protein lain yang penting untuk proses degranulasi.
2.  Aktifasi Btk (Bruton Tyrosine Kinase) PI3K yang membentuk kompleks signalosom mengubah Phosphatidylinositol (4,5) biphosphate yang terdapat pada lipid raft
menjadi Phosphatidylinositol (3,4,5) triphosphate. Perubahan tersebut menarik Btk menuju ke membran sel. Pertemuan Phosphatidylinositol (3,4,5) triphosphatedengan Btk membuat Btk menjadi aktif. Btk kemudian mengakti fk an PLC γ (Phospholipase C γ ) yang akan memecah Phosphatidylinositol (4,5) biphosphate menjadi IP3 (inositol triphosphate) dan DAG (Diacyl Glyserol). Kedua zat ini mempunyai fungsi yang berbeda. DAG mengakti fk an PKC (Protein Kinase C)  sedangkan IP3 memicu peningkatan kadar kalsium intrasel (Draber et al , 2012).
a. Peran IP3
Peningkatan kalsium intrasel diawali dengan ikatan antara IP3 dengan reseptor IP3 pada membran retikulum endoplasma. Hal ini memicu keluarnya ion kalsium ke dalam sitoplasma. Retikulum endoplasma yang kekurangan ion kalsium merangsang sensor kalsium STIM  ( Stromal Interaction Molecule ) pada retikulum endoplasma. STIM kemudian bergerak ke arah membran plasma untuk berikatan dengan kanal kalsium yang terdiri atas Orai dan TRPC ( Transient Receptor Potential Canonical ). Ikatan antara STIM dengan Orai dan TRPC distabilkan oleh CRACR ( Calsium Release-activated Calsium  Current Regulator ). Akibat dari ikatan ini adalah terbukanya kanal kalsium sehingga kalsium masuk ke dalam sel (Ha´jkova´ et al , 2011; Shen, Frieden, Demaurex., 2011).
Peningkatan ion kalsium di dalam sel mast menyebabkan terjadinya depolimerisasi F-aktin. Depolimerasisasi ini diperantarai oleh berbagai protein lain yang menjadi
Bioeksperimen Volume 2 No. 1, (Maret 2016)
ISSN 2460-1365
aktif dengan meningkatnya ion kalsium (Draber et al , 2012). b. Peran PKC
Sel mast mengandung PKC konvensional (PKC α dan PKC β ), PKC novel (PKC θ ), dan PKC atipik (PKC ζ dan PKC λ ). Ion kalsium dan DAG mengakti fk an PKC konvensional sedangkan DAG sendiri tanpa bantuan ion kalsium mengakti fk an PKC novel.
PKC yang aktif akan mempengaruhi degranulasi sel mast dengan cara (1) memfosforilasi MARCK ( myristoylated alanine-rich protein kinase C substrate ) yang memaksa MARCK terlepas dari Phosphatidylinositol (4,5) biphosphate. Hal ini menyebabkan bergabungnya synaptogagmin dengan membran plasma sehingga terjadilah degranulasi. (2) PKC mengakti fk an ADAP yang akan mempengaruhi MTOC. (3) PKC mempengaruhi Ras untuk aktif sehingga terjadilah reorganisasi mikrotubulus (Gadi et al , 2011; Huse, 2012; Lessmann et al , 2006;
Liu et al , 2001).

## 3. Aktifasi PDK1 (Phosphoinositide Dependent Kinase 1)
P h o s p h a t i d y l i n o s i t o l ( 3 , 4 , 5 ) triphosphate yang terbentuk akibat aktifnya PI3K menarik PDK1 ke membran sel. Kemudian PDK1 bergabung dengan Akt yang akan diikuti dengan aktifnya Akt. Akt yang telah aktif  kemudian memfosforilasi GSK3 β ( Glycogen Synthase Kinase 3 β ) dengan bantuan DOCK5. Penghambatan GSK3 β memicu terjadinya pembentukan mikrotubulus sehingga terjadi degranulasi sel mast (Kim, Radinger, Gil fi llan., 2008; Ogawa et al , 2014).

## 4.  Aktifasi PLD (Phospholipase D)
Protein lain yang diakti fk an oleh PI3K adalah PLD yang kemudian mengakti fk an sphingokinase. Fungsi sphingokinase adalah mengubah sphingosine menjadi sphingosine-1 phosphate. Hasil akhir dari proses ini adalah semakin meningkatnya kadar ion kalsium di dalam sel sehingga memicu depolimerisasi F-aktin (Rivera & Gil fi llan, 2006).

## 5. Aktifasi Rho
Adapter protein Gab2 dan PI3K yang tergabung di dalam signalosom mengakti fk an Rho. Phosphatidylinositol (3,4,5) triphosphate juga mengakti fk an Rho dengan cara menarik GEF ( GTP Exachange Factor )  sehingga terjadi pertukaran GDP dengan GTP pada Rho (draber et al , 2012; Nishida et al , 2005).
Protein Rho selanjutnya mempengaruhi mDia (Mammalian diaphanous protein) dan Rho Kinase. Fungsi dari pengaktifan mDia adalah untuk menstabilkan microtubules plus ends sedangkan Rho Kinase mempengaruhi vimentin (Schwar tz , 2003).

## 6. Aktifasi Rac
Phosphatidylinositol (3,4,5) triphosphate, PI3K, dan Btk mengakti fk an Rac dengan  proses yang mirip dengan pengaktifan Rho. Target dari Rac adalah PAK  ( p21 Activated Kinase ), OP18 (oncoprotein18), dan IQGAP ( IQ motif containing GTPase activating protein ). Penghambatan OP18 dan pengaktifan PAK merangsang pemanjangan mikrotubulus, sedangkan IQGAP  akan membentuk kompleks dengan CLIP170 dan microtubule plus end untuk mengatur

## Bioeksperimen
Volume 2 No. 1, (Maret 2016) ISSN 2460-1365
polaritas mikrotubulus (Allen et al, 2009; Nayak et al , 2013).

## 7. Aktifasi cdc42
Phosphatidylinositol (3,4,5) triphosphate sebagai hasil penambahan phosphate pada phosphatidylinositol(4,5) biphosphate oleh PI3K berperan penting dalam aktifasi cdc42. Saat ini diketahui bahwa cdc42 menjadikan PAK1 dan GSK-3 β sebagai target downstream . Fungsi utama keduanya adalah reorganisasi mikrotubulus (Draber et al , 2012;
Melendez, Grogg, Zheng., 2011).
8. Aktifasi LAT LAT yang terfosforilasi ketika sel mast aktif menarik protein GADs ( Grb2- related adapter protein ). GADs berfungsi untuk menjembatani SLP76 ( SH2- domain-containing leukocyte protein of 76 kDa ) agar membentuk kompleks dengan
LAT. Slanjutnya SLP76 menarik PLC γ dan Vav. LAT juga diketahui membentuk kompleks dengan Grb2-Sos-Vav (Draber et al , 2012; Huse, 2009).
Pengaruh aktifasi PLC γ sama seperti aktifasi PLC γ oleh NTAL.
Pembahasan sinyal downstream PLC γ telah disampaikan pada sub bab sebelumnya.
Vav diketahui mempunyai peran dalam degranulasi sel mast karena kemampuannya dalam mengakti fk an Ras, Rac, dan Cdc42. Ketiganya merupakan pemicu reorganisasi mikrotubulus (Draber et al, 2012).
AKTIFASI MELALUI C-KIT c-Kit atau CSF reseptor akan mengenali c-Kit ligan dan membentuk ikatan dengannya. Ikatan ini memicu terjadinya perubahan pada domain sitoplasmik dari c-Kit. Perubahan ini memberikan kesempatan pada PLC γ ,
PI3K, dan Shc-Grb2-Sos untuk membentuk komplek dengan c-Kit. Sinyal downstream dari kompleks tersebut memicu degranulasi dengan proses yang mirip dengan sinyal downstream dari ketiganya ketika terakti fk an melalui NTAL dan TAL (Gil fi llan & Rivera, 2009; Lennartsson & Rönnstrand, 2012).

## SIMPULAN, SARAN, DAN REKOMENDASI
Berbagai jalur sinyal intrasel terjadi ketika sel mast terakti fk an oleh alergen. Ujung perjalanan sinyal intrasel tersebut adalah reorganisasi sitoskeleton yang meliputi pemanjangan mikrotubulus, reorganisasi vimentin, dan degradasi F-aktin sub membran. Reorganisasi ini diikuti dengan degranulasi karena granula terbawa menuju ke arah membran sel dengan proses yang rumit.
Pengetahuan tentang reorganisasi sitoskeleton pada sel mast memberikan harapan baru dalam terapi reaksi hipersensitivitas tipe I dengan cara menghambat reorganisasi sitoskeleton.
Di akhir tulisan ini penulis sangat merekomendasikan untuk melakukan penelitian mengenai uji klinik inhibitor reorganisasi sitoskeleton untuk terapi hipersensitivitas tipe I.

## DAFTAR PUSTAKA
Allen JD, Ja ﬀ er ZM, Park SJ, Burgin S, Hofmann C, Sells MA, et al., 2009. p21-activated kinase regulates mast cell degranulation via e ﬀ ects on calcium mobilization and cytoskeletal dynamics. Blood .113:2695-705
Amin K., 2012. The role of mast cells in allergic in fl ammation. Resp Med ,106: 9-14
Bioeksperimen Volume 2 No. 1, (Maret 2016) ISSN 2460-1365
Beaven MA., 2009. Our perception of the mast cell from Paul Ehrlich to now. Eur. J. Immunol . 39: 11–25
Blank U, Falcone FH,  Nilsson G., 2013. The history of mast cell and basophil research – some lessons learnt from the last century. Allergy . 68:1093–
101
Bradding P, 2009. Asthma: Eosinophil Disease, Mast Cell Disease, or Both?. Allergy, Asthma Clin Immunol ,
4:84-90
Draber P, Halova I, Levi-Scha ﬀ er F, Draberov L., 2012. Transmembrane adaptor proteins in the high-a ﬃ nity  IgE receptor signaling. Front . Immun . 2(95):1-11
Dráber P, Sulimenko V, Dráberová E., 2012. Cytoskeleton in mast cell signaling. Front Immunol , 3(130):1-18
Gadi D, Wagenknecht-Wiesner A, Holowka D, Baird B., 2011. Sequestration of phosphoinositides by mutated MARCKS e ﬀ ector domain inhibits stimulated Ca2+ mobilization and degranulation in mast cells. Mol Biol Cell , 22(15):4908-17
Gil fi llan AM, Rivera J., 2009. The tyrosine kinase network regulating mast cell activation. Immunol Rev . 228(1): 149–69
Ha´jkova´ Z, Bugajev V, Dra´berova´ E,
Vinopal S, Dra´berova´ L, Jana´c ˇ ek J, et al., 2011. STIM1-Directed Reorganization of Microtubules in Activated Mast Cells. J Immunol , 186:1-12
Huse M., 2009. The T-cell-receptor signaling network . J Cell Sci , 122: 1269-73
Huse M., 2012. Microtubule-organizing center polarity and the
immunological synapse: protein kinase C and beyond. Front Immunol , 3(235):1-11
Kim MS, Radinger M, Gil fi llan AM., 2008. The multiple roles of Phosphoinositide 3-kinase in mast cell biology. Trends Immunol , 29(10):493-501
Jatmiko SW, Aisyah RA., 2015. Imunitas Alamiah. Edisi 1. Surakarta:UNS Press. 20-2
Lennartsson J, Rönnstrand L., 2012. Stem Cell Factor Receptor/C-Kit: From Basic Science to Clinical Implications. Physiol Rev , 92: 1619 –49
Lessmann E, Leitges M, Huber M., 2006. A redundant role for PKC-e in mast cell signaling and e ﬀ ector function.
Int Immunol , 18(5): 767–73
Liu Y, Graham C, Parravicini V, Brown MJ, Rivera J, Shaw S., 2001. Protein kinase C u is expressed in mast cells and is functionally involved in Fc« receptor I signaling. J. Leukoc. Biol . 69:831–40
Melendez J, Grogg M, Zheng Y., 2011. Signaling Role of Cdc42 in Regulating Mammalian Physiology. J Biol Chem , 286(4):2375-
81
Nayak RC, Chang KH, Vaitinadin NS,
Cancelas JA., 2013. Rho GTPases control speci fi c cytoskeleton- dependent functions of hematopoietic stem cells. Immunol Rev . 256(1):1-23
Nishida K, Yamasaki S, Ito Y, Kabu K, Ha tt ori K, Tezuka T, et al., 2005. Fc ε RI- mediated mast cell degranulation requires calcium-independent m i c r o t u b u l e - d e p e n d e n t translocation of granules to the

## Bioeksperimen
Volume 2 No. 1, (Maret 2016) ISSN 2460-1365
plasma membrane. J Cell Biol , 170 (1):115–26
Ogawa K, Tanaka Y, Uruno T, Duan X, Harada Y, Sanematsu S, et al., 2014. DOCK5 Function as a key signalling adaptor that links Fc ε RI signals to microtubule dynamic during mast cell degranulation. J Exp Med, 211(7):1407-19
Okayama Y, Kashiwakura JI, Matsuda A, Sasaki-Sakamoto T, Nunomura S, Yokoi N, et al., 2012. The interaction between Lyn and FceRIb is indispensable for FceRI-mediated human mast cell activation. Allergy ,
67: 1241–49.
Orr SJ, McVicar DW., 2011. LAB/NTAL/ Lat2: a force to be reckoned with in all leukocytes?. J. Leukoc. Biol . 89:
11–19
Polakovicova I, Draberova L, Simicek M, Draber P., 2014. Multiple Regulatory Roles of the Mouse Transmembrane Adaptor Protein NTAL in Gene Transcription and Mast Cell Physiology. PLoS ONE, 9(8): e105539. doi:10.1371/journal. pone.0105539
Pullen NA, Falanga YT, Morales JK, Ryan JJ., 2012. The Fyn-STAT5 pathway: a new Frontier in IgE and IgG mediated mast cell signaling. Front Immunol , 3(117): 1-9
Ra C,Nunomura S, Okayama Y., 2012. Fine-tuning of mast cell activation by Fc ε RI β chain. Front Immunol ,
3(112):1-8
Rivera J, Gil fi llan AM., 2006. Molecular regulation of mast cell activation. J Allergy Clin Immunol, 117(6):1214- 25
Schwar tz M., 2003. Rho signalling at a glance. J Cell Sci , 117(23):5457-8
Shen WW, Frieden M, Demaurex N., 2011. Remodelling of the reticulum endoplasmic during store-operated calcium entry. Bio Cell , 103:365-80
Sibilano R, Frossi B, Pucillo CE., 2014. Mast cell activation: A complex interplay of positive and negative signaling pathways. Eur. J. Immunol . 44: 2558–66
Siraganian RP., 2003. Mast cell signal transduction from the high-a ﬃ nity IgE receptor. Current Opinion Immunol , 15:639–46
Siraganian RP, de Castro RO, Barbu MA, Zhang J., 2010. Mast cell signaling: The role of protein tyrosine kinase Syk, its activation and screening methods for new pathway participants. FEBS Le tt ers , 584:4933–40
Theoharides TC, Alysandratos KD, Angelidou A, Delivanis DA, Sismanopoulos N, Zhang B, et al., 2010. Mast cells and in fl ammation. Biochim Biophysic Acta , 1822:21–33
Tumova´ M, Ko ﬀ er  A,  Sim ı ´cek M, Dra´berova´ L, Draber P., 2010. The transmembrane adaptor protein NTAL signals to mast cell cytoskeleton via the small GTPase Rho. Eur. J. Immunol . 40: 3235–45
Yamasaki S, Ishikawa E, Sakuma M, Kanagawa O, Cheng AM, Malissen B, et al., 2007. LAT and NTAL Mediate Immunoglobulin E-Induced Sustained Extracellular Signal-Regulated Kinase Activation Critical for Mast Cell Survival. Mol Cell Biol , 27(12): 4406–15